【手続補正書】
【提出日】平成28年4月11日(2016.4.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
サンプル中のスーパーファミリー受容体タンパク質のリガンドを検出または定量化するためのシステムであって、システムが：
第1の追跡可能な融合タンパク質を発現する第1哺乳動物細胞；
第2の追跡可能な融合タンパク質を発現する第2哺乳動物細胞；および
マーカータンパク質の細胞質から核への移行の検出のための検出システム
を含み、
ここで、第1および第2の追跡可能な融合タンパク質が、独立して、
(1)スーパーファミリー受容体タンパク質、および
マーカータンパク質ドメイン；または
(2)グルココルチコイド受容体の細胞質／核移行ドメイン、
スーパーファミリー受容体タンパク質のリガンド結合ドメイン、および
マーカータンパク質ドメイン
のいずれかを含み、第1および第2の追跡可能な融合タンパク質が異なる標的リガンドに結合しかつグルココルチコイド、アンドロゲン、プロゲスチン、アリール炭化水素、またはミネラルコルチコイドのうちの1つに結合する、システム。
【請求項２】
リガンドがアゴニストまたはアンタゴニストである、請求項1記載のシステム。
【請求項３】
マーカータンパク質ドメインが、第1および第2の追跡可能な融合タンパク質において異なる、請求項1記載のシステム。
【請求項４】
マーカータンパク質ドメインが蛍光タンパク質ドメインである、請求項1〜3のいずれか一項記載のシステム。
【請求項５】
第1または第2の追跡可能な融合タンパク質についてのリガンドが、追跡可能な融合タンパク質のスーパーファミリー受容体タンパク質についての天然リガンド、またはそれと競合的に結合する天然もしくは合成化合物である、請求項1記載のシステム。
【請求項６】
追跡可能な融合タンパク質のリガンド結合ドメインについてのリガンドの不在下でシステムの追跡可能な融合タンパク質と安定して会合し、かつ、追跡可能な融合タンパク質のリガンド結合ドメインについてのリガンドの存在下で融合タンパク質から解離する、1つまたは複数の化合物および／または組成物をさらに含む、請求項1〜5のいずれか一項記載のシステム。
【請求項７】
哺乳動物細胞がヒト細胞である、請求項1〜6のいずれか一項記載のシステム。
【請求項８】
異なる追跡可能な融合タンパク質を各々発現する少なくとも4つの哺乳動物細胞系を含み、ここで、追跡可能な融合タンパク質が各々、グルココルチコイド、アンドロゲン、プロゲスチン、アリール炭化水素、またはミネラルコルチコイドのうちの1つに結合する、請求項1〜7のいずれか一項記載のシステム。
【請求項９】
キットとして提供される、請求項1〜8のいずれか一項記載のシステム。
【請求項１０】
サンプル中の内分泌かく乱物質（EDC）リガンドを検出または定量化するための方法であって、
サンプルと、第1の追跡可能な融合タンパク質を発現する第1哺乳動物細胞および第2の追跡可能な融合タンパク質を発現する第2哺乳動物細胞とを接触させる工程であって、第1および第2の追跡可能な融合タンパク質が、独立して、
(1)スーパーファミリー受容体タンパク質、および
マーカータンパク質ドメイン；または
(2)グルココルチコイド受容体の細胞質／核移行ドメイン、
スーパーファミリー受容体タンパク質のリガンド結合ドメイン、および
マーカータンパク質ドメイン
のいずれかを含む、工程；ならびに
サンプル中のリガンド結合ドメインのリガンドへの結合に応答しての第1および/または第2の融合タンパク質の細胞質から核への移行を検出する工程
を含み、第1および第2の追跡可能な融合タンパク質が異なる標的リガンドに結合しかつグルココルチコイド、アンドロゲン、プロゲスチン、アリール炭化水素、またはミネラルコルチコイドのうちの1つに結合する、方法。
【請求項１１】
サンプル中の内分泌かく乱物質（EDC）リガンドの濃度を測定する方法であって、
サンプルと、第1の追跡可能な融合タンパク質を発現する第1哺乳動物細胞および第2の追跡可能な融合タンパク質を発現する第2哺乳動物細胞を含む、融合タンパク質をそれらの細胞質中において発現する真核細胞の集団とを接触させる工程であって、第1および第2の追跡可能な融合タンパク質が、独立して、
(1)スーパーファミリー受容体タンパク質、および
マーカータンパク質ドメイン；または
(2)グルココルチコイド受容体の細胞質／核移行ドメイン、
スーパーファミリー受容体タンパク質のリガンド結合ドメイン、および
マーカータンパク質ドメイン
のいずれかを含む、工程；ならびに
1つまたは複数の試験細胞をスキャンして融合タンパク質のマーカーからのシグナルデータを得る工程；
シグナルデータを変換して試験細胞中の標識タンパク質の細胞内位置を得る工程；ならびに
試験細胞の細胞質および核の間の標識融合タンパク質の分布の変化を計算するためのアルゴリズムを有する分析システムを使用してシグナルデータを分析する工程であって、分析システムがリガンドの濃度の正確なリーディングを提供する能力を有する、工程
を含み、第1および第2の追跡可能な融合タンパク質が異なる標的リガンドに結合しかつグルココルチコイド、アンドロゲン、プロゲスチン、アリール炭化水素、またはミネラルコルチコイドのうちの1つに結合する、方法。
【請求項１２】
サンプルが、水サンプル、土壌サンプル、または空気サンプルを含む環境サンプルである、請求項1〜9のいずれか一項記載のシステム。
【請求項１３】
サンプルが、地表水、地表面下（地下）水、雨水、流去水、井戸水、湧水、飲料水（処理済みもしくは未処理）、河川水、河口水、海水、廃液、処理汚水または未処理汚水を含む水サンプルを含む、請求項12記載のシステム。
【請求項１４】
サンプルが、水サンプル、土壌サンプル、または空気サンプルを含む環境サンプルである請求項10または11記載の方法。
【請求項１５】
サンプルが、地表水、地表面下（地下）水、雨水、流去水、井戸水、湧水、飲料水（処理済みもしくは未処理）、河川水、河口水、海水、廃液、処理汚水または未処理汚水を含む水サンプルを含む、請求項14記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１７】
[本発明1001]
環境サンプル中のスーパーファミリー受容体タンパク質のリガンドを検出または定量化するためのシステムであって、システムが：
第1の追跡可能な融合タンパク質を発現する第1哺乳動物細胞；
第2の追跡可能な融合タンパク質を発現する第2哺乳動物細胞；および
マーカータンパク質の細胞質から核への移行の検出のための検出システム
を含み、
ここで、第1および第2の追跡可能な融合タンパク質が、独立して、
(1)スーパーファミリー受容体タンパク質、および
マーカータンパク質ドメイン；または
(2)グルココルチコイド受容体の細胞質／核移行ドメイン、
スーパーファミリー受容体タンパク質のリガンド結合ドメイン、および
マーカータンパク質ドメイン
のいずれかを含む、システム。
[本発明1002]
リガンドがアゴニストまたはアンタゴニストである、本発明1001のシステム。
[本発明1003]
第1の追跡可能な融合タンパク質が、第2の追跡可能な融合タンパク質とは異なるリガンドに結合する、本発明1001のシステム。
[本発明1004]
マーカータンパク質ドメインが、第1および第2の追跡可能な融合タンパク質において異なる、本発明1003のシステム。
[本発明1005]
マーカータンパク質ドメインが蛍光タンパク質ドメインである、前記本発明のいずれかのシステム。
[本発明1006]
第1または第2の追跡可能な融合タンパク質についてのリガンドが、追跡可能な融合タンパク質のスーパーファミリー受容体タンパク質についての天然リガンド、またはそれと競合的に結合する天然もしくは合成化合物である、本発明1001のシステム。
[本発明1007]
追跡可能な融合タンパク質のリガンド結合ドメインについてのリガンドの不在下でシステムの追跡可能な融合タンパク質と安定して会合し、かつ、追跡可能な融合タンパク質のリガンド結合ドメインについてのリガンドの存在下で融合タンパク質から解離する、1つまたは複数の化合物および／または組成物をさらに含む、前記本発明のいずれかのシステム。
[本発明1008]
哺乳動物細胞がヒト細胞である、前記本発明のいずれかのシステム。
[本発明1009]
異なる追跡可能な融合タンパク質を各々発現する少なくとも4つの哺乳動物細胞系を含み、ここで、少なくとも1つの追跡可能な融合タンパク質がグルココルチコイドに結合し、少なくとも1つの追跡可能な融合タンパク質がアンドロゲンに結合し、少なくとも1つの追跡可能な融合タンパク質がプロゲスチンに結合し、かつ、少なくとも1つの追跡可能な融合タンパク質がアリール炭化水素に結合する、前記本発明のいずれかのシステム。
[本発明1010]
異なる追跡可能な融合タンパク質を各々発現する少なくとも4つの哺乳動物細胞系を含み、ここで、追跡可能な融合タンパク質が各々、グルココルチコイド、アンドロゲン、プロゲスチン、アリール炭化水素、またはミネラルコルチコイドのうちの1つに結合する、本発明1001〜1008のいずれかのシステム。
[本発明1011]
キットとして提供される、前記本発明のいずれかのシステム。
[本発明1012]
環境サンプル中の内分泌かく乱物質（EDC）リガンドを検出または定量化するための方法であって、
環境サンプルと、以下を含む融合タンパク質をその細胞質中において発現するヒト細胞とを接触させる工程：
リガンドについての受容体であって、リガンド結合の際に細胞質から核へ移行する受容体、および
マーカータンパク質ドメイン；ならびに
環境サンプル中のリガンド結合ドメインのリガンドへの結合に応答しての融合タンパク質の細胞質から核への移行を検出する工程
を含む、方法。
[本発明1013]
環境サンプル中の内分泌かく乱物質（EDC）リガンドの濃度を測定する方法であって、
環境サンプルと、以下を含む融合タンパク質をそれらの細胞質中において発現する真核細胞の集団とを接触させる工程：
リガンドについての受容体であって、リガンド結合の際に細胞質から核へ移行する受容体、および
マーカータンパク質ドメイン；ならびに
1つまたは複数の試験細胞をスキャンして融合タンパク質のマーカーからのシグナルデータを得る工程；
シグナルデータを変換して試験細胞中の標識タンパク質の細胞内位置を得る工程；ならびに
試験細胞の細胞質および核の間の標識融合タンパク質の分布の変化を計算するためのアルゴリズムを有する分析システムを使用してシグナルデータを分析する工程であって、分析システムがリガンドの濃度の正確なリーディングを提供する能力を有する、工程
を含む、方法。
[本発明1014]
環境サンプルが、水サンプル、土壌サンプル、または空気サンプルを含む、前記本発明のいずれかのシステムまたは方法。
[本発明1015]
サンプルが、地表水、地表面下（地下）水、雨水、流去水、井戸水、湧水、飲料水（処理済みもしくは未処理）、河川水、河口水、海水、廃液、処理汚水または未処理汚水を含む水サンプルを含む、本発明1014のシステムまたは方法。
[本発明1016]
サンプル中のスーパーファミリー受容体タンパク質のリガンドを検出または定量化するためのシステムであって、システムが：
第1の追跡可能な融合タンパク質を発現する第1哺乳動物細胞；
第2の追跡可能な融合タンパク質を発現する第2哺乳動物細胞：および
マーカータンパク質の細胞質から核への移行の検出のための検出システム
を含み、
ここで、第1および第2の追跡可能な融合タンパク質が、独立して、
(1)スーパーファミリー受容体タンパク質、および
マーカータンパク質ドメイン；または
(2)グルココルチコイド受容体の細胞質／核移行ドメイン、
スーパーファミリー受容体タンパク質のリガンド結合ドメイン、および
マーカータンパク質ドメイン
のいずれかを含む、システム。
[本発明1017]
サンプル中の内分泌かく乱物質（EDC）リガンドを検出または定量化するための方法であって、
サンプルと、以下を含む融合タンパク質をその細胞質中において発現するヒト細胞とを接触させる工程：
リガンドについての受容体であって、リガンド結合の際に細胞質から核へ移行する受容体、および
マーカータンパク質ドメイン；ならびに
サンプル中のリガンド結合ドメインのリガンドへの結合に応答しての融合タンパク質の細胞質から核への移行を検出する工程
を含む、方法。
[本発明1018]
サンプル中の内分泌かく乱物質（EDC）リガンドの濃度を測定する方法であって、
サンプルと、以下を含む融合タンパク質をそれらの細胞質中において発現する真核細胞の集団とを接触させる工程：
リガンドについての受容体であって、リガンド結合の際に細胞質から核へ移行する受容体、および
マーカータンパク質ドメイン；ならびに
1つまたは複数の試験細胞をスキャンして融合タンパク質のマーカーからのシグナルデータを得る工程；
シグナルデータを変換して試験細胞中の標識タンパク質の細胞内位置を得る工程；ならびに
試験細胞の細胞質および核の間の標識融合タンパク質の分布の変化を計算するためのアルゴリズムを有する分析システムを使用してシグナルデータを分析する工程であって、分析システムがリガンドの濃度の正確なリーディングを提供する能力を有する、工程
を含む、方法。
本発明の前述および他の目的、特徴、および利点は、添付の図面を参照して進行する、以下の詳細な説明からより明らかとなるであろう。