【手続補正書】
【提出日】平成28年10月14日(2016.10.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
異種ＲＮＡ安定化末端配列に連結された、ポリＡテイルを欠くＲＮＡ分子
を含むハイブリッド核酸。
【請求項２】
前記ＲＮＡ分子が細胞質ＲＮＡ、核ＲＮＡ、ｍＲＮＡ、非コードＲＮＡ、真核生物ＲＮＡ、哺乳動物ＲＮＡ、植物ＲＮＡまたはヒトＲＮＡである、請求項１に記載のハイブリッド核酸。
【請求項３】
前記異種ＲＮＡ安定化末端配列が三重らせんコンフォメーションを有するか、またはＭＡＬＡＴ１末端配列、ＭＥＮβ末端配列、Ｕリッチ配列、Ａリッチ配列、ＵリッチおよびＡリッチ配列、ＣリッチおよびＧリッチ配列、または三重らせん構造を有するＲＮＡである、請求項１〜２のいずれか一項に記載のハイブリッド核酸。
【請求項４】
前記ＲＮＡ分子がレポーター分子に対応する、請求項１〜３のいずれか一項に記載のハイブリッド核酸。
【請求項５】
前記ＲＮＡ分子がナノ粒子中に製剤化される、請求項１〜４のいずれか一項に記載のハイブリッド核酸。
【請求項６】
前記ＲＮＡ分子が免疫原性タンパク質をコードする、請求項１〜５のいずれか一項に記載のハイブリッド核酸。
【請求項７】
前記ＲＮＡ分子が足場において増殖された細胞または組織中に発現される、請求項１〜６のいずれか一項に記載のハイブリッド核酸。
【請求項８】
前記ＲＮＡ分子が分化した細胞中に発現され、そして前記ＲＮＡが、再プログラミングタンパク質をコードし、その結果、前記分化した細胞中の前記ＲＮＡが再プログラミングを促進して、多能性幹細胞を形成させる、請求項１〜６のいずれか一項に記載のハイブリッド核酸。
【請求項９】
前記ＲＮＡ分子が非ヒト動物中に発現される、請求項１〜６のいずれか一項に記載のハイブリッド核酸。
【請求項１０】
ＲＮＡ分子に対応する核酸、前記ＲＮＡ分子に対応する前記核酸の上流のプロモーター、および前記ＲＮＡ分子に対応する前記核酸の下流の末端配列に対応する核酸を含み、必要に応じて、前記ベクターがプラスミドである、ベクター。
【請求項１１】
前記ＲＮＡ分子に対応する前記核酸が、レポータータンパク質をコードする核酸である、請求項１０に記載のベクター。
【請求項１２】
前記レポータータンパク質が緑色蛍光タンパク質である、請求項１１に記載のベクター。
【請求項１３】
前記ＲＮＡ分子がｍＲＮＡである、請求項１０〜１２のいずれか一項に記載のベクター。
【請求項１４】
請求項１〜９のいずれか一項に記載のハイブリッド核酸を生成する核酸配列を含む、請求項１０〜１２のいずれか一項に記載のベクター。
【請求項１５】
前記核酸が、少なくとも１つの化学的改変または天然の改変を含む、請求項１０に記載のベクター。
【請求項１６】
前記ベクターが、ナノ粒子またはマイクロ粒子中に製剤化される、請求項１０〜１５のいずれか一項に記載のベクター。
【請求項１７】
ＲＮＡの翻訳を増強するための方法であって、前記方法は：
ポリＡテイルを欠く単離された細胞質ＲＮＡを、細胞において発現させるステップを含み、ここで前記細胞質ＲＮＡは、前記細胞における前記ＲＮＡの翻訳を増強するのに有効な３’末端配列を有する、方法。
【請求項１８】
３’末端配列を有しポリＡテイルを欠く前記単離された細胞質ＲＮＡが、請求項１〜９のいずれか一項に記載のハイブリッド核酸である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
ポリＡテイルを欠く前記単離された細胞質ＲＮＡを、前記細胞において発現させるステップが、請求項１０〜１６のいずれか一項に記載のベクターによって達成される、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
ポリＡテイルを欠くＲＮＡを発現させるための方法であって、前記方法は：
３’異種末端配列を有しポリＡテイルを欠くＲＮＡを含む単離された核酸を細胞においてｉｎ  ｖｉｔｒｏで発現させるステップを含み、必要に応じて、前記単離された核酸が、請求項１〜９のいずれか一項に記載のハイブリッド核酸である、方法。
【請求項２１】
ＲＮＡを精製するための方法であって、前記方法は：
３’異種末端配列を有しポリＡテイルを欠くＲＮＡを含む単離された核酸の混合物を、アフィニティー精製ステップまたはサイズ排除精製ステップに供して、ポリＡテイルを欠く精製されたＲＮＡを得るステップを含み、必要に応じて、前記単離された核酸が、請求項１〜９のいずれか一項に記載のハイブリッド核酸である、方法。
【請求項２２】
被験体における疾患の処置において使用するための組成物であって、前記組成物は：
前記被験体においてタンパク質を発現させるのに有効な量の、３’異種末端配列を有しポリＡテイルを欠くＲＮＡを含む単離された核酸、および薬学的に許容される担体を含み、前記タンパク質は、前記被験体における疾患の処置において有用である、組成物。
【請求項２３】
前記疾患が、機能喪失に関連する疾患、例えば、筋ジストロフィーまたは嚢胞性線維症であるか、または前記疾患が、がん、心血管疾患、自己免疫、神経変性疾患および皮膚疾患からなる群より選択される疾患である、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２４】
組織生成のための方法であって、前記方法は：
３’異種末端配列を有しポリＡテイルを欠くＲＮＡを含む単離された核酸を細胞において発現させるステップ、前記細胞を増殖条件下で足場において増殖させて、組織を形成させるステップを含む、方法。
【請求項２５】
請求項２４に記載の方法に従って生成された組織。
【請求項２６】
請求項２５に記載の組織を含む組成物であって、前記組織が身体中に移植されるものであることを特徴とする、組成物。
【請求項２７】
幹細胞を生成するための方法であって、前記方法は：
３’異種末端配列を有しポリＡテイルを欠くＲＮＡを含む単離された核酸を、分化した細胞の集団において発現させるステップであって、前記ＲＮＡは、再プログラミングタンパク質をコードする、ステップ、再プログラミングを促進する条件下で前記分化した細胞を増殖させて、多能性幹細胞を形成させるステップを含む、方法。
【請求項２８】
請求項２７に記載の方法に従って生成された多能性幹細胞。
【請求項２９】
分化した細胞を生成するための方法であって、前記方法は：
３’異種末端配列を有しポリＡテイルを欠くＲＮＡを含む単離された核酸を、幹細胞の集団において発現させるステップであって、前記ＲＮＡは、分化タンパク質をコードする、ステップ、分化を促進する条件下で前記幹細胞を増殖させて、分化した細胞を形成させるステップを含む、方法。
【請求項３０】
前記疾患が、遺伝的欠陥または遺伝障害を含み、必要に応じて、前記遺伝的欠陥が、免疫系障害を引き起こす遺伝的欠陥；神経学的障害を引き起こす遺伝的欠陥；心障害を引き起こす遺伝的欠陥；循環障害を引き起こす遺伝的欠陥および呼吸障害を引き起こす遺伝的欠陥からなる群より選択される、請求項２２に記載の組成物。
【請求項３１】
遺伝障害の処置を必要とする被験体における遺伝障害の処置において使用するための組成物であって、前記組成物は：
３’異種末端配列を有しポリＡテイルを欠くＲＮＡを含む単離された核酸を含む単離された細胞の治療有効量を含み、前記ＲＮＡは置き換えタンパク質をコードし、前記置き換えタンパク質の欠如は、前記遺伝障害に関連する、組成物。
【請求項３２】
異種ＲＮＡ安定化末端配列に連結された、ポリＡテイルを欠くＲＮＡ分子を含む、ハイブリッド核酸であって、前記ＲＮＡ分子は、免疫原性タンパク質をコードする、ハイブリッド核酸。
【請求項３３】
被験体のワクチン接種において使用するための組成物であって、前記組成物は、請求項３２に記載のハイブリッド核酸を、前記免疫原性タンパク質に対する獲得免疫応答を惹起するための有効量で含む、組成物。
【請求項３４】
非ヒト動物であって、前記動物の１つまたは複数の細胞中に、異種ＲＮＡに連結された、ポリＡテイルを欠く外因性ＲＮＡ分子、および安定化させる末端配列を含み、前記ＲＮＡ分子が治療タンパク質もしくは免疫原性タンパク質をコードする、非ヒト動物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３３】
本発明は、その適用において、以下の説明において示されるまたは図面中に例示される構成要素の構築および配置の詳細に限定されない。本発明は、他の実施形態が可能であり、種々の方法で実行または実施されることが可能である。上記実施形態および態様の各々は、任意の他の実施形態または態様と関連付けられ得る。また、本明細書で使用される言葉遣いおよび専門用語は、説明を目的としており、限定として解釈すべきではない。本明細書中での「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、または「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｖｏｌｖｉｎｇ）」およびそれらのバリエーションの使用は、その後に列挙される項目およびそれらの等価物ならびにさらなる項目を包含する意味である。
特定の実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
異種ＲＮＡ安定化末端配列に連結された、ポリＡテイルを欠くＲＮＡ分子
を含むハイブリッド核酸。
（項目２）
前記異種ＲＮＡ安定化末端配列が三重らせんコンフォメーションを有する、項目１に記載のハイブリッド核酸。
（項目３）
前記ＲＮＡ分子が細胞質ＲＮＡまたは核ＲＮＡである、項目１〜２のいずれか一項に記載のハイブリッド核酸。
（項目４）
前記ＲＮＡ分子がｍＲＮＡである、項目１〜３のいずれか一項に記載のハイブリッド核酸。
（項目５）
前記ＲＮＡ分子が非コードＲＮＡである、項目１〜３のいずれか一項に記載のハイブリッド核酸。
（項目６）
前記ＲＮＡ分子が真核生物ＲＮＡである、項目１〜３のいずれか一項に記載のハイブリッド核酸。
（項目７）
前記ＲＮＡ分子が哺乳動物ＲＮＡである、項目１〜３のいずれか一項に記載のハイブリッド核酸。
（項目８）
前記ＲＮＡ分子が植物ＲＮＡである、項目１〜３のいずれか一項に記載のハイブリッド核酸。
（項目９）
前記ＲＮＡ分子がヒトＲＮＡである、項目１〜３のいずれか一項に記載のハイブリッド核酸。
（項目１０）
前記異種ＲＮＡ安定化末端配列がＭＡＬＡＴ１末端配列である、項目１〜８のいずれか一項に記載のハイブリッド核酸。
（項目１１）
前記異種ＲＮＡ安定化末端配列がＭＥＮβ末端配列である、項目１〜８のいずれか一項に記載のハイブリッド核酸。
（項目１２）
前記異種ＲＮＡ安定化末端配列がＵリッチ配列である、項目１〜８のいずれか一項に記載のハイブリッド核酸。
（項目１３）
前記異種ＲＮＡ安定化末端配列がＡリッチ配列である、項目１〜８のいずれか一項に記載のハイブリッド核酸。
（項目１４）
前記異種ＲＮＡ安定化末端配列がＵリッチおよびＡリッチ配列である、項目１〜８のいずれか一項に記載のハイブリッド核酸。
（項目１５）
前記異種ＲＮＡ安定化末端配列がＣリッチおよびＧリッチ配列である、項目１〜８のいずれか一項に記載のハイブリッド核酸。
（項目１６）
前記異種ＲＮＡ安定化末端配列が、三重らせん構造を有するＲＮＡである、項目１〜８のいずれか一項に記載のハイブリッド核酸。
（項目１７）
前記ＲＮＡ分子がレポーター分子に対応する、項目１〜１６のいずれか一項に記載のハイブリッド核酸。
（項目１８）
ＲＮＡ分子に対応する核酸、前記ＲＮＡ分子に対応する前記核酸の上流のプロモーター、および前記ＲＮＡ分子に対応する前記核酸の下流の末端配列に対応する核酸を含む、ベクター。
（項目１９）
プラスミドである、項目１８に記載のベクター。
（項目２０）
前記ＲＮＡ分子に対応する前記核酸が、レポータータンパク質をコードする核酸である、項目１８〜１９のいずれか一項に記載のベクター。
（項目２１）
前記レポータータンパク質が緑色蛍光タンパク質である、項目２０に記載のベクター。
（項目２２）
前記ＲＮＡ分子がｍＲＮＡである、項目１８〜２１のいずれか一項に記載のベクター。
（項目２３）
項目１〜１７のいずれか一項に記載のハイブリッド核酸を生成する核酸配列を含む、項目１８〜２２のいずれか一項に記載のベクター。
（項目２４）
前記プロモーターが異種プロモーターである、項目１８〜２３のいずれか一項に記載のベクター。
（項目２５）
前記プロモーターがＣＭＶプロモーターである、項目１８〜２４のいずれか一項に記載のベクター。
（項目２６）
前記ＲＮＡ分子が、真核生物ＲＮＡ、哺乳動物ＲＮＡ、植物ＲＮＡまたはヒトＲＮＡである、項目１８〜２５のいずれか一項に記載のベクター。
（項目２７）
前記末端配列がＭＡＬＡＴ１末端配列である、項目１８〜２５のいずれか一項に記載のベクター。
（項目２８）
前記末端配列がＭＥＮβ末端配列である、項目１８〜２５のいずれか一項に記載のベクター。
（項目２９）
前記末端配列がＵリッチ配列である、項目１８〜２５のいずれか一項に記載のベクター。
（項目３０）
前記末端配列がＡリッチ配列である、項目１８〜２５のいずれか一項に記載のベクター。
（項目３１）
前記末端配列がＵリッチおよびＡリッチ配列である、項目１８〜２５のいずれか一項に記載のベクター。
（項目３２）
前記末端配列がＣリッチおよびＧリッチ配列である、項目１８〜２５のいずれか一項に記載のベクター。
（項目３３）
前記末端配列が、三重らせん構造を有するＲＮＡである、項目１８〜２５のいずれか一項に記載のベクター。
（項目３４）
前記末端配列が、リガンド結合ドメインを有する、項目１８〜３３のいずれか一項に記載のベクター。
（項目３５）
前記リガンド結合ドメインが、組織特異的エレメントを有する、項目３４に記載のベクター。
（項目３６）
前記組織ががん性組織であり、前記組織特異的エレメントが、前記がん性組織における翻訳の調節に関与する、項目３５に記載のベクター。
（項目３７）
核酸が、少なくとも１つの化学的改変または天然の改変を含む、項目１〜１７のいずれか一項に記載のハイブリッド核酸または項目１８〜３６のいずれか一項に記載のベクター。
（項目３８）
ＲＮＡの翻訳を増強するための方法であって、前記方法は：
ポリＡテイルを欠く単離された細胞質ＲＮＡを、細胞において発現させるステップを含み、ここで前記細胞質ＲＮＡは、前記細胞における前記ＲＮＡの翻訳を増強するのに有効な３’末端配列を有する、方法。
（項目３９）
３’末端配列を有しポリＡテイルを欠く前記単離された細胞質ＲＮＡが、項目１〜１７のいずれか一項に記載のハイブリッド核酸である、項目３８に記載の方法。
（項目４０）
項目１８〜３６のいずれか一項に記載のベクターが、ポリＡテイルを欠く前記単離された細胞質ＲＮＡを発現させるために前記細胞に投与される、項目３８に記載の方法。
（項目４１）
ポリＡテイルを欠くＲＮＡを発現させるための方法であって、前記方法は：
３’異種末端配列を有しポリＡテイルを欠くＲＮＡを含む単離された核酸を細胞において発現させるステップを含む、方法。
（項目４２）
前記単離された核酸が、項目１〜１７のいずれか一項に記載のハイブリッド核酸である、項目４１に記載の方法。
（項目４３）
項目１８〜３６のいずれか一項に記載のベクターが、前記単離された核酸を発現させるために前記細胞に投与される、項目４１に記載の方法。
（項目４４）
ナノ粒子中に製剤化された、異種ＲＮＡ安定化末端配列に連結された、ポリＡテイルを欠くＲＮＡ分子を含む、組成物。
（項目４５）
ＲＮＡが、少なくとも１つの化学的改変または天然の改変を含む、項目４４に記載の組成物。
（項目４６）
項目１８〜３６のいずれか一項に記載の核酸ベクターを含むナノ粒子またはマイクロ粒子を含む、組成物。
（項目４７）
核酸が、少なくとも１つの化学的改変または天然の改変を含む、項目４６に記載の組成物。
（項目４８）
項目４６に記載の組成物を被験体に投与するステップを含む、ＲＮＡをｉｎ  ｖｉｖｏで細胞に送達する方法。
（項目４９）
ＲＮＡを精製するための方法であって、前記方法は：
３’異種末端配列を有しポリＡテイルを欠くＲＮＡを含む単離された核酸の混合物を、アフィニティー精製ステップまたはサイズ排除精製ステップに供して、ポリＡテイルを欠く精製されたＲＮＡを得るステップを含む、方法。
（項目５０）
前記単離された核酸が、項目１〜１７のいずれか一項に記載のハイブリッド核酸である、項目４９に記載の方法。
（項目５１）
精製されたＲＮＡが、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｅｘ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏの方法において使用される、項目４９に記載の方法。
（項目５２）
被験体において疾患を処置するための方法であって、前記方法は：
３’異種末端配列を有しポリＡテイルを欠くＲＮＡを含む単離された核酸を、前記被験体においてタンパク質を発現させるのに有効な量で前記被験体に投与するステップを含み、前記タンパク質は、前記被験体における疾患の処置において有用である、方法。
（項目５３）
前記疾患が、機能喪失に関連する疾患である、項目５２に記載の方法。
（項目５４）
前記疾患が、筋ジストロフィーまたは嚢胞性線維症である、項目５３に記載の方法。
（項目５５）
前記疾患が、がん、心血管疾患、自己免疫、神経変性疾患および皮膚疾患からなる群より選択される疾患である、項目５２に記載の方法。
（項目５６）
前記単離された核酸が、項目１〜１７のいずれか一項に記載のハイブリッド核酸である、項目５２に記載の方法。
（項目５７）
項目１８〜３６のいずれか一項に記載のベクターが、前記単離された核酸を発現させるために前記細胞に投与される、項目５２に記載の方法。
（項目５８）
組織生成のための方法であって、前記方法は：
３’異種末端配列を有しポリＡテイルを欠くＲＮＡを含む単離された核酸を細胞において発現させるステップ、前記細胞を増殖条件下で足場において増殖させて、組織を形成させるステップを含む、方法。
（項目５９）
前記組織が身体中に移植される、項目５８に記載の方法。
（項目６０）
項目５８に記載の方法に従って生成された組織。
（項目６１）
幹細胞を生成するための方法であって、前記方法は：
３’異種末端配列を有しポリＡテイルを欠くＲＮＡを含む単離された核酸を、分化した細胞の集団において発現させるステップであって、前記ＲＮＡは、再プログラミングタンパク質をコードする、ステップ、再プログラミングを促進する条件下で前記分化した細胞を増殖させて、多能性幹細胞を形成させるステップを含む、方法。
（項目６２）
項目６１に記載の方法に従って生成された多能性幹細胞。
（項目６３）
分化した細胞を生成するための方法であって、前記方法は：
３’異種末端配列を有しポリＡテイルを欠くＲＮＡを含む単離された核酸を、幹細胞の集団において発現させるステップであって、前記ＲＮＡは、分化タンパク質をコードする、ステップ、分化を促進する条件下で前記幹細胞を増殖させて、分化した細胞を形成させるステップを含む、方法。
（項目６４）
遺伝的欠陥の訂正を必要とする被験体において遺伝的欠陥を訂正する方法であって、前記方法は：
３’異種末端配列を有しポリＡテイルを欠くＲＮＡを含む単離された核酸を含む単離された細胞の治療有効量を前記被験体に投与するステップを含み、前記ＲＮＡは、前記遺伝的欠陥を訂正するためのタンパク質をコードする、方法。
（項目６５）
前記遺伝的欠陥が、免疫系障害を引き起こす遺伝的欠陥；神経学的障害を引き起こす遺伝的欠陥；心障害を引き起こす遺伝的欠陥；循環障害を引き起こす遺伝的欠陥および呼吸障害を引き起こす遺伝的欠陥からなる群より選択される、項目６４に記載の方法。
（項目６６）
遺伝障害の処置を必要とする被験体において遺伝障害を処置する方法であって、前記方法は：
３’異種末端配列を有しポリＡテイルを欠くＲＮＡを含む単離された核酸を含む単離された細胞の治療有効量を前記被験体に投与するステップを含み、前記ＲＮＡは置き換えタンパク質をコードし、前記置き換えタンパク質の欠如は、前記遺伝障害に関連する、方法。
（項目６７）
異種ＲＮＡ安定化末端配列に連結された、ポリＡテイルを欠くＲＮＡ分子を含む、ハイブリッド核酸であって、前記ＲＮＡ分子は、免疫原性タンパク質をコードする、ハイブリッド核酸。
（項目６８）
被験体をワクチン接種するための方法であって、前記方法は：
被験体に項目６７に記載のハイブリッド核酸を、前記免疫原性タンパク質に対する獲得免疫応答を惹起するための有効量で投与するステップを含む、方法。
（項目６９）
非ヒト動物であって、前記動物の１つまたは複数の細胞中に、異種ＲＮＡに連結された、ポリＡテイルを欠く外因性ＲＮＡ分子、および安定化させる末端配列を含む、非ヒト動物。
（項目７０）
前記ＲＮＡ分子が治療タンパク質をコードする、項目６９に記載の動物。
（項目７１）
前記ＲＮＡ分子が免疫原性タンパク質をコードする、項目６９に記載の動物。