(57)【要約】【課題】成層時に試料の境界面に乱れを生じさせることなく容易に成層することができ、且つ分離した対象物の混合を防止して、純度よく回収することができる細胞分離装置を提供する。【解決手段】第１液体収容部５１を有する第１容器１１と、第２液体収容部５２を有し第１容器１１の下方に設けられる第２容器１２と、第１容器１１と第２容器１２との間に配置され、第１液体収容部５１に向かって延びる第１ニードル７２及び該第１ニードル７２と連通し第２液体収容部５２に向かって延びる第２ニードル７３を有する連通部材２０と、を備える。第１容器１１と第２容器１２とを近接又は離間させることで、連通部材２０を介して第１液体収容部５１と第２液体収容部５２とを連通させる連通状態と、該連通を遮断する遮断状態とを切替可能な切替機構５５を備える。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
第１液体収容部を有する第１容器と、第２液体収容部を有し前記第１容器の下方に設けられる第２容器と、を備え、溶液を遠心分離するために遠心分離器に装着される細胞分離装置であって、
前記第１容器と前記第２容器との間には、前記第１液体収容部に向かって延びる第１ニードルと、該第１ニードルと連通し前記第２液体収容部に向かって延びる第２ニードルが形成された連通部材が設けられ、
前記第１容器と前記第２容器とを近接又は離間させることで、前記第１液体収容部と前記第２液体収容部とを連通させる連通状態と前記第１液体収容部と前記第２液体収容部との連通を遮断する遮断状態とを切替可能な切替機構を備えることを特徴とする細胞分離装置。
【請求項２】
前記第１容器の底面には、貫通孔が形成されており、
前記貫通孔は、前記貫通孔に向かって下方に傾斜するテーパ面に囲繞されていることを特徴とする請求項１に記載の細胞分離装置。
【請求項３】
前記テーパ面は、水平面に対する傾斜角度が３０°以上であることを特徴とする請求項２に記載の細胞分離装置。
【請求項４】
前記第１及び第２容器には、それぞれ導入孔と開閉制御可能なフィルター付ベントが設けられており、
前記導入孔は、シリンジの挿入により開口するニードルレスポートであることを特徴とする請求項１〜３のいずれか１項に記載の細胞分離装置。
【請求項５】
第３液体収容部を有し、前記第１容器の上方に設けられる第３容器が前記第１容器に相対回転可能に取り付けられており、
前記第１容器と前記第３容器とを相対回転させることにより、前記第１液体収容部と前記第３液体収容部とを連通させる連通状態と前記第１液体収容部と前記第３液体収容部との連通を遮断する遮断状態とを切替可能な他の切替機構を備えることを特徴とする請求項１〜３のいずれか１項に記載の細胞分離装置。
【請求項６】
前記第１容器の天面には、少なくとも２以上の貫通孔が形成されており、
前記貫通孔は、それぞれ前記貫通孔に向かって上方に傾斜するテーパ面に囲繞されていることを特徴とする請求項５に記載の細胞分離装置。
【請求項７】
前記テーパ面は、水平面に対する傾斜角度が３０°以上であることを特徴とする請求項６に記載の細胞分離装置。
【請求項８】
前記第１容器には、導入孔が設けられており、
前記第２容器には、導入孔と開閉制御可能なフィルター付ベントが設けられており、
前記第３容器には、導出孔と開閉制御可能なフィルター付ベントが設けられており、
前記導入孔と前記導出孔は、シリンジの挿入により開口するニードレスポートであることを特徴とする請求項５〜７のいずれか１項に記載の細胞分離装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞分離装置に関し、より詳細には、末梢血、臍帯血、骨髄液などの溶液から所定の細胞を分離するための細胞分離装置に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、血液などから細胞を分離する一般的な技術としては、試験管の底部にフィコール・パック（Ficoll-Paque，ファルマシア社製）などの分離液を設置して遠心分離する方法が知られている（例えば、特許文献１、２参照。）。しかし、特許文献１、２に記載の方法では、試料を分離液の上に載置する際の境界面の乱れや、分離回収時の他層との混合などにより、目的とする細胞を所望の純度で得ることが困難であった。
【０００３】
このような問題点に対処する技術として、試験管内にフィコール・パック（水溶性密度勾配物質）及び水溶性ゲル様物質を順に添加し、更に血液サンプルを加えて遠心分離することで、比重の重い物質と軽い物質との間に、ゲル様物質と水溶性密度勾配物質によるバリヤー層を形成するようにした血液分離方法が提案されている（例えば、特許文献３参照。）。また、分離管の中間部に細径の頸部を形成して、界面を乱さずに重層可能とした分離用遠心管が知られている（例えば、特許文献４参照。）。更に、通常の重力状態では血液等の液体分散系物体を支持可能であり、遠心分離の際には二方向の交差流れを可能とする成層用インサートを細胞分離装置内に嵌入し、作用流体の物体を成層用インサートの下側部分に、液体分散系物体を成層用インサートの上側部分に装入して、液体分散系の容器への注入を容易にすると共に、遠心分離の所要時間を短縮可能とした遠心分離方法が開示されている（例えば、特許文献５参照。）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特表２０１０−５０４０８３号公報
【特許文献２】特表２００７−５０９６０１号公報
【特許文献３】特開昭６１−８４５５７号公報
【特許文献４】実開平２−１４７２４８号公報
【特許文献５】特開平６−２０６００８号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかしながら、特許文献３、４によると、細胞分離後の搬送時や、容器の転倒などにより、分離された溶液が混合してしまう問題点があった。また、特許文献５によると、細胞の分離工程の途中で、成層用インサートの複数の毛細管孔や円辺の凹みが詰まってしまい、分離が十分になされなくなる虞がある。さらに、特許文献３、４、５に記載の方法では、依然として対象物の分離、回収が純度よく行えない問題点があった。
【０００６】
本発明は、前述した課題に鑑みてなされたものであり、その目的は、成層時に溶液の境界面に乱れを生じさせることなく容易に成層することができ、且つ分離した対象物の混合を防止して、目的とする成分を純度よく回収することができる細胞分離装置を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明の上記目的は、下記の構成により達成される。
（１）  第１液体収容部を有する第１容器と、第２液体収容部を有し前記第１容器の下方に設けられる第２容器と、を備え、溶液を遠心分離するために遠心分離器に装着される細胞分離装置であって、
前記第１容器と前記第２容器との間には、前記第１液体収容部に向かって延びる第１ニードルと、該第１ニードルと連通し前記第２液体収容部に向かって延びる第２ニードルが形成された連通部材が設けられ、
前記第１容器と前記第２容器とを近接又は離間させることで、前記第１液体収容部と前記第２液体収容部とを連通させる連通状態と、前記第１液体収容部と前記第２液体収容部との連通を遮断する遮断状態とを切替可能な切替機構を備えることを特徴とする細胞分離装置。
（２）  前記第１容器の底面には、貫通孔が形成されており、
前記貫通孔は、前記貫通孔に向かって下方に傾斜するテーパ面に囲繞されていることを特徴とする上記（１）に記載の細胞分離装置。
（３）  前記テーパ面は、水平面に対する傾斜角度が３０°以上であることを特徴とする上記（２）に記載の細胞分離装置。
（４）  前記第１及び第２容器には、それぞれ導入孔と開閉制御可能なフィルター付ベントが設けられており、
前記導入孔は、シリンジの挿入により開口するニードルレスポートであることを特徴とする上記（１）〜（３）のいずれかに記載の細胞分離装置。
（５）  第３液体収容部を有し、前記第１容器の上方に設けられる第３容器が前記第１容器に相対回転可能に取り付けられており、
前記第１容器と前記第３容器とを相対回転させることにより、前記第１液体収容部と前記第３液体収容部とを連通させる連通状態と前記第１液体収容部と前記第３液体収容部との連通を遮断する遮断状態とを切替可能な他の切替機構を備えることを特徴とする上記（１）〜（３）のいずれかに記載の細胞分離装置。
（６）  前記第１容器の天面には、少なくとも２以上の貫通孔が形成されており、
前記貫通孔は、それぞれ前記貫通孔に向かって上方に傾斜するテーパ面に囲繞されていることを特徴とする上記（５）に記載の細胞分離装置。
（７）  前記テーパ面は、水平面に対する傾斜角度が３０°以上であることを特徴とする上記（６）に記載の細胞分離装置。
（８）  前記第１容器には、導入孔が設けられており、
前記第２容器には、導入孔と開閉制御可能なフィルター付ベントが設けられており、
前記第３容器には、導出孔と開閉制御可能なフィルター付ベントが設けられており、
前記導入孔と前記導出孔は、シリンジの挿入により開口するニードレスポートであることを特徴とする上記（５）〜（７）のいずれかに記載の細胞分離装置。
【発明の効果】
【０００８】
上記（１）に記載の細胞分離装置によれば、第１液体収容部を有する第１容器と、第２液体収容部を有し第１容器の下方に設けられる第２容器と、第１液体収容部に向かって延びる第１ニードルと該第１ニードルと連通し第２液体収容部に向かって延びる第２ニードルが形成され第１容器と第２容器との間に配置された連通部材と、を備え、第１容器と第２容器とを近接又は離間させることで、第１液体収容部と第２液体収容部とを連通させる連通状態と、該連通を遮断する遮断状態とを切替可能な切替機構を備えるので、第１液体収容部と第２液体収容部とを遮断状態として第１液体収容部に試料溶液を注入し、第２液体収容部に分離液を注入することで、試料溶液と分離液とが混合することなく分離して注入され、容易に成層することができる。また、第１液体収容部と第２液体収容部とを連通状態として遠心分離した後、再び遮断状態として、分離液を混合させることなく対象物を純度よく回収することができる。また、細胞分離装置は、全分離工程において外部と遮断した状態で実施されるので、無菌室などの特殊な環境を準備することなく、通常の環境下での分離操作が可能となる。
【０００９】
上記（２）及び（３）に記載の細胞分離装置によれば、遠心分離時の残留物を低減することができ、純度を高めることができる。
【００１０】
上記（４）に記載の細胞分離装置によれば、より無菌性を高めることができる。
【００１１】
上記（５）に記載の細胞分離装置によれば、第３液体収容部を有して相対回転可能に第１容器の上方に設けられる第３容器をさらに備え、第１容器と第３容器とを相対回転させることにより、第１液体収容部と第３液体収容部とを連通させる連通状態と、該連通を遮断する遮断状態とに切替可能な他の切替機構を備えるので、第１液体収容部と第２液体収容部とを用いて１回目の分離作業を行った後、第１液体収容部と第３液体収容部とを用いて２回目の分離作業を連続して行うことができ、対象物を更に高純度で回収することができる。
【００１２】
上記（６）及び（７）に記載の細胞分離装置によれば、遠心分離時の残留物を低減することができ、純度を高めることができる。
【００１３】
上記（８）に記載の細胞分離装置によれば、より無菌性を高めることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】本発明に係る第１実施形態の細胞分離装置の外観図である。
【図２】図１に示す細胞分離装置を容器ごとに分解して示す分解斜視図である。
【図３】図２に示す第１容器の分解斜視図である。
【図４】図２に示す第２容器の分解斜視図である。
【図５】図２に示す第３容器の分解斜視図である。
【図６】連通部材の斜視図である。
【図７】切替機構の構成を示す断面図である。
【図８】（ａ）は連通状態の他の切替機構の構成を斜め上方から見た斜視図であり、（ｂ）は遮断状態の他の切替機構の構成を斜め上方から見た斜視図である。
【図９】（ａ）は第１及び第２容器間に配置された切替機構及び第１及び第３容器間に配置された他の切替機構が共に連通状態とされた細胞分離装置の断面図、（ｂ）は第１及び第２容器間に配置された切替機構が連通状態、他の切替機構が遮断状態とされた細胞分離装置の断面図である。
【図１０】収縮リングのテーパ面の最適な傾斜角度を決めるための実験にあたり、末梢血から単核球層を分離する概略工程を示す説明図である。
【図１１】収縮リング上に残る赤血球の状態をテーパ面の傾斜角度ごとに示す写真である。
【図１２】（ａ）〜（ｅ）は細胞分離装置の分離操作手順を示す説明図である。
【図１３】（ａ）は１回目の遠心分離前の状態を示す図であり、（ｂ）は１回目の遠心分離後の状態を示す図であり、（ｃ）は２回目の遠心分離後の状態を示す図である。
【図１４】本発明に係る第２実施形態の細胞分離装置の外観図である。
【図１５】図１３に示す第３容器の分解斜視図である。
【図１６】第１及び第２容器間に配置された切替機構及び第１及び第３容器間に配置された他の切替機構が共に連通状態とされた第２実施形態の細胞分離装置の断面図である。
【図１７】（ａ）〜（ｅ）は第２実施形態の細胞分離装置の分離操作手順を示す説明図である。
【図１８】本発明に係る第３実施形態の細胞分離装置の外観図である。
【図１９】第１及び第２容器間に配置された切替機構が連通状態とされた第３実施形態の細胞分離装置の断面図である。
【図２０】（ａ）〜（ｄ）は第３実施形態の細胞分離装置の分離操作手順を示す説明図である。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
以下、本発明に係る細胞分離装置の各実施形態を図面に基づいて詳細に説明する。
（第１実施形態）
＜細胞分離装置＞
図１は本発明に係る第１実施形態の細胞分離装置の全体外観図、図２は分解斜視図である。図１及び図２に示すように、細胞分離装置１０は、第１容器１１と、第２容器１２と、第３容器１３と、連通部材２０と、を備える。
【００１６】
＜第１容器＞
図３も参照して、第１容器１１は、中央容器１４と、下部収縮リング１５Ａと、上部収縮リング１６と、連結リング３８と、から構成される。中央容器１４は、上下方向に貫通する略円筒状に形成された部材であり、その上端縁には、上部収縮リング１６に熱溶着、超音波溶着、または接着によって液密に接合する環状突起１７（図９参照）が形成されている。また、下端縁には、下部収縮リング１５Ａと液密に嵌合する環状段部１８が形成されている。
【００１７】
中央容器１４の上部には、ヘパリン溶液及び骨髄液などの溶液の導入孔であるニードルレスポート１９が設けられている。ニードルレスポート１９は、不図示のシリンジの挿入により開口して連結される従来公知のコネクタであり、通常は閉じている開口部が注射針を用いなくてもシリンジを挿入することで内部と連通が可能となるものである。なお、ニードルレスポートについては、特表２００１‐５０５０８７、特表２００５‐５２３７８２、特開２００９‐６１６４などに詳述されているので参照されたい。
【００１８】
中央容器１４を形成する素材は、剛性及び透明性を備える素材であれば特に限定されず、例えば、ＰＰ、ＰＥ、ポリカーボネイト、ポリアクリル性樹脂等が例示できる。透明性の要件からは、ポリカーボネイトが好適に例示される。
【００１９】
下部収縮リング１５Ａは、中心に貫通孔６１が形成された円筒状部材であり、上面には貫通孔６１に向かって下方に傾斜するテーパ面６２が形成されている（図７参照）。換言すれば、貫通孔６１は、貫通孔６１に向かって下方に傾斜するテーパ面６２に囲繞されている。テーパ面６２の水平面に対する傾斜角度は、３０°以上に設定されている。傾斜角度が３０°以上に設定されている理由については、後に詳述する。なお、テーパ面は、平面で構成される場合のみならず湾曲面で構成される場合も含むものである。
【００２０】
下部収縮リング１５Ａの下面には、貫通孔６１を形成するパイプ部６３が下方に突出して形成されている。パイプ部６３の根元には、垂直方向にスリットが形成された弁部６６が設けられており、貫通孔６１は、通常時には弁部６６により閉鎖されており、後述する連通部材２０の第１ニードル７２の挿通により弁部６６が開口する構造となっている。なお、弁部６６は第１ニードル７２を抜き差しした場合でも密閉性が保たれる構造となっている。また、下部収縮リング１５Ａの外周面には、軸方向中央に他の部分より大径とされた円環状鍔部６４が設けられている。
【００２１】
下部収縮リング１５Ａを形成する素材は、柔軟性を持つゴム素材が好適であり、シリコンゴム、天然ゴム、イソプレンゴム、及び熱可塑性エラストマー（ＴＰＥ）等が例示される。
【００２２】
上部収縮リング１６は、隔壁２１によって上下方向に分割されている。隔壁２１には、９０°間隔で設けられた４つの貫通孔２２が形成されている。隔壁２１は、それぞれの貫通孔２２に向かって上方に傾斜する４つのテーパ面２１ａを有する。換言すれば、貫通孔２２は、それぞれ貫通孔２２に向かって上方に傾斜する独立したテーパ面２１ａに囲繞されている。各テーパ面２１ａの水平面に対する傾斜角度は、３０°以上に設定されている。傾斜角度が３０°以上に設定されている理由については、後に詳述する。なお、テーパ面は、平面で構成される場合のみならず湾曲面で構成される場合も含むものである。
【００２３】
また、テーパ面２１ａの裏面側となる隔壁２１の上面２１ｂ（図２参照）は、平滑な平面となっている。上部収縮リング１６の下端縁には、中央容器１４の環状突起１７と嵌合して液密に接合する円環溝２３が形成されている。
【００２４】
上部収縮リング１６を形成する素材は、剛性があればいずれの素材でも用いることができ、例えば、ＰＰ、ＰＥ、ポリカーボネイト、ポリアクリル性樹脂等が例示できる。
【００２５】
連結リング３８は、一定の強度を有する素材、例えば、ＰＰ、ＰＥ、ポリカーボネイト、ポリアクリル性樹脂等で形成された断面略Ｌ字型のリングであり、下部収縮リング１５Ａの円環状鍔部６４に係合して、中央容器１４と下部収縮リング１５Ａとの分離を阻止する。
【００２６】
第１容器１１は、図９に示すように、中央容器１４の環状突起１７が上部収縮リング１６の円環溝２３に嵌合して、熱溶着、超音波溶着、または接着によって液密に接合する。また、中央容器１４の環状段部１８には、下部収縮リング１５Ａが内嵌すると共に、下部収縮リング１５Ａの円環状鍔部６４に下方から挿入されて外嵌する連結リング３８が、中央容器１４の下端縁外周面（環状段部１８の外周面）に熱溶着、超音波溶着、または接着によって液密に接合する。これにより、第１容器１１の内部には、中央容器１４、下部収縮リング１５Ａ、及び上部収縮リング１６によって画成される第１液体収容部５１が形成される。
【００２７】
＜第２容器＞
図４は第２容器の分解斜視図であり、第２容器１２は、下部容器２５、下部収縮リング１５Ｂ、及び連結リング３８と、から構成される。下部容器２５は、略有底円筒状に形成された部材であり、その上端縁には、大径に形成された環状段部２８が形成されている。また、下部容器２５の上部には、中央容器１４と同様の構造を有するニードルレスポート１９と、外部と通気可能なフィルター付きベント６５とが、周方向の異なる位置に設けられている。
【００２８】
ニードルレスポート１９は、第２容器１２内に分離液を注入するための導入孔である。また、フィルター付きベント６５は、下部容器２５の内外を連通させる開口部であり、連通部には、外部から侵入する細菌などを除去可能なフィルターが配置されている。フィルター付きベント６５は、ニードルレスポート１９と同様の機構か、若しくは三方活栓の機構が組み込まれており、外部との連通、また遮断を制御可能となっている。溶液の混和時、及び遠心分離時にフィルター付きベント６５を閉じておくことにより、フィルターの濡れが防止される。
【００２９】
下部容器２５を形成する素材は、剛性及び透明性があれば特に限定されず、例えば、ＰＰ、ＰＥ、ポリカーボネイト、ポリアクリル性樹脂等が例示できるが、透明性の要件からポリカーボネイトが好適に使用可能である。
【００３０】
下部収縮リング１５Ｂ及び連結リング３８は、図３に示す第１容器１１を構成する下部収縮リング１５Ａ及び連結リング３８と同一部材であり、第２容器１２においては、上下方向が逆方向に向けられて下部容器２５の上部に固着されている。即ち、下部容器２５の環状段部２８に、下部収縮リング１５Ｂが内嵌すると共に、下部収縮リング１５Ｂの円環状鍔部６４に上方から挿入されて外嵌する連結リング３８が、下部容器２５の上端縁外周面（環状段部２８の外周面）に熱溶着、超音波溶着、または接着によって液密に接合する。これにより、図９に示すように、第２容器１２の内部には、下部容器２５、及び下部収縮リング１５Ｂによって画成される第２液体収容部５２が形成される。
【００３１】
＜第３容器＞
図５に示すように、第３容器１３は、上部容器４１と、切替リング２７と、から構成される。上部容器４１は、半球状凹部が形成された略椀状の部材であり、下端縁の外周には、切替リング２７と液密に嵌合するための溝４３が設けられている。また、上部容器４１の上部には、半球状凹部に連通するニードルレスポート１９が設けられている。上部容器４１を形成する素材は、比較的剛性のある一般的な素材であればよく、ＰＰ、ＰＥ、ポリカーボネイト等が例示できる。
【００３２】
切替リング２７は、円盤状の天面板３１と、天面板３１の外周縁から図中上方に延設されるリング状壁部３２と、を有し、リング状壁部３２の内側に凹部３４が設けられた略有底円筒状に形成されている。天面板３１は、リング状壁部３２と反対側の面３１ａ（図中下面）が平面に形成されると共に、４つの貫通孔３３が９０°間隔で形成されている。切替リング２７の中心から貫通孔３３までの半径は、上部収縮リング１６の中心から貫通孔２２までの半径と同じ距離に設定されている。
【００３３】
リング状壁部３２の上端縁には、上部容器４１の溝４３に係合する環状突部３５が形成されている。またリング状壁部３２には、下部容器２５と同様の機構を有し、凹部３４に連通可能なフィルター付きベント６５が設けられている。
【００３４】
天面板３１の直径は、上部収縮リング１６の内径と略同等の直径を有し、２つの突部３７が径方向に突出して形成されている。この突部３７は、切替リング２７が上部収縮リング１６に組み付けられて他の切替機構である第２切替機構５６を構成する際、上部収縮リング１６の内溝２４（図８参照）に係合する。これにより、切替リング２７と上部収縮リング１６とは、離間が防止され且つ相対回転可能（切替リング２７を上部収縮リング１６に対して回転することが可能であることの意）に組み付けられる。なお、突部３７と内溝２４との係合は、後述するようにゴム素材からなる切替リング２７を弾性変形させることで組み付け可能である。
【００３５】
切替リング２７を形成する素材は、柔軟性を持つゴム素材が好適であり、シリコンゴム、天然ゴム、イソプレンゴム、及び熱可塑性エラストマー（ＴＰＥ）等が例示される。
【００３６】
そして、切替リング２７のリング状壁部３２を、ゴム素材の持つ弾性により上部容器４１の溝４３に液密に嵌合することで、図９に示すように、上部容器４１、切替リング２７によって画成される第３液体収容部５３が形成される。
【００３７】
＜連通部材＞
図６に示すように、連通部材２０は、略円筒状に形成された部材であり、軸方向中央に設けられた隔壁７１によって円筒部７５の内部空間が上下に分割されている。隔壁７１の中心には、上方に向かって延びる第１ニードル７２と、該第１ニードル７２と連通し下方に向かって延びる第２ニードル７３とが形成されている。第１ニードル７２および第２ニードル７３は、それぞれの先端部が斜めに形成されて両頭針を形成すると共に、貫通孔７４によって連通している。連通部材２０の円筒部７５は、内径が連結リング３８の外径よりも僅かに大きく、連結リング３８に外嵌可能である。連通部材２０には十分な剛性が要求され、好適な素材としてはポリカーボネイト、ポリアクリル製樹脂等が例示できる。
【００３８】
このように構成された第１容器１１、第２容器１２、及び第３容器１３は、第１容器１１と第２容器１２との間に連通部材２０を配置して第１容器１１の下方に第２容器１２が組み付けられると共に、第１容器１１の上方に第３容器１３が組み付けられて細胞分離装置１０が形成される。具体的には、図７及び図９に示すように、連通部材２０の隔壁７１より上方の円筒部７５に第１容器１１の連結リング３８が内嵌すると共に、隔壁７１より下方の円筒部７５に第２容器１２の連結リング３８が内嵌して組み付けられる。また、上部収縮リング１６の上部に第３容器１３の切替リング２７が組み付けられる。
【００３９】
＜切替機構＞
図７から図９に示すように、第１容器１１の下部収縮リング１５Ａ、連通部材２０、及び第２容器１２の下部収縮リング１５Ｂにより第１切替機構５５が形成され、上部収縮リング１６と切替リング２７とにより他の切替機構である第２切替機構５６が形成される。
【００４０】
第１切替機構５５は、下部収縮リング１５Ａの貫通孔６１に連通部材２０の第１ニードル７２が僅かに挿入された状態で、第１容器１１の連結リング３８が隔壁７１より上方の円筒部７５に内嵌している。また、下部収縮リング１５Ｂの貫通孔６１に連通部材２０の第２ニードル７３が僅かに挿入された状態で、第２容器１２の連結リング３８が隔壁７１より下方の円筒部７５に内嵌して組み付けられている。
【００４１】
この連通部材２０の第１及び第２ニードル７２、７３が、僅かに下部収縮リング１５Ａ、１５Ｂの貫通孔６１にそれぞれ挿入された状態においては、常時、弁部６６が閉じられているので貫通孔６１は閉鎖されており、第１液体収容部５１と第２液体収容部５２とは隔離されている（遮断状態）。この状態から第１容器１１と第２容器１２とを接近する方向に相対移動させると、第１ニードル７２が下部収縮リング１５Ａの弁部６６を貫通して第１液体収容部５１に挿入されると共に、第２ニードル７３が下部収縮リング１５Ｂの弁部６６を貫通して第２液体収容部５２に挿入される。これにより、連通部材２０の貫通孔７４によって第１及び第２液体収容部５１、５２が連通して連通状態となる（図９参照）。なお、このとき、弁部６６は貫通孔６１の内周面に押し付けられた状態となっており、図９中では簡単のため図示を省略している。
【００４２】
図８及び図９に示すように、第２切替機構５６は、切替リング２７の突部３７が、上部収縮リング１６の内溝２４に係合し、略４５°相対回転可能（切替リング２７を上部収縮リング１６に対して回転することが可能であることの意）に組み付けられている。このとき、切替リング２７のリング状壁部３２と反対側の面３１ａ（図中下面）は、上部収縮リング１６の隔壁２１の上面２１ｂに摺接する。切替リング２７の貫通孔３３と、上部収縮リング１６の貫通孔２２とが一致した位相にあるとき（図８（ａ）参照）、第２切替機構５６は連通状態であり、この連通状態から第１容器１１と第３容器１３とを略４５°相対回転させると、切替リング２７の貫通孔３３と、上部収縮リング１６の貫通孔２２との位相が異なる位置となって第２切替機構５６が遮断状態となる（図８（ｂ）参照）。即ち、第１容器１１と第３容器１３とを略４５°相対回転させることで、第２切替機構５６の連通、遮断が切り換え可能であり、第１液体収容部５１と第３液体収容部５３とが連通し、また連通が遮断される。
【００４３】
＜収縮リングのテーパ面＞
次に、収縮リングのテーパ面の傾斜角度について説明する。細胞分離装置１０による細胞の分離効率は、下部収縮リング１５（１５Ａ、１５Ｂ）及び上部収縮リング１６のテーパ面６２、２１ａの傾斜角度によって異なる。図１０はテーパ面６２、２１ａの最適な傾斜角度を求めるために行ったラットの末梢血から単核球層を分離する実験の概略工程を示している。
【００４４】
実験に用いた分離装置１００は、シリコンでリング状に作製した収縮部材１０２を、ポリプロピレン製の容器１０１の中央に水平に設置した。収縮部材１０２は、開口部より低く、容器１０１の断面積よりも小さい円形の縁領域１０３を有する下方向傾斜表面１０２ａを備える。収縮部材１０２は、下方向傾斜表面１０２ａと水平面とのなす傾斜角度を０°から５０°まで、１０°刻みで変えて合計６種類を作製して用いた。
【００４５】
図１０に示すように、容器１０１の底部から縁領域１０３の高さまで、遠心分離媒体１０５で満たした。遠心分離媒体１０５は、造影剤（オムニパーク１４０：第一三共株式会社）を９３．２ｍＬ、生理食塩水（大塚生食注：大塚製薬株式会社）を１０３．６ｍＬ、及び蒸留水（大塚蒸留水：大塚製薬株式会社）を３．２ｍＬ混和して作成した。作成された遠心分離媒体１０５の比重は１．０７７、浸透圧（生理食塩液に対する比）は１．０、ｐＨは７．４であった。
【００４６】
次いで、ラットの末梢血を用いて上記分離装置１００での遠心分離を行った。ラット末梢血は、ＬＥＷ系統ラット１１０の腹部大動脈から採血を行い、得られた血液量の１０％相当のヘパリン（ノボ・ヘパリン注：持田製薬株式会社）、及び血液量と等量の生理食塩水（大塚生食注：大塚製薬株式会社）を加え、サンプル１０６を調製した。
【００４７】
このサンプル１０６を遠心分離媒体１０５に重層し、次いで４００Ｇで４０分間遠心分離を行った。遠心分離により、容器１０１の底部には赤血球層が堆積し、容器１０１の上部には単核球層が堆積し、赤血球層と単核球層との間に遠心分離媒体１０５が介在している。遠心分離後後、収縮部材１０２の下方向傾斜表面１０２ａから容器１０１の開口部までの液体を除去し、容器１０１の開口部から下方向傾斜表面１０２ａに残留する赤血球を観察した。
【００４８】
図１１は、収縮部材１０２上に残る赤血球の状態を下方向傾斜表面１０２ａの傾斜角度ごとに示す図であり、傾斜角度が２０°以下では、下方向傾斜表面１０２ａに赤血球が残留している様子が観察されるが、傾斜角度が３０°以上では、下方向傾斜表面１０２ａに赤血球は観察されなかった。従って、効率よく細胞を分離するためには、下方向傾斜表面１０２ａの傾斜角度が３０°以上が好ましいことが分かる。この実験に基づいて、下部及び上部収縮リング１５、１６のテーパ面６２、２１ａの傾斜角度を３０°以上に設定した。
【００４９】
＜細胞分離装置の分離操作手順（遠心分離方法）＞
上記のように構成された細胞分離装置１０を用いた溶液の遠心分離は、図１２を参照して概略下記の手順で行われる。
（ａ）図１２（ａ）に示すように、組みつけられていない第２容器１２のフィルター付きベント６５を開く。
（ｂ）第２容器１２のニードルレスポート１９からシリンジで分離液を第２液体収容部５２内に注入した後、フィルター付きベント６５を閉じる。分離液は、下部収縮リング１５Ｂの弁部６６に接する液位まで充填することが好ましい（図７参照）。分離液の注入により上昇する第２液体収容部５２内の圧力は、開かれている第２容器１２のフィルター付きベント６５から逃がされるので、容易に注入することができる。
（ｃ）図１２（ｂ）に示すように、組み付けられた状態の第１容器１１と第３容器１３とを相対回転させて第２切替機構５６が連通状態であることを確認する。
（ｄ）第３容器１３のフィルター付きベント６５を開く。
（ｅ）骨髄液（赤血球等の細胞及び血液凝固阻止目的のヘパリン溶液等を含む）をシリンジに採取する。
（ｆ）第１容器１１のニードルレスポート１９から採取した骨髄液を第１液体収容部５１に注入する。骨髄液を注入後、生理食塩水、リンゲル液等の低比重等張液（以下、これらを総称して希釈液とも呼ぶ。）を注入して２倍以上に適宜希釈する。骨髄液及び希釈液の注入により上昇する第１液体収容部５１内の圧力は、開かれている第３容器１３のフィルター付きベント６５から逃がされるので、容易に注入することができる。希釈液の注入は、骨髄液の粘性を下げる効果がある。
（ｇ）第３容器１３のフィルター付きベント６５を閉じ、第１容器１１と第３容器１３とを相対回転させて第２切替機構５６を遮断状態とする。
（ｈ）組み付けられた第１容器１１及び第３容器１３を転倒させたり、左右に振って骨髄液及び希釈液を十分に混和する。溶液の混和時、及び連続して行われる遠心分離時には、第２切替機構５６を遮断しフィルター付きベント６５が閉じているので、エアフィルターの濡れを防止することができる。図１３（ａ）は、１回目の遠心分離前の状態を示す図である。第１液体収容部５１内には混和した骨髄液及び希釈液が収容されており、第２液体収容部５２内には分離液が収容されている。
（ｉ）図１２（ｃ）に示すように、連通部材２０の第１ニードル７２を第１容器１１の下部収縮リング１５Ａの貫通孔６１に形成された弁部６６（図７参照）に挿入する。
（ｊ）（ｉ）とほぼ同時に連通部材２０の第２ニードル７３を第２容器１２の下部収縮リング１５Ｂの貫通孔６１に形成された弁部６６に挿入して第１液体収容部５１と第２液体収容部５２とを連通させる（第１切替機構５５を開き、連通状態とする）。このとき、細胞分離装置１０は図９（ｂ）に示す断面構成をなす。
（ｋ）所定の条件で遠心分離操作を行う。図１３（ｂ）は、１回目の遠心分離後の状態を示す図である。第１液体収容部５１と第２液体収容部５２には、上から血清、単核球、分離液、及び赤血球、血小板等の血球成分が、この順に分離して成層される。
（ｌ）図１２（ｄ）に示すように、遠心分離操作終了後、第１容器１１内にある溶液を目視して、単核球の細胞のバンドがあることを確認する。次いで、第１容器１１の下部収縮リング１５Ａから連通部材２０を抜き取り、連通部材２０及び第２容器１２を取り去る。下部収縮リング１５Ａの貫通孔６１に形成された弁部６６は、第１ニードル７２を抜き取りことで自動的に閉じる。以上の操作により１回目の遠心分離が完了する。
（ｍ）続いて２回目の遠心分離を実施すべく、第１容器１１内にある溶液を目視して、単核球の細胞のバンドがあることを確認した後、再び第３容器１３のフィルター付きベント６５を開けた状態で第１容器１１のニードルレスポート１９から生理食塩水又はリンゲル液等の希釈液を注入し、フィルター付きベント６５を閉じ第１容器１１と第３容器１３とを相対回転させて第２切替機構５６を遮断状態として組み付けられた第１容器１１及び第３容器１３を転倒させたり、左右に振って内溶液を十分に混和する。一度分離された血清及び単核球を濃縮する際に希釈液を加えることで、血清及び分離液の密度をより小さくし、細胞である単核球を確実に沈めることができる。
（ｎ）第１容器１１と第３容器１３とを相対回転させて第２切替機構５６を連通状態とし、第１液体収容部５１と第３液体収容部５３とを連通する。
（ｏ）図１２（ｅ）に示すように、第３液体収容部５３を下側（上下逆）にして、所定の条件で遠心分離操作を行う。図１３（ｃ）は、２回目の遠心分離後の状態を示す図である。第１液体収容部５１と第３液体収容部５３には、下部に単核球が堆積し、その上に混和した血清、分離液、及び希釈液が成層される。
（ｐ）遠心分離操作終了後、第１容器１１と第３容器１３とを相対回転させて第２切替機構５６を閉じ、第１液体収容部５１と第３液体収容部５３とを遮断状態とする。
（ｑ）第３容器１３のフィルター付きベント６５を開いた後、第３容器１３のニードルレスポート１９から第３液体収容部５３内の溶液をシリンジで採取する。必要によりピペッティングを行い、細胞を均一に分散させる。
（ｒ）必要により、輸液バッグ等に採取した細胞を懸濁させる。
【００５０】
以上説明したように、本実施形態の細胞分離装置１０によれば、第１液体収容部５１を有する第１容器１１と、第２液体収容部５２を有し第１容器１１の下方に設けられる第２容器１２と、第１液体収容部５１に向かって延びる第１ニードル７２と該第１ニードル７２と連通し第２液体収容部５２に向かって延びる第２ニードル７３が形成され第１容器１１と第２容器１２との間に配置された連通部材２０と、を備え、第１容器１１と第２容器１２とを近接又は離間させることで、第１液体収容部５１と第２液体収容部５２とが連通する連通状態と、該連通を遮断する遮断状態とを切替可能な第１切替機構５５を備えるので、第１液体収容部５１と第２液体収容部５２とを遮断状態（第１容器１１と第２容器１２とが分離した状態）として第１液体収容部５１に試料溶液を注入し、第２液体収容部５２に分離液を注入することで、試料溶液と分離液とが混合することなく分離して注入され、境界面を乱さない成層が可能となる。
【００５１】
また、第１液体収容部５１と第２液体収容部５２とを連通状態として遠心分離した後、再び遮断状態（第１容器１１と第２容器１２とを分離）とすることで、細胞分離装置１０を傾けた場合でも血球成分と分離液の混合を防止することができ、対象物を純度よく回収することができる。また、搬送・輸送を容易に行うことができる。更に、細胞分離装置１０は、全遠心分離工程において外部と遮断された状態で行われるので、無菌室などの特殊な環境を準備することなく、通常の環境下での遠心分離が可能であり、操作性が向上する。
【００５２】
第１容器１１には、シリンジの挿入により開口するニードルレスポート１９が配設され、第２容器１２には、ニードルレスポート１９とフィルター付きベント６５が設けられており、第３容器１３には、ニードルレスポート１９とフィルター付きベント６５が配設されているので、外部と遮断した状態で溶液を注入することができ、無菌性を高めることができる。
【００５３】
第１容器１１の底面には、貫通孔６１が形成されており、貫通孔６１は、貫通孔６１に向かって３０°以上の傾斜角度で下方に傾斜するテーパ面６２に囲繞されているので、赤血球などの比重の重い媒体を第２液体収容部５２に確実に導くことができ、分離後の溶液の純度をより高めることができる。
【００５４】
また、細胞分離装置１０は、第３液体収容部５３を有して相対回転可能に第１容器１１の上方に設けられる第３容器１３を備え、第１容器１１と第３容器１３とを相対回転させることにより、第１液体収容部５１と第３液体収容部５３とを連通させる連通状態と、該連通を遮断する遮断状態とに切替可能な第２切替機構５６を備えるので、１回目の遠心分離後、細胞分離装置１０を反転させて再度遠心分離を行うことで、容器の移し替えを行うことなく分離溶液の濃縮を行うことができる。即ち、２度の遠心分離操作を閉鎖系で実施することができ、無菌室等の特別な施設以外でも行うことができる。
【００５５】
第１容器１１の天面には、少なくとも１つ以上の貫通孔２２が形成されており、貫通孔２２は、それぞれ貫通孔２２に向かって３０°以上の傾斜角度で上方に傾斜するテーパ面２１ａに囲繞されているので、細胞を第３液体収容部５３に確実に導くことができ、細胞の純度をより高めることができる。貫通孔２２は、１つだけ形成するよりも複数形成した方が、収縮リングの高さを低くすることができ、デッドスペースの削減できるため、２つ以上設けることが好ましい。
【００５６】
また、１回目の遠心分離後、２回目の遠心分離前に、生理食塩水又はリンゲル液等の希釈液を注入することで、一度分離された血清及び単核球を濃縮する際に、血清及び分離液の密度をより小さくし、細胞である単核球を確実に沈めることができる。
【００５７】
（第２実施形態）
次に、本発明に係る第２実施形態の細胞分離装置について説明する。図１４は本発明に係る第２実施形態の細胞分離装置の外観図であり、図１５は図１４に示す第３容器の分解斜視図であり、図１６は第１及び第２容器間に配置された切替機構及び第１及び第３容器間に配置された他の切替機構が共に連通状態とされた第２実施形態の細胞分離装置の断面図である。
【００５８】
第２実施形態の細胞分離装置１０Ａは、第１容器及び第３容器の形態が第１実施形態の細胞分離装置１０と異なる。その他の構成、および効果は、第１実施形態の細胞分離装置１０と同様であるので、同一部分には同一符号を付して詳細な説明は省略する。
【００５９】
＜第１容器＞
図１４〜図１６に示すように、第１容器１１Ａは、中央容器１４Ａと、下部収縮リング１５Ａと、上部収縮リング１６と、連結リング３８と、から構成され、中央容器１４Ａにヘパリン溶液及び骨髄液などの溶液の導入孔であるニードルレスポート１９に加えて、フィルター付きベント６５が設けられている以外、第１実施形態の第１容器１１と同様の構成を有している。
【００６０】
＜第３容器＞
図１４〜図１６に示すように、第３容器１３Ａは、上部容器４１Ａと、隔壁フィルム４２と、切替リング２７Ａと、から構成される。上部容器４１Ａは、図中下面側に半球状凹部が形成された略椀状の部材であり、下端縁の外周には、切替リング２７Ａと液密に嵌合するための溝４３が設けられている。また、上部容器４１Ａの頭頂部には、エアベントである貫通孔４４が形成されており、切替リング２７Ａのニードルレスポート１９からの溶液の出し入れに伴って半球状凹部内の空気を貫通孔４４から排出または吸入する。上部容器４１Ａを形成する素材は、比較的剛性のある一般的な素材であればよく、PP、PE、ポリカーボネイト等が例示できる。
【００６１】
隔壁フィルム４２は、熱溶着性を有する柔軟なPP又はPEのフィルム素材からなり、鍔部４５を有する中空半球状に形成されている。隔壁フィルム４２は、鍔部４５が上部容器４１Ａの下端面に全周に亘って液密に熱溶着されている。
【００６２】
切替リング２７Ａは、図５に示す第１実施形態の切替リング２７のフィルター付きベント６５がニードルレスポート１９となっている以外は同様の構成を有しており、上端縁に形成された環状突部３５が上部容器４１Ａの溝４３に嵌合して組み付けられる。これにより、隔壁フィルム４２と切替リング２７Ａとによって画成される第３液体収容部５３が形成される。また、切替リング２７Ａと上部収縮リング１６とは、第２切替機構５６を構成する。
【００６３】
＜細胞分離装置の分離操作手順（遠心分離方法）＞
上記のように構成された細胞分離装置１０Ａを用いた溶液の遠心分離は、図１７及び図１６を参照して概略下記の手順で行われる。
（ａ）図１７（ａ）に示すように、組みつけられていない第２容器１２のフィルター付きベント６５を開く。
（ｂ）第２容器１２のニードルレスポート１９からシリンジで分離液を第２液体収容部５２内に注入した後、第２容器１２のフィルター付きベント６５を閉じる。分離液は、下部収縮リング１５Ｂの弁部６６に接する液位まで充填することが好ましい（図７参照）。
（ｄ）′図１７（ｂ）に示すように、第１容器１１Ａに第３容器１３Ａを組み付けた後、第１容器１１Ａのフィルター付きベント６５を開く。
（ｅ）骨髄液（赤血球等の細胞及び血液凝固阻止目的のヘパリン溶液等を含む）をシリンジに採取する。
（ｆ）第１容器１１Ａのニードルレスポート１９から採取した骨髄液を第１液体収容部５１に注入する。骨髄液を注入後、生理食塩水、リンゲル液等の低比重等張液（以下、これらを総称して希釈液とも呼ぶ。）を注入して２倍以上に適宜希釈する。
（ｇ）′第１容器１１Ａのフィルター付きベント６５を閉じ、第１容器１１Ａと第３容器１３Ａとを相対回転させて第２切替機構５６を遮断状態とする。なお、（ｄ）′における第１容器１１Ａに第３容器１３Ａを組み付ける工程は、（ｅ）〜（ｆ）で第１容器１１Ａのニードルレスポート１９から骨髄液を第１液体収容部５１に注入した後に、行ってもよい。
（ｈ）組み付けられた第１容器１１Ａ及び第３容器１３Ａを転倒させたり、左右に振って骨髄液及び希釈液を十分に混和する。
（ｉ）図１７（ｃ）に示すように、連通部材２０の第１ニードル７２を第１容器１１Ａの下部収縮リング１５Ａの貫通孔６１に形成された弁部６６（図７参照）に挿入する。
（ｊ）（ｉ）とほぼ同時に連通部材２０の第２ニードル７３を第２容器１２の下部収縮リング１５Ｂの貫通孔６１に形成された弁部６６に挿入して第１液体収容部５１と第２液体収容部５２とを連通させる（第１切替機構５５を開き、連通状態とする）。
（ｋ）所定の条件で遠心分離操作を行う。
（ｌ）図１７（ｄ）に示すように、遠心分離操作終了後、第１容器１１Ａ内にある溶液を目視して、単核球の細胞のバンドがあることを確認する。次いで、第１容器１１Ａの下部収縮リング１５Ａから連通部材２０を抜き取り、連通部材２０及び第２容器１２を取り去る。下部収縮リング１５Ａの貫通孔６１に形成された弁部６６は、第１ニードル７２を抜き取りことで自動的に閉じる。以上の操作により１回目の遠心分離が完了する。
（ｍ）続いて２回目の遠心分離を実施すべく、第１容器１１Ａ内にある溶液を目視して、単核球の細胞のバンドがあることを確認した後、再び第１容器１１Ａのフィルター付きベント６５を開けた状態で第１容器１１のニードルレスポート１９から生理食塩水又はリンゲル液等の希釈液を注入し、フィルター付きベント６５を閉じて組み付けられた第１容器１１Ａ及び第３容器１３Ａを転倒させたり、左右に振って内溶液を十分に混和する。
（ｎ）第１容器１１Ａと第３容器１３Ａとを相対回転させて第２切替機構５６を連通状態とし、第１液体収容部５１と第３液体収容部５３とを連通する。
（ｏ）図１７（ｅ）に示すように、第３液体収容部５３を下側（上下逆）にして、所定の条件で遠心分離操作を行う。
（ｐ）遠心分離操作終了後、第１容器１１Ａと第３容器１３Ａとを相対回転させて第２切替機構５６を閉じ、第１液体収容部５１と第３液体収容部５３とを遮断状態とする。
（ｑ）′第３容器１３Ａのニードルレスポート１９から第３液体収容部５３内の溶液をシリンジで採取する。必要によりピペッティングを行い、細胞を均一に分散させる。
（ｒ）必要により、輸液バッグ等に採取した細胞を懸濁させる。
【００６４】
以上説明したように、本実施形態の細胞分離装置１０Ａによっても、第１実施形態の細胞分離装置１０と同様に、第１液体収容部５１と第２液体収容部５２とを遮断状態（第１容器１１Ａと第２容器１２とが分離した状態）として第１液体収容部５１に試料溶液を注入し、第２液体収容部５２に分離液を注入することで、試料溶液と分離液とが混合することなく分離して注入され、境界面を乱さない成層が可能となる。また、第１液体収容部５１と第２液体収容部５２とを連通状態として遠心分離した後、再び遮断状態（第１容器１１Ａと第２容器１２とを分離）とすることで、細胞分離装置１０Ａを傾けた場合でも分離液の混合を防止することができ、対象物を純度よく回収することができる。また、搬送・輸送を容易に行うことができる。更に、細胞分離装置１０Ａは、全遠心分離工程において外部と遮断された状態で行われるので、無菌室などの特殊な環境を準備することなく、通常の環境下での遠心分離が可能であり、操作性が向上する。
【００６５】
（第３実施形態）
次に、本発明に係る第３実施形態の細胞分離装置について説明する。図１８は本発明に係る第３実施形態の細胞分離装置１０Ｂの外観図であり、図１９は第１及び第２容器間に配置された切替機構が連通状態とされた第３実施形態の細胞分離装置の断面図である
【００６６】
第３実施形態の細胞分離装置１０Ｂは、１回の遠心分離により所望の成分を分離可能な溶液、即ち、１回の遠心分離により所望の成分をそのまま使用する場合に適用される。本実施形態の細胞分離装置１０Ｂは、図１８に示すように、第３容器１３を備えず、上部収縮リング１６に代えて略半球状のキャップ８０が第１容器１１Ａの上部に配設されている点で第２実施形態の細胞分離装置１０Ａと相違する。その他の構成、および効果は、第２実施形態の細胞分離装置１０Ａと同様であるので、同一部分には同一符号を付して詳細な説明は省略する。
【００６７】
＜細胞分離装置の分離操作手順＞
上記のように構成された細胞分離装置１０Ｂを用いた溶液の遠心分離は、図２０及び図１９を参照して概略下記の手順で行われる。
（ａ）図２０（ａ）に示すように、組みつけられていない第２容器１２のフィルター付きベント６５を開く。
（ｂ）第２容器１２のニードルレスポート１９からシリンジで分離液を第２液体収容部５２内に注入した後、第２容器１２のフィルター付きベント６５を閉じる。分離液は、下部収縮リング１５Ｂの弁部６６に接する液位まで充填することが好ましい（図７参照）。
（ｄ）″図２０（ｂ）に示すように、第１容器１１Ａのフィルター付きベント６５を開く。
（ｅ）骨髄液（赤血球等の細胞及び血液凝固阻止目的のヘパリン溶液等を含む）をシリンジに採取する。
（ｆ）第１容器１１Ａのニードルレスポート１９から採取した骨髄液を第１液体収容部５１に注入する。骨髄液を注入後、生理食塩水、リンゲル液等の低比重等張液（以下、これらを総称して希釈液とも呼ぶ。）を注入して２倍以上に適宜希釈する。
（ｇ）″第１容器１１Ａのフィルター付きベント６５を閉じる。
（ｈ）′第１容器１１Ａを転倒させたり、左右に振って骨髄液及び希釈液を十分に混和する。
（ｉ）図２０（ｃ）に示すように、連通部材２０の第１ニードル７２を第１容器１１Ａの下部収縮リング１５Ａの貫通孔６１に形成された弁部６６（図７参照）に挿入する。
（ｊ）（ｉ）とほぼ同時に連通部材２０の第２ニードル７３を第２容器１２の下部収縮リング１５Ｂの貫通孔６１に形成された弁部６６に挿入して第１液体収容部５１と第２液体収容部５２とを連通させる（第１切替機構５５を開き、連通状態とする）。
（ｋ）所定の条件で遠心分離操作を行う。
（ｌ）′図２０（ｄ）に示すように、遠心分離操作終了後、第１容器１１Ａの下部収縮リング１５Ａから連通部材２０を抜き取り、連通部材２０と第２容器１２を取り去る。
（ｓ）第１容器１１Ａのフィルター付きベント６５を開いた後、第１容器１１Ａのニードルレスポート１９から第１液体収容部５１内の細胞をシリンジで採取する。必要によりピペッティングを行い、細胞を均一に分散させる。
（ｒ）必要により、輸液バッグ等に採取した細胞を懸濁させる。
【００６８】
以上説明したように、本実施形態の細胞分離装置１０Ｂによっても、第１実施形態の細胞分離装置１０と同様に、第１液体収容部５１と第２液体収容部５２とを遮断状態（第１容器１１Ａと第２容器１２とが分離した状態）として第１液体収容部５１に試料溶液を注入し、第２液体収容部５２に分離液を注入することで、試料溶液と分離液とが混合することなく分離して注入され、境界面を乱さない成層が可能となる。また、第１液体収容部５１と第２液体収容部５２とを連通状態として遠心分離した後、再び遮断状態（第１容器１１Ａと第２容器１２とを分離）とすることで、細胞分離装置１０Ｂを傾けた場合でも分離液の混合を防止することができ、対象物を純度よく回収することができる。また、搬送・輸送を容易に行うことができる。更に、細胞分離装置１０Ｂは、全遠心分離工程において外部と遮断された状態で行われるので、無菌室などの特殊な環境を準備することなく、通常の環境下での遠心分離が可能であり、操作性が向上する。
【００６９】
さらに、１回の遠心分離により所望の成分を分離可能な溶液の場合、本実施形態の細胞分離装置１０Ｂを用いることで、部品点数を削減して構造を簡素化することができる。
【００７０】
尚、本発明は、前述した実施形態に限定されるものではなく、適宜、変形、改良、等が可能である。
【符号の説明】
【００７１】
１０、１０Ａ、１０Ｂ   細胞分離装置
１１、１１Ａ    第１容器
１２     第２容器
１３、１３Ａ    第３容器
１９     ニードルレスポート（導入孔、導出孔）
２０     連通部材
２１     隔壁（第１容器の天面）
２１ａ、６２    テーパ面
２２、６１      貫通孔
５１     第１液体収容部
５２     第２液体収容部
５３     第３液体収容部
５５     第１切替機構（切替機構）
５６     第２切替機構（他の切替機構）
７２     第１ニードル
７３     第２ニードル
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図２０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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