(57)【要約】【課題】ＢＤＮＦ様作用を有する末梢投与可能な低分子化合物を有効成分として含む神経変性疾患治療薬および精神疾患治療薬を提供する。【解決手段】式（１）［式中、Ａ１はフェニル基、ピリジル基、アダマンチル基、Ｃ１−６アルコキシカルボニル基等を表し；ｎは０または１を表し；Ｌは−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ１）−等を表し；Ｒ１は水素原子またはＣ１−６アルキル基を表し；Ａ２はフェニル基、Ｃ３−７シクロアルキル基等を表す。］で表される化合物もしくはそれらの薬学上許容される塩を有効成分とする神経変性疾患および精神疾患の治療薬。2013116858.tif 000010【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（１）：
【化１】
2013116858.tif 000009
［式中、Ａ１は、Ｃ１−６アルキル基；ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、およびＣ１−６アルコキシからなる群から選ばれる１〜３個の基で置換されていてもよいフェニル基；ピリジル基；Ｃ３−７シクロアルキル基；アダマンチル基；フェニルオキシカルボニル基；Ｃ１−６アルコキシカルボニル基；ベンゾイル基；またはＣ１−６アルキルカルボニル基を表し、
ｎは、０または１を表し、
Ｌは、−ＳＯ２−、−ＳＯ２−Ｎ（Ｒ１）−、−Ｃ（＝Ｏ）−、または−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ１）−を表し、
Ｒ１は、水素原子、またはＣ１−６アルキル基を表し、
Ａ２は、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、およびベンジルオキシからなる群から選ばれる１〜３個の基で置換されていてもよいフェニル基；ピリジル基；Ｃ３−７シクロアルキル基；またはアダマンチル基を表す。］
で表される化合物またはその薬学上許容される塩を有効成分とする神経変性疾患または精神疾患の治療薬。
【請求項２】
Ａ１が、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、およびＣ１−６アルコキシからなる群から選ばれる１〜３個の基で置換されていてもよいフェニル基；ピリジル基；アダマンチル基；またはＣ１−６アルコキシカルボニル基であり、Ａ２が、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、およびベンジルオキシからなる群から選ばれる１〜３個の基で置換されていてもよいフェニル基；またはＣ３−７シクロアルキル基である、請求項１記載の神経変性疾患または精神疾患の治療薬。
【請求項３】
Ａ１が、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、およびＣ１−６アルコキシからなる群から選ばれる１〜３個の基で置換されていてもよいフェニル基であり、ｎが１であり、Ｌが−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ１）−であり、Ｒ１が水素原子であり、Ａ２が、Ｃ１−６アルコキシ基で置換されていてもよいフェニル基；またはＣ３−７シクロアルキル基である、請求項１記載の神経変性疾患または精神疾患の治療薬。
【請求項４】
Ａ１が、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、およびＣ１−６アルコキシからなる群から選ばれる１〜３個の基で置換されていてもよいフェニル基；ピリジル基；アダマンチル基；またはＣ１−６アルコキシカルボニル基であり、ｎが０であり、Ｌが、−ＳＯ２−、または−Ｃ（＝Ｏ）−であり、Ａ２が、ハロゲン原子、Ｃ１−６アルキル、およびベンジルオキシからなる群から選ばれる１〜３個の基で置換されていてもよいフェニル基である、請求項１記載の神経変性疾患または精神疾患の治療薬。
【請求項５】
Ａ１が、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、およびＣ１−６アルコキシからなる群から選ばれる１〜３個の基で置換されていてもよいフェニル基；またはピリジル基であり、ｎが０であり、Ｌが−Ｃ（＝Ｏ）−であり、Ａ２が、ハロゲン原子、Ｃ１−６アルキル、およびベンジルオキシからなる群から選ばれる１〜３個の基で置換されていてもよいフェニル基である、請求項１記載の神経変性疾患または精神疾患の治療薬。
【請求項６】
４−（４，５−ジクロロ−２−メチルフェニル）スルフォニルピペラジン−１−カルボン酸エチル、
１−（５−クロロ−２−メチルフェニル）−４−（３−フルオロベンゾイル）ピペラジン、
１−（４−クロロ−３−メチルフェニル）−４−（３−フルオロベンゾイル）ピペラジン、
１−（３−ベンジルオキシベンゾイル）−４−（２−ピリジル）ピペラジン、
Ｎ−シクロヘプチル−２−［４−（２，３−ジメチルフェニル）ピペラジン−１−イル］アセトアミド、
Ｎ−シクロヘプチル−２−［４−（２−エトキシフェニル）ピペラジン−１−イル］アセトアミド、
２−［４−（２，３−ジメチルフェニル）ピペラジン−１−イル］−Ｎ−（２−エトキシフェニル）アセトアミド、
１−（１−アダマンチル）−４−（３−フルオロベンゾイル）ピペラジン、もしくは
２−［４−（５−クロロ−２−メチルフェニル）ピペラジン−１−イル］−Ｎ−シクロペンチルアセトアミド、またはその薬学上許容される塩を有効成分とする、請求項１記載の神経変性疾患または精神疾患の治療薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、脳由来神経成長因子（ＢＤＮＦ）様低分子化合物を含有する治療薬に関する。詳しくは、ＴＲＰＣ３またはＴＲＰＣ６チャンネルを活性化することによりＢＤＮＦ様作用を示す低分子化合物を有効成分とする神経変性疾患および精神疾患の治療薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
神経栄養因子は、中枢神経系（ＣＮＳ）の神経膠細胞及び神経細胞で恒常的に発現され、神経系の発達（分化）と生存維持に重要な役割を果たす。神経栄養因子には神経成長因子（ＮＧＦ）、脳由来神経成長因子（ＢＤＮＦ）、ニューロトロフィン３（Neurotrophin 3、ＮＴ３）などが含まれ、ＴｒｋＡ，ＴｒｋＢ，ＴｒｋＣ等の特異的な受容体型チロシンキナーゼに結合して、これを活性化させる。中でもＢＤＮＦシグナルを活性化することは、アルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病、レット症候群、外傷性脳損傷、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）などの神経変性疾患、老年性認知症、うつ病、双極性障害、統合失調症などの精神疾患を治療する上で、特に重要な役割を果たすと考えられている。
しかしながら、ＢＤＮＦを末梢投与しても、血中半減期が１分以下と短い上に、脳移行性も悪いため、ＢＤＮＦ蛋白そのものを神経変性疾患および精神疾患の治療薬として開発することは困難であった。そこで、ＢＤＮＦに替わって末梢投与で薬効を発現する低分子化合物の発見が待ち望まれてきた。
ＢＤＮＦと同様の効果を奏する（ミミックする）低分子化合物としては、ＴｒｋＢ受容体を直接活性化する７，８−ジヒドロフラボン誘導体（例えば、非特許文献１を参照）や、ＬＭ２２化合物（例えば、非特許文献２を参照）が知られているが、これらは治療薬として開発された実績はない。
一方、ＢＤＮＦシグナルはＴＲＰＣ３またはＴＲＰＣ６チャンネルと「共役(couple)」カップルしていることが知られており（例えば、非特許文献３を参照）、理論上、これらのチャンネルを直接活性化する低分子化合物はＢＤＮＦミミックとして働き、上述の神経変性疾患治療薬、精神疾患治療薬となりうる。唯一、ヨーロッパの民間伝承薬であるセイヨウオトギリソウ（Ｓｔ．Ｊｏｈｎ‘ｓ Ｗｏｒｔ）の有効成分と考えられているハイパフォリン（Hyperforin）がＴＲＰＣ６チャンネルを活性化することにより神経栄養因子様作用を示すという報告がなされているが（例えば、非特許文献４を参照）、他に、ＴＲＰＣ３またはＴＲＰＣ６チャンネルを活性化しＢＤＮＦ様作用を示す化合物の報告はほとんど見当たらない。
【０００３】
下記［表１］の化合物がＮＡＤＨ依存性エノイルＡＣＰレダクターゼ（NADH-dependent enoyl-ACP reductase）阻害作用を有することが知られている（非特許文献５を参照）。しかしながら、当該化合物がＴＲＰＣチャンネルを活性化するという記載や示唆は一切ない。
【表１】
2013116858.tif 000002
【０００４】
また下記式［化１］で表される化合物が、Ｎ−ホルミルペプチド受容体を活性化することが知られている（非特許文献６を参照）。しかしながら、当該化合物がＴＲＰＣチャンネルを活性化するという記載や示唆は一切ない。
【０００５】
【化１】
2013116858.tif 000003
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 107, 2687-2692 (2010)
【非特許文献２】J. Clin. Invest., 120, 1774-1785 (2010)
【非特許文献３】Nat. Neurosci. 10, 559-567 (2007)
【非特許文献４】FASEB J. 21, 4101-4111 (2007)
【非特許文献５】Bioorg. Med. Chem., 15, 6649-6658 (2007)
【非特許文献６】Eur. J. Med. Chem., 45, 5406-5419 (2010)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の課題は、ＢＤＮＦ様作用を有する末梢投与可能な低分子化合物を有効成分として含む神経変性疾患治療薬および精神疾患治療薬を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、鋭意検討した結果、下記式（１）で表される化合物およびその薬学上許容される塩（以下必要に応じ「本発明に係る化合物」と略称することがある。）が、ＴＲＰＣ３またはＴＲＰＣ６チャンネルを直接活性化することによりＢＤＮＦ様作用を示すことを見出し、発明を完成させるに至った。
【０００９】
すなわち本発明は、以下の通りである。
〔１〕  式（１）：
【化２】
2013116858.tif 000004
［式中、Ａ１は、Ｃ１−６アルキル基；ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、およびＣ１−６アルコキシからなる群から選ばれる１〜３個の基で置換されていてもよいフェニル基；ピリジル基；Ｃ３−７シクロアルキル基；アダマンチル基；フェニルオキシカルボニル基；Ｃ１−６アルコキシカルボニル基；ベンゾイル基；またはＣ１−６アルキルカルボニル基を表し、
ｎは、０または１を表し、
Ｌは、−ＳＯ２−、−ＳＯ２−Ｎ（Ｒ１）−、−Ｃ（＝Ｏ）−、または−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ１）−を表し、
Ｒ１は、水素原子、またはＣ１−６アルキル基を表し、
Ａ２は、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、およびベンジルオキシからなる群から選ばれる１〜３個の基で置換されていてもよいフェニル基；ピリジル基；Ｃ３−７シクロアルキル基；またはアダマンチル基を表す。］
で表される化合物またはその薬学上許容される塩を有効成分とする神経変性疾患または精神疾患の治療薬。
【００１０】
〔２〕  Ａ１が、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、およびＣ１−６アルコキシからなる群から選ばれる１〜３個の基で置換されていてもよいフェニル基；ピリジル基；アダマンチル基；またはＣ１−６アルコキシカルボニル基であり、Ａ２が、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、およびベンジルオキシからなる群から選ばれる１〜３個の基で置換されていてもよいフェニル基；またはＣ３−７シクロアルキル基である、〔１〕記載の神経変性疾患または精神疾患の治療薬。
【００１１】
〔３〕  Ａ１が、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、およびＣ１−６アルコキシからなる群から選ばれる１〜３個の基で置換されていてもよいフェニル基であり、ｎが１であり、Ｌが−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ１）−であり、Ｒ１が水素原子であり、Ａ２が、Ｃ１−６アルコキシ基で置換されていてもよいフェニル基；またはＣ３−７シクロアルキル基である、〔１〕記載の神経変性疾患または精神疾患の治療薬。
【００１２】
〔４〕  Ａ１が、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、およびＣ１−６アルコキシからなる群から選ばれる１〜３個の基で置換されていてもよいフェニル基；ピリジル基；アダマンチル基；またはＣ１−６アルコキシカルボニル基であり、ｎが０であり、Ｌが、−ＳＯ２−、または−Ｃ（＝Ｏ）−であり、Ａ２が、ハロゲン原子、Ｃ１−６アルキル、およびベンジルオキシからなる群から選ばれる１〜３個の基で置換されていてもよいフェニル基である、〔１〕記載の神経変性疾患または精神疾患の治療薬。
【００１３】
〔５〕  Ａ１が、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、およびＣ１−６アルコキシからなる群から選ばれる１〜３個の基で置換されていてもよいフェニル基；またはピリジル基であり、ｎが０であり、Ｌが−Ｃ（＝Ｏ）−であり、Ａ２が、ハロゲン原子、Ｃ１−６アルキル、およびベンジルオキシからなる群から選ばれる１〜３個の基で置換されていてもよいフェニル基である、〔１〕記載の神経変性疾患または精神疾患の治療薬。
【００１４】
〔６〕  ４−（４，５−ジクロロ−２−メチルフェニル）スルフォニルピペラジン−１−カルボン酸エチル［後記式(２)で表される化合物］、
１−（５−クロロ−２−メチルフェニル）−４−（３−フルオロベンゾイル）ピペラジン［後記式(３)で表される化合物］、
１−（４−クロロ−３−メチルフェニル）−４−（３−フルオロベンゾイル）ピペラジン［後記式(４)で表される化合物］、
１−（３−ベンジルオキシベンゾイル）−４−（２−ピリジル）ピペラジン［後記式(５)で表される化合物］、
Ｎ−シクロヘプチル−２−［４−（２，３−ジメチルフェニル）ピペラジン−１−イル］アセトアミド［後記式(６)で表される化合物］、
Ｎ−シクロヘプチル−２−［４−（２−エトキシフェニル）ピペラジン−１−イル］アセトアミド［後記式(７)で表される化合物］、
２−［４−（２，３−ジメチルフェニル）ピペラジン−１−イル］−Ｎ−（２−エトキシフェニル）アセトアミド［後記式(８)で表される化合物］、
１−（１−アダマンチル）−４−（３−フルオロベンゾイル）ピペラジン［後記式(９)で表される化合物］、もしくは
２−［４−（５−クロロ−２−メチルフェニル）ピペラジン−１−イル］−Ｎ−シクロペンチルアセトアミド［後記式(１０)で表される化合物］、またはその薬学上許容される塩を有効成分とする、〔１〕記載の神経変性疾患または精神疾患の治療薬。
【００１５】
また本発明では、以下の態様も含む。
〔７〕  式（１１）：
【化３】
2013116858.tif 000005
［式中、Ａ１は、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、およびＣ１−６アルコキシからなる群から選ばれる１〜３個の基で置換されていてもよいフェニル基またはピリジル基である置換または無置換芳香環を表し、
ｎはそれぞれ独立して、０または１を表し、
Ａ２は、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、およびベンジルオキシからなる群から選ばれる１〜３個の基で置換されていてもよいフェニル基またはＣ３−７シクロアルキル基である置換または無置換環基を表す。］
で表される化合物またはその薬学上許容される塩を有効成分とする神経変性疾患または精神疾患の治療薬。
【００１６】
〔８〕  式（１）：
【化４】
2013116858.tif 000006
［式中、Ａ１は、Ｃ１−６アルキル基；ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、およびＣ１−６アルコキシからなる群から選ばれる１〜３個の基で置換されていてもよいフェニル基；ピリジル基；Ｃ３−７シクロアルキル基；アダマンチル基；フェニルオキシカルボニル基；Ｃ１−６アルコキシカルボニル基；ベンゾイル基；またはＣ１−６アルキルカルボニル基を表し、
ｎは、０または１を表し、
Ｌは、−ＳＯ２−、−ＳＯ２−Ｎ（Ｒ１）−、−Ｃ（＝Ｏ）−、または−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ１）−を表し、
Ｒ１は、水素原子、またはＣ１−６アルキル基を表し、
Ａ２は、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、およびベンジルオキシからなる群から選ばれる１〜３個の基で置換されていてもよいフェニル基；ピリジル基；Ｃ３−７シクロアルキル基；またはアダマンチル基を表すが、但し
４−（４，５−ジクロロ−２−メチルフェニル）スルフォニルピペラジン−１−カルボン酸エチル、
１−（５−クロロ−２−メチルフェニル）−４−（３−フルオロベンゾイル）ピペラジン、
１−（４−クロロ−３−メチルフェニル）−４−（３−フルオロベンゾイル）ピペラジン、
１−（３−ベンジルオキシベンゾイル）−４−（２−ピリジル）ピペラジン、
Ｎ−シクロヘプチル−２−［４−（２，３−ジメチルフェニル）ピペラジン−１−イル］アセトアミド、
Ｎ−シクロヘプチル−２−［４−（２−エトキシフェニル）ピペラジン−１−イル］アセトアミド、
２−［４−（２，３−ジメチルフェニル）ピペラジン−１−イル］−Ｎ−（２−エトキシフェニル）アセトアミド、
１−（１−アダマンチル）−４−（３−フルオロベンゾイル）ピペラジン、および
２−［４−（５−クロロ−２−メチルフェニル）ピペラジン−１−イル］−Ｎ−シクロペンチルアセトアミド、並びに
上記非特許文献５および６に開示された化合物を除く。］
で表される化合物またはその薬学上許容される塩。
【００１７】
〔９〕  〔８〕の化合物またはその薬学上許容される塩を有効成分とする神経変性疾患または精神疾患の治療薬。
【００１８】
〔１０〕  上記〔１〕〜〔７〕および〔９〕のいずれかに記載の有効成分を治療が必要な哺乳動物に投与することを特徴とする、神経変性疾患または精神疾患の治療方法。
【００１９】
〔１１〕  神経変性疾患または精神疾患の治療に使用するための上記〔１〕〜〔７〕および〔９〕のいずれかに記載の有効成分。
【００２０】
〔１２〕  神経変性疾患または精神疾患の治療剤の製造における上記〔１〕〜〔７〕および〔９〕のいずれかに記載の有効成分の使用。
【発明の効果】
【００２１】
本発明に係る化合物は、ＴＲＰＣ３またはＴＲＰＣ６チャンネルを直接活性化することによりＢＤＮＦ様作用を示すと共に、ＢＤＮＦと同様の神経突起伸展作用を示し、神経変性疾患および精神疾患の予防および／または治療に有用である。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】は、式（２）で表される化合物の試験例２の結果を示す。白色のカラムは-100 mV、黒色のカラムは+100 mV時の値であり、化合物投与後の電流値を化合物投与前の電流値と比較した相対値で示してある。投与前後の２群間で統計学的有意差（T検定、* P<0.05, *** P<0.001）が認められた。
【図２】は、式（３）で表される化合物の試験例２の結果を示す。白色のカラムは-100 mV、黒色のカラムは+100 mV時の値であり、化合物投与後の電流値を化合物投与前の電流値と比較した相対値で示してある。投与前後の２群間で統計学的有意差（T検定、** P<0.01）が認められた。
【図３】は、式（４）で表される化合物の試験例２の結果を示す。白色のカラムは-100 mV、黒色のカラムは+100 mV時の値であり、化合物投与後の電流値を化合物投与前の電流値と比較した相対値で示してある。投与前後の２群間で統計学的有意差（T検定、* P<0.05）が認められた。
【図４】は、式（６）で表される化合物の試験例２の結果を示す。白色のカラムは-100 mV、黒色のカラムは+100 mV時の値であり、化合物投与後の電流値を化合物投与前の電流値と比較した相対値で示してある。投与前後の２群間で統計学的有意差（T検定、* P<0.05）が認められた。
【図５】は、式（７）で表される化合物の試験例２の結果を示す。白色のカラムは-100 mV、黒色のカラムは+100 mV時の値であり、化合物投与後の電流値を化合物投与前の電流値と比較した相対値で示してある。投与前後の２群間で統計学的有意差（T検定、* P<0.05）が認められた。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
以下に、本発明をさらに詳細に説明する。本明細書において「置換基」の定義における炭素の数を、例えば、「Ｃ１−６」などと表記する場合もある。具体的には、「Ｃ１−６アルキル」なる表記は、炭素数１から６のアルキル基と同義である。
【００２４】
本明細書において「基」なる用語は、１価基を意味する。例えば、「アルキル基」は、１価の飽和炭化水素基を意味する。また、本明細書における置換基の説明において、「基」なる用語を省略する場合もある。
また、特に指示した場合を除き、各々の基の説明はその基が他の基の一部分または置換基である場合にも該当する。
【００２５】
「ハロゲン原子」は、フッ素原子、塩素原子、臭素原子またはヨウ素原子が挙げられる。好ましくはフッ素原子または塩素原子が挙げられる。
【００２６】
「Ｃ１−６アルキル基」は、炭素数１〜６個を有する直鎖状もしくは分枝状の飽和炭化水素基を意味する。好ましくは、「Ｃ１−４アルキル基」である。「Ｃ１−６アルキル基」の具体例としては、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、１−エチルプロピル、ヘキシル、イソヘキシル、１，１−ジメチルブチル、２，２−ジメチルブチル、３，３−ジメチルブチル、２−エチルブチル等が挙げられる。
【００２７】
「Ｃ３−７シクロアルキル基」は、３員〜７員の単環式の飽和炭化水素基を意味する。好ましくは、「Ｃ３−６シクロアルキル基」である。「Ｃ３−７シクロアルキル基」の具体例としては、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル等が挙げられる。
【００２８】
「Ｃ１−６アルコキシ基」は前記「Ｃ１−６アルキル基」に酸素原子が結合した基を意味する。好ましくは、「Ｃ１−４アルコキシ基」である。「Ｃ１−６アルコキシ基」の具体例としては、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、イソブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ等が挙げられる。
【００２９】
「Ｃ１−６アルキルカルボニル基」の「Ｃ１−６アルキル」部分は、前記「Ｃ１−６アルキル」と同義である。好ましくは、「Ｃ１−４アルキルカルボニル基」である。「Ｃ１−６アルキルカルボニル基」の具体例としては、例えば、メチルカルボニル、エチルカルボニル、プロピルカルボニル、イソプロピルカルボニル、ペンチルカルボニル、イソブチルカルボニル、またはブチルカルボニル等が挙げられる。
【００３０】
「Ｃ１−６アルコキシカルボニル基」の「Ｃ１−６アルコキシ」部分は、前記「Ｃ１−６アルコキシ」と同義である。好ましくは、「Ｃ１−４アルコキシカルボニル基」などが挙げられる。「Ｃ１−６アルコキシカルボニル基」の具体例としては、例えば、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル、イソブトキシカルボニル等が挙げられる。
【００３１】
式（１）で表される化合物において、Ａ１はＣ１−６アルキル基；ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、およびＣ１−６アルコキシからなる群から選ばれる１〜３個の基で置換されていてもよいフェニル基；ピリジル基；Ｃ３−７シクロアルキル基；アダマンチル基；フェニルオキシカルボニル基；Ｃ１−６アルコキシカルボニル基；ベンゾイル基；またはＣ１−６アルキルカルボニル基を表し、好ましくはハロゲン、Ｃ１−６アルキル、およびＣ１−６アルコキシからなる群から選ばれる１〜３個の基で置換されていてもよいフェニル基；ピリジル基；Ｃ３−７シクロアルキル基；アダマンチル基；フェニルオキシカルボニル基；またはベンゾイル基のような環基を含む基を表し、より好ましくはハロゲン、Ｃ１−６アルキル、およびＣ１−６アルコキシからなる群から選ばれる１〜３個の基で置換されていてもよいフェニル基；またはピリジル基を表す。
また、ここでピリジル基、Ｃ３−７シクロアルキル基、アダマンチル基、フェニルオキシカルボニル基、Ｃ１−６アルコキシカルボニル基、ベンゾイル基、およびＣ１−６アルキルカルボニル基もフェニル基と同様に、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、およびＣ１−６アルコキシからなる群から選ばれる１〜３個の基で置換されていてもよい。
上記フェニル基等に置換されてもよい１〜３個の置換基は、好ましくは１または２個の置換基、より好ましくは１個の置換基で置換されていてもよい。
【００３２】
式（１）で表される化合物において、Ａ２はハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、およびベンジルオキシからなる群から選ばれる１〜３個の基で置換されていてもよいフェニル基；ピリジル基；Ｃ３−７シクロアルキル基；またはアダマンチル基を表し、好ましくはハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、およびベンジルオキシからなる群から選ばれる１〜３個の基で置換されていてもよいフェニル基；ピリジル基；またはＣ３−７シクロアルキル基を表し、より好ましくはハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、およびベンジルオキシからなる群から選ばれる１〜３個の基で置換されていてもよいフェニル基；またはＣ３−７シクロアルキル基を表す。
また、ここでピリジル基；Ｃ３−７シクロアルキル基；またはアダマンチル基もフェニル基と同様に、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、およびＣ１−６アルコキシからなる群から選ばれる１〜３個の基で置換されていてもよい。
上記フェニル基等に置換されてもよい１〜３個の置換基は、好ましくは１または２個の置換基、より好ましくは１個の置換基で置換されていてもよい。
【００３３】
式（１）で表される化合物において、Ｌは−ＳＯ２−、−ＳＯ２−Ｎ（Ｒ１）−、−Ｃ（＝Ｏ）−、または−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ１）−を表し、好ましくは−Ｃ（＝Ｏ）−、または−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ１）−を表す。
Ｒ１は水素原子またはＣ１−６アルキル基を表し、好ましくは水素原子、メチル基またはエチル基を表し、より好ましくは水素原子またはメチル基を表す。
【００３４】
式（１）で表される化合物の薬学上許容される塩としては、例えば無機酸または有機酸との塩が挙げられる。無機酸との塩の具体例としては、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、硝酸塩、硫酸塩、リン酸塩等が挙げられる。有機酸との塩の具体例としては、例えば、ギ酸塩、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、プロピオン酸塩、乳酸塩、酒石酸塩、シュウ酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、クエン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩等が挙げられる。本発明に係る化合物は、水和物等の溶媒和物の形態をとってもよい。
【００３５】
本発明に係る化合物は、公知化合物を原料として公知の合成方法を組み合わせることにより合成することができる。原料化合物として用いられる化合物は、それぞれ塩として用いてもよい。
【００３６】
式（１）で表される化合物のうち、ｎが０であり、Ｌが−Ｃ（＝Ｏ）−である化合物は、例えば非文献文献５に記載されている方法等と同様の方法によって製造することができる。
【００３７】
式（１）で表される化合物のうち、ｎが１であり、Ｌが−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ１）−であり、Ｒ１が水素原子またはＣ１−６アルキル基である化合物は、例えば文献（国際公開第２００９／０２５６２５号）に記載されている方法等と同様の方法によって製造することができる。
【００３８】
後記式（２）〜（１０）で表される化合物は、ＣＡＳ（Chemical Abstracts Service）により、Reg No.：838865-46-6、Reg No.：915893-66-2、Reg No.：915880-51-2、Reg No.：896659-19-1、Reg No.：896202-54-3、Reg No.：885435-40-5、Reg No.：896203-18-2、Reg No.：886634-85-1、およびReg No.：885428-11-5でそれぞれ登録されており、入手可能である。
また式（５）で表される化合物は、国際公開第２００９／１４３４０４号に記載されている方法によって製造することもできる。
【００３９】
尚、これらの反応は単なる例示であり、有機合成に習熟している者の知識に基づき、適宜、これらの例示に準じた方法や、他の方法で製造することもできる。
【００４０】
本発明に係る化合物は、不斉が生じる場合または不斉炭素を有する置換基を有する場合があり、そのような化合物にあっては光学異性体が存在する。本発明に係る化合物にはこれらの各異性体の混合物や単離されたものを含む。そのような光学異性体を純粋に得る方法としては、例えば光学分割法が挙げられる。
【００４１】
光学分割法としては、本発明に係る化合物またはその中間体を不活性溶媒中（例えばメタノール、エタノール、２−プロパノール等のアルコール系溶媒；ジエチルエーテル等のエーテル系溶媒；酢酸エチル等のエステル系溶媒；トルエン等の芳香族炭化水素系溶媒；アセトニトリル等のニトリル系溶媒；およびこれらの混合溶媒）、光学活性な酸（例えば、マンデル酸、Ｎ−ベンジルオキシアラニン、乳酸などのモノカルボン酸類；酒石酸、ｏ−ジイソプロピリデン酒石酸、リンゴ酸などのジカルボン酸類；カンファースルフォン酸、ブロモカンファースルフォン酸などのスルフォン酸類）と塩を形成させて光学活性体を単離する方法が挙げられる。
【００４２】
塩を形成させる温度としては、室温から溶媒の沸点の範囲が挙げられる。光学純度を向上させるためには、一旦、溶媒の沸点付近まで温度を上げることが望ましい。析出した塩を濾取する前に必要に応じて冷却し、収率を向上させることができる。光学活性な酸またはアミンの使用量は、基質に対し約０．５〜約２．０当量の範囲、好ましくは１当量前後の範囲が適当である。必要に応じ結晶を不活性溶媒中（例えばメタノール、エタノール、２−プロパノール等のアルコール系溶媒、ジエチルエ−テル等のエ−テル系溶媒、酢酸エチル等のエステル系溶媒、トルエン等の芳香族炭化水素系溶媒、アセトニトリル等およびこれらの混合溶媒）で再結晶し、高純度の光学活性な塩を得ることもできる。必要に応じ、得られた塩を通常の方法で酸または塩基と処理しフリー体を得ることもできる。
【００４３】
本発明に係る化合物は、ＴＲＰＣ６チャンネルおよび（または）ＴＲＰＣ３チャンネルを直接活性化し、ラット小脳由来顆粒細胞において、ＢＤＮＦと同様の神経突起伸展作用を示した。従って、本発明に係る化合物は、神経突起伸展作用剤であり、ＢＤＮＦが薬効を示すであろうと期待されている以下の疾患、即ち、アルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病、レット症候群、外傷性脳損傷、脊髄損傷、多発性硬化症、老年性認知症、ＡＬＳ、うつ病、双極性障害、統合失調症などの神経変性疾患および精神疾患の治療薬として有用である。
【００４４】
「末梢投与」は、本発明に係る化合物が中枢神経系に直接、例えば脳室内または髄腔内投与される投与経路の外、任意の投与経路を包含する。例えば、経口投与；経鼻投与；舌下投与；経皮的投与；点眼的投与；経肺投与；直腸内投与；硝子体内投与；腹腔内投与；静脈内投与；皮下投与；筋肉内投与；およびこれらの投与経路の２つ以上の組み合わせからなる群から選択される経路によって投与される。
【００４５】
経口的に投与する場合、通常用いられる投与形態で投与することができる。経口剤または直腸投与剤としては、例えば、カプセル、錠剤、ピル、散剤、カシェ剤、坐剤、液剤等が挙げられる。注射剤としては、例えば、無菌の溶液または懸濁液等が挙げられる。局所投与剤としては、例えば、クリーム、軟膏、ロ−ション、経皮剤（通常のパッチ剤、マトリクス剤）等が挙げられる。
【００４６】
上記の剤形は通常の方法で、薬学的に許容される賦形剤、添加剤とともに製剤化される。薬学的に許容される賦形剤、添加剤としては、担体、結合剤、香料、緩衝剤、増粘剤、着色剤、安定剤、乳化剤、分散剤、懸濁化剤、防腐剤等が挙げられる。
【００４７】
薬学的に許容される担体としては、例えば、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、砂糖、ラクトース、ペクチン、デキストリン、澱粉、ゼラチン、トラガント、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロ−ス、低融点ワックス、カカオバター等が挙げられる。カプセルは、本発明に係る化合物を薬学的に許容される担体と共に中に入れることにより製剤できる。本発明に係る化合物は薬学的に許容される賦形剤と共に混合し、または賦形剤なしにカプセルの中に入れることができる。カシェ剤も同様の方法で製造できる。
【００４８】
注射用液剤としては、溶液、懸濁液、乳剤等が挙げられる。例えば、水溶液、水−プロピレングリコール溶液等が挙げられる。液剤は、水を含んでもよい、ポリエチレングリコールまたは／およびプロピレングリコールの溶液の形で製造することもできる。経口投与に適切な液剤は、本発明に係る化合物を水に加え、着色剤、香料、安定化剤、甘味剤、溶解剤、増粘剤等を必要に応じて加え製造することができる。また経口投与に適切な液剤は、本発明に係る化合物を分散剤とともに水に加え、粘重にすることによっても製造できる。増粘剤としては、例えば、薬学的に許容される天然または合成ガム、レジン、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロースまたは公知の懸濁化剤等が挙げられる。
【００４９】
局所投与剤としては、上記の液剤および、クリーム、エアロゾル、スプレー、粉剤、ローション、軟膏等が挙げられる。上記の局所投与剤は、本発明に係る化合物と通常に使用される薬学的に許容される希釈剤および担体と混合し製造できる。軟膏およびクリ−ムは、例えば、水性または油性の基剤に増粘剤および／またはゲル化剤を加えて製剤化して得られる。該基剤としては、例えば、水、液体パラフィン、植物油（ピーナッツ油、ひまし油等）等が挙げられる。増粘剤としては、例えばソフトパラフィン、ステアリン酸アルミニウム、セトステアリルアルコール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ラノリン、水素添加ラノリン、蜜蝋等が挙げられる。
【００５０】
ローションは、水性または油性の基剤に、一種類またはそれ以上の薬学的に許容される安定剤、懸濁化剤、乳化剤、拡散剤、増粘剤、着色剤、香料等を加えることができる。
【００５１】
散剤は、薬学的に許容される散剤の基剤と共に製剤化される。基剤としては、タルク、ラクトース、澱粉等が挙げられる。ドロップは水性または非水性の基剤と一種またはそれ以上の薬学的に許容される拡散剤、懸濁化剤、溶解剤等と共に製剤化できる。
【００５２】
局所投与剤は、必要に応じて、ヒドロキシ安息香酸メチル、ヒドロキシ安息香酸プロピル、クロロクレゾール、ベンズアルコニウムクロリド等の防腐剤、細菌増殖防止剤を含んでもよい。
【００５３】
本発明に係る化合物またはその塩は、神経変性疾患、精神疾患を患っている患者に対して投与できる。その際の、投与量、投与回数は症状、年齢、体重、投与形態等によって異なるが、経口投与する場合には、通常は成人に対し１日あたり約１〜約５００ｍｇの範囲、好ましくは約５〜約１００ｍｇの範囲を１回または数回に分けて投与することができる。注射剤として投与する場合には約０．１〜約３００ｍｇの範囲、好ましくは約１〜約１００ｍｇの範囲を１回または数回に分けて投与することができる。
【実施例】
【００５４】
試験例１
以下の試験例に従って、本発明に係る化合物のＴＲＰＣチャンネル活性化能を評価した。
【００５５】
ＴＲＰＣ３チャンネルを一過性に発現したＨＥＫ２９３細胞を用いた膜電位アッセイ
６ウェル プレートにＨＥＫ２９３細胞を２．５×１０５ 細胞／２ｍＬ／ウェルで播きこみ、一晩培養した。培地は抗生物質不含１０％ ＦＢＳ／ＭＥＭを用いた。マウスＴＲＰＣ３チャンネル発現プラスミドをリポフェクション法で導入し、３７℃で４〜６時間培養した。トリプシンで細胞を剥がし、１０％ ＦＢＳ／ＭＥＭに懸濁し、３８４ウェル black／clear プレート（Greiner, Cat#781090）に５×１０３ 細胞／０．０２ｍＬ／ウェルで再度播きこみ、一晩培養した。培地を捨て、カルシウムを含まない２０ ｍＭ Hepes／Hanks緩衝液（以下ＨＨ）で調製した膜電位測定試薬（Molecular Devices, FLIPR membrane potential assay kit BLUE Bulk format, Cat# R8034）を０．０２ｍＬ／ウェル添加し、室温で１時間静置した。試験化合物を１０μＬ／ウェル添加（注入速度：２０μＬ／秒）し、ＦＬＩＰＲで経時的に蛍光強度測定した（Ex 515_545, Em 565_625 nm）。最大蛍光強度を最大膜電位変化量とし、その半分の変化量分を増加させる濃度をＥＣ５０値とした。
【００５６】
ＴＲＰＣ６安定発現細胞株の取得
ＨＥＫ２９３細胞にマウスＴＲＰＣ６発現プラスミドをリポフェクション法で導入して、限外希釈法により複数のＧ４１８（４００μｇ）耐性株を取得した。これらからＴＲＰＣ６に共役するアセチルコリン受容体の活性化剤であるカルバコール、既知のＴＲＰＣ６阻害剤である２−アミノエチルジフェニルボリナートに対する応答性が見られる細胞株を選抜した。
【００５７】
ＴＲＰＣ６安定発現ＨＥＫ２９３細胞株を用いた膜電位アッセイ
マウスＴＲＰＣ６安定発現ＨＥＫ２９３細胞株を３８４ウェル black／clear プレート（Greiner, Cat#781090）に５×１０３細胞／２０μＬ／ウェルで播きこみ、一晩培養した。ＨＨで調製した膜電位測定試薬を２０μＬ／ウェル添加し、室温で１時間静置した。試験化合物を１０μＬ／ウェル添加（注入速度：２０μＬ／秒）し、ＦＬＩＰＲで経時的に蛍光強度測定した（Ex 515_545, Em 565_625 nm）。最大蛍光強度を最大膜電位変化量とし、その半分の変化量分を増加させる濃度をＥＣ５０値とした。
【００５８】
以下に、試験を実施した本発明に係る化合物の名称と構造を示す。
４−（４，５−ジクロロ−２−メチルフェニル）スルフォニルピペラジン−１−カルボン酸エチル［後記式(２)で表される化合物］
１−（５−クロロ−２−メチルフェニル）−４−（３−フルオロベンゾイル）ピペラジン［後記式(３)で表される化合物］
１−（４−クロロ−３−メチルフェニル）−４−（３−フルオロベンゾイル）ピペラジン［後記式(４)で表される化合物］
１−（３−ベンジルオキシベンゾイル）−４−（２−ピリジル）ピペラジン［後記式(５)で表される化合物］
Ｎ−シクロヘプチル−２−［４−（２，３−ジメチルフェニル）ピペラジン−１−イル］アセトアミド［後記式(６)で表される化合物］
Ｎ−シクロヘプチル−２−［４−（２−エトキシフェニル）ピペラジン−１−イル］アセトアミド［後記式(７)で表される化合物］
２−［４−（２，３−ジメチルフェニル）ピペラジン−１−イル］−Ｎ−（２−エトキシフェニル）アセトアミド［後記式(８)で表される化合物］
１−（１−アダマンチル）−４−（３−フルオロベンゾイル）ピペラジン［後記式(９)で表される化合物］
２−［４−（５−クロロ−２−メチルフェニル）ピペラジン−１−イル］−Ｎ−シクロペンチルアセトアミド［後記式(１０)で表される化合物］
【化５】
2013116858.tif 000007
【００５９】
試験例１の評価結果を以下に記す。
【表２】
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【００６０】
試験例２
電気生理学的アッセイによるＴＲＰＣ６チャンネルの活性化能評価
電気生理学的アッセイはＥＰＣ−１０（HEKA Elektronik, Lambrecht, Germany）パッチクランプアンプ（patch-clamp amplifier）を用いて２２−２５℃で実施した。
カバースリップ上に培養させたＴＲＰＣ６安定発現ＨＥＫ２９３細胞株を測定に使用した。ＴＲＰＣ６電流はホールセルパッチクランプ法の膜電位固定法にて測定した。細胞外液（１２０ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ ＫＣｌ、１．２ ｍＭ ＭｇＣｌ２、１ｍＭ ＣａＣｌ２、１０ｍＭグルコース、１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ＮａＯＨでｐＨ ７．４に調整）で満たされたバス内にカバースリップを設置し、顕微鏡観察下にてピペット内液（１００ｍＭ ＣｓＯＨ、１００ｍＭ アスパラギン酸、２０ｍＭ ＣｓＣｌ、２ｍＭ ＭｇＣｌ２−６Ｈ２Ｏ、４ｍＭ ＣａＣｌ２、１０ｍＭ ＢＡＰＴＡ、５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、２ｍＭ ＡＴＰ Ｎａ２、０．１ｍＭ ＧＴＰ、ＣｓＯＨでｐＨ ７．２に調整）を充填したガラス微小電極を細胞に押し当てて、非常に高い抵抗状態を作り上げた後にそのパッチを破壊することでホールセルを形成した。ホールセル形成後、細胞を−６０ｍＶの電位に保持し、５００ｍｓかけて−１００ｍＶから１００ｍＶまでのランプパルスを５秒間隔で与えた際に流れた電流を記録した。自発的に見られる活性が安定した後、１０μＭの化合物を細胞外からバス内に投与してＴＲＰＣ６電流に与える効果を計測した。なお、明確なＴＲＰＣ６電流活性作用が観察されなかった場合は化合物をウォッシュアウト後に１００μＭのカルバコールを投与し、ＴＲＰＣ６が発現していたことを確認した。
結果を図１〜５に示す。化合物添加後一定時間ランプパルスを与え、−１００ｍＶ、１００ｍＶ時に流れた電流変化の割合を、化合物添加前の変化率を１として相対的に算出した。
【００６１】
試験例３
初代培養ラット小脳由来神経細胞を用いた神経突起伸展
ＳＤラット哺乳６日目（清水実験材料）を使用。
（小脳神経細胞培養）
ラットをエーテル麻酔、７０％エタノール消毒後、小脳を摘出した。軟膜および血管を除いた後、ＰＢＳで洗浄し、２ｍｍ角に切り分けた。トリプシン、ＤＮａｓｅを処置した後、１０％ウシ胎児血清を加えたＤＭＥＭに懸濁した。懸濁液をセルストレイナーにかけた後、２６ｍＭ ＫＣｌ／１０％ウシ胎児血清／ＤＭＥＭに希釈し、２４ウェルプレート中のポリエチレンイミンコートしたガラスへ１．０×１０５細胞／ウェルとなるように播種した。４時間後、試験化合物またはＢＤＮＦを含む培地に交換し、２４時間培養後パラホルムアルデヒド固定した。
【００６２】
（神経突起伸長評価）
小脳神経細胞を化合物処置後２４時間培養し、４％パラホルムアルデヒド／４％スクロース／ＰＢＳ 固定液で固定した。ＰＢＳで洗浄した後、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００により膜透過処理を行った。洗浄後、１％ＢＳＡ／ＰＢＳでブロッキングし、神経細胞のマーカーとして抗ＭＡＰ２抗体を加えて４℃で一晩振盪した。洗浄後、２次抗体Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標） ４８８−抗マウスＩｇＧ、およびアクチン繊維を染めるＡｌｅｘａ５４６（登録商標） ファロイジンを加え室温で一時間振盪した。洗浄後、スライドガラス上に封入し、共焦点レーザー顕微鏡によって観察した。ＭＡＰ２のシグナルが見られる細胞について、アクチン繊維のシグナルを指標に神経突起伸長を測定した。神経突起伸長は、１細胞あたりの神経突起全長を決定して評価した。
上記の試験において、神経突起伸展の平均長はコントロール群で４５．１μｍであったのに対し、ＢＤＮＦ（５０ｎｇ／ｍＬ）添加群で６４．８μｍ (Ｔテスト：P<0.01 vs コントロール)、化合物３（１０ｎＭ）添加群で６７．１μｍ（Ｔテスト：P<0.001 vs コントロール）であった。
【産業上の利用可能性】
【００６３】
本発明に係る化合物は、ＴＲＰＣ３またはＴＲＰＣ６チャンネルを直接活性化することによりＢＤＮＦ様作用を示すので、神経変性疾患および精神疾患の予防および／または治療に有用である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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