【手続補正書】
【提出日】平成28年3月14日(2016.3.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ウイルス様粒子（ＶＬＰ）であって、
ａ．組み換え型ポリヌクレオチドを有するアルファウイルスレプリコンと、
ｂ．レトロウイルスのｇａｇタンパク質と、
ｃ．融合エンベロープタンパク質と
を有し、前記ＶＬＰはアルファウイルス構造タンパク質遺伝子を含まないウイルス様粒子（ＶＬＰ）。
【請求項２】
請求項１記載のＶＬＰにおいて、前記アルファウイルスレプリコンはシンドビスウイルスまたはベネズエラウマ脳炎ウイルスに由来するものであるＶＬＰ。
【請求項３】
請求項１または２記載のＶＬＰにおいて、前記アルファウイルスレプリコンは、
ａ．シンドビスウイルスまたはベネズエラウマ脳炎ウイルス非構造タンパク質ＮＳＰ１、ＮＳＰ２、ＮＳＰ３、およびＮＳＰ４と、
ｂ．レトロウイルスパッケージングシグナルと
をコードする配列を有するポリヌクレオチドを有するものであるＶＬＰ。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか１つに記載のＶＬＰにおいて、前記レトロウイルスのｇａｇタンパク質は、ラウス肉腫ウイルスまたはマウス白血病ウイルスのゲノム配列を有するポリヌクレオチドによってコードされるものであるＶＬＰ。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか１つに記載のＶＬＰにおいて、前記融合エンベロープタンパク質は、ヘマグルチニン、ラウス肉腫ウイルス融合タンパク質、ダニ媒介性脳炎ウイルスおよびデング熱ウイルスのＥタンパク質、セムリキ森林ウイルスのＥ１タンパク質、バキュロウイルスｇｐ６４、ＶＳＶ−ＥｎｖＡ、およびＶＳＶ−Ｇタンパク質から成る群から選択されるエンベロープタンパク質をコードするゲノム配列を有するポリヌクレオチドによってコードされるものであるＶＬＰ。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか１つに記載のＶＬＰにおいて、前記ＶＬＰは真核細胞と結合することが可能であるＶＬＰ。
【請求項７】
請求項１記載のＶＬＰにおいて、前記レプリコンは真核細胞において複製されるものであるＶＬＰ。
【請求項８】
請求項１記載のＶＬＰにおいて、前記ＶＬＰは宿主細胞に細胞変性をもたらさないものであるＶＬＰ。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれか１つに記載のＶＬＰにおいて、前記アルファウイルスレプリコンは、前記組み換え型ポリヌクレオチドに操作可能に結合したウイルスＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼのプロモーターを有するものであるＶＬＰ。
【請求項１０】
請求項１記載のＶＬＰにおいて、前記組み換え型ポリヌクレオチドは、アンチセンスＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、またはｍｉＲＮＡをコードし、前記アンチセンスＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、またはｍｉＲＮＡは、前記細胞において遺伝子の発現をノックダウンするものであるＶＬＰ。
【請求項１１】
請求項１記載のＶＬＰにおいて、前記組み換え型ポリヌクレオチドはタンパク質に翻訳されることが可能なＲＮＡを有するものであるＶＬＰ。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか１つに記載のＶＬＰを産生する方法であって、
ａ．真核細胞を同時形質転換する工程であって、
ｉ．前記アルファウイルスレプリコンをコードするポリヌクレオチド配列を有する第１のベクターであって、前記アルファウイルスレプリコンが目的のポリヌクレオチドを含むものである第１のベクターと、
ｉｉ．前記レトロウイルスのｇａｇタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を有する第２のベクターと、
ｉｉｉ．前記融合エンベロープタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を有する第３のベクターと
により真核細胞を同時形質転換する、前記同時形質転換する工程と、
ｂ．各々のベクターがそのコードする産物を産生させるのに適した条件下で前記同時形質転換した細胞を培養し、それにより前記ＶＬＰを産生する工程と、
ｃ．前記細胞から前記ＶＬＰを単離する工程と
を有し、前記ベクターおよび前記細胞はいかなるアルファウイルス構造タンパク質遺伝子を含まない方法。
【請求項１３】
真核細胞において少なくとも１つの組み換え型ポリヌクレオチドを発現する方法であって、請求項１〜１１のいずれか１つに記載のＶＬＰを細胞に接触させる工程を有する方法。
【請求項１４】
請求項１〜１１のいずれか１つに記載のＶＬＰを有する医薬組成物。
【請求項１５】
真核細胞であって、
ａ．アルファウイルスレプリコンをコードするポリヌクレオチド配列を有するプラスミドであって、前記アルファウイルスレプリコンが目的のポリヌクレオチドを含むものであるプラスミドと、
ｂ．ｇａｇタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を有するプラスミドと、
ｃ．異種融合エンベロープタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を有するプラスミドと
を有し、前記プラスミドおよび前記細胞はアルファウイルス構造タンパク質をコードする遺伝子を含まない真核細胞。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００８】
ターゲティングの特異性が欠如しているため、遺伝子治療の分野においてアルファウイルスの使用には限界がある。しかしながら、Ｅ２の構造の非保存ループの可変抗体領域の導入を通し、特定の細胞集団が標的とされる。さらにまた、いくつかの内在性アルファウイルスタンパク質が感染においてアポトーシスの誘導に関与しているので、また、アルファウイルスカプシドが宿主細胞へのｍＲＮＡの一過性導入のみを介して行われるので、遺伝子治療の場合、全てのアルファウイルスの使用は限られた有効性しか持たない。これらの限界のどちらも、レトロウイルスまたはレンチウイルスのアルファウイルスエンベロープの偽型には及ばない。
この出願の発明に関連する先行技術文献情報としては、以下のものがある（国際出願日以降国際段階で引用された文献及び他国に国内移行した際に引用された文献を含む）。
（先行技術文献）
（特許文献）
（特許文献１）  米国特許出願公開第２０１１／０２５０６７５号明細書
（特許文献２）  米国特許出願公開第２００８／０１１８９５６号明細書
（特許文献３）  米国特許第６，５４１，０１０号明細書
（特許文献４）  米国特許第６，７８３，９３９号明細書
（特許文献５）  米国特許第７，４２５，３３７号明細書
（特許文献６）  国際公開第２００８／１１５１９９号
（非特許文献）
（非特許文献１）  Ｈａｒｖｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｋｕｎｊｉｎ  Ｖｉｒｕｓ  Ｒｅｐｌｉｃｏｎ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｈｕｍａｎ  Ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  Ｖｉｒｕｓ  Ｖａｃｃｉｎｅ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ＪＯＵＲＮＡＬ  ＯＦ  ＶＩＲＯＬＯＧＹ，Ｊｕｌｙ  ２００３，ｐ．７７９６−７８０３
（非特許文献２）  Ｋａｃｚｍａｒｃｚｙｋ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｕｓｉｎｇ  ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ  ｖｉｒｕｓ−ｌｉｋｅ  ｐａｒｔｉｃｌｅｓ  ＰＮＡＳ  Ｏｃｔｏｂｅｒ  １１，２０１１  ｐｐ．１６９９８−１７００３
（非特許文献３）  Ｆｒｏｌｏｖ  ｅｔ  ａｌ．；"Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ＲＮＡ  Ｒｅｐｌｉｃｏｎｓ  Ｃａｐａｂｌｅ  ｏｆ  Ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔ  Ｎｏｎｃｙｔｏｐａｔｈｉｃ  Ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ"；Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ；Ｍａｙ  １９９９；Ｖｏｌ．７３  Ｎｏ．５；ｐ．３８５４−３８６５
（非特許文献４）  Ｘｉｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．；"Ｓｉｎｄｂｉｓ  ｖｉｒｕｓ：ａｎ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ，ｂｒｏａｄ  ｈｏｓｔ  ｒａｎｇｅ  ｖｅｃｔｏｒ  ｆｏｒ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ａｎｉｍａｌ  ｃｅｌｌｓ"；Ｓｃｉｅｎｃｅ；Ｍａｒｃｈ  ３，１９８９；Ｖｏｌ．２４３  Ｎｏ．４８９５；ｐ．１１８８−１１９１
（非特許文献５）  Ｂｒｅｄｅｎｂｅｅｋ  ｅｔ  ａｌ．；Ｓｉｎｄｂｉｓ  Ｖｉｒｕｓ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｖｅｃｔｏｒｓ：Ｐａｃｋａｇｉｎｇ  ｏｆ  ＲＮＡ  Ｒｅｐｌｉｃｏｎｓ  ｂｙ  Ｕｓｉｎｇ  Ｄｅｆｅｃｔｉｖｅ  Ｈｅｌｐｅｒ  ＲＮＡｓ"；Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ；Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  １９９３；Ｖｏｌ．６７  Ｎｏ．１１；ｐ．６４３９−６４４６
（非特許文献６）  Ｐｉｖｅｒ  ｅｔ  ａｌ．；"Ｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｆｕｌｌ−Ｌｅｎｇｔｈ  Ｓｅｍｌｉｋｉ  Ｆｏｒｅｓｔ  Ｖｉｒｕｓ  Ｒｅｐｌｉｃｏｎ  ｂｙ  Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓ  Ｐａｒｔｉｃｌｅｓ"；Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ；Ｏｃｔｏｂｅｒ  ２００６；Ｖｏｌ．８０  Ｎｏ．１９；ｐ．９８８９−９８９５
（非特許文献７）  Ｊｕｒｇｅｎｓ  ｅｔ  ａｌ．；"Ａ  Ｎｏｖｅｌ  Ｓｅｌｆ−Ｒｅｐｌｉｃａｔｉｎｇ  Ｃｈｉｍｅｒｉｃ  Ｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓ−Ｌｉｋｅ  Ｐａｒｔｉｃｌｅ"；Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ；Ｊａｎｕａｒｙ  ２０１２；Ｖｏｌ．８６  Ｎｏ．１；ｐ．２４６−２６１
（非特許文献８）  Ｓｃｈｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．；"Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ａｇａｉｎｓｔ  Ｈｉｇｈ−Ｄｏｓｅ  Ｓｉｍｉａｎ  Ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  Ｖｉｒｕｓ  Ｃｈａｌｌｅｎｇｅ  Ｃｏｎｆｅｒｒｅｄ  ｂｙ  ａ  Ｎｅｗ  Ｐｒｉｍｅ−Ｂｏｏｓ  Ｖａｃｃｉｎｅ  Ｒｅｇｉｍｅｎ"；Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ；Ｊｕｎｅ  ２０１１；Ｖｏｌ．８５  Ｎｏ．１２；ｐ．５７６４−５７７２
（非特許文献９）  Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．；"Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ｍｏｌｏｎｅｙ  ｍｕｒｉｎｅ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｖｉｒｕｓ  ｐａｒｔｉｃｌｅｓ  ｉｎ  ＢＨＫ  ｃｅｌｌｓ  ｕｓｉｎｇ  Ｓｅｍｌｉｋｉ  Ｆｏｒｅｓｔ  ｖｉｒｕｓ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ＲＮＡ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｖｅｃｔｏｒｓ"；Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．；Ｏｃｔｏｂｅｒ  １９９６；Ｖｏｌ．９３；ｐ．１１６５８−１１６６３
（非特許文献１０）  Ｄｉａｔｔａ  ｅｔ  ａｌ．；"Ｓｅｍｌｉｋｉ  Ｆｏｒｅｓｔ  ｖｉｒｕｓ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｖｉｒｕｓ−ｌｉｋｅ  ｐａｒｔｉｃｌｅｓ：ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅｉｒ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ  ｐａｔｈｗａｙｓ"；Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ；Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  ２００５；Ｖｏｌ．８６；ｐ．３１２９−３１３６