【手続補正書】
【提出日】平成28年11月1日(2016.11.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
IL-6プロモーターに機能的に連結された、ヒトIL-6をコードする核酸、ならびに
（i）SIRPaプロモーターに機能的に連結された、ヒトSIRPaをコードする核酸；
（ii）M-CSFプロモーターに機能的に連結された、ヒトM-CSFをコードする核酸；
（iii）IL-3プロモーターに機能的に連結された、ヒトIL-3をコードする核酸；
（iv）GM-CSFプロモーターに機能的に連結された、ヒトGM-CSFをコードする核酸；および
（v）TPOプロモーターに機能的に連結された、ヒトTPOをコードする核酸
からなる群より選択される、少なくとも1種の付加的な核酸
を含む、遺伝学的に修飾された非ヒト動物。
【請求項２】
IL-6プロモーターが非ヒト動物IL-6プロモーターであり、ヒトIL-6をコードする核酸が、非ヒト動物IL-6遺伝子座において非ヒト動物IL-6プロモーターに機能的に連結された、請求項1に記載の遺伝学的に修飾された非ヒト動物。
【請求項３】
ヒトM-CSFをコードする核酸が非ヒト動物M-CSF遺伝子座にあり、ヒトIL-3をコードする核酸が非ヒト動物IL-3遺伝子座にあり、ヒトGM-CSFをコードする核酸が非ヒト動物GM-CSF遺伝子座にあり、ヒトTPOをコードする核酸が非ヒト動物TPO遺伝子座にある、請求項1に記載の遺伝学的に修飾された非ヒト動物。
【請求項４】
免疫不全である、請求項1に記載の遺伝学的に修飾された非ヒト動物。
【請求項５】
組換え活性化遺伝子（RAG）を発現しない、請求項4に記載の遺伝学的に修飾された非ヒト動物。
【請求項６】
IL2受容体γ鎖を発現しない（γ鎖-/-）、請求項4に記載の遺伝学的に修飾された非ヒト動物。
【請求項７】
RAG2を発現せず、かつIL2rgを発現しない、請求項4に記載の遺伝学的に修飾された非ヒト動物。
【請求項８】
ヒト造血細胞の生着をさらに含む、請求項1に記載の遺伝学的に修飾された非ヒト動物。
【請求項９】
ヒト造血細胞がCD34+細胞である、請求項8に記載の遺伝学的に修飾された非ヒト動物。
【請求項１０】
ヒト造血細胞が多発性骨髄腫細胞である、請求項8に記載の遺伝学的に修飾された非ヒト動物。
【請求項１１】
マウスである、請求項1に記載の遺伝学的に修飾された非ヒト動物。
【請求項１２】
免疫不全であり、かつヒトIL-6をコードする核酸を含む、遺伝学的に修飾された非ヒト動物へ、ヒト造血細胞の集団を移植する工程
を含む、ヒトB細胞の発達および機能の動物モデルを生成する方法であって、
該ヒトIL-6をコードする核酸がIL-6プロモーターに機能的に連結され、該動物がヒトIL-6を発現し、かつ非ヒト動物IL-6を発現しない、方法。
【請求項１３】
IL-6プロモーターが非ヒト動物IL-6プロモーターであり、ヒトIL-6をコードする核酸が、非ヒト動物IL-6遺伝子座において非ヒト動物IL-6プロモーターに機能的に連結された、請求項12に記載の方法。
【請求項１４】
移植される造血細胞の集団がCD34+細胞を含む、請求項12に記載の方法。
【請求項１５】
移植される造血細胞の集団が多発性骨髄腫細胞を含む、請求項12に記載の方法。
【請求項１６】
移植する工程が、大腿骨内注射および／または脛骨内注射を含む、請求項12に記載の方法。
【請求項１７】
動物がヒトSIRPaをコードする核酸をさらに含み、該ヒトSIRPaをコードする核酸が、SIRPaプロモーターに機能的に連結された、請求項12に記載の方法。
【請求項１８】
免疫不全の、遺伝学的に修飾された動物が、
（i）M-CSFプロモーターに機能的に連結された、ヒトM-CSFをコードする核酸；
（ii）IL-3プロモーターに機能的に連結された、ヒトIL-3をコードする核酸；
（iii）GM-CSFプロモーターに機能的に連結された、ヒトGM-CSFをコードする核酸；および
（iv）TPOプロモーターに機能的に連結された、ヒトTPOをコードする核酸
からなる群より選択される少なくとも1種の付加的なヒト核酸を発現する、請求項17に記載の方法。
【請求項１９】
動物がマウスである、請求項12〜18のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
請求項12〜19のいずれか一項に記載の方法に従って調製された、生着された非ヒト動物。
【請求項２１】
ヒト造血器癌細胞を生着された請求項20に記載の遺伝学的に修飾された非ヒト動物を、候補薬剤と接触させる工程、および
該接触された非ヒト動物におけるヒト造血器癌細胞の生存率および／または増殖速度を、ヒト造血器癌細胞を生着されたが候補薬剤と接触されていない請求項20に記載の遺伝学的に修飾された非ヒト動物におけるヒト造血器癌細胞の生存率および／または増殖速度と比較する工程
を含む、造血器癌を処置する能力について候補薬剤をスクリーニングする方法であって、
該接触された非ヒト動物におけるヒト造血器癌細胞の生存率および／または増殖速度の減少が、その候補薬剤が造血器癌を処置するであろうことを示す、方法。
【請求項２２】
造血器癌が多発性骨髄腫である、請求項21に記載の方法。
【請求項２３】
生着され遺伝学的に修飾された免疫不全マウスを抗原で免疫化する工程
を含む、抗原結合タンパク質を産生する方法であって、
該マウスが、
ヒトIL-6をコードする核酸を含むゲノムであって、該核酸が、マウスIL-6遺伝子座においてプロモーターに機能的に連結された、ゲノム、および
ヒト造血細胞の生着
を含み、
免疫化の後、該マウスが、抗原に特異的に結合する抗原結合タンパク質を含むヒト細胞を産生する、方法。
【請求項２４】
マウスの脾臓、リンパ節、末梢血、骨髄、またはそれらの一部のうちの少なくとも1つを、マウスから収集する工程をさらに含む、請求項23に記載の方法。
【請求項２５】
マウスの脾臓、リンパ節、末梢血、骨髄、またはそれらの一部のうちの少なくとも1つから、ヒト細胞を単離する工程をさらに含む、請求項24に記載の方法。
【請求項２６】
ヒト細胞から抗原結合タンパク質を単離する工程をさらに含む、請求項25に記載の方法。
【請求項２７】
ヒト細胞がB細胞である、請求項26に記載の方法。
【請求項２８】
ヒト細胞からハイブリドーマ細胞系を産生する工程をさらに含む、請求項25に記載の方法。
【請求項２９】
ハイブリドーマ細胞系から、抗原に特異的に結合する抗原結合タンパク質を単離する工程をさらに含む、請求項28に記載の方法。
【請求項３０】
抗原結合タンパク質がヒトIgGである、請求項23に記載の方法。
【請求項３１】
ヒト造血細胞がCD34+細胞である、請求項23に記載の方法。
【請求項３２】
ヒト造血細胞が、ヒト胎児肝臓、ヒト骨髄、ヒト臍帯血、ヒト末梢血、およびヒト脾臓の1つまたは複数から得られる、請求項23に記載の方法。
【請求項３３】
抗原が、ペプチド、MHC/ペプチド複合体、DNA、生ウイルス、死ウイルスもしくはその一部、生細菌、死細菌もしくはその一部、および癌細胞もしくはその一部のうちの少なくとも1つである、請求項23に記載の方法。
【請求項３４】
抗原が、生着され遺伝学的に修飾された免疫不全マウスに、ヒト造血細胞の生着から1〜5ヶ月後に投与される、請求項23に記載の方法。
【請求項３５】
核酸が、生着され遺伝学的に修飾された免疫不全マウスのIL-6プロモーターに機能的に連結された、請求項23に記載の方法。
【請求項３６】
生着され遺伝学的に修飾された免疫不全マウスが、マウスIL-6を発現しない、請求項23に記載の方法。
【請求項３７】
生着され遺伝学的に修飾された免疫不全マウスが、ヒトSIRPaをコードする核酸をさらに含むゲノムを含み、該核酸が、プロモーターに機能的に連結された、請求項23に記載の方法。
【請求項３８】
生着され遺伝学的に修飾された免疫不全マウスが、組換え活性化遺伝子（RAG）のノックアウトを含む、請求項23に記載の方法。
【請求項３９】
生着され遺伝学的に修飾された免疫不全マウスが、IL2受容体γ鎖（IL2rg）遺伝子のノックアウトを含む、請求項23に記載の方法。
【請求項４０】
生着され遺伝学的に修飾された免疫不全マウスが、組換え活性化遺伝子（RAG）のノックアウトおよびIL2受容体γ鎖（IL2rg）遺伝子のノックアウトを含む、請求項23に記載の方法。
【請求項４１】
生着され遺伝学的に修飾された免疫不全マウスから、抗原に特異的に結合する抗原結合タンパク質を産生するヒト細胞を単離する工程
を含む、抗原結合タンパク質を単離する方法であって、
該生着され遺伝学的に修飾された免疫不全マウスが、
ヒトIL-6をコードする核酸を含むゲノムであって、該核酸が、マウスIL-6遺伝子座においてプロモーターに機能的に連結された、ゲノム、および
ヒト造血細胞の生着
を含み、該生着され遺伝学的に修飾された免疫不全マウスが、抗原で免疫化されている、方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２３】
様々な態様において、本開示のヒト造血細胞を生着させられた、遺伝学的に修飾された非ヒト動物の使用を包含する方法が提供される。これらの方法には、例えば、造血細胞および免疫細胞の増殖および分化のインビボ評価の方法、ヒト造血系のインビボ評価の方法、癌細胞のインビボ評価の方法、免疫応答のインビボ査定の方法、ワクチンおよび予防接種計画のインビボ評価の方法、癌細胞の増殖または生存をモジュレートする薬剤の効果の試験における使用の方法、癌の処置のインビボ評価の方法、ならびにヒト抗体を含む免疫メディエーターのインビボの作製および収集、ならびに造血細胞および免疫細胞の機能をモジュレートする薬剤の効果の試験における使用の方法が含まれる。例えば、いくつかの態様において、造血器癌を処置する能力について候補薬剤をスクリーニングする方法が提供される。いくつかの態様において、方法には、ヒト造血器癌細胞が生着している本開示の遺伝学的に修飾された非ヒト動物を、候補薬剤と接触させる工程、ならびに接触させられた生着させられた遺伝学的に修飾された非ヒト動物におけるヒト造血器癌細胞の生存率および／または増殖速度を、候補薬剤と接触させられていない同様に生着させられた遺伝学的に修飾された非ヒト動物におけるヒト造血器癌細胞と比較する工程を含む。本法において、接触させられた生着させられた非ヒト動物におけるヒト造血器癌細胞の生存率および／または増殖速度の減少は、その候補薬剤が造血器癌を処置するであろうことを示す。これらおよびその他の方法は、本明細書中の開示から当業者には明白であろう。
[本発明1001]
IL-6プロモーターに機能的に連結されたヒトIL-6をコードする核酸、ならびに
（i）非ヒト動物のゲノムにランダムに組み込まれた、SIRPaプロモーターに機能的に連結されたヒトSIRPaをコードする核酸；
（ii）M-CSFプロモーターに機能的に連結されたヒトM-CSFをコードする核酸；
（iii）IL-3プロモーターに機能的に連結されたヒトIL-3をコードする核酸；
（iv）GM-CSFプロモーターに機能的に連結されたヒトGM-CSFをコードする核酸；および
（v）TPOプロモーターに機能的に連結されたヒトTPOをコードする核酸：
からなる群より選択される少なくとも1種の付加的な核酸
を含む、遺伝学的に修飾された非ヒト動物。
[本発明1002]
IL-6プロモーターが非ヒト動物IL-6プロモーターであり、ヒトIL-6をコードする核酸が非ヒト動物IL-6遺伝子座において非ヒト動物IL-6プロモーターに機能的に連結されている、本発明1001の遺伝学的に修飾された非ヒト動物。
[本発明1003]
ヒトM-CSFをコードする核酸が非ヒト動物M-CSF遺伝子座にあり、ヒトIL-3をコードする核酸が非ヒト動物IL-3遺伝子座にあり、ヒトGM-CSFをコードする核酸が非ヒト動物GM-CSF遺伝子座にあり、ヒトTPOをコードする核酸が非ヒト動物TPO遺伝子座にある、本発明1001の遺伝学的に修飾された非ヒト動物。
[本発明1004]
免疫不全である、本発明1001の遺伝学的に修飾された非ヒト動物。
[本発明1005]
組換え活性化遺伝子（RAG）を発現しない、本発明1004の遺伝学的に修飾された非ヒト動物。
[本発明1006]
IL2受容体γ鎖を発現しない（γ鎖-/-）、本発明1004の遺伝学的に修飾された非ヒト動物。
[本発明1007]
RAG2を発現せず、かつIL2rgを発現しない、本発明1004の遺伝学的に修飾された非ヒト動物。
[本発明1008]
ヒト造血細胞の生着をさらに含む、本発明1001の遺伝学的に修飾された非ヒト動物。
[本発明1009]
ヒト造血細胞がCD34+細胞である、本発明1008の遺伝学的に修飾された非ヒト動物。
[本発明1010]
ヒト造血細胞が多発性骨髄腫細胞である、本発明1008の遺伝学的に修飾された非ヒト動物。
[本発明1011]
マウスである、本発明1001の遺伝学的に修飾された非ヒト動物。
[本発明1012]
免疫不全であり、IL-6プロモーターに機能的に連結されたヒトIL-6をコードする核酸を含み、ヒトIL-6を発現しかつ非ヒト動物IL-6を発現しない遺伝学的に修飾された非ヒト動物へ、ヒト造血細胞の集団を移植する工程
を含む、ヒトB細胞の発達および機能の動物モデルを生成する方法。
[本発明1013]
IL-6プロモーターが非ヒト動物IL-6プロモーターであり、ヒトIL-6をコードする核酸が非ヒト動物IL-6遺伝子座において非ヒト動物IL-6プロモーターに機能的に連結されている、本発明1012の方法。
[本発明1014]
移植される造血細胞の集団がCD34+細胞を含む、本発明1012の方法。
[本発明1015]
移植される造血細胞の集団が多発性骨髄腫細胞を含む、本発明1012の方法。
[本発明1016]
移植する工程が、大腿骨内注射および／または脛骨内注射を含む、本発明1012の方法。
[本発明1017]
動物が、非ヒト動物のゲノムにランダムに組み込まれた、SIRPaプロモーターに機能的に連結されたヒトSIRPaをコードする核酸をさらに含む、本発明1012の方法。
[本発明1018]
免疫不全の、遺伝学的に修飾された動物が、
（i）M-CSFプロモーターに機能的に連結されたヒトM-CSFをコードする核酸；
（ii）IL-3プロモーターに機能的に連結されたヒトIL-3をコードする核酸；
（iii）GM-CSFプロモーターに機能的に連結されたヒトGM-CSFをコードする核酸；および
（iv）TPOプロモーターに機能的に連結されたヒトTPOをコードする核酸：
からなる群より選択される少なくとも1種の付加的なヒト核酸を発現する、本発明1017の方法。
[本発明1019]
動物がマウスである、本発明1012〜1018のいずれかの方法。
[本発明1020]
本発明1012〜1019のいずれかの方法に従って調製された、生着させられた非ヒト動物。
[本発明1021]
ヒト造血器癌細胞が生着している本発明1020の遺伝学的に修飾された非ヒト動物を、候補薬剤と接触させる工程、および
該接触させられた非ヒト動物におけるヒト造血器癌細胞の生存率および／または増殖速度を、ヒト造血器癌細胞を生着させられているが候補薬剤と接触させられていない本発明1020の遺伝学的に修飾された非ヒト動物におけるヒト造血器癌細胞の生存率および／または増殖速度と比較する工程
を含む、造血器癌を処置する能力について候補薬剤をスクリーニングする方法であって、該接触させられた非ヒト動物におけるヒト造血器癌細胞の生存率および／または増殖速度の減少が、その候補薬剤が造血器癌を処置するであろうことを示す、方法。
[本発明1022]
造血器癌が多発性骨髄腫である、本発明1021の方法。