(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリモレキュラリティ指数が２．８より低いデンプン加水分解物の製造方法において、
−ほとんどアミロペクチンだけで構成されているろう状のデンプンミルクを、酸加水分解することにより、８と１５の間のＤ．Ｅ．を有する、老化を生じない酸加水分解物を得ること；
−アルカリ金属またはアルカリ土類金属態のマクロ細孔強陽イオン性樹脂において、得られた上記加水分解物をクロマトグラフィにかけること；
−このクロマトグラフィ工程の間、溶出されたデンプン加水分解物を収集すること、
を備えたことを特徴とする製造方法。
【請求項２】
上記ポリモレキュラリティ指数が２．８より低いデンプン加水分解物の重量収率が、上記クロマトグラフィ工程で用いた上記加水分解物の１０と８０％の間にあることを特徴とする請求項１記載の製造方法。
【請求項３】
上記クロマトグラフィがカリウム態の樹脂において行われることを特徴とする請求項１または２に記載の製造方法。
【請求項４】
上記溶出されたデンプン加水分解物が、還元末端をトレハロースに転換する、触媒的水素化または酵素的異性化を含む熱安定化工程に供されることを特徴とする請求項１ないし３のいずれかに記載の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は低いポリモレキュラリティ（polymolecularity）指数を有するデンプン加水分解物の製造方法に関する。
より正確には、特に連続性外来腹膜透析（continuous and ambulatory peritoneal dialysis）の技術に適したポリモレキュラリティ指数の低いデンプン加水分解物の製造方法に関する。また連続性外来腹膜透析における浸透圧剤としての上記加水分解物の使用と同様に、新規産物、すなわちこうして得られたデンプン加水分解物としても興味の対象である。
【０００２】
標準的なデンプン加水分解物は、穀物または塊茎のデンプンを酸あるいは酵素で加水分解することにより製造される。これらの加水分解は、実際には、非常に多岐にわたる分子量のグルコースおよびグルコースポリマーの混合物である。
【０００３】
それらを分類する第１の方法は、それらの還元力の測定であり、この還元力は、従来より、Ｄ．Ｅ．１００を純粋のグルコースまたはデキストロース、すなわちポリマーを構成するモノマー、と定めて定義されたデキストロース等価（dextrose equivalent）あるいはＤ．Ｅ．の概念により表される。デンプンは、非常に大きいグルコースポリマーであり、０に近いＤ．Ｅ．を有する。デンプン加水分解物全体の範囲は、１００に近いＤ．Ｅ．を有する最も加水分解されたものと、０に向かうＤ．Ｅ．を有する最も加水分解されていないものの２つの値の間にある。
【０００４】
しかしながら、そのようなＤ．Ｅ．の測定は、デンプン加水分解物の分子組成を正確に表すには不十分である。したがって、例えば、２つのグルコース分子からなるグルコースポリマーであるマルトースは、２に等しい重合度（Ｄ．Ｐ．）を有し、グルコース２分子当たりただ１つの還元末端を有しており、理論的Ｄ．Ｅ．は５０の領域を示し、これはデンプンおよびグルコースの等重量混合物のものと同じである。
【０００５】
デンプンの全くランダムな酸加水分解、あるいはそれよりは少し秩序立っている酵素加水分解により提供された、グルコースとグルコースポリマーの混合物は、Ｄ．Ｅ．測定だけでは正確に定義することができず、低いＤ．Ｐ．を有する非常に短い分子と、高いＤ．Ｐ．を有する非常に長い分子を同様に含んでいる。
【０００６】
実際に、Ｄ．Ｅ．の測定は、これらのポリマーの平均の重合度とそれらの数平均分子量：Ｍｎのおおよその見当を与えるにすぎない。
【０００７】
数平均分子量Ｍｎは、実際に以下の式で表される。
【化１】
0003983826.tif 000002
【０００８】
デンプンおよびグルコースの等重量混合物の例においては、以下の式が得られる。
【化２】
0003983826.tif 000003
これはグルコースの分子量の２倍に相当し、マルトースの分子量にほぼ等しいものである。
【０００９】
Ｄ．Ｅ．の場合と同様に、Ｍｎでも、デンプン加水分解物のポリマー混合物の分子量の分散を完全に特徴づけることは、不可能である。なぜなら、マルトースと、デンプン、グルコースの等量混合物との間の相違を示すことさえできないからである。
【００１０】
この相違を示すことを可能にするために、重量平均分子量：Ｍｗが定義された。これは以下の式で定義される。
Ｍｗ＝ Σ各分子の重量フラクション × この分子の分子量
【００１１】
所望の例において、以下の式が得られる。
Ｍｗ：０．５×１８０＋０．５×∞＝∞、この結果は３４２に等しいマルトースの分子量から非常に離れているが、この場合、その混合物に大きなポリマーが存在することをよく示唆している。
【００１２】
より単純化するために、以下においては、デンプンは無限の分子量を有すると仮定する。デンプンは非常に大きなグルコースポリマーであるが、その分子量は、実際には、有限で、数百万ダルトンのオーダーである。同様にして、ポリマーを完全に加水分解するために必要な反応の水も考慮に入れないが、しかしポリマーの重量のわずか１０％に相当するにすぎず、マルトースの重量の５％に相当するにすぎない。
【００１３】
Ｍｗ／Ｍｎ比は”ポリモレキュラリティ指数”として参照されることが多く、高分子混合物の分子量の全体的な分散を特徴づけることを可能にする。
【００１４】
純粋なマルトースの理想的な場合、この比は１である。デンプンとグルコースの等量混合物の場合、これは無限に向かうであろう。
【００１５】
実際に、ＭｎとＭｗの値によって、ポリマー混合物を構成する高分子種をよりよく定義することが可能になるが、これらは算出されるのではなく、種々の技術により測定される。Ｄ．Ｅ．の場合、浸透圧測定（osmometry）、沸点測定（ebulliometry）、クライオメトリー（cryometry）、等温蒸留（isothermal distillation）、熱電法（thermoelectric method）またはポリマー末端基の化学的アッセイによって、Ｍｎに近づけることができる。光散乱（light scattering）によっては、Ｍｗに、時にはＭｎに近づけることができる。既知の分子量のデキストランで標準化されたクロマトグラフィカラム上のゲル透過クロマトグラフィ（Alsopら, Process Biochem, 12, 15-22; 1977 またはAlsopら, Chromatography 246, 227-240; 1982）によっても、これらＭｗとＭｎの２つの値に近づけることができる。この最後の測定方法は、グルコースポリマーに非常に適しており、本発明において用いられる方法である。
【００１６】
英国特許出願第２，２４７，２４２号には、アミロース顆粒が記載されており、これは水性相で析出するものであり、かつ４，０００から７，０００ダルトンのＭｎと、１．４から１．７という特に低いポリディスパーシティ指数（polydispersity index）を有し、かくしてこれらの顆粒は５．６００から１１，９００ダルトンのＭｗに固定されているものである。
【００１７】
欧州特許出願第２０７，６７６号は、連続性外来腹膜透析での使用において、無色透明な１０％水溶液を形成し、かつ５，０００から１００，０００ダルトンの重量平均分子量（Ｍｗ）と８，０００ダルトンより低い数平均分子量（Ｍｎ）を有するデンプン加水分解物が好ましいことを教示している。
【００１８】
そのようなデンプン加水分解物は、また、分子量が５，０００と５０，０００ダルトンの間にあるようなグルコースポリマーを少なくとも８０％含むことが好ましく、Ｄ．Ｐ．が３以下（分子量５０４）のグルコースまたはグルコースポリマーをほとんどまたは全く含まず、分子量が１００，０００より高いグルコースポリマー（６００の領域のＤ．Ｐ．）をほとんどまたは全く含まないことが好ましい。
【００１９】
換言すれば、好適なデンプン加水分解物は、ポリモレキュラリティ指数の低いデンプン加水分解物である。
【００２０】
実際に、低分子量モノマーまたはポリマーは、腹膜壁を迅速に越えてしまうので、浸透圧勾配を創出するための継続的な価値を有していないこと、および浸透力を欠く非常に高分子量のポリマーは、それらの逆勾配（retorogradation）の後析出するかもしれないという危険性があるので、避けるべきであり使用してはならないことを、この目的において理解することは容易である。
【００２１】
ポリモレキュラリティ指数の低いこれらのデンプン加水分解物を得るために、本特許出願で提案された方法は以下のものを備えている：
−水混和性の溶剤を用いて、マルトデキストリンの分画沈澱（fraction precipitation）を行うこと、
−あるいは適当な溶出またはカットオフ限界（cut-off threshold）を有する種々の膜を通して、この同じマルトデキストリンの分子ろ過を行うこと。
【００２２】
両方の場合で、これらの方法は非常に高い分子量のポリマーと低い分子量のモノマーまたはオリゴマーの両方を除去することを目的としている。
【００２３】
しかしながら、これらの方法は、その実行性の見地からも、得られる製品の収率と品質の見地からも満足できるものではない。
【００２４】
この理由は、非常に大量の水あるいは、より悪いことには、非常に大量の高価で危険な有機溶媒の扱いを必要とするために、それらの実行が非常に複雑であるからである。それらは、使用される標準デンプン加水分解物に対して、ポリモレキュラリティ指数の低いデンプン加水分解物は２５％より高い収率で得ることができないために、収率が低い。これらの方法はまた、上述の理由で望まれているにもかかわらず、特にポリモレキュラリティ指数の低いデンプン加水分解物を得ることができない。欧州特許出願第２０７，６７６号では、製品のポリモレキュラリティ指数は、実際、最良の場合で７から２．８５の範囲である。
【００２５】
完全に水溶性で、ポリモレキュラリティ指数の低いデンプン加水分解物の製造方法を開発することを目的に、出願人の会社は、この問題に取り組んできた。ここで目的としたポリモレキュラリティ指数は、通常７より低く、好ましくは２．８より低く、さらに好ましくは２．５より低く、また目的としたデンプン加水分解物は、８，０００ダルトンより低いＭｎと、５，０００と１００，０００ダルトンの間のＭｗ、好ましくは８，０００と５０，０００ダルトンの間のＭｗ、より好ましくは１２，０００と２０，０００ダルトンの間のＭｗを有し、従来技術の欠点を有しないものであった。そして、出願人の会社は、膨大な試験の後に、そのようなデンプン加水分解物は以下の工程を備えた方法によって得られることを見いだした：
−ろう状のデンプンミルク（waxy starch milk）を、Ｄ．Ｅ．が８と１５の間になるまで、酸加水分解すること；
−得られた上記酸加水分解物を、任意に、細菌のαアミラーゼを用いて、Ｄ．Ｅ．が１１と１８の間になるまで、酵素加水分解すること；
−アルカリ金属またはアルカリ土類金属態のマクロ細孔強陽イオン性樹脂において、得られた上記加水分解物をクロマトグラフィにかけること；
−このクロマトグラフィ工程の間、溶出されたデンプン加水分解物を収集すること。
【００２６】
このクロマトグラフィ工程の間に溶出されるデンプン加水分解物は、好ましくは、上記クロマトグラフィ工程で用いた上記加水分解物に対して、一般的に１０と８０％の間の重量収率で、集められることが好ましい。
【００２７】
上記クロマトグラフィの重量収率が低いほど、ポリディスパーシティ指数（polydispersity index）が低くなる。５０％の収率は通常、２．５より低いポリディスパーシティ指数に対応する。
【００２８】
本発明の方法では、特にポリモレキュラリティ指数の低い、完全に水溶性のデンプン加水分解物を得ることができる。したがって、新規工業製品として、本発明は、ポリモレキュラリティ指数が２．８より低く、好ましくは２．５より低く、重量平均分子量Ｍｗが、８，０００と２２，５００ダルトンの間、好ましくは１２，０００と２０，０００ダルトンの間にあり、数平均分子量Ｍｎが、８，０００ダルトンより低いことを特徴とするろう状のデンプン加水分解物を目的としている。
【００２９】
この問題となるデンプン加水分解物は、好ましくはグルコースおよび３以下のＤ．Ｐ．のグルコースポリマーを３％より少なく含み、６００より大きいＤ．Ｐ．のグルコースポリマーを０．５％より少なく含む。
【００３０】
出願人の会社は、ほとんどアミロペクチンだけで構成され、通常ろう状のデンプンと呼ばれるデンプンだけが、本発明の方法において原料として用いることができることを発見した。無視できない割合のアミロースを含む穀物デンプンまたは塊茎デンプンは適していない。
【００３１】
本発明の方法で用いられるデンプンは、好ましくはろう状のコーンスターチ（waxy corn starch）であるが、ろう状のコメデンプン（waxy rice starch）またはろう状の塊茎デンプン（waxy tuber starch）もまた適している。
【００３２】
上記酸加水分解は、好ましくは２０と５０ｍｅｇ／ｌ（１リットル当たりミリ等量）の間の値に、デンプンミルクの酸度をもたらすのに十分な量の塩酸を用いて行われる。加水分解の温度は、１０５と１３５℃の間で行うことができるが、一般的には、圧力下で１１７℃の領域の温度で行うことが好ましい。加水分解時間はさまざまで、使用した酸の量およびこの加水分解を行った温度に反比例している。
【００３３】
これらの３つのパラメータの相互依存性は、当業者にはよく知られており、彼らは、この工程の最後において、Ｄ．Ｅ．が８と１５の間にあるデンプン加水分解物を得るようにそれらを調製する方法を知っている。これらの値から遠くはなれすぎているＤ．Ｅ．価では、ポリモレキュラリティの低いデンプン加水分解物を高い収率で得ることができないであろう。
【００３４】
細菌のαアミラーゼを用いた酵素加水分解の任意の工程は、４０と１００℃の間の温度において行われることが好ましく、５０と８０℃の間が好ましい。特に非常に高い分子量の製品の加水分解に対応するような工程は、同じクロマトグラフィ収率において、得られる製品のポリディスパーシティ指数を低くすることができる。
【００３５】
反応媒質のｐＨはついで石灰を用いて調整され、例えば、用いられるαアミラーゼの至適ｐＨに近い値、通常５と７の間に調整される。
【００３６】
使用される酵素の量は、好ましくは使用されるデンプン１ｋｇ当たり２００と２，０００ＴＡＵユニット（熱安定性アミラーゼユニット）の間である。この従来とは異なるユニットは、以下のように定義される：１ＴＡＵユニットは、標準の条件において、１分間当たり可溶性デンプン１ｍｇを、ヨウ素との反応後、６２０ｎｍで、参照色（reference colour）と、同じ吸光度を有する産物に転換する酵素の量である。この標準の条件とは、ｐＨ６．６、温度３０℃、反応時間１５から２５分間である。
【００３７】
この測定の正確な手順はＧＩＳＴ社より得ることができる。
【００３８】
しかしながら、デンプン１ｋｇ当たり５００と１５００ＴＡＵの酵素量を使用することが好ましく、この量は、反応を許容時間内で行うために低すぎることはなく、またこの加水分解を時間内に止めることができるために高すぎることはない。またこの加水分解は１１と１８の間、好ましくは１２と１５の間のＤ．Ｅ．が得られたときに終わらせるべきである。
【００３９】
ここでも、これらの値より遠く離れたＤ．Ｅ．価では、本発明の方法の産物として高い収率で望まれるポリモレキュラリティ指数の低いデンプン加水分解物を得ることはできないであろう。
【００４０】
いかなる化学的または物理的なαアミラーゼの変性の方法も、この加水分解を止めるために使用できる。しかしながら、物理化学的方法が好ましく使用され、これは従来、反応媒質を４より低いｐＨに調整した後、その反応媒質を７０から１２０℃の温度まで、５から６０分間加熱することによって行われている。
【００４１】
酸でまたついで任意に酵素でろう状デンプンを加水分解して得られた反応媒質のクロマトグラフィの後の工程を行う前に、標準ろ過と脱塩化操作を行うことが好ましく、その目的は、酵素変性の物理的または化学的処理によって、使用されるデンプンに含まれているかまたは上記処理を行うために添加された、無機塩または他のイオンまたは非電荷不純物と同様に、不溶性または溶解されていないタンパク質を除去することである。
【００４２】
クロマトグラフィ工程は、それ自体他のデンプン加水分解物との関連で知られている方法で行われる。これはバッチ式（batchwise）あるいは連続式（流動床で摸式化される）により行うことができるが、デンプン加水分解物の、あるいはその異性体の分画において従来用いられている、ゲル構造の陽イオン性樹脂は、この適用に適していないことを出願人の会社は発見したので、マクロ細孔陽イオン性樹脂タイプの吸着剤において行われるべきである。これらの樹脂はまた、強陽イオン性樹脂でなければならず、またアルカリ金属態又は任意にアルカリ土類金属態でなければならない。
【００４３】
しかしながら、カルウム態Ｋ+は、好ましい。
【００４４】
このクロマトグラフィ工程は、例えば、出願人の会社が特許権者である米国特許第４，４２２，８８１号に記載された方法と装置を用いて実行されることができる。クロマトグラフィの吸着剤として使用される樹脂もまた、好ましくは約１００と１，５００ミクロンの間の均一の粒径を有するべきである。好ましい粒径は２００と５００ミクロンの間である。この方法を実施するために特に好ましいタイプの樹脂の一つは、Ｋ+態のレジンＣ１５０であり、ＰＵＲＯＬＩＴＥ社により市販されている。
【００４５】
クロマトグラフィ操作のためのパラメータの選択として、殊更に注目するべきことは、分画化されるシロップの供給のための、溶出相対流速度であり、すなわち、酸で、ついで任意に酵素で加水分解されたろう状のデンプン加水分解物の場合は、ポリモレキュラリティ指数の低いデンプン加水分解物を構成する分画の抽出流速、および樹脂に保持される低分子量グルコースポリマーと、最終的には、米国特許第４，４２２，８８１号の方法と装置を用いたときの、脱離の、吸着の、および富化の領域の組成物とを本質的に結合する分画の相対流速である。これらのパラメーターの選択は、実施例において図示および説明する。
【００４６】
これらパラメータの選択は、この分画工程で使用される、酸−酵素によるろう状のデンプン加水分解物の固体量に対して、ポリモレキュラリティ指数の低いデンプン加水分解物を構成するフラクションＸ1が１０から８０％、好ましくは３０から７０％、より好ましくは４０から６０％となるように定められる。
【００４７】
上記の結果を得るため、上述の米国特許の教示に従ってクロマトグラフィ分画を行なう場合、また使用する吸着剤が粒径４００〜１，２００ミクロンのジビニルベンゼン約７．５％と架橋したマクロ細孔陽イオン性樹脂である場合及びこの樹脂をＫ+型として用いる場合に、以下のようにこれらのパラメーターを選択する：
-吸着剤の７５〜７５０l/h/m3の相対溶出流量
-ろう状のデンプン加水分解物を供給する、吸着剤の１０〜１００l/h/m3の相対的流量
-ポリモレキュラリティー（polymplecularity）が低いデンプン加水分解物からなるフラクションＸ1を抽出する、吸着剤の６５〜６５０l/h/m3の相対的流量
-低分子量のグルコースポリマーを本質的に含むフラクションＸ2を抽出する、吸着剤の２０〜２００l/h/m3の相対的流量。
【００４８】
本発明の製造方法の非常に具体的な条件下で用いたろう状デンプンの加水分解は、クロマトグラフィ処置に用いた加水分解物に、その分子量が２００，０００ダルトンより大であるグルコースポリマーを注目に値するほどは含まないものである。このことにより、単にそこからの平均的サイズのグルコースポリマーを保持するためだけにフラクションＸ1を再分画する必要がないので、このクロマトグラフィー処置は著しく単純化される。この事実によって、本発明の製造方法により得られることができる低ポリモレキュラリティーのデンプン加水分解物の収量が優れていることが部分的に説明される。
【００４９】
フラクションＸ1は、不溶性の物質を含まないことから、この状態で、もしくは脱色、ろ過、脱塩による従来通りの精製の後に、透析溶液を調整するための基盤とすることができるが、その安定性、特に熱的安定性を増大するために化学的もしくは生物学的操作によって有利に修正することもできる。
【００５０】
したがって、その最終的なグルコース還元末端が、ソルビトールの非還元末端に置換されたポリマーを得るために、このフラクションを水素化することができる。
【００５１】
上記のような形質転換は、特に当業者にはよく知られた触媒水素化技術により行なうことができる。これらの技術は例えば、還元糖の溶液を、本発明の場合は低ポリモレキュラリティー指数をもつデンプン加水分解物を、ラネー・ニッケル触媒の存在下において、水素化圧４０〜７０kg/cm2、温度１００〜１５０℃とすることを含む。水素化生成物の事実上の還元力が全く見られなくなるまで、水素化は数時間続けられる。
【００５２】
同様にこのフラクションＸ1は、本発明の製造方法によって得られるポリマーのマルトース還元末端結合をアルファ−アルファ・トレハロース非還元結合に異性化するような特異活性を有するリゾビウム （Rhyzobium ）タイプもしくはアルスロバクター （Arthrobacter） タイプの細菌から特に抽出される酵素の反応に供することができる。
【００５３】
こうした異性化は例えば、その教示を参照としてここに併記した欧州特許出願ＥＰ６０６，７５３号に開示された技術によって行なうことができる。該特許出願は、低ポリモレキュラリティー指数をもつデンプン加水分解物の溶液を、温度４０〜５５℃、pH５〜１０において非還元サッカライドを形成する酵素の反応に供することを含む。ある意味では本発明の製造方法によって得られる生成物中に、この分子上では酵素が低活性である低分子量の分子（グルコース、マルトース、マルトリオース）がないために、弱い還元力しかもたず、何はともあれ無水グルコースの単位からなるものではない生成物が得られる。
【００５４】
ここで、これら２つの方法、水素化もしくは酵素による異性化のいずれもが、これらの反応に供される生成物のＭｗ、Ｍｎもしくはポリモレキュラリティー指数を著しく修正しないことは注目すべきである。同様に、該生成物は、依然として水に完全に可溶である。
【００５５】
本発明の生成物は、腹膜透析において用いられる浸透剤として非常に適当であるにも関わらず、これがデンプン加水分解物として低ポリモレキュラリティーのものであろうと、水素化したものであろうと、異性化した等量のものであろうと、あるいはまた強化甘味料、着色料、調味料、可溶な紅茶もしくはコーヒーの非常に弱い吸湿性支持剤としても使用可能なものであろうと、低ＤＥで老化の影響を受けにくいマルトデキストリン（maltodextrins）を通常使用するあらゆる場合において、有利に用いることができる。
【００５６】
低分子量のグルコースポリマーからなるフラクションＸ2もまた、全量を回収することができ、完全に加水分解してグルコースとすることができ、このことによって、例えば、本発明の製造方法の経済性に貢献している。
【００５７】
このフラクションＸ2はまた、Ｄ．Ｅ．が２２の領域にあり、比較的重いグルコースポリマーを含まないマルトデキストリンとしてこのまま市販することができる。
【００５８】
以下の実施例の目的は、本発明を例示することである。これは、一連の製造方法の、ある具体的な実行につながる具体的な装置を叙述したものであって、特に以下に記載したクロマトグラフィ処置に関しては限定をするものではない。
【００５９】
一つもしくはそれ以上のカラムを用いたバッチ式の方法もまた、他の連続式のの系のように、使用することができる。採用した装置の外形及び樹脂内に生じたピストン運動の効果は、これまで概説したパラメーターに影響を与えるであろうが、当業者にあっては、ここに叙述した通りに実行することができない場合でも、どのようにして平均値近くに修正したらよいか、即座に判るであろう。
【００６０】
【実施例】
（酸性の液化）
ろう状であるが、１１７℃の温度において３２０g/kgの固体含有量を有するデンプンミルクを酸性化により液化した。このためには塩酸を用い、このミルクが３４meg/lの酸性となるように該ミルクに添加した。
【００６１】
この酸性液化は、該加水分解物を、そのＤ．Ｅ．が１１．５に達するとすぐに冷却することで終了した。
【００６２】
そこで、この加水分解物のＭｗが１０．０７０、Ｍｎが２．０２０であった。１００，０００ダルトンより大きい分子のポリマーの含有量は約０．１８％であり、Ｄ．Ｐ．１、Ｄ．Ｐ．２、Ｄ．Ｐ．３の含有量は約７％であった。
【００６３】
（酵素の液化）
このようにして得られた酸性の加水分解物をpH６．２に調整し、その温度を６５℃に上昇させ、さらにGIST社により市販されているＭＡＸＡＭＹＬR 細菌アルファ・アミラーゼを０．１５°／‥の重量分添加した。この酵素は、６，５００TAU/gに特異な活性を有していた。Ｄ．Ｅ．が１２．６になるまで加水分解を続け、その後、該混合物を素速く昇温させ、酵素を変性させるために１２０℃を５分間保った。
【００６４】
こうして、この加水分解物を測定し、Ｍｗ８，６００、Ｍｎ１，６５０の値を得ることができた。１００，０００ダルトン以上の分子のポリマーの含有量は約０．１％にすぎなかった。Ｄ．Ｐ．１＋Ｄ．Ｐ．２＋Ｄ．Ｐ．３の含有量は約８．５％であった。デンプン加水分解物を精製する際の通例に従ってこの加水分解物をろ過し、脱色し、脱塩した。
【００６５】
完全に無色透明の糖液が得られ、このものを３０％の固体含有量にまで再濃縮し、クロマトグラフィによる分別を施すこととした。
【００６６】
（クロマトグラフィ分離）
この加水分解物の分別を、その設置法及び操作法が米国特許ＵＳ４，４２２，８８１に叙述されている一連のクロマトグラフィ装置中で行なった。この方法の理解のために必要であるので、以下にこれらの細部について反復して述べる。
【００６７】
米国特許（図１及び詳細な説明については前述の米国特許を参照のこと）の図２に示されるように、この装置は、PUROLITE社のＣ１５０マクロ細孔強陽イオン性樹脂を充填した、それぞれが２００リットルでＣ1からＣ8の８本のカラムもしくは段からなり、前記樹脂はカリウム型に変換したもので、粒径４００〜１２００μm、架橋度が７．５であるものである。
【００６８】
図１に示されるように、電気栓の制御によって、カラム６及び７に相当する２段の脱離領域I、カラム８に相当する１段の吸着領域II、及びカラム１から５に相当し、ポリモレキュラリティー指数が小さいデンプン加水分解物の強化及び分離のための５段の領域をこの装置中に設置した。この図１は本装置を図２に準じて図解したものであり、下記の事項のみがこの特徴となるもので、
-Ｃ1からＣ8のカラム、
-封入装置、この場合は電気栓１０６、
-水及び加水分解物を供給して分別するための管、これらはそれぞれ１２８、１４に表され、
-管１３８は、グルコース及び樹脂によって保持された小さい分子量のグルコースポリマーの抽出のためのものである（フラクション２）一方、管１４６は、ポリモレキュラリティー指数が小さいデンプン加水分解物の抽出のためのものである（フラクション１）。
【００６９】
封入装置１０６は、その配置箇所において、高分子量ポリマーの強化のための領域で、その末端部にてポリモレキュラリティー指数が小さいデンプン加水分解物が、管１４６により回収される領域IIIと、他方グルコース及び低分子量のグルコースポリマーの脱離のための領域で、その領域の口部から脱離用水が導入される領域Iとの間の防漏出性を完全に維持する。
【００７０】
この封入装置１０６は、樹脂を通過する液相の方向を決定する。
【００７１】
タイマーを１，５００秒にセットし、以下の流量を与えた。
-水、管１２８経由、３６６リットル／時
-固体含有量３０％の加水分解物、管１４経由、５０リットル／時
-ポリモレキュラリティー指数が小さいデンプン加水分解物、管１４６経由、３２６リットル／時
-グルコース及び低分子量グルコースポリマー、管１３８経由、９０リットル／時
【００７２】
１，５００秒後、封入装置１０６はもちろん、全ての導入口及び流出口を右にひねった。
【００７３】
上記流量は、１，５００秒の後に加水分解物の量が吸着樹脂の体積及びその吸着能に矛盾のないものとなるように設定した。同様に、この時導入した水の量では、事実上樹脂に吸着した全てのグルコース及び低分子量のポリマーを脱離することが可能である。
【００７４】
ポリモレキュラリティー指数が小さいグルコースポリマーと低分子量生成物に関する相対的な収量の割合は、管１４６及び１３８の流出量の比率によって与えられる。この実施例において採用した条件の下では、ポリモレキュラリティー指数が小さいグルコースポリマーの収量は、クロマトグラフィ装置に導入した固体含有量の５０％にほぼ等しかった。
【００７５】
この収量を増加させることは、流出口１４６の流量を増加させることによって得られるであろうが、そのポリモレキュラリティー指数が増大し、その重量平均分子量及び数平均分子量が減少した生成物の生成を招くこととなろう。
【００７６】
この収量を減少させることは、明らかに逆の結果につながる。
【００７７】
このクロマトグラフィを行なうために、カラム内の温度を７５℃に保つ。
【００７８】
フラクションＸ1は、上記のような条件下では、実際に前記循環系の樹脂カラムの溶出から生ずる純水の一部から成っているが、２つのサブフラクションに分離している。最初のサブフラクションは、１，５００秒の系の初めの７００秒を表し、各系の初めの６３．５リットルにも等しいが、実際上は回収されない純水から成っている。
【００７９】
このフラクションの第２の部分は、７０１秒目から各１，５００秒の系が終了するまでの間に流出口１４６を経て装置を流出するものであるが、これを回収し、さらに精製する。これは、固体含有量が約４．５％であり、ポリモレキュラリティー指数が小さいデンプン加水分解物からなるフラクションである。
【００８０】
このフラクションを連続性外来腹膜透析にそのまま用いてはならず、以下のように精製を経ねばならないが、この操作はクロマトグラフィ処置の後に得られた生成物のＭｗ、Ｍｎもしくはポリモレキュラリティー指数になんら影響を与えるものではない。
【００８１】
下記の精製処理に先立って、既に叙述した触媒水素化処理もしくは酵素異性化反応を行なうことももちろん可能である。
【００８２】
（精製）
クロマトグラフィ処置により得られ、任意に水素化もしくは異性化したフラクションＸ1の第２の部分を減圧下で固体含有量３０％にまで濃縮した。その後、水素型に変換した強陽イオン性の樹脂、ヒドロキシル型に変換した弱陰イオン性の樹脂、並びに、これもまたＨ+及びＯＨ-型である強陽イオン性樹脂と陰イオン性樹脂との混成基盤からなるイオン交換樹脂の列の上で脱塩した。脱塩は、特に流量について、糖液に１０6ohms.cmより大きい抵抗率が得られるような条件の下で行なった。
【００８３】
脱塩化の後、発熱原性の物質を除去するため、該糖液を、ＣＥＣＡ社により市販されているＡＣＴＩＣＡＲＢＯＮ ３Ｓ 木炭１％を用いて処理した。
【００８４】
この糖液を殺菌するため網目サイズ０．２２μmの細菌用フィルターでろ過し、その後これを厳密な無菌状態の下で噴霧して無味無臭の粉末を得た。
【００８５】
ポリモレキュラリティー指数が低いこのデンプン加水分解物は、以下の分析結果を与える：
【００８６】
Ｄ．Ｐ．１＋Ｄ．Ｐ．２＋Ｄ．Ｐ．３の含有量は１％であり、分子量が１００，０００ダルトンより大きいグルコースポリマーの含有量は、０．２５％より少なかった。
Ｍｗ          １４，６００
Ｍｎ            ６，３００
Ｍｗ／Ｍｎ＝２．３
【００８７】
本発明の製造方法によって得られる生成物のポリモレキュラリティー指数は、極めて小さいことが判るであろう。
【００８８】
指針としては、グルコース及び低分子量のグルコースポリマーを混合するフラクションＸ2の分析は、以下の分析結果を与えた：
Ｍｗ            ４，４００
Ｍｎ                ８７０
【００８９】
こうして精製し、脱水したポリモレキュラリティー指数が小さいデンプン加水分解物は、他の電解液と容易に溶解し、連続性外来腹膜透析において極めて性能の高い浸透剤を与えた。
【図面の簡単な説明】
【図１】  本発明の製造方法においてデンプン加水分解物の精製に用いるクロマトグラフィ装置のカラム部分を例示した図である。
【図２】  本発明の製造方法においてデンプン加水分解物の精製に用いるクロマトグラフィ装置の一例を示した図である。
【図１】
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【図２】
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