(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（１）：
【化１】
0003896577.tif 000037
（式中、Glcはグルコース残基を、ｎは０または１以上の整数を意味する。）
で示されるクエルセチン配糖体の混合物からなる組成物であって、少なくともｎ＝３のクエルセチン配糖体を含み、且つ下記（ａ）の要件を満たすクエルセチン配糖体組成物：
(ａ) 当該組成物中に含まれるｎ＝１〜３のクエルセチン配糖体の総量が５０モル％以上であって、且つｎが４以上のクエルセチン配糖体の総量が１５モル％以下である。
【請求項２】
ｎが４以上のクエルセチン配糖体の総量が１０モル％以下である、請求項１記載のクエルセチン配糖体組成物。
【請求項３】
ｎ＝１〜３のクエルセチン配糖体の総量が６０モル％以上である、請求項１記載のクエルセチン配糖体組成物。
【請求項４】
ｎ＝１〜３のクエルセチン配糖体の総量が７０モル％以上である、請求項１記載のクエルセチン配糖体組成物。
【請求項５】
さらに下記（ｂ）または（ｃ）の少なくとも１方の要件を満たす、請求項１に記載のクエルセチン配糖体組成物：
（ｂ）当該組成物中に含まれるｎが０のクエルセチン配糖体が２０モル％以下、
（ｃ）ｎ＝２および３のクエルセチン配糖体を含み、それらの総量が５０モル％以上。
【請求項６】
酵素処理イソクエルシトリンをアミラーゼ処理して調製される請求項１記載のクエルセチン配糖体組成物。
【請求項７】
アミラーゼがβ−アミラーゼである請求項６に記載するクエルセチン配糖体組成物。
【請求項８】
請求項１に記載するクエルセチン配糖体組成物を含む食品。
【請求項９】
酵素処理イソクエルシトリンを原料として、一般式（２）：
【化２】
0003896577.tif 000038
（式中、Glcはグルコース残基を、ｎは４以上の整数を意味する。）
で示されるクエルセチン配糖体の量を低減してその総量を１５モル％以下にする工程を有する、酵素処理イソクエルシトリンよりも経口吸収性の高い、請求項１に記載するクエルセチン配糖体組成物を調製する方法。
【請求項１０】
一般式（２）で示されるクエルセチン配糖体の量を低減する工程が、酵素処理イソクエルシトリンをアミラーゼ処理する操作を含むものである、請求項９記載の方法。
【請求項１１】
アミラーゼがβ−アミラーゼである請求項１０記載の方法。
【請求項１２】
酵素処理イソクエルシトリンを原料として、一般式（２）：
【化３】
0003896577.tif 000039
（式中、Glcはグルコース残基を、ｎは４以上の整数を意味する。）
で示されるクエルセチン配糖体の量を低減する工程を有する、クエルセチン配糖体組成物の経口吸収性を高める方法。
【請求項１３】
一般式（２）で示されるクエルセチン配糖体の量を低減する工程が、酵素処理イソクエルシトリンをアミラーゼ処理する操作を含むものである、請求項１２記載の方法。
【請求項１４】
アミラーゼがβ−アミラーゼである請求項１３に記載する方法。
【請求項１５】
さらに、一般式（３）：
【化４】
0003896577.tif 000040
（式中、Glcはグルコース残基を、ｎは０を意味する。）
で示されるイソクエルシトリンの量を低減する工程を有する、請求項１２に記載する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、酸化防止剤、退色防止剤、及び香味変化防止剤等として食品分野や香粧品分野等で広く使用されているイソクエルシトリンやα−グリコシルイソクエルシトリン（以下、これらを総称して「クエルセチン配糖体」という）の混合物からなる新規組成物に関する。また本発明は、かかる組成物の調製方法に関する。本発明の組成物は、経口吸収性および抗酸化作用に優れるため、生体用抗酸化剤として好適に食品に適用することができる。
【背景技術】
【０００２】
近年、活性酸素やフリーラジカルによる酸化ストレスが、生活習慣病を始めとする様々な疾病の原因になることが知られている。酸素は生きていくためのエネルギーを産生するために必須の分子である一方、過剰の酸素が非常に反応性の高い活性酸素に変化し、生体に傷害を与えていることも事実である。活性酸素としては、スーパーオキシドアニオンラジカル（・O2−）、過酸化水素（H2O2）、OHラジカル（・OH）および励起分子種である一重項酸素（１O2）等がある。生物はもともとこれらの活性酸素による酸化障害を防ぐ能力を備えており、ビタミンＥや抗酸化酵素がこれを担っている。しかしながら、加齢等の要因により酸化障害を防ぐ能力が低下したり、また過激な運動やストレス負荷等の要因により防御能力以上の活性酸素が発生した場合には、消去しきれない活性酸素が標的分子を酸化し、その結果、生体成分は障害を受け、老化が引き起こされることになる。【０００３】
したがって、活性酸素やフリーラジカルを消去する抗酸化物質を効率的に摂取し、酸化ストレスから防御することが様々な疾病の予防や治療の観点から非常に重要であると考えられている。特に、食物から酸化的障害に対する防御機能成分を積極的に摂取することで、より効率的にこの障害を抑制・消去できると考えられることから、抗酸化作用を有する様々な食品成分に注目が集まっている。【０００４】
フラボノイドは、日常摂取する食品の中に多種多様な形態で含まれており、強い抗酸化活性を持つことが知られている。しかしながら、その抗酸化活性は、生体外においては有効であるものの、経口吸収性が低いために生体内における活性酸素やフリーラジカルを消去するには十分でない。そこで、フラボノイド（ヘスペリジン、ディオスミン、ナリンジン、ネオヘスペリジン）に糖を結合させることにより吸収性を高める方法が提案されている（特許文献１参照）。また、そばなどに含まれるルチンに糖転移して得られたα−グルコシルルチンが、ルチンと比較してその吸収性が向上することが報告されている（特許文献２、非特許文献１参照）。【０００５】
ルチンのアグリコンであるクエルセチン（Quercetin：3,3’,4’,5,7-pentahydroxyflavone）は、強力な抗酸化活性（非特許文献２参照）の他、血小板の凝集抑制および接着抑制作用、血管拡張作用、抗ガン作用等、多彩な生理機能をもつことが知られている。このクエルセチンについても、タマネギに多く含まれるクエルセチン配糖体（Quercetin-4’-β-D-glucoside、Quercetin-3,4’-β-D-glucoside）のほうが吸収性に優れていることが報告されている（非特許文献３参照）。また同様に、クエルセチンの３位にグルコースがβ結合したイソクエルシトリン（Quercetin-3-β-D-glucoside）は、クエルセチンやルチンよりも吸収性が高いことが報告されている（非特許文献４参照）。【０００６】
このようにイソクエルシトリンは、クエルセチンやルチンより吸収性に優れた成分であるものの、水に難溶であるため食品や飲料等の水系の組成物に対して利用が制限されるという問題を有している。そこで、この問題を解消する方法として、糖転移酵素を用いて、基質のグルコース残基をイソクエルシトリンのグルコース残基部位に転移させてα−グリコシルイソクエルシトリンを調製する方法が提案（特許文献３参照）されている。斯くして調製されるα−グリコシルイソクエルシトリンは、イソクエルシトリンの作用はそのままに、水への溶解性が改善された水易溶性物質であり、三栄源エフ・エフ・アイ株式会社から食品用の酸化防止剤（食品添加物）として『サンメリンAO-1007』もしくは『サンメリンパウダーC-10』の名称で上市されている。
【特許文献１】特開２０００−７８９５６号公報
【特許文献２】特開２００４−５９５２２号公報
【特許文献３】特開平１−２１３２９３号公報
【非特許文献１】Shimoi K. et al., J Agric Food Chem., 51, 2785-2789, 2003
【非特許文献２】Middlton EJ. et al., Pharmacol Rev., 52, 673-751, 2000
【非特許文献３】Hollman PC et al., Arch Toxicol Suppl., 20, 237-248, 1998
【非特許文献４】Morand C et al., Free Rad Res., 33, 667-676, 2000
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
上記のとおり、配糖体化により経口吸収性が向上することは多くのフラボノイドで確かめられているものの、いまだその効果は十分とはいえない。【０００８】
そこで本発明は、フラボノイドの一種であるイソクエルシトリンやα−グリコシルイソクエルシトリンといったクエルセチン配糖体について、その経口吸収性をさらに高めることを目的とする。具体的には、本発明は、経口吸収性が改善されてなるクエルセチン配糖体の混合物からなる新規組成物を提供することを目的とする。さらに本発明は、かかる新規組成物の調製方法を提供することを目的とする。本発明は、クエルセチン配糖体組成物について、従来の酵素処理イソクエルシトリンよりも経口吸収性を高める方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意検討したところ、下記式【００１０】
【化１】
0003896577.tif 000002
【００１１】
（式中、Glcはグルコース残基を、ｎは０または１以上の整数を意味する。）
で示されるクエルセチン配糖体（Ｇｎ）のグルコース残基のα位に結合する糖（グルコース）の数（ｎ）によって、クエルセチン配糖体（Ｇｎ）の経口吸収性に差が生じることを見出した。具体的には、上記グルコース数（ｎ）が０のイソクエルシトリン（Ｇ０）及び上記グルコース数（ｎ）が１〜７のα−グリコシルイソクエルシトリン（Ｇ１，Ｇ２，・・・，Ｇ７）の混合物から、Ｇ０、Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３またはＧ４を豊富に含む画分を分取して経口吸収性を調べた結果、驚くべきことに、Ｇ３を豊富に含む画分において経口吸収性が最も高くなること、詳細には、グルコース数（ｎ）が１，２および３と増すにつれて、経口吸収性が高くなり、グルコース数（ｎ）が４になると経口吸収性が低下することを見出した。【００１２】
本発明者らは、更なる検討を続けたところ、酵素処理イソクエルセチンを原料として、グルコース数（ｎ）が４以上のα−グリコシルイソクエルシトリン（Ｇ（4≦））の量を低減する処理を行うことにより経口吸収性が向上すること、さらにグルコース数（ｎ）が０のイソクエルシトリン（Ｇ０）の量を低減する処理を行うことでさらに経口吸収性が向上することを見出した。そして本発明者らは、上記グルコース数（ｎ）が１〜３の範囲にあるα−グリコシルイソクエルシトリン（Ｇ１−３）を多く含んでおり、上記グルコース数（ｎ）が４以上のα−グリコシルイソクエルシトリン（Ｇ（4≦））やｎが０であるイソクエルシトリン（Ｇ０）の含有量が少ない組成物（クエルセチン配糖体の混合物）が、従来公知の酵素処理イソクエルセチンよりも高い経口吸収性を有しており、その結果、生体内で優れた抗酸化作用を発揮することを確認した。【００１３】
さらに本発明者らは、斯かる組成物は酵素処理イソクエルシトリン（イソクエルシトリン配糖体）をアミラーゼ、特にβ−アミラーゼで処理することによって比較的簡単に且つ安定的に調製できることを見出し、経口吸収性に優れる上記のクエルセチン配糖体組成物を工業的に大量製造することが可能であることを確認した。本発明はこれらの知見に基づいて完成したものである。【００１４】
すなわち、本発明は下記の態様を有する：
（１）クエルセチン配糖体組成物
（1-1）．一般式（１）：【００１５】
【化２】
0003896577.tif 000003
【００１６】
（式中、Glcはグルコース残基を、ｎは０または１以上の整数を意味する。）
で示されるクエルセチン配糖体の混合物からなる組成物であって、少なくともｎ＝３のクエルセチン配糖体を含み、且つ下記（ａ）の要件を満たすクエルセチン配糖体組成物：
(ａ) 当該組成物中に含まれるｎ＝１〜３のクエルセチン配糖体の総量が５０モル％以上であって、且つｎが４以上のクエルセチン配糖体の総量が１５モル％以下である。
（1-2）．ｎが４以上のクエルセチン配糖体の総量が１０モル％以下である、（1-1）記載のクエルセチン配糖体組成物。
（1-3）．ｎ＝１〜３のクエルセチン配糖体の総量が６０モル％以上である、（1-1）または（1-2）記載のクエルセチン配糖体組成物。
（1-4）．ｎ＝１〜３のクエルセチン配糖体の総量が７０モル％以上である、（1-1）または（1-2）記載のクエルセチン配糖体組成物。
（1-5）．さらに下記（ｂ）および（ｃ）の少なくとも１方の要件を満たす、（1-1）乃至（1-4）のいずれかに記載のクエルセチン配糖体組成物：
（ｂ）当該組成物中に含まれるｎが０のクエルセチン配糖体が２０モル％以下、
（ｃ）ｎ＝２および３のクエルセチン配糖体を含み、それらの総量が５０モル％以上。
（1-6）．さらに下記（ｄ）の要件を満たす（1-1）乃至（1-5）のいずれかに記載のクエルセチン配糖体組成物：
（ｄ）当該組成物中に含まれるｎ＝１〜３のクエルセチン配糖体の総量が６０モル％以上であって、且つｎが０のクエルセチン配糖体が２０モル％以下。
（1-7）．さらに下記（ｅ）の要件を満たす（1-1）乃至（1-6）のいずれかに記載のクエルセチン配糖体組成物：
（ｅ）当該組成物中に含まれるｎ＝１〜３のクエルセチン配糖体の総量が７０モル％以上であって、且つｎが４以上のクエルセチン配糖体の総量が１０モル％以下、およびｎが０のクエルセチン配糖体が２０モル％以下。
（1-8）．さらに下記（ｆ）の要件を満たす（1-1）乃至（1-7）のいずれかに記載のクエルセチン配糖体組成物：
（ｆ）ｎ＝１、２および３のクエルセチン配糖体を含む。
（1-9）．酵素処理イソクエルシトリンをアミラーゼで処理して調製される（1-1）乃至（1-8）のいずれかに記載のクエルセチン配糖体組成物。
（1-10）．酵素処理イソクエルシトリンをアミラーゼ処理した後にイソクエルシトリンを除去するか、または酵素処理イソクエルシトリンからイソクエルシトリンを除去した後にアミラーゼ処理することによって調製される、（1-1）乃至（1-8）のいずれかに記載のクエルセチン配糖体組成物。
（1-11）．アミラーゼがβ−アミラーゼである（1-9）または（1-10）に記載するクエルセチン配糖体組成物。【００１７】
（２）食品
（2-1）．（1-1）乃至（1-11）のいずれかに記載するクエルセチン配糖体組成物を含む食品。【００１８】
（３）経口吸収性の高いクエルセチン配糖体組成物を調製する方法
（3-1）．酵素処理イソクエルシトリンを原料として、一般式（２）：【００１９】
【化３】
0003896577.tif 000004
【００２０】
（式中、Glcはグルコース残基を、ｎは４以上の整数を意味する。）
で示されるクエルセチン配糖体の量を低減してその総量を１５モル％以下にする工程を有する、酵素処理イソクエルシトリンよりも経口吸収性の高い、上記（1-1）に記載するクエルセチン配糖体組成物を調製する方法。
（3-2）．一般式（２）で示されるクエルセチン配糖体の量を低減する工程が、酵素処理イソクエルシトリンをアミラーゼで処理する操作を含むものである、（3-1）記載の方法。
（3-3）．アミラーゼがβ−アミラーゼである（3-2）記載の方法。
（3-4）．さらに、一般式（３）：【００２１】
【化４】
0003896577.tif 000005
【００２２】
（式中、Glcはグルコース残基を、ｎは０を意味する。）
で示されるイソクエルシトリンの量を低減する工程を有する、（3-1）乃至（3-3）のいずれかに記載する方法。
（3-5）．酵素処理イソクエルシトリンをアミラーゼで処理する工程の前後に、さらにイソクエルシトリンを除去する工程を有する、（3-4）に記載するクエルセチン配糖体組成物の調製方法。【００２３】
（４）経口吸収性を高める方法
（4-1）．酵素処理イソクエルシトリンを原料として、一般式（２）：【００２４】
【化５】
0003896577.tif 000006
【００２５】
（式中、Glcはグルコース残基を、ｎは４以上の整数を意味する。）
で示されるクエルセチン配糖体の量を低減する工程を有する、クエルセチン配糖体組成物の経口吸収性を高める方法。
（4-2）．一般式（２）で示されるクエルセチン配糖体の量を低減する工程が、酵素処理イソクエルシトリンをアミラーゼで処理する操作を含むものである、（4-1）記載の方法。
（4-3）．アミラーゼがβ−アミラーゼである（4-2）記載の方法。
（4-4）．さらに、一般式（３）：【００２６】
【化６】
0003896577.tif 000007
【００２７】
（式中、Glcはグルコース残基を、ｎは０を意味する。）
で示されるイソクエルシトリンの量を低減する工程を有する、（4-1）乃至（4-3）のいずれかに記載する方法。
（4-5）．酵素処理イソクエルシトリンをアミラーゼで処理する工程の前後に、イソクエルシトリンを除去する工程を有する、（4-4）に記載する方法。
（4-6）．酵素処理イソクエルシトリンをアミラーゼで処理して、一般式（１）【００２８】
【化７】
0003896577.tif 000008
【００２９】
（式中、Glcはグルコース残基を、ｎは０または１以上の整数を意味する。）
で示されるクエルセチン配糖体の混合物からなる組成物であって、下記（i）および(ii)の要件を満たす組成物を調製することを特徴とする、クエルセチン配糖体組成物の経口吸収性を高める方法：
(i) 少なくともｎ＝３のクエルセチン配糖体を含む、
(ii) 当該組成物中に含まれるｎ＝１〜３のクエルセチン配糖体の総量が５０モル％以上であって、且つｎが４以上のクエルセチン配糖体の総量が１５モル％以下である。
（4-7）．さらに下記（iii）の要件を満たすクエルセチン配糖体組成物を調製することを特徴とする（4-6）に記載する方法：
（iii）当該組成物中に含まれるｎ＝１〜３のクエルセチン配糖体の総量が６０モル％以上であって、且つｎが０のクエルセチン配糖体が２０モル％以下である。
（4-8）．さらに下記（iv）の要件を満たすクエルセチン配糖体組成物を調製する工程を有する（4-6）または（4-7）に記載する方法：
（iv）当該組成物中に含まれるｎ＝１〜３のクエルセチン配糖体の総量が７０モル％以上であって、且つｎが４以上のクエルセチン配糖体の総量が１０モル％以下で、ｎが０のクエルセチン配糖体が２０モル％以下である。
（4-9）．さらに下記（v）の要件を満たすクエルセチン配糖体組成物を調製する工程を有する（4-6）乃至（4-8）のいずれかに記載する方法：
(v)当該組成物中にｎ＝２および３のクエルセチン配糖体を含み、それらの総量が５０モル％以上である。
【発明の効果】
【００３０】
本発明のクエルセチン配糖体組成物は、イソクエルシトリンや従来の酵素処理イソクエルシトリンに比して、経口投与による体内吸収性が優れており、その結果、生体内において高い抗酸化作用を発揮することができる。このため、本発明のクエルセチン配糖体組成物並びに当該組成物を含有する食品によれば、身体の各部位で活性酸素を消去し、細胞障害や老化を予防することができ、活性酸素によって引き起こされる様々な疾病を予防・治療および改善することが可能と考えられる。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１】図１は、酵素処理イソクエルシトリンをβ−アミラーゼ処理して得られた各種クエルシトリン配糖体組成物の組成〔ＩＱＣ、各ＩＧＣ配糖体（IQC-G1、IQC-G2、IQC-G3、IQC-G4、 IQC-G5、IQC-G6）のモル比（％）〕を示す（調製例６）。
【図２】図２は、調製例１で得られたＧ０画分、Ｇ１画分、Ｇ２画分、Ｇ３画分およびＧ４画分の経口吸収性を示す結果である（実験例１）。具体的には、これらの各画分を経口投与したラット血漿中のクエルセチン・グルクロン酸抱合体濃度とクエルセチン濃度の各曲線下面積から算出されたＡＵＣ（Area under the curve）(0-3hrs)(μg/ml・hr)を示す。
【図３】図３は、酵素処理イソクエルシトリン(IQC-G(mix))、イソクエルシトリンＧ（1-3）画分〔IQC-G(1-3)画分〕、イソクエルシトリンＧ（3-6）画分〔IQC-G(3-6)画分〕、およびイソクエルシトリン（IQC）の経口吸収性を示す結果である（実験例２）。図ａおよびｂは、これらの各成分を経口投与したラット血漿中のクエルセチン・グルクロン酸抱合体濃度およびクエルセチン濃度の経時的変化をそれぞれ示す。
【図４】図４は、図３ａおよびｂに示す血漿クエルセチン・グルクロン酸抱合体濃度および血漿クエルセチン濃度の各曲線下面積から算出された、各IQC-G(mix)、IQC-G(1-3)画分、IQC-G(3-6)画分およびＩＱＣのＡＵＣ（Area under the curve）(0-3hrs)(μg/ml・hr)を示す。
【図５】図５は、調製例３で得られた酵素処理イソクエルシトリン(IQC-G(mix))およびイソクエルシトリンＧ（4-6）画分〔IQC-G(4-6)画分〕の経口吸収性を示す結果である（実験例３）。具体的には、これらの各画分を経口投与したラット血漿中のクエルセチン・グルクロン酸抱合体濃度とクエルセチン濃度の各曲線下面積から算出されたＡＵＣ（Area under the curve）(0-3hrs)(μg/ml・hr)を示す。
【図６】図６は、図３および４に示す各IQC-G(mix)、IQC-G(1-3)画分、IQC-G(3-6)画分およびIQC、並びに対照としてカルボキシメチルセルロース（CMC）を経口投与したラット血漿の抗酸化能を、血漿のＦＲＡＰ（Ferrous Reducing Activity of Plasma）活性から評価した結果を示す（実験例４）。
【図７】図７は、調製例４で得られた試料１（IQC-G(mix)）、試料３〜５の経口吸収性を示す結果である（実験例５）。具体的には、これらの各画分を経口投与したラット血漿中のクエルセチン・グルクロン酸抱合体濃度とクエルセチン濃度の各曲線下面積から算出されたＡＵＣ（Area under the curve）(0-3hrs)(μg/ml・hr)を示す。
【図８】図８は、調製例５で得られた試料６〜９の経口吸収性を示す結果である（実験例６）。具体的には、これらの各画分を経口投与したラット血漿中のクエルセチン・グルクロン酸抱合体濃度とクエルセチン濃度の各曲線下面積から算出されたＡＵＣ（Area under the curve）(0-3hrs)(μg/ml・hr)を示す。
【図９】図９は、調製例４で得られた試料１（IQC-G(mix)）と試料２の経口吸収性を示す結果である（実験例７）。具体的には、これらの各画分を経口投与したラット血漿中のクエルセチン・グルクロン酸抱合体濃度とクエルセチン濃度の各曲線下面積から算出されたＡＵＣ（Area under the curve）(0-3hrs)(μg/ml・hr)を示す。
【図１０】図１０は、調製例７で得られた試料Ａ（IQC-G(mix)）および試料Ｂ〜Ｄの経口吸収性を示す結果である（実験例８）。具体的には、これらの各画分を経口投与したラット血漿中のクエルセチン・グルクロン酸抱合体濃度とクエルセチン濃度の各曲線下面積から算出されたＡＵＣ（Area under the curve）(0-3hrs)(μg/ml・hr)を示す。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３２】
Ｉ．用語の説明
(I-1) クエルセチン配糖体、およびクエルセチン配糖体組成物
本発明においてクエルセチン配糖体とは、下式（４）で示されるクエルセチンの３位にグルコースがβ結合したイソクエルシトリン (quercetin 3-O-β-D-glucopyranoside)（以下、単に「ＩＱＣ」ともいう）、および当該ＩＱＣのグルコース残基に、さらにグルコースがα−１,４結合で１〜１５程度付加した個々のα−グリコシルイソクエルシトリンを意味する。【００３３】
【化８】
0003896577.tif 000009
【００３４】
上記ＩＱＣおよびα−グリコシルイソクエルシトリンは、いずれもクエルセチンの配糖体であるから、本明細書ではこれらを総称して、また両者を区別することなく「クエルセチン配糖体」という。またα−グリコシルイソクエルシトリンはＩＱＣの配糖体に相当するから、本明細書ではこれを、ＩＱＣと区別する意味で、「ＩＱＣ配糖体」と称する場合もある。【００３５】
本発明が対象とするクエルセチン配糖体組成物は、これらのＩＱＣと各種ＩＱＣ配糖体を、任意の割合で組み合わせて含有する混合物である。【００３６】
本発明のクエルセチン配糖体組成物は、具体的には下式（１）で示される、クエルセチン配糖体の混合物であって、少なくともｎ＝３のα−グリコシルイソクエルシトリンを含むものである。【００３７】
【化９】
0003896577.tif 000010
【００３８】
（式中、Glcはグルコース残基を、ｎは０または１以上の整数を示す）
本明細書では、説明の便宜上、上記式（１）中、ｎ＝０で示されるＩＱＣを「Ｇ０」または「ＩＱＣ−Ｇ０」、ｎ＝１で示されるＩＱＣ配糖体（ＩＱＣにグルコースがα−１,４結合で１つ結合した配糖体）を「Ｇ１」または「ＩＱＣ−Ｇ１」、ｎ＝２で示されるＩＱＣ配糖体（ＩＱＣにグルコースがα−１,４結合で２つ結合した配糖体）を「Ｇ２」または「ＩＱＣ−Ｇ２」、ｎ＝３で示されるＩＱＣ配糖体（ＩＱＣにグルコースがα−１,４結合で３つ結合した配糖体）を「Ｇ３」または「ＩＱＣ−Ｇ３」、ｎ＝４で示されるＩＱＣ配糖体（ＩＱＣにグルコースがα−１,４結合で４つ結合した配糖体）を「Ｇ４」または「ＩＱＣ−Ｇ４」、ｎ＝５で示されるＩＱＣ配糖体（ＩＱＣにグルコースがα−１,４結合で５つ結合した配糖体）を「Ｇ５」または「ＩＱＣ−Ｇ５」、ｎ＝６で示されるＩＱＣ配糖体（ＩＱＣにグルコースがα−１,４結合で６つ結合した配糖体）を「Ｇ６」または「ＩＱＣ−Ｇ６」、・・・・およびｎがｍで示されるＩＱＣ配糖体（ＩＱＣにグルコースがα−１,４結合でｍ個結合した配糖体）を「Ｇｍ」または「ＩＱＣ−Ｇｍ」（ｍは７以上の整数を意味する）と記載する場合がある。【００３９】
本明細書において、ＩＱＣ、ＩＱＣ配糖体、クエルセチン配糖体、Ｇ０、Ｇ１（または「ＩＱＣ−Ｇ１」）、Ｇ２（または「ＩＱＣ−Ｇ２」）、Ｇ３（または「ＩＱＣ−Ｇ３」）、Ｇ４（または「ＩＱＣ−Ｇ４」）、・・・Ｇｍ（または「ＩＱＣ−Ｇｍ」）という用語は、単一の化合物を意味するか、またはこれらの化合物を総称する意味で用いられる。一方、個々のクエルセチン配糖体（Ｇ０、Ｇ１、Ｇ２、・・・Ｇｍ）の任意の組合せからなる混合物を意味する場合は、「クエルセチン配糖体組成物」または「クエルセチン配糖体混合物」と称する。【００４０】
また本明細書において、「イソクエルシトリンＧ（1-3）の総量」または「ＩＱＣ−Ｇ（1-3）の総量」とは、対象とするクエルセチン配糖体組成物中に含まれているｎが１のクエルセチン配糖体（Ｇ１）、ｎが２のクエルセチン配糖体（Ｇ２）、およびｎが３のクエルセチン配糖体（Ｇ３）の総量を意味する。また本明細書において、「イソクエルシトリンＧ（4≦）の総量」または「ＩＱＣ−Ｇ（4≦）の総量」とは、対象とするクエルセチン配糖体組成物中に含まれるｎが４以上のクエルセチン配糖体の総量を意味する。【００４１】
(I-2) 酵素処理イソクエルシトリン
本発明で「酵素処理イソクエルシトリン」とは、慣用の方法に従って、ＩＱＣに糖供与体（グルコース源）の存在下、グルコース残基転移酵素を作用させて得られるもので、下式で示す、ＩＱＣと種々の程度にグルコシル化されたα−グリコシルイソクエルシトリンとの混合物を意味する（例えば、FFIジャーナルVol.209、No.7、2004、ｐ.622-628、食品衛生学雑誌, Vol.41, No.1, pp.54-60など参照のこと）。【００４２】
【化１０】
0003896577.tif 000011
【００４３】
（式中、Glcはグルコース残基を、ｎは０または１以上の整数を示す）
具体的には「酵素処理イソクエルシトリン」は、上記式においてα−１,４結合のグルコース数（ｎ）が０のＩＱＣと、α−１,４結合のグルコース数（ｎ）が１以上、通常１〜１５、好ましくは１〜１０の範囲にあるα−グリコシルイソクエルシトリンとの混合物である。【００４４】
ここでＩＱＣの配糖化処理に使用されるグルコース残基転移酵素としては、例えばα−アミラーゼ（E.C.3.2.1.1）やα−グルコシダーゼ（E.C.3.2.1.20）等のグルコシダーゼ；またはシクロデキストリングルカノトランスフェラーゼ（E.C.2.4.1.19）（以下ＣＧＴａｓｅと略記する）等のトランスグルコシダーゼを挙げることができる。【００４５】
これらの糖転移酵素はいずれも商業的に入手できる酵素である。かかる市販の酵素剤としては、例えばコンチザイム（商品名）（天野エンザイム（株）製）を例示することができる。なお、糖転移酵素の使用量は、ＣＧＴａｓｅ〔酵素比活性約１００単位（溶性デンプンからβ−シクロデキストリンを１分間あたり１ｍｇ生成する酵素量を１単位とする）〕を例にすると、イソクエルシトリン１重量部に対し、糖転移酵素を０．００１〜２０重量部の範囲を挙げることができる。好ましくは、０．００５〜１０重量部程度、より好ましくは０．０１〜５重量部程度である。【００４６】
配糖化の際に用いられる糖供与体（グルコース源）としては、そのグルコース残基の１分子以上がＩＱＣの１分子に転移されうるものであればよい。例えばグルコース、マルトース、アミロース、アミロペクチン、でん粉や、でん粉液化物、でん粉糖化物、及びシクロデキストリンなどを挙げることができる。かかるグルコース源の使用量は、反応系に存在するイソクエルシトリン１重量部に対して、通常０．１〜２０重量部の割合、好ましくは０．５〜１５重量部、より好ましくは１〜１０重量部の割合を挙げることができる。【００４７】
「酵素処理イソクエルシトリン」は使用する酵素の種類によって異なってくるが、例えば、８０℃以下、好ましくは約２０〜８０℃、より好ましくは約４０〜７５℃、また通常ｐＨ３〜１１程度、好ましくはｐＨ４〜８の条件で、上記糖供与体（グルコース源）の存在下、ＩＱＣにグルコース残基転移酵素を作用させることによって調製することができ、通常、下記の組成を有している。【００４８】
【表１】
0003896577.tif 000012
【００４９】
上記反応は、静置または攪拌若しくは振盪しながら行うことができる。反応中の酸化を防止するために、反応系のヘッドスペースを窒素等の不活性ガスで置換してもよく、またアスコルビン酸等の酸化防止剤を反応系に添加することも可能である。【００５０】
酵素処理イソクエルシトリンは、上記のようにイソクエルシトリンを原料とする他、ルチンから出発して調製することも可能である。この場合、ルチンにα−１，６−ラムノシダーゼ（E.C.3.2.1.40）を作用させてイソクエルシトリンに変えてから、上記方法に従って酵素処理イソクエルシトリンを調製することができる。α−１，６−ラムノシダーゼは、その活性を有するものであればよく、市販品としてはヘスペリジナーゼやナリンジナーゼ（何れも、田辺製薬（株）製）、及びセルラーゼＡ「アマノ」３（天野エンザイム（株）製）を例示することができる。【００５１】
ＩＩ．クエルセチン配糖体組成物
本発明が対象とするクエルセチン配糖体組成物は、下式（１）で示される、クエルセチン配糖体の混合物であって、少なくともｎ＝３のα−グリコシルイソクエルシトリンを含むものである。【００５２】
【化１１】
0003896577.tif 000013
【００５３】
（式中、Glcはグルコース残基を、ｎは０または１以上の整数を示す）
より詳細には、本発明のクエルセチン配糖体組成物は、式（１）中、ｎ＝３のα−グリコシルイソクエルシトリン（Ｇ３）を含み、下記（ａ）の要件を満たすものである：
(ａ) 当該組成物中に含まれるｎ＝１〜３のクエルセチン配糖体（ＩＱＣ−Ｇ（1-3））の総量が５０モル％以上であって、且つｎが４以上のクエルセチン配糖体（ＩＱＣ−Ｇ（4≦））の総量が１５モル％以下である。【００５４】
後述する実験例１〜３、５、７および８に示すように、ＩＱＣにα−１,４結合したグルコース数（ｎ）が１〜３であるα−グリコシルイソクエルシトリン（Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３）を多く含む組成物は、公知の酵素処理イソクエルシトリンやグルコース数（ｎ）が４〜６のα−グリコシルイソクエルシトリン（Ｇ４、Ｇ５、Ｇ６）を多く含む組成物やグルコース数（ｎ）が３〜６のα−グリコシルイソクエルシトリン（Ｇ３、Ｇ４、Ｇ５、Ｇ６）を多く含む組成物に比べて、経口投与による体内吸収性（血中移行性）が高く、その結果、経口投与した場合に体内で優れた抗酸化能を発揮する。グルコース数（ｎ）が１〜３であるα−グリコシルイソクエルシトリンの中でも、特にグルコース数（ｎ）が３のα−グリコシルイソクエルシトリン（Ｇ３）、次いでグルコース数（ｎ）が２のα−グリコシルイソクエルシトリン（Ｇ２）は、高い体内吸収性（血中移行性）を有している。一方、グルコース数（ｎ）が４のα−グリコシルイソクエルシトリン（Ｇ４）になると、グルコース数（ｎ）が３のα−グリコシルイソクエルシトリン（Ｇ３）と比べて体内吸収性（血中移行性）が低下する傾向にある（実験例１、図２参照）。【００５５】
従って、本発明のクエルセチン配糖体組成物は、上記するように、Ｇ３を含み、ＩＱＣ−Ｇ（4≦）の総量が１５モル％以下の組成物であって、しかもＩＱＣ−Ｇ（1-3）を、総量として、全体の５０モル％以上、好ましくは５５モル％以上、より好ましくは６０モル％以上、さらに好ましくは６５モル％以上、またさらに好ましくは７０モル％以上、よりさらに好ましくは７５モル％以上、特に好ましくは８０モル％以上、更に特に好ましくは８５モル％以上の割合で含むものである。【００５６】
上記のとおり、クエルセチン配糖体組成物は、ｎが４以上のα−グリコシルイソクエルシトリン〔ＩＱＣ−Ｇ（4≦）〕を高い割合で含有すると体内吸収性（血中移行性）が低下する傾向にある。このため、本発明のクエルセチン配糖体組成物中のＩＱＣ−Ｇ（4≦）の含有割合（総量）は１５モル％よりもさらに低い方が好ましい。例えばＩＱＣ−Ｇ（4≦）の含有割合として、１０モル％以下、好ましくは６モル％以下を例示することができる。【００５７】
本発明のクエルセチン配糖体組成物は、ｎが０のイソクエルシトリン（ＩＱＣ）（Ｇ０）を含有するものであってもよい。但し、ＩＱＣ（Ｇ０）の含有割合は低いほうが、クエルセチン配糖体組成物の全体に占めるｎ＝１〜３のα−グリコシルイソクエルシトリン（ＩＱＣ-Ｇ(1-3)）の総量を一層高めることができることから、好ましい。本発明のクエルセチン配糖体組成物中に含まれるＩＱＣ（Ｇ０）の割合としては、例えば４５モル％以下、好ましくは３０モル％以下、より好ましくは２０モル％以下、さらに好ましくは１０モル％以下を例示することができる。【００５８】
本発明のクエルセチン配糖体組成物は、好ましくは、上記（ａ）の要件に加えて、下記（ｂ）の要件を満たすものである：
(ｂ) 当該組成物中に含まれるｎが０のクエルセチン配糖体の量が２０モル％以下。【００５９】
また本発明のクエルセチン配糖体組成物の他の好適な態様として、上記（ａ）の要件に加えて、または上記（ａ）と（ｂ）の要件に加えて、下記の（ｃ）の要件を満たすものを挙げることができる：
（ｃ）ｎ＝２と３のα−グリコシルイソクエルシトリン（Ｇ２とＧ３）を含み、これら（ＩＱＣ−Ｇ（2-3））の総量が全体の５０モル％以上。【００６０】
ＩＱＣ−Ｇ（2-3）の総量としてより好ましくは、５５モル％以上、６０モル％以上、６５モル％以上、７０モル％以上、７５モル％以上を挙げることができる。【００６１】
さらに本発明のクエルセチン配糖体組成物の他の好適な態様として、Ｇ３を含み、ＩＱＣ−Ｇ（4≦）の総量が１５モル％以下であって、下記（ｄ）の要件を満たすものを挙げることができる：
(ｄ) 当該組成物中に含まれるｎ＝１〜３のクエルセチン配糖体（ＩＱＣ−Ｇ（1-3））の総量が６０モル％以上であって、且つｎが０のクエルセチン配糖体（ＩＱＣまたはＧ０）が２０モル％以下。【００６２】
上記要件（ｄ）を満たすクエルセチン配糖体組成物として、より好ましくはｎ＝１〜３のクエルセチン配糖体（ＩＱＣ−Ｇ（1-3））の総量が７０モル％以上、好ましくは８０モル％以上、より好ましくは８５モル％である。また好ましくはｎが４以上のクエルセチン配糖体の総量が１０モル％以下、好ましくは６モル％以下である。さらに好ましくはｎが０のクエルセチン配糖体（ＩＱＣまたはＧ０）が１０モル％以下である。【００６３】
本発明のクエルセチン配糖体組成物のまた別の態様として、式（１）中、ｎ＝３のα−グリコシルイソクエルシトリン（Ｇ３）を含み、下記（ｅ）の要件を満たすものを挙げることができる：
(ｅ) 当該組成物中に含まれるｎ＝１〜３のクエルセチン配糖体（ＩＱＣ−Ｇ（1-3））の総量が７０モル％以上であって、且つｎが４以上のクエルセチン配糖体（ＩＱＣ−Ｇ（4≦））の総量が１０モル％以下、およびｎが０のクエルセチン配糖体（ＩＱＣまたはＧ０）が２０モル％以下。【００６４】
上記要件（ｅ）を満たすクエルセチン配糖体組成物として、より好ましくはＩＱＣ−Ｇ（1-3)の総量が７５モル％以上、好ましくは８０モル％以上、より好ましくは８５モル％である。また好ましくはＩＱＣ−Ｇ（4≦）の総量が６モル％以下である。さらに好ましくはｎが０のクエルセチン配糖体（Ｇ０）が１０モル％以下のものを挙げることができる。
III．クエルセチン配糖体組成物の調製方法
経口吸収性の高い本発明のクエルセチン配糖体組成物は、酵素処理イソクエルシトリンを原料として、一般式（２）：【００６５】
【化１２】
0003896577.tif 000014
【００６６】
（式中、Glcはグルコース残基を、ｎは４以上の整数を意味する。）
で示されるクエルセチン配糖体（ＩＱＣ−Ｇ（4≦））の量を低減してその総量を２０モル％以下にする工程を経て調製することができる。【００６７】
ここで、ＩＱＣ−Ｇ（4≦）の量を低減する方法は問わず、例えば酵素処理イソクエルシトリンからＩＱＣ−Ｇ（4≦）を分画除去する方法、酵素処理イソクエルシトリン中に含まれるＩＱＣ−Ｇ（4≦）を分解する方法などのいずれの方法を用いることができる。好ましくは、酵素処理イソクエルシトリンをアミラーゼで処理する方法を挙げることができる。【００６８】
ここで使用されるアミラーゼは、アミラーゼ活性を有する酵素であればよく、その起原を特に制限するものではない。例えば、α-アミラーゼ（E.C.3.2.1.1）、β-アミラーゼ（E.C.3.2.1.2）、α-グルコシダーゼ（E.C.3.2.1.20）、グルコアミラーゼ（E.C.3.2.1.3）、マルトトリオヒドロラーゼなどのマルトオリゴ糖生成酵素を挙げることができる。【００６９】
好適にはβ−アミラーゼを挙げることができる。アミラーゼとしてβ−アミラーゼを用いた場合、選択的にα−１,４結合のグルコース残基数（ｎ）が４以上のα−グリコシルイソクエルシトリン（ＩＱＣ−Ｇ（4≦））の含有割合を低減させて、組成物中に含まれるｎ＝１〜３のα−グリコシルイソクエルシトリン（ＩＱＣ−Ｇ（1-3））の含有量を増加させることができる。従って、Ｇ３を含み、下記（ａ）の要件を満たす発明のクエルセチン配糖体組成物を簡単に調製することができる。
(ａ) 当該組成物中に含まれるＩＱＣ−Ｇ（1-3）の総量が５０モル％以上であって、且つＩＱＣ−Ｇ（4≦）の総量が１５モル％以下である。【００７０】
上記の本発明で好適に使用されるβ−アミラーゼとしては、大豆、大麦、小麦、大根，甘藷，Aspergillus oryzae，Bacillus cereus，Bacillus polymyxa，Bacillus megaterium等に含まれていることが知られており、いずれもこの発明に自由に使用することができる。β−アミラーゼは、商業的に入手できる酵素であり、例えば大豆由来のβ−アミラーゼとしては「β−アミラーゼ＃１５００」（ナガセケムテックス（株）製）、「ビオザイムＭ５」（天野エンザイム（株）製）；大麦由来のβ−アミラーゼとしては、「β−アミラーゼＬ」（ナガセケムテック（株）製）、「ビオザイム／ＭＬ」（天野エンザイム（株）製）、及び「マルトチーム２０６」（ナガセケムテックス（株）製）：胚芽由来のβ−アミラーゼとしては、「ビオザイムＭ」（天野エンザイム（株）製）：Aspergillus oryzae由来のβ−アミラーゼとしては、「ユニアーゼＬ」（ヤクルト薬品工業（株）製）を例示することができる。【００７１】
β−アミラーゼは、必ずしも精製されている必要はなく、本発明の目的が達成できる限り、粗精製物であってもよい。例えば、酵素処理イソクエルシトリンとβ−アミラーゼを含む画分（例えば、大豆や大麦などの抽出物）を混合して反応させてもよい。また、β−アミラーゼを固定化して、これをバッチ式若しくは連続式に、酵素処理イソクエルシトリンと反応させてもよい。【００７２】
β−アミラーゼの反応条件は、酵素処理イソクエルシトリンにβ−アミラーゼが作用する条件であれば特に制限されない。好ましくはＧ３を含み、ＩＱＣ−Ｇ（4≦）の総量が１５モル％以下であって、ＩＱＣ−Ｇ（1-3）を、総量として、全体の５０モル％以上、好ましくは５５モル％以上、より好ましくは６０モル％以上、さらに好ましくは６５モル％以上、またさらに好ましくは７０モル％以上、よりさらに好ましくは７５モル％以上、特に好ましくは８０モル％以上、更に特に好ましくは８５モル％以上の割合で含むクエルセチン配糖体組成物を生成する条件を挙げることができる。また、ＩＱＣ−Ｇ（4≦）の含有割合（総量）が１５モル％よりも低く、例えば１０モル％以下、好ましくは６モル％以下の割合で含むクエルセチン配糖体組成物を生成する条件を挙げることができる。【００７３】
β−アミラーゼの反応条件として、例えば、４０００Ｕ／ｇの酵素を使用した場合のβ−アミラーゼの使用量は、酵素処理イソクエルシトリン１重量部に対し、０．０００１〜０．５重量部の範囲から適宜選択して使用することができる。好ましくは０．０００５〜０．４重量部程度、より好ましくは０．００１〜０．３重量部程度である。なお、反応系中の酵素処理イソクエルシトリンの量は、特に制限されないが、反応を効率よく行う目的からは、反応系１００重量％中に、通常０．１〜２０重量％、好ましくは０．５〜１０重量％、より好ましくは１〜１０重量％の割合で含まれていることが望ましい。【００７４】
反応温度としては約８０℃以下の範囲を挙げることができ、この範囲で適宜選択して用いることができる。この範囲内において工業的に有利なのは約２０〜８０℃、好ましくは約４０〜７５℃である。またｐＨ条件は通常ｐＨ３〜１１程度以下、好ましくはｐＨ４〜８である。【００７５】
反応は、静置または攪拌若しくは振盪しながら行うことができる。反応中の酸化を防止するために、反応系のヘッドスペースを窒素等の不活性ガスで置換してもよく、またアスコルビン酸等の酸化防止剤を反応系に添加することも可能である。【００７６】
なお、必要に応じて、上記の方法によって取得される反応生成物に対して、さらにイソクエルシトリンを低減する工程を行うこともできる。かかる方法としては、上記方法で得られる反応生成物の中からイソクエルシトリン（IQC）（G0）を除去・脱離できる方法であれば特に制限されず、慣用の精製方法を任意に組み合わせて行うことができる。【００７７】
例えば、上記反応物を酸性に調整して冷却することによってＩＱＣ（Ｇ０）を析出沈殿させて除去する方法、各種の樹脂処理法（吸着法、イオン交換法、ゲルろ過法など）、膜処理法（限外濾過膜処理法、逆浸透膜処理法、イオン交換膜処理法、ゼータ電位膜処理法など）、電気透析法、塩析、酸析、再結晶、溶媒分画法および活性炭処理法等を例示することができる。【００７８】
なお、ＩＱＣの除去工程は、上記のように、アミラーゼ処理後の反応生成物に対して行ってもよいが、またアミラーゼ処理前に、例えば酵素処理イソクエルシトリンに対して行うこともできる。とくにアミラーゼとしてβ-アミラーゼを用いる場合は、アミラーゼ処理前後で、ＩＱＣの含有量に殆ど変動がない。このため、予め酵素処理イソクエルシトリンからＩＱＣを除去低減させた後にβ−アミラーゼ処理しても、酵素処理イソクエルシトリンをβ−アミラーゼで処理した後にＩＱＣを除去低減させる場合と、得られる反応生成物にほとんど相違がない。【００７９】
斯くして得られるクエルセチン配糖体組成物は、ＩＱＣ−Ｇ（4≦）およびＩＱＣ（Ｇ０）の含有割合が低減する結果、全体に占めるＩＱＣ−Ｇ（1-3）の割合を一層高めることができる。かかるクエルセチン配糖体組成物として、好適にはＩＱＣ−Ｇ（1-3）の割合が全体（１００モル％）の６０モル％以上、好ましくは６５モル％以上、より好ましくは７０モル％以上、さらに好ましくは７５モル％以上、さらにまた好ましくは８０モル％以上、特に好ましくは８５モル％以上の組成物を挙げることができる。中でも、ＩＱＣ−Ｇ（2-3）の割合が、全体（１００モル％）の５０モル％以上、好ましくは５５モル％以上、より好ましくは６０モル％以上、さらに好ましくは６５モル％以上の組成物、さらにまた好ましくは７０モル％以上、特に好ましくは７５モル％以上を占めるクエルセチン配糖体組成物は、体内吸収性の点でより好適な組成物である。かかるクエルセチン配糖体組成物中のＩＱＣ−Ｇ（4≦）およびＩＱＣ（Ｇ０）の割合は、上記ＩＱＣ−Ｇ（1-3）の含有量に応じて定めることができるが、通常、ＩＱＣ−Ｇ（4≦）の割合として１０モル％以下、好ましくは２モル％以下、ＩＱＣ（Ｇ０）の割合として２０モル％以下、好ましくは１０モル％以下を好適に例示することができる。【００８０】
ＩＶ．クエルセチン配糖体組成物の用途
本発明のクエルセチン配糖体組成物は、後述する実験例で示すように、イソクエルシトリン並びに酵素処理イソクエルシトリンに比して、経口投与による体内吸収性（血中移行性）（経口吸収性）に優れており、その結果、経口投与した場合に体内で優れた抗酸化能を発揮するという特長を備えている。【００８１】
従って、本発明は、上記本発明のクエルセチン配糖体組成物を有効成分とする抗酸化剤、特に生体に対する抗酸化剤（以下、「生体内抗酸化剤」ともいう。）；ならびに本発明のクエルセチン配糖体組成物を含有することによって抗酸化機能（活性酸素消去機能）を備えてなる食品を提供するものである。【００８２】
上記の生体内抗酸化剤としては、その形態を特に制限するものではなく、例えば粉末状、顆粒状、錠剤状、カプセル状などの固体状；液状、懸濁液等の溶液状；またはペースト状等の半固体状などといった経口投与に適した任意の形態に調製することができる。【００８３】
当該抗酸化剤に配合されるクエルセチン配糖体組成物の割合は、特に制限されず、０.０１〜１００重量％の範囲から適宜選択することができる。なお、当該抗酸化剤の使用量としては、生体内で抗酸化効果を奏する限り特に制限されないが、体重６０ｋｇの成人の場合、一回投与あたり、抗酸化剤中にクエルセチン配糖体組成物を１ｍｇ〜３０ｇの割合で含むような範囲から適宜選択することができる。【００８４】
抗酸化剤は、クエルセチン配糖体組成物に、さらに希釈剤、担体または添加剤等の成分を配合して任意の製剤化処理を行い、製剤として調製することができる。ここで希釈剤または担体としては、本発明の効果を妨げないものであれば特に制限されず、例えばシュクロース、グルコース、果糖、マルトース、トレハロース、乳糖、オリゴ糖、デキストリン、デキストラン、サイクロデキストリン、澱粉、水飴、異性化液糖などの糖類；エタノール、プロピレングリコール、グリセリン等のアルコール類；ソルビトール、マンニトール、エリスリトール、ラクチトール、キシリトール、マルチトール、還元パラチノース、還元澱粉分解物等の糖アルコール類；トリアセチン等の溶剤；アラビアガム、カラギナン、キサンタンガム、グァーガム、ジェランガム、ペクチン等の多糖類；または水を挙げることができる。また添加剤としては、キレート剤等の助剤、香料、香辛料抽出物、防腐剤などを挙げることができる。【００８５】
使用上の利便等から、これらの希釈剤、担体または添加剤を用いて上記製剤を調製する場合は、クエルセチン配糖体組成物が製剤１００重量％中に、０．０１〜１００重量％、好ましくは０．１〜５０重量％の割合で含まれるように調製することが望ましい。【００８６】
抗酸化機能（活性酸素消去機能）を備えてなる食品としては、本発明のクエルセチン配糖体組成物そのもの、またはクエルセチン配糖体組成物に上記希釈剤、担体または添加剤等を添加配合して調製される製剤（例えば粉末、顆粒、錠剤、カプセル、液剤、ドリンク剤など）などの、例えばサプリメント、ならびに一般の食品に上記本発明のクエルセチン配糖体組成物を１成分として配合して、その食品に生体に対する抗酸化機能（活性酸素消去機能）を付加してなる機能性食品（特定保健用食品や条件付き特定保健用食品が含まれる）を挙げることができる。なお、これらの食品には、上記本発明のクエルセチン配糖体組成物を含有し、生体抗酸化作用（活性酸素消去作用）を有することを特徴とするものであって、生体における酸化反応またはそれによって生じる障害を予防ないし抑制するために用いられる旨の表示を付してなる食品が含まれる。【００８７】
抗酸化機能（活性酸素消去機能）を有する食品の場合、当該食品に配合されるクエルセチン配糖体組成物の割合は、その機能を有する限り特に制限されないが、通常０.００１〜１００重量％の範囲から適宜選択することができる。【００８８】
対象とする食品としては、制限はされないが、アイスクリーム、アイスミルク、ラクトアイス、シャーベット、氷菓等の冷菓類；乳飲料、乳酸菌飲料、清涼飲料（果汁入りを含む）、炭酸飲料、果汁飲料、野菜飲料、野菜・果実飲料、スポーツ飲料、粉末飲料等の飲料類；リキュールなどのアルコール飲料；コーヒー飲料、紅茶飲料等の茶飲料類；コンソメスープ、ポタージュスープ等のスープ類；カスタードプリン、ミルクプリン、果汁入りプリン等のプリン類、ゼリー、ババロア及びヨーグルト等のデザート類；チューインガムや風船ガム等のガム類（板ガム、糖衣状粒ガム）；マーブルチョコレート等のコーティングチョコレートの他、イチゴチョコレート、ブルーベリーチョコレート及びメロンチョコレート等の風味を付加したチョコレート等のチョコレート類；ハードキャンディー（ボンボン、バターボール、マーブル等を含む）、ソフトキャンディー（キャラメル、ヌガー、グミキャンディー、マシュマロ等を含む）、ドロップ、タフィ等のキャラメル類；ハードビスケット、クッキー、おかき、煎餅等の焼き菓子類；浅漬け、醤油漬け、塩漬け、味噌漬け、粕漬け、麹漬け、糠漬け、酢漬け、芥子漬、もろみ漬け、梅漬け、福神漬、しば漬、生姜漬、朝鮮漬、梅酢漬け等の漬物類；セパレートドレッシング、ノンオイルドレッシング、ケチャップ、たれ、ソースなどのソース類；ストロベリージャム、ブルーベリージャム、マーマレード、リンゴジャム、杏ジャム、プレザーブ等のジャム類；赤ワイン等の果実酒；シロップ漬のチェリー、アンズ、リンゴ、イチゴ、桃等の加工用果実；ハム、ソーセージ、焼き豚等の畜肉加工品；魚肉ハム、魚肉ソーセージ、魚肉すり身、蒲鉾、竹輪、はんぺん、薩摩揚げ、伊達巻き、鯨ベーコン等の水産練り製品；チーズ等の酪農製品類；うどん、冷麦、そうめん、ソバ、中華そば、スパゲッティ、マカロニ、ビーフン、はるさめ及びワンタン等の麺類；その他、各種総菜及び麩、田麩等の種々の加工食品を挙げることができる。【００８９】
なお、本発明の食品の摂取量としては、摂取して体内で抗酸化効果を奏する限り特に制限されないが、例えば体重６０ｋｇの成人の場合、一回摂取食品中に、クエルセチン配糖体組成物を１ｍｇ〜３０ｇの割合で含むような範囲から適宜選択することができる。【００９０】
Ｖ．クエルシトリン配糖体組成物の経口吸収性を高める方法
本発明は、クエルシトリン配糖体組成物の経口吸収性を高める方法を提供する。本発明の方法によれば、抗酸化作用が知られているクエルシトリン配糖体組成物について、従来公知の酵素処理イソクエルシトリンよりも経口吸収性を高めることができ、その結果、クエルシトリン配糖体組成物の生体内での抗酸化作用を高めることが可能となる。【００９１】
本発明の方法は、酵素処理イソクエルシトリンを原料として、一般式（２）：【００９２】
【化１３】
0003896577.tif 000015
【００９３】
（式中、Glcはグルコース残基を、ｎは４以上の整数を意味する。）
で示されるクエルセチン配糖体（ＩＱＣ−Ｇ（4≦））の量を低減する工程を経て行うことができる。【００９４】
ここでＩＱＣ−Ｇ（4≦）の量を低減する方法は問わず、例えば酵素処理イソクエルシトリンからＩＱＣ−Ｇ（4≦）を分画除去する方法、酵素処理イソクエルシトリン中に含まれるＩＱＣ−Ｇ（4≦）を分解する方法などのいずれの方法を用いることができる。好ましくは、酵素処理イソクエルシトリンをアミラーゼ、好ましくはβ−アミラーゼで処理する方法を挙げることができる。酵素処理イソクエルシトリンに対するアミラーゼの反応条件は、上記IIIに記載する条件を同様に使用することができる。【００９５】
なお、ＩＱＣ−Ｇ（4≦）の低減の度合いとしては、最終クエルセチン配糖体組成物中のＩＱＣ−Ｇ（4≦）の含有割合（総量）が１５モル％以下となるような割合を挙げることができる。好ましくは１０モル％以下、さらに好ましくは６モル％以下である。【００９６】
経口吸収性の向上に際しては、さらに、一般式（３）：【００９７】
【化１４】
0003896577.tif 000016
【００９８】
（式中、Glcはグルコース残基を、ｎは０を意味する。）
で示されるイソクエルシトリン（ＩＱＣまたはＧ０）の量を低減する工程を行うこともできる。かかる方法としては、上記のＩＱＣ−Ｇ（4≦）低減処理にて得られる反応生成物の中からイソクエルシトリン（ＩＱＣまたはＧ０）を低減、除去または脱離できる方法であれば特に制限されず、慣用の精製方法を任意に組み合わせて行うことができる。具体的には、上記IIIに記載する方法を挙げることができる。【００９９】
なお、ＩＱＣの低減・除去工程は、上記のように、アミラーゼ処理後の反応生成物に対して行ってもよいが、またアミラーゼ処理前の、例えば酵素処理イソクエルシトリンに対して行うこともできる。【０１００】
本発明の方法は、好適には、酵素処理イソクエルシトリンに対して上記操作（アミラーゼ処理、またはアミラーゼ処理＋ＩＱＣの除去低減）を施して、当該酵素処理イソクエルシトリンを下記のクエルセチン配糖体組成物に変換することによって行うことができる。【０１０１】
一般式（１）【０１０２】
【化１５】
0003896577.tif 000017
【０１０３】
（式中、Glcはグルコース残基を、ｎは０または１以上の整数を意味する。）
で示されるクエルセチン配糖体の混合物からなる組成物であって、下記（1）および(2)の要件を満たす組成物：
(1) 少なくともｎ＝３のクエルセチン配糖体を含む、
(2) 当該組成物中に含まれるｎ＝１〜３のクエルセチン配糖体の総量が５０モル％以上であって、且つｎが４以上のクエルセチン配糖体の総量が１５モル％以下である。【０１０４】
かかる組成物は、さらに下記（3）の要件を満たしていることが好ましい：
(3）当該組成物中に含まれるｎ＝１〜３のクエルセチン配糖体の総量が６０モル％以上であって、且つｎが０のクエルセチン配糖体が２０モル％以下である。【０１０５】
また上記組成物は、さらに下記（4）の要件を満たしていることが好ましい：
（4）当該組成物中に含まれるｎ＝１〜３のクエルセチン配糖体の総量が７０モル％以上であって、且つｎが４以上のクエルセチン配糖体の総量が１０モル％以下で、ｎが０のクエルセチン配糖体が２０モル％以下である。【０１０６】
さらに上記組成物は、さらに下記（5）の要件を満たしていることが好ましい：
(5)当該組成物中にｎ＝２および３のクエルセチン配糖体を含み、それらの総量が５０モル％以上である。【０１０７】
かかる方法によれば、経口投与した場合に、酵素処理イソクエルシトリンを、酵素処理イソクエルシトリンに比して１．３倍以上の体内吸収性を示すクエルセチン配糖体組成物に変換することができる。好ましくは１．０１〜５倍、より好ましくは１．０１〜２倍である。
【実施例】
【０１０８】
以下、調製例、実験例、および実施例を挙げて本発明を説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。【０１０９】
参考調製例１    酵素処理イソクエルシトリンの調製
（１）イソクエルシトリンの調製
マメ科植物であるエンジュのつぼみ250gを2500mLの熱水（95℃以上）に2時間浸漬した後、濾別した濾液を「第一抽出液」として取得した。一方、濾別した残渣を更に熱水に浸漬して抽出し、「第二抽出液」を得た。これらの第一および第二抽出液を合わせ、30℃以下に冷却して沈殿した成分を濾別し、沈殿部を水洗、再結晶、および乾燥することにより、純度95％以上のルチン22.8gを得た。【０１１０】
このルチン20ｇを水400mLに分散し、ｐＨ調整剤を用いてｐＨ4.9に調整した。これにナリンギナーゼ（天野エンザイム（株）、商品名「ナリンギナーゼ"アマノ"」、3,000U／g）を0.12ｇ添加して反応を開始し、これを72℃で24時間保持した。その後、反応液を20℃に冷却し、冷却によって生じた沈殿物を濾別した。得られた沈殿物（固形分）を水洗した後、乾燥し、イソクエルシトリン13.4gを回収した。【０１１１】
（２）酵素処理イソクエルシトリンの調製
上記で得られたイソクエルシトリン10gに、500mLの水を加えコーンスターチ40gを添加し分散させた。これにシクロデキストリングルカノトランスフェラーゼ（CGTase：天野エンザイム（株）、商品名「コンチザイム」、600U／mL）15gを添加して反応を開始し、これをｐＨ7.25、60℃の条件下、24時間保持した。得られた反応液を冷却した後、ダイヤイオンHP-20（三菱化学工業（株）製）のカラム（Φ3.0×40cm）に付加し、1000mLの水で洗浄した。次いでカラムに600mLの50容量％のエタノール水溶液を供し、得られた溶出液を減圧濃縮した後、凍結乾燥して、酵素処理イソクエルシトリン〔以下、これを「イソクエルシトリンＧ(mix)」または「ＩＱＣ-Ｇ(mix)」という〕12.8gを取得した。これを下記条件のＨＰＬＣに供して各成分を分取し、各成分を質量分析装置（LC/MS/MS，日本Waters，型式Quattro Micro）を使用して分析した。【０１１２】
＜ＨＰＬＣ条件＞
カラム：Inertsil ODS-2  Φ4.6×250mm（GLサイエンス製）
溶離液：水／アセトニトリル／ＴＦＡ＝８５０／１５／２
検出：波長３５１ｎｍにおける吸光度測定
流速：０．８ｍＬ／ｍｉｎ。【０１１３】
その結果、上記酵素処理イソクエルシトリン〔ＩＱＣ-Ｇ(mix)〕は、下式で示すＩＱＣと各種ＩＱＣ配糖体の混合物からなることが分かった。【０１１４】
【化１６】
0003896577.tif 000018
【０１１５】
（式中、Glcはグルコース残基、ｎは０または１以上の整数を示す。）
ＨＰＬＣ分析結果より、次式に基づいて、上記混合物に含まれるＩＱＣおよび各ＩＱＣ配糖体のモル比（％）を算出したところ、表２に示すような組成であった。【０１１６】
【数１】
0003896577.tif 000019
【０１１７】
【表２】
0003896577.tif 000020
【０１１８】
調製例１    ＩＱＣ配糖体（Ｇｎ）の精製
参考調製例１で得られた酵素処理イソクエルシトリンＧ(mix)（ＩＱＣ-Ｇ(mix)）を、下記条件のＨＰＬＣに供して、イソクエルシトリン（Ｇ０）を豊富に含む画分（Ｇ０画分）、Ｇ１を豊富に含む画分（Ｇ１画分）、Ｇ２を豊富に含む画分（Ｇ２画分）、Ｇ３を豊富に含む画分（Ｇ３画分）、およびＧ４を豊富に含む画分（Ｇ４画分）をそれぞれ分取した。【０１１９】
＜ＨＰＬＣ分取条件＞
カラム；Develosil  ODS-UG-15/30、5cm×50cm
溶媒  ；Ａ溶媒；１容量％酢酸含有水溶液
Ｂ溶媒；１容量％酢酸および90容量％ＣＨ３ＣＮ含有水溶液
溶出  ；Ｂ溶媒18容量％とＡ溶媒82容量％を混合し、アイソクラティックな条件で、流速３２ｍＬ／ｍｉｎで溶出
検出  ；３６０ｎｍにおける吸光度検出。【０１２０】
具体的には、溶出時間40分より113分までを、１分間に１フラクションの割合で73フラクションに分けて分取し、フラクション17−24をＧ４画分、フラクション26−33をＧ３画分、フラクション35−43をＧ２画分、フラクション45−53をＧ１画分、フラクション55−73をＧ０画分として回収した。各画分を凍結乾燥して、固形分として各々約３００ｍｇずつを得た。  【０１２１】
次いで得られたＧ０画分、Ｇ１画分、Ｇ２画分、Ｇ３画分、およびＧ４画分を、各々下記条件のＨＰＬＣ分析に供し、各画分に含まれるＩＱＣ並びに各ＩＱＣ配糖体のモル比（％）と平均分子量を算出した。モル比（％）の結果を表３に示す。表３に示すように、Ｇ０画分、Ｇ１画分、Ｇ２画分、Ｇ３画分、およびＧ４画分は、それぞれＩＱＣ（Ｇ０）、ＩＱＣ配糖体Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３、およびＧ４を７３％以上含んでいた。【０１２２】
＜ＨＰＬＣ分析条件＞
カラム；Develosil  C30-UG-5 （4.6×150mm）
溶媒  ；Ａ溶媒：0.05容量％ ＴＦＡ含有水溶液、
Ｂ溶媒：0.05容量％ ＴＦＡ/ＣＨ３ＣＮ
溶出  ；Ｂ溶媒10容量％→80容量％(0-20min)、Ｂ溶媒80容量％→80容量％（20-25min）、Ｂ溶媒80容量％→10容量％（25-25.1min）、Ｂ溶媒10容量％（25.1-32min）のグラジエント溶出
検出  ；波長３７０ｎｍにおける吸光度検出
カラム温度；４０℃。【０１２３】
【表３】
0003896577.tif 000021
【０１２４】
調製例２    イソクエルシトリンＧ(1-3)画分およびイソクエルシトリンＧ(3-6)画分の調製
参考調製例１で得られた酵素処理イソクエルシトリン（ＩＱＣ-Ｇ(mix)）０.６５ｇを含水メタノールに溶解し、ゲルろ過樹脂（Sephadex LH-20 : Amersham Bioscience K.K．）を用いてゲル濾過クロマトグラフィーを行った。通過液を一定量ずつ分取した後、上記参考調製例１に記載する条件でＨＰＬＣ分析を行い、ＩＱＣにグルコースが３個α−１,４結合したＧ３、４個結合したＧ４、５個結合したＧ５、および６個結合したＧ６を豊富に含む画分（以下、「イソクエルシトリンＧ(3-6)画分」または「ＩＱＣ-Ｇ(3-6)」画分という）と、ＩＱＣにグルコースが１個α−１,４結合したＧ１、２個結合したＧ２、および３個結合したＧ３を豊富に含む画分（以下、「イソクエルシトリンＧ(1-3)画分」または「ＩＱＣ-Ｇ(1-3)画分」という）との３画分に分けた。次いで、これら３画分をそれぞれ減圧濃縮により溶媒を除去した後、凍結乾燥して、「イソクエルシトリンＧ(3-6)画分」（「ＩＱＣ-Ｇ(3-6)画分」）０．１５ｇおよび「イソクエルシトリンＧ(1-3)画分」（「ＩＱＣ-Ｇ(1-3)画分」）０．１ｇを得た。これらの画分について前述の参考調製例１に記載する条件のＨＰＬＣ分析を行い、各画分に含まれるＩＱＣ並びに各ＩＱＣ配糖体のモル比（％）を算出した。【０１２５】
結果を表４に示す。表４からわかるように、ＩＱＣ-Ｇ(1-3)画分中に含まれるＧ１、Ｇ２およびＧ３の割合は総量で９４％、ＩＱＣ-Ｇ(3-6)画分中に含まれるＧ３、Ｇ４、Ｇ５およびＧ６の割合は総量で８６％であった。【０１２６】
【表４】
0003896577.tif 000022
【０１２７】
調製例３    酵素処理イソクエルシトリンＧ(mix)およびイソクエルシトリンＧ(4-6)画分の調製
参考調製例１と全く同様の方法で酵素処理イソクエルシトリンを調製した（ＩＱＣ-Ｇ(mix) (2)）。これを調製例２と同様に含水メタノールに溶解して、ゲル濾過クロマトグラフィーおよびＨＰＬＣ分析を行い、ＩＱＣにグルコースが４個α−１,４結合したＧ４、５個結合したＧ５、および６個結合したＧ６を豊富に含む画分（以下、「イソクエルシトリンＧ(4-6)画分」または「ＩＱＣ-Ｇ(4-6)」画分という）を得、この画分をそれぞれ減圧濃縮により溶媒を除去した後、凍結乾燥して、「イソクエルシトリンＧ(4-6)画分」（「ＩＱＣ-Ｇ(4-6)」画分）０．１ｇを得た。上記のＩＱＣ-Ｇ(mix) (2)および「ＩＱＣ-Ｇ(4-6)」画分について、前述の参考調製例１に記載する条件のＨＰＬＣ分析を行い、ＩＱＣ並びに各ＩＱＣ配糖体のモル比（％）を算出した。【０１２８】
結果を表５に示す。ＩＱＣ-Ｇ(4-6)画分中に含まれるＧ４、Ｇ５およびＧ６の割合は総量で８３％であった。【０１２９】
【表５】
0003896577.tif 000023
【０１３０】
調製例４    試料１〜５の調製
（１）試料１の調製
参考調製例１（１）および（２）に従って酵素処理イソクエルシトリン（ＩＱＣ-Ｇ(mix)）を調製した（試料１：ＩＱＣ-Ｇ(mix)(3)）。【０１３１】
（２）試料２の調製
試料１（０．５g）を５０mLイオン交換水に溶解し、攪拌条件下、冷却ろ過した後、吸着樹脂カラム（三菱化学（株）製、ダイヤイオンSP-207）に通液した。吸着樹脂を充分に水洗して糖質等の不純物を除去した後、60容量％エチルアルコール水溶液を通液して溶出液を回収した。回収した溶出液を減圧濃縮した後、凍結乾燥した（試料２）。【０１３２】
（３）試料３の調製
試料１およびイソクエルシトリン（ＩＱＣ）をそれぞれメタノールに溶解し、ＩＱＣのモル比が約４５％になるよう混合した。次いで、この画分を減圧濃縮により溶媒を除去した後、凍結乾燥した（試料３）。【０１３３】
（４）試料４の調製
試料３（０．５g）を５０mLイオン交換水に溶解し、β-アミラーゼ（天野エンザイム（株）製、商品名「ビオザイムM」、4000Ｕ／ｇ）を２．５ｍｇ添加し、50℃、ｐＨ5.0にて１．５時間保持した。加熱処理により酵素を失活させた後、吸着樹脂カラム（三菱化学（株）製、ダイヤイオンSP-207）に通液した。吸着樹脂を充分に水洗して糖質等の不純物を除去した後、60容量％エチルアルコール水溶液を通液して溶出液を回収した。回収した溶出液を減圧濃縮した後、凍結乾燥して０．３ｇの試料（試料４）を得た。【０１３４】
（５）試料５の調製
試料１（５ｇ）を含水メタノールに溶解し、ゲルろ過樹脂（Sephadex LH-20 : Amersham Bioscience K.K．）を用いてゲル濾過クロマトグラフィーを行った。通過液を一定量ずつ分取した後、上記参考調製例１に記載する条件でＨＰＬＣ分析を行い、Ｇ４、Ｇ５、Ｇ６およびＧ７を豊富に含む画分を回収した。次いで、この画分を減圧濃縮により溶媒を除去した後、凍結乾燥した。この１．０gを５０mLイオン交換水に溶解し、β-アミラーゼ（天野エンザイム（株）製、商品名「ビオザイムM」、4000Ｕ／ｇ）を7ｍｇ添加し、50℃、ｐＨ5.0にて２時間保持した。加熱処理により酵素を失活させた後、吸着樹脂カラム（三菱化学（株）製、ダイヤイオンSP-207）に通液した。吸着樹脂を充分に水洗して糖質等の不純物を除去した後、60容量％エチルアルコール水溶液を通液して溶出液を回収した。回収した溶出液を減圧濃縮した後、凍結乾燥した（試料５、０．２ｇ）。【０１３５】
上記の試料１〜５について、上述の参考調製例1に記載する条件でＨＰＬＣを行い、試料中に含まれるＩＱＣおよび各ＩＱＣ配糖体のモル比（％）を算出したところ、次に示すような組成であった。【０１３６】
【表６】
0003896577.tif 000024
【０１３７】
調製例５    試料６〜９の調製
（１）試料６の調製
参考調製例１（１）および（２）に従って酵素処理イソクエルシトリン（ＩＱＣ-Ｇ(mix)）を調製した。このＩＱＣ-Ｇ(mix)およびイソクエルシトリン（ＩＱＣ）をそれぞれメタノールに溶解し、ＩＱＣのモル比が約４５％になるよう混合した。次いで、この画分を減圧濃縮により溶媒を除去した後、凍結乾燥した（試料６）。【０１３８】
（２）試料７，８および９の調製
調製例１と同様に調製して、試料１をＨＰＬＣに供してＧ１を豊富に含む画分（Ｇ１画分）、Ｇ２を豊富に含む画分（Ｇ２画分）およびＧ３を豊富に含む画分（Ｇ３画分）を回収した。次いで、これらの画分および試料６をそれぞれメタノールに溶解し、ＩＱＣ−Ｇ(1-3)の総量がモル比で約５４％、６４％、８０％になるよう混合した。次いで、この画分を減圧濃縮により溶媒を除去した後、凍結乾燥した（試料７，８，９）。【０１３９】
上記の試料６〜９について、上述の参考調製例1に記載する条件でＨＰＬＣを行い、試料中に含まれるＩＱＣおよび各ＩＱＣ配糖体のモル比（％）を算出したところ、次に示すような組成であった。【０１４０】
【表７】
0003896577.tif 000025
【０１４１】
参考調製例２    酵素処理イソクエルシトリンの調製
（１）イソクエルシトリンの調製
水１００Ｌにルチン５ｋｇを分散し、 ｐＨ調整剤を用いてｐＨ４．９に調整したこれにナリンギナーゼ（天野エンザイム（株），商品名「ナリンギナーゼ“アマノ”」，３０００Ｕ／ｇ）を３０ｇ添加して反応を開始し、これを２４時間７２℃に保持した。その後、反応液を３０℃に冷却し、冷却により沈殿した成分を濾別した。得られた固形分を水洗した後、乾燥し、イソクエルシトリンを回収した。【０１４２】
（２）酵素処理イソクエルシトリンの調製
得られたイソクエルシトリン２ｋｇに、１００Ｌの水を加え、コーンスターチ８ｋｇを添加し分散させた。これにＣＧＴａｓｅ（天野エンザイム（株），商品名「コンチザイム」，６００Ｕ／ｍＬ）３Ｌを添加し、６０℃、ｐＨ７.２５にて２４時間保持した。この液を冷却した後、ろ過して、酵素処理イソクエルシトリン〔「イソクエルシトリンＧ(mix)」または「ＩＱＣ-Ｇ(mix)」という〕（液状）を得た。このＩＱＣ−Ｇ(mix)について、前述の参考調製例１に記載する条件のＨＰＬＣに供して分析し、モル比（％）を算出した。その結果、表８に示す組成のＩＱＣおよび各種ＩＱＣ配糖体の混合物からなることが分かった。ＨＰＬＣ分析を行い、ＩＱＣ−Ｇ(mix)に含まれるＩＱＣおよび各ＩＱＣ配糖体のモル比（％）を算出した。【０１４３】
【表８】
0003896577.tif 000026
【０１４４】
調製例６    β−アミラーゼ処理の制御
参考調製例２の（１）および（２）の方法に従って酵素処理イソクエルシトリン（反応液）を調製した。この反応液５０Ｌに、β-アミラーゼ（天野エンザイム（株）製、商品名「ビオザイムM」、4000Ｕ／ｇ）を４ｇ添加し、50℃、ｐＨ5.0にて一定時間保持した後、一部反応液を採取した。採取した反応液を加熱処理により酵素を失活させた後、吸着樹脂カラム（三菱化学（株）製、ダイヤイオンSP-207）に通液した。吸着樹脂を充分に水洗して糖質等の不純物を除去した後、60容量％エチルアルコール水溶液を通液して溶出液を回収した。回収した溶出液を減圧濃縮した後、凍結乾燥することで、β−アミラーゼを異なる時間作用させて調製した種々のクエルセチン配糖体組成物を得た。これらを参考調製例1に記載する条件でＨＰＬＣを行い、ＩＱＣおよび各ＩＱＣ配糖体のモル比（％）を算出した。【０１４５】
結果を表９および図１に示す。反応時間に関わらず、イソクエルシトリン（ＩＱＣ）のモル比はほぼ一定で、反応が進むにつれてＩＱＣにグルコースが１個α−１,４結合したＧ１およびＩＱＣにグルコースが２個α−１,４結合したＧ２の割合（ＩＱＣ−Ｇ(1-2)）は増加した。そして、最終的には、Ｇ０、Ｇ１およびＧ２で構成されるクエルセチン配糖体組成物となった（図示および表記せず）。ＩＱＣにグルコースが３個α−１,４結合したＧ３は、反応初期では、ＩＱＣにグルコースが４個以上α−１,４結合したＧ(４≦)が分解されてその一部がＧ３となることから、ＩＱＣ−Ｇ３のモル比は反応途中までは増加するが、Ｇ(４≦)が消失する（反応時間：約６０分）と、続いてＧ３の分解が生じることからＩＱＣ−Ｇ３のモル比は徐々に減少した。【０１４６】
【表９】
0003896577.tif 000027
【０１４７】
調製例７    試料Ａ〜Ｄの調製
（１）試料Ａの調製
参考調製例２の（１）および（２）の方法に従って調製した酵素処理イソクエルシトリンを吸着樹脂カラム（三菱化学（株）製、ダイヤイオンSP-207）に通液した。吸着樹脂を充分に水洗して未反応の糖質等の不純物を除去した後、60容量％エチルアルコール水溶液を通液して溶出液を回収した。回収した溶出液を減圧濃縮した後、乾燥、および粉砕して粉末状にした（試料Ａ：IQC-G(mix)）。【０１４８】
（２）試料Ｂの調製
試料Ａ（反応液）を、攪拌条件下、冷却ろ過した後、吸着樹脂カラム（三菱化学（株）製、ダイヤイオンSP-207）に通液した。吸着樹脂を充分に水洗して糖質等の不純物を除去した後、60容量％エチルアルコール水溶液を通液して溶出液を回収した。回収した溶出液を減圧濃縮した後、凍結乾燥して試料Ｂを得た。【０１４９】
（３）試料ＣおよびＤの調製
試料Ａ（反応液）５０Ｌを、攪拌条件下、冷却ろ過した後、β-アミラーゼ（天野エンザイム（株）製、商品名「ビオザイムM」、4000Ｕ／ｇ）を４ｇ添加し、50℃、ｐＨ5.0にて３０分または４２０分保持した。その後、それぞれを加熱処理により酵素を失活させた後、吸着樹脂カラム（三菱化学（株）製、ダイヤイオンSP-207）に通液した。吸着樹脂を充分に水洗して糖質等の不純物を除去した後、60容量％エチルアルコール水溶液を通液して溶出液を回収した。回収した溶出液を減圧濃縮した後、凍結乾燥して試料Ｃ（β-アミラーゼ処理30分）および試料Ｄ（β-アミラーゼ処理420分）を得た。【０１５０】
試料Ａ〜Ｄについて、参考調製例1に記載する条件でＨＰＬＣを行い、試料中に含まれるＩＱＣおよび各ＩＱＣ配糖体のモル比（％）を算出したところ、表１０に示すような組成であった。【０１５１】
【表１０】
0003896577.tif 000028
【０１５２】
調製例８
参考調製例２で調製したＩＱＣ-Ｇ(mix)(5)５０Ｌに、β−アミラーゼ（天野エンザイム（株）製，商品名「ビオザイムＭ」，４０００Ｕ／ｇ）を１５ｇ添加し、５０℃、ｐＨ５.０にて３時間保持した後、加熱処理により酵素を失活させた。この反応液（β−アミラーゼ処理ＩＱＣ-Ｇ(mix)（１））を前述の参考調製例１に記載する条件のＨＰＬＣに供して分析し、モル比（％）を算出した。その結果、下記組成のＩＱＣおよび各種ＩＱＣ配糖体の混合物からなることが分かった。【０１５３】
【表１１】
0003896577.tif 000029
【０１５４】
調製例９
参考調製例２で得られたＩＱＣ-Ｇ(mix)(5)５０Ｌにβ−アミラーゼ（天野エンザイム（株）製，「ビオザイムＭ」，４０００Ｕ／ｇ）を４ｇ添加し、５０℃、ｐＨ５.０にて１時間保持した後、加熱処理により酵素を失活させた。この反応液（β−アミラーゼ処理ＩＱＣ-Ｇ(mix)（２））を前述の条件のＨＰＬＣに供して分析し、モル比（％）を算出した。その結果、下記組成のＩＱＣおよび各種ＩＱＣ配糖体の混合物からなることが分かった。【０１５５】
【表１２】
0003896577.tif 000030
【０１５６】
調製例１０
参考調製例２で得られたＩＱＣ-Ｇ(mix)(5)５０Ｌにβ−アミラーゼ（天野エンザイム（株）製，「ビオザイムＭ」，４０００Ｕ／ｇ）を１５ｇ添加し、５０℃、ｐＨ５.０にて３時間保持した後、加熱処理により酵素を失活させた。この反応液を攪拌条件下、冷却しろ過した後、吸着樹脂カラム（三菱化学（株）製、ダイヤイオンＳＰ−２０７）に供した。吸着樹脂カラムを充分に水洗した後、６０容量％エチルアルコール水溶液を通液して溶出液を回収した。溶出液（β−アミラーゼ処理ＩＱＣ-Ｇ(mix)（３））を前述する条件のＨＰＬＣに供して分析し、モル比（％）を算出した。その結果、下記組成のＩＱＣおよびＩＱＣ配糖体の混合物からなることが分かった。【０１５７】
【表１３】
0003896577.tif 000031
【０１５８】
調製例１１
参考調製例２で得られたＩＱＣ-Ｇ(mix)(5)５０Ｌにβ−アミラーゼ（天野エンザイム（株）製，「ビオザイムＭ」，４０００Ｕ／ｇ）を４ｇ添加し、５０℃、ｐＨ５.０にて１時間保持した後、加熱処理により酵素を失活させた。この反応液を攪拌条件下、冷却しろ過した後、吸着樹脂カラム（三菱化学（株）製  ダイヤイオンＨＰ−２０）に供した。この吸着樹脂カラムを充分に水洗した後、６０容量％エチルアルコール水溶液を通液して溶出液を回収した。溶出液（β−アミラーゼ処理ＩＱＣ-Ｇ(mix)（４））を前述の条件のＨＰＬＣに供して分析し、モル比（％）を算出した。その結果、下記組成のＩＱＣおよびＩＱＣ配糖体の混合物からなることが分かった。【０１５９】
【表１４】
0003896577.tif 000032
【０１６０】
調製例１２
参考調製例２で得られたＩＱＣ-Ｇ(mix)(5)５０Ｌにβ−アミラーゼ（天野エンザイム（株）製，「ビオザイムＭ」，４０００Ｕ／ｇ）を１５ｇ添加し、５０℃、ｐＨ５.０にて３時間保持した後、加熱処理により酵素を失活させた。この反応液を攪拌条件下、冷却してろ過した。得られた濾液を分画分子量１００００のＵＦ膜（旭化成ケミカルズ社製、ＳＥＰ−３０５３）に供し、膜透過液を回収し、この液を更に分画分子量１０００のＵＦ膜（日本ポール（株）製，ポール・フィルトロン限外ろ過膜、ノバシリーズ）に供して、濃縮液を調製した。この液を水で５０Ｌになるように希釈調整した後、吸着樹脂カラム（三菱化学（株）製  ダイヤイオンＳＰ−２０７）に供した。この吸着樹脂カラムを充分に水洗した後、６０容量％エチルアルコール水溶液を通液して溶出液を回収した。この溶出液（β−アミラーゼ処理ＩＱＣ-Ｇ(mix)（５））を前述の条件のＨＰＬＣに供して分析し、モル比（％）を算出した。その結果、下記組成のＩＱＣおよびＩＱＣ配糖体の混合物からなることが分かった。【０１６１】
【表１５】
0003896577.tif 000033
【０１６２】
調製例１３
参考調製例２で得られたＩＱＣ-Ｇ(mix)(5)５０Ｌに，β−アミラーゼ（天野エンザイム（株）製，「ビオザイムＭ」，４０００Ｕ／ｇ）を４ｇ添加し、５０℃、ｐＨ５.０にて１時間保持した後、加熱処理により酵素を失活させた。この反応液を攪拌条件下、冷却した後、ろ過した。得られた濾液を分画分子量１００００のＵＦ膜（旭化成ケミカルズ社製、ＳＥＰ−３０５３）に供して膜処理を行い、膜透過液を回収し、この液を更に分画分子量１０００のＵＦ膜（日本ポール（株）製、ポール・フィルトロン限外ろ過膜，ノバシリーズ）に供して濃縮液を調製した。この液を水で５０Ｌに希釈した後、吸着樹脂カラム（三菱化学（株）製、ダイヤイオンＨＰ−２０）に供した。この吸着樹脂カラムを充分に水洗した後、６０容量％エチルアルコール水溶液を通液して溶出液を回収した。この溶出液（β−アミラーゼ処理ＩＱＣ-Ｇ(mix)（６））を前述の条件のＨＰＬＣに供して分析し、モル比（％）を算出した。その結果、下記組成のＩＱＣおよびＩＱＣ配糖体の混合物からなることが分かった。【０１６３】
【表１６】
0003896577.tif 000034
【０１６４】
調製例１４
参考調製例２で得られたＩＱＣ-Ｇ(mix)(5)５０Ｌにβ−アミラーゼ（ナガセケムテックス（株）製，β−アミラーゼ＃１５００，１５０００Ｕ／ｇ）を１ｇ添加し、５０℃、ｐＨ５.０にて３時間保持した後、加熱処理により酵素を失活させた。この反応液を攪拌条件下、冷却した後、ろ過した。得られた濾液を減圧濃縮器にてＢｒｉｘ７０まで濃縮した。この濃縮液に８倍量の９５容量％エタノールを攪拌しながら投入し、冷却して糖等の不純物を沈殿させた後、上清を回収した。この上清（β−アミラーゼ処理ＩＱＣ-Ｇ(mix)（７））を前述の条件のＨＰＬＣに供して分析し、モル比（％）を算出した。その結果、下記組成のＩＱＣおよびＩＱＣ配糖体の混合物からなることが分かった。【０１６５】
【表１７】
0003896577.tif 000035
【０１６６】
調製例１５
参考調製例２で得られたＩＱＣ-Ｇ(mix)(5)５０Ｌにβ−アミラーゼ（ナガセケムテックス株式会社製，β−アミラーゼ＃１５００，１５０００Ｕ／ｇ）を５ｇ添加し、５０℃、ｐＨ５.０にて１時間保持した後、加熱処理により酵素を失活させた。この反応液を攪拌条件下、冷却した後、ろ過した。得られた濾液を減圧濃縮器にてＢｒｉｘ７０まで濃縮した。この濃縮液に８倍量の９５容量％エタノールを攪拌時投入し、冷却して糖等の不純物を沈殿させた後、上清を回収した。この上清（β−アミラーゼ処理ＩＱＣ-Ｇ(mix)（８））を前述の条件のＨＰＬＣに供して分析し、モル比を算出した。その結果、下記の組成のＩＱＣおよびＩＱＣ配糖体の混合物からなることが分かった。          【０１６７】
【表１８】
0003896577.tif 000036
【実験例】
【０１６８】
実験例１    血中移行性（経口吸収性）の測定（その１）
調製例１で得られたＧ０画分、Ｇ１画分、Ｇ２画分、Ｇ３画分、およびＧ４画分について、経口吸収性を調べた。具体的には、前夜から絶食させておいたＳＤ系雄性ラット（７〜９週齢）３０匹を５群（各群６匹づつ）に分けて、それぞれＧ０画分、Ｇ１画分、Ｇ２画分、Ｇ３画分、およびＧ４画分を各１５０μｍｏｌ／ｋｇの用量で経口投与した。０分（投与前）、並びに投与から３０分、１時間、および３時間後に尾静脈より血液を採取し、これにヘパリンを添加し遠心分離して上清からヘパリン血漿サンプルを調製した。調製したヘパリン血漿サンプルに含まれるクエルセチン・グルクロン酸抱合体およびクエルセチンの濃度のそれぞれを、下記の条件のＨＰＬＣによって計測した。そして、血漿中のクエルセチン・グルクロン酸抱合体濃度（μg/ml）の曲線下面積および血漿中のクエルセチン濃度（μg/ml）の曲線下面積からＡＵＣ（Area under the curve）（0-3hr）（μg/ml・hr）を算出した。なお、クエルセチン・グルクロン酸抱合体およびクエルセチンはいずれもイソクエルシトリンの生体内代謝産物である。よって、以下の実験ではこれら両方のＡＵＣの総量に基づいて経口吸収性を評価した。
【０１６９】
＜ＨＰＬＣ条件＞
カラム；Develosil  C30-UG-5 （4.6×150 mm）
溶媒  ；Ａ溶媒：0.05容量％ ＴＦＡ含有水溶液、Ｂ溶媒：0.05容量％ ＴＦＡ/ＣＨ３ＣＮ
溶出  ；Ｂ溶媒10容量％→80容量％(0-20 min)、Ｂ溶媒80容量％→80容量％（20-25 min）、Ｂ溶媒80容量％→10容量％（25-25.1 min）、Ｂ溶媒10容量％（25.1-32 min）のグラジエント溶出
検出  ；波長370 nmにおける吸光度検出
カラム温度；40℃。
【０１７０】
結果を図２に示す。図２より明らかなように、ＩＱＣにα−１,４結合するグルコース残基の数によってその経口吸収性（血中移行性）に差があることが判明した。具体的には、Ｇ０画分と比較して、Ｇ１画分、Ｇ２画分、およびＧ３画分と、ＩＱＣにα−１,４結合するグルコース数（ｎ）が１，２および３と増すにつれて、血中移行性（経口吸収性）が高くなるものの、グルコース数（ｎ）が４になると血中移行性（経口吸収性）が低下した。すなわち、ＩＱＣにグルコースが３個、２個および１個ついたＩＱＣ-Ｇ３、ＩＱＣ-Ｇ２およびＩＱＣ-Ｇ１は、この順番で吸収性に優れており、グルコースの数が少なくても（Ｇ０）、また多すぎても（Ｇ４以上）吸収性が悪くなることが明らかとなった。
【０１７１】
実験例２    血中移行性（経口吸収性）の測定（その２）
参考調製例１で調製したイソクエルシトリン（ＩＱＣ）およびＩＱＣ-Ｇ(mix)、ならびに調製例２で調製したＩＱＣ-Ｇ(3-6)画分およびＩＱＣ-Ｇ(1-3)画分について、経口吸収性を調べた。
【０１７２】
具体的には、前夜から絶食させておいたＳＤ系雄性ラット（７〜９週齢）２４匹を４群（各群６匹づつ）に分けて、それぞれに参考調製例１で調製したＩＱＣ、ＩＱＣ-Ｇ(mix)、調製例２で調製したＩＱＣ-Ｇ(3-6)画分またはＩＱＣ-Ｇ(1-3)画分を、各１９８μｍｏｌ／ｋｇの用量で経口投与した。次いで、実験例１と同様にして、血漿を調製し、血漿中のクエルセチン・グルクロン酸抱合体およびクエルセチンの濃度をＨＰＬＣにて計測した。また、コントロールとして、何も投与しない群についても同様の計測を行った。
【０１７３】
結果を図３に示す。図３のａは、各試料を投与した場合の血漿中のクエルセチン・グルクロン酸抱合体濃度（μg/ml）の経時的変化を、また図３のｂは、各試料を投与した場合の血漿中のクエルセチン濃度（μg/ml）の経時的変化を示したものである。
【０１７４】
図３からわかるように、ＩＱＣ-Ｇ(1-3)画分を経口投与した場合には、ＩＱＣのみならず、酵素処理イソクエルシトリン（ＩＱＣ-Ｇ(mix)）およびＩＱＣ-Ｇ(3-6)画分を経口投与した場合に比べて、血中のクエルセチン・グルクロン酸抱合体濃度およびクエルセチン濃度がいずれも有意に高く上昇した。
【０１７５】
図３ａで示す血漿中のクエルセチン・グルクロン酸抱合体濃度（μg/ml）の曲線下面積および図３ｂで示す血漿中のクエルセチン濃度（μg/ml）の曲線下面積から算出されるＡＵＣ（Area under the curve）（0-3hr）を図４に示す。図４より、ＩＱＣ-Ｇ(1-3)画分は、ＩＱＣ-Ｇ(mix)およびＩＱＣ-Ｇ(3-6)画分に比べ、ＡＵＣが１.４〜１.５倍上昇することが分かった。
【０１７６】
実験例３    血中移行性（経口吸収性）の測定（その３）
調製例３で調製したＩＱＣ-Ｇ(mix) (2)およびＩＱＣ-Ｇ(4-6)画分について、経口吸収性を調べた。具体的には、前夜から絶食させておいたＳＤ系雄性ラット（７〜９週齢）１２匹を２群（各群６匹づつ）に分けて、それぞれに参考調製例１で調製したイソクエルシトリンおよび調製例１で調製したＩＱＣ-Ｇ(4-6)画分を、各１９８μｍｏｌ／ｋｇの用量で経口投与した。次いで、実験例１と同様にして、血漿を調製し、血漿中のクエルセチン・グルクロン酸抱合体およびクエルセチンの濃度をＨＰＬＣにて計測した。そして、血漿中のクエルセチン・グルクロン酸抱合体濃度（μg/ml）の曲線下面積および血漿中のクエルセチン濃度（μg/ml）の曲線下面積からＡＵＣ（Area under the curve）（0-3hr）（μg/ml・hr）を算出した。
【０１７７】
結果を図５に示す。図５からわかるように、ＩＱＣ-Ｇ(4-6)画分を経口投与した場合は、酵素処理イソクエルシトリン（ＩＱＣ-Ｇ(mix)）を経口投与した場合に比べて、血中のクエルセチン・グルクロン酸抱合体濃度およびクエルセチン濃度が低下した。
【０１７８】
図４および図５の結果から、ＩＱＣ-Ｇ(mix)を経口投与した場合に比べて、ＩＱＣ-Ｇ(4-6)画分を経口投与した場合には血中のクエルセチン・グルクロン酸抱合体濃度およびクエルセチン濃度が低下するのに対し、ＩＱＣ-Ｇ(3-6)画分を経口投与した場合にはＡＵＣが変化しないことから、ＩＱＣにグルコースが３個ついたＩＱＣ−Ｇ３が体内吸収に関係していることが示唆された。また、ＩＱＣにグルコースが４〜６個ついたＩＱＣ−Ｇ(4-6)が少ないクエルセチン配糖体組成物および／またはＩＱＣにグルコースが１〜３個ついたＩＱＣ−Ｇ(1-3)が多いクエルセチン配糖体組成物は、経口投与した場合に従来の酵素処理イソクエルシトリン（ＩＱＣ-Ｇ(mix)）よりも血中移行性（経口吸収性）が高いことが示唆された。
【０１７９】
実験例４    抗酸化能の測定
上記実験例２において、各試料投与前（０分）、経口投与後３０分、１時間、および３時間目に採取した血漿の抗酸化能（ＦＲＡＰ；Ferrous Reducing Activity of Plasma）を調べて、ＩＱＣ、酵素処理イソクエルシトリン（ＩＱＣ-Ｇ(mix)）、ＩＧＣ-Ｇ(3-6)画分およびＩＱＣ-Ｇ(1-3)画分をそれぞれ経口投与した場合の、生体内での有効性を評価した。なお、ＦＲＡＰは、Irisらの方法（Iris F F Benzie et al., Analytical Biochemistry 239, 70-76 (1996)）に従って、鉄の３価から２価への還元能を測定することによって求めた。
【０１８０】
具体的には、９９０μｌのＦＲＡＰ試薬（10ｍM TPTZ（2,4,6-tri (2-pyridyl)-s-triazine）、20mM FeCl3・6H2O in 300mM acetate buffer(pH3.6)）に各被験血漿４０μｌを添加した後、すぐに５９３ｎｍにおける吸光度を４分間モニタリングした。コントロール試験として、ＩＱＣやＩＱＣ配糖体混合物の代わりに、０.５％のカルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）を経口投与したラットの血漿の抗酸化能を測定した。各被験血漿のＦＲＡＰ活性（μｍｏｌ／ｌ）は、標準物質としてＦｅＳＯ４（１００〜１０００μＭ）を用いて作成した検量線をもとにして算出した。
【０１８１】
結果を図６に示す。なお、結果は、試料経口投与前（０分）のＦＲＡＰ活性（μmol/l）値を１００％として、試料経口投与後（３０分、１時間、３時間）のＦＲＡＰ活性を、それに対する相対活性（％）として表した。図６に示すように、血漿の抗酸化能は、実験例１および２で体内吸収性が一番優れていることが確認されたＩＱＣ-Ｇ(1-3)画分が、その他のＩＱＣ-Ｇ(3-6)画分、ＩＱＣ-Ｇ(mix)およびＩＱＣに比べ、有意に高い値を示すことが確認された。
【０１８２】
実験例５    血中移行性（経口吸収性）の測定（その４）
調製例４で得られた酵素処理イソクエルシトリン（試料１：IQC-G(mix）(3)）、ならびに試料３、試料４および試料５について、実験例１の方法に従って経口吸収性を調べた。具体的には、前夜から絶食させておいたＳＤ系雄性ラット（７〜９週齢）２４匹を４群（各群６匹づつ）に分けて、それぞれ試料１〜３を各１９８μｍｏｌ／ｋｇの用量で経口投与した。次いで、実験例１と同様にして、血漿を調製し、血漿中のクエルセチン・グルクロン酸抱合体およびクエルセチンの濃度をＨＰＬＣにて計測した。
【０１８３】
血漿中のクエルセチン・グルクロン酸抱合体濃度（μg/ml）の曲線下面積および血漿中のクエルセチン濃度（μg/ml）の曲線下面積から算出されるＡＵＣ（Area under the curve）（0-3hr）（μg/ml・hr）の結果を、図７に示す。
【０１８４】
この結果からわかるように、Ｇ３を含むＩＱＣ−Ｇ（1-3）を総量で５５モル％以上含み、ＩＱＣ−Ｇ(４≦)の総量が５モル％以下の試料４および試料５は、従来の酵素処理イソクエルシトリン（試料１）よりも有意に高い体内吸収性を示した。とくに体内吸収性の高かった試料５は、ＩＱＣ−Ｇ（2-3）を総量で５０モル％以上含んでいた。一方、試料３は、Ｇ３を含み、ＩＱＣ−Ｇ(４≦)の総量が１０モル％以下と少ないものの、ＩＱＣ−Ｇ(1-3)の総量で５０モル％以下であるため、従来の酵素処理イソクエルシトリン（試料１）よりも体内吸収性が低かった。
【０１８５】
各々の試料の比較から、以下のことが示唆された。
(i)試料１および試料３：イソクエルシトリン（ＩＱＣ）の総量が増えると、体内吸収が低くなる。
(ii) 試料３および試料４：酵素処理イソクエルシトリン（ＩＱＣ−Ｇ(mix)）にβ−アミラーゼを作用させると、体内吸収が高くなる。
(iii) 試料３、試料４および試料５：ＩＱＣ−Ｇ(mix) にβ−アミラーゼを作用させると体内吸収が高くなり、さらにイソクエルシトリン（ＩＱＣ）を低減させると、より体内吸収が高くなる。
【０１８６】
実験例６    血中移行性（経口吸収性）の測定（その５）
調製例５で得られた試料６、試料７、試料８および試料９について、前述の実験例５と同様の実験を行い、血漿中のクエルセチン・グルクロン酸抱合体濃度（μg/ml）の曲線下面積および血漿中のクエルセチン濃度（μg/ml）の曲線下面積からＡＵＣ（Area under the curve）（0-3hr）（μg/ml・hr）を算出した。
【０１８７】
結果を、図８に示す。体内吸収性は、試料６＜試料７＜試料８＜試料９の順に高かった。この結果から、体内吸収性は、ＩＱＣ−Ｇ３の総量およびＩＱＣ−Ｇ(1-3)の総量が関係していることが示唆された。
【０１８８】
各試料におけるＩＱＣ−Ｇ３の総量およびＩＱＣ−Ｇ(1-3)の総量は次のとおり：
試料６（Ｇ３：７．８モル％，Ｇ(1-3)：４５．１モル％）、試料７（Ｇ３：９．８モル％，Ｇ(1-3)：５４．４モル％）、試料８（Ｇ３：１３．３モル％，Ｇ(1-3)：６４．２モル％）、試料９（Ｇ３：１７．３モル％，Ｇ(1-3)：７９．６モル％）。
【０１８９】
実験例７    血中移行性（経口吸収性）の測定（その６）
調製例４で得られた酵素処理イソクエルシトリン（試料１：IQC-G(mix)(3)）および試料２について、前述の実験５と同様の実験を行い、血漿中のクエルセチン・グルクロン酸抱合体濃度（μg/ml）の曲線下面積および血漿中のクエルセチン濃度（μg/ml）の曲線下面積からＡＵＣ（Area under the curve）（0-3hr）（μg/ml・hr）を算出した。結果を、図９に示す。試料１（IQC-G(mix)）を経口投与した場合に比べて、試料１からＩＱＣを低減したクエルセチン配糖体組成物である試料２を経口投与した場合には、体内吸収性はわずかに高くなった。
【０１９０】
実験例８    血中移行性（経口吸収性）の測定（その７）
調製例７で得られた酵素処理イソクエルシトリン〔試料Ａ（IQC-G(mix)）〕ならびに試料Ｂ、試料Ｃおよび試料Ｄについて、実験例１の方法に従って経口吸収性を調べた。具体的には、前夜から絶食させておいたＳＤ系雄性ラット（７〜９週齢）１７匹を４群（１群あたり３〜５匹）に分けて、それぞれ試料ＡおよびＢを各１９８μｍｏｌ／ｋｇの用量で経口投与した。次いで、実験例１と同様にして、血漿を調製し、血漿中のクエルセチン・グルクロン酸抱合体およびクエルセチンの濃度をＨＰＬＣにて計測した。血漿中のクエルセチン・グルクロン酸抱合体濃度（μg/ml）の曲線下面積および血漿中のクエルセチン濃度（μg/ml）の曲線下面積から算出されるＡＵＣ（Area under the curve）（0-3hr）（μg/ml・hr）の結果を、図１０に示す。
【０１９１】
この結果からわかるように、Ｇ３を含むＩＱＣ−Ｇ(1-3)を総量で７５モル％以上含み、ＩＱＣ−Ｇ(４≦)の総量が１０モル％以下の試料Ｃおよび試料Ｄは、従来の酵素処理イソクエルシトリン（試料Ａ：IQC-G(mix)）よりも有意に高い体内吸収性を示した。とくに体内吸収性の高かった試料Ｃは、ＩＱＣ−Ｇ（2-3）を総量で５０モル％以上含んでいた。一方、Ｇ３を含むＩＱＣ−Ｇ(1-3)を総量で５０モル％以上含むものの、ＩＱＣ−Ｇ(４≦)の総量が２６モル％と比較的多く含む試料Ｂは、従来の酵素処理イソクエルシトリン（試料Ａ）よりも体内吸収性が低かった。
【０１９２】
図９の試料１と試料２、図１０の試料Ａと試料Ｂは、いずれも酵素処理イソクエルシトリン（ＩＱＣ−Ｇ(mix)）からイソクエルシトリン（ＩＱＣ）を低減させたものである。試料２を経口投与した場合には試料１を経口投与した場合に比べて体内吸収性が高いが、試料Ｂを経口投与した場合には試料Ａを経口投与した場合に比べて体内吸収性が低かった。この結果から、Ｇ３を含むＩＱＣ−Ｇ(４≦)の総量が１５モル％以下、かつＩＱＣ−Ｇ(1-3)の総量が６０モル％以上の場合に、従来の酵素処理イソクエルシトリン（試料１または試料Ａ）よりも体内吸収が高くなることが示唆された。
【０１９３】
また、図１と図１０の結果をあわせると、酵素処理イソクエルシトリン（IQC-G(mix)）にアミラーゼ処理等を施すと、ＩＱＣ−Ｇ(４≦)の総量が低減されて相対的にＩＱＣ−Ｇ（1-3）の総量（割合）が高くなることから、体内吸収性を高めることができる。アミラーゼ処理が進んで、Ｇ(４≦)が消失すると、続いてＧ３の分解が始まり、ＩＱＣ−Ｇ３の総量（割合）が低減する。そうすると、ＩＱＣ−Ｇ１の総量およびＩＱＣ−Ｇ(４≦)の総量が一定の下では、ＩＱＣ−Ｇ３の総量が多いほど体内吸収性は高いので、アミラーゼ反応が進むにつれて体内吸収性は低くなっていく。
【０１９４】
実施例１  錠剤
（重量％）
ＩＱＣ−Ｇ（1-3）画分（調製例２）                             １８
乳糖                                                              ７８
ショ糖脂肪酸エステル                                          ４
上記各成分を均一に混合し、１粒２５０ｍｇの錠剤とした。
【０１９５】
実施例２  散剤および顆粒剤
（重量％）
ＩＱＣ−Ｇ（1-3）画分（調製例２）                           １８
乳糖                                                            ６０
でんぷん                                                      ２２
上記各成分を均一に混合し、散剤あるいは顆粒剤とした。
【０１９６】
実施例３    カプセル剤
（重量％）
ゼラチン                                                    ７０．０
グリセリン                                                   ２２．９
パラオキシ安息香酸メチル                               ０．１５
パラオキシ安息香酸プロピル                            ０．３５
水                                                          適   量      
合計                                                   １００．００％
上記成分からなるソフトカプセル剤皮の中に、実施例２で調製した顆粒剤を常法により充填し、１粒250ｍｇのソフトカプセルを得た。
【０１９７】
実施例４    ドリンク剤                                              
呈味：DL-酒石酸ナトリウム                                ０．１０  ｇ
コハク酸                                              ０．００９ｇ
甘味：液糖                                                ８００．００  ｇ
酸味：クエン酸                                             １２．００  ｇ
ビタミン：ビタミンＣ                                         １０．００  ｇ
ＩＱＣ−Ｇ（1-3）画分（調製例２）                           １．８０  ｇ
ビタミンＥ                                                    ３０．００  ｇ
シクロデキストリン                                            ５．００  ｇ
香料                                                          １５．００ｍｌ
塩化カリウム                                                    １．００  ｇ
硫酸マグネシウム                                             ０．５０  ｇ 
上記成分を配合し、水を加えて１０リットルとした。このドリンク剤は、１回あたりの投与用量が約250ｍｌとなるように調製されている。
【０１９８】
実施例５  飴
砂糖                                                        ９８ｇ
水飴（ブリックス７５）                                      ９１ｇ
ＩＱＣ−Ｇ（1-3）画分（調製例２）の濃縮液
（ブリックス４０）                                            ７５ｇ    
上記の各成分をよく混合し、水分が２％になるまで煮詰め、１粒あたり２ｇの飴を作製した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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