【手続補正書】
【提出日】平成28年2月16日(2016.2.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
マウスの生殖系列に存在する単一の再構成されたヒトＶκ１−３９／Ｊκ配列に由来する、ヒト免疫グロブリン軽鎖可変ドメインを各々発現するＢ細胞の集団を含む遺伝子改変マウスであって、該単一の再構成されたヒトＶκ１−３９／Ｊκ配列が、ヒト生殖系列Ｖκ１−３９遺伝子セグメントおよびヒト生殖系列Ｊκ遺伝子セグメントを含み、該単一の再構成されたヒトＶκ１−３９／Ｊκ配列は、免疫グロブリン軽鎖定常領域配列に作動可能に連結されており、該ヒト免疫グロブリン軽鎖可変ドメインは、該再構成されたヒトＶκ１−３９／Ｊκ配列と同一であるかまたは該再構成されたヒトＶκ１−３９／Ｊκ配列の体細胞超変異バリアントである配列から発現され、
該集団の該Ｂ細胞は、１−６９／６−１３／４、１−６９／６−６／５、２−５／３−２２／１、３−１３／６−６／５、３−２３／２−８／４、３−２３／６−６／４、３−２３／７−２７／４、３−３０／１−１／４、３−３０／３−３／４、３−３０／５−５／２および３−３０／７−２７／６からなる群から選択される再構成されたヒトＶＨ／Ｄ／ＪＨ領域に由来するヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインを発現する少なくとも１つのＢ細胞を含む、マウス。
【請求項２】
前記集団の前記Ｂ細胞が、１−６９／６−１３／４、１−６９／６−６／５、２−５／３−２２／１、３−１３／６−６／５、３−２３／２−８／４、３−２３／６−６／４、３−２３／７−２７／４、３−３０／１−１／４、３−３０／３−３／４、３−３０／５−５／２および３−３０／７−２７／６からなる群から選択される前記再構成されたヒトＶＨ／Ｄ／ＪＨ領域の各々に由来するヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインを一緒に発現する、請求項１に記載のマウス。
【請求項３】
前記集団の少なくとも１つのＢ細胞によって発現される前記ヒト免疫グロブリン軽鎖可変ドメインが、前記再構成されたヒトＶκ１−３９／Ｊκ配列の体細胞変異されたバリアントから発現されるという点で該再構成されたヒトＶκ１−３９／Ｊκ配列に由来する、請求項１〜２のいずれか一項に記載のマウス。
【請求項４】
前記再構成されたヒトＶκ１−３９／Ｊκ配列が、
（ａ）ヒト生殖系列Ｖκ１−３９遺伝子セグメントおよびヒト生殖系列Ｊκ５遺伝子セグメントを含む再構成されたヒトＶκ１−３９／Ｊκ５配列であり；
（ｂ）マウスＣκ領域に作動可能に連結されており；
（ｃ）内因性の再構成されていない免疫グロブリンＶκ遺伝子セグメントおよび内因性の再構成されていない免疫グロブリンＪκ遺伝子セグメントと置き換わるように配置されており；
（ｄ）すべての機能的で内因性の再構成されていない免疫グロブリンＶκ遺伝子セグメントおよび内因性の再構成されていない免疫グロブリンＪκ遺伝子セグメントと置き換わるように配置されており；ならびに／または
（ｅ）マウスまたはラットの免疫グロブリン軽鎖定常領域配列から選択される免疫グロブリン軽鎖定常領域配列に作動可能に連結されている、
請求項１〜３のいずれか一項に記載のマウス。
【請求項５】
前記ヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインをコードする配列が
（ａ）ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３もしくはそれらの組み合わせをコードするマウス免疫グロブリン重鎖定常（ＣＨ）領域配列に作動可能に連結されている；および／または
（ｂ）内因性免疫グロブリン重鎖遺伝子座内に存在する
請求項１に記載のマウス。
【請求項６】
前記遺伝子改変マウスの前記生殖系列が、免疫グロブリン軽鎖の発現に機能的な内因性の再構成されていない免疫グロブリンＶκ遺伝子セグメントをいずれも欠いており、該遺伝子改変マウスの該生殖系列が、免疫グロブリン軽鎖の発現に機能的な内因性の再構成されていない免疫グロブリンＪκ遺伝子セグメントをいずれも欠いている、請求項１に記載のマウス。
【請求項７】
マウスの生殖系列に存在する単一の再構成されたヒトＶκ３−２０／Ｊκ配列に由来するヒト免疫グロブリン軽鎖可変ドメインを各々が発現するＢ細胞の集団を含む遺伝子改変マウスであって、該単一の再構成されたヒトＶκ３−２０／Ｊκ配列が、ヒト生殖系列Ｖκ３−２０遺伝子セグメントおよびヒト生殖系列Ｊκ遺伝子セグメントを含み、該単一の再構成されたヒトＶκ３−２０／Ｊκ配列は、免疫グロブリン軽鎖定常領域配列に作動可能に連結されており、該ヒト免疫グロブリン軽鎖可変ドメインが、該再構成されたヒトＶκ３−２０／Ｊκ配列と同一であるかまたは該再構成されたヒトＶκ３−２０／Ｊκ配列の体細胞超変異バリアントである配列から発現され；
該集団の該Ｂ細胞は、３−３０／３−３／３、３−３３／１−７／４、３−３３／２−１５／４および３−５３／１−１／４からなる群から選択される再構成されたヒトＶＨ／Ｄ／ＪＨ領域に由来するヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインを発現する少なくとも１つのＢ細胞を含む、マウス。
【請求項８】
前記集団の前記Ｂ細胞が、３−３０／３−３／３、３−３３／１−７／４、３−３３／２−１５／４および３−５３／１−１／４からなる群から選択される前記再構成されたヒトＶＨ／Ｄ／ＪＨ領域の各々に由来するヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインを一緒に発現する、請求項７に記載のマウス。
【請求項９】
前記集団の少なくとも１つのＢ細胞によって発現される前記ヒト免疫グロブリン軽鎖可変ドメインが、前記再構成されたヒトＶκ３−２０／Ｊκ配列の体細胞変異されたバリアントから発現されるという点で該再構成されたヒトＶκ３−２０／Ｊκ配列に由来する、請求項７に記載のマウス。
【請求項１０】
前記再構成されたヒトＶκ３−２０／Ｊκ配列が、
（ａ）ヒト生殖系列Ｖκ３−２０遺伝子セグメントおよびヒト生殖系列Ｊκ１遺伝子セグメントを含む再構成されたヒトＶκ３−２０／Ｊκ１配列であり；
（ｂ）マウスＣκ領域に作動可能に連結されており；
（ｃ）内因性の再構成されていない免疫グロブリンＶκ遺伝子セグメントおよび内因性の再構成されていない免疫グロブリンＪκ遺伝子セグメントと置き換わるように配置されており；
（ｄ）すべての機能的で内因性の再構成されていない免疫グロブリンＶκ遺伝子セグメントおよび内因性の再構成されていない免疫グロブリンＪκ遺伝子セグメントと置き換わるように配置されており；ならびに／または
（ｅ）マウスまたはラットの免疫グロブリン軽鎖定常領域配列から選択される免疫グロブリン軽鎖定常領域配列に作動可能に連結されている、
請求項７に記載のマウス。
【請求項１１】
前記ヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインをコードする配列が
（ａ）ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３もしくはそれらの組み合わせをコードするマウス免疫グロブリン重鎖定常（ＣＨ）領域配列に作動可能に連結されている；および／または
（ｂ）内因性免疫グロブリン重鎖遺伝子座内に存在する
請求項７に記載のマウス。
【請求項１２】
前記遺伝子改変マウスの前記生殖系列が、免疫グロブリン軽鎖の発現に機能的な内因性の再構成されていない免疫グロブリンＶκ遺伝子セグメントをいずれも欠いており、該遺伝子改変マウスの該生殖系列が、免疫グロブリン軽鎖の発現に機能的な内因性の再構成されていない免疫グロブリンＪκ遺伝子セグメントをいずれも欠いている、請求項７に記載のマウス。
【請求項１３】
遺伝子改変マウスを使用して抗体を作製する方法であって、該マウスは、該マウスが、抗体を発現するＢ細胞の集団を含み、該抗体が各々、該マウスの生殖系列に存在する単一の再構成されたヒトＶκ１−３９／Ｊκ配列に由来する、ヒト免疫グロブリン軽鎖可変ドメインを含み、該単一の再構成されたヒトＶκ１−３９／Ｊκ配列が、ヒト生殖系列Ｖκ１−３９遺伝子セグメントおよびヒト生殖系列Ｊκ遺伝子セグメントを含み、該単一の再構成されたヒトＶκ１−３９／Ｊκ配列が、免疫グロブリン軽鎖定常領域配列に作動可能に連結されており、該ヒト免疫グロブリン軽鎖可変ドメインが、該再構成されたヒトＶκ１−３９／Ｊκ配列と同一であるかまたは該再構成されたヒトＶκ１−３９／Ｊκ配列の体細胞超変異バリアントである配列から発現され、Ｂ細胞の該集団によって発現される少なくとも一つの抗体が、ヒトＶＨ１−６９遺伝子セグメントに由来するヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインを含む、ことを特徴とする、方法。
【請求項１４】
Ｂ細胞の前記集団によって発現される少なくとも一つの抗体が、１−６９／６−１３／４、１−６９／６−６／５、２−５／３−２２／１、３−１３／６−６／５、３−２３／２−８／４、３−２３／６−６／４、３−２３／７−２７／４、３−３０／１−１／４、３−３０／３−３／４、３−３０／５−５／２および３−３０／７−２７／６からなる群から選択される再構成されたヒトＶＨ／Ｄ／ＪＨ領域に由来するヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインを含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
遺伝子改変マウスを使用して抗体を作製する方法であって、該マウスは、該マウスが、抗体を発現するＢ細胞の集団を含み、該抗体が各々、該マウスの生殖系列に存在する単一の再構成されたヒトＶκ３−２０／Ｊκ配列に由来するヒト免疫グロブリン軽鎖可変ドメインを含み、該単一の再構成されたヒトＶκ３−２０／Ｊκ配列が、ヒト生殖系列Ｖκ３−２０遺伝子セグメントおよびヒト生殖系列Ｊκ遺伝子セグメントを含み、該単一の再構成されたヒトＶκ３−２０／Ｊκ配列が、免疫グロブリン軽鎖定常領域配列に作動可能に連結されており、該ヒト免疫グロブリン軽鎖可変ドメインが、該再構成されたヒトＶκ３−２０／Ｊκ配列と同一であるかまたは該再構成されたヒトＶκ３−２０／Ｊκ配列の体細胞超変異バリアントである配列から発現され、Ｂ細胞の該集団によって発現される少なくとも一つの抗体が、ヒトＶＨ３−５３遺伝子セグメントに由来するヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインを含むことを特徴とする、方法。
【請求項１６】
Ｂ細胞の前記集団によって発現される少なくとも１つの抗体は、３−３０／３−３／３、３−３３／１−７／４、３−３３／２−１５／４および３−５３／１−１／４からなる群から選択される再構成されたヒトＶＨ／Ｄ／ＪＨ領域に由来するヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインを含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記遺伝子改変マウスを使用して作製される前記抗体が、完全にヒトの抗体である、請求項１３〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記遺伝子改変マウスを使用して作製される前記抗体が、二重特異性抗体である、請求項１３〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記抗体が、ヒトＶＨ１−６９遺伝子セグメント、ならびに／または１−６９／６−１３／４、１−６９／６−６／５、２−５／３−２２／１、３−１３／６−６／５、３−２３／２−８／４、３−２３／６−６／４、３−２３／７−２７／４、３−３０／１−１／４、３−３０／３−３／４、３−３０／５−５／２および３−３０／７−２７／６からなる群から選択される１つもしくはそれより多くの再構成されたヒトＶＨ／Ｄ／ＪＨ領域に由来する、請求項１３〜１４および１７〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記抗体が、ヒトＶＨ３−５３遺伝子セグメント、ならびに／または３−３０／３−３／３、３−３３／１−７／４、３−３３／２−１５／４および３−５３／１−１／４からなる群より選択される１もしくはそれより多くの再構成されたヒトＶＨ／Ｄ／ＪＨ領域に由来する、請求項１５〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
請求項１３〜２０のいずれか一項に記載の方法によって作製された抗体。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９９】
本明細書に記載される実施形態および態様のいずれも、特に明記しない限り、または文脈から明らかでない限り、互いに一緒に用いることができる。他の実施形態は、後に続く記載の概観から当業者にとって明らかになる。
特定の実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
マウスの生殖系列の単一のヒト軽鎖配列に由来する、ヒト軽鎖可変（ＶＬ）ドメインの限定されたレパートリーまたは単一のヒトＶＬドメインを発現するＢ細胞集団を含む遺伝子改変マウスであって、再構成されていない内因性免疫グロブリンＶκ遺伝子セグメント、再構成されていない内因性免疫グロブリンκ軽鎖連結（Ｊκ）遺伝子セグメントまたはその組合せを欠き；免疫グロブリン軽鎖ＶκおよびＪκ遺伝子セグメントの野生型相補体を含むマウスとほぼ同じであるκ：λ軽鎖比を示すマウス。
（項目２）
前記単一のヒト軽鎖配列が、再構成されたヒト免疫グロブリン軽鎖配列である、項目１に記載のマウス。
（項目３）
約５５：１から７５：１であるκ：λ比を示す、項目１または２に記載のマウス。
（項目４）
約１８：１から２３：１であるκ：λ比を示す、項目１または２に記載のマウス。
（項目５）
前記ヒト軽鎖配列が、マウス、ラットおよびヒトの配列から選択される免疫グロブリン軽鎖定常領域配列に作動可能に連結される、項目１から４のいずれか一項に記載のマウス。
（項目６）
前記再構成されたヒト免疫グロブリン軽鎖配列がヒトＶκおよびＪκ遺伝子セグメントを含む、項目２に記載のマウス。
（項目７）
前記ヒトＶκセグメントが、ヒトＶκ１−３９およびヒトＶκ３−２０から選択され、前記ヒトＪκ遺伝子セグメントが、ヒトＪκ１およびヒトＪκ５から選択される、項目６に記載のマウス。
（項目８）
単一の再構成されたヒトκ軽鎖配列に由来するヒトκ軽鎖を発現する遺伝子改変マウスであって、再構成されていない内因性免疫グロブリンＶκ遺伝子セグメント、再構成されていない内因性免疫グロブリンＪκ遺伝子セグメントまたはその組合せを欠き；完全であるかまたは実質的に完全であるヒトκ軽鎖遺伝子座を有するマウスによって示される同じκ軽鎖の使用より約１００倍以上、少なくとも約２００倍以上、少なくとも約３００倍以上、少なくとも約４００倍以上、少なくとも約５００倍以上、少なくとも約６００倍以上、少なくとも約７００倍以上、少なくとも約８００倍以上、少なくとも約９００倍以上、少なくとも約１０００倍以上大きいκ軽鎖の使用を示すマウス。
（項目９）
前記再構成されたヒトκ軽鎖配列がヒトＶκ１−３９配列を含む、項目８に記載のマウス。
（項目１０）
前記再構成されたヒトκ軽鎖配列がヒトＶκ１−３９Ｊκ５配列である、項目８または７に記載のマウス。
（項目１１）
前記再構成されたヒトκ軽鎖配列がヒトＶκ３−２０Ｊκ１配列である、項目８または７に記載のマウス。
（項目１２）
前記再構成されたヒトκ軽鎖配列がマウス免疫グロブリンκ定常（Ｃκ）領域に作動可能に連結される、項目８、９、１０または１１に記載のマウス。
（項目１３）
再構成されたヒトＶκ１−３９／Ｊκ５配列に由来するヒトＶＬドメインを発現するＢ細胞を含む遺伝子改変マウスであって、再構成されていない内因性免疫グロブリンＶκ遺
伝子セグメントおよび再構成されていない内因性免疫グロブリンＪκ遺伝子セグメントを欠き；該ヒトＶＬドメインが、２−５／３−２２／１、３−１３／６−６／５、３−２３／２−８／４、３−２３／６−６／４、３−２３／７−２７／４、３−３０／１−１／４、３−３０／３−３／４、３−３０／５−５／２、３−３０／７−２７／６、１−６９／６−６／５および１−６９／６−１３／４から選択される再構成されたヒトＶＨ／ＤＨ／ＪＨ領域に由来するヒト重鎖可変（ＶＨ）ドメインと会合しているマウス。
（項目１４）
前記ヒトＶκ１−３９／Ｊκ５配列がマウスＣκ領域に作動可能に連結される、項目１３に記載のマウス。
（項目１５）
前記ヒトＶＨドメインが、ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３およびその組合せから選択されるマウス重鎖定常（ＣＨ）領域配列に作動可能に連結される、項目１３に記載のマウス。
（項目１６）
前記ヒトＶＨドメインが内因性免疫グロブリン重鎖遺伝子座から発現される、項目１３に記載のマウス。
（項目１７）
再構成されたヒトＶκ３−２０／Ｊκ１配列に由来するヒトＶＬドメインを発現するＢ細胞を含む遺伝子改変マウスであって、再構成されていない内因性免疫グロブリンＶκ遺伝子セグメントおよび再構成されていない内因性免疫グロブリンＪκ遺伝子セグメントを欠き；該ヒトＶＬドメインが、３−３０／３−３／３、３−３３／１−７／４、３−３３／２−１５／４および３−５３／１−１／４から選択される再構成されたヒトＶＨ／ＤＨ／ＪＨ領域に由来するヒトＶＨドメインと会合しているマウス。
（項目１８）
前記ヒトＶκ３−２０／Ｊκ１配列がマウスＣκ領域に作動可能に連結される、項目１７に記載のマウス。
（項目１９）
前記ヒトＶＨドメインが、ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３およびその組合せから選択されるマウスＣＨ領域配列に作動可能に連結される、項目１７に記載のマウス。
（項目２０）
前記ヒトＶＨドメインが内因性免疫グロブリン重鎖遺伝子座から発現される、項目１７に記載のマウス。