【手続補正書】
【提出日】平成28年3月28日(2016.3.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）ＳＡＭＨＤ１阻害活性を保持するＶｐｘタンパク質またはＶｐｒタンパク質と、（ｂ）抗原をコードする外因性ポリヌクレオチドと、（ｃ）ＤＣ−ＳＩＧＮを発現する細胞に優先的に結合する複数のエンベロープ糖タンパク質とを含む偽型レンチウイルスベクター粒子を含む組成物であって、マンノシダーゼ阻害剤の不在下で調製された同じ偽型レンチウイルスベクター粒子の対照組成物と比較して、より高度にマンノシル化されている、組成物。
【請求項２】
前記エンベロープ糖タンパク質が、アルファウイルス糖タンパク質またはシンドビス糖タンパク質から成る群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
高マンノシル化が、マンノシダーゼ阻害剤の不在下で調製された対照組成物よりもさらにＥｎｄｏＨ感受性であることを特徴とする、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
ＥｎｄｏＨ感受性が、ＥｎｄｏＨ処理後、ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）によって、前記エンベロープ糖タンパク質の分子量を評価することによって判定される、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
ＥｎｄｏＨによる処理後の前記エンベロープ糖タンパク質の分子量が、（ａ）エンドグリコシダーゼにより処理されないエンベロープ糖タンパク質と、（ｂ）ＰＮＧａｓｅ  Ｆにより処理されたエンベロープ糖タンパク質との間の距離の約４５％以上、約７０％以上、または約９０％以上シフトしている、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
前記組成物中の前記エンベロープ糖タンパク質のうちの少なくとも３０％が、マンノシダーゼ阻害剤の不在下で調製された偽型レンチウイルスベクター粒子の対照組成物中の同じアミノ酸配列（複数を含む）を有する対照糖タンパク質と比較して、増加した量のＥｎｄｏＨ感受性グリカンを有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
前記偽型レンチウイルスベクター粒子が、組み込み不能である、請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
前記組成物が、シンドビスＥ２糖タンパク質、配列番号３０［ＳＩＮ−Ｖａｒ１］と９０％同一であるシンドビスＥ２糖タンパク質、配列番号３０［ＳＩＮ−Ｖａｒ１］と９０％同一であるシンドビスＥ２糖タンパク質であって、（ｉ）前記Ｅ２糖タンパク質の残基１６０が、不在であるか、またはグルタミン酸以外のアミノ酸であり、（ｉｉ）前記Ｅ２糖タンパク質変異体の残基７０、７６、もしくは１５９のうちの１つ以上が、非塩基性残基であり、（ｉｉｉ）前記Ｅ２糖タンパク質変異体が、シンドビスウイルスＥ３糖タンパク質との融合タンパク質の一部ではない、シンドビスＥ２糖タンパク質、あるいは配列番号３０［ＳＩＮ−Ｖａｒ１］に示されるシンドビスＥ２糖タンパク質から成る群から選択される糖タンパク質を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
前記Ｖｐｘタンパク質が、ＳＩＶｍａｃ  Ｖｐｘ［配列番号４４］と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含むか、あるいは前記Ｖｐｘタンパク質が、ＳＩＶｍａｃ  Ｖｐｘ（配列番号４４）、ＳＩＶｓｍ  Ｖｐｘ（配列番号４５）、ＳＩＶｒｃｍ  Ｖｐｘ（配列番号４６）、またはＨＩＶ−２  Ｖｐｘ（配列番号４７）と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むか、あるいは前記Ｖｐｘタンパク質が、ＳＩＶｄｅｂ  Ｖｐｒ（配列番号４８）またはＳＩＶｍｕｓ  Ｖｐｒ（配列番号４９）と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
前記抗原が、
（ａ）腫瘍特異的抗原またはウイルス特異的抗原である；
（ｂ）ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＭＡＧＥ、ＭＡＲＴ−１／Ｍｅｌａｎ−Ａ、ＢＡＧＥ、ＲＡＧＥ、ｇｐ１００、ｇｐ７５、ｍｄａ−７、チロシナーゼ、チロシナーゼ関連タンパク質、腎細胞癌抗原、５Ｔ４、ＳＭ２２−アルファ、炭酸脱水酵素Ｉ、炭酸脱水酵素ＩＸ（Ｇ２５０としても知られる）、ＨＩＦ−１アルファ、ＨＩＦ−２アルファ、ＶＥＧＦ、前立腺特異性膜抗原（ＰＳＭＡ）、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、前立腺酸性リン酸塩、前立腺の６−膜貫通上皮抗原（ＳＴＥＡＰ）、ＮＫＸ３．１、テロメラーゼ酵素、スルビビン、メソテリン、変異型ｒａｓ、ｂｃｒ／ａｂｌ再構成、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、変異型ｐ５３、野生型ｐ５３、サイトクロームＰ４５０  １Ｂ１、Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ−Ｖ、ヒトパピローマウイルスタンパク質Ｅ６、ヒトパピローマウイルスタンパク質Ｅ７、癌胎児性抗原、およびアルファ−フェトタンパク質から成る群から選択される；あるいは
（ｃ）ＨＩＶ抗原、ＳＩＶ抗原、アデノウイルス抗原、エンテロウイルス抗原、コロナウイルス抗原、カリシウイルス抗原、ジステンパーウイルス抗原、エボラウイルス抗原、フラビウイルス抗原、肺炎ウイルス抗原、ヘルペスウイルス抗原、感染性腹膜炎ウイルス抗原、インフルエンザウイルス抗原、白血病ウイルス抗原、マールブルグウイルス抗原、オルトミクソウイルス抗原、パピローマウイルス抗原、パラインフルエンザウイルス抗原、パラミクソウイルス抗原、パラボウイルス抗原、ペスチウイルス抗原、ピコルナウイルス抗原、ポリオウイルス抗原、ポックスウイルス抗原、狂犬病ウイルス抗原、レオウイルス抗原、レトロウイルス抗原、またはロタウイルス抗原である、
請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
前記レンチウイルスベクターが、第２の抗原をコードするヌクレオチド配列をさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１２】
前記第１および第２の抗原が、前記２つの抗原の間に自己切断型Ａ２ペプチドを含む融合タンパク質として発現される、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
自己切断型Ａ２ペプチドが、配列番号５６または配列番号５７のアミノ酸配列を含む、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
前記第１の抗原が、ＮＹ−ＥＳＯ−１であり、前記第２の抗原が、ＭＡＧＥ−Ａ３である、請求項１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１５】
前記第１および第２の抗原が、二方向性プロモーターから発現される、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１６】
前記エンベロープ糖タンパク質が、マウスＳＩＧＮＲ１を発現する細胞に結合する、請求項１に記載の組成物。
【請求項１７】
前記偽型レンチウイルスベクター粒子が、マウスＳＩＧＮＲ１を発現しない細胞と比較して、マウスＳＩＧＮＲ１を発現する細胞をより効率的に形質導入する、請求項１に記載の組成物。
【請求項１８】
偽型レンチウイルスベクター粒子を生成する方法であって、
（ａ）キフネンシンを含む培養培地中で、
（１）外因性抗原をコードするポリヌクレオチドを含むレンチウイルスベクターゲノムと、
（２）ＤＣ−ＳＩＧＮを発現する樹状細胞に優先的に結合するシンドビスＥ２糖タンパク質をコードするポリヌクレオチドと、
（３）ＳＡＭＨＤ１阻害活性を保持するＶｐｘタンパク質またはＶｐｒタンパク質をコードするポリヌクレオチドと、を含むウイルスパッケージング細胞を培養することと、
（ｂ）ＤＣ−ＳＩＧＮを発現する樹状細胞に優先的に結合する偽型レンチウイルスベクター粒子を単離することと、を含む、方法。
【請求項１９】
（ａ）前記Ｅ２糖タンパク質が、配列番号３０［ＳＩＮ−Ｖａｒ１］と９０％同一である；
（ｂ）（ｉ）前記Ｅ２糖タンパク質の残基１６０が、不在であるか、またはグルタミン酸以外のアミノ酸であり、（ｉｉ）前記Ｅ２糖タンパク質変異体の残基７０、７６、または１５９のうちの１つ以上が、非塩基性残基であり、（ｉｉｉ）前記Ｅ２糖タンパク質変異体が、シンドビスウイルスＥ３糖タンパク質との融合タンパク質の一部ではない、あるいは
（ｃ）前記Ｅ２糖タンパク質が、配列番号３０［ＳＩＮ−Ｖａｒ１］である、
請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
（ａ）前記Ｖｐｘタンパク質が、ＳＩＶｍａｃ  Ｖｐｘ［配列番号４４］と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｂ）前記Ｖｐｘタンパク質が、ＳＩＶｍａｃ  Ｖｐｘ（配列番号４４）、ＳＩＶｓｍ  Ｖｐｘ（配列番号４５）、ＳＩＶｒｃｍ  Ｖｐｘ（配列番号４６）、またはＨＩＶ−２  Ｖｐｘ（配列番号４７）と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む；あるいは
（ｃ）前記Ｖｐｘタンパク質が、ＳＩＶｄｅｂ  Ｖｐｒ（配列番号４８）またはＳＩＶｍｕｓ  Ｖｐｒ（配列番号４９）と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、
請求項１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記抗原が、
（ａ）腫瘍特異的抗原またはウイルス特異的抗原である；
（ｂ）ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＭＡＧＥ、ＭＡＲＴ−１／Ｍｅｌａｎ−Ａ、ＢＡＧＥ、ＲＡＧＥ、ｇｐ１００、ｇｐ７５、ｍｄａ−７、チロシナーゼ、チロシナーゼ関連タンパク質、腎細胞癌抗原、５Ｔ４、ＳＭ２２−アルファ、炭酸脱水酵素Ｉ、炭酸脱水酵素ＩＸ（Ｇ２５０としても知られる）、ＨＩＦ−１アルファ、ＨＩＦ−２アルファ、ＶＥＧＦ、前立腺特異性膜抗原（ＰＳＭＡ）、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、前立腺酸性リン酸塩、前立腺の６−膜貫通上皮抗原（ＳＴＥＡＰ）、ＮＫＸ３．１、テロメラーゼ酵素、スルビビン、メソテリン、変異型ｒａｓ、ｂｃｒ／ａｂｌ再構成、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、変異型ｐ５３、野生型ｐ５３、サイトクロームＰ４５０  １Ｂ１、Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ−Ｖ、ヒトパピローマウイルスタンパク質Ｅ６、ヒトパピローマウイルスタンパク質Ｅ７、癌胎児性抗原、およびアルファ−フェトタンパク質から成る群から選択される；あるいは
（ｃ）ＨＩＶ抗原、ＳＩＶ抗原、アデノウイルス抗原、エンテロウイルス抗原、コロナウイルス抗原、カリシウイルス抗原、ジステンパーウイルス抗原、エボラウイルス抗原、フラビウイルス抗原、肺炎ウイルス抗原、ヘルペスウイルス抗原、感染性腹膜炎ウイルス抗原、インフルエンザウイルス抗原、白血病ウイルス抗原、マールブルグウイルス抗原、オルトミクソウイルス抗原、パピローマウイルス抗原、パラインフルエンザウイルス抗原、パラミクソウイルス抗原、パラボウイルス抗原、ペスチウイルス抗原、ピコルナウイルス抗原、ポリオウイルス抗原、ポックスウイルス抗原、狂犬病ウイルス抗原、レオウイルス抗原、レトロウイルス抗原、またはロタウイルス抗原である、
請求項１８に記載の方法。
【請求項２２】
前記レンチウイルスベクターゲノムが、第２の抗原をコードするヌクレオチド配列をさらに含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２３】
前記第１および第２の抗原が、前記２つの抗原の間に自己切断型Ａ２ペプチドを含む融合タンパク質として発現される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
自己切断型Ａ２ペプチドが、配列番号５６または配列番号５７のアミノ酸配列を含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記第１の抗原が、ＮＹ−ＥＳＯ−１であり、前記第２の抗原が、ＭＡＧＥ−Ａ３である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２６】
前記第１および第２の抗原が、二方向性プロモーターから発現される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２７】
前記キフネンシンが、約０．１μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌの濃度で、前記培養培地中に存在するか、または前記キフネンシンが、約０．２５μｇ／ｍｌ〜約２μｇ／ｍｌの濃度で、前記培養培地中に存在する、請求項１８に記載の方法。
【請求項２８】
前記ウイルスパッケージング細胞が、
（ｉ）ｇａｇおよびｐｏｌ遺伝子を含むポリヌクレオチドと、
（ｉｉ）ｒｅｖタンパク質をコードするポリヌクレオチドとをさらに含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２９】
前記ｇａｇおよびｐｏｌ遺伝子が、ヒトのコドンに最適化され、配列番号５４の１２２８〜１５０９位周辺に最適化されないウインドウを含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記ｇａｇおよびｐｏｌ遺伝子を含むポリヌクレオチドが、機能的ｒｅｖ応答要素（ＲＲＥ）を欠いている、請求項２８に記載の方法。
【請求項３１】
前記ｐｏｌ遺伝子が、不活性インテグラーゼ酵素をコードする、請求項２８に記載の方法。
【請求項３２】
前記インテグラーゼ酵素が、Ｄ６４Ｖ突然変異体を有する、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記レンチウイルスベクターゲノムが、ＨＩＶ−１に由来する、請求項１８に記載の方法。
【請求項３４】
前記レンチウイルスベクターゲノムが、不活性化された３’側の長い末端反復（ＬＴＲ）または自己不活性化された３’側の長い末端反復（ＬＴＲ）を有する、請求項１８に記載の方法。
【請求項３５】
前記レンチウイルスベクターゲノムが、エンハンサー配列、ＴＡＴＡボックス、Ｓｐ１部位、ＮＫ−カッパＢ部位、またはポリプリン区画（ＰＰＴ）のうちの少なくとも１つを欠いているＵ３要素を含む、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記レンチウイルスベクターゲノムが、配列番号２１、２２、または２３のうちのいずれか１つの前記ヌクレオチド配列を含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項３７】
前記レンチウイルスベクターゲノムが、樹状細胞成熟／刺激因子をコードするヌクレオチド配列をさらに含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項３８】
前記樹状細胞成熟／刺激因子が、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、ＩＬ−２３、ＴＮＦα、Ｂ７．１、Ｂ７．２、４−１ＢＢ、ＣＤ４０リガンド、および薬物誘導ＣＤ４０から成る群から選択される、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
抗原をコードする前記ヌクレオチド配列が、ヒトユビキチンＣプロモ−ター（ＵｂｉＣ）、サイトメガロウイルス前初期プロモ−ター（ＣＭＶ）、ラウス肉腫ウイルスプロモ−ター（ＲＳＶ）、およびテトラサイクリン応答プロモ−ターから成る群から選択されるプロモ−ターに作動可能に連結している、請求項１８に記載の方法。
【請求項４０】
前記プロモ−ターが、イントロン欠損プロモーターである、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記イントロン欠損プロモーターが、ＵｂｉＣプロモーターである、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
請求項１８に記載の方法によって産生される、レンチウイルスベクター粒子。
【請求項４３】
請求項２８に記載の方法によって産生される、レンチウイルスベクター粒子。
【請求項４４】
偽型レンチウイルスベクター粒子を生成する方法であって、
（ａ）キフネンシンを含む培養培地中で、
（１）ＭＡＧＥ−Ａ３およびＮＹ−ＥＳＯ−１をコードするポリヌクレオチドを含むレンチウイルスベクターゲノムであって、自己切断型ＴＡ２ペプチドをコードするポリヌクレオチドが、ＭＡＧＥ−Ａ３およびＮＹ−ＥＳＯ−１をコードするポリヌクレオチドとの間に配置され、前記レンチウイルスゲノムがポリプリン区画（ＰＰＴ）を欠いており、ＭＡＧＥ−Ａ３およびＮＹ−ＥＳＯ−１の発現が、イントロンを欠いているＵｂｉＣプロモーターによって制御される、レンチウイルスベクターゲノムと、
（２）ＤＣ−ＳＩＧＮを発現する樹状細胞に優先的に結合するシンドビスＥ２糖タンパク質をコードするポリヌクレオチドと、
（３）ヒトのコドンに最適化されるｇａｇおよびｐｏｌ遺伝子を含むポリヌクレオチドであって、前記ポリヌクレオチドが機能的ｒｅｖ応答要素（ＲＲＥ）を欠いており、前記ｐｏｌ遺伝子が不活性インテグラーゼ酵素をコードする、ポリヌクレオチドと、
（４）ＳＡＭＨＤ１阻害活性を保持するＶｐｘタンパク質またはＶｐｒタンパク質をコードするポリヌクレオチドとを含むウイルスパッケージング細胞を培養することと、
（ｂ）ＤＣ−ＳＩＧＮを発現する樹状細胞に優先的に結合する偽型レンチウイルスベクター粒子を単離することと、を含む、方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４５】
本明細書に記載されるいくつかのまたは任意の実施形態において、偽型レンチウイルスベクター粒子はまた、マウスＳＩＧＮＲ１を発現しない細胞と比較して、マウスＳＩＧＮＲ１を発現する細胞をより効率的に形質導入する。
本発明は、例えば、以下の項目も提供する。
（項目１）
（ａ）ＳＡＭＨＤ１阻害活性を保持するＶｐｘタンパク質またはＶｐｒタンパク質と、（ｂ）抗原をコードする外因性ポリヌクレオチドと、（ｃ）ＤＣ−ＳＩＧＮを発現する細胞に優先的に結合する複数のエンベロープ糖タンパク質とを含む偽型レンチウイルスベクター粒子を含む組成物であって、マンノシダーゼ阻害剤の不在下で調製された同じ偽型レンチウイルスベクター粒子の対照組成物と比較して、より高度にマンノシル化されている、組成物。
（項目２）
前記エンベロープ糖タンパク質が、アルファウイルス糖タンパク質である、項目１に記載の組成物。
（項目３）
前記エンベロープ糖タンパク質が、シンドビス糖タンパク質である、項目２に記載の組成物。
（項目４）
高マンノシル化が、マンノシダーゼ阻害剤の不在下で調製された対照組成物よりもさらにＥｎｄｏＨ感受性であることを特徴とする、項目１〜３のいずれかに記載の組成物。
（項目５）
ＥｎｄｏＨ感受性が、ＥｎｄｏＨ処理後、ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）によって、前記エンベロープ糖タンパク質の分子量を評価することによって判定される、項目１〜３のいずれかに記載の組成物。
（項目６）
ＥｎｄｏＨによる処理後の前記エンベロープ糖タンパク質の分子量が、（ａ）エンドグリコシダーゼにより処理されないエンベロープ糖タンパク質と、（ｂ）ＰＮＧａｓｅ  Ｆにより処理されたエンベロープ糖タンパク質との間の距離の約４５％以上シフトしている、項目１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
（項目７）
ＥｎｄｏＨによる処理後の前記エンベロープ糖タンパク質の分子量が、（ａ）エンドグリコシダーゼにより処理されないエンベロープ糖タンパク質と、（ｂ）ＰＮＧａｓｅ  Ｆにより処理されたエンベロープ糖タンパク質との間の距離の約７０％以上シフトしている、項目６に記載の組成物。
（項目８）
ＥｎｄｏＨによる処理後の前記エンベロープ糖タンパク質の分子量が、（ａ）エンドグリコシダーゼにより処理されないエンベロープ糖タンパク質と、（ｂ）ＰＮＧａｓｅ  Ｆにより処理されたエンベロープ糖タンパク質との間の距離の約９０％以上シフトしている、項目６に記載の組成物。
（項目９）
前記組成物中の前記エンベロープ糖タンパク質のうちの少なくとも３０％が、マンノシダーゼ阻害剤の不在下で調製された偽型レンチウイルスベクター粒子の対照組成物中の同じアミノ酸配列（複数を含む）を有する対照糖タンパク質と比較して、増加した量のＥｎｄｏＨ感受性グリカンを有する、項目１〜８のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１０）
前記エンベロープ糖タンパク質の大部分が、高度にマンノシル化されている、項目１〜９のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１１）
前記偽型レンチウイルスベクター粒子が、組み込み不能である、項目１〜１０のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１２）
前記組成物が、シンドビスＥ２糖タンパク質を含む、項目１〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１３）
前記Ｅ２糖タンパク質が、配列番号３０［ＳＩＮ−Ｖａｒ１］と９０％同一である、項目１２に記載の組成物。
（項目１４）
（ｉ）前記Ｅ２糖タンパク質の残基１６０が、不在であるか、またはグルタミン酸以外のアミノ酸であり、（ｉｉ）前記Ｅ２糖タンパク質変異体の残基７０、７６、もしくは１５９のうちの１つ以上が、非塩基性残基であり、（ｉｉｉ）前記Ｅ２糖タンパク質変異体が、シンドビスウイルスＥ３糖タンパク質との融合タンパク質の一部ではない、項目１２または１３に記載の組成物。
（項目１５）
前記Ｅ２糖タンパク質が、配列番号３０［ＳＩＮ−Ｖａｒ１］である、項目１４に記載の組成物。
（項目１６）
前記Ｖｐｘタンパク質が、ＳＩＶｍａｃ  Ｖｐｘ［配列番号４４］と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む、項目１〜１５のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１７）
前記Ｖｐｘタンパク質が、ＳＩＶｍａｃ  Ｖｐｘ（配列番号４４）、ＳＩＶｓｍ  Ｖｐｘ（配列番号４５）、ＳＩＶｒｃｍ  Ｖｐｘ（配列番号４６）、またはＨＩＶ−２  Ｖｐｘ（配列番号４７）と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、項目１〜１５のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１８）
前記Ｖｐｘタンパク質が、ＳＩＶｄｅｂ  Ｖｐｒ（配列番号４８）またはＳＩＶｍｕｓ
Ｖｐｒ（配列番号４９）と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、項目１〜１４のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１９）
前記抗原が、腫瘍特異的抗原またはウイルス特異的抗原である、項目１〜１８のいずれか一項に記載の組成物。
（項目２０）
前記腫瘍特異的抗原が、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＭＡＧＥ、ＭＡＲＴ−１／Ｍｅｌａｎ−Ａ、ＢＡＧＥ、ＲＡＧＥ、ｇｐ１００、ｇｐ７５、ｍｄａ−７、チロシナーゼ、チロシナーゼ関連タンパク質、腎細胞癌抗原、５Ｔ４、ＳＭ２２−アルファ、炭酸脱水酵素Ｉ、炭酸脱水酵素ＩＸ（Ｇ２５０としても知られる）、ＨＩＦ−１アルファ、ＨＩＦ−２アルファ、ＶＥＧＦ、前立腺特異性膜抗原（ＰＳＭＡ）、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、前立腺酸性リン酸塩、前立腺の６−膜貫通上皮抗原（ＳＴＥＡＰ）、ＮＫＸ３．１、テロメラーゼ酵素、スルビビン、メソテリン、変異型ｒａｓ、ｂｃｒ／ａｂｌ再構成、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、変異型ｐ５３、野生型ｐ５３、サイトクロームＰ４５０  １Ｂ１、Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ−Ｖ、ヒトパピローマウイルスタンパク質Ｅ６、ヒトパピローマウイルスタンパク質Ｅ７、癌胎児性抗原、およびアルファ−フェトタンパク質から成る群から選択される、項目１９に記載の組成物。
（項目２１）
前記ウイルス特異的抗原が、ＨＩＶ抗原、ＳＩＶ抗原、アデノウイルス抗原、エンテロウイルス抗原、コロナウイルス抗原、カリシウイルス抗原、ジステンパーウイルス抗原、エボラウイルス抗原、フラビウイルス抗原、肺炎ウイルス抗原、ヘルペスウイルス抗原、感染性腹膜炎ウイルス抗原、インフルエンザウイルス抗原、白血病ウイルス抗原、マールブルグウイルス抗原、オルトミクソウイルス抗原、パピローマウイルス抗原、パラインフルエンザウイルス抗原、パラミクソウイルス抗原、パラボウイルス抗原、ペスチウイルス抗原、ピコルナウイルス抗原、ポリオウイルス抗原、ポックスウイルス抗原、狂犬病ウイルス抗原、レオウイルス抗原、レトロウイルス抗原、またはロタウイルス抗原である、項目１９に記載の組成物。
（項目２２）
前記レンチウイルスベクターゲノムが、第２の抗原をコードするヌクレオチド配列をさらに含む、項目１〜２１のいずれか一項に記載の組成物。
（項目２３）
前記第１および第２の抗原が、前記２つの抗原の間に自己切断型Ａ２ペプチドを含む融合タンパク質として発現される、項目２２に記載の組成物。
（項目２４）
自己切断型Ａ２ペプチドが、配列番号５６または配列番号５７のアミノ酸配列を含む、項目２３に記載の組成物。
（項目２５）
前記第１の抗原が、ＮＹ−ＥＳＯ−１であり、前記第２の抗原が、ＭＡＧＥ−Ａ３である、項目２２〜２４のいずれか一項に記載の組成物。
（項目２６）
前記第１および第２の抗原が、二方向性プロモーターから発現される、項目２２に記載の組成物。
（項目２７）
前記エンベロープ糖タンパク質が、マウスＳＩＧＮＲ１を発現する細胞に結合する、項目１に記載の組成物。
（項目２８）
前記偽型レンチウイルスベクター粒子が、マウスＳＩＧＮＲ１を発現しない細胞と比較して、マウスＳＩＧＮＲ１を発現する細胞をより効率的に形質導入する、項目１に記載の組成物。
（項目２９）
偽型レンチウイルスベクター粒子を生成する方法であって、
（ａ）キフネンシンを含む培養培地中で、
（１）外因性抗原をコードするポリヌクレオチドを含むレンチウイルスベクターゲノムと、
（２）ＤＣ−ＳＩＧＮを発現する樹状細胞に優先的に結合するシンドビスＥ２糖タンパク質をコードするポリヌクレオチドと、
（３）ＳＡＭＨＤ１阻害活性を保持するＶｐｘタンパク質またはＶｐｒタンパク質をコードするポリヌクレオチドと、を含むウイルスパッケージング細胞を培養することと、
（ｂ）ＤＣ−ＳＩＧＮを発現する樹状細胞に優先的に結合する偽型レンチウイルスベクター粒子を単離することと、を含む、方法。
（項目３０）
前記Ｅ２糖タンパク質が、配列番号３０［ＳＩＮ−Ｖａｒ１］と９０％同一である、項目２９に記載の方法。
（項目３１）
（ｉ）前記Ｅ２糖タンパク質の残基１６０が、不在であるか、またはグルタミン酸以外のアミノ酸であり、（ｉｉ）前記Ｅ２糖タンパク質変異体の残基７０、７６、または１５９のうちの１つ以上が、非塩基性残基であり、（ｉｉｉ）前記Ｅ２糖タンパク質変異体が、シンドビスウイルスＥ３糖タンパク質との融合タンパク質の一部ではない、項目２９または３０に記載の方法。
（項目３２）
前記Ｅ２糖タンパク質が、配列番号３０［ＳＩＮ−Ｖａｒ１］である、項目３０に記載の方法。
（項目３３）
前記Ｖｐｘタンパク質が、ＳＩＶｍａｃ  Ｖｐｘ［配列番号４４］と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む、項目２９〜３２のいずれか一項に記載の方法。
（項目３４）
前記Ｖｐｘタンパク質が、ＳＩＶｍａｃ  Ｖｐｘ（配列番号４４）、ＳＩＶｓｍ  Ｖｐｘ（配列番号４５）、ＳＩＶｒｃｍ  Ｖｐｘ（配列番号４６）、またはＨＩＶ−２  Ｖｐｘ（配列番号４７）と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、項目２９〜３２のいずれか一項に記載の方法。
（項目３５）
前記Ｖｐｘタンパク質が、ＳＩＶｄｅｂ  Ｖｐｒ（配列番号４８）またはＳＩＶｍｕｓ
Ｖｐｒ（配列番号４９）と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、項目２９〜３２のいずれか一項に記載の方法。
（項目３６）
前記抗原が、腫瘍特異的抗原またはウイルス特異的抗原である、項目２９〜３５のいずれか一項に記載の方法。
（項目３７）
前記腫瘍特異的抗原が、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＭＡＧＥ、ＭＡＲＴ−１／Ｍｅｌａｎ−Ａ、ＢＡＧＥ、ＲＡＧＥ、ｇｐ１００、ｇｐ７５、ｍｄａ−７、チロシナーゼ、チロシナーゼ関連タンパク質、腎細胞癌抗原、５Ｔ４、ＳＭ２２−アルファ、炭酸脱水酵素Ｉ、炭酸脱水酵素ＩＸ（Ｇ２５０としても知られる）、ＨＩＦ−１アルファ、ＨＩＦ−２アルファ、ＶＥＧＦ、前立腺特異性膜抗原（ＰＳＭＡ）、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、前立腺酸性リン酸塩、前立腺の６−膜貫通上皮抗原（ＳＴＥＡＰ）、ＮＫＸ３．１、テロメラーゼ酵素、スルビビン、メソテリン、変異型ｒａｓ、ｂｃｒ／ａｂｌ再構成、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、変異型ｐ５３、野生型ｐ５３、サイトクロームＰ４５０  １Ｂ１、Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ−Ｖ、ヒトパピローマウイルスタンパク質Ｅ６、ヒトパピローマウイルスタンパク質Ｅ７、癌胎児性抗原、およびアルファ−フェトタンパク質から成る群から選択される、項目３６に記載の方法。
（項目３８）
前記ウイルス特異的抗原が、ＨＩＶ抗原、ＳＩＶ抗原、アデノウイルス抗原、エンテロウイルス抗原、コロナウイルス抗原、カリシウイルス抗原、ジステンパーウイルス抗原、エボラウイルス抗原、フラビウイルス抗原、肺炎ウイルス抗原、ヘルペスウイルス抗原、感染性腹膜炎ウイルス抗原、インフルエンザウイルス抗原、白血病ウイルス抗原、マールブルグウイルス抗原、オルトミクソウイルス抗原、パピローマウイルス抗原、パラインフルエンザウイルス抗原、パラミクソウイルス抗原、パラボウイルス抗原、ペスチウイルス抗原、ピコルナウイルス抗原、ポリオウイルス抗原、ポックスウイルス抗原、狂犬病ウイルス抗原、レオウイルス抗原、レトロウイルス抗原、またはロタウイルス抗原である、項目３６に記載の方法。
（項目３９）
前記レンチウイルスベクターゲノムが、第２の抗原をコードするヌクレオチド配列をさらに含む、項目２９〜３８のいずれか一項に記載の方法。
（項目４０）
前記第１および第２の抗原が、前記２つの抗原の間に自己切断型Ａ２ペプチドを含む融合タンパク質として発現される、項目３９に記載の方法。
（項目４１）
自己切断型Ａ２ペプチドが、配列番号５６または配列番号５７のアミノ酸配列を含む、項目４０に記載の方法。
（項目４２）
前記第１の抗原が、ＮＹ−ＥＳＯ−１であり、前記第２の抗原が、ＭＡＧＥ−Ａ３である、項目３９〜４１のいずれか一項に記載の方法。
（項目４３）
前記第１および第２の抗原が、二方向性プロモーターから発現される、項目３９に記載の方法。
（項目４４）
前記キフネンシンが、約０．１μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌの濃度で、前記培養培地中に存在する、項目２９〜４３のいずれか一項に記載の方法。
（項目４５）
前記キフネンシンが、約０．２５μｇ／ｍｌ〜約２μｇ／ｍｌの濃度で、前記培養培地中に存在する、項目４４に記載の方法。
（項目４６）
前記ウイルスパッケージング細胞が、
（ｉ）ｇａｇおよびｐｏｌ遺伝子を含むポリヌクレオチドと、
（ｉｉ）ｒｅｖタンパク質をコードするポリヌクレオチドとをさらに含む、項目２９〜４５のいずれか一項に記載の方法。
（項目４７）
前記ｇａｇおよびｐｏｌ遺伝子が、ヒトのコドンに最適化され、配列番号５４の１２２８〜１５０９位周辺に最適化されないウインドウを含む、項目４６に記載の方法。
（項目４８）
前記ｇａｇおよびｐｏｌ遺伝子を含むポリヌクレオチドが、機能的ｒｅｖ応答要素（ＲＲＥ）を欠いている、項目４６または４７に記載の方法。
（項目４９）
前記ｐｏｌ遺伝子が、不活性インテグラーゼ酵素をコードする、項目４６〜４８のいずれか一項に記載の方法。
（項目５０）
前記インテグラーゼ酵素が、Ｄ６４Ｖ突然変異体を有する、項目４９に記載の方法。
（項目５１）
前記Ｖｐｘタンパク質をコードするポリヌクレオチドが、前記ｒｅｖタンパク質をコードするポリヌクレオチド、または前記ｇａｇおよびｐｏｌ遺伝子を含むポリヌクレオチドと同じまたは異なるプラスミド上にある、項目４６〜５０のいずれか一項に記載の方法。
（項目５２）
前記レンチウイルスベクターゲノムが、ＨＩＶ−１に由来する、項目２９〜５１のいずれか一項に記載の方法。
（項目５３）
前記レンチウイルスベクターゲノムが、不活性化された３’側の長い末端反復（ＬＴＲ）または自己不活性化された３’側の長い末端反復（ＬＴＲ）を有する、項目２９〜５２のいずれか一項に記載の方法。
（項目５４）
前記レンチウイルスベクターゲノムが、エンハンサー配列、ＴＡＴＡボックス、Ｓｐ１部位、ＮＫ−カッパＢ部位、またはポリプリン区画（ＰＰＴ）のうちの少なくとも１つを欠いているＵ３要素を含む、項目５３に記載の方法。
（項目５５）
前記レンチウイルスベクターゲノムが、配列番号２１、２２、または２３のうちのいずれか１つの前記ヌクレオチド配列を含む、項目２９〜５４のいずれか一項に記載の方法。
（項目５６）
前記レンチウイルスベクターゲノムが、樹状細胞成熟／刺激因子をコードするヌクレオチド配列をさらに含む、項目２９〜５５のいずれか一項に記載の方法。
（項目５７）
前記樹状細胞成熟／刺激因子が、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、ＩＬ−２３、ＴＮＦα、Ｂ７．１、Ｂ７．２、４−１ＢＢ、ＣＤ４０リガンド、および薬物誘導ＣＤ４０から成る群から選択される、項目５６に記載の方法。
（項目５８）
抗原をコードする前記ヌクレオチド配列が、ヒトユビキチンＣプロモ−ター（ＵｂｉＣ）、サイトメガロウイルス前初期プロモ−ター（ＣＭＶ）、ラウス肉腫ウイルスプロモ−ター（ＲＳＶ）、およびテトラサイクリン応答プロモ−ターから成る群から選択されるプロモ−ターに作動可能に連結している、項目２９〜５７のいずれか一項に記載の方法。
（項目５９）
前記プロモ−ターが、イントロン欠損プロモーターである、項目５８に記載の方法。
（項目６０）
前記イントロン欠損プロモーターが、ＵｂｉＣプロモーターである、項目５９に記載の方法。
（項目６１）
項目２９〜４５に記載の方法によって産生される、レンチウイルスベクター粒子。
（項目６２）
項目４６〜６０に記載の方法によって産生される、レンチウイルスベクター粒子。
（項目６３）
偽型レンチウイルスベクター粒子を生成する方法であって、
（ａ）キフネンシンを含む培養培地中で、
（１）ＭＡＧＥ−Ａ３およびＮＹ−ＥＳＯ−１をコードするポリヌクレオチドを含むレンチウイルスベクターゲノムであって、自己切断型ＴＡ２ペプチドをコードするポリヌクレオチドが、ＭＡＧＥ−Ａ３およびＮＹ−ＥＳＯ−１をコードするポリヌクレオチドとの間に配置され、前記レンチウイルスゲノムがポリプリン区画（ＰＰＴ）を欠いており、ＭＡＧＥ−Ａ３およびＮＹ−ＥＳＯ−１の発現が、イントロンを欠いているＵｂｉＣプロモーターによって制御される、レンチウイルスベクターゲノムと、
（２）ＤＣ−ＳＩＧＮを発現する樹状細胞に優先的に結合するシンドビスＥ２糖タンパク質をコードするポリヌクレオチドと、
（３）ヒトのコドンに最適化されるｇａｇおよびｐｏｌ遺伝子を含むポリヌクレオチドであって、前記ポリヌクレオチドが機能的ｒｅｖ応答要素（ＲＲＥ）を欠いており、前記ｐｏｌ遺伝子が不活性インテグラーゼ酵素をコードする、ポリヌクレオチドと、
（４）ＳＡＭＨＤ１阻害活性を保持するＶｐｘタンパク質またはＶｐｒタンパク質をコードするポリヌクレオチドとを含むウイルスパッケージング細胞を培養することと、
（ｂ）ＤＣ−ＳＩＧＮを発現する樹状細胞に優先的に結合する偽型レンチウイルスベクター粒子を単離することと、を含む、方法。