【誤訳訂正書】
【提出日】平成28年3月14日(2016.3.14)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記（１）〜（４）のいずれかの、乳癌転移検出用、微小転移巣検出用、ｐＴＮＭステージ判定用、乳癌治療の間の腫瘍のリアルタイムモニタリング用又は乳癌予後予測用の検査キット。
（１）配列番号１で示されるプライマー、配列番号２で示されるプライマー及び配列番号３で示されるプローブを含み、ＴａｑＭａｎプローブに基づいてＣＳＴ４のｍＲＮＡをリアルタイムで定量する検査キット
（２）配列番号２で示されるＣＳＴ４用プライマー、配列番号３２で示されるＣＳＴ４用プライマー、及び配列番号３でプローブを含み、核酸ベース増幅（ＮＡＳＢＡ）または転写媒介増幅（ＴＭＡ）に基づいてＣＳＴ４のｍＲＮＡを定量する検査キット
（３）配列番号３３〜３６で示される４つのプローブを含み、リガーゼ連鎖反応（ＬＣＲ）に基づいてＣＳＴ４のｍＲＮＡを定量する検査キット
（４）配列番号３７〜４０で示されるプライマーおよび配列番号４１で示されるプローブを含み、好熱性鎖置換増幅（ｔＳＤＡ）に基づいてＣＳＴ４のｍＲＮＡを定量する検査キット
【請求項２】
陽性対照および陰性対照ならびにブランクサンプルを含む、請求項１に記載の検査キット。
【請求項３】
前記検査キットを介して測定される乳癌マーカーの発現レベルまたは定量的含有量が健常者の前記検査キットを介して測定される乳癌マーカーの発現レベルまたは定量的含有量と比較され、その結果が陽性か否かを決定し、またはその結果がカットオフ値より高ければ陽性と決定する、請求項１に記載の検査キットであって、前記カットオフ値が乳癌患者および健常者の体液または組織サンプル中の乳癌マーカー発現／レベルの比較を通して得られ、前記カットオフ値が統計的に有意であり、前記サンプルが血液、尿、骨髄、乳癌細胞株、乳癌腫瘍および腫瘍隣接組織ならびにリンパ節組織よりなる群から選択される１以上を含有する、請求項１に記載の検査キット。
【請求項４】
乳癌転移診断用又は乳癌ｐＴＮＭステージ判定用の検査キットであって、前記検査キットが、血液のシスタチンＳレベルを検出し、固体基質、前記基質上に固定されたキャプチャー、ならびにビオチン化キャプチャーおよび比色検出用の対応する基質を包含し、固定されたキャプチャーは特異的モノクローナル抗体であり、ビオチン化キャプチャーはポリクローナル抗体であるか、または
前記検出キットが、血液シスタチンＳレベルを検出し、固体基質、前記固体基質上に固定されたシスタチンＳ、マウス抗シスタチンＳモノクローナル抗体、酵素標識化二次抗体および比色検出用の対応する基質を包含するか、または
前記検出キットが、血液シスタチンＳレベルを検出し、固体基質、キャプチャー、酵素標識化二次抗体および比色検出用の対応する基質を包含し、キャプチャーが特異的モノクローナル抗体を包含し、ビオチン化キャプチャーがポリクローナル抗体である、乳癌転移診断用又は乳癌ｐＴＮＭステージ判定用の検査キット。
【請求項５】
二重抗体サンドイッチＥＬＩＳＡキット、免疫ブロッティングキット、又は競合ＥＬＩＳＡキットである、請求項４に記載の乳癌転移診断用又は乳癌ｐＴＮＭステージ判定用の検査キット。
【請求項６】
前記検査キットが二重抗体サンドイッチＥＬＩＳＡキットであり、モノクローナル抗体がラット抗シスタチンＳ抗体であり、固体基質がＥＬＩＳＡプレートであり、ビオチン化ポリクローナル抗体がビオチン化ウサギ抗シスタチンＳポリクローナル抗体である、請求項５に記載の乳癌転移診断用又は乳癌ｐＴＮＭステージ判定用の検査キット。
【請求項７】
ラット抗シスタチンＳ抗体によりＥＬＩＳＡプレートをコーティングし、その後に３％ＢＳＡでバックフィルされ、８倍に希釈したサンプルを前記プレートにアプライし、それを３７℃でインキュベートし、ＴＢＳによってサンプルを含む前記穴を洗浄し、ビオチン化ウサギ抗シスタチンＳポリクローナル抗体を加え、３７℃で前記プレートをインキュベートし、ＴＢＳによってサンプルを含む穴を洗浄し、ストレプトアビジン−ビオチン−西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）複合体を加え、３７℃で前記プレートをインキュベートし、続いて、ＴＢＳでプレートを洗浄し、最後に検体をアルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）を添加し、マイクロプレートリーダーにおけるＯＤ（４０５ｎｍ）で読んで定量化される、請求項６に記載の乳癌転移診断用又は乳癌ｐＴＮＭステージ判定用の検査キット。
【請求項８】
前記検査キットが二重抗体サンドイッチＥＬＩＳＡキットであり、ＥＬＩＳＡプレートが固体基質であり、固定されたキャプチャーがラット抗シスタチンＳモノクローナル抗体であり、前記ビオチン化キャプチャーがウサギ抗シスタチンＳポリクローナル抗体（価数１：１０００である）でありおよび前記比色検出用基質がアルカリホスファターゼであるか、または
前記検査キットが競合ＥＬＩＳＡキットであり、ＥＬＩＳＡプレートが前記固体基質であり、シスタチンＳの濃度が５μｇ／ｍＬであり、前記特異的モノクローナル抗体がラット抗シスタチンＳ抗体（価数１：２０００である）であり、酵素ラベル化二次抗体がＡＬＰラベル化ヤギ抗マウスＩｇＧ（価数１：２０００であり）であり、および前記比色検出用基質がＡＬＰ基質であり、シスタチンＳ、酵素ラベル化二次抗体およびＡＬＰ基質の体積比が１：２であるか、または
前記検査キットが免疫ブロッティングキットであり、前記固体基質はニトロセルロース膜であり、前記キャプチャーはモノクローナルシスタチンＳ抗体（価数１：１０００である）であり、前記酵素ラベル化二次抗体はペルオキシダーゼラベル化ヤギ抗ウサギＩｇＧであり、および前記酵素基質はＴＭＢ溶液である、請求項５に記載の乳癌転移診断用又は乳癌ｐＴＮＭステージ判定用の検査キット。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３７】
【図１】ＣＳＴ４を含む組み換えプラスミドＰｍｄ１８−Ｔを示す図である。
【図２】扁桃腺、下垂体後葉、甲状腺、唾液腺、骨格筋、骨髄、赤血球および血小板を含まない末梢血、肺、胃、肝臓、心臓、腎臓、副腎、腸管、結腸、膵臓、脾臓、膀胱、前立腺、卵巣、子宮、胎盤および精巣、ヒト乳癌細胞株（ＨＣＣ１９３７、ＳＫ−ＢＲ−３、およびＭＣＦ−７）ならびに正常な乳房組織細胞株（Ｈｓ５７８Ｂｓｔ）を包含している、正常組織におけるＣＳＴ４遺伝子の発現を示す図である。
【図３】プローブとして蛍光色素を含むリアルタイムｑＰＣを用いる乳癌腫瘍およびそれらの個々の腫瘍隣接組織の２０個の場合におけるＣＳＴ１２４、ＣＳＴ１、ＣＳＴ２、ＣＳＴ４の発現比較を示す図である。
【図４】乳癌腫瘍およびそれぞれの腫瘍隣接組織の１００個の場合におけるリアルタイムＰＣＲにより定量化されるＣＳＴ４の発現を示す図である。
【図５】乳癌腫瘍の４０個の場合と４０個の生検サンプルにおけるリアルタイムＰＣＲにより定量化されるＣＳＴ４の発現を示す図である。
【図６】乳房癌転移を有する３０個のリンパ節サンプルおよび乳房癌転移を有しない３０個のリンパ節サンプル中のリアルタイムＰＣＲにより定量化されたＣＳＴ４の発現を示す図である。
【図７】細胞学的研究およびリアルタイムＰＣＲにより定量化された末梢血におけるＣＳＴ４発現を用いる乳癌診断の正確さの比較を示す図である。
【図８】細胞学的研究およびリアルタイムＰＣＲにより定量化されたＣＳＴ４発現を用いる乳癌骨髄転移予想の正確さの比較を示す図である。
【図９】リアルタイムＰＣＲ（Ａ）および受信者動作特性（ＲＯＣ）曲線（Ｂ）により定量化された５０人の乳癌患者、３０人の健常者および３０人の乳腺炎患者の無細胞ＲＮＡにおけるＣＳＴ４発現を示す図である。ＲＯＣ曲線は、乳腺炎および通常から乳癌を区別する方法の感度および特異性の評価のために用いられうる。
【図１０】ＬＣＲにより定量化された５０人の乳癌患者、３０人の健常者および３０人の乳腺炎患者の無細胞ＲＮＡにおけるＣＳＴ４発現を示す図である。
【図１１】逆転写ストランド置換増幅（ｒｔＳＤＡ）により定量化された５０人の乳癌患者、３０人の健常者および３０人の乳腺炎患者の無細胞ＲＮＡにおけるＣＳＴ４発現を示す図である。
【図１２】核酸ベース増幅（ＮＡＳＢＡ）により定量化される３０人の乳癌患者、２０人の健常者および２０人の乳腺炎患者の尿サンプルにおけるＣＳＴ４発現を示す図である。
【図１３】種々のｐＴＮＭステージ（３０人のＩ＋ＩＩの例および５０人のＩＩＩ＋ＩＶの例）にある８０人の乳癌患者の転写増幅法（ＴＭＡ）によるＣＳＴ４発現を示す図である。
【図１４】乳癌細胞株の培養上清（ｃｕｌｔｅｒ  ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔ）および健常者の血清におけるシスタチンＳ発現を示す図である。
【図１５】乳癌細胞株および健常者の血清におけるシスタチンＳ発現を示す図である。
【図１６】３０人の乳癌患者および２０人の健常者の血清サンプルにおける競合ＥＬＩＳＡによるシスタチンＳ発現を示す図である。
【図１７】乳癌予測のためのシスタチンＳおよびＣＥＡの特異性および感度比較（ＥＬＩＳＡにより測定）を示す図である。
【図１８】中央値より高いまたは低いシスタチンＳ発現を有する処置後の乳癌患者の無病生存率（ＤＦＳ）を示す図である。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１１８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１１８】
３．モノクローナル抗体を用いたＥＬＩＳＡによる血清シスタチンＳレベルの測定
実験：シスタチンＳ（５μｇ／ｍＬ）をＥＬＩＳＡプレートにアプライし、一晩（４℃）インキュベートした。５０個の血清サンプル（乳癌患者から３０個および健常者から２０個）を抗シスタチンＳモノクローナル抗体（価数１：２０００、３％のＢＳＡをＴＢＳに溶解させた）と混合し、当該サンプル混合物を前処理したＥＬＩＳＡプレートにアプライし、１時間（常温）インキュベートした。当該ＥＬＩＳＡプレートをＴＢＳ緩衝液で洗浄し、ヤギ抗ウサギ抗体（０．０８μｇ／ｍＬ、ＴＢＳに溶解させた）でインキュベートした。プレートをｐ−ニトロフェニルホスフェート（ｐ−ＮＰＰ）と反応させた。マイクロプレートリーダーを定量化のために用いた。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１１９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１１９】
図１６に示されているように、正常な血清中のシスタチンＳレベルの中央値は１．３５ｎｇ／ｍＬであり、乳癌血清中で２．９５ｎｇ／ｍＬである。３．１０５ｎｇ／ｍＬのカットオフ値は、癌性サンプルおよび健常サンプルを区別するのが可能である。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１５３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１５３】
９．乳癌の治療のために化学療法と組み合わせられる内分泌セラピーの評価用シスタチンＳ発現
実験の詳細は、セクション７と同一である。２８８５人の乳癌（Ｎ０−１ステージ）を研究した。患者をＡＣ（ドキソルビシン＋シクロホスファミド）又は（ドキソルビシン＋パクリタキセル）の４サイクルで処理した。内分泌セラピーは、ホルモン受容体条件に基づいて行われた。すべての患者は、７６ヶ月間追跡した。シスタチンＳ発現を上記セラピーの最終サイクルの後測定した。７７６人の場合が研究で検証され、そのシスタチンＳ発現中央値は３．９６ｎｇ／ｍＬだった。図１８に示されているように、中央値よりも高いシスタチンＳ発現を有する患者の無病生存率（ＤＦＳ）は４９％であり、中央値よりも低いシスタチンＳ発現を有する群の生存率（６４％）より低かった。