【手続補正書】
【提出日】平成28年10月27日(2016.10.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
非ヒト家畜動物を作製する方法であって、
家畜細胞及び家畜胚からなる群から選択される生命体に、性成熟選択的神経内分泌遺伝子を不活性化する薬剤を導入するステップ
を含む方法。
【請求項２】
前記性成熟選択的神経内分泌遺伝子が、Ｇｐｒ５４、Ｋｉｓｓ１、及びＧｎＲＨ１１からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記薬剤が前記細胞の染色体標的部位に特異的に結合して二本鎖ＤＮＡ切断を生じさせ、それにより前記性成熟選択的神経内分泌遺伝子が不活性化される、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
前記薬剤が、ＴＡＬＥＮ、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、Ｃａｓ９／ＣＲＩＳＰＲ及びリコンビナーゼ融合タンパク質からなる群から選択される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記薬剤がＴＡＬＥＮを含み、前記方法が、前記生命体にリコンビナーゼを前記ＴＡＬＥＮと共導入するステップをさらに含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記薬剤を発現する導入遺伝子が前記生命体のゲノムに置かれる、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記薬剤が前記リコンビナーゼ融合タンパク質であり、前記方法が、標的化核酸配列を前記融合タンパク質と共に導入するステップを含み、前記標的化核酸配列が前記染色体部位に対する特異的結合のため前記リコンビナーゼとフィラメントを形成する、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
ある配列を有する核酸鋳型を前記生命体に導入するステップであって、前記生命体の前記ゲノムが前記二本鎖切断の部位で前記配列を受け取るステップをさらに含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記生命体から前記動物をクローニングするステップをさらに含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記動物が、ウシ、ブタ、ヒツジ、ニワトリ、ヤギ、ウサギ、及び魚からなる群から選択される、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記遺伝子の前記不活性化が誘導性システムの制御下にある、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法により作製される遺伝子改変非ヒト家畜動物。
【請求項１３】
性成熟選択的神経内分泌遺伝子の不活性化を含むゲノムを含む遺伝子改変非ヒト家畜動物であって、前記遺伝子の前記不活性化により前記動物が性的に成熟することが阻止されている、家畜動物。
【請求項１４】
前記遺伝子の前記不活性化が、
前記性成熟遺伝子をコードする配列及び／又はそのシス調節エレメント
における１つ以上の塩基の挿入、欠失、又は置換
を含む、請求項１３に記載の家畜動物。
【請求項１５】
前記遺伝子がトランス作用因子により不活性化され、前記トランス作用因子が干渉性ＲＮＡ及びドミナントネガティブ因子からなる群から選択され、前記トランス作用因子が外来遺伝子又は内在性遺伝子により発現する、請求項１３又は１４に記載の家畜動物。
【請求項１６】
前記遺伝子の前記不活性化が誘導性システムの制御下にある、請求項１３〜１５のいずれか一項に記載の家畜動物。
【請求項１７】
前記動物が、ウシ、ブタ、ヒツジ、ニワトリ、ヤギ、及び魚からなる群から選択される、請求項１３〜１６のいずれか一項に記載の家畜動物。
【請求項１８】
前記性成熟遺伝子が、Ｇｐｒ５４、Ｋｉｓｓ１、及びＧｎＲＨ１１からなる群から選択される、請求項１３〜１７のいずれか一項に記載の家畜動物。
【請求項１９】
前記動物が、外因性組換えタンパク質をさらに発現する、請求項１３〜１８のいずれか一項に記載の家畜動物。
【請求項２０】
処理なしには遺伝的に成熟不能である、請求項１３〜１９のいずれか一項に記載の家畜動物。
【請求項２１】
細胞、胚、胚盤胞、体細胞、初代細胞、及び始原生殖細胞からなる群から選択される生命体に神経内分泌遺伝子のノックアウトを調製するステップを含む、請求項１３〜２０のいずれか一項に記載の家畜動物を作製する方法。
【請求項２２】
性成熟選択的神経内分泌遺伝子の不活性化に関してヘテロ接合であるゲノムを含む遺伝子改変非ヒト家畜動物であって、前記不活化遺伝子がホモ接合の子孫は性的に成熟することが阻止される、動物。
【請求項２３】
前記神経内分泌遺伝子が、Ｇｐｒ５４、Ｋｉｓｓ１、及びＧｎＲＨ１１からなる群から選択される、請求項２２に記載の動物。
【請求項２４】
動物の性成熟のため前記動物に薬剤を投与するステップであって、前記薬剤が前記動物の遺伝的性成熟不能を補償する、ステップ
を含む、非ヒト家畜動物を飼育する方法。
【請求項２５】
前記薬剤がゴナドトロピン又はゴナドトロピン類似体を含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記動物の前記遺伝的成熟不能が、性成熟選択的神経内分泌遺伝子を遺伝的に不活性化した結果である、請求項２４又は２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記不活化遺伝子が、Ｇｐｒ５４、Ｋｉｓｓ１、及びＧｎＲＨ１１からなる群から選択される、請求項２４〜２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
細胞又は動物胚盤胞からなる群から選択されるインビトロ生命体であって、性成熟遺伝子の不活性化を含むゲノムを含む非ヒトインビトロ生命体。
【請求項２９】
ウシ、ブタ、ヒツジ、ニワトリ、ヤギ、ウサギ、及び魚からなる群から選択される細胞又は胚である、請求項２８に記載の生命体。
【請求項３０】
前記細胞が、体細胞、初代細胞、又は始原生殖細胞からなる群から選択される、請求項２８又は２９に記載の生命体。
【請求項３１】
性成熟選択的神経内分泌遺伝子の不活性化に関してヘテロ接合であるゲノムを有する、請求項２８〜３０のいずれか一項に記載の生命体。
【請求項３２】
前記神経内分泌遺伝子が、Ｇｐｒ５４、Ｋｉｓｓ１、及びＧｎＲＨ１１からなる群から選択される、請求項２８〜３１のいずれか一項に記載の生命体。
【請求項３３】
前記遺伝子の前記不活性化が
前記性成熟遺伝子をコードする配列及び／又はそのシス調節エレメント
における１つ以上の塩基の挿入、欠失、又は置換
を含む、請求項２８〜３２のいずれか一項に記載の生命体。
【請求項３４】
前記遺伝子がトランス作用因子により不活性化され、前記トランス作用因子が干渉性ＲＮＡ及びドミナントネガティブ因子からなる群から選択され、前記トランス作用因子が外来遺伝子又は内在性遺伝子により発現する、請求項２８〜３３のいずれか一項に記載の生命体。
【請求項３５】
家畜細胞及び家畜胚からなる群から選択される生命体に、前記細胞の染色体標的部位に特異的に結合する薬剤を導入するステップであって、それにより性成熟選択的神経内分泌遺伝子を不活性化するステップ
を含む、非ヒトインビトロ生命体を作製する方法。
【請求項３６】
前記薬剤が、ＴＡＬＥＮ、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、Ｃａｓ９／ＣＲＩＳＰＲ及びリコンビナーゼ融合タンパク質からなる群から選択され；及び場合により前記生命体にリコンビナーゼを共導入するステップを含む、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記薬剤を発現する導入遺伝子が前記生命体のゲノムに置かれる、請求項３５又は３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記薬剤が前記リコンビナーゼ融合タンパク質であり、前記方法が、標的化核酸配列を前記融合タンパク質と共に導入するステップを含み、前記標的化核酸配列が前記染色体部位に対する特異的結合のため前記リコンビナーゼとフィラメントを形成する、請求項３５〜３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
ある配列を有する核酸鋳型を前記生命体に導入するステップであって、前記生命体の前記ゲノムが前記二本鎖切断の部位で前記配列を受け取るステップをさらに含む、請求項３５〜３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
前記性成熟遺伝子が、Ｇｐｒ５４、Ｋｉｓｓ１、及びＧｎＲＨ１１からなる群から選択される、請求項３５〜３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４１】
前記遺伝子の前記不活性化が誘導性システムの制御下にある、請求項３５〜４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
前記家畜細胞が、体細胞、初代細胞、又は始原生殖細胞を含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４３】
性成熟に関与する神経内分泌遺伝子の不活性化を含む、非ヒト家畜動物細胞。
【請求項４４】
前記不活性化遺伝子が、Ｇｐｒ５４、Ｋｉｓｓ１、及び／又はＧｎＲＨ１１である、請求項４３に記載の非ヒト家畜動物細胞。
【請求項４５】
前記細胞が、胚、胚盤胞、体細胞、初代細胞及び／又は始原生殖細胞を含む、請求項４３または４４に記載の非ヒト家畜動物細胞。
【請求項４６】
ゲノム編集ツールを使用して前記神経内分泌遺伝子の不活性化が達成される、請求項４３〜４５のいずれか一項に記載の非ヒト家畜動物細胞。
【請求項４７】
前記ゲノム編集ツールが、ＴＡＬＥＮ、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、Ｃａｓ９／ＣＲＩＳＰＲ及びリコンビナーゼ融合タンパク質を含む、請求項４３〜４６のいずれか一項に記載の非ヒト家畜動物細胞。
【請求項４８】
前記ゲノム編集ツールが、ＴＡＬＥＮを含み、かつ前記細胞にリコンビナーゼを前記ＴＡＬＥＮと共導入することをさらに含む、請求項４７に記載の非ヒト家畜動物細胞。
【請求項４９】
前記不活性化が、前記細胞に、ある配列を有する核酸鋳型を導入することによりさらに達成される、請求項４３〜４８のいずれか一項に記載の非ヒト家畜動物細胞。
【請求項５０】
前記ゲノム編集ツール及び前記核酸鋳型が、同じ遺伝子座に標的化される、請求４９に記載の非ヒト家畜動物細胞。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】
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