【手続補正書】
【提出日】平成28年6月10日(2016.6.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
健常なドナー由来のヒトＴ細胞を含むＴビヒクルであって、
ヒトＴ細胞は、天然型Ｔ細胞受容体を持ち、治療のための特質を有するよう改変されており、
改変されたヒトＴ細胞が認識可能な抗原は、ヒト以外の抗原のみである、Ｔビヒクル。
【請求項２】
請求項１のＴビヒクルであって、
治療のための特質が化学療法剤を含む、Ｔビヒクル。
【請求項３】
請求項１のＴビヒクルであって、
治療のための特質が抗菌剤を含む、Ｔビヒクル。
【請求項４】
請求項１のＴビヒクルであって、
治療のための特質が放射性同位体を含む、Ｔビヒクル。
【請求項５】
請求項１のＴビヒクルであって、
治療のための特質がＤＮＡを含む、Ｔビヒクル。
【請求項６】
請求項１のＴビヒクルであって、
治療のための特質がＲＮＡを含む、Ｔビヒクル。
【請求項７】
請求項１のＴビヒクルであって、
治療のための特質が組み替えタンパク質を含む、Ｔビヒクル。
【請求項８】
請求項１のＴビヒクルであって、
治療のための特質がペプチドを含む、Ｔビヒクル。
【請求項９】
請求項１のＴビヒクルであって、
治療のための特質がアプタマーを含む、Ｔビヒクル。
【請求項１０】
冷凍されている請求項１のＴビヒクル。
【請求項１１】
同種細胞バンクに保存されている請求項１のＴビヒクル。
【請求項１２】
ヒト以外の抗原のみを認識する天然のＴ細胞受容体を有するヒトＴ細胞を含むＴビヒクルであって、
ヒトＴ細胞が、化学療法剤、抗菌剤、放射性同位体、ＤＮＡ、ＲＮＡ、組み換えタンパク質、ペプチド、又はアプタマーを含む治療のための特質を運ぶことのできる輸送体となるよう改変されている、Ｔビヒクル。
【請求項１３】
請求項１２のＴビヒクルであって、
Ｔ細胞が健常なドナー由来である、Ｔビヒクル。
【請求項１４】
冷凍されている請求項１２のＴビヒクル。
【請求項１５】
ヒト正常細胞に存在しない抗原のみを認識する天然のＴ細胞受容体を持ったＴ細胞を含むＴビヒクルであって、
Ｔ細胞は、治療のための特質を有するよう改変されており、
同種細胞バンクに冷凍保存されている、Ｔビヒクル。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００２】
本発明は概して細胞培養方法に関するものであり、より詳細には細胞療法のための細胞培養に関するものである。更に、本発明は、養子細胞療法で使用するための治療属性（又は、治療のための特質という。以下同じ）を有するＴ細胞の作製に関するものである。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００７】
養子細胞療法において、天然型抗原特異性を有するＴ細胞（すなわち、特定のヒト白血球抗原（ＨＬＡ）対立遺伝子との関連において提示される際、特定の標的抗原由来の特定のペプチドに対するＴ細胞）は、ウイルス感染及び標的腫瘍を治療するために、自己セッティング及び部分的にＨＬＡ適合したセッティングにおいて投与される。これらの場合はいずれも、（ｉ）天然型のＴ細胞受容体が目的の抗原を認識した、及び（ｉｉ）標的化ペプチドを提示するのに必要なＨＬＡ対立遺伝子を発現したレシピエントにＴ細胞が投与されたという事実から治療上の利点が得られた。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１０】
ＨＳＣＴ後の特定のウイルス感染を予防・治療するための代替方策は、抗ウイルス活性を有する生体外で増殖されたＴ細胞の養子細胞移入である。ウイルス反応性Ｔ細胞の特定の増殖は、同種反応性Ｔ細胞を増大させることなく注入可能なウイルス特異的Ｔ細胞の数を増大させるという利点を有する。特定の抗原に対する反応性を有する富化された抗原特異的Ｔ細胞の注入は、潜在的にＧＶＨＤなどの望ましくない病の発生を低減しつつ治療有効性を増大させ、この治療様式は、血液悪性腫瘍並びに黒色腫などの固形腫瘍及びホジキンリンパ腫及び鼻咽頭がんなどのＥＢＶ関連悪性腫瘍の治療に対して効果的かつ安全であることが証明されている。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１１】
注目すべきは、全ての療法では、天然型Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を介した主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子との関連において、抗原を認識するために天然型Ｔ細胞受容体の特異性を使用することが必要とされる。故に、治療上の利点自体が、ＨＬＡ適合したＴ細胞又は部分的に適合したＴ細胞の使用／投与に依存する。例えば、黒色腫細胞を標的とするために、ＧＰ１００（がん細胞に発現する腫瘍関連抗原）に対するＨＬＡハプロタイプ（ａ）を発現するドナー由来の抗原特異的な黒色腫指向性Ｔ細胞を増殖することができる。この状況において、治療上の利点は、標的抗原を有する天然型Ｔ細胞受容体の特異的相互作用によってもたらされる。しかしながら、この相互作用は、適合可能なＨＬＡのセッティングにおいて（つまり、自己セッティングにおいて、又はＨＬＡも発現する別の個人との関連において）のみ生じ得る。この手法は、様々なＨＬＡハプロタイプを有する系統を含む細胞バンクの生成によって複数の患者を治療するために拡張することができるだけで、ここでは、患者は最も適するＴ細胞系統に適合される。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１２】
要するに、現在の養子細胞療法の全適用では、その治療目的をもたらすＴ細胞の治療のための特質は、ドナーＴ細胞の天然型抗原特異性である。この固有の特徴は、ドナーとレシピエントとの少なくとも部分的なＨＬＡ適合を必要とし、同種セッティングにおいて、ＧＶＨＤなどの病の可能性を生み出す。他のものは、複雑な遺伝子操作によってドナーＴ細胞抗原受容体を完全に排除すること、及びキメラ抗原受容体を担持するようにＴ細胞の遺伝子再操作を行うことにより、Ｔ細胞の固有の認識能力を全て排除することを提案している。しかしながら、これはＴ細胞作製方法を更に複雑にし、このことは既に養子細胞療法の主要な問題の１つとなっている。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１３】
メインストリームの社会におけるより広範な用途を可能にするために、既存の問題を克服する養子細胞療法に対する全く新しい手法が必要とされている。我々は、ドナーＴ細胞の抗原特異性を損なわずに、しかし、ドナーＴ細胞の天然型抗原特異性をその治療目的と無関係にする治療のための特質でドナーＴ細胞を改変する新たなパラダイムを開示する。本質的に、このパラダイムシフトは、ドナーとレシピエントとの間でＨＬＡ適合があるか否かに関係なく、これまでには想定されていなかった方法でＴ細胞の治療用途への扉を開けるものである。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１９】
本発明の実施形態において、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）にレシピエントを曝さないが、レシピエントの利益になる治療目的を有する治療のための特質を備えた同種Ｔビヒクルが作成される。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２０】
本発明の一実施形態において、抗原でドナーＰＢＭＣ又はドナー臍帯血を刺激して、１又は複数の抗原に対する天然型抗原特異性を有するＴ細胞の成長を活性化することを含むプロセスによって作成されるＴビヒクルを得ることによって治療を行う。そうすることにより、それらの成長を刺激するために使用された１又は複数の抗原に対する抗原特異性を有する天然型抗原受容体を含んだ抗原特異的Ｔ細胞群を作製する。抗原特異的Ｔ細胞群は、天然型抗原受容体を包含せずに、天然型抗原受容体の抗原特異性とは無関係な治療目的を有する少なくとも１つの治療のための特質を包含することにより、Ｔビヒクルの個体群を作成するように改変する。次いで、レシピエントの細胞がＴビヒクルの１又は複数の天然型抗原受容体により認識された抗原を提示するか否かに関係なく、及び／又はレシピエントの細胞がＴビヒクルの１又は複数の天然型抗原受容体により認識された抗原を提示しない場合に、Ｔビヒクルから治療上の利点を引き出すことができるレシピエントにＴビヒクルをもたらす。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２１】
本発明の別の実施形態において、抗原でドナーＰＢＭＣ又はドナー臍帯血を刺激して、１又は複数の抗原に対する天然型抗原特異性を有するＴ細胞の成長を活性化することを含むプロセスによって作成されるＴビヒクルを得ることによって治療を行う。そうすることにより、それらの成長を刺激するために使用された１又は複数の抗原に対する抗原特異性を有する天然型抗原受容体を含んだ抗原特異的Ｔ細胞群を作製する。抗原特異的Ｔ細胞群は、天然型抗原受容体を包含せずに、天然型抗原受容体の抗原特異性とは無関係な治療目的を有する少なくとも１つの治療のための特質を包含することにより、Ｔビヒクルの個体群を作成するように改変する。次いでＴビヒクルから治療上の利点を引き出すことができ、Ｔビヒクルに対するＨＬＡ適合を持たないレシピエントにＴビヒクルをもたらす。
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２２】
本発明の多様な実施形態において、Ｔビヒクルは、免疫療法のアジュバントとして投与される組換えタンパク質が負荷されるように改変され、がんの標的療法用化学療法剤の治療上の特質で改変され、抗菌剤の治療上の特質で改変され、腫瘍特異性を細胞に与えるトランスジェニック分子を発現するという治療上の特質で改変され、自己免疫疾患を治療するための組換えタンパク質が負荷される又は当該組換えタンパク質で遺伝子操作されるという治療上の特質で改変され、生体内画像化のために負荷される及び／又は遺伝子操作されるという治療上の特質で改変される。
【手続補正１２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２５】
本発明の多様な実施形態において、正常なヒト細胞上に存在せず、かつ、正常な哺乳動物細胞上にも存在しない抗原の単一エピトープのみを認識させることを可能にする天然型抗原特異性を有するドナーＴ細胞が作製される。
【手続補正１３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２７】
【図１Ａ】実施例１における抗原特異的Ｔ細胞群が、最初の７日間にわたり、初期刺激の後に少なくとも７回の細胞分裂を受けることを示す。
【図１Ｂ】実施例１についての四量体分析によって測定された、時間の経過につれて細胞集団中のＴ細胞群が増殖する速度を実証するデータを示す。
【図１Ｃ】実施例１において、２３日の期間にわたり抗原特異的Ｔ細胞群の増殖速度が減少することを示す。
【図２】実施例１において、抗原特異的Ｔ細胞の予測される増殖と観察された増殖倍率との間の相違を例示する表である。
【図３Ａ】実施例２の刺激後の抗原特異的Ｔ細胞の存在を示す。
【図３Ｂ】実施例２において、抗原特異的Ｔ細胞：抗原提示細胞の比を４：１に維持しながら、表面密度が１×ｌ０6／ｃｍ2から３．１×１０4／ｃｍ2まで減少するときの抗原特異的Ｔ細胞群の増殖を示す。
【図３Ｃ】実施例２において、一定数の抗原提示細胞の存在下で、表面密度が１×１０6／ｃｍ2から３．１×１０4／ｃｍ2まで減少するときの抗原特異的Ｔ細胞群の増殖を示す。
【図４】図３に記載される研究を継続する際に得られた結果の例を示し、目的の細胞が他の細胞のサポートを必要とする際に、目的細胞がフィーダー細胞及び／又は抗原提示細胞の適切な供給の存在下にある限り、従来とは異なって低い目的細胞の表面密度で個体数の増殖を開始できることをさらに実証する。
【図５】３種の異なる細胞表面密度（ＣＴＬ数／ｃｍ2）で培養を開始することによって、目的の細胞の個体数増殖を繰り返す速さの能力を実証するヒストグラムを示す。
【図６】データを得るために使用した気体透過性試験器具の横断面図を示す。
【図７Ａ】本発明に従って作製された抗原特異的Ｔ細胞の成長曲線を、実施例５で行ったような従来の方法と比較して示す。
【図７Ｂ】実施例５において、フローサイトメトリーの前方散乱対側方散乱分析によって測定したとき、細胞生存率は、本発明に従って作製された抗原特異的Ｔ細胞における方が従来の方法と比較して有意に高かったことを示す。
【図７Ｃ】実施例５において、アネキシン−ＰＩ７ＡＡＤによって測定したとき、細胞生存率が、本発明に従って作製された抗原特異的Ｔ細胞における方が従来の方法と比較して有意に高かったことを示す。
【図７Ｄ】実施例５において、本発明の新規の方法において作製された細胞の優位な増殖が、毎日のＣＦＳＥ標識細胞のフローサイトメトリー分析によって測定されたとき、従来の方法を使用して培養された細胞と同じ細胞特異的増殖速度を示しており、これにより、細胞増殖速度の増加が細胞死の減少に起因したことを確認したことを示す。
【図８Ａ】培地を交換する必要のない従来の方法において可能であった範囲を超えて、ＥＶＢ−ＣＴＬがどのように増殖することができたかを示す。
【図８Ｂ】ＥＢＥＲをＱ−ＰＣＲによって評価したとき、実施例６の培養条件が最終細胞産物をどのように改変しなかったかを示す。
【図８Ｃ】Ｂ細胞マーカーであるＣＤ２０をＱ−ＰＣＲによって評価したとき、実施例６の培養条件が最終細胞産物をどのように改変しなかったかを示す。
【図９】目的の細胞及び抗原提示細胞の表面密度の累積が非常に低い（ここでは、ＡＬ−ＣＴＬ細胞及びＬＣＬ細胞を組み合わせて、細胞表面密度３００００個／ｃｍ2の細胞集団を作成している）ことによって、ＡＬ−ＣＴＬ群が成長を開始することができなかったことを実験により実証した例示的実施例を示す。
【図１０Ａ】細胞を培養する新規の２つの方法が、２３日の期間にわたって、従来の方法より多くの細胞をどのように作製するかを示す実施例８のデータを提示する。
【図１０Ｂ】実施例８における試験器具の中で培養された細胞の写真を示す。
【図１０Ｃ】実施例８において、２つの新規の培養方法及び従来の方法が全て同じ表現型を有する細胞を作製することを示す。
【図１０Ｄ】実施例８で、ＬＭＰ１、ＬＭＰ２、ＢＺＬＦ１由来のＥＢＶペプチドエピトープ及びＥＢＶのＥＢＮＡ１で刺激され、ＨＬＡ−Ａ２−ＬＭＰ２ペプチド五量体染色法で染色されたＴ細胞がペプチド特異的Ｔ細胞と同様の発生頻度を示した代表的な培養を示す。
【図１０Ｅ】51Ｃｒ放出アッセイによって評価したとき、細胞が細胞溶解活性及び細胞特異性を維持し、自己ＥＢＶ−ＬＣＬを死滅させたが、ＨＬＡ不適合ＥＢＶ−ＬＣＬの死滅は低かったことを実施例８の新規の方法及び従来の方法に関して示す。
【図１１】本発明の一態様を使用した目的の細胞型の個体群の増殖と、従来のシナリオに基づく生育面上の目的細胞群の増殖とを比較したグラフ表示を示す。
【図１２】気体透過性材料を含む生育面、及び、１又は２ｍｌ／ｃｍ2を超える、従来と異なって高い培地容量：生育面面積比を利用することにより得ることができる利点の一例を示す。
【図１３】完了時の細胞表面密度が従来の表面密度より極めて大きい、本発明の一実施形態下における目的細胞型群の増殖と従来のシナリオに基づく生育面上の目的細胞群の増殖の新規の方法を比較したグラフ表示を示す。
【図１４】従来の方法を超える別のさらなる利点を提供する細胞作製の別の新規な方法を示す。
【図１５】新規方法の力を実証するべく図１４に示した各作製方法の比較を示し、十分に効率を獲得するために、多様な段階で作製プロトコールを調節することが有用である理由を示す。
【図１６】作製が進むにつれて効率を獲得するために、新規な方法では作製プロトコールをどのように調節することができるのかの一例を示す。
【図１７】Ｔビヒクルが不適合同種ドナー由来の細胞を認識できないことを実証する試験結果を示す。
【図１８】フロー分析によって測定されるとき、ＣＤ３４Δ−ＩＬ７サイトカイン発現の治療のための特質を有するＴビヒクルを作成するようにドナーＴ細胞を改変可能であることを示す試験結果を示す。
【図１９Ａ】ＩＬ７サイトカインの全身送達により、マウス腎臓では腫瘍部位より多くのサイトカインが検出されたことを示す試験結果を示す。
【図１９Ｂ】ＩＬ７サイトカインのＴビヒクル送達により、他の臓器と比べてマウスの腫瘍部位でのサイトカイン濃度が高いことを示す試験結果を示し、かつ、Ｔビヒクル投与後から少なくとも２週間、どのようにサイトカイン産生が腫瘍で持続されたかを示す。
【図２０】フロー分析により測定されるとき、ＣＡＲ−ＰＳＣＡの治療のための特質を有するＴビヒクルを作成するようにドナーＴ細胞を改変可能であることを示す試験結果を示す。
【図２１】ＣＡＲ−ＰＳＣＡの治療のための特質を有するＴビヒクルが、腫瘍細胞を全滅させることができることを示す試験結果を示す。
【図２２Ａ】ＩＬ４を結合することができる受容体を含むＴビヒクルが、ＩＬ４サイトカインを発現する腫瘍細胞に近接していることを示す。
【図２２Ｂ】どのように、ＴビヒクルにＩＬ４サイトカインが結合され、腫瘍細胞を保護するＩＬ４サイトカインの量が大きく低減され得るかを示す。
【図２３】細胞外組換えサイトカイン受容体ＩＬ４Ｒ／７を発現するという治療のための特質を有するＴビヒクルが、ＩＬ４サイトカインを枯渇させることができることを実証する試験結果を示す。
【図２４Ａ】化学療法剤が負荷されたＴビヒクルが、どのように炎症部位へ向かって移動するのかを示す。
【図２４Ｂ】レシピエントの免疫系が、どのように腫瘍細胞の部位に配置されたＴビヒクルを標的とするかを示す。
【図２４Ｃ】レシピエントの免疫系による攻撃下で、Ｔビヒクルが、どのように腫瘍細胞の部位で負荷物（この場合には、化学療法剤）を放出するのかを示す。
【手続補正１４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８１】
これら新規方法を用いると、以下の培養を開始する特質を組み合わせることによって更なる利点を達成することができる。すなわち、従来とは異なる低表面積を使用すること、目的細胞及び／又はフィーダー細胞の新規表面密度比を使用すること、気体透過性材料からなる生育面面積を利用すること、従来とは異なる高い培地容量：生育面面積比を利用すること、及びサイクルで作製を行うことである。当該条件は、作製時間の短縮、表面積の利用、供給頻度などのバランスを取るなど、目的の結果を達成するべく任意の作製サイクルで変更可能である。
【手続補正１５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８７】
本発明の開示は、Ｔビヒクルと呼ばれる新しい種類の治療目的の細胞を作成することによって養子細胞療法の分野を進歩させる。Ｔビヒクルは、ＧＶＨＤの固有のリスクを持たないＴ細胞群を含み、更に治療目的で作用能力がある１以上の治療のための特質を包含するように更に改変され、治療上の利点をレシピエントにもたらす。ＴビヒクルはＧＶＨＤ疾患を引き起こす生来の能力を持たないため、広範な病状及び疾患と闘うことができる任意数の対抗手段を備える理想的な生物学的輸送体となる。本発明は、最先端の方法に存在するＧＶＨＤの固有のリスクを有することなく養子細胞療法の健康上の利点をレシピエントにもたらすために、治療のための特質を備えたＴビヒクルを作製かつ使用する方法を開示する。重要なのは、Ｔビヒクルの治療目的は天然型のＴ細胞受容体の抗原特異性とは全く無関係であるため、Ｔビヒクルは最先端の養子細胞療法とは逆に機能することである。当業者は、本開示や提示された例示的実施形態の全体を通して、Ｔビヒクルの治療のための特質にはＴビヒクルの天然型抗原受容体が含まれないことを認識すべきである。
【手続補正１６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８８】
Ｔビヒクルは、ドナーＰＢＭＣ又はドナー臍帯血を抗原で刺激して、抗原に対する天然型抗原特異性を有するドナーＴ細胞の成長を活性化させ、それにより抗原に対する抗原特異性を有する抗原受容体を含む抗原特異的Ｔ細胞群を作製することによって産生される。正常細胞上には存在しない抗原を選択することによって、正常細胞を認識できない抗原受容体を有するＴ細胞群を作成することができる。天然型のＴ細胞抗原特異性から得られるであろう治療上の利点を無視し、自然の抗原受容体認識能力を包含しない、１以上の治療のための特質を有する天然型のＴ細胞を改変することによって、それらの抗原特異的認識とは無関係の目的を有し、かつ、ＧＶＨＤを本質的に引き起こす傾向がない又は引き起こすことができないＴビヒクル群を作成することができる。
【手続補正１７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８９】
Ｔビヒクルは２以上の天然型抗原特異的Ｔ細胞群を包含し得るが、Ｔビヒクルはその治療目的のためにそれらの天然型抗原特異性に依存していないため、Ｔビヒクルはレシピエントの血清型がＴビヒクルの１以上の天然型抗原受容体に対して陽性適合を呈するか否かに関係なく、レシピエントに注入することができる。また、Ｔビヒクルが得られる１以上の天然型のＴ細胞群はＧＶＨＤの固有のリスクを持たないため、Ｔビヒクルの重要な特質としては、ＨＬＡ不適合の場において使用されるそれらの能力が挙げられる。これは、最先端の方法で必要とされるＨＬＡ適合の制限なく、社会で広く役立てられるＴビヒクルの同種バンクを確立させることができる。Ｔビヒクルがレシピエントに対してＨＬＡ不適合である天然型抗原特異性を有する場合、Ｔビヒクルの天然型Ｔ細胞受容体は、レシピエントの細胞を認識し、ＧＶＨＤを引き起こすことができない。にもかかわらず、Ｔビヒクルは、その治療目的を達成するために天然型抗原受容体に依存しない治療のための特質を有するように改変されているため、完全にＨＬＡ不適合の場においてそれらの治療活性を開始する。しかしながら、ＴビヒクルはＨＬＡ不適合の場での使用に限定されない。正常細胞では発現しない抗原に対する高度に制限された抗原特異性を伴う天然型抗原受容体を有するＴ細胞からなるＴビヒクルを作成することによって、レシピエントとＴビヒクルの天然型抗原特異性との間の部分的なＨＬＡ適合にもかかわらず、ＧＶＨＤ疾患の発症を回避することができる。ＴビヒクルをＨＬＡ適合又はＨＬＡ不適合の場で使用させるためには、Ｔビヒクルの天然型抗原特異性が、正常細胞好ましくは正常なヒト細胞には存在しない抗原をＴビヒクルに認識させることが好ましく、正常な哺乳類細胞には存在しない抗原の単一エピトープのみを認識できることが更により好ましい。
【手続補正１８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９１】
高度に制限された抗原特異性を有する天然型抗原受容体を有するＴ細胞を作製する方法：歴史的に見て、養子細胞療法での広範な使用に必要な規模でＴ細胞群を作製することは実際には不可能であった。Ｔ細胞群を好ましい規模の治療用量へと増殖させるための最先端の作製方法はあまりに実用的ではなく扱いにくいため、細胞療法が、少数の非常に専門的な機関で扱わねばならない極めて少ない人数に限られてしまう。Ｔビヒクルの基本的な特質は、それらＴ細胞の生来の特性が本質的にはレシピエントをＧＶＨＤに暴露しないということである。Ｔビヒクルの天然型抗原特異性は正常細胞、より好ましくは正常なヒト細胞には存在しない抗原をそれらに認識させるだけであるのが好ましく、正常な哺乳類細胞には存在しない抗原の単一エピトープのみを認識できるのが更により好ましいため、これら細胞の効果的な作製は、Ｔビヒクルを包含する方法の広範な使用の基礎となる。このようなＴ細胞は、ドナーＰＢＭＣ又は臍帯血中に非常に低い、時に検出不能な頻度で存在するにすぎない。よって、最先端のＴ細胞作製方法に固有の問題は、Ｔビヒクルでの使用に最も適するＴ細胞群を生成しようとすると悪化する。
【手続補正１９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９２】
我々は、２０１２年５月１８日に「養子細胞療法のための改良型細胞培養方法」という名称で出願された米国特許出願第１３／４７５７００号（以下、Ｖｅｒａ’７００と呼ぶ）（参照により本明細書に援用する）に記載されるような方法及び器具を発見した。これは、最先端の方法と相反し、本質的にレシピエントをＧＶＨＤに暴露しない生来の特性を有するＴ細胞を効率的に作製するものである。そのように行う際、ドナーＰＢＭＣ又は臍帯血中に低頻度で見られるＴ細胞の実用的な作製に必要な長い期間が満たされる。更に、Ｔ細胞の天然型抗原特異性に固有ではない治療の特質を持つＴ細胞の今までにない概念と組み合わせたとき、生物学的担体として機能するＴビヒクルの作製が可能になり、実用的になる。
【手続補正２０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９３】
１つの例示的方法において、培養開始時に、２以上の選択した抗原を、２以上の独特の抗原特異的Ｔ細胞群（各群は提示される抗原の１つに対する抗原受容体を発現する）の成長を刺激するために、ＰＢＭＣ又は臍帯血（すなわち、抗原特異的Ｔ細胞の元来の貯蔵場）に提示する。その意図は、作製のために最も豊富及び／又は望ましい自然に（増えた）Ｔ細胞群を後に選択して、その他のものを終了させることである。開始後に培養が進行するにつれ、様々な抗原に反応する様々なＴ細胞群は、それらの元の個体群の大きさに応じて、様々な個体数増殖レベルを呈する可能性がある。更に、それらの一部又は全ては検出不能であり続ける場合がある。しばらくしたら、選択した抗原のいずれかに反応するＴ細胞群の許容可能な成長に関して培養を評価する。このような評価は、１つの抗原に特異的なたった１つの個体群又は更なる抗原に特異的な更なる個体群に関するものである可能性がある。１つの抗原特異的Ｔ細胞群が許容可能な増殖を実証しているとき、それが認識する抗原を器具内に加えるだけで当該特定のＴ細胞群を再刺激して残りのＴ細胞を最終的に死滅させ、一方で、特定の目的のＴ細胞群は増殖し続ける。しかしながら、２以上のＴ細胞群が許容可能な増殖を実証しているときには２つの選択肢がある：１）培養物を、特定のＴ細胞群が反応している抗原のみで再刺激することができる（それによって、豊富ではないＴ細胞群の増殖を終了させる）、又は２）培養物を２つ以上の培養器具に分ける。各器具は他の全ての器具の抗原とは異なる単一の抗原を受容してたった１つのＴ細胞群を各器具内で増殖させ、最も豊富な培養物以外は全て最終的に終結される。好ましくは、全ての培養器具は気体透過性であり、同時係属米国特許公開公報２００５／０１０６７１７Ａ１（Ｗｉｌｓｏｎら）（以下、Ｗｉｌｓｏｎ‘７１７と呼ぶ）及び２００８／０２２７１７６Ａ１（Ｗｉｌｓｏｎら）（以下、Ｗｉｌｓｏｎ‘１７６と呼ぶ）（これらはいずれも参照により本明細書に援用する）に記載され、Ｖｅｒａ‘７００の方法に依拠する種類である。
【手続補正２１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９５】
Ｔビヒクルの好ましい天然型抗原特異性の選択についてここで説明する：Ｔビヒクルの天然型抗原特異性のみが正常細胞、より好ましくは正常なヒト細胞には存在しない抗原をそれらに認識させるのが好ましく、正常な哺乳類細胞には存在しない抗原の単一エピトープのみを認識できるのが更により好ましいが、これは非限定的であり、当業者が考慮すべき天然型抗原受容体の多くのふさわしい特性がある。多くの選択肢及び特性が好ましい。例として、Ｔビヒクルの天然型抗原特異性は、天然型抗原特異性を有する２以上のＴ細胞群からなるものであり得る。Ｔビヒクルの天然型抗原特異性は、自己又は非自己抗原；爬虫類、両生類、魚類又は鳥類；海綿動物、腔腸動物、蠕虫、節足動物、軟体動物又は棘皮動物などの無脊椎動物；細菌類、真菌類、寄生虫及び海綿動物；アデノウイルス、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、サイトメガロ・ウイルス（ＣＭＶ）、アデノウイルス（Ａｄｖ）、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、ヒトヘルペスウイルス６（ＨＨＶ６）、ヒトヘルペスウイルス７（ＨＨＶ７）、ＢＫウイルス、ＪＣウイルス、インフルエンザ、Ｈ１Ｎ１、パラインフルエンザ、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、パルボウイルスＢ１９、コロナウイルス、メタニューモウイルス、ボカウイルス又はＫ１ウイルス／ＷＵウイルスなどを含むがこれらに限定されないウイルス；又はサバイビン、ｇｐ１００、チロシナーゼ、ＳＳＸ２、ＳＳＸ４、ＣＥＡ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ４、クローディン−６、サイクリン−Ｂ１、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ−ＥｒｂＢ２、ヒストンＨ１．２、ヒストンＨ４、マンマグロビン−Ａ、メラン−Ａ／ＭＡＲＴ−１、Ｍｙｃ、ｐ５３、ｒａｓ、ＰＳＡ、ＰＳＭＡ、ＰＳＣＡ、Ｓｏｘ２、ストロメリシン−３、Ｔｒｐ２、ＷＴ１、プロテイナーゼ３、Ｍｕｃ１、αフェトプロテイン、ＣＡ−１２５、ｂｃｒ−ａｂｌ、ｈＴＥＲＴ又は前立腺酸性フォスファターゼ−３の全抗原又は単一エピトープに対するものである可能性がある。
【手続補正２２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９６】
ドナー細胞の適切な天然型のＴ細胞群の成長を促進するために、当業者は、米国特許公開公報第２０１１／０１８２８７０Ａ１号（以下、Ｌｅｅｎ‘８７０と呼ぶ）（参照により本明細書に援用する）を精査し、樹状細胞、単球、マクロファージ、Ｂ細胞、Ｔ細胞、ＰＢＭＣ又は人工抗原提示細胞、例えば改変ｋ５６２（これらはいずれも目的の抗原を提示してドナーの天然型のＴ細胞群の目的の抗原特異性及び故にＴビヒクルの天然型抗原特異性を生じることができる）を使用した刺激；目的の抗原を含有する細胞溶解物、目的の抗原を含有する精製タンパク質、目的の抗原を含有する組換えタンパク質、目的の抗原をコードするプラスミドＤＮＡ、目的の抗原をコードするプラスミドＲＮＡ、及び／若しくは目的の抗原を含有するペプチドライブラリー並びに／又は目的の抗原を含有する１以上の単一合成ペプチドによりドナー細胞において目的の免疫応答を誘導するための抗原の使用についても考慮すべきである。
【手続補正２３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９８】
実施例９：ＣＭＶエピトープＮＬＶを認識する天然型Ｔ細胞受容体を有するＴビヒクルは非自己細胞標的を認識することができない。
【手続補正２４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９９】
ＮＬＶ−ＣＭＶに対する天然型抗原特異性を有する抗原特異的Ｔ細胞を、先に記載した方法により１２日間でＰＢＭＣ中０．０３％から８７％の頻度に増殖させた。次いで、これらの細胞を、標的ＣＭＶ抗原のＮＬＶペプチドを提示する３体のＨＬＡ不適合ドナーから得られた細胞を有する培養物中に置いた。
【手続補正２５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０１】
目的とする１以上の治療のための特質の選択及び作成：少なくとも１つの治療のための特質を包含するように抗原特異的Ｔ細胞群を改変するための広範な選択肢がある。以下の例は、非限定的であるが、治療のための特質の選択がどのようにして治療目的によって決まるのか、何故治療のための特質及びその治療目的がＴビヒクル天然型抗原受容体の抗原特異性とは無関係であるのかを当業者に認識させることを意図している。
【手続補正２６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０４】
当業者は、Ｔビヒクルを使用して、伝統的な非特異的全身投与の代わりにこのようなサイトカインの送達を目的とし得ることを認識すべきである。例えば、サイトカインＩＬ７を産生し、切断型ＣＤ３４Δを発現することができるＴビヒクルを作成すべく実験に着手した。この切断型ＣＤ３４Δは、形質導入細胞の割合を検出し、トランスジェニック個体群を選択するのに使用することができる。この場合、図１８に示すように、フロー分析によって測定されるとき、ＣＭＶウイルスのＮＬＶエピトープに対して９８％の天然型抗原特異性を有するドナーＴ細胞を、ＣＤ３４Δ−ＩＬ７サイトカイン発現の治療のための特質を有するＴビヒクルを作成するように首尾よく改変した。更に、試験により、レトロウイルスベクター（ＣＤ３４Δ−ＩＬ７サイトカイン）で修飾したＴビヒクルのみが、ＥＬＩＳＡで検出されるように、ＩＬ７を産生できることが実証された。
【手続補正２７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０７】
図１９Ｂは、グループ２について、様々な位置でのＩＬ７サイトカイン蓄積を示している。ＩＬ７サイトカインのＥＬＩＳＡ分析により、他の臓器と比較して腫瘍部位におけるサイトカイン濃度がより高く、Ｔビヒクル投与後から少なくとも２週間、サイトカイン産生が腫瘍で持続されたことを実証している。故に、Ｔビヒクルは、腫瘍部位に移動して、長時間サイトカインＩＬ７を優先的に送達することができた。これは明らかに、サイトカインを送達することができる治療の特質を有するＴビヒクルの能力により、全身投与されるサイトカインの最先端の送達方法と比べて優れた治療上の利点が得られることを実証している。予想されるように、１週目から２週目の間のサイトカイン濃度の低下によって示されるように、Ｔビヒクルの生体内での存在は制限されている。Ｔビヒクルがレシピエント内にとどまらないため、これはＴビヒクルの更なる利点と見なすことができる。好ましくは、治療結果が満たされるまで、更なる用量のＴビヒクルが必要に応じて投与され、更なる用量を投与しない場合、Ｔビヒクルはレシピエントから除去される。
【手続補正２８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０８】
実施例１１：治療のための特質が特定抗原を標的とするキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であるＴビヒクルを作成するようにドナーＴ細胞を修飾することができる。
【手続補正２９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０９】
ウイルスＣＭＶのエピトープＮＬＶに対する天然型抗原特異性を有するＴ細胞の９８％を有するドナーＴ細胞（五量体分析によって評価される）を、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）を認識することができるＣＡＲを発現するという治療のための特質を有するＴビヒクルを作成するように形質導入することができる。Ｔビヒクルの治療目的は、前立腺腫瘍細胞の破壊である。図２０に示すように、四分割部分Ｅ２では、ドナーＴ細胞の５７．２３％が、フロー分析により測定されるとき、ＣＡＲ−ＰＳＣＡの治療のための特質を有するＴビヒクルを作成するように首尾よく改変された。ＣＡＲ−ＰＳＣＡの治療のための特質を含むＴビヒクルの死滅有効性を試験するために、未改変ドナーＴ細胞及びドナーＴ細胞をＣＡＲ−ＰＳＣＡで修飾することによって作成されたＴビヒクルを、抗原ＰＳＣＡ陽性（ＧＦＰ＋）又はＰＳＣＡ陰性（ｍＯｒａｎｇｅ＋）である標的細胞と共に１：１の比で培養した。７２時間の培養後、残留ＰＳＣＡ陽性腫瘍細胞数をフロー分析で測定した。図２１は、７２時間での実験結果を示しており、四分割部分Ａ１は、ＰＳＣＡ陰性細胞数を表し、四分割部分Ａ３は、Ｔビヒクル数を表し、四分割部分Ａ４は、ＰＳＣＡ陽性腫瘍細胞数を表す。予想するように、７２時間後、未改変ドナーＴ細胞は元の培養集団を改変しなかった。しかしながら、それとは逆に、ＣＡＲ−ＰＳＣＡを発現するＴビヒクルは、ＰＳＣＡ陽性腫瘍細胞群全体をほぼ全滅させることができ、同時に、ＰＳＣＡ陰性細胞を無傷のままにしておくことによってＰＳＣＡ抗原に対する優れた選択を実証した。これは明らかに、その天然型抗原特異性とは無関係に治療上の利点を生じるＴビヒクルの能力を実証している。
【手続補正３０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１０】
実施例１２：治療のための特質がレシピエントにおいて望ましくないサイトカインを枯渇させることができる受容体であるＴビヒクルを作成するように、ドナーＴ細胞を改変することができる。
【手続補正３１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１１】
腫瘍細胞は、内因性Ｔ細胞の抗腫瘍効果を抑制する免疫抑制サイトカインを産生することによって免疫系から保護される。ドナーＴ細胞は、望ましくない特定サイトカインを腫瘍から吸引するという治療目的を付与するために特定のサイトカイン受容体が必要とされるものなら何でも発現するという治療のための特質を有するＴビヒクルを作成するように改変され、それにより、免疫療法の戦略に対して腫瘍環境をより寛容なものにするという治療上の利点を有することができる。図２２Ａ及び図２２Ｂは、このようなプロセスを描写する図である。図２２Ａの描写では、ＩＬ４を結合することができる受容体の治療のための特質を含むＴビヒクルが、ＩＬ４サイトカインを発現する腫瘍細胞に近接している。図２２Ｂの描写では、ＴビヒクルにはＩＬ４サイトカインが結合され、腫瘍細胞を保護するＩＬ４サイトカインの量は、大きく低減されている。留意すべきは、Ｔビヒクルの治療のための特質、治療目的及び治療上の利点がいかにＴビヒクルの天然型抗原受容体を包含せず、かつ、それとは無関係であるかということである。細胞外組換えサイトカイン受容体ＩＬ４Ｒ／７を発現するという治療のための特質を有するＴビヒクルの能力を評価し、ＩＬ４サイトカインを枯渇させるために実験を行った。ＣＭＶウイルスのＮＬＶエピトープに対する天然の特異性を有するドナーＴ細胞を改変することによって、Ｔビヒクルを調整した。５Ｅ＋０５Ｔビヒクルを、２４ウェルプレート内で、２０００ｐｇ／ｍｌのＩＬ４の存在下、用量２ｍｌの培地中で培養し、ドナーＴ細胞と比較した。次いで、サイトカインＩＬ４の濃度を、２４、４８及び７２時間目にＥＬＩＳＡにより評価した。結果を図２３に示す。７２時間での免疫抑制腫瘍成長因子ＩＬ４サイトカインの低下が著しかったため、Ｔビヒクルは明らかにそれらの治療目的を達成することができた。逆に、ドナーＴ細胞（すなわち、「未修飾Ｔビヒクル」と名付けられたヒストグラム）は、ＩＬ４の存在を低減する能力を全く示さなかった。
【手続補正３２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１２】
当業者は、Ｔビヒクルが多くの治療のための特質を備えることにより、レシピエントに治療上の利点を付与することを意図した治療目的を達成することができるようになることを認識すべきである。ここで、開示された可能性を幾つかの更なる例により増補する。
【手続補正３３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１３】
がんの標的治療のための化学療法剤の治療上の特質を用いて改変されたＴビヒクル：様々な化学療法剤又は抗腫瘍薬を使用して、乳がん、前立腺がん、膵臓がん、肝臓がん、肺がん、脳腫瘍、白血病、リンパ腫、黒色腫及び骨髄腫などの様々な種類のがんを治療する。ほとんどの化学療法は静脈内に送達されるが、多くの薬剤は経口投与され、その後体中を循環する。急速に分裂する（ほとんどのがん細胞の主要な特性の１つである）細胞を死滅させることによって化学療法剤は作用する。これは、化学療法が正常な状況下で急速に分裂する細胞（例えば、骨髄、消化管及び毛嚢における細胞）も傷付けてしまうことを意味する。この結果、化学療法の最も一般的な副作用は骨髄抑制（血液細胞産生の低下、故に免疫抑制）、粘膜炎（消化管粘膜の炎症）及び脱毛症（毛髪の損失）である。化学療法に誘発される吐き気及び嘔吐も、よく見られる治療の副作用である。これらの薬剤を乗せたＴビヒクルの投与は、これらの毒性を相殺する可能性を有する。これは、Ｔビヒクルに化学療法剤を含有させて、それらをレシピエントに注入することによって起こり得る。これにより、Ｔビヒクルは炎症（がん）部位に移動して走化性勾配を下げる。このように、化学療法剤は、レシピエントに全身投与される場合とは対照的に、腫瘍細胞に近接して配置される。ＨＬＡ不適合の場合、レシピエントの免疫系は、Ｔビヒクルに対する攻撃を開始し、結果としてそのＴビヒクルは破壊されるが、腫瘍細胞部位で化学療法剤が放出される。よって、負荷物（すなわち、化学療法剤）は、全身投与とは異なり、標的部位に直接堆積され、それにより、化学療法に関連する意図していない部位での毒性を低減させる。
【手続補正３４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１４】
このプロセスは、図２４Ａ、図２４Ｂ及び図２４Ｃに示す通りである。図２４Ａに示すように、化学療法剤が負荷されたＴビヒクルは、炎症部位（すなわち、腫瘍細胞）へ向かって移動し、Ｔビヒクルとレシピエント細胞とのＨＬＡ不適合に起因して、Ｔビヒクルの天然型抗原受容体は、レシピエント細胞を認識せず、ＧＶＨＤを引き起こすことなく腫瘍細胞へ到達する。図２４Ｂに示すように、レシピエントの免疫系は、腫瘍細胞の部位に配置されたＴビヒクルを標的とする。図２４Ｃに示すように、レシピエントの免疫系による攻撃下で、Ｔビヒクルは腫瘍細胞部位で化学療法剤を放出し、それにより、最先端の化学療法送達方法に固有の意図していない部位での毒性を回避する。
【手続補正３５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１７】
腫瘍特異性を有する細胞を与えるトランスジェニック分子を発現するという治療のための特質で改変されたＴビヒクル：同様に、サイトカインなどの組換えタンパク質でＴビヒクルを修飾することができ、Ｔビヒクルはまた、ウイルス（例えば、アデノウイルス、レトロウイルス、レンチウイルスなど）又は非ウイルストランスフェクション手法を用いて遺伝子改変し、キメラＴ細胞受容体（ＣＡＲ）をトランスジェニック的に発現することもできる。
【手続補正３６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１８】
自己免疫疾患治療のための組換えタンパク質を乗せる又は組み替えタンパク質を人工的に作るという治療の特質を備えるよう改変されたＴビヒクル：自己免疫疾患は、身体内に通常存在する物質及び組織に対する身体の不適切な免疫応答から生じる。換言すると、免疫系は、身体の一部を病原体と間違って、それ自身の細胞を攻撃する。これは一部の臓器に限定され得る。炎症を抑制するＩＬ１０、ＴＧＦＢ、ＩＬ１３サイトカインなどの組換えタンパク質が負荷されたＴビヒクルの投与は、これらの組換えタンパク質を無差別に分配するのではなく、必要とされる場合に組換えタンパク質を炎症部位に直接送達することによって、このような自己免疫作用を克服し得る。
【手続補正３７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１９】
Ｔビヒクルは自殺遺伝子を発現するように遺伝子改変可能である：注入した細胞を迅速かつ完全に排除するために、Ｔビヒクルを安全スイッチ又は自殺遺伝子と共に組み込むことができ、これらの安全スイッチ又は自殺遺伝子は、万一毒性が生じた場合に作動し得る。自殺遺伝子の最も有効なものは、単純ヘルペスＩ型（ＨＳＶ−ｔｋ）からのチミジンキナーゼである。この酵素は、非毒性プロドラッグであるガンシクロビルをリン酸化し、次いでこのガンシクロビルは、内因性キナーゼによりリン酸化されてＧＣＶ−三リン酸塩となって、ＤＮＡに組み込まれると連鎖停止及び単鎖切断を引き起こし、それにより分裂中の細胞を死滅させる。幾つかの段階Ｉ−ＩＩの研究は、ガンシクロビルの投与が移植ＨＳＶ−ｔｋ−修飾細胞を生体内で安全に排除し得ることを示している。より最近になって、誘導性Ｆａｓ、Ｆａｓ関連死ドメイン含有タンパク質（ＦＡＤＤ）及びカスパーゼ９が、代替の非免疫原性自殺遺伝子として考えられている。これら分子の各々は、健常人において安全性が証明された合成剤である二量化化学誘導物質（ＣＩＤ）ＡＰ１９０３を結合するＦＫ結合タンパク質（ＦＫＢＰ）変異体と融合されると、自殺スイッチとして作用し得る。この小分子を投与すると、プロアポトーシス標的分子の架橋及び活性化が起こる。誘導性Ｆａｓ又はＦＡＤＤを形質導入されたＴ細胞の最大９０％が、ＣＩＤへの曝露後にアポトーシスを受ける。有望ではあるが、形質導入細胞の９０％を排除することは、遺伝子改変した細胞の安全性を生体内で確保するには不十分な場合がある。通常はＢ細胞上で発現されるＣＤ２０分子のトランスジェニック発現も、Ｔ細胞療法のための自殺遺伝子と仮定される。この戦略は、ＣＤ２０抗原を発現する腫瘍性Ｂ細胞及び正常なＢ細胞の両方を排除するのに広く使用されるヒト化抗ＣＤ２０抗体（リツキシマブ）の臨床利用可能性に依存している。よって、ヒトＣＤ２０をトランスジェニック的に発現するＴ細胞を注入し、次いでリツキシマブを生体内で投与することによって、注入されたＴ細胞群は効果的に排除されるが、正常なＢ細胞もやはり排除されてしまう。よって、Ｔビヒクルは、これら異なる自殺遺伝子の１つ又はそれらの組み合わせを発現して負荷物の排除及び送達を制御するように修飾可能である。
【手続補正３８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１２０】
生体内画像化に対して遺伝子改変された及び／又は負荷された治療のための特質で改変されたＴビヒクル：ポジトロン放出断層撮影法（ＰＥＴ）は、身体内の機能的プロセスの三次元画像又は写真を生み出す核医学画像法である。このシステムは、身体内の生物学的活性分子上に導入されるポジトロン放出放射性核種（トレーサー）によって間接的に放出されるγ線対を検出する。次いで、身体内のトレーサー濃度の三次元画像がコンピューター分析によって構築される。腫瘍部位まで移動するＴビヒクルの能力に起因して、Ｔビヒクルは、腫瘍部位の位置を生体内で検出し、決定することを可能にする放射性同位体を負荷し得る。
【手続補正３９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１２２】
当業者は、Ｔビヒクルの任意の所与の治療目的に関する治療のための特質が、以下の技術を含むがこれらに限定されない多くの技術によって作成可能であることを認識すべきである：
ａ）レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ関連ウイルス又はレンチウイルスなどのウイルスベクターでの遺伝子改変、及び／又は
ｂ）トランスポゾン及びトランスポーゼース（例えば、Ｓｌｅｅｐｉｎｇ  Ｂｅａｕｔｙ）を使用するエレクトロポレーション及び／又はリポフェクション法、及び／又はピギーバック（Ｐｉｇｇｙｂａｃ）技術などの物理的及び／又は化学的技術により組み込まれるＤＮＡ及び／又はＲＮＡベクターの使用を含む、非ウイルスベクターによる遺伝子改変、及び／又は
ｃ）Ｔビヒクル移動を改変する、自殺遺伝子を組み込む、レシピエントの免疫再構築（例えば、サイトカイン産生）を改善する、及び／又は直接的な抗ウイルス又は抗腫瘍効果を導く（例えば、キメラ抗原受容体）又は自己免疫疾患治療のために免疫応答を抑制する１以上のトランスジーンを包含させるための遺伝子改変、及び／又は
ｄ）Ｔビヒクルの移動を改善するＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３−Ａ、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、ＣＸ3ＣＲ１及び／又はＸＣＲ１などの１以上のケモカイン受容体の発現によりＴビヒクルの移動を改善するための遺伝子改変、及び／又は
ｅ）ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦα、ＩＮＦγ、ＩＬ２、ＩＬ８、ＩＬ１５、ＩＬ７、ＩＬ１２、ＩＬ２１又はＩＬ２６などの１以上のサイトカインのＴビヒクル発現により、又は、共刺激分子ＣＤ８０、ＣＤ８６、４１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌの発現又は過剰発現により、レシピエントの免疫再構築を改善するための遺伝子改変、及び／又は
ｆ）チミジンキナーゼＴＫ遺伝子、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ｉカスパーゼ９などの１以上の自殺遺伝子の発現によりＴビヒクルの死を誘導するための遺伝子改変、及び／又は
ｇ）ｉ）ＩｇＧ−ＦＣ領域由来のＣＨ２ＣＨ３配列を使用する細胞外スペーサーと、又はｉｉ）ＣＤ２８、ＣＤ４、ＣＤ３又はＣＤ８の配列を含むがこれらに限定されない膜貫通成分と、ｉｉｉ）ＣＤ３(エンドドメイン（ｅｎｄｏｄｏｍａｉｎ）と連結された、又はｉｖ）ＣＤ３(エンドドメインをコードするサイトカイン受容体又はサイトカインなどの天然リガンドの発現により連結された特定の抗体から単離された単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を介して腫瘍標的を認識するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）などの１以上のトランスジーンの発現、を含むがこれらに限定されない、直接的な抗ウイルス又は抗腫瘍効果を導くための遺伝子改変、及び／又は
ｈ）例えば、ＩＬ４、ＩＬ６、ＩＬ１０、ＩＬ１３、ＴＦＧβなどの１以上の免疫抑制サイトカインを産生するトランスジーンの発現により又はＣＴＬＡ−４、ＰＤ１などの競合リガンドの発現により、自己免疫疾患治療のために免疫応答を抑制するための遺伝子改変。