【手続補正書】
【提出日】平成28年10月28日(2016.10.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下によって表される化合物を含む、インテグリン陽性腫瘍細胞にＲＮＡｉトリガーをインビボで送達するための医薬組成物：
Ｒ−Ｌ−Ｐ−ＲＮＡｉトリガー
式中、Ｒは、ＲＧＤ模倣体を含み、Ｌは生理学的に不安定な連結を含み、Ｐは膜活性ポリアミンを含む。
【請求項２】
前記インテグリンがαｖβ３インテグリンである、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記ＲＧＤ模倣体が、アミド結合を介してグリシン−アスパラギン酸ジペプチドに連結したグアニジニウム基を含む、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
Ｌが
Ａ１Ａ２−アミドベンジル−カルバマート
（式中、Ａ１は、疎水性アミノ酸であり、Ａ２は、アミド結合を介してＡ１に連結した非荷電親水性アミノ酸であり、該非荷電親水性アミノ酸は、中性ｐＨで非荷電である。）
を含む、請求項３に記載の医薬組成物：
【請求項５】
Ａ１が、アラニン、フェニルアラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、およびトリプトファンからなる群より選択される、請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項６】
Ａ２が、シトルリン、スレオニン、アスパラギン、およびグルタミンからなる群より選択される、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
Ｒ−Ａ１Ａ２−アミドベンジル−カルバマート−Ｐが、以下によって表される構造を有する、請求項６に記載の医薬組成物：
2016535058.tif 000001
式中、Ｒ４は、ＲＧＤ模倣体を含み、Ｒ１は、疎水性アミノ酸の側基であり、Ｒ２は、非荷電親水性アミノ酸の側基であり、ポリアミンは、膜活性ポリアミンＰである。
【請求項８】
前記ＲＧＤ模倣体が、以下によって表される構造を含む、請求項３に記載の医薬組成物：
2016535058.tif 000002
。
【請求項９】
前記グアニジニウムが、
2016535058.tif 000003
およびその共鳴構造、または
2016535058.tif 000004
およびその共鳴構造
より選択される、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
膜活性ポリアミンが可逆的に修飾されている、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記化合物が、生理学的に不安定な可逆的共有結合を介して前記膜活性ポリアミンに連結したポリエチレングリコールをさらに含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記化合物が以下によって表される構造を有する、請求項１１に記載の医薬組成物：
2016535058.tif 000005
式中、Ｎは、ＲＮＡｉトリガーであり、Ｌ１は、任意であり、存在する場合には、生理学的に不安定な連結であり、ＰＥＧは、ポリエチレングリコールを含み、ｙは、ゼロより大きい整数であり、ｚは、ゼロより大きい整数である。
【請求項１３】
以下によって表される構造を含む、ＲＧＤ模倣体含有化合物：
Ｒ−Ａ１Ａ２−アミドベンジル−カルボナート
式中、Ｒは、ＲＧＤ模倣体を含み、Ａ１は、疎水性アミノ酸であり、Ａ２は、アミド結合を介してＡ１に連結した非荷電親水性アミノ酸であり、カルボナートは、アミンと反応でき、カルバマートを形成する、アミン反応性カルボナート部分を含む。
【請求項１４】
Ａ１が、アラニン、フェニルアラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、およびトリプトファンからなる群より選択される、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１５】
Ａ２が、シトルリン、スレオニン、アスパラギン、およびグルタミンからなる群より選択される、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１６】
Ｒ−Ａ１Ａ２−アミドベンジル−カルボナートが、以下によって表される構造を有する、請求項１５に記載の化合物：
2016535058.tif 000006
式中、Ｒ１は、疎水性アミノ酸Ａ１の側基であり、Ｒ２は、非荷電親水性アミノ酸Ａ２の側基であり、Ｒ３は、−ＣＨ２−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｚであり、ここで−Ｚは、
2016535058.tif 000007
である。
【請求項１７】
前記ＲＧＤ模倣体が、以下によって表される構造を含む、請求項１３に記載の化合物：
2016535058.tif 000008
ここで、該グアニジニウムは、
2016535058.tif 000009
およびその共鳴構造、または
2016535058.tif 000010
およびその共鳴構造から選択される。
【請求項１８】
前記ＲＧＤ模倣体が、ＰＥＧ連結部分を含む、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１９】
（ａ）Ｒ１が、−ＣＨ３、−（ＣＨ２）−フェニル、−ＣＨ−（ＣＨ３）２、−ＣＨ２−ＣＨ−（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ２−ＣＨ３、およびトリプトファンからなる群より選択され、
（ｂ）Ｒ２が、−（ＣＨ２）３−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ２、−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ２、および−（ＣＨ２）２−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ２からなる群より選択される、
請求項１６に記載の化合物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１８】
一実施形態において、ＲＧＤリガンドは、ＲＧＤリガンドのジペプチドへの連結およびマスキング剤の可溶性を助長するリンカーを用いてジペプチドに連結される。好ましいマスキング剤は、一般式：ＲＧＤリガンド−ＰＥＧ１−ジアリールヒドラゾン−ＰＥＧ２−ジペプチド−アミドベンジル−カルボナートを有する。各要素は、アミド結合の形成などの当該技術分野にて標準的な方法を用いて連結することができる。ジアリールヒドラゾンは、ＨｙＮｉｃ（ヒドラジノ−ニコチンアミド）とアリールアルデヒドとの反応によって生成することができる。ＰＥＧ１は、（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎを含み、ＰＥＧ２は（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎを含む。ｎおよびｍは、独立して、４以上の整数であり、ｎとｍの和は、１２〜４８である。ＰＥＧ基は、ＲＧＤリガンドの溶解性および提示を助長し、これにより、修飾ポリアミンの腫瘍標的化が向上する。驚くべきことに、ジアリールヒドラゾンはまた、修飾ポリアミンのインビボ機能も向上させる。一実施形態において、アリールアルデヒド−ＰＥＧ２−ジペプチド−アミドベンジル−カルボナートを、初めにポリアミンと反応させて、アリールアルデヒド−ＰＥＧ２−ジペプチド−アミドベンジル−カルバマート−ポリアミンを生成する。次いで、この化合物をＲＧＤリガンド−ＰＥＧ１−ＨｙＮｉｃと反応させて、ＲＧＤリガンド−ＰＥＧ１−ジアリールヒドラゾン−ＰＥＧ２−ジペプチド−アミドベンジル−カルボマート−ポリアミンを生成する。
[本発明1001]
次式によって表される構造を含む、インテグリン陽性腫瘍細胞にＲＮＡｉトリガーをインビボで送達するための化合物：
Ｒ−Ａ1Ａ2−アミドベンジル−カルバマート−Ｐ
式中、Ｒは、ＲＧＤリガンドを含み、Ａ1は、疎水性アミノ酸であり、Ａ2は、アミド結合を介してＡ1に連結した非荷電親水性アミノ酸であり、該非荷電親水性アミノ酸は、中性ｐＨで非荷電であり、Ｐは、膜活性ポリアミンを含む。
[本発明1002]
Ａ1が、アラニン、フェニルアラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、およびトリプトファンからなる群から選択される、本発明1001の化合物。
[本発明1003]
Ａ2が、シトルリン、グリシン、スレオニン、アスパラギン、およびグルタミンからなる群から選択される、本発明1001〜1002のいずれかの化合物。
[本発明1004]
前記インテグリンがαｖβ3インテグリンである、本発明1001〜1003のいずれかの化合物。
[本発明1005]
Ｒ−Ａ1Ａ2−アミドベンジル−カルバマート−Ｐが、次式によって表される構造を有する、本発明1001〜1004のいずれかの化合物：
2016535058.tif 000011
式中、Ｒ4は、ＲＧＤリガンドを含み、Ｒ1は、疎水性アミノ酸の側基であり、Ｒ2は、非荷電親水性アミノ酸の側基であり、ポリアミンは、膜活性ポリアミンＰである。
[本発明1006]
前記ＲＧＤリガンドがＲＧＤ模倣体を含む、本発明1001〜1005のいずれかの化合物。
[本発明1007]
前記ＲＧＤ模倣体が、アミド結合を介してグリシン−アスパラギン酸ジペプチドに連結したグアニジニウム基を含む、本発明1006の化合物。
[本発明1008]
前記ＲＧＤ模倣体が、次式によって表される構造を含む、本発明1007の化合物：
2016535058.tif 000012
。
[本発明1009]
前記グアニジニウムが、
2016535058.tif 000013
およびその共鳴構造、ならびに
2016535058.tif 000014
およびその共鳴構造から選択される、本発明1008の化合物。
[本発明1010]
Ｒが、
ＲＧＤ模倣体−ＰＥＧ1−ジアリールヒドラゾン−ＰＥＧ2を含み、
式中、
ＰＥＧ1は（ＣＨ2−ＣＨ2−Ｏ）ｎを含み、
ＰＥＧ2は（ＣＨ2−ＣＨ2−Ｏ）ｍを含み、
ｎおよびｍは、独立して、4以上の整数であり、
ｎとｍの和は、12〜48であり、
ＲＧＤ模倣体は、次式によって表される構造からなり、
2016535058.tif 000015
式中、Ｒ14は、
2016535058.tif 000016
およびその共鳴構造、ならびに
2016535058.tif 000017
およびその共鳴構造からなる群から選択される、
本発明1001〜1005のいずれかの化合物。
[本発明1011]
生理学的に不安定な可逆的共有結合を介して前記膜活性ポリアミンに連結したポリエチレングリコールをさらに含む、本発明1001〜1010のいずれかの化合物。
[本発明1012]
前記ＲＮＡｉトリガーが前記膜活性ポリアミンに共有結合している、本発明1001〜1011のいずれかの化合物。
[本発明1013]
次式によって表される構造を有する、本発明1012の化合物：
2016535058.tif 000018
式中、Ｎは、ＲＮＡｉトリガーであり、Ｌ1は、生理学的に不安定な連結であり、ＰＥＧは、ポリエチレングリコールを含み、Ｌ2は、Ａ1Ａ2−アミドベンジル−カルバマートであり、ｙは、ゼロより大きい整数であり、ｚは、ゼロより大きい整数であり、ｙとｚの和の値は、修飾されていない膜活性ポリアミン上のアミンの数により求めた膜活性ポリアミンＰ上に存在するアミンの数の50％よりも大きい。
[本発明1014]
Ｐ−Ｌ2−Ｒが、
Ｒ−ＰＥＧ'−ジアリールヒドラゾン−ＰＥＧ''−ＡＡ−アミドベンジルカルバマート−ポリアミンを含み、
式中、
Ｒは、次式によって表される構造を有し、
2016535058.tif 000019
ＰＥＧ'は、次式によって表される構造を有し、
2016535058.tif 000020
式中、Ｎ＝4〜44であり、
ジアリールヒドラゾンは、次式によって表される構造を有し、
2016535058.tif 000021
ＰＥＧ''は、次式によって表される構造を有し、
2016535058.tif 000022
式中、ｍは4〜44であり、
ＡＡ−アミドベンジルカルバマート−ポリアミンは、次式によって表される構造を有し、
2016535058.tif 000023
式中、ポリアミンは、膜活性ポリアミンＰである、
本発明1013の化合物。
[本発明1015]
以下の段階を含む、インテグリン陽性腫瘍細胞にＲＮＡｉトリガーをインビボで送達するための化合物を生成するために、膜活性ポリアミンを可逆的に修飾するための方法：
（ａ）前記ポリアミン上の1つまたは複数のアミンを、次式によって表される構造をそれぞれ有する1つまたは複数の第1の化合物と反応させることにより、前記1つまたは複数のアミンを可逆的に修飾する段階：
2016535058.tif 000024
式中、Ｒ3は、前記アミンと反応してカルバマートを生成することができるアミン反応性カルボナート部分を含み、Ｒ7は、前記アミン反応性カルボナートよりもアミン反応性の低い第1の反応性基を含み、Ｒ1は、疎水性アミノ酸の側基であり、Ｒ2は、非荷電親水性アミノ酸の側鎖であり、ならびに
（ｂ）Ｒ7を、次式によって表される構造を有する第2の化合物と反応させる段階：
2016535058.tif 000025
式中、Ｒ14は、
2016535058.tif 000026
からなる群から選択され、
Ａは、前記Ｒ7の第1の反応性基と反応して共有結合を形成することができる第2の反応性基に連結した、4〜44のエトキシ単位を有するポリエチレングリコールを含む。
[本発明1016]
Ｒ7が、4〜44のエトキシ単位を有するポリエチレングリコール基をさらに含む、本発明1015の方法。
[本発明1017]
前記ポリアミン上の1つまたは複数のアミンを、次式によって表される構造をそれぞれ有する1つまたは複数の化合物と反応させることにより、前記1つまたは複数のアミンを可逆的に修飾する段階をさらに含む、本発明1015〜1016のいずれかの方法：
ＰＥＧ−Ａ1Ａ2−アミドベンジル−カルボナート
ＰＥＧは、ポリエチレングリコールを含み、Ａ1は、疎水性アミノ酸であり、Ａ2は、アミド結合を介してＡ1に連結した非荷電親水性アミノ酸であり、該非荷電親水性アミノ酸は、中性ｐＨで非荷電である。
[本発明1018]
前記ポリアミン上のアミンの数の80％以上が可逆的に修飾され、該修飾されたポリアミンが膜活性でない、本発明1015〜1017のいずれかの方法。
[本発明1019]
ＲＮＡｉトリガー分子が、生理学的に不安定な結合を介して前記ポリアミンに共有結合される、本発明1015〜1018のいずれかの方法。
[本発明1020]
前記インテグリンがαｖβ3インテグリンである、本発明1015〜1019のいずれかの方法。