【手続補正書】
【提出日】平成28年8月8日(2016.8.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
複数の標的が複数の細胞に存在するか否かを同定するための方法であって、該方法は、該標的に複数の核酸タグを結合する工程を包含し、核酸タグは、
ａ）該標的の同一性、および
ｂ）該核酸タグが結合している該細胞の同一性
を表すコードを含み、ここで、該複数のうちの少なくとも第１の標的対は、１００倍よりも多くその相対存在量が変化する、方法。
【請求項２】
少なくとも第３の標的が、前記第１の標的対における両方の標的よりも１０倍よりも多くその相対存在量が変化する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
同じ標的の同一性および細胞の同一性を有する少なくとも２個の異なる核酸タグをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記少なくとも２個の異なる核酸タグが、同じプライマーのセットを用いて様々な速度で増幅する、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
個々の細胞または標的の分離または単離は、前記検出する工程に不必要である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記コードを検出する工程をさらに包含し、個々の細胞の分離または単離は、該検出する工程に不必要である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記検出する工程が配列決定することを含む、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
各標的が、タンパク質または核酸である、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
各標的がｍＲＮＡである、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記核酸タグが、前記標的のうちの１つに特異的である第１のＵＢＡを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記第１のＵＢＡが、標識されたＵＢＡと非標識のＵＢＡとの混合物を含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記第１のＵＢＡが、抗体を含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
前記核酸タグが、前記標的の同一性をコードする核酸ＥＳＢを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記ＥＳＢが、標識ＥＳＢと未標識ＥＳＢとの混合物を含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記核酸タグが、検出可能に異なるコードユニットを含む少なくとも２個の核酸ＡＰＳを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記結合する工程中に、前記少なくとも２個のＡＰＳが、分割プール合成の連続したラウンドにおいて順序づけられた様式で前記核酸タグに付加される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記核酸タグが、ライゲーションによって連結された、複数個のＡＰＳ、ＥＳＢおよびＵＢＡを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
前記複数個のＡＰＳ、前記ＥＳＢまたは前記ＵＢＡが、クリックケミストリーにより連結されることが可能である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記ＡＰＳまたは前記ＥＳＢが、増幅プライマー結合領域を含む、請求項１７に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５５】
いくつかの実施形態において、本発明は、ａ）標識ＵＢＡおよび未標識ＵＢＡを既知の比で含む混合物をサンプルに加える工程、ｂ）標的に結合した標識ＵＢＡの量を検出することによって、そのサンプル中の標的の量の近似値を生成する工程を包含する方法を提供し、ここで、前記生成工程は、検出された標識ＵＢＡの量に、標識ＵＢＡと未標識ＵＢＡとの比によって決定される係数を乗算することを含む。いくつかの実施形態において、標識ＵＢＡは、ＥＳＢと会合する。いくつかの実施形態において、標識ＵＢＡは、ＡＰＳと会合する。いくつかの実施形態において、標識ＵＢＡは、ＣＯＢと会合する。いくつかの実施形態において、サンプルは、細胞のサンプルである。いくつかの実施形態において、細胞は、分割プール合成に供される。
特定の実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
複数の標的が複数の細胞に存在するか否かを同定するための方法であって、該方法は、該標的に複数のタグを結合する工程を包含し、タグは、
ａ）該標的の同一性、および
ｂ）タグが結合している該細胞の同一性
を表すコードを含み、ここで、該複数のうちの少なくとも第１の標的対は、１００倍よりも多くその相対存在量が変化する、方法。
（項目２）
前記複数のうちの少なくとも第１の標的対は、１０００倍よりも多くその相対存在量が変化する、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記複数のうちの少なくとも第１の標的対は、１００００倍よりも多くその相対存在量が変化する、項目１に記載の方法。
（項目４）
少なくとも第３の標的が、前記第１の標的対における両方の標的よりも１０倍よりも多くその相対存在量が変化する、項目１〜３のうちの一項に記載の方法。
（項目５）
少なくとも第３の標的が、前記第１の標的対における両方の標的よりも１００倍よりも多くその相対存在量が変化する、項目１〜３のうちの一項に記載の方法。
（項目６）
少なくとも第３の標的が、前記第１の標的対における両方の標的よりも１０００倍よりも多くその相対存在量が変化する、項目１〜３のうちの一項に記載の方法。
（項目７）
前記複数の標的は、少なくとも５の標的を含む、項目１に記載の方法。
（項目８）
前記複数の標的は、少なくとも１０の標的を含む、項目１に記載の方法。
（項目９）
前記複数の標的は、少なくとも２５の標的を含む、項目１に記載の方法。
（項目１０）
前記複数の標的は、少なくとも５０の標的を含む、項目１に記載の方法。
（項目１１）
前記複数の標的は、少なくとも１００の標的を含む、項目１に記載の方法。
（項目１２）
同じ標的の同一性および細胞の同一性を有する少なくとも２個の異なるタグをさらに含む、項目１に記載の方法。
（項目１３）
前記少なくとも２個の異なるタグが、同じプライマーのセットを用いて様々な速度で増幅する、項目１２に記載の方法。
（項目１４）
個々の細胞または標的の分離または単離は、前記検出する工程に不必要である、項目１に記載の方法。
（項目１５）
前記コードを検出する工程をさらに包含し、個々の細胞の分離または単離は、該検出する工程に不必要である、項目１に記載の方法。
（項目１６）
前記検出する工程が配列決定することを含む、項目１５に記載の方法。
（項目１７）
各標的が、タンパク質または核酸である、項目１に記載の方法。
（項目１８）
各標的がｍＲＮＡである、項目１７に記載の方法。
（項目１９）
前記タグが、核酸である、項目１に記載の方法。
（項目２０）
前記タグが、ＵＢＡを含む、項目１に記載の方法。
（項目２１）
前記ＵＢＡが、前記標的のうちの１つに特異的である、項目２０に記載の方法。
（項目２２）
前記ＵＢＡが、標識されたＵＢＡと非標識のＵＢＡとの混合物を含む、項目２１に記載の方法。
（項目２３）
前記ＵＢＡが、抗体を含む、項目２１に記載の方法。
（項目２４）
前記タグが、ＥＳＢを含む、項目１に記載の方法。
（項目２５）
前記ＥＳＢが、共通リンカー（ＣＬ）を含む、項目２４に記載の方法。
（項目２６）
前記ＥＳＢが、該標的の同一性をコードする、項目２４に記載の方法。
（項目２７）
前記ＥＳＢが、標識ＥＳＢと未標識ＥＳＢとの混合物を含む、項目２６に記載の方法。
（項目２８）
前記ＥＳＢが、核酸を含む、項目２４に記載の方法。
（項目２９）
前記タグが、ＡＰＳを含む、項目１に記載の方法。
（項目３０）
前記ＡＰＳが、検出可能に異なるコードユニットを含む、項目２９に記載の方法。
（項目３１）
前記結合する工程中に、複数個のＡＰＳが、分割プール合成の連続したラウンドにおいて順序づけられた様式で該タグに付加される、項目２９に記載の方法。
（項目３２）
前記タグが、少なくとも２個のＡＰＳを含む、項目１に記載の方法。
（項目３３）
前記ＡＰＳが、核酸を含む、項目２９に記載の方法。
（項目３４）
前記タグが、ライゲーションによって連結された、複数個のＡＰＳ、ＥＳＢおよびＵＢＡを含む、項目１に記載の方法。
（項目３５）
前記複数個のＡＰＳ、前記ＥＳＢまたは前記ＵＢＡが、クリックケミストリーで連結されることが可能である、項目３４に記載の方法。
（項目３６）
前記ＡＰＳまたは前記ＥＳＢが、増幅プライマー結合領域を含む、項目３４に記載の方法。
（項目３７）
前記ＵＢＡ、ＥＳＢまたはＡＰＳが、鋳型になり得る、項目３４に記載の方法。
（項目３８）
ａ）第１の標的分子、
ｂ）該第１の標的分子に特異的な第１のユニーク結合物質（ＵＢＡ）、
ｃ）少なくとも2個の異なる連結可能なＵＢＡ依存性のエピトープ特異的バーコード（
ＥＳＢ）、および
ｄ）複数の順序づけられたアッセイ可能ポリマーサブユニット（ＡＰＳ）
を含み、該ＡＰＳの順序は、検出可能である、組成物。
（項目３９）
前記少なくとも２個の異なるＵＢＡが、同じプライマーのセットを用いる増幅に様々な割合で影響する少なくとも２個の異なるプライマー結合領域を含む、項目３８に記載の組成物。
（項目４０）
前記少なくとも２個の異なるＵＢＡが、同じプライマーのセットを用いる増幅に様々な割合で影響する少なくとも２個の異なるプライマー結合領域に連結されている、項目３８に記載の組成物。
（項目４１）
前記少なくとも２個の異なるＵＢＡが、ＥＳＢまたはＣＯＢを様々な効率で補充する１つ以上の結合領域を含む、項目３８に記載の組成物。
（項目４２）
前記少なくとも２個の異なるＵＢＡが、様々な効率で結合パートナーと会合する１つ以上の捕捉領域を含む、項目３８に記載の組成物。
（項目４３）
組成物であって、該組成物は、
ａ）第１の標的分子、
ｂ）該第１の標的分子に特異的な第１のユニーク結合物質（ＵＢＡ）、
第１の連結可能なＵＢＡ依存性のエピトープ特異的バーコード（ＥＳＢ）、および
ｃ）少なくとも２つの連結可能なＵＢＡ依存性のエピトープ特異的バーコード（ＥＳＢ）、および
ｄ）複数の順序づけられたアッセイ可能ポリマーサブユニット（ＡＰＳ）
を含み、
ここで、ＡＰＳの順序が検出可能である、組成物。
（項目４４）
前記少なくとも２個の異なるＥＳＢが、同じプライマーのセットを用いる増幅に様々な割合で影響する少なくとも２個の異なるプライマー結合領域を含む、項目４３に記載の組成物。
（項目４５）
前記少なくとも２個の異なるＥＳＢが、同じプライマーのセットを用いる増幅に様々な割合で影響する少なくとも２個の異なるプライマー結合領域に連結されている、項目４３に記載の組成物。
（項目４６）
前記少なくとも２個の異なるＥＳＢが、ＵＢＡまたはＣＯＢを様々な効率で補充する１つ以上の結合領域を含む、項目４３に記載の組成物。
（項目４７）
前記少なくとも２個の異なるＥＳＢが、様々な効率で結合パートナーと会合する１つ以上の捕捉領域を含む、項目４３に記載の組成物。
（項目４８）
前記標的分子が、ペプチド、ポリペプチド、オリゴペプチド、タンパク質、リンタンパク質、抗体、核酸、ペプチド核酸、合成小分子、二糖、三糖、オリゴ糖、多糖、脂質、ステロイドおよびリン脂質からなる群より選択される、項目３８または４３に記載の組成物。
（項目４９）
前記複数の順序づけられたＡＰＳは、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０個のＡＰＳを含む、項目３８または４３に記載の組成物。
（項目５０）
前記ＵＢＡ、ＥＳＢまたはＡＰＳが、鋳型になり得る、項目３８または４３に記載の組成物。
（項目５１）
個々のＡＰＳ、ＥＳＢまたは連結オリゴヌクレオチド分子が、ユニークなカウンタータグを含む、項目３８または４３に記載の組成物。
（項目５２）
前記ユニークなカウンタータグが、検出可能である、項目５１に記載の組成物。
（項目５３）
細胞の集団中の細胞の標的分子を細胞起源バーコードで標識するためのキットであって、
（ａ）ｍ個のアッセイ可能ポリマーサブユニット（ＡＰＳ）のｎ個のセットであって、各々は、異なる情報パッケージを含み；ここで、該情報パッケージは、順序づけられた形式で連結されることが可能である、セット；および
（ｂ）同じ標的に特異的な少なくとも２個のユニーク結合物質（ＵＢＡ）
を備える、キット。
（項目５４）
細胞の集団中の細胞の標的分子を細胞起源バーコードで標識するためのキットであって、
（ａ）ｍ個のアッセイ可能ポリマーサブユニット（ＡＰＳ）のｎ個のセットであって、各々は、異なる情報パッケージを含み；ここで、該情報パッケージは、順序づけられた形式で連結されることが可能である、セット；および
（ｂ）標的分子特異的な複数のユニーク結合物質（ＵＢＡ）であって、各々は、ＵＢＡ特異的なエピトープ特異的バーコード（ＥＳＢ）と連結されており、少なくとも1個のＵ
ＢＡの２個のサブタイプをさらに含み、ここで、該2個のサブタイプが異なるＥＳＢに連
結されている、標的分子特異的な複数のユニーク結合物質（ＵＢＡ）
を備える、キット。
（項目５５）
細胞の集団中の細胞の標的分子を細胞起源バーコードで標識するためのキットであって、
（ａ）ｍ個のアッセイ可能ポリマーサブユニット（ＡＰＳ）のｎ個のセットであって、各々は、異なる情報パッケージを含み；ここで、該情報パッケージは、順序づけられた形式で連結されることが可能である、セット；
（ｂ）標的分子特異的な複数のユニーク結合物質（ＵＢＡ）；および
（ｃ）ＵＢＡ特異的な複数のエピトープ特異的バーコード（ＥＳＢ）であって、各ＥＳＢは、指定のＵＢＡと連結することが可能であり、同じＵＢＡに特異的である少なくとも１このＥＳＢの少なくとも２個のサブタイプをさらに含む、ＵＢＡ特異的な複数のエピトープ特異的バーコード（ＥＳＢ）
を備える、キット。
（項目５６）
ｎが、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０である、項目５３〜５５のうちの一項に記載のキット。
（項目５７）
ｍが、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である、項目５３〜５５のうちの一項に記載のキット。
（項目５８）
ｎが、１０より大きい、項目５３〜５５のうちの一項に記載のキット。
（項目５９）
ｍが、２０より大きい、項目５３〜５５のうちの一項に記載のキット。
（項目６０）
個々のＡＰＳ、ＥＳＢまたは連結オリゴヌクレオチド分子が、ユニークなカウンタータ
グを含む、項目５３〜５５のうちの一項に記載のキット。
（項目６１）
前記ユニークなカウンタータグが、検出可能である、項目６０に記載のキット。
（項目６２）
ＡＰＳまたはＥＳＢが、増幅プライマー結合領域を含む、項目５３〜５５のうちの一項に記載のキット。
（項目６３）
プローブをさらに含む、項目５３〜５５のうちの一項に記載のキット。
（項目６４）
サンプル中の標的分子を検出するための方法であって、該方法は、
（ａ）
（ｉ）該標的分子を含む細胞の集団、
（ｉｉ）複数の標的特異的ＵＢＡ混合物であって、少なくとも１つのＵＢＡ混合物は、標識ＵＢＡおよび未標識ＵＢＡを所定の比で含む、複数の標的特異的ＵＢＡ混合物、
（ｉｉｉ）該ＵＢＡと会合することができる複数のＥＳＢ、および
（ｉｖ）複数のラウンド特異的なＡＰＳセットであって、各セットは、互いに検出可能に異なる複数のＡＰＳを含む、複数のラウンド特異的なＡＰＳセット
を得る工程；
（ｂ）該ＵＢＡの混合物を該細胞の集団と接触させる工程であって、該標識ＵＢＡおよび該未標識ＵＢＡは、該標的分子に結合する、工程；
（ｃ）該複数のＥＳＢを該細胞の集団と接触させる工程；および
（ｄ）ラウンド特異的な該複数のＡＰＳを使用して分割プール合成を行う工程
を包含する、方法。
（項目６５）
第１の標識ＵＢＡが、同じ標的に対する第１の未標識ＵＢＡよりも少なくとも１０倍、ＥＳＢと優先的に会合する、項目６４に記載の方法。
（項目６６）
第２の標識ＵＢＡが、同じ標的に対する第２の未標識ＵＢＡよりも少なくとも１０倍、ＥＳＢと優先的に会合する、項目６５に記載の方法。
（項目６７）
第１の標識ＵＢＡが、同じ標的に対する第１の未標識ＵＢＡよりも少なくとも１０倍、ＣＯＢと優先的に会合する、項目６４に記載の方法。
（項目６８）
第２の標識ＵＢＡが、第２の未標識ＵＢＡよりも少なくとも１０倍、ＣＯＢと優先的に会合する、項目６７に記載の方法。
（項目６９）
第１の標識ＵＢＡが、同じ標的に対する第１の未標識ＵＢＡよりも少なくとも１０倍、優先的に検出される、項目６４に記載の方法。
（項目７０）
第２の標識ＵＢＡが、同じ標的に対する第２の未標識ＵＢＡよりも少なくとも１０倍、優先的に検出される、項目６９に記載の方法。
（項目７１）
第１の標識ＵＢＡが、同じ標的に対する第１の未標識ＵＢＡよりも少なくとも１０倍、優先的に増幅される、項目６４に記載の方法。
（項目７２）
第２の標識ＵＢＡが、同じ標的に対する第２の未標識ＵＢＡよりも少なくとも１０倍、優先的に増幅される、項目７１に記載の方法。
（項目７３）
第１の標識ＵＢＡが、同じ標的に対する第１の未標識ＵＢＡよりも少なくとも１０倍、優先的に枯渇される、項目６４に記載の方法。
（項目７４）
第２の標識ＵＢＡが、同じ標的に対する第２の未標識ＵＢＡよりも少なくとも１０倍、優先的に枯渇される、項目７３に記載の方法。
（項目７５）
サンプル中の標的分子を検出するための方法であって、該方法は、
（ａ）
（ｉ）該標的分子を含む細胞の集団、
（ｉｉ）複数の標的特異的ＵＢＡ、
（ｉｉｉ）複数のＥＳＢ混合物であって、各々は、該ＵＢＡ混合物のうちの１つと会合することができ、少なくとも１つのＥＳＢ混合物は、標識ＥＳＢおよび未標識ＥＳＢを所定の比で含む、複数のＥＳＢ混合物、および
（ｉｖ）複数のラウンド特異的なＡＰＳセットであって、各セットは、互いに検出可能に異なる複数のＡＰＳを含む、複数のラウンド特異的なＡＰＳセット
を得る工程；
（ｂ）該ＵＢＡを該細胞の集団と接触させる工程；
（ｃ）該複数のＥＳＢを該細胞の集団と接触させる工程であって、該標識ＥＳＢおよび該未標識ＥＳＢは、該ＵＢＡに結合する、工程；および
（ｄ）該複数のラウンド特異的なＡＰＳを使用して分割プール合成を行う工程
を包含する、方法。
（項目７６）
第１の標識ＥＳＢが、同じ標的に対する第１の未標識ＥＳＢよりも少なくとも１０倍、ＵＢＡと優先的に会合する、項目７５に記載の方法。
（項目７７）
第２の標識ＥＳＢが、同じ標的に対する第２の未標識ＥＳＢよりも少なくとも１０倍、ＵＢＡと優先的に会合する、項目７６に記載の方法。
（項目７８）
第１の標識ＥＳＢが、同じ標的に対する第１の未標識ＥＳＢよりも少なくとも１０倍、ＣＯＢと優先的に会合する、項目７５に記載の方法。
（項目７９）
第２の標識ＥＳＢが、同じ標的に対する第２の未標識ＥＳＢよりも少なくとも１０倍、ＣＯＢと優先的に会合する、項目７８に記載の方法。
（項目８０）
第１の標識ＥＳＢが、同じ標的に対する第１の未標識ＥＳＢよりも、少なくとも１０倍、優先的に検出される、項目７５に記載の方法。
（項目８１）
第２の標識ＥＳＢが、同じ標的に対する第２の未標識ＥＳＢよりも少なくとも１０倍、優先的に検出される、項目８０に記載の方法。
（項目８２）
第１の標識ＥＳＢが、同じ標的に対する第１の未標識ＥＳＢよりも、少なくとも１０倍、優先的に増幅される、項目７５に記載の方法。
（項目８３）
第２の標識ＥＳＢが、同じ標的に対する第２の未標識ＥＳＢよりも少なくとも１０倍、優先的に増幅される、項目８２に記載の方法。
（項目８４）
第１の標識ＥＳＢが、同じ標的に対する第１の未標識ＥＳＢよりも、少なくとも１０倍、優先的に枯渇される、項目７５に記載の方法。
（項目８５）
第２の標識ＥＳＢが、同じ標的に対する第２の未標識ＥＳＢよりも少なくとも１０倍、優先的に枯渇される、項目８４に記載の方法。
（項目８６）
前記ＵＢＡ−ＥＳＢ−ＡＰＳ複合体の少なくとも一部を検出することによって、少なくとも１つの標的特異的シグナルを得る工程をさらに包含する、項目６４または７５のうちの一項に記載の方法。
（項目８７）
前記標的特異的シグナルを乗数で正規化することによって、該標的特異的シグナルと関連している標的分子を定量する工程をさらに包含し、ここで、該乗数は、前記所定の比に基づく、項目８６に記載の方法。
（項目８８）
前記検出工程が、配列決定することを含む、項目８６に記載の方法。
（項目８９）
前記乗数が、前記所定の比の逆数である、項目８７に記載の方法。
（項目９０）
ａ）細胞を含むサンプルを、標識ＵＢＡおよび未標識ＵＢＡを所定の比で含む混合物と接触させる工程、および
ｂ）細胞に関連する標的に結合した標識ＵＢＡの量を検出し、該検出値を該所定の比に基づく係数で正規化することによって、該標的の量の近似値を生成する工程
を包含する方法であって、ここで、該細胞は、分割プール合成に供される、方法。
（項目９１）
第１の標識ＵＢＡが、同じ標的に対する第１の未標識ＵＢＡよりも少なくとも１０倍、ＥＳＢと優先的に会合する、項目９０に記載の方法。
（項目９２）
第２の標識ＵＢＡが、同じ標的に対する第２の未標識ＵＢＡよりも少なくとも１０倍、ＥＳＢと優先的に会合する、項目９１に記載の方法。
（項目９３）
第１の標識ＵＢＡが、同じ標的に対する第１の未標識ＵＢＡよりも少なくとも１０倍、ＣＯＢと優先的に会合する、項目９０に記載の方法。
（項目９４）
第２の標識ＵＢＡが、第２の未標識ＵＢＡよりも少なくとも１０倍、ＣＯＢと優先的に会合する、項目９３に記載の方法。
（項目９５）
第１の標識ＵＢＡが、同じ標的に対する第１の未標識ＵＢＡよりも少なくとも１０倍、優先的に検出される、項目９０に記載の方法。
（項目９６）
第２の標識ＵＢＡが、同じ標的に対する第２の未標識ＵＢＡよりも少なくとも１０倍、優先的に検出される、項目９５に記載の方法。
（項目９７）
第１の標識ＵＢＡが、同じ標的に対する第１の未標識ＵＢＡよりも少なくとも１０倍、優先的に増幅される、項目９０に記載の方法。
（項目９８）
第２の標識ＵＢＡが、同じ標的に対する第２の未標識ＵＢＡよりも少なくとも１０倍、優先的に増幅される、項目９７に記載の方法。
（項目９９）
第１の標識ＵＢＡが、同じ標的に対する第１の未標識ＵＢＡよりも少なくとも１０倍、優先的に枯渇される、項目９０に記載の方法。
（項目１００）
第２の標識ＵＢＡが、同じ標的に対する第２の未標識ＵＢＡよりも少なくとも１０倍、優先的に枯渇される、項目９９に記載の方法。
（項目１０１）
ａ）細胞を含むサンプルを、ＵＢＡならびに標識ＥＳＢおよび未標識ＥＳＢを所定の比で含む混合物と接触させる工程、および
ｂ）細胞に関連する標的に結合した標識ＥＳＢの量を検出し、該検出値を該所定の比に基づく係数で正規化することによって、該標的の量の近似値を生成する工程
を包含する方法であって、ここで、該細胞は、分割プール合成に供される、方法。
（項目１０２）
第１の標識ＥＳＢが、同じ標的に対する第１の未標識ＥＳＢよりも、少なくとも１０倍、ＵＢＡと優先的に会合する、項目１０１に記載の方法。
（項目１０３）
第２の標識ＥＳＢが、同じ標的に対する第２の未標識ＥＳＢよりも少なくとも１０倍、ＵＢＡと優先的に会合する、項目１０２に記載の方法。
（項目１０４）
第１の標識ＥＳＢが、同じ標的に対する第１の未標識ＥＳＢよりも少なくとも１０倍、ＣＯＢと優先的に会合する、項目１０１に記載の方法。
（項目１０５）
第２の標識ＥＳＢが、同じ標的に対する第２の未標識ＥＳＢよりも少なくとも１０倍、ＣＯＢと優先的に会合する、項目１０４に記載の方法。
（項目１０６）
第１の標識ＥＳＢが、同じ標的に対する第１の未標識ＥＳＢよりも、少なくとも１０倍、優先的に検出される、項目１０１に記載の方法。
（項目１０７）
第２の標識ＥＳＢが、同じ標的に対する第２の未標識ＥＳＢよりも少なくとも１０倍、優先的に検出される、項目１０６に記載の方法。
（項目１０８）
第１の標識ＥＳＢが、同じ標的に対する第１の未標識ＥＳＢよりも、少なくとも１０倍、優先的に増幅される、項目１０１に記載の方法。
（項目１０９）
第２の標識ＥＳＢが、同じ標的に対する第２の未標識ＥＳＢよりも少なくとも１０倍、優先的に増幅される、項目１０８に記載の方法。
（項目１１０）
第１の標識ＥＳＢが、同じ標的に対する第１の未標識ＥＳＢよりも、少なくとも１０倍、優先的に枯渇される、項目１０１に記載の方法。
（項目１１１）
第２の標識ＥＳＢが、同じ標的に対する第２の未標識ＥＳＢよりも少なくとも１０倍、優先的に枯渇される、項目１１０に記載の方法。