【手続補正書】
【提出日】平成28年2月17日(2016.2.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式：
Ｓｔ−Ｒ１−Ｓ１−Ｑ−Ｓ２−Ｒ２
を有するポリペプチドであって、
式中、
Ｓｔは軸配列であり、該軸配列は、該ポリペプチドが標的細胞の表面に発現する場合、ＲおよびＱエピトープを該細胞表面から突出させ；
Ｒ１およびＲ２は、各々配列番号１、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、および１６から成る群から選択されるアミノ酸配列を有するリツキシマブ結合エピトープであり；
Ｓ１およびＳ２はスペーサー配列であり、該スペーサー配列は同じまたは異なり得、Ｒ１とＲ２との間の距離は、該ポリペプチドがリツキシマブの両方の抗原結合部位に同時に結合するには長過ぎるように、該スペーサー配列は、合わせて少なくとも約１０アミノ酸の長さを有し；そして
Ｑは、配列番号２で示されるアミノ酸配列を有するＱＢＥｎｄ１０結合エピトープである、ポリペプチド。
【請求項２】
Ｒ１とＲ２との間の距離は、７６．５７Åより大きい、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項３】
前記軸配列は、ＣＤ８αから誘導可能である、請求項１または２に記載のポリペプチド。
【請求項４】
前記軸配列は、配列番号３で示されるアミノ酸配列を含む、請求項３に記載のポリペプチド。
【請求項５】
配列番号４で示される配列、または配列番号４で示される配列と少なくとも８０％の同一性を有するその変異体を含み、
（ｉ）ＱＢＥＮＤ１０に結合し；（ｉｉ）リツキシマブに結合し、そして（ｉｉｉ）細胞の表面に発現した場合、リツキシマブの存在下で、該細胞の補体媒介性死滅を誘導する、請求項１〜４のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項６】
目的のタンパク質（ＰＯＩ）に融合した、請求項１〜５のいずれかに記載のポリペプチドを含む融合タンパク質。
【請求項７】
前記ＰＯＩは、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）またはＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である、請求項６に記載の融合タンパク質。
【請求項８】
前記ポリペプチドと前記目的のタンパク質との間に、自己切断ペプチドを含む、請求項６または７に記載の融合タンパク質。
【請求項９】
請求項１〜５のいずれかに記載のポリペプチド、または請求項６〜８のいずれかに記載の融合タンパク質をコードすることが可能な核酸配列。
【請求項１０】
請求項９に記載の核酸配列を含むベクター。
【請求項１１】
目的の導入遺伝子をさらに含む請求項１０に記載のベクター。
【請求項１２】
前記目的の導入遺伝子は、キメラ抗原受容体またはＴ細胞受容体をコードし、その結果、前記ベクターが標的細胞を形質導入するために使用される場合、該標的細胞は、請求項１〜５のいずれかに記載のポリペプチドと、キメラ抗原受容体またはＴ細胞受容体とを共発現する、請求項１１に記載のベクター。
【請求項１３】
請求項１〜５のいずれかに記載のポリペプチドを発現する細胞。
【請求項１４】
前記細胞表面に前記ポリペプチドおよびＰＯＩを共発現する、請求項１３に記載の細胞。
【請求項１５】
請求項９に記載の核酸配列を含む細胞。
【請求項１６】
Ｔ細胞である、請求項１３〜１５のいずれかに記載の細胞。
【請求項１７】
請求項１０〜１２のいずれかに記載のベクターで細胞をエキソビボにおいて形質導入またはトランスフェクトする工程を含む、請求項１３〜１６のいずれかに記載の細胞を作製するための方法。
【請求項１８】
請求項１０〜１２のいずれかに記載のベクターでエキソビボにおいてトランスフェクトまたは形質導入した細胞の表面における前記ＱＢＥｎｄ１０結合エピトープの発現を検出する工程を含む、遺伝子治療法の形質導入効率を調査するための方法。
【請求項１９】
以下の工程：
（ｉ）請求項１１に記載のベクターで、エキソビボにおいてトランスフェクトまたは形質導入した細胞の表面における前記ＱＢＥｎｄ１０結合エピトープの発現を検出する工程；および
（ｉｉ）該ＱＢＥｎｄ１０結合エピトープを発現すると同定された細胞を選択する工程を含む、ＰＯＩを発現する細胞を選択するための方法。
【請求項２０】
請求項１９に記載の方法を用いて、細胞の集団からＰＯＩを発現する細胞を選択する工程を含む、ＰＯＩを発現する細胞について富化された細胞の精製集団を調製するための方法。
【請求項２１】
以下の工程：
（ｉ）請求項１１のいずれかに記載のベクターで、エキソビボにおいて患者から単離した細胞の集団を形質導入またはトランスフェクトする工程；および
（ｉｉ）請求項２０に記載の方法によって、形質導入／トランスフェクトされた細胞集団から、前記ＰＯＩを発現する細胞を選択する工程
を含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
請求項１〜５のいずれかに記載のポリペプチドを発現する細胞について富化され、従ってＰＯＩを発現する細胞にについて富化された細胞集団。
【請求項２３】
前記細胞表面における、請求項１〜５のいずれかに記載のポリペプチドの発現を検出する工程を含む、インビボで形質導入細胞を追跡するための方法。
【請求項２４】
リツキシマブを含む、請求項１３〜１６のいずれかに記載の細胞を消失させるための組成物であって、前記組成物が前記細胞に曝露されることを特徴とする、組成物。
【請求項２５】
請求項１３〜１６のいずれかに記載の細胞、または請求項２４に記載の細胞集団を含む、被験体における疾患の処置において使用するための組成物であって、前記組成物が該被験体に投与されることを特徴とする、組成物。
【請求項２６】
被験体における疾患の処置において使用するための組成物であって、
前記細胞が、前記被験体から単離され、請求項１１に記載のベクターで形質導入またはトランスフェクトされること、および
前記投与が、該形質導入／トランスフェクトされた細胞が該被験体へ戻されることであることをさらに特徴とする、請求項２５に記載の組成物。
【請求項２７】
被験体における疾患の処置において使用するための組成物であって、がんの処置において使用するためのものである、請求項２６に記載の組成物。
【請求項２８】
養子細胞移入における使用のための、請求項１３〜１６のいずれかに記載の細胞または請求項２２に記載の細胞集団。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５３】
第１４の局面において、本発明は、養子細胞移入による治療において使用するための、本発明の第５の局面による細胞、または本発明の第１０の局面による細胞集団を提供する。
本発明は、例えば、以下の項目も提供する。
（項目１）
式：
Ｓｔ−Ｒ１−Ｓ１−Ｑ−Ｓ２−Ｒ２
を有するポリペプチドであって、
式中、
Ｓｔは軸配列であり、該軸配列は、該ポリペプチドが標的細胞の表面に発現する場合、ＲおよびＱエピトープを該細胞表面から突出させ；
Ｒ１およびＲ２は、各々配列番号１、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、および１６から成る群から選択されるアミノ酸配列を有するリツキシマブ結合エピトープ、またはリツキシマブ結合活性を保持するその変異体であり；
Ｓ１およびＳ２は任意選択のスペーサー配列であり、該スペーサー配列は同じまたは異なり得；そして
Ｑは、配列番号２で示されるアミノ酸配列を有するＱＢＥｎｄ１０結合エピトープ、またはＱＢＥｎｄ１０結合活性があるその変異体である、ポリペプチド。
（項目２）
Ｒ１とＲ２との間の距離は、前記ポリペプチドがリツキシマブの両方の抗原結合部位に同時に結合するには長過ぎる、項目１に記載のポリペプチド。
（項目３）
前記スペーサー配列Ｓ１およびＳ２は、合わせて少なくとも約１０アミノ酸の長さを有する、項目２に記載のポリペプチド。
（項目４）
Ｒ１とＲ２との間の距離は、７６．５７Åより大きい、前記項目のいずれかに記載のポリペプチド。
（項目５）
前記軸配列は、ＣＤ８αから誘導可能である、前記項目のいずれかに記載のポリペプチド。
（項目６）
前記軸配列は、配列番号３で示されるアミノ酸配列を含む、項目５に記載のポリペプチド。
（項目７）
配列番号４で示される配列、または配列番号４で示される配列と少なくとも８０％の同一性を有するその変異体を含み、
（ｉ）ＱＢＥＮＤ１０に結合し；（ｉｉ）リツキシマブに結合し、そして（ｉｉｉ）細胞の表面に発現した場合、リツキシマブの存在下で、該細胞の補体媒介性死滅を誘導する、前記項目のいずれかに記載のポリペプチド。
（項目８）
目的のタンパク質（ＰＯＩ）に融合した、前記項目のいずれかに記載のポリペプチドを含む融合タンパク質。
（項目９）
前記ＰＯＩは、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）またはＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である、項目８に記載の融合タンパク質。
（項目１０）
前記ポリペプチドと前記目的のタンパク質との間に、自己切断ペプチドを含む、項目８または９に記載の融合タンパク質。
（項目１１）
項目１〜７のいずれかに記載のポリペプチド、または項目８〜１０のいずれかに記載の融合タンパク質をコードすることが可能な核酸配列。
（項目１２）
項目１１に記載の核酸配列を含むベクター。
（項目１３）
目的の導入遺伝子をさらに含む項目１２に記載のベクター。
（項目１４）
前記目的の導入遺伝子は、キメラ抗原受容体またはＴ細胞受容体をコードし、その結果、前記ベクターが標的細胞を形質導入するために使用される場合、該標的細胞は、項目１〜７のいずれかに記載のポリペプチドと、キメラ抗原受容体またはＴ細胞受容体とを共発現する、項目１３に記載のベクター。
（項目１５）
項目１〜７のいずれかに記載のポリペプチドを発現する細胞。
（項目１６）
前記細胞表面に前記ポリペプチドおよびＰＯＩを共発現する、項目１５に記載の細胞。
（項目１７）
項目１１に記載の核酸配列を含む細胞。
（項目１８）
Ｔ細胞である、項目１５〜１７のいずれかに記載の細胞。
（項目１９）
項目１２〜１４のいずれかに記載のベクターで細胞を形質導入またはトランスフェクトする工程を含む、項目１５〜１８のいずれかに記載の細胞を作製するための方法。
（項目２０）
項目１２〜１４のいずれかに記載のベクターでトランスフェクトまたは形質導入した細胞の表面における前記ＱＢＥｎｄ１０結合エピトープの発現を検出する工程を含む、遺伝子治療法の形質導入効率を調査するための方法。
（項目２１）
以下の工程：
（ｉ）項目１３に記載のベクターで、トランスフェクトまたは形質導入した細胞の表面における前記ＱＢＥｎｄ１０結合エピトープの発現を検出する工程；および
（ｉｉ）該ＱＢＥｎｄ１０結合エピトープを発現すると同定された細胞を選択する工程を含む、ＰＯＩを発現する細胞を選択するための方法。
（項目２２）
項目２１に記載の方法を用いて、細胞の集団からＰＯＩを発現する細胞を選択する工程を含む、ＰＯＩを発現する細胞について富化された細胞の精製集団を調製するための方法。
（項目２３）
以下の工程：
（ｉ）項目１３のいずれかに記載のベクターで、エキソビボにおいて患者から単離した細胞の集団を形質導入またはトランスフェクトする工程；および
（ｉｉ）項目２２に記載の方法によって、形質導入／トランスフェクトされた細胞集団から、前記ＰＯＩを発現する細胞を選択する工程
を含む、項目２２に記載の方法。
（項目２４）
項目１〜７のいずれかに記載のポリペプチドを発現する細胞について富化され、従ってＰＯＩを発現する細胞にについて富化された細胞集団。
（項目２５）
前記細胞表面における、項目１〜７のいずれかに記載のポリペプチドの発現を検出する工程を含む、インビボで形質導入細胞を追跡するための方法。
（項目２６）
前記細胞をリツキシマブに曝露する工程を含む、項目１５〜１８のいずれかに記載の細胞を消失させるための方法。
（項目２７）
項目１５〜１８のいずれかに記載の細胞、または項目２４に記載の細胞集団を被験体に投与する工程を含む、該被験体における疾患を処置するための方法。
（項目２８）
以下の工程：
（ｉ）項目１３に記載のベクターで、被験体から単離した細胞のサンプルを形質導入またはトランスフェクトする工程、および
（ｉｉ）該形質導入／トランスフェクトされた細胞を該患者へ戻す工程、
を含む、項目２７に記載の方法。
（項目２９）
がんを処置するための項目２８に記載の方法。
（項目３０）
養子細胞移入における使用のための、項目１５〜１８のいずれかに記載の細胞または項目２４に記載の細胞集団。