【手続補正書】
【提出日】平成27年12月3日(2015.12.3)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
プロモーター、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列、および発現増強エレメントを含む発現カセットであって、発現増強エレメントが、哺乳動物グリセルアルデヒド３−リン酸デヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤＨ）プロモーターの下流の非翻訳ゲノムＤＮＡ配列を含み、前記ポリヌクレオチド配列によりコードされる前記ポリペプチドがＧＡＰＤＨではなく、前記哺乳動物ＧＡＰＤＨプロモーターの下流の前記非翻訳ゲノムＤＮＡ配列が、＋１近傍のヌクレオチド位置〜＋７０００近傍のヌクレオチド位置にわたる領域内で開始され、前記ヌクレオチド位置が、ＧＡＰＤＨ  ｍＲＮＡの転写開始点に照らした位置であり、前記哺乳動物ＧＡＰＤＨプロモーターの下流の前記非翻訳ゲノムＤＮＡ配列の長さが９５〜１６５００ヌクレオチドである、発現カセット。
【請求項２】
哺乳動物ＧＡＰＤＨプロモーターの上流の非翻訳ゲノムＤＮＡ配列をさらに含み、前記哺乳動物ＧＡＰＤＨプロモーターの上流の前記非翻訳ゲノムＤＮＡ配列が、前記哺乳動物ＧＡＰＤＨプロモーターの５’端近傍〜−３５００近傍のヌクレオチド位置にわたる領域内で開始され、前記ヌクレオチド位置が、ＧＡＰＤＨ  ｍＲＮＡの転写開始点に照らした位置であり、前記哺乳動物ＧＡＰＤＨプロモーターの上流の前記非翻訳ゲノムＤＮＡ配列の長さが９５〜１６５００ヌクレオチドである、請求項１に記載の発現カセット。
【請求項３】
哺乳動物ＧＡＰＤＨプロモーターまたはその断片を含まないという条件で、プロモーター、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列、および哺乳動物ＧＡＰＤＨプロモーターの上流の非翻訳ゲノムＤＮＡ配列を含む発現カセットであって、前記ポリヌクレオチド配列によりコードされる前記ポリペプチドがＧＡＰＤＨではなく、前記哺乳動物ＧＡＰＤＨプロモーターの上流の前記非翻訳ゲノムＤＮＡ配列が、前記哺乳動物ＧＡＰＤＨプロモーターの５’端近傍〜−３５００近傍のヌクレオチド位置にわたる領域内で開始され、前記ヌクレオチド位置が、ＧＡＰＤＨ  ｍＲＮＡの転写開始点に照らした位置であり、前記哺乳動物ＧＡＰＤＨプロモーターの上流の前記非翻訳ゲノムＤＮＡ配列の長さが１００〜１６５００ヌクレオチドである、発現カセット。
【請求項４】
哺乳動物ＧＡＰＤＨプロモーターの下流の非翻訳ゲノムＤＮＡ配列をさらに含み、前記哺乳動物ＧＡＰＤＨプロモーターの下流の前記非翻訳ゲノムＤＮＡ配列が、＋１近傍のヌクレオチド位置〜＋７０００近傍のヌクレオチド位置にわたる領域内で開始され、前記ヌクレオチド位置が、ＧＡＰＤＨ  ｍＲＮＡの転写開始点に照らした位置であり、前記哺乳動物ＧＡＰＤＨプロモーターの下流の前記非翻訳ゲノムＤＮＡ配列の長さが９５〜１６５００ヌクレオチドである、請求項３に記載の発現カセット。
【請求項５】
前記哺乳動物ＧＡＰＤＨプロモーターの下流および／または上流の前記非翻訳ゲノムＤＮＡ配列が、前記ポリペプチドをコードする前記ポリヌクレオチド配列に作動可能に連結されていない、請求項１から４のいずれか一項に記載の発現カセット。
【請求項６】
ポリアデニル化部位をさらに含む、請求項１から４のいずれか一項に記載の発現カセット。
【請求項７】
前記哺乳動物ＧＡＰＤＨプロモーターの下流の前記非翻訳ゲノムＤＮＡ配列の長さが９〜１１ヌクレオチドであり、その最長の場合で、ＩＦＦ０１遺伝子の最後から２番目のイントロンまたはその一部まで伸びる、請求項１または４に記載の発現カセット。
【請求項８】
前記哺乳動物ＧＡＰＤＨプロモーターの下流の前記非翻訳ゲノムＤＮＡ配列が、前記哺乳動物のＧＡＰＤＨのポリアデニル化部位の下流で開始され、前記哺乳動物ＧＡＰＤＨプロモーターの下流の前記非翻訳ゲノムＤＮＡ配列の長さが、少なくとも９５ヌクレオチドであり、その最長の場合で、ＩＦＦ０１遺伝子の最後から２番目のイントロンまで伸びる、請求項１または４に記載の発現カセット。
【請求項９】
前記哺乳動物ＧＡＰＤＨプロモーターの上流の前記非翻訳ゲノムＤＮＡ配列の長さが、少なくとも９５ヌクレオチドであり、その最長の場合で、ＮＣＡＰＤ２遺伝子の開始コドンまで伸びる、請求項２に記載の発現カセット。
【請求項１０】
前記哺乳動物ＧＡＰＤＨプロモーターの上流の前記非翻訳ゲノムＤＮＡ配列の長さが、少なくとも９５ヌクレオチドであり、その最長の場合で、ＮＣＡＰＤ２遺伝子の最後から３番目のイントロンまで伸びる、請求項２に記載の発現カセット。
【請求項１１】
前記哺乳動物ＧＡＰＤＨプロモーターの上流の前記非翻訳ゲノムＤＮＡ配列の長さが、少なくとも１００ヌクレオチドであり、その最長の場合で、ＮＣＡＰＤ２遺伝子の開始コドンまで伸びる、請求項３に記載の発現カセット。
【請求項１２】
前記哺乳動物ＧＡＰＤＨプロモーターの上流の前記非翻訳ゲノムＤＮＡ配列の長さが、少なくとも１００ヌクレオチドであり、その最長の場合で、ＮＣＡＰＤ２遺伝子の最後から３番目のイントロンまで伸びる、請求項３に記載の発現カセット。
【請求項１３】
前記哺乳動物ＧＡＰＤＨプロモーターの下流および／または上流の前記非翻訳ゲノムＤＮＡ配列が齧歯動物またはヒトに由来する、請求項１ないし４のいずれかに記載の発現カセット。
【請求項１４】
前記哺乳動物ＧＡＰＤＨプロモーターの下流の前記非翻訳ゲノムＤＮＡ配列が、配列番号８および２１またはその断片からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項１または４に記載の発現カセット。
【請求項１５】
前記哺乳動物ＧＡＰＤＨプロモーターの下流の前記非翻訳ゲノムＤＮＡ配列が、配列番号８および２１またはその断片からなる群から選択されるヌクレオチド配列と相補的なヌクレオチド配列を含む、請求項１または４に記載の発現カセット。
【請求項１６】
前記哺乳動物ＧＡＰＤＨプロモーターの下流の前記非翻訳ゲノムＤＮＡ配列が、配列番号８および２１またはその断片からなる群から選択されるヌクレオチド配列と少なくとも８０％同一なヌクレオチド配列を含む、請求項１または４に記載の発現カセット。
【請求項１７】
前記哺乳動物ＧＡＰＤＨプロモーターの上流の前記非翻訳ゲノムＤＮＡ配列が、配列番号７、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、２０、２２、２３、２４、２５、２６、２７、および２８またはその断片からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項２または３に記載の発現カセット。
【請求項１８】
配列番号７、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、２０、２２、２３、２４、２５、２６、２７、および２８またはその断片からなる群から選択される前記ヌクレオチド配列が、５カ所以下の核酸修飾を含む、請求項１７に記載の発現カセット。
【請求項１９】
前記哺乳動物ＧＡＰＤＨプロモーターの上流の前記非翻訳ゲノムＤＮＡ配列が、配列番号７、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、２０、２２、２３、２４、２５、２６、２７、および２８またはその断片からなる群から選択されるヌクレオチド配列と相補的なヌクレオチド配列を含む、請求項２または３に記載の発現カセット。
【請求項２０】
前記哺乳動物ＧＡＰＤＨプロモーターの上流の前記非翻訳ゲノムＤＮＡ配列が、配列番号７、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、２０、２２、２３、２４、２５、２６、２７、および２８またはその断片からなる群から選択されるヌクレオチド配列と少なくとも８０％同一なヌクレオチド配列を含む、請求項２または３に記載の発現カセット。
【請求項２１】
前記プロモーターと、ポリペプチドをコードする前記ポリヌクレオチド配列とが、作動的に連結されている、請求項１から４のいずれか一項に記載の発現カセット。
【請求項２２】
前記哺乳動物ＧＡＰＤＨプロモーターの下流の前記非翻訳ゲノムＤＮＡ配列が、ポリペプチドをコードする前記ポリヌクレオチド配列と同方向に配向している、請求項１または４に記載の発現カセット。
【請求項２３】
前記哺乳動物ＧＡＰＤＨプロモーターの下流の前記非翻訳ゲノムＤＮＡ配列が、ポリペプチドをコードする前記ポリヌクレオチド配列と逆方向に配向している、請求項１または４に記載の発現カセット。
【請求項２４】
前記哺乳動物ＧＡＰＤＨプロモーターの上流の前記非翻訳ゲノムＤＮＡ配列が、ポリペプチドをコードする前記ポリヌクレオチド配列と同方向に配向している、請求項２または３に記載の発現カセット。
【請求項２５】
前記哺乳動物ＧＡＰＤＨプロモーターの上流の前記非翻訳ゲノムＤＮＡ配列が、ポリペプチドをコードする前記ポリヌクレオチド配列と逆方向に配向している、請求項２または３に記載の発現カセット。
【請求項２６】
前記プロモーターが、ＳＶ４０プロモーター、ＭＰＳＶプロモーター、マウスＣＭＶ、ヒトｔｋ、ヒトＣＭＶ、ラットＣＭＶ、ヒトＥＦ１アルファ、チャイニーズハムスターＥＦ１アルファ、ヒトＧＡＰＤＨ、ＭＹＣプロモーター、ＨＹＫプロモーター、およびＣＸプロモーターを組み入れたハイブリッドプロモーターからなる群から選択される、請求項１から４のいずれか一項に記載の発現カセット。
【請求項２７】
前記ポリペプチドが、抗体、抗体断片、または抗体誘導体からなる群から選択される、請求項１から４のいずれか一項に記載の発現カセット。
【請求項２８】
前記ポリアデニル化部位が、ＢＧＨ  ｐｏｌｙ（Ａ）およびＳＶ４０  ｐｏｌｙ（Ａ）からなる群から選択される、請求項６に記載の発現カセット。
【請求項２９】
さらなるプロモーター、エンハンサー、転写制御エレメント、および選択マーカーからなる群から選択される遺伝子エレメントをさらに含む、請求項１から４のいずれか一項に記載の発現カセット。
【請求項３０】
前記遺伝子エレメントが選択マーカーであり、前記選択マーカーをコードするポリヌクレオチド配列中に含有されるＣｐＧ部位の含量が４５以下である、請求項２９に記載の発現カセット。
【請求項３１】
請求項１から３０のいずれか一項に記載の発現カセットを含む発現ベクター。
【請求項３２】
ａ）哺乳動物ＧＡＰＤＨプロモーターの上流および／もしくは下流の非翻訳ゲノムＤＮＡ配列
ｂ）プロモーター
ｃ）ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列
ｄ）ポリアデニル化部位
ｅ）エンハンサー
ｆ）哺乳動物ＧＡＰＤＨプロモーターの下流および／もしくは上流の非翻訳ゲノムＤＮＡ配列、または
ａ）哺乳動物ＧＡＰＤＨプロモーターの上流および／もしくは下流の非翻訳ゲノムＤＮＡ配列
ｂ）エンハンサー
ｃ）プロモーター
ｄ）ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列
ｅ）ポリアデニル化部位
ｆ）哺乳動物ＧＡＰＤＨプロモーターの下流および／もしくは上流の非翻訳ゲノムＤＮＡ配列、または
ａ）エンハンサー
ｂ）哺乳動物ＧＡＰＤＨの上流および／もしくは下流の非翻訳ゲノムＤＮＡ配列
ｃ）プロモーター
ｄ）ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列
ｅ）ポリアデニル化部位
ｆ）哺乳動物ＧＡＰＤＨの下流および／もしくは上流の非翻訳ゲノムＤＮＡ配列
を、ａ）またはｂ）が、哺乳動物ＧＡＰＤＨの上流の非翻訳ゲノムＤＮＡ配列である場合は、ｆ）が、哺乳動物ＧＡＰＤＨの下流の非翻訳ゲノムＤＮＡ配列であり、ａ）またはｂ）が、哺乳動物ＧＡＰＤＨの下流の非翻訳ゲノムＤＮＡ配列である場合は、ｆ）が、哺乳動物ＧＡＰＤＨの上流の非翻訳ゲノムＤＮＡ配列であるという条件で、順に含む発現ベクターであって、前記エンハンサーの組入れが任意選択であり、前記ポリヌクレオチド配列によりコードされる前記ポリペプチドがＧＡＰＤＨではなく、前記哺乳動物ＧＡＰＤＨプロモーターの下流の前記非翻訳ゲノムＤＮＡ配列が、＋１近傍のヌクレオチド位置〜＋７０００近傍のヌクレオチド位置にわたる領域内で開始され、前記ヌクレオチド位置が、ＧＡＰＤＨ  ｍＲＮＡの転写開始点に照らした位置であり、前記哺乳動物ＧＡＰＤＨプロモーターの下流の前記非翻訳ゲノムＤＮＡ配列の長さが、９５〜１６５００ヌクレオチドであり、前記哺乳動物ＧＡＰＤＨプロモーターの上流の前記非翻訳ゲノムＤＮＡ配列が、哺乳動物ＧＡＰＤＨプロモーターの５’端近傍〜−３５００近傍のヌクレオチド位置にわたる領域内で開始され、前記ヌクレオチド位置が、ＧＡＰＤＨ  ｍＲＮＡの転写開始点に照らした位置であり、前記哺乳動物ＧＡＰＤＨプロモーターの上流の前記非翻訳ゲノムＤＮＡ配列の長さが９５〜１６５００ヌクレオチドである、発現ベクター。
【請求項３３】
前記発現ベクターが、さらなるプロモーター、エンハンサー、転写制御エレメント、複製起点、および選択マーカーからなる群から選択される遺伝子エレメントをさらに含む、請求項３１または３２に記載の発現ベクター。
【請求項３４】
前記発現ベクターが複製起点および選択マーカーをさらに含み、前記複製起点および前記選択マーカーをコードする前記発現ベクターのポリヌクレオチド配列中に含有されるＣｐＧ部位の含量が２００以下である、請求項３１または３２に記載の発現ベクター。
【請求項３５】
請求項１から３０のいずれか一項に記載の発現カセット、または請求項３１から３４のいずれか一項に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
【請求項３６】
障害を処置するための医薬として用いられる、請求項１から３０のいずれか一項に記載の発現カセット、または請求項３１から３４のいずれか一項に記載の発現ベクター。
【請求項３７】
遺伝子治療で使用するための、請求項１から３０のいずれか一項に記載の発現カセット、または請求項３１から３４のいずれか一項に記載の発現ベクター。
【請求項３８】
ポリペプチドを発現させるためのｉｎ  ｖｉｔｒｏ法であって、宿主細胞を、請求項１から３０のいずれか一項に記載の発現カセット、または請求項３１から３４のいずれか一項に記載の発現ベクターでトランスフェクトするステップと、前記ポリペプチドを回収するステップとを含むｉｎ  ｖｉｔｒｏ法。
【請求項３９】
前記発現カセットまたは前記発現ベクターを、安定的にトランスフェクトする、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記発現カセットまたは前記発現ベクターを、一過性にトランスフェクトする、請求項３８に記載の方法。
【請求項４１】
哺乳動物の宿主細胞から異種ポリペプチドを発現させるための、請求項１から３０のいずれか一項に記載の発現カセット、または請求項３１から３４のいずれか一項に記載の発現ベクターの使用。