【手続補正書】
【提出日】平成28年6月24日(2016.6.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
血清を欠いた培地を含有する大規模な培養容器中の懸濁液で、組換えＩ２Ｓタンパク質およびホルミルグリシン生成酵素（ＦＧＥ）を共発現する哺乳類細胞を培養することを含む、哺乳類細胞の組換えイズロン酸２スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）タンパク質の大規模製造の方法。
【請求項２】
（ａ）哺乳類細胞の培養は、細胞が平均して約１５ピコグラム／細胞／日超若しくは約３０ピコグラム／細胞／日超の比生産率で組換えＩ２Ｓタンパク質を製造するような条件下で行われ、さらに製造された組換えＩ２Ｓタンパク質は、平均して、ヒトＩ２Ｓタンパク質のＣｙｓ５９に対応するシステイン残基のＣα-ホルミルグリシンへの、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％若しくは少なくとも約９７％の転換を含み、および／または
（ｂ）培養ステップは灌流プロセスを含み、必要に応じて、灌流プロセスが、（ｉ）新鮮培地／リアクターの作業体積／日（ＶＶＤ）の約０．５〜２容量の範囲にある灌流速度を有するか、若しくは（ｉｉ）約０．０５〜５ナノリットル／細胞／日（ｎＬ／細胞／日）の範囲にある細胞特異的灌流速度を有し、および／または
（ｃ）細胞が少なくとも６ｍｇ／リットル／日の平均回収力価で組換えＩ２Ｓタンパク質を製造する、
請求項１に記載の方法。
【請求項３】
（ａ）哺乳類細胞はヒト細胞またはＣＨＯ細胞であり、および／または
（ｂ）大規模培養容器はバイオリアクターであり、必要に応じて、バイオリアクターの規模が１０Ｌ、２００Ｌ、５００Ｌ、１０００Ｌ、１５００Ｌ、若しくは２０００Ｌまたはそれ以上であり、および／または
（ｃ）培地は動物性由来の成分を欠いており、および／または
（ｄ）培地は既知組成培地であり、および／または
（ｅ）培地にはタンパク質がない、
請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項４】
培地は少なくとも１つの酸化還元調節因子を含む請求項１〜３のいずれか１つに記載の方法。
【請求項５】
（ａ）少なくとも１つの酸化還元調節因子は、グルタチオン、グルコース-６−リン酸、カルノシン、カルノソール、スルホラファン、トコフェロール、アスコルビン酸塩、デヒドロアスコルビン酸、セレン、２−メルカプトエタノール、Ｎ-アセチルシステイン、システイン、リボフラビン、ニコチン酸、葉酸塩、フラビンアデニンジヌクレオチド（ＦＡＤ）、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰ）から成る群から選択され、必要に応じて、
（ｉ）少なくとも１つの酸化還元調節因子はシステインを含み、必要に応じて、システインの濃度は約０．１ｍｇ／Ｌ〜約６５ｍｇ／Ｌの範囲にあり、および／または
（ｉｉ）少なくとも１つの酸化還元調節因子は２−メルカプトエタノールを含み、必要に応じて、２−メルカプトエタノールの濃度は、約０．００１ｍＭ〜約０．０１ｍＭの範囲にあり、および／または
（ｉｉｉ）少なくとも１つの酸化還元調節因子はＮ-アセチルシステインを含み、必要に応じて、Ｎ-アセチルシステインの濃度は、約３ｍＭ〜約９ｍＭの範囲にあり、ならびに／あるいは
（ｂ）培地は少なくとも１つの成長調節因子を含み、必要に応じて、
（ｉ）少なくとも１つの成長因子はヒポキサンチンを含み、必要に応じて、ヒポキサンチンの濃度は、約０．１ｍＭ〜約１０ｍＭの範囲にあり、および／または
（ｉｉ）少なくとも１つの成長調節因子はチミジンを含み、必要に応じて、チミジンの濃度は、約１ｍＭ〜約１００ｍＭの範囲にある、
請求項４に記載の方法。
【請求項６】
培地のｐＨは６．８〜７．５の範囲にあり、必要に応じて、培地のｐＨは６．９〜７．３の範囲にある請求項１〜５のいずれか１つに記載の方法。
【請求項７】
（ａ）培養ステップは成長期および生産期を含み、ならびに／あるいは
（ｂ）哺乳類細胞は３０〜３７℃の範囲の温度で培養され、必要に応じて、
（ｉ）哺乳類細胞は成長期および生産期の間、異なる温度で培養され、および／または
（ｉｉ）成長期および生産期の培地は異なるｐＨを有し、および／または
（ｉｉｉ）哺乳類細胞は、生産期に約１．０〜５０Ｘ１０６生細胞／ｍＬの範囲の生細胞密度で保持され、および／または
（ｉｖ）生産期は約５〜９０日間続く、
請求項１〜６のいずれか１つに記載の方法。
【請求項８】
方法はさらに組換えＩ２Ｓタンパク質を回収するステップを含む請求項１〜７のいずれか１つに記載の方法。
【請求項９】
（ａ）組換えＩ２Ｓタンパク質は、配列番号１と少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を含み、必要に応じて、組換えＩ２Ｓタンパク質は、配列番号１と同一のアミノ酸配列を含み、および／または
（ｂ）ＦＧＥは配列番号５と少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を含み、必要に応じて、ＦＧＥは配列番号５と同一のアミノ酸配列を含み、および／または
（ｃ）細胞は組換えＩ２Ｓタンパク質および／またはＦＧＥをコードする１つ以上の外因性核酸を含み、必要に応じて、
（ｉ）１つ以上の外因性核酸は細胞のゲノムに取り込まれるか、若しくは
（ｉｉ）１つ以上の外因性核酸は１つ以上の染色体外の構築物上に存在し、および／または
（ｄ）細胞は組換えＩ２Ｓタンパク質を過剰発現し、および／または
（ｅ）細胞はＦＧＥを過剰発現する、
請求項１〜８のいずれか１つに記載の方法。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか１つの方法を使用して製造される組換えイズロン酸２スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）タンパク質。
【請求項１１】
組換えイズロン酸２スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）タンパク質は、配列番号１と少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を有し、配列番号１のＣｙｓ５９に対応するシステイン残基のＣα-ホルミルグリシン（ＦＧｌｙ）への、少なくとも約７０％の転換を含む、当該組換えＩ２Ｓタンパク質の調製物。
【請求項１２】
（ａ）組換えＩ２Ｓタンパク質は配列番号１のＣｙｓ５９に対応するシステイン残基のＦＧｌｙへの少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、若しくは少なくとも約９７％の転換を含み、および／または
（ｂ）組換えＩ２Ｓタンパク質は、基質としてヘパリン二糖を使用したｉｎ  ｖｉｔｒｏの硫酸塩放出活性アッセイによって決定されるように、少なくとも４０Ｕ／ｍｇ、少なくとも６０Ｕ／ｍｇ若しくは少なくとも８０Ｕ／ｍｇの特異的活性を有する、
請求項１１に記載の調製物。
【請求項１３】
組換えＩ２Ｓタンパク質は、配列番号１と少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を含み、必要に応じて、組換えＩ２Ｓタンパク質は、配列番号１と同一のアミノ酸配列を含む、請求項１１または請求項１２に記載の調製物。
【請求項１４】
請求項１２または請求項１３に記載の調製物および薬剤的に許容可能な担体を含む医薬組成物。
【請求項１５】
ハンター症候群の治療のための医薬の製造における使用のための、請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
ハンター症候群を治療するための、請求項１４に記載の医薬組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３１】
本発明のその他の特徴、目的、および利点は、以下の詳細な記述で明らかにする。しかしながら、詳細な記述は、本発明の実施形態を示すが、説明のためだけにあり、限定することを意味しないことを理解されたい。本発明の範囲内での様々な変更または修正は、詳細な記述から、当業者に明白であろう。
本発明は、例えば、以下の項目も提供する。
（項目１）
血清を欠いた培地を含有する大規模な培養容器中の懸濁液で、組換えＩ２Ｓタンパク質およびホルミルグリシン生成酵素（ＦＧＥ）を共発現する哺乳類細胞を培養することを含む、哺乳類細胞の組換えイズロン酸２スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）タンパク質の大規模製造の方法。
（項目２）
細胞が平均して約１５ピコグラム／細胞／日超の比生産率で組換えＩ２Ｓタンパク質を製造するような条件下、血清を欠いた培地を含有する大規模な培養容器中の懸濁液で、組換えＩ２Ｓタンパク質およびホルミルグリシン生成酵素（ＦＧＥ）を共発現する哺乳類細胞を培養することを含む、哺乳類細胞の組換えイズロン酸２スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）タンパク質の大規模製造の方法であって、さらに製造された組換えＩ２Ｓタンパク質は、平均して、ヒトＩ２Ｓタンパク質のＣｙｓ５９に対応するシステイン残基をＣα-ホルミル
グリシンに、少なくとも約６０％転換することを含む、方法。
（項目３）
培養ステップは灌流プロセスを含む項目１または２に記載の方法。
（項目４）
灌流プロセスの灌流速度が新鮮培地／リアクターの作業体積／日（ＶＶＤ）の約０．５〜２容量の範囲にある、項目３に記載の方法。
（項目５）
灌流プロセスの細胞特異的灌流速度が約０．０５〜５ナノリットル／細胞／日（ｎＬ／細胞／日）の範囲にある、項目３に記載の方法。
（項目６）
細胞が平均して約３０ピコグラム／細胞／日超の比生産率で組換えＩ２Ｓタンパク質を製造する、前記項目いずれか１つに記載の方法。
（項目７）
細胞が少なくとも６ｍｇ／リットル／日の平均回収力価で組換えＩ２Ｓタンパク質を製造する、前記項目いずれか１つに記載の方法。
（項目８）
製造された組換えＩ２Ｓタンパク質は、平均して、ヒトＩ２Ｓタンパク質のＣｙｓ５９に対応するシステイン残基をＣα-ホルミルグリシンに、少なくとも約７０％転換するこ
とを含む、前記項目いずれか１つに記載の方法。
（項目９）
製造された組換えＩ２Ｓタンパク質は、平均して、ヒトＩ２Ｓタンパク質のＣｙｓ５９に対応するシステイン残基をＦＧｌｙに、少なくとも約８０％転換することを含む、前記項目いずれか１つに記載の方法。
（項目１０）
製造された組換えＩ２Ｓタンパク質は、平均して、ヒトＩ２Ｓタンパク質のＣｙｓ５９に対応するシステイン残基をＣα-ホルミルグリシン（ＦＧｌｙ）に、少なくとも約９７
％転換することを含む、前記項目いずれか１つに記載の方法。
（項目１１）
哺乳類細胞はヒト細胞である前記項目いずれか１つに記載の方法。
（項目１２）
哺乳類細胞はＣＨＯ細胞である項目１〜１０いずれか１つに記載の方法。
（項目１３）
大規模培養容器はバイオリアクターである前記項目いずれか１つに記載の方法。
（項目１４）
バイオリアクターの規模が１０Ｌ、２００Ｌ、５００Ｌ、１０００Ｌ、１５００Ｌ、若しくは２０００Ｌまたはそれ以上である、項目１３に記載の方法。
（項目１５）
培地は動物性由来の成分を欠いている前記項目いずれか１つに記載の方法。
（項目１６）
培地は既知組成培地である前記項目いずれか１つに記載の方法。
（項目１７）
培地にはタンパク質がない前記項目いずれか１つに記載の方法。
（項目１８）
培地は少なくとも１つの酸化還元調節因子を含む前記項目いずれか１つに記載の方法。
（項目１９）
少なくとも１つの酸化還元調節因子は、グルタチオン、グルコース-６−リン酸、カル
ノシン、カルノソール、スルホラファン、トコフェロール、アスコルビン酸塩、デヒドロアスコルビン酸、セレン、２−メルカプトエタノール、Ｎ-アセチルシステイン、システ
イン、リボフラビン、ニコチン酸、葉酸塩、フラビンアデニンジヌクレオチド（ＦＡＤ）、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰ）から成る群から選択される、項目１８に記載の方法。
（項目２０）
少なくとも１つの酸化還元調節因子はシステインを含む項目１９に記載の方法。
（項目２１）
システインの濃度は約０．１ｍｇ／Ｌ〜約６５ｍｇ／Ｌの範囲にある項目２０に記載の方法。
（項目２２）
少なくとも１つの酸化還元調節因子は２−メルカプトエタノールを含む項目１８〜２１のいずれか１つに記載の方法。
（項目２３）
２−メルカプトエタノールの濃度は、約０．００１ｍＭ〜約０．０１ｍＭの範囲にある項目２２に記載の方法。
（項目２４）
少なくとも１つの酸化還元調節因子はＮ-アセチルシステインを含む項目１８〜２３
のいずれか１つに記載の方法。
（項目２５）
Ｎ-アセチルシステインの濃度は、約３ｍＭ〜約９ｍＭの範囲にある項目２４に記載
の方法。
（項目２６）
培地は少なくとも１つの成長因子を含む前記項目いずれか１つに記載の方法。
（項目２７）
少なくとも１つの成長因子はヒポキサンチンを含む項目２６に記載の方法。
（項目２８）
ヒポキサンチンの濃度は、約０．１ｍＭ〜約１０ｍＭの範囲にある項目２７に記載の方法。
（項目２９）
少なくとも１つの成長因子はチミジンを含む項目２６〜２８のいずれか１つに記載の方法。
（項目３０）
チミジンの濃度は、約１ｍＭ〜約１００ｍＭの範囲にある項目２９に記載の方法。
（項目３１）
培地のｐＨは６．８〜７．５の範囲にある前記項目いずれか１つに記載の方法。
（項目３２）
培地のｐＨは６．９〜７．３の範囲にある項目３１に記載の方法。
（項目３３）
培養ステップは成長期および生産期を含む前記項目いずれか１つに記載の方法。
（項目３４）
哺乳類細胞は３０〜３７℃の範囲の温度で培養される前記項目いずれか１つに記載の方法。
（項目３５）
哺乳類細胞は成長期および生産期の間、異なる温度で培養される項目３３または３４のいずれか１つに記載の方法。
（項目３６）
成長期および生産期の培地は異なるｐＨを有する項目３３〜３５のいずれか１つに記載の方法。
（項目３７）
哺乳類細胞は、生産期に約１．０〜５０Ｘ１０６生細胞／ｍＬの範囲の生細胞密度で保持される、項目３３〜３６のいずれか１つに記載の方法。
（項目３８）
生産期は約５〜９０日間続く項目３３〜３７のいずれか１つに記載の方法。
（項目３９）
方法はさらに組換えＩ２Ｓタンパク質を回収するステップを含む前記項目いずれか１つに記載の方法。
（項目４０）
組換えＩ２Ｓタンパク質は、配列番号１と少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を含む前記項目いずれか１つに記載の方法。
（項目４１）
組換えＩ２Ｓタンパク質は、配列番号１と同一のアミノ酸配列を含む項目４０に記載の方法。
（項目４２）
ＦＧＥは配列番号５と少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を含む前記項目いずれか１つに記載の方法。
（項目４３）
ＦＧＥは配列番号５と同一のアミノ酸配列を含む項目４２に記載の方法。
（項目４４）
細胞は組換えＩ２Ｓタンパク質および／またはＦＧＥをコードする１つ以上の外因性核酸を含む前記項目いずれか１つに記載の方法。
（項目４５）
１つ以上の外因性核酸は細胞のゲノムに取り込まれる項目４４に記載の方法。
（項目４６）
１つ以上の外因性核酸は１つ以上の染色体外の構築物上に存在する、項目４４に記載の方法。
（項目４７）
細胞は組換えＩ２Ｓタンパク質を過剰発現する前記項目いずれか１つに記載の方法。
（項目４８）
細胞はＦＧＥを過剰発現する前記項目いずれか１つに記載の方法。
（項目４９）
前記項目のいずれか１つの方法を使用して製造される組換えイズロン酸２スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）タンパク質。
（項目５０）
組換えイズロン酸２スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）タンパク質は、配列番号１と少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を有し、配列番号１のＣｙｓ５９に対応するシステイン残基をＣα-ホルミルグリシン（ＦＧｌｙ）に、少なくとも約７０％転換することを含む、当該
組換えＩ２Ｓタンパク質の調製。
（項目５１）
組換えＩ２Ｓタンパク質は配列番号１のＣｙｓ５９に対応するシステイン残基をＦＧｌｙに少なくとも約８０％転換することを含む、項目５０に記載の調製。
（項目５２）
組換えＩ２Ｓタンパク質は配列番号１のＣｙｓ５９に対応するシステイン残基をＦＧｌｙに少なくとも約９０％転換することを含む、項目５０または５１に記載の調製。
（項目５３）
組換えＩ２Ｓタンパク質は配列番号１のＣｙｓ５９に対応するシステイン残基をＦＧｌｙに少なくとも約９５％転換することを含む、項目５０〜５２のいずれか１つに記載の調製。
（項目５４）
組換えＩ２Ｓタンパク質は配列番号１のＣｙｓ５９に対応するシステイン残基をＦＧｌｙに少なくとも約９７％転換することを含む、項目５０〜５３のいずれか１つに記載の調製。
（項目５５）
組換えＩ２Ｓタンパク質は、基質としてヘパリン二糖を使用したｉｎ  ｖｉｔｒｏの硫酸塩放出活性アッセイによって決定されるように、少なくとも４０Ｕ／ｍｇの特異的活性を有する、項目５０〜５４のいずれか１つに記載の調製。
（項目５６）
組換えＩ２Ｓタンパク質は、基質としてヘパリン二糖を使用したｉｎ  ｖｉｔｒｏの硫酸塩放出活性アッセイによって決定されるように、少なくとも６０Ｕ／ｍｇの特異的活性を有する、項目５０〜５５のいずれか１つに記載の調製。
（項目５７）
組換えＩ２Ｓタンパク質は、基質としてヘパリン二糖を使用したｉｎ  ｖｉｔｒｏの硫酸塩放出活性アッセイによって決定されるように、少なくとも８０Ｕ／ｍｇの特異的活性を有する、項目５０〜５６のいずれか１つに記載の調製。
（項目５８）
組換えＩ２Ｓタンパク質は、配列番号１と少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を含む、項目５０〜５７のいずれか１つに記載の調製。
（項目５９）
組換えＩ２Ｓタンパク質は、配列番号１と同一のアミノ酸配列を含む、項目５０〜５８のいずれか１つに記載の調製。
（項目６０）
項目５０〜５９のいずれか１つの組換えＩ２Ｓタンパク質および薬剤的に許容可能な担体を含む医薬組成物。
（項目６１）
項目６０に記載の医薬組成物を治療が必要な対象に投与することを含むハンター症候群の治療方法。