【手続補正書】
【提出日】平成28年7月21日(2016.7.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
試験サンプル中の少なくとも１つの標的分析物を検出する方法であって、
（ａ）試験サンプルと、遷移金属錯体及び酵素反応部分（ＥＲＭ）を含み、第１のＥ０を有する電気活性部分（ＥＡＭ）とを、前記試験サンプル中の少なくとも１つの標的分析物の存在下で前記ＥＲＭが前記ＥＡＭの少なくとも一部から除去され、第２のＥ０を有するＥＡＭを生じる条件下で接触させることと、
（ｂ）前記ＥＡＭの第１のＥ０と第２のＥ０との間の変化を検出することと、
を含み、前記変化が前記少なくとも１つの標的分析物の存在の指標である、方法。
【請求項２】
（ａ）前記少なくとも１つの標的分析物が、前記ＥＡＭから前記ＥＲＭを除去する酵素であり；及び／又は（ｂ）前記少なくとも１つの標的分析物が、第１の固体支持体に結合する捕捉結合リガンドと、前記ＥＡＭから前記ＥＲＭを除去する酵素である代理酵素を含む可溶性結合リガンドとの間で結合し；例えば、（ｉ）前記捕捉結合リガンド及び前記可溶性結合リガンドが、モノクローナル抗体、モノクローナル抗体のフラグメント、ポリクローナル抗体、ポリクローナル抗体のフラグメント、タンパク質及びペプチドからなる群から独立して選択され；及び／又は（ｉｉ）前記代理酵素が、プロテアーゼ、ペプチダーゼ、ホスファターゼ、オキシダーゼ、ヒドロラーゼ、リアーゼ、トランスフェラーゼ、イソメラーゼ及びリガーゼからなる群から選択され；及び／又は（ｃ）溶液相中のアッセイ混合物が工程（ａ）中及び工程（ｂ）前に形成され、該アッセイ混合物と、電極又は電極アレイを備える第２の固体支持体とを、前記第１のＥ０を有するＥＡＭ及び前記第２のＥ０を有するＥＡＭを含む自己組織化単分子層（ＳＡＭ）が前記電極上に形成される条件下で接触させる工程（ａ１）を更に含み、任意に、前記試験サンプル中で２つ以上の異なる標的分析物が検出され得るように、前記電極アレイの各々の電極が固有のＥＡＭを含むＳＡＭで修飾されており、各々のＥＡＭが特異的標的分析物又は前記代理酵素に固有のＥＲＭを含み；及び／又は（ｄ）前記ＥＡＭが、自己組織化単分子層（ＳＡＭ）として第２の固体支持体上の電極又は電極アレイに共有結合し；及び／又は（ｅ）前記ＥＡＭが前記ＥＲＭと前記遷移金属錯体とを結び付ける自己犠牲部分（ＳＩＭ）を更に含み；及び／又は（ｆ）前記酵素反応部分（ＥＲＭ）が、アミノ酸、ペプチド、アセテート、脂質、炭水化物、ホスフェート又は他の官能基からなる群から選択され；及び／又は（ｇ）前記少なくとも１つの標的分析物が、プロテアーゼ、ペプチダーゼ、ホスファターゼ、オキシダーゼ、ヒドロラーゼ、リアーゼ、トランスフェラーゼ、イソメラーゼ及びリガーゼからなる群から選択され；及び／又は（ｈ）前記標的分析物が前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）であり；及び／又は（ｉ）前記遷移金属錯体が、鉄、ルテニウム及びオスミウムからなる群から選択される遷移金属を含み；及び／又は（ｊ）前記遷移金属錯体がフェロセン及び置換フェロセンを含み；及び／又は（ｋ）前記ＥＡＭが、前記遷移金属錯体を前記電極に繋留する柔軟性オリゴマーアンカーを含み、該柔軟性アンカーが、例えばポリアクリル酸、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリビニルアルコール、ポリメタクリレート、ポリビニルピロリジノン、アクリルアミド、無水マレイン酸、及びポリビニルピリジン、アリルアミン、エチレンイミン、オキサゾリン、並びに分子間の疎水性相互作用を制限し、組織化及び剛性を防ぐ側鎖を有する疎水性オリゴマーから選択される、主鎖又は側鎖に極性又は帯電官能基を有するオリゴマーである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
固体支持体を含む組成物であって、該固体支持体が、
（ｉ）自己組織化単分子層（ＳＡＭ）と、
（ｉｉ）遷移金属錯体及び酵素反応部分（ＥＲＭ）を含む共有結合した電気活性部分（ＥＡＭ）と、
を含む電極を備え、前記ＥＡＭが、前記ＥＲＭが存在する場合に第１のＥ０を有し、前記ＥＲＭが存在しない場合に第２のＥ０を有する、組成物。
【請求項４】
前記ＥＡＭが前記ＥＲＭと前記遷移金属錯体とを結び付ける自己犠牲部分（ＳＩＭ）を更に含む、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
前記遷移金属が、鉄、ルテニウム及びオスミウムからなる群から選択される、請求項３又は４に記載の組成物。
【請求項６】
前記遷移金属錯体がフェロセン又は置換フェロセンである、請求項３〜５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
前記ＥＡＭが、前記遷移金属錯体を前記電極に繋留する柔軟性オリゴマーアンカーを含み、該柔軟性アンカーが、例えばポリアクリル酸、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリビニルアルコール、ポリメタクリレート、ポリビニルピロリジノン、アクリルアミド、無水マレイン酸、及びポリビニルピリジン、アリルアミン、エチレンイミン、オキサゾリン、並びに分子間の疎水性相互作用を制限し、組織化及び剛性を防ぐ側鎖を有する他の疎水性オリゴマーから選択される、主鎖又は側鎖に極性又は帯電官能基を有するオリゴマーである、請求項３〜６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
前記固体支持体が電極アレイを備える、請求項３〜７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
前記試験サンプル中で２つ以上の異なる標的分析物が検出され得るように、前記電極アレイの各々の電極が固有のＥＡＭを含むＳＡＭで修飾されており、各々のＥＡＭが特異的標的分析物又は前記代理酵素に固有のＥＲＭを含む、請求項３〜８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
試験サンプル中の少なくとも１つの標的分析物を検出するキットであって、請求項３〜９のいずれか一項に記載の組成物を含む、キット。
【請求項１１】
試験サンプル中の少なくとも１つの標的分析物を検出する方法であって、
（ａ）試験サンプルと、第１のＥ０を有し、遷移金属錯体及び酵素反応部分（ＥＲＭ）を含む電気活性部分（ＥＡＭ）とを、前記試験サンプル中の少なくとも１つの標的分析物の存在下で前記ＥＲＭが前記ＥＡＭの少なくとも一部から除去され、第２のＥ０を有するＥＡＭを生じる条件下で接触させることであって、溶液相中のアッセイ混合物を形成することと、
（ｂ）前記アッセイ混合物と電極又は電極アレイを備える固体支持体とを、前記第１のＥ０を有するＥＡＭ及び前記第２のＥ０を有するＥＡＭを含む自己組織化単分子層（ＳＡＭ）が前記電極上に形成される条件下で接触させることと、
（ｃ）前記ＥＡＭの第１のＥ０と第２のＥ０との間の変化を検出することと、
を含み、前記変化が前記少なくとも１つの標的分析物の存在の指標である、方法。
【請求項１２】
試験サンプル中の少なくとも１つの標的分析物を検出する方法であって、
（ａ）試験サンプルと電極又は電極アレイを備える固体支持体とを、該試験サンプル中の少なくとも１つの標的分析物の存在下で前記ＥＲＭが前記ＥＡＭの少なくとも一部から除去され、第２のＥ０を有するＥＡＭを生じる条件下で接触させることであって、前記電極が、
（ｉ）自己組織化単分子層と、
（ｉｉ）第１のＥ０を有し、遷移金属錯体及び酵素反応部分（ＥＲＭ）を含む共有結合した電気活性部分（ＥＡＭ）と、
を含むことと、
（ｂ）前記ＥＡＭの第１のＥ０と第２のＥ０との間の変化を検出することと、
を含み、前記変化が前記少なくとも１つの標的分析物の存在の指標である、方法。
【請求項１３】
試験サンプル中の少なくとも１つの標的分析物を検出する方法であって、
（ａ）試験サンプルと第１の固体支持体に結合した捕捉結合リガンドとを、少なくとも１つの標的分析物の存在下で第１の錯体が形成される条件下で接触させることと、
（ｂ）前記第１の錯体と代理酵素を含む可溶性結合リガンドとを、前記第１の固体支持体上に第２の錯体が形成される条件下で接触させることと、
（ｃ）前記第２の錯体と、遷移金属錯体及び酵素反応部分（ＥＲＭ）を含み、第１のＥ０を有する電気活性部分（ＥＡＭ）とを、前記試験サンプル中の少なくとも１つの標的分析物の存在下で前記ＥＲＭが前記ＥＡＭの少なくとも一部から除去され、第２のＥ０を有するＥＡＭを生じる条件下で接触させることと、
（ｄ）前記ＥＡＭの第１のＥ０と第２のＥ０との間の変化を検出することと、
を含み、前記変化が前記少なくとも１つの標的分析物の存在の指標であり、前記代理酵素が前記ＥＲＭを前記ＥＡＭから除去する酵素である、方法。
【請求項１４】
工程（ａ）と工程（ｂ）との間に洗浄工程を含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
（ａ）工程（ｂ）と工程（ｃ）との間に洗浄工程を含み；及び／又は（ｂ）溶液相中のアッセイ混合物が工程（ｃ）中で形成され、該アッセイ混合物と、電極又は電極アレイを備える第２の固体支持体とを、前記第１のＥ０を有するＥＡＭ及び前記第２のＥ０を有するＥＡＭを含む自己組織化単分子層（ＳＡＭ）が前記電極上に形成される条件下で接触させる工程（ｃ１）を更に含み；及び／又は（ｃ）前記ＥＡＭが、自己組織化単分子層（ＳＡＭ）として第２の固体支持体上の電極又は電極アレイに共有結合する、請求項１３又は１４に記載の方法。