(57)【要約】【課題】本発明は、ポリアセチレン化合物及びその応用を提供する。【解決手段】樟芝の子実体より分離し、一酸化窒素生成抑制の効果を持つ該ポリアセチレン化合物であり、該ポリアセチレン化合物は、抗炎症效果を持つ医薬組成物の製造に使用されるものであり、本発明は更に、樟芝の子実体における指標となる生理的な代謝物を示し、それが樟芝品質の評価に用いられる。【選択図】図１
2013119544.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の化７で表されることを特徴とするポリアセチレン化合物。
【化７】
2013119544.tif 000013
【請求項２】
該Ｒ１と該Ｒ２は独立し、同一または異なるアルコキシ基であることを特徴とする請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
該アルコキシ基は、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ基であることを特徴とする請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
下記の化８で表されることを特徴とする請求項１に記載の化合物。
【化８】
2013119544.tif 000014
【請求項５】
下記の化９で表されるポリアセチレン化合物を含有していることを特徴とする樟芝抽出物。
【化９】
2013119544.tif 000015
【請求項６】
樟芝の子実体から抽出したものであることを特徴とする請求項５に記載の抽出物。
【請求項７】
有效量の活性成分、及び医学的に許容されるキャリヤーが含まれており、該活性成分は、請求項１に記載のポリアセチレン化合物、または請求項５に記載の樟芝抽出物であることを特徴とする医薬組成物。
【請求項８】
該活性成分０．１〜９５ｗｔ％、及び該医学的に許容されるキャリヤー０．１〜９５ｗｔ％が含まれていることを特徴とする請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項９】
炎症反応の抑制に用いられることを特徴とする請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
一酸化窒素生成の抑制に用いられることを特徴とする請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
医学的に許容されるキャリヤーは乳糖、澱粉、繊維素派生物、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、水、適切な油、生理食塩水、ブドウ糖水溶液またはその組み合わせであることを特徴とする請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
カプセル、錠剤、散剤、液剤、懸濁液剤または注射剤であることを特徴とする請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
下記の手順、
a.     乾燥した樟芝の子実体を取得、
b.     該樟芝の子実体のアルコール抽出物を取得、そして
c.     該アルコール抽出物でのトリテルペノイド類化合物、ポリアセチレン化合物とベンゼン環化合物の含有量を分析して、樟芝の品質を決めること
が含まれ、該ポリアセチレン化合物は、下記の化１０で表される化合物であることを特徴とする樟芝品質の評価方法。
【化１０】
2013119544.tif 000016
【請求項１４】
該トリテルペノイド類化合物は、アントシンＫ、アントシンＣ、アントシンＨ、デヒドロスルフレン酸、アントシンＢ、アントシンＧ、アントシンＡ、１５−アセトキシ−デヒドロスルフレン酸、デヒドロエブリコ酸が含まれていることを特徴とする請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
該ポリアセチレン化合物は更に、アントロカンフィンＡを含有していることを特徴とする請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
該ベンゼン環化合物は、１，４−ビスメトキシ−２，３−メチレンジオキシ−５−トルエン、及び２，２’５，５’−テトラメトキシ−３，４，３’，４’−ビスメチレンジオキシ−６，６’−ジメチルビフェニルが含まれていることを特徴とする請求項１３に記載の樟芝品質の評価方法。
【請求項１７】
該手順ｂは、該乾燥した樟芝の子実体とアルコールを混合、そして抽出時間６０〜１２０分間で行われることが含まれていることを特徴とする請求項１３に記載の方法。
【請求項１８】
該分析方法は、高速液体クロマトグラフィーであることを特徴とする請求項１３に記載の方法。
【請求項１９】
該高速液体クロマトグラフィー法の固定相はカーボン１８チューブ、流動相は水、メチルアルコールとアセトニトリルによる混合物であることを特徴とする請求項１８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ポリアセチレン化合物及びその応用に関わり、特に、樟芝から抽出したポリアセチレン化合物及びその応用に関する。
【背景技術】
【０００２】
牛樟芝ベニクスノキタケ（Ａｎｔｒｏｄｉａ  ｃｉｎｎａｍｏｍｅａ）は別名樟芝とも呼ばれ、ヒダナシタケ目（Ａｐｈｙｌｌｏｐｈｏｒａｌｅｓ）、サルノコシカケ科（Ｐｏｌｙｐｏｒａｃｅａｅ）の多年生の蕈菌類に属する台湾特有の真菌であり、樟芝が牛樟樹（Ｃｉｎｎａｍｏｕｍ  ｋａｎｅｈｉｒａｉ  Ｈａｙ）の空洞になった幹内部の腐った内壁のみに寄生するものであり、牛樟樹は数が非常に少なく、台湾で保護樹木として指定され、また樟芝は生長速度が緩慢なことから、樟芝の数も非常に希少であり、市場ニーズに対応するために、現在の研究により、樟芝が牛樟樹のみに寄生する制限は突破されたが、高い注目を集めている薬用価値があるから、樟芝の値段は高くて相場がなかなか下がらないようである。
【０００３】
台湾の伝統医学の考えによると、樟芝には、肝臓、高血圧、腹痛やガンなど疾患の潜在的治療効果があるとされ、科学的に、樟芝に含まれている複雑な成分に対しても大きな興味を示し、現在、樟芝に含有されている生理活性成分は、トリテルペノイド類（ｔｒｉｔｅｒｐｅｎｏｉｄｓ）化合物、多糖体（ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ、例えば、β−−Ｄ−−デキストラン）、アデノシン（ａｄｅｎｏｓｉｎｅ）、ビタミン（例えば、ビタミンＢ、ナイアシン）、スーパーオキシドディスムターゼ（ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ  ｄｉｓｍｕｔａｓｅ、ＳＯＤ）酵素、核酸、ステロール類と血圧安定物質物質（例えばａｎｔｏｄｉａ  ａｃｉｄ）などが明らかになり、その中、トリテルペノイド類化合物に関する研究が最も多く行われており、樟芝に含まれている薬用価値の成分研究や開発に取り組んでいるなか、現在でも樟芝の生長や成熟過程における代謝物を完全に明らかにすることはできない。
【０００４】
一般的に、樟芝の子実体は、薬用価値が最も高い部分だと考えられているが、現在はまだ、樟芝の子実体の生理組成物を研究するための完全な実験方法はなく、樟芝を適当に薬物製造に生かす目的を実現させるために、樟芝の子実体の生理組成物を十分に分析することにより、更に、樟芝に含まれている各種の化合物、及び各種化合物特有の治療効果と用途を完全に把握できると思われる。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の目的は、樟芝から抽出され、薬用価値を持つ新規な化合物を提供することにある。
【０００６】
本発明のもう一つの目的は、樟芝から抽出した活性成分を有し、樟芝の特性を適当に運用する目的を実現させるための医薬組成物を提供することにある。  
【０００７】
本発明の更にもう一つの目的は、樟芝の生長や成熟過程における代謝物を理解し、それにより、指標となる生理的な代謝物を確かめ、更に樟芝の生長品質と状態を把握するための樟芝品質の評価方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
上述した目的を達成させるために、本発明は、下記の化１で表され
ることを特徴とするポリアセチレン化合物を提供する。
【０００９】
【化１】
2013119544.tif 000003
該Ｒ１と該Ｒ２は、同一または異なるアルコキシ基であることを特徴とする好適な該化合物。
【００１０】
該アルコキシ基は、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ基であることを特徴とする好適な該化合物。
【００１１】
下記の化２で表されることを特徴とする好適な該ポリアセチレン化合物。
【００１２】
【化２】
2013119544.tif 000004
本発明はまた、下記の化３で表されるポリアセチレン化合物を含有していることを特徴とする樟芝抽出物を提供する。
【００１３】
【化３】
2013119544.tif 000005
樟芝の子実体から抽出したものであることを特徴とする好適な該抽出物。
【００１４】
本発明は更に、有效量の活性成分、及び医学的に許容されるキャリヤーが含まれており、該活性成分は、該ポリアセチレン化合物または該樟芝抽出物であることを特徴とする医薬組成物を提供する。
【００１５】
該活性成分５〜９５ｗｔ％、及び該医学的に許容されるキャリヤー５〜９５ｗｔ％が含まれていることを特徴とする好適な該医薬組成物。
【００１６】
炎症反応の抑制に用いられることを特徴とする好適な該医薬組成物。
【００１７】
好適な該医薬組成物は、一酸化窒素生成の抑制に用いられることを特徴とする好適な該医薬組成物。
【００１８】
該医学的に許容されるキャリヤーは乳糖、澱粉、繊維素派生物、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、水、適切な油、生理食塩水、ブドウ糖水溶液またその組み合わせであることを特徴とする好適な該医薬組成物。
【００１９】
カプセル、錠剤、散剤、液剤、懸濁液剤または或注射剤であることを特徴とする好適な該医薬組成物。
【００２０】
本発明はまた更に、下記の手順、ａ．乾燥した樟芝の子実体を取得、ｂ．該樟芝の子実体のアルコール抽出物を取得、そしてｃ．該アルコール抽出物でのトリテルペノイド類化合物、ポリアセチレン化合物とベンゼン環化合物の含有量を分析して、樟芝の品質を決めることが含まれ、該ポリアセチレン化合物は、下記の化４で表される化合物であることを特徴とする樟芝品質の評価方法を提供する。
【００２１】
【化４】
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該トリテルペノイド類化合物は、アントシンＫ、アントシンＣ、アントシンＨ、デヒドロスルフレン酸、アントシンＢ、アントシンＧ、アントシンＡ、１５−アセトキシ−デヒドロスルフレン酸、デヒドロエブリコ酸が含まれていることを特徴とする好適な方法である。
【００２２】
該ポリアセチレン化合物は更に、アントロカンフィンＡを含有していることを特徴とする好適な方法である。
【００２３】
該ベンゼン環化合物は１，４−ビスメトキシ−２，３−メチレンジオキシ−５−トルエン、及び２，２’，５，５’−テトラメトキシ−３，４，３’，４’−ビスメチレンジオキシ−６，６’−ジメチルビフェニルが含まれていることを特徴とする好適な方法である。
【００２４】
該手順ｂは、該乾燥した樟芝の子実体とアルコールを混合、そして抽出時間６０〜１２０分間で行われることが含まれていることを特徴とする好適な方法である。
【００２５】
該分析方法は、高速液体クロマトグラフィーであることを特徴とする好適な方法である。
【００２６】
該高速液体クロマトグラフィーの固定相はカーボン１８チューブ、流動相は水、メチルアルコールとアセトニトリルによる混合物であることを特徴とする好適な方法である。
【００２７】
上述した内容をまとめると、本発明は、樟芝から抽出したポリアセチレン化合物、それを含有する抽出物、及び該化合物または該抽出物を活性成分として作られた医薬組成物に関わり、本発明では、該ポリアセチレン化合物には、一酸化窒素生成の抑制作用があることから、抗炎症に効果があると分かり、一方、樟芝の生長や成熟過程における代謝物を研究することにより、指標となる生理的な代謝物を決め、そこで、該指標となる生理的な代謝物を分析して、樟芝品質の評価方法を求めたのである。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１】本発明のＡＣ−３−９、ＡＣ−５−９、ＡＣ−７−９とＡＣ−９−９抽出物のＨＰＬＣ分析スペクトルを表す。
【図２】ＡＣ−９−３、ＡＣ−９−６、ＡＣ−９−９とＡＣ−９−１２抽出物のＨＰＬＣ分析スペクトルを表す。
【図３】本発明の実施例３より得られた化合物の一酸化窒素生成抑制活性。
【発明を実施するための形態】
【００２９】
現在、実験により、樟芝に含まれている多くの化合物が確認されているが、樟芝の子実体の生理組成物を研究するための完全な実験方法はなく、本発明は、樟芝の子実体の生理組成物を分析することにより、指標となる生理的代謝物が分かり、更に、樟芝品質の評価方法が出来上がったが、本発明は、該指標となる生理的な代謝物から、更に、新規な化合物が発見され、更に、そこに潜在的薬用価値があると考えられている。
【００３０】
本発明はポリアセチレン化合物は、下記の化５で表されている。
【００３１】
【化５】
2013119544.tif 000007
該Ｒ１と該Ｒ２は、同一または異なるアルコキシ基であり、好適な形態として、該アルコキシ基はＣ１〜Ｃ４アルコキシ基である。
【００３２】
本発明でいう該樟芝抽出物とは、明らかに樟芝の子実体より抽出した物のことをいい、本発明の樟芝抽出物の抽出方法について簡単に言えば、まず、乾燥した樟芝の子実体とアルコールを十分に混合し、６０〜１２０分間抽出するが、混合の仕方は、特に制限することはなく、例えば、超音波発振装置を使用し、混合効果を高めてもよいが、それから、得られた粗抽出物を乾燥したあと、更に、それをメチルアルコールに溶解するが、最後は、該粗抽出物の溶解しているメチルアルコール溶液が固相抽出カートリッジ（ＳＰＥ  ｃａｒｔｒｉｄｇｅ；  Ｓｅｐ−Ｐａｋ  Ｃ１８，ｗａｔｅｒ  Ｃｏ．、Ｍｉｌｆｏｒｄ、ＭＡ  ＵＳＡ）を通過すると、本実施例の樟芝の子実体抽出物が得られる。
【００３３】
本発明でいう  “医学的に許容される”とは、臨床実験により、試験対象に対して正常な生理的反応に影響を及ぼさず、特に、含有する活性成分との不良反応が起こらないことをいい、不良反応とは、該活性成分の効果を低下、消失させ、または、該活性成分との相互作用により、試験対象に害のある物質を与えることをいう。
【００３４】
本発明でいう“医学的に許容されるキャリヤー”とは、乳糖、澱粉、繊維素派生物、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、水、適切な油、生理食塩水、ブドウ糖水溶液またはそれの組み合わせが含まれているが、それに限らないことをいい、本発明の医薬組成物は、カプセル、錠剤、散剤、液剤、懸濁液剤または注射剤でもよく、よく明確に言えば、本発明の医薬組成物の形式により、選択可能で適切な医学的に許容されるキャリヤー、例えばカプセルの場合、通常使用するキャリヤーは例えば、乳糖、澱粉、繊維素派生物、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはその組み合わせが挙げられる。
【００３５】
好適な形態として、本発明の医薬組成物は、活性成分５〜９５ｗｔ％、及び医学的に許容されるキャリヤー５〜９５ｗｔ％が含まれており、該活性成分は、本発明のポリアセチレン化合物、またはそれを含有する樟芝抽出物であり、本発明の医薬組成物は場合により、医学的に許容される安定剤、防腐剤、抗酸化剤またはその組み合わせを配合してもよいが、当該分野における通常の知識を有する者であれば分かると思われるが、本発明の医薬組成物の投与量は、要素の変化、例えば、投与形式と経路、投与対象者の年齢、健康と体重、症状の性質と程度、並行治療の種類、治療頻度、及び求める效果により調整可能である。
【００３６】
本発明でいう“品質”とは、樟芝の成熟度、及びその含有する薬用価値のある成分の含有量をいい、成熟度とは、該樟芝の個体は、十分な薬用価値の成分量が生成され、そして該成分の含有量は、該個体の含有量が安定した状態にあることをいい、本発明でいう“樟芝品質の評価”とは、取得した樟芝の状態を評価、取得した樟芝の子実体または樟芝の子実体抽出物、その由来の樟芝の状態を評価することをいう。
【実施例１】
【００３７】
本発明に使用する樟芝
本発明に使用する樟芝は、国立中興大学から取得したもので、計ＡＣ−３、ＡＣ−５、ＡＣ−７及ＡＣ−９の４品種を取得、実驗を行うために、これらの４品種をそれぞれ牛樟樹（Ｃｉｎｎａｍｏｍｕｍ  ｋａｎｅｈｉｒａｉ）に移し９か月培養、ＡＣ−３−９、ＡＣ−５−９、ＡＣ−７−９とＡＣ−９−９４品種を得るが、その中、ＡＣ−９は、９か月のものの他に、更に３か月、６か月と１２か月培養して得たもの、それぞれＡＣ−９−３、ＡＣ−９−６、ＡＣ−９−１２がある。
【実施例２】
【００３８】
樟芝の子実体より抽出物を抽出する。
抽出の手順に入るとき、最適化の抽出效果を得るために、まず、抽出時間による抽出率を測定するが、最適な抽出時間を得るために、新鮮な樟芝の子実体を７２時間乾燥したあと、平均粒径０．７  ｍｍ以下の粉末に粉砕し、その中から子実体粉末５ｇを三角フラスコ（ｆｌａｓｋ；２５０ｍＬ）に入れ、アルコール（ＥｔＯＨ）１００ｍＬと混合させるが、子実体粉末とアルコールの入っている三角フランクを、超音波発振装置（Ｂｒａｎｓｏｎ  ５５１０、Ｂｒａｎｓｏｎ  Ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ、Ｏｎｔａｒｉｏ、Ｃａｎａｄａ）の中に入れ、振動させることにより、十分に混合させるようにするが、子実体粉末とアルコールをそれぞれ１０、２０、３０、６０、１２０分間混合後（抽出時間）、デカントし（ｄｅｃａｎｔ）、真空中でろ過するが、その後、回転蒸散器で濃縮、乾燥するが、抽出時間により得られた抽出率は、下記の表１に示すが、その中に示したデータは、平均値±標準偏差（ｎ＝３）で示されている。
【００３９】
【表１】
2013119544.tif 000008
表１のデータから分かるように、抽出率は原則として、抽出時間の増加により増加し、抽出時間は１０、２０と３０及び６０と１２０の二グループに分かれるが、本発明では、抽出率と時間の效率を考慮に入れ、最適な抽出時間を６０分間とした。
【００４０】
最適な抽出時間を確かめたあと、抽出を行い、本発明に必要な樟芝抽出物を得るが、まず、実施例一に述べた乾燥した樟芝の子実体を取得するが、常温下、アルコール９５％にて乾燥した樟芝の子実体５８０ｇを抽出するが、得られたアルコール粗抽出物（ｃｒｕｄｅ  ｅｘｔｒａｃｔ）を真空で乾燥させ、乾燥物１８３．９ｇを得たが、該乾燥物を再びメチルアルコール（１０ｍｇ／ｍＬ）に溶解し、その後、固相抽出カートリッジ（ＳＰＥ  ｃａｒｔｒｉｄｇｅ；  Ｓｅｐ−Ｐａｋ  Ｃ１８，ｗａｔｅｒ  Ｃｏ．、Ｍｉｌｆｏｒｄ、ＭＡ  ＵＳＡ）に通過させると、本実施例の樟芝の子実体抽出物を得られる。  
【実施例３】
【００４１】
実施例２より得られた樟芝ＡＣ−９−９抽出物の組成を分析する。
樟芝の子実体抽出物に含まれている成分をより完全に把握するために、本実施例では、高速液体クロマトグラフィー法（ＨＰＬＣ）により、実施例２で得られた抽出物を分離させる。
【００４２】
本実施例に使用する高速液体クロマトグラフィー法はＡｇｉｌｅｎｔ  １１００  ＨＰＬＣ  システムに紫外線検出器（ＵＶ  ｄｅｔｅｃｔｏｒ）をセットしたものであり、固定相はカーボン１８チューブ（Ｌｕｎａ  Ｃ１８  ｃｏｌｕｍｎ；  ２５０×１０．０  ｍｍ、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ、Ｔｏｒｒａｎｃｅ  ＣＡ）、流動相は、次の三溶液（Ａ）水、（Ｂ）メチルアルコール（ＭｅＯＨ）、（Ｃ）アセトニトリル（ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ）を混合したもので、勾配溶出プロファイル（ｇｒａｄｉｅｎｔ  ｅｌｕｔｉｏｎ  ｐｒｏｆｉｌｅ）は次のように、Ａ：Ｂ：Ｃ  ＝  ４０：３０：３０（ｉｓｏｃｒａｔｉｃ）を０〜５分間、Ａ：Ｂ：Ｃ  ＝  ４０：３０：３０からＡ：Ｂ：Ｃ  ＝  １０：１０：８０（ｌｉｎｅａｒ  ｇｒａｄｉｅｎｔ）までを５〜９５分間、Ａ：Ｂ：Ｃ  ＝  １０：１０：８０からＡ：Ｂ：Ｃ  ＝  ０：０：１００（ｌｉｎｅａｒ  ｇｒａｄｉｅｎｔ）までを９５〜１０５分間、１００％Ｃ（ｉｓｏｃｒａｔｉｃ）を１０５〜１１５分間としたが、流速は０〜９５分間は０．５  ｍＬ／ｍｉｎ、９５〜１１５分間は１．０  ｍＬ／ｍｉｎ、測定用波長は２５４  ｎｍ。
【００４３】
実施例２の抽出物から計１３種の化合物が分離され、滞留時間（ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ  ｔｉｍｅ）はそれぞれ、１７．９分間（化合物ａ）、２０．８分間（化合物ｂ）、３８．１分間（化合物ｃ）、４１．２分間（化合物ｄ）、４２．１分間（化合物ｅ）、４６．１分間（化合物ｆ）、４８．７分間（化合物ｇ）、５１．８分間（化合物ｈ）、５３．４分間（化合物ｉ）、５５．０分間（化合物ｊ）、６７．８分間（化合物ｋ）、７３．２分間（化合物ｌ）、１０２．７分間（化合物ｍ）であり、更に、スペクトル分析により識別した化合物ａ〜ｍを次の表２に示す。
【００４４】
【表２】
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上記の表２から分かるように、化合物ａ、ｃ、ｆ、ｇ、ｉ、ｊ、ｋ、ｌ、ｍはトリテルペノイド及びステロール類化合物（ｔｒｉｔｅｒｐｅｎｏｉｄｓ  ａｎｄ  ｓｔｅｒｏｉｄｓ）、化合物ｄ、ｈはポリアセチレン化合物（ｐｏｌｙａｃｅｔｙｌｅｎｅｓ）、化合物ｂ、ｅはベンゼン環化合物（ｂｅｎｚｅｎｏｉｄｓ）に属するもので、注意すべきことは、本発明では、予想外の新化合物ｈが分離されているが、エレクトロスプレーイオン化質量分析装置（ＥＳＩ−ＭＳ）の解析により、化合物ｈは化学式Ｃ１５Ｈ１６Ｏ４（ｍ／ｚ  ２６０）、電子衝撃型高分解能質量分析装置（ＨＲＥＩＭＳ）の解析により、化合物ｈは化学式Ｃ１５Ｈ１６Ｏ４（ｍ／ｚ  ２６０．１０４２  ［Ｍ］＋、計算値２６０．１０４９）．  化合物ｈは、炭素信号が１５個あり、その中、芳香族炭素６個（ａｒｏｍａｔｉｃ  ｃａｒｂｏｎ）（δＣ  ＝  １３９．８、１３９．５、１３７．１、１３６．２、１２７．９、１０９．８）、アセチレン系炭素２個（ａｃｅｔｙｌｅｎｉｃ  ｃａｒｂｏｎ）（δＣ  ＝  ９７．５、８３．５）、オレフィン炭素２個（ｏｌｅｆｉｎｉｃ  ｃａｒｂｏｎ）（δＣ  ＝  １２７．２、１２１．１）、メトキシ基２個（ｍｅｔｈｏｘｙｌ  ｇｒｏｕｐ）（δＣ  ＝  ６０．４、６０．０）、メチル炭素２個（ｍｅｔｈｙｌ  ｃａｒｂｏｎ）（δＣ  ＝  ２３．６、１３．９）とメチレン炭素１個（ｍｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｃａｒｂｏｎ）（δＣ  ＝  １０１．４）が含まれている。
【００４５】
核磁気共鳴分光法（１Ｈ  ＮＭＲ）により、化合物ｈは、メトキシ基２個（δＨ  ＝  ３．９８、ｓ、３Ｈ；  ３．８７、ｓ、３Ｈ）、メチレンジオキシ  プロトン１個（ｍｅｔｈｙｌｅｎｅｄｉｏｘｙ  ｐｒｏｔｏｎ）（δＨ  ＝  ５．９８、ｓ、２Ｈ）、ビニルプロトン２個（ｖｉｎｙｌ  ｐｒｏｔｏｎ）（δＨ  ＝  ５．３８、ｂｒ  ｓ、１Ｈ；  ５．２７、ｂｒ  ｓ、１Ｈ）とメチルプロトン２個（ｍｅｔｈｙｌ  ｐｒｏｔｏｎ）（δＨ  ＝  ２．２７、ｓ、３Ｈ；  ２．０１、ｓ、３Ｈ）あるが、１３Ｃと１Ｈ  ＮＭＲ核磁気共鳴分光法により得たカーボンとプロトンの数は、ＨＲＥＩＭＳにより得た結果と一致し、メトキシ基の数及びメチレンジオキシ基のほかに、化合物ｈの１３Ｃと１Ｈ  ＮＭＲ核磁気共鳴分光法による結果が、アントロカンフィンＡの場合に類似したことから、この分離された新化合物ｈは、アントロカンフィンＣ（ａｎｔｒｏｃａｍｐｈｉｎ  Ｃ）と命名した。
【００４６】
アントロカンフィンＣは黄色の粉末で、下記の化６で表され、ＨＲＥＩＭＳ  ｍ／ｚ  ２６０．１０４２、［Ｍ］＋  Ｃ１５Ｈ１６Ｏ４（分子量の計算値は２６０．１０４９）．  ＥＩＭＳ（７０  ｅＶ）ｍ／ｚ（ｒｅｌｉｎｔ）：  ２６０（１００）［Ｍ］＋、２４５（２８）、１６１（１７）、１４６（７）、１２８（６）、１１７（６）、１１６（８）、１１５（１４）、１０４（１４）、１０３（１１）、９１（１０）、７７（１０）．  １Ｈ  ＮＭＲ  δ（６００  ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：  ５．９４（２Ｈ、ｓ、ＣＯＣＨ２ＯＣ）、５．３８（１Ｈ、ｂｒ  ｓ、Ｈｂ−４’）、５．２７（１Ｈ、ｂｒ  ｓ、Ｈａ−４’）、３．９８（３Ｈ、ｓ、ＯＣＨ３−５）、３．８７（３Ｈ、ｓ、ＯＣＨ３−６）、２．２７（３Ｈ、ｓ、ＣＨ３−３）、２．０１（３Ｈ、ｓ、ＣＨ３−３’）．  １３Ｃ  ＮＭＲ  δ（１２５  ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：  １３９．８（Ｃ−５）、１３９．５（Ｃ−１）、１３７．１（Ｃ−２）、１３６．２（Ｃ−６）、１２７．９（Ｃ−３）、１２７．２（Ｃ−３’）、１２１．１（Ｃ−４’）、１０９．８（Ｃ−４）、１０１．４（ＣＯＣＨ２ＯＣ）、９７．５（Ｃ−２’）、８３．５（Ｃ−１’）、６０．４（ＯＣＨ３−５）、６０．０（ＯＣＨ３−６）、２３．６（ＯＣＨ３−３’）、１３．９（ＣＨ３−３）である。
【００４７】
【化６】
2013119544.tif 000010
【実施例４】
【００４８】
実施例２より得られた樟芝抽出物の組成を分析する。
実施例１で述べたように、由来により、培養時間と培養条件が異なるが、本発明は計ＡＣ−３−９、ＡＣ−５−９、ＡＣ−７−９、ＡＣ−９−３、ＡＣ−９−６、ＡＣ−９−９、ＡＣ−９−１２、ＡＣ−９−９−ＣＣ、ＡＣ−９−９−ＣＫの９品種を使用、試験するが、実施例２では、本発明の樟芝ＡＣ−９−９の子実体抽出物の組成を分析したが、本実施例では、本発明の他の実験品種の子実体抽出物の組成を分析し、そこから指標となる生理的な代謝物を得ようとする。
【００４９】
実施例３での高速液体クロマトグラフィーにより、ＡＣ−３−９、ＡＣ−５−９、ＡＣ−７−９樟芝の子実体抽出物の組成を分析するが、それを、ＡＣ−９−９の結果と比較する。図１に示すように、ＡＣ−３−９、ＡＣ−７−９、ＡＣ−９−９抽出物に含まれている組成物の種類と割合は非常に類似し、その中、化合物ｉは、抽出物での含有量が一番多い成分であり、ＡＣ−５−９の組成物はやや異なるが、実施例３より分析された該１３種化合物も含まれているが、その中、化合物ｇは含有量が一番多い成分であり、次の表３には、ＡＣ−３−９、ＡＣ−５−９、ＡＣ−７−９とＡＣ−９−９抽出物に含まれている該１３種化合物の含有量を示す。
【００５０】
【表３】
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その上、実施例３と同様な高速液体クロマトグラフィー法により、ＡＣ−９−３、ＡＣ−９−６、ＡＣ−９−１２樟芝の子実体抽出物の組成を分析、ＡＣ−９−９の結果と比較するが、図２に示すように、品種ＡＣ−９を牛樟樹（Ｃｉｎｎａｍｏｍｕｍ  ｋａｎｅｈｉｒａｉ）に３〜１２か月培養している間、樟芝の子実体の組成が時間により変わるが、ＡＣ−９−３子実体の成分組成は比較的に単純で、化合物ｇと化合物ｍの二ピーク値だけが、時間の流れに伴って増加するが、樟芝の子実体の成分組成が次第に豊富になり、実施例３で分析した該１３種の生理的な代謝物になりつつあるが、この実驗結果により、安定した含有量を持つ該１３種生理的な代謝物の生成で、樟芝の成熟度を表していると考えられる。次の表４には、ＡＣ−９−３、ＡＣ−９−６、ＡＣ−９−９とＡＣ−９−１２抽出物に含まれている該１３種化合物の含有量を示す。
【００５１】
【表４】
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本実施例の結果から、実施例３で分析して得た該１３種化合物は、樟芝の成熟過程における指標となる生理的な代謝物であり、これらの物質は、異なる品種に類似した含有量を持つだけでなく、潜在的薬用価値があるものが多いというのがより重要なことだと分かり、当該分析より得た樟芝の抽出物における該１３種化合物の含有量から、得た樟芝の抽出物の品質の良し悪しが素早く判別できるのである。
【実施例５】
【００５２】
実施例３より分離した化合物の薬用価値を分析する。
台湾での伝統医学と学術研究では、樟芝の薬用価値についてかなり研究されており、本実施例は、実施例２より得られた化合物の抗炎症（ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ）効果を検討する。
【００５３】
本実施例では、リポ多糖類（ＬＰＳ）により誘導されたマウスの炎症マクロファージーを分析、それに、グライス反応（Ｇｒｅｉｓｓ  ｒｅａｃｔｉｏｎ）で、亜硝酸塩の測定により、間接的に一酸化窒素（ＮＯ）の生成量を測定するが、一酸化窒素は、炎症反応に関与する重要な要素であるため、一酸化窒素の生成量から、炎症反応の程度が推測できるのである。
【００５４】
簡単に言えば、あらかじめ培養皿７５ｃｍ２に培養されているマウスのマクロファージー（ＲＡＷ  ２６４．７  ｃｅｌｌ）を、密度２×１０５  ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの９６穴プレートに移し、培養するが、使用する培養液はＤＭＥＭに、ＦＢＳ１０％、ペニシリン（ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ）１００  ｕｎｉｔｓ／ｍＬとストレプトマイシン１００  μｇ／ｍＬ（ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ）を加えたものであり、培養環境は３７℃、ＣＯ２５％の細胞培養容器であり、それから、正常に付着した細胞にぞれぞれ実施例２により得た化合物を添加または添加しない状況で、ＬＰＳ（１μｇ／ｍＬ）処理を行いまたは行わずに、グライス反応により、細胞培養後の培養液のきれいな上澄液の亜硝酸塩濃度を測定する。
【００５５】
実験結果は図３に示すように、ＩＣ５０の方法により化合物それぞれのＮＯ生成抑制力を示すが、ＩＣ５０は５０％抑制濃度で、すなわち、活性酸素５０％が試料に阻害されたということであり、図３のデータに示すように、実施例２により得られた化合物はどれも、ＮＯ生成抑制反応があり、すなわち、抗炎症効果があることであり、化合物ｂ、ｅ、ｇ、ｍはＩＣ５０が０μｇ／ｍＬ（約２０〜３５μｇ／ｍＬ）より大きい場合を除き、その他の化合物はＣ５０がすべて２０μｇ／ｍＬより小さく、また、構造的にアントロカンフィンＡに類似した、分離された新化合物ｈも優れた抗炎症力があった。
【００５６】
なお、ＭＴＴ試験により、化合物それぞれの生物毒性を測定したが実験結果から、用量５〜４０μｇ／ｍＬのもとで、該化合物はどれも生物体に毒性が生じないことを明らかにした。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【手続補正書】
【提出日】平成23年12月9日(2011.12.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図３】
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