【手続補正書】
【提出日】平成28年10月12日(2016.10.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
シトクロムＰ４５０レダクターゼまたはその触媒活性部分をコードする核酸分子を含む宿主細胞であって、
前記コードされるシトクロムＰ４５０レダクターゼまたはその触媒活性部分が、配列番号１２もしくは１３に記載のシトクロムＰ４５０レダクターゼポリペプチドまたはその対応する触媒活性部分に対して少なくとも８０％の配列同一性を示し、
前記コードされるシトクロムＰ４５０レダクターゼポリペプチドまたはその触媒活性断片が、ＮＡＤＰＨから電子受容体への２個の電子の伝達を触媒し、
前記核酸分子が前記宿主細胞にとって異種性である、
前記宿主細胞。
【請求項２】
コードされるシトクロムＰ４５０レダクターゼポリペプチドまたはその触媒活性断片が、配列番号１２または１３に記載のアミノ酸の配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のアミノ酸配列同一性を示す、請求項１に記載の宿主細胞。
【請求項３】
コードされるシトクロムＰ４５０レダクターゼポリペプチドまたはその触媒活性部分が、Santalum属のＰ４５０レダクターゼポリペプチドである、請求項１または２に記載の宿主細胞。
【請求項４】
コードされるシトクロムＰ４５０レダクターゼポリペプチドまたはその触媒活性部分が、Santalum albumのＰ４５０レダクターゼポリペプチドである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の宿主細胞。
【請求項５】
コードされるシトクロムＰ４５０レダクターゼポリペプチドまたはその触媒活性断片が、配列番号１２または１３に記載のシトクロムＰ４５０レダクターゼポリペプチドに対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸の配列を含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の宿主細胞。
【請求項６】
コードされるシトクロムＰ４５０レダクターゼポリペプチドまたはその触媒活性断片が、配列番号１２または１３に記載のアミノ酸の配列を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の宿主細胞。
【請求項７】
コードされるシトクロムＰ４５０レダクターゼポリペプチドが、配列番号１４もしくは１５に記載のアミノ酸の配列、または、配列番号１４もしくは１５に記載のアミノ酸の配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％のアミノ酸配列同一性を示す配列を含む触媒活性断片である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の宿主細胞。
【請求項８】
電子受容体が、シトクロムＰ４５０、ヘムオキシゲナーゼ、シトクロムｂ５、またはスクアレンエポキシダーゼである、請求項１〜７のいずれか一項に記載の宿主細胞。
【請求項９】
シトクロムＰ４５０オキシダーゼポリペプチドまたはその触媒活性部分をコードする核酸分子を含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の宿主細胞であって、
前記コードされるシトクロムＰ４５０オキシダーゼポリペプチドまたはその触媒活性部分が、配列番号５０またはその対応する触媒活性部分に対して少なくとも７０％の配列同一性を示し、
前記コードされるシトクロムＰ４５０オキシダーゼまたはその触媒活性断片が、サンタレンおよび／またはベルガモテンの水酸化または一酸素添加を触媒し、
前記核酸分子が前記宿主細胞にとって異種性である、
前記宿主細胞。
【請求項１０】
コードされる全長シトクロムＰ４５０オキシダーゼポリペプチドが、配列番号５０に対して少なくとも７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を示す、請求項１〜９のいずれか一項に記載の宿主細胞。
【請求項１１】
コードされるシトクロムＰ４５０オキシダーゼポリペプチドまたはその触媒活性断片が、配列番号７、７４、７５、７６、もしくは７７に記載のアミノ酸の配列を含むか、または、
コードされるシトクロムＰ４５０オキシダーゼポリペプチドまたはその触媒活性断片が、配列番号７、７４、７５、７６、もしくは７７に記載のシトクロムＰ４５０オキシダーゼポリペプチドに対して少なくとも７０％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を含み、および
コードされるシトクロムＰ４５０オキシダーゼポリペプチドまたはその触媒活性断片が、サンタレンおよび／もしくはベルガモテンの水酸化もしくは一酸素添加を触媒する、
請求項１〜１０のいずれか一項に記載の宿主細胞。
【請求項１２】
コードされるシトクロムＰ４５０オキシダーゼポリペプチドまたはその触媒活性断片が、配列番号７、７４、７５、７６、または７７に記載のアミノ酸の配列に対して少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のアミノ酸配列同一性を示す、請求項１１に記載の宿主細胞。
【請求項１３】
シトクロムＰ４５０オキシダーゼポリペプチドまたはその触媒活性断片が、配列番号６、８、９、または７３に記載のアミノ酸の配列を含む、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の宿主細胞。
【請求項１４】
（ａ）シトクロムＰ４５０オキシダーゼポリペプチドまたはその触媒活性部分をコードする核酸分子、ここで
該コードされるシトクロムＰ４５０オキシダーゼポリペプチドまたはその触媒活性部分が、配列番号５０に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を示し、
該コードされるシトクロムＰ４５０オキシダーゼポリペプチドまたはその触媒活性断片が、サンタレンおよび／またはベルガモテンの水酸化または一酸素添加を触媒し、
前記核酸分子が前記の宿主細胞にとって異種性である、
（ｂ）シトクロムＰ４５０レダクターゼまたはその触媒活性部分をコードする核酸分子、ここで
該核酸分子が前記の宿主細胞にとって異種性であり、
前記コードされるシトクロムＰ４５０レダクターゼまたはその触媒活性部分が、配列番号１２〜１５に記載のアミノ酸の配列、または、配列番号１２〜１５に記載のシトクロムＰ４５０レダクターゼポリペプチドに対して少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸の配列を含む、および
（ｃ）サンタレンシンターゼをコードする核酸分子、ここで
該核酸分子が前記の宿主細胞にとって異種性であり、
前記コードされるサンタレンシンターゼが、配列番号１７、５２、もしくは５３のいずれかに記載のアミノ酸の配列、または、配列番号１７、５２、もしくは５３のいずれか対して少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一のアミノ酸の配列あるいはその触媒活性断片を含む、
を含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の宿主細胞。
【請求項１５】
（ａ）シトクロムＰ４５０オキシダーゼポリペプチドまたはその触媒活性部分をコードする核酸分子、ここで
該コードされるシトクロムＰ４５０オキシダーゼポリペプチドまたはその触媒活性部分が、配列番号５０に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を示し、
前記コードされるシトクロムＰ４５０オキシダーゼポリペプチドまたはその触媒活性断片が、サンタレンおよび／またはベルガモテンの水酸化または一酸素添加を触媒する、
（ｂ）シトクロムＰ４５０レダクターゼまたはその触媒活性部分をコードする核酸分子、ここで
該コードされるシトクロムＰ４５０レダクターゼまたはその触媒活性部分が、配列番号１２〜１５に記載のアミノ酸の配列、または、配列番号１２〜１５に記載のシトクロムＰ４５０レダクターゼポリペプチドに対して少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸の配列を含む、および
（ｃ）サンタレンシンターゼをコードする核酸分子、ここで
該コードされるサンタレンシンターゼが、配列番号１７、５２、もしくは５３のいずれかに記載のアミノ酸の配列、または、配列番号１７、５２、もしくは５３のいずれかに対して、少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一のアミノ酸の配列あるいはその触媒活性断片を含む、
を含み、（ａ）または（ｂ）に記載の核酸分子の少なくとも１つが、前記の宿主細胞にとって異種性である、宿主細胞。
【請求項１６】
コードされるシトクロムＰ４５０オキシダーゼポリペプチドまたはその触媒活性部分が、配列番号６〜９もしくは７３〜７７に記載のアミノ酸の配列、または、配列番号６〜９もしくは７３〜７７に記載のシトクロムＰ４５０オキシダーゼポリペプチドに対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を含む、請求項１４または１５に記載の宿主細胞。
【請求項１７】
原核細胞または真核細胞である、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の宿主細胞。
【請求項１８】
ファルネシル二リン酸を天然に産生するか、または、改変されていない細胞と比較してより多くのファルネシル二リン酸を産生するように改変されている、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の宿主細胞。
【請求項１９】
シトクロムＰ４５０オキシダーゼポリペプチドまたはその触媒活性部分をコードする、単離された核酸分子であって、
該核酸分子が、ｃＤＮＡであり、
前記コードされるシトクロムＰ４５０オキシダーゼポリペプチドまたはその触媒活性部分が、配列番号５０またはその対応する触媒活性部分に対して少なくとも７０％の配列同一性を示し、
前記コードされるシトクロムＰ４５０オキシダーゼまたはその触媒活性断片が、サンタレンおよび／またはベルガモテンの水酸化または一酸素添加を触媒する、
前記核酸分子。
【請求項２０】
全長のコードされるシトクロムＰ４５０オキシダーゼポリペプチドが、配列番号５０に対して少なくとも７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を示す、請求項１９に記載の核酸分子。
【請求項２１】
コードされるシトクロムＰ４５０オキシダーゼポリペプチドもしくはその触媒活性断片が、配列番号７、７４、７５、７６、もしくは７７に記載のアミノ酸の配列を含むか、または
コードされるシトクロムＰ４５０オキシダーゼポリペプチドもしくはその触媒活性断片が、配列番号７、７４、７５、７６、もしくは７７に記載のシトクロムＰ４５０オキシダーゼポリペプチドに対して少なくとも７０％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を含み、
前記コードされるシトクロムＰ４５０オキシダーゼポリペプチドもしくはその触媒活性断片が、サンタレンおよび／もしくはベルガモテンの水酸化または一酸素添加を触媒する、
請求項１９または２０に記載の核酸分子。
【請求項２２】
シトクロムＰ４５０レダクターゼまたはその触媒活性部分をコードする核酸分子であって、
該核酸分子がｃＤＮＡであり、
前記コードされるシトクロムＰ４５０レダクターゼまたはその触媒活性部分が、配列番号１２または１３に記載のシトクロムＰ４５０レダクターゼポリペプチドに対して少なくとも８０％の配列同一性を示し、
前記のコードされるシトクロムＰ４５０レダクターゼポリペプチドまたはその触媒活性断片が、ＮＡＤＰＨから電子受容体への２個の電子の伝達を触媒する、
前記核酸分子。
【請求項２３】
コードされるシトクロムＰ４５０レダクターゼポリペプチドまたはその触媒活性断片が、配列番号１２または１３に記載のアミノ酸の配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のアミノ酸配列同一性を示す、請求項２２に記載の核酸分子。
【請求項２４】
コードされるシトクロムＰ４５０レダクターゼポリペプチドまたはその触媒活性断片が、配列番号１２または１３に記載のアミノ酸の配列を含む、請求項２２または２３に記載の核酸分子。
【請求項２５】
コードされるシトクロムＰ４５０レダクターゼポリペプチドが、配列番号１４もしくは１５に記載のアミノ酸の配列、または、配列番号１４もしくは１５に記載のアミノ酸の配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％のアミノ酸配列同一性を示す配列を含む触媒活性断片である、請求項２２〜２４のいずれか一項に記載の核酸分子。
【請求項２６】
電子受容体が、シトクロムＰ４５０、ヘムオキシゲナーゼ、シトクロムｂ５、またはスクアレンエポキシダーゼである、請求項２２〜２５のいずれか一項に記載の核酸分子。
【請求項２７】
請求項２２〜２６のいずれか一項に記載の核酸分子によってコードされる、シトクロムＰ４５０レダクターゼポリペプチドまたはその触媒活性部分。
【請求項２８】
融合蛋白質をコードする核酸分子であって、
ａ）Santalum albumのシトクロムＰ４５０オキシダーゼまたはその触媒活性断片、ここで該シトクロムＰ４５０オキシダーゼまたはその触媒活性断片は、サンタレンおよび／またはベルガモテンの水酸化または一酸素添加を触媒する、
ｂ）シトクロムＰ４５０レダクターゼまたはその触媒活性断片、ここで該シトクロムＰ４５０レダクターゼは、ＮＡＤＰＨからシトクロムＰ４５０オキシダーゼ電子受容体への２個の電子の伝達を触媒する、ならびに
ｃ）サンタレンシンターゼまたはその触媒活性断片、ここで該サンタレンシンターゼは、前記シトクロムＰ４５０のサンタレンおよび／またはベルガモテンのテルペン基質の生成を触媒する、
のポリペプチドからなる群から選択される、少なくとも２つのポリペプチドをコードする核酸の配列を含み、
ここで、前記コードされるシトクロムＰ４５０オキシダーゼまたはその触媒活性断片が、配列番号６〜９もしくは７３〜７７に記載のアミノ酸の配列、または、配列番号６〜９もしくは７３〜７７に記載のシトクロムＰ４５０オキシダーゼポリペプチドに対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を含み、
前記サンタレンシンターゼまたはその触媒活性断片が、配列番号１７、５２、もしくは５３のいずれかに記載のアミノ酸の配列、または、配列番号１７、５２、もしくは５３のいずれかもしくはその触媒活性断片に対して少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一のアミノ酸の配列を含む、
前記核酸分子。
【請求項２９】
シトクロムＰ４５０オキシダーゼまたはその触媒活性断片をコードする核酸と、シトクロムＰ４５０レダクターゼまたはその触媒活性断片をコードする核酸とを含み、
前記コードされるシトクロムＰ４５０オキシダーゼまたはその触媒活性断片が、配列番号６〜９もしくは７３〜７７に記載のアミノ酸の配列、または、配列番号６〜９もしくは７３〜７７に記載のシトクロムＰ４５０オキシダーゼポリペプチドに対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を含み、
前記シトクロムＰ４５０レダクターゼまたはその触媒活性断片が、配列番号１２〜１５に記載のアミノ酸の配列、または、配列番号１２〜１５に記載のシトクロムＰ４５０レダクターゼポリペプチドに対して少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸の配列を含む、
請求項２８に記載の核酸分子。
【請求項３０】
請求項２２〜２６、２８および２９のいずれか一項に記載の核酸分子を含む、ベクター。
【請求項３１】
請求項３０に記載のベクターを含む、宿主細胞。
【請求項３２】
シトクロムＰ４５０レダクターゼポリペプチドまたはその触媒活性断片を産生するための方法であって、
請求項２２〜２６、２８および２９のいずれか一項に記載の核酸分子または請求項３０に記載のベクターを、細胞内に導入すること、
前記細胞を、前記核酸またはベクターによってコードされるシトクロムＰ４５０レダクターゼポリペプチドの発現にとって適当な条件下において培養すること、および
任意に、前記シトクロムＰ４５０レダクターゼポリペプチドを単離すること、
を含む、前記方法。
【請求項３３】
シトクロムＰ４５０レダクターゼポリペプチドまたはその触媒活性断片を産生するための方法であって、
請求項１〜６および３１のいずれか一項に記載の細胞を、前記シトクロムＰ４５０レダクターゼポリペプチドの発現にとって適当な条件下において培養すること、および
任意に、前記シトクロムＰ４５０レダクターゼポリペプチドを単離すること、
を含む、前記方法。
【請求項３４】
サンタロール、ベルガモトールおよび／またはその混合物を産生するための方法であって、
（ａ）非環式のピロホスファートのテルペン前駆体とサンタレンシンターゼまたはその触媒活性断片とを、サンタレンおよび／またはベルガモテンの生成にとって適当な条件下において接触させること、
（ｂ）サンタレンおよび／またはベルガモテンとシトクロムＰ４５０オキシダーゼポリペプチドとを接触させること、および
（ｃ）任意に、前記サンタロール、ベルガモトールおよび／またはその混合物を単離すること、
を含み、
ステップ（ａ）および（ｂ）が、同時にまたは連続的に実施され、サンタレンシンターゼおよびＰ４５０シトクロムオキシダーゼを含有する融合ポリペプチドをコードする請求項２８に記載の核酸分子を用いて実施される、
前記方法。
【請求項３５】
ステップ（ｂ）がＰ４５０レダクターゼの存在下において起こる、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
サンタロール、ベルガモトール、および／またはその混合物を産生するための方法であって、
（ａ）請求項１〜１８および３１のいずれか一項に記載の宿主細胞を、サンタロール、ベルガモトール、および／またはその混合物の生成に適当な条件下において培養すること、および
（ｂ）任意に、前記のサンタロール、ベルガモトール、および／またはその混合物を単離すること、
を含む、前記方法。