【手続補正書】
【提出日】平成28年8月15日(2016.8.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３３６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３３６】
記載の方法及び本開示のシステムの、本開示の範囲及び精神から逸脱しない種々の修正形態及び変形形態は、当業者にとって明らかであろう。本開示を特定の所望の実施形態と関連させて説明してきたが、その開示は、特許を請求する場合、このような特定の実施形態に不相応に限定されるものではないことを理解されたい。実際、医学、薬学、又は関連する分野の当業者にとって明らかである、開示を実施するために記載された方式の種々の修正形態は、本開示の範囲に包含されると解釈される。
本発明の実施形態として、例えば以下を挙げることができる。
[1]  ペプチド、ポリペプチド、炭水化物、中性有機ポリマー、正帯電ポリマー、治療剤、標的指向性部分、エンドソーム脱出部分、及びこれらの任意の組合せからなる群から選択される成分(i)を含むポリヌクレオチド構築物であって、成分(i)が、ヌクレオチド間架橋基に結合された生物可逆性基を介してポリヌクレオチド構築物に連結されている、ポリヌクレオチド構築物。
[2]  親水性官能基を含む生物可逆性基、コンジュゲート部分を含む生物可逆性基、並びにコンジュゲート部分及び親水性基を含む生物可逆性基からなる群から選択される少なくとも1種の第2成分(ii)をさらに含み、コンジュゲート部分が保護基をさらに含んでいてもよい、[1]に記載のポリヌクレオチド構築物。
[3]  生物可逆性基が、チオエステルを含む、[1]又は[2]に記載のポリヌクレオチド構築物。
[4]  成分(i)が、ポリヌクレオチド構築物が細胞内輸送されることを可能にし、その結果、生物可逆性基が開裂される、[1]から[3]のいずれかに記載のポリヌクレオチド構築物。
[5]  小分子、ペプチド、ポリペプチド、炭水化物、中性有機ポリマー、正帯電ポリマー、治療剤、標的指向性部分、エンドソーム脱出部分、又はこれらの任意の組合せからなる群から選択される少なくとも1種の第3成分(iii)をさらに含み、成分(iii)が、ヌクレオチド間架橋基又は末端ヌクレオチド基の細胞内生物可逆性基にコンジュゲートされている、[1]から[4]のいずれかに記載のポリヌクレオチド構築物。
[6]  成分(iii)が、小分子である、[5]に記載のポリヌクレオチド構築物。
[7]  小分子が、置換されていてもよいC1〜6アルキルである、[6]に記載のポリヌクレオチド構築物。
[8]  式II:
【化５７】
2015529073.tif 000001
(式中、
1つのR2は、成分(i)を含み、
Zは、0〜150の数字であり、
各B1は、個別に核酸塩基であり、
各Xは、個別に、O、S及びNR5からなる群から選択され、
各Yは、個別に、水素、ヒドロキシル、ハロ、置換されていてもよいC1〜6アルコキシ、又は保護されたヒドロキシル基からなる群から選択され、
各R2は、個別に、存在しないか、水素、又は親水性官能基を含む第1生物可逆性基、コンジュゲート部分を含む第2生物可逆性基、或いは小分子、ペプチド、ポリペプチド、炭水化物、中性有機ポリマー、正帯電ポリマー、治療剤、標的指向性部分、エンドソーム脱出部分、又はこれらの組合せからなる群から選択される補助部分を含む第3生物可逆性基であり、ここで、コンジュゲート部分又は親水性官能基は、保護基で保護されていてもよく、
各R5は、個別に、H、置換されていてもよいC1〜6アルキル、S-ピバロイルチオエタノール、ヒドロキシル、置換されていてもよいC1〜6アルコキシ、置換されていてもよいC3〜8シクロアルキル、置換されていてもよいC6〜12アリール、及び置換されていてもよいC2〜9ヘテロシクリルからなる群から選択され、
各R9は、個別に、O又はSであり、
R10は、H、ヒドロキシル、置換されていてもよいC1〜6アルコキシ、保護されたヒドロキシル基、一リン酸、二リン酸、三リン酸、四リン酸、五リン酸、5'キャップ、ホスホチオール、置換されていてもよいC1〜6アルキル、アミノ含有基、ビオチン含有基、ジゴキシゲニン含有基、コレステロール含有基、色素含有基、クエンチャー含有基、ペプチド、ポリペプチド、炭水化物、中性有機ポリマー、正帯電ポリマー、治療剤、標的指向性部分、エンドソーム脱出部分、及びこれらの任意の組合せからなる群から選択され、
R11は、H、ヒドロキシル、置換されていてもよいC1〜6アルコキシ、保護されたヒドロキシル基、一リン酸、二リン酸、三リン酸、四リン酸、五リン酸、置換されていてもよいC1〜6アルキル、アミノ含有基、ビオチン含有基、ジゴキシゲニン含有基、コレステロール含有基、色素含有基、クエンチャー含有基、ホスホチオール、ペプチド、ポリペプチド、炭水化物、中性有機ポリマー、正帯電ポリマー、治療剤、標的指向性部分、エンドソーム脱出部分、及びこれらの任意の組合せからなる群から選択される)
の構造を有する、[1]に記載のポリヌクレオチド構築物又はその塩。
[9]  式II(a):
【化５８】
2015529073.tif 000002
の構造を有するヌクレオチドの1つ以上の鎖を含む、[8]に記載のポリヌクレオチド構築物。
[10]  R2が第1、第2、又は第3生物可逆性基であるヌクレオチドに関して、Yが、F又はOMeである、[8]又は[9]に記載のポリヌクレオチド構築物。
[11]  生物可逆性基に結合された成分(i)が、構造式V:
【化５９】
2015529073.tif 000003
(式中、
G1は、ペプチド、ポリペプチド、炭水化物、中性有機ポリマー、正帯電ポリマー、治療剤、標的指向性部分、エンドソーム脱出部分、又はこれらの組合せであり、
L1は、置換されていてもよいC2〜10アルキレン、置換されていてもよいC2〜10アルケニレン、又は置換されていてもよいC2〜10アルキニレンであり、ここで、アルキレン、アルケニレン、又はアルキニレンのそれぞれは、O、N及びSから選択される1〜10個のヘテロ原子で割り込まれていてもよく、
L2は、共有結合であるか、或いは置換されていてもよいC1〜10アルキレン、置換されていてもよいC2〜10アルケニレン、置換されていてもよいC2〜10アルキニレン、及び置換されていてもよいC6〜12アリーレンから選択され、ここで、アルキレン、アルケニレン、又はアルキニレンのそれぞれは、O、N及びSから選択される1〜10個のヘテロ原子で割り込まれていてもよい)
を有する、[1]に記載のポリヌクレオチド構築物。
[12]  生物可逆性基に結合された成分(ii)が、構造式V:
【化６０】
2015529073.tif 000004
(式中、
G1は、コンジュゲート部分又は親水性官能基であり、
L1は、置換されていてもよいC2〜10アルキレン、置換されていてもよいC2〜10アルケニレン、又は置換されていてもよいC2〜10アルキニレンであり、ここで、アルキレン、アルケニレン、又はアルキニレンのそれぞれは、O、N及びSから選択される1〜10個のヘテロ原子で割り込まれていてもよく、
L2は、共有結合であるか、或いは置換されていてもよいC1〜10アルキレン、置換されていてもよいC2〜10アルケニレン、置換されていてもよいC2〜10アルキニレン、及び置換されていてもよいC6〜12アリーレンから選択され、ここで、アルキレン、アルケニレン、又はアルキニレンのそれぞれは、O、N及びSから選択される1〜10個のヘテロ原子で割り込まれていてもよい)
を有する、[2]に記載のポリヌクレオチド構築物。
[13]  L1が、
【化６１】
2015529073.tif 000005
(式中、
L2'は、共有結合であるか、或いは置換されていてもよいC1〜10アルキレン、置換されていてもよいC2〜10アルケニレン、置換されていてもよいC2〜10アルキニレン、及び置換されていてもよいC6〜12アリーレンから選択され、ここで、アルキレン、アルケニレン、又はアルキニレンのそれぞれは、O、N及びSから選択される1〜10個のヘテロ原子で割り込まれていてもよく、
G2は、コンジュゲート部分、親水性官能基、小分子、ペプチド、ポリペプチド、炭水化物、中性有機ポリマー、正帯電ポリマー、治療剤、標的指向性部分、エンドソーム脱出部分、又はこれらの組合せである)
である、[11]又は[12]に記載のポリヌクレオチド構築物。
[14]  式V':
【化６２】
2015529073.tif 000006
(式中、
G1'は、コンジュゲート部分、親水性官能基、小分子、ペプチド、ポリペプチド、炭水化物、中性有機ポリマー、正帯電ポリマー、治療剤、標的指向性部分、エンドソーム脱出部分、又はこれらの組合せであり、
L1'は、置換されていてもよいC2〜10アルキレン、置換されていてもよいC2〜10アルケニレン、又は置換されていてもよいC2〜10アルキニレンであり、ここで、アルキレン、アルケニレン、又はアルキニレンのそれぞれは、O、N及びSから選択される1〜10個のヘテロ原子で割り込まれていてもよく、
L2'は、共有結合であるか、或いは置換されていてもよいC1〜10アルキレン、置換されていてもよいC2〜10アルケニレン、置換されていてもよいC2〜10アルキニレン、及び置換されていてもよいC6〜12アリーレンから選択され、ここで、アルキレン、アルケニレン、又はアルキニレンのそれぞれは、O、N及びSから選択される1〜10個のヘテロ原子で割り込まれていてもよい)
の構造をさらに含む、[11]又は[12]に記載のポリヌクレオチド構築物。
[15]  構造式V又はV'が、
【化６３】
2015529073.tif 000007
2015529073.tif 000008
からなる群から選択される、[11]から[14]に記載のポリヌクレオチド構築物。
[16]  構造式V又はV'が、
【化６４】
2015529073.tif 000009
2015529073.tif 000010
からなる群から選択される、[15]に記載のポリヌクレオチド構築物。
[17]  構造式V又はV'が、
【化６５】
2015529073.tif 000011
からなる群から選択される、[15]に記載のポリヌクレオチド構築物。
[18]  構造式V又はV'が、
【化６６】
2015529073.tif 000012
からなる群から選択される、[15]に記載のポリヌクレオチド構築物。
[19]  構造式V'が、
【化６７】
2015529073.tif 000013
からなる群から選択される、[15]に記載のポリヌクレオチド構築物。
[20]  L1が、置換されていてもよいC2〜10アルキレンである、[11]から[19]のいずれかに記載のポリヌクレオチド構築物。
[21]  L1が、非置換又は置換されたC2、C4又はC5アルキレンである、[20]に記載のポリヌクレオチド構築物。
[22]  L2が、共有結合である、[11]から[21]のいずれかに記載のポリヌクレオチド構築物。
[23]  L2が、置換されていてもよいC1〜10アルキレン又は置換されていてもよいC6〜12アリーレンである、[11]から[21]のいずれかに記載のポリヌクレオチド構築物。
[24]  G1が、ヒドロキシルである、[12]から[18]及び[20]から[23]のいずれかに記載のポリヌクレオチド構築物。
[25]  G1が、コンジュゲート部分である、[12]から[18]及び[20]から[23]のいずれかに記載のポリヌクレオチド構築物。
[26]  コンジュゲート部分が、-CHO、チオール、又は-N3である、[25]に記載のポリヌクレオチド構築物。
[27]  G1が、ペプチド、ポリペプチド、炭水化物、中性有機ポリマー、正帯電ポリマー、治療剤、標的指向性部分、エンドソーム脱出部分、又はこれらの任意の組合せを含む、[11]、[13]から[18]、及び[20]から[24]のいずれかに記載のポリヌクレオチド構築物。
[28]  L2が結合ではなく、且つG1が、ペリ環状反応；ヒドロキシル、チオール、又はアミノ部分のアルキル化若しくはアリール化；及びヒドロキシル、チオール又はアミノ求核基の電子求引基との反応からなる群から選択される反応によって形成された結合を介してL2に結合されている、[27]に記載のポリヌクレオチド構築物。
[29]  L2が結合ではなく、且つG1が、アミド結合、スルホンアミド結合、カルボン酸エステル、チオエステル、置換されていてもよいC6〜12アリール若しくはC2〜9ヘテロアリール、イミン、ヒドラゾン、オキシム、又はスクシンイミドを介してL2に結合されている、[27]に記載のポリヌクレオチド構築物。
[30]  R2の1つ以上の親水性官能基及び/又はコンジュゲート部分が、保護基で保護されている、[12]から[29]のいずれかに記載のポリヌクレオチド構築物。
[31]  ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、炭水化物、中性有機ポリマー、正帯電ポリマー、治療剤、標的指向性部分、エンドソーム脱出部分、又はこれらの組合せが、アルデヒドコンジュゲート部分との縮合反応を介して生物可逆性基に連結されて、イミン、エナミン又はヒドラゾン結合を形成している、[1]から[30]のいずれかに記載のポリヌクレオチド構築物。
[32]  ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、炭水化物、中性有機ポリマー、正帯電ポリマー、治療剤、標的指向性部分、エンドソーム脱出部分、又はこれらの組合せが、式III:
【化６８】
2015529073.tif 000014
(式中、
A1、A2、A4及びA5は、それぞれ個別に、N又はCR8であり、
A3及びA6は、Cであり、
R6〜R7は、それぞれ個別に、H、置換されていてもよいC1〜6アルキル、置換されていてもよいC2〜6アルケニル、置換されていてもよいイミン、及び置換されていてもよいエナミンであり、
各R8は、個別に、H、置換されていてもよいC1〜6アルキル、置換されていてもよいC2〜6アルケニル、置換されていてもよいC2〜6アルキニル、ハロ、ヒドロキシル、-CHO、置換されていてもよいC1〜6アシル、カルボキシル、シアノ、ニトロ、置換されていてもよいアミノ、チオール、置換されていてもよいC2〜9ヘテロシクリル、置換されていてもよいC6〜12アリール、置換されていてもよいC3〜8シクロアルキル、及び置換されていてもよいC4〜8シクロアルケニルである)
の構造を有する1つ以上の窒素含有コンジュゲート部分によって生物可逆性基に連結されている、[1]から[31]のいずれかに記載のポリヌクレオチド構築物。
[33]  生物可逆性基の多くても25%が、ペプチド、ポリペプチド、炭水化物、中性有機ポリマー、正帯電ポリマー、治療剤、標的指向性部分、エンドソーム脱出部分、又はこれらの組合せに連結されている、[1]から[32]のいずれかに記載のポリヌクレオチド構築物。
[34]  生物可逆性基の多くても50%が、ペプチド、ポリペプチド、炭水化物、中性有機ポリマー、正帯電ポリマー、治療剤、標的指向性部分、エンドソーム脱出部分、又はこれらの組合せに連結されている、[1]から[33]のいずれかに記載のポリヌクレオチド構築物。
[35]  生物可逆性基の多くても75%が、ペプチド、ポリペプチド、炭水化物、中性有機ポリマー、正帯電ポリマー、治療剤、標的指向性部分、エンドソーム脱出部分、又はこれらの組合せに連結されている、[1]から[34]のいずれかに記載のポリヌクレオチド構築物。
[36]  生物可逆性基の多くても90%が、ペプチド、ポリペプチド、炭水化物、中性有機ポリマー、正帯電ポリマー、治療剤、標的指向性部分、エンドソーム脱出部分、又はこれらの組合せに連結されている、[1]から[35]のいずれかに記載のポリヌクレオチド構築物。
[37]  成分(i)が、送達ドメインを含む、[1]から[36]のいずれかに記載のポリヌクレオチド構築物。
[38]  送達ドメインが、1つ以上のペプチド導入ドメイン(PTD)を含む、[37]に記載のポリヌクレオチド構築物。
[39]  1つ以上のPTDが、イミン、エナミン、又はヒドラゾン結合を介して生物可逆性基に連結されている、[37]に記載のポリヌクレオチド構築物。
[40]  1つ以上のPTDが、生物可逆性基に連結されて構造式IV:
【化６９】
2015529073.tif 000015
(式中、
R2'は、PTDに結合された生物可逆性基の残余部であり、
z'は、1〜10の数字であり、ここで、z'が1を超える場合、PTDは、1〜10個の繰り返し単位を有するポリ(C1〜4アルキレンオキシド)基を介して一緒に連結されていてもよい)
を形成している、[37]に記載のポリヌクレオチド構築物。
[41]  1つ以上のPTDが、トランス活性化転写活性化因子(TAT)ペプチドである、[37]から[40]のいずれかに記載のポリヌクレオチド構築物。
[42]  PTDが、式III:
【化７０】
2015529073.tif 000016
(式中、
A1、A2、A4及びA5は、それぞれ個別に、N又はCR8であり、
A3及びA6は、Cであり、
R6〜R7は、それぞれ個別に、H、置換されていてもよいC1〜6アルキル、置換されていてもよいC2〜6アルケニル、置換されていてもよいイミン、及び置換されていてもよいエナミンであり、
各R8は、個別に、H、置換されていてもよいC1〜6アルキル、置換されていてもよいC2〜6アルケニル、置換されていてもよいC2〜6アルキニル、ハロ、ヒドロキシル、-CHO、置換されていてもよいC1〜6アシル、カルボキシル、シアノ、ニトロ、置換されていてもよいアミノ、チオール、置換されていてもよいC2〜9ヘテロシクリル、置換されていてもよいC6〜12アリール、置換されていてもよいC3〜8シクロアルキル、及び置換されていてもよいC4〜8シクロアルケニルである)
の構造を含む相補性コンジュゲート部分を介して生物可逆性基に連結されている、[37]から[41]のいずれかに記載のポリヌクレオチド構築物。
[43]  コンジュゲーション前の生物可逆性基が、
【化７１】
2015529073.tif 000017
からなる群から選択される、[42]に記載のポリヌクレオチド構築物。
[44]  PTDが、5〜15個のアミノ酸にわたって5〜10個のアルギニン及び/又はリシン残基を有するカチオン性ペプチド配列を含む、[37]から[43]のいずれかに記載のポリヌクレオチド構築物。
[45]  PTDが、配列RKKRRQRRR(配列番号1)を含む、[37]から[44]に記載のポリヌクレオチド構築物。
[46]  成分(i)が、1〜10個の繰り返し単位を有するポリ(エチレングリコール)(PEG)にコンジュゲートされたPTDを含む、[37]から[44]に記載のポリヌクレオチド構築物。
[47]  成分(i)が、
PEG-(PTD)、
GG-(PTD)-PEG-(PTD)、
PEG-(PTD)-PEG-(PTD)、
GG-(PTD)-PEG-PEG-PEG-(PTD)、
PEG-(PTD)-PEG-PEG-PEG-(PTD)、
GG-(PTD)-PEG-(PTD)-PEG-(PTD)、及び
GG-(PTD)-PEG-PEG-PEG-(PTD)-PEG-PEG-PEG-(PTD)
(ここで、PEGは1〜10個の繰り返し単位を有するポリ(エチレングリコール)リンカーである)
からなる群から選択される配列を含む、[46]に記載のポリヌクレオチド構築物。
[48]  成分(i)が、標的指向性部分を含む、[1]から[36]のいずれかに記載のポリヌクレオチド構築物。
[49]  標的指向性部分が、リガンド、炭水化物、抗体、FAb、ScFv、又は単一ドメイン抗体である、[48]に記載のポリヌクレオチド構築物。
[50]  非天然核酸塩基を含む、[1]から[49]のいずれかに記載のポリヌクレオチド構築物。
[51]  天然に存在する核酸塩基のみを含む、[1]から[50]のいずれかに記載のポリヌクレオチド構築物。
[52]  核酸塩基が、シトシン、グアニン、アデニン、ウラシル、及びチミジンから選択される、[51]に記載のポリヌクレオチド構築物。
[53]  ポリヌクレオチド構築物中のヌクレオチドの75%以下が、生物可逆性基を有する、[1]から[52]のいずれかに記載のポリヌクレオチド構築物。
[54]  ポリヌクレオチド構築物中のヌクレオチドの65%以下が、生物可逆性基を有する、[1]から[53]のいずれかに記載のポリヌクレオチド構築物。
[55]  ポリヌクレオチド構築物が、2〜40個の生物可逆性基を含む、[1]から[54]のいずれかに記載のポリヌクレオチド構築物。
[56]  ポリヌクレオチド構築物が、5〜10個の生物可逆性基を含む、[1]から[55]のいずれかに記載のポリヌクレオチド構築物。
[57]  ポリヌクレオチド構築物が、10〜32個のヌクレオチドを有する、[1]から[56]のいずれかに記載のポリヌクレオチド構築物。
[58]  ポリヌクレオチド構築物が、17〜30個のヌクレオチドを有する、[57]に記載のポリヌクレオチド構築物。
[59]  式II(a):
【化７２】
2015529073.tif 000018
[式中、
1つのR2は、成分(i)を含み、
Zは、0〜30の数字であり、
各B1は個別に核酸塩基であり、
各Yは、個別に、ヒドロキシル、ハロ、又はC1〜6アルコキシからなる群から選択され、  各R2は、個別に、存在しないか、水素、式Vの基:
【化７３】
2015529073.tif 000019
(式中、
G1は、ペプチド、ポリペプチド、中性有機ポリマー、又はこれらの任意の組合せであり、
L1は、置換されていてもよいC2〜6アルキレン、置換されていてもよいC2〜6アルケニレン、又は置換されていてもよいC2〜6アルキニレンであり、ここで、アルキレン、アルケニレン、又はアルキニレンのそれぞれは、1又は2つの酸素原子で割り込まれていてもよく、
L2は、共有結合であるか、或いは置換されていてもよいC1〜6アルキレン、置換されていてもよいC2〜6アルケニレン、置換されていてもよいC2〜6アルキニレン、及び置換されていてもよいC6〜10アリーレンから選択される)、又は式V'の基:
【化７４】
2015529073.tif 000020
(式中、
G1'は、水素、アルデヒド、若しくは保護されたアルデヒド、ヒドロキシル、保護されたヒドロキシル、アミン、保護されたアミン、又は保護基若しくはC1〜6アルキルで置換されていてもよい5又は6員の複素環式アミンであり、
L1'は、置換されていてもよいC2〜6アルキレンであり、ここで、各アルキレンは、1又は2つの酸素原子で割り込まれていてもよく、
L2'は、共有結合であるか、或いは置換されていてもよいC1〜6アルキレン及び置換されていてもよいC6〜10アリーレンから選択される)であり、
R10は、H、ヒドロキシル、置換されていてもよいC1〜6アルコキシ、保護されたヒドロキシル基、一リン酸、二リン酸、三リン酸、5'キャップ、ホスホチオール、置換されていてもよいC1〜6アルキル、アミノ含有基、ペプチド、ポリペプチド、中性有機ポリマー、並びにペプチド、ポリペプチド及び中性有機ポリマーの任意の組合せからなる群から選択され、
R11は、H、ヒドロキシル、置換されていてもよいC1〜6アルコキシ、保護されたヒドロキシル基、一リン酸、二リン酸、三リン酸、置換されていてもよいC1〜6アルキル、ペプチド、ポリペプチド、中性有機ポリマー、並びにペプチド、ポリペプチド及び中性有機ポリマーの任意の組合せからなる群から選択される]
の構造を有する、請求項1に記載のポリヌクレオチド構築物又はその塩。
[60]  R2が式V又はV'の基であるヌクレオチドに関して、Yが、F又はOMeである、[59]に記載のポリヌクレオチド構築物。
[61]  構造式V'が、
【化７５】
2015529073.tif 000021
2015529073.tif 000022
からなる群から選択される、[59]又は[60]に記載のポリヌクレオチド構築物。
[62]  G1が、送達ドメインを含む、[59]から[61]のいずれかに記載のポリヌクレオチド構築物。
[63]  送達ドメインが、1つ以上のペプチド導入ドメイン(PTD)を含む、[62]に記載のポリヌクレオチド構築物。
[64]  G1、R10又はR11の中性有機ポリマーが、ポリ(エチレングリコール)である、[59]から[63]のいずれかに記載のポリヌクレオチド構築物。
[65]  ヌクレオチド間架橋基又は末端ヌクレオチド基に結合され、
【化７６】
2015529073.tif 000023
からなる群から選択される1つ以上の生物可逆性基を含むポリヌクレオチド構築物。
[66]  式II:
【化７７】
2015529073.tif 000024
(式中、
Zは、0〜150の数字であり、
各B1は、個別に、核酸塩基であり、
各Xは、個別に、O、S及びNR5からなる群から選択され、
各Yは、個別に、水素、ヒドロキシル、ハロ、置換されていてもよいC1〜6アルコキシ、又は保護されたヒドロキシル基からなる群から選択され、
各R2は、個別に、存在しないか、水素、生物可逆性基(i)、生物可逆性基(ii)、又は生物可逆性基(iii)であり、
各R5は、個別に、H、置換されていてもよいC1〜6アルキル、S-ピバロイルチオエタノール、ヒドロキシル、置換されていてもよいC1〜6アルコキシ、置換されていてもよいC3〜8シクロアルキル、置換されていてもよいC6〜12アリール、及び置換されていてもよいC2〜9ヘテロシクリルからなる群から選択され、
各R9は、個別にO又はSであり、
R10は、H、ヒドロキシル、置換されていてもよいC1〜6アルコキシ、保護されたヒドロキシル基、一リン酸、二リン酸、三リン酸、四リン酸、五リン酸、5'キャップ、ホスホチオール、置換されていてもよいC1〜6アルキル、アミノ含有基、ビオチン含有基、ジゴキシゲニン含有基、コレステロール含有基、色素含有基、クエンチャー含有基、ペプチド、ポリペプチド、炭水化物、中性有機ポリマー、正帯電ポリマー、治療剤、標的指向性部分、エンドソーム脱出部分、及びこれらの任意の組合せからなる群から選択され、
R11は、H、ヒドロキシル、置換されていてもよいC1〜6アルコキシ、保護されたヒドロキシル基、一リン酸、二リン酸、三リン酸、四リン酸、五リン酸、置換されていてもよいC1〜6アルキル、アミノ含有基、ビオチン含有基、ジゴキシゲニン含有基、コレステロール含有基、色素含有基、クエンチャー含有基、ホスホチオール、ペプチド、ポリペプチド、炭水化物、中性有機ポリマー、正帯電ポリマー、治療剤、標的指向性部分、エンドソーム脱出部分、及びこれらの任意の組合せからなる群から選択される)
の構造を有する、[65]に記載のポリヌクレオチド構築物又はその塩。
[67]  式II(a):
【化７８】
2015529073.tif 000025
の構造を有するヌクレオチドの1つ以上の鎖を含む、[66]に記載のポリヌクレオチド構築物。
[68]  R2が生物可逆性基(i)、(ii)又は(iii)であるヌクレオチドに関して、Yが、F又はOMeである、[66]又は[67]に記載のポリヌクレオチド構築物。
[69]  ポリヌクレオチド構築物が、R2基の混合物を含み、
ここで、
1つ以上のR2基は、存在しないか、Hであり、
1つ以上のR2基は、生物可逆性基(i)であり、且つ
1つ以上のR2基は、生物可逆性基(ii)又は(iii)である、[66]から[68]のいずれかに記載のポリヌクレオチド構築物。
[70]  存在しないかHであるR2基の、生物可逆性基(i)、(ii)又は(iii)であるR2基に対する比率が、1:10〜10:1である、[69]に記載のポリヌクレオチド構築物。
[71]  存在しないかHであるR2基の、生物可逆性基(i)、(ii)又は(iii)であるR2基に対する比率が、1:5〜5:1である、[69]に記載のポリヌクレオチド構築物。
[72]  存在しないかHであるR2基の、生物可逆性基(i)、(ii)又は(iii)であるR2基に対する比率が、1:4〜4:1である、[69]に記載のポリヌクレオチド構築物。
[73]  存在しないかHであるR2基の、生物可逆性基(i)、(ii)又は(iii)であるR2基に対する比率が、1:3〜3:1である、[69]に記載のポリヌクレオチド構築物。
[74]  存在しないかHであるR2基の、生物可逆性基(i)、(ii)又は(iii)であるR2基に対する比率が、1:2〜2:1である、[69]に記載のポリヌクレオチド構築物。
[75]  存在しないかHであるR2基の、生物可逆性基(i)、(ii)又は(iii)であるR2基に対する比率が、1:1である、[69]に記載のポリヌクレオチド構築物。
[76]  生物可逆性基(i)であるR2基の、生物可逆性基(ii)又は(iii)であるR2基に対する比率が、1:10〜10:1である、[69]に記載のポリヌクレオチド構築物。
[77]  生物可逆性基(i)であるR2基の、生物可逆性基(ii)又は(iii)であるR2基に対する比率が、1:5〜5:1である、[69]に記載のポリヌクレオチド構築物。
[78]  生物可逆性基(i)であるR2基の、生物可逆性基(ii)又は(iii)であるR2基に対する比率が、1:4〜4:1である、[69]に記載のポリヌクレオチド構築物。
[79]  生物可逆性基(i)であるR2基の、生物可逆性基(ii)又は(iii)であるR2基に対する比率が、1:3〜3:1である、[69]に記載のポリヌクレオチド構築物。
[80]  生物可逆性基(i)であるR2基の、生物可逆性基(ii)又は(iii)であるR2基に対する比率が、1:2〜2:1である、[69]に記載のポリヌクレオチド構築物。
[81]  生物可逆性基(i)であるR2基の、生物可逆性基(ii)又は(iii)であるR2基に対する比率が、1:1である、[69]に記載のポリヌクレオチド構築物。
[82]  相補性ポリヌクレオチドにハイブリッド化された[1]から[81]のいずれかに記載のポリヌクレオチド構築物を含む、ハイブリッド化ポリヌクレオチド。
[83]  相補性ポリヌクレオチドが、ヌクレオチド間架橋基又は末端ヌクレオチド基にコンジュゲートされた細胞内生物可逆性基を含む、[82]に記載のポリヌクレオチド。
[84]  [1]から[75]に記載のポリヌクレオチド構築物、及び相補性ポリヌクレオチドが、それぞれ9つ以下の生物可逆性基を含む、[82]又は[83]に記載のポリヌクレオチド。
[85]  ヌクレオチドの総数の75%以下が、生物可逆性基を有する、[82]から[84]のいずれかに記載のポリヌクレオチド。
[86]  [1]から[75]に記載のポリヌクレオチド構築物、及び相補性ヌクレオチドが、それぞれ10〜32個のヌクレオチドを有する、[82]から[85]のいずれかに記載のポリヌクレオチド。
[87]  [1]から[75]に記載のポリヌクレオチド構築物、及び相補性ヌクレオチドが、それぞれ19〜25個のヌクレオチドを有する、[86]に記載のポリヌクレオチド。
[88]  ハイブリッド化ポリヌクレオチドが、siRNAである、[82]から[87]のいずれかに記載のポリヌクレオチド。
[89]  [1]から[75]に記載のポリヌクレオチド構築物がガイド鎖であり、相補性ポリヌクレオチドがパッセンジャー鎖である、[88]に記載のポリヌクレオチド。
[90]  パッセンジャー鎖が、細胞内酵素によって開裂できない部分を有するリン酸トリエステルを含む、[89]に記載のポリヌクレオチド。
[91]  細胞内酵素によって開裂できない部分が、置換されていてもよいC1〜6アルキルである、[90]に記載のポリヌクレオチド。
[92]  [1]から[91]のいずれかに記載のポリヌクレオチド構築物又はポリヌクレオチド、及び薬学上許容される賦形剤を含む医薬組成物。
[93]  [1]から[91]のいずれかに記載の構築物又はハイブリッド化ポリヌクレオチドを細胞に、遺伝子発現のアンチセンス又はRNAi介在性低減を誘導するのに十分な量で投与することを含む、タンパク質の発現を低減する方法。
[94]  式(I):
【化７９】
2015529073.tif 000026
(式中、
B1は、核酸塩基であり、
Xは、O、S又はNR5であり、
Yは、ハロ、置換されていてもよいC1〜6アルコキシ、又は保護されたヒドロキシル基であり、
R1は、ヒドロキシル、置換されていてもよいC1〜6アルコキシ、保護されたヒドロキシル基、一リン酸、二リン酸、三リン酸、四リン酸、又は五リン酸であり、
R2は、ペプチド、ポリペプチド、炭水化物、中性有機ポリマー、正帯電ポリマー、治療剤、標的指向性部分、エンドソーム脱出部分、及びこれらの任意の組合せからなる群から選択される補助部分を含む生物可逆性基であり、ここで、補助部分は、1つ以上の共有結合で生物可逆性基に連結されており、
R3は、O、S、又は置換されていてもよいアミノであり、
R4は、H、ヒドロキシル、置換されていてもよいC1〜6アルコキシ、保護されたヒドロキシル基、一リン酸、二リン酸、三リン酸、四リン酸、五リン酸であるか、R3が置換されていてもよいアミノである場合は存在せず、
R5は、H、置換されていてもよいC1〜6アルキル、S-ピバロイルチオエタノール、ヒドロキシル、置換されていてもよいC1〜6アルコキシ、置換されていてもよいC3〜8シクロアルキル、置換されていてもよいC6〜12アリール、又は置換されていてもよいC2〜9ヘテロシクリルである)
の構造を含むヌクレオチド構築物又はその塩。
[95]  式I(a):
【化８０】
2015529073.tif 000027
の構造を含む、[94]に記載のヌクレオチド構築物。
[96]  R1が、4,4'-ジメトキシトリチル基(DMT)で保護されたヒドロキシル基である、[95]に記載のヌクレオチド構築物。
[97]  R2が、構造式V:
【化８１】
2015529073.tif 000028
(式中、
G1は、ペプチド、ポリペプチド、炭水化物、中性有機ポリマー、正帯電ポリマー、治療剤、標的指向性部分、エンドソーム脱出部分、又はこれら任意の組合せであり、
L1は、置換されていてもよいC2〜10アルキレン、置換されていてもよいC2〜10アルケニレン、又は置換されていてもよいC2〜10アルキニレンであり、ここで、アルキレン、アルケニレン、又はアルキニレンのそれぞれは、O、N及びSから選択される1〜10個のヘテロ原子で割り込まれていてもよく、
L2は、共有結合であるか、或いは置換されていてもよいC1〜10アルキレン、置換されていてもよいC2〜10アルケニレン、置換されていてもよいC2〜10アルキニレン、及び置換されていてもよいC6〜12アリーレンから選択され、ここで、アルキレン、アルケニレン、又はアルキニレンのそれぞれは、O、N及びSから選択される1〜10個のヘテロ原子で割り込まれていてもよい)
を含む、[94]から[96]のいずれかに記載のヌクレオチド構築物。
[98]  L1が、置換されていてもよいC2〜10アルキレンである、[97]に記載のヌクレオチド構築物。
[99]  L1が、非置換又は置換されたC2、C4又はC5アルキレンである、[98]に記載のヌクレオチド構築物。
[100]  L2が、共有結合である、[97]から[99]のいずれかに記載のヌクレオチド構築物。
[101]  L2が、置換されていてもよいC1〜10アルキレン、又は置換されていてもよいC6〜12アリーレンである、[97]から[99]のいずれかに記載のヌクレオチド構築物。
[102]  L2が、結合ではなく、且つG1が、ペリ環状反応；ヒドロキシル、チオール、又はアミノ部分のアルキル化若しくはアリール化；及びヒドロキシル、チオール、又はアミノ求核基の電子求引基との反応からなる群から選択される反応によって形成される結合を介してL2に結合されている、[97]から[101]のいずれかに記載のヌクレオチド構築物。
[103]  L2が、結合ではなく、且つG1が、アミド結合、スルホンアミド結合、カルボン酸エステル、チオエステル、置換されていてもよいC6〜12アリール若しくはC2〜9ヘテロアリール、イミン、ヒドラゾン、オキシム、又はスクシンイミドを介してL2に結合されている、[97]から[101]のいずれかに記載のヌクレオチド構築物。
[104]  G1が、ペプチド、ポリペプチド、中性有機ポリマー、又はこれらの任意の組合せであり、
L1が、置換されていてもよいC2〜6アルキレン、置換されていてもよいC2〜6アルケニレン、又は置換されていてもよいC2〜6アルキニレンであり、ここで、アルキレン、アルケニレン、又はアルキニレンのそれぞれは、1又は2つの酸素原子で割り込まれていてもよく、
L2は、共有結合であるか、或いは置換されていてもよいC1〜6アルキレン、置換されていてもよいC2〜6アルケニレン、置換されていてもよいC2〜6アルキニレン、及び置換されていてもよいC6〜10アリーレンから選択される、[97]に記載のヌクレオチド構築物。
[105]  G1が、送達ドメインを含む、[104]に記載のヌクレオチド構築物。
[106]  送達ドメインが、1つ以上のペプチド導入ドメイン(PTD)を含む、[105]に記載のヌクレオチド構築物。
[107]  G1の中性有機ポリマーが、ポリ(エチレングリコール)である、[104]から[106]のいずれかに記載のヌクレオチド構築物。
[108]  L1が、
【化８２】
2015529073.tif 000029
(式中、
L2'は、共有結合であるか、或いは置換されていてもよいC1〜10アルキレン、置換されていてもよいC2〜10アルケニレン、置換されていてもよいC2〜10アルキニレン、及び置換されていてもよいC6〜12アリーレンから選択され、ここで、アルキレン、アルケニレン、又はアルキニレンのそれぞれは、O、N及びSから選択される1〜10個のヘテロ原子で割り込まれていてもよく、
G2は、コンジュゲート部分、親水性官能基、小分子、ペプチド、ポリペプチド、炭水化物、中性有機ポリマー、正帯電ポリマー、治療剤、標的指向性部分、エンドソーム脱出部分、又はこれらの組合せである)
である、[97]から[103]のいずれかに記載のヌクレオチド構築物。
[109]  XがOである、[94]から[104]のいずれかに記載のヌクレオチド構築物。
[110]  ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、炭水化物、中性有機ポリマー、正帯電ポリマー、治療剤、標的指向性部分、エンドソーム脱出部分、又はこれらの組合せが、アルデヒド基との縮合反応を介して生物可逆性基に連結されて、イミン、エナミン、又はヒドラゾン結合を形成している、[94]から[105]のいずれかに記載のヌクレオチド構築物。
[111]  ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、炭水化物、中性有機ポリマー、正帯電ポリマー、治療剤、標的指向性部分、エンドソーム脱出部分、又はこれらの組合せが、式III:
【化８３】
2015529073.tif 000030
(式中、
A1、A2、A4及びA5は、それぞれ個別に、N又はCR8であり、
A3及びA6は、Cであり、
R6〜R7は、それぞれ個別に、H、置換されていてもよいC1〜6アルキル、置換されていてもよいC2〜6アルケニル、置換されていてもよいイミン、及び置換されていてもよいエナミンであり、
各R8は、個別に、H、置換されていてもよいC1〜6アルキル、置換されていてもよいC1〜6アルケニル、置換されていてもよいC2〜6アルキニル、ハロゲン化物、ヒドロキシル、-CHO、置換されていてもよいC1〜6アシル、カルボン酸、シアノ、ニトロ、置換されていてもよいアミノ、チオール、置換されていてもよいC2〜9ヘテロシクリル、置換されていてもよいC6〜12アリール、置換されていてもよいC3〜8シクロアルキル、及び置換されていてもよいC4〜8シクロアルケニルである)
の構造を有する1つ以上の窒素含有相補性コンジュゲート部分によって生物可逆性基に連結されている、[94]から[105]のいずれかに記載のヌクレオチド構築物。
[112]  R2が、送達ドメインを含む、[94]から[107]のいずれかに記載のヌクレオチド構築物。
[113]  送達ドメインが、1つ以上のペプチド導入ドメイン(PTD)を含む、[105]に記載のヌクレオチド構築物。
[114]  式I(c):
【化８４】
2015529073.tif 000031
(式中、
R2'は、PTDに結合された生物可逆性基の残余部であり、
z'は、1〜10の数字であり、ここで、z'が1を超える場合、PTDは、1〜10個の繰り返し単位を有するポリ(C1〜4アルキレンオキシド)基を介して一緒に連結されている)
の構造を含む、[113]に記載のヌクレオチド構築物。
[115]  PTDが、5〜15個のアミノ酸にわたって5〜10個のアルギニン及び/又はリシン残基を有するカチオン性ペプチド配列である、[113]又は[114]に記載のヌクレオチド構築物。
[116]  PTDが、配列RKKRRQRRR(配列番号1)を含む、[113]から[115]のいずれかに記載のヌクレオチド構築物。
[117]  送達ドメインが、1〜10個の繰り返し単位を有するポリ(エチレングリコール)にコンジュゲートされたPTDを含む、[113]から[116]のいずれかに記載のヌクレオチド構築物。
[118]  送達ドメインが、
PEG-(PTD)、
GG-(PTD)-PEG-(PTD)、
PEG-(PTD)-PEG-(PTD)、
GG-(PTD)-PEG-PEG-PEG-(PTD)、
PEG-(PTD)-PEG-PEG-PEG-(PTD)、
GG-(PTD)-PEG-(PTD)-PEG-(PTD)、及び
GG-(PTD)-PEG-PEG-PEG-(PTD)-PEG-PEG-PEG-(PTD)
(ここで、PEGは、1〜10個の繰り返し単位を有するポリ(エチレングリコール)リンカーである)
からなる群から選択される配列を含む、[117]に記載のヌクレオチド構築物。
[119]  R2が、標的指向性部分を含む、[94]から[116]に記載のヌクレオチド構築物。
[120]  標的指向性部分が、リガンド、炭水化物、抗体、FAb、ScFv、又は単一ドメイン抗体である、[119]に記載のヌクレオチド構築物。
[121]  B1が、非天然核酸塩基である、[94]から[120]のいずれかに記載のヌクレオチド構築物。
[122]  B1が、天然に存在する核酸塩基である、[94]から[120]のいずれかに記載のヌクレオチド構築物。
[123]  B1が、シトシン、グアニン、アデニン、ウラシル、又はチミジンである、[122]に記載のヌクレオチド構築物。
[124]  式(I):
【化８５】
2015529073.tif 000032
(式中、
B1は、核酸塩基であり、
Xは、O、S又はNR5であり、
Yはハロ、置換されていてもよいC1〜6アルコキシ、又は保護されたヒドロキシル基であり、
R1は、ヒドロキシル、置換されていてもよいC1〜6アルコキシ、保護されたヒドロキシル基、一リン酸、二リン酸、三リン酸、四リン酸、又は五リン酸であり、
R2は、
【化８６】
2015529073.tif 000033
2015529073.tif 000034
2015529073.tif 000035
であり、
R3は、O、S、又は置換されていてもよいアミノであり、
R4は、H、ヒドロキシル、置換されていてもよいC1〜6アルコキシ、保護されたヒドロキシル基、一リン酸、二リン酸、三リン酸、四リン酸、五リン酸であるか、R3が置換されていてもよいアミノである場合は存在せず、
R5は、H、置換されていてもよいC1〜6アルキル、S-ピバロイルチオエタノール、ヒドロキシル、置換されていてもよいC1〜6アルコキシ、置換されていてもよいC3〜8シクロアルキル、置換されていてもよいC6〜12アリール、又は置換されていてもよいC2〜9ヘテロシクリルである)
の構造を含むヌクレオチド構築物又はその塩。
[125]  (1)5'位にDMT保護基を含む第1ヌクレオシド又はヌクレオチドを、非プロトン性溶媒系中で酸性条件下にDMT基を除去することによって脱ブロックするステップであって、第1ヌクレオシド又はヌクレオチドが、3'位で固体支持体に固定されていてもよく、或いは代わりに3'位が、酸に不安定ではないヒドロキシル保護基で保護されており、第1ヌクレオシド又はヌクレオチドが溶解している、ステップ、
(2)脱ブロックされた第1ヌクレオシド又はヌクレオチドを、[88]から[114]に記載の活性化されたヌクレオチド又は3'位にホスホルアミダイトを含む活性化されたヌクレオチドと、酸性アゾール触媒の存在下にカップリングするステップ、
(3)カップリングされたヌクレオチドを、プロトン性溶媒及び弱塩基を含む溶媒系中、酸化剤で酸化するステップ、及び
(4)カップリングされたヌクレオチドを、カップリングされたヌクレオチドの5'位のDMT基を非プロトン性溶媒系中、酸性条件下に除去することによって脱ブロックするステップ、
を含み、
ステップ(2)〜(4)が、1〜149回繰り返され、且つポリヌクレオチド構築物が、[94]から[124]のいずれかに記載の少なくとも1つのヌクレオチド構築物を含む、ポリヌクレオチド構築物を製造する方法。
[126]  ステップ(1)の第1ヌクレオシド又はヌクレオチドが、固体支持体に結合され、生じたポリヌクレオチド構築物が、最後の脱ブロックステップの後に、固体支持体から開裂される、[125]に記載の製造方法。
[127]  各ステップが、コンピュータで制御される装置を使用して実施される、[125]に記載の製造方法。
[128]  ポリヌクレオチド構築物の合成後に、核酸塩基が1つ以上の保護基を含む場合、次いで該保護基を除去し、且つ/又は保護基で保護された親水性官能基又はコンジュゲート部分を含む任意の生物可逆性基について、次いで保護基を除去する、[125]に記載の製造方法。
[129]  ポリヌクレオチド構築物の合成後に、小分子、ペプチド、ポリペプチド、炭水化物、中性有機ポリマー、正帯電ポリマー、治療剤、標的指向性部分、及び/又はエンドソーム脱出部分が、1つ以上の生物可逆性基の1つ以上のコンジュゲート部分に連結される、[125]又は[128]に記載の製造方法。
[130]  アルデヒド基と縮合して1つ以上の共有結合及び[1]から[81]のいずれかに記載のポリヌクレオチド構築物を形成できる1つ以上のコンジュゲート部分を有する、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、炭水化物、中性有機ポリマー、正帯電ポリマー、治療剤、標的指向性部分、エンドソーム脱出部分、又はこれらの任意の組合せを含む容器又は容器群を含むキット。
【手続補正２】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
標的指向性部分、ペプチド、ポリペプチド、炭水化物、中性有機ポリマー、正帯電ポリマー、治療剤、エンドソーム脱出部分、及びこれらの任意の組合せからなる群から選択される成分(i)を含むポリヌクレオチド構築物であって、成分(i)が、ヌクレオチド間架橋基に結合された生物可逆性基を介してポリヌクレオチド構築物に連結されている、ポリヌクレオチド構築物。
【請求項２】
親水性官能基を含む生物可逆性基、コンジュゲート部分を含む生物可逆性基、並びにコンジュゲート部分及び親水性基を含む生物可逆性基からなる群から選択される少なくとも1種の第2成分(ii)をさらに含み、コンジュゲート部分が保護基をさらに含んでいてもよい、請求項1に記載のポリヌクレオチド構築物。
【請求項３】
生物可逆性基が、チオエステルを含み、又は成分(i)が、ポリヌクレオチド構築物が細胞内輸送されることを可能にし、その結果、生物可逆性基が開裂される、請求項1又は2に記載のポリヌクレオチド構築物。
【請求項４】
小分子、ペプチド、ポリペプチド、炭水化物、中性有機ポリマー、正帯電ポリマー、治療剤、標的指向性部分、エンドソーム脱出部分、又はこれらの任意の組合せからなる群から選択される少なくとも1種の第3成分(iii)をさらに含み、成分(iii)が、ヌクレオチド間架橋基又は末端ヌクレオチド基の細胞内生物可逆性基にコンジュゲートされている、請求項1から3のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド構築物。
【請求項５】
式II:
【化１】
2015529073.tif 000036
(式中、
1つのR2は、成分(i)を含み、
Zは、0〜150の数字であり、
各B1は、個別に核酸塩基であり、
各Xは、個別に、O、S及びNR5からなる群から選択され、
各Yは、個別に、水素、ヒドロキシル、ハロ、置換されていてもよいC1〜6アルコキシ、又は保護されたヒドロキシル基からなる群から選択され、
各R2は、個別に、存在しないか、水素、又は親水性官能基を含む第1生物可逆性基、コンジュゲート部分を含む第2生物可逆性基、或いは小分子、ペプチド、ポリペプチド、炭水化物、中性有機ポリマー、正帯電ポリマー、治療剤、標的指向性部分、エンドソーム脱出部分、又はこれらの組合せからなる群から選択される補助部分を含む第3生物可逆性基であり、ここで、コンジュゲート部分又は親水性官能基は、保護基で保護されていてもよく、
各R5は、個別に、H、置換されていてもよいC1〜6アルキル、S-ピバロイルチオエタノール、ヒドロキシル、置換されていてもよいC1〜6アルコキシ、置換されていてもよいC3〜8シクロアルキル、置換されていてもよいC6〜12アリール、及び置換されていてもよいC2〜9ヘテロシクリルからなる群から選択され、
各R9は、個別に、O又はSであり、
R10は、H、ヒドロキシル、置換されていてもよいC1〜6アルコキシ、保護されたヒドロキシル基、一リン酸、二リン酸、三リン酸、四リン酸、五リン酸、5'キャップ、ホスホチオール、置換されていてもよいC1〜6アルキル、アミノ含有基、ビオチン含有基、ジゴキシゲニン含有基、コレステロール含有基、色素含有基、クエンチャー含有基、ペプチド、ポリペプチド、炭水化物、中性有機ポリマー、正帯電ポリマー、治療剤、標的指向性部分、エンドソーム脱出部分、及びこれらの任意の組合せからなる群から選択され、
R11は、H、ヒドロキシル、置換されていてもよいC1〜6アルコキシ、保護されたヒドロキシル基、一リン酸、二リン酸、三リン酸、四リン酸、五リン酸、置換されていてもよいC1〜6アルキル、アミノ含有基、ビオチン含有基、ジゴキシゲニン含有基、コレステロール含有基、色素含有基、クエンチャー含有基、ホスホチオール、ペプチド、ポリペプチド、炭水化物、中性有機ポリマー、正帯電ポリマー、治療剤、標的指向性部分、エンドソーム脱出部分、及びこれらの任意の組合せからなる群から選択される)
の構造を有する、請求項1に記載のポリヌクレオチド構築物又はその塩であって、好ましくは、式IIが、式II(a):
【化２】
2015529073.tif 000037
の構造を有し、好ましくは、R2が第1、第2、又は第3生物可逆性基であるヌクレオチドに関して、Yが、F又はOMeである、前記ポリヌクレオチド構築物又はその塩。
【請求項６】
生物可逆性基に結合された成分(i)が、構造式V:
【化３】
2015529073.tif 000038
(式中、
G1は、ペプチド、ポリペプチド、炭水化物、中性有機ポリマー、正帯電ポリマー、治療剤、標的指向性部分、エンドソーム脱出部分、又はこれらの組合せであり、
L1は、置換されていてもよいC2〜10アルキレン、置換されていてもよいC2〜10アルケニレン、又は置換されていてもよいC2〜10アルキニレンであり、ここで、アルキレン、アルケニレン、又はアルキニレンのそれぞれは、O、N及びSから選択される1〜10個のヘテロ原子で割り込まれていてもよく、
L2は、共有結合であるか、或いは置換されていてもよいC1〜10アルキレン、置換されていてもよいC2〜10アルケニレン、置換されていてもよいC2〜10アルキニレン、及び置換されていてもよいC6〜12アリーレンから選択され、ここで、アルキレン、アルケニレン、又はアルキニレンのそれぞれは、O、N及びSから選択される1〜10個のヘテロ原子で割り込まれていてもよい)
を有する、請求項1に記載のポリヌクレオチド構築物であって、好ましくは、L1が、
【化４】
2015529073.tif 000039
(式中、
L2'は、共有結合であるか、或いは置換されていてもよいC1〜10アルキレン、置換されていてもよいC2〜10アルケニレン、置換されていてもよいC2〜10アルキニレン、及び置換されていてもよいC6〜12アリーレンから選択され、ここで、アルキレン、アルケニレン、又はアルキニレンのそれぞれは、O、N及びSから選択される1〜10個のヘテロ原子で割り込まれていてもよく、
G2は、コンジュゲート部分、親水性官能基、小分子、ペプチド、ポリペプチド、炭水化物、中性有機ポリマー、正帯電ポリマー、治療剤、標的指向性部分、エンドソーム脱出部分、又はこれらの組合せである)
であり、又は好ましくは、該ポリヌクレオチド構築物が、式V':
【化５】
2015529073.tif 000040
(式中、
G1'は、コンジュゲート部分、親水性官能基、小分子、ペプチド、ポリペプチド、炭水化物、中性有機ポリマー、正帯電ポリマー、治療剤、標的指向性部分、エンドソーム脱出部分、又はこれらの組合せであり、
L1'は、置換されていてもよいC2〜10アルキレン、置換されていてもよいC2〜10アルケニレン、又は置換されていてもよいC2〜10アルキニレンであり、ここで、アルキレン、アルケニレン、又はアルキニレンのそれぞれは、O、N及びSから選択される1〜10個のヘテロ原子で割り込まれていてもよく、
L2'は、共有結合であるか、或いは置換されていてもよいC1〜10アルキレン、置換されていてもよいC2〜10アルケニレン、置換されていてもよいC2〜10アルキニレン、及び置換されていてもよいC6〜12アリーレンから選択され、ここで、アルキレン、アルケニレン、又はアルキニレンのそれぞれは、O、N及びSから選択される1〜10個のヘテロ原子で割り込まれていてもよい)
の構造をさらに含む、前記ポリヌクレオチド構築物。
【請求項７】
生物可逆性基に結合された成分(ii)が、構造式V:
【化６】
2015529073.tif 000041
(式中、
G1は、コンジュゲート部分又は親水性官能基であり、
L1は、置換されていてもよいC2〜10アルキレン、置換されていてもよいC2〜10アルケニレン、又は置換されていてもよいC2〜10アルキニレンであり、ここで、アルキレン、アルケニレン、又はアルキニレンのそれぞれは、O、N及びSから選択される1〜10個のヘテロ原子で割り込まれていてもよく、
L2は、共有結合であるか、或いは置換されていてもよいC1〜10アルキレン、置換されていてもよいC2〜10アルケニレン、置換されていてもよいC2〜10アルキニレン、及び置換されていてもよいC6〜12アリーレンから選択され、ここで、アルキレン、アルケニレン、又はアルキニレンのそれぞれは、O、N及びSから選択される1〜10個のヘテロ原子で割り込まれていてもよい)
を有する、請求項2に記載のポリヌクレオチド構築物であって、好ましくは、L1が、
【化７】
2015529073.tif 000042
(式中、
L2'は、共有結合であるか、或いは置換されていてもよいC1〜10アルキレン、置換されていてもよいC2〜10アルケニレン、置換されていてもよいC2〜10アルキニレン、及び置換されていてもよいC6〜12アリーレンから選択され、ここで、アルキレン、アルケニレン、又はアルキニレンのそれぞれは、O、N及びSから選択される1〜10個のヘテロ原子で割り込まれていてもよく、
G2は、コンジュゲート部分、親水性官能基、小分子、ペプチド、ポリペプチド、炭水化物、中性有機ポリマー、正帯電ポリマー、治療剤、標的指向性部分、エンドソーム脱出部分、又はこれらの組合せである)
であり、又は、好ましくは、該ポリヌクレオチド構築物が、式V':
【化８】
2015529073.tif 000043
(式中、
G1'は、コンジュゲート部分、親水性官能基、小分子、ペプチド、ポリペプチド、炭水化物、中性有機ポリマー、正帯電ポリマー、治療剤、標的指向性部分、エンドソーム脱出部分、又はこれらの組合せであり、
L1'は、置換されていてもよいC2〜10アルキレン、置換されていてもよいC2〜10アルケニレン、又は置換されていてもよいC2〜10アルキニレンであり、ここで、アルキレン、アルケニレン、又はアルキニレンのそれぞれは、O、N及びSから選択される1〜10個のヘテロ原子で割り込まれていてもよく、
L2'は、共有結合であるか、或いは置換されていてもよいC1〜10アルキレン、置換されていてもよいC2〜10アルケニレン、置換されていてもよいC2〜10アルキニレン、及び置換されていてもよいC6〜12アリーレンから選択され、ここで、アルキレン、アルケニレン、又はアルキニレンのそれぞれは、O、N及びSから選択される1〜10個のヘテロ原子で割り込まれていてもよい)
の構造をさらに含む、前記ポリヌクレオチド構築物。
【請求項８】
構造式V又はV'が、
【化９】
2015529073.tif 000044
2015529073.tif 000045
からなる群から選択される、請求項6又は7に記載のポリヌクレオチド構築物。
【請求項９】
L1が、置換されていてもよいC2〜10アルキレンであるか、
L1が、非置換又は置換されたC2、C4又はC5アルキレンであるか、
L2が、共有結合であるか、
L2が、置換されていてもよいC1〜10アルキレン又は置換されていてもよいC6〜12アリーレンであるか、
G1が、ヒドロキシルであるか、
G1が、コンジュゲート部分であり、好ましくは、該コンジュゲート部分は、-CHO、チオール、又は-N3であるか、
G1が、ペプチド、ポリペプチド、炭水化物、中性有機ポリマー、正帯電ポリマー、治療剤、標的指向性部分、エンドソーム脱出部分、又はこれらの任意の組合せを含むか、
L2が結合ではなく、且つG1が、ペリ環状反応；ヒドロキシル、チオール、又はアミノ部分のアルキル化若しくはアリール化；及びヒドロキシル、チオール又はアミノ求核基の電子求引基との反応からなる群から選択される反応によって形成された結合を介してL2に結合されているか、
L2が結合ではなく、且つG1が、アミド結合、スルホンアミド結合、カルボン酸エステル、チオエステル、置換されていてもよいC6〜12アリール若しくはC2〜9ヘテロアリール、イミン、ヒドラゾン、オキシム、又はスクシンイミドを介してL2に結合されているか、
R2の1つ以上の親水性官能基及び/又はコンジュゲート部分が、保護基で保護されているか、或いは
ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、炭水化物、中性有機ポリマー、正帯電ポリマー、治療剤、標的指向性部分、エンドソーム脱出部分、又はこれらの組合せが、アルデヒドコンジュゲート部分との縮合反応を介して生物可逆性基に連結されて、イミン、エナミン又はヒドラゾン結合を形成している、請求項6又は7に記載のポリヌクレオチド構築物。
【請求項１０】
ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、炭水化物、中性有機ポリマー、正帯電ポリマー、治療剤、標的指向性部分、エンドソーム脱出部分、又はこれらの組合せが、式III:
【化１０】
2015529073.tif 000046
(式中、
A1、A2、A4及びA5は、それぞれ個別に、N又はCR8であり、
A3及びA6は、Cであり、
R6〜R7は、それぞれ個別に、H、置換されていてもよいC1〜6アルキル、置換されていてもよいC2〜6アルケニル、置換されていてもよいイミン、及び置換されていてもよいエナミンであり、
各R8は、個別に、H、置換されていてもよいC1〜6アルキル、置換されていてもよいC2〜6アルケニル、置換されていてもよいC2〜6アルキニル、ハロ、ヒドロキシル、-CHO、置換されていてもよいC1〜6アシル、カルボキシル、シアノ、ニトロ、置換されていてもよいアミノ、チオール、置換されていてもよいC2〜9ヘテロシクリル、置換されていてもよいC6〜12アリール、置換されていてもよいC3〜8シクロアルキル、及び置換されていてもよいC4〜8シクロアルケニルである)
の構造を有する1つ以上の窒素含有コンジュゲート部分によって生物可逆性基に連結されている、請求項1から9のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド構築物。
【請求項１１】
生物可逆性基の多くても25%が、ペプチド、ポリペプチド、炭水化物、中性有機ポリマー、正帯電ポリマー、治療剤、標的指向性部分、エンドソーム脱出部分、又はこれらの組合せに連結されているか、
生物可逆性基の多くても50%が、ペプチド、ポリペプチド、炭水化物、中性有機ポリマー、正帯電ポリマー、治療剤、標的指向性部分、エンドソーム脱出部分、又はこれらの組合せに連結されているか、
生物可逆性基の多くても75%が、ペプチド、ポリペプチド、炭水化物、中性有機ポリマー、正帯電ポリマー、治療剤、標的指向性部分、エンドソーム脱出部分、又はこれらの組合せに連結されているか、或いは
生物可逆性基の多くても90%が、ペプチド、ポリペプチド、炭水化物、中性有機ポリマー、正帯電ポリマー、治療剤、標的指向性部分、エンドソーム脱出部分、又はこれらの組合せに連結されている、請求項1から10のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド構築物。
【請求項１２】
成分(i)が、送達ドメインを含み、
(a) 該送達ドメインが、1つ以上のペプチド導入ドメイン(PTD)を含んでいてもよいか、
(b) 該送達ドメインが、イミン、エナミン、又はヒドラゾン結合を介して生物可逆性基に連結されている1つ以上のPTDを含んでいてもよいか、或いは
(c) 1つ以上のPTDが、生物可逆性基に連結されて構造式IV:
【化１１】
2015529073.tif 000047
(式中、
R2'は、PTDに結合された生物可逆性基の残余部であり、
z'は、1〜10の数字であり、ここで、z'が1を超える場合、PTDは、1〜10個の繰り返し単位を有するポリ(C1〜4アルキレンオキシド)基を介して一緒に連結されていてもよい)
を形成していてもよい、請求項1から11のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド構築物。
【請求項１３】
1つ以上のPTDが、トランス活性化転写活性化因子(TAT)ペプチドであり、
PTDが、5〜15個のアミノ酸にわたって5〜10個のアルギニン及び/又はリシン残基を有するカチオン性ペプチド配列を含むか、
PTDが、配列RKKRRQRRR(配列番号1)を含むか、
PTDが、1〜10個の繰り返し単位を有するポリ(エチレングリコール)(PEG)にコンジュゲートされているか、
成分(i)が、
PEG-(PTD)、
GG-(PTD)-PEG-(PTD)、
PEG-(PTD)-PEG-(PTD)、
GG-(PTD)-PEG-PEG-PEG-(PTD)、
PEG-(PTD)-PEG-PEG-PEG-(PTD)、
GG-(PTD)-PEG-(PTD)-PEG-(PTD)、及び
GG-(PTD)-PEG-PEG-PEG-(PTD)-PEG-PEG-PEG-(PTD)
(ここで、PEGは1〜10個の繰り返し単位を有するポリ(エチレングリコール)リンカーである)
からなる群から選択される配列を含むか、
PTDが、式III:
【化１２】
2015529073.tif 000048
(式中、
A1、A2、A4及びA5は、それぞれ個別に、N又はCR8であり、
A3及びA6は、Cであり、
R6〜R7は、それぞれ個別に、H、置換されていてもよいC1〜6アルキル、置換されていてもよいC2〜6アルケニル、置換されていてもよいイミン、及び置換されていてもよいエナミンであり、
各R8は、個別に、H、置換されていてもよいC1〜6アルキル、置換されていてもよいC2〜6アルケニル、置換されていてもよいC2〜6アルキニル、ハロ、ヒドロキシル、-CHO、置換されていてもよいC1〜6アシル、カルボキシル、シアノ、ニトロ、置換されていてもよいアミノ、チオール、置換されていてもよいC2〜9ヘテロシクリル、置換されていてもよいC6〜12アリール、置換されていてもよいC3〜8シクロアルキル、及び置換されていてもよいC4〜8シクロアルケニルである)
の構造を含む相補性コンジュゲート部分を介して生物可逆性基に連結されているか、或いは
コンジュゲーション前の生物可逆性基が、
【化１３】
2015529073.tif 000049
からなる群から選択される、請求項12に記載のポリヌクレオチド構築物。
【請求項１４】
成分(i)が、標的指向性部分を含み、好ましくは、該標的指向性部分が、リガンド、炭水化物、抗体、FAb、ScFv、又は単一ドメイン抗体である、請求項1から13のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド構築物。
【請求項１５】
ポリヌクレオチド構築物中のヌクレオチドの75%以下が、生物可逆性基を有するか、
ポリヌクレオチド構築物中のヌクレオチドの65%以下が、生物可逆性基を有するか、
ポリヌクレオチド構築物が、2〜40個の生物可逆性基を含むか、
ポリヌクレオチド構築物が、5〜10個の生物可逆性基を含むか、
ポリヌクレオチド構築物が、10〜32個のヌクレオチドを有するか、又は
ポリヌクレオチド構築物が、17〜30個のヌクレオチドを有する、請求項1から14のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド構築物。
【請求項１６】
相補性ポリヌクレオチドにハイブリッド化された請求項1から15のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド構築物を含む、ハイブリッド化ポリヌクレオチドであって、好ましくは、該相補性ポリヌクレオチドが、ヌクレオチド間架橋基又は末端ヌクレオチド基にコンジュゲートされた細胞内生物可逆性基を含み、
請求項1から15のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド構築物、及び相補性ポリヌクレオチドが、それぞれ9つ以下の生物可逆性基を含むか、
ヌクレオチドの総数の75%以下が、生物可逆性基を有するか、
請求項1から15のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド構築物、及び相補性ヌクレオチドが、それぞれ10〜32個のヌクレオチドを有し、より好ましくは、請求項1から15のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド構築物、及び相補性ヌクレオチドが、それぞれ19〜25個のヌクレオチドを有するか、或いは、
ハイブリッド化ポリヌクレオチドが、siRNAであり、好ましくは、請求項1から15のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド構築物がガイド鎖であり、相補性ポリヌクレオチドがパッセンジャー鎖であり、より好ましくは、該パッセンジャー鎖が、細胞内酵素によって開裂できない部分を有するリン酸トリエステルを含み、さらにより好ましくは、該細胞内酵素によって開裂できない部分が、置換されていてもよいC1〜6アルキルである、
前記ハイブリッド化ポリヌクレオチド。
【請求項１７】
請求項1から16のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド構築物又はポリヌクレオチド、及び薬学上許容される賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項１８】
タンパク質の発現を低減する方法において使用するための、請求項1から16のいずれか一項に記載の構築物又はハイブリッド化ポリヌクレオチドであって、該方法が、細胞に、遺伝子発現のアンチセンス又はRNAi介在性低減を誘導するのに十分な量で投与することを含む、前記構築物又はハイブリッド化ポリヌクレオチド。
【請求項１９】
式(I):
【化１４】
2015529073.tif 000050
(式中、
B1は、核酸塩基であり、
Xは、O、S又はNR5であり、
Yは、ハロ、置換されていてもよいC1〜6アルコキシ、又は保護されたヒドロキシル基であり、
R1は、ヒドロキシル、置換されていてもよいC1〜6アルコキシ、保護されたヒドロキシル基、一リン酸、二リン酸、三リン酸、四リン酸、又は五リン酸であり、
R2は、ペプチド、ポリペプチド、炭水化物、中性有機ポリマー、正帯電ポリマー、治療剤、標的指向性部分、エンドソーム脱出部分、及びこれらの任意の組合せからなる群から選択される補助部分を含む生物可逆性基であり、ここで、補助部分は、1つ以上の共有結合で生物可逆性基に連結されており、
R3は、O、S、又は置換されていてもよいアミノであり、
R4は、H、ヒドロキシル、置換されていてもよいC1〜6アルコキシ、保護されたヒドロキシル基、一リン酸、二リン酸、三リン酸、四リン酸、五リン酸であるか、R3が置換されていてもよいアミノである場合は存在せず、
R5は、H、置換されていてもよいC1〜6アルキル、S-ピバロイルチオエタノール、ヒドロキシル、置換されていてもよいC1〜6アルコキシ、置換されていてもよいC3〜8シクロアルキル、置換されていてもよいC6〜12アリール、又は置換されていてもよいC2〜9ヘテロシクリルである)
の構造を含むヌクレオチド構築物又はその塩であって、好ましくは、式I(a):
【化１５】
2015529073.tif 000051
の構造を含む、前記ヌクレオチド構築物又はその塩。
【請求項２０】
R1が、4,4'-ジメトキシトリチル基(DMT)で保護されたヒドロキシル基であるか、又は
R2が、構造式V:
【化１６】
2015529073.tif 000052
(式中、
G1は、ペプチド、ポリペプチド、炭水化物、中性有機ポリマー、正帯電ポリマー、治療剤、標的指向性部分、エンドソーム脱出部分、又はこれら任意の組合せであり、
L1は、置換されていてもよいC2〜10アルキレン、置換されていてもよいC2〜10アルケニレン、又は置換されていてもよいC2〜10アルキニレンであり、ここで、アルキレン、アルケニレン、又はアルキニレンのそれぞれは、O、N及びSから選択される1〜10個のヘテロ原子で割り込まれていてもよく、
L2は、共有結合であるか、或いは置換されていてもよいC1〜10アルキレン、置換されていてもよいC2〜10アルケニレン、置換されていてもよいC2〜10アルキニレン、及び置換されていてもよいC6〜12アリーレンから選択され、ここで、アルキレン、アルケニレン、又はアルキニレンのそれぞれは、O、N及びSから選択される1〜10個のヘテロ原子で割り込まれていてもよい)
を含み、好ましくは、
(a) L1が、置換されていてもよいC2〜10アルキレンであるか、
(b) L1が、非置換又は置換されたC2、C4又はC5アルキレンであるか、
(c) L2が、共有結合であるか、
(d) L2が、置換されていてもよいC1〜10アルキレン、又は置換されていてもよいC6〜12アリーレンであるか、
(e) L2が、結合ではなく、且つG1が、ペリ環状反応；ヒドロキシル、チオール、又はアミノ部分のアルキル化若しくはアリール化；及びヒドロキシル、チオール、又はアミノ求核基の電子求引基との反応からなる群から選択される反応によって形成される結合を介してL2に結合されているか、
(f) L2が、結合ではなく、且つG1が、アミド結合、スルホンアミド結合、カルボン酸エステル、チオエステル、置換されていてもよいC6〜12アリール若しくはC2〜9ヘテロアリール、イミン、ヒドラゾン、オキシム、又はスクシンイミドを介してL2に結合されているか、
(g) G1が、ペプチド、ポリペプチド、中性有機ポリマー、又はこれらの任意の組合せであり、
L1が、置換されていてもよいC2〜6アルキレン、置換されていてもよいC2〜6アルケニレン、又は置換されていてもよいC2〜6アルキニレンであり、ここで、アルキレン、アルケニレン、又はアルキニレンのそれぞれは、1又は2つの酸素原子で割り込まれていてもよく、
L2は、共有結合であるか、或いは置換されていてもよいC1〜6アルキレン、置換されていてもよいC2〜6アルケニレン、置換されていてもよいC2〜6アルキニレン、及び置換されていてもよいC6〜10アリーレンから選択され、より好ましくは、G1が、送達ドメインを含み、さらにより好ましくは、該送達ドメインが、1つ以上のペプチド導入ドメイン(PTD)を含むか、若しくはG1の中性有機ポリマーが、ポリ(エチレングリコール)であるか、
(h) L1が、
【化１７】
2015529073.tif 000053
(式中、
L2'は、共有結合であるか、或いは置換されていてもよいC1〜10アルキレン、置換されていてもよいC2〜10アルケニレン、置換されていてもよいC2〜10アルキニレン、及び置換されていてもよいC6〜12アリーレンから選択され、ここで、アルキレン、アルケニレン、又はアルキニレンのそれぞれは、O、N及びSから選択される1〜10個のヘテロ原子で割り込まれていてもよく、
G2は、コンジュゲート部分、親水性官能基、小分子、ペプチド、ポリペプチド、炭水化物、中性有機ポリマー、正帯電ポリマー、治療剤、標的指向性部分、エンドソーム脱出部分、又はこれらの組合せである)
であるか、
(i) XがOであるか、
(j) ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、炭水化物、中性有機ポリマー、正帯電ポリマー、治療剤、標的指向性部分、エンドソーム脱出部分、又はこれらの組合せが、アルデヒド基との縮合反応を介して生物可逆性基に連結されて、イミン、エナミン、又はヒドラゾン結合を形成しているか、或いは
(k) ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、炭水化物、中性有機ポリマー、正帯電ポリマー、治療剤、標的指向性部分、エンドソーム脱出部分、又はこれらの組合せが、式III:
【化１８】
2015529073.tif 000054
(式中、
A1、A2、A4及びA5は、それぞれ個別に、N又はCR8であり、
A3及びA6は、Cであり、
R6〜R7は、それぞれ個別に、H、置換されていてもよいC1〜6アルキル、置換されていてもよいC2〜6アルケニル、置換されていてもよいイミン、及び置換されていてもよいエナミンであり、
各R8は、個別に、H、置換されていてもよいC1〜6アルキル、置換されていてもよいC1〜6アルケニル、置換されていてもよいC2〜6アルキニル、ハロゲン化物、ヒドロキシル、-CHO、置換されていてもよいC1〜6アシル、カルボン酸、シアノ、ニトロ、置換されていてもよいアミノ、チオール、置換されていてもよいC2〜9ヘテロシクリル、置換されていてもよいC6〜12アリール、置換されていてもよいC3〜8シクロアルキル、及び置換されていてもよいC4〜8シクロアルケニルである)
の構造を有する1つ以上の窒素含有相補性コンジュゲート部分によって生物可逆性基に連結されており、
好ましくは、R2が、送達ドメインを含み、より好ましくは、該送達ドメインが、1つ以上のペプチド導入ドメイン(PTD)を含む、
請求項19に記載のヌクレオチド構築物。
【請求項２１】
式I(c):
【化１９】
2015529073.tif 000055
(式中、
R2'は、PTDに結合された生物可逆性基の残余部であり、
z'は、1〜10の数字であり、ここで、z'が1を超える場合、PTDは、1〜10個の繰り返し単位を有するポリ(C1〜4アルキレンオキシド)基を介して一緒に連結されている)
の構造を含む、請求項20に記載のヌクレオチド構築物であって、好ましくは、
PTDが、5〜15個のアミノ酸にわたって5〜10個のアルギニン及び/又はリシン残基を有するカチオン性ペプチド配列であるか、
PTDが、配列RKKRRQRRR(配列番号1)を含むか、
送達ドメインが、1〜10個の繰り返し単位を有するポリ(エチレングリコール)にコンジュゲートされたPTDを含み、より好ましくは、送達ドメインが、
PEG-(PTD)、
GG-(PTD)-PEG-(PTD)、
PEG-(PTD)-PEG-(PTD)、
GG-(PTD)-PEG-PEG-PEG-(PTD)、
PEG-(PTD)-PEG-PEG-PEG-(PTD)、
GG-(PTD)-PEG-(PTD)-PEG-(PTD)、及び
GG-(PTD)-PEG-PEG-PEG-(PTD)-PEG-PEG-PEG-(PTD)
(ここで、PEGは、1〜10個の繰り返し単位を有するポリ(エチレングリコール)リンカーである)
からなる群から選択される配列を含むか、
R2が、標的指向性部分を含み、好ましくは、該標的指向性部分が、リガンド、炭水化物、抗体、FAb、ScFv、又は単一ドメイン抗体であるか、
B1が、非天然核酸塩基であるか、或いは
B1が、天然に存在する核酸塩基であり、好ましくは、B1が、シトシン、グアニン、アデニン、ウラシル、又はチミジンである、
前記ヌクレオチド構築物。