(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号５のアミノ酸配列からなるインターロイキン−１β−変換酵素（ICE）の活性を阻害するペプチド。
【請求項２】
薬として用いるための請求項１に記載のペプチド。
【請求項３】
自己免疫疾患、炎症性疾患、致死の細菌感染及びウイルス感染の治療のための薬の製造のための請求項１に記載のペプチドの使用。
【請求項４】
自己免疫疾患、炎症性疾患、致死の細菌感染及びウイルス感染の治療のための薬の製造のための配列番号４のアミノ酸配列から成るペプチドの使用。
【請求項５】
前記病状が自己免疫疾患の群から選択されるという事実を特徴とする請求項３または４に記載の使用。
【請求項６】
前記病状が致死の細菌感染及びウイルス感染からなる群から選択されるという事実を特徴とする請求項３または４に記載の使用。
【請求項７】
前記病状が炎症性疾患からなる群から選択されるという事実を特徴とする請求項３または４に記載の使用。
【請求項８】
前記病状が関節リウマチ、敗血性ショック、急性骨髄白血病、宿主に対する移植の免疫学的反応、後天性免疫不全症候群（AIDS）、潰瘍性大腸炎及び多発性硬化症からなる群から選択される、請求項３〜７のいずれか１項に記載の使用。
【請求項９】
請求項１に記載のペプチドといっしょに１以上の医薬として許容し得る担体及び／または賦形剤を含有する医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
発明の属する技術分野
本発明はICE及び／またはICEファミリーの酵素に結合可能なペプチドに関し、そのペプチドは任意にＮ末端及び／またはＣ末端に１以上のアミノ酸を有する、配列番号１のアミノ酸配列から本質的になり、そこでXaaはAsp及びAlaの間で選択される。
本発明は上記ペプチドをICE阻害及び／またはICEファミリーの酵素の阻害を必要とする病状において活性な医薬組成物の製造に使用することにも関する。
発明の背景
ICE（インターロイキン−１β−変換酵素」は最近精製され、クローン化されたヘテロ２量体システインプロテアーゼである（１）。インターロイキン−１β（IL−１β）は、不活性な33KDaまたは31KDaの前駆体（pIL−１β）として合成される。IL−１βの完全に活性な17.5KDaの成熟型はAla117で始まり、Asp116及びAla117の間のプロセシングに起因するようである（２，３）。したがって、IL−１β前駆体タンパク質はICEにより、成熟し、かつ、生物学的に活性な形に開裂する。
ICE活性は単球及びTHP１細胞において確認され、それらはpIL−１βをAsp116−Ala117並びにAsp27−Gly28で開裂し、それぞれ17.5KDaと28KDaの生成物を生じる（３，４）。各部位での開裂はＰ１位置におけるアスパラギン酸に依存する（４，６，７）。
ケノルハブジチス・エレガンス（Caenorhobditis elegans）細胞死タンパク質ced−３に関連するシステインプロテアーゼは細胞消滅機構のエフェクター成分に相当する。ICEは最初に記載されたCED−３の同族体であり、Rat−１線維芽細胞におけるICEまたはCED−３の過発現がアポプトシスを誘導したことが知られている（８）。さらに、研究は、ICEファミリーのプロテアーゼは細胞消滅メカニズムにおいて重要な役割を演ずるかもしれないことも示唆している。
多くのAsp−Ｘ結合を含有するIL−１αまたはいくつかの他のタンパク質は開裂しないから、ICEはpIL−１β特異的プロセシング酵素であるようである。
インターロイキンIL−１α及びIL−１βは多面作用性（theotropic）サイトカインであり、それらの配列は類似性が少ないけれども、それらは種々の組織に多数の同様な影響を及ぼし、多くのヒトの病状、特に生物の免疫応答及び炎症過程に作用する（９）。両タンパク質は約17.5KDaの分子量を有し、約31KDaの分子量を有するより大きいサイズの前駆体分子として以前に合成されている。
IL−１ｓは通常は有益な効果を有するが、生物に極めて不健康な作用も有することがある、推定の（potent）炎症及び発熱原性サイトカインである。それらは、たとえば、全身性エリマトーデスのような自己免疫病状の症状の病因に関係することがあり、特に、それらは、たとえば、慢性関節リウマチにおけるような組織に損傷を引き起こす仲介者として関係する。
IL−１の多くの生物学的影響は敗血症の出来事の間に認められるものと同様である。最近の研究は、１〜10ng／kgの用量のIL−１の静脈内投与は、熱、眠け、食欲不振、一般化した筋肉痛、関節痛及び頭痛を起こすことを示した。
IL−１ｓは多面発現の活性（その多くは生物体に負の影響を及ぼす）を有しているから、IL−１の強力な影響は厳格な生理学的制御の下に置くべきである。
IL−１合成は抗炎症性サイトカイン、プロスタグランジン及びグルココルチコイドにより阻害され、IL−１の阻害の多数倍のレベルの存在は、この仲介者の厳格な制御の必要性を示す。
IL−１ＲＩ及びIL−１ＲIIと名づけられた２つの型のIL−１レセプターがあり、IL−１ＲIIは、IL−１のための制御されたおとり（decoy）標的として行動する非−シグナルIL−１結合分子である（10〜12）。
IL−１のレセプターのためのアンタゴニストポリペプチドが現在まで記載されていた。すなわち、レセプター−結合タンパク質のファミリーの今日までの第３番目の公知の成分はIL−１レセプター（IL−１ra）のためのアンタゴニストである（13〜15）。これらの３つの成分（II−１α、II−１β、IL−１ra）は細胞表面上の同じレセプター（IL−１Ｒ）を認識し及び結合する。IL−１Ｒに結合するIL−１α及びIL−１βはシグナルを伝達するのに、IL−１raは伝達しない。
IL−１raはIL−１ＲＩに結合するポリペプチドで、IL−１ＲIIとの親和性は少なく、いかなるアゴニスト活性も有しない。IL−１raの生産は、単核食細胞、多形核細胞（PMN）及び線維芽細胞を包含する種々の細胞型中に、IgG、サイトカイン及び細菌の生成物により誘導される。
現在まで、IL−１raの２つの分子形が同定され、クローン化された。すなわち、１）選択されたIL−１raは152アミノ酸の成熟したタンパク質を与える25アミノ酸の古典的なリーダー配列を含有する、２）細胞内1L−１ra（icIL−１ra）はリーダー配列を欠き、したがってこのタンパク質は細胞内に留まることを予測させる。
sIL−１ra及びicIL−１raは同じ遺伝子から発生する。icIL−１raトランスクリプトは、代りの出発部位から及び第１の代りのエキソンのスプライシングから、sIL−１raの第１エキソン中に位置する内部スプライスアクセプター部位に起こる。したがって、予測されたタンパク質は、それらのNH2末端を除いて等しく、sIL−１raの最初の21アミノ酸がicIL−１raにおいて４つのアミノ酸により置換されている。
sIL−１ra及びicIL−１raをコードするトランスクリプトの発現は、異なるように制御される。icIL−１raの生物学的重要性はいまだに不明である。
IL−１が多くの病気の病因に関係することを考慮すると、IL−１の不健康な影響を制限するのに有用な利用し得る薬剤を有する必要性が明らかである。
icIL−１raの新しい分子形が最近同定され、クローン化された（16及びPCT／EP95／04023）。この分子はicIL−１raの特異形の第１及び第２エキソンの間の新しい63bpエキソンのフレーム挿入により生じる。この新しいトランスクリプトは、線維芽細胞、ケラチン生成細胞、活性化単球及び多形核細胞において発現されることが見い出された。COS細胞における発現は、この新しい分子がほとんど細胞内であって、SDS−PAGEにおいて、ほぼ、25KDaの分子量を有することを明らかにした。上記新しい分子はicIL−１ra型II（icIL−１raII）と呼ばれている。icIL−１raIIがICEと同様に細胞内タンパク質であることを考慮して、出願人はICE活性を阻害するicIL−１raの能力も試験した。結果をこの特許出願の例において報告し、icIL−１raIIがICE活性を阻害することを示す。
発明の説明
本発明の主な目的は、ICEに結合可能で、したがって、IL−１βの活性形の生産を妨げることが可能な新規なペプチド及び／または、より一般的には、ICEファミリーの酵素に結合可能で、したがって、そのような酵素の活性を妨げることが可能な新規なペプチドを提供することである。だから、本発明はICE及び／またはICEファミリーの酵素に結合可能なペプチドに関し、そのペプチドは、本質的には配列番号１のアミノ酸配列からなり、そこで、Xaaは特に配列番号２または３において報告されているように、Asp及びAlaの間で選択される。任意に、このペプチドはＮ末端及びＣ末端に１以上のアミノ酸も含有する。したがって、本発明のペプチドは19〜40、好ましくは19〜25のアミノ酸の長さであり得る。
特に、本発明の１態様によると、ペプチドは本質的に配列番号４または５のアミノ酸配列からなる。
ICEファミリーのシスティンプロテアーゼの非限定のリストは、CED−３（17）、Nedd−２／ICH−１（18，19）、Yama／CPP−32／Apopain（20，21，22）、Tx／ICH−２／ICEre１−II（23，24，25）、ICEre１−III（25）、Mch−２（26）、ICE−LAP ３／Mch−３／CMH−１（27，28，29）、ICE−LAP−６（30）及びFL ICE／MACH（31，32）を包含する。
本発明の他の目的は、ICE阻害及び／またはICEファミリーの酵素の阻害を必要とする病状において、活性成分として医薬組成物に用いるのに適切であるために、実質的に精製された形で前記ペプチドを提供することである。
本発明による新規なアンタゴニストが予防、治療または診断用途のために有利に用いられる病状の例は、致死の細菌感染及びウイルス感染並びに自己免疫及び炎症性疾患である。特定の例は、関節リウマチ、敗血性ショック急性骨髄白血病、宿主に対する移植の免疫学的反応、後天性免疫不全症候群（AIDS）、潰瘍性大腸炎及び多発性硬化症を包含する。
本発明の目的及び利点は次の記載により明らかとなるだろう。
本発明の態様は薬理学的活性量の本発明のペプチドの、ICE阻害及び／またはICEファミリーの酵素の阻害を要する病状を発現する恐れのある患者またはすでにそのような病状を示している患者への投与である。
活性素と適合するいかなるルートの投与も用い得るが、特に好ましいのは、短時間で全身的効果を有することが可能であるという理由で非経口投与である。この理由で、外科手術の直前、間または後の静脈ボーラス投与が好ましい。投与されるペプチドの用量は、患者の年令、体重及び個々の応答による医療の処方箋の基準に依存する。
投与量は１kgの体重当り0.05〜30mgであることができ、好ましい用量は１kgの体重当り0.1〜10mgである。
非経口用途のための医薬組成物は、活性素及び適切なビヒクルを含む注射可能な形で製造し得る。非経口投与のためのビヒクルは当技術分野で周知であり、たとえば、水、塩類溶液、リンゲル溶液及びデキストロースを含む。ビヒクルは、溶液安定性と等張性を維持するために、より少量の賦形剤を含有し得る。
引用の溶液の製造は通常の様式に従って行うことができ、好ましくは、ペプチド含量は１mg／ml〜10mg／mlからなるだろう。
本発明を特定の態様を参照して記載してきたが、記載内容は、請求項の意味及び目的を越えて広がることなく、当業者によりもたらされるすべての修正及び置換を含む。
さて、本発明を次の例により記載する。それは、いかなる様にも本発明を制限すると解すべきでない。例は以下に特定する図面に関係するだろう。
図面の説明
図１：トランスフェクトされたCOS細胞におけるICE mRAN発現のノザン分析を示す。モック（mock）ベクターまたはヒトICEをコードするcDNAでトランスフェクトされたCOS細胞により抽出された全mRNAをICE特異的mRNAの発現を証明するためにノザン分析により分析した。特にレーン１：MOCK、レーン２：ICE
図２：ウエスタンブロット分析を示す。pIL−１βを文献（４）の記載のように製造された単球溶解物とインキュベートした。37℃での60分間のインキュベート後反応混合物をSDS−PAGE上で動かし、前駆体または成熟IL−１βの存在をウエスタンブロットにより証明した。特に、
レーン１：pIL−１及び
レーン２：pIL−１＋単球溶解物である。
図３：研究下のペプチドのアミノ酸配列を示す。ペプチドＡ（配列番号６）及びペプチドＣ（配列番号４）は、icIL−１raII配列を基礎にして設計された。ペプチドＸ（配列番号７）はランダムに選択されたペプチドである。ペプチドＳ（配列番号５）は２つのAsp残基に代る２つのAlaの存在以外はペプチドＣと同一である。ペプチドＢ（配列番号８）は公知のICE阻害剤（１ａ）である。
図４：研究下の低濃度のペプチドによるICE活性の阻害を示す。pIL−１β（５ng）をペプチド（0.25または2.5μＭ）の存在または不存在でICEとインキュベートし、図２に記載したように前駆体または成熟IL−１βの存在を証明した。特に、
レーン１：pIL−１、
レーン２：pIL−１＋ペプチドＡ、
レーン３：pIL−１＋ペプチドＢ、
レーン４：pIL−１＋ペプチドＣ、
レーン５：pIL−１＋ICE、
レーン６：pIL−１＋ICE＋ペプチドＡ（2.5μＭ）、
レーン７：pIL−１＋ICE＋ペプチドＡ（0.25μＭ）、
レーン８：pIL−１＋ICE＋ペプチドＢ（2.5μＭ）、
レーン９：pIL−１＋ICE＋ペプチドＢ（0.25μＭ）、
レーン10：pIL−１＋ICE＋ペプチドＣ（2.5μＭ）及び
レーン11：pIL−１＋ICE＋ペプチドＣ（0.25μＭ）である。
図５：研究下の高濃度のペプチドによるICE活性の阻害を示す。pIL−１β（５ng）をペプチド（40または400μＭ）の存在または不存在でICEとインキュベートし、図２に記載したように、前駆体または成熟IL−１βの存在を証明した。特に、
レーン１：pIL−１＋ペプチドＡ、
レーン２：pIL−１＋ペプチドＢ、
レーン３：pIL−１＋ペプチドＣ、
レーン４：pIL−１−ペプチドＸ、
レーン５：pIL−１、
レーン６：pIL−１＋ICE、
レーン７：pIL−１＋ICE＋ペプチドＡ（400μＭ）、
レーン８：pIL−１＋ICE＋ペプチドＢ（400μＭ）、
レーン９：pIL−１＋ICE＋ペプチドＣ（400μＭ）、
レーン10：pIL−１＋ICE＋ペプチドＸ（400μＭ）、
レーン11：pIL−１＋ICE＋ペプチドＡ（40μＭ）、
レーン12：pIL−１＋ICE＋ペプチドＢ（40μＭ）、
レーン13：pIL−１＋ICE＋ペプチドＣ（40μＭ）及び
レーン14：pIL−１＋ICE＋ペプチドＸ（40μＭ）である。
図６：ペプチドＣ及びＳによるICE活性の阻害を示す。pIL−１β（５ng）をペプチド（100，300または1,000 μＭ）の存在または不存在でICEとインキュベートし、図２に記載したように、前駆体及び成熟IL−１βの存在を証明した。特に、
レーン１：pIL−１、
レーン２：pIL−１＋ペプチドＣ、
レーン３：pIL−１＋ペプチドＳ、
レーン４：pIL−１＋ペプチドＢ、
レーン５：pIL−１＋ICE、
レーン６：pIL−１＋ICE＋ペプチドＣ（0.1mM）、
レーン７：pIL−１＋ICE＋ペプチドＣ（0.3mM）、
レーン８：pIL−１＋ICE＋ペプチドＣ（１mM）、
レーン９：pIL−１＋ICE＋ペプチドＳ（0.1mM）、
レーン10：pIL−１＋ICE＋ペプチドＳ（0.3mM）、
レーン11：pIL−１＋ICE＋ペプチドＳ（１mM）及び
レーン12：pIL−１＋ICE＋ペプチドＢ（１mM）である。
例
材料及び方法
試薬
次の市販の試薬を細胞の培養及び分離に用いた。
Ficoll（Seramed、独国、ベルリン）、Percoll（Pharmacia、スェーデン、ウプサラ）、RPMI 1640（Seramed、独国、ベルリン）、FCS（HycloneLaboratories，UK、ローガン）、グルタミン（Seramed、独国、ベルリン）及びHepes（Merk、独国、ダーマシュタット）。
細胞
単核細胞はFicollグラジエント遠心分離によりヒトの健康なドナーの末梢血液から得た。精製された単球を室温で30分間の2,000rpmでのPercollグラジエント遠心分離により分離した（10）。COS−７細胞（米国、メリーランド州、ロックビルのATCCから購入した）及び単球をRPMI 1640培地＋10％FCS−２mMグルタミン＋20mM Hepes中で培養した。ヒト組換えIL−１β前駆体を米国、ニュージャージー州、パインブルームのCistron Biotechnologyから得た。成熟及び前駆体IL−１βの両方と反応性のポリクローナル抗体をこの研究室で生じさせた。
PCR
ICE cDNAを公表された配列（８ａ）に基づいて、RT−PCRによって得た。RT−PCRを記載されているように（16）、95℃で１分30秒、55℃で１分30秒及び72℃で１分30秒を30サイクル行なった。オリゴヌクレオチドをDuotech（イタリア国、ミラン）から得た。選択的にICEを増幅するのに用いられたオリゴの配列は次のとおりであった。
0004018154.tif 000002
結果
COS細胞における組換えICEの発現
ヒトICEをコードするcDNAをPCRにより増幅した。配列を確認し、cDNAをpSG５発現ベクター中にサブクローン化した。COS細胞を空のベクター（mock）またはICE cDNAを含有するベクターでトランスフェクトし、48時間後、ICE特異的mRNAについて細胞を分析した。図３に示されているように、ICE cDNAでトランスフェクトされたCOS細胞は高レベルのICE mRNAを発現した。
前に記載した（11）ように製造された単球溶解物もpIL−１βを成熟形（図２）に変換することができた。したがって、組換えICEまたは新しく単離された単球をさらなる実験のためのICE酵素活性源として用いた。
ICE活性の阻害
ICE活性源を製造し、そのpIL−１βを開裂する能力を反応を37℃で１時間、インキュベートすることにより試験した。次に混合物をSDS−PAGE上で動かし、ウエスタンブロットによりpIL−１βまたは成熟形の存在を証明した。
４つの異なるペプチドを設計し、合成し、それらのICE活性を阻害する能力について試験した。これらのペプチドは図３に示されており、Applied Biosystems（カリフォルニア州、フォスターシティー）からの固相合成機により得た。これらのペプチドの純度は高圧液体クロマトグラフィーにより確かめた。
公知のICE阻害剤（１ａ）である、図３に報告されたテトラペプチドＢ（Bachem、スイス国ブンデンドルフ）を陽性の対照として用いた。
参考文献
1.  ａ）  Thornbeny他、「新規なシステインプロテアーゼが単球におけるインターロイキン−１βプロセシングに必要である」、Nature、356、768-774（1990）
ｂ）  Ceretti他、「インターロイキン−１β変換酵素の分子クローン化」、Science、256、97-100（1992）
2.  Cameron他、「ヒトIL−１のアミノ酸分析、生化学的に独特な形のIL−１のための証拠」、J. Exp. Med.、162、790-801（1985）
3.  Mosley他、「インターロイキン１  レセプターはヒトインターロイキン−１α前駆体と結合するが、インターロイキン−１β前駆体とは結合しない」、J. Biol. Chem.、262、2941-2944（1987）
4.  Kostura他、「単球特異的プレインターロイキン−１βコンバーターゼ活性の同定」、Proc. Natl. Acad. Sci. USA、86、5227-5231（1989）
5.  Black他、「共誘導されたプロテアーゼによるインターロイキン−１βの活性化」、FEBS Lett.、427、386-390（1989）
6.  Howard他、「IL−１変換酵素は２つの特有の部位でIL−１β前駆体のプロセシングのためにアスパラギン酸を必要とし、31KDa IL−１αを開裂しない」、J.Immunol.、147、2964-2969（1991）
7.  Griffm他、III Int. J. Mass. Spectrom. Ion. Phys.、11、131-149（1991）
8.  Miura他、「インターロイキン−１β−変換酵素による線維芽細胞におけるアポプトシスの誘導、C. elegans細胞死遺伝子ced−３の哺乳動物同族体」、Cell、75、653-660（1993）
9.  Dinarello、「インターロイキン１及びインターロイキン−１括抗作用」、Blood、77、1627-1652（1991）
10.  Colotta、「インターロイキン−１型IIレセプター、IL−４により制御されるIL−１のためのおとり標的」、Science、261、472-475（1993）
11.  Sims他、「インターロイキン−１シグナルは型Ｉレセプターを経由して排他的に起こる」、Proc. Natl. Acad. USA、90、6155-6159（1993）
12.  Colotta他、Immunol. Today、15、562-566（1994）
13.  Hannum他、「ヒトインターロイキン−１阻害剤のインターロイキン−１レセプターアンタゴニスト」、Nature、343、336-340（1990）
14.  Eisenberg他、「ヒトインターロイキン−１レセプターアンタゴニストの主要構造及び機能的発現形相補DNA」、Nature、343、341-346（1990）
15.  Carter他、「インターロイキン−１レセプターアンタゴニストタンパク質の精製、クローン化、発現及び特徴づけ」、Nature、344、633-638（1990）
16.  Muzio他、「インターロイキン−１（IL−１）レセプターアンタゴニスト（IL１ra）の新イソ型のクローン化と特徴づけ」、J. Exp. Med.、182623（1995）
17.  Yuan他、「C. elegans細胞死遺伝子ced−３は哺乳類のインターロイキン−１β−交換酵素と同様なタンパク質をコードする」、Cell、75、641-652（1993）
18.  Kumar他、「マウスnedd２遺伝子によるアポプトシスの誘導、それはC. elegans細胞死遺伝子ced−３の生成物及び哺乳類のインターロイキン−１β−変換酵素と同様なタンパク質をコードする」、Genes Dev.、８、1613-1626（1994）
19.  Wang他、「Ich−１であるIce/ced−３関連遺伝子はプログラムされた細胞死の正と負の調節遺伝子の両方をコードする」、Cell、78、739-750（1994）
20.  Fernandes-Alnemri他、「CPP−32、すなわち、Caenorhabditis elegans細胞死タンパク質CDE−３及び哺乳類のインターロイキン−１β−変換酵素と相同な新規なビト細胞消滅性タンパク質」、J. Biol. Chem.、269、30761-30764（1994）
21.  Nicholson他、「哺乳類のアポプトシスに必要なICE／CED−３プロテアーゼの同定及び阻害」、Nature、376、37-43（1995）
22.  Tewari他、「Yama/CPP−32βであるCED−３の哺乳類の同族体は、死基質ポリ（ADP−リボース）ポリメラーゼを開裂するCmA−阻害性プロテアーゼである」、Cell、81、801-809（1995）
23.  Faucheu他、「インターロイキン−１β−変換酵素に類似する新規なヒトプロテアーゼはトランスフェクトされた細胞においてアポプトシスを誘導する」、EMBO J.、14、1914-1922（1995）
24.  Kamens他、「システインプロテアーゼのインターロイキン−１β−変換酵素ファミリーの新規なメンバーであるICH−２の同定と特徴づけ」、J. Biol. Chem.、270、15250-15256（1995）
25.  Munday他、「システインプロテアーゼのICE/CED−３ファミリーのメンバーであるICE re１−II及びICE re１−IIIの分子クローン化及びプロ細胞消滅性活性」、J. Biol. Chem.、270、15870-15876（1995）
26.  Fernandes-Alnemri他、「Mch−２、細胞消滅性CED−３／ICEシステインプロテアーゼ遺伝子ファミリーの新しいメンバー」、Cancer Res.、55、2737-2742（1995）
27.  Duan他、「Caenorhabditis elegans細胞死タンパク質CED−３の新規な哺乳類の同族体であるICE−LAP ３は、Fas−及びTNF−誘導アポプトシスの間に活性化される」、J. Biol. Chem.、2271、35013-35035（1996）
28.  Fernandes-Alnemri他、「CPP−32に高度に関係する新規なヒトの細胞消滅性システインプロテアーゼ、Mch−３」、Cancer Res.、55、6045-6052（1995）
29.  Lippke他、「CPP−32と同様な新規なプロテアーゼである、CPP−32/Mch−２同族体１の同定及び特徴づけ」、J. Biol. Chem.、271、1825-1828（1996）
30.  Duan他、「ICE/Ced−３遺伝子ファミリーの新規なメンバーである、ICE−LAP ６は、細胞毒性Ｔ細胞プロテアーゼグランザイムＢにより活性化される」、J. Biol. Chem.、（1996印刷中）
31.  Muzio他、「新規なFADD−同族体ICE/CED−３−様プロテアーゼであるFLICEは、CD95（Fas/Apo−１）死−誘導シグナル複合体に補充される」、Cell、85、817-827（1996）
32.  Boldin他、「Fas/Apo−１−及びTNF受容体誘導細胞死における、新規なMORT−１／FADD−相互作用プロテアーゼであるMACHの包含」、Cell、85、803-815（1996）
配列表
（１）一般情報
（iii）配列の数
（２）配列番号：１についての情報
（ｉ）配列の特徴
（Ａ）配列の長さ：19アミノ酸
（Ｂ）配列の型：アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：
（Ｄ）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（ix）特性
（Ａ）NAME/KEY：修飾部位
（Ｂ）位置：２
（Ｄ）他の情報：／note＝［Xaaは好ましくはAsp及びAlaの間で選択される。より好ましくは、Aspである。」
（ix）特性
（Ａ）NAME/KEY：修飾部位
（Ｂ）位置：19
（Ｄ）他の情報：／note＝「Xaaは好ましくはAsp及びAlaの間で選択される。より好ましくは、Aspである。」
（xi）配列番号：１：
0004018154.tif 000003
（２）配列番号：２についての情報
（ｉ）配列の特徴
（Ａ）配列の長さ：19アミノ酸
（Ｂ）配列の型：アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：
（Ｄ）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列番号：２：
0004018154.tif 000004
（２）配列番号：３についての情報
（ｉ）配列の特徴
（Ａ）配列の長さ：19アミノ酸
（Ｂ）配列の型：アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：
（Ｄ）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列番号：３：
0004018154.tif 000005
（２）配列番号：４についての情報
（ｉ）配列の特徴
（Ａ）配列の長さ：24アミノ酸
（Ｂ）配列の型：アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：
（Ｄ）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列番号：４：
0004018154.tif 000006
（２）配列番号：５についての情報
（ｉ）配列の特徴
（Ａ）配列の長さ：24アミノ酸
（Ｂ）配列の型：アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：
（Ｄ）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列番号：５：
0004018154.tif 000007
（２）配列番号：６についての情報
（ｉ）配列の特徴
（Ａ）配列の長さ：９アミノ酸
（Ｂ）配列の型：アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：
（Ｄ）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列番号：６：
0004018154.tif 000008
（２）配列番号：７についての情報
（ｉ）配列の特徴
（Ａ）配列の長さ：13アミノ酸
（Ｂ）配列の型：アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：
（Ｄ）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列番号：７：
0004018154.tif 000009
（２）配列番号：８についての情報
（ｉ）配列の特徴
（Ａ）配列の長さ：６アミノ酸
（Ｂ）配列の型：アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：
（Ｄ）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（iii）ハイポセティカル：No
（iv）アンチセンス：No
（ix）特性
（Ａ）NAME/KEY：修飾部位
（Ｂ）位置：１
（Ｄ）他の情報：／note＝「Xaaはアセチルである。」
（ix）特性
（Ａ）NAME/KEY：修飾部位
（Ｂ）位置：６
（Ｄ）他の情報：／note＝「Xaaは−CHOである。」
（xi）配列番号：８：
0004018154.tif 000010
（２）配列番号：９についての情報
（ｉ）配列の特徴
（Ａ）配列の長さ：22塩基対
（Ｂ）配列の型：核酸
（Ｃ）鎖の数：一本鎖
（Ｄ）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：他の核酸
（Ａ）記述：／desc＝「オリゴヌクレオチド」
（iii）ハイポセティカル：No
（iv）アンチセンス：No
（xi）配列番号：９：
0004018154.tif 000011
（２）配列番号：10についての情報
（ｉ）配列の特徴
（Ａ）配列の長さ：22塩基対
（Ｂ）配列の型：核酸
（Ｃ）鎖の数：一本鎖
（Ｄ）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：他の核酸
（Ａ）記述：／desc＝「オリゴヌクレオチド」
（ii）ハイポセティカル：No
（iv）アンチセンス：No
（xi）配列番号：10：
0004018154.tif 000012
【図１】
0004018154.tif 000013
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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