【手続補正書】
【提出日】平成28年3月7日(2016.3.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｂ細胞集団を含む遺伝子改変マウスであって、前記Ｂ細胞のそれぞれが、前記マウスの生殖系列に存在する単一の再構成されたヒトＶκ１−３９／Ｊκ配列に由来するヒト免疫グロブリン軽鎖可変領域によってコードされるヒト免疫グロブリン軽鎖可変ドメインを発現し、前記単一の再構成されたヒトＶκ１−３９／Ｊκ配列が、ヒト生殖系列Ｖκ１−３９遺伝子セグメントおよびヒト生殖系列Ｊκ遺伝子セグメントを含み、前記単一の再構成されたヒトＶκ１−３９／Ｊκ配列が、免疫グロブリン軽鎖定常領域配列に作動可能に連結し、前記ヒト免疫グロブリン軽鎖可変ドメインが、前記再構成されたＶκ１−３９／Ｊκ配列と同一である配列または前記再構成されたＶκ１−３９／Ｊκ配列の体細胞超変異バリアントである配列から発現され、
ここで、前記集団のＢ細胞が、ＶＨ１−４６、ＶＨ２−２６、ＶＨ３−２１、およびＶＨ３−６４からなる群から選択されるヒトＶＨ遺伝子セグメントに由来するヒト免疫グロブリン重鎖可変領域によってコードされるヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインを発現する少なくとも１種類のＢ細胞を含む、遺伝子改変マウス。
【請求項２】
前記集団のＢ細胞が、ＶＨ１−４６、ＶＨ２−２６、ＶＨ３−２１、およびＶＨ３−６４のそれぞれを含むヒトＶＨ遺伝子セグメントに由来するヒト免疫グロブリン重鎖可変領域によってコードされるヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインを共に発現する、請求項１に記載のマウス。
【請求項３】
前記単一の再構成されたヒトＶκ１−３９／Ｊκ配列が、
（ａ）ヒト生殖系列Ｖκ１−３９遺伝子セグメントおよびヒト生殖系列Ｊκ５遺伝子セグメントを含む再構成されたヒトＶκ１−３９／Ｊκ５配列であり；
（ｂ）マウスＣκ領域に作動可能に連結し；
（ｃ）内因性の再構成されていない免疫グロブリンＶκ遺伝子セグメントおよび内因性の再構成されていない免疫グロブリンＪκ遺伝子セグメントを置換するように位置し；
（ｄ）全ての機能的な内因性の再構成されていない免疫グロブリンＶκ遺伝子セグメントおよび内因性の再構成されていない免疫グロブリンＪκ遺伝子セグメントを置換するように位置し；および／または
（ｅ）マウスまたはラットの免疫グロブリン軽鎖定常領域配列から選択される免疫グロブリン軽鎖定常領域配列に作動可能に連結する、
請求項１または請求項２に記載のマウス。
【請求項４】
前記ヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインをコードする前記配列が、
（ａ）ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３またはこれらの組み合わせをコードするマウス免疫グロブリンン重鎖定常（ＣＨ）領域配列に作動可能に連結し、および／または
（ｂ）内因性免疫グロブリン重鎖遺伝子座に存在する、
請求項１〜３のいずれか一項に記載のマウス。
【請求項５】
前記遺伝子改変マウスの生殖系列が、免疫グロブリン軽鎖における発現に機能的な任意の内因性の再構成されていない免疫グロブリンＶκ遺伝子セグメントを欠き、かつ前記遺伝子改変マウスの生殖系列が、免疫グロブリン軽鎖における発現に機能的な任意の内因性の再構成されていない免疫グロブリンＪκ遺伝子セグメントを欠いている、請求項１〜４のいずれか一項に記載のマウス。
【請求項６】
請求項１〜５に記載の遺伝子改変マウスを使用して抗原結合性タンパク質を作成する方法であって、前記抗原結合性タンパク質が、第１の免疫グロブリン重鎖および／または第２の免疫グロブリン重鎖を含み、前記第１および／または第２の免疫グロブリン重鎖が、ＶＨ１−４６、ＶＨ２−２６、ＶＨ３−２１、およびＶＨ３−６４からなる群から選択されるヒトＶＨ遺伝子セグメントに由来する、方法。
【請求項７】
前記第１の免疫グロブリン重鎖が、前記マウスのＢ細胞から得られた免疫グロブリン重鎖可変領域から発現される第１のヒト重鎖可変ドメインを含み、および／または前記抗原結合性タンパク質の前記第２の免疫グロブリンン重鎖が、前記マウスのＢ細胞から得られた免疫グロブリン重鎖可変領域から発現される第２のヒト重鎖可変ドメインを含む、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記マウスが、第１の目的の抗原で免疫化され、前記集団のＢ細胞が、前記第１の目的の抗原に対する第１の抗体を発現する少なくとも１種類のＢ細胞を含み；および／または前記マウスが、第２の目的の抗原で免疫化され、前記集団のＢ細胞が、前記第２の目的の抗原に対する第２の抗体を発現する少なくとも１種類のＢ細胞を含む、請求項６または請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記第１および第２の抗体が異なる抗原に結合する、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記第１および第２の抗原が同じ抗原であり、前記第１および第２の抗体が前記同じ抗原の異なるエピトープに結合する、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
前記抗原結合性タンパク質の作製が、前記第１および／または第２の抗体のヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインを含む重鎖を選択することを含む、請求項８〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
抗原結合性タンパク質を作製する方法であって、
（ａ）請求項１〜５のいずれかに記載の第１のマウスを提供するステップであって、前記第１のマウスが、第１の目的の抗原で免疫化され、前記第１のマウスの前記集団のＢ細胞が、第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインを含む第１の免疫グロブリン重鎖を含む、前記第１の目的の抗原に対する第１の抗体を発現する少なくとも１種類のＢ細胞を含む、ステップ；
（ｂ）請求項１〜５のいずれかに記載の第２のマウスを提供するステップであって、前記第２のマウスが、第２の目的の抗原で免疫化され、前記第２のマウスの前記集団のＢ細胞が、第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインを含む第２の免疫グロブリン重鎖を含む、前記第２の目的の抗原に対する第２の抗体を発現する少なくとも１種類のＢ細胞を含む、ステップ；
（ｃ）前記第１の目的の抗原に対する前記第１の抗体由来の前記第１のヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインを含む前記第１の免疫グロブリン重鎖を選択し、そして前記第２の目的の抗原に対する前記第２の抗体由来の前記第２のヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインを含む前記第２の免疫グロブリン重鎖を選択するステップであって、前記第１および第２のヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインが異なり、前記第１および／または第２の免疫グロブリン重鎖が、ＶＨ１−４６、ＶＨ２−２６、ＶＨ３−２１、およびＶＨ３−６４からなる群から選択されるヒトＶＨ遺伝子セグメントに由来する、ステップ；
（ｄ）前記第１および第２のヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインの配列を決定するステップ；ならびに
（ｅ）前記第１および第２のヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインの配列を使用して、二重特異的抗原結合性タンパク質を作製するステップ
を含む、方法。
【請求項１３】
前記第１のマウスおよび前記第２のマウスが、同じマウスまたは異なるマウスである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記第１および第２の抗原が同じ抗原であり、前記第１および第２の抗体が、前記同じ抗原の異なるエピトープに結合する、請求項１２または請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記抗原結合性タンパク質の作製が、再構成されたヒトＶκ１−３９／Ｊκ配列に由来する免疫グロブリン軽鎖をさらに発現する細胞において、前記第１のマウスから選択される前記第１のヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインを含む第１の免疫グロブリン重鎖および／または前記第２のマウスから選択される前記第２のヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインを含む第２の免疫グロブリン重鎖を共に発現させることを含む、請求項１２〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記抗原結合性タンパク質が、完全なヒトの抗原結合性タンパク質である、請求項６〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記抗原結合性タンパク質が、二重特異的抗原結合性タンパク質である、請求項６〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
請求項６〜１７のいずれか一項に記載の方法にしたがって生成された二重特異的抗原結合性タンパク質であって、前記第１および／または第２の免疫グロブリン重鎖が、ＶＨ１−４６、ＶＨ２−２６、ＶＨ３−２１、およびＶＨ３−６４からなる群から選択されるヒトＶＨ遺伝子セグメントに由来する、二重特異的抗原結合性タンパク質。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１３１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１３１】
本明細書に記載される実施形態および態様のいずれも、特に明記しない限り、または文脈から明らかでなければ、互いに一緒に用いることができる。他の実施形態は、後に続く記載の概観から当業者に明らかになる。
本発明は、例えば、以下の項目も提供する。
（請求項１）
抗原での曝露（ｃｈａｌｌｅｎｇｅ）に応答して抗原特異的抗体の集団を発現するマウスであって、前記抗原特異的抗体の集団の免疫グロブリンの軽鎖全てが、同じ単一のヒトＶＬ遺伝子セグメントに由来するヒト軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、前記免疫グロブリンの重鎖が、ＶＨ１−２、ＶＨ１−３、ＶＨ１−８、ＶＨ１−１８、ＶＨ１−２４、ＶＨ１−４６、ＶＨ１−５８、ＶＨ１−６９、ＶＨ２−５、ＶＨ２−２６、ＶＨ２−７０、ＶＨ３−７、ＶＨ３−９、ＶＨ３−１１、ＶＨ３−１３、ＶＨ３−１５、ＶＨ３−２０、ＶＨ３−２１、ＶＨ３−２３、ＶＨ３−３０、ＶＨ３−３３、ＶＨ３−４３、ＶＨ３−４８、ＶＨ３−５３、ＶＨ３−６４、ＶＨ３−７２、ＶＨ３−７３、ＶＨ４−３１、ＶＨ４−３４、ＶＨ４−３９、ＶＨ４−５９、ＶＨ５−５１、ＶＨ６−１から選択されるヒトＶＨ遺伝子セグメントに由来するヒト重鎖可変（ＶＨ）領域を含む、マウス。
（請求項２）
前記同じ単一のヒトＶＬ遺伝子セグメントがヒトＶκ１−３９遺伝子セグメントである、請求項１に記載のマウス。
（請求項３）
前記同じ単一のヒトＶＬ遺伝子セグメントがヒトＶκ３−２０遺伝子セグメントである、請求項１に記載のマウス。
（請求項４）
前記免疫グロブリンの軽鎖が全てヒト軽鎖Ｊ（ＪＬ）遺伝子セグメントを含む、請求項１に記載のマウス。
（請求項５）
前記ヒトＪＬ遺伝子セグメントがヒトＪκ１およびＪκ５遺伝子セグメントから選択される、請求項４に記載のマウス。
（請求項６）
マウス免疫グロブリンＶＬ遺伝子セグメント、マウス免疫グロブリンＪＬ遺伝子セグメント、およびその組合せから選択される配列を欠く、請求項１に記載のマウス。
（請求項７）
前記ヒトＶＬ領域が、ヒト、マウス、またはラットの免疫グロブリン軽鎖定常（ＣＬ）領域に作動可能に連結されている、請求項１に記載のマウス。
（請求項８）
前記ヒトＶＬ領域が内因性免疫グロブリン軽鎖遺伝子座から発現される、請求項１に記載のマウス。
（請求項９）
前記ヒトＶＨ領域が、ヒト、マウス、またはラットの免疫グロブリン重鎖定常（ＣＨ）領域に作動可能に連結されている、請求項１に記載のマウス。
（請求項１０）
前記ヒトＶＨ領域が内因性免疫グロブリン重鎖遺伝子座から発現される、請求項１に記載のマウス。
（請求項１１）
抗原での曝露に応答して抗原特異的抗体の集団を発現するマウスであって、前記抗原特異的抗体の集団の免疫グロブリンの軽鎖全てが、ヒトＶκ１−３９遺伝子セグメントに由来するヒトＶＬ領域を含み、前記免疫グロブリンの重鎖が、ＶＨ１−１８、ＶＨ１−６９、ＶＨ２−５、ＶＨ３−９、ＶＨ３−１３、ＶＨ３−１５、ＶＨ３−２０、ＶＨ３−２３、ＶＨ３−３０、ＶＨ３−４８、ＶＨ３−５３、ＶＨ３−６４、ＶＨ４−３１、ＶＨ４−３４、ＶＨ４−３９、ＶＨ４−５９、ＶＨ５−５１  およびＶＨ６−１から選択されるヒトＶＨ遺伝子セグメントに由来するヒト重鎖可変（ＶＨ）領域を含む、マウス。
（請求項１２）
前記ヒトＶＬ領域がＪκ５配列を含む、請求項１１に記載のマウス。
（請求項１３）
マウス免疫グロブリンのＶＬおよび／またはＪＬ遺伝子セグメントを欠く、請求項１１に記載のマウス。
（請求項１４）
前記ヒトＶＬ領域が、ヒト、ラット、またはマウスの免疫グロブリンの軽鎖定常（ＣＬ）領域に作動可能に連結されている、請求項１１に記載のマウス。
（請求項１５）
前記ヒトＶＬ領域が内因性免疫グロブリン軽鎖遺伝子座から発現される、請求項１１に記載のマウス。
（請求項１６）
前記ヒトＶＨ領域が、ヒトＪＨ１、ＪＨ２、ＪＨ３、ＪＨ４、ＪＨ５、およびＪＨ６遺伝子セグメントから選択されるヒトＪＨ領域をコードする配列を含む、請求項１１に記載のマウス。
（請求項１７）
前記ヒトＶＨ領域が、ヒト、ラット、またはマウスの免疫グロブリンの重鎖定常（ＣＨ）領域に作動可能に連結されている、請求項１１に記載のマウス。
（請求項１８）
前記ヒトＶＨ領域が内因性免疫グロブリン重鎖遺伝子座から発現される、請求項１１に記載のマウス。
（請求項１９）
抗原での曝露に応答して抗原特異的抗体の集団を発現するマウスであって、前記抗原特異的抗体の集団の免疫グロブリンの軽鎖全てが、ヒトＶκ３−２０遺伝子セグメントに由来するヒトＶＬ領域を含み、前記免疫グロブリンの重鎖が、ＶＨ１−１８、ＶＨ１−６９、ＶＨ２−７０、ＶＨ３−１１、ＶＨ３−３０、ＶＨ３−３３、ＶＨ３−５３、ＶＨ４−３９、ＶＨ４−５９、ＶＨ５−５１、およびＶＨ６−１から選択されるヒトＶＨ遺伝子セグメントに由来するヒト重鎖可変（ＶＨ）領域を含む、マウス。
（請求項２０）
前記ヒトＶＬ領域がＪκ５配列を含む、請求項１９に記載のマウス。
（請求項２１）
マウス免疫グロブリンのＶＬおよび／またはＪＬ遺伝子セグメントを欠く、請求項１９に記載のマウス。
（請求項２２）
前記ヒトＶＬ領域が、ヒト、ラット、またはマウスの免疫グロブリン軽鎖定常（ＣＬ）領域に作動可能に連結されている、請求項１９に記載のマウス。
（請求項２３）
前記ヒトＶＬ領域が内因性免疫グロブリンの軽鎖遺伝子座から発現される、請求項１９に記載のマウス。
（請求項２４）
前記ヒトＶＨ領域が、ヒトＪＨ２、ＪＨ３、ＪＨ４、ＪＨ５、およびＪＨ６遺伝子セグメントから選択されるヒトＪＨ領域をコードする配列を含む、請求項１９に記載のマウス。
（請求項２５）
前記ヒトＶＨ領域が、ヒト、ラット、またはマウスの免疫グロブリンの重鎖定常（ＣＨ）領域に作動可能に連結されている、請求項１９に記載のマウス。
（請求項２６）
前記ヒトＶＨ領域が内因性免疫グロブリンの重鎖遺伝子座から発現される、請求項１９に記載のマウス。
（請求項２７）
遺伝子改変マウスを作製するための方法が提供され、内因性マウス重鎖遺伝子座で全てまたは実質的に全てのマウスＶＨ遺伝子セグメントのヒトＶＨ遺伝子セグメントによる置換を含み、前記マウスが、全てのマウス軽鎖遺伝子セグメントを置換する再構成されたヒト軽鎖ＶＬ／ＪＬ配列を１つまたは２つ以下含むように遺伝子改変され、前記ヒト重鎖可変遺伝子セグメントがマウス定常遺伝子に連結されており、前記再構成されたヒト軽鎖配列がヒトまたはマウスの定常遺伝子に連結されており、前記ヒトＶＨ遺伝子セグメントが、ＶＨ１−２、ＶＨ１−３、ＶＨ１−８、ＶＨ１−１８、ＶＨ１−２４、ＶＨ１−４６、ＶＨ１−５８、ＶＨ１−６９、ＶＨ２−５、ＶＨ２−２６、ＶＨ２−７０、ＶＨ３−７、ＶＨ３−９、ＶＨ３−１１、ＶＨ３−１３、ＶＨ３−１５、ＶＨ３−２０、ＶＨ３−２１、ＶＨ３−２３、ＶＨ３−３０、ＶＨ３−３３、ＶＨ３−４３、ＶＨ３−４８、ＶＨ３−５３、ＶＨ３−６４、ＶＨ３−７２、ＶＨ３−７３、ＶＨ４−３１、ＶＨ４−３４、ＶＨ４−３９、ＶＨ４−５９、ＶＨ５−５１、ＶＨ６−１、およびそれらの組合せから選択される、方法。
（請求項２８）
前記２つの再構成されたヒト軽鎖ＶＬ／ＪＬ遺伝子セグメントが、再構成されたＶκ１−３９／Ｊ、再構成されたＶκ３−２０／Ｊ、およびそれらの組合せを含む、請求項２７に記載の方法。