【手続補正書】
【提出日】平成28年7月15日(2016.7.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）細胞に一式の発現ベクターを遺伝子導入して、感染性インフルエンザウイルスのシードを生成する工程と、
ｂ）ＣＨＯ細胞を感染性インフルエンザウイルスの前記シードで感染させる工程と
を含む、感染性インフルエンザウイルスの産生方法。
【請求項２】
工程ａ）における細胞が、（ｉ）霊長類、イヌもしくは鳥起源の細胞である；（ｉｉ）霊長類、イヌもしくは鳥起源の細胞とＣＨＯ細胞の混合物である；または（ｉｉｉ）ＣＨＯ細胞からなる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
霊長類起源の細胞がＶｅｒｏ細胞である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記ＣＨＯ細胞がＣＨＯ−Ｋ１細胞である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記一式の発現ベクターが、
−  少なくともインフルエンザＰＢ１、ＰＢ２、ＰＡ、ＮＰ、Ｍ、ＮＳ、ＨＡ、およびＮＡタンパク質をコードしている１つまたはそれ以上のｍＲＮＡの発現を可能にする発現ベクターと、
−  インフルエンザＰＢ１、ＰＢ２、ＰＡ、ＮＰ、Ｍ、ＮＳ、ＨＡ、およびＮＡ  ｖＲＮＡ、または対応するｃＲＮＡの１つまたはそれ以上の発現を可能にする発現ベクターとを含み、
ここで前記一式の発現ベクターの発現によって、（ｉ）該インフルエンザｖＲＮＡを含有しているリボ核タンパク質複合体（ＲＮＰ）の形成、および（ｉｉ）前記遺伝子導入細胞中での感染性インフルエンザウイルスの生成が可能になる、
請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
（ｉ）インフルエンザＰＢ１、ＰＢ２、ＰＡ、ＮＰ、Ｍ、ＮＳ、ＨＡ、およびＮＡタンパク質をコードしているｍＲＮＡの１つまたはそれ以上の発現を可能にする前記発現ベクターが、異なる４つの一方向性プラスミドを含み、各プラスミドは、ＰＢ１、ＰＢ２、Ｐ
Ａ、およびＮＰインフルエンザタンパク質から選択される４種の別個のタンパク質の１つをコードしているｍＲＮＡに相補的な１つまたはそれ以上のｃＤＮＡを含有し、ここで前記１つまたはそれ以上のｃＤＮＡはＲＮＡポリメラーゼＩＩに結合するプロモーターの制御下にあり、そして
（ｉｉ）インフルエンザＰＢ１、ＰＢ２、ＰＡ、ＮＰ、Ｍ、ＮＳ、ＨＡ、およびＮＡ  ｖＲＮＡ、または対応するｃＲＮＡの発現を可能にする前記発現ベクターが、異なる８つの一方向性プラスミドを含み、各プラスミドは、前記ＰＢ１、ＰＢ２、ＰＡ、ＮＰ、Ｍ、ＮＳ、ＨＡ、およびＮＡインフルエンザｖＲＮＡから選択される８つの別個のｖＲＮＡ、または対応するｃＲＮＡに相補的な１つまたはそれ以上のｃＤＮＡを含有し、ここで前記１つまたはそれ以上のｃＤＮＡはＲＮＡポリメラーゼＩに結合するプロモーターの制御下にある、
請求項５に記載の方法。
【請求項７】
（ｉｉ）項の前記各プラスミドが、センス鎖の５’から３’に、
ａ）ＲＮＡポリメラーゼＩまたはＴ７  ＲＮＡポリメラーゼに結合するプロモーターと；
ｂ）センス鎖の５’から３’に、
−  認識配列の外側に切断部位を有し、粘着末端を生じる、第１の制限酵素の逆方向相補的認識配列；
−  認識配列の内側に切断部位を有する第２の制限酵素の制限部位；
−  認識配列の内側に切断部位を有する第３の制限酵素の制限部位；および
−  認識配列の外側に切断部位を有し、粘着末端を生じる、前記第１の制限酵素の認識配列を含み、
前記第２および第３の制限酵素は異なる、組換えカセットと；
ｃ）
−  該プロモーターがＲＮＡポリメラーゼＩに結合するとき、前記ターミネーター配列は、肝炎デルタリボザイム配列であり；
−  該プロモーターがＴ７  ＲＮＡポリメラーゼに結合するとき、前記ターミネーター配列は、Ｔ７ポリメラーゼターミネーター配列である、
ターミネーター配列と
を含むベクターに、前記ｃＤＮＡ配列をクローン化することによって得たものである、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記ベクターが、配列番号：１の配列を含む、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記一式の発現ベクターが、異なる８つの双方向性プラスミドを含み、各プラスミドは、２つのプロモーターの制御下にある、前記ＰＢ１、ＰＢ２、ＰＡ、ＮＰ、Ｍ、ＮＳ、ＨＡ、およびＮＡインフルエンザｖＲＮＡから選択される８つの別個のｖＲＮＡの１つに相補的なｃＤＮＡを含有しており、前記第１のプロモーターは、ポリメラーゼＩに結合し、前記第２のプロモーターは、ポリメラーゼＩＩに結合し、
ここで前記一式の発現ベクターの発現によって、（ｉ）該インフルエンザｖＲＮＡを含有しているリボ核タンパク質複合体（ＲＮＰ）の形成、および（ｉｉ）前記遺伝子導入細胞中での感染性インフルエンザウイルスの生成が可能になる、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
産生される感染性インフルエンザウイルスが、Ａ型またはＢ型インフルエンザウイルスである、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
産生される感染性インフルエンザウイルスが、再集合体感染性インフルエンザウイルスであり、その遺伝物質は、少なくとも２種のドナーウイルスの遺伝物質を組み合わせた結
果として得られる、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
ドナーウイルスが、Ａ／プエルトリコ／８／３４（Ｈ１Ｎ１）（Ａ／ＰＲ／８／３４）、Ｂ／Ｌｅｅ／４０、またはＢ／パナマ／４５／９０のうちの１つである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
産生される感染性インフルエンザウイルスがキメラウイルスである、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
前記キメラウイルスが、キメラインフルエンザＨＡおよび／またはＮＡ  ｖＲＮＡを含有している、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
キメラインフルエンザＨＡ  ｖＲＮＡおよび／またはＮＡ  ｖＲＮＡが、季節性または汎流行性ウイルスからのＨＡ  ｖＲＮＡの１つもしくはそれ以上のドメインまたはＮＡ  ｖＲＮＡの１つもしくはそれ以上のドメインと、別のドナーウイルスからのＨＡ  ｖＲＮＡの１つもしくはそれ以上のドメインまたはＮＡ  ｖＲＮＡの１つもしくはそれ以上のドメインとを含み、前記季節性または汎流行性インフルエンザウイルスからのＨＡ  ｖＲＮＡの少なくとも１つのドメインは、前記季節性または汎流行性インフルエンザウイルスからのＨＡ１および／またはＨＡ２のような、ＨＡの抗原性外部ドメインをコードしているｍＲＮＡの領域に相補的であり、前記季節性または汎流行性インフルエンザウイルスからのＮＡ  ｖＲＮＡの少なくとも１つのドメインは、前記季節性または汎流行性インフルエンザウイルスからのＮＡの抗原性外部ドメインをコードしているｍＲＮＡの領域に相補的である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記方法を、無血清培地または無動物成分条件において完全に実行する、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
ａ）請求項１〜１６のいずれか１項に記載の方法によってインフルエンザウイルスを産生する工程と；
ｂ）感染性インフルエンザウイルスを、ＣＨＯ細胞中で増加させた後収穫する工程と、
ｃ）収穫した感染性インフルエンザウイルスを精製する工程と、
ｄ）場合により、精製したウイルスを不活化する工程と、
ｅ）精製したウイルスを薬学的に許容される担体と混合する工程と
を含む、インフルエンザワクチン組成物の調製方法。
【請求項１８】
請求項５〜９のいずれか１項で定義したとおりの一式の発現ベクターを含むＣＨＯ細胞。
【請求項１９】
ＣＨＯ−Ｋ１細胞である、請求項１８に記載のＣＨＯ細胞。
【請求項２０】
センス鎖の５’から３’に、
−  ＲＮＡポリメラーゼＩまたはＴ７  ＲＮＡポリメラーゼに結合するプロモーターと；
−  センス鎖の５’から３’に、
−  認識配列の外側に切断部位を有し、粘着末端を生じる、第１の制限酵素の逆方向相補的認識配列；
−  認識配列の内側に切断部位を有する第２の制限酵素の制限部位；
−  認識配列の内側に切断部位を有する第３の制限酵素の制限部位；および
−  認識配列の外側に切断部位を有し、粘着末端を生じる、前記第１の制限酵素の認識配列を含み、
前記第２および第３の制限酵素は異なる、組換えカセットと；
−  該プロモーターがＲＮＡポリメラーゼＩに結合するとき、前記ターミネーター配列は、肝炎デルタリボザイム配列であり、
−  該プロモーターがＴ７  ＲＮＡポリメラーゼに結合するとき、前記ターミネーター配列は、Ｔ７ポリメラーゼターミネーター配列である、
ターミネーター配列と
を含むベクター。
【請求項２１】
前記プロモーターが、げっ歯類ＲＮＡポリメラーゼＩまたはヒトＲＮＡポリメラーゼＩに結合する、請求項２０に記載のベクター。
【請求項２２】
組換えカセットの前記第１の制限酵素が、ＢｂｓＩまたはＳａｐＩであり、組換えカセットの前記第２および第３の制限酵素が、ＮｏｔＩおよびＳｂｆＩからなる群から選択される、請求項２０または２１に記載のベクター。
【請求項２３】
前記組換えカセットが、配列番号：２の配列からなる、請求項２０〜２２のいずれか１項に記載のベクター。
【請求項２４】
配列番号：１の配列を含む、請求項２０〜２３のいずれか１項に記載のベクター。
【請求項２５】
再集合体ＲＮＡウイルスを逆遺伝学によって産生する方法において使用するための、請求項２０〜２４のいずれか１項に記載のベクター。
【請求項２６】
インフルエンザ発現ベクターを含むＣＨＯ細胞を製造する方法であって、前記方法が、請求項５〜９のいずれか１項で定義された一式の発現ベクターをＣＨＯ細胞に形質導入する工程を含み、場合により前記ＣＨＯ細胞はＣＨＯ−Ｋ１細胞である、方法。