【手続補正書】
【提出日】平成28年10月12日(2016.10.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号２に対して少なくとも８０％の同一性、ならびに配列番号２と比べて、Ｘ１９、Ｘ２１、Ｘ３４、Ｘ５３、Ｘ５６、Ｘ７３、Ｘ８６、Ｘ８８、Ｘ１０７、Ｘ１１３、Ｘ１４７、Ｘ１５５、Ｘ１６５、Ｘ１７１、Ｘ１７８、Ｘ２３３、Ｘ２５１、Ｘ２５９、Ｘ２６８、Ｘ２７７、Ｘ２８６、Ｘ３１２、Ｘ３１６、Ｘ３１７、Ｘ３５８、Ｘ３６６、Ｘ３８３、Ｘ３９９、Ｘ４１４、Ｘ４１５、Ｘ４１７、Ｘ４２６、Ｘ４３４およびＸ４５０から選択される残基位置に１つ以上の残基差異を有するアミノ酸配列を含む、トランスアミナーゼ活性を有する操作されたポリペプチドであって、ここで、残基位置Ｘ２１、Ｘ５６、Ｘ８６、Ｘ８８、Ｘ１０７、Ｘ１１３、Ｘ１３３、Ｘ１４７、Ｘ２３３、Ｘ２８６、Ｘ３１２、Ｘ３１６、Ｘ３８３、Ｘ４１５、Ｘ４１７およびＸ４３４における前記残基差異は、Ｘ２１Ｈ、Ｘ５６Ａ／Ｃ、Ｘ８６Ｃ、Ｘ８８Ｈ／Ｙ、Ｘ１０７Ｇ、Ｘ１１３Ｌ／Ｐ、Ｘ１４７Ｈ／Ｖ、Ｘ２３３Ｖ、Ｘ２８６Ｃ／Ｈ、Ｘ３１２Ｎ、Ｘ３１６Ｃ／Ｆ／Ｇ／Ｎ／Ｓ／Ｔ、Ｘ３８３Ｃ／Ｆ／Ｉ／Ｍ／Ｔ、Ｘ４１５Ａ／Ｇ／Ｈ／Ｌ／Ｖ、Ｘ４１７ＶおよびＸ４３４Ｔから選択され、ここで、必要に応じて、前記残基位置Ｘ１９、Ｘ３４、Ｘ５３、Ｘ７３、Ｘ１５５、Ｘ１６５、Ｘ１７１、Ｘ１７８、Ｘ２５１、Ｘ２５９、Ｘ２６８、Ｘ２７７、Ｘ３１７、Ｘ３５８、Ｘ３６６、Ｘ３９９、Ｘ４１４、Ｘ４２６およびＸ４５０における前記残基差異が、Ｘ１９Ｗ、Ｘ３４Ａ、Ｘ５３Ｍ、Ｘ７３Ｒ、Ｘ１５５Ｖ、Ｘ１６５Ｆ、Ｘ１７１Ｑ、Ｘ１７８Ｗ、Ｘ２５１Ｖ、Ｘ２５９Ｖ、Ｘ２６８Ａ、Ｘ２７７Ａ、Ｘ３１７Ｌ、Ｘ３５８Ｋ、Ｘ３６６Ｈ、Ｘ３９９Ａ、Ｘ４１４Ｉ、Ｘ４２６ＲおよびＸ４５０Ｓから選択される、操作されたポリペプチド。
【請求項２】
前記アミノ酸配列が、
ａ）配列番号２と比べて、Ｘ３４Ａ、Ｘ５６Ａ、Ｘ８８Ｈ、Ｘ１０７Ｇ、Ｘ１１３Ｌ、Ｘ１４７Ｈ、Ｘ１５３Ｃ、Ｘ１５５Ｖ、Ｘ２３３Ｖ、Ｘ３１５Ｇ、Ｘ３１６Ｎ、Ｘ３８３ＩおよびＸ４５０Ｓから選択される少なくとも１つ以上の残基差異を含む；
ｂ）配列番号２と比べて、Ｘ３１Ｍ、Ｘ５７Ｆ／Ｌ、Ｘ８６Ｎ／Ｓ、Ｘ１５３Ａ、Ｘ２３３Ｔ、Ｘ３２３Ｔ、Ｘ３８３ＶおよびＸ４１７Ｔから選択される１つ以上の残基差異と、必要に応じて、少なくとも配列番号２と比べて、Ｘ３４Ａ、Ｘ５６Ａ、Ｘ５７Ｌ、Ｘ８６Ｓ、Ｘ８８Ａ；Ｘ１５３Ｃ、Ｘ１５５Ｖ、Ｘ１６３Ｆ、Ｘ３１５ＧおよびＸ４１７Ｔを含む残基差異の組み合わせを含む；ならびに／あるいは
ｃ）配列番号２と比べて、Ｘ３１６Ｎの残基差異を含み、ここで、必要に応じて、前記アミノ酸配列は、配列番号２と比べて、Ｘ３１Ｍ、Ｘ５７Ｆ、Ｘ３２３Ｔ、Ｘ３８３Ｉ／Ｔ、Ｘ４１５ＨおよびＸ４５０Ｓから選択される残基差異をさらに含み、例えば、
前記アミノ酸配列は、配列番号２と比べて、以下：
Ｘ３１Ｍ、Ｘ５７Ｆ、Ｘ３２３ＴおよびＸ３８３Ｖ；
Ｘ３１Ｍ、Ｘ５７Ｆ、Ｘ１０７Ｇ、Ｘ１１３Ｌ、Ｘ２３３Ｔ、Ｘ４１５ＨおよびＸ４５０Ｓ；
Ｘ３１Ｍ、Ｘ５７Ｆ、Ｘ２３３Ｖ、Ｘ３２３Ｔ、Ｘ３８３Ｉ、Ｘ４１５ＨおよびＸ４５０Ｓ；ならびに
Ｘ３１Ｍ、Ｘ５７Ｆ、Ｘ１４７Ｈ、Ｘ３２３Ｔ、Ｘ３８３Ｉ、Ｘ４１５ＨおよびＸ４５０Ｓ
から選択される残基差異の組み合わせをさらに含む、
請求項１に記載の操作されたポリペプチド。
【請求項３】
前記トランスアミナーゼが、
ａ）配列番号４のポリペプチドと比べて、少なくとも１．２倍高い安定性を有し、前記アミノ酸配列が、配列番号２と比べて、Ｘ３４Ｔ、Ｘ１０７Ｇ、Ｘ１１３Ｌ、Ｘ１４７Ｈ、Ｘ１５５Ｖ、Ｘ２３３Ｔ／Ｖ、Ｘ３２３Ｔ、Ｘ３８３Ｉ／ＶおよびＸ４５０Ｓから選択される１つ以上の残基差異を含むか；
ｂ）化合物（２）を化合物（１）に変換する際に、配列番号４のポリペプチドと比べて少なくとも１．２倍高い活性を有し、前記アミノ酸配列が、配列番号２と比べて、Ｘ５６Ａ、Ｘ８６Ｓ、Ｘ８８Ｈ、Ｘ１５３Ｃ、Ｘ４１５ＨおよびＸ４１７Ｔから選択される１つ以上の残基差異を含むか；または
ｃ）化合物（２）を化合物（１）に変換する際に、配列番号４のポリペプチドと比べて高いエナンチオ選択性を有し、前記アミノ酸配列が、配列番号２と比べて、Ｘ５７Ｆ、Ｘ１５３ＣおよびＸ３１６Ｎから選択される１つ以上の残基差異を含む、
請求項１に記載の操作されたポリペプチド。
【請求項４】
ａ）前記アミノ酸配列が、配列番号２と比べて、Ｘ１８Ａ、Ｘ１９Ｗ、Ｘ２１Ｈ、Ｘ３１Ｍ、Ｘ３４Ａ、Ｘ５３Ｍ、Ｘ５６Ａ／Ｃ、Ｘ５７Ｃ／Ｆ／Ｌ、Ｘ７３Ｒ、Ｘ８６Ｃ／Ｎ／Ｓ／Ｙ、Ｘ８８Ｈ／Ｙ、Ｘ１０７Ｇ、Ｘ１１３Ｃ／Ｌ／Ｐ、Ｘ１４６Ｌ、Ｘ１４７Ｈ／Ｋ／Ｖ、Ｘ１５３Ａ／Ｃ／Ｖ、Ｘ１５５Ａ／Ｖ、Ｘ１６３Ｌ、Ｘ１６５Ｆ、Ｘ１７１Ｑ、Ｘ１７８Ｗ、Ｘ１９０Ｋ、Ｘ２０６Ｋ、Ｘ２２８Ｇ、Ｘ２３３Ｔ／Ｖ、Ｘ２３５Ｐ、Ｘ２４４Ｔ、Ｘ２５１Ｖ、Ｘ２５９Ｖ、Ｘ２６８Ａ、Ｘ２７７Ａ、Ｘ２８６Ｃ／Ｈ、Ｘ３１２Ｎ、Ｘ３１４Ｎ、Ｘ３１５Ｇ、Ｘ３１６Ａ／Ｃ／Ｆ／Ｎ／Ｓ／Ｔ、Ｘ３１７Ｌ、Ｘ３１９Ｎ、Ｘ３２３Ｔ、Ｘ３５８Ｋ、Ｘ３６６Ｈ、Ｘ３８３Ｃ／Ｆ／Ｉ／Ｌ／Ｍ／Ｔ／Ｖ、Ｘ３９５Ｐ、Ｘ３９９Ａ、Ｘ４１４Ｉ、Ｘ４１５Ａ／Ｇ／Ｈ／Ｌ／Ｖ、Ｘ４１７Ｔ／Ｖ、Ｘ４２４Ａ、Ｘ４２６Ｒ、Ｘ４２７Ｙ、Ｘ４３４ＴおよびＸ４５０Ｓから選択される残基差異をさらに含み；そして／または
ｂ）前記アミノ酸配列が、配列番号２と比べて、Ｘ９、Ｘ４５、Ｘ１７７、Ｘ２１１、Ｘ２９４、Ｘ３２４およびＸ３９１位に残基差異を含まない、
請求項１〜３のいずれか１項に記載の操作されたポリペプチド。
【請求項５】
前記アミノ酸配列が、配列番号４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、９８、１００、１０２、１０４、１０６、１０８、１１０、１１２、１１４、１１６、１１８、１２０、１２２、１２４、１２６、１２８、１３０、１３２、１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４、１４６、１４８、１５０、１５２、１５４、１５４、１５６、１５８、１６０、１６２、１６４、１６６、１６８、１７０、１７２、１７４、１７６、１７８、１８０、１８２、１８４、１８６、１８８、１９０、１９２、１９４、１９６、１９８、２００、２０２および２０４から選択される配列を含む、請求項１に記載の操作されたポリペプチド。
【請求項６】
前記ポリペプチドが、固体支持体上に固定化されており、必要に応じて、該固体支持体が、エポキシド官能基を有するポリメタクリレート、アミノエポキシド官能基を有するポリメタクリレート、オクタデシル官能基を有するスチレン／ＤＶＢコポリマーまたはポリメタクリレートを含むビーズまたは樹脂である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の操作されたポリペプチド。
【請求項７】
請求項１〜５のいずれか１項に記載の操作されたトランスアミナーゼポリペプチドをコードするポリヌクレオチドであって、必要に応じて、配列番号３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１、８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、９７、９９、１０１、１０３、１０５、１０７、１０９、１１１、１１３、１１５、１１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３、１４５、１４７、１４９、１５１、１５３、１５５、１５７、１５９、１６１、１６３、１６５、１６７、１６９、１７１、１７３、１７５、１７７、１７９、１８１、１８３、１８５、１８７、１８９、１９１、１９３、１９５、１９７、１９９、２０１および２０３から選択されるヌクレオチド配列を含む、ポリヌクレオチド。
【請求項８】
請求項７に記載のポリヌクレオチドを含み、必要に応じてさらに調節配列を含む、発現ベクター。
【請求項９】
請求項７に記載のポリヌクレオチドまたは請求項８に記載の発現ベクターを含む、宿主細胞。
【請求項１０】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の操作されたポリペプチドを調製する方法であって、請求項９に記載の宿主細胞を前記ポリペプチドの発現に好適な条件下において培養する工程を含み、必要に応じて、前記操作されたポリペプチドを単離する工程をさらに含む、方法。
【請求項１１】
式（Ｉ）：
【化４０】
2016501544.tif 000001
のアミン化合物を調製するためのプロセスであって、式中、
環Ａは、２位と３位との間および／もしくは５位と６位との間に不飽和Ｃ−Ｃ結合を必要に応じて含み、かつ／または２、３、４、５および６位においてハロ、ヒドロキシおよびメチルから選択される基で必要に応じて独立して置換される、６員の炭素環であり；
環Ｂは、５位と１０位との間に不飽和Ｃ−Ｃ結合を必要に応じて含み、かつ／または９位および１０位のうちの１つ以上においてハロ、ヒドロキシおよびメチルから選択される基で必要に応じて独立して置換される、６員の炭素環であり；
環Ｃは、１０位においてハロ、ヒドロキシ、メチル、エチルおよびカルボニルから選択される基で必要に応じて置換される、５または６員の炭素環（すなわち、ｍ＝０または１）であり；
環Ｄは、１、２もしくは３つの不飽和Ｃ−Ｃ結合を必要に応じて含み、かつ／または以下のとおり：
１４位において、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、カルボキシ、シアノ、ニトロ、チオ、直鎖または分枝鎖の（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、直鎖または分枝鎖の（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、直鎖または分枝鎖の（Ｃ１−Ｃ３）アルキルアミノ、および１２位に架橋しているシクロプロピルから選択される基で；
１５位または１６位において、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、カルボキシ、シアノ、ニトロ、チオ、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）アルキルオキシ、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミノ、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）ジアルキルアミノ、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）アルキルチオ、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）アルキルスルホニル、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）アルキルスルフィニル、カルボキシ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルオキシカルボニル、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルカルボニルオキシ、必要に応じて置換されるアミノカルボニル、アミノカルボニル（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、必要に応じて置換されるシクロアルキル、必要に応じて置換されるヘテロシクロアルキル、必要に応じて置換されるアリール、必要に応じて置換されるヘテロアリール、必要に応じて置換されるアリールオキシ、必要に応じて置換されるアリールアミノ、必要に応じて置換されるアリールチオ、必要に応じて置換されるアリールスルホニル、必要に応じて置換されるアリールスルフィニル、必要に応じて置換されるアリールオキシカルボニル、必要に応じて置換されるアリールカルボニルオキシ、必要に応じて置換されるヘテロアリールオキシ、必要に応じて置換されるヘテロアリールアミノ、必要に応じて置換されるヘテロアリールチオ、必要に応じて置換されるヘテロアリールスルホニル、必要に応じて置換されるヘテロアリールスルフィニル、必要に応じて置換されるヘテロアリールオキシカルボニル、必要に応じて置換されるヘテロアリールカルボニルオキシ、アルキルアミノスルホニル（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、アリールスルホニル（Ｃ１−Ｃ６）アルキルおよびヘテロアリールスルホニル（Ｃ１−Ｃ６）アルキルから選択される基で、
必要に応じて独立して置換される、５、６または７員の炭素環（すなわち、ｎ＝０、１または２）であるが；
ただし、式（Ｉ）の化合物は、化合物（１）：
【化４１】
2016501544.tif 000002
ではなく、
前記方法は、環Ａ、Ｂ、ＣおよびＤが、式（Ｉ）の化合物に対して上で定義されたとおりである、式（ＩＩ）：
【化４２】
2016501544.tif 000003
のケトン基質化合物を、請求項１〜６のいずれか１項に記載の操作されたトランスアミナーゼポリペプチドと、アミノドナーの存在下の好適な反応条件下において接触させる工程を含む、プロセス。
【請求項１２】
ａ）式（Ｉ）のアミン化合物が、式（Ｉａ）：
【化４３】
2016501544.tif 000004
の化合物であり、式中、
環ＡおよびＢは、以下：
（ａ）５位と６位との間に、不飽和Ｃ−Ｃ結合；
（ｂ）５位と１０位との間に、不飽和Ｃ−Ｃ結合；
（ｃ）５位に、４位のメチル基に対してシスである水素；または
（ｄ）５位に、４位のメチル基に対してトランスである水素
のうちの１つを含み；
環Ｄは、１２位と１４位との間に不飽和Ｃ−Ｃ結合を含み；
Ｒ１は、水素、ハロ、ヒドロキシ、メチル、エチルおよびカルボニルから選択され；
Ｒ２は、水素、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、カルボキシ、シアノ、ニトロ、チオ、直鎖または分枝鎖の（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、直鎖または分枝鎖の（Ｃ１−Ｃ４）アルケニルおよび直鎖または分枝鎖の（Ｃ１−Ｃ３）アルキルアミノから選択され；
Ｒ３は、水素、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、カルボキシ、シアノ、ニトロ、チオ、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）アルキルオキシ、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミノ、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）ジアルキルアミノ、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）アルキルチオ、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）アルキルスルホニル、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）アルキルスルフィニル、カルボキシ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルオキシカルボニル、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルカルボニルオキシ、必要に応じて置換されるアミノカルボニルおよびアミノカルボニル（Ｃ１−Ｃ６）アルキルから選択され；
前記方法は、環Ａ、Ｂ、ＣおよびＤならびにＲ１、Ｒ２およびＲ３が、式（Ｉａ）の化合物に対して上で定義されたとおりである、式（ＩＩａ）：
【化４４】
2016501544.tif 000005
のケトン基質化合物を、請求項１〜６のいずれか１項に記載の操作されたトランスアミナーゼポリペプチドと、アミノドナーの存在下の好適な反応条件下において接触させる工程を含むか；
ｂ）式（Ｉ）のアミン化合物が、式（Ｉｂ）：
【化４５】
2016501544.tif 000006
の化合物であり、式中、
環ＡおよびＢは、以下：
（ａ）５位と６位との間に、不飽和Ｃ−Ｃ結合；
（ｂ）５位と１０位との間に、不飽和Ｃ−Ｃ結合；
（ｃ）５位に、４位のメチル基に対してシスである水素；または
（ｄ）５位に、４位のメチル基に対してトランスである水素
のうちの１つを含み；
環Ｄは、１２位と１４位との間に不飽和Ｃ−Ｃ結合、または１２位と１４位との間に架橋シクロプロピルを含み；
Ｒ１は、水素、ハロ、ヒドロキシ、メチル、エチルおよびカルボニルから選択され；
Ｒ２は、水素、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、カルボキシ、シアノ、ニトロ、チオ、直鎖または分枝鎖の（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、直鎖または分枝鎖の（Ｃ１−Ｃ４）アルケニルおよび直鎖または分枝鎖の（Ｃ１−Ｃ３）アルキルアミノから選択され；
Ｒ３は、水素、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、カルボキシ、シアノ、ニトロ、チオ、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）アルキルオキシ、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミノ、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）ジアルキルアミノ、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）アルキルチオ、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）アルキルスルホニル、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）アルキルスルフィニル、カルボキシ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルオキシカルボニル、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルカルボニルオキシ、必要に応じて置換されるアミノカルボニルおよびアミノカルボニル（Ｃ１−Ｃ６）アルキルから選択され；
前記方法は、環Ａ、Ｂ、ＣおよびＤならびにＲ１、Ｒ２およびＲ３が、式（Ｉｂ）の化合物に対して上で定義されたとおりである、式（ＩＩｂ）：
【化４６】
2016501544.tif 000007
のケトン基質化合物を、請求項１〜６のいずれか１項に記載の操作されたトランスアミナーゼポリペプチドと、アミノドナーの存在下の好適な反応条件下において接触させる工程を含むか；
ｃ）式（Ｉ）のアミン化合物が、式（Ｉｃ）：
【化４７】
2016501544.tif 000008
の化合物であり、式中、
環ＡおよびＢは、以下：
（ａ）５位と６位との間に、不飽和Ｃ−Ｃ結合；
（ｂ）５位と１０位との間に、不飽和Ｃ−Ｃ結合；
（ｃ）５位に、４位のメチル基に対してシスである水素；または
（ｄ）５位に、４位のメチル基に対してトランスである水素
のうちの１つを含み；
環Ｄは、芳香族であり；
Ｒ１は、水素、ハロ、ヒドロキシ、メチル、エチルおよびカルボニルから選択され；
Ｒ２は、水素、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、カルボキシ、シアノ、ニトロ、チオ、直鎖または分枝鎖の（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、直鎖または分枝鎖の（Ｃ１−Ｃ４）アルケニルおよび直鎖または分枝鎖の（Ｃ１−Ｃ３）アルキルアミノから選択され；
Ｒ３は、水素、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、カルボキシ、シアノ、ニトロ、チオ、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）アルキルオキシ、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミノ、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）ジアルキルアミノ、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）アルキルチオ、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）アルキルスルホニル、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）アルキルスルフィニル、カルボキシ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルオキシカルボニル、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルカルボニルオキシ、必要に応じて置換されるアミノカルボニルおよびアミノカルボニル（Ｃ１−Ｃ６）アルキルから選択され；
前記方法は、環Ａ、Ｂ、ＣおよびＤならびにＲ１、Ｒ２およびＲ３が、式（Ｉｃ）の化合物に対して上で定義されたとおりである、式（ＩＩｃ）：
【化４８】
2016501544.tif 000009
のケトン基質化合物を、請求項１〜６のいずれか１項に記載の操作されたトランスアミナーゼポリペプチドと、アミノドナーの存在下の好適な反応条件下において接触させる工程を含むか；
ｄ）式（Ｉ）のアミン化合物が、式（Ｉｄ）：
【化４９】
2016501544.tif 000010
の化合物であり、式中、
環Ａは、２位と３位との間または５位と６位との間に不飽和Ｃ−Ｃ結合を含み；
Ｒ１およびＲ２は、水素、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、カルボキシ、シアノ、ニトロ、チオ、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）アルキルオキシ、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミノ、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）ジアルキルアミノ、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）アルキルチオ、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）アルキルスルホニル、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）アルキルスルフィニル、カルボキシ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルオキシカルボニル、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルカルボニルオキシ、必要に応じて置換されるアミノカルボニル、アミノカルボニル（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、必要に応じて置換されるシクロアルキル、必要に応じて置換されるヘテロシクロアルキル、必要に応じて置換されるアリール、必要に応じて置換されるヘテロアリール、必要に応じて置換されるアリールオキシ、必要に応じて置換されるアリールアミノ、必要に応じて置換されるアリールチオ、必要に応じて置換されるアリールスルホニル、必要に応じて置換されるアリールスルフィニル、必要に応じて置換されるアリールオキシカルボニル、必要に応じて置換されるアリールカルボニルオキシ、必要に応じて置換されるヘテロアリールオキシ、必要に応じて置換されるヘテロアリールアミノ、必要に応じて置換されるヘテロアリールチオ、必要に応じて置換されるヘテロアリールスルホニル、必要に応じて置換されるヘテロアリールスルフィニル、必要に応じて置換されるヘテロアリールオキシカルボニル、必要に応じて置換されるヘテロアリールカルボニルオキシ、アルキルアミノスルホニル（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、アリールスルホニル（Ｃ１−Ｃ６）アルキルおよびヘテロアリールスルホニル（Ｃ１−Ｃ６）アルキルから独立して選択され；
Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は、水素、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、カルボキシ、シアノ、ニトロ、チオ、直鎖または分枝鎖の（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、直鎖または分枝鎖の（Ｃ１−Ｃ４）アルケニルおよび直鎖または分枝鎖の（Ｃ１−Ｃ３）アルキルアミノから独立して選択され；
Ｒ６、Ｒ７およびＲ８は、水素、ハロ、ヒドロキシおよびメチルから独立して選択され；
前記方法は、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が、式（Ｉｄ）の化合物に対して上で定義されたとおりである、式（ＩＩｄ）：
【化５０】
2016501544.tif 000011
のケトン基質化合物を、請求項１〜６のいずれか１項に記載の操作されたトランスアミナーゼポリペプチドと、アミノドナーの存在下の好適な反応条件下において接触させる工程を含む、請求項１１に記載のプロセス。
【請求項１３】
ａ）式（ＩＩ）の基質化合物が、約０．５〜約２００ｇ／Ｌ、１〜約２００ｇ／Ｌ、５〜約１５０ｇ／Ｌ、約１０〜約１００ｇ／Ｌまたは約２０〜約１００ｇ／Ｌの負荷であるか；
ｂ）式（ＩＩ）の基質化合物が、少なくとも約０．５ｇ／Ｌ、１ｇ／Ｌ、５ｇ／Ｌ、１０ｇ／Ｌ、２０ｇ／Ｌ、３０ｇ／Ｌ、４０ｇ／Ｌ、５０ｇ／Ｌ、１００ｇ／Ｌ、１５０ｇ／Ｌまたは２００ｇ／Ｌの負荷であるか；あるいは
ｃ）前記アミノドナーが、イソプロピルアミン、Ｌ−リジン、α−フェネチルアミン、Ｄ−アラニン、Ｌ−アラニンまたはＤ，Ｌ−アラニンまたはＤ，Ｌ−オルニチンからなる群より選択され、好ましくは前記アミノドナーが、イソプロピルアミン（ＩＰＭ）であり、必要に応じて：
（ｉ）前記イソプロピルアミンが、約０．１〜約３Ｍ、０．２〜約２．５Ｍ、約０．５〜約２Ｍまたは約１〜約２Ｍの濃度であるか；または
（ｉｉ）前記イソプロピルアミンが、約０．１Ｍ、０．２Ｍ、０．３Ｍ、０．４Ｍ、０．５Ｍ、０．６Ｍ、０．７Ｍ、０．８Ｍ、１Ｍ、１．５Ｍ、２Ｍ、２．５Ｍまたは３Ｍの濃度である、
請求項１１または１２のいずれか１項に記載のプロセス。
【請求項１４】
前記好適な反応条件が、
ａ）緩衝剤を含み、必要に応じて、前記緩衝剤が、ホウ酸塩、リン酸塩、炭酸塩、トリエタノールアミン（ＴＥＡ）およびＴｒｉｓから選択され、好ましくは、前記緩衝剤が、ＴＥＡを含み、前記ＴＥＡの濃度は、約０．０１〜約０．４Ｍ、約０．０５〜約０．４Ｍ、約０．１〜約０．３Ｍまたは約０．１〜約０．２Ｍであり、例えば、前記ＴＥＡの濃度が、約０．０１Ｍ、０．０２Ｍ、０．０３Ｍ、０．０４Ｍ、０．０５Ｍ、０．０７Ｍ、０．１Ｍ、０．１２Ｍ、０．１４Ｍ、０．１６Ｍ、０．１８Ｍ、０．２Ｍ、０．３Ｍまたは０．４Ｍであるか；
ｂ）約６〜約１２のｐＨ、約６〜約１０のｐＨ、約６〜約８のｐＨ、約７〜約１０のｐＨ、約７〜約９のｐＨまたは約７〜約８のｐＨ、例えば、約６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、１０．１０．５、１１、１１．５または１２のｐＨを含むか；
ｃ）約１０℃〜約７０℃、約１０℃〜約６５℃、約１５℃〜約６０℃、約２０℃〜約６０℃、約２０℃〜約５５℃、約３０℃〜約５５℃または約５０℃〜約６０℃の温度、好ましくは、少なくとも約１０℃、１５℃、２０℃、２５℃、３０℃、３５℃、４０℃、４５℃、５０℃、５５℃、６０℃、６５℃または７０℃の温度を含むか；
ｄ）ピリドキサール補助因子であるピリドキサール−５’−リン酸（ＰＬＰ）を約０．１ｇ／Ｌ〜約１０ｇ／Ｌ、約０．２ｇ／Ｌ〜約５ｇ／Ｌまたは約０．５ｇ／Ｌ〜約２．５ｇ／Ｌの濃度、例えば、約０．１ｇ／Ｌ、０．２ｇ／Ｌ、０．５ｇ／Ｌ、１ｇ／Ｌ、２．５ｇ／Ｌ、５ｇ／Ｌまたは１０ｇ／ＬのＰＬＰ濃度を含むか；
ｅ）共溶媒を含み、必要に応じて、前記共溶媒が、極性共溶媒を含み、例えば、前記共溶媒が、ポリオール、ＤＭＳＯまたは低級アルコールから選択され、例えば、前記共溶媒が、ＤＭＳＯであり、前記ＤＭＳＯが、約１％〜約４０％ｖ／ｖ；約２％〜約３０％ｖ／ｖ；または約５％〜約２５％ｖ／ｖの濃度で存在し、好ましくは、前記ＤＭＳＯが、約１％ｖ／ｖ、２％ｖ／ｖ、５％ｖ／ｖ、１０％ｖ／ｖ、１５％ｖ／ｖ、２０％ｖ／ｖ、２５％ｖ／ｖ、３０％ｖ／ｖ、３５％ｖ／ｖ、３５％ｖ／ｖまたは４０％ｖ／ｖの濃度で存在するか；ならびに／あるいは
ｆ）前記トランスアミナーゼポリペプチドが、約０．０１〜約５０ｇ／Ｌ、約０．０５〜約５０ｇ／Ｌ、約０．１〜約４０ｇ／Ｌ、約１〜約４０ｇ／Ｌ、約２〜約４０ｇ／Ｌ、約５〜約４０ｇ／Ｌ、約５〜約３０ｇ／Ｌ、約０．１〜約１０ｇ／Ｌ、約０．５〜約１０ｇ／Ｌ、約１〜約１０ｇ／Ｌ、約０．１〜約５ｇ／Ｌ、約０．５〜約５ｇ／Ｌまたは約０．１〜約２ｇ／Ｌの濃度であり、好ましくは、前記トランスアミナーゼポリペプチドが、約０．０１ｇ／Ｌ、０．０５ｇ／Ｌ、０．１ｇ／Ｌ、０．２ｇ／Ｌ、０．５ｇ／Ｌ、１ｇ／Ｌ、２ｇ／Ｌ、５ｇ／Ｌ、１０ｇ／Ｌ、１５ｇ／Ｌ、２０ｇ／Ｌ、２５ｇ／Ｌ、３０ｇ／Ｌ、３５ｇ／Ｌ、４０ｇ／Ｌまたは５０ｇ／Ｌの濃度である、
請求項１１〜１３のいずれか１項に記載のプロセス。
【請求項１５】
前記好適な反応条件が、以下：
（Ｉ）
（ａ）約５ｇ／Ｌ〜２００ｇ／Ｌの基質負荷；
（ｂ）約０．１〜５０ｇ／Ｌの操作されたトランスアミナーゼポリペプチド；
（ｃ）約０．１〜４Ｍのイソプロピルアミン（ＩＰＭ）；
（ｄ）約０．１〜１０ｇ／Ｌのピリドキサールリン酸（ＰＬＰ）補助因子；
（ｅ）約６〜９のｐＨ；および
（ｆ）約３０〜６５℃の温度；
（ＩＩ）
（ａ）約１０ｇ／Ｌ〜１５０ｇ／Ｌの基質負荷；
（ｂ）約０．５〜２０ｇ／Ｌの操作されたトランスアミナーゼポリペプチド；
（ｃ）約０．１〜３Ｍのイソプロピルアミン（ＩＰＭ）；
（ｄ）約０．１〜１０ｇ／Ｌのピリドキサールリン酸（ＰＬＰ）補助因子；
（ｅ）約０．０５〜０．２０Ｍのトリエタノールアミン（ＴＥＡ）緩衝液；
（ｆ）約１％〜約４５％のＤＭＳＯ；
（ｇ）約６〜９のｐＨ；および
（ｈ）約３０〜６５℃の温度；または
（ＩＩＩ）
（ａ）約２０ｇ／Ｌ〜１００ｇ／Ｌの基質負荷；
（ｂ）約１〜５ｇ／Ｌの操作されたトランスアミナーゼポリペプチド；
（ｃ）約０．５〜２Ｍのイソプロピルアミン（ＩＰＭ）；
（ｄ）約０．２〜２ｇ／Ｌのピリドキサールリン酸（ＰＬＰ）補助因子；
（ｅ）約０．１ＭのＴＥＡ緩衝液；
（ｆ）約２５％のＤＭＳＯ；
（ｅ）約８のｐＨ；および
（ｆ）約４５〜６０℃の温度
を含む、請求項１１〜１４のいずれか１項に記載のプロセス。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６８】
操作されたトランスアミナーゼの選択、生体触媒の調製、酵素基質の選択および上記プロセスを行うためのパラメータに関する指針は、以下の詳細な説明においてさらに説明される。
例えば、本発明は、以下の項目を提供する。
（項目１）
配列番号２に対して少なくとも８０％の同一性、ならびに配列番号２と比べて、Ｘ１９、Ｘ２１、Ｘ３４、Ｘ５３、Ｘ５６、Ｘ７３、Ｘ８６、Ｘ８８、Ｘ１０７、Ｘ１１３、Ｘ１４７、Ｘ１５５、Ｘ１６５、Ｘ１７１、Ｘ１７８、Ｘ２３３、Ｘ２５１、Ｘ２５９、Ｘ２６８、Ｘ２７７、Ｘ２８６、Ｘ３１２、Ｘ３１６、Ｘ３１７、Ｘ３５８、Ｘ３６６、Ｘ３８３、Ｘ３９９、Ｘ４１４、Ｘ４１５、Ｘ４１７、Ｘ４２６、Ｘ４３４およびＸ４５０から選択される残基位置に１つ以上の残基差異を有するアミノ酸配列を含む、トランスアミナーゼ活性を有する操作されたポリペプチドであって、ここで、残基位置Ｘ２１、Ｘ５６、Ｘ８６、Ｘ８８、Ｘ１０７、Ｘ１１３、Ｘ１３３、Ｘ１４７、Ｘ２３３、Ｘ２８６、Ｘ３１２、Ｘ３１６、Ｘ３８３、Ｘ４１５、Ｘ４１７およびＸ４３４における前記残基差異は、Ｘ２１Ｈ、Ｘ５６Ａ／Ｃ、Ｘ８６Ｃ、Ｘ８８Ｈ／Ｙ、Ｘ１０７Ｇ、Ｘ１１３Ｌ／Ｐ、Ｘ１４７Ｈ／Ｖ、Ｘ２３３Ｖ、Ｘ２８６Ｃ／Ｈ、Ｘ３１２Ｎ、Ｘ３１６Ｃ／Ｆ／Ｇ／Ｎ／Ｓ／Ｔ、Ｘ３８３Ｃ／Ｆ／Ｉ／Ｍ／Ｔ、Ｘ４１５Ａ／Ｇ／Ｈ／Ｌ／Ｖ、Ｘ４１７ＶおよびＸ４３４Ｔから選択される、操作されたポリペプチド。
（項目２）
前記残基位置Ｘ１９、Ｘ３４、Ｘ５３、Ｘ７３、Ｘ１５５、Ｘ１６５、Ｘ１７１、Ｘ１７８、Ｘ２５１、Ｘ２５９、Ｘ２６８、Ｘ２７７、Ｘ３１７、Ｘ３５８、Ｘ３６６、Ｘ３９９、Ｘ４１４、Ｘ４２６およびＸ４５０における前記残基差異が、Ｘ１９Ｗ、Ｘ３４Ａ、Ｘ５３Ｍ、Ｘ７３Ｒ、Ｘ１５５Ｖ、Ｘ１６５Ｆ、Ｘ１７１Ｑ、Ｘ１７８Ｗ、Ｘ２５１Ｖ、Ｘ２５９Ｖ、Ｘ２６８Ａ、Ｘ２７７Ａ、Ｘ３１７Ｌ、Ｘ３５８Ｋ、Ｘ３６６Ｈ、Ｘ３９９Ａ、Ｘ４１４Ｉ、Ｘ４２６ＲおよびＸ４５０Ｓから選択される、項目１に記載の操作されたポリペプチド。
（項目３）
前記アミノ酸配列が、配列番号２と比べて、Ｘ３４Ａ、Ｘ５６Ａ、Ｘ８８Ｈ、Ｘ１０７Ｇ、Ｘ１１３Ｌ、Ｘ１４７Ｈ、Ｘ１５３Ｃ、Ｘ１５５Ｖ、Ｘ２３３Ｖ、Ｘ３１５Ｇ、Ｘ３１６Ｎ、Ｘ３８３ＩおよびＸ４５０Ｓから選択される少なくとも１つ以上の残基差異を含む、項目１または２に記載の操作されたポリペプチド。
（項目４）
前記アミノ酸配列が、配列番号２と比べて、Ｘ３１Ｍ、Ｘ５７Ｆ／Ｌ、Ｘ８６Ｎ／Ｓ、Ｘ１５３Ａ、Ｘ２３３Ｔ、Ｘ３２３Ｔ、Ｘ３８３ＶおよびＸ４１７Ｔから選択される１つ以上の残基差異をさらに含む、項目１、２または３に記載の操作されたポリペプチド。
（項目５）
前記アミノ酸配列が、配列番号２と比べて、Ｘ３４Ａ、Ｘ５６Ａ、Ｘ５７Ｌ、Ｘ８６Ｓ、Ｘ８８Ａ；Ｘ１５３Ｃ、Ｘ１５５Ｖ、Ｘ１６３Ｆ、Ｘ３１５ＧおよびＸ４１７Ｔを含む残基差異の組み合わせを少なくとも含む、項目４に記載の操作されたポリペプチド。
（項目６）
前記アミノ酸配列が、配列番号２と比べて、Ｘ３１６Ｎの残基差異をさらに含む、項目５に記載の操作されたポリペプチド。
（項目７）
前記アミノ酸配列が、配列番号２と比べて、Ｘ３１Ｍ、Ｘ５７Ｆ、Ｘ３２３Ｔ、Ｘ３８３Ｉ／Ｔ、Ｘ４１５ＨおよびＸ４５０Ｓから選択される残基差異をさらに含む、項目６に記載の操作されたポリペプチド。
（項目８）
前記アミノ酸配列が、配列番号２と比べて、以下：
Ｘ３１Ｍ、Ｘ５７Ｆ、Ｘ３２３ＴおよびＸ３８３Ｖ；
Ｘ３１Ｍ、Ｘ５７Ｆ、Ｘ１０７Ｇ、Ｘ１１３Ｌ、Ｘ２３３Ｔ、Ｘ４１５ＨおよびＸ４５０Ｓ；
Ｘ３１Ｍ、Ｘ５７Ｆ、Ｘ２３３Ｖ、Ｘ３２３Ｔ、Ｘ３８３Ｉ、Ｘ４１５ＨおよびＸ４５０Ｓ；ならびに
Ｘ３１Ｍ、Ｘ５７Ｆ、Ｘ１４７Ｈ、Ｘ３２３Ｔ、Ｘ３８３Ｉ、Ｘ４１５ＨおよびＸ４５０Ｓ
から選択される残基差異の組み合わせをさらに含む、項目７に記載の操作されたポリペプチド。
（項目９）
前記トランスアミナーゼが、配列番号４のポリペプチドと比べて、少なくとも１．２倍高い安定性を有し、前記アミノ酸配列が、配列番号２と比べて、Ｘ３４Ｔ、Ｘ１０７Ｇ、Ｘ１１３Ｌ、Ｘ１４７Ｈ、Ｘ１５５Ｖ、Ｘ２３３Ｔ／Ｖ、Ｘ３２３Ｔ、Ｘ３８３Ｉ／ＶおよびＸ４５０Ｓから選択される１つ以上の残基差異を含む、項目１に記載の操作されたポリペプチド。
（項目１０）
前記トランスアミナーゼが、化合物（２）を化合物（１）に変換する際に、配列番号４のポリペプチドと比べて少なくとも１．２倍高い活性を有し、前記アミノ酸配列が、配列番号２と比べて、Ｘ５６Ａ、Ｘ８６Ｓ、Ｘ８８Ｈ、Ｘ１５３Ｃ、Ｘ４１５ＨおよびＸ４１７Ｔから選択される１つ以上の残基差異を含む、項目１に記載の操作されたポリペプチド。
（項目１１）
前記トランスアミナーゼが、化合物（２）を化合物（１）に変換する際に、配列番号４のポリペプチドと比べて高いエナンチオ選択性を有し、前記アミノ酸配列は、配列番号２と比べて、Ｘ５７Ｆ、Ｘ１５３ＣおよびＸ３１６Ｎから選択される１つ以上の残基差異を含む、項目１に記載の操作されたポリペプチド。
（項目１２）
前記アミノ酸配列が、配列番号２と比べて、Ｘ１８Ａ、Ｘ１９Ｗ、Ｘ２１Ｈ、Ｘ３１Ｍ、Ｘ３４Ａ、Ｘ５３Ｍ、Ｘ５６Ａ／Ｃ、Ｘ５７Ｃ／Ｆ／Ｌ、Ｘ７３Ｒ、Ｘ８６Ｃ／Ｎ／Ｓ／Ｙ、Ｘ８８Ｈ／Ｙ、Ｘ１０７Ｇ、Ｘ１１３Ｃ／Ｌ／Ｐ、Ｘ１４６Ｌ、Ｘ１４７Ｈ／Ｋ／Ｖ、Ｘ１５３Ａ／Ｃ／Ｖ、Ｘ１５５Ａ／Ｖ、Ｘ１６３Ｌ、Ｘ１６５Ｆ、Ｘ１７１Ｑ、Ｘ１７８Ｗ、Ｘ１９０Ｋ、Ｘ２０６Ｋ、Ｘ２２８Ｇ、Ｘ２３３Ｔ／Ｖ、Ｘ２３５Ｐ、Ｘ２４４Ｔ、Ｘ２５１Ｖ、Ｘ２５９Ｖ、Ｘ２６８Ａ、Ｘ２７７Ａ、Ｘ２８６Ｃ／Ｈ、Ｘ３１２Ｎ、Ｘ３１４Ｎ、Ｘ３１５Ｇ、Ｘ３１６Ａ／Ｃ／Ｆ／Ｎ／Ｓ／Ｔ、Ｘ３１７Ｌ、Ｘ３１９Ｎ、Ｘ３２３Ｔ、Ｘ３５８Ｋ、Ｘ３６６Ｈ、Ｘ３８３Ｃ／Ｆ／Ｉ／Ｌ／Ｍ／Ｔ／Ｖ、Ｘ３９５Ｐ、Ｘ３９９Ａ、Ｘ４１４Ｉ、Ｘ４１５Ａ／Ｇ／Ｈ／Ｌ／Ｖ、Ｘ４１７Ｔ／Ｖ、Ｘ４２４Ａ、Ｘ４２６Ｒ、Ｘ４２７Ｙ、Ｘ４３４ＴおよびＸ４５０Ｓから選択される残基差異をさらに含む、項目１〜１１のいずれか１項に記載の操作されたポリペプチド。
（項目１３）
前記アミノ酸配列が、配列番号２と比べて、Ｘ９、Ｘ４５、Ｘ１７７、Ｘ２１１、Ｘ２９４、Ｘ３２４およびＸ３９１位に残基差異を含まない、項目１〜１２のいずれか１項に記載の操作されたポリペプチド。
（項目１４）
前記アミノ酸配列が、配列番号４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、９８、１００、１０２、１０４、１０６、１０８、１１０、１１２、１１４、１１６、１１８、１２０、１２２、１２４、１２６、１２８、１３０、１３２、１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４、１４６、１４８、１５０、１５２、１５４、１５４、１５６、１５８、１６０、１６２、１６４、１６６、１６８、１７０、１７２、１７４、１７６、１７８、１８０、１８２、１８４、１８６、１８８、１９０、１９２、１９４、１９６、１９８、２００、２０２および２０４から選択される配列を含む、項目１に記載の操作されたポリペプチド。
（項目１５）
前記ポリペプチドが、固体支持体上に固定化されている、項目１〜１４のいずれか１項に記載の操作されたポリペプチド。
（項目１６）
前記固体支持体が、エポキシド官能基を有するポリメタクリレート、アミノエポキシド官能基を有するポリメタクリレート、オクタデシル官能基を有するスチレン／ＤＶＢコポリマーまたはポリメタクリレートを含むビーズまたは樹脂である、項目１５に記載の操作されたポリペプチド。
（項目１７）
項目１〜１４のいずれか１項に記載の操作されたトランスアミナーゼポリペプチドをコードする、ポリヌクレオチド。
（項目１８）
配列番号３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１、８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、９７、９９、１０１、１０３、１０５、１０７、１０９、１１１、１１３、１１５、１１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３、１４５、１４７、１４９、１５１、１５３、１５５、１５７、１５９、１６１、１６３、１６５、１６７、１６９、１７１、１７３、１７５、１７７、１７９、１８１、１８３、１８５、１８７、１８９、１９１、１９３、１９５、１９７、１９９、２０１および２０３から選択されるヌクレオチド配列を含む、項目１に記載の操作されたトランスアミナーゼポリペプチドをコードするポリヌクレオチド。
（項目１９）
項目１７または１８に記載のポリヌクレオチドを含む、発現ベクター。
（項目２０）
調節配列を含む、項目１９に記載の発現ベクター。
（項目２１）
項目１７もしくは１８に記載のポリヌクレオチドまたは項目１９もしくは２０に記載の発現ベクターを含む、宿主細胞。
（項目２２）
項目１〜１４のいずれか１項に記載の操作されたポリペプチドを調製する方法であって、前記方法は、項目２１に記載の宿主細胞を前記ポリペプチドの発現に適した条件下で培養する工程を含む、方法。
（項目２３）
前記操作されたポリペプチドを単離する工程をさらに含む、項目２２に記載の方法。
（項目２４）
式（Ｉ）：
【化４０】
2016501544.tif 000012
のアミン化合物を調製するためのプロセスであって、式中、
環Ａは、２位と３位との間および／もしくは５位と６位との間に不飽和Ｃ−Ｃ結合を必要に応じて含み、かつ／または２、３、４、５および６位においてハロ、ヒドロキシおよびメチルから選択される基で必要に応じて独立して置換される、６員の炭素環であり；
環Ｂは、５位と１０位との間に不飽和Ｃ−Ｃ結合を必要に応じて含み、かつ／または９位および１０位のうちの１つ以上においてハロ、ヒドロキシおよびメチルから選択される基で必要に応じて独立して置換される、６員の炭素環であり；
環Ｃは、１０位においてハロ、ヒドロキシ、メチル、エチルおよびカルボニルから選択される基で必要に応じて置換される、５または６員の炭素環（すなわち、ｍ＝０または１）であり；
環Ｄは、１、２もしくは３つの不飽和Ｃ−Ｃ結合を必要に応じて含み、かつ／または以下のとおり：
１４位において、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、カルボキシ、シアノ、ニトロ、チオ、直鎖または分枝鎖の（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、直鎖または分枝鎖の（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、直鎖または分枝鎖の（Ｃ１−Ｃ３）アルキルアミノ、および１２位に架橋しているシクロプロピルから選択される基で；
１５位または１６位において、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、カルボキシ、シアノ、ニトロ、チオ、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）アルキルオキシ、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミノ、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）ジアルキルアミノ、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）アルキルチオ、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）アルキルスルホニル、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）アルキルスルフィニル、カルボキシ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルオキシカルボニル、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルカルボニルオキシ、必要に応じて置換されるアミノカルボニル、アミノカルボニル（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、必要に応じて置換されるシクロアルキル、必要に応じて置換されるヘテロシクロアルキル、必要に応じて置換されるアリール、必要に応じて置換されるヘテロアリール、必要に応じて置換されるアリールオキシ、必要に応じて置換されるアリールアミノ、必要に応じて置換されるアリールチオ、必要に応じて置換されるアリールスルホニル、必要に応じて置換されるアリールスルフィニル、必要に応じて置換されるアリールオキシカルボニル、必要に応じて置換されるアリールカルボニルオキシ、必要に応じて置換されるヘテロアリールオキシ、必要に応じて置換されるヘテロアリールアミノ、必要に応じて置換されるヘテロアリールチオ、必要に応じて置換されるヘテロアリールスルホニル、必要に応じて置換されるヘテロアリールスルフィニル、必要に応じて置換されるヘテロアリールオキシカルボニル、必要に応じて置換されるヘテロアリールカルボニルオキシ、アルキルアミノスルホニル（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、アリールスルホニル（Ｃ１−Ｃ６）アルキルおよびヘテロアリールスルホニル（Ｃ１−Ｃ６）アルキルから選択される基で、
必要に応じて独立して置換される、５、６または７員の炭素環（すなわち、ｎ＝０、１または２）であるが；
ただし、式（Ｉ）の化合物は、化合物（１）：
【化４１】
2016501544.tif 000013
ではなく、
前記方法は、環Ａ、Ｂ、ＣおよびＤが、式（Ｉ）の化合物に対して上で定義されたとおりである、式（ＩＩ）：
【化４２】
2016501544.tif 000014
のケトン基質化合物を、項目１〜１６のいずれか１項に記載の操作されたトランスアミナーゼポリペプチドと、アミノドナーの存在下の好適な反応条件下において接触させる工程を含む、プロセス。
（項目２５）
式（Ｉ）のアミン化合物が、式（Ｉａ）：
【化４３】
2016501544.tif 000015
の化合物である、項目２４に記載のプロセスであって、式中、
環ＡおよびＢは、以下：
（ａ）５位と６位との間に、不飽和Ｃ−Ｃ結合；
（ｂ）５位と１０位との間に、不飽和Ｃ−Ｃ結合；
（ｃ）５位に、４位のメチル基に対してシスである水素；または
（ｄ）５位に、４位のメチル基に対してトランスである水素
のうちの１つを含み；
環Ｄは、１２位と１４位との間に不飽和Ｃ−Ｃ結合を含み；
Ｒ１は、水素、ハロ、ヒドロキシ、メチル、エチルおよびカルボニルから選択され；
Ｒ２は、水素、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、カルボキシ、シアノ、ニトロ、チオ、直鎖または分枝鎖の（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、直鎖または分枝鎖の（Ｃ１−Ｃ４）アルケニルおよび直鎖または分枝鎖の（Ｃ１−Ｃ３）アルキルアミノから選択され；
Ｒ３は、水素、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、カルボキシ、シアノ、ニトロ、チオ、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）アルキルオキシ、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミノ、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）ジアルキルアミノ、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）アルキルチオ、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）アルキルスルホニル、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）アルキルスルフィニル、カルボキシ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルオキシカルボニル、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルカルボニルオキシ、必要に応じて置換されるアミノカルボニルおよびアミノカルボニル（Ｃ１−Ｃ６）アルキルから選択され；
前記方法は、環Ａ、Ｂ、ＣおよびＤならびにＲ１、Ｒ２およびＲ３が、式（Ｉａ）の化合物に対して上で定義されたとおりである、式（ＩＩａ）：
【化４４】
2016501544.tif 000016
のケトン基質化合物を、項目１〜１６のいずれか１項に記載の操作されたトランスアミナーゼポリペプチドと、アミノドナーの存在下の好適な反応条件下において接触させる工程を含む、プロセス。
（項目２６）
式（Ｉ）のアミン化合物が、式（Ｉｂ）：
【化４５】
2016501544.tif 000017
の化合物である、項目２４に記載のプロセスであって、式中、
環ＡおよびＢは、以下：
（ａ）５位と６位との間に、不飽和Ｃ−Ｃ結合；
（ｂ）５位と１０位との間に、不飽和Ｃ−Ｃ結合；
（ｃ）５位に、４位のメチル基に対してシスである水素；または
（ｄ）５位に、４位のメチル基に対してトランスである水素
のうちの１つを含み；
環Ｄは、１２位と１４位との間に不飽和Ｃ−Ｃ結合、または１２位と１４位との間に架橋シクロプロピルを含み；
Ｒ１は、水素、ハロ、ヒドロキシ、メチル、エチルおよびカルボニルから選択され；
Ｒ２は、水素、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、カルボキシ、シアノ、ニトロ、チオ、直鎖または分枝鎖の（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、直鎖または分枝鎖の（Ｃ１−Ｃ４）アルケニルおよび直鎖または分枝鎖の（Ｃ１−Ｃ３）アルキルアミノから選択され；
Ｒ３は、水素、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、カルボキシ、シアノ、ニトロ、チオ、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）アルキルオキシ、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミノ、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）ジアルキルアミノ、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）アルキルチオ、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）アルキルスルホニル、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）アルキルスルフィニル、カルボキシ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルオキシカルボニル、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルカルボニルオキシ、必要に応じて置換されるアミノカルボニルおよびアミノカルボニル（Ｃ１−Ｃ６）アルキルから選択され；
前記方法は、環Ａ、Ｂ、ＣおよびＤならびにＲ１、Ｒ２およびＲ３が、式（Ｉｂ）の化合物に対して上で定義されたとおりである、式（ＩＩｂ）：
【化４６】
2016501544.tif 000018
のケトン基質化合物を、項目１〜１６のいずれか１項に記載の操作されたトランスアミナーゼポリペプチドと、アミノドナーの存在下の好適な反応条件下において接触させる工程を含む、プロセス。
（項目２７）
式（Ｉ）のアミン化合物が、式（Ｉｃ）：
【化４７】
2016501544.tif 000019
の化合物である、項目２４に記載のプロセスであって、式中、
環ＡおよびＢは、以下：
（ａ）５位と６位との間に、不飽和Ｃ−Ｃ結合；
（ｂ）５位と１０位との間に、不飽和Ｃ−Ｃ結合；
（ｃ）５位に、４位のメチル基に対してシスである水素；または
（ｄ）５位に、４位のメチル基に対してトランスである水素
のうちの１つを含み；
環Ｄは、芳香族であり；
Ｒ１は、水素、ハロ、ヒドロキシ、メチル、エチルおよびカルボニルから選択され；
Ｒ２は、水素、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、カルボキシ、シアノ、ニトロ、チオ、直鎖または分枝鎖の（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、直鎖または分枝鎖の（Ｃ１−Ｃ４）アルケニルおよび直鎖または分枝鎖の（Ｃ１−Ｃ３）アルキルアミノから選択され；
Ｒ３は、水素、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、カルボキシ、シアノ、ニトロ、チオ、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）アルキルオキシ、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミノ、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）ジアルキルアミノ、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）アルキルチオ、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）アルキルスルホニル、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）アルキルスルフィニル、カルボキシ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルオキシカルボニル、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルカルボニルオキシ、必要に応じて置換されるアミノカルボニルおよびアミノカルボニル（Ｃ１−Ｃ６）アルキルから選択され；
前記方法は、環Ａ、Ｂ、ＣおよびＤならびにＲ１、Ｒ２およびＲ３が、式（Ｉｃ）の化合物に対して上で定義されたとおりである、式（ＩＩｃ）：
【化４８】
2016501544.tif 000020
のケトン基質化合物を、項目１〜１６のいずれか１項に記載の操作されたトランスアミナーゼポリペプチドと、アミノドナーの存在下の好適な反応条件下において接触させる工程を含む、プロセス。
（項目２８）
式（Ｉ）のアミン化合物が、式（Ｉｄ）：
【化４９】
2016501544.tif 000021
の化合物である、項目２４に記載のプロセスであって、式中、
環Ａは、２位と３位との間または５位と６位との間に不飽和Ｃ−Ｃ結合を含み；
Ｒ１およびＲ２は、水素、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、カルボキシ、シアノ、ニトロ、チオ、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）アルキルオキシ、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミノ、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）ジアルキルアミノ、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）アルキルチオ、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）アルキルスルホニル、必要に応じて置換される（Ｃ１−Ｃ６）アルキルスルフィニル、カルボキシ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルオキシカルボニル、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルカルボニルオキシ、必要に応じて置換されるアミノカルボニル、アミノカルボニル（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、必要に応じて置換されるシクロアルキル、必要に応じて置換されるヘテロシクロアルキル、必要に応じて置換されるアリール、必要に応じて置換されるヘテロアリール、必要に応じて置換されるアリールオキシ、必要に応じて置換されるアリールアミノ、必要に応じて置換されるアリールチオ、必要に応じて置換されるアリールスルホニル、必要に応じて置換されるアリールスルフィニル、必要に応じて置換されるアリールオキシカルボニル、必要に応じて置換されるアリールカルボニルオキシ、必要に応じて置換されるヘテロアリールオキシ、必要に応じて置換されるヘテロアリールアミノ、必要に応じて置換されるヘテロアリールチオ、必要に応じて置換されるヘテロアリールスルホニル、必要に応じて置換されるヘテロアリールスルフィニル、必要に応じて置換されるヘテロアリールオキシカルボニル、必要に応じて置換されるヘテロアリールカルボニルオキシ、アルキルアミノスルホニル（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、アリールスルホニル（Ｃ１−Ｃ６）アルキルおよびヘテロアリールスルホニル（Ｃ１−Ｃ６）アルキルから独立して選択され；
Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は、水素、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、カルボキシ、シアノ、ニトロ、チオ、直鎖または分枝鎖の（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、直鎖または分枝鎖の（Ｃ１−Ｃ４）アルケニルおよび直鎖または分枝鎖の（Ｃ１−Ｃ３）アルキルアミノから独立して選択され；
Ｒ６、Ｒ７およびＲ８は、水素、ハロ、ヒドロキシおよびメチルから独立して選択され；
前記方法は、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が、式（Ｉｄ）の化合物に対して上で定義されたとおりである、式（ＩＩｄ）：
【化５０】
2016501544.tif 000022
のケトン基質化合物を、項目１〜１６のいずれか１項に記載の操作されたトランスアミナーゼポリペプチドと、アミノドナーの存在下の好適な反応条件下において接触させる工程を含む、プロセス。
（項目２９）
式（ＩＩ）の基質化合物が、約０．５〜約２００ｇ／Ｌ、１〜約２００ｇ／Ｌ、５〜約１５０ｇ／Ｌ、約１０〜約１００ｇ／Ｌまたは約２０〜約１００ｇ／Ｌの負荷である、項目２４〜２８のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目３０）
式（ＩＩ）の基質化合物が、少なくとも約０．５ｇ／Ｌ、１ｇ／Ｌ、５ｇ／Ｌ、１０ｇ／Ｌ、２０ｇ／Ｌ、３０ｇ／Ｌ、４０ｇ／Ｌ、５０ｇ／Ｌ、１００ｇ／Ｌ、１５０ｇ／Ｌまたは２００ｇ／Ｌの負荷である、項目２９に記載のプロセス。
（項目３１）
前記アミノドナーが、イソプロピルアミン、Ｌ−リジン、α−フェネチルアミン、Ｄ−アラニン、Ｌ−アラニンまたはＤ，Ｌ−アラニンまたはＤ，Ｌ−オルニチンからなる群より選択される、項目２４〜３０のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目３２）
前記アミノドナーが、イソプロピルアミン（ＩＰＭ）である、項目３１に記載のプロセス。
（項目３３）
前記イソプロピルアミンが、約０．１〜約３Ｍ、０．２〜約２．５Ｍ、約０．５〜約２Ｍまたは約１〜約２Ｍの濃度である、項目３２に記載のプロセス。
（項目３４）
前記イソプロピルアミンが、約０．１Ｍ、０．２Ｍ、０．３Ｍ、０．４Ｍ、０．５Ｍ、０．６Ｍ、０．７Ｍ、０．８Ｍ、１Ｍ、１．５Ｍ、２Ｍ、２．５Ｍまたは３Ｍの濃度である、項目３３に記載のプロセス。
（項目３５）
前記好適な反応条件が、緩衝剤を含む、項目２４〜３４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目３６）
前記緩衝剤が、ホウ酸塩、リン酸塩、炭酸塩、トリエタノールアミン（ＴＥＡ）およびＴｒｉｓから選択される、項目３５に記載のプロセス。
（項目３７）
前記緩衝剤が、ＴＥＡを含み、前記ＴＥＡの濃度は、約０．０１〜約０．４Ｍ、約０．０５〜約０．４Ｍ、約０．１〜約０．３Ｍまたは約０．１〜約０．２Ｍである、項目３６に記載のプロセス。
（項目３８）
前記ＴＥＡの濃度が、約０．０１Ｍ、０．０２Ｍ、０．０３Ｍ、０．０４Ｍ、０．０５Ｍ、０．０７Ｍ、０．１Ｍ、０．１２Ｍ、０．１４Ｍ、０．１６Ｍ、０．１８Ｍ、０．２Ｍ、０．３Ｍまたは０．４Ｍである、項目３７に記載のプロセス。
（項目３９）
前記好適な反応条件が、約６〜約１２のｐＨ、約６〜約１０のｐＨ、約６〜約８のｐＨ、約７〜約１０のｐＨ、約７〜約９のｐＨまたは約７〜約８のｐＨを含む、項目２４〜３８のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目４０）
前記好適な反応条件が、約６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、１０．１０．５、１１、１１．５または１２のｐＨを含む、項目３９に記載のプロセス。
（項目４１）
前記好適な反応条件が、約１０℃〜約７０℃、約１０℃〜約６５℃、約１５℃〜約６０℃、約２０℃〜約６０℃、約２０℃〜約５５℃、約３０℃〜約５５℃または約５０℃〜約６０℃の温度を含む、項目２４〜４０のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目４２）
前記好適な反応条件が、少なくとも約１０℃、１５℃、２０℃、２５℃、３０℃、３５℃、４０℃、４５℃、５０℃、５５℃、６０℃、６５℃または７０℃の温度を含む、項目４１に記載のプロセス。
（項目４３）
前記好適な反応条件が、ピリドキサール補助因子であるピリドキサール−５’−リン酸（ＰＬＰ）を約０．１ｇ／Ｌ〜約１０ｇ／Ｌ、約０．２ｇ／Ｌ〜約５ｇ／Ｌまたは約０．５ｇ／Ｌ〜約２．５ｇ／Ｌの濃度で含む、項目２４〜４２のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目４４）
前記好適な反応条件が、約０．１ｇ／Ｌ、０．２ｇ／Ｌ、０．５ｇ／Ｌ、１ｇ／Ｌ、２．５ｇ／Ｌ、５ｇ／Ｌまたは１０ｇ／ＬのＰＬＰ濃度を含む、項目４３に記載のプロセス。
（項目４５）
前記好適な反応条件が、共溶媒を含む、項目２４〜４４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目４６）
前記共溶媒が、極性共溶媒を含む、項目４５に記載のプロセス。
（項目４７）
前記共溶媒が、ポリオール、ＤＭＳＯまたは低級アルコールから選択される、項目４６に記載のプロセス。
（項目４８）
前記共溶媒が、ＤＭＳＯである、項目４７に記載のプロセス。
（項目４９）
前記ＤＭＳＯが、約１％〜約４０％ｖ／ｖ；約２％〜約３０％ｖ／ｖ；または約５％〜約２５％ｖ／ｖの濃度で存在する、項目４４に記載のプロセス。
（項目５０）
前記ＤＭＳＯが、約１％ｖ／ｖ、２％ｖ／ｖ、５％ｖ／ｖ、１０％ｖ／ｖ、１５％ｖ／ｖ、２０％ｖ／ｖ、２５％ｖ／ｖ、３０％ｖ／ｖ、３５％ｖ／ｖ、３５％ｖ／ｖまたは４０％ｖ／ｖの濃度で存在する、項目４９に記載のプロセス。
（項目５１）
前記トランスアミナーゼポリペプチドが、約０．０１〜約５０ｇ／Ｌ、約０．０５〜約５０ｇ／Ｌ、約０．１〜約４０ｇ／Ｌ、約１〜約４０ｇ／Ｌ、約２〜約４０ｇ／Ｌ、約５〜約４０ｇ／Ｌ、約５〜約３０ｇ／Ｌ、約０．１〜約１０ｇ／Ｌ、約０．５〜約１０ｇ／Ｌ、約１〜約１０ｇ／Ｌ、約０．１〜約５ｇ／Ｌ、約０．５〜約５ｇ／Ｌまたは約０．１〜約２ｇ／Ｌの濃度である、項目２４〜５０に記載のプロセス。
（項目５２）
前記トランスアミナーゼポリペプチドが、約０．０１ｇ／Ｌ、０．０５ｇ／Ｌ、０．１ｇ／Ｌ、０．２ｇ／Ｌ、０．５ｇ／Ｌ、１ｇ／Ｌ、２ｇ／Ｌ、５ｇ／Ｌ、１０ｇ／Ｌ、１５ｇ／Ｌ、２０ｇ／Ｌ、２５ｇ／Ｌ、３０ｇ／Ｌ、３５ｇ／Ｌ、４０ｇ／Ｌまたは５０ｇ／Ｌの濃度である、項目５１に記載のプロセス。
（項目５３）
前記好適な反応条件が、以下：
（ａ）約５ｇ／Ｌ〜２００ｇ／Ｌの基質負荷；
（ｂ）約０．１〜５０ｇ／Ｌの操作されたトランスアミナーゼポリペプチド；
（ｃ）約０．１〜４Ｍのイソプロピルアミン（ＩＰＭ）；
（ｄ）約０．１〜１０ｇ／Ｌのピリドキサールリン酸（ＰＬＰ）補助因子；
（ｅ）約６〜９のｐＨ；および
（ｆ）約３０〜６５℃の温度
を含む、項目２４〜２８のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目５４）
前記好適な反応条件が、以下：
（ａ）約１０ｇ／Ｌ〜１５０ｇ／Ｌの基質負荷；
（ｂ）約０．５〜２０ｇ／Ｌの操作されたトランスアミナーゼポリペプチド；
（ｃ）約０．１〜３Ｍのイソプロピルアミン（ＩＰＭ）；
（ｄ）約０．１〜１０ｇ／Ｌのピリドキサールリン酸（ＰＬＰ）補助因子；
（ｅ）約０．０５〜０．２０Ｍのトリエタノールアミン（ＴＥＡ）緩衝液；
（ｆ）約１％〜約４５％のＤＭＳＯ；
（ｇ）約６〜９のｐＨ；および
（ｈ）約３０〜６５℃の温度
を含む、項目２４〜２８のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目５５）
前記好適な反応条件が、以下：
（ａ）約２０ｇ／Ｌ〜１００ｇ／Ｌの基質負荷；
（ｂ）約１〜５ｇ／Ｌの操作されたトランスアミナーゼポリペプチド；
（ｃ）約０．５〜２Ｍのイソプロピルアミン（ＩＰＭ）；
（ｄ）約０．２〜２ｇ／Ｌのピリドキサールリン酸（ＰＬＰ）補助因子；
（ｅ）約０．１ＭのＴＥＡ緩衝液；
（ｆ）約２５％のＤＭＳＯ；
（ｅ）約８のｐＨ；および
（ｆ）約４５〜６０℃の温度
を含む、項目２４〜２８のいずれか１項に記載のプロセス。