【誤訳訂正書】
【提出日】平成28年1月14日(2016.1.14)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
生細胞においてエンドサイトーシスを検出する方法であって、
（ａ）レポーター要素を細胞表面分析物に係留して、融合要素を作り出すステップであって、前記レポーター要素からの検出可能なシグナルが、前記融合要素のエンドサイトーシス時に変化するステップ、
（ｂ）前記生細胞の外側で、前記レポーター要素からの前記検出可能なシグナルを検出するステップ、
（ｃ）前記融合要素のエンドサイトーシスを可能にするステップ、
（ｄ）前記生細胞の内側で、前記レポーター要素からの変化した検出可能なシグナルを検出するステップ、及び、
（ｅ）前記検出可能なシグナルを前記変化した検出可能なシグナルと比較して、エンドサイトーシスを検出するステップ
を含む方法。
【請求項２】
前記検出可能なシグナル及び前記変化した検出可能なシグナルが、前記レポーター要素とレポーター基質との相互作用時に放出される、請求項１に記載のエンドサイトーシスを検出する方法。
【請求項３】
ステップ（ａ）と（ｂ）との間に、前記レポーター要素を前記レポーター基質と接触させるステップをさらに含む、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記細胞表面分析物が、細胞表面受容体を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記細胞表面分析物が、前記細胞表面の成分と非共有結合的に会合している、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記レポーター要素および前記細胞表面分析物が、融合タンパク質として発現される、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記レポーター要素が、ルシフェラーゼ酵素を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記ルシフェラーゼ酵素が、甲虫もしくはオプロフォーラスルシフェラーゼ酵素、またはそれらの機能的に同等な変異型もしくは変異体である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
ステップ（ｄ）が、エンドソーム内で前記第二のシグナルを検出することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記第二のシグナルが、前記生細胞の外側の前記第一のシグナルと比較して、前記エンドソーム内で検出可能に変化している、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
ステップ（ｂ）と（ｃ）との間に、エンドサイトーシスを誘起するステップをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記レポーター基質が、前記生細胞の形質膜に対して透過性である、請求項３に記載の方法。
【請求項１３】
前記レポーター基質は、前記細胞の前記細胞内空間から完全にまたは大部分が排除される、請求項３に記載の方法。
【請求項１４】
前記レポーターが酵素であり、かつ、基質を代謝回転することができる、請求項３に記載の方法。
【請求項１５】
前記レポーター基質が、ルシフェリン、ルシフェリン誘導体、セレンテラジン、またはセレンテラジン誘導体である、請求項３に記載の方法。
【請求項１６】
前記レポーター要素が前記細胞外空間に局在するように、前記融合要素が細胞膜に取り込まれる、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
前記レポーター要素のエンドサイトーシスが、細胞外空間からエンドソーム内への前記レポーター要素の移動をもたらす、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
前記融合タンパク質が前記生細胞内で内因的に発現される、請求項６に記載のエンドサイトーシスを検出する方法。
【請求項１９】
前記融合タンパク質が外因的に前記生細胞の培地に添加される、請求項６に記載のエンドサイトーシスを検出する方法。
【請求項２０】
前記変化した検出可能なシグナルが、前記検出可能なシグナルよりも小さい、請求項１に記載の方法。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００４】
一部の実施形態において、本発明は、（ａ）レポーター要素を細胞表面分析物に係留（tethering）し、融合要素を作り出すことと、（ｂ）レポーター要素からの検出可能なシグナルを監視し、それによってエンドサイトーシスを検出することと、を含む、エンドサイトーシスを検出する方法を提供する。一部の実施形態において、レポーター要素は、レポーター基質との相互作用時に検出可能なシグナルを放出する。一部の実施形態において、方法は、ステップ（ａ）と（ｂ）との間に、レポーター要素をレポーター基質と接触させるステップをさらに含む。一部の実施形態において、方法は、ステップ（ａ）と（ｂ）との間に、細胞表面分析物、レポーター要素、および／または融合要素のエンドサイトーシスを可能にするステップをさらに含む。一部の実施形態において、レポーター要素からの検出可能なシグナルは、レポーター要素のエンドサイトーシス時に変化する。一部の実施形態において、検出可能なシグナルを監視し、それによってエンドサイトーシスを検出することは、（ｉ）融合要素のエンドサイトーシスを可能にすることと、（ｉｉ）エンドサイトーシスの誘発後にシグナルを検出することと、を含む。一部の実施形態において、エンドサイトーシスを検出するために検出可能なシグナルを監視することは、（ｉ）エンドサイトーシスの前のレポーター要素からのシグナルを検出することと、（ｉｉ）融合要素のエンドサイトーシスを可能にすることと、（ｉｉｉ）レポーター要素からのシグナルの検出を繰り返すことと、（ｉｖ）ステップ（ｉ）からのシグナルとステップ（ｉｉｉ）からのシグナルを比較し、エンドサイトーシスを検出することと、を含む。一部の実施形態において、融合要素のエンドサイトーシスを可能にすることは、エンドサイトーシスの時間（例えば、十分な時間）を考慮することを含む（例えば、１秒．．．２秒．．．５秒．．．３０秒．．．１分．．．２分．．．５分．．．３０分．．．６０分以上）。一部の実施形態において、細胞表面分析物は、細胞表面成分である。一部の実施形態において、細胞表面成分は、細胞表面受容体を含む。一部の実施形態において、細胞表面分析物は、細胞表面の成分に非共有結合的に会合している。一部の実施形態において、レポーター要素および細胞表面分析物は、融合タンパク質として発現される。一部の実施形態において、レポーター要素および細胞表面分析物は、共有結合的または非共有結合的に共役する（例えば、翻訳後）。一部の実施形態において、レポーター要素および細胞表面分析物は、融合タンパク質として発現される。一部の実施形態において、検出可能なシグナルは、光学的シグナルを含む。一部の実施形態において、検出可能なシグナルは、発光を含む。一部の実施形態において、レポーター要素は、ルシフェラーゼ酵素を含む。一部の実施形態において、ルシフェラーゼ酵素は、甲虫またはオプロフォーラスルシフェラーゼ酵素である。一部の実施形態において、ルシフェラーゼ酵素は、野生型ルシフェラーゼ（例えば、甲虫またはオプロフォーラスルシフェラーゼ酵素）またはそれらの変異体（例えば、野生型と７０％超配列相同性）である。一部の実施形態において、エンドサイトーシスは、細胞外空間から細胞内空間へのレポーター要素の移動をもたらす。一部の実施形態において、レポーター要素は、生体膜（例えば、形質膜）を通過して移動する。一部の実施形態において、レポーター要素は、新規膜微小環境に転位置する。一部の実施形態において、検出可能なシグナルは、細胞外空間と比較して細胞内空間内で、検出可能に変化する（例えば、シグナルの増大、シグナルの減少、放出性質の変化等）。一部の実施形態において、レポーターからの検出可能なシグナルは、細胞外空間と比較して細胞内空間内で減少する。一部の実施形態において、細胞内空間は、エンドソームを含む。一部の実施形態において、検出可能なシグナルは、細胞外空間と比較してエンドソーム内で検出可能に変化する（例えば、シグナルの増大、シグナルの減少、放出性質の変化等）。一部の実施形態において、レポーターからの検出可能なシグナルは、細胞の外側と比較してエンドソーム内で減少する。一部の実施形態において、方法は、ステップ（ｉ）と（ｉｉ）との間に、エンドサイトーシスを誘起するステップをさらに含む。一部の実施形態において、エンドサイトーシスは、受容体作動薬（例えば、小分子、サイトカイン等）、修飾された成長条件、薬理化合物、細胞シグナル経路の変化、種を誘発する任意のエンドサイトーシスの存在等の１つ以上によって誘起される。一部の実施形態において、レポーター基質は、生細胞の形質膜に対して透過性である。一部の実施形態において、レポーター基質は、細胞膜に対して透過性である。一部の実施形態において、レポーター基質は、細胞の細胞内空間から完全にまたは大部分が排除される。一部の実施形態において、レポーターは、複数のレポーター基質を代謝回転することができる（例えば、複数の基質代謝回転）。
一部の実施形態において、レポーター基質は、ルシフェリン、ルシフェリン誘導体、セレンテラジン、またはセレンテラジン誘導体である。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００５】
一部の実施形態において、本発明は、（ａ）融合要素を細胞の細胞膜に取り込むことであって、融合要素が細胞表面分析物およびレポーター要素を含む、取り込むことと、（ｂ）レポーターをレポーター基質と接触させることであって、その接触が検出可能なシグナルを生成する、接触することと、（ｃ）検出可能なシグナルを監視し、それによってエンドサイトーシスを検出することと、を含む、エンドサイトーシスを検出する方法を提供する。一部の実施形態において、検出可能なシグナルの監視は、（ｉ）融合要素のエンドサイトーシスを可能にすることと、（ｉｉ）エンドサイトーシスの誘発後にシグナルを検出することと、を含む。一部の実施形態において、検出可能なシグナルを監視することは、（ｉ）エンドサイトーシスの前のシグナルを検出することと、（ｉｉ）融合要素のエンドサイトーシスを可能にすることと、（ｉｉｉ）エンドサイトーシス後のシグナルを検出することと、（ｉｖ）ステップ（ｉ）からのシグナルとステップ（ｉｉｉ）からのシグナルを比較し、エンドサイトーシスを検出することと、を含む。一部の実施形態において、融合要素は、融合タンパク質を含む。一部の実施形態において、エンドサイトーシスを可能にすることは、エンドサイトーシスの時間（例えば、十分な時間）を考慮することを含む（例えば、１秒．．．２秒．．．５秒．．．３０秒．．．１分．．．２分．．．５分．．．３０分．．．６０分以上）。一部の実施形態において、細胞表面分析物は、細胞表面成分を含む。一部の実施形態において、細胞表面成分は、細胞表面受容体を含む。一部の実施形態において、細胞表面分析物は、細胞表面の成分に非共有結合的に会合している。一部の実施形態において、レポーター要素は、ルシフェラーゼ酵素を含む。一部の実施形態において、ルシフェラーゼ酵素は、甲虫またはオプロフォーラスルシフェラーゼ酵素である。一部の実施形態において、ルシフェラーゼ酵素は、野生型酵素（例えば、甲虫またはオプロフォーラスルシフェラーゼ酵素）またはそれらの変異体（例えば、７０％超配列相同性）である。一部の実施形態において、融合要素は、レポーター要素が細胞外空間内に局在（例えば、細胞に隣接）するように、細胞膜に取り込まれる。一部の実施形態において、レポーター要素のエンドサイトーシスは、細胞外空間からエンドソーム内へのレポーター要素の移動をもたらす。一部の実施形態において、シグナルは、細胞外空間と比較してエンドソーム内で検出可能に変化する。一部の実施形態において、シグナルは、細胞外空間と比較してエンドソーム内で減少する。一部の実施形態において、方法は、ステップ（ｉ）と（ｉｉ）との間に、エンドサイトーシスを誘起するステップをさらに含む。一部の実施形態において、エンドサイトーシスは、受容体作動薬（例えば、小分子、サイトカイン等）、修飾された成長条件、薬理化合物、細胞シグナル経路の変化、種を誘発する任意のエンドサイトーシスの存在等の１つ以上によって誘起される。一部の実施形態において、レポーター基質は、生細胞の形質膜に対して透過性であることが知られている。一部の実施形態において、レポーター基質は、細胞膜に対して透過性であるか、または実験の条件下で細胞の位相的内側から完全にもしくは大部分が排除される。一部の実施形態において、レポーター基質は、ルシフェリン、ルシフェリン誘導体、セレンテラジン、またはセレンテラジン誘導体である。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００６】
一部の実施形態において、本発明は、（ａ）融合タンパク質を細胞の細胞膜に取り込むステップであって、融合タンパク質がレポーターポリペプチドおよび細胞表面受容体を含み、レポーターポリペプチドがレポーター基質との相互作用時に検出可能なシグナルを放出する、取り込むステップ、（ｂ）レポーターポリペプチドをレポーター基質と接触させるステップ、（ｃ）検出可能なシグナルを検出するステップ、（ｄ）エンドサイトーシスを誘発し、かつ／またはエンドサイトーシスの発生を可能にするステップ、（ｅ）検出可能なシグナルの検出を繰り返すステップ、および（ｆ）ステップ（ｃ）からのシグナルをステップ（ｅ）からのシグナルと比較するステップであって、シグナルの変化が、エンドサイトーシスが発生したことを示す、比較するステップのうちの１つ以上（例えば、すべてのステップ、順序通りのすべてのステップ）を含むエンドサイトーシスを検出する方法を提供する。一部の実施形態において、融合タンパク質は、融合構築物から発現される。
一部の実施形態において、融合タンパク質は、抗体抗原会合に基づいて生成される。一部の実施形態において、融合タンパク質は、細胞内で発現される。一部の実施形態において、細胞表面分析物は、外因的に生成され、細胞の培地に添加される。一部の実施形態において、レポーター基質は、細胞膜透過性である。一部の実施形態において、レポーターポリペプチドは、レポーター基質の複数の代謝回転能力を有する。一部の実施形態において、レポーターポリペプチドは、ルシフェラーゼ酵素を含む。一部の実施形態において、ルシフェラーゼ酵素は、甲虫またはオプロフォーラスルシフェラーゼ酵素である。一部の実施形態において、ルシフェラーゼ酵素は、野生型酵素（例えば、甲虫またはオプロフォーラスルシフェラーゼ酵素）またはそれらの変異体（例えば、７０％超配列相同性）である。一部の実施形態において、融合タンパク質は、レポーター要素が細胞の外側に局在するように、細胞膜に取り込まれる。一部の実施形態において、レポーターポリペプチドのエンドサイトーシスは、細胞外空間から細胞内空間へのレポーターポリペプチドの移動をもたらす。一部の実施形態において、シグナルは、細胞外空間と比較して細胞内空間内で検出可能に変化する。一部の実施形態において、細胞内空間は、エンドソーム内にある。一部の実施形態において、シグナルは、細胞外空間と比較してエンドソーム内で検出可能に変化する。一部の実施形態において、シグナルは、細胞外空間と比較して細胞内空間内で減少する。一部の実施形態において、シグナルは、細胞外空間と比較してエンドソーム内で減少する。一部の実施形態において、レポーター基質は、生細胞の形質膜に対して透過性であることが知られている。一部の実施形態において、レポーター基質は、細胞膜に対して透過性であるか、または実験の条件下で細胞の位相的内側から完全にもしくは大部分が排除される。一部の実施形態において、レポーター基質は、ルシフェリン、ルシフェリン誘導体、セレンテラジン、またはセレンテラジン誘導体である。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００８】
一部の実施形態において、本発明は、（ａ）融合要素を細胞の細胞膜に取り込むことであって、融合要素が細胞表面分析物およびレポーター要素を含む、取り込むことと、（ｂ）レポーター要素をレポーター基質と接触させることであって、その接触は、レポーター要素からシグナルを生成する、接触することと、（ｃ）シグナルを監視し、それによってエンドサイトーシスを検出することと、を含む、エンドサイトーシスを検出する方法を提供する。一部の実施形態において、シグナルを監視し、エンドサイトーシスを検出することは、（ｉ）エンドサイトーシスの前のシグナルを検出することと、（ｉｉ）融合要素および細胞表面分析物のエンドサイトーシスを可能にすることと、（ｉｉｉ）エンドサイトーシス後のシグナルを検出することと、（ｉｖ）ステップ（ｉ）からのシグナルとステップ（ｉｉｉ）からのシグナルを比較し、それによってエンドサイトーシスを検出することと、を含む。一部の実施形態において、融合要素は、融合タンパク質を含む。一部の実施形態において、細胞表面分析物は、細胞表面成分を含む。一つの実施形態において、細胞表面成分は、細胞表面受容体を含む。一部の実施形態において、レポーター要素は、ルシフェラーゼ酵素（例えば、甲虫またはオプロフォーラスルシフェラーゼ酵素）を含む。一部の実施形態において、ルシフェラーゼ酵素は、野生型酵素（例えば、甲虫またはオプロフォーラスルシフェラーゼ酵素）またはそれらの変異体（例えば、７０％超配列相同性）である。一部の実施形態において、融合要素は、レポーター要素が細胞の外側に局在するように細胞膜に取り込まれる。一部の実施形態において、レポーター要素のエンドサイトーシスは、細胞の外側からエンドソーム内へのレポーター要素の移動をもたらす。一部の実施形態において、シグナルは、エンドソーム内で細胞の外側と比較して検出可能に変化する。一部の実施形態において、シグナルは、細胞の外側と比較してエンドソーム内で減少する。一部の実施形態において、放出性質、例えば、シグナルの波長は、細胞の外側と比較してエンドソーム内で変化する。一部の実施形態において、方法は、ステップ（ｉ）と（ｉｉ）との間に、エンドサイトーシスを誘起するステップをさらに含む。一部の実施形態において、レポーター基質は、生細胞の形質膜に対して透過性であるか、細胞膜に対して透過性であるか、または細胞の位相的内側から完全にもしくは大部分が排除される。一部の実施形態において、レポーター基質は、膜透過性基質である。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３１】
一部の実施形態において、細胞の内部移行および／またはレポーターのエンドサイトーシス時に変化する（例えば、減少する）検出可能なシグナルを放出するレポーター要素または複合体が提供される。一部の実施形態において、細胞表面成分およびレポーター要素を含む融合要素が提供される。一部の実施形態において、レポーター要素は、例えば、基質との相互作用時にまたは（例えば、ｐＨの変化による、光への曝露による）刺激される際に、検出可能なシグナルを生成する任意の分子、巨大分子（例えば、タンパク質）、または複合体である。一部の実施形態において、レポーター要素は、タンパク質である。一部の実施形態において、レポーター要素は、酵素である。一部の実施形態において、レポーター、レポーター基質、および／またはレポーター／基質複合体は、光学的な、分光学的な、光化学的な、生化学的な、免疫学的な、化学的な、および／または磁気的な手段で検出可能である。一部の実施形態において、レポーター、レポーター基質、および／またはレポーター／基質複合体は、標識を含む。好適な標識には、着色性、放射性、蛍光性、紫外線の、および／または磁気分子もしくは粒子が挙げられるが、これらに限定されない。一部の実施形態において、レポーター、レポーター基質、および／またはレポーター／基質複合体は、抗体、遺伝子プローブ、色素、蛍光色素、タンパク質、ペプチド、アミノ酸、糖質、ポリヌクレオチド、酵素、補酵素、補助因子、抗生物質、ステロイド、ホルモン、またはビタミンのうちの１つ以上によって標識される。一部の実施形態において、レポーター、レポーター基質、および／またはレポーター／基質複合体、および／またはそれらの標識は、刺激性の現象を伴って、または伴わずに検出される測定可能なシグナルを生成する。一部の実施形態において、検出可能な基質（例えば、蛍光性、放射性、光学的に検出可能な造影剤等）は、レポーターと接触させる、相互作用する、会合する、および／または結合する。一部の実施形態において、レポーターの基質は、検出可能である。一部の実施形態において、レポーターは、検出可能である。一部の実施形態において、レポーターは、ペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質である。一部の実施形態において、レポータータンパク質は、クロラムフェニコールアセチル基転移酵素（ＣＡＴ）、β−グルクロニダーゼ（ＧＵＳ）、またはβ−ガラクトシダーゼ等の酵素を含む。一部の実施形態において、レポーターは、発光性、蛍光性、および／または化学発光性である。一部の実施形態において、レポーターは、ルシフェラーゼ、βラクタマーゼ、およびアルカリホスファターゼ等のタンパク質を含む。一部の実施形態において、レポーターは、ルシフェラーゼ、例えば、甲虫ルシフェラーゼ、例えば、ホタルルシフェラーゼ（例えば、フォティヌスピラリス（Ｐｈｏｔｉｎｕｓ  ｐｙｒａｌｉｓ）またはフォティヌスピペンシルヴァニカ（Ｐｈｏｔｕｒｉｓ  ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉｃａ））、ウミシイタケルシフェラーゼ、ガウシア（Ｇａｕｓｓｉａ）ルシフェラーゼ、オプロフォーラスルシフェラーゼ、ルシフェリン利用ルシフェラーゼ、セレンテラジン利用ルシフェラーゼ、およびそれらの任意の好適な��異型もしくは変異体を含む。一部の実施形態において、レポータータンパク質は、複数の基質代謝回転が可能な酵素を含む。一部の実施形態において、レポータータンパク質は、従来の酵素に限定されない。一部の実施形態において、レポータータンパク質は、野生型タンパク質または変異型、例えば、レポーターアッセイにおける使用に野生型より優れた利点を提供する耐熱性および／または化学安定性（ｃｈｅｍｏｓｔａｂｌｅ）の形態である。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５５】
本明細書に提供されるすべての刊行物および特許は、参照によりそれらの全体が組み込まれる。本発明の範囲および趣旨を逸脱することのない本発明の記載の組成物および方法の様々な修正および変更が、当業者に明らかである。本発明は、特定の好ましい実施形態に関して記載されたが、特許請求される本発明は、そのような特定の実施形態に過度に制限されるべきではないことを理解されたい。実際に、関連分野の技術者に明らかである本発明を実施するための記載の手法の様々な修正は、本発明の範囲内であると意図される。
本発明のまた別の態様は、以下のとおりであってもよい。
〔１〕    エンドサイトーシスを検出する方法であって、
ａ）レポーター要素を細胞表面分析物に係留し、融合要素を作り出すことと、
ｂ）前記レポーター要素からの検出可能なシグナルを監視し、それによってエンドサイトーシスを検出することと、を含む、方法。
〔２〕前記レポーター要素が、レポーター基質との相互作用時に前記検出可能なシグナルを放出する、前記〔１〕に記載のエンドサイトーシスを検出する方法。
〔３〕ステップ（ａ）と（ｂ）との間に、前記レポーター要素をレポーター基質と接触させるステップをさらに含む、前記〔２〕に記載の方法。
〔４〕ステップ（ａ）と（ｂ）との間に、前記細胞表面分析物、前記レポーター要素、および／または前記融合要素のエンドサイトーシスを可能にするステップをさらに含む、前記〔２〕に記載の方法。
〔５〕前記レポーター要素からの前記検出可能なシグナルが、前記レポーター要素のエンドサイトーシス時に変化する、前記〔４〕に記載の方法。
〔６〕    前記検出可能なシグナルを監視し、それによってエンドサイトーシスを検出することは、
ｉ）前記融合要素のエンドサイトーシスを可能にすることと、
ｉｉ）エンドサイトーシスの誘発後に前記シグナルを検出することと、を含む、前記〔１〕に記載の方法。
〔７〕    前記検出可能なシグナルを監視し、エンドサイトーシスを検出することは、
ｉ）エンドサイトーシスの前の前記レポーター要素からの前記シグナルを検出することと、
ｉｉ）前記融合要素のエンドサイトーシスを可能にすることと、
ｉｉｉ）前記レポーター要素からの前記シグナルの検出を繰り返すことと、
ｉｖ）ステップ（ｉ）からの前記シグナルをステップ（ｉｉｉ）からの前記シグナルと比較し、エンドサイトーシスを検出することと、を含む、前記〔１〕に記載の方法。
〔８〕前記細胞表面分析物が、細胞表面成分である、前記〔１〕に記載の方法。
〔９〕前記細胞表面成分が、細胞表面受容体を含む、前記〔８〕に記載の方法。
〔１０〕前記細胞表面分析物が、前記細胞表面の成分と非共有結合的に会合している、前記〔１〕に記載の方法。
〔１１〕前記レポーター要素および前記細胞表面分析物が、融合タンパク質として発現される、前記〔１〕に記載の方法。
〔１２〕前記検出可能なシグナルが、光学的シグナルを含む、前記〔１〕に記載の方法。
〔１３〕前記検出可能なシグナルが、発光を含む、前記〔１〕に記載の方法。
〔１４〕前記レポーター要素が、ルシフェラーゼ酵素を含む、前記〔１〕に記載の方法。
〔１５〕前記ルシフェラーゼ酵素が、甲虫もしくはオプロフォーラスルシフェラーゼ酵素、またはそれらの変異型もしくは変異体である、前記〔１４〕に記載の方法。
〔１６〕エンドサイトーシスが、細胞外空間から細胞内空間への前記レポーター要素の移動をもたらす、前記〔１〕に記載の方法。
〔１７〕前記検出可能なシグナルが、前記細胞外空間と比較して前記細胞内空間内で検出可能に変化する、前記〔１６〕に記載の方法。
〔１８〕前記レポーターからの前記検出可能なシグナルが、前記細胞外空間と比較して前記細胞内空間内で減少する、前記〔１７〕に記載の方法。
〔１９〕前記細胞内空間が、エンドソームを含む、前記〔１６〕に記載の方法。
〔２０〕前記検出可能なシグナルが、前記細胞外空間と比較して前記エンドソーム内で検出可能に変化する、前記〔１９〕に記載の方法。
〔２１〕前記レポーターからの前記検出可能なシグナルが、前記細胞の外側と比較して前記エンドソーム内で減少する、前記〔２０〕に記載の方法。
〔２２〕ステップ（ｉ）と（ｉｉ）との間に、エンドサイトーシスを誘起するステップをさらに含む、前記〔６〕または〔７〕に記載の方法。
〔２３〕前記レポーター基質が、生細胞の形質膜に対して透過性である、前記〔３〕に記載の方法。
〔２４〕前記レポーター基質が、細胞膜に対して透過性である、前記〔３〕に記載の方法。
〔２５〕前記レポーター基質は、前記細胞の前記細胞内空間から完全にまたは大部分が排除される、前記〔３〕に記載の方法。
〔２６〕前記レポーターが、複数のレポーター基質を代謝回転することができる、前記〔３〕に記載の方法。
〔２７〕前記レポーター基質が、ルシフェリン、ルシフェリン誘導体、セレンテラジン、またはセレンテラジン誘導体である、前記〔３〕に記載の方法。
〔２８〕    エンドサイトーシスを検出する方法であって、
ａ）融合要素を細胞の細胞膜に取り込むことであって、前記融合要素が細胞表面分析物およびレポーター要素を含む、取り込むことと、
ｂ）前記レポーターをレポーター基質と接触させることであって、前記接触が検出可能なシグナルを生成する、接触させることと、
ｃ）前記検出可能なシグナルを監視し、それによってエンドサイトーシスを検出することと、を含む、方法。
〔２９〕    前記検出可能なシグナルを監視することは、
ｉ）前記融合要素のエンドサイトーシスを可能にすることと、
ｉｉ）エンドサイトーシスの誘発後に前記シグナルを検出することと、を含む、前記〔２８〕に記載のエンドサイトーシスを検出する方法。
〔３０〕    前記検出可能なシグナルを監視することは、
ｉ）エンドサイトーシスの前の前記シグナルを検出することと、
ｉｉ）前記融合要素のエンドサイトーシスを可能にすることと、
ｉｉｉ）エンドサイトーシス後の前記シグナルを検出することと、
ｉｖ）ステップ（ｉ）からの前記シグナルをステップ（ｉｉｉ）からの前記シグナルと比較し、エンドサイトーシスを検出することと、を含む、前記〔２８〕に記載のエンドサイトーシスを検出する方法。
〔３１〕前記融合要素が、融合タンパク質を含む、前記〔２８〕に記載の方法。
〔３２〕前記細胞表面分析物が、細胞表面成分を含む、前記〔２８〕に記載の方法。
〔３３〕前記細胞表面成分が、細胞表面受容体を含む、前記〔３２〕に記載の方法。
〔３４〕前記細胞表面分析物が、細胞表面の成分と非共有結合的に会合している、前記〔２８〕に記載の方法。
〔３５〕前記レポーター要素が、ルシフェラーゼ酵素を含む、前記〔２８〕に記載の方法。
〔３６〕前記ルシフェラーゼ酵素が、甲虫もしくはオプロフォーラスルシフェラーゼ酵素、またはそれらの変異体もしくは変異型である、前記〔３５〕に記載の方法。
〔３７〕前記レポーター要素が前記細胞外空間に局在するように、前記融合要素が前記細胞膜に取り込まれる、前記〔２８〕に記載の方法。
〔３８〕前記レポーター要素のエンドサイトーシスが、細胞外空間からエンドソーム内への前記レポーター要素の移動をもたらす、前記〔２８〕に記載の方法。
〔３９〕前記シグナルが、前記細胞外空間と比較して前記エンドソーム内で検出可能に変化する、前記〔３８〕に記載の方法。
〔４０〕前記シグナルが、前記細胞外空間と比較して前記エンドソーム内で減少する、前記〔３８〕に記載の方法。
〔４１〕ステップ（ｉ）と（ｉｉ）との間にエンドサイトーシスを誘起するステップをさらに含む、前記〔２９〕または〔３０〕に記載の方法。
〔４２〕前記レポーター基質が、生細胞の前記形質膜に対して透過性であることが知られている、前記〔２８〕に記載の方法。
〔４３〕前記レポーター基質が、細胞膜に対して透過性であるか、または実験の条件下で前記細胞の位相的内側から完全にもしくは大部分が排除される、前記〔２８〕に記載の方法。
〔４４〕前記レポーター基質が、ルシフェリン、ルシフェリン誘導体、セレンテラジン、またはセレンテラジン誘導体である、前記〔２８〕に記載の方法。
〔４５〕    エンドサイトーシスを検出する方法であって、
ａ）融合タンパク質を細胞の細胞膜に取り込むことであって、前記融合タンパク質がレポーターポリペプチドおよび細胞表面受容体を含み、前記レポーターポリペプチドがレポーター基質との相互作用時に検出可能なシグナルを放出する、取り込むことと、
ｂ）前記レポーターポリペプチドを前記レポーター基質と接触させることと、
ｃ）前記検出可能なシグナルを検出することと、
ｄ）エンドサイトーシスを誘発する、および／またはエンドサイトーシスの発生を可能にすることと、
ｅ）前記検出可能なシグナルの検出を繰り返すことと、
ｆ）ステップ（ｃ）からの前記シグナルをステップ（ｅ）からの前記シグナルと比較することであって、前記シグナルの変化が、エンドサイトーシスが発生したことを示す、比較することと、を含む、方法。
〔４６〕前記融合タンパク質が、融合構築物から発現される、前記〔４５〕に記載の方法。
〔４７〕前記融合タンパク質が、抗体抗原会合に基づいて生成される、前記〔４５〕に記載の方法。
〔４８〕前記融合タンパク質が、前記細胞内で発現される、前記〔４５〕に記載の方法。
〔４９〕前記細胞表面分析物が、外因的に生成され、前記細胞の培地に添加される、前記〔４５〕に記載の方法。
〔５０〕前記レポーター基質が、細胞膜透過性である、前記〔４５〕に記載の方法。
〔５１〕前記レポーターポリペプチドが、前記レポーター基質の複数の代謝回転能力を有する、前記〔４５〕に記載の方法。
〔５２〕前記レポーターポリペプチドが、ルシフェラーゼ酵素を含む、前記〔４５〕に記載の方法。
〔５３〕前記ルシフェラーゼ酵素が、甲虫もしくはオプロフォーラスルシフェラーゼ酵素、またはそれらの変異体もしくは変異型である、前記〔５２〕に記載の方法。
〔５４〕前記レポーター要素が前記細胞の外側に局在するように、前記融合タンパク質が前記細胞膜に取り込まれる、前記〔４５〕に記載の方法。
〔５５〕前記レポーターポリペプチドのエンドサイトーシスが、細胞外空間から細胞内空間への前記レポーターポリペプチドの移動をもたらす、前記〔４５〕に記載の方法。
〔５６〕前記シグナルが、前記細胞外空間と比較して前記細胞内空間内で検出可能に変化する、前記〔５５〕に記載の方法。
〔５７〕前記細胞内空間が、エンドソーム内にある、前記〔５５〕に記載の方法。
〔５８〕前記シグナルが、前記細胞外空間と比較して前記エンドソーム内で検出可能に変化する、前記〔５７〕に記載の方法。
〔５９〕前記シグナルが、前記細胞外空間と比較して前記細胞内空間内で減少する、前記〔５５〕に記載の方法。
〔６０〕前記シグナルが、前記細胞外空間と比較して前記エンドソーム内で減少する、前記〔５７〕に記載の方法。
〔６１〕前記レポーター基質が、生細胞の前記形質膜に対して透過性であることが知られている、前記〔４５〕に記載の方法。
〔６２〕前記レポーター基質が、細胞膜に対して透過性であるか、または実験の条件下で前記細胞の位相的内側から完全にもしくは大部分が排除される、前記〔４５〕に記載の方法。
〔６３〕前記レポーター基質が、ルシフェリン、ルシフェリン誘導体、セレンテラジン、またはセレンテラジン誘導体である、前記〔４５〕に記載の方法。
〔６４〕    膜貫通輸送を検出する方法であって、
ａ）融合タンパク質を細胞膜に取り込むことであって、前記融合タンパク質がレポーター要素および膜会合要素を含み、前記レポーター要素がレポーター基質との相互作用時に検出可能なシグナルを放出する、取り込むことと、
ｂ）前記レポーター要素を前記レポーター基質と接触させることと、
ｃ）前記検出可能なシグナルを検出することと、を含む、方法。
〔６５〕    
ｄ）膜貫通輸送を誘発し、かつ／または膜貫通輸送の発生を可能にするステップと、
ｅ）前記検出可能なシグナルの検出を繰り返すステップと、
ｆ）ステップ（ｃ）からの前記シグナルをステップ（ｅ）からの前記シグナルと比較するステップであって、前記シグナルの変化が、膜貫通輸送が発生したことを示す、比較するステップと、をさらに含む、前記〔６４〕に記載の方法。
〔６６〕ステップ（ａ）と（ｂ）との間に、エンドサイトーシスを誘発し、かつ／または膜貫通輸送の発生を可能にするステップをさらに含む、前記〔６４〕に記載の方法。
〔６７〕    ｆ）ステップ（ｃ）からの前記シグナルを対照シグナルと比較することであって、前記シグナルの変化が、膜貫通輸送が発生したことを示す、比較することをさらに含む、前記〔６６〕に記載の方法。
〔６８〕前記レポーター要素が、酵素である、前記〔６４〕に記載の方法。
〔６９〕前記酵素が、ルシフェラーゼ酵素を含む、前記〔６８〕に記載の方法。
〔７０〕前記ルシフェラーゼ酵素が、甲虫もしくはオプロフォーラスルシフェラーゼ酵素、またはそれらの変異体もしくは変異型である、前記〔６９〕に記載の方法。
〔７１〕前記シグナルが、光学的シグナルである、前記〔６４〕に記載の方法。
〔７２〕前記レポーター基質が、膜透過性である、前記〔６４〕に記載の方法。
〔７３〕膜会合要素が、膜会合ポリペプチドである、前記〔６４〕に記載の方法。