(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
サンプル中の被検体の存在あるいは量を測定するための該サンプル中の該被検体の量を示す多量の酸化剤を生じる酵素を含んでなる試薬系を含む検査装置であって、該試薬系が、該酸化剤によって酸化されると発色団を形成する色素カップルを含んでなり、該色素カップルが、式
【化１】
0003878702.tif 000011
式中、Ｒは、式（Ｖ）
【化２】
0003878702.tif 000012
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４のいずれもが、Ｈ、アルキル、アリール、シリル、ハリド、ハイドロキシド、メルカプチド、アルコキシド、チオアルコキシド、アミン、スルホネート、あるいはカルボキシレートからなる群から独立して選択され、Ｘが、アミン、スルホネート、あるいはカルボキシレートからなる群から選択される。）で表される基であり、そして
Ｙは、ＮＯ２、ＳＯ３−、ハリド、アルキル、あるいはＺがアルキルまたはアリールのいずれかであるＳｉＺ３からなる群から選択される、
で示されるが、但し、メタ[３‐メチル  ２‐ベンゾチアゾリノン  ヒドラゾン]  Ｎ−スルホニルベンゼンスルホネート  １ナトリウムを除く、化合物を含んでなる検査装置。
【請求項２】
酵素が、グルコースオキシダーゼ、コレステロールオキシダーゼ、アルコールオキシダーゼ、ウリカーゼ、アルデヒドオキシダーゼ及びグリセロ燐酸オキシダーゼからなる群から選択される請求項１記載の検査装置。
【請求項３】
酵素が、グルコースオキシダーゼと西洋ワサビペルオキシダーゼからなる，請求項１又は２記載の検査装置。
【請求項４】
色素カップルが、さらに３−ジメチルアミノ安息香酸からなる請求項１〜３のいずれかに記載の検査装置。
【請求項５】
色素カップルが、さらに８−アニリノ−１−ナフタレンスルホネートからなる請求項１〜３のいずれかに記載の検査装置。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、全血のような水性の流体中の化学的及び生化学的成分（被検体）を比色測定するための検査装置及び方法に関し、より詳細には、そのような装置及び方法において用いるための色素カップルに関する。
【０００２】
【従来の技術】
着色した水性の流体、特に、全血及び尿のような着色した生物学的流体、並びに血清や血しょうのような生物学的流体の派生物中の、化学的及び生化学的成分の定量は、ますます重要である。重要な応用は、医療診断や治療に、そして、治療薬、酒、危険な化学薬品などにさらされている量を測ることにある。いくつかの例において、測定される物質の量が非常に少ない（デシリットル当たり１ミリグラムあるいはそれ以下の範囲にある）か、あるいは、正確に測定することが非常に困難であるかのいずれかのために、用いられる装置は複雑で、熟練した研究室の人員に対してのみ有用である。この場合、その結果は、一般的に、サンプリング後、数時間または数日間入手できない。他の例においては、迅速なあるいは即時の情報表示を有する研究室の環境外で、その検査を日常的に、すばやく、そして再現性よく行う上で、素人のオペレーターの能力がしばしば問題にされる。
【０００３】
一つの一般的な医療検査は、糖尿病患者の血液グルコースレベルの測定である。現在の教示は、糖尿病患者の固有の場合の性質や重度により、一日に２ないし７回、その血液グルコースレベルを測定するよう、糖尿病患者に勧告する。測定されたグルコースレベルで観察されたパターンに基づいて、その疾患をよりよく管理するために、その患者と医師は一緒に、食事、運動、及びインシュリン摂取量を調製する。明らかに、この情報は、即時に患者に対して利用できなければならない。
【０００４】
多くの血液グルコース検査法や検査品は、当該技術分野において知られており、これらの全ては、種々の制限を被っている。大きな改善が、Ｒ．Ｐｈｉｌｌｉｐｓ等により、米国特許第４，９３５，３４６号、第５，０４９，４８７号、第５，０５９，３９４号、及び第５，１７９，００５号に開示され、そして特許請求されており、これらの特許は、本願と同じ譲り受け人へ譲渡されている。
【０００５】
これらの特許に開示され、そして特許請求された方法は、分析される流体が、一つの面に加えられ、そして読み取られる面へマトリックスを通って移動する時に、被検体と相互作用して光を吸収する反応生成物を生じる試薬が含浸された、不活性な多孔質マトリックスのもう一つの面からの反射を読み取ることを必要とする。試薬は、サンプル中のグルコースを消費して過酸化水素を生成するグルコースオキシダーゼを含み、過酸化水素は、もう一つの酵素西洋ワサビペルオキシダーゼの存在下、３−メチル−２−ベンゾチアゾリノン  ヒドラゾン  塩酸塩（ＭＢＴＨ）と３−ジメチルアミノ安息香酸（ＤＭＡＢ）を含む色素カップルを酸化して青色の色素を生じる。次に、反射率の測定が、２つの別々の波長でなされる。血液中のグルコースの濃度は、ＬＥＤ分光光度型の助けで、その色素の着色の強度を基にして測定される。
【０００６】
１９９４年５月１９日に出され、共通して譲渡された私の同時係属中のＵ．Ｓ．Ｓ．Ｎ．２４５，９４０において、上記のＭＢＴＨ−ＤＭＡＢの色素カップルの代わりに用いられる、遊離形態または酸形態の３−メチル−２−ベンゾチアゾリノン  ヒドラゾン（ＭＢＴＨ）と酸または塩形態の８−アニリノ−１−ナフタレンスルホネイト（ＡＮＳ）を含んでなる、色素カップルが開示されている。このＭＢＴＨ−ＡＮＳ色素カップルは、酸化に際して溶解性がより低く、それ故、酸化されたＭＢＴＨ−ＤＭＡＢ色素カップルに比べると、最小の色素退色で、より安定な終点を提供する。
【０００７】
これらの先行の系は、グルコースの存在あるいは量を測定するための有用な検査装置を作製するために効果的に用いられてきたが、いくつかの欠点が示されてきた。そのような色素カップルが用いられる検査装置は、家庭用と専門用の両方のために考案され、そのまま、それらが、使用者の在庫品の中にかなりの期間残り、そしてもちろんこの期間中有効のままであることを予想して、製造業者や配給者により販売される。これが相当の保存期限を必要とするので、色素カップルの成分の一つとしてＭＢＴＨを用いる製品の処方に困難をもたらしてきた。
【０００８】
第一に、ＭＢＴＨの安定性は、温度とアルカリ性の上昇に伴って低減することが、見いだされている。酸形態のＭＢＴＨは、非常に不安定で、昇華しやすい。これに対応する試みにおいて、好ましい形態は、ＭＢＴＨの酸水和物、例えば、３−メチル−２−ベンゾチアゾリノン  ヒドラゾン  塩酸塩である。残念ながら、この水和物は、それ自身が、温度の上昇に不安定で、加熱すると容易に酸を遊離したＭＢＴＨとＨＣｌに解離する。高いｐＨで低い安定性を有することに加えて、そのカップリング相手と酸化的に反応するＭＢＴＨの効率は、アルカリ性の増加とともに非常に減少し、それ故、高いｐＨでは、その色素カップルから本質的にほとんどあるいは全く着色を生じない。
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】
これらの関係を考慮して、不安定性と無効率の影響を最小にするために、実際上、ＭＢＴＨは、大過剰でかつ低いｐＨで用いられなければならない。理想的には、２．０以下のｐＨが、その化合物の少ない昇華と高い効率の観点から、好まれる。残念ながら、ここに考えられる系には、そのような理想的な低いｐＨは、用いられない。上記のように、用いられる試薬系は、基質の被検体に作用し、検査されるサンプル中に存在する被検体の量を示す、多量の酸化剤を生じる酵素に依存する。ＭＢＴＨ試薬に関して理想的な低いｐＨは、例えばグルコースオキシダーゼや西洋ワサビペルオキシダーゼのような酵素には、全く不適当である。そのような低いｐＨでは、そのような商業的に入手できる酵素の多くは、ほとんどあるいは全く活性がない。従って、当該技術は、例えば、４のような中等度のｐＨ、及び、要求される保存期限用の検査装置の効率を保証するための大過剰の試薬からなることを強いられてきており、これらを選択してきた。
【００１０】
【課題を解決するための手段】
本発明の教示に従えば、非常に安定な色素カップルの成分が、酵素を含む検査装置において提供される。その成分は、先行の検査装置に用いられたものに比べて、高い酵素効率と両立できる比較的高いｐＨの条件で、多種多様のカップリング相手と効率の良い酸化カップリングができる。特に、本発明の色素カップルの化合物は、サンプル中の被検体の存在あるいは量を検出するための試薬系を含む、検査装置であって、その試薬系は、被検体の存在下、サンプル中の被検体の量を示す多量の酸化剤を生じる、一つあるいはそれ以上の酵素からなる装置である。この教示に従うと、その試薬系は、さらに、生じた酸化剤により酸化されると発色団を形成することのできる、色素カップルからなり、その色素カップルは以下の化合物からなる。
【００１１】
【化３】
0003878702.tif 000002
【００１２】
式中、Ｒは、アルキル、置換されたアルキル、アリール、置換されたアリール、複素環式、第四級アミンまたは有機酸基からなる群から選択され、Ｙは、ＮＯ2、ＳＯ3−、Ｈ、ハリド、アルキル、あるいは、ＺがアルキルまたはアリールのいずれかであるＳｉＺ3からなる群から選択される。好ましくは、ＹはＨである。好ましい態様において、Ｒは、
【００１３】
【化４】
0003878702.tif 000003
【００１４】
式中、Ｒ1，Ｒ2，Ｒ3，及びＲ4はいずれも、Ｈ、アルキル、アリール、シリル、ハリド、ヒドロキシド、メルカプチド、アルコキシド、チオアルコキシド、アミン、スルホネート、あるいはカルボキシレートからなる群から独立して選択され、Ｘは、アミン、スルホネート、あるいはカルボキシレートからなる群から選択される。特定の態様において、その検査装置は、全て共通して血液の被検体として測定される、グルコース、コレステロール、アルコール、尿酸、ホルムアルデヒド、あるいはグリセロール−３−燐酸のような被検体の存在あるいは量を測定するために提供される。これらの例では、酵素系は、ペルオキシダーゼまたはペルオキシダーゼ様活性を有する無機複合体、例えば、ヘマチン、ヘミン、及びテトラキス［スルフォフェニル］ポルフィリン  マンガネーゼと共に、グルコースオキシダーゼ、コレステロールオキシダーゼ、アルコールオキシダーゼ、ウリカーゼ、アルデヒドオキシダーゼ、及びグリセロ燐酸オキシダーゼからなる群から選択された酵素を含んでなる。選択されるペルオキシダーゼは、西洋ワサビペルオキシダーゼである。
【００１５】
上記のように、本発明は、流体サンプル中の被検体の存在あるいは量を測定するための検査装置で用いるための色素カップル化合物に関する。本発明の好ましい態様の図１を参照すると、検査装置は、その中に化学試薬系を取り込み、そして支持体１２に粘着された、多孔質マトリックス１０を含んでなる。開口部１６が、支持体を貫いて設けられそれによりマトリックス１０のサンプル受け面１７に、流体サンプルが加えられる。化学系は、流体サンプル中に存在するいかなる被検体とも反応し、その流体サンプル中に存在する被検体の量を示す光反射性を、マトリックスの検査面１９にもたらすように提供される。その検査面は、裸眼で読んでもよいが、好ましくは、分光光度計を用いて読まれる。そのような装置の要素は、図１に略図的に示され、そして一定の波長光を試検査面１９上に好ましく当てるための、発光ダイオードのような光源１８を含んでなる。その上に、面１９からの反射光を検出し、そして検出された光の量を示すシグナル２２を生じるための光検出器２０も提供される。そのシグナルは、サンプル中の被検体の量を計算するために読み取り装置に組み入れられた、例えばマイクロプロセッサーにより処理することができる。
【００１６】
上記のような系は、今や当該技術分野において知られており、米国特許第４，９３５，３４６号、第５，０４９，４８７号、第５，０５９，３９４号及び第５，１７９，００５号に詳細に述べられている。そのような系は、これらの検査装置が読み取り装置に挿入され、次いでサンプル、例えば血液が、サンプル受け面１７に加えられることを意図する。図２は、これに対する別の態様を表す。ここでは、血液がまず最初にサンプル受け面１７に加えられ、そしてその後、検査面１９が読みとりのために装置としてのみ提供されているにすぎない。全ての他の点において、図２の中で番号の付けられた多くの要素は、図１のものと同一である。
【００１７】
流体サンプル中の被検体と多孔質マトリックス内に存在する化学試薬との間の一連の化学反応の作用により、検査面の反射特性は、サンプル中の被検体量と共に変わる。特に、マトリックスは、被検体と基質と共に、過酸化水素あるいは他の強酸化剤を生じる、一つあるいはそれ以上の酵素を含む。色素カップル、すなわち、存在する発色団の量に比例して、特定の波長で光を吸収する発色団を形成するように、酸化され得る２つの化合物が、マトリックスに含まれる。酵素の触媒する反応により形成される酸化剤は、次にその色素サンプルと反応し、発色団を生じる。
【００１８】
酵素の選択、結果として生じる酸化剤、及び色素カップルの選択は、当該技術分野において幅広く変わり、どの被検体が測定されているかということに大いに関わっている。例えば、血液サンプル中のようなコレステロールの測定の場合、コレステロールオキシダーゼのようなオキシダーゼ酵素を用いることができる。同様に、メタノールあるいはエタノールの測定は、アルコールオキシダーゼを用いることができる。ホルムアルデヒドの測定は、アルデヒドオキシダーゼを用いることができる。あるいはグリセロール−３−燐酸の測定は、グリセロ燐酸オキシダーゼを用いることができる。これらの酵素が触媒した反応の過酸化水素生成物は、色素カップルと反応して発色団を形成するための活性酸化剤を生じるように、続いて酵素が触媒する反応により、さらに修飾することができる。こうして、例えば、活性酸化剤を生じるための過酸化水素の反応は、西洋ワサビペルオキシダーゼ酵素により触媒されることができる。
【００１９】
従って、本発明の教示は、広く応用できることが理解されるけれども、以下の記述では、被検体は、全血の流体サンプル中のグルコースにより例示される。次に、好ましい化学系は、グルコース基質に働き過酸化水素を生じる酵素、グルコースオキシダーゼにより例示される。過酸化水素は、順に、もう一つの酵素、西洋ワサビペルオキシダーゼの反応により、活性酸化剤に変えられる。
【００２０】
これまで、上記のようなグルコース診断検査に広く用いられる色素カップルは、３−メチル−２−ベンゾチアゾリノン  ヒドラゾン、塩酸塩水和物（ＭＢＴＨ塩酸塩水和物）（式Ｉ）とジメチルアミノ  ベンゼン（式ＩＩ）との組み合わせであった。これらの化合物は、以下の酸化反応を行い、青色に着色した発色団（式ＩＩＩ）を生じる。
【００２１】
【化５】
0003878702.tif 000004
【００２２】
［Ｏ］＝過酸化水素／西洋ワサビペルオキシダーゼ
上記のように、このシステムは、いくつかの欠点を被る。ＭＢＴＨは、塩酸塩水和物の形態においてさえ、熱やアルカリ性の作用の下、比較的不安定である。さらに、上記の反応は、高度に酸性の条件、例えば、ｐＨ２あるいはそれ未満の下で最も効率がよい。残念ながら、これらの条件では、検査装置に用いられる酵素、例えば、グルコースオキシダーゼや西洋ワサビペルオキシダーゼは、ほどんどあるいは全く活性を持たない。従って、商業的実施では、比較的安定な系を得るために、最適ｐＨは、例えば  約４が用いられ、そして減少した酵素活性及びカップリング反応の減少した酸化効率を補うために、多量の酵素と色素カップルの両方を用いることが強いられている。
【００２３】
本発明に従えば、これまでに遭遇された安定性の問題を克服し、さらに、ここに意図された検査装置に用いられる酵素活性をより導く環境、例えば、約４から約７の範囲のｐＨ値で、効率良く反応する、ＭＢＴＨの修飾された形態が提供され得ることが、見い出された。ある一定の好ましい誘導体は、望ましいカップリングの相手である芳香族アミンと高度に反応することが、さらに見いだされている。本発明の誘導体は、以下の式IVに示される一般構造を有する。
【００２４】
【化６】
0003878702.tif 000005
【００２５】
式中、Ｒは、アルキル、置換されたアルキル、アリール、置換されたアリール、複素環式、第四級アミンまたは有機酸基からなる群から選択され、Ｙは、ＮＯ2、ＳＯ3−、Ｈ、ハリド、アルキルまたはＺがアルキルもしくはアリールのいずれかであるＳｉＺ3からなる群から選択される。好ましくは、ＹはＨである。好ましい態様において、Ｒは、以下のものである。
【００２６】
【化７】
0003878702.tif 000006
【００２７】
式中、Ｒ1，Ｒ2，Ｒ3，及びＲ4はいずれも、Ｈ、アルキル、アリール、シリル、ハリド、ヒドロキシド、メルカプチド、アルコキシド、チオアルコキシド、アミン、スルホネート、またはカルボキシレートからなる群から独立して選択され、Ｘは、アミン、スルホネート、またはカルボキシレートからなる群から選択される。
【００２８】
本発明のＭＢＴＨ誘導体は、芳香族アミン、フェノール、及び置換されたフェノールのような、広範囲の色素カップルと酸化反応を行うことができる。さらに、そのような反応は、室温で、そして４から１１まで変わることのできるｐＨで、効率よく進むことができる。本発明の誘導体の好ましい形態において、酸化反応は、約４から約７までのｐＨで最適であり、それ故、３−ジメチルアミノ安息香酸や８−アニリノー１ーナフタレンスルホネートのような診断化学において関心のある、アミンの色素カップルの相手と共に、特に有用である。
【００２９】
ＭＢＴＨと異なり、酸を遊離したあるいは酸水和形態のいずれかにおいて、これらの誘導体は、１００℃で１６時間もの間加熱された時でさえ、著しく安定である。さらに、酸化反応の条件で、西洋ワサビペルオキシダーゼのような過酸化物を触媒する酵素は、酸化カップリング反応を取り扱うのに特に効率がよい。
【００３０】
【実施例】
参考例１−ＭＢＴＨ誘導体の合成
メタ［３−メチル  ２−ベンゾチアゾリノン  ヒドラゾン］Ｎ−スルホニルベンゾスルホネート  １ナトリウム、［２］の合成
合成方法
【００３１】
【化８】
0003878702.tif 000007
【００３２】
原料
３−メチル  ２−ベンゾチアゾリノン  ヒドラゾン  塩酸塩（ＭＢＴＨ．ＨＣｌ）、ＮａＩ、水酸化テトラブチルアンモニウム、塩化メチレン及びｎ−メチル−２−ピロリドンは、Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｏｍｐａｎｙｏｆ  Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎから購入され、精製せずに使用された。トリエチルアミンは、Ｂａｋｅｒ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓから入手し、Ｂａｘｔｅｒ  Ｃｏｍｐａｎｙ  ｏｆ  Ｐｈｉｌｌｉｐｓｂｕｒｇ，Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙにより配給された。１、３ジスルホニルクロライド  ベンゼンはＦｌｕｋａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ  ｏｆ  Ｒｏｎｋｏｎｋｏｍａ、Ｎｅｗ  ＹｏｒｋあるいはＬａｎｃａｓｔｅｒＣｈｅｍｉｃａｌｓ  ｏｆ  Ｗｉｎｄｈａｍ、Ｎｅｗ  Ｈａｍｐｓｈｉｒｅから購入された。
【００３３】
［１］の合成
ＭＢＴＨ．ＨＣｌの４ｇｍサンプルが、磁気撹はん棒を備えた１５０ｍｌのエーレンマイヤーフラスコに充填され、そして５０ｍｌのｎ−メチル−２−ピロリドンと５ｍｌのトリエチルアミンが加えられた。そのフラスコは、ゴム栓でふたされ、磁気撹はんホットプレ−ト上に置かれた。その混合物は、０．５時間、激しく撹はんされながら、６０−７０℃に加熱され、黄色の泥状流動体を生じた。そのフラスコは、冷却するために氷浴中に置かれた。
【００３４】
１，３ジスルホニルクロライド  ベンゼンの５ｇｍのサンプルが、磁気撹はん棒を備えた、２５０ｍｌのエーレンマイヤーフラスコに加えられた。そのフラスコは、氷浴中に沈められ、２０ｍｌのｎ−メチル−２−ピロリドンが加えられた。その混合物は、全固体が溶解されるまで撹はんされた（約１５分）。前に得られた、ＭＢＴＨの塩基の遊離した泥状流動体は、その溶液中に静かに移された。その結果生じた明黄色の混合物は、氷浴温度で１．５時間反応させられた。その後、その反応は、１０ｍｌの２Ｎ  ＨＣｌで抑制され、さらに３０分間室温で撹はんされた。５０ｍｇの１２メッシュＮｏｒｔｉ（活性化された炭素沈澱物）が、その溶液に入れられ、１０分間の撹はんの後、明黄色の溶液を生じた。その溶液は次に、アスピレイターの助けで、微細級のフリット（ｆｒｉｔ）を通してろ過された。黄から明茶の滑らかな溶液が得られた。３００ｍｌの２Ｎ  ＨＣｌが、その撹はんしている黄色溶液に加えられ、オフホワイトの粉末の沈澱物を生じた。その固体は、真空ろ過により集められ、その生成物は、２５ｍｌの脱イオン水で３回洗浄された。真空中１１０℃で２時間の乾燥で、５．６ｇｍのわずかに灰色がかった白色の生成物が得られた。その生成物は、1ＨＮＭ及びＨＰＬＣで、９７％の純度であると分析された。
【００３５】
化合物［１］は、大部分の一般的な有機溶媒や水にあまり可溶ではない。しかしながら、塩基性の溶液やＤＭＳＯ、ＮＭＰ、及びＤＮＦのような極性の溶媒に可溶である。
【００３６】
［２］の合成
２．０ｇｍサンプルの夾雑物の混ざる［１］は、５０ｍｌの塩化メチレン中に懸濁された。４ｍｌの１Ｍテトラブチルアンモニウム水酸化物が、２分の内にゆっくりとその撹はんしている懸濁液に加えられ、明黄色の溶液を生じた。その溶液は、１０ｍｌの脱イオン水で洗浄され、無水硫酸ナトリウム上で乾燥された。その硫酸塩は、重力ろ過により除かれ、得られた混合液は、ロータリーエバポレーターで乾燥するまで蒸発された。粘性の黄色の油状物が集められた。その油状物は１２５ｍｌのアセトンにとられ、１０ｍｌの２０％ＮａＩ／アセトン液が、５分の内に加えられた。白色の沈澱物が現われた。その混合物は、さらに２０分間反応させられ、その沈澱物は、微細級のフリットを用いた真空ろ過により集められた。
【００３７】
こうして得られたわずかに灰色がかった固体は、２０ｍｌのアセトンで３回洗浄された。１１０℃で４５分間の乾燥で、１．３グラム（６５％）の所望の生成物が得られた。
【００３８】
化合物［２］は、水及び水−アルコール混合液に非常によく溶ける。この固体は、空気及び光の中で安定であるが、その溶液は、長い期間光にさらすと、明黄色のかすんだ混合液へとゆっくりと分解する。
【００３９】
実施例２
検査装置の調製
１枚のポリマー膜（反応マトリックス）のストリップが、表１の水性のディップに飽和するまで浸される。ディップから除かれた余分な試薬は、ガラス棒で取り除かれる。その膜は、次に、５６℃で循環している空気中に約５−１０分間、乾燥するために吊るされる。その後、その膜は、取り除かれ、表１に述べられた有機ディップに飽和するまで浸される。次に、再び、それは、前のステップのようにして乾燥される。得られたストリップは、検査のために望ましい形に形造られる。
【００４０】
【表１】
0003878702.tif 000008
【００４１】
実施例３−グルコースの測定
グルコースを含む血液サンプルは、試薬をしみこませたストリップの表面に加えられる。そのサンプルは、すぐにマトリックスに吸収され、青色の着色が見える。着色の強度は、時間と共に増加し，被検体の濃度に比例する。その着色の強度を基にして、グルコース濃度は、標準測定曲線と比べることにより、決定される。
【００４２】
同様に、過酸化水素の水性の溶液（有機過酸化物、フェリック、及びキノン）もまた、その試薬をしみこませた膜上に、期待される青色の着色を生じる。被検体の濃度は、上記と同じ手段で決定されることができる。
【００４３】
以下、本発明の特徴および主な態様を挙げる。
【００４４】
１．サンプル中の被検体の存在あるいは量を測定するための該サンプル中の該被検体の量を示す多量の酸化剤を生じる酵素を含んでなる試薬系を含む検査装置であって、該試薬系が、該酸化剤によって酸化されると発色団を形成する色素カップルを含んでなり、該色素カップルが、式
【００４５】
【化９】
0003878702.tif 000009
【００４６】
式中、Ｒは、アルキル、置換されたアルキル、アリール、置換されたアリール、複素環式、第四級アミン、あるいは有機酸基からなる群から選択され、Ｙは、ＮＯ2、ＳＯ3−、Ｈ、ハリド、アルキル、あるいはＺがアルキルまたはアリールのいずれかであるＳｉＺ3からなる群から選択される、
で示される化合物を含んでなる、検査装置。
【００４７】
２．Ｒが式（Ｖ）
【００４８】
【化１０】
0003878702.tif 000010
【００４９】
式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、及びＲ4のいずれもが、Ｈ、アルキル、アリール、シリル、ハリド、ハイドロキシド、メルカプチド、アルコキシド、チオアルコキシド、アミン、スルホネート、あるいはカルボキシレートからなる群から独立して選択され、Ｘが、アミン、スルホネート、あるいはカルボキシレートからなる群から選択される、上記１の検査装置。
【００５０】
３．ＹがＨである、上記２の検査装置。
【００５１】
４．該酵素が、グルコースオキシダーゼ、コレステロールオキシダーゼ、アルコールオキシダーゼ、ウリカーゼ、アルデヒドオキシダーゼ、及びグリセロ燐酸オキシダーゼからなる群から選択される、上記１の検査装置。
【００５２】
５．該酵素が、さらにペルオキシダーゼまたはペルオキシダーゼ様の性質を有する無機複合体からなる、上記４の検査装置。
【００５３】
６．該酵素が、グルコースオキシダーゼと西洋ワサビペルオキシダーゼからなる、上記４の検査装置。
【００５４】
７．該色素カップルが、さらに３−ジメチルアミノベンゾイック酸からなる上記１の検査装置。
【００５５】
８．該色素カップルが、さらに８−アニリノ−１−ナフタレンスルホネートからなる上記１の検査装置。
【００５６】
９．該化合物が、メタ［３−メチル  ２−ベンゾチアゾリノン  ヒドロゾン］Ｎ−スルホニル  ベンゼンスルホネート  １ナトリウムである上記１の検査装置。
【図面の簡単な説明】
【図１】分析される流体サンプルが加えられる反応パッドを含む一つの態様の検査装置の斜視図である。
【図２】図１の検査装置を用いた、別の態様の斜視図である。
【符号の説明】
１０  多孔質マトリックス
１２  支持体
１６  開口部
１７  サンプル受け面
１９  検査面
２２  シグナル
【図１】
0003878702.tif 000013
【図２】
0003878702.tif 000014