【手続補正書】
【提出日】平成28年7月29日(2016.7.29)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞内部位へ治療剤を送達する方法であって、
担体を含む組成物を細胞へ提供する工程であって、前記担体は、前記担体の細胞内標的化を向上させる１つまたは複数の変異を含むペントンベース（ＰＢ）ポリペプチドを含む、工程を含む、方法。
【請求項２】
前記１つまたは複数の変異を含むＰＢポリペプチドが１１１Ｃまたは３３３Ｆである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記担体が、細胞質または細胞核を標的とする、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記担体が、治療薬または遺伝子と複合体化している、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記細胞が、腫瘍細胞である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記ＰＢポリペプチドが、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９または配列番号２０による配列を含む、請求項１、４または５に記載の方法。
【請求項７】
前記１つまたは複数の変異が、Ｍｅｔ１Ｔｈｒ、Ｌｅｕ６０Ｔｒｐ、Ｌｙｓ３７５Ｇｌｕ、Ｖａｌ４４９Ｍｅｔ、またはＰｒｏ４６９Ｓｅｒを含み、アミノ酸の番号付けは野生型ペントンベース配列を参照している、請求項１、４または５に記載の方法。
【請求項８】
前記ＰＢポリペプチドがＣ末端欠失を含む、請求項１、４または５に記載の方法。
【請求項９】
前記担体が正電荷を持つドメインを含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記担体がポリリシンモチーフを含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記担体が細胞標的ドメインをさらに含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記細胞標的ドメインが哺乳動物細胞を標的とする、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記細胞標的ドメインが疾患細胞を標的とする、請求項１１または１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記細胞標的ドメインが癌細胞を標的とする、請求項１１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記細胞標的ドメインがヘレグリンまたはその変異体である、請求項１１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
細胞小器官を標的とする薬物送達分子を生成する方法であって、
ａ．ペントンベース（ＰＢ）遺伝子をコードするポリヌクレオチドを得、前記ポリヌクレオチドの変異体を生成する工程と、
ｂ．変異ポリヌクレオチドをファージベクター内でクローニングし、前記ファージベクターを含むファージライブラリーを生成する工程と、
ｃ．細胞を前記ファージライブラリーで形質転換する工程と、
ｄ．形質転換した細胞を分画し、前記形質転換した細胞から細胞小器官を収集する工程と、
ｅ．収集した細胞小器官からファージを増幅させる工程と、
ｆ．収集した前記細胞小器官から増幅させた前記ファージで細胞を形質転換する工程と、
ｇ．工程（ｄ）、（ｅ）、および（ｆ）を反復する工程と、
ｈ．各ラウンドから収集した前記細胞小器官から前記ファージを滴定する工程と、
ｉ．最も高い力価を有するファージを選択し、前記ファージから変異ポリヌクレオチドの配列を得る工程と、
ｊ．前記配列のうちの１つによってコードされる変異ポリペプチドを生成する工程と、
を含み、前記変異ポリペプチドは前記細胞小器官を標的化する薬物送達分子である、方法。
【請求項１７】
前記細胞小器官は、ミトコンドリア、ゴルジ装置、小胞体、核、リボソーム、細胞膜および細胞質ゾルからなる群から選択される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記細胞は、哺乳動物細胞である、請求項１６または１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記細胞は、非哺乳動物細胞である、請求項１６または１７に記載の方法。
【請求項２０】
変異体は、ＰＣＲベースの方法、化学変異誘発、紫外線誘導性変異誘発またはそれらの組み合わせのいずれか一つもしくは複数を使用して生成される、請求項１６〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記薬物送達分子は、標的ドメイン、エンドソーム溶解性リガンドドメインおよび正電荷を持つドメインを含む、請求項１６〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
細胞内部位へ治療剤を送達するための担体であって、細胞内標的化を向上させる１つまたは複数の変異を含むペントンベース（ＰＢ）ポリペプチドを含む、担体。
【請求項２３】
前記１つまたは複数の変異を含むＰＢポリペプチドが、１１１Ｃまたは３３３Ｆである、請求項２２に記載の担体。
【請求項２４】
前記担体が、細胞質または細胞核を標的とする、請求項２２に記載の担体。
【請求項２５】
前記ＰＢポリペプチドが、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９または配列番号２０による配列を含む、請求項２２に記載の担体。
【請求項２６】
前記１つまたは複数の変異が、Ｍｅｔ１Ｔｈｒ、Ｌｅｕ６０Ｔｒｐ、Ｌｙｓ３７５Ｇｌｕ、Ｖａｌ４４９Ｍｅｔ、またはＰｒｏ４６９Ｓｅｒを含み、アミノ酸の番号付けは野生型ペントンベース配列を参照している、請求項２２に記載の担体。
【請求項２７】
前記ＰＢポリペプチドがＣ末端欠失を含む、請求項２２に記載の担体。
【請求項２８】
前記担体が正電荷を持つドメインを含む、請求項２２〜２７のいずれか一項に記載の担体。
【請求項２９】
前記担体がポリリシンモチーフを含む、請求項２２〜２８のいずれか一項に記載の担体。
【請求項３０】
前記担体が細胞標的ドメインをさらに含む、請求項２２〜２９のいずれか一項に記載の担体。
【請求項３１】
前記細胞標的ドメインが哺乳動物細胞を標的とする、請求項３０に記載の担体。
【請求項３２】
前記細胞標的ドメインが疾患細胞を標的とする、請求項３０または３１に記載の担体。
【請求項３３】
前記細胞標的ドメインが癌細胞を標的とする、請求項３０〜３２のいずれか一項に記載の担体。
【請求項３４】
前記細胞標的ドメインがヘレグリンまたはその変異体である、請求項３０〜３３のいずれか一項に記載の担体。
【請求項３５】
治療薬または遺伝子と複合体化している、請求項３０〜３４のいずれか一項に記載の担体を含む、治療剤。
【請求項３６】
前記治療薬が、化学療法剤である、請求項３５に記載の治療剤。
【請求項３７】
増殖活性を有さない担体を生成する方法であって、
（ａ）ヘレグリン（Ｈｅｒ）の受容体結合ドメインをコードするポリヌクレオチドを得、前記ポリヌクレオチドの変異体を生成する工程と、
（ｂ）変異Ｈｅｒポリヌクレオチドをファージベクター内でクローニングし、前記ファージベクターを含むファージライブラリーを生成する工程と、
（ｃ）有糸分裂阻害剤の存在下で細胞を前記ファージライブラリーで形質転換する工程と、
（ｄ）形質転換した細胞を分画し、前記細胞の膜分画を抽出する工程と、
（ｅ）前記膜分画からファージを収集する工程と、
（ｆ）有糸分裂阻害剤の存在下で膜分画からの前記ファージを細胞内で形質転換する工程と、
（ｇ）工程（ｄ）、（ｅ）および（ｆ）を反復する工程と、
（ｈ）各ラウンドにおいて細胞の増殖をモニタし、最も低い細胞増殖を有する膜分画からのファージを選択する工程と、
（ｉ）選択した膜分画からのファージにおいてＨｅｒポリヌクレオチド変異の配列を得る工程と、
（ｊ）Ｈｅｒ配列およびペントンベース遺伝子によってコードされる変異ポリペプチドを生成する工程と、
を含み、前記変異ポリペプチドは増殖活性を有さない担体である、方法。
【請求項３８】
請求項３７に記載の方法によって形成される、治療剤を送達するための担体。
【請求項３９】
ペントンベース（ＰＢ）ポリペプチドおよびポリリシンモチーフをコードするポリペプチドをさらに含む、請求項３８に記載の担体。
【請求項４０】
前記ＰＢポリペプチドが、変異ペントンベースタンパク質である、請求項３９に記載の担体。
【請求項４１】
治療薬または遺伝子と複合体化されている、請求項３８〜４０のいずれか一項に記載の担体を含む治療剤。
【請求項４２】
前記治療薬が化学療法剤である、請求項４１に記載の治療剤。