【手続補正書】
【提出日】平成28年3月25日(2016.3.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
SEQ ID NO:23の少なくとも349番目の残基を含むエピトープおよびSEQ ID NO:24の少なくとも349番目の残基を含むエピトープに結合する、Toll様受容体4（TLR4）に特異的に結合する単離抗体。
【請求項２】
2015514094.tif 000001
の可変重鎖相補性決定領域1（CDRH1）アミノ酸配列；
2015514094.tif 000002
の可変重鎖相補性決定領域2（CDRH2）アミノ酸配列；および
X1がN、Q、DまたはEであり、X2が任意の疎水性アミノ酸であり、かつX3が任意の疎水性アミノ酸である、
2015514094.tif 000003
の可変重鎖相補性決定領域3（CDRH3）アミノ酸配列
を含む3つの相補性決定領域（CDR）を有する重鎖、ならびに
2015514094.tif 000004
の可変軽鎖相補性決定領域1（CDRL1）アミノ酸配列；
YAS（SEQ ID NO:38）の可変軽鎖相補性決定領域2（CDRL2）アミノ酸配列；および
2015514094.tif 000005
の可変軽鎖相補性決定領域3（CDRL3）アミノ酸配列
を含む3つのCDRを有する軽鎖を含む、請求項1記載の単離抗体。
【請求項３】
エピトープが、SEQ ID NO:23およびSEQ ID NO:24の少なくとも328番目および329番目の残基をさらに含む、請求項1記載の単離抗体。
【請求項４】
エピトープが、SEQ ID NO:23およびSEQ ID NO:24の少なくとも351番目の残基をさらに含む、請求項1記載の単離抗体。
【請求項５】
エピトープが、SEQ ID NO:23およびSEQ ID NO:24の369番目の残基から371番目の残基のあいだの1つまたは複数の残基をさらに含む、請求項1記載の単離抗体。
【請求項６】
エピトープが、SEQ ID NO:23およびSEQ ID NO:24の少なくとも369番目の残基から371番目の残基をさらに含む、請求項1記載の単離抗体。
【請求項７】
SEQ ID NO:23およびSEQ ID NO:24の少なくとも328番目、329番目、349番目、351番目、および369番目から371番目の残基を含むエピトープに特異的に結合する、請求項1記載の単離抗体。
【請求項８】
SEQ ID NO:23の少なくとも349番目の残基を含むエピトープに結合し、ヒトTLR4に対する結合に関して、SEQ ID NO:43の可変重鎖アミノ酸配列およびSEQ ID NO:4の可変軽鎖アミノ酸配列を有する参照抗体によって示されるEC50値より低いEC50値を示す、Toll様受容体4（TLR4）に特異的に結合する単離抗体。
【請求項９】
ヒトTLR4に対する結合に関するEC50値が競合的ELISAによって決定される、請求項8記載の単離抗体。
【請求項１０】
ヒトTLR4に対する結合に関して、参照抗体によって示されるEC50値より少なくとも10倍低いEC50値を示す、請求項8または請求項9記載の単離抗体。
【請求項１１】
SEQ ID NO:24の少なくとも349番目の残基を含むエピトープにさらに特異的に結合する、請求項8〜10のいずれか1項記載の単離抗体。
【請求項１２】
X1がFまたはYであり、X2がR、G、またはWであり、X3がY、F、またはGである、
2015514094.tif 000006
の可変重鎖相補性決定領域1（CDRH1）アミノ酸配列；
2015514094.tif 000007
の可変重鎖相補性決定領域2（CDRH2）アミノ酸配列；および
X1がN、Q、DまたはEであり、X2が任意の疎水性アミノ酸であり、かつX3が任意の疎水性アミノ酸である、
2015514094.tif 000008
の可変重鎖相補性決定領域3（CDRH3）アミノ酸配列
を含む3つの相補性決定領域（CDR）を有する重鎖、ならびに
2015514094.tif 000009
の可変軽鎖相補性決定領域1（CDRL1）アミノ酸配列；
YAS（SEQ ID NO:38）の可変軽鎖相補性決定領域2（CDRL2）アミノ酸配列；および
X1がYまたはNであり、X2がDまたはEであり、X3がFまたはYであり、かつX4が任意の疎水性アミノ酸である、
2015514094.tif 000010
のアミノ酸配列、または
2015514094.tif 000011
のアミノ酸配列を含む可変軽鎖相補性決定領域3（CDRL3）
を含む3つのCDRを有する軽鎖を含む、請求項8から11のいずれか1項記載の単離抗体。
【請求項１３】
野生型ヒトIgG1 Fc骨格の抗体が、ヒト全血アッセイにおけるヒトTLR4のLPS活性化の阻害に関して、SEQ ID NO:43の可変重鎖アミノ酸配列およびSEQ ID NO:4の可変軽鎖アミノ酸配列を有する参照抗体によって示されるIC50値より低いIC50値を示す、SEQ ID NO:23のToll様受容体4（TLR4）に特異的に結合する単離抗体。
【請求項１４】
ヒトTLR4のLPS活性化の阻害に関して、参照抗体によって示されるIC50値より少なくとも2倍低いIC50値を示す、請求項13記載の単離抗体。
【請求項１５】
X1がFまたはYであり、X2がR、G、またはWであり、X3がY、F、またはGである、
2015514094.tif 000012
の可変重鎖相補性決定領域1（CDRH1）アミノ酸配列；
2015514094.tif 000013
の可変重鎖相補性決定領域2（CDRH2）アミノ酸配列；および
X1がN、Q、Dであり、X2が任意の疎水性アミノ酸であり、かつX3が任意の疎水性アミノ酸である、
2015514094.tif 000014
の可変重鎖相補性決定領域3（CDRH3）アミノ酸配列
を含む3つの相補性決定領域（CDR）を有する重鎖、ならびに
2015514094.tif 000015
の可変軽鎖相補性決定領域1（CDRL1）アミノ酸配列；
YAS（SEQ ID NO:38）の可変軽鎖相補性決定領域2（CDRL2）アミノ酸配列；および
X1がYまたはNであり、X2がDであり、X3がFまたはYであり、かつX4が任意の疎水性アミノ酸である、
2015514094.tif 000016
のアミノ酸配列、または
2015514094.tif 000017
のアミノ酸配列を含む可変軽鎖相補性決定領域3（CDRL3）
を含む3つのCDRを有する軽鎖を含む、請求項13または14記載の単離抗体。
【請求項１６】
X1がFまたはYであり、X2がR、G、またはWであり、X3がY、F、またはGである、
2015514094.tif 000018
の可変重鎖相補性決定領域1（CDRH1）アミノ酸配列；
2015514094.tif 000019
の可変重鎖相補性決定領域2（CDRH2）アミノ酸配列；および
X1がN、Q、DまたはEであり、X2が任意の疎水性アミノ酸であり、かつX3が任意の疎水性アミノ酸である、
2015514094.tif 000020
の可変重鎖相補性決定領域3（CDRH3）アミノ酸配列
を含む3つの相補性決定領域（CDR）を有する重鎖、ならびに
2015514094.tif 000021
の可変軽鎖相補性決定領域1（CDRL1）アミノ酸配列；
YAS（SEQ ID NO:38）の可変軽鎖相補性決定領域2（CDRL2）アミノ酸配列；および
X1がYまたはNであり、X2がDまたはEであり、X3がFまたはYであり、かつX4が任意の疎水性アミノ酸である、
2015514094.tif 000022
の可変軽鎖相補性決定領域3（CDRL3）アミノ酸配列
を含む3つのCDRを有する軽鎖を含む、Toll様受容体4（TLR4）に特異的に結合する単離抗体。
【請求項１７】
2015514094.tif 000023
のCDRH1アミノ酸配列；
2015514094.tif 000024
のCDRH2アミノ酸配列；および
2015514094.tif 000025
からなる群より選択されるCDRH3アミノ酸配列；
2015514094.tif 000026
のCDRL1アミノ酸配列；
YAS（SEQ ID NO:38）のCDRL2アミノ酸配列；および
2015514094.tif 000027
からなる群より選択されるCDRL3アミノ酸配列を含む、請求項16記載の単離抗体。
【請求項１８】
以下からなる群より選択される、CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2、およびCDRL3の組み合わせを含む、請求項16記載の単離抗体：
(a)SEQ ID NO:56のアミノ酸配列を含むCDRH1、SEQ ID NO:26のアミノ酸配列を含むCDRH2、SEQ ID NO:27のアミノ酸配列を含むCDRH3、SEQ ID NO:37のアミノ酸配列を含むCDRL1、SEQ ID NO:38のアミノ酸配列を含むCDRL2、およびSEQ ID NO:39のアミノ酸配列を含むCDRL3；
(b)SEQID NO:55のアミノ酸配列を含むCDRH1、SEQ ID NO:26のアミノ酸配列を含むCDRH2、SEQ ID NO:27のアミノ酸配列を含むCDRH3、SEQ ID NO:37のアミノ酸配列を含むCDRL1、SEQ ID NO:38のアミノ酸配列を含むCDRL2、およびSEQ ID NO:39のアミノ酸配列を含むCDRL3；
(c)SEQ ID NO:57のアミノ酸配列を含むCDRH1、SEQ ID NO:26のアミノ酸配列を含むCDRH2、SEQ ID NO:27のアミノ酸配列を含むCDRH3、SEQ ID NO:37のアミノ酸配列を含むCDRL1、SEQ ID NO:38のアミノ酸配列を含むCDRL2、およびSEQ ID NO:39のアミノ酸配列を含むCDRL3；
(d)SEQ ID NO:58のアミノ酸配列を含むCDRH1、SEQ ID NO:26のアミノ酸配列を含むCDRH2、SEQ ID NO:27のアミノ酸配列を含むCDRH3、SEQ ID NO:37のアミノ酸配列を含むCDRL1、SEQ ID NO:38のアミノ酸配列を含むCDRL2、およびSEQ ID NO:39のアミノ酸配列を含むCDRL3；
(e)SEQ ID NO:59のアミノ酸配列を含むCDRH1、SEQ ID NO:26のアミノ酸配列を含むCDRH2、SEQ ID NO:27のアミノ酸配列を含むCDRH3、SEQ ID NO:37のアミノ酸配列を含むCDRL1、SEQ ID NO:38のアミノ酸配列を含むCDRL2、およびSEQ ID NO:39のアミノ酸配列を含むCDRL3；
(f)SEQ ID NO:60のアミノ酸配列を含むCDRH1、SEQ ID NO:26のアミノ酸配列を含むCDRH2、SEQ ID NO:27のアミノ酸配列を含むCDRH3、SEQ ID NO:37のアミノ酸配列を含むCDRL1、SEQ ID NO:38のアミノ酸配列を含むCDRL2、およびSEQ ID NO:39のアミノ酸配列を含むCDRL3；
(g)SEQ ID NO:56のアミノ酸配列を含むCDRH1、SEQ ID NO:26のアミノ酸配列を含むCDRH2、SEQ ID NO:27のアミノ酸配列を含むCDRH3、SEQ ID NO:37のアミノ酸配列を含むCDRL1、SEQ ID NO:38のアミノ酸配列を含むCDRL2、およびSEQ ID NO:61のアミノ酸配列を含むCDRL3；
(h)SEQ ID NO:56のアミノ酸配列を含むCDRH1、SEQ ID NO:26のアミノ酸配列を含むCDRH2、SEQ ID NO:27のアミノ酸配列を含むCDRH3、SEQ ID NO:37のアミノ酸配列を含むCDRL1、SEQ ID NO:38のアミノ酸配列を含むCDRL2、およびSEQ ID NO:63のアミノ酸配列を含むCDRL3；
(i)SEQ ID NO:56のアミノ酸配列を含むCDRH1、SEQ ID NO:26のアミノ酸配列を含むCDRH2、SEQ ID NO:27のアミノ酸配列を含むCDRH3、SEQ ID NO:37のアミノ酸配列を含むCDRL1、SEQ ID NO:38のアミノ酸配列を含むCDRL2、およびSEQ ID NO:64のアミノ酸配列を含むCDRL3；
(j)SEQ ID NO:56のアミノ酸配列を含むCDRH1、SEQ ID NO:26のアミノ酸配列を含むCDRH2、SEQ ID NO:27のアミノ酸配列を含むCDRH3、SEQ ID NO:37のアミノ酸配列を含むCDRL1、SEQ ID NO:38のアミノ酸配列を含むCDRL2、およびSEQ ID NO:65のアミノ酸配列を含むCDRL3；
(k)SEQ ID NO:25のアミノ酸配列を含むCDRH1、SEQ ID NO:26のアミノ酸配列を含むCDRH2、SEQ ID NO:27のアミノ酸配列を含むCDRH3、SEQ ID NO:37のアミノ酸配列を含むCDRL1、SEQ ID NO:38のアミノ酸配列を含むCDRL2、およびSEQ ID NO:61のアミノ酸配列を含むCDRL3；
(l)SEQ ID NO:25のアミノ酸配列を含むCDRH1、SEQ ID NO:26のアミノ酸配列を含むCDRH2、SEQ ID NO:27のアミノ酸配列を含むCDRH3、SEQ ID NO:37のアミノ酸配列を含むCDRL1、SEQ ID NO:38のアミノ酸配列を含むCDRL2、およびSEQ ID NO:62のアミノ酸配列を含むCDRL3；
(m)SEQ ID NO:25のアミノ酸配列を含むCDRH1、SEQ ID NO:26のアミノ酸配列を含むCDRH2、SEQ ID NO:27のアミノ酸配列を含むCDRH3、SEQ ID NO:37のアミノ酸配列を含むCDRL1、SEQ ID NO:38のアミノ酸配列を含むCDRL2、およびSEQ ID NO:63のアミノ酸配列を含むCDRL3；
(n)SEQ ID NO:25のアミノ酸配列を含むCDRH1、SEQ ID NO:26のアミノ酸配列を含むCDRH2、SEQ ID NO:27のアミノ酸配列を含むCDRH3、SEQ ID NO:37のアミノ酸配列を含むCDRL1、SEQ ID NO:38のアミノ酸配列を含むCDRL2、およびSEQ ID NO:64のアミノ酸配列を含むCDRL3；ならびに
(o)SEQ ID NO:25のアミノ酸配列を含むCDRH1、SEQ ID NO:26のアミノ酸配列を含むCDRH2、SEQ ID NO:27のアミノ酸配列を含むCDRH3、SEQ ID NO:37のアミノ酸配列を含むCDRL1、SEQ ID NO:38のアミノ酸配列を含むCDRL2、およびSEQ ID NO:65のアミノ酸配列を含むCDRL3。
【請求項１９】
SEQ ID NO: 2、6、8、10、12、14、16、18、20、22、67、69、71、73、75、または77からなる群より選択される重鎖可変アミノ酸配列を含み、かつSEQ ID NO: 4、79、81、83、85、または87のアミノ酸配列を含む軽鎖可変アミノ酸を含む、Toll様受容体4（TLR4）に特異的に結合する単離抗体。
【請求項２０】
（a）SEQ ID NO:69のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域およびSEQ ID NO:4のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（b）SEQ ID NO:67のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域およびSEQ ID NO:4のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（c）SEQ ID NO:71のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域およびSEQ ID NO:4のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（d）SEQ ID NO:73のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域およびSEQ ID NO:4のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（e）SEQ ID NO:75のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域およびSEQ ID NO:4のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（f）SEQ ID NO:77のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域およびSEQ ID NO:4のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（g）SEQ ID NO:89のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域およびSEQ ID NO:91のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（h）SEQ ID NO:93のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域およびSEQ ID NO:95のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（i）SEQ ID NO:97のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域およびSEQ ID NO:99のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（j）SEQ ID NO:101のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域およびSEQ ID NO:103のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（k）SEQ ID NO:2のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域およびSEQ ID NO:79のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（l）SEQ ID NO:2のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域およびSEQ ID NO:81のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（m）SEQ ID NO:2のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域およびSEQ ID NO:83のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（n）SEQ ID NO:2のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域およびSEQ ID NO:85のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（o）SEQ ID NO:2のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域およびSEQ ID NO:87のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（p）SEQ ID NO:6のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域およびSEQ ID NO:4のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（q）SEQ ID NO:8のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域およびSEQ ID NO:4のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（r）SEQ ID NO:10のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域およびSEQ ID NO:4のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（s）SEQ ID NO:12のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域およびSEQ ID NO:4のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（t）SEQ ID NO:14のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域およびSEQ ID NO:4のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（u）SEQ ID NO:16のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域およびSEQ ID NO:4のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（v）SEQ ID NO:18のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域およびSEQ ID NO:4のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（w）SEQ ID NO:2のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域およびSEQ ID NO:4のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（x）SEQ ID NO:20のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域およびSEQ ID NO:4のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；および
（y）SEQ ID NO:22のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域およびSEQ ID NO:4のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
からなる群より選択される可変重鎖アミノ酸配列と可変軽鎖アミノ酸配列の組み合わせを含む、請求項19記載の単離抗体。
【請求項２１】
γ重鎖定常領域においてEUの325番目のアミノ酸の位置でのアミノ酸置換、およびEUの328番目のアミノ酸の位置でのアミノ酸置換をさらに含む、請求項1〜20のいずれか1項記載の単離抗体。
【請求項２２】
EUの325番目のアミノ酸の位置で置換されるアミノ酸がセリンであり、かつEUの328番目のアミノ酸の位置で置換されるアミノ酸がフェニルアラニンである、請求項21記載の単離抗体。
【請求項２３】
請求項1〜22のいずれか1項記載の抗体を含む、それを必要とする対象における異常なTLR4シグナル伝達に関連する病態の症状を軽減するための薬学的組成物。
【請求項２４】
対象がヒトである、請求項23記載の薬学的組成物。
【請求項２５】
請求項1〜22のいずれか1項記載の抗体を含む、それを必要とする対象における自己免疫疾患または炎症障害を処置するための薬学的組成物。
【請求項２６】
対象がヒトである、請求項25記載の薬学的組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１６】
本発明はまた、SEQ ID NO:23の少なくとも349番目の残基を含むエピトープに結合し、ヒトTLR4に対する結合に関して、SEQ ID NO:43の可変重鎖アミノ酸配列およびSEQ ID NO:4の可変軽鎖アミノ酸配列を有する参照抗体によって示されるEC50値より低いEC50値を示す、Toll様受容体4（TLR4）に特異的に結合する単離抗体を提供する。いくつかの態様において、ヒトTLR4に対する結合に関するEC50値は、競合的ELISAによって決定される。いくつかの態様において、抗体は、ヒトTLR4に対する結合に関して、参照抗体によって示されるEC50値より少なくとも10倍低いEC50値を示す。いくつかの態様において、抗体は、SEQ ID NO:24の少なくとも349番目の残基を含むエピトープに特異的に結合する。いくつかの態様において、抗体は、X1がFまたはYであり、X2がR、G、またはWであり、X3がY、F、またはGである
2015514094.tif 000028
の可変重鎖相補性決定領域1（CDRH1）アミノ酸配列；
2015514094.tif 000029
の可変重鎖相補性決定領域2（CDRH2）アミノ酸配列；およびX1がN、Q、D、またはEであり、X2が任意の疎水性アミノ酸であり、およびX3が任意の疎水性アミノ酸である
2015514094.tif 000030
の可変重鎖相補性決定領域3（CDRH3）アミノ酸配列を含む3つの相補性決定領域（CDR）を有する重鎖、ならびに
2015514094.tif 000031
の可変軽鎖相補性決定領域1（CDRL1）アミノ酸配列；YAS（SEQ ID NO:38）の可変軽鎖相補性決定領域2（CDRL2）アミノ酸配列；およびX1がYまたはNであり、X2がDまたはEであり、X3がFまたはYであり、およびX4が任意の疎水性アミノ酸である、
2015514094.tif 000032
のアミノ酸配列、または
2015514094.tif 000033
のアミノ酸配列を含む可変軽鎖相補性決定領域3（CDRL3）を含む3つのCDRを有する軽鎖を含む。いくつかの態様において、抗体はγ重鎖定常領域においてEUの325番目のアミノ酸の位置でアミノ酸置換を含み、およびEUの328番目のアミノ酸の位置でアミノ酸置換を含む。いくつかの態様において、EUの325番目のアミノ酸の位置で置換されるアミノ酸はセリンであり、EUの328番目のアミノ酸の位置で置換されるアミノ酸はフェニルアラニンである。いくつかの態様において、TLR4抗体はまた、ヒトおよび／またはカニクイザルTLR4/MD-2複合体にも結合する。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１７】
本発明はまた、SEQ ID NO:23の少なくとも349番目の残基を含むエピトープに結合し、およびSEQ ID NO:24の少なくとも349番目の残基を含むエピトープに結合し、ヒトTLR4に対する結合に関して、SEQ ID NO:43の可変重鎖アミノ酸配列およびSEQ ID NO:4の可変軽鎖アミノ酸配列を有する参照抗体によって示されるEC50値より低いEC50値を示す、Toll様受容体4（TLR4）に特異的に結合する単離抗体を提供する。いくつかの態様において、ヒトTLR4に対する結合に関するEC50値は、競合的ELISAによって決定される。いくつかの態様において、抗体は、ヒトTLR4に対する結合に関して、参照抗体によって示されるEC50値より少なくとも10倍低いEC50値を示す。いくつかの態様において、抗体はさらに、SEQ ID NO:24の少なくとも349番目の残基を含むエピトープに特異的に結合する。いくつかの態様において、抗体は、X1がFまたはYであり、X2がR、G、またはWであり、X3がY、F、またはGである
2015514094.tif 000034
の可変重鎖相補性決定領域1（CDRH1）アミノ酸配列；
2015514094.tif 000035
の可変重鎖相補性決定領域2（CDRH2）アミノ酸配列；およびX1がN、Q、D、またはEであり、X2が任意の疎水性アミノ酸であり、およびX3が任意の疎水性アミノ酸である
2015514094.tif 000036
の可変重鎖相補性決定領域3（CDRH3）アミノ酸配列を含む3つの相補性決定領域（CDR）を有する重鎖、ならびに
2015514094.tif 000037
の可変軽鎖相補性決定領域1（CDRL1）アミノ酸配列；YAS（SEQ ID NO:38）の可変軽鎖相補性決定領域2（CDRL2）アミノ酸配列；およびX1がYまたはNであり、X2がDまたはEであり、X3がFまたはYであり、およびX4が任意の疎水性アミノ酸である、
2015514094.tif 000038
のアミノ酸配列、または
2015514094.tif 000039
のアミノ酸配列を含む可変軽鎖相補性決定領域3（CDRL3）を含む3つのCDRを有する軽鎖を含む。いくつかの態様において、抗体はさらに、γ重鎖定常領域においてEUの325番目のアミノ酸の位置でアミノ酸置換を含み、およびEUの328番目のアミノ酸の位置でアミノ酸置換を含む。いくつかの態様において、EUの325番目のアミノ酸の位置で置換されるアミノ酸はセリンであり、EUの328番目のアミノ酸の位置で置換されるアミノ酸はフェニルアラニンである。いくつかの態様において、TLR4抗体はまた、ヒトおよび／またはカニクイザルTLR4/MD-2複合体にも結合する。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１８】
本発明はまた、野生型ヒトIgG1 Fc骨格の抗体が、ヒト全血アッセイにおいてヒトTLR4のLPSによる活性化の阻害に関して、SEQ ID NO:43の可変重鎖アミノ酸配列およびSEQ ID NO:4の可変軽鎖アミノ酸配列を有する参照抗体によって示されるIC50値より低いIC50値を示す、SEQ ID NO:23のToll様受容体4（TLR4）に特異的に結合する単離抗体も提供する。いくつかの態様において、抗体は、ヒトTLR4のLPSによる活性化の阻害に関して、参照抗体が示すIC50値より少なくとも2倍低いIC50値を示す。いくつかの態様において、抗体は、X1がFまたはYであり、X2がR、G、またはWであり、X3がY、F、またはGである
2015514094.tif 000040
の可変重鎖相補性決定領域1（CDRH1）アミノ酸配列；
2015514094.tif 000041
の可変重鎖相補性決定領域2（CDRH2）アミノ酸配列；およびX1がN、Q、D、またはEであり、X2が任意の疎水性アミノ酸であり、およびX3が任意の疎水性アミノ酸である
2015514094.tif 000042
の可変重鎖相補性決定領域3（CDRH3）アミノ酸配列を含む3つの相補性決定領域（CDR）を有する重鎖、ならびに
2015514094.tif 000043
の可変軽鎖相補性決定領域1（CDRL1）アミノ酸配列；YAS（SEQ ID NO:38）の可変軽鎖相補性決定領域2（CDRL2）アミノ酸配列；およびX1がYまたはNであり、X2がDまたはEであり、X3がFまたはYであり、およびX4が任意の疎水性アミノ酸である、
2015514094.tif 000044
のアミノ酸配列、または
2015514094.tif 000045
のアミノ酸配列を含む可変軽鎖相補性決定領域3（CDRL3）を含む3つのCDRを有する軽鎖を含む。いくつかの態様において、抗体は、SEQ ID NO:23の少なくとも349番目の残基を含むエピトープに結合する。いくつかの態様において、抗体は、SEQ ID NO:23の少なくとも349番目の残基を含むエピトープに結合し、SEQ ID NO:24の少なくとも349番目の残基を含むエピトープに結合する。いくつかの態様において、抗体はさらに、γ重鎖定常領域においてEUの325番目のアミノ酸の位置でアミノ酸置換を含み、およびEUの328番目のアミノ酸の位置でアミノ酸置換を含む。いくつかの態様において、EUの325番目のアミノ酸の位置で置換されるアミノ酸はセリンであり、EUの328番目のアミノ酸の位置で置換されるアミノ酸はフェニルアラニンである。いくつかの態様において、TLR4抗体はまた、ヒトおよび／またはカニクイザルTLR4/MD-2複合体にも結合する。