【手続補正書】
【提出日】平成28年2月17日(2016.2.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
血液培養陽性試料から生存微生物を分離し濃縮するための緩衝液であって、基礎液、少なくとも１種の非イオン性洗剤、少なくとも１種のチオール、および任意選択で塩化アンモニウムを含み、前記緩衝液中の前記基礎液、前記少なくとも１種の非イオン性洗剤、および前記少なくとも１種のチオールの相対量は、肺炎連鎖球菌の生存能力を維持するように選択されることを特徴とする緩衝液。
【請求項２】
前記少なくとも１種の非イオン性洗剤は、最大約１ｇ／Ｌの前記緩衝液中の濃度でトリトンＸ−１００を含むことを特徴とする請求項１に記載の緩衝液。
【請求項３】
前記基礎液は、栄養ブロス、等張緩衝液、ペプトン、および塩からなる群から選択された少なくとも１つを含み、前記緩衝液中の前記栄養ブロスの濃度は、約１０ｇ／Ｌから約５０ｇ／Ｌであることを特徴とする請求項１に記載の緩衝液。
【請求項４】
等張緩衝液は、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、リン酸緩衝生理食塩水、および生理食塩水からなる群から選択された少なくとも１つを含み、前記緩衝液中の等張緩衝液の濃度は、約１ｇ／Ｌから約２０ｇ／Ｌであることを特徴とする請求項１に記載の緩衝液。
【請求項５】
前記少なくとも１種の非イオン性洗剤は、トリトン系の洗剤、サポニン、ブリジ系の洗剤、オクチル−b−グルコシド、タージトール系の洗剤、ＣＹＭＡＬ系の洗剤、ＭＥＧＡ系の洗剤、ＰＬＵＲＯＮＩＣ系の洗剤、およびＣＨＡＰ系の洗剤からなる群から選択されることを特徴とする請求項１に記載の緩衝液。
【請求項６】
前記非イオン性洗剤は、サポニンであり、約０．０１ｇ／Ｌから約２０ｇ／Ｌの前記緩衝液の濃度で少なくとも１種の追加的な非イオン性洗剤をさらに含むことを特徴とする請求項５に記載の緩衝液。
【請求項７】
前記少なくとも１種のチオールは、Ｌ−システインＨＣＬ、チオグリコール酸ナトリウム、メルカプトエチルアミン、メルカプトコハク酸、メルカプトエタノール、メルカプトエタンスルホン酸、およびチオグリセロールからなる群から選択され、前記緩衝液中の前記少なくとも１種のチオールの濃度は、約０．００５ｇ／Ｌから４ｇ／Ｌであることを特徴とする請求項１に記載の緩衝液。
【請求項８】
塩化アンモニウムをさらに含み、前記緩衝液中の塩化アンモニウムの濃度は、約０．０１ｇ／Ｌから約８０ｇ／Ｌであることを特徴とする請求項１に記載の緩衝液。
【請求項９】
前記基礎液は、トリプチケースソイブロスを含み、
前記少なくとも１種のチオールは、Ｌ−システインＨＣＬおよびチオグリコール酸ナトリウムを含み、
前記少なくとも１種の非イオン性洗剤は、サポニンおよびトリトンＸ−１００を含むことを特徴とする請求項１に記載の緩衝液。
【請求項１０】
前記基礎液は、約８ｇ／Ｌから約３５ｇ／Ｌの前記緩衝液中の濃度でカゼインペプトン、約２ｇ／Ｌから約１０ｇ／Ｌの前記緩衝液中の濃度で塩化ナトリウム、約１．５ｇ／Ｌから約１５ｇ／Ｌの前記緩衝液中の濃度で大豆ペプトン、および約０．５ｇ／Ｌから約５ｇ／Ｌの前記緩衝液中の濃度でリン酸カリウムを含み、
前記少なくとも１種のチオールは、約０．０１ｇ／Ｌから約２．５ｇ／Ｌの前記緩衝液中の濃度でＬ−システイン、および約０．０１ｇ／Ｌから約２．５ｇ／Ｌの前記緩衝液中の濃度でチオグリコール酸ナトリウムを含み、
前記少なくとも１種の非イオン性洗剤は、約０．０１ｇ／Ｌから約１０ｇ／Ｌの前記緩衝液中の濃度でサポニン、および約０．０１ｇ／Ｌから約２０ｇ／Ｌの前記緩衝液中の濃度でトリトンＸ−１００を含み、
前記任意選択の塩化アンモニウムは、存在する場合、約０．０１ｇ／Ｌから約８０ｇ／Ｌの前記緩衝液中の濃度であることを特徴とする請求項１に記載の緩衝液。
【請求項１１】
前記少なくとも１種の非イオン性洗剤は、サポニンとトリトンＸ−１００との混合物であり、前記緩衝液は、消泡剤を含有しないことを特徴とする請求項１に記載の緩衝液。
【請求項１２】
血液培養陽性試料から生存微生物を分離し濃縮するための方法であって、
血液培養陽性試料の一部分を請求項１に記載の緩衝液と混合して、混合物を生成するステップであって、血液培養陽性試料に対する前記緩衝液の量は、細胞が溶解され、かつ前記血液培養陽性試料中の微生物の生存能力が維持されるような量になされる、ステップと、
任意選択で、前記混合物をインキュベートするステップと、
前記混合物を遠心分離にかけて、ペレットおよび上清を生成するステップと、
前記ペレットを保持しながら、前記上清を廃棄するステップと、
前記ペレットを前記緩衝液で再懸濁して、再懸濁されたペレットを作成するステップと、
前記再懸濁されたペレットを遠心分離にかけて、第２の上清および第２のペレットを生成するステップと、
生存微生物を含有している前記第２のペレットを保持しながら、前記第２の上清を廃棄するステップと
を含むことを特徴とする方法。
【請求項１３】
前記血液培養陽性試料の前記一部分は、同容積の緩衝液と混合されて、前記混合物を生成することを特徴とする請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記第２のペレットを溶液で再懸濁し、質量分析法による前記微生物の同定、表現型同定、抗菌薬感受性試験、および分子試験からなる群から選択される前記再懸濁された第２のペレットの少なくとも１つの下流の試験を行うステップをさらに含むことを特徴とする請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
前記微生物は、グラム陽性菌、グラム陰性菌、および酵母からなる群から選択されることを特徴とする請求項１２に記載の方法。
【請求項１６】
前記グラム陽性菌は、ストレプトコッカスニューモニエであることを特徴とする請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
血液培養陽性試料から生存ストレプトコッカスニューモニエを分離し濃縮するための方法であって、
少なくとも１つの微生物を含有する疑いがある血液試料を得るステップと、
前記血液試料の一部分を嫌気性血液培養ボトルに加える一方、前記血液試料の第２の部分を好気性血液培養ボトルに加えるステップと、
嫌気性血液培養陽性ボトルと好気性血液培養陽性ボトルの両方で陽性シグナルを得るステップと、
好気性血液培養陽性試料の一部分を前記請求項１に記載の緩衝液と混ぜ合わせて混合物を形成し、前記混合物をインキュベートして前記血液試料中の血液細胞を溶解し、前記混合物を遠心分離にかけて、前記血液試料中のストレプトコッカスニューモニエの存在の早期表示を提供する緑色のペレットを形成することによって、前記血液試料中のストレプトコッカスニューモニエの存在の早期表示を得るステップと、
下流の分析のために嫌気性血液培養陽性試料の一部分を調製するステップであって、
前記嫌気性血液培養陽性試料の一部分を、最大約１ｇ／ＬでトリトンＸ−１００を含む前記緩衝液と混合して、混合物を生成するステップ、
任意選択で、前記混合物をインキュベートするステップ、
前記混合物を遠心分離にかけて、ペレットおよび上清を生成するステップ、
前記ペレットを保持しながら、前記上清を廃棄するステップ、
前記ペレットを前記緩衝液で再懸濁して、再懸濁されたペレットを作成するステップ、
前記再懸濁されたペレットを遠心分離にかけて、第２の上清および第２のペレットを生成するステップ、および
生存ストレプトコッカスニューモニエを含有している前記第２のペレットを保持しながら、前記第２の上清を廃棄するステップを含む、調製するステップと
を含むことを特徴とする方法。
【請求項１８】
前記嫌気性血液培養陽性試料の前記一部分は、同容積の緩衝液と混合されて、前記混合物を生成することを特徴とする請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記嫌気性血液培養陽性試料の前記一部分は、約０．３３５ｇ／Ｌの前記緩衝液中の濃度のトリトンＸ−１００を含む前記緩衝液と混合されて、前記混合物を生成することを特徴とする請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
前記第２のペレットを溶液で再懸濁し、質量分析法による前記微生物の同定、表現型同定、抗菌薬感受性試験、および分子試験からなる群から選択される前記再懸濁された第２のペレットの少なくとも１つの下流の試験を行うステップをさらに含むことを特徴とする請求項１７に記載の方法。
【請求項２１】
請求項１に記載の緩衝液の少なくとも１つの処方物を含むことを特徴とする血液培養陽性試料から微生物を分離し濃縮するためのキット。