【手続補正書】
【提出日】平成28年7月4日(2016.7.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
試料（ＥＯ）を観察するための方法であって、
ａ）０．００１より大きいまたはこれに等しい、好ましくは０．０１より大きいまたはこれに等しい虚部ｋを有する複素屈折率を有する、コントラスト増幅層と呼ばれる少なくとも１つの層（ＣＡ）が堆積された透明基板（ＳＴ）を備える試料支持体（ＳＡＣ）を提供するステップと、
ｂ）観察される前記試料を、前記支持体上の前記コントラスト増幅層の側に置くステップと、
ｃ）前記試料上に、前記基板を通し、空間的インコヒーレント光ビーム（Ｆ）を向けるステップであって、前記空間的インコヒーレント光ビームは、２０°より大きいまたはこれに等しい開口半角θを有する照明コーンを形成するように集束されるステップと、
ｄ）前記試料を対物レンズ（ＬＯ）および前記基板を通して観察するステップと、含み、
前記コントラスト増幅層は、前記試料が前記支持体の不在の場合よりも高いコントラストで観察されるように寸法調整され、
前記空間的インコヒーレント光ビーム（Ｆ）が、偏光されない、方法。
【請求項２】
前記コントラスト増幅層が、金属製である、請求項１に記載の試料を観察するための方法。
【請求項３】
前記照明コーンの開口半角が、２０°から７５°の間、好ましくは３０°から７０°の間、より好ましくは４０°から６５°の間であり、
前記照明コーンの軸は、前記基板に対して垂直である、請求項１または２に記載の試料を観察するための方法。
【請求項４】
前記対物レンズが、前記試料を照らしかつ観察するために使用される、請求項１から３のいずれか一項に記載の試料を観察するための方法。
【請求項５】
前記コントラスト増幅層および前記試料が、水中または水溶液中に浸漬される、請求項１から４のいずれか一項に記載の試料を観察するための方法。
【請求項６】
前記コントラスト増幅層が、厚さこう配を有する、請求項１から５のいずれか一項に記載の試料を観察するための方法。
【請求項７】
前記コントラスト増幅層の前記厚さまたは局所的厚さが、少なくとも１つの照明波長に対して、前記照明コーン上に統合されたコントラストを最適化するように決定され、前記コントラストによって、前記コントラスト増幅層の前記厚さのバリエーションから構成された基準試料が観察される、請求項１から６のいずれか一項に記載の試料を観察するための方法。
【請求項８】
前記コントラスト増幅層を寸法調整する事前ステップを含み、
前記事前ステップは、
−前記基準試料が観察されるコントラストを表す領域を、照明波長に対して正規化された前記層の前記厚さおよび前記照明ビームの前記開口半角θの関数として算出するステップと、
−前記開口半角θを表す軸に対してほぼ平行な配向を有する、前記領域の頂点または凹線を特定するステップと、
前記頂点または凹線に対応する、前記層の厚さの値、または値の範囲を特定するステップとを含み、
前記コントラスト増幅層の前記厚さまたは局所的厚さが、こうして特定された前記値に等しくまたは前記値の範囲内で選択される、請求項７に記載の試料を観察するための方法。
【請求項９】
前記試料支持体が、前記コントラスト増幅層の上方に、少なくとも１つの化学種または生物学的種（ＥＣＤ）を結合させることができる官能基化層（ＣＦ）を有し、
前記方法が、前記官能基化層を、結合される前記化学種または生物学種の溶液と接触させるステップであって、その結果、前記化学種または生物学的種が、前記官能基化層の上方に、観察される前記試料を構成する層（ＣＥ）を形成するステップを含む、請求項１から８のいずれか一項に記載の試料を観察するための方法。
【請求項１０】
前記または少なくとも１つの化学種または生物学的種が、吸水性であり、０．０００１より大きいまたはこれに等しい虚部ｋを有する複素屈折率を有しており、または散乱性である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記官能基化層が、異なる化学種または生物学的種を結合させることができる複数のスポットの形態である、請求項９または１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記コントラスト層が、前記スポットに対応する位置においてのみ堆積される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記支持体が、前記スポットの外側に、前記溶液中に含まれたいかなる化学種または生物学的種の結合も防止する不動態化層を含む、請求項１１または１２に記載の方法。
【請求項１４】
少なくとも１つの化学種または生物学的種を検出する、または定量的に決定するための方法であって、
ａ）少なくとも１つの化学種または生物学的種を結合させることができる少なくとも１つの官能基化層（ＣＦ）が堆積された透明基板（ＳＴ）を提供するステップと、
ｂ）前記官能基化層を、金属ナノ粒子または吸収性もしくは散乱性のラベルで標識された化学種または生物学的種を含む少なくとも１つの溶液と接触させて置くステップであって、前記種が、前記官能基化層に、直接的、または１つまたは複数の他の化学種または生物学的種を用いて結合することができ、その結果、前記粒子は、連続的または非連続的な、金属製の、吸収性もしくは散乱性の層（ＣＭ）を形成する、ステップと、
ｃ）少なくとも前記官能基化層および金属製の、吸収性または散乱性の層から構成された組立体上に、前記基板を通して、空間的インコヒーレント光ビーム（Ｆ）を向けるステップであって、前記空間的インコヒーレント光ビーム（Ｆ）が、２０°より大きいまたはこれに等しい開口半角θを有する照明コーンを形成するように集束される、ステップと、
ｄ）前記組立体を、対物レンズ（ＬＯ）および前記基板を通して観察するステップと、を含み、
前記空間的インコヒーレント光ビーム（Ｆ）が、偏光されない、方法。
【請求項１５】
ステップｂ）中、前記官能基化層が、検出されるまたは定量的に決定される、金属ナノ粒子（ＮＰＭ）または吸水性もしくは散乱性のラベルで標識された化学種または生物学的種（ＥＣＤ）を含む溶液（Ｓ）と接触して置かれ、前記種は、前記官能基化層と結合し、それによって前記連続的または非連続的な金属層（ＣＭ）を形成することができる、請求項１４に記載の少なくとも１つの化学種または生物学的種を検出する、または定量的に決定するための方法。
【請求項１６】
前記ステップｂ）が、
ｂ１）前記官能基化層を、検出されるまたは定量的に決定される化学種または生物学的種を含む第１の溶液（Ｓ１）と接触させて置き、それによって「中間」層（ＣＩ）を形成するサブステップと、
ｂ２）前記中間層を、「補助的」化学種または生物学的種（ＥＣＡ）を含む第２の溶液（Ｓ２）と接触させて置くサブステップであって、前記「補助的」化学種または生物学的種が、金属ナノ粒子または吸水性もしくは散乱性のラベルで標識され、前記中間層と結合し、それによって前記連続的または非連続的な、金属製の、吸水性もしくは散乱性の層（ＣＭ）を形成することができるサブステップとを含む、請求項１４に記載の少なくとも１つの化学種または生物学的種を検出する、または定量的に決定するための方法。
【請求項１７】
前記ステップｂ）が、
ｂ１）前記官能基化層を、中間種（ＥＣＴ）と呼ばれる化学種または生物学的種を含む第１の溶液（Ｓ１）と接触させて置くサブステップであって、前記第１の化学種または生物学的種が、金属ナノ粒子または吸水性もしくは散乱性のラベルで標識され、前記官能基化層と結合し、それによって前記連続的または非連続的な、金属製の、吸水性もしくは散乱性の層（ＣＭ）を形成することができる、サブステップと、
ｂ２）前記官能基化層および前記金属性または吸収性もしくは散乱性の層を、検出されるまたは定量的に決定される前記化学種または生物学的種を含む第２の溶液（Ｓ２）と接触させて置くサブステップであって、前記第２の溶液が、前記中間種のものより大きい前記官能基化層との親和性を有し、その結果、前記中間種は変位され、前記金属性の、吸収性または散乱性の層は、少なくとも部分的に無くされるサブステップとを含む、請求項１４に記載の少なくとも１つの化学種または生物学的種を検出する、または定量的に決定するための方法。
【請求項１８】
前記ステップｂ）中、前記官能基化層が、定量的に決定される前記化学種または生物学的種、および前記競合の化学種または生物学的種（ＥＣＣ）も含む溶液（Ｓ）と接触して置かれ、前記２つの種のうち１つは、金属ナノ粒子または吸収性もしくは散乱性のラベルで標識され、その結果、連続的または非連続的な金属製の、吸水性もしくは散乱性の層（ＣＭ）が得られ、その有効厚さは、前記競合の化学種または生物学的種の濃度と、定量的に決定される前記化学種または生物学的種のものとの間の比によって決まる、請求項１４に記載の少なくとも１つの化学種または生物学的種を定量的に決定するための方法。
【請求項１９】
前記照明コーンの前記開口半角が、２０°から７５°の間、好ましくは３０°から７０°の間、より好ましくは４０°から６５°の間であり、前記コーンの軸が、前記基板に対して垂直である、請求項１４から１８のいずれか一項に記載の検出する、または定量的に決定するための方法。
【請求項２０】
前記同じ対物レンズが、前記試料を照らし、観察するために使用される、請求項１４から１９のいずれか一項に記載の検出する、または定量的に決定するための方法。
【請求項２１】
前記官能基化層が、前記基板の表面上に置かれた複数のスポットの形態であり、異なる化学種または生物学的種を結合させることができる、請求項１４から２０のいずれか一項に記載の検出する、または定量的に決定するための方法。
【請求項２２】
０．００１より大きい、またはこれに等しい、好ましくは０．０１より大きい、またはこれに等しい虚部ｋを有する複素屈折率を有するコントラスト増幅層と呼ばれるものが、前記基板と前記官能基化層の間に間置される、請求項１４から２１のいずれか一項に記載の検出する、または定量的に決定するための方法。
【請求項２３】
前記支持体が、前記スポットの外側に、前記溶液中に含まれたいかなる化学種または生物学的種の結合も防止する不動態化層を含む、請求項２１または２２に記載の方法。