【手続補正書】
【提出日】平成28年3月11日(2016.3.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
分子複合体を作製するための方法であって、配列番号１において示されるアミノ酸配列と少なくとも８５％の配列同一性を有するポリペプチドを、配列番号８において示されるアミノ酸配列と少なくとも８５％の配列同一性を有するプロテアーゼと接触させることを含み、前記プロテアーゼが、アミノ酸５０とアミノ酸７４との間の１またはそれより多くの部位で前記ポリペプチドを切断する、方法。
【請求項２】
前記ポリペプチドが、配列番号１において示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または前記ポリペプチドが、配列番号１において示されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するか、または前記ポリペプチドが配列番号１において示されるアミノ酸配列を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記接触させることが、インビトロにおいて実行される、請求項１または２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４】
前記接触させることが、組換え真菌細胞において行われる、請求項１または２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記真菌細胞が、Ｙａｒｒｏｗｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ、Ａｒｘｕｌａ  ａｄｅｎｉｎｉｖｏｒａｎｓ、またはＣａｎｄｉｄａ、Ｈａｎｓｅｎｕｌａ、Ｏｏｇａｔａｅａ、ＰｉｃｈｉａおよびＴｏｒｕｌｏｐｓｉｓからなる群から選択される属のメチロトローフの酵母などのメチロトローフの酵母である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記プロテアーゼが、アミノ酸６０とアミノ酸６５との間の１またはそれより多くの部位で前記ポリペプチドを切断する、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
アミノ酸７１９とアミノ酸７４６との間の１もしくはそれより多くの部位、および／またはアミノ酸１３７とアミノ酸１５１との間の１もしくはそれより多くの部位で、前記ポリペプチドをタンパク質分解することをさらに含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記分子複合体を、前記分子複合体の、哺乳類細胞の内部へ輸送される能力の増強をもたらす少なくとも１つの改変で変更することをさらに含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記少なくとも１つの改変が、細胞外受容体に対するリガンドを含むか、または前記少なくとも１つの改変が、ヒトインスリン様成長因子ＩＩの認識ドメインを含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記分子複合体の前記ポリペプチドのうちの少なくとも１つが、１またはそれより多くのリン酸化Ｎ−グリカンを含み、前記改変が、少なくとも１つのリン酸化Ｎ−グリカンのキャップを外すことおよび脱マンノシル化を含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
前記ポリペプチド上のＮ−グリカンのうちの少なくとも４０％が、キャップを外されかつ脱マンノシル化されているか、前記ポリペプチド上のＮ−グリカンのうちの少なくとも６０％がキャップを外されかつ脱マンノシル化されているか、または前記ポリペプチド上のＮ−グリカンのうちの少なくとも８０％がキャップを外されかつ脱マンノシル化されているか、または前記ポリペプチド上のＮ−グリカンのうちの少なくとも９０％がキャップを外されかつ脱マンノシル化されている、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
配列番号１において示されるＧＡＡアミノ酸配列と少なくとも８５％の配列同一性を有するＧＡＡアミノ酸配列をコードする核酸および配列番号８において示されるアミノ酸配列と少なくとも８５％の配列同一性を有するアルカリプロテアーゼをコードする核酸を含む単離された真菌細胞であって、前記真菌細胞が、ＧＡＡ活性を有しかつ少なくとも２つのポリペプチドを含む分子複合体を産生し、それぞれのポリペプチドが、配列番号１において示されるアミノ酸配列のセグメントと少なくとも８５％の配列同一性を有し、それぞれのセグメントが、前記アルカリプロテアーゼによる、アミノ酸５０とアミノ酸７４との間の１またはそれより多くの部位での、配列番号１において示されるアミノ酸配列と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列のタンパク質分解によって誘導される、単離された真菌細胞。
【請求項１３】
それぞれのセグメントが、前記アルカリプロテアーゼによる、アミノ酸６０とアミノ酸６５との間の１またはそれより多くの部位での、配列番号１において示されるアミノ酸配列と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列のタンパク質分解によって誘導される、請求項１２に記載の単離された真菌細胞。
【請求項１４】
前記真菌細胞が、
１）マンノシダーゼをコードする核酸であって、前記マンノシダーゼが、（ｉ）マンノース−１−ホスホ−６−マンノース部分をマンノース−６−リン酸に加水分解することができかつ（ｉｉ）末端のα−１，２マンノース結合、α−１，３マンノース結合、および／またはα−１，６マンノース結合を加水分解することができる、核酸；あるいは
２）マンノシダーゼをコードする核酸であって、前記マンノシダーゼが、マンノース−１−ホスホ−６−マンノース部分をマンノース−６−リン酸に加水分解することができる、核酸；あるいは
３）マンノシダーゼをコードする核酸であって、前記マンノシダーゼが、末端のα−１，２マンノース結合、α−１，３マンノース結合、および／またはα−１，６マンノース結合を加水分解することができる、核酸；あるいは
４）マンノシルリン酸化を促進することができるポリペプチドをコードする核酸
をさらに含む、請求項１２または請求項１３に記載の真菌細胞。
【請求項１５】
前記真菌細胞が、ＯＣＨ１活性を欠損するように遺伝子操作される、請求項１２〜１４のいずれか一項に記載の真菌細胞。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２５】
本発明の他の特色および利点は、以下の詳細な記載から、および特許請求の範囲から明らかである。
特定の実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
酸性αグルコシダーゼ（ＧＡＡ）活性を有し、かつ少なくとも２つのポリペプチドを含む単離された分子複合体であって、それぞれのポリペプチドが、配列番号１において示されるアミノ酸配列のセグメントと少なくとも８５％の配列同一性を有し、それぞれのセグメントが、アミノ酸５０とアミノ酸７４との間の１またはそれより多くの部位での、配列番号１において示されるアミノ酸配列のタンパク質分解によって誘導され、前記分子複合体が、前記分子複合体の、哺乳類細胞の内部へ輸送される能力の増強をもたらす少なくとも１つの改変を含む、単離された分子複合体。
（項目２）
それぞれのセグメントが、アミノ酸６０とアミノ酸６５との間の１またはそれより多くの部位での、配列番号１において示されるアミノ酸配列のタンパク質分解によって誘導される、項目１に記載の分子複合体。
（項目３）
前記複合体が、少なくとも３つのポリペプチドを含む、項目１に記載の分子複合体。
（項目４）
配列番号１において示されるアミノ酸配列の前記タンパク質分解が、配列番号１において示されるアミノ酸配列のアミノ酸７１９とアミノ酸７４６との間での１もしくはそれより多くの部位での切断またはアミノ酸１３７とアミノ酸１５１との間の１もしくはそれより多くの部位での切断をさらに含む、項目１〜３のいずれか一項に記載の分子複合体。
（項目５）
前記複合体が、少なくとも４つのポリペプチドを含む、項目１〜４のいずれか一項に記載の分子複合体。
（項目６）
前記タンパク質分解が、配列番号１において示されるアミノ酸配列のアミノ酸７１９とアミノ酸７４６との間の１またはそれより多くの部位での切断、ならびに配列番号１において示されるアミノ酸配列のアミノ酸１３７とアミノ酸１５１との間の１またはそれより多くの部位での切断をさらに含む、項目５に記載の分子複合体。
（項目７）
前記ポリペプチドのうちの少なくとも１つが、１またはそれより多くのリン酸化Ｎ−グリカンを含み、前記改変が、少なくとも１つのリン酸化Ｎ−グリカンのキャップを外すことおよび脱マンノシル化を含む、項目１〜６のいずれか一項に記載の分子複合体。
（項目８）
前記ポリペプチド上のＮ−グリカンの少なくとも４０％が、キャップを外されかつ脱マンノシル化されている、項目５に記載の分子複合体。
（項目９）
前記ポリペプチド上のＮ−グリカンの少なくとも６０％が、キャップを外されかつ脱マンノシル化されている、項目８に記載の分子複合体。
（項目１０）
前記ポリペプチド上のＮ−グリカンの少なくとも８０％が、キャップを外されかつ脱マンノシル化されている、項目８に記載の分子複合体。
（項目１１）
前記ポリペプチド上のＮ−グリカンの少なくとも９０％が、キャップを外されかつ脱マンノシル化されている、項目８に記載の分子複合体。
（項目１２）
それぞれのポリペプチドが、配列番号１において示されるアミノ酸配列のセグメントと少なくとも９０％の配列同一性を有する、項目１〜１１のいずれか一項に記載の分子複合体。
（項目１３）
それぞれのポリペプチドが、配列番号１において示されるアミノ酸配列のセグメントと少なくとも９５％の配列同一性を有する、項目１〜１１のいずれか一項に記載の分子複合体。
（項目１４）
前記少なくとも２つのポリペプチドのうちの１つについて、前記セグメントが、配列番号１のアミノ酸２２〜５７を含み、前記少なくとも２つのポリペプチドのうちの１つについて、前記セグメントが、配列番号１のアミノ酸６６〜８９６を含む、項目１〜１３のいずれか一項に記載の分子複合体。
（項目１５）
前記少なくとも３つのポリペプチドのうちの１つについて、前記セグメントが、配列番号１のアミノ酸２２〜５７を含み、前記少なくとも３つのポリペプチドのうちの１つについて、前記セグメントが、配列番号１のアミノ酸６６〜７２６を含み、前記少なくとも３つのポリペプチドのうちの１つについて、前記セグメントが、配列番号１のアミノ酸７３６〜８９６を含む、項目３〜１４のいずれか一項に記載の分子複合体。
（項目１６）
前記少なくとも４つのポリペプチドのうちの１つについて、前記セグメントが、配列番号１のアミノ酸２２〜５７を含み、前記少なくとも４つのポリペプチドのうちの１つについて、前記セグメントが、配列番号１のアミノ酸６６〜１４３を含み、前記少なくとも４つのポリペプチドのうちの１つについて、前記セグメントが、配列番号１のアミノ酸１５８〜７２６を含み、前記少なくとも４つのポリペプチドのうちの１つについて、前記セグメントが、配列番号１のアミノ酸７３６〜８９６を含む、項目５〜１４のいずれか一項に記載の分子複合体。
（項目１７）
前記少なくとも１つの改変が、前記ポリペプチドのうちの少なくとも１つに融合された、細胞外受容体に対するリガンドを含む、項目１〜１６のいずれか一項に記載の分子複合体。
（項目１８）
前記少なくとも１つの改変が、前記ポリペプチドのうちの少なくとも１つに融合された標的化ドメインを含み、前記標的化ドメインが、標的細胞の表面上の受容体の細胞外ドメイ
ンに結合する、項目１〜１６のいずれか一項に記載の分子複合体。
（項目１９）
前記少なくとも１つの改変が、前記ポリペプチドのうちの少なくとも１つに融合されたウロキナーゼ型プラスミノゲン受容体を含む、項目１〜１６のいずれか一項に記載の分子複合体。
（項目２０）
前記少なくとも１つの改変が、前記ポリペプチドのうちの少なくとも１つに融合されたヒトインスリン様成長因子ＩＩの認識ドメインを含む、項目１〜１６のいずれか一項に記載の分子複合体。
（項目２１）
前記分子複合体が、凍結乾燥されている、項目１〜２０のいずれか一項に記載の分子複合体を含む組成物。
（項目２２）
前記組成物が、一回使い切りのバイアルとしてパッケージングされている、項目２１に記載の組成物。
（項目２３）
項目１〜２０のいずれか一項に記載の分子複合体および薬学的に許容され得るキャリアを含む医薬組成物。
（項目２４）
前組成物が、静脈内投与または皮下投与のために製剤化されている、項目２３に記載の組成物。
（項目２５）
前記組成物が、静脈内注入のために製剤化されている、項目２３に記載の組成物。
（項目２６）
ポンペ病を処置するための方法であって、ポンペ病と診断された患者に対して項目２３〜２５のいずれか一項に記載の組成物を投与することを含む、方法。
（項目２７）
前記患者が、乳児発症型ポンペ病と診断される、項目２６に記載の方法。
（項目２８）
前記患者が、遅発型ポンペ病と診断される、項目２６に記載の方法。
（項目２９）
分子複合体を作製するための方法であって、配列番号１において示されるアミノ酸配列を有するポリペプチドを、配列番号８において示されるアミノ酸配列と少なくとも８５％の配列同一性を有するプロテアーゼと接触させることを含み、前記プロテアーゼが、アミノ酸５０とアミノ酸７４との間の１またはそれより多くの部位で前記ポリペプチドを切断する、方法。
（項目３０）
前記接触させることが、インビトロにおいて実行される、項目２９に記載の方法。
（項目３１）
前記プロテアーゼが、アミノ酸６０とアミノ酸６５との間の１またはそれより多くの部位で前記ポリペプチドを切断する、項目２９または項目３０に記載の方法。
（項目３２）
キャップを外されかつ脱マンノシル化したリン酸化Ｎ−グリカンを含む分子複合体を作製するための方法であって、分子複合体を、（ｉ）マンノース−１−ホスホ−６−マンノース部分をマンノース−６−リン酸に加水分解することができかつ（ｉｉ）末端のα−１，２マンノース結合、α−１，３マンノース結合、および／またはα−１，６マンノース結合を加水分解することのできるマンノシダーゼと接触させることを含み、前記分子複合体が、ＧＡＡ活性を有し、かつ少なくとも２つのポリペプチドを含み、それぞれのポリペプチドが、配列番号１において示されるアミノ酸配列のセグメントと少なくとも８５％の配列同一性を有し、それぞれのセグメントが、アミノ酸５０とアミノ酸７４との間の１またはそれより多くの部位での、配列番号１において示されるアミノ酸配列のタンパク質分解によって誘導され、前記ポリペプチドのうちの少なくとも１つが、１またはそれより多くのマンノース−１−ホスホ−６−マンノース部分を含有するリン酸化Ｎ−グリカンを含む、方法。
（項目３３）
前記マンノシダーゼが、ファミリー３８のグリコシルヒドロラーゼである、項目３２に記載の方法。
（項目３４）
前記マンノシダーゼが、Ｃａｎａｖａｌｉａ  ｅｎｓｉｆｏｒｍｉｓマンノシダーゼである、項目３２または３３に記載の方法。
（項目３５）
前記マンノシダーゼが、Ｙａｒｒｏｗｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａマンノシダーゼである、項目３２または３３に記載の方法。
（項目３６）
前記接触させることが、組換え真菌細胞において行われ、前記真菌細胞が、前記マンノシダーゼを発現する、項目３２〜３５のいずれか一項に記載の方法。
（項目３７）
キャップを外されかつ脱マンノシル化したリン酸化Ｎ−グリカンを含む分子複合体を作製する方法であって、分子複合体を、末端のα−１，２マンノース結合、α−１，３マンノース結合、および／またはα−１，６マンノース結合を加水分解することのできるマンノシダーゼと接触させることを含み、前記分子複合体が、ＧＡＡ活性を有し、かつ少なくとも２つのポリペプチドを含み、それぞれのポリペプチドが、配列番号１において示されるアミノ酸配列のセグメントと少なくとも８５％の配列同一性を有し、それぞれのセグメントが、アミノ酸５０とアミノ酸７４との間の１またはそれより多くの部位での、配列番号１において示されるアミノ酸配列のタンパク質分解によって誘導され、前記接触させることの前に、前記ポリペプチドのうちの少なくとも１つが、キャップを外されたマンノース−６−リン酸部分を含むリン酸化Ｎ−グリカンを含む、方法。
（項目３８）
前記マンノシダーゼが、ファミリー４７のグリコシルヒドロラーゼである、項目３７に記載の方法。
（項目３９）
前記マンノシダーゼが、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｓａｔｏｉマンノシダーゼである、項目３７または３８に記載の方法。
（項目４０）
前記マンノシダーゼが、ファミリー９２のグリコシルヒドロラーゼである、項目３７に記載の方法。
（項目４１）
マンノシダーゼが、Ｃｅｌｌｕｌｏｓｉｍｉｃｒｏｂｉｕｍ  ｃｅｌｌｕｌａｎｓマンノシダーゼである、項目３７または４０に記載の方法。
（項目４２）
前記マンノシダーゼが、ファミリー３８のグリコシルヒドロラーゼである、項目３７に記載の方法。
（項目４３）
前記マンノシダーゼが、Ｃａｎａｖａｌｉａ  ｅｎｓｉｆｏｒｍｉｓマンノシダーゼである、項目３７または項目４２に記載の方法。
（項目４４）
前記接触させることが、組換え真菌細胞において行われ、前記真菌細胞が、前記マンノシダーゼを発現する、項目３７〜４３のいずれか一項に記載の方法。
（項目４５）
キャップを外されかつ脱マンノシル化したリン酸化Ｎ−グリカンを含む分子複合体を作製する方法であって、分子複合体を、マンノース−１−ホスホ−６−マンノース部分をマンノース−６−リン酸に加水分解することができるマンノシダーゼと接触させることを含み、前記分子複合体が、ＧＡＡ活性を有し、かつ少なくとも２つのポリペプチドを含み、それぞれのポリペプチドが、配列番号１において示されるアミノ酸配列のセグメントと少なくとも８５％の配列同一性を有し、それぞれのセグメントが、アミノ酸５０とアミノ酸７４との間の１またはそれより多くの部位での、配列番号１において示されるアミノ酸配列のタンパク質分解によって誘導され、前記接触させることの前に、前記ポリペプチドのうちの少なくとも１つが、マンノース−１−ホスホ−６−マンノース部分を含む、方法。
（項目４６）
前記マンノシダーゼが、ファミリー３８のグリコシルヒドロラーゼである、項目４５に記載の方法。
（項目４７）
前記マンノシダーゼが、Ｃａｎａｖａｌｉａ  ｅｎｓｉｆｏｒｍｉｓマンノシダーゼである、項目４５または４６に記載の方法。
（項目４８）
前記マンノシダーゼが、Ｙａｒｒｏｗｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａマンノシダーゼである、項目４５または４６に記載の方法。
（項目４９）
キャップを外されかつ脱マンノシル化したリン酸化Ｎ−グリカンを含む分子複合体を作製する方法であって、
ａ）分子複合体を、マンノース−１−ホスホ−６−マンノース部分をマンノース−６−リン酸に加水分解することができるマンノシダーゼと接触させて、前記分子複合体における少なくとも１つのポリペプチド上のマンノース−６−リン酸部分のキャップを外すステップであって、前記分子複合体が、ＧＡＡ活性を有し、かつ少なくとも２つのポリペプチドを含み、それぞれのポリペプチドが、配列番号１において示されるアミノ酸配列のセグメントと少なくとも８５％の配列同一性を有し、それぞれのセグメントが、アミノ酸５０とアミノ酸７４との間の１またはそれより多くの部位での、配列番号１において示されるアミノ酸配列のタンパク質分解によって誘導されるステップ、ならびに
ｂ）前記分子複合体を、末端のα−１，２マンノース結合、α−１，３マンノース結合、および／またはα−１，６マンノース結合を加水分解することのできるマンノシダーゼと接触させるステップ
を含む、方法。
（項目５０）
ステップ（ａ）およびステップ（ｂ）が、２つの異なる酵素によって触媒される、項目４９に記載の方法。
（項目５１）
ステップ（ａ）およびステップ（ｂ）が、単一の酵素によって触媒される、項目４９に記載の方法。
（項目５２）
前記接触させるステップが、組換え真菌宿主細胞において行われ、前記真菌宿主細胞が、ステップ（ａ）を触媒することができるマンノシダーゼおよびステップ（ｂ）を触媒することができるマンノシダーゼを発現する、項目４９または５０に記載の方法。
（項目５３）
前記接触させるステップが、組換え真菌宿主細胞において行われ、前記真菌宿主が、ステップ（ａ）およびステップ（ｂ）を触媒することができるマンノシダーゼを発現する、項目４９または５１に記載の方法。
（項目５４）
前記方法が、哺乳類細胞を、前記キャップを外されかつ脱マンノシル化したＮ−グリカンを含む少なくとも１つのポリペプチドを含む前記分子複合体と接触させるステップをさらに含み、前記接触させるステップの後に、前記分子複合体が、増強された効率により、前記哺乳類細胞の内部へ輸送される、項目３２〜５３のいずれか一項に記載の方法。
（項目５５）
前記哺乳類細胞が、ヒト細胞である、項目５４に記載の方法。
（項目５６）
ＧＡＡ活性を有する分子複合体を細胞の内部へと輸送する方法であって、哺乳類細胞を、前記分子複合体と接触させることを含み、前記分子複合体が、少なくとも２つのポリペプチドを含み、それぞれのポリペプチドが、配列番号１において示されるアミノ酸配列のセグメントと少なくとも８５％の配列同一性を有し、それぞれのセグメントが、アミノ酸５０とアミノ酸７４との間の１またはそれより多くの部位での、配列番号１において示されるアミノ酸配列のタンパク質分解によって誘導され、前記ポリペプチドのうちの少なくとも１つの上のリン酸化Ｎ−グリカンが、項目３３〜５５のいずれか一項において示されるように、キャップを外されかつ脱マンノシル化されている、方法。
（項目５７）
ＧＡＡ活性を有する分子複合体を細胞の内部へと輸送する方法であって、哺乳類細胞を、
前記分子複合体と接触させることを含み、前記分子複合体が、少なくとも２つのポリペプチドを含み、それぞれのポリペプチドが、配列番号１において示されるアミノ酸配列のセグメントと少なくとも８５％の配列同一性を有し、それぞれのセグメントが、アミノ酸５０とアミノ酸７４との間の１またはそれより多くの部位での、配列番号１において示されるアミノ酸配列のタンパク質分解によって誘導され、前記分子複合体が、前記分子複合体の、哺乳類細胞の内部へ輸送される能力の増強をもたらす少なくとも１つの改変を含む、方法。
（項目５８）
前記哺乳類細胞が、インビトロにある、項目５６または項目５７に記載の方法。
（項目５９）
前記哺乳類細胞が、哺乳類被験体中にある、項目５６または項目５７に記載の方法。
（項目６０）
前記哺乳類細胞が、ヒト細胞である、項目５８〜５９のいずれか一項に記載の方法。
（項目６１）
前記改変が、前記ポリペプチドのうちの少なくとも１つに融合された標的化ドメインを含み、前記標的化ドメインが、標的細胞の表面上の受容体の細胞外ドメインに結合する、項目５７〜６０のいずれか一項に記載の方法。
（項目６２）
前記少なくとも１つの改変が、前記ポリペプチドのうちの少なくとも１つに融合されたウロキナーゼ型プラスミノゲン受容体を含む、項目５７〜６０のいずれか一項に記載の方法。
（項目６３）
前記少なくとも１つの改変が、前記ポリペプチドのうちの少なくとも１つに融合された、ヒトインスリン様成長因子ＩＩの認識ドメインを含む、項目５７〜６０のいずれか一項に記載の方法。
（項目６４）
配列番号１において示されるＧＡＡアミノ酸配列をコードする核酸および配列番号８において示されるアミノ酸配列と少なくとも８５％の配列同一性を有するアルカリプロテアーゼをコードする核酸を含む単離された真菌細胞であって、前記真菌細胞が、ＧＡＡ活性を有しかつ少なくとも２つのポリペプチドを含む分子複合体を産生し、それぞれのポリペプチドが、配列番号１において示されるアミノ酸配列のセグメントと少なくとも８５％の配列同一性を有し、それぞれのセグメントが、前記アルカリプロテアーゼによる、アミノ酸５０とアミノ酸７４との間の１またはそれより多くの部位での、配列番号１において示されるアミノ酸配列のタンパク質分解によって誘導される、単離された真菌細胞。
（項目６５）
それぞれのセグメントが、前記アルカリプロテアーゼによる、アミノ酸６０とアミノ酸６５との間の１またはそれより多くの部位での、配列番号１において示されるアミノ酸配列のタンパク質分解によって誘導される、項目６４に記載の単離された真菌細胞。
（項目６６）
前記真菌細胞が、マンノシダーゼをコードする核酸をさらに含み、前記マンノシダーゼが、（ｉ）マンノース−１−ホスホ−６−マンノース部分をマンノース−６−リン酸に加水分解することができかつ（ｉｉ）末端のα−１，２マンノース結合、α−１，３マンノース結合、および／またはα−１，６マンノース結合を加水分解することができる、項目６４または項目６５に記載の真菌細胞。
（項目６７）
前記真菌細胞が、マンノシダーゼをコードする核酸をさらに含み、前記マンノシダーゼが、マンノース−１−ホスホ−６−マンノース部分をマンノース−６−リン酸に加水分解することができる、項目６４または項目６５に記載の真菌細胞。
（項目６８）
前記真菌細胞が、マンノシダーゼをコードする核酸をさらに含み、前記マンノシダーゼが、末端のα−１，２マンノース結合、α−１，３マンノース結合、および／またはα−１，６マンノース結合を加水分解することができる、項目６４または項目６５に記載の真菌細胞。
（項目６９）
前記真菌細胞が、マンノシルリン酸化を促進することができるポリペプチドをコードする
核酸をさらに含む、項目６５に記載の真菌細胞。
（項目７０）
前記真菌細胞が、ＯＣＨ１活性を欠損するように遺伝子操作される、項目６４〜６９のいずれか一項に記載の真菌細胞。
（項目７１）
配列番号８において示されるアミノ酸配列と少なくとも８５％の配列同一性を有するアルカリプロテアーゼをコードする外因性核酸を含む単離された真菌細胞。