【手続補正書】
【提出日】平成28年3月4日(2016.3.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
インヒビターシステインノット（ＩＣＫ）モチーフタンパク質等のシステインリッチ殺虫性タンパク質（ＣＲＩＰ）に操作可能に連結されている小胞体シグナルペプチド（ＥＲＳＰ）から構成されるタンパク質であって、
ここで、前記ＥＲＳＰは、前記タンパク質のＮ末端である（ＥＲＳＰ−ＩＣＫ）、タンパク質。
【請求項２】
前記ＥＲＳＰが、発現されたＣＲＩＰを植物細胞の小胞体へと誘導する、任意のシグナルペプチドである、請求項１に記載のタンパク質。
【請求項３】
前記ＣＲＩＰが、インヒビターシステインノット（ＩＣＫ）タンパク質である、請求項２に記載のタンパク質。
【請求項４】
前記ＣＲＩＰが、非ＩＣＫタンパク質である、請求項２に記載のタンパク質。
【請求項５】
前記ＥＲＳＰが、５〜５０アミノ酸の長さであり、植物由来のペプチドである、請求項２に記載のタンパク質。
【請求項６】
翻訳安定化タンパク質（ＳＴＡ）に操作可能に連結されている請求項１に記載のタンパク質であって、
ここで、前記ＥＲＳＰは、前記タンパク質のＮ末端であり、および翻訳安定化タンパク質（ＳＴＡ）は、任意選択的にＩＣＫモチーフタンパク質（ＥＲＳＰ−ＳＴＡ−ＩＣＫ）または非ＩＣＫモチーフタンパク質（ＥＲＳＰ−ＳＴＡ−非ＩＣＫ）である、ＣＲＩＰのＮ末端側上、または、ＩＣＫもしくは非ＩＣＫモチーフタンパク質のＣ末端側上（ＥＲＳＰ−ＩＣＫ−ＳＴＡ）または（ＥＲＳＰ−非ＩＣＫ−ＳＴＡ）、のいずれかであっても良い、タンパク質。
【請求項７】
公知のペプチドに付加され、および操作可能に連結される、Ｎ末端ジペプチドを有するペプチドであって、
前記Ｎ末端ジペプチドは、前記ジペプチドのＮ末端上の１つの非極性アミノ酸、および前記ジペプチドのＣ末端上の１つの極性アミノ酸から構成され、
ここで、前記ペプチドは、例えばＩＣＫ、ペプチドまたは非ＩＣＫペプチド等の、ＣＲＩＰ（システインリッチ殺虫性ペプチド）から選択される、ペプチド。
【請求項８】
公知のペプチドに付加され、および操作可能に連結される、Ｎ末端ジペプチドを有する請求項７に記載のペプチドであって、
ここで、前記Ｎ末端ジペプチドは、前記ジペプチドのＮ末端上の１つの非極性アミノ酸および、前記ジペプチドのＣ末端上の１つの極性アミノ酸から構成される、ペプチド。
【請求項９】
前記Ｎ末端ジペプチドのＮ末端アミノ酸の前記非極性アミノ酸が、グリシン、アラニン、プロリン、バリン、ロイシン、イソロイシン、フェニルアラニンおよびメチオニンから選択される、請求項８に記載のペプチド。
【請求項１０】
前記Ｎ末端ジペプチドのＣ末端アミノ酸の前記極性アミノ酸が、セリン、スレオニン、システイン、アスパラギン、グルタミン、ヒスチジン、トリプトファン、チロシンから選択される、請求項８に記載のペプチド。
【請求項１１】
前記Ｎ末端ジペプチドのＮ末端アミノ酸の前記非極性アミノ酸が、グリシン、アラニン、プロリン、バリン、ロイシン、イソロイシン、フェニルアラニン、およびメチオニンから選択され、ならびに、前記Ｎ末端ジペプチドのＣ末端アミノ酸の前記極性アミノ酸が、セリン、スレオニン、システイン、アスパラギン、グルタミン、ヒスチジン、トリプトファン、チロシンから選択される、請求項８に記載のペプチド。
【請求項１２】
前記ジペプチドが、グリシン−セリンから構成される、請求項１１に記載のペプチド。
【請求項１３】
少なくとも２つのタイプの殺虫性タンパク質またはペプチドを含有する組成物であって、
ここで、１つのタイプが、孔形成殺虫性タンパク質（ＰＦＩＰ）であり、他方のタイプが、システインリッチ殺虫性ペプチド（ＣＲＩＰ）である、組成物。
【請求項１４】
前記ＣＲＩＰが、インヒビターシステインノット（ＩＣＫ）モチーフタンパク質であり、前記ＩＣＫが、Ｕ−ＡＣＴＸポリペプチド、Ｕ−ＡＣＴＸ−Ｈｖ１ａ、ｒＵ−ＡＣＴＸ−Ｈｖ１ａ、ｒＵ−ＡＣＴＸ−Ｈｖ１ｂまたは殺虫性の突然変異体もしくは殺虫性の変異体として知られる毒素を含有する、Ｈａｄｒｏｎｙｃｈｅ  ｖｅｒｓｕｔａ、またはブルーマウンテンジョウゴグモ、Ａｔｒａｘ  ｒｏｂｕｓｔｕｓ、Ａｔｒａｘ  ｆｏｒｍｉｄａｂｉｌｉｓ、Ａｔｒａｘ  ｉｎｆｅｎｓｕｓから誘導される、または由来する、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
前記ＣＲＩＰは、非ＩＣＫ  ＣＲＩＰであり、および、任意選択的に前記非ＩＣＫ  ＣＲＩＰが、イソギンチャク、ウニおよびウミウシ等の非ＩＣＫ−ＣＲＩＰＳを有し、Ａｎｅｍｏｎｉａ  ｖｉｒｉｄｉと名付けられるイソギンチャクを任意選択的に含む動物から誘導される、または由来し、任意選択的に、Ａｖ２およびＡｖ３と名付けられたペプチド、特に、配列表に記載されるペプチドまたは突然変異体もしくは変異体等を含む、Ａｖ２およびＡｖ３に類似するペプチドを含む、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
Ｂｔ抵抗性昆虫を制御するための、請求項１３に記載の組成物の使用方法であって、
少なくとも２つのタイプのペプチドの組成物を作製することを含み、
ここで、１つのペプチドのタイプは、孔形成殺虫性タンパク質（ＰＦＩＰ）であり、他方のタイプのペプチドは、システインリッチ殺虫性ペプチド（ＣＲＩＰ）であり、ならびに、ＰＦＩＰおよびＣＲＩＰタンパク質は、本明細書に記述される任意の組成物から、および、配列表に提示される任意のタンパク質から選択され、
次いで、前記組成物を、昆虫がいる場所へと適用すること、を含む方法。
【請求項１７】
少なくとも２つの適切にフォールディングされたペプチドの組み合わせを発現する植物を作製することを含む、Ｂｔ抵抗性昆虫から植物を防御することを含む、Ｂｔ抵抗性昆虫を制御する請求項１６に記載の方法であって、
ここで、ペプチドの１つのタイプは孔形成殺虫性タンパク質（ＰＦＩＰ）であり、他方のペプチドのタイプは、システインリッチ殺虫性ペプチド（ＣＲＩＰ）であり、ならびに、ＰＦＩＰおよびＣＲＩＰタンパク質は、本明細書に記述される任意の組成物および配列表に提示される任意のタンパク質から選択される、方法。
【請求項１８】
前記ＰＦＩＰが、昆虫の腸内膜に影響を及ぼしている間の任意のときにＣＲＩＰが投与される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
Ｂｔ抵抗性について昆虫を検証した後で、ＣＲＩＰが投与される、請求項１８に記載の方法であって、前記検証された昆虫が、Ｂｔ抵抗性である、方法。
【請求項２０】
固体または液体の形態にある、本明細書に記述される任意の化合物の、昆虫への適用、昆虫のいる場所への適用、または植物組込み型防御剤としての適用。
【請求項２１】
固体または液体の形態にある、少なくとも２つのタイプの殺虫性タンパク質またはペプチドを含有する組成物であって、ここで、１つのタイプが、孔形成殺虫性タンパク質（ＰＦＩＰ）であり、他方のタイプが、システインリッチ殺虫性ペプチド（ＣＲＩＰ）である、組成物の、昆虫への適用、昆虫のいる場所への適用、または植物組込み型防御剤としての適用。
【請求項２２】
前記ＰＦＩＰが、Ｂｔタンパク質であり、前記ＣＲＩＰが、ＩＣＫであり、前記ＩＣＫが、２０〜１００のアミノ酸および２〜４のジスルフィド結合を含有し、ハイブリッド−ＡＣＴＸ−Ｈｖ１ａに対し、少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有するペプチドである、請求項１４に記載の組成物。
【請求項２３】
前記ＰＦＩＰが、Ｂｔタンパク質であり、前記ＩＣＫが、ハイブリッド−ＡＣＴＸ−Ｈｖ１ａに対し、少なくとも９９％の配列同一性を有するペプチドである、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２４】
前記Ｂｔタンパク質が、表４−６に記載のＣｒｙまたはＣｙｔタンパク質から選択されるＣｒｙまたはＣｙｔタンパク質である、請求項２３に記載の組成物。
【請求項２５】
前記Ｂｔタンパク質が、ＣｒｙまたはＣｙｔタンパク質であり、および／または、前記Ｂｔタンパク質が、Ｃｒｙ１、Ｃｒｙ３、ＴＩＣ８５１、ＣｒｙＥＴ７０、Ｃｒｙ２２、ＴＩＣ９０１、ＴＩＣ２０１、ＴＩＣ４０７、ＴＩＣ４１７、バイナリー殺虫性タンパク質ＣｒｙＥＴ８０およびＣｒｙＥＴ７６、バイナリー殺虫性タンパク質ＴＩＣ１００およびＴＩＣ１０１、殺虫性タンパク質ＴＩＣ８１０またはＴＩＣ８１２を有する殺虫性タンパク質ＥＴ２９またはＥＴ３７の組み合わせ、およびバイナリー殺虫性タンパク質ＰＳ１４９Ｂ１からなる群から選択される、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２６】
前記ＰＦＩＰが、Ｂｔタンパク質のＣｒｙまたはＣｙｔタイプであり、前記Ｂｔタンパク質のタイプが、Ｃｒｙ１、Ｃｒｙ３、ＴＩＣ８５１、ＣｒｙＥＴ７０、Ｃｒｙ２２、ＴＩＣ９０１、ＴＩＣ２０１、ＴＩＣ４０７、ＴＩＣ４１７、バイナリー殺虫性タンパク質ＣｒｙＥＴ８０およびＣｒｙＥＴ７６、バイナリー殺虫性タンパク質ＴＩＣ１００およびＴＩＣ１０１、殺虫性タンパク質ＴＩＣ８１０もしくはＴＩＣ８１２を有する殺虫性タンパク質ＥＴ２９もしくはＥＴ３７の組み合わせ、およびバイナリー殺虫性タンパク質ＰＳ１４９Ｂ１、またはそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１４に記載の組成物。
【請求項２７】
前記組成物が、ＰＦＩＰを含み、前記ＰＦＩＰが、Ｂｔタンパク質であり、前記Ｂｔタンパク質が、ＣｒｙまたはＣｙｔタンパク質であり、および／または、前記Ｂｔタンパク質が、Ｃｒｙ１、Ｃｒｙ３、ＴＩＣ８５１、ＣｒｙＥＴ７０、Ｃｒｙ２２、ＴＩＣ９０１、ＴＩＣ２０１、ＴＩＣ４０７、ＴＩＣ４１７、バイナリー殺虫性タンパク質ＣｒｙＥＴ８０およびＣｒｙＥＴ７６、バイナリー殺虫性タンパク質ＴＩＣ１００およびＴＩＣ１０１、殺虫性タンパク質ＴＩＣ８１０またはＴＩＣ８１２を有する殺虫性タンパク質ＥＴ２９またはＥＴ３７の組み合わせ、およびバイナリー殺虫性タンパク質ＰＳ１４９Ｂ１からなる群から選択され、
前記組成物は、さらに、トリプシン介在型オースタティック因子またはＴＭＯＦペプチドを含み、前記ＴＭＯＦペプチドは、配列番号７０８〜７２１から選択される、請求項１３に記載の組成物。
【請求項２８】
前記ＣＲＩＰが、ＩＣＫであり、前記ＩＣＫが、２０〜１００のアミノ酸および２〜４のジスルフィド結合を含有し、ハイブリッド−ＡＣＴＸ−Ｈｖ１ａに対し、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有するペプチドである、請求項２７に記載の組成物。
【請求項２９】
前記ＣＲＩＰが、非ＩＣＫであり、前記非ＩＣＫが、任意選択的に、Ａｎｅｍｏｎｉａ  ｖｉｒｉｄｉと名付けられているイソギンチャクを含み、任意選択的に、Ａｖ２およびＡｖ３と名付けられるペプチド、特に配列表にリストアップされるペプチドまたは突然変異体または変異体を含むＡｖ２およびＡｖ３に類似するペプチドを含む、イソギンチャク、ウニおよびウミウシに由来する毒性ペプチドから選択されるペプチドであり、
前記孔形成殺虫性タンパク質（ＰＦＩＰ）が、Ｂｔタンパク質であり、前記Ｂｔタンパク質が、ＣｒｙまたはＣｙｔタンパク質であり、および／または、前記Ｂｔタンパク質が、Ｃｒｙ１、Ｃｒｙ３、ＴＩＣ８５１、ＣｒｙＥＴ７０、Ｃｒｙ２２、ＴＩＣ９０１、ＴＩＣ２０１、ＴＩＣ４０７、ＴＩＣ４１７、バイナリー殺虫性タンパク質ＣｒｙＥＴ８０およびＣｒｙＥＴ７６、バイナリー殺虫性タンパク質ＴＩＣ１００およびＴＩＣ１０１、殺虫性タンパク質ＴＩＣ８１０またはＴＩＣ８１２を有する殺虫性タンパク質ＥＴ２９またはＥＴ３７の組み合わせ、およびバイナリー殺虫性タンパク質ＰＳ１４９Ｂ１からなる群から選択される、請求項２７に記載の組成物。
【請求項３０】
前記Ｂｔタンパク質が、Ｃｒｙ１として知られるタンパク質であり、前記ＩＣＫが、ハイブリッド−ＡＣＴＸ−Ｈｖ１ａに対し、少なくとも９５％の配列同一性を有するペプチドである、請求項２３に記載の組成物。
【請求項３１】
前記Ｂｔタンパク質が、Ｃｒｙ１として知られるタンパク質であり、前記ＩＣＫが、「ｒＵ−ＡＣＴＸ−Ｈｖ１ａ」と名付けられ、また「ハイブリッド＋２」と名付けられた、配列番号６５２を有するペプチドである、請求項２３に記載の組成物。
【請求項３２】
昆虫を制御するための製剤にされる、請求項１３〜１５，２２〜３１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３３】
昆虫を制御するための散布可能な製剤にされる、請求項１３〜１５，２２〜３１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３４】
請求項３３に記載の組成物の散布可能な製剤を用い、前記製剤を植物、または昆虫のいる位置、または保護が必要な植物の位置へ散布する方法。
【請求項３５】
前記ＰＦＩＰが、Ｂｔタンパク質であり、前記Ｂｔタンパク質が、Ｃｒｙ１、Ｃｒｙ３、ＴＩＣ８５１、ＣｒｙＥＴ７０、Ｃｒｙ２２、ＴＩＣ９０１、ＴＩＣ２０１、ＴＩＣ４０７、ＴＩＣ４１７、Ｃｒｙ１、Ｃｒｙ３、ＣｒｙＥＴ７０、およびＣｒｙ２２からなる群から選択され、Ｃｒｙ１および前記ＩＣＫが、ハイブリッド−ＡＣＴＸ−Ｈｖ１ａに対し、少なくとも９５％の配列同一性を有するペプチドである、請求項２１に記載の組成物。
【請求項３６】
前記ＩＣＫが、「ｒＵ−ＡＣＴＸ−Ｈｖ１ａ」と名付けられ、また「ハイブリッド＋２」と名付けられた、配列番号６５２を有するペプチドである、請求項３５に記載の組成物。
【請求項３７】
前記孔形成殺虫性タンパク質（ＰＦＩＰ）が、Ｕ−ＡＣＴＸポリペプチド、Ｕ−ＡＣＴＸ−Ｈｖ１ａ、ｒＵ−ＡＣＴＸ−Ｈｖ１ａ、ｒＵ−ＡＣＴＸ−Ｈｖ１ｂまたは殺虫性の突然変異体もしくは変異体として知られる毒素を含む、Ｈａｄｒｏｎｙｃｈｅ  ｖｅｒｓｕｔａまたはブルーマウンテンジョウゴグモ、Ａｔｒａｘ  ｒｏｂｕｓｔｕｓ、Ａｔｒａｘ  ｆｏｒｍｉｄａｂｉｌｉｓ、Ａｔｒａｘ  ｉｎｆｅｎｓｕｓからなる群から選択され、誘導され、または由来し、
前記Ｂｔタンパク質が、Ｃｒｙ１、Ｃｒｙ３、ＴＩＣ８５１、ＣｒｙＥＴ７０、Ｃｒｙ２２、ＴＩＣ９０１、ＴＩＣ２０１、ＴＩＣ４０７、ＴＩＣ４１７、Ｃｒｙ１、Ｃｒｙ３、ＣｒｙＥＴ７０、およびＣｒｙ２２からなる群から選択されるタンパク質であり、Ｃｒｙ１および前記ＩＣＫが、ハイブリッド−ＡＣＴＸ−Ｈｖ１ａに対し、少なくとも９５％の配列同一性を有するペプチドであり、Ｕ＋２−ＡＣＴＸ−Ｈｖ１ａ、および「ｒＵ−ＡＣＴＸ−Ｈｖ１ａ」と名付けられ、また「ハイブリッド＋２」と名付けられた、配列番号６５２を有するペプチドから選択されるペプチドを含む、請求項１４に記載の組成物。
【請求項３８】
前記孔形成殺虫性タンパク質（ＰＦＩＰ）が、Ｕ−ＡＣＴＸポリペプチド、Ｕ−ＡＣＴＸ−Ｈｖ１ａ、ｒＵ−ＡＣＴＸ−Ｈｖ１ａ、ｒＵ−ＡＣＴＸ−Ｈｖ１ｂまたは殺虫性の突然変異体もしくは殺虫性の変異体からなる群から選択され、誘導され、または由来し、
前記Ｂｔタンパク質が、Ｃｒｙ１、Ｃｒｙ３、ＴＩＣ８５１、ＣｒｙＥＴ７０、Ｃｒｙ２２、ＴＩＣ９０１、ＴＩＣ２０１、ＴＩＣ４０７、ＴＩＣ４１７、Ｃｒｙ１、Ｃｒｙ３、ＣｒｙＥＴ７０、およびＣｒｙ２２からなる群から選択されるタンパク質であり、Ｃｒｙ１および前記ＩＣＫが、ハイブリッド−ＡＣＴＸ−Ｈｖ１ａに対し、少なくとも９５％の配列同一性を有するペプチドであり、Ｕ＋２−ＡＣＴＸ−Ｈｖ１ａ、および、配列番号６５２を有する、「ハイブリッド＋２」とも名付けられた「ｒＵ−ＡＣＴＸ−Ｈｖ１ａ」を含む、請求項１４に記載の組成物。
【請求項３９】
前記孔形成殺虫性タンパク質（ＰＦＩＰ）が、Ｕ−ＡＣＴＸポリペプチド、Ｕ−ＡＣＴＸ−Ｈｖ１ａ、ｒＵ−ＡＣＴＸ−Ｈｖ１ａ、ｒＵ−ＡＣＴＸ−Ｈｖ１ｂまたは殺虫性の突然変異体もしくは殺虫性の変異体からなる群から選択され、誘導され、または由来し、
前記Ｂｔタンパク質が、Ｃｒｙ１、Ｃｒｙ３、ＴＩＣ８５１、ＣｒｙＥＴ７０、Ｃｒｙ２２、ＴＩＣ９０１、ＴＩＣ２０１、ＴＩＣ４０７、ＴＩＣ４１７、Ｃｒｙ１、Ｃｒｙ３、ＣｒｙＥＴ７０、およびＣｒｙ２２からなる群から選択されるタンパク質であり、Ｃｒｙ１および前記ＩＣＫが、ハイブリッド−ＡＣＴＸ−Ｈｖ１ａに対し、少なくとも９５％の配列同一性を有するペプチドであり、配列番号６５２を有する、「ハイブリッド＋２」とも名付けられたペプチド「ｒＵ−ＡＣＴＸ−Ｈｖ１ａ」を含む、請求項１４に記載の組成物。
【請求項４０】
前記孔形成殺虫性タンパク質（ＰＦＩＰ）が、配列番号３３〜５３３を含む配列表に記載の配列を有するＢｔタンパク質のいずれかから選択され、
前記システインリッチ殺虫性タンパク質（ＣＲＩＰ）が、表に記載の、ならびに配列番号３３〜５３３、配列番号５３４〜７０７、および、配列番号６５２を有するペプチドを含む配列表に記載の配列を有するタンパク質のいずれかから選択されるＣＲＩＰである、請求項１３に記載の組成物。
【請求項４１】
前記孔形成殺虫性タンパク質（ＰＦＩＰ）が、ａ）Ｃｒｙ１ＦおよびＣｒｙ１Ａタンパク質、ｂ）Ｄｉｐｅｌならびにｃ）Ｔｈｕｒｉｃｉｄｅの組み合わせから選択され、
前記ＣＲＩＰが、ａ）Ｈｖ１ａペプチド、ｂ）ハイブリッド−ＡＣＴＸ−Ｈｖ１ａペプチド、ｃ）ハイブリッド＋２−ＡＣＴＸ−Ｈｖ１ペプチド、およびｄ）配列番号６５２を有する、「ハイブリッド＋２」とも名付けられたペプチド「ｒＵ−ＡＣＴＸ−Ｈｖ１ａ」から選択される、請求項１３に記載の組成物。