【誤訳訂正書】
【提出日】平成28年8月4日(2016.8.4)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１８】
【図１】ＨｅｐＧ２細胞を、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００を用いて導入されたホスホロチオエートオリゴヌクレオチドで処置後のＳＣＮ１ＡのｍＲＮＡの倍率変化＋標準偏差を対照と比較したリアルタイムＰＣＲの結果のグラフである。ＳＣＮ１ＡアンチセンスＢＧ７２４１４７に対するアンチセンスオリゴヌクレオチドの１つで処置後４８時間で、ＨｅｐＧ２細胞においてＳＣＮ１ＡのｍＲＮＡのレベルが顕著に上昇することをリアルタイムＰＣＲの結果は示している。ＣＵＲ−１６２４〜ＣＵＲ−１６２７と表示されたバーは、それぞれ配列番号３０〜配列番号３３で処置されたサンプルに対応する。
【図２】ＨｅｐＧ２細胞を、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００を用いて導入されたホスホロチオエートオリゴヌクレオチドで処置後のＳＣＮ１ＡのｍＲＮＡの倍率変化＋標準偏差を対照と比較したリアルタイムＰＣＲの結果のグラフである。ＣＵＲ−１６２８〜ＣＵＲ−１６３１と表示されたバーは、それぞれ配列番号３４〜配列番号３７で処置されたサンプルに対応する。
【図３】ＨｅｐＧ２細胞を、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００を用いて導入されたホスホロチオエートオリゴヌクレオチドで処置後のＳＣＮ１ＡのｍＲＮＡの倍率変化＋標準偏差を対照と比較したリアルタイムＰＣＲの結果のグラフである。ＣＵＲ−１６３２〜ＣＵＲ−１６３６と表示されたバーは、それぞれ配列番号３８〜配列番号４２で処置されたサンプルに対応する。
【図４】Ｄｒａｖｅｔ症候群に関連する変異を生ずる初代ヒト皮膚線維芽細胞におけるＳＣＮ１ＡのｍＲＮＡの用量依存性のアップレギュレーションを示す。ＣＵＲ−１９１６、ＣＵＲ−１７４０、ＣＵＲ−１７６４およびＣＵＲ−１７７０は、それぞれ配列番号７０、４５、５２および５７で処置されたサンプルに対応する。
【図５】ＳＫ−Ｎ−ＡＳ細胞内のＳＣＮ１ＡのｍＲＮＡの用量依存性のアップレギュレーションを示す。ＣＵＲ−１９１６、ＣＵＲ−１７４０、ＣＵＲ−１７６４およびＣＵＲ−１７７０は、それぞれ配列番号７０、４５、５２および５７で処置されたサンプルに対応する。
【図６】Ｖｅｒｏ７６細胞内のＳＣＮ１ＡのｍＲＮＡの用量依存性のアップレギュレーションを示。ＣＵＲ−１９１６、ＣＵＲ−１７４０、ＣＵＲ−１７６４およびＣＵＲ−１７７０は、それぞれ配列番号７０、４５、５２および５７で処置されたサンプルに対応する。
【図７】ＳＣＮ１ＡのｍＲＮＡのアップレギュレーションがアンチセンスオリゴヌクレオチドの非特異的な毒性により引き起こされないことを示す。Ａ−ＣＵＲ−１９１６によるアップレギュレーション；Ｂ−ＣＵＲ−１７７０によるアップレギュレーション。ＣＵＲ−１４６２は類似のケミストリを有する不活性な対照オリゴヌクレオチドである。
【図８】ＳＣＮ１Ａの天然のアンチセンス転写物を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドでの処置によりＤｒａｖｅｔ関連変異を生ずるヒト線維芽細胞のＳＣＮ８ＡおよびＳＣＮ９Ａのチャネルの発現が著しく影響を受けないことを示す。Ａ−ＣＵＲ−１７７０での処置；Ｂ−ＣＵＲ−１９１６での処置。
【図９】ＳＣＮ１Ａに特異的な天然のアンチセンス転写物を標的にするアンチセンスオリゴヌクレオチドの安定度を示す。Ｖｅｒｏ７６細胞を、実施例２で記述したように、２０１０年８月および２０１１年３月に合成されたＣＵＲ−１９１６の２つの異なるバッチで処置した。２０１０年８月に合成されたオリゴヌクレオチドは、１ｍＭの水溶液として４°Ｃで貯蔵された。２０１１年３月に合成されたオリゴヌクレオチドは、凍結乾燥した形態で輸送され、到着後直ちにテストした。
【図１０】ＳＣＮ１Ａの天然のアンチセンスに相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチドで処置したＤｒａｖｅｔ症候群変異を生ずる繊維芽細胞におけるＳＣＮ１Ａタンパク質のアップレギュレーションを示す。繊維芽細胞を２４穴プレートで増殖させ、ＳＣＮ１Ａの天然のアンチセンスに相補的なアンチセンスオリゴ２０ｎＭ（パネルｃ：ＣＵＲ−１７４０；ｄ：ＣＵＲ−１７７０；ｅ：ＣＵＲ−１９１６）、および０ｎＭ（ｂ）で処置した。アビジン／ビオチン法（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  ｃａｔ＃ＳＰ−２００１；Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  ｃａｔ＃ＰＫ−６１０１；  Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  ｃａｔ＃ＳＫ−４１０５）を用いた、抗ＳＣＮ１Ａ抗体（Ａｂｅａｍ  ｃａｔ＃ａｂ２４８２０）および二次抗体染色／増幅を使用する間接型免疫組織化学的検査使用により、細胞をＳＣＮ１Ａに関して染色した（ｂ−ｅ）；パネルａ−負の対照、一次抗体としてウサギ抗マウス抗体を使用し、次いでパネルｂ−ｅと同一の染色方法を用いた。
【図１１】ＳＣＮ１Ａの天然のアンチセンスに相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチドで処置したＳＫ−Ｎ−ＡＳ細胞におけるＳＣＮ１Ａタンパク質のアップレギュレーションを示す。ＳＫ−Ｎ−ＡＳ細胞を２４穴プレートで増殖させ、オリゴヌクレオチド２０ｎＭ（ｃ：ＣＵＲ−１７４０；ｄ：ＣＵＲ−１７６４；ｅ：ＣＵＲ−１７７０；ｆ：ＣＵＲ−１９１６）、および０ｎＭ（ｂ）で処置した。アビジン／ビオチン法（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  ｃａｔ＃ＳＰ−２００１；Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  ｃａｔ＃ＰＫ−６１０１；Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  ｃａｔ＃ＳＫ−４１０５）を用いた、抗ＳＣＮ１Ａ抗体（Ａｂｅａｍ  ｃａｔ＃ａｂ２４８２０）および二次抗体染色／増幅をする間接型免疫組織化学的検査使用により、ＳＫ−Ｎ−ＡＳ細胞をＳＣＮ１Ａに関して染色した（ｂ−ｆ）；負の対照として、ウサギ抗マウス抗体を一次抗体として使用し、次いでｂ−ｆと同一の染色方法を用いた（パネルａ）。
【図１２】ＳＣＮ１Ａの天然のアンチセンスに相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチドで処置したＶｅｒｏ７６細胞におけるＳＣＮ１Ａタンパク質のアップレギュレーションを示す。Ｖｅｒｏ７６細胞を２４穴プレートで増殖させ、ＳＣＮ１Ａの天然のアンチセンスに相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチド２０ｎＭ（ｃ：ＣＵＲ−１７４０；ｄ：ＣＵＲ−１９４５；ｅ：ＣＵＲ−１７７０；ｆ：ＣＵＲ−１９１６；ｇ：ＣＵＲ−１９２４）、および０ｎＭ（ｂ）で処置した。アビジン／ビオチン法（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  ｃａｔ＃ＳＰ−２００１；  Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  ｃａｔ＃ＰＫ−６１０１；  Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  ｃａｔ＃Ｓｋ−４１０５）を用いた、ＳＣＮ１Ａ抗体（Ａｂｅａｍ  ｃａｔ＃ａｂ２４８２０）および二次抗体染色／増幅を使用する間接型免疫組織化学的検査使用により、Ｖｅｒｏ７６細胞をＳＣＮ１Ａに関して染色した（ｂ−ｆ）；パネルａ−負の対照、一次抗体としてウサギ抗マウス抗体を使用し、次いでパネルｂ−ｇと同一の染色方法を用いた。
【図１３】ＳＣＮ１ＡのｍＲＮＡをアップレギュレートするＳＣＮ１Ａに特異的な天然のアンチセンス転写物を標的にするオリゴヌクレオチドは、Ｖｅｒｏ７６細胞内のアクチンをアップレギュレートしないことを示す。ＳＣＮ１ＡのｍＲＮＡおよびタンパク質をアップレギュレートすることが実施例５および１２で示されたＳＣＮ１Ａに特異的な天然のアンチセンス転写物を標的にする同一のアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＣＵＲ−１７４０、ＣＵＲ−１８３８、ＣＵＲ−１９２４）を、これらのＶｅｒｏ７６細胞内のβアクチンｍＲＮＡ発現への影響に関してテストした。ＳＣＮ１Ａに特異的な天然のアンチセンス転写物を標的にするオリゴヌクレオチドは、アクチンのような関連のない遺伝子をアップレギュレートしないことがデータにより確認される。ＣＵＲ−１７４０、ＣＵＲ−１８３８およびＣＵＲ−１９２４と表示されたバーは、それぞれ配列番号４５、６２および７８で処置されたサンプルに対応する。
【図１４】ＳＣＮ１ＡのｍＲＮＡおよびタンパク質をアップレギュレートすることが示されたＳＣＮ１Ａに特異的な天然のアンチセンス転写物を標的にするオリゴヌクレオチドは、Ｄｒａｖｅｔ関連変異を生ずる繊維芽細胞内のアクチンをアップレギュレートしないことを示す。ＳＣＮ１ＡのｍＲＮＡおよびタンパク質をアップレギュレートすることが実施例２および７で示されたＳＣＮ１Ａに特異的な天然のアンチセンス転写物を標的にするオリゴヌクレオチド（ＣＵＲ−１９１６、ＣＵＲ、ＣＵＲ−１９４５）を、これらのＤｒａｖｅｔ関連変異を生ずる繊維芽細胞内のアクチンｍＲＮＡ発現への影響に関してテストした。ＳＣＮ１Ａに特異的な天然のアンチセンス転写物を標的にするオリゴヌクレオチドは、アクチンのような関連のない遺伝子をアップレギュレートしないことが以下のデータにより確認される。ＣＵＲ−１９１６、ＣＵＲ−およびＣＵＲ−１９４５と表示されたバーは、それぞれ配列番号７０、および９３で処置されたサンプルに対応する。
【図１５】ＳＣＮ１ＡのｍＲＮＡおよびタンパク質をアップレギュレートすることが示されたＳＣＮ１Ａに特異的な天然のアンチセンス転写物を標的にするオリゴヌクレオチドはＳＫ−Ｎ−ＡＳ細胞内のアクチンをアップレギュレートしないことを示す。ＳＣＮ１ＡのｍＲＮＡおよびタンパク質をアップレギュレートすることが実施例で示された同一のアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＣＵＲ−１７４０、ＣＵＲ−１７７０、ＣＵＲ−１９１６、ＣＵＲ−１７６４、ＣＵＲ−１８３８）を、これらのＳＫ−Ｎ−ＡＳ細胞内のアクチンｍＲＮＡ発現への影響に対してテストした。ＳＣＮ１Ａに特異的な天然のアンチセンス転写物を標的にするオリゴヌクレオチドは、アクチンのような関連のない遺伝子をアップレギュレートしないことがデータにより確認される。ＣＵＲ−１７４０、ＣＵＲ−１７７０、ＣＵＲ−１９１６、ＣＵＲ−１７６４およびＣＵＲ−１８３８は、それぞれ配列番号４５、５７、７０、５２および６２で処置されたサンプルに対応する。
【図１６】ＳＣＮ１Ａの天然のアンチセンスに相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチドで処置したＳＫ−Ｎ−ＡＳ細胞におけるアクチンタンパク質の染色を示す。ＳＫ−Ｎ−ＡＳ細胞を２４穴プレートで増殖させ、オリゴヌクレオチド２０ｎＭ（ｂ：ＣＵＲ−１７４０；ｃ：ＣＵＲ−１７６４；ｄ：ＣＵＲ−１７７０；ｅ：ＣＵＲ−１９１６）、および０ｎＭ（ａ）で処置した。アビジン／ビオチン法（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  ｃａｔ＃ＳＰ−２００１；Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  ｃａｔ＃ＰＫ−６１０１；Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  ｃａｔ＃ＳＫ−４１０５）を用いた、抗アクチン抗体（Ａｂｅａｍ  ｃａｔ＃ａｂ１８０１）および二次抗体染色／増幅を使用する間接型免疫組織化学的検査使用により、ＳＫ−Ｎ−ＡＳ細胞をアクチンに関して染色した（ａ−ｅ）。
【図１７】ＳＣＮ１Ａの天然のアンチセンスに相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチドで処置したＶｅｒｏ７６細胞におけるアクチンタンパク質の染色を示す。Ｖｅｒｏ７６細胞を２４穴プレートで増殖させ、ＳＣＮ１Ａの天然のアンチセンスに相補的なアンチセンスオリゴ２０ｎＭ（ｂ：ＣＵＲ−１７４０；ｃ：ＣＵＲ−１７７０；ｄ：ＣＵＲ−１９１６；ｅ：ＣＵＲ−１９２４；ｆ：ＣＵＲ−１９４５）、および０ｎＭ（ａ）で処置した。アビジン／ビオチン法（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  ｃａｔ＃ＳＰ−２００１；  Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  ｃａｔ＃ＰＫ−６１０１；  Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  ｃａｔ＃Ｓｋ−４１０５）を用いた、抗アクチン抗体（Ａｂｅａｍ  ｃａｔ＃ａｂ１８０１）および二次抗体染色増幅を使用する間接型免疫組織化学的検査使用により、Ｖｅｒｏ７６７６細胞をアクチンに関して染色した（ｂ−ｆ）；パネルａ−負の対照、一次抗体としてウサギ抗マウス抗体を使用し、次いでパネルｂ−ｇと同一の染色方法を用いた。
【図１８】ＳＣＮ１Ａの天然のアンチセンスに相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチドで処置したＤｒａｖｅｔ症候群変異を生ずる繊維芽細胞におけるアクチンタンパク質のアップレギュレーションを示す。繊維芽細胞を２４穴プレートで増殖させ、ＳＣＮ１Ａの天然のアンチセンスに相補的なアンチセンスオリゴ２０ｎＭ（パネルｂ：ＣＵＲ−１７４０；ｃ：ＣＵＲ−１７６４；ｄ：ＣＵＲ−１７７０；ｅ：ＣＵＲ−１８３８およびｆ：ＣＵＲ−１９１６）、および０ｎＭ（ａ）で処置した。アビジン／ビオチン法（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  ｃａｔ＃ＳＰ−２００１；  Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  ｃａｔ＃ＰＫ−６１０１；  Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  ｃａｔ＃Ｓｋ−４１０５）を用いた、抗アクチン抗体（Ａｂｅａｍ  ｃａｔ＃ａｂ１８０１）および二次抗体染色増幅を使用する間接型免疫組織化学的検査使用により、細胞をアクチンに関して染色した（ａ−ｆ）。
【図１９】ＳＣＮ１Ａの天然のアンチセンスに相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチドで処置したＤｒａｖｅｔ症候群変異を生ずる繊維芽細胞におけるＳＣＮ１Ａタンパク質のアップレギュレーションをＥＬＩＳＡを使用して定量化したものを示す。繊維芽細胞を、０または８０ｎＭのＳＣＮ１Ａの天然のアンチセンスに相補的なオリゴヌクレオチドで処置した。４８時間後、細胞を９６穴プレートに移して２４時間置き、固定し、ＳＣＮ１ＡおよびアクチンのＥＬＩＳＡに使用した。ＳＣＮ１Ａ信号に対するＯＤ読み値を同一の実験条件のアクチン信号に標準化した。オリゴヌクレオチド０ｎＭを投与した細胞内の標準化されたＳＣＮ１Ａ信号をベースライン（１００％）として使用した。ＣＵＲ−１７４０、ＣＵＲ−１７７０およびＣＵＲ−１９１６と表示されたバーは、それぞれ配列番号４５、５７および７０で処置されたサンプルに対応する。
【図２０】ＳＣＮ１Ａの天然のアンチセンスに相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチドで処置したＶｅｒｏ７６細胞におけるＳＣＮ１Ａタンパク質のアップレギュレーションをＥＬＩＳＡを使用して定量化したものを示す。Ｖｅｒｏ７６細胞を、０または８０ｎＭのＳＣＮ１Ａの天然のアンチセンスに相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチドで処置した。４８時間後、細胞を９６穴プレートに移して２４時間置き、固定し、ＳＣＮ１ＡおよびアクチンのＥＬＩＳＡに使用した。ＳＣＮ１Ａ信号に対するＯＤ読み値を同一の実験条件のアクチン信号に標準化した。オリゴヌクレオチド０ｎＭを投与した細胞内の標準化されたＳＣＮ１Ａ信号をベースライン（１００％）として使用した。ＣＵＲ−１７４０、ＣＵＲ−１７７０、ＣＵＲ−１９１６、ＣＵＲ−１９２４およびＣＵＲ−１９４５は、それぞれ配列番号４５、５７、７０、７８および９３で処置されたサンプルに対応する。
【図２１】ＳＣＮ１Ａの天然のアンチセンスに相補的なオリゴヌクレオチドで処置したＳＫ−Ｎ−ＡＳ細胞におけるＳＣＮ１Ａタンパク質のアップレギュレーションをＥＬＩＳＡを使用して定量化したものを示す。ＳＫ−Ｎ−ＡＳ細胞を、０または８０ｎＭのＳＣＮ１Ａの天然のアンチセンスに相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチドで処置した。４８時間後、細胞を９６穴プレートに移して２４時間置き、固定し、ＳＣＮ１ＡおよびアクチンのＥＬＩＳＡに使用した。ＳＣＮ１Ａ信号に対するＯＤ読み値を同一の実験条件のアクチン信号に標準化した。オリゴヌクレオチド０ｎＭを投与した細胞内の標準化されたＳＣＮ１Ａ信号をベースライン（１００％）として使用した。ＣＵＲ−１７４０、ＣＵＲ−１７７０、ＣＵＲ−１９２４およびＣＵＲ−１９４５と表示されたバーは、それぞれ配列番号、４５、５７、７８および９３で処置されたサンプルに対応する。
【図２２】ＳＣＮ１Ａの天然のアンチセンス転写物ＢＧ７２４１４７の３’ＲＡＣＥの第２ＰＣＲラウンドからの産物を示す。３’ＲＡＣＥは、ａ）アデノシンを加えたＨｅｐＧ２細胞からの全ＲＮＡ；ｂ−ＨｅｐＧ２細胞から単離されたポリＡ  ＲＮＡ；ｃ−アデノシンを加えたＤｒａｖｅｔ症候群に関連する変異を生ずる初代ヒト線維芽細胞からの全ＲＮＡｄ−Ｄｒａｖｅｔ症候群に関連する変異を生ずる初代ヒト線維芽細胞から単離されたポリＡ  ＲＮＡに対して行った。図は、ＧｅｌＲｅｄ（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ、ｃａｔ＃Ｍ００１２０）で染色された、１％のアガロースゲル／１ｘＴＡＥのネガティブ染色を表す。矢印は、ＨｅｐＧ２細胞およびＤｒａｖｅｔ症候群に関連する変異を生ずる初代ヒト線維芽細胞に共通のバンドを示し、これらの細胞内のＢＧ７２４１４７の天然のアンチセンス転写物の存在を示す。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１９】
配列表の説明  配列番号１：ヒトナトリウムチャネル、電位依存性、Ｉ型、αサブユニット（ＳＣＮ１Ａ）、転写物変異型１、ｍＲＮＡ（ＮＣＢＩ登録番号：ＮＭ＿００１１６５９６３）；配列番号２：ヒトナトリウムチャネル、電位依存性、ＩＩ型、αサブユニット（ＳＣＮ２Ａ）、転写物変異型１、ｍＲＮＡ（ＮＣＢＩ登録番号：ＮＭ＿０２１００７）；配列番号３：ヒトナトリウムチャネル、電位依存性、ＩＩＩ型、αサブユニット（ＳＣＮ３Ａ）、転写物変異型１、ｍＲＮＡ（ＮＣＢＩ登録番号：ＮＭ＿００６９２２）；配列番号４：ヒトナトリウムチャネル、電位依存性、ＩＶ型、αサブユニット（ＳＣＮ４Ａ）、転写物変異型１、ｍＲＮＡ（ＮＣＢＩ登録番号：ＮＭ＿０００３３４）；配列番号５：ヒトナトリウムチャネル、電位依存性、Ｖ型、αサブユニット（ＳＣＮ５Ａ）、転写物変異型１、ｍＲＮＡ（ＮＣＢＩ登録番号：ＮＭ＿１９８０５６）；配列番号６：ヒトナトリウムチャネル（電位依存性）、ＶＩＩ型、α（ＳＣＮ７Ａ）、ｍＲＮＡ（ＮＣＢＩ登録番号：ＮＭ＿００２９７６）；配列番号７：ヒトナトリウムチャネル（電位依存性）、ＶＩＩＩ型、αサブユニット（ＳＣＮ８Ａ）、転写物変異型１（ｍＲＮＡ（ＮＣＢＩ登録番号：ＮＭ＿０１４１９１））；配列番号８：ヒトナトリウムチャネル（電位依存性）、ＩＸ型、αサブユニット（ＳＣＮ９Ａ）、ｍＲＮＡ（ＮＣＢＩ登録番号：ＮＭ＿００２９７７）；配列番号９：ヒトナトリウムチャネル（電位依存性）、Ｘ型（αサブユニット（ＳＣＮ１０Ａ）、ｍＲＮＡ（ＮＣＢＩ登録番号：ＮＭ＿００６５１４）；配列番号１０：ヒトナトリウムチャネル（電位依存性）、ＸＩ型（αサブユニット（ＳＣＮ１１Ａ）、ｍＲＮＡ（ＮＣＢＩ登録番号：ＮＭ  ０１４１３９）；配列番号１１：ヒト電位依存性Ｎａ＋チャネルαサブユニットＳＣＮ１２Ａ（ＳＣＮ１２Ａ）、ｍＲＮＡ（完全長ｃｄ（ＮＣＢＩ登録番号：ＡＦ１０９７３７）；配列番号１２：天然ＳＣＮ１Ａアンチセンス配列（ＢＧ７２４１４７伸長）；配列番号１３：天然ＳＣＮ１Ａアンチセンス配列（Ｈｓ．６６２２１０）；配列番号１４：天然ＳＣＮ１Ａアンチセンス配列（ＡＡ３８３０４０）；配列番号１５：天然ＳＣＮ１Ａアンチセンス配列（ＢＣ０２９４５２）；配列番号１６：天然ＳＣＮ１Ａアンチセンス配列（ＡＡ６３００３５）；配列番号１７：天然ＳＣＮ１Ａアンチセンス配列（ＢＥ５６６１２６）；配列番号１８：天然ＳＣＮ１Ａアンチセンス配列（ＢＦ６７３１００）；配列番号１９：天然ＳＣＮ１Ａアンチセンス配列（ＢＧ１８１８０７）；配列番号２０：天然ＳＣＮ１Ａアンチセンス配列（ＢＧ１８３８７１）；配列番号２１：天然ＳＣＮ１Ａアンチセンス配列（ＢＧ２１５７７７）；配列番号２２：天然ＳＣＮ１Ａアンチセンス配列（ＢＧ２２７９７０）；配列番号２３：天然ＳＣＮ１Ａアンチセンス配列（ＢＭ９０５５２７）；配列番号２４：天然ＳＣＮ１Ａアンチセンス配列（ＢＵ１８０７７２）；配列番号２５：マウス天然ＳＣＮ１Ａアンチセンス配列（ＢＧ７２４１４７  ＥｘｔＭｏｕｓｅ）；配列番号２６：マウス天然ＳＣＮ１Ａアンチセンス配列（Ｈｓ．６６２２１０ｍｏｕｓｅＡＳｌ）；配列番号２７：マウス天然ＳＣＮ１Ａアンチセンス配列（Ｈｓ．６６２��１０ｍｏｕｓｅＡＳ２）；配列番号２８：マウス天然ＳＣＮ１Ａアンチセンス配列（Ｈｓ．６６２２１０ｍｏｕｓｅＡＳ３）；配列番号２９〜９４：アンチセンスオリゴヌクレオチド。配列番号９５および９６は、アンチセンスオリゴ配列番号５８および５９それぞれの逆相補である。＊ホスホロチオエート結合を示す。＋はロックト核酸を示す。「ｒ」はＲＮＡを示す。「ｍ」は、オリゴヌクレオチドの示された糖部分上の２’酸素原子上のメチル基を示す。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１２９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１２９】
＊はホスホチオアート結合を示す。＋はロックト核酸を示す。「ｒ」はＲＮＡを示す。「ｍ」は、オリゴヌクレオチドの命名された糖質部分上の２’酸素原子上のメチル基を示す。曖昧さを回避するために、このＬＮＡは次式であり、
【化１】
2013535958.tif 000001
ここでＢは示された特定の塩基である。
表２：ＳＣＮ１Ａに特異的な天然のアンチセンス転写物を標的にするアンチセンスオリゴヌクレオチドで処置された細胞内のＳＣＮ１ＡのｍＲＮＡの相対的な発現。平均（Ａｖｇ）−偽トランスフェクト対照と比較したＳＣＮ１Ａ発現での平均の倍差；標準偏差（Ｓｔｄ）−標準偏差、Ｐ−治療されたサンプルが偽対照とは異ならない可能性。反復数（Ｎ）−反復数
【表２】
2013535958.tif 000002
2013535958.tif 000003
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２４８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２４８】
結果：表２に偽トランスフェクト対照と比較した、アンチセンスオリゴヌクレオチド２０ｎＭで処置後の異種細胞株内のＳＣＮ１ＡのｍＲＮＡのレベルを示す。データから理解されるように、オリゴヌクレオチドのうちのいくつかは、２０ｎＭで用いられた場合、ＳＣＮ１ＡのｍＲＮＡレベルのアップレギュレートに関して活性が高く、いくつかの種（ヒト、アフリカミドリザルおよびマウス）において、異なる臓器／細胞型（肝臓、腎、脳、胚線維芽細胞）に由来する細胞株およびＳＣＮ１Ａ変異を生ずる初代皮膚線維芽細胞において一貫してアップレギュレーションを示す。Ｄｒａｖｅｔ変異を生ずる細胞内でＳＣＮ１Ａタンパク質がアップレギュレーションされることから、ＳＣＮ１Ａ遺伝子の変異に関連した疾患の治療方法の適合性が支持される。天然のアンチセンス配列に対して設計されたオリゴヌクレオチドのいくつかは、テストした細胞株の全てで、またはいくつかでＳＣＮ１ＡのｍＲＮＡレベルに影響を与えず、またはわずかにしか影響を与えなかった。これらの差異は、オリゴヌクレオチドの結合がオリゴヌクレオチドの標的配列の二次および三次構造に依存する可能性があることを示す文献のデータに合致している。特に、ＳＣＮ１Ａの天然のアンチセンス配列と相同性は無いが同様のケミストリを有するオリゴヌクレオチド（ＣＵＲ−１４６２）で処置された細胞内のＳＣＮ１Ａレベルは、偽トランスフェクト対照とは著しく異ならず、これは標的とされたオリゴヌクレオチドの影響がこれらの分子の非特異的な毒性に依存しないことを確認する。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２５１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２５１】
材料および方法：Ｖｅｒｏ７６、ＳＫ−Ｎ−ＡＳおよびＤｒａｖｅｔ変異を生ずる初代ヒト線維芽細胞を、各ウエルの処置に使用するオリゴヌクレオチドおよびＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００の濃度を除き、実施例２で記述したようにアンチセンスオリゴヌクレオチドで処置した。オリゴヌクレオチドおよびＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００の濃度を、最終オリゴヌクレオチド濃度が５、１０、２０、４０および８０ｎＭ、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００と２０μΜオリゴヌクレオチド貯蔵液の比が、２：１（ｖ：ｖ）となるように調節した。
結果：用量応答実験の結果により、ＳＣＮ１Ａに特異的な天然のアンチセンスＲＮＡを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドがＳＣＮ１ＡのｍＲＮＡの用量依存性のアップレギュレーションを引き起こせることが確認された（図１−３）。一部の場合において、このアップレギュレーションは高用量で大変顕著であった（最高６０倍）（図１−３）。異種細胞株において同一のヌクレオチドにより引き起こされたアップレギュレーションの程度は、異なるようであり、例えば、４０ｎＭで初代線維芽細胞において達成されたアップレギュレーションは、１０−４０倍のレベルであったが、同一濃度、同一オリゴヌクレオチドによるＶｅｒｏ７６細胞内のアップレギュレーションは、２−６倍であった（図１対図３）。これらの差は異種細胞株で導入効率が異なること、またはこれら細胞により発現された多様なフィードバック経路が原因であろう。ほとんどのオリゴヌクレオチドの効果は約４０ｎＭでプラトーに到達したが、ＳＣＮ１Ａ繊維芽細胞におけるＣＵＲ−１７６４およびＣＵＲ−１７７０、およびＶｅｒｏ７６細胞において検査されたすべてのオリゴヌクレオチドは例外であり、テストした最高濃度でプラトーに到達しなかった。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２５４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２５４】
材料および方法：Ｖｅｒｏ７６およびＤｒａｖｅｔ変異を生ずる初代ヒト線維芽細胞を、各ウエルの処置に使用するオリゴヌクレオチドの濃度を除き、実施例２で記述したようにアンチセンスオリゴヌクレオチドで処置した。活性オリゴヌクレオチドを、類似のケミストリを有するが、ヒトゲノムで既知の標的が無く（ＣＵＲ−１４６２）、テストした複数の遺伝子の発現に効果が無い（データを示さず）不活性オリゴヌクレオチドと一緒に投与した。Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００の量と同様オリゴヌクレオチドの総量も一定としたが、混合物における活性オリゴヌクレオチドの割合は変化させた。オリゴヌクレオチドの濃度を、活性オリゴヌクレオチドの最終濃度が５、１０、２０、および４０ｎＭ、全オリゴヌクレオチドの濃度（活性＋非活性）が４０ｎΜとなるように調節した。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２５８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２５８】
材料および方法：Ｖｅｒｏ７６およびＤｒａｖｅｔ変異を生ずる初代ヒト線維芽細胞を、実施例３で記述したようにアンチセンスオリゴヌクレオチドで処置した。処置後、単離したＲＮＡを実施例２の記述のように解析したが、ここではリアルタイムＰＣＲを実行するために使用されたＴａｑｍａｎ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｓｓａｙｓでＳＣＮ９Ａ、ＳＣＮ８Ａ、ＳＣＮ７Ａ、ＳＣＮ３ＡおよびＳＣＮ２ＡのチャンネルのｍＲＮＡを検出した。ヒトＳＣＮ９Ａ、ＳＣＮ８Ａ、ＳＣＮ７Ａ、ＳＣＮ３ＡおよびＳＣＮ２Ａチャンネルのαサブユニットに対するアッセイをＡＢＩ  Ｉｎｃ．（それぞれｃａｔ＃Ｈｓ００１６１５６７＿ｍｌ、Ｈｓ００２７４０７５＿ｍｌ、Ｈｓ００１６１５４６＿ｍｌ、Ｈｓ００３６６９０２＿ｍｌおよびＨｓ００２２１３７９＿ｍｌ）から入手した。