【手続補正書】
【提出日】平成27年12月3日(2015.12.3)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（a）・5'から3'への方向に、hCMVプロモーター、抗体軽鎖をコードする核酸、bGHポリAシグナル配列、およびhGTターミネーター配列を含む第一の発現カセット、
・5'から3'への方向に、hCMVプロモーター、抗体重鎖をコードする核酸、bGHポリAシグナル配列、およびhGTターミネーター配列を含む第二の発現カセット
を含み、第一の発現カセットおよび第二の発現カセットが一方向に配置されている発現ベクターで、哺乳動物細胞をトランスフェクトし、それによって、多数の組換え哺乳動物細胞を入手する工程、ならびに
（b）多数の組換え哺乳動物細胞から（単一の）安定にトランスフェクトされた組換え哺乳動物細胞を選択する工程
を含む、
安定にトランスフェクトされた組換え哺乳動物細胞を選択する方法。
【請求項２】
抗体軽鎖をコードする核酸および／または抗体重鎖をコードする核酸が少なくとも1個のイントロンを含むことを特徴とする、請求項1記載の方法。
【請求項３】
抗体軽鎖をコードする核酸および／または抗体重鎖をコードする核酸がcDNAであることを特徴とする、請求項1または2記載の方法。
【請求項４】
発現プラスミドが選択マーカーをさらに含むことを特徴とする、請求項1〜3のいずれか一項記載の方法。
【請求項５】
発現カセットおよび選択マーカーが一方向に配置されていることを特徴とする、請求項1〜4のいずれか一項記載の方法。
【請求項６】
発現カセットがLC-HC-SMの順に配置されていることを特徴とする、請求項1〜5のいずれか一項記載の方法。
【請求項７】
哺乳動物細胞がCHO細胞、HEK細胞、BHK細胞、NS0細胞、およびSP2/0細胞から選択されることを特徴とする、請求項1〜6のいずれか一項記載の方法。
【請求項８】
哺乳動物細胞が、安定にトランスフェクトされた細胞の選択のため、CHO細胞であることを特徴とする、請求項1〜7のいずれか一項記載の方法。
【請求項９】
（a）・5'から3'への方向に、hCMVプロモーター、抗体軽鎖をコードする核酸、bGHポリAシグナル配列、およびhGTターミネーター配列を含む第一の発現カセット、
・5'から3'への方向に、hCMVプロモーター、抗体重鎖をコードする核酸、bGHポリAシグナル配列、およびhGTターミネーター配列を含む第二の発現カセット
を含む哺乳動物細胞を培養する工程、ならびに
（b）細胞または培養培地から抗体を回収する工程
を含み、
第一の発現カセットおよび第二の発現カセットが、抗体の安定的な産生のため、一方向に配置されている、
抗体を産生する方法。
【請求項１０】
抗体軽鎖をコードする核酸および／または抗体重鎖をコードする核酸が少なくとも1個のイントロンを含むことを特徴とする、請求項9記載の方法。
【請求項１１】
抗体軽鎖をコードする核酸および／または抗体重鎖をコードする核酸がcDNAであることを特徴とする、請求項9または10記載の方法。
【請求項１２】
発現プラスミドが選択マーカーをさらに含むことを特徴とする、請求項9〜11のいずれか一項記載の方法。
【請求項１３】
発現カセットおよび選択マーカーが一方向に配置されていることを特徴とする、請求項9〜12のいずれか一項記載の方法。
【請求項１４】
発現カセットがLC-HC-SMの順に配置されていることを特徴とする、請求項9〜13のいずれか一項記載の方法。
【請求項１５】
哺乳動物細胞がCHO細胞、HEK細胞、BHK細胞、NS0細胞、およびSP2/0細胞から選択されることを特徴とする、請求項9〜14のいずれか一項記載の方法。
【請求項１６】
哺乳動物細胞が、抗体の安定的な産生のため、CHO細胞であることを特徴とする、請求項9〜15のいずれか一項記載の方法。
【請求項１７】
・5'から3'への方向に、hCMVプロモーター、抗体軽鎖をコードする核酸、bGHポリAシグナル配列、およびhGTターミネーター配列を含む第一の発現カセット、
・5'から3'への方向に、hCMVプロモーター、抗体重鎖をコードする核酸、bGHポリAシグナル配列、およびhGTターミネーター配列を含む第二の発現カセット
を含む発現ベクター。
【請求項１８】
抗体軽鎖をコードする核酸および／または抗体重鎖をコードする核酸が少なくとも1個のイントロンを含むことを特徴とする、請求項17記載の発現ベクター。
【請求項１９】
抗体軽鎖をコードする核酸および／または抗体重鎖をコードする核酸がcDNAであることを特徴とする、請求項17または18記載の発現ベクター。
【請求項２０】
第一の発現カセットおよび第二の発現カセットが、安定にトランスフェクトされた細胞の選択のため、一方向に配置されていることを特徴とする、請求項17〜19のいずれか一項記載の発現ベクター。
【請求項２１】
発現プラスミドが選択マーカーをさらに含むことを特徴とする、請求項17〜20のいずれか一項記載の発現ベクター。
【請求項２２】
発現カセットおよび選択マーカーが一方向に配置されていることを特徴とする、請求項17〜21のいずれか一項記載の発現ベクター。
【請求項２３】
発現カセットがLC-HC-SMの順に配置されていることを特徴とする、請求項17〜22のいずれか一項記載の発現ベクター。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１６３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１６３】
一つの態様において、抗体重鎖発現カセットの一方は、第一定常ドメインとして抗体軽鎖定常ドメイン（CL）を含む抗体重鎖をコードし、かつ／または抗体重鎖発現カセットの一方は、第一定常ドメインとして抗体重鎖CH1ドメインを含む抗体重鎖をコードする。
[本発明1001]
以下の工程を含む、組換え哺乳動物細胞を選択する方法：
（a）−5'から3'への方向に、hCMVプロモーター、抗体軽鎖をコードする核酸、bGHポリAシグナル配列、およびhGTターミネーター配列を含む第一の発現カセット、
−5'から3'への方向に、hCMVプロモーター、抗体重鎖をコードする核酸、bGHポリAシグナル配列、およびhGTターミネーター配列を含む第二の発現カセット
を含む発現ベクターで哺乳動物細胞をトランスフェクトし、かつそれによって、多数の組換え哺乳動物細胞を入手する工程、ならびに
（b）多数の組換え哺乳動物細胞から（単一の）組換え哺乳動物細胞を選択する工程。
[本発明1002]
抗体軽鎖をコードする核酸および／または抗体重鎖をコードする核酸が少なくとも1個のイントロンを含むことを特徴とする、本発明1001の方法。
[本発明1003]
抗体軽鎖をコードする核酸および／または抗体重鎖をコードする核酸がcDNAであることを特徴とする、本発明1001または1002のいずれかの方法。
[本発明1004]
第一の発現カセットおよび第二の発現カセットが、安定トランスフェクトされた細胞の選択のため、一方向に配置されていることを特徴とする、本発明1001〜1003のいずれかの方法。
[本発明1005]
第一の発現カセットおよび第二の発現カセットが、一過性トランスフェクトされた細胞の選択のため、双方向に配置されていることを特徴とする、本発明1001〜1003のいずれかの方法。
[本発明1006]
発現プラスミドが選択マーカーをさらに含むことを特徴とする、本発明1001〜1005のいずれかの方法。
[本発明1007]
発現カセットおよび選択マーカーが一方向に配置されていることを特徴とする、本発明1001〜1004および1006のいずれかの方法。
[本発明1008]
発現カセットがLC-HC-SMの順に配置されていることを特徴とする、本発明1001〜1004および1006〜1007のいずれかの方法。
[本発明1009]
哺乳動物細胞がCHO細胞、HEK細胞、BHK細胞、NS0細胞、およびSP2/0細胞から選択されることを特徴とする、本発明1001〜1008のいずれかの方法。
[本発明1010]
哺乳動物細胞が、安定トランスフェクトされた細胞の選択のため、CHO細胞であることを特徴とする、本発明1001〜1004および1006〜1008のいずれかの方法。
[本発明1011]
哺乳動物細胞が、一過性トランスフェクトされた細胞の選択のため、HEK細胞であることを特徴とする、本発明1001〜1003および1005〜1008のいずれかの方法。
[本発明1012]
以下の工程を含む、抗体を産生する方法：
（a）−5'から3'への方向に、hCMVプロモーター、抗体軽鎖をコードする核酸、bGHポリAシグナル配列、およびhGTターミネーター配列を含む第一の発現カセット、
−5'から3'への方向に、hCMVプロモーター、抗体重鎖をコードする核酸、bGHポリAシグナル配列、およびhGTターミネーター配列を含む第二の発現カセット
を含む哺乳動物細胞を培養する工程、ならびに
（b）細胞または培養培地から抗体を回収する工程。
[本発明1013]
抗体軽鎖をコードする核酸および／または抗体重鎖をコードする核酸が少なくとも1個のイントロンを含むことを特徴とする、本発明1012の方法。
[本発明1014]
抗体軽鎖をコードする核酸および／または抗体重鎖をコードする核酸がcDNAであることを特徴とする、本発明1012〜1013のいずれかの方法。
[本発明1015]
第一の発現カセットおよび第二の発現カセットが、抗体の安定的な産生のため、一方向に配置されていることを特徴とする、本発明1012〜1014のいずれかの方法。
[本発明1016]
第一の発現カセットおよび第二の発現カセットが、抗体の一過性の産生のため、双方向に配置されていることを特徴とする、本発明1012〜1014のいずれかの方法。
[本発明1017]
発現プラスミドが選択マーカーをさらに含むことを特徴とする、本発明1012〜1016のいずれかの方法。
[本発明1018]
発現カセットおよび選択マーカーが一方向に配置されていることを特徴とする、本発明1012〜1015および1017のいずれかの方法。
[本発明1019]
発現カセットがLC-HC-SMの順に配置されていることを特徴とする、本発明1012〜1015および1017〜1018のいずれかの方法。
[本発明1020]
哺乳動物細胞がCHO細胞、HEK細胞、BHK細胞、NS0細胞、およびSP2/0細胞から選択されることを特徴とする、本発明1012〜1019のいずれかの方法。
[本発明1021]
哺乳動物細胞が、抗体の安定産生のため、CHO細胞であることを特徴とする、本発明1012〜1015および1017〜1020のいずれかの方法。
[本発明1022]
哺乳動物細胞が、抗体の一過性産生のため、HEK細胞であることを特徴とする、本発明1012〜1014および1016〜1020のいずれかの方法。
[本発明1023]
−5'から3'への方向に、hCMVプロモーター、抗体軽鎖をコードする核酸、bGHポリAシグナル配列、およびhGTターミネーター配列を含む第一の発現カセット、
−5'から3'への方向に、hCMVプロモーター、抗体重鎖をコードする核酸、bGHポリAシグナル配列、およびhGTターミネーター配列を含む第二の発現カセット
を含む発現ベクター。
[本発明1024]
抗体軽鎖をコードする核酸および／または抗体重鎖をコードする核酸が少なくとも1個のイントロンを含むことを特徴とする、本発明1023の発現ベクター。
[本発明1025]
抗体軽鎖をコードする核酸および／または抗体重鎖をコードする核酸がcDNAであることを特徴とする、本発明1023〜1024のいずれかの発現ベクター。
[本発明1026]
第一の発現カセットおよび第二の発現カセットが、安定トランスフェクトされた細胞の選択のため、一方向に配置されていることを特徴とする、本発明1023〜1025のいずれかの発現ベクター。
[本発明1027]
第一の発現カセットおよび第二の発現カセットが、一過性トランスフェクトされた細胞の選択のため、双方向に配置されていることを特徴とする、本発明1023〜1025のいずれかの発現ベクター。
[本発明1028]
発現プラスミドが選択マーカーをさらに含むことを特徴とする、本発明1023〜1027のいずれかの発現ベクター。
[本発明1029]
発現カセットおよび選択マーカーが一方向に配置されていることを特徴とする、本発明1023〜1026および1028のいずれかの発現ベクター。
[本発明1030]
発現カセットがLC-HC-SMの順に配置されていることを特徴とする、本発明1023〜1026および1028〜1029のいずれかの発現ベクター。
[本発明1031]
以下の工程を含む、組換え哺乳動物細胞を選択する方法：
（a）−5'から3'への方向に、hEF1αプロモーター、抗体軽鎖をコードする核酸、およびbGHポリAシグナル配列を含む第一の発現カセット、
−5'から3'への方向に、hEF1αプロモーター、抗体重鎖をコードする核酸、bGHポリAシグナル配列を含む第二の発現カセット
を含む発現ベクターで哺乳動物細胞をトランスフェクトし、かつそれによって、多数の組換え哺乳動物細胞を入手する工程、ならびに
（b）多数の組換え哺乳動物細胞から（単一の）組換え哺乳動物細胞を選択する工程。
[本発明1032]
抗体軽鎖をコードする核酸および／または抗体重鎖をコードする核酸が少なくとも1個のイントロンを含むことを特徴とする、本発明1031の方法。
[本発明1033]
抗体軽鎖をコードする核酸および／または抗体重鎖をコードする核酸がcDNAであることを特徴とする、本発明1031〜1032のいずれかの方法。
[本発明1034]
第一の発現カセットおよび第二の発現カセットが、安定トランスフェクトされた細胞の選択のため、一方向に配置されていることを特徴とする、本発明1031〜1033のいずれかの方法。
[本発明1035]
第一の発現カセットおよび第二の発現カセットが、一過性トランスフェクトされた細胞の選択のため、双方向に配置されていることを特徴とする、本発明1031〜1033のいずれかの方法。
[本発明1036]
発現プラスミドが選択マーカーをさらに含むことを特徴とする、本発明1031〜1035のいずれかの方法。
[本発明1037]
発現カセットおよび選択マーカーが一方向に配置されていることを特徴とする、本発明1031〜1034および1036のいずれかの方法。
[本発明1038]
発現カセットがLC-HC-SMの順に配置されていることを特徴とする、本発明1031〜1034および1036〜1037のいずれかの方法。
[本発明1039]
ヒト伸長因子1αプロモーターがイントロンAを含むことを特徴とする、本発明1031〜1038のいずれかの方法。
[本発明1040]
発現ベクターが転写ターミネーター配列を含まないことを特徴とする、本発明1031〜1039のいずれかの方法。
[本発明1041]
ターミネーター配列がhGT配列であることを特徴とする、本発明1040の方法。
[本発明1042]
哺乳動物細胞がCHO細胞、HEK細胞、BHK細胞、NS0細胞、およびSP2/0細胞から選択されることを特徴とする、本発明1031〜1041のいずれかの方法。
[本発明1043]
哺乳動物細胞が、安定トランスフェクトされた細胞の選択のため、CHO細胞であることを特徴とする、本発明1042の方法。
[本発明1044]
哺乳動物細胞が、一過性トランスフェクトされた細胞の選択のため、HEK細胞であることを特徴とする、本発明1042の方法。
[本発明1045]
以下の工程を含む、抗体を産生する方法：
（a）−5'から3'への方向に、hEF1αプロモーター、抗体軽鎖をコードする核酸、およびbGHポリAシグナル配列を含む第一の発現カセット、
−5'から3'への方向に、hEF1αプロモーター、抗体重鎖をコードする核酸、およびbGHポリAシグナル配列を含む第二の発現カセット
を含む哺乳動物細胞を培養する工程、ならびに
（b）細胞または培養培地から抗体を回収する工程。
[本発明1046]
抗体軽鎖をコードする核酸および／または抗体重鎖をコードする核酸が少なくとも1個のイントロンを含むことを特徴とする、本発明1045の方法。
[本発明1047]
抗体軽鎖をコードする核酸および／または抗体重鎖をコードする核酸がcDNAであることを特徴とする、本発明1045〜1046のいずれかの方法。
[本発明1048]
第一の発現カセットおよび第二の発現カセットが、安定トランスフェクトされた細胞の選択のため、一方向に配置されていることを特徴とする、本発明1045〜1047のいずれかの方法。
[本発明1049]
第一の発現カセットおよび第二の発現カセットが、一過性トランスフェクトされた細胞の選択のため、双方向に配置されていることを特徴とする、本発明1045〜1047のいずれかの方法。
[本発明1050]
発現プラスミドが選択マーカーをさらに含むことを特徴とする、本発明1045〜1049のいずれかの方法。
[本発明1051]
発現カセットおよび選択マーカーが一方向に配置されていることを特徴とする、本発明1045〜1048および1050のいずれかの方法。
[本発明1052]
発現カセットがLC-HC-SMの順に配置されていることを特徴とする、本発明1045〜1048および1050〜1051のいずれかの方法。
[本発明1053]
ヒト伸長因子1αプロモーターがイントロンAを含むことを特徴とする、本発明1045〜1052のいずれかの方法。
[本発明1054]
発現ベクターが転写ターミネーター配列を含まないことを特徴とする、本発明1045〜1053のいずれかの方法。
[本発明1055]
ターミネーター配列がhGT配列であることを特徴とする、本発明1054の方法。
[本発明1056]
哺乳動物細胞がCHO細胞、HEK細胞、BHK細胞、NS0細胞、およびSP2/0細胞から選択されることを特徴とする、本発明1045〜1055のいずれかの方法。
[本発明1057]
哺乳動物細胞が、抗体の安定産生のため、CHO細胞であることを特徴とする、本発明1056の方法。
[本発明1058]
哺乳動物細胞が、抗体の一過性産生のため、HEK細胞であることを特徴とする、本発明1056の方法。
[本発明1059]
−5'から3'への方向に、hEF1αプロモーター、抗体軽鎖をコードする核酸、およびbGHポリAシグナル配列を含む第一の発現カセット、ならびに
−5'から3'への方向に、hEF1αプロモーター、抗体重鎖をコードする核酸、およびbGHポリAシグナル配列を含む第二の発現カセット
を含む発現ベクター。
[本発明1060]
抗体軽鎖をコードする核酸および／または抗体重鎖をコードする核酸が少なくとも1個のイントロンを含むことを特徴とする、本発明1059の発現ベクター。
[本発明1061]
抗体軽鎖をコードする核酸および／または抗体重鎖をコードする核酸がcDNAであることを特徴とする、本発明1059〜1060のいずれかの発現ベクター。
[本発明1062]
第一の発現カセットおよび第二の発現カセットが、安定トランスフェクトされた細胞の選択のため、一方向に配置されていることを特徴とする、本発明1059〜1061のいずれかの発現ベクター。
[本発明1063]
第一の発現カセットおよび第二の発現カセットが、一過性トランスフェクトされた細胞の選択のため、双方向に配置されていることを特徴とする、本発明1059〜1061のいずれかの発現ベクター。
[本発明1064]
発現プラスミドが選択マーカーをさらに含むことを特徴とする、本発明1059〜1064のいずれかの発現ベクター。
[本発明1065]
発現カセットおよび選択マーカーが一方向に配置されていることを特徴とする、本発明1059〜1062および1064のいずれかの発現ベクター。
[本発明1066]
発現カセットがLC-HC-SMの順に配置されていることを特徴とする、本発明1059〜1062および1064〜1065のいずれかの発現ベクター。
[本発明1067]
ヒト伸長因子1αプロモーターがイントロンAを含むことを特徴とする、本発明1059〜1066のいずれかの発現ベクター。
[本発明1068]
発現ベクターが転写ターミネーター配列を含まないことを特徴とする、本発明1059〜1067のいずれかの発現ベクター。
[本発明1069]
ターミネーター配列がhGT配列であることを特徴とする、本発明1068の発現ベクター。
[本発明1070]
−5'から3'への方向に、第一のプロモーター、抗体軽鎖をコードする核酸、第一のポリAシグナル配列を含み、かつ任意で、第一の転写ターミネーター配列を含む第一の発現カセット、
−5'から3'への方向に、第二のプロモーター、抗体重鎖をコードする核酸、第二のポリAシグナル配列を含み、かつ任意で、第二の転写ターミネーター配列を含む第二の発現カセット、および
−5'から3'への方向に、第三のプロモーター、選択剤に対する耐性を付与する核酸、第三のポリAシグナル配列を含み、かつ任意で、第三の転写ターミネーター配列を含む第三の発現カセット
を含み、3種の発現カセットが、一方向に、第一の発現カセット-第二の発現カセット-第三の発現カセットの順に構成されている発現ベクターの、哺乳動物細胞における抗体の安定的な組換え産生のための使用。
[本発明1071]
抗体軽鎖をコードする核酸および／または抗体重鎖をコードする核酸が少なくとも1個のイントロンを含むことを特徴とする、本発明1070の使用。
[本発明1072]
抗体軽鎖をコードする核酸および／または抗体重鎖をコードする核酸がcDNAであることを特徴とする、本発明1070〜1071のいずれかの使用。
[本発明1073]
第一および第二のプロモーターがhCMVプロモーターであり、第一および第二のポリAシグナル配列がbGHポリAシグナル配列であり、かつ転写終結配列が存在しかつhGTターミネーター配列であることを特徴とする、本発明1070〜1072のいずれかの使用。
[本発明1074]
第一および第二のプロモーターがhEF1αプロモーターであり、第一および第二のポリAシグナル配列がbGHポリAシグナル配列であり、かつ発現カセットが転写ターミネーター配列を含まないことを特徴とする、本発明1070〜1072のいずれかの使用。
[本発明1075]
哺乳動物細胞がCHO細胞、HEK細胞、BHK細胞、NS0細胞、およびSP2/0細胞から選択されることを特徴とする、本発明1070〜1074のいずれかの使用。
[本発明1076]
哺乳動物細胞がCHO細胞であることを特徴とする、本発明1070〜1075のいずれかの使用。
[本発明1077]
−5'から3'への方向に、第一のプロモーター、抗体軽鎖をコードする核酸、第一のポリAシグナル配列を含み、かつ任意で、第一の転写ターミネーター配列を含む第一の発現カセット、
−5'から3'への方向に、第二のプロモーター、抗体重鎖をコードする核酸、第二のポリAシグナル配列を含み、かつ任意で、第二の転写ターミネーター配列を含む第二の発現カセット、および
−5'から3'への方向に、第三のプロモーター、選択剤に対する耐性を付与する核酸、第三のポリAシグナル配列を含み、かつ任意で、第三の転写ターミネーター配列を含む第三の発現カセット
を含み、3種の発現カセットが、一方向に、第一の発現カセット-第二の発現カセット-第三の発現カセットの順に構成されている発現ベクター。
[本発明1078]
抗体軽鎖をコードする核酸および／または抗体重鎖をコードする核酸が少なくとも1個のイントロンを含むことを特徴とする、本発明1077の発現ベクター。
[本発明1079]
抗体軽鎖をコードする核酸および／または抗体重鎖をコードする核酸がcDNAであることを特徴とする、本発明1077〜1078のいずれかの発現ベクター。
[本発明1080]
第一および第二のプロモーターがhCMVプロモーターであり、第一および第二のポリAシグナル配列がbGHポリAシグナル配列であり、かつ転写終結配列が存在しかつhGTターミネーター配列であることを特徴とする、本発明1077〜1079のいずれかの発現ベクター。
[本発明1081]
第一および第二のプロモーターがhEF1αプロモーターであり、第一および第二のポリAシグナル配列がbGHポリAシグナル配列であり、かつ発現カセットが転写ターミネーター配列を含まないことを特徴とする、本発明1077〜1079のいずれかの発現ベクター。
[本発明1082]
−5'から3'への方向に、第一のプロモーター、抗体軽鎖をコードする核酸、第一のポリAシグナル配列を含み、かつ任意で、第一の転写ターミネーター配列を含む第一の発現カセット、
−5'から3'への方向に、第二のプロモーター、抗体重鎖をコードする核酸、第二のポリAシグナル配列を含み、かつ任意で、第二の転写ターミネーター配列を含む第二の発現カセット、および
−5'から3'への方向に、第三のプロモーター、選択剤に対する耐性を付与する核酸、第三のポリAシグナル配列を含み、かつ任意で、第三の転写ターミネーター配列を含む第三の発現カセット
を含み、発現カセットが双方向に構成され、第一の発現カセットおよび第二の発現カセットが逆方向に配置されている発現ベクターの、哺乳動物細胞における抗体の一過性の組換え産生のための使用。
[本発明1083]
抗体軽鎖をコードする核酸および／または抗体重鎖をコードする核酸が少なくとも1個のイントロンを含むことを特徴とする、本発明1082の使用。
[本発明1084]
抗体軽鎖をコードする核酸および／または抗体重鎖をコードする核酸がcDNAであることを特徴とする、本発明1082〜1083のいずれかの使用。
[本発明1085]
第一および第二のプロモーターがhCMVプロモーターであり、第一および第二のポリAシグナル配列がbGHポリAシグナル配列であり、かつ転写終結配列が存在しかつhGTターミネーター配列であることを特徴とする、本発明1082〜1084のいずれかの使用。
[本発明1086]
第一および第二のプロモーターがhEF1αプロモーターであり、第一および第二のポリAシグナル配列がbGHポリAシグナル配列であり、かつ発現カセットが転写ターミネーター配列を含まないことを特徴とする、本発明1082〜1084のいずれかの使用。
[本発明1087]
哺乳動物細胞がCHO細胞、HEK細胞、BHK細胞、NS0細胞、およびSP2/0細胞から選択されることを特徴とする、本発明1082〜1086のいずれかの使用。
[本発明1088]
哺乳動物細胞がHEK細胞であることを特徴とする、本発明1082〜1087のいずれかの使用。
[本発明1089]
−5'から3'への方向に、第一のプロモーター、抗体軽鎖をコードする核酸、第一のポリAシグナル配列を含み、任意で、第一の転写ターミネーター配列を含む第一の発現カセット、
−5'から3'への方向に、第二のプロモーター、抗体重鎖をコードする核酸、第二のポリAシグナル配列を含み、任意で、第二の転写ターミネーター配列を含む第二の発現カセット、および
−5'から3'への方向に、第三のプロモーター、選択剤に対する耐性を付与する核酸、第三のポリAシグナル配列を含み、任意で、第三の転写ターミネーター配列を含む第三の発現カセット
を含み、発現カセットが双方向に構成され、第一の発現カセットおよび第二の発現カセットが逆方向に配置されている発現ベクター。
[本発明1090]
抗体軽鎖をコードする核酸および／または抗体重鎖をコードする核酸が少なくとも1個のイントロンを含むことを特徴とする、本発明1089の発現ベクター。
[本発明1091]
抗体軽鎖をコードする核酸および／または抗体重鎖をコードする核酸がcDNAであることを特徴とする、本発明1089〜1090のいずれかの発現ベクター。
[本発明1092]
第一および第二のプロモーターがhCMVプロモーターであり、第一および第二のポリAシグナル配列がbGHポリAシグナル配列であり、かつ転写終結配列が存在しかつhGTターミネーター配列であることを特徴とする、本発明1089〜1091のいずれかの発現ベクター。
[本発明1093]
第一および第二のプロモーターがhEF1αプロモーターであり、第一および第二のポリAシグナル配列がbGHポリAシグナル配列であり、かつ発現カセットが転写ターミネーター配列を含まないことを特徴とする、本発明1089〜1091のいずれかの発現ベクター。
[本発明1094]
5'から3'への方向に、プロモーター配列、抗体重鎖または抗体軽鎖をコードする核酸、IRES要素、選択マーカーをコードする核酸配列、およびポリAシグナル配列を含み、IRES要素がEMCV-IRES要素である発現プラスミド。
[本発明1095]
5'から3'への方向に、プロモーター配列、抗体重鎖または抗体軽鎖をコードする核酸、IRES要素、選択マーカーをコードする核酸配列、およびポリAシグナル配列を含み、IRES要素がEMCV-IRES要素である発現カセットの、抗体産生細胞の選択のための使用。
[本発明1096]
以下の工程を含む、抗体を発現する真核細胞の選択の方法：
−（i）本発明1094の発現プラスミドと（ii）本発明1094の発現プラスミドによってコードされないそれぞれの他の抗体鎖をコードする核酸とを含む真核細胞を培養する工程、
−検出可能なポリペプチドを発現する細胞を選択する工程。
[本発明1097]
5'から3'への方向に、プロモーター配列、抗体軽鎖をコードする核酸、IRES要素、抗体重鎖をコードする核酸配列、およびポリAシグナル配列を含み、IRES要素がEV71-IRES要素である発現プラスミド。
[本発明1098]
5'から3'への方向に、プロモーター配列、抗体軽鎖をコードする核酸、IRES要素、抗体重鎖をコードする核酸配列、およびポリAシグナル配列を含み、IRES要素がEV71-IRES要素である発現プラスミドの、抗体の発現のための使用。
[本発明1099]
以下の工程を含む、抗体を発現する真核細胞の選択の方法：
−（i）本発明1097の発現プラスミドと（ii）本発明1097の発現プラスミドによってコードされないそれぞれの他の抗体鎖をコードする核酸とを含む真核細胞を培養する工程、
−検出可能なポリペプチドを発現する細胞を選択する工程。
[本発明1100]
発現ベクターが、
−5'から3'への方向に、プロモーター、第一の抗体軽鎖をコードする核酸、ポリAシグナル配列を含み、かつ任意で、ターミネーター配列を含む第一の発現カセット、
−5'から3'への方向に、プロモーター、第二の抗体軽鎖をコードする核酸、ポリAシグナル配列を含み、かつ任意で、ターミネーター配列を含む第二の発現カセット、
−5'から3'への方向に、プロモーター、第一の抗体重鎖をコードする核酸、ポリAシグナル配列を含み、かつ任意で、ターミネーター配列を含む第三の発現カセット、
−5'から3'への方向に、プロモーター、第二の抗体重鎖をコードする核酸、ポリAシグナル配列を含み、かつ任意で、ターミネーター配列を含む第四の発現カセット
または
−5'から3'への方向に、プロモーター、抗体軽鎖をコードする核酸、ポリAシグナル配列を含み、かつ任意で、ターミネーター配列を含む第一の発現カセットであって、ここで抗体軽鎖が両方の抗体重鎖に共通の軽鎖である、第一の発現カセット、
−5'から3'への方向に、プロモーター、第一の抗体重鎖をコードする核酸、ポリAシグナル配列を含み、かつ任意で、ターミネーター配列を含む第二の発現カセット、および
−5'から3'への方向に、プロモーター、第二の抗体重鎖をコードする核酸、ポリAシグナル配列を含み、かつ任意で、ターミネーター配列を含む第三の発現カセット
のいずれかを含むことを特徴とする、本発明1001〜1099のいずれかの発現プラスミドまたは使用または方法。
[本発明1101]
発現ベクターが二特異性抗体をコードすることを特徴とする、本発明1001〜1100のいずれかの発現プラスミドまたは使用または方法。
[本発明1102]
二特異性抗体が、第一の抗原または抗原上の第一のエピトープに特異的に結合する第一の結合特異性または結合部位を有し、かつ第二の抗原または抗原上の第二のエピトープに特異的に結合する第二の結合特異性または結合部位を有することを特徴とする、本発明1100〜1101のいずれかの発現プラスミドまたは使用または方法。
[本発明1103]
発現ベクターが、
−抗体軽鎖発現カセット、
−第一の抗体重鎖発現カセット、
−第二の抗体重鎖発現カセット、および
−選択マーカー発現カセット
を含むことを特徴とする、本発明1100〜1102のいずれかの発現プラスミドまたは使用または方法。
[本発明1104]
発現ベクターが、
−第一の抗体軽鎖発現カセット、
−第二の抗体軽鎖発現カセット、
−第一の抗体重鎖発現カセット、
−第二の抗体重鎖発現カセット、および
−選択マーカー発現カセット
を含むことを特徴とする、本発明1100〜1103のいずれかの発現プラスミドまたは使用または方法。
[本発明1105]
抗体重鎖発現カセットの一方が、ホール変異を含む抗体重鎖をコードすることを特徴とする、本発明1100〜1104のいずれかの発現プラスミドまたは使用または方法。
[本発明1106]
抗体重鎖発現カセットの一方が、ノブ変異を含む抗体重鎖をコードすることを特徴とする、本発明1100〜1105のいずれかの発現プラスミドまたは使用または方法。
[本発明1107]
抗体軽鎖発現カセットの一方が、抗体軽鎖可変ドメインおよび定常ドメインとしての抗体重鎖CH1ドメインを含む抗体軽鎖バリアントをコードし、かつ／または抗体軽鎖発現カセットの一方が、抗体軽鎖可変ドメインおよび定常ドメインとしての抗体軽鎖CLドメインを含む抗体軽鎖をコードすることを特徴とする、本発明1100〜1106のいずれかの発現プラスミドまたは使用または方法。
[本発明1108]
抗体重鎖発現カセットの一方が、第一定常ドメインとして抗体軽鎖定常ドメイン（CL）を含む抗体重鎖バリアントをコードし、かつ／または抗体重鎖発現カセットの一方が、第一定常ドメインとして抗体重鎖CH1ドメインを含む抗体重鎖をコードすることを特徴とする、本発明1100〜1107のいずれかの発現プラスミドまたは使用または方法。