【誤訳訂正書】
【提出日】平成28年3月15日(2016.3.15)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
多能性幹細胞から膵内分泌前駆細胞集団を誘導する方法であって、
ａ．多能性幹細胞集団を培養する工程と、
ｂ．前記多能性幹細胞を、胚体内胚葉系（definitive endoderm lineage）に特徴的なマーカーを発現する細胞集団へと分化させる工程と、
ｃ．前記胚体内胚葉系に特徴的なマーカーを発現する細胞を、原始腸管細胞集団へと分化させる工程と、
ｄ．前記原始腸管細胞集団を、前腸後方の細胞集団へと分化させる工程と、
ｅ．前記前腸後方の細胞集団を、ＣＹＰ２６Ａ阻害剤を添加した培地で処理することにより前腸後方の細胞集団を膵内分泌前駆細胞集団に分化させる工程と、を含む、方法。
【請求項２】
前記前腸後方の細胞集団を、ＣＹＰ２６Ａ阻害剤を添加した培地で処理することにより前腸後方の細胞集団を膵内分泌前駆細胞集団に分化させる工程を含む、膵内分泌前駆細胞集団を誘導する方法。
【請求項３】
前記ＣＹＰ２６Ａ阻害剤が１ｎＭ〜１０００ｎＭの濃度で使用される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記ＣＹＰ２６Ａ阻害剤が１０ｎＭ〜１００ｎＭの濃度で使用される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項５】
前記ＣＹＰ２６Ａ阻害剤がＮ−｛４−［２−エチル−１−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ブチル］フェニル｝−１，３−ベンゾチアゾール−２−アミンである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記工程ｂ〜ｄの分化工程がＣＹＰ２６Ａ阻害剤を含まない培地中で行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記処理により内分泌腺前駆体マーカーＮＧＮ３、ＰａｘおよびＮｅｕｒｏＤの発現量が増加する、請求項１または２に記載の方法。
【請求項８】
前記処理によりＣＤＸ２およびアルブミンの発現量が減少する、請求項１または２に記載の方法。
【請求項９】
前記ＣＹＰ２６Ａ阻害剤を添加した培地にＢＭＰ阻害能をもつ因子、ＴＧＦβ受容体シグナル伝達阻害剤およびＰＫＣ活性化剤からなる群から選択される少なくとも１つの因子がさらに添加されている、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
ＢＭＰ阻害能をもつ因子がノギンである、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
ＴＧＦβ受容体シグナル伝達阻害剤がＡＬＫ５の阻害剤である、請求項８に記載の方法。
【請求項１２】
ＡＬＫ５の阻害剤がＡＬＫ５阻害剤ＩＩである、請求項８に記載の方法。
【請求項１３】
ＰＫＣ活性化剤が、（２Ｓ，５Ｓ）−（Ｅ，Ｅ）−８−（５−（４−（トリフルオロメチル）フェニル）−２，４−ペンタジエモイルアミノ）ベンゾラクタム、インドラクタムＶ（ＩＬＶ）、ホルボール−１２−ミリステート−１３−アセテート（ＰＭＡ）、及びホルボール−１２，１３−ジブチレート（ＰＤＢｕ）からなる群から選択される、請求項８に記載の方法。
【請求項１４】
前記多能性幹細胞を、胚体内胚葉系（definitive endoderm lineage）に特徴的なマーカーを発現する細胞集団へと分化させる工程が、アクチビンＡを補充した培地中で多能性幹細胞を培養することを含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記多能性幹細胞を、胚体内胚葉系（definitive endoderm lineage）に特徴的なマーカーを発現する細胞集団へと分化させる工程が、ＧＤＦ−８およびＧＳＫ３Ｂ阻害剤を補充した培地中で多能性幹細胞を培養することを含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記ＧＳＫ３Ｂ阻害剤が１４−プロパ−２−エン−１−イル−３，５，７，１４，１７，２３，２７−ヘプタアザテトラシクロ［１９．３．１．１〜２，６〜．１〜８，１２〜］ヘプタコサ−１（２５），２（２７），３，５，８（２６），９，１１，２１，２３−ノナエン−１６−オンである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
胚体内胚葉系（definitive endoderm lineage）に特徴的なマーカーを発現する細胞集団が胚体内胚葉細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
前記胚体内胚葉系に特徴的なマーカーを発現する細胞を、原始腸管細胞集団へと分化させる工程が、胚体内胚葉系に特徴的なマーカーを発現する細胞をＦＧＦ７を添加した培地中で培養することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
前記原始腸管細胞集団を、前腸後方の細胞集団へと分化させる工程が、原始腸管細胞集団をレチノイン酸およびｐ３８阻害剤を添加した培地中で培養することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
請求項１〜１９のいずれか一項に記載の方法によって得られる膵内分泌前駆細胞集団。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２３】
一実施形態では、膵内分泌前駆細胞集団の生成は、段階的な分化プロトコルにより実施され、このプロトコルでは、まず始めに、多能性幹細胞集団を、胚体内胚葉系（definitive endoderm lineage）に特徴的なマーカーを発現する細胞集団へと分化させる。次に、胚体内胚葉系に特徴的なマーカーを発現する細胞集団を、原始腸管細胞集団へと分化させる。次に、原始腸管細胞集団を前腸後方の細胞集団（Posterior foregut）へと分化させる。次に、ＣＹＰ２６Ａ阻害剤を添加した培地により、前腸後方の細胞を処理することで、前腸後方の細胞集団を内分泌前駆細胞の集団へと分化させる。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３１】
本明細書で使用するとき、「膵内胚葉系に特徴的なマーカーを発現する細胞」とは、以下のマーカー、すなわち、ＰＤＸ１、ＮＫＸ６．１、ＨＮＦ１  β、ＰＴＦ１  α、ＨＮＦ６、ＨＮＦ４  α、ＳＯＸ９、ＨＢ９、又はＰＲＯＸ１のうちの少なくとも１つを発現する細胞を指す。膵内胚葉系統に特徴的なマーカーを発現する細胞としては、膵臓内胚葉細胞、原始腸管細胞、後部前腸細胞が挙げられる。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３７】
本明細書で使用するとき、「原始腸管細胞」は、次のマーカー：ＨＮＦ１  β又はＨＮＦ４  αのうちの少なくとも１つを発現する細胞を指す。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５４】
一実施形態では、本発明は膵前駆細胞の生成方法を提供し、この方法は、次工程：ａ、ｂ、ｃ、ｄ及びｅを含む。
ａ．多能性幹細胞集団を培養する工程、
ｂ．多能性幹細胞集団を、胚体内胚葉系に特徴的なマーカーを発現する細胞集団へと分化させる工程、
ｃ．胚体内胚葉系に特徴的なマーカーを発現する細胞集団を、原始腸管細胞集団へと分化させる工程、
ｄ．原始腸管細胞集団を、前腸後方の細胞集団へと分化させる工程、及び
ｅ．前腸後方の細胞集団をＣＹＰ２６Ａ阻害剤を添加した培地で処理することにより、前腸後方の細胞集団を、膵内分泌前駆細胞集団へと分化させる工程。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６２】
膵内胚葉系（原始腸管細胞及び前腸後方の細胞を包含する）に特徴的なマーカーは、ＰＤＸ１、ＮＫＸ６．１、ＨＮＦ１  β、ＰＴＦ１  α、ＨＮＦ６、ＨＮＦ４  α、ＳＯＸ９、ＨＢ９及びＰＲＯＸ１からなる群から選択される。膵内胚葉系に特徴的なこれらのマーカーのうちの少なくとも１つを発現する細胞が本発明における使用に適している。本発明の一態様では、膵内胚葉系に特徴的なマーカーを発現する細胞は、膵臓内胚葉細胞である。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７４】
膵内胚葉系統に特徴的なマーカーを発現する細胞の生成
膵内胚葉系統に特徴的なマーカーを発現する細胞としては、膵臓内胚葉細胞、原始腸管細胞、後部前腸細胞が挙げられる。一実施形態では、本発明の方法により生成された胚体内胚葉系に特徴的なマーカーを発現する細胞集団は、当該技術分野の任意の方法により、膵臓内胚葉系に特徴的なマーカーを発現する細胞集団へと更に分化する。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７７】
膵内分泌前駆細胞集団の生成
一実施形態では、本発明は膵前駆細胞の生成方法を提供し、この方法は、次工程：ａ、ｂ、ｃ、ｄ及びｅを含む。
ａ．多能性幹細胞集団を培養する工程、
ｂ．多能性幹細胞集団を、胚体内胚葉系に特徴的なマーカーを発現する細胞集団へと分化させる工程、
ｃ．胚体内胚葉系に特徴的なマーカーを発現する細胞集団を、原始腸管細胞集団へと分化させる工程、
ｄ．原始腸管細胞集団を、前腸後方の細胞集団へと分化させる工程、及び
ｅ．前腸後方の細胞集団をＣＹＰ２６Ａ阻害剤を添加した培地で処理することにより、前腸後方の細胞集団を、膵内分泌前駆細胞集団へと分化させる工程。
【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００２】
（発明の分野）
本発明は、多能性幹細胞からのインスリン産生細胞への分化を促進する方法を提供する。特に、本発明は、ＣＹＰ２６Ａ阻害剤を用いて内分泌前駆細胞集団を生成する方法を提供する。
【誤訳訂正１０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２１】
よりβ細胞に類似している、機能性のインスリン発現細胞を生成するためのｉｎ  ｖｉｔｒｏ法の開発が未だに強く求められている。本発明は、ＣＹＰ２６Ａ阻害剤を用いて膵前駆細胞集団を生成することにより、多能性幹細胞のインスリン発現細胞への分化効率を改善するという、代替的なアプローチを取る。
【誤訳訂正１１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２２】
一実施形態では、本発明は、ＣＹＰ２６Ａ阻害剤を用いて内分泌前駆細胞集団を生成する剤を用いる方法を提供する。
【誤訳訂正１２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７８】
ＣＹＰ２６Ａ阻害剤は、約１ｎＭ〜約１０００ｎＭの濃度で使用することができる。あるいは、ＣＹＰ２６Ａ阻害剤は、約１０ｎＭ〜約１００ｎＭの濃度で使用することができる。
【誤訳訂正１３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００８１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００８１】
一実施形態では、ＣＹＰ２６Ａ阻害剤を添加した培地には、更に、ＢＭＰ阻害能をもつ因子、ＴＧＦβ受容体シグナル伝達阻害剤、ビタミンＡ及びＰＫＣ活性化剤からなる群から選択される少なくとも１つの因子が添加される。