【手続補正書】
【提出日】平成28年4月18日(2016.4.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
組み換え熱帯熱マラリア原虫スポロゾイト周囲タンパク質を精製するプロセスであって、該プロセスは、
（ａ）組み換え熱帯熱マラリア原虫スポロゾイト周囲タンパク質二量体を含む細菌細胞溶解物調製物を得る工程、
（ｂ）工程（ａ）の細菌細胞溶解物調製物を、組み換え熱帯熱マラリア原虫スポロゾイト周囲タンパク質二量体を含む可溶性画分と、不溶性画分とに分離する工程、
（ｃ）工程（ｂ）の可溶性画分中の組み換え熱帯熱マラリア原虫スポロゾイト周囲タンパク質二量体を、可溶性画分中の宿主細胞タンパク質から分離する工程、および、
（ｄ）組み換え熱帯熱マラリア原虫スポロゾイト周囲タンパク質を得るために、選択的な還元条件に、工程（ｃ）で得られた組み換え熱帯熱マラリア原虫スポロゾイト周囲タンパク質二量体を晒す工程であって、ここで選択的な還元条件は、ｒＣＳＰにおける分子間のジスルフィド結合を減らして分子内のジスルフィド結合を保存し、
それによって、変性又はリフォールディングする工程を含まずに精製された組み換え熱帯熱マラリア原虫スポロゾイト周囲タンパク質を得る工程であって、ここで得られた組み換え熱帯熱マラリア原虫スポロゾイト周囲タンパク質は最も多くのＮ−末端システインを含み、最も多くのＮ−末端システインはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に記載されている２５の位置のシステインに対応しており、得られた精製組み換え熱帯熱マラリア原虫スポロゾイト周囲タンパク質の約１０％以下が二量体化されており、得られた精製組み換え熱帯熱マラリア原虫スポロゾイト周囲タンパク質の約１０％以下が高分子量凝集体として存在する、工程、
を含むプロセス。
【請求項２】
（ｅ）工程（ｄ）で得られた組み換え熱帯熱マラリア原虫スポロゾイト周囲タンパク質を、宿主細胞タンパク質、Ｎ末端分解したｒＣＳＰ、および／または、他の望ましくないｒＣＳＰ種から分離する工程をさらに含む、請求項１記載のプロセス。
【請求項３】
精製された組み換え熱帯熱マラリア原虫スポロゾイト周囲タンパク質が、約１０％乃至約７５％の全精製収率で得られる、請求項１記載のプロセス。
【請求項４】
得られる精製された組み換え熱帯熱マラリア原虫スポロゾイト周囲タンパク質が、少なくとも約９０％の熱帯熱マラリア原虫スポロゾイト周囲タンパク質単量体を含む、請求項１記載のプロセス。
【請求項５】
工程（ｃ）の分離がクロマトグラフィーを含み、クロマトグラフィーは陰イオン交換クロマトグラフィーと混合モードクロマトグラフィーを含む、請求項１記載のプロセス。
【請求項６】
混合モードクロマトグラフィーがヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーである、請求項５記載のプロセス。
【請求項７】
工程（ｅ）の分離が疎水性相互作用クロマトグラフィーを含む、請求項２記載のプロセス。
【請求項８】
選択的な還元条件は穏やかな還元剤を含む、請求項１記載のプロセス。
【請求項９】
穏やかな還元剤が、ＤＴＴ、システイン、アセチルシステイン、グルタチオン、モノチオグリセロール（ＭＴＧ）、チオグリコレート、ジチオレイトール、ジチオエリトリトール、アセチルシステイン、２−メルカプトエタノール（Ｂ−メルカプトエタノール）、ＴＣＥＰ−ＨＣｌ（純粋な結晶のトリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン）塩酸塩、あるいは、２−メルカプトエチルアミン−ＨＣｌ（２−ＭＥＡ）である、請求項８記載のプロセス。
【請求項１０】
穏やかな還元剤が、約０．０１乃至約０．０３ｍＭの濃度のＤＴＴ、または、約０．５ｍＭ乃至約１．５ｍＭの濃度のＭＴＧである、請求項９記載のプロセス。
【請求項１１】
選択的な還元条件が、脱凝集剤をさらに含む、請求項８記載のプロセス
【請求項１２】
脱凝集剤が尿素、アルギニン、グアニジンＨＣｌ、または、洗剤である、請求項１１記載のプロセス。
【請求項１３】
約０．５ｍＭ〜約１．５ｍＭのＭＴＧと、約１０％〜約２０％のアルギニンとを含む製剤バッファー中の約１ｍｇ／ｍｌ〜約５０ｍｇ／ｍｌ、約１ｍｇ／ｍｌ〜約２５ｍｇ／ｍｌ、約１ｍｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌ、約１ｍｇ／ｍｌ〜約５ｍｇ／ｍｌ、約５ｍｇ／ｍｌ〜約５０ｍｇ／ｍｌ、約５ｍｇ／ｍｌ〜約２５ｍｇ／ｍｌ、または、約５ｍｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌの組み換え熱帯熱マラリア原虫スポロゾイト周囲タンパク質を透析する工程、及び安定したタンパク質製剤を約３℃〜約２５℃の保存温度で保存する工程を含む、安定した液体の組み換え熱帯熱マラリア原虫スポロゾイト周囲タンパク質製剤を調製する工程をさらに含む、請求項１又は２記載のプロセス。
【請求項１４】
細菌細胞溶解物が、組み換え熱帯熱マラリア原虫スポロゾイト周囲タンパク質をコードする核酸配列を含む発現ベクターを用いて形質転換された宿主細胞から調製される、請求項１記載のプロセス。
【請求項１５】
宿主細胞がシュードモナス科細胞である、請求項１４記載のプロセス。
【請求項１６】
宿主細胞がシュードモナス属細胞である、請求項１５記載のプロセス。
【請求項１７】
核酸配列によってコードされた組み換え熱帯熱マラリア原虫スポロゾイト周囲タンパク質が、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ３で説明されるようなアミノ酸配列、または、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ３で説明されるようなアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を有している、請求項１４記載のプロセス。
【請求項１８】
組み換え熱帯熱マラリア原虫スポロゾイト周囲タンパク質をコードする核酸配列が、ペリプラズム分泌シグナル配列に融合される、請求項１６記載のプロセス。
【請求項１９】
約０．５〜約１．５ｍＭのＭＴＧと約１０％〜約２０％のアルギニンとを含む製剤バッファー中の約１〜約５、約１〜約１０、約１〜約２０、約１〜約３０、約１〜約４０、または、約１〜約５０ｍｇ／ｍｌの組み換え熱帯熱マラリア原虫スポロゾイト周囲タンパク質を含み、保存温度が約３℃〜約２５℃である、組み換え熱帯熱マラリア原虫スポロゾイト周囲タンパク質の安定した液体製剤。
【請求項２０】
製剤バッファーが０．５×または１×ＰＢＳを含む、請求項１９記載の安定した液体製剤。
【請求項２１】
製剤バッファーが０．５×または１×ＰＢＳを含む、請求項１３記載のプロセス。
【請求項２２】
製剤バッファーが、約６．０〜約７．５、約６．４〜約７．２、約６．４〜約７．０、約６．６〜約６．８、約６．４、約６．７、または、約７．０のｐＨを有している、請求項２０記載の安定した液体製剤。
【請求項２３】
製剤バッファーが、約６．０〜約７．５、約６．４〜約７．２、約６．４〜約７．０、約６．６〜約６．８、約６．４、約６．７、または、約７．０のｐＨを有している、請求項２１記載のプロセス。
【請求項２４】
約１〜約５ｍｇ／ｍｌのｒＣＳＰ、約１．０ｍＭのＭＴＧ、約１０％のアルギニン、１×ＰＢＳを含み、約６．０〜約７．５のｐＨを有し、保存温度が約４℃〜約６℃である、請求項２２記載の安定した液体製剤。
【請求項２５】
製剤バッファーが、約１．０ｍＭのＭＴＧ、約１０％から約２０％のアルギニン、１×ＰＢＳを含み、約６．４〜約７．５のｐＨを有し、保存温度が約４℃〜約６℃である、請求項２３記載のプロセス。
【請求項２６】
安定した液体組み換え熱帯熱マラリア原虫スポロゾイト周囲タンパク質製剤が、多くて約１％、多くて約２％、多くて約３％、多くて約４％、多くて約５％、多くて約６％、多くて約７％、多くて約８％、多くて約９％、または多くて約１０％の組み換え熱帯熱マラリア原虫スポロゾイト周囲タンパク質二量体；多くて約１％、多くて約２％、多くて約３％、多くて約４％、多くて約５％、多くて約６％、多くて約７％、多くて約８％、多くて約９％、または多くて約１０％の組み換え熱帯熱マラリア原虫スポロゾイト周囲タンパク質高分子量の凝集体；および、多くて約１％、多くて約２％、多くて約３％、多くて約４％、多くて約５％、多くて約６％、多くて約７％、多くて約８％、多くて約９％、または多くて約１０％の組み換え熱帯熱マラリア原虫スポロゾイト周囲タンパク質分解産物の少なくとも１つを含む、請求項１９記載の安定した液体製剤。
【請求項２７】
安定した液体組み換え熱帯熱マラリア原虫スポロゾイト周囲タンパク質製剤が、多くて約１％、多くて約２％、多くて約３％、多くて約４％、多くて約５％、多くて約６％、多くて約７％、多くて約８％、多くて約９％、または多くて約１０％の組み換え熱帯熱マラリア原虫スポロゾイト周囲タンパク質二量体；多くて約１％、多くて約２％、多くて約３％、多くて約４％、多くて約５％、多くて約６％、多くて約７％、多くて約８％、多くて約９％、または多くて約１０％の組み換え熱帯熱マラリア原虫スポロゾイト周囲タンパク質高分子量の凝集体；および、多くて約１％、多くて約２％、多くて約３％、多くて約４％、多くて約５％、多くて約６％、多くて約７％、多くて約８％、多くて約９％、または多くて約１０％の組み換え熱帯熱マラリア原虫スポロゾイト周囲タンパク質分解産物の少なくとも１つを含む、請求項１３記載のプロセス。
【請求項２８】
安定した液体製剤中でｒＣＳＰを安定して維持するためのプロセスであって、該プロセスは、
約６．０〜約７．５のｐＨの１×ＰＢＳ中に、約１〜約５、約１〜約１０、約１〜約２０、約１〜約３０、約１〜約４０、または約１〜約５０ｍｇ／ｍｌのｒＣＳＰ、約０．５〜約１．５ｍＭのＭＴＧ、および、約１％〜約２０％のアルギニンを含む安定した製剤を提供する工程を含み、
ｒＣＳＰは、少なくとも約７日、少なくとも約８日、少なくとも約９日、少なくとも約１０日、少なくとも約１１日、少なくとも約１２日、少なくとも約１３日、少なくとも約１４日、少なくとも約１５日、少なくとも約１６日、少なくとも約１７日、少なくとも約１８日、少なくとも約１９日、少なくとも約２０日、少なくとも約２１日、少なくとも約２２日、少なくとも約２３日、少なくとも約２４日、少なくとも約２５日、少なくとも約３０日、少なくとも約６０日、少なくとも約７０日、少なくとも約８０日、少なくとも約９０日、少なくとも約６か月、または、少なくとも約１年のあいだ、約３℃〜約２５℃の温度で安定して維持される、プロセス。
【請求項２９】
安定した液体製剤中で精製された組み換え熱帯熱マラリア原虫スポロゾイト周囲タンパク質を安定して維持する工程をさらに含み、約６．０〜約７．５のｐＨの０．５×または１×ＰＢＳ中に、約１〜約５、約１〜約１０、約１〜約２０、約１〜約３０、約１〜約４０、または、約１〜約５０ｍｇ／ｍｌのｒＣＳＰ、約０．５〜約１．５ｍＭのＭＴＧ、および、約１〜約２０％のアルギニンを含む製剤を提供する工程を含み、
ｒＣＳＰは、少なくとも約７日、少なくとも約８日、少なくとも約９日、少なくとも約１０日、少なくとも約１１日、少なくとも約１２日、少なくとも約１３日、少なくとも約１４日、少なくとも約１５日、少なくとも約１６日、少なくとも約１７日、少なくとも約１８日、少なくとも約１９日、少なくとも約２０日、少なくとも約２１日、少なくとも約２２日、少なくとも約２３日、少なくとも約２４日、少なくとも約２５日、少なくとも約３０日、少なくとも約６０日、少なくとも約７０日、少なくとも約８０日、少なくとも約９０日、少なくとも約６か月、または、少なくとも約１年のあいだ、約３℃〜約２５℃の温度で安定して維持される、請求項１又は２記載のプロセス。