【手続補正書】
【提出日】平成28年8月5日(2016.8.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
SEQ ID NO：7に対して少なくとも約90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む変異型カルボン酸レダクターゼ（CAR）ポリペプチドであって、アミノ酸位置3、18、20、22、80、87、191、288、473、535、750、827、870、873、926、927、930および1128からなる群より選択されるアミノ酸位置に少なくとも1つの突然変異を有するように遺伝子操作された、変異型CARポリペプチド。
【請求項２】
組換え宿主細胞における前記変異型CARポリペプチドの発現が、対応する野生型ポリペプチドを発現する宿主細胞と比較してより高い力価の脂肪アルコール組成物をもたらす、請求項1記載の変異型CARポリペプチド。
【請求項３】
CARポリペプチドがCarBポリペプチドである、請求項1記載の変異型CARポリペプチド。
【請求項４】
S3R、D18R、D18L、D18T、D18P、E20V、E20S、E20R、S22R、S22N、S22G、L80R、R87G、R87E、V191S、F288R、F288S、F288G、Q473L、Q473W、Q473Y、Q473I、Q473H、A535S、D750A、R827C、R827A、I870L、R873S、V926A、V926E、S927K、S927G、M930K、M930RおよびL1128Wからなる群より選択される突然変異を含む、請求項1記載の変異型CARポリペプチド。
【請求項５】
突然変異A535Sを含む、請求項4記載の変異型CARポリペプチド。
【請求項６】
変異型ポリペプチドが突然変異E20R、F288G、Q473IおよびA535Sを含む、請求項4記載の変異型CARポリペプチド。
【請求項７】
変異型ポリペプチドが突然変異E20R、F288G、Q473H、A535S、R827AおよびS927Gを含む、請求項4記載の変異型CARポリペプチド。
【請求項８】
変異型ポリペプチドが突然変異E20R、S22R、F288G、Q473H、A535S、R827AおよびS927Gを含む、請求項4記載の変異型CARポリペプチド。
【請求項９】
変異型ポリペプチドが突然変異S3R、E20R、S22R、F288G、Q473H、A535S、R873S、S927G、M930RおよびL1128Wを含む、請求項4記載の変異型CARポリペプチド。
【請求項１０】
変異型ポリペプチドが突然変異E20R、S22R、F288G、Q473H、A535S、R873S、S927G、M930RおよびL1128Wを含む、請求項4記載の変異型CARポリペプチド。
【請求項１１】
変異型ポリペプチドが突然変異D18R、E20R、S22R、F288G、Q473I、A535S、S927G、M930KおよびL1128Wを含む、請求項4記載の変異型CARポリペプチド。
【請求項１２】
変異型ポリペプチドが突然変異E20R、S22R、F288G、Q473I、A535S、R827C、V926E、S927KおよびM930Rを含む、請求項4記載の変異型CARポリペプチド。
【請求項１３】
変異型ポリペプチドが突然変異D18R、E20R、288G、Q473I、A535S、R827C、V926E、M930KおよびL1128Wを含む、請求項4記載の変異型CARポリペプチド。
【請求項１４】
変異型ポリペプチドが突然変異E20R、S22R、F288G、Q473H、A535S、R827C、V926A、S927KおよびM930Rを含む、請求項4記載の変異型CARポリペプチド。
【請求項１５】
変異型ポリペプチドが突然変異E20R、S22R、F288G、Q473H、A535SおよびR827Cを含む、請求項4記載の変異型CARポリペプチド。
【請求項１６】
変異型ポリペプチドが突然変異E20R、S22R、F288G、Q473I、A535S、R827CおよびM930Rを含む、請求項4記載の変異型CARポリペプチド。
【請求項１７】
変異型ポリペプチドが突然変異E20R、S22R、F288G、Q473I、A535S、I870L、S927GおよびM930Rを含む、請求項4記載の変異型CARポリペプチド。
【請求項１８】
変異型ポリペプチドが突然変異E20R、S22R、F288G、Q473I、A535S、I870LおよびS927Gを含む、請求項4記載の変異型CARポリペプチド。
【請求項１９】
変異型ポリペプチドが突然変異D18R、E20R、S22R、F288G、Q473I、A535S、R827C、I870L、V926AおよびS927Gを含む、請求項4記載の変異型CARポリペプチド。
【請求項２０】
変異型ポリペプチドが突然変異E20R、S22R、F288G、Q473H、A535S、R827C、I870LおよびL1128Wを含む、請求項4記載の変異型CARポリペプチド。
【請求項２１】
変異型ポリペプチドが突然変異D18R、E20R、S22R、F288G、Q473H、A535S、R827C、I870L、S927GおよびL1128Wを含む、請求項4記載の変異型CARポリペプチド。
【請求項２２】
変異型ポリペプチドが突然変異E20R、S22R、F288G、Q473I、A535S、R827C、I870L、S927GおよびL1128Wを含む、請求項4記載の変異型CARポリペプチド。
【請求項２３】
変異型ポリペプチドが突然変異E20R、S22R、F288G、Q473I、A535S、R827C、I870L、S927G、M930KおよびL1128Wを含む、請求項4記載の変異型CARポリペプチド。
【請求項２４】
変異型ポリペプチドが突然変異E20R、S22R、F288G、Q473H、A535S、I870L、S927GおよびM930Kを含む、請求項4記載の変異型CARポリペプチド。
【請求項２５】
変異型ポリペプチドが突然変異E20R、F288G、Q473I、A535S、I870L、M930Kを含む、請求項4記載の変異型CARポリペプチド。
【請求項２６】
変異型ポリペプチドが突然変異E20R、S22R、F288G、Q473H、A535S、S927G、M930KおよびL1128Wを含む、請求項4記載の変異型CARポリペプチド。
【請求項２７】
変異型ポリペプチドが突然変異D18R、E20R、S22R、F288G、Q473I、A535S、S927GおよびL1128Wを含む、請求項4記載の変異型CARポリペプチド。
【請求項２８】
変異型ポリペプチドが突然変異E20R、S22R、F288G、Q473I、A535S、R827C、I870LおよびS927Gを含む、請求項4記載の変異型CARポリペプチド。
【請求項２９】
変異型ポリペプチドが突然変異D18R、E20R、S22R、F288G、Q473I、A535S、R827C、I870L、S927GおよびL1128Wを含む、請求項4記載の変異型CARポリペプチド。
【請求項３０】
変異型ポリペプチドが突然変異D18R、E20R、S22R、F288G、Q473I、A535S、S927G、M930RおよびL1128Wを含む、請求項4記載の変異型CARポリペプチド。
【請求項３１】
変異型ポリペプチドが突然変異E20R、S22R、F288G、Q473H、A535S、V926E、S927GおよびM930Rを含む、請求項4記載の変異型CARポリペプチド。
【請求項３２】
変異型ポリペプチドが突然変異E20R、S22R、F288G、Q473H、A535S、R827C、I870L、V926AおよびL1128Wを含む、請求項4記載の変異型CARポリペプチド。
【請求項３３】
SEQ ID NO：7に対して少なくとも90％の配列同一性を有し、かつ、アミノ酸位置3、18、20、22、80、87、191、288、473、535、750、827、870、873、926、927、930および1128からなる群より選択されるアミノ酸位置に少なくとも1つの突然変異を有する変異型カルボン酸レダクターゼ（CAR）ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含む組換え宿主細胞であって、該組換え宿主細胞が、炭素源を含有する培地中で、該変異型CARポリペプチドを発現するのに有効な条件下で培養された場合に、対応する野生型CARポリペプチドを発現する宿主細胞よりも高い力価または収量で脂肪アルコール組成物を産生する、組換え宿主細胞。
【請求項３４】
SEQ ID NO：7が前記対応する野生型CARポリペプチドである、請求項33記載の組換え宿主細胞。
【請求項３５】
チオエステラーゼポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをさらに含む、請求項33記載の組換え宿主細胞。
【請求項３６】
FabBポリペプチドおよびFadRポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをさらに含む、請求項35記載の組換え宿主細胞。
【請求項３７】
前記組換え宿主細胞が、該組換え宿主細胞と同じ条件下で培養した場合の前記対応する野生型CARポリペプチドを発現する宿主細胞の力価よりも少なくとも3倍高い力価を有する、請求項33記載の組換え宿主細胞。
【請求項３８】
約30g/L〜約250g/Lの力価を有する、請求項37記載の組換え宿主細胞。
【請求項３９】
約90g/L〜約120g/Lの力価を有する、請求項38記載の組換え宿主細胞。
【請求項４０】
前記組換え宿主細胞が約10％〜約40％までの収量を有する、請求項33記載の組換え宿主細胞。
【請求項４１】
請求項33記載の組換え宿主細胞を含む、細胞培養物。
【請求項４２】
前記対応する野生型CARポリペプチドを発現する細胞培養物の産生能よりも少なくとも3倍高い産生能を有する、請求項41記載の細胞培養物。
【請求項４３】
産生能が約0.7mg/L/hr〜約3g/L/hrの範囲である、請求項42記載の細胞培養物。
【請求項４４】
培養培地が脂肪アルコール組成物を含む、請求項43記載の細胞培養物。
【請求項４５】
前記脂肪アルコール組成物が細胞外環境に分泌される、請求項44記載の細胞培養物。
【請求項４６】
前記脂肪アルコール組成物がC6、C8、C10、C12、C13、C14、C15、C16、C17、またはC18脂肪アルコールのうち1つまたは複数を含む、請求項45記載の細胞培養物。
【請求項４７】
前記脂肪アルコール組成物がC10:1、C12:1、C14:1、C16:1、またはC18:1不飽和脂肪アルコールを含む、請求項45記載の細胞培養物。
【請求項４８】
前記脂肪アルコール組成物がC12およびC14脂肪アルコールを含む、請求項45記載の細胞培養物。
【請求項４９】
前記脂肪アルコール組成物がC12およびC14脂肪アルコールを約3：1の比で含む、請求項48記載の細胞培養物。
【請求項５０】
前記脂肪アルコール組成物が不飽和脂肪アルコールを含む、請求項45記載の細胞培養物。
【請求項５１】
前記脂肪アルコール組成物が、脂肪アルコールの還元末端からC7〜C8の間の炭素鎖における7番目の位置に二重結合を有する該脂肪アルコールを含む、請求項50記載の細胞培養物。
【請求項５２】
前記脂肪アルコール組成物が飽和脂肪アルコールを含む、請求項45記載の細胞培養物。
【請求項５３】
前記脂肪アルコール組成物が分枝鎖脂肪アルコールを含む、請求項45記載の細胞培養物。
【請求項５４】
脂肪アルデヒドレダクターゼ（AlrA）をコードするポリヌクレオチドをさらに含む、請求項35記載の組換え宿主細胞。
【請求項５５】
請求項54記載の組換え宿主細胞を含む、細胞培養物。
【請求項５６】
脂肪アルコール組成物を高い力価、収量または産生能で製造する方法であって、
（a）請求項1記載の組換え宿主細胞を遺伝子工学的に作製する段階；
（b）炭素源を含む培地中で該組換え宿主細胞を培養する段階；および
（c）任意で、該培地から該脂肪アルコール組成物を単離する段階
を含む、方法。