(57)【要約】【課題】アレルギー性状態および／または過敏症状態に作用する医薬の製造における薬剤の使用を提供すること。【解決手段】本発明の薬剤は、ガングリオシド関連活性を調節し得る。この薬剤は、抗原に結合されない。ガングリオシド関連活性の調節は、アレルギー性状態および／または過敏症状態に作用する。ここで、この調節は、以下：（ｉ）抗原特異的ＩｇＥレベル；ならびに／または（ｉｉ）抗原特異的Ｔ細胞反応性；ならびに／または（ｉｉｉ）ＩｇＧおよび／もしくはＩｇＡレベルにおける変化により特徴付けられる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
本願明細書に記載の発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医薬に関する。
【０００２】
詳細には、本発明は、アレルギー性状態および／または過敏症状態に作用する
に有用な医薬に関する。
【０００３】
より詳細には、１つの局面において、本発明は免疫学的寛容の誘導剤に関する
。
【０００４】
より詳細には、本発明は、哺乳動物、特にヒトのアレルギー性疾患および他の
過敏症疾患の処置における使用のための特定の抗原と、必要に応じて同時投与さ
れるような薬剤に関する。
【背景技術】
【０００５】
適応性免疫応答が過度または不適切な形態で生じる場合に、用語アレルギー性
または過敏症が適用される。アレルギー性反応または過敏症反応は、外来抗原（
通常は、環境性の高分子）に対して不適切に作用する、通常は有益な免疫応答の
結果であり、そして時折、炎症性応答および組織損傷を生じる。これら状況にお
いて、通常は無害の環境性刺激物（「アレルゲン」と呼ばれる）は、再曝露の際
に、病理学的損傷を生成するように再活性化される免疫応答を誘発する。アレル
ギーまたは過敏症は、４つの反応型に分類される。最初の３つは抗体に媒介され
、４つ目はＴ細胞およびマクロファージによって主に媒介される。
【０００６】
Ｉ型即時型過敏／アトピー性アレルギーにおいて、アレルゲンに対する主要な
免疫応答はＩｇＥ抗体の産生を含む。このような障害はヒトにおいて断然広まっ
ており、そして新しい治療的アプローチについての主要な標的として考えられる
。これらの疾患は、排他的にＩｇＥに媒介されないが、ＩｇＥは肥満細胞および
好塩基球のような組織内の細胞に結合し、そしてアレルゲンによる細胞表面上の
ＩｇＥの架橋が、多くの炎症性メディエータの放出を誘起する。そのような疾患
の代表的な例としては、喘息、アレルギー性の咳、アレルギー性鼻炎および結膜
炎、アトピー性湿疹および皮膚炎、じんま疹（ｕｒｔｉｃａｒｉａ）、じんま疹
（ｈｉｖｅｓ）、虫刺されアレルギー、食事性および特定の薬物のアレルギーが
挙げられる。多くの場合、個々のアレルゲンが公知である。例として、喘息にお
ける主要アレルゲンはヒョウヒダニ由来のＤｅｒＰ１であるが、ペットの鱗屑（
ｐｅｔ  ｄａｎｄｅｒ）抗原のような喘息の他の誘発物もまた存在する。
【０００７】
ＩＩ型または抗体依存性細胞傷害性過敏症は、異なる型の抗体（通常は、Ｉｇ
ＧおよびＩｇＭ）が、細胞上で自己抗原または外来抗原のいずれかと結合した場
合に生じ、そして食作用、キラー細胞の活性化、または補体に媒介される細胞溶
解へと導く。これらのアレルギーの型は比較的珍しいものであるが、薬物に対す
るいくつかのアレルギーを含み得る。
【０００８】
ＩＩＩ型過敏症は、免疫複合体が多量に形成される場合、または細網内皮系に
よって適切に一掃され得ない場合に発達する。免疫複合体は通常、これらの部位
での抗体（通常は、ＩｇＭまたはＩｇＧ）とアレルゲンの複合体の沈着物から生
じる。通常の環境下では、抗体はアレルゲンに結合し、そして種々の組織細胞に
よって一掃される。しかし、多くの因子が免疫複合体の存続に影響し得る。そして免疫複合体が血液中に長期間残存する場合、それらは腎臓、皮膚（ここでそれ
らは、発疹を生じる）および関節（ここでそれらは慢性関節リウマチ以外の型の
関節炎を生じ得る）において収容ならびに炎症を樹立し得る。
【０００９】
ＩＶ型または遅延型過敏症（ＤＴＨ）は抗体に関与しないが、代わりにＴリン
パ球の長期活性化に関する。これらのＴ細胞は、組織損傷を生じ、そして組織へ
の他の細胞型の漸増および活性化を増強する可溶性因子を分泌し得る。侵入して
きた細胞自体は、炎症および組織損傷の一因となる。ＤＴＨは、抗原（例えば、
マイコバクテリア結核に関連する抗原）がマクロファージに捕捉され、そして一
掃され得ない場合に、最も重大に著しい。次いで、Ｔ細胞は、ある範囲の炎症性
応答を媒介するサイトカインを合成するよう刺激される。ＤＴＨ反応は、Ｉ型応
答よりも一般的ではないが、移植拒絶およびアレルギー性接触皮膚炎（これは一
般に、環境性の「接触性アレルゲン」（例えば、重金属）に対する接触過敏症（
通常、皮膚発疹を含むアレルギー）として明らかにされてる）において見られる
。
【００１０】
抗原（例えば、アレルゲンおよび自己抗原）の経口投与は、末梢性Ｔ細胞応答
を予防するための方法として長い間認識され、そして自己抗原の場合、いくつか
の実験的自己免疫疾患（実験的アレルギー性脳脊髄炎（ＥＡＥ）を含む）の発症
を予防または遅延することも示されている。そのようなストラテジーで認められ
る主要な問題は、大用量ではなくても、多用量の自己抗原の摂取を通常必要とす
ること、および免疫においてネイティブの宿主とは対照的に一般的にあまり効率
的ではないことである。後者の問題は、このストラテジーの治療的可能性を制限
してきた。しかし現在、Ｓｕｎら（１９９４  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  
Ｓｃｉ  ９１：１０７９５−１０７９９）によって、コレラ毒素Ｂサブユニット
（ＣｔｘＢ）、コレラ毒素の非毒性レセプター結合部分に結合された、微量の基
本型微粒子および可溶性タンパク質抗原の経口投与は、末梢Ｔ細胞画分における
寛容を容易に誘導し得、そしてネイティブのみならず全身的に感作された動物に
おいてもまた効果的であることが示されている。さらに、ＣｔｘＢに結合された
微量の自己抗原、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）の経口投与は、Ｌｅｗｉ
ｓラットにおいてＥＡＥを予防し得る（Ｓｕｎら、１９９６  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔ
ｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ９３：７１９６−７２０１）。他の研究者らもまた、コ
レラ毒素のレセプター結合非毒性Ｂサブユニット部分（ＣｔｘＢ）に接合した単
回用量の微量（マイクログラム）の抗原ですら摂食することは、ネイティブなら
びに実験動物において、全身性Ｔ細胞媒介炎症性反応を著しく抑制し得ることを
示している（Ｂｅｒｇｅｒｏｔら  １９９７  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  
Ｓｃｉ  ９４：４６１０−４６１４）。
【００１１】
Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ（Ｅ．ｃｏｌｉ）の熱不安定性エンテロト
キシン（Ｅｔｘ）、およびそれの密接に関連したホモログであるコレラ毒素（Ｃ
ｔｘ）は、宿主細胞表面上の糖脂質レセプターに結合するタンパク質毒素の例で
ある。各毒素は、６つの非共有結合的に連結されたペプチド鎖からなり、これは
単一のＡサブユニット（２７ｋＤ）および５つの同一なＢサブユニット（１１．
６ｋＤ）（これは、哺乳動物細胞の表面上に見出されるＧＭ１ガングリオシドレ
セプターに主に結合する）からなる（Ｎａｓｈａｒら、１９９６  Ｐｒｏｃ  Ｎ
ａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ９３：２２６−２３０）。Ａサブユニットは、アデ
ノシン二リン酸（ＡＤＰ）ＡＤＰ−リボシルトランスフェラーゼ活性を保有する
毒性を担い、一方でＢサブユニット（ＥｔｘＢおよびＣｔｘＢ）は、ＧＭ１と呼
ばれる偏在的な細胞表面糖脂質ガングリオシドを結合および架橋し、従って、Ａ
サブユニットの細胞内への侵入が促進する、非毒性オリゴマーである。
【００１２】
ＧＭ１ガングリオシドレセプターは、疎水性部分、セラミド、親水性部分（す
なわち、オリゴ糖鎖）によって形成される、糖脂質（グリコスフィンゴリピドと
も呼ばれる）を含有するシアル酸を含むガングリオシドファミリーのメンバーで
ある。ガングリオシドは、他の糖残基に加えて、１つ以上のシアル残基を保有す
る任意のセラミドオリゴ糖として規定される（Ｏｘｆｏｒｄ  Ｄｉｃｔｉｏｎａ
ｒｙ  ｏｆ  ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｂｉｏ
ｌｏｇｙ．Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ．１９９７、Ｓｍ
ｉｔｈ  ＡＤ、Ｄａｔｔａ  ＳＰ、Ｈｏｗａｒｄ  Ｓｍｉｔｈ  Ｇ、Ｃａｍｐｂ
ｅｌｌ  ＰＮ、Ｂｅｎｔｌｅｙ  ＲおよびＭｃＫｅｎｚｉｅ  ＨＡ編）。最初は
神経組織において記載されたが、いくつかの研究は、ガングリオシドが全ての脊
椎組織において発現されるほぼ偏在的な分子であることを示している。細胞内に
おいて、ガングリオシドは通常は原形質膜に結合し、ここで種々の分子について
のレセプターとして作用し得、そして細胞と細胞の相互作用およびシグナル伝達
に関与する。さらに、ガングリオシドは、いくつかの内分泌細胞（例えば、膵島
および副腎髄質）の分泌性顆粒の膜のようなサイトゾル膜において発現される。
【００１３】
ガングリオシドは、そのオリゴ糖の頭部基において、ガングリオシドの極性頭
部に、ｐＨ７．０で正味の負電荷を提供するシアル酸の１つ以上の残基を含む。
ヒトガングリオシドにおいて通常見出されるシアル酸は、Ｎ−アセチルノイラミ
ン酸である。２０を超える異なる型のガングリオシドが同定されている。これら
はヘキソースおよびシアル残基の数ならびに相対的位置において異なっており、
この差異がそれらの分類の基本を形成している。公知のガングリオシドのほとん
ど全ては、セラミドとのグリコシド結合においてグルコース残基を有し、Ｄ−ガ
ラクトースおよびＮ−アセチル−Ｄ−ガラクトサミンの残基もまた存在する。
【００１４】
Ｓｖｅｎｎｅｒｈｏｌｍにより考案された、ガングリオシドのガングリオシド
命名法において（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ、第２版、１
９７５  Ｗｏｒｔｈ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ  Ｉｎｃ  第２９４〜２９５頁）、
下付きの文字は、シアル基の数を示す。Ｍはモノシアロであり、Ｄはジシアロで
あり、Ｔはトリシアロである。
【００１５】
ガングリオシドファミリーの最も研究されたメンバーのうちの１つが、モノシ
アロシルガングリオシドのＧＭ１であり、これはコレラ毒素についての天然のレ
セプターであることが示されている。可溶性ガングリオシドＧＭ１は、高親和性
で毒素に結合し、そしてそれを不活性化する（Ｓｖｅｎｎｅｒｈｏｌｍ  １９７
６  Ａｄｖ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  Ｂｉｏｌ  ７１：１９１−２０４）。
【００１６】
ＧＭ１についての化学式は、以下のように表され得る：
Ｇａｌβ３ＧａｌＮＡｃβ４（ＮｅｕＡｃα３）Ｇａｌβ４Ｇｌｃβ１Ｃｅ
ｒ
ここで、ＧｌｕはＤ−グルコース、ＧａｌはＤ−ガラクトース、ＧａｌＮＡｃは
Ｎ−アセチル−Ｄ−ガラクトサミン；ＮｅｕＡｃはＮ−アセチルノイラミン酸、
Ｃｅｒはセラミドである。
【００１７】
ＧＭ１についての化学式は、以下のようにもまた表され得る；
ガラクトシル−Ｎ−アセチルガラクトサミニル｛シアロシル｝ラクトシルセ
ラミド、
または
ガラクトシル−Ｎ−アセチル−ガラクトサミニル−（シアリル）−ガラクトシルグルコシル（ｇｌｕｓｏｓｙｌ）セラミド。
【００１８】
ラクトースに結合したＥｘｔのＸ線結晶構造（Ｓｉｘｍａら、１９９２  Ｎａ
ｔｕｒｅ（Ｌｏｎｄｏｎ）３５５：５６１−５６４）およびＧＭ１の五糖に結合
したＣｔｘＢのＸ線結晶構造（Ｍｅｒｒｉｔｔら、１９９４  Ｐｒｏｔｅｉｎ  
Ｓｃｉ  ３：１６６−１７５）は、ＣｔｘＢおよびＥｔｘＢが、以下のように表
され得るＧＭ１の末端ガラクトースならびにシアル酸部分に結合すること；
Ｇａｌβ−１−３−３ＧａｌＮＡｃ
そして、そのような結合はＢサブユニットコンフォメーションにおいていかなる
著しい変換も誘導しないことを明らかにした。
【００１９】
さらにコレラ毒素は、第２の内部シアル酸（例えば、ＧＤ１ｂ中）との置換に
対する寛容性と共に、末端ガラクトースおよび内部シアル酸残基（例えば、ＧＭ
１中）についての絶対的要求を示すことが示された。
【００２０】
Ｅｔｘは、Ｃｔｘのようにまた、おそらく末端糖配列：
Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃβ１−４（ＮｅｕＡｃα２−３）Ｇａｌ
に結合する。ここで、ＧａｌＮＡｃはＮ−アセチルガラクトサミンであり、そし
てＮｅｕＡｃはＮ−アセチルノイラミン酸である。
【００２１】
ＧＭ１への結合に加えて、ＥｔｘＢは他のガングリオシド（ＧＭ２およびアシ
アロ−ＧＭ１を含む非ガラクトース、ならびにガラクトタンパク質を含む）に弱
く結合する（Ｎａｓｈａｒら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １９９７  ９１：５７２
−５７８）。他の研究者らは、ＥｘｔＢがＧＭ１に結合し得、そしてＧＭ１の末
端ガラクトースの置換ではなく内部シアル酸残基（それぞれ、アシアロ−ＧＭ１
およびＧＤ１ｂにおけるような）の除去または伸長を許容されることを示した（
ＵｍｅｓａｋｉおよびＳｅｔｏｙａｍａ  １９９２  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ７
５：３８６−３８８）。
【００２２】
Ａサブユニット単独での貧弱な免疫原性とは対照的に、ＥｘｔＢおよびＣｔｘ
Ｂの両方は例外的に強力な免疫原であり、そしてそれらのそれぞれのホロトキシ
ン（ｈｏｌｏｔｏｘｉｎ）、ＥｘｔおよびＣｔｘは、関連のない抗原との組み合
わせにおいて経口的に与えられる場合に、例外的に強力なアジュバントになり得
ることが公知である（Ｒｕｅｄｌら  １９９６  Ｖａｃｃｉｎｅ  １４：７９２
−７９８；Ｎａｓｈａｒら、１９９３  Ｖａｃｃｉｎｅ  １１：２３５；Ｎａｓ
ｈａｒおよびＨｉｒｓｔ  １９９５  Ｖａｃｃｉｎｅ  １３：８０３；Ｅｌｓｏ
ｎおよびＥａｌｄｉｎｇ  １９８４  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １３３；２８９２；
ＬｙｃｋｅおよびＨｏｌｍｇｒｅｎ  １９８６  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ５９：
３０１）。それらの著しい免疫原性のため、ＥｘｔＢおよびＣｔｘＢの両方は、
他のエピトープおよび抗原のキャリアとして使用され（Ｎａｓｈａｒら、１９９
３  同書）、そしてコレラおよびＥ．ｃｏｌｉ性の下痢に対するワクチンの成分
として使用されている（Ｊｅｔｂｏｒｎら、１９９２  Ｖａｃｃｉｎｅ  １０：
１３０）。
【００２３】
ＣｔｘおよびＥｔｘのＢサブユニットが哺乳動物細胞上に存在するレセプター
と相互作用する能力は、それらの細胞の機能に調節的効果を発揮することが示さ
れている。免疫系の細胞が以下のこのような相互作用に示差的に影響されること
は、公知である。特に、ＷＯ  ９５／０２００４５は、ＥｔｘＢが哺乳動物細胞
の表面に見い出されるＧＭ１ガングリシドレセプターに結合すること、ならびに
この結合がＣＤ８＋Ｔ細胞の特異的減損およびＢ細胞の付随する活性化を含む、リンパ球集団への示差的効果を誘導することを開示する。ＧＭ１結合活性が欠損
している変異体ＥｔｘＢタンパク質を使用する場合、これらの効果は存在しない
。これらの観察は、自己免疫疾患の予防および処置、移植拒絶反応、ならびに対
宿主性移植片病（ＧＶＨＤ）において、ＧＭ１と結合し得る薬剤の使用を導いた
。これらの研究は、ＧＭ１に結合する薬剤、またはＧＭ１に結合する擬態物が免
疫学的寛容の誘導を促進することを示唆する。
【００２４】
研究者らは、免疫学的非応答の状態（「免疫学的または経口的寛容」としても
また知られる）は、食物性タンパク質抗原の経口投与によって誘導され得ること
を示した（Ｓｕｎら  １９９４  同書；Ｓｕｎら  １９９６  同書；Ｂｅｒｇｅ
ｒｏｔら  １９９７  同書）。抗原の吸入はまた、特異的な免疫学的非応答また
は「鼻寛容」の状態を誘導し得る。従って、粘膜経路より経口的または鼻的に抗
原が投与される場合、全身的免疫学的寛容が誘導され得る。ＷＯ  ９５／０１３
０１は、特定の寛容原に結合される粘膜結合剤を含む免疫学的寛容誘導剤を開示
する。ＷＯ  ９５／１０３０１はまた、アレルゲンと結合した粘膜結合剤を使用
するアレルギーの処置の言及を含む。Ｔａｍｕｒａら（１９７７  Ｖａｃｃｉｎ
ｅ  １５：２２５−２２９）のような他の研究者は、ＷＯ  ９５／１０３０１の
プロトコルを直接取り入れ、そしてＩ型アレルギーのマウスモデルにおいてアレ
ルギー予防のその効力を試験した。彼らは、効力の強力な予測物質であるＩｇＥ
レベルの有意な低下を報告した。そして、彼らは、卵白アルブミンに結合したＥ
ｔｘＢの投与の後（結果は含まれず）、ＩｇＥレベルが一旦確立されるとＥｔｘ
Ｂが有効でなくなることを示すデータを引用する。それはまた、経口的投与され
るＣｔｘおよびＥｔｘは、胃腸管においてのみならず、遠方の粘膜エフェクター
部位（例えば、気道）においてもまた、いくつかの体液性および細胞性免疫応答
に作用し得ることを示す。これらのデータは、遠くの粘膜組織において局所免疫
応答を改良するために、一般的粘膜免疫系の概念に従って、これらの粘膜アジュ
バントが経口免疫ストラテジーにおける潜在的使用を有することを示唆する（Ｂ
ｉｅｎｅｎｓｔｏｃｋ  Ｊ  １９７４  Ｔｈｅ  ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  
ｔｈｅ  ｌｏｃａｌ  ｉｍｍｕｎｅ  ｓｙｓｔｅｍ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｇａｓｔ
ｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｔｒａｃｔ．：Ｐｒｏｇｒｅｓｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕ
ｎｏｌｏｇｙ  ＩＩ、第４巻：ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｓｐｅｃｔｓ、Ｉ．Ｌ．  
Ｂｒｅｎｔ，Ｊ．Ｈｏｌｂｏｒｒｏｗ編、  Ａｍｓｔｅｒｄａｍ、  Ｎｏｒｔｈ
Ｈｏｌｌａｎｄ、１９７〜２０７頁；Ｒｕｅｄｌら  １９９６  同書；Ｕｍｅ
ｓａｋｉ  １９９２  同書；ＣｚｅｒｋｉｎｓｋｙおよびＨｏｌｍｇｒｅｎ（１
９９４  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ４０：３７−４４））。
【００２５】
免疫学的寛容の誘導は、以下に要約され得る多くの異なる機構を含み得る：
（ｉ）それによって、抗原反応細胞が、それらに自殺（アポトーシス）を引き起
こすことを通じて除去されるプロセス；
（ｉｉ）アレルギーの誘導または抗原反応細胞の長期不活性化；
（ｉｉｉ）病的な応答の発生とは異なる抗原反応細胞の免疫偏向；
（ｉｖ）抗原反応細胞の抑制、または特異的因子もしくは調節細胞によるそれら
の調節。
【００２６】
アレルギーの処置において、任意のこれらの機構の誘導が有用であり得ること
は可能である。しかし、一旦詳細なアレルゲンが公知になると、抗原反応細胞の
欠損および／またはアレルギーの誘導が有用なストラテジーである一方、これら
の機構の発動は、通常、処置様式で与えられたアレルゲンに対して応答するそれ
らの細胞のみを沈黙させる。一方、免疫偏向または抑制ストラテジーの実行は、
条件に関与するが処置の一部ではなかった抗原に対する応答の潜在的な調節の利益を有する。この現象は、「傍観者抑制（ｂｙｓｔａｎｄｅｒ  ｓｕｐｐｒｅｓ
ｓｉｏｎ）」として知られ、非抗原特異的サプレッサー分子の可能な分泌を通じ
て、または抗原特異的細胞と特異的免疫化抗原との間の相互作用の結果としての
、その組織中の抑制性細胞相互作用を通じてのいずれかで、標的組識中の他の抗
原（例えば、アレルゲン）に対する寛容の「広がり」を許容する。このように、
その障害に関与する少なくとも１つの抗原が公知である限り、この条件は、同様
に関係している他の抗原が存在する場合さえも、処置され得る。従って、良好な
治療の目的は、特異的免疫偏向または抑制の誘導である。
【００２７】
Ｎａｓｈａｒおよび共同研究者（Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  １
９９６  ９３：２２３−２２６；Ｉｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９９６  ８：７３
１−７３６；Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９９７  ９１：５７２−５７８）は、ＥｔｘＢ
および他の相同物の投与が  Ｔｈ１サイトカイン（例えば、ＩＦＮγおよびイン
ターロイキン２（ＩＬ−２））の生成から離れて、そしてＴｈ２サイトカイン（
例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−１０およびＩＬ−１３）の分泌に向かう免疫応答を調
節し得る。ＩＦＮγは、古典的なＴｈ１サイトカインであり、ＩＬ−４は、古典
的なＴｈ２サイトカインである。この「免疫偏向」は、ＷＯ  ９７／０２０４５
の開示に基づき、そして自己免疫疾患の処置において有効性を示す。ＷＯ  ９７
／０２０４５の実験結果は、ＧＭ１結合剤がアレルギー性状態および／または過
敏感性状態の処置における使用を見出さないことを示唆する。なぜなら、このよ
うな状態は、一般にＩＬ−４によって促進され、およびＩＦＮγによって下方調
節されるように受容されている産物であるＩｇＥを含むからである。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２８】
本発明はここで、特異的免疫偏向または抑制の誘導を通じてアレルギー性状態
および／または過敏感性状態の新しい処置方法を提供することを探究する。
【課題を解決するための手段】
【００２９】
本発明の第１の局面に従って、アレルギー性状態および／または過敏症状態に
影響を与える医薬の製造における薬剤の使用を提供する；ここで、この薬剤は、
ガングリオシド関連活性を調節し得る；そして、この薬剤は、抗原と結合しない
；そして、このガングリオシド関連活性の調節は、アレルギー性状態および／ま
たは過敏症状態に影響を与える。
【００３０】
本発明の第２の局面に従って、アレルギー性状態および／または過敏症状態に
影響を与える医薬の製造における薬剤の使用を提供する；ここで、この薬剤は、
ＧＭ１関連活性を調節し得る；そして、この薬剤は、抗原と結合しない；そして
、このＧＭ１関連活性の調節は、アレルギー性状態および／または過敏症状態に
影響を与える。
【００３１】
本発明の第３の局面に従って、ＩｇＥ媒介応答をブロックし得る、本発明に従
う薬剤を提供する。
【００３２】
好ましくは、この薬剤は、ＩｇＥ媒介応答をインビボでブロックし得る。
【００３３】
本発明の第４の局面に従って、アレルギー性状態および／または過敏症状態に
影響し得る本発明に従う薬剤を同定するためのアッセイ方法を提供する；ここで
、このアッセイ方法は、以下：（ａ）薬剤をガングリオシドと接触させる工程；
（ｂ）この薬剤がガングリオシド関連活性を調節するかどうかを決定する工程；
その結果、ガングリオシド関連活性の調節は、この薬剤がアレルギー性状態およ
び／または過敏症状態に影響し得ることを示す；そして、この薬剤は、抗原と結
合しない。
【００３４】
本発明の第５の局面に従って、本発明に従うアッセイ方法を提供する。ここで
、このアッセイは、アレルギー性状態および／もしくは過敏症状態の予防ならび
に／または処置において有用な薬剤についてスクリーニングするためのアッセイ
である。
【００３５】
本発明の第６の局面に従って、以下の工程：（ａ）本発明に従ってこのアッセ
イを実施する工程；（ｂ）ガングリオシド関連活性を調節し得る１つ以上の薬剤
を同定する工程；および（ｃ）これらの１つ以上の薬剤の量を調製する工程を包
含するプロセスを提供する。
【００３６】
本発明の第７の局面に従って、以下の工程：（ａ）本発明に従ってこのアッセ
イを実施する工程；（ｂ）ガングリオシド関連活性を調節し得る１つ以上の薬剤
を同定する工程；および（ｃ）これらの１つ以上の同定された薬剤を含む薬学的
組成物を調製する工程を包含するプロセスを提供する。
【００３７】
本発明の第８の局面に従って、以下の工程：（ａ）本発明に従ってこのアッセ
イを実施する工程；（ｂ）ガングリオシド関連活性を調節し得る１つ以上の薬剤
を同定する工程；および（ｃ）ガングリオシド関連活性を調節し得る１つ以上の
同定された薬剤を改変する工程；および（ｄ）これらの１つ以上の改変された薬
剤を含有する薬学的組成物を調製する工程を包含するプロセスを提供する。
【００３８】
本発明の第９の局面に従って、本発明のプロセスにより同定される薬剤を提供
する。
【００３９】
好ましくは、この同定された薬剤は、ガングリオシド関連活性の調節を通じて
アレルギー性状態および／または過敏症状態に影響を与えることが予め公知では
ない。
【００４０】
本発明の第１０の局面に従って、アレルギー性状態および／または過敏症状態
に１つ以上の薬剤を用いて影響を与える方法を提供する；ここで、この薬剤は、
インビトロアッセイ方法においてガングリシド関連活性を調節し得る；そして、
このインビトロアッセイ方法は、本発明中に規定されるアッセイ方法である。
【００４１】
好ましくは、インビボでのアレルギー性状態および／または過敏症状態に１つ
以上の薬剤を用いて影響を与える方法を提供する；ここで、この薬剤は、インビ
トロアッセイ方法においてガングリシド関連活性を調節し得る；そして、このイ
ンビトロアッセイ方法は、本発明中で規定されるアッセイ方法である。
【００４２】
本発明の第１１の局面に従って、医薬品としての使用のために本発明に記載の
薬剤を提供する。
【００４３】
本発明の第１２の局面に従って、アレルギー性状態および／または過敏症状態
に影響を与える医薬の製造において本発明に従う薬剤の使用を提供する。
【００４４】
本発明の第１３の局面に従って、本発明に従う薬剤を含むか、またはこれから
調製される薬学的組成物を提供する。
【００４５】
好ましくは、この薬剤は、ＧＭ１結合剤である。
【００４６】
好ましくは、ガングリオシド関連活性を調節し得る薬剤は、Ｃｔｘ、Ｅｔｘ、
ＣｔｘＢおよびＥｔｘＢからなる群より選択される。
【００４７】
好ましくは、ガングリオシド関連活性を調節し得る薬剤は、アレルギー性状態
および／または過敏症状態を有する被験体においてＩｇＥ媒介応答をブロックし
得る。
【００４８】
好ましくは、この被験体はヒト−例えば、ヒト患者である。
【００４９】
好ましくは、この薬剤は、ＥｔｘＢである。
【００５０】
特定の好ましい実施態様において、この薬剤は、野生型ＥｔｘＢである。
【００５１】
あるいは、好ましくは、この薬剤は、ガングリオシド関連活性を調節し得るＥ
ｔｘＢの変異体、またはそれと等価な他のタンパク質のいずれかである。
【００５２】
好ましくは、この薬剤（単数または複数）は、非毒性である。
【００５３】
好ましくは、この薬剤は、ＣｔｘＢおよびガングリオシド関連活性を調節し得
るその変異体である。
【００５４】
好ましくは、このガングリオシドは、ＧＭ１ガングリオシドレセプターである
。
【００５５】
好ましくは、ガングリオシド関連活性を調節し得る薬剤は、ＧＭ１ガングリオ
シドレセプターと架橋され得る。
【００５６】
好ましくは、ＥｔｘＢは、その五量体形態の効力によってＧＭ１ガングリオシ
ドレセプターを架橋し得るような薬剤である。
【００５７】
好ましくは、この医薬は、Ｉ型アレルギーおよび／または接触過敏症のような
ＩＶ型過敏症状態の処置または予防のために使用される。
【００５８】
好ましくは、この医薬は、必要に応じて抗原と同時投与される１つ以上の抗原
を含む。
【００５９】
好ましくは、この薬剤は、哺乳動物に抗原を同時投与するかまたは同時投与せ
ずに投与され得る。
【００６０】
好ましくは、この哺乳動物とは、ヒト−例えば、ヒト患者である。
したがって、本発明は、以下をも提供する。
（１）  アレルギー性状態および／または過敏症状態に作用する医薬
の製造における薬剤の使用であって、ここで；
該薬剤は、ガングリオシド関連活性を調節し得；
該薬剤は、抗原に結合せず；
該ガングリオシド関連活性の調節が、アレルギー性状態および／または過敏症
状態に作用し；そして
該調節は、以下：
（ｉ）抗原特異的ＩｇＥレベル；ならびに／または
（ｉｉ）抗原特異的Ｔ細胞反応性；ならびに／または
（ｉｉｉ）ＩｇＧおよび／もしくはＩｇＡレベル
における変化により特徴付けられる、使用。
（２）  アレルギー性状態および／または過敏症状態に作用する医薬
の製造における薬剤の使用であって、ここで；
該薬剤は、ＧＭ１関連活性を調節し得；
該薬剤は、抗原に結合せず；そして
該ＧＭ１関連活性の調節は、アレルギー性状態および／または過敏症状態に作
用する、使用。
（３）  前記薬剤が、ＩｇＥ媒介応答をブロックし得る、項目１ま
たは項目２に記載の薬剤の使用。
（４）  アレルギー性状態および／または過敏症状態に作用し得る請
求項１〜３のいずれか１項に記載の薬剤を同定するためのアッセイ方法であって
；
ここで該アッセイ方法は、以下の工程：
（ａ）薬剤をガングリオシドレセプターと接触させる工程；
（ｂ）（ｉ）抗原特異的ＩｇＥレベル；ならびに／または
（ｉｉ）抗原特異的Ｔ細胞反応性；ならびに／または
（ｉｉｉ）ＩｇＧおよび／もしくはＩｇＡレベル、
における変化を測定することによって、該薬剤がガングリオシド関連活性を調節
するか否かを決定する工程であって、
その結果、該ガングリオシド関連活性の調節が、該薬剤がアレルギー性状態およ
び／または過敏症状態に作用し得ることの指標となる工程、を包含し；そして
ここで該薬剤は抗原に結合されない、方法。
（５）  項目４に記載のアッセイ方法であって、前記アッセイが、
アレルギー性状態および／または過敏症状態の予防および／または処置において
有用な薬剤についてスクリーニングする、方法。
（６）  以下の工程：
（ａ）項目４または項目５に記載のアッセイを実施する工程；
（ｂ）ガングリオシド関連活性を調節し得る１つ以上の薬剤を同定する工程；お
よび
（ｃ）ある量の該１つ以上の薬剤を調製する工程、
を包含する、方法。
（７）  以下の工程：
（ａ）項目４または項目５に記載のアッセイを実施する工程；
（ｂ）ガングリオシド関連活性を調節し得る１つ以上の薬剤を同定する工程；お
よび
（ｃ）該１つ以上の同定された薬剤を含有する薬学的組成物を調製する工程、
を包含する、方法。
（８）  以下の工程：
（ａ）項目４または項目５に記載のアッセイを実施する工程；
（ｂ）ガングリオシド関連活性を調節し得る１つ以上の薬剤を同定する工程；
（ｃ）ガングリオシド関連活性を調節する１つ以上の同定された薬剤を改変する
工程；および
（ｄ）該１つ以上の改変された薬剤を含有する薬学的組成物を調製する工程、
を包含する、方法。
（９）  項目６または項目７または項目８の方法によって同定
される、薬剤。
（１０）  前記薬剤がＧＭ１結合剤である、項目９に記載の薬剤。
（１１）  前記薬剤がＥｔｘＢであり、ここで該薬剤はガングリオシ
ド関連活性の調節を通してアレルギー性状態および／または過敏症状態に作用し
得る、項目１０に記載の薬剤。
（１２）  前記薬剤が、以下：（ｉ）抗原特異的ＩｇＥレベル；なら
びに／または（ｉｉ）抗原特異的Ｔ細胞反応性；ならびに／または（ｉｉｉ）Ｉ
ｇＧおよび／もしくはＩｇＡレベル；における変化によって特徴付けられるガン
グリオシド関連活性の調節を通して、アレルギー性状態および／また過敏症状態
に作用することが以前に公知ではなかった、項目９に記載の薬剤。
（１３）  前記ガングリオシドがＧＭ１ガングリオシドである、請求
項１、４、６、７または８のいずれか１項に規定されるガングリオシド。
（１４）  アレルギー性状態または過敏症状態に１つ以上の薬剤で作
用する方法であって；
ここで該薬剤はインビトロアッセイ方法においてガングリオシド関連活性を調
節し得；そして
ここで該インビトロアッセイ方法は、項目４または項目５に規定されるア
ッセイ方法である、
方法。
（１５）  アレルギー性状態および／または過敏症状態に作用する医
薬の製造における、項目４〜１２または項目１４のいずれか１項に規定され
る薬剤の使用。
（１６）  アレルギー性状態および／または過敏症状態に作用し得る
薬学的組成物としての使用のための、項目９もしくは項目１０もしくは請求
項１１もしくは項目１２に記載の薬剤、または項目６もしくは項目７もし
くは８に記載の方法によって調製される薬剤。
（１７）  項目９もしくは項目１０もしくは項目１１もしくは
項目１２のいずれか１項に記載の薬剤、または項目６もしくは項目７もし
くは項目８に記載の方法によって調製される薬剤、を含有するかあるいは該薬
剤から調製される薬学的組成物であって、該組成物はアレルギー性状態および／
または過敏症状態に作用し得る、薬学的組成物。
（１８）  アレルギー性状態および／または過敏症状態の処置のため
の、項目７または項目８または項目１６または項目１７に規定される薬
学的組成物の調製における、薬剤の使用。
（１９）  添付の図面を参照して本明細書中に実質的に記載されるガングリオシド関連活性の調節を通して、アレルギー性状態および／または過敏症
状態に作用し得る、薬剤。
【発明の効果】
【００６１】
本発明に従って、本発明者らは、驚くべきことに、ガングリオシド関連活性を
調節し得る薬剤の使用が、単独で投与される場合または適切な抗原と同時投与さ
れる場合に、アレルギー性状態および／または過敏症状態に対する有効な治療と
して使用され得ることを見出した。以前の研究者らは、機構を見出す試み（Ｓｕ
ｎら  １９９６  同書）、またはガングリオシド関連活性を調節し得る薬剤（例
えば、ＥｔｘＢおよびＣｔｘＢ）が、抗原に対する免疫応答においてＴｈ１から
Ｔｈ２へのスイッチを引き起こすことの議論（ＷＯ９７／０２０４５）のいずれ
もしていなかった。アレルギー性状態がＴｈ２応答によって促進されることが当
該分野において公知であるため、次いで以前の知見は、このような薬剤がアレル
ギーの処置において効果がないか、またはより悪化さえさせ得ることのいずれか
であることを示唆する。
【００６２】
本発明者らは、驚くべきことに、ＥｔｘＢおよびＣｔｘＢがＴｈ２関連応答の
いくつかの局面を促進する一方、いくつかの場合において、それらがアレルギー
を引き起こす主な因子である、ＩｇＥの生成を刺激し得ないことを見出した。従
って、アレルギー性状態および／または過敏症状態は、ガングリオシド関連活性
を調節し得る薬剤（例えば、これは抗原とは結合しない）を用いて処置され得る
。
【００６３】
有意には、構成成分の結合は、必要性が見られない。さらに、本発明者らの研
究結果は、アレルギー性状態および／または過敏症状態に対する防御機構には、
抗原特異的ＩｇＥ分泌の抑制および／または非炎症性抗原特異的抗体イソタイプ
（特にＩｇＧおよびＩｇＡ）の上方調節産生が挙げられ得るがそれらに限定され
ない。
【００６４】
従って、アレルギー性状態および／または過敏症状態は、必要に応じて抗原と
同時投与されるガングリオシド関連活性を調節し得る薬剤を用いて処置され得る
ので、本発明は有利である。
【発明を実施するための形態】
【００６５】
本発明に関して使用される場合、用語「ガングリオシド」は、当該分野におけ
るその通常の定義（上記で定義されるような）ならびにその活性フラグメントを
含む。
【００６６】
このガングリオシドは、合成的に作製され得るか、または天然の供給源から単
離され得る。あるいは、市販の供給源から得られ得る。
【００６７】
用語「ガングリオシド関連活性」は、任意の１つ以上の調節ガングリオシドレ
セプターまたは免疫調節ガングリオシドレセプターを含み、これらはガングリオ
シドレセプター結合の前、結合の間または結合の後のいずれかのシグナリング事
象を調節する。
【００６８】
用語「Ｃｔｘ」は、コレラ毒素をいい、そしてＣｔｘＢは、コレラ毒素のＢサ
ブユニットをいう。他の文脈において、これらは時々ＣＴまたはＣｔまたはＣＴ
ＢまたはＣｔＢとしてそれぞれ同一とされ得る。
【００６９】
用語「Ｅｔｘ」は本明細書中において、Ｅ．ｃｏｌｉ熱不安定性エンテロトキ
シンを意味し、そしてＥｔｘＢは、ＥｔｘのＢサブユニットである。他の文脈に
おいて、これらは時々ＬＴまたはＬｔ、およびＬＴＢまたはＬｔＢとしてそれぞ
れ同一とされ得る。
【００７０】
用語「アジュバント」は、抗原に対する免疫応答を増強する物質を含む。
【００７１】
用語「粘膜アジュバント」は、この薬剤が非関連の抗原に対して粘膜免疫応答
を容易にし得るように非関連の抗原とともに粘膜を介して送達される薬剤を含む
。このように、この薬剤は、いわゆる粘膜アジュバントとして作用する。
【００７２】
用語「粘膜表面」は、経口、舌下、鼻腔内、腟内、直腸、唾液、腸管および結
膜表面を含むがそれらに限定されない。
【００７３】
用語「粘膜」および／または「粘膜組織」は、腸、肺、口、生殖管、鼻および
眼を含むがそれらに限定されない。
【００７４】
「ワクチンキャリア」は、関連する抗原のキャリアを含む（Ｓｚｏｓｔａｋら
１９９６  Ｊ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ４４：１６１−１７０）。
【００７５】
用語「粘膜免疫原」は、局所的抗体産生および／もしくは全身的抗体産生、な
らびに／または細胞媒介免疫反応、ならびに／または遅延型過敏症反応を誘起す
る能力を有する粘膜経路により投与可能な薬剤を含む。
【００７６】
「ハプテン」は、エピトープとして作用し得るがそれ自体によって抗体応答を
誘発し得ない、低分子を意味する。
【００７７】
用語「免疫学的寛容または経口的寛容」は、特異的に寛容された抗原（単数ま
たは複数）に対する宿主の免疫学的反応性の減少を意味する。免疫学的寛容また
は経口的寛容は、特定の抗原に対する免疫応答の完全な抑制を意味しなくてもよ
いが、これは「免疫偏向」または「分裂寛容」としてもまた知られている形態ま
たは寛容である。
【００７８】
用語「免疫偏向」または「分裂寛容」は、いくらかのＩｇＧ応答の保持を伴う
が、しかし遅延した過敏症および／またはＩｇＥ応答の下方調節を伴う局所的Ｉ
ｇＡ応答の保存のようなものを記載するために使用され得る。
【００７９】
用語「寛容」とは、特異的免疫学的非応答性の状態を意味する。
【００８０】
「寛容原」は、寛容化された抗原を意味する。
【００８１】
用語「自己免疫」は、身体が自己抗原に対する免疫応答を生じるプロセスを述
べるために使用される。
【００８２】
用語「ガングリオシド関連活性を調節し得る薬剤」は、ガングリオシドとの相
互作用を通じて、免疫調節物質として作用する任意の薬剤を記載するために用い
られ得る。
【００８３】
用語「ＧＭ１結合剤」とは、ＧＭ１ガングリオシドレセプターとの相互作用を
通じて、免疫調節物質として作用する任意の薬剤を含む。
【００８４】
用語「免疫調節物質」とは、抗原の抗原性を変更することによってか、または
非特異的様式で特定の反応性、もしくは宿主の非特異的エフェクター関連機構を
変更することによって抗原に対する免疫応答の程度を変更する任意の薬剤を含む
。
【００８５】
用語「投与される」とは、ウィルス性または非ウィルス性の技法による送達を
含む。ウィルス性の送達機構は、アデノウィルスベルター、アデノ随伴ウィルス
（ＡＡＶ）ベクター、ヘルペスウィルスベクター、レトロウィルスベクター、レ
ンチウィルスベクター、およびバキュロウィルスベクターを含むが、これらに限
定されない。非ウィルス性の送達機構は、脂質媒介トランスフェクション、リポ
ソーム、イムノリポソーム、リポフェクチン、カチオン性顔面用両親媒性（ｃａ
ｔｉｏｎｉｃ  ｆａｃｉａｌ  ａｍｐｈｉｐｈｉｌｅｓ）（ＣＦＡ）、およびこ
れらの組み合わせを含む。このような送達機構に関する経路は、粘膜、経鼻、経
口、非経口、胃腸、局所、または舌下の経路を含むが、これらに限定されない。
【００８６】
用語「同時投与される」とは、各々の薬剤および抗原の投与部位および投与時
間が、免疫系の必要な調節が達成されるようであることを意味する。従って、こ
の薬剤および抗原は、同じ瞬間に間に合ってかつ同じ場所に投与され得るが、こ
の薬剤を抗原とは異なる時間にかつ異なる部位へ投与することに利点が存在し得
る。この薬剤および抗原は、さらに、同じ送達ビヒクル（例えば、Ｍａｃｒｏｓ
ｏｌTM、ＷＯ９５／１３７９５およびＷＯ９６／１４８７１を参照のこと）中で
、但し、この薬剤およびこの抗原を結合させないで送達され得る。
【００８７】
用語「投与される」とは、（例えば、鼻用スプレーまたは吸入用エアロゾルと
して、あるいは摂取可能な溶液としての）粘膜経路による；送達が注射可能な形
態による場合、例えば、静脈内経路、筋肉内経路、または皮下経路のような、非
経口経路による送達を含むが、これらに限定されない。
【００８８】
用語「全身性免疫処置」とは、皮膚または血液のような非粘膜組織中への抗原
の導入を意味する。
【００８９】
用語「自己抗原」とは、宿主組織に由来する成分を意味する。
【００９０】
用語「標的相互作用成分」は、ガングリオシド関連活性を調節し得る薬剤、ガ
ングリオシド、および／または抗原を含むが、これに限定されない。
【００９１】
用語「結合される（ｃｏｕｐｌｅｄ）」（これは用語「結合される（ｌｉｎｋ
ｅｄ）」と同じ意味を持つ）とは、抗原と薬剤との結合（これは、（イオン結合
または共有結合によるのような）直接的な結合、あるいは適切なスペーサー基の
供給による間接的な結合を含むが、これに限定されない）を意味する。
【００９２】
用語「結合していない（ｕｎｃｏｕｐｌｅｄ）」（これは用語「結合していな
い（ｕｎｌｉｎｋｅｄ）」と同じ意味を持つ）とは、薬剤が、抗原と結合してい
ないことを意味する。
【００９３】
しかし、本発明に従って、この薬剤および／または抗原は、別の存在物と結合
し得る。
【００９４】
用語「作用する」とは、処置、予防、抑制、緩和、回復、もしくは予め存在す
る状態の他の変化および／または将来の状態に潜在的に作用すること、ならびに
それらのいずれかの組み合わせのような調節を含む。
【００９５】
「抗原」とは、免疫応答性動物へ導入した場合、薬剤と結合し得る特異抗体の
生成を刺激する薬剤を意味する。この抗原は、純粋な物質、物質の混合物、ある
いは（細胞または細胞フラグメントを含む）可溶性または粒状の材料であり得る
。この意味で、この用語は、任意の適切な抗原決定基、自己抗原（ａｕｔｏ−ａ
ｎｔｉｇｅｎ）、自己抗原（ｓｅｌｆ−ａｎｔｉｇｅｎ）、寛容原、アレルゲン
、ハプテン、および免疫原、またはそれらの部分、ならびにそれらいずれかの組
み合わせを含み、そしてこれらの用語は本明細書中を通して交換可能に用いられ
る。
【００９６】
「アレルゲン」は、Ｉ型過敏性反応を含むアレルギー性反応を刺激する、任意
の抗原を含む。
【００９７】
一般的なアレルゲン供給原の例は、以下の表に概説される。
【００９８】
【表１】
2013151568.tif 000002
【００９９】
用語「アレルギー性状態」とは、喘息、アレルギー性の咳、アレルギー性鼻炎
および結膜炎、アトピー性湿疹および皮膚炎、じんま疹（ｕｔｉｃａｒｉａ）、
じんま疹（ｈｉｖｅｓ）、虫刺されアレルギー、食事性アレルギー（ピーナッツ
、魚、牛乳、小麦など）ならびに薬物アレルギーを含むが、これに限定されない
。
【０１００】
用語「過敏症状態」とは、植物の有毒ツタにより誘発される接触過敏症のよう
な状態を含むが、これに限定されない。
【０１０１】
用語「薬剤」とは、ガングリオシド関連活性を調節し得る存在物を含む。この
薬剤は、１つ以上の無機化学薬品または有機化学薬品、ならびにそれらの組み合
わせであり得る。例として、それらが、必要とされる免疫調節活性を維持する限
りは、この薬剤はポリペプチド、ならびにそれらの改変体／相同体／誘導体／フ
ラグメントであり得る。この薬剤はまた、それらの模倣物および等価物および変異体を含む。アレルギー性状態または過敏症状態の処置のための他の薬剤は、標
的相互作用成分に対する抗体を含む。このような抗体は、ポリクローナル、モノ
クローナル、キメラ、単鎖、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ発現ライブラリーによ
って生成されたフラグメントおよび特別に設計されたヒト化モノクローナル抗体
を含むが、これらに限定されない。
【０１０２】
ガングリオシド関連活性を調節し得る薬剤は、当該分野で公知の方法によって
、上記に概説されたように設計および生成され得る。例として、本発明の薬剤が
、ＥｔｘＢサブユニットまたはＣｔｘＢサブユニットのようなタンパク質である
場合、この薬剤は、このタンパク質が形成される特定のポリペプチド鎖をコード
する遺伝子が、適切なベクター中へ挿入され、次いで適切な宿主へのトランスフ
ェクトに用いられる方法によって、本発明の全ての局面において用いるために生
成され得る。例えば、ＥｔｘＢを組み立てるこのポリペプチド鎖をコードする遺
伝子が、例えば、プラスミドｐＭＭ６８中へ挿入され得、次いでこれはＶｉｂｒ
ｉｏ  ｓｐ．６０のような宿主細胞のトランスフェクトに用いられ得る。このタ
ンパク質は、それ自体が公知の様式において精製され、そして単離される。次い
で、活性な変異体のＥｔｘＢタンパク質を発現する変異遺伝子は、野生型遺伝子
から公知の方法によって生成され得る。
【０１０３】
標的相互作用成分がタンパク質である場合、この成分に対する抗体の生成のた
めに、当該分野で周知の手順が用いられ得る。
【０１０４】
抗体の生成のために、ヤギ、ウサギ、ラット、マウス、などを含む種々の宿主
が、標的相互作用成分またはそれらの任意の誘導体もしくは相同体、あるいは免
疫原の特性を保持するオリゴペプチドを注射することによって免疫され得る。宿
主種に依存して、免疫応答を増大させるために種々のアジュバントが用いられ得
る。このようなアジュバントは、フロイント、水酸化アルミニウムのような鉱物
ゲル、ならびにリゾレシチン、プルロニック（ｐｌｕｒｏｎｉｃ）ポリオール、
ポリアニオン、ペプチド、オイルエマルジョン、およびジニトロフェノールのよ
うな界面活性を含むが、これらに限定されない。ＢＣＧ（Ｂａｃｉｌｌｉ  Ｃａ
ｌｍｅｔｔｅ−Ｇｕｅｒｉｎ）およびＣｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｐａｒ
ｖｕｍは、潜在的に有用なヒトアジュバントである。
【０１０５】
標的相互作用成分が、タンパク質である場合、この成分に対するモノクローナ
ル抗体が、培養中の連続する細胞株による抗体分子の生成を提供する任意の技法
を用いて調製され得る。これらは、当初はＫｏｅｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉ
ｎ（１９７５  Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５−４９７）によって記載されたハ
イブリドーマ技法、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技法（Ｋｏｓｂｏｒら（１９８３
）Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｔｏｄａｙ  ４：７２；Ｃｏｔｅら（１９８３）Ｐｒｏｃ  
Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ８０：２０２６−２０３０）、およびＥＢＶハイ
ブリドーマ技法（Ｃｏｌｅら（１９８５）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏ
ｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ  Ｒ  Ｌｉｓｓ  
Ｉｎｃ，７７−９６頁）を含むが、これらに限定されない。さらに、「キメラ抗
体」の生成のために開発された技法である、適切な抗原特異性および生物学的活
性を有する分子を得るための、マウス抗体遺伝子のヒト抗体遺伝子へのスプライ
シングが、用いられ得る（Ｍｏｒｒｉｓｏｎら（１９８４）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ
Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ８１：６８５１−６８５５；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら（１９
８４）Ｎａｔｕｒｅ  ３１２：６０４−６０８；Ｔａｋｅｄａら（１９８５）Ｎ
ａｔｕｒｅ  ３１４：４５２−４５４）。あるいは、単鎖抗体の生成に関して記
載された技法（米国特許第４，９４６，７７９号）が、標的相互作用成分に特異的な単鎖抗体を生成するために適応され得る。
【０１０６】
抗体はまた、リンパ球集団における生成をインビボで誘導することによってか
、あるいはＯｒｌａｎｄｉら（１９８９，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃ
ｉ  ８６：３８３３−３８３７）、およびＷｉｎｔｅｒ  ＧおよびＭｉｌｓｔｅ
ｉｎ  Ｃ（１９９１；Ｎａｔｕｒｅ  ３４９：２９３−２９９）により開示され
たように、高特異的結合試薬で組換え免疫グロブリンライブラリーまたはパネル
をスクリーニングすることによって生成され得る。
【０１０７】
標的相互作用成分に対する特異的結合部位を含む抗体フラグメントもまた、作
製され得る。例えば、このようなフラグメントは、この抗体分子のペプシン消化
によって生成され得るＦ（ａｂ’）2フラグメント、およびＦ（ａｂ’）2フラグ
メントのジスルフィド架橋を還元することによって生成され得るＦａｂフラグメ
ントを含むが、これらに限定されない。あるいは、Ｆａｂ発現ライブラリーは、
所望された特異性のモノクローナルＦａｂフラグメントの迅速かつ容易な同定を
可能にするために構築され得る（Ｈｕｓｅ  ＷＤら（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ
２５６：１２７５−１２８１）。
【０１０８】
本発明の標的相互作用成分、またはそれらの誘導体もしくは相同体、および／
あるいは本発明の標的相互作用成分、またはそれらの誘導体もしくは相同体を発
現する細胞株は、標的相互作用の調節因子として作用する、抗体、ペプチド、あ
るいは有機分子または無機分子のような他の薬剤に関するスクリーニングに用い
られ得、それによって標的相互作用を調節し得る治療薬剤を同定する。例えば、
標的相互作用を調節し得る抗体が同定され得る。
【０１０９】
あるいは、組換え的に発現された標的相互作用成分、またはそれらの誘導体も
しくは相同体、あるいは標的相互作用成分、またはそれらの誘導体もしくは相同
体を発現する細胞株を用いる、コンビナトリアルケミストリーによって作製され
るペプチドライブラリーまたは有機物ライブラリーのスクリーニングは、標的相
互作用を調節することによって機能する治療薬剤の同定に有用であり得る。合成
化合物、天然産物、および潜在的に生物学的に活性な材料の他の供給源は、当業
者にとって慣用的であると考えられる多くの方法でスクリーニングされ得る。
【０１１０】
標的相互作用成分ポリペプチド、その免疫原フラグメントまたはそれらのオリ
ゴペプチドは、種々の薬物スクリーニング技法のいずれかにおいて治療用の化合
物のスクリーニングに用いられ得る。このような試験に用いられるポリペプチド
は、溶液中で遊離し得るか、固体支持体に付着され得るか、細胞表面に保有され
得るか、または細胞内に位置し得る。活性の破壊または標的相互作用成分と試験
される薬剤との間の結合複合体の形成が、測定され得る。
【０１１１】
あるいは、ファージディスプレイは、標的相互作用成分に作用する候補薬剤の
同定に用いられ得る。
【０１１２】
ファージディスプレイは、組換えバクテリオファージを利用する分子スクリー
ニングのプロトコルである。この技法は、バクテリオファージを、標的相互作用
成分（またはそれらの誘導体もしくは相同体）と反応し得る適切なリガンド（こ
の場合、候補薬剤）をコードする遺伝子、あるいはこのリガンドをコードするヌ
クレオチド配列（またはそれらの誘導体もしくは相同体）で形質転換することを
含む。形質転換されたバクテリオファージ（これは好ましくは、固体支持体に係
留される）は、適切なリガンド（例えば、候補薬剤）を発現し、そしてそれらのファージの外被上にそれを提示する。この候補薬剤を認識する標的分子を有する
存在物（例えば、細胞）が、単離されそして増幅される。次いで、首尾良い候補
薬剤は、特徴付けされる。ファージディスプレイは、標準的なアフィニティリガ
ンドスクリーニング技法を超える利点を有する。このファージの表面は、候補の
天然に存在するコンホメーションに、より厳密に似た、三次元の配置で、候補薬
剤を提示する。これは、スクリーニングの目的のために、より特異的かつより高
い親和性の結合を可能にする。
【０１１３】
従って、本発明は、複数の薬剤を提供する工程；標的相互作用成分、またはそ
れらの誘導体もしくは相同体を複数の薬剤それぞれと、適切な条件下で、結合を
可能にするのに十分な時間で合わせる工程；および複数の薬剤それぞれに対する
、標的相互作用成分、またはそれらの誘導体もしくは相同体の結合を検出し、そ
れによって標的相互作用成分に特異的に結合する薬剤を同定する工程を含む、標
的相互作用成分、またはそれらの誘導体もしくは相同体との特異的結合親和性に
関して複数の薬剤をスクリーニングするのための方法を提供する。このようなア
ッセイにおいて、この複数の薬剤は、当業者に公知のコンビナトリアルケミスト
リーの技法によって生成され得る。
【０１１４】
スクリーニングのための別の技法は、標的相互作用成分のポリペプチドに対す
る適切な結合親和性を有する薬剤の高処理量スクリーニングを提供し、そしてＷ
Ｏ  ８４／０３５６４において詳細に記載された方法に基づく。要約すれば、大
量の異なる小さなペプチド試験化合物が、プラスチックピン、または何か他の表
面のような固体基材上で合成される。このペプチド試験薬剤は、標的相互作用成
分フラグメントと反応され、そして洗浄される。次いで、結合した標的相互作用
成分は、（例えば、当該分野で周知の適切に適合させた方法によって）検出され
る。精製された標的相互作用成分はまた、前述の薬物スクリーニング技法に使用
するためにプレート上に直接的に被覆され得る。あるいは、非中和抗体は、この
ペプチドを捕捉し、そしてそれを固体支持体上に固定化するために用いられ得る
。
【０１１５】
本発明は、ガングリオシド関連活性を調節し得る治療上有効な量の薬剤、およ
び薬学的に受容可能なキャリア、希釈剤、賦形剤、またはアジュバントを投与す
る工程を包含する、処置の必要がある、被験体を処置するための薬学的組成物も
また提供する。
【０１１６】
この薬学的組成物は、ヒトまたは動物への用法のためであり得、そして代表的
には、薬学的に受容可能な希釈剤、キャリア、賦形剤、またはアジュバントのい
ずれか１つ以上を含む。薬学的キャリア、賦形剤、または希釈剤の選択は、意図
した投与経路および標準的な薬学的実践に関して選択され得る。この薬学的組成
物は、キャリア、賦形剤または希釈剤として（または、それに加えて）任意の適
切な結合剤、滑沢剤、懸濁剤、コーティング剤、可溶化剤を含み得る。
【０１１７】
薬学的組成物は、適切な抗原と共に処方され得る。
【０１１８】
あるいは、それぞれの治療剤および抗原に対して別々の組成物を含むキットが
提供され得る。
【０１１９】
本発明のいくつかの実施態様において、この薬学的組成物は、１つ以上の以下
を含む：本発明のアッセイによってスクリーニングされた薬剤；ここでこの薬剤
は、ガングリオシド関連活性を調節し得る。
【０１２０】
本発明はまた、薬学的に受容可能な希釈剤、キャリア、賦形剤またはアジュバ
ント（それらの組み合わせを含む）と混和した、有効な量の抗原を含む薬学的組
成物に関係する。
【０１２１】
本発明はまた、有効量の本発明の薬学的組成物を被験体に投与する工程を包含
する、処置の必要がある、この被験体を処置する方法を提供する。
【０１２２】
本発明は、標的相互作用成分の全てまたは部分を単独で、または少なくとも１
つの他の薬剤（例えば、安定化化合物）と組み合わせで含み得、そして生理食塩
水、緩衝化生理食塩水、デキストロース、および水を含むが、これらに限定され
ない任意の滅菌した生体適合性の薬学的キャリア中で投与され得る薬学的組成物
に関係する。
【０１２３】
異なる送達系に依存して、異なる組成物の要求／処方物の要求があり得る。
【０１２４】
本発明の薬学的組成物は、例えば、鼻用スプレー、または吸入用エアロゾル、
または摂取可能な溶液として粘膜経路によって、あるいは組成物が、（例えば、
静脈内経路、筋肉内経路、または皮下経路による）送達のための注射可能な形態
に処方されて、非経口的に送達されるように処方され得る。あるいは、処方物は
、両方の経路によって送達されるように設計され得る。
【０１２５】
薬剤が、胃腸粘膜を通して粘膜的に送達される場合、胃腸管を通過している間
安定であることが好ましい；例えば、好ましくは、タンパク質分解性分解に耐性
であり、酸性ｐＨに安定であり、そして胆汁の界面活性効果に対して耐性である
ことが好ましい。
【０１２６】
代表的には、医者は、被験体に最も適切な実際の投与量を決定し、そして投与
量は、特定の被験体の年齢、体重および応答によって変化する。薬剤および抗原
決定基の単一の用量は、十分で有り得るが、複数の用量は、本発明の範囲内に考
慮される。
【０１２７】
適切な場合、薬学的組成物が、吸入によって投与され得、坐薬もしくは膣坐薬
の形態で、代表的にはローション、溶液、クリーム、軟膏、または粉剤の形態で
、皮膚パッチを用いて投与され得るか、デンプンもしくは乳糖のような賦形剤を
含む錠剤の形態で、あるいは単体もしくは賦形剤との混合物でのいずれかでカプ
セルまたはオーブルス（ｏｖｕｌｅｓ）で、または矯味矯臭剤もしくは着色剤を
含むエリキシル、溶液または懸濁液の形態で経口的に投与され得るか、あるいは
、それらは、例えば，空洞内に、静脈内に、筋肉内にまたは腹腔内に非経口的に
注射され得る。非経口的投与については，この組成物は、滅菌水溶液の形態で最
もよく使用され得、これは、他の物質（例えば、溶液を血液と等張にするように
、十分な塩または単糖類）を含み得る。頬肉または舌下投与については、この組
成物は、錠剤またはトローチの形態で、投与され得、これらの錠剤またはトロー
チは、従来の手法で処方され得る。
【０１２８】
異なった組成物／処方系に依存した異なる送達要求があり得る。
【０１２９】
レトロウイルス、アデノウイルス、ヘルペスウイルス、またはワクシニアウイ
ルス由来の発現ベクター、あるいは種々の細菌プラスミド由来の発現ベクターが
、標的化された組織および／または細胞集団への薬剤の送達に用いられ得る。当業者に周知の方法が、薬剤を含む組換えベクターの構築に用いられ得る。あるい
は、薬剤は、リポソーム中で標的細胞に送達され得る。
【０１３０】
例示のために、生物分解性のポリマー微粒子を用いた粘膜表面での抗原の制御
された放出が、抗原の標的化および初回免疫に必要な用量の数の減少を助け得る
（ＧｕｐｔａおよびＳｉｂｅｒ  １９９５  Ｖａｃｃｉｎｅ  １３：１２６３−
１２７６）。
【０１３１】
生物分解性微粒子へのワクチンのカプセル化が、優れた粘膜性免疫原を提供す
る。組換えノーウォークウイルス様（ｒＮＶ）粒子はまた、粘膜性抗原送達に用
いられ得る（Ｂａｌｌら  １９９６  Ａｒｃｈ  Ｖｉｏｌ  増補  １２：２４３
−２４９）。
【０１３２】
ウイルス様粒子（ＶＬＰｓ）は、ＢおよびＴ細胞エピトープを含む複数の免疫
原のワクチン送達系として利用されてきた（Ｒｏｙ  １９９６  Ｉｎｔｅｒｖｉ
ｒｏｌｏｇｙ  ３９：６２−７１）。
【０１３３】
経口送達の１つの好ましい方法を、ＷＯ  ９５／１３７９５、ＷＯ  ９６／１
７５９３およびＷＯ  ９６／１７５９４に記載されるような形成に用いる。これ
らの処方物は、タンパク質のような高分子が、経口送達のために「油（ｏｉｌｓ
）」に可溶化することを可能にする。従って、そのような処方物は、腸の粘膜表
面への高分子の送達を可能にする。
【０１３４】
さらなるアプローチにおいて、再び、治療的薬剤が、タンパク質である場合、
ＷＯ  ９３／１７１１７に記載されるような細菌送達系の手法により、そのよう
なタンパク質の送達が可能である。この系は、例えば経口的にまたは実際は経鼻
的であるような、他の粘膜経路によってタンパク質を送達するために細菌Ｌａｃ
ｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｌａｃｔｉｓを利用する。
【０１３５】
要約すると、本発明は、アレルギー性状態および／または過敏症状態に影響を
与える医薬の製造における薬剤の使用を提供する；ここで、薬剤は、抗原と結合
せずに、ガングリオシド関連活性を調節させ得る。
【０１３６】
別の広範な局面において、本発明は、抗原と結合しないガングリオシド関連活
性を調節させ得る薬剤を含む免疫学的耐性を誘導する薬剤を提供する。
【０１３７】
本発明の別の局面は、ここで以下の番号づけされたパラグラフにより示され、
以下が挙げられる：
１．  ＧＭ１結合活性を有する薬剤、またはＧＭ１媒介細胞内シグナル伝達事
象に対する影響を有するが、ＧＭ１結合活性を有さない薬剤の、アレルギー性状
態または他の過敏症状態を処置するための医薬の調製における使用。但し、この
薬剤が、アレルゲンおよび／または抗原と結合しない。
【０１３８】
２．  上記薬剤が、Ｃｔｘ、Ｅｔｘ、ＣｔｘＢまたはＥｔｘＢのようなＧＭ１
結合薬剤、あるいはそれらの変異体形態または誘導体である、パラグラフ１に規
定される使用。
【０１３９】
３．  上記医薬が、ぜん息、アレルギー性の咳、アレルギー性鼻炎、結膜炎、
アトピー性湿疹、皮膚炎、じんま疹（ｕｔｉｃａｒｉａ）、じんま疹（ｈｉｖｅ
ｓ）、虫刺されアレルギー、食事性アレルギー（ピーナッツ、魚、ミルク、コムギなど）、薬物アレルギー、または接触アレルギー（ｃｏｎｔａｃｔ）および他
の過敏症の予防または処置のためである、パラグラフ１およびパラグラフ２に規
定される使用。
【０１４０】
４．  ＧＭ１結合活性を有する薬剤、またはＧＭ１媒介細胞内シグナル伝達事
象に対する影響を有するが、ＧＭ１結合活性を有さない薬剤の（但し、この薬剤
は、アレルゲンおよび／または抗原と結合しない）、有効量を被験体に投与する
工程を包含する、アレルギーまたは他の過敏症状態の処置または予防の方法。
【０１４１】
５．  上記薬剤が、Ｃｔｘ、Ｅｔｘ、ＣｔｘＢまたはＥｔｘＢのようなＧＭ１
結合薬剤、あるいはそれらの変異体形態または誘導体である、パラグラフ４に規
定される方法。
【０１４２】
６．  上記方法が、ぜん息、アレルギー性の咳、アレルギー性鼻炎、結膜炎、
アトピー性湿疹、皮膚炎、じんま疹（ｕｔｉｃａｒｉａ）、じんま疹（ｈｉｖｅ
ｓ）、虫刺されアレルギー、食事性アレルギー（ピーナッツ、魚、ミルク、コム
ギなど）、薬物アレルギー、または接触過敏症の予防または処置のためである、
パラグラフ４またはパラグラフ５に規定される方法。
【０１４３】
７．  ヒトアレルギー性および／または過敏症疾患の処置のための薬学的組成
物であって、
（ｉ）  ＧＭ１結合活性を有する薬剤；または
（ｉｉ）  ＧＭ１結合活性を有さないが、ＧＭ１媒介細胞内シグナル伝達事象に
対する影響を有する薬剤；
を含む薬学的組成物。但し、この薬剤は、アレルゲン／抗原；および薬学的に受
容可能なキャリアまたはそれらの希釈液と結合しない。
【０１４４】
８．  アレルギー性状態または他の過敏症状態を処置する医薬の調製における
、ＧＭ１結合活性を有する薬剤、またはＧＭ１結合活性を有さないが、ＧＭ１媒
介細胞内シグナル伝達事象に対する影響を有する薬剤を含む生成物（但し、この
薬剤は、アレルゲンおよび／または抗原と結合せず、そして少なくとも１つの抗
原／アレルゲンは、同時の、別々のまたは経時的な使用のために組み合わせて調
製される）。
【０１４５】
本発明は、ここで、例示のためにのみ記載される。
【０１４６】
（実施例）
（ガングリオシド関連活性を変化させ得る薬剤のスクリーニング）
ガングリオシド関連活性を変化させ得る薬剤を、種々の方法のうちいずれか１
つにより試験する。
【０１４７】
そのような方法の例は、以下の方法を含むがそれらに限定されない：
１．ＧＭ１のようなガングリオシドレセプターへの結合を、マイクロタイター
プレートをコートする、精製されたＧＭ１を用いることにより決定する。さらな
る非特異的なタンパク質のプレートへの結合のブロックに続いて、研究中の薬剤
を、プレートに添加し、そして洗浄に先だって相互作用を可能にし、そして上記
薬剤に特異的な抗体を用いて検出する。酵素または放射性標識との直接的または
間接的のいずれかでの抗体の結合体は、続く比色定量（ｃｏｌｏｒｍｅｔｒｉｃ
）または放射活性に基づいた方法（それぞれＥＬＩＳＡまたはＲＩＡ）のいずれ
かを用いた結合の定量化を可能にする。
【０１４８】
２．ＧＭ１のようなガングリオシドの五糖部分は、標準的なアフィニティーク
ロマトグラフィーを行なうことを可能にするために適切なカラムマトリックスに
結合する。希釈液からカラムに添加した公知の化合物の除去は、結合活性の証拠
として用いられる。あるいは、化合物の混合物を、カラムに添加する場合、溶出
および続く分析は、ガングリオシド関連活性を変化させ得る薬剤の性質を決定し
得る。
【０１４９】
タンパク質分析は、ペプチド配列およびトリプシンの消化地図作製に続く利用
可能なデータベースとの比較を含む。溶出されたタンパク質が、この方法では同
定できない場合、例えば、レーザー脱離質量分析による質量決定のような標準的
な生物化学的分析を、化合物をさらに特徴づけるために用いる。ＧＭ１−アフィ
ニティーカラムから溶出された非タンパク質を、ＨＰＬＣおよび単一な同種のピ
ークの質量分光測定により分析する。
【０１５０】
３．ＧＭ１のようなガングリオシドへの結合能力および相互作用の正確なアフ
ィニティーを、以前に報告された（Ｋｕｚｉｅｍｋｏら、（１９９６）Ｂｉｏｃ
ｈｅｍ  ３５：６３７５−６３８４）ようにプラスモン表面共鳴（ｐｌａｓｍｏ
ｎ  ｓｕｒｆａｃｅ  ｒｅｓｏｎａｎｃｅ）を用いて決定し得る。
【０１５１】
（同定された薬剤の評価）
ガングリオシド関連活性の調節が、アレルギー性状態および／または過敏症状
態に影響するように、ガングリオシド関連活性を調節させ得る薬剤の同定を、以
下のように決定する：
実験動物を、当該分野で周知の方法により抗原特異的ＩｇＥの産生のために刺
激する。例示のために、マウスに、ミョウバン沈殿させた可溶性タンパク質抗原
（例えば、オボアルブミン、あるいはブタクサまたはヒョウヒダニ抗原のような
ヒトアレルギー性疾患に関与する公知のアレルゲン）を、皮下または腹腔内のい
ずれかでチャレンジする。
【０１５２】
無処置の動物において、この手順は、慣用的に、適切なマイクロタイタープレ
ートを被覆するために抗原を用いて、標準的なＥＬＩＳＡにより血清中に容易に
検出される抗原特異的ＩｇＥの産物を導く。免疫化されたマウスからの血清を、
非特異的タンパク質の結合をブロックした後プレートに添加し、そしてＩｇＥの
存在を、広範に利用可能なマウスＩｇＥに特異的な、標識された抗体を用いて決
定する。
【０１５３】
アレルギーを予防または処置する薬剤の能力について薬剤をスクリーニングす
るために、ガングリオシド関連活性を変化させ得る薬剤を、用量の範囲内でそし
て種々の経路により、チャレンジ抗原の存在下または非存在下のいずれかでマウ
スへ投与する。経口的な経路は、投与の好ましい方法であるが、送達は、他の粘
膜表面によってまたは非経口的になされ得る。そのような投与の頻度ならびに反
復した投薬のタイミングもまた、研究する。そのような研究のストラテジーは、
ＩｇＥを誘導する抗原チャレンジ（予防）に先だって、またはＩｇＥを誘導する
抗原チャレンジ（処置）の後のいずれかで利用される。抗原のチャレンジは、（
ｉ）予防または処置のプロトコールの一部として用いる抗原；（ｉｉ）無関係な
抗原、または（ｉｉｉ）それぞれ、応答の特異性およびバイスタンダー抑制の誘
導を試験するための、チャレンジおよび無関係な抗原の混合物のいずれかであり
得る。
【０１５４】
種々の方法により有効性が決定され、そして多くの異なる結果が示される。
【０１５５】
１．  抗原特異的ＩｇＥレベル。特定のＥＬＩＳＡ（記載したように）による
血清ＩｇＥの測定は、予防または治療のプロトコールが、抗原特異的ＩｇＥの血
清レベルを減少させ得るか否かを決定するために用いられる。ＩｇＥ応答を決定
するために用いられる当該分野で公知の他の方法が、ＥＬＩＳＡの代替としてか
、もしくは相補的なデータを提供するためのいずれかで用いられる。そのような
方法は、いわゆる「Ｕｓｓｉｎｇ  Ｃｈａｍｂｅｒ  ｔｅｓｔ」または「受身皮
膚アナフィラキシー」アッセイを含む。特異的ＩｇＥの減少は、これらのアッセ
イのいずれかによって決定されるように、潜在的臨床有効性の強力なマーカーで
ある。
【０１５６】
２．抗原特異的Ｔ−細胞反応性。チャレンジ抗原に対する処置された動物の二
次的なリンパ組織由来のＴ−細胞の応答が、確立された方法論を用いて研究され
た。細胞懸濁液を調製し、そしてチャレンジ抗原の存在または不在下において培
養する。培養を開始してから適切な時間で、サンプルを細胞増殖およびサイトカ
イン産生について評価する。
【０１５７】
サイトカインを、特定の捕捉ＥＬＩＳＡ、細胞内染色に続く細胞数測定分析、
ＲＴ−ＰＣＲ、または他の確立された手順により測定する。抗原の不在に対して
、抗原の存在下での細胞増殖およびサイトカイン産生の比較が、各場合において
、チャレンジ抗原に対する特異的な応答の部分の測定を提供する。予防的または
治療的プロトコールの有効性の証拠が、Ｔｈ２関連サイトカイン産生の減少（特
に、ＩＬ−４）またはアレルギー性応答の下方調節に関与するサイトカイン発現
の増加（例えば、ＩＬ−１０またはＴＧＦβ）により実証される。
【０１５８】
３．ＩｇＧおよびＩｇＡのレベル。抗原特異的ＩｇＥのレベルを下げないプロ
トコールはさらに、他の非アレルギーに関連した抗体アイソトープの産生も増強
し得る事象に潜在的に効果を有すると考えられ得る。従って、ＩｇＧおよびＩｇ
Ａの存在について予防または処置プロトコールの一部として研究されている、薬
剤を処置しなかったかまたは与えたかのいずれかの動物由来の血清および粘膜分
泌物の研究がまた、実行される。ＩｇＧおよびそれらの特異的なサブクラス、そ
してＩｇＡに特異的な検出抗体を利用する標準的な抗原特異的ＥＬＩＳＡアッセ
イ（記載したように）が、この目的のために用いられる。分泌物または血清のＩ
ｇＧまたはＩｇＡ抗体を増強された生成物は、有効性を示す。なぜなら、そのよ
うな抗体は、アレルゲンの、肥満細胞、好塩基球および好酸球（ｃｏｓｉｎｏｐ
ｈｉｌ）に結合した架橋ＩｇＥを阻止するか、または粘膜上皮を越えた抗原の取
り込みを制限することが期待され、それゆえ、それに続くアレルギー性の炎症応
答を阻止する。
【０１５９】
（酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ））
ＥｔｘＢまたはＥｔｘＢ（Ｇ３３Ｄ）のＧＭ１への結合は、ＧＭ１−ＥＬＩＳ
Ａにより調べられる（Ａｍｉｎ，Ｔ．およびＨｉｒｓｔ，Ｔ．Ｒ．（１９９４）
Ｐｒｏｔ．Ｅｘｐｒｅｓｓ．ａｎｄ  Ｐｕｒｉｆ．５、１９８−２０４）。
【０１６０】
血清および腸分泌物を、サンプルを、５μｇ／ｍｌのＰＢＳ中のＥｔｘＢまた
はＥｔｘＢ（Ｇ３３Ｄ）のいずれかで被覆したマイクロプレート（Ｉｍｍｕｌｏ
ｎ  Ｉ、Ｄｙｎａｔｅｃｋ、ＵＳＡ）に添加するＥＬＩＳＡにより、抗Ｂサブユ
ニットＩｇＧおよびＩｇＡ抗体の存在について調査する。腸分泌物の上清中の抗
−ＢサブユニットＩｇＡ抗体は、ＰＢＳ中の１μｇ／ｍｌウサギ抗マウスＩｇＡ（α鎖特異的；Ｚｙｍｅｄ  Ｌａｂ、ＵＳＡ）で各プレートの２列のウェルを被
覆し、続いて１μｇ／ｍｌのマウス骨髄腫ＩｇＡ（ＭＯＰＣ  ３１５、Ｓｉｇｍ
ａ、ＵＳＡ）を添加にすることにより作製される標準曲線から推定する。総Ｉｇ
Ａを測定するために、ウェルを、ウサギ抗マウスＩｇＡで被覆し、続いて腸分泌
物上清を添加する。全てのサンプルを、連続的に希釈した。ヤギ抗マウスＩｇＧ
（Ｆｃフラグメント特異的；Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂ．、ＵＳＡ）またはヤギ抗
マウスＩｇＡ（α鎖特異的；Ｓｉｇｍａ）ペルオキシダーゼ結合物を希釈し、そ
して全てのウェルに添加する。抗−ＢサブユニットＩｇＧ力価（Ａ450nm＞０．
２で得られる）を決定する。腸分泌物中のＥｔｘＢおよびＥｔｘＢ（Ｇ３３Ｄ）
のそれぞれに対するＩｇＡ抗−Ｂサブユニットの応答を、「ＩｇＡ特異的活性」
として算出する（ＩｇＡ抗−Ｂサブユニット（μｇ／ｍｌ）／総ＩｇＡ（μｇ／
ｍｌ）を意味する）。
【０１６１】
ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１０、およびＩＦＮ−γのサイトカイ
ンレベルを測定するために公知のＥＬＩＳＡ法を用いる。手短に言えば、マイク
ロタイタープレートを、マウスＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１０およ
びＩＦＮ−γに対するラット抗体で被覆する。プレートを、２％（ｗ／ｖ）ウシ
血清アルブミンでブロックする。培養培地からの上清をウェルに添加し、そして
希釈する。各サイトカインについて各プレートの一列は、標準的な量の組換えサ
イトカインを含む。次いで、プレートを、０．５μｇ／ｍｌのビオチン標識され
た抗サイトカインモノクローナル抗体とインキュベートし、続いてアビジンペル
オキシダーゼおよび３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（Ｔｅｔｒａ
ｍｅｔｈｙｌｂｅｎｚｉｄｅｎｅ）（ＴＭＢ）基質を添加し、そしてＡ450nmで
測定する。
【０１６２】
上述の明細書中に述べられた全ての出版物は、本明細書中に参考として援用さ
れる。本発明に記載した方法およびシステムの種々の変更および変化は、本発明
の範囲および精神から逸脱することなく当業者に明らかである。本発明は，特定
の好ましい実施態様に関連して記載されるが、本願発明は、このような特定の実
施態様に過度に制限されるべきでないことが理解されるべきである。実際に，分
子生物学または関連の分野の当業者に明らかである、記載された本発明を実施す
るための態様の種々の変更が、上記の請求の範囲内であることが意図される。