(57)【要約】【課題】安全性が高く、抗アレルギー効果が高い乳酸菌、その乳酸菌を含む抗アレルギー剤、及びその乳酸菌を含む飲食品を提供すること。【解決手段】本発明の新規な菌株である、エンテロコッカス・カセリフラバスＨＡ−１４８菌株、ロイコノストック・メセンテロイデスＨＡ−９３９菌株、ワイセラ・コンフサＨＡ−１３１５菌株、ラクトコッカス・ラクティスＨＡ−９菌株は、それぞれの菌株の標準株と比較して高い抗アレルギー効果を奏する。本発明の抗アレルギー剤は、上記の菌株からなる群より選ばれた少なくとも一種の菌株を含むことを特徴とする。本発明の飲食品は、上記の菌株からなる群より選ばれた少なくとも一種の菌株又は上記の抗アレルギー剤を含むことを特徴とする。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
エンテロコッカス・カセリフラバスＨＡ−１４８（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｃａｓｓｅｌｉｆｌａｖｕｓ  ＨＡ−１４８）  ＮＩＴＥ  Ｐ−１２９８菌株。
【請求項２】
ロイコノストック・メセンテロイデスＨＡ−９３９（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ  ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ  ＨＡ−９３９）  ＮＩＴＥ  Ｐ−１２９９菌株。
【請求項３】
ワイセラ・コンフサＨＡ−１３１５（Ｗｅｉｓｓｅｌｌａ  ｃｏｎｆｕｓａ  ＨＡ−１３１５）ＮＩＴＥ  Ｐ−１１６１菌株。
【請求項４】
ラクトコッカス・ラクティスＨＡ−９（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｌａｃｔｉｓ  ＨＡ−９）ＮＩＴＥ  Ｐ−１４７８菌株。
【請求項５】
ニンニクより単離されることを特徴とする、請求項１〜請求項４のいずれか一項に記載の菌株。
【請求項６】
請求項１〜請求項５に記載の菌株からなる群より選ばれた少なくとも一種の菌株を含むことを特徴とする、抗アレルギー剤。
【請求項７】
請求項１〜請求項５に記載の菌株からなる群より選ばれた少なくとも一種の菌株を培養することによって得られる培養物を含むことを特徴とする、抗アレルギー剤。
【請求項８】
前記培養物は、前記菌株による発酵によって得られる発酵成分であり、前記発酵成分を有効成分とすることを特徴とする、請求項７に記載の抗アレルギー剤。
【請求項９】
ニンニクから抽出されるニンニク成分を含むことを特徴とする、請求項６〜請求項８のいずれか一項に記載の抗アレルギー剤。
【請求項１０】
請求項１〜請求項５に記載の菌株からなる群より選ばれた少なくとも一種の菌株を含むことを特徴とする、飲食品。
【請求項１１】
請求項６〜請求項９のいずれか一項に記載の抗アレルギー剤を含むことを特徴とする、飲食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗アレルギー効果を有する乳酸菌株、その乳酸菌株を含む抗アレルギー剤、及びその乳酸菌株を含む飲食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
日本におけるアレルギー疾患の患者数は、肉類を中心とした食生活へと変化する食生活の欧米化、大気汚染による環境変化、ダニやホコリなどが要因となり、高度経済成長期頃から劇的に増加している。平成２３年８月に行われた厚生科学審議会疾病対策部会リウマチ・アレルギー対策委員会の報告によると、我が国の全人口の約２人に１人は何らかのアレルギー疾患に羅患している。
【０００３】
アレルギー疾患の代表的なものには、花粉症、アトピー性皮膚炎、気管支喘息、蕁麻疹等がある。これらアレルギー疾患に羅患した患者に対して適用される抗アレルギー剤としては、例えば、肥満細胞からヒスタミンやロイコトリエンなどの遊離を抑制するメディエーター遊離阻害剤、遊離したヒスタミンがＨ１受容体に結合することを抑えることによってヒスタミンが末梢神経へ伝達されるのを阻害するヒスタミンＨ１−拮抗阻害剤等がある。また、遊離したロイコトリエンがロイコトリエン受容体と結合することを防ぐロイコトリエン拮抗薬や、トロンボキサンＡ２の産生を抑制、又はトロンボキサンＡ２がトロンボキサン受容体に結合することを抑えるトロンボキサンＡ２阻害・拮抗剤が、気管支平滑筋収縮作用を抑制することによって気管支喘息の治療に有用であることが明らかとなっている。上記抗アレルギー剤のほとんどは抗アレルギー効果を有する化合物を含有する合成医薬品である。
【０００４】
一方、近年では、アレルギー疾患を改善、予防するために、乳酸菌を使用した抗アレルギー剤の研究が行われている。例えば、特開平９−２９５９には、様々な乳酸菌の菌体を有効成分とする抗アレルギー剤について報告されている（特許文献１）。また、特開２００８−２３１０９４には、ロイコノストック・メセンテロイデス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ  ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ）に属する乳酸菌を有効成分として含有する抗アレルギー剤が、ヒスタミンやロイコトリエンなどの遊離に関与する免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）抗体の産生を抑制することによって、アレルギー疾患の発症を抑えることが報告されている（特許文献２）。また、非特許文献１には、乳酸菌であるエンテロコッカス・カセリフラバス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｃａｓｓｅｌｉｆｌａｖｕｓ）が、アレルギー疾患の一つである能動的アナフィラキシーや、アレルギー疾患の一つである塩化ピクリルによって誘発された接触性皮膚炎を発症したマウスの治療に有用であることが報告されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開平９−２９５９
【特許文献２】特開２００８−２３１０９４
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】嶋田貴志，有鞭毛乳酸菌Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｃａｓｓｅｌｉｆｌａｖｕｓ  ＮＦ−１００４の死菌体標品のアレルギー抑制作用，月刊アレルギーの臨床，３３８，９８９−９９２，２００５
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
しかしながら、抗アレルギー剤として合成医薬品を使用する場合には、長期の使用によって副作用を発症する可能性があり安全性の面で問題がある。副作用としては、例えば、発疹などの過敏症、悪心や嘔吐などの消火器症状、頻尿や血尿などの膀胱炎様症状、ＧＯＴ（グルタミン酸オキサロ酢酸トランスアミナーゼ）やＧＰＴ（グルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ）が上昇するなどの肝機能障害、眠気や沈静などの中枢神経抑制症状などがある。
【０００８】
また、特許文献１、特許文献２、非特許文献１に記載の抗アレルギー剤は、抗アレルギー効果が低いという問題がある。例えば、特許文献１に記載の抗アレルギー剤においては、所望の抗アレルギー効果を得るために、成人１日当たりの菌体重量が約１０〜１０００ｍｇになるように大量に経口投与する必要がある。また、特許文献２に記載の抗アレルギー剤においては、アレルギー性鼻炎のモルモットの鼻汁を抑制するために、菌体の凍結乾燥粉末試料を１日に２回、モルモットの体重１ｋｇ当たり１０００ｍｇになるように２８日間連続で大量に経口投与する必要がある。また、非特許文献１に記載の抗アレルギー剤においては、能動的アナフィラキシーに対して有用な抗アレルギー効果を得るために、乳酸菌の死菌体粉末を１日当たりの投与量が６０ｍｇになるように２８日間連続で大量に投与する必要がある。
【０００９】
本発明は、上記問題を解決するためになされたものであり、安全性が高く、抗アレルギー効果が高い乳酸菌、その乳酸菌を含む抗アレルギー剤、及びその乳酸菌を含む飲食品を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明の菌株は、受託番号がＮＩＴＥ  Ｐ−１２９８であるエンテロコッカス・カセリフラバスＨＡ−１４８（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｃａｓｓｅｌｉｆｌａｖｕｓ  ＨＡ−１４８）菌株、受託番号がＮＩＴＥ  Ｐ−１２９９であるロイコノストック・メセンテロイデスＨＡ−９３９（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ  ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ  ＨＡ−９３９）菌株、受託番号がＮＩＴＥ  Ｐ−１１６１であるワイセラ・コンフサＨＡ−１３１５（Ｗｅｉｓｓｅｌｌａ  ｃｏｎｆｕｓａ  ＨＡ−１３１５）菌株、受託番号がＮＩＴＥ  Ｐ−１４７８であるラクトコッカス・ラクティスＨＡ−９（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｌａｃｔｉｓ  ＨＡ−９）菌株である。
【００１１】
本発明の菌株は、それぞれの菌株の標準株と比較して高い抗アレルギー効果を奏する。よって、上記菌株を用いれば、それぞれの菌株の標準株を使用した場合と比較して、抗アレルギー効果を向上させることができる。なお、抗アレルギー効果とは、例えば、花粉症、アトピー性皮膚炎、気管支喘息、蕁麻疹等のアレルギー疾患を予防・治療・改善・緩和する効果のことである。より具体的には、アレルギー疾患の発症の要因となる因子の産生を抑制又は促進する効果のことである。
【００１２】
本発明の菌株は、菌株培養の常法に従って任意の条件で培養することができる。培養方法については特に限定されず、従来公知の方法を適宜選択して使用することができる。
本発明の菌株は、それぞれニンニクより単離されることが好ましい。
【００１３】
ニンニクより単離された本発明の菌株は、その菌株の標準株と比較して抗アレルギー効果が高い。
また、ニンニクより単離されることにより安全性が高い。
【００１４】
ニンニクの安全性が高いことは、次の記載からも明らかである。
ニンニクはユリ科のネギ属に属する植物である。ニンニクは、古代エジブトの時代においてピラミッドの建設の際に、労働者に与えられていたことが知られている。また、現在においても、香辛料として、中国料理、イタリア料理、韓国料理等の世界中の国の料理に使用されている。このように、ニンニクは、長年、食料として使用されていることから、安全性が高いことは明らかである。
【００１５】
ニンニクからの単離は、一般的な手法で行うことができる。例えば、特願２０１１−２６５９５９に記載と同様の方法を使用して単離することもできる。すなわち、ニンニクを、滅菌した生理食塩水で洗浄した後、洗浄液からニンニクに付着している菌を単離することもできる。また、ニンニクを粉砕後、粉砕物から得た試料を、ブロムクレゾールパープルを含む乳酸菌分離用培地に加え、それぞれの菌株を培養後に、菌株のコロニーの周囲が黄変している菌株を回収することによって単離することもできる。
【００１６】
また、ニンニクより単離されることによって、ニンニクから抽出されるニンニク成分に耐性を有する菌株を得ることができるので、抗アレルギー効果を有するニンニク成分と併用して使用することも可能である。
【００１７】
使用されるニンニクの品種や産地は特に限定されない。
本発明の第１の抗アレルギー剤は、受託番号がＮＩＴＥ  Ｐ−１２９８であるエンテロコッカス・カセリフラバスＨＡ−１４８（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｃａｓｓｅｌｉｆｌａｖｕｓ  ＨＡ−１４８）菌株、受託番号がＮＩＴＥ  Ｐ−１２９９であるロイコノストック・メセンテロイデスＨＡ−９３９（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ  ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ  ＨＡ−９３９）菌株、受託番号がＮＩＴＥ  Ｐ−１１６１であるワイセラ・コンフサＨＡ−１３１５（Ｗｅｉｓｓｅｌｌａ  ｃｏｎｆｕｓａ  ＨＡ−１３１５）菌株、受託番号がＮＩＴＥ  Ｐ−１４７８であるラクトコッカス・ラクティスＨＡ−９（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｌａｃｔｉｓ  ＨＡ−９）菌株、及びニンニクより単離される該菌株それぞれからなる群より選ばれた少なくとも一種の菌株を含むことを特徴とする。
【００１８】
このような第１の抗アレルギー剤によれば、それぞれの菌株の標準株を使用した抗アレルギー剤と比較して抗アレルギー効果を向上させることができる。
ニンニクより単離される該菌株それぞれを含む場合は、ニンニクから単離されることによって安全性を一層高くすることができる。また、ニンニクから抽出されるニンニク成分に耐性を有するので、ニンニクから抽出されるニンニク成分と併用することが可能になる。
【００１９】
抗アレルギー剤とは、抗アレルギー効果を備える薬剤である。
本発明の第２の抗アレルギー剤は、上記記載の菌株からなる群より選ばれた少なくとも一種の菌株を培養することによって得られる培養物を含むことを特徴とする。
【００２０】
このような第２の抗アレルギー剤は、含有する培養物によって抗アレルギー効果が高い。
培養物とは、菌株を培養した培養液や培養液中に含まれる培養液の成分のことである。培養物は、殺菌の有無に関わらず、液体状態又は培養物を乾燥させてなる固体状態で第２の抗アレルギー剤の構成物質として使用することができる。
【００２１】
本発明の第２の抗アレルギー剤において、培養物は、上記菌株による発酵によって得られる発酵成分であり、その発酵成分を有効成分とすると好ましい。
発酵成分を有効成分とする場合は、抗アレルギー効果が一層高い。
【００２２】
発酵成分とは、それぞれの菌株の発酵によって得られる成分である。この成分は、例えば菌株を培養した培養液の上清に含まれる。上清とは、菌株を培養後、培養後の培養液を遠心分離等で分離し、菌体等の固形分を沈殿させて得られる液体成分である。
【００２３】
本発明の第１及び第２の抗アレルギー剤において、抗アレルギー効果を奏する菌株や培養物は、抗アレルギー剤の原料を製造する段階、抗アレルギー剤を製剤化する段階などで添加、配合される。有効成分量は、投与される者の年齢、体重、症状、投与時期、投与形態、投与方法などを考慮して決定することができる。
【００２４】
本発明の第１及び第２の抗アレルギー剤には、それぞれ賦形剤、結合剤、崩壊剤、潤沢剤、コーティング剤等を含有させてもよい。他にも、希釈剤、緩衝剤、懸濁剤、乳化剤等、医薬品の製造技術分野において通常使用しうる添加剤を含有させてもよい。また、必要に応じて他の薬剤を調合してもよい。
【００２５】
賦形剤としては、特に限定されないが、例えば、白糖、乳糖、マンニトール、グルコース等の糖類、トウモロコシデンプン、バレイショデンプン、コメデンプン等のデンプン類、炭酸カルシウム、硫酸カルシウム等の無機物、結晶セルロース、蒸留水、精製水、ゴマ油、ダイズ油、トウモロコシ油、オリーブ油、綿実油等を挙げることができる。
【００２６】
結合剤としては、特に限定されないが、例えば、キトサン、デキストリン、アルギン酸ナトリウム、カラギーナン、グアーガム、アラビアゴム、寒天等の多糖類、トラガント、ゼラチン、グルテン等の天然高分子類、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルエチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム等のセルロース誘導体、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリビニルアセテート、ポリエチレングリコール、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、酢酸ビニル樹脂等の合成高分子等を挙げることができる。
【００２７】
崩壊剤としては、特に限定されないが、例えば、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース等のセルロース誘導体、カルボキシメチルスターチナトリウム、ヒドロキシプロピルスターチ、トウモロコシデンプン、バレイショデンプン、コメデンプン、部分α化デンプン等のデンプン類等を挙げることができる。
【００２８】
潤沢剤としては、特に限定されないが、例えば、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、コロイダルシリカ、含水二酸化ケイ素、ワックス類、硬化油等を挙げることができる。
【００２９】
コーティング剤としては、特に限定されないが、例えば、ジメチルアミノエチルメタアクリレート・メタアクリル酸共重合体、ポリビニルアセタールジエチルアミノアセテート、アクリル酸エチル・メタアクリル酸共重合体、アクリル酸エチル・メタアクリル酸メチル・メタアクリル酸塩化トリメチルアンモニウムエチル共重合体、エチルセルロース等の水不溶性高分子、メタアクリル酸・アクリル酸エチル共重合体、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート等の腸溶性高分子、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコール等の水溶性高分子等を挙げることができる。
【００３０】
また、投与形態は限定されることはなく、例えば、粉末、顆粒、錠剤、カプセル剤、シロップ剤などの形態で経口投与されるものであってもよいし、注射剤等の非経口投与されるものであってもよい。
【００３１】
本発明の第１及び第２の抗アレルギー剤それぞれは、ニンニクから抽出されるニンニク成分を含むと好ましい。
ニンニクから抽出されるニンニク成分には抗アレルギー効果を有する物がある。したがって、第１の抗アレルギー剤においては、抗アレルギー効果を有するニンニク成分を含むことにより、菌株を単独で使用した場合と比較して、抗アレルギー効果を高めることができる。また、第２の抗アレルギー剤においては、抗アレルギー効果を有するニンニク成分を含むことにより、菌株を培養することによって得られる培養物を単独で、又は培養物として菌株による発酵によって得られる発酵成分を有効成分として単独で使用した場合と比較して、抗アレルギー効果を高めることができる。
【００３２】
また、ニンニクから抽出されるニンニク成分は天然成分であるため、化学薬剤等の天然成分ではない薬剤の使用に起因する副作用を防止することができるので、第１及び第２の抗アレルギー剤それぞれの安全性を一層高めることができる。
【００３３】
第１の抗アレルギー剤において、ニンニク成分を含む場合に使用される菌株としては、ニンニクより単離された菌株等が挙げられる。
第２の抗アレルギー剤において、ニンニク成分を含む場合、ニンニクから単離された菌株を培養することによって得られる培養物、又はその培養物として菌株による発酵によって得られる発酵成分等を用いることができる。
【００３４】
また、ニンニクから抽出されるニンニク成分としては、抗菌物質であるアリシンやアホエン等が挙げられる。
本発明の第１の飲食品は、上記記載の菌株からなる群より選ばれた少なくとも一種の菌株を含むことを特徴とする。
【００３５】
このような第１の飲食品には、上記記載の高い抗アレルギー効果を有する菌株が含まれている。したがって、このような飲食品は、安全性及び抗アレルギー効果が高い。また、ニンニクより単離された菌株を使用する場合には、安全性を一層高くすることができる。
【００３６】
第１の飲食品において、上記菌株は、飲食品の原料を製造する段階、飲食品を製造した製品の段階などで添加、配合される。上記菌株が含まれる量は、摂取する者の年齢、体重、症状、摂取時期、摂取形態、摂取方法などを考慮して決定することができる。
【００３７】
第１の飲食品としては、上記記載の菌株を直接任意の食品に加えた物や、香料等の添加剤と混合させて、粉末状、顆粒状、塊状等の任意の形態の固形食品や飲料食品とした物等が挙げられる。例えば、乳製品や野菜等に上記記載の菌株を加えて発酵食品にしたもの等がある。
【００３８】
また、任意の賦形剤、結合剤、希釈剤等を混合して、例えば粉末、顆粒、錠剤、カプセル剤、飲料等の任意の形態の健康食品とした物等もある。
本発明の第２の飲食品は、上記記載の抗アレルギー剤を含むことを特徴とする。
【００３９】
このような第２の飲食品は、上記記載の抗アレルギー剤が含まれているので、安全性及び抗アレルギー効果が高い。また、ニンニクより単離された菌株を含む抗アレルギー剤、ニンニクより単離された菌株を培養することによって得られる培養物を含む抗アレルギー剤、又は該培養物として、ニンニクより単離された菌株による発酵によって得られる発酵成分を使用する場合には安全性を一層高くすることができる。
【００４０】
第２の飲食品としては、第１の飲食品と同様な固形食品や飲料食品等が挙げられる。
また、第１の飲食品と同様に任意の賦形剤、結合剤、希釈剤等を混合して、例えば粉末、顆粒、錠剤、カプセル剤、飲料等の任意の形態の健康食品とした物等もある。
【発明を実施するための形態】
【００４１】
次に、本発明の実施形態について一例を挙げて説明する。但し、本発明はこれら実施例になんら限定されるものではない。
１．抗アレルギー効果を奏するＨＡ−１４８、ＨＡ−９３９、ＨＡ−１３１５、ＨＡ−９菌株の単離
（１）ニンニク（ホワイト種）はスーパーマーケットで市販されている物を使用した。ニンニクの外皮を除いた後フードプロセッサーにて粉砕した。１時間保持した後、この粉砕物を１ｇ採取し、滅菌した生理食塩水１０ｍｌに懸濁し、０．１ｍｌをＢＣＰ加プレートカウントアガール（日水製薬製）に接種した。これを寒天培地１とした。
（２）上記（１）を繰り返し、寒天培地１からコロニーの周囲が黄変しているコロニーを２０００菌株採取した。乳酸菌株のコロニーの周囲は黄変しているので、このコロニーを回収することによって乳酸菌株を得ることができる。採取した２０００菌株それぞれをＭＲＳ液体培地（Ｄｉｆｃｏ社製）で培養した。
（３）上記（２）に記載の菌株の抗アレルギー試験を行った。試験には、試料として濁度が１．０の菌株の培養液を用いた。
【００４２】
抗アレルギー試験の方法について、以下に説明する。ＢＡＬＢ／ｃ系雄マウス（日本エスエルシー社製）を、飼料としてＣＥ−２（日本クレア社製）を自由摂取させて飼育した。卵白アルブミン（以下、ＯＶＡと略す。シグマ社製）１０μｇ及びアジュバントとして水酸化アルミニウム（和光純薬株式会社製）２ｍｇを生理食塩水３００μｌに懸濁した。この懸濁液を、６週齢の上記マウスに、感作開始日及び４日目に腹腔内投与し、一次感作を行った。二次感作として、ＯＶＡを生理食塩水に溶解してＯＶＡの濃度が２５ｍｇ／ｍｌとなるＯＶＡ抗原溶液にマウスの鼻を約３秒間浸した。この操作を１回につき３度繰り返し、１日に２回行った。これを感作８〜１４日目まで毎日行ない、高ＩｇＥマウスを得た。
【００４３】
感作１５日目に、この高ＩｇＥマウスの尾静脈から部分採血し、採取した血液より血清サンプルを得た。感作１６日目に、この血清サンプル中のＯＶＡ特異的ＩｇＥ（以下、ＯＶＡ−ＩｇＥと略す）量を、ＤＳマウス  ＩｇＥ  ＥＬＩＳＡ（ＯＶＡ）（ＤＳファーマバイオメディカル社製）を使用して測定した。測定はプロトコールに従って行った。
【００４４】
血中ＯＶＡ−ＩｇＥが均一になるように、マウスを一群５匹ずつに振り分けた。各群のマウスに、感作１７日目〜１９日目の間、試料を１日につき１ｍｌ、胃ゾンデにより強制投与した。感作２０日目に、それぞれのマウスの尾静脈から部分採血し、採取した血液より血清サンプルを調製した。感作２１日目に、この血清サンプル中のＯＶＡ−ＩｇＥ量を上記の記載と同様にして測定した。
【００４５】
その結果、採取した２０００菌株のうち、特定の４つの菌株から得られた試料を含む場合には、試料を含まないブランクと比較して、血清サンプル中のＯＶＡ−ＩｇＥ量の上昇が抑制されることが示された。したがって、特定の４つの菌株の抗アレルギー効果は高いことが明らかとなった。その４つの菌株を以下ではＨＡ−１４８、ＨＡ−９３９、ＨＡ−１３１５、ＨＡ−９と称する。
【００４６】
ＨＡ−１４８、ＨＡ−９３９、ＨＡ−１３１５、ＨＡ−９の抗アレルギー試験の結果を表１に示す。
【００４７】
【表１】
2013236623.tif 000002
【００４８】
なお、ＨＡ−１４８、ＨＡ−９３９、ＨＡ−１３１５、ＨＡ−９は、それぞれ独立行政法人産業技術総合研究所  特許生物寄託センターに寄託されている。ＨＡ−１４８は、受託番号ＮＩＴＥ  Ｐ−１２９８、ＨＡ−９３９は、受託番号ＮＩＴＥ  Ｐ−１２９９、ＨＡ−１３１５は、受託番号ＮＩＴＥ  Ｐ−１１６１、ＨＡ−９は、受託番号ＮＩＴＥ  Ｐ−１４７８として寄託されている。
２．単離された菌株の同定
（１）ＨＡ−１４８について、公知の方法を用いて、１６ＳｒＤＮＡ（１６Ｓリボソ−ムＤＮＡ）解析を行った。その結果、ＨＡ−１４８は、既にデータベースに登録されているエンテロコッカス・カセリフラバスの株との間で、１６ＳｒＤＮＡの部分配列において高い相同性を示した。このことから、ＨＡ−１４８は、エンテロコッカス・カセリフラバスであることが分かった。同様にして、ＨＡ−９３９、ＨＡ−１３１５、ＨＡ−９についても１６ＳｒＤＮＡ解析を行った。その結果、ＨＡ−９３９は、ロイコノストック・メセンテロイデスであり、ＨＡ−１３１５は、ワイセラ・コンフサであり、ＨＡ−９は、ラクトコッカス・ラクティスであることが分かった。また、ＨＡ−９３９、ＨＡ−１３１５、ＨＡ−９については、基準株との相同性が１００％ではないことから、公知の菌株とは異なる、新規な菌株であることが分かった。
（２）ＨＡ−１４８、ＨＡ−９３９、ＨＡ−１３１５、ＨＡ−９の菌学的性質（形態的性状、生殖様式、生理・化学的性状等）を分析した。糖の資化性はＡＰＩ（アピ）  ＣＨキット（シスメックス・ビオメリュー社製）を用いて分析した。分析結果を表２に示す。
【００４９】
【表２】
2013236623.tif 000003
【００５０】
ＨＡ−１４８、ＨＡ−９３９、ＨＡ−１３１５、ＨＡ−９の菌学的性質は、それぞれの基準株と比較して以下に記載のように糖の資化性に違いがあることが示された。ＨＡ−１４８株の基準株では、Ｄラフィノースに資化性を示さないが、ＨＡ−１４８では、Ｄラフィノースに対して弱い資化性を示した。ＨＡ−９３９は、その基準株と比較して、Ｄマンニトールとゲンチオビオースに対して弱い資化性を示した。ＨＡ−１３１５は、その基準株と比較してＤガラクトースに対して弱い資化性を示した。ＨＡ−９株の基準株では、Ｄマンニトールの資化性は示さなかったが、ＨＡ−９では、Ｄマンニトールに対して資化性を示した。以上のことからも、これら菌株は、公知の菌株とは異なる、新規な菌株であることがわかった。
【００５１】
以下、上記記載のニンニクから単離されたＨＡ−１４８、ＨＡ−９３９、ＨＡ−１３１５、ＨＡ−９をまとめて、ニンニクより単離された菌株と称する。
３．ニンニク成分に対する耐性試験
ニンニクより単離された各菌株とそれぞれの基準株について、ニンニク成分に対する耐性試験を行った。耐性試験には、ニンニク搾汁とアホエンを使用した。アホエンは、ニンニク由来の抗菌性を有する抗菌成分である。アホエンの製造と分析は、特許第２６０８２５２号公報に開示されている方法に従って行った。
【００５２】
ニンニク搾汁に対する耐性試験を以下に記載の通りに行った。外皮を除去したニンニク１００ｇを７０％エタノールに浸した後、２０ｍｌの滅菌水を加え、フードプロセッサーで処理してニンニクの搾汁を得た。各菌株を１０5ｃｆｕ／ｍｌ含む培養液とニンニクの搾汁とを１：１の割合で含むように混合して３７℃で１時間保持後、混合液をＢＣＰ加プレートカウントアガールに接種し、各菌株のコロニー数を計測した。
【００５３】
アホエンに対する耐性試験を以下に記載の通りに行った。各菌株を１０5ｃｆｕ／ｍｌ含む培養液にアホエンを１５０μｇ／ｍｌ含むように添加し、１時間保持した後、培養液をＢＣＰ加プレートカウントアガールに接種し、各菌株のコロニー数を計測した。この結果を表３に示す。なお、表３のブランクとは、各菌株を１０5ｃｆｕ／ｍｌ含む培養液と生理食塩水とを１：１の割合で混合して３７℃で１時間保持後、混合液をＢＣＰ加プレートカウントアガールに接種し、各菌株のコロニー数を計測した結果を示す。
【００５４】
【表３】
2013236623.tif 000004
【００５５】
表３に示されるように、基準株を使用した場合には、各菌株の生菌数は大きく減少したが、ニンニクより単離された菌株は、培養液中にニンニク搾汁やアホエンを含む場合でも、各菌株の生菌数は低下しなかった。したがって、ニンニクより単離された菌株はニンニク成分に対し、耐性を有することが明らかとなった。
４．第１の抗アレルギー剤
ニンニクより単離された菌株それぞれについて、それぞれの菌株を含む第１の抗アレルギー剤を次に記載のように製造した。
【００５６】
ニンニクより単離された菌株それぞれの培養液について、濁度が１．０になるまで培養した。この培養液を第１の抗アレルギー剤とした。
第１の抗アレルギー剤について、上記１．（３）の記載と同様の方法を使用して抗アレルギー試験を行った。
【００５７】
なお、ニンニクより単離された菌株それぞれの基準株についても同様にして抗アレルギー剤を製造し、抗アレルギー試験を行った。その結果を表４に示す。なお、表４のブランクとは、菌株を含まない場合における抗アレルギー効果を試験した結果である。
【００５８】
【表４】
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【００５９】
第１の抗アレルギー剤を使用した場合は、それぞれの基準株を含む抗アレルギー剤を使用した場合と比較して、血清サンプル中のＯＶＡ−ＩｇＥ量の上昇が抑制されることが示された。したがって、第１の抗アレルギー剤は、抗アレルギー効果が高いことが明らかとなった。
５．第２の抗アレルギー剤
ニンニクより単離された菌株それぞれについて、菌株による発酵によって得られる発酵成分を有効成分とする第２の抗アレルギー剤を次に記載のように製造した。
【００６０】
ニンニクより単離された菌株それぞれの培養液について、濁度が１．０になるまで培養し、培養液を遠心分離後、その上清を０．４５μｍの滅菌済みフィルターでろ過して菌株培養上清を得た。この上清みを第２の抗アレルギー剤とした。
【００６１】
第２の抗アレルギー剤について、上記１．（３）の記載と同様の方法を使用して抗アレルギー試験を行った。その結果を表５に示す。なお、表５のブランクとは、菌株による発酵によって得られる発酵成分を含まない場合における抗アレルギー効果を試験した結果である。
【００６２】
【表５】
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【００６３】
第２の抗アレルギー剤を使用した場合は、ブランクと比較して、血清サンプル中のＯＶＡ−ＩｇＥ量の上昇が抑制されることが示された。したがって、第２の抗アレルギー剤は抗アレルギー効果が高いことが明らかとなった。
６．本発明の菌株や抗アレルギー剤を含む飲食品
本発明の菌株や抗アレルギー剤を、牛などの家畜の生乳に加えることによって、発酵乳やヨーグルトを生成することもできる。また、野菜や果物の搾汁やペースト状のものに加えることによって発酵食品にすることもできる。さらに、任意の賦形剤、結合剤、希釈剤等を混合して、粉末、顆粒、錠剤、カプセル剤、飲料の形態の健康食品に加工することもできる。
【００６４】
本発明の飲食品は、本発明の菌株や抗アレルギー剤を含むので、これらを含まない飲食品と比較して、高い抗アレルギー効果を奏する。
以上のように、ニンニクから単離された上記菌株や上記菌株を培養することによって得られる培養物は、高い抗アレルギー効果を有する。また、ニンニクから単離されることにより安全性が高い。さらに、ニンニク由来の抗菌成分に対して耐性を持つため、これら抗菌成分と併用して使用することもできる。
【００６５】
本発明の菌株や第１の抗アレルギー剤、第２の抗アレルギー剤、飲食品において、抗アレルギー効果が高い理由は、結果的にアレルギー症状を引き起こす原因となる物質の放出を妨げるためであり、特に血清サンプル中のＩｇＥ量の上昇を抑制できることによりアレルギー症状を引き起こす物質の放出が妨げられるためと推定される。したがって、本発明の菌株や第１の抗アレルギー剤、第２の抗アレルギー剤、飲食品は、ＩｇＥ量の上昇を抑制する以外のメカニズムで高い抗アレルギー効果を奏するものであってもよい。
【００６６】
尚、本発明は前記実施形態になんら限定されるものではなく、本発明を逸脱しない範囲において種々の態様で実施しうることはいうまでもない。
例えば、第１の抗アレルギー剤や第２の抗アレルギー剤は、アホエンなどのニンニクから抽出される成分を含有することができる。アホエンを含有する場合は、アホエンが有する抗アレルギー効果との相乗効果よって、第１の抗アレルギー剤及び第２の抗アレルギー剤は、一層高い抗アレルギー効果を奏する。