【手続補正書】
【提出日】平成28年2月26日(2016.2.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトのドナー反応性制御性T細胞(Treg)を作製するための方法であって、
(a)ヒトドナーのCD19+ B細胞を、照射済みのCD40L+ヒト白血病フィーダー細胞と共に、刺激されたB細胞(sBc)を作製するのに有効な条件下で共培養する段階；および
(b)ヒトレシピエントのCD4+、CD25+、CD127-/lo T細胞を該sBcと共に、ヒトのドナー反応性制御性T細胞(Treg)を選択的に増大させるのに有効な条件下で共培養する段階
を含み、該ドナーがヒトレシピエントに関してHLAミスマッチである、方法。
【請求項２】
CD4+、Helios+、およびFoxp3+である再刺激されたドナー反応性Tregを作製するのに有効な条件下で、前記ドナー反応性TregのCD3およびCD28を架橋することによって、該ドナー反応性Tregを再刺激する段階(c)をさらに含む、請求項1記載の方法。
【請求項３】
段階(b)を開始してから9〜12日後に段階(c)を開始する、請求項2記載の方法。
【請求項４】
前記再刺激されたドナー反応性TregがCD27+、CD62L+である、請求項2または3記載の方法。
【請求項５】
段階(a)の前に、前記ヒトレシピエントから得られた凍結保存末梢血単核細胞(PBMC)から蛍光活性化セルソーティング(FACS)によってCD4+、CD25+、CD127-/lo T細胞を単離する段階をさらに含む、請求項2〜4のいずれか一項記載の方法。
【請求項６】
段階(a)が、前記B細胞と前記フィーダー細胞とを、インスリン、トランスフェリン、インターロイキン-4およびシクロスポリンAを含む培地中で共培養することを含む、請求項2〜5のいずれか一項記載の方法。
【請求項７】
段階(b)が、前記sBcが照射された後で、該sBcおよび前記CD4+, CD25+, CD127-/lo T細胞を、インターロイキン-2を含む培地中で共培養することを含む、請求項2〜6のいずれか一項記載の方法。
【請求項８】
前記再刺激されたドナー反応性Tregが、段階(b)の開始時の前記CD4+, CD25+, CD127-/lo T細胞よりも200倍〜2000倍多い細胞を含む、請求項2〜7のいずれか一項記載の方法。
【請求項９】
請求項2〜8のいずれか一項記載の方法を用いて作製された再刺激されたドナー反応性Treg、および生理学的に許容される緩衝液を含有する、組成物であって、Treg対レスポンダーの比が1：125で存在する場合に、ドナー反応性Tregがドナー刺激されたT細胞増殖を抑制することができる、組成物。
【請求項１０】
請求項2〜8のいずれか一項記載の方法を用いて作製された107〜1011個の再刺激されたドナー反応性Tregを含有する、ヒトレシピエントによる固形臓器同種移植片の拒絶反応を治療または予防するための薬剤。
【請求項１１】
前記固形臓器同種移植片が、心臓、肺、心臓/肺、腎臓、膵臓、腎臓/膵臓、肝臓、腸、および皮膚の同種移植片からなる群より選択される、請求項10記載の薬剤。
【請求項１２】
急性および/または慢性の移植拒絶反応の可能性を低減させるのに有効である、請求項10または11記載の薬剤。
【請求項１３】
ベースラインを超えてTregの割合を増加させること、ドナー反応性Tregの頻度を増加させること、ドナー反応性Tregの活性を増加させること、ならびにPBMCおよび/または移植組織において寛容遺伝子発現プロファイルを誘導すること、からなる群の1つまたは複数を達成するのに有効である、請求項10〜12のいずれか一項記載の薬剤。
【請求項１４】
リンパ球枯渇を達成するのに有効な量でウサギ抗胸腺細胞グロブリンを含むTreg支持的免疫抑制療法をヒトレシピエントが受けた後に、該ヒトレシピエントに投与される、請求項10〜13のいずれか一項記載の薬剤。
【請求項１５】
標準治療より低い用量のプレドニゾン、ミコフェノール酸モフェチルおよびタクロリムスと同時にヒトレシピエントに投与される、請求項10〜14のいずれか一項記載の薬剤。
【請求項１６】
シロリムスと同時にヒトレシピエントに投与される、請求項10〜12のいずれか一項記載の薬剤。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１０】
本明細書で使用する場合、単数形「1つの」、「ある」および「その」は、特に明記しない限り、複数の言及を含むものである。
[本発明1001]
ヒトのドナー反応性制御性T細胞(Treg)を作製するための方法であって、以下の段階を含む方法：
(a)ヒトドナーのCD19+ B細胞を、照射済みのCD40L+ヒト白血病フィーダー細胞と共に、刺激されたB細胞(sBc)を作製するのに有効な条件下で共培養する段階；および
(b)ヒトレシピエントのCD4+、CD25+、CD127-/lo T細胞を該sBcと共に、ヒトのドナー反応性制御性T細胞(Treg)を選択的に増大させるのに有効な条件下で共培養する段階。
[本発明1002]
再刺激されたドナー反応性Tregを作製するのに有効な条件下で、前記ドナー反応性TregのCD3およびCD28を架橋することによって、該ドナー反応性Tregを再刺激する段階(c)をさらに含む、本発明1001の方法。
[本発明1003]
段階(b)を開始してから9〜12日後に段階(c)を開始する、本発明1002の方法。
[本発明1004]
前記ドナー反応性TregがCD4+、Helios+およびFoxp3+である、本発明1001の方法。
[本発明1005]
段階(a)の前に、前記ヒトレシピエントから得られた凍結保存末梢血単核細胞(PBMC)からCD4+、CD25+、CD127-/lo T細胞を単離する段階をさらに含む、本発明1001の方法。
[本発明1006]
段階(a)が、前記B細胞と前記フィーダー細胞とを、インスリン、トランスフェリン、インターロイキン-4およびシクロスポリンAを含む培地中で共培養することを含む、本発明1001の方法。
[本発明1007]
段階(b)が、前記sBcが照射された後で、該sBcおよび前記CD4+, CD25+, CD127-/lo T細胞を、インターロイキン-2を含む培地中で共培養することを含む、本発明1001の方法。
[本発明1008]
前記再刺激されたドナー反応性Tregが、段階(b)の開始時の前記CD4+, CD25+, CD127-/lo T細胞よりも200倍〜2000倍多い細胞を含む、本発明1001の方法。
[本発明1009]
本発明1002〜1008のいずれかの方法を用いて作製された再刺激されたドナー反応性Treg、および生理学的に許容される緩衝液を含有する、組成物。
[本発明1010]
本発明1002〜1008のいずれかの方法を用いて作製された107〜1011個の再刺激されたドナー反応性Tregを含有する、ヒトレシピエントによる固形臓器同種移植片の拒絶反応を治療または予防するための薬剤。
[本発明1011]
前記固形臓器同種移植片が、心臓、肺、心臓/肺、腎臓、膵臓、腎臓/膵臓、肝臓、腸、および皮膚の同種移植片からなる群より選択される、本発明1010の薬剤。
[本発明1012]
急性および/または慢性の移植拒絶反応の可能性を低減させるのに有効である、本発明1010の薬剤。
[本発明1013]
ベースラインを超えてTregの割合を増加させること、ドナー反応性Tregの頻度を増加させること、ドナー反応性Tregの活性を増加させること、ならびにPBMCおよび/または移植組織において寛容遺伝子発現プロファイルを誘導すること、からなる群の1つまたは複数を達成するのに有効である、本発明1010の薬剤。
[本発明1014]
リンパ球枯渇を達成するのに有効な量でウサギ抗胸腺細胞グロブリンを含むTreg支持的免疫抑制療法をヒトレシピエントが受けた後に、該ヒトレシピエントに投与される、本発明1010の薬剤。
[本発明1015]
標準治療より低い用量のプレドニゾン、ミコフェノール酸モフェチルおよびタクロリムスと同時にヒトレシピエントに投与される、本発明1010の薬剤。
[本発明1016]
シロリムスと同時にヒトレシピエントに投与される、本発明1010の薬剤。