(57)【要約】【課題】生体組織への接着性および柔軟性を有する医療用接着剤を提供する。【解決手段】ゼラチンを主要成分とする主液成分（Ａ液）と、グルタルアルデヒドを主要成分とする硬化液成分（Ｂ液）とから構成される医療用接着剤であって、前記主液成分（Ａ液）中にはゼラチンが５〜４０質量％含有されており、前記硬化液成分（Ｂ液）中にはグルタルアルデヒドが０．０１〜４質量％含有されていることを特徴としており、Ａ液とＢ液の２液を混合して用いるものである。【選択図】    なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
主液成分（Ａ液）と硬化液成分（Ｂ液）とから構成される組織接着性を有する医療用接着剤であって、
前記主液成分（Ａ液）中のゼラチン濃度が５〜４０質量％であって、さらに、
前記硬化液成分（Ｂ液）中のグルタルアルデヒド濃度が０．０１〜４質量％である  
ことを特徴とする医療用接着剤。
【請求項２】
ゼラチンの重量平均分子量が１０万〜３０万である請求項１記載の医療用接着剤。
【請求項３】
主液成分（Ａ液）と硬化液成分（Ｂ液）を混合した溶液のｐＨが５〜９である請求項１又は２記載の医療用接着剤。
【請求項４】
主液成分（Ａ液）は、さらに増粘剤を０．５〜２質量％である請求項１〜３のいずれかに記載の医療用接着剤。
【請求項５】
硬化液成分（Ｂ液）は、さらに増粘剤を０．５〜２質量％である請求項１〜４のいずれかに記載の医療用接着剤。
【請求項６】
主液成分（Ａ液）と硬化液成分（Ｂ液）との混合比（Ｂ／Ａ）が、体積比で０．１〜０．３である請求項１〜５のいずれかに記載の医療用接着剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は生体吸収性材料からなり、一定期間後に生体内で分解、吸収されることを特徴とする、外科手術の際に用いられる医療用接着剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
外科手術において、損傷した組織の修復や閉鎖方法として、縫合糸を用いることが多い。しかしながら、損傷部が微少である場合や組織が脆弱である場合には、医療用の接着剤を用いることがある。また、損傷部の微少血管が損傷することにより起こる、組織から血液が滲み出るような出血に対しては、電気メスを用いた止血などが行われるが、さらに損傷を大きくすることにもなるので、接着剤を用いて損傷部を閉鎖する方法が用いられることがある。さらに、肺手術においては小さな損傷部からエアリークが起こることもあり、接着剤による損傷部の閉鎖が行われることもある。
【０００３】
このような医療用接着剤は、生体組織や併用する医療材料などに素早く接着し、かつ、接着力が優れることが必要とされる。同時に、局所に刺激を与えず、また、生体に害を与えないことが重要である。
【０００４】
皮膚や内蔵、肺などの生体軟組織に用いる場合には、生体軟組織に接着するだけでなく、軟組織の伸縮に追随できるような柔軟性が必要である。柔軟性がない場合には、軟組織が伸縮することによって接着剤が剥がれてしまったり、接着剤自体が壊れてしまうためである。
【０００５】
このような医療用接着剤としてシアノアクリレート系の接着剤などが実用化されている。しかしながら、生体内非吸収性材料からなる接着剤を用いた場合には、接着剤が半永久的に生体内に異物として残ることとなり、好ましくない。また、接着剤が硬化した後には組織の伸縮に追随することができず組織から剥がれ落ちてしまい、持続的な接着効果が望めない。
【０００６】
生体吸収性の医療用接着剤としては、血液が硬化する作用を利用したフィブリン糊が広く用いられているが、原材料がヒト血液由来成分であり、未知のウイルス感染などのリスクが指摘されている。また、医療用接着剤としての強度や接着力が不十分であるという問題点もあった。
【０００７】
特許文献１には、コラーゲン蛋白部分加水分解物質、水及び多価フェノールとからなる接着成分と、ホルムアルデヒド及びグルタルアルデヒドを含有する水溶液からなる硬化成分とからなる生体組織接着用組成物が開示されている。
しかしながら、前記生体組織接着用組成物では、原料に発癌性物質であるホルムアルデヒドが使用されており、生体への安全面で充分ではない。また、接着剤としては脆く、皮膚や内蔵、肺など常に動く組織に接着剤を用いても、接着剤が動きに追随することができず、すぐに壊れてしまい接着剤としての役割を果たせないという問題点もあった。
【０００８】
特許文献２には、血漿タンパク質及び二又は多官能アルデヒドの混合液を含んでなる接着剤組成物が開示されている。
しかしながら、使用される血漿タンパク質はヒトの血清由来のアルブミンであることから、フィブリン糊と同じような安全性の問題がある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】特開平６−７０９７２号公報
【特許文献２】国際公開第９４／０１５０８号パンフレット
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は前記の状況に鑑み、接着性、生体安全性、柔軟性にすぐれた、生体吸収性医療用接着剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
すなわち、本発明はゼラチンを主成分とする主液成分（Ａ液）、グルタルアルデヒドを主成分とする硬化液成分（Ｂ液）から構成される医療用の接着剤であって、前記主液成分（Ａ液）中のゼラチン濃度が５〜３０質量％であり、前記硬化液成分（Ｂ液）中のグルタルアルデヒド濃度が０．０１〜２質量％であることを特徴とする、生体吸収性医療用接着剤である。
【００１２】
本発明者らは、鋭意検討の結果、特定の濃度のゼラチンを含有する主液成分（Ａ液）と、グルタルアルデヒドを含有する硬化液成分（Ｂ液）とを混合して使用することにより、優れた接着性、柔軟性及び生体安全性を有する生体吸収性医療用接着剤とすることができることを見出し、本発明を完成させた。
【００１３】
本発明は、主液成分（A液）と硬化液成分（Ｂ液）とから構成される２液混合型の生体吸収性医療用接着剤である。
【００１４】
前記主液成分（Ａ液）は、ゼラチンを水又はｐＨ５〜８の緩衝液である溶媒に溶解させたものである。原料となるゼラチンは特に限定されるものではなく、牛、豚、鶏、鮭などの皮膚、骨、腱などから調製されたものを用いることができる。前記ゼラチンは、水に不溶性のコラーゲンを酸又はアルカリで前処理してから、熱加水分解して可溶化したものである。本発明においては、いずれのゼラチンを使用してもよく、求められる効果には差はない。ただし、塩基性細胞成長因子等を複合化する場合にはアルカリ処理したゼラチンを選択することが好ましい。
【００１５】
前記ゼラチンは、ＧＰＣ測定法による重量平均分子量の好ましい下限が１万、好ましい上限が３０万である。前記重量平均分子量が１万未満であると、ゼラチンが固まらないおそれがある。一方、重量平均分子量が３０万を超えると、主液成分の粘度が高くなりすぎて接着剤として塗布することが困難になるおそれがある。前記重量平均分子量のより好ましい下限は１０万、より好ましい上限は３０万である。
【００１６】
前記ゼラチンは、市販品を用いてもよく、例えば、メディゼラチン（ニッピ社製）等を使用することができる。
【００１７】
前記主液成分の溶媒としては、注射用水、生理食塩水、リン酸緩衝液（ＰＢＳ）、トリス塩酸緩衝液（Ｔｒｉｓ−Ｃｌ）等を挙げることができる。
【００１８】
前記主液成分（Ａ液）中のゼラチン濃度は５〜３０質量％である。
ゼラチン濃度が５質量％未満であると流動性が高く、目的部位に塗布した時に流れてしまい、接着剤としての役割を果たせなくなる。３０質量％を超えると、粘度が高くなり過ぎるために、目的部位に塗布して塗り拡げることが不可能になってしまう。
ゼラチン濃度は、１５〜３０質量％であることが好ましい。
【００１９】
前記主液成分（Ａ液）中には、細胞成長因子をさらに含有していてもよい。
細胞成長因子を含有することにより、接着剤として塗布した臓器表面の創傷治癒を促進させることができる。前記細胞成長因子としては、塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）などを挙げることができる。
【００２０】
前記主液成分（Ａ液）は、ｐＨが５〜９であることが好ましい。
ｐＨが５未満であると、ゼラチンのゲル化時間が長くなってしまい、接着剤としての機能を果たせないおそれがある。ｐＨが９を超えると、アルカリ性となり塗布した部位の組織に炎症を惹起させてしまうおそれがある。
前記主液成分Ａは、ｐＨが６〜８であることがより好ましい。なお、ｐＨの調整は、リン酸緩衝液（ＰＢＳ）、トリス塩酸緩衝液（Ｔｒｉｓ−Ｃｌ）、炭酸水素ナトリウム（ＮａＨＣＯ３）等を使用して行うとよい。
【００２１】
前記主液成分（Ａ液）中には、さらに増粘剤を含有させることができる。増粘剤を含有することによって、主液成分（Ａ液）の粘度が高まり、生体組織に塗布した際に流れ落ちることなく塗り広げることが可能になるからである。また、接着剤の柔軟性を高める効果もあり、伸縮が大きな生体組織に用いた場合にも動きに追随しやすくなり、剥がれにくくなるとともに損傷部の閉鎖性も高まる。
このような増粘剤としては、粘度を高めることができる物質であれば特に限定されるものではないが、天然多糖類であることが望ましい。前記天然多糖類としては、アルギン酸、ヒアルロン酸、カルボシキメチルセルロース、アミロース、アミロペクチン等が例示することができる。
【００２２】
前記主液成分（Ａ液）中の増粘剤の濃度は、０．５〜５質量％であることが好ましい。０．５質量％未満であると、十分な粘性が得られずに主液成分（Ａ液）が流延してしまうおそれがある。５質量％を超えると、粘性が高くなり過ぎて硬化液成分（Ｂ液）と十分に混合できないおそれがある。
前記増粘剤の濃度は、０．５〜２質量％であることがより好ましい。
【００２３】
前記硬化液成分（Ｂ液）は、グルタルアルデヒドを蒸留水に溶解させたものであって、ｐＨは３．０〜４．０である。
【００２４】
前記硬化液成分（Ｂ液）中の、グルタルアルデヒド濃度は０．０１〜２質量％である。グルタルアルデヒド濃度が０．０１質量％未満であると、ゼラチンの架橋反応が進まず、接着剤としての機能を発揮できなくなるおそれがある。２質量％を超えると、ゲル化速度が高まりすぎ、手術時の混合操作などに支障を及ぼすおそれがあるからである。
前記グルタルアルデヒド濃度は、０．５〜１．５質量％であることが好ましい。
【００２５】
前記硬化液成分（Ｂ液）中には、更に、増粘剤を含有することが好ましい。
増粘剤を含有することにより、主液成分（Ａ液）と混合する際に硬化液成分（Ｂ液）が流れ落ちることなく混合させることができる。
前記増粘剤としては、水溶液の粘度を高める物質であれば特に限定されるものではないが、多糖類であることが好ましい。前記多糖類としては、アルギン酸、ヒアルロン酸、カルボシキメチルセルロース、アミロース、アミロペクチン等が例示できる。
【００２６】
前記硬化液成分（Ｂ液）中の増粘剤の濃度は、０．５〜５質量％であることが好ましい。０．５質量％未満であると、十分な粘性が得られずに硬化液成分（Ｂ液）が流延してしまうおそれがある。５質量％を超えると、粘性が高くなり過ぎて主液成分Ａと十分に混合できないおそれがある。
前記増粘剤の濃度は、０．５〜２質量％であることがより好ましい。
【００２７】
前記硬化液成分（Ｂ液）のｐＨは特に限定されるものではないが、ｐＨが高くなるとグルタルアルデヒドが縮合反応してしまい、架橋剤として使えなくなってしまう。前記硬化液成分Ｂは、ｐＨが３〜５であることがより好ましい。
【００２８】
本発明の医療用接着剤では、前記主液成分（Ａ液）と前記硬化液成分（Ｂ液）とを混合することにより、ゲルが生成される。このゲルにより、生体組織が接着又は接合される。
【００２９】
前記硬化液成分（Ｂ液）と前記主液成分（Ａ液）との混合比（Ｂ液／Ａ液）は、体積比で０．０１〜０．５であることが好ましい。前記硬化液成分（Ｂ液）の量が前記範囲より少ないと十分な接着強度が得られないおそれがあり、多いと接着剤全体が硬くなり脆くなるおそれがある。
前記混合比は、０．１〜０．４であることがより好ましい。
【００３０】
前記主液成分（Ａ液）と前記硬化液成分（Ｂ液）とを混合する場合の温度は、３０〜６５℃であることが好ましい。３０℃未満であると主液成分（Ａ液）が固まってしまうおそれがある。６５℃を超えるとゼラチンが変性してしまうおそれがある。前記温度は、３５〜４５℃であることがより好ましい。
【００３１】
前記主液成分（Ａ液）と前記硬化液成分（Ｂ液）とを混合してからゲルが生成するまでのゲル化時間は、４０℃雰囲気下で５〜１００秒であることが好ましい。
前記ゲル化時間が５秒未満であると、操作中に接着剤が固まってしまい組織に接着しなくなるおそれがある。１００秒を超えると接着剤を塗布した部位から流延してしまうおそれがある。
前記ゲル化時間は、１０〜６０秒であることがより好ましい。
【００３２】
本発明の医療用接着剤の使用方法については、前記主液成分（Ａ液）と前記硬化液成分（Ｂ液）とをあらかじめ混合してから、生体組織の接合部又は止血部に塗布してもよいし、前記主液成分（Ａ液）を前記接合部又は止血部に塗布した後に、前記硬化液成分（Ｂ液）をその上に塗布してもよい。
適用部位への接着剤の塗布が短時間にかつ簡便にできる点で、あらかじめ主液成分（Ａ液）と前記硬化液成分（Ｂ液）とを混合してから、生体組織又は臓器の接合部又は止血部に塗布する方が好ましい。
【００３３】
また、本発明の医療用接着剤の混合方法としては、例えば、主液成分（Ａ液）と硬化液成分（Ｂ液）をそれぞれ別のシリンジに充填し、シリンジの先端部に二股ノズルを取り付け、両方のシリンジを同時に押すことによって、ノズル先端部で２液を混合させるという方法を挙げることができる。
本発明の医療用接着剤は、このように前記主液成分（Ａ液）と前記硬化液成分（Ｂ液）との２液混合型接着剤であることが好ましい。
【００３４】
前記塗布量としては、例えば、０．４〜４，０００ ｍｇ／ｃｍ２であることが好ましい。０．４ｍｇ／ｃｍ２未満であると、ゲルを十分に伸ばせなくなるおそれがある。４，０００ｍｇ／ｃｍ２を超えると、ゲルが壊れてしまうおそれがある。前記塗布量は４〜４００ ｍｇ／ｃｍ２であることがより好ましい。
【００３５】
本発明では、このように前記主液成分（Ａ液）と前記硬化液成分（Ｂ液）とを混合することにより、ゲル化が起こり、ゲル状の医療用接着剤が得られる。このような主液成分（Ａ液）と硬化液成分（Ｂ液）とを混合して生成されるゲル状の医療用接着剤を主体とする医用材料もまた本発明の一つである。
【００３６】
前記ゲルを主体とする医用材料は、接着強度が５０ｇｆ／ｃｍ２以上であることが好ましい。前記接着強度が５０ｇｆ／ｃｍ２未満であると、組織を接着するという目的を達成できないだけでなく、生体組織の動きによる伸縮や動きに耐えられないおそれがある。前記接着強度は、９０ｇｆ／ｃｍ２以上であることがより好ましい。
前記接着強度は、バネ秤を用いた方法により測定して得られた値である。
【００３７】
このように本発明の医療用接着剤は、主液成分（Ａ液）に含有されるゼラチンの分子量、ゼラチンの濃度、硬化液成分（Ｂ液）に含有されるグルタルアルデヒドの濃度、前記主液成分（Ａ液）と硬化液成分（Ｂ液）を混合した時の水溶液のｐＨ、反応温度等について最適条件を設定することにより、主液成分（Ａ液）と硬化液成分（Ｂ液）とからなる医療用接着剤において、前記グルタルアルデヒドの含有量を従来より低減させることが可能になり、かつ、優れた接着性及び生体安全性を有するゲル状の医療用材料を得ることができる医療用接着剤とすることができたものである。
【００３８】
また、本発明の医療用接着剤を用いて、生体吸収性医療用フィルムを生体組織に接着させることもできる。生体吸収性医療用フィルムを生体組織に接着させることにより、止血、癒着防止、エアリーク防止などの効果を高めることもできる。
このような生体吸収性医療用フィルムの材料としては、コラーゲン、ゼラチン、ヒアルロン酸などの天然高分子、ポリグリコール酸、乳酸−カプロラクトン共重合体、グリコール酸−カプロラクトン共重合体などの合成吸収性高分子などがあげられる。
フィルムとは、孔のないフィルムのみならず、不織布やスポンジ、微細な孔を有する多孔質フィルムであってもよい。
特に、ゼラチンフィルムを用いることにより、接着剤と同じ材料を用いることとなり、組織への接着性や分解速度の制御がしやすくなるものである。
【発明の効果】
【００３９】
本発明の医療用接着剤は、上述の構成からなるものであるため、接着性及び生体安全性に優れたものである。このため、本発明の医療用接着剤は、外科手術において、生体組織等の結合や止血等に好適に適用することができる。
【図面の簡単な説明】
【００４０】
【図１】接着性試験の概要図である。
【発明を実施するための形態】
【００４１】
以下に実施例を掲げて本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例のみに限定されるものではない。なお、特に断りのない限り、「％」及び「部」は、それぞれ「質量％」及び「質量部」を意味するものとする。
【００４２】
（実験例）
（１）接着剤の引き裂きエネルギー
ゼラチン粉末（商品名メディゼラチン、ニッピ社製）をリン酸緩衝液（ＰＢＳ）（−）に添加して、２６％濃度のゼラチン水溶液からなる主液成分（Ａ液）を調製した。また、同様に、グルタルアルデヒド（和光純薬社製）を蒸留水に添加して、１％の濃度のグルタルアルデヒド（ＧＡ）水溶液からなる硬化液成分（Ｂ液）を調製した。
４５℃に保温したプラスチック平面上にてＡ液５ｍｌとＢ液０．６７ｍｌを混合し、ゼラチンゲル（厚み1ｍｍ）を作製し、室温で２時間静置した。これを幅１ｃｍ、長さ３ｃｍの短冊状に切り、片側を固定しその反対側に強力測定器を取り付けて引っ張ることによって引張り強度を測定した。
比較として、医療用のフィブリン糊（商品名ベリプラスト、ＣＳＬベーリング社製）を当該製品の用法に従って調製したもの、医療用の血清アルブミン糊（商品名ＢｉｏＧｌｕｅ、ＣｒｙｏＬｉｆｅ社製）を当該製品の用法に従ってそれぞれ調製した。前述のようにゲルを作製し、引張り強度を測定した。
表１にそれぞれのゲル伸度とゲル単位体積あたりの引き裂きエネルギーを示した。
【００４３】
【表１】
2013202337.tif 000002
【００４４】
（２）エアリーク防止能
ゼラチン粉末（商品名メディゼラチン、ニッピ社製）をリン酸緩衝液（ＰＢＳ）（−）に添加して、２６％濃度のゼラチン水溶液からなる主液成分（Ａ液）を調製した。また、同様に、グルタルアルデヒド（和光純薬社製）を蒸留水に添加して、１％の濃度のグルタルアルデヒド（ＧＡ）水溶液からなる硬化液成分（Ｂ液）を調製した。
犠牲死させたイヌの肺の表面に、Ａ液０．５ｍｌと、Ｂ液０．０６７ｍｌとを同時に塗布して混合し、ゲルシートを形成した。３分間室温で静置した後、挿管チューブに繋いだ呼吸器から肺に空気を入れていき、ゲルが剥離する圧を測定した。空気圧を８０ｍｍＨｇまで上げたが、ゼラチンゲルは剥離せず、肺に追随していた。
また同様に、比較として、医療用のフィブリン糊（商品名ベリプラスト、ＣＳＬベーリング社製）を当該製品の用法に従って調製したもの、医療用の血清アルブミン糊（商品名ＢｉｏＧｌｕｅ、ＣｒｙｏＬｉｆｅ社製）を当該製品の用法に従ってそれぞれ調製し、犠牲死させたイヌの肺の表面に塗布した。フィブリン糊は肺の空気圧が３５ｍｍＨｇで剥離した。また、血清アルブミン糊は空気圧が５０ｍｍＨｇでゲルが引き裂かれた。
【００４５】
（３）組織追随性
ゼラチン粉末（商品名メディゼラチン、ニッピ社製）をリン酸緩衝液（ＰＢＳ）（−）に添加して、２６％濃度のゼラチン水溶液からなる主液成分（Ａ液）を調製した。また、同様に、グルタルアルデヒド（和光純薬社製）を蒸留水に添加して、１％の濃度のグルタルアルデヒド（ＧＡ）水溶液からなる硬化液成分（Ｂ液）を調製した。
犠牲死させたイヌの下大静脈上に、Ａ液０．５ｍｌと、Ｂ液０．０６７ｍｌとを同時に塗布して混合して塗布した。３分間室温で静置した後、下大静脈の片側を固定し、反対側を５０ｍｍ／ｍｉｎ．の速度で引張ったところ、１００％延伸しても塗布した接着剤は下大静脈から剥離しなかった。
また同様に、比較として、医療用のフィブリン糊（商品名ベリプラスト、ＣＳＬベーリング社製）を当該製品の用法に従って調製したもの、医療用の血清アルブミン糊（商品名ＢｉｏＧｌｕｅ、ＣｒｙｏＬｉｆｅ社製）を当該製品の用法に従ってそれぞれ調製し、前記と同じ方法でイヌの下大静脈上に塗布した。前述と同様にイヌの下大静脈の片側を固定し、反対側を５０ｍｍ／ｍｉｎ．の速度で引張ったところ、フィブリン糊は伸度５０％で下大静脈から剥離し、血清アルブミン糊は伸度５０％でゲルが引き裂かれた。
【００４６】
（４）組織接着強度
ゼラチン粉末（商品名メディゼラチン、ニッピ社製）をリン酸緩衝液（ＰＢＳ）（−）に添加して、２６％濃度のゼラチン水溶液からなる主液成分（Ａ液）を調製した。また、同様に、グルタルアルデヒド（和光純薬社製）を蒸留水に添加して、１％の濃度のグルタルアルデヒド（ＧＡ）水溶液からなる硬化液成分（Ｂ液）を調製した。
全量が２００μＬとなるように、Ａ液とＢ液を容積比５：１で混合し、３７℃に保温したトリ肉上に塗布して室温で５分間静置した。次にこれを図１に示す方法で、ゲル内に封入した糸に強力測定器を取り付け、垂直にゆっくりと強力測定器を引張り上げてゲルがトリ肉から剥がれるときの測定値を接着強度とした。接着強度測定を２回行ったときの平均値を表２に示す。
比較として、医療用のフィブリン糊（商品名ベリプラスト、ＣＳＬベーリング社製）、医療用の血清アルブミン糊（商品名ＢｉｏＧｌｕｅ、ＣｒｙｏＬｉｆｅ社製）それぞれについて当該製品の用法に従って用いた。フィブリン糊の接着強度は３７±２６ｇｆ／ｃｍ２、結成アルブミン糊の接着強度は３７±２６ｇｆ／ｃｍ２であった。
【００４７】
【表２】
2013202337.tif 000003
【００４８】
（５）流延性
ゼラチン粉末（商品名メディゼラチン、ニッピ社製）及び、増粘剤としてヒアルロン酸ナトリウム、アルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロースのいずれかをリン酸緩衝液（ＰＢＳ）（−）に添加し、表３に示す主液成分（Ａ液）を調製した。グルタルアルデヒド（和光純薬社製）及び、増粘剤としてヒアルロン酸ナトリウム、アルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロースのいずれかを蒸留水に添加して表３に示す硬化液成分（Ｂ液）を調製した。
次に、３７ ℃ 、相対湿度５０％ の雰囲気下でトリ肉の表面（１０ｃｍ(７ｃｍ）を水平面から３０°に傾け、３７℃に温めたＡ液とＢ液を容積比５：１で混合し、シリンジにて表面下部より５ｃｍの位置に０．５ｍｌ塗布した。５分間観察し、塗布した部分からほとんど垂れ落ちない場合を◎、垂れるがトリ肉より流れ落ちた量が１０％以下の場合を○、流れ落ちた量が約５０％の場合を△、大半が流れてしまった（８０％以上）場合を×で判定した。得られた結果を表３に示した。
比較として、医療用のフィブリン糊（商品名ベリプラスト、ＣＳＬベーリング社製）、あるいは医療用の血清アルブミン糊（商品名ＢｉｏＧｌｕｅ、ＣｒｙｏＬｉｆｅ社製）それぞれについて当該製品の用法に従って用いた。フィブリン糊は◎、血清アルブミン糊は×と判定した。
【００４９】
【表３】
2013202337.tif 000004
【００５０】
（６）ゲル化時間
ゼラチン粉末（商品名メディゼラチン、ニッピ社製）及び、増粘剤としてヒアルロン酸ナトリウムをリン酸緩衝液（ＰＢＳ）（−）に添加し、表４に示す主液成分（Ａ液）を調製した。グルタルアルデヒド（和光純薬社製）を蒸留水に添加して、１％の濃度のグルタルアルデヒド（ＧＡ）水溶液からなる硬化液成分（Ｂ液）を調製した（Ｂ液）。
Ａ液とＢ液それぞれを３７℃にて１０分間保温後、Ａ液とＢ液を容積比５：１で混合し、その直後から流動性の喪失するゲル化までの時間（ゲル化時間）を測定した。ゲル化時間を表４に示す。
比較として、医療用のフィブリン糊（商品名ベリプラスト、ＣＳＬベーリング社製）、あるいは医療用の血清アルブミン糊（商品名ＢｉｏＧｌｕｅ、ＣｒｙｏＬｉｆｅ社製）それぞれについて当該製品の用法に従って用いた。ゲル化するまでの時間は、フィブリン糊は３秒、血清アルブミン糊は１３秒であった。
【００５１】
【表４】
2013202337.tif 000005
【００５２】
（７）生体内吸収性
ゼラチン粉末（商品名メディゼラチン、ニッピ社製）をリン酸緩衝液（ＰＢＳ）（−）に添加して、２６％濃度のゼラチン水溶液からなる主液成分（Ａ液）を調製した。また、同様に、グルタルアルデヒド（和光純薬社製）を蒸留水に添加して、１％の濃度のグルタルアルデヒド（ＧＡ）水溶液からなる硬化液成分（Ｂ液）を調製した。
Ａ液とＢ液とを表２に示した割合にて混合してゲル化させた後、０．５×１ｃｍ２の大きさに切り、重量を測定した。
比較として、医療用のフィブリン糊（商品名ベリプラスト、ＣＳＬベーリング社製）、あるいは医療用の血清アルブミン糊（商品名ＢｉｏＧｌｕｅ、ＣｒｙｏＬｉｆｅ社製）それぞれについて当該製品の用法に従って用いた。これらのゲル切片を、ラットの背中を切開して作製したポケット内に埋め込んだ。７日および１４日後にゲルの有無を確認し、残存している場合は、ゲルを取り出して冷水で洗浄し、乾燥重量を測定してゲルの残存率を算出した。その結果、血清アルブミン糊は埋入１４日後も９０％以上のゲルが残存していたが、その他の試料は１４日以内に全て吸収されており、炎症反応も認められなかった。
【００５３】
（８）フィルム接着性
ゼラチン粉末（商品名メディゼラチン、ニッピ社製）をリン酸緩衝液（ＰＢＳ）（−）に添加して、２６％濃度のゼラチン水溶液からなる主液成分（Ａ液）を調製した。また、同様に、グルタルアルデヒド（和光純薬社製）を蒸留水に添加して、１％の濃度のグルタルアルデヒド（ＧＡ）水溶液からなる硬化液成分（Ｂ液）を調製した。
ゼラチン製フィルム（厚み1ｍｍ、４×４ｃｍ2）の片面の周縁部に、Ａ液と、Ｂ液とを体積比５：１で混合したものを１００μｌ塗布後、直ちにガーゼで表面を軽く拭いたトリ肉上に３７℃で貼付した。５分後、フィルムを貼付したトリ肉を３７℃の生理食塩水に浸漬し、５０ｒｐｍで１時間振とうしたところ、フィルムの移動も剥離も認められず、接着剤としての効果を確認した。
【００５４】
（９）細胞毒性試験
ゼラチン粉末（商品名メディゼラチン、ニッピ社製）をリン酸緩衝液（ＰＢＳ）（−）に添加して、２６％濃度のゼラチン水溶液からなる主液成分（Ａ液）を調製した。また、同様に、グルタルアルデヒド（和光純薬社製）を蒸留水に添加して、１％の濃度のグルタルアルデヒド（ＧＡ）水溶液からなる硬化液成分（Ｂ液）を調製した。
Ａ液０．５ｍｌと、Ｂ液０．０６７ｍｌとを混合して１ｇのゲルを作製した。
比較として、医療用のフィブリン糊（商品名ベリプラスト、ＣＳＬベーリング社製）、医療用の血清アルブミン糊（商品名ＢｉｏＧｌｕｅ、ＣｒｙｏＬｉｆｅ社製）それぞれについて当該製品の用法に従って１ｇのゲルを調製した。
前記のゲルを５ｍｌのＤＭＥＭ（１０％  ＦＢＳ）中に浸漬して２４時間、３７℃で静置した。
正常ヒト皮膚繊維芽細胞（ＮＨＤＦ  ＫＦ−４００９、クラボウ社製）を１２ウェルプレートに１×１０６ｃｅｌｌｓ／ウェルとなるように播種し、ＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）にて７日間培養した。培養液を除去し、前記のゲルを浸漬した５ｍｌのＤＭＥＭ（１０％  ＦＢＳ）と交換し、２４時間、３７℃、５%ＣＯ２にてさらに培養した。各ウェルをＰＢＳで２回洗浄した後に、ＭＴＴアッセイを行って細胞生存率を計算した。Ａ液とＢ液を混合して作製したゲルを浸漬したＤＭＥＭ培養液で培養した場合に細胞生存率は８０％であった。一方、フィブリン糊、血清アルブミン糊を浸漬したＤＭＥＭ培養液で培養した場合には、細胞生存率は２０％であった。
【産業上の利用可能性】
【００５５】
本発明の医療用接着剤及び医療用材料は、生体組織の結合、止血や、肺の空気漏れ防止等に対して好適に適用されるものである。
【図１】
2013202337.tif 000006