【手続補正書】
【提出日】平成28年7月11日(2016.7.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
第一重鎖ポリペプチドと、少なくとも1つのＣＤ3発現細胞上のＣＤ3複合体と結合するＣＤ3結合ポリペプチド構築物とを含む第一ポリペプチド構築物；
前記第一重鎖ポリペプチドとは異なる第二重鎖ポリペプチドと、少なくとも1つのＢ細胞上の標的抗原と結合する抗原結合ポリペプチド構築物とを含む第二ポリペプチド構築物
を含む単離多重特異性ヘテロ多量体構築物であって、
前記ＣＤ3結合ポリペプチド構築物および前記抗原結合ポリペプチド構築物のうちの少なくとも1つが一本鎖Ｆｖ領域を含み；
任意で、前記多重特異性ヘテロ多量体構築物が1より大きい結合価で前記少なくとも1つのＢ細胞に結合し；
ＣＤ3発現細胞が活性化され、それによりＢ細胞の死滅を誘導するよう、前記多重特異性ヘテロ多量体構築物が前記少なくとも1つのＢ細胞および前記少なくとも1つのＣＤ3発現細胞に同時に関与し；かつ
前記第一および第二重鎖ポリペプチドが、前記ヘテロ二量体Ｆｃの形成を促す少なくとも1つのアミノ酸突然変異を含む変異体免疫グロブリンＣＨ3領域を含むヘテロ二量体Ｆｃ領域を形成し、
前記ヘテロ二量体Ｆｃは少なくともネイティブホモ二量体Ｆｃに匹敵する安定性を伴って形成され、かつ
前記ヘテロ二量体Ｆｃは、前記多重特異性ヘテロ多量体構築物が発現生成物において安定な哺乳動物細胞から同時発現される場合、前記発現生成物が少なくとも約70％の前記多重特異性ヘテロ多量体構築物を含み、かつ前記第一または第二ポリペプチド構築物の単量体またはホモ二量体を10％未満含むような純度で形成され；
前記ヘテロ多量体構築物が任意で少なくとも1つのリンカーを含み、かつ前記リンカーが任意で約1〜約100個のアミノ酸を含むポリペプチドを含む、単離多重特異性ヘテロ多量体構築物。
【請求項２】
前記第一または第二ポリペプチド構築物が、免疫グロブリン軽鎖および免疫グロブリン第一定常（ＣＨ1）領域のうちの少なくとも1つを欠いている、請求項1記載の単離多重特異性ヘテロ多量体構築物。
【請求項３】
前記ヘテロ二量体Ｆｃ領域が、すべてのＦｃガンマ受容体との機能的に有効な結合を妨げるアミノ酸修飾を含む、変異体ＣＨ2ドメインまたはヒンジを含み；
任意で、アミノ酸修飾を含む前記変異体ＣＨ2ドメインまたはヒンジが、補体タンパク質（Ｃ1ｑ複合体）との機能的に有効な結合も妨げ；
任意で、前記ヘテロ二量体Ｆｃ領域が、ＦｃγＲＩＩｂ受容体との結合を増強するアミノ酸修飾を含む変異体ＣＨ2ドメインまたはヒンジを含み；
任意で、前記ヘテロ二量体Ｆｃ領域が、Ｆｃガンマ受容体の選択的結合を促進するためのアミノ酸修飾を含む変異体ＣＨ2ドメインを含み；
任意で、前記変異体ＣＨ2ドメインが、野生型ＣＨ2ドメインより多くＦｃガンマＩＩｂ受容体に選択的に結合し、かつ任意で前記変異体ＣＨ2ドメインが、野生型ＣＨ2ドメインより多くＦｃガンマＩＩＩａおよびＦｃガンマＩＩａ受容体のうちの少なくとも1つに選択的に結合する、請求項1〜2のいずれか一項に記載の単離多重特異性ヘテロ多量体構築物。
【請求項４】
前記抗原結合ポリペプチド構築物が、存在しないかまたは立体調節構築物に取って代わられている、請求項1〜3のいずれか一項に記載の単離多重特異性ヘテロ多量体構築物。
【請求項５】
第一重鎖ポリペプチドと、少なくとも1つのＣＤ3発現細胞上のＣＤ3複合体と結合するＣＤ3結合ポリペプチド構築物とを含む第一ポリペプチド構築物；
前記第一重鎖ポリペプチドとは異なる第二重鎖ポリペプチドを含む第二ポリペプチド構築物であって、抗原結合ポリペプチド構築物を含まない、第二ポリペプチド構築物
を含む単離多重特異性ヘテロ多量体構築物であって、
ＣＤ3発現細胞が活性化され、それによりＢ細胞の死滅を誘導するよう、前記多重特異性ヘテロ多量体構築物が少なくとも1つのＢ細胞および前記少なくとも1つのＣＤ3発現細胞に同時に関与し；かつ
前記第一および第二重鎖ポリペプチドが、前記ヘテロ二量体Ｆｃの形成を促す少なくとも1つのアミノ酸突然変異を含む変異体免疫グロブリンＣＨ3領域を含むヘテロ二量体Ｆｃ領域を形成し、
前記ヘテロ二量体Ｆｃは少なくともネイティブホモ二量体Ｆｃに匹敵する安定性を伴って形成され、かつ
前記ヘテロ二量体Ｆｃは、前記多重特異性ヘテロ多量体構築物が発現生成物において安定な哺乳動物細胞から同時発現される場合、前記発現生成物が少なくとも約75％の前記多重特異性ヘテロ多量体構築物を含み、かつ前記第一または第二ポリペプチド構築物の単量体またはホモ二量体を10％未満含むような純度で形成される、単離多重特異性ヘテロ多量体構築物。
【請求項６】
前記ヘテロ二量体Ｆｃ領域が９０％以上の純度で形成され、Ｔｍが少なくとも７５℃であり；任意で、前記ヘテロ二量体Ｆｃ領域が９５％以上の純度で形成されている、請求項1〜5のいずれか一項に記載の単離多重特異性ヘテロ多量体構築物。
【請求項７】
ａ．  第一重鎖ポリペプチドの変異体ＣＨ3配列がアミノ酸修飾Ｌ351Ｙ、Ｆ405Ａ、およびＹ407Ｖを含み、かつ第二重鎖ポリペプチドの変異体ＣＨ3配列がアミノ酸修飾Ｔ366Ｌ、Ｋ392Ｍ、およびＴ394Ｗを含むか；
ｂ．  第一重鎖ポリペプチドの変異体ＣＨ3配列がアミノ酸修飾Ｌ351Ｙ、Ｆ405Ａ、およびＹ407Ｖを含み、かつ第二重鎖ポリペプチドの変異体ＣＨ3配列がアミノ酸修飾Ｔ366Ｌ、Ｋ392Ｌ、およびＴ394Ｗを含むか；
ｃ．  第一重鎖ポリペプチドの変異体ＣＨ3配列がアミノ酸修飾Ｔ350Ｖ、Ｌ351Ｙ、Ｆ405Ａ、およびＹ407Ｖを含み、かつ第二重鎖ポリペプチドの変異体ＣＨ3配列がアミノ酸修飾Ｔ350Ｖ、Ｔ366Ｌ、Ｋ392Ｍ、およびＴ394Ｗを含むか；
ｄ．  第一重鎖ポリペプチドの変異体ＣＨ3配列がアミノ酸修飾Ｔ350Ｖ、Ｌ351Ｙ、Ｆ405Ａ、およびＹ407Ｖを含み、かつ第二重鎖ポリペプチドの変異体ＣＨ3配列がアミノ酸修飾Ｔ350Ｖ、Ｔ366Ｌ、Ｋ392Ｌ、およびＴ394Ｗを含むか；
ｅ．  第一重鎖ポリペプチドの変異体ＣＨ3配列がアミノ酸修飾Ｔ366Ｌ、Ｎ390Ｒ、Ｋ392Ｒ、およびＴ394Ｗを含み、かつ第二重鎖ポリペプチドの変異体ＣＨ3配列がアミノ酸修飾Ｌ351Ｙ、Ｓ400Ｅ、Ｆ405Ａ、およびＹ407Ｖを含むか；あるいは
ｆ．  第一重鎖ポリペプチドの変異体ＣＨ3配列がアミノ酸修飾Ｔ350Ｖ、Ｔ366Ｌ、Ｎ390Ｒ、Ｋ392Ｒ、およびＴ394Ｗを含み、かつ第二重鎖ポリペプチドの変異体ＣＨ3配列がアミノ酸修飾Ｔ350Ｖ、Ｌ351Ｙ、Ｓ400Ｅ、Ｆ405Ａ、およびＹ407Ｖを含む、請求項1〜6のいずれか一項に記載の単離多重特異性ヘテロ多量体構築物。
【請求項８】
前記ヘテロ二量体Ｆｃがアフコシル化（afucosylated）されている、および／またはアグリコシル化（aglycosylated）されている、請求項1〜7のいずれか一項に記載の単離多重特異性ヘテロ多量体構築物。
【請求項９】
少なくとも1つのＣＤ3発現細胞上のＣＤ3複合体と結合する少なくとも1つのＣＤ3結合ポリペプチド構築物と融合された第一輸送体ポリペプチドを含む第一ポリペプチド構築物；
少なくとも1つのＢ細胞上の標的抗原と結合する少なくとも1つの抗原結合ポリペプチド構築物と融合された、前記第一輸送体ポリペプチドとは異なる第二輸送体ポリペプチドを含む第二ポリペプチド構築物
を含む単離多重特異性ヘテロ多量体構築物であって、
前記第一および第二輸送体ポリペプチドが前記タンパク質のセグメント化によるタンパク質に由来し、各輸送体ポリペプチドが前記タンパク質のセグメントと少なくとも90％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ前記輸送体ポリペプチドが自己集合して前記単量体タンパク質の擬似ネイティブ構造を形成し；
任意で、各輸送体ポリペプチドがアルブミン誘導体であり；
任意で、前記アルブミンがヒト血清アルブミンであるかまたはアロアルブミン誘導体であり；
任意で、各輸送体ポリペプチドが異なるアロアルブミンに由来する、単離多重特異性ヘテロ多量体構築物。
【請求項１０】
少なくとも1つのＢ細胞上の標的抗原と結合する前記抗原結合ポリペプチド構築物が、抗体、フィブロネクチン、アフィボディ、アンチカリン、システインノットタンパク質、ＤＡＲＰｉｎ、アビマー、クニッツドメイン、またはその変異体もしくは誘導体に由来する少なくとも1つの標的抗原結合ドメインを含む、請求項1〜3および5〜9のいずれか一項に記載の単離多重特異性ヘテロ多量体構築物。
【請求項１１】
前記抗原結合ポリペプチド構築物が、少なくとも1つのＣＤ19結合ドメインまたは少なくとも1つのＣＤ20結合ドメインを含む、請求項1〜10のいずれか一項に記載の単離多重特異性ヘテロ多量体構築物。
【請求項１２】
前記少なくとも1つのＣＤ3結合ポリペプチド構築物が、ＣＤ3特異的抗体、ナノボディ、フィブロネクチン、アフィボディ、アンチカリン、システインノットタンパク質、ＤＡＲＰｉｎ、アビマー、クニッツドメイン、またはその変異体もしくは誘導体に由来する少なくとも1つのＣＤ3結合ドメインを含み；
任意で、前記少なくとも1つのＣＤ3結合ドメインが、修飾を含まない対応するＣＤ3結合ドメインと比較した場合に免疫原性を低減させる少なくとも1つのアミノ酸修飾を含み；
任意で、前記少なくとも1つのＣＤ3結合ドメインが、修飾を含まない対応するＣＤ3結合ドメインと比較した場合にＴｍにより測定されるその安定性を増大させる少なくとも1つのアミノ酸修飾を含み； 
任意で、前記少なくとも1つのＣＤ3結合ポリペプチド構築物が、非抗体タンパク質足場ドメイン由来の少なくとも1つのＣＤ3結合ドメインを含む、請求項1〜11のいずれか一項に記載の単離多重特異性ヘテロ多量体構築物。
【請求項１３】
前記ＣＤ3特異的抗体が、軽鎖を欠く重鎖抗体である、請求項12に記載の単離多重特異性ヘテロ多量体構築物。
【請求項１４】
前記第一および第二ポリペプチド構築物のうちの少なくとも1つが、一本鎖Ｆｖポリペプチドをさらに含み；
任意で、前記第一および第二ポリペプチド構築物のうちの少なくとも1つが、一本鎖Ｆａｂポリペプチドをさらに含む、請求項1〜13のいずれか一項に記載の単離多重特異性ヘテロ多量体構築物。
【請求項１５】
ＣＤ3発現細胞がＴ細胞であり；
任意で、前記ヘテロ多量体構築物が、十分な親和性でＴ細胞と結合し、Ｔ細胞とＢ細胞が架橋される際にＢ細胞死滅活性を示すようＴ細胞を誘導する十分な能力でＴ細胞を修飾する、請求項1〜14のいずれか一項に記載の単離多重特異性ヘテロ多量体構築物。
【請求項１６】
請求項1〜15のいずれか一項に記載の多重特異性ヘテロ多量体構築物を発現するための一式の発現ベクターであって、前記第一ポリペプチド構築物をコードする少なくとも1つの第一ＤＮＡ配列および前記第二ポリペプチド構築物をコードする少なくとも1つの第二ＤＮＡ配列を含む、一式の発現ベクター。
【請求項１７】
安定な哺乳動物細胞で、請求項1〜15のいずれか一項に記載の多重特異性ヘテロ多量体構築物を含有する発現生成物の産生方法であって、
前記第一ポリペプチド構築物をコードする少なくとも1つの第一ＤＮＡ配列および前記第二ポリペプチド構築物をコードする少なくとも1つの第二ＤＮＡ配列で少なくとも1つの哺乳動物細胞をトランスフェクトし、これにより前記少なくとも1つの第一ＤＮＡ配列、前記少なくとも1つの第二ＤＮＡ配列が、予定比率で前記少なくとも1つの哺乳動物細胞にトランスフェクトされて安定な哺乳動物細胞を生成する段階；
前記安定な哺乳動物細胞を培養して前記多重特異性ヘテロ多量体構築物を含む前記発現生成物を産生する段階
を包含し、
任意で、少なくとも1つの第一ＤＮＡ配列：少なくとも1つの第二ＤＮＡ配列の前記予定比率が、約1:1であり；
任意で、前記哺乳動物細胞が、ＶＥＲＯ、ＨｅＬａ、ＨＥＫ、ＮＳ0、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）、Ｗ138、ＢＨＫ、ＣＯＳ−7、Ｃａｃｏ−2およびＭＤＣＫ細胞、ならびにそのサブクラスおよび変異体からなる群から選択される、方法。
【請求項１８】
請求項1〜15のいずれか一項で定義されるような多重特異性ヘテロ多量体構築物、および適切な賦形剤を含み；任意で、前記ヘテロ二量体が別の治療薬と一緒になっている、薬学的組成物。
【請求項１９】
別の治療薬をさらに含む、請求項1〜15のいずれか一項に記載の前記ヘテロ多量体構築物を含む組成物。
【請求項２０】
(i)増殖性疾患、微小残存癌、腫瘍性疾患、炎症性疾患、免疫学的障害、自己免疫疾患、感染性疾患、ウィルス性疾患、アレルギー反応、寄生生物性反応、移植片対宿主疾患または宿主対移植片疾患、あるいは細胞悪性腫瘍のうちの少なくとも1つの防止、処置または改善のための方法；
(ii)それを必要とする哺乳動物における癌の処置方法であって、
有効量の請求項18に記載の薬学的組成物を任意で他の薬学的に活性な分子と組み合わせて含む組成物を前記哺乳動物に投与する段階を包含し、
任意で、前記癌が固形腫瘍であり；
任意で、前記固形腫瘍が肉腫、癌腫およびリンパ腫のうちの1つ以上であり；
任意で、前記癌が血液学的癌であり；
任意で、前記血液学的癌が、Ｂ細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、および白血病のうちの1つ以上である、方法；
(iii)それを必要とする哺乳動物における、ＣＤ19溶解性抗体、ＣＤ20溶解性抗体およびブリナツモマブのうちの少なくとも1つに非応答性であるか、その後の再発であるか、それで処置されている癌の処置方法であって、
有効量の請求項18に記載の薬学的組成物を含む組成物を前記哺乳動物に投与する段階を包含する、方法；および
(iv)それを必要とする哺乳動物における自己免疫症状の処置方法であって、
有効量の請求項18で提供される薬学的組成物を含む組成物を前記哺乳動物に投与する段階を包含し、
任意で、前記自己免疫症状が、多発性硬化症、関節リウマチ、全身性紅斑性狼瘡、乾癬性関節炎、乾癬、血管炎、ブドウ膜炎、クローン病、および1型糖尿病のうちの1つ以上である、方法
における使用のための請求項18に記載の薬学的組成物。
【請求項２１】
請求項1〜15のいずれか一項で定義されるようなヘテロ多量体構築物を含むキット、ならびにその使用説明書。