【手続補正書】
【提出日】平成28年7月15日(2016.7.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ｅＩＦ４Ｇ遺伝子に対する修飾又は外来性ｅＩＦ４Ｇ遺伝子を発現する核酸を含むインビトロ細胞。
【請求項２】
前記ｅＩＦ４Ｇ遺伝子が、動物の野生型ｅＩＦ４Ｇタンパク質と比べて改変されたｅＩＦ４Ｇタンパク質を発現し、前記ｅＩＦ４Ｇタンパク質が、口蹄疫ウイルス酵素のプロテイナーゼによる切断に抵抗性である、請求項１に記載の細胞。
【請求項３】
ブタ、魚、ウサギ、ウシ、ニワトリ、ヤギ、及びヒツジからなる群から選択される、請求項１又は２に記載の細胞。
【請求項４】
前記修飾ｅＩＦ４Ｇ遺伝子によって発現されるｅＩＦ４Ｇタンパク質をさらに含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項５】
口蹄疫ウイルス酵素のプロテイナーゼによる切断に抵抗性であるｅＩＦ４Ｇタンパク質のアイソフォームをコードする単離核酸。
【請求項６】
口蹄疫に対する抵抗性の存在に関するスクリーニング方法であって、細胞、胚、又は動物を調べて、それが修飾ｅＩＦ４Ｇ遺伝子及び／又は修飾ｅＩＦ４Ｇタンパク質を含むかどうかを決定するステップを含む方法。
【請求項７】
遺伝子修飾生物の作出方法であって、
ａ．細胞、初代細胞、又は胚の天然ｅＩＦ４Ｇ遺伝子をインビトロで改変するステップ、及び前記初代細胞をクローニングするか又は母動物に前記胚を移植するステップであって、前記ｅＩＦ４Ｇ遺伝子が、口蹄疫プロテアーゼによるタンパク質分解に抵抗するｅＩＦ４Ｇアイソフォームを発現するように改変される、ステップ、又は
ｂ．外来性ｅＩＦ４Ｇ遺伝子の発現を初代細胞又は胚にインビトロで加えるステップ、及び前記初代細胞をクローニングするか又は母動物に前記胚を移植するステップであって、前記外来性ｅＩＦ４Ｇ遺伝子が、口蹄疫プロテアーゼによるタンパク質分解に抵抗するｅＩＦ４Ｇアイソフォームを発現する、ステップ、又は
ｃ．（ａ）及び（ｂ）の両方
を含む方法。
【請求項８】
前記初代細胞又は前記胚に：
ａ．前記天然ｅＩＦ４Ｇ遺伝子のある部位を特異的に切断する部位特異的ヌクレアーゼをコードする核酸と、
ｂ．前記ｅＩＦ４Ｇ遺伝子の少なくとも一部分を含む核酸鋳型であって、前記鋳型が前記天然ｅＩＦ４Ｇ遺伝子の代替の対立遺伝子を提供し、前記代替の対立遺伝子が、口蹄疫ウイルス酵素のプロテイナーゼによる切断に抵抗性のｅＩＦ４Ｇアイソフォームをコードする、核酸鋳型と
を導入するステップを含む、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記部位特異的ヌクレアーゼが、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）及びクラスターを形成する規則的に間隔が置かれた短いパリンドロームリピート（ＣＲＩＳＰＲ）からなる群から選択される、請求項７又は８に記載の方法。
【請求項１０】
請求項７〜９のいずれか一項に記載の方法により作製される動物。
【請求項１１】
ｅＩＦ４Ｇ遺伝子にゲノム修飾を含む遺伝子修飾された家畜動物。
【請求項１２】
前記修飾が、前記ｅＩＦ４Ｇ遺伝子の１つ以上の塩基の挿入、欠失、又は置換を含む、請求項１１に記載の動物。
【請求項１３】
前記ｅＩＦ４Ｇ遺伝子が、前記動物の野生型ｅＩＦ４Ｇタンパク質と比べて、口蹄疫ウイルス酵素のプロテイナーゼによる切断に抵抗性となるように改変されたｅＩＦ４Ｇタンパク質を発現する、請求項１１又は１２に記載の動物。
【請求項１４】
前記ｅＩＦ４Ｇ遺伝子が、前記動物の野生型ｅＩＦ４Ｇタンパク質と比べて、口蹄疫ウイルス酵素のリーダープロテイナーゼ（Ｌｐｒｏ）による切断に抵抗性となるように改変されたｅＩＦ４Ｇタンパク質を発現する、請求項１１〜１３のいずれか一項に記載の動物。
【請求項１５】
前記ｅＩＦ４Ｇ遺伝子が、前記動物の野生型ｅＩＦ４Ｇタンパク質と比べて、口蹄疫ウイルス酵素のウイルスコード３Ｃプロテアーゼ（３Ｃｐｒｏ）による切断に抵抗性となるように改変されたｅＩＦ４Ｇタンパク質を発現する、請求項１１〜１４のいずれか一項に記載の動物。
【請求項１６】
ブタ、魚、ウサギ、ウシ、ニワトリ、ヤギ、及びヒツジからなる群から選択される、請求項１１〜１５のいずれか一項に記載の動物。
【請求項１７】
前記動物が第１の品種の動物であり、前記ゲノム修飾が、その動物の別の品種に見出されるｅＩＦ４Ｇ遺伝子の天然の対立遺伝子である、請求項１１〜１６のいずれか一項に記載の動物。
【請求項１８】
前記動物が第１の種の動物であり、前記ゲノム修飾が、第２の種の別の品種におけるｅＩＦ４Ｇ遺伝子の対立遺伝子である、請求項１１〜１６のいずれか一項に記載の動物。
【請求項１９】
前記動物が前記修飾されたｅＩＦ４Ｇ遺伝子に関してホモ接合体である、請求項１１に記載の動物。
【請求項２０】
創始動物である、請求項１１〜１９のいずれか一項に記載の動物。
【請求項２１】
前記修飾ｅＩＦ４Ｇ遺伝子によって発現される前記ｅＩＦ４Ｇタンパク質をさらに含む、請求項１１〜２０のいずれか一項に記載の動物。
【請求項２２】
口蹄疫に抵抗性である、請求項１１〜２１のいずれか一項に記載の動物。
【請求項２３】
前記修飾ｅＩＦ４Ｇタンパク質が、Ｌｐｒｏ及び／又はＣｐｒｏの結合を防ぐように修飾される、請求項１１〜２２のいずれか一項に記載の動物。
【請求項２４】
口蹄疫の治療又は予防に使用するための、口蹄疫ウイルス酵素のプロテイナーゼによる切断に抵抗性のｅＩＦ４Ｇタンパク質をコードする単離核酸化合物。
【請求項２５】
外来性ｅＩＦ４Ｇ遺伝子を発現する核酸又は前記動物の野生型ｅＩＦ４Ｇタンパク質と比べて改変されたｅＩＦ４Ｇタンパク質を発現する核酸である、請求項２４に記載の核酸。
【請求項２６】
請求項２４又は２５に記載の核酸をコードするベクター。
【請求項２７】
口蹄疫を治療するための、又はそれを予防するための、請求項２４〜２６のいずれか一項に記載の核酸又はベクターの使用。
【請求項２８】
前記改変が、前記ｅＩＦ４Ｇ遺伝子の１つ以上の塩基の挿入、欠失、又は置換を含む、請求項７〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記ｅＩＦ４Ｇ遺伝子が、前記修飾生物の野生型ｅＩＦ４Ｇタンパク質と比べて、口蹄疫ウイルス酵素のプロテイナーゼによる切断に抵抗性となるように改変されたｅＩＦ４Ｇタンパク質を発現する、請求項７〜９及び２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
前記ｅＩＦ４Ｇ遺伝子が、前記修飾生物の野生型ｅＩＦ４Ｇタンパク質と比べて、口蹄疫ウイルス酵素のリーダープロテイナーゼ（Ｌｐｒｏ）による切断に抵抗性となるように改変されたｅＩＦ４Ｇタンパク質を発現する、請求項７〜９及び２８〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
前記ｅＩＦ４Ｇ遺伝子が、前記修飾生物の野生型ｅＩＦ４Ｇタンパク質と比べて、口蹄疫ウイルス酵素のウイルスコード３Ｃプロテアーゼ（３Ｃｐｒｏ）による切断に抵抗性となるように改変されたｅＩＦ４Ｇタンパク質を発現する、請求項７〜９及び２８〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
前記修飾生物が、ブタ、魚、ウサギ、ウシ、ニワトリ、ヤギ、及びヒツジからなる群から選択される、請求項７〜９及び２８〜３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
前記修飾生物が第１の品種の動物であり、前記ゲノム改変が、その動物の別の品種に見出されるｅＩＦ４Ｇ遺伝子の天然の対立遺伝子である、請求項７〜９及び２８〜３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
前記修飾生物が第１の種の動物であり、前記ゲノム改変が、第２の種の別の品種におけるｅＩＦ４Ｇ遺伝子の対立遺伝子である、請求項７〜９及び２８〜３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
前記修飾生物が前記改変されたｅＩＦ４Ｇ遺伝子に関してホモ接合体である、請求項７〜９及び２８〜３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
前記修飾生物が前記改変ｅＩＦ４Ｇ遺伝子によって発現される前記ｅＩＦ４Ｇタンパク質をさらに含む、請求項７〜９及び２８〜３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
前記修飾生物が口蹄疫に抵抗性である、請求項７〜９及び２８〜３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
前記改変ｅＩＦ４Ｇタンパク質が、Ｌｐｒｏ及び／又はＣｐｒｏの結合を防ぐように改変される、請求項７〜９及び２８〜３７のいずれか一項に記載の方法。