【手続補正書】
【提出日】平成27年11月27日(2015.11.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞内のエクソン７含有ＳＭＮ２ｍＲＮＡのエクソン欠失ＳＭＮ２ｍＲＮＡに対するレベルを増強するための１０〜４０ヌクレオチドの長さのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む組成物であって、前記アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＳＭＮ２遺伝子内の一領域に特異的にハイブリダイズし、前記細胞を、前記アンチセンスオリゴヌクレオチドと接触させて、細胞内のエクソン７含有ＳＭＮ２ｍＲＮＡのエクソン７欠失ＳＭＮ２ｍＲＮＡに対するレベルが増強することを特徴とし、前記アンチセンスオリゴヌクレオチドは、生理学的ｐＨにおいて正に荷電したヌクレオシド間結合を少なくとも１つ有する、組成物。
【請求項２】
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、約４．５〜約１２のｐＫａを示すヌクレオシド間結合を少なくとも１つ有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、塩基性窒素とアルキル、アリール、又はアラルキル基との両方を含有するヌクレオシド間結合を有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
アンチセンスオリゴヌクレオチドがモルホリノを含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記オリゴヌクレオチドが次式：
【化１】
2015504650.tif 000001
並びにこれらの薬学的に許容可能な塩を有するヌクレオチドを少なくとも１つ有し、式中、Ｎｕは核酸塩基であり；
Ｒ１は次式
【化２】
2015504650.tif 000002
の部分であり、ｑは０、１、２、３又は４であり；
Ｒ２は、水素、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、及びホルムアミジニル部分からなる群から選択され、かつ
Ｒ３は、水素及びＣ１〜Ｃ５アルキルからなる群から選択されるか、又は
Ｒ２及びＲ３は、結合して、任意追加的に酸素ヘテロ原子を含有する５〜７員の複素環を形成し、この環は任意追加的にＣ１〜Ｃ５アルキル、フェニル、ハロゲン、及びアラルキルからなる群から選択される置換基で置換されていてもよく；
Ｒ４は、不在、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキル及びアラルキルからなる群から選択され；
Ｒｘは、ＨＯ−、ヌクレオチド、膜透過性ペプチド部分、及びピペラジニルからなる群から選択され；
Ｒｙは、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ヌクレオチド、ペプチド部分、アミノ酸、ホルムアミジニル部分、及びアシルからなる群から選択され；
Ｒｚは、不在、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、及びアシルからなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
Ｎｕが、アデニン、グアニン、チミン、ウラシル、シトシン、及びヒポキサンチンからなる群から選択される、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
Ｎｕがチミン又はウラシルである、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
前記ヌクレオチドが次式：
【化３】
2015504650.tif 000003
を有し、式中、Ｒｘ、Ｒｙ、Ｒｚ、及びＮｕは請求項５に記載の通りである、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
Ｎｕがチミン又はウラシルである、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
標的領域が、ＳＭＮ２遺伝子のエクソン７、イントロン７、又はエクソン８内にある、請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、ＳＭＮ２遺伝子のイントロン７に相補的な配列を含む、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、ＳＭＮ２遺伝子のイントロン７及びエクソン８の一部分に相補的な配列を含む、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、約１０〜約３０ヌクレオチドの配列を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１４】
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、約１４〜約２１ヌクレオチドの配列を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１５】
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、表１に記載の配列を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１６】
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、細胞取り込みを増強するペプチド部分を更に含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１７】
前記ペプチドが、アルギニンリッチペプチドである、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
患者の脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）を処置するための１０〜４０ヌクレオチドの長さのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む組成物であって、前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、ＳＭＮ２プレｍＲＮＡ内の一領域に特異的にハイブリダイズし、前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが前記患者に投与されて、前記患者におけるエクソン７含有ＳＭＮ２ｍＲＮＡのエクソン欠失ＳＭＮ２ｍＲＮＡに対するレベルが増強することを特徴とし、前記アンチセンスオリゴヌクレオチドは、生理学的ｐＨにおいて正に荷電したヌクレオシド間結合を少なくとも１つ有する、組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１５】
患者の脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）の処置方法もまた、本発明の範囲内である。このような方法は、ＳＭＮ２遺伝子内の一領域に特異的にハイブリダイズするのに十分な長さ及び相補性のヌクレオチド配列を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドを患者に投与して、細胞内のエクソン７含有ＳＭＮ２ｍＲＮＡのエクソン欠失ＳＭＮ２ｍＲＮＡに対するレベルを増強する工程を含み、このアンチセンスオリゴヌクレオチドは、生理学的ｐＨにおいて正に荷電したヌクレオシドを少なくとも１つ有し、それによって患者を処置する。
本発明は、例えば、以下の項目も提供する。
（項目１）
細胞内のエクソン７含有ＳＭＮ２ｍＲＮＡのエクソン欠失ＳＭＮ２ｍＲＮＡに対するレベルを増強する方法であって、ＳＭＮ２遺伝子内の一領域に特異的にハイブリダイズする１０〜４０ヌクレオチドの長さのアンチセンスオリゴヌクレオチドに細胞を接触させて、細胞内のエクソン７含有ＳＭＮ２ｍＲＮＡのエクソン７欠失ＳＭＮ２ｍＲＮＡに対するレベルを増強する工程を含み、前記アンチセンスオリゴヌクレオチドは、生理学的ｐＨにおいて正に荷電したヌクレオシド間結合を少なくとも１つ有する、方法。
（項目２）
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、約４．５〜約１２のｐＫａを示すヌクレオシド間結合を少なくとも１つ有する、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、塩基性窒素とアルキル、アリール、又はアラルキル基との両方を含有するヌクレオシド間結合を有する、項目１に記載の方法。
（項目４）
アンチセンスオリゴヌクレオチドがモルホリノを含む、項目１に記載の方法。
（項目５）
前記オリゴヌクレオチドが次式：
【化１】
2015504650.tif 000004
並びにこれらの薬学的に許容可能な塩を有するヌクレオチドを少なくとも１つ有し、式中、Ｎｕは核酸塩基であり；
Ｒ１は次式
【化２】
2015504650.tif 000005
の部分であり、ｑは０、１、２、３又は４であり；
Ｒ２は、水素、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、ホルムアミジニル部分からなる群から選択され、かつ
Ｒ３は、水素及びＣ１〜Ｃ５アルキルからなる群から選択されるか、又は
Ｒ２及びＲ３は、結合して、任意追加的に酸素ヘテロ原子を含有する５〜７員の複素環を形成し、この環は任意追加的にＣ１〜Ｃ５アルキル、フェニル、ハロゲン、及びアラルキルからなる群から選択される置換基で置換されていてもよく；
Ｒ４は、不在、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキル及びアラルキルからなる群から選択され；
Ｒｘは、ＨＯ−、ヌクレオチド、膜透過性ペプチド部分、及びピペラジニルからなる群から選択され；
Ｒｙは、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ヌクレオチド、ペプチド部分、アミノ酸、ホルムアミジニル部分、及びアシルからなる群から選択され；
Ｒｚは、不在、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、及びアシルからなる群から選択される、項目１に記載の方法。
（項目６）
Ｎｕが、アデニン、グアニン、チミン、ウラシル、シトシン、及びヒポキサンチンからなる群から選択される、項目５に記載の方法。
（項目７）
Ｎｕがチミン又はウラシルである、項目６に記載の方法。
（項目８）
前記ヌクレオチドが次式：
【化３】
2015504650.tif 000006
を有し、式中、Ｒｘ、Ｒｙ、Ｒｚ、及びＮｕは項目５に記載の通りである、項目１に記載の方法。
（項目９）
Ｎｕがチミン又はウラシルである、項目８に記載の方法。
（項目１０）
標的領域が、ＳＭＮ２遺伝子のエクソン７、イントロン７、又はエクソン８内にある、項目１に記載の方法。
（項目１１）
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、ＳＭＮ２遺伝子のイントロン７に相補的な配列を含む、項目１０に記載の方法。
（項目１２）
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、ＳＭＮ２遺伝子のイントロン７及びエクソン８の一部分に相補的な配列を含む、項目１１に記載の方法。
（項目１３）
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、約１０〜約３０ヌクレオチドの配列を含む、項目１に記載の方法。
（項目１４）
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、約１４〜約２１ヌクレオチドの配列を含む、項目１に記載の方法。
（項目１５）
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、表１に記載の配列を含む、項目１に記載の方法。
（項目１６）
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、細胞取り込みを増強するペプチド部分を更に含む、項目１に記載の方法。
（項目１７）
前記ペプチドが、アルギニンリッチペプチドである、項目１６に記載の方法。
（項目１８）
患者の脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）の処置方法であって、ＳＭＮ２プレｍＲＮＡ内の一領域に特異的にハイブリダイズする１０〜４０ヌクレオチドの長さのヌクレオチド配列を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドを前記患者に投与して、細胞内のエクソン７含有ＳＭＮ２ｍＲＮＡのエクソン欠失ＳＭＮ２ｍＲＮＡに対するレベルを増強する工程を含み、前記アンチセンスオリゴヌクレオチドは、生理学的ｐＨにおいて正に荷電したヌクレオシドを少なくとも１つ有し、それによって前記患者を処置する、方法。