【手続補正書】
【提出日】平成28年9月16日(2016.9.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
グラム陰性菌由来の外膜小胞（ＯＭＶ）であって、前記ＯＭＶは、内腔内において遊離している少なくとも１種の異種タンパク質を含み、そして前記ＯＭＶは、哺乳動物に投与されると、前記異種タンパク質に対する免疫応答を惹起することができる、外膜小胞。
【請求項２】
前記異種タンパク質が可溶性タンパク質である、請求項１に記載のＯＭＶ。
【請求項３】
前記異種タンパク質が前記ＯＭＶの内腔内で機能的に活性である、請求項１または請求項２に記載のＯＭＶ。
【請求項４】
前記免疫応答が抗体免疫応答である、請求項１〜３のいずれか一項に記載のＯＭＶ。
【請求項５】
請求項１〜３のいずれか一項に記載のＯＭＶを調製する方法であって、前記グラム陰性菌のペリプラズムにおいて前記異種タンパク質を発現させるステップを含む、方法。
【請求項６】
前記異種タンパク質を、ペリプラズムタンパク質のシグナル配列をコードする核酸に作動可能に連結した前記異種タンパク質をコードする核酸配列を含む発現ベクターを使用して前記グラム陰性菌のペリプラズム内で発現させる、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記異種タンパク質の天然のシグナル配列が前記ペリプラズムタンパク質のシグナル配列で置き換えられている、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記ＯＭＶを単離するステップをさらに含む、請求項５〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
請求項５〜８のいずれか一項に記載の方法によって得られたまたは得ることができるＯＭＶ。
【請求項１０】
前記グラム陰性菌が、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｎ．ｍｅｎｉｇｉｔｉｄｅｓ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ種、およびＳｈｉｇｅｌｌａ種からなる群より選択される、請求項１〜９のいずれか一項に記載のＯＭＶまたは方法。
【請求項１１】
前記グラム陰性菌が、前記グラム陰性菌の過剰ブレブ形成株である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載のＯＭＶまたは方法。
【請求項１２】
前記グラム陰性菌がΔｔｏｌＲ  Ｅ．ｃｏｌｉ株またはΔｏｍｐＡ  Ｅ．ｃｏｌｉ株である、請求項１１に記載のＯＭＶまたは方法。
【請求項１３】
前記異種タンパク質が抗原である、請求項１〜１２のいずれか一項に記載のＯＭＶまたは方法。
【請求項１４】
前記異種タンパク質が異種生物体内の細胞質タンパク質またはペリプラズムタンパク質である、請求項１〜１３のいずれか一項に記載のＯＭＶまたは方法。
【請求項１５】
前記異種タンパク質が異種生物体内の膜結合タンパク質であり、膜アンカーが欠失している、請求項１〜１３のいずれか一項に記載のＯＭＶまたは方法。
【請求項１６】
前記異種タンパク質が、βラクタマーゼ（ＴＥＭ１）、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ由来のｆＨｂｐ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ由来の細胞外コレステロール依存性ストレプトリジンＯの二重変異体（Ｓｌｏ−ｄｍ）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ由来の細胞エンベロープセリンプロテアーゼＳｐｙＣＥＰ、またはＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ由来の推定表面排除タンパク質Ｓｐｙ０２６９である、請求項１〜１５のいずれか一項に記載のＯＭＶまたは方法。
【請求項１７】
前記ＯＭＶが、内腔内において遊離している少なくとも２種の異種タンパク質を含む、請求項１〜１６のいずれか一項に記載のＯＭＶまたは方法。
【請求項１８】
前記ＯＭＶが、内腔内において遊離している少なくとも３種の異種タンパク質を含む、請求項１７に記載のＯＭＶまたは方法。
【請求項１９】
前記異種タンパク質が、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ由来の細胞外コレステロール依存性ストレプトリジンＯの二重変異体（Ｓｌｏ−ｄｍ）およびＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ由来の推定表面排除タンパク質Ｓｐｙ０２６９を含む、請求項１７または１８に記載のＯＭＶまたは方法。
【請求項２０】
前記異種タンパク質が、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ由来の細胞外コレステロール依存性ストレプトリジンＯの二重変異体（Ｓｌｏ−ｄｍ）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ由来の細胞エンベロープセリンプロテアーゼＳｐｙＣＥＰ、およびＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ由来の推定表面排除タンパク質Ｓｐｙ０２６９を含む、請求項１８に記載のＯＭＶまたは方法。
【請求項２１】
（ａ）請求項１〜４または９〜２０のいずれか一項に記載のＯＭＶと、（ｂ）薬学的に許容されるキャリアとを含む薬学的組成物。
【請求項２２】
免疫原性組成物である、請求項２１に記載の薬学的組成物。
【請求項２３】
ワクチンである、請求項２１または請求項２２に記載の薬学的組成物。
【請求項２４】
哺乳動物において異種タンパク質に対する免疫応答を生じさせるための組成物であって、前記組成物は、グラム陰性菌由来のＯＭＶを有効量で含み、前記ＯＭＶが内腔内に少なくとも１種の異種タンパク質を含み、前記免疫応答が前記ＯＭＶ内の前記異種タンパク質に対するものである、組成物。
【請求項２５】
哺乳動物において異種タンパク質に対する免疫応答を生じさせるための組成物であって、前記組成物は、請求項１〜４もしくは９〜２０のいずれかに記載のＯＭＶ、または請求項２１〜２３のいずれか一項に記載の薬学的組成物を有効量で含み、前記免疫応答が前記ＯＭＶ内の前記異種タンパク質に対するものである、組成物。
【請求項２６】
療法において使用するための、請求項１〜４もしくは９〜２０のいずれか一項に記載のＯＭＶ、または請求項２１〜２３のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１８８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１８８】
ポリペプチド配列間の同一性は、ＭＰＳＲＣＨプログラム（Ｏｘｆｏｒｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ）において実行されるＳｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムによって、ギャップオープンペナルティ（ｇａｐ  ｏｐｅｎ  ｐｅｎａｌｔｙ）＝１２およびギャップ伸長ペナルティ（ｇａｐ  ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ  ｐｅｎａｌｔｙ）＝１のパラメータを用いたアフィンギャップ検索を使用して決定することが好ましい。
本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
グラム陰性菌由来の外膜小胞（ＯＭＶ）であって、前記ＯＭＶは、内腔内に遊離する少なくとも１種の異種タンパク質を含み、そして前記ＯＭＶは、哺乳動物に投与されると、前記異種タンパク質に対する免疫応答を惹起することができる、外膜小胞。
（項目２）
前記異種タンパク質が可溶性タンパク質である、項目１に記載のＯＭＶ。
（項目３）
前記異種タンパク質が前記ＯＭＶの内腔内で機能的に活性である、項目１または項目２に記載のＯＭＶ。
（項目４）
前記免疫応答が抗体免疫応答である、前記項目のいずれか一項に記載のＯＭＶ。
（項目５）
項目１〜３のいずれか一項に記載のＯＭＶを調製する方法であって、グラム陰性菌のペリプラズムにおいて異種タンパク質を発現させるステップを含む、方法。
（項目６）
前記異種タンパク質を、ペリプラズムタンパク質のシグナル配列をコードする核酸に作動可能に連結した前記異種タンパク質をコードする核酸配列を含む発現ベクターを使用して前記グラム陰性菌のペリプラズム内で発現させる、項目５に記載の方法。
（項目７）
前記異種タンパク質の天然のシグナル配列がペリプラズムタンパク質のシグナル配列で置き換えられている、項目６に記載の方法。
（項目８）
前記ＯＭＶを単離するステップをさらに含む、項目５〜７のいずれか一項に記載の方法。
（項目９）
項目５〜８のいずれか一項に記載の方法によって得られたまたは得ることができるＯＭＶ。
（項目１０）
前記グラム陰性菌が、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｎ．ｍｅｎｉｇｉｔｉｄｅｓ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ種、およびＳｈｉｇｅｌｌａ種からなる群より選択される、前記項目のいずれか一項に記載のＯＭＶまたは方法。
（項目１１）
前記グラム陰性菌が、前記グラム陰性菌の過剰ブレブ形成株である、前記項目のいずれか一項に記載のＯＭＶまたは方法。
（項目１２）
前記グラム陰性菌がΔｔｏｌＲ  Ｅ．ｃｏｌｉ株またはΔｏｍｐＡ  Ｅ．ｃｏｌｉ株である、項目１１に記載のＯＭＶまたは方法。
（項目１３）
前記異種タンパク質が抗原である、前記項目のいずれか一項に記載のＯＭＶまたは方法。
（項目１４）
前記異種タンパク質が異種生物体内の細胞質タンパク質またはペリプラズムタンパク質である、前記項目のいずれか一項に記載のＯＭＶまたは方法。
（項目１５）
前記異種タンパク質が異種生物体内の膜結合タンパク質であり、膜アンカーが欠失している、項目１〜１３のいずれか一項に記載のＯＭＶまたは方法。
（項目１６）
前記異種タンパク質が、βラクタマーゼ（ＴＥＭ１）、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ由来のｆＨｂｐ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ由来の細胞外コレステロール依存性ストレプトリジンＯの二重変異体（Ｓｌｏ−ｄｍ）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ由来の細胞エンベロープセリンプロテアーゼＳｐｙＣＥＰ、またはＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ由来の推定表面排除タンパク質Ｓｐｙ０２６９である、前記項目のいずれか一項に記載のＯＭＶまたは方法。
（項目１７）
前記ＯＭＶが、内腔内に遊離する少なくとも２種の異種タンパク質を含む、前記項目のいずれか一項に記載のＯＭＶまたは方法。
（項目１８）
前記ＯＭＶが、内腔内に遊離する少なくとも３種の異種タンパク質を含む、項目１７に記載のＯＭＶまたは方法。
（項目１９）
前記異種タンパク質が、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ由来の細胞外コレステロール依存性ストレプトリジンＯの二重変異体（Ｓｌｏ−ｄｍ）およびＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ由来の推定表面排除タンパク質Ｓｐｙ０２６９を含む、項目１７または１８に記載のＯＭＶまたは方法。
（項目２０）
前記異種タンパク質が、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ由来の細胞外コレステロール依存性ストレプトリジンＯの二重変異体（Ｓｌｏ−ｄｍ）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ由来の細胞エンベロープセリンプロテアーゼＳｐｙＣＥＰ、およびＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ由来の推定表面排除タンパク質Ｓｐｙ０２６９を含む、項目１８に記載のＯＭＶまたは方法。
（項目２１）
（ａ）項目１〜４または９〜２０のいずれか一項に記載のＯＭＶと、（ｂ）薬学的に許容されるキャリアとを含む薬学的組成物。
（項目２２）
免疫原性組成物である、項目２１に記載の薬学的組成物。
（項目２３）
ワクチンである、項目２１または項目２２に記載の薬学的組成物。
（項目２４）
哺乳動物において異種タンパク質に対する免疫応答を生じさせる方法であって、前記方法は、前記哺乳動物にグラム陰性菌由来のＯＭＶを有効量で投与することを含み、前記ＯＭＶが内腔内に少なくとも１種の異種タンパク質を含み、前記免疫応答が前記ＯＭＶ内の前記異種タンパク質に対するものである、方法。
（項目２５）
哺乳動物において異種タンパク質に対する免疫応答を生じさせる方法であって、前記方法は、前記哺乳動物に、項目１〜４もしくは９〜２０のいずれかに記載のＯＭＶ、または項目２１〜２３に記載の薬学的組成物を有効量で投与することを含み、前記免疫応答が前記ＯＭＶ内の前記異種タンパク質に対するものである、方法。
（項目２６）
療法において使用するための、項目１〜４もしくは９〜２０のいずれか一項に記載のＯＭＶ、または項目２１〜２３に記載の薬学的組成物。