(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
４−アセトキシ−２α−ベンゾイルオキシ−５β，２０−エポキシ−１β−ヒドロキシ−７β，１０β−ビス（２，２，２−トリクロロエトキシカルボニルオキシ）−９−オキソ−１１−タキセン−１３α−イル（２Ｒ，３Ｓ）−３−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ−３−フェニル−２−ヒドロキシプロピオネートを亜鉛及び酢酸で処理することにより得られたドセタキセルの粗生成物を、ヘプタン／酢酸エチル／メタノール／水（体積比で２：４：３：２）混合物を用いる遠心分配クロマトグラフィーに付すことを特徴とするドセタキセルの精製法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は遠心分配クロマトグラフィー（ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ  ｐａｒｔｉｔｉｏｎ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）によるタキソイドの精製法に関する。
【０００２】
さらに特定的には、本発明はタキソテレ（Ｔａｘｏｔｅｒｅ）及び１０−デアセチルバッカチンＩＩＩの精製法に関する。
【０００３】
【従来の技術及び課題】
いちいの葉から抽出される１０−デアセチルバッカチンＩＩＩは、例えばヨーロッパ特許ＥＰ  ０，２５３，７３８又はＥＰ  ０，３３６，８４１、あるいは国際特許ＰＣＴ  ＷＯ  ９２／０９，５８９に記載されているような条件下におけるタキソテレの製造に有用である。
【０００４】
いちいの葉の抽出により得られる１０−デアセチルバッカチンＩＩＩは、それが由来する種に依存して不純物を含み、それは主に、例えば、２α−ベンゾイルオキシ−４−アセトキシ−５β，２０−エポキシ−１β，７β，１０β，１３α，１９−ペンタヒドロキシ−９−オキソ−１１−タキセン、２α−ベンゾイルオキシ−４−アセトキシ−５β，２０−エポキシ−１β，７α，１０β，１３α−テトラヒドロキシ−１１−タキセン又はタキシン類などのタキソイド群に属する生成物である。
【０００５】
１０−デアセチルバッカチンＩＩＩから部分的合成により得られるタキソテレは、主な不純物として、１０−デアセチルバッカチンＩＩＩに含まれる不純物のエステル化生成物、ならびに例えば側鎖の２’位における炭素のエピマー化に由来する他の不純物を含む。
【０００６】
１０−デアセチルバッカチンＩＩＩ及びタキソテレ自身は、一般に、カラム上の液体クロマトグラフィー法により、さらに特定的には、シリカカラム上の高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により精製することができる。しかし、これらの方法は数十グラムの精製には特に適しているが、それらを工業的に外挿すると、消費される溶媒の量及び毒性残留物により汚染された（シリカ）担体の取り扱い及び破壊などの圧迫に会い、それは最大となる。
【０００７】
毒性が非常に高い場合が多く、反応性が高い生成物を構成するタキソイド類の場合、優れた生産性を有し、購入、使用及び破壊が高価な固体担体を必要とせず、少量の溶媒の使用を必要とし、容易に自動化して連続的生産を可能にすることができる精製法の使用の可能性を有することが特に重要である。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
今回、その原理が、例えば、Ａ．Ｆｏｕｃａｕｌｔ  ａｎｄ  Ｐ．Ｒｏｓｓｅｔ，Ａｎａｌｕｓｉｓ，１６（３），１５７−１６７（１９８８）に記載されている遠心分配クロマトグラフィー（ＣＰＣ）又は高速向流クロマトグラフィーを行うことによりタキソイド類の精製、さらに特定的にはタキソテレ及び１０−デアセチルバッカチンＩＩＩの精製が達成されることが見いだされ、これが本発明の主題を形成する。
【０００９】
遠心分配クロマトグラフィーは、論理的に及び自動的に作られる連続的平衡を確立することにより、分離されるべき混合物の成分を２種の非混和性液相に分配することを可能にする。
【００１０】
この方法は非常に有効な分配機構、固定相の強い保持（ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ）及び可動相の高速を特徴とし、数時間で優れた分離に導く。
【００１１】
遠心分配クロマトグラフィーは２つの部分的混和相を与える２つ又はそれ以上の溶媒の使用を必要とする。この特徴を示す溶媒は無限にあるが、非−塩素化及び無−毒性工業用溶媒を用いるのが工業的に特に重要である。比較的低い危険で工業的に用いることができる溶媒の中に、メタノールなどのアルコール類、メチルｔ−ブチルエーテルなどのエーテル類、酢酸エチルなどのエステル類、メチルイソブチルケトンなどのケトン類及びヘプタン又はイソオクタンなどの脂肪族炭化水素類を挙げることができる。
【００１２】
有効な精製を行うために、それが迅速に完全に分離して分配係数が０．１〜１０、好ましくは０．５〜５、さらに好ましくは１近辺である２相を与える溶媒の混合物を選択することが必要である。
【００１３】
分配係数（Ｋ）が例えば１０に等しい生成物は、下相より上相に１０倍可溶性である。結局、上相が可動相である場合、それは迅速に溶離し、下相が可動相である場合、非常に長時間の後も非常に分割が悪い。対照的にＫが１近辺である場合、両相における溶解度が事実上同一であり、溶離の両様式を用いることができ、適切に組み合わされると最大の分割を得ることができる。
【００１４】
１０−デアセチルバッカチンＩＩＩの特定の場合、脂肪族炭化水素、エステル、アルコール及び水の混合物、例えばヘプタン／酢酸エチル／メタノール／水（体積により１：２：１：２）混合物、さらに脂肪族ケトン類及び水の混合物、例えばメチルイソブチルケトン／アセトン／水（体積により２：３：２）混合物が最も特別に適している。
【００１５】
さらに、装置の合計体積における、可動相の流量が固定された平衡時に固定相により占有される割合である固定相における保持が可能な限り高く、少なくとも５０％に等しいことが必要である。
【００１６】
さらに、生産性の向上のために高流量で作業できることが特に有利であり、それはローターにより与えられる最大圧力により制限される。
【００１７】
タキソテレの特定の場合、脂肪族炭化水素、エステル、アルコール及び水の混合物、例えばヘプタン／酢酸エチル／メタノール／水（体積により２：４：３：２）系を用いるのが有利であり、その保持は８０％であり、分配係数は０．５近辺であり、かくして迅速に溶離する狭いピークを与え、それにより生産性における非常に顕著な向上に導く。
【００１８】
遠心分配クロマトグラフィーは、この目的に適した商業的に入手可能ないずれの装置においても、例えばＹｏｉｃｈｉｒｏ  Ｉｔｏ［ＣＲＣ  Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．，１７，６５（１９８６）］により開発された装置、あるいはＳＡＮＫＩ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｌｉｍｉｔｅｄ  ｉｎ  Ｋｙｏｔｏ（Ｊａｐａｎ）により販売されている装置において行うことができる。
【００１９】
本発明は、それが本発明の方法を行うことにより得られる場合、精製タキソテレ及び精製１０−デアセチルバッカチンＩＩＩにも関する。
【００２０】
【実施例】
【００２１】
下記の実施例は本発明の実行法を示す。
実施例１−タキソテレの精製
４−アセトキシ−２α−ベンゾイルオキシ−５β，２０−エポキシ−１β−ヒドロキシ−７β，１０β−ビス（２，２，２−トリクロロエトキシカルボニルオキシ）−９−オキソ−１１−タキセン−１３α−イル（２Ｒ，３Ｓ）−３−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ−３−フェニル−２−ヒドロキシプロピオネートを酢酸の存在下で、ヨーロッパ特許ＥＰ  ０，３３６，８４１に記載の条件下において亜鉛で処理することにより、タキソテレ（すなわち４−アセトキシ−２α−ベンゾイルオキシ−５β，２０−エポキシ−１α，７β，１０β−トリヒドロキシ−９−オキソ−１１−タキセン−１３α−イル（２Ｒ，３Ｓ）−３−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ−３−フェニル−２−ヒドロキシプロピオネート）を得る。
【００２２】
１０ｇの４−アセトキシ−２α−ベンゾイルオキシ−５β，２０−エポキシ−１β−ヒドロキシ−７β，１０β−ビス（２，２，２−トリクロロエトキシカルボニルオキシ）−９−オキソ−１１−タキセン−１３α−イル（２Ｒ，３Ｓ）−３−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ−３−フェニル−２−ヒドロキシプロピオネートを１５０ｃｍ3のメチルｔ−ブチルエーテルに溶解し、次いで１０ｇの亜鉛を加える。蒸発乾固の後、灰色の粉末が得られ、それを反応器に入れる。
【００２３】
撹拌後、６ｃｍ3の酢酸及び５０ｃｍ3のアセトニトリルの混合物を５分かけて加える。混合物を水浴を用いて外部から４５℃において１時間加熱する。氷浴において冷却した後、８５０ｍ3のメチルｔ−ブチルエーテルを激しく撹拌しながら導入し、次いで亜鉛塩及び過剰の亜鉛を多孔度が４の焼結ガラス上で濾過する。
【００２４】
濾液を濃縮乾固する。それにより泡（１２ｇ）が得られ、それをすぐに２０ｃｍ3の酢酸エチル、１５ｃｍ3のメタノール、１０ｃｍ3のヘプタン及び１０ｃｍ3の水に取り上げる。
【００２５】
遠心分配クロマトグラフィーをＳＡＮＫＩ  ＬＬＩ−０７装置において行う。圧力を５５バールに制限するポペットバルブを設けた２つのピストンポンプにより遠心機に供給する。１つのポンプはセレクターバルブを用いて２層の片方又は他方を運搬するように働き、他のポンプは注入用に確保されている。
【００２６】
装置に固定相を低い回転速度（２００ｒｐｍ）及び高い流量（１１０ｃｍ3／分）で充填した後、直後に注入を行う。
【００２７】
水相から始めて２相を注入し、ヘキサン／酢酸エチル／メタノール／水（体積により２：４：３：２）系の水相を用いて６０ｃｍ3／分の流量で溶離を行う。７１％保持に等しい１．９リットルの固定相を集め、次いで１５−ｃｍ3の画分を集める。画分７２〜１１０をプールし、１４０ｃｍ3の体積に濃縮する。形成される沈澱を濾過により分離する。内部標準法を用いて９９．７％と分析される５．２ｇのタキソテレ三水和物がそれにより８０．５％の収率で得られる。
実施例２−タキソテレの精製
８２ｇの４−アセトキシ−２α−ベンゾイルオキシ−５β，２０−エポキシ−１β−ヒドロキシ−７β，１０β−ビス（２，２，２−トリクロロエトキシカルボニルオキシ）−９−オキソ−１１−タキセン−１３α−イル（２Ｒ，３Ｓ）−３−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ−３−フェニル−２−ヒドロキシプロピオネート、８２ｇの亜鉛及び１５０ｃｍ3の４９．２ｃｍ3の酢酸と３２８ｃｍ3のアセトニトリルの混合物を用いて出発する以外は実施例１に記載の方法を用い、理論的に４９．６９ｇのタキソテレ又は５３ｇのタキソテレ三水和物を含む１１５ｇの粗生成物が得られる。
【００２８】
粗生成物を４５０ｃｍ3のメチルｔ−ブチルエーテルを用いて取り上げ、次いで合計で１５ｇの塩化ナトリウムを含む４５０ｃｍ3の水で３回洗浄する。合わせた水相を２００ｃｍ3のメチルｔ−ブチルエーテルで２回抽出する。３つのエーテル抽出物を合わせ、濃縮乾固する。７２ｇの泡がそれにより得られ、その生成物を１２０ｃｍ3のメタノールを用いて取り上げる。
【００２９】
得られる淡黄色溶液に１６０ｃｍ3の酢酸エチル、８０ｃｍ3の水及び８０ｃｍ3のヘプタンをこの順序で加える。
【００３０】
それにより合計体積が４６０ｃｍ3の２つの透明な液相が得られ、その上相はタキソテレの不在の場合の３５％の代わりに合計体積の１／４を示すのみである。
【００３１】
遠心分配クロマトグラフィー装置に１１０ｃｍ3／分の流量で、２００ｒｐｍの回転速度において有機相を充填する。装置が満たされたら、回転速度を８００ｒｐｍに上げる。水相を注入し、次いで有機相の注入の後に２００ｃｍ3の有機相を用いて濯ぎを行い、次いで水相を用いて６０ｃｍ3／分の流量で溶離する。
【００３２】
６７．７％保持に等しい２．５リットルの過剰の固定相を集める。
【００３３】
２００ｃｍ3の水性可動相が通過した後、３６０の１２−〜１３−ｃｍ3画分を集める。２００ｃｍ3の体積に濃縮された画分２５〜１１０は８７．７％の収率で４６．５ｇのタキソテレ三水和物の沈澱を与え、その純度は９９．１％である。
実施例３−１０−デアセチルバッカチンＩＩＩの精製
合計体積が２４５ｃｍ3のＳＡＮＫＩ  ＨＰＣＰＣシリーズ１０００クロマトグラフにおいて遠心分配クロマトグラフィーを行う。
【００３４】
１００ｒｐｍで回転するローターに、６ｃｍ3／分の流量で有機相及び３ｃｍ3の流量で水相を同時にポンプで汲み入れることにより、下降様式で（ｉｎ  ｔｈｅ  ｄｅｓｃｅｎｄｉｎｇ  ｍｏｄｅ）メチルイソブチルケトン／アセトン／水（体積により２：３：２）混合物を充填する。
【００３５】
その後回転速度を１２００ｒｐｍに上げ、次いで８３．３％の１０−デアセチルバッカチンＩＩＩ及び３．４％の１０−デアセチル−１９−ヒドロキシバッカチンＩＩＩを含む１．５ｇの結晶化粗１０−デアセチルバッカチンＩＩＩを注入する。
【００３６】
次いで３ｃｍ3／分の流量において水相を用い、下降様式で溶離を行い、２分毎に６−ｃｍ3の画分を集める。
【００３７】
１０−デアセチル−１９−ヒドロキシバッカチンＩＩＩは画分３９〜５２に含まれる。
【００３８】
６１番目の画分において溶離の方向を逆転し、かくして５ｃｍ3／分の流量において上昇様式で可動相として有機相を用い、２分毎に１０−ｃｍ3の画分を集める。
【００３９】
１０−デアセチルバッカチンＩＩＩを含む画分７０〜８４を減圧下で濃縮する。１５ｃｍ3のアセトニトリル中の再結晶の後、アセトニトリルで溶媒和された（１モル／モル）１．２５ｇの１０−デアセチルバッカチンＩＩＩが白色結晶の形態で得られ、内部標準法を用いたＨＰＬＣにより決定されるその純度は９８％である。
【００４０】
修正された収率は９１．２％である。