【手続補正書】
【提出日】平成28年5月2日(2016.5.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
体細胞を脱分化または再プログラム化するための方法であって、
Ｏｃｔ４、Ｓｏｘ２、Ｋｌｆ４、ｃＭｙｃ、ＮａｎｏｇおよびＬｉｎ２８から選択される再プログラム化因子の合成ｍＲＮＡのうちいずれか１種または複数とトランス活性化ドメインとの融合産物を有効量含む組成物を、単離された前記体細胞にトランスフェクトし、これにより前記体細胞を再プログラム化または脱分化するステップ
を含む、方法。
【請求項２】
前記組成物が、Ｎ末端ＭｙｏＤトランス活性化ドメインと融合したＯｃｔ４を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
Ｏｃｔ４が、タンデムに３連でＮ末端ＭｙｏＤトランス活性化ドメインと融合している、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
Ｏｃｔ４、Ｓｏｘ２、Ｋｌｆ４、ｃＭｙｃ、ＮａｎｏｇおよびＬｉｎ２８から選択される再プログラム化因子の合成ｍＲＮＡのうちいずれか１種または複数を使用することにより哺乳動物細胞を再プログラム化するための方法であって、
ａ）フィーダーフリー表面において標準６ウェルプレートのウェルあたり細胞２５ｋ〜２５０ｋの密度で、または他の表面領域のウェルにおいてウェル当たり比例して減らした数の細胞で、標的細胞を成長させるステップと、
ｂ）再プログラム化の間に各回５０ｎｇ〜８００ｎｇ／ｍｌで変動する用量のｍＲＮＡを細胞にトランスフェクトするステップと
を含む、方法。
【請求項５】
標的細胞を、フィーダーフリー表面において標準６ウェルプレートのウェルあたり細胞５０ｋ、７５ｋ、１００ｋまたは１５０ｋの密度で成長させ、
ａ）再プログラム化の間に各回５０ｎｇ〜８００ｎｇ／ｍｌで変動する用量のｍＲＮＡを細胞にトランスフェクトするステップであって、より初期の時点においてより後期の時点よりも低い用量を使用する、ステップと、
ｂ）継代せずにｉＰＳＣを獲得するステップと
を含む、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
標的細胞を、フィーダーフリー表面において標準６ウェルプレートのウェルあたり細胞５０ｋ、７５ｋ、１００ｋまたは１５０ｋの密度で成長させるが、各ウェルの容量を、０．５ｍｌ〜５ｍｌの適切な培地となるよう調整し、
ａ）再プログラム化の間に各回５０ｎｇ〜８００ｎｇ／ｍｌで変動する用量のｍＲＮＡを細胞にトランスフェクトするステップであって、より初期の時点においてより後期の時点よりも低い用量を使用する、ステップと、
ｂ）継代せずにｉＰＳＣを獲得するステップと
を含む、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記哺乳動物細胞が、ヒト細胞である、請求項４に記載の方法。
【請求項８】
異種フリーである、請求項４に記載の方法。
【請求項９】
前記１種または複数の因子が、ｍＲＮＡ、制御性ＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡおよびこれらの組合せからなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記体細胞に、少なくとも２種の異なるＲＮＡをトランスフェクトする、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記体細胞が、単能性細胞、複能性細胞、多能性細胞および分化細胞からなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記１種または複数のＲＮＡが、前記体細胞から単能性細胞、複能性細胞または多能性細胞への脱分化を誘導する、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記因子のうち少なくとも１種が、ＯＣＴ４、ＳＯＸ２、ＮＡＮＯＧ、ＬＩＮ２８、ＫＬＦ４およびＭＹＣ  ｍＲＮＡからなる群より選択される、請求項４に記載の方法。
【請求項１４】
ＯＣＴ４、ＳＯＸ２、ＮＡＮＯＧおよびＬＩＮ２８  ｍＲＮＡを組み合わせて投与する、請求項４に記載の方法。
【請求項１５】
ＯＣＴ４、ＳＯＸ２、ＫＬＦ４およびＭＹＣ  ｍＲＮＡを組み合わせて投与する、請求項４に記載の方法。
【請求項１６】
前記トランスフェクトされた細胞が、培養において人工多能性幹（ｉＰＳ）細胞として維持される、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
前記トランスフェクトされた細胞が、人工多能性幹細胞を形成し、分化細胞を形成するように前記ｉＰＳ細胞を誘導するステップをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
患者における疾患または障害の１種または複数の症状を処置または阻害するための組成物であって、ｉｎ  ｖｉｔｒｏの脱分化細胞を含み、前記脱分化細胞が、請求項１に記載の方法に従って調製されることと、前記脱分化細胞が前記患者に投与されることとを特徴とする、組成物。
【請求項１９】
前記組成物が、ＲａｒｇおよびＬｒＨ−１トランス活性化ドメインをさらに含む、請求項２に記載の方法。
【請求項２０】
前記組成物が、ＶＰ１６トランス活性化ドメインと融合したＯｃｔ４を含む、請求項１に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１９】
本明細書に記載および特許請求されている発明は、本概要に表記または記載または参照されている特質および実施形態等を含むがこれらに限定されない、多くの特質および実施形態を有する。これは包括的であるようには企図されておらず、本明細書に記載および特許請求されている発明は、本概要に同定されている特色または実施形態に（よって）限定されず、これら特色または実施形態は、制限目的ではなく単なる説明目的で含まれている。後述する詳細な説明において、追加的な実施形態を開示することができる。
特定の実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
体細胞を脱分化または再プログラム化するための方法であって、
Ｏｃｔ４、Ｓｏｘ２、Ｋｌｆ４、ｃＭｙｃ、ＮａｎｏｇおよびＬｉｎ２８から選択される再プログラム化因子の合成ｍＲＮＡのうちいずれか１種または複数とトランス活性化ドメインとの融合産物を有効量含む組成物を、単離された前記体細胞にトランスフェクトし、これにより前記体細胞を再プログラム化または脱分化するステップ
を含む、方法。
（項目２）
前記組成物が、Ｎ末端ＭｙｏＤトランス活性化ドメインと融合したＯｃｔ４を含む、項目１に記載の方法。
（項目３）
Ｏｃｔ４が、タンデムに３連でＮ末端ＭｙｏＤトランス活性化ドメインと融合している、項目２に記載の方法。
（項目４）
項目１に記載の再プログラム化因子の合成ｍＲＮＡのうちいずれか１種または複数を使用することにより哺乳動物細胞を再プログラム化するための方法であって、
ａ）フィーダーフリー表面において標準６ウェルプレートのウェルあたり細胞２５ｋ〜２５０ｋの密度で、または他の表面領域のウェルにおいてウェル当たり比例して減らした数の細胞で、標的細胞を成長させるステップと、
ｂ）再プログラム化の間に各回５０ｎｇ〜８００ｎｇ／ｍｌで変動する用量のｍＲＮＡを細胞にトランスフェクトするステップと
を含む、方法。
（項目５）
標的細胞を、フィーダーフリー表面において標準６ウェルプレートのウェルあたり細胞５０ｋ、７５ｋ、１００ｋまたは１５０ｋの密度で成長させ、
ａ）再プログラム化の間に各回５０ｎｇ〜８００ｎｇ／ｍｌで変動する用量のｍＲＮＡを細胞にトランスフェクトするステップであって、より初期の時点においてより後期の時点よりも低い用量を使用する、ステップと、
ｂ）継代せずにｉＰＳＣを獲得するステップと
を含む、項目４に記載の方法。
（項目６）
標的細胞を、フィーダーフリー表面において標準６ウェルプレートのウェルあたり細胞５０ｋ、７５ｋ、１００ｋまたは１５０ｋの密度で成長させるが、各ウェルの容量を、０．５ｍｌ〜５ｍｌの適切な培地となるよう調整し、
ａ）再プログラム化の間に各回５０ｎｇ〜８００ｎｇ／ｍｌで変動する用量のｍＲＮＡを細胞にトランスフェクトするステップであって、より初期の時点においてより後期の時点よりも低い用量を使用する、ステップと、
ｂ）継代せずにｉＰＳＣを獲得するステップと
を含む、項目４に記載の方法。
（項目７）
前記哺乳動物細胞が、ヒト細胞である、項目４に記載の方法。
（項目８）
異種フリーである、項目４に記載の方法。
（項目９）
前記１種または複数の因子が、ｍＲＮＡ、制御性ＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡおよびこれらの組合せからなる群より選択される、項目１に記載の方法。
（項目１０）
前記体細胞に、少なくとも２種の異なるＲＮＡをトランスフェクトする、項目１に記載の方法。
（項目１１）
前記体細胞が、単能性細胞、複能性細胞、多能性細胞および分化細胞からなる群より選択される、項目１に記載の方法。
（項目１２）
前記１種または複数のＲＮＡが、前記体細胞から単能性細胞、複能性細胞または多能性細胞への脱分化を誘導する、項目１に記載の方法。
（項目１３）
前記因子のうち少なくとも１種が、ＯＣＴ４、ＳＯＸ２、ＮＡＮＯＧ、ＬＩＮ２８、ＫＬＦ４およびＭＹＣ  ｍＲＮＡからなる群より選択される、項目４に記載の方法。
（項目１４）
ＯＣＴ４、ＳＯＸ２、ＮＡＮＯＧおよびＬＩＮ２８  ｍＲＮＡを組み合わせて投与する、項目４に記載の方法。
（項目１５）
ＯＣＴ４、ＳＯＸ２、ＫＬＦ４およびＭＹＣ  ｍＲＮＡを組み合わせて投与する、項目４に記載の方法。
（項目１６）
前記トランスフェクトされた細胞が、培養において人工多能性幹（ｉＰＳ）細胞として維持される、項目１に記載の方法。
（項目１７）
前記トランスフェクトされた細胞が、人工多能性幹細胞を形成し、分化細胞を形成するように前記ｉＰＳ細胞を誘導するステップをさらに含む、項目１に記載の方法。
（項目１８）
患者における疾患または障害の１種または複数の症状を処置または阻害するための方法であって、項目１に記載の方法に従って細胞をｉｎ  ｖｉｔｒｏで脱分化させるステップと、前記細胞を前記患者に投与するステップとを含む、方法。
（項目１９）
前記組成物が、ＲａｒｇおよびＬｒＨ−１トランス活性化ドメインをさらに含む、項目２に記載の方法。
（項目２０）
前記組成物が、ＶＰ１６トランス活性化ドメインと融合したＯｃｔ４を含む、項目１に記載の方法。