【手続補正書】
【提出日】平成27年11月30日(2015.11.30)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトの疾患と関係がある延長されたＤＮＡリピートに対して配列相補性を有している１０〜４０ヌクレオチドの長さのアンチセンスオリゴヌクレオチドであって、前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、リンを含有しているサブユニット間結合により結合したモルホリノ環構造を含むモルホリノオリゴマーであり、ここで、前記リンを含有しているサブユニット間結合が、構造：
【化１】
2015506669.tif 000001
［式中、
ＷはＳまたはＯであり；
ＸはＲ１、ＮＲ１１Ｒ１２またはＯＲ１６であり；
ＹはＯまたはＮＲ１７である］
の結合であり、
そして、前記サブユニット間結合が、以下：
（ａ）非電荷結合（ａ）（式中ＸはＮＲ１１Ｒ１２またはＯＲ１６であり、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１６、およびＲ１７はそれぞれが、水素およびＣ１〜Ｃ６アルキルより選択される）；あるいは
（ｂ１）陽イオン性結合（ｂ１）（式中、ＸはＲ１であり、Ｒ１は、式：
【化２】
2015506669.tif 000002
（式中、
ｑは、０、１、２、３、または４であり；
Ｒ２は、水素、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、およびホルムアミジニル部分からなる群より選択され、そして
Ｒ３は、水素およびＣ１〜Ｃ５アルキルからなる群より選択されるか、または
Ｒ２とＲ３とが一緒になって酸素ヘテロ原子を随意に含有している５〜７員複素環を形成し、ここでは、前記環は、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、フェニル、ハロゲン、およびアラルキルからなる群より選択される置換基で随意に置換され得；
Ｒ４は、不在、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキルおよびアラルキルからなる群より選択される）
の部分である）から独立して選択され、
少なくとも１つのサブユニット間結合が、陽イオン性結合（ｂ１）である、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその薬学的に許容され得る塩。
【請求項２】
Ｒ１が以下からなる群より選択される、請求項１に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその薬学的に許容され得る塩：
【化３】
2015506669.tif 000003
。
【請求項３】
結合（ｂ１）の少なくとも１つの例が、式：
【化４】
2015506669.tif 000004
を有する、請求項１に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその薬学的に許容され得る塩。
【請求項４】
配列が、（ＣＣＧ）ｎ、（ＣＴＧ）ｎ、（ＴＴＣ）ｎ、（ＮＧＣ）ｎ、（ＧＮＣ）ｎ、（ＣＡＧＧ）ｎ、（ＡＧＡＡＴ）ｎ、および（ＣＧＣＧ４ＣＧ４）ｎからなる群より選択され、式中、Ｎが任意のヌクレオチドであり、ｎが３から１０までである、請求項１に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその薬学的に許容され得る塩。
【請求項５】
前記ヒトの疾患が、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、ならびに１型および２型筋強直性ジストロフィーからなる群より選択される、請求項１に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその薬学的に許容され得る塩。
【請求項６】
配列（ＧＣＴ）７を含む、請求項５に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその薬学的に許容され得る塩。
【請求項７】
請求項１に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチドと薬学的に許容され得る担体を含む、薬学的組成物。
【請求項８】
ハンチントン病の処置において使用するための、請求項１に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む組成物または請求項７に記載の薬学的組成物。
【請求項９】
式：
【化５】
2015506669.tif 000005
［Ｎｕ１、Ｎｕ２、およびＮｕ３はそれぞれが、アデニン、グアニン、チミン、ウラシル、シトシン、およびヒポキサンチンからなる群より独立して選択されるヌクレオ塩基であり；
ｎは、３から１０までの整数であり、ヌクレオチド配列（Ｎｕ１、Ｎｕ２、Ｎｕ３）のリピートの数を表しており；
Ｒ１は、請求項１に規定されている通りであり；
Ｒｘは、ＨＯ−、ヌクレオチド、細胞透過性ペプチド部分、およびピペラジニルからなる群より選択され；
Ｒｙは、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ヌクレオチド、ペプチド部分、アミノ酸、ホルムアミジニル部分、およびアシルからなる群より選択され；そして
Ｒｚは、不在、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、およびアシルからなる群より選択される］を有している、請求項１に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその薬学的に許容され得る塩。
【請求項１０】
Ｎｕ１、Ｎｕ２、およびＮｕ３の配列が、（ＣＣＧ）、（ＣＴＧ）、（ＴＴＣ）、（ＮＧＣ）、および（ＧＮＣ）からなる群より選択され、式中、Ｎは任意のヌクレオチドである、請求項９に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその薬学的に許容され得る塩。
【請求項１１】
Ｎｕ１、Ｎｕ２、およびＮｕ３の配列が（ＧＣＴ）７である、請求項９に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその薬学的に許容され得る塩。
【請求項１２】
ＲｙがＧヌクレオチドである、請求項９に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチドまたは薬学的に許容され得る塩。
【請求項１３】
請求項９に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチドと薬学的に許容され得る担体を含む、薬学的組成物。
【請求項１４】
ハンチントン病の処置における使用のための、請求項９に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む組成物または請求項１３に記載の薬学的組成物。
【請求項１５】
ａ．ホモジナイズされた組織試料または細胞から全ＲＮＡを抽出する工程；
ｂ．ｍＲＮＡを単離する工程；
ｃ．ゲル電気泳動を使用して大きさによりｍＲＮＡを分離する工程；
ｄ．ｍＲＮＡをメンブレンにトランスファーする工程；
ｅ．ｍＲＮＡをメンブレンに固定する工程；および
ｆ．延長されたリピートを検出するためにプローブを使用する工程であって、ここでは、プローブが請求項１に記載のオリゴヌクレオチドである工程
を含む、ノーザンブロッティングにより検出された前記延長されたリピートを、延長されたＤＮＡリピートと関係がある遺伝性障害の指標とする方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２４】
別の態様は、以下の工程を含む、オリゴヌクレオチド療法での処置に対するポリヌクレオチドリピート障害の被検体の応答性を決定するための方法に関する：
ｉ．被検体から細胞を単離する工程；
ｉｉ．細胞を培養する工程；
ｉｉｉ．オリゴヌクレオチドを細胞に導入する工程；
ｉｖ．細胞からｍＲＮＡまたはタンパク質を単離する工程；
ｖ．ポリヌクレオチドリピート病の病因転写物に対する遺伝子特異的プライマーを使用してｍＲＮＡを逆転写し、増幅する工程であって、ここでは、上記遺伝子特異的プライマーが上記ポリヌクレオチドリピートの両方の末端に隣接している、工程；
ｖｉ．突然変異体であるポリヌクレオチドリピート病の病因ｍＲＮＡまたはタンパク質と、基準である野生型ｍＲＮＡまたはタンパク質のレベルを定量化する工程；ならびに
ｖｉｉ．突然変異体であるポリヌクレオチドリピート病の病因ｍＲＮＡまたはタンパク質のレベルを、基準である野生型ｍＲＮＡまたはタンパク質のレベルと比較する工程；ならびに
ｖｉｉｉ．突然変異体であるポリヌクレオチドリピート病の病因ｍＲＮＡまたはタンパク質のレベルが基準である野生型ｍＲＮＡまたはタンパク質のレベルより低い場合に、被検体がオリゴヌクレオチド療法に対して応答性であることを決定する工程。
本発明は、例えば、以下の項目も提供する。
（項目１）
ヒトの疾患と関係がある延長されたＤＮＡリピートに対して配列相補性を有している１０〜４０ヌクレオチドの長さのアンチセンスオリゴヌクレオチドであって、ここでは、前記アンチセンスが式：
【化１】
2015506669.tif 000006
［式中、Ｎｕはヌクレオ塩基であり；
Ｒ１は、式：
【化２】
2015506669.tif 000007
（ｑは、０、１、２、３、または４であり；
Ｒ２は、水素、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、およびホルムアミジニル部分からなる群より選択され、そして
Ｒ３は、水素およびＣ１〜Ｃ５アルキルからなる群より選択されるか、または
Ｒ２とＲ３とが一緒になって酸素ヘテロ原子を随意に含有している５〜７員複素環を形成し、ここでは、前記環は、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、フェニル、ハロゲン、およびアラルキルからなる群より選択される置換基で随意に置換され得；
Ｒ４は、不在、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキルおよびアラルキルからなる群より選択される）
の部分であり；
Ｒｘは、ＨＯ−、ヌクレオチド、細胞透過性ペプチド部分、およびピペラジニルからなる群より選択され；
Ｒｙは、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ヌクレオチド、ペプチド部分、アミノ酸、ホルムアミジニル部分、およびアシルからなる群より選択され；そして
Ｒｚは、不在、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、およびアシルからなる群より選択される］を有しているヌクレオチドおよびその薬学的に許容され得る塩を含む、アンチセンスオリゴヌクレオチド。
（項目２）
Ｎｕが、アデニン、グアニン、チミン、ウラシル、シトシン、およびヒポキサンチンからなる群より選択される、項目１に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
（項目３）
Ｎｕが、チミンまたはウラシルである、項目２に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
（項目４）
Ｒ１が以下からなる群より選択される、項目１に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド：
【化３】
2015506669.tif 000008
（項目５）
前記ヌクレオチドが式：
【化４】
2015506669.tif 000009
を有し、式中、Ｒｘ、Ｒｙ、Ｒｚ、およびＮｕは項目１に記載されたとおりである、項目１に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
（項目６）
Ｎｕがチミンである、項目５に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
（項目７）
（ＣＣＧ）ｎ、（ＣＴＧ）ｎ、（ＴＴＣ）ｎ、（ＮＧＣ）ｎ、（ＧＮＣ）ｎ、（ＣＡＧＧ）ｎ、（ＡＧＡＡＴ）ｎ、および（ＣＧＣＧ４ＣＧ４）ｎからなる群より選択される配列を含み、式中、Ｎが任意のヌクレオチドであり、ｎが３から１０までである、項目１に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
（項目８）
前記ヒトの疾患が、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、ならびに１型および２型筋強直性ジストロフィーからなる群より選択される、項目１に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
（項目９）
配列（ＧＣＴ）７を含む、項目８に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
（項目１０）
ＲｙがＧヌクレオチドである、項目９に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
（項目１１）
項目１に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチドと薬学的に許容され得る担体を含む、薬学的組成物。
（項目１２）
項目１１に記載の組成物を投与する工程を含む、被検体のハンチントン病の処置方法。
（項目１３）
式：
【化５】
2015506669.tif 000010
［Ｎｕ１、Ｎｕ２、およびＮｕ３は、アデニン、グアニン、チミン、ウラシル、シトシン、およびヒポキサンチンからなる群より選択されるヌクレオ塩基であり；
ｎは、約３から約１０までであり、ヌクレオチド配列（Ｎｕ１、Ｎｕ２、Ｎｕ３）のリピートの数を表しており；
Ｒ１は、式：
【化６】
2015506669.tif 000011
（ｑは、０、１、２、３、または４であり；
Ｒ２は、水素、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、ホルムアミジニル部分からなる群より選択され、そして
Ｒ３は、水素およびＣ１〜Ｃ５アルキルからなる群より選択されるか、または
Ｒ２とＲ３とが一緒になって酸素ヘテロ原子を随意に含有している５〜７員複素環を形成し、ここでは、前記環は、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、フェニル、ハロゲン、およびアラルキルからなる群より選択される置換基で随意に置換され得；
Ｒ４は、不在、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキルおよびアラルキルからなる群より選択される）
の部分であり；
Ｒｘは、ＨＯ−、ヌクレオチド、細胞透過性ペプチド部分、およびピペラジニルからなる群より選択され；
Ｒｙは、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ヌクレオチド、ペプチド部分、アミノ酸、ホルムアミジニル部分、およびアシルからなる群より選択され；そして
Ｒｚは、不在、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、およびアシルからなる群より選択される］を有している繰り返される３ヌクレオチドの配列およびその薬学的に許容され得る塩を含む、アンチセンスオリゴヌクレオチド。
（項目１４）
Ｎｕがチミンである、項目１３に記載のアンチセンスヌクレオチド。
（項目１５）
前記３ヌクレオチドの配列が、（ＣＣＧ）、（ＣＴＧ）、（ＴＴＣ）、（ＮＧＣ）、および（ＧＮＣ）からなる群より選択され、式中、Ｎは任意のヌクレオチドである、項目１３に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
（項目１６）
繰り返される３ヌクレオチドの配列が（ＧＣＴ）７である、項目１３に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
（項目１７）
ＲｙがＧヌクレオチドである、項目１３に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
（項目１８）
項目１３に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチドと薬学的に許容され得る担体を含む、薬学的組成物。
（項目１９）
項目１８に記載の組成物を投与する工程を含む、被検体のハンチントン病の処置方法。
（項目２０）
ｇ．ホモジナイズされた組織試料または細胞からの全ＲＮＡの抽出；
ｈ．ｍＲＮＡを単離する工程；
ｉ．ゲル電気泳動を使用して大きさによりｍＲＮＡを分離する工程；
ｊ．ｍＲＮＡをメンブレンにトランスファーする工程；
ｋ．ｍＲＮＡをメンブレンに固定する工程；および
ｌ．延長されたリピートを検出するためにプローブを使用する工程であって、ここでは、プローブが項目１に記載のオリゴヌクレオチドである工程
を含む、ノーザンブロッティングによる延長されたＤＮＡリピートと関係がある遺伝性障害の診断方法。