(57)【要約】【課題】被験者の皮膚から低侵襲で簡便に核酸を採取することができる方法及び核酸採取キットを提供することを目的とする。【解決手段】被験者の皮膚に微細孔を形成する工程と、微細孔が形成された皮膚上に、回収液を有する核酸採取部材を配置することにより、被験者の表皮に含まれる核酸を採取する工程とを含む核酸採取方法により、上記の課題を解決する。また、被験者の皮膚に微細孔を形成する微細針を有する微細針チップと、微細孔を形成した皮膚上に配置される、核酸を採取するための核酸採取部材とを含む核酸採取キットを提供することにより、上記の課題を解決する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験者の皮膚に微細孔を形成する工程と、
微細孔が形成された皮膚上に、回収液を有する核酸採取部材を配置することにより、被験者の表皮に含まれる核酸を採取する工程と、
を含む、核酸採取方法。
【請求項２】
被験者の皮膚に微細孔を形成する工程が、微細針を被験者の皮膚に接触させる工程である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
微細針の先端の径が１〜５０μｍである、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
核酸採取部材が、上下に開口を有する核酸収集チャンバと回収液とからなる、請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
回収液が、核酸分解酵素を除去した滅菌水である、請求項１〜４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
被験者の皮膚に、核酸分解酵素の混入を抑止するための皮膜を設ける工程をさらに含み、
微細孔を形成する工程が、皮膜を貫通して微細孔を形成する、請求項１〜５のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
被験者の皮膚に皮膜を設ける工程が、当該皮膚に液状の皮膜形成性樹脂を塗布し、その後、塗布した皮膜形成性樹脂を乾燥させて皮膜を形成する工程である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
皮膜形成性樹脂の塗布領域を画定する開口を有する枠状シールを被験者の皮膚に貼付する工程をさらに含み、
被験者の皮膚に貼付された枠状シールの開口内に皮膜形成性樹脂を塗布する、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
枠状シールの厚さが所望の皮膜厚さよりも厚い、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
皮膜形成性樹脂がセルロース系樹脂又はアクリル樹脂からなる、請求項７〜９のいずれかに記載の方法。
【請求項１１】
セルロース系樹脂がピロキシリンである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
液状の皮膜形成性樹脂が、皮膜形成性樹脂を、アルコール系溶媒、ケトン系溶媒、エステル系溶媒又は芳香族化合物からなる溶媒に溶かしたものである、請求項７〜１１のいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
皮膜の厚さが１〜１０００μｍである、請求項６〜１２のいずれかに記載の方法。
【請求項１４】
微細針の長さが、皮膜の膜厚の１〜１００倍に設定されている、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
被験者の皮膚に微細孔を形成する工程と、
微細孔が形成された皮膚から、被験者の表皮に含まれる核酸を採取する工程と、
採取した核酸を解析する工程と、
を含む、核酸解析方法。
【請求項１６】
被験者の皮膚に微細孔を形成する微細針を有する微細針チップと、
微細孔を形成した皮膚上に配置される、核酸を採取するための核酸採取部材と、
を含む、核酸採取キット。
【請求項１７】
微細針チップを被験者の皮膚に当接させて皮膚に微細孔を形成する微細孔形成装置をさらに含む、請求項１５に記載のキット。
【請求項１８】
核酸採取部材が、核酸収集チャンバと回収液からなる、請求項１５または１６に記載のキット。
【請求項１９】
回収液が、核酸分解酵素を除去した滅菌水である、請求項１５〜１７のいずれかに記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、皮膚から核酸を採取する方法に関する。また、本発明は核酸を採取するキットにも関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚疾患や肌状態に関する情報を取得するために、皮膚の表皮細胞中に含まれる遺伝子の解析が行われている。この遺伝子解析を行うためには、皮膚の表皮細胞中の核酸を取得する必要がある。
皮膚の表皮細胞中の核酸を取得する方法として、例えば特許文献１には、肌の老化に関する遺伝子の発現量を取得するため、サクションブリスター法で採取した皮膚組織から遺伝子のｍＲＮＡを抽出する方法が記載されている。この方法では、皮膚に人工的に水泡を形成させて皮膚組織を採取するため、皮膚への侵襲性が大きいという問題があった。
そこで、皮膚への侵襲性を抑えるために、特許文献２には、皮膚の表皮細胞（角質層）を粘着性テープにより剥ぎ取り、剥ぎ取った細胞から核酸を抽出する方法が記載されている。この方法では、表皮細胞のうち角質層の細胞のみを粘着性のテープで剥ぎ取るため、皮膚への侵襲性は小さいが、測定で必要な試料量が採取できない恐れがあった。また、取得した細胞を溶解して核酸を抽出する工程が必要であるため、操作が煩雑で手間がかかるという問題があった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開２０１０−１１５１３１号公報
【特許文献２】特開２００８−１７８３９０号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
このような事情に鑑みて、本発明は、被験者の皮膚から低侵襲で簡便に核酸を採取することができる方法を提供することを目的とする。また、本発明は、その方法で用いられる核酸採取キットを提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
（１）本発明の核酸採取方法は、被験者の皮膚に微細孔を形成する工程と、微細孔が形成された皮膚上に、回収液を有する核酸採取部材を配置することにより、被験者の表皮に含まれる核酸を採取する工程とを含むことを特徴とする。
【０００６】
本発明の核酸採取方法では、皮膚に形成された微細孔から核酸を採取することにより、皮膚に対して低侵襲で核酸を採取することができる。また、細胞を溶解して核酸を抽出するという工程を行うことなく、簡便に核酸を採取することができる。
【０００７】
（２）前記（１）の核酸採取方法において、被験者の皮膚に微細孔を形成する工程が、微細針を被験者の皮膚に接触させる工程を含むものとすることができる。
【０００８】
（３）前記（２）の核酸採取方法において、微細針の先端の径が１〜５０μｍとすることができる。
【０００９】
（４）前記（３）の核酸採取方法において、核酸採取部材が、上下に開口を有する核酸収集チャンバと回収液であることが好ましい。
【００１０】
（５）前記（１）〜（４）の核酸採取方法において、回収液が、核酸分解酵素を除去した滅菌水であることが好ましい。
【００１１】
（６）前記（１）〜（５）の核酸採取方法において、被験者の皮膚に、核酸分解酵素の混入を抑止するための皮膜を設ける工程をさらに含み、微細孔を形成する工程が、皮膜を貫通して微細孔を形成するようにすることができる。
【００１２】
（７）前記（６）の核酸採取方法において、被験者の皮膚に皮膜を設ける工程が、当該皮膚に液状の皮膜形成性樹脂を塗布し、その後、塗布した皮膜形成性樹脂を乾燥させて皮膜を形成する工程とすることができる。
【００１３】
（８）前記（７）の核酸採取方法において、皮膜形成性樹脂の塗布領域を画定する開口を有する枠状シールを被験者の皮膚に貼付する工程をさらに含み、被験者の皮膚に貼付された枠状シールの開口内に皮膜形成性樹脂を塗布するものとすることができる。
【００１４】
（９）前記（８）の核酸採取方法において、枠状シールの厚さが所望の皮膜厚さよりも厚いことが好ましい。
【００１５】
（１０）前記（７）〜（９）の核酸採取方法において、皮膜形成性樹脂がセルロース系樹脂又はアクリル樹脂であることが好ましい。
【００１６】
（１１）前記（１０）の核酸採取方法において、セルロース系樹脂がピロキシリンであることが好ましい。
【００１７】
（１２）前記（７）〜（１１）の核酸採取方法において、液状の皮膜形成性樹脂が、皮膜形成性樹脂を、アルコール系溶媒、ケトン系溶媒、エステル系溶媒又は芳香族化合物からなる溶媒に溶かしたものであることが好ましい。
【００１８】
（１３）前記（６）〜（１２）の核酸採取方法において、皮膜の厚さが１〜１０００μｍであることが好ましい。
【００１９】
（１４）前記（１３）の核酸採取方法において、微細針の長さが、皮膜の膜厚の１〜１００倍に設定することが好ましい。
【００２０】
（１５）本発明の核酸採取キットは、前記（１）の方法を用いて被験者の皮膚から核酸を採取するキットであって、被験者の皮膚に微細孔を形成する微細針を有する微細針チップと、微細孔を形成した皮膚を介して核酸を採取するための核酸採取部材とを含むことを特徴とする。
【００２１】
（１６）前記（１５）の核酸採取キットにおいて、微細針チップを被験者の皮膚に当接させて皮膚に微細孔を形成する微細孔形成装置をさらに含むことができる。
【００２２】
（１７）前記（１５）または（１６）の核酸採取キットにおいて、核酸採取部材が、核酸収集チャンバと回収液からなることが好ましい。
【００２３】
（１８）前記（１７）の核酸採取キットにおいて、回収液が、核酸分解酵素を除去した滅菌水であることが好ましい。
【発明の効果】
【００２４】
本発明の核酸採取方法および核酸採取キットによれば、被験者の皮膚から、低侵襲かつ簡便に核酸を採取することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】本発明の核酸採取方法に用いる微細孔形成装置の一例の外観を示す斜視説明図である。
【図２】被験者の皮膚に核酸収集チャンバを設置した状態を示す説明図である。
【図３】微細針チップの斜視図である。
【図４】核酸採取部材の一例の図である。
【図５】微細孔形成装置によって微細孔が形成された皮膚の断面説明図である。
【図６】本発明の一実施の形態に係る核酸採取方法のフローチャートである。
【図７】被験者の皮膚に貼付した枠状シールの開口に皮膜形成性樹脂を供給する方法を示す図である。
【図８】本発明の一実施の形態に係る被験者の皮膚に核酸収集チャンバを設置した状態を示す説明図である。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
以下、添付図面を参照しつつ、本発明の核酸採取方法の実施の形態を詳細に説明する。
図１は、本発明の核酸採取方法に用いる微細孔形成装置の一例の外観を示す斜視説明図であり、図２は、被験者の皮膚に核酸を採取するための核酸収集チャンバを設置した図である。まず図１及び図２を参照して、本発明の核酸採取方法で用いられる核酸採取キットについて説明する。なお、本発明で採取される核酸とは、ＤＮＡおよびＲＮＡなどのポリヌクレオチドを示す。
【００２７】
〔微細孔形成装置〕
被験者の皮膚に微細孔を形成する微細孔形成装置の一例について説明する。微細孔形成装置は、被験者の皮膚を介して核酸を採取するために、被験者の皮膚の表皮細胞に微細孔を形成させる装置である。本実施の形態では、微細孔形成により被験者の表皮細胞が破壊され、漏出した核酸が採取される。
【００２８】
図１は、本発明の核酸採取方法において被験者の皮膚に微細孔を形成するのに用いられる微細孔形成装置の一例に係る穿刺具１００の斜視説明図であり、図２は、被験者の皮膚に核酸を収集するための核酸収集チャンバ４００を設置した図である。図３は、図１に示される穿刺具１００に装着される微細針チップ２００の斜視図であり、図４は、被験者の皮膚から核酸を採取する際に用いられる核酸収集チャンバ４００と、核酸の採取に用いられる回収液の入った試薬容器４０１である。図５は、穿刺具１００によって微細孔が形成された皮膚３００の断面説明図である。
【００２９】
図１〜５に示されるように、穿刺具１００は、滅菌処理された微細針チップ２００を装着して、当該微細針チップ２００の微細針２０１を生体の表皮（被験者の皮膚３００）に当接させることによって、被験者の皮膚３００に微細孔３０１を形成させ、皮膚の表皮細胞を破壊して核酸を漏出させる装置である。微細針チップ２００の微細針２０１は、穿刺具１００により微細孔３０１を形成した場合に、当該微細孔３０１が皮膚３００の表皮内にとどまり真皮までは到達しないような大きさを有する。
また、微細針２０１はミクロ的に見ると截頭円錐体形状を呈しているが、その長さや先端の径は、被験者の皮膚に設けられる皮膜の厚さなども考慮して適宜選定することができ、本発明において特に限定されるものではないが、通常、長さは２０〜１０００μｍ程度であり、また、先端の径は１〜５０μｍ程度である。
【００３０】
図１に示されるように、穿刺具１００は、筐体１０１と、この筐体１０１の表面に設けられたリリースボタン１０２と、筐体１０１の内部に設けられたアレイチャック１０３及びバネ部材１０４とを備えている。筐体１０１の下部１０１ａの下端面（皮膚に当接する面）には、前記微細針チップ２００が通過可能な開口（図示せず）が形成されている。バネ部材１０４はアレイチャック１０３を穿刺方向に付勢する機能を有する。アレイチャック１０３は下端に微細針チップ２００を装着することができる。微細針チップ２００の下面には、複数の微細針２０１が形成されている。微細針チップ２００の下面は、１０ｍｍ（長辺）x５ｍｍ（短辺）の大きさからなる。また、穿刺具１００は、アレイチャック１０３をバネ部材１０４の付勢力に逆らって上方（反穿刺方向）に押し上げた状態で固定する固定機構（図示せず）を有しており、使用者（被験者）がリリースボタン１０２を押下することにより、当該固定機構によるアレイチャック１０３の固定が解除され、バネ部材１０４の付勢力によって当該アレイチャック１０３が穿刺方向に移動し、前記開口から突出した微細針チップ２００の微細針２０１が皮膚を穿刺するように構成されている。なお、図４において、１０５は筐体１０１の下部１０１ａに形成された鍔部であり、穿刺具１００の使用時には前記鍔部１０５の裏面が被験者の皮膚の所定箇所に当接される。
【００３１】
〔核酸採取部材〕
本実施の形態における核酸採取部材は、核酸収集チャンバ４００と回収液とからなる。核酸収集チャンバ４００は、上下に開口を有する筒状の部材であり、穿刺具１００によって形成された微細孔３０１上に設置される。
【００３２】
〔回収液〕
回収液は、採取対象である核酸が分解されない液体であれば特に限定されず、市販の溶媒を目的に応じて適宜選択することができる。例えば、回収液として、DNase Free 滅菌水、RNaseFree滅菌水、Nuclease-Free滅菌水などを用いることができる。より具体的には、Distilled Water（DNase/RNase Free）（invitrogen社製）やRNase-free Water（タカラバイオ株式会社製）を用いることができる。
【００３３】
〔核酸分解酵素混入防止用皮膜〕
本実施の形態における核酸分解酵素混入防止用皮膜は、液状の皮膜形成性樹脂を被験者の皮膚に塗布し乾燥させることで得ることができる。液状の皮膜形成性樹脂は、皮膜形成性樹脂を溶媒に溶かすことで得ることができる。上記皮膜により、皮膚に存在する核酸分解酵素や夾雑物等が回収液へ混入することを防ぐことができる。
【００３４】
皮膜形成性樹脂は、皮膚に存在する核酸分解酵素が回収液に混入することを防止するため、水分非浸透性であれば特に限定されない。好ましくは、以下の（１）〜（３）の特性を有するものである。
（１）形成される皮膜が被験者の皮膚のしわの中まで入り込んで当該皮膚との密着性を高め、採取される回収液中への夾雑物の混入を確実に防止するために、皮膚表面への塗布時には液状であり、塗布後は速乾性があること。
（２）皮膜の伸縮性が高いと、穿刺具による穿刺時に、皮膜が微細針形状に合わせて変形し、貫通されないため、乾燥後にはある程度の剛性を有し、微細孔が皮膜を貫通して形成可能であること。
（３）人体の皮膚表面を被覆するものであることから、生体に対して十分な安全性を有すること。
【００３５】
このような特性を有する合成樹脂の例としては、例えば、ニトロセルロースなどのセルロース系樹脂；アクリル酸・スチレン共重合体、アクリル酸・メタアクリル酸アミド共重合体、アクリル酸ブチル・メタアクリル酸共重合体、アクリル酸ヒドロキシプロピル・メタアクリル酸ブチルアミノエチル・アクリル酸オクチルアミド共重合体、アクリルアミド・ポリビニルアルコール共重合体、メタクリル酸ジメチルアミノエチル・メタクリル酸エステル共重合体、アクリル酸エチル・メタアクリル酸メチル・メタアクリル酸塩化トリメチルアンモニウムエチル共重合体などのアクリル系樹脂；ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、エチレンー酢酸ビニル共重合体などのビニル系樹脂；エポキシ系樹脂；ウレタン系樹脂；シリコーン系樹脂；フッソ系樹脂；アルキッド系樹脂などを挙げることができる。かかる合成樹脂のうち、人体への安全性が高いという点から、セルロース系樹脂及びアクリル系樹脂を用いることが好ましく、特に、グルコース単位につき二箇所で酢酸エステル化されたニトロセルロースであるピロキシンを用いることが好ましい。
【００３６】
前述した合成樹脂を溶かすのに用いることができる溶媒の例としては、例えば、エタノール、イソプロパノール、メチルイソブチルイソプロパノールなどのアルコール系溶媒；アセトン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトンなどのケトン系溶媒；酢酸エチル、酢酸ブチル、アジピン酸ジイソプロピル、セバシン酸ジイソプロピル、トリアセチンなどのエステル系溶媒；キシレン、トルエンなどの芳香族化合物などを挙げることができる。
【００３７】
前記ピロキシンをエタノール／エーテル混合液に溶かしたものはコロジオンと呼ばれているが、このコロジオンを液状の皮膜形成性樹脂として好適に用いることができる。
皮膜の厚さは、材質、強度、微細孔形成性などを考慮して選定することができ、本発明において特に限定されるものではないが、例えば１〜１０００μｍとすることができ、このうち微細針形状の点より１〜３００μｍとすることが好ましく、１〜１００μｍとすることが更に好ましい。微細針の長さと皮膜の厚さとの関係は、微細針及び皮膜の材質などにより異なるが、通常、微細針の長さが、皮膜の膜厚の１〜１００倍程度に設定されていることが好ましい。
【００３８】
〔核酸採取方法〕
次に、図６〜８を参照して、本発明の一実施形態による核酸採取方法について説明する。
【００３９】
〔ステップＳ１：皮膜形成工程〕
まずステップＳ１において、被験者の皮膚であって微細孔を形成する領域に核酸分解酵素や夾雑物の混入を防止するための皮膜を形成する。具体的に、まず被験者の皮膚３００をアルコールなどで清拭し、測定結果の外乱要因となる物質（塵など）を除去する。ついで、清拭した部分に図７に示されるように、枠状シール１５を貼付する。この枠状シール１５は、長方形状であり、その中央部分に後述する皮膜形成性樹脂の塗布領域を画定する開口１５ａを有している。枠状シール１５の厚さは、所望の皮膜厚さよりも厚く設定されている。
【００４０】
ついで、枠状シール１５の開口１５ａ内に液状の皮膜形成性樹脂１６を供給し、コテ１７等を用いて樹脂をならして当該樹脂が開口１５ａの全域に均一な厚さで行き渡るようにする。余分な樹脂は、コテに付着させる等して取り除いておく。塗布後、所定時間（例えば、５分程度）乾燥させることで皮膜が形成される。
【００４１】
〔ステップＳ２：微細孔形成工程〕
ステップＳ２において、被験者の皮膚に微細孔を形成する。具体的に、ステップＳ１においてその開口１５ａに皮膜が形成された枠状シール１５上に、前述した微細針チップ２００が前記皮膜と接触し得るように当該微細針チップ２００を装着した穿刺具１００の鍔部１０５を配置し、ついでリリースボタン１０２を押圧して微細針チップ２００の微細針２０１を前記皮膜を貫通して被験者の皮膚３００に接触させることで、当該皮膚３００に微細孔３０１を形成する。かかる微細孔３０１を形成することで、被験者の表皮細胞が破壊され、漏出した核酸を採取可能な状態となる
【００４２】
〔ステップＳ３：核酸採取工程〕
ついで、ステップＳ３において穿刺具１００を被験者の皮膚３００から離し、その後微細孔が形成された領域（微細孔形成領域）に、上下に開口を有する核酸収集チャンバ４００を粘着層４１０により貼り付ける。つぎに、設置した核酸収集チャンバ４００内に、回収液４０２を入れ、微細孔形成領域から核酸を採取する。上側の開口を介して核酸収集チャンバ４００内にピペットにより所定の量の回収液４０２を注入した後、水の蒸発を防ぐために核酸収集チャンバ４００の上側の開口をシール部材４１１によりシールする。これにより、表皮細胞に微細孔３０１を形成した部位と回収液４０２とが接触するとともに、微細孔形成により破壊された被験者の表皮細胞から漏出した核酸が採取される。
【００４３】
〔ステップＳ４：核酸取得工程〕
ステップＳ４において、所定の時間が経過した後、シール部材４１１を取り外すとともに、ピペットにより核酸収集チャンバ４００内の液体（回収液４０２）を回収する。これにより、被験者の皮膚を介して核酸を採取することができる。
【００４４】
上記で得られた核酸を含む回収液は、公知の核酸検出測定等の解析試料として用いることができる。
【００４５】
本発明における核酸採取方法では、回収液に核酸を採取するため、簡便に核酸を採取することができる。
【００４６】
なお、本発明の核酸採取キットは、図１の核酸採取装置１００（穿刺具１００）、図３のカートリッジ２００（微細針チップ２００）、及び図４の核酸採取用チャンバ４００を備える核酸採取キットとすることができる。
【００４７】
〔効果の検証〕
微細針を用いた皮膚表層からの核酸採取方法について検証した。実験の詳細は以下の通りである。
＜条件＞
１．被験者情報
被験者数：                2名
２．割り付け条件
被験者A
瞬時穿刺法適用部位：      2部位
押し付け穿刺法適用部位：  2部位
非穿刺部位：              2部位（皮膜形成部1部位を含む）
被験者B
瞬時穿刺法適用部位：      なし
押し付け穿刺法適用部位：  3部位
非穿刺部位：              4部位（皮膜形成部2部位を含む）
３．微細針アレイ適用条件
瞬時穿刺法：        穿刺速度6 m/sで皮膚表面に適用し、皮膚に刺さった瞬間、戻りバネにより適用部から取り外される。
押し付け穿刺法：      皮膜形成後の皮膚表面に、穿刺速度5 m/sで適用し、一定の押し圧で皮膚に刺さった状態を3分間維持する。
４．微細針アレイ形状
先端径：                  約10μm
微細針長さ：              300μm、
微細針数：                305本
５．皮膜形成方法
皮膜形成剤：              エキバンA（タイヘイ薬品社製）
乾燥時間：                約10分
６．サンプリング方法
サンプリング用チャンバ：                ポリテトラフルオロエチレン製チャンバ
サンプリング媒体：        RNase-free Water（タカラバイオ社製）
サンプリング媒体量：      100 μL ＋ 100 μL（洗浄）
サンプリング面積：        5 mm × 10 mm
サンプリング時間：        15分および60分
７．測定方法
核酸濃度測定：RediPlate 96 Ribogreen RNA Quantitation Kit（invitrogen社製）を用いて核酸濃度を測定した。測定は、キットのプロトコールに沿って実施した。
なお、本キットは高分子核酸を選択的に検出するものであり、RNAのみを測定する場合、その他の核酸の除去操作が必要となるが、本実験では同操作を実施せず、高分子核酸の総濃度を測定した。
【００４８】
＜実験操作手順＞
〔手順1：皮膜形成〕
被験者の前腕腹部をエタノール含浸綿で清拭し、厚み約13.5μmのスペーサーを貼付した。本スペーサーとは、その中心部に皮膜形成剤塗布部として13 mm × 20 mmの空洞部を有する枠状テープである。本スペーサーの中心部にエキバンA（タイヘイ薬品）を十分量滴下した後、金属製のコテを使用して、スペーサーの厚み以上の余分なエキバンAを取り除き、10分間乾燥させることで、皮膜形成を行った（図７）。完成した皮膜表面を、RNase quiet（ナカライテスク）を含ませたキムワイプで清拭した。
【００４９】
〔手順２：微細針アレイの適用〕
専用のアプリケータに装着した微細針アレイを、上記の条件に示す方法で、2名の被験者の前腕腹部に適用した。
【００５０】
〔手順３：サンプリング〕
微細針アレイ適用部に、サンプリング用チャンバ（ポリテトラフルオロエチレン製）を両面テープを用いて固定した。その後、チャンバ内に100 μLのRNase-free waterを入れ、メンディングテープでチャンバ上部にフタをした状態で、＜条件＞に示す所定時間静置し、サンプリングを行った。所定時間経過後、チャンバ内のサンプルをサンプルチューブに回収した。さらに、100 μLの新しいRNase-free waterを入れ、チャンバ内の洗浄を行った後、サンプルと同じサンプルチューブに回収した。
【００５１】
〔手順４：試料の測定〕
RediPlate 96 Ribogreen RNA Quantitation Kit（invitrogen社製）を用い、全てのサンプルの核酸濃度を測定した。
【００５２】
＜結果＞
核酸濃度測定結果を、表1に示す。
【００５３】
【表１】
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【００５４】
被験者AおよびBに対し、微細針の適用を行った全ての部位から取得したサンプル中に、核酸が存在していることが明らかとなった。一方、微細針を適用しなかった部位から取得したサンプルは、全て測定下限以下であり、核酸の存在は認められなかった。瞬時穿刺法（皮膜なし）と比較して、押し付け穿刺法（皮膜あり）では核酸採取量が増大する傾向が認められた。その原因として、皮膜形成により核酸分解酵素の混入量が減少し、効率的に核酸を回収することができた可能性が考えられるが、その他にも、微細針アレイの押し付けにより細胞破壊量が増大した影響が考えられる。
本結果より、前腕腹部に微細針アレイを適用し、当該部に抽出溶媒を接触させることにより、皮膚表層からの核酸採取が可能であることが示された。
【００５５】
〔他の変形例〕
なお、本発明は前述した実施の形態に限定されるものではなく、特許請求の範囲内において種々の変更が可能である。例えば、前述した実施の形態では、皮膜を形成するために液状の皮膜形成性樹脂を被験者の皮膚に滴下し、ついで滴下した皮膜形成性樹脂をコテで均しているが、粘度調整をした液状の皮膜形成性樹脂を適宜の噴霧器で皮膚の所定箇所に噴霧し、ついで乾燥させることでも皮膜を形成することができる。噴霧により皮膜を形成する場合、皮膚に液状の皮膜形成性樹脂を直接噴霧しても良いし、形成すべき皮膜の形状に対応させた開口を先端に有するアダプターを噴霧器の噴霧口に装着し、当該アダプターの開口を被験者の皮膚に当接させた状態で噴霧しても良い。
【００５６】
また、前述した実施の形態では、微細針チップの形状（長方形）に対応させて長方形の開口を有する長方形状の枠状シールを用いているが、開口の形状や枠状シールの外形は、円形や多角形など他の形状であっても良い。
【００５７】
また、前述した実施の形態では、微細針チップを用いて皮膚に微細孔を形成しているが、レーザーアブレーションなどを用いて皮膚に微細孔を形成してもよい。
【００５８】
また、前述した実施の形態では、微細針チップの形状（長方形）に対応させて長方形の開口を有する長方形状の核酸収集チャンバを用いているが、開口の形状は、円形や多角形など他の形状であっても良い。
【００５９】
また、前述した実施の形態では、核酸採取部材として核酸収集チャンバと回収液を用いているが、回収液を有するゲルを核酸収集部材として用いても良い。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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