【手続補正書】
【提出日】平成28年6月23日(2016.6.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ウイルス様粒子（ＶＬＰ）を精製する方法であって、
前記ＶＬＰを含有する細胞可溶化物、培養上清、又は濾液を生成するか又は得るステップと、
ｐＨ調整済み溶液を生成するために、前記可溶化物、上清、又は濾液のｐＨを約５未満のｐＨ値に調整するステップと、
前記ＶＬＰを含む精製済み溶液を生成するために、前記ｐＨ調整済み溶液から非ＶＬＰ微粒子／凝集体を除去するステップと、
を含む、方法。
【請求項２】
前記ＶＬＰが、少なくとも前記ＶＬＰの第一亜集団及び第二亜集団を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記非ＶＬＰ微粒子／凝集体の前記除去が、前記ｐＨ調整済み溶液からＶＬＰの前記第二亜集団を除去するステップを含み、前記精製済み溶液がＶＬＰの前記第一亜集団を実質的に保持する、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記細胞可溶化物又は培養上清／濾液の前記ＶＬＰがノロウイルスＶＬＰであり、前記第一亜集団が、完全長ＶＰ１サブユニットを有するノロウイルスＶＬＰを含み、前記第二亜集団が、切断型ＶＰ１サブユニットを有するノロウイルスＶＬＰを含む、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
残留汚染タンパク質に対するＶＬＰの前記第一亜集団の比率が、少なくとも約２倍増加する、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
前記ｐＨの前記調整が、約３０分間と約４８時間の間の継続時間実行される、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記ＶＬＰが、酸安定性ＶＬＰを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記除去が、前記精製済み溶液を生成するために、デプス濾過及びその後の追加的濾過によってｐＨ調整済み溶液を浄化するステップを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
残留汚染核酸の少なくとも約９８％が、前記精製の結果として、前記可溶化物、上清、又は濾液から除去される、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
１つ又は複数のクロマトグラフィプロセスを使用して、前記精製済み溶液からＶＬＰの第一亜集団を分離するステップをさらに含み、各クロマトグラフィプロセスが、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィ、疎水性相互作用クロマトグラフィ、サイズ排除クロマトグラフィ、イオン交換クロマトグラフィ、混合モードクロマトグラフィ、及びアフィニティクロマトグラフィから個別に選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
ウイルス様粒子（ＶＬＰ）を精製する方法であって、
ＶＬＰを含有する細胞可溶化物、培養上清、又は濾液を生成するか又は得るステップと、
多工程クロマトグラフィプロセスを使用して前記ＶＬＰを精製するステップと、を含み、
前記多工程クロマトグラフィプロセスのうち少なくとも１つのクロマトグラフィプロセスが、
前記可溶化物、上清又は濾液をクロマトグラフィ材料と接触させるステップであって、前記ＶＬＰが前記クロマトグラフィ材料に結合する、ステップと、
溶媒及び／又は洗浄剤で前記クロマトグラフィ材料を処理するステップと、
前記処理の後、前記クロマトグラフィ材料から前記ＶＬＰを溶出させるステップと、
を含む、方法。
【請求項１２】
前記溶媒及び／又は洗浄剤が、ＴｎＢＰ、オクチルフェノール、エチレンオキシド凝縮液、モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン、及びコール酸ナトリウム、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００、及びリン酸トリブチルのうち１つ又は複数を含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記ＶＬＰが、ノロウイルス遺伝子群Ｉ型ＶＬＰ、ノロウイルス遺伝子群ＩＩ型ＶＬＰ、ノロウイルス遺伝子群ＩＶ型ＶＬＰ、キメラノロウイルスＶＬＰ、及びサポウイルスＶＬＰのうち１つ又は複数である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
残留汚染タンパク質に対する前記ＶＬＰの比率が、前記可溶化物、上清又は濾液と比較して少なくとも約１０倍増加する、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
前記精製の結果、残留汚染タンパク質の少なくとも約５０％が、前記可溶化物、上清又は濾液から除去される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１６】
前記精製中に失われる前記ＶＬＰが約５０％以下である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１７】
各クロマトグラフィプロセスが、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィ、疎水性相互作用クロマトグラフィ、サイズ排除クロマトグラフィ、イオン交換クロマトグラフィ、混合モードクロマトグラフィ、膜式クロマトグラフィ、及びアフィニティクロマトグラフィから個別に選択される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１８】
前記ＶＬＰが、細菌細胞、昆虫細胞、酵母細胞、植物、又は哺乳類細胞中で産生される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１９】
ウイルス様粒子（ＶＬＰ）を精製する方法であって、
ＶＬＰを含有する細胞可溶化物、培養上清、又は濾液を生成するか又は得るステップであって、前記ＶＬＰが少なくとも前記ＶＬＰの第一亜集団及び第二亜集団を含む、ステップと、
ｐＨ調整済み溶液を生成するために、前記可溶化物、上清又は濾液のｐＨを約５未満のｐＨに調整するステップと、
濾過済み精製済み溶液を生成するために、濾過プロセスを使用して前記ｐＨ調整済み溶液からＶＬＰの前記第二亜集団を除去するステップであって、前記濾過済み精製済み溶液が実質的にＶＬＰの前記第一亜集団を保持する、ステップと、
多工程クロマトグラフィプロセスを使用して、前記濾過済み精製済み溶液からＶＬＰの前記第一亜集団を分離するステップとを含む方法。
【請求項２０】
前記多工程クロマトグラフィプロセスの少なくとも１つのクロマトグラフィプロセスが、
前記濾過済み精製済み溶液をクロマトグラフィ材料と接触させるステップであって、ＶＬＰの前記第一亜集団が前記クロマトグラフィ材料に結合する、ステップと、
前記クロマトグラフィ材料を溶媒及び／又は洗浄剤で処理するステップと、
前記クロマトグラフィ材料からＶＬＰの前記第一亜集団を溶出するステップと、を含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
残留汚染タンパク質に対するＶＬＰの前記第一亜集団の比率が、前記可溶化物、上清又は濾液と比較して少なくとも約２倍増加する、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
各クロマトグラフィプロセスが、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィ、疎水性相互作用クロマトグラフィ、サイズ排除クロマトグラフィ、イオン交換クロマトグラフィ、混合モードクロマトグラフィ、及びアフィニティクロマトグラフィから個別に選択される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２３】
前記ＶＬＰが、ノロウイルス遺伝子群Ｉ型ＶＬＰ、ノロウイルス遺伝子群ＩＩ型ＶＬＰ、ノロウイルス遺伝子群ＩＶ型ＶＬＰ、キメラノロウイルスＶＬＰ、及びサポウイルスＶＬＰのうち１つ又は複数である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２４】
前記ＶＬＰが、ノロウイルス遺伝子群Ｉ型ＶＬＰであり、前記第一亜集団が、完全長ＶＰ１サブユニットを有するノロウイルスＶＬＰを含み、前記第二亜集団が、切断型ＶＰ１サブユニットを有するノロウイルスＶＬＰを含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記ＶＬＰが、細菌細胞、昆虫細胞、酵母細胞、植物、又は哺乳類細胞中で産生される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２６】
前記ｐＨの前記調整が、約３０分間と約４８時間の間の継続時間実行される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２７】
請求項１９に記載の方法によって調製されたＶＬＰの前記第一亜集団を含む、ワクチン。
【請求項２８】
ウイルス様粒子（ＶＬＰ）を精製する方法であって、
前記ＶＬＰを含有する細胞可溶化物、培養上清、又は濾液を生成するか又は得るステップと、
ｐＨ調整済み溶液を生成するために、前記可溶化物、上清又は濾液のｐＨを約５未満のｐＨ値に調整するステップと、
前記ｐＨ調整済み溶液から非ＶＬＰ微粒子／凝集体を除去するステップと、を含み、前記除去するステップが、精製したデプス濾過済み溶液を生成するために、デプス濾過プロセスによって前記ｐＨ調整済み溶液を浄化するステップとを含む、方法。
【請求項２９】
前記デプス濾過プロセスが、前記ｐＨ調整済み溶液を１つ又は複数のデプスフィルタと接触させるステップを含み、前記デプスフィルタの少なくとも１つが、珪藻土デプスフィルタである、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記可溶化物、上清又は濾液と比較して、残留汚染核酸の少なくとも約９５％が、前記ｐＨ調整済み溶液から除去される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３１】
前記可溶化物、上清又は濾液と比較して、前記ｐＨ調整済み溶液からの前記ＶＬＰの回収率が少なくとも約７５％である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３２】
前記ＶＬＰが、少なくとも前記ＶＬＰの第一亜集団及び第二亜集団を含み、前記浄化が、前記デプス濾過済み精製済み溶液を生成するために、前記ｐＨ調整済み溶液からＶＬＰの前記第二亜集団を分離し、前記デプス濾過済み精製済み溶液が実質的にＶＬＰの前記第一亜集団を保持する、請求項２８に記載の方法。
【請求項３３】
前記分離が、１つ又は複数のクロマトグラフィプロセスを使用して、前記デプス濾過済み精製済み溶液からＶＬＰの前記第一亜集団を分離するステップをさらに含み、各クロマトグラフィプロセスが、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィ、疎水性相互作用クロマトグラフィ、サイズ排除クロマトグラフィ、アニオン交換クロマトグラフィ、カチオン交換クロマトグラフィ、混合モードクロマトグラフィ、及びアフィニティクロマトグラフィから個別に選択される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記ＶＬＰが、ノロウイルス遺伝子群Ｉ型ＶＬＰ、ノロウイルス遺伝子群ＩＩ型ＶＬＰ、ノロウイルス遺伝子群ＩＶ型ＶＬＰ、キメラノロウイルスＶＬＰ、及びサポウイルスＶＬＰのうち１つ又は複数である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３５】
前記ＶＬＰが、ノロウイルス遺伝子群Ｉ型ＶＬＰであり、前記第一亜集団が、完全長ＶＰ１サブユニットを有するノロウイルスＶＬＰを含み、前記第二亜集団が、切断型ＶＰ１サブユニットを有するノロウイルスＶＬＰを含む、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記ＶＬＰが、細菌細胞、昆虫細胞、酵母細胞、植物、又は哺乳類細胞中で産生される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３７】
ノロウイルスＶＬＰの精製済み集団を含む溶液であって、前記溶液が、サイズ排除クロマトグラフィ及びＥＬＩＳＡで測定して、ＶＬＰに対して約８０％以下の残留汚染タンパク質を含有し、前記溶液が、前記ノロウイルスＶＬＰを含有する細胞可溶化物、培養上清、又は濾液から精製される、溶液。
【請求項３８】
請求項３７に記載の前記溶液から調製された前記ノロウイルスＶＬＰを含む、ワクチン。
【請求項３９】
前記可溶化物、上清又は濾液に対して約３５％以下の残留汚染核酸を含有する、請求項３７に記載の溶液。
【請求項４０】
前記可溶化物、上清又は濾液からの前記ノロウイルスＶＬＰの回収率が少なくとも約５０％である、請求項３７に記載の溶液。
【請求項４１】
残留汚染タンパク質に対する前記ノロウイルスＶＬＰの比率が、前記可溶化物、上清又は濾液と比較して少なくとも約１０倍増加する、請求項３７に記載の溶液。
【請求項４２】
前記溶液が、商業的プロセスに使用するのに適切であり、前記商業的プロセスが、少なくとも２０リットルの加工ボリュームを有する、請求項３７に記載の溶液。
【請求項４３】
少なくとも前記ノロウイルスＶＬＰの第一亜集団及び第二亜集団を含む前記ノロウイルスＶＬＰを含有する細胞可溶化物、培養上清、又は濾液を生成するか又は得ることと、
ｐＨ調整済み溶液を生成するために、前記可溶化物、上清、又は濾液のｐＨを約５未満のｐＨに調整することと、
実質的にノロウイルスＶＬＰの前記第一亜集団を保持する濾過済み精製済み溶液を生成するために、濾過プロセスを使用して前記ｐＨ調整済み溶液からノロウイルスＶＬＰの前記第二亜集団を除去することによって生成することと、
多工程クロマトグラフィプロセスを使用して、前記濾過済み精製済み溶液からノロウイルスＶＬＰの前記第一亜集団を分離することによって生成される、請求項３７に記載の溶液。
【請求項４４】
（ｉ）前記ノロウイルスＶＬＰが、ノロウイルス遺伝子群Ｉ型ＶＬＰであり、前記第一亜集団が、完全長ＶＰ１サブユニットを有するノロウイルス遺伝子群Ｉ型ＶＬＰを含み、前記第二亜集団が、切断型ＶＰ１サブユニットを有するノロウイルス遺伝子群Ｉ型ＶＬＰを含み、又は、（ｉｉ）前記ノロウイルスＶＬＰが、ノロウイルス遺伝子群ＩＩ型ＶＬＰであり、前記第一亜集団が、完全長ＶＰ１サブユニットを有するノロウイルス遺伝子群ＩＩ型ＶＬＰを含み、前記第二亜集団が、切断型ＶＰ１サブユニットを有するノロウイルス遺伝子群ＩＩ型ＶＬＰを含む、請求項４３に記載の溶液。
【請求項４５】
ＶＬＰの精製済み集団を含む溶液であり、前記溶液が、完全長ＶＰ１サブユニットを有する少なくとも５０％のＶＬＰを含有する、溶液。
【請求項４６】
前記溶液が、切断型ＶＰ１サブユニットを有するＶＬＰを実質的に含まない、請求項４５に記載の溶液。
【請求項４７】
前記溶液が、
ｐＨ調整済み溶液を生成するために、前記未精製溶液のｐＨを約５未満のｐＨ値に調整し、
精製済み溶液として前記溶液を生成するために、前記ｐＨ調整済み溶液から切断型ＶＰ１サブユニットを有するＶＬＰを除去することによって、前記未精製溶液から生成され、前記ｐＨ調整済み溶液が実質的に、完全長ＶＰ１サブユニットを有する前記ＶＬＰを保持する、請求項４５に記載の溶液。
【請求項４８】
１つ又は複数のクロマトグラフィプロセスを請求項４５に記載の溶液に適用することによって生成される、完全長ＶＰ１サブユニットを有するＶＬＰの精製済み集団。
【請求項４９】
生きたウイルスを含有し、前記生きたウイルスによって生成されたＶＬＰをさらに含有する溶液中において、前記生きたウイルスを除去及び／又は不活性化する方法であって、
ｐＨ調整済み溶液を生成するために、前記生きたウイルスを含有する前記溶液のｐＨを約５未満のｐＨ値に調整するステップを含む、方法。
【請求項５０】
前記ｐＨ調整済み溶液中の前記生きたウイルスのレベルが少なくとも約１０４減少する、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
精製済み溶液を生成するために、前記ｐＨ調整済み溶液から非ＶＬＰ微粒子／凝集体を除去するステップと、
少なくとも１つのクロマトグラフィプロセスを使用して、前記精製済み溶液を精製するステップとをさらに含み、前記少なくとも１つのクロマトグラフィプロセスが、
前記ｐＨ調整済み溶液をクロマトグラフィ材料と接触させるステップであって、前記ＶＬＰは前記クロマトグラフィ材料に結合する、ステップと
前記クロマトグラフィ材料を溶媒及び／又は洗浄剤で処理するステップと、
前記処理の後、溶出液を生成するために、前記クロマトグラフィ材料から前記ＶＬＰを溶出するステップとを含み、
前記溶出液中の前記生きたウイルスのレベルが、前記生きたウイルスを含有する前記溶液と比較して少なくとも約１０２減少する、請求項４９に記載の方法。
【請求項５２】
前記溶出液中の前記生きたウイルスのレベルが、前記生きたウイルスを含有する前記溶液と比較して少なくとも約１０３減少する、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
請求項５１に記載の前記溶出液から生成される、ワクチン。
【請求項５４】
生きたウイルスを含有し、前記生きたウイルスによって生成されたＶＬＰをさらに含有する溶液中において、前記生きたウイルスを除去及び／又は不活性化する方法であって、
少なくとも１つのクロマトグラフィプロセスを使用して前記生きたウイルスを含有する前記溶液を精製するステップを含み、前記少なくとも１つのクロマトグラフィプロセスが、
前記生きたウイルスを含有する前記溶液をクロマトグラフィ材料と接触させるステップであって、前記ＶＬＰは前記クロマトグラフィ材料に結合する、ステップと、
前記クロマトグラフィ材料を溶媒及び／又は洗浄剤で処理するステップと、
前記処理の後、溶出液を生成するために、前記クロマトグラフィ材料から前記ＶＬＰを溶出するステップと、を含む、方法。
【請求項５５】
前記溶出液中の前記生きたウイルスのレベルが、前記生きたウイルスを含有する前記溶液と比較して少なくとも約１０５減少する、請求項５４に記載の方法。