【手続補正書】
【提出日】平成28年8月18日(2016.8.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１６】
細胞増殖システム（ＣＥＳ）の一例が、図１Ａに概略的に示される。ＣＥＳ１０は、第１流体循環路１２と第２流体循環路１４とを有する。第１流体流路１６は、中空糸型細胞成長チャンバー２４（「バイオリアクター」とも呼ばれる）に流体的に関連付けられた少なくとも両端部１８、２０を有する。詳細には、端部１８は、細胞成長チャンバー２４の第１入口２２と流体的に関連付けられ、端部２０は、細胞成長チャンバー２４の第１出口２８と流体的に関連付けられる。第１循環路１２において、流体は、細胞成長チャンバー２４に配置された中空糸膜の中空糸の内部を通る（細胞成長チャンバー及び中空糸膜は以下でより詳細に説明される）。また、第１流量コントローラ３０が、第１流体流路１６に動作可能に接続され、第１循環路１２における流体の流れを制御する。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１７】
第２流体循環路１４は、第２流体流路３４と、細胞成長チャンバー２４と、第２流量コントローラ３２と、を有する。第２流体流路３４は、少なくとも両端部３６、３８を有する。第２流体流路３４の端部３６は、細胞成長チャンバー２４の入口ポート４０に、端部３８は、出口ポート４２にそれぞれ流体的に関連付けられる。細胞成長チャンバー２４を流れる流体は、細胞成長チャンバー２４の中空糸膜の外側と接触する。第２流体循環路１４は、第２流量コントローラ３２と動作可能に接続される。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１８】
このように、第１及び第２流体循環路１２、１４は、中空糸膜によって、細胞成長チャンバー２４において分離されている。第１流体循環路１２の流体は、細胞成長チャンバーにおいて中空糸の毛細管内側（ＩＣ）空間を流れる。従って、第１流体循環路１２を「ＩＣループ」と呼ぶ。第２流体循環路１４の流体は、細胞成長チャンバーにおいて中空糸の毛細管外側（ＥＣ）空間を流れる。従って、第２流体循環路１４を「ＥＣループ」と呼ぶ。第１流体循環路１２の流体は、第２流体循環路１４の流体の流れに対して、並流方向又は逆流方向のどちらを流れてもよい。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１９】
流体入口路４４は、第１流体循環路１２に流体的に関連付けられる。流体入口路４４によって、流体は第１流体循環路１２に導入され、流体出口路４６によって、流体は、ＣＥＳ１０から排出される。第３流量コントローラ４８が、流体入口路４４に動作可能に関連付けられる。あるいは、第３流量コントローラ４８は、流体出口路４６に関連付けられてもよい。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２７】
細胞成長チャンバー８０１のＥＣ出口ポート８０１Ｄを離れた後、第２流体循環路８０４の流体は、ＥＣ循環ポンプ８２８を通って、ガス輸送モジュール８３２に至る。ＥＣ循環ポンプ８２８は、両方向に流体をポンピング可能である。第２流体流路８２２は、ガス輸送モジュール８３２の入口ポート８３２Ａ及び出口ポート８３２Ｂを介してガス輸送モジュール８３２と流体的に関連付けられている。動作中は、流体培地は、入口ポート８３２Ａを介して、ガス輸送モジュール８３２に流入し、出口ポート８３２Ｂを介して、ガス輸送モジュール８３２から流出する。ガス輸送モジュール８３２は、ＣＥＳ８００における培地に対して、酸素を付加し、気泡を除去する。種々の実施形態において、第２流体循環路８０４における培地は、ガス輸送モジュール８３２に入るガスと平衡状態にある。ガス輸送モジュール８３２は、当分野で知られているような、酸素供給又はガス輸送に有用な、適当なサイズの任意の装置でよい。空気又はガスは、フィルタ８４０を介してガス輸送モジュール８３２に流入し、フィルタ８３８を介して、酸素供給器又はガス輸送装置８３２から流出する。フィルタ８３８、８４０は、酸素供給器８３２及び関連する培地の汚染を減少又は防止する。プライミング工程の一部を行っている際にＣＥＳ８００からパージされた空気又はガスは、ガス輸送モジュール８３２を介して大気にベント可能である。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２９】
少なくとも１つの実施形態において、（細胞容器、例えばバッグのようなソースからの）細胞を含む培地は、取り付け点８６２に取り付けられ、培地源からの流体培地は、取り付け点８４６に取り付けられる。細胞及び培地は、第１流体流路８０６を介して第１流体循環路８０２に導入される。取り付け点８６２は、バルブ８６４を介して、第１流体流路８０６と流体的に関連付けられる。取り付け点８４６は、バルブ８５０を介して、第１流体流路８０６と流体的に関連付けられる。試薬源を、点８４４に流体的に関連付けて、バルブ８４８を介して流体入口路８４２に関連付けてもよいし、又はバルブ８４８及び８７２を介して第２流体入口路８７４に関連付けてもよい。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３５】
ＣＥＳ８００の各部品は、細胞増殖機のような装置又はハウジング内に収容され、該装置は、細胞及び培地を所定温度に維持する。ある実施形態において、ＣＥＳ８００の部品は、ＣＥＳ１０（図１Ａ）又はＣＥＳ９００（図１Ｃ）のような他のＣＥＳと組み合わせてもよい。他の実施形態において、ＣＥＳは、本開示の範囲内において、図１Ａ〜図１Ｃに示されるよりも少ない部品を含んでもよい。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３６】
図１Ｃは、ＣＥＳの他の実施形態を示す。ＣＥＳ９００は、第１流体循環路９０２（「毛細管内側（ＩＣ）ループ」とも呼ぶ）と、第２流体循環路９０４（「毛細管外側ループ」又は「ＥＣループ」とも呼ぶ）とを有する。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３７】
第１流体流路９０６は、細胞成長チャンバー９０８と流体的に関連付けられて、第１流体循環路９０２を構成する。流体は、入口ポート９１０を通って、細胞成長チャンバー９０８に流入し、細胞成長チャンバー９０８内の中空糸を通り、出口ポート９０７を介して外に出る。圧力計９１７は、細胞成長チャンバー９０８を離れる培地の圧力を測定する。培地は、バルブ９１３及びポンプ９１１を介して流通する。バルブ９１３及びポンプ９１１は、培地の流量を制御するために使用される。培地のサンプルは、動作中に、サンプルポート９０５又はサンプルコイル９０９から得ることができる。第１流体循環路に配置された圧力／温度計９１５によって、動作中における培地圧力及び培地温度が検知できる。培地は、入口ポート９１０に戻って、流体循環路９０２を完了する。細胞成長チャンバー９０８で増殖した細胞は、細胞成長チャンバー９０８から流し出されるか又はさらなる成長のために中空糸内に再分配される。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３８】
第２流体循環路９０４は、細胞成長チャンバー９０８とループ状で流体的に関連付けられた第２流体流路９１２を有する。第２流体循環路９０４において、流体は、入口ポート９１４を介して細胞成長チャンバー９０８に入り、出口ポート９１６を介して細胞成長チャンバー９０８を離れる。培地は、細胞成長チャンバー９０８内の中空糸の外側と接触することにより、小分子が、中空糸へ及び中空糸から拡散可能となる。
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３９】
培地が細胞成長チャンバー９０８のＥＣ空間に入る前に、第２循環路に配置された圧力／温度計９１９によって、該培地の圧力及び温度が測定可能である。培地が細胞成長チャンバーを離れた後、圧力計９２１によって、第２循環路において該培地の圧力が測定可能である。
【手続補正１２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４０】
第２流体循環路９０４において、流体は、細胞成長チャンバー９０８の出口ポート９１６を離れた後、ポンプ９２０及びバルブ９２２を通って、酸素供給器９１８へ至る。第２流体流路９１２は、酸素供給器入口ポート９２４及び酸素供給器出口ポート９２６を介して酸素供給器９１８と流体的に関連付けられる。動作において、流体培地は、酸素供給器入口ポート９２４を通って、酸素供給器９１８に流入し、酸素供給器出口ポート９２６を通って、酸素供給器９１８から流出する。
【手続補正１３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４１】
酸素供給器９１８は、ＣＥＳの培地に酸素を付加する。種々の実施形態において、第２流体循環路９０４の培地は、酸素供給器に入るガスと平衡状態にある。酸素供給器は、当分野で知られる如何なる酸素供給器でもよい。ガスは、フィルタ９２８を通って、酸素供給器９１８に入り、フィルタ９３０を通って、酸素供給器９１８から出る。フィルタ９２８、９３０は、酸素供給器９１８及び関連する培地の汚染を減少又は防止する。
【手続補正１４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４２】
ＣＥＳ９００として示された構成において、第１循環路９０２及び第２循環路９０４における流体培地は、細胞成長チャンバー９０８を同じ方向（並流構成）に流れる。ＣＥＳ９００は、対向流構成にしてもよいことは、当業者であれば理解できよう。また、入口ポート及び出口ポートは、細胞成長チャンバーにおいて如何なる箇所に配置してもよいことは、当業者であれば理解できよう。
【手続補正１５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４３】
細胞と流体培地は、第１流体入口路９３２を介して流体循環路９０２に導入される。流体容器９３４はバルブ９３８を介して、流体容器９３６はバルブ９４０を介して、それぞれ第１流体入口路９３２と流体的に関連付けられる。同様に、細胞容器９４２は、バルブ９４３を介して、第１流体循環路９０２と流体的に関連付けられる。細胞及び流体は、熱交換器９４４、ポンプ９４６を通って、ドリップチャンバー９４８に導入される。ドリップチャンバー９４８は、第１循環路９０２と流体的に関連付けられる。ドリップチャンバー９４８からのオーバーフローは、バルブ９５２を介してオーバーフローライン９５０から流れ出す。
【手続補正１６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４４】
流体容器９５４及び９５６から、流体が、第１及び第２流体循環路９０２、９０４に追加される。流体容器９５４は、バルブ９５８と流体的に関連付けられる。バルブ９５８は、第１流体入口路９６０を介して第１流体循環路９０２と流体的に関連付けられる。第１流体流路は、バルブ９６４を含む。また、流体容器９５４は、第２流体入口路９６２とも流体的に関連付けられる。同様に、流体容器９５６は、バルブ９６６と流体的に関連付けられ、バルブ９６６は、第１流体入口路９６０を介して第１流体循環路９０２と流体的に関連付けられる。また、流体容器９５６は、第２流体入口路９６２とも流体的に関連付けられる。
【手続補正１７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４５】
第２流体入口路９６２は、流体がドリップチャンバー９７０に入る前にポンプ９６８を流れるように構成される。第２流体入口路９６２は、第２流体循環路９０４へと続く。流体のオーバーフローは、バルブ９７４を通って、オーバーフローライン９７２を経由して、廃棄容器９７６へ向かう。
【手続補正１８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４６】
細胞は、細胞収穫路９７８を介して収穫される。細胞成長チャンバー９０８からの細胞は、該細胞を含む培地をポンピングすることにより、細胞収穫路９７８を通って、細胞収穫バッグ９８０へ収穫される。
【手続補正１９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４７】
第１及び第２流体循環路９０２、９０４は、接続路９８４によって、接続される。バルブ９８６を開けると、培地は、接続路９８４を介して、第１循環路９０２と第２循環路９０４との間を流れることができる。同様に、ポンプ９９０は、別の接続路９８８を介して、第１流体循環路９０２と第２流体循環路９０４との間において、培地をポンピングすることができる。
【手続補正２０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４８】
ＣＥＳの各部品は、インキュベーター９９９に収容される。インキュベーター９９９は、細胞及び培地を一定温度に保つ。
【手続補正２１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４９】
当業者であれば理解できるように、任意の数の流体容器（例えば、培地バッグ）を、任意の組み合わせで、ＣＥＳと流体的に関連付けることができる。さらに、ドリップチャンバーの位置又はドリップチャンバーとは独立のセンサの位置は、ＣＥＳにおいて、入口ポート９１０の前の任意の位置にしてよい。
【手続補正２２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５４】
種々の実施形態において、着脱可能な流れ回路は、取り外し可能に且つ使い捨て方式で、流量コントローラに取り付けてよい。着脱可能な流れ回路は、ＣＥＳのいくつかの部分に接続する着脱可能な流体管（例えば、可撓性チューブ）を含むことができる。図１Ｅを参照すると、着脱可能な流れ回路は、第１流体循環路１２６の配管を含むが、ポンプは含まない。着脱可能な流れ回路はさらに、バルブを含まずに、フラッシュライン（ｆｌｕｓｈ  ｌｉｎｅ）１３２の配管を含むことができる。着脱可能な流れ回路はさらに、第１循環路１２６をフラッシュライン１３２に接続する配管と、第１流体入口路１２４を含むことができる。その他の変形例では、着脱可能な流れ回路は、培地インレットバッグ１０６、１０８、ベントバッグ１１０、細胞入力バッグ１１２をドリップチャンバー１８６に接続する配管を含むことができる。着脱可能な流れ回路はまた、細胞収穫バッグ１４０を第１循環路１２６に接続する配管を含むことができる。
【手続補正２３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５８】
実施形態によれば、細胞は、ＩＣループ又はＥＣループにおいて、成長（増殖）される。接着性懸濁細胞及び非接着性懸濁細胞が増殖される。一実施形態において、細胞成長チャンバーの中空糸の内腔は、フィブロネクチンがコーティングされる。二価陽イオンを含まない（例えば、カルシウム及びマグネシウムを含まない）ＰＢＳがＣＥＳシステムに付加される。接着性細胞が細胞成長チャンバー（例えば、チャンバー２４、９０８、８０１）に導入された後、それら細胞が中空糸に付着するように、十分な時間で培養される。ＩＣ及びＥＣ培地は、十分な栄養が細胞に確実に供給されるように、循環させられる。
【手続補正２４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５９】
ＩＣループ及びＥＣループの流量は、ある特定の値に調整される。種々の実施形態において、ＩＣループ及びＥＣループの流量はそれぞれ独立に、約２、約４、約６、約８、約１０、約１５、約２０、約２５、約３０、約３５、約４０、約４５、約５０、約６０、約７０、約８０、約９０、約１００、約２００、約３００、約４００、又は約５００ｍＬ／分に設定される。種々の実施形態において、ＩＣ回路ループの流量は、１０〜２０ｍＬ／分に、ＥＣ回路ループの流量は、２０〜３０ｍＬ／分（培地が酸素供給器を流れて酸素レベルを回復可能な程度）に設定される。ガス交換／酸素供給器３０、９１８、８３２のようなガス交換モジュールを通じて蒸発する培地を補うため、追加の培地が、低い流量（例えば、いくつかの実施形態では０．１ｍＬ／分）で、ＣＥＳ内にポンピングされてよい。種々の実施形態において、ＥＣループは細胞廃棄物（ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｗａｓｔｅ）を除去し、ＩＣループは培地内に成長因子を含む。
【手続補正２５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６８】
細胞成長チャンバーの一実施形態が、図２Ａ及び図２Ｂに示される。中空糸型細胞成長チャンバー２００が一部切欠側面図で示されている。細胞成長チャンバー２００は、細胞成長チャンバーハウジング２０２に収納されている。細胞成長チャンバーハウジング２０２は、４つの開口部すなわち４つのポート（入口ポート２０４、出口ポート２０６、入口ポート２０８、出口ポート２１０）を有する。
【手続補正２６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９０】
図４は、ＣＥＳ４３０の一部を示す斜視図である。ＣＥＳ４３０の一部は、ＣＥＳ４３０のボディ４０８の後部４３４を含む。明確にするため、ボディ４０８の前部は示さないが、前部は、例えば、蝶番４３８によって後部４３４に取り付けられる。これにより、前部は、ＣＥＳ４３０のバイオリアクター３００にアクセスするために開けることが可能なドア又はハッチを備えることが可能となる。バイオリアクター３００には、配管のためのスプール４１６とサンプリングポート４２０が取り付けられる。バイオリアクター３００の周りの環境は、細胞成長に適した条件となるように温度調整される。
【手続補正２７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９１】
図５は、ＣＥＳを用いた細胞増殖プロセス５００の一実施形態のフローチャートを示す。該プロセスは、以下で記載するように、バイオリアクター３００に細胞を投入・分配することに関する工程を含む。ＣＥＳ４３０の特徴が、プロセス５００のいくつかの工程を実行するように記載されるが、本発明はそれらに限定されない。本明細書では記載されないが、異なる特徴を有する他のＣＥＳが、プロセス５００の他の実施形態において、使用されてもよい。従って、バイオリアクター３００のようなＣＥＳ４３０の特徴に対する言及は、あくまで例示のためであって、プロセス５００が、ＣＥＳ４３０の使用に限定されるものではない。
【手続補正２８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９２】
細胞増殖プロセス５００を始めるため、ステップ５０４において、バイオリアクター３００及び関連する配管、関連する構造を本体４０８に取り付けて、ＣＥＳ４３０を操作可能とする。本体４０８に取り付けたら、ステップ５０８において、生理食塩水のような適当なプライミング流体を用いて、バイオリアクター３００、関連する配管、関連する構造に対して、プライミングを行う。ステップ５１２において、細胞を、バイオリアクター３００に投入・分配する。実施形態において、細胞の投入・分配は、いくつかのサブステップを含む。例えば、ある実施形態において、ステップ５１２は、バイオリアクター３００を開始位置に合わせて配置するサブステップ５１６と、バイオリアクター３００において細胞を投入・分配するサブステップ５２０と、を有する。細胞をバイオリアクター３００に投入・分配した後、ステップ５２８において、細胞増殖が行われる。すなわち、バイオリアクター３００内の細胞を成長及び／又は増殖させる。ステップ５３２において、細胞をバイオリアクター３００に追加する必要があるかどうか、及び／又は、バイオリアクター３００内で細胞を分配させるためにバイオリアクター３００を回転させる必要があるかどうか、について判断が行われる。細胞をバイオリアクター３００に投入する必要がある場合、及び／又は細胞をバイオリアクター３００において分配させる必要がある場合、細胞増殖プロセス５００は、ステップ５１２に戻る。細胞を追加する必要がない場合、及び／又は、バイオリアクター３００を回転させる必要がない場合、ステップ５３６において、細胞増殖ステップ５２８が完了したかどうかが、判断される。ここでは、十分な細胞数及び／又は細胞特徴の変化が達成された場合、細胞増殖プロセスは完了したと判断される。細胞増殖ステップ５２８が完了した場合、ステップ５４０において、細胞は収穫される。細胞増殖ステップ５２８が完了していない場合、細胞増殖ステップ５２８が続けられる。
【手続補正２９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１５】
細胞が一様に懸濁されたら、循環レートを下げるためのステップ１１２０が行われる。ステップ１１２０は、循環ポンプのレートを下げる又は循環ポンプを完全に停止することを含む。どんな場合でも、流体の循環レートは、ステップ１１２０において、下げられる。ステップ１１２４において、細胞を沈殿させる。上記から分かるように、細胞は、システム（例えば、ＣＥＳ１０、９００、８００）全体にわたって、略均一に分配される。ステップ１１２４において、バイオリアクター内にある細胞はバイオリアクター内に沈殿すると共に、バイオリアクター外にある細胞はバイオリアクター外に沈殿する。
【手続補正３０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１３２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１３２】
図２１は、本発明の実施形態が実行される基本的なコンピュータシステム１２００の構成要素例を示す。コンピュータシステム１２００は、細胞を投入・分配する方法のいくつかのステップを実行する。システム１２００は、増殖のために細胞を投入・分配する上述のＣＥＳシステム１０、８００、９００の構成要素や特徴事項（例えば、流量制御装置、ポンプ、バルブ、バイオリアクターの回転等）を制御するためのコントローラである。
【手続補正３１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞増殖システムにおいて複数の細胞を投入する方法であって、該方法は、
細胞増殖システムのバイオリアクター内において第１レートで循環する流体に、複数の細胞を付加するステップと、
前記流体の循環レートを、所定の期間、前記第１レートに維持して、前記流体において所望の細胞濃度を得るステップと、
前記所望の細胞濃度が達成された後、前記流体の循環レートを、前記第１レートよりも低いレートに減らし、所定の期間で、前記複数の細胞のうちの第１のパーセンテージの量を前記バイオリアクター内に沈殿させ、前記複数の細胞のうちの第２のパーセンテージの量を前記バイオリアクターの外側に沈殿させるステップと、
前記バイオリアクター内において前記第１のパーセンテージの量の細胞を増殖するステップと、
前記第２のパーセンテージの量の細胞を廃棄するステップと、
を有する方法。
【請求項２】
細胞増殖システムにおいて複数の細胞を投入する方法であって、該方法は、
細胞増殖システムのバイオリアクター内において第１レートで循環する流体に、複数の細胞を付加するステップと、
付加した後、前記バイオリアクター内を循環する前記流体の循環レートを、前記第１レートから、前記第１レートよりも高い第２レートに増やすステップと、
前記流体の循環レートを、所定の期間、前記第２レートに維持して、前記流体において所望の細胞濃度を得るステップと、
前記所望の細胞濃度を達成した後、前記流体の循環レートを、前記第２レートよりも低いレートに減らし、所定の期間で、前記複数の細胞のうちの第１のパーセンテージの量を前記バイオリアクター内に沈殿させ、前記複数の細胞のうちの第２のパーセンテージの量を前記バイオリアクターの外側に沈殿させるステップと、
前記バイオリアクターにおいて前記第１のパーセンテージの量の細胞を増殖するステップと、
前記第２のパーセンテージの量の細胞を廃棄するステップと、
を有する方法。
【請求項３】
請求項１又は２に記載の方法において、前記第１のパーセンテージは、前記複数の細胞の約５５％以上であることを特徴とする方法。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法において、前記第１のパーセンテージは、前記複数の細胞の約６０％以上であることを特徴とする方法。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法において、前記第１のパーセンテージは、前記複数の細胞の約８５％以下であることを特徴とする方法。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法において、前記第１のパーセンテージは、前記複数の細胞の約８０％以下であることを特徴とする方法。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法において、前記第１レートは、約７５ｍｌ／分以上であることを特徴とする方法。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法において、前記第１レートは、約１００ｍｌ／分以上であることを特徴とする方法。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法において、前記第１レートは、約２２５ｍｌ／分以下であることを特徴とする方法。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法において、前記第１レートは、約２００ｍｌ／分以下であることを特徴とする方法。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法において、前記維持するステップにおいて、
前記バイオリアクターを、第１の姿勢から第２の姿勢へ、回転軸を中心として回転させ、
前記バイオリアクターを、前記第２の姿勢で、第１の期間、休止させ、
前記バイオリアクターを、前記回転軸を中心として回転させて、前記第１の姿勢に戻し、
前記バイオリアクターを、前記第１の姿勢で、第２の期間、休止させる、
ことを特徴とする方法。
【請求項１２】
請求項１１記載の方法において、前記第２の期間は、前記第１の期間と略等しいことを特徴とする方法。
【請求項１３】
請求項１１記載の方法において、前記バイオリアクターを回転させる際の前記バイオリアクターの角速度（ｒａｄ／秒）をωとした場合、前記第２の期間は、２ω-1に略等しいことを特徴とする方法。
【請求項１４】
請求項１１記載の方法において、前記バイオリアクターを、前記第１の姿勢と前記第２の姿勢との間で回転させる際は、第１角速度が維持されることを特徴とする方法。
【請求項１５】
請求項１４記載の方法において、前記バイオリアクターを、前記回転軸を中心として回転させて、前記第１の姿勢に戻す際は、第２角速度が維持され、前記第２角速度は、前記第１角速度と略等しいことを特徴とする方法。
【請求項１６】
複数の細胞を増殖するためのシステムであって、該システムは、
少なくとも両端部を有する第１流体流路を備えるバイオリアクターと、
前記第１流体流路と流体的に関連付けられた流体入口路と、
前記バイオリアクターの前記第１流体流路において流体を循環させる第１ポンプと、
前記第１ポンプの動作を制御するコントローラと、
を備え、
前記第１流体流路の第１端部は、中空糸膜の第１ポートと流体的に関連付けられ、前記第１流体流路の第２端部は、前記中空糸膜の第２ポートと流体的に関連付けられ、前記第１流体流路は、前記中空糸膜の毛細管内側部分を有し、
前記流体入口路を介して、前記第１流体流路には、複数の細胞が導入され、
前記コントローラは、前記ポンプを制御することによって、
前記第１流体流路内において、流体を、第１レートにて循環させ、
前記流体の循環レートを、所定の期間、前記第１レートに維持して、前記流体において所望の細胞濃度を得て、
前記所望の細胞濃度を達成した後、前記流体の循環レートを、前記第１レートよりも低いレートに減らし、前記複数の細胞のうちの第１のパーセンテージの量を前記バイオリアクター内に沈殿させ、前記複数の細胞のうちの第２のパーセンテージの量を前記バイオリアクターの外側に沈殿させ、
成長培地を有する流体を循環させて、前記バイオリアクターにおいて前記第１のパーセンテージの量の細胞を増殖させ且つ前記第１流体流路から前記第２のパーセンテージの量の細胞の大部分を廃棄することを特徴とするシステム。
【請求項１７】
請求項１６記載のシステムにおいて、前記第１のパーセンテージは、前記複数の細胞の約６５％以上であることを特徴とするシステム。
【請求項１８】
請求項１６又は１７に記載のシステムにおいて、前記第１のパーセンテージは、前記複数の細胞の約９０％以下であることを特徴とするシステム。
【請求項１９】
請求項１６〜１８のいずれか１項に記載のシステムにおいて、前記第１レートは、約１４５ｍｌ／分以上であることを特徴とするシステム。
【請求項２０】
請求項１６〜１９のいずれか１項に記載のシステムにおいて、前記第１レートは、約２５０ｍｌ／分以下であることを特徴とするシステム。