(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
次式
【化１】
0004010714.tif 000010
で表わされる２−ホルミル−５−（３′，４′−ジメトキシベンゾイルオキシ）−３−メチル−２−シクロペンテン−１−アセトアルデヒドであるイリドイド誘導体。
【請求項２】
次式
【化２】
0004010714.tif 000011
で表わされる２−ホルミル−５−（４′−メトキシベンゾイルオキシ）−３−メチル−２−シクロペンテン−１−アセトアルデヒドであるイリドイド誘導体。
【請求項３】
請求項１または２のイリドイド誘導体を有効活性成分とする抗炎症剤。
【請求項４】
請求項１または２のイリドイド誘導体を有効活性成分とする抗自己免疫疾患剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
この出願の発明は、イリドイド誘導体とこれを有効成分とする抗炎症剤並びに抗自己免疫疾患剤関するものである。
【０００２】
【従来の技術とその課題】
ヒト血液中の白血球やリンパ球は、炎症性物質や抗原物質等に暴露されると活性化することで知られている。そして、白血球は活性酸素や細胞毒素等を放出して、血管内皮細胞や内蔵器官の上皮細胞に傷害を与え、心不全や腎不全、消化器障害等を引き起こす。また、リンパ球は、ウイルスや菌等の異種抗原の感染が誘因となり、自己抗原を攻撃して慢性関節リウマチや糖尿病等の自己免疫疾患を招来する。このように疾患の発生機序についての理解は深まっているものの、これら疾患に対処するための薬剤については、より低毒性で有効性が高い抗炎症剤や抗自己免疫疾患剤については依然として充分に満足できるものは得られていない。特に自己免疫疾患については、疾病の種類が多く、未だに有効な治療薬が見出されていないのが現状である。
【０００３】
そこで、この出願の発明は、より低毒性で有効性が高く、ヒト白血球からの活性酸素発生の抑制や、慢性関節リウマチモデルであるマウスコラーゲン関節炎に対する予防及び治療効果に優れ、難病である慢性関節リウマチや、糖尿病、関節症等の治療薬としての適用が期待される新しい活性成分物質と、これを有効成分とする抗炎症剤並びに抗自己免疫疾患剤を提供することを課題としている。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
この出願の発明は、上記のとおりの課題を解決するものとして、第１には、
次式
【０００５】
【化３】
0004010714.tif 000002
【０００６】
で表わされる２−ホルミル−５−（３′，４′−ジメトキシベンゾイルオキシ）−３−メチル−２−シクロペンテン−１−アセトアルデヒドであるイリドイド誘導体を提供する。
【０００７】
また、この出願の発明は、第２には次式
【０００８】
【化４】
0004010714.tif 000003
【０００９】
で表わされる２−ホルミル−５−（４′−メトキシベンゾイルオキシ）−３−メチル−２−シクロペンテン−１−アセトアルデヒドであるイリドイド誘導体を提供する。
【００１０】
そして、この出願の発明は、第３には前記いずれかのイリドイド誘導体を有効活性成分とする抗炎症剤を提供し、第４には、これらいずれかのイリドイド誘導体を有効活性成分とする抗自己免疫疾患剤を提供する。
【００１１】
【発明の実施の形態】
この出願の発明は、上記のとおりの特徴をもつものであるが、以下にその実施の形態について説明する。
【００１２】
まず、この出願の発明が提供する前記のイリドイド誘導体化合物は、天然植物成分として得られるという特徴を有している。すなわち、南米産Bignoniaceae科樹木テコマ・イペ・マルトTecoms ipe Mart.（異名Tabebuia impetiginosa またはTabebuia avellanedae)
（橋本梧郎：ブラジル産業用植物事典、アポック社出版局、鎌倉、１９９６．）の樹皮を材料とする。この植物は、ブラジル、アルゼンチン、メキシコ、パラグアイなどでラパチョ、パウダルコ、パウデアルコ、イペ、イペローザ、タヒボ、イペロッショなどと称呼されている全ての植物を含んでいる。
【００１３】
これら植物の樹皮よりこの出願の発明の化合物である前記の；
化合物１
２−ホルミル−５−（３′，４′−ジメトキシベンゾイルオキシ）−３−メチル−２−シクロペンテン−１−アセトアルデヒド  ２−formyl−５−（３′，４′−dimethoxybenzoyloxy)−３−methyl−２−cyclopentene −１−acetaldehyde
分子量  ３３２
メタノール、ジクロロエタン、ＤＭＳＯ可溶
化合物２
２−ホルミル−５−（４′−メトキシベンゾイルオキシ）−３−メチル−２−シクロペンテン−１−アセトアルデヒド  ２−formyl−５−（４′−methoxybenzoyloxy)−３−methyl−２−cyclopentene −１−acetaldehyde
分子量  ３０２
メタノール、ジクロロエタン、ＤＭＳＯ可溶
が分離されることになる。
【００１４】
以上の化合物は、抗炎症剤、抗自己免疫疾患薬（たとえば、慢性関節リウマチ、糖尿病、関節症、呼吸器障害、ブドウ膜炎、抗原病、全身性エリテマトージス、ペーチェット病、膜性腎症なども含む）として有用な生理活性を有している。
【００１５】
そこで以下に実施例を示し、さらに詳しくこの出願の発明について説明する。
【００１６】
【実施例】
（実施例１）
前記のテコマ・イペ・マルトの乾燥樹皮（１７ｋｇ）をメタノールで抽出し、その抽出物（７４０ｇ）を順次、ヘキサン（抽出量：４１ｇ）、クロロホルム（抽出量：１３７ｇ）、ジクロロエタン（抽出物３５ｇ）、酢酸エチルエステル（抽出量：１１０ｇ）でさらに抽出する。ジクロロエタン抽出物４ｇをクロロホルムに完全に溶かし、LiChroprep Si 60（メルク社製  １０４０１）のカラムクロマトグラフィーにかけ、クロロホルムで溶出する（５００ｍｌずつ）。２番目から６番目までの溶出液を集め、シリカゲルの分取薄層クロマトグラフィー（メルク社製  ５７４４）のプレートを用い、クロロホルム：メタノール：アセトン（１２０：２：１）で展開する。Ｒｆ値０．４３の部分を分取し、オイル状の目的の活性物質を得る（１５ｍｇ）。これをさらにシリカゲル５７４４を用い、ベンゼン：エーテル（２：３）で展開し、Ｒｆ値０．３８（化合物１）とＲｆ値０．４８（化合物２）の２つの部分に分離する。それぞれの化合物は、５００ＭＨｚの 1Ｈ−ＮＭＲ、13Ｃ−ＮＭＲ、ＨＭＱＣ、ＨＭＢＣ、ＮＯＥＳＹ、質量分析、ＩＲを測定し、その構造を決定した。
【００１７】
化合物１は、分析結果（表１）から、次式で表される３，４−ジメトキシ安息香酸誘導体である。
【００１８】
【化５】
0004010714.tif 000004
【００１９】
【表１】
0004010714.tif 000005
【００２０】
化合物２は、分析結果（表２）から、次式で表される４−メトキシ安息香酸誘導体である。
【００２１】
【化６】
0004010714.tif 000006
【００２２】
【表２】
0004010714.tif 000007
【００２３】
毒  性
培養ヒト肺癌細胞に対する５０％致死濃度は０．５ｍｇ／ｍｌで、極めて低毒性である。
（実施例２）
＜抗炎症活性＞
原理：白血球を発癌プロモータ活性を有する起炎剤ホルポールミリステートアセテート（ＰＭＡ）で処理すると、白血球のＮＡＤ（Ｐ）Ｈオキシダーゼが活性化し、活性酸素の一種スーパーオキシドアニオンを産生する。スーパーオキシドアニオンはＮＢＴ（ニトロブルーテトラゾリウム）試薬を還元して青色のジホルマザンを生成するので、被験物質による発色抑制効果を観察し、抗炎症活性を測定する（Hirai, K.-1., Moriguchi, K. and Wang, G.-Y.: Human neutrophile produce free radicals from the cell-zymosan interface and during phagocytosis and from the whole plasma membrane when sitmulated  with calcium ionophore A23187. Exp. Cell Res, 194: 19-27, 1991.) 。
＜試験材料＞
ヒト白血球：健常成人静脈血より得た白血球を用いた。
＜試験方法＞
25μｇ／ｍｌ  ＮＢＴ、０．１％ブドウ糖、１０ｍＭアジ化ナトリウムを含むリンガー生理的食塩水に、１×１０4 個の白血球と５００ｎｇ／ｍｌ  ＰＭＡを加え３７℃で２０分間反応を行い、ＤＭＳＯで色素を抽出し、分光光度計を用いて波長５６０ｎｍの吸光度変化を記録した。
＜被験物質＞
（１）ジクロロエタン可溶画分から得た化合物１
（２）ジクロロエタン可溶画分から得た化合物２
＜コントロール＞
（１）ジクロロエタン可溶画分から得た４−メトキシ安息香酸（４−methoxybenzoic acid)
（２）ジクロロエタン可溶画分から得た３，４−ジメトキシ安息香酸（３，４−dimethoxybenzoic acid)
（３）ヘキサン可溶画分Ｈ
（４）クロロホルム可溶画分Ｃ
（５）酢酸エチルエステル可溶画分Ａ
＜試験成績＞
（１）化合物１および化合物２の試験成績を図１に示した。
【００２４】
化合物１は４μｇ／ｍｌで１００％白血球の炎症反応を阻害し、５０％阻害濃度Ｉ50は１．０５μｇ／ｍｌであった。
化合物２は３μｇ／ｍｌで１００％白血球の炎症反応を阻害し、５０％阻害濃度Ｉ50は０．８μｇ／ｍｌであった。
（２）コントロール１の４−メトキシ安息香酸およびコントロール２の３，４−ジメトキシ安息香酸の試験成績を図２に示した。
【００２５】
４−メトキシ安息香酸および３，４−ジメトキシ安息香酸とも白血球の炎症反応を阻害しなかった。
（３）コントロール３のヘキサン可溶画分Ｈ、コントロール４のクロロホルム可溶画分Ｃおよびコントロール５の酢酸エチルエステル可溶画分Ａの試験成績を図３に示した。
【００２６】
ヘキサン可溶画分Ｈ、クロロホルム可溶画分Ｃおよび酢酸エチルエステル可溶画分Ａとも白血球の炎症反応を阻害しなかった。
（実施例３）
＜活性酸素スカベンジャー活性がないこと＞
化合物１および化合物２がＳＯＤ様活性をもつ活性酸素スカベンジャーではないことを、キサンチン−キサンチンオキシダーゼ法を用いて証明した。もし同法により生成するスーパーオキシドアニオンを不均化する場合は、ＳＯＤ様活性をもつ活性酸素スカベンジャーであるか、またはキサンチンオキシダーゼの阻害剤と同定される（鈴木敬一郎：Ｍｎ−ＳＯＤ，Ｃｕ，Ｚｎ−ＳＯＤ測定法、活性酸素実験プロトコール：測定法、遺伝子解析、病理生理モデル、秀潤社、東京、p.120-124, 1994.）。
＜試験方法＞
炭酸ナトリウム緩衝液に０．１ｍＭキサンチンと１０ｍＵ／ｍｌのキサンチンオキシダーゼを含む反応液に、被験物質を加えたときのＮＢＴ試薬の発色抑制効果を波長５６０ｎｍの吸光度変化で測定した。
＜試験成績＞
化合物１および化合物２の試験成績を図４に示した。
【００２７】
化合物１および化合物２とも、スーパーオキシドアニオンを不均化しなかった。この事実から、化合物１および化合物２は活性酸素スカベンジャーではなく、白血球に直接作用してその活性化を抑制する抗炎症剤であることが確認された。（実施例４）
＜抗リウマチ活性＞
慢性関節リウマチは、原因不明に手足や指の関節が腫れ、激しい痛みとこわばりを伴い、やがて破壊されて手足を動かすことが出来なくなる。最近の研究で、ウイルスや菌の感染に関連して自己免疫疾患発病の可能性が明らかにされ出している。即ち、感染したウイルスゲノムが免疫細胞の遺伝子に組み込まれることによって、自己抗原に対する免疫寛容が消失し、ウイルスや菌との共通の抗原基がある自己抗原をエヘクターＴリンパ球が攻撃するとしている。しかし全容が明らかにされたわけではない（住田孝之：自己免疫疾患におけるＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）レパトア、実験医学、10：118-126, 1992.）。
【００２８】
この実施例では、ヒトの慢性関節リウマチモデルであるマウスコラーゲン関節炎発症に対する化合物１および化合物２の抑制効果を調べた。
＜試験動物＞
クリーン動物のＤＢＡマウス（雄、生後４週令）３０匹を用いた。
＜試験方法＞
関節軟骨成分のコラーゲンIIを背部皮内注射し（一次感作）、３週間後に腹腔内注射して（二次感作）関節炎を発症させ、６週目に４肢の腫れのリウマチスコアをカウントする。
【００２９】
発症予防群では、被験物質の化合物１および化合物２混合物（１％アルコールに０．１４μｇ含む）を一次感作の日から毎日２週間ゾンデを用いて経口投与した。
【００３０】
治療群では、発症６週目から２週間、毎日被験物質の化合物１および化合物２混合物を経口投与し、８週目に４肢の腫れのスコアをカウントする。
＜試験成績＞
予防効果
化合物１および化合物２混合物の試験成績を表３に示した。
【００３１】
コントロール（発症群）では、９０％が発症した。
予防群では、４０％と発症が抑えられ、５０％の予防効果を示した。
【００３２】
【表３】
0004010714.tif 000008
【００３３】
治療効果
コントロール（発症群）では、６週から８週にかけてリウマチスコアが２．３から４．０へ増悪した。
【００３４】
治療群では、６週から８週にかけてリウマチスコアが３．３から３．０へ低下改善した。
本試験成績から化合物１および化合物２に、慢性関節リウマチの予防および治療効果があることが証明された。
（実施例５）
＜化合物１および化合物２の有効症例＞
この発明の化合物の抽出原料テコマ・イペ・マルトは食品として市販利用されており、同樹皮粉末の熱水抽出液には、化合物１および化合物２が含まれる。この熱水抽出液を飲用することで自己免疫疾患の改善がみられた。この部分からは、化合物１および化合物２以外の有効な成分は見出されていない。
＜試験方法＞
（株）エルエスアール（金沢市八木１−１３−１）から入手した純粋テコマ・イペ・マルト（ＴＥＣＯＭＡR）を、１日当たり６ｇ宛３０分間熱水処理した抽出液６００ｍｌ（約５０μｇの化合物１および化合物２混合物を含む）を樹木茶としてボランティア患者が自主的に３０日間飲用した。
＜試験成績＞
試験成績を表４に示した。
【００３５】
慢性関節リウマチ患者１２名（男６、女６）中、疼痛、こわばりが消失または改善したもの９名（男５、女４）で、有効率７５％であった。
糖尿病患者１５名（男６、女９）中、血糖値が正常化または改善したもの１４名（男５、女９）で、有効率９３％であった。
【００３６】
全身性エリテマトージスまたは膠原病患者４名（女）中、４名全員が、ステロイド剤の副作用消失、こわばりや腫脹の消失、タンパク尿、耳鳴り、発熱の消失または改善をみ、有効率１００％であった。
【００３７】
【表４】
0004010714.tif 000009
【００３８】
【発明の効果】
この出願の発明によれば、天然植物成分としてより低毒性で、安全性に優れているとともに、抗炎症活性、抗自己免疫疾患活性を有する新しい生理活性化合物が提供される。
【図面の簡単な説明】
【図１】ＰＭＡで誘導したヒト白血球の炎症反応に対する、この発明の化合物１および化合物２による抗炎症活性を示した図である。
【図２】ＰＭＡで誘導したヒト白血球の炎症反応に対する、４−メトキシ安息香酸および３，４−ジメトキシ安息香酸による抗炎症活性を示した図である。
【図３】ＰＭＡで誘導したヒト白血球の炎症反応に対するクロロホルム可溶画分Ｃ、ヘキサン可溶画分Ｈおよび酢酸エチルエステル可溶画分Ａによる抗炎症活性を示した図である。
【図４】キサンチン−キサンチンオキシダーゼ法を用いたスーパーオキシドによるＮＢＴ反応に対する、化合物１および化合物２によるＳＯＤ様活性を示した図である。
【図１】
0004010714.tif 000012
【図２】
0004010714.tif 000013
【図３】
0004010714.tif 000014
【図４】
0004010714.tif 000015