(57)【要約】【課題】グレリン分泌を促進する手段を提供する。【解決手段】パリサポニンｂやジオスシン等のステロイドサポニン類を含有するグレリン分泌促進剤によりグレリン分泌を促進する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（Ｉ）または（ＩＩ）で表される化合物、およびその塩から選択される１またはそれ以上の化合物を含有する、グレリン分泌促進剤：
【化１】
2013227309.tif 000010
（式中、Ｒ１は、水素原子、α−Ｌ−ラムノピラノシル基、またはα−Ｌ−ラムノピラノシル（１→４）−α−Ｌ−ラムノピラノシル基を表す。）；
【化２】
2013227309.tif 000011
（式中、Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立に、水素原子またはα−Ｌ−ラムノピラノシル基を表す。）。
【請求項２】
前記式（Ｉ）で表される化合物またはその塩を含有し、前記式（Ｉ）において、Ｒ１がα−Ｌ−ラムノピラノシル基である、請求項１に記載のグレリン分泌促進剤。
【請求項３】
前記式（Ｉ）で表される化合物またはその塩を含有し、前記式（Ｉ）において、Ｒ１がα−Ｌ−ラムノピラノシル（１→４）−α−Ｌ−ラムノピラノシル基である、請求項１に記載のグレリン分泌促進剤。
【請求項４】
前記式（ＩＩ）で表される化合物またはその塩を含有し、前記式（ＩＩ）において、Ｒ２およびＲ３の少なくともいずれかがα−Ｌ−ラムノピラノシル基である、請求項１に記載のグレリン分泌促進剤。
【請求項５】
さらに、賦形剤、嬌味剤、および香料から選択される１またはそれ以上の成分を含有す
る、請求項１〜４のいずれか１項に記載のグレリン分泌促進剤。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか１項に記載のグレリン分泌促進剤からなる医薬組成物。
【請求項７】
グレリン分泌が関与する症状の予防、改善、および／または治療用である、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記症状が、悪液質および食欲不振から選択される、請求項７に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、悪液質や食欲不振などのグレリン分泌が関与する症状の予防および治療の分野に関する。
【背景技術】
【０００２】
グレリンは、成長ホルモン分泌促進因子の受容体（growth hormone secretagogue receptor；GHSR）に対する内因性リガンドとしてヒトの胃から発見された28残基のペプチドホルモンであり、成長ホルモン分泌促進活性を有する。グレリンは、3番目のセリンがオクタン酸によりアシル化されており、この修飾が生理活性に必須のものと考えられている。グレリンは唯一の内因性摂食促進因子であり、近年の非臨床・臨床研究により、成長ホルモン分泌促進活性以外にも多様な作用をもたらすことが見出されてきた。すなわち、グレリンは、摂食・エネルギー代謝調節機能に関しては摂食亢進、脂肪蓄積促進、インスリン分泌抑制、褐色脂肪組織の機能抑制等の作用を、消化器系に関しては消化管運動促進、胃酸分泌亢進、膵外分泌亢進等の作用を、循環器系に関しては交感神経系抑制、血管拡張、心収縮力増大、心筋細胞の保護作用等の作用を示す。これらの多彩な生理作用を臨床応用する試みも既に始まっており、人工関節置換術後、消化器癌術後、摂食障害、機能性ディスペプシア、癌カヘキシア、慢性心不全カヘキシア、慢性腎不全カヘキシア、慢性閉塞性肺疾患（COPD）の患者にグレリンを投与する臨床試験が行われている。ただし、現在のところグレリンの投与は静脈内投与によるものであり、その半減期が非常に短いことからも、実用には困難が伴う。また、グレリンのオクタン酸修飾を補う目的でオクタン酸を豊富に含む経口栄養剤の摂取試験も行われており、血漿中グレリンレベルの上昇、食欲や栄養状態の改善が認められているが、経口栄養剤の摂取が困難な病態であることも多く、解決策が求められている。
【０００３】
グレリンは、胃のA-like細胞といわれる貯蔵顆粒含有内分泌細胞から分泌され、循環血中に入り全身をめぐるが、その作用は多くが神経経由で発揮される。たとえば、成長ホルモン分泌促進作用や摂食亢進作用は、胃に分布する迷走神経終末に局在するGHSRにグレリンが結合し、迷走神経求心路の電気活動を抑制することにより、中枢神経へシグナルが伝達された結果もたらされると考えられている。
【０００４】
グレリン分泌の制御因子については明らかではないが、例えば動物実験においては、神経伝達物質であるβアゴニスト、セクレチンなどのペプチドホルモンによるグレリンの分泌促進が認められている。もし、低分子化合物によって分泌が促進されれば、低栄養、消化器機能障害、術後回復などに有用である。
【０００５】
一方、ステロイドサポニン類には種々の構造を有する類縁体が知られており（非特許文献１）、中でも、植物に由来するステロイドサポニン類の１つであるジオスシンは成長ホルモン分泌の促進作用を有することが知られている（非特許文献２）。しかしながら、ジオスシン等のステロイドサポニン類とグレリン分泌との関係は知られていない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Yoshikawa M, et.al., Chem. Pharm. Bull. 2007; 55(2), 308-316
【非特許文献２】Lee HY, et.al., J Biochem Mol Biol. 2007; 40 (6), 1016-20
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、グレリン分泌を促進する手段を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討を行った結果、ジオスシン等の特定のステロイドサポニン類が、ラット胃より単離されたグレリン分泌細胞においてグレリン分泌を促進することを見出し、本発明を完成させた。
【０００９】
すなわち、本発明は以下の内容を含む。
[１]
下記式（Ｉ）または（ＩＩ）で表される化合物、およびその塩から選択される１またはそれ以上の化合物を含有する、グレリン分泌促進剤：
【００１０】
【化１】
2013227309.tif 000002
【００１１】
（式中、Ｒ１は、水素原子、α−Ｌ−ラムノピラノシル基、またはα−Ｌ−ラムノピラノシル（１→４）−α−Ｌ−ラムノピラノシル基を表す。また、式中、黒丸は該当部位の水素原子が上向きであることを表す。）；
【００１２】
【化２】
2013227309.tif 000003
【００１３】
（式中、Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立に、水素原子またはα−Ｌ−ラムノピラノシル基を表す。また、式中、黒丸は該当部位の水素原子が上向きであることを表す。）。
[２]
前記式（Ｉ）で表される化合物またはその塩を含有し、前記式（Ｉ）において、Ｒ１が
α−Ｌ−ラムノピラノシル基である、前記グレリン分泌促進剤。
[３]
前記式（Ｉ）で表される化合物またはその塩を含有し、前記式（Ｉ）において、Ｒ１がα−Ｌ−ラムノピラノシル（１→４）−α−Ｌ−ラムノピラノシル基である、前記グレリン分泌促進剤。
[４]
前記式（ＩＩ）で表される化合物またはその塩を含有し、前記式（ＩＩ）において、Ｒ２およびＲ３の少なくともいずれかがα−Ｌ−ラムノピラノシル基である、請求項１に記載のグレリン分泌促進剤。
[５]
さらに、賦形剤、嬌味剤、および香料から選択される１またはそれ以上の成分を含有する、前記グレリン分泌促進剤。
[６]
前記グレリン分泌促進剤からなる医薬組成物。
[７]
グレリン分泌が関与する症状の予防、改善、および／または治療用である、前記医薬組成物。
[８]
前記症状が、悪液質および食欲不振から選択される、前記医薬組成物。
【発明の効果】
【００１４】
本発明によって、優れたグレリン分泌促進剤が提供され、グレリン分泌を促進することができる。よって、本発明は、グレリン分泌が関与する症状の予防および／または治療に有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】アサツキからのグレリン分泌促進成分の抽出スキームを示す図。
【図２】ジオスシン標品および化合物２のＨＰＣＬでの溶出クロマトグラムを示す図。
【図３】化合物１（Ｐｂ）および化合物２（ジオスシン）の構造式を示す図。
【図４】ジオスゲニン、ジオスシン、フォルマサニンCのグレリン分泌促進効果を示す図。縦軸は、溶媒対照群（0.1%DMSO処理群）のアシルグレリン濃度を１とした場合の、各サンプルで処理した群のアシルグレリン濃度の相対値を示す。（n=2-3）
【図５】ジオスシンのグレリン分泌促進効果の濃度依存性を示す図。縦軸は、溶媒対照群（0.1%DMSO処理群）のアシルグレリン濃度を１とした場合の、各サンプルで処理した群のアシルグレリン濃度の相対値を示す。（n=2-3）
【図６】フォルマサニンCのグレリン分泌促進効果の濃度依存性を示す図。縦軸は、溶媒対照群（0.1%DMSO処理群）のアシルグレリン濃度を１とした場合の、各サンプルで処理した群のアシルグレリン濃度の相対値を示す。（n=2-3）
【図７】「クーガイモ」メタノール抽出物のグレリン分泌促進効果の濃度依存性を示す図。縦軸は、溶媒対照群（0.1%DMSO処理群）のアシルグレリン濃度を１とした場合の、各サンプルで処理した群のアシルグレリン濃度の相対値を示す。（n=2-3）
【図８】各種ステロイドサポニン類のグレリン分泌促進効果を示す図。縦軸は、溶媒対照群（0.1%DMSO処理群）のアシルグレリン濃度を１とした場合の、各サンプルで処理した群のアシルグレリン濃度の相対値を示す。（n=2-3）
【図９】ジオスシン経口投与によるグレリン分泌促進作用を示す図。結果は、平均値±標準誤差で示す。（n=4）
【図１０】ジオスシン経口投与によるグレリン分泌促進作用を示す図。結果は、平均値±標準誤差で示す。（n=7）
【図１１】ジオスシン経口投与による摂食量増加効果を示す図。結果は、平均値±標準誤差で示す。（n=10）
【発明を実施するための形態】
【００１６】
以下、本発明を詳細に説明する。なお、本発明において、濃度は、特記しない限り質量を基準とする濃度である。すなわち、例えば、「％」は特記しない限り「質量％」を、「ｐｐｍ」は特記しない限り「質量ｐｐｍ」を示す。
【００１７】
本発明は、下記式（Ｉ）または（ＩＩ）で表される化合物、およびその塩から選択される１またはそれ以上の化合物を含有する、グレリン分泌促進剤を提供する。以下、「式（Ｉ）または（ＩＩ）で表される化合物、およびその塩から選択される１またはそれ以上の化合物」を総称して「有効成分」ともいう。
【００１８】
式（Ｉ）は以下の通りである。
【００１９】
【化３】
2013227309.tif 000004
【００２０】
式（Ｉ）中、Ｒ１は、水素原子、α−Ｌ−ラムノピラノシル基、またはα−Ｌ−ラムノピラノシル（１→４）−α−Ｌ−ラムノピラノシル基を表す。また、式（Ｉ）中、黒丸は該当部位の水素原子が上向きであることを表す。
【００２１】
前記式（Ｉ）において、アグリコン骨格中のスピロ環のメチル基が上向き、すなわちスピロ環部分が下記構造（ＩＩＩ）である場合、式（Ｉ）の化合物はヤモゲニン配糖体に相当する。
【００２２】
【化４】
2013227309.tif 000005
【００２３】
この場合、Ｒ１が水素原子であれば、式（Ｉ）の化合物はヤモゲニン−３−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル（１→２）−β−Ｄ−グルコピラノシド（yamogenin 3-O-α-L-rhamn
opyranosyl (1→2)-β-D-glucopyranoside）である。
【００２４】
また、Ｒ１がα−Ｌ−ラムノピラノシル基であれば、式（Ｉ）の化合物はヤモゲニン−３−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル（１→４）−α−Ｌ−ラムノピラノシル（１→２）−β−Ｄ−グルコピラノシド（yamogenin 3-O-α-L-rhamnopyranosyl (1→4)-α-L-rhamnopyranosyl (1→2)-β-D-glucopyranoside）である。
【００２５】
また、Ｒ１がα−Ｌ−ラムノピラノシル（１→４）−α−Ｌ−ラムノピラノシル基であれば、式（Ｉ）の化合物はヤモゲニン−３−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル（１→４）−α−Ｌ−ラムノピラノシル（１→４）−[α−Ｌ−ラムノピラノシル（１→２）]−β−Ｄ−グルコピラノシド（yamogenin 3-O-α-L-rhamnopyranosyl (1→4)-α-L-rhamnopyranosyl (1→4)-[α-L-rhamnopyranosyl (1→2)]-β-D-glucopyranoside）である。
【００２６】
また、前記式（Ｉ）において、アグリコン骨格中のスピロ環のメチル基が下向き、すなわちスピロ環部分が下記構造（ＩＶ）である場合、式（Ｉ）の化合物はジオスゲニン配糖体に相当する。
【００２７】
【化５】
2013227309.tif 000006
【００２８】
この場合、Ｒ１が水素原子であれば、式（Ｉ）の化合物はジオスゲニン−３−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル（１→２）−β−Ｄ−グルコピラノシド（diosgenin 3-O-α-L-rhamnopyranosyl (1→2)-β-D-glucopyranoside）である。
【００２９】
また、Ｒ１がα−Ｌ−ラムノピラノシル基であれば、式（Ｉ）の化合物はジオスゲニン−３−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル（１→４）−α−Ｌ−ラムノピラノシル（１→２）−β−Ｄ−グルコピラノシド（diosgenin 3-O-α-L-rhamnopyranosyl (1→4)-α-L-rhamnopyranosyl (1→2)-β-D-glucopyranoside）であり、ジオスシン（dioscin）とも呼ばれ
る。ジオスシンの構造式を、後述する図３に示す。
【００３０】
また、Ｒ１がα−Ｌ−ラムノピラノシル（１→４）−α−Ｌ−ラムノピラノシル基であれば、式（Ｉ）の化合物はジオスゲニン−３−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル（１→４）−α−Ｌ−ラムノピラノシル（１→４）−[α−Ｌ−ラムノピラノシル（１→２）]−β−Ｄ−グルコピラノシド（diosgenin 3-O-α-L-rhamnopyranosyl (1→4)-α-L-rhamnopyranosyl (1→4)-[α-L-rhamnopyranosyl (1→2)]-β-D-glucopyranoside）であり、フォルマサニンＣ（formasanin C）やパリサポニンＢ（parisaponin B）とも呼ばれる。パリサポ
ニンＢの構造式を、後述する図３に示す。
【００３１】
式（ＩＩ）は以下の通りである。
【００３２】
【化６】
2013227309.tif 000007
【００３３】
式（ＩＩ）中、Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立に、水素原子またはα−Ｌ−ラムノピラノシル基を表す。また、式（ＩＩ）中、黒丸は該当部位の水素原子が上向きであることを表す。
【００３４】
前記式（ＩＩ）において、Ｒ２およびＲ３が水素原子である場合、式（ＩＩ）の化合物はボラソサイドＤ（borassoside D）である。
【００３５】
また、前記式（ＩＩ）において、Ｒ２が水素原子でＲ３がα−Ｌ−ラムノピラノシル基である場合、式（ＩＩ）の化合物はボラソサイドＥ（borassoside E）である。
【００３６】
また、前記式（ＩＩ）において、Ｒ２およびＲ３がα−Ｌ−ラムノピラノシル基である場合、式（ＩＩ）の化合物はボラソサイドＦ（borassoside F）である。
【００３７】
本発明における有効成分としては、前記いずれのステロイドサポニン類であってもよいが、式（Ｉ）で表されるステロイドサポニン類であることも好ましい。また、別の観点からは、式（ＩＩ）で表されるステロイドサポニン類であることも好ましい。
【００３８】
また、前記式（Ｉ）において、Ｒ１は、水素原子またはα−Ｌ−ラムノピラノシル基であることが好ましく、特に、原料入手の観点からはα−Ｌ−ラムノピラノシル基であることが好ましい。
【００３９】
また、一方で、前記式（Ｉ）において、Ｒ１は、α−Ｌ−ラムノピラノシル（１→４）−α−Ｌ−ラムノピラノシル基であることも好ましい。
【００４０】
また、前記式（Ｉ）の化合物は、アグリコン骨格中のスピロ環のメチル基が下向き、すなわちスピロ環部分が下記構造（ＩＶ）である化合物、すなわちジオスゲニン配糖体であることも好ましい。
【００４１】
【化７】
2013227309.tif 000008
【００４２】
特に、前記式（Ｉ）で表される化合物としては、ジオスシンまたはパリサポニンＢが好ましい。
【００４３】
また、前記式（ＩＩ）において、Ｒ２およびＲ３の少なくともいずれかは、α−Ｌ−ラムノピラノシル基であることも好ましい。
【００４４】
本発明において、有効成分は、フリー体もしくはその塩、またはそれらの混合物であってよい。
【００４５】
塩としては、薬理学的に許容される塩または可食性の塩であれば特に制限されない。例えば、酸性基に対する塩としては、具体的には、アンモニウム塩、ナトリウム、カリウム等のアルカリ金属との塩、カルシウム、マグネシウム等のアルカリ土類金属との塩、アルミニウム塩、亜鉛塩、トリエチルアミン、エタノールアミン、モルホリン、ピロリジン、ピペリジン、ピペラジン、ジシクロへキシルアミン等の有機アミンとの塩、アルギニン、リジン等の塩基性アミノ酸との塩が挙げられる。また、例えば、塩基性基に対する塩としては、具体的には、塩酸、硫酸、リン酸、硝酸、臭化水素酸等の無機酸との塩、酢酸、クエン酸、安息香酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、コハク酸、タンニン酸、酪酸、ヒベンズ酸、パモ酸、エナント酸、デカン酸、テオクル酸、サリチル酸、乳酸、シュウ酸、マンデル酸、リンゴ酸等の有機カルボン酸との塩、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸等の有機スルホン酸との塩が挙げられる。なお、本発明において、アミノ酸は、特記しない限りＬ−体である。なお、塩としては、１種の塩を用いてもよく、２種またはそれ以上の塩を組み合わせて用いてもよい。
【００４６】
有効成分としては、１種の化合物を用いてもよく、２種またはそれ以上の化合物を組み合わせて用いてもよい。
【００４７】
有効成分としては、市販品を用いてもよく、適宜製造して取得したものを用いてもよい。
【００４８】
有効成分の製造方法は特に制限されず、例えば公知の方法を利用できる。有効成分は、例えば、化学合成により製造することができる。有効成分を化学合成により製造する方法としては、例えば、European Journal of Medicineal Chemistry 45 (2010) 4827-37 に
記載の方法を用いることができる。
【００４９】
また、有効成分は、例えば、有効成分を含有する素材から抽出等することにより製造することができる。有効成分を含有する素材としては、例えば、アサツキ（チャイブ）、ヤムイモ、サトウヤシ（Borassus flabellifer）の雄花が挙げられる。有効成分を含有する素材からの有効成分の抽出は、例えば、公知の方法により行うことができる。具体的には、例えば、実施例に記載した手法により、チャイブからパリサポニンＢやジオスシンを抽出することができる。
【００５０】
有効成分が製造されたことは、例えば、合成または抽出された有効成分を検出または同定することにより確認できる。有効成分の検出または同定は、例えば、公知の手法により行うことができる。そのような手法としては、例えば、ＨＰＬＣ、ＬＣ／ＭＳ、ＧＣ／ＭＳ、およびＮＭＲが挙げられる。
【００５１】
有効成分は、精製されたものであってもよく、そうでなくてもよい。例えば、合成または抽出された有効成分は、必要により所望の純度まで精製して用いることができる。有効成分の純度は、例えば、30％以上、50％以上、70％以上、90％以上、または95％以上であってよい。精製は、例えば、公知の方法により行うことができる。具体的には、例えば、イオン交換クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィーにより精製を行うことができる。また、例えば、有効成分としては、上記例示したような当該有効成分を含有する素材を用いてもよい。
【００５２】
本発明のグレリン分泌促進剤は、上記有効成分を含む。本発明のグレリン分泌促進剤は、上記有効成分のみからなるものであってもよく、その他の成分を含むものであってもよい。「その他の成分」としては、薬理学的に許容されるものまたは可食性のものであれば特に制限されず、例えば、医薬や飲食品に配合して利用されるものを利用できる。
【００５３】
例えば、本発明のグレリン分泌促進剤は、任意の剤形で製剤化されていてよい。剤形としては、例えば、液剤、懸濁剤、散剤、錠剤、丸剤、カプセル剤が挙げられる。製剤化にあたっては、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定化剤、矯味剤、矯臭剤、香料、希釈剤、界面活性剤等の薬理学的に許容される添加剤を使用することができる。
【００５４】
また、例えば、本発明のグレリン分泌促進剤は、他の公知のグレリン分泌促進成分を含んでいてもよい。そのような成分としては、例えば、神経伝達物質であるβアゴニスト、セクレチンなどのペプチドホルモンが挙げられる。
【００５５】
本発明のグレリン分泌促進剤における有効成分の濃度は、本発明のグレリン分泌促進剤によりグレリン分泌を促進できる限り特に制限されず、有効成分の種類、本発明のグレリン分泌促進剤の剤型、本発明のグレリン分泌促進剤の投与量等の諸条件に応じて適宜設定することができる。本発明のグレリン分泌促進剤における有効成分の濃度は、特に制限されないが、例えば、１００％以下、１０％以下、または１％以下であってよい。また、本発明のグレリン分泌促進剤における有効成分の濃度は、特に制限されないが、例えば、０．０１％以上、０．１％以上、または１％以上であってよい。
【００５６】
本発明のグレリン分泌促進剤は、そのまま、あるいは水、生理食塩水、または緩衝液等の薬理学的に許容されるあるいは経口摂取可能な溶媒を用いて希釈又は溶解し、対象に投与することができる。なお、このように希釈あるいは溶解等した場合にも、本発明のグレリン分泌促進剤の範囲に含まれることは言うまでもない。投与態様としては、特に制限されないが、例えば、経口投与、注射等の侵襲的投与、経皮投与が挙げられる。投与態様は、例えば、本発明のグレリン分泌促進剤に含まれる成分の種類等の諸条件に応じて設定すればよい。本発明のグレリン分泌促進剤は、経口投与されるのが好ましい。
【００５７】
本発明のグレリン分泌促進剤を対象に投与することにより、対象のグレリン分泌を促進することができる。グレリン分泌の促進により、グレリン分泌が関与する症状の予防、改善、および／または治療を行うことができると考えられる。よって、本発明のグレリン分泌促進剤は、医薬組成物、具体的には、グレリン分泌が関与する症状の予防、改善、および／または治療用の医薬組成物として利用できる。本発明のグレリン分泌促進剤をグレリン分泌が関与する症状の予防、改善、および／または治療用の医薬組成物として利用する場合、本発明のグレリン分泌促進剤における有効成分の濃度等は、本発明のグレリン分泌促進剤によりグレリン分泌が関与する症状の予防、改善、および／または治療効果が得られるように適宜設定すればよい。
【００５８】
「グレリン分泌が関与する症状」としては、グレリン分泌が不足することにより現れる症状やグレリン分泌の促進により改善される症状が挙げられる。「グレリン分泌が関与する症状」として、具体的には、例えば、悪液質や食欲不振が挙げられる。悪液質としては、例えば、癌カヘキシア、慢性心不全カヘキシア、慢性腎不全カヘキシアが挙げられる。
【００５９】
本発明のグレリン分泌促進剤の投与量は、有効成分の含有量、用法、年齢、性別、症状
の程度等の諸条件に応じて適宜設定することができる。本発明のグレリン分泌促進剤の投与量は、有効成分の投与量に換算して、例えば、好ましくは０．１ｍｇ／ｋｇ体重／日〜５００ｍｇ／ｋｇ体重／日、より好ましくは１ｍｇ／ｋｇ体重／日〜１００ｍｇ／ｋｇ体重／日であってよい。本発明のグレリン分泌促進剤は、１日１回又は複数回に分けて投与することができる。また、本発明のグレリン分泌促進剤は、数日又は数週間に１回の投与としてもよい。各回の投与時の投与量は、有効成分の投与量に換算して一定でもよく、差があってもよい。
【００６０】
また、本発明のグレリン分泌促進剤は、グレリン分泌が関与する症状の予防、改善、および／または治療用の飲食品の成分として利用することができる。すなわち、本発明は、本発明のグレリン分泌促進剤を含有するグレリン分泌が関与する症状の予防、改善、および／または治療用の飲食品（「本発明の飲食品」ともいう）を提供する。本発明の飲食品は、例えば、容器や包装に上記例示したようなグレリン分泌が関与する症状の予防、改善、および／または治療に有効である旨を表示した飲食品として提供されてよい。
【００６１】
飲食品としては、特に制限されず、あらゆる飲食品が包含される。飲食品としては、例えば、水、果汁、牛乳、茶、アルコール飲料、スープなどの飲料；ハム、ソーセージなどの食肉加工食品；かまぼこ、ちくわなどの水産加工食品；バター、発酵乳、粉乳などの乳製品；パン、麺類、菓子等が挙げられる。
【００６２】
本発明の飲食品は、本発明のグレリン分泌促進剤を添加すること以外は、通常の飲食品と同様の原料を用い、同様の方法によって製造することができる。本発明のグレリン分泌促進剤の添加は、飲食品の製造工程のいずれの段階で行われてもよい。すなわち、本発明のグレリン分泌促進剤は、飲食品の原料に添加されてもよく、製造途中の飲食品に添加されてもよく、製造された飲食品に添加されてもよい。本発明の調味料または有効成分は、１回添加されてもよく、２またはそれ以上の回数に分けて添加されてもよい。本発明のグレリン分泌促進剤の添加量は、有効成分の種類、本発明のグレリン分泌促進剤における有効成分の濃度、飲食品の摂取態様等の諸条件に応じて適宜設定することができる。
【００６３】
本発明の飲食品の摂取量は、有効成分の含有量、用法、年齢、性別、症状の程度等の諸条件に応じて適宜設定することができる。上述の本発明のグレリン分泌促進剤の投与量についての記載は、本発明の飲食品の摂取量にも準用できる。
【実施例】
【００６４】
本発明は以下の実施例によって、更に具体的に説明されるが、これらはいかなる意味でも本発明を限定する意図と解してはならない。
【００６５】
実施例１．アサツキからのグレリン分泌促進成分の抽出
フリーズドライあさつき(2880g)（GABAN株式会社）にメタノールを加えて一晩抽出した。抽出液を減圧留去し得られたメタノール抽出液(1110g)にノルマルヘキサン(6L×5)を加えヘキサン画分、メタノール画分、残渣を得た。得られたメタノール画分(908.75g)のうち、500gをダイヤイオンHP20充填ガラスカラムに通して固相抽出した。蒸留水で脱塩した後、含水メタノール（60％メタノール、100％メタノール、100％エタノール）で順次溶出させた。続いて100％メタノール画分をSep-Pak C18 plusカートリッジカラムに通し、含水アセトニトリル（40%アセトニトリル、60%アセトニトリル、100%アセトニトリル）で順次溶出させた。60%アセトニトリル溶出画分を、HPLC(Inertsil ODS-3, 50×250mm)を用いてアセトニトリル-H2O (60：40→10：0)の濃度勾配の混液で溶出した。ラット胃内分泌細胞を用いた評価系（後述）でグレリン分泌促進活性の見られた画分を回収し、リサイクルループ付きHPLC(Inertsil ODS-3, 20×250mm, 55%アセトニトリル)で分離精製し、化合物１(140mg)および化合物２(90mg)を得た。抽出スキームを図１に示す。
【００６６】
化合物１は、MS、NMRなどの物理学的データの解析によりパリサポニンｂ（Parisaponin
b；Pb）と同定した。化合物２は、MS、NMRなどの物理学的データの解析および標準品と
の比較によりジオスシン（Dioscin）と同定した。ジオスシン標品および化合物２のＨＰ
ＣＬでの溶出クロマトグラムを図２に示す。化合物１（Ｐｂ）および化合物２（ジオスシン）の構造式を図３に示す。
【００６７】
化合物１のMSデータおよびNMRデータは以下の通りである。
（１）MSデータ
m/z 1015.5139(calculated for C51H83O20)[M+H]+
（２）NMRデータ１
1H NMR(600MHz, pyridine-d5)
0.66(3H,d,J=5.6Hz,H-27), 0.80(3H,s,H-18), 0.86(1H,dt,J=5.1,11.4Hz,H-9), 0.94(1H,dt,J=3.6,13.6Hz,H-1), 1.02(3H,s,H-19), 1.04(1H,m,H-14), 1.06(1H,m,H-12), 1.10(3H,d, J=7.0Hz,H-21), 1.40(1H,m,H-11), 1.41(2H,m,H-11,15), 1.48(1H,m,H-7), 1.56(2H,m,H-8,23), 1.57(3H,Rha-II-6), 1.58(3H,m,H-24,25), 1.59(3H, Rha-III-6), 1.63(1H,m,H-23), 1.65(1H,m,H-12), 1.68(1H,m,H-1), 1.74(3H,d,J=6.3Hz,Rha-I-6), 1.76(1H,m,H-17), 1.83(1H,m,H-2), 1.84(1H,m,H-7), 1.92(1H,m,H-20), 2.01(1H,m,H-15), 2.07(1H,m,H-2), 2.71(1H,dq,J=2.2,12.2Hz,H-4), 2.77(1H,dd,J=3.6,12.8Hz,H-4), 3.47(1H,t,J=10.5Hz,H-26), 3.55(1H,m,H-26), 3.57(1H,m,Glu-I-5), 3.85(1H,m,H-3), 4.01(1H,dd,J=2.9,12.3Hz,Glu-I-6), 4.17(1H,m,Glu-I-6), 4.18(1H,m,Glu-I-2), 4.19(1H,m,Glu-I-3), 4.27(1H,t,J=9.1Hz,Rha-III-4), 4.33(1H,m,Rha-III-5), 4.34(1H,t,J=9.1Hz,Rha-I-4), 4.38(1H,m,Glu-I-4), 4.41(1H,m,Rha-II-4), 4.47(1H,dd,J=3.3,9.0Hz,Rha-III-3), 4.51(1H,m,H-16), 4.52(2H,m,Rha-II-2,Rha-II-3), 4.61(1H,dd,J=3.4,9.3Hz,Rha-I-3), 4.82(1H,dd,J=1.4,3.3Hz,Rha-I-2), 4.87(1H,t,J=1.6Hz,Rha-III-2), 4.91(1H,m,Glu-I-1), 4.92(1H,m,Rha-II-5), 4.93(1H,m,Rha-I-5), 5.29(1H,d,J=4.7Hz,H-6), 5.81(1H,s,Rha-II-1), 6.25(1H,s,Rha-III-1), 6.37(1H,s,Rha-I-1)
（３）NMRデータ２
13C NMR(150MHz, pyridine-d5)
15.0(C-21), 16.3(C-18), 17.2(C-27), 18.3(Rha-III-6), 18.6(Rha-I-6), 18.8(Rha-II-6), 19.3(C-19), 21.0(C-11), 29.2(C-24), 30.1(C-2), 30.5(C-25), 31.6(C-8), 31.7(C-23), 32.1(C-15), 32.2(C-7), 37.0(C-10), 37.4(C-1), 38.9(C-4), 39.8(C-12), 40.4(C-13), 41.9(C-20), 50.2(C-9), 56.5(C-14), 61.1(Glu-I-6), 62.8(C-17), 66.8(C-26), 68.2(Rha-II-5), 69.5(Rha-I-5), 70.3(Rha-III-5), 72.4(Rha-I-2), 72.5(Rha-III-2), 72.8(Rha-II-2), 72.8(Rha-I-3), 72.8(Rha-III-3), 73.2(Rha-II-3), 73.9(Rha-III-4), 74.0(Rha-I-4), 76.9(Glu-I-5), 77.6(Glu-I-4), 77.6(Glu-I-3), 77.9(Glu-I-2), 78.0(C-3), 80.3(Rha-II-4), 81.0(C-16), 100.2(Glu-I-1), 102.1(Rha-I-1), 102.1(Rha-II-1), 103.2(Rha-III-1), 109.2(C-22), 121.7(C-6), 140.7(C-5)
【００６８】
化合物２のMSデータおよびNMRデータは以下の通りである。
（１）MSデータ
m/z 869.4542(calculated for C45H73O16)[M+H]+
（２）NMRデータ１
1H NMR(600MHz, pyridine-d5)
0.67(3H,d,H=5.6Hz,H-27), 0.81(3H,s,H-18), 0.86(1H,m,H-9), 0.98(1H,dq,J=3.6,12.5Hz,H-1), 1.03(3H,s,H-19), 1.04(1H,m,H-14), 1.06(1H,m,H-12), 1.11(3H,d,J=6.9Hz,H-21), 1.36(1H,m,H-11), 1.42(1H,m,H-11), 1.43(1H,m,H-15), 1.49(2H,m,H-7,H-8), 1.56(3H,m,H-24,H-25), 1.61(3H,d,J=6.2Hz,Rha-II-6), 1.64(2H,m,H-23), 1.66(1H,m,H-12), 1.71(1H,m,H-1), 1.75(3H,d,J=6.3Hz,Rha-I-6), 1.78(1H,m,H-17), 1.83(1H,m,H-7), 1.85(1H,m,H-2), 1.93(1H,t,J=6.8Hz,H-20), 2.02(1H,m,H-15), 2.05(1H,m,H-2), 2.72(1H,br q,J=11.9Hz,H-4), 2.78(1H,dd,J=3.9,13.2Hz,H-4), 3.48(1H,t,J=10.6Hz,H-26), 3.56(1H,dd,J=2.8,8.9Hz,H-26), 3.62(1H,br d,J=8.9Hz,Glu-I-5), 3.86(1H,m,H-3), 4.07(1H,dd,J=3.3,12.2Hz,Glu-I-6), 4.19(1H,m,Glu-I-6), 4.21(2H,m,Glu-I-2, Glu-I-3), 4.32(1H,t,J=9.4Hz,Rha-II-4), 4.35(1H,t,J=9.4Hz,Rha-I-4), 4.38(1H,m,Glu-I-4), 4.52(1H,m,H-16), 4.53(1H,m,Rha-II-3), 4.61(1H,dd,J=3.4,9.3Hz,Rha-I-3), 4.67(1H,dd,J=1.5,3.2Hz,Rha-II-2), 4.82(1H,dd,J=1.4,3.3Hz,Rha-I-2), 4.92(1H,m,Rha-II-5), 4.94(1H,m,Glu-I-1), 4.95(1H,m,Rha-I-5), 5.29(1H,d,J=5.0Hz,H-6), 5.85(1H,s,Rha-II-1), 6.39(1H,s,Rha-I-1)
（３）NMRデータ２
13C NMR(150MHz, pyridine-d5)
15.0(C-21), 16.3(C-18), 17.3(C-27), 18.5(Rha-II-6), 18.6(Rha-I-6), 19.4(C-19), 21.1(C-11), 29.2(C-24), 30.1(C-2), 30.6(C-25), 31.7(C-8), 31.8(C-23), 32.2(C-15), 32.3(C-7), 37.1(C-10), 37.5(C-1), 38.9(C-4), 39.8(C-12), 40.4(C-13), 41.9(C-20), 50.3(C-9), 56.6(C-14), 61.2(Glu-I-6), 62.9(C-17), 66.8(C-26), 69.5(Rha-II-5), 70.4(Rha-I-5), 72.5(Rha-I-2), 72.5(Rha-II-2), 72.7(Rha-II-3), 72.8(Rha-I-3), 73.9(Rha-II-4), 74.1(Rha-I-4), 76.9(Glu-I-5), 77.7(Glu-I-3), 77.9(Glu-I-2), 78.0(C-3), 78.5(Glu-I-4), 81.1(C-16), 100.2(Glu-I-1), 102.0(Rha-I-1), 102.9(Rha-II-1), 109.2(C-22), 121.8(C-6), 140.8(C-5)
【００６９】
グレリン分泌促進成分の抽出に用いた各種溶媒、クロマトグラフィー用担体、およびHPLC用カラムの詳細は以下の通りである。
メタノール(MeOH)：関東化学社製、一級
ノルマルヘキサン(Hexane)：関東化学社製、一級
エタノール(EtOH)：関東化学社製、特級
アセトニトリル(CH3CN)：関東化学社製、高速液体クロマトグラフィー用
ダイヤイオンHP-20：三菱化学社製
Sep-Pak C18 plus：waters社製
HPLC用カラム：GLサイエンス社製、Inertsil ODS-3 (50×250mm)
HPLC用カラム：GLサイエンス社製、Inertsil ODS-3 (20×250mm)
Corona （登録商標） CAD （登録商標）用カラム：GLサイエンス社製、Inertsil ODS-3 (4.6×250mm)
【００７０】
グレリン分泌促進成分の同定に用いた測定機器の詳細は以下の通りである。
LC-MS；SYNAPT MS, waters社製
NMR；AVANCE600, Bruker社製
Corona （登録商標） CAD （登録商標）;ESA社製
【００７１】
なお、核磁気共鳴 (NMR)スペクトルにおいて、化学シフトδは百万分の一 (ppm)で表示し、略語はそれぞれ次の意味を有する： s：シングレット； d：ダブレット； dd：ダブ
ルダブレット； t：トリプレット； dt：ダブルトリプレット； q：クァルテット； dq：ダブルクァルテット； m：マルチプレット； br：ブロード
【００７２】
グレリン分泌促進成分の抽出および同定における参考文献は以下の通りである。
T. Nohara et al., Chem. Pharm. Bull., 1973, 21, 1240
M. Miyamura et al., Chem. Pharm. Bull., 1982, 30, 712
Sarah C. et al., J. Agric. Food. Chem., 1993, 41, 267
N. Sata et al., Biosci. Biotechnol.Biochem., 1998, 62, 1904
Zhao Wang et al., Biol.Pharm.Bull.,2001, 24, 159
【００７３】
実施例２．ラット胃内分泌細胞を用いたグレリン分泌促進作用の評価
（１）サンプルの調製
実施例１で得られたジオスシン、実施例１で得られたパリサポニンｂ（フォルマサニンＣ）、および市販のジオスゲニン（シグマ社製）を、それぞれジメチルスルホシキド(DMSO)で一定濃度に調製し、サンプルとした。なお、ジオスゲニンはジオスシンおよびフォルマサニンＣのアグリコン（非糖成分）に相当し、すなわち、ジオスシンおよびフォルマサニンＣはいずれもジオスゲニンの配糖体である。
【００７４】
（２）評価法
7〜11週齢雄性SDラットを安楽死後、胃を摘出し、プロテアーゼ処理により胃体部を構
成する細胞を分離した。エルトリエーターシステム（日立工機）を用いてこれらの細胞をサイズおよび密度別に分取し、回転数2400rpm、流速25、30ml/minで得られる細胞画分を
培地(advanced DMEM/F-12)に懸濁後、37℃、5%CO2にて静置した。数時間後、細胞を回収
し、緩衝液(147mM NaCl、25mM NaHCO3、5mM KCl、1.3mM MgSO4、1.5mM CaCl2、15mM HEPES、20ｍM Glucose)にて懸濁した後、96ウェルプレートに1ウェルあたり1x105個の割合で播種した。上記調製したサンプルで細胞を60分間処理した後、上清を回収し、上清中のアシルグレリン（活性型グレリン）濃度をELISAキット（SCETI社）により測定した。各サンプルで処理した群のアシルグレリン濃度を、対照群（0.1%DMSO処理群）のアシルグレリン濃度を１として相対値で示した。なお、実施例１における各溶出画分のグレリン分泌促進作用の測定も同様に行っている。
【００７５】
（３）結果
終濃度12.5 μMのジオスゲニン、ジオスシン、フォルマサニンCでそれぞれ処理したと
ころ、ジオスゲニン処理群ではアシルグレリン濃度の上昇はほとんど認められなかったが、ジオスゲニン配糖体であるジオスシン処理群およびフォルマサニンC処理群においてアシルグレリン濃度の顕著な増加が認められた（図４）。また、ジオスシンおよびフォルマサニンCは濃度依存的なグレリン分泌促進作用を示し、一定濃度を超えるとその作用は減弱した（図５、６）。
【００７６】
（４）
さらに、宝ヘルスケア社より発売されている「クーガイモ」にはヤムイモ由来のジオスゲニン配糖体ヤムスゲニン（登録商標）が含まれていることから、本商品をメタノール抽出することにより得られたサンプルを上記評価系に供し、グレリン分泌促進作用を測定した。その結果、図４に示すとおり、アシルグレリン濃度の顕著な増加が認められた。
【００７７】
実施例３．各種ステロイドサポニン類によるグレリン分泌促進作用の評価
下記表１に記載のステロイドサポニン類（compound-1〜compound-11）を、文献（M.Yoshikawa et al., Chem. Pharm. Bull. 55(2) 308-316 (2007)）記載の方法に準じ、サトウヤシ（Borassus flabellifer）の雄花のメタノール抽出物から、分画、精製により得た。得られたステロイドサポニン類を、それぞれジメチルスルホシキド(DMSO)で２μＭおよび１０μＭに調製し、各サンプルとした。
【００７８】
【表１】
2013227309.tif 000009
【００７９】
各サンプルのグレリン分泌促進作用を、実施例２と同様の手法により測定した。
【００８０】
溶媒対照群（0.1%DMSO処理群）のアシルグレリン濃度を１とした場合の、各サンプルで処理した群のアシルグレリン濃度の比率（ratio）で、各サンプルのグレリン分泌促進活
性の有無を判定した。比率（ratio）≧２．０の場合に、グレリン分泌促進活性があると
判定した。結果、サンプル（compound-1〜compound-11）の内、フリー体であるcompound-１及び２には活性が認められなかったが、配糖体であるcompound-３〜１１の９種にグレ
リン分泌促進活性が認められた。結果を図８に示す。
【００８１】
このように、各種ステロイドサポニン類について、優れたグレリン分泌を促進する活性が確認された。したがって、これらのステロイドサポニン類は、グレリン分泌促進剤の有効成分として有用であることが示された。
【００８２】
実施例４．ジオスシン経口投与によるグレリン分泌促進作用の評価
（１）サンプルの調製
ジオスシン（Carbosynth社：Dioscorea zingiberensisの葉由来）を、10 mg/kgおよび45 mg/kgの投与量となるようそれぞれ量りとり、乳鉢上ですり混ぜながら0.5 % CMC-Na（
ナカライテスク：carboxymethylcellulose）を滴下し、ジオスシン懸濁液を調製した。
【００８３】
（２）評価法
被検動物としては、雄性SDラット（７週齢、7:00-明期／19:00-暗期の明暗サイクル、
飲料水は水道水、餌はAIN93G粉餌を与え、自由飲水、自由摂食の条件下でブラケットケージにて飼育したもの）を、明期開始時（7:00）から試験終了まで絶食して用いた。
【００８４】
調製した各ジオスシン懸濁液を経口投与ゾンデ付き5 mLシリンジに入れ、10 mL/kg量（ジオスシン量として、それぞれ10 mg/kgおよび45 mg/kg）をラットに経口投与した。また、別途、溶媒対照群として、0.5% CMC-Naを10 mL/kg量でラットに経口投与した。採血は、投与前と投与0.5, 2, 4, 6, 8, 10時間後に麻酔下で実施した。採血開始時間3分前に、ラットをイソフルラン（マイラン製薬）による吸入麻酔にかけ、右眼眼窩静脈叢よりヘパリン処理されたキャピラリーチューブ（Fisherbrand：22-362-566）を用いて採血を行なった。血液は、ヘパリン（持田製薬：ノボ・ヘパリン注1万単位/10 mL）10 μLが入った1.5 mLチューブに採取し、よく混和した。次いで、混合物300 μLをピペットで取り、アプロチニン（sigma：A6279）30 μLと0.5 M EDTA 3 μLをあらかじめ添加しておいた1.5 mLチューブに入れて、転倒混和した後、7000 r.p.m.、4 ℃、2分間で遠心し、血漿を分離した。得られた血漿は、1 mLチューブに採取した。血漿30 μLをピペットで取り、1N HCl 3 μL（血漿に対して1/10量）を添加した0.5 μLチューブに入れて、よく混和し、グレリン濃度測定用血漿とした。
【００８５】
グレリン濃度としては、活性型グレリンであるアシルグレリンの濃度を測定した。血漿中のアシルグレリン濃度は、ELISAキット（SCETI社：Active Ghrelin ELISA kit,cat#97751）により測定した。血漿は、アッセイバッファーを用いて5倍希釈して測定に供し、希釈倍率で補正してアシルグレリン濃度を算出した。
【００８６】
（３）結果
その結果、ジオスシン10mg/kg投与群およびジオスシン45mg/kg投与群共に、投与30分後に血中グレリン濃度の上昇が認められた（図９）。また、ジオスシン45mg/kg投与群は、
投与2時間後でも、溶媒対照群と比較して高い血中グレリン濃度を示した（図９）。
【００８７】
実施例５．ジオスシン経口投与によるグレリン分泌促進作用の評価
（１）サンプルの調製
サンプル調製溶媒として、大豆油：Tween 80：DMSO：D.W.（7：11：1：1）を混和した
溶液を用いた。大豆油に、Tween80および水を、容量比（大豆油：Tween 80：D.W.）が7：11：1となるよう加え、激しく転倒混和した後、超音波破砕装置（TAITEC：VP-5S）を用いて溶液が白濁するまで乳化させた。ジオスシン（Carbosynth社：Dioscorea zingiberensisの葉由来）を、10 mg/kgおよび45 mg/kgの投与量となるようそれぞれ量りとり、DMSOで溶解後、乳化した上記溶媒に1の割合で加え、ボルテックスミキサーで激しく混和し、ジオスシン溶液を調製した。また、乳化した上記溶媒にDMSOを1の割合で加えたものを対照溶媒とした。
【００８８】
（２）評価法
被検動物としては、雄性SDラット（9週齢、7:00-明期／19:00-暗期の明暗サイクル、飲料水は水道水、餌はAIN93G粉餌を与え、自由飲水、自由摂食の条件下でブラケットケージにて飼育したもの）を、明期開始時（7:00）から試験終了まで絶食して用いた。
【００８９】
明期開始3時間後に、経口投与ゾンデ（フチガミ機械7206）付き5 mLシリンジに調製し
た各ジオスシン溶液を入れ、10 mL/kg量（ジオスシン量として、それぞれ10 mg/kgおよび45 mg/kg）をラットに経口投与した。また、別途、溶媒対照群として、上記対照溶媒を10
mL/kg量でラットに経口投与した。採血は、投与前と投与0.5, 2, 4, 6, 8, 10時間後に
麻酔下で実施した。採血開始時間3分前に、ラットをイソフルラン（マイラン製薬）によ
る吸入麻酔にかけ、右眼眼窩静脈叢よりヘパリン処理されたキャピラリーチューブ（Fisherbrand：22-362-566）を用いて採血を行なった。血液は、ヘパリン（持田製薬：ノボ・ヘパリン注1万単位/10 mL）10 μLが入った1.5 mLチューブに採取し、よく混和した。次いで、混合物300 μLをピペットで取り、アプロチニン（sigma：A6279）30 μLと0.5 M EDTA 3 μLをあらかじめ添加しておいた1.5 mLチューブに入れて、転倒混和した後、7000 r.p.m.、4 ℃、2分間で遠心し、血漿を分離した。得られた血漿は、1 mLチューブに採取した。血漿30 μLをピペットで取り、1N HCl 3 μL（血漿に対して1/10量）を添加した0.5 μLチューブに入れて、よく混和し、グレリン濃度測定用血漿とした。
【００９０】
グレリン濃度としては、活性型グレリンであるアシルグレリンの濃度を測定した。血漿中のアシルグレリン濃度は、ELISAキット（SCETI社：Active Ghrelin ELISA kit,cat#97751）により測定した。血漿は、アッセイバッファーを用いて5倍希釈して測定に供し、希釈倍率で補正してアシルグレリン濃度を算出した。
【００９１】
（３）結果
その結果、ジオスシン45 mg/kg投与群にて、投与30分以降に血中グレリン濃度の上昇が認められた（図１０）。
【００９２】
実施例６．ジオスシン経口投与による摂食量増加効果の評価
（１）サンプルの調製
サンプル調製溶媒として、大豆油：Tween 80：DMSO：D.W.（7：11：1：1）を混和した
溶液を用いた。大豆油に、Tween80および水を、容量比（大豆油：Tween 80：D.W.）が7：11：1となるよう加え、激しく転倒混和した後、超音波破砕装置（TAITEC：VP-5S）を用いて溶液が白濁するまで乳化させた。ジオスシン（Carbosynth社：Dioscorea zingiberensisの葉由来）を、10 mg/kgおよび45 mg/kgの投与量となるようそれぞれ量りとり、DMSOで溶解後、乳化した上記溶媒に1の割合で加え、ボルテックスミキサーで激しく混和し、ジオスシン溶液を調製した。また、乳化した上記溶媒にDMSOを1の割合で加えたものを対照溶媒とした。
【００９３】
（２）評価法
被検動物としては、雄性SDラット（7週齢、7:00-明期19:00-暗期の明暗サイクル、飲料水は水道水、餌はAIN93G粉餌を与え、自由飲水、自由摂食の条件下でブラケットケージにて飼育したもの）を用いた。明期開始3時間後に、経口投与ゾンデ（フチガミ機械7206）
付き5 mLシリンジに調製した各ジオスシン溶液を入れ、10 mL/kg量（ジオスシン量として、それぞれ10 mg/kgおよび45 mg/kg）をラットに経口投与した。また、別途、溶媒対照群として、上記対照溶媒を10 mL/kg量でラットに経口投与した。餌重量を、投与前と投与2, 4, 6, 8, 10, 24時間後に測定し、摂食量を算出した。
【００９４】
（３）結果
その結果、ジオスシン投与群（10mg/kgおよび45mg/kg）において、投与2時間以降の累
積摂食量の増加が認められた（図１１）。
【図１】
2013227309.tif 000012
【図２】
2013227309.tif 000013
【図３】
2013227309.tif 000014
【図４】
2013227309.tif 000015
【図５】
2013227309.tif 000016
【図６】
2013227309.tif 000017
【図７】
2013227309.tif 000018
【図８】
2013227309.tif 000019
【図９】
2013227309.tif 000020
【図１０】
2013227309.tif 000021
【図１１】
2013227309.tif 000022