(57)【要約】      （修正有）【課題】口腔乾燥症の簡便な検査キットを提供する。【解決手段】被験者の口に診断キットの濾紙面の一端を一定時間含ませた後、被験者の唾液がペーパークロマトグラフィーの濾紙に定量的に浸透し展開され、それにともなって予め塗布してあったメラノイジンが唾液とともに展開されて、特別な装置を用いることなく視覚的に容易にかつ明確に唾液量を定量できる。また、メラノイジンに加えてカプサイシンもしくは、クエン酸もしくは酒石酸を合わせて浸透させた刺激唾液量測定用濾紙を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
口腔乾燥症を診断するために、短冊形の濾紙の先端部分にメラノイジンを浸透させた唾液量定量濾紙
【請求項２】
請求項１のメラノイジン類が、コーヒー由来あるいは醤油由来あるいは糖類とアミノ酸類によるメーラード反応させた反応物である唾液量測定用濾紙
【請求項３】
請求項１の唾液量定量濾紙でメラノイジンに加えてカプサイシンもくしくは、クエン酸もしくは酒石酸を合わせて浸透させた刺激唾液量測定用濾紙
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、口腔乾燥症の程度を簡便に測定する検査キットに関するものである。
【背景技術】
【０００２】
口腔乾燥症は唾液腺の器質的障害、分泌神経の障害、全身の代謝性疾患などにより唾液分泌量が低下し、口腔粘膜の乾燥症状を呈する疾病である。その結果、口内疼痛、灼熱感、味覚異常、嚥下障害、義歯不適合、睡眠障害、会話障害、口臭、ウ蝕、歯周疾患、口角糜爛、口腔カンジダ症などの併発を惹起する。平成１３年度の厚生労働省の長寿科学総合研究事業「高齢者の口腔乾燥症と唾液物性の研究」による調査では、高齢者の２７．７％は常に口腔乾燥感を自覚しており、軽度の乾燥自覚者を含めると５６．７%の高率であった。また、６５歳未満の若年層においても、常時乾燥感自覚者が１０．５%、軽度を含めると３５．１%で、年齢に関わりなく口腔乾燥症が多く認められている（非特許文献１）。一方、Fieldら(非特許文献２)は人口の１０％以上が口腔乾燥症であると報告している。
【０００３】
口腔乾燥症の早期発見、診断は全身並びに口腔の健康維持にとって重要である。しかしながら、その診断法として唾液分泌量の測定、唾液腺造影などが行われているが、操作の煩雑性などから必ずしも十分に活用されていない。
【０００４】
先に我々は口腔乾燥症を診断するために、ヨウ化カリウム、デンプン、カプサイシンを予め浸透させておいた濾紙を製造し、その一端を口に入れて唾液を吸収させ、一定時間後に口から出して、呈色試薬として局方過酸化水素水（オキシドール）を塗布して、青色の呈色によって安静時唾液ならびに刺激唾液の分泌量を測定する方法および口腔乾燥症診断用キット（特許文献１および２）を考案した。
【０００５】
しかしながら、これらの方法は呈色試薬を添加して判定しなければならない操作の煩雑性、また刺激唾液を測定するために添加したクエン酸がヨードーデンプン反応の呈色反応を妨害し、正しい判定を下すことができない問題点があった。これらの諸問題を解決するため、ヨウ化カリウム、デンプンを添加するかわりに、予めメラノイジン（コーヒー由来メラノイジン、醤油由来メラノイジンならびにアミノ酸、糖質よりのメーラード反応で形成されるメラノイジン）の添加によりこの問題を解決することができた。すなわちメラノイジンは唾液量と並行して移動することから、一定時間後に口から濾紙を出した直後、目視で安静時唾液量ならびに刺激唾液量を測定することができる。
【０００６】
【特許文献１】特願2008-116506
【特許文献２】特願200９-２５２５３５
【非特許文献１】柿木保明、岩木悦央：口腔乾燥感と口腔乾燥度に関する研究―高齢者の口腔乾燥症と唾液物性に関する研究、平成１４年度厚生科学研究費研究報告書、２００３年２２−２６頁
【非特許文献２】Field  ら、Gerontology、2001年18巻21−24頁
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
解決しようとする課題は、口腔乾燥症の診断において、簡易であり、かつより信頼できる方法を作ることである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、メラノイジン色素がペーパークロマトグラフィーの原理によって、水とともに濾紙上を展開の先端とともに移動する性質を用いたもので、メラノイジンを口に含ませる先端に含ませた診断濾紙を作成し、それを被験者の口に一定時間含ませメラノイジンの色の移動を測定することによって分泌された唾液量を定量的に測定することを特徴とする。
【０００９】
目的を達成する技術的解決原理に関わる要素
本願は、コーヒー由来メラノイジンならびにアミノ酸類と糖類によるメーラード反応によって形成されるメラノイジンを利用したもので、コーヒー由来メラノイジンはコーヒー重量の約２５％を占め、その量は波長405nmの吸光度より簡便に測定することができる（非特許文献３および４）。メラノイジンの分子量は3kDa  から  22kDaの範囲で、多様で一定でない（非特許文献５）。一方、Bekedam  E.K  らは、12  から  14  kDa以上の高分子メラノイジンとそれ以下の低分子メラノイジン分画は、それぞれ５９％、４１％の比率で存在し、両メラノイジンともにアニオン性の色素であると報告している（非特許文献６）。コーヒー由来メラノイジンはクロロゲン酸を始めとするポリフェノールが、アラビノース、マンノース、グルコースなどの糖質、グリシン、アラニン、セリンなどのアミノ酸がメーラード  反応により形成された褐色物質である（非特許文献７）。このような褐色色素はアミノ酸と糖のメーラード  反応からも形成される。すなわち、グリシンとグルコースの混合溶液を加熱してもメラノイジンの褐色色素を得ることができ、その反応機序も明らかにされている（非特許文献８）。
【００１０】
【非特許文献３】Bekedam  E.  Kら、High  molecular  weight  melanoidins  in  coffee  brew.  J.  Agric.  Food  Chem.,  2006,  54,  7658-7666;
【非特許文献４】Bekedam  E.K  et  al.  Low  molecular  weight  melanoidins  in  coffee  brew.  J.  Agric.  Food  Chem.,  2008,  56,  4060-4067)。
【非特許文献５】Gniechwitz  D  et  al.  Isolation  and  characterization  of  a  coffee  melanoidin  fraction.  J  Science  of  Food  and  Agriculture,  2007,  88,  2153-2169)。
【非特許文献６】Bekedam  E.K  et  al.  Arabinogalactan  proteins  are  incorporated  in  negatively  charged  coffee  brew  melanoidins.  J.Agric.Food  Chem.,  2007,  55,  761-768)。
【非特許文献７】Nunes  F.  M.  and  Coimbra  M.A.  Melanoidins  from  coffee  infusions.  Fractionation,  chemical  characterization,  and  effect  of  degree  of  roast.  J.Agric.Food  Chem.,2007,55,  3967-3977
【非特許文献８】Davidek  T.  et  al.  Sugar  fragmentation  in  the  メーラード  reaction  cascade:  formation  of  short-chain  carboxylic  acids  by  a  new  oxidative  a-dicarbonyl  cleavage  pathway.  J.Agric.  Food  Chem.,  2006,  54,  6677-6684
【００１１】
刺激唾液量測定
カプサイシンによる唾液分泌刺激効果は、以下のようにすでに知られている事実である。即ち、カプサイシンはクエン酸など他の味覚刺激剤と同様に、味覚反射すなわち三叉神経―副交感神経反射を介して唾液分泌を刺激する（非特許文献９、１０）。そしてその刺激効果は極めて短く（２秒）、刺激開始直後より唾液分泌を惹起した（非特許文献１１）。
【００１２】
【非特許文献９】Duner-Engstrom  M  et  al.  Autonomic  mechanism  underlying  capsaicin  induced  oral  sensations  and  salivation  in  man.  J  Physiol,  373,  87-96  (1986)
【非特許文献１０】Nasrawi  CW  and  Pangborn  RM.  Temporal  gustatory  and  salivary  responses  to  capsaicin  upon  related  stimulation.  Physiol  Behav,  47,  611-615  (1990)
【非特許文献１１】桑沢隆補  同時記録による左右両側および耳下腺―顎下腺の味覚反射性唾液分泌の電気生理学的研究  東女医大誌、６３、４００−４０８  （１９９３）
【発明の効果】
【００１３】
本発明の口腔乾燥症診断キットは、被験者が、一定時間、本願の診断濾紙を口に含んだ後、予め添加して浸透させてあるメラノイジンが唾液とともに移動して、メラノイジンが褐色の明確な色を持つので、濾紙上で唾液の移動が、肉眼的に簡単に判定できるという利点がある。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
クロマトグラフィー用の濾紙を短冊状に切り、その先端にメラノイジンを浸透させた部分を作るという、最少の仕掛けで、定量的に唾液の分泌量の測定を実現した。予め浸透させたメラノイジンは、コーヒー由来メラノイジンやグルコースとグリシンの加熱反応より形成されるメラノイジンなど、メラノイジン類を広く用いることができる。
【実施例１】
【００１５】
メラノイジンの調製。メラノイジンを３種の材料を用いて調製した。
コーヒー由来メラノイジンの調製
インスタントコーヒー(Nescafe  goldblend,  L12184911/0921;  ネスレ日本株式会社、神戸)121  mgを蒸留水0.4  ml  に溶解し、Sephadex  G-25  を充填したFine  gel  filtration  chromatography  column  (19  x  2.8  cm  i.  d.;  Pharmacia  LKB,  Biotechnology  AB,  Uppsala,  Sweden)  を用いてコーヒー由来メラノイジンを分離した。溶出液は蒸留水を用い、メラノイジン量  はA405,  アミノ酸量はニンヒドリン反応後のA540でそれぞれマイクロプレートリーダー(Labsystem-Multiskan,  Dainipon  Pharm.  Co.,  Japan)で測定した。メラノイジンは三つの溶出ピークとして得られたが（図１）、溶出量38  mlから  50  mlの溶出画分をコーヒー由来メラノイジンとして利用した。そしてその画分をメラノイジン濃度が20  micro  g/  micro  L  になるように油浴中(120度)で濃縮した。
【００１６】
グルコースとグリシンを基質とした加熱反応によって生ずるメラノイジンの調製
グルコースとグリシンよりのメラノイジン形成は0.1  Mリン酸ナトリウム(pH8.4)  溶液15  mlにグルコース(和光純薬、東京)、グリシン(和光純薬、東京)をそれぞれ2.7  g,  1.1  g加えて油浴中で120°C,  45分間、加熱処理したメーラード  反応産物より調製した。この調製物131  mg  （湿重量）  は蒸留水0.4  ml  に溶解し、上述のSephadex  G-25  Fine  gel  filtration  chromatography  columnよりメラノイジンを分離した。溶出液は蒸留水を用い、メラノイジン量  はA405,  アミノ酸量はニンヒドリン反応後のA540でそれぞれマイクロプレートリーダーで測定した。図２に示すようにグルコースとグリシンより形成されたメラノイジンは二つのピークとして得られ、溶出量38  mlから  50  mlの溶出画分をグルコースとグリシン由来のメラノイジンとして利用した。そしてその画分をメラノイジン濃度が20  micro  g/micro  Lになるように油浴中(120度)で濃縮した。尚、未反応物質であるグルコースとグリシンは溶出量  80  ml  付近で検出された。
【００１７】
醤油メラノイジンの調製
醤油原液（本醸造かおり；菱山六醤油株式会社、新潟）0.4  mlは上述のSephadex  G-25  Fine  gel  filtration  chromatography  column  より醤油のメラノイジンを分離した。溶出液は蒸留水を用い、メラノイジン量  はA405でマイクロプレートリーダーを用いて測定した。図３に示すようにメラノイジンは三つのピークとして得られ、溶出量38  mlから  50  mlの溶出画分を醤油由来のメラノイジンとして利用した。そしてその画分はメラノイジン濃度が20  micro  g/micro  Lになるように油浴中(120度)  で濃縮した。
【実施例２】
【００１８】
食用色素とメラノイジンの性能比較
唾液の浸透量をモニターする素材として、メラノイジンや食品に使われる色素が考えられる。ここでは、安全で入手しやすい色素などを指示素材としての性能を比較した。
In  vitroにおける唾液量と色素の移動
唾液量と色素の移動を調べるために、予め各種の色素を濾紙の先端部に塗布し、乾燥させた色素含有濾紙を作製した。濾紙先端部はヒト混合プール唾液300  micro  Lに浸し、２分間放置した。図４に示すように、濾紙上のコーヒー由来メラノイジン色素(４２０  micro  g)は、唾液の浸透の展開の先端の線と一致して移動した。しかしながら、メチレンブルー(150  ng)、ブドウ（キャンベル；60  mg）抽出液は塩基性色素であるため濾紙に吸着し、ほとんど移動しなかった。また、食用黄色４号(5  micro  g)、食用赤色１０２号(5  micro  g)は濾紙に対して弱い吸着性があるためか、その移動度は唾液の移動と比べて僅かに遅れた（Rf  92.5±1.6%）。また、食用青色２号(5  micro  g)は移動度が５７．２±１．０%であった。従って、色素の移動は唾液量を正確に反映しなかった。  尚、醤油由来メラノイジンおよびグルコースとグリシンより合成されたメラノイジン色素は唾液の移動と並行して移動し、唾液量を正確に反映した。その他フサスグリ(アカスグリ)  の赤色素の使用を試みたが、酸味を呈することから、安静時唾液用の色素としては不適当であることがわかった。
【実施例３】
【００１９】
安静時唾液測定用濾紙の作製
用いた濾紙は、クロマトグラフィー用濾紙（厚さ0.7  ｍｍ  ;  Advantec,  No.526;  Toyo  Roshi  Kaisha,  Ltd.,  Japan）で、濾紙の大きさは、縦６７ｍｍ、横２１ｍｍであり、その短冊状の濾紙の先端部分から、１ｍｍごとの線を予め印刷した。
メラノイジンを水に溶解して、至適量を塗布させるとメラノイジンの広がる範囲は、８．９ｍｍ±０．１ｍｍ（ｎ＝５）となった。５０％エタノール溶液で溶解したメラノイジン色素では、７．０±０．２ｍｍ（ｎ＝５）であった。
口腔乾燥症の判断基準は、唾液分泌量１００micro  L／min  であるので、メラノイジン色素の塗布領域は、１０ｍｍ以下であれば目的を達することができる。このことは、図６の結果から明らかで１００micro  Lを吸収させた時には、１３ｍｍとなり、十分に目的を達することができる。
よって、メラノイジン色素の塗布範囲が、１０ｍｍ以下の位置であれば、診断に影響は及ぼさない。
安静時唾液測定用濾紙のマーカーとして、至適のメラノイジン量を求めるために、実施例１で調製したコーヒー由来メラノイジン溶液は等量のエタノールで希釈した後、溶液50  micro  Lを濾紙先端部に塗布し、室温で自然乾燥した。
メラノイジンの至適濃度の決定
濾紙先端部をヒト混合プール唾液300  microLに浸し、２分間放置後、色素の移動を観察した。図５に示すようにメラノイジン量の増加とともに色調は鮮明となった。したがって、安静時唾液測定用濾紙のマーカーとしてのメラノイジン量は５００  micro  gとした。
【００２０】
定量性の証明
本願の簡易型口腔乾燥症診断キットが、定量性があることを次のようにして確認した。唾液プルを用いて種々の量の唾液を浸透させて、それぞれの際のメラノイジンの移動を調べたところ図６のように直線関係が得られた。よって、本願のキットは診断に十分な定量性があることを証明した。
【実施例４】
【００２１】
カプサイシンの至適濃度の決定
刺激唾液量の測定には、カプサイシンと共存させることが好ましいことを既に特許出願している。カプサイシンの至適濃度は特許文献2並びに非特許文献７に従い、濾紙に塗布するカプサイシン量を種々変化させて最適な量を探した。尚、カプサイシン（和光純薬）はエタノール（関東化学）で溶解した。試験では、塗布したカプサイシン量は、１枚当たりの試験濾紙における重さで表現し、メラノイジン５００  micro  g  含有の濾紙を用いて、健常人を被検者とした試験を実施した（表１）。唾液分泌の刺激効果はカプサイシンの塗布量に依存した。しかしながら、カプサイシンが1.4  micro  g以上ではその刺激効果は一定で、むしろ濃度に依存して強い痛みを感じた。その結果、刺激濃度として１．２５  micro  gのカプサイシン量が適切であることが判った。
【００２２】
表１．カプサイシン含有濾紙における健常人刺激唾液採取（１分間）とメラノイジンの移動
―――――――――――――――――――――――――
カプサイシン  
(micro  g)                    メラノイジンの移動距離  (cm)
――――――――――――――――――――――――
0  micro  g                        2.6±0.2
0.24  micro  g                        3.0±0.3
0.48  micro  g                        3.2±0.3
1.0  micro  g                          3.6±0.2
1.4  micro  g                          3.8±0.3
2.0  micro  g                          3.9±0.2
―――――――――――――――――――――――――
n=3
【００２３】
刺激唾液測定用濾紙は、カプサイシン刺激唾液測定用濾紙は実施例１で調製したメラノイジン溶液  (20  micro  g/micro  L)  に等量のカプサイシン溶液(0.05  micro  g/micro  L)  を加えた溶液50  micro  L  を濾紙先端部に塗布し、室温で自然乾燥して作製した。
【００２４】
【非特許文献１２】T.Kanehira  et  al.  A  screening  test  for  capsaicin-stimulated  salivary  flow  using  filter  paper:  a  study  for  diagnosis  of  hyposalivation  with  a  complaint  of  dry  mouth.  Oral  Surg  Oral  Med  Oral  Pathol  Oral  Radiol  Endod.  112;  73-80  (2011)
【００２５】
カプサイシンによるメラノイジン色素の影響
カプサイシン添加によるメラノイジン色素の安定性は、次のようにして調べた。実施例１で作成したメラノイジン色素溶液125  micro  L  (4.32  mg/ml)を96穴マイクロプレート(Nunclon  167008;  Nunc  A/S,  Denmark)に入れた後、種々の濃度のカプサイシン溶液125  micro  Lを添加し、色調の変化をマイクロプレートリーダー（A405）で調べた。その結果、終末濃度31.2  micro  gまでのカプサイシンは室温で７日間放置しても、メラノイジンの色調になんら変化を与えなかった(表  ２)。
【００２６】
表  ２．  カプサイシン添加によるメラノイジン色素の影響
――――――――――――――――――――――――
カプサイシン                  A405
(micro  g)    ――――――――――――――――――
0  day    3  day      5  day    7  day
――――――――――――――――――――――――
0                1.82        1.80        1.81        1.80
1.0              1.81        1.81        1.82        1.82
3.9              1.83        1.8          1.83        1.83
7.8              1.83        1.80        1.82        1.80
31.2              1.86        1.85        1.83        1.84
――――――――――――――――――――――――
【実施例５】
【００２７】
至適クエン酸濃度の決定
クエン酸の至適濃度は非特許文献２に従い、濾紙に塗布するクエン酸量を種々変化させて最適な量を探した。尚、クエン酸（クエン酸水和物:関東化学）は蒸留水で溶解した。試験では、塗布したクエン酸量は、１枚当たりの試験濾紙における重さで表現し、メラノイジン５００micro  g含有の濾紙を用いて、健常人を被検者とした試験を実施した（表３）。唾液分泌の刺激効果はクエン酸の塗布量に依存した。しかしながら、クエン酸が2000  micro  g以上ではその刺激効果は一定で、むしろ濃度に依存して強い痛みを感じた。その結果、刺激濃度として2000  micro  gのクエン酸量が適切であることが判った。
刺激唾液の測定法として、クエン酸による刺激を用いることが好ましいことを既に特許出願している。ここでは、メラノイジンの発色がクエン酸によって妨害させるなどの不具合が生じないかを調べた。
【００２８】
（表３）  クエン酸含有濾紙における健常人刺激唾液採取（１分間）とメラノイジンの移動
―――――――――――――――――――――――――
クエン酸含有量                    メラノイジンの移動距離
(micro  g)                              (cm)
―――――――――――――――――――――――――
0  micro  g                            2.6±0.2
500  micro  g                            2.8±0.3
1000  micro  g                          3.2±0.3
2000  micro  g                          3.8±0.2
4000  micro  g                          3.9±0.2
―――――――――――――――――――――――――
n=3
クエン酸添加によるメラノイジン色素の安定性
クエン酸添加によるメラノイジン色素の安定性は、メラノイジン色素溶液125  micro  L(4.32  mg/ml)を96穴マイクロプレートに入れた後、種々の濃度のクエン酸溶液125  micro  Lを添加し、色の変化をマイクロプレートリーダー（A405）で調べた。その結果、終末濃度40  mgまでのクエン酸は室温で７日間放置において、メラノイジンの色調になんら変化を与えなかった（表４）。
【００２９】
表4.  クエン酸添加によるメラノイジン色素の影響    
――――――――――――――――――――――――――
クエン酸                        A405
(mg)      ――――――――――――――――――――
0  day      3  day        5  day    7  day
―――――――――――――――――――――――――――
0                  1.82          1.80          1.81        1.80
4.0                1.85          1.83          1.84        1.86
10                1.90          1.85          1.84        1.82
20                1.82          1.90          1.92        1.90
40                1.92          1.88          1.90        1.88
――――――――――――――――――――――――――――
【００３０】
刺激唾液測定用濾紙の作製
クエン酸刺激唾液測定用濾紙は実施例１で調製したメラノイジン溶液  (20  micro  g/micro  L)  にクエン酸溶液(80  mg/  ml;  クエン酸水和物:関東化学)  を等量加えた。そして十分撹拌した後、溶液50  micro  Lを濾紙先端部に塗布し、室温で自然乾燥した。
【実施例６】
【００３１】
口腔乾燥症患者の判定の例
（特許文献2）並びに（非特許文献１２）に従い、今回考案した簡易型口腔乾燥症診断キットを口腔舌下に２分間挿入し、その間に移動した色素の距離より健常人と口腔乾燥症患者の判定を試みた。
すなわち、刺激剤(カプサイシン、クエン酸)含有濾紙と刺激剤を含有しない濾紙を使用することにより簡単に安静時唾液、刺激時唾液を測定することができ、かつ容易に口腔乾燥症患者のスクリーニングができた。図７は健常人で、図８は口腔乾燥症患者である。
（非特許文献１２）より色素移動が安静時唾液で1.7  cm、刺激時唾液で2.2  cm以下の場は口腔乾燥症と判定できる。
【実施例７】
【００３２】
至適酒石酸濃度の決定
刺激時唾液分泌量測定の一つに酒石酸テスト(非特許文献１３)がある。この方法は０．２５M  酒石酸２mlを舌背部に均等に散布し、２分間口腔内に含ませ、この後８分間（合わせて１０分間）の唾液をメスシリンダーにため、唾液分泌量から口腔乾燥症を判定する方法である。濾紙法における酒石酸の至適濃度は濾紙に塗布する酒石酸量を種々変化させて最適な量を探した。尚、酒石酸（酒石酸:  和光純薬）は蒸留水で溶解した。試験では、塗布した酒石酸量は、１枚当たりの試験濾紙における重さで表現し、メラノイジン５００mｇ含有の濾紙を用いて、健常人を被検者とした試験を実施した（表５）。唾液分泌の刺激効果は酒石酸の塗布量に依存した。しかしながら、酒石酸が2000mｇ以上ではその刺激効果は一定で、むしろ濃度に依存して強い痛みを感じた。その結果、刺激濃度として2000mｇの酒石酸量が適切であることが判った。
(非特許文献１３)寺田修久、今野照義  唾液腺疾患と口内乾燥  MB  ENT.  65,  18-24,  2006
【００３３】
酒石酸刺激唾液測定用濾紙の作製
酒石酸刺激唾液測定用濾紙は実施例１で調製したメラノイジン溶液  (20  micro  g/micro  L)  に等量の酒石酸溶液(80  mg/  ml)を加えた。そして十分撹拌した後、溶液50  micro  Lを濾紙先端部に塗布し、室温で自然乾燥した。しかしながら、このように作成した酒石酸刺激唾液測定用濾紙は先の刺激唾液測定用濾紙と異なり、濾紙先端部に塗布したメラノイジンの大部分が濾紙に吸着され、唾液の浸透と共に移動するメラノイジンは少量であった（図  ９）。したがって、酒石酸の塗布方法を改良した。すなわち、あらかじめメラノイジン溶液  (１0  micro  g/micro  L)  50  micro  Lを濾紙先端部に塗布し、室温で自然乾燥させた後、エタノールで溶解した酒石酸溶液(６７  mg/  ml)  ３0  micro  Lを濾紙先端部に塗布した。その結果、図９に示すようにメラノイジンの大部分が唾液の浸透と共に移動させることができた。
【００３４】
表５．  酒石酸含有濾紙における健常人刺激唾液採取（１分間）とメラノイジンの移動
酒石酸含有量  (micro  g)      メラノイジンの移動距離  (cm)
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0  micro  g                                  2.6±0.2
500  micro  g                                    2.8±0.3
1000  micro  g                                  3.2±0.3
2000  micro  g                                  3.９±0.2
4000  micro  g                                  3.9±0.2
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n=3
【産業上の利用可能性】
【００３５】
予めメラノイジンを添加し浸透させた先端を有する濾紙を決めた時間で被験者の口に含ませ唾液を吸い上げることによって簡単な操作で口腔乾燥症の診断を行うことができる。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】コーヒー由来メラノイジンのSephadex  G-25における溶出パターンインスタントコーヒー(Nescafe  goldblend,  L12184911/0921;  ネスレ日本株式会社、神戸)121  mgを蒸留水0.4mlに溶解し、Sephadex  G-25  Fine  gel  filtration  chromatography  column  (19x2.8  cm  i.d.;  Pharmacia  LKB,  Biotechnology  AB,  Uppsala,  Sweden)に添加し、蒸留水で溶出した。実線：メラノイジンの吸光度。４０５ｎｍの吸光度で測定破線：ニンヒドリンによるアミノ酸の発色。５４０ｎｍの吸光度で測定
【図２】グルコースとグリシンより合成されたメラノイジンのSephadex  G-25における溶出パターングルコースとグリシンより合成されたメーラード反応産物131  mg  湿重量は、蒸留水0.4  ml  に溶解し、Sephadex  G-25  Fine  gel  filtration  chromatography  column  (19  x  2.8    cm  i.d.;  Pharmacia  LKB,  Biotechnology  AB,  Uppsala,  Sweden)  に添加し、蒸留水で溶出した。実線：メラノイジンの吸光度。４０５ｎｍの吸光度で測定破線：ニンヒドリンによるアミノ酸の発色。５４０ｎｍの吸光度で測定
【図３】醤油由来メラノイジンのSephadex  G-25における溶出パターン醤油原液（本醸造かおり；菱山六醤油株式会社、新潟）0.4  mlをSephadex  G-25  Fine  gel  filtration  chromatography  column  (19x2.8  cm  i.d.;  Pharmacia  LKB,  Biotechnology  AB,  Uppsala,  Sweden)  に添加し、蒸留水で溶出した。メラノイジン量はA405をマイクロプレートリーダー(Labsystem-Multiskan,  Dainipon  Pharm.Co.,  Japan)で測定した。実線：メラノイジンの吸光度。４０５ｎｍの吸光度で測定
【図４】In  vitroにおける唾液量と色素の移動濾紙先端部はヒト混合プール唾液300  micro  Lに浸し、２分間放置後、色素の移動を観察した。1)メチレンブルー  (150  ng);  2)ブドウ（キャンベル）抽出液(60  mg);  3)食用黄色４号(5  micro  g);  4)食用赤色１０２号(5  micro  g);  Ｃｏｐ−２)  コーヒー由来メラノイジン抽出液  (４２０  micro  g)
【図５】コーヒー由来メラノイジン抽出液色素の至適濃度の決定濾紙先端部はヒト混合プール唾液300  micro  Lに浸し、２分間放置後、色素の移動を観察した。１）  コーヒー由来メラノイジン抽出液  (１２５０  micro  g)、２）    コーヒー由来メラノイジン抽出液  (６２５  micro  g)、  ３）  コーヒー由来メラノイジン抽出液  (４２０  micro  g)、  ４）  コーヒー由来メラノイジン抽出液  (２５０  micro  g);  c)  水
【図６】In  vitroにおける唾液量とコーヒー由来メラノイジン抽出液色素の移動
【図７】健常人の安静時唾液量および刺激唾液量Ｃ０）  簡易型口腔乾燥症診断キット  未使用C)  安静時唾液測定濾紙    K)  クエン酸刺激時唾液測定濾紙    T)  カプサイシン刺激時唾液測定濾紙
【図８】口腔乾燥症患者の安静時唾液量および刺激唾液量Ｃ０）  簡易型口腔乾燥症診断キット  未使用C)  安静時唾液測定濾紙    K)  クエン酸刺激時唾液測定濾紙    T)  カプサイシン刺激時唾液測定濾紙
【図９】酒石酸溶液の塗布方法とメラノイジンの移動N)  安静時唾液測定濾紙；    S)  メラノイジン溶液  (20  micro  g/micro  L)  に等量の酒石酸溶液(80  mg/  ml)を加えた溶液50  micro  L塗布；CS-3)  安静時唾液測定濾紙にエタノールで溶解した酒石酸溶液(６７  mg/  ml)  ３0  micro  L塗布
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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