【手続補正書】
【提出日】平成28年6月21日(2016.6.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
１つまたは複数のｍｉＲ−１５ファミリーメンバーのヌクレオチド配列と実質的に相補的であるオリゴヌクレオチドであって、該オリゴヌクレオチドが、５’−ＡＣＣＡＴＴＡＴＧＴＧＣＴＧＣＴ−３’（配列番号１）、５’−ＡＴＡＴＴＴＡＣＧＴＧＣＴＧＣＴ−３’（配列番号３）、および５’−ＡＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＴＧＣＴ−３’（配列番号４）から選択されるヌクレオチド配列を含み、少なくとも１位、５位、８位、１０位、および１６位にロックドヌクレオチドを有する、オリゴヌクレオチド。
【請求項２】
前記１つまたは複数のｍｉＲ−１５ファミリーメンバーがｍｉＲ−１５ａ、ｍｉＲ−１５ｂ、ｍｉＲ−１６、ｍｉＲ−１９５、ｍｉＲ−４２４、およびｍｉＲ−４９７から選択される、請求項１に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項３】
少なくとも８つのロックドヌクレオチドを含有する、請求項１または２に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項４】
９つのロックドヌクレオチドおよび／または７つの非ロックドヌクレオチドを含有する、請求項１または２に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項５】
前記１つまたは複数のｍｉＲ−１５ファミリーメンバーのシード領域と相補的な領域が、少なくとも４つのロックドヌクレオチドを含む、請求項１から４のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項６】
３つより多く連続した非ロックドヌクレオチドおよび／または３つより多く連続したロックドヌクレオチドを有するひと続きのヌクレオチドを含有しない、請求項１から５のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項７】
少なくとも１つの非ロックドヌクレオチドが２’デオキシ、２’−Ｏ−メチル、２’−Ｏ−アルキル、２’−ハロ、および２’−フルオロヌクレオチドから選択される、請求項１から６のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項８】
少なくとも１つの非ロックドヌクレオチドが２’デオキシである、請求項７に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項９】
非ロックドヌクレオチドの全てが２’デオキシである、請求項８に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項１０】
前記ロックドヌクレオチドがエチレン基またはメチレン基を含む２’−４’架橋を有する、請求項１から９のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項１１】
前記ロックドヌクレオチドが２’−４’メチレン架橋を有する、請求項１０に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項１２】
５’および／または３’キャップ構造を有する、請求項１から１１のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項１３】
１つまたは複数のホスホロチオエート結合を含有する、請求項１から１２のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項１４】
完全にホスホロチオエート結合している、請求項１３に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項１５】
１つ〜３つのリン酸結合を有する、請求項１３に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項１６】
化合物Ｍ−１０６７０、Ｍ−１１２０６、Ｍ−１１２０７、Ｍ−１１２０８、Ｍ−１１２０９、Ｍ−１１２１０、Ｍ−１１２１１、Ｍ−１１２１２、Ｍ−１１２１３、Ｍ−１１２１４、またはＭ−１１２１５の構造を有する、請求項１に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項１７】
ペンダント親油基をさらに含む、請求項１から１６のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項１８】
有効量の請求項１から１７のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド、または薬学的に許容されるその塩、および薬学的に許容される担体または希釈剤を含む医薬組成物。
【請求項１９】
前記薬学的に許容される担体が、コロイド分散系、高分子複合体、ナノカプセル、ミクロスフェア、ビーズ、水中油エマルション、ミセル、混合ミセル、またはリポソームを含む、請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
前記薬学的に許容される担体または希釈剤が、生理食塩水から本質的になる、請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
細胞における１つまたは複数のｍｉＲ−１５ファミリーメンバーの活性を低下させまたは阻害するための、請求項１から１７のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチドを含む組成物または請求項１８から２０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
前記細胞が哺乳動物細胞である、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２３】
前記細胞が心臓細胞である、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２４】
前記細胞がｉｎ  ｖｉｖｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏにある、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２５】
対象における１つまたは複数のｍｉＲ−１５ファミリーメンバーに付随するまたはそれによって媒介される状態を予防または処置するための、請求項１８から２０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２６】
前記医薬組成物が、非経口投与することによって、または心臓組織に直接注射することによって投与される、請求項２５に記載の医薬組成物。
【請求項２７】
前記非経口投与が静脈内投与、皮下投与、腹腔内投与、または筋肉内投与である、請求項２６に記載の医薬組成物。
【請求項２８】
前記組成物が、経口投与、経皮投与、持続放出投与、制御放出投与、遅延放出投与、坐薬投与、カテーテル投与、または舌下投与によって投与される、請求項２５から２７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２９】
前記状態が心臓の状態である、請求項２５から２８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項３０】
前記心臓の状態が病的心肥大、心筋梗塞、心不全、虚血、または虚血再灌流傷害である、請求項２９に記載の医薬組成物。
【請求項３１】
前記心臓の状態が心臓移植に付随するものである、請求項２９に記載の医薬組成物。
【請求項３２】
前記対象がヒトである、請求項２５から３１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２１】
さらに他の態様では、本発明は、例えば、哺乳動物対象における状態の進行を処置する、好転させる、または予防するために、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏのいずれかでオリゴヌクレオチドおよび医薬組成物を哺乳動物細胞に送達するための方法を提供する。当該方法は、オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチドを含む組成物を、Ｐｉｍ１の標的抑制解除のために有効な用量で標的細胞の集団または哺乳動物対象に投与することを含んでよい。対象は、１つまたは複数のｍｉＲ−１５ファミリーメンバーの発現に付随する、それによって媒介される、またはそれによって生じる状態を有してよい。そのような状態としては、例えば、心肥大、心筋梗塞、心不全（例えば、うっ血性心不全）、虚血、虚血再灌流傷害、血管損傷、再狭窄、病的心臓線維症、または心臓移植に付随する状態が挙げられる。したがって、本発明は、そのような状態を処置するため、およびそのような処置用の医薬を調製するための、修飾されたオリゴヌクレオチドおよび組成物の使用を提供する。
本発明は、例えば、以下の項目も提供する。
（項目１）
少なくとも１つのロックドヌクレオチドを含有するオリゴヌクレオチドであって、
該ヌクレオチドが、ヌクレオチド配列５’−ＧＴＧＣＴＧＣＴ−３’を含み、１つまたは複数のｍｉＲ−１５ファミリーメンバーのヌクレオチド配列と実質的に相補的であり、
ｉｎ  ｖｉｔｒｏルシフェラーゼアッセイにおいて約５０ｎＭ以下のオリゴヌクレオチド濃度で、またはげっ歯類モデルにおいて約２５ｍｇ／ｋｇ以下の用量で１つまたは複数のｍｉＲ−１５ファミリーメンバーの活性を低下させまたは阻害する、
オリゴヌクレオチド。
（項目２）
前記１つまたは複数のｍｉＲ−１５ファミリーメンバーがｍｉＲ−１５ａ、ｍｉＲ−１５ｂ、ｍｉＲ−１６、ｍｉＲ−１９５、ｍｉＲ−４２４、およびｍｉＲ−４９７から選択される、項目１に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目３）
少なくとも８つのロックドヌクレオチドを含有する、項目１または２に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目４）
約８ヌクレオチド〜約１８ヌクレオチドの長さである、項目１から３のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目５）
約１２ヌクレオチド〜約１７ヌクレオチドの長さである、項目４に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目６）
約１６ヌクレオチドの長さである、項目５に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目７）
５’−ＡＣＣＡＴＴＡＴＧＴＧＣＴＧＣＴ−３’（配列番号１）、５’−ＡＣＣＡＴＧＡＴＧＴＧＣＴＧＣＴ−３’（配列番号２）、５’−ＡＴＡＴＴＴＡＣＧＴＧＣＴＧＣＴ−３’（配列番号３）、および５’−ＡＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＴＧＣＴ−３’（配列番号４）から選択されるヌクレオチド配列を含む、項目５または６に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目８）
９つのロックドヌクレオチドおよび／または７つの非ロックドヌクレオチドを含有する、項目６または７に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目９）
少なくとも１位、５位、８位、１０位、および１６位がロックドヌクレオチドである、項目６から８のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目１０）
約１２ヌクレオチドの長さである、項目４に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目１１）
５’−ＴＴＡＴＧＴＧＣＴＧＣＴ−３’（配列番号５）、５’−ＴＴＡＣＧＴＧＣＴＧＣＴ−３’（配列番号６）、５’−ＴＴＣＴＧＴＧＣＴＧＣＴ−３’（配列番号７）、５’−ＴＴＣＣＧＴＧＣＴＧＣＴ−３’（配列番号８）、５’−ＴＧＡＴＧＴＧＣＴＧＣＴ−３’（配列番号９）、５’−ＴＧＡＣＧＴＧＣＴＧＣＴ−３’（配列番号１０）、５’−ＴＧＣＴＧＴＧＣＴＧＣＴ−３’（配列番号１１）、および５’−ＴＧＣＣＧＴＧＣＴＧＣＴ−３’（配列番号１２）から選択されるヌクレオチド配列を含む、項目４または１０に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目１２）
８つのロックドヌクレオチドおよび／または４つの非ロックドヌクレオチドを含有する、項目１０または１１に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目１３）
少なくとも１位、４位、９位、および１２位がロックドヌクレオチドである、項目１０から１２のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目１４）
約８ヌクレオチドの長さである、項目４に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目１５）
実質的に全てのロックドヌクレオチドおよび５’−ＧＴＧＣＴＧＣＴ−３’のヌクレオチド配列を有する、項目１４に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目１６）
前記１つまたは複数のｍｉＲ−１５ファミリーメンバーのシード領域と相補的な領域が、少なくとも４つのロックドヌクレオチドを含む、項目１から１５のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目１７）
３つより多く連続した非ロックドヌクレオチドおよび／または３つより多く連続したロックドヌクレオチドを有するひと続きのヌクレオチドを含有しない、項目１から１６のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目１８）
少なくとも１つの非ロックドヌクレオチドが２’デオキシ、２’−Ｏ−メチル、２’−Ｏ−アルキル、２’−ハロ、および２’−フルオロヌクレオチドから選択される、項目１から１７のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目１９）
少なくとも１つの非ロックドヌクレオチドが２’デオキシである、項目１８に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目２０）
非ロックドヌクレオチドの全てが２’デオキシである、項目１９に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目２１）
前記ロックドヌクレオチドがエチレン基またはメチレン基を含む２’−４’架橋を有する、項目１から２０のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目２２）
前記ロックドヌクレオチドが２’−４’メチレン架橋を有する、項目２１に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目２３）
５’および／または３’キャップ構造を有する、項目１から２２のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目２４）
１つまたは複数のホスホロチオエート結合を含有する、項目１から２３のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目２５）
完全にホスホロチオエート結合している、項目２４に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目２６）
１つ〜３つのリン酸結合を有する、項目２４に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目２７）
化合物Ｍ−１０１１３、Ｍ−１０１３４、Ｍ−１０５６４、Ｍ−１０５６６、Ｍ−１０５６７、Ｍ−１０６７０、Ｍ−１１２０６、Ｍ−１１２０７、Ｍ−１１２０８、Ｍ−１１２０９、Ｍ−１１２１０、Ｍ−１１２１１、Ｍ−１１２１２、Ｍ−１１２１３、Ｍ−１１２１４、Ｍ−１１２１５、Ｍ−１１２１６、Ｍ−１１２１７、Ｍ−１１２１８、Ｍ−１１２１９、Ｍ−１１２２０、Ｍ−１１２２１、Ｍ−１１２２２、Ｍ−１１２２３、またはＭ−１１２２４の構造を有する、項目１に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目２８）
ペンダント親油基をさらに含む、項目１から２７のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目２９）
有効量の項目１から２８のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド、または薬学的に許容されるその塩、および薬学的に許容される担体または希釈剤を含む医薬組成物。
（項目３０）
前記薬学的に許容される担体が、コロイド分散系、高分子複合体、ナノカプセル、ミクロスフェア、ビーズ、水中油エマルション、ミセル、混合ミセル、またはリポソームを含む、項目２９に記載の医薬組成物。
（項目３１）
前記薬学的に許容される担体または希釈剤が、生理食塩水から本質的になる、項目２９に記載の医薬組成物。
（項目３２）
細胞における１つまたは複数のｍｉＲ−１５ファミリーメンバーの活性を低下させまたは阻害する方法であって、該細胞を項目１から２８のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチドまたは項目２９から３１のいずれか一項に記載の組成物と接触させることを含む、方法。
（項目３３）
前記細胞が哺乳動物細胞である、項目３２に記載の方法。
（項目３４）
前記細胞が心臓細胞である、項目３３に記載の方法。
（項目３５）
前記細胞がｉｎ  ｖｉｖｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏにある、項目３２に記載の方法。
（項目３６）
対象における１つまたは複数のｍｉＲ−１５ファミリーメンバーに付随するまたはそれによって媒介される状態を予防または処置する方法であって、該対象に少なくとも１つのｍｉＲ−１５ファミリーの阻害剤をＰｉｍ１の標的抑制解除のために十分な用量で投与することを含む、方法。
（項目３７）
前記ｍｉＲ１５ファミリーの阻害剤が項目１から２８のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチドである、項目３６に記載の方法。
（項目３８）
前記対象に項目２９から３１のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与することを含む、項目３６に記載の方法。
（項目３９）
前記医薬組成物を、非経口投与することによって、または心臓組織に直接注射することによって投与する、項目３８に記載の方法。
（項目４０）
前記非経口投与が静脈内投与、皮下投与、腹腔内投与、または筋肉内投与である、項目３９に記載の方法。
（項目４１）
前記組成物を、経口投与、経皮投与、持続放出投与、制御放出投与、遅延放出投与、坐薬投与、カテーテル投与、または舌下投与によって投与する、項目３８から４０のいずれか一項に記載の方法。
（項目４２）
前記状態が心臓の状態である、項目３６から４１のいずれか一項に記載の方法。
（項目４３）
前記心臓の状態が病的心肥大、心筋梗塞、心不全、虚血、または虚血再灌流傷害である、項目４２に記載の方法。
（項目４４）
前記心臓の状態が心臓移植に付随するものである、項目４２に記載の方法。
（項目４５）
前記対象がヒトである、項目３６から４４のいずれか一項に記載の方法。