【手続補正書】
【提出日】平成28年9月23日(2016.9.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
第一のインスリンポリペプチド及び第二のインスリンポリペプチドを含むインスリンアナローグダイマーであって、
前記第一のインスリンポリペプチドは単鎖インスリンポリペプチドであり、GIVX4X5CCX8X9X10CX12LX14X15LEX18X19CX21-R13（配列番号：70）の第一のA鎖配列、X25LCGX29X30LVX33X34LYLVCGX41X42GFX45（配列番号：44）の第一のB鎖配列及び第一の連結部分を含み、前記第一の連結ペプチドの第一の末端は第一のB鎖のカルボキシ末端と共有結合しており、前記第一の連結部分の第二の末端は第一のA鎖のアミノ末端と共有結合しており、
前記第二のインスリンポリペプチドは単鎖インスリン又は二鎖インスリンであって、GIVX4X5CCX8X9X10CX12LX14X15LEX18X19CX21-R13（配列番号：70）の第二のA鎖配列及びX25LCGX29X30LVX33X34LYLVCGX41X42GFX45（配列番号：44）の第二のB鎖配列を含むが、ただし前記第二のインスリンポリペプチドが単鎖インスリンであるときは、前記第二のインスリンポリペプチドはさらに第二の連結部分を含むことを条件とし、ここで前記第二の連結部分の第一の末端は該B鎖のカルボキシ末端と共有結合しており、前記第二の連結部分の第二の末端は該A鎖のアミノ末端と共有結合しており、
前記第一及び第二のインスリンポリペプチドは、前記第一の連結部分の7位又は8位アミノ酸の側鎖を、a）第二のインスリンポリペプチドのアミノ末端、又はb）第二の連結部分の7位又は8位アミノ酸の側鎖と共有結合により連結する結合又は二官能性連結部分を介して互いに連結されており、
X4はグルタミン酸又はアスパラギン酸であり、
X5はグルタミン酸又はグルタミンであり、
X8はスレオニン、ヒスチジン又はフェニルアラニンであり、
X9はセリン、アルギニン、オルニチン又はアラニンあり、
X10はセリン又はイソロイシンであり、
X12はセリン又はアスパラギン酸であり、
X14はアルギニン、チロシン、オルニチン又はアラニンであり、
X15はグルタミン、アルギニン、アラニン、オルニチン又はロイシンであり、
X18はメチオニン、アスパラギン又はスレオニンであり、
X19はチロシン、4-メトキシ-フェニルアラニン又は4-アミノフェニルアラニンであり、
X21はアラニン、グリシン又はアスパラギンであり、
X25はヒスチジン又はスレオニンであり、
X29アラニン、グリシン又はセリンであり、
X30はヒスチジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ホモシステイン酸又はシステイン酸であり、
X33はアスパラギン酸又はグルタミン酸であり、
X34はアラニン又はスレオニンであり、
X41はアスパラギン酸又はグルタミン酸であり、
X42はアラニン、オルニチン又はアルギニンであり、
X45はチロシン又はフェニルアラニンであり、且つ
R13はCOOH又はCONH2であり、さらに、
前記ダイマーが、自然のままのインスリンと比較して60％以下の最大用量応答を示す、前記インスリンアナローグダイマー。
【請求項２】
以下のi）、ii)、iii)又はiv）の第一のインスリンポリペプチド及び第二のインスリンポリペプチド、
i）第一のインスリンポリペプチド及び第二のインスリンポリペプチドであって、
前記第一のインスリン及び第二のインスリンポリペプチドはともに単鎖インスリンアナローグであり、各々はA鎖、B鎖及び連結部分の第一並びに第二のセットを含み、A鎖、B鎖及び連結部分の各セットについて前記連結部分の第一の末端はB鎖のカルボキシ末端と共有結合しており、前記連結部分の第二の末端はA鎖のアミノ末端と共有結合しており、さらに第一及び第二のインスリンポリペプチドはPEGを介して互いに連結されているか、又は第一及び第二のインスリンポリペプチドそれぞれの連結部分のリジンの側鎖に共有結合するジスルフィド保有ダイマー化リンカーを介して互いに連結されており、
前記第一及び第二のインスリンポリペプチドのA鎖は、GIVEQCCTSICSLYQLENYCN（配列番号：1）、GIVDECCFRSCDLRRLENYCN（配列番号：11）、GIVDECCFRSCDLRRLEMYCA（配列番号：5）及びGIVEECCFRSCDLALLETYCA（配列番号：7）から独立して選択される配列を含み、
前記第一及び第二のインスリンポリペプチドのB鎖は、FVNQHLCGSHLVEALYLVCGERGFF（配列番号：23）、GPETLCGAELVDALYLVCGDRGFY（配列番号：77）、GPETLCGAELVDALQFVCGDRGFY（配列番号：89）、GPEHLCGAELVDALYLVCGDRGFY（配列番号：14）、AYRPSETLCGGELVDTLQFVCGDRGFY（配列番号：90）及びAYRPSETLCGGELVDTLYLVCGDRGFY（配列番号：92）から独立して選択される配列を含み、
前記第一及び第二のインスリンポリペプチドの連結部分は、GYGSSSRX68APQT（配列番号：9）、X51X52GSSSX57X58APQT（配列番号：16）及びPEG8-X68-PEG4から独立して選択される配列を含み、
X51はグリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン及びプロリンから成る群から選択され、
X52はアラニン、チロシン、バリン、ロイシン、イソロイシン又はプロリンであり、
X57及びX58の一方はアルギニンであり、他方は下記構造Iの側鎖を含むアミノ酸であり、
2015532283.tif 000001
且つ、
X68は下記構造Iの側鎖を含むアミノ酸である、
2015532283.tif 000002
ii）第一のインスリンポリペプチド及び第二のインスリンポリペプチドであって、
前記第一のインスリンポリペプチドは第一のA鎖及び第一のB鎖を含む二鎖インスリンアナローグであり、前記第一のA鎖及び第一のB鎖は鎖間ジスルフィド結合を介して互いに連結されており、
前記第二のインスリンポリペプチドは第二のA鎖、第二のB鎖及び連結部分を含む単鎖インスリンアナローグであり、前記連結部分の第一の末端は第二のB鎖のカルボキシ末端と共有結合しており、前記連結部分の第二の末端は第二のA鎖のアミノ末端と共有結合しており、
第一及び第二のインスリンポリペプチドはジスルフィド保有ダイマー化リンカーを介して互いに連結されており、該ダイマー化リンカーの第一の末端は前記第一のインスリンポリペプチドのB鎖のN-末端アミノ酸の側鎖と共有結合しており、該ダイマー化リンカーの第二の末端は第二のインスリンポリペプチドの連結部分のリジンの側鎖と共有結合しており、
前記第一及び第二のインスリンポリペプチドのA鎖は、GIVEQCCTSICSLYQLENYCN（配列番号：1）、GIVDECCFRSCDLRRLENYCN（配列番号：11）、GIVDECCFRSCDLRRLEMYCA（配列番号：5）及びGIVEECCFRSCDLALLETYCA（配列番号：7）から独立して選択される配列を含み、
前記第一のインスリンポリペプチドのB鎖は、CFVNQHLCGSHLVEALYLVCGERGFFYTPKT（配列番号：94）、CGPETLCGAELVDALYLVCGDRGFYFNKPT（配列番号：95）、CGPETLCGAELVDALQFVCGDRGFYFNKPT（配列番号：96）、CGPEHLCGAELVDALYLVCGDRGFYNKPT（配列番号：97）、CAYRPSETLCGGELVDTLQFVCGDRGFY（配列番号：91）及びCAYRPSETLCGGELVDTLYLVCGDRGFY（配列番号：93）から独立して選択される配列を含み、
前記第二のインスリンポリペプチドのB鎖は、FVNQHLCGSHLVEALYLVCGERGFF（配列番号：23）、GPETLCGAELVDALYLVCGDRGFY（配列番号：77）、GPETLCGAELVDALQFVCGDRGFY（配列番号：89）、GPEHLCGAELVDALYLVCGDRGFY（配列番号：14）、AYRPSETLCGGELVDTLQFVCGDRGFY（配列番号：90）及びAYRPSETLCGGELVDTLYLVCGDRGFY（配列番号：92）から独立して選択される配列を含み、
前記第二のインスリンポリペプチドの連結部分は、GYGSSSRX68APQT（配列番号：9）、X51X52GSSSX57X58APQT（配列番号：16）及びPEG8-X68-PEG4から独立して選択される配列を含み、
X51はグリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン及びプロリンから成る群から選択され、
X52はアラニン、チロシン、バリン、ロイシン、イソロイシン又はプロリンであり、
X57及びX58の一方はアルギニンであり、他方は下記構造Iの側鎖を含むアミノ酸であり、
2015532283.tif 000003
X68は下記構造Iの側鎖を含むアミノ酸である、
2015532283.tif 000004
iii）第一のインスリンポリペプチド及び第二のインスリンポリペプチドあって、
前記第一のインスリン及び第二のインスリンポリペプチドはともに、それぞれA鎖及びB鎖の第一並びに第二のセットを含む二鎖インスリンアナローグであり、各セットのA鎖及びB鎖は鎖間ジスルフィド結合を介して互いに連結されており、さらに該第一及び第二のインスリンポリペプチドは、2つのB鎖それぞれのカルボキシ末端アミノ酸の側鎖を継ぎ合わせるダイマー化リンカーを介して互いに連結されており、
前記第一及び第二のインスリンポリペプチドのA鎖は、GIVEQCCTSICSLYQLENYCN（配列番号：1）、GIVDECCFRSCDLRRLENYCN（配列番号：11）、GIVDECCFRSCDLRRLEMYCA（配列番号：5）及びGIVEECCFRSCDLALLETYCA（配列番号：7）から成る群から独立して選択される配列を含み、
前記第一及び第二のインスリンのB鎖は、FVNQHLCGSHLVEALYLVCGERGFFYTPX68T（配列番号：2）及びGPETLCGAELVDALYLVCGDRGFYFNX68PT（配列番号：99）から成る群から独立して選択される配列を含み、
X68は下記構造Iの側鎖を含むアミノ酸である、
2015532283.tif 000005
iv）第一のインスリンポリペプチド及び第二のインスリンポリペプチドであって、
前記第一のインスリン及び第二のインスリンポリペプチドはともに、各々がA鎖、B鎖及び連結部分の第一並びに第二のセットを含む単鎖インスリンアナローグであり、A鎖、B鎖及び連結部分の各セットについて前記連結部分の第一の末端はB鎖のカルボキシ末端と共有結合しており、前記連結部分の第二の末端はA鎖のアミノ末端と共有結合しており、さらに第一及び第二のインスリンポリペプチドはPEG又はジスルフィド保有ダイマー化リンカーを介して互いに連結されており、ここで該ダイマー化リンカーの第一の末端は第一又は第二のインスリンポリペプチドの一方の連結部分のリジンの側鎖と共有結合しており、該ダイマー化リンカーの第二の末端は他方の第一又は第二のインスリンポリペプチドのB鎖のN-末端アミンと共有結合しており、
前記第一のインスリンポリペプチドのA鎖は、配列TPAKSEGIVEECCFRSCDLALLETYCA（配列番号：103）を含み、
前記第一のインスリンポリペプチドのB鎖は、配列AYRPSETLCGGELVDTLQFVCGDRGFY（配列番号：90）又はAYRPSETLCGGELVDTLYLVCGDRGFY（配列番号：92）を含み、
前記第二のインスリンポリペプチドのA鎖は、配列GIVEQCCTSICSLYQLENYCN（配列番号：1）を含み、
前記第二のインスリンポリペプチドのB鎖は、FVNQHLCGSHLVEALYLVCGERGFF（配列番号：23）及びGPEHLCGAELVDALYLVCGDRGFY（配列番号：14）から独立して選択される配列を含み、
前記第一及び第二のインスリンポリペプチドの連結部分はGYGSSSRX68APQT（配列番号：9）、SRVSRX68SR（配列番号：87）及びPEG8-X68-PEG4から独立して選択される配列を含み、
X68はアルギニン又は下記構造Iの側鎖を含むアミノ酸である、
2015532283.tif 000006
を含む、請求項１に記載のインスリンアナローグダイマー。
【請求項３】
前記ダイマーが第一のインスリンポリペプチド及び第二のインスリンポリペプチドを含み、
前記第一のインスリン及び第二のインスリンポリペプチドがともに単鎖インスリンアナローグであり、
前記第一及び第二のインスリンのA鎖がGIVEQCCTSICSLYQLENYCN（配列番号：1）及びGIVDECCFRSCDLRRLENYCN（配列番号：11）から独立して選択される配列を含み、
前記第一及び第二のインスリンのB鎖がFVNQHLCGSHLVEALYLVCGERGFF（配列番号：23）及びGPEHLCGAELVDALYLVCGDRGFY（配列番号：14）から独立して選択される配列を含み、
前記ダイマー化リンカーがGYGSSSRX68APQT（配列番号：9）及びPEG8-X68-PEG4から独立して選択される配列を含み、
X68が下記構造Iの側鎖を含むアミノ酸である、
2015532283.tif 000007
請求項２に記載のインスリンアナローグダイマー。
【請求項４】
前記ダイマーが第一のインスリンポリペプチド及び第二のインスリンポリペプチドを含み、
前記第一のインスリンポリペプチドが第一のA鎖及び第一のB鎖を含む二鎖インスリンアナローグであり、前記第一のA鎖及び第一のB鎖が鎖間ジスルフィド結合を介して互いに連結されており、
前記第二のインスリンポリペプチドが第二のA鎖、第二のB鎖及び連結部分を含む単鎖インスリンアナローグであり、前記連結部分の第一の末端が第二のB鎖のカルボキシ末端と共有結合しており、前記連結部分の第二の末端が第二のA鎖のアミノ末端と共有結合しており、
第一及び第二のインスリンポリペプチドが、第一のインスリンポリペプチドのB鎖のN-末端システイン側鎖と第二のインスリンポリペプチドの連結部分の改変リジンの側鎖との間でジスルフィド結合を介して互いに連結されており、
前記第一及び第二のインスリンポリペプチドのA鎖が、GIVEQCCTSICSLYQLENYCN（配列番号：1）、GIVDECCFRSCDLRRLENYCN（配列番号：11）、GIVDECCFRSCDLRRLEMYCA（配列番号：5）及びGIVEECCFRSCDLALLETYCA（配列番号：7）から独立して選択される配列を含み、
前記第一のインスリンポリペプチドのB鎖がCFVNQHLCGSHLVEALYLVCGERGFFYTPKT（配列番号：94）及びCGPEHLCGAELVDALYLVCGDRGFYNKPT（配列番号：97）から独立して選択される配列を含み、
前記第二のインスリンポリペプチドのB鎖がFVNQHLCGSHLVEALYLVCGERGFF（配列番号：23）及びGPEHLCGAELVDALYLVCGDRGFY（配列番号：14）から独立して選択される配列を含み、
前記第二のインスリンポリペプチドの連結部分が配列GYGSSSRX68APQT（配列番号：9）を含み、X68が下記の側鎖を含むアミノ酸である、
2015532283.tif 000008
請求項２に記載のインスリンアナローグダイマー。
【請求項５】
前記ダイマーが第一のインスリンポリペプチド及び第二のインスリンポリペプチドを含み、
前記第一のインスリン及び第二のインスリンポリペプチドがともに単鎖インスリンアナローグであり、
前記第一のインスリンポリペプチドのA鎖が配列TPAKSEGIVEECCFRSCDLALLETYCA（配列番号：103）を含み、
前記第一のインスリンポリペプチドのB鎖が配列AYRPSETLCGGELVDTLQFVCGDRGFY（配列番号：90）を含み、前記第一のインスリンポリペプチドのための連結部分が配列SRVSRX68SR（配列番号：98）を含み、
前記第二のインスリンポリペプチドのA鎖が配列GIVEQCCTSICSLYQLENYCN（配列番号：1）を含み、
前記第二のインスリンポリペプチドのB鎖が配列FVNQHLCGSHLVEALYLVCGERGFF（配列番号：23）を含み、前記第二のインスリンポリペプチドのための連結部分が配列GYGSSSRX68APQT（配列番号：9）を含み、
X68がアルギニン又は下記構造Iの側鎖を含むアミノ酸である、
2015532283.tif 000009
請求項２に記載のインスリンアナローグダイマー。
【請求項６】
（ｉ）前記第一及び任意の第二の連結部分が独立して、
GYGSSSRX68APQT（配列番号：9）、SRVSRX68SR（配列番号：98）、X51X52GSSSX57X58APQT（配列番号：16）、(SSSSX59APPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQX60)n（配列番号：18）、MGSSSSX59APPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQEEEEEX60（配列番号：19）及びW2-Z2-Y2から成る群から選択され、
W2はPEG6、PEG7又はPEG8であり、
Y2はPEG4、PEG5又はPEG6であり、且つ
Z2はリジン、システイン、又は下記構造Iの側鎖を含むアミノ酸であり
2015532283.tif 000010
nは1、2又は3から成る群から選択される整数であり、
X51はグリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン及びプロリンから成る群から選択され、
X52はアラニン、チロシン、バリン、ロイシン、イソロイシン又はプロリンであり、
X57及びX58は独立して、アルギニン、リジン、システイン、ホモシステイン、アセチルフェニルアラニン又はオルニチンであり、
X59及びX60は独立してアルギニン又はリジンであり、且つ
X68はシステイン又は下記構造Iの側鎖を含むアミノ酸であり、
2015532283.tif 000011
mは1〜4から選択される整数である、又は
（ｉｉ）前記第一及び任意の第二の連結部分が独立して、配列GYGSSSRKAPQT（配列番号：21）、GYGSSSRX68APQT（配列番号：9）、SRVSRX68SR（配列番号：98）又はPEG8-X68-PEG4から成り、X68はシステイン又は下記構造Iの側鎖を含むアミノ酸であり、
2015532283.tif 000012
mが4である、
請求項１に記載のインスリンアナローグダイマー。
【請求項７】
前記第一及び任意の第二の連結部分が独立して、配列GYGSSSRKAPQT（配列番号：21）、GYGSSSRX68APQT（配列番号：9）、SRVSRX68SR（配列番号：98）又はPEG8-X68-PEG4から成り、X68はシステイン又は下記構造Iの側鎖を含むアミノ酸であり、
2015532283.tif 000013
mが4であり、該第二のインスリンポリペプチドが二鎖インスリンであり、前記第一及び第二のインスリンポリペプチドが、第一の連結ペプチドの8位アミノ酸のアミノ酸側鎖を、第二のインスリンポリペプチドのB鎖のN-末端アルファアミンに共有結合により連結する結合又は二官能性連結部分を介して互いに共有結合されている、請求項１に記載のインスリンアナローグダイマー。
【請求項８】
前記第一及び任意の第二の連結部分が独立して、配列GYGSSSRKAPQT（配列番号：21）、GYGSSSRX68APQT（配列番号：9）、SRVSRX68SR（配列番号：98）又はPEG8-X68-PEG4から成り、X68はシステイン又は下記構造Iの側鎖を含むアミノ酸であり、
2015532283.tif 000014
mが4であり、該第二のインスリンポリペプチドが単鎖インスリンであり、前記第一及び第二のインスリンポリペプチドが、前記第一の連結ペプチドの8位アミノ酸のアミノ酸側鎖を、前記第二の連結ペプチドの8位アミノ酸の側鎖に共有結合により連結する結合又は二官能性連結部分を介して互いに共有結合されている、請求項１に記載のインスリンアナローグダイマー。
【請求項９】
該第一の連結部分がPEG8-X68-PEG4又は配列GYGSSSRX68APQT（配列番号：9）から成り、  X68は下記構造Iの側鎖を有するアミノ酸であり、
2015532283.tif 000015
mは1〜4から選択される整数であり、前記任意の第二の連結部分が、配列GYGSSSRKAPQT（配列番号：21）、GYGSSSRX68APQT（配列番号：9）、SRVSRX68SR（配列番号：98）又はPEG8-X68-PEG4から成り、X68はシステイン又は下記構造Iの側鎖を含むアミノ酸であり、
2015532283.tif 000016
mが4であり、且つ、第一及び第二のインスリンポリペプチドが、下記構造Iの側鎖を有する第一の連結部分のアミノ酸の側鎖と、
2015532283.tif 000017
第二のインスリンポリペプチドのN-末端に付加されるシステインの側鎖との間でジスルフィド結合を介して互いに共有結合されている、請求項１に記載のインスリンアナローグダイマー。
【請求項１０】
該第一及び第二のインスリンポリペプチドが、GIVEQCCTSICSLYQLENYCN（配列番号：1）、GIVDECCFRSCDLRRLEMYCA（配列番号：5）及びGIVEECCFRSCDLALLETYCA（配列番号：7）から成る群から独立して選択されるA鎖、並びにFVNQHLCGSHLVEALYLVCGERGFFYTPKT（配列番号：2）、GPETLCGAELVDALYLVCGDRGFY（配列番号：77）、GPETLCGAELVDALYLVCGDRGFYFNKPT（配列番号：79）及びAYRPSETLCGGELVDTLYLVCGDRGFYFSRPA（配列番号：80）から成る群から独立して選択されるB鎖を含む、請求項１又は６〜９のいずれか１項に記載のインスリンアナローグダイマー。
【請求項１１】
前記第一及び第二のインスリンポリペプチドのA鎖がGIVDECCX8RSCDLRRLENYCN（配列番号：83）及びGIVEQCCTSICSLYQLENYCN（配列番号：1）から独立して選択される配列を含み、前記第一及び第二のインスリンポリペプチドのB鎖がGPETLCGAELVDALYLVCGDRGFY（配列番号：77）、HLCGAELVDALYLVCGDRGFY（配列番号：84）及びHLCGSHLVEALYLVCGERGFF（配列番号：85）から独立して選択される配列を含み、X8がヒスチジン又はフェニルアラニンである、請求項１又は６〜９のいずれか1項に記載のインスリンアナローグダイマー。
【請求項１２】
親水性部分が、該連結部分のアミノ酸と、又はA鎖のA9、A14及びA15から成る群から選択される位置又はB鎖のB1、B2、B10、B22、B28若しくはB29位のアミノ酸で共有結合により連結されており、任意に該親水性部分がポリエチレングリコール鎖である、請求項１〜１１のいずれか1項に記載のインスリンアナローグダイマー。
【請求項１３】
下記式Xの構造のジペプチド成分をさらに含む、請求項１〜１２のいずれか1項に記載のインスリンアナローグダイマーであって、
2015532283.tif 000018
前記ジペプチド成分は、該ジペプチド成分と第一又は第二のインスリンポリペプチドのアミンとの間で形成されるアミド結合を介して前記インスリンアナローグダイマーに連結されており、
R1、R2、R4及びR8は、H、C1-C18アルキル、C2-C18アルケニル、(C1-C18アルキル)OH、(C1-C18アルキル)SH、(C2-C3アルキル)SCH3、(C1-C4アルキル)CONH2、(C1-C4アルキル)COOH、(C1-C4アルキル)NH2、(C1-C4アルキル)NHC(NH2+)NH2、(C0-C4アルキル)(C3-C6シクロアルキル)、(C0-C4アルキル)(C2-C5複素環)、(C0-C4アルキル)(C6-C10アリール)R7、(C1-C4アルキル)(C3-C9ヘテロアリール)、及びC1-C12アルキル(W1)C1-C12アルキルから成る群から独立して選択され、W1はN、S及びOから成る群から選択されるヘテロ原子であり、又は
R1及びR2は、それらが結合する原子と一緒にC3-C12シクロアルキル又はアリールを形成しているか、若しくは
R4及びR8はそれらが結合する原子と一緒にC3-C6シクロアルキルを形成しており、
R3は、C1-C18アルキル、(C1-C18アルキル)OH、(C1-C18アルキル)NH2、(C1-C18アルキル)SH、(C0-C4アルキル)(C3-C6)シクロアルキル、(C0-C4アルキル)(C2-C5複素環)、(C0-C4アルキル)(C6-C10アリール)R7、及び(C1-C4アルキル)(C3-C9ヘテロアリール) から成る群から選択されるか、又はR4及びR3はそれらが結合する原子と一緒に4、5又は6員複素環式環を形成しており、
R5はNHR6又はOHであり、
R6はH、C1-C8アルキルであるか、又はR6及びR1はそれらが結合する原子と一緒に4、5又は6員複素環式環を形成しており、且つ
R7は、H、OH、C1-C18アルキル、C2-C18アルケニル、(C0-C4アルキル)CONH2、(C0-C4アルキル)COOH、(C0-C4アルキル)NH2、(C0-C4アルキル)OH、及びハロから成る群から選択される、
前記インスリンアナローグダイマー。
【請求項１４】
第一又は第二のインスリンポリペプチドのアミノ酸側鎖が、アルキルアミン、アミド、エーテル、エステル、チオエーテル、又はチオエステル結合によりアシル基又はアルキル基に共有結合により付着しており、前記アシル基又はアルキル基は天然に存在するアミノ酸にとって本来のものではない、請求項１〜１２のいずれか1項に記載のインスリンアナローグダイマー。
【請求項１５】
請求項１〜１４のいずれか1項に記載のインスリンアナローグダイマー及び医薬的に許容できる担体を含む、医薬組成物。
【請求項１６】
糖尿病の治療に用いるための、請求項１５に記載の医薬組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３１８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３１８】
結果
B1-C8結合を有する2つのインスリン-IGF-2ヘテロダイマーを設計して、2つのインスリン受容体アイソフォームにおけるそれらの活性を精査した。ダイマー#61は1つの単鎖インスリン#27及び1つのIGF-2アナローグ#31を含んでいた。#27のN末端はジスルフィド結合によって#31のLysC8に架橋された。ペプチド#31は、LysD4Arg及びArgC8Lysの2つの変異を有するIGF-2配列から誘導された。この設計はLysC8位との架橋反応をもたらした。これら2つの位置は受容体活性のために必須ではなく、これら2つの位置の変異は、IR-A及びIR-Bの双方でわずかに2倍効力を低下させた。ダイマー#62はまた1つの単鎖インスリンアナローグ#27*を含み、そのLysC8は自然のままのIGF-2のN-末端アミンにジスルフィド結合を介して架橋されていた。インスリン及びIGF-2モノマーの向きは、2つのモノマーユニットの向きの影響を調べるために#62で逆になっていた。
ダイマー#61は両受容体で部分的アゴニストであったが、最大応答はIR-Bで高かった。IR-Aでは、#61によって誘発される最大応答は、自然のままのインスリンによって誘発される最大応答の〜50％であったが、IR-Bでは最大応答は〜80％であった（図22A及び22B）。逆向きのインスリン及びIGF-1ユニットを含むダイマー#62もまたIR-Bでより高い最大応答を示した。ダイマー#62は、最大応答がIR-Bでインスリンのそれとほぼ同じであったのでIR-Bではほぼ完全なアゴニストであった。対照的に、#62はIR-Aではなお部分的アゴニストであった。前記はインスリンがタイプA受容体で誘発する最大応答の約80％を誘発した。
＃61及び＃62はともに、より高い最大応答で示されるようにタイプBインスリン受容体に対して優先性を示した。ダイマー#61は、受容体活性化において#62よりも強い阻害性作用を示した。なぜならば、両受容体アイソフォームで#61によって誘発される最大応答は、#62によって誘発されるものよりも低いからである。インスリン及びIGF-2モノマーユニットの向きは受容体選択性を変化させなかったが、受容体活性化の阻害にはなお影響を示した。#61及び#62の応答曲線はベル形であった（前記ベル形はインスリンホモダイマー#53及びインスリンヘテロダイマー#60についても観察された）。最大レベルに達した後、受容体応答は#61又は#62の濃度を増加させることによって低下した。しかしながら、#61又は#62では受容体応答は〜50％までしか低下しなかったが、一方、#53及び#60は高濃度で受容体活性化を完全に阻害することができた。#61及び#62はIGF-1受容体でともに部分的アゴニストであり、さらに#61は、最大受容体活性化で#62よりも強い阻害性作用を示した（図22E）。
本発明の好ましい態様は、下記の通りである。
〔１〕インスリンアナローグダイマーであって、以下のi）、ii)、iii)又はiv）の第一のインスリンポリペプチド及び第二のインスリンポリペプチド、
i）第一のインスリンポリペプチド及び第二のインスリンポリペプチドであって、
前記第一のインスリン及び第二のインスリンポリペプチドはともに単鎖インスリンアナローグであり、各々はA鎖、B鎖及び連結部分の第一並びに第二のセットを含み、A鎖、B鎖及び連結部分の各セットについて前記連結部分の第一の末端はB鎖のカルボキシ末端と共有結合しており、前記連結部分の第二の末端はA鎖のアミノ末端と共有結合しており、さらに第一及び第二のインスリンポリペプチドはPEGを介して互いに連結されているか、又は第一及び第二のインスリンポリペプチドそれぞれの連結部分のリジンの側鎖に共有結合するジスルフィド保有ダイマー化リンカーを介して互いに連結されており、
前記第一及び第二のインスリンポリペプチドのA鎖は、GIVEQCCTSICSLYQLENYCN（配列番号：1）、GIVDECCFRSCDLRRLENYCN（配列番号：11）、GIVDECCFRSCDLRRLEMYCA（配列番号：5）及びGIVEECCFRSCDLALLETYCA（配列番号：7）から独立して選択される配列を含み、
前記第一及び第二のインスリンポリペプチドのB鎖は、FVNQHLCGSHLVEALYLVCGERGFF（配列番号：23）、GPETLCGAELVDALYLVCGDRGFY（配列番号：77）、GPETLCGAELVDALQFVCGDRGFY（配列番号：89）、GPEHLCGAELVDALYLVCGDRGFY（配列番号：14）、AYRPSETLCGGELVDTLQFVCGDRGFY（配列番号：90）及びAYRPSETLCGGELVDTLYLVCGDRGFY（配列番号：92）から独立して選択される配列を含み、
前記第一及び第二のインスリンポリペプチドの連結部分は、GYGSSSRX68APQT（配列番号：9）、X51X52GSSSX57X58APQT（配列番号：16）及びPEG8-X68-PEG4から独立して選択される配列を含み、
X51はグリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン及びプロリンから成る群から選択され、
X52はアラニン、チロシン、バリン、ロイシン、イソロイシン又はプロリンであり、
X57及びX58の一方はアルギニンであり、他方は下記構造Iの側鎖を含むアミノ酸であり、
2015532283.tif 000019
且つ、
X68は下記構造Iの側鎖を含むアミノ酸である、
2015532283.tif 000020
ii）第一のインスリンポリペプチド及び第二のインスリンポリペプチドであって、
前記第一のインスリンポリペプチドは第一のA鎖及び第一のB鎖を含む二鎖インスリンアナローグであり、前記第一のA鎖及び第一のB鎖は鎖間ジスルフィド結合を介して互いに連結されており、
前記第二のインスリンポリペプチドは第二のA鎖、第二のB鎖及び連結部分を含む単鎖インスリンアナローグであり、前記連結部分の第一の末端は第二のB鎖のカルボキシ末端と共有結合しており、前記連結部分の第二の末端は第二のA鎖のアミノ末端と共有結合しており、
第一及び第二のインスリンポリペプチドはジスルフィド保有ダイマー化リンカーを介して互いに連結されており、該ダイマー化リンカーの第一の末端は前記第一のインスリンポリペプチドのB鎖のN-末端アミノ酸の側鎖と共有結合しており、該ダイマー化リンカーの第二の末端は第二のインスリンポリペプチドの連結部分のリジンの側鎖と共有結合しており、
前記第一及び第二のインスリンポリペプチドのA鎖は、GIVEQCCTSICSLYQLENYCN（配列番号：1）、GIVDECCFRSCDLRRLENYCN（配列番号：11）、GIVDECCFRSCDLRRLEMYCA（配列番号：5）及びGIVEECCFRSCDLALLETYCA（配列番号：7）から独立して選択される配列を含み、
前記第一のインスリンポリペプチドのB鎖は、CFVNQHLCGSHLVEALYLVCGERGFFYTPKT（配列番号：94）、CGPETLCGAELVDALYLVCGDRGFYFNKPT（配列番号：95）、CGPETLCGAELVDALQFVCGDRGFYFNKPT（配列番号：96）、CGPEHLCGAELVDALYLVCGDRGFYNKPT（配列番号：97）、CAYRPSETLCGGELVDTLQFVCGDRGFY（配列番号：91）及びCAYRPSETLCGGELVDTLYLVCGDRGFY（配列番号：93）から独立して選択される配列を含み、
前記第二のインスリンポリペプチドのB鎖は、FVNQHLCGSHLVEALYLVCGERGFF（配列番号：23）、GPETLCGAELVDALYLVCGDRGFY（配列番号：77）、GPETLCGAELVDALQFVCGDRGFY（配列番号：89）、GPEHLCGAELVDALYLVCGDRGFY（配列番号：14）、AYRPSETLCGGELVDTLQFVCGDRGFY（配列番号：90）及びAYRPSETLCGGELVDTLYLVCGDRGFY（配列番号：92）から独立して選択される配列を含み、
前記第二のインスリンポリペプチドの連結部分は、GYGSSSRX68APQT（配列番号：9）、X51X52GSSSX57X58APQT（配列番号：16）及びPEG8-X68-PEG4から独立して選択される配列を含み、
X51はグリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン及びプロリンから成る群から選択され、
X52はアラニン、チロシン、バリン、ロイシン、イソロイシン又はプロリンであり、
X57及びX58の一方はアルギニンであり、他方は下記構造Iの側鎖を含むアミノ酸であり、
2015532283.tif 000021
X68は下記構造Iの側鎖を含むアミノ酸である、
2015532283.tif 000022
iii）第一のインスリンポリペプチド及び第二のインスリンポリペプチドあって、
前記第一のインスリン及び第二のインスリンポリペプチドはともに、それぞれA鎖及びB鎖の第一並びに第二のセットを含む二鎖インスリンアナローグであり、各セットのA鎖及びB鎖は鎖間ジスルフィド結合を介して互いに連結されており、さらに該第一及び第二のインスリンポリペプチドは、2つのB鎖それぞれのカルボキシ末端アミノ酸の側鎖を継ぎ合わせるダイマー化リンカーを介して互いに連結されており、
前記第一及び第二のインスリンポリペプチドのA鎖は、GIVEQCCTSICSLYQLENYCN（配列番号：1）、GIVDECCFRSCDLRRLENYCN（配列番号：11）、GIVDECCFRSCDLRRLEMYCA（配列番号：5）及びGIVEECCFRSCDLALLETYCA（配列番号：7）から成る群から独立して選択される配列を含み、
前記第一及び第二のインスリンのB鎖は、FVNQHLCGSHLVEALYLVCGERGFFYTPX68T（配列番号：2）及びGPETLCGAELVDALYLVCGDRGFYFNX68PT（配列番号：99）から成る群から独立して選択される配列を含み、
X68は下記構造Iの側鎖を含むアミノ酸である、
2015532283.tif 000023
iv）第一のインスリンポリペプチド及び第二のインスリンポリペプチドであって、
前記第一のインスリン及び第二のインスリンポリペプチドはともに、各々がA鎖、B鎖及び連結部分の第一並びに第二のセットを含む単鎖インスリンアナローグであり、A鎖、B鎖及び連結部分の各セットについて前記連結部分の第一の末端はB鎖のカルボキシ末端と共有結合しており、前記連結部分の第二の末端はA鎖のアミノ末端と共有結合しており、さらに第一及び第二のインスリンポリペプチドはPEG又はジスルフィド保有ダイマー化リンカーを介して互いに連結されており、ここで該ダイマー化リンカーの第一の末端は第一又は第二のインスリンポリペプチドの一方の連結部分のリジンの側鎖と共有結合しており、該ダイマー化リンカーの第二の末端は他方の第一又は第二のインスリンポリペプチドのB鎖のN-末端アミンと共有結合しており、
前記第一のインスリンポリペプチドのA鎖は、配列TPAKSEGIVEECCFRSCDLALLETYCA（配列番号：103）を含み、
前記第一のインスリンポリペプチドのB鎖は、配列AYRPSETLCGGELVDTLQFVCGDRGFY（配列番号：90）又はAYRPSETLCGGELVDTLYLVCGDRGFY（配列番号：92）を含み、
前記第二のインスリンポリペプチドのA鎖は、配列GIVEQCCTSICSLYQLENYCN（配列番号：1）を含み、
前記第二のインスリンポリペプチドのB鎖は、FVNQHLCGSHLVEALYLVCGERGFF（配列番号：23）及びGPEHLCGAELVDALYLVCGDRGFY（配列番号：14）から独立して選択される配列を含み、
前記第一及び第二のインスリンポリペプチドの連結部分はGYGSSSRX68APQT（配列番号：9）、SRVSRX68SR（配列番号：87）及びPEG8-X68-PEG4から独立して選択される配列を含み、
X68はアルギニン又は下記構造Iの側鎖を含むアミノ酸である、
2015532283.tif 000024
を含む、インスリンアナローグダイマー。
〔２〕前記ダイマーが第一のインスリンポリペプチド及び第二のインスリンポリペプチドを含み、
前記第一のインスリン及び第二のインスリンポリペプチドがともに単鎖インスリンアナローグであり、
前記第一及び第二のインスリンのA鎖がGIVEQCCTSICSLYQLENYCN（配列番号：1）及びGIVDECCFRSCDLRRLENYCN（配列番号：11）から独立して選択される配列を含み、
前記第一及び第二のインスリンのB鎖がFVNQHLCGSHLVEALYLVCGERGFF（配列番号：23）及びGPEHLCGAELVDALYLVCGDRGFY（配列番号：14）から独立して選択される配列を含み、
前記ダイマー化リンカーがGYGSSSRX68APQT（配列番号：9）及びPEG8-X68-PEG4から独立して選択される配列を含み、
X68が下記構造Iの側鎖を含むアミノ酸である、
2015532283.tif 000025
前記〔1〕に記載のインスリンアナローグダイマー。
〔３〕前記ダイマーが第一のインスリンポリペプチド及び第二のインスリンポリペプチドを含み、
前記第一のインスリンポリペプチドが第一のA鎖及び第一のB鎖を含む二鎖インスリンアナローグであり、前記第一のA鎖及び第一のB鎖が鎖間ジスルフィド結合を介して互いに連結されており、
前記第二のインスリンポリペプチドが第二のA鎖、第二のB鎖及び連結部分を含む単鎖インスリンアナローグであり、前記連結部分の第一の末端が第二のB鎖のカルボキシ末端と共有結合しており、前記連結部分の第二の末端が第二のA鎖のアミノ末端と共有結合しており、
第一及び第二のインスリンポリペプチドが、第一のインスリンポリペプチドのB鎖のN-末端システイン側鎖と第二のインスリンポリペプチドの連結部分の改変リジンの側鎖との間でジスルフィド結合を介して互いに連結されており、
前記第一及び第二のインスリンポリペプチドのA鎖が、GIVEQCCTSICSLYQLENYCN（配列番号：1）、GIVDECCFRSCDLRRLENYCN（配列番号：11）、GIVDECCFRSCDLRRLEMYCA（配列番号：5）及びGIVEECCFRSCDLALLETYCA（配列番号：7）から独立して選択される配列を含み、
前記第一のインスリンポリペプチドのB鎖がCFVNQHLCGSHLVEALYLVCGERGFFYTPKT（配列番号：94）及びCGPEHLCGAELVDALYLVCGDRGFYNKPT（配列番号：97）から独立して選択される配列を含み、
前記第二のインスリンポリペプチドのB鎖がFVNQHLCGSHLVEALYLVCGERGFF（配列番号：23）及びGPEHLCGAELVDALYLVCGDRGFY（配列番号：14）から独立して選択される配列を含み、
前記第二のインスリンポリペプチドの連結部分が配列GYGSSSRX68APQT（配列番号：9）を含み、X68が下記の側鎖を含むアミノ酸である、
2015532283.tif 000026
前記〔1〕に記載のインスリンアナローグダイマー。
〔４〕前記ダイマーが第一のインスリンポリペプチド及び第二のインスリンポリペプチドを含み、
前記第一のインスリン及び第二のインスリンポリペプチドがともに単鎖インスリンアナローグであり、
前記第一のインスリンポリペプチドのA鎖が配列TPAKSEGIVEECCFRSCDLALLETYCA（配列番号：103）を含み、
前記第一のインスリンポリペプチドのB鎖が配列AYRPSETLCGGELVDTLQFVCGDRGFY（配列番号：90）を含み、前記第一のインスリンポリペプチドのための連結部分が配列SRVSRX68SR（配列番号：98）を含み、
前記第二のインスリンポリペプチドのA鎖が配列GIVEQCCTSICSLYQLENYCN（配列番号：1）を含み、
前記第二のインスリンポリペプチドのB鎖が配列FVNQHLCGSHLVEALYLVCGERGFF（配列番号：23）を含み、前記第二のインスリンポリペプチドのための連結部分が配列GYGSSSRX68APQT（配列番号：9）を含み、
X68がアルギニン又は下記構造Iの側鎖を含むアミノ酸である、
2015532283.tif 000027
前記〔1〕に記載のインスリンアナローグダイマー。
〔５〕糖尿病治療に付随する低血糖のリスクを軽減する方法であって、前記方法が、前記〔1〕〜〔4〕のいずれか1項に記載のインスリンアナローグダイマーを含む医薬組成物の有効量を投与する工程を含む、前記方法。
〔６〕部分的アゴニストインスリンダイマーを含む医薬組成物の有効量を投与する工程を含む、糖尿病治療に付随する低血糖のリスクを軽減する方法であって、
前記部分的アゴニストインスリンダイマーが、ダイマー化リンカーを介して互いに連結されている第一及び第二のインスリンポリペプチドを含み、前記第一及び第二のインスリンポリペプチドは各々独立して、下記i)及びii)から成る群から選択されるインスリンポリペプチドを含み、
i）鎖間ジスルフィド結合を介して連結されているA鎖及びB鎖を含む二鎖ヘテロ二重体、ii）A鎖、B鎖及び連結部分を含む単鎖インスリンポリペプチドであって、前記連結部分の第一の末端がB鎖のカルボキシ末端と共有結合しており、前記連結部分の第二の末端がA鎖のアミノ末端と共有結合している前記ポリペプチド、
前記A鎖はGIVX4X5CCX8X9X10CX12LX14X15LEX18X19CX21-R13（配列番号：70）の配列を含み、
前記B鎖はX25LCGX29X30LVX33X34LYLVCGX41X42GFX45（配列番号：44）の配列を含み、
X4はグルタミン酸又はアスパラギン酸であり、
X5はグルタミン酸又はグルタミンであり、
X8はスレオニン、ヒスチジン又はフェニルアラニンであり、
X9はセリン、アルギニン、オルニチン又はアラニンあり、
X10はセリン又はイソロイシンであり、
X12はセリン又はアスパラギン酸であり、
X14はアルギニン、チロシン、オルニチン又はアラニンであり、
X15はグルタミン、アルギニン、アラニン、オルニチン又はロイシンであり、
X18はメチオニン、アスパラギン又はスレオニンであり、
X19はチロシン、4-メトキシ-フェニルアラニン又は4-アミノフェニルアラニンであり、
X21はアラニン、グリシン又はアスパラギンであり、
X25はヒスチジン又はスレオニンであり、
X29アラニン、グリシン又はセリンであり、
X30はヒスチジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ホモシステイン酸又はシステイン酸であり、
X33はアスパラギン酸又はグルタミン酸であり、
X34はアラニン又はスレオニンであり、
X41はアスパラギン酸又はグルタミン酸であり、
X42はアラニン、オルニチン又はアルギニンであり、
X45はチロシン又はフェニルアラニンであり、及び、
R13はCOOH又はCONH2であり、且つ、
a）第一及び第二のインスリンポリペプチドは、第一及び第二のインスリンポリペプチドそれぞれのB29位アミノ酸の側鎖を介して互いに連結されているか、
b）前記第一及び第二のインスリンポリペプチドの少なくとも一方は単鎖インスリンポリペプチドであり、該第一及び第二のインスリンポリペプチドは、前記第一及び第二のインスリンポリペプチドの一方のB1位アミノ酸の側鎖と前記連結部分のアミノ酸の側鎖とを介して互いに連結されているか、又は
c）第一及び第二のインスリンポリペプチドがともに単鎖インスリンポリペプチドであり、該第一及び第二のインスリンポリペプチドは、第一及び第二のインスリンポリペプチドそれぞれの連結部分のアミノ酸の側鎖を介して互いに連結されている、前記方法。
〔７〕該単鎖インスリンアナローグの連結部分が、GYGSSSRX68APQT（配列番号：9）、SRVSRX68SR（配列番号：98）、X51X52GSSSX57X58APQT（配列番号：16）、(SSSSX59APPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQX60)n（配列番号：18）、MGSSSSX59APPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQEEEEEX60（配列番号：19）及びW2-Z2-Y2から成る群から選択され、
W2はPEG6、PEG7又はPEG8であり、
Y2はPEG4、PEG5又はPEG6であり、且つ
Z2はリジン、システイン、又は下記構造Iの側鎖を含むアミノ酸であり、
2015532283.tif 000028
nは1、2又は3から成る群から選択される整数であり、
X51はグリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン及びプロリンから成る群から選択され、
X52はアラニン、チロシン、バリン、ロイシン、イソロイシン又はプロリンであり、
X57及びX58は独立して、アルギニン、リジン、システイン、ホモシステイン、アセチルフェニルアラニン又はオルニチンであり、
X59及びX60は独立してアルギニン又はリジンであり、且つ
X68は、アルギニン、システイン、又は下記構造Iの側鎖を含むアミノ酸であり、
2015532283.tif 000029
mは1−4〜選択される整数である、
前記〔6〕に記載の方法。
〔８〕該第一及び第二のインスリンポリペプチドの連結部分が独立して、SRVSRX68SR（配列番号：98）、GYGSSSRKAPQT（配列番号：21）、GYGSSSRX68APQT（配列番号：9）及びPEG8-X68-PEG4から成る群から選択され、
X68が下記構造Iの側鎖を含むアミノ酸であり、
2015532283.tif 000030
mが4である、
前記〔6〕又は〔7〕に記載の方法。
〔９〕該第一のインスリンポリペプチドが第一の連結部分を含む単鎖インスリンポリペプチドであり、第一及び第二のインスリンポリペプチドが、第二のインスリンポリペプチドのN-末端アミン又はB1位アミノ酸の側鎖と前記第一の連結部分のアミノ酸の側鎖とを介して互いに連結されている、前記〔6〕〜〔8〕のいずれか1項に記載の方法。
〔１０〕該第二のインスリンポリペプチドが、鎖間ジスルフィド結合を介して連結されているA鎖及びB鎖を含む二鎖ヘテロ二重体であり、該第一のインスリンポリペプチドが、A鎖、B鎖及び連結部分を含む単鎖インスリンポリペプチドであり、該連結部分がPEG8-X68-PEG4又はGYGSSSRX68APQT（配列番号：9）であり、X68が下記構造IIの側鎖を含むアミノ酸であり、
2015532283.tif 000031
且つ、
前記第一及び第二のインスリンポリペプチドが、第二のインスリンポリペプチドのN-末端アミン又はB1位アミノ酸の側鎖と第一のインスリンポリペプチドの連結部分に存在する構造IIの側鎖を含むアミノ酸とを介して互いに連結されている、前記〔6〕〜〔8〕のいずれか1項に記載の方法。
〔１１〕該第一及び第二のインスリンポリペプチドが、GIVEQCCTSICSLYQLENYCN（配列番号：1）、GIVDECCFRSCDLRRLENYCN（配列番号：11）、GIVDECCFRSCDLRRLEMYCA（配列番号：5）及びGIVEECCFRSCDLALLETYCA（配列番号：7）から成る群から独立して選択されるA鎖、並びにFVNQHLCGSHLVEALYLVCGERGFFYTPKT（配列番号：2）、FVNQHLCGSHLVEALYLVCGERGFF（配列番号：23）、GPETLCGAELVDALYLVCGDRGFY（配列番号：77）、CGPEHLCGAELVDALYLVCGDRGFYFNPK（配列番号：78）、GPETLCGAELVDALYLVCGDRGFYFNKPT（配列番号：79）及びAYRPSETLCGGELVDTLYLVCGDRGFYFSRPA（配列番号：80）から成る群から独立して選択されるB鎖を含む、前記〔6〕〜〔10〕のいずれか1項に記載の方法。
〔１２〕該第一及び第二のインスリンポリペプチドが各々単鎖インスリンポリペプチドであり、
該第一のインスリンポリペプチドが、GIVEQCCTSICSLYQLENYCN（配列番号：1）のA鎖配列、FVNQHLCGSHLVEALYLVCGERGFF（配列番号：23）のB鎖配列、並びにPEG8-X68-PEG4及びGYGSSSRX68APQT（配列番号：9）から成る群から選択される配列を含む第一の連結部分を含み、
該第二のインスリンポリペプチドが、GIVEECCFRSCDLALLETYCA（配列番号：7）、TPAX75SEGIVEECCFRSCDLALLETYCA（配列番号：88）又はGIVDECCFRSCDLRRLEMYCA（配列番号：5）のA鎖配列、AYRPSETLCGGELVDTLQFVCGDRGFYFSRPA（配列番号：87）又はGPETLCGAELVDALQFVCGDRGFYFNKPT（配列番号：10）のB鎖配列、並びにPEG8-X68-PEG4及びGYGSSSRX68APQT（配列番号：9）から成る群から選択される配列を含む第二の連結部分を含み、
X68はアルギニン又は下記構造Iの側鎖を含むアミノ酸であり、
2015532283.tif 000032
X75はリジン又はアルギニンであり、さらに、
該第一及び第二のインスリンポリペプチドは、前記第一又は第二のインスリンポリペプチドの一方のN末端アミン又はB1位アミノ酸の側鎖と他方のインスリンポリペプチドの連結部分のリジン側鎖とを介して互いに連結されている、前記〔6〕に記載の方法。
〔１３〕第一のインスリンポリペプチド及び第二のインスリンポリペプチドを含むインスリンアナローグダイマーであって、
前記第一のインスリンポリペプチドは単鎖インスリンポリペプチドであり、GIVX4X5CCX8X9X10CX12LX14X15LEX18X19CX21-R13（配列番号：70）の第一のA鎖配列、X25LCGX29X30LVX33X34LYLVCGX41X42GFX45（配列番号：44）の第一のB鎖配列及び第一の連結部分を含み、前記第一の連結ペプチドの第一の末端は第一のB鎖のカルボキシ末端と共有結合しており、前記第一の連結部分の第二の末端は第一のA鎖のアミノ末端と共有結合しており、
前記第二のインスリンポリペプチドは単鎖インスリン又は二鎖インスリンであって、GIVX4X5CCX8X9X10CX12LX14X15LEX18X19CX21-R13（配列番号：70）の第二のA鎖配列及びX25LCGX29X30LVX33X34LYLVCGX41X42GFX45（配列番号：44）の第二のB鎖配列を含むが、ただし前記第二のインスリンポリペプチドが単鎖インスリンであるときは、前記第二のインスリンポリペプチドはさらに第二の連結部分を含むことを条件とし、ここで前記第二の連結部分の第一の末端は該B鎖のカルボキシ末端と共有結合しており、前記第二の連結部分の第二の末端は該A鎖のアミノ末端と共有結合しており、
前記第一及び第二のインスリンポリペプチドは、前記第一の連結部分の8位アミノ酸の側鎖を、a）第二のインスリンポリペプチドのアミノ末端、又はb）第二の連結部分の8位アミノ酸の側鎖と共有結合により連結する結合又は二官能性連結部分を介して互いに連結されており、
X4はグルタミン酸又はアスパラギン酸であり、
X5はグルタミン酸又はグルタミンであり、
X8はスレオニン、ヒスチジン又はフェニルアラニンであり、
X9はセリン、アルギニン、オルニチン又はアラニンあり、
X10はセリン又はイソロイシンであり、
X12はセリン又はアスパラギン酸であり、
X14はアルギニン、チロシン、オルニチン又はアラニンであり、
X15はグルタミン、アルギニン、アラニン、オルニチン又はロイシンであり、
X18はメチオニン、アスパラギン又はスレオニンであり、
X19はチロシン、4-メトキシ-フェニルアラニン又は4-アミノフェニルアラニンであり、
X21はアラニン、グリシン又はアスパラギンであり、
X25はヒスチジン又はスレオニンであり、
X29アラニン、グリシン又はセリンであり、
X30はヒスチジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ホモシステイン酸又はシステイン酸であり、
X33はアスパラギン酸又はグルタミン酸であり、
X34はアラニン又はスレオニンであり、
X41はアスパラギン酸又はグルタミン酸であり、
X42はアラニン、オルニチン又はアルギニンであり、
X45はチロシン又はフェニルアラニンであり、且つ
R13はCOOH又はCONH2であり、さらに、
前記ダイマーが、自然のままのインスリンと比較して60％以下の最大用量応答を示す、前記インスリンアナローグダイマー。
〔１４〕前記第一及び場合によって第二の連結部分が独立して、GYGSSSRX68APQT（配列番号：9）、SRVSRX68SR（配列番号：98）、X51X52GSSSX57X58APQT（配列番号：16）、(SSSSX59APPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQX60)n（配列番号：18）、MGSSSSX59APPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQEEEEEX60（配列番号：19）及びW2-Z2-Y2から成る群から選択され、
W2はPEG6、PEG7又はPEG8であり、
Y2はPEG4、PEG5又はPEG6であり、且つ
Z2はリジン、システイン、又は下記構造Iの側鎖を含むアミノ酸であり
2015532283.tif 000033
nは1、2又は3から成る群から選択される整数であり、
X51はグリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン及びプロリンから成る群から選択され、
X52はアラニン、チロシン、バリン、ロイシン、イソロイシン又はプロリンであり、
X57及びX58は独立して、アルギニン、リジン、システイン、ホモシステイン、アセチルフェニルアラニン又はオルニチンであり、
X59及びX60は独立してアルギニン又はリジンであり、且つ
X68はシステイン又は下記構造Iの側鎖を含むアミノ酸であり、
2015532283.tif 000034
mは1〜4から選択される整数である、
前記〔13〕に記載のインスリンアナローグダイマー。
〔１５〕前記第一及び場合によって第二の連結部分が独立して、配列GYGSSSRKAPQT（配列番号：21）、GYGSSSRX68APQT（配列番号：9）、SRVSRX68SR（配列番号：98）又はPEG8-X68-PEG4から成り、mが4である、前記〔13〕に記載のインスリンアナローグダイマー。
〔１６〕該第二のインスリンポリペプチドが二鎖インスリンであり、前記第一及び第二のインスリンポリペプチドが、第一の連結ペプチドの8位アミノ酸のアミノ酸側鎖を、第二のインスリンポリペプチドのB鎖のN-末端アルファアミンに共有結合により連結する結合又は二官能性連結部分を介して互いに共有結合されている、前記〔13〕〜〔15〕のいずれか1項に記載のインスリンアナローグダイマー。
〔１７〕該第二のインスリンポリペプチドが単鎖インスリンであり、前記第一及び第二のインスリンポリペプチドが、前記第一の連結ペプチドの8位アミノ酸のアミノ酸側鎖を、前記第二の連結ペプチドの8位アミノ酸の側鎖に共有結合により連結する結合又は二官能性連結部分を介して互いに共有結合されている、前記〔15〕に記載のインスリンアナローグダイマー。
〔１８〕該第一の連結部分がPEG8-X68-PEG4又は配列GYGSSSRX68APQT（配列番号：9）から成り、
X68は下記構造Iの側鎖を有するアミノ酸であり、
2015532283.tif 000035
mは1〜4から選択される整数であり、且つ、第一及び第二のインスリンポリペプチドが、下記構造Iの側鎖を有する第一の連結部分のアミノ酸の側鎖と、
2015532283.tif 000036
第二のインスリンポリペプチドのN-末端に付加されるシステインの側鎖との間でジスルフィド結合を介して互いに共有結合されている、前記〔15〕に記載のインスリンアナローグダイマー。
〔１９〕該第一及び第二のインスリンポリペプチドが同じ配列を有する、前記〔13〕〜〔18〕のいずれか1項に記載のインスリンアナローグダイマー。
〔２０〕該第一のインスリンポリペプチドが自然のままのヒトインスリンA及びB鎖を含み、該第二のインスリンポリペプチドがIGF-2 A及びB鎖を含む、前記〔13〕〜〔18〕のいずれか1項に記載のインスリンアナローグダイマー。
〔２１〕該第一及び第二のインスリンポリペプチドが各々単鎖インスリンポリペプチドであり、
該第一のインスリンポリペプチドが、GIVEQCCTSICSLYQLENYCN（配列番号：1）のA鎖配列、FVNQHLCGSHLVEALYLVCGERGFF（配列番号：23）のB鎖配列、並びにPEG8-X68-PEG4及びGYGSSSRX68APQT（配列番号：9）から成る群から選択される配列を含む第一の連結部分を含み、且つ
該第二のポリペプチドが、TPAX75SEGIVEECCFRSCDLALLETYCA（配列番号：88）のA鎖配列、AYRPSETLCGGELVDTLQFVCGDRGFYFSRPA（配列番号：87）のB鎖配列、並びにPEG8-X68-PEG4及びGYGSSSRX68APQT（配列番号：9）から成る群から選択される配列を含む第二の連結部分を含み、
X68はアルギニン又は下記構造Iの側鎖を含むアミノ酸であり、
2015532283.tif 000037
X75はリジン又はアルギニンであり、さらに、
第一及び第二のインスリンポリペプチドは、前記第一又は第二のインスリンポリペプチドの一方のB鎖のN末端アミン又はB1位アミノ酸の側鎖と他方のインスリンポリペプチドの連結部分のリジン側鎖とを介して互いに連結されている、
前記〔20〕に記載のインスリンアナローグダイマー。
〔２２〕該第一及び第二のインスリンポリペプチドが、GIVDECCX8X9SCDLRRLEX18YCX21-R13（配列番号：81）のA鎖配列及びX25LCGAELVDALYLVCGDX42GFY（配列番号：82）のB鎖配列を含み、
X8はヒスチジン又はフェニルアラニンであり、
X9はアルギニン、オルニチン又はアラニンであり、
X18はメチオニン、アスパラギンであり、
X21はアラニン又はアスパラギンであり、
X25はヒスチジン又はスレオニンであり、
X42はアラニン、オルニチン及びアルギニンから成る群から選択され、且つ
R13はCOOHである、
前記〔13〕〜〔20〕のいずれか1項に記載のインスリンアナローグダイマー。
〔２３〕該第一及び第二のインスリンポリペプチドが、GIVEQCCTSICSLYQLENYCN（配列番号：1）、GIVDECCFRSCDLRRLEMYCA（配列番号：5）及びGIVEECCFRSCDLALLETYCA（配列番号：7）から成る群から独立して選択されるA鎖、並びにFVNQHLCGSHLVEALYLVCGERGFFYTPKT（配列番号：2）、GPETLCGAELVDALYLVCGDRGFY（配列番号：77）、GPETLCGAELVDALYLVCGDRGFYFNKPT（配列番号：）及びAYRPSETLCGGELVDTLYLVCGDRGFYFSRPA（配列番号：80）から成る群から独立して選択されるB鎖を含む、前記〔22〕に記載のインスリンアナローグダイマー。
〔２４〕X8がフェニルアラニンであり、X9がアルギニンあり、X18及びX21がともにアスパラギンであり、X25がヒスチジンであり、且つ、X42がアルギニンである、前記〔22〕に記載のインスリンアナローグダイマー。
〔２５〕前記第一及び第二のインスリンポリペプチドのA鎖がGIVDECCX8RSCDLRRLENYCN（配列番号：83）及びGIVEQCCTSICSLYQLENYCN（配列番号：1）から独立して選択される配列を含み、前記第一及び第二のインスリンポリペプチドのB鎖がGPETLCGAELVDALYLVCGDRGFY（配列番号：77）、HLCGAELVDALYLVCGDRGFY（配列番号：84）及びHLCGSHLVEALYLVCGERGFF（配列番号：85）から独立して選択される配列を含み、X8がヒスチジン又はフェニルアラニンである、前記〔13〕〜〔20〕のいずれか1項に記載のインスリンアナローグダイマー。
〔２６〕親水性部分が、該連結部分のアミノ酸と、又はA鎖のA9、A14及びA15から成る群から選択される位置又はB鎖のB1、B2、B10、B22、B28若しくはB29位のアミノ酸で共有結合により連結されている、前記〔1〕〜〔4〕及び〔13〕〜〔25〕のいずれか1項に記載のインスリンアナローグダイマー。
〔２７〕該親水性部分がポリエチレングリコール鎖である、前記〔26〕に記載のインスリンアナローグダイマー。
〔２８〕下記式Xの構造のジペプチド成分をさらに含む、前記〔1〕〜〔4〕及び〔13〕〜〔27〕のいずれか1項に記載のインスリンアナローグダイマーであって、
2015532283.tif 000038
前記ジペプチド成分は、該ジペプチド成分と第一又は第二のインスリンポリペプチドのアミンとの間で形成されるアミド結合を介して前記インスリンアナローグダイマーに連結されており、
R1、R2、R4及びR8は、H、C1-C18アルキル、C2-C18アルケニル、(C1-C18アルキル)OH、(C1-C18アルキル)SH、(C2-C3アルキル)SCH3、(C1-C4アルキル)CONH2、(C1-C4アルキル)COOH、(C1-C4アルキル)NH2、(C1-C4アルキル)NHC(NH2+)NH2、(C0-C4アルキル)(C3-C6シクロアルキル)、(C0-C4アルキル)(C2-C5複素環)、(C0-C4アルキル)(C6-C10アリール)R7、(C1-C4アルキル)(C3-C9ヘテロアリール)、及びC1-C12アルキル(W1)C1-C12アルキルから成る群から独立して選択され、W1はN、S及びOから成る群から選択されるヘテロ原子であり、又は
R1及びR2は、それらが結合する原子と一緒にC3-C12シクロアルキル又はアリールを形成しているか、若しくは
R4及びR8はそれらが結合する原子と一緒にC3-C6シクロアルキルを形成しており、
R3は、C1-C18アルキル、(C1-C18アルキル)OH、(C1-C18アルキル)NH2、(C1-C18アルキル)SH、(C0-C4アルキル)(C3-C6)シクロアルキル、(C0-C4アルキル)(C2-C5複素環)、(C0-C4アルキル)(C6-C10アリール)R7、及び(C1-C4アルキル)(C3-C9ヘテロアリール) から成る群から選択されるか、又はR4及びR3はそれらが結合する原子と一緒に4、5又は6員複素環式環を形成しており、
R5はNHR6又はOHであり、
R6はH、C1-C8アルキルであるか、又はR6及びR1はそれらが結合する原子と一緒に4、5又は6員複素環式環を形成しており、且つ
R7は、H、OH、C1-C18アルキル、C2-C18アルケニル、(C0-C4アルキル)CONH2、(C0-C4アルキル)COOH、(C0-C4アルキル)NH2、(C0-C4アルキル)OH、及びハロから成る群から選択される、
前記インスリンアナローグダイマー。
〔２９〕R1及びR2が独立してC1-C18アルキル又はアリールであり、
R3はC1-C18アルキルであるか、又はR3及びR4はそれらが結合する原子と一緒に4〜12複素環式環を形成しており、
R4及びR8は水素、C1-C18アルキル及びアリールから成る群から独立して選択され、且つ
R5はアミン又はヒドロキシルである、
前記〔28〕に記載のインスリンアナローグダイマー。
〔３０〕R1及びR2が水素、C1-C8アルキル及びアリールから成る群から独立して選択され、
R3はC1-C18アルキルであるか、又はR3及びR4はそれらが結合する原子と一緒に4〜6複素環式環を形成しており、
R4及びR8は各々水素であり、且つ
R5は、アミン、N-置換アミン及びヒドロキシルから成る群から選択される、
前記〔28〕に記載のインスリンアナローグダイマー。
〔３１〕該ジペプチド成分のアミノ酸に連結されたデポーポリマーをさらに含む、前記〔28〕に記載のインスリンアナローグダイマー。
〔３２〕第一又は第二のインスリンポリペプチドのアミノ酸側鎖が、アルキルアミン、アミド、エーテル、エステル、チオエーテル、又はチオエステル結合によりアシル基又はアルキル基に共有結合により付着しており、前記アシル基又はアルキル基は天然に存在するアミノ酸にとって本来のものではない、前記〔1〕〜〔4〕及び〔8〕〜〔26〕のいずれか1項に記載のインスリンアナローグダイマー。
〔３３〕ジペプチド成分を構成するアミノ酸の一つのアミノ酸側鎖が、アルキルアミン、アミド、エーテル、エステル、チオエーエル、又はチオエステル結合によりアシル基又はアルキル基に共有結合により付着しており、前記アシル基又はアルキル基は天然に存在するアミノ酸にとって本来のものではない、前記〔28〕〜〔30〕のいずれか1項に記載のインスリンアナローグダイマー。
〔３４〕前記ダイマーが、B鎖のN-末端アルファアミン、A14、A15、B1、B2、B10、B22、B28、B29位アミノ酸の側鎖、アミノ酸の側鎖、又は連結部分のアミノ酸の側鎖から選択される1つ以上の位置でアシル化されている、前記〔32〕に記載のインスリンアナローグダイマー。
〔３５〕前記〔1〕〜〔4〕又は〔13〕〜〔34〕のいずれか1項に記載のインスリンアナローグダイマー及び医薬的に許容できる担体を含む、医薬組成物。
〔３６〕糖尿病を治療する方法であって、前記方法が前記〔35〕に記載の医薬組成物の有効量を投与する工程を含む、前記方法。
〔３７〕高血糖治療用医薬の製造における、前記〔1〕〜〔4〕又は〔13〕〜〔34〕のいずれか1項に記載の化合物の使用。
〔３８〕糖尿病を治療するための、前記〔1〕〜〔4〕又は〔13〕〜〔34〕のいずれか1項に記載の化合物の使用。