【誤訳訂正書】
【提出日】平成28年10月25日(2016.10.25)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
組換えリソソーム酵素に結合したターゲティングペプチドを製造する方法であって：
第１の架橋剤で修飾された組換えヒトリソソーム酵素を、一つ又はそれより多い第２の架橋剤で修飾された変異型ＩＧＦ−２ペプチドに結合させること；
を含んでなり、ここで
第１の架橋剤で修飾された組換えリソソーム酵素は、第１の架橋剤で化学的に修飾されたＮ−末端及び一つ又はそれより多い第１の架橋剤で修飾されたリシン残基を有するとして特徴付けられる組換えリソソーム酵素を含んでなり；そして
一つ又はそれより多い第２の架橋剤で修飾された変異型ＩＧＦ−２ペプチドは、アミノ（Ｎ）末端の、５ないし２０個のアミノ酸残基を含んでなる短い伸長リンカー内の第２の架橋剤で修飾されたアミノ酸を含んでなる一つ又はそれより多い変異型ＩＧＦ−２ペプチドを含んでなり、
変異型ＩＧＦ−２ペプチドは、以下の修飾：６位におけるグルタミン酸のアルギニンへの置換；アミノ酸１−４及び６の削除；アミノ酸１−４及び６、７の削除；アミノ酸１−４及び６の削除並びに７位におけるトレオニンのリシンへの置換；アミノ酸１−４の削除及び６位におけるグルタミン酸のグリシンへの置換及び７位におけるトレオニンのリシンへの置換；２７位におけるチロシンのロイシンへの置換；４３位におけるバリンのロイシンへの置換；６５位におけるリシンのアルギニンへの置換の一つ又は組合せを含有する、前記方法。
【請求項２】
前記組換えヒトリソソーム酵素が、ヒト酸性α−グルコシダーゼ（ｒｈＧＡＡ）である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
二つのリシン残基が、前記組換えヒトリソソーム酵素上で修飾される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記第１の架橋剤が、Ｎ−スクシンイミジル６−ヒドラジノニコチン酸アセトン（Ｓ−Ｈｙｎｉｃ）を含んでなる、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記第２の架橋剤が、ＰＥＧ４−ペンタフルオロベンゼン−４−ホルミル安息香酸（ＰＥＧ４−ＰＦＢ）を含んでなる、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
組換えヒトリソソーム酵素上のＮ−末端及び一つ又はそれより多いリシン残基が、第一アミンを欠くｐＨ７．３の緩衝液中で、３０分間室温で修飾される、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記第１の架橋剤で修飾された組換えヒトリソソーム酵素を、前記短い伸長リンカーを含有する第２の架橋剤で修飾された変異型ＩＧＦ−２ペプチドに結合させる前に、前記短い伸長リンカーを含有する第２の架橋剤で修飾された変異型ＩＧＦ−２ペプチドを精製することを更に含んでなる、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記第１の架橋剤が、スルホ−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル−ホスフィン（スルホ−ＮＨＳ−ホスフィン）を含んでなる、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記第１の架橋剤が、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル−テトラオキサペンタデカンアセチレン（ＮＨＳ−ＰＥＧ４−アセチレン）を含んでなる、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記第１の架橋剤が、ジフルオロシクロオクチン（ＤＩＦＯ）及びジベンゾシクロオクチン（ＤＩＢＯ）から選択されるヘテロ二官能性架橋剤を含んでなる、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記第２の架橋剤が、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル−ＰＥＧ４−アジド（ＮＨＳ−ＰＥＧ４−アジド）を含んでなる、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
酵素置換療法に適した分子を製造する方法であって：
ヘテロ二官能性架橋剤を変異型ＩＧＦ−２ペプチドに結合させること；及び
ヘテロ二官能性架橋剤で修飾された変異型ＩＧＦ−２ペプチドを、組換えヒトリソソーム酵素に結合させること；
又は、
ヘテロ二官能性架橋剤を組換えヒトリソソーム酵素に結合させること；及び
ヘテロ二官能性架橋剤で修飾された組換えヒトリソソーム酵素を、変異型ＩＧＦ−２ペプチドに結合させること；
を含んでなり、
変異型ＩＧＦ−２ペプチドは、以下の修飾：６位におけるグルタミン酸のアルギニンへの置換；アミノ酸１−４及び６の削除；アミノ酸１−４及び６、７の削除；アミノ酸１−４及び６の削除並びに７位におけるトレオニンのリシンへの置換；アミノ酸１−４の削除及び６位におけるグルタミン酸のグリシンへの置換及び７位におけるトレオニンのリシンへの置換；２７位におけるチロシンのロイシンへの置換；４３位におけるバリンのロイシンへの置換；６５位におけるリシンのアルギニンへの置換の一つ又は組合せを含有する、前記方法。
【請求項１３】
前記組換えヒトリソソーム酵素が、ヒト酸性α−グルコシダーゼ（ｒｈＧＡＡ）である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記二官能性架橋剤が、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）を含んでなる、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
組換えヒトリソソーム酵素に化学的に結合した一つ又はそれより多い変異型ＩＧＦ−２ペプチドを含んでなり、
変異型ＩＧＦ−２ペプチドは、以下の修飾：６位におけるグルタミン酸のアルギニンへの置換；アミノ酸１−４及び６の削除；アミノ酸１−４及び６、７の削除；アミノ酸１−４及び６の削除並びに７位におけるトレオニンのリシンへの置換；アミノ酸１−４の削除及び６位におけるグルタミン酸のグリシンへの置換及び７位におけるトレオニンのリシンへの置換；２７位におけるチロシンのロイシンへの置換；４３位におけるバリンのロイシンへの置換；６５位におけるリシンのアルギニンへの置換の一つ又は組合せを含有する、複合体。
【請求項１６】
前記組換えヒトリソソーム酵素が、ヒト酸性α−グルコシダーゼ（ｒｈＧＡＡ）である、請求項１５に記載の複合体。
【請求項１７】
化学的結合が、アミノ反応性二官能性架橋剤から誘導される架橋剤に媒介されている、請求項１５に記載の複合体。
【請求項１８】
化学的結合が、Ｎ−スクシンイミジル６−ヒドラジノニコチン酸アセトン（Ｓ−Ｈｙｎｉｃ）から誘導される架橋剤に媒介されている、請求項１５に記載の複合体。
【請求項１９】
化学的結合が、スルホ−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル−ホスフィン（スルホ−ＮＨＳ−ホスフィン）から誘導される架橋剤に媒介されている、請求項１５に記載の複合体。
【請求項２０】
化学的結合が、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル−テトラオキサペンタデカンアセチレン（ＮＨＳ−ＰＥＧ４−アセチレン）から誘導される架橋剤に媒介されている、請求項１５に記載の複合体。
【請求項２１】
化学的結合が、ジフルオロシクロオクチン（ＤＩＦＯ）及びジベンゾシクロオクチン（ＤＩＢＯ）から選択されるヘテロ二官能性架橋剤から誘導される架橋剤に媒介されている、請求項１５に記載の複合体。
【請求項２２】
組換えヒトリソソーム酵素に結合したヘテロ二官能性架橋剤で修飾された変異型ＩＧＦ−２ペプチドを含んでなる、請求項１５に記載の複合体。
【請求項２３】
リソソーム蓄積症に罹った対象を治療するための医薬であって、請求項１５に記載の複合体のリソソーム蓄積症を治療するために十分な量を含んでなる、医薬。
【請求項２４】
前記リソソーム蓄積症が、以下の：ポンペ病、ファブリー病、及びゴーシェ病、ＭＰＳ  Ｉ、ＭＰＳ  ＩＩ、ＭＰＳ  ＶＩＩ、テイ・サックス、サンドホフ、α−マンノシドーシス、並びにウォルマンの少なくとも一つである、請求項２３に記載の医薬。
【請求項２５】
前記変異型ＩＧＦ−２ペプチドが、配列番号：２のアミノ酸配列を含んでなる、請求項１に記載の方法。
【請求項２６】
前記変異型ＩＧＦ−２ペプチドが、配列番号：２のアミノ酸配列を含んでなる、請求項１５に記載の複合体。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００９】
[0008]哺乳動物において、ＩＧＦ−２は、胚発生中の主要な成長ホルモンである。誕生後、それはもはや成長を媒介しないが、ＩＧＦ−２レベルは、比較的一定のままである（成長は、生涯を通してヒト成長ホルモンによる刺激により、ＩＧＦ−１によって媒介される）。誕生後のＩＧＦ−２の役割は、十分に理解されていないが、しかしこのペプチドは、創傷治癒及び組織修復を援助すると信じられている。ＩＧＦ−２は、遊離のＩＧＦ−２ペプチドのレベルを媒介する血清ＩＧＦ結合タンパク質（ＩＧＦＢＰ１−６）によって循環中に殆ど結合されている。これらのＩＧＦＢＰは、インスリン及びＩＧＦ−１も結合し、そしてこれらの循環レベルを制御する。ＩＧＦ−２／ＣＩ−ＭＰＲは、遊離のＩＧＦ−２ペプチドのための天然のクリアランス経路である。ＩＧＦ−２はインスリン及びＩＧＦ−１と構造的に類似であるために、これは、ＩＧＦ−２／ＣＩ−ＭＰＲと比較して、インスリン受容体（約１００倍低い）及びＩＧＦ−１受容体（約２３０倍低い）に対する低い親和性を有する。この特異性は、各種のアミノ酸を除去するか、又は特異的なアミノ酸残基（例えば、［Ｌｅｕ２７］ＩＧＦ−２＆［Ｌｅｕ４３］ＩＧＦ−２）を置換して、ＩＧＦ−２／ＣＩ−ＭＲＰに対する高親和性結合（表１）を維持し、しかしインスリン及びＩＧＦ−１受容体に対する結合を有意に減少させるか、又は排除することによって、著しく改善することができる。同様に、最初の６個のアミノ酸残基を欠くＩＧＦ２の変異型又は６位におけるグルタミン酸のアルギニンへの置換は、ＩＧＦＢＰに対するＩＧＦ２ペプチドの親和性を有意に減少させることが示されている。重要なことには、ＩＧＦ−２ペプチドは、臨床試験において安全であることが示されており、そしてある種の成長障害を治療することを援助するために臨床的に使用されている。これらの集合的データは、ＩＧＦ−２ペプチドを、組換えリソソーム酵素の細胞取込み及びリソソームへの輸送を容易にするために、伝統的なＭ６Ｐ糖鎖構造の代わりのターゲティングモチーフとして使用することができることを示唆する。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７４】
実施例９
[0083]配列番号：１は、Ｎ−末端伸長リンカー領域及びＴＥＶプロテアーゼ認識部位を伴う、８ＸＨｉｓ−標識された［（ｄｅｌ１−４）−Ａｒｇ６−Ｌｅｕ２７−Ａｒｇ６５］ＩＧＦ−２ペプチドに対するｃＤＮＡ配列を表す（Ｅ．ｃｏｌｉ中の発現のために最適化）。
配列番号：１：
ａｔｇｇｇｃａｇｃｃａｃｃａｃｃａｃｃａｔｃａｔｃａｃｃａｃｃａｃａｃｔａｇｔｇｃｃｇｇｃｇａｇａａｔｃｔｇｔａｃｔｔｔｃａｇｇｇｃｇｇｔｇｇｔｇｇｔａｇｃｇｇｃｇｇｔｇｇｔｇｇｔａｇｃｃｇｔａｃｃｃｔｇｔｇｔｇｇｔｇｇｃｇａａｔｔｇｇｔｔｇａｔａｃｇｃｔｇｃａａｔｔｃｇｔｃｔｇｔｇｇｔｇａｃｃｇｃｇｇｔｔｔｃｃｔｇｔｔｃｔｃｔｃｇｔｃｃｇｇｃｇｔｃｃｃｇｃｇｔｇａｇｃｃｇｔｃｇｃａｇｃｃｇｔｇｇｔａｔｃｇｔｔｇａａｇａｇｔｇｃｔｇｔｔｔｔｃｇｔａｇｃｔｇｃｇａｃｃｔｇｇｃｔｃｔｇｃｔｇｇａａａｃｃｔａｔｔｇｃｇｃｇａｃｃｃｃｇｇｃａｃｇｔａｇｃｇａｇｔｇａ
[0084]配列番号：２は、伸長配列を伴う変異型ＩＧＦ２ペプチドに対するアミノ酸配列を表す。
配列番号：２：
ＮＨ２−ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＲＴＬＣＧＧＥＬＶＤＴＬＱＦＶＣＧＤＲＧＦＬＦＳＲＰＡＳＲＶＳＲＲＳＲＧＩＶＥＥＣＣＦＲＳＣＤＬＡＬＬＥＴＹＣＡＴＰＡＲＳＥ−ＣＯＯＨ
[0085]配列番号：２は、ＴＥＶプロテアーゼによるＮ−末端の８ＸＨｉｓ標識の除去後の変異型ＩＧＦ２ペプチドに対応する。この変異型ＩＧＦ２ペプチドは、Ｎ−末端のセリン残基が、ＷＴ  ＩＧＦ２の残基５に対応するように、残基１−４を欠く。６位においてグルタミン酸を置換するアルギニンは、血清ＩＧＦ結合性タンパク質（ＩＧＦＢＰ）に対するＩＧＦ２ペプチドの結合親和性を実質的に低下させることが知られている。２７位におけるロイシンへのチロシンの置換は、インスリン及びＩＧＦ１受容体に対するＩＧＦ２ペプチドの結合親和性を実質的に低下させることが知られている。６５位におけるアルギニンへのリシンの保存的置換は、リソソーム酵素への結合のためのＮ−末端の伸長リンカー領域のみの化学的修飾を可能にするために使用された。Ｎ−末端の伸長領域は、配列番号：３によって表される。