【手続補正書】
【提出日】平成28年3月16日(2016.3.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
(ａ)ポリメラーゼ反応混合物を含む水性相と油性混合物とを含む混合物を準備することと、
(ｂ)２mmから50μmの間の直径を有するオリフィスに40μl/秒から220μl/秒の速度で混合物を通過させることにより、混合物を乳化することと、
(ｃ)エマルジョンを、核酸増幅のために充分な条件に供することと
を含む、エマルジョンポリメラーゼ増幅の方法。
【請求項２】
混合物が、オリフィスを少なくとも５、10、15、20、25、30、35又は40回通過する請求項１に記載の方法。
【請求項３】
混合物が、オリフィスを40回以下通過する請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
混合物が、60μl/秒 から180μl/秒、80μl/秒から160μl/秒、又は80μl/秒から120μl/秒の速度でオリフィスを通過する請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
オリフィスが、１mmから100μmの間、800μmから200μmの間、又は800μmから400μmの間の直径を有する請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
オリフィスに混合物を通過させることが、混合物をピペット操作することを含む請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
油性混合物が、ミネラルオイル、炭酸ジエチルヘキシル、イソステアリン酸ポリグリセリル-４、セチルPEG/PPG-10/1-ジメチコン、ラウリン酸ヘキシル又はオレイン酸ポリグリセリル-３を含む請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
油性混合物が、ミネラルオイル、炭酸ジエチルヘキシル、イソステアリン酸ポリグリセリル-４、セチルPEG/PPG-10/1-ジメチコン及びラウリン酸ヘキシルを含む請求項７に記載の方法。
【請求項９】
油性混合物が、
(ａ) 10〜30%(w/v)のミネラルオイルと、
(ｂ) 55〜75%(w/v)の炭酸ジエチルヘキシルと、
(ｃ)５〜15% (w/v)の、イソステアリン酸ポリグリセリル-４とセチルPEG/PPG-10/1-ジメチコンとラウリン酸ヘキシルとからなる組成物と、
(ｄ)５〜15% (w/v)のオレイン酸ポリグリセリル-３又はイソステアリン酸ポリグリセリル-４と
を含む請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
(ａ) 10〜30%(w/v)のミネラルオイルと、
(ｂ) 55〜75%(w/v)の炭酸ジエチルヘキシルと、
(ｃ)５〜15% (w/v)の、イソステアリン酸ポリグリセリル-４とセチルPEG/PPG-10/1-ジメチコンとラウリン酸ヘキシルとからなる組成物と、
(ｄ)５〜15% (w/v)のオレイン酸ポリグリセリル-３又はイソステアリン酸ポリグリセリル-４と
を含む油性組成物。
【請求項１１】
５〜15% (w/v)のオレイン酸ポリグリセリル-３を含む請求項10に記載の油性組成物。
【請求項１２】
５〜15% (w/v)のイソステアリン酸ポリグリセリル-４を含む請求項10に記載の油性組成物。
【請求項１３】
(ａ) 15〜25% (w/v)のミネラルオイルと、
(ｂ) 60〜70% (w/v)の炭酸ジエチルヘキシルと、
(ｃ)５〜10% (w/v)の、イソステアリン酸ポリグリセリル-４とセチルPEG/PPG-10/1 -ジメチコンとラウリン酸ヘキシルとからなる組成物と、
(ｄ)５〜10% (w/v)のオレイン酸ポリグリセリル-３又はイソステアリン酸ポリグリセリル-４と
を含む請求項10に記載の油性組成物。
【請求項１４】
(ａ) 18〜22% (w/v)のミネラルオイルと、
(ｂ) 62〜66% (w/v)の炭酸ジエチルヘキシルと、
(ｃ)５〜10% (w/v)の、イソステアリン酸ポリグリセリル-４とセチルPEG/PPG-10/1 -ジメチコンとラウリン酸ヘキシルとからなる組成物と、
(ｄ)５〜10% (w/v)のオレイン酸ポリグリセリル-３又はイソステアリン酸ポリグリセリル-４と
を含む請求項13に記載の油性組成物。
【請求項１５】
(ａ) 20〜50%の２-ブタノールと、
(ｂ) 20〜50%の１-プロパノールと、
(ｃ)10〜40%の水と
を含み、
少なくとも１種の洗浄剤と少なくとも１種の塩とを含むエマルジョン破壊溶液。
【請求項１６】
0.1%から2.0%のSDSを含む請求項15に記載のエマルジョン破壊溶液。
【請求項１７】
アルカリ性変性剤を含む請求項15又は16に記載のエマルジョン破壊溶液。
【請求項１８】
(ａ) 30〜50%の２-ブタノールと、
(ｂ) 30〜50%の１-プロパノールと、
(ｃ) 10〜30%の水と
を含む請求項15〜17のいずれか１項に記載のエマルジョン破壊溶液。
【請求項１９】
pH緩衝剤、NaCl、Triton X-100、キレート化剤又はSDSをさらに含む請求項15〜18のいずれか１項に記載のエマルジョン破壊溶液。
【請求項２０】
(ａ)５〜20%の２-ブタノールと、
(ｂ)５〜20%の１-プロパノールと、
(ｃ) 70〜90%の水と
を含み、
少なくとも１種の洗浄剤と少なくとも１種の塩とを含むエマルジョン浄化溶液。
【請求項２１】
pH緩衝剤、NaCl、Triton X-100、キレート化剤、NaOH又はSDSをさらに含む請求項20に記載のエマルジョン浄化溶液。
【請求項２２】
(ａ) (ｉ)ポリメラーゼ反応混合物を含む水性相と、(ii)請求項10〜14のいずれか１項に従う油性組成物とを含む混合物を準備することと、
(ｂ)混合物を乳化することと
を含むエマルジョンポリメラーゼ増幅の方法。
【請求項２３】
エマルジョンポリメラーゼ増幅の方法としてさらに定義され、
(ｃ)エマルジョンを、核酸増幅のために充分な条件に供すること
をさらに含む請求項22に記載の方法。
【請求項２４】
混合物を乳化することが、１mmから50μmの間の直径を有するオリフィスに40μl/秒から220μl/秒の速度で混合物を通過させることを含む請求項22又は23に記載の方法。
【請求項２５】
混合物が、オリフィスを少なくとも５、10、15、20、25、30、35又は40回通過する請求項24に記載の方法。
【請求項２６】
オリフィスが、約800μmから200μmの間の直径を有する請求項24又は25に記載の方法。
【請求項２７】
オリフィスに混合物を通過させることが、混合物をピペット操作することを含む請求項24〜26のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２８】
乳化ステップが、自動化されている請求項22〜27のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２９】
複数の反応容器中でのエマルジョンポリメラーゼ増幅の方法としてさらに定義される請求項23〜28のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３０】
複数の反応容器が、プレート上のウェルとして整列されている請求項29に記載の方法。
【請求項３１】
水性相が、複数の核酸鋳型とコンジュゲートした複数のビーズを含む請求項22〜30のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３２】
ビーズが、磁性である請求項31に記載の方法。
【請求項３３】
(ｄ)破壊溶液を混合物に加えてエマルジョンを破壊すること
をさらに含む請求項22〜32のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３４】
破壊溶液が、請求項15〜19のいずれか１項に従う破壊溶液である請求項33に記載の方法。
【請求項３５】
(ｅ)油性相又は水性相を除去すること
をさらに含む請求項33又は34に記載の方法。
【請求項３６】
破壊溶液が、アルカリ性変性剤をさらに含む請求項33〜35のいずれか１項に記載の方法。