(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列表の配列番号６に示すアミノ酸配列を有するＨ鎖可変領域と、配列表の配列番号８に示すアミノ酸配列を有するＬ鎖可変領域とを有するポリペプチドからなることを特徴とするＩｇＧモノクローナル抗体。
【請求項２】
前記ＩｇＧモノクローナル抗体がヒトアルブミンと高速で反応するＩｇＧモノクローナル抗体であって、ヒトアルブミンとの抗体固定時又は抗原固定時の５分間の抗原抗体反応で、金薄膜に抗原又は抗体を固定し表面プラズモン共鳴の原理を用いて抗原抗体反応を解析するバイオセンサーにより、飽和時の８０％以上の結合を達成できるものであることを特徴とする請求項１に記載のＩｇＧモノクローナル抗体。
【請求項３】
前記ヒトアルブミンとの抗体固定時又は抗原固定時の５分間の抗原抗体反応で、金薄膜に抗原又は抗体を固定し表面プラズモン共鳴の原理を用いて抗原抗体反応を解析するバイオセンサーが、ＢＩＡcore（登録商標名）であることを特徴とする請求項２に記載のＩｇＧモノクローナル抗体。
【請求項４】
配列表の配列番号９〜配列番号１１の全ての塩基配列と配列表の配列番号１２〜配列番号１４の全ての塩基配列とを少なくとも有し、請求項１〜請求項３のいずれかに記載のＩｇＧモノクローナル抗体をコードすることを特徴とする核酸。
【請求項５】
哺乳動物のミエローマ細胞とヒト血清アルブミンで免疫された哺乳動物の脾細胞との融合によって作製され、請求項１〜請求項３のいずれかに記載のＩｇＧモノクローナル抗体を生産することを特徴とするハイブリドーマ細胞。
【請求項６】
金薄膜に抗原又は抗体を固定し表面プラズモン共鳴の原理を用いて抗原抗体反応を解析するバイオセンサーを用いて尿中のヒトアルブミンを検出する検査方法であって、
前記ヒトアルブミンに特異的に結合する抗体として、請求項１〜請求項３のいずれかに記載のＩｇＧモノクローナル抗体を用いることを特徴とする検査方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明はハイブリドーマ細胞、モノクローナル抗体及び核酸に関し、更に詳しくは、ミエローマ細胞とヒト血清アルブミンで免疫された脾細胞との融合によって作製され選抜されたハイブリドーマ細胞と、かかるハイブリドーマ細胞によって生産され、ヒトアルブミンと高速で反応するIgＧモノクローナル抗体と、このIgＧモノクローナル抗体のＨ鎖，Ｌ鎖の可変領域をコードする核酸、更にはこれらの可変領域における抗原との結合を決定付ける領域をコードする核酸に関する。
【０００２】
【従来の技術】
糖尿病性腎症は、糖尿病の主要な合併症の一つであり、旧来は検尿法により尿蛋白陽性を以て診断されて来た。しかし、この方法によって診断される時期には既に腎不全が進行している場合が多いため、これに代わる早期診断法の構築が望まれて来た。
【０００３】
近年、尿中蛋白の増加に先立ち、微量のアルブミンが尿中に認められることが明らかになり、糖尿病性腎症の早期診断マーカーとしてアルブミンが注目されている。又、早期診断の測定法としては、抗原としてのマーカー物質に特異的に結合するため微量マーカーの検出に最適な材料の一つである、抗体をセンサーとしたシステムが有利である。
【０００４】
このため、抗体を用いて尿中の微量のアルブミンを検出するシステムが提案され、市販されている。例えば、ヒト血清アルブミンをマウス，ラット等の動物に免疫することにより、ヒト血清アルブミンと特異的に結合するモノクローナル抗体が得られることは公知であり、特開昭６０−２５８１２８号公報にはラットでの抗体取得について開示されている。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
しかし、上記従来の抗体をセンサーとしたシステムでは、この抗原抗体反応の速度が律速となっていることに問題があった。従って、センサーに使用する抗体としては抗原と高速に反応する抗体が望ましいが、現在、高速反応性と言う新しい観点に基づく抗体は取得されていない。
【０００６】
又、今後、高速反応性抗体と言う観点で抗体を作製、選択するには、実用的に有効な高速反応性の定義付けが必要である。
【０００７】
本発明では、高速反応性抗体と言う新規抗体の概念を示し、かつ、（従来取得されている抗体よりも有意に差のある高速反応性を示すものは一般に、本発明の高速反応性抗体として使用し得るけれども、）特に好ましい高速反応性抗体の定義として、５分間の抗原抗体反応でＢＩＡcoreにより飽和時の８０％以上の結合を達成する抗体であることを示す。
【０００８】
上記特開昭６０−２５８１２８号公報に係る発明では、抗原抗体反応を一晩行わせるとしているため、上記に定義する高速反応性抗体には該当しないと思われる。又、公知の通常の抗体においても抗原抗体反応は少なくとも１〜２時間程度行うものとしており、そのため、例えば自己診断が可能な程に簡便性，迅速性，定量性に優れたシステムを構築することは困難であった。
【０００９】
そこで本発明は、アルブミンとの迅速な結合能を有する抗体と、その抗体の生産手段と、その抗体の遺伝情報とを提供することを、解決すべき課題とする。
【００１０】
【課題を解決するための手段】
（第１発明の構成）
上記課題を解決するための本願第１発明（請求項１に記載の発明）の構成は、哺乳動物のミエローマ細胞とヒト血清アルブミンで免疫された哺乳動物の脾細胞との融合によって作製され、ヒトアルブミンと高速で反応するIgＧモノクローナル抗体を生産するハイブリドーマ細胞である。
【００１１】
（第２発明の構成）
上記課題を解決するための本願第２発明（請求項２に記載の発明）の構成は、前記第１発明に係るハイブリドーマ細胞によって生産され、ヒトアルブミンと高速で反応するIgＧモノクローナル抗体である。
【００１２】
（第３発明の構成）
上記課題を解決するための本願第３発明（請求項３に記載の発明）の構成は、前記第１発明に係るハイブリドーマ細胞によって生産され、ヒトアルブミンとの抗体固定時又は抗原固定時の５分間の抗原抗体反応で、ＢＩＡcoreにより飽和時の８０％以上の結合を達成できるIgＧモノクローナル抗体である。
【００１３】
ここに「ＢＩＡcore」とは、金薄膜に抗原又は抗体を固定し、表面プラズモン共鳴の原理を用いて抗原抗体反応を解析するバイオセンサーを言う。
【００１４】
（第４発明の構成）
上記課題を解決するための本願第４発明（請求項４に記載の発明）の構成は、配列表の配列番号５に示す塩基配列を有し、又は、配列表の配列番号５に示す塩基配列を有する核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズすると共に第２発明又は第３発明のいずれかに係るIgＧモノクローナル抗体のＨ鎖可変領域をコードする、核酸である。
【００１５】
（第５発明の構成）
上記課題を解決するための本願第５発明（請求項５に記載の発明）の構成は、配列表の配列番号７に示す塩基配列を有し、又は、配列表の配列番号７に示す塩基配列を有する核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズすると共に第２発明又は第３発明のいずれかに係るIgＧモノクローナル抗体のＬ鎖可変領域をコードする、核酸である。
【００１６】
（第６発明の構成）
上記課題を解決するための本願第６発明（請求項６に記載の発明）の構成は、配列表の配列番号９〜配列番号１１のいずれかに示す塩基配列のうちの一以上の塩基配列を有し、又は、これらのいずれかの塩基配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズすると共に請求項２又は請求項３のいずれかに記載のＩｇＧモノクローナル抗体のＨ鎖可変領域における抗原との結合を決定付ける領域をコードする塩基配列のうちの一以上の塩基配列を有する、核酸である。
【００１７】
（第７発明の構成）
上記課題を解決するための本願第７発明（請求項７に記載の発明）の構成は、配列表の配列番号１２〜配列番号１４のいずれかに示す塩基配列のうちの一以上の塩基配列を有し、又は、これらのいずれかの塩基配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズすると共に請求項２又は請求項３のいずれかに記載のＩｇＧモノクローナル抗体のＬ鎖可変領域における抗原との結合を決定付ける領域をコードする塩基配列のうちの一以上の塩基配列を有する、核酸である。
【００１８】
【発明の作用・効果】
（第１発明の作用・効果）
第１発明によって、アルブミンとの迅速な結合能を有するIgＧモノクローナル抗体の生産手段が提供される。この生産手段がハイブリドーマであるため、成長及び増殖が速く、抗体大量生産によるコスト低下を期待できる。
【００１９】
（第２発明及び第３発明の作用・効果）
第２発明及び第３発明によって、従来にない、アルブミンとの迅速な結合能を有するIgＧモノクローナル抗体が提供される。従って、アルブミンを迅速に検出できる高速免疫センサーの開発が可能となり、例えば自己診断が可能な程に簡便性，迅速性，定量性に優れたシステムを構築することも可能となる。
【００２０】
特に第３発明のように、IgＧモノクローナル抗体がヒトアルブミンとの抗体固定時又は抗原固定時の５分間の抗原抗体反応でＢＩＡcoreにより飽和時の８０％以上の結合を達成できる抗体である場合に、上記の効果が顕著である。
【００２１】
（第４発明及び第５発明の作用・効果）
第４発明及び第５発明によって、第２発明及び第３発明に係るＩｇＧモノクローナル抗体のＨ鎖可変領域及びＬ鎖可変領域の遺伝情報が解明された。従って第４発明及び第５発明により、遺伝子工学的手段に基づく上記ＩｇＧモノクローナル抗体の提供が可能となる。又、この遺伝情報に基づき、例えば遺伝子改良により更に高速にアルブミンと結合する抗体の作製を期待できる等、遺伝情報の種々の利用が可能となる。
【００２２】
（第６発明及び第７発明の作用・効果）
それぞれＫａｂａｔのデータベース（Sequence of proteins of immunological interest 4th edition,1987）の超可変領域に相当する部分であると言う根拠から、第６発明に係る所定の塩基配列は第２発明及び第３発明に係るＩｇＧモノクローナル抗体のＨ鎖可変領域における抗原との結合を決定付ける領域をコードしており、第７発明に係る所定の塩基配列は第２発明及び第３発明に係るＩｇＧモノクローナル抗体のＬ鎖可変領域における抗原との結合を決定付ける領域をコードしている、と考えられる。
【００２３】
従って、第６発明及び第７発明の核酸又はその遺伝情報を利用することにより、上記第４発明及び第５発明と同様の作用・効果を期待することができる。
【００２４】
【発明の実施の形態】
次に、本願発明の実施の形態について説明する。
【００２５】
〔ハイブリドーマ細胞及びIgＧモノクローナル抗体〕
ハイブリドーマ細胞は、哺乳動物のミエローマ細胞と、ヒト血清アルブミンで免疫された哺乳動物の脾細胞との融合によって作成されたものである。又、このようなハイブリドーマ細胞であっても、ヒトアルブミンと高速で反応するIgＧモノクローナル抗体を生産しないものは除外される。
【００２６】
このようなハイブリドーマ細胞として、従来の抗体よりも有意に高速で反応するハイブリドーマ細胞、及び、後述の表１及び／又は表２において「○」の評価を受けたハイブリドーマ細胞株が含まれ、そのうち、４Ｆ９株については、生命研条寄第６５５２号（ＦＥＲＭ  ＢＰ−６５５２）として、既に工業技術院生命工学工業技術研究所に特許寄託している。
【００２７】
IgＧモノクローナル抗体について、「高速で反応する」とは、IgＧモノクローナル抗体のヒトアルブミンとの抗原抗体反応の速度が、従来の抗体よりも有意に高速である（例えば、抗原抗体反応を行う時間が３０分以下、より好ましくは１０分以下で足りる）こと、更に好ましくは、例えばIgＧモノクローナル抗体のヒトアルブミンとの抗体固定時又は抗原固定時の５分間の抗原抗体反応で、ＢＩＡcoreにより飽和時の８０％以上の結合を達成できる程度であることを言う。
【００２８】
細胞融合によりハイブリドーマ細胞を構成すべきミエローマ細胞と、ヒト血清アルブミンで免疫された脾細胞としては、ヒトを除く哺乳動物の細胞を用いることができるが、この種の目的に常用されるサル，ラット，マウス等の哺乳動物が好ましく、とりわけ、ミエローマ細胞の系が確立されており扱い易いと言う理由から、マウスが好ましい。
【００２９】
ヒト血清アルブミンで免疫された脾細胞を取得する方法、細胞融合によりハイブリドーマ細胞を取得する方法、ハイブリドーマ細胞を培養する方法、その培地からIgＧモノクローナル抗体を取得する方法等については、公知の各種の方法を任意に採用することができる。
【００３０】
〔核酸〕
第４発明〜第７発明において「核酸」とは、センス／アンチセンスＤＮＡ又はＲＮＡや、ハイブリダイゼーション用プローブ、ＰＣＲ用プライマー、融合遺伝子作製時における鋳型等を含む概念である。
【００３１】
第４発明に係る核酸には、少なくとも、配列表の配列番号５に示す塩基配列を有する核酸、及び、配列表の配列番号５に示す塩基配列を有する核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ、前記IgＧモノクローナル抗体のＨ鎖可変領域をコードする核酸が含まれる。
【００３２】
第５発明に係る核酸には、少なくとも、配列表の配列番号７に示す塩基配列を有する核酸、及び、配列表の配列番号７に示す塩基配列を有する核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ、前記IgＧモノクローナル抗体のＬ鎖可変領域をコードする核酸が含まれる。
【００３３】
第６発明に係る核酸は、第２発明又は第３発明に係るＩｇＧモノクローナル抗体のＨ鎖可変領域における抗原との結合を決定付ける領域をコードする核酸であり、配列表の配列番号９〜配列番号１１のいずれかに示す塩基配列、あるいはこれらにハイブリダイズする前記所定の塩基配列を有するものが含まれる。
【００３４】
第７発明に係る核酸は、第２発明又は第３発明に係るＩｇＧモノクローナル抗体のＬ鎖可変領域における抗原との結合を決定付ける領域をコードする核酸であり、配列表の配列番号１２〜配列番号１４のいずれかに示す塩基配列、あるいはこれらにハイブリダイズする前記所定の塩基配列を有するものが含まれる。
【００３５】
【実施例】
次に、本発明の実施例を説明する。
【００３６】
（免疫）
ヒトアルブミン１０ｍｇ／ｍＬが１５μＬ，ヒトIgＡ２．９ｍｇ／ｍＬが５２μＬ及びＰＢＳ（Phosphate Buffered Salts）が１．４３ｍＬからなる抗原液１．５ｍＬ中の１．４ｍＬを、等量のフロイントアジュバントと注射器内にて混合し、エマルジョンとした。
【００３７】
このエマルジョンを別の注射器に１ｍＬ取り、投与抗原量が０．２ｍｇとなるように、雌５週齢ＢＡＬＢ／ｃマウスの腹腔内に注射した。この操作を２週間毎に２回行い、ＥＬＩＳＡ法により抗体生産を確認した後、同マウスの腹腔内に抗原注射を行った。
【００３８】
（細胞の調製）
免疫終了後のマウス脾細胞を取り出し、ＲＰＭＩ  １６４０培地１０ｍＬで細胞をほぐした後、１５ｍＬ容の遠心チューブに移して放置した。そして、塊が沈んだ上清を別の遠心チューブに移し、１５００ｒｐｍで５分間遠心分離した後、上清を捨て、細胞をほぐし１０ｍＬのＲＰＭＩ  １６４０培地を加えた。
【００３９】
そこから後述のミエローマ細胞の５倍相当量を取り、１５００ｒｐｍで５分間遠心分離して上清を捨てた後、融合バッファー５ｍＬを加えた。これを１５００ｒｐｍで５分間遠心分離して上清を捨て、融合バッファーにて４×１０7細胞／ｍＬとした。
【００４０】
ミエローマ細胞については、マウス骨髄腫を取り出してＲＰＭＩ  １６４０培地で細胞をほぐし、細胞数をカウントした後、１５００ｒｐｍで５分間遠心分離して上清を捨て、融合バッファー５ｍＬを加えた。これを１５００ｒｐｍで５分間遠心分離して上清を捨て、融合バッファーにて８×１０6細胞／ｍＬとした。
【００４１】
（ハイブリドーマの作製）
上記により調製された脾細胞とミエローマ細胞とを、５：１の細胞数割合で用いて電気細胞融合法により融合させた後、いわゆるＨＡＴ培地により１２日間培養した。そして培養用８穴プレートの各穴について抗ヒト血清アルブミン抗体価を測定し、活性な穴を選んで、限界希釈法によりクローニングを行った。
【００４２】
クローニングの後、ＢＩＡcoreによりヒトアルブミンとの５分間の抗原抗体反応で飽和時の８０％以上の結合を達成できるモノクローナル抗体を産出するハイブリドーマ細胞を次のように選択した。
【００４３】
即ち、ＢＩＡcoreセンサーチップにリガントとして抗原、１０ｍｇ／ｍＬヒトアルブミンを固定し、抗体としてクローニング後のハイブリドーマ培養上清（濃度は表１参照）をフローインジェクションし、抗原と抗体との結合速度をＢＩＡcoreによって評価した。その結果を表１に示す。又、１８μｇ／ｍＬ抗マウスIgＧ抗体を固定したチップにハイブリドーマ培養上清を流し込むことによりマウスIgＧ抗体を固定し、抗原として１００μｇ／ｍＬヒトアルブミンをフローインジェクションして抗原抗体反応速度を測定した。その結果を表２に示す。なお、温度はどちらの測定系においても２５°Ｃに制御した。
【００４４】
【表１】
0003947315.tif 000002
【００４５】
【表２】
0003947315.tif 000003
このようにして選択された、表１，表２で「○」に評価された各クローンのうち、特に好ましい評価であったのが、４Ｆ９株と名付けたものである。前記のように、４Ｆ９株はＦＥＲＭ  ＢＰ−６５５２として特許寄託している。
【００４６】
（エピトープの決定）
ヒト血清アルブミンのアミノ酸配列より抗体のエピトープと予想される箇所を選択し、図１のNo.1〜No.13 に示すように、１２〜２５のアミノ酸残基で構成されるペプチドを１３本合成した。なお、図１のNo.1〜No.13 において、各アミノ酸は略号としての１文字記号（例えば、「岩波  生物学辞典」参照）を以て表記している。
【００４７】
これらのペプチドと、上記ハイブリドーマ細胞４Ｆ９株から得られたモノクローナル抗体とを混合し、反応させた後、ヒト血清アルブミンを抗原としたＥＬＩＳＡ法により抗体の定量を行った。
【００４８】
その結果を図２（ａ）及び図２（ｂ）に示す。図２（ａ）は４Ｆ９株から得られた抗体と各ペプチドとの反応の結果を示し、図２（ｂ）はＩＣＩ株から得られた抗体と各ペプチドとの反応の結果を示す。図２（ａ）及び図２（ｂ）において、グラフの横軸方向にNo.1〜No.13 のペプチドの種別を示し、グラフの縦軸方向に発色度（単位Abs.／４０５ｎｍ）を示す。又、各ペプチドについて右側のグラフが実験例であり、左側のグラフがペプチドを添加しない場合のポジティブコントロールである。
【００４９】
この方法において、ペプチドが抗体のエピトープであるなら、抗体がペプチドと結合し、ＥＬＩＳＡ法における発色は減少することになる。そして、図２（ａ），図２（ｂ）より明らかなようにNo.4  のペプチドにおいて発色が顕著に減少したため、本モノクローナル抗体のエピトープはNo.4のアミノ酸配列部分であると思われる。
【００５０】
（マウスハイブリドーマ細胞からのｍＲＮＡの抽出）
培養されたハイブリドーマ細胞４Ｆ９株の細胞３．４×１０7個から、ｍＲＮＡ精製用の Quickprep mRNA Purificayion Kit（ Pharmacia製）を用いて、ｍＲＮＡの抽出を行った。
【００５１】
細胞を抽出バッファー１．５ｍＬに溶解しシリンジ内でホモジナイズした後、滅菌した遠心管に移して１００００ｒｐｍで５分間遠心分離し、その上清液を回収した。
【００５２】
一方、 Origo(dT)-Cellulose Spun Colum を軽く振とうし１３５０ｒｐｍで２分間遠心分離して保存液を除いたもとで、これに上記の回収した上清液をを注入し、１０分間振とうした後、１３５０ｒｐｍで２分間遠心分離し、上清液を除去した。
【００５３】
次いで、このカラムに high-saltバッファー３ｍＬを入れ、軽く振とうした後１３５０ｒｐｍで２分間遠心分離し、上清液を除去すると言う操作を３回繰り返した。又、上記カラムに low-salt バッファー３ｍＬを入れ、軽く振とうした後１３５０ｒｐｍで２分間遠心分離し、上清液を除去すると言う操作を２回繰り返した。
【００５４】
次に、６５°Ｃに保温した溶出バッファーをカラムに２５０μＬ入れてｍＲＮＡを溶出させ、１３５０ｒｐｍで２分間遠心分離した後に溶出液を回収すると言う操作を３回繰り返した。その結果６９μｇのｍＲＮＡをを取得した。
【００５５】
（ｃＤＮＡの合成）
上記のように取得したハイブリドーマ細胞４Ｆ９株のｍＲＮＡから、ｃＤＮＡ合成用の３’-Full RACE Core Set （宝酒造製）を用いて、ｃＤＮＡの合成を行った。
【００５６】
反応液は、１０×バッファー２μＬ，塩化マグネシウム（２５ｍＭ）４μＬ，ｄＮＴＰ（１０ｍＭ）２μＬ，ＲＮase 阻害剤０．５μＬ，Oligo-ｄＴプライマー１μＬに対して、上記４Ｆ９株のｍＲＮＡ１μｇと、ＡＭＶ（Avian Myeloblastosis Virus）由来の逆転写酵素（５Ｕ／μＬ）１μＬを加え、ＲＮase freeの滅菌水により２０μＬとした。
【００５７】
上記反応液の作製後、３０°Ｃで１０分間アニーリングし、次いで５０°Ｃで３０分間伸長反応を行い、９５°Ｃ，５分間で酵素を失活させた後、５°Ｃで５分間氷冷した。
【００５８】
（ＰＣＲ法による抗体遺伝子の増幅）
抗体遺伝子の可変領域は、Ｈ鎖，Ｌ鎖共にＮ末端、Ｃ末端にそれぞれ相同性を保持していることが知られている。そこでこの相同性を基にＰＣＲプライマーの設計を行った。
【００５９】
ＰＣＲプライマーの塩基配列は、Ｈ鎖Ｎ末端が配列表の配列番号１、Ｈ鎖Ｃ末端が配列表の配列番号２、Ｌ鎖Ｎ末端が配列表の配列番号３、Ｌ鎖Ｃ末端が配列表の配列番号４に、それぞれ示す通りのものとした。
【００６０】
これらのＰＣＲプライマーを用いて、 Perkin Elmer 社製のＰＣＲ装置を利用して、ＰＣＲ法によりＨ鎖，Ｌ鎖の遺伝子増幅を行った。
【００６１】
反応液は、Ｈ鎖，Ｌ鎖のいずれについても、上記でｃＤＮＡを合成した反応液を鋳型として２０μＬ，上記Ｈ鎖又はＬ鎖のＮ末端及びＣ末端プライマーを各１００ p mol，１０×ＰＣＲバッファー（ Perkin Elmer 社製）を１０μＬ，１０ｍＭのｄＮＴＰを２．５μＬ，ＤＮＡ合成酵素 Ampli Taq（ Perkin Elmer 社製）を１μＬ用い、これらに滅菌水を加えて１００μＬとした。
【００６２】
ＰＣＲ法の条件は、解離反応を９４°Ｃで３０秒、アニーリング反応を５０°Ｃで３０秒、伸長反応を７２°Ｃで２分とし、これらを３０サイクル行った。こうして得られたＰＣＲ反応液の電気泳動を行った処、目的の位置約３５０ bp にバンドを確認することができた。
【００６３】
（抗体遺伝子のクローニング）
ＰＣＲ法により増幅したＨ鎖，Ｌ鎖の遺伝子をそれぞれ pT7Blue-3ベクター（ Novagen社製）に挿入し、クローニングした。このベクターは、EcoRV で切断することにより平滑末端を生じ、ＰＣＲ産物を直接クローニングすることが可能になる。
【００６４】
（抗体遺伝子の塩基配列決定）
クローニングした株を、ＰＣＲ後目的の遺伝子が増幅されることを指標としてコロニーＰＣＲにより選択した後、それらの株からプラスミドを抽出し、塩基配列の決定を行った。その結果、Ｈ鎖可変領域は配列表の配列番号５に示す３４５塩基（実際には３４８塩基−１１６アミノ酸であるが、発現ベクター導入のため１番目のアミノ酸残基は欠損）、Ｌ鎖可変領域は配列表の配列番号７に示す３２４塩基（１０８アミノ酸）で構成されていることが推定された。
【００６５】
又、相同領域の配列及び分子量から、ｃＤＮＡのこれらの塩基配列はIgＧモノクローナル抗体のＨ鎖，Ｌ鎖をコードしていると判断された。
【００６６】
なお、配列番号５の塩基配列における塩基番号８８〜１０５（H1領域）、塩基番号１５１〜１９５（H2領域）、塩基番号２９２〜３１２（H3領域）、及び、配列番号７の塩基配列における塩基番号６４〜９９（L1領域）、塩基番号１４５〜１６５（L2領域）、塩基番号２６２〜２８８（L3領域）の各領域は、前記Ｋａｂａｔのデータベースの超可変領域に相当する部分であり、抗原との結合を決定付ける領域を示す。
【００６７】
【配列表】
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【図面の簡単な説明】
【図１】実施例で用いたペプチドの一覧を示す図である。
【図２】図２（ａ）及び図２（ｂ）はペプチドの発色度を示すグラフである。
【図１】
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【図２】
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