(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
医療目的以外の目的で、皮膚に、２種類以上の化学物質を塗布し、該２種類以上の化学物質の皮膚浸透量を測定し、該皮膚浸透量の比を算出することを特徴とする皮膚性状の評価方法。
【請求項２】
皮膚浸透量の測定が、光音響法、クロマトグラフィー法、色差法又は吸光度測定法によるものである請求項１記載の皮膚性状の評価方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、皮膚性状を評価する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
皮膚性状は、角質層のバリアー機能と密接な関係を有し、バリアー機能の低下が、肌荒れ等の皮膚性状の悪化をもたらすことが知られている。かかるバリアー機能を表す指標として、身体の内部から皮膚を通して揮散する水分量（ＴＥＷＬ）が用いられており、バリアー機能が低下すると、ＴＥＷＬが増加するとされている。しかし、ＴＥＷＬと角質層のバリアー機能とは、必ずしも高い相関関係を有していない。それは、刺激物、アレルゲンに対する角質層のバリアー機能の低下を皮膚外部から内部への物質の浸透量として捉えていない点にある。
【０００３】
したがって、皮膚性状は、物質の皮膚への浸透性（経皮吸収性）を測定することにより、的確に評価できると考えられる。物質の皮膚への浸透性は、光音響法、クロマトグラフィー法、吸光度測定法等により測定できることが知られている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
しかし、化学物質の皮膚への浸透量は、化学物質や皮膚の温度、湿度、皮膚への塗布量、塗布方法等の因子により変化し、かかる因子を完全に一定にして測定することは技術的に困難であるため、測定誤差が大きく、浸透量の測定値から皮膚性状を評価することは極めて困難であった。このため、皮膚生理状態を数値化できる皮膚性状の評価方法が求められていた。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、２種類以上の化学物質の皮膚浸透量を測定し、その皮膚浸透量の比をとれば、上記温度や塗布方法等の皮膚浸透量測定誤差因子が相殺されるため、該比を高い精度で算出することができ、その結果該比が皮膚性状と極めて高い相関関係をもつことを見出した。
【０００６】
すなわち、本発明は、医療目的以外の目的で、皮膚に、２種類以上の化学物質を塗布し、該２種類以上の化学物質の皮膚浸透量を測定し、該皮膚浸透量の比を算出することを特徴とする皮膚性状の評価方法を提供するものである。
【０００７】
【発明の実施の形態】
本発明の評価方法は、まず皮膚に２種類以上の化学物質を塗布する。皮膚は身体のいずれの部分でもよい。化学物質は、化粧品原料基準等に記載されているものが挙げられる。２種類以上の化学物質は、物性が異なればよい。ここで物性とは、化学物質の皮膚浸透性に影響を及ぼす化学物質の特性であり、例えば溶媒に対する溶解性、分子量、イオン性、水／油剤に対する分配性（ｌｏｇＰ）、ｐＫａ、ｐＨ、皮膚への吸着性、化学物質を溶解した溶液の粘度等が挙げられる。このうち測定の容易性の観点から、溶媒に対する溶解性、分子量、イオン性、ｐＫａ又はｐＨが好ましい。
【０００８】
かかる２種類以上の化学物質の組み合わせとしては、物性が溶媒に対する溶解性の場合、例えばエタノール、水に対する溶解性が異なる色素が挙げられ、黄色４号と赤色２１５号等が特に好ましい。物性がｌｏｇＰの場合、例えば水溶性／油溶性の物質に対する分配係数が異なる１，３−ブタンジオール、グリセリン−１−ベンジル−３−ｎ−ヘキシルジエーテル等が挙げられる。この場合、１つはｌｏｇＰが３以下であることが望ましい。物性が分子量の場合、例えばリボフラビン（Ｒｆ）、フラビンアデニンジヌクレオチド（ＦＡＤ）、フラビンモノヌクレオチド（ＦＭＮ）等が挙げられる。
【０００９】
実際の測定にあたっては、２種類以上の化学物質は、均一に混合し、必要により適当な溶媒に溶解し、混合溶液として皮膚に塗布することが、皮膚浸透量測定誤差因子排除の観点から好ましい。さらに３種類以上の化学物質を同時に塗布すると精度が向上する。
【００１０】
次いで該２種類以上の化学物質の浸透量（単位面積当たりの浸透量）を測定する。化学物質塗布から測定までの時間は、一定であれば特に制限はないが、例えば０．５〜３０分間が好ましい。測定方法としては、光音響法、クロマトグラフィー法又は吸光度測定法が好ましく、皮膚浸透量を直接in vivo で測定できる点で光音響法が特に好ましい。光音響法は、被測定物が照射光を吸収することにより発熱し、その熱により発生した圧力波（音波）を検出する測定法である。光音響法の測定装置（光音響セル）は、例えば特開平９−２９２３２７号公報等に詳述されている。かかる光音響セルを塗布部分に接触させ、変調周波数、励起波長、半値幅を適宜選択して光を照射することにより、光音響信号強度を測定でき、これから皮膚浸透量を得ることができる。一般に角質層の厚さは１０〜５０μｍであり、変調周波数は５〜８００Ｈｚが望ましい。クロマトグラフィー法及び吸光度測定法は、テープストリッピング等の方法で皮膚を剥離し、皮膚に浸透した化学物質を、適当な溶媒で抽出した後、常法に従って測定する。クロマトグラフィー法としては、例えば吸着クロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィー、液体クロマトグラフィー等が挙げられるが、このうち液体クロマトグラフィーがより好ましく、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）が特に好ましい。
【００１１】
次いで上記で得られた皮膚浸透量の比を算出する。光音響法を皮膚浸透量の測定法として用いる場合、該方法により得られる測定値は、上記したように光音響信号強度であるが（皮膚浸透量と該光音響信号強度とは極めて高い相関関係を有する）、浸透量測定後、その比を算出するのであるから、光音響信号強度を皮膚浸透量に換算しなくてもよい。クロマトグラフィー法、吸光度測定法の場合も同様である。
【００１２】
得られた比は、温度等の影響を相殺できるため、測定誤差が非常に小さい。このため、かかる比は、皮膚性状と極めて高い相関関係を有し、皮膚性状の評価に有効である。
【００１３】
上記した物性の異なる２種類以上の化学物質を含有する試薬と、皮膚浸透量測定器具とを組み合わせれば皮膚性状を評価するための皮膚性状診断用キットとすることができる。皮膚浸透量測定器具としては、in vivo で測定する場合、例えば特開平９−２９２３２７号公報に記載の光音響セル等が挙げられる。また化学物質を皮膚から剥離し、抽出等することにより測定する場合、ＨＰＬＣ等のクロマトグラフィー装置、吸光度測定装置等が挙げられる。かかるキットを用い、上記した方法で皮膚浸透量の比を算出することにより、皮膚性状を評価することができる。
【００１４】
【実施例】
実施例１
エタノールに対する溶解度が０．０５ｍｏｌ／ｄｍ3、水に対する溶解度が０．３３ｍｏｌ／ｄｍ3である親水性の黄色４号、及びエタノールに対する溶解度が０．２ｍｏｌ／ｄｍ3、水に対する溶解度が０．２３ｍｏｌ／ｄｍ3である両親媒性の赤色２１５号を、濃度がそれぞれ０．０５ｍｏｌ／ｄｍ3及び０．２ｍｏｌ／ｄｍ3となるようにエタノールに溶解して混合溶液を作成した。健常人３名及びアトピー性皮膚疾患患者２名の前腕部５個所に該混合溶液を１ｃｍ2あたり、２０μｌ塗布した。２分後、特開平９−２９２３２７号公報第５頁実施例１（該公報図１）に記載の光音響セルを用い、変調周波数４１０Ｈｚ、励起波長５４５ｎｍ（赤）及び４３０ｎｍ（黄色）／半値幅１０ｎｍで、皮膚表面から１５μｍ内部までの光音響信号強度を測定した。各被験者の５個所の信号強度の平均値ｘ1及びその標準偏差σ1を図１に示す。また各被験者の黄色４号の信号強度／赤色２１５号の信号強度（信号強度比）の平均値ｘ2及び標準偏差σ2を図２に示す。
【００１５】
図１から、赤色２１５号のｘ1は、全被験者で大きな差はなかった。黄色４号のｘ1は、アトピー性皮膚疾患患者は健常者より高かったが、σ1が非常に大きく、被験者Ｅのｘ1−σ1は、３名の健常者の各ｘ1＋σ1より小さくなった。
従って、各色素の信号強度から皮膚性状を評価することは困難である。
【００１６】
図２においては、アトピー性皮膚疾患患者のｘ２は、健常者のｘ2より高く、またσ2も小さいため、２名のアトピー性皮膚疾患患者の各ｘ2−σ2は、３名の健常者の各ｘ2＋σ2より高くなった。これから、各色素の信号強度比を算出することにより皮膚性状を評価できる。
【００１７】
実施例２
実施例１において、健常者、アトピー性皮膚疾患患者をともに１名とした以外は実施例１と同様にして、前記混合溶液を塗布した。２分後、各塗布部に粘着テープを貼付して角質層を剥離し、１０％エタノール水溶液で各色素を抽出し、黄色４号は４３０ｎｍ、赤色２１５号は５４５ｎｍで吸光度を測定した。それらの平均値ｘ3と標準偏差σ3、及び黄色４号の吸光度／赤色２１５号の吸光度の平均値ｘ4と標準偏差σ4を表１に示す。
【００１８】
【表１】
0003938745.tif 000002
【００１９】
各色素の吸光度は誤差が大きいため、各色素の吸光度から皮膚性状を評価することは困難であるが、吸光度の比を算出すれば、皮膚性状を評価できる。
【００２０】
実施例３
健常人２名のうち１名について、前腕部をエチルエーテル／アセトン（１：１）で１０分間有機溶媒による洗浄処理し（Ａ／Ｅ処理）、人工的に荒れ肌にした。該被験者２名について、実施例１と同様にして光音響信号強度を測定した。各被験者の信号強度の平均値ｘ5と標準偏差σ5、及び各被験者の黄色４号の信号強度／赤色２１５号の信号強度（信号強度比）の平均値ｘ6及び標準偏差σ6を表２に示す。
【００２１】
【表２】
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【００２２】
各色素の信号強度は誤差が大きいため、各色素の信号強度から皮膚性状を評価することは困難であるが、信号強度比を算出すれば、皮膚性状を評価できる。
【００２３】
実施例４
健常なユカタンミニ豚（日本チャールスリバー（株）製）の剥離皮膚を用いて、Ａ／Ｅ処理して荒れ肌にした。Ａ／Ｅ処理しないものを対象とした。該被験豚２頭について、実施例１と同様にして光音響信号強度を測定した。各被験豚の信号強度の平均値ｘ7と標準偏差σ7、及び各被験豚の黄色４号の信号強度／赤色２１５号の信号強度（信号強度比）の平均値ｘ8及び標準偏差σ8を表３に示す。
【００２４】
【表３】
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【００２５】
各色素の信号強度は誤差が大きいため、各色素の信号強度から皮膚性状を評価することは困難であるが、信号強度比を算出すれば、皮膚性状を評価できる。
【００２６】
実施例５
ｌｏｇＰが０．１９である１，３−ブタンジオール及びｌｏｇＰが３．６６であるグリセリン−１−ベンジル−３−ｎ−ヘキシルジエーテルの混合溶液を、健常豚（ユカタンミニ豚）及びＡ／Ｅ処理豚の各５個所に２００μＬ／ｃｍ2塗布した。塗布４時間後、該被験豚について、各塗布部に粘着テープを貼付して角質層を剥離し、各化学物質をＡ／Ｅで２０分間抽出し、ＨＰＬＣ（ＯＤＳカラム）により定量した。各被験豚の測定量の平均値ｘ9及びその標準偏差σ9、及び各被験豚の１，３−ブタンジオールの測定量／グリセリン−１−ベンジル−３−ｎ−ヘキシルジエーテルの測定量の平均値ｘ10及び標準偏差σ10を表４に示す。
【００２７】
【表４】
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【００２８】
各化学物質の測定量は誤差が大きいため、各化学物質の測定量から皮膚性状を評価することは困難であるが、その比を算出すれば、皮膚性状を評価できる。
【００２９】
実施例６
ＦＡＤ、ＦＭＮ及びＲｆを、濃度がそれぞれ５．８ｍｏｌ／ｄｍ3、０．４８ｍｏｌ／ｄｍ3、及び０．０１１ｍｏｌ／ｄｍ3となるように水に溶解して溶媒を作成した。各溶液を健常豚（ユカタンミニ豚）及びＡ／Ｅ処理豚のそれぞれ近傍５個所に塗布した。塗布２分後、各塗布部に粘着テープを貼付して角質層を剥離し、各化学物質を１％ＳＤＳで１０分間抽出した後、４２０ｎｍで吸光度を測定し、ＦＡＤ、ＦＭＮ、Ｒｆの浸透量を求めた。各被験豚の浸透量の平均値ｘ11とその標準偏差σ11、ＦＭＮの吸光度／Ｒｆの吸光度の平均値ｘ12とその標準偏差σ12、及びＦＡＤの吸光度／Ｒｆの吸光度の平均値ｘ13とその標準偏差σ13を表５に示す。
【００３０】
【表５】
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【００３１】
各化学物質の吸光度は誤差が大きいため、各化学物質の吸光度から皮膚性状を評価することは困難であるが、各化学物質の吸光度の比を算出すれば、皮膚性状を評価できる。
【００３２】
実施例７
実施例６と同様にして、各被験豚に前記溶液を塗布した。塗布２分後、各被験豚の光音響信号強度を測定した。塗布時の、濃度１ｍｏｌ／ｄｍ3当たりの各被験豚の５個所の信号強度の平均値ｘ14とその標準偏差σ14、ＦＭＮの信号強度／Ｒｆの信号強度の平均値ｘ15とその標準偏差σ15、及びＦＡＤの信号強度／Ｒｆの信号強度の平均値ｘ16とその標準偏差σ16を表６に示す。
【００３３】
【表６】
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【００３４】
各化学物質の光音響信号強度は誤差が大きいため、各化学物質の信号強度から皮膚性状を評価することは困難であるが、各化学物質の信号強度の比を算出すれば、皮膚性状を評価できる。
【００３５】
【発明の効果】
本発明の方法を用いれば、皮膚性状を容易に評価することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】実施例１において、各被験者の５個所の信号強度の平均値及びその標準偏差を示す。平均値は長方形の高さ、２σ1はＩで表わされる。
【図２】実施例１において、各被験者の黄色４号の信号強度／赤色２１５号の信号強度（信号強度比）の平均値及び標準偏差を示す。平均値は長方形の高さ、２σ2はＩで表わされる。
【図１】
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【図２】
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