(57)【要約】【課題】創閉鎖に要する時間を短縮できる組織再生用材料を提供することを目的とする。【解決手段】タンパク質（Ｚ）及び（Ａ）を含有する組織再生用材料であって、（Ｚ）が、下記ポリペプチド鎖（Ｙ）及び／又は下記ポリペプチド鎖（Ｙ’）を有し、（Ｚ）中の（Ｙ）と（Ｙ’）との合計個数が１〜１００個であり、疎水性度が０．２〜１．２であるタンパク質であり、（Ａ）が下記最小アミノ酸配列（Ｂ）を１分子中に少なくとも１個有するタンパク質であり、（Ｚ）と（Ａ）との重量比が４００／１〜１０／１である組織再生用材料。ポリペプチド鎖（Ｙ）：アミノ酸配列（Ｘ）が２〜２００個連続したポリペプチド鎖。ポリペプチド鎖（Ｙ’）：（Ｙ）中の１〜１００個のアミノ酸がそれぞれリシン又はアルギニンで置換されているポリペプチド鎖。最小アミノ酸配列（Ｂ）：ＲＧＤ配列等からなる群より選ばれる少なくとも１種のアミノ酸配列。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
タンパク質（Ｚ）及びタンパク質（Ａ）を含有する組織再生用材料であって、
（Ｚ）が、下記ポリペプチド鎖（Ｙ）及び／又は下記ポリペプチド鎖（Ｙ’）を有し、（Ｚ）中の（Ｙ）と（Ｙ’）との合計個数が１〜１００個であり、疎水性度が０．２〜１．２であるタンパク質であり、
（Ａ）が下記最小アミノ酸配列（Ｂ）を１分子中に少なくとも１個有するタンパク質であり、
組織再生用材料中の（Ｚ）と（Ａ）との重量比（（Ｚ）／（Ａ））が４００／１〜１０／１である組織再生用材料。
ポリペプチド鎖（Ｙ）：ＶＰＧＶＧ配列（２）、ＧＶＧＶＰ配列（３）、ＧＰＰ配列、ＧＡＰ配列及びＧＡＨＧＰＡＧＰＫ配列（４）のうちいずれか１つのアミノ酸配列（Ｘ）が２〜２００個連続したポリペプチド鎖。
ポリペプチド鎖（Ｙ’）：（Ｙ）中の１〜１００個のアミノ酸がそれぞれリシン又はアルギニンで置換されているポリペプチド鎖。
最小アミノ酸配列（Ｂ）：ＲＧＤ配列、ＬＤＶ配列、ＲＥＤＶ配列（１７）、ＹＩＧＳＲ配列（１８）、ＰＤＳＧＲ配列（１９）、ＲＹＶＶＬＰＲ配列（２０）、ＬＧＴＩＰＧ配列（２１）、ＲＮＩＡＥＩＩＫＤＩ配列（２２）、ＩＫＶＡＶ配列（２３）、ＬＲＥ配列、ＤＧＥＡ配列（２４）及びＨＡＶ配列からなる群より選ばれる少なくとも１種のアミノ酸配列。
【請求項２】
タンパク質（Ａ）の下記細胞接着率が８０〜１００％であり、
タンパク質（Ｚ）の下記細胞接着率が０〜２０％である請求項１に記載の組織再生用材料。
細胞接着率：１ｃｍ2当たり０．１μｇのタンパク質（Ａ）又はタンパク質（Ｚ）を有する基材を作成し、基材にマウス歯肉上皮細胞を播種したとき、基材に接着するマウス歯肉上皮細胞の割合。
【請求項３】
タンパク質（Ｚ）が、さらにＧＡＧＡＧＳ配列（１）を有するタンパク質である請求項１又は２に記載の組織再生用材料。
【請求項４】
タンパク質（Ｚ）がＧＡＧＡＧＳ配列（１）を有し、１分子中の、ＧＡＧＡＧＳ配列（１）とアミノ酸配列（Ｘ）及び下記アミノ酸配列（Ｘ’）の合計との配列の数の比率（配列（１）：アミノ酸配列（Ｘ）及び（Ｘ’）の合計）が、１：２〜１：２０である請求項１〜３のいずれかに記載の組織再生用材料。
アミノ酸配列（Ｘ’）：アミノ酸配列（Ｘ）中の１〜２個のアミノ酸がそれぞれリシン又はアルギニンで置換されているアミノ酸配列。
【請求項５】
タンパク質（Ｚ）のＳＤＳ−ＰＡＧＥ（ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動）法による分子質量が１５〜２００ｋＤａである請求項１〜４のいずれかに記載の組織再生用材料。
【請求項６】
タンパク質（Ｚ）が、アミノ酸配列（Ｘ）がＧＶＧＶＰ配列（３）であるポリペプチド鎖（Ｙ１）中の１個のアミノ酸がリシンで置換されたポリペプチド鎖（Ｙ’１）を有するタンパク質（Ｚ２）である請求項１〜５のいずれかに記載の組織再生用材料。
【請求項７】
タンパク質（Ｚ）が、（ＧＡＧＡＧＳ）4配列（９）であるポリペプチド鎖（Ｓ２）及び（ＧＶＧＶＰ）4ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）3配列（８）であるポリペプチド鎖（Ｙ’１１）を有するタンパク質（Ｚ２１）である請求項１〜６のいずれかに記載の組織再生用材料。
【請求項８】
タンパク質（Ａ）１分子中の最小アミノ酸配列（Ｂ）の数が３〜５０個である請求項１〜７のいずれかに記載の組織再生用材料。
【請求項９】
タンパク質（Ａ）が、さらに下記アミノ酸配列（Ｃ）を有するタンパク質である請求項１〜８のいずれかに記載の組織再生用材料。
アミノ酸配列（Ｃ）：（ＧＡ）g配列、（ＧＡＧＡＧＳ）h配列、（ＧＡＧＡＧＴ）i配列、（ＧＡＧＶＧＴ）j配列、（ＧＡＧＴＧＶ）k配列、｛ＤＧＧ（Ａ）lＧＧＡ｝m配列、（ＧＶＰＧＶ）n配列又は（ＧＧＡ）o配列。
［なお、ｇは１〜４００の整数、ｈは１〜２００の整数、ｉは１〜２００の整数、ｊは１〜２００の整数、ｋは１〜２００の整数、ｌは１〜２００の整数、ｍは１〜１００の整数、ｎは１〜２００の整数、ｏは１〜２００の整数である。］
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれかに記載の組織再生用材料及び水を含有する組織再生用タンパク質溶液。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、組織再生用材料及び組織再生用タンパク質溶液に関する。
【背景技術】
【０００２】
熱傷、採皮創、皮膚剥削創及び外傷性皮膚欠損創等の疾患ないし創傷による患部を保護するために、患部に一時的に適応される創傷被覆材として、従来、ガーゼ及び脱脂綿等が用いられている。また、真皮層が欠損した創傷では、創傷被覆材として、肉芽組織の形成を促進させるために、創傷面の湿潤環境を維持させるイントラサイトゲルやグラニュゲルのようなカルボキシメチルセルロースゲル（特許文献１、２）や肉芽組織を形成する細胞の足場としてコラーゲンスポンジ（特許文献３）が使用されている。これらの被覆材は、組織、特に細胞との親和性が高いものではなく、被覆材自体に上皮化促進効果等の治療効果があるものではない。そのため、創閉鎖まで、自然治癒力に依存した治療となってしまい、創閉鎖（上皮化が完了した状態）まで時間がかかる問題がある。特に、上皮化を促進し、組織を再生するような被覆材（組織再生用材料）はなく、上皮化を促進させる組織再生用材料が求められている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特許第２６６４５３９号公報
【特許文献２】特許第３４８５５９３号公報
【特許文献３】特開平１０−０８０４３８号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、創閉鎖に要する時間を短縮できる組織再生用材料を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明の組織再生用材料は、タンパク質（Ｚ）及びタンパク質（Ａ）を含有する組織再生用材料であって、（Ｚ）が、下記ポリペプチド鎖（Ｙ）及び／又は下記ポリペプチド鎖（Ｙ’）を有し、（Ｚ）中の（Ｙ）と（Ｙ’）との合計個数が１〜１００個であり、疎水性度が０．２〜１．２であるタンパク質であり、（Ａ）が下記最小アミノ酸配列（Ｂ）を１分子中に少なくとも１個有するタンパク質であり、組織再生用材料中の（Ｚ）と（Ａ）との重量比（（Ｚ）／（Ａ））が４００／１〜１０／１である組織再生用材料；この組織再生用材料及び水を含有する組織再生用タンパク質溶液である。
ポリペプチド鎖（Ｙ）：ＶＰＧＶＧ配列（２）、ＧＶＧＶＰ配列（３）、ＧＰＰ配列、ＧＡＰ配列及びＧＡＨＧＰＡＧＰＫ配列（４）のうちいずれか１つのアミノ酸配列（Ｘ）が２〜２００個連続したポリペプチド鎖。
ポリペプチド鎖（Ｙ’）：（Ｙ）中の１〜１００個のアミノ酸がそれぞれリシン又はアルギニンで置換されているポリペプチド鎖。
最小アミノ酸配列（Ｂ）：ＲＧＤ配列、ＬＤＶ配列、ＲＥＤＶ配列（１７）、ＹＩＧＳＲ配列（１８）、ＰＤＳＧＲ配列（１９）、ＲＹＶＶＬＰＲ配列（２０）、ＬＧＴＩＰＧ配列（２１）、ＲＮＩＡＥＩＩＫＤＩ配列（２２）、ＩＫＶＡＶ配列（２３）、ＬＲＥ配列、ＤＧＥＡ配列（２４）及びＨＡＶ配列からなる群より選ばれる少なくとも１種のアミノ酸配列。
【発明の効果】
【０００６】
本発明の組織再生用材料及び組織再生用タンパク質溶液は、創閉鎖に要する時間を短縮できるという効果を奏する。
【発明を実施するための形態】
【０００７】
本発明において、タンパク質（Ｚ）及びタンパク質（Ａ）は、天然物から抽出されたものでもよく、人工的に製造されるものでもよいが、動物由来成分を排除する観点から、人工的に製造されるタンパク質が好ましい。また、人工的な製造に用いられる方法としては、有機合成法（酵素法、固相合成法及び液相合成法等）及び遺伝子組み換え法等によって製造できる。有機合成法に関しては、「生化学実験講座１、タンパク質の化学ＩＶ（１９８１年７月１日、日本生化学会編、株式会社東京化学同人発行）」又は「続生化学実験講座２、タンパク質の化学（下）（昭和６２年５月２０日、日本生化学会編、株式会社東京化学同人発行）」に記載されている方法等が適用できる。遺伝子組み換え法に関しては、特許第３３３８４４１号公報に記載されている方法等が適用できる。有機合成法及び遺伝子組み換え法とも、タンパク質（Ｚ）及び（Ａ）を作製できるが、アミノ酸配列を簡便に変更でき、安価に大量生産できるという観点等から、遺伝子組み換え法が好ましい。
【０００８】
本発明の組織再生用材料は、タンパク質（Ｚ）及び（Ａ）を含有することにより、細胞との親和性が高く、細胞増殖（特に上皮細胞の増殖）を促し、上皮化を促進するので、創閉鎖に要する時間を短縮できる。また、タンパク質（Ｚ）及び（Ａ）は、タンパク質であるので、生分解性が高く、創閉鎖（上皮化）後、皮膚内の組織再生用材料が、肉芽組織に置き換わりやすい。したがって、本発明の組織再生用材料を用いれば、創傷の治癒が早くなる。
【０００９】
本発明の組織再生用材料は、タンパク質（Ｚ）及びタンパク質（Ａ）を含有する組織再生用材料であって、（Ｚ）が、下記ポリペプチド鎖（Ｙ）及び／又は下記ポリペプチド鎖（Ｙ’）を有し、（Ｚ）中の（Ｙ）と（Ｙ’）との合計個数が１〜１００個であり、疎水性度が０．２〜１．２であるタンパク質であり、（Ａ）が下記最小アミノ酸配列（Ｂ）を１分子中に少なくとも１個有するタンパク質であり、組織再生用材料中の（Ｚ）と（Ａ）との重量比（（Ｚ）／（Ａ））が４００／１〜１０／１である組織再生用材料である。
ポリペプチド鎖（Ｙ）：ＶＰＧＶＧ配列（２）、ＧＶＧＶＰ配列（３）、ＧＰＰ配列、ＧＡＰ配列及びＧＡＨＧＰＡＧＰＫ配列（４）のうちいずれか１つのアミノ酸配列（Ｘ）が２〜２００個連続したポリペプチド鎖。
ポリペプチド鎖（Ｙ’）：（Ｙ）中の１〜１００個のアミノ酸がそれぞれリシン又はアルギニンで置換されているポリペプチド鎖。
最小アミノ酸配列（Ｂ）：ＲＧＤ配列、ＬＤＶ配列、ＲＥＤＶ配列（１７）、ＹＩＧＳＲ配列（１８）、ＰＤＳＧＲ配列（１９）、ＲＹＶＶＬＰＲ配列（２０）、ＬＧＴＩＰＧ配列（２１）、ＲＮＩＡＥＩＩＫＤＩ配列（２２）、ＩＫＶＡＶ配列（２３）、ＬＲＥ配列、ＤＧＥＡ配列（２４）及びＨＡＶ配列からなる群より選ばれる少なくとも１種のアミノ酸配列。
【００１０】
タンパク質（Ｚ）は、下記ポリペプチド鎖（Ｙ）及び／又は下記ポリペプチド鎖（Ｙ’）を有し、（Ｚ）中の（Ｙ）と（Ｙ’）との合計個数が１〜１００個であり、疎水性度が０．２〜１．２であるタンパク質である。
ポリペプチド鎖（Ｙ）：ＶＰＧＶＧ配列（２）、ＧＶＧＶＰ配列（３）、ＧＰＰ配列、ＧＡＰ配列及びＧＡＨＧＰＡＧＰＫ配列（４）のうちいずれか１つのアミノ酸配列（Ｘ）が２〜２００個連続したポリペプチド鎖。
ポリペプチド鎖（Ｙ’）：（Ｙ）中の１〜１００個のアミノ酸がそれぞれリシン又はアルギニンで置換されているポリペプチド鎖。
（Ｚ）中に（Ｙ）を２個以上有する場合は、それぞれの（Ｙ）を構成するアミノ酸配列（Ｘ）の種類は同じでもよく、異なっていてもよい。つまり、ポリペプチド鎖（Ｙ）として（ＶＰＧＶＧ）b配列、（ＧＶＧＶＰ）c配列、（ＧＰＰ）d配列、（ＧＡＰ）e配列及び（ＧＡＨＧＰＡＧＰＫ）f配列から選ばれる１種を有する（Ｚ）でもよく、ポリペプチド鎖（Ｙ）として（ＶＰＧＶＧ）b配列、（ＧＶＧＶＰ）c配列、（ＧＰＰ）d配列、（ＧＡＰ）e配列及び（ＧＡＨＧＰＡＧＰＫ）f配列から選ばれる２種以上を有する（Ｚ）であってもよい。（なお、ｂ〜ｆは、それぞれ、アミノ酸配列（Ｘ）の連続する個数であり、２〜２００の整数である）。
【００１１】
アミノ酸配列（Ｘ）のうち、細胞親和性の観点から、ＶＰＧＶＧ配列（２）及びＧＶＧＶＰ配列（３）が好ましい。つまり、（Ｚ）がポリペプチド鎖（Ｙ）を有する場合、細胞親和性及び創閉鎖時間短縮の観点から、（Ｚ）が、ポリペプチド鎖（Ｙ）として（ＶＰＧＶＧ）b配列を有するもの及び（ＧＶＧＶＰ）c配列を有するものが好ましい。
アミノ酸配列（Ｘ）の種類が異なるポリペプチド鎖（Ｙ）を２種以上有する場合、細胞親和性及び創閉鎖時間短縮の観点から、（ＶＰＧＶＧ）b配列、（ＧＰＰ）d配列、（ＧＶＧＶＰ）c配列及び（ＧＡＨＧＰＡＧＰＫ）f配列から選ばれる２種以上であることが好ましく、特に好ましくは（ＧＶＧＶＰ）c配列及び（ＧＡＨＧＰＡＧＰＫ）f配列である。
【００１２】
また、タンパク質（Ｚ）中にアミノ酸配列（Ｘ）が同種類のポリペプチド鎖（Ｙ）を複数有する場合は、上記（Ｘ）の連続する個数は、（Ｙ）ごとに同一でも異なっていてもよい。すなわち、上記ｂ〜ｆが同じポリペプチド鎖（Ｙ）を複数有してもよく、（Ｘ）の連続する個数ｂ〜ｆが異なるポリペプチド鎖（Ｙ）を複数有してもいい。
【００１３】
ポリペプチド鎖（Ｙ）は、アミノ酸配列（Ｘ）が２〜２００個連続した（上記ｂ〜ｆが２〜２００）配列であるが、細胞親和性及び創閉鎖時間短縮の観点から、連続する個数は２〜５０個（上記ｂ〜ｆが２〜５０）が好ましく、さらに好ましくは２〜３０個（上記ｂ〜ｆが２〜３０）である。
【００１４】
ポリペプチド鎖（Ｙ’）は、ポリペプチド鎖（Ｙ）を構成するアミノ酸配列（Ｘ）が、一部、下記アミノ酸配列（Ｘ’）に置換され、ポリペプチド（Ｙ）中の１〜１００個のアミノ酸がそれぞれＫ（リシン）又はＲ（アルギニン）で置換されたポリペプチド鎖である。ポリペプチド鎖（Ｙ’）であるかどうかは、タンパク質（Ｚ）の配列中の全てのＫ及びＲを、他のアミノ酸（Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｐ又はＨ）に置きかえたときに、ポリペプチド鎖（Ｙ）となるかによって判断する。
アミノ酸配列（Ｘ’）：アミノ酸配列（Ｘ）中の１〜２個のアミノ酸がそれぞれリシン又はアルギニンで置換されているアミノ酸配列。
（Ｙ’）において、（Ｙ）中のアミノ酸のうち置換されるアミノ酸の数は、水への溶解性の観点から、１〜７０個が好ましく、さらに好ましくは１〜３０個である。
【００１５】
アミノ酸配列（Ｘ’）として、水への溶解性及び適度な疎水性度にする観点から、ＧＫＧＶＰ配列（１３）、ＧＫＧＫＰ配列（１４），ＧＫＧＲＰ配列（１５）及びＧＲＧＲＰ配列（１６）が好ましく、さらに好ましくはＧＫＧＶＰ配列（１３）及びＧＫＧＫＰ配列（１４）である。
【００１６】
タンパク質（Ｚ）中に、（Ｘ）の種類及び／又は連続する個数が異なる（Ｙ）を有している場合は、それぞれを１個として数え、（Ｙ）の個数はその合計である。（Ｙ’）も同様である。
【００１７】
タンパク質（Ｚ）は、（Ｚ）１分子中にポリペプチド鎖（Ｙ）及び／又はポリペプチド鎖（Ｙ’）を合計１〜１００個有するが、創閉鎖時間短縮の観点から、１〜８０個が好ましく、特に好ましくは１〜６０個である。
【００１８】
本発明において、（Ｚ）の疎水性度は０．２〜１．２であり、（Ｚ）の水への溶解性及びゲル化する観点から、０．３〜１．２が好ましく、さらに好ましくは０．４〜１．２であり、特に好ましくは０．５〜１．０である。
（Ｚ）の疎水性度は、（Ｚ）分子の疎水性の度合いを示すものであり、（Ｚ）分子を構成するそれぞれのアミノ酸の数（Ｍα）、それぞれのアミノ酸の疎水性度（Ｎα）及び（Ｚ）１分子中のアミノ酸の総数を、下記数式に当てはめることにより算出することができる。なお、それぞれのアミノ酸の疎水性度は、非特許文献（レ−ニンジャ−の新生化学  上，ｐ．３４６−３４７）に下記の数値が記載されている。
疎水性度＝｛Σ（Ｍα×Ｎα）｝／（ＭT）
Ｍα：（Ｚ）１分子中のそれぞれのアミノ酸の数
Ｎα：各アミノ酸の疎水性度
ＭT：（Ｚ）１分子中のアミノ酸の総数
Ａ（アラニン）：１．８
Ｒ（アルギニン）：−４．５
Ｎ（アスパラギン）：−３．５
Ｄ（アスパラギン酸）：−３．５
Ｃ（システイン）：２．５
Ｑ（グルタミン）：−３．５
Ｅ（グルタミン酸）：−３．５
Ｇ（グリシン）：−０．４
Ｈ（ヒスチジン）：−３．２
Ｉ（イソロイシン）：４．５
Ｌ（ロイシン）：３．８
Ｋ（リシン）：−３．９
Ｍ（メチオニン）：１．９
Ｆ（フェニルアラニン）：２．８
Ｐ（プロリン）：−１．６
Ｓ（セリン）：−０．８
Ｔ（トレオニン）：−０．７
Ｗ（トリプトファン）：−０．９
Ｙ（チロシン）：−１．３
Ｖ（バリン）：４．２
例えば、（Ｚ）が（ＧＶＧＶＰ）4ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）3配列（８）であある場合、（Ｚ）の疎水性度＝｛１６（Ｇの数）×（−０．４）＋１５（Ｖの数）×４．２＋８（Ｐの数）×（−１．６）＋１（Ｋの数）×（−３．９）｝／４０（アミノ酸の総数）＝１．００である。
【００１９】
本発明において、タンパク質（Ｚ）は、さらにＧＡＧＡＧＳ配列（１）を有していてもよい。（Ｚ）がＧＡＧＡＧＳ配列（１）を有している場合、（Ｚ）がゲル化する観点から、ＧＡＧＡＧＳ配列（１）が２〜１００個連続して結合したポリペプチド鎖（Ｓ）を有していることが好ましい。
ポリペプチド鎖（Ｓ）において、配列（１）が連続する数は、ゲル化する観点から、２〜１００個が好ましく、さらに好ましくは２〜５０個であり、次にさらに好ましくは３〜４０個であり、特に好ましくは４〜３０個である。
（Ｚ）において、ポリペプチド鎖（Ｓ）を有する際、（Ｚ）１分子中に（Ｓ）を１つ有すればよいが、ゲル化する観点から、１〜２０個が好ましく、さらに好ましくは３〜１０個である。
【００２０】
タンパク質（Ｚ）において、ポリペプチド鎖（Ｙ）、ポリペプチド鎖（Ｙ’）及びポリペプチド鎖（Ｓ）を合計２個以上有する場合は、ポリペプチド鎖とポリペプチド鎖との間に、介在アミノ酸配列（Ｗ）を有していてもよい。（Ｗ）は、アミノ酸１個、アミノ酸配列（Ｘ）１個、アミノ酸配列（Ｘ’）１個又はアミノ酸が２個以上結合したペプチド配列である。（Ｗ）を構成するアミノ酸の数は、細胞親和性及び創閉鎖時間短縮の観点から、１〜３０個が好ましく、さらに好ましくは１〜１５個、特に好ましくは１〜１０個である。（Ｗ）として、具体的には、ＶＡＡＧＹ配列（５）、ＧＡＡＧＹ配列（６）及びＬＧＰ配列等が挙げられる。
【００２１】
タンパク質（Ｚ）は、（Ｙ）、（Ｙ’）、（Ｓ）以外にも、両末端に末端アミノ酸配列（Ｔ）を有していてもよい。（Ｔ）を有する場合、（Ｚ）の両末端の構造が、（Ｙ）又は（Ｙ’）に（Ｔ）が結合した構造であることが好ましい（Ｔ）は、アミノ酸１個、アミノ酸配列（Ｘ）１個、アミノ酸配列（Ｘ’）１個又はアミノ酸が２個以上結合したペプチド配列である。（Ｔ）を構成するアミノ酸の数は、細胞親和性の観点から、１〜１００個が好ましく、さらに好ましくは１〜５０個、特に好ましくは１〜４０個である。（Ｔ）として、具体的には、ＭＤＰＶＶＬＱＲＲＤＷＥＮＰＧＶＴＱＬＮＲＬＡＡＨＰＰＦＡＳＤＰＭ配列（７）等が挙げられる。
【００２２】
タンパク質（Ｚ）は、上記（Ｔ）以外に、発現させた（Ｚ）の精製または検出を容易にするために、（Ｚ）のＮ及び／又はＣ末端に特殊なアミノ酸配列を有するタンパク質又はペプチド（以下これらを「精製タグ」と称する）を有してもいい。精製タグとしては、アフィニティー精製用のタグが利用される。そのような精製タグとしては、ポリヒスチジンからなる６×Ｈｉｓタグ、ＧＴＳタグ、ＭＢＰタグ、ＨＱタグ、Ｍｙｃタグ、ＨＡタグ、ＦＬＡＧタグ、Ｖ５タグ、Ｘｐｒｅｓｓタグ、ＡＵ１タグ、Ｔ７タグ、ＶＳＶ−Ｇタグ、ＤＤＤＤＫタグ、Ｓタグ、ＣｒｕｚＴａｇ０９TM、ＣｒｕｚＴａｇ２２TM、ＣｒｕｚＴａｇ４１TM、Ｇｌｕ−Ｇｌｕタグ、Ｈａ．１１タグ及びＫＴ３タグ等がある。
以下に、各精製タグ（ｉ）とそのタグを認識結合するリガンド（ｉｉ）との組み合わせの一例を示す。
（ｉ−１）グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＴＳ）  （ｉｉ−１）グルタチオン
（ｉ−２）マルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）  （ｉｉ−２）アミロース
（ｉ−３）ＨＱタグ  （ｉｉ−３）ニッケル
（ｉ−４）Ｍｙｃタグ  （ｉｉ−４）抗Ｍｙｃ抗体
（ｉ−５）ＨＡタグ  （ｉｉ−５）抗ＨＡ抗体
（ｉ−６）ＦＬＡＧタグ  （ｉｉ−６）抗ＦＬＡＧ抗体
（ｉ−７）６×Ｈｉｓタグ  （ｉｉ−７）ニッケル又はコバルト
前記精製タグ配列の導入方法としては、発現用ベクターにおけるタンパク質（Ｚ）をコードする核酸の５’又は３’末端に精製タグをコードする核酸を挿入する方法や市販の精製タグ導入用ベクターを使用する方法等が挙げられる。
【００２３】
タンパク質（Ｚ）１分子中のアミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）の合計含有量（重量％）は、細胞親和性及び創閉鎖時間短縮の観点から、（Ｚ）の分子質量を基準として１０〜８０重量％が好ましく、さらに好ましくは１５〜７５重量％である。
【００２４】
タンパク質（Ｚ）中のアミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）の合計含有量は、プロテインシークエンサーによって求めることができる。具体的には、下記の測定法により測定される。
＜アミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）の含有量の測定法＞
特定のアミノ酸残基で切断出来る切断方法から２種類以上を用いて、タンパク質（Ｚ）を３０残基以下程度まで分解する。その後、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にて分離した後、プロテインシークエンサーにてアミノ酸配列を読み取る。得られたアミノ酸配列からペプチドマッピングして、タンパク質（Ｚ）の全配列を決定する。その後、以下記載の測定式にてアミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）の合計含有量を測定する。
アミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）の合計含有量（％）＝［｛アミノ酸配列（Ｘ）の分子質量｝×｛アミノ酸配列（Ｘ）の数｝＋｛アミノ酸配列（Ｘ’）の分子質量｝×｛アミノ酸配列（Ｘ’）の数｝］／｛（Ｚ）の分子質量｝×１００
【００２５】
タンパク質（Ｚ）１分子中の、ＧＡＧＡＧＳ配列（１）とアミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）との配列の数の比率（ＧＡＧＡＧＳ配列（１）の数：アミノ酸配列（Ｘ）及び（Ｘ’）の数の合計）は、細胞親和性、創閉鎖時間短縮及びゲル化する観点から、１：２〜１：２０が好ましく、さらに好ましくは１：２〜１：１２である。
【００２６】
タンパク質（Ｚ）の分子質量は、創閉鎖時間短縮の観点から、１５〜２００ｋＤａが好ましく、さらに好ましくは１５〜１００ｋＤａである。
なお、タンパク質（Ｚ）の分子質量は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ（ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動）法により、測定サンプルを分離し、泳動距離を標準物質と比較する方法によって求められる。
【００２７】
本発明においては、タンパク質（Ｚ）が上記ポリペプチド鎖（Ｙ）及び／又はポリペプチド鎖（Ｙ’）を有していることで、細胞親和性が高く、上皮化促進効果が優れ、創閉鎖時間の短い組織再生用材料となる。また、上記ポリペプチド鎖（Ｙ）及び／又はポリペプチド鎖（Ｙ’）を有し、且つ（Ｚ）の疎水性度が上記範囲内であることにより、組織再生用材料であるタンパク質（Ｚ）を水に溶解することができ、また、この水溶液をゲル化することができる。疎水性度が低すぎると、親水性が高くなりゲル化せず、また疎水性度が高すぎると、水に溶解してタンパク質溶液とすることができない。
また、（Ｚ）がポリペプチド鎖（Ｙ）及び／又はポリペプチド鎖（Ｙ’）を有し、疎水性度が０．２〜１．２であればゲル化するが、（Ｚ）がＧＡＧＡＧＳ配列（１）を有していると、（Ｚ）のゲル化能（ゲル化までの時間が患部を被覆・充填するのに適度である等）がさらに高くなる。特に、ＧＡＧＡＧＳ配列（１）とアミノ酸配列（Ｘ）及び（Ｘ’）との比が１：２〜１：２０であることで、さらに高くなる。
タンパク質溶液がゲル化し、流動性が低くなれば、タンパク質溶液を患部に投与した際に流出しにくくなり、また、ゲル化物が肉芽組織の代わりとなり、上皮化を促進し、創閉鎖時間短縮の効果が高くなるので好ましい。
【００２８】
好ましいタンパク質（Ｚ）の一部を以下に例示する。
（１）アミノ酸配列（Ｘ）がＧＶＧＶＰ配列（３）であるもの
（１−１）ＧＶＧＶＰ配列（３）が連続したポリペプチド鎖（Ｙ１）を有するタンパク質（Ｚ１）であり、さらに好ましくは、ＧＶＧＶＰ配列（３）が２個連続したポリペプチド鎖（Ｙ１１）及びＧＡＧＡＧＳ配列（１）が６個連続したポリペプチド鎖（Ｓ１）を有するタンパク質（Ｚ１１）である。
具体的には、ポリペプチド鎖（Ｙ１１）とポリペプチド鎖（Ｓ１−１）とが結合したアミノ酸ブロック（Ｌ−１）｛（ＧＶＧＶＰ）2（ＧＡＧＡＧＳ）6｝が２９個繰り返し化学結合した構造を有する分子質量が約９３ｋＤａの配列（２５）のタンパク質（ＳＬＰ４．１、疎水性度０．４７）等。
【００２９】
（１−２）ＧＶＧＶＰ配列（３）が連続したポリペプチド鎖（Ｙ１）中の１個のアミノ酸がＫ（リシン）で置換されたポリペプチド鎖（Ｙ’１）を有するタンパク質（Ｚ２）であり、さらに好ましくは、（ＧＶＧＶＰ）4ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）3配列（８）であるポリペプチド鎖（Ｙ’１１）及び（ＧＡＧＡＧＳ）4配列（９）のポリペプチド鎖（Ｓ２）を有するタンパク質（Ｚ２１）並びに（ＧＶＧＶＰ）4ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）3配列（８）であるポリペプチド鎖（Ｙ’１１）及び（ＧＡＧＡＧＳ）2配列（１０）であるポリペプチド鎖（Ｓ３）を有するタンパク質（Ｚ２２）、並びにポリペプチド鎖（Ｙ’１１）、ポリペプチド鎖（Ｓ２）及びポリペプチド鎖（Ｓ３）を有するタンパク質（Ｚ２３）である。
具体的には、ＧＡＧＡＧＳ配列（１）が４個連続した（ＧＡＧＡＧＳ）4配列（９）のポリペプチド鎖（Ｓ２）を１２個及びＧＶＧＶＰ配列（３）が８個連続したポリペプチド鎖（Ｙ１１）中のＶ（バリン）のうち１個がＫ（リシン）に置換された（ＧＶＧＶＰ）4ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）3配列（８）（Ｙ’１１）を１３個有し、これらが交互に化学結合してなるものに、ＧＡＧＡＧＳ配列（１）が２個連続した（ＧＡＧＡＧＳ）2配列（１０）のポリペプチド鎖（Ｓ３）１個が化学結合した構造を有する分子質量が約８０ｋＤａの配列（１１）のタンパク質（ＳＥＬＰ８Ｋ、疎水性度０．６１８）；ＧＡＧＡＧＳ配列（１）が２個連続した（ＧＡＧＡＧＳ）2配列（１０）のポリペプチド鎖（Ｓ３）及び（ＧＶＧＶＰ）4ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）3配列（８）のポリペプチド鎖（Ｙ’１１）をそれぞれ１７個有し、これらが交互に化学結合してなる構造を有する分子質量が約８２ｋＤａの配列（１２）のタンパク質（ＳＥＬＰ０Ｋ、疎水性度０．７１８）等。
【００３０】
（１−３）ＧＶＧＶＰ配列（３）が連続したポリペプチド鎖（Ｙ１）中の２個のアミノ酸がＫ（リシン）で置換されたポリペプチド鎖（Ｙ’２）を有するタンパク質（Ｚ３）であり、さらに好ましくは、ＧＫＧＶＰ配列（１３）が２個連続したポリペプチド鎖（Ｙ’２１）、ＧＡＧＡＧＳ配列（１）が６個結合したポリペプチド鎖（Ｓ１）及びＧＡＧＡＧＳ配列（１）が１０個結合したポリペプチド鎖（Ｓ４）を有するタンパク質（Ｚ３１）である。
具体的には、ポリペプチド鎖（Ｓ１）にポリペプチド鎖（Ｙ’２１）が結合し、さらにポリペプチド鎖（Ｓ４）が結合したアミノ酸ブロック（Ｌ−２）｛（ＧＡＧＡＧＳ）6（ＧＫＧＶＰ）2（ＧＡＧＡＧＳ）10｝が１０個繰り返し化学結合した構造を有する分子質量が約７３ｋＤａの配列（２６）のタンパク質（ＳＬＰ４．２、疎水性度０．２）等
【００３１】
（２）アミノ酸配列（Ｘ）がＶＰＧＶＧ配列（２）であるもの
（２−１）ＶＰＧＶＧ配列（２）が連続したポリペプチド鎖（Ｙ２）を有するタンパク質（Ｚ４）であり、さらに好ましくはＶＰＧＶＧ配列（２）が１６０個連続したポリペプチド鎖（Ｙ２１）を有するタンパク質（Ｚ４１）である。
具体的には、ＶＰＧＶＧ配列（２）が１６０個連続したポリペプチド鎖（Ｙ２１）を有する分子質量が約６５ｋＤａの配列（２７）のタンパク質（ＥＬＰ１、疎水性度１．２）等。
（２−２）ＶＰＧＶＧ配列（２）が４個連続したポリペプチド鎖（Ｙ２２）及びＶＰＧＶＧ配列（２）が８個連続したポリペプチド鎖（Ｙ２３）を有するタンパク質（Ｚ５）であり、さらに好ましくは、ＶＰＧＶＧ配列（２）が４個連続したポリペプチド鎖（Ｙ２２）、ＶＰＧＶＧ配列（２）が８個連続したポリペプチド鎖（Ｙ２３）及びＧＡＧＡＧＳ配列（１）を有するタンパク質（Ｚ５１）であり、具体的には、ポリペプチド鎖（Ｙ２２）にＧＡＧＡＧＳ配列（１）１個が結合し、さらにポリペプチド鎖（Ｙ２３）が結合したアミノ酸ブロック（Ｌ−３）｛（ＶＰＧＶＧ）4（ＧＡＧＡＧＳ）（ＶＰＧＶＧ）8｝が４０個繰り返し化学結合した構造を有する分子質量が約２２０ｋＤａの配列（２８）のタンパク質（ＥＬＰ１．１、疎水性度１．１２）等
【００３２】
本発明においてタンパク質（Ａ）は、下記最小アミノ酸配列（Ｂ）を１分子中に少なくとも１個有するタンパク質である。
最小アミノ酸配列（Ｂ）：ＲＧＤ配列、ＬＤＶ配列、ＲＥＤＶ配列（１７）、ＹＩＧＳＲ配列（１８）、ＰＤＳＧＲ配列（１９）、ＲＹＶＶＬＰＲ配列（２０）、ＬＧＴＩＰＧ配列（２１）、ＲＮＩＡＥＩＩＫＤＩ配列（２２）、ＩＫＶＡＶ配列（２３）、ＬＲＥ配列、ＤＧＥＡ配列（２４）及びＨＡＶ配列からなる群より選ばれる少なくとも１種アミノ酸配列。
（Ａ）中の最小アミノ酸配列（Ｂ）の個数は、細胞接着性、細胞（特に上皮細胞）増殖性及び創閉鎖時間短縮の観点から、１〜５０が好ましく、さらに好ましくは３〜４０、特に好ましくは４〜３０である。
最小アミノ酸配列（Ｂ）としては、細胞接着性、細胞増殖性及び創閉鎖時間短縮の観点から、ＲＧＤ配列が好ましい。
【００３３】
本発明において、タンパク質（Ａ）は、タンパク質（Ａ）の分解性の観点から、さらに下記アミノ酸配列（Ｃ）を有することが好ましい。
アミノ酸配列（Ｃ）：（ＧＡ）g配列、（ＧＡＧＡＧＳ）h配列、（ＧＡＧＡＧＴ）i配列、（ＧＡＧＶＧＴ）j配列、（ＧＡＧＴＧＶ）k配列、｛ＤＧＧ（Ａ）lＧＧＡ｝m配列、（ＧＶＰＧＶ）n配列又は（ＧＧＡ）o配列。
［なお、ｇは１〜４００の整数、ｈは１〜２００の整数、ｉは１〜２００の整数、ｊは１〜２００の整数、ｋは１〜２００の整数、ｌは１〜２００の整数、ｍは１〜１００の整数、ｎは１〜２００の整数、ｏは１〜２００の整数である。］
アミノ酸配列（Ｃ）のうち、タンパク質（Ａ）の分解性の観点から、（ＧＡＧＡＧＳ）hが好ましい。
【００３４】
アミノ酸配列（Ｃ）を有する場合、（Ｃ）の含有個数は、タンパク質（Ａ）の分解性の観点等から、タンパク質（Ａ）１分子中に、２〜５０が好ましく、さらに好ましくは３〜３０、特に好ましくは４〜２０、最も好ましくは５〜１５である。また、タンパク質（Ａ）は、２種以上のアミノ酸配列（Ｃ）を有してもよい。
【００３５】
タンパク質（Ａ）が（Ｃ）を有する場合、（Ａ）中の（Ｂ）と（Ｃ）との個数の比率［（Ｂ）／（Ｃ）］は、タンパク質の分解性の観点から、０．５〜２が好ましく、さらに好ましくは０．７５〜１．７５である。また、タンパク質（Ａ）がβシート構造を取りやすい観点から、（Ｂ）と（Ｃ）とが交互に位置することが好ましく、特に好ましくはＲＧＤ配列と（ＧＡＧＡＧＳ）h配列とが交互に位置することである。
【００３６】
タンパク質（Ａ）は、分岐鎖を含んでいてもよく、一部が架橋されていてもよく、環状構造を含んでいてもよい。しかし、タンパク質（Ａ）は、細胞からの認識されやすさという観点から、架橋されていないことが好ましく、さらに好ましくは架橋されていない直鎖構造、特に好ましくは環状構造を持たず架橋されていない直鎖構造である。なお、直鎖構造には、β構造（直鎖状ペプチドが折れ曲がってこの部分同士が平行に並び、その間に水素結合が作られる二次構造）も含まれる。
【００３７】
タンパク質（Ａ）は、細胞増殖性及び創閉鎖時間短縮の観点等から、最小アミノ酸配列（Ｂ）とアミノ酸配列（Ｃ）とが、必要により（Ｂ）と（Ｃ）の間に他のアミノ酸配列を介して、交互に化学結合してなる構造であることが好ましく、（Ｂ）の両端に後述するアミノ酸配列（Ｄ）を含むアミノ酸配列と（Ｃ）とが交互に化学結合してなる構造であることがさらに好ましい。これらの場合、最小アミノ酸配列（Ｂ）とアミノ酸配列（Ｃ）との繰り返し単位（Ｂ−Ｃ）の数（個）は、細胞増殖性及び創閉鎖時間短縮の観点等から、１〜５０が好ましく、さらに好ましくは２〜４０、特に好ましくは３〜３０、最も好ましくは４〜２０である。
【００３８】
アミノ酸配列（Ｄ）としては、最小アミノ酸配列（Ｂ）のＮ末端には、細胞増殖性及び創閉鎖時間短縮の観点から、ＲＫＬＰＤＡ配列（５８）、ＧＡＡＶＴＧ配列（２９）、ＧＬＰＧＰＫＧＤ配列（３０）、ＧＧＰＡＶＴＧ配列（３１）、ＡＧＰＫＧＡＤＧＳＰＧＰＡＶＴＧ配列（３２）、ＧＡＡＶＣＥＰＧ配列（３３）、ＧＡＡＬＣＶＳＥＰＧ配列（３４）、ＳＰＡＳＡＡＬＣＶＳＥＰＧ配列（３５）、ＳＰＡＳＡＡＶＣＥＰＧ配列（３６）、ＡＧＰＫＧＡＤＧＳＰＧＰＡＶＣＥＰＧ配列（３７）、ＡＧＰＫＧＡＤＧＳＰＧＰＡＬＣＶＳＥＰＧ配列（３８）、ＧＰＡＶＣＥＰＧ配列（３９）、ＧＰＡＬＣＶＳＥＰＧ配列（４０）及びＧＡＡＰＧＡＳ配列（４１）からなる群より選ばれる少なくとも１種のアミノ酸配列（Ｄ）を結合していることが好ましく、ＲＫＬＰＤＡ配列（５８）、ＧＡＡＶＴＧ配列（２９）、ＧＬＰＧＰＫＧＤ配列（３０）、ＧＧＰＡＶＴＧ配列（３１）及びＡＧＰＫＧＡＤＧＳＰＧＰＡＶＴＧ配列（３２）からなる群より選ばれる少なくとも１種がさらに好ましく、ＲＫＬＰＤＡ配列（５８）及びＧＡＡＶＴＧ配列（２９）が特に好ましい。
【００３９】
アミノ酸配列（Ｄ）としては、最小アミノ酸配列（Ｂ）のＣ末端には、細胞増殖性及び創閉鎖時間短縮の観点から、ＲＫＬＰＤＡ配列（５８）、ＳＰＡＳＡＡＧＹ配列（４２）、ＳＰＡＳＡＡＬＣＶＳ配列（４３）、ＳＰＡＳＡＡＶＣ配列（４４）、ＡＧＰＫＧＡＤＧＳＰＧＰ配列（４５）、ＡＧＰＫＧＡＤＧＳＰＧＰＡＶＣ配列（４６）、ＡＧＰＫＧＡＤＧＳＰＧＰＡＬＣＶＳ配列（４７）、ＡＧＰＫＧＡＤＧＳＰ配列（４８）、ＳＰＡＳＡＡＧＰＶＧＳＰ配列（４９）、ＣＤＡＧＹ配列（５０）、ＣＤＡＧＰＶＧＳＰ配列（５１）及びＳＡＧＰＳＡＧＹ配列（５２）からなる群より選ばれる少なくとも１種のアミノ酸配列（Ｄ）を結合していることが好ましく、ＲＫＬＰＤＡ配列（５８）、ＳＰＡＳＡＡＧＹ配列（４２）、ＳＰＡＳＡＡＬＣＶＳ配列（４３）、ＳＰＡＳＡＡＶＣ配列（４４）、ＡＧＰＫＧＡＤＧＳＰＧＰ配列（４５）、ＡＧＰＫＧＡＤＧＳＰＧＰＡＶＣ配列（４６）、ＡＧＰＫＧＡＤＧＳＰＧＰＡＬＣＶＳ配列（４７）、ＡＧＰＫＧＡＤＧＳＰ配列（４８）及びＳＰＡＳＡＡＧＰＶＧＳＰ配列（４９）からなる群より選ばれる少なくとも１種がさらに好ましく、ＲＫＬＰＤＡ配列（５８）及びＳＰＡＳＡＡＧＹ配列（４２）が特に好ましい。
【００４０】
タンパク質（Ａ）は、化合物（ＡＭ）でさらに修飾されていてもよい。化合物（ＡＭ）としては、１級、２級および３級のアミノ基を含有する化合物及びその塩並びにアンモニウム塩（ＡＭ−１）、カルボキシル基を含有する化合物（ＡＭ−２）、スルホ基を含有する化合物（ＡＭ−３）並びにヒドロキシル基を含有する化合物（ＡＭ−４）が含まれる。（ＡＭ）で修飾されていると、細胞増殖性がさらに良好となり、創閉鎖時間が短縮できる。
【００４１】
１級、２級および３級のアミノ基を含有する化合物及びその塩並びにアンモニウム塩を含有する化合物（ＡＭ−１）としては、ポリアミン、アミノアルコール、アミノ基を有するハロゲン化物、アミノ基含有モノマー及びアミノ基含有モノマーを構成単量体とする重合体、並びにこれらのハロゲン化水素塩及び４級化物等が使用できる。
ポリアミンとしては、少なくとも１個の１級アミノ基又は２級アミノ基を有するポリアミン（炭素数２〜５６）等が用いられ、脂肪族ポリアミン、脂環式ポリアミン、複素環式ポリアミン及び芳香族ポリアミン等が用いられる。
【００４２】
脂肪族ポリアミンとしては、アルキレンジアミン（エチレンジアミン、プロピレンジアミン、トリメチレンジアミン、テトラメチレンジアミン及びヘキサメチレンジアミン等）、アルキレン基の炭素数が２〜６であるポリアルキレンポリアミン（ジエチレントリアミン、イミノビスプロピルアミン、トリエチレンテトラミン、テトラエチレンペンタミン及びペンタエチレンヘキサミン等）、並びにこれらのアルキル（炭素数１〜１８）置換体（ジメチルアミノプロピルアミン、ジエチルアミノプロピルアミン、ジプロピルアミノプロピルアミン、メチルエチルアミノプロピルアミン、トリメチルヘキサメチレンジアミン、Ｎ，Ｎ−ジオクタデシルエチレンジアミン、トリオクタデシルエチレンジアミン及びメチルイミノビスプロピルアミン等）等が挙げられる。
【００４３】
脂環式ポリアミンとしては、１，３−ジアミノシクロヘキサン、１，３−ビス（メチルアミノ）シクロヘキサン、１，３−ビス（ジヒドロキシアミノ）シクロヘキサン、イソホロンジアミン、メンタンジアミン及び４，４’−メチレンジシクロヘキサンジアミン等が挙げられる。
【００４４】
複素環式ポリアミンとしては、ピペラジン、Ｎ−メチルピペラジン、Ｎ−アミノエチルピペラジン及び１，４−ジアミノエチルピペラジン等が挙げられる。
【００４５】
芳香族ポリアミンとしては、フェニレンジアミン、Ｎ，Ｎ’−ジメチルフェニレンジアミン、Ｎ，Ｎ，Ｎ’−トリメチルフェニレンジアミン、ジフェニルメタンジアミン及び２，６−ジアミノピリジン、トリレンジアミン、ジエチルトリレンジアミン、４，４’−ビス（メチルアミノ）ジフェニルメタン及び１−メチル−２−メチルアミノ−４−アミノベンゼン等が挙げられる。
【００４６】
アミノアルコールとしては、炭素数２〜５８のアミノアルコール等が用いられ、炭素数２〜１０のアルカノールアミン［モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、モノイソプロパノールアミン、モノブタノールアミン、トリエタノールアミン、トリプロパノールアミン、トリブタノールアミン、Ｎ，Ｎ−ビス（ヒドロキシエチル）エチレンジアミン及びＮ，Ｎ、Ｎ’、Ｎ’−テトラキス（ヒドロキシエチル）エチレンジアミン等］、これらのアルキル（炭素数１〜１８）置換体［Ｎ，Ｎ−ジメチルエタノールアミン、Ｎ，Ｎ−ジエチルエタノールアミン、Ｎ−エチルジエタノールアミン、Ｎ−オクタデシルジエタノールアミン、Ｎ，Ｎ−ジエチル−Ｎ’，Ｎ’−ビス（ヒドロキシエチル）エチレンジアミン、Ｎ，Ｎ−ジオクタデシル−Ｎ’，Ｎ’−ビス（ヒドロキシエチル）エチレンジアミン及びＮ，Ｎ，Ｎ’−トリオクタデシル−Ｎ’−ヒドロキシエチルエチレンジアミン等］等が挙げられる。
【００４７】
アミノ基を有するハロゲン化物としては、炭素数２〜１７のアルキルアミンのハロゲン（塩素及び臭素等）化物等が用いられ、アミノエチルクロリド、Ｎ−メチルアミノプロピルクロリド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルクロリド、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノエチルクロリド、Ｎ，Ｎ−ジベンジルアミノエチルブロミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロピルブロミド、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノプロピルクロリド及びＮ，Ｎ−ジベンジルアミノプロピルクロリド等が挙げられる。
【００４８】
アミノ基含有モノマーとしては、炭素数５〜２１のアミノ基含有ビニル化合物、エチレンイミン及び炭素数２〜２０のアミノ酸等が用いられる。
アミノ基含有ビニル化合物としては、アミノ基含有（メタ）アクリレート、アミノ基含有（メタ）アクリルアミド、アミノ基含有芳香族ビニル炭化水素及びアミノ基含有アリルエーテル等が用いられる。
【００４９】
アミノ基含有（メタ）アクリレートとしては、アミノエチル（メタ）アクリレート、Ｎ−メチルアミノエチル（メタ）アクリレート、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチル（メタ）アクリレート、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノプロピル（メタ）アクリレート、Ｎ，Ｎ−ジプロピルアミノエチル（メタ）アクリレート、Ｎ−ベンジル−Ｎ−メチルアミノエチル（メタ）アクリレート、Ｎ，Ｎ−ジベンジルアミノエチル（メタ）アクリレート、Ｎ，Ｎ−ジベンジルアミノプロピル（メタ）アクリレート、モルホリノエチル（メタ）アクリレート及びＮ−メチルピペチジノエチル（メタ）アクリレート等が挙げられる。
【００５０】
アミノ基含有（メタ）アクリルアミドとしては、アミノエチルアクリルアミド、Ｎ−メチルアミノプロピルアクリルアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチル（メタ）アクリルアミド、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノプロピル（メタ）アクリルアミド、Ｎ，Ｎ−ジプロピルアミノエチル（メタ）アクリルアミド、Ｎ−ベンジル−Ｎ−メチルアミノエチル（メタ）アクリルアミド、モルホリノエチル（メタ）アクリルアミド及びＮ−メチルピペチジノエチル（メタ）アクリルアミド等が挙げられる。
【００５１】
アミノ基含有芳香族ビニル炭化水素としては、アミノエチルスチレン、Ｎ−メチルアミノエチルスチレン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノスチレン、Ｎ，Ｎ−ジプロピルアミノスチレン及びＮ−ベンジル−Ｎ−メチルアミノスチレン等が挙げられる。
【００５２】
アミノ基含有アリルエーテルとしては、アミノエチルアリルエーテル、Ｎ−メチルアミノエチルアリルエーテル、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルアリルエーテル及びＮ，Ｎ−ジエチルアミノエチルアリルエーテル等が挙げられる。
【００５３】
アミノ酸としては、アルギニン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、バリン、アラニン、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン、グルタミン酸、プロリン、システイン、リシン、セリン、グリシン、３−アミノプロピオン酸、８−アミノアクタン酸及び２０−アミノエイコサン酸等が挙げられる。
【００５４】
アミノ基含有モノマーの重合体としては、アミノ基含有ビニル化合物からなるビニルポリマー、ポリエチレンイミン及びポリペプチド（（Ａ）は含まない。）等が挙げられる。
アミノ基含有モノマーの重合体の重量平均分子量は、５００〜１００万が好ましく、さらに好ましくは１，０００〜８０万、特に好ましくは２，０００〜５０万である。なお、重量平均分子量は、ゲルパーミエーションクロマトグラフィー（ＧＰＣ）で測定することができる｛基準物質：分子量４２０〜２０,６００,０００のポリスチレンスタンダード（東ソー製）等｝。
【００５５】
ハロゲン化水素塩としては、上記アミノ基含有化合物とハロゲン化物（フッ化水素、塩化水素、臭化水素及びヨウ化水素等）との塩が挙げられる。
具体的には、塩酸Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルクロリド及び塩酸Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノエチルクロリド等が挙げられる。
【００５６】
これらの４級化物としては、これらのアミノ基を４級化剤（メチルクロリド、エチルクロリド、ベンジルクロリド、ジメチル炭酸、ジメチル硫酸及びエチレンオキシド等）によって４級化したもの等が挙げられる。
【００５７】
これらの１級、２級および３級のアミノ基を含有する化合物及びその塩並びにアンモニウム塩（ＡＭ−１）のうち、細胞増殖性及び創閉鎖時間短縮の観点から、塩酸Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルクロリド及び塩酸Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノエチルクロリドが好ましく、さらにに好ましくは塩酸Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルクロリドである。
【００５８】
カルボキシル基を含有する化合物（ＡＭ−２）としては、炭素数２〜３０のカルボン酸であり、具体的には、ぎ酸、酢酸、プロピオン酸、こはく酸、グリコール酸、グルコン酸、乳酸、りんご酸、酒石酸、くえん酸、アスコルビン酸、グルクロン酸、マレイン酸、フマル酸、ピルビン酸、アスパラギン酸、グルタミン酸、安息香酸、アントラニル酸、メシル酸、サリチル酸、４−ヒドロキシ安息香酸及びフェニル酢酸等が挙げられる。また、これらカルボキシル基を有するハロゲン化物等も使用できる。具体的には、クロロ酢酸及びクロロぎ酸等が挙げられる。これらのカルボキシル基を含有する化合物（ＡＭ−２）のうち、細胞増殖性及び創閉鎖時間短縮の観点からクロロ酢酸が好ましい。
【００５９】
スルホ基を含有する化合物（ＡＭ−３）としては、炭素数２〜３０のスルホン酸であり、具体的には、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、パントテン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、スルファニル酸及びシクロヘキシルアミノスルホン酸等が挙げられる。また、これらスルホ基を有するハロゲン化物等も使用できる。具体的には、クロロスルホン酸及びクロロエタンスルホン酸等が挙げられる。これらのスルホン基を含有する化合物（ＡＭ−３）のうち、細胞増殖性及び創閉鎖時間短縮の観点からクロロエタンスルホン酸が好ましい。
【００６０】
ヒドロキシル基を含有する化合物（ＡＭ−４）としては、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等が挙げられる。また、これらヒドロキシル基を有するハロゲン化物等も使用できる。具体的には、クロロエタノール及びクロロプロパノール等が挙げられる。これらのヒドロキシル基を含有する化合物（ＡＭ−４）のうち、細胞増殖性及び創閉鎖時間短縮の観点からクロロエタノールが好ましい。
【００６１】
化合物（ＡＭ）で修飾する方法としては、（１）化合物（ＡＭ）と、修飾前のタンパク質（Ａ）とを化学結合｛共有結合、イオン結合及び／又は水素結合等｝させる方法、並びに、（２）化合物（ＡＭ）を修飾前のポリペプチドに物理吸着（ファンデルワールス力による吸着）させる方法等が適用できる。
これらのうち、細胞増殖性及び創閉鎖時間短縮の観点等から、（１）の化学結合させる方法が好ましく、さらに好ましくは共有結合である。
【００６２】
（１）化合物（ＡＭ）と、修飾前のタンパク質（Ａ）とを化学結合｛共有結合、イオン結合及び／又は水素結合等｝させる方法において、化学結合させるために、（Ａ）がアミノ酸残基として反応性基｛ヒドロキシル基、カルボキシル基、メルカプト基、及び１級又は２級アミノ基等｝をもつアミノ酸を持っていることが好ましい。反応性基のうち、細胞増殖性の観点から、ヒドロキシル基、カルボキシル基及び１級アミノ基が好ましく、さらに好ましくはヒドロキシル基及びカルボキシル基、特に好ましくはヒドロキシル基である。また、（Ａ）の１分子中に反応性基を少なくとも１個有すればよいが、細胞増殖性及び創閉鎖時間短縮の観点から、１分子中に２〜５０個有するものが好ましく、さらに好ましくは１分子中に３〜３０個、特に好ましくは１分子中に５〜２０個有するものである。
【００６３】
化学結合させる方法としては、公知の方法が適用でき、特開２００７−５１１２７号公報等に記載の方法が挙げられる。化学結合形成反応には反応溶媒を使用してもよく、反応溶媒としては公知のものが使用でき、例えば、水、臭化リチウム水溶液、過塩素酸リチウム水溶液、メタノール、エタノール、イソプロパノール、アセトン、ジメチルスルフォキシド、ジメチルアセトアミド及びテトラヒドロフランが挙げられる。
【００６４】
化合物（ＡＭ）と修飾前のタンパク質（Ａ）とを共有結合させる具体例としては、（Ａ）中の側鎖にヒドロキシル基を含有するアミノ酸（例えば、Ｓｅｒ及びＴｙｒ）を１級、２級および３級のアミノ基、及び／又はアンモニウム塩、カルボキシル基、スルホン基、ヒドロキシル基を有するアルキルハロゲン化物でアルキルエーテル化する方法、及び側鎖にカルボキシル基を含有するアミノ酸（例えば、Ａｓｐ及びＧｌｕ）をアミノ基、及び／又はアンモニウム塩を有するアルコールでエステル化する方法が挙げられる。
【００６５】
タンパク質（Ａ）の好適な例を以下に示す。
ＲＧＤ配列１３個と（ＧＡＧＡＧＳ）9配列（５３）の１２個とを有し、これらが交互に位置する構造を有するＭｎ約１１万の配列（５４）のポリペプチド｛「プロネクチンＦ」、プロネクチン（ＰＲＯＮＥＣＴＩＮ）は三洋化成工業（株）の登録商標（日本及び米国）である。三洋化成工業（株）製＜以下同じ＞｝；
プロネクチンＦを化合物（ＡＭ）で修飾したタンパク質であり、具体的には、化合物（ＡＭ）として塩酸Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルクロリドを用いて修飾したポリペプチド（「プロネクチンＦプラス」）；
ＲＧＤ配列の５個と（ＧＡＧＡＧＳ）3配列（５５）の５個とを有しこれらが交互に位置する構造を有するＭｎ約２万の配列（５６）のポリペプチド（「プロネクチンＦ２」）；
ＲＧＤ配列の３個と（ＧＡＧＡＧＳ）3配列（５５）の３個とを有しこれらが交互に位置する構造を有するＭｎ約１万の配列（５７）のポリペプチド（「プロネクチンＦ３」）；
ＲＧＤ配列の６個とＲＫＬＰＤＡ配列（５８）の６個と（ＧＡＧＡＧＳ）9配列（５３）の１２個とを有し、これらがＲＧＤ配列、（ＧＡＧＡＧＳ）9配列（５３）、ＲＫＬＰＤＡ配列（５８）、（ＧＡＧＡＧＳ）9配列（５３）の順に交互に位置する構造を有するＭｎ約１１万の配列（５９）のポリペプチド（「プロネクチンＦＴ」）；
「プロネクチンＦ」のＳｅｒ残基に対してアミノ酸配列ＲＫＬＰＤＡ配列（５８）を化学結合したＭｎ約１２万の配列のポリペプチド（「プロネクチンＦＴ２」）等。
【００６６】
（Ａ）の分子質量は、細胞増殖性及び創閉鎖時間短縮の観点から、３００〜３，０００，０００が好ましく、さらに好ましくは１，０００〜１，０００，０００、特に好ましくは３，０００〜３００，０００である。なお、（Ａ）の分子質量は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ（ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動）法で、（Ａ）を分離し、泳動距離を標準物質と比較することによって求めるものである（以下、同じである）。
【００６７】
本発明の組織再生用材料は、上記タンパク質（Ｚ）及びタンパク質（Ａ）を含有するものであり、組織再生用材料中の（Ｚ）と（Ａ）との重量比（（Ｚ）／（Ａ））が４００／１〜１０／１のものであるが、創閉鎖時間短縮の観点から、重量比が４００／１〜５０／１であることが好ましい。
【００６８】
本発明の組織再生用材料において、タンパク質（Ａ）の細胞接着率は、上皮化促進及び創閉鎖時間短縮の観点から、８０〜１００％が好ましく、さらに好ましくは８５〜１００％であり、特に好ましくは９０〜１００％である。
タンパク質（Ａ）は、最小アミノ酸配列（Ｂ）を有していることで細胞接着性が高く、（Ａ）中の最小アミノ酸配列（Ｂ）の割合が増えると（Ａ）の細胞接着率はより高くなる。（Ａ）の細胞接着率が高いことで、タンパク質（Ｚ）及びタンパク質（Ａ）を含む組織再生用材料とした際に、適度な細胞接着性となり、上皮細胞が伸展しやすくなり、創閉鎖短縮効果が高くなる。
また、タンパク質（Ｚ）の細胞接着率は、上皮化促進及び創閉鎖時間短縮の観点から、０〜２０％が好ましく、さらに好ましくは０〜１８％であり、特に好ましくは３〜１５％である。
タンパク質（Ｚ）は、アミノ酸配列（Ｘ）を有していることで細胞接着性が低く、（Ｚ）中のアミノ酸配列（Ｘ）の割合が増えると（Ｚ）の細胞接着率はより低くなる。また、（Ｚ）の細胞接着率が低いことで、タンパク質（Ｚ）及びタンパク質（Ａ）を含む組織再生用材料とした際に、適度な細胞接着性となり、上皮細胞が伸展しやすくなり、創閉鎖短縮効果が高くなる。
細胞接着率：１ｃｍ2当たり０．１μｇのタンパク質（Ａ）又はタンパク質（Ｚ）を有する基材を作成し、基材にマウス歯肉上皮細胞を播種したとき、基材に接着するマウス歯肉上皮細胞の割合。
【００６９】
細胞接着率は、具体的には下記測定方法により測定される。
＜細胞接着率の測定法＞
脱イオン水１ｍＬに、測定試料のタンパク質１ｍｇを溶解し、さらに、０．０２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．２、純度９９．５重量％塩化ナトリウムを０．８５重量％含有するＰＢＳ）で希釈して、１０μｇ／ｍＬのタンパク質水溶液を作成する。この水溶液を、９６穴のポリスチレンプレートに５０μＬ／穴で加え、２５℃で２時間静置する。
２時間静置後、アスピレーターを用いて溶媒を除去し、生理食塩水（０．９重量／容量％  塩化ナトリウム水溶液）１００μＬ／穴で２回洗浄し、さらに脱イオン水１００μＬ／穴で洗浄して、基材の表面１ｃｍ2当たり０．１μｇのタンパク質を有する基材を作成する。
作成した基材の表面積当たりのタンパク質の量は次の測定を行うことによって確認する。Ｍｉｃｒｏ  ＢＣＡTM  ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｓｓａｙ  ｋｉｔ（ＴＨＥＲＭＯ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）付属のＲｅａｇｅｎｔＡ溶液：ＲｅａｇｅｎｔＢ溶液：ＲｅａｇｅｎｔＣ溶液＝２５：２４：１の混合液（Ｃ）を作成する。基材に、混合液（Ｃ）を１００μＬ／穴加え、３７℃で２時間静置する。
静置２時間後に、ビシンコニン酸（ＢＣＡ）とＣｕ+のキレート生成量を、４５０ｎｍ（対照波長６３０ｎｍ）の吸光度でプレートリーダー（コロナ電気株式会社製ＭＴＰ−３２）を用いて室温で測定する。さらに、あらかじめウシ血清アルブミンにより作成した検量線からコーティング量を得る。
作成した基材に、血清を含まないＤＭＥＭ培地を５０μＬ／穴で添加し、３７℃インキュベーター内に１時間保存した。１時間後、マウス歯肉上皮細胞を１万ｃｅｌｌｓ／５０μＬ／穴で添加し、３７℃、二酸化炭素濃度５容量％のインキュベーター中で２時間放置して培養する。
培養終了後、アスピレーターを用いて培地を除去し、生理食塩水を細胞に直接当たらないように注意しながら１００μＬ／穴で添加し、アスピレーターを用いて生理食塩水を除去する。次にＰＢＳを５０μＬ／穴で添加し、さらにテトラカラーワン（生化学工業株式会社）を１０μＬ／穴で添加して、３７℃、二酸化炭素濃度５容量％のインキュベーター中に４時間放置する。
４時間後に、ホルマザン生成量を、４５０ｎｍ（参照波長６３０ｎｍ）の吸光度でプレートリーダーを用いて測定する。接着した細胞数は、吸光度の高さに比例するので、接着した細胞数はあらかじめ作成しておいた検量線から算出する。細胞接着率は、接着した細胞数と播種した細胞数から、下記式によって算出する。
細胞接着率（％）＝接着した細胞数／播種した細胞数×１００
【００７０】
本発明の組織再生用材料の患部への適用方法としては、下記の方法が挙げられる。
（１）タンパク質（Ｚ）、タンパク質（Ａ）及び水を所定量含む後述する組織再生用タンパク質溶液を４〜２５℃で作製する。組織再生用タンパク質溶液には、必要により無機塩及び／又はリン酸（塩）を含んでもよい。また、組織再生用タンパク質溶液は、必要により患部に投与する直前に温めてもよい。
（２）患部（創傷部等）に組織再生用タンパク質溶液を投与する。
（３）投与後、組織再生用タンパク質溶液が患部から流出しないように、適当なドレッシングで被覆する。
【００７１】
組織再生用タンパク質溶液中の各成分の量は、後述する本発明の組織再生用タンパク質溶液と同様であり、好ましい範囲も同様である。
組織再生用タンパク質溶液は、タンパク質（Ａ）、タンパク質（Ｚ）及び水を混合した直後は溶液状であるが、時間の経過、熱等の刺激を加える等により、流動性が低くなりゲル化することが好ましい。
組織再生用タンパク質溶液をゲル化させる温度は、短時間でゲル化させる観点から、組織再生用タンパク質溶液の温度は２５〜８０℃が好ましい。８０℃以下であると、組織再生用材料の機能を低下させずにゲル化させることができ、また、ゲル化までの時間が適度である。
また、組織再生用タンパク質溶液を使用する場合、適用時の組織再生用タンパク質溶液の温度は、組織再生用材料の熱安定性及びハンドリング性の観点から、４〜８０℃が好ましく、さらに好ましくは４〜６０℃、次にさらに好ましくは２５〜５０℃、特に好ましくは３０〜４０℃である。
【００７２】
患部への投与方法としては、患部を被覆できれば特に制限はないが、患者への負担の観点から、患部の欠損部分を埋めるように注入することが好ましい。
【００７３】
上記（３）で使用するドレッシングの材質としては、特に限定されないが、ポリウレタン、シリコーン、ポリビニルアルコール、ポリプロピレン、ポリエステル、ポリスチレン、ポリエチレン、エチレン酢酸ビニル共重合体及びナイロン等が挙げられる。
ドレッシングの形状としては、組織再生用タンパク質溶液を投与後に、組織再生用タンパク質溶液が患部から流出しないように被覆できれば制限なく使用できるが、フィルム状が好ましい。
【００７４】
本発明の組織再生用材料は、動物由来の血清等が含まれていないので、抗原性が低いと推察される。また、タンパク質（Ｚ）及びタンパク質（Ａ）は、生物由来配列を有するので、生体適合性が高いと推察される。さらに、タンパク質（Ｚ）及びタンパク質（Ａ）は大腸菌等の細菌により、安価に大量生産できるので、組織再生用材料を容易に入手できる。
【００７５】
本発明の組織再生用タンパク質溶液は、上記組織再生用材料及び水を含有する組織再生用タンパク質溶液である。
組織再生用タンパク質溶液中の組織再生用材料の含有量（重量％）は、創傷治癒の観点から、組織再生用材料及び水の合計重量を基準として５．０３〜３０．３が好ましく、さらに好ましくは１０．０５〜３０．１である。
組織再生用タンパク質溶液中のタンパク質（Ｚ）の含有量（重量％）は、組織再生用タンパク質溶液がゲル化する及び創傷治癒の観点から、組織再生用材料及び水の合計重量を基準として、５〜３０が好ましく、さらに好ましくは１０〜３０である。
組織再生用タンパク質溶液中のタンパク質（Ａ）の含有量（重量％）は、創閉鎖時間短縮の観点から、組織再生用材料及び水の合計重量を基準として、０．０３〜０．３が好ましく、さらに好ましくは０．０５〜０．１である。
組織再生用タンパク質溶液中の組織再生用材料の含有量（重量％）は、創傷治癒の観点から、組織再生用タンパク質溶液の重量を基準として５．０３〜３０．３が好ましく、さらに好ましくは１０．０５〜３０．１である。
組織再生用タンパク質溶液中のタンパク質（Ｚ）の含有量（重量％）は、タンパク質溶液がゲル化する及び創傷治癒の観点から、組織再生用タンパク質溶液の重量を基準として、５〜３０が好ましく、さらに好ましくは１０〜３０である。
組織再生用タンパク質溶液中のタンパク質（Ａ）の含有量（重量％）は、
創閉鎖時間短縮の観点から、組織再生用タンパク質溶液の重量を基準として、０．０３〜０．３が好ましく、さらに好ましくは０．０５〜０．１である。
【００７６】
組織再生用タンパク質溶液中の水としては、滅菌されたものであれば特に限定するものではなく、滅菌方法としては、０．２μｍ以下の孔径を持つ精密ろ過膜を通した水、限外ろ過膜を通した水、逆浸透膜を通した水及びオートクレーブで１２１℃２０分加熱して過熱滅菌した脱イオン水等が挙げられる。
組織再生用タンパク質溶液中の水の含有量（重量％）はタンパク質（Ｚ）及び（Ａ）の溶解性の観点から、組織再生用材料及び水の合計重量を基準として、６９．７〜９４．９７が好ましく、さらに好ましくは６９．９〜８９．９５である。
組織再生用タンパク質溶液中の水の含有量（重量％）はタンパク質（Ｚ）及び（Ａ）の溶解性の観点から、組織再生用タンパク質溶液の重量を基準として、６９．７〜９４．９７が好ましく、さらに好ましくは６９．９〜８９．９５であり、次にさらに好ましくは６９．９〜８９．６５であり、特に好ましくは８８．３５である。
【００７７】
組織再生用タンパク質溶液中には、上記組織再生用材料及び水以外に無機塩及びリン酸（塩）を含んでもいい。
無機塩としては、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、塩化マグネシウム、硫酸ナトリウム、硫酸カリウム、硫酸カルシウム、硫酸マグネシウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム、炭酸水素カルシウム及び炭酸水素マグネシウム等が挙げられる。リン酸塩は無機塩に含まない。
組織再生用タンパク質溶液中の塩の含有量（重量％）は、人間の体液と同等にするという観点から、組織再生用タンパク質溶液の重量を基準として０〜１．３が好ましく、さらに好ましくは０．５〜１．３であり、次にさらに好ましくは０．７〜１．１であり、特に好ましくは０．８５〜０．９５である。
【００７８】
リン酸（塩）は、リン酸及び／又はリン酸塩を意味する。
組織再生用タンパク質溶液中のリン酸（塩）としては、リン酸及びリン酸塩が挙げられる。
塩としては、アルカリ金属塩及びアルカリ土類金属塩が挙げられ、具体的には、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩及びマグネシウム塩等が挙げられる。
組織再生用タンパク質溶液中のリン酸（塩）の含有量（重量％）は、創傷治癒の観点から、組織再生用タンパク質水溶液（Ｂ）の重量を基準として０〜０．３０が好ましく、さらに好ましくは０．１０〜０．３０であり、次にさらに好ましくは０．１２〜０．２８であり、特に好ましくは０．１４〜０．２６である。
【００７９】
組織再生用タンパク質溶液のｐＨは、組織親和性の観点から、５〜９が好ましく、さらに好ましくは６〜８である。
【００８０】
本発明の組織再生用タンパク質溶液は、上記組織再生用材料を含んでいるので、熱傷、採皮創、皮膚剥削創及び外傷性皮膚欠損創等の疾患ないし創傷による創傷部の治癒を促進する材料（特に上皮化を促進する材料）として有効である。特に、上述の好ましい範囲で組織再生用材料及び水を含有し、ゲル化するタンパク質溶液は、創傷部の被覆材や充填材としても有用である。
【実施例】
【００８１】
以下、実施例及び比較例により本発明をさらに説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００８２】
＜製造例１＞
○ＳＥＬＰ８Ｋの生産
特許第４０８８３４１号公報の実施例記載の方法に準じて、ＳＥＬＰ８ＫをコードしたプラスミドｐＰＴ０３４５を作製した。
作製したプラスミドを大腸菌にトランスフォーメーションし、ＳＥＬＰ８Ｋ生産株を得た。以下、このＳＥＬＰ８Ｋ生産株を用いてＳＥＬＰ８Ｋを生産する方法を示す。
３０℃で生育させたＳＥＬＰ８Ｋ生産株の一夜培養液を使用して、２５０ｍｌフラスコ中のＬＢ培地５０ｍｌに接種した。カナマイシンを最終濃度５０μｇ／ｍｌとなるように加え、該培養液を３０℃で攪拌しながら（２００ｒｐｍ）インキュベートした。培養液がＯＤ６００＝０．８（吸光度計ＵＶ１７００：島津製作所製を使用）となった時に、４０ｍｌを４２℃に前もって温めたフラスコに移し、同じ温度で約２時間インキュベートした。該培養体を氷上で冷却し、培養液のＯＤ６００を測定した。大腸菌を遠心分離で集めた。集菌した大腸菌からタンパク質を取り出すために、超音波破砕（４℃、３０秒×１０回）をして溶菌した。
この大腸菌により産生されたタンパク質を、ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）に供した後、ポリフッ化ビニリデン膜にトランスファーした。その後、一次抗体に抗ラビットＳＥＬＰ８Ｋ抗体、２次抗体に抗ラビットＩｇＧ ＨＲＰ標識抗体（ＧＥヘルスケア社製）を用いたウエスタンブロット分析を行なった。該生成物の見かけ分子質量は約８０ｋＤａであった。よってＳＥＬＰ８Ｋ生産株は、見かけ分子質量８０，０００の抗ラビットＳＥＬＰ８Ｋ抗体反応性を有するＳＥＬＰ８Ｋを生成したことが分かった。
【００８３】
○ＳＥＬＰ８Ｋ精製
上記で得たＳＥＬＰ８Ｋを、菌体溶解、遠心分離による不溶性細片の除去、及びアフィニティークロマトグラフィーにより大腸菌バイオマスから精製した。このようにして、分子質量が約８０ｋＤａのタンパク質（Ｚ）であるＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ｚ−１）を得た。
【００８４】
○ＳＥＬＰ８Ｋの同定
得られたＳＥＬＰ８Ｋ（Ｚ−１）を下記の手順で同定した。
抗ラビットＳＥＬＰ８Ｋ抗体及びＣ末端配列の６×Ｈｉｓタグに対する抗ラビット６×Ｈｉｓ抗体（Ｒｏｌａｎｄ社製）を用いたウエスタンブロットにより分析した。見かけ分子質量８０，０００のタンパク質バンドが、各抗体に抗体反応性を示した。また得られたタンパク質をアミノ分析供した結果、該生成物が、グリシン（４３．７％）、アラニン（１２．３％）、セリン（５．３％）、プロリン（１１．７％）及びバリン（２１．２％）に富むものであった。また、該生成物はリシンを１．５％含んでいた。下記の表１は、精製された生成物の組成と、合成遺伝子配列から推測された予測理論組成との相関関係を示す。
したがって、ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ｚ−１）はＧＶＧＶＰ配列（３）が８個連続したポリペプチド鎖（Ｙ）であり、（Ｙ）中のＶのうち１個がＫに置換された（ＧＶＧＶＰ）4ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）3配列（８）を１３個及びＧＡＧＡＧＳ配列（１）が４個連続した（ＧＡＧＡＧＳ）4配列（９）のポリペプチド鎖（Ｙ）を１２個有し、これらが交互に化学結合してなる配列（１１）のタンパク質であることを確認した。
【００８５】
【表１】
2013176547.tif 000002
【００８６】
＜製造例２＞
○タンパク質（Ａ１−１）（プロネクチンＦプラス）の合成
特表平３−５０２９３５号公報中の実施例記載の方法に準じて、ＲＧＤ配列の１３個と（ＧＡＧＡＧＳ）9配列（５３）の１２個とを有し、これらが交互に位置する構造を有するＭｎ約１１万の配列（５４）のポリペプチド（プロネクチンＦ）を遺伝子組換え大腸菌により製造し、タンパク質（Ａ１）を得た。
タンパク質（Ａ１）５０ｍｇと塩酸Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルクロリド（特級試薬）１５０ｍｇとを４．５Ｍ過塩素酸リチウム水溶液１．５ｍＬに２０〜４０℃で溶解した後、その溶液を２０〜４０℃で攪拌しながら、水酸化ナトリウム（特級試薬）１００ｍｇを溶解した４．５Ｍ過塩素酸リチウム水溶液１．３２５ｍＬを４５〜５０秒間かけて一定速度で滴下し仕込んだ。室温（２５℃）で１時間攪拌したのち、反応液を分画分子質量１２，０００〜１４，０００の透析膜を用いて、脱イオン水１０Ｌに対して４８時間透析した。なお、最初の１２時間は、4時間経過毎に脱イオン水を交換した。得られた水溶液を、−２０℃、０．１ｋＰａ以下の条件で、２４時間凍結乾燥して、水溶性のタンパク質（Ａ１−１）を得た。導入された塩酸Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルクロリドの数は、特表平１０−５００７０１公報中の実施例記載の方法に準じて、測定した結果、１分子中に１２個であった。
【００８７】
＜製造例３＞
製造例１において、「ＳＥＬＰ８ＫをコードしたプラスミドｐＰＴ０３４５」に変えて、「ＳＥＬＰ０ＫをコードしたプラスミドｐＰＴ０３６４」を用いる以外は同様にして、分子質量が約８２ｋＤａの配列（１２）のＳＥＬＰ０Ｋタンパク質（Ｚ−２）を得た。
【００８８】
＜製造例４＞
製造例１において、「ＳＥＬＰ８ＫをコードしたプラスミドｐＰＴ０３４５」に変えて、「ＥＬＰ１．１をコードしたプラスミドｐＰＴ０１０２−１」を用いる以外は同様にして、分子質量が約２２０ｋＤａの配列（２８）のＥＬＰ１．１タンパク質（Ｚ−３）を得た。
【００８９】
＜製造例５＞
製造例１において、「ＳＥＬＰ８ＫをコードしたプラスミドｐＰＴ０３４５」に変えて、「ＳＬＰ４．１をコードしたｐＳＹ１３９８−１」を用いる以外は同様にして、分子質量が約９３ｋＤａの配列（２５）のＳＬＰ４．１タンパク質（Ｚ−４）を得た。
【００９０】
＜製造例６＞
製造例１において、「ＳＥＬＰ８ＫをコードしたプラスミドｐＰＴ０３４５」に変えて、「ＥＬＰ１をコードしたプラスミドｐＰＴ０１０２」を用いる以外は同様にして、分子質量が約６５ｋＤａの配列（２７）のＥＬＰ１タンパク質（Ｚ−５）を得た。
【００９１】
＜製造例７＞
製造例１において、「ＳＥＬＰ８ＫをコードしたプラスミドｐＰＴ０３４５」に変えて、「ＳＬＰ４．２をコードしたｐＳＹ１３９８−２」を用いる以外は同様にして、分子質量が約７３ｋＤａの配列（２６）のＳＬＰ４．２タンパク質（Ｚ−６）を得た。
【００９２】
＜製造例８＞
製造例１において、「ＳＥＬＰ８ＫをコードしたプラスミドｐＰＴ０３４５」に変えて、「ＳＬＰ４をコードしたｐＳＹ１３９８」を用いる以外は同様にして、分子質量が約７０ｋＤａの配列（６０）のＳＬＰ４タンパク質（Ｚ’−１）を得た。
【００９３】
＜製造例９＞
製造例１において、「ＳＥＬＰ８ＫをコードしたプラスミドｐＰＴ０３４５」に変えて、「ＣＬＰ３．７をコードしたｐＰＴ０３１２」を用いる以外は同様にして、分子質量が約６６ｋＤａの配列（６１）のＣＬＰ３．７タンパク質（Ｚ’−２）を得た。
【００９４】
＜製造例１０＞
製造例１において、「ＳＥＬＰ８ＫをコードしたプラスミドｐＰＴ０３４５」に変えて、「ＤＣＰ２をコードしたプラスミドｐＰＴ０１６１」を用いる以外は同様にして、分子質量が約８０ｋＤａの配列（６２）のＤＣＰ２タンパク質（Ｚ’−３）を得た。
【００９５】
＜製造例１１＞
製造例１において、「ＳＥＬＰ８ＫをコードしたプラスミドｐＰＴ０３４５」に変えて、「ＥＬＰ１．２をコードしたプラスミドｐＰＴ０１０２−２」を用いる以外は同様にして、分子質量が約３７ｋＤａの配列（６３）のＥＬＰ１．２タンパク質（Ｚ’−４）を得た。
【００９６】
＜細胞接着率の測定＞
脱イオン水１ｍＬに、タンパク質（Ｚ−１）〜（Ｚ−６）及び（Ａ１−１）をそれぞれ１ｍｇ溶解し、さらに、０．０２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．２、純度９９．５重量％塩化ナトリウムを０．８５重量％含有するＰＢＳ）で希釈して、１０μｇ／ｍＬのタンパク質水溶液を作成した。この水溶液を、９６穴のポリスチレンプレート（日本ベクトン・ディッキンソン株式会社）に５０μＬ／穴で加え、２５℃で２時間静置した。
２時間静置後、アスピレーターを用いて溶媒を除去し、生理食塩水（０．９重量／容量％  塩化ナトリウム水溶液）１００μＬ／穴で２回洗浄し、さらに脱イオン水１００μＬ／穴で洗浄し、基材（Ｋ１）〜（Ｋ７）を作成した。
Ｍｉｃｒｏ  ＢＣＡTM  ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｓｓａｙ  ｋｉｔ（ＴＨＥＲＭＯ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）付属のＲｅａｇｅｎｔＡ溶液：ＲｅａｇｅｎｔＢ溶液：ＲｅａｇｅｎｔＣ溶液＝２５：２４：１の混合液（Ｃ）を作成した。基材（Ｋ１）〜（Ｋ７）に、混合液（Ｃ）を１００μＬ／穴加え、３７℃で２時間静置した。
静置２時間後に、ビシンコニン酸（ＢＣＡ）とＣｕ+のキレート生成量を、４５０ｎｍ（対照波長６３０ｎｍ）の吸光度でプレートリーダー（コロナ電気株式会社製ＭＴＰ−３２）を用いて室温で測定した。さらに、あらかじめウシ血清アルブミンにより作成した検量線からコーティング量を得たところ、基材の表面１ｃｍ2当たりのタンパク質の量は全て０．１μｇであった。
作成した基材（Ｋ１）〜（Ｋ７）に、血清を含まないＤＭＥＭ培地（ＩＣＮ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ社製）を５０μＬ／穴で添加し、３７℃インキュベーター内に１時間保存した。１時間後、マウス歯肉上皮細胞を１万ｃｅｌｌｓ／５０μＬ／穴で添加し、３７℃、二酸化炭素濃度５容量％のインキュベーター中で２時間放置して培養した。
培養終了後、アスピレーターを用いて培地を除去し、生理食塩水を細胞に直接当たらないように注意しながら１００μＬ／穴で添加し、アスピレーターを用いて生理食塩水を除去する。次にＰＢＳを５０μＬ／穴で添加し、さらにテトラカラーワン（生化学工業株式会社）を１０μＬ／穴で添加して、３７℃、二酸化炭素濃度５容量％のインキュベーター中に４時間放置した。
４時間後に、ホルマザン生成量を、４５０ｎｍ（参照波長６３０ｎｍ）の吸光度でプレートリーダー（コロナ電気株式会社製ＭＴＰ−３２）を用いて測定した。接着した細胞数は、吸光度の高さに比例するので、接着した細胞数はあらかじめ作成しておいた検量線から算出した。細胞接着率は、接着した細胞数と播種した細胞数から、下記式によって算出した。結果を表２に示す。
細胞接着率（％）＝接着した細胞数／播種した細胞数×１００
【００９７】
【表２】
2013176547.tif 000003
【００９８】
＜実施例１〜６＞
プラスティックチューブ容器中に、製造例１、３〜７で得たタンパク質（Ｚ−１）〜（Ｚ−６）を２０ｍｇ、８０μＬの４℃のリン酸緩衝液（ＰＢＳ）にそれぞれ溶解し、さらにそれぞれにタンパク質（Ａ１−１）０．２ｍｇを溶解し、タンパク質溶液（Ｂ１）〜（Ｂ６）を作製した。
【００９９】
＜比較例１〜４＞
プラスティックチューブ容器中に、製造例８〜１１で得たタンパク質（Ｚ’−１）〜（Ｚ’−４）を２０ｍｇ、８０μＬの４℃のリン酸緩衝液（ＰＢＳ）にそれぞれ溶解し、さらにそれぞれにタンパク質（Ａ１−１）０．２ｍｇを溶解し、タンパク質溶液（Ｂ７）〜（Ｂ１０）を作製した。
【０１００】
＜タンパク質溶液のゲル化能評価＞
タンパク質溶液（Ｂ１）〜（Ｂ１０）を３７℃で静置し、２時間後、４時間後に、ゲル化したかを確認した。ゲル化したかの確認は、タンパク質溶液（１００μＬ）が入ったプラスティックチューブ容器（エッペンドルフチューブ、１．５ｍＬ）を転倒し、溶液が垂れない場合はゲル化しているとし、溶液が垂れる場合はゲル化しないと判断した。結果を表３に示す。なお、表中、タンパク質溶液がゲル化したものを○、ゲル化しなかったものを×とした。
【０１０１】
【表３】
2013176547.tif 000004
【０１０２】
表３の結果から、ポリペプチド鎖（Ｙ）や（Ｙ’）を有しておらず疎水性度が０．２〜１．２の範囲外であるタンパク質（Ｚ’−１）〜（Ｚ’−３）及びポリペプチド鎖（Ｙ）を有しているものの疎水性度が上記範囲外であるタンパク質（Ｚ’−４）を含むタンパク質溶液（Ｂ７）〜（Ｂ１０）は、ゲル化しないことが分かる。
一方、ポリペプチド鎖（Ｙ）及び／又はポリペプチド鎖（Ｙ’）を有し、疎水性度が０．２〜１．２であるタンパク質（Ｚ−１）〜（Ｚ−６）を含むタンパク質溶液（Ｂ１）〜（Ｂ６）は、ゲル化することが分かる。したがって、創傷部に充填し、創傷部を被覆・封鎖することができることがわかる。特に、タンパク質（Ｚ−１）又は（Ｚ−２）を含むタンパク質溶液（Ｂ１）及び（Ｂ２）は、２時間後にはゲル化しており、創傷部をより早く被覆・封鎖するのに有効であることがわかる。
【０１０３】
＜実施例７〜１２＞
○タンパク質溶液の作製
ＳＥＬＰ８Ｋ（Ｚ−１）及びタンパク質（Ａ１−１）を表４の割合で、４℃のリン酸緩衝液（ＰＢＳ）に溶解し、タンパク質溶液（１）〜（６）を作製した。
【０１０４】
＜比較例５〜８＞
表４の割合で、それぞれの成分を混合し、タンパク質溶液（７）〜（１０）を作製した。
【０１０５】
＜比較例９＞
イントラサイトゲル（スミスアンドネフュー社製）２００ｍｇ及びタンパク質（Ａ１−１）２ｍｇを７９８μＬの４℃のＰＢＳに溶解し、ゲル溶物（１１）を作製した。
【０１０６】
＜比較例１０＞
グラニュゲル（コンバテック社製）２００ｍｇ及びタンパク質（Ａ１−１）２ｍｇを７９８μＬの４℃のＰＢＳに溶解し、ゲル溶物（１２）を得た。
【０１０７】
【表４】
2013176547.tif 000005
【０１０８】
＜実施例１３〜１８＞
ＳＥＬＰ０Ｋ（Ｚ−５）及びタンパク質（Ａ１−１）を表５の割合で、４℃のＰＢＳに溶解し、タンパク質溶液（１３）〜（１８）を作製した。
【０１０９】
＜比較例１１〜１３＞
ＳＥＬＰ０Ｋ（Ｚ−５）及びタンパク質（Ａ１−１）を表５の割合で、４℃のＰＢＳに溶解し、タンパク質溶液（１９）〜（２１）を作製した。
【０１１０】
【表５】
2013176547.tif 000006
【０１１１】
＜実施例１９〜２２＞
ＥＬＰ１（Ｚ−５）及びタンパク質（Ａ１−１）を表６の割合で、４℃のＰＢＳに溶解し、タンパク質溶液（２２）〜（２５）を作製した。
【０１１２】
＜比較例１４〜１６＞
ＥＬＰ１（Ｚ−５）及びタンパク質（Ａ１−１）を表６の割合で、４℃のＰＢＳに溶解し、タンパク質溶液（２６）〜（２８）を作製した。
【０１１３】
【表６】
2013176547.tif 000007
【０１１４】
＜評価＞
（健常モルモットを用いた全層欠損層モデルでの治療試験）
健常モルモット♀  ｓｔｄ  Ｈａｒｔｌｅｙ（日本エスエルシー社製）７週齢を麻酔下で除毛し、消毒したモルモット背部皮膚に脂肪層が完全に露出した創面１０×１０ｍｍの全層皮膚欠損創を作製し、止血、乾燥した後、実施例７〜１２及び比較例５〜１０で得たタンパク質溶液（１）〜（１０）、（１３）〜（２８）及びゲル溶物（１１）〜（１２）をそれぞれ８０μＬ注入し、ポリウレタンフィルムを貼付した。その後、各創傷部の上にガーゼのせて、ナイロン糸で創傷部周囲と固定した。タンパク質溶液（１）〜（９）及び（１３）〜（２８）は、創に注入してから４時間後には全てゲル化していた。治療期間１０日目に検体を擬死させ、創傷部を含む皮膚を採取し、病理標本（ＨＥ染色）を作製した。
治療期間１０日目の病理標本を用いて、正常組織から伸長した上皮化長をマイクロルーラー（株式会社テックジャム製、品名顕微鏡用マイクロルーラー）を使用して測定した。結果を表４〜６に示す。
【０１１５】
表４の評価結果から、タンパク質（Ａ１−１）のみを用いた比較例８は、上皮化長が１．１ｍｍと短く、（Ａ１−１）のみでは創閉鎖時間短縮効果が低かった。また、タンパク質（Ａ１−１）とグラニュゲル又はイントラサイトゲルとを混合した比較例９及び１０でも、上皮化長は０．７〜０．８ｍｍと短く、創閉鎖時間短縮効果が低かった。したがって、ポリペプチド鎖（Ｙ）や（Ｙ’）を有していないゲル化物と（Ａ１−１）を混合しただけでは創閉鎖時間短縮効果が低いことが分かる。
また、タンパク質（Ｚ−１）のみを用いた比較例７の組織再生用材料は、上皮化に一定の効果はあるものの、本発明の実施例７〜１２より短かった。また、（Ｚ−１）と（Ａ１−１）との重量比が４００／１〜１０／１の範囲外である比較例５及び６の組織再生用材料を用いた場合は、比較例７と比較して、上皮化長が同等程度又はそれ以下であった。
一方、（Ｚ−１）と（Ａ１−１）との重量比が４００／１〜１０／１の範囲内である実施例７〜１２の組織再生用材料を用いた場合は、上皮化長が４．３ｍｍ以上であり、（Ｚ−１）のみを用いた場合よりも上皮化促進効果が高く、創閉鎖時間を短縮できることがわかる。特に、（Ｚ−１）と（Ａ１−１）との重量比が４００／１〜５０／１である実施例７〜１０は、上皮化長が５．０ｍｍ以上と長く、上皮化促進効果が極めて高いので、創閉鎖時間を非常に短縮できることがわかる。
同様に、表５及び表６の評価結果から、（Ｚ−２）又は（Ｚ−５）を用いた場合も（Ｚ−１）の場合と同様に、（Ｚ−２）又は（Ｚ−５）と（Ａ１−１）との重量比が４００／１〜１０／１の範囲外である比較例１１〜１４の組織再生用材料を用いた場合は、比較例７と比較して、上皮化長が同等程度又はそれ以下であった。
一方、（Ｚ−２）又は（Ｚ−５）と（Ａ１−１）との重量比が４００／１〜１０／１の範囲内である実施例１３〜２２の組織再生用材料を用いた場合は、上皮化長が５．１ｍｍ以上であり、（Ｚ−２）又は（Ｚ−５）のみを用いた場合よりも上皮化促進効果が高く、創閉鎖時間を短縮できることがわかる。
【産業上の利用可能性】
【０１１６】
本発明の組織再生用材料は、上皮化促進作用に優れ、創閉鎖時間が短く、生分解性が高い。したがって、熱傷、採皮創、皮膚剥削創及び外傷性皮膚欠損創等の疾患ないし創傷による患部を保護する創傷被覆材としてだけでなく、上皮化を促進する組織再生用材料として有効である。
【配列表】
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