【手続補正書】
【提出日】平成28年3月11日(2016.3.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
幹細胞の筋原細胞への分化を誘導する方法であって、（i）GSK3経路阻害物質；（ii）3',5'-環状アデノシン一リン酸（cAMP）の細胞内レベルを増加させる化合物；および（iii）FGF経路活性化物質、の少なくとも2つと共に幹細胞を培養する工程を含む、方法。
【請求項２】
培養する工程が、GSK3経路阻害物質、3',5'-環状アデノシン一リン酸の細胞内レベルを増加させる化合物、およびFGF経路活性化物質の存在下で行われる、請求項1記載の方法。
【請求項３】
幹細胞が、人工多能性幹（iPS）細胞、胚性幹（ES）細胞または多分化能性幹細胞である、請求項1または2記載の方法。
【請求項４】
GSK3経路阻害物質が、GSK3β阻害物質である、請求項1〜3のいずれか一項記載の方法。
【請求項５】
GSK3経路阻害物質が、6-ブロモインジルビン-3'-オキシム（BIO）、CHIR98014；CHIR99021；ARA014418；ヒメニアルジシン（hymenialdisine）；フラボピリドール；アロイジンA；アロイジンB；CT20026；SU9516；スタウロスポリン；GF109203x；RO318220；SB216763；SB415286；I5；CGP60474；ケンパウロン（9-ブロモパウロン）；アルスターパウロン；2-シアノエチル-アルスターパウロン；1-アザ-アルスターパウロン；1-アザ-ケンパウロン；9-シアノ-2,3-ジメトキシパウロン；2-ヨードパウロン；2-ブロモ-9-ニトロパウロン；2,3-ジメトキシ-9-ニトロパウロン；7-ブロモ-5-(4-ニトロフェニルヒドラゾノ)-4,5-ジヒドロ-1-H-[1]ベンゾアゼピン2(3H)-オン；7,8-ジメトキシ-5-(4-ニトロフェニルヒドラゾノ)-4,5ジヒドロ-1H-[1]ベンゾアゼピン-2-(3H)-オン；9-シアノパウロン；9-クロロパウロン；9-トリフルオロメチルパウロン；2,3-ジメトキシ-9-トリフルオロメチルパウロン；9-ブロモ-12-メチルオキシカルボニルメチルパウロン；9-フルオロパウロン；9-ブロモ-2,3-ジメトキシパウロン；9-ブロモ-2,3-ジメトキシパウロン；9-メチルパウロン；10-ブロモパウロン；2-ブロモパウロン；11-クロロパウロン；2-(3-ヒドロキシ-1-プロピニル)-9-トリフルオロメチルパウロン；9-ブロモ-12-(2-ヒドロキシエチル)-パウロン；ケンパウロン；アルスターパウロン；2-シアノエチル-アルスターパウロン；1-アザ-ケンパウロン；1-アザ-アルスターパウロン；9-ブロモ-12-メチルパウロン；9-ブロモ-5-(メチルオキシカルボニルメチル)パウロン；11-メチルパウロン；パウロン；11-エチルパウロン；9-ブロモ-7,12-ジヒドロ-6-(ヒドロキシアミノ)-インドロ[2-3-d][1]ベンゾアゼピン；2,9-ジブロモパウロン；11-ブロモパウロン；2,3-ジメトキシパウロン；9-ブロモ-7,12ジヒドロ-6-メチルチオ-インドロ[2-3-d][1]ベンゾアゼピン；(E)-2(3-オキソ-1-ブテニル)-9-トリフルオロメチルパウロン；9-ブロモ-12エチルパウロン；9-ブロモ-7,12-ジヒドロ-インドロ[2-3-d][1]ベンゾアゼピン-6(5H)-チオン；2-ブロモ-9-トリフルオロメチルパウロン；2-[2-(1-ヒドロキシシクロヘキシル)エチニル]-9-トリフルオロメチル-パウロン；9-ブロモ-5メチルパウロン；9-メトキシパウロン；2-ヨード-9-トリフルオロメチルパウロン；9-ブロモ-12-(tert-ブチルオキシカルボニル)-パウロン；9-ブロモ-12-(2-プロペニル)パウロン；9-ブロモ-4-ヒドロキシパウロン；8,10-ジクロロパウロン；5-ベンジル-9-ブロモパウロン；9-ブロモ-4-メトキシパウロン；9-ブロモ-5-エチルパウロン；9-ブロモ-5,7ビス-(tert-ブチルオキシカルボニル)-パウロン；4-メトキシパウロン；9-ブロモ-5,6,7,12-テトラヒドロベンゾ[6-7]シクロヘプト[1,2.b]インドール；2-フェニル-4-(2-チエニル)-5H-ピリド[2-3d][1]ベンゾアゼピン-6(7H)-チオン；9-ブロモ-5,7,12-トリ-(tert-ブチルオキシカルボニル)-パウロン；9-ブロモ-5,12-ビス-(tert-ブチルオキシカルボニル)パウロン；4-(4-クロロフェニル)-2-(2-ナフチル)-5H-ピリド[23-d][1]ベンゾアゼピン-6(7H)-チオン；5,6,7,12-テトラヒドロベンゾ[6-7]シクロヘプト[1,2-b]インドール；N-ブチル-N'-(5-ニトロ-1,3-チアゾール-2-イル)ウレア；N-(5-ニトロ-1,3-チアゾール-2-イル)ペンタンアミド；1-{4-アミノ-2-[(4-メトキシフェニル)アミノ]-1,3-チアゾール-5-イル}エタノン；N-ベンジル-N'-(5-ニトロ-1,3-チアゾール-2-イル)ウレア；N-(4-メトキシベンジル)-N'-(5-ニトロ-1,3-チアゾール-2-イル)ウレア；3-(4-メトキシフェニル)-N-(5-ニトロ-1,3-チアゾール-2-イル)プロパンアミド；4-(4-メトキシフェニル)-N-(5-ニトロ-1,3-チアゾール-2-イル)ブタンアミド；2-(3-メトキシフェニル)-N-(5-ニトロ-1,3-チアゾール-2イル)アセトアミド；2-(4-フルオロフェニル)-N-(5-ニトロ-1,3-チアゾール-2-イル)プロパンアミド；2-(3-メチルフェニル)-N-(5-ニトロ-1,3-チアゾール-2-イル)アセトアミド；1-ベンジル-3-ナフタレン-1-イル-ウレアまたは1-ベンジル[1,3]ジオキソール-5-イル-3-ベンジル-ウレア；およびそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される、請求項1〜4のいずれか一項記載の方法。
【請求項６】
GSK3経路阻害物質の濃度が、約0.05μM〜約50μMである、請求項1〜5のいずれか一項記載の方法。
【請求項７】
cAMPの細胞内レベルを増加させる化合物が、アデニリルシクラーゼの活性化物質である、請求項1〜6のいずれか一項記載の方法。
【請求項８】
cAMPの細胞内レベルを増加させる化合物が、フォルスコリン；フォルスコリン誘導体およびアナログ；cAMPの非加水分解性アナログ；イソプロテレノール（isoprotenol）；血管作動性腸管ペプチド；カルシウムイオノフォア；膜脱分極；cAMPを刺激するマクロファージ由来因子；マクロファージの活性化を刺激する作用物質；ホスホジエステラーゼ阻害物質；下垂体アデニル酸シクラーゼ活性化ペプチド（PACAP）；コレラ毒素；プロスタグランジン化合物；ベータ2-アドレナリン受容体アゴニスト；およびそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される、請求項1〜7のいずれか一項記載の方法。
【請求項９】
cAMPの細胞内レベルを増加させる化合物の濃度が、約0.1μM〜約500μMである、請求項1〜8のいずれか一項記載の方法。
【請求項１０】
FGF経路活性化物質が、ホスファチジルイノシチド 3-キナーゼ（PI3K）PI3K活性化物質である、請求項1〜9のいずれか一項記載の方法。
【請求項１１】
FGF経路活性化物質が、線維芽細胞成長因子（bFGF、FGF2またはFGF-β）；TGFα；TGFβ；EGF；NGF；Akt活性化物質；ニコチン；カルバコール；4-(メチルニトロソアミノ)-1-(3-ピリジル)-1-ブタノン（NNK）；アドレノメデュリン；リゾホスファチジン酸；血小板活性化因子；マクロファージ刺激因子；スフィンゴシン-1-リン酸；インスリンおよびインスリン成長因子-1；血小板由来成長因子；ならびにそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される、請求項1〜10のいずれか一項記載の方法。
【請求項１２】
FGF経路活性化物質の濃度が、約0.25 ng/ml〜約100 ng/mlである、請求項1〜11のいずれか一項記載の方法。
【請求項１３】
GSK3経路阻害物質がBIOであり、3',5'-環状アデノシン一リン酸の細胞内レベルを増加させる化合物がフォルスコリンであり、かつFGF経路活性化物質がbFGFである、請求項1〜12のいずれか一項記載の方法。
【請求項１４】
筋原細胞が、骨格筋形成系譜の細胞である、請求項1〜13のいずれか一項記載の方法。
【請求項１５】
筋原細胞が、Pax3、Pax7、MyoD、Myf5、ミオゲニン、GATA2、MHCおよびそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される細胞マーカーを発現する、請求項1〜14のいずれか一項記載の方法。
【請求項１６】
筋原細胞が、中胚葉細胞である、請求項1〜15のいずれか一項記載の方法。
【請求項１７】
接触の前に幹細胞から胚様体を形成する工程をさらに含む、請求項1〜16のいずれか一項記載の方法。
【請求項１８】
接触が、少なくとも1日間行われる、請求項1〜17のいずれか一項記載の方法。
【請求項１９】
幹細胞が、損傷した筋組織または筋肉量の増加の処置を必要とする対象由来である、請求項1〜18のいずれか一項記載の方法。
【請求項２０】
損傷した筋組織が、身体的受傷または事故、疾患、感染、酷使、血液循環の喪失または筋萎縮もしくは筋消耗の結果である、請求項19記載の方法。
【請求項２１】
請求項1〜20のいずれか一項記載の方法にしたがい生成される筋原細胞。
【請求項２２】
請求項1〜20のいずれか一項記載の方法のいずれかにしたがい生成される筋原細胞および薬学的に許容される担体を含む組成物。
【請求項２３】
（i）GSK3経路阻害物質；（ii）3',5'-環状アデノシン一リン酸（cAMP）の細胞内レベルを増加させる化合物；および（iii）FGF経路活性化物質、の少なくとも2つを含む、組成物。
【請求項２４】
GSK3経路阻害物質、3',5'-環状アデノシン一リン酸の細胞内レベルを増加させる化合物およびFGF経路活性化物質を含む、請求項23記載の組成物。
【請求項２５】
幹細胞をさらに含む、請求項23または24記載の組成物。
【請求項２６】
（i）GSK3経路阻害物質；（ii）3',5'-環状アデノシン一リン酸（cAMP）の細胞内レベルを増加させる化合物；および（iii）bFGF経路活性化物質、の少なくとも2つを含む、細胞培養培地。
【請求項２７】
GSK3経路阻害物質、3',5'-環状アデノシン一リン酸の細胞内レベルを増加させる化合物およびFGF経路活性化物質を含む、請求項26記載の細胞培養培地。
【請求項２８】
多能性幹細胞をさらに含む、請求項6または27記載の細胞培養培地。
【請求項２９】
（i）GSK3経路阻害物質；（ii）3',5'-環状アデノシン一リン酸（cAMP）の細胞内レベルを増加させる化合物；および（iii）FGF経路活性化物質、の少なくとも2つを含む、多能性細胞から骨格筋前駆細胞への分化を誘導するための試薬キット。
【請求項３０】
GSK3経路阻害物質、3',5'-環状アデノシン一リン酸の細胞内レベルを増加させる化合物およびFGF経路活性化物質を含む、請求項29記載のキット。
【請求項３１】
幹細胞をさらに含む、請求項29または30記載のキット。
【請求項３２】
3',5'-環状アデノシン一リン酸の細胞内レベルを増加させる化合物の存在下で衛星細胞を培養する工程を含む、衛星細胞の増殖を増加させる方法。
【請求項３３】
該化合物がアデニリルシクラーゼの活性化物質である、請求項32記載の方法。
【請求項３４】
該化合物が、フォルスコリン；フォルスコリン誘導体およびアナログ；cAMPの非加水分解性アナログ；イソプロテレノール；血管作動性腸管ペプチド；カルシウムイオノフォア；膜脱分極；cAMPを刺激するマクロファージ由来因子；マクロファージの活性化を刺激する作用物質；ホスホジエステラーゼ阻害物質；下垂体アデニル酸シクラーゼ活性化ペプチド（PACAP）；コレラ毒素；プロスタグランジン化合物；ベータ2-アドレナリン受容体アゴニスト；およびそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される、請求項32または33記載の方法。
【請求項３５】
該化合物の濃度が、約0.01nM〜約100μMである、請求項32〜34のいずれか一項記載の方法。
【請求項３６】
接触が少なくとも1日間である、請求項32〜35のいずれか一項記載の方法。
【請求項３７】
衛星細胞が、損傷した筋組織または筋肉量の増加の処置を必要とする対象由来である、請求項32〜36のいずれか一項記載の方法。
【請求項３８】
損傷した筋組織が、身体的受傷または事故、疾患、感染、酷使、血液循環の喪失または筋萎縮もしくは筋消耗の結果である、請求項37記載の方法。
【請求項３９】
請求項32〜38のいずれか一項記載の方法により生成される衛星細胞。
【請求項４０】
請求項32〜38のいずれか一項記載の方法により生成される衛星細胞および薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物。
【請求項４１】
請求項32〜38のいずれか一項記載の方法にしたがい生成される衛星細胞を含む、対象に衛星細胞を移植するための薬学的組成物。
【請求項４２】
請求項1〜20のいずれか一項記載の方法にしたがい生成される筋原細胞を含む、対象に筋原細胞を移植するための薬学的組成物。
【請求項４３】
対象が、損傷した筋組織または筋肉量の増加の処置を必要としている、請求項41または42記載の薬学的組成物。
【請求項４４】
（i）GSK3経路阻害物質；（ii）3',5'-環状アデノシン一リン酸（cAMP）の細胞内レベルを増加させる化合物；および（iii）FGF経路活性化物質、の少なくとも2つの組み合わせを含む、損傷した筋組織または筋肉量の増加のために対象を処置するための薬学的組成物。
【請求項４５】
スクリーニングアッセイであって、試験化合物の存在下で割球を培養する工程であって、割球がレポーター遺伝子を含み、レポーター遺伝子が細胞系譜特異的マーカーをコードしておりかつ発現されたときに検出可能なシグナルを生成する、工程；および検出可能なシグナルを測定／検出する工程であって、検出可能なシグナルのレベルまたは量の変化が、試験化合物が細胞系譜特異的マーカーを発現する細胞系譜の発生または機能を調整することを示す、工程、を含む、スクリーニングアッセイ。
【請求項４６】
レポーター遺伝子が、蛍光タンパク質に融合された細胞系譜特異的マーカーを含む融合タンパク質をコードする、請求項45記載のスクリーニングアッセイ。
【請求項４７】
割球が2つの異なるレポーター遺伝子を含み、各レポーター遺伝子が異なる細胞系譜特異的マーカーをコードしておりかつ発現されたときに検出可能なシグナルを生成する、請求項45または46記載のスクリーニングアッセイ。
【請求項４８】
割球が、ゼブラフィッシュの割球である、請求項45〜47のいずれか一項記載のスクリーニングアッセイ。
【請求項４９】
試験化合物が、有機または無機低分子；サッカリン；オリゴ糖；多糖；ペプチド；タンパク質；ペプチドアナログおよび誘導体；ペプチド模倣体；核酸；核酸アナログおよび誘導体；生物材料から得られる抽出物；動物組織；天然に存在するまたは合成性の組成物；ならびにそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される、請求項45〜48のいずれか一項記載のスクリーニングアッセイ。
【請求項５０】
試験化合物が、0.01nm〜約10mMの最終濃度でインキュベートされる、請求項45〜49のいずれか一項記載のスクリーニングアッセイ。
【請求項５１】
高スループットスクリーニング（HTS）アッセイである、請求項45〜50のいずれか一項記載のスクリーニングアッセイ。
【請求項５２】
請求項45〜51のいずれか一項記載のスクリーニングアッセイによって選択される化合物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２４】
1つの局面において、本明細書には、ゼブラフィッシュ割球細胞において化学化合物または組成物をスクリーニングするための方法であって、試験化合物の存在下でゼブラフィッシュ割球細胞の集団を培養する工程であって、割球細胞が、蛍光タンパク質に融合された細胞系譜特異的マーカー（CLSM）（すなわち、CSLM::FPコンストラクト）を含む、工程、およびFPを可視化する工程、を含む方法、が提供される。FPのレベルまたは量の変化は、試験化合物が、その細胞系譜特異的マーカーを発現する臓器の発生を調節することを示す。FPのレベルまたは発現は、参照または対照に対して相対的に決定され得る。
[本発明1001]
幹細胞の筋原細胞への分化を誘導する方法であって、（i）GSK3経路阻害物質；（ii）3',5'-環状アデノシン一リン酸（cAMP）の細胞内レベルを増加させる化合物；および（iii）FGF経路活性化物質、の少なくとも2つと共に幹細胞を培養する工程を含む、方法。
[本発明1002]
培養する工程が、GSK3経路阻害物質、3',5'-環状アデノシン一リン酸の細胞内レベルを増加させる化合物、およびFGF経路活性化物質の存在下で行われる、本発明1001の方法。
[本発明1003]
幹細胞が、人工多能性幹（iPS）細胞、胚性幹（ES）細胞または多分化能性幹細胞である、本発明1001または1002の方法。
[本発明1004]
GSK3経路阻害物質が、GSK3β阻害物質である、本発明1001〜1003のいずれかの方法。
[本発明1005]
GSK3経路阻害物質が、6-ブロモインジルビン-3'-オキシム（BIO）、CHIR98014；CHIR99021；ARA014418；ヒメニアルジシン（hymenialdisine）；フラボピリドール；アロイジンA；アロイジンB；CT20026；SU9516；スタウロスポリン；GF109203x；RO318220；SB216763；SB415286；I5；CGP60474；ケンパウロン（9-ブロモパウロン）；アルスターパウロン；2-シアノエチル-アルスターパウロン；1-アザ-アルスターパウロン；1-アザ-ケンパウロン；9-シアノ-2,3-ジメトキシパウロン；2-ヨードパウロン；2-ブロモ-9-ニトロパウロン；2,3-ジメトキシ-9-ニトロパウロン；7-ブロモ-5-(4-ニトロフェニルヒドラゾノ)-4,5-ジヒドロ-1-H-[1]ベンゾアゼピン2(3H)-オン；7,8-ジメトキシ-5-(4-ニトロフェニルヒドラゾノ)-4,5ジヒドロ-1H-[1]ベンゾアゼピン-2-(3H)-オン；9-シアノパウロン；9-クロロパウロン；9-トリフルオロメチルパウロン；2,3-ジメトキシ-9-トリフルオロメチルパウロン；9-ブロモ-12-メチルオキシカルボニルメチルパウロン；9-フルオロパウロン；9-ブロモ-2,3-ジメトキシパウロン；9-ブロモ-2,3-ジメトキシパウロン；9-メチルパウロン；10-ブロモパウロン；2-ブロモパウロン；11-クロロパウロン；2-(3-ヒドロキシ-1-プロピニル)-9-トリフルオロメチルパウロン；9-ブロモ-12-(2-ヒドロキシエチル)-パウロン；ケンパウロン；アルスターパウロン；2-シアノエチル-アルスターパウロン；1-アザ-ケンパウロン；1-アザ-アルスターパウロン；9-ブロモ-12-メチルパウロン；9-ブロモ-5-(メチルオキシカルボニルメチル)パウロン；11-メチルパウロン；パウロン；11-エチルパウロン；9-ブロモ-7,12-ジヒドロ-6-(ヒドロキシアミノ)-インドロ[2-3-d][1]ベンゾアゼピン；2,9-ジブロモパウロン；11-ブロモパウロン；2,3-ジメトキシパウロン；9-ブロモ-7,12ジヒドロ-6-メチルチオ-インドロ[2-3-d][1]ベンゾアゼピン；(E)-2(3-オキソ-1-ブテニル)-9-トリフルオロメチルパウロン；9-ブロモ-12エチルパウロン；9-ブロモ-7,12-ジヒドロ-インドロ[2-3-d][1]ベンゾアゼピン-6(5H)-チオン；2-ブロモ-9-トリフルオロメチルパウロン；2-[2-(1-ヒドロキシシクロヘキシル)エチニル]-9-トリフルオロメチル-パウロン；9-ブロモ-5メチルパウロン；9-メトキシパウロン；2-ヨード-9-トリフルオロメチルパウロン；9-ブロモ-12-(tert-ブチルオキシカルボニル)-パウロン；9-ブロモ-12-(2-プロペニル)パウロン；9-ブロモ-4-ヒドロキシパウロン；8,10-ジクロロパウロン；5-ベンジル-9-ブロモパウロン；9-ブロモ-4-メトキシパウロン；9-ブロモ-5-エチルパウロン；9-ブロモ-5,7ビス-(tert-ブチルオキシカルボニル)-パウロン；4-メトキシパウロン；9-ブロモ-5,6,7,12-テトラヒドロベンゾ[6-7]シクロヘプト[1,2.b]インドール；2-フェニル-4-(2-チエニル)-5H-ピリド[2-3d][1]ベンゾアゼピン-6(7H)-チオン；9-ブロモ-5,7,12-トリ-(tert-ブチルオキシカルボニル)-パウロン；9-ブロモ-5,12-ビス-(tert-ブチルオキシカルボニル)パウロン；4-(4-クロロフェニル)-2-(2-ナフチル)-5H-ピリド[23-d][1]ベンゾアゼピン-6(7H)-チオン；5,6,7,12-テトラヒドロベンゾ[6-7]シクロヘプト[1,2-b]インドール；N-ブチル-N'-(5-ニトロ-1,3-チアゾール-2-イル)ウレア；N-(5-ニトロ-1,3-チアゾール-2-イル)ペンタンアミド；1-{4-アミノ-2-[(4-メトキシフェニル)アミノ]-1,3-チアゾール-5-イル}エタノン；N-ベンジル-N'-(5-ニトロ-1,3-チアゾール-2-イル)ウレア；N-(4-メトキシベンジル)-N'-(5-ニトロ-1,3-チアゾール-2-イル)ウレア；3-(4-メトキシフェニル)-N-(5-ニトロ-1,3-チアゾール-2-イル)プロパンアミド；4-(4-メトキシフェニル)-N-(5-ニトロ-1,3-チアゾール-2-イル)ブタンアミド；2-(3-メトキシフェニル)-N-(5-ニトロ-1,3-チアゾール-2イル)アセトアミド；2-(4-フルオロフェニル)-N-(5-ニトロ-1,3-チアゾール-2-イル)プロパンアミド；2-(3-メチルフェニル)-N-(5-ニトロ-1,3-チアゾール-2-イル)アセトアミド；1-ベンジル-3-ナフタレン-1-イル-ウレアまたは1-ベンジル[1,3]ジオキソール-5-イル-3-ベンジル-ウレア；およびそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される、本発明1001〜1004のいずれかの方法。
[本発明1006]
GSK3経路阻害物質の濃度が、約0.05μM〜約50μMである、本発明1001〜1005のいずれかの方法。
[本発明1007]
cAMPの細胞内レベルを増加させる化合物が、アデニリルシクラーゼの活性化物質である、本発明1001〜1006のいずれかの方法。
[本発明1008]
cAMPの細胞内レベルを増加させる化合物が、フォルスコリン；フォルスコリン誘導体およびアナログ；cAMPの非加水分解性アナログ；イソプロテレノール（isoprotenol）；血管作動性腸管ペプチド；カルシウムイオノフォア；膜脱分極；cAMPを刺激するマクロファージ由来因子；マクロファージの活性化を刺激する作用物質；ホスホジエステラーゼ阻害物質；下垂体アデニル酸シクラーゼ活性化ペプチド（PACAP）；コレラ毒素；プロスタグランジン化合物；ベータ2-アドレナリン受容体アゴニスト；およびそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される、本発明1001〜1007のいずれかの方法。
[本発明1009]
cAMPの細胞内レベルを増加させる化合物の濃度が、約0.1μM〜約500μMである、本発明1001〜1008のいずれかの方法。
[本発明1010]
FGF経路活性物質が、ホスファチジルイノシチド 3-キナーゼ（PI3K）PI3K活性化物質である、本発明1001〜1009のいずれかの方法。
[本発明1011]
FGF経路活性化物質が、線維芽細胞成長因子（bFGF、FGF2またはFGF-β）；TGFα；TGFβ；EGF；NGF；Akt活性化物質；ニコチン；カルバコール；4-(メチルニトロソアミノ)-1-(3-ピリジル)-1-ブタノン（NNK）；アドレノメデュリン；リゾホスファチジン酸；血小板活性化因子；マクロファージ刺激因子；スフィンゴシン-1-リン酸；インスリンおよびインスリン成長因子-1；血小板由来成長因子；ならびにそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される、本発明1001〜1000のいずれかの方法。
[本発明1012]
FGF経路活性化物質の濃度が、約0.25 ng/ml〜約100 ng/mlである、本発明1001〜1011のいずれかの方法。
[本発明1013]
GSK3経路阻害物質がBIOであり、3',5'-環状アデノシン一リン酸の細胞内レベルを増加させる化合物がフォルスコリンであり、かつFGF経路活性化物質がbFGFである、本発明1001〜1012のいずれかの方法。
[本発明1014]
筋原細胞が、骨格筋形成系譜の細胞である、本発明1001〜1013のいずれかの方法。
[本発明1015]
筋原細胞が、Pax3、Pax7、MyoD、Myf5、ミオゲニン、GATA2、MHCおよびそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される細胞マーカーを発現する、本発明1001〜1014のいずれかの方法。
[本発明1016]
筋原細胞が、中胚葉細胞である、本発明1001〜1015のいずれかの方法。
[本発明1017]
接触の前に幹細胞から胚様体を形成する工程をさらに含む、本発明1001〜1016のいずれかの方法。
[本発明1018]
接触が、少なくとも1日間行われる、本発明1001〜1017のいずれかの方法。
[本発明1019]
幹細胞が、損傷した筋組織または筋肉量の増加の処置を必要とする対象由来である、本発明1001〜1018のいずれかの方法。
[本発明1020]
損傷した筋組織が、身体的受傷または事故、疾患、感染、酷使、血液循環の喪失または筋萎縮もしくは筋消耗の結果である、本発明1019の方法。
[本発明1021]
本発明1001〜1020のいずれかの方法にしたがい生成される筋原細胞。
[本発明1022]
本発明1001〜1020のいずれかの方法のいずれかにしたがい生成される筋原細胞および薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物。
[本発明1023]
（i）GSK3経路阻害物質；（ii）3',5'-環状アデノシン一リン酸（cAMP）の細胞内レベルを増加させる化合物；および（iii）FGF経路活性化物質、の少なくとも2つを含む、組成物。
[本発明1024]
GSK3経路阻害物質、3',5'-環状アデノシン一リン酸の細胞内レベルを増加させる化合物およびFGF経路活性化物質を含む、本発明1023の組成物。
[本発明1025]
幹細胞をさらに含む、本発明1023または1024の組成物。
[本発明1026]
（i）GSK3経路阻害物質；（ii）3',5'-環状アデノシン一リン酸（cAMP）の細胞内レベルを増加させる化合物；および（iii）bFGF経路活性化物質、の少なくとも2つを含む、細胞培養培地。
[本発明1027]
GSK3経路阻害物質、3',5'-環状アデノシン一リン酸の細胞内レベルを増加させる化合物およびFGF経路活性化物質を含む、本発明1026の細胞培養培地。
[本発明1028]
多能性幹細胞をさらに含む、本発明1006または1027の細胞培養培地。
[本発明1029]
（i）GSK3経路阻害物質；（ii）3',5'-環状アデノシン一リン酸（cAMP）の細胞内レベルを増加させる化合物；および（iii）FGF経路活性化物質、の少なくとも2つを含む、多能性細胞から骨格筋前駆細胞への分化を誘導するための試薬キット。
[本発明1030]
GSK3経路阻害物質、3',5'-環状アデノシン一リン酸の細胞内レベルを増加させる化合物およびFGF経路活性化物質を含む、本発明1029のキット。
[本発明1031]
幹細胞をさらに含む、本発明1029または1030のキット。
[本発明1032]
3',5'-環状アデノシン一リン酸の細胞内レベルを増加させる化合物の存在下で衛星細胞を培養する工程を含む、衛星細胞の増殖を増加させる方法。
[本発明1033]
該化合物がアデニリルシクラーゼの活性化物質である、本発明1032の方法。
[本発明1034]
該化合物が、フォルスコリン；フォルスコリン誘導体およびアナログ；cAMPの非加水分解性アナログ；イソプロテレノール；血管作動性腸管ペプチド；カルシウムイオノフォア；膜脱分極；cAMPを刺激するマクロファージ由来因子；マクロファージの活性化を刺激する作用物質；ホスホジエステラーゼ阻害物質；下垂体アデニル酸シクラーゼ活性化ペプチド（PACAP）；コレラ毒素；プロスタグランジン化合物；ベータ2-アドレナリン受容体アゴニスト；およびそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される、本発明1032または1033の方法。
[本発明1035]
該化合物の濃度が、約0.01nM〜約100μMである、本発明1032〜1034のいずれかの方法。
[本発明1036]
接触が少なくとも1日間である、本発明1032〜1035のいずれかの方法。
[本発明1037]
衛星細胞が、損傷した筋組織または筋肉量の増加の処置を必要とする対象由来である、本発明1032〜1036のいずれかの方法。
[本発明1038]
損傷した筋組織が、身体的受傷または事故、疾患、感染、酷使、血液循環の喪失または筋萎縮もしくは筋消耗の結果である、本発明1037の方法。
[本発明1039]
本発明1032〜1038のいずれかの方法により生成される衛星細胞。
[本発明1040]
本発明1032〜1038のいずれかの方法により生成される衛星細胞および薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物。
[本発明1041]
本発明1032〜1038のいずれかの方法にしたがい生成される衛星細胞を対象に植え込む工程を含む、対象に衛星細胞を移植する方法。
[本発明1042]
本発明1001〜1020のいずれかの方法にしたがい生成される筋原細胞を対象に植え込む工程を含む、対象に筋原細胞を移植する方法。
[本発明1043]
対象が、損傷した筋組織または筋肉量の増加の処置を必要としている、本発明1041または1042の方法。
[本発明1044]
損傷した筋組織または筋肉量の増加のために対象を処置する方法であって、それを必要とする対象に、（i）GSK3経路阻害物質；（ii）3',5'-環状アデノシン一リン酸（cAMP）の細胞内レベルを増加させる化合物；および（iii）FGF経路活性化物質、の少なくとも2つを共投与する工程を含む、方法。
[本発明1045]
スクリーニングアッセイであって、試験化合物の存在下で割球を培養する工程であって、割球がレポーター遺伝子を含み、レポーター遺伝子が細胞系譜特異的マーカーをコードしておりかつ発現されたときに検出可能なシグナルを生成する、工程；および検出可能なシグナルを測定／検出する工程であって、検出可能なシグナルのレベルまたは量の変化が、試験化合物が細胞系譜特異的マーカーを発現する細胞系譜の発生または機能を調整することを示す、工程、を含む、スクリーニングアッセイ。
[本発明1046]
レポーター遺伝子が、蛍光タンパク質に融合された細胞系譜特異的マーカーを含む融合タンパク質をコードする、本発明1045のスクリーニングアッセイ。
[本発明1047]
割球が2つの異なるレポーター遺伝子を含み、各レポーター遺伝子が異なる細胞系譜特異的マーカーをコードしておりかつ発現されたときに検出可能なシグナルを生成する、本発明1045または1046のスクリーニングアッセイ。
[本発明1048]
割球が、ゼブラフィッシュの割球である、本発明1045〜1047のいずれかのスクリーニングアッセイ。
[本発明1049]
試験化合物が、有機または無機低分子；サッカリン；オリゴ糖；多糖；ペプチド；タンパク質；ペプチドアナログおよび誘導体；ペプチド模倣体；核酸；核酸アナログおよび誘導体；生物材料から得られる抽出物；動物組織；天然に存在するまたは合成性の組成物；ならびにそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される、本発明1045〜1048のいずれかのスクリーニングアッセイ。
[本発明1050]
試験化合物が、0.01nm〜約10mMの最終濃度でインキュベートされる、本発明1045〜1049のいずれかのスクリーニングアッセイ。
[本発明1051]
高スループットスクリーニング（HTS）アッセイである、本発明1045〜1040のいずれかのスクリーニングアッセイ。
[本発明1052]
本発明1045〜1051のいずれかのスクリーニングアッセイによって選択される化合物。