【手続補正書】
【提出日】平成27年12月21日(2015.12.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
融合タンパク質であって、
―  フラグメントがｈＴＲＡＩＬ９５より小さくない位置のアミノ酸から始まり、ｈＴＲＡＩＬ２８１の位置のアミノ酸で終わる、可溶性ｈＴＲＡＩＬタンパク質配列の機能的フラグメントであるか、または、少なくとも７０％の配列同一性、好ましくは８５％の同一性を有する、前記機能的フラグメントのホモログである、ドメイン（ａ）、および
―  細胞膜に小孔を形成する細胞溶解性エフェクターペプチドの配列である、少なくとも１つのドメイン（ｂ）、
を含み、
ここでドメイン（ｂ）の配列が、ドメイン（ａ）のＣ末端および／またはＮ末端に付着している、前記融合タンパク質。
【請求項２】
ドメイン（ａ）が、ｈＴＲＡＩＬ９５からｈＴＲＡＩＬ１２１までの範囲（両端を含む）のアミノ酸から始まり、アミノ酸ｈＴＲＡＩＬ２８１で終わる、可溶性ｈＴＲＡＩＬ（配列番号９０）タンパク質配列のフラグメントを含む、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項３】
ドメイン（ａ）が、ｈＴＲＡＩＬ９５−２８１、ｈＴＲＡＩＬ１１４−２８１、ｈＴＲＡＩＬ１１５−２８１、ｈＴＲＡＩＬ１１６−２８１、ｈＴＲＡＩＬ１１９−２８１、およびｈＴＲＡＩＬ１２１−２８１からなる群から選択される、請求項１または２に記載の融合タンパク質。
【請求項４】
ドメイン（ｂ）が、
―  配列番号３４のヒトグラニュライシンの活性型、
―  配列番号３５の１５アミノ酸合成溶解性ペプチド、
―  配列番号３６のピロスリン１、
―  配列番号３７のピロスリン５、
―  配列番号３８のタキプレシンからのペプチド、
―  配列番号３９の融合ペプチドボンベシン−マガイニン２、
―  配列番号４０のマガイニン２、
―  配列番号４１の１４アミノ酸合成溶解性ペプチド、
―  配列番号４２の２６アミノ酸ハイブリッドペプチドセクロピン−メリチン、
―  配列番号４３の２７アミノ酸ペプチドＦＦｈＣＡＰ１８、
―  配列番号４４のＢＡＭＰ−２８ペプチド、
―  配列番号４５の、Entamoeba histolyticaからの溶解性ペプチドのアイソフォームＣのアナログ、
―  配列番号４６の、Entamoeba histolyticaからの溶解性ペプチドのアイソフォームＡのアナログ、
―  配列番号４７の、Entamoeba histolyticaからの溶解性ペプチドのアイソフォームＢのアナログ、
―  配列番号４８の、インフルエンザウイルスヘマグルチニンのＨＡ２ドメインのフラグメント、
―  配列番号４９の、ホスホリパーゼＣ活性を有する、Clostridium perfringensからのα毒素のＮ末端ドメイン、
―  配列番号５０のリステリオリシンＯ、
―  配列番号５１のホスホリパーゼＰＣ−ＰＬＣ、
―  配列番号５２のイクイナトキシンＥｑＴｘ−ＩＩ、
―  配列番号５３のビスコトキシンＡ３（ＶｔＡ３）、
―  配列番号５４のヒトパーフォリンの活性フラグメント、
―  配列番号５５のBacillus thuringensisのパラスポリン２、
―  配列番号５６の、ＥＧＦインヒビターと合成溶解性ペプチドを含む融合ペプチド、
―  配列番号１２５の、ＫＬＬＫモチーフを有する合成溶解性ペプチドとＰＤＧＦ受容体のアンタゴニストであるペプチドを含む、融合タンパク質、
―  配列番号１２６のプレウロシジンアナログ、
―  配列番号１２７のプレウロシジンアナログ、
―  配列番号１２８の合成溶解性ペプチド、
―  配列番号１２９の、ボンベシンとＢ２７ペプチドを含む融合ペプチド、
―  配列番号１３０の１７アミノ酸合成Ｂ２７ペプチド、
―  配列番号１３１の、ボンベシンとＢ２８ペプチドを含む融合ペプチド、および
―  配列番号１３２のメリチンペプチド、
からなる群から選択される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の融合タンパク質。
【請求項５】
ドメイン（ｂ）が、
―  配列番号３４のヒトグラニュライシンの活性型、
―  配列番号３５の１５アミノ酸合成溶解性ペプチド、
―  配列番号３８のタキプレシンからのペプチド、
―  配列番号３９の融合ペプチドボンベシン−マガイニン２、
―  配列番号４０のマガイニン２、
―  配列番号４２の２６アミノ酸ハイブリッドペプチドセクロピン−メリチン、
―  配列番号５３のビスコトキシンＡ３（ＶｔＡ３）、
―  配列番号５６の、ＥＧＦインヒビターと合成溶解性ペプチドを含む融合ペプチド、
―  配列番号１２９の、ボンベシンとＢ２７ペプチドを含む融合ペプチド、
―  配列番号１３０の１７アミノ酸合成Ｂ２７ペプチド、
―  配列番号１３１の、ボンベシンとＢ２８ペプチドを含む融合ペプチド、および
―  配列番号１３２のメリチンペプチド、
からなる群から選択される強い正電荷を有するペプチドである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の融合タンパク質。
【請求項６】
ドメイン（ｂ）が、
―  配列番号３６のピロスリン１、
―  配列番号３７のピロスリン５、
―  配列番号４１の１４アミノ酸合成溶解性ペプチド、
―  配列番号４３の２７アミノ酸ペプチドＦＦｈＣＡＰ１８、
―  配列番号４４のＢＡＭＰ−２８ペプチド、
―  配列番号４５の、Entamoeba histolyticaからの溶解性ペプチドのアイソフォームＣのアナログ、
―  配列番号４６の、Entamoeba histolyticaからの溶解性ペプチドのアイソフォームＡのアナログ、
―  配列番号４７の、Entamoeba histolyticaからの溶解性ペプチドのアイソフォームＢのアナログ、
―  配列番号４８の、インフルエンザウイルスヘマグルチニンのＨＡ２ドメインのフラグメント、
―  配列番号５４のヒトパーフォリンの活性フラグメント、
―  配列番号５５のBacillus thuringensisのパラスポリン２、
―  配列番号１２５の、ＫＬＬＫモチーフを有する合成溶解性ペプチドとＰＤＧＦ受容体のアンタゴニストであるペプチドを含む、融合タンパク質、
―  配列番号１２６のプレウロシジンアナログ、
―  配列番号１２７のプレウロシジンアナログ、および
―  配列番号１２８の合成溶解性ペプチド、
からなる群から選択される両親媒性αヘリックスを有するペプチドである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の融合タンパク質。
【請求項７】
ドメイン（ｂ）が、ホスホリパーゼ、溶血素、および／または細胞溶解素の群から選択される酵素活性を有するペプチド、好ましくは、
―  配列番号４９の、ホスホリパーゼＣ活性を有する、Clostridium perfringensからのα毒素のＮ末端ドメイン、
―  配列番号５０のリステリオリシンＯ、
―  配列番号５１のホスホリパーゼＰＣ−ＰＬＣ、および
―  配列番号５２のイクイナトキシンＥｑＴｘ−ＩＩ、
からなる群から選択されるペプチドである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の融合タンパク質。
【請求項８】
ドメイン（ａ）とドメイン（ｂ）の間、または複数のドメイン（ｂ）の間に、メタロプロテアーゼＭＭＰにより認識される配列、ウロキナーゼｕＰＡにより認識される配列、およびフューリンにより認識される配列、およびネイティブフューリンにより認識される配列から選択される、プロテアーゼ切断部位を含有するドメイン（ｃ）を含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の融合タンパク質。
【請求項９】
メタロプロテアーゼＭＭＰにより認識される配列が、Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ  Ａｌａ  Ｇｌｙであり、ウロキナーゼｕＰＡにより認識される配列が、Ａｒｇ  Ｖａｌ  Ｖａｌ  Ａｒｇであり、フューリンにより認識される配列が、Ａｒｇ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ａｒｇであり、およびネイティブフューリンにより認識される配列が、Ａｒｇ  Ｈｉｓ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ｐｒｏ  Ａｒｇ  Ｇｌｙ  Ｔｒｐ  Ｇｌｕ  Ｇｌｎ  ＬｅｕまたはＨｉｓ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ｐｒｏ  Ａｒｇ  Ｇｌｙ  Ｔｒｐ  Ｇｌｕ  Ｇｌｎである、請求項８に記載の融合タンパク質。
【請求項１０】
ドメイン（ｃ）が、互いに隣接して位置する、メタロプロテアーゼＭＭＰにより認識される配列と、ウロキナーゼｕＰＡにより認識される配列の組み合わせである、請求項８または９に記載の融合タンパク質。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれか一項に記載の融合タンパク質であって、ドメイン（ｂ）のエフェクターペプチドが、輸送ドメイン（ｄ）にさらに結合されており、該輸送ドメイン（ｄ）が、以下：
―（ｄ１）６、７、８、９、１０または１１個のＨｉｓ残基を含む、細胞膜を通って輸送するポリヒスチジン配列、および
―（ｄ２）６、７、８、９、１０または１１個のＡｒｇ残基からなる、細胞膜を通って輸送するポリアルギニン配列、
―（ｄ３）ＰＤ４輸送ドメイン（タンパク質形質導入ドメイン４）Ｔｙｒ  Ａｌａ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ａｌａ  Ａｌａ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ａｒｇ  Ａｌａ、
―（ｄ４）トランスフェリン受容体結合配列Ｔｈｒ  Ｈｉｓ  Ａｒｇ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ｍｅｔ  Ｔｒｐ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ｖａｌ  Ｔｒｐ  Ｐｒｏからなる輸送配列、および
―（ｄ５）ＰＤ５輸送ドメイン（タンパク質形質導入ドメイン５、ＴＡＴタンパク質）Ｔｙｒ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ａｒｇ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ａｒｇ  Ａｒｇ  Ａｒｇ、
およびそれらの組み合わせ、からなる群から選択される、前記融合タンパク質。
【請求項１２】
配列（ｄ）が、エフェクターペプチドドメイン（ｂ）のＣ末端またはＮ末端に位置する、請求項１１に記載の融合タンパク質。
【請求項１３】
輸送ドメイン（ｄ）が、ドメイン（ｂ）とドメイン（ｃ）の間、またはドメイン（ａ）とドメイン（ｃ）の間、または２つのドメイン（ｃ）の間に位置する、請求項１１に記載の融合タンパク質。
【請求項１４】
配列（ｄ）が、融合タンパク質のＣ末端に位置する、請求項１１に記載の融合タンパク質。
【請求項１５】
２つの（ｃ）ドメインの間に、Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ｇｌｙ  Ｐｒｏ  Ｇｌｕ  ＧｌｙおよびＡｌａ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ｇｌｙ  Ｐｒｏ  Ｇｌｕから選択される、ＰＥＧ分子の付着のためのリンカーであるドメイン（ｄ）を含む、請求項８〜１４のいずれか一項に記載の融合タンパク質。
【請求項１６】
フレキシブルな立体リンカーをドメイン（ａ）、（ｂ）、および／または（ｃ）の間にさらに含む、請求項８〜１５のいずれか一項に記載の融合タンパク質。
【請求項１７】
立体リンカーが、Ｇｌｙ  Ｇｌｙ、Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ、Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ、Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ、Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ、Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ、Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ、Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ、Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ、Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ、Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ、Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ａｌａ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ａｌａ  Ａｌａ  Ｃｙｓ、Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ａｌａ  Ａｌａ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ａｌａ  Ｃｙｓ、Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ、単一のグリシン残基Ｇｌｙ、および単一のシステイン残基Ｃｙｓ、およびこれらの組み合わせから選択される、請求項１６に記載の融合タンパク質。
【請求項１８】
以下からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項１に記載の融合タンパク質：配列番号１；配列番号２；配列番号３；配列番号４；配列番号５；配列番号６；配列番号７；配列番号８；配列番号９；配列番号１０；配列番号１１；配列番号１２；配列番号１３；配列番号１４；配列番号１５；配列番号１６；配列番号１７；配列番号１８；配列番号１９；配列番号２０；配列番号２１；配列番号２２；配列番号２３；配列番号２４；配列番号２５；配列番号２６；配列番号２７；配列番号２８；配列番号２９；配列番号３０；配列番号３１；配列番号３２；配列番号３３；配列番号９１；配列番号９２；配列番号９３；配列番号９４；配列番号９５；配列番号９６；配列番号９７；配列番号９８；配列番号９９；配列番号１００；配列番号１０１；配列番号１０２；配列番号１０３；配列番号１０４；配列番号１０５；配列番号１０６；および配列番号１０７。
【請求項１９】
組み換えタンパク質である、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の融合タンパク質。
【請求項２０】
請求項１〜１８のいずれか一項に記載の融合タンパク質をコードする、ポリヌクレオチド配列。
【請求項２１】
E. coliにおける遺伝子発現について最適化された、請求項２０に記載のポリヌクレオチド配列。
【請求項２２】
以下からなる群から選択される、請求項２１に記載の配列：配列番号５７；配列番号５８；配列番号５９；配列番号６０；配列番号６１；配列番号６２；配列番号６３；配列番号６４；配列番号６５；配列番号６６；配列番号６７；配列番号６８；配列番号６９；配列番号７０；配列番号７１；配列番号７２；配列番号７３；配列番号７４；配列番号７５；配列番号７６；配列番号７７；配列番号７８；配列番号７９；配列番号８０；配列番号８１；配列番号８２；配列番号８３；配列番号８４；配列番号８５；配列番号８６；配列番号８７；配列番号８８；配列番号８９；配列番号１０８；配列番号１０９；配列番号１１０；配列番号１１１；配列番号１１２；配列番号１１３；配列番号１１４；配列番号１１５；配列番号１１６；配列番号１１７；配列番号１１８；配列番号１１９；配列番号１２０；配列番号１２１；配列番号１２２；配列番号１２３；および配列番号１２４。
【請求項２３】
活性成分としての請求項１〜１９のいずれか一項に記載の融合タンパク質を、薬学的に許容し得る担体と組み合わせて含む、医薬組成物。
【請求項２４】
非経口投与用の形態である、請求項２３に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
ヒトを含む哺乳動物における腫瘍性疾患の処置に用いるための、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の融合タンパク質。