(57)【要約】【課題】ＰＰＡＲ−γ活性化作用に起因する副作用が軽減され、ＰＰＡＲ−γ活性化作用を有する糖尿病治療薬の使用が制限されている糖尿病患者に対しても投薬することが可能な、糖尿病の治療剤又は予防剤を提供すること。【解決手段】本発明は、下記の化学式（Ｉ）で示される化合物又はその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する糖尿病の治療剤又は予防剤を提供する。2013028577.tif 000008【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の化学式（Ｉ）で示されるチアゾリジンジオン誘導体又はその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する、糖尿病の治療剤又は予防剤。
【化１】
2013028577.tif 000007
【請求項２】
前記糖尿病は、２型糖尿病である、請求項１記載の治療剤又は予防剤。
【請求項３】
血糖降下作用を有する、請求項１又は２記載の治療剤又は予防剤。
【請求項４】
インスリン感受性調節作用を有する、請求項１又は２記載の治療剤又は予防剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、糖尿病の治療剤又は予防剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
糖尿病は、インスリンの量的不足又はインスリンの作用不足を伴う慢性高血糖状態を主徴とし、種々の特徴的な代謝異常を伴う疾患群である。その患者数は世界的に増加傾向を示しており、特に、肥満、高トリグリセライド血症、低ＨＤＬ−コレステロール血症、糖代謝異常、高血圧等の危険因子を合併したメタボリックシンドローム型の２型糖尿病患者数が増加している（非特許文献１）。その背景には、インスリン抵抗性が強く関与していることが知られている（非特許文献２）。
【０００３】
チアゾリジンジオン誘導体であるピオグリタゾン（非特許文献３）やロシグリタゾン（非特許文献４）は、２型糖尿病治療薬として用いられている。その作用機序は、転写因子の一つであるペルオキシソーム増殖剤応答性受容体−ガンマー（Ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ  Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ  Ａｃｔｉｖａｔｅｄ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｇａｍｍａ；以下、ＰＰＡＲ−γ）を活性化することにより、障害を受けているインスリン受容体の機能回復及びそれに伴うインスリン感受性の向上並びにインスリン抵抗性の改善を導き、２型糖尿病に対して治療効果を発揮するとされている（非特許文献５）。
【０００４】
また、近年になると、チアゾリジンジオン誘導体は、ＰＰＡＲ−γ活性化作用とは異なる作用機序で糖尿病に対して治療効果を発揮していることが報告され、サイクリン依存性キナーゼ５の阻害作用によって糖尿病に対する治療効果を発揮しているとも言われている（非特許文献６）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｍｉｓｒａら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  ＆  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ、２００８年、第９３巻、ｐ．Ｓ９−Ｓ３０
【非特許文献２】Ｔａｋａｓｈｉら、Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ＆Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、２００３年、第２２８巻、ｐ．１１１１−１１１７
【非特許文献３】Ｇｉｌｌｉｅｓら、Ｄｒｕｇｓ、２０００年、第６０巻、ｐ．３３３−３４３
【非特許文献４】Ｂａｌｆｏｕｒら、Ｄｒｕｇｓ、１９９９年、第５７巻、ｐ．９２１−９３０
【非特許文献５】Ｌｅｈｍａｎｎら、Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、１９９５年、第２７０巻、ｐ．１２９５３−１２９５６
【非特許文献６】Ｃｈｏｉら、Ｎａｔｕｒｅ、２０１０年、第４６６巻、ｐ．４５１−４５７
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかしながら、ピオグリタゾンやロシグリタゾン等のチアゾリジンジオン誘導体は、ＰＰＡＲ−γ活性化作用を有することは明らかであり、ＰＰＡＲ−γ活性化作用に起因する副作用（体重増加、浮腫等）を回避することができないため、心不全の患者、体重コントロールが必要な患者や既往者には使用上の制限があるのが現状である。このため、慢性疾患である糖尿病の治療においては、これら副作用を軽減した医薬品の開発が急務であり、医療の現場から切望されている。
【０００７】
そこで、本発明の目的は、ＰＰＡＲ−γ活性化作用に起因する副作用が軽減され、ＰＰＡＲ−γ活性化作用を有する糖尿病治療薬の使用が制限されている糖尿病患者に対しても投薬することが可能な、糖尿病の治療剤又は予防剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは上記課題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、ＰＰＡＲ−γの活性化作用を示さないチアゾリジンジオン誘導体の合成に成功し、このチアゾリジンジオン誘導体及びその薬理学的に許容される塩が、糖尿病に対して優れた治療効果を保持していることを見出し、本発明を完成させるに至った。
【０００９】
すなわち、本発明は、下記の化学式（Ｉ）で示されるチアゾリジンジオン誘導体又はその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する、糖尿病の治療剤又は予防剤を提供する。
【化１】
2013028577.tif 000002
【００１０】
上記の糖尿病の治療剤又は予防剤は、２型糖尿病の治療剤又は予防剤であることが好ましい。
【００１１】
また上記の糖尿病の治療剤又は予防剤は、血糖降下作用又はインスリン感受性調節作用を有することがさらに好ましく、血糖降下剤又はインスリン感受性調節剤としても利用できる。
【発明の効果】
【００１２】
本発明の糖尿病の治療剤又は予防剤は、ＰＰＡＲ−γ活性化作用に起因する体重増加や浮腫等の副作用を有さず、血糖降下作用及びインスリン感受性調節作用を発揮し、糖尿病を治療又は予防することができる。さらに、本発明の糖尿病の治療剤又は予防剤は、ＰＰＡＲ−γ活性化作用を有する糖尿病治療薬の使用が制限されている糖尿病患者に対しても投薬することが可能であり、慢性的な投薬にも適している。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】実施例１の化合物のＰＰＡＲ−γ活性化作用を示す図である。
【図２】実施例１の化合物の正常マウス（Ｃ５７ＢＬ６／Ｊマウス）における糖取り込み増加作用を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
本発明の糖尿病の治療剤又は予防剤は、下記の化学式（Ｉ）で示されるチアゾリジンジオン誘導体又はその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有することを特徴としている。
【化２】
2013028577.tif 000003
【００１５】
上記のチアゾリジンジオン誘導体は、特に指定しない限り、不斉炭素の存在による異性体（Ｒ体、Ｓ体、α体、β体、エナンチオマー）、旋光性を有する光学異性体（Ｄ体、Ｌ体、ｄ体、ｌ体、（＋）体、（−）体）、これら任意の割合の混合物、又はラセミ混合物を全て含有する。
【００１６】
上記のチアゾリジンジオン誘導体の薬理学的に許容される塩としては、例えば、塩酸塩、硫酸塩、リン酸塩若しくは臭化水素酸塩等の無機酸塩、又はシュウ酸塩、マロン酸塩、クエン酸塩、フマル酸塩、乳酸塩、リンゴ酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、マレイン酸塩、グルコン酸塩、安息香酸塩、アスコルビン酸塩、メタンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩若しくはケイ皮酸塩等の有機酸塩が挙げられる。
【００１７】
上記のチアゾリジンジオン誘導体及びその薬理学的に許容される塩は、水和物若しくは溶媒和物又は結晶多形を形成してもよい。
【００１８】
上記のチアゾリジンジオン誘導体は、例えば、以下に記載する製造方法に従って製造することができる。その際、原料化合物は市販の試薬又はその塩を用いてもよい。なお、上記のチアゾリジンジオン誘導体は、公知の方法、例えば、溶媒抽出、再結晶及び／又はクロマトグラフィーによって単離精製でき、公知の方法又はそれに準じる方法によって目的とする塩に変換でき、上記のチアゾリジンジオン誘導体が塩の状態で得られた場合には、公知の方法又はそれに準ずる方法によって、上記のチアゾリジンジオン誘導体又はその目的とする他の塩に変換することができる。
【００１９】
上記のチアゾリジンジオン誘導体は、以下の工程１、工程２及び工程３を経て製造できる。以下に各工程について説明する。
【００２０】
（工程１）
４−（２−（５−エチルピリジン−２−イル）エトキシ）ベンズアルデヒドは、公知の方法又はこれらに準じた方法に従って製造することができる。例えば、市販されている５−エチル−２−ピリジンエタノールに４−ヒドロキシベンズアルデヒドを作用させる光延反応（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、１９９６年、３９巻、ｐ．５０５３−５０６３）又はこれに準ずる方法に従って製造することができる。
【００２１】
（工程２）
メチル２−（４−（２−（５−エチルピリジン−２−イル）エトキシ）フェニル）−２−ヒドロキシアセテートは、公知の方法又はこれらに準じた方法に従って製造することができる。例えば、４−（２−（５−エチルピリジン−２−イル）エトキシ）ベンズアルデヒドにトリメチルシリルシアニドを作用させ、酸性条件下メタノールを作用させる方法（Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２００５年、第１３巻、ｐ．３６２７−３６３９）又はこれに準ずる方法に従って製造することができる。
【００２２】
（工程３）
５−（４−（２−（５−エチルピリジン−２−イル）エトキシ）フェニル）チアゾリジン−２，４−ジオンは、公知の方法又はこれらに準じた方法に従って製造することができる。例えば、メチル２−（４−（２−（５−エチルピリジン−２−イル）エトキシ）フェニル）−２−ヒドロキシアセテートに塩化チオニルを作用させ、続いて酢酸ナトリウム存在下、チオウレアを作用させ環化させた後に、酸性条件下加水分解反応を行う方法（Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２００５年、第１３巻、ｐ．３６２７−３６３９）又はこれに準ずる方法に従って製造することができる。
【００２３】
上記の糖尿病の治療剤又は予防剤は、糖取り込み増加作用を有することから、血糖降下作用及びインスリン感受性調節（向上）作用を示し、これらの作用により慢性の高血糖状態及びインスリン抵抗性を改善することができるため、糖尿病を治療又は予防することができる。
【００２４】
「糖尿病」とは、インスリンの量的不足又は作用不足による慢性の高血糖状態を主徴とする代謝疾患群であり、世界保健機構、日本糖尿病学会、米国糖尿病協会又は欧州糖尿病協会等の診断基準に該当する病態を意味する。糖尿病は、インスリン依存型糖尿病（１型糖尿病）とインスリン非依存型糖尿病（２型糖尿病）に大別されるが、上記の糖尿病の治療剤又は予防剤は、２型糖尿病の治療又は予防に好ましく用いることができる。
【００２５】
「血糖降下作用」とは慢性的高血糖状態において血糖値を低下させることを意味し、血糖値とは随時血糖値及び／又は空腹時血糖値を意味する。
【００２６】
「インスリン感受性」とはインスリンの作用の程度、即ち血糖低下作用及び糖新生抑制作用の程度を意味し、「インスリン感受性調節作用」とはインスリン感受性を向上させる作用を意味する。
【００２７】
上記の糖尿病の治療剤又は予防剤の、血糖降下作用及びインスリン感受性調節作用は、例えば、糖取り込み増加作用を測定することで評価できる。糖取り込み増加作用は、例えば、正常動物及び病態モデル動物を用いた高インスリン正常血糖クランプ法におけるＧｌｕｃｏｓｅ  ｉｎｆｕｓｉｏｎ  ｒａｔｅ（ＧＩＲ）を指標として評価できる。
【００２８】
「インスリン抵抗性」とは組織におけるインスリンの感受性が低下し、インスリンの作用が十分に発揮できない状態を意味する。インスリン抵抗性は、例えば、空腹時血糖とインスリン濃度、Ｂｒｇｍａｎのミニマムモデル、ｓｔｅａｄｙ  ｓｔａｔｅ  ｐｌａｓｍａ  ｇｌｕｃｏｓｅ（ＳＳＰＧ）法、ＨＯＭＡ−ＩＲ（Ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ  ｍｏｄｅｌ  ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｏｆ  ｉｎｓｕｌｉｎ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ）、高インスリン正常血糖クランプ法を用いて評価できる。
【００２９】
上記の糖尿病の治療剤又は予防剤の、糖尿病に対する効果を直接的に評価する方法としては、病態モデル動物を用いた評価法が挙げられる。病態モデル動物としては、高脂肪食誘導肥満・糖尿病マウス（Ｄｉｅｔ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｏｂｅｓｉｔｙ：ＤＩＯマウス）、肥満・２型糖尿病マウス（ｄｂ／ｄｂマウス、ｏｂ／ｏｂマウス、ＫＫ／Ｔａマウス、ＫＫ−Ａｙマウス）、肥満・２型糖尿病ラット（Ｚｕｃｋｅｒ  ｆａｔｔｙラット、Ｚｕｃｋｅｒ  ｄｉａｂｅｔｉｃ  ｆａｔｔｙラット）等が挙げられる。病態モデル動物における糖尿病に対する有効性は、血中グリコヘモグロビン値（ＨｂＡｌｃ）、空腹時血糖値、血中ｃ−ペプチド値、血中グリコアルブミン値、１，５−ＡＧ（１，５−アンヒドログリシトール）、血中空腹時インスリン値、糖負荷試験（ｏｒａｌ  ｇｌｕｃｏｓｅ  ｔｏｌｅｒａｎｃｅ  ｔｅｓｔ：ＯＧＴＴ）における耐糖能障害改善作用、ＨＯＭＡ−ＩＲ、高インスリン正常血糖クランプ法における全身糖利用率、インスリン負荷試験（Ｉｎｓｌｉｎ  ｔｏｌｅｒａｎｃｅ  ｔｅｓｔ：ＩＴＴ）におけるインスリン感受性を指標として評価できる。
【００３０】
また、上記の糖尿病の治療剤又は予防剤は、ＰＰＡＲ−γ活性化作用を示さないため、ＰＰＡＲ−γ活性化作用に起因する体重増加や浮腫等の副作用を伴わず、糖尿病の治療又は予防に極めて有用である。ＰＰＡＲ−γ活性化作用は、例えば、ＰＰＡＲ−γ  ｌｉｇａｎｄ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｄｏｍａｉｎに対するリガンド応答性の時間分解蛍光共鳴エネルギー転移（ＴＲ−ＦＲＥＴ）を指標として評価できる。
【００３１】
上記の糖尿病の治療剤又は予防剤は、哺乳動物（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、ネコ、イヌ、ウシ、ヒツジ、サル又はヒト）、特にヒトに対して投与した場合に、糖尿病に対する治療効果又は予防効果を発揮できる。
【００３２】
上記の糖尿病の治療剤又は予防剤の投与形態としては、上記のチアゾリジンジオン誘導体又はその薬理学的に許容される塩を、無添加の状態で又は医薬として許容される担体を配合して、経口的又は非経口的に投与できる。
【００３３】
上記の糖尿病の治療剤又は予防剤を経口投与する場合の剤形としては、例えば、錠剤（糖衣錠及びフィルムコーティング錠を含む）、丸剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤（ソフトカプセル剤及びマイクロカプセル剤を含む）、シロップ剤、乳剤又は懸濁剤が挙げられ、非経口投与する場合の剤形としては、例えば、注射剤、注入剤、点滴剤又は坐剤が挙げられる。また、上記のチアゾリジンジオン誘導体又はその薬理学的に許容される塩は、適当な基剤（例えば、酪酸の重合体、グリコール酸の重合体、酪酸−グリコール酸の共重合体、酪酸の重合体とグリコール酸の重合体との混合物又はポリグリセロール脂肪酸エステル）と組み合わせて、徐放性製剤とすることも可能であり、糖尿病の治療に有効である。
【００３４】
上記の糖尿病の治療剤又は予防剤の剤形は、製剤分野で一般的に用いられている方法に従って調製できる。この場合、必要に応じて、製剤分野において一般的に用いられる賦形剤、結合剤、滑沢剤、崩壊剤、甘味剤、界面活性剤、懸濁化剤、乳化剤等を含有させて調製できる。
【００３５】
錠剤の調製は、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤又は滑沢剤を含有させて行うことができ、丸剤及び顆粒剤の調製は、例えば、賦形剤、結合剤又は崩壊剤を含有させて行うことができる。また、散剤及びカプセル剤の調製は、例えば、賦形剤を、シロップ剤の調製は、例えば、甘味剤を、乳剤及び懸濁剤の調製は、例えば、界面活性剤、懸濁化剤又は乳化剤を含有させて行うことができる。
【００３６】
賦形剤としては、例えば、乳糖、ブドウ糖、デンプン、ショ糖、微結晶セルロース、カンゾウ末、マンニトール、炭酸水素ナトリウム、リン酸カルシウム又は硫酸カルシウムが挙げられる。結合剤としては、例えば、デンプンのり液、アラビアゴム液、ゼラチン液、トラガント液、カルボキシメチルセルロース液、アルギン酸ナトリウム液又はグリセリンが挙げられる。崩壊剤としては、例えば、デンプン又は炭酸カルシウムが挙げられる。滑沢剤としては、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、ステアリン酸カルシウム又は精製タルクが挙げられる。甘味剤としては、例えば、ブドウ糖、果糖、転化糖、ソルビトール、キシリトール、グリセリン又は単シロップが挙げられる。界面活性剤としては、例えば、ラウリル硫酸ナトリウム、ポリソルベート８０、ソルビタンモノ脂肪酸エステル又はステアリン酸ポリオキシル４０が挙げられる。懸濁化剤としては、例えば、アラビアゴム、アルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース又はベントナイトが挙げられる。乳化剤としては、例えば、アラビアゴム、トラガント、ゼラチン又はポリソルベート８０が挙げられる。
【００３７】
さらに、上記の糖尿病の治療剤又は予防剤を、上記の剤形に調製する場合は、製剤分野において一般的に用いられる、着色剤、保存剤、芳香剤、矯味剤、安定剤、粘稠剤等を添加することができる。
【実施例】
【００３８】
以下、実施例を用いて本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００３９】
以下の記載において、ＮＭＲデータ中の溶媒名は、測定に使用した溶媒を示している。また、４００  ＭＨｚ  ＮＭＲスペクトルは、ＪＮＭ−ＡＬ４００型核磁気共鳴装置（日本電子製）を用いて測定した。ケミカルシフトは、テトラメチルシランを基準としてδ（単位：ｐｐｍ）で表し、シグナルはそれぞれｓ（一重線）、ｄ（二重線）、ｔ（三重線）、ｑ（四重線）、ｑｕｉｎｔ（五重線）、ｓｅｐｔ（七重線）、ｍ（多重線）、ｂｒ（幅広）、ｄｄ（二重二重線）、ｄｔ（二重三重線）、ｄｄｄ（二重二重二重線）、ｄｑ（二重四重線）、ｔｄ（三重二重線）又はｔｔ（三重三重線）で表した。ＩＲスペクトルは、ＦＴ／ＩＲ−４１０（日本分光製）を用い、ＥＳＩ−ＭＳスペクトルは、Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ  ＺＱ２Ｋ（Ｗａｔｅｒｓ製）又は１２００ＬＣ／ＭＳＤ（ＡｇｉｌｅｎｔＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ製）を用いて測定した。溶媒は全て市販のものを用い、フラッシュクロマトグラフィーはＹＦＬＣ  Ｗ−ｐｒｅｐ２ＸＹ（山善製）を用いた。
【００４０】
（実施例１）  ５−（４−（２−（５−エチルピリジン−２−イル）エトキシ）フェニル）チアゾリジン−２，４−ジオンの合成： 
（第１工程）  ４−（２−（５−エチルピリジン−２−イル）エトキシ）ベンズアルデヒドの合成：
【化３】
2013028577.tif 000004
５−エチル−２−ピリジンエタノール（７００ｍｇ、４．６３ｍｍｏｌ）、４−ヒドロキシベンズアルデヒド（５９４ｍｇ、４．８６ｍｍｏｌ）及びトリフェニルホスフィン（１．３３ｇ、５．０９ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２３ｍＬ）に溶解させ、氷冷下にてジイソプロピルアゾジカルボキシレート（０．９９ｍＬ、５．０９ｍｍｏｌ）をゆっくり滴下し、室温にて１６時間撹拌した。反応終了後、減圧下にて溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ヘキサン／酢酸エチル＝２０：１〜３：７）にて精製して、４−（２−（５−エチルピリジン−２−イル）エトキシ）ベンズアルデヒド（５４９ｍｇ、２．１５ｍｍｏｌ、４６％）を無色油状物として得た。
1H-NMR(400 MHz, CDCl3) δ: 9.87(s, 1H), 8.40(d, 1H, J=4.0 Hz), 7.81(dd, 2H, J=4.0, 8.0 Hz), 7.46(dd, 1H, J=4.0, 8.0 Hz), 7.18(d, 1H, J=8.0 Hz), 7.00(dd, 2H, J=4.0, 8.0 Hz), 4.45(t, 2H, J=8.0 Hz), 3.26(t, 2H, J=8.0 Hz), 2.64(q, 2H, J=8.0 Hz), 1.25(t, 3H, J=8.0 Hz).
ESI-MS: m/z= 256 (M+H+).
【００４１】
（第２工程）  メチル２−（４−（２−（５−エチルピリジン−２−イル）エトキシ）フェニル）−２−ヒドロキシアセテートの合成：
【化４】
2013028577.tif 000005
４−（２−（５−エチルピリジン−２−イル）エトキシ）ベンズアルデヒド（５１２ｍｇ、２．００ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１０ｍＬ）に溶解させ、トリメチルシシルシアニド（０．３５ｍＬ、２．６１ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（０．０２８ｍＬ、０．２０１ｍｍｏｌ）を氷冷下にて加え、室温にて２４時間撹拌した。反応終了後、減圧下溶媒を留去し、残渣にジエチルエーテル（２ｍＬ）及び１０％塩化水素／メタノール溶液（１０ｍＬ）を加え、室温にて２４時間撹拌した。反応終了後、減圧下溶媒を留去し、残渣をクロロホルムにて希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（２５ｍＬ）に注ぎ、ｐＨを８にした。水層をクロロホルムにて２回抽出した。合わせた有機層を飽和食塩水にて洗浄し、無水硫酸ナトリウムにて乾燥した。ろ過後、減圧下溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ヘキサン／酢酸エチル＝９：１〜０：１）にて精製して、メチル２−（４−（２−（５−エチルピリジン−２−イル）エトキシ）フェニル）−２−ヒドロキシアセテート（４３８ｍｇ、１．３９ｍｍｏｌ、６９％）を無色油状物として得た。
1H-NMR(400 MHz, CDCl3) δ: 8.39(d, 1H, J=4.0 Hz), 7.45(dd, 1H, J=4.0, 8.0 Hz), 7.30(d, 2H, J=8.0 Hz), 7.18(d, 1H, J=8.0 Hz), 6.89(d, 2H, J=8.0 Hz), 5.11(d, 1H, J=4.0 Hz), 4.34(t, 2H, J=8.0 Hz), 3.75(s, 3H), 3.37(d, 1H, J=4.0 Hz), 3.22(t, 2H, J=4.0 Hz), 2.63(q, 2H, J=8.0 Hz), 1.24(t, 3H, J=8.0 Hz).
ESI-MS: m/z= 316(M+H+).
【００４２】
（第３工程）  ５−（４−（２−（５−エチルピリジン−２−イル）エトキシ）フェニル）チアゾリジン−２，４−ジオンの合成：
【化５】
2013028577.tif 000006
メチル２−（４−（２−（５−エチルピリジン−２−イル）エトキシ）フェニル）−２−ヒドロキシアセテート（４３８ｍｇ、１．３９ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（７．０ｍＬ）に溶解させ、ピリジン（０．２８ｍＬ、３．４７ｍｍｏｌ）を加え、−７８℃にて塩化チオニル（０．２１ｍＬ、２．９２ｍｍｏｌ）を滴下し、室温にて２４時間撹拌した。反応終了後、減圧下溶媒を留去し、残渣にトルエンを加え、共沸、濃縮乾固した。残渣をエタノール（７．０ｍＬ）に溶解させ、チオウレア（１１６ｍｇ、１．５３ｍｍｏｌ）及び酢酸ナトリウム（２２８ｍｇ、２．７８ｍｍｏｌ）を加え、６時間加熱還流した。反応終了後、ろ過し、不溶物をジエチルエーテルにて３回洗浄した。ろ液を減圧下濃縮乾固した。得られた残渣をエタノール（４．６ｍＬ）と２ ｍｏｌ／Ｌ塩酸（４．８ｍＬ）を加え、１０時間加熱還流した。反応終了後、減圧下溶媒を留去し、残渣をクロロホルムにて希釈し、水酸化ナトリウム水溶液を加え、ｐＨを５〜６に調節した。クロロホルムにて水層を４回抽出した。合わせた有機層を飽和食塩水にて洗浄し、無水硫酸ナトリウムにて乾燥した。ろ過後、減圧下濃縮乾固し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ヘキサン／酢酸エチル＝９：１〜０：１）にて精製して、５−（４−（２−（５−エチルピリジン−２−イル）エトキシ）フェニル）チアゾリジン−２，４−ジオン（以下、実施例１の化合物）（９２．５ｍｇ、０．３２３ｍｍｏｌ、１９％）を黄色固体として得た。
1H-NMR(400 MHz, CDCl3) δ: 8.40(d, 1H, J=4.0 Hz), 7.46(d, 1H, J=8.0 Hz), 7.30(d, 2H, J=8.0 Hz), 7.18(d, 1H, J=8.0 Hz), 6.91(d, 2H, J=8.0 Hz), 5.33(s, 1H), 4.34(t, 2H, J=8.0 Hz), 3.24(t, 2H, J=8.0 Hz), 2.64(q, 3H, J=8.0 Hz), 1.25(t, 3H, J=8.0 Hz).
ESI-MS: m/z= 343(M+H+).
【００４３】
（実施例２）  ＰＰＡＲ−γ活性化作用：
実施例１の化合物のＰＰＡＲ−γ活性化作用は、ヒトＰＰＡＲ−γ  ｌｉｇａｎｄ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｄｏｍａｉｎ（以下、ＰＰＡＲ−γＬＢＤ）に対するリガンド応答性の時間分解蛍光共鳴エネルギー転移（ＴＲ−ＦＲＥＴ）を指標として測定した。測定にはＬａｎｔｈａＳｃｒｅｅｎ  ＴＲ−ＦＲＥＴ  Ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ  Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ  Ａｃｔｉｖａｔｅｄ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  （ＰＰＡＲ）  ｇａｍｍａ  Ｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いた。なお、比較対照として、ピオグリタゾン塩酸塩（Ｂｉｏｎｅｔ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）を用いた。
【００４４】
被験化合物（実施例１の化合物及びピオグリタゾン塩酸塩）は、ジメチルスルホキシド（以下、ＤＭＳＯ）に溶解し、上記キットに添付のアッセイバッファーを用いて２００μＭを最大濃度として公比３で段階希釈した（１ｎＭ〜２００μＭ、ＤＭＳＯ最終濃度２％）。３８４ウェルブラックプレート（コーニング）に、希釈した被験化合物を１０μＬ／ウェル添加した後、氷冷したアッセイバッファーを用いて２０ｎＭに調製したＰＰＡＲ−γＬＢＤを５μＬ／ウェル添加した。さらに、常温のアッセイバッファーを用いて調製した０．５μＭの蛍光ペプチド（Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ−ＴＲＡＰ２２０／ＤＲＩＰ−２  ｐｅｐｔｉｄｅ）及び２０ｎＭのテルビウム標識抗ＧＳＴ抗体を、上記の３８４ウェルブラックプレートにそれぞれ５μＬ／ウェル添加した。なお、被験化合物各濃度につき、Ｎ＝４で実施した。
【００４５】
上記の３８４ウェルブラックプレートを、遮光下、常温で２時間インキュベーションし、反応液の蛍光波長（励起波長３４０ｎｍ、蛍光波長４９０ｎｍ、５２０ｎｍ）をマルチラベルカウンター（Ｅｎｖｉｓｉｏｎ、パーキンエルマー）にて測定した。被験化合物の各濃度の、５２０ｎｍにおける測定値と４９０ｎｍにおける測定値の比（被験化合物Ｒａｔｉｏ＝Ｅｍ５２０／Ｅｍ４９０）を算出し、平均値（Ｎ＝４）を求めた。また、被験化合物非添加時の、５２０ｎｍにおける測定値と４９０ｎｍにおける測定値の比（被験化合物非添加Ｒａｔｉｏ）も同様に算出した。得られた値から下記の式を用いて発光増加率を求めた。
発光増加率（％）＝（被験化合物Ｒａｔｉｏ−被験化合物非添加Ｒａｔｉｏ）／（被験化合物非添加Ｒａｔｉｏ）×１００
【００４６】
その結果を、図１に示す。Ｘ軸に被験化合物の濃度（Ｌｏｇ[μＭ]）、Ｙ軸に発光増加率（％）をプロットした。図中の黒四角はピオグリタゾン塩酸塩の結果を示し、黒三角は実施例１の化合物の結果を示す。なお、発光増加率（％）の値が高いほど、ＰＰＡＲ−γ活性化作用が高いことを示す。
【００４７】
ピオグリタゾン塩酸塩は濃度依存的に発光増加を示したが、実施例１の化合物は濃度依存的な発光増加は認められなかった。この結果から、実施例１の化合物はＰＰＡＲ−γ活性を示さないことが明らかとなった。したがって、実施例１の化合物又はその薬理学的に許容される塩は、ＰＰＡＲ−γ活性化作用を示さないことから、ＰＰＡＲ−γ活性化作用に起因する従来のチアゾリジンジオン誘導体に特有の体重増加や浮腫等の副作用を伴わないことが示唆された。
【００４８】
（実施例３）  ｉｎ  ｖｉｖｏ糖取り込み作用：
８〜１２週齢のＣ５７ＢＬ／６Ｎマウス（日本チャールス・リバー、Ｎ＝４）をペントバルビタール（７０ｍｇ／ｋｇ）の腹腔内投与により麻酔し、右頚静脈にカテーテルを留置した。カテーテルは静脈挿入部がシリコン成分（ファイコンチューブ、富士システムズ）とその他部分がポリエチレン成分（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）からなるものを用いた。カテーテル留置後は個別飼育ケージにて飼育し、回復させた。カテーテル留置の翌日に、４時間の絶食を行った後、マウスを下記の実験に用いた。
【００４９】
被験化合物（実施例１の化合物及びピオグリタゾン塩酸塩（ＫＥＭＰＲＯＴＥＣ  Ｌｉｍｉｔｅｄ））は、ＤＭＳＯ（最終濃度１０％）に溶解後、Ｔｗｅｅｎ８０（最終濃度１０％）及び生理食塩液を加えて１ｍｇ／ｍＬに調製した。被験化合物を、留置したカテーテル部位から頚静脈内投与（１０ｍＬ／ｋｇ）した。被験化合物投与直後、インスリン溶液を２０μＬ／ｍｉｎ（１５ｍＵ／ｋｇ／ｍｉｎ）で１０分間持続注入し、その後４μＬ／ｍｉｎ（３ｍＵ／ｋｇ／ｍｉｎ）の速度に切り替え、実験終了時まで持続注入を維持した。なお、インスリン溶液は、ヒトインスリン注射液（ヒューマリンＲ注、イーライリリー）を０．２％ＢＳＡ含有生理食塩液により、目的の濃度となる様に調製したものを用いた。インスリン溶液持続注入開始１５分後に、ブドウ糖溶液（大塚糖液５０％、大塚製薬工場）の持続注入を開始した（注入開始時濃度：４０ｍｇ／ｋｇ／ｍｉｎ）。ブドウ糖溶液持続注入開始から、血糖値を５分毎に測定し、血糖値が１２０ｍｇ／ｄＬを維持するようにブドウ糖溶液の注入量（ｍｇ／ｋｇ／ｍｉｎ）（Ｇｌｕｃｏｓｅ  ｉｎｆｕｓｉｏｎ  ｒａｔｅ；以下、ＧＩＲ）を調節した。なお、血糖値は、尾静脈から約５μＬの血液を採取し、簡易型血糖測定装置（メディセンス・プレシジョンエクシード、アボットジャパン株式会社）を用いて測定した。
【００５０】
Ｘ軸に時間（分）、Ｙ軸にＧＩＲ（ｍｇ／ｋｇ／ｍｉｎ）をプロットし、インスリン溶液持続注入開始１５分から６０分の各個体のＧＩＲ推移曲線下面積（ＧＩＲ  ＡＵＣ１５−６０）を算出し、群毎の平均値±標準誤差（Ｎ＝４）を求めた。
【００５１】
その結果を図２に示す。図中の「溶媒」はマウスに溶媒を投与した群（溶媒投与群）を示し、「ピオグリタゾン」はマウスにピオグリタゾン塩酸塩  １０ｍｇ／ｋｇを投与した群（ピオグリタゾン投与群）を示し、「実施例１の化合物」はマウスに実施例１の化合物  １０ｍｇ／ｋｇを投与した群（実施例１の化合物投与群）を示す。ＧＩＲ  ＡＵＣ１５−６０は、溶媒投与群で１８１５．６±３０５．３、ピオグリタゾン投与群で２２３６．３±１５２．０、実施例１の化合物投与群で２２００．０±２９３．５であり、ピオグリタゾン投与群及び実施例１の化合物投与群において糖取り込み増加作用が認められた。
【００５２】
したがって、実施例１の化合物又はその薬理学的に許容される塩は、ピオグリタゾンと同程度のｉｎ  ｖｉｖｏ糖取り込み増加作用を有することが示され、糖尿病に対する治療又は予防効果を有することが明らかとなった。
【産業上の利用可能性】
【００５３】
本発明の糖尿病の治療剤又は予防剤は、ＰＰＡＲ−γ活性化作用を示さず、ピオグリタゾンと同程度のｉｎ  ｖｉｖｏ糖取り込み増加作用を示すことから、副作用が軽減された優れた医薬として使用できる。
【図１】
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【図２】
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