(57)【要約】      （修正有）【課題】筋肉を有効に増加させ、安全性が高く、経済的で、継続して用いやすい筋肉増加剤の提供。【解決手段】魚鱗、魚骨、及び魚皮のいずれかに由来するコラーゲン又はゼラチンをバチルス（Bacillus）属由来の分解酵素を用いて加水分解して得られるコラーゲンペプチドを有効成分として含有する筋肉増加剤。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
コラーゲン又はゼラチンを加水分解して得られるコラーゲンペプチドを有効成分として含有することを特徴とする筋肉増加剤。
【請求項２】
前記コラーゲン又はゼラチンが魚鱗、魚骨、及び魚皮のいずれかに由来する、請求項１に記載の筋肉増加剤。
【請求項３】
前記魚鱗、魚骨、及び魚皮がスズキ目魚類由来である、請求項２に記載の筋肉増加剤。
【請求項４】
前記加水分解が、バチルス（Bacillus）属由来の分解酵素を用いる加水分解である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の筋肉増加剤。
【請求項５】
前記コラーゲンペプチドの数平均分子量が５００〜１５００である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の筋肉増加剤。
【請求項６】
運動と併用して摂取されることを特徴とする、請求項１〜５のいずれか一項に記載の筋肉増加剤。
【請求項７】
前記運動が中強度以上である、請求項６に記載の筋肉増加剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、筋肉増加剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
現代人の生活スタイルでは、運動機会の減少や食生活の欧米化により、肥満を引き起こす危険性が増している。肥満は、高血圧、高脂血症、心臓疾患、糖尿病などを引き起こす原因ともなるため、健康を維持する観点から、肥満を予防・改善することは極めて重要である。肥満の多くは、摂取エネルギーが消費エネルギーよりも高いことが原因となるため、消費エネルギーを増加させることが肥満の改善につながる。ここで、筋肉が増加すると基礎代謝に必要なエネルギーが増加するため、筋肉を増加させることにより、健康の維持・増進を図ることができる。
また、スポーツ選手のように筋肉の増加やその維持が必要となる場合にも、食事によって筋肉を増加させることができれば便利である。
【０００３】
従来、筋肉を増加させるためのタンパク質やペプチド、アミノ酸等を含有する筋肉増加剤や、これらを添加した加工食品、飲料、サプリメント、またステロイド剤のような筋肉増強剤が多数知られている（特許文献１〜４）。
しかし、従来のタンパク質やペプチド、アミノ酸等を含有する筋肉増加剤は、単に摂取するだけでは筋肉を増加させることはできず、運動と併用することにより、はじめて筋肉を増加させることが可能となるものが多かった。肥満を解消するために運動を行うことには苦痛が伴うため強い意志が必要となるし、筋肉の増加につながるような継続的な運動を行うのが難しい状況も現代人の生活スタイルでは多い。また、特許文献１に記載の筋肉増加剤は運動を必須としないが、牛肉由来の成分を含むため、感染症など安全性上の問題が存する。また、ステロイド剤を筋肉増強剤として用いると、肝機能障害、心機能障害、男性化、多毛症のような副作用を伴うことがあるため望ましくない。
このため、運動の有無に関係なく、簡便かつ安全に、筋肉を増加させることができる手段の開発が望まれている。
【０００４】
ところで、近年、コラーゲン分解ペプチドに種々の効果が認められてきており、医薬品や機能性食品等に配合されている。例えば、ウシ・ブタ、魚等の皮膚・骨由来のコラーゲンの加水分解物を骨粗鬆症の治療等に適用したり（特許文献５〜７）、ブタやウシ等のコラーゲンの加水分解物を肥満防止剤の有効成分として含有させたり（特許文献８、９）、魚鱗類由来のコラーゲンを加水分解したペプチドを用いて血糖値の上昇を抑制したり（特許文献１０）することが知られている。
また、本発明者らはこれまでに、魚鱗類由来のコラーゲンを継続して摂取した運動選手において、トレーニングによりつくり上げた体組成（体重、筋重量、脂肪量）が維持されることを報告している（非特許文献１）。
しかしながら、運動を併用せずともコラーゲンの摂取のみで筋肉を増加させることができることは、これまでに知られていなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２００４−０７５６３７号公報
【特許文献２】特開２００４−２９２３２５号公報
【特許文献３】特開号２００４−２５６５１３公報
【特許文献４】国際公開パンフレット２００４／０７５９０５号
【特許文献５】特開平１１−１２１９２号公報
【特許文献６】特開２００５−３４３８５２号公報
【特許文献７】特開２００８−２３１０６５号公報
【特許文献８】特開２００９−１０２２３３号公報
【特許文献９】特開２００２−２０３１２号公報
【特許文献１０】特開２００２−３２６９５１号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】FOOD Style 21, 2010年7月号（Vol.14, No.7）別刷, p.1-4
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
上記の通り、運動の有無に関係なく、簡便かつ安全に、筋肉を増加させることができる手段の開発が望まれている。また、筋肉を増加させるという体構成の変化は長い期間をかけて継続的に行うことが身体に負担をかけず好ましいため、有効性が高いことはもちろん、安全で経済的で継続しやすい態様の方法が求められる。
本発明はそのような状況に鑑み、摂取という簡便な手段のみで筋肉の増加に有効で、安全性が高く、経済的で、継続して用いやすい筋肉増加剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本願発明者らは、上記課題を解決するべく鋭意研究の末、コラーゲン又はゼラチンを加水分解して得られるコラーゲンペプチドを摂取することにより、筋肉増加効果が得られることを見出した。
【０００９】
すなわち、本発明は以下のとおりである。
（１）コラーゲン又はゼラチンを加水分解して得られるコラーゲンペプチドを有効成分として含有することを特徴とする筋肉増加剤。
（２）前記コラーゲン又はゼラチンが魚鱗、魚骨、及び魚皮のいずれかに由来する、（１）に記載の筋肉増加剤。
（３）前記魚鱗、魚骨、及び魚皮がスズキ目魚類由来である、（２）に記載の筋肉増加剤。
（４）前記加水分解が、バチルス（Bacillus）属由来の分解酵素を用いる加水分解である、（１）〜（３）のいずれかに記載の筋肉増加剤。
（５）前記コラーゲンペプチドの数平均分子量が５００〜１５００である、（１）〜（４）のいずれかに記載の筋肉増加剤。
（６）運動と併用して摂取されることを特徴とする、（１）〜（５）のいずれかに記載の筋肉増加剤。
（７）前記運動が中強度以上である、（６）に記載の筋肉増加剤。
【発明の効果】
【００１０】
本発明の筋肉増加剤を摂取することにより、有効に筋肉を増加させることができる。具体的には、骨格筋が増加する。また、本発明の筋肉増加剤は、好ましくは魚鱗、魚骨及び魚皮から選択される一種以上に由来するコラーゲン又はゼラチンを原料とするため、安全性が高く経済的である。また、本発明の筋肉増加剤は入手しやすいため、継続しやすい筋肉増加対策を実現する。また、日常に取り入れやすい程度の運動負荷と併用すれば、より筋肉増加効果を高めることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】体重補正した下肢筋湿重量値を表すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明の筋肉増加剤は、コラーゲンペプチドを有効成分として含有する。ここでコラーゲンペプチドとは、コラーゲン又はゼラチンを加水分解して得たペプチドを意味する。
コラーゲン又はゼラチンは、ウシ、ブタ、トリ、ヒツジ等の骨や皮や、魚類の鱗や骨、皮など、いずれから得たものであっても構わない。特に好ましくは、魚鱗、魚骨、及び魚皮から選択される一種以上から得たコラーゲン又はゼラチン由来のコラーゲンペプチドである。このようなペプチドは、ウシやブタ由来のコラーゲンペプチドに比して、家畜伝染病などの心配がなく安全性が高い点、さらに魚鱗、魚骨の場合は味や臭いを悪くする脂肪分の含有割合が非常に小さい点で、有用性が高い。
本発明の筋肉増加剤の原料となる魚鱗、魚骨、又は魚皮（以降、これらを魚鱗類と記す）を得る魚種としては、特に限定されず、イワシ、サンマ、ティラピア、マダイ、イトヨリダイ、フエフキダイ、ママカリ、サケ、ニシン、コイ、ナマズ、ハモ等を使用できるが、鱗中のコラーゲンの含有比率が高い点、及び鱗が比較的大きい点から、スズキ目魚種が好ましい。
【００１３】
本発明におけるコラーゲンまたはゼラチンの加水分解物であるコラーゲンペプチドの製造条件は特に限定されるものではないが、例えば、酸脱灰後に熱水抽出して酵素加水分解する方法や、加圧による抽出後に酵素加水分解する方法などを挙げることができる。なかでも品質面で優れた酵素加水分解物が得られることから、本発明においては、酸脱灰後に熱水抽出して酵素加水分解する方法が好ましい。
酸脱灰後に熱水抽出して酵素分解する方法とは、具体的には、塩酸や酢酸等で脱灰、水洗浄した湿潤又は乾燥粗コラーゲンに対し重量比で５〜２０倍量の４０〜１００℃の温水又は熱水を用い、１〜２０時間かけてコラーゲンまたはゼラチンを抽出し、この抽出液にタンパク質分解酵素を加え、抽出されたコラーゲンまたはゼラチンを酵素加水分解する方法である。
【００１４】
用いるタンパク質分解酵素としては、食品に使用できるものであり、高分解率で大量製造され比較的安価で入手可能で、アミノ酸の生成量が少ないものが好ましい。これらの諸条件を満足させる分解条件としては、コラーゲンがゼラチン化する４０℃以上の温度と分解が容易なｐＨ５．０〜８．０で使用できる中性酵素や、ｐＨ６．５〜１２で使用できるアルカリ性酵素が好ましく、具体的にはバチルス（Bacillus）属由来の細菌性プロテアーゼが挙げられる。このような細菌性プロテアーゼとしては、中性酵素では例えばプロチンＰ（登録商標）（大和化成株式会社製）、オリエンターゼ（登録商標）９０Ｎ（エイチビィアイ株式会社製）、プロテアーゼＮアマノＧ（登録商標）（天野エンザイム株式会社製）等が挙げられ、アルカリ性酵素では例えばアルカラーゼ（登録商標）（ノボノルディスクバイオインダストリー株式会社製）、ビオプラーゼ（登録商標）ＳＰ−１５ＦＧ（長瀬産業株式会社製）、プロレザー（登録商標）ＦＧ−Ｆ（天野製薬株式会社製）等が挙げられる。
【００１５】
本発明でのコラーゲンペプチドは精製工程を経ることで、より品質が向上する。当該精製工程には活性炭処理が好適である。本発明において好適に行われる活性炭処理については、活性炭の種類やその使用量をはじめ特に限定されるものではない。本発明において好ましい活性炭処理方法としては、粗コラーゲンに対して１〜２０重量％の活性炭を、酵素加水分解物を含有する溶液に添加し、３０〜６０℃の温度範囲で１５〜３６０分撹拌する工程を、１〜５回繰り返し行う方法を挙げることができる。なお、精製工程に使用する活性炭は市販品を用いることができる。
精製に使用した活性炭は、活性炭処理後の溶液をろ過することにより取り除くことができる。ろ過の手段は特に限定されないが、例えば市販の珪藻土を粗コラーゲンに対して１〜５０重量％の割合となるように添加し、フイルタープレス等でろ過することにより取り除くことができる。
【００１６】
精製されたコラーゲンペプチド水溶液は、濃縮工程を経ることにより液状のコラーゲンペプチドとして、または濃縮工程、乾燥粉末化工程を経ることにより、粉末状のコラーゲンペプチドとして用いることができる。好適な濃縮工程には薄膜蒸発機などの真空濃縮装置が挙げられ、乾燥粉末化工程にはスプレードライヤーなどが挙げられる。
【００１７】
本発明の筋肉増加剤の有効成分であるコラーゲンペプチドの分子量は特に限定されるものではないが、ゲルクロマトグラフィー（ＧＰＣ）法による数平均分子量で１５０００以下であることが好ましく、より好ましくは３００〜５０００の範囲であり、特により好ましくは５００〜１５００の範囲である。上記範囲であれば水に対する溶解性が良好で、かつ体内で早く吸収されることが予想されるため、効果の早い発現が望める。
【００１８】
本発明の筋肉増加剤は、コラーゲン又はゼラチンを加水分解して得られるコラーゲンペプチドを有効成分として含有し、筋肉増加剤中における該有効成分の含有量は筋肉増加効果を発揮できる量であれば特に制限はなく、摂取の頻度、摂取量、使用の目的によって適宜調整すればよい。少ない使用量で効果を発揮させる場合には、該含有量は多い方が好ましい。すなわち、筋肉増加剤全体の１〜１００重量％含有することが好ましく、５０〜１００重量％含有することがより好ましく、８０〜１００重量％含有することがさらに好ましい。
【００１９】
本発明の筋肉増加剤は、本発明の効果を損なわない限りにおいて、上記有効成分の他の成分を含有することができる。他の成分としては、例えば生理的に許容される賦形剤、結合剤、滑沢剤、崩壊剤、懸濁化剤、乳化剤、防腐剤、安定化剤、防腐剤、着色料、香料、その他種々の食品添加物等が挙げられる。
本発明の筋肉増加剤は、経口にて摂取される。その剤形としては、錠剤、コーティング錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、マイクロカプセル剤、シロップ剤、液剤等の形態を適用することができ、あるいは液体・固体を問わず飲食物に添加する形態でもよい。
【００２０】
本発明の筋肉増加剤を飲食物に添加する場合、その形態としては、特に制限はないが、例えば飲料、栄養ドリンク、菓子、加工食品、油脂類、乳製品、レトルト食品、レンジ食品、冷凍食品、調味料、健康補助食品等の形態が挙げられる。添加される飲食物の形状・性状も特に制限されず、固体状、半固体状、ゲル状、液体状、粉末状等いずれでもよく、また、錠剤、カプセル剤、液剤、顆粒剤等いずれでもよい。
【００２１】
また、飲食物への添加を含め、本発明の筋肉増加剤を用いる場合は、各種機能の向上等を目的として、本剤の他の生理活性成分等をも配合したり組み合わせたりすることができる。
特に、筋肉増加効果の相加・相乗的な向上、筋肉増加効果の補助、吸収性の向上等を目的として、他の生理活性成分等と組み合わせることは好ましい。そのような目的における他の生理活性成分、その生理機能が明確であるものであれば特に制限は無いが、例えば、他の筋肉増加剤・筋肉増強剤や、筋肉増加用機能性飲食物等、例えば、ホエイタンパク、ホエイペプチド、カゼイン、大豆タンパク（プロテイン）、大豆ペプチド、小麦タンパク（プロテイン）、バリン、ロイシン、イソロイシン、アルギニン、シトルリン等のアミノ酸、リンゴポリフェノール、ウルソル酸、トマト抽出物（脂肪酸）、ＥＭＲ（酵素処理ルチン）カテキン、クレアチン等が挙げられる。
【００２２】
また、その他の機能向上等を目的として組み合わせる他の生理活性成分としては、抗酸化成分、油性成分、栄養強化のための各種ビタミン類、ミネラル類、アミノ酸類等が挙げられる。
抗酸化成分としては、特に制限は無いが、例えば、トコフェロール類およびそれらの誘導体、トコトリエノール類およびそれらの誘導体、セサミン、エピセサミン、セサミノー
ル、セサモリン、セサモール等のリグナン類およびそれらの配糖体、β−カロチン等のカロテノイド類およびその誘導体、没食子酸やエラグ酸等のタンニン類およびそれらの誘導体、フラボン、カテキン、ケルセチン、ロイコアントシアニジン等のフラボノイド類、ユビキノンやビタミンＫ等のキノン類、オリザノール等のフェルラ酸誘導体、オリーブ抽出物等が挙げられる。栄養強化のための各種ビタミン類、ミネラル類、アミノ酸類等の種類については特に制限はないが、食品添加物公定書に定められるものが望ましい。
【００２３】
本発明の筋肉増加剤を添加する飲食物について、下記に具体例を列記するが、本発明はこれらに制限されるものではない。また、その形態等について特に制限はないが、例えば、おかき、煎餅、おこし、饅頭、飴等の和菓子、クッキー、ビスケット、クラッカー、パイ、カステラ、ドーナッツ、プリン、スポンジケーキ、ワッフル、バタークリーム、カスタードクリーム、シュークリーム、チョコレート、チョコレート菓子、キャラメル、キャンデー、チューインガム、ゼリー、ホットケーキ、パン、菓子パン等の各種洋菓子、ポテトチップ等のスナック菓子、アイスクリーム、アイスキャンデー、シャーベット等の氷菓、水、乳酸飲料、乳酸菌飲料、濃厚乳性飲料、果汁飲料、果肉飲料、機能性飲料、炭酸飲料等の清涼飲料水、緑茶、紅茶、コーヒー、ココア等の嗜好品およびこれらの飲料、牛乳、粉乳、発酵乳、加工乳、チーズ等の乳製品、豆乳、豆腐等の大豆加工食品、ジャム、果実のシロップ漬、フラワーペースト、ピーナツペースト、フルーツペースト等のペースト類、漬物類、うどんの麺、パスタ等の穀物製品類、ハム、ソーセージ、ベーコン、ドライソーセージ、ビーフジャーキー、ハンバーグ等の畜肉製品類、魚肉ハム、魚肉ソーセージ、かまぼこ、ちくわ、はんぺん等の魚貝類製品、魚、貝等の干物、鰹、鯖、鰺等の各種節、ウニ、イカ等の塩辛、スルメ、魚等のみりん干、鮭等の燻製品、のり、小魚、貝、山菜、椎茸、昆布等の佃煮、カレー、シチュー等のレトルト食品、みそ、醤油、ソース、ケチャップ、ブイヨン、焼肉のタレ、カレールー、シチューの素、スープの素、だしの素等の各種調味料、米飯類、パン、油脂やマーガリン、ショートニング、マヨネーズ、ドレッシング等の油脂加工品や、油脂を含有する各種レンジおよび冷凍食品等が挙げられる。
【００２４】
本発明の筋肉増加剤の摂取量は各人の年齢、体重などに応じて異なるが、成人に対する一日の摂取量は、上記コラーゲンペプチドとして１〜２０ｇが好ましく、５〜１５ｇがより好ましい。また、１日のうち複数回に分けて摂取してもよく、摂取する人の日常生活に取り入れやすいようにすることができる。
摂取量を上記範囲とすることにより、筋肉を増加させる作用が促進される。
なお、本発明の筋肉増加剤を摂取する人（投与対象者）は、筋肉を増やしたい人であり、例えば運動選手や体力づくりをしたい人、肥満の解消や健康増進等の目的で消費エネルギーを増やしたい人が挙げられる。
【００２５】
本発明の筋肉増加剤は、好ましくは運動と併用して摂取される。運動を併用することにより、より筋肉増加効果が向上する。
ここで、運動とは身体活動を示し、計画的・意図的に実施する運動、労働、家事、通勤・通学、趣味等の日常の生活活動を含む。
負荷の程度としては３メッツ以上の中強度運動が好ましく、２３エクササイズ（メッツ・時）／週以上の運動量が好ましい。なお、「メッツ」とは、厚生労働省の運動所要量・運動指針の策定検討会が「健康づくりのための運動指針２００６（エクササイズガイド２００６）」で示した、運動の強さを表す単位であり、座って安静にしている状態（１メッツ）を基準として、その何倍に相当するかで運動強度が表される。また、「エクササイズ（メッツ・時）」とは同様に、運動の量を表す単位であり、運動強度（メッツ）に運動時間をかけたものである。例えば、普通の歩行、ボーリング、バレーボール等が３メッツの運動に、速歩、水中運動、自転車こぎ等が４メッツの運動に該当し、３メッツの運動を毎日３０分間／日行うと１０．５エクササイズ／週となる。
運動を併用して本発明の筋肉増加剤を用いる場合、その摂取するタイミングとしては、
運動の前後いずれでもよく、特に制限されない。
運動頻度としては、毎日の実施が好ましいが、２３エクササイズ（メッツ・時）／週以上となるように運動できればよい。
【００２６】
本発明の筋肉増加剤又はこれを含有する飲食物は、筋肉増加のために用いられるものである旨の表示を付してもよい。筋肉増加のために用いられるものである旨の表示は、主に特定保健用食品として表示可能な表記であり、例えば「筋肉を増やして、健康な体づくりのために」「筋肉増加で基礎代謝をアップさせよう」「筋肉アップで脂肪の燃えやすい体に」等の表示が挙げられる。
また、本発明の筋肉増加剤又はこれを含有する飲食物は、運動と併用して摂取するものである旨の表示を付してもよい。運動と併用して摂取するものである旨の表示は、主に特定保健用食品として表示可能な表記であり、例えば「本剤／本飲食物を運動と一緒に摂取／飲食して、より筋肉の増加を」「摂取／飲食した後は運動を」「筋肉をより増やしたい方は、ウォーキング運動を」等の表示が挙げられる。
なお、これらの表示は、公知の方法で容器包装手段に付すことができ、これによって本発明の筋肉増加剤又はこれを含有する飲食物は筋肉増加のために用いられるものであること、又は運度と併用して摂取するものであることが明示されるので、通常の剤又は飲食物との区別が明確となる。
【００２７】
本発明において筋肉増加作用とは、筋肉、特に骨格筋の量を増加させる作用を意味し、もとの筋肉の量を増やすこと、トレーニング等で増やした筋肉の量を減らさず維持することを含む。したがって、本発明の筋肉増加作用は、筋重量を測定することにより評価することができる。
本発明の筋肉増加剤を摂取することによって、運動の併用の有無にかかわらず筋肉を増加させることができることから、生活スタイルに合わせた無理のない筋肉増強に有効である。また、運動を併用することによってより筋肉増加効果を向上させることができるため、運動選手などの体づくりにも好適に利用できる。
【実施例】
【００２８】
以下、実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００２９】
＜１＞本発明の筋肉増加剤の製造
スズキ目の魚鱗を洗浄乾燥し、これを公知の方法により塩酸脱灰後、水洗（イオン交換水を使用）して粗コラーゲンを得た。すなわち、洗浄乾燥鱗１００ｇ（水分１５重量％）に０．６モル塩酸１，５００ｍＬを加え、２時間攪拌した。１００メッシュ網にてろ過（脱灰溶液ｐＨ１．５）、固形分を１Ｌのイオン交換水に入れて１５分間攪拌し、この水洗／ろ過処理を３回繰り返した。１０５℃で３ｈｒ乾燥させた絶乾鱗の粗コラーゲン量は５０重量％、Ｎ：１７．４重量％、残カルシウム：０．１２重量％、残リン酸分：０．３７重量％であった。
該粗コラーゲンを２０倍量（重量）のイオン交換水に懸濁し、これにBacillus subtilis由来のタンパク質分解酵素、天野エンザイム（株）製のプロテアーゼＮ「アマノ」Ｇ（
登録商標）を粗コラーゲンに対し１．０重量％の割合となるよう添加して５０℃で３時間加水分解した。その後、活性炭「フタムラ化学（株）製  太閤Ｓ」（登録商標）を粗コラーゲンに対して０．４重量％加え、４０℃において３０分間攪拌処理して脱臭脱色した。その溶液を室温まで冷却後珪藻土ろ過し、濃縮、粉末化してコラーゲンペプチドを得た。
【００３０】
上記で得たコラーゲンペプチドの数平均分子量を、写真用ゼラチン試験法合同審議会が定めるパギイ法２０−２「平均分子量」に準じて、高速液体クロマトグラフィーを用いたゲル濾過法によって測定したところ、１０１０であった。
１）試料０．２ｇを１００ｍＬメスフラスコに取り、溶離液（０．１ｍｏｌ／Ｌリン酸二水素カリウム溶液と０．１ｍｏｌ／Ｌリン酸水素二ナトリウム溶液の等量混合液）を加え、１時間膨潤させた後、４０℃で６０分間加温して溶かした。室温まで冷却した後、溶離液を標線まで加えた。
２）得られた溶液を溶離液で正確に１０倍希釈し、検液とした。
３）検液を用い、ゲル濾過法によってクロマトグラムを求めた。
カラム：Ｓｈｏｄｅｘ  Ａｓａｈｉｐａｋ  ＧＳ  ６２０  ７Ｇ  を２本直列
溶離液の流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
カラムの温度：５０℃
検出方法：測定波長２３０ｎｍの吸光度
４）保存時間を横軸にとり、対応した２３０ｎｍの吸光度値を縦軸にして、試料の分子分布曲線を作成し、数平均分子量を算出した。
【００３１】
＜２＞筋肉増加作用試験
＜２−１＞試験方法
前記製造例のように製造した本発明の筋肉増加剤を用いて、筋肉増加作用試験を行った。
被験動物として５週齢のWistar系雄ラットを用いた。飼料のタンパク質源にはカゼインを用い、タンパク質含量を飼料重量に対し２０重量％（標準食；Moderate :Ｍ）とした。また、飼料中のカゼイン１００重量部中の３０重量部を本発明の筋肉増加剤に置き換えた群（ＭＣ）を設けた。さらに各群を非運動群と運動群（Ｅｘ）とに分け、合計で表１に示す８群とした。
【００３２】
【表１】
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【００３３】
各群とも、予備飼育を１週間行った後、試験期間を１１週間とした。
試験期間中は、２３±１℃，湿度５０±５％，１２時間ごとの明暗サイクル（明期８：００ａ.ｍ.〜８:００ｐ.ｍ.）の環境下でラットの飼育を行い、表２に示す組成の飼料及
び脱イオン蒸留水を自由摂取させた。
【００３４】
【表２】
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【００３５】
また、試験期間中は運動負荷として、小動物用トレッドミル（ＫＮ−７３、夏目製作所、東京）を用いた走行運動を、ラットに週６回の頻度で行わせた。運動適応期間を１９日間設け、実験開始２０日目から本走行を合計で５５日間行った（２５ｍ／ｍｉｎを６０ｍｉｎ）。ランニングスピードは漸増的に上げ（２５〜２７ｍ／ｍｉｎ）、最終的に２５ｍ／ｍｉｎを１５分、２７ｍ／ｍｉｎを４５分の合計６０分連続走行させた。なお、運動前後に準備運動（１５ｍ／ｍｉｎを５分）とクールダウン（１５ｍ／ｍｉｎを５分）を実施し、１日の総走行時間は７０分とした。なお、本実施例の被験動物において２５〜２７ｍ／ｍｉｎのランニングスピードは６０〜７０％ＶＯ2ｍａｘに相当し（Wheeler DL, Graves JE, Miller GL, Vander-Griend RE, Wronski TJ, Powers SK, Park HM. 1995. Effects
of running in the torisional strength, morphometry, and bone mass of the rat skeleton. Med Sci Sports Exerc 27: 520-529）、ヒトにおける中強度の運動負荷に相当する。
【００３６】
体重及び飼料摂取量は２日ごとに計測した。飼育最終日に、１２時間絶食させたラットをジエチルエーテル麻酔下で解剖して右側骨格筋（大腿四頭筋、腓腹筋、ヒラメ筋、足底筋）を採取して湿重量を測定した。
なお、測定値は統計処理を行い、全てmean±SEで表した。統計ソフトはＳＰＳＳ（version 12.0J; Inc., Chicago, IL, USA）を使用し、各群の差は一元配置分散分析を用い検
討した。グループ間の多重比較はScheffe法を用い、危険率５％で検定した。
【００３７】
＜２−２＞各評価項目及び結果
表３に最終体重、飼料摂取量、飼料効率を示す。
実験開始時の体重に各群間に差はなかった。最終体重、飼料摂取量では、本発明の筋肉増加剤の有無にかかわらず、運動群（ＭＥｘ及びＭＣＥｘ）が非運動群（Ｍ及びＭＣ）よりもそれぞれ有意に低値を示した。また、飼料効率において運動群（ＭＥｘ及びＭＣＥｘ）は非運動群（Ｍ及びＭＣ）と比較してそれぞれ有意に低値を示し、本発明の筋肉増加剤の摂取と運動負荷とを併用した群（ＭＣＥｘ）が最も低値だった。
【００３８】
【表３】
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【００３９】
図１に右側骨格筋（大腿四頭筋、腓腹筋、ヒラメ筋、足底筋）の湿重量を、それぞれ体重補正した値として示す。
大腿四頭筋については、Ｍ群に比べてＭＣ群は、有意差はなかったものの高値を示した。また本発明の筋肉増加剤と運動とを併用した群（ＭＣＥｘ）はＭ群よりも有意に高値を示した。腓腹筋、ヒラメ筋、足底筋についても、Ｍ群に比べてＭＣ群は、有意差はなかったものの高値を示した。また、発明の筋肉増加剤と運動とを併用した群（ＭＣＥｘ）も、有意差はなかったものの高値または高値傾向を示した。
これらの結果から、本発明の筋肉増加剤の摂取により、特別な食餌や運動をせずとも、筋肉の増加を図ることができることが示された。さらに、本剤の摂取と併行して運動を行うことにより、さらに筋肉を増加させることができることが示された。
【産業上の利用可能性】
【００４０】
本発明により、筋肉の増加に有効で、安全性が高く、経済的で、継続して用いやすい筋肉増加剤が提供されるため、産業上非常に有用である。
【図１】
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