【誤訳訂正書】
【提出日】平成28年3月15日(2016.3.15)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
フェルスター共鳴エネルギー転移（ＦＲＥＴ）においてドナーおよびアクセプター部分として働くことが組み合わせにおいて可能な、任意の好適なドナー蛍光タンパク質とアクセプター蛍光タンパク質部分との間に、細菌のＬｌｄＲ転写制御因子を含んでいる、ＦＲＥＴベースの乳酸塩ナノセンサーであって、単一細胞もしくは細胞集団において、接着細胞においてもしくは懸濁液において、細胞培養、組織培養、混合細胞培養、組織外植片において、またはインビボの動物組織において、発現され得る、ＦＲＥＴベースの乳酸塩ナノセンサー。
【請求項２】
前記蛍光タンパク質部分は、ｍＴＦＰ(単量体のティール（teal）色蛍光タンパク質）、ＣＦＰ(シアン色蛍光タンパク質)、ＢＦＰ(青色蛍光タンパク質)、ＧＦＰ(緑色蛍光タンパク質)、ＹＦＰ(黄色蛍光タンパク質)、それらの強化されたバリアント、例えば強化ＹＦＰ（ＥＹＦＰ）、ＹＦＰ−シトリン、Ｖｅｎｕｓ、または細菌のフィトクロム由来の赤外線蛍光タンパク質からなる群の中から選択される、請求項１に記載のＦＲＥＴベースの乳酸塩ナノセンサー。
【請求項３】
前記蛍光タンパク質部分はｍＴＦＰおよびＶｅｎｕｓである、請求項１に記載のＦＲＥＴベースの乳酸塩ナノセンサー。
【請求項４】
配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、または配列番号１６と、少なくとも、９５％または９９％のアミノ酸配列同一性を有する、請求項１または３に記載のＦＲＥＴベースの乳酸塩ナノセンサー。
【請求項５】
配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、または配列番号３２と少なくとも、９５％または９９％の配列同一性を有する核酸配列によってコードされている、請求項１または３に記載のＦＲＥＴベースの乳酸塩ナノセンサー。
【請求項６】
ａ．単一細胞もしくは細胞集団、接着細胞または懸濁液中、細胞培養、組織培養、混合細胞培養または組織外植片中などの、所望の宿主内で、請求項１〜５の何れか一項に記載のＦＲＥＴベースの乳酸塩ナノセンサーを発現させる工程と、
ｂ．時間内に乳酸塩濃度を記録しながら、細胞内乳酸塩濃度の規定値、細胞外乳酸塩濃度の規定値、細胞レベル下乳酸塩濃度の規定値で、前記宿主を較正する工程と、
ｃ．前記細胞における乳酸塩の定常状態を妨害する工程と、
ｄ．異なった時点において前記乳酸塩濃度を計算している、前記ナノセンサーからの出力を記録し、輸送速度を決定する工程と、を包含する、乳酸塩輸送の測定方法。
【請求項７】
工程ｂ）において、細胞における前記ＦＲＥＴベースの乳酸塩ナノセンサーは、インビトロで得られた前記センサーの反応速度定数、およびピルビン酸塩の存在下で決定されたゼロ乳酸塩レベルを用いることによって較正される、請求項６に記載の乳酸塩の測定方法。
【請求項８】
工程ｃ）において、前記乳酸塩の定常状態の妨害は、様々な濃度の細胞外乳酸塩に細胞を曝露することによるものである、請求項７に記載の乳酸塩の測定方法。
【請求項９】
ａ．単一細胞もしくは細胞集団、接着細胞または懸濁液中、細胞培養、組織培養、混合細胞培養または組織外植片中などの、所望の宿主内で、請求項１〜５の何れか一項に記載のＦＲＥＴベースの乳酸塩ナノセンサーを発現させる工程と、
ｂ．時間内に乳酸塩濃度を記録しながら、細胞内乳酸塩濃度の規定値、細胞外乳酸塩濃度の規定値、細胞レベル下乳酸塩濃度の規定値で、宿主を較正する工程と、
ｃ．前記細胞における乳酸塩の定常状態を妨害する工程と、
ｄ．異なった時点において前記乳酸塩濃度を計算している、前記ナノセンサーからの出力を記録し、乳酸塩生産速度または乳酸塩消費速度を決定する工程と、を包含する、乳酸塩生産速度または乳酸塩消費速度の測定方法。
【請求項１０】
工程ｂ）において、細胞における前記ＦＲＥＴベースの乳酸塩ナノセンサーは、インビトロで得られた前記センサーの反応速度定数およびピルビン酸塩の存在下で決定されたゼロ乳酸塩レベルを用いることによって、較正される、請求項９に記載の乳酸塩生産速度または乳酸塩消費速度の測定方法。
【請求項１１】
工程ｃ）において、乳酸塩の前記定常状態の妨害は、前記乳酸塩生産速度と同等の乳酸塩蓄積速度、または前記乳酸塩消費速度と同等の乳酸塩枯渇速度を測定する、ＭＣＴ阻害剤を添加することによるものである、請求項９に記載の乳酸塩生産速度または乳酸塩消費速度の測定方法。
【請求項１２】
ａ．単一細胞もしくは細胞集団、接着細胞または懸濁液中、細胞培養、組織培養、混合細胞培養または組織外植片中などの、所望の宿主内で、請求項１〜５の何れか一項に記載のＦＲＥＴベースの乳酸塩ナノセンサーを発現させる工程と、
ｂ．時間内に乳酸塩濃度を記録しながら、細胞内乳酸塩濃度の規定値、細胞外乳酸塩濃度の規定値、細胞レベル下乳酸塩濃度、の規定値で、前記宿主を較正する工程と、
ｃ．前記細胞における前記乳酸塩の定常状態を妨害する工程と、
ｄ．異なった時点において前記乳酸塩濃度を計算している、前記ナノセンサーからの出力を記録し、ミトコンドリアのピルビン酸塩消費速度を決定する工程と、を包含する、ミトコンドリアのピルビン酸塩消費速度の測定方法。
【請求項１３】
工程ｂ）において、細胞における前記ＦＲＥＴベースの乳酸塩ナノセンサーがインビトロで得られた前記センサーの反応速度定数およびピルビン酸塩の存在下で決定されたゼロ乳酸塩レベルを用いることによって較正される、請求項１２に記載のミトコンドリアのピルビン酸塩消費速度の測定方法。
【請求項１４】
工程ｃ）において、乳酸塩の前記定常状態の妨害は、ミトコンドリアのピルビン酸塩輸送体の遮断剤を添加することによるものであり、ミトコンドリアによるピルビン酸塩消費速度と同等の乳酸塩蓄積の初速度を測定する、請求項１２に記載のミトコンドリアのピルビン酸塩消費速度の測定方法。
【請求項１５】
ａ．単一細胞もしくは細胞集団、接着細胞または懸濁液中、細胞培養、組織培養、混合細胞培養または組織外植片中などの、所望の宿主内で、請求項１〜５の何れか一項に記載のＦＲＥＴベースの乳酸塩ナノセンサーを発現させる工程と、
ｂ．時間内に乳酸塩濃度を記録しながら、細胞内乳酸塩濃度の規定値、細胞外乳酸塩濃度の規定値、細胞レベル下乳酸塩濃度乳酸塩濃度の規定値で、前記宿主を較正する工程と、
ｃ．前記細胞における乳酸塩の定常状態を妨害する工程と、
ｄ．異なった時点における前記乳酸塩濃度を計算している、前記ナノセンサーからの出力を記録し、輸送速度を決定する工程と、
ｅ．ＭＣＴ阻害剤の存在下の前記乳酸塩蓄積速度と、ミトコンドリアのピルビン酸塩輸送体の阻害剤の存在下の前記乳酸塩蓄積速度との間の比率を計算することによって、ワールブルグ現象を定量する工程と、を包含する、ワールブルグ現象の定量方法。
【請求項１６】
工程ｂ）において、細胞における前記ＦＲＥＴベースの乳酸塩ナノセンサーは、インビトロで得られた前記センサーの前記反応速度定数およびピルビン酸塩の存在下で決定されたゼロ乳酸塩レベルを用いることによって較正されている、請求項１５に記載のワールブルグ現象の消費の定量方法。
【請求項１７】
工程ｃ）において、乳酸塩の前記定常状態の妨害は、前記乳酸塩生産速度または前記乳酸塩消費速度を測定する、ＭＣＴ阻害剤を添加すること、およびミトコンドリアのピルビン酸塩輸送体の遮断薬を添加することによるものであって、当該方法は、ミトコンドリアによるピルビン酸塩消費速度と同等である乳酸塩蓄積の初速度を測定する工程をさらに包含する、請求項１５に記載のワールブルグ現象の定量方法。