【手続補正書】
【提出日】平成28年7月4日(2016.7.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
空間（２０）内に含まれる液体媒体中のマクロイオンを検出する方法であって、
ａ）前記液体媒体を刺激する電場に掛けて、マクロイオンの塊の形成を誘発する段階であって、前記塊の形成は、前記液体媒体中の前記マクロイオンの濃度のランダムな空間的ゆらぎを生成し、マクロイオンの前記形成された塊は好ましくは、何らの追加のラベリング剤を含まない、前記誘発する段階と、
ｂ）前記空間の検出ゾーンにおいて、前記液体媒体中の前記マクロイオンの前記濃度に依存する少なくとも一つの変数の、前記液体媒体内の空間的な及び／又は時間的なゆらぎを測定する段階と、
ｃ）これらゆらぎに基づいて、前記マクロイオンの存在を決定する段階であって、段階ｃ）は好ましくは、段階ｂ）で測定された前記ゆらぎを、時間依存若しくは空間依存解析により、より好ましくはウェーブレット解析により、又は、自己相関により、処理することを含む、前記決定する段階と
を含む、前記方法。
【請求項２】
前記マクロイオンが多価電解質であり、及び多価電解質の塊が段階ａ）で形成され、前記多価電解質が好ましくは、核酸、より好ましくは５キロ塩基以上、又は５キロ塩基対以上、好ましくは１０キロ塩基以上、又は１０キロ塩基対以上、を有する核酸鎖を含み、前記核酸の塊は好ましくは、段階ａ）で形成され、前記多価電解質が好ましくは、核酸、より好ましくは５キロ塩基以上、又は５キロ塩基対以上、好ましくは１０キロ塩基以上、又は１０キロ塩基対以上、を有する核酸鎖を含み、及び、段階ａ）での前記液体媒体中に存在する前記多価電解質は好ましくは、核酸増幅の段階の後に又はその間に得られ、前記増幅は好ましくは、リアルタイム定量増幅であり、又は、逆転写、ポリメラーゼ連鎖反応増幅、核酸等温増幅、ローリング・サークル増幅、分岐ローリング・サークル増幅、サークル−サークル増幅、LAMP、NASBA、TMA、SMART、HAD、RPA、CPA、SMART-AMP、RCA、HRCA、RAM、SDA、NEAR、NEMA、ICA、EXPAR、BAD  AMP、若しくはPG-RCA増幅、又は、Phi29  ＤＮＡポリメラーゼを使用する核酸増幅方法のうちの少なくとも一つを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
段階ｂ）で測定される前記空間的な及び／又は時間的なゆらぎが、電気的変数、好ましくは、伝導度又はインピーダンス、複素インピーダンス、複素伝導度、電流又は電圧、より好ましくは伝導度、のゆらぎであり、
又は、
段階ｂ）で測定される前記空間的な及び／又は時間的なゆらぎが、光学的変数、好ましくは、光学吸収、蛍光、発光、二色性、複屈折、光散乱、又は旋光能の中から選択される光学的変数のゆらぎである、
請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
前記段階ａ）で施与される刺激する電場が、
−  直流の電場又は、1000Hz以下、好ましくは100Hz以下の周波数の交流の電場であり、及び／又は、
−  50V/cm以上、好ましくは100V/cm以上、より好ましくは200V/cm以上の強度を有し、及び／又は、
−  異なる周波数を有する少なくとも第１及び第２の電場成分の重畳を含み、前記第２の電場成分は前記第１の電場成分の振幅よりも低い振幅を有し、及び、前記第２の電場成分は、直流であり又は、前記第１の電場成分の周波数よりも低い周波数を有する、
請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記変数が電気的であり、及び、前記電気的変数の前記ゆらぎが、前記液体媒体と直接電気接触する少なくとも２つの電極（１０）により段階ｂ）で測定される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記電気的変数の前記ゆらぎが、前記刺激する電場の方向に対して横である、好ましくは垂直である、軸に沿って、互いに向かい合う、少なくとも２つの電極（１０）により段階ｂ）で測定される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記変数が電気的であり、及び、前記電気的変数の前記ゆらぎが、前記電場の方向に対して平行な軸に沿って異なる位置で配置された少なくとも２つの電極により段階ｂ）で測定され、段階ａ）で施与される前記刺激する電場が好ましくは、前記電気的変数の前記ゆらぎを段階ｂ）で測定する電極と同じ電極により施与される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
段階ａ）で施与される前記刺激する電場が、前記電気的変数の前記ゆらぎを段階ｂ）で測定する電極（１０）と異なる電極（３０）により施与される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記変数が電気的であり、及び、前記電気的変数の前記ゆらぎが、段階ａ）で施与される前記刺激する電場の最高周波数成分と異なる周波数を有する交流分極信号により分極された少なくとも２つの電極（１０）により段階ｂ）で測定され、前記分極信号の前記周波数は好ましくは、前記周波数成分よりも大きく、より好ましくは少なくとも１０倍、より好ましくは１００倍、より好ましくは１０００倍大きい、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記変数の前記ゆらぎは前記刺激する電場が施与される間に測定され、又は、前記変数の前記ゆらぎは前記刺激する電場が施与されていない間に測定され、前記刺激する電場が好ましくは、第１の期間の間に施与されず、前記第１の期間は、前記刺激する電場がその間に施与される第２の期間と交互に起こる、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記核酸が、前記核酸増幅の段階の間、緩衝液を含む媒体中に存在し、及び、段階ａ）で使用される前記液体媒体がまた、同じ前記緩衝液を含み、前記緩衝液が好ましくは、1000mS/m以下、好ましくは500mS/m以下、より好ましくは350mS/m以下、特には300mS/m以下、特には275mS/m以下の伝導度を有する、む、請求項３〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記緩衝液が、３７℃又はそれ未満、好ましくは３０℃又はそれ未満、の温度で活性なポリメラーゼを含み、前記緩衝液がさらにリガーゼを含み、前記ポリメラーゼが好ましくはＤＮＡポリメラーゼである、請求項１０及び１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記空間（２０）が複数の検出ゾーン（100a；…；100n）を備えており、前記検出ゾーン（100a；…；100n）のそれぞれが、前記液体媒体中の前記マクロイオンの前記濃度に依存する少なくとも一つの変数の検出器（10a；10b；10c）を備えている、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記液体媒体が、検出されるべきマクロイオン、特には核酸、の種々のタイプを含み、及び、前記マクロイオンと相互作用するように構成された複数の化合物（110a；…；110n）は、前記検出ゾーン（100a；…；100n）のそれぞれに存在し、一つの検出ゾーンに存在する該複数の化合物は、他の検出ゾーンに存在する複数の化合物と異なり、検出されるべき前記マクロイオンが好ましくは核酸であり、及び、前記化合物（110a；…；110n）は、前記核酸の種々のヌクレオチド配列と相互作用するように、特にはそれにハイブリダイズするように、構成されている、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法を実行するための装置であって、
−液体媒体を受ける為の空間（２０）であって、前記空間は好ましくは、複数のマクロイオン、好ましくは多価電解質、を含む液体媒体を含む、前記空間（２０）と、
−前記液体媒体中のマクロイオン分散物からマクロイオン塊の形成を誘発する為に、刺激する電場を生成する為の少なくとも２つの電極（３０）であって、前記電極の対は第１の電源（４０）に接続されている、前記少なくとも２つの電極（３０）と、
−前記液体媒体中の前記マクロイオン塊の存在により誘発された電気的変数の空間的及び／又は時間的ゆらぎを測定する為の複数の電極（１０）を備えている電気的変数の検出器、好ましくは伝導度又はインピーダンス検出器、であって、前記複数の電極は、前記刺激する電場を生成する為の前記電極（３０）と同じであり又はそれと異なり、好ましくは前記第１の電源と共通の電位参照を有さない第２の電源（５０）に接続されている、前記検出器と、
−時間依存的若しくは空間依存的解析、好ましくはウェーブレット解析、を、又は、前記電気的変数の変動について、若しくは画像検出器から発行された画像について、若しくは統合的光学検出器の出力について自己相関を実行する為のデジタル・プロセッサ（９０）と、
−前記検出器の前記電極（１０）は、好ましくは前記液体媒体と接触するように構成されており、前記検出器は好ましくは、差分増幅器（５７）の反転入力及び非反転入力にそれぞれ接続されている２つの電極を備えており、各電極は好ましくは、前記差分増幅器の個々の入力に及び対応する抵抗器（５６）を介して定電流源に接続されており、前記検出器電極は好ましくは、前記液体媒体中の１の場所で前記電気的変数の変動を測定するように構成されており、ここで、前記刺激する電場を誘発する前記電位の絶対値が最小であり、好ましくは実質的にゼロである、
−前記第１の電源は、好ましくは対称の電源（Vs,-Vs）である、
−前記２つの電極は、好ましくは互いに向かい合う、前記２つの検出器電極（１０）であって、好ましくは、前記刺激する電場の方向に対して横であり、好ましくは垂直であり、且つ前記検出記の前記電極（１０）は好ましくは、前記電気的変数の変動を測定する場合に、前記刺激する電場の周波数と異なる周波数を有する交流分極信号により分極され、前記分極信号の前記周波数は好ましくは、前記刺激する電場の主成分の周波数よりも大きく、より好ましくは少なくとも１０倍、より好ましくは少なくとも１００倍、より好ましくは少なくとも１０００倍大きく、前記第２の電源（５０）は好ましくは、浮動接地を有する、
を備えている、前記装置。