【誤訳訂正書】
【提出日】平成28年11月8日(2016.11.8)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
野生型と比較して低下した脂肪酸分解能を有し且つ組換えアルカンオキシダーゼを発現する微生物であって、脂肪酸分解能が、β−酸化経路に関与する酵素をコードする遺伝子の欠失、阻害または不活性化によって低下され、かつ、それぞれの野生型における同等の条件下で同一の酵素の活性に対して少なくとも４０％活性が低下されていることを特徴とする、前記微生物。
【請求項２】
発現したアルカンオキシダーゼが、ルブレドキシン依存性アルカンオキシダーゼ、チトクロームＰ４５０酵素、キシレンモノオキシゲナーゼ、メタンモノオキシゲナーゼ及びその変異体からなる群から選択される、請求項１に記載の微生物。
【請求項３】
β−酸化経路に関与する酵素が、脂肪酸インポーター、脂肪酸ＣｏＡリガーゼ、アシルＣｏＡデヒドロゲナーゼ、２，４−ジエノイル−ＣｏＡレダクターゼ、エノイル−ＣｏＡヒドラターゼ及び３−ケトアシル−ＣｏＡチオラーゼからなる群から選択される、請求項１又は２に記載の微生物。
【請求項４】
微生物が、原核又は下等真核細胞である、請求項１から３までのいずれか１項に記載の微生物。
【請求項５】
微生物が組換えアルコールデヒドロゲナーゼを発現する、請求項１から４までのいずれか１項に記載の微生物。
【請求項６】
微生物が組換えトランスアミナーゼを発現する、請求項１から５までのいずれか１項に記載の微生物。
【請求項７】
微生物が組換えアミノ酸デヒドロゲナーゼを発現する、請求項６に記載の微生物。
【請求項８】
組換えアミノ酸デヒドロゲナーゼが、アラニンデヒドロゲナーゼである、請求項７に記載の微生物。
【請求項９】
アルキルの酸化方法であって、
ａ）アルキルと請求項１から８までのいずれか１項に記載の細胞を含む水溶液とを接触させることを含む、前記方法。
【請求項１０】
請求項９に記載の方法であって、
ｂ）工程ａ）からの水溶液と水非混和性有機溶媒とを接触させることを更に含む、前記方法。
【請求項１１】
請求項１０に記載の方法であって、アルキル酸化を完了させた後に、工程ｂ）を実施する、前記方法。
【請求項１２】
請求項１から８までのいずれか１項に記載の微生物をアルキルの酸化に用いる使用。
【請求項１３】
アルキルが式Ｈ−（ＣＨ２）ｘ−Ｒ（式中、ｘは１〜３０であり、且つＲは−ＯＨ、−ＣＯＨ、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＯＲ１、−ＮＨ２、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＯＰＯ３Ｈ、−ＳＯ３Ｈ及び−Ｈからなる群から選択されるものであり、ここでＲ１は非置換の直鎖状アルキルである）によって表される化合物である、請求項９から１２までのいずれか１項に記載の方法又は使用。
【請求項１４】
アルキルが直鎖状アルカンである、請求項９から１３までのいずれか１項に記載の方法又は使用。
【請求項１５】
水非混和性有機溶媒が水非混和性脂肪酸又は脂肪酸エステルである、請求項１０、１１、１３および１４のいずれか１項に記載の方法又は使用。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４１】
微生物中の脂肪酸の分解は、酵素的に触媒される一連の反応により達成される。まず第一に、脂肪酸が取り込まれ、大腸菌の場合、それぞれＦａｄＬ及びＦａｄＤと呼ばれる、脂肪酸ＣｏＡリガーゼ活性を有する少なくとも１つの外膜タンパク質及び１つの内膜関連タンパク質を含むトランスポート／アシル活性化機構を介して細胞膜にわたり転位する。細胞の内部では、分解されるべき脂肪酸は、β−酸化経路の他の反応を触媒する酵素に供される。最初の細胞内の工程は、アシル−ＣｏＡのエノイル−ＣｏＡへのアシル−ＣｏＡ脱水素酵素を介した変換を含み、これは大腸菌の場合、ＦａｄＥと呼ばれる。得られたエノイル−ＣｏＡは、３−ヒドロキシアシル−ＣｏＡを介して、水素化及び酸化を通して、３−ケトアシル−ＣｏＡに転換され、触媒されてエノイル−ＣｏＡヒドラターゼ／３−ヒドロキシアシル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼになり、これは大腸菌においてＦａｄＢと呼ばれる。最後に、３−ケトアシルＣｏＡチオラーゼ、大腸菌におけるＦａｄＡが、３−ケトアシル−ＣｏＡの切断を触媒すると、アセチル−ＣｏＡ及び２つの炭素原子によって短縮された導入アシル−ＣｏＡが得られる。好ましい実施態様では、本願明細書で使用される、「低下した脂肪酸分解能を有する微生物」との用語は、脂肪酸を取り込む及び／又は分解する能力が低下した微生物、好ましくは少なくとも８個の炭素鎖を有するものを意味する。微生物の脂肪酸分解能は、様々な方法で低下され得る。好ましい実施態様では、微生物は、その野生型と比較して、低下したβ−酸化経路に関与する酵素の活性を有する。好ましい実施態様では、本願明細書で使用される、「β−酸化経路に関与する酵素」との用語は、β−酸化経路を介して、前記脂肪酸の分解の一部として形成された脂肪酸又はその誘導体と直接相互作用する酵素を意味し、一連の反応は、好ましくは脂肪酸又はその誘導体を基質と見なすことによって、脂肪酸のアセチル−ＣｏＡ及び短縮された脂肪酸のＣｏＡエステルへの変換を行い、そしてこれをβ−酸化経路の一部として形成された代謝物に変換する。特に好ましい実施態様では、「β−酸化経路に関与する酵素」との用語は、脂肪酸インポーター、更に具体的には脂肪酸導入機構の要素、例えば、ＦａｄＬ又はその変型及び膜結合脂肪酸ＣｏＡ−リガーゼの成分を含む。例えば、アシル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼは、脂肪酸−ＣｏＡと相互作用し且つ脂肪酸−ＣｏＡエステルをエノイル−ＣｏＡに変換し、これはβ−酸化の一部として形成される代謝物質であるため、β−酸化経路に関与する酵素である。好ましい実施態様では、本願明細書で使用される、「脂肪導入酸化経路に関与する酵素」との用語は、導入された脂肪酸及びその成分、脂肪酸ＣｏＡ−リガーゼ、アシル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ、エノイル−ＣｏＡヒドラターゼ、３−ヒドロキシアシル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ及び３−ケト−アシル−ＣｏＡチオラーゼを含む群からの任意のポリペプチドを含む。好ましい実施態様では、本願明細書で使用される、「脂肪酸トランスポーター」との用語は、膜の外側から又は外側、即ち、媒体に露出した膜、微生物の膜の外側から脂肪酸を、場合により複数の活性ポリペプチドを含む機構の一部として、細胞の内部��転位することが可能なポリペプチドを意味する。例えば、大腸菌中のポリペプチドＦａｄＬ（アクセスコード：ＢＡＡ１６２０５．１）は脂肪酸トランスポーターである。好ましい実施態様では、本願明細書で使用される「脂肪酸−ＣｏＡリガーゼ」との用語は、脂肪酸のＣｏＡエステルへの脂肪酸の変換を触媒することが可能なポリペプチド、即ち、好ましくは前記脂肪酸をβ−酸化経路に導入するために、カルボキシ基の官能基−ＯＨが−Ｓ−ＣｏＡに置き換えられた分子を意味する。例えば、大腸菌中のポリペプチドＦａｄＤ（アクセスコード：ＢＡＡ１５６０９．１）はアシル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼである。好ましい実施態様では、本願明細書で使用される、「アシル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ」との用語は、好ましくはβ−酸化経路の一部として、アシル−ＣｏＡのエノイル−ＣｏＡへの変換を触媒することが可能なポリペプチドである。例えば、大腸菌中のポリペプチドＦａｄＥ（アクセスコード：ＢＡＡ７７８９１．２）はアシル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼである。好ましい実施態様では、本願明細書で使用される「２，４−ジエノイル−ＣｏＡレダクターゼ」との用語は、好ましくはβ−酸化経路の一部として、２，４−ジエノイルＣｏＡの、不飽和脂肪酸からエノイル−ＣｏＡへの変換を触媒することが可能なポリペプチドである。例えば、大腸菌中のポリペプチドＦａｄＨは２，４−ジエノイル−ＣｏＡレダクターゼである。好ましい実施態様では、本願明細書で使用される、「エノイル−ＣｏＡヒドラターゼ」との用語は、３−ヒドロキシアシル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼをも意味し、水素化及び酸素化を通して、好ましくはβ−酸化経路の一部として、エノイル−ＣｏＡの３−ケトアシル−ＣｏＡへの転換を触媒することが可能なポリペプチドを意味する。例えば、大腸菌中のポリペプチドＦａｄＢ（アクセスコード：ＢＡＥ７７４５７．１）はエノイル−ＣｏＡヒドラターゼである。好ましい実施態様では、本願明細書で使用される、「ケトアシル−ＣｏＡチオラーゼ」との用語は、好ましくはβ−酸化経路の最終段階として、２つの炭素原子及びアセチル−ＣｏＡによって短縮されたアシルＣｏＡが得られる、切断３−ケトアシル−ＣｏＡの変換を触媒することが可能なポリペプチドを意味する。例えば、大腸菌中のポリペプチドＦａｄＡ（アクセスコード：ＡＰ００９０４８．１）はケトアシル−ＣｏＡチオラーゼである。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５１】
好ましい実施態様では、工程ｂ）は、アルキル酸化の完了後であって、かつ好ましくは本発明の細胞の水溶液からの除去後に行われる。好ましい実施態様では、アルキル酸化、即ち、本発明の細胞によって触媒されるアルキルの酸化は、以下の要件の少なくとも１つが満たされる場合、完全であるとみなされ得る：ａ）本発明の細胞が代謝的に活性でなくなる、ｂ）基質ターンオーバーが検出できない、ｃ）基質がもはや水溶液中に存在しない、ｄ）生成物の正味量がもはや有意に増加しない、例えば、濃度プラトーに到達したか又は生成物の形成を示すグラフの傾きが２時間を超えてゼロ以下である。細胞は、例えば、遠心分離、濾過又はデカンテーションによって、当業者に公知の多数の方法で水溶液から除去され得る。