【手続補正書】
【提出日】平成28年2月26日(2016.2.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２２４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２２４】
すべての数字は、例示のために提供され、限定のために提供されるものでない。具体的な実施例が提供されているが、その記載は例示的であり、限定的でない。これまで記載された実施形態の特徴の任意の1つ以上は、本開示中の任意の他の実施形態の1つ以上の特徴と任意の様式で組み合わせることができる。さらに、本開示の多数の変形形態が、本開示の概観によって当業者には明白であろう。
本発明の実施形態として、例えば以下を挙げることができる。
(1)  第1の抽出緩衝液及び試料の相分離をもたらす第2の抽出緩衝液を試料に添加するステップと、第2の抽出層を分光学的に分析してコエンザイムQ10(CoQ10)量を決定するステップとを含む、試料中のコエンザイムQ10(CoQ10)量を決定するための方法。
(2)  第1の抽出緩衝液及び第2の抽出緩衝液を試料に添加するステップと、
試料を混合するステップと、
第2の抽出層を分析してCoQ10量を決定するステップと
を含み、第1の抽出緩衝液及び第2の抽出緩衝液による単回抽出によってメタノールのみの抽出を使用するより少なくとも2倍多い量のCoQ10の検出をもたらす、試料中のCoQ10量を決定するための方法。
(3)  第1の抽出緩衝液を試料に添加するステップと、
試料を加熱し、混合するステップと、
試料の相分離をもたらす第2の抽出緩衝液を試料に添加するステップと、
試料を加熱し、混合するステップと、
周囲温度まで試料を冷却するステップと、
第2の抽出緩衝液層を分析して試料中のCoQ10量を決定するステップと
を含む、試料中のCoQ10量を決定するための方法。
(4)  第1の抽出緩衝液を試料に添加するステップと、
試料を加熱し、混合するステップと、
試料の相分離をもたらす第2の抽出緩衝液を試料に添加するステップと、
試料を加熱し、混合するステップと、
試料を周囲温度まで冷却するステップと、
第2の抽出緩衝液層を分光分析によって分光学的に分析して試料中のCoQ10量を決定するステップと
を含み、前記抽出緩衝液による単回抽出によって、メタノールのみの抽出とその後の液体クロマトグラフィー/質量分析法/質量分析法(LC/MS/MS)とを使用するより少なくとも2倍多い量のCoQ10の抽出をもたらす、試料中のCoQ10量を決定するための方法。
(5)  試料中で検出されるCoQ10量が、分光分析によって分光学的に決定される、(1)〜(3)のいずれかに記載の方法。
(6)  CoQ10量が、LC/MS/MSを使用して検出される、(1)〜(3)のいずれかに記載の方法。
(7)  第1の抽出緩衝液及び第2の抽出緩衝液を使用して抽出されるCoQ10量が分光学的に決定され、メタノールのみの抽出を使用して検出されるCoQ10量がLC/MS/MSを使用して決定される、(2)又は(4)のいずれかに記載の方法。
(8)  ハイスループットスクリーニング分析法の一部である、(1)〜(7)のいずれかに記載の方法。
(9)  方法全体が、自動化によって実施される、(1)〜(8)のいずれかに記載の方法。
(10)  方法全体が、短時間で実施される、(1)〜(9)のいずれかに記載の方法。
(11)  試料が第1の抽出緩衝液及び第2の抽出緩衝液を使用して抽出され、CoQ10量が分光学的に決定される場合の、試料中で検出される全CoQ10量が、メタノールのみの抽出とその後のLC/MS/MSによるCoQ10検出とを使用して検出される全CoQ10量より少なくとも2倍多い、(1)、(3)〜(4)、及び(7)〜(10)のいずれかに記載の方法。
(12)  試料が第1の抽出緩衝液及び第2の抽出緩衝液を使用して抽出され、CoQ10量が分光学的に決定される場合の、試料中で検出される全CoQ10量が、メタノールのみの抽出とその後のLC/MS/MSによるCoQ10検出とを使用して検出されるCoQ10量より少なくとも5倍多い、(11)に記載の方法。
(13)  試料が第1の抽出緩衝液及び第2の抽出緩衝液を使用して抽出され、CoQ10量が分光学的に決定される場合の、試料中で検出される全CoQ10量が、メタノールのみの抽出とその後のLC/MS/MSによるCoQ10検出とを使用して検出されるCoQ10量より少なくとも10倍多い、(11)に記載の方法。
(14)  試料が第1の抽出緩衝液及び第2の抽出緩衝液を使用して抽出され、CoQ10量が分光学的に決定される場合の、試料中で検出される全CoQ10量が、メタノールのみの抽出とその後のLC/MS/MSによるCoQ10検出とを使用して検出されるCoQ10量より少なくとも15倍多い、(11)に記載の方法。
(15)  試料が第1の抽出緩衝液及び第2の抽出緩衝液を使用して抽出され、CoQ10量が分光学的に決定される場合の、試料中で検出される全CoQ10量が、メタノールのみの抽出とその後のLC/MS/MSによるCoQ10検出とを使用して検出されるCoQ10量より少なくとも25倍多い、(11)に記載の方法。
(16)  第2の抽出緩衝液が非極性溶媒を含む、(1)〜(15)のいずれかに記載の方法。
(17)  第2の抽出緩衝液が有機溶媒を含む、(1)〜(16)のいずれかに記載の方法。
(18)  第2の抽出緩衝液が、ベンゼン、トルエン、キシレン、ヘキサン、ヘプタン、オクタン、シクロヘキサン、1,4-ジオキサン、クロロホルム、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、及びジイソブチルエーテル、四塩化炭素、ジメチルホルムアミド(DMF)、クロロメタン、及びジクロロメタンからなる群から選択される溶媒を含む、(1)〜(17)のいずれかに記載の方法。
(19)  第2の抽出緩衝液が、アルカンを含む、(1)〜(18)のいずれかに記載の方法。
(20)  第2の抽出緩衝液が、ヘキサンを含む、(1)〜(19)のいずれかに記載の方法。
(21)  第2の抽出緩衝液が、アセトニトリルを含む、(1)〜(15)又は(17)のいずれかに記載の方法。
(22)  第2の抽出緩衝液が、イソプロパノールを含む、(1)〜(15)又は(17)のいずれかに記載の方法。
(23)  第1の抽出緩衝液が、極性プロトン性溶媒を含む、(1)〜(22)のいずれかに記載の方法。
(24)  第1の抽出緩衝液が、有機溶媒を含む、(1)〜(23)のいずれかに記載の方法。
(25)  第1の抽出緩衝液が、ギ酸、n-ブタノール、イソプロパノール、n-プロパノール、エタノール、メタノール、酢酸、トリクロロ酢酸(TCA)、及び水からなる群から選択される溶媒を含む、(1)〜(24)のいずれかに記載の方法。
(26)  溶媒が、アルコールを含む、(25)に記載の方法。
(27)  アルコールが、メタノールである、(26)に記載の方法。
(28)  第1の抽出緩衝液が、界面活性剤を含む、(1)〜(27)のいずれかに記載の方法。
(29)  第1の抽出緩衝液が、洗剤を含む、(1)〜(28)のいずれかに記載の方法。
(30)  洗剤が、温和な洗剤である、(29)に記載の方法。
(31)  第1の抽出緩衝液が、水溶液である、(1)〜(30)のいずれかに記載の方法。
(32)  第1の抽出緩衝液が、ステロイド酸を含む、(1)〜(31)のいずれかに記載の方法。
(33)  ステロイド酸が、胆汁酸である、(32)に記載の方法。
(34)  胆汁酸が、タウロ塩素酸、グリココール酸、コール酸、ケノデオキシコール酸、デオキシコール酸、及びリトコール酸からなる群から選択される酸を含む、(33)に記載の方法。
(35)  胆汁酸が、デオキシコール酸を含む、(33)に記載の方法。
(36)  デオキシコール酸が、塩である、(35)に記載の方法。
(37)  デオキシコール酸塩が、I族金属である無機イオンを含む、(36)に記載の方法。
(38)  デオキシコール酸塩の無機イオンが、Li+、Na+、及びK+からなる群から選択される塩である無機イオンを含む、(37)に記載の方法。
(39)  デオキシコール酸塩の無機イオンが、Na+である無機イオンを含む、(34)に記載の方法。
(40)  試料が、生物試料を含む、(1)〜(39)のいずれかに記載の方法。
(41)  生物試料が、細胞ベースの試料である、(40)に記載の方法。
(42)  試料が、哺乳類試料又は両生類試料を含む、(1)〜(41)のいずれかに記載の方法。
(43)  試料が、ヒト試料、非ヒト霊長類試料、及び齧歯動物試料からなる群から選択される試料を含む、(1)〜(42)のいずれかに記載の方法。
(44)  試料が、マウス、ラット、モルモット、ウサギ、及びヒトから選択される対象からの試料である、(1)〜(43)のいずれかに記載の方法。
(45)  分光分析が、吸光分光法、蛍光X線分光法、炎光分光法、可視分光法、紫外分光法、赤外分光法、近赤外分光法、ラマン分光法、コヒーレント反ストークスラマン分光法(CARS)、核磁気共鳴分光法、光子放出分光法、及びメスバウアー分光法から選択される分光学的技法を使用することによって実施される、(1)〜(44)のいずれかに記載の方法。
(46)  分光技法が、紫外分光法である、(45)に記載の方法。
(47)  紫外分光法が、270nm〜280nmの1つ以上の波長で実施される、(45)又は(46)に記載の方法。
(48)  紫外分光法が、273nm〜277nmの1つ以上の波長で実施される、(45)又は(46)に記載の方法。
(49)  紫外分光法が、波長275nmで実施される、(45)又は(46)に記載の方法。
(50)  第1の抽出緩衝液の体積と第2の抽出緩衝液の体積の比が、5:1〜1:1である、(1)〜(49)のいずれかに記載の方法。
(51)  界面活性剤又は洗剤と第1の抽出緩衝液の体積の比が、50:1〜1:1である、(28)〜(50)のいずれかに記載の方法。
(52)  試料が、第1の抽出緩衝液、第2の抽出緩衝液、又は第1と第2の両方の抽出緩衝液の添加後に50〜100℃まで加熱される、(1)〜(51)のいずれかに記載の方法。
(53)  試料が、第1の抽出緩衝液、第2の抽出緩衝液、又は第1と第2の両方の抽出緩衝液の添加後に55〜75℃まで加熱される、(1)〜(52)のいずれかに記載の方法。
(54)  試料が、第1の抽出緩衝液、第2の抽出緩衝液、又は第1と第2の両方の抽出緩衝液の添加後に60〜70℃まで加熱される、(1)〜(53)のいずれかに記載の方法。
(55)  試料が、第1の抽出緩衝液、第2の抽出緩衝液、又は第1と第2の両方の抽出緩衝液の添加後に65℃まで加熱される、(1)〜(54)のいずれかに記載の方法。
(56)  試料が、第1の抽出緩衝液及び第2の抽出緩衝液の添加後に同じ温度まで加熱される、(52)〜(55)のいずれかに記載の方法。
(57)  試料が、第1の抽出緩衝液及び第2の抽出緩衝液の添加後に異なる温度まで加熱される、(52)〜(55)のいずれかに記載の方法。
(58)  加熱が、少なくとも5秒、少なくとも10秒、少なくとも15秒、少なくとも20秒、少なくとも30秒、少なくとも40秒、少なくとも50秒、少なくとも60秒、少なくとも75秒、少なくとも90秒、少なくとも105秒、又は少なくとも120秒の間である、(52)〜(57)のいずれかに記載の方法。
(59)  試料が、第1の抽出緩衝液及び第2の抽出緩衝液の添加後に同じ時間加熱される、(52)〜(58)のいずれかに記載の方法。
(60)  試料が、第1の抽出緩衝液及び第2の抽出緩衝液の添加後に異なる時間加熱される、(52)〜(58)のいずれかに記載の方法。
(61)  試料を加熱することが、加熱されなかった対照試料に比較して少なくとも5%、少なくとも10%、少なくとも15%、少なくとも20%、少なくとも25%、少なくとも30%、又は少なくとも50%、CoQ10の抽出を増加させる、(52)〜(60)のいずれかに記載の方法。
(62)  試料が、機械撹拌によって混合される、(2)〜(61)のいずれかに記載の方法。
(63)  試料が、超音波処理によって混合される、(2)〜(61)のいずれかに記載の方法。
(64)  試料が、磁気撹拌によって混合される、(2)〜(61)のいずれかに記載の方法。
(65)  試料が、第1の抽出緩衝液の添加後に混合される、(62)〜(64)のいずれかに記載の方法。
(66)  試料が、第2の抽出緩衝液の添加後に混合される、(62)〜(64)のいずれかに記載の方法。
(67)  試料が、第1の抽出緩衝液及び第2の抽出緩衝液の添加後に混合される、(62)〜(64)のいずれかに記載の方法。
(68)  無機塩が、第2の抽出緩衝液の添加後に試料に添加される、(1)〜(67)のいずれかに記載の方法。
(69)  無機塩が、NaClを含む、(68)に記載の方法。
(70)  飽和ブライン溶液が、第2の抽出緩衝液の添加後に試料に添加される、(1)〜(69)のいずれかに記載の方法。
(71)  塩が、約1mM〜約50mMの最終濃度まで添加される、(68)〜(70)のいずれかに記載の方法。
(72)  試料が、第2の抽出緩衝液の分光分析の前にろ過される、(1)〜(71)のいずれかに記載の方法。
(73)  方法全体が、10分以内に完了する、(1)〜(72)のいずれかに記載の方法。
(74)  方法全体が、5分以内に完了する、(1)〜(73)のいずれかに記載の方法。
(75)  方法全体が、1分以内に完了する、(1)〜(74)のいずれかに記載の方法。
(76)  方法全体が、30秒以内に完了する、(1)〜(75)のいずれかに記載の方法。
(77)  (1)〜(76)のいずれかに記載の方法を実施するためのキット。
(78)  以下のもの:第1の抽出緩衝液、第2の抽出緩衝液、及びCoQ10のうちの少なくとも2つを含む、(77)に記載のキット。
(79)  a)既知量の重水素化コエンザイムQ10(CoQ10-d6)を試料に添加するステップと、
b)質量分析法によってCoQ10及びCoQ10-d6を検出するステップと、
c)検出されたCoQ10の量を、既知量の検出されたCoQ10-d6とそれを比較することによって決定するステップと、
を含む、試料中のコエンザイムQ10(CoQ10)量を決定するための方法。
(80)  a)既知量の還元重水素化コエンザイムQ10(CoQ10H2-d6)を試料に添加するステップと、
b)質量分析法によってCoQ10H2及びCoQ10H2-d6を検出するステップと、
c)検出されたCoQ10H2の量を、既知量の検出されたCoQ10H2-d6とそれを比較することによって決定するステップと、
を含む、試料中のCoQ10の還元形態(CoQ10H2)の量を決定するための方法。
(81)  a)既知量のCoQ10-d6及びCoQ10H2-d6を試料に添加するステップと、
b)質量分析法によってCoQ10、CoQ10H2、CoQ10-d6及びCoQ10H2-d6を検出するステップと、
c)検出されたCoQ10の量を、既知量の検出されたCoQ10H2-d6とそれを比較することによって決定するステップと、
d)検出されたCoQ10H2の量を、既知量の検出されたCoQ10H2-d6とそれを比較することによって決定するステップと、
を含む、試料中のCoQ10及びCoQ10H2量を同時に決定するための方法。
(82)  a)既知量のCoQ10H2-d6及び/又はCoQ10-d6を試料に添加するステップと、
b)質量分析法によって試料中のCoQ10H2-d6及びCoQ10-d6の相対量を測定するステップと、
c)CoQ10H2-d6及びCoQ10-d6の理論的相対量をステップbで測定されたCoQ10H2-d6及びCoQ10-d6の相対量と比較するステップと、
を含む、試料中のCoQ10H2酸化度を決定するための方法。
(83)  CoQ10H2-d6が、CoQ10-d6を1つ以上の還元剤と反応させることによって得られる、(80)〜(82)に記載の方法。
(84)  前記還元剤が、水素化ホウ素ナトリウムである、(83)に記載の方法。
(85)  CoQ10-d6及び/又はCoQ10H2-d6が、試料の収集直後に試料に添加される、(81)〜(84)に記載の方法。
(86)  試料が、生物試料である、(81)〜(85)に記載の方法。
(87)  生物試料が、血漿又は血清である、(86)に記載の方法。
(88)  生物試料が、ヒト試料である、(86)又は(87)に記載の方法。
(89)  a)試料を用意するステップと、
b)既知量のCoQ10-d6を試料に添加するステップと、
c)試料を抽出するステップと、
d)任意選択で試料を液体クロマトグラフィーにかけるステップと、
e)質量分析法によってCoQ10及びCoQ10-d6を検出するステップと、
f)検出されたCoQ10の量を、既知量の検出されたCoQ10-d6とそれを比較することによって決定するステップと、
を含む、試料中のCoQ10量を決定するための方法。
(90)  a)試料を用意するステップと、
b)既知量のCoQ10H2-d6を試料に添加するステップと、
c)試料を抽出するステップと、
d)任意選択で試料を液体クロマトグラフィーにかけるステップと、
e)質量分析法によってCoQ10H2及びCoQ10H2-d6を検出するステップと、
f)検出されたCoQ10H2の量を、既知量の検出されたCoQ10H2-d6とそれを比較することによって決定するステップと、
を含む、試料中のCoQ10H2量を決定するための方法。
(91)  a)試料を用意するステップと、
b)既知量のCoQ10-d6及びCoQ10H2-d6を試料に添加するステップと、
c)試料を抽出するステップと、
d)任意選択で試料を液体クロマトグラフィーにかけるステップと、
e)質量分析法によってCoQ10、CoQ10-d6、CoQ10H2及びCoQ10H2-d6を検出するステップと、
f)検出されたCoQ10の量を、既知量の検出されたCoQ10-d6とそれを比較することによって決定するステップと、
g)検出されたCoQ10H2の量を、既知量の検出されたCoQ10H2-d6とそれを比較することによって決定するステップと
を含む、試料中のCoQ10量及びCoQ10H2量を決定するための方法。
(92)  ステップcが、抽出緩衝液を添加するステップを含む、(89)〜(91)に記載の方法。
(93)  抽出緩衝液が、1-プロパノールを含む、(92)に記載の方法。
(94)  抽出緩衝液が、イソプロパノールを含む、(92)に記載の方法。
(95)  ステップb〜dが、予冷クライオブロックを使用して実施される、(89)〜(94)に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
第1の抽出緩衝液及び試料の相分離をもたらす第2の抽出緩衝液を試料に添加するステップと、第2の抽出層を分析してコエンザイムQ10(CoQ10)量を決定するステップとを含む、試料中のコエンザイムQ10(CoQ10)量を決定するための方法。
【請求項２】
第1の抽出緩衝液及び第2の抽出緩衝液を試料に添加するステップと、
試料を混合するステップと、
第2の抽出層を分析してCoQ10量を決定するステップと
を含み、第1の抽出緩衝液及び第2の抽出緩衝液による単回抽出によってメタノールのみの抽出を使用するより少なくとも2倍多い量のCoQ10の検出をもたらす、請求項1に記載の方法。
【請求項３】
第1の抽出緩衝液を試料に添加するステップと、
試料を加熱し、混合するステップと、
試料の相分離をもたらす第2の抽出緩衝液を試料に添加するステップと、
試料を加熱し、混合するステップと、
周囲温度まで試料を冷却するステップと、
第2の抽出緩衝液層を分析して試料中のCoQ10量を決定するステップと
を含む、請求項1に記載の方法。
【請求項４】
第1の抽出緩衝液を試料に添加するステップと、
試料を加熱し、混合するステップと、
試料の相分離をもたらす第2の抽出緩衝液を試料に添加するステップと、
試料を加熱し、混合するステップと、
試料を周囲温度まで冷却するステップと、
第2の抽出緩衝液層を分光分析によって分光学的に分析して試料中のCoQ10量を決定するステップと
を含み、前記抽出緩衝液による単回抽出によって、メタノールのみの抽出とその後の液体クロマトグラフィー/質量分析法/質量分析法(LC/MS/MS)とを使用するより少なくとも2倍多い量のCoQ10の抽出をもたらす、請求項2に記載の方法。
【請求項５】
試料中で検出されるCoQ10量が、分光分析によって分光学的に決定されるか、又はCoQ10量が、LC/MS/MSを使用して検出される、請求項1に記載の方法。
【請求項６】
第1の抽出緩衝液及び第2の抽出緩衝液を使用して抽出されるCoQ10量が分光学的に決定され、メタノールのみの抽出を使用して検出されるCoQ10量がLC/MS/MSを使用して決定される、請求項2に記載の方法。
【請求項７】
ハイスループットスクリーニング分析法の一部である、請求項1に記載の方法。
【請求項８】
方法全体が、自動化によって実施される、請求項1に記載の方法。
【請求項９】
試料が第1の抽出緩衝液及び第2の抽出緩衝液を使用して抽出され、CoQ10量が分光学的に決定される場合の、試料中で検出される全CoQ10量が、メタノールのみの抽出とその後のLC/MS/MSによるCoQ10検出とを使用して検出される全CoQ10量より少なくとも2倍多い、請求項1に記載の方法。
【請求項１０】
第2の抽出緩衝液が非極性溶媒又は有機溶媒を含む、請求項1に記載の方法。
【請求項１１】
第2の抽出緩衝液が、ベンゼン、トルエン、キシレン、ヘキサン、ヘプタン、オクタン、シクロヘキサン、1,4-ジオキサン、クロロホルム、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、及びジイソブチルエーテル、四塩化炭素、ジメチルホルムアミド(DMF)、クロロメタン、ジクロロメタンからなる群から選択される溶媒を含むか、又は第2の抽出緩衝液が、アルカン、ヘキサン、アセトニトリル若しくはイソプロパノールを含む、請求項10に記載の方法。
【請求項１２】
第1の抽出緩衝液が、極性プロトン性溶媒若しくは有機溶媒を含むか、又は第1の抽出緩衝液が水溶液である、請求項1に記載の方法。
【請求項１３】
第1の抽出緩衝液が、ギ酸、n-ブタノール、イソプロパノール、n-プロパノール、エタノール、メタノール、酢酸、トリクロロ酢酸(TCA)、水からなる群から選択される溶媒を含むか、又は溶媒がアルコールを含む、請求項12に記載の方法。
【請求項１４】
第1の抽出緩衝液が、界面活性剤又は洗剤を含む、請求項1〜13のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
洗剤が、温和な洗剤である、請求項14に記載の方法。
【請求項１６】
第1の抽出緩衝液が、ステロイド酸を含む、請求項1に記載の方法。
【請求項１７】
ステロイド酸が、胆汁酸である、請求項16に記載の方法。
【請求項１８】
胆汁酸が、タウロ塩素酸、グリココール酸、コール酸、ケノデオキシコール酸、デオキシコール酸、及びリトコール酸からなる群から選択される酸を含む、請求項17に記載の方法。
【請求項１９】
胆汁酸がデオキシコール酸を含み、さらにデオキシコール酸が塩である、請求項17に記載の方法。
【請求項２０】
デオキシコール酸塩が、I族金属である無機イオンを含む、請求項19に記載の方法。
【請求項２１】
デオキシコール酸塩の無機イオンが、Li+、Na+、及びK+からなる群から選択される塩である無機イオンを含む、請求項20に記載の方法。
【請求項２２】
試料が、生物試料を含む、請求項1に記載の方法。
【請求項２３】
生物試料が、細胞ベースの試料であるか、又は試料が、哺乳類試料又は両生類試料を含む、請求項22に記載の方法。
【請求項２４】
試料が、ヒト試料、非ヒト霊長類試料、及び齧歯動物試料からなる群から選択される試料を含む、請求項23に記載の方法。
【請求項２５】
試料が、マウス、ラット、モルモット、ウサギ、及びヒトから選択される対象からの試料である、請求項24に記載の方法。
【請求項２６】
分光分析が、吸光分光法、蛍光X線分光法、炎光分光法、可視分光法、紫外分光法、赤外分光法、近赤外分光法、ラマン分光法、コヒーレント反ストークスラマン分光法(CARS)、核磁気共鳴分光法、光子放出分光法、及びメスバウアー分光法から選択される分光学的技法を使用することによって実施される、請求項5に記載の方法。
【請求項２７】
分光技法が、紫外分光法である、請求項26に記載の方法。
【請求項２８】
紫外分光法が、270nm〜280nm、273nm〜277nm及び275nmからなる群から選択される1つ以上の波長で実施される、請求項26に記載の方法。
【請求項２９】
第1の抽出緩衝液の体積と第2の抽出緩衝液の体積の比が、5:1〜1:1である、請求項1に記載の方法。
【請求項３０】
界面活性剤又は洗剤と第1の抽出緩衝液の体積の比が、50:1〜1:1である、請求項14に記載の方法。
【請求項３１】
試料が、第1の抽出緩衝液、第2の抽出緩衝液、又は第1と第2の両方の抽出緩衝液の添加後に50〜100℃、55〜75℃、60〜70℃及び65℃からなる群から選択される温度まで加熱される、請求項1に記載の方法。
【請求項３２】
試料が、第1の抽出緩衝液及び第2の抽出緩衝液の添加後に同じ温度まで加熱される、請求項31に記載の方法。
【請求項３３】
試料が、第1の抽出緩衝液及び第2の抽出緩衝液の添加後に異なる温度まで加熱される、請求項31に記載の方法。
【請求項３４】
加熱が、少なくとも5秒、少なくとも10秒、少なくとも15秒、少なくとも20秒、少なくとも30秒、少なくとも40秒、少なくとも50秒、少なくとも60秒、少なくとも75秒、少なくとも90秒、少なくとも105秒、又は少なくとも120秒の間である、請求項31に記載の方法。
【請求項３５】
試料が、第1の抽出緩衝液及び第2の抽出緩衝液の添加後に同じ時間加熱される、請求項31に記載の方法。
【請求項３６】
試料が、第1の抽出緩衝液及び第2の抽出緩衝液の添加後に異なる時間加熱される、請求項31に記載の方法。
【請求項３７】
試料を加熱することが、加熱されなかった対照試料に比較して少なくとも5%、少なくとも10%、少なくとも15%、少なくとも20%、少なくとも25%、少なくとも30%、又は少なくとも50%、CoQ10の抽出を増加させる、請求項31に記載の方法。
【請求項３８】
試料が、機械撹拌、超音波処理又は磁気撹拌によって混合される、請求項2に記載の方法。
【請求項３９】
試料が、第1の抽出緩衝液の添加後及び/又は第2の抽出緩衝液の添加後に混合される、請求項38に記載の方法。
【請求項４０】
無機塩が、第2の抽出緩衝液の添加後に試料に添加される、請求項1に記載の方法。
【請求項４１】
無機塩が、NaClを含む、請求項40に記載の方法。
【請求項４２】
飽和ブライン溶液が、第2の抽出緩衝液の添加後に試料に添加される、請求項1に記載の方法。
【請求項４３】
塩が、約1mM〜約50mMの最終濃度まで添加される、請求項40に記載の方法。
【請求項４４】
試料が、第2の抽出緩衝液の分光分析の前にろ過される、請求項4に記載の方法。
【請求項４５】
方法全体が、10分以内、5分以内、1分以内又は30秒以内に完了する、請求項1に記載の方法。
【請求項４６】
請求項1に記載の方法を実施するためのキット。
【請求項４７】
a)既知量のCoQ10-d6及び/又はCoQ10H2-d6を試料に添加するステップと、
b)質量分析法によってCoQ10及びCoQ10-d6並びに/又はCoQ10H2及びCoQ10H2-d6を検出するステップと、
c)検出されたCoQ10の量を、既知量の検出されたCoQ10H2-d6とそれを比較することによって決定するステップ、及び/又は
d)検出されたCoQ10H2の量を、既知量の検出されたCoQ10H2-d6とそれを比較することによって決定するステップ
を含む、試料中のCoQ10及び/又はCoQ10H2量を決定するための方法。
【請求項４８】
a)既知量のCoQ10H2-d6及び/又はCoQ10-d6を試料に添加するステップと、
b)質量分析法によって試料中のCoQ10H2-d6及びCoQ10-d6の相対量を測定するステップと、
c)CoQ10H2-d6及びCoQ10-d6の理論的相対量をステップbで測定されたCoQ10H2-d6及びCoQ10-d6の相対量と比較するステップと、
を含む、試料中のCoQ10H2酸化度を決定するための請求項47に記載の方法。
【請求項４９】
CoQ10H2-d6が、CoQ10-d6を1つ以上の還元剤と反応させることによって得られる、請求項47に記載の方法。
【請求項５０】
前記還元剤が、水素化ホウ素ナトリウムである、請求項49に記載の方法。
【請求項５１】
CoQ10-d6及び/又はCoQ10H2-d6が、試料の収集直後に試料に添加される、請求項47に記載の方法。
【請求項５２】
試料が、生物試料である、請求項47に記載の方法。
【請求項５３】
生物試料が、血漿又は血清であるか、又は生物試料がヒト試料である、請求項52に記載の方法。
【請求項５４】
a)試料を用意するステップと、
b)既知量のCoQ10-d6及び/又はCoQ10H2-d6を試料に添加するステップと、
c)試料を抽出するステップと、
d)任意選択で試料を液体クロマトグラフィーにかけるステップと、
e)質量分析法によってCoQ10及びCoQ10-d6並びに/又はCoQ10H2及びCoQ10H2-d6を検出するステップと、
f)検出されたCoQ10の量を、既知量の検出されたCoQ10-d6とそれを比較することによって決定するステップ、及び/又は
g)検出されたCoQ10H2の量を、既知量の検出されたCoQ10H2-d6とそれを比較することによって決定するステップ
を含む、試料中のCoQ10量及び/又はCoQ10H2量を決定するための方法。
【請求項５５】
ステップcが、抽出緩衝液を添加するステップを含む、請求項54に記載の方法。
【請求項５６】
抽出緩衝液が、1-プロパノール又はイソプロパノールを含む、請求項55に記載の方法。
【請求項５７】
ステップb〜dが、予冷クライオブロックを使用して実施される、請求項54に記載の方法。