(57)【要約】【課題】有効利用されていないオカラを利用した、優れた抗酸化作用を有する抗酸化組成物、優れた二糖類水解酵素活性阻害作用を有する二糖類水解酵素活性阻害組成物、優れた整腸作用を有する整腸組成物、優れたダイエット作用を有するダイエット組成物、飲食品及びアラビノースの選択的製造方法の提供。【解決手段】オカラを細胞壁分解酵素で処理してなるオカラ酵素処理物を含む抗酸化組成物、オカラを細胞壁分解酵素で処理してなるオカラ酵素処理物を酵母菌で発酵させてなるオカラ酵素処理発酵物を含む二糖類水解酵素活性阻害組成物、整腸組成物、及びダイエット組成物、前記抗酸化組成物、二糖類水解酵素活性阻害組成物、整腸組成物、及びダイエット組成物の少なくともいずれかを含む飲食品、オカラを細胞壁分解酵素で処理してオカラ酵素処理物を調製し、前記オカラ酵素処理物における液体中に可溶化したアラビノースを選択的に得るアラビノースの選択的製造方法である。【選択図】図４
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
オカラを細胞壁分解酵素で処理してなるオカラ酵素処理物を含有することを特徴とする抗酸化組成物。
【請求項２】
オカラ酵素処理物を酵母菌で発酵させてなるオカラ酵素処理発酵物を含有し、前記オカラ酵素処理物がオカラを細胞壁分解酵素で処理してなることを特徴とする抗酸化組成物。
【請求項３】
細胞壁分解酵素が、セルラーゼを含む請求項１から２のいずれかに記載の抗酸化組成物。
【請求項４】
オカラ酵素処理物を酵母菌で発酵させてなるオカラ酵素処理発酵物を含有し、前記オカラ酵素処理物がオカラを細胞壁分解酵素で処理してなることを特徴とする二糖類水解酵素活性阻害組成物。
【請求項５】
オカラ酵素処理物にグルコースを添加して酵母菌で発酵させてなる請求項４に記載の二糖類水解酵素活性阻害組成物。
【請求項６】
オカラ酵素処理物を酵母菌で発酵させてなるオカラ酵素処理発酵物を含有し、前記オカラ酵素処理物がオカラを細胞壁分解酵素で処理してなることを特徴とする整腸組成物。
【請求項７】
オカラ酵素処理物にグルコースを添加して酵母菌で発酵させてなる請求項６に記載の整腸組成物。
【請求項８】
オカラ酵素処理物を酵母菌で発酵させてなるオカラ酵素処理発酵物を含有し、前記オカラ酵素処理物がオカラを細胞壁分解酵素で処理してなることを特徴とするダイエット組成物。
【請求項９】
オカラ酵素処理物にグルコースを添加して酵母菌で発酵させてなる請求項８に記載のダイエット組成物。
【請求項１０】
請求項１から３のいずれかに記載の抗酸化組成物、請求項４から５のいずれかに記載の二糖類水解酵素活性阻害組成物、請求項６から７のいずれかに記載の整腸組成物、及び請求項８から９のいずれかに記載のダイエット組成物の少なくともいずれかを含有することを特徴とする飲食品。
【請求項１１】
オカラを細胞壁分解酵素で処理してオカラ酵素処理物を調製し、前記オカラ酵素処理物における液体中に可溶化したアラビノースを選択的に得ることを特徴とするアラビノースの選択的製造方法。
【請求項１２】
オカラ酵素処理物を酵母菌で発酵させる発酵工程を更に含む請求項１１に記載のアラビノースの選択的製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、大豆を圧搾した後の副産物であるオカラを細胞壁分解酵素で処理したオカラ酵素処理物を含有する抗酸化組成物、前記オカラ酵素処理物を更に発酵させたオカラ酵素処理発酵物を含有する二糖類水解酵素活性阻害組成物、整腸組成物、及びダイエット組成物、これらの組成物を含有する飲食品、及びアラビノースの選択的製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
オカラは、豆腐や油揚などを製造する際、大豆から豆乳を絞る圧搾工程で大量に生じる残渣である。前記オカラには、例えば、セルロース、ヘミセルロース、Ｌ−アラビノース、Ｄ−キシロースなどの有用成分が多く含まれていることが知られている。
このオカラは、食品としても流通しているが、食品としての需要が供給を大きく下回り、また、品質の劣化が早く日持ちがしないため、家畜の飼料として活用され、或いは脱水して保存性を高めて供給される他は、その大部分が産業廃棄物として処理されており、有効利用されていないのが現状である。
【０００３】
従来より、食品生成過程で排出される副産物から有用成分を分離、精製或いは濃縮する方法は多く提案されてきた。
例えば、醸造副産物である糠や玄米を基材とし、ヘミセルラーゼ系酵素、液化酵素及び糖化酵素で処理し、次いで、酵母で処理して得られた機能性素材が提案されている（特許文献１参照）。この提案では、Ｌ−アラビノース、Ｄ−キシロース、アラビノキシラン等のオリゴ糖成分を豊富に含有する機能性素材が得られている。
しかしながら、この提案では、原料としてオカラを用いるものではなく、オカラを原料として前記処理を行った抗酸化組成物、二糖類水解酵素活性阻害組成物、整腸組成物、及びダイエット組成物は、未だ提供されていない。また、この提案におけるオリゴ糖成分の可溶化率は、十分とはいえず、また、前記オリゴ糖のうち特定のオリゴ糖を効率よく得るためには、それぞれを分離する必要があった。
【０００４】
一方、オカラを原料とした機能性素材としては、例えば、オカラを発酵菌で発酵させたオカラ発酵物と、果肉成分及び／又は果皮成分とを含有する抗酸化剤が提案されている（特許文献２参照）。
しかしながら、この提案では、オカラ発酵物自体が高い抗酸化作用を有するものではなく、また、抗酸化剤としての活性を向上させるために、酵素処理を行うものではなかった。
【０００５】
したがって、有効利用されていないオカラを利用し、優れた抗酸化作用、二糖類水解酵素活性阻害作用、整腸作用、ダイエット作用などの機能を有する組成物の早急な開発が強く求められている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特許第４７９０９９６号公報
【特許文献２】特開２００７−００８９７８号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、前記従来における諸問題を解決し、以下の目的を達成することを課題とする。即ち、本発明は、有効利用されていないオカラを利用した、優れた抗酸化作用を有する抗酸化組成物、優れた二糖類水解酵素活性阻害作用を有する二糖類水解酵素活性阻害組成物、優れた整腸作用を有する整腸組成物、優れたダイエット作用を有するダイエット組成物、及びこれらの組成物を含有する飲食品、並びに、アラビノースの選択的製造方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、前記目的を達成すべく鋭意検討を行った結果、オカラを細胞壁分解酵素で処理したオカラ酵素処理物が、優れた抗酸化作用を示すことを知見した。また、オカラを細胞壁分解酵素で処理したオカラ酵素処理物を、更に酵母菌を用いて発酵することにより製造された組成物が、優れた二糖類水解酵素活性阻害作用、優れた整腸作用、及び優れたダイエット作用を示すことを知見した。また、オカラを細胞壁分解酵素で処理した場合のアラビノース可溶化率は、従来の酵素処理物に比べて非常に高く、また、オカラに含まれるキシロースがほとんど可溶化されない（０．１％未満）ため、アラビノースを選択的に製造できることを知見した。
【０００９】
本発明は、本発明者らによる前記知見に基づくものであり、前記課題を解決するための手段としては、以下の通りである。即ち、
＜１＞  オカラを細胞壁分解酵素で処理してなるオカラ酵素処理物を含有することを特徴とする抗酸化組成物である。
＜２＞  オカラ酵素処理物を酵母菌で発酵させてなるオカラ酵素処理発酵物を含有し、前記オカラ酵素処理物がオカラを細胞壁分解酵素で処理してなることを特徴とする抗酸化組成物である。
＜３＞  細胞壁分解酵素が、セルラーゼを含む前記＜１＞から＜２＞のいずれかに記載の抗酸化組成物である。
＜４＞  オカラ酵素処理物を酵母菌で発酵させてなるオカラ酵素処理発酵物を含有し、前記オカラ酵素処理物がオカラを細胞壁分解酵素で処理してなることを特徴とする二糖類水解酵素活性阻害組成物である。
＜５＞  オカラ酵素処理物にグルコースを添加して酵母菌で発酵させてなる前記＜４＞に記載の二糖類水解酵素活性阻害組成物である。
＜６＞  オカラ酵素処理物を酵母菌で発酵させてなるオカラ酵素処理発酵物を含有し、前記オカラ酵素処理物がオカラを細胞壁分解酵素で処理してなることを特徴とする整腸組成物である。
＜７＞  オカラ酵素処理物にグルコースを添加して酵母菌で発酵させてなる前記＜６＞に記載の整腸組成物である。
＜８＞  オカラ酵素処理物を酵母菌で発酵させてなるオカラ酵素処理発酵物を含有し、前記オカラ酵素処理物がオカラを細胞壁分解酵素で処理してなることを特徴とするダイエット組成物である。
＜９＞  オカラ酵素処理物にグルコースを添加して酵母菌で発酵させてなる前記＜８＞に記載のダイエット組成物である。
＜１０＞  前記＜１＞から＜３＞のいずれかに記載の抗酸化組成物、前記＜４＞から＜５＞のいずれかに記載の二糖類水解酵素活性阻害組成物、前記＜６＞から＜７＞のいずれかに記載の整腸組成物、及び前記＜８＞から＜９＞のいずれかに記載のダイエット組成物の少なくともいずれかを含有することを特徴とする飲食品である。
＜１１＞  オカラを細胞壁分解酵素で処理してオカラ酵素処理物を調製し、前記オカラ酵素処理物における液体中に可溶化したアラビノースを選択的に得ることを特徴とするアラビノースの選択的製造方法である。
＜１２＞  オカラ酵素処理物を酵母菌で発酵させる発酵工程を更に含む前記＜１１＞に記載のアラビノースの選択的製造方法である。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、従来における前記諸問題を解決し、前記目的を達成することができ、有効利用されていないオカラを利用した、優れた抗酸化作用を有する抗酸化組成物、優れた二糖類水解酵素活性阻害作用を有する二糖類水解酵素活性阻害組成物、優れた整腸作用を有する整腸組成物、優れたダイエット作用を有するダイエット組成物、及びこれらの組成物を含有する飲食品、並びに、アラビノースの選択的製造方法を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】図１は、各種のオカラ及び細胞壁分解酵素を組み合わせた場合のオカラ酵素処理物におけるアラビノース可溶化率を示すグラフである。
【図２】図２は、各種のオカラ及び細胞壁分解酵素を組み合わせた場合のオカラ酵素処理物におけるグルコース濃度を示すグラフである。
【図３】図３は、細胞壁分解酵素の量を変更した場合のオカラ酵素処理物におけるアラビノース可溶化率を示すグラフである。
【図４】図４は、オカラに対する細胞壁分解酵素処理及び発酵処理の条件を変更した場合のオカラ酵素処理発酵物におけるアラビノース可溶化率を示すグラフである。
【図５】図５は、オカラに対する細胞壁分解酵素処理及び発酵処理の条件を変更した場合のオカラ酵素処理発酵物におけるアルコール濃度を示すグラフである。
【図６】図６は、実施例３３における各臓器の体重あたりの比重量を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
（抗酸化組成物、二糖類水解酵素活性阻害組成物、整腸組成物、及びダイエット組成物）
本発明の抗酸化組成物は、オカラを細胞壁分解酵素で処理してなるオカラ酵素処理物を含有し、又は前記オカラ酵素処理物を酵母菌で発酵させてなるオカラ酵素処理発酵物を含有し、更に必要に応じてその他の成分を含有する。
本発明の二糖類水解酵素活性阻害組成物は、前記オカラ酵素処理物を酵母菌で発酵させてなるオカラ酵素処理発酵物を含有し、更に必要に応じてその他の成分を含有する。
本発明の整腸組成物は、前記オカラ酵素処理物を酵母菌で発酵させてなるオカラ酵素処理発酵物を含有し、更に必要に応じてその他の成分を含有する。
本発明のダイエット組成物は、前記オカラ酵素処理物を酵母菌で発酵させてなるオカラ酵素処理発酵物を含有し、更に必要に応じてその他の成分を含有する。
本発明の抗酸化組成物、二糖類水解酵素活性阻害組成物、整腸組成物、及びダイエット組成物は、後述するようにＬ−アラビノースを豊富に含むものであり、Ｌ−アラビノースが抗酸化作用、二糖類水解酵素活性阻害作用、整腸作用、及びダイエット作用に何らかの効果を有するものと思われる。
【００１３】
＜オカラ＞
本発明で使用されるオカラとしては、大豆を原料として、例えば豆腐を製造する過程で副生されるものであり、原料となる大豆の種類、製造条件などは特に制限されない。また、使用するオカラは、いわゆる生オカラであっても、乾燥オカラであってもよい。前記生オカラとしては、副生されたままのものでも、それを水洗いしたものでもよいが、細胞壁分解酵素で処理される前に、水分を抜き、乾燥させたものが好ましい。前記生オカラの中でも、抗酸化作用に優れる点で、水洗いをしないものが好ましい。
【００１４】
＜オカラ酵素処理物＞
前記オカラ酵素処理物は、前記オカラを細胞壁分解酵素で処理してなる。本明細書においては、この処理を「酵素処理工程」又は「酵素反応」ともいう。この処理は、オカラが有する多糖類の分解、及びアラビノース、グルコース等の遊離を目的としたものである。なお、前記細胞壁分解酵素を単に「酵素」ということがある。
【００１５】
前記細胞壁分解酵素としては、前記オカラに含まれるセルロース、ヘミセルロース、アラビノース、キシロースなどを分解し、遊離させることができる限り特に制限はなく、オカラの分解を促進、或いはオカラ中の脂質や蛋白質を分解する作用を有するものであってもよい。また、オカラからのグルコース遊離を促進するもの、製造された組成物に好ましい風味を与えるものであってもよい。
これらの酵素は、精製されていても、精製されていなくてもよい。また、これらの酵素の起源は、特に制限はない。
前記細胞壁分解酵素としては、例えば、ペクチナーゼ、ヘミセルラーゼ、セルラーゼ、アラビナーゼ、マンナナーゼ、フィターゼ、リパーゼ、α−ガラクトシダーゼ、プロテアーゼなどが挙げられる。これらの酵素は、目的に応じて、１種単独で使用してもよく、２種以上を併用してもよい。これらの酵素の中でも、アラビノースを遊離させる点で、ペクチナーゼ、アラビナーゼが好ましく、抗酸化作用を向上させる点で、セルラーゼを併用することが好ましい。
【００１６】
前記細胞壁分解酵素としては、市販の酵素剤を利用してもよく、該市販の酵素剤としては、例えば、ペクチナーゼ剤として、スミチームＰＸ（新日本化学工業株式会社製）、マセロチームＡ（ヤクルト薬品工業株式会社製）、ペクチナーゼＸＰ−５３４（ナガセケムテックス株式会社製）、ペクチナーゼＧ「アマノ」（天野エンザイム株式会社製）；ヘミセルラーゼ剤として、ヘミセルラーゼ「アマノ」９０（天野エンザイム株式会社製）、ヘミセルラーゼＭ（エイチビィアイ株式会社製）；セルラーゼ剤として、スミチームＡＣ（新日本化学工業株式会社製）；アラビナーゼ剤として、スミチームＡＲＳ（新日本化学工業株式会社製）；マンナナーゼ剤として、セルロシンＧＭ５（エイチビィアイ株式会社製）；リパーゼ剤として、リパーゼＡ−１０ＦＧ（ナガセケムテックス株式会社製）、リパーゼＡＹ「アマノ」３０Ｇ（天野エンザイム株式会社製）；フィターゼ剤として、スミチームＰＨＹ（新日本化学株式会社製）；キシラナーゼ剤として、セルロシンＴＰ２５（エイチビィアイ株式会社製）などが挙げられる。
【００１７】
前記酵素処理における処理条件、例えば、原料に対する酵素量、反応温度、ｐＨ、反応時間等としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
本発明においては、オカラを構成する多糖類を十分に分解し、遊離（可溶化）させるため、前記酵素処理を複数回行ってもよく、例えば、一段階目の酵素処理を行った後、更に二段階目の酵素処理を行う二段階酵素反応（「二段階酵素処理」ともいう）を施すことが好ましい。一段目で使用する酵素と二段目で使用する酵素とは、同一であっても、異なっていてもよいが、可溶化の効率の点で、異なっていることが好ましい。
【００１８】
前記オカラ（原料）に対する前記細胞壁分解酵素それぞれの割合（質量比）としては、通常１／２００〜１／５０である。前記質量比が、１／２００未満であると、酵素反応が不十分であり、或いは酵素反応に長時間を要することとなり、１／５０を超えると、経済的に好ましくない。
【００１９】
前記反応温度としては、使用する酵素の至適温度を考慮して決定すべきであり、例えば、１５℃〜６０℃が一般的である。
【００２０】
前記反応ｐＨとしては、使用する酵素の至適ｐＨを考慮して決定すべきであり、一般的には３〜１０の範囲である。ｐＨ調整は、ｐＨ調整用の塩酸又は水酸化ナトリウムを使用してもよいし、ｐＨ調整用バッファーを使用してもよい。
【００２１】
前記反応時間としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜決定することができるが、短すぎると反応が不十分であり、長すぎると雑菌の混入等の問題が生じるので好ましくない。
【００２２】
＜オカラ酵素処理発酵物＞
本発明においてオカラ酵素処理発酵物は、前記酵素処理により得られたオカラ酵素処理物を酵母菌で発酵してなる。本明細書において、この処理を「発酵」、「酵母処理」、「発酵工程」又は「酵母処理工程」ともいう。この酵母処理の特徴は、ペントース（例えば、Ｌ−アラビノース、Ｄ−キシロース等）非発酵（非資化）性であり、かつグルコース、フルクトース発酵（資化）性である酵母菌によりペントースを濃縮し、酵母菌が製造するアルコールで微生物汚染を防止すること、及び酵母菌を増殖させて酵母菌体を多く得ることである。前記酵母菌については、特にその細胞壁成分由来の食物繊維が豊富な機能を有することが見出されており、また酵母菌自体にも種々の栄養素が含まれ、胃腸にも良いとされている。更に酵母菌により発酵させることで好ましい発酵香も生じる。
【００２３】
発酵工程における発酵条件、例えば、培養温度、培養時間、ｐＨ、及び使用する酵母菌、通気条件等も適宜決定することができるが、使用する酵母菌のグルコース消費、増殖等の特性に適した条件とすべきである。
【００２４】
前記酵母菌としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、サッカロミセス属、シゾサッカロミセス属、カンジダ属、クルイベロミセス属などが挙げられる。これらの中でも、飲食品や医薬組成物への用途の観点から、サッカロミセス属の酵母菌が好ましく、清酒酵母、ビール酵母、ワイン酵母、焼酎酵母、ウイスキー酵母等の醸造用酵母が好ましい。
前記清酒酵母としては、例えば、協会６号酵母（ＮＢＲＣ２３４６）、協会７号（ＮＢＲＣ２３４７）などが挙げられる。前記ビール酵母としては、例えば、市販のビール製造キット「ブラックロック  ラガー」に付属のビール７Ｇ酵母などが挙げられる。前記ワイン酵母としては、例えば、Ｊａｐａｎｅｓｅ  ｗｉｎｅ酵母（ＮＢＲＣ０９６５）、Ｐａｌｍ  ｗｉｎｅ酵母（ＮＢＲＣ０２１０）、Ｗｉｎｅ酵母（ＮＢＲＣ０２２１）などが挙げられる。前記焼酎酵母としては、Ｓｈｏｕｃｈｕ  ｍｏｒｏｍｉ酵母（ＮＢＲＣ０２８２）などが挙げられる。前記ウイスキー酵母としては、Ｗｈｉｓｋｙ酵母（ＮＢＲＣ２１１４）などが挙げられる。これらの中でも、アラビノースの可溶化率の観点から、短期発酵（３日間以内）の場合には、Ｊａｐａｎｅｓｅ  ｗｉｎｅ酵母、協会６号酵母、協会７号酵母が好ましく、長期発酵（３日間超）の場合には、Ｐａｌｍ  ｗｉｎｅ酵母、協会６号酵母、Ｗｉｎｅ酵母が好ましい。これらの中でも、短期発酵及び長期発酵のいずれの場合にもアラビノースの可溶化率が優れる点で、協会６号酵母が好ましい。また、β−グルカンの総量、並びに、香り、味、及び色調の評価等の総合的な観点からも、協会６号酵母が特に好ましい。
【００２５】
前記酵素処理物に対する酵母菌の接種量としては、酵母菌が発酵を行える限り、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択できるが、通常、１０７個／ｍＬ〜１０８個／ｍＬのオーダーである。
【００２６】
前記酵母処理においては、グルコースを添加（補糖）しても、しなくてもよい。
前記グルコースの添加量としては、例えば、終濃度で、３質量％〜８質量％とすることができる。
【００２７】
前記培養温度としては、酵母菌による発酵が進む限り特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、通常１０℃〜５０℃であり、１５℃〜４０℃が好ましく、２０℃〜３５℃が更に好ましい。
【００２８】
前記培養時間としては、酵母菌による発酵が進む限り特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、通常１時間〜５日間であり、３時間〜３日間が好ましく、６時間〜２日間が更に好ましい。また、培養は、振とう培養で行ってもよいし、静置培養で行ってもよいが、発酵を促進させる点で、振とう培養を行うことが好ましい。なお、前記培養において、通気は必要に応じて行うことができる。
【００２９】
前記ｐＨとしては、酵母菌による発酵が進む限り特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
【００３０】
（アラビノースの選択的製造方法）
本発明のアラビノースの選択的製造方法は、オカラを細胞壁分解酵素で処理してオカラ酵素処理物を調製し、前記オカラ酵素処理物における液体中に可溶化したアラビノースを選択的に得ることを含み、好ましくは、前記オカラ酵素処理物を酵母菌で発酵させる発酵工程を更に含み、必要に応じて更にその他の工程を含む。
【００３１】
前記酵素処理物を調製する方法及び前記発酵工程は、上述した通りである。
本発明においては、オカラを細胞壁分解酵素で処理することにより、オカラに含まれるオリゴ糖成分のうち、アラビノースを高い割合で可溶化でき、その他のキシロースなどは、ほぼ可溶化されない（測定装置の検出限界以下）ため、前記オカラ酵素処理物における液体中に可溶化したアラビノースを選択的に得ることができる。
【００３２】
前記その他の工程としては、例えば、濃縮工程、乾燥工程などが挙げられる。これらの工程は、特に制限はなく、従来公知の方法を用いることができる。
【００３３】
＜用途＞
本発明で得られるオカラ酵素処理物は、Ｌ−アラビノースを多く含み、また、本発明で用いられるオカラ酵素処理発酵物は、更に酵母菌も多く含むものであり、これらは、以下に詳述するような豊富な機能を有するものである。
【００３４】
本発明の抗酸化組成物、二糖類水解酵素活性阻害組成物、整腸組成物、及びダイエット組成物は、上記方法で得られたオカラ酵素処理物又はオカラ酵素処理発酵物をそのまま使用してもよく、或いはこれらを更に処理乃至加工して用いてもよい。例えば、更に濃縮又は希釈してもよく、凍結乾燥、加熱乾燥等の乾燥処理に付して使用してもよく、或いは更に固形分を水などで抽出して用いてもよい。その形態は特に限定されず、例えば、溶液、懸濁液、半固体（例えば、ペースト状）、固体（例えば、粉末、顆粒）などであってもよい。
実施例で説明するように、本発明の抗酸化組成物、二糖類水解酵素活性阻害組成物、整腸組成物、及びダイエット組成物は、健康によいとされる抗酸化機能、消化吸収抑制機能、血糖値上昇抑制機能、整腸機能、ダイエット機能などの種々の生理活性や機能及び薬理学的活性や機能を示す。また、本発明の抗酸化組成物、二糖類水解酵素活性阻害組成物、整腸組成物、及びダイエット組成物は、安全性が高く、飲食品、医薬品、化粧品などへの用途が考えられる。
【００３５】
（飲食品）
本発明の抗酸化組成物、二糖類水解酵素活性阻害組成物、整腸組成物、及びダイエット組成物は、種々の用途に用いることができる。例えば、本発明の抗酸化組成物、二糖類水解酵素活性阻害組成物、整腸組成物、及びダイエット組成物の少なくともいずれかを食品中に用いて種々の機能性食品或いは健康食品としての用途に用いることができる。したがって、本発明の飲食品は、本発明の抗酸化組成物、本発明の二糖類水解酵素活性阻害組成物、本発明の整腸組成物、及び本発明のダイエット組成物の少なくともいずれかを含有してなる。前記抗酸化組成物、前記二糖類水解酵素活性阻害組成物、前記整腸組成物、及び前記ダイエット組成物の少なくともいずれかを含有させる形態としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、そのまま使用してもよく、ペレット、粉末、顆粒などの形態として使用してもよく、食品添加物、調味料、ふりかけとして使用してもよい。また、前記抗酸化組成物、前記二糖類水解酵素活性阻害組成物、前記整腸組成物、及び前記ダイエット組成物の少なくともいずれかを食材中に含有せしめて使用してもよい。
【００３６】
＜その他の用途＞
＜＜医薬品＞＞
また、本発明の抗酸化組成物、二糖類水解酵素活性阻害組成物、整腸組成物、及びダイエット組成物の少なくともいずれかを医薬組成物中に含有させて医薬品としての用途に用いることができる。前記医薬組成物は、通常、本発明の抗酸化組成物、二糖類水解酵素活性阻害組成物、整腸組成物、及びダイエット組成物の少なくともいずれかの他に医薬用担体又は賦形剤を含む。前記医薬組成物の形態は、特に限定されず、例えば、固体（錠剤、粉末、顆粒等）、半固体（ペースト等）、液体（溶液、懸濁液、エマルジョン等）、或いはカプセルに封入されたものであってもよい。これらの剤形のための担体又は賦形剤も当業者によく知られており、適宜選択され得る。
【００３７】
＜＜化粧品＞＞
更に、本発明の抗酸化組成物、二糖類水解酵素活性阻害組成物、整腸組成物、及びダイエット組成物の少なくともいずれかを化粧組成物中に含有させて化粧品としての用途に用いることができる。本発明の抗酸化組成物、二糖類水解酵素活性阻害組成物、整腸組成物、及びダイエット組成物は、イソフラボンを豊富に含み、グルコースをほとんど又は全く含有しないので、グルコースによる皮膚へのべたつきがなく、イソフラボンによる保湿効果、除毛・抑毛効果、メラニン生成抑制効果等があり、化粧品素材としての用途がある。本発明の化粧組成物は、本発明の抗酸化組成物、二糖類水解酵素活性阻害組成物、整腸組成物、及びダイエット組成物の少なくともいずれかの他に化粧品に常用される担体、例えば、水、グリセリン、アルコール類、油脂などを含有するものであり、更に香料、着色料、防腐剤などを適宜添加してもよい。本発明の抗酸化組成物、二糖類水解酵素活性阻害組成物、整腸組成物、及びダイエット組成物の少なくともいずれかを含む化粧組成物の形状としては、特に制限はなく、例えば、ローション、乳液、クリーム、軟膏などの形状とすることができる。
【実施例】
【００３８】
以下、本発明の実施例を説明するが、本発明は、これらの実施例に何ら限定されるものではない。また、特に断りのない限り、「％」は質量％を示し、各データの値は、２サンプルの平均値で示した。
【００３９】
（実施例１：オカラの可溶化（アラビノースの選択的製造方法））
＜材料＞
大豆に水を加えて粉砕又は磨砕し加熱した後、圧搾して豆乳を濾過した後の残渣である不要物（オカラ）、前記オカラを十分に水洗いしたもの（以下、「オカラ（水洗）」と表記する）及び乾燥オカラ（不二製油株式会社製）を材料として用いた。
前記オカラ及びオカラ（水洗）を用いる場合には、８０℃で一晩乾燥させたものを使用した。
【００４０】
＜酵素処理＞
前記オカラ、オカラ（水洗）又は乾燥オカラを１ｇ、１００ｍｍｏｌ／Ｌ酢酸緩衝液（ｐＨ４．５）１０ｍＬ、スミチームＰＸ（新日本化学工業株式会社製）及びスミチームＡＲＳ（新日本化学工業株式会社製）のいずれか２０μＬ、スミチームＡＣ（新日本化学工業株式会社製）２０ｍｇを混合し、４５℃で一晩（１６時間）振とうしながら反応させた（一段階目）。酵素反応後の溶液にマセロチームＡ（ヤクルト薬品工業株式会社製）２０ｍｇを添加して混合し、４５℃で一晩振とうしながら反応させた（二段階目）。
次いで、得られた反応液を３，０００ｒｐｍで１０分間遠心した後、上清をろ紙で濾過して回収した。
回収したオカラの酵素処理液を７０℃で１０分間処理して酵素を失活させ、フィルター濾過を行った。なお、このようにして得られたものを以下「オカラ酵素処理物」と呼ぶ。
得られたオカラ酵素処理物中に含まれる遊離アラビノース及び遊離グルコースの定量分析を行った。前記分析は、液体クロマトグラフィー〔ＨＰＬＣ：Ｗａｔｅｒｓ  ２６９５  セパレーションモジュール（Ｗａｔｅｒｓ社製）、検出器：Ｗａｔｅｒｓ  ２４２４  エバポレイト光散乱（ＥＬＳ）検出器（Ｗａｔｅｒｓ社製）、カラム：ＳＵＧＡＲ  ＳＰＯ  ８１０（Ｓｈｏｄｅｘ社製）〕で行った。なお、アラビノースについては、遊離アラビノースの測定値から、下記計算式によりアラビノース可溶化率（％）を算出した。結果を図１及び図２に示す。
アラビノース可溶化率（％）＝（オカラ酵素処理物中の遊離アラビノース量／オカラ中のアラビノース量）×１００
オカラ酵素処理物中の遊離アラビノース量＝ＨＰＬＣの結果×オカラ酵素処理液の液量
【００４１】
ここで、上記計算式中、オカラ中のアラビノース量とは、オカラ１ｇ当たりに含まれるアラビノースの全量（オカラ１ｇを構成するアラビノース量）を表し、以下の測定方法により求めた。
前記オカラ、オカラ（水洗）又は乾燥オカラの試料を硫酸加水分解し、次いで中和した後、上清をろ紙で濾過して回収した。前記硫酸加水分解は、７２％硫酸を前記試料に加え、室温で１時間攪拌した後、４％硫酸中で１時間オートクレーブ（１２１℃）を行った。回収したオカラの硫酸加水分解液をメンブレンフィルターで濾過し、得られた溶液を高速液体クロマトグラフィー〔ＨＰＬＣ：ＬＣ−１０ＡＤｖｐ（株式会社島津製作所製）、検出器：蛍光分光光度計  ＲＦ−１０ＡＸＬ（株式会社島津製作所製）、カラム：ＴＳＫｇｅｌ  ＳＵＧＡＲ  ＡＸＩ（直径４．６ｍｍ、長さ１５０ｍｍ、東ソー株式会社製）〕により測定した。
【００４２】
図１から、素材としていずれのオカラを用いた場合でも、スミチームＡＲＳを用いた場合よりもスミチームＰＸを用いた場合の方がアラビノースを可溶化し易いことが分かった。また、図２から、セルラーゼ剤としてマセロチームＡを用いることにより、１％程度のグルコースが検出された。なお、実施例１において、遊離したアラビノース量の測定方法と同様にして、遊離したキシロースの量を測定したが、検出限界以下（０．１％未満）であった。
【００４３】
上記実施例１の酵素処理の結果を受けて、最適な酵素の組合せ及びその量比を検討するため、以下のオカラ酵素処理を行った。
【００４４】
（実施例２〜８）
実施例１において、材料として下記のようにして用意したオカラを用い、１００ｍｍｏｌ／Ｌ酢酸緩衝液（ｐＨ４．５）の量を１０ｍＬから８ｍＬに変更し、一段階目の酵素処理及び二段階目の酵素処理に用いる細胞壁分解酵素の種類及び量を表１に示すように変更した以外は、実施例１と同様にして、オカラ酵素処理物を調製し、アラビノース可溶化率を算出した。結果を表１及び図３に示す。
＜材料＞
大豆を煮て圧搾機により圧搾して豆乳を濾過した後の残渣であるオカラを材料として用いた。前記オカラは、８０℃で一晩乾燥させたものを使用した。なお、前記オカラ１ｇ中の全アラビノース量を実施例１と同様に測定したところ２４ｍｇであった。
【００４５】
【表１】
2013172711.tif 000003
【００４６】
表１及び図３から、スミチームＡＣを倍量添加した実施例４が実施例２及び３よりも高いアラビノース可溶化率を示した。また、使用する全ての酵素量を増加させた実施例６〜８でのアラビノース可溶化率が６５％以上と最も高くなった。なお、実施例２〜８において、可溶化されたキシロースの量は検出限界以下（０．１％未満）であった。材料として米糠、小麦などを用いた従来の酵素処理物の場合には、アラビノースと共にキシロースも可溶化されることが知られている。例えば、特許第４７９０９９６号公報には、米糠を材料とした米糠酵素処理発酵物において、アラビノースの可溶化率が３５％であり、キシロースの可溶化率が２３％であることが記載されている（特許第４７９０９９６号公報の実施例４（赤糠発酵物２）を参照）。したがって、本発明のアラビノースの製造方法においては、これらのオリゴ糖を分離しなくても、アラビノースを選択的に、かつ、高い収率で得られることが分かった。
なお、得られたオカラ酵素処理物には、セルラーゼにより産生されたグルコースが含まれると考えられる。前記グルコースは、酵母で発酵させることにより資化（消費）され、一方、前記アラビノースは資化されないため、アラビノースが濃縮されたものが得られると予想される。これを検討するため、以下のようにオカラ酵素処理物の発酵を行った。
【００４７】
（実施例９：オカラ酵素処理発酵物の調製）
＜材料＞
大豆を煮て圧搾機により圧搾して豆乳を濾過した後の残渣であるオカラを材料として用いた。前記オカラは、８０℃で一晩乾燥させたものを使用した。
【００４８】
＜細胞壁分解酵素による処理＞
前記オカラ１ｇ、１００ｍｍｏｌ／Ｌ酢酸緩衝液（ｐＨ４．５）１０ｍＬ、及びスミチームＰＸ（新日本化学工業株式会社製）２０μＬを混合し、５０℃で一晩振とうしながら反応させた（一段階目）。なお、セルラーゼを添加する区分では、更にスミチームＡＣ（新日本化学工業株式会社製）１０ｍｇを添加した。反応後の溶液にマセロチームＡ（ヤクルト薬品工業株式会社製）２０ｍｇを添加して混合し、４５℃で一晩振とうしながら反応させた（二段階目）。
次いで、得られた反応液を３，０００ｒｐｍで１０分間遠心した後、上清をろ紙で濾過して回収した。
回収したオカラの酵素処理液を７０℃で１０分間処理して酵素を失活させ、フィルター濾過を行い、オカラ酵素処理物を得た。
得られたオカラ酵素処理物に含まれる遊離アラビノースの定量分析を行った。アラビノース可溶化率（％）は、実施例１と同様にして遊離アラビノースの測定値から算出した。結果を図４に示す。
【００４９】
＜酵母菌による発酵処理＞
得られたオカラ酵素処理物（セルラーゼを添加した区分と添加しなかった区分の２区分を含む）に、１００ｍｍｏｌ／Ｌの酢酸緩衝液（ｐＨ４．５）を５ｍＬ加えた。また、補糖する区分には、終濃度５％となるようにグルコースを添加した。
清酒酵母協会７号（Ｋ７、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）を５×１０６ｃｅｌｌｓ／ｍＬとなるように植菌し、２０℃、１５０ｒｐｍで２日間振とう培養（発酵）を行った。
得られた酵母培養液をろ紙で濾過し、濾過液を７０℃で１０分間処理して酵素を失活させ、フィルター濾過を行った。なお、酵母処理（発酵）することにより得られたものを以下「オカラ酵素処理発酵物」と呼ぶ。
得られたオカラ酵素処理発酵物中の遊離アラビノース、アルコール及びグルコースの定量分析を行った。前記分析は、上記と同様の液体クロマトグラフィーで行った。アラビノースについては、前述したように遊離アラビノース量からアラビノース可溶化率を算出した。結果を図４及び図５、並びに表２に示す。
【００５０】
なお、図４では、グラフの右側縦軸としてオカラ酵素処理物及びオカラ酵素処理発酵物の乾燥物１ｇあたりのアラビノース量（ｍｇ）を示す。前記アラビノース量は計算値であり、その算出方法は次の通りである。実施例１と同様のＨＰＬＣ分析から、実施例９で用いた原料の生オカラには２．４％のアラビノース（総量）が含まれていた。また、生オカラとその乾燥物との質量比から、生オカラには６８％の水分が含まれていた。したがって、水分を除いた乾燥物中におけるアラビノース総量は、７．５％であり、乾燥物１ｇあたりでは７５ｍｇ含まれることになる。ここで、オカラ酵素発酵物に含まれる酵素及び酵母菌の量はオカラの量に比べて非常に少なく無視できるため、「アラビノース可溶化率１００％＝７５ｍｇ／オカラ酵素処理物又はオカラ酵素処理発酵物の乾燥物１ｇ」と換算できる。
【００５１】
【表２】
2013172711.tif 000004
【００５２】
図４から、オカラ酵素処理発酵物の乾燥物は、特許第４７９０９９６号公報に記載された米糠発酵物（赤糠発酵物２）の乾燥物に比べて、遊離されたアラビノースが多く含まれることが分かった。このアラビノース量の違いは、原料中のアラビノース総量における違いとともに、本発明においてアラビノースの可溶化率が非常に優れることに起因すると考えられる。
【００５３】
表２から、酵母処理（発酵）を行った区分では、グルコースが消費されており、グルコースの量は検出限界以下（０．１％未満）であった。これは、酵母で発酵されることによりグルコース等の発酵糖は資化（消費）されることによる。一方、アラビノースは資化されないため、アラビノースが濃縮されたものとなったと考えられる。また、図５から、アルコール濃度は、セルラーゼを含有する区分で補糖を行わなかったオカラ酵素処理発酵物において最も高く、３％程度生産されていた。
【００５４】
（実施例１０〜２６）
実施例９において、オカラ酵素処理物を実施例６と同様にして得られたオカラ酵素処理物に変更し、酵母処理（発酵）に用いた酵母を表３に記載の酵母に変更し、酵母の培養（発酵）時間を表３に記載の時間に変更した以外は、実施例９と同様にして、オカラ酵素処理発酵物を得た。得られたオカラ酵素処理発酵物のアラビノース可溶化率、アルコール濃度及びグルコース濃度の定量分析を、実施例９と同様にして行った。結果を表３に示す。
【００５５】
【表３】
2013172711.tif 000005
表３中、酵母細胞数において、Ｅは１０のべき乗を表し、例えば「Ｅ＋０８」は「×１０８」を表す。
【００５６】
表３の結果から、培養時間が３日間の場合には、Ｊａｐａｎｅｓｅ  ｗｉｎｅ酵母、協会７号、及び協会６号においてアラビノース可溶化率が高く、培養時間が５日間の場合には、Ｐａｌｍ  ｗｉｎｅ酵母、Ｗｉｎｅ酵母、及び協会６号においてアラビノース可溶化率が高かった。また、Ｐａｌｍ  ｗｉｎｅ酵母を用いた実施例２３においてアラビノース可溶化率が最も高く、補糖した場合に８０％以上となった。また、実施例２０〜２６から、様々な種類の酵母において５日間発酵させることによりアラビノース可溶化率を増加させ得ることが分かった。
また、特許第４７９０９９６号公報に記載された、赤糠を材料として用いた米糠酵素処理発酵物（赤糠発酵物２）の可溶化率が３５％であることに比べて、本願実施例１０〜２６におけるアラビノース可溶化率は、非常に高いことが分かった。
また、実施例９と同様に、実施例１０〜２６のオカラ酵素処理発酵物では、酵母で発酵されることによりグルコース等の発酵糖は資化されて検出限界以下となり、一方、アラビノースは資化されず濃縮されたものとなった。
【００５７】
（実施例２７：オカラ酵素処理発酵物のβ−グルカン量の測定）
実施例１２、１４、１７、１８、２２、２３、及び２６において、終濃度５％で補糖した条件で得られた各オカラ酵素処理発酵物について、以下の方法により決定した各酵母菌種毎のβ−グルカン量（％、ｗ／ｗ）を基にβ−グルカン総量の比較を行った。結果を表４に示す。
なお、本実施例の発酵に用いたオカラ酵素処理物（発酵前）のアラビノース可溶化率は、５９．７％であった。
【００５８】
＜β−グルカン量の測定方法＞
β−グルカン量の測定は、β−グルカン定量キット（メガザイム社製）を用いて行った。
ＹＰＤ液体培地（１質量％酵母エキス、２質量％ペプトン、２質量％グルコース、ｐＨ６．０）２００ｍＬに酵母を植菌し、３０℃、１００ｒｐｍで２日間振とう培養した。遠心分離で、酵母菌体を回収し、凍結乾燥を行った。凍結乾燥を行った酵母菌体の重量を測定した。
酵母菌体に２０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．５）を５ｍＬ加え、１２１℃で１５分間オートクレーブを行った。放冷後、リケナーゼ（前記キットに付属）を０．２ｍＬ加え、４０℃で１時間インキュベートした。次いで、これを遠心分離し、上清を回収し、０．１ｍＬずつ３本の試験管に分注した。３本のうち、１本（ブランク用）に５０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）、残りの２本（サンプル用）にβ−グルコシダーゼ（５０ｍＭ酢酸緩衝液、ｐＨ５．０）を各０．１ｍＬずつ加え、それぞれ４０℃で１５分間インキュベートした。次いで、グルコースオキシダーゼ／ペルオキシダーゼ試薬（前記キットに付属）３．０ｍＬを各試験管に加え、４０℃で２０分間インキュベートした。
以上のようにして得られた各サンプルについて、吸光光度計を用いて波長５１０ｎｍで吸光度測定を行い、以下の式からβ−グルカン量を算出した。
β−グルカン（％、ｗ／ｗ）＝ΔＡ（サンプル−ブランク）×Ｆ／Ｗ×２７
ΔＡ（サンプル−ブランク）：サンプルの吸光度−ブランクの吸光度
Ｆ：１００／Ｄ−グルコース１００μgの吸光度の値
Ｗ：凍結乾燥後の酵母菌体の重量（ｍｇ）
【００５９】
【表４】
2013172711.tif 000006
＊表４中、酵母細胞数において、Ｅは１０のべき乗を表し、例えば「Ｅ＋０８」は「×１０８」を表す。また、β−グルカン総量は、黒酵母で３日間発酵させたオカラ酵素処理発酵物中のβ−グルカン総量を１とした相対量を表す。また、収率は、材料として用いたオカラの質量に対して、得られたオカラ酵素処理発酵物を凍結乾燥機で乾燥させた乾燥物の質量を百分率で示した。
【００６０】
表４から、オカラ酵素処理発酵物中において、機能性食品素材であるβ−グルカンの量は、黒酵母で発酵させた場合に比べて、Ｊ．  ｗｉｎｅ酵母、Ｐａｌｍ酵母及びＫ６酵母（協会６号酵母）で発酵させた場合により多く、Ｋ６酵母で発酵させた場合に最も多いことが分かった。
【００６１】
（実施例２８：オカラ酵素処理発酵物の香り、味、及び色調の評価）
実施例１２、１４、１７、及び１８において終濃度５％で補糖した条件で得られた各オカラ酵素処理発酵物の香り、味（コク、甘味、酸味、苦み、塩味、旨味など）、及び色調（他の飲食品と併用した場合に着色しない）について下記評価基準に基づき官能評価を行った。また、比較例１として、特許第４７９０９９６号公報に記載の米糠酵素処理発酵物（赤糠発酵物２）についても同様に評価を行った。結果を表５に示す。
−評価基準−
５点：良い
４点：やや良い
３点：普通
２点：やや悪い
１点：悪い
【００６２】
【表５】
2013172711.tif 000007
【００６３】
（実施例２９：オカラ酵素処理発酵物のアミノ酸分析）
実施例１２、１４、１７、１８、２２、２３、及び２６において終濃度５％で補糖した条件で得られたオカラ酵素処理発酵物について、アミノ酸分析を行った。分析装置としては、アミノ酸分析計（株式会社日立製作所製、Ｌ−８９００）を用いた。また、比較例２として、特許第４７９０９９６号公報に記載の米糠酵素処理発酵物（赤糠発酵物２）、発酵前の対照として、実施例７で得られたオカラ酵素処理物について同様にしてアミノ酸分析を行った。結果を表６に示す。
【００６４】
【表６】
2013172711.tif 000008
【００６５】
表６から、総アミノ酸量の減少は、酵母菌の資化によるものと考えられ、総アミノ酸量の増加は、酵母菌の代謝によるものと考えられる。発酵に用いられた酵母菌の種類により、発酵後の遊離アミノ酸の組成を変化させることができ、これにより味がよくなったものと考えられる。
【００６６】
（実施例３０：オカラ酵素処理発酵物の有機酸分析）
実施例１２、１４、１７、１８、２２、２３、及び２６において終濃度５％で補糖した条件で得られたオカラ酵素処理発酵物について、有機酸分析を行った。分析装置としては、有機酸分析計（日本ダイオネクス株式会社製、イオンクロマトグラフィーシステム  ＩＣＳ−１５００）を用いた。また、比較例３として、特許第４７９０９９６号公報に記載の米糠酵素処理発酵物（赤糠発酵物２）、発酵前の対照として、実施例７で得られたオカラ酵素処理物について同様にして有機酸分析を行った。結果を表７に示す。
【００６７】
【表７】
2013172711.tif 000009
【００６８】
表７において、発酵前のオカラ酵素処理物に含まれる主な有機酸は、酢酸とピルビン酸であり、いずれも酸味を呈する。この酢酸は、酢酸緩衝液、ピルビン酸は粗酵素の共雑物に由来すると推測される。黒酵母で発酵させた場合のみ、ピルビン酸の減少が見られ、その他の酵母で発酵させた場合には、ピルビン酸の増加が見られた。また、黒酵母以外の酵母で発酵させた場合は、僅かな量であるが、旨味となるコハク酸が含まれる。これにより味がよりよくなったものと考えられる。一方、比較例３では、乳酸はｐＨ調整用に添加されたものに由来すると推測されるが、その他の有機酸の組成が大きく異なる。
【００６９】
（実施例３１：抗酸化能の測定）
実施例９のオカラ酵素処理物及びオカラ酵素処理発酵物の抗酸化能を評価するため、抗酸化能測定キット  ラジカルキャッチ（アロカ株式会社製）を用いて測定を行った。
具体的には、以下の手順により行った。
前記キットに付属しているＡ液及びＢ液を各５０μＬ、サンプル２０μＬを測定容器に分注し、混合した。ここで、サンプルとしては、１倍、２倍、又は５倍希釈したものを用い、前記サンプルの代わりに滅菌水２０μＬを入れたものを対照とした。
前記測定容器を３７℃で５分間予備加温を行った後、前記キットに付属しているＣ液を１，０００倍に希釈した溶液５０μＬを注入し、攪拌した後、化学発光測定装置にセットして、発光量を測定した。
【００７０】
前記測定装置において、Ｐｏｉｎｔ  １７及びＰｏｉｎｔ  ２４より、発光量として測定開始後８５秒から１２０秒までの積算値を求め、下記計算式からラジカル消去率を算出した。前記各サンプルの希釈系列のラジカル消去率から検量線を作成し、ＩＣ５０値を求めた。ここで、ＩＣ５０値とは、試薬によって発生させた活性酸素量を半分にする値を意味する。結果を表８に示す。
ラジカル消去率（％）＝（対照の発光量−サンプルの発光量）／対照の発光量×１００
【００７１】
【表８】
2013172711.tif 000010
【００７２】
表８より、セルラーゼで処理しなかったオカラ二段階酵素処理物とこれを更に発酵させたオカラ酵素処理発酵物とでは、二段階酵素処理物の方が若干ＩＣ５０値が低かった。オカラ二段階酵素処理物及びオカラ酵素処理発酵物は、いずれも酵素処理工程においてセルラーゼで処理することにより、その抗酸化能を高める効果があることが分かった。
【００７３】
（実施例３２：二糖類水解酵素活性阻害能の測定）
実施例９のオカラ酵素処理物及びオカラ酵素処理発酵物の消化吸収抑制効果を評価するため、次に調製方法を示す小腸粗酵素（以下、「粗酵素」と呼ぶ）を用いて二糖類水解酵素活性阻害率を測定した。
Ｒａｔ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ａｃｅｔｏｎｅ  ｐｏｗｄｅｒ（シグマ社製）に１０倍容のマレイン酸緩衝液（ｐＨ６．０）を加え、５，０００ｒｐｍで３０分間の遠心分離後、得られた上清を粗酵素とした。
【００７４】
二糖類水解酵素活性阻害率を測定するため、基質として２％マルトース溶液１５０μＬ、サンプル１５０μＬを分注して混合した。ここで、サンプルとしては、１０倍、５０倍、１００倍希釈したものを用い、前記サンプルの代わりに滅菌水１５０μＬを入れたものをＢｌａｎｋ１とした。
得られた混合溶液を３７℃で５分間予備加温を行った後、サンプル及びＢｌａｎｋ１に２倍希釈した粗酵素液１５０μＬを添加し、攪拌した後、３７℃で３０分間、基質と粗酵素とを反応させた。なお、１００℃で１０分間酵素を失活させた粗酵素液１５０μＬをサンプルに添加したものをＢｌａｎｋ２とした。
次いで、１００℃で１０分間、粗酵素を失活させて酵素反応を停止させた後、酵素反応させたサンプル、Ｂｌａｎｋ１及びＢｌａｎｋ２にグルコース定量キット（グルコースｃＩＩテストワコー、和光純薬工業株式会社製）の発色試液１．５ｍＬを添加し、混合した。３７℃で５分間反応させた後、分光光度計を用いて波長５０５ｎｍで吸光度を測定した。前記吸光度の測定値から下記計算式により二糖類水解酵素活性阻害率を求め、検量線を作成し、ＩＣ５０値を算出した。結果を表９に示す。
二糖類水解酵素活性阻害率（％）＝１００−（Ａ−Ｃ）／Ｂ  ×  １００
Ａ：サンプルの測定値
Ｂ：Ｂｌａｎｋ１の測定値
Ｃ：Ｂｌａｎｋ２の測定値
なお、サンプル、Ｂｌａｎｋ１及びＢｌａｎｋ２の構成を以下に示す。
サンプル：基質（２％マルトース）、オカラのサンプル、粗酵素液
Ｂｌａｎｋ１：基質（２％マルトース）、滅菌水、粗酵素液
Ｂｌａｎｋ２：基質（２％マルトース）、オカラのサンプル、失活させた粗酵素液
【００７５】
【表９】
2013172711.tif 000011
【００７６】
表９より、オカラ二段階酵素処理物に比べ、これを更に発酵したオカラ酵素処理発酵物においては、ＩＣ５０値が低い傾向にあること、すなわち二糖類水解酵素活性阻害効果が高い傾向にあることが分かった。これらの発酵物においては、グルコースを低減し、アラビノースなどの糖を濃縮している結果と考えられる。
【００７７】
（実施例３３：整腸能及びダイエット能の測定）
実施例９のオカラ酵素処理発酵物（二段階酵素反応  有り、セルラーゼ  有り、発酵処理  有り、補糖  有り）の整腸能及びダイエット能を評価するため、下記動物実験を行った。
【００７８】
＜動物実験＞
６週齢のＳｌｃ：ＳＤ系雄ラット（日本エスエルシー株式会社製）をポリカーボネート製ケージに各１匹収容し、室温２３℃±２℃、照明時間を１２時間／日に設定した飼育室において、４週間飼育した。前記ラットは、試験群及び対照群の各群６匹とした。
前記飼育期間中、飲料水（水道水）は自由に摂取させ、飼料は下記飼料を自由摂取させた。
なお、下記オカラ酵素処理発酵物は、前記実施例９のオカラ酵素処理発酵物（二段階酵素反応  有り、セルラーゼ  有り、発酵処理  有り、補糖  有り）を粉砕器（Ｏｓｔｅｒ）で粉砕したものである。また、下記基礎飼料は、マウス、ラット用粉末飼料（ラボＭＲストック、日本農産工業株式会社製）を用いた。
−試験群の飼料−
・  オカラ酵素処理発酵物  ・・・  １０質量％
・  基礎飼料              ・・・  ８８．５質量％
・  コレステロール        ・・・  １質量％
・  コール酸              ・・・  ０．５質量％
−対照群の飼料−
・  基礎飼料              ・・・  ９８．５質量％
・  コレステロール        ・・・  １質量％
・  コール酸              ・・・  ０．５質量％
【００７９】
前記飼育期間（４週間）後に、ラットをと殺し、盲腸（内容物の洗浄前；以下、「盲腸（洗浄前）と称することがある）、盲腸（内容物の洗浄後；以下、「盲腸洗浄後」と称することがある）、及び腹腔内脂肪（腸間膜、及び腎周囲（精巣周囲を含む）；以下、「脂肪」と称することがある）について重量を測定した。また、得られた臓器重量及び体重値から、体重あたりの比重量（ｇ／ｋｇ）を求めた。結果を図６に示す。
図６における比重量は、平均値＋標準誤差である。また、図６中、「＊」は、対照群と比較して有意差あり（ｐ＜０．０５）、「＊＊」は、対照群と比較して有意差あり（ｐ＜０．０１）を示す。
【００８０】
図６から分かるように、盲腸重量は、洗浄前及び洗浄後のいずれにおいても試験群は対照群より有意に大きく（ｐ＜０．０５及びｐ＜０．０１）、腹腔内脂肪重量は、試験群は対照群より有意に小さかった（ｐ＜０．０１）。
このことから、オカラ酵素処理発酵物は、盲腸内での発酵を促進し、盲腸を肥大させ、腸内発酵を促進する整腸効果を有すること、及び脂肪量を減少させるダイエット効果を有することが認められた。
【００８１】
本願実施例で用いられた酵母菌株を表１０に示す。なお、これらの酵母菌株は、財団法人日本醸造協会、独立行政法人製品評価技術基盤機構バイオテクノロジーセンター（ＮＢＲＣ）、市販のビール製造キットから入手することができる。
【００８２】
【表１０】
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【産業上の利用可能性】
【００８３】
本発明は、有効利用されていないオカラを細胞壁分解酵素で処理することにより、或いは更に発酵させることにより、優れた抗酸化作用を有する抗酸化組成物、優れた二糖類水解酵素活性阻害作用を有する二糖類水解酵素活性阻害組成物、優れた整腸作用を有する整腸組成物、及び優れたダイエット作用を有するダイエット組成物を提供するものである。これらの抗酸化組成物、二糖類水解酵素活性阻害組成物、整腸組成物、及びダイエット組成物は、飲食品、医薬品、化粧品などに好適に用いることができる。
また、本発明によれば、アラビノースの選択的製造方法を提供することができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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