(57)【要約】【課題】尿酸含有溶液の保存中の尿酸の析出や分解を回避し、溶液中の尿酸を安定化する方法と、安定化された尿酸を含有する尿酸標準液、及びこの尿酸標準液を含む尿酸を測定する測定キットを提供する。【解決手段】尿酸含有溶液に、ビス（２−ヒドロキシエチル）イミノトリス（ヒドロキシメチル）メタン（Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ）、Ｎ−（２−アセトアミド）イミノジ酢酸（ＡＤＡ）、Ｎ−（２−アセトアミド）−２−アミノエタンスルホン酸（ＡＣＥＳ）、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−２−アミノエタンスルホン酸（ＴＥＳ）及び３−モルホリノプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）から選ばれる少なくとも一つの物質を添加する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ビス（２−ヒドロキシエチル）イミノトリス（ヒドロキシメチル）メタン（Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ）、Ｎ−（２−アセトアミド）イミノジ酢酸（ＡＤＡ）、Ｎ−（２−アセトアミド）−２−アミノエタンスルホン酸（ＡＣＥＳ）、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−２−アミノエタンスルホン酸（ＴＥＳ）及び３−モルホリノプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）から選ばれる少なくとも一つの物質を含有することを特徴とする尿酸含有溶液。
【請求項２】
尿酸含有溶液に、ビス（２−ヒドロキシエチル）イミノトリス（ヒドロキシメチル）メタン（Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ）、Ｎ−（２−アセトアミド）イミノジ酢酸（ＡＤＡ）、Ｎ−（２−アセトアミド）−２−アミノエタンスルホン酸（ＡＣＥＳ）、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−２−アミノエタンスルホン酸（ＴＥＳ）及び３−モルホリノプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）から選ばれる少なくとも一つの物質を添加することを特徴とする、溶液中の尿酸の安定化方法。
【請求項３】
試料中の尿酸の測定に使用するための標準液において、ビス（２−ヒドロキシエチル）イミノトリス（ヒドロキシメチル）メタン（Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ）、Ｎ−（２−アセトアミド）イミノジ酢酸（ＡＤＡ）、Ｎ−（２−アセトアミド）−２−アミノエタンスルホン酸（ＡＣＥＳ）、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−２−アミノエタンスルホン酸（ＴＥＳ）、３−モルホリノプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）から選ばれる少なくとも一つの物質を含有することを特徴とする尿酸測定用標準液。
【請求項４】
請求項３記載の標準液を含むことを特徴とする試料中の尿酸を測定するための測定キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、尿酸含有溶液、溶液中の尿酸の安定化方法、尿酸標準液及び該標準液を含む尿酸測定キットに関するものである。
本発明は、特に、化学、生命科学、分析化学及び臨床検査等の分野において有用なものである。
【背景技術】
【０００２】
尿酸は、プリン体代謝の終末産物であり、内因性及び食事性の核タンパクやヌクレオチドを素材として肝臓、骨髄、筋肉等で産生され、尿中に排泄される。体内における尿酸の産生量と排泄量のバランスが崩れると、高尿酸血症や痛風といった様々な疾患を発現する。従って、これらの疾患に関連して、尿酸濃度を正確に測定するための試薬や方法が求められている。
尿酸の測定方法には尿酸の還元性を利用した還元法、尿酸酸化酵素であるウリカーゼを用いた酵素法、高速液体クロマトグラフィー（ｈｉｇｈ  ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ｌｉｑｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ；ＨＰＬＣ）を用いた分離分析法などが知られている。現在では、ウリカーゼを用いた酵素法が広く一般の臨床検査法として使用されており、各種の自動分析装置に適用されている。
【０００３】
尿酸濃度の正確な測定値を得るためには、標準液を使用することが必要であり、尿酸の測定に際しては既知濃度の尿酸含有溶液を尿酸標準液として用いる場合が多い。また、この場合、尿酸標準液は水溶液という形態で供される。
しかしながら、尿酸は水溶性が比較的低いという性質を有するため、保存中に尿酸が析出したり、分解してしまうという問題があった。
また、尿酸の水溶性はｐＨによっても変化し、アルカリ側で溶解性が向上し、酸性側では析出が生じやすい傾向にある。このため、尿酸標準液にはリン酸緩衝液等の緩衝剤を添加してｐＨが変動しない工夫がなされている。また、尿酸含有溶液に塩類やキレート剤を添加することにより、溶液中の尿酸の安定化を高める工夫がなされている（例えば、特許文献１参照。）
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開昭４９−３０３９１号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
前記のように、尿酸は溶液状態での安定性が悪いため、尿酸含有溶液として溶液状態で長期間保存すると、尿酸が析出したり、分解してしまうという問題があった。また、このような尿酸含有溶液を標準液として使用した場合、尿酸濃度の正確な測定値を得られないという問題があった。また、尿酸の水溶性の変化を抑制するため、尿酸標準液に、リン酸緩衝液等の緩衝剤を添加してｐＨが変動しない工夫がなされているが、その効果が必ずしも十分ではなかった。このため、これらの問題を解決する方法が望まれていた。
従って、本発明の課題は、尿酸含有溶液の保存中の尿酸の析出や分解を回避し、溶液中の尿酸を安定化する方法と、安定化された尿酸を含有する尿酸標準液、及びこの尿酸標準液を含む尿酸を測定する測定キットを提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、上記の問題点の解決を目指して鋭意検討を行った結果、尿酸含有溶液に、ビス（２−ヒドロキシエチル）イミノトリス（ヒドロキシメチル）メタン（Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ）、Ｎ−（２−アセトアミド）イミノジ酢酸（ＡＤＡ）、Ｎ−（２−アセトアミド）−２−アミノエタンスルホン酸（ＡＣＥＳ）、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−２−アミノエタンスルホン酸（ＴＥＳ）及び３−モルホリノプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）から選ばれる少なくとも一つの物質を添加することにより、保存中の尿酸の析出や分解を抑制し、溶液中の尿酸を長期間安定化できることを見出した。
また、このように、長期間安定な尿酸を含有する溶液を尿酸測定方法における尿酸標準液として使用することにより、誤差のない正確な尿酸の測定を行うことができることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００７】
すなわち、本発明は、以下の発明を提供する。
（１）ビス（２−ヒドロキシエチル）イミノトリス（ヒドロキシメチル）メタン（Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ）、Ｎ−（２−アセトアミド）イミノジ酢酸（ＡＤＡ）、Ｎ−（２−アセトアミド）−２−アミノエタンスルホン酸（ＡＣＥＳ）、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−２−アミノエタンスルホン酸（ＴＥＳ）及び３−モルホリノプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）から選ばれる少なくとも一つの物質を含有させることを特徴とする尿酸含有溶液。
（２）尿酸含有溶液に、ビス（２−ヒドロキシエチル）イミノトリス（ヒドロキシメチル）メタン（Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ）、Ｎ−（２−アセトアミド）イミノジ酢酸（ＡＤＡ）、Ｎ−（２−アセトアミド）−２−アミノエタンスルホン酸（ＡＣＥＳ）、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−２−アミノエタンスルホン酸（ＴＥＳ）及び３−モルホリノプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）から選ばれる少なくとも一つの物質を含有させることを特徴とする、溶液中の尿酸の安定化方法。
（３）試料中の尿酸の測定に使用するための標準液において、ビス（２−ヒドロキシエチル）イミノトリス（ヒドロキシメチル）メタン（Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ）、Ｎ−（２−アセトアミド）イミノジ酢酸（ＡＤＡ）、Ｎ−（２−アセトアミド）−２−アミノエタンスルホン酸（ＡＣＥＳ）、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−２−アミノエタンスルホン酸（ＴＥＳ）、３−モルホリノプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）から選ばれる少なくとも一つの物質を含有させることを特徴とする尿酸測定用標準液。
（４）前記（３）記載の標準液を含むことを特徴とする試料中の尿酸を測定するための測定キット。
【発明の効果】
【０００８】
本発明によれば、尿酸含有溶液に、ビス（２−ヒドロキシエチル）イミノトリス（ヒドロキシメチル）メタン（Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ）、Ｎ−（２−アセトアミド）イミノジ酢酸（ＡＤＡ）、Ｎ−（２−アセトアミド）−２−アミノエタンスルホン酸（ＡＣＥＳ）、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−２−アミノエタンスルホン酸（ＴＥＳ）及び３−モルホリノプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）から選ばれる少なくとも一つの物質を含有させることにより、尿酸含有溶液を長期間保存した場合でも、尿酸の析出や分解を防いで溶液中の尿酸を安定化することによって、尿酸含有溶液の保存安定性を向上させることができるものである。そして、前記の安定化された尿酸含有溶液を標準液として用いることにより、誤差のない正確な尿酸の測定を行うことができるものである。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
以下、本発明を詳細に説明するが、以下の実施の形態は、本発明を説明するための例示であり、本発明はこの実施の形態に限定されるものではない。また、本発明は、その要旨を逸脱しない限り、様々な形態で実施することができる。
【００１０】
〔１〕尿酸含有溶液
（１）概要
本発明においては、尿酸含有溶液にビス（２−ヒドロキシエチル）イミノトリス（ヒドロキシメチル）メタン（Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ）、Ｎ−（２−アセトアミド）イミノジ酢酸（ＡＤＡ）、Ｎ−（２−アセトアミド）−２−アミノエタンスルホン酸（ＡＣＥＳ）、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−２−アミノエタンスルホン酸（ＴＥＳ）及び３−モルホリノプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）から選ばれる少なくとも一つの物質を含有させることにより、溶液状態の尿酸を安定化することができる。
また、本発明で用いられるこれらの物質は単独で、または２種以上を組み合わせて用いることができる。
【００１１】
本発明で用いられる前記の物質は、いずれもグッド緩衝剤として知られているものであるが、グッド緩衝剤がすべて本発明で有効に用いられるわけではなく、例えば、２−モルホリノエタンスルホン酸（ＭＥＳ）、ピペラジン−１，４−ビス（２−エタンスルホン酸）（ＰＩＰＥＳ）、２−［４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニル］エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、ピペラジン−１，４−ビス（２−ヒドロキシ−３−プロパンスルホン酸）（ＰＯＰＳＯ）等は、本発明の目的とする溶液中の尿酸に対する安定化効果は得られない。また、尿酸標準液の緩衝剤として広く一般に使用されているリン酸緩衝剤を用いた場合も、本発明の目的とする溶液中の尿酸に対する安定化効果は得られない。
【００１２】
本発明において、尿酸含有溶液に、Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ、ＡＤＡ、ＡＣＥＳ、ＴＥＳ及びＭＯＰＳから選ばれる少なくとも一つの物質を含有させる場合の濃度は、溶液中の尿酸を十分に安定化できる量であれば特に限定されるものではなく、溶液中の尿酸の濃度等によって最適濃度は異なるが、５ｍＭ以上であれば所望の安定化効果が得られ、５〜５００ｍＭの範囲にあることが好ましく、１０〜５００ｍＭの範囲にあることがより好ましく、１０〜１００ｍＭの範囲にあることが特に好ましい。
【００１３】
（２）溶液のｐＨ
本発明の尿酸含有溶液のｐＨは、ｐＨ６以上であることが好ましく、ｐＨ６〜８の範囲が特に好ましい。
【００１４】
（３）その他の構成成分
本発明の尿酸含有溶液の溶液中には、Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ、ＡＤＡ、ＡＣＥＳ、ＴＥＳ及びＭＯＰＳの他に、公知のｐＨ調整剤、防腐剤等を必要に応じて適宜含有させることができる。
なお、本発明において、溶液中の尿酸を安定化するためには、尿酸含有溶液に、Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ、ＡＤＡ、ＡＣＥＳ、ＴＥＳ及びＭＯＰＳから選ばれる少なくとも一つの物質を存在させるだけでよく、それ以外の操作は特に必要ない。
【００１５】
〔２〕尿酸測定用標準液
本発明はまた、試料中の尿酸の測定に使用するための標準液において、ビス（２−ヒドロキシエチル）イミノトリス（ヒドロキシメチル）メタン（Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ）、Ｎ−（２−アセトアミド）イミノジ酢酸（ＡＤＡ）、Ｎ−（２−アセトアミド）−２−アミノエタンスルホン酸（ＡＣＥＳ）、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−２−アミノエタンスルホン酸（ＴＥＳ）、３−モルホリノプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）から選ばれる少なくとも一つの物質を含有させることを特徴とする尿酸測定用標準液を提供するものである。
本発明において、尿酸測定用標準液に、前記のＢｉｓ−Ｔｒｉｓ、ＡＤＡ、ＡＣＥＳ、ＴＥＳ及びＭＯＰＳから選ばれる少なくとも一つの物質を含有させる場合の濃度は、標準液中の尿酸を十分に安定化できる量であれば特に限定されるものではなく、標準液中の尿酸の濃度等によって最適濃度は異なるが、５ｍＭ以上であれば所望の安定化効果が得られ、５〜５００ｍＭの範囲にあることが好ましく、１０〜５００ｍＭの範囲にあることがより好ましく、１０〜１００ｍＭの範囲にあることが特に好ましい。
【００１６】
本発明の尿酸測定用標準液に含有される尿酸の濃度は、尿酸測定用標準液として通常使用される濃度範囲から適宜選択すればよい。
なお、本発明の標準液は、尿酸含有溶液に前記の物質を１種または２種以上を添加することによって調製することができ、例えば、前記のＢｉｓ−Ｔｒｉｓ、ＡＤＡ、ＡＣＥＳ、ＴＥＳ及びＭＯＰＳから選ばれる少なくとも一つの物質と尿酸とを純水に溶解し、公知のｐＨ調整剤等によりｐＨを調整することにより、調製することができる。
また、本発明の尿酸測定用標準液のｐＨは、ｐＨ６以上であることが好ましく、ｐＨ６〜８の範囲が特に好ましい。
【００１７】
〔３〕試料中の尿酸を測定するための測定キット
本発明は、さらに、前記した本発明の尿酸測定用標準液を含む試料中の尿酸を測定するための測定キット（以下「尿酸測定キット」ということもある）である。本発明の尿酸測定キットは、前記した尿酸測定用標準液を含むこと以外は、従来より公知の試料中の尿酸測定キットに従えばよい。
例えば、尿酸測定キットは、前記した本発明の尿酸測定用標準液、被酸化性発色試薬、ペルオキシダーゼ、ウリカーゼ等の酸化酵素等の通常の測定に用いられる試薬から構成されるものであり、また、その他の構成成分として、測定反応に使用する成分、基質、色素、公知の防腐剤、又は安定化剤等を必要に応じて適宜使用することができる。
【実施例】
【００１８】
以下、実施例により本発明をより具体的に詳述するが、本発明はこれらの実施例によって限定されるものではない。
【００１９】
〔実施例１〕（本発明による溶液中の尿酸の安定化効果の確認−１）
尿酸と共に、本発明の溶液中の尿酸の安定化効果を有する物質、リン酸カリウム、又は他の物質を含有する水溶液を調製し、５℃及び３７℃それぞれにおける１７日間の保存安定性について比較を行った。
【００２０】
１．尿酸標準液の調製
（１）標準液（ＭＥＳ）の調製
２−モルホリノエタンスルホン酸〔ＭＥＳ〕の濃度が２０ｍＭとなるように、かつ尿酸の濃度が１０ｍｇ／ｄＬとなるように各々純水に溶解し、そして２０℃でｐＨがｐＨ５．５、ｐＨ６．０、ｐＨ６．５又はｐＨ７．０となるようにそれぞれｐＨを調整して、ｐＨが異なる計４種類の「標準液（ＭＥＳ）」を調製した。
【００２１】
（２）標準液（Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ）の調製
ビス（２−ヒドロキシエチル）イミノトリス（ヒドロキシメチル）メタン〔Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ〕の濃度が２０ｍＭとなるように、かつ尿酸の濃度が１０ｍｇ／ｄＬとなるように各々純水に溶解し、そして２０℃でｐＨがｐＨ６．０、ｐＨ６．５又はｐＨ７．０となるようにそれぞれｐＨを調整して、ｐＨが異なる計３種類の「標準液（Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ）」を調製した。
【００２２】
（３）標準液（ＡＤＡ）の調製
Ｎ−（２−アセトアミド）イミノジ酢酸〔ＡＤＡ〕の濃度が２０ｍＭとなるように、かつ尿酸の濃度が１０ｍｇ／ｄＬとなるように各々純水に溶解し、そして２０℃でｐＨがｐＨ６．０、ｐＨ６．５又はｐＨ７．０となるようにそれぞれｐＨを調整して、ｐＨが異なる計３種類の「標準液（ＡＤＡ）」を調製した。
【００２３】
（４）標準液（ＰＩＰＥＳ）の調製
ピペラジン−１，４−ビス（２−エタンスルホン酸）〔ＰＩＰＥＳ〕の濃度が２０ｍＭとなるように、かつ尿酸の濃度が１０ｍｇ／ｄＬとなるように各々純水に溶解し、そして２０℃でｐＨがｐＨ６．５、ｐＨ７．０又はｐＨ７．５となるようにそれぞれｐＨを調整して、ｐＨが異なる計３種類の「標準液（ＰＩＰＥＳ）」を調製した。
【００２４】
（５）標準液（ＡＣＥＳ）の調製
Ｎ−（２−アセトアミド）−２−アミノエタンスルホン酸〔ＡＣＥＳ〕の濃度が２０ｍＭとなるように、かつ尿酸の濃度が１０ｍｇ／ｄＬとなるように各々純水に溶解し、そして２０℃でｐＨがｐＨ６．０、ｐＨ６．５、ｐＨ７．０又はｐＨ７．５となるようにそれぞれｐＨを調整して、ｐＨが異なる計４種類の「標準液（ＡＣＥＳ）」を調製した。
【００２５】
（６）標準液（ＴＥＳ）の調製
Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−２−アミノエタンスルホン酸〔ＴＥＳ〕の濃度が２０ｍＭとなるように、かつ尿酸の濃度が１０ｍｇ／ｄＬとなるように各々純水に溶解し、そして２０℃でｐＨがｐＨ７．０、ｐＨ７．５、及びｐＨ８．０となるようにそれぞれｐＨを調整して、ｐＨが異なる計３種類の「標準液（ＴＥＳ）」を調製した。
【００２６】
（７）標準液（ＨＥＰＥＳ）の調製
２−［４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニル］プロパンスルホン酸〔ＨＥＰＥＳ〕の濃度が２０ｍＭとなるように、かつ尿酸の濃度が１０ｍｇ／ｄＬとなるように各々純水に溶解し、そして２０℃でｐＨがｐＨ７．０、ｐＨ７．５、及びｐＨ８．０となるようにそれぞれｐＨを調整して、ｐＨが異なる計３種類の「標準液（ＨＥＰＥＳ）」を調製した。
【００２７】
（８）標準液（ＰＯＰＳＯ）の調製
ピペラジン−１，４−ビス（２−ヒドロキシ−３−プロパンスルホン酸）〔ＰＯＰＳＯ〕の濃度が２０ｍＭとなるように、かつ尿酸の濃度が１０ｍｇ／ｄＬとなるように各々純水に溶解し、そして２０℃でｐＨがｐＨ７．５、ｐＨ８．０、及びｐＨ８．５となるようにそれぞれｐＨを調整して、ｐＨが異なる計３種類の「標準液（ＰＯＰＳＯ）」を調製した。
【００２８】
（９）対照標準液の調製
リン酸カリウムの濃度が２０ｍＭとなるように、かつ尿酸の濃度が１０ｍｇ／ｄＬとなるように各々純水に溶解し、そして２０℃でｐＨがｐＨ６．０、ｐＨ６．５、ｐＨ７．０、及びｐＨ７．５となるようにそれぞれｐＨを調整して、ｐＨが異なる計４種類の「対照標準液」を調製した。
【００２９】
２．尿酸測定試薬の調製
（１）尿酸測定用第１試薬の調製
下記の測定試薬成分をそれぞれ記載の濃度になるように純水に溶解し、ｐＨを８．０（２０℃）に調整して、尿酸測定用第１試薬を調製した。
Ｎ−（２−アセトアミド）イミノジ酢酸〔ＡＤＡ〕    １０ｍＭ
Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−３，５−ジメトキシアニリンナトリウム〔ＨＤＡＯＳ〕    ０．６ｍＭ
ペルオキシダーゼ  １０００単位／Ｌ
【００３０】
（２）尿酸測定用第２試薬の調製
下記の試薬成分をそれぞれ記載の濃度になるように純水に溶解し、ｐＨを６．５（２０℃）に調整して、尿酸測定用第２試薬を調製した。
Ｎ−（２−アセトアミド）イミノジ酢酸〔ＡＤＡ〕    １００ｍＭ
４−アミノアンチピリン    １．９７ｍＭ
ウリカーゼ    ８００単位／Ｌ
【００３１】
３．安定性検討のための標準液の保存
前記１の（１）〜（９）において調製した各標準液をそれぞれ密栓し、５℃及び３７℃それぞれの温度にて１７日間保存した。
【００３２】
４．保存した標準液の安定性の確認
前記３にて１７日間保存した各標準液を試料として、その保存開始時及び保存１７日後に、前記２の（１）で調製した尿酸測定用第１試薬及び前記２の（２）で調製した尿酸測定用第２試薬を用いて、尿酸含量の測定を行った。
【００３３】
各試料（各標準液）中の尿酸の測定は、日立ハイテクノロジーズ社製７１８０形自動分析装置を用いて行った。
【００３４】
前記の試料３．３μＬに、第１試薬として前記の尿酸測定用第１試薬を１６０μＬ添加し３７℃で５分間反応させた後、第２試薬として前記の尿酸測定用第２試薬を４０μＬ添加し混合液（最終反応液）とした。
【００３５】
そして、３７℃で反応を行わせ、主波長６００ｎｍ及び副波長７００ｎｍにおける前記第２試薬の添加直前（１６ポイント）と、前記第２試薬の添加５分後（３４ポイント）の吸光度の増加分より、尿酸濃度が正確に分かっている尿酸標準液を測定した時の吸光度との比例計算によって各試料中の尿酸値（尿酸含量）を求めた。
【００３６】
なお、純水を試料として測定した時の吸光度を試薬盲検値として、前記１６ポイント及び前記３４ポイントの各ポイントにおいて測定した吸光度より、前記の各ポイントにおける試薬盲検値を差し引いた吸光度を各試料中の尿酸値の算出に用いた。
【００３７】
５．測定結果
前記４における保存前後の各標準液の尿酸値（尿酸含量）の測定結果を表１〜表４に示した。
【００３８】
表１は各標準液の保存開始時の尿酸測定値を示し、そして表２は５℃及び３７℃それぞれにおいて１７日間保存後の各標準液の尿酸測定値を示したものである。
また、表３は５℃及び３７℃それぞれにおける１７日間保存後の各標準液の尿酸測定値より、各々の保存開始時の尿酸測定値を差し引いた値、すなわちこの１７日間の保存における尿酸安定性の変動を示したものである。
そして、表４は１７日間保存後の各標準液の尿酸測定値において、５℃保存の尿酸測定値から３７℃保存の尿酸測定値を差し引いた値、すなわち同じ保存期間（１７日間）における保存温度の違い（５℃と３７℃）による尿酸安定性の変動を示したものである。
【００３９】
【表１】
2013208096.tif 000002
【００４０】
【表２】
2013208096.tif 000003
【００４１】
【表３】
2013208096.tif 000004
【００４２】
【表４】
2013208096.tif 000005
【００４３】
６．まとめ
（１）表３から明らかなように、５℃での１７日間の保存の後も、標準液（Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ）、標準液（ＡＤＡ）、標準液（ＰＩＰＥＳ）、標準液（ＡＣＥＳ）、標準液（ＴＥＳ）、標準液（ＨＥＰＥＳ）、標準液（ＰＯＰＳＯ）、及び対照標準液においては、これらの各標準液の尿酸値（尿酸含量）には変化が無いか又は変化がほとんど無いことが分かる。
しかし、この５℃での１７日間の保存の後、標準液（ＭＥＳ）においては、この標準液の尿酸値（尿酸含量）は大幅に低下していることが分かる。
【００４４】
（２）また、この表３から明らかなように、３７℃での１７日間の保存の後、標準液（ＰＩＰＥＳ）、標準液（ＨＥＰＥＳ）、標準液（ＰＯＰＳＯ）、及び対照標準液においては、これらの各標準液の尿酸値（尿酸含量）が顕著に低下していることが分かる。
これに対し、３７℃での１７日間の保存の後、標準液（Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ）、標準液（ＡＤＡ）、標準液（ＡＣＥＳ）、及び標準液（ＴＥＳ）においては、これらの各標準液の尿酸値（尿酸含量）には変化が無いか又は変化がほとんど無いことが分かる。
【００４５】
（３）また、表４に示された値、すなわち各標準液の５℃・１７日間保存の尿酸測定値より３７℃・１７日間保存の尿酸測定値を差し引いた値から明らかなように、標準液（ＭＥＳ）、標準液（ＰＩＰＥＳ）、標準液（ＨＥＰＥＳ）、標準液（ＰＯＰＳＯ）、及び対照標準液においては、この差し引いた値が大きくマイナスの値となっていることが分かる。すなわち、５℃での保存に比して３７℃での保存では、これらの各標準液の尿酸値（尿酸含量）が顕著に低下していることが分かる。
これに対し、標準液（Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ）、標準液（ＡＤＡ）、標準液（ＡＣＥＳ）、及び標準液（ＴＥＳ）においては、この差し引いた値はわずかなマイナスの値に留まるものであることが分かる。すなわち、３７℃での保存時においても、これらの各標準液の尿酸値（尿酸含量）は、５℃での保存時の値と大きな差が無いことが分かる。
【００４６】
（４）これらのことより、溶液中の尿酸は、ＭＥＳ、ＰＩＰＥＳ、ＨＥＰＥＳ、ＰＯＰＳＯ、又はリン酸によっては安定化されないか又はその安定化効果は小さいものの、Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ、ＡＤＡ、ＡＣＥＳ、及びＴＥＳはそれぞれ、３７℃に加温した場合であっても、溶液中の尿酸を効果的に安定化することができることが確かめられた。
すなわち、本発明の効果を確認することができた。
【００４７】
〔実施例２〕（本発明による溶液中の尿酸の安定化効果の確認−２）
尿酸と共に、本発明の溶液中の尿酸の安定化効果を有する物質、又はリン酸カリウムを含有する水溶液を調製し、−２℃及び５℃それぞれにおける長期間の保存安定性について比較を行った。
【００４８】
１．尿酸標準液の調製
（１）標準液（ＭＯＰＳ）〔尿酸濃度１０ｍｇ／ｄＬ〕の調製
３−モルホリノプロパンスルホン酸〔ＭＯＰＳ〕の濃度が１００ｍＭとなるように、尿酸の濃度が１０ｍｇ／ｄＬとなるように、ＥＤＴＡ２ナトリウムの濃度が１ｍＭとなるように、かつアジ化ナトリウムの濃度が０．０２％となるように各々純水に溶解し、そして２０℃でｐＨがｐＨ６．５、ｐＨ６．８又はｐＨ７．０となるようにそれぞれｐＨを調整して、ｐＨが異なる計３種類の「標準液（ＭＯＰＳ）〔尿酸濃度１０ｍｇ／ｄＬ〕」を調製した。
【００４９】
（２）標準液（ＭＯＰＳ）〔尿酸濃度１５ｍｇ／ｄＬ〕の調製
３−モルホリノプロパンスルホン酸〔ＭＯＰＳ〕の濃度が１００ｍＭとなるように、尿酸の濃度が１５ｍｇ／ｄＬとなるように、ＥＤＴＡ２ナトリウムの濃度が１ｍＭとなるように、かつアジ化ナトリウムの濃度が０．０２％となるように各々純水に溶解し、そして２０℃でｐＨがｐＨ６．５、ｐＨ６．８又はｐＨ７．０となるようにそれぞれｐＨを調整して、ｐＨが異なる計３種類の「標準液（ＭＯＰＳ）〔尿酸濃度１５ｍｇ／ｄＬ〕」を調製した。
【００５０】
（３）標準液（Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ）〔尿酸濃度１０ｍｇ／ｄＬ〕の調製
ビス（２−ヒドロキシエチル）イミノトリス（ヒドロキシメチル）メタン〔Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ〕の濃度が１００ｍＭとなるように、尿酸の濃度が１０ｍｇ／ｄＬとなるように、ＥＤＴＡ２ナトリウムの濃度が１ｍＭとなるように、かつアジ化ナトリウムの濃度が０．０２％となるように各々純水に溶解し、そして２０℃でｐＨがｐＨ６．５、ｐＨ６．８又はｐＨ７．０となるようにそれぞれｐＨを調整して、ｐＨが異なる計３種類の「標準液（Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ）〔尿酸濃度１０ｍｇ／ｄＬ〕」を調製した。
【００５１】
（４）標準液（Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ）〔尿酸濃度１５ｍｇ／ｄＬ〕の調製
ビス（２−ヒドロキシエチル）イミノトリス（ヒドロキシメチル）メタン〔Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ〕の濃度が１００ｍＭとなるように、尿酸の濃度が１５ｍｇ／ｄＬとなるように、ＥＤＴＡ２ナトリウムの濃度が１ｍＭとなるように、かつアジ化ナトリウムの濃度が０．０２％となるように各々純水に溶解し、そして２０℃でｐＨがｐＨ６．５、ｐＨ６．８又はｐＨ７．０となるようにそれぞれｐＨを調整して、ｐＨが異なる計３種類の「標準液（Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ）〔尿酸濃度１５ｍｇ／ｄＬ〕」を調製した。
【００５２】
（５）標準液（ＴＥＳ）〔尿酸濃度１０ｍｇ／ｄＬ〕の調製
Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−２−アミノエタンスルホン酸〔ＴＥＳ〕の濃度が１００ｍＭとなるように、尿酸の濃度が１０ｍｇ／ｄＬとなるように、ＥＤＴＡ２ナトリウムの濃度が１ｍＭとなるように、かつアジ化ナトリウムの濃度が０．０２％となるように各々純水に溶解し、そして２０℃でｐＨがｐＨ６．５、ｐＨ６．８又はｐＨ７．０となるようにそれぞれｐＨを調整して、ｐＨが異なる計３種類の「標準液（ＴＥＳ）〔尿酸濃度１０ｍｇ／ｄＬ〕」を調製した。
【００５３】
（６）標準液（ＴＥＳ）〔尿酸濃度１５ｍｇ／ｄＬ〕の調製
Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−２−アミノエタンスルホン酸〔ＴＥＳ〕の濃度が１００ｍＭとなるように、尿酸の濃度が１５ｍｇ／ｄＬとなるように、ＥＤＴＡ２ナトリウムの濃度が１ｍＭとなるように、かつアジ化ナトリウムの濃度が０．０２％となるように各々純水に溶解し、そして２０℃でｐＨがｐＨ６．５、ｐＨ６．８又はｐＨ７．０となるようにそれぞれｐＨを調整して、ｐＨが異なる計３種類の「標準液（ＴＥＳ）〔尿酸濃度１５ｍｇ／ｄＬ〕」を調製した。
【００５４】
（７）標準液（ＡＣＥＳ）〔尿酸濃度１０ｍｇ／ｄＬ〕の調製
Ｎ−（２−アセトアミド）−２−アミノエタンスルホン酸〔ＡＣＥＳ〕の濃度が１００ｍＭとなるように、尿酸の濃度が１０ｍｇ／ｄＬとなるように、ＥＤＴＡ２ナトリウムの濃度が１ｍＭとなるように、かつアジ化ナトリウムの濃度が０．０２％となるように各々純水に溶解し、そして２０℃でｐＨがｐＨ６．５、ｐＨ６．８又はｐＨ７．０となるようにそれぞれｐＨを調整して、ｐＨが異なる計３種類の「標準液（ＡＣＥＳ）〔尿酸濃度１０ｍｇ／ｄＬ〕」を調製した。
【００５５】
（８）標準液（ＡＣＥＳ）〔尿酸濃度１５ｍｇ／ｄＬ〕の調製
Ｎ−（２−アセトアミド）−２−アミノエタンスルホン酸〔ＡＣＥＳ〕の濃度が１００ｍＭとなるように、尿酸の濃度が１５ｍｇ／ｄＬとなるように、ＥＤＴＡ２ナトリウムの濃度が１ｍＭとなるように、かつアジ化ナトリウムの濃度が０．０２％となるように各々純水に溶解し、そして２０℃でｐＨがｐＨ６．５、ｐＨ６．８又はｐＨ７．０となるようにそれぞれｐＨを調整して、ｐＨが異なる計３種類の「標準液（ＡＣＥＳ）〔尿酸濃度１５ｍｇ／ｄＬ〕」を調製した。
【００５６】
（９）対照標準液〔尿酸濃度１０ｍｇ／ｄＬ〕の調製
リン酸カリウムの濃度が１００ｍＭとなるように、尿酸の濃度が１０ｍｇ／ｄＬとなるように、ＥＤＴＡ２ナトリウムの濃度が１ｍＭとなるように、かつアジ化ナトリウムの濃度が０．０２％となるように各々純水に溶解し、そして２０℃でｐＨがｐＨ６．５、ｐＨ６．８又はｐＨ７．０となるようにそれぞれｐＨを調整して、ｐＨが異なる計３種類の「対照標準液〔尿酸濃度１０ｍｇ／ｄＬ〕」を調製した。
【００５７】
（１０）対照標準液〔尿酸濃度１５ｍｇ／ｄＬ〕の調製
リン酸カリウムの濃度が１００ｍＭとなるように、尿酸の濃度が１５ｍｇ／ｄＬとなるように、ＥＤＴＡ２ナトリウムの濃度が１ｍＭとなるように、かつアジ化ナトリウムの濃度が０．０２％となるように各々純水に溶解し、そして２０℃でｐＨがｐＨ６．５、ｐＨ６．８又はｐＨ７．０となるようにそれぞれｐＨを調整して、ｐＨが異なる計３種類の「対照標準液〔尿酸濃度１５ｍｇ／ｄＬ〕」を調製した。
【００５８】
２．尿酸測定試薬の調製
（１）尿酸測定用第１試薬の調製
下記の測定試薬成分をそれぞれ記載の濃度になるように純水に溶解し、ｐＨを８．０（２０℃）に調整して、尿酸測定用第１試薬を調製した。
Ｎ−（２−アセトアミド）イミノジ酢酸〔ＡＤＡ〕    １０ｍＭ
Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−３，５−ジメトキシアニリンナトリウム〔ＨＤＡＯＳ〕    ０．６ｍＭ
ペルオキシダーゼ  １０００単位／Ｌ
【００５９】
（２）尿酸測定用第２試薬の調製
下記の試薬成分をそれぞれ記載の濃度になるように純水に溶解し、ｐＨを６．５（２０℃）に調整して、尿酸測定用第２試薬を調製した。
Ｎ−（２−アセトアミド）イミノジ酢酸〔ＡＤＡ〕    １００ｍＭ
４−アミノアンチピリン    １．９７ｍＭ
ウリカーゼ    ８００単位／Ｌ
【００６０】
３．安定性検討のための標準液の保存
前記１の（１）〜（１０）において調製した各標準液をそれぞれ密栓し、−２℃の温度にて６か月間保存した。
また、前記１の（１）〜（１０）において調製した各標準液をそれぞれ密栓し、５℃の温度にて１２か月間保存した。
【００６１】
４．保存した標準液の安定性の確認
前記３にて−２℃で６か月間保存した各標準液を試料として、その保存開始時、保存１か月後及び保存６か月後に、前記２の（１）で調製した尿酸測定用第１試薬及び前記２の（２）で調製した尿酸測定用第２試薬を用いて、尿酸含量の測定を行った。
また、前記３にて５℃で１２か月間保存した各標準液を試料として、その保存開始時、保存１か月後、保存６か月後及び保存１２か月後に、前記２の（１）で調製した尿酸測定用第１試薬及び前記２の（２）で調製した尿酸測定用第２試薬を用いて、尿酸含量の測定を行った。
【００６２】
各試料（各標準液）中の尿酸の測定は、日立ハイテクノロジーズ社製７１８０形自動分析装置を用いて行った。
【００６３】
前記の試料３．３μＬに、第１試薬として前記の尿酸測定用第１試薬を１６０μＬ添加し３７℃で５分間反応させた後、第２試薬として前記の尿酸測定用第２試薬を４０μＬ添加し混合液（最終反応液）とした。
【００６４】
そして、３７℃で反応を行わせ、主波長６００ｎｍ及び副波長７００ｎｍにおける前記第２試薬の添加直前（１６ポイント）と、前記第２試薬の添加５分後（３４ポイント）の吸光度の増加分より、尿酸濃度が正確に分かっている尿酸標準液を測定した時の吸光度との比例計算によって各試料中の尿酸値（尿酸含量）を求めた。
【００６５】
なお、純水を試料として測定した時の吸光度を試薬盲検値として、前記１６ポイント及び前記３４ポイントの各ポイントにおいて測定した吸光度より、前記の各ポイントにおける試薬盲検値を差し引いた吸光度を各試料中の尿酸値の算出に用いた。
【００６６】
５．測定結果
前記４における保存前後の各標準液の尿酸値（尿酸含量）の測定結果を表５及び表６に示した。
【００６７】
表５は−２℃において６か月間保存した際の各標準液の尿酸測定値を示したものである。
また、表６は５℃において１２か月間保存した際の各標準液の尿酸測定値を示したものである。
【００６８】
【表５】
2013208096.tif 000006
【００６９】
【表６】
2013208096.tif 000007
【００７０】
６．まとめ
（１）表５から明らかなように、−２℃での６か月間の保存の後も、標準液（ＭＯＰＳ）、標準液（Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ）、標準液（ＴＥＳ）、及び標準液（ＡＣＥＳ）においては、これらの各標準液の尿酸の濃度が１０ｍｇ／ｄＬ及び１５ｍｇ／ｄＬのいずれにおいても、これらの各標準液の尿酸値（尿酸含量）には変化が無いか又は変化がほとんど無いことが分かる。
しかし、この−２℃での６か月間の保存の後、対照標準液においては、この標準液の尿酸の濃度が１０ｍｇ／ｄＬ及び１５ｍｇ／ｄＬのいずれにおいても、この標準液の尿酸値（尿酸含量）は大幅に低下していることが分かる。
【００７１】
（２）また、表６から明らかなように、５℃での１２か月間の保存の後も、標準液（ＭＯＰＳ）、標準液（Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ）、標準液（ＴＥＳ）、及び標準液（ＡＣＥＳ）においては、これらの各標準液の尿酸の濃度が１０ｍｇ／ｄＬ及び１５ｍｇ／ｄＬのいずれにおいても、これらの各標準液の尿酸値（尿酸含量）には変化が無いか又は変化がほとんど無いことが分かる。
しかし、この５℃での１２か月間の保存の後、対照標準液においては、この標準液の尿酸の濃度が１０ｍｇ／ｄＬ及び１５ｍｇ／ｄＬのいずれにおいても、この標準液の尿酸値（尿酸含量）は顕著に低下していることが分かる。
【００７２】
（４）これらのことより、ＭＯＰＳ、Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ、ＴＥＳ、及びＡＣＥＳはそれぞれ、溶液中の尿酸を長期間効果的に安定化することができることが確かめられた。
すなわち、本発明の効果を確認することができた。