【手続補正書】
【提出日】平成28年8月1日(2016.8.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）バチルス菌株Ｆ７２７（ＮＮＲＬ受託番号Ｂ−５０７６８）発酵から回収された全細胞ブロスであって、前記バチルス菌株Ｆ７２７が、配列番号１０のｒｅｃＡ配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するヌクレオチド配列を有し、かつ殺菌活性または植物生長増殖活性を有する、ブロス、および
（ｂ）担体、希釈剤、表面活性物質、またはアジュバントの少なくとも１つ
を含む組成物。
【請求項２】
さらに、化学的または生物学的殺有害生物剤を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記バチルス菌株Ｆ７２７が、カナマイシン、クロラムフェニコール、アンピシリン、ペニシリン、セフロキシム、ピペラシリン、またはテトラサイクリンに耐性がある、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記バチルス菌株Ｆ７２７が、アルカリホスファターゼ、エステラーゼ、酸性ホスファターゼ、またはナフトール−ＡＳ−ＢＩ−ホスホヒドロラーゼ活性を有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
植物における有害生物侵入を調節するための方法であって、
前記有害生物侵入を調節するのに十分な量の請求項１に記載の組成物を、前記植物および／またはその種子および／または前記植物の成長に使用する基質に施用することを含み、前記組成物が殺有害生物剤をさらに含んでもよい、方法。
【請求項６】
前記有害生物が、真菌または細菌である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記真菌が、ボトリチス（Botrytis）、スクレロティニア（Sclerotinia）、リゾクトニア（Rhizoctonia）およびビポラリス（Bipolaris）からなる群から選択される、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記有害生物が真菌であり、殺有害生物剤がレイノウトリアサカリネンシス（Reynoutria sachalinensis）（タデ）に由来する、請求項５に記載の方法。
【請求項９】
植物の成長および／または種子の発芽を調節するための方法であって、
前記植物、その成長基質、および／または前記植物の種子を、一定量の請求項１に記載の組成物、および場合により、前記植物の成長および／または前記種子の発芽を調節するために有効な１つ以上の物質と接触させることを含む、方法。
【請求項１０】
前記1つ以上の物質が、成長促進剤、表面活性物質、担体、アジュバント、および／または化学肥料を含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
請求項１に記載の組成物を含む種子。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００６】
本発明は以下を提供する。
［１］バチルス（Bacillus）菌株の実質的に純粋な培養物であって、以下の特徴：
（Ａ）（１）配列番号３で示される１６ＳｒＲＲＮＡ配列と少なくとも９９．５％の同一性を有するヌクレオチド配列、
（２）配列番号１０で示されるｒｅｃＡ配列と少なくとも９５％の同一性を有するヌクレオチド配列、および
（３）配列番号１３で示される逆ｐｈｏＲ配列と少なくとも９０％の同一性を有するヌクレオチド配列
の少なくとも１つ、
（Ｂ）殺有害生物剤活性、
（Ｃ）カナマイシン、クロラムフェニコール、アンピシリン、ペニシリン、セフロキシム、ピペラシリン、テトラサイクリンに耐性があること、
（Ｄ）アルカリホスファターゼ、エステラーゼ、酸性ホスファターゼ、ナフトール−ＡＳ−ＢＩ−ホスホヒドロラーゼ活性を有すること、および
（Ｅ）脊椎動物に対して非病原性であること
を有する培養物。
［２］上記菌株がバチルス（bacillus）菌株Ｆ７２７（ＮＲＲＬ受託番号Ｂ−５０７６８）の少なくとも１つの識別特徴を有する、上記［１］に記載の培養物。
［３］上記［１］に記載の培養物から得られる濾過物、上清、抽出物、細胞分画または全細胞ブロス。
［４］（ａ）（ｉ）バチルス種（Bacillus sp.）分離株Ｆ７２７から得られ、
（ｉｉ）殺有害生物剤活性を有し、
（ｉｉｉ）液体クロマトグラフィー／質量分光分析（ＬＣ／ＭＳ）により測定して約１０２０〜１０６０、より詳細には１０４４の分子量を有し、
（ｉｖ）δ７．１５、６．７２、４．８１、４．７０、４．６５、４．４０、４．３５、４．２５、４．１５、３．８５、３．６５、３．５０、３．２２、２．８５、２．８０、２．６５、２．４５、２．３５、２．３０、２．２０、１．９５、１．５５、１．３１、１．２０および０．８５の１ＨＮＭＲ値を有し、
（ｖ）０．５ｍＬ／分の流速および２１０ｎｍでのＵＶ検出において、水：アセトニトリル（ＣＨ３ＣＮ）勾配溶媒系（０〜２０分；９０〜０％水性ＣＨ３ＣＮ、２０〜２４分；１００％ＣＨ３ＣＮ、２４〜２７分；０〜９０％水性ＣＨ３ＣＮ、２７〜３０分；９０％水性ＣＨ３ＣＮ）を使用した逆相Ｃ−１８ＨＰＬＣ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ、Ｌｕｎａ５μＣ１８（２）１００Ａ、１００×４．６０ｍｍ）カラムで約６〜１２分間、より具体的には約８分間、さらにより具体的には約８．３１分間の高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）保持時間を有し、
（ｖｉ）４７個の炭素原子、７２個の水素原子、１２個の窒素原子、および１５個の酸素原子を場合によっては含有し、
（ｖｉｉ）場合によってはグルタミン（１単位）、プロリン（１単位）、セリン（１単位）、チロシン（１単位）およびアスパラギン（３単位）を含むペプチドである化合物Ａ、
（ｂ）（ｉ）殺有害生物剤活性を有し、
（ｉｉ）液体クロマトグラフィー／質量分光分析（ＬＣ／ＭＳ）により測定して約１０３０〜１０８０、より詳細には１０５８の分子量を有し、
（ｉｉｉ）０．５ｍＬ／分の流速および２１０ｎｍでのＵＶ検出において、水：アセトニトリル（ＣＨ３ＣＮ）勾配溶媒系（０〜２０分；９０〜０％水性ＣＨ３ＣＮ、２０〜２４分；１００％ＣＨ３ＣＮ、２４〜２７分；０〜９０％水性ＣＨ３ＣＮ、２７〜３０分；
９０％水性ＣＨ３ＣＮ）を使用した逆相Ｃ−１８ＨＰＬＣカラムで約６〜１４分間、より具体的には約８分間、さらにより具体的には約８．６７分間の高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）保持時間を有し、
（ｉｖ）４８個の炭素原子、７４個の水素原子、１２個の窒素原子、および１５個の酸素原子を場合によっては含み、
（ｖ）場合によってはグルタミン（１単位）、プロリン（１単位）、セリン（１単位）、チロシン（１単位）およびアスパラギン（３単位）を含むペプチドである化合物Ｂ、および
（ｃ）（ｉ）殺有害生物剤活性を有し、
（ｉｉ）液体クロマトグラフィー／質量分光分析（ＬＣ／ＭＳ）により測定して約１０５０〜１１２０、より詳細には１０７２の分子量を有し、
（ｉｉｉ）０．５ｍＬ／分の流速および２１０ｎｍでのＵＶ検出において、水：アセトニトリル（ＣＨ３ＣＮ）勾配溶媒系（０〜２０分；９０〜０％水性ＣＨ３ＣＮ、２０〜２４分；１００％ＣＨ３ＣＮ、２４〜２７分；０〜９０％水性ＣＨ３ＣＮ、２７〜３０分；９０％水性ＣＨ３ＣＮ）を使用した逆相Ｃ−１８ＨＰＬＣカラムで約６〜１４分間、より具体的には約９分間、さらにより具体的には約９．１９分間の高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）保持時間を有し、
（ｉｖ）４９個の炭素原子、７６個の水素原子、１２個の窒素原子、および１５個の酸素原子を場合によっては含み、
（ｖ）場合によってはグルタミン（１単位）、プロリン（１単位）、セリン（１単位）、チロシン（１単位）およびアスパラギン（３単位）を含むペプチドである化合物「Ｃ」
からなる群から選択される化合物。
［５］（ａ）（ｉ）上記［１］に記載の培養物、
（ｉｉ）上記［１］に記載の培養物の細胞分画、
（ｉｉｉ）上記［１］に記載の培養物から得られる上清、
（ｉｖ）上記［１］に記載の培養物から得られる濾過物、
（ｖ）（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）または（ｉｖ）のいずれかの抽出物、
（ｖｉ）上記［１］に記載の培養物によって生成する代謝産物、
（ｖｉｉ）化合物Ａ、
（ｖｉｉｉ）化合物Ｂ、
（ｉｘ）化合物Ｃ
からなる群から選択される第１の物質を、
（ｂ）場合によっては
（ｉ）１つまたは複数の化学的または生物学的殺有害生物剤、植物成長促進剤、抗植物病原体物質および化学肥料である第２の物質、および
（ｉｉ）少なくとも１つの担体、希釈剤、表面活性物質、またはアジュバントの少なくとも１つと組み合わせて含む組成物。
［６］上記第２の物質が化学的または生物学的殺有害生物剤である、上記［５］に記載の組合せ。
［７］組合せが組成物である、上記［５］に記載の組合せ。
［８］植物における有害生物侵入を調節するための方法であって、
上記有害生物侵入を調節するのに有効な量の
（ａ）上記［１］に記載の培養物、
（ｂ）上記［１］に記載の培養物の細胞分画、
（ｃ）上記［１］に記載の培養物から得られる上清、
（ｄ）上記［１］に記載の培養物から得られる濾過物、
（ｅ）（ａ）、（ｂ）、（ｃ）または（ｄ）のいずれかの抽出物、
（ｆ）上記［１］に記載の培養物によって生成する代謝産物、
（ｇ）化合物Ａ、
（ｈ）化合物Ｂ、および
（ｉ）化合物Ｃ
からなる群から選択される組成物を、植物および／またはその種子および／または上記植物の成長に使用する基質に施用することを含む方法。
［９］有害生物が真菌または細菌である、上記［８］に記載の方法。
［１０］真菌がアスペルギルス（Aspergillus）、アルテルナリア（Alternaria）、ブレミア（Bremia）、スフェロテカ（Sphaerotheca）、コレトトリカム（Colletotrichum）、フザリウム（Fusarium）、ベルチシリウム（Verticillium）、ボトリチス（Botrytis）、スクレロティニア（Sclerotinia）、スクレロチウム（Sclerotium）、リゾクトニア（Rhizoctonia）およびビポラリス（Bipolaris）からなる群から選択される、上記［９］に記載の方法。
［１１］組成物が胞子発芽を阻害する、上記［１０］に記載の方法。
［１２］細菌がバチルス（Bacillus）、エルウィニア（Erwinia）、アシドボラックス（Acidovorax）およびクラビバクター（Clavibacter）からなる群から選択される、上記［９］に記載の方法。
［１３］有害生物がフィトフトラ（Phytophthora）である、上記［８］に記載の方法。
［１４］組成物が殺有害生物剤をさらに含む、上記［９］に記載の方法。
［１５］有害生物が真菌であり、殺有害生物剤がレイノウトリアサカリネンシス（Reynoutria sachalinensis）（タデ）抽出物、Ｒｅｇａｌｉａ（登録商標）およびＤｏｕｂｌｅ  Ｎｉｃｋｅｌ５５（商標）からなる群から選択される、上記［１４］に記載の方法。
［１６］植物の成長および／または種子の発芽を調節するための方法であって、
上記植物、その成長基質、および／または上記植物の種子と
（ａ）上記［１］に記載の培養物、
（ｂ）上記［１］に記載の培養物の細胞分画、
（ｃ）上記［１］に記載の培養物から得られる上清、
（ｄ）上記［１］に記載の培養物から得られる濾過物、
（ｅ）（ａ）、（ｂ）、（ｃ）または（ｄ）のいずれかの抽出物、
（ｆ）上記［１］に記載の培養物によって生成する代謝産物、
（ｇ）化合物Ａ、
（ｈ）化合物Ｂ、および
（ｉ）化合物Ｃ
からなる群から選択される一定量の組成物を接触させることを含み、
上記量が上記植物の成長および／または上記種子の発芽を調節するのに有効である方法。
［１７］組成物が植物成長促進剤、表面活性物質、担体、アジュバント、および／または化学肥料をさらに含む、上記［１６］に記載の方法。
［１８］組成物がタルク製剤である、上記［１６］に記載の方法。
［１９］殺有害生物剤および／または植物成長促進組成物を製剤化するための組成物の使用であって、組成物が
（ａ）上記［１］に記載の培養物、
（ｂ）上記［１］に記載の培養物の細胞分画、
（ｃ）上記［１］に記載の培養物から得られる上清、
（ｄ）上記［１］に記載の培養物から得られる濾過物、
（ｅ）（ａ）、（ｂ）、（ｃ）または（ｄ）のいずれかの抽出物、
（ｆ）上記［１］に記載の培養物によって生成する代謝産物、
（ｇ）化合物Ａ、
（ｈ）化合物Ｂ、および
（ｉ）化合物Ｃ
からなる群の１つまたは複数から選択される使用。
［２０］殺有害生物剤または植物成長促進組成物が、
（ａ）殺有害生物剤、
（ｂ）植物成長促進剤、
（ｃ）担体、
（ｄ）アジュバント、
（ｅ）表面活性物質、
（ｆ）化学肥料、および
（ｇ）抗植物病原体物質
からなる群の１つまたは複数から選択される第２の物質をさらに含む、上記［１９］に記載の使用。
［２１］殺有害生物剤が殺菌剤、殺真菌剤および殺線虫剤からなる群から選択される、上記［２０］に記載の使用。
［２２］殺有害生物剤がタデ抽出物およびＲｅｇａｌｉａ（登録商標）からなる群から選択される、上記［２１］に記載の使用。
本明細書で開示するのは、殺有害生物剤活性を有する微生物菌株、バチルス種（Bacillus sp.）分離株Ｆ７２７である。この菌株は、有害生物の防除および植物成長の促進において活性がある生体活性代謝産物を生成する。有害生物の防除および植物成長の促進のための、バチルス種（Bacillus sp.）分離株Ｆ７２７およびその代謝産物の使用法も開示する。特定の実施形態では、このバチルス種（Bacillus sp.）はＮＲＲＬ  Ｂ−５０７６８の少なくとも１つの識別特徴（identifying characteristics）を有し得る。