【手続補正書】
【提出日】平成27年12月15日(2015.12.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
１以上の外因性ポリヌクレオチドを含み、前記１以上の外因性ポリヌクレオチドを有していない対応する非ヒト生物またはその一部と比較し、１以上の非極性脂質のレベルが増加している、非ヒト生物またはその一部であり、ここで、前記１以上の各外因性ポリヌクレオチドは、非ヒト生物またはその一部中のポリヌクレオチドの発現を指示することができるプロモーターに動作可能に連結されており、
（ｉ）前記１以上の外因性ポリヌクレオチドが、非ヒト生物またはその一部の１以上の解糖系遺伝子または脂肪酸生合成遺伝子の発現を増加させる転写因子ポリペプチドをコードする第一の外因性ポリヌクレオチド、および、１以上の非極性脂質の生合成に関与するポリペプチドをコードする第二の外因性ポリヌクレオチドを含み、且つ
（ｉｉ）もし非ヒト生物が植物である場合、前記植物の生育部分は、少なくとも約１０％（ｗ／ｗ乾重量）の総非極性脂質含有量を有している、
非ヒト生物またはその一部。
【請求項２】
１以上またはすべての以下の特長（ｉ）〜（ｉｘ）が該当する、請求項１に記載の非ヒト生物またはその一部：
（ｉ）前記非ヒト生物またはその一部の非極性脂質中の総脂肪酸含量が、１以上の外因性ポリヌクレオチドを有していない対応する非ヒト生物またはその一部中の脂質よりも、少なくとも２％多いオレイン酸、および／または、少なくとも２％少ないパルミチン酸、を含む、
（ｉｉ）前記非極性脂質（複数含む）が、ヒドロキシル基、エポキシ基、シクロプロパン基、二重炭素−炭素結合、三重炭素−炭素結合、共役二重結合、分枝鎖、たとえば、メチル化分枝鎖またはヒドロキシル化分枝鎖、またはそれらの２以上の組み合わせ、または、上述の基、結合または分枝鎖の任意の２、３、４、５または６つを含む脂肪酸を含む、
（ｉｉｉ）前記非ヒト生物またはその一部が、その脂質中で、エステル化形態またはエステル化していない形態で、オレイン酸を含んでおり、ここで、前記非ヒト生物またはその一部の脂質中の総脂肪酸の少なくとも２０％（ｍｏｌ％）、少なくとも２２％（ｍｏｌ％）、少なくとも３０％（ｍｏｌ％）、少なくとも４０％（ｍｏｌ％）、少なくとも５０％（ｍｏｌ％）、または少なくとも６０％（ｍｏｌ％）、好ましくは少なくとも６５％（ｍｏｌ％）、または少なくとも６６％（ｍｏｌ％）が、オレイン酸である、
（ｉｖ）前記非ヒト生物またはその一部が、その非極性脂質中で、エステル化形態で、オレイン酸を含んでおり、ここで、前記植物または生育植物部分の前記非極性脂質の総脂肪酸の、少なくとも２０％（ｍｏｌ％）、少なくとも２２％（ｍｏｌ％）、少なくとも３０％（ｍｏｌ％）、少なくとも４０％（ｍｏｌ％）、少なくとも５０％（ｍｏｌ％）、または少なくとも６０％（ｍｏｌ％）、好ましくは少なくとも６５％（ｍｏｌ％）、または少なくとも６６％（ｍｏｌ％）が、オレイン酸である、
（ｖ）前記非ヒト生物またはその一部の脂質中の総脂肪酸含量が、１以上の外因性ポリヌクレオチドを有していない対応する非ヒト生物またはその一部中の脂質よりも、少なくとも２％多いオレイン酸、および／または、少なくとも２％少ないパルミチン酸、を含む、
（ｖｉ）前記非ヒト生物が、珪藻植物（ｂａｃｉｌｌａｒｉｏｐｈｙｔｅｓ）、緑藻類（ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｔｅｓ）、青緑藻類（ｃｙａｎｏｐｈｙｔｅｓ）、金茶藻類（ｃｈｒｙｓｏｐｈｙｔｅｓ）、ハプト藻、茶藻類および黄色藻類（ｈｅｔｅｒｏｋｏｎｔ  ａｌｇａｅ）からなる群から選択される藻類である、
（ｖｉｉ）前記非極性脂質（複数含む）が、総ステロール、好ましくは遊離ステロール、ステロイルエステルおよび／またはステロイルグリコシド、の改変レベルを含む、
（ｖｉｉｉ）前記非極性脂質（複数含む）が、ワックスおよび／またはワックスエステルを含む、および、
（ｉｘ）前記非ヒト生物またはその一部が、少なくとも約１０００のそのような非ヒト生物またはその一部の、群またはコレクションの一員である。
【請求項３】
（ｉ）前記非ヒト生物が植物、藻類または、たとえば菌類等の、発酵に適した生物である、または
（ｉｉ）前記非ヒト生物が、菌類、好ましくは油性菌類、たとえば、油性酵母である、または
（ｉｉｉ）前記非ヒト生物の一部が、種子、果実、または、たとえば気生植物部分または緑色部分、たとえば葉または茎の、植物の生育部分である、
請求項１または２に記載の非ヒト生物またはその一部。
【請求項４】
前記非極性脂質の総ステロール含量および／または組成が、前記１以上の外因性ポリヌクレオチドを有していない対応する非ヒト生物またはその一部の非極性脂質の総ステロール含量および／または組成と、有意に異なる、請求項１から３のいずれか１項に記載の非ヒト生物またはその一部。
【請求項５】
１以上の非極性脂質の増加レベルが、以下の特長のうちの１以上またはすべてが該当するものである、請求項１から４のいずれか１項に記載の非ヒト生物またはその一部：
（ｉ）前記レベルは、対応する非ヒト生物またはその一部のレベルよりも、重量ベースで、少なくとも０．５％大きい、
（ｉｉ）前記レベルは、対応する非ヒト生物またはその一部のレベルよりも、相対ベースで、少なくとも１％大きい、
（ｉｉｉ）前記非ヒト生物またはその一部の総非極性脂質含量は、対応する非ヒト生物またはその一部の含量よりも、それぞれ、重量ベースで、少なくとも０．５％大きい、
（ｉｖ）前記非ヒト生物またはその一部の総非極性脂質含量が、対応する非ヒト生物またはその一部の含量よりも、それぞれ、相対ベースで、少なくとも１％大きい、
（ｖ）前記非ヒト生物またはその一部の、１以上の非極性脂質のレベルおよび／または、総非極性脂質の含量が、前記１以上の外因性ポリヌクレオチドを有しておらず、および、Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ  ｔｈａｌｉａｎａＤＧＡＴ１をコードする外因性ポリヌクレオチドを含む対応する非ヒト生物またはその一部よりも、それぞれ、重量ベースで少なくとも０．５％大きいか、および／または、相対ベースで少なくとも１％大きい。
【請求項６】
以下を含む、請求項１から5のいずれか１項に記載の非ヒト生物またはその一部：
（ｉ）対応する非ヒト生物またはその一部のＴＡＧ、ＤＡＧ、ＴＡＧおよびＤＡＧ、またはＭＡＧ含量よりも、相対ベースで、少なくとも１０％大きい、ＴＡＧ、ＤＡＧ、ＴＡＧおよびＤＡＧ、またはＭＡＧ含量、および／または
（ｉｉ）対応する非ヒト生物またはその一部の総多価不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）含量と比較して増加または減少している、総ＰＵＦＡ含量。
【請求項７】
（ｉ）  前記第一の外因性ポリヌクレオチドは、Ｗｒｉｎｋｌｅｄ  １（ＷＲＩ１）転写因子、Ｌｅａｆｙ  Ｃｏｔｙｌｅｄｏｎ  １（Ｌｅｃ１）転写因子、Ｌｅａｆｙ  Ｃｏｔｙｌｅｄｏｎ  ２（ＬＥＣ２）転写因子、Ｆｕｓ３転写因子、ＡＢＩ３転写因子、Ｄｏｆ４転写因子、ＢＡＢＹ  ＢＯＯＭ（ＢＢＭ）転写因子、またはＤｏｆ１１転写因子をコードする、および／または
（ｉｉ）前記第二の外因性ポリヌクレオチドは、ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ（ＤＧＡＴ）活性、モノアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ（ＭＧＡＴ）活性、または、グリセロール−３−リン酸アシルトランスフェラーゼ（ＧＰＡＴ）活性を有するポリペプチドをコードする、請求項１から６のいずれか一項に記載の非ヒト生物またはその一部。
【請求項８】
前記非ヒト生物またはその一部が、以下のうちの１つ以上または任意の組み合わせをコードする、第三の、またはそれ以上の外因性ポリヌクレオチド（複数含む）、さらに含有する、請求項１から７のいずれか１項に記載の非ヒト生物またはその一部：
（ｉ）非ヒト生物またはその一部の、１以上の解糖系遺伝子または脂肪酸生合成遺伝子の発現を増加させる、さらなる転写因子ポリペプチド、
（ｉｉ）１以上の非極性脂質の生合成に関与する、さらなるポリペプチド、
（ｉｉｉ）前記１以上の非極性脂質、好ましくはオレオシン、たとえば、ポリオレオシンまたはカレオシン、より好ましくはポリオレオシンを安定化させるポリペプチド、
（ｉｖ）たとえばＡＧＰａｓｅポリペプチドのようなデンプン生合成に関与するポリペプチドをコードする遺伝子の発現を阻害するＲＮＡ分子、
（ｖ）脂質の分解に関与する、および／または、たとえばＣＧｉ５８ポリペプチドのようなリパーゼ等の脂質含量を減少させる、ポリペプチドをコードする遺伝子の発現を阻害するＲＮＡ分子、
（ｖｉ）サイレンシングサプレッサーポリペプチド、
ここで、前記第三、またはそれ以上の外因性ポリヌクレオチド（複数含む）は、非ヒト生物またはその一部でポリヌクレオチド（複数含む）の発現を指示することができるプロモーターに動作可能に連結されている。
【請求項９】
前記１以上の外因性ポリヌクレオチドは以下をコードする、請求項１から８のいずれか１項に記載の非ヒト生物またはその一部：
（ｉ）Ｗｒｉｎｋｌｅｄ１（ＷＲＩ１）転写因子およびＤＧＡＴ、
（ｉｉ）ＷＲＩ１転写因子およびＤＧＡＴおよびオレオシン、
（ｉｉｉ）ＷＲＩ１転写因子、ＤＧＡＴ、ＭＧＡＴおよびオレオシン、
（ｉｖ）モノアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ（ＭＧＡＴ）、
（ｖ）ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ２（ＤＧＡＴ２）、
（ｖｉ）ＭＧＡＴおよびグリセロール−３−リン酸アシルトランスフェラーゼ（ＧＰＡＴ）、
（ｖｉｉ）ＭＧＡＴおよびＤＧＡＴ、
（ｖｉｉｉ）ＭＧＡＴ、ＧＰＡＴおよびＤＧＡＴ、
（ｉｘ）ＷＲＩ１転写因子およびＭＧＡＴ、
（ｘ）ＷＲＩ１転写因子、ＤＧＡＴおよびＭＧＡＴ、
（ｘｉ）ＷＲＩ１転写因子、ＤＧＡＴ、ＭＧＡＴ、オレオシンおよびＧＰＡＴ、
（ｘｉｉ）ＤＧＡＴおよびオレオシン、または、
（ｘｉｉｉ）ＭＧＡＴおよびオレオシン、ならびに、
（ｘｉｖ）任意選択的に、サイレンシングサプレッサーポリペプチド。
【請求項１０】
前記非ヒト生物の一部が
（ｉ）少なくとも約１１％、より好ましくは少なくとも約１２％、より好ましくは少なくとも約１３％、より好ましくは少なくとも約１４％、またはより好ましくは少なくとも約１５％（ｗ／ｗ乾重量または種子重量）の総非極性脂質含量、および／または
（ｉｉ）少なくとも約７％、より好ましくは少なくとも約１０％、より好ましくは少なくとも約１１％、より好ましくは少なくとも約１２％、より好ましくは少なくとも約１３％、より好ましくは少なくとも約１４％、より好ましくは少なくとも約１５％、またはより好ましくは少なくとも約１７％（ｗ／ｗ乾重量または種子重量）の総ＴＡＧ含量
を含む生育植物部分である、請求項１から9のいずれか１項に記載の非ヒト生物またはその一部。
【請求項１１】
前記非ヒト生物またはその一部が、ＷＲＩ１をコードする第一の外因性ポリヌクレオチド、ＤＧＡＴ、好ましくはＤＧＡＴ１をコードする第二の外因性ポリヌクレオチド、オレオシンをコードする第三のポリヌクレオチドを含み、ここで、前記非ヒト生物またはその一部が、以下の特長のうちの１以上、またはすべてを有している、請求項１から１０のいずれか１項に記載の非ヒト生物またはその一部：
（ｉ）少なくとも１０％、少なくとも１２．５％、少なくとも１５％、または少なくとも１７％（乾重量の重量％）の総ＴＡＧ含量、
（ｉｉ）前記外因性ポリヌクレオチドを有していない対応する非ヒト生物またはその一部と比較して、前記非ヒト生物またはその一部の総ＴＡＧ含量が、少なくとも４０倍、少なくとも５０倍、少なくとも６０倍、または少なくとも７０倍、または少なくとも１００倍、高い、
（ｉｉｉ）オレイン酸が、前記ＴＡＧ中の脂肪酸の少なくとも１９％、少なくとも２２％、または少なくとも２５％（重量％）を構成する、
（ｉｖ）前記外因性ポリヌクレオチドを有していない対応する非ヒト生物またはその一部と比較して、前記非ヒト生物またはその一部のＴＡＧ中のオレイン酸のレベルが、少なくとも１０倍、少なくとも１５倍、少なくとも１７倍、または少なくとも１９倍、高い、
（ｖ）パルミチン酸が、前記ＴＡＧ中の脂肪酸の少なくとも２０％、少なくとも２５％、または少なくとも２８％（重量％）を構成する、
（ｖｉ）前記外因性ポリヌクレオチドを有していない対応する非ヒト生物またはその一部と比較して、前記非ヒト生物またはその一部のＴＡＧ中のパルミチン酸のレベルが、少なくとも１．２５倍高い、
（ｖｉｉ）リノール酸が、前記ＴＡＧ中の脂肪酸の、少なくとも１５％、または少なくとも２０％（重量％）を構成する、
（ｖｉｉｉ）αリノレン酸が、前記ＴＡＧ中の脂肪酸の、１５％未満、１１％未満、または８％未満（重量％）を構成する、および、
（ｉｘ）前記外因性ポリヌクレオチドを有していない対応する非ヒト生物またはその一部と比較して、前記非ヒト生物またはその一部のＴＡＧ中のαリノレン酸のレベルが、少なくとも５倍、または少なくとも８倍、低い。
【請求項１２】
非ヒト生物またはその一部中の、１以上の解糖系遺伝子または脂肪酸生合成遺伝子の発現を増加させる転写因子ポリペプチドをコードする第一のポリヌクレオチドの、１以上の非極性脂質の生合成に関与するポリペプチドをコードする第二のポリヌクレオチドとの、第一および第二のポリヌクレオチドを有していない対応する非ヒト生物またはその一部と比較して、１以上の非極性脂質を産生する能力が増強されているトランスジェニック非ヒト生物またはその一部を産生するための使用であって、ここで、前記第一および第二のポリヌクレオチドは各々、前記非ヒト生物またはその一部に対して外因性であり、および、各々が、それぞれ、前記トランスジェニック非ヒト生物またはその一部のポリヌクレオチドの発現を指示することができるプロモーターに動作可能に連結されており、もし前記トランスジェニック非ヒト生物が植物である場合、前記植物の生育部分は、少なくとも約１０％の総非極性脂質含量を有している、使用。
【請求項１３】
工業製品、好ましくは炭化水素製品、たとえば脂肪酸エステル、好ましくは脂肪酸メチルエステルおよび／または脂肪酸エチルエステル、アルカン、たとえばメタン、エタンまたは長鎖アルカン、長鎖アルカン類の混合物、アルケン、バイオ燃料、または一酸化炭素および／または水素ガス、バイオアルコール、たとえば、エタノール、プロパノールまたはブタノール、バイオ炭、または一酸化炭素、水素およびバイオ炭の混合物の製造のための、請求項１から１１のいずれか１項に記載の非ヒト生物またはその一部の使用。
【請求項１４】
工業製品を製造する方法であって、以下のステップを含む、方法：
（ｉ）請求項１から１１のいずれか１項に記載の非ヒト生物またはその一部を得ること、および、
（ｉｉ）任意選択的にステップ（ｉ）の前記非ヒト生物またはその一部を物理的に処理すること、および
（ｉｉｉ）ステップ（ｉ）の前記非ヒト生物またはその一部の、またはステップ（ｉ１）によって得られた処理された非ヒト生物またはその一部の、前記脂質の少なくとも一部を、熱、化学的手段または酵素的手段、またはそれらの任意の組み合わせを、前記ステップ（ｉ）の前記非ヒト生物またはその一部の、またはステップ（ｉ１）によって得られた処理された非ヒト生物またはその一部の脂質に、ｉｎ  ｓｉｔｕで適用することにより、工業製品へと転換し、および、
（ｉｖ）前記工業製品を回収すること。
【請求項１５】
抽出脂質の製造方法であって、以下のステップを含む方法：
（ｉ）請求項１から１１のいずれか１項に記載の非ヒト生物またはその一部を得ること、
（ｉｉ）前記非ヒト生物またはその一部から脂質を抽出すること、および、
（ｉｉｉ）前記抽出された脂質を回収すること。
【請求項１６】
（ｉ）任意選択的に触媒の存在下で、請求項１から１１のいずれか１項に記載の非ヒト生物またはその一部から回収された脂質または抽出された脂質とアルコールを反応させ、アルキルエステルを産生すること、および、
（ｉｉ）任意選択的にアルキルエステルと石油ベースの燃料とを混合させること、
を含む、燃料を製造する工程。
【請求項１７】
（ｉ）請求項１から１１のいずれか１項に記載の非ヒト生物またはその一部の脂質を、ガス化により合成ガスへと転換すること、および、
（ｉｉ）前記合成ガスを、金属触媒または微生物触媒を用いて、バイオ燃料へと転換すること、
を含む、合成ディーゼル燃料を製造する工程。
【請求項１８】
請求項１から１１のいずれか１項に記載の非ヒト生物またはその一部の脂質を、熱分解によりバイオ−油へと転換すること、発酵によりバイオアルコールへと転換すること、またはガス化または嫌気性消化によりバイオガスへと転換することを含む、バイオ燃料を製造する工程。
【請求項１９】
請求項１から１１のいずれか１項に記載の非ヒト生物またはその一部を含む、飼料、化粧品または化学薬品。