【手続補正書】
【提出日】平成28年8月5日(2016.8.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
２つまたはそれ以上のタイプの発現コンストラクトを含む宿主細胞であって、
各タイプの前記発現コンストラクトは、誘導性プロモーターおよび該誘導性プロモーターから転写されるための遺伝子産物をコードするポリヌクレオチド配列を含み、
少なくとも１つの前記誘導性プロモーターは、別の前記誘導性プロモーターの誘導物質と異なる誘導物質に対して応答性があり、各誘導性プロモーターはラクトース誘導性プロモーターではなく、
前記宿主細胞は、少なくとも１つの前記誘導性プロモーターの誘導物質を代謝するタンパク質をコードする少なくとも１つの遺伝子の遺伝子機能の低減されたレベルを有し、
少なくとも１つの前記遺伝子産物は、別の前記遺伝子産物と多量体を形成する遺伝子産物からなる群より選択され、少なくとも２つのジスルフィド結合を形成するポリペプチドである、宿主細胞。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１５３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１５３】
本発明の実施についての一定の形態を含むために見出されるまたは提案される特定の実施形態の見地から、本発明は記載される。本開示に照らして、種々の変更および変化が、本発明の意図される範囲から逸脱することなく、例証される特定の実施形態においてなされ得ることが当業者により理解されるであろう。特許公開公報を含む、全ての挙げられた参考文献は、それらの全体において、参照により本明細書に組み込まれる。公開されている遺伝子座決定または他の記載により言及される、ヌクレオチドおよび他の遺伝子配列もまた、参照により本明細書に明白に組み込まれる。
ある態様において、本発明は以下であってもよい。
［態様１］２つまたはそれ以上のタイプの発現コンストラクトを含む宿主細胞であって、
各タイプの前記発現コンストラクトは、誘導性プロモーターおよび該誘導性プロモーターから転写されるための遺伝子産物をコードするポリヌクレオチド配列を含み、
少なくとも１つの前記誘導性プロモーターは、別の前記誘導性プロモーターの誘導物質と異なる誘導物質に対して応答性があり、
少なくとも１つの前記遺伝子産物は、別の前記遺伝子産物と多量体を形成する、宿主細胞。
［態様２］２つまたはそれ以上のタイプの発現コンストラクトを含む宿主細胞であって、
各タイプの前記発現コンストラクトは、誘導性プロモーターおよび該誘導性プロモーターから転写されるための遺伝子産物をコードするポリヌクレオチド配列を含み、
少なくとも１つの前記遺伝子産物は、
（ａ）シグナルペプチドを欠き、少なくとも３つのジスルフィド結合を形成するポリペプチド、
（ｂ）アラビノース利用酵素およびキシロース利用酵素からなる群から選択されるポリペプチド、
（ｃ）リグニン分解ペルオキシダーゼからなる群から選択されるポリペプチド、
からなる群から選択される、宿主細胞。
［態様３］少なくとも１つの誘導性プロモーターがＬ‐アラビノース誘導性プロモーターである、態様１または２の宿主細胞。
［態様４］少なくとも１つの誘導性プロモーターがプロピオネート誘導性プロモーターである、態様１または２の宿主細胞。
［態様５］少なくとも１つの誘導性プロモーターが、ａｒａＢＡＤプロモーター、ｐｒｐＢＣＤＥプロモーター、ｒｈａＳＲプロモーター、およびｘｌｙＡプロモーターからなる群から選択される、態様１または２の宿主細胞。
［態様６］各誘導性プロモーターがラクトース誘導性プロモーターではない、態様１または２の宿主細胞。
［態様７］少なくとも１つの発現コンストラクトが、誘導性プロモーターに結合する転写制御因子をコードするポリヌクレオチド配列をさらに含む、態様１または２の宿主細胞。
［態様８］転写制御因子をコードする前記ポリヌクレオチド配列および前記転写制御因子が結合する前記誘導性プロモーターが同じ発現コンストラクトにある、態様７の宿主細胞。
［態様９］前記転写制御因子がＡｒａＣ、ＰｒｐＲ、ＲｈａＲ、およびＸｙｌＲからなる群から選択される、態様７の宿主細胞。
［態様１０］少なくとも１つの発現コンストラクトが、ｐＢＡＤ１８、ｐＢＡＤ１８−Ｃｍ、ｐＢＡＤ１８−Ｋａｎ、ｐＢＡＤ２４、ｐＢＡＤ２８、ｐＢＡＤ３０、ｐＢＡＤ３３、ｐＰＲＯ１８、ｐＰＲＯ１８−Ｃｍ、ｐＰＲＯ１８−Ｋａｎ、ｐＰＲＯ２４、ｐＰＲＯ３０、およびｐＰＲＯ３３からなる群から選択されるプラスミド内に、ポリヌクレオチド配列を挿入する工程を含む方法により生産された、態様１または２の宿主細胞。
［態様１１］少なくとも１つの遺伝子産物がポリペプチドである、態様１の宿主細胞。
［態様１２］少なくとも１つの遺伝子産物が、（ａ）免疫グロブリン重鎖、（ｂ）免疫グロブリン軽鎖、および（ｃ）（ａ）から（ｂ）のいずれかのフラグメント、からなる群から選択される、態様１または２の宿主細胞。
［態様１３］前記遺伝子産物が免疫グロブリン軽鎖である、態様１２の宿主細胞。
［態様１４］前記遺伝子産物が免疫グロブリン重鎖である、態様１２の宿主細胞。
［態様１５］少なくとも１つの遺伝子産物が、シグナルペプチドを欠くポリペプチドであり、少なくとも３つのジスルフィド結合を形成する、態様１または２の宿主細胞。
［態様１６］前記ポリペプチドが、（ａ）少なくとも３であって１７よりも少ないジスルフィド結合、および（ｂ）少なくとも１８であって１００より少ないジスルフィド結合からなる群から選択される、いくつかのジスルフィド結合を形成する、態様１５の宿主細胞。
［態様１７］前記ポリペプチドが、少なくとも３であって１０より少ないジスルフィド結合を形成する、態様１５の宿主細胞。
［態様１８］前記ポリペプチドが、少なくとも３であって８より少ないジスルフィド結合を形成する、態様１５の宿主細胞。
［態様１９］前記ポリペプチドが、（ａ）免疫グロブリン重鎖、（ｂ）免疫グロブリン軽鎖、（ｃ）マンガンペルオキシダーゼ、および（ｄ）（ａ）から（ｃ）のいずれかのフラグメント、からなる群から選択される、態様１５の宿主細胞。
［態様２０］少なくとも１つの遺伝子産物は、アラビノース利用酵素およびキシロース利用酵素からなる群から選択されるポリペプチドである、態様２の宿主細胞。
［態様２１］前記ポリペプチドはキシロースイソメラーゼである、態様２０の宿主細胞。
［態様２２］少なくとも１つの遺伝子産物は、リグニン分解ペルオキシダーゼからなる群から選択されるポリペプチドである、態様２の宿主細胞。
［態様２３］前記ポリペプチドはマンガンペルオキシダーゼである、態様２２の宿主細胞。
［態様２４］少なくとも１つの追加の遺伝子産物は、タンパク質ジスルフィドイソメラーゼである、態様２２の宿主細胞。
［態様２５］前記ポリペプチドは汎用性のあるペルオキシダーゼである、態様２２の宿主細胞。
［態様２６］前記宿主細胞は、２つのタイプの発現コンストラクトを含む、態様１または２の宿主細胞。
［態様２７］１つのタイプの発現コンストラクトが、ｐＢＡＤ２４プラスミド内にポリヌクレオチド配列を挿入する工程を含む方法により産生され、他のタイプの発現コンストラクトが、ｐＰＲＯ３３プラスミド内にポリヌクレオチド配列を挿入する工程を含む方法により産生される、態様２６の宿主細胞。
［態様２８］前記宿主細胞は、少なくとも１つの前記誘導性プロモーターの誘導物質についての輸送タンパク質をコードする少なくとも１つの遺伝子の遺伝子機能の変異を有する、態様１または２の宿主細胞。
［態様２９］輸送タンパク質をコードする前記遺伝子は、ａｒａＥ、ａｒａＦ、ａｒａＧ、ａｒａＨ、ｒｈａＴ、ｘｙｌＦ、ｘｙｌＧ、およびｘｙｌＨからなる群から選択される、態様２８の宿主細胞。
［態様３０］前記宿主細胞は、少なくとも１つの前記誘導性プロモーターの誘導物質を代謝するタンパク質をコードする少なくとも１つの遺伝子の遺伝子機能の低減されたレベルを有する、態様１または２の宿主細胞。
［態様３１］少なくとも１つの前記誘導性プロモーターの誘導物質を代謝するタンパク質をコードする前記遺伝子は、ａｒａＡ、ａｒａＢ、ａｒａＤ、ｐｒｐＢ、ｐｒｐＤ、ｒｈａＡ、ｒｈａＢ、ｒｈａＤ、ｘｙｌＡ、およびｘｙｌＢからなる群から選択される、態様３０の宿主細胞。
［態様３２］前記宿主細胞は、少なくとも１つの前記誘導性プロモーターの誘導物質の生合成を伴うタンパク質をコードする少なくとも１つの遺伝子の遺伝子機能の低減されたレベルを有する、態様１または２の宿主細胞。
［態様３３］少なくとも１つの前記誘導性プロモーターの誘導物質の生合成を伴うタンパク質をコードする前記遺伝子は、ｓｃｐＡ／ｓｂｍ、ａｒｇＫ／ｙｇｆＤ、ｓｃｐＢ／ｙｇｆＧ、ｓｃｐＣ／ｙｇｆＨ、ｒｍｌＡ、ｒｍｌＢ、ｒｍｌＣ、およびｒｍｌＤからなる群から選択される、態様３２の宿主細胞。
［態様３４］前記宿主細胞が原核細胞である、態様１または２の宿主細胞。
［態様３５］前記宿主細胞が大腸菌である、態様３４の宿主細胞。
［態様３６］前記宿主細胞は、該宿主細胞の細胞質の還元／酸化環境に影響を及ぼす遺伝子の変異した遺伝子機能を有する、態様１または２の宿主細胞。
［態様３７］前記宿主細胞の細胞質の還元／酸化環境に影響を及ぼす前記遺伝子は、ｇｏｒおよびｇｓｈＢからなる群から選択される、態様３６の宿主細胞。
［態様３８］前記宿主細胞は、還元酵素をコードする遺伝子の低減されたレベルの遺伝子機能を有する、態様１または２の宿主細胞。
［態様３９］還元酵素をコードする前記遺伝子はｔｒｘＢである、態様３８の宿主細胞。
［態様４０］前記宿主細胞は、少なくとも１つのジスルフィド結合イソメラーゼタンパク質をコードする少なくとも１つの発現コンストラクトを含む、態様１または２の宿主細胞。
［態様４１］少なくとも１つの発現コンストラクトは、ジスルフィド結合イソメラーゼタンパク質ＤｓｂＣをコードする、態様４０の宿主細胞。
［態様４２］前記宿主細胞は、シグナルペプチドを欠くＤｓｂＣの形態をコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドを含む、態様１または２の宿主細胞。
［態様４３］前記宿主細胞は、Ｅｒｖ１ｐをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドを含む、態様１または２の宿主細胞。
［態様４４］各タイプの前記発現コンストラクトは、各他のタイプの発現コンストラクトの前記誘導性プロモーターと異なる誘導性プロモーターを含む、態様１または２の宿主細胞。
［態様４５］各タイプの前記発現コンストラクトは、各他のタイプの前記発現コンストラクトの複製起点と異なる複製起点を含む、態様１または２の宿主細胞。
［態様４６］２つのタイプの発現コンストラクトを含む、大腸菌の宿主細胞であって、１つのタイプの発現コンストラクトは、ｐＢＡＤ２４プラスミド内にポリヌクレオチド配列を挿入する工程を含む方法により産生され、他のタイプの発現コンストラクトは、ｐＰＲＯ３３プラスミド内にポリヌクレオチド配列を挿入する工程を含む方法により産生され、２つまたはそれ以上の以下の、（ａ）ａｒａＢＡＤ遺伝子の欠失；（ｂ）変異した遺伝子機能のａｒａＥおよびａｒａＦＧＨ遺伝子；（ｃ）ｌａｃＹ（Ａ１７７Ｃ）遺伝子；（ｄ）低減された遺伝子機能のｐｒｐＢおよびｐｒｐＤ遺伝子；（ｅ）好ましくはｙｇｆＩ遺伝子の発現に影響を及ぼさない、低減された遺伝子機能のｓｂｍ／ｓｃｐＡ−ｙｇｆＤ／ａｒｇＫ−ｙｇｆＧＨ／ｓｃｐＢＣ遺伝子；（ｆ）低減された遺伝子機能のｇｏｒおよびｔｒｘＢ遺伝子；（ｇ）低減された遺伝子機能のＡｓｃＧ遺伝子；（ｈ）シグナルペプチドを欠くＤｓｂＣの形態をコードするポリヌクレオチド；（ｉ）Ｅｒｖ１ｐをコードするポリヌクレオチド；（ｊ）タンパク質ジスルフィドイソメラーゼをコードするポリヌクレオチド；（ｊ）ＣｈｕＡをコードするポリヌクレオチド；および（ｌ）シャペロンをコードするポリヌクレオチドをさらに含む、宿主細胞。
［態様４７］少なくとも１つの発現コンストラクトが、誘導性プロモーターから転写されるための遺伝子産物をコードするポリヌクレオチド配列をさらに含む、態様４６の宿主細胞。
［態様４８］前記遺伝子産物は、（ａ）免疫グロブリン重鎖、（ｂ）免疫グロブリン軽鎖、および（ｃ）（ａ）から（ｂ）のいずれかのフラグメント、からなる群から選択される、態様４７の宿主細胞。
［態様４９］遺伝子産物を産生する方法であって、態様１または２の前記宿主細胞の培養を増殖させることと、前記培養に少なくとも１つの誘導性プロモーターの誘導物質を添加することを含む、方法。
［態様５０］態様４９の方法により産生される、遺伝子産物。
［態様５１］前記遺伝子産物は多量体産物である、態様５０に記載の遺伝子産物。
［態様５２］前記多量体産物は抗体である、態様５１に記載の多量体産物。
［態様５３］前記多量体産物はアグリコシル化抗体である、態様５２に記載の多量体産物。
［態様５４］前記多量体産物はヒト抗体である、態様５２に記載の多量体産物。
［態様５５］態様１または２の前記宿主細胞を含む、キット。
［態様５６］態様５０の前記遺伝子産物を含む、キット。
［態様５７］態様５１の前記多量体産物を含む、キット。