(57)【要約】      （修正有）【課題】血圧の上昇を抑制したり、低下させることができる高血圧の予防又は治療剤および該高血圧の予防又は治療剤を配合した経口組成物の提供。【解決手段】１００℃超の加熱処理し、かつペクチナーゼおよびマンナナーゼ、場合によっては、さらにセルラーゼ及び／またはクロロゲン酸エステラーゼにより酵素処理した米糠水分散液からなる高血圧の予防又は治療剤および該高血圧の予防又は治療剤を配合した経口組成物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
１００℃超の加熱処理し、かつペクチナーゼおよびマンナナーゼにより酵素処理した米糠水分散液からなる高血圧の予防又は治療剤。
【請求項２】
さらに、ペクチナーゼおよびマンナナーゼに加え、セルラーゼ及び／またはクロロゲン酸エステラーゼを用いた酵素処理を行うことを特徴とする請求項１に記載の高血圧の予防又は治療剤。
【請求項３】
請求項１または２の何れかに記載の高血圧の予防又は治療剤を配合した高血圧の予防用及び/または治療用の経口組成物。
【請求項４】
ＡＣＥ阻害活性作用を有する組成物を製造するための方法であって、
米糠の水分散液を１００℃超で加熱処理する工程；および
加熱処理された米糠を、ペクチナーゼおよびマンナナーゼにより酵素処理する工程を含むことを特徴とする製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血圧の上昇抑制や低下させる高血圧の予防又は治療剤及び該高血圧の予防又は治療剤を配合した経口組成物に関する。より詳細には、米糠の酵素処理物およびそれを配合した食品組成物または医薬品組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
我が国において死亡率の高い三大疾病は、脳血管疾患、心疾患、悪性新生物であり、このうち、脳血管疾患及び心疾患の二つは高血圧症や動脈硬化症と極めて高い関係があるとされている。ここで、高血圧症とは、収縮期血圧（最高血圧）又は拡張期血圧（最低血圧）のいずれかが、指標となる血圧値より高くなる状態を指す。従って、共に指標値を越えている以外に、収縮期血圧のみが指標値を越えている収縮期性高血圧や、その逆の拡張期性高血圧が存在する。高血圧症の８０〜９０％を占めると考えられている本態性高血圧症の発現及び進行は、食事の影響や心理的要因、社会的要因などの環境要因と遺伝要因との相互関係に左右されるといわれており、カテコールアミン、アンジオテンシンなどの体液性因子と自律神経系因子が複雑に絡み合った根本治療の難しい疾病である。高血圧症は、様々な循環器疾患の原因や要因になっていることが知られており、特に動脈硬化症の進行とは極めて密接な関係があるといわれている。従って、高血圧症を予防又は治療することは循環器系疾患を予防する意味でも極めて重要なことである。
【０００３】
最近、食生活やライフスタイルの変化に伴い、高血圧症を罹患する中高年者や若者が年々増加してきており、発症年齢の低下や罹患率の上昇も認められている。これらの高血圧症の治療には、通常、食事療法と血圧降下剤の投与が行われる。医薬品である血圧降下剤の投与によって血圧の正常化が見込めても、投与を止めると再び血圧が上昇する場合が多いため、血圧降下剤の投与は長期にわたることが普通である。また、高血圧症を本格的に予防や治療をする場合には、食塩の摂取制限、ストレス解消、運動療法、エネルギー摂取制限、禁煙、飲酒の抑制などといった日常の食生活やライフスタイルの改善が最も効果的であるといわれているが、食べる楽しみを奪われ我慢を強いられる長期の食事制限やライフスタイルの改善は、継続して実現させることが極めて難しい。
【０００４】
近年、食品科学の進歩とともに、様々な食品由来の生理活性物質が明らかになりつつある。食品由来の血圧降下剤は安全性及び経済性に優れていることから、日々摂取している食品や副作用の心配のない天然素材を有効成分とした医薬品の開発が最適な解決方法と考えられ、幾つかの提案がなされている。例えば、植物由来成分については、大豆蛋白質加水分解物由来のペプチド（特許文献１、２）、胡麻蛋白質加水分解物由来のペプチド（特許文献３）、小麦蛋白質加水分解物由来のペプチド（特許文献４）、トウモロコシ蛋白質加水分解物由来のペプチド（特許文献５、非特許文献１）などが提案されている。しかし、これらは効果が不十分だったり、食品素材としては高価であるなどの問題があり、効果が高くかつ安価な素材が望まれていた。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開平３―１６７１９８号公報
【特許文献２】特開平５―３３９１６６号公報
【特許文献３】特開平８―２３１５８８号公報
【特許文献４】特開平４―９１０９７号公報
【特許文献５】特開平１０―２１２２４５号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】S.Prat et. al.,Nucl.Acids Res., 13, 1493(1985)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、天然由来の成分を有効成分として含有し、血圧の上昇抑制や低下させる作用を有する高血圧の予防又は治療剤及び該予防又は治療剤を配合した経口組成物を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、かかる事情に鑑み鋭意検討を重ねた結果、驚くべきことに、米糠を特定の酵素を用いて処理することにより、ＡＣＥ阻害活性が発現することを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００９】
すなわち、本発明は、下記の高血圧の予防又は治療剤を提供するものである。
項１．１００℃超の加熱処理し、かつペクチナーゼおよびマンナナーゼにより酵素処理した米糠水分散液からなる高血圧の予防又は治療剤。
項２．さらに、ペクチナーゼおよびマンナナーゼに加え、セルラーゼ及び／またはクロロゲン酸エステラーゼを用いた酵素処理を行うことを特徴とする項１に記載の高血圧の予防又は治療剤。
項３．項１または２に記載の高血圧の予防又は治療剤を配合した高血圧の予防用及び/または治療用の経口組成物。
項４．ＡＣＥ阻害活性作用を有する組成物を製造するための方法であって、  米糠の水分散液を１００℃超で加熱処理する工程；および加熱処理された米糠を、ペクチナーゼおよびマンナナーゼにより酵素処理する工程を含むことを特徴とする製造方法。
項５．酵素処理に用いる酵素が、ペクチナーゼ、マンナナーゼ、セルラーゼ及びクロロゲン酸エステラーゼであることを特徴とする項４に記載の製造方法。
【発明の効果】
【００１０】
本発明組成物は、優れた血圧の上昇抑制又は低下作用を有している。従って、本発明組成物は、これら作用により、高血圧の予防又は治療のために用いることができる。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明組成物は、米糠の水分散液を１００℃超の温度で加熱処理した後に、ペクチナーゼおよびマンナナーゼを用いた酵素処理、もしくは、ペクチナーゼとマンナナーゼに、セルラーゼおよび/またはクロロゲン酸エステラーゼを用いた酵素処理を行うことで得ることが出来る。
【００１２】
米糠は玄米の精米工程で生じるものであり、精米歩合９０％程度までで得られる赤糠、８５％程度までで得られる中糠、７５％程度までで得られる白糠、さらに精米を進めて得られる特上糠または特白糠に分類される。米糠は、主に玄米の外胚乳、糊粉層、胚芽からなり、精米歩合が高まるほど内胚乳の割合が増えて白色度が増す。本発明では、原料として用いる米糠の種類は特に問わず、上記のいかなる種類の米糠や、それらの混合物を用いることができるが、赤糠を用いることが好ましい。赤糠には内胚乳の割合が少ない一方で外胚乳、糊粉層、胚芽の割合が比較的多く、本発明にとっての重要成分である酵素処理により新たに発生する血圧の上昇を抑制又は低下させる作用を有する成分は、内胚乳ではなく外胚乳などにより多く含まれていると考えられる。
【００１３】
本発明に用いる米糠は、酵素処理を効率的に行うために、米糠を公知の方法で脱脂処理して得られるものを用いるほうがよい。脱脂方法としては、例えば、有機溶媒による抽出、加熱とそれに続く冷却、加圧などを挙げることができるが、その中でも加圧による脱脂方法が有害な有機溶媒の残留の心配が無いため好ましい。なお、脱脂米糠中の油分含有量は１５質量％以下とすることが好ましい。
【００１４】
また米糠は、粉末化しておくことが好ましい。粉末化しておくことにより、以降の工程の効率をより一層高めることが可能になる。但し、米糠はもともと十分に細かいとはいえ、通常、当該工程を経なくても有効成分の分離は可能であるので、当該工程は任意であり、必ずしも実施しなくてもよい。粉末化には、ボールミル、ビーズミル、ロールミル、ハンマーミル、サイクロンミルなど通常の粉砕機械を用いることができる。また、粉末化の程度も特に制限されないが、例えば、一般的な粒度分布計により測定される粒度分布から求められる体積平均粒子径で１μｍ以上、２００μｍ以下程度となるようにすればよい。体積平均粒子径が２００μｍ以下であれば、以降の工程を十分効率的に実施することが可能である。一方、過剰に細かくしようとすれば本発明方法全体の効率が低下するおそれがあり得るので、体積平均粒子径としては１μｍ以上が好ましい。当該平均粒子径としては、５μｍ以上がより好ましく、１０μｍ以上がさらに好ましく、また、１００μｍ以下がより好ましく、８０μｍ以下がさらに好ましく、５０μｍ以下がさらに好ましい。当該工程は任意であって、また、脱脂工程の前後いずれに実施してもよい。但し、粉末化手段によっては油分が滲出することがあり得るので、好適には脱脂工程を実施した後に粉末化工程を実施する。さらに、粉末化工程は、以下に説明する加熱工程の後に実施することも可能である。
【００１５】
分散液における米糠濃度は適宜調整すればよいが、例えば、得られる分散液（米糠と水の合計）に対して０．５質量％以上、４０質量％以下程度とすることができる。当該割合が４０質量％以下であれば水の量は十分であるといえる一方で、水の量が多過ぎると最終的に得られる組成物の効果が低くなるおそれがあり得るので、当該割合としては０．５質量％以上が好ましい。当該割合としては、１質量％以上がより好ましく、また、３０質量％以下がより好ましい。ここで使用される米糠は、脱脂工程および／若しくは粉末化工程を経た米糠、または未処理の米糠を挙げることができる。分散液の調製に用いられる水は特に制限されず、イオン交換水、精製水、ＲＯ水、水道水、井戸水などを用いることができるが、一般的にはイオン交換水、ＲＯ水や水道水を用いればよい。
【００１６】
本発明において、加熱処理は１００℃超であればよいが、１０５℃〜２００℃が好ましく、１１５℃〜１５０℃がより好ましく、１２０℃〜１４０℃が最も好ましい。加熱時間は特に制限されず、処理条件に応じて適宜調整すればよいが、例えば、３０秒〜５時間とすることができるが、好ましくは５分間〜４時間、より好ましくは１５分〜３時間、最も好ましくは３０分〜２時間である。加熱手段としては、特に制限されないが、例えば、オートクレーブ、超高圧乳化分散装置、レトルト殺菌機などを挙げることができる
【００１７】
次に、加熱処理された米糠分散液は、ペクチナーゼおよびマンナナーゼを用いた酵素処理、もしくは、ペクチナーゼとマンナナーゼに加え、セルラーゼおよび/またはクロロゲン酸エステラーゼを用いた酵素処理を行う。上記各酵素の使用量、ｐＨ、反応温度、反応時間などは、適宜調整すればよい。また、各酵素反応は、個別に順次行ってもよいし、同時に行ってもよい。即ち、いずれかの酵素を添加してその酵素に応じた至適反応条件で反応を行った後、次の酵素を添加してその酵素に応じた至適反応条件で反応を行うという操作を繰り返してもよいし、酵素を全て添加した上で全ての酵素が活性を示す条件に調整して反応を行ってもよい。なお、同時に酵素反応を行う態様は、酵素反応効率が多少低下することもあり得るが、総反応時間を短縮できるので、工業的な大量生産に適している
【００１８】
得られた酵素処理液は、血圧の上昇抑制や低下させる作用を示すものであるので、そのまま飲用しても良い。しかし、該酵素処理液は固形分を多く含有していることから、飲用時に固形分が喉に引っかかる感じを受けたり、飲用した後に口中に残留物が残った感じを受けたりするなどの課題を生じる可能性がある。これら課題点が生じた場合には、製剤技術を駆使したり、当該酵素処理液を固液分離することで、課題点を解決することができる。固液分離手段は特に制限されないが、例えば、濾過、遠心分離、静置後のデカンテーションなどを用いることができる。
【００１９】
上記酵素処理工程に引き続いて、必要に応じて固液分離した後に、更に精製を行ってもよい。例えば、水分の除去、抽出、塩析、クロマトグラフィ、再結晶などの精製手段を適宜選択または組合せなどにより、血圧の上昇抑制や低下させる作用を増強させるための精製を行ってもよい。
【００２０】
上記の本発明方法で得られた高血圧の予防又は治療剤は、食用にもできる米糠由来のものであることから安全で、恒常的な摂取も可能であることから、長期継続して摂取が必要となる予防用途の組成物として用いることが出来る。血圧は、加齢に伴い上昇する人が多いため、例えば、高血圧症と診断され、血圧を低下させる必要のある人用の食品や、血圧がいわゆる境界域付近で推移しているため更なる血圧上昇を抑制したり、低下させる必要のある人用の特定保健用食品だけでなく、多目的で開発される病者用食品、高齢者用食品、特定保健用食品などの特別用途食品や、医薬部外品、機能性食品、健康食品などにも配合し、付加的に血圧上昇を予防する目的で幅広く使用することができる。
【００２１】
本発明の高血圧の予防又は治療剤を医薬品として用いる場合には、予防又は治療の目的に応じて、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、腸溶剤、液剤などの各種の形態に、常法にしたがって調製することができる。治療用に用いる場合は、有効成分を効率よく吸収させるために、小腸にて溶解する腸溶剤の形態とすることが好ましい。投与方法は特に制限がないが、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、腸溶剤、液剤などが望ましい。
【００２２】
本発明組成物を食品として用いる場合には、例えば、塊状、液状（液体，粘稠流体，ペーストなど）、ゼリー状、粉末状、顆粒状などの各種形態に、常法に従って調製することができる。かかる形態の具体的な例としては、清涼飲料水、ジュース、茶類などの飲料（ドリンク剤）；粉末ジュース、粉末スープ、などの粉末飲料；クッキー、ビスケット、シリアル、チュアブル錠剤、チューイングガム、キャンディー、グミ、ウェハース、せんべいなどの菓子類；ドレッシング、ソース、粉末調味料などの調味料；パン、麺類、餅などの主食製品;などが挙げられる。また、本発明組成物は、任意の食品を調製するために使用することの出来る食品素材（例えば食品添加剤など）として用いることもできる。
【００２３】
本発明組成物の投与量又は摂取量については、本発明の所期の効果が得られるものであれば特に限定されるものではなく、組成物の形態、疾患の程度、患者又は摂取者の年齢，性別，その他の条件などにより適宜設定される。また、本発明組成物は、１日に１回又は数回に分けて投与又は摂取することができる
【００２４】
本発明組成物には、本発明の効果を損なわない範囲であれば、必要に応じて、通常医薬品や食品に配合される成分、例えば、他の蛋白質、脂質、炭水化物、ミネラル、ビタミンなどの栄養素；粉砕物、脱脂物、抽出エキス、抽出末などの動植物成分；二糖類、糖アルコール、多糖類、水溶性高分子などの賦形剤；増量剤；甘味料；香味剤；着色剤；防腐剤；乳化剤、可溶化剤、泡安定化剤、消泡剤などの界面活性剤；アルコール類、多価アルコール類などのハイドロトロープ剤などを配合することができる。これら成分の本発明組成物における配合量は特に限定されず、剤型、形態、用途などに応じて適宜設定することができる。
【実施例】
【００２５】
以下、実施例を挙げて本発明をより具体的に説明するが、本発明はもとより下記実施例によって制限を受けるものではなく、前・後記の趣旨に適合し得る範囲で適当に変更を加えて実施することも勿論可能であり、それらはいずれも本発明の技術的範囲に包含される。
【００２６】
試験例１  ＡＣＥ阻害活性評価
市販の半脱脂米糠粉末（サンブラン社製，製品名「ハイブレフ」）を水道水に分散させ、５質量％分散液とした。オートクレーブ（トミー精工社製）を用い、１２１℃で当該分散液を加熱処理した。処理後、常温まで冷却し、酵素処理を行った。酵素処理は、前記処理分散液（３０ｍＬ）へ、ペクチナーゼ、マンナナーゼを０．１質量％添加し、ｐＨ５．０、４３℃で２０時間攪拌することで行った。酵素処理後、分散液を遠心分離（12000r.p.m.、３０分）し、上清を得た。さらに、得られた上清を凍結乾燥処理により粉末とし、得られた粉末を、本発明の高血圧の予防又は治療剤とした。比較対象としては、ＡＣＥ阻害活性作用の存在が知られている、脱脂ゴマのサーモリシン酵素処理液の上清を凍結乾燥して得られるゴマペプチド（粉末）および指定医薬品の薬効成分であるカプトプリルを使用した。
ＡＣＥ阻害活性の測定は、ＡＣＥ−ＫＩＴ  ＷＳＴ（同仁化学研究所製）を用いて行った。具体的には、９６穴マイクロプレートの各ウェルに２０μｌの被検体もしくは純水（ブランク１及びブランク２）を入れ、さらに、Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ  Ｂｕｆｆｅｒ（前記キットに付属）を２０μｌ各ウェルに加える。ブランク２のウェルには純水を２０μｌ加え、被検体及びブランク１のウェルにはＥｎｚｙｍｅ  ｗｏｒｋｉｎｇ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ（前記キットに付属）を２０μｌ加える。プレートを３７℃で６０分間インキュベートした後、総てのウェルにＩｎｄｉｃａｔｏｒ  ｗｏｒｋｉｎｇ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ（前記キットに付属）を２００μｌ加え、室温で１０分間放置し、プレートリーダー（４５０ｎｍフィルター）を用いて４５０ｎｍの吸光度を測定する。なお、ＡＣＥ阻害活性値（阻害率％）は下記式にて求める。
ＡＣＥ阻害活性値（％）＝１００*[（ブランク１の吸光度）-（被検体の吸光度）]／[（ブランク１の吸光度）−（ブランク２の吸光度）]
得られた結果から[ＡＣＥ阻害率（％）-濃度]のグラフを作成し、グラフ上からＡＣＥ活性を５０％阻害するに必要な濃度（ＩＣ50）を求めた。結果を表１に示す。
【００２７】
【表１】
2013203696.tif 000002
【００２８】
表１に示した通り、米糠のペクチナーゼおよびマンナナーゼ酵素処理液の上清の凍結乾燥から得られる粉末は、ＡＣＥ阻害活性が知られているゴマペプチドよりも比活性が高いことが判った。一方、酵素処理していない米糠においては、ＡＣＥ阻害活性がほとんどないことがわかった。なお、カプトプリルのＩＣ50は、公知の値とほぼ同じであり、本試験が正常に行われたことを確認した。
【００２９】
以下に、本発明に係る処方例を記載する。
【００３０】
実施例１：飲料
成  分                                          配合量％    
酵素処理米糠分散液（＊）                          ９９．６２５
還元パラチノース                                    ０．０５２５
スクラロース                                        ０．０２２５
香料                                                ０．３      
合  計                                      １００．０
＊  ５％米糠水分散液をペクチナーゼ、マンナナーゼ、セルラーゼ及びクロロゲン酸エステラーゼで酵素処理したもの