【手続補正書】
【提出日】平成28年3月11日(2016.3.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ．  ＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲに由来するか又はＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲの変異体に由来する核酸配列を含むか又はからなる少なくとも１つの５’−非翻訳領域エレメント（５’ＵＴＲエレメント）と、
ｂ．  少なくとも１つのオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）と、
ｃ． アルブミン遺伝子の３’ＵＴＲに由来するか又はアルブミン遺伝子の３’ＵＴＲの変異体に由来する核酸配列を含むか又はからなる少なくとも１つの３’ＵＴＲエレメントと、
を含むことを特徴とする人工核酸分子。
【請求項２】
少なくとも１つの３’ＵＴＲエレメントが、脊椎動物のアルブミン遺伝子の３’ＵＴＲ又はその変異体、好ましくは、哺乳類のアルブミン遺伝子の３’ＵＴＲ又はその変異体、より好ましくは、ヒトのアルブミン遺伝子の３’ＵＴＲ又はその変異体、更により好ましくはＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿０００４７７．５に係るヒトのアルブミン遺伝子の３’ＵＴＲ又はその変異体に由来する核酸配列を含むか又はからなる請求項１に記載の人工核酸分子。
【請求項３】
少なくとも１つの３’ＵＴＲエレメントが、少なくとも約５０ヌクレオチド、好ましくは少なくとも約７５ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも約１００ヌクレオチド、更により好ましくは少なくとも約１２５ヌクレオチド、最も好ましくは少なくとも約１５０ヌクレオチドの長さを有する請求項１から２のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項４】
５’ＵＴＲエレメントとオープンリーディングフレームとが、異種であり、且つ５’ＵＴＲが５’ＴＯＰモチーフを有しないか、又は例えば、５’ＴＯＰモチーフの挿入、欠失、又は置換によって、５’ＵＴＲが機能的５’ＴＯＰモチーフを含有しない請求項１から３のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項５】
５’ＵＴＲエレメントが、人工核酸分子からのタンパク質産生を増加させるのに好適である請求項１から４のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項６】
５’ＵＴＲエレメントが、ＴＯＰモチーフを含まず、好ましくは、ＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲに由来する核酸配列、好ましくは５’ＵＴＲエレメントが、その５’末端において、ＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲのＴＯＰモチーフの下流の位置１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０に位置するヌクレオチドで始まる請求項１から５のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項７】
ＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲに由来する核酸配列、好ましくは５’ＵＴＲエレメントが、その３’末端において、前記５’ＵＴＲが由来する遺伝子又はｍＲＮＡのオープンリーディングフレームの開始コドンの上流の位置１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０に位置するヌクレオチドで終わる請求項１から６のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項８】
ＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲに由来する核酸配列が、真核生物のＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲ又はその変異体に由来し、好ましくは植物又は動物のＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲ又はその変異体に由来し、より好ましくは脊索動物のＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲ又はその変異体に由来し、更により好ましくは脊椎動物のＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲ又はその変異体に由来し、最も好ましくは哺乳類のＴＯＰ遺伝子（例えば、ヒトのＴＯＰ遺伝子）の５’ＵＴＲ又はその変異体に由来する請求項１から７のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項９】
少なくとも１つの３’ＵＴＲエレメントと少なくとも１つの５’ＵＴＲエレメントとが、少なくとも相加的に、好ましくは相乗的に作用して、人工核酸分子からのタンパク質産生を増加させる請求項１から８のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項１０】
ｄ． ポリ（Ａ）配列及びポリアデニル化シグナルの少なくともいずれか
を更に含む請求項１から９のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項１１】
ポリアデニル化シグナルが、３’ＵＴＲエレメント内に位置する請求項１０に記載の人工核酸分子。
【請求項１２】
ポリアデニル化シグナルが、コンセンサス配列ＮＮ（Ｕ／Ｔ）ＡＮＡ（Ｎは、Ａ又はＵである）、好ましくはＡＡ（Ｕ／Ｔ）ＡＡＡ又はＡ（Ｕ／Ｔ）（Ｕ／Ｔ）ＡＡＡを含む請求項１０から１１のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項１３】
ポリアデニル化シグナル、好ましくはコンセンサス配列ＮＮＵＡＮＡが、３’ＵＴＲの３’末端の約５０ヌクレオチド未満上流に位置する請求項１０から１２のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項１４】
ポリ（Ａ）配列が、約２０アデニンヌクレオチド〜約３００アデニンヌクレオチド、好ましくは約４０アデニンヌクレオチド〜約２００アデニンヌクレオチド、より好ましくは約５０アデニンヌクレオチド〜約１００アデニンヌクレオチドの長さを有する請求項１０から１３のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項１５】
５’ＵＴＲエレメントが、リボソームラージタンパク質（ＲＰＬ）をコードしているＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲ又はリボソームラージタンパク質（ＲＰＬ）をコードしているＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲの変異体に由来し、且つ５’ＵＴＲが５’ＴＯＰモチーフを有しないか、又は例えば、５’ＴＯＰモチーフの挿入、欠失、又は置換によって、５’ＵＴＲが機能的５’ＴＯＰモチーフを含有しない請求項１から１４のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項１６】
５’ＵＴＲエレメントが、配列番号６７、２５９、１，２８４〜１，３１８、１，３４４、１，３４６、１，３４８〜１，３５４、１，３５７、１，３５８、１，４２１及び１，４２２のいずれかに係る核酸配列の５’ＵＴＲ、又は対応するＲＮＡ配列に対して少なくとも約４０％、好ましくは少なくとも約５０％、好ましくは少なくとも約６０％、好ましくは少なくとも約７０％、より好ましくは少なくとも約８０％、より好ましくは少なくとも約９０％、更により好ましくは少なくとも約９５％、更により好ましくは少なくとも約９９％の同一性を有する核酸配列（好ましくは、５’ＴＯＰモチーフを有しない）を含むか又はからなる、或いは、少なくとも１つの５’ＵＴＲエレメントが、配列番号６７、２５９、１，２８４〜１，３１８、１，３４４、１，３４６、１，３４８〜１，３５４、１，３５７、１，３５８、１，４２１及び１，４２２のいずれかに係る核酸配列の５’ＵＴＲ又は対応するＲＮＡ配列に対して少なくとも約４０％、好ましくは少なくとも約５０％、好ましくは少なくとも約６０％、好ましくは少なくとも約７０％、より好ましくは少なくとも約８０％、より好ましくは少なくとも約９０％、更により好ましくは少なくとも約９５％、更により好ましくは少なくとも約９９％の同一性を有する核酸配列の断片（好ましくは、５’ＴＯＰモチーフを有しない）を含むか又はからなる請求項１から１５のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項１７】
５’ＵＴＲエレメントが、リボソームタンパク質ラージ３２遺伝子（ＲＰＬ３２）、リボソームタンパク質ラージ３５遺伝子（ＲＰＬ３５）、リボソームタンパク質ラージ２１遺伝子（ＲＰＬ２１）、ＡＴＰシンターゼ、Ｈ＋輸送、ミトコンドリアＦ１複合体アルファサブユニット１、心筋（ＡＴＰ５Ａ１）遺伝子、ヒドロキシステロイド（１７−ベータ）デヒドロゲナーゼ４遺伝子（ＨＳＤ１７Ｂ４）、アンドロゲン誘導１遺伝子（ＡＩＧ１）、シトクロムｃオキシダーゼサブユニットＶＩｃ遺伝子（ＣＯＸ６Ｃ）、若しくはＮ−アシルスフィンゴシンアミドヒドロラーゼ（酸性セラミダーゼ）１遺伝子（ＡＳＡＨ１）、又はこれらの変異体、好ましくは、脊椎動物のリボソームタンパク質ラージ３２遺伝子（ＲＰＬ３２）、脊椎動物のリボソームタンパク質ラージ３５遺伝子（ＲＰＬ３５）、脊椎動物のリボソームタンパク質ラージ２１遺伝子（ＲＰＬ２１）、脊椎動物のＡＴＰシンターゼ、Ｈ＋輸送、ミトコンドリアＦ１複合体アルファサブユニット１、心筋（ＡＴＰ５Ａ１）遺伝子、脊椎動物のヒドロキシステロイド（１７−ベータ）デヒドロゲナーゼ４遺伝子（ＨＳＤ１７Ｂ４）、脊椎動物のアンドロゲン誘導１遺伝子（ＡＩＧ１）、脊椎動物のシトクロムｃオキシダーゼサブユニットＶＩｃ遺伝子（ＣＯＸ６Ｃ）、若しくは脊椎動物のＮ−アシルスフィンゴシンアミドヒドロラーゼ（酸性セラミダーゼ）１遺伝子（ＡＳＡＨ１）、又はこれらの変異体、より好ましくは、哺乳類のリボソームタンパク質ラージ３２遺伝子（ＲＰＬ３２）、リボソームタンパク質ラージ３５遺伝子（ＲＰＬ３５）、リボソームタンパク質ラージ２１遺伝子（ＲＰＬ２１）、哺乳類のＡＴＰシンターゼ、Ｈ＋輸送、ミトコンドリアＦ１複合体アルファサブユニット１、心筋（ＡＴＰ５Ａ１）遺伝子、哺乳類のヒドロキシステロイド（１７−ベータ）デヒドロゲナーゼ４遺伝子（ＨＳＤ１７Ｂ４）、哺乳類のアンドロゲン誘導１遺伝子（ＡＩＧ１）、哺乳類のシトクロムｃオキシダーゼサブユニットＶＩｃ遺伝子（ＣＯＸ６Ｃ）、若しくは哺乳類のＮ−アシルスフィンゴシンアミドヒドロラーゼ（酸性セラミダーゼ）１遺伝子（ＡＳＡＨ１）、又はこれらの変異体、最も好ましくは、ヒトのリボソームタンパク質ラージ３２遺伝子（ＲＰＬ３２）、ヒトのリボソームタンパク質ラージ３５遺伝子（ＲＰＬ３５）、ヒトのリボソームタンパク質ラージ２１遺伝子（ＲＰＬ２１）、ヒトのＡＴＰシンターゼ、Ｈ＋輸送、ミトコンドリアＦ１複合体アルファサブユニット１、心筋（ＡＴＰ５Ａ１）遺伝子、ヒトのヒドロキシステロイド（１７−ベータ）デヒドロゲナーゼ４遺伝子（ＨＳＤ１７Ｂ４）、ヒトのアンドロゲン誘導１遺伝子（ＡＩＧ１）、ヒトのシトクロムｃオキシダーゼサブユニットＶＩｃ遺伝子（ＣＯＸ６Ｃ）、若しくはヒトのＮ−アシルスフィンゴシンアミドヒドロラーゼ（酸性セラミダーゼ）１遺伝子（ＡＳＡＨ１）、又はこれらの変異体の５’ＵＴＲに由来する核酸配列を含むか又はからなり、好ましくは、前記５’ＵＴＲエレメントが、前記遺伝子の５’ＴＯＰモチーフを含まない請求項１から１６のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項１８】
５’ＵＴＲエレメントが、配列番号１，３６８若しくは１，４１２〜１，４２０に係る核酸配列又は対応するＲＮＡ配列に対して少なくとも約４０％、好ましくは少なくとも約５０％、好ましくは少なくとも約６０％、好ましくは少なくとも約７０％、より好ましくは少なくとも約８０％、より好ましくは少なくとも約９０％、更により好ましくは少なくとも約９５％、更により好ましくは少なくとも約９９％の同一性を有する核酸配列を含むか又はからなる、或いは、少なくとも１つの５’ＵＴＲエレメントが、配列番号１，３６８若しくは１，４１２〜１，４２０に係る核酸配列又は対応するＲＮＡ配列に対して少なくとも約４０％、好ましくは少なくとも約５０％、好ましくは少なくとも約６０％、好ましくは少なくとも約７０％、より好ましくは少なくとも約８０％、より好ましくは少なくとも約９０％、更により好ましくは少なくとも約９５％、更により好ましくは少なくとも約９９％の同一性を有する核酸配列の断片を含むか又はからなる請求項１から１７のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項１９】
断片が、前記断片が由来する完全長配列の少なくとも２０％、好ましくは少なくとも３０％、より好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％、更により好ましくは少なくとも６０％、更により好ましくは少なくとも７０％、更により好ましくは少なくとも８０％、最も好ましくは少なくとも９０％を表す、前記完全長配列における連続する一続きのヌクレオチドに対応する連続する一続きのヌクレオチドからなる請求項１６及び１８のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項２０】
少なくとも１つの５’ＵＴＲエレメントが、少なくとも約２０ヌクレオチド、好ましくは少なくとも約３０ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも約４０ヌクレオチドの長さを有する請求項１から１９のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項２１】
少なくとも１つの３’ＵＴＲエレメントが、配列番号１，３６９〜１，３９３から選択される核酸配列又は対応するＲＮＡ配列に対して少なくとも約４０％、好ましくは少なくとも約５０％、好ましくは少なくとも約６０％、好ましくは少なくとも約７０％、より好ましくは少なくとも約８０％、より好ましくは少なくとも約９０％、更により好ましくは少なくとも約９５％、更により好ましくは少なくとも約９９％の同一性を有する核酸配列を含むか又はからなる、或いは、少なくとも１つの３’ＵＴＲエレメントが、配列番号１，３６９〜１，３９３から選択される核酸配列又は対応するＲＮＡ配列に対して少なくとも約４０％、好ましくは少なくとも約５０％、好ましくは少なくとも約６０％、好ましくは少なくとも約７０％、より好ましくは少なくとも約８０％、より好ましくは少なくとも約９０％、更により好ましくは少なくとも約９５％、更により好ましくは少なくとも約９９％の同一性を有する核酸配列の断片を含むか又はからなる請求項１から２０のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項２２】
断片が、前記断片が由来する完全長配列の少なくとも２０％、好ましくは少なくとも３０％、より好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％、更により好ましくは少なくとも６０％、更により好ましくは少なくとも７０％、更により好ましくは少なくとも８０％、最も好ましくは少なくとも９０％を表す、前記完全長配列における連続する一続きのヌクレオチドに対応する連続する一続きのヌクレオチドからなる請求項２１に記載の人工核酸分子。
【請求項２３】
断片が、少なくとも約５０ヌクレオチド、好ましくは少なくとも約７５ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも約１００ヌクレオチド、更により好ましくは少なくとも約１２５ヌクレオチド、最も好ましくは少なくとも約１５０ヌクレオチドの長さを有する請求項２１から２２のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項２４】
少なくとも１つの３’ＵＴＲエレメントが、少なくとも約５０ヌクレオチド、好ましくは少なくとも約７５ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも約１００ヌクレオチド、更により好ましくは少なくとも約１２５ヌクレオチド、最も好ましくは少なくとも約１５０ヌクレオチドの長さを有する請求項１から２３のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項２５】
オープンリーディングフレームが、レポータータンパク質（例えば、ＧＦＰタンパク質、ルシフェラーゼタンパク質、グロビンタンパク質、ヒト成長ホルモン、又はヒトのアルブミン）をコードしておらず、好ましくは、アルブミンをコードしていない請求項１から２４のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項２６】
５’−キャップ構造、ポリ（Ｃ）配列、及び／又はＩＲＥＳモチーフを更に含む請求項１から２５のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項２７】
プロモーター含有配列を更に含む請求項１から２６のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項２８】
人工核酸分子、好ましくはオープンリーディングフレームが、少なくとも部分的にＧ／Ｃ改変されており、好ましくは、前記オープンリーディングフレームのＧ／Ｃ含量が、野生型オープンリーディングフレームに比べて増加している請求項１から２７のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項２９】
オープンリーディングフレームが、コドンが最適化されている領域を含み、好ましくは、前記オープンリーディングフレームのコドンが最適化されている請求項１から２８のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項３０】
ＲＮＡ、好ましくはｍＲＮＡの分子である請求項１から２９のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項３１】
ａ． ＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲに由来するか又はＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲの変異体に由来する核酸配列を含むか又はからなる少なくとも１つの５’−非翻訳領域エレメント（５’ＵＴＲエレメント）と、
ｂ． 少なくとも１つのオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）及び少なくとも１つのクローニングサイトの少なくともいずれかと、
ｃ． アルブミン遺伝子の３’ＵＴＲに由来するか又はアルブミン遺伝子の３’ＵＴＲの変異体に由来する核酸配列を含むか又はからなる少なくとも１つの３’ＵＴＲエレメントと、
を含むことを特徴とするベクター。
【請求項３２】
５’ＵＴＲエレメントとオープンリーディングフレームとが、異種である請求項３１に記載のベクター。
【請求項３３】
ＲＮＡベクター又はＤＮＡベクターである請求項３１から３２のいずれかに記載のベクター。
【請求項３４】
プラスミドベクター又はウイルスベクター、好ましくは、プラスミドベクターである請求項３１から３３のいずれかに記載のベクター。
【請求項３５】
請求項１から３０のいずれかに記載の人工核酸分子を含むか又はコードしている請求項３１から３４のいずれかに記載のベクター。
【請求項３６】
環状分子である請求項３１から３５のいずれかに記載のベクター。
【請求項３７】
５’→３’方向において、コード鎖のＯＲＦ、ポリ（Ａ）配列、又は３’ＵＴＲエレメントに続いて環状ベクター分子を線形化するための制限酵素部位が配置されている請求項３６に記載のベクター。
【請求項３８】
請求項１から３０のいずれかに記載の人工核酸分子又は請求項３１から３７のいずれかに記載のベクターを含み、好ましくは哺乳類細胞であり、より好ましくは哺乳類の被験体（好ましくは、ヒトの被験体）の単離細胞であることを特徴とする細胞。
【請求項３９】
請求項１から３０のいずれかに記載の人工核酸分子、請求項３１から３７のいずれかに記載のベクター、又は請求項３８に記載の細胞を含み、好ましくは、１以上の薬学的に許容できる希釈剤、賦形剤、及び１以上のアジュバントの少なくともいずれかを更に含むことを特徴とする医薬組成物。
【請求項４０】
医薬として使用するための請求項１から３０のいずれかに記載の人工核酸分子、請求項３１から３７のいずれかに記載のベクター、請求項３８に記載の細胞、又は請求項３９に記載の医薬組成物。
【請求項４１】
ワクチンとして又は遺伝子治療において使用するための請求項１から３０のいずれかに記載の人工核酸分子、請求項３１から３７のいずれかに記載のベクター、請求項３８に記載の細胞、又は請求項３９に記載の医薬組成物。