(57)【要約】【課題】ｃｙｓＬＴ２受容体が関与する呼吸器疾患モデル、特にｃｙｓＬＴ１受容体及びｃｙｓＬＴ２受容体が共に関与する呼吸器疾患モデルの提供。【解決手段】予め抗原感作されていてもよいモルモットであって、γグルタミルトランスペプチダーゼの基質競合阻害剤による前処置後、ロイコトリエンＣ４または抗原の投与によりｃｙｓＬＴ２受容体が関与する呼吸器疾患を発症してなるモルモットを提供する。本発明は、ｃｙｓＬＴ２受容体が関与する呼吸器疾患（例えば、喘息やアレルギー性鼻炎等）の治療に極めて有用であると考えられているｃｙｓＬＴ２受容体拮抗薬またはｃｙｓＬＴ１／ＬＴ２受容体デュアル拮抗薬のｉｎ  ｖｉｖｏでの薬効を評価することができるモルモット呼吸器疾患モデルを提供するものであり、新規の医薬品を創出するための薬効評価に有用である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
予め抗原感作されていてもよいモルモットであって、γグルタミルトランスペプチダーゼの基質競合阻害剤による前処置後、ロイコトリエンＣ４または抗原の投与によりｃｙｓＬＴ２受容体が関与する呼吸器疾患を発症してなるモルモット。
【請求項２】
γグルタミルトランスペプチダーゼの基質競合阻害剤が、グルタチオンまたはＳ−ヘキシルグルタチオンである請求項１に記載のモルモット。
【請求項３】
ｃｙｓＬＴ２受容体が関与する呼吸器疾患が、ｃｙｓＬＴ１受容体とｃｙｓＬＴ２受容体が共に関与する呼吸器疾患である請求項１または請求項２に記載のモルモット。
【請求項４】
ｃｙｓＬＴ２受容体が関与する呼吸器疾患が、喘息またはアレルギー性鼻炎である請求項１から請求項３のいずれか一項に記載のモルモット。
【請求項５】
ｃｙｓＬＴ２受容体が関与する呼吸器疾患が、喘息である請求項４に記載のモルモット。
【請求項６】
予め抗原感作されていてもよいモルモットであって、下記工程（ｉ）〜（ｉｉｉ）：
（ｉ）１０ｍｇ／ｋｇ以上のＳ−ヘキシルグルタチオンを静脈内投与で前処置後２μｇ／ｋｇ以上１５μｇ／ｋｇ以下のロイコトリエンＣ４を投与される工程、
（ｉｉ）２．５ｍｇ／ｋｇ以上のＳ−ヘキシルグルタチオンを静脈内投与で前処置後０．２ｍｇ／ｋｇ以上０．６ｍｇ／ｋｇ以下の卵白アルブミンを投与される工程、または
（ｉｉｉ）５ｍｇ／ｋｇ以上のＳ−ヘキシルグルタチオンを静脈内投与で前処置後０．６ｍｇ／ｋｇを超え１．２ｍｇ／ｋｇ以下の卵白アルブミンを投与される工程、
のいずれかの工程を経てｃｙｓＬＴ２受容体が関与する喘息を発症してなる請求項５に記載のモルモット。
【請求項７】
予め抗原感作されていてもよいモルモットであって、下記工程（ｉ）〜（ｉｖ）：
（ｉ）１０ｍｇ／ｋｇ以上１５ｍｇ／ｋｇ以下のＳ−ヘキシルグルタチオンを静脈内投与で前処置後１０μｇ／ｋｇ以上１５μｇ／ｋｇ未満のロイコトリエンＣ４を投与される工程、
（ｉｉ）１０ｍｇ／ｋｇ以上３０ｍｇ／ｋｇ以下のＳ−ヘキシルグルタチオンを静脈内投与で前処置後１５μｇ／ｋｇのロイコトリエンＣ４を投与される工程、
（ｉｉｉ）２．５ｍｇ／ｋｇ以上１５ｍｇ／ｋｇ以下のＳ−ヘキシルグルタチオンを静脈内投与で前処置後０．２ｍｇ／ｋｇ以上０．６ｍｇ／ｋｇ以下の卵白アルブミンを投与される工程、または
（ｉｖ）５ｍｇ／ｋｇのＳ−ヘキシルグルタチオンを静脈内投与で前処置後０．６ｍｇ／ｋｇを超え１．２ｍｇ／ｋｇ以下の卵白アルブミンを投与される工程、
のいずれかの工程を経てｃｙｓＬＴ１受容体とｃｙｓＬＴ２受容体が共に関与する喘息を発症してなる請求項５に記載のモルモット。
【請求項８】
請求項５から請求項７のいずれか一項に記載のモルモットを用いて、被験物質の喘息に対する効果を、気道収縮、喘息発作、気道血管透過性及び／または気道過敏に対する効果で評価することを特徴とする、ｃｙｓＬＴ２受容体に拮抗作用を示す化合物の薬効評価及び／またはスクリーニング方法。
【請求項９】
予め抗原感作されていてもよいモルモットに、１０ｍｇ／ｋｇ以上のＳ−ヘキシルグルタチオンを静脈内投与で前処置後１０μｇ／ｋｇ以上１５μｇ／ｋｇ以下のロイコトリエンＣ４または０．２ｍｇ／ｋｇ以上０．６ｍｇ／ｋｇ以下の卵白アルブミンを投与することでｃｙｓＬＴ２受容体が関与する喘息を発症させたモルモットを用いて、被験物質の喘息に対する効果を気道収縮に対する効果で評価することを特徴とする、請求項８に記載の薬効評価及び／またはスクリーニング方法。
【請求項１０】
予め抗原感作されていてもよいモルモットに、下記工程（ｉ）〜（ｉｉｉ）：
（ｉ）１０ｍｇ／ｋｇ以上１５ｍｇ／ｋｇ以下のＳ−ヘキシルグルタチオンを静脈内投与で前処置後１０μｇ／ｋｇ以上１５μｇ／ｋｇ未満のロイコトリエンＣ４または０．２ｍｇ／ｋｇの卵白アルブミンを投与する工程、
（ｉｉ）１０ｍｇ／ｋｇ以上３０ｍｇ／ｋｇ以下のＳ−ヘキシルグルタチオンを静脈内投与で前処置後１５μｇ／ｋｇのロイコトリエンＣ４を投与する工程、または
（ｉｉｉ）１０ｍｇ／ｋｇのＳ−ヘキシルグルタチオンを静脈内投与で前処置後０．２ｍｇ／ｋｇを超え０．６ｍｇ／ｋｇ以下の卵白アルブミンを投与する工程、
のいずれかの工程を付すことでｃｙｓＬＴ１受容体とｃｙｓＬＴ２受容体が共に関与する喘息を発症させたモルモットを用いて、被験物質の喘息に対する効果を気道収縮に対する効果で評価することを特徴とする、請求項８に記載の薬効評価及び／またはスクリーニング方法。
【請求項１１】
予め抗原感作されていてもよいモルモットに、２.５ｍｇ／ｋｇ以上のＳ−ヘキシルグルタチオンを静脈内投与で前処置後０．６ｍｇ／ｋｇの卵白アルブミンを投与するか、または５ｍｇ／ｋｇ以上のＳ−ヘキシルグルタチオンを静脈内投与で前処置後０．６ｍｇ／ｋｇを超え１．２ｍｇ／ｋｇ以下の卵白アルブミンを投与することでｃｙｓＬＴ２受容体が関与する喘息を発症させたモルモットを用いて、被験物質の喘息に対する効果を喘息発作に対する効果で評価することを特徴とする、請求項８に記載の薬効評価及び／またはスクリーニング方法。
【請求項１２】
予め抗原感作されていてもよいモルモットに、２.５ｍｇ／ｋｇ以上１５ｍｇ／ｋｇ以下のＳ−ヘキシルグルタチオンを静脈内投与で前処置後０．６ｍｇ／ｋｇの卵白アルブミンを投与するか、または５ｍｇ／ｋｇのＳ−ヘキシルグルタチオンを静脈内投与で前処置後０．６ｍｇ／ｋｇを超え１．２ｍｇ／ｋｇ以下の卵白アルブミンを投与することでｃｙｓＬＴ１受容体とｃｙｓＬＴ２受容体が共に関与する喘息を発症させたモルモットを用いて、被験物質の喘息に対する効果を喘息発作に対する効果で評価することを特徴とする、請求項８に記載の薬効評価及び／またはスクリーニング方法。
【請求項１３】
予め抗原感作されていてもよいモルモットに、５ｍｇ／ｋｇ以上のＳ−ヘキシルグルタチオンを静脈内投与で前処置後０．６ｍｇ／ｋｇ以上１．２ｍｇ／ｋｇ以下の卵白アルブミンを投与することでｃｙｓＬＴ２受容体が関与する喘息を発症させたモルモットを用いて、被験物質の喘息に対する効果を気道血管透過性に対する効果で評価することを特徴とする、請求項８に記載の薬効評価及び／またはスクリーニング方法。
【請求項１４】
予め抗原感作されていてもよいモルモットに、５ｍｇ／ｋｇ以上７．５ｍｇ／ｋｇ以下のＳ−ヘキシルグルタチオンを静脈内投与で前処置後０．６ｍｇ／ｋｇの卵白アルブミンを投与するか、または５ｍｇ／ｋｇのＳ−ヘキシルグルタチオンを静脈内投与で前処置後０．６ｍｇ／ｋｇを超え１．２ｍｇ／ｋｇ以下の卵白アルブミンを投与することでｃｙｓＬＴ１受容体とｃｙｓＬＴ２受容体が共に関与する喘息を発症させたモルモットを用いて、被験物質の喘息に対する効果を気道血管透過性に対する効果で評価することを特徴とする、請求項８に記載の薬効評価及び／またはスクリーニング方法。
【請求項１５】
ｃｙｓＬＴ１受容体とｃｙｓＬＴ２受容体の両受容体に拮抗作用を示す化合物の薬効評価及び／またはスクリーニング方法である請求項８から請求項１４のいずれか一項に記載の薬効評価及び／またはスクリーニング方法。
【請求項１６】
ｉｎ  ｖｉｖｏでｃｙｓＬＴ２受容体に拮抗作用を示す化合物を選別するための請求項１記載のモルモットの使用。
【請求項１７】
ｉｎ  ｖｉｖｏでｃｙｓＬＴ２受容体に拮抗作用を示す化合物がｃｙｓＬＴ１受容体にも拮抗作用を示す化合物である請求項１６記載の使用。
【請求項１８】
ｃｙｓＬＴ２受容体が関与する呼吸器疾患が、アレルギー性鼻炎である請求項４に記載のモルモット。
【請求項１９】
予め抗原感作されていてもよいモルモットであって、５ｍｇ／ｋｇ以上のＳ−ヘキシルＧＳＨを静脈内投与で前処置後２ｍｇ／ｋｇの卵白アルブミンを投与される工程を経てｃｙｓＬＴ２受容体が関与するアレルギー性鼻炎を発症してなる請求項１８に記載のモルモット。
【請求項２０】
予め抗原感作されていてもよいモルモットであって、５ｍｇ／ｋｇ以上１５ｍｇ／ｋｇ以下のＳ−ヘキシルＧＳＨを静脈内投与で前処置後２ｍｇ／ｋｇの卵白アルブミンを投与される工程を経てｃｙｓＬＴ１受容体とｃｙｓＬＴ２受容体が共に関与するアレルギー性鼻炎を発症してなる請求項１８に記載のモルモット。
【請求項２１】
請求項１８から請求項２０のいずれか一項に記載のモルモットを用いて、被験物質のアレルギー性鼻炎に対する効果を、鼻腔抵抗、炎症性細胞浸潤及び／または鼻汁に対する効果で評価することを特徴とする、ｃｙｓＬＴ２受容体に拮抗作用を示す化合物の薬効評価及び／またはスクリーニング方法。
【請求項２２】
ｃｙｓＬＴ１受容体とｃｙｓＬＴ２受容体の両受容体に拮抗作用を示す化合物の薬効評価及び／またはスクリーニング方法である請求項２１に記載の薬効評価及び／またはスクリーニング方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ｃｙｓＬＴ２受容体が関与するモルモット呼吸器疾患モデル、及びそのモデルを用いたｃｙｓＬＴ２受容体に拮抗作用を示す化合物の薬効評価及び／またはスクリーニング方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
システニイルロイコトリエン（以下、ｃｙｓＬＴｓと略記することがある。）はアラキドン酸の５−リポキシゲナーゼ代謝産物である生体内の生理活性物質である。ｃｙｓＬＴｓには少なくとも２種類の受容体が存在し、これまでにｃｙｓＬＴ１受容体とｃｙｓＬＴ２受容体がクローニングされている（Ｎａｔｕｒｅ，３９９，７８９−７９３，１９９９、Ｊ．Ｂｉｏｌ．，Ｃｈｅｍ．，２７５，３０５３１−３０５３６，２０００）。ｃｙｓＬＴ１受容体は主に気道平滑筋に発現しており、気管支喘息の発症に深く関わっている（Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．，１６３，２２６−２３３，２００１）。一方、ｃｙｓＬＴ２受容体はｃｙｓＬＴ１受容体と同様にロイコトリエンＣ４、ロイコトリエンＤ４及びロイコトリエンＥ４（以下、それぞれ、ＬＴＣ４、ＬＴＤ４、ＬＴＥ４と略記することがある。）をリガンドとし、気道平滑筋に発現していることが報告されており、ｃｙｓＬＴ１受容体のみならずｃｙｓＬＴ２受容体も気管支喘息の病態に関与している可能性が示唆されている（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７５，３０５３１−３０５３６，２０００、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．，１６４，２０９８−２１０１，２００１、Ｃｕｒｒ．Ａｌｌｅｒｇｙ．Ａｓｔｈｍａ．Ｒｅｐ．，８，３６７−３７３，２００８）。
【０００３】
プランルカスト水和物、モンテルカストナトリウム及びザフィルルカストは、現在上市されているｃｙｓＬＴ１受容体選択的拮抗薬であり、経口気管支喘息治療薬及び／または経口アレルギー性鼻炎治療薬等として用いられている。
【０００４】
しかしながら、これらのｃｙｓＬＴ１受容体選択的拮抗薬は重症よりも軽症及び中等症の気管支喘息により奏効すること、また軽症及び中等症の中でも薬剤の有効性を十分に示さない非奏効例が存在することが知られている。従って、これらｃｙｓＬＴ１受容体選択的拮抗薬の活性を上回る可能性を有する、ｃｙｓＬＴ１／ＬＴ２受容体デュアル拮抗薬の開発が望まれている。
【０００５】
ｃｙｓＬＴ１／ＬＴ２受容体デュアル拮抗薬を開発する上で、その薬効の評価に適した動物モデルが不可欠である。
【０００６】
これまでに、ＬＴＤ４または抗原によるモルモット喘息モデルや抗原によるモルモットアレルギー性鼻炎モデルが報告されており、ｃｙｓＬＴ１受容体選択的拮抗薬であるモンテルカストの薬効評価に使用されている（非特許文献１参照）。しかしながら、ｃｙｓＬＴ２受容体拮抗薬の薬効を評価した動物モデルの報告は、一切ない。
【０００７】
一方、非特許文献２には、モルモットの摘出気管筋にγグルタミルトランスペプチダーゼの阻害剤を前処置することによって、ＬＴＣ４による気管筋収縮がｃｙｓＬＴ１受容体拮抗薬では抑制されなかったのに対し、ｃｙｓＬＴ１／ＬＴ２受容体デュアル拮抗薬で抑制されたことが報告されている。しかしながら、本文献には、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ（摘出気管筋）におけるｃｙｓＬＴ１／ＬＴ２受容体デュアル拮抗薬の評価方法が記載されているものの、ｃｙｓＬＴ１／ＬＴ２受容体デュアル拮抗薬またはｃｙｓＬＴ２受容体拮抗薬のｉｎ  ｖｉｖｏでの薬効を評価するための動物モデルについては記載も示唆もない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】シングレア（登録商標）錠５ｍｇ医薬品インタビューフォーム、２０１１年６月改訂（改訂第２５版）２３〜２４頁
【非特許文献２】ブリティッシュ・ジャーナル・オブ・ファーマコロジー（Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ）１３３巻、１１３４〜１１４４頁（２００１年）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
これまで、ｃｙｓＬＴ２受容体の関与を評価できる呼吸器疾患（例えば、喘息やアレルギー性鼻炎）モデルが存在しなかったため、ｃｙｓＬＴ２受容体拮抗薬またはｃｙｓＬＴ１／ＬＴ２受容体デュアル拮抗薬のｉｎ  ｖｉｖｏでの薬効を評価できなかった。
【００１０】
本発明の課題は、ｃｙｓＬＴ２受容体が関与する呼吸器疾患モデル、特にｃｙｓＬＴ１受容体及びｃｙｓＬＴ２受容体が共に関与する呼吸器疾患モデルの提供である。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意検討した。
【００１２】
まず、ＬＴＣ４または抗原（例えば、卵白アルブミン（以下、ＯＶＡと略記することがある。））を投与したモルモット喘息モデルまたはモルモットアレルギー性鼻炎モデルを作成し、ｃｙｓＬＴ２受容体の関与を検討したが、これらのモデルでｃｙｓＬＴ２受容体選択的拮抗薬は効果を示さなかった。そこで、ＬＴＣ４または抗原の投与前に、種々のグルタミルトランスペプチダーゼ（以下、γＧＴと略記することがある。）の阻害剤を前処置したところ、γＧＴの阻害剤の中で、基質競合阻害剤であるグルタチオン（以下、ＧＳＨと略記することがある。）またはＳ−ヘキシルグルタチオン（以下、Ｓ−ヘキシルＧＳＨと略記することがある。）を前処置した場合に、ｃｙｓＬＴ２受容体が関与するモルモット呼吸器疾患モデル（喘息モデル及びアレルギー性鼻炎モデル）を構築することができた。一方で、驚くべきことに、γＧＴの遷移状態阻害剤であるセリンホウ酸（Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，  ７５，  ４８０６−４８０９，  １９７８）や不可逆阻害剤であるアシビシン（ｃａｎｃｅｒ  ｒｅｓｅａｃｈ，５４，５９２５−５９２９，１９９４）ではｃｙｓＬＴ２受容体が関与する呼吸器疾患モデルは構築できなかった。このことから、ｃｙｓＬＴ２受容体が関与する呼吸器疾患モデルの構築には、γＧＴ阻害剤の中でも、基質競合阻害剤の使用が不可欠であることが明らかとなった。
【００１３】
本発明者らは、さらに検討を進め、ｃｙｓＬＴ１受容体とｃｙｓＬＴ２受容体が共に関与するモルモット呼吸器疾患モデル（喘息モデル及びアレルギー性鼻炎モデル）を見出した。
【００１４】
また、本発明者らは、本発明のモデルを用いて、ｃｙｓＬＴ２受容体に拮抗作用を示す化合物のｉｎ  ｖｉｖｏでの薬効評価及び／またはスクリーニング方法を見出し、本発明を完成させた。
【００１５】
すなわち、本発明は、
（１）  予め抗原感作されていてもよいモルモットであって、γＧＴの基質競合阻害剤による前処置後、ＬＴＣ４または抗原の投与によりｃｙｓＬＴ２受容体が関与する呼吸器疾患を発症してなるモルモット、
（２）  γＧＴの基質競合阻害剤が、ＧＳＨまたはＳ−ヘキシルＧＳＨである前記（１）に記載のモルモット、
（３）  ｃｙｓＬＴ２受容体が関与する呼吸器疾患が、ｃｙｓＬＴ１受容体とｃｙｓＬＴ２受容体が共に関与する呼吸器疾患である前記（１）または前記（２）に記載のモルモット、
（４）  ｃｙｓＬＴ２受容体が関与する呼吸器疾患が、喘息またはアレルギー性鼻炎である前記（１）から前記（３）のいずれかに記載のモルモット、
（５）  ｃｙｓＬＴ２受容体が関与する呼吸器疾患が、喘息である前記（４）に記載のモルモット、
（６）  予め抗原感作されていてもよいモルモットであって、下記工程（ｉ）〜（ｉｉｉ）：
（ｉ）１０ｍｇ／ｋｇ以上のＳ−ヘキシルＧＳＨを静脈内投与で前処置後２μｇ／ｋｇ以上１５μｇ／ｋｇ以下のＬＴＣ４を投与される工程、
（ｉｉ）２．５ｍｇ／ｋｇ以上のＳ−ヘキシルＧＳＨを静脈内投与で前処置後０．２ｍｇ／ｋｇ以上０．６ｍｇ／ｋｇ以下のＯＶＡを投与される工程、または
（ｉｉｉ）５ｍｇ／ｋｇ以上のＳ−ヘキシルＧＳＨを静脈内投与で前処置後０．６ｍｇ／ｋｇを超え１．２ｍｇ／ｋｇ以下のＯＶＡを投与される工程、
のいずれかの工程を経てｃｙｓＬＴ２受容体が関与する喘息を発症してなる前記（５）に記載のモルモット、
（７）  予め抗原感作されていてもよいモルモットであって、下記工程（ｉ）〜（ｉｖ）：
（ｉ）１０ｍｇ／ｋｇ以上１５ｍｇ／ｋｇ以下のＳ−ヘキシルＧＳＨを静脈内投与で前処置後１０μｇ／ｋｇ以上１５μｇ／ｋｇ未満のＬＴＣ４を投与される工程、
（ｉｉ）１０ｍｇ／ｋｇ以上３０ｍｇ／ｋｇ以下のＳ−ヘキシルＧＳＨを静脈内投与で前処置後１５μｇ／ｋｇのＬＴＣ４を投与される工程、
（ｉｉｉ）２．５ｍｇ／ｋｇ以上１５ｍｇ／ｋｇ以下のＳ−ヘキシルＧＳＨを静脈内投与で前処置後０．２ｍｇ／ｋｇ以上０．６ｍｇ／ｋｇ以下のＯＶＡを投与される工程、または
（ｉｖ）５ｍｇ／ｋｇのＳ−ヘキシルＧＳＨを静脈内投与で前処置後０．６ｍｇ／ｋｇを超え１．２ｍｇ／ｋｇ以下のＯＶＡを投与される工程、
のいずれかの工程を経てｃｙｓＬＴ１受容体とｃｙｓＬＴ２受容体が共に関与する喘息を発症してなる前記（５）に記載のモルモット、
（８）  前記（５）から前記（７）のいずれかに記載のモルモットを用いて、被験物質の喘息に対する効果を、気道収縮、喘息発作、気道血管透過性及び／または気道過敏に対する効果で評価することを特徴とする、ｃｙｓＬＴ２受容体に拮抗作用を示す化合物の薬効評価及び／またはスクリーニング方法、
（９）  予め抗原感作されていてもよいモルモットに、１０ｍｇ／ｋｇ以上のＳ−ヘキシルＧＳＨを静脈内投与で前処置後１０μｇ／ｋｇ以上１５μｇ／ｋｇ以下のＬＴＣ４または０．２ｍｇ／ｋｇ以上０．６ｍｇ／ｋｇ以下のＯＶＡを投与することでｃｙｓＬＴ２受容体が関与する喘息を発症させたモルモットを用いて、被験物質の喘息に対する効果を気道収縮に対する効果で評価することを特徴とする、前記（８）に記載の薬効評価及び／またはスクリーニング方法、
（１０）  予め抗原感作されていてもよいモルモットに、下記工程（ｉ）〜（ｉｉｉ）：
（ｉ）１０ｍｇ／ｋｇ以上１５ｍｇ／ｋｇ以下のＳ−ヘキシルＧＳＨを静脈内投与で前処置後１０μｇ／ｋｇ以上１５μｇ／ｋｇ未満のＬＴＣ４または０．２ｍｇ／ｋｇのＯＶＡを投与する工程、
（ｉｉ）１０ｍｇ／ｋｇ以上３０ｍｇ／ｋｇ以下のＳ−ヘキシルＧＳＨを静脈内投与で前処置後１５μｇ／ｋｇのＬＴＣ４を投与する工程、または
（ｉｉｉ）１０ｍｇ／ｋｇのＳ−ヘキシルＧＳＨを静脈内投与で前処置後０．２ｍｇ／ｋｇを超え０．６ｍｇ／ｋｇ以下のＯＶＡを投与する工程、
のいずれかの工程を付すことでｃｙｓＬＴ１受容体とｃｙｓＬＴ２受容体が共に関与する喘息を発症させたモルモットを用いて、被験物質の喘息に対する効果を気道収縮に対する効果で評価することを特徴とする、前記（８）に記載の薬効評価及び／またはスクリーニング方法、
（１１）  予め抗原感作されていてもよいモルモットに、２．５ｍｇ／ｋｇ以上のＳ−ヘキシルＧＳＨを静脈内投与で前処置後０．６ｍｇ／ｋｇのＯＶＡを投与するか、または５ｍｇ／ｋｇ以上のＳ−ヘキシルＧＳＨを静脈内投与で前処置後０．６ｍｇ／ｋｇを超え１．２ｍｇ／ｋｇ以下のＯＶＡを投与することでｃｙｓＬＴ２受容体が関与する喘息を発症させたモルモットを用いて、被験物質の喘息に対する効果を喘息発作に対する効果で評価することを特徴とする、前記（８）に記載の薬効評価及び／またはスクリーニング方法、
（１２）  予め抗原感作されていてもよいモルモットに、２．５ｍｇ／ｋｇ以上１５ｍｇ／ｋｇ以下のＳ−ヘキシルＧＳＨを静脈内投与で前処置後０．６ｍｇ／ｋｇのＯＶＡを投与するか、または５ｍｇ／ｋｇのＳ−ヘキシルＧＳＨを静脈内投与で前処置後０．６ｍｇ／ｋｇを超え１．２ｍｇ／ｋｇ以下のＯＶＡを投与することでｃｙｓＬＴ１受容体とｃｙｓＬＴ２受容体が共に関与する喘息を発症させたモルモットを用いて、被験物質の喘息に対する効果を喘息発作に対する効果で評価することを特徴とする、前記（８）に記載の薬効評価及び／またはスクリーニング方法、
（１３）  予め抗原感作されていてもよいモルモットに、５ｍｇ／ｋｇ以上のＳ−ヘキシルＧＳＨを静脈内投与で前処置後０．６ｍｇ／ｋｇ以上１．２ｍｇ／ｋｇ以下のＯＶＡを投与することでｃｙｓＬＴ２受容体が関与する喘息を発症させたモルモットを用いて、被験物質の喘息に対する効果を気道血管透過性に対する効果で評価することを特徴とする、前記（８）に記載の薬効評価及び／またはスクリーニング方法、
（１４）  予め抗原感作されていてもよいモルモットに、５ｍｇ／ｋｇ以上７．５ｍｇ／ｋｇ以下のＳ−ヘキシルＧＳＨを静脈内投与で前処置後０．６ｍｇ／ｋｇのＯＶＡを投与するか、または５ｍｇ／ｋｇのＳ−ヘキシルＧＳＨを静脈内投与で前処置後０．６ｍｇ／ｋｇを超え１．２ｍｇ／ｋｇ以下のＯＶＡを投与することでｃｙｓＬＴ１受容体とｃｙｓＬＴ２受容体が共に関与する喘息を発症させたモルモットを用いて、被験物質の喘息に対する効果を気道血管透過性に対する効果で評価することを特徴とする、前記（８）に記載の薬効評価及び／またはスクリーニング方法、
（１５）  ｃｙｓＬＴ１受容体とｃｙｓＬＴ２受容体の両受容体に拮抗作用を示す化合物の薬効評価及び／またはスクリーニング方法である前記（８）から前記（１４）のいずれかに記載の薬効評価及び／またはスクリーニング方法、
（１６）  ｉｎ  ｖｉｖｏでｃｙｓＬＴ２受容体に拮抗作用を示す化合物を選別するための請求項１記載のモルモットの使用、
（１７）  ｉｎ  ｖｉｖｏでｃｙｓＬＴ２受容体に拮抗作用を示す化合物がｃｙｓＬＴ１受容体にも拮抗作用を示す化合物である請求項１６記載の使用、
（１８）  ｃｙｓＬＴ２受容体が関与する呼吸器疾患が、アレルギー性鼻炎である前記（４）に記載のモルモット、
（１９）  予め抗原感作されていてもよいモルモットであって、５ｍｇ／ｋｇ以上のＳ−ヘキシルＧＳＨを静脈内投与で前処置後２ｍｇ／ｋｇのＯＶＡを投与される工程を経てｃｙｓＬＴ２受容体が関与するアレルギー性鼻炎を発症してなる前記（１８）に記載のモルモット、
（２０）  予め抗原感作されていてもよいモルモットであって、５ｍｇ／ｋｇ以上１５ｍｇ／ｋｇ以下のＳ−ヘキシルＧＳＨを静脈内投与で前処置後２ｍｇ／ｋｇのＯＶＡを投与される工程を経てｃｙｓＬＴ１受容体とｃｙｓＬＴ２受容体が共に関与するアレルギー性鼻炎を発症してなる前記（１８）に記載のモルモット、
（２１）  前記（１８）から前記（２０）のいずれかに記載のモルモットを用いて、被験物質のアレルギー性鼻炎に対する効果を、鼻腔抵抗、炎症性細胞浸潤及び／または鼻汁に対する効果で評価することを特徴とする、ｃｙｓＬＴ２受容体に拮抗作用を示す化合物の薬効評価及び／またはスクリーニング方法、及び
（２２）  ｃｙｓＬＴ１受容体とｃｙｓＬＴ２受容体の両受容体に拮抗作用を示す化合物の薬効評価及び／またはスクリーニング方法である前記（２１）に記載の薬効評価及び／またはスクリーニング方法に関する。
【発明の効果】
【００１６】
本発明のｃｙｓＬＴ２受容体が関与するモルモット呼吸器疾患モデル（以下、本発明のモデルと略記することがある。）により、ｃｙｓＬＴ２受容体拮抗薬あるいはｃｙｓＬＴ１／ＬＴ２受容体デュアル拮抗薬のｉｎ  ｖｉｖｏでの薬効評価が可能となる。さらに、本発明のモデルは、ｃｙｓＬＴ２受容体が関与する呼吸器疾患（例えば、喘息やアレルギー性鼻炎）の予防及び／または治療薬のｉｎ  ｖｉｖｏスクリーニングに有用かつ効率的に適用することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】種々の濃度のＳ−ヘキシルＧＳＨ（０〜３０ｍｇ／ｋｇ）を前処置後ＯＶＡ（０．６ｍｇ／ｋｇ）で惹起したｃｙｓＬＴ２受容体が関与するモルモット喘息モデルの喘息発作に対するモンテルカスト及び化合物１の効果を示す。
【図２】Ｓ−ヘキシルＧＳＨ（５ｍｇ／ｋｇ）を前処置後ＯＶＡ（０．６または１．２ｍｇ／ｋｇ）で惹起したｃｙｓＬＴ２受容体が関与するモルモット喘息モデルの喘息発作に対するモンテルカスト、化合物１及びモンテルカストと化合物１の併用の効果を示す。
【図３】Ｓ−ヘキシルＧＳＨ（６０ｍｇ／ｋｇ）を前処置後ＬＴＣ４（２μｇ／ｋｇ）で惹起したｃｙｓＬＴ２受容体が関与するモルモット喘息モデルの気道血管透過性に対するモンテルカスト及び化合物１の効果を示す。
【図４】セリンホウ酸（３０ｍｇ／ｋｇ）を前処置後ＯＶＡ（１．６ｍｇ／ｋｇ）で惹起したモルモット喘息モデルの喘息発作に対するモンテルカストの効果を示す。
【図５】Ｓ−ヘキシルＧＳＨ（１５ｍｇ／ｋｇ）を前処置後ＯＶＡ（２ｍｇ／ｋｇ）で惹起したｃｙｓＬＴ２受容体が関与するモルモットアレルギー性鼻炎モデルにおける抗原惹起即時相（ＩＡＲ）及び遅発相（ＬＴＲ）の鼻腔抵抗の上昇に対するモンテルカスト及びモンテルカストと化合物１の併用の効果を示す。図中、併用は、モンテルカストと化合物１の併用を示す。
【図６】Ｓ−ヘキシルＧＳＨ（５〜１５ｍｇ／ｋｇ）を前処置後ＯＶＡ（２ｍｇ／ｋｇ）で惹起したｃｙｓＬＴ２受容体が関与するモルモットアレルギー性鼻炎モデルにおける鼻腔洗浄液中の好酸球浸潤に対するモンテルカスト及びモンテルカストと化合物１の併用の効果を示す。図中、併用は、モンテルカストと化合物１の併用を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
本発明において、ｃｙｓＬＴ２受容体が関与する呼吸器疾患としては、気管支喘息、アスピリン喘息、運動誘発性喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、肺気腫、慢性気管支炎、肺炎（間質性肺炎、好酸球性肺炎等）、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、無呼吸性症候群（睡眠時無呼吸症候群、アデノイド／扁桃肥大に伴う睡眠呼吸障害、アデノイド／扁桃肥大術後の睡眠呼吸障害等）、アレルギー性鼻炎、副鼻腔炎（急性副鼻腔炎、慢性副鼻腔炎、好酸球性副鼻腔炎等）、肺線維症、咳嗽（慢性咳嗽等、空咳等）、肺高血圧症等が挙げられる。ｃｙｓＬＴ２受容体が関与する呼吸器疾患として好ましくは、気管支喘息またはアレルギー性鼻炎である。また、本発明において、ｃｙｓＬＴ２受容体が関与する呼吸器疾患として好ましくは、ｃｙｓＬＴ１受容体とｃｙｓＬＴ２受容体が共に関与する呼吸器疾患である。
【００１９】
本発明において、呼吸器疾患を発症してなるモルモットとモルモット呼吸器疾患モデルは同義であり、同様に喘息を発症してなるモルモットとモルモット喘息モデル及びアレルギー性鼻炎を発症してなるモルモットとモルモットアレルギー性鼻炎モデルも同義である。また、発症してなるは、発症したと同義である。
【００２０】
本発明のモルモット喘息モデルは、気道収縮、喘息発作、気道血管透過性の亢進、または気道過敏のいずれかの症状を示す喘息モデルであればよく、好ましくは気道収縮、喘息発作、及び気道血管透過性の亢進から選択される２つ以上の症状、さらに好ましくは、気道収縮、喘息発作、及び気道血管透過性の亢進の全ての症状を示す喘息モデルである。なお、これに加えて、喘息の症状に特徴付けられる他の症状を示す喘息モデルであってもよい。また、本発明のモルモット喘息モデルは、即時型喘息反応と遅発型喘息反応のどちらの反応も示す即時型・遅発型喘息モデルである。
【００２１】
本発明のモルモットアレルギー性鼻炎モデルは、鼻腔抵抗の上昇、炎症細胞浸潤または鼻汁のいずれかの症状を示すアレルギー性鼻炎モデルであればよく、好ましくは鼻腔抵抗の上昇と炎症細胞浸潤の両方の症状を示すアレルギー性鼻炎モデルである。なお、これに加えて、アレルギー性鼻炎の症状に特徴付けられる他の症状を示すアレルギー性鼻炎モデルであってもよい。また、本発明のアレルギー性鼻炎モデルは、即時型反応と遅発型反応のどちらの反応も示すアレルギー性即時型・遅発型鼻炎モデルである。
【００２２】
本発明において、γＧＴの基質競合阻害剤としては、γＧＴの基質と同じ部位に競合的に結合してγＧＴの酵素活性を阻害する如何なる物質であってもよいが、例えば、ＧＳＨまたはＧＳＨ関連化合物等が挙げられる。
【００２３】
ＧＳＨは、式γ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ−Ｇｌｙを有するトリペプチドである。ＧＳＨ関連化合物は、グリシン、システイン、あるいは、γ-グルタミン酸残基のうち少なくとも１つが、代替のアミノ酸残基で置換されたＧＳＨの改変形態であり、例えば、Ｓ−ヘキシルＧＳＨ、Ｓ−デシルＧＳＨ、ＧＳＳＧ等が挙げられる。γ−ＧＴの基質競合阻害剤として好ましくは、Ｓ−ヘキシルＧＳＨまたはＧＳＨである。
【００２４】
本発明において、γ−ＧＴの基質競合阻害剤の投与方法としては、経口投与、皮下投与、静脈内投与、腹腔内投与など投与可能な方法であればいずれの方法であってもよいが、γ−ＧＴの基質競合阻害剤がＳ−ヘキシルＧＳＨまたはＧＳＨである場合は、静脈内投与および腹腔内投与が好ましい。
【００２５】
本発明において、γ−ＧＴの基質競合阻害剤の投与量としては、例えば、ＧＳＨを静脈内投与または腹腔内投与で用いる場合は、約１０ｍｇ／ｋｇ乃至３０００ｍｇ／ｋｇの範囲で用いられ、Ｓ−ヘキシルＧＳＨを静脈内投与または腹腔内投与で用いる場合は、約１ｍｇ／ｋｇ乃至１０００ｍｇ／ｋｇの範囲で用いられる。ＧＳＨを静脈内投与で用いる場合の投与量として好ましくは、１０ｍｇ／ｋｇ乃至１００ｍｇ／ｋｇである。Ｓ−ヘキシルＧＳＨを静脈内投与で用いる場合の投与量として好ましくは、２．５ｍｇ／ｋｇ乃至１００ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ乃至１００ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ乃至１００ｍｇ／ｋｇであり、さらに好ましくは、２．５ｍｇ／ｋｇ乃至１５ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ乃至１５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ乃至１５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ乃至３０ｍｇ／ｋｇである。
【００２６】
本発明において、抗原としては、ＯＶＡなど当該分野で通常使用される抗原を用いることができるが、とりわけＯＶＡが好ましい。また、抗原による惹起は、予め抗原感作されたモルモットに行うのが好ましい。
【００２７】
抗原を投与して感作する方法としては、例えば、ＯＶＡ及び百日咳死菌を含む生理食塩液をモルモットに腹腔内投与、気管内投与または吸入投与して感作する方法やＯＶＡ及び水酸化アルミニウムゲルを含む生理食塩液をモルモットの頚背部に投与、あるいは腹腔内投与、気管内投与または吸入投与して感作する方法等が挙げられる。
【００２８】
本発明において、ＬＴＣ４の投与方法としては、静脈内投与、気管内投与または吸入投与など投与可能な方法であればいずれの方法であってもよいが、とりわけ静脈内投与が好ましい。
【００２９】
本発明において、ＯＶＡの投与方法としては、吸入投与、気管内投与、皮下投与、点鼻投与、静脈内投与など投与可能な方法であればいずれの方法でもよい。モルモット喘息モデルの構築の場合、ＯＶＡの投与方法として好ましくは、静脈内投与である。アレルギー性鼻炎モデルの構築の場合、ＯＶＡの投与方法として好ましくは、吸入投与、静脈内投与、点鼻投与であり、さらに好ましくは点鼻投与である。
【００３０】
本発明において、ＬＴＣ４またはＯＶＡの投与タイミングとして好ましくは、Ｓ−ヘキシルＧＳＨまたはＧＳＨを前処置後３０分以内であり、さらに好ましくは前処置後１分以内である。
【００３１】
本発明において、ＬＴＣ４及びＯＶＡの投与量としては、呼吸器疾患を惹起しうる投与量であれば、如何なる用量であってもよいが、通常、ＬＴＣ４は約０．１μｇ／ｋｇ乃至１００μｇ／ｋｇの範囲で用いられ、ＯＶＡは約０．０５ｍｇ／ｋｇ乃至５０ｍｇ／ｋｇの範囲で用いられる。ＬＴＣ４の投与量として好ましくは、２μｇ／ｋｇ乃至１５μｇ／ｋｇであり、さらに好ましくは１０μｇ／ｋｇ乃至１５μｇ／ｋｇである。ＯＶＡの投与量として好ましくは、０．２ｍｇ／ｋｇ乃至４ｍｇ／ｋｇであり、さらに好ましくは０．２ｍｇ／ｋｇ乃至２ｍｇ／ｋｇである。喘息モデルの構築の場合、ＯＶＡの投与量として好ましくは、０．２ｍｇ／ｋｇ乃至１．６ｍｇ／ｋｇであり、さらに好ましくは０．２ｍｇ／ｋｇ乃至１．２ｍｇ／ｋｇである。アレルギー性鼻炎モデルの構築の場合、ＯＶＡの投与量として好ましくは、１ｍｇ／ｋｇ乃至４ｍｇ／ｋｇであり、さらに好ましくは１ｍｇ／ｋｇ乃至２ｍｇ／ｋｇである。
【００３２】
本発明において、ｃｙｓＬＴ２受容体が関与するモルモット喘息モデルとして好ましくは、下記工程（ｉ）〜（ｉｉｉ）：
（ｉ）１０ｍｇ／ｋｇ以上のＳ−ヘキシルＧＳＨを静脈内投与で前処置後２μｇ／ｋｇ以上１５μｇ／ｋｇ以下のＬＴＣ４を投与される工程、
（ｉｉ）２．５ｍｇ／ｋｇ以上のＳ−ヘキシルＧＳＨを静脈内投与で前処置後０．２ｍｇ／ｋｇ以上０．６ｍｇ／ｋｇ以下のＯＶＡを投与される工程、または
（ｉｉｉ）５ｍｇ／ｋｇ以上のＳ−ヘキシルＧＳＨを静脈内投与で前処置後０．６ｍｇ／ｋｇを超え１．２ｍｇ／ｋｇ以下のＯＶＡを投与される工程、
のいずれかの工程を経てｃｙｓＬＴ２受容体が関与する喘息を発症してなるモルモットである。
【００３３】
本発明において、ｃｙｓＬＴ１受容体とｃｙｓＬＴ２受容体が共に関与するモルモット喘息モデルとして好ましくは、下記工程（ｉ）〜（ｉｖ）：
（ｉ）１０ｍｇ／ｋｇ以上１５ｍｇ／ｋｇ以下のＳ−ヘキシルＧＳＨを静脈内投与で前処置後１０μｇ／ｋｇ以上１５μｇ／ｋｇ未満のＬＴＣ４を投与される工程、
（ｉｉ）１０ｍｇ／ｋｇ以上３０ｍｇ／ｋｇ以下のＳ−ヘキシルＧＳＨを静脈内投与で前処置後１５μｇ／ｋｇのＬＴＣ４を投与される工程、
（ｉｉｉ）２．５ｍｇ／ｋｇ以上１５ｍｇ／ｋｇ以下のＳ−ヘキシルＧＳＨを静脈内投与で前処置後０．２ｍｇ／ｋｇ以上０．６ｍｇ／ｋｇ以下のＯＶＡを投与される工程、または
（ｉｖ）５ｍｇ／ｋｇのＳ−ヘキシルＧＳＨを静脈内投与で前処置後０．６ｍｇ／ｋｇを超え１．２ｍｇ／ｋｇ以下のＯＶＡを投与される工程、
のいずれかの工程経てｃｙｓＬＴ１受容体とｃｙｓＬＴ２受容体が共に関与する喘息を発症してなるモルモットである。
【００３４】
本発明において、ｃｙｓＬＴ２受容体が関与するアレルギー性鼻炎モデルとして好ましくは、５ｍｇ／ｋｇ以上のＳ−ヘキシルＧＳＨを静脈内投与で前処置後２ｍｇ／ｋｇのＯＶＡを投与される工程を経てｃｙｓＬＴ２受容体が関与するアレルギー性鼻炎を発症してなるモルモットである。
【００３５】
本発明において、ｃｙｓＬＴ１受容体とｃｙｓＬＴ２受容体が共に関与するアレルギー性鼻炎モデルとして好ましくは、５ｍｇ／ｋｇ以上１５ｍｇ／ｋｇ以下のＳ−ヘキシルＧＳＨを静脈内投与で前処置後２ｍｇ／ｋｇのＯＶＡを投与される工程を経てｃｙｓＬＴ１受容体とｃｙｓＬＴ２受容体が共に関与するアレルギー性鼻炎を発症してなるモルモットである。
【００３６】
本発明のモデルは、ｃｙｓＬＴ２受容体に拮抗作用を示す化合物の薬効評価、及び／またはｃｙｓＬＴ２受容体に拮抗作用を示す化合物のスクリーニング方法（以下、本発明の方法と略記する場合がある。）に適用することができる。
【００３７】
本発明の方法において、被験物質の喘息に対する効果は、気道収縮、喘息発作、気道血管透過性及び／または気道過敏に対する効果で評価することができる。
【００３８】
本発明の方法において、被験物質の喘息に対する効果を気道収縮に対する効果で評価する場合、１０ｍｇ／ｋｇ以上のＳ−ヘキシルＧＳＨを静脈内投与で前処置後１０μｇ／ｋｇ以上１５μｇ／ｋｇ以下のＬＴＣ４または０．２ｍｇ／ｋｇ以上０．６ｍｇ／ｋｇ以下のＯＶＡを投与することでｃｙｓＬＴ２受容体が関与する喘息を発症させたモルモットを用いるのが好ましく、下記工程（ｉ）〜（ｉｉｉ）：
（ｉ）１０ｍｇ／ｋｇ以上１５ｍｇ／ｋｇ以下のＳ−ヘキシルＧＳＨを静脈内投与で前処置後１０μｇ／ｋｇ以上１５μｇ／ｋｇ未満のＬＴＣ４または０．２ｍｇ／ｋｇのＯＶＡを投与する工程、
（ｉｉ）１０ｍｇ／ｋｇ以上３０ｍｇ／ｋｇ以下のＳ−ヘキシルＧＳＨを静脈内投与で前処置後１５μｇ／ｋｇのＬＴＣ４を投与する工程、または
（ｉｉｉ）１０ｍｇ／ｋｇのＳ−ヘキシルＧＳＨを静脈内投与で前処置後０．２ｍｇ／ｋｇを超え０．６ｍｇ／ｋｇ以下のＯＶＡを投与する工程、
のいずれかの工程を付すことでｃｙｓＬＴ１受容体とｃｙｓＬＴ２受容体が共に関与する喘息を発症させたモルモットを用いるのがさらに好ましい。
【００３９】
本発明の方法において、被験物質の喘息に対する効果を喘息発作に対する効果で評価する場合、２.５ｍｇ／ｋｇ以上のＳ−ヘキシルＧＳＨを静脈内投与で前処置後０．６ｍｇ／ｋｇのＯＶＡを投与するか、または５ｍｇ／ｋｇ以上のＳ−ヘキシルＧＳＨを静脈内投与で前処置後０．６ｍｇ／ｋｇを超え１．２ｍｇ／ｋｇ以下のＯＶＡを投与することでｃｙｓＬＴ２受容体が関与する喘息を発症させたモルモットを用いるのが好ましく、２.５ｍｇ／ｋｇ以上１５ｍｇ／ｋｇ以下のＳ−ヘキシルＧＳＨを静脈内投与で前処置後０．６ｍｇ／ｋｇのＯＶＡを投与するか、または５ｍｇ／ｋｇのＳ−ヘキシルＧＳＨを静脈内投与で前処置後０．６ｍｇ／ｋｇを超え１．２ｍｇ／ｋｇ以下のＯＶＡを投与することでｃｙｓＬＴ１受容体とｃｙｓＬＴ２受容体が共に関与する喘息を発症させたモルモットを用いるのがさらに好ましい。
【００４０】
本発明の方法において、被験物質の喘息に対する効果を気道血管透過性に対する効果で評価する場合、５ｍｇ／ｋｇ以上のＳ−ヘキシルＧＳＨを静脈内投与で前処置後０．６ｍｇ／ｋｇ以上１．２ｍｇ／ｋｇ以下のＯＶＡを投与することでｃｙｓＬＴ２受容体が関与する喘息を発症させたモルモットを用いるのが好ましく、５ｍｇ／ｋｇ以上７．５ｍｇ／ｋｇ以下のＳ−ヘキシルＧＳＨを静脈内投与で前処置後０．６ｍｇ／ｋｇのＯＶＡを投与するか、または５ｍｇ／ｋｇのＳ−ヘキシルＧＳＨを静脈内投与で前処置後０．６ｍｇ／ｋｇを超え１．２ｍｇ／ｋｇ以下のＯＶＡを投与することでｃｙｓＬＴ１受容体とｃｙｓＬＴ２受容体が共に関与する喘息を発症させたモルモットを用いるのがさらに好ましい。
【００４１】
本発明の方法において、被験物質のアレルギー性鼻炎に対する効果は、鼻腔抵抗、炎症性細胞浸潤及び／または鼻汁に対する効果で評価することができる。
【００４２】
本発明において、ｃｙｓＬＴ２受容体に拮抗作用を示す化合物として好ましくは、ｃｙｓＬＴ１受容体とｃｙｓＬＴ２受容体の両受容体に拮抗作用を示す化合物である。また、ｃｙｓＬＴ１受容体とｃｙｓＬＴ２受容体の両受容体に拮抗作用を示す化合物とｃｙｓＬＴ１／ＬＴ２受容体デュアル拮抗薬は同義である。
【実施例】
【００４３】
以下、実施例によって本発明を詳述するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００４４】
以下の実施例において、ｃｙｓＬＴ１受容体選択的拮抗薬として、１−（（（１（Ｒ）−（３−（２−（７−クロロ−２−キノリニル）エテニル）フェニル）−３−（２−（１−ヒドロキシ−１−メチルエチル）フェニル）プロピル）チオ）メチル）シクロプロパン酢酸  ナトリウム塩（以下、モンテルカストと略記する）を使用した。モンテルカストは、公知の方法、例えば、国際公開１９９５／１８１０７号公報の実施例８に記載された方法により製造することができる。
【００４５】
ｃｙｓＬＴ２受容体選択的拮抗薬として、１−（５−カルボキシ−２−｛３−［４−（３−シクロヘキシルプロポキシ）フェニル］プロポキシ｝ベンゾイル）ピペリジン−４−カルボン酸（以下、化合物１と略記する）を使用した。化合物１は、公知の方法、例えば、特表２００６―５０９７９３号公報の実施例３１に記載された方法により製造することができる。化合物１のヒトｃｙｓＬＴ１受容体及びｃｙｓＬＴ２受容体に対する拮抗活性は、細胞系においてそれぞれＩＣ５０値で２５００及び１４ｎＭである（特表２００６―５０９７９３号公報参照）。
実施例１：ＧＳＨを前処置後ＬＴＣ４で惹起したｃｙｓＬＴ２受容体が関与するモルモット喘息モデルの構築（評価項目：気道収縮）
モルモットをペントバルビタールナトリウム（７５ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）にて麻酔し、気管を切開してポリエチレン細管を挿入後、頸静脈にカテーテルを挿入した。気管に挿入したポリエチレン細管の片側を定量式人工呼吸装置に接続し、換気量４〜５ｍＬ、換気回数７０回／分で人工呼吸した。１００ｍｇ／ｋｇのＧＳＨ（東京化成工業株式会社）を頚静脈に挿入したカテーテルを介して静脈内に投与後、引き続き５０μｇ／ｋｇのＬＴＣ４（Ｃａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ）を静脈内投与することにより、喘息を惹起した（モルモット喘息モデルの構築）。本モデルを用いて、ｃｙｓＬＴ１受容体選択的拮抗薬であるモンテルカスト及びｃｙｓＬＴ２受容体選択的拮抗薬である化合物１の気道収縮に対する抑制効果を評価した。その結果を、表１に示す。
【００４６】
気道収縮は、ＬＴＣ４を頚静脈内に投与することにより誘発し、コンツェットレスラー（Ｋｏｎｚｅｔｔ＆Ｒｏｓｓｌｅｒ）法により、ＬＴＣ４投与３０分後までの気道抵抗を測定した。気道収縮率の経時的変化、その曲線下面積及び各化合物の気道収縮抑制率については、気管を完全に閉塞して得られる最大通気圧を１００％として算出した。なお、モンテルカスト（０．１ｍｇ／ｋｇ）はＬＴＣ４投与１時間前に経口投与し、化合物１（１０ｍｇ／ｋｇ）はＬＴＣ４投与１分前に頚静脈に挿入したカテーテルを介して静脈内に投与した。
【００４７】
本実施例においては、気道収縮抑制率が、８０％を超えた場合を完全な抑制と評価し、２０％以下の場合を抑制効果なしと評価した。また、２１〜８０％の気道収縮抑制率を示す場合を部分的抑制と評価した。表１においては、「−」は０〜２０％の抑制率を、「＋」は２１〜４０％の抑制率を、「＋＋」は４１〜６０％の抑制率を、「＋＋＋＋」は８１〜１００％の抑制率をそれぞれ表す。
【００４８】
【表１】
2013208110.tif 000002
【００４９】
ＧＳＨ非処置下でのＬＴＣ４惹起モルモット喘息モデルにおいて、ｃｙｓＬＴ１受容体選択的拮抗薬であるモンテルカストが、０．１ｍｇ／ｋｇの用量で気道収縮を完全に抑制したのに対し、ｃｙｓＬＴ２受容体選択的拮抗薬である化合物１は１０ｍｇ／ｋｇの用量においても気道収縮を抑制しなかった。このように、ＧＳＨ非処置下でＬＴＣ４により惹起される喘息（気道収縮）には、ｃｙｓＬＴ２受容体の関与は認められない。
【００５０】
これに対し、ＧＳＨを前処置後ＬＴＣ４で惹起したモルモット喘息モデルでの気道収縮は、モンテルカスト及び化合物１によって部分的に抑制され、両化合物を併用することで完全に抑制された。この結果から、モルモットに１００ｍｇ／ｋｇのＧＳＨを前処置後５０μｇ／ｋｇのＬＴＣ４を処置することにより、ｃｙｓＬＴ１受容体とｃｙｓＬＴ２受容体が共に関与する喘息（気道収縮）が惹起されることが明らかとなった。
実施例２：Ｓ−ヘキシルＧＳＨを前処置後ＬＴＣ４で惹起したｃｙｓＬＴ２受容体が関与するモルモット喘息モデルの構築（評価項目：気道収縮）
ＧＳＨの代わりに、１０〜６０ｍｇ／ｋｇのＳ−ヘキシルＧＳＨ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を用いて、実施例１と同様の方法で、モルモット喘息モデルを構築した。本モデルを用いて、ｃｙｓＬＴ１受容体選択的拮抗薬であるモンテルカスト及びｃｙｓＬＴ２受容体選択的拮抗薬である化合物１の気道収縮に対する抑制効果を、実施例１と同様の方法で評価した。その結果を表２に示す。なお、モンテルカスト（０．３ｍｇ／ｋｇ）はＬＴＣ４投与２４時間前に経口投与し、化合物１（１ｍｇ／ｋｇ）はＬＴＣ４投与約１分前に静脈内投与した。
【００５１】
本実施例においても、気道収縮の抑制率が８０％を超えた場合を完全な抑制と評価し、２０％以下の場合を抑制効果なしと評価した。また、２１〜８０％の気道収縮抑制率を示す場合を部分的抑制と評価した。表２においては、「−」は０〜２０％の抑制率を、「＋」は２１〜４０％の抑制率を、「＋＋」は４１〜６０％の抑制率を、「＋＋＋」は６１〜８０％の抑制率を、「＋＋＋＋」は８１〜１００％の抑制率をそれぞれ表す。
【００５２】
【表２】
2013208110.tif 000003
【００５３】
本モデルにおけるモンテルカストの気道収縮抑制効果は、Ｓ−ヘキシルＧＳＨの投与量の増加に伴って減弱したが、化合物１の抑制効果は増強した。
【００５４】
以上の結果から、モルモットに１０ｍｇ／ｋｇ以上のＳ−ヘキシルＧＳＨを前処置後１０〜１５μｇ／ｋｇのＬＴＣ４を処置することにより、ｃｙｓＬＴ２受容体が関与する喘息（気道収縮）が惹起されることが明らかとなった。また、１０〜１５ｍｇ／ｋｇのＳ−ヘキシルＧＳＨを前処置後１０〜１５μｇ／ｋｇのＬＴＣ４を処置する実験条件、または１０〜３０ｍｇ／ｋｇのＳ−ヘキシルＧＳＨを前処置後１５μｇ／ｋｇのＬＴＣ４を処置する実験条件下で、ｃｙｓＬＴ１受容体とｃｙｓＬＴ２受容体が共に関与する喘息（気道収縮）がモルモットにおいて惹起されることが明らかとなった。
実施例３：Ｓ−ヘキシルＧＳＨを前処置後ＯＶＡで惹起したｃｙｓＬＴ２受容体が関与するモルモット喘息モデルの構築（評価項目：気道収縮）
ＯＶＡ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）１ｍｇと百日咳死菌約５×１０９個を含む生理食塩液０．５ｍＬを腹腔内投与することにより、モルモットを能動的に感作し、感作１４〜２０日後に実験に供した。なお、実験前日までに感作チェックを行い、感作の成立した動物を実験に用いた。
【００５５】
モルモットをペントバルビタールナトリウム（７５ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）にて麻酔し、気管を切開してポリエチレン細管を挿入後、頸静脈にカテーテルを挿入した。気管に挿入したポリエチレン細管の片側を定量式人工呼吸装置に接続し、換気量４〜５ｍＬ、換気回数７０回／分で人工呼吸した。頸静脈に挿入したカテーテルから抗ヒスタミン剤であるピリラミン（１ｍｇ／ｋｇ）及びシクロオキシゲナーゼ阻害剤であるインドメタシン（５ｍｇ／ｋｇ）の等容量混合液を静脈内投与し、その約２分５０秒後にＳ−ヘキシルＧＳＨ（１０〜１５ｍｇ／ｋｇ）、続いてその約１０秒後にＯＶＡ（０．２または０．６ｍｇ／ｋｇ）を静脈内投与し、モルモット喘息モデルを構築した。本モデルを用いて、ｃｙｓＬＴ１受容体選択的拮抗薬であるモンテルカスト及びｃｙｓＬＴ２受容体選択的拮抗薬である化合物１の、気道収縮に対する抑制効果を実施例１と同様の方法で評価した。その結果を表３に示す。なお、モンテルカスト（０．１または０．３ｍｇ／ｋｇ）はＯＶＡ投与２４時間前に経口投与し、化合物１（１ｍｇ／ｋｇ）はＯＶＡ投与約３０秒〜１分前に静脈内投与した。
【００５６】
本実施例においても、気道収縮の抑制率が８０％を超えた場合を完全な抑制と評価し、２０％以下の場合を抑制効果なしと評価した。また、２１〜８０％の気道収縮抑制率を示す場合を部分的抑制と評価した。表３においては、「−」は０〜２０％の抑制率を、「＋」は２１〜４０％の抑制率を、「＋＋」は４１〜６０％の抑制率を、「＋＋＋」は６１〜８０％の抑制率を、「＋＋＋＋」は８１〜１００％の抑制率をそれぞれ表す。また、ＯＶＡ０．６ｍｇ／ｋｇを処置した群で用いたモンテルカストの投与量は０．１ｍｇ／ｋｇであり、ＯＶＡ０．２ｍｇ／ｋｇを処置した群で用いたモンテルカストの投与量は０．３ｍｇ／ｋｇである。
【００５７】
【表３】
2013208110.tif 000004
【００５８】
Ｓ−ヘキシルＧＳＨ非処置下でのＯＶＡ惹起モルモット喘息モデルに対しては、ｃｙｓＬＴ２受容体選択的拮抗薬である化合物１は気道収縮抑制効果を示さず、本モデルでみられる気道収縮には、ｃｙｓＬＴ２受容体の関与は認められない。
【００５９】
これに対し、Ｓ−ヘキシルＧＳＨを前処置後ＯＶＡで惹起したモルモット喘息モデルにおいては、モンテルカスト及び化合物１の両者が、気道収縮を抑制した。この結果から、能動感作したモルモットに１０ｍｇ／ｋｇ以上のＳ−ヘキシルＧＳＨを前処置後０．２〜０．６ｍｇ／ｋｇのＯＶＡを処置することにより、ｃｙｓＬＴ２受容体が関与する喘息（気道収縮）が惹起されること、また能動感作したモルモットに、１０〜１５ｍｇ／ｋｇのＳ−ヘキシルＧＳＨを前処置後０．２ｍｇ／ｋｇのＯＶＡを処置する実験条件、または１０ｍｇ／ｋｇのＳ−ヘキシルＧＳＨを前処置後０．２〜０．６ｍｇ／ｋｇのＯＶＡを処置する実験条件下で、ｃｙｓＬＴ１受容体とｃｙｓＬＴ２受容体が共に関与する喘息（気道収縮）が惹起されることも明らかとなった。
実施例４：Ｓ−ヘキシルＧＳＨを前処置後ＯＶＡで惹起したｃｙｓＬＴ２受容体が関与するモルモット喘息モデルの構築（評価項目：喘息発作）
実施例３と同様の方法で感作したモルモットに、抗ヒスタミン剤であるピリラミン（１ｍｇ／ｋｇ）及びシクロオキシゲナーゼ阻害剤であるインドメタシン（５ｍｇ／ｋｇ）の等容量混合液を静脈内投与し、その約１４分後にＳ−ヘキシルＧＳＨ（２．５〜３０ｍｇ／ｋｇ）を静脈内投与し、続いてその約１分後にＯＶＡ（０．６または１．２ｍｇ／ｋｇ）を静脈内投与して喘息を惹起した。本モデルを用いて、ｃｙｓＬＴ１受容体選択的拮抗薬であるモンテルカスト及びｃｙｓＬＴ２受容体選択的拮抗薬である化合物１の喘息発作に対する効果を評価した。その結果を、図１及び図２に示す。症状観察はＯＶＡ投与２時間後まで行なった。なお、モンテルカスト（０．１ｍｇ／ｋｇ）はＯＶＡ投与２４時間前に経口投与し、化合物１（１ｍｇ／ｋｇ）はＯＶＡ投与約１分前に静脈内投与した。
【００６０】
Ｓ−ヘキシルＧＳＨ非処置下でのＯＶＡ惹起モルモット喘息モデルにおいては、ｃｙｓＬＴ１受容体選択的拮抗薬であるモンテルカストが喘息発作を抑制したのに対し、ｃｙｓＬＴ２受容体選択的拮抗薬である化合物１は効果を示さず、本モデルにおける喘息発作にはｃｙｓＬＴ２受容体の関与は認められない。
【００６１】
これに対して、Ｓ−ヘキシルＧＳＨを前処置したＯＶＡ惹起モルモット喘息モデルにおけるモンテルカストの抑制効果は、Ｓ−ヘキシルＧＳＨの投与量の増加に伴って減弱したが、化合物１の抑制効果は増強した。
【００６２】
以上の結果から、能動感作したモルモットに２．５ｍｇ／ｋｇ以上のＳ−ヘキシルＧＳＨを前処置後０．６ｍｇ／ｋｇのＯＶＡを処置する実験条件、または５ｍｇ／ｋｇ以上のＳ−ヘキシルＧＳＨを前処置後０．６〜１．２ｍｇ／ｋｇのＯＶＡを処置する実験条件下において、ｃｙｓＬＴ２受容体が関与する喘息（喘息発作反応）が惹起されることが明らかとなった。また、２．５〜１５ｍｇ／ｋｇのＳ−ヘキシルＧＳＨを前処置後０．６ｍｇ／ｋｇのＯＶＡを処置する実験条件、または５ｍｇ／ｋｇのＳ−ヘキシルＧＳＨを前処置後０．６〜１．２ｍｇ／ｋｇのＯＶＡを処置する実験条件下でも、ｃｙｓＬＴ１受容体とｃｙｓＬＴ２受容体が共に関与する喘息（喘息発作）が惹起されることが明らかとなった。
実施例５：Ｓ−ヘキシルＧＳＨを前処置後ＯＶＡで惹起したｃｙｓＬＴ２受容体が関与するモルモット喘息モデルの構築（評価項目：気道血管透過性）
実施例３と同様の方法で感作したモルモットに、インドメタシン（５ｍｇ／ｋｇ）及びピリラミン（１ｍｇ／ｋｇ）の等容量混合液を静脈内投与し、約１５分後に２０ｍｇ／ｋｇのエバンスブルーを含むＯＶＡ（０．６または１．２ｍｇ／ｋｇ）を静脈内投与した。なお、Ｓ−ヘキシルＧＳＨ（５〜７.５ｍｇ／ｋｇ）はＯＶＡ惹起の約１分前に静脈内投与した。本モデルを用いて、ｃｙｓＬＴ１受容体選択的拮抗薬であるモンテルカスト及びｃｙｓＬＴ２受容体選択的拮抗薬である化合物１の気道の血管透過性亢進に対する効果を評価した。その結果を表４に示す。
【００６３】
ＯＶＡ惹起１５分後にモルモットを放血致死させ、右心室より肺動脈に金属ゾンデを挿入後、５０ｍＬの生理食塩液を注入して肺を灌流した。肺を摘出し、肺実質を除去後、気道の重量を測定した。気道を１ｍＬのホルムアミドに浸してエバンスブルーを抽出（室温・一晩）後、抽出液の６２０ｎｍにおける吸光度をマイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ：Ｓｐｅｃｔｒａ  ＭＡＸ２５０）を用いて測定し、検量線から漏出色素量を算出した。気道に漏出したエバンスブルー量は、組織重量当りのエバンスブルー漏出量（ｎｇ／ｍｇ）として算出し、気道の血管透過性亢進の指標とした。なお、モンテルカスト（０．１ｍｇ／ｋｇ）はＯＶＡ投与約２４時間前に経口投与し、化合物１（１ｍｇ／ｋｇ）はＯＶＡ投与約３０秒前に静脈内投与した。
【００６４】
本実施例においては、気道の血管透過性亢進に対する抑制率が８０％を超えた場合を、完全な抑制と評価し、２０％以下の場合を、抑制効果なしと評価した。また、２１〜８０％の抑制率を示す場合を、部分抑制と評価した。表４においては、「−」は０〜２０％の抑制率を、「＋」は２１〜４０％の抑制率を、「＋＋」は４１〜６０％の抑制率を、「＋＋＋」は６１〜８０％の抑制率を、「＋＋＋＋」は８１〜１００％の抑制率をそれぞれ表す。
【００６５】
【表４】
2013208110.tif 000005
【００６６】
Ｓ−ヘキシルＧＳＨ非処置下でのＯＶＡ惹起モルモット喘息モデルにおいては、ｃｙｓＬＴ１受容体選択的拮抗薬であるモンテルカストが、０．１ｍｇ／ｋｇの用量において気道の血管透過性の亢進を完全に抑制した。
【００６７】
これに対して、Ｓ−ヘキシルＧＳＨを前処置後ＯＶＡで惹起したモルモット喘息モデルでは、モンテルカスト及び化合物１による気道の血管透過性亢進の部分的な抑制が認められた。この結果から、能動感作したモルモットに、５ｍｇ／ｋｇ以上のＳ−ヘキシルＧＳＨを前処置後０．６〜１．２ｍｇ／ｋｇのＯＶＡを処置することにより、モルモットにｃｙｓＬＴ２受容体が関与する喘息（気道血管透過性の亢進）が惹起されることが明らかとなった。また、５〜７．５ｍｇ／ｋｇのＳ−ヘキシルＧＳＨを前処置後に０．６ｍｇ／ｋｇのＯＶＡを処置する実験条件、または５ｍｇ／ｋｇのＳ−ヘキシルＧＳＨを前処置後０．６〜１．２ｍｇ／ｋｇのＯＶＡを処置する実験条件下において、ｃｙｓＬＴ１受容体とｃｙｓＬＴ２受容体が共に関与する関与する喘息（気道血管透過性の亢進）が惹起されることが明らかとなった。
実施例６：Ｓ−ヘキシルＧＳＨを前処置後ＬＴＣ４で惹起したｃｙｓＬＴ２受容体が関与するモルモット喘息モデルの構築（評価項目：気道血管透過性）
モルモットに、蛍光標識されたアルブミン（ＦＩＴＣ−ＢＳＡ、２ｍｇ／ｋｇ）を静脈内投与した後、６０ｍｇ／ｋｇのＳ−ヘキシルＧＳＨを静脈内投与した。その後直ちに、２μｇ／ｋｇのＬＴＣ４を静脈内投与した。本モデルを用いて、ｃｙｓＬＴ１受容体選択的拮抗薬であるモンテルカスト及びｃｙｓＬＴ２受容体選択的拮抗薬である化合物１の気道の血管透過性の亢進に対する効果を評価した。その結果を図３に示す。
【００６８】
ＬＴＣ４投与１５分後にモルモットを放血致死させ、気管内に挿入したカニューレよりクエン酸含有生理食塩液を注入・回収する操作を行い気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）を回収した。回収したＢＡＬＦの遠心上清中の蛍光強度を測定し、検量線よりＦＩＴＣ−ＢＳＡ濃度を算出し、気道の血管透過性亢進の指標とした。なお、モンテルカスト（０．１ｍｇ／ｋｇ）はＬＴＣ４投与約２４時間前に経口投与し、化合物１（１ｍｇ／ｋｇ）はＬＴＣ４投与約１分前に静脈内投与した。
【００６９】
Ｓ−ヘキシルＧＳＨを前処置後ＬＴＣ４で惹起したモルモット喘息モデルの気道の血管透過性亢進において、モンテルカストは効果を示さず、化合物１による完全な抑制が認められた。この結果から、モルモットに６０ｍｇ／ｋｇのＳ−ヘキシルＧＳＨを前処置後２μｇ／ｋｇのＬＴＣ４を処置することにより、ｃｙｓＬＴ２受容体が関与する喘息（気道血管透過性の亢進）が惹起されることが明らかとなった。
【００７０】
以上、上記実施例をまとめた結果を表５に示す。表５において、Ｓｈ−ＧＳＨは、Ｓ−ヘキシルＧＳＨを表す。
【００７１】
【表５】
2013208110.tif 000006
【００７２】
実施例７：Ｓ−ヘキシルＧＳＨを前処置後ＯＶＡで惹起したｃｙｓＬＴ２受容体が関与するモルモットアレルギー性鼻炎モデルの構築（評価項目：鼻腔抵抗、炎症性細胞浸潤）
ＯＶＡ５０ｍｇと水酸化アルミニウムゲル１ｍｇを含む生理食塩液１ｍＬを頚背部に皮下投与することにより、モルモットを感作した。感作１５日後に５０ｍｇ／ｍＬのＯＶＡ含有生理食塩液を２０μＬずつ両側の鼻腔内に点鼻投与し、アレルギー性鼻炎を惹起した。Ｓ−ヘキシルＧＳＨ（５〜１５ｍｇ／ｋｇ）は、ＯＶＡ投与直前とＯＶＡ投与３時間後の鼻腔抵抗の測定直前に静脈内投与した。
【００７３】
本モデルを用いて、ｃｙｓＬＴ１受容体選択的拮抗薬であるモンテルカスト及びモンテルカストとｃｙｓＬＴ２受容体選択的拮抗薬である化合物１の併用のアレルギー性鼻炎に対する効果を評価した。なお、モンテルカスト（３ｍｇ／ｋｇ）はＯＶＡ投与２４時間前に経口投与し、化合物１（１ｍｇ／ｋｇ）はＯＶＡ投与直前とＯＶＡ投与３時間後のＳ−ヘキシルＧＳＨ投与直前に静脈内投与した。
＜鼻腔抵抗測定＞
抗原投与６０〜５分前、抗原投与１０分後、２、３、４、５、６及び７時間後に、モルモットにカラーをつけ呼吸機能測定用チャンバーに収容し、総合呼吸機能解析システム（ｐｕｌｍｏｓ−Ｉ、Ｍ．Ｉ．Ｐ．Ｓ社）を用い、鼻腔抵抗（ｎＲａｗ）を測定した。ｎＲａｗの測定は、各測定時間に１回とし、１００呼吸分のｎＲａｗの平均値を各測定時間におけるｎＲａｗとした。ｎＲａｗ増加率は、総合呼吸機能解析システムの解析ソフト（ＷｉｎＰＵＬ１６バージョン１．２３）上で、以下の式により算出した。
【００７４】
【数１】
2013208110.tif 000007
【００７５】
評価は、抗原投与１０分後のｎＲａｗ増加率（即時型反応：ＩＡＲ）及び抗原投与３〜７時間後のｎＲａｗ増加率から算出した曲線下面積（ＡＵＣ３−７ｈｒ）（遅発型反応：ＬＴＲ）について行った。
【００７６】
図５に、Ｓ−ヘキシルＧＳＨを１５ｍｇ／ｋｇで前処置した際の結果を示す。
【００７７】
その結果、Ｓ−ヘキシルＧＳＨを前処置後ＯＶＡで惹起したモルモットアレルギー性鼻炎モデルにおける即時型および遅発型反応のいずれの鼻腔抵抗の上昇に対しても、モンテルカストと化合物１の併用群は、モンテルカスト単独群よりも強い抑制効果を示した。
＜炎症性細胞の計測＞
抗原投与７時間後の鼻腔抵抗の測定終了後、モルモットをペントバルビタールナトリウム（３０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）にて麻酔し、気管を切開して、呼吸維持のため肺側にカニューレを挿入し、結紮固定した。咽頭を瞬間接着剤で閉塞し、更に口腔内にはワセリンで処置した脱脂綿を詰め、口腔と鼻腔の連絡を遮断した。気管切開部より鼻腔内にカニューレを挿入し結紮固定後、シリンジポンプを接続し１ｍＬ／分の流速で１０分間、生理食塩液で鼻腔内を灌流した。灌流液を回収し、鼻腔洗浄液とした。鼻腔洗浄液を２３０ｇ、１０分間、４℃で遠心分離した後、上清及び沈殿（ペレット）を得た。ペレットに０．５ｍＬの２ｍｇ／ｍＬ塩化ナトリウム液を加えることにより溶血させ、その１分後に１６ｍｇ／ｍＬ塩化ナトリウム液を０．５ｍＬ加えることで等張化した。再度上記条件で遠心分離し、上清を除いたペレットを生理食塩液１００μＬに懸濁し、視算法にて、１μＬ当たりの全白血球数（総細胞数）を算出した。算出後、再度上記条件で遠心分離した。そのペレットに生理食塩液を加え、２×１０６ｃｅｌｌｓ／ｍＬ以下の細胞懸濁液となるように希釈した。セトリングチャンバー（ＤＣ８／ＤＣ８ＡＰ、家田貿易株式会社）にセットしたスライドガラスに、希釈された細胞懸濁液を２０μＬずつのせ、４８．６ｇ、３０秒間、４℃で遠心し、ドライヤーの冷風で乾燥させ塗抹標本を作製した。乾燥後、メイグリンワルド・ギムザ染色を行った。顕微鏡（ＯＬＹＭＰＵＳ  ＣＸ３１  １０×４０）にて最大５００個の白血球を観察し、好中球、好酸球、マクロファージ及びリンパ球に分類した。１μＬ当たりの総細胞数に対する各細胞の比率を求め、この比率に基づき１μＬ当たりの各細胞数を、以下の式により算出した。
【００７８】
【数２】
2013208110.tif 000008
【００７９】
評価は、１μＬ当たりの総細胞数及び各細胞数について行った。
【００８０】
図６に、好酸球浸潤における結果を示した。
【００８１】
Ｓ−ヘキシルＧＳＨを前処置後ＯＶＡで惹起したモルモットアレルギー性鼻炎モデルにおける好酸球浸潤に対し、モンテルカストと化合物１の併用群は、モンテルカスト単独群よりも強い抑制効果を示した。
【００８２】
以上の結果から、モルモットに５ｍｇ／ｋｇ以上のＳ−ヘキシルＧＳＨを前処置後２ｍｇ／ｋｇのＯＶＡを処置することにより、ｃｙｓＬＴ２受容体が関与するアレルギー性鼻炎が惹起されることが明らかとなった。また、５〜１５ｍｇ／ｋｇのＳ−ヘキシルＧＳＨを前処置後２ｍｇ／ｋｇのＯＶＡを処置する実験条件下で、ｃｙｓＬＴ１受容体とｃｙｓＬＴ２受容体が共に関与するアレルギー性鼻炎がモルモットにおいて惹起されることが明らかとなった。
参考例１  アシビシンを前処置後にＬＴＣ４で惹起したモルモット喘息モデル（評価項目：気道収縮）
ＧＳＨの代わりに、γＧＴの不可逆的阻害剤として知られているアシビシン（ＢＩＯＭＯＬ）を用いて、実施例１と同様の方法により、モルモット喘息モデルを作成した。アシビシンは、生体内で十分なγＧＴ阻害作用を示すと考えられている２０ｍｇ／ｋｇの投与量（ｃａｎｃｅｒ  ｒｅｓｅａｃｈ，５４，５９２５−５９２９，１９９４参照）を、ＬＴＣ４（５０μｇ／ｋｇ）投与２時間前に静脈内に投与した。本モデルを用いて、ｃｙｓＬＴ１受容体選択的拮抗薬であるモンテルカストの気道収縮に対する効果について、実施例１と同様の方法により評価した。結果を表６に示す。
【００８３】
本実施例においては、気道収縮の抑制率が８０％を超えた場合を、完全な抑制と評価し、２０％以下の場合を抑制効果なしと評価した。表６においては、「−」は０〜２０％の抑制率を、「＋＋＋＋」は８１〜１００％の抑制率をそれぞれ表す。
【００８４】
【表６】
2013208110.tif 000009
【００８５】
モルモットにアシビシンを前処置しても、モンテルカストによる気道収縮抑制効果は減弱せず、アシビシン非処置下でのモルモット喘息モデルと同様に完全な抑制を示した。この結果から、γＧＴの不可逆的阻害剤であるアシビシンをモルモットに前処置しても、ｃｙｓＬＴ２受容体が関与するモルモット喘息モデルは構築できないことが明らかとなった。
参考例２  セリンホウ酸を前処置後にＯＶＡで惹起したモルモット喘息モデル（評価項目：喘息発作）
Ｓ−ヘキシルＧＳＨの代わりに、γＧＴの遷移状態阻害剤として知られているセリンホウ酸を用いて、実施例４と同様の方法によりモルモット喘息モデルを作成した。セリンホウ酸は、生体内で十分なγＧＴ阻害作用を示すと考えられている３０ｍｇ／ｋｇの投与量（Ａｍ．  Ｊ．  Ｒｅｓｐｉｒ．  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．，１５，２６０−２６７，１９９６参照）を、１．６ｍｇ／ｋｇのＯＶＡと同時またはＯＶＡ投与の１０分前に静脈内に投与した。本モデルを用いて、ｃｙｓＬＴ１受容体選択的拮抗薬であるモンテルカストの喘息発作に対する効果を評価した。その結果を、図４に示す。症状観察はＯＶＡ投与２時間後まで行なった。なお、モンテルカスト（１ｍｇ／ｋｇ）はＯＶＡ投与１時間前に経口投与した。
【００８６】
モルモットにセリンホウ酸を前処置しても、モンテルカストによる喘息発作抑制効果が減弱することはなく、増強する傾向を示した。この結果から、モルモットにγＧＴの遷移状態阻害剤であるセリンホウ酸を前処置しても、ｃｙｓＬＴ２受容体が関与する喘息モデルは構築できないことが明らかとなった。
【００８７】
以上の如く、正常若しくはＯＶＡにより能動感作したモルモットに、γＧＴの基質競合阻害剤（Ｓ−ヘキシルＧＳＨ、ＧＳＨ）を前処置した後に惹起剤（ＬＴＣ４またはＯＶＡ）を投与することにより、ｃｙｓＬＴ２受容体が関与する呼吸器疾患（例えば、喘息やアレルギー性鼻炎等）が惹起されることが明らかとなった。さらに、ｃｙｓＬＴ１受容体とｃｙｓＬＴ２受容体が共に関与する喘息またはアレルギー性鼻炎が惹起されるＳ−ヘキシルＧＳＨ及び惹起剤の投与条件を見出した。
【００８８】
一方、γＧＴの不可逆的阻害剤（アシビシン）または遷移状態阻害剤（セリンホウ酸）の前処置では、ｃｙｓＬＴ２受容体が関与する喘息（気道収縮、喘息発作、気道血管透過性亢進）を惹起することはできなかった。このことから、モルモットにおいてｃｙｓＬＴ２受容体が関与する呼吸器疾患を惹起するためには、γＧＴ阻害剤の中でも基質競合阻害剤の使用が不可欠であることが明らかとなった。
【産業上の利用可能性】
【００８９】
本発明は、ｃｙｓＬＴ２受容体が関与する呼吸器疾患（例えば、喘息やアレルギー性鼻炎等）の治療に極めて有用であると考えられているｃｙｓＬＴ２受容体拮抗薬またはｃｙｓＬＴ１／ＬＴ２受容体デュアル拮抗薬のｉｎ  ｖｉｖｏでの薬効を評価することができるモルモット呼吸器疾患モデルを提供するものであり、新規の医薬品を創出するための薬効評価に有用である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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