【手続補正書】
【提出日】平成28年5月2日(2016.5.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＨＥＲ２に結合する単離された一価抗体構築物であって、
ＨＥＲ２に一価的に結合する抗原結合ポリペプチド構築物と、
２つの単量体Ｆｃポリペプチドを含む二量体Ｆｃポリペプチド構築物であって、それぞれがＣＨ３ドメインを含み、単量体Ｆｃポリペプチドのうちの１つが抗原結合ポリペプチド構築物に融合される、二量体Ｆｃポリペプチド構築物と
を含み、
該抗体構築物が、標的細胞によってインターナライズされ、
該構築物が、ＨＥＲ２に結合する対応する単一特異性二価抗体構築物と比較して、該標的細胞上で提示されるＨＥＲ２への結合密度およびＢｍａｘの増加を示し、かつ
該構築物が、ＫＤを上回りかつ飽和状態の等モル濃度において、対応する単一特異性二価抗体構築物と比較して、より高いＡＤＣＣ、より高いＡＤＣＰ、およびより高いＣＤＣのうちの少なくとも１つを示す、単離された一価抗体構築物。
【請求項２】
前記抗体構築物が、
（ｉ）ＦｃＲｎに結合するが、２つの抗原結合領域を持つ対応する単一特異性二価抗体構築物と比較して、より高い分布容積（Ｖｓｓ）を示す；
（ｉｉ）１つ以上の薬物分子と結合されている；および／または
（ｉｉｉ）アビディティーを示さない、
請求項１に記載の単離された一価抗体構築物。
【請求項３】
前記抗原結合ポリペプチド構築物が、ＨＥＲ２に結合することができるＦａｂ、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ、またはポリペプチドドメインである、請求項１に記載の単離された一価抗体構築物。
【請求項４】
前記抗体構築物が、対応する単一特異性二価抗体構築物のＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、およびＣＤＣのうちの少なくとも１つの約１０５％超を有するか、少なくとも約１２５％を有するか、少なくとも約１５０％を有するか、または少なくとも約３００％を有する、請求項１または２に記載の単離された一価抗体構築物。
【請求項５】
前記結合密度およびＢｍａｘの増加が、対応する単一特異性二価抗体構築物の結合密度およびＢｍａｘの少なくとも約１２５％であるか、少なくとも約１５０％であるか、または少なくとも約２００％である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の単離された一価抗体構築物。
【請求項６】
前記二量体Ｆｃ構築物が、
（ｉ）変異型ＣＨ３ドメインを含むヘテロ二量体Ｆｃ構築物であり、任意で、
（ａ）該変異型ＣＨ３ドメインが、ネイティブのホモ二量体Ｆｃ領域に相当する安定性を持つヘテロ二量体の形成を促進するアミノ酸突然変異体を含む、および／もしくは
（ｂ）該変異型ＣＨ３ドメインが、約７０℃以上、約７５℃以上、もしくは約８０℃以上の融解温度（Ｔｍ）を有する；
（ｉｉ）Ｆｃγ受容体の選択的結合を促進するアミノ酸修飾を含む変異型ＣＨ２ドメインをさらに含む；ならびに／または
（ｉｉｉ）約７５％を超える、約８０％を超える、もしくは約９０％を超える純度で形成されたヘテロ二量体Ｆｃ構築物である、
請求項１〜５のいずれか一項に記載の単離された一価抗体構築物。
【請求項７】
前記標的細胞が、低レベル、中程度レベルもしくは高レベルでＨＥＲ２を発現するか、またはプロゲステロン陰性細胞もしくはエストロゲン受容体陰性細胞である；ならびに／または
前記抗原結合ポリペプチド構築物が、
（ｉ）リンカーによって単量体Ｆｃポリペプチドに融合される、
（ｉｉ）ＨＥＲ２細胞外ドメイン（ＥＣＤ）に結合し、該ＥＣＤが、ＥＣＲ１、２、３および４のうちの少なくとも１つである、ならびに／または
（ｉｉｉ）グリコシル化一価抗体構築物もしくは糖改変アフコシル化一価抗体構築物であり、任意で、該抗体構築物が、
（ａ）（Ｉ）重鎖可変ドメインおよび第１のＦｃドメインポリペプチドを含む第１の重鎖ポリペプチドをコードする、第１のＤＮＡ配列と、
（ＩＩ）第２のＦｃドメインポリペプチドを含む第２の重鎖ポリペプチドをコードする第２のＤＮＡ配列であって、第２の重鎖ポリペプチドが可変ドメインを欠いている、第２のＤＮＡ配列と、
（ＩＩＩ）軽鎖可変ドメインを含む軽鎖ポリペプチドをコードする、第３のＤＮＡ配列と
を用いて、該第１のＤＮＡ配列、該第２のＤＮＡ配列、および該第３のＤＮＡ配列が既定の比率で哺乳類細胞にトランスフェクトされるように、少なくとも１つの安定した哺乳類細胞をトランスフェクトする段階、ならびに
（ｂ）重鎖および軽鎖ポリペプチドが少なくとも１つの安定した哺乳類細胞内で所望のグリコシル化一価非対称抗体として発現されるように、少なくとも１つの哺乳類細胞内の該第１のＤＮＡ配列、該第２のＤＮＡ配列、および該第３のＤＮＡ配列を翻訳する段階であって、任意で、該哺乳類細胞が、ＶＥＲＯ、ＨｅＬａ、ＨＥＫ、ＮＳ０、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）、Ｗ１３８、ＢＨＫ、ＣＯＳ−７、Ｃａｃｏ−２およびＭＤＣＫ細胞、ならびにそれらのサブクラスおよび変異体からなる群より選択される、段階
を含む方法によって、安定した哺乳類細胞内で生成される、
請求項１〜６のいずれか一項に記載の単離された一価抗体構築物。
【請求項８】
（ａ）1つの単量体Ｆｃポリペプチドが、抗原結合ポリペプチド構築物に融合され、突然変異体Ｔ３５０Ｖ＿Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖを含み、他の単量体Ｆｃポリペプチドが、突然変異体Ｔ３５０Ｖ＿Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｌ＿Ｔ３９４Ｗを含むか；
（ｂ）1つの単量体Ｆｃポリペプチドが、抗原結合ポリペプチド構築物に融合され、突然変異体Ｔ３５０Ｖ＿Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｍ＿Ｔ３９４Ｗを含み、他の単量体Ｆｃポリペプチドが、突然変異体Ｔ３５０Ｖ＿Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖを含むか；
（ｃ）1つの単量体Ｆｃポリペプチドが、抗原結合ポリペプチド構築物に融合され、突然変異体Ｔ３５０Ｖ＿Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖを含み、他の単量体Ｆｃポリペプチドが、突然変異体Ｔ３５０Ｖ＿Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｌ＿Ｔ３９４Ｗを含むか；
（ｄ）1つの単量体Ｆｃポリペプチドが、抗原結合ポリペプチド構築物に融合され、突然変異体Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖを含み、他の単量体Ｆｃポリペプチドが、突然変異体Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｌ＿Ｔ３９４Ｗを含むか；または
（ｅ）1つの単量体Ｆｃポリペプチドが、突然変異体Ｌ３５１Ｙ＿Ｓ４００Ｅ＿Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖを含み、他の単量体Ｆｃポリペプチドが、突然変異体Ｔ３６６Ｉ＿Ｎ３９０Ｒ＿Ｋ３９２Ｍ＿Ｔ３９４Ｗを含む、抗原結合ポリペプチドである、
請求項１〜７のいずれか一項に記載の単離された一価抗体構築物。
【請求項９】
前記一価抗体構築物が、
（ａ）配列番号：１４に示される最終タンパク質生成物配列を含み、シグナルペプチド配列を含まない、軽鎖ポリペプチド、
配列番号：１２に示される最終タンパク質生成物配列を含み、シグナルペプチド配列を含まない、第１の重鎖ポリペプチド、および
配列番号：１６に示される最終タンパク質生成物配列を含み、シグナルペプチド配列を含まない、第２の重鎖ポリペプチド
を含むか；
（ｂ）配列番号：２２に示される最終タンパク質生成物配列を含み、シグナルペプチド配列を含まない、軽鎖ポリペプチド、
配列番号：１８に示される最終タンパク質生成物配列を含み、シグナルペプチド配列を含まない、第１の重鎖ポリペプチド、および
配列番号：２０に示される最終タンパク質生成物配列を含み、シグナルペプチド配列を含まない、第２の重鎖ポリペプチド
を含むか；
（ｃ）配列番号：４４に示される最終タンパク質生成物配列を含み、シグナルペプチド配列を含まない、軽鎖ポリペプチド、
配列番号：４０に示される最終タンパク質生成物配列を含み、シグナルペプチド配列を含まない、第１の重鎖ポリペプチド、および
配列番号：４２に示される最終タンパク質生成物配列を含み、シグナルペプチド配列を含まない、第２の重鎖ポリペプチド
を含むか；
（ｄ）配列番号：５０に示される最終タンパク質生成物配列を含み、シグナルペプチド配列を含まない、軽鎖ポリペプチド、
配列番号：４６に示される最終タンパク質生成物配列を含み、シグナルペプチド配列を含まない、第１の重鎖ポリペプチド、および
配列番号：４８に示される最終タンパク質生成物配列を含み、シグナルペプチド配列を含まない、第２の重鎖ポリペプチド
を含むか；または
（ｅ）配列番号：３６に示される最終タンパク質生成物配列を含み、シグナルペプチド配列を含まない、第１のポリペプチド、および
配列番号：３８に示される最終タンパク質生成物配列を含み、シグナルペプチド配列を含まない、第２のポリペプチド
を含む、
請求項１〜７のいずれか一項に記載の単離された一価抗体構築物。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか一項に記載の単離された一価抗体構築物をコードする核酸、または該核酸を含むベクター。
【請求項１１】
請求項１０に記載の単離された一価抗体構築物をコードする核酸またはベクターを含む、宿主細胞。
【請求項１２】
請求項１〜９のいずれか一項に記載の単離された一価抗体構築物を調製する方法であって、
（ａ）該一価抗体構築物をコードする核酸を含む宿主細胞を培養する段階、および
（ｂ）該宿主細胞培養物から該一価抗体構築物を回収する段階
を含む、方法。
【請求項１３】
請求項１〜９のいずれか一項に記載の一価抗体構築物および薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
【請求項１４】
患者における癌を治療する方法に使用するための、請求項１〜９のいずれか一項に記載の一価抗体構築物を含む医薬組成物。
【請求項１５】
（ｉ）前記方法が腫瘍の成長を阻害するか、腫瘍を縮小させるか、もしくは腫瘍を死滅させる；
（ｉｉ）前記癌の細胞が低ＨＥＲ２発現細胞である； 
（ｉｉｉ）前記癌が乳癌であり、任意で、前記患者がトラスツズマブ、ペルツズマブ、ＴＤＭ１、および抗ＨＥＲ二価抗体のうちの１つ以上を用いた治療に部分的に応答性であるか、もしくは応答しない；ならびに／または
（ｉｖ）前記抗体構築物が、別の治療に加えて、癌の治療のために提供される、
請求項１４に記載の医薬組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、米国特許法第１１９条（ｅ）に基づき、２０１２年５月１０日に出願された、米国仮特許出願第６１／６４５５４７号、２０１２年１１月２日に出願された、米国仮特許出願第６１／７２２０７０号、２０１２年７月１３日に出願された、米国仮特許出願第６１／６７１６４０号、および２０１３年２月８日に出願された、米国仮特許出願第６１／７６２８１２号の利益を主張するものであり、そのそれぞれはその全体が参照することにより本明細書に組み込まれる。
配列表
本願は、ASCII形式でEFS-Webを介して提出されかつその全体が参照により本明細書に組み込まれる配列表を含む。2013年6月13日に作成された当該ASCIIのコピーは、40252-722.601_SL.txtという名称であり、134,043バイトのサイズである。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３７】
[本発明1001]
単離された一価抗体構築物であって、
抗原に一価的に結合する抗原結合ポリペプチド構築物と、
それぞれがＣＨ3ドメインを含む2つの単量体Ｆｃポリペプチドを含む二量体Ｆｃポリペプチド構築物であって、1つの前記単量体Ｆｃポリペプチドが、前記抗原結合ポリペプチド構築物からの少なくとも1つのポリペプチドに融合する、二量体Ｆｃポリペプチド構築物と
を含み、
前記一価抗体構築物が、
2つの抗原結合領域を持つ対応する単一特異性二価抗体構築物と比較して増加した結合密度およびＢｍａｘで、
前記単一特異性二価抗体構築物に相当する解離定数（Ｋｄ）で、
前記単一特異性二価抗体構築物のものに相当するか、またはより遅いオフ速度で、前記抗原を提示する標的細胞に選択的および／または特異的に結合し、
前記一価抗体構築物が、前記単一特異性二価抗体構築物に相当する生物物理学的およびインビボ安定性と、前記単一特異性二価抗体構築物に相当するか、またはそれを超えるオンターゲット細胞傷害性と、を示す、前記単離された一価抗体構築物。
[本発明1002]
同族のリガンドが前記標的抗原に結合することを遮断する、本発明1001の単離された一価抗体構築物。
[本発明1003]
前記同族リガンドの前記標的抗原への結合を遮断しない、本発明1001の単離された一価抗体構築物。
[本発明1004]
1：1の抗体対標的比において、単一特異性二価抗体に対する結合密度およびＢｍａｘの増加が、前記抗体の観測される平衡定数（Ｋｄ）を超えて飽和濃度までの濃度で観測される、本発明1001の単離された一価抗体構築物。
[本発明1005]
前記抗体の前記観測される平衡定数（Ｋｄ）を超えて飽和濃度までの濃度で、前記対応する二価抗体構築物と比較してより高いＡＤＣＣ、より高いＡＤＣＰ、およびより高いＣＤＣ効果のうちの少なくとも1つを示す、本発明1001〜1004のいずれかの単離された一価抗体構築物。
[本発明1006]
前記構築物が、エフェクター活性に関与するＦｃドメインを含む一価溶解性抗体構築物であり、前記溶解性抗体構築物が、非アゴニストであり、同族リガンドの前記標的抗原への結合を遮断し、抗原シグナル伝達を遮断し、細胞成長を阻害することができ、
前記溶解性抗体構築物が、2つの抗原結合領域を持つ対応する単一特異性二価抗体構築物と比較して、増加したＢｍａｘ、速いオン速度、および同等のオフ速度で前記標的細胞に結合し、飽和する、本発明1001〜1005のいずれかの単離された一価抗体構築物。
[本発明1007]
インターナライズされない、本発明1006の単離された一価抗体構築物。
[本発明1008]
インターナライズされる、本発明1001〜1006のいずれかの単離された一価抗体構築物。
[本発明1009]
前記構築物が、効果的にインターナライズされる一価インターナライズ抗体構築物であり、
前記インターナライズ抗体が、抗原シグナル伝達を遮断することができ、非アゴニストであり、同族リガンドの前記標的抗原への結合を遮断し、かつ細胞成長を誘発せず、
前記インターナライズ抗体構築物が、2つの抗原結合領域を持つ対応する単一特異性二価抗体構築物と比較して、増加したＢｍａｘ、速いオン速度、およびより遅いオフ速度で前記標的細胞に結合する、本発明1001〜1006のいずれかの単離された一価抗体構築物。
[本発明1010]
前記構築物の前記インターナリゼーションが、前記単一特異性二価抗体のものを超える、同等である、またはそれを下回る、本発明1001〜1006、1008、または1009のいずれかの単離された一価抗体構築物。
[本発明1011]
前記結合密度およびＢｍａｘの増加が、前記標的細胞上の前記抗原の密度に依存しない、本発明1001〜1009のいずれかの単離された一価抗体構築物。
[本発明1012]
前記結合密度およびＢｍａｘの増加が、前記標的抗原エピトープに依存しない、本発明1001〜1010のいずれかの単離された一価抗体構築物。
[本発明1013]
前記標的細胞が、前記同族の抗原を発現する細胞であり、前記細胞がＨＥＲ受容体を発現する疾患細胞および癌細胞を含む一覧から選択される、本発明1001〜1011のいずれかの単離された一価抗体構築物。
[本発明1014]
アビディティーを示さない、本発明1001〜1012のいずれかの単離された一価抗体構築物。
[本発明1015]
前記二量体Ｆｃポリペプチド構築物が、ヘテロ二量体である、本発明1001〜1013のいずれかの単離された一価抗体構築物。
[本発明1016]
前記抗原結合ポリペプチド構築物がＨＥＲ2に結合し、前記標的細胞が、低度、中程度、もしくは高度ＨＥＲ2発現細胞、プロゲステロン受容体陰性細胞、またはエストロゲン受容体陰性細胞のうちの少なくとも1つである、本発明1001〜1014のいずれかの単離された一価抗体構築物。
[本発明1017]
前記抗原結合ポリペプチド構築物がＨＥＲ2細胞外ドメインに結合し、前記細胞外ドメインが、ＥＣＤ1、2、3、および4のうちの少なくとも1つである、本発明1001〜1015のいずれかの単離された一価抗体構築物。
[本発明1018]
前記一価抗原結合ポリペプチド構築物が、Ｆａｂフラグメント、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ、抗原結合ペプチド、または前記抗原に結合することができるタンパク質ドメインである、本発明1001〜1016のいずれかの単離された一価抗体構築物。
[本発明1019]
前記Ｆａｂフラグメントが、重鎖ポリペプチドおよび軽鎖ポリペプチドを含む、本発明1017の単離された一価抗体構築物。
[本発明1020]
ＨＥＲ2に結合する単離された一価抗体構築物であって、
ＨＥＲ2に一価的に結合する抗原結合ポリペプチド構築物と、
2つの単量体Ｆｃポリペプチドを含む二量体Ｆｃポリペプチド構築物であって、それぞれがＣＨ3ドメインを含み、前記単量体Ｆｃポリペプチドのうちの1つが前記抗原結合ポリペプチド構築物に融合する、二量体Ｆｃポリペプチド構築物と
を含み、
前記抗体構築物が、ＫＤを上回りかつ飽和状態の等モル濃度においてＨＥＲ2に結合する対応する二価抗体構築物と比較して、免疫エフェクター細胞上のＦｃγＲによって、前記標的細胞の増加した装飾（ｄｅｃｏｒａｔｉｏｎ）を媒介する、前記単離された一価抗体構築物。
[本発明1021]
ＨＥＲ2に結合する単離された一価抗体構築物であって、
ＨＥＲ2に一価的に結合する抗原結合ポリペプチド構築物と、
2つの単量体Ｆｃポリペプチドを含む二量体Ｆｃポリペプチド構築物であって、それぞれがＣＨ3ドメインを含み、前記単量体Ｆｃポリペプチドのうちの1つが前記抗原結合ポリペプチド構築物に融合する、前記二量体Ｆｃポリペプチド構築物と
を含み、
前記抗体構築物が、標的細胞によってインターナライズされ、
前記構築物が、ＨＥＲ2に結合する対応する二価抗体構築物と比較して、前記標的細胞上で提示されるＨＥＲ2への結合密度およびＢｍａｘの増加を示し、
前記構築物が、ＫＤを上回りかつ飽和状態の等モル濃度において前記対応する二価ＨＥＲ2結合抗体構築物と比較してより高いＡＤＣＣ、より高いＡＤＣＰ、およびより高いＣＤＣのうちの少なくとも1つを示す、前記単離された一価抗体構築物。
[本発明1022]
ＨＥＲ2に結合する単離された一価抗体構築物であって、
ＨＥＲ2に一価的に結合する抗原結合ポリペプチド構築物と、
2つの単量体Ｆｃポリペプチドを含む二量体Ｆｃポリペプチド構築物であって、それぞれがＣＨ3ドメインを含み、前記単量体Ｆｃポリペプチドのうちの1つが前記抗原結合ポリペプチド構築物に融合する、二量体Ｆｃポリペプチド構築物と
を含み、
前記抗体構築物がＦｃＲｎに結合するが、2つの抗原結合領域を持つ対応する単一特異性二価抗体構築物と比較してより高いＶｓｓを示す、前記単離された一価抗体構築物。
[本発明1023]
1つ以上の薬物分子と結合している、本発明1001〜1021のいずれかの単離された一価抗体構築物。
[本発明1024]
アビディティーを示さない、本発明1001〜1023のいずれかの単離された一価抗体構築物。
[本発明1025]
前記一価ＨＥＲ2結合ポリペプチド構築物が、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ、またはポリペプチドのうちの少なくとも1つである、本発明1013〜1014のいずれかの単離された一価抗体構築物。
[本発明1026]
2つの抗原結合ポリペプチド構築物を持つ対応する二価抗体構築物のＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、およびＣＤＣのうちの少なくとも1つの約105％超を有する、本発明1001〜1024のいずれかの単離された一価抗体構築物。
[本発明1027]
2つの抗原結合ポリペプチド構築物を持つ対応する二価抗体構築物のＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、およびＣＤＣのうちの少なくとも約125％を有する、本発明1001〜1025のいずれかの単離された一価抗体構築物。
[本発明1028]
対応する二価抗体構築物のＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、およびＣＤＣのうちの少なくとも1つの少なくとも約150％を有する、本発明1001〜1026のいずれかの単離された一価抗体構築物。
[本発明1029]
2つの抗原結合ポリペプチド構築物を持つ対応する二価抗体構築物のＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、およびＣＤＣのうちの少なく とも1つの少なくとも約300％を有する、本発明1001〜1027のいずれかの単離された一価抗体構築物。
[本発明1030]
前記結合密度およびＢｍａｘの増加が、前記対応する二価抗体構築物の前記結合密度およびＢｍａｘの少なくとも約125％である、本発明1001〜1028のいずれかの単離された一価抗体構築物。
[本発明1031]
前記結合密度およびＢｍａｘの増加が、前記対応する二価抗体構築物の前記結合密度およびＢｍａｘの少なくとも約150％である、本発明1001〜1029のいずれかの単離された一価抗体構築物。
[本発明1032]
前記結合密度およびＢｍａｘの増加が、前記対応する二価抗体構築物の前記結合密度およびＢｍａｘの少なくとも約200％である、本発明1001〜1030のいずれかの単離された一価抗体構築物。
[本発明1033]
前記二量体Ｆｃ構築物が、変異型ＣＨ3ドメインを含むヘテロ二量体Ｆｃ構築物である、本発明1001〜1031のいずれかの単離された一価抗体構築物。
[本発明1034]
前記変異型ＣＨ3ドメインが、ネイティブのホモ二量体Ｆｃ領域に相当する安定性を持つ前記ヘテロ二量体の形成を促進するアミノ酸突然変異体を含む、本発明1032の単離された一価抗体構築物。
[本発明1035]
前記変異型ＣＨ3ドメインが、約70℃以上の融解温度（Ｔｍ）を有する、本発明1033の単離された一価抗体構築物。
[本発明1036]
前記変異型ＣＨ3ドメインが、約75℃以上の融解温度（Ｔｍ）を有する、本発明1034の単離された一価抗体構築物。
[本発明1037]
前記変異型ＣＨ3ドメインが、約80℃以上の融解温度（Ｔｍ）を有する、本発明1035の単離された一価抗体構築物。
[本発明1038]
前記二量体Ｆｃ構築物が、Ｆｃγ受容体の選択的結合を促進するアミノ酸修飾を含む変異型ＣＨ2ドメインをさらに含む、本発明1001〜1036のいずれかの単離された一価抗体構築物。
[本発明1039]
前記ヘテロ二量体Ｆｃ構築物が、野生型Ｆｃ領域と比べて、前記ＣＨ3ドメインに追加のジスルフィド結合を含まない、本発明1032〜1037のいずれかの単離された一価抗体。
[本発明1040]
前記ヘテロ二量体Ｆｃ構築物が、野生型Ｆｃ領域と比べて前記変異型ＣＨ3ドメインに追加のジスルフィド結合を含み、前記変異型ＣＨ3ドメインが少なくとも約77．5℃の融解温度（Ｔｍ）を有する、本発明1032〜1038のいずれかの単離された一価抗体。
[本発明1041]
前記二量体Ｆｃ構築物が、約75％を超える純度で形成されたヘテロ二量体Ｆｃ構築物である、本発明1001〜1039のいずれかの単離された一価抗体。
[本発明1042]
前記二量体Ｆｃ構築物が、約80％を超える純度で形成されたヘテロ二量体Ｆｃ構築物である、本発明1001〜1040のいずれかの単離された一価抗体。
[本発明1043]
前記二量体Ｆｃ構築物が、約90％を超える純度で形成されたヘテロ二量体Ｆｃ構築物である、本発明1001〜1041のいずれかの単離された一価抗体。
[本発明1044]
前記二量体Ｆｃ構築物が、約95％を超える純度で形成されたヘテロ二量体Ｆｃ構築物である、本発明1001〜1042のいずれかの単離された一価抗体。
[本発明1045]
前記単量体Ｆｃポリペプチドが、リンカーによって前記抗原結合ポリペプチド構築物に融合する、本発明1001〜1043のいずれかの単離された一価抗体構築物。
[本発明1046]
前記リンカーが、ポリペプチドリンカーである、本発明1044の単離された一価抗体構築物。
[本発明1047]
本発明1001〜1045のいずれかの単離された一価抗体構築物をコードする核酸を含む宿主細胞。
[本発明1048]
前記抗原結合ポリペプチド構築物をコードする前記核酸および前記Ｆｃ構築物をコードする前記核酸が単一のベクター中に存在する、本発明1046の宿主細胞。
[本発明1049]
本発明1001〜1047のいずれかの単離された一価抗体構築物を調製する方法であって、
（ａ）前記抗体フラグメントをコードする核酸を含む宿主細胞を培養する段階と、
（ｂ）前記宿主細胞培養物から前記抗体フラグメントを回収する段階と
を含む、前記方法。
[本発明1050]
本発明1001〜1045のいずれかの前記一価抗体構築物および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
[本発明1051]
前記一価抗体構築物と結合している薬物分子をさらに含む、本発明1049の医薬組成物。
[本発明1052]
癌を治療する方法であって、その方法を必要とする患者に、有効量の本発明1049〜1051のいずれかの医薬組成物を提供する段階を含む、前記方法。
[本発明1053]
ＨＥＲシグナル伝達の障害を治療する方法であって、その方法を必要とする患者に、有効量の本発明1049〜1051のいずれかの医薬組成物を提供する段階を含む、前記方法。
[本発明1054]
腫瘍の成長を阻害する方法であって、前記腫瘍を、有効量の本発明1001〜1045のいずれかの前記一価抗体構築物を含む組成物と接触させる段階を含む、前記方法。
[本発明1055]
腫瘍を縮小させる方法であって、前記腫瘍を、有効量の本発明1001〜1045のいずれかの前記一価抗体構築物を含む組成物と接触させる段階を含む、前記方法。
[本発明1056]
抗原分子のシグナル伝達を阻害する方法であって、前記抗原を、有効量の本発明1001〜1045のいずれかの前記一価抗体構築物を含む組成物と接触させる段階を含む、前記方法。
[本発明1057]
抗原がその同族の結合パートナーと結合することを阻害する方法であって、前記抗原を、前記抗原に結合させるのに十分な量の本発明1001〜1045のいずれかの前記一価抗体構築物を含む組成物と接触させる段階を含む、前記方法。
[本発明1058]
乳癌を治療する方法であって、その方法を必要とする患者に、有効量の本発明1012〜1045のいずれかの一価抗体構築物を提供する段階を含む、前記方法。
[本発明1059]
トラスツズマブ、ペルツズマブ、ＴＤＭ1、および抗ＨＥＲ二価抗体のうちの1つ以上を用いた治療に部分的に応答性である患者において乳がんを治療する方法であって、前記方法が、その方法を必要とする患者に、有効量の本発明1012〜1045のいずれかの一価抗体構築物を提供する段階を含む、前記方法。
[本発明1060]
トラスツズマブ、ペルツズマブ、ＴＤＭ1（ＡＤＣ）、および抗ＨＥＲ二価抗体のうちの1つ以上を用いた治療に応答しない患者において乳がんを治療する方法であって、その方法を必要とする患者に、有効量の本発明1012〜1045のいずれかの一価抗体構築物を提供する段階を含む、前記方法。
[本発明1061]
別の治療薬に加えて前記抗体構築物を提供する段階を含む、本発明1057〜1060のいずれかの乳癌を治療する方法。
[本発明1062]
前記抗体構築物が、前記治療薬と同時に提供される、本発明1060の乳癌を治療する方法。
[本発明1063]
前記抗体構築物が、前記治療薬と結合している、本発明1060の乳癌を治療する方法。
[本発明1064]
安定した哺乳類細胞内でグリコシル化一価抗体構築物または糖が改変されたアフコシル化一価抗体構築物を生成する方法であって、
重鎖可変ドメインおよび第1のＦｃドメインポリペプチドを含む第1の重鎖ポリペプチドをコードする、第1のＤＮＡ配列;
第2のＦｃドメインポリペプチドを含む前記第2の重鎖ポリペプチドをコードする第2のＤＮＡ配列であって、第2の重鎖ポリペプチドが可変ドメインを欠いている、第2のＤＮＡ配列;及び
軽鎖可変ドメインを含む軽鎖ポリペプチドをコードする、第3のＤＮＡ配列
を用いて、前記第1のＤＮＡ配列、前記第2のＤＮＡ配列、および前記第3のＤＮＡ配列が既定の比率で哺乳類細胞にトランスフェクトされるように、少なくとも1つの安定した前記哺乳類細胞へトランスフェクトする段階と、
前記重鎖および軽鎖ポリペプチドが前記少なくとも1つの安定した哺乳類細胞内で前記所望のグリコシル化一価非対称抗体として発現されるように、前記少なくとも1つの哺乳類細胞内の前記第1のＤＮＡ配列、前記第2のＤＮＡ配列、および前記第3のＤＮＡ配列を翻訳する段階と
を含む、前記方法。
[本発明1065]
少なくとも2つの細胞のそれぞれが、異なる比率で前記重鎖ポリペプチドおよび前記軽鎖ポリペプチドを発現するように、前記第1のＤＮＡ配列、前記第2のＤＮＡ配列、および前記第3のＤＮＡ配列を異なる既定の比率で、前記少なくとも2つの異なる細胞へトランスフェクトする段階を含む、本発明1063の方法。
[本発明1066]
前記第1、第2、および第3のＤＮＡ配列のうちの少なくとも2つを含むマルチシストロンベクターを前記少なくとも1つの哺乳類細胞へトランスフェクトする段階を含む、本発明1064の方法。
[本発明1067]
前記少なくとも1つの哺乳類細胞が、ＶＥＲＯ、ＨｅＬａ、ＨＥＫ、ＮＳ0、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）、Ｗ138、ＢＨＫ、ＣＯＳ−7、Ｃａｃｏ−2、およびＭＤＣＫ細胞、ならびにそれらのサブクラスおよび変異体から成る群から選択される、本発明1063〜1065のいずれかの方法。
[本発明1068]
前記第1のＤＮＡ配列：第2のＤＮＡ配列：第3のＤＮＡ配列の前記既定の比率が、約1：1：1である、本発明1063〜1066のいずれかの方法。
[本発明1069]
前記第1のＤＮＡ配列：第2のＤＮＡ配列：第3のＤＮＡ配列の前記既定の比率が、翻訳される第1の重鎖ポリペプチドの量が前記第2の重鎖ポリペプチドの量および前記軽鎖ポリペプチドの量にほぼ等しくなるようなものである、本発明1063〜1067のいずれかの方法。
[本発明1070]
前記少なくとも1つの安定した哺乳類細胞の前記発現生成物が、前記単量体重鎖もしくは軽鎖ポリペプチド、または他の抗体と比較して、より大きいパーセンテージの前記所望のグリコシル化一価抗体を含む、本発明1063〜1068のいずれかの方法。
[本発明1071]
前記所望のグリコシル化一価抗体を同定し、精製する段階を含む、本発明1063〜1069のいずれかの方法。
[本発明1072]
前記同定が、液体クロマトグラフィーおよび質量分析法の1つまたは両方によるものである、本発明1070の方法。
[本発明1073]
改善されたＡＤＣＣを有する抗体構築物を生成する方法であって、
重鎖可変ドメインおよび第1のＦｃドメインポリペプチドを含む第1の重鎖ポリペプチドをコードする、第1のＤＮＡ配列；
第2のＦｃドメインポリペプチドを含む前記第2の重鎖ポリペプチドをコードする第2のＤＮＡ配列であって、第2の重鎖ポリペプチドが可変ドメインを欠いている、第2のＤＮＡ配列；及び
軽鎖可変ドメインを含む軽鎖ポリペプチドをコードする、第3のＤＮＡ配列
を用いて、前記第1のＤＮＡ配列、前記第2のＤＮＡ配列、および前記第3のＤＮＡ配列が、既定の比率で哺乳類細胞にトランスフェクトされるように、少なくとも1つの安定した前記哺乳類細胞へトランスフェクトする段階と、
前記重鎖および軽鎖ポリペプチドが前記少なくとも1つの安定した哺乳類細胞内でグリコシル化一価抗体として発現されるように、前記少なくとも1つの哺乳類細胞内の前記第1のＤＮＡ配列、前記第2のＤＮＡ配列、および前記第3のＤＮＡ配列を翻訳する段階と
を含み、前記グリコシル化一価非対称抗体が、対応する野生型抗体と比較してより高いＡＤＣＣを有する、前記方法。
[本発明1074]
改善されたＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、およびＣＤＣのうちの少なくとも1つを有する、ＨＥＲ2結合抗体構築物を生成する方法であって、
重鎖可変ドメインおよび第1のＦｃドメインポリペプチドを含む第1の重鎖ポリペプチドをコードする、第1のＤＮＡ配列；
第2のＦｃドメインポリペプチドを含む前記第2の重鎖ポリペプチドをコードする第2のＤＮＡ配列であって、第2の重鎖ポリペプチドが可変ドメインを欠いている、第2のＤＮＡ配列；及び
軽鎖可変ドメインを含む軽鎖ポリペプチドをコードする、第3のＤＮＡ配列
を用いて、前記第1のＤＮＡ配列、前記第2のＤＮＡ配列、および前記第3のＤＮＡ配列が、既定の比率で哺乳類細胞にトランスフェクトされるように、少なくとも1つの安定した前記哺乳類細胞へトランスフェクトする段階と、
前記重鎖および軽鎖ポリペプチドが前記少なくとも1つの安定した哺乳類細胞内でグリコシル化一価非対称ＨＥＲ2結合抗体として発現されるように、前記少なくとも1つの哺乳類細胞内の前記第1のＤＮＡ配列、前記第2のＤＮＡ配列、および前記第3のＤＮＡ配列を翻訳する段階と
を含み、前記グリコシル化一価ＨＥＲ2結合抗体が、対応する野生型ＨＥＲ2結合抗体と比較して改善されたＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、およびＣＤＣのうちの少なくとも1つを有する、前記方法。
[本発明1075]
標的細胞に一価抗体構築物を提供する少なくとも1つの標的細胞上で抗体濃度を上昇させる方法であって、
抗原に一価的に結合する抗原結合ポリペプチド構築物と、
二量体Ｆｃ領域と
を含み、
前記一価抗体構築物が、2つの抗原結合領域を持つ対応する二価抗体構築物と比較して前記抗原を提示する標的細胞に対する結合密度およびＢｍａｘの増加を示し、
前記一価抗体構築物が、対応する二価抗体構築物と比較して改善された効果を示し、前記改善された効果が前記抗原の架橋、抗原二量体形成によるものではない、前記方法。
[本発明1076]
標的細胞に一価抗体構築物を提供する少なくとも1つの標的細胞上で抗体濃度を上昇させる方法であって、
抗原に一価的に結合する抗原結合ポリペプチド構築物と、
二量体Ｆｃ領域と
を含み、
前記一価抗体構築物が、2つの抗原結合領域を持つ対応する二価抗体構築物と比較して前記抗原を提示する標的細胞に対する結合密度およびＢｍａｘの増加を示し、
前記一価抗体構築物が、対応する二価抗体構築物と比較して改善された効果を示し、前記改善された効果が抗原調節を含み得る、前記方法。
[本発明1077]
腫瘍を死滅させる方法であって、前記腫瘍を、有効量の本発明1001〜1045のいずれかの前記一価抗体構築物を含む組成物と接触させる段階を含む、前記方法。
[本発明1078]
前記標的細胞が、前記同族の抗原を発現する細胞であり、前記細胞がＨＥＲ2を発現する疾患細胞および癌細胞を含む一覧から選択される、本発明1001〜1011のいずれかの単離された一価抗体構築物。
[本発明1079]
前記構築物が、非アゴニストであるか、または部分的にアゴニストである、本発明1006の単離された一価抗体構築物。
[本発明1080]
ＨＥＲ2に結合する単離された一価抗体構築物であって、
配列番号14に示される最終タンパク質生成物配列を含む、軽鎖ポリペプチドと、
配列番号12に示される最終タンパク質生成物配列を含む、第1の重鎖ポリペプチドと、
配列番号16に示される最終タンパク質生成物配列を含む、第2の重鎖ポリペプチドと
を含み、
前記抗体構築物がＨＥＲ2を呈する標的細胞に一価的に結合することができ、前記最終タンパク質生成物配列のそれぞれがシグナルポリペプチド配列を含まない、前記単離された一価抗体構築物。
[本発明1081]
ＨＥＲ2に結合する単離された一価抗体構築物であって、
配列番号13に示されるＤＮＡ配列によってコードされるポリペプチド配列を含む、軽鎖ポリペプチドと、
配列番号11に示されるＤＮＡ配列によってコードされるポリペプチド配列を含む、第1の重鎖ポリペプチドと、
配列番号15に示されるＤＮＡ配列によってコードされるポリペプチド配列を含む、第2の重鎖ポリペプチドと
を含み、
前記抗体構築物がＨＥＲ2を呈する標的細胞に一価的に結合することができ、前記ポリペプチド配列のそれぞれがシグナルポリペプチド配列を含まない、前記単離された一価抗体構築物。
[本発明1082]
ＨＥＲ2に結合する単離された一価抗体構築物であって、
配列番号44に示される最終タンパク質生成物配列を含む、軽鎖ポリペプチドと、
配列番号40に示される最終タンパク質生成物配列を含む、第1の重鎖ポリペプチドと、
配列番号42に示される最終タンパク質生成物配列を含む、第2の重鎖ポリペプチドと
を含み、
前記抗体構築物がＨＥＲ2を呈する標的細胞に一価的に結合することができ、前記最終タンパク質生成物配列のそれぞれがシグナルポリペプチド配列を含まない、前記単離された一価抗体構築物。
[本発明1083]
ＨＥＲ2に結合する単離された一価抗体構築物であって、
配列番号43に示されるＤＮＡ配列によってコードされるポリペプチド配列を含む、軽鎖ポリペプチドと、
配列番号39に示されるＤＮＡ配列によってコードされるポリペプチド配列を含む、第1の重鎖ポリペプチドと、
配列番号41に示されるＤＮＡ配列によってコードされるポリペプチド配列を含む、第2の重鎖ポリペプチドと
を含み、
前記抗体構築物がＨＥＲ2を呈する標的細胞に一価的に結合することができ、前記ポリペプチド配列のそれぞれがシグナルポリペプチド配列を含まない、前記単離された一価抗体構築物。
[本発明1084]
ＨＥＲ2に結合する単離された一価抗体構築物であって、
配列番号36に示される最終タンパク質生成物配列を含む、第1のポリペプチドと、
配列番号38に示される最終タンパク質生成物配列を含む、第2のポリペプチドと
を含み、
前記抗体構築物がＨＥＲ2を呈する標的細胞に一価的に結合することができ、前記最終タンパク質生成物配列のそれぞれがシグナルポリペプチド配列を含まない、前記単離された一価抗体構築物。
[本発明1085]
ＨＥＲ2に結合する単離された一価抗体構築物であって、
配列番号35に示されるＤＮＡ配列によってコードされるポリペプチド配列を含む、第1のポリペプチドと、
配列番号37に示されるＤＮＡ配列によってコードされるポリペプチド配列を含む、第2のポリペプチドと
を含み、
前記抗体構築物がＨＥＲ2を呈する標的細胞に一価的に結合することができ、前記ポリペプチド配列のそれぞれがシグナルポリペプチド配列を含まない、前記単離された一価抗体構築物。
[本発明1086]
前記一価抗体構築物が、2つのＨＥＲ2結合領域を持つ対応する単一特異性二価抗体構築物と比較して増加した結合密度およびＢｍａｘで、ＨＥＲ2を呈する標的細胞に選択的および／または特異的に結合し、前記一価抗体構築物が、前記単一特異性二価抗体構築物に相当するか、またはそれを超えるオンターゲット細胞傷害性を示す、本発明1080〜1085のいずれかの単離された一価抗体構築物。
[本発明1087]
前記抗原結合ポリペプチド構築物が、配列番号14、配列番号44、または配列番号36に示される最終タンパク質生成物配列を含むポリペプチドを含み、前記最終タンパク質生成物配列がシグナルポリペプチド配列を含まない、本発明1020〜1022のいずれかの単離された一価ＨＥＲ2結合抗体構築物。
[本発明1088]
前記二量体Ｆｃポリペプチド構築物が、第1および第2の単量体Ｆｃポリペプチドを含み、前記第1の単量体Ｆｃポリペプチドが配列番号12、配列番号40、または配列番号36に示される最終タンパク質生成物配列を含み、前記第2の単量体Ｆｃポリペプチドが配列番号16、配列番号42、または配列番号38に示される最終タンパク質生成物配列を含み、前記最終タンパク質生成物配列のそれぞれがシグナルポリペプチド配列を含まない、本発明1020〜1022のいずれかの単離された一価ＨＥＲ2結合抗体構築物。
[本発明1089]
前記ヘテロ二量体Ｆｃポリペプチド構築物が、第1および第2の単量体Ｆｃポリペプチドを含み、前記第1の単量体Ｆｃポリペプチドが配列番号12、配列番号40、または配列番号36に示される最終タンパク質生成物配列を含み、前記第2の単量体Ｆｃポリペプチドが配列番号16、配列番号42、または配列番号38の最終タンパク質生成物配列を含み、前記最終タンパク質生成物配列のそれぞれがシグナルポリペプチド配列を含まない、本発明1015の単離された一価抗体構築物。
[本発明1090]
前記一価抗原結合ポリペプチド構築物が、配列番号36に示される最終タンパク質生成物配列を含むｓｃＦｖを含み、前記最終タンパク質生成物配列がシグナルポリペプチド配列を含まない、本発明1018の単離された一価抗体構築物。
添付の図面と併せて、本発明の具体的な実施形態の以下の説明を考察することで、本発明の他の態様および特徴が、当業者に明らかとなるであろう。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３８】
本発明の実施形態を例示する図面において、
【図１】抗体Ｆｃ依存性細胞傷害、すなわち、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、および抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）の図解を示す。
【図２】抗原に結合する一価および二価抗体を示す。図２Ａは１：１の化学量で抗原に結合する本明細書に記載の一価抗体構築物を示す。図２Ｂは１：２の化学量で抗原に結合する二価抗体構築物を示す。本明細書に記載のように、一価抗体構築物は１細胞当たり、より高い抗体濃度／装飾をもたらし、ならびにＡＤＣＣ、ＣＤＣ、ＡＤＣＰによる、より大きなＦｃ媒介性細胞死滅をもたらす。
【図３】ＳＫＯＶ３細胞に結合する例示的な一価抗ＨＥＲ２抗体の能力を示す：Ａ．非線形適合結合曲線（ｎｏｎ−ｌｉｎｅａｒ  ｆｉｔ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｃｕｒｖｅ）；Ｂ．対数変換曲線。
【図４】異なる密度において、ＨＥＲ２を発現する細胞に結合する例示的な一価抗ＨＥＲ２抗体の能力を示す：Ａ．ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞；Ｂ．ＳＫＯＶ３細胞；Ｃ．ＳＫＢＲ３細胞。
【図５】二価のフルサイズ抗体（ＦＳＡ）と比較して強化されたＡＤＣＣを媒介する例示的な一価抗ＨＥＲ２抗体の能力を示す。
【図６】二価のフルサイズ抗体（ＦＳＡ）と比較して強化されたＣＤＣを媒介する例示的な一価抗ＨＥＲ２抗体の能力を示す。
【図７】二価のフルサイズ抗体（ＦＳＡ）と比較して強化されたＣＤＣを媒介する例示的な一価抗ＨＥＲ２抗体の能力を示す：Ａ．およびＢ．は、それぞれ２つのＰＢＭＣ供与体を用いた実験を表す。Ｃ．は、１供与体当たりで示されるＣＤ１６＋細胞のパーセントを用いた、ＯＡ２−Ｆａｂ−ＨＥＲ２および４つのＰＢＭＣ供与体による２つの別々の実験の要約。データは、ＷＴ  ＦＳＡ  Ｈｃｐｔｎの最大溶解度に対して正規化され、ＯＡ２−Ｆａｂ−ＨＥＲ２対ＷＴ  ＦＳＡ  Ｈｃｐｔｎの最大溶解度において倍数の差が存在する。
【図８−１】プロテインＡ精製後の例示的な一価抗ＨＥＲ２抗体の収率および純度の分析を示す。Ａ．精製された一価抗ＨＥＲ２抗体のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析。
【図８−２】Ｂ．ＯＡ１−Ｆａｂ−ＨＥＲ２のＬＣＭＳ分析；Ｃ．ＯＡ２−Ｆａｂ−ＨＥＲ２のＬＣＭＳ分析；Ｄ．約０．８％の２本の軽鎖＋１本の短い重鎖（７２，８９８  Ｄａ）、約０．７％の短い重鎖単体（２５，９０７  Ｄａ）で低質量ペプチドを示すＯＡ２−Ｆａｂ−ＨＥＲ２のＬＣＭＳスペクトルの拡大図。
【図９】インターナライズされる一価抗ＨＥＲ２抗体の能力を示す。Ａ．インターナリゼーションの割合（％）としてプロットされた結果；Ｂ．対照に対する効果（％）としてプロットされた結果。
【図１０】ＳＫＢＲ３細胞の成長を阻害する一価抗ＨＥＲ２抗体の能力を示す。
【図１１】ＦｃＲｎ受容体に結合する一価抗ＨＥＲ２抗体の能力を示す。
【図１２】ＳＫＯＶ３細胞に結合する別の例示的な一価抗ＨＥＲ２抗体の能力を示す。
【図１３−１】ＦＳＡ−ｓｃＦｖ−ＨＥＲ２のＤＮＡおよびアミノ酸配列を示す。Ａ．鎖ＡのＤＮＡ配列（配列番号：３）；Ｂ．鎖Ａのアミノ酸配列（配列番号：４）。
【図１３−２】ＦＳＡ−ｓｃＦｖ−ＨＥＲ２のＤＮＡおよびアミノ酸配列を示す。Ｃ．鎖ＢのＤＮＡ配列（配列番号：５）；Ｄ．鎖Ｂのアミノ酸配列（配列番号：６）。
【図１４−１】ＯＡ３−ｓｃＦｖ−ＨＥＲ２のＤＮＡおよびアミノ酸配列を示す。Ａ．鎖ＡのＤＮＡ配列（配列番号：７）；Ｂ．鎖Ａのアミノ酸配列（配列番号：８）。
【図１４−２】ＯＡ３−ｓｃＦｖ−ＨＥＲ２のＤＮＡおよびアミノ酸配列を示す。Ｃ．鎖ＢのＤＮＡ配列（配列番号：９）；Ｄ．鎖Ｂのアミノ酸配列（配列番号：１０）。
【図１５−１】ＯＡ１−Ｆａｂ−ＨＥＲ２のＤＮＡおよびアミノ酸配列を示す。Ａ．重鎖ＡのＤＮＡ配列（配列番号：１１）；Ｂ．重鎖Ａのアミノ酸配列（配列番号：１２）；Ｃ．軽鎖のＤＮＡ配列（配列番号：１３）。
【図１５−２】ＯＡ１−Ｆａｂ−ＨＥＲ２のＤＮＡおよびアミノ酸配列を示す。Ｄ．軽鎖のアミノ酸配列（配列番号：１４）；Ｅ．重鎖ＢのＤＮＡ配列（配列番号：１５）；Ｆ．重鎖Ｂのアミノ酸配列（配列番号：１６）。
【図１６−１】ＯＡ２−Ｆａｂ−ＨＥＲ２のＤＮＡおよびアミノ酸配列を示す。Ａ．重鎖ＡのＤＮＡ配列（配列番号：１７）；Ｂ．重鎖Ａのアミノ酸配列（配列番号：１８）；Ｃ．軽鎖のＤＮＡ配列（配列番号：１９）。
【図１６−２】ＯＡ２−Ｆａｂ−ＨＥＲ２のＤＮＡおよびアミノ酸配列を示す。Ｄ．軽鎖のアミノ酸配列（配列番号：２０）；Ｅ．重鎖ＢのＤＮＡ配列（配列番号：２１）；Ｆ．重鎖Ｂのアミノ酸配列（配列番号：２２）。
【図１７−１】ｗｔ  ＦＳＡ  ＨｃｐｔｎのＤＮＡおよびアミノ酸配列を示す。Ａ．重鎖ＡのＤＮＡ配列（配列番号：２３）；Ｂ．重鎖Ａのアミノ酸配列（配列番号：２４）。
【図１７−２】ｗｔ  ＦＳＡ  ＨｃｐｔｎのＤＮＡおよびアミノ酸配列を示す。Ｃ．軽鎖のＤＮＡ配列（配列番号：２５）；Ｄ．軽鎖のアミノ酸配列（配列番号：２６）。
【図１８−１】ＦＳＡ−Ｆａｂ−ＨＥＲ２のＤＮＡおよびアミノ酸配列を示す。Ａ．重鎖ＡのＤＮＡ配列（配列番号：２７）；Ｂ．重鎖Ａのアミノ酸配列（配列番号：２８）；Ｃ．軽鎖のＤＮＡ配列（配列番号：２９）。
【図１８−２】ＦＳＡ−Ｆａｂ−ＨＥＲ２のＤＮＡおよびアミノ酸配列を示す。Ｄ．軽鎖のアミノ酸配列（配列番号：３０）；Ｅ．重鎖ＢのＤＮＡ配列（配列番号：３１）；Ｆ．重鎖Ｂのアミノ酸配列（配列番号：３２）。
【図１９】ＦＳＡ−ｓｃＦｖ−ＢＩＤ２のＤＮＡおよびアミノ酸配列を示す。Ａ．鎖Ａおよび鎖ＢのＤＮＡ配列（配列番号：３３）；Ｂ．鎖Ａおよび鎖Ｂのアミノ酸配列（配列番号：３４）。
【図２０−１】ＯＡ４−ｓｃＦｖ−ＢＩＤ２のＤＮＡおよびアミノ酸配列を示す。Ａ．鎖ＡのＤＮＡ配列（配列番号：３５）；Ｂ．鎖Ａのアミノ酸配列（配列番号：３６）。
【図２０−２】ＯＡ４−ｓｃＦｖ−ＢＩＤ２のＤＮＡおよびアミノ酸配列を示す。Ｃ．鎖ＢのＤＮＡ配列（配列番号：３７）；Ｄ．鎖Ｂのアミノ酸配列（配列番号：３８）。
【図２１Ａ】異なる細胞株においてＡＤＣＣを媒介する例示的な一価抗体構築物の能力を示す。図２１Ａは、ＭＣＦ７細胞における結果を示す。
【図２１Ｂ】異なる細胞株においてＡＤＣＣを媒介する例示的な一価抗体構築物の能力を示す。図２１Ｂは、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞における結果を示す。
【図２１Ｃ】異なる細胞株においてＡＤＣＣを媒介する例示的な一価抗体構築物の能力を示す。図２１Ｃは、ＭＣＦ７細胞における結果を示す。
【図２１Ｄ】異なる細胞株においてＡＤＣＣを媒介する例示的な一価抗体構築物の能力を示す。図２１Ｄは、ＭＣＦ７細胞における結果を示す。
【図２１Ｅ】異なる細胞株においてＡＤＣＣを媒介する例示的な一価抗体構築物の能力を示す。図２１Ｅは、ＭＣＦ７細胞における結果を示す。
【図２２】マウスにおける例示的な一価抗体構築物の薬物動態プロファイルを示す。
【図２３】シグナル伝達分子のリン酸化における例示的な一価抗ＨＥＲ２抗体（ＯＡ１−Ｆａｂ−Ｈｅｒ２）を用いたＳＫＢＲ３細胞の治療の効果を示す。パネルＡは、ＥｒｂＢ２のリン酸化における効果を示し、一方パネルＢは、ＭＡＰＫおよびＡＫＴのリン酸化における効果を示す。
【図２４】１５分（パネルＡ）および３０分（パネルＢ）時点でＥＬＩＳＡによって測定されるＡｋｔのリン酸化の度合いの定量的評価を示す。
【図２５Ａ】ＪＩＭＴ−１細胞（パネルＡ）に結合する、本発明による例示的な一価抗体構築物の能力を示す。
【図２５Ｂ】ＢＴ４７４細胞（パネルＢ）に結合する、本発明による例示的な一価抗体構築物の能力を示す。
【図２５Ｃ】ＭＣＦ−７細胞（パネルＣ）に結合する、本発明による例示的な一価抗体構築物の能力を示す。
【図２６】ＢＴ−４７４細胞（パネルＡ、ＯＡ１−Ｆａｂ−Ｈｅｒ２  ＯＡ２−Ｆａｂ−ＨＥＲ２；パネルＢ、ＯＡ５−Ｆａｂ−ＨＥＲ２、ＯＡ６−Ｆａｂ−Ｈｅｒ２）の成長を阻害する例示的な一価抗ＨＥＲ２抗体の能力を示す。
【図２７】ＢＴ−４７４細胞（パネルＡ）またはＪＩＭＴ−１細胞（パネルＢ）中でインターナライズする例示的な一価抗体構築物ＯＡ１−Ｆａｂ−Ｈｅｒ２およびＯＡ５−Ｆａｂ−Ｈｅｒ２（２００ｎＭにおける）の能力を示す。
【図２８】ＭＡＬＭＥ−３Ｍ細胞に結合する例示的な一価抗体構築物の能力を示す。
【図２９】ＢＴ４７４細胞を死滅させる例示的な一価抗体構築物−抗体薬物複合体（ＡＤＣ）の能力を示す。
【図３０Ａ】構築物の純度を示す。図３０Ａは、プロテインＡ精製後の例示的な一価抗体構築物ＯＡ５−Ｆａｂ−Ｈｅｒ２およびＯＡ６−Ｆａｂ−Ｈｅｒ２の純度を示す。
【図３０Ｂ】構築物の純度を示す。図３０Ｂは、ＬＣ／ＭＳによるヘテロ二量体純度分析を示し、これはＯＡ５−Ｆａｂ−Ｈｅｒ２およびＯＡ６−Ｆａｂ−Ｈｅｒ２の両方が、プロテインＡおよびサイズ排除クロマトグラフィー後に９９％を超える純度に精製され得ることを示す。
【図３１−１】ＯＡ５−Ｆａｂ−ＨＥＲ２のＤＮＡおよびアミノ酸配列を示す；図３１Ａは鎖ＡのＤＮＡ配列（配列番号：３９）。
【図３１−２】ＯＡ５−Ｆａｂ−ＨＥＲ２のＤＮＡおよびアミノ酸配列を示す；図３１Ｂは、鎖Ａのアミノ酸配列（配列番号：４０）。
【図３１−３】ＯＡ５−Ｆａｂ−ＨＥＲ２のＤＮＡおよびアミノ酸配列を示す；図３１Ｃおよび図３１Ｄは、それぞれ鎖ＢのＤＮＡ配列（配列番号：４１）およびアミノ酸配列（配列番号：４２）。
【図３１−４】ＯＡ５−Ｆａｂ−ＨＥＲ２のＤＮＡおよびアミノ酸配列を示す；図３１Ｅおよび図３１Ｆは、それぞれ軽鎖のＤＮＡ配列（配列番号：４３）およびアミノ酸配列（配列番号：４４）。
【図３２−１】ＯＡ６−Ｆａｂ−ＨＥＲ２のＤＮＡおよびアミノ酸配列を示す；図３２Ａおよび図３２Ｂは、それぞれ鎖ＡのＤＮＡ配列（配列番号：４５）およびアミノ酸配列（配列番号：４６）。
【図３２−２】ＯＡ６−Ｆａｂ−ＨＥＲ２のＤＮＡおよびアミノ酸配列を示す；図３２Ｃは、鎖ＢのＤＮＡ配列（配列番号：４７）。
【図３２−３】ＯＡ６−Ｆａｂ−ＨＥＲ２のＤＮＡおよびアミノ酸配列を示す；図３２Ｄは、鎖Ｂのアミノ酸配列（配列番号：４８）。
【図３２−４】ＯＡ６−Ｆａｂ−ＨＥＲ２のＤＮＡおよびアミノ酸配列を示す；図３２Ｅおよび図３２Ｆは、それぞれ軽鎖のＤＮＡ配列（配列番号：４９）およびアミノ酸配列（配列番号：５０）。
【図３３−１】ＦＳＡ−Ｆａｂ−ｐｅｒｔのＤＮＡおよびアミノ酸配列を示す；図３３Ａは、鎖ＡのＤＮＡ配列（配列番号：５１）。
【図３３−２】ＦＳＡ−Ｆａｂ−ｐｅｒｔのＤＮＡおよびアミノ酸配列を示す；図３３Ｂは、鎖Ａのアミノ酸配列（配列番号：５２）。
【図３３−３】ＦＳＡ−Ｆａｂ−ｐｅｒｔのＤＮＡおよびアミノ酸配列を示す；図３３Ｃは、鎖ＢのＤＮＡ配列（配列番号：５３）。
【図３３−４】ＦＳＡ−Ｆａｂ−ｐｅｒｔのＤＮＡおよびアミノ酸配列を示す；図３３Ｄは、鎖Ｂのアミノ酸配列（配列番号：５４）。
【図３３−５】ＦＳＡ−Ｆａｂ−ｐｅｒｔのＤＮＡおよびアミノ酸配列を示す；図３３Ｅおよび図３３Ｆは、それぞれ軽鎖のＤＮＡ配列（配列番号：５５）およびアミノ酸配列（配列番号：５６）。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２０２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２０２】
哺乳類細胞におけるその分泌を指示するための抗体構築物に融合されるシグナルペプチドの例には、ＭＰＩＦ−１シグナル配列（例えば、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＢ５１１３４のアミノ酸１−２１）、スタンニオカルシンシグナル配列（ＭＬＱＮＳＡＶＬＬＬＬＶＩＳＡＳＡ（配列番号：１））、およびコンセンサスシグナル配列（ＭＰＴＷＡＷＷＬＦＬＶＬＬＬＡＬＷＡＰＡＲＧ（配列番号：２））が挙げられるが、これらに限定されない。バキュロウイルス発現系と併せて使用され得る好適なシグナル配列は、ｇｐ６７シグナル配列（例えば、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＡ７２７５９のアミノ酸１−１９）である。