(57)【要約】【課題】浮遊性細胞の浮遊培養に用いるポリペプチドであって、細胞どうしで接着することを抑制することができ、アポトーシス抑制効果が高く、培養した細胞の生存率を高くすることができるポリペプチドを提供することを目的とする。【解決手段】浮遊性細胞（Ｓ）の浮遊培養に用いるポリペプチド（Ｐ）であって、（Ｐ）がアミノ酸配列（Ｘ）を有するポリペプチドであり、（Ｘ）が下記ペンタペプチド配列、下記ヘキサペプチド配列、Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｐｈｅ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ配列（１２）及びＡｌａ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ配列（１３）からなる群より選ばれる少なくとも１種である浮遊性細胞浮遊培養用ポリペプチド。ペンタペプチド配列：Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ配列（１）等。ヘキサペプチド配列：Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ａｌａ  Ｐｒｏ配列（６）等。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
浮遊性細胞（Ｓ）の浮遊培養に用いるポリペプチド（Ｐ）であって、
（Ｐ）がアミノ酸配列（Ｘ）を有するポリペプチドであり、
（Ｘ）が下記ペンタペプチド配列、下記ヘキサペプチド配列、Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｐｈｅ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ配列（１２）及びＡｌａ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ配列（１３）からなる群より選ばれる少なくとも１種である浮遊性細胞浮遊培養用ポリペプチド。
ペンタペプチド配列：Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ配列（１）、Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ配列（２）、Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ配列（３）、Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ配列（４）及びＰｒｏ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ配列（５）。
ヘキサペプチド配列：Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ａｌａ  Ｐｒｏ配列（６）、Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ配列（７）、Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ配列（８）、Ｖａｌ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ配列（９）、Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ配列（１０）及びＰｒｏ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ａｌａ配列（１１）。
【請求項２】
ポリペプチド（Ｐ）が、補助アミノ酸配列（Ｙ）を有し、補助アミノ酸配列（Ｙ）が、Ｇｌｙ  Ａｌａ配列を有し、アミノ酸が２〜５０個結合した配列である請求項１に記載の浮遊性細胞浮遊培養用ポリペプチド。
【請求項３】
ポリペプチド（Ｐ）が、補助アミノ酸配列（Ｙ）を有し、（Ｙ）がＧｌｙ  Ａｌａ配列、Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ配列（１４）、Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｔｙｒ配列（１５）、Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｔｙｒ配列（１６）、Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｔｙｒ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ配列（１７）及び下記配列（Ｙ−６）からなる群より選ばれる少なくとも１種である請求項１又は２に記載の浮遊性細胞浮遊培養用ポリペプチド。
配列（Ｙ−６）：Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  （Ａｌａ）f  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ａｌａ配列。なお、ｆは１〜４４の整数である。
【請求項４】
ポリペプチド（Ｐ）が、アミノ酸配列（Ｘ’）を有し、（Ｘ’）がアミノ酸配列（Ｘ）中の１個又は２個のＶａｌがＬｙｓに置換された配列である請求項１〜３のいずれかに記載の浮遊性細胞浮遊培養用ポリペプチド。
【請求項５】
ポリペプチド（Ｐ）が、上記ペンタペプチド配列、Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ配列（３６）及びＧｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ配列（１４）を有する請求項１〜４のいずれかに記載の浮遊性細胞浮遊培養用ポリペプチド。
【請求項６】
ポリペプチド（Ｐ）が、下記アミノ酸ブロック（Ｌ１）〜（Ｌ４）からなる群より選ばれる少なくとも１種のアミノ酸ブロック（Ｌ）を有するポリペプチドである請求項１〜５のいずれかに記載の浮遊性細胞浮遊培養用ポリペプチド。
アミノ酸ブロック（Ｌ１）：ペンタペプチド配列が４回繰り返した配列に、Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ配列（３６）１個が化学結合し、さらにペンタペプチド配列が３回繰り返した配列が化学結合し、さらにＧｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ配列（１４）が２回繰り返した配列が化学結合したアミノ酸ブロック
アミノ酸ブロック（Ｌ２）：ペンタペプチド配列が４回繰り返した配列に、Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ配列（３６）１個が化学結合し、さらにペンタペプチド配列が３回繰り返した配列が化学結合し、さらにＧｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ配列（１４）が４回繰り返した配列が化学結合したアミノ酸ブロック
アミノ酸ブロック（Ｌ３）：Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ配列（１４）が２回繰り返した配列に、ペンタペプチド配列が４回繰り返した配列が化学結合し、Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ配列（３６）を結合し、さらにペンタペプチド配列が１１回繰り返した配列が化学結合し、さらにＧｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ配列（１４）が２回繰り返した配列が化学結合したアミノ酸ブロック
アミノ酸ブロック（Ｌ４）；Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ配列（１４）が２回繰り返した配列に、ペンタペプチド配列が４回繰り返した配列が化学結合し、Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ配列（３６）を結合し、さらにペンタペプチド配列が１１回繰り返した配列が化学結合し、さらにＧｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ配列（１４）が４回繰り返した配列が化学結合したアミノ酸ブロック
【請求項７】
ポリペプチド（Ｐ）が、下記ポリペプチド（Ｐ１）〜（Ｐ６）からなる群より選ばれる１種である請求項１〜６のいずれかに記載の浮遊性細胞浮遊培養用培養用ポリペプチド。
（Ｐ１）：Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ配列（１）を５６個、Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ配列（３６）を８個及びＧｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ配列（１４）を１６個有するポリペプチド
（Ｐ２）：Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ配列（１）を１１９個、Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ配列（３６）を１７個及びＧｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ配列（１４）を３４個有するポリペプチド
（Ｐ３）：Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ配列（１）を４９個、Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ配列（３６）を７個及びＧｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ配列（１４）を２８個有するポリペプチド
（Ｐ４）：Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ配列（１）を９１個、Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ配列（３６）を１３個及びＧｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ配列（１４）を５２個有するポリペプチド
（Ｐ５）：Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ配列（１）を１２０個、Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ配列（３６）を８個  及び  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ配列（１４）を３２個有するポリペプチド
（Ｐ６）：Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ配列（１）を９０個、Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ配列（３６）を６個及びＧｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ配列（１４）を３６個有するポリペプチド
【請求項８】
請求項１〜７のいずれかに記載のポリペプチド（Ｐ）及び基材（Ｂ）からなる浮遊性細胞浮遊培養用基材。
【請求項９】
ＭＥＬ細胞の細胞接着率が０〜２０％である請求項８に記載の浮遊性細胞浮遊培養用基材。
【請求項１０】
浮遊性細胞浮遊培養用基材表面におけるポリペプチド（Ｐ）の含有量が、浮遊培養用基材の培養に用いる面において単位面積（ｃｍ2）あたり、０．１〜５μｇである請求項８又は９に記載の浮遊性細胞浮遊培養用基材。
【請求項１１】
請求項１〜７のいずれかに記載のポリペプチド（Ｐ）及び培地（Ｃ）を含む浮遊性細胞浮遊培養用培養液。
【請求項１２】
浮遊性細胞浮遊培養用培養液中のポリペプチド（Ｐ）の濃度が０．１〜５０，０００μｇ／ｍＬである請求項１１に記載の浮遊性細胞浮遊培養用培養液。
【請求項１３】
請求項１〜７のいずれかに記載のポリペプチド（Ｐ）の存在下で浮遊性細胞（Ｓ）を浮遊培養する培養方法。
【請求項１４】
請求項８〜１０のいずれかに記載の浮遊性細胞浮遊培養用基材及び／又は請求項１１若しくは１２に記載の浮遊性細胞浮遊培養用培養液を用いて浮遊性細胞（Ｓ）を浮遊培養する請求項１３に記載の培養方法。
【請求項１５】
請求項８〜１０のいずれかに記載の浮遊性細胞浮遊培養用基材を用いて浮遊性細胞（Ｓ）を浮遊培養する培養方法であって、浮遊性細胞浮遊培養用基材の培養に用いる面におけるポリペプチド（Ｐ）の含有量が、浮遊性細胞（Ｓ）１万個に対して０．００１〜５μｇである請求項１２又は１３に記載の培養方法。
【請求項１６】
請求項１１又は１２に記載の浮遊性細胞浮遊培養用培養液を用いて浮遊性細胞（Ｓ）を浮遊培養する培養方法であって、浮遊性細胞浮遊培養用培養液におけるポリペプチド（Ｐ）の含有量が、浮遊性細胞（Ｓ）１万個に対して０．０１〜５０００μｇである浮遊性細胞（Ｓ）の培養方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、浮遊性細胞浮遊培養用ポリペプチドに関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、さまざまな方法で細胞培養が行われている。細胞には、接着性細胞と浮遊性細胞とがあり、浮遊性細胞の細胞培養方法としては、例えば、スピンナーフラスコを用いて旋回培養する方法、ロータリーフラスコを用いて旋回培養する方法、シェーカーを用いて旋回培養する方法が知られている。
【０００３】
しかしながら、浮遊性細胞を長時間培養すると、栄養分や溶存酸素量の低下によるストレスにより、アポトーシスの誘導が起こり、細胞の生存率が低くなる問題がある。
【０００４】
また、近年、浮遊性細胞をバイオリアクターを用いて高密度浮遊培養する方法が注目されており、この方法が抗体やサイトカインの生産に用いられている。しかしながら、浮遊性細胞を高密度で培養すると、栄養分や溶存酸素量の低下によるストレスによりアポトーシスの誘導が起こり、細胞の生存率が低くなる問題がある。また、浮遊性細胞を高密度で培養すると、浮遊性細胞どうしで接着又は浮遊性細胞が培養基材に接着しやすくなる問題がある。さらに、細胞どうしが接着することにより、細胞の分化の状態が変化し、目的の細胞が得られず、本来の浮遊性細胞を浮遊培養することができない問題がある。
【０００５】
浮遊性細胞が培養基材に接着することを防ぐ方法としては、細胞接着性の低い細胞低接着性コーティング材料を有する基材を用いることが試みられている。細胞低接着性コーティング材料としては、アガー（アガロース）、ポリビニルアルコール、ポリヒドロキシエチルメタクリレート及びポリエチレングリコール等が知られている（非特許文献１）。しかしながら、浮遊性細胞への毒性が高く、細胞の生存率が低くなる問題がある。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ、３５４、２００８年、ｐ１７４〜１７９
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の目的は、浮遊性細胞の浮遊培養に用いるポリペプチドであって、細胞どうしで接着することを抑制することができ、アポトーシス抑制効果が高く、培養した細胞の生存率を高くすることができるポリペプチドを提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者は、鋭意研究を重ねてきた結果、本発明に到達した。
すなわち、本発明は、浮遊性細胞（Ｓ）の浮遊培養に用いるポリペプチド（Ｐ）であって、（Ｐ）がアミノ酸配列（Ｘ）を有するポリペプチドであり、（Ｘ）が下記ペンタペプチド配列、下記ヘキサペプチド配列、Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｐｈｅ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ配列（１２）及びＡｌａ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ配列（１３）からなる群より選ばれる少なくとも１種である浮遊性細胞浮遊培養用ポリペプチドである。
ペンタペプチド配列：Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ配列（１）、Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ配列（２）、Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ配列（３）、Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ配列（４）及びＰｒｏ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ配列（５）。
ヘキサペプチド配列：Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ａｌａ  Ｐｒｏ配列（６）、Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ配列（７）、Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ配列（８）、Ｖａｌ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ配列（９）、Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ配列（１０）及びＰｒｏ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ａｌａ配列（１１）。
【発明の効果】
【０００９】
本発明のポリペプチドは、細胞どうしで接着することを抑制することができ、アポトーシス抑制効果が高く、培養した浮遊性細胞の生存率が高いという効果を奏する。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本発明の浮遊性細胞浮遊培養用ポリペプチドは、浮遊性細胞（Ｓ）の浮遊培養に用いるポリペプチド（Ｐ）であって、（Ｐ）がアミノ酸配列（Ｘ）を有するポリペプチドであり、（Ｘ）が下記ペンタペプチド配列、下記ヘキサペプチド配列、Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｐｈｅ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ配列（１２）及びＡｌａ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ配列（１３）からなる群より選ばれる少なくとも１種である浮遊性細胞浮遊培養用ポリペプチドである。
ペンタペプチド配列：Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ配列（１）、Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ配列（２）、Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ配列（３）、Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ配列（４）及びＰｒｏ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ配列（５）からなる群より選ばれる少なくとも１種の配列。
ヘキサペプチド配列：Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ａｌａ  Ｐｒｏ配列（６）、Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ配列（７）、Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ配列（８）、Ｖａｌ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ配列（９）、Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ配列（１０）及びＰｒｏ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ａｌａ配列（１１）からなる群より選ばれる少なくとも１種の配列。
【００１１】
上記アミノ酸配列（Ｘ）のうち、細胞の低接着性（細胞の基材等に対する低接着性及び細胞どうしの低接着性を意味する。以下同じ。）並びにアポトーシス抑制効果の観点から、ペンタペプチド配列が好ましく、さらに好ましくはＧｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ配列（１）である。
なお、ペンタペプチド配列（配列（１）〜（５）のいずれか１種）が２回以上繰り返し化学結合する場合は、配列（２）〜（５）が２回以上繰り返し化学結合した構造は、配列（１）がその繰り返し回数から１を減じた回数繰り返した構造とほぼ同程度の機能を有する。これは、配列（２）がｎ回（ｎは２以上の整数）繰り返し化学結合している配列を有するポリペプチド（Ｐ）中には、配列（１）をｎ−１個有するためである。
【００１２】
ポリペプチド（Ｐ）は、アミノ酸配列（Ｘ）を（Ｐ）の１分子中に少なくとも１個有すればよいが、細胞の低接着性及びアポトーシス抑制効果の観点から、１分子中に１０〜２００個有するものが好ましく、さらに好ましくは４５〜１３０個有するものであり、次にさらに好ましくは４９〜１２０個である。
なお、２種以上のアミノ酸配列（Ｘ）がポリペプチド（Ｐ）１分子中に含まれていてもよい。
【００１３】
ポリペプチド（Ｐ）は、さらに、補助アミノ酸配列（Ｙ）を有してもいい。
補助アミノ酸（Ｙ）は、Ｇｌｙ  Ａｌａ配列を有し、アミノ酸が２〜５０個結合した配列である。
【００１４】
補助アミノ酸配列（Ｙ）としては、細胞の低接着性及びポリペプチド（Ｐ）の熱安定性の観点から、Ｇｌｙ及びＡｌａの合計含有割合（％）は、補助アミノ酸配列（Ｙ）の全アミノ酸個数に基づいて、細胞の低接着性及びポリペプチド（Ｐ）の熱安定性の観点から、１０〜１００が好ましく、さらに好ましくは２０〜９５、特に好ましくは３０〜９０、最も好ましくは４０〜８５である。
【００１５】
補助アミノ酸配列（Ｙ）中のＧｌｙ及びＡｌａの含有個数割合（Ｇｌｙ／Ａｌａ）は、細胞の低接着性及びポリペプチド（Ｐ）の熱安定性の観点から、０．０３〜４０が好ましく、さらに好ましくは０．０８〜１３、特に好ましくは０．２〜５である。
【００１６】
補助アミノ酸配列（Ｙ）として、具体的には、Ｇｌｙ  Ａｌａ配列、Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ配列（１４）、Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｔｙｒ配列（１５）、Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｔｙｒ配列（１６）、Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｔｙｒ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ配列（１７）及び下記配列（Ｙ−６）等が含まれる。
配列（Ｙ−６）：Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  （Ａｌａ）f  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ａｌａ配列。なお、ｆは１〜４４の整数である。
（Ｐ）中に補助アミノ酸配列（Ｙ）を有する場合、（Ｙ）は１種でもよく、２種以上を有してもよい。
【００１７】
補助アミノ酸配列（Ｙ）のうち、細胞の低接着性及びポリペプチド（Ｐ）の熱安定性の観点から、Ｇｌｙ  Ａｌａ配列、Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ配列（１４）、Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｔｙｒ配列（１５）が好ましく、さらに好ましくはＧｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ配列（１４）である。
【００１８】
ポリペプチド（Ｐ）が補助アミン酸配列（Ｙ）を有する場合、（Ｙ）を（Ｐ）の１分子中に少なくとも１個有すればよいが、細胞の低接着性及びポリペプチド（Ｐ）の熱安定性の観点から、１分子中に１０〜１００個有するものが好ましく、さらに好ましくは１５〜６０個有するものであり、次にさらに好ましくは１６〜５２個有するものである。
なお、２種以上の補助アミノ酸配列（Ｙ）が（Ｐ）１分子中に含まれていてもよい。
【００１９】
ポリペプチド（Ｐ）が補助アミノ酸配列（Ｙ）を有する場合、ポリペプチド（Ｐ）の熱安定性の観点から、（Ｐ）の分子中に（Ｙ）が複数回繰り返した配列を有することが好ましい。例えば、（Ｇｌｙ  Ａｌａ）a配列、（Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ）b配列、（Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｔｙｒ）c配列、（Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｔｙｒ）d配列、（Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｔｙｒ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ）e配列及び｛Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  （Ａｌａ）f  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ａｌａ｝g配列が挙げられる。なお、ａは１〜２５の整数、ｂ、ｃ、ｄ及びｅは１〜８の整数、ｆは１〜４４の整数、ｆが１の場合ｇは１〜７の整数、ｆが２の場合ｇは１〜６の整数、ｆが３又は４の場合ｇは１〜５の整数、ｆが５又は６の場合ｇは１〜４の整数、ｆが７〜１０の整数の場合ｇは１〜３、ｆが１１〜１９の整数の場合ｇは１又は２、ｆが２０〜４４の整数の場合ｇは１である。
【００２０】
（Ｇｌｙ  Ａｌａ）a配列の場合は、具体的には配列（１８）〜（２０）で表されるアミノ酸配列等が挙げられる。
（Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ）b配列の場合は、具体的には配列（２１）〜（２３）で表されるアミノ酸配列等が挙げられる。
（Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｔｙｒ）c配列の場合は、具体的には配列（２４）〜（２６）で表されるアミノ酸配列等が挙げられる。
（Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｔｙｒ）d配列の場合は、具体的には配列（２７）〜（２９）で表されるアミノ酸配列等が挙げられる。
（Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｔｙｒ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ）e配列の場合は、具体的には配列（３０）〜（３２）で表されるアミノ酸配列等が挙げられる。
｛Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  （Ａｌａ）f  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ａｌａ｝g配列の場合は、具体的には配列（３３）〜（３５）で表されるアミノ酸配列等が挙げられる。
【００２１】
これらの補助アミノ酸配列（Ｙ）が複数回繰り返した配列のうち、細胞の低接着性及びポリペプチド（Ｐ）の熱安定性の観点から、配列（２１）〜（２３）が好ましく、さらに好ましくは配列（２１）｛ｂ＝２｝及び（２２）｛ｂ＝４｝である。
【００２２】
ポリペプチド（Ｐ）は、さらに、アミノ酸配列（Ｘ’）を有してもいい。
アミノ酸配列（Ｘ’）は、アミノ酸配列（Ｘ）中の１個又は２個のＶａｌがＬｙｓに置換されたアミノ酸配列である。
【００２３】
（Ｘ’）としては、アミノ酸配列（Ｘ）中の１個のＶａｌがＬｙｓに置換された下記配列（Ｘ’−１）〜（Ｘ’−４）又はアミノ酸配列（Ｘ）中の２個のＶａｌがＬｙｓに置換された下記配列（Ｘ’−５）〜（Ｘ’−８）が含まれる。
（Ｘ’−１）：ペンタペプチド配列中の１個のＶａｌがＬｙｓに置換された配列。具体的には、Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ配列（３６）、Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｐｒｏ配列（３７）、Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ配列（３８）、Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ配列（３９）、Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ配列（４０）、Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ配列（４１）、Ｌｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ配列（４２）、Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ配列（４３）、Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ配列（４４）及びＰｒｏ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ配列（４５）等が挙げられる。
（Ｘ’−２）：ヘキサペプチド配列中の１個のＶａｌがＬｙｓに置換された配列。具体的には、Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ａｌａ  Ｐｒｏ配列（４６）、Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ｐｒｏ配列（４７）、Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ配列（４８）、Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ配列（４９）、Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ配列（５０）、Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ配列（５１）、Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ配列（５２）、Ｖａｌ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ配列（５３）、Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ配列（５４）、Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ配列（５５）、Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ａｌａ配列（５６）及びＰｒｏ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ａｌａ配列（５７）等が挙げられる。
（Ｘ’−３）：配列（１２）のアミノ酸配列中の１個のＶａｌがＬｙｓに置換された配列。具体的には、Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｐｈｅ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ配列（５８）及びＡｌａ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｐｈｅ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ配列（５９）等が挙げられる。
（Ｘ’−４）：配列（１３）のアミノ酸配列中の１個のＶａｌがＬｙｓに置換された配列。具体的には、Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ配列（６０）及びＡｌａ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ配列（６１）等が挙げられる。
（Ｘ’−５）：ペンタペプチド配列中の２個のＶａｌがＬｙｓに置換された配列。具体的には、Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｐｒｏ配列（６２）、Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ配列（６３）、Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ配列（６４）、Ｌｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ配列（６５）及びＰｒｏ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ配列（６６）等が挙げられる。
（Ｘ’−６）：ヘキサペプチド配列中の２個のＶａｌがＬｙｓに置換された配列。具体的には、Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ｐｒｏ配列（６７）、Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ配列（６８）、Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ配列（６９）、Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ配列（７０）、Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ配列（７１）及びＰｒｏ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ａｌａ配列（７２）等が挙げられる。
（Ｘ’−７）：配列（１２）のアミノ酸配列中の２個のＶａｌがＬｙｓに置換された配列。具体的には、Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｐｈｅ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ配列（７３）等が挙げられる。
（Ｘ’−８）：配列（１３）のアミノ酸配列中の２個のＶａｌがＬｙｓに置換された配列。具体的には、Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ配列（７４）等が挙げられる。
【００２４】
アミノ酸配列（Ｘ’）のうち、細胞の低接着性及びアポトーシス抑制の観点から、（Ｘ’−１）が好ましく、さらに好ましくはＧｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ配列（３６）である。
ポリペプチド（Ｐ）１分子中には、２種以上の（Ｘ’）を含んでもいい。
【００２５】
ポリペプチド（Ｐ）がアミノ酸配列（Ｘ’）を有するものである場合、（Ｐ）１分子中に（Ｘ’）を少なくとも１個有すればよいが、ポリペプチド（Ｐ）の溶解性、細胞の低接着性及びアポトーシス抑制の観点から、（Ｐ）１分子中に１〜２０個有するものが好ましく、さらに好ましくは６〜１７個、最も好ましくは１３個である。
【００２６】
また、（Ｐ）１分子中の（Ｘ）の数と（Ｘ’）の数との比（（Ｘ）／（Ｘ’））は、細胞の低接着性及びアポトーシス抑制の観点から、５〜２０が好ましく、さらに好ましくは７〜１５である。
【００２７】
上記アミノ酸配列（Ｘ）及び／又は（Ｘ’）の両端には、介在アミノ酸配列（Ｚ）を有してもいい。
介在アミノ酸配列（Ｚ）としては、アミノ酸配列（Ｘ）、アミノ酸配列（Ｘ’）及び補助アミノ酸配列（Ｙ）以外のアミノ酸配列が含まれ、アラニン（Ａｌａ）、グリシン（Ｇｌｙ）、セリン（Ｓｅｒ）、トレオニン（Ｔｈｒ）、バリン（Ｖａｌ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）、システイン（Ｃｙｓ）、メチオニン（Ｍｅｔ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、チロシン（Ｔｙｒ）、プロリン（Ｐｒｏ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ）、アルギニン（Ａｒｇ）、リジン（Ｌｙｓ）及び／又はヒスチジン（Ｈｉｓ）等から構成されるアミノ酸配列が含まれる。
（Ｚ）は、アミノ酸１個又はアミノ酸が２個以上結合したペプチド配列である。（Ｚ）を構成するアミノ酸の数は、ペプチドの熱安定性の観点から、１〜３０個が好ましく、さらに好ましくは１〜１５個、次にさらに好ましくは１〜１０個、特に好ましくは１〜４個である。
【００２８】
ポリペプチド（Ｐ）中の上記介在アミノ酸配列（Ｚ）の含有量は、細胞の低接着性及びアポトーシス抑制の観点から、ポリペプチド（Ｐ）の重量を基準として、０〜２０重量％が好ましく、さらに好ましくは０〜１３重量％である。
【００２９】
ポリペプチド（Ｐ）がアミノ酸配列（Ｘ）、補助アミノ酸配列（Ｙ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）を有するポリペプチドである場合、ポリペプチド（Ｐ）の溶解性、細胞の低接着性、アポトーシス抑制及び（Ｐ）の熱安定性の観点から、アミノ酸配列（Ｘ）と補助アミノ酸配列（Ｙ）とが結合し、アミノ酸配列（Ｘ）とアミノ酸配列（Ｘ’）とが結合している配列を有するものが好ましく、さらに好ましくはアミノ酸配列（Ｘ’）が１個又は２個以上結合した配列をアミノ酸配列（Ｘ）とアミノ酸配列（Ｘ）との間に有することであり、最も好ましくはポリペプチド（Ｐ）がアミノ酸ブロック（Ｌ）［｛（アミノ酸配列（Ｘ））l−（アミノ酸配列（Ｘ’））m−（アミノ酸配列（Ｘ））n−（補助アミノ酸配列（Ｙ））o｝；ｌ、ｍ、ｎ及びｏは１〜１００の整数並びに／又は｛（補助アミノ酸配列（Ｙ））q−（アミノ酸配列（Ｘ））r−（アミノ酸配列（Ｘ’））s−（アミノ酸配列（Ｘ））t−（補助アミノ酸配列（Ｙ））u｝；ｑ、ｒ、ｓ、ｔ及びｕは１〜１００の整数］を有していることである。
ｌは、細胞の低接着性及びアポトーシスの観点から、１〜５０の整数が好ましく、さらに好ましくは２〜２０の整数であり、次にさらに好ましくは３〜１１の整数である。
ｍは、（Ｐ）の溶解性、細胞の低接着性及びアポトーシスの観点から、１〜５０の整数が好ましく、さらに好ましくは１〜２０の整数である。
ｎは、細胞の低接着性及びアポトーシスの観点から、１〜５０の整数が好ましく、さらに好ましくは２〜２０の整数であり、次にさらに好ましくは３〜１１の整数である。
０は、細胞の低接着性及びポリペプチド（Ｐ）の熱安定性の観点から、１〜５０の整数が好ましく、さらに好ましくは２〜２０の整数である。
ｑは、細胞の低接着性及びポリペプチド（Ｐ）の熱安定性の観点から、１〜５０の整数が好ましく、さらに好ましくは２〜２０の整数である。
ｒは、細胞の低接着性及びアポトーシスの観点から、１〜５０の整数が好ましく、さらに好ましくは２〜２０の整数であり、次にさらに好ましくは３〜１１の整数である。
ｓは、（Ｐ）の溶解性、細胞の低接着性及びアポトーシスの観点から、１〜５０の整数が好ましく、さらに好ましくは１〜２０の整数である。
ｔは、細胞の低接着性及びアポトーシスの観点から、１〜５０の整数が好ましく、さらに好ましくは２〜２０の整数であり、次にさらに好ましくは３〜１１の整数である。
ｕは、細胞の低接着性及びポリペプチド（Ｐ）の熱安定性の観点から、１〜５０の整数が好ましく、さらに好ましくは２〜２０の整数である。
【００３０】
アミノ酸ブロック（Ｌ）として、具体的には、下記アミノ酸ブロック（Ｌ１）〜（Ｌ７）が含まれる。
○アミノ酸配列（Ｘ）がペンタペプチド配列である場合
アミノ酸ブロック（Ｌ１）：ペンタペプチド配列が４回繰り返した配列に、Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ配列（３６）１個が化学結合し、さらにペンタペプチド配列が３回繰り返した配列が化学結合し、さらにＧｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ配列（１４）が２回繰り返した配列が化学結合したアミノ酸ブロック。ペンタペプチド配列としては、配列（１）〜（５）のいずれか１つが繰り返し化学結合していることが好ましい。例えば、アミノ酸ブロック（Ｌ１−１）｛（配列（１））4−（配列（３６））−（配列（１））3−（配列（１４））2｝、アミノ酸ブロック（Ｌ１−２）｛（配列（２））4−（配列（３６））−（配列（２））3−（配列（１４））2｝、アミノ酸ブロック（Ｌ１−３）｛（配列（３））4−（配列（３６））−（配列（３））3−（配列（１４））2｝、アミノ酸ブロック（Ｌ１−４）｛（配列（４））4−（配列（３６））−（配列（４））3−（配列（１４））2｝及びアミノ酸ブロック（Ｌ１−５）｛（配列（５））4−（配列（３６））−（配列（５））3−（配列（１４））2｝等が挙げられる。
【００３１】
アミノ酸ブロック（Ｌ２）：ペンタペプチド配列が４回繰り返した配列に、Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ配列（３６）１個が化学結合し、さらにペンタペプチド配列が３回繰り返した配列が化学結合し、Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ配列（１４）が４回繰り返した配列が化学結合したアミノ酸ブロック。ペンタペプチド配列としては、配列（１）〜（５）のいずれか１つが繰り返し化学結合していることが好ましい。例えば、アミノ酸ブロック（Ｌ２−１）｛（配列（１））4−（配列（３６））−（配列（１））3−（配列（１４））4｝、アミノ酸ブロック（Ｌ２−２）｛（配列（２））4−（配列（３６））−（配列（２））3−（配列（１４））4｝、アミノ酸ブロック（Ｌ２−３）｛（配列（３））4−（配列（３６））−（配列（３））3−（配列（１４））4｝、アミノ酸ブロック（Ｌ２−４）｛（配列（４））4−（配列（３６））−（配列（４））3−（配列（１４））4｝及びアミノ酸ブロック（Ｌ２−５）｛（配列（５））4−（配列（３６））−（配列（５））3−（配列（１４））4｝等が挙げられる。
【００３２】
アミノ酸ブロック（Ｌ３）：Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ配列（１４）が２回繰り返した配列に、ペンタペプチド配列が４回繰り返した配列が化学結合し、Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ配列（３６）を結合し、さらにペンタペプチド配列が１１回繰り返した配列が化学結合し、さらにＧｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ配列（１４）が２回繰り返した配列が化学結合したアミノ酸ブロック。ペンタペプチド配列としては、配列（１）〜（５）のいずれか１つが繰り返し化学結合していることが好ましい。例えば、アミノ酸ブロック（Ｌ３−１）｛（配列（１４））2−（配列（１））4−（配列（３６））−（配列（１））11−（配列（１４））2｝、アミノ酸ブロック（Ｌ３−２）｛（配列（１４））2−（配列（２））4−（配列（３６））−（配列（２））11−（配列（１４））2｝アミノ酸ブロック（Ｌ３−３）｛（配列（１４））2−（配列（３））4−（配列（３６））−（配列（３））11−（配列（１４））2｝、アミノ酸ブロック（Ｌ３−４）｛（配列（１４））2−（配列（４））4−（配列（３６））−（配列（４））11−（配列（１４））2｝及びアミノ酸ブロック（Ｌ３−５）｛（配列（１４））2−（配列（５））4−（配列（３６））−（配列（５））11−（配列（１４））2｝等が挙げられる。
【００３３】
アミノ酸ブロック（Ｌ４）；Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ配列（１４）が２回繰り返した配列に、ペンタペプチド配列が４回繰り返した配列が化学結合し、Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ配列（３６）を結合し、さらにペンタペプチド配列が１１回繰り返した配列が化学結合し、さらにＧｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ配列（１４）が４回繰り返した配列が化学結合したアミノ酸ブロック。ペンタペプチド配列としては、配列（１）〜（５）のいずれか１つが繰り返し化学結合していることが好ましい。例えば、アミノ酸ブロック（Ｌ４−１）｛（配列（１４））2−（配列（１））4−（配列（３６））−（配列（１））11−（配列（１４））4｝、アミノ酸ブロック（Ｌ４−２）｛（配列（１４））2−（配列（２））4−（配列（３６））−（配列（２））11−（配列（１４））4｝、アミノ酸ブロック（Ｌ４−３）｛（配列（１４））2−（配列（３））4−（配列（３６））−（配列（３））11−（配列（１４））4｝、アミノ酸ブロック（Ｌ４−４）｛（配列（１４））2−（配列（４））4−（配列（３６））−（配列（４））11−（配列（１４））4｝及びアミノ酸ブロック（Ｌ４−５）｛（配列（１４））2−（配列（５））4−（配列（３６））−（配列（５））11−（配列（１４））4｝等が挙げられる。
【００３４】
○アミノ酸配列（Ｘ）がヘキサアミノ酸配列であるもの
アミノ酸ブロック（Ｌ５）；ヘキサペプチド配列｛（６）〜（１１）のいずれか１つ｝が４回繰り返した配列に、Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ａｌａ  Ｐｒｏ配列（４６）を結合し、さらにヘキサペプチド配列｛（６）〜（１１）のいずれか１つ｝が３回繰り返した配列が化学結合し、さらにＧｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ配列（１４）が４回繰り返した配列が化学結合したアミノ酸ブロック。
【００３５】
○アミノ酸配列（Ｘ）がＡｌａ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｐｈｅ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ配列（１２）のもの
アミノ酸ブロック（Ｌ６）；Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｐｈｅ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ配列（１２）が４回繰り返した配列に、Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｐｈｅ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ配列（５８）を結合し、さらにＡｌａ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｐｈｅ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ配列（１２）が３回繰り返した配列が化学結合し、さらにＧｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ配列（１４）が４回繰り返した配列が化学結合したアミノ酸ブロック。
【００３６】
○アミノ酸配列（Ｘ）がＡｌａ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ配列（１３）のもの
アミノ酸ブロック（Ｌ７）；Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ配列（１３）が４回繰り返した配列に、Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ配列（６０）を結合し、さらにＡｌａ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ配列（１３）が３回繰り返した配列が化学結合し、さらにＧｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ配列（１４）が４回繰り返した配列が化学結合したアミノ酸ブロック。
【００３７】
アミノ酸ブロック（Ｌ）のうち、細胞の低接着性及びアポトーシス抑制の観点から、アミノ酸ブロック（Ｌ１）〜（Ｌ４）が好ましい。
また、アミノ酸ブロック（Ｌ）は、ポリペプチド（Ｐ）中に１種含んでも良く、２種以上含んでも良い。
ポリペプチド（Ｐ）は、細胞の低接着性及びアポトーシス抑制の観点から、アミノ酸ブロック（Ｌ）を１〜１００個有していることが好ましく、さらに好ましくはアミノ酸ブロック（Ｌ１）〜（Ｌ７）からなる群より選ばれる少なくとも１種のアミノ酸ブロックを１〜１００個有していることであり、次にさらに好ましくはアミノ酸ブロック（Ｌ１）〜（Ｌ４）からなる群より選ばれる少なくとも１種のアミノ酸ブロックを１〜１００個有していることである。
【００３８】
ポリペプチド（Ｐ）がアミノ酸ブロック（Ｌ）が繰り返した構造を有している場合、アミノ酸ブロック（Ｌ）の繰り返し数は、細胞の低接着性及びアポトーシス抑制の観点から、１〜５０の整数が好ましく、さらに好ましくは２〜２０の整数であり、次にさらに好ましくは６〜１７の整数である。
【００３９】
ポリペプチド（Ｐ）は、発現させた（Ｐ）の精製または検出を容易にするために、（Ｐ）のＮ又はＣ末端に特殊なアミノ酸配列を有するタンパク質又はペプチド（以下これらを「精製タグ」と称する）を有してもいい。精製タグとしては、アフィニティー精製用のタグが利用される。そのような精製タグとしては、ポリヒスチジンからなる６×Ｈｉｓタグ、Ｖ５タグ、Ｘｐｒｅｓｓタグ、ＡＵ１タグ、Ｔ７タグ、ＶＳＶ−Ｇタグ、ＤＤＤＤＫタグ、Ｓタグ、ＣｒｕｚＴａｇ０９TM、ＣｒｕｚＴａｇ２２TM、ＣｒｕｚＴａｇ４１TM、Ｇｌｕ−Ｇｌｕタグ、Ｈａ．１１タグ及びＫＴ３タグ等がある。
以下に、各精製タグ（ｉ）とそのタグを認識結合するリガンド（ｉｉ）との組み合わせの一例を示す。
（ｉ−１）グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＴＳ）  （ｉｉ−１）グルタチオン
（ｉ−２）マルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）  （ｉｉ−２）アミロース
（ｉ−３）ＨＱタグ  （ｉｉ−３）ニッケル
（ｉ−４）Ｍｙｃタグ  （ｉｉ−４）抗Ｍｙｃ抗体
（ｉ−５）ＨＡタグ  （ｉｉ−５）抗ＨＡ抗体
（ｉ−６）ＦＬＡＧタグ  （ｉｉ−６）抗ＦＬＡＧ抗体
（ｉ−７）６×Ｈｉｓタグ  （ｉｉ−７）ニッケル又はコバルト
前記精製タグ配列の導入方法としては、発現用ベクターにおけるポリペプチド（Ｐ）をコードする核酸の５’又は３’末端に精製タグをコードする核酸を挿入する方法や市販の精製タグ導入用ベクターを使用する方法等が挙げられる。
【００４０】
ポリペプチド（Ｐ）は、直鎖構造を有するものである（分岐構造、環状構造及び架橋構造を持たない。）ことが好ましい。なお、直鎖構造にはβシート構造（直鎖状ペプチドが折れ曲がってこの部分同士が平行に並び、その間に水素結合が作られる二次構造）も含まれる。
【００４１】
ポリペプチド（Ｐ）の数平均分子量（以下、Ｍｎと略記）は、細胞の低接着性及びアポトーシス抑制の観点から、３０，０００〜１２０，０００が好ましく、さらに好ましくは５０，０００〜１００，０００、特に好ましくは６０，０００〜８０，０００である。なお、Ｍｎは、公知の方法により測定でき、例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ（ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動）法により、測定サンプルを分離し、泳動距離を標準物質と比較することによって求められる。
【００４２】
ポリペプチド（Ｐ）１分子中のアミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）の合計含有量（重量％）は、細胞の低接着性、（Ｐ）の溶解性及びアポトーシス抑制の観点から、（Ｐ）の分子量を基準として、４０〜８０重量％が好ましく、さらに好ましくは５０〜７０重量％である。
【００４３】
ポリペプチド（Ｐ）中のアミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）の合計含有量は、プロテインシークエンサーによって求めることができる。具体的には、下記の測定法により求めることができる。
＜アミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）の含有量の測定法＞
特定のアミノ酸残基で切断出来る切断方法から２種類以上を用いて、ポリペプチド（Ｐ）を３０残基以下程度まで分解する。その後、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にて分離した後、プロテインシークエンサーにてアミノ酸配列を読み取る。得られたアミノ酸配列からペプチドマッピングして、ポリペプチド（Ｐ）の全配列を決定する。その後、以下記載の測定式にてアミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）の合計含有量を測定する。
アミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）の合計含有量（％）＝［｛アミノ酸配列（Ｘ）の分子量｝×｛アミノ酸配列（Ｘ）の数｝＋｛アミノ酸配列（Ｘ’）の分子量｝×｛アミノ酸配列（Ｘ’）の数｝］／｛（Ｐ）の分子量｝×１００
【００４４】
ポリペプチド（Ｐ）１分子中の、補助アミノ酸配列（Ｙ）の個数とアミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）の合計個数との比率（補助アミノ酸配列（Ｙ）の個数：アミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）の合計個数）は、細胞の低接着性、（Ｐ）の熱安定性及びアポトーシス抑制の観点から、１：２〜１：２０が好ましく、さらに好ましくは１：２〜１：１０である。
【００４５】
ポリペプチド（Ｐ）は、アミノ酸配列（Ｘ）を有することにより、細胞どうし及び細胞が基材等に接着することを抑制し、（Ｐ）から細胞にシグナルが導入されてアポトーシス抑制効果を発揮し、細胞の生存率を高くすることができる。また、アミノ酸配列（Ｘ’）を有することにより、水溶性が向上しハンドリング性が向上するとともに、さらに細胞どうしが接着することを抑制する効果が高くなる。また、補助アミノ酸配列（Ｙ）を有することにより、βシート構造をとり、ポリペプチドの熱安定性が高くなる。
【００４６】
好ましいポリペプチド（Ｐ）の一部を以下に例示する。
（ｉ）アミノ酸配列（Ｘ）がＧｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ配列（１）の場合
この場合、ポリペプチド（Ｐ）が、Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ配列（１）、Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ配列（３６）及びＧｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ配列（１４）を有するポリペプチドであることが好ましい。具体的には以下の例が挙げられる。
（ｉ−１）Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ配列（１）を５６個、Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ配列（３６）を８個及びＧｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ配列（１４）を１６個有するポリペプチド（Ｐ１）。
（Ｐ１）として、具体的には、上記アミノ酸ブロック（Ｌ１−１）が８回繰り返し化学結合したＭｎ３５，１６４の配列（７５）のポリペプチドが含まれる。
【００４７】
（ｉ−２）Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ配列（１）を１１９個、Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ配列（３６）を１７個及びＧｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ配列（１４）を３４個有するポリペプチド（Ｐ２）
（Ｐ２）として、具体的には、上記アミノ酸ブロック（Ｌ１−１）が１７回繰り返し化学結合したＭｎ７６，５８１の配列（７６）のポリペプチドが含まれる。
【００４８】
（ｉ−３）Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ配列（１）を４９個、Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ配列（３６）を７個及びＧｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ配列（１４）を２８個有するポリペプチド（Ｐ３）
（Ｐ３）として、具体的には、上記アミノ酸ブロック（Ｌ２−１）が７回繰り返し化学結合したＭｎ３５，８６３の配列（７７）のポリペプチド。
【００４９】
（ｉ−４）Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ配列（１）を９１個、Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ配列（３６）を１３個及びＧｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ配列（１４）を５２個有するポリペプチド（Ｐ４）
（Ｐ４）として、具体的には、上記アミノ酸ブロック（Ｌ２−１）が１３回繰り返し化学結合したＭｎ６９，７７２の配列（７８）のポリペプチド。
【００５０】
（ｉ−５）Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ配列（１）を１２０個、Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ配列（３６）を８個及びＧｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ配列（１４）を３２個有するポリペプチド（Ｐ５）
（Ｐ５）として、具体的には、上記アミノ酸ブロック（Ｌ３−１）が８回繰り返し化学結合したＭｎ７１，４４５の配列（７９）のポリペプチド。
【００５１】
（ｉ−６）Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ配列（１）を９０個およびＧｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ配列（３６）を６個及びＧｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ配列（１４）を３６個有するポリペプチド（Ｐ６）
（Ｐ６）として、具体的には、上記アミノ酸ブロック（Ｌ４−１）が６回繰り返し化学結合したＭｎ６４，６９４の配列（８０）のポリペプチド。
【００５２】
（ｉｉ）アミノ酸配列（Ｘ）がＧｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ａｌａ  Ｐｒｏ配列（６）の場合
（ｉｉ−１）Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ａｌａ  Ｐｒｏ配列（６）を９１個、Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ａｌａ  Ｐｒｏ配列（４６）を１３個及びＧｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ配列（１４）を５２個有するポリペプチド（Ｐ７）
（Ｐ７）として、具体的には、上記アミノ酸ブロック（Ｌ５）が１３回繰り返し化学結合したＭｎ７１，１９５の配列（８１）のポリペプチド。
【００５３】
（ｉｉｉ）アミノ酸配列（Ｘ）がＡｌａ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｐｈｅ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ配列（１２）の場合
（ｉｉｉ−１）Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｐｈｅ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ配列（１２）を９１個、Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｐｈｅ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ配列（５８）を１３個及びＧｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ配列（１４）を５２個有するポリペプチド（Ｐ８）
（Ｐ８）として、具体的には、上記アミノ酸ブロック（Ｌ６）が１３回繰り返し化学結合したＭｎ１０５，９３３の配列（８２）のポリペプチド。
【００５４】
ポリペプチド（Ｐ）は、人工的に製造でき、有機合成法（酵素法、固相合成法及び液相合成法等）、及び遺伝子組み換え法等によって容易に製造できる。有機合成法に関しては、生化学実験講座１、タンパク質の化学ＩＶ（１９８１年７月１日、日本生化学会編、株式会社東京化学同人発行）又は続生化学実験講座２、タンパク質の化学（下）（昭和６２年５月２０日、日本生化学会編、株式会社東京化学同人発行）に記載されている方法等が適用できる。遺伝子組み換え法に関しては、特許第３３３８４４１号公報に記載されている方法等が適用できる。有機合成法及び遺伝子組み換え法はともに、ポリペプチド（Ｐ）を作製できるが、ポリペプチド（Ｐ）を安価に大量生産できるという観点等から、遺伝子組み換え法が好ましい。
【００５５】
本発明の浮遊性細胞浮遊培養用ポリペプチドは、上記ポリペプチド（Ｐ）であることにより、細胞表面に存在するインテグリンと（Ｐ）が結合（接触）し、細胞内にシグナルが伝達されるので、アポトーシス抑制効果が発揮されると推察される。
【００５６】
本発明の浮遊性細胞浮遊培養用ポリペプチドは、浮遊性細胞（Ｓ）の浮遊培養に用いるポリペプチド（Ｐ）である。
浮遊性細胞（Ｓ）としては、浮遊したまま生存する細胞として一般的に知られている細胞が含まれ、具体的には、血球系細胞（血液由来細胞、骨髄由来細胞、リンパ芽球、Ｔリンパ芽球様細胞、Ｂリンパ芽球様細胞、赤芽球様細胞、Ｔリンパ球様、Ｂリンパ球、好酸球性細胞、好塩基球様細胞及びマクロファージ等）並びに幹細胞等が挙げられる。
【００５７】
本発明の浮遊性細胞浮遊培養用ポリペプチドと浮遊性細胞（Ｓ）との細胞接着性（％）は、細胞安定性の観点から、０〜２０％が好ましく、さらに好ましくは０〜１０％である。
浮遊性細胞浮遊培養用ポリペプチドと浮遊性細胞（Ｓ）との細胞接着性とは、培養容器に浮遊性細胞浮遊培養用ポリペプチドを含む溶液中に浮遊性細胞（Ｓ）を懸濁させた溶液を加え、溶媒を減圧留去し、容器を洗浄したときに、培養容器に加えた（Ｓ）の数に対する容器に付着している（Ｓ）の割合を表し、下記測定法で測定することができる。
【００５８】
＜浮遊性細胞浮遊培養用ポリペプチドと浮遊性細胞（Ｓ）との細胞接着性の測定＞
ポリペプチド（Ｐ）を１０μｇ／Ｌの濃度で含むＲＰＭＩ培地（１０ｍＬ）に、ＭＥＬ細胞（ＤＳファーマバイオメディカル株式会社製）（１×１０5個）を加え、細胞懸濁液を作製する。細胞培養用９６ウェルプレート（ＩＷＡＫＩ社製）に細胞懸濁液を０．１ｍＬ加え、３７℃、５容量％ＣＯ2条件下で２時間静置する。
２時間静置後、アスピレーターを用いて培地を除去し、生理食塩水を細胞に直接当たらないように注意しながら１００μＬ／穴で添加し、アスピレーターを用いて生理食塩水を除去する。次にＰＢＳを５０μＬ／穴で添加し、さらにテトラカラーワン（生化学工業株式会社）を１０μＬ／穴で添加して、３７℃、二酸化炭素濃度５容量％のインキュベーター中に４時間放置する。
４時間後に、ホルマザン生成量を、４５０ｎｍ（参照波長６３０ｎｍ）の吸光度でプレートリーダー（コロナ電気株式会社製ＭＴＰ−３２）を用いて測定する。容器に付着した細胞数は、吸光度の高さに比例するので、予め、細胞の数と吸光度の関係を表す検量線を作成しておき、測定された吸光度から容器に付着している細胞の数（ｙ）を算出する。下記式から、細胞接着性を算出する。
細胞接着性（％）＝｛細胞の数（ｙ）｝／｛培養容器に加えた細胞の数（１×１０5×０．０１）｝×１００
【００５９】
本発明の浮遊性細胞浮遊培養用ポリペプチドの使用方法としては、浮遊性細胞（Ｓ）を浮遊培養する際に、浮遊性細胞浮遊培養用ポリペプチドの存在下で培養する方法が含まれ、特に制限はない。例えば、培養容器等に浮遊性細胞浮遊培養用ポリペプチドを存在させて培養する方法や、培養液中に存在させて培養する方法等が挙げられ、具体的には、後述する本発明の浮遊性細胞浮遊培養用基材及び／又は浮遊性細胞浮遊培養用培養液を用いて浮遊性細胞を培養する方法等が挙げられる。
【００６０】
本発明の浮遊性細胞浮遊培養用基材は、上記ポリペプチド（Ｐ）及び基材（Ｂ）からなる浮遊培養用基材である。
基材（Ｂ）の素材としては、プラスチック（例えば、ポリスチレン、ポリアルフォオレフィン、ポリプロピレン、ポリエチレン及びこれらの複合体等）及び／又は無機物（例えば、ガラス、セラミックス、金属及びこれらの複合体等）が挙げられる。
（Ｂ）の素材としては、プラスチックやガラスなど、透明で培養中の細胞を顕微鏡観察ができるものが好ましい。
【００６１】
基材（Ｂ）としては、従来の細胞培養（浮遊性細胞の培養）に用いる基材（細胞培養容器等）を制限無く使用できるが、入手が容易である観点から、細胞培養容器が好ましい。細胞培養容器としては、マルチウェルプレート（例えば、６穴プレート、２４穴プレート及び９６穴プレート等）、シャーレ（例えば、直径（ｍｍ）；３５、６０及び１００等）、Ｔ−フラスコ（例えば、容量（ｍＬ）；２５、７５、１５０及び２２５等）、ローラーボトル（例えば、培養面積（ｃｍ2）；６９０、９７０、１２００及び１３００等）、スピンナーフラスコ（例えば、容量（ｍＬ）；５０、１２５、２５０及び５００ｍＬ等）及びシェーカー（例えば、容量（ｍＬ）；５０、１２５、２５０及び５００ｍＬ等）等が用いられる。
【００６２】
本発明において、浮遊性細胞浮遊培養用基材表面におけるポリペプチド（Ｐ）のコーティング量は、細胞の低接着性及びアポトーシス抑制の観点から、浮遊培養用基材の培養に用いる面において単位面積（ｃｍ2）あたり０．００１〜５μｇが好ましく、さらに好ましくは０．０１〜２．１μｇである。
なお、培養に用いる面とは、例えば、基材（Ｂ）が細胞培養容器であれば、容器の内側であって、培養液を入れて培養する際に、培養が攪拌培養の場合は培養液と接触する部分であり、静置培養の場合は、細胞が接触する底面部分である。この部分がポリペプチド（Ｐ）でコーティングされていると、ポリペプチド（Ｐ）と培養液中に存在する細胞とが結合（接触）し、細胞と培養容器との接着を抑制したり、アポトーシスを抑制することができる。
【００６３】
浮遊性細胞浮遊培養用基材表面におけるポリペプチド（Ｐ）のコーティング量は、具体的には、下記の測定法により測定できる。
＜ポリペプチド（Ｐ）のコーティング量の測定＞
Ｍｉｃｒｏ  ＢＣＡTM  ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｓｓａｙ  ｋｉｔ（ＴＨＥＲＭＯ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）付属のＲｅａｇｅｎｔＡ溶液：ＲｅａｇｅｎｔＢ溶液：ＲｅａｇｅｎｔＣ溶液＝２５：２４：１の混合液（Ｃ）を作成する。浮遊性細胞浮遊培養用基材に対して、測定したい基材の表面積に対して３１２．５μＬ／ｃｍ2で混合液（Ｃ）を加え、測定したい基材の表面にまんべんなく付着させて、３７℃で２時間静置する。
静置２時間後に、ビシンコニン酸（ＢＣＡ）とＣｕ+のキレート生成量を、４５０ｎｍ（対照波長６３０ｎｍ）の吸光度でプレートリーダー（コロナ電気株式会社製ＭＴＰ−３２）を用いて室温で測定する。さらに、あらかじめウシ血清アルブミンにより作成した検量線からコーティング量を得る。
【００６４】
本発明の浮遊性細胞浮遊培養用基材は、基材（Ｂ）及びポリペプチド（Ｐ）からなるものであればよく、ポリペプチド（Ｐ）が基材（Ｂ）の表面に物理吸着及び／又は化学結合（イオン結合及び／又は水素結合）したものが含まれる。
物理吸着させる方法としては、ポリペプチド（Ｐ）の水溶液に、基材（Ｂ）を浸して、３７℃で所定の時間吸着させる方法が含まれる。吸着後は、余剰の溶液を除去もしくは乾燥させることにより、浮遊性細胞浮遊培養用基材を得ることができる。
化学結合させる方法としては、基材（Ｂ）がプラスチック材料の場合は、例えば、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミド又はカルボジイミド等の存在下で、基材（Ｂ）とポリペプチド（Ｐ）を接触させることによりエステル化又はアミド化させ、洗浄乾燥させる方法等が含まれる。基材（Ｂ）が金属材料又は無機材料の場合、シランカップリング剤又はチタンカップリング剤などを基材（Ｂ）と反応させた後、ポリペプチド（Ｐ）とグルタルアルデヒドで架橋させ、洗浄乾燥させる方法が含まれる。
上記のうち、細胞の低接着性及びアポトーシス抑制の観点から、物理吸着が好ましい。
【００６５】
浮遊性細胞浮遊培養用基材に播種した浮遊性細胞（Ｓ）のうち、基材に接着する（Ｓ）の割合を示す細胞接着率は、浮遊性細胞の培養に用いる観点から、０〜２０％であることが好ましく、さらに好ましくは５〜２０％である。
【００６６】
浮遊性細胞浮遊培養用基材に対する浮遊性細胞（Ｓ）の細胞接着率は、具体的には下記測定法によって測定できる。
＜浮遊性細胞浮遊培養用基材に対する浮遊性細胞（Ｓ）の細胞接着率の測定＞
浮遊性細胞浮遊培養用基材に、ポリペプチド（Ｐ）を付着させた部分の面積に対して３１２．５μＬ／ｃｍ2で０．０２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．２、純度９９．５重量％塩化ナトリウムを０．８５重量％含有するリン酸緩衝生理食塩水（以下、ＰＢＳと略記））を加えて２回洗浄し、さらに脱イオン水をポリペプチド（Ｐ）を付着させた部分の面積に対して３１２．５μＬ／ｃｍ2で加えて、まんべんなく接触するようにして、１回洗浄する。
次に、血清を含まないＤＭＥＭ培地（ＩＣＮ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ社製）をポリペプチド（Ｐ）を付着させた部分の面積に対して３１２．５μＬ／ｃｍ2で加え、まんべんなく接触するようにして、３７℃インキュベーター内に１時間保存する。１時間後、ＭＥＬ細胞（ＤＳファーマバイオメディカル株式会社製）を、ポリペプチド（Ｐ）を付着させた部分の面積に対して約２万ｃｅｌｌｓ／ｃｍ2で播種し、３７℃、二酸化炭素濃度５容量％のインキュベーター中にて２時間放置して培養する。
培養終了後、アスピレーターを用いて培地を除去し、細胞に直接当たらないように注意しながら生理食塩水をポリペプチド（Ｐ）を付着させた部分の面積に対して３１２．５μＬ／ｃｍ2で加え、まんべんなく接触するようにして、アスピレーターを用いて生理食塩水を除去する。次にＰＢＳをポリペプチド（Ｐ）を付着させた部分の面積に対して１５６．２５μＬ／ｃｍ2で加え、まんべんなく接触するようにして、さらにテトラカラーワン（生化学工業株式会社）をポリペプチド（Ｐ）を付着させた部分の面積に対して３１．２５μＬ／ｃｍ2で加え、まんべんなく接触するようにして、３７℃、二酸化炭素濃度５容量％のインキュベーター中に４時間放置する。
４時間後に、ホルマザン生成量を、４５０ｎｍ（対照波長６３０ｎｍ）の吸光度でプレートリーダー（コロナ電気株式会社製ＭＴＰ−３２）を用いて測定する。接着した細胞数は、吸光度の高さに比例するので、接着した細胞数はあらかじめ作成しておいた検量線から算出する。細胞接着率は、算出した接着した細胞数と播種した細胞数から、下記式によって算出する。
細胞接着率（％）＝（接着した細胞数／播種した細胞数）×１００
【００６７】
本発明の浮遊性細胞浮遊培養用基材の使用方法としては、従来の細胞培養と同じでよく、特に制限はない。例えば、浮遊性細胞浮遊培養用基材に細胞懸濁液を加える方法及び細胞懸濁液中に浮遊性細胞浮遊培養用基材を浸す方法が挙げられる。本発明の浮遊性細胞浮遊培養用基材を用いて浮遊性細胞（Ｓ）を培養することにより、細胞が基材に接着することを抑制することができ、細胞どうしが接着することも抑制することができる。また、ポリペプチド（Ｐ）が浮遊性細胞浮遊培養用基材の表面に存在することで、細胞表面に存在するインテグリンと（Ｐ）が結合（接触）し、細胞内にシグナルが伝達されるので、アポトーシス抑制効果が発揮されると推察される。
【００６８】
本発明の浮遊性細胞浮遊培養用培養液は、ポリペプチド（Ｐ）及び培地（Ｃ）を含む浮遊培養用培養液である。
培地（Ｃ）としては、無血清培地及び血清培地が含まれる。
無血清培地としては、ＲＰＭＩ培地（ＲＰＭＩ１６４０培地等）、Ｇｒａｃｅ培地、ＩＰＬ−４１培地、Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ’ｓ培地、Ｏｐｔｉ−ＰＲＯTMＳＦＭ培地、Ｏｐｔｉ−ＭＥＭTMＩ培地、ＶＰ−ＳＦＭ培地、ＣＤ２９３培地、２９３ＳＦＭＩＩ培地、ＣＤ−ＣＨＯ培地、ＣＨＯ−Ｓ−ＳＦＭＩＩ培地、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅTM２９３培地、ＣＤ−ＣＨＯ  ＡＧＴTM培地、ＲＰＭＩ培地、ＤＭＥＭ培地、ＭＥＭ培地、Ｅａｇｌｅ’ｓＭＥＭ培地、ＢＭＥ培地、ＤＭＥ培地、αＭＥＭ培地、ＩＭＥＭ培地、ＥＳ培地、ＤＭ−１６０培地、Ｆｉｓｈｅｒ培地、Ｆ１２培地、ＷＥ培地、ＡＳＦ１０３培地、ＡＳＦ１０４培地、ＡＳＦ３０１培地、ＴＣ−１００培地、Ｓｆ−９００ＩＩ培地、Ｅｘ−ｃｅｌｌ４０５培地、Ｅｘｐｒｅｓｓ−Ｆｉｖｅ培地、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ培地及びこれらの混合培地等が挙げられる。
これらのうち、細胞の安定性の観点から、ＲＰＭＩ１６４０培地、Ｏｐｔｉ−ＰＲＯTMＳＦＭ培地、Ｏｐｔｉ−ＭＥＭTMＩ培地、ＶＰ−ＳＦＭ培地、ＣＤ２９３培地、２９３ＳＦＭＩＩ培地、ＣＤ−ＣＨＯ培地、ＣＨＯ−Ｓ−ＳＦＭＩＩ培地、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅTM２９３培地、ＣＤ−ＣＨＯ  ＡＧＴTM培地、ＤＭＥＭ培地及びこれらの混合培地が好ましく、さらに好ましくはＲＰＭＩ１６４０培地、Ｏｐｔｉ−ＰＲＯTMＳＦＭ培地、ＶＰ−ＳＦＭ培地、ＣＤ２９３培地、２９３ＳＦＭＩＩ培地、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅTM２９３培地、ＤＭＥＭ培地及びこれらの混合培地である。
血清培地としては、一般の培地（ＤＭＥＭ培地、ＤＭＥ培地、ＲＰＭＩ培地、ＭＥＭ培地、ＢＭＥ培地、ＤＭＥ培地、αＭＥＭ培地、ＩＭＥＭ培地、ＥＳ培地、ＤＭ−１６０培地、Ｆｉｓｈｅｒ培地、Ｆ１２培地、ＷＥ培地、ＡＳＦ１０３培地、ＡＳＦ１０４培地、ＡＳＦ３０１培地、ＴＣ−１００培地、Ｓｆ−９００ＩＩ培地、Ｅｘ−ｃｅｌｌ４０５培地、Ｅｘｐｒｅｓｓ−Ｆｉｖｅ培地、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ培地及びこれらの混合培地等）に血清を加えたもの等が挙げられる。血清としては、ヒト血清、及び動物血清（ウシ血清、ウマ血清、ヤギ血清、ヒツジ血清、ブタ血清、ウサギ血清、ニワトリ血清、ラット血清、及びマウス血清等）が含まれる。
【００６９】
本発明の浮遊性細胞浮遊培養用培養液中のポリペプチド（Ｐ）の濃度は、細胞間の接着抑制の観点から、０．１〜５０，０００μｇ／ｍＬが好ましく、さらに好ましくは１〜２１，０００μｇ／ｍＬである。
【００７０】
培地（Ｃ）中には、成長因子を添加してもいい。成長因子としては、上皮成長因子（Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ：ＥＧＦ）、インスリン様成長因子（Ｉｎｓｕｌｉｎ−ｌｉｋｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ：ＩＧＦ）、トランスフォーミング成長因子（Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ：ＴＧＦ）、神経成長因子（Ｎｅｒｖｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ：ＮＧＦ）、脳由来神経栄養因子（Ｂｒａｉｎ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ  ｆａｃｔｏｒ：ＢＤＮＦ）、血管内皮細胞増殖因子（Ｖｅｓｉｃｕｌａｒ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ：ＶＥＧＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ−ｃｏｌｏｎｙ  ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ：Ｇ−ＣＳＦ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（Ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ−ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ−ｃｏｌｏｎｙ  ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ：ＧＭ−ＣＳＦ）、血小板由来成長因子（Ｐｌａｔｅｌｅｔ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ：ＰＤＧＦ）、エリスロポエチン（Ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ：ＥＰＯ）、トロンボポエチン（Ｔｈｒｏｍｂｏｐｏｉｅｔｉｎ：ＴＰＯ）、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂａｓｉｃ  ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ：ｂＦＧＦまたはＦＧＦ２）、肝細胞増殖因子（Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ：ＨＧＦ）等が挙げられる。
培地（Ｃ）中の成長因子の濃度は、細胞増殖性の観点から、０．０１〜１００ｎＭが好ましく、さらに好ましくは０．１〜５０ｎＭである。
【００７１】
本発明の浮遊性細胞浮遊培養用培養液のｐＨは、通常細胞培養に用いられるｐＨであれば特に制限ないが、細胞の生存率の観点から、ｐＨ６．０〜８．０が好ましく、さらに好ましくはｐＨ６．５〜７．５である。
【００７２】
本発明の浮遊性細胞浮遊培養用培養液の使用方法としては、従来の細胞培養と同じでよく、特に制限はない。本発明の浮遊性細胞浮遊培養用培養液を用いて浮遊性細胞（Ｓ）を培養することにより、細胞が基材に接着することを抑制することができる。また、ポリペプチド（Ｐ）が浮遊性細胞浮遊培養用培養液中に存在することで、細胞表面に存在するインテグリンと（Ｐ）が結合し、細胞内にシグナルが伝達されるので、アポトーシス抑制効果が発揮されると推察される。
【００７３】
本発明の培養方法は、ポリペプチド（Ｐ）の存在下で浮遊性細胞（Ｓ）を浮遊培養する培養方法である。
本発明の培養方法において、ポリペプチド（Ｐ）の存在下で浮遊性細胞（Ｓ）を浮遊培養する以外は従来の培養方法と同じでよく、特に制限はない。
本発明の培養方法においては、上記浮遊性細胞浮遊培養用基材及び／又は浮遊性細胞浮遊培養用培養液を用いることが好ましい。
例えば、下記工程（１）及び（２）又は（１’）及び（２）により培養する方法が含まれる。
（１）浮遊性細胞浮遊培養用基材が培養容器である場合は、浮遊性細胞浮遊培養用基材に、培養液として、培地又は浮遊性細胞浮遊培養用培養液、必要によりさらにポリペプチド（Ｐ）を入れ、浮遊性細胞（Ｓ）を懸濁させる工程
（１’）浮遊性細胞浮遊培養用基材が培養容器でない場合は、培養容器に、培養液として、培地及びポリペプチド（Ｐ）を入れ、又は浮遊性細胞浮遊培養用培養液を入れ、必要により浮遊性細胞浮遊培養用基材を浸し、必要によりさらにポリペプチド（Ｐ）を入れ、浮遊性細胞（Ｓ）を懸濁させる工程
（２）所定の温度で所定の時間培養する工程
【００７４】
本発明の培養方法において、浮遊性細胞浮遊培養用基材を用いる場合、浮遊性細胞浮遊培養用基材の培養に用いる面におけるポリペプチド（Ｐ）の含有量は、細胞の低接着性及びアポトーシス抑制の観点から、浮遊性細胞（Ｓ）１万個に対して０．００１〜５μｇであることが好ましく、さらに好ましくは０．００３〜２．１μｇである。
なお、培養に用いる面とは、例えば、基材（Ｂ）が細胞培養容器であれば、容器の内側であって、培養液を入れて培養する際に培養液と接触する部分である。この部分がポリペプチド（Ｐ）でコーティングされていると、ポリペプチド（Ｐ）と培養液中に存在する細胞とが接触し、細胞の接着を抑制したり、アポトーシスを抑制することができる。
【００７５】
本発明の培養方法において、培養液中のポリペプチド（Ｐ）の濃度は、細胞の低接着性及びアポトーシス抑制の観点から、培養開始から培養終了までのいずれかの時点において、浮遊性細胞（Ｓ）１万個に対して０．０１〜５０００μｇであることが好ましく、さらに好ましくは０．１〜２１００μｇである。
また、浮遊性細胞浮遊培養用培養液を用いる場合、浮遊性細胞浮遊培養用培養液中のポリペプチド（Ｐ）の含有量は、細胞の低接着性及びアポトーシス抑制の観点から、培養開始から培養終了までのいずれかの時点において、浮遊性細胞（Ｓ）１万個に対して０．１〜５μｇであることが好ましく、さらに好ましくは１〜２．１μｇである。なお、培養開始時は、浮遊性細胞浮遊培養用培養液と（Ｓ）とが共存した時点を示し、培養終了時は、細胞の増殖が停止した時点、生産が停止した時点などが挙げられる。
また、本発明の培養方法において、培養液中のポリペプチド（Ｐ）の濃度は、培養開始から培養終了までの５０％以上の時間上記範囲であることが好ましく、さらに好ましくは８０％以上の時間上記範囲であることであり、特に好ましくは１００％の時間上記範囲であることである。
【００７６】
工程（１）及び（１’）において、浮遊性細胞浮遊培養用培養液中に懸濁させる浮遊性細胞（Ｓ）の濃度（ｃｅｌｌｓ／ｍＬ）は、細胞の生存率の観点から、１０3〜１０7ｃｅｌｌｓ／ｍＬが好ましく、さらに好ましくは１０4〜１０6ｃｅｌｌｓ／ｍＬである。
浮遊性細胞浮遊培養用培養液の温度は、通常細胞培養に用いられる温度であれば特に制限ないが、細胞の生存率の観点から、２５〜４５℃が好ましく、さらに好ましくは３０〜４０℃で、最も好ましくは３７℃である。
浮遊性細胞浮遊培養用培養液のｐＨは、通常細胞培養に用いられるｐＨであれば特に制限ないが、細胞の生存率の観点から、ｐＨ６．０〜８．０が好ましく、さらに好ましくはｐＨ６．５〜７．５である。
【００７７】
工程（２）において、培養温度は、細胞の生存率の観点から、２５〜４５℃が好ましく、さらに好ましくは３０〜４０℃で、最も好ましくは３７℃である。
培養時間は、細胞の生存率の観点から、１〜１０日間が好ましく、さらに好ましくは３〜７日間である。
【００７８】
培養容器がマルチウェルプレート、平底プレート、シャーレ及びＴ−フラスコである場合、旋回培養できないため、静置培養する。
培養容器がスピナーフラスコ及びローラーボトルである場合、細胞の低接着性の観点から、旋回培養することが好ましい。
旋回培養の場合、攪拌の回転数は、細胞の生存率及び細胞の低接着性の観点から、３０〜１２０ｒｐｍが好ましく、さらに好ましくは６０〜８０ｒｐｍである。
【実施例】
【００７９】
以下、実施例及び比較例により本発明をさらに説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００８０】
＜実施例１＞
○ポリペプチド（Ｐ１）の作製
特表平３−５０２９３５号公報中の実施例記載の方法に準じて、遺伝子組換え大腸菌により製造し、カラムクロマトグラフィーにて精製した、Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ配列（１）が４回繰り返した配列に、Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ配列（３６）１個が化学結合し、さらにＧｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ配列（１）が３回繰り返した配列が化学結合し、さらにＧｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ配列（１４）が２回繰り返した配列が化学結合したアミノ酸ブロック（Ｌ１−１）が８回繰り返し化学結合したＭｎ３５，１６４の配列（７５）のポリペプチド（Ｐ１）を得た。
【００８１】
＜実施例２＞
○ポリペプチド（Ｐ２）の作製
実施例１と同様にして、上記アミノ酸ブロック（Ｌ１−１）が１７回繰り返し化学結合したＭｎ７６，５８１の配列（７６）のポリペプチド（Ｐ２）を作製した。
【００８２】
＜実施例３＞
○ポリペプチド（Ｐ３）の作製
実施例１と同様にして、Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ配列（１）が４回繰り返した配列に、Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ配列（３６）１個が化学結合し、さらにＧｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ配列（１）が３回繰り返した配列が化学結合し、Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ配列（１４）が４回繰り返した配列が化学結合したアミノ酸ブロック（Ｌ２−１）が７回繰り返し化学結合したＭｎ３５，８６３の配列（７７）のポリペプチド（Ｐ３）を作製した。
【００８３】
＜実施例４＞
○ポリペプチド（Ｐ４）の作製
実施例１と同様にして、上記アミノ酸ブロック（Ｌ２−１）が１３回繰り返し化学結合したＭｎ６９，７７２の配列（７８）のポリペプチド（Ｐ４）を作製した。
【００８４】
＜実施例５＞
○ポリペプチド（Ｐ５）の作製
実施例１と同様にして、Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ配列（１４）が２回繰り返した配列に、Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ配列（１）が４回繰り返した配列が化学結合し、Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ配列（３６）を結合し、さらにＧｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ配列（１）が１１回繰り返した配列が化学結合し、さらにＧｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ配列（１４）が２回繰り返した配列が化学結合したアミノ酸ブロック（Ｌ３−１）が８回繰り返し化学結合したＭｎ７１，４４５の配列（７９）のポリペプチド（Ｐ５）を作製した。
【００８５】
＜実施例６＞
○ポリペプチド（Ｐ６）の作製
実施例１と同様にして、Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ配列（１４）が２回繰り返した配列に、Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ配列（１）が４回繰り返した配列が化学結合し、Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ配列（３６）を結合し、さらにＧｌｙ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ配列（１）が１１回繰り返した配列が化学結合し、さらにＧｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ配列（１４）が４回繰り返した配列が化学結合したアミノ酸ブロック（Ｌ４−１）が６回繰り返し化学結合したＭｎ６４，６９４の配列（８０）のポリペプチド（Ｐ６）を作製した。
【００８６】
＜評価：浮遊性細胞浮遊培養用ポリペプチドと浮遊性細胞（Ｓ）との細胞接着性の測定＞
実施例１〜６で得たポリペプチド（Ｐ１）〜（Ｐ６）をそれぞれ１０μｇ／Ｌの濃度で含むＲＰＭＩ培地（１０ｍＬ）に、ＭＥＬ細胞（ＤＳファーマバイオメディカル株式会社製）（１×１０5個）を加え、細胞懸濁液を作製した。細胞培養用９６ウェルプレート（ＩＷＡＫＩ社製）に細胞懸濁液を０．１ｍＬ加え、３７℃、５容量％ＣＯ2条件下で２時間静置した。
２時間静置後、アスピレーターを用いて培地を除去し、生理食塩水を細胞に直接当たらないように注意しながら１００μＬ／穴で添加し、アスピレーターを用いて生理食塩水を除去した。次にＰＢＳを５０μＬ／穴で添加し、さらにテトラカラーワン（生化学工業株式会社）を１０μＬ／穴で添加して、３７℃、二酸化炭素濃度５容量％のインキュベーター中に４時間放置した。
４時間後に、ホルマザン生成量を、４５０ｎｍ（参照波長６３０ｎｍ）の吸光度でプレートリーダー（コロナ電気株式会社製ＭＴＰ−３２）を用いて測定した。容器に付着した細胞数は、吸光度の高さに比例するので、予め、細胞の数と吸光度の関係を表す検量線を作成しておき、測定された吸光度から容器に付着している細胞の数（ｙ）を算出した。下記式から、細胞接着性を算出した。
細胞接着性（％）＝｛細胞の数（ｙ）｝／｛培養容器に加えた細胞の数（１×１０5×０．０１）｝×１００
結果を表１に示す。
【００８７】
【表１】
2013151489.tif 000002
【００８８】
＜実施例７＞
○ポリペプチド（Ｐ１）を用いた浮遊性細胞の浮遊培養
１０ｍＬ容量のスピナーフラスコに、ポリペプチド（Ｐ１）１００μｇ及びＲＰＭＩ１６４０培地（１０ｍｌ）を加えて浮遊性細胞浮遊培養用培養液とし、さらに、細胞（１×１０6個）を加えて、３７℃、５容量％ＣＯ2、攪拌１００ｒｐｍで７日間培養を行った。浮遊性細胞（Ｓ）１万個に対するポリペプチド（Ｐ）の量は、下記式から算出した。
（Ｓ）１万個に対するポリペプチド（Ｐ）の量（μｇ）＝使用したポリペプチド（Ｐ）の量（μｇ）／１００（万ｃｅｌｌｓ）
【００８９】
＜実施例８〜１２＞
○ポリペプチド（Ｐ２）〜（Ｐ６）を用いた浮遊性細胞の浮遊培養
実施例７において、「ポリペプチド（Ｐ１）」に変えて、「ポリペプチド（Ｐ２）〜（Ｐ６）をそれぞれ」用いる以外は、実施例７と同様にして行った。
【００９０】
＜実施例１３＞
実施例１において、ポリペプチド（Ｐ１）を「１００μｇ」に代えて「１μｇ」とする以外は同様にして実施した。
【００９１】
＜実施例１４＞
実施例１において、ポリペプチド（Ｐ１）を「１００μｇ」に代えて「１０μｇ」とする以外は同様にして実施した。
【００９２】
＜実施例１５＞
実施例１において、ポリペプチド（Ｐ１）を「１００μｇ」に代えて「５００ｍｇ」とする以外は同様にして実施した。
【００９３】
＜実施例１６＞
実施例１において、ポリペプチド（Ｐ１）を「１００μｇ」に代えて「２１０ｍｇ」とする以外は同様にして実施した。
【００９４】
＜比較例１＞
実施例７において、ポリペプチド（Ｐ１）を加えない事以外は、実施例７と同様にして行った。
【００９５】
＜評価：シングルセルの割合＞
実施例７〜１６及び比較例１において、培養７日培養後、培養液３００μＬをそれぞれのフラスコから回収した。
回収した培養液を、９６ｗｅｌｌプレートに３カ所ずつ、それぞれ１００μｌ／ウェルで添加した。その後、それぞれのウェルについて、細胞の４０倍の顕微鏡画像を取得し（用いた顕微鏡；ＣＫＸ４１，ＯＬＹＭＰＵＳ社製、画像解析ソフト；ｉｍａｇｅ  Ｊ，アメリカ国立衛生研究所）、全粒子数に対するシングルセルの割合を算出した。測定した結果は、３カ所のウェルの平均値で示した。結果を表２に示す。
【００９６】
＜評価：カスパーゼ活性＞
実施例７〜１６及び比較例１において、７日間培養後、Ｃａｓｐａｓｅ−Ｇｌｏ（登録商標）３／７  Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ社製）を用いて、カスパーゼ活性を測定した。カスパーゼ反応液を１００μＬ／穴で添加し、室温で３時間放置した。３時間後、蛍光強度を、ルミネッセンスプレートリーダー  ＭｉｃｒｏＬｕｍａｔ  Ｐｌｕｓ  ＬＢ９６（ベルトールドテクノロジー社製）を用いて測定した。比較例１の活性を１００％として、カスパーゼ活性を相対値で表した。これらの結果を表２に示す（これらの結果は各々３穴分の平均データである。）。なお、カスパーゼ活性が低いものは、アポトーシス抑制効果が高いことを示す。
【００９７】
＜細胞の活性評価；ミトコンドリア活性＞
実施例７〜１６及び比較例１において、７日間培養後、細胞にテトラカラーワン（生化学工業株式会社）を１０μＬ／穴で添加して、３７℃、二酸化炭素濃度５容量％のインキュベーター中に４時間放置した。
４時間後に、ホルマザン生成量を、４５０ｎｍ（対照波長６３０ｎｍ）の吸光度でプレートリーダー（コロナ電気株式会社製ＭＴＰ−３２）を用いて測定した。生細胞数は細胞に核放出溶液（０．２重量％クリスタルバイオレット、０．２Ｍクエン酸三ナトリウム、２重量％Ｔｗｅｅｎ２０）を加え、１時間置くことで生細胞の核を細胞から放出させ、血球計数盤を用いて核数を測定した。ホルマザン生成量を生細胞数で標準化し、細胞のミトコンドリア活性とした。得られたミトコンドリア活性は、比較例１で培養した細胞のミトコンドリア活性を１００％とした相対値で表した。結果を表２に示す。
【００９８】
【表２】
2013151489.tif 000003
【００９９】
表１の結果から、浮遊性細胞浮遊培養用ポリペプチドであるポリペプチド（Ｐ１）〜（Ｐ６）は細胞接着性が低いことが分かる。
また、表２のシングルセルの割合の評価結果から、浮遊性細胞浮遊培養用ポリペプチドであるポリペプチド（Ｐ１）〜（Ｐ６）を用いた実施例７〜１６で培養した細胞は、シングルセルの割合が高く、細胞どうしの接着抑制効果が高いことが分かる。
また、表２のカスパーゼ活性の評価結果から、浮遊性細胞浮遊培養用ポリペプチドであるポリペプチド（Ｐ１）〜（Ｐ６）を用いた実施例７〜１６で培養した細胞は、ポリペプチド（Ｐ１）〜（Ｐ６）を用いない比較例１と比較して、カスパーゼ活性が低く、アポトーシスが効率よく抑制されていることが分かる。
また、表２のミトコンドリア活性の評価結果から、浮遊性細胞浮遊培養用ポリペプチドであるポリペプチド（Ｐ１）〜（Ｐ６）を用いた実施例７〜１６で培養した細胞は、ポリペプチド（Ｐ１）〜（Ｐ６）を用いない比較例１と比較して、ミトコンドリア活性が高いことがわかる。したがって、ポリペプチド（Ｐ１）〜（Ｐ６）を用いることで、高活性な細胞を生存率高く培養できたことが分かる。
以上のことから、本発明の浮遊性細胞浮遊培養用ポリペプチドを培養液中に存在させることで、浮遊性細胞どうしが接着するのを抑制し、アポトーシスを抑制し、高活性な細胞を生存率高く培養できることが分かる。
【０１００】
＜実施例１７＞
○浮遊性細胞浮遊培養用基材［ＰＢ１］の作製
ポリペプチド（Ｐ１）１ｍｇを脱イオン水１ｍＬに溶解し、さらに、０．０２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．２、純度９９．５重量％塩化ナトリウムを０．８５重量％含有するＰＢＳ）で希釈して、ポリペプチド（Ｐ１）溶液（Ａ１）〜（Ａ４）｛溶液（Ａ１）〜（Ａ４）中のポリペプチド（Ｐ１）の濃度（μｇ／ｍＬ）；（Ａ１）：０．０１、（Ａ２）：１、（Ａ３）：１０、（Ａ４）：１００｝を作製した。この溶液（Ａ１）〜（Ａ４）を９６穴のポリスチレンプレート（日本ベクトン・ディッキンソン株式会社、底面積：０．３２ｃｍ2 ）中の８穴ずつにそれぞれ５０μＬ／穴で投入し、室温（約２５℃）で２時間放置した。アスピレーターを用いて溶媒を除去した後、生理食塩水（０．９重量／容量％  塩化ナトリウム水溶液）１００μＬ／穴で２回洗浄し、さらに脱イオン水１００μＬ／穴で洗浄して、穴の底面をポリペプチド（Ｐ１）でコーティングした浮遊性細胞浮遊培養用基材［ＰＢ１］（コーティング量が異なるＰＢ１−１〜ＰＢ１−４）を得た。
【０１０１】
＜実施例１８〜２２＞
実施例１７において、ポリペプチド（Ｐ１）に変えてポリペプチド（Ｐ２）〜（Ｐ６）をそれぞれ用いる以外は、実施例１３と同様にして、［ＰＢ２］〜[ＰＢ６]（コーティング量が異なるＰＢ２−１〜ＰＢ６−４）を得た。
【０１０２】
＜比較例２＞
ポリペプチド（Ｐ１）をポリビニルアルコール（以下、ＰＶＡと略記する）（日本塩ビ・ポバール社製、品名：ＪＰ−１８）に変更したこと以外、実施例１３と同様にして、基材の表面にポリビニルアルコールを有する比較用の浮遊性細胞浮遊培養用基材［ＰＢ７］（コーティング量が異なるＰＢ７−１〜ＰＢ７−４）を得た。
【０１０３】
＜比較例３＞
ポリペプチド（Ｐ１）をアガロース（ナカライテスク社製、品名：アガロース−ＲＥ）に変更したこと以外、実施例１３と同様にして、基材の表面にアガロースを有する比較用の浮遊性細胞浮遊培養用基材［ＰＢ８］（コーティング量が異なるＰＢ８−１〜ＰＢ８−４）を得た。
【０１０４】
＜比較例４＞
浮遊性細胞浮遊培養用基材として市販されている、基材の表面に光架橋親水性ポリマーを有する浮遊培養用フラスコ（容量３００μｌ、住友ベークライト株式会社製）を浮遊性細胞浮遊培養用基材［ＰＢ９］として用いた。
【０１０５】
＜浮遊性細胞浮遊培養用基材（ＰＢ１〜ＰＢ６）のコーティング量の測定＞
Ｍｉｃｒｏ  ＢＣＡTM  ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｓｓａｙ  ｋｉｔ（ＴＨＥＲＭＯ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）に付属のＲｅａｇｅｎｔ  Ａ溶液：Ｒｅａｇｅｎｔ  Ｂ溶液：Ｒｅａｇｅｎｔ  Ｃ溶液＝２５：２４：１の混合液（Ｃ）を得た。浮遊性細胞浮遊培養用基材（コーティング量の異なるＰＢ１−１）〜（ＰＢ６−４）の各ウェルに混合液（Ｃ）を１００μＬ加え、３７℃で２時間静置した。
２時間後に、ビシンコニン酸（ＢＣＡ）とＣｕ+とからなるキレートの生成量を、４５０ｎｍ（対照波長６３０ｎｍ）の吸光度でプレートリーダー（コロナ電気株式会社製ＭＴＰ−３２）を用いて測定し、あらかじめウシ血清アルブミンにより作成した検量線からコーティング量を得た。これらの結果を表３に示す（これらの結果は各々８穴分の平均データである。）。
【０１０６】
＜浮遊性細胞浮遊培養用基材（ＰＢ７）のコーティング量の測定＞
コーティングプレート片（１ｇ）を蒸留水５０ｍＬに加え、６０℃で３０分間加熱した。加熱後、ろ液を回収した。また、ろ過後のプレート片を０．１Ｎ  ＨＣｌ水５０ｍＬで１時間放置し、熱水２００ｍＬで洗いこみながらろ過した。それぞれのろ液を合わせて５００ｍＬにフィルアップした。
フィルアップ後、２０ｍＬを５０ｍＬメスフラスコに加えて、ホウ酸溶液（ホウ酸４０ｇ／ｌ）を１５ｍＬ添加した。その後、Ｉ2溶液（ＫＩ２５ｇ＋Ｉ2１２．５ｇ／１Ｌ）を３ｍＬ加え、５０ｍＬにフィルアップした。
室温で、６９０ｎｍの吸光度（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ社製、ＶＥＲＳＡ  ＭＡＸ  ｐｌａｔｅｒｅａｄｅｒ）からＰＶＡの濃度を算出した。これらの結果を表３に示す（これらの結果は各々８穴分の平均データである。）。
【０１０７】
＜浮遊性細胞浮遊培養用基材（ＰＢ８）のコーティング量の測定＞
０．５Ｍ  ２−シアノアセタミド水溶液５０μｌ及びホウ酸―リン酸緩衝液（０．３Ｍホウ砂と０．３Ｍリン酸一水素カリウムを混合し、ｐＨ８．０に調整したもの）２５０μｌ加え、混合物をよく振り混ぜた後、９８℃で３０分間加熱した。
室温で、３３１ｎｍで励起した３８３ｎｍでの蛍光を測定（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ社製、ＳＰＥＣＴＲＡ  ＭＡＸ  ＧＥＭＩＮＩ  ＥＭ）し、アガロース濃度を算出した。これらの結果を表３に示す（これらの結果は各々８穴分の平均データである。）。
【０１０８】
＜評価：浮遊性細胞浮遊培養用基材に対する浮遊性細胞（Ｓ）の細胞接着率の測定＞
血清を含まないＲＰＭＩ１６４０培地を５０μＬ／穴で［ＰＢ１］〜［ＰＢ９］にそれぞれ添加し、３７℃インキュベーター内に１時間保存した。１時間後、ＭＥＬ細胞（ＤＳファーマバイオメディカル株式会社製）を１万ｃｅｌｌｓ／５０μＬ／穴で添加し、３７℃、二酸化炭素濃度５容量％のインキュベーター中にて２時間放置して培養した。
培養終了後、アスピレーターを用いて培地を除去し、生理食塩水を細胞に直接当たらないように注意しながら１００μＬ／穴で添加し、アスピレーターを用いて生理食塩水を除去した。次にＰＢＳを５０μＬ／穴で添加し、さらにテトラカラーワン（生化学工業株式会社）を１０μＬ／穴で添加して、３７℃、二酸化炭素濃度５容量％のインキュベーター中に４時間放置した。
４時間後に、ホルマザン生成量を、４５０ｎｍ（参照波長６３０ｎｍ）の吸光度でプレートリーダー（コロナ電気株式会社製ＭＴＰ−３２）を用いて測定した。接着した細胞数は、吸光度の高さに比例するので、接着した細胞数はあらかじめ作成しておいた検量線から算出する。細胞接着率は、算出した接着した細胞数と播種した細胞数から、下記式によって算出した。
細胞接着率（％）＝接着した細胞数／播種した細胞数×１００
これらの結果を表３に示す（これらの結果は各々８穴分の平均データである。）。
【０１０９】
【表３】
2013151489.tif 000004
【０１１０】
表３の結果から、実施例１８〜２２の本発明の浮遊性細胞浮遊培養用基材及び比較例２〜３の浮遊性細胞浮遊培養用基材は、コーティング量が増えるにつれて細胞接着率が低くなり、浮遊性細胞が培養容器に接着することを抑制することができることが分かる。
【０１１１】
＜実施例２３〜２８＞
細胞接着率が異なる浮遊性細胞浮遊培養用基材[ＰＢ１]〜[ＰＢ６]に、それぞれ、ＭＥＬ細胞の懸濁液１００μＬ（１０万ｃｅｌｌｓ／ｍＬ）を加えた。３７℃、５容量％ＣＯ2で静置して、７日間培養を行った。なお、静置培養であるため、細胞はほぼ底面にしか接触していなかった。したがって、浮遊性細胞（Ｓ）１万個に対するポリペプチド（Ｐ）の量は、下記式から算出した。
（Ｓ）１万個に対するポリペプチド（Ｐ）の量（μｇ）＝基材のコーティング量（μｇ／ｃｍ2）×０．３２ｃｍ2×１０（万ｃｅｌｌｓ／ｍＬ）×０．１（ｍＬ）
【０１１２】
＜比較例５〜７＞
細胞接着率が異なる浮遊性細胞浮遊培養用基材[ＰＢ７]〜[ＰＢ８]及び[ＰＢ９]に、それぞれ、ＭＥＬ細胞の懸濁液１００μＬ（１０万ｃｅｌｌｓ／ｍＬ）を加えた。３７℃、５容量％ＣＯ2で静置して、７日間培養を行った。なお、静置培養であるため、細胞はほぼ底面にしか接触していなかった。
【０１１３】
＜評価：カスパーゼ活性＞
実施例２３〜２８及び比較例５〜７において、７日間培養後、Ｃａｓｐａｓｅ−Ｇｌｏ（登録商標）３／７  Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ社製）を用いて、カスパーゼ活性を測定した。カスパーゼ反応液を１００μＬ／穴で添加し、室温で３時間放置した。３時間後、蛍光強度を、ルミネッセンスプレートリーダー  ＭｉｃｒｏＬｕｍａｔ  Ｐｌｕｓ  ＬＢ９６（ベルトールドテクノロジー社製）を用いて測定した。比較例１の活性を１００％として、カスパーゼ活性を相対値で表した。これらの結果を表４に示す（これらの結果は各々３穴分の平均データである。）。なお、カスパーゼ活性が低いものは、アポトーシス抑制効果が高いことを示す。
【０１１４】
＜評価：シングルセルの割合＞
実施例２３〜２８及び比較例５〜７において、培養７日培養後、培養液３００μＬをそれぞれのフラスコから回収した。
回収した培養液を、９６ｗｅｌｌプレートに３カ所ずつ、それぞれ１００μｌ／ウェルで添加した。その後、それぞれのウェルについて、細胞の４０倍の顕微鏡画像を取得し（用いた顕微鏡；ＣＫＸ４１，ＯＬＹＭＰＵＳ社製、画像解析ソフト；ｉｍａｇｅ  Ｊ，アメリカ国立衛生研究所）、全粒子数に対するシングルセルの割合を算出した。測定した結果は、３カ所のウェルの平均値で示した。結果を表４に示す。
【０１１５】
＜細胞の活性評価；ミトコンドリア活性＞
実施例２３〜２８及び比較例５〜７において、７日間培養後、細胞にテトラカラーワン（生化学工業株式会社）を１０μＬ／穴で添加して、３７℃、二酸化炭素濃度５容量％のインキュベーター中に４時間放置した。
４時間後に、ホルマザン生成量を、４５０ｎｍ（対照波長６３０ｎｍ）の吸光度でプレートリーダー（コロナ電気株式会社製ＭＴＰ−３２）を用いて測定した。生細胞数は細胞に核放出溶液（０．２重量％クリスタルバイオレット、０．２Ｍクエン酸三ナトリウム、２重量％Ｔｗｅｅｎ２０）を加え、１時間置くことで生細胞の核を細胞から放出させ、血球計数盤を用いて核数を測定した。ホルマザン生成量を生細胞数で標準化し、細胞のミトコンドリア活性とした。得られたミトコンドリア活性は、比較例１で培養した細胞のミトコンドリア活性を１００％とした相対値で表した。結果を表４に示す。
【０１１６】
【表４】
2013151489.tif 000005
【０１１７】
表４のシングルセルの割合の評価結果から、本発明の浮遊性細胞浮遊培養用基材を用いて培養した実施例２３〜２８と、ポリペプチド（Ｐ１）〜（Ｐ６）以外でコーティングした基材を用いた比較例５〜７とを比較した場合、実施例２３〜２８ではシングルセルの割合が６０％以上であり、比較例５〜７よりも高く、実施例２３〜２８では浮遊性細胞どうしが接着することを防ぐことができ、浮遊性細胞の状態の変化を防ぐことができたことが分かる。
また、表４のカスパーゼ活性の評価結果から、浮遊性細胞浮遊培養用ポリペプチドであるポリペプチド（Ｐ１）〜（Ｐ６）を有する浮遊性細胞浮遊培養用基材を用いた実施例２３〜２８と、ポリペプチド（Ｐ１）〜（Ｐ６）以外でコーティングした基材を用いた比較例５〜７とについて、コーティング量が同程度のものを比較した場合、実施例２３〜２８で得た細胞の方がカスパーゼ活性が低く、アポトーシスが抑制されていることが分かる。
また、表４のミトコンドリア活性の評価結果から、本発明の浮遊性細胞浮遊培養用基材を用いて培養した実施例２３〜２８と、ポリペプチド（Ｐ１）〜（Ｐ６）以外でコーティングした基材を用いた比較例５〜７とについて、コーティング量が同程度のものを比較した場合、ミトコンドリア活性が同程度又はそれ以上であることが分かる。
したがって、ポリペプチド（Ｐ１）〜（Ｐ６）を有する浮遊性細胞浮遊培養用基材を用いることで、浮遊性細胞の変質を防ぎ、高活性な浮遊性細胞を生存率高く培養できたことが分かる。
以上のことから、本発明の浮遊性細胞浮遊培養用基材及び比較例の浮遊性細胞浮遊培養用基材は、共に、コーティング量が増加すると、細胞接着率が減少し、浮遊性細胞が培養容器に接着することを抑制することができるものの、本発明の浮遊性細胞浮遊培養用基材の方が、より細胞どうしの接着を防ぎ、細胞を変質させずに培養でき、アポトーシスを抑制し、高活性な細胞を生存率高く培養できるという効果が高いことが分かる。
【０１１８】
＜実施例２９＞
実施例１７で得た浮遊性細胞浮遊培養用基材［ＰＢ１］（コーティング量の異なるＰＢ１−１〜ＰＢ１−４）に、ポリペプチド（Ｐ１）２０μｇ／ｍＬ溶液（ＲＰＭＩ１６４０に溶解）を５０μＬ添加し、３７℃で1時間保存した。１時間後、ＭＥＬ細胞（ＤＳファーマバイオメディカル株式会社製）を１万ｃｅｌｌｓ／５０μＬ／穴で添加し、３７℃、５容量％ＣＯ2のインキュベーター中にて静置して、７日間培養を行った。なお、静置培養であるため、細胞はほぼ底面にしか接触していなかった。
【０１１９】
＜実施例３０〜３４＞
実施例２９において、「浮遊性細胞浮遊培養用基材［ＰＢ１］」に代えて実施例１８〜２２で得た浮遊性細胞浮遊培養基材［ＰＢ２］〜［ＰＢ６］（コーティング量が異なるＰＢ２−１〜ＰＢ６−４）をそれぞれ用いて、「ポリペプチド（Ｐ１）」に代えてポリペプチドを（Ｐ２）〜（Ｐ６）をそれぞれ用いる以外は同様にして実施した。
【０１２０】
＜評価：カスパーゼ活性＞
実施例２９〜３４において、７日間培養後、Ｃａｓｐａｓｅ−Ｇｌｏ（登録商標）３／７  Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ社製）を用いて、カスパーゼ活性を測定した。カスパーゼ反応液を１００μＬ／穴で添加し、室温で３時間放置した。３時間後、蛍光強度を、ルミネッセンスプレートリーダー  ＭｉｃｒｏＬｕｍａｔ  Ｐｌｕｓ  ＬＢ９６（ベルトールドテクノロジー社製）を用いて測定した。比較例１の活性を１００％として、カスパーゼ活性を相対値で表した。これらの結果を表５に示す（これらの結果は各々３穴分の平均データである。）。なお、カスパーゼ活性が低いものは、アポトーシス抑制効果が高いことを示す。
【０１２１】
＜評価：シングルセルの割合＞
実施例２９〜３４において、培養７日培養後、培養液３００μＬをそれぞれのフラスコから回収した。
回収した培養液を、９６ｗｅｌｌプレートに３カ所ずつ、それぞれ１００μｌ／ウェルで添加した。その後、それぞれのウェルについて、細胞の４０倍の顕微鏡画像を取得し（用いた顕微鏡；ＣＫＸ４１，ＯＬＹＭＰＵＳ社製、画像解析ソフト；ｉｍａｇｅ  Ｊ，アメリカ国立衛生研究所）、全粒子数に対するシングルセルの割合を算出した。測定した結果は、３カ所のウェルの平均値で示した。結果を表５に示す。
【０１２２】
＜細胞の活性評価；ミトコンドリア活性＞
実施例２９〜３４において、７日間培養後、細胞にテトラカラーワン（生化学工業株式会社）を１０μＬ／穴で添加して、３７℃、二酸化炭素濃度５容量％のインキュベーター中に４時間放置した。
４時間後に、ホルマザン生成量を、４５０ｎｍ（対照波長６３０ｎｍ）の吸光度でプレートリーダー（コロナ電気株式会社製ＭＴＰ−３２）を用いて測定した。生細胞数は細胞に核放出溶液（０．２重量％クリスタルバイオレット、０．２Ｍクエン酸三ナトリウム、２重量％Ｔｗｅｅｎ２０）を加え、１時間置くことで生細胞の核を細胞から放出させ、血球計数盤を用いて核数を測定した。ホルマザン生成量を生細胞数で標準化し、細胞のミトコンドリア活性とした。得られたミトコンドリア活性は、比較例１で培養した細胞のミトコンドリア活性を１００％とした相対値で表した。結果を表５に示す。
【０１２３】
【表５】
2013151489.tif 000006
【０１２４】
表５のカスパーゼ活性の評価結果から、浮遊性細胞浮遊培養用ポリペプチドであるポリペプチド（Ｐ１）〜（Ｐ６）を有する浮遊性細胞浮遊培養用基材及びポリペプチド（Ｐ１）〜（Ｐ６）を培養液中に含む浮遊性細胞浮遊培養用培養液を用いた実施例２９〜３４で培養した細胞は、カスパーゼ活性が１００未満であり、アポトーシスが抑制されていることが分かる。
また、表５のミトコンドリア活性の評価結果から、本発明の浮遊性細胞浮遊培養用基材及びポリペプチド（Ｐ１）〜（Ｐ６）を培養液中に含む浮遊性細胞浮遊培養用培養液を用いた実施例２９〜３４で得た細胞は、ミトコンドリア活性が高く、高活性な細胞を生存率高く培養できたことが分かる。
以上のことから、本発明の浮遊性細胞浮遊培養用基材及び浮遊性細胞浮遊培養用培養液を用いることで、アポトーシスを抑制し、高活性な細胞を生存率高く培養できるという効果が高いことが分かる。
【産業上の利用可能性】
【０１２５】
本発明の浮遊性細胞浮遊培養用ポリペプチド、浮遊性細胞浮遊培養用基材及び浮遊性細胞浮遊培養用培養液は、浮遊性細胞の浮遊培養（特に、長時間浮遊培養したり、高密度浮遊培養する等）に有用であり、得られた浮遊性細胞は、毒性試験や創薬におけるスクリーニング試験、細胞移植治療などに用いることができる。
【配列表】
2013151489000001.app