【手続補正書】
【提出日】平成28年3月28日(2016.3.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗腫瘍応答を媒介するγ9δ2T細胞レセプターを同定するための方法であって、
a)T細胞を用意する工程;
b)γ9-CDR3コード領域を含むγ9-T細胞レセプター鎖をコードする核酸配列とδ2-CDR3コード領域を含むδ2-T細胞レセプター鎖をコードする核酸配列とを用意する工程であって、前記γ9-CDR3コード領域がランダムに改変され、前記δ2-CDR3コード領域がランダムに改変される、工程;
c)工程b)の核酸配列を前記T細胞中に導入して、工程b)のγ9-T細胞レセプター鎖および工程b)のδ2-T細胞レセプター鎖を含むγ9δ2T細胞レセプターを有する操作されたT細胞を用意する工程;
d)工程c)において用意される操作されたT細胞の抗腫瘍応答を決定する工程;
e)抗腫瘍応答を媒介する、前記操作されたT細胞のγ9δ2T細胞レセプターを同定する工程
を含む、方法。
【請求項２】
工程b)および工程c)を反復するさらなる工程を含み、前記さらなる工程において用意される操作されたT細胞について、前記操作されたT細胞の抗腫瘍応答が決定される、請求項1に記載の方法。
【請求項３】
γ9-T細胞レセプター鎖をコードする核酸配列が、配列番号1のアミノ酸配列と少なくとも60%の配列同一性を有するアミノ酸配列をコードし、および/またはδ2-T細胞レセプター鎖をコードする核酸配列が、配列番号2のアミノ酸配列と少なくとも60%の配列同一性を有するアミノ酸配列をコードする、請求項1又は2に記載の方法。
【請求項４】
ランダムに改変されたγ9-CDR3コード領域が、配列番号1のアミノ酸残基122〜124に対応するアミノ酸配列において改変される、請求項1から3のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
ランダムに改変されたδ2-CDR3コード領域が、配列番号2のアミノ酸残基115〜122に対応するアミノ酸配列において改変される、請求項1から4のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記δ2-CDR3コード領域に対応するアミノ酸配列をランダムに改変することが、長さにおける改変を含む、請求項5に記載の方法。
【請求項７】
アミノ酸配列をランダムに改変することが、アミノ酸の置換、欠失および/または挿入を導入することを含む、請求項1から6のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
γ9-T細胞レセプター鎖をコードする核酸配列が1つの発現ベクター中に提供され、δ2-T細胞レセプター鎖をコードする核酸配列が1つの発現ベクター中に提供される、またはγ9-T細胞レセプター鎖をコードする核酸配列およびδ2-T細胞レセプター鎖をコードする核酸配列が、単一の発現ベクター中に提供される、請求項1から7のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
γ9-T細胞レセプター鎖をコードする核酸配列が1つのレトロウイルスベクター中に提供され、δ2-T細胞レセプター鎖をコードする核酸配列が1つのレトロウイルスベクター中に提供される、またはγ9-T細胞レセプター鎖をコードする核酸配列およびδ2-T細胞レセプター鎖をコードする核酸配列が、単一のレトロウイルスベクター中に提供され、前記核酸配列を前記T細胞中に導入する工程が、前記T細胞のレトロウイルスベクター形質導入を含む、請求項1から8のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記抗腫瘍応答を決定する工程が、前記操作されたT細胞を腫瘍細胞と接触させる工程、ならびに前記腫瘍細胞を溶解させるおよび/またはIFN-γを誘導するその能力を測定する工程、を含む、請求項1から9のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
γ9-CDR3領域を含むγ9-T細胞レセプター鎖とδ2-CDR3領域を含むδ2-T細胞レセプター鎖とを含むγ9δ2T細胞レセプターまたはその断片であって、配列番号1のアミノ酸残基122〜124に対応するγ9-CDR3領域のアミノ酸配列が改変され、配列番号2のアミノ酸残基115〜122に対応するδ2-CDR3領域のアミノ酸配列が改変され、γ9δ2T細胞レセプターまたはその断片内のアミノ酸改変の組み合わせが以下：
【表１】
2015513900.tif 000001
に列挙される通りである、γ9δ2T細胞レセプターまたはその断片。
【請求項１２】
γ9-CDR3領域を含むγ9-T細胞レセプター鎖とδ2-CDR3領域を含むδ2-T細胞レセプター鎖とを含むγ9δ2T細胞レセプターまたはその断片であって、配列番号1のアミノ酸配列のアミノ酸残基122〜124に対応するγ9-CDR3領域のアミノ酸配列がAQQであり、配列番号2のアミノ酸配列のアミノ酸残基115〜122に対応するδ2-CDR3領域のアミノ酸配列がALKRTDである、γ9δ2T細胞レセプターまたはその断片。
【請求項１３】
配列番号1のアミノ酸配列のアミノ酸残基118〜121に対応するγ9-CDR3領域のアミノ酸配列がALWEであり、配列番号1のアミノ酸配列のアミノ酸残基125〜132に対応するγ9-CDR3領域のアミノ酸配列がELGKKIKVであり、配列番号2のアミノ酸配列のアミノ酸残基112〜114に対応するδ2-CDR3領域のアミノ酸配列がACDであり、配列番号2のアミノ酸配列のアミノ酸残基123〜127に対応するδ2-CDR3領域のアミノ酸配列がTDKLIである、請求項11または12に記載のγ9δ2T細胞レセプターまたはその断片。
【請求項１４】
前記γ9-T細胞レセプター鎖が、配列番号1のアミノ酸配列と少なくとも60%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記δ2-T細胞レセプター鎖が、配列番号2のアミノ酸配列と少なくとも60%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項11から13のいずれか一項に記載のγ9δ2T細胞レセプターまたはその断片。
【請求項１５】
前記γ9-T細胞レセプター鎖が、配列番号12のアミノ酸配列を含み、前記δ2-T細胞レセプター鎖が、配列番号14のアミノ酸配列を含み、又は、前記γ9-T細胞レセプター鎖が、配列番号1のアミノ酸配列を含み、前記δ2-T細胞レセプター鎖が、配列番号14のアミノ酸配列を含む、請求項11から13のいずれか一項に記載のγ9δ2T細胞レセプターまたはその断片。
【請求項１６】
前記γ9-T細胞レセプター鎖が、配列番号1のアミノ酸配列のアミノ酸残基1〜121および125〜315を含むアミノ酸配列を含み、改変されたアミノ酸残基122〜124が、請求項10から13のいずれか一項に規定される通りであり、前記δ2-T細胞レセプター鎖が、配列番号2のアミノ酸配列のアミノ酸残基1〜114および123〜293を含むアミノ酸配列を含み、改変されたアミノ酸残基115〜122が、請求項10から13のいずれか一項に規定される通りである、請求項11から15のいずれか一項に記載のγ9δ2T細胞レセプターまたはその断片。
【請求項１７】
薬剤に連結された、請求項11から16のいずれか一項に記載のγ9δ2T細胞レセプターの可溶性断片を含む、コンジュゲート。
【請求項１８】
前記薬剤が、診断剤、治療剤、抗癌剤、化学物質、ナノ粒子、化学療法剤または蛍光色素からなる群より選択される、請求項17に記載のコンジュゲート。
【請求項１９】
配列番号2のアミノ酸配列のアミノ酸残基115〜122に対応するδ2-CDR3領域が、アミノ酸残基ALKRTDまたはLLGYで置換される、請求項11から16のいずれか一項に規定されるδ2-T細胞レセプター鎖またはその断片をコードする単離された核酸配列。
【請求項２０】
配列番号1のアミノ酸配列のアミノ酸残基122〜124に対応するγ9-CDR3領域のアミノ酸配列が、アミノ酸残基IQで置換される、請求項11から16のいずれか一項に規定されるγ9-T細胞レセプター鎖またはその断片をコードする単離された核酸配列。
【請求項２１】
請求項19または20に記載の単離された核酸配列を含む、遺伝子構築物。
【請求項２２】
請求項21に記載の遺伝子構築物を含む、レトロウイルスベクター。
【請求項２３】
請求項11から16のいずれか一項に規定されるγ9δ2T細胞レセプターまたはその断片をコードする、単離された核酸配列。
【請求項２４】
請求項23に記載の核酸配列を含む、遺伝子構築物。
【請求項２５】
請求項24に記載の遺伝子構築物を含む、レトロウイルスベクター。
【請求項２６】
請求項17に規定されるγ9δ2T細胞レセプターの可溶性断片を発現する、細胞。
【請求項２７】
請求項11から16のいずれか一項に記載のγ9δ2T細胞レセプターを含む、T細胞。
【請求項２８】
請求項19または20に記載の単離された核酸配列、請求項21に記載の遺伝子構築物、または請求項22に記載のレトロウイルスベクターを含む、請求項27に記載のT細胞。
【請求項２９】
医薬として使用するための、請求項11から16のいずれか一項に記載のγ9δ2T細胞レセプターまたはその断片、請求項17または18に記載のコンジュゲート、請求項19、20および23のいずれか一項に記載の単離された核酸配列、あるいは請求項21または24に記載の遺伝子構築物、あるいは請求項22または25に記載のレトロウイルスベクター、あるいは請求項27または28に記載のT細胞。
【請求項３０】
癌の処置において医薬として使用するための、請求項11から16のいずれか一項に記載のγ9δ2T細胞レセプターまたはその断片、請求項17または18に記載のコンジュゲート、請求項19、20および23のいずれか一項に記載の単離された核酸配列、あるいは請求項21または24に記載の遺伝子構築物、あるいは請求項22または25に記載のレトロウイルスベクター、あるいは請求項27または28に記載のT細胞。