【手続補正書】
【提出日】平成28年9月5日(2016.9.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
３つ以上の異なるペプチドを含む単離ペプチドの集団であって、前記集団内の各ペプチドが以下を含む、単離ペプチドの集団：
（ｉ）
2016500815.tif 000001
の配列もしくはその断片であって、
式中、Ｘ２が、ＡおよびＶからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ５が、ＥおよびＤからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ８が、ＴおよびＰからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ１０が、ＴおよびＶからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ１１が、ＧおよびＡからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ１２が、ＬおよびＶからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ１３が、ＹおよびＦからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ１８が、ＤおよびＮからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ２０が、ＤおよびＮからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ２２が、ＳおよびＶからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ２３が、Ａ、Ｓ、およびＴからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ２４が、ＡおよびＩからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ２５が、ＴおよびＰからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ２６が、Ｓ、Ｎ、およびＫからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ３９が、任意のアミノ酸であり、Ｘ４４が、任意のアミノ酸であり、Ｘ４９が、任意のアミノ酸であり、Ｘ５６が、任意のアミノ酸であり、且つＸ５８が、任意のアミノ酸である、前記配列もしくはその断片、または
（ｉｉ）
2016500815.tif 000002
の配列もしくはその断片であって、
式中、Ｘ２が、ＡおよびＶからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ５が、ＥおよびＤからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ８が、ＴおよびＰからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ１０が、ＴおよびＶからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ１１が、ＧおよびＡからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ１２が、ＬおよびＶからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ１３が、ＹおよびＦからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ１８が、ＤおよびＮからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ２０が、ＤおよびＮからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ２２が、ＳおよびＶからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ２３が、Ａ、Ｓ、およびＴからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ２４が、ＡおよびＩからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ２５が、ＴおよびＰからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ２６が、Ｓ、Ｎ、およびＫからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ３９が、任意のアミノ酸であり、Ｘ４１が、ＤおよびＮからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ４４が、任意のアミノ酸であり、Ｘ４８が、ＶおよびＡからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ４９が、任意のアミノ酸であり、Ｘ５６が、任意のアミノ酸であり、且つＸ５８が、任意のアミノ酸である、前記配列もしくはその断片。
【請求項２】
（i）Ｘ３９が、Ｋである；
（ii）Ｘ４４が、ＫおよびＲからなる群から選択されるアミノ酸であり、且つＸ４９が、ＥおよびＤからなる群から選択されるアミノ酸である；または
（iii）Ｘ５６が、ＫおよびＱからなる群から選択されるアミノ酸であり、且つＸ５８が、ＥおよびＴからなる群から選択されるアミノ酸である、
請求項１に記載の単離ペプチドの集団。
【請求項３】
前記断片が、配列番号３または配列番号７２からの少なくとも２０個、２５個、３０個、３５個、または４０個の連続したアミノ酸を含み、好ましくは、前記断片が、配列番号３または配列番号７２のアミノ酸３３〜７１を含む、請求項１に記載の単離ペプチドの集団。
【請求項４】
各単離ペプチドが、天然ＯＭＰ−１配列であるかまたは非ＯＭＰ−１エールリヒア抗原である付加的Ｎ末端またはＣ末端ペプチド配列を含む、請求項１に記載の単離ペプチドの集団。
【請求項５】
各単離ペプチドが、少なくとも７０個、７５個、８０個、または８５個のアミノ酸を含む、請求項１に記載の単離ペプチドの集団。
【請求項６】
前記単離ペプチドのうちの１つ以上が、
（i）リガンドに共役されているか、またはビオチン化されている；または
（ii）アビジン、ストレプトアビジン、ニュートラアビジン、血清アルブミン、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、酵素、または金属ナノ粒子もしくはナノシェルに共役されている、
請求項１に記載の単離ペプチドの集団。
【請求項７】
任意に金属ナノ層を介して固体支持体に固定化されている、請求項１に記載の単離ペプチドの集団。
【請求項８】
前記固体支持体が、複数のビーズ、ラテラルフローイムノアッセイデバイス内の流路、マイクロタイタープレート内のウェル、またはローター内の流路である、請求項１に記載の単離ペプチドの集団。
【請求項９】
エールリヒア種からの１つ以上の抗原ペプチドをさらに含む、請求項１に記載の単離ペプチドの集団。
【請求項１０】
前記１つ以上の抗原ペプチドが、
2016500815.tif 000003
の配列またはその断片を有し、式中、Ｘ７が、任意のアミノ酸であり、Ｘ１２が、任意のアミノ酸であり、Ｘ１７が、任意のアミノ酸であり、Ｘ２４が、任意のアミノ酸であり、且つＸ２６が、任意のアミノ酸である、請求項９に記載の単離ペプチドの集団。
【請求項１１】
（i）配列番号７１のＸ７が、Ｋである；
（ii）配列番号７１のＸ１２が、ＫおよびＲからなる群から選択されるアミノ酸であり、且つ配列番号７１のＸ１７が、ＥおよびＤからなる群から選択されるアミノ酸である；または
（iii）配列番号７１のＸ２４が、ＫおよびＱからなる群から選択されるアミノ酸であり、且つ配列番号７１のＸ２６が、ＥおよびＴからなる群から選択されるアミノ酸である、
請求項１０に記載の単離ペプチドの集団。
【請求項１２】
試料中のエールリヒア抗原のエピトープに対する抗体を検出するための方法であって、
試料を、請求項１に記載の単離ペプチドの集団と接触させることと、
前記集団内の１つ以上のペプチドを含む抗体−ペプチド複合体の形成を検出することと
を含み、
前記複合体の形成が、エールリヒア抗原のエピトープに対する抗体が前記試料中に存在することを示す、方法。
【請求項１３】
前記エールリヒア抗原が、エールリヒア・シャフェンシス（Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ  ｃｈａｆｆｅｅｎｓｉｓ）、エールリヒア・エウィンギ（Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ  ｅｗｉｎｇｉｉ）、エールリヒア・カニス（Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ  ｃａｎｉｓ）、またはエールリヒア・ムリス（Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ  ｍｕｒｉｓ）種に由来する、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
対象における単球および／または顆粒球エールリヒア症を検査するための方法であって、
前記対象からの試料を、請求項１に記載の単離ペプチドの集団と接触させることと、
前記集団内の１つ以上のペプチドを含む抗体−ペプチド複合体の形成を検出することと
を含み、
前記複合体の形成が、前記対象が前記単球および／または顆粒球エールリヒア症を有することを示す、方法。
【請求項１５】
請求項１に記載の単離ペプチドの集団と、前記集団内の１つ以上のペプチドのエピトープを認識する抗体に結合することができる標識試薬とを含む、キット。
【請求項１６】
非ヒト対象における単球および／または顆粒球エールリヒア症を診断するための方法であって、
前記対象からの試料を、請求項１に記載の単離ペプチドの集団と接触させることと、
前記集団内の１つ以上のペプチドを含む抗体−ペプチド複合体の形成を検出することと
を含み、
前記複合体の形成が、前記対象が前記単球および／または顆粒球エールリヒア症を有することを示す、方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２９】
[本発明1001]
3つ以上の異なるペプチドを含む単離ペプチドの集団であって、前記集団内の各ペプチドが以下を含む、単離ペプチドの集団：
（ｉ）
2016500815.tif 000004
の配列もしくはその断片であって、
式中、Ｘ2が、ＡおよびＶからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ5が、ＥおよびＤからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ8が、ＴおよびＰからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ10が、ＴおよびＶからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ11が、ＧおよびＡからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ12が、ＬおよびＶからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ13が、ＹおよびＦからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ18が、ＤおよびＮからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ20が、ＤおよびＮからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ22が、ＳおよびＶからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ23が、Ａ、Ｓ、およびＴからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ24が、ＡおよびＩからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ25が、ＴおよびＰからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ26が、Ｓ、Ｎ、およびＫからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ39が、任意のアミノ酸であり、Ｘ44が、任意のアミノ酸であり、Ｘ49が、任意のアミノ酸であり、Ｘ56が、任意のアミノ酸であり、Ｘ58が、任意のアミノ酸である、前記配列もしくはその断片、または
（ｉｉ）
2016500815.tif 000005
の配列もしくはその断片であって、
式中、Ｘ2が、ＡおよびＶからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ5が、ＥおよびＤからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ8が、ＴおよびＰからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ10が、ＴおよびＶからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ11が、ＧおよびＡからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ12が、ＬおよびＶからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ13が、ＹおよびＦからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ18が、ＤおよびＮからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ20が、ＤおよびＮからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ22が、ＳおよびＶからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ23が、Ａ、Ｓ、およびＴからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ24が、ＡおよびＩからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ25が、ＴおよびＰからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ26が、Ｓ、Ｎ、およびＫからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ39が、任意のアミノ酸であり、Ｘ41が、ＤおよびＮからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ44が、任意のアミノ酸であり、Ｘ48が、ＶおよびＡからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ49が、任意のアミノ酸であり、Ｘ56が、任意のアミノ酸であり、Ｘ58が、任意のアミノ酸である、前記配列もしくはその断片。
[本発明1002]
Ｘ39が、Ｋである、本発明1001の単離ペプチドの集団。
[本発明1003]
Ｘ44が、ＫおよびＲからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ49が、ＥおよびＤからなる群から選択されるアミノ酸である、本発明1001の単離ペプチドの集団。
[本発明1004]
Ｘ56が、ＫおよびＱからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ58が、ＥおよびＴからなる群から選択されるアミノ酸である、本発明1001の単離ペプチドの集団。
[本発明1005]
前記断片が、配列番号3または配列番号72からの少なくとも20個、25個、30個、35個、または40個の連続したアミノ酸を含む、本発明1001の単離ペプチドの集団。
[本発明1006]
前記断片が、配列番号3または配列番号72のアミノ酸33〜71を含む、本発明1005の単離ペプチドの集団。
[本発明1007]
各単離ペプチドが、天然ＯＭＰ−1配列であるかまたは非ＯＭＰ−1エールリヒア抗原である付加的Ｎ末端ペプチド配列を含む、本発明1001の単離ペプチドの集団。
[本発明1008]
各単離ペプチドが、天然ＯＭＰ−1配列であるかまたは非ＯＭＰ−1エールリヒア抗原である付加的Ｃ末端ペプチド配列を含む、本発明1001の単離ペプチドの集団。
[本発明1009]
各単離ペプチドが、少なくとも70個、75個、80個、または85個のアミノ酸を含む、本発明1001の単離ペプチドの集団。
[本発明1010]
前記単離ペプチドのうちの1つ以上が、リガンドに共役されているか、またはビオチン化されている、本発明1001の単離ペプチドの集団。
[本発明1011]
前記単離ペプチドのうちの1つ以上が、アビジン、ストレプトアビジン、ニュートラアビジン、血清アルブミン、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、酵素、または金属ナノ粒子もしくはナノシェルに共役されている、本発明1001の単離ペプチドの集団。
[本発明1012]
任意に金属ナノ層を介して固体支持体に固定化されている、本発明1001の単離ペプチドの集団。
[本発明1013]
前記固体支持体が、複数のビーズ、ラテラルフローイムノアッセイデバイス内の流路、マイクロタイタープレート内のウェル、またはローター内の流路である、本発明1001の単離ペプチドの集団。
[本発明1014]
エールリヒア種からの1つ以上の抗原ペプチドをさらに含む、本発明1001の単離ペプチドの集団。
[本発明1015]
前記1つ以上の抗原ペプチドが、
2016500815.tif 000006
の配列またはその断片を有し、式中、Ｘ7が、任意のアミノ酸であり、Ｘ12が、任意のアミノ酸であり、Ｘ17が、任意のアミノ酸であり、Ｘ24が、任意のアミノ酸であり、Ｘ26が、任意のアミノ酸である、本発明1014の単離ペプチドの集団。
[本発明1016]
配列番号71のＸ7が、Ｋである、本発明1015の単離ペプチドの集団。
[本発明1017]
配列番号71のＸ12が、ＫおよびＲからなる群から選択されるアミノ酸であり、配列番号71のＸ17が、ＥおよびＤからなる群から選択されるアミノ酸である、本発明1015の単離ペプチドの集団。
[本発明1018]
配列番号71のＸ24が、ＫおよびＱからなる群から選択されるアミノ酸であり、配列番号71のＸ26が、ＥおよびＴからなる群から選択されるアミノ酸である、本発明1015の単離ペプチドの集団。
[本発明1019]
試料中のエールリヒア抗原のエピトープに対する抗体を検出するための方法であって、
試料を、本発明1001の単離ペプチドの集団と接触させることと、
前記集団内の1つ以上のペプチドを含む抗体−ペプチド複合体の形成を検出することと
を含み、
前記複合体の形成が、エールリヒア抗原のエピトープに対する抗体が前記試料中に存在することを示す、方法。
[本発明1020]
前記エールリヒア抗原が、エールリヒア・シャフェンシス（Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ  ｃｈａｆｆｅｅｎｓｉｓ）、エールリヒア・エウィンギ（Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ  ｅｗｉｎｇｉｉ）、エールリヒア・カニス（Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ  ｃａｎｉｓ）、またはエールリヒア・ムリス（Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ  ｍｕｒｉｓ）種に由来する、本発明1019の方法。
[本発明1021]
前記単離ペプチドの集団が、任意に金属ナノ層を介して固体支持体に固定化されている、本発明1019の方法。
[本発明1022]
前記固体支持体が、複数のビーズ、ラテラルフローアッセイデバイス内の流路、マイクロタイタープレート内のウェル、またはローター内の流路である、本発明1021の方法。
[本発明1023]
前記検出するステップが、（ｉ）ＥＬＩＳＡアッセイを行うこと、（ｉｉ）ラテラルフローアッセイを行うこと、（ｉｉｉ）凝集アッセイを行うこと、（ｉｖ）ウェスタンブロット、スロットブロット、もしくはドットブロットを行うこと、（ｖ）波長シフトアッセイを行うこと、または（ｖｉ）試料を分析用または遠心分離用ローターに供することを含む、本発明1019の方法。
[本発明1024]
前記試料が、ヒト、イヌ、またはネコ対象に由来する、本発明1019の方法。
[本発明1025]
前記試料が、血液、血清、血漿、脳脊髄液、組織抽出物、尿、または唾液試料である、本発明1019の方法。
[本発明1026]
複数の抗体−ペプチド複合体の形成が検出され、かつ前記複合体の形成が、複数のエールリヒア種からのエールリヒア抗原のエピトープに対する抗体が前記試料中に存在することを示す、本発明1019の方法。
[本発明1027]
対象における単球および／または顆粒球エールリヒア症を診断するための方法であって、
前記対象からの試料を、本発明1001の単離ペプチドの集団と接触させることと、
前記集団内の1つ以上のペプチドを含む抗体−ペプチド複合体の形成を検出することと
を含み、
前記複合体の形成が、対象が前記単球および／または顆粒球エールリヒア症を有することを示す、方法。
[本発明1028]
本発明1001の単離ペプチドの集団と、前記集団内の1つ以上のペプチドのエピトープを認識する抗体に結合することができる標識試薬とを含む、キット。
[本発明1029]
前記単離ペプチドの集団が、任意に金属ナノ層を介して固体支持体に付着しているかまたはその表面に固定化されている、本発明1028のキット。
[本発明1030]
前記固体支持体が、複数のビーズ、管もしくはウェル、ラテラルフローアッセイデバイス、または分析用もしくは遠心分離用ローターである、本発明1028のキット。
[本発明1031]
前記標識試薬が、検出可能な標識に共役された抗ヒト、抗イヌ、もしくは抗ネコＩｇＧ抗体または抗ヒト、抗イヌ、もしくは抗ネコＩｇＭ抗体である、本発明1028のキット。
[本発明1032]
前記検出可能な標識が、酵素、金属ナノ粒子、金属ナノシェル、金属ナノ層、フルオロフォア、または着色ラテックス粒子である、本発明1031のキット。
[本発明1033]
前記標識試薬が、検出可能な標識に共役された、プロテインＡ、プロテインＧ、および／またはプロテインＡ／Ｇ融合タンパク質である、本発明1028のキット。
[本発明1034]
前記検出可能な標識が、酵素、金属ナノ粒子、金属ナノシェル、金属ナノ層、フルオロフォア、または着色ラテックス粒子である、本発明1033のキット。
本発明の付加的態様および実施形態は、続く詳細な説明から明らかとなるであろう。