【誤訳訂正書】
【提出日】平成28年6月13日(2016.6.13)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
次のステップを含むシアル酸誘導体の製造方法：
（ａ）単一の反応器で、シチジン５’−一リン酸（ＣＭＰ）、アセチルホスフェート、ヌクレオチドトリホスフェート（ＮＴＰ）、Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ピルビン酸（Ｓｏｄｉｕｍ  ｐｙｒｕｖａｔｅ）、及びガラクトース残基を含む化合物を基質として添加し、シチジン５’−一リン酸キナーゼ（ＣＭＫ）、アセテートキナーゼ（ＡＣＫ）、ＣＭＰ−Ｎ−アセチルノイラミン酸合成酵素（ＮＥＵ）、Ｎ−アセチルグルコサミン−２−エピメラーゼ（ＮＡＮＥ）、Ｎ−アセチルノイラミン酸アルドラーゼ（ＮＡＮ）および配列番号１のアミノ酸配列を有するα-２，３−シアル酸転移酵素の３１３番目アミノ酸のＲからＮ、Ｈ、Ｔ、もしくはＹへの置換または配列番号１のアミノ酸配列を有するα-２，３−シアル酸転移酵素の２６５番目アミノ酸のＴからＮもしくはＳへの置換を含むα-２，３−シアル酸転移酵素変異体、あるいは配列番号１３のアミノ酸配列を有するα-２，６−シアル酸転移酵素の４１１番目アミノ酸のＩからＴへの置換または配列番号１３のアミノ酸配列を有するα-２，６−シアル酸転移酵素の４３３番目アミノ酸のＬからＳもしくはＴへの置換を含むα-２，６−シアル酸転移酵素変異体を添加した反応液を反応させて、シアリルラクトースまたはガラクトース残基を含む化合物のシアル酸誘導体を製造するステップ；並びに
（ｂ）前記製造されたシアリルラクトースまたはガラクトース残基を含む化合物のシアル酸誘導体を取得するステップ。
【請求項２】
前記α-２，３−シアル酸転移酵素は配列番号２〜６のいずれか一つのアミノ酸配列を有することを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記α-２，６−シアル酸転移酵素は配列番号１４〜１８のいずれか一つのアミノ酸配列を有することを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記反応は２５〜３８℃で行うことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項５】
反応液のｐＨは７〜９であることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記Ｎ−アセチルグルコサミン−２−エピメラーゼ（ＮＡＮＥ）は配列番号２５のアミノ酸配列を有することを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記ガラクトース残基を含む化合物は、単糖、オリゴ糖、リンカー、フラボノイド、抗癌剤、抗生剤、免疫抑制剤および抗体で構成される群から選択される化合物のガラクトースを含む誘導体であることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１３】
前記目的を達成するために、本発明は、（ａ）単一の反応器で、シチジン５’−一リン酸（Ｃｙｔｉｄｉｎｅ  ５’−ｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ、ＣＭＰ）、ＮＴＰ（Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｔｒｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、ピルビン酸（Ｓｏｄｉｕｍ  ｐｙｒｕｖａｔｅ）、ガラクトース残基を含む化合物を基質として添加し、シチジン５’−一リン酸キナーゼ（ｃｙｔｉｄｉｎｅ  ５’−ｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｋｉｎａｓｅ、ＣＭＫ）、アセテートキナーゼ（ａｃｅｔａｔｅ  ｋｉｎａｓｅ、ＡＣＫ）、ＣＭＰ−Ｎ−アセチルノイラミン酸合成酵素（ＣＭＰ−ＮｅｕＡｃ  ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ、ＮＥＵ）、Ｎ−アセチルグルコサミン−２−エピメラーゼ（ＧｌｃＮＡｃ−２−ｅｐｉｍｅｒａｓｅ、ＮＡＮＥ）、Ｎ−アセチルノイラミン酸アルドラーゼ（ＮｅｕＡｃ  ａｌｄｏｌａｓｅ、ＮＡＮ）およびシアル酸転移酵素を添加した反応液を反応させて、シアリルラクトース（Ｓｉａｌｙｌｌａｃｔｏｓｅ）またはガラクトース残基を含む化合物のシアル酸誘導体を製造するステップと、（ｂ）前記製造されたシアリルラクトースまたはガラクトース残基を含む化合物のシアル酸誘導体を取得するステップと、を含むシアル酸誘導体の製造方法を提供する。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２４】
本発明の一様態において、シアリルラクトースは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで安価の基質であるＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ピルビン酸（Ｓｏｄｉｕｍ  ｐｙｒｕｖａｔｅ）、シチジン５’−一リン酸（ＣＭＰ）などからワンポット反応で生産する。７．５ｍＭ／ｈｒ〜８．５ｍＭ／ｈｒのＣＭＰ−Ｎ−アセチルノイラミン酸の生成速度下でシアリルラクトースの転換率は、シチジン５’−一リン酸（ＣＭＰ）を基準として６５０％であり、Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）から８１％である。９８％以上の純度を有するシアリルラクトースの精製収率は７５％である。Ｉｎ  ｓｉｔｕのシチジン５’−一リン酸（ＣＭＰ）再使用システムによるシアリルラクトース生産は、細胞抽出液酵素を利用して成功的に行われた。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１０７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１０７】
反応混合液［５〜１０ｍＭシチジン５’−一リン酸（ＣＭＰ、Ｓｈａｎｇｈａｉ  ＱＺＵ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  ＆  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、２０〜８０ｍＭ  Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ、Ｓｈａｎｇｈａｉ  Ｊｉｕｂａｎｇ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ）、４０〜１２０ｍＭピルビン酸（Ｓｏｄｉｕｍ  ｐｙｒｕｖａｔｅ、ＺＭＣ  Ｉｎｃ）、４０〜１２０ｍＭラクトース（Ｌａｃｔｏｓｅ、ＤＭＶ  Ｉｎｃ）、２０ｍＭ  Ｍｇｃｌ２・Ｈ２Ｏ（Ｄｕｋｓａｎ）、１ｍＭ  ＮＴＰ（ｓｉｇｍａ）、８０〜３００ｍＭアセチルホスフェート（Ａｃｅｔｙｌ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ、ｓｉｇｍａ）、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ＨＣlバッファー（ｐＨ７．０）、３７℃  ２Ｍ  ＮａＯＨを使用してｐＨ６．５〜８．０維持］をシチジン５’−一リン酸キナーゼ（ＣＭＫ）、アセテートキナーゼ（ＡＣＫ）、Ｎ−アセチルノイラミン酸アルドラーゼ（ＮＡＮ）、ＣＭＰ−Ｎ−アセチルノイラミン酸シンテターゼ（ＮＥＵ）およびＮ−アセチルグルコサミン−２−エピメラーゼ（ＮＡＮＥ）、２，３−シアル酸転移酵素（ＰＳＴ２，３ｓｔ  Ｒ３１３Ｎ）を混合した後、反応器で撹拌して５〜１２時間反応させた。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１１３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１１３】
既存のツーポット方法は、反応混合液［５０ｍＭシチジン５’−一リン酸（ＣＭＰ）、１００ｍＭ  Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、１００ｍＭピルビン酸（Ｓｏｄｉｕｍ  ｐｙｒｕｖａｔｅ）、２０ｍＭ  Ｍｇｃｌ２・Ｈ２Ｏ、１ｍＭ  ＮＴＰ、３００ｍＭアセチルホスフェート、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ＨＣｌバッファー（ｐＨ７．０）７Ｌ、３７℃  ２Ｍ  ＮａＯＨを使用してｐＨ６．５〜８．０維持］を前記実施例２で製造したシチジン５’−一リン酸キナーゼ（ＣＭＫ）、アセテートキナーゼ（ＡＣＫ）、Ｎ−アセチルノイラミン酸アルドラーゼ（ＮＡＮ）、ＣＭＰ−Ｎ−アセチルノイラミン酸シンテターゼ（ＮＥＵ）およびＮ−アセチルグルコサミン−２−エピメラーゼ（ＮＡＮＥ）を混合した後、反応器で撹拌して５〜１２時間反応させて、ＣＭＰ−Ｎ−アセチルノイラミン酸を合成した。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１１８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１１８】
反応混合液［５〜１０ｍＭシチジン５’−一リン酸（ＣＭＰ）、２０〜８０ｍＭ  Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、４０〜１２０ｍＭピルビン酸（Ｓｏｄｉｕｍ  ｐｙｒｕｖａｔｅ）、４０〜１２０ｍＭガラクトース２０ｍＭ  Ｍｇｃｌ２・Ｈ２Ｏ、１ｍＭ  ＮＴＰ、８０〜３００ｍＭアセチルホスフェート、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ＨＣｌ  バッファー（ｐＨ７．０）、３７℃  ２Ｍ  ＮａＯＨを使用してｐＨ６．５〜８．０維持］をシチジン５’−一リン酸キナーゼ（ＣＭＫ）、アセテートキナーゼ（ＡＣＫ）、Ｎ−アセチルノイラミン酸アルドラーゼ（ＮＡＮ）、ＣＭＰ−Ｎ−アセチルノイラミン酸シンテターゼ（ＮＥＵ）およびＮ−アセチルグルコサミン−２−エピメラーゼ（ＮＡＮＥ）、２，３−シアル酸転移酵素（ＰＳＴ２，３ｓｔ  Ｒ３１３Ｎ）を混合した後、反応器で撹拌して５〜１２時間反応させた。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１２１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１２１】
反応混合液［５〜１０ｍＭシチジン５’−一リン酸（ＣＭＰ）、２０〜８０ｍＭ  Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、４０〜１２０ｍＭピルビン酸（Ｓｏｄｉｕｍ  ｐｙｒｕｖａｔｅ）、４０〜１２０ｍＭガラクトース末端のアミノヘキシルリンカー、２０ｍＭ  Ｍｇｃｌ２・Ｈ２Ｏ、１ｍＭ  ＮＴＰ、８０〜３００ｍＭアセチルホスフェート、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ＨＣｌ  バッファー（ｐＨ７．０）、３７℃  ２Ｍ  ＮａＯＨを使用してｐＨ６．５〜８．０維持］をシチジン５’−一リン酸キナーゼ（ＣＭＫ）、アセテートキナーゼ（ＡＣＫ）、Ｎ−アセチルノイラミン酸アルドラーゼ（ＮＡＮ）、ＣＭＰ−Ｎ−アセチルノイラミン酸シンテターゼ（ＮＥＵ）およびＮ−アセチルグルコサミン−２−エピメラーゼ（ＮＡＮＥ）、２，３−シアル酸転移酵素をそれぞれ混合した後、反応器で撹拌して５〜１２時間反応させた。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１２５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１２５】
反応混合液［５〜１０ｍＭシチジン５’−一リン酸（ＣＭＰ）、２０〜８０ｍＭ  Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、４０〜１２０ｍＭピルビン酸（Ｓｏｄｉｕｍ  ｐｙｒｕｖａｔｅ）、４０〜１２０ｍＭフラボノイドＣＳＨ−Ｉ−５４のラクトース誘導体、２０ｍＭ  Ｍｇｃｌ２・Ｈ２Ｏ、１ｍＭ  ＮＴＰ、８０〜３００ｍＭアセチルホスフェート、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ＨＣｌ  バッファー（ｐＨ７．０）、３７℃  ２Ｍ  ＮａＯＨを使用してｐＨ６．５〜８．０維持］をシチジン５’−一リン酸キナーゼ（ＣＭＫ）、アセテートキナーゼ（ＡＣＫ）、Ｎ−アセチルノイラミン酸アルドラーゼ（ＮＡＮ）、ＣＭＰ−Ｎ−アセチルノイラミン酸シンテターゼ（ＮＥＵ）およびＮ−アセチルグルコサミン−２−エピメラーゼ（ＮＡＮＥ）、２，３−シアル酸転移酵素をそれぞれ混合した後、反応器で撹拌して５〜１２時間反応させた。
【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１３３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１３３】
反応混合液［５〜１０ｍＭシチジン５’−一リン酸（ＣＭＰ）、２０〜８０ｍＭ  Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、４０〜１２０ｍＭピルビン酸（Ｓｏｄｉｕｍ  ｐｙｒｕｖａｔｅ）、４０〜１２０ｍＭタクロリムスガラクトース誘導体、２０ｍＭ  Ｍｇｃｌ２・Ｈ２Ｏ、１ｍＭ  ＮＴＰ、８０〜３００ｍＭアセチルホスフェート、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ＨＣｌ  バッファー（ｐＨ７．０）、３７℃  ２Ｍ  ＮａＯＨを使用してｐＨ６．５〜８．０維持］をシチジン５’−一リン酸キナーゼ（ＣＭＫ）、アセテートキナーゼ（ＡＣＫ）、Ｎ−アセチルノイラミン酸アルドラーゼ（ＮＡＮ）、ＣＭＰ−Ｎ−アセチルノイラミン酸シンテターゼ（ＮＥＵ）およびＮ−アセチルグルコサミン−２−エピメラーゼ（ＮＡＮＥ）、２，３−シアル酸転移酵素をそれぞれ混合した後、反応器で撹拌して５〜１２時間反応させた。
【誤訳訂正１０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１４０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１４０】
反応混合液［５〜１０ｍＭシチジン５’−一リン酸（ＣＭＰ）、２０〜８０ｍＭ  Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、４０〜１２０ｍＭピルビン酸（Ｓｏｄｉｕｍ  ｐｙｒｕｖａｔｅ）、４０〜１２０ｍＭタキソールガラクトース誘導体、２０ｍＭ  Ｍｇｃｌ２・Ｈ２Ｏ、１ｍＭ  ＮＴＰ、８０〜３００ｍＭアセチルホスフェート、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ＨＣｌ  バッファー（ｐＨ７．０）、３７℃  ２Ｍ  ＮａＯＨを使用してｐＨ６．５〜８．０維持］をシチジン５’−一リン酸キナーゼ（ＣＭＫ）、アセテートキナーゼ（ＡＣＫ）、Ｎ−アセチルノイラミン酸アルドラーゼ（ＮＡＮ）、ＣＭＰ−Ｎ−アセチルノイラミン酸シンテターゼ（ＮＥＵ）およびＮ−アセチルグルコサミン−２−エピメラーゼ（ＮＡＮＥ）、２，３−シアル酸転移酵素をそれぞれ混合した後、反応器で撹拌して５〜１２時間反応させた。
【誤訳訂正１１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１４７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１４７】
反応混合液［５〜１０ｍＭシチジン５’−一リン酸（ＣＭＰ）、２０〜８０ｍＭ  Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、４０〜１２０ｍＭピルビン酸（Ｓｏｄｉｕｍ  ｐｙｒｕｖａｔｅ）、４０〜１２０ｍＭバンコマイシンガラクトース誘導体、２０ｍＭ  Ｍｇｃｌ２・Ｈ２Ｏ、１ｍＭ  ＮＴＰ、８０〜３００ｍＭアセチルホスフェート、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ＨＣｌバッファー（ｐＨ７．０）、３７℃  ２Ｍ  ＮａＯＨを使用してｐＨ６．５〜８．０維持］をシチジン５’−一リン酸キナーゼ（ＣＭＫ）、アセテートキナーゼ（ＡＣＫ）、Ｎ−アセチルノイラミン酸アルドラーゼ（ＮＡＮ）、ＣＭＰ−Ｎ−アセチルノイラミン酸シンテターゼ（ＮＥＵ）およびＮ−アセチルグルコサミン−２−エピメラーゼ（ＮＡＮＥ）、２，３−シアル酸転移酵素をそれぞれ混合した後、反応器で撹拌して５〜１２時間反応させた。