(57)【要約】      （修正有）【課題】筋繊維再生剤、偏頭痛予防・改善剤、カルシウムイオン流入抑制剤の効果を有するアンジオテンシンII活性阻害剤の提供。【解決手段】ベニコウジ色素及びオタネニンジン（Panax ginseng）抽出物からなる群より選ばれる少なくとも１種を有効成分とする、アンジオテンシンII活性阻害剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ベニコウジ色素及びオタネニンジン（Panax ginseng）抽出物からなる群より選ばれる少なくとも１種を有効成分とする、アンジオテンシンII活性阻害剤。
【請求項２】
ベニコウジ色素及びオタネニンジン（Panax ginseng）抽出物からなる群より選ばれる少なくとも１種を有効成分とする、筋繊維再生剤。
【請求項３】
ベニコウジ色素及びオタネニンジン（Panax ginseng）抽出物からなる群より選ばれる少なくとも１種を有効成分とする、偏頭痛予防・改善剤。
【請求項４】
ベニコウジ色素及びオタネニンジン（Panax ginseng）抽出物からなる群より選ばれる少なくとも１種を有効成分とする、カルシウムイオン流入抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アンジオテンシンII活性阻害剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
レニン−アンジオテンシン系は、体内水分量、体内電解質バランスなどの恒常性調節機能に関与している。レニン−アンジオテンシン系に関与する物質の１種として、アンジオテンシンIIが知られている。
アンジオテンシンIIの前駆体であるアンジオテンシンIは、アミノ酸１０残基より成るペプチドであり、腎傍糸球体より分泌されるレニンが肝臓で生成されるレニン基質に作用して生成される。これにアンジオテンシンI変換酵素が働き、末端に存在するヒスチジン及びロイシン残基が切断され、アンジオテンシンIIが生成する。
【０００３】
アンジオテンシンIIは、細胞膜上のアンジオテンシンII１型(AT1)受容体を介してその作用を示すことが知られている。例えば、非特許文献１には、アンジオテンシンIIが血管平滑筋細胞膜上のAT1に結合するとカルシウムイオンが細胞内に流入することが記載されている。また、アンジオテンシンIIは、副腎皮質球状帯に作用してアルドステロンの分泌を促進する。さらに、脳下垂体にも作用し、バソプレッシン（ADH）の分泌を促進する。
アンジオテンシンIIが過度に亢進すると筋繊維症や偏頭痛が発症する場合がある。したがって、筋繊維症や偏頭痛等の症状の改善及び予防に有効な、アンジオテンシンII活性阻害剤が求められている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Touyz  R．M.，Curr．Hypertens．Rep.，vol．5，No．2，p．155-164，2003
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、アンジオテンシンIIの機能を阻害する作用を有する、アンジオテンシンII活性阻害剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者等は上記課題に鑑み、鋭意検討を行った。その結果、ベニコウジ色素及びオタネニンジン（Panax ginseng）抽出物がそれぞれアンジオテンシンIIの機能を阻害する作用を有し、細胞内へのカルシウムイオンの流入を抑制し、筋繊維の再生及び偏頭痛の予防・改善に有用であることを見い出した。本発明はこれらの知見に基づいて完成するに至った。
【０００７】
本発明は、ベニコウジ色素及びオタネニンジン抽出物からなる群より選ばれる少なくとも１種を有効成分とする、アンジオテンシンII活性阻害剤に関する。
また、本発明は、ベニコウジ色素及びオタネニンジン抽出物からなる群より選ばれる少なくとも１種を有効成分とする、筋繊維再生剤に関する。
また、本発明は、ベニコウジ色素及びオタネニンジン抽出物からなる群より選ばれる少なくとも１種を有効成分とする、偏頭痛予防・改善剤に関する。
さらに、本発明は、ベニコウジ色素及びオタネニンジン抽出物からなる群より選ばれる少なくとも１種を有効成分とする、カルシウムイオン流入抑制剤に関する。
【発明の効果】
【０００８】
本発明のアンジオテンシンII活性阻害剤は、アンジオテンシンIIの機能を阻害する効果を有する。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
本発明のアンジオテンシンII活性阻害剤、筋繊維再生剤、偏頭痛予防・改善剤、及びカルシウムイオン流入抑制剤は、ベニコウジ色素及びオタネニンジン抽出物からなる群より選ばれる少なくとも１種を有効成分とする。
【００１０】
本発明におけるベニコウジ色素とは、ベニコウジ菌（例えば、Monascus pilosus又はMonascus purpureusなどの糸状菌）の培養生成物から抽出して得られる水溶性の赤色色素であり、その主成分はモナスコルブリン類、アンカフラビン類などである。ベニコウジ色素の調製方法としては、ベニコウジ菌の菌体を、室温又は加温下で、エタノール水溶液やプロピレングリコール水溶液等で抽出する方法等があるが、本発明はこれに制限するものではない。本発明において、市販されているベニコウジ色素を用いてもよい。
【００１１】
本発明におけるオタネニンジンとは、ウコギ（Araliaceae）科オタネニンジン（Panax）属の多年草の植物である。オタネニンジンの根を乾燥させたものは、漢方薬として広く用いられている。
【００１２】
本発明において、オタネニンジンの全ての任意の部分が使用可能である。例えば、オタネニンジンの全草、根、根茎、茎、葉、樹脂、花、果実、種子、果皮、莢、芽、花穂等の任意の部分、及びそれらの組み合わせのいずれか１つ又は２つ以上を使用することができる。本発明においてオタネニンジン抽出物を得るには、オタネニンジンの根茎を抽出することが好ましい。あるいは、市販されているオタネニンジン抽出物を用いてもよい。
【００１３】
本発明において用いる、オタネニンジン抽出物の製造方法については特に限定はなく、オタネニンジンを通常の方法で抽出することにより抽出物を得ることができる。具体的には、オタネニンジンを乾燥させた乾燥物、その粉砕物等を圧搾抽出することにより得られる搾汁、水蒸気蒸留物、各種抽出溶剤による粗抽出物、粗抽出物を分配又はカラムクロマトなどの各種クロマトグラフィーなどで精製して得られた抽出物画分などをオタネニンジン抽出物として用いることができる。
オタネニンジンはそのまま抽出に供することも可能であるが、より抽出効率を高めるために、乾燥、細断、粉砕等の工程を加えることも好ましい。また、本発明においては、前記抽出物、水蒸気蒸留物、圧搾物等のいずれかを単独で、又は２種以上を組み合わせて使用してもよい。なかでも、オタネニンジン抽出物としては、オタネニンジンを乾燥させた乾燥物又はその粉砕物から、抽出溶剤を用いて得られた抽出物を用いることがより好ましい。
【００１４】
抽出溶剤としては、極性溶剤、非極性溶剤のいずれをも使用することができ、これらを混合して用いることもできる。例えば、水；メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等のアルコール類；エチレングリコール、プロピレングリコール、ブチレングリコール等の多価アルコール類；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類；酢酸メチル、酢酸エチル等のエステル類；テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル等の鎖状及び環状エーテル類；ポリエチレングリコール等のポリエーテル類；ジクロロメタン、クロロホルム、四塩化炭素等のハロゲン化炭化水素類；ヘキサン、シクロヘキサン、石油エーテル等の炭化水素類；ベンゼン、トルエン等の芳香族炭化水素類；ピリジン類；超臨界二酸化炭素；油脂、ワックス、その他オイル等が挙げられる。あるいは、上記溶剤の２種以上を組み合わせた混合物を、抽出溶剤として用いることができる。このうち、水、アルコール類、水−アルコール混合液、多価アルコール類を用いるのが好ましく、エタノール水溶液やプロピレングリコール水溶液を用いるのがより好ましい。
【００１５】
オタネニンジン抽出物を得るための抽出条件については、使用する溶剤によって異なり特に制限はなく、通常の条件を適用できる。例えば、オタネニンジンを０〜１００℃で１時間〜３０日間浸漬又は加熱還流すればよい。また、抽出効率を向上させるため、併せて攪拌を行ったり、溶媒中でホモジナイズ処理を行ってもよい。
【００１６】
上記溶媒で抽出して得られた抽出物はそのまま使用してもよいが、さらに適当な分離手段、例えばゲル濾過、クロマトグラフィー、精密蒸留、活性炭処理等により活性の高い画分を分画して用いることもできる。本発明において、オタネニンジン抽出物とは、このようにして得られた各種抽出物、その希釈液、その濃縮液、その精製物又はそれらの乾燥末を包含するものである。
【００１７】
本発明のアンジオテンシンII活性阻害剤、筋繊維再生剤、偏頭痛予防・改善剤、及びカルシウムイオン流入抑制剤には、前記有効成分のうちのいずれか１種を利用しても、２種以上を併用してもよい。また、前記抽出物を有効成分としてそのまま用いてもよいし、前記抽出物を有効成分として含有する組成物として用いてもよい。
【００１８】
アンジオテンシンIIは、細胞膜上のAT1を介してその作用を示すことが知られている。さらに、ベニコウジ色素及びオタネニンジン抽出物がアンジオテンシンIIの機能を阻害し、細胞（特に、血管平滑筋細胞）内へのカルシウムイオンの流入を抑制する。したがって、ベニコウジ色素及びオタネニンジン抽出物からなる群より選ばれる少なくとも１種を有効成分とすることで、アンジオテンシンII活性阻害剤、及びカルシウムイオン流入抑制剤を得ることができる。前記有効成分がアンジオテンシンIIの機能を阻害する作用を奏し、細胞内へのカルシウムイオンの流入を抑制することは、本発明者らによって新たに得られた知見である。
なお、アンジオテンシンII活性の評価方法について特に制限はないが、例えば、”J．Hypertens.”，vol．15，p．1431-1439，1997に記載の方法を参考にすることができる。
【００１９】
本発明のアンジオテンシンII活性阻害剤及びカルシウムイオン流入抑制剤によれば、アンジオテンシンIIの機能の阻害が治療に有効な組織障害又は病態の予防又は改善が可能である。このような組織障害及び病態の例としては、動脈硬化、炎症、筋繊維症、血管及び心筋リモデリング、アルドステロン症、心臓肥大、心房細動、糖尿病、アルブミン尿、蛋白尿、偏頭痛、脳卒中、高トリグリセリド血症等が挙げられる（例えば、Barry  J．Gales，et  al.，Ann．Pharmacother.，vol．44，p．360-366，2010；Ronald  D．Cohn，et  al.，Nat．Med.，vol．13，No．2，p．204-210，2007；Tyesha  N．Burks，et  al.，Sci．Transl．Med.，vol．3，No．82，p．82ra37，2011；Mochizuki  S．et  al.，Lancet.，vol．369，p．1431-1439，2007；Kintscher  U．et  al.，Cardiovasc．Diabetol.，vol．6，No.12，2007等参照）。
【００２０】
アンジオテンシンII活性の阻害及びカルシウムイオン流入の抑制が治療に有効な組織障害又は病態について、具体例を挙げて説明する。
アンジオテンシンII活性の阻害及びカルシウムイオン流入の抑制と、筋繊維の再生との間に相関関係があり、アンジオテンシンII経路を抑制することにより、骨格筋においてサテライト細胞の機能や筋修復を阻害するTGF-βシグナルを抑制したり、骨格筋においてタンパク分解や合成に決定的な役割を果たすIGF-1/Akt/mTOR経路を活性化する（例えば、Ronald  D．Cohn，et  al.，Nat．Med.，vol．13，No．2，p．204-210，2007；Tyesha  N．Burks，et  al.，Sci．Transl．Med.，vol．3，No．82，p．82ra37，2011等参照）。したがって、本発明のアンジオテンシンII活性阻害剤及びカルシウムイオン流入抑制剤は、筋繊維再生剤への適用が可能である。
また、アンジオテンシンII活性及びカルシウムイオン流入と、偏頭痛との間にも相関関係があり、アンジオテンシンII経路が、痛覚に影響を与えるエンドルフィン代謝に作用することや、脳血流、神経ホルモンレベル、炎症作用、電解質移動等に影響を与えることが示唆されており、実際にアンジオテンシン変換酵素阻害剤（ACE）やアンジオテンシンII受容体拮抗薬（ARB）の摂取が片頭痛患者に有効であることが報告されている（例えば、Barry  J．Gales，et  al.，Ann．Pharmacother.，vol．44，p．360-366，2010参照）。したがって、本発明のアンジオテンシンII活性阻害剤及びカルシウムイオン流入抑制剤は、偏頭痛予防・改善剤への適用が可能である。
【００２１】
本発明のアンジオテンシンII活性阻害剤、筋繊維再生剤、偏頭痛予防・改善剤、及びカルシウムイオン流入抑制剤は、医薬品、医薬部外品、食品、飲料等の用途に適用することができる。さらに本発明のアンジオテンシンII活性阻害剤、筋繊維再生剤、偏頭痛予防・改善剤、及びカルシウムイオン流入抑制剤は、液状、固形状、乳液状、ペースト状、ゲル状、パウダー状（粉末状）、顆粒状、ペレット状、スティック状等、ヒトや動物に適用されうる各種剤型をとることができる。
【００２２】
本発明のアンジオテンシンII活性阻害剤、筋繊維再生剤、偏頭痛予防・改善剤、及びカルシウムイオン流入抑制剤を医薬品、医薬部外品に適用する場合、必要により各種添加剤を配合し、前記有効成分を適量含有させて、各種剤形の医薬品又は医薬部外品として調製することができる。例えば、錠剤、被覆錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤、エキス剤等の経口医薬として、又は、軟膏、眼軟膏、ローション、クリーム、貼付剤、坐剤、点眼薬、点鼻薬、注射剤といった非経口医薬として調製することができる。これらの医薬は、各種添加剤を用いて常法に従って製造すればよい。使用する添加剤には特に制限はなく、通常用いられているものを使用することができる。その例としては、デンプン、乳糖、白糖、マンニトール、カルボキシメチルセルロース、コーンスターチ、無機塩等の固形担体、蒸留水、生理食塩水、ブドウ糖水溶液、エタノール等のアルコール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール等の液体担体、各種の動植物油、白色ワセリン、パラフィン、ロウ類等の油性担体、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、結合剤、等張化剤、崩壊剤、滑沢剤、希釈剤、浸透圧調整剤、ｐＨ調整剤、防腐剤、酸化防止剤、着色剤、紫外線吸収剤、保湿剤、増粘剤、光沢剤、緩衝剤、矯味剤、矯臭剤等が挙げられる。
【００２３】
本発明のアンジオテンシンII活性阻害剤、筋繊維再生剤、偏頭痛予防・改善剤、及びカルシウムイオン流入抑制剤を飲食品、ペットフード等に適用する場合、食用又は飲料用に適した形態、例えば、顆粒状、粒状、錠剤、カプセル、ペーストなどに成形して提供することができる。さらに、前記飲食品は、一般飲食品の他、細胞内へのカルシウムイオン流入の亢進により発症し、アンジオテンシンII活性の抑制が治療又は予防に有効な症状の予防又は改善をコンセプトとし、必要に応じてその旨を表示した美容食品、病者用食品、栄養機能食品又は特定保健用食品等の機能性飲食品の形態とすることができる。
【００２４】
飲食品の形態としては特に制限はなく、例えば、果汁飲料、乳飲料、茶系飲料等の飲料類、キャンディ、ドロップ、ゼリー、クッキー、チョコレート、ケーキ、ヨーグルト、ガム等の菓子類、調味料、調理油、乳製品、パン類、麺類、加工米等が挙げられる。また、錠剤（タブレット）、カプセル、顆粒、シロップ等の美容食品、健康飲食品等としてもよい。
これらの飲食品は、例えば、甘味剤、着色剤、抗酸化剤、ビタミン類、香料、ミネラル等の添加剤、タンパク質、脂質、糖質、炭水化物、食物繊維等の食品原料を適宜組み合わせて用い、これと本発明のアンジオテンシンII活性阻害剤、筋繊維再生剤、偏頭痛予防・改善剤、又はカルシウムイオン流入抑制剤とを含有させ、常法に従って各種飲食品の形態とすることにより調製することができる。
【００２５】
本発明のアンジオテンシンII活性阻害剤、筋繊維再生剤、偏頭痛予防・改善剤、及びカルシウムイオン流入抑制剤はそのままで医薬品、医薬部外品、食品、飲料等として用いてもよいし、医薬品、医薬部外品、食品、飲料等の添加剤又は配合剤として用いてもよい。
【００２６】
本発明のアンジオテンシンII活性阻害剤、筋繊維再生剤、偏頭痛予防・改善剤、及びカルシウムイオン流入抑制剤における前記有効成分の配合量は、その使用形態により異なるが、医薬品、例えば、錠剤、被覆錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤等の経口用固形製剤、内服液剤、シロップ剤等の経口用液体製剤の場合は、0.001〜50質量％が好ましく、0.01〜25質量％がより好ましく、0.05〜10質量％がさらに好ましい。飲食品やペットフード等に配合する場合は、0.001〜50質量％が好ましく、0.01〜25質量％がより好ましく、0.05〜10質量％がさらに好ましい。
【００２７】
本発明のアンジオテンシンII活性阻害剤、筋繊維再生剤、偏頭痛予防・改善剤、及びカルシウムイオン流入抑制剤の投与又は摂取量は、個体の状態、体重、性別、年齢、又はその他の要因に従って変動し得る。成人（体重６０kg）の１日当りの投与又は摂取量は、0.001〜10ｇが好ましく、0.005〜5ｇがより好ましく、0.01〜0.5ｇがさらに好ましい。本発明のアンジオテンシンII活性阻害剤、筋繊維再生剤、偏頭痛予防・改善剤、及びカルシウムイオン流入抑制剤は、１日に３回、１日に２回、１日１回、２日に１回、３日に１回、１週間に１回、又は任意の期間及び間隔で投与又は摂取され得る。
【実施例】
【００２８】
以下、本発明を実施例に基づきさらに詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
【００２９】
製造例１  ベニコウジ色素の調製
ベニコウジ色素（OCI社（大阪府、日本）より入手）を２０体積％エタノールに濃度が１％（ｗ/ｖ）となるように溶解した。
【００３０】
製造例２  オタネニンジン抽出物の調製
オタネニンジン抽出液（丸善製薬社より入手、根茎部を含水エタノールで抽出、蒸発残分：2.78％）を５０体積％エタノールに濃度が１％（ｗ/ｖ）となるように希釈し、オタネニンジン抽出物を得た。
【００３１】
＜アンジオテンシンIIの活性測定＞
”J．Hypertens.”，vol．15，p．1431-1439，1997に記載の方法を参考に、下記に示すようにアンジオテンシンIIの活性測定を行った。
血管平滑筋細胞増殖用低血清培地（Humedia-SG2、クラボウ社製）を用い、正常ヒト血管平滑筋細胞（Human  aortic  smooth  muscle  cell（HASMC）、クラボウ社製）を5％CO2、95％air、37℃に保ったインキュベータ内で培養した。トリプシン・EDTA（ギブコ社製）を用いて細胞の継代を行い、下記に示す試験では、全て５〜８継代以内の細胞を用いた。
【００３２】
細胞内カルシウムイオンの測定キット（商品名：Calcium  Kit  II-Fluo4、同仁化学研究所社製）のプロトコールに従い、下記に示す組成の溶液を調製した。

（組成）
クエンチングバッファー                        ５ｍＬ
１０×Hanks’HEPESバッファー              ５００μＬ
５％PluronicTM  F-127                      １２０μＬ（終濃度０．０３％)
２５０ｍＭ  プロベネシド（probenecid）      ８０μＬ（終濃度１ｍＭ)
脱イオン水                                ４．３ｍＬ                    
合計                                        １０ｍＬ

これに、５０μＬのジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解した５０μｇのFluo4-AM溶液（商品名、同仁化学研究所社製）を加え、ローディングバッファーを調製した。
調製したローディングバッファーに、製造例１及び２で調製した各抽出物を５００倍希釈となるように添加して、検体調製液とした。
【００３３】
９６ウェルプレートに20,000cells/wellのHASMCを捲き、３〜５日間培養した。９０μＬのHumedia-SG2培地で培養したHASMCに、等量の前記検体調製液を加え、室温で１時間反応させた。反応後、３７℃に加温したプレートリーダー（商品名：FDSS、浜松ホトニクス社製）に１０分間静置し、静置後、励起光４８０ｎｍ、蛍光５４０ｎｍの条件でHASMCの蛍光強度の測定を行った。測定開始３０秒後に、２０μＬのアンジオテンシンII（終濃度０．１μＭ、シグマアルドリッチ社製）をインジェクションして、アンジオテンシンIIの刺激による、細胞内のカルシウムイオン濃度の変化を計測した。結果は、アンジオテンシンIIのみの刺激による細胞内のカルシウムイオン濃度の増加に対する、検体添加によるカルシウムイオン濃度上昇の抑制をアンジオテンシンII阻害率（％）として表した。
結果を表１に示す。
【００３４】
【表１】
2013119534.tif 000002
【００３５】
表１の結果から明らかなように、ベニコウジ色素及びオタネニンジン抽出物をそれぞれ添加することにより、細胞内へのカルシウムイオンの流入が阻害された。したがって、ベニコウジ色素及びオタネニンジン抽出物は、アンジオテンシンIIの機能を阻害する作用を有する。
以上のように、ベニコウジ色素及びオタネニンジン抽出物は、アンジオテンシンIIに対する阻害活性を有するので、細胞内へカルシウムイオンが流入するのを抑制する。したがって、ベニコウジ色素及びオタネニンジン抽出物は、筋繊維再生効果、偏頭痛予防・改善効果も有する。