【誤訳訂正書】
【提出日】平成28年1月28日(2016.1.28)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２３】
【図１】図１は、対照と比較した、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ  ２０００を使用して導入されたホスホロチオエートオリゴヌクレオチドにてＨｅｐＧ２細胞を処置した後の、ＩＤＵＡのｍＲＮＡの倍率変化＋標準偏差を示すリアルタイムＰＣＲの結果のグラフである。ＣＵＲ−１８２０〜ＣＵＲ−１８２３と表示されたバーは、それぞれ配列番号１０〜配列番号１３で処置されたサンプルに対応する。
【図２】図２は、対照と比較した、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ  ＴＭ  ２０００を使用して導入されたホスホロチエートオリゴヌクレオチドにてＨｅｐＧ２細胞を処置した後の、ＩＤＵＡのｍＲＮＡの倍率変化＋標準偏差を示すリアルタイムＰＣＲの結果のグラフである。ＣＵＲ−１９７３、ＣＵＲ−１９７５、ＣＵＲ−１９７６、ＣＵＲ−１９７８、ＣＵＲ−１９８１、ＣＵＲ−１９８４、ＣＵＲ−１９８５、ＣＵＲ−１９８７、ＣＵＲ−１９８８と表示されたバーは、それぞれ配列番号１４〜配列番号２２で処置されたサンプルに対応する。
【図３】図３は、対照と比較した、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ  ＴＭ  ２０００を使用して導入されたホスホロチエートオリゴヌクレオチドにてＨｅｐＧ２細胞を処置した後の、ＩＤＵＡのｍＲＮＡの倍率変化＋標準偏差を示すリアルタイムＰＣＲの結果のグラフである。ＣＵＲ−１９７４、ＣＵＲ−１９７７、ＣＵＲ−１９８６、ＣＵＲ−１９８３、ＣＵＲ−１９７９およびＣＵＲ−１９８２と表示されたバーは、それぞれ配列番号２３〜配列番号２８で処置されたサンプルに対応する。
【図４】図４は、対照と比較した、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ  ＴＭ  ２０００を使用して導入されたホスホロチエートオリゴヌクレオチドにてＳＫ−Ｎ−Ａｓ細胞を処置した後の、ヒトＩＤＵＡのｍＲＮＡの倍率変化＋標準偏差を示すリアルタイムＰＣＲの結果のグラフである。ＣＵＲ−１９７３、ＣＵＲ−１９７５、ＣＵＲ−１９７６、ＣＵＲ−１９７８、ＣＵＲ−１９８１、ＣＵＲ−１９８４、ＣＵＲ−１９８５、ＣＵＲ−１９８７、ＣＵＲ−１９８８と表示されたバーは、それぞれ配列番号１４〜配列番号２２で処置されたサンプルに対応する。
【図５】図５（配列番号８）は、クローンオープンバイオシステムの（Ｃｌｏｎｅ  ｏｐｅｎ  ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）のＮＡＥ０４Ｂ０３を使用した、元のイヌの配列ＤＮ８７６１２１配列（配列番号５）（鮮明な部分）における５７８ヌクレオチド（灰色）の伸長を示している。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２４】
［配列表の説明］
配列番号１：ヒトα‐Ｌ‐イズロニダーゼ（ＩＤＵＡ）、ｍＲＮＡ（ＮＣＢＩ登録番号ＮＭ＿０００２０３）；配列番号２：天然のＩＤＵＡアンチセンス配列（Ｈｓ．  ６５６２８５）；配列番号３：天然のＩＤＵＡアンチセンス配列（ＣＲ６２６１０８）；配列番号４：天然のＩＤＵＡアンチセンス配列（ＤＮ３３４７５７）；配列番号５：天然のＩＤＵＡアンチセンス配列：（ＤＮ８７６１２１）；配列番号６：天然のＩＤＵＡアンチセンス配列（ＤＮ７４４１９０）；配列番号７：天然のＩＤＵＡアンチセンス配列（ＤＮ３３０９１８）；配列番号８：天然のＩＤＵＡアンチセンス配列（ＤＮ８７６１２１−伸長）；配列番号９：伸長されたヒトの天然のＩＤＵＡアンチセンス配列；配列番号１０〜配列番号２８：アンチセンスオリゴヌクレオチド。＊はホスホチオアート結合を示す；配列番号２９〜配列番号４５：ＵｎｉＧｅｎｅクラスターＨｓ６５６２８５。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２３６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２３６】
［結果］：リアルタイムＰＣＲの結果は、ＨｅｐＧ２細胞でのＩＤＵＡのｍＲＮＡレベルが、オリゴ類ＣＵＲ−１８２０およびＣＵＲ−１８２１（図１）、オリゴ類ＣＵＲ−１９７８、ＣＵＲ−１９８４、ＣＵＲ−１９８５、ＣＵＲ−１９８７およびＣＵＲ１９８８（図２）並びにオリゴ類ＣＵＲ−１９７４およびＣＵＲ−１９８６（図３）を備えたヒトの天然のＩＤＵＡアンチセンスＨＳ．６５６２８５に対するアンチセンスオリゴヌクレオチドでの処置から４８時間後に顕著に増殖することを示している。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２３８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２３８】
［結果］：
物質および方法
ＡＴＣＣ  （ｃａｔ＃  ＣＲＬ−２１３７）からの、ＳＫ−Ｎ−ＡＳ細胞培養株、ＳＫ−Ｎ−ＡＳ神経芽細胞腫は、３７℃および５％のＣＯ２の増殖培地（ＤＭＥＭ  （Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ  ｃａｔ＃  １０−０１３−ＣＶ）  ＋１０％  ＦＢＳ  （Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ  ｃａｔ＃  ＭＴ３５−０１１−ＣＶ）＋ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ  ｃａｔ＃  ＭＴ３０−００２−ＣＩ）＋非必須アミノ酸類（ＮＥＡＡ）（ＨｙＣｌｏｎｅ  ＳＨ３０２３８．０１））にて増殖した。この細胞は、以下の方法の内の１つを使用してアンチセンスオリゴヌクレオチド類を処置した。次の日の方法のため、この実験の前日に、細胞は、約３ｘ１０５ウェルの密度にて増殖培地中の６ウェルプレートへ再播種され、一晩３７℃、ＣＯ２５％にてインキュベートされた。次の日、６ウェルプレートの培地は、新鮮な増殖培地（１．５ｍｌ／ウェル）に変えられ、この細胞は、アンチセンスオリゴヌクレオチド類を投与される。すべてのアンチセンスオリゴヌクレオチド類は、ＩＤＴ  Ｉｎｃ．  （Ｃｏｒａｌｖｉｌｌｅ，  ＩＡ）もしくはＥｘｉｑｏｎ  （Ｖｅｄｂａｅｋ，デンマーク）により製造された。すべてのオリゴヌクレオチド類の配列は、表１に示されている。オリゴヌクレオチド類の原液は、ＤＮＡｓｅ／ＲＮＡｓｅ−ｆｒｅｅ  ｓｔｅｒｉｌｅ  ｗａｔｅｒにて２０μＭの濃度に希釈された。１つのウェルに投与するために、この溶液１μｌを、室温にて２０分間、２００μｌＯｐｔｉ−ＭＥＭ培地（Ｇｉｂｃｏ  ｃａｔ＃３１９８５−０７０）  および２μｌのＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ  ２０００  （Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ｃａｔ＃  １１６６８０１９）とインキュベートし、細胞と共に、２４ウェルプレートの１つのウェルに液滴適用した。オリゴヌクレオチド溶液の変わりに１μｌの水を含む類似の混合物が、モックトランスフェクトの対照として使用された。３７℃および５％のＣＯ２で１８時間インキュベートした後、この培地は、新鮮な培地へと変えられた。アンチセンスオリゴヌクレオチド類の添加から４８時間後、製造者の指示に従って、Ｐｒｏｍｅｇａ  （ｃａｔ  ＃  Ｚ３１０５）からＳＶ  Ｔｏｔａｌ  ＲＮＡ  Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍを使用して細胞から、ＲＮＡが抽出された。６００ナノグラムの精製された総ＲＮＡは、製造者の手順に記載されているＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  （ｃａｔ＃１１７５４−２５０）からのＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ  ＶＩＬＯ  ｃＤＮＡ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  Ｋｉｔを使用して行われる逆転写反応に加えられた。この逆転写反応からのｃＤＮＡは、ＡＢＩ  Ｔａｑｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｍｉｘ  （ｃａｔ＃４３６９５１０）およびＡＢＩ  （ａｓｓａｙｓ  Ｈｓ００１６４９４０＿ｍ１）により設計されたプライマー／プローブを使用するリアルタイムＰＣＲによる遺伝子発現を管理した。３つすべてのアッセイを使用して得られた結果は非常に類似していた。以下の、（Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓを適用した）ステップワンプラスリアルタイムＰＣＲシステム（ＳｔｅｐＯｎｅ  Ｐｌｕｓ  Ｒｅａｌ  Ｔｉｍｅ  ＰＣＲ  ｓｙｓｔｅｍ）を使用して、５０℃を２分、９５℃を１０分、（９５℃を１５秒、６０℃を１分）を４０回といったＰＣＲの周期が使用された。１８Ｓのアッセイは、ＡＢＩ  （ｃａｔ＃  ４３１９４１３Ｅ）により製造された。アンチセンスオリゴヌクレオチド類との処置後の遺伝子発現の倍率変化は、処置されたサンプルおよびモックトランスフェクトサンプルの間の１８−Ｓ標準化ｄＣｔ値の差異に基づき計算された。
結果
リアルタイムＰＣＲの結果は、ＳＫ−Ｎ−ＡＳ細胞のＩＤＵＡのｍＲＮＡレベルが、ヒトＩＤＵＡの天然のアンチセンスＨｓ．６５６２８５に対するアンチセンスオリゴヌクレオチド類ＣＵＲ−１９７６、ＣＵＲ１９７８およびＣＵＲ−１９８７での処置から４８時間後に増加傾向を示すということを示す（図４）。