【手続補正書】
【提出日】平成28年10月4日(2016.10.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
精製された細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートを調製するためのプロセスであって、細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートと１つ以上の不純物とを含む混合物をポリビニルジフルオライド（ＰＶＤＦ）膜に供して、前記混合物から前記不純物の少なくとも一部を除去し、それによって精製された細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートを提供することを含む、プロセス。
【請求項２】
前記プロセスは、２、３、または４回連続して繰り返される、請求項１に記載のプロセス。
【請求項３】
請求項１に記載のプロセスであって、前記プロセスは、
（ａ）細胞結合剤を細胞毒性剤と接触させて、前記細胞結合剤と前記細胞毒性剤とを含む第１の混合物を形成し、その後、前記第１の混合物を、約４〜約９のｐＨを有する溶液中でリンカーを含む二官能性架橋試薬と接触させて、前記リンカーを介して前記細胞毒性剤に化学的に結合された前記細胞結合剤を含む前記細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートと１つ以上の不純物とを含む第２の混合物を提供することと、
（ｂ）前記第２の混合物をポリビニルジフルオライド（ＰＶＤＦ）膜に供して、前記不純物の少なくとも一部を除去し、それによって前記細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートの精製された第２の混合物を提供することと、
（ｃ）ステップ（ｂ）の後、前記精製された第２の混合物を、タンジェント流濾過、選択的析出、非吸着クロマトグラフィー、吸着濾過、吸着クロマトグラフィー、またはこれらの組み合わせに供して、前記細胞結合剤−細胞毒性剤コンジュゲートを前記不純物からさらに精製し、それによって前記細胞結合剤−細胞毒性剤コンジュゲートの精製された第３の混合物を調製することであって、前記精製された第３の混合物は、前記精製された第２の混合物と比較して低減された量の前記不純物を含む、調製することと、を含む、プロセス。
【請求項４】
ステップ（ｂ）は、ステップ（ｃ）の前に２、３、または４回連続して繰り返される、請求項３に記載のプロセス。
【請求項５】
吸着クロマトグラフィーまたはタンジェント流濾過は、ステップ（ｃ）で利用される、請求項３または４に記載のプロセス。
【請求項６】
請求項１に記載のプロセスであって、前記プロセスは、
（ａ）細胞結合剤を二官能性架橋試薬と接触させて、リンカーを前記細胞結合剤に共有結合させ、それによって、結合されたリンカーを有する細胞結合剤を含む第１の混合物を調製することと、
（ｂ）前記第１の混合物を、タンジェント流濾過、選択的析出、非吸着クロマトグラフィー、吸着濾過、吸着クロマトグラフィー、またはこれらの組み合わせに供し、それによって、結合されたリンカーを有する細胞結合剤の精製された第１の混合物を調製することと、
（ｃ）結合されたリンカーを有する前記細胞結合剤を、約４〜約９のｐＨを有する溶液中で細胞毒性剤と反応させることによって、細胞毒性剤を、前記精製された第１の混合物中で結合されたリンカーを有する前記細胞結合剤に結合させて、前記リンカーを介して前記細胞毒性剤に化学的に結合された前記細胞結合剤を含む前記細胞結合剤−細胞毒性剤コンジュゲートと１つ以上の不純物とを含む第２の混合物を調製することと、
（ｄ）前記第２の混合物をポリビニルジフルオライド（ＰＶＤＦ）膜に供して、前記不純物の少なくとも一部を除去して、それによって前記細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートの精製された第２の混合物を提供することと、
（ｅ）ステップ（ｄ）の後、前記精製された第２の混合物を、タンジェント流濾過、選択的析出、非吸着クロマトグラフィー、吸着濾過、吸着クロマトグラフィー、またはこれらの組み合わせに供して、前記細胞結合剤−細胞毒性剤コンジュゲートを前記不純物からさらに精製し、それによって前記細胞結合剤−細胞毒性剤コンジュゲートの精製された第３の混合物を調製することであって、前記精製された第３の混合物は、前記精製された第２の混合物と比較して低減された量の前記不純物を含む、調製することと、を含む、プロセス。
【請求項７】
ステップ（ｄ）は、ステップ（ｅ）の前に２、３、または４回連続して繰り返される、請求項６に記載のプロセス。
【請求項８】
前記プロセスは、ステップ（ｃ）と（ｄ）との間に、前記混合物をイオン交換クロマトグラフィー膜に供することをさらに含む、請求項６または７に記載のプロセス。
【請求項９】
吸着クロマトグラフィーは、ステップ（ｂ）および（ｄ）で利用される；またはタンジェント流濾過は、ステップ（ｂ）で利用され、吸着クロマトグラフィーは、ステップ（ｄ）で利用される；または吸着クロマトグラフィーは、ステップ（ｂ）で利用され、タンジェント流濾過は、ステップ（ｄ）で利用される；またはタンジェント流濾過は、ステップ（ｂ）および（ｄ）で利用される；または、非吸着クロマトグラフィーは、ステップ（ｂ）および（ｄ）で利用される、請求項６〜８のいずれか１項に記載のプロセス。
【請求項１０】
請求項１に記載のプロセスであって、前記プロセスは：
（ａ）細胞結合剤を二官能性架橋試薬と接触させて、リンカーを前記細胞結合剤に共有結合させ、それによって、結合されたリンカーを有する細胞結合剤を含む第１の混合物を調製することと、
（ｂ）結合されたリンカーを有する前記細胞結合剤を細胞毒性剤と反応させることによって、細胞毒性剤を、前記第１の混合物中で結合されたリンカーを有する前記細胞結合剤に結合させて、前記リンカーを介して前記細胞毒性剤に化学的に結合された前記細胞結合剤を含む前記細胞結合剤−細胞毒性剤コンジュゲートと１つ以上の不純物とを含む第２の混合物を調製することと、
（ｃ）前記第２の混合物を、ポリビニルジフルオライド（ＰＶＤＦ）膜に供して、前記不純物の少なくとも一部を除去して、それによって前記細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートの精製された第２の混合物を提供することと、
（ｄ）ステップ（ｃ）の後、前記精製された第２の混合物を、タンジェント流濾過、選択的析出、非吸着クロマトグラフィー、吸着濾過、吸着クロマトグラフィー、またはこれらの組み合わせに供して、前記細胞結合剤−細胞毒性剤コンジュゲートを前記不純物からさらに精製し、それによって前記細胞結合剤−細胞毒性剤コンジュゲートの精製された第３の混合物を調製することであって、前記精製された第３の混合物は、前記精製された第２の混合物と比較して低減された量の前記不純物を含む、調製することと、を含む、プロセス。
【請求項１１】
前記第１の混合物は、ステップ（ａ）と（ｂ）の間では精製に供されない、請求項１０に記載のプロセス。
【請求項１２】
ステップ（ｃ）は、ステップ（ｄ）の前に２、３、または４回連続して繰り返される、請求項１０または１１に記載のプロセス。
【請求項１３】
前記プロセスは、ステップ（ｂ）と（ｃ）との間に、前記混合物をイオン交換クロマトグラフィー膜に供すること；またはステップ（ｃ）と（ｄ）との間に、前記混合物をイオン交換クロマトグラフィー膜に供することをさらに含む、請求項１０〜１２のいずれか１項に記載のプロセス。
【請求項１４】
吸着クロマトグラフィー、タンジェント流濾過または非吸着クロマトグラフィーは、ステップ（ｄ）で利用される、請求項１０〜１３のいずれか１項に記載のプロセス。
【請求項１５】
前記吸着クロマトグラフィーは、ハイドロキシアパタイトクロマトグラフィー、疎水性電荷誘導クロマトグラフィー（ＨＣＩＣ）、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）、イオン交換クロマトグラフィー、混合モードイオン交換クロマトグラフィー、固定化金属アフィニティクロマトグラフィー（ＩＭＡＣ）、色素リガンドクロマトグラフィー、アフィニティクロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項３〜１４のいずれか１項に記載のプロセス。
【請求項１６】
前記吸着クロマトグラフィーは、イオン交換クロマトグラフィーである、請求項１５に記載のプロセス。
【請求項１７】
前記イオン交換クロマトグラフィーは、セラミックハイドロキシアパタイト（ＣＨＴ）クロマトグラフィーである、請求項１６に記載のプロセス。
【請求項１８】
ステップ（ｃ）における前記溶液は、クエン酸緩衝液、酢酸緩衝液、コハク酸緩衝液、およびリン酸緩衝液からなる群から選択される緩衝剤を含む、請求項６〜９のいずれか１項に記載のプロセス、またはステップ（ｂ）における前記溶液は、クエン酸緩衝液、酢酸緩衝液、コハク酸緩衝液、およびリン酸緩衝液からなる群から選択される緩衝剤を含む、請求項１０〜１７のいずれか１項に記載のプロセス。
【請求項１９】
ステップ（ｃ）における前記溶液は、ＨＥＰＰＳＯ（Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−Ｎ’−（２−ヒドロキシプロパンスルホン酸））、ＰＯＰＳＯ（ピペラジン−１，４−ビス−（２−ヒドロキシ−プロパン−スルホン酸）無水物）、ＨＥＰＥＳ（４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−エタンスルホン酸）、ＨＥＰＰＳ（ＥＰＰＳ）（４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−プロパンスルホン酸）、ＴＥＳ（Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］−２−アミノエタンスルホン酸）、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される緩衝剤を含む、請求項６〜９のいずれかに記載のプロセス、またはステップ（ｂ）における前記溶液は、ＨＥＰＰＳＯ（Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−Ｎ’−（２−ヒドロキシプロパンスルホン酸））、ＰＯＰＳＯ（ピペラジン−１，４−ビス−（２−ヒドロキシ−プロパン−スルホン酸）無水物）、ＨＥＰＥＳ（４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−エタンスルホン酸）、ＨＥＰＰＳ（ＥＰＰＳ）（４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−プロパンスルホン酸）、ＴＥＳ（Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］−２−アミノエタンスルホン酸）、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される緩衝剤を含む、請求項１０〜１７のいずれか１項に記載のプロセス。
【請求項２０】
前記ＰＶＤＦ膜は、０．２２ミクロン孔径膜、０．４５ミクロン孔径膜、および二重層０．４５／０．２２ミクロン孔径膜からなる群から選択される、請求項１〜１９のいずれか１項に記載のプロセス。
【請求項２１】
前記ＰＶＤＦ膜は、γ線照射される、請求項１〜２０のいずれか１項に記載のプロセス。
【請求項２２】
ステップ（ａ）における前記接触は、約０℃〜約１５℃の温度、または約１６℃〜約２４℃の温度で生じる、請求項３〜２１のいずれか１項に記載のプロセス。
【請求項２３】
前記二官能性架橋試薬は、酸不安定性リンカー、ジスルフィド含有リンカー、感光性リンカー、ペプチダーゼ不安定性リンカー、またはエステラーゼ不安定性リンカーである、請求項３〜２２のいずれか１項に記載のプロセス。
【請求項２４】
前記二官能性架橋試薬は、ジスルフィド含有切断可能リンカーである、請求項３〜２２のいずれか１項に記載のプロセス。
【請求項２５】
前記二官能性架橋試薬は、非切断可能リンカーである、請求項３〜２２のいずれか１項に記載のプロセス。
【請求項２６】
前記二官能性架橋試薬は、Ｎ−スクシンイミジルエステル部分、Ｎ−スルホスクシンイミジルエステル部分、マレイミド系部分、またはハロアセチル系部分を含む、請求項３〜２２のいずれか１項に記載のプロセス。
【請求項２７】
前記二官能性架橋試薬は、Ｎ−スクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）ブタノエート（ＳＰＤＢ）、Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）ペンタノエート（ＳＰＰ）、およびＮ−スクシンイミジル−４−（２−ピリジルジチオ）２−スルホブタノエート（スルホ−ＳＰＤＢ）からなる群から選択される、請求項２４に記載のプロセス。
【請求項２８】
前記二官能性架橋試薬は、Ｎ−スクシンイミジル４−（マレイミドメチル）シクロヘキサンカルボキシレート（ＳＭＣＣ）、Ｎ−スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）−シクロヘキサン−１−カルボキシ−（６−アミドカプロアート）（ＬＣ−ＳＭＣＣ）、κ−マレイミドウンデカン酸Ｎ−スクシンイミジルエステル（ＫＭＵＡ）、γ−マレイミド酪酸Ｎ−スクシンイミジルエステル（ＧＭＢＳ）、β−マレイミドプロピルオキシ−スクシンイミジルエステル（ＢＭＰＳ）、ε−マレイミドカプロン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＥＭＣＳ）、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）、Ｎ−（α−マレイミドアセトキシ）−スクシンイミドエステル（ＡＭＡＳ）、スクシンイミジル−６−（β−マレイミドプロピオンアミド）ヘキサノエート（ＳＭＰＨ）、Ｎ−スクシンイミジル４−（ｐ−マレイミドフェニル）−ブチラート（ＳＭＰＢ）、およびＮ−（ｐ−マレイミドフェニル）イソシアナート（ＰＭＰＩ）、スルホ−Ｍａｌ、ＰＥＧ４−Ｍａｌ、およびＣＸ１−１からなる群から選択される、請求項２５に記載のプロセス。
【請求項２９】
前記細胞結合剤は、抗体である、請求項１〜２８のいずれか１項に記載のプロセス。
【請求項３０】
前記抗体は、モノクローナル抗体である、請求項２９に記載のプロセス。
【請求項３１】
前記抗体は、ｈｕＢ４、ｈｕＣ２４２、トラスツズマブ、ビバツズマブ、シブロツズマブ、ｈｕＤＳ６、リツキシマブ、抗ＣＤ３３抗体、抗ＣＤ２７Ｌ抗体、抗Ｈｅｒ２抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体、クリプト（Ｃｒｉｐｔｏ）、抗ＣＤ１３８抗体、抗ＣＤ３８抗体、抗ＥｐｈＡ２抗体、インテグリン標的抗体、抗ＣＤ３７抗体、抗葉酸受容体抗体、抗Ｈｅｒ３抗体、Ｂ−Ｂ４抗体、および抗ＩＧＦＩＲ抗体からなる群から選択される抗体である、請求項２９に記載のプロセス。
【請求項３２】
前記細胞毒性剤は、マイタンシノイドである請求項１〜３１のいずれか１項に記載のプロセス。
【請求項３３】
前記マイタンシノイドは、Ｎ２’−デアセチル−Ｎ２’−（３−メルカプト−１−オキソプロピル）−マイタンシン（ＤＭ１）またはＮ２’−デアセチル−Ｎ２’−（４−メチル−４−メルカプト−１−オキソペンチル）−マイタンシン（ＤＭ４）である、請求項３２に記載のプロセス。
【請求項３４】
前記細胞毒性剤は、ＤＭ１であり、前記二官能性架橋剤は、ＳＭＣＣであり、前記細胞結合剤は、ｈｕＣＤ３７−３抗体である、請求項１〜２２のいずれか１項に記載のプロセス。
【請求項３５】
前記細胞毒性剤は、ＤＭ１であり、前記二官能性架橋剤は、ＳＭＣＣであり、前記細胞結合剤は、トラスツズマブである、請求項１〜２２のいずれか１項に記載のプロセス。