【手続補正書】
【提出日】平成28年3月15日(2016.3.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
遺伝子改変された非ヒト動物であって、該非ヒト動物は、
（ｉ）少なくとも１つのヒスチジンコドンの挿入または少なくとも１つの非ヒスチジンコドンのヒスチジンコドンによる置換を含む、再構成されていない免疫グロブリン可変領域配列を含む第一の免疫グロブリン可変領域遺伝子の遺伝子座であって、該ヒスチジンコドンは、対応する野生型生殖細胞系列遺伝子セグメントによってコードされない、遺伝子座、ならびに／あるいは
（ｉｉ）少なくとも１つのヒスチジンコドンの挿入または少なくとも１つの非ヒスチジンコドンのヒスチジンコドンによる置換を含む、免疫グロブリン可変領域配列を含む第二の免疫グロブリン可変領域遺伝子の遺伝子座、
のいずれかまたは両方をその生殖細胞系列に含み、
該挿入または置換されたヒスチジンコドンが、対応する野生型生殖細胞系列遺伝子セグメントによってコードされず、該非ヒト動物は、該非ヒト動物の生殖細胞系列におけるヒスチジン置換またはヒスチジン挿入に由来するヒスチジンを含む、免疫グロブリン重鎖可変ドメインおよび／または免疫グロブリン軽鎖可変ドメインを発現する、非ヒト動物。
【請求項２】
定常領域遺伝子配列に作動可能に連結された再構成されていないヒト免疫グロブリン重鎖可変領域の核酸配列（再構成されていないＶセグメント、Ｄセグメント、Ｊセグメント）の少なくとも一部分を含む第一の可変領域遺伝子の遺伝子座であって、該Ｖ遺伝子セグメント、Ｄ遺伝子セグメント、およびＪ遺伝子セグメントのうちの１つまたは複数が、少なくとも１カ所の非ヒスチジンコドンのヒスチジンコドンによる置換、または少なくとも１カ所のヒスチジンコドンの挿入を含み、該再構成されていないヒト免疫グロブリン重鎖可変領域の核酸配列の該ヒスチジンコドンは、対応するヒト生殖細胞系列遺伝子セグメントによってコードされない、第一の可変領域遺伝子の遺伝子座と；
定常領域遺伝子配列に作動可能に連結された再構成されていないヒト免疫グロブリン軽鎖可変領域の核酸配列（再構成されていないＶセグメント、Ｊセグメント）の少なくとも一部分を含む第二の可変領域遺伝子の遺伝子座であって、該Ｖ遺伝子セグメントおよびＪ遺伝子セグメントのうちの１つまたは複数が、少なくとも１カ所の非ヒスチジンコドンのヒスチジンコドンによる置換、または少なくとも１カ所のヒスチジンコドンの挿入を含み、該再構成されていないヒト免疫グロブリン軽鎖可変領域の核酸配列の該ヒスチジンコドンは、対応するヒト生殖細胞系列遺伝子セグメントによってコードされない、第二の可変領域遺伝子の遺伝子座と
を含み、
マウスの生殖細胞系列におけるヒスチジン置換またはヒスチジン挿入に由来するヒスチジンを含む、免疫グロブリン重鎖可変ドメインおよび／または免疫グロブリン軽鎖可変ドメインを発現する、遺伝子改変された非ヒト動物。
【請求項３】
定常領域遺伝子配列に作動可能に連結された再構成されていないヒト免疫グロブリン重鎖可変領域の核酸配列（再構成されていないＶセグメント、Ｄセグメント、Ｊセグメント
）の少なくとも一部分を含む第一の可変領域遺伝子の遺伝子座であって、該再構成されていないＶ遺伝子セグメント、Ｄ遺伝子セグメント、およびＪ遺伝子セグメントのうちの１つまたは複数が、少なくとも１カ所の非ヒスチジンコドンのヒスチジンコドンによる置換、または少なくとも１カ所のヒスチジンコドンの挿入を含み、該再構成されていないヒト免疫グロブリン重鎖可変領域の核酸配列の該ヒスチジンコドンは、対応するヒト生殖細胞系列遺伝子セグメントによってコードされない、第一の可変領域遺伝子の遺伝子座と；
軽鎖定常領域遺伝子配列に作動可能に連結された再構成されたヒト免疫グロブリン軽鎖可変領域の核酸配列（再構成されたＶＪ配列）を含む第二の可変領域遺伝子の遺伝子座であって、該再構成されたＶＪ配列が、少なくとも１カ所の非ヒスチジンコドンのヒスチジンコドンによる置換、または少なくとも１カ所のヒスチジンコドンの挿入を含み、該再構成されたヒト免疫グロブリン軽鎖可変領域の核酸配列の該ヒスチジンコドンは、対応するヒト生殖細胞系列遺伝子セグメントによってコードされない、第二の可変領域遺伝子の遺伝子座と
を含み、
マウスの生殖細胞系列におけるヒスチジン置換またはヒスチジン挿入に由来するヒスチジンを含む、免疫グロブリン重鎖可変ドメインおよび／または免疫グロブリン軽鎖可変ドメインを発現する、遺伝子改変された非ヒト動物。
【請求項４】
前記第一の可変領域遺伝子の遺伝子座および前記第二の可変領域遺伝子の遺伝子座の両方が各々、少なくとも１つの非ヒスチジンコドンのヒスチジンコドンによる置換または挿入を含む、請求項１に記載の非ヒト動物。
【請求項５】
前記第一の可変領域遺伝子の遺伝子座が、再構成されていない重鎖可変遺伝子座（再構成されていないＶセグメント、Ｄセグメント、Ｊセグメント）の少なくとも１つの機能性部分を含む、請求項１または４に記載の非ヒト動物。
【請求項６】
前記再構成されていない重鎖可変遺伝子座が、再構成されていないヒト可変領域遺伝子の遺伝子座（再構成されていないＶセグメント、Ｄセグメント、Ｊセグメント）の少なくとも一部分を含む、請求項５に記載の非ヒト動物。
【請求項７】
前記再構成されていない重鎖遺伝子座が、再構成されていないＶセグメント、リンカーを含む合成Ｄセグメント、およびヒトＪセグメントを含むヒト遺伝子座である、請求項２または５に記載の非ヒト動物。
【請求項８】
前記合成Ｄセグメントが、少なくとも１つのヒスチジンコドンを含む、請求項７に記載の非ヒト動物。
【請求項９】
前記第二の可変遺伝子座が、再構成されていない軽鎖遺伝子座（再構成されていないＶセグメント、Ｊセグメント）の少なくとも１つの機能性部分を含む、請求項１および４〜８のいずれか一項に記載の非ヒト動物。
【請求項１０】
前記再構成された軽鎖遺伝子座が、２つ以下の再構成されたＶセグメントを含む、請求項９に記載の非ヒト動物。
【請求項１１】
前記第二の可変遺伝子座が、再構成された免疫グロブリン軽鎖可変遺伝子配列（再構成されたＶＪ配列）を含む、請求項１および４〜８のいずれか一項に記載の非ヒト動物。
【請求項１２】
非ヒスチジンコドンのヒスチジンコドンによる前記置換および／またはヒスチジンコドンの前記挿入が、可変ドメインをコードする核酸配列においてであり、ヒスチジンが、免疫グロブリン鎖のＮ末端領域、免疫グロブリン鎖のループ４領域、重鎖のＣＤＲ１、重鎖のＣＤＲ２、重鎖のＣＤＲ３、軽鎖のＣＤＲ１、軽鎖のＣＤＲ２、軽鎖のＣＤＲ３、およびこれらの組合せから選択される領域にある、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の非ヒト動物。
【請求項１３】
前記第一の可変遺伝子座または前記第二の可変遺伝子座のうちの少なくとも１つが、内因性非ヒト免疫グロブリン遺伝子座において、内因性非ヒト定常領域の核酸配列に作動可能に連結された、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の非ヒト動物。
【請求項１４】
前記第一の可変遺伝子座が、内因性非ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域の核酸配列に作動可能に連結された、再構成されていないヒトＶセグメント、ヒトＤセグメント、ヒトＪセグメントを含む、請求項１３に記載の非ヒト動物。
【請求項１５】
再構成されていないヒトＶセグメント、ヒトＤセグメント、ヒトＪセグメントを含む前記第一の可変遺伝子座が、内因性非ヒト免疫グロブリン遺伝子座において、前記内因性非ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域の核酸配列に作動可能に連結された、請求項１４に記載の非ヒト動物。
【請求項１６】
前記第二の可変遺伝子座（再構成されていないＶセグメント、Ｊセグメント）が、内因性非ヒト免疫グロブリン軽鎖定常領域配列に作動可能に連結された、請求項１、２、４〜１０および１２〜１５のいずれか一項に記載の非ヒト動物。
【請求項１７】
前記内因性非ヒト免疫グロブリン軽鎖定常領域配列が、内因性非ヒト免疫グロブリン遺伝子座にある、請求項１６に記載の非ヒト動物。
【請求項１８】
哺乳動物である、請求項１〜１７のいずれかに記載の遺伝子改変された非ヒト動物。
【請求項１９】
齧歯動物である、請求項１８に記載の遺伝子改変された哺乳動物。
【請求項２０】
マウス、ラット、およびハムスターからなる群から選択される、請求項１９に記載の齧歯動物。
【請求項２１】
野生型の非ヒト動物と比較した、Ｂ細胞集団の免疫グロブリン重鎖におけるおよび免疫グロブリン軽鎖におけるヒスチジン残基の存在の増強を特徴とするＢ細胞集団をさらに含む、請求項１〜２０のいずれかに記載の非ヒト動物。
【請求項２２】
前記増強が、約２〜４倍である、請求項２１に記載の遺伝子改変された非ヒト動物。
【請求項２３】
前記増強が、約２〜１０倍である、請求項２１に記載の遺伝子改変された非ヒト動物。
【請求項２４】
前記非ヒト動物の生殖細胞系列の免疫グロブリン配列における置換および／または挿入によりコードされるヒスチジンを含む、免疫グロブリン軽鎖および免疫グロブリン重鎖をさらに含む、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の遺伝子改変された非ヒト動物。
【請求項２５】
前記可変領域配列が、ヒスチジンコドンによる非ヒスチジンコドンの置換および／またはヒスチジンコドンの挿入である、２つ、３つ、４つ、または５つのヒスチジンによるクラスターを含む、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の遺伝子改変された非ヒト動物。
【請求項２６】
前記再構成されていない重鎖遺伝子座が、前記重鎖遺伝子座の配向の方向に対して反転されたＤ遺伝子セグメントを含む、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の遺伝子改変された非ヒト動物。
【請求項２７】
非ヒト動物を作製するための方法であって、
該非ヒト動物を、その生殖細胞系列において、少なくとも１カ所のヒスチジンコドンによる非ヒスチジンコドンの置換またはヒスチジンコドンの挿入を、再構成されていない免疫グロブリン重鎖可変（再構成されていないＶセグメント、Ｄセグメント、Ｊセグメント）遺伝子座に含むように改変するステップであって、該再構成されていない免疫グロブリン重鎖可変遺伝子座の該ヒスチジンコドンが、対応する野生型生殖細胞系列遺伝子セグメントによってコードされない、ステップと、および／または
該非ヒト動物を、その生殖細胞系列において、少なくとも１カ所のヒスチジンコドンによる非ヒスチジンコドンの置換またはヒスチジンコドンの挿入を、再構成されていない免疫グロブリン軽鎖可変（再構成されていないＶセグメント、Ｊセグメント）遺伝子座に含むように改変するステップであって、該再構成されていない免疫グロブリン軽鎖可変遺伝子座の該ヒスチジンコドンが、対応する野生型生殖細胞系列遺伝子セグメントによってコードされない、ステップと
を含む方法。
【請求項２８】
マウスの生殖細胞系列を、再構成されていないヒト免疫グロブリン重鎖可変（Ｖセグメント、Ｄセグメント、Ｊセグメント）遺伝子座の少なくとも一部分を含むように遺伝子改変するステップと、ヒスチジン置換またはヒスチジン挿入を、該再構成されていない免疫グロブリン重鎖可変（再構成されていないＶセグメント、Ｄセグメント、Ｊセグメント）ヒト遺伝子座に施すステップとを含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
マウスの生殖細胞系列を、再構成されていないヒト免疫グロブリン軽鎖（再構成されていないＶセグメント、Ｊセグメント）遺伝子座の少なくとも一部分を含むように遺伝子改変するステップと、ヒスチジン置換またはヒスチジン挿入を、該再構成されていないヒト免疫グロブリン軽鎖遺伝子座に施すステップとを含む、請求項２７または２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記非ヒト動物が、齧歯動物である、請求項２７〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
前記齧歯動物が、マウス、ラット、およびハムスターから選択される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
非ヒト動物を作製するための方法であって、
該非ヒト動物を、少なくとも１カ所のヒスチジンコドンによる非ヒスチジンコドンの置換またはヒスチジンコドンの挿入を、再構成されていない免疫グロブリン重鎖可変（再構成されていないＶセグメント、Ｄセグメント、Ｊセグメント）遺伝子座に含むように改変するステップであって、該再構成されていない免疫グロブリン重鎖可変遺伝子座の該ヒスチジンコドンが、対応する野生型生殖細胞系列遺伝子セグメントによってコードされない、ステップと、および／または
該非ヒト動物を、少なくとも１カ所のヒスチジンコドンによる非ヒスチジンコドンの置換またはヒスチジンコドンの挿入を、該生殖細胞系列における再構成された免疫グロブリン軽鎖可変配列（再構成されたＶＪ配列）に含むように改変するステップであって、該再構成された免疫グロブリン軽鎖可変配列に含まれる該ヒスチジンコドンが、対応する野生型生殖細胞系列遺伝子セグメントによってコードされない、ステップと
を含む方法。
【請求項３３】
前記非ヒト動物が、齧歯動物である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記齧歯動物が、マウス、ラット、およびハムスターから選択される、請求項３３に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０５８８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０５８８】
様々な実施形態では、本明細書に記載されている、遺伝子改変された免疫グロブリン遺伝子座は、非ヒト動物、例えば、哺乳動物、例えば、齧歯動物、例えば、マウス、ラット、またはハムスターの生殖細胞系列ゲノムに存在する。
特定の実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
少なくとも１つの非ヒスチジンコドンのヒスチジンコドンによる置換または挿入を免疫グロブリン可変遺伝子座に含む、免疫グロブリン遺伝子座をその生殖細胞系列に含む、遺伝子改変された非ヒト動物であって、該ヒスチジンコドンは、対応する野生型生殖細胞系列遺伝子セグメントによってコードされない。非ヒト動物。
（項目２）
第一の可変遺伝子座および第二の可変遺伝子座を含み、少なくとも該第一の可変遺伝子座または該第二の可変遺伝子座は、少なくとも１つのヒスチジンコドンの挿入または少なくとも１つの非ヒスチジンコドンのヒスチジンコドンによる置換を含む、項目１に記載の非ヒト動物。
（項目３）
前記第一の可変遺伝子座および前記第二の可変遺伝子座の両方が各々、少なくとも１つの非ヒスチジンコドンのヒスチジンコドンによる置換または挿入を含む、項目２に記載の非ヒト動物。
（項目４）
前記第一の可変遺伝子座が、再構成されていない重鎖可変遺伝子座（再構成されていないＶセグメント、Ｄセグメント、Ｊセグメント）の少なくとも１つの機能性部分を含む、項目３に記載の非ヒト動物。
（項目５）
前記再構成されていない重鎖可変遺伝子座が、ヒト遺伝子座（再構成されていないＶセグメント、Ｄセグメント、Ｊセグメント）の少なくとも一部分を含む、項目４に記載の非ヒト動物。
（項目６）
前記再構成されていない重鎖遺伝子座が、再構成されていないＶセグメント、リンカーを含む合成Ｄセグメント、およびヒトＪセグメントを含むヒト遺伝子座である、項目４に記載の非ヒト動物。
（項目７）
前記合成Ｄセグメントが、少なくとも１つのヒスチジンコドンを含む、項目６に記載の非ヒト動物。
（項目８）
前記第二の可変遺伝子座が、再構成されていない軽鎖遺伝子座（再構成されていないＶセグメント、Ｊセグメント）の少なくとも１つの機能性部分を含む、項目３に記載の非ヒト動物。
（項目９）
前記第二の可変遺伝子座が、再構成された免疫グロブリン軽鎖可変遺伝子配列（再構成されたＶＪ配列）を含む、項目４に記載の非ヒト動物。
（項目１０）
非ヒスチジンコドンのヒスチジンコドンによる前記置換および／またはヒスチジンコドンの前記挿入が、可変ドメインをコードする核酸配列においてであり、ヒスチジンが、免疫グロブリン鎖のＮ末端領域、免疫グロブリン鎖のループ４領域、重鎖のＣＤＲ１、重鎖のＣＤＲ２、重鎖のＣＤＲ３、軽鎖のＣＤＲ１、軽鎖のＣＤＲ２、軽鎖のＣＤＲ３、およびこれらの組合せから選択される領域にある、項目１に記載の非ヒト動物。
（項目１１）
前記第一の可変遺伝子座または前記第二の可変遺伝子座のうちの少なくとも１つが、内因性非ヒト免疫グロブリン遺伝子座において、内因性非ヒト定常領域の核酸配列に作動可能に連結された、項目２に記載の非ヒト動物。
（項目１２）
前記第一の可変遺伝子座（再構成されていないヒトＶセグメント、ヒトＤセグメント、ヒトＪセグメント）が、内因性非ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域の核酸配列に作動可能に連結された、項目５に記載の非ヒト動物。
（項目１３）
前記第一の可変遺伝子座（再構成されていないヒトＶセグメント、ヒトＤセグメント、ヒトＪセグメント）が、内因性非ヒト免疫グロブリン遺伝子座において、前記内因性非ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域の核酸配列に作動可能に連結された、項目１２に記載の非ヒト動物。
（項目１４）
前記第二の可変遺伝子座（再構成されていないＶセグメント、Ｊセグメント）が、内因性非ヒト免疫グロブリン軽鎖定常領域配列に作動可能に連結された、項目６に記載の非ヒト動物。
（項目１５）
前記内因性非ヒト免疫グロブリン軽鎖定常領域配列が、内因性非ヒト免疫グロブリン遺伝子座にある、項目１４に記載の非ヒト動物。
（項目１６）
定常領域遺伝子配列に作動可能に連結された再構成されていないヒト免疫グロブリン重鎖可変領域の核酸配列（再構成されていないＶセグメント、Ｄセグメント、Ｊセグメント）の少なくとも一部分であって、該Ｖ遺伝子セグメント、Ｄ遺伝子セグメント、およびＪ遺伝子セグメントのうちの１つまたは複数が、少なくとも１カ所の非ヒスチジンコドンのヒスチジンコドンによる置換、または少なくとも１カ所のヒスチジンコドンの挿入を含み、該再構成されていないヒト免疫グロブリン重鎖可変領域の核酸配列の該ヒスチジンコドンは、対応するヒト生殖細胞系列遺伝子セグメントによってコードされない、再構成されていないヒト免疫グロブリン重鎖可変領域の核酸配列の少なくとも一部分と；
定常領域遺伝子配列に作動可能に連結された再構成されていないヒト免疫グロブリン軽鎖可変領域の核酸配列（再構成されていないＶセグメント、Ｊセグメント）の少なくとも一部分であって、該Ｖ遺伝子セグメントおよびＪ遺伝子セグメントのうちの１つまたは複数が、少なくとも１カ所の非ヒスチジンコドンのヒスチジンコドンによる置換、または少なくとも１カ所のヒスチジンコドンの挿入を含み、該再構成されていないヒト免疫グロブリン軽鎖可変領域の核酸配列の該ヒスチジンコドンは、対応するヒト生殖細胞系列遺伝子セグメントによってコードされない、再構成されていないヒト免疫グロブリン軽鎖可変領域の核酸配列の少なくとも一部分と
を含み、
マウスの生殖細胞系列におけるヒスチジン置換またはヒスチジン挿入に由来するヒスチジンを含む、免疫グロブリン重鎖可変ドメインおよび／または免疫グロブリン軽鎖可変ドメインを発現する、遺伝子改変された非ヒト動物。
（項目１７）
哺乳動物である、項目１６に記載の遺伝子改変された非ヒト動物。
（項目１８）
齧歯動物である、項目１７に記載の遺伝子改変された哺乳動物。
（項目１９）
マウス、ラット、およびハムスターからなる群から選択される、項目１８に記載の齧歯動物。
（項目２０）
前記再構成されていないヒト免疫グロブリン重鎖可変領域の核酸配列が、非ヒト定常領域配列に作動可能に連結された、項目１６に記載の遺伝子改変された非ヒト動物。
（項目２１）
前記再構成されていないヒト免疫グロブリン重鎖可変領域の核酸配列に作動可能に連結された前記非ヒト定常領域核酸配列が、前記非ヒト動物の生殖細胞系列における内因性非ヒト免疫グロブリン遺伝子座にある、項目２０に記載の遺伝子改変された非ヒト動物。
（項目２３）
前記再構成されていないヒト免疫グロブリン軽鎖可変領域の核酸配列に作動可能に連結された前記非ヒト定常領域核酸配列が、前記非ヒト動物の生殖細胞系列における内因性非ヒト免疫グロブリン遺伝子座にある、項目１６に記載の遺伝子改変された非ヒト動物。
（項目２４）
定常領域遺伝子配列に作動可能に連結された再構成されていないヒト免疫グロブリン重鎖可変領域の核酸配列（再構成されていないＶセグメント、Ｄセグメント、Ｊセグメント）の少なくとも一部分であって、該再構成されていないＶ遺伝子セグメント、Ｄ遺伝子セグメント、およびＪ遺伝子セグメントのうちの１つまたは複数が、少なくとも１カ所の非ヒスチジンコドンのヒスチジンコドンによる置換、または少なくとも１カ所のヒスチジンコドンの挿入を含み、該再構成されていないヒト免疫グロブリン重鎖可変領域の核酸配列の該ヒスチジンコドンは、対応するヒト生殖細胞系列遺伝子セグメントによってコードされない、再構成されていないヒト免疫グロブリン重鎖可変領域の核酸配列の少なくとも一部分と；
軽鎖定常領域遺伝子配列に作動可能に連結された再構成されたヒト免疫グロブリン軽鎖可変領域の核酸配列（再構成されたＶＪ配列）であって、該再構成されたＶＪ配列が、少なくとも１カ所の非ヒスチジンコドンのヒスチジンコドンによる置換、または少なくとも１カ所のヒスチジンコドンの挿入を含み、該再構成されたヒト免疫グロブリン軽鎖可変領域の核酸配列の該ヒスチジンコドンは、対応するヒト生殖細胞系列遺伝子セグメントによってコードされない、再構成されたヒト免疫グロブリン軽鎖可変領域の核酸配列と
を含み、
マウスの生殖細胞系列におけるヒスチジン置換またはヒスチジン挿入に由来するヒスチジンを含む、免疫グロブリン重鎖可変ドメインおよび／または免疫グロブリン軽鎖可変ドメインを発現する、遺伝子改変された非ヒト動物。
（項目２５）
哺乳動物である、項目２４に記載の遺伝子改変された非ヒト動物。
（項目２６）
齧歯動物である、項目２５に記載の遺伝子改変された哺乳動物。
（項目２７）
マウス、ラット、およびハムスターからなる群から選択される、項目２６に記載の齧歯動物。
（項目２８）
前記再構成されていないヒト免疫グロブリン重鎖可変領域の核酸配列が、非ヒト定常領域配列に作動可能に連結された、項目２４に記載の遺伝子改変された非ヒト動物。
（項目２９）
前記再構成されていないヒト免疫グロブリン重鎖可変領域の核酸配列に作動可能に連結された前記非ヒト定常領域配列が、前記非ヒト動物の生殖細胞系列における内因性非ヒト免疫グロブリン遺伝子座にある、項目２８に記載の遺伝子改変された非ヒト動物。
（項目３０）
前記再構成されたヒト免疫グロブリン軽鎖可変領域の核酸配列に作動可能に連結された前記非ヒト定常領域配列が、前記非ヒト動物の生殖細胞系列における内因性非ヒト免疫グロブリン遺伝子座にある、項目２９に記載の遺伝子改変された非ヒト動物。
（項目３１）
遺伝子改変された非ヒト動物であって、
その生殖細胞系列に、
免疫グロブリン重鎖遺伝子での非ヒスチジンコドンのヒスチジンコドンによる少なくとも１カ所の挿入または少なくとも１カ所の置換であって、該免疫グロブリン重鎖遺伝子座の該ヒスチジンコドンが、対応する生殖細胞系列遺伝子セグメントによってコードされない、挿入または置換、および
免疫グロブリン軽鎖遺伝子での非ヒスチジンコドンのヒスチジンコドンによる少なくとも１カ所の挿入または少なくとも１カ所の置換であって、該免疫グロブリン軽鎖遺伝子座の該ヒスチジンコドンが、対応する生殖細胞系列遺伝子セグメントによってコードされない、挿入または置換、および
野生型の非ヒト動物と比較した、Ｂ細胞集団の免疫グロブリン重鎖におけるおよび免疫グロブリン軽鎖におけるヒスチジン残基の存在の増強を特徴とするＢ細胞集団
を含む、遺伝子改変された非ヒト動物。
（項目３２）
前記増強が、約２〜４倍である、項目３１に記載の遺伝子改変された非ヒト動物。
（項目３３）
前記増強が、約２〜１０倍である、項目３１に記載の遺伝子改変された非ヒト動物。
（項目３４）
非ヒト動物の生殖細胞系列の免疫グロブリン配列における置換および／または挿入によりコードされるヒスチジンを含む、免疫グロブリン軽鎖および免疫グロブリン重鎖を発現する、遺伝子改変された非ヒト動物。
（項目３５）
前記可変領域配列が、ヒスチジンコドンによる非ヒスチジンコドンの置換および／またはヒスチジンコドンの挿入である、２つ、３つ、４つ、または５つのヒスチジンによるクラスターを含む、項目１に記載の遺伝子改変された非ヒト動物。
（項目３６）
前記再構成されていない重鎖遺伝子座が、前記重鎖遺伝子座の配向の方向に対して反転されたＤ遺伝子セグメントを含む、項目５に記載の遺伝子改変された非ヒト動物。
（項目３７）
生殖細胞系列のヒスチジンコドンによりコードされるヒスチジンを有する抗体可変ドメインを作製する非ヒト動物を作製するための方法であって、
該非ヒト動物を、その生殖細胞系列において、少なくとも１カ所のヒスチジンコドンによる非ヒスチジンコドンの置換またはヒスチジンコドンの挿入を、再構成されていない免疫グロブリン重鎖可変（再構成されていないＶセグメント、Ｄセグメント、Ｊセグメント）遺伝子座に含むように改変するステップであって、該再構成されていない免疫グロブリン重鎖可変遺伝子座の該ヒスチジンコドンが、対応する野生型生殖細胞系列遺伝子セグメントによってコードされない、ステップと、
該非ヒト動物を、その生殖細胞系列において、少なくとも１カ所のヒスチジンコドンによる非ヒスチジンコドンの置換またはヒスチジンコドンの挿入を、再構成されていない免疫グロブリン軽鎖可変（再構成されていないＶセグメント、Ｊセグメント）遺伝子座に含むように改変するステップであって、該再構成されていない免疫グロブリン軽鎖可変遺伝子座の該ヒスチジンコドンが、対応する野生型生殖細胞系列遺伝子セグメントによってコードされない、ステップと
を含む方法。
（項目３８）
マウスの生殖細胞系列を、再構成されていないヒト免疫グロブリン重鎖可変（Ｖセグメント、Ｄセグメント、Ｊセグメント）遺伝子座の少なくとも一部分を含むように遺伝子改変するステップと、ヒスチジン置換またはヒスチジン挿入を、該再構成されていない免疫グロブリン重鎖可変（再構成されていないＶセグメント、Ｄセグメント、Ｊセグメント）ヒト遺伝子座に施すステップとを含む、項目３７に記載の方法。
（項目３９）
マウスの生殖細胞系列を、再構成されていないヒト免疫グロブリン軽鎖（再構成されていないＶセグメント、Ｊセグメント）遺伝子座の少なくとも一部分を含むように遺伝子改変するステップと、ヒスチジン置換またはヒスチジン挿入を、該再構成されていないヒト免疫グロブリン軽鎖遺伝子座に施すステップとを含む、項目３７に記載の方法。
（項目４０）
前記非ヒト動物が、齧歯動物である、項目３７に記載の方法。
（項目４１）
前記齧歯動物が、マウス、ラット、およびハムスターから選択される、項目４０に記載の方法。
（項目４２）
生殖細胞系列のヒスチジンコドンによりコードされるヒスチジンを有する抗体可変ドメインを作製する非ヒト動物を作製するための方法であって、
該非ヒト動物を、少なくとも１カ所のヒスチジンコドンによる非ヒスチジンコドンの置換またはヒスチジンコドンの挿入を、再構成されていない免疫グロブリン重鎖可変（再構成されていないＶセグメント、Ｄセグメント、Ｊセグメント）遺伝子座に含むように改変するステップであって、該再構成されていない免疫グロブリン重鎖可変遺伝子座の該ヒスチジンコドンが、対応する野生型生殖細胞系列遺伝子セグメントによってコードされない、ステップと、
該非ヒト動物を、少なくとも１カ所のヒスチジンコドンによる非ヒスチジンコドンの置換またはヒスチジンコドンの挿入を、該生殖細胞系列における再構成された免疫グロブリン軽鎖可変配列（再構成されたＶＪ配列）に含むように改変するステップであって、該再構成された免疫グロブリン軽鎖可変配列に含まれる該ヒスチジンコドンが、対応する野生型生殖細胞系列遺伝子セグメントによってコードされない、ステップと
を含む方法。
（項目４３）
前記非ヒト動物が、齧歯動物である、項目４２に記載の方法。
（項目４４）
前記齧歯動物が、マウス、ラット、およびハムスターから選択される、項目４３に記載の方法。