(57)【要約】【課題】本発明は、新規な抗肥満用および／または抗動脈硬化用組成物を提供することを課題とする。【解決手段】  有効成分が、海洋性腐植土の水性溶媒抽出物であることを特徴とする抗肥満用および／または抗動脈硬化用組成物により課題を解決する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
有効成分が、海洋性腐植土の水性溶媒抽出物であることを特徴とする抗肥満用組成物。
【請求項２】
有効成分が、海洋性腐植土の水性溶媒抽出物であることを特徴とする抗動脈硬化用組成物。
【請求項３】
前記海洋性腐植土が、有明海産の海洋性腐植土である請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
前記抽出物が、段戸フルボ酸または筑後川フルボ酸である請求項１または２に記載の組成物。
【請求項５】
前記水性溶媒が、水または５０容量％以下の低級アルコール水溶液である請求項１〜４のいずれか１つに記載の組成物。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか１つに記載の組成物を含む食品または健康食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、海洋性腐植土の水性溶媒抽出物の新規用途に関する。
具体的には、本発明は、海洋性腐植土の水性溶媒抽出物を有効成分とする抗肥満用および／または抗動脈硬化用組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
海洋性腐植土は、推定５００万年〜数千万年の古代に、海草、藻類、植物、魚介類および他の生物などが海底深く埋没し、長い年月をかけて重なり合い堆積し作り上げられたものであり、その地層が地殻変動により隆起して現れたものと考えられている。
【０００３】
海洋性腐植土には、海洋性腐植物質として、上記の海草、藻類、植物、魚介類および他の生物などが、土壌中で微生物などによる分解された分解物；土壌中で発酵した発酵物；土壌生物により消化された消化物；さらに上記の分解物、発酵物、消化物から微生物などにより合成された合成物などの種々の有機物およびミネラルが含まれることが知られている。
【０００４】
また、海洋性腐植土に含まれる有機物の大部分が、上記の海洋性腐植物質である。
海洋性腐植土を、水酸化ナトリウムまたはピロリン酸ナトリウムなどのアルカリを加え処理すると、海洋性腐植土に含まれる海洋性腐植物質の６０〜８０％を含む濃赤褐色の懸濁液が得られる。
【０００５】
この懸濁液を常法により水性溶液と不溶成分に分離した不溶成分をフミン（humin）という。このフミンは、アルカリだけでなく酸にも不溶性の高分子有機物の混合物であり、土壌の無機成分と強く結合する性質を有している。
また、アルカリを加えて得られた溶液にｐＨ１〜２程度の酸を加えて酸性にすると黒褐色の綿状の沈殿物を生じる。この酸に不溶な物質を腐植酸（humic acid）という。
腐植酸は分子量３００,０００程度までの物質であり、腐植物質としての性質はこの腐植酸によるものとされている。
【０００６】
また海洋性腐植土を水に懸濁した後に得られる黄色の上澄み液で、アルカリにも酸にも可溶の部分をフルボ酸（fulvic acid）という。このフルボ酸は、分子量２,０００〜５０,０００程度の比較的分子量が小さい物質の混合物である。この画分は分画操作上の画分であって、該画分が含む有機物の混合物の本質的な違いを表したものではない。このフルボ酸については古くから研究されてきているが、その本質についてはあまり分かっていない（非特許文献１および２）。
【０００７】
なお、上記のフルボ酸としては、日本腐植物質学会より提供された段戸フルボ酸および佐賀大学総合分析実験センターより提供された筑後川フルボ酸が挙げられる。
【０００８】
これまで、海洋性腐植物質の生理活性については、抗菌・殺菌作用、抗腫瘍効果などが報告されているが他の生理作用については何ら報告されていない（非特許文献３〜５）。
【０００９】
近年、動脈硬化症などの生活習慣病が急激に増加している。生活習慣病の急増は、昨今の食生活の欧米化に伴う肥満が原因であると考えられている。肥満のヒトにおいては、脂肪細胞または脂肪組織が肥大化する傾向にある。
【００１０】
脂肪細胞および脂肪組織は単に脂肪を蓄積しているだけではなく、生理活性物質（アディポサイトカイン）を分泌している。そのような脂肪組織由来の分泌蛋白質であるアディポサイトカインには、レプチン、アディポネクチンおよびプラスミノーゲンアクチベーターインヒビター１（plasminogen activator inhibitor-1;PAI-1）などがある。
【００１１】
例えばアディポネクチン分泌量が低下すると動脈硬化症が促進されることが知られている。また、PAI-1の分泌量が増加すると、線溶活性が阻害されて血栓形成傾向（向血栓性）となる。その結果、動脈硬化症および続発する血栓塞栓性疾患の進展を助長する。一般に、脂肪細胞が肥大化した状態、すなわち肥満になると、アディポネクチンの分泌量が低下することが知られている。したがって、肥満は、動脈硬化症および続発する血栓塞栓性疾患の進展と密接な関係を有すると考えられている。
【００１２】
アディポサイトカイン発現制御に関して、Nagasawa A.らにより、精巣上皮白色脂肪組織におけるPAI-1遺伝子の発現が、動物性蛋白質（カゼイン）よりも大豆から抽出された蛋白質によって抑制され、アディポネクチン遺伝子の発現および血中アディポネクチンの濃度を上昇させることが報告されている（非特許文献６）。
他の食物成分によるアディポサイトカイン発現制御に関する報告は見受けられない。
一方、ある種のミネラル成分が培養血管内皮細胞からのPAI-1分泌を抑制することは知られている。
【００１３】
動脈硬化症の進展には血管平滑筋細胞の内膜への遊走とその増殖が関与しており、腫瘍細胞（マウスメラノーマ細胞）の存在下における血管平滑筋細胞の増殖には線溶系因子の受容体が重要である（非特許文献７）。
【００１４】
血管平滑筋細胞の遊走能は、脂肪細胞から分泌されるPAI-1やアディポネクチンによって変化する。
PAI-1は、細胞外基質のビトロネクチンと結合することによって血管平滑筋細胞の遊走能を促進し、アディポネクチンは血管平滑筋細胞内のシグナル伝達を介して血管平滑筋細胞の遊走能を抑制することが知られている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１５】
【非特許文献１】松中照夫：土壌学の基礎−生成・機能・肥沃土・環境−、農山漁村文化協会、４７〜４９（２００３）
【非特許文献２】久馬一剛、庄子貞雄ら：新土壌学、朝倉書店、４０〜４９（１９８９）
【非特許文献３】Kodama H.、 DensoおよびNakagawa T.：Protection against atypical Aeromonas salmonicida infection in carp (Cyprinus carpio L.) by oral administration of humus extract、J. Vet. Med. Sci.、69(4)、405-408 (2007)
【非特許文献４】Kodama H.およびDENSO：Antitumor Effect of Humus Extract on Murine Transplantable L1210 Leukemia, J. Vet. Med. Sci.、69(10)、1069-1071 (2007)
【非特許文献５】Kodama H.、Denso、Okazaki F.およびIshida S.：Protective effect of humus extract against Trypanosoma brucei infection in mice.、J. Vet. Med. Sci.、70(11)：1185-90 (2008)
【非特許文献６】Nagasawa A.、Fukui K.、Kojima M.、Kishida K.、Maeda N.、Nagaretani H.、Hibuse T.、Nishizawa H.、Kihara S.、Waki M.、Takamatsu K.、Funahashi T.およびMatsuzawa Y.：Divergent effects of soy protein diet on the expression of adipocytokines.、Biochem Biophys Res Commun. 311(4)：909-14(2003)
【非特許文献７】Ueshima S.、Fukao H.、Okada K.およびMatsuo O.：Growth inhibition of vascular smooth muscle cells derived from urokinase receptor (u-PAR)-deficient mice in the presence of carcinoma cells.、Thromb Res. 113(1)：41-9 (2004)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１６】
本発明が解決しようとする課題は、新規な抗肥満用および／または抗動脈硬化用組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
本発明者らは、海洋性腐植土の水性溶媒抽出物が脂肪細胞におよぼす影響、および脂肪細胞の存在下での血管平滑筋細胞の増殖能・遊走能に対してどのような作用をおよぼすのかを明らかにする目的で鋭意研究努力を重ねた結果、驚くべきことに海洋性腐植土の水性溶媒抽出物が、抗肥満作用および抗動脈硬化作用を有することを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１８】
本発明によれば、有効成分が、海洋性腐植土の水性溶媒抽出物であることを特徴とする抗肥満用および／または抗動脈硬化用組成物が提供される。
【００１９】
また、本発明によれば、前記水性溶媒が、水または５０容量％以下の低級アルコール水溶液である前記組成物が提供される。
【００２０】
さらに、本発明によれば、本発明による組成物を含む食品または健康食品が提供される。
【発明の効果】
【００２１】
本発明によれば、海洋性腐植土の水性溶媒抽出物を抗肥満用および／または抗動脈硬化用組成物として安全に使用できる。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】海洋性腐植土の水性溶媒抽出物の添加による油滴蓄積量への影響を示すグラフである。
【図２】脂肪細胞存在下における血管平滑筋細胞の遊走能を検討する方法を示す模式図である。
【図３】共存する脂肪細胞の分化段階による血管平滑筋細胞の遊走能の変化を示すグラフである。
【図４】海洋性腐植土の水性溶媒抽出物が脂肪細胞存在下における血管平滑筋細胞の遊走能へ及ぼす影響を示すグラフである。
【図５】海洋性腐植土の水性溶媒抽出物が脂肪細胞から分泌される活性型PAI-1に及ぼす影響を示すグラフである。
【図６】海洋性腐植土の水性溶媒抽出物が脂肪細胞から分泌されるアディポネクチンに及ぼす影響を示すグラフである。
【図７】海洋性腐植土の水性溶媒抽出物が血管平滑筋細胞共存下での脂肪細胞から分泌される活性型PAI-1に及ぼす影響を示すグラフである。
【図８】海洋性腐植土の水性溶媒抽出物が血管平滑筋細胞共存下での脂肪細胞から分泌されるアディポネクチンに及ぼす影響を示すグラフである。
【図９】海洋性腐植土の水性溶媒抽出物が脂肪細胞培養液中のt-PA活性に及ぼす影響を示すグラフである。
【図１０】海洋性腐植土の水性溶媒抽出物が脂肪細胞培養液中のu-PA活性に及ぼす影響を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
本発明では、海洋性腐植土の水性溶媒抽出物が用いられる。
本発明において用いられる海洋性腐植土としては、特に限定されないが、海底から０.５〜２５０ｍの深さに存在する海洋性腐植土層、またはこの海洋性腐植土層が地殻変動により隆起した波打ち際または湿地帯の深さ５〜３０ｍに存在する海洋性腐植土層から採取した海洋性腐植土を使用できる。
【００２４】
このような海洋性腐植土としては、例えば、マリネックス社製の有明海産の粉末状海洋性腐植土（Lot. No. ０８−０２）などが挙げられる。
【００２５】
上記の水性溶媒としては、水；希塩酸のような酸性水溶液；水性エタノールのような５０容量％以下の低級アルコールの水溶液を用いることができる。
水は、塩素を除去したものが好ましい。塩素を除去する方法としては特に限定されないが、常温で数日間放置する方法、アスコルビン酸などの還元剤を用いる方法、活性炭またはイオン交換樹脂などの吸着剤を用いる方法などが挙げられるが、蒸留水、イオン交換蒸留水またはミリポア水がさらに好ましい。
【００２６】
本発明において、用いられる用語「低級アルコール」とは、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノールまたはこれらアルコールの異性体もしくはこれらアルコールの混合物を意味する。
水性溶媒のｐＨは特に限定されないが、ｐＨ６.０〜８.０の範囲のものが好ましく、より好ましくはｐＨ６.３〜７.５の範囲である。
【００２７】
本発明で用いられる海洋性腐植土の水性溶媒抽出物を得る方法は特に限定されないが、以下の工程（１）〜（３）を含む方法が好ましい。
（１）海洋性腐植土と水性溶媒との混合物（１：５〜１：１０（重量比））の撹拌および静置の繰り返し工程；
（２）固形物の除去工程；
（３）得られた微細な不溶物を含む懸濁液を周囲温度で長期間静置し、上清を得る工程。
【００２８】
上記の工程（１）では、まず、水槽などの容器中で、海洋性腐植土に対して５〜１０倍量（重量比）の水性溶媒を撹拌しながら海洋性腐植土に加えて、懸濁物を得る。
次いで、得られた懸濁物を室温で静置する。
本明細書において用いられる「室温」とは、１５〜４５℃、好ましくは２０〜４０℃、より好ましくは２５〜３５℃の室内温度を意味する。
本発明の海洋性腐植土の水性溶媒抽出物は、上記の撹拌および静置を繰り返すことにより調製される。
撹拌は、容器の底部に沈殿した海洋性腐植土が水性溶媒中に拡散される程度に行えばよく、連続的または断続的のいずれであってもよい。この処理は、１週間以上続けることができる。
【００２９】
上記の工程（２）において固形物を分離する方法としては、海洋性腐植土と液体とを分離することができる方法であれば特に限定されないが、静置後に沈殿物をデカントにより分離するか、または遠心分離などにより分離できる。
【００３０】
デカントにより沈殿物を分離する方法は、懸濁物を２５〜３５℃で１５０〜２４０時間程度静置して海洋性腐植土を沈殿させた後に、デカントにより上清だけを分取する。より確実に固形物を除去するために、さらに布などを用いて浮遊物をろ過してもよい。このようにして得られる上清は、ｐＨ２.５〜３.０程度である。
【００３１】
工程（３）は、得られた上清を周囲温度で長期間静置することにより行われる。長期間とは、１８０〜５００日間程度であればよく、好ましくは３００〜４００日間程度である。この放置の間、温度は一定であってもよいし、変動してもよい。通常、２５〜３５℃の温度で３０〜６０日保持し、５〜１５℃の温度で３０〜６０日保持すると、本発明で用いるのにより好ましい海洋性腐植土の水性溶媒抽出物を得ることができる。
【００３２】
上記の静置により得られた液を、さらにろ過してもよい。ろ過は、液中の浮遊物を除去できる程度であればよく、例えば孔径４０〜１００μｍおよび１０〜４０μｍの２種類のメンブレンフィルターを用いろ過を行うことができる。
上記の方法により得られる海洋性腐植土の水性溶媒抽出物は、ｐＨ２.０〜３.５、および電気伝導度が３５０〜５００ｍＶの黄色〜薄茶色の実質的に無臭の液体である。
【００３３】
また、上記の海洋性腐植土の水性溶媒抽出は、超音波ホモジナイザーなどを用いて積極的に分散抽出を短時間で行うこともできる。
すなわち、上記の海洋性腐植土の水性溶媒抽出物を、海洋性腐植土１重量部に対して蒸留水３〜１２重量部、好ましくは、４〜８重量部、さらに好ましくは、６重量部を用いて混合し、超音波ホモジナイザーアイラＶＣＸ−１３０（ＳＯＮＩＣＳ ＆ ＭＡＴＥＲＩＡＬＳ Ｉｎｃ,；１３０Watt、２０Khz、３０％振幅）にて１０分間超音波処理した。この超音波処理液を、１０００ｒｐｍで５分間遠心分離して、得られた上清を、ステラディスク（０.２μｍ）を用いてろ過し、得られたろ液（ｐＨ２.８３）を海洋性腐植土水性溶媒抽出物として用いることもできる。
【００３４】
なお、この海洋性腐植土の水性溶媒抽出物は、凍結乾燥後の重量が、海洋性腐植土の水性溶媒抽出液１００ｍｌあたり０.５〜１ｇであり、ＤＡＸ−８樹脂カラムを通して吸着される成分（フルボ酸）の凍結乾燥後の重量が、海洋性腐植土の水性溶媒抽出液１００ｍｌあたり０.００１ｇ以下であるという特徴を有している。
【００３５】
また、上記海洋性腐植土の水性溶媒抽出物は、さらに精製処理に付すことができる。
精製処理には、上記の溶媒による分配抽出以外に、当業者に公知のクロマトグラフ法、イオン交換クロマトグラフ法等を単独で、または組み合わせて採用することができる。例えば、クロマトグラフ法としては、順相もしくは逆相担体またはイオン交換樹脂を用いるカラムクロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィーまたは遠心液体クロマトグラフィー等のいずれか、またはそれらを組み合わせて行う方法が挙げられる。この際の担体、溶出溶媒等の精製条件は、各種クロマトグラフィーに対応して適宜選択することができる。
【００３６】
また、上記海洋性腐植土の水性溶媒抽出物は、さらに濃縮処理に付すことができる。濃縮は、減圧下に行うのが好ましい。濃縮は抽出液が乾固するまで行ってもよい。
【００３７】
したがって、本発明における海洋性腐植土の水性溶媒抽出物とは、海洋性腐植土の水性溶媒抽出液、その濃縮物、その濃縮乾固物、凍結乾燥物、前記の段戸フルボ酸および筑後川フルボ酸を含むフルボ酸のいずれをも意味するが、本発明による抽出物は、精製せずにそのまま用いることもでき、本発明の一部を構成している。
【００３８】
なお、本発明による海洋性腐植土の水性溶媒抽出物は、海洋性腐植土を、上記の方法に従って水で抽出した抽出物は、清涼飲料水としてそのまま飲用でき、また、該抽出物または凍結乾燥物を食品添加物または組成物として使用できる。
【００３９】
本発明の抽出物は、そのままの状態、または適当な媒体で希釈して、あるいは医薬品の製造分野において公知の方法により、固形剤（例えば散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤）、半固形剤または液剤等、種々の医薬品の形態に製剤化して使用することができる。
【００４０】
これらの医薬品形態においては、適当な媒体を添加してもよい。そのような媒体としては、医薬的に許容される賦形剤、例えば結合剤または崩壊剤等が挙げられる。
【００４１】
賦形剤としては、例えば、エリスリトール、マルチトール、マンニトール、ソルビトール、キシリトール、ラクチトールなどの糖アルコール、精製白糖、白糖、トレハロース、乳糖、還元麦芽糖水アメ、粉末還元麦芽糖水アメ、ブドウ糖、麦芽糖などの糖類、コーンスターチ、結晶セルロース、粉末セルロース、リン酸一水素カルシウム、リン酸水素カルシウム、無水リン酸水素カルシウム、乳酸カルシウム、沈降炭酸カルシウム、軽質無水ケイ酸、含水二酸化ケイ素、二酸化ケイ素などが挙げられる。
【００４２】
結合剤としては、例えば、アラビアゴム末、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルエチルセルロースなどのセルロース誘導体、ポビドン（ＰＶＰ）、ビニルピロリドン共重合体（コポリビドン）、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、アクリル酸系高分子、プルラン、デキストリン、アルファー化デンプン、ヒドロキシプロピルスターチ、トラガント末、結晶セルロース、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース（Ｌ−ＨＰＣ）などが挙げられる。
【００４３】
崩壊剤としては、例えば、クロスカルメロースナトリウム、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、カルメロースカルシウム、クロスポビドン、コーンスターチ、カルボキシメチルスターチナトリウム、ヒドロキシプロピルスターチ、部分α化デンプンなどが挙げられる。
【００４４】
製剤において、さらに他の添加剤、例えば、滑沢剤、流動化剤、着色剤、ｐＨ調節剤、甘味剤、香料、防腐剤などを使用してもよい。他の担体成分または添加剤としては、滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、タルク、ショ糖脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、硬化油、マクロゴール６０００など）、流動化剤（例えば、軽質無水ケイ酸、含水二酸化ケイ素、カオリンなど）、抗酸化剤（例えば、ジブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、没食子酸プロピル、ブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、トコフェロール、クエン酸など）、保存剤（パラオキシ安息香酸エステル類など）、
【００４５】
着色剤（例えば、リボフラビン、ビタミンＢ１２、酸化チタン、黄色三二酸化鉄、三二酸化鉄、食用赤色２号、食用赤色３号、食用赤色１０２号、食用赤色１０４号、食用赤色１０５号、食用赤色１０６号、食用黄色４号、食用黄色５号、食用緑色３号、食用青色１号、食用青色２号、銅クロロフィルナトリウム、銅クロロフィルなど）、ｐＨ調節剤（例えば、水酸化ナトリウム、クエン酸ナトリウム、塩酸、炭酸水素ナトリウム、炭酸ナトリウム、乳酸カルシウム、リン酸、リン酸二カリウム、リン酸水素ナトリウム、リン酸二水素カリウム、リン酸二水素ナトリウムなど）、
【００４６】
甘味剤（例えば、ショ糖、マンニトール、Ｄ−ソルビトール、キシリトール、アスパルテーム、ステビア、グリチルリチン酸ジカリウム、アセスルファームＫ、スクラロースなど）、香料（例えば、Ｌ−メントール、ハッカ油、ユーカリ油、オレンジ油、チョウジ油、テレビン油、ウイキョウ油、バニリンなど）、界面活性剤（ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、モノステアリン酸グリセリン、ソルビタン脂肪酸エステル（モノステアリン酸ソルビタン、モノラウリン酸ソルビタンなど）、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレン、ポリソルベート類、ラウリル硫酸ナトリウム、マクロゴール類、ショ糖脂肪酸エステルなど）、可塑剤（クエン酸トリエチル、ポリエチレングリコール、トリアセチン、セタノールなど）、矯味剤または着香剤（メントールなど）、吸着剤、防腐剤、湿潤剤、帯電防止剤などが挙げられる。
【００４７】
固形剤は必要に応じて、ＨＰＣ、ＨＰＭＣ、ポビドンなどの水溶性基剤（または高分子）、エチルセルロースなどの不溶性基剤（または高分子）、腸溶性基剤、胃溶性基剤、糖類などでコーティングしてもよい。
【００４８】
固形剤は慣用の方法で製造できる。前記活性成分と担体成分とを混合して粉剤を調製してもよく、通常、活性成分と担体成分とを造粒し、必要により造粒物を整粒して粒剤（細粒剤または顆粒剤）を調製するか、または造粒物を含む混合物（特に、造粒物と担体成分との混合物）を打錠することにより裸錠を調製できる。カプセル剤は前記粒剤をカプセルに充填することにより調製できる。
【００４９】
造粒は、慣用の方法、例えば、撹拌造粒法、流動層造粒法、押出造粒法、乾式造粒法などで行うことができる。好ましい造粒法は流動層造粒法である。造粒においては、活性成分と担体成分とを、結合剤を含む溶液を用いて造粒する場合が多く、例えば、活性成分と担体成分との流動層に結合剤を含む溶液を噴霧することにより造粒できる。コーティング製剤は、フィルムコーティング機を用いて、コーティング基剤を含有するコーティング剤を未コーティング製剤（素顆粒、素錠など）に噴霧することにより得ることができる。
【００５０】
液剤において、担体成分としては、水性媒体（精製水、エタノール含有精製水など）、アルコール類（エタノール、グリセリンなど）、水溶性高分子などが利用できる。担体成分としては、精製水、エタノール含有精製水などを用いる場合が多い。半固形製剤の担体成分としては、油性基剤（植物油などの脂質、ワセリン、流動パラフィンなど）、親水性基剤（乳剤性基剤）などが利用できる。また、添加剤としては、崩壊助剤、抗酸化剤または酸化防止剤、界面活性剤、乳化剤、分散剤、懸濁剤、溶解補助剤、増粘剤、ｐＨ調整剤または緩衝剤、防腐剤または保存剤（パラベン類など）、殺菌剤または抗菌剤、帯電防止剤、矯味剤またはマスキング剤（例えば、甘味剤など）、清涼化剤、着色剤、矯臭剤または香料などが挙げられる。
【００５１】
液剤は、各成分を担体成分に溶解または分散させ、必要により濾過または滅菌処理し、所定の容器に充填することにより調製できる。半固形剤も慣用の方法、例えば、各成分と担体成分とを混合し、必要により滅菌処理し、所定の容器に充填したり、基材に塗布することにより調製できる。
【００５２】
上記の水性溶媒抽出物の使用量は、その形態により異なるが、液体であれば１回に１００ｍｌ〜５００ｍｌが適当であり、固形物であれば、０.１ｇ〜５ｇが適当である。
なお、海洋性腐植土の水抽出液は、清涼飲料水としても認可されており、極めて毒性が低いか、または無視し得るほどの毒性であるので、安全に使用できる。
【００５３】
本発明による抽出物を、固形剤または半固形剤として使用する場合には、その使用量は、年齢、症状等によって異なるが、成人で１日１〜３回、１回につき０.１ｇ〜１ｇ程度使用できる。
また、液剤として使用する場合には、成人で１日１〜３回、１回につき１０ ｍｌ〜５００ ｍｌ程度使用できる。
【００５４】
また、本発明による組成物を有効成分として食品に添加したものを食品または健康食品として利用することができる。
【００５５】
健康食品とは、通常の食品よりも積極的な意味で保健、健康維持・増進等を目的とした食品を意味し、クッキー、せんべい、ゼリー、ようかん、ヨーグルト、まんじゅう等の菓子類、清涼飲料、お茶類、栄養飲料、スープ等の形態が挙げられる。
これらの食品の製造工程において、あるいは最終製品に、上記の抽出物を添加して、健康食品とすることができる。
【００５６】
食品または健康食品は、その味や外観に悪影響を及ぼさない量、例えば、対象となる食品または健康食品１ｋｇに対し上記乾固物を、０.１ｇ〜１０ｇ程度の範囲で用いるか、あるいは食品または健康食品の製造工程において使用する水の代わりに本発明による水溶性溶媒抽出物を用いることができる。
【実施例】
【００５７】
以下、本発明に係る実施例を図面に基づいてさらに具体的に説明するが、本発明は、以下の実施例に限定されるものではない。なお、本明細書の記載および図の説明において、「Control」および「Cont.」との記載は「コントロール」を意味する。
【００５８】
材料
海洋性腐植土は、マリネックス社製有明海産粉末状海洋性腐植土（Lot. No. ０８−０２）を用いた。
【００５９】
製造例１
海洋性腐植土の水性溶媒抽出物
海洋性腐植土の水性溶媒抽出物は、株式会社マリネックス社製粉末状海洋性腐植土３.０ｇに対して蒸留水１８.０ｇを用いて混合し、超音波ホモジナイザーアイラＶＣＸ−１３０（ＳＯＮＩＣＳ ＆ ＭＡＴＥＲＩＡＬＳ Ｉｎｃ,；１３０Watt、２０Khz、３０％振幅）にて１０分間超音波処理した。この超音波処理液を、１０００ｒｐｍで５分間遠心分離して、得られた上清１１.０ｇを、ステラディスク２５（倉敷紡績株式会社製；Ｌｏｔ. Ｎｏ.２１０９０７）を用いてろ過し、得られた生成物を海洋性腐植土水性溶媒抽出物の試料とした。
【００６０】
3T3-L1前駆脂肪細胞は、ヒューマンサイエンス研究振興財団より得た（JCRB9014、大阪、日本）。マウス由来血管平滑筋細胞はYongZhong Houら（Hou Y.、 Okada K.、Okamoto C.、Ueshima S.およびMatsuo O.：c-Myc is essential for urokinase plasminogen activator expression on hypoxia-induced vascular smooth muscle cells.、Cardiovasc Res.、75(1):186-94 (2007)）の方法に従って得た。
【００６１】
実施例１
油滴蓄積量におよぼす海洋性腐植土抽出物（以下、単に腐植土ともいう）の効果
分化維持培地中に海洋性腐植土抽出物を添加した。海洋性腐植土抽出物を分化維持培地に培地容量１容量％になるように加えた。コントロールとして滅菌蒸留水を培地容量１容量％になるように分化維持培地に加えた。分化2日目、4日目、6日目および8日目の3T3-L1細胞をOil-Red O染色した。色素抽出後、マイクロプレートリーダーにて波長492nmにおける吸光度測定（O.D.492nm）を行い、油滴蓄積量を評価した。結果を図１に示す。縦軸に吸光度（O.D. 492nm）を示す。分化8日目における吸光度の値は、コントロールで 0.860±0.489、海洋性腐植土抽出物で0.626±0.441となり、海洋性腐植土抽出物添加はコントロールよりも油滴蓄積量を有意に抑えた（図１）。
【００６２】
実施例２
脂肪細胞存在下における血管平滑筋細胞の遊走能の検討
分化0日目から分化8日目の脂肪細胞が存在するdown chamberに血管平滑筋細胞を播種したup chamberを装着し、4時間後にメンブレンの裏側に遊走してくる細胞数を計測した（図２）。
Down chamberには分化２日毎の脂肪細胞を準備し、up chamberに血管平滑筋細胞を0.3×105個播種した。播種後、4時間でメンブレンを通過した細胞を固定・染色し、メンブレンの裏側に遊走してきた細胞の数を計測して血管平滑筋細胞の遊走能を評価した。結果を図３に示す。一視野あたりの遊走細胞数を縦軸に示す。分化4日目以降の脂肪細胞存在下における血管平滑筋細胞の遊走細胞数は分化0日目の脂肪細胞存在下における血管平滑筋細胞の遊走細胞数よりも有意に増加した（図３）。
【００６３】
Down chamberに海洋性腐植土抽出物を含有した分化維持培地で2日間培養した脂肪細胞の存在下において、血管平滑筋細胞の遊走能を評価した。更にdown chamber内で脂肪細胞を培養する際、分化2日毎に海洋性腐植土抽出物を含有した分化維持培地に交換し、分化8日まで脂肪細胞存在下における血管平滑筋細胞の遊走能を評価した。コントロールとして滅菌蒸留水を用いた。結果を図４に示す。一視野あたりの遊走細胞数を縦軸に示す。海洋性腐植土抽出物によって、分化脂肪細胞存在下における血管平滑筋細胞の遊走能は、分化4日目、8日目において、コントロールよりも有意に低下した（図４）。
【００６４】
実施例３
脂肪細胞からのPAI-1、アディポネクチン分泌に対する海洋性腐植土抽出物の影響
分化誘導後の3T3-L1脂肪細胞の培地を、海洋性腐植土抽出物を1容量％含む分化維持培地へ交換した。滅菌蒸留水を1容量％含む分化維持培地をコントロールとした。この分化維持培地への交換日を分化0日目とし、2日毎に同様の培地で培地交換を行った。そして、分化8日目の培地を回収し、ELISAキットを用いて、培地中の活性型PAI-1を定量した。結果を図５に示す。縦軸に活性型PAI-1の濃度を示す。分化8日目の培地中の活性型PAI-1量は、分化維持培地中に滅菌蒸留水を加えて培養したコントロールに対して変化を示さなかった(図５)。
【００６５】
分化誘導後の3T3-L1脂肪細胞の培地を、海洋性腐植土抽出物を１容量％含む分化維持培地へ交換した。滅菌蒸留水を1容量％含む分化維持培地をコントロールとした。この分化維持培地への交換日を分化0日目とし、2日毎に同様の培地で培地交換を行った。そして、分化8日目の培地を回収し、培地中のアディポネクチンの定量をELISA キットを用いて行った。結果を図６に示す。縦軸にアディポネクチン（adiponectin）の濃度を示す。分化8日目の培地中のアディポネクチン量は分化維持培地中に滅菌蒸留水を加えて培養したコントロールと比較して、有意に増加していた （図６）。
【００６６】
脂肪細胞の分化維持培地中に海洋性腐植土抽出物を加えdown chamber内で2日間毎、8日間脂肪細胞の培養を行った後、血管平滑筋細胞を播種したup chamberを装着した。血管平滑筋細胞の遊走能を評価し、その時の培養培地を回収して培地中の活性型PAI-1を定量した。1容量％の滅菌蒸留水を含有した分化維持培地を用いて血管平滑筋細胞の遊走能を評価した時の培地中活性型PAI-1量をコントロールとした（Cont.）。結果を図７に示す。縦軸に活性型PAI-1の濃度を示す。Up chamber装着の4時間後に回収した培地中の活性型PAI-1量は、コントロールと比較して、海洋性腐植土抽出物によって低下する傾向を示した（図７）。
【００６７】
脂肪細胞の分化維持培地中に海洋性腐植土抽出物を加えdown chamber内で2日間毎、8日間脂肪細胞の培養を行った後、血管平滑筋細胞を播種したup chamberを装着した。血管平滑筋細胞の遊走能を評価し、その時の培養培地を回収して培地中のアディポネクチンを定量した。１容量％の滅菌蒸留水を含有した分化維持培地で2日間毎、8日間培養した脂肪細胞を存在させ、血管平滑筋細胞の遊走能を評価した時の培地中アディポネクチン量をコントロールとした（Cont.）。結果を図８に示す。縦軸にアディポネクチンの濃度を示す。Up chamber装着の4時間後に回収した培地中のアディポネクチン量は、コントロールと比較して有意に低下していた（図８）。
【００６８】
実施例４
海洋性腐植土抽出物分が脂肪細胞培養液のプラスミノーゲンアクチベータ（PA）活性に及ぼす影響
脂肪細胞の分化維持培地中に海洋性腐植土抽出物を加えて培養を行い、分化8日目に回収した培地をフィブリンエンザイモグラフィーにて解析した。そして、脂肪細胞培養液中のt-PA活性を、分化維持培地に滅菌蒸留水を加えた場合のt-PA活性（コントロール）と比較した。結果を図９に示す。t-PA相対活性（縦軸）は、コントロールを100%とした時の、分化維持培地に海洋性腐植土抽出物（腐植土）を加えた場合の培養液中のt-PA活性の百分率を示す。t-PA相対活性は、コントロールよりも有意に増加していた（図９）。
【００６９】
脂肪細胞の分化維持培地中に海洋性腐植土抽出物を加えて培養を行い、分化8日目に回収した培地をフィブリンエンザイモグラフィーにて解析した。そして、脂肪細胞培養液中のu-PA活性を、分化維持培地に滅菌蒸留水を加えた場合のu-PA活性（コントロール）と比較した。結果を図１０に示す。u-PA相対活性（縦軸）は、コントロールを100%とした時の、分化維持培地に海洋性腐植土抽出物（腐植土）を加えた場合の培養液中のu-PA活性の百分率を示す。u-PA相対活性は、コントロールよりも有意に増加していた（図１０）。
【産業上の利用可能性】
【００７０】
本発明によれば、細胞毒性がない海洋性腐植土の水性溶媒抽出物を、抗肥満用および／または抗動脈硬化用組成物として安全に利用できる。
【図１】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図２】
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