【手続補正書】
【提出日】平成28年3月10日(2016.3.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号２に示す配列の変種を含む変異体ライセニン（lysenin）モノマーであって、前記モノマーがポアを形成でき、前記変種が、配列番号２のアミノ酸配列と配列全長にわたって少なくとも８５％の相同性を有し、前記変種が、ポリヌクレオチドと相互作用するモノマーの能力を変更する配列番号２のＥ８４及びＥ９２の位置での置換を含む、変異体ライセニンモノマー。
【請求項２】
前記変種が、ポリヌクレオチドと相互作用するモノマーの能力を変更する配列番号２のＥ８５、Ｅ９７及びＤ１２６の位置での置換を含む、請求項１に記載の変異体ライセニンモノマー。
【請求項３】
前記置換が、（ａ）前記モノマーの立体効果を変更する、（ｂ）前記モノマーの正味電荷を変更する、（ｃ）前記ポリヌクレオチドと水素結合する前記モノマーの能力を変更する、（ｄ）非局在化電子ｐｉシステムを通じて相互作用する化学的基を導入するもしくは除去する、および／または（ｅ）モノマーの構造を変更する、請求項１に記載の変異体ライセニンモノマー。
【請求項４】
（ｉ）前記置換が、正味の正電荷を増加または減少させ、（ｉｉ）前記置換が、Ｅ８４又はＥ９２に正に荷電したアミノ酸を導入することによりまたはＥ８４及びＥ９２で負電荷を中和することによって前記正味の正電荷を増加させ、または（ｉｉｉ）前記置換が、前記負に荷電したアミノ酸を１つもしくは複数の無荷電アミノ酸、非極性アミノ酸および／もしくは芳香族アミノ酸で置換することによって、Ｅ８４及びＥ９２で負電荷を中和する、請求項３に記載の変異体ライセニンモノマー。
【請求項５】
Ｅ８４およびＥ９２の位置で置換されたアミノ酸が、アスパラギン（Ｎ）、セリン（Ｓ）、グルタミン（Ｑ）、アルギニン（Ｒ）、グリシン（Ｇ）、チロシン（Ｙ）、ロイシン（Ｌ）、リジン（Ｋ）またはアラニン（Ａ）から選択される、請求項１に記載の変異体ライセニンモノマー。
【請求項６】
前記変種が次の置換：
ｉ．Ｅ８４Ｑ、Ｅ８５Ｋ、Ｅ９２Ｑ、Ｅ９７Ｓ、Ｄ１２６ＧおよびＥ１６７Ａの１つもしくは複数；
ｉｉ．Ｅ７６Ｓ、Ｅ８４Ｑ、Ｅ８５Ｋ、Ｅ９２Ｑ、Ｅ９７Ｓ、Ｄ１２６ＧおよびＥ１６７Ａの１つもしくは複数；
ｉｉｉ．Ｅ８４Ｑ、Ｅ８５Ｋ、Ｅ９２Ｑ、Ｅ９７Ｓ、Ｄ１２６Ｇ、Ｅ１６７ＡおよびＥ５０Ｓの１つもしくは複数；
ｉｖ．Ｅ８４Ｑ、Ｅ８５Ｋ、Ｅ９２Ｑ、Ｅ９７Ｓ、Ｄ１２６Ｇ、Ｅ１６７ＡおよびＥ７１Ｓの１つもしくは複数；
ｖ．Ｅ８４Ｑ、Ｅ８５Ｋ、Ｅ９２Ｑ、Ｅ９７Ｓ、Ｄ１２６Ｇ、Ｅ１６７ＡおよびＥ９４Ｓの１つもしくは複数；
ｖｉ．Ｅ８４Ｑ、Ｅ８５Ｋ、Ｅ９２Ｑ、Ｅ９７Ｓ、Ｄ１２６Ｇ、Ｅ１６７ＡおよびＥ１０２Ｓの１つもしくは複数；
ｖｉｉ．Ｅ８４Ｑ、Ｅ８５Ｋ、Ｅ９２Ｑ、Ｅ９７Ｓ、Ｄ１２６Ｇ、Ｅ１６７ＡおよびＥ１２８Ｓの１つもしくは複数；
ｖｉｉｉ．Ｅ８４Ｑ、Ｅ８５Ｋ、Ｅ９２Ｑ、Ｅ９７Ｓ、Ｄ１２６Ｇ、Ｅ１６７ＡおよびＥ１３５Ｓの１つもしくは複数；
ｉｘ．Ｅ８４Ｑ、Ｅ８５Ｋ、Ｅ９２Ｑ、Ｅ９７Ｓ、Ｄ１２６Ｇ、Ｅ１６７ＡおよびＤ６８Ｓの１つもしくは複数；
ｘ．Ｅ８４Ｑ、Ｅ８５Ｋ、Ｅ９２Ｑ、Ｅ９７Ｓ、Ｄ１２６Ｇ、Ｅ１６７ＡおよびＤ１２１Ｓの１つもしくは複数；
ｘｉ．Ｅ８４Ｑ、Ｅ８５Ｋ、Ｅ９２Ｑ、Ｅ９７Ｓ、Ｄ１２６Ｇ、Ｅ１６７ＡおよびＤ１３４Ｓの１つもしくは複数；または
ｘｉｉ．Ｅ８４Ｑ、Ｅ８５Ｋ、Ｅ９２Ｑ、Ｅ９７Ｓ、Ｄ１２６ＧおよびＥ１３５Ｓの１つもしくは複数；
ｘｉｉｉ．Ｅ８４Ｑ、Ｅ８５Ｋ、Ｅ９２Ｑ、Ｅ９７Ｓ、Ｈ１０３ＳおよびＤ１２６Ｇの１つもしくは複数；
ｘｉｖ．Ｅ８４Ｑ、Ｅ８５Ｋ、Ｍ９０Ｓ、Ｅ９２Ｑ、Ｅ９７ＳおよびＤ１２６Ｇの１つもしくは複数；
ｘｖ．Ｅ８４Ｑ、Ｑ８７Ｓ、Ｅ８５Ｋ、Ｅ９２Ｑ、Ｅ９７ＳおよびＤ１２６Ｇの１つもしくは複数；
ｘｖｉ．Ｅ８４Ｑ、Ｅ８５Ｓ、Ｅ９２Ｑ、Ｅ９７ＳおよびＤ１２６Ｇの１つもしくは複数；
ｘｖｉｉ．Ｅ８４Ｓ、Ｅ８５Ｋ、Ｅ９２Ｑ、Ｅ９７ＳおよびＤ１２６Ｇの１つもしくは複数；
ｘｖｉｉｉ．Ｈ８１Ｓ、Ｅ８４Ｑ、Ｅ８５Ｋ、Ｅ９２Ｑ、Ｅ９７ＳおよびＤ１２６Ｇの１つもしくは複数；
ｘｉｘ．Ｙ７９Ｓ、Ｅ８４Ｑ、Ｅ８５Ｋ、Ｅ９２Ｑ、Ｅ９７ＳおよびＤ１２６Ｇの１つもしくは複数；
ｘｘ．Ｆ７０Ｓ、Ｅ８４Ｑ、Ｅ８５Ｋ、Ｅ９２Ｑ、Ｅ９７ＳおよびＤ１２６Ｇの１つもしくは複数；
ｘｘｉ．Ｈ５８Ｓ、Ｅ８４Ｑ、Ｅ８５Ｋ、Ｅ９２Ｑ、Ｅ９７ＳおよびＤ１２６Ｇの１つもしくは複数；
ｘｘｉｉ．Ｒ５２Ｓ、Ｅ８４Ｑ、Ｅ８５Ｋ、Ｅ９２Ｑ、Ｅ９７ＳおよびＤ１２６Ｇの１つもしくは複数；
ｘｘｉｉｉ．Ｎ４８Ｓ、Ｅ８４Ｑ、Ｅ８５Ｋ、Ｅ９２Ｑ、Ｅ９７ＳおよびＤ１２６Ｇの１つもしくは複数；
ｘｘｉｖ．Ｎ４６Ｓ、Ｅ８４Ｑ、Ｅ８５Ｋ、Ｅ９２Ｑ、Ｅ９７ＳおよびＤ１２６Ｇの１つもしくは複数；
ｘｘｖ．Ｍ４４Ｓ、Ｅ８４Ｑ、Ｅ８５Ｋ、Ｅ９２Ｑ、Ｅ９７ＳおよびＤ１２６Ｇの１つもしくは複数；
ｘｘｖｉ．Ｅ８４Ｑ、Ｅ８５Ｋ、Ｅ９２ＱおよびＥ９７Ｓの１つもしくは複数；
ｘｘｖｉｉ．Ｅ８４Ｑ、Ｅ８５Ｋ、Ｅ９２Ｑ、Ｅ９７ＳおよびＤ１２６Ｇの１つもしくは複数；
ｘｘｖｉｉｉ．Ｅ８４Ｑ、Ｅ８５Ｋ、Ｅ９２Ｑ、Ｅ９７ＳおよびＥ１６７Ａの１つもしくは複数；
ｘｘｉｘ．Ｅ８４Ｑ、Ｅ８５Ｋ、Ｅ９２Ｑ、Ｄ１２６ＧおよびＥ１６７Ａの１つもしくは複数；
ｘｘｘ．Ｅ８４Ｑ、Ｅ９２Ｑ、Ｅ９７Ｓ、Ｄ１２６ＧおよびＥ１６７Ａの１つもしくは複数；
ｘｘｘｉ．Ｅ８４Ｑ、Ｅ８５Ｋ、Ｅ９２Ｑ、Ｅ９７Ｓ、Ｄ１２６Ｇ、Ｅ１６７ＡおよびＤ１２１Ｓの１つもしくは複数；
ｘｘｘｉｉ．Ｅ８４Ｑ、Ｅ８５Ｋ、Ｅ９２Ｑ、Ｅ９７Ｓ、Ｄ１２６Ｇ、Ｅ１６７ＡおよびＤ６８Ｓの１つもしくは複数；
ｘｘｘｉｉｉ．Ｅ８４Ｑ、Ｅ８５Ｋ、Ｅ９２Ｑ、Ｅ９７Ｓ、Ｄ１２６Ｇ、Ｅ１６７ＡおよびＥ１３５Ｓの１つもしくは複数；
ｘｘｘｉｖ．Ｅ８４Ｑ、Ｅ８５Ｋ、Ｅ９２Ｑ、Ｅ９７Ｓ、Ｄ１２６Ｇ、Ｅ１６７ＡおよびＥ１２８Ｓの１つもしくは複数；
ｘｘｘｖ．Ｅ８４Ｑ、Ｅ８５Ｋ、Ｅ９２Ｑ、Ｅ９７Ｓ、Ｄ１２６Ｇ、Ｅ１６７ＡおよびＥ１０２Ｓの１つもしくは複数；
ｘｘｘｖｉ．Ｅ８４Ｑ、Ｅ８５Ｋ、Ｅ９２Ｑ、Ｅ９７Ｓ、Ｄ１２６Ｇ、Ｅ１６７ＡおよびＥ９４Ｓの１つもしくは複数；
ｘｘｘｖｉｉ．Ｅ８４Ｑ、Ｅ８５Ｋ、Ｅ９２Ｑ、Ｅ９７Ｓ、Ｄ１２６Ｇ、Ｅ１６７ＡおよびＥ７１Ｓの１つもしくは複数；
ｘｘｘｖｉｉｉ．Ｅ８４Ｑ、Ｅ８５Ｋ、Ｅ９２Ｑ、Ｅ９７Ｓ、Ｄ１２６Ｇ、Ｅ１６７ＡおよびＥ５０Ｓの１つもしくは複数；
ｘｘｘｉｘ．Ｅ７６Ｓ、Ｅ８４Ｑ、Ｅ８５Ｋ、Ｅ９２Ｑ、Ｅ９７Ｓ、Ｄ１２６ＧおよびＥ１６７Ａの１つもしくは複数；または
ｘｌ．Ｅ８４Ｑ、Ｅ８５Ｋ、Ｅ９２Ｑ、Ｅ９７Ｓ、Ｄ１２６ＧおよびＥ１６７Ａの１つもしくは複数
を含む、請求項１に記載の変異体ライセニンモノマー。
【請求項７】
前記変種がｉからｘｌのいずれか１つの全ての置換を含む、請求項６に記載の変異体ライセニンモノマー。
【請求項８】
ライセニン由来の２つ以上の共有結合的に付着されたモノマーを含む構築物であって、モノマーの少なくとも１つが請求項１から７のいずれか一項に記載の変異体ライセニンモノマーである、構築物。
【請求項９】
（ｉ）前記２つ以上のモノマーが同じであるまたは異なっている、および／または
（ｉｉ）少なくとも１つのモノマーが配列番号２に示す配列を含み、および／または
（ｉｉｉ）前記構築物が２つのモノマーを含み、および／または
（ｉｖ）前記モノマーが遺伝子的に融合されており、および／または
（ｖ）前記モノマーがリンカーを介して付着している、 
請求項８に記載の構築物。
【請求項１０】
請求項１から７のいずれか一項に記載の変異体ライセニンモノマーまたは請求項８に記載の構築物をコードしているポリヌクレオチド。
【請求項１１】
請求項１から７のいずれか一項に記載の十分な数の変異体ライセニンモノマーを含むライセニン由来のホモオリゴマーポア。
【請求項１２】
請求項１から７のいずれか一項に記載の少なくとも１つの変異体ライセニンモノマーを含むライセニン由来のヘテロオリゴマーポア。
【請求項１３】
（ａ）標的分析物を請求項１１または１２に記載のポアに接触させて、前記標的分析物が前記ポアを通って移動するようにするステップ、および
（ｂ）前記分析物が前記ポアに対して移動するときに１つまたは複数の測定を行うステップであって、前記測定が標的分析物の１つまたは複数の特性を示し、それにより標的分析物を特性決定するステップ
を含む、標的分析物を特性決定する方法。
【請求項１４】
標的分析物を特性決定するための請求項１１または１２に記載のポアの使用。
【請求項１５】
（ａ）請求項１１または１２に記載のポアおよび（ｂ）ポリヌクレオチド結合タンパク質を含む、標的ポリヌクレオチドを特性決定するためのキット。