【手続補正書】
【提出日】平成28年11月11日(2016.11.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリペプチド及び一又は複数の混入物を含む組成物を分析するための方法であって、該方法が、
ａ）ローディングバッファーを使用して、ポリペプチド及び一又は複数の混入物をイオン交換クロマトグラフィー材料に結合させる工程であって、ローディングバッファーが最初のｐＨであり、且つ最初のイオン強度を含む工程と；
ｂ）溶出バッファーを使用して、イオン交換クロマトグラフィー材料からポリペプチド及び一又は複数の混入物を溶出する工程であって、溶出バッファーのｐＨはｐＨ勾配で変更され、且つ溶出バッファーのイオン強度はイオン強度勾配で変更され、ポリペプチド及び一又は複数の混入物がｐＨ勾配及びイオン強度勾配の組み合わせにより分離される工程と；
ｃ）ポリペプチド及び一又は複数の混入物を検出する工程
とを含む方法。
【請求項２】
ポリペプチド及び一又は複数の混入物を含む組成物を分析するための方法であって、該方法が、
ａ）ローディングバッファーを使用して、ポリペプチド及び一又は複数の混入物をイオン交換クロマトグラフィー材料に結合させる工程であって、ローディングバッファーが初期ｐＨであり、且つ初期イオン強度を含む工程と；
ｂ）溶出バッファーを使用して、イオン交換クロマトグラフィー材料からポリペプチド及び一又は複数の混入物を溶出する工程であって、溶出バッファーのｐＨはｐＨ勾配で変更され、且つ溶出バッファーのイオン強度はローディングバッファーの初期イオン強度と基本的に同一であり、ポリペプチド及び一又は複数の混入物はｐＨ勾配によりほぼ初期イオン強度で分離される工程と；
ｃ）ポリペプチド及び一又は複数の混入物を検出する工程
とを含む方法。
【請求項３】
ポリペプチドが約９．０より大きいｐＩを有する、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
クロマトグラフィー材料が陽イオン交換クロマトグラフィー材料である、請求項１から３の何れか一項に記載の方法。
【請求項５】
陽イオン交換クロマトグラフィー材料がスルホン化されたクロマトグラフィー材料又はカルボキシル化されたクロマトグラフィー材料である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
ｐＨ勾配が直線勾配である、請求項１から５の何れか一項に記載の方法。
【請求項７】
ｐＨ勾配が段階勾配である、請求項１から５の何れか一項に記載の方法。
【請求項８】
ｐＨ勾配が約ｐＨ５から約ｐＨ１１への増加を含む、請求項６又は７に記載の方法。
【請求項９】
ｐＨ勾配が一又は複数のバッファーを使用してつくられる、請求項１から８の何れか一項に記載の方法。
【請求項１０】
一又は複数のバッファーが、ピペラジン、イミダゾール、トリス、ホスフェート又はＣＡＰＳから選択される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
イオン強度勾配が直線勾配である、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
イオン強度勾配が段階勾配である、請求項１又は１１に記載の方法。
【請求項１３】
イオン強度勾配が約０ｍＭから約２００ｍＭへの塩濃度の増加を含む、請求項１１又は１２に記載の方法。
【請求項１４】
イオン強度勾配がＮａＣｌ勾配、ＫＣｌ勾配又はＮａ２ＳＯ４勾配である、請求項１１から１３の何れか一項に記載の方法。
【請求項１５】
溶出バッファーのイオン強度が約０ｍＭから約１００ｍＭである、請求項２に記載の方法。
【請求項１６】
溶出バッファーが約０ｍＭのＮａＣｌから約１００ｍＭのＮａＣｌ、約０ｍＭのＫＣｌから約１００ｍＭのＫＣｌ、又は約０ｍＭのＮａ２ＳＯ４から約１００ｍＭのＮａ２ＳＯ４を含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
ポリペプチドが約７．０より小さいｐＩを有する、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
クロマトグラフィー材料が陰イオン交換クロマトグラフィー材料である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
陰イオン交換クロマトグラフィー材料が第四級アミンクロマトグラフィー材料又は第三級アミンクロマトグラフィー材料である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
ｐＨ勾配が直線勾配である、請求項１７から１９の何れか一項に記載の方法。
【請求項２１】
ｐＨ勾配が段階勾配である、請求項１７から１９の何れか一項に記載の方法。
【請求項２２】
ｐＨ勾配が約ｐＨ８から約ｐＨ５への減少を含む、請求項２０又は２１に記載の方法。
【請求項２３】
ｐＨ勾配が一又は複数のバッファーを使用してつくられる、請求項１７から２２の何れか一項に記載の方法。
【請求項２４】
一又は複数のバッファーが、ピペラジン、イミダゾール又はトリスから選択される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
イオン強度勾配が直線勾配である、請求項１７から２４の何れか一項に記載の方法。
【請求項２６】
イオン強度勾配が段階勾配である、請求項１７から２４の何れか一項に記載の方法。
【請求項２７】
イオン強度勾配が約０ｍＭから約２００ｍＭへの塩濃度の増加を含む、請求項２５又は２６に記載の方法。
【請求項２８】
イオン強度勾配がＮａＣｌ勾配、ＫＣｌ勾配又はＮａ２ＳＯ４勾配である、請求項２５から２７の何れか一項に記載の方法。
【請求項２９】
ポリペプチドが約７．０より小さいｐＩを有する、請求項２に記載の方法。
【請求項３０】
クロマトグラフィー材料が陰イオン交換クロマトグラフィー材料である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
陰イオン交換クロマトグラフィー材料が第四級アミンクロマトグラフィー材料又は第三級アミンクロマトグラフィー材料である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
ｐＨ勾配が直線勾配である、請求項２９から３１の何れか一項に記載の方法。
【請求項３３】
ｐＨ勾配が段階勾配である、請求項２９から３１の何れか一項に記載の方法。
【請求項３４】
ｐＨ勾配が約ｐＨ８から約ｐＨ５への減少を含む、請求項３２又は３３に記載の方法。
【請求項３５】
ｐＨ勾配が一又は複数のバッファーを使用してつくられる、請求項２９から３４の何れか一項に記載の方法。
【請求項３６】
一又は複数のバッファーが、ピペラジン、イミダゾール又はトリスから選択される、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
溶出バッファーのイオン強度が約０ｍＭから約１００ｍＭである、請求項２９から３６の何れか一項に記載の方法。
【請求項３８】
溶出バッファーが約０ｍＭのＮａＣｌから約１００ｍＭのＮａＣｌを含む、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
分析が高速液体クロマトグラフィーによる、請求項１から３８の何れか一項に記載の方法。
【請求項４０】
ポリペプチド及び一又は複数の混入物を含む組成物中のポリペプチドを分析するための方法であって、該方法はポリペプチドから一又は複数の混入物を分離し、該方法が、
ａ）ローディングバッファーを使用して、ポリペプチド及び一又は複数の混入物をイオン交換クロマトグラフィー材料に結合させる工程であって、ローディングバッファーが最初のｐＨであり、且つ最初のイオン強度を含む工程と；
ｂ）溶出バッファーを使用して、イオン交換クロマトグラフィー材料からポリペプチド及び一又は複数の混入物を溶出する工程であって、溶出バッファーのｐＨはｐＨ勾配で変更され、且つ溶出バッファーのイオン強度はイオン強度勾配で変更され、ポリペプチド及び一又は複数の混入物はｐＨ勾配及びイオン強度勾配の組み合わせにより分離される工程と；
ｃ）ポリペプチド及び一又は複数の混入物を検出する工程
とを含み、
該方法が約７．０から約９．５の範囲のｐＩを有するポリペプチドを分析するために使用される方法。
【請求項４１】
ポリペプチド及び一又は複数の混入物を含む組成物中のポリペプチドを分析するための方法であって、該方法が、
ａ）ローディングバッファーを使用して、ポリペプチド及び一又は複数の混入物をイオン交換クロマトグラフィー材料に結合させる工程であって、ローディングバッファーが初期ｐＨであり、且つ初期イオン強度を含む工程と；
ｂ）溶出バッファーを使用して、イオン交換クロマトグラフィー材料からポリペプチド及び一又は複数の混入物を溶出する工程であって、溶出バッファーのｐＨはｐＨ勾配で変更され、且つ溶出バッファーのイオン強度はローディングバッファーの初期イオン強度と基本的に同一であり、ポリペプチド及び一又は複数の混入物はほぼ初期イオン強度においてｐＨ勾配により分離される工程と；
ｃ）ポリペプチド及び一又は複数の混入物を検出する工程
とを含み、
該方法が約７．０から約９．５の範囲のｐＩを有するポリペプチドを分析するために使用される方法。
【請求項４２】
ポリペプチドが抗体若しくはイムノアドヘシン又はそれらの断片である、請求項１から４１の何れか一項に記載の方法。
【請求項４３】
ポリペプチドがモノクローナル抗体又はその断片である、請求項１から４２の何れか一項に記載の方法。
【請求項４４】
抗体がヒト抗体、ヒト化抗体、又はキメラ抗体である、請求項４２又は４３に記載の方法。
【請求項４５】
抗体が抗体断片である、請求項４２から４４の何れか一項に記載の方法。
【請求項４６】
混入物がポリペプチドの変異体である、請求項１から４５の何れか一項に記載の方法。
【請求項４７】
混入物がポリペプチドの分解産物である、請求項１から４６の何れか一項に記載の方法。
【請求項４８】
混入物がポリペプチドの電荷変異体である、請求項１から４７の何れか一項に記載の方法。
【請求項４９】
ローディングバッファー及び／又は溶出バッファー中のバッファーの濃度が約１０ｍＭから約５０ｍＭで変化する、請求項１から４８の何れか一項に記載の方法。
【請求項５０】
最初のｐＨが約ｐＨ５．０から約ｐＨ７．０で変化する、請求項１から４９の何れか一項に記載の方法。
【請求項５１】
クロマトグラフィー材料の温度が約２０℃から約５０℃で変化する、請求項１から５０の何れか一項に記載の方法。
【請求項５２】
ローディング及び溶出が約０．５ｍｌ／分から約２．０ｍｌ／分で変化する流速で行われる、請求項１から５１の何れか一項に記載の方法。
【請求項５３】
請求項１から５２の方法の何れか一つにより組成物を分析する工程と、組成物中のポリペプチド対混入物の比率を決定する工程とを含む、組成物中のポリペプチドの純度を決定する方法。
【請求項５４】
ポリペプチドを含む組成物中のポリペプチドの安定性を決定する方法であって、該方法が、
ａ）ポリペプチドを含む組成物を４０℃で３又は６週間インキュベートする工程、
ｂ）請求項１から５３に記載の方法の何れかにより、工程ａ）の組成物を分析する工程、及び
ｃ）組成物中のポリペプチドに対する変異体の比率を決定する工程であって、インキュベートされなかった組成物と比較した組成物中のポリペプチドに対する変異体の比率の増加が、組成物中のポリペプチドの分解を示す工程
を含む方法。