【手続補正書】
【提出日】平成28年6月13日(2016.6.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
エステル化形態で脂肪酸を含み、該脂肪酸は、オレイン酸、パルミチン酸、リノール酸（ＬＡ）を含むω６脂肪酸、α‐リノレン酸（ＡＬＡ）を含むω３脂肪酸、およびドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、並びに、任意にステアリドン酸（ＳＤＡ）、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、ドコサぺンタエン酸（ＤＰＡ）、およびエイコサテトラエン酸（ＥＴＡ）の１またはそれ以上を含む抽出植物脂質であって、前記抽出脂質の総脂肪酸含有量における前記ＤＨＡのレベルは約７％から２０％であり、前記抽出脂質の前記総脂肪酸含有量におけるパルミチン酸のレベルは約２％から１６％の間であり、前記抽出脂質の前記総脂肪酸含有量における前記ミリスチン酸（Ｃ１４：０）のレベルは１％未満である、前記抽出植物脂質。
【請求項２】
以下の特徴：
ｉ）前記抽出脂質の前記総脂肪酸含有量におけるパルミチン酸のレベルは、約２％から１５％の間である、
ｉｉ）  ｉｉ）前記抽出脂質の前記総脂肪酸含有量における前記オレイン酸のレベルは、約３％から約３０％の間である、
ｉｉｉ）前記抽出脂質の前記総脂肪酸含有量における前記リノール酸（ＬＡ）のレベルは、約４％から約３５％の間である、
ｉｖ）前記抽出脂質の前記総脂肪酸含有量における前記α‐リノレン酸（ＡＬＡ）のレベルは、約７％から約４０％の間である、
ｖ）前記抽出脂質の前記総脂肪酸含有量における前記γ‐リノレン酸（ＧＬＡ）のレベルは、４％未満である、
ｖｉ）前記抽出脂質の前記総脂肪酸含有量における前記ステアリドン酸（ＳＤＡ）のレベルは、約４％未満である、
ｖｉｉ）前記抽出脂質の前記総脂肪酸含有量における前記エイコサテトラエン酸（ＥＴＡ）のレベルは、約４％未満である、
ｖｉｉｉ）前記抽出脂質の前記総脂肪酸含有量における前記エイコサトリエン酸（ＥＴｒＡ）のレベルは、４％未満である、
ｉｘ）前記抽出脂質の前記総脂肪酸含有量における前記エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）のレベルは、４％未満である、
ｘ）前記抽出脂質の前記総脂肪酸含有量における前記ドコサぺンタエン酸（ＤＰＡ）のレベルは、４％未満である、
ｘｉ）前記抽出脂質の前記総脂肪酸含有量における前記ＤＨＡのレベルは、約１１％から２０％の間である、
ｘｉｉ）前記抽出脂質の前記総脂肪酸含有量における総飽和脂肪酸のレベルは、約４％から約２５％の間である、
ｘｉｉｉ）前記抽出脂質の前記総脂肪酸含有量における総一価不飽和脂肪酸のレベルは、約４％から約３５％の間である、
ｘｉｖ）前記抽出脂質の前記総脂肪酸含有量における総多価不飽和脂肪酸のレベルは、約２０％から約７５％の間である、
ｘｖ）前記抽出脂質の前記総脂肪酸含有量における総ω６脂肪酸のレベルは、２０％未満である、
ｘｖｉ）前記抽出脂質の前記総脂肪酸含有量における新ω６脂肪酸のレベルは、約１０％未満である、
ｘｖｉｉ）前記抽出脂質の前記総脂肪酸含有量における総ω３脂肪酸のレベルは、４０％から約６０％の間である、
ｘｖｉｉｉ）前記抽出脂質の前記総脂肪酸含有量における新ω３脂肪酸のレベルは、９％から約３３％の間である、
ｘｉｘ）前記抽出脂質の前記脂肪酸含有量における、総ω６脂肪酸：総ω３脂肪酸の比は、約１．０から約３．０の間である、
ｘｘ）前記抽出脂質の前記脂肪酸含有量における、新ω６脂肪酸：新ω３脂肪酸の比は、約１．０から約３．０の間である、
ｘｘｉ）前記脂質の前記脂肪酸組成は、少なくとも約１０％の、オレイン酸のＤＨＡへの転換の効率に基づく、
ｘｘｉｉ）前記脂質の前記脂肪酸組成は、少なくとも約１５％の、ＬＡのＤＨＡへの転換の効率に基づく、
ｘｘｉｉｉ）前記脂質の前記脂肪酸組成は、少なくとも約１７％の、ＡＬＡのＤＨＡへの転換の効率に基づく、
ｘｘｉｖ）前記抽出脂質における前記総脂肪酸は、Ｃ２０：１を１％未満有する、
ｘｘｖ）前記脂質の前記トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）含有量は、少なくとも約７０％である、
ｘｘｖｉ）前記脂質は、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）を含む、
ｘｘｖｉｉ）前記脂質は、約１０％未満の遊離（非エステル化）脂肪酸および／もしくはリン脂質を含む、または、これらを実質的に含まない、
ｘｘｖｉｉｉ）ＴＡＧの形態でエステル化されたＤＨＡの少なくとも７０％が、前記ＴＡＧのｓｎ‐１またはｓｎ‐３の位置にある、
ｘｘｉｘ）前記脂質は、トリ‐ＤＨＡ  ＴＡＧ（ＴＡＧ６６：１８）を含む、
の１もしくはそれ以上、または全てを有する請求項１の脂質。
【請求項３】
１またはそれ以上のステロールをさらに含む、および/またはオイルの形態であって、約１０ｍｇのステロール／ｇのオイル未満、約７ｍｇのステロール／ｇのオイル未満、約１．５ｍｇから約１０ｍｇの間のステロール／ｇのオイル、または約１．５ｍｇから約７ｍｇの間のステロール／ｇのオイルを含む、請求項１または２の脂質。
【請求項４】
前記脂質は、アブラナ属種オイルまたはカメリナ サティバオイルである、請求項１から３のいずれか１つの脂質。
【請求項５】
抽出植物脂質を産生するためのプロセスであって、以下の工程：
ｉ）脂質を含む植物部分を得ることであって、前記脂質はエステル化形態で脂肪酸を含み、該脂肪酸は、オレイン酸、パルミチン酸、リノール酸（ＬＡ）およびγ‐リノレン酸（ＧＬＡ）を含むω６脂肪酸、α‐リノレン酸（ＡＬＡ）を含むω３脂肪酸、ステアリドン酸（ＳＤＡ）、ドコサぺンタエン酸（ＤＰＡ）、およびドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、並びに任意にエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）およびエイコサテトラエン酸（ＥＴＡ）の１またはそれ以上を含み、前記植物部分における抽出可能な脂質の前記総脂肪酸含有量における前記ＤＨＡのレベルは、約７％から２０％であり、前記抽出脂質の前記総脂肪酸含有量におけるパルミチン酸のレベルは約２％から１６％の間であり、前記抽出脂質の前記総脂肪酸含有量における前記ミリスチン酸（Ｃ１４：０）のレベルは１％未満である、工程、ならびに
ｉｉ）前記植物部分から脂質を抽出することであって、前記抽出脂質の前記総脂肪酸含有量における前記ＤＨＡのレベルは、約７％から２０％であり、前記抽出脂質の前記総脂肪酸含有量におけるパルミチン酸のレベルは約２％から１６％の間であり、前記抽出脂質の前記総脂肪酸含有量における前記ミリスチン酸（Ｃ１４：０）のレベルは１％未満である、工程、
を含む、前記プロセス。
【請求項６】
前記抽出脂質は、請求項２から４に定義される１またはそれ以上の特徴を有する、請求項５のプロセス。
【請求項７】
前記植物部分は、Δ１２‐デサチュラーゼ、ω３‐デサチュラーゼもしくはΔ１５‐デサチュラーゼ、Δ６‐デサチュラーゼ、Δ５‐デサチュラーゼ、Δ４‐デサチュラーゼ、Δ６‐エロンガーゼ、およびΔ５‐エロンガーゼをコードし、
各ポリヌクレオチドが、前記植物部分の細胞において、前記ポリヌクレオチドの発現を方向づけることが可能である、１またはそれ以上のプロモーターに操作可能に結合される、外因性ポリヌクレオチドを含む、請求項５または６のプロセス。
【請求項８】
前記植物部分が、以下の特徴：
ｉ）前記Δ１２‐デサチュラーゼが、少なくとも約６０％の効率で、１またはそれ以上の植物の細胞におけるオレイン酸をリノール酸に転換する、
ｉｉ）前記ω３‐デサチュラーゼが、少なくとも約６５％の効率で、１またはそれ以上の植物の細胞において、ω６脂肪酸をω３脂肪酸に転換する、
ｉｉｉ）前記Δ６‐デサチュラーゼが、少なくとも約３０％の効率で、１またはそれ以上の植物の細胞において、ＡＬＡをＳＤＡに転換する、
ｉｖ）前記Δ６‐デサチュラーゼが、約５％未満の効率で、１またはそれ以上の植物の細胞において、リノール酸をγ‐リノレン酸に転換する、
ｖ）前記Δ６‐エロンガーゼが、少なくとも約６０％の効率で、１またはそれ以上の植物の細胞において、ＳＤＡをＥＴＡに転換する、
ｖｉ）前記Δ５‐デサチュラーゼが、少なくとも約６０％の効率で、１またはそれ以上の植物の細胞において、ＥＴＡをＥＰＡに転換する、
ｖｉｉ）前記Δ５‐エロンガーゼが、少なくとも約８０％の効率で、１またはそれ以上の植物の細胞において、ＥＰＡをＤＰＡに転換する、
ｖｉｉｉ）前記Δ４‐デサチュラーゼが、少なくとも約８０％の効率で、１またはそれ以上の植物の細胞において、ＤＰＡをＤＨＡに転換する、
ｉｘ）前記植物部分の１またはそれ以上の細胞における、ＤＨＡへのオレイン酸の転換の効率が、少なくとも約１０％である、
ｘ）前記植物部分の１またはそれ以上の細胞における、ＤＨＡへのＬＡの転換の効率が、少なくとも約１５％である、
ｘｉ）前記植物部分の１またはそれ以上の細胞における、ＤＨＡへのＡＬＡの転換の効率が、少なくとも約１７％である、
ｘｉｉ）前記植物部分の１またはそれ以上の細胞が、前記外因性ポリヌクレオチドを欠いている対応する細胞よりも、少なくとも約１５％多いω３脂肪酸を含む、
ｘｉｉｉ）前記Δ６‐デサチュラーゼは、、リノール酸（ＬＡ）に対してα‐リノレン酸（ＡＬＡ）を優先的に不飽和化する、
ｘｉｖ）前記Δ６‐エロンガーゼは、また、Δ９‐エロンガーゼ活性を有する、
ｘｖ）前記Δ１２‐デサチュラーゼは、また、Δ１５‐デサチュラーゼ活性を有する、
ｘｖｉ）前記Δ６‐デサチュラーゼは、また、Δ８‐デサチュラーゼ活性を有する、
ｘｖｉｉ）前記ω３‐デサチュラーゼは、また、ＬＡでΔ１５‐デサチュラーゼ活性を有する、
ｘｖｉｉｉ）前記ω３‐デサチュラーゼは、両方のＬＡおよび／またはＧＬＡを不飽和化する、
ｘｉｘ）前記ω３‐デサチュラーゼは、、ＬＡに対してＧＬＡを優先的に不飽和化する、
ｘｘ）前記植物部分における前記ＤＨＡのレベルは、少なくとも約１０％の、前記植物部分におけるオレイン酸のＤＨＡへの転換の効率に基づく、
ｘｘｉ）前記植物部分における前記ＤＨＡのレベルは、少なくとも約１５％の、前記植物部分におけるＬＡのＤＨＡへの転換の効率に基づく、
ｘｘｉｉ）前記植物部分における前記ＤＨＡのレベルは、少なくとも約１７％の、前記植物部分におけるＡＬＡのＤＨＡへの転換の効率に基づく、
ｘｘｉｉｉ）１もしくはそれ以上のまたは全ての前記デサチュラーゼが、対応するアシル‐ＰＣ基質よりもアシル‐ＣｏＡ基質で、より高い活性を有する、
ｘｘｉｖ）前記Δ６‐デサチュラーゼが、脂肪酸基質としての、ＬＡよりもＡＬＡで、より高いΔ６‐デサチュラーゼ活性を有する、
ｘｘｖ）前記Δ６‐デサチュラーゼが、脂肪酸基質としてのＰＣのＳｎ‐２位置に結合するＡＬＡよりも、脂肪酸基質としてのＡＬＡ‐ＣｏＡで、より高いΔ６‐デサチュラーゼ活性を有する、
ｘｘｖｉ）前記Δ６‐デサチュラーゼが、基質としてのＡＬＡで、ＬＡと比較して、少なくとも約２倍高いΔ６‐デサチュラーゼ活性を有する、
ｘｘｖｉｉ）前記Δ６‐デサチュラーゼは、脂肪酸基質としてのＰＣのＳｎ‐２位置に結合するＡＬＡよりも、脂肪酸基質としてのＡＬＡ‐ＣｏＡで、より高い活性を有する、
ｘｘｖｉｉｉ）前記Δ６‐デサチュラーゼは、脂肪酸基質としてのＰＣのＳｎ‐２位置に結合するＡＬＡよりも、脂肪酸基質としてのＡＬＡ‐ＣｏＡで、少なくとも約５倍高いΔ６‐デサチュラーゼ活性を有する、
ｘｘｉｘ）前記デサチュラーゼは、フロントエンドのデサチュラーゼである、
ｘｘｘ）前記Δ６‐デサチュラーゼは、ＥＴＡで、検出可能なΔ５‐デサチュラーゼ活性を有していない、
の１もしくはそれ以上、または全てを有する請求項７のプロセス。
【請求項９】
以下の１またはそれ以上の特徴：
ｉ）前記外因性ポリヌクレオチドは、前記植物部分の細胞のゲノムに組込まれるＤＮＡ分子、好ましくはＴ‐ＤＮＡ分子において共有結合で結合され、好ましくは前記植物部分の前記細胞の前記ゲノムに組込まれるこのようなＤＮＡ分子の数は、１、２もしくは３以下であり、または２もしくは３である；
ｉｉ）前記外因性ポリヌクレオチドを含む前記植物部分の総オイル含有量は、前記外因性ポリヌクレオチドを欠く対応する植物部分の総オイル含有量の少なくとも約４０％である；
ｉｉｉ）前記脂質は、オイル、好ましくは油料種子由来の種子オイルの形態であり、前記脂質の重量の少なくとも約９０％がトリアシルグリセロールである；
ｉｖ）前記総脂肪酸含有量のパーセンテージとしての前記ＤＨＡのレベルを増加させるために前記脂質を処理することをさらに含み、好ましくは前記処理がエステル交換反応である；
が該当する、請求項５から８のいずれか１つのプロセス。
【請求項１０】
以下のセットの酵素：
ｉ）Δ１２‐デサチュラーゼ、ω３‐デサチュラーゼもしくはΔ１５‐デサチュラーゼ、Δ６‐デサチュラーゼ、Δ５‐デサチュラーゼ、Δ４‐デサチュラーゼ、Δ６‐エロンガーゼ、およびΔ５‐エロンガーゼ、
ｉｉ）ω３‐デサチュラーゼ、Δ６‐デサチュラーゼ、Δ５‐デサチュラーゼ、Δ４‐デサチュラーゼ、Δ６‐エロンガーゼ、およびΔ５‐エロンガーゼ、
ｉｉｉ）Δ１５‐デサチュラーゼ、Δ６‐デサチュラーゼ、Δ５‐デサチュラーゼ、Δ４‐デサチュラーゼ、Δ６‐エロンガーゼ、およびΔ５‐エロンガーゼ、
ｉｖ）Δ１２‐デサチュラーゼ、Δ６‐デサチュラーゼ、Δ５‐デサチュラーゼ、Δ４‐デサチュラーゼ、Δ６‐エロンガーゼ、およびΔ５‐エロンガーゼ、
ｖ）ω３‐デサチュラーゼ、Δ８‐デサチュラーゼ、Δ５‐デサチュラーゼ、Δ４‐デサチュラーゼ、Δ９‐エロンガーゼ、およびΔ５‐エロンガーゼ、
ｖｉ）Δ１５‐デサチュラーゼ、Δ８‐デサチュラーゼ、Δ５‐デサチュラーゼ、Δ４‐デサチュラーゼ、Δ９‐エロンガーゼ、およびΔ５‐エロンガーゼ、
ｖｉｉ）Δ１２‐デサチュラーゼ、Δ８‐デサチュラーゼ、Δ５‐デサチュラーゼ、Δ４‐デサチュラーゼ、Δ９‐エロンガーゼ、およびΔ５‐エロンガーゼ、または
ｖｉｉｉ）Δ１２‐デサチュラーゼ、ω３‐デサチュラーゼもしくはΔ１５‐デサチュラーゼ、Δ８‐デサチュラーゼ、Δ５‐デサチュラーゼ、Δ４‐デサチュラーゼ、Δ９‐エロンガーゼ、およびΔ５‐エロンガーゼ、
の１つをコードする、外因性ポリヌクレオチドを含む宿主細胞であって、
各ポリヌクレオチドは、前記細胞における前記ポリヌクレオチドの発現を方向づけることができるように、１またはそれ以上のプロモーターと操作可能に結合され、ここで前記細胞は、請求項１から４のいずれか１つに定義される脂質を含む、前記細胞。
【請求項１１】
請求項１０の細胞を含む、トランスジェニック非ヒト生物。
【請求項１２】
トランスジェニック植物である、請求項１１のトランスジェニック非ヒト生物。
【請求項１３】
ａ）その種子における脂質であって、該脂質がエステル化形態における脂肪酸を含む脂質、ならびに
ｂ）以下のセットの酵素：
ｉ）Δ１２‐デサチュラーゼ、真菌のω３‐デサチュラーゼ、および／または真菌のΔ１５‐デサチュラーゼ、Δ６‐デサチュラーゼ、Δ５‐デサチュラーゼ、Δ４‐デサチュラーゼ、Δ６‐エロンガーゼ、およびΔ５‐エロンガーゼ、または
ｉｉ）Δ１２‐デサチュラーゼ、真菌のω３‐デサチュラーゼ、および／もしくは真菌のΔ１５‐デサチュラーゼ、Δ８‐デサチュラーゼ、Δ５‐デサチュラーゼ、Δ４‐デサチュラーゼ、Δ９‐エロンガーゼ、およびΔ５‐エロンガーゼ、の１つをコードする外因性ポリヌクレオチド
を含む油料種子植物であって、
各ポリヌクレオチドは、前記植物の種子を発生する場合に、前記ポリヌクレオチドの発現を方向づけることができるように１またはそれ以上の種子特異的プロモーターを操作可能に結合され、
前記脂肪酸は、オレイン酸、パルミチン酸、リノール酸（ＬＡ）およびγ‐リノレン酸（ＧＬＡ）を含むω６脂肪酸、α‐リノレン酸（ＡＬＡ）を含むω３脂肪酸、ステアリドン酸（ＳＤＡ）、ドコサぺンタエン酸（ＤＰＡ）およびドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、ならびに任意にエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）および／またはエイコサテトラエン酸（ＥＴＡ）を含み、
前記脂質の前記総脂肪酸含有量における前記ＤＨＡのレベルは約７％から２０％であり、前記抽出脂質の前記総脂肪酸含有量におけるパルミチン酸のレベルは約２％から１６％の間であり、前記抽出脂質の前記総脂肪酸含有量における前記ミリスチン酸（Ｃ１４：０）のレベルは１％未満である、前記油料種子植物。
【請求項１４】
以下の特徴：
ｉ）キャノーラ、ダイズ、カメリナ サティバ、またはシロイヌナズナ植物である；
ｉｉ）１またはそれ以上の前記デサチュラーゼは、アシル‐ＣｏＡ基質を使用することができる；
ｉｉｉ）前記植物の成熟した、収穫された種子は、１グラムの種子あたり少なくとも約２８ｍｇのＤＨＡ含有量を有する；
の１またはそれ以上が該当する、請求項１３の植物。
【請求項１５】
以下の特徴：
ｉ）請求項１から４のいずれか１つに定義される脂質を含む；
ｉｉ）請求項１２から１４のいずれか１つの植物由来である；または
ｉｉｉ）請求項５から９のいずれか１つのプロセスで使用され得る；
の１またはそれ以上を有する植物部分。
【請求項１６】
種子である、請求項１５の植物部分。
【請求項１７】
種子を産生する方法であって、
ａ）請求項１５もしくは１６に定義される部分を産生する植物を成長させること、または請求項１２から１５のいずれか１つに定義される部分を産生する植物を成長させることと、
ｂ）前記植物の１つまたは複数から種子を収穫することと、
ｃ）任意に、前記種子から脂質を抽出して、好ましくは、少なくとも６０ｋｇＤＨＡ／ヘクタールの総ＤＨＡ収率を有するオイルを産生することと、
を含む、方法。
【請求項１８】
請求項１６の種子から得られる種子ミール。
【請求項１９】
家畜飼料を産生する方法であって、
１またはそれ以上の、請求項１から４のいずれか１つの前記脂質もしくはオイル、請求項１０の前記細胞、請求項１１もしくは１２の前記トランスジェニック生物、請求項１３もしくは１４の前記油料種子植物、請求項１５もしくは１６の前記植物部分、または請求項１８の前記種子ミールを、少なくとも１つの他の食品原料成分と混合することを含む、方法。
【請求項２０】
ＰＵＦＡから利益を得る、症状の治療または防止に使用するための、請求項１から４のいずれか１つの前記脂質もしくはオイル、請求項１０の前記細胞、請求項１１もしくは１２の前記トランスジェニック生物、請求項１３もしくは１４の前記油料種子植物、請求項１５もしくは１６の前記植物部分、または請求項１８の前記種子ミールの１またはそれ以上。
【請求項２１】
多価不飽和脂肪酸のエチルエステルを産生するためのプロセスであって、
抽出植物脂質におけるトリアシルグリセロールをエステル交換することを含み、前記抽出植物脂質は、エステル化形態で脂肪酸を含み、該脂肪酸は、オレイン酸、パルミチン酸、リノール酸（ＬＡ）を含むω６脂肪酸、α‐リノレン酸（ＡＬＡ）を含むω３脂肪酸、およびドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、並びに任意に１またはそれ以上のステアリドン酸（ＳＤＡ）、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、ドコサぺンタエン酸（ＤＰＡ）、およびエイコサテトラエン酸（ＥＴＡ）を含み、前記抽出脂質の前記総脂肪酸含有量における前記ＤＨＡのレベルが約７％から２０％であり、前記抽出脂質の前記総脂肪酸含有量におけるパルミチン酸のレベルは約２％から１６％の間であり、前記抽出脂質の前記総脂肪酸含有量における前記ミリスチン酸（Ｃ１４：０）のレベルは１％未満であり、これにより前記エチルエステルを産生する、プロセス。