【手続補正書】
【提出日】平成28年10月14日(2016.10.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
タンパク質をコードする外因性導入遺伝子を含む細胞であって、該外因性導入遺伝子が、ヌクレアーゼを使用して内因性セーフハーバー遺伝子に部位特異的に組み込まれ、さらに、該タンパク質が、メチルマロン酸血症、プロピオン酸血症、糖原病１型、一般的な遺伝および代謝疾患である家族性高コレステロール血症（ＦＨ）、尿素サイクル障害、クリグラー・ナジャー症候群（ＣＮＳ）、ジルベール症候群、肝腎チロシン血症、原発性高シュウ酸尿症、トランスサイレチン遺伝子（ＴＴＲ）媒介性アミロイドーシス（ＡＴＴＲ）、ウィルソン病、フェニルケトン尿症（ＰＫＵ）ならびに家族性リポタンパク質リパーゼ欠乏症（ＬＰＬＤ）からなる群から選択される代謝障害において異常に発現されるタンパク質の機能性バージョンである細胞。
【請求項２】
肝細胞、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）、造血幹細胞、肝細胞、肝幹細胞および赤血球前駆細胞からなる群から選択される、請求項１に記載の細胞。
【請求項３】
前記内因性セーフハーバー遺伝子が、ＣＣＲ５、ＨＰＲＴ、ＡＡＶＳ１、Ｒｏｓａおよびアルブミンからなる群から選択される、請求項１または請求項２に記載の細胞。
【請求項４】
前記導入遺伝子が、ＭＭＡＡ、ＭＭＡＢ、ＭＭＡＣＨＣ、ＭＭＡＤＨＣ（Ｃ２ｏｒｆ２５）、ＭＴＲＲ、ＬＭＢＲＤ１、ＭＴＲ、プロピオニル−ＣｏＡカルボキシラーゼ（ＰＣＣＡまたはＰＣＣＢ）、グルコース−６−リン酸トランスポーター（Ｇ６ＰＴ）タンパク質またはグルコース−６−ホスファターゼ（Ｇ６Ｐａｓｅ）、ＬＤＬ受容体（ＬＤＬＲ）、ＡｐｏＢタンパク質、ＬＤＬＲＡＰ−１タンパク質、ＰＣＳＫ９タンパク質、ＮＡＧＳ（Ｎ−アセチルグルタミン酸シンテターゼ）、ＣＰＳ１（カルバモイルリン酸シンテターゼＩ）およびＯＴＣ（オルニチントランスカルバミラーゼ）等のミトコンドリアタンパク質、ＡＳＳ（アルギニノコハク酸シンテターゼ）、ＡＳＬ（アルギニノコハク酸リアーゼ）および／またはＡＲＧ１（アルギナーゼ）、および／または溶質輸送体ファミリー２５（ＳＬＣ２５Ａ１３、アスパラギン酸／グルタミン酸担体）タンパク質、ＵＧＴ１Ａ１またはＵＤＰグルクロノシルトランスフェラーゼポリペプチドＡ１、フマリルアセト酢酸ヒドロリアーゼ（ＦＡＨ）、アラニン−グリオキシル酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＧＸＴ）タンパク質、グリオキシル酸レダクターゼ／ヒドロキシピルビン酸レダクターゼ（ＧＲＨＰＲ）タンパク質、トランスサイレチン遺伝子（ＴＴＲ）タンパク質、ＡＴＰ７Ｂタンパク質、フェニルアラニンヒドロキシラーゼ（ＰＡＨ）タンパク質ならびにリポタンパク質リアーゼ（ＬＰＬ）タンパク質からなる群から選択されるタンパク質をコードする、請求項１から３のいずれかに記載の細胞。
【請求項５】
前記導入遺伝子の発現が、内因性プロモーターにより駆動される、請求項１から４のいずれかに記載の細胞。
【請求項６】
前記導入遺伝子が、前記導入遺伝子の発現を駆動するプロモーター配列に作動可能に連結している、請求項１から４のいずれかに記載の細胞。
【請求項７】
前記ヌクレアーゼが、ベクター、ｍＲＮＡを介してまたはインタクトなタンパク質として前記細胞に投与されることを特徴とする、請求項１から６のいずれかに記載の細胞。
【請求項８】
請求項１から７のいずれかに記載の遺伝的に修飾された細胞を生成するための、ヌクレアーゼと前記導入遺伝子をコードするベクターとを含む組成物であって、前記組成物は、前記導入遺伝子が、前記内因性セーフハーバー遺伝子座に組み込まれるように前記細胞に投与されることを特徴とする、組成物。
【請求項９】
代謝障害を有する対象において異常に発現されるタンパク質の発現を増加させるための、請求項１から７のいずれかに記載の細胞を含む組成物であって、請求項８に記載の組成物を使用して、前記対象における細胞が修飾されることを特徴とする、組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３０】
本発明の組成物（例えば、遺伝的に修飾された細胞、ＺＦＰ、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系および／またはＴＡＬＥＮ）を含むキットも提供される。本キットは、ヌクレアーゼをコードする核酸（例えば、ＲＮＡ分子または好適な発現ベクターに含有されるヌクレアーゼコード遺伝子）、ドナー分子、好適な宿主細胞系、本発明の方法を実施するための説明書等を含むことができる。
本発明は、例えば、以下の項目も提供する。
（項目１）
タンパク質をコードする外因性導入遺伝子を含む細胞であって、該外因性導入遺伝子が、ヌクレアーゼを使用して内因性セーフハーバー遺伝子に部位特異的に組み込まれ、さらに、該タンパク質が、メチルマロン酸血症、プロピオン酸血症、糖原病１型、一般的な遺伝および代謝疾患である家族性高コレステロール血症（ＦＨ）、尿素サイクル障害、クリグラー・ナジャー症候群（ＣＮＳ）、ジルベール症候群、肝腎チロシン血症、原発性高シュウ酸尿症、トランスサイレチン遺伝子（ＴＴＲ）媒介性アミロイドーシス（ＡＴＴＲ）、ウィルソン病、フェニルケトン尿症（ＰＫＵ）ならびに家族性リポタンパク質リパーゼ欠乏症（ＬＰＬＤ）からなる群から選択される代謝障害において異常に発現されるタンパク質の機能性バージョンである細胞。
（項目２）
肝細胞、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）、造血幹細胞、肝細胞、肝幹細胞および赤血球前駆細胞からなる群から選択される、項目１に記載の細胞。
（項目３）
前記内因性セーフハーバー遺伝子が、ＣＣＲ５、ＨＰＲＴ、ＡＡＶＳ１、Ｒｏｓａおよびアルブミンからなる群から選択される、項目１または項目２に記載の細胞。
（項目４）
前記導入遺伝子が、ＭＭＡＡ、ＭＭＡＢ、ＭＭＡＣＨＣ、ＭＭＡＤＨＣ（Ｃ２ｏｒｆ２５）、ＭＴＲＲ、ＬＭＢＲＤ１、ＭＴＲ、プロピオニル−ＣｏＡカルボキシラーゼ（ＰＣＣＡまたはＰＣＣＢ）、グルコース−６−リン酸トランスポーター（Ｇ６ＰＴ）タンパク質またはグルコース−６−ホスファターゼ（Ｇ６Ｐａｓｅ）、ＬＤＬ受容体（ＬＤＬＲ）、ＡｐｏＢタンパク質、ＬＤＬＲＡＰ−１タンパク質、ＰＣＳＫ９タンパク質、ＮＡＧＳ（Ｎ−アセチルグルタミン酸シンテターゼ）、ＣＰＳ１（カルバモイルリン酸シンテターゼＩ）およびＯＴＣ（オルニチントランスカルバミラーゼ）等のミトコンドリアタンパク質、ＡＳＳ（アルギニノコハク酸シンテターゼ）、ＡＳＬ（アルギニノコハク酸リアーゼ）および／またはＡＲＧ１（アルギナーゼ）、および／または溶質輸送体ファミリー２５（ＳＬＣ２５Ａ１３、アスパラギン酸／グルタミン酸担体）タンパク質、ＵＧＴ１Ａ１またはＵＤＰグルクロノシルトランスフェラーゼポリペプチドＡ１、フマリルアセト酢酸ヒドロリアーゼ（ＦＡＨ）、アラニン−グリオキシル酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＧＸＴ）タンパク質、グリオキシル酸レダクターゼ／ヒドロキシピルビン酸レダクターゼ（ＧＲＨＰＲ）タンパク質、トランスサイレチン遺伝子（ＴＴＲ）タンパク質、ＡＴＰ７Ｂタンパク質、フェニルアラニンヒドロキシラーゼ（ＰＡＨ）タンパク質ならびにリポタンパク質リアーゼ（ＬＰＬ）タンパク質からなる群から選択されるタンパク質をコードする、項目１から３のいずれかに記載の細胞。
（項目５）
前記導入遺伝子の発現が、内因性プロモーターにより駆動される、項目１から４のいずれかに記載の細胞。
（項目６）
前記導入遺伝子が、前記導入遺伝子の発現を駆動するプロモーター配列に作動可能に連結している、項目１から４のいずれかに記載の細胞。
（項目７）
前記ヌクレアーゼが、ベクター、ｍＲＮＡを介してまたはインタクトなタンパク質として前記細胞に投与される、項目１から６のいずれかに記載の方法。
（項目８）
前記導入遺伝子が、前記内因性セーフハーバー遺伝子座に組み込まれるように、ヌクレアーゼおよび前記導入遺伝子をコードするベクターを前記細胞に投与することを含む、項目１から７のいずれかに記載の遺伝的に修飾された細胞を生成する方法。
（項目９）
項目８に記載の対象における細胞を修飾することを含む、代謝障害を有する対象において異常に発現されるタンパク質の発現を増加させる方法。