【手続補正書】
【提出日】平成28年9月21日(2016.9.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＶＨ３領域を少なくとも有するエピトープ結合領域を含むポリペプチドを含む免疫グロブリンまたはその断片であって、
ＶＨ３領域が、免疫グロブリンまたはその断片とプロテインＡとの結合を低減させるまたは喪失させる改変を含み、
ＶＨ３領域の改変が、
（ｉ）６５位におけるアミノ酸置換ならびに／もしくは５７Ｅ、６５Ｓ、６６Ｑ、６８Ｖ、８１Ｅ、８２ａＳおよび組み合わせ１９Ｇ／５７Ａ／５９Ａ（Ｋａｂａｔナンバリング）からなる群から選択されるアミノ酸置換、または
（ｉｉ）６５Ｓ、８１Ｅおよび８２ａＳ（Ｋａｂａｔナンバリング）からなる群から選択されるアミノ酸置換、または
（ｉｉｉ）アミノ酸置換６５Ｓ（Ｋａｂａｔナンバリング）
を含む、免疫グロブリンまたはその断片。
【請求項２】
ポリペプチドが、ＶＨ３領域を少なくとも有する１または複数のさらなるエピトープ結合領域を含む、請求項１に記載の免疫グロブリンまたはその断片。
【請求項３】
ポリペプチドが、ＩＧＨＧ１、ＩＧＨＧ２およびＩＧＨＧ４から選択されるヒトＩＧＨＧのＣＨ２および／またはＣＨ３領域を少なくとも含む免疫グロブリン定常領域をさらに含み、
（ｉ）免疫グロブリン定常領域が、ヒトＩＧＨＧ３由来のＣＨ３領域で置き換えられているＣＨ３領域を含むか、または
（ｉｉ）免疫グロブリン定常領域が、アミノ酸置換４３５Ｒ（ＥＵナンバリングシステム）を含むＣＨ３領域を含むか、または
（ｉｉｉ）免疫グロブリン定常領域が、アミノ酸置換４３５Ｒおよび４３６Ｆ（ＥＵナンバリングシステム）を含むＣＨ３領域を含む、
請求項１又は２に記載の免疫グロブリンまたはその断片。
【請求項４】
（ａ）第１エピトープと結合するエピトープ結合領域を含む第１ポリペプチドと、
（ｂ）第２エピトープと結合するＶＨ３領域を少なくとも有するエピトープ結合領域を含む第２ポリペプチドと
を含むヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片であって、
第２ポリペプチドのＶＨ３領域が、ヘテロ二量体免疫グロブリンとプロテインＡとの結合を低減させるまたは喪失させる前記改変を含む、
請求項１に記載の免疫グロブリンまたはその断片。
【請求項５】
（ｉ）改変が、未改変の免疫グロブリンもしくはその断片または未改変のヘテロ二量体免疫グロブリンもしくはその断片と比較して、免疫グロブリンもしくはその断片またはヘテロ二量体免疫グロブリンもしくはその断片のｉｎ  ｖｉｖｏ半減期を増加させるか、あるいは
（ｉｉ）改変が、未改変の免疫グロブリンもしくはその断片または未改変のヘテロ二量体免疫グロブリンもしくはその断片と比較して、免疫グロブリンもしくはその断片またはヘテロ二量体免疫グロブリンもしくはその断片のヒトＦｃＲｎに対する親和性を増加させるか、あるいは
（ｉｉｉ）改変が、表面プラズモン共鳴により測定して、未改変の免疫グロブリンもしくはその断片または未改変のヘテロ二量体免疫グロブリンもしくはその断片と比較して、免疫グロブリンもしくはその断片またはヘテロ二量体免疫グロブリンもしくはその断片とヒトＦｃＲｎとの結合の少なくとも１０％の保持をもたらす、
請求項１から３のいずれか一項に記載の免疫グロブリンもしくはその断片、または請求項４に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンもしくはその断片。
【請求項６】
（ａ）第１エピトープと結合するエピトープ結合領域と、ＣＨ１および／またはＣＨ２および／またはＣＨ３領域を少なくとも含む免疫グロブリン定常領域とを含む第１ポリペプチドと、
（ｂ）ＶＨ３を少なくとも含む第２エピトープと結合するエピトープ結合領域ならびに／またはＣＨ２および／もしくはＣＨ３領域を少なくとも含む免疫グロブリン定常領域を含む第２ポリペプチドと
を含むヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片であって、
第１ポリペプチドが、ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片とプロテインＧとの結合を低減させるまたは喪失させる改変を含み、
第２ポリペプチドが、ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片とプロテインＡとの結合を低減させるまたは喪失させる改変を含む、
請求項４又は５に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片。
【請求項７】
第１ポリペプチドの免疫グロブリン定常領域が、ヒトＩＧＨＧ由来であり、第２ポリペプチドが、ＩＧＨＧ１、ＩＧＨＧ２またはＩＧＨＧ４から選択され、
第１ポリペプチドの改変が、免疫グロブリン定常領域中の改変を含み、
免疫グロブリン定常領域の改変が、
（ｉ）２５２Ａ／３８０Ａ／３８２Ａ／４３６Ａ／４３８Ａ、
２５４Ｍ／３８０Ｍ／３８２Ｌ／４２６Ｍ／４２８Ｇおよび
４２６Ｍ／４２８Ｇ／４３３Ｄ／４３４Ａ
からなる群から選択されるアミノ酸置換（ＥＵナンバリングシステム）、あるいは
（ｉｉ）４２８Ｇ、４２８Ｓ、４２８Ｔおよび４２８Ｖからなる群から選択されるアミノ酸置換と、そのＣＨ２領域および／もしくはＣＨ３領域内の任意の位置におけるさらなる置換とを含むか、
または免疫グロブリン定常領域の改変が、４３４Ａもしくは４３４Ｓから選択されるアミノ酸置換と、そのＣＨ２領域および／もしくはＣＨ３領域内の任意の位置におけるさらなる置換とを含む（ＥＵナンバリングシステム）、
請求項６に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片。
【請求項８】
免疫グロブリン定常領域の改変が、免疫グロブリンまたはその断片とプロテインＧとの結合を、未改変の免疫グロブリンまたはその断片の結合と比較して少なくとも１０％低減する、請求項７に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片。
【請求項９】
免疫グロブリン定常領域中の改変が、２５０位（ＥＵナンバリングシステム）におけるアミノ酸置換をさらに含み、該アミノ酸置換が、２５０Ｑ（ＥＵナンバリングシステム）でないか４２８Ｌ（ＥＵナンバリングシステム）でない、請求項７に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片。
【請求項１０】
ＣＨ１領域が、ヒトＩＧＨＧ由来であり、ＩＧＨＡ１もしくはＩＧＨＭ由来のＣＨ１領域で置き換えられているか、
ＣＨ１が、ＩＧＨＧ由来であり、ストランドＧおよび一部のＦＧループが、ＩＧＨＡ１もしくはＩＧＨＭ由来のＣＨ１ストランドＧおよび一部のＦＧループで置き換えられているか、
ＣＨ１領域の改変が、２０９位、２１０位、２１３位および２１４位（ＥＵナンバリングシステム）からなる群から選択される位置におけるアミノ酸置換を含むか、または、
ＣＨ１領域の改変が、
（ｉ）２０９位および２１３位（ＥＵナンバリングシステム）におけるアミノ酸置換、または
（ｉｉ）２０９Ｐ／２１０Ｓ、
２１３Ｖ／２１４Ｔおよび
２０９Ｇ／２１０Ｎ
からなる置換の群（ＥＵナンバリングシステム）から選択されるアミノ酸置換、
を含む、請求項４〜９のいずれか一項に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれか一項に記載の、ＶＨ３領域を含む免疫ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片を精製する方法であって、
（ｉ）免疫グロブリンの混合物から、１つの改変重鎖を含むヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片を単離するステップであって、改変重鎖が、ＶＨ３領域中またはＶＨ３領域および免疫グロブリン定常領域中に改変を含み、改変が、ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片とプロテインＡとの結合を低減させるまたは喪失させるステップと、
（ｉｉ）免疫グロブリンの混合物をプロテインＡに供するステップと、
（ｉｉｉ）ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片をプロテインＡから溶出するステップと、
を含む方法。
【請求項１２】
少なくとも１つのＶＨ３領域が存在する、請求項４〜１０のいずれか一項に記載の免疫グロブリン重鎖のヘテロ二量体またはその断片の精製のための親和性クロマトグラフィーの方法であって、
（ｉ）重鎖の一方を改変して、プロテインＡとの結合を低減させるまたは喪失させるステップと、
（ｉｉａ）ヘテロ二量体内に１つだけＶＨ３領域が存在するならば、前記ＶＨ３領域が、プロテインＡとの結合を保持する未改変の重鎖の一部であるか、または前記ＶＨ３領域が、プロテインＡとの結合を低減させるもしくは喪失させるように改変されるか、あるいは
（ｉｉｂ）ヘテロ二量体内に２つ以上のＶＨ３領域が存在するならば、１つを除く全てのＶＨ３領域が、プロテインＡとの結合を低減させるもしくは喪失させるように改変され、未改変のＶＨ３領域が、プロテインＡとの結合を保持する未改変の重鎖の一部であるか、または全てのＶＨ３領域が、プロテインＡとの結合を低減させるもしくは喪失させるように改変されステップと、
（ｉｉｉ）２つの重鎖を別々または同時に発現させるステップと、
（ｉｖ）同時発現させた重鎖または予め集合させた別々に発現させた重鎖をプロテインＡに供するステップと、
（ｖ）重鎖のヘテロ二量体またはその断片をプロテインＡから溶出するステップと、
を含む方法。
【請求項１３】
請求項４〜１０のいずれか一項に記載の重鎖のヘテロ二量体の差次的精製の方法であって、
（ｉ）重鎖の混合物から、第１親和性試薬との結合を低減させるまたは喪失させる改変を含む第１重鎖と、第２親和性試薬との結合を低減させるまたは喪失させる改変を含む第２重鎖とを含む重鎖のヘテロ二量体を単離するステップと、
（ｉｉ）重鎖の混合物を、第１親和性試薬を含む第１カラムに供するステップと、
（ｉｉｉ）重鎖のヘテロ二量体を第１カラムから溶出するステップと、
（ｉｖ）第１カラムからの溶出物を、第２親和性試薬を含む第２カラムに供するステップと、
（ｖ）重鎖のヘテロ二量体を第２カラムから溶出するステップと、
を含み、
第１親和性試薬が、プロテインＡであり、第２親和性試薬が、プロテインＧであるか、または第１親和性試薬が、プロテインＧであり、第２親和性試薬が、プロテインＡである、方法。
【請求項１４】
請求項１〜１０のいずれか一項に記載の、対象の免疫グロブリンまたはその断片を免疫グロブリンの混合物から単離する方法であって、
（ｉ）対象の免疫グロブリンまたはその断片を免疫グロブリンの混合物から単離するステップであって、対象の免疫グロブリンまたはその断片が、プロテインＡおよび／またはプロテインＧに対する結合部位を全て喪失しているステップと、
（ｉｉ）第１ステップにおける免疫グロブリンの混合物をプロテインＡまたはプロテインＧに供するステップと、
（ｉｉｉ）ステップ（ｉｉ）からの未結合の対象の免疫グロブリンまたはその断片を回収するステップと、場合によって、
（ｉｖ）第２ステップにおけるステップ（ｉｉｉ）からの未結合の対象の免疫グロブリンまたはその断片をプロテインＡまたはプロテインＧに供するステップと、
（ｖ）ステップ（ｉｖ）からの未結合の対象の免疫グロブリンまたはその断片を回収するステップと、
を含み、
ステップ（ｉｉ）において、免疫グロブリンの混合物をプロテインＡに供し、ステップ（ｉｖ）において、免疫グロブリンの混合物をプロテインＧに供するか、または
ステップ（ｉｉ）において、免疫グロブリンの混合物をプロテインＧに供し、ステップ（ｉｖ）において、免疫グロブリンの混合物をプロテインＡに供する、
方法。