【手続補正書】
【提出日】平成28年6月17日(2016.6.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
各々がFc領域に共有結合により連結される、1つ、2つ、3つ若しくは4つの天然に存在するか又は合成のインクレチン受容体リガンドポリペプチドを含むFc領域融合ポリペプチド又はFc領域複合物であって、該融合ポリペプチド又は複合物がアミノ酸配列LPXTG（配列番号：75）を含む、前記Fc領域融合ポリペプチド又はFc領域複合物。
【請求項２】
該インクレチン受容体リガンドポリペプチドのアミノ酸配列及び該Fc領域のアミノ酸配列の間にアミノ酸配列LPETG（配列番号：74）を含む、請求項1に記載のFc領域融合ポリペプチド又はFc領域複合物。
【請求項３】
LPETG（配列番号：74）のC-末端にGly-Gly又はGly-Gly-Ser又はGly-Gly-Gly、Gly-Gly-Gly-Ser（配列番号：88）、Gly-Gly-Gly-Gly（配列番号：85）、又はGly-Gly-Gly-Gly-Ser（配列番号：90）を含む、請求項2に記載のFc領域融合ポリペプチド又はFc領域複合物。
【請求項４】
(GGGS)n（式中n＝1−6（配列番号：57−60、88及び89））、(GGGGS)m（式中m＝1−6（配列番号：61−64、90及び91））、又は(GGGGGS)o（式中o＝1−6（配列番号：65−67及び92−94））を含む、請求項3に記載のFc領域融合ポリペプチド又はFc領域複合物。
【請求項５】
配列番号：57−67のいずれか1つを含む、請求項4に記載のFc領域融合ポリペプチド又はFc領域複合物。
【請求項６】
LPXTG（配列番号：75）のN-末端にGly又はGly-Glyを含む、請求項1から5のいずれか1項に記載のFc領域融合ポリペプチド又はFc領域複合物。
【請求項７】
該Fc領域が、329位のアミノ酸残基の変異、並びに228、233、234、235、236、237、297、318、320、322及び331位のアミノ酸残基を含む群から選択される少なくとも1つのアミノ酸の異なる残基への少なくとも1つのさらに別の変異を有するヒトFc領域であることを特徴とし、ここでFc領域の残基がKabatのEUインデックスにしたがって番号を付けられる、請求項1から6のいずれか1項に記載のFc領域融合ポリペプチド又はFc領域複合物。
【請求項８】
該変種ヒトFc領域が、野生型IgG Fc領域を含むFc領域融合ポリペプチド又はFc領域複合物と比較して、ヒトFcγRIIIA及び／又はFcγRIIA及び／又はFcγRIに対して親和性の低下を有することを特徴とする、請求項1から7のいずれか1項に記載のFc領域融合ポリペプチド又はFc領域複合物。
【請求項９】
該Fc領域の少なくとも1つのアミノ酸の該少なくとも1つのさらに別の変異が、S228P、E233P、L234A、L235A、L235E、N297A、N297D又はP331Sであることを特徴とする、請求項7及び8のいずれか1項に記載のFc領域融合ポリペプチド又はFc領域複合物。
【請求項１０】
該Fc領域の該少なくとも1つのさらに別の変異が、Fc領域がヒトIgG1アイソタイプならばL234A及びL235Aであるか、又はFc領域がヒトIgG4アイソタイプならばS228P及びL235Eであることを特徴とする、請求項9に記載のFc領域融合ポリペプチド又はFc領域複合物。
【請求項１１】
該Fc領域融合ポリペプチド又は複合物によって誘発される血小板凝集が、野生型ヒトIgG Fc領域を含むFc領域融合ポリペプチド又は複合物によって誘発される血小板凝集と比較して低下することを特徴とする、請求項1から10のいずれか1項に記載のFc領域融合ポリペプチド又はFc領域複合物。
【請求項１２】
1つ又は2つのインクレチン受容体リガンドポリペプチドを含むことを特徴とする、請求項1から11のいずれか1項に記載のFc領域融合ポリペプチド又はFc領域複合物。
【請求項１３】
該インクレチン受容体リガンドポリペプチドの各々が1つのFc領域ポリペプチド鎖のN-末端に融合又は結合され、各Fc領域ポリペプチド鎖が1つのインクレチン受容体リガンドポリペプチドにのみ融合又は結合されることを特徴とする、請求項1から12のいずれか1項に記載のFc領域融合ポリペプチド又はFc領域複合物。
【請求項１４】
該インクレチン受容体リガンドポリペプチドの各々が1つのFc領域ポリペプチド鎖のC-末端に融合又は結合され、各Fc領域ポリペプチド鎖が1つのインクレチン受容体リガンドポリペプチドにのみ融合又は結合されることを特徴とする、請求項12及び13のいずれか1項に記載のFc領域融合ポリペプチド又はFc領域複合物。
【請求項１５】
該インクレチン受容体リガンドポリペプチドが、GIP、GLP-1、エクセンジン-3、エクセンジン-4、GIP-GLP-1二重アゴニスト、GIP-GLP-1-グルカゴン受容体三重アゴニスト、キメラGIP/GLPアゴニスト及び前記の前駆体、誘導体又は機能的フラグメントから互いに別個に選択されることを特徴とする、請求項1から14のいずれか1項に記載のFc領域融合ポリペプチド又はFc領域複合物。
【請求項１６】
該Fc領域が、配列番号：42−56から成る群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項1から15のいずれか1項に記載のFc領域融合ポリペプチド又はFc領域複合物。
【請求項１７】
該インクレチン受容体リガンドポリペプチドが、配列番号：1−39、76及び77から成る群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項1から16のいずれか1項に記載のFc領域融合ポリペプチド又はFc領域複合物。
【請求項１８】
該Fc領域融合ポリペプチド又はFc領域複合物が、該Fc領域及び該インクレチン受容体リガンドポリペプチドの間にリンカーを含み、該リンカーが配列番号：57−69及び82−94から成る群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項1から17のいずれか1項に記載のFc領域融合ポリペプチド又はFc領域複合物。
【請求項１９】
配列番号：95のアミノ酸配列を含む、Fc領域融合ポリペプチド又はFc領域複合物。
【請求項２０】
配列番号：96のアミノ酸配列を含む、Fc領域融合ポリペプチド又はFc領域複合物。
【請求項２１】
配列番号：97のアミノ酸配列を含む、Fc領域融合ポリペプチド又はFc領域複合物。
【請求項２２】
配列番号：98のアミノ酸配列を含む、Fc領域融合ポリペプチド又はFc領域複合物。
【請求項２３】
請求項1から22のいずれか1項に記載のFc領域融合ポリペプチド又はFc領域複合物を含む医薬組成物。
【請求項２４】
ある疾患の治療用医薬の製造のための、請求項1から22のいずれか1項に記載のFc領域融合ポリペプチド又はFc領域複合物の使用であって、野生型ヒトIgG Fc領域の変種Fc領域を含む融合ポリペプチド又は複合物のエフェクター機能が、野生型ヒトIgG Fc領域を含む融合ポリペプチド又は複合物によって誘発されるエフェクター機能と比較して低下することが有益である、前記使用。
【請求項２５】
野生型ヒトIgG Fc領域の変種Fc領域を含む請求項1から22のいずれか1項に記載のFc領域融合ポリペプチド又はFc領域複合物を含む医薬組成物であって、野生型ヒトIgG Fc領域のPro329がグリシンで置換され（ここで該残基はKabatのEUインデックスにしたがって番号を付けられる）、該融合ポリペプチド又は複合物が、野生型ヒトIgG Fc領域を含む融合ポリペプチド又は複合物によって誘発されるADCCの少なくとも20％のADCCの下方調整のために、及び／又はADCPの下方調整のためにヒトFcγRIIIA及びFcγRIIAに対して親和性の低下を示す、前記医薬組成物。
【請求項２６】
該疾患が2型糖尿病又は肥満である、請求項24に記載の使用。
【請求項２７】
該疾患が1型糖尿病である、請求項24に記載の使用。
【請求項２８】
インクレチン受容体リガンドポリペプチドのアミノ酸配列及びLPXTG（配列番号：75）（Xは任意のアミノ酸である）を含むポリペプチド。
【請求項２９】
Xが酸性アミノ酸である、請求項28に記載のポリペプチド。
【請求項３０】
該酸性アミノ酸がGluである、請求項29に記載のポリペプチド。
【請求項３１】
LPETG（配列番号：74）のC-末端にGly-Gly又はGly-Gly-Ser又はGly-Gly-Gly、Gly-Gly-Gly-Ser（配列番号：88）、Gly-Gly-Gly-Gly（配列番号：85）、又はGly-Gly-Gly-Gly-Ser（配列番号：90）を含む、請求項28から30のいずれか1項に記載のポリペプチド。
【請求項３２】
(GGGS)n（式中n＝1−6（配列番号：57−60、88及び89））、(GGGGS)m（式中m＝1−6（配列番号：61−64、90及び91））、又は(GGGGGS)o（式中o＝1−6（配列番号：65−67及び92−94））を含む、請求項31に記載のポリペプチド。
【請求項３３】
配列番号：57−67のいずれか1つを含む、請求項32に記載のポリペプチド。
【請求項３４】
LPXTG（配列番号：75）のN-末端にGly又はGly-Glyを含む、請求項28から33のいずれか1項に記載のポリペプチド。
【請求項３５】
ある疾患の治療用医薬の製造における請求項28から34のいずれか1項に記載のポリペプチドの使用。
【請求項３６】
該医薬の製造がソルターゼA及びヒトFc領域の使用を含む、請求項35に記載の使用。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１５２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１５２】
急性db/dbマウス実験
10週齢の雄のdb/dbマウス（C57BLKS; BKS.Cg-m +/+ Lepr (000642); Jackson Laboratories, USA）を温度と湿度が管理された環境に12時間照明：12時間消灯サイクルで収容し、通常の固形飼料及び水に随意に接近させた（固形飼料、脂肪として5％kcal；Harlan 7912）。マウス（約42g）を、随意の血液グルコースレベルを基準にして種々の処置グループに任意抽出した。これらのマウスに暗サイクルの開始前にベヒクル（s.c.）、コントロール（s.c.）、又は化合物（20nmol/kg（s.c.））を投与した。次の日、腹腔内グルコースチャレンジ試験前に6時間マウスを空腹にさせた（N＝8マウス/グループ）。6時間の空腹に続いて、基準値の決定（携帯フリースタイルフリーダムライトグルコースメーター（Abott）を用いる）のために尾部クリップから血液サンプルを収集した（t＝0分）。続いて前記マウスにグルコースの腹腔内ボーラス注射を実施し（1g/kg；25％デキストロース溶液）、グルコース測定のために規則的な間隔（t＝15、30、60及び120分）で追加の血液サンプルを収集した。腹腔内グルコース耐性に対する化合物の影響を分析するために、台形法を用いて血液グルコースの移動について曲線下面積（AUC0-120min）を決定した。
データ分析：
提示した全データが平均+/-標準誤差（s.e.m.）である。データの統計評価は、一元配置ANOVA、続いてDunnett検定を用いて実施し、統計的に有意な相違がベヒクルと薬剤処理グループの間に存在するか否かを決定した。相違はP＜0.05で有意であると考えた．データ分析はGraphPadソフトウェア（GraphPad Prism）で実施した。
結果：
雄のdb/dbマウスへの急激な化合物（ペプチド-ロング-G3Fc及びペプチド-ショート-G3Fc）の投与（20nmol/kg, s.c.）は、腹腔内グルコースチャレンジに応答するグルコース移動を有意に減少させた（ipGTT；AUC ipGTT）（図10）。前記効果は用量依存性である（図11）。
本発明のまた別の態様は、以下のとおりであってもよい。
〔１〕各々がFc領域に共有結合により連結される、1つ、2つ、3つ若しくは4つの天然に存在するか又は合成のインクレチン受容体リガンドポリペプチドを含むFc領域融合ポリペプチド又はFc領域複合物であって、該融合ポリペプチド又は複合物がアミノ酸配列LPXTG（配列番号：75）、場合によってLPETG（配列番号：74）を含む、前記Fc領域融合ポリペプチド又はFc領域複合物。
〔２〕該インクレチン受容体リガンドポリペプチドのアミノ酸配列及び該Fc領域のアミノ酸配列の間にアミノ酸配列LPETG（配列番号：74）を含む、前記〔1〕に記載のFc領域融合ポリペプチド又はFc領域複合物。
〔３〕LPETG（配列番号：74）のC-末端にGly-Gly又はGly-Gly-Ser又はGly-Gly-Gly、Gly-Gly-Gly-Ser（配列番号：88）、Gly-Gly-Gly-Gly（配列番号：85）、又はGly-Gly-Gly-Gly-Ser（配列番号：90）を含む、前記〔2〕に記載のFc領域融合ポリペプチド又はFc領域複合物。
〔４〕(GGGS)n（式中n＝1−6（配列番号：57−60、88及び89））、(GGGGS)m（式中m＝1−6（配列番号：61−64、90及び91））、又は(GGGGGS)o（式中o＝1−6（配列番号：65−67及び92−94））を含む、前記〔3〕に記載のFc領域融合ポリペプチド又はFc領域複合物。
〔５〕配列番号：57−67のいずれか1つを含む、前記〔4〕に記載のFc領域融合ポリペプチド又はFc領域複合物。
〔６〕LPXTG（配列番号：75）のN-末端にGly又はGly-Glyを含む、前記〔1〕から〔5〕のいずれか1項に記載のFc領域融合ポリペプチド又はFc領域複合物。
〔７〕該Fc領域が、329位のアミノ酸残基の変異、並びに228、233、234、235、236、237、297、318、320、322及び331位のアミノ酸残基を含む群から選択される少なくとも1つのアミノ酸の異なる残基への少なくとも1つのさらに別の変異を有するヒトFc領域であることを特徴とし、ここでFc領域の残基がKabatのEUインデックスにしたがって番号を付けられる、前記〔1〕から〔6〕のいずれか1項に記載のFc領域融合ポリペプチド又はFc領域複合物。
〔８〕該変種ヒトFc領域が、野生型IgG Fc領域を含むFc領域融合ポリペプチド又はFc領域複合物と比較して、ヒトFcγRIIIA及び／又はFcγRIIA及び／又はFcγRIに対して親和性の低下を有することを特徴とする、前記〔1〕から〔7〕のいずれか1項に記載のFc領域融合ポリペプチド又はFc領域複合物。
〔９〕該Fc領域の少なくとも1つのアミノ酸の該少なくとも1つのさらに別の変異が、S228P、E233P、L234A、L235A、L235E、N297A、N297D又はP331Sであることを特徴とする、前記〔7〕及び〔8〕のいずれか1項に記載のFc領域融合ポリペプチド又はFc領域複合物。
〔１０〕該Fc領域の該少なくとも1つのさらに別の変異が、Fc領域がヒトIgG1アイソタイプならばL234A及びL235Aであるか、又はFc領域がヒトIgG4アイソタイプならばS228P及びL235Eであることを特徴とする、前記〔9〕に記載のFc領域融合ポリペプチド又はFc領域複合物。
〔１１〕該Fc領域融合ポリペプチド又は複合物によって誘発される血小板凝集が、野生型ヒトIgG Fc領域を含むFc領域融合ポリペプチド又は複合物によって誘発される血小板凝集と比較して低下することを特徴とする、前記〔1〕から〔10〕のいずれか1項に記載のFc領域融合ポリペプチド又はFc領域複合物。
〔１２〕1つ又は2つのインクレチン受容体リガンドポリペプチドを含むことを特徴とする、前記〔1〕から〔11〕のいずれか1項に記載のFc領域融合ポリペプチド又はFc領域複合物。
〔１３〕該インクレチン受容体リガンドポリペプチドの各々が1つのFc領域ポリペプチド鎖のN-末端に融合又は結合され、各Fc領域ポリペプチド鎖が1つのインクレチン受容体リガンドポリペプチドにのみ融合又は結合されることを特徴とする、前記〔1〕から〔12〕のいずれか1項に記載のFc領域融合ポリペプチド又はFc領域複合物。
〔１４〕該インクレチン受容体リガンドポリペプチドの各々が1つのFc領域ポリペプチド鎖のC-末端に融合又は結合され、各Fc領域ポリペプチド鎖が1つのインクレチン受容体リガンドポリペプチドにのみ融合又は結合されることを特徴とする、前記〔12〕及び〔13〕のいずれか1項に記載のFc領域融合ポリペプチド又はFc領域複合物。
〔１５〕該インクレチン受容体リガンドポリペプチドが、GIP、GLP-1、エクセンジン-3、エクセンジン-4、GIP-GLP-1二重アゴニスト、GIP-GLP-1-グルカゴン受容体三重アゴニスト、キメラGIP/GLPアゴニスト及び前記の前駆体、誘導体又は機能的フラグメントから互いに別個に選択されることを特徴とする、前記〔1〕から〔14〕のいずれか1項に記載のFc領域融合ポリペプチド又はFc領域複合物。
〔１６〕該Fc領域が、配列番号：42−56から成る群から選択されるアミノ酸配列を含む、前記〔1〕から〔15〕のいずれか1項に記載のFc領域融合ポリペプチド又はFc領域複合物。
〔１７〕該インクレチン受容体リガンドポリペプチドが、配列番号：1−39、76及び77から成る群から選択されるアミノ酸配列を含む、前記〔1〕から〔16〕のいずれか1項に記載のFc領域融合ポリペプチド又はFc領域複合物。
〔１８〕該Fc領域融合ポリペプチド又はFc領域複合物が、該Fc領域及び該インクレチン受容体リガンドポリペプチドの間にリンカーを含み、該リンカーが配列番号：57−69及び82−94から成る群から選択されるアミノ酸配列を含む、前記〔1〕から〔17〕のいずれか1項に記載のFc領域融合ポリペプチド又はFc領域複合物。
〔１９〕配列番号：95のアミノ酸配列を含む、Fc領域融合ポリペプチド又はFc領域複合物。
〔２０〕配列番号：96のアミノ酸配列を含む、Fc領域融合ポリペプチド又はFc領域複合物。
〔２１〕配列番号：97のアミノ酸配列を含む、Fc領域融合ポリペプチド又はFc領域複合物。
〔２２〕配列番号：98のアミノ酸配列を含む、Fc領域融合ポリペプチド又はFc領域複合物。
〔２３〕前記〔1〕から〔22〕のいずれか1項に記載のFc領域融合ポリペプチド又はFc領域複合物を含む医薬組成物。
〔２４〕前記〔1〕から〔22〕のいずれか1項に記載のFc領域融合ポリペプチド又はFc領域複合物の医薬としての使用。
〔２５〕ある疾患の治療用医薬の製造のための、前記〔1〕から〔22〕のいずれか1項に記載のFc領域融合ポリペプチド又はFc領域複合物の使用であって、野生型ヒトIgG Fc領域の変種Fc領域を含む融合ポリペプチド又は複合物のエフェクター機能が、野生型ヒトIgG Fc領域を含む融合ポリペプチド又は複合物によって誘発されるエフェクター機能と比較して低下することが有益である、前記使用。
〔２６〕野生型ヒトIgG Fc領域の変種Fc領域を含む前記〔1〕から〔22〕のいずれか1項に記載のFc領域融合ポリペプチド又はFc領域複合物の使用であって、野生型ヒトIgG Fc領域のPro329がグリシンで置換され（ここで該残基はKabatのEUインデックスにしたがって番号を付けられる）、該融合ポリペプチド又は複合物が、野生型ヒトIgG Fc領域を含む融合ポリペプチド又は複合物によって誘発されるADCCの少なくとも20％のADCCの下方調整のために、及び／又はADCPの下方調整のためにヒトFcγRIIIA及びFcγRIIAに対して親和性の低下を示す、前記使用。
〔２７〕該疾患が2型糖尿病又は肥満である、前記〔24〕から〔26〕のいずれか1項に記載の使用。
〔２８〕該疾患が1型糖尿病である、前記〔24〕から〔26〕のいずれか1項に記載の使用。
〔２９〕インクレチン受容体リガンドポリペプチドのアミノ酸配列及びLPXTG（配列番号：75）（Xは任意のアミノ酸である）を含むポリペプチド。
〔３０〕Xが酸性アミノ酸である、前記〔29〕に記載のポリペプチド。
〔３１〕該酸性アミノ酸がGluである、前記〔30〕に記載のポリペプチド。
〔３２〕LPETG（配列番号：74）のC-末端にGly-Gly又はGly-Gly-Ser又はGly-Gly-Gly、Gly-Gly-Gly-Ser（配列番号：88）、Gly-Gly-Gly-Gly（配列番号：85）、又はGly-Gly-Gly-Gly-Ser（配列番号：90）を含む、前記〔29〕から〔31〕のいずれか1項に記載のポリペプチド。
〔３３〕(GGGS)n（式中n＝1−6（配列番号：57−60、88及び89））、(GGGGS)m（式中m＝1−6（配列番号：61−64、90及び91））、又は(GGGGGS)o（式中o＝1−6（配列番号：65−67及び92−94））を含む、前記〔32〕に記載のポリペプチド。
〔３４〕配列番号：57−67のいずれか1つを含む、前記〔33〕に記載のポリペプチド。
〔３５〕LPXTG（配列番号：75）のN-末端にGly又はGly-Glyを含む、前記〔29〕から〔34〕のいずれか1項に記載のポリペプチド。
〔３６〕ある疾患の治療用医薬の製造における前記〔29〕から〔35〕のいずれか1項に記載のポリペプチドの使用。
〔３７〕該医薬の製造がソルターゼA及びヒトFc領域の使用を含む、前記〔36〕に記載の使用。