【手続補正書】
【提出日】平成28年5月25日(2016.5.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ｇＨ、ｇＬおよび少なくとも１つの追加的なＨＣＭＶ糖タンパク質を含む単離されたＨＣＭＶ膜タンパク質複合体を作製するためのプロセスであって、該ｇＨ、ｇＬおよび少なくとももう１つのＨＣＭＶ糖タンパク質の組換え発現を含む、プロセス。
【請求項２】
ｇＨ、ｇＬおよび少なくとももう１つのＨＣＭＶ糖タンパク質を含むＨＣＭＶ膜タンパク質複合体を、
−ｇＨ、ｇＬおよび少なくとももう１つのＨＣＭＶ糖タンパク質をコードする１つまたは複数の組換え核酸分子を発現系に導入すること、
−該１つまたは複数の核酸を該発現系において発現させること、ならびに
−該膜タンパク質複合体を精製すること
によって発現させるためのプロセス。
【請求項３】
哺乳動物細胞に、膜貫通ドメインを欠くｇＨの断片をコードする第１の核酸構築物、ｇＬタンパク質をコードする第２の核酸構築物、および少なくとももう１つのＨＣＭＶ糖タンパク質をコードする第３の核酸構築物をトランスフェクトするステップを含む、請求項２に記載のプロセス。
【請求項４】
前記ＨＣＭＶ膜タンパク質複合体がｇＨ、ｇＬおよびｇＯからなる、前記請求項のいずれかに記載のプロセス。
【請求項５】
前記ＨＣＭＶ膜タンパク質複合体がｇＨ、ｇＬ、ｐＵＬ１２８、ｐＵＬ１３０およびｐＵＬ１３１Ａからなる、前記請求項のいずれかに記載のプロセス。
【請求項６】
−前記ｐＵＬ１２８が配列番号１３、１４、１５または３３に記載されている配列のいずれか１つを含み、またはそれからなり、
−前記ｐＵＬ１３０が配列番号１６、１７または３４に記載されている配列のいずれか１つを含み、またはそれからなり、かつ／または、
−前記ｐＵＬ１３１Ａが配列番号１８、１９、２０または３５に記載されている配列のいずれか１つを含む、またはそれからなる、
請求項５に記載のプロセス。
【請求項７】
前記ＨＣＭＶ膜タンパク質複合体の純度が＞８５質量％、＞８６質量％、＞８７質量％、＞８８質量％、＞８９質量％、＞９０質量％、＞９１質量％、＞９２質量％、＞９３質量％、＞９４質量％または＞９５質量％である、前記請求項のいずれかに記載のプロセス。
【請求項８】
前記ＨＣＭＶ膜タンパク質複合体内のｇＨ、ｇＬ、ｇＯ、ｐＵＬ１２８、ｐＵＬ１３０およびｐＵＬ１３１Ａのうちの１つまたは複数が、
−哺乳動物のグリコシル化パターンを有し、かつ／または、
−昆虫細胞のグリコシル化パターンを含有しない、
前記請求項のいずれかに記載のプロセス。
【請求項９】
ｇＨ、ｇＬおよび少なくとももう１つのＨＣＭＶ糖タンパク質を含む精製されたＨＣＭＶ膜タンパク質複合体。
【請求項１０】
前記請求項のいずれかに記載のプロセスによって作製される、ｇＨ、ｇＬおよび少なくとももう１つのＨＣＭＶ糖タンパク質を含むＨＣＭＶ膜タンパク質複合体。
【請求項１１】
請求項９または請求項１０に記載の単離されたＨＣＭＶ膜複合体を含む免疫原性組成物。
【請求項１２】
ワクチンである、請求項１１に記載の免疫原性組成物。
【請求項１３】
アジュバントを含む、請求項１１に記載の免疫原性組成物。
【請求項１４】
前記アジュバントが水中油エマルションまたはアルミニウム塩である、請求項１２に記載の免疫原性組成物。
【請求項１５】
−ＨＣＭＶ膜タンパク質複合体をコードする自己複製ＲＮＡ分子と、
−請求項９または請求項１０に記載のＨＣＭＶ膜タンパク質複合体と
を含む免疫原性組成物。
【請求項１６】
−ＨＣＭＶ膜タンパク質複合体をコードする自己複製ＲＮＡ分子を含む初回刺激用組成物と、
−請求項９または請求項１０に記載のＨＣＭＶ膜タンパク質複合体を含む追加刺激用組成物と
を含むキット。
【請求項１７】
ｇＬ、膜貫通ドメインを欠くｇＨ、および少なくとも１つの追加的なＨＣＭＶ糖タンパク質をコードする組換え核酸分子であって、
（ａ）自己複製ＲＮＡ分子ではなく、
（ｂ）アルファウイルスレプリコンではなく、
（ｃ）ＮＳＰ１、ＮＳＰ２、ＮＳＰ３およびＮＳＰ４などのアルファウイルス非構造タンパク質のいずれもコードせず、
（ｄ）ＥＭＣＶまたはＥＶ７１などの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）を含有せず、かつ／または、
（ｅ）ＦＭＤＶなどのウイルスの２Ａ部位を含有しない
組換え核酸分子。
【請求項１８】
−ｇＬ、膜貫通ドメインを欠くｇＨ、ｐＵＬ１２８、ｐＵＬ１３０およびｐＵＬ１３１Ａ、または、
−ｇＬ、膜貫通ドメインを欠くｇＨおよびｇＯ
をコードする、請求項１７に記載の組換え核酸分子。
【請求項１９】
ｇＬ、膜貫通ドメインを欠くｇＨ、および少なくとも１つの追加的なＨＣＭＶ糖タンパク質をコードする複数の組換え核酸であって、前記複数の組換え核酸のうちの１つまたは複数または全てが、
（ａ）自己複製ＲＮＡ分子ではなく、
（ｂ）アルファウイルスレプリコンではなく、
（ｃ）ＮＳＰ１、ＮＳＰ２、ＮＳＰ３およびＮＳＰ４などのアルファウイルス非構造タンパク質のいずれもコードせず、
（ｄ）ＥＭＣＶまたはＥＶ７１などの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）を含有せず、かつ／または、
（ｅ）ＦＭＤＶなどのウイルスの２Ａ部位を含有しない
複数の組換え核酸。
【請求項２０】
−膜貫通ドメインを欠くｇＨ、およびｇＬをコードする第１の構築物と、
−１つの追加的なＨＣＭＶ糖タンパク質をコードする第２の構築物と
を含む、請求項１９に記載の複数の組換え核酸。
【請求項２１】
前記第２の構築物が、
−ｐＵＬ１２８、ｐＵＬ１３０およびｐＵＬ１３１Ａ、または、
−ｇＯ
をコードする、請求項２０に記載の複数の組換え核酸。
【請求項２２】
−ｇＬをコードする第１の組換え核酸分子と、
−膜貫通ドメインを欠くｇＨの断片をコードする第２の組換え核酸分子と、
−１つまたは複数の追加的なＨＣＭＶタンパク質をコードする１つまたは複数の第３の組換え核酸分子と
を含む、請求項２１に記載の複数の組換え核酸。
【請求項２３】
ｇＨ、ｇＬおよび少なくとも１つの追加的なＨＣＭＶ糖タンパク質を含む細胞であって、
（ａ）ＨＣＭＶゲノムを含有せず、
（ｂ）ＨＣＭＶビリオンを産生せず、
（ｃ）前記ｇＨ、ｇＬおよび少なくとも１つの追加的なＨＣＭＶ糖タンパク質をコードする自己複製ＲＮＡ分子を含有せず、かつ／または、
（ｄ）アルファウイルスレプリコンを含有しない
細胞。
【請求項２４】
ｇＨ、ｇＬおよび少なくとも１つの追加的なＨＣＭＶ糖タンパク質を含む単離または精製されたＨＣＭＶ膜タンパク質複合体を作製するためのプロセスであって、請求項２３に記載の細胞を増殖培地中で増殖させることを伴う、プロセス。
【請求項２５】
前記ＨＣＭＶ膜タンパク質複合体が前記増殖培地中に分泌される、請求項２４に記載のプロセス。
【請求項２６】
前記ＨＣＭＶ膜タンパク質複合体を増殖培地１リットル当たり複合体＞０．８ｍｇ、＞０．８５ｍｇ、＞０．８８ｍｇ、＞０．９ｍｇ、＞０．９５ｍｇ、＞１ｍｇ、＞１．５ｍｇ、＞２ｍｇ、＞２．５ｍｇ、＞３ｍｇ、＞３．５ｍｇ、＞４ｍｇ、＞４．５ｍｇ、＞５ｍｇの濃度まで蓄積させる、請求項２５に記載のプロセス。
【請求項２７】
−ｇＨ、ｇＬおよび少なくとも１つの追加的なＨＣＭＶ糖タンパク質を含むＨＣＭＶ膜タンパク質複合体のタンパク質成分の１つまたは複数をコードするＲＮＡを含む１つまたは複数の初回刺激免疫組成物と、
−ｇＨ、ｇＬおよび少なくとも１つの追加的なＨＣＭＶ糖タンパク質を含む精製されたＨＣＭＶ膜タンパク質複合体を含む１つまたは複数のその後の追加刺激免疫組成物と
を含む、ＲＮＡ初回刺激−タンパク質追加刺激組み合わせ物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２５】
本発明の抗体は、診断アッセイにおいて使用することができ、そして直接的にまたは間接的に標識されていてよい。一部の実施形態では、本発明の抗体は、療法において、例えば、ＨＣＭＶ感染症の治療において使用することができる。
本発明は、例えば、以下の項目も提供する。
（項目１）
ｇＨ、ｇＬおよび少なくとも１つの追加的なＨＣＭＶ糖タンパク質を含む単離されたＨＣＭＶ膜タンパク質複合体を作製するためのプロセスであって、該ｇＨ、ｇＬおよび少なくとももう１つのＨＣＭＶ糖タンパク質の組換え発現を含む、プロセス。
（項目２）
ｇＨ、ｇＬおよび少なくとももう１つのＨＣＭＶ糖タンパク質を含むＨＣＭＶ膜タンパク質複合体を、
−ｇＨ、ｇＬおよび少なくとももう１つのＨＣＭＶ糖タンパク質をコードする１つまたは複数の組換え核酸分子を発現系に導入すること、
−該１つまたは複数の核酸を該発現系において発現させること、ならびに
−該膜タンパク質複合体を精製すること
によって発現させるためのプロセス。
（項目３）
哺乳動物細胞に、膜貫通ドメインを欠くｇＨの断片をコードする第１の核酸構築物、ｇＬタンパク質をコードする第２の核酸構築物、および少なくとももう１つのＨＣＭＶ糖タンパク質をコードする第３の核酸構築物をトランスフェクトするステップを含む、項目２に記載のプロセス。
（項目４）
前記ＨＣＭＶ膜タンパク質複合体がｇＨ、ｇＬおよびｇＯからなる、前記項目のいずれかに記載のプロセス。
（項目５）
前記ＨＣＭＶ膜タンパク質複合体がｇＨ、ｇＬ、ｐＵＬ１２８、ｐＵＬ１３０およびｐＵＬ１３１Ａからなる、前記項目のいずれかに記載のプロセス。
（項目６）
−前記ｐＵＬ１２８が配列番号１３、１４、１５または３３に記載されている配列のいずれか１つを含み、またはそれからなり、
−前記ｐＵＬ１３０が配列番号１６、１７または３４に記載されている配列のいずれか１つを含み、またはそれからなり、かつ／または、
−前記ｐＵＬ１３１Ａが配列番号１８、１９、２０または３５に記載されている配列のいずれか１つを含む、またはそれからなる、
項目５に記載のプロセス。
（項目７）
前記ＨＣＭＶ膜タンパク質複合体の純度が＞８５質量％、＞８６質量％、＞８７質量％、＞８８質量％、＞８９質量％、＞９０質量％、＞９１質量％、＞９２質量％、＞９３質量％、＞９４質量％または＞９５質量％である、前記項目のいずれかに記載のプロセス。
（項目８）
前記ＨＣＭＶ膜タンパク質複合体内のｇＨ、ｇＬ、ｇＯ、ｐＵＬ１２８、ｐＵＬ１３０およびｐＵＬ１３１Ａのうちの１つまたは複数が、
−哺乳動物のグリコシル化パターンを有し、かつ／または、
−昆虫細胞のグリコシル化パターンを含有しない、
前記項目のいずれかに記載のプロセス。
（項目９）
ｇＨ、ｇＬおよび少なくとももう１つのＨＣＭＶ糖タンパク質を含む精製されたＨＣＭＶ膜タンパク質複合体。
（項目１０）
前記項目のいずれかに記載のプロセスによって作製される、ｇＨ、ｇＬおよび少なくとももう１つのＨＣＭＶ糖タンパク質を含むＨＣＭＶ膜タンパク質複合体。
（項目１１）
項目９または項目１０に記載の単離されたＨＣＭＶ膜複合体を含む免疫原性組成物。
（項目１２）
ワクチンである、項目１１に記載の免疫原性組成物。
（項目１３）
アジュバントを含む、項目１１に記載の免疫原性組成物。
（項目１４）
前記アジュバントが水中油エマルションまたはアルミニウム塩である、項目１２に記載の免疫原性組成物。
（項目１５）
−ＨＣＭＶ膜タンパク質複合体をコードする自己複製ＲＮＡ分子と、
−項目９または項目１０に記載のＨＣＭＶ膜タンパク質複合体と
を含む免疫原性組成物。
（項目１６）
−ＨＣＭＶ膜タンパク質複合体をコードする自己複製ＲＮＡ分子を含む初回刺激用組成物と、
−項目９または項目１０に記載のＨＣＭＶ膜タンパク質複合体を含む追加刺激用組成物と
を含むキット。
（項目１７）
ｇＬ、膜貫通ドメインを欠くｇＨ、および少なくとも１つの追加的なＨＣＭＶ糖タンパク質をコードする組換え核酸分子であって、
（ａ）自己複製ＲＮＡ分子ではなく、
（ｂ）アルファウイルスレプリコンではなく、
（ｃ）ＮＳＰ１、ＮＳＰ２、ＮＳＰ３およびＮＳＰ４などのアルファウイルス非構造タンパク質のいずれもコードせず、
（ｄ）ＥＭＣＶまたはＥＶ７１などの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）を含有せず、かつ／または、
（ｅ）ＦＭＤＶなどのウイルスの２Ａ部位を含有しない
組換え核酸分子。
（項目１８）
−ｇＬ、膜貫通ドメインを欠くｇＨ、ｐＵＬ１２８、ｐＵＬ１３０およびｐＵＬ１３１Ａ、または、
−ｇＬ、膜貫通ドメインを欠くｇＨおよびｇＯ
をコードする、項目１７に記載の組換え核酸分子。
（項目１９）
ｇＬ、膜貫通ドメインを欠くｇＨ、および少なくとも１つの追加的なＨＣＭＶ糖タンパク質をコードする複数の組換え核酸であって、前記複数の組換え核酸のうちの１つまたは複数または全てが、
（ａ）自己複製ＲＮＡ分子ではなく、
（ｂ）アルファウイルスレプリコンではなく、
（ｃ）ＮＳＰ１、ＮＳＰ２、ＮＳＰ３およびＮＳＰ４などのアルファウイルス非構造タンパク質のいずれもコードせず、
（ｄ）ＥＭＣＶまたはＥＶ７１などの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）を含有せず、かつ／または、
（ｅ）ＦＭＤＶなどのウイルスの２Ａ部位を含有しない
複数の組換え核酸。
（項目２０）
−膜貫通ドメインを欠くｇＨ、およびｇＬをコードする第１の構築物と、
−１つの追加的なＨＣＭＶ糖タンパク質をコードする第２の構築物と
を含む、項目１９に記載の複数の組換え核酸。
（項目２１）
前記第２の構築物が、
−ｐＵＬ１２８、ｐＵＬ１３０およびｐＵＬ１３１Ａ、または、
−ｇＯ
をコードする、項目２０に記載の複数の組換え核酸。
（項目２２）
−ｇＬをコードする第１の組換え核酸分子と、
−膜貫通ドメインを欠くｇＨの断片をコードする第２の組換え核酸分子と、
−１つまたは複数の追加的なＨＣＭＶタンパク質をコードする１つまたは複数の第３の組換え核酸分子と
を含む、項目２１に記載の複数の組換え核酸。
（項目２３）
ｇＨ、ｇＬおよび少なくとも１つの追加的なＨＣＭＶ糖タンパク質を含む細胞であって、
（ａ）ＨＣＭＶゲノムを含有せず、
（ｂ）ＨＣＭＶビリオンを産生せず、
（ｃ）前記ｇＨ、ｇＬおよび少なくとも１つの追加的なＨＣＭＶ糖タンパク質をコードする自己複製ＲＮＡ分子を含有せず、かつ／または、
（ｄ）アルファウイルスレプリコンを含有しない
細胞。
（項目２４）
ｇＨ、ｇＬおよび少なくとも１つの追加的なＨＣＭＶ糖タンパク質を含む単離または精製されたＨＣＭＶ膜タンパク質複合体を作製するためのプロセスであって、項目２３に記載の細胞を増殖培地中で増殖させることを伴う、プロセス。
（項目２５）
前記ＨＣＭＶ膜タンパク質複合体が前記増殖培地中に分泌される、項目２４に記載のプロセス。
（項目２６）
前記ＨＣＭＶ膜タンパク質複合体を増殖培地１リットル当たり複合体＞０．８ｍｇ、＞０．８５ｍｇ、＞０．８８ｍｇ、＞０．９ｍｇ、＞０．９５ｍｇ、＞１ｍｇ、＞１．５ｍｇ、＞２ｍｇ、＞２．５ｍｇ、＞３ｍｇ、＞３．５ｍｇ、＞４ｍｇ、＞４．５ｍｇ、＞５ｍｇの濃度まで蓄積させる、項目２５に記載のプロセス。
（項目２７）
−ｇＨ、ｇＬおよび少なくとも１つの追加的なＨＣＭＶ糖タンパク質を含むＨＣＭＶ膜タンパク質複合体のタンパク質成分の１つまたは複数をコードするＲＮＡを用いて１回または複数回の初回刺激免疫を実施することと、
−ｇＨ、ｇＬおよび少なくとも１つの追加的なＨＣＭＶ糖タンパク質を含む精製されたＨＣＭＶ膜タンパク質複合体を用いて１回または複数回の追加刺激免疫を後に実施することと
を含む、ＲＮＡ初回刺激−タンパク質追加刺激レジメン。