(57)【要約】【課題】  白甘藷の皮部及び／又は塊根部の水系抽出物から得られるアラビノガラクタンプロテインの新規な用途を提供する。【解決手段】  白甘藷の皮部及び／又は塊根部の水系抽出物から得られる、９０〜９５質量％の下記構成を有する糖鎖と５〜１０質量％の下記構成を有するタンパク質とからなる約１０〜１５万Ｄａの分子量を有するアラビノガラクタンプロテインを、血中脂質低下作用剤及びアディポネクチン産生作用剤として使用する。【選択図】  図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
白甘藷由来のアラビノガラクタンプロテイン及び／又はアラビノガラクタンプロテインを含む白甘藷の皮部及び／又は塊根部の水系抽出物を有効成分とする血中脂質降下剤。
【請求項２】
白甘藷由来のアラビノガラクタンプロテイン及び／又はアラビノガラクタンプロテインを含む白甘藷の皮部及び／又は塊根部の水系抽出物を有効成分とする高分子アディポネクチン産生促進剤。
【請求項３】
９０〜９５質量％の下記構成を有する糖鎖と、５〜１０質量％の下記構成を有するタンパク質とからなる約１０〜１５万Ｄａの分子量を有する白甘藷由来のアラビノガラクタンプロテインを有効成分とする血中脂質降下剤。
前記糖鎖：主にラムノース、アラビノース、ガラクトース及びグルクロン酸で構成され、その構成比は０.６〜１.２：３.５〜４.５：６.５〜７.５：０.８〜１.６（モル比）、
前記タンパク質：１７種のアミノ酸から構成され、ヒドロキシプロリン、セリン及びアラニンが主要な構成アミノ酸であって、その構成比は１３〜２５：１０〜１５：１３〜２０（モル％）
【請求項４】
９０〜９５質量％の下記構成を有する糖鎖と、５〜１０質量％の下記構成を有するタンパク質とからなる約１０〜１５万Ｄａの分子量を有する白甘藷由来のアラビノガラクタンプロテインを有効成分とする高分子アディポネクチン産生促進剤。
前記糖鎖：主にラムノース、アラビノース、ガラクトース及びグルクロン酸で構成され、その構成比は０.６〜１.２：３.５〜４.５：６.５〜７.５：０.８〜１.６（モル比）、
前記タンパク質：１７種のアミノ酸から構成され、ヒドロキシプロリン、セリン及びアラニンが主要な構成アミノ酸であって、その構成比は１３〜２５：１０〜１５：１３〜２０（モル％）
【請求項５】
血中脂質降下剤又は高分子アディポネクチン産生促進剤の製造方法であって、
９０〜９５質量％の下記構成を有する糖鎖と、５〜１０質量％の下記構成を有するタンパク質とからなる約１０〜１５万Ｄａの分子量を有する白甘藷由来のアラビノガラクタンプロテインを使用することを特徴とする製造方法。
前記糖鎖：主にラムノース、アラビノース、ガラクトース及びグルクロン酸で構成され、その構成比は０.６〜１.２：３.５〜４.５：６.５〜７.５：０.８〜１.６（モル比）、
前記タンパク質：１７種のアミノ酸から構成され、ヒドロキシプロリン、セリン及びアラニンが主要な構成アミノ酸であって、その構成比は１３〜２５：１０〜１５：１３〜２０（モル％）
【請求項６】
食品の製造方法であって、
９０〜９５質量％の下記構成を有する糖鎖と、５〜１０質量％の下記構成を有するタンパク質とからなる約１０〜１５万Ｄａの分子量を有する白甘藷由来のアラビノガラクタンプロテインを含有せしめることを特徴とする製造方法。
前記糖鎖：主にラムノース、アラビノース、ガラクトース及びグルクロン酸で構成され、その構成比は０.６〜１.２：３.５〜４.５：６.５〜７.５：０.８〜１.６（モル比）
前記タンパク質：１７種のアミノ酸から構成され、ヒドロキシプロリン、セリン及びアラニンが主要な構成アミノ酸であって、その構成比は１３〜２５：１０〜１５：１３〜２０（モル％）
【請求項７】
前記食品が、錠剤、カプセル剤、液体、ゼリー、飴の何れかの形態である請求項６に記載の製造方法。
【請求項８】
血中脂質降下作用又は高分子アディポネクチン産生促進作用を発揮する量の前記白甘藷由来のアラビノガラクタンを含有せしめる請求項６又は７に記載の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血中脂質降下剤及び高分子アディポネクチン産生促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、腹部に脂肪の蓄積が認められる内臓脂肪型肥満が、脂質異常症、糖尿病、高血圧症、虚血性心疾患などのいわゆる生活習慣病の発症リスクを高めることが明らかとなったことから、「メタボリックシンドローム（内臓脂肪症候群）」の概念が提唱されている。厚生労働省が公表した「平成１９年国民健康・栄養調査結果」によると、４０〜７４歳でみた場合のメタボリックシンドロームが強く疑われる者及びその予備軍と考えられる者の合計が推定２,０１０万人であり、男性の２人に１人が、女性の５人に１人がメタボリックシンドロームに該当すると言われている。メタボリックシンドロームの診断基準は、腹囲が男性：８５ｃｍ、女性：９０ｃｍ以上であって、その他３つの項目（脂質：高トリグリセライド１５０ｍｇ／ｄＬ以上かつ／または低ＨＤＬコレステロール４０ｍｇ／ｄＬ未満、血圧：収縮期１３０ｍｍＨｇかつ／または拡張期８５ｍｍＨｇ以上、空腹時血糖値：１１０ｍｇ／ｄＬ以上）の内２つ以上の項目に該当することである（非特許文献１）。メタボリックシンドロームと診断されるヒトでは、動脈硬化が招かれやすく、その結果として狭心症、心筋梗塞、脳出血、脳梗塞といった命に関わる疾病をひきおこす危険性が非常に高い。事実、厚生労働省「平成２２年人口動態統計の年間推計」においても、３大死因は１９９０年以降代わることなく第１位が悪性新生物、第２位が心疾患、第３位が脳血管疾患である。メタボリックシンドロームが要因の一つとして考えられる心疾患（狭心症、心筋梗塞）と脳血管疾患による死亡者数は悪性新生物による死亡者数に匹敵する（平成２２年：悪性新生物・３５万２，０００人、心疾患と脳血管疾患・３１万２，０００人）。このことを考慮すると、事態は極めて深刻であり、メタボリックシンドローム該当者及びこれに該当する可能性の高い者を少なくすることは急務といえる。
【０００３】
生活習慣病の増加は食生活の変化が主な原因であるといわれており、これは内臓脂肪蓄積、つまり腹囲が必須の判断基準に位置付けられていることから考えても容易に推測される。この原因として、脂肪や食塩の摂取量が増加したことに加え、運動不足によるエネルギー消費の低下が主たる原因として考えられている。このため、肥満の是正とりわけ脂質代謝の改善が一つの予防策として重要であるといえる。
【０００４】
肥満や脂質代謝異常の評価指標として、血中におけるトリグリセライド（中性脂肪：以下「ＴＧ」と記される場合がある。）やアディポネクチンが用いられる。近年においては、とりわけアディポネクチンが注目されている。アディポネクチンは、脂肪細胞から分泌される特異的なサイトカインである。また、アディポネクチンは高血圧、脂質代謝及びインスリン抵抗性の改善など多岐にわたる作用を有することが見出されている（非特許文献２）。さらに、近年、アディポネクチンには３量体（低分子アディポネクチン）、６量体（中分子アディポネクチン）及び１２〜１８量体（高分子アディポネクチン）が存在することが明らかにされ（非特許文献３）、中でも高分子アディポネクチンは低・中分子アディポネクチンと比較して細胞膜表面への結合性が高く、糖の取り込みや脂肪酸燃焼に関与するＡＭＰキナーゼの活性化能に優れていることが明らかにされている（非特許文献３及び４）。このことから、評価指標として、総アディポネクチン濃度よりも、高分子アディポネクチン濃度や高分子アディポネクチン／総アディポネクチン比が重要視されている。従って、血中ＴＧ濃度の低下だけでなく血中の高分子アディポネクチン濃度や高分子アディポネクチン／総アディポネクチン比を高めることは、メタボリックシンドロームを抑制するだけでなく、それに関連する疾病の予防や改善につながることが期待される。
【０００５】
このような状況下、メタボリックシンドロームの予防や改善を目的として様々な素材が提供されている。例えば、血中ＴＧ降下作用が期待される素材としてグァバ葉（特許文献１）やキトサン（特許文献２）が、また、アディポネクチン産生促進作用が期待される素材として柿（特許文献３）、西洋梨（特許文献４）などが提供されている。さらにはイソフラボンやコエンザイムＱ１０などの抗酸化剤とグルコサミン類やコンドロイチン硫酸コンドロイチンを組み合わせてアディポネクチンの分泌を促進させる方法も提供されている（特許文献５）。
【０００６】
ところで、アラビノガラクタンプロテイン（以下、「ＡＧＰ」と記される場合がある。）は、糖鎖であるアラビノガラクタンと、ペプチド又はタンパク質とから構成される糖タンパクである。ＡＧＰは、植物の細胞壁や滲出物にその存在が確認され、植物界では普遍的に存在する成分として知られている。植物における生理機能として、細胞増殖や分化、組織伸張、細胞間相互作用など細胞壁のネットワークにおいて、ＡＧＰが重要な役割を果たす（非特許文献５）。
【０００７】
代表的なＡＧＰの一つに、アラビアガムが挙げられる。これはアカシア  セネガル（Ａｃａｃｉａ ｓｅｎｅｇａｌ）の滲出液より回収されるＡＧＰ（以下「ＧＡ」と記される場合がある。）である（非特許文献６）。ＧＡは、前述の生理機能の他に優れた乳化作用を有することから、現在では食品、薬品及び化粧品において広く応用されている。また、ＧＡは、コレステロール降下作用を有することも知られている（非特許文献６）。このコレステロール降下作用は、水溶性食物繊維におけるコレステロール降下作用と同様であって、コレステロールの吸収が抑制された結果、胆汁酸の腸内濃度が低下することによるものであると考えられている。つまり、腸内胆汁酸濃度が低下すると、コレステロールからの胆汁酸合成が増加し、肝臓でのコレステロール合成が上昇する。その結果、血中コレステロール濃度が低下すると考えられている。他には、腸内細菌の作用を受け産生される短鎖脂肪酸が肝臓でのコレステロール合成を抑制することも知られており、これもまた、コレステロール降下のメカニズムの一つとして考えられている（非特許文献７、８）。
【０００８】
さらに、他のＡＧＰとして、白甘藷に含まれるＡＧＰが知られている（非特許文献９）。このＡＧＰは、９０〜９５質量％の糖鎖と、５〜１０質量％のタンパク質とからなる約１０〜１５万Ｄａの分子量を有する糖タンパクであって、前記糖鎖は、主にラムノース、アラビノース、ガラクトース及びグルクロン酸で構成され、その構成比は０.６〜１.２：３.５〜４.５：６.５〜７.５：０.８〜１.６（モル比）であり、前記タンパク質は、１７種のアミノ酸から構成され、ヒドロキシプロリン、セリン及びアラニンが主要な構成アミノ酸であって、その構成比は、それぞれ１３〜２５：１０〜１５：１３〜２０（モル％）である。
【０００９】
なるほど、白甘藷の抽出物が血中ＴＧ濃度の降下作用を有するとの報告もあるが（非特許文献１１）、その活性本態は十分に検討されていない。また、白甘藷に含まれるアラビノガラクタン（以下、「ＡＧ」と略記される場合がある。）が血糖降下作用を示すこと（特許文献６）やＡＧが免疫賦活作用を示すこと（特許文献７）が報告されているが、ＡＧＰが血中ＴＧ濃度の降下作用やアディポネクチンの産生促進作用を示すとの報告はない。さらに、ＡＧＰが投与された糖尿病マウスにおける血中ＴＧ濃度変化や血中アディポネクチン濃度変化が報告されているが（非特許文献１０）、この報告では、白甘藷由来のＡＧＰは、糖尿病マウスにおいて、血中ＴＧ濃度や血中アディポネクチン濃度に影響は与えないことが示されている。
【００１０】
このように、これまでのところ、ＧＡや他のＡＧＰにおける血中ＴＧ降下作用や高分子アディポネクチン産生促進作用に関連する報告は知られていない。さらに、血中ＴＧ降下作用と高分子アディポネクチン産生促進作用の二つの作用を有する化合物は知られておらず、双方の作用を有する化合物を利用すれば、肥満などに代表されるメタボリックシンドロームに対して、より優れた予防効果や治療効果が期待される。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】特開２００８−００１６１５号公報
【特許文献２】特開２００７−３３２３３６号公報
【特許文献３】特開２０１０−０８３８３８号公報
【特許文献４】特開２０１０−０８８４０３号公報
【特許文献５】特開２０１１−０６３５４３号公報
【特許文献６】国際公開  ＷＯ２００５／１０５８５２号公報
【特許文献７】特開２００８−２０８１０２号公報
【非特許文献】
【００１２】
【非特許文献１】メタボリックシンドローム診断基準検討委員会，日本内科学会誌，９４，７９４−８０９（２００５）
【非特許文献２】Kadowaki T., Yamauchi T., Endcrine Rev, 26, 439-451(2005)
【非特許文献３】Aso Y. et al., Diabetes, 55, 1954-1960(2006)
【非特許文献４】Kubota N. et al., Cell Metab., 6, 55-68(2007)
【非特許文献５】Showalter A. M., CMLS,58, 1399-1417(2001)
【非特許文献６】Ali, B.H. et al., Food. Chem. Toxicol., 47, 1-8(2009)
【非特許文献７】Bridges, S. R. et al., Am J Clin Nutr., 56. 455-459(1992)
【非特許文献８】Furgal-Dierzuk, J Animal Food Sci., 13, 31-34(2004)
【非特許文献９】Ozaki Sei, et al., J. Agric. Food Chem. 58, 11593-11599(2010)
【非特許文献１０】Naoko Oki, et al., Biosci. Biotechnol. Biochem., 75, 596-698(2011)
【非特許文献１１】Shuichi Kusano et al., Biol. Pharm. Bull. 23(1), 23-26(2000)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
本願に係る発明は、白甘藷由来のＡＧＰが有する血中ＴＧ濃度の降下作用及び高分子アディポネクチンの産生促進作用を利用したものであって、新規な血中脂質降下剤及び新規な高分子アディポネクチンの産生促進剤を提供することを目的としている。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本願発明においては、アラビノガラクタンプロテイン及び／又はアラビノガラクタンプロテインを含む白甘藷の皮部及び／又は塊根部の水系抽出物が、血中脂質降下剤及び高分子アディポネクチン産生促進剤の有効成分として利用される。
【発明の効果】
【００１５】
本願発明に係るアラビノガラクタンの服用は、高い血中ＴＧ濃度を低下させ、また、血中における高分子アディポネクチン濃度を上昇させる。この結果、脂質代謝異常や肥満の改善が図られ、メタボリックシンドロームに起因する生活習慣病が未然に防止される。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】図１は、白甘藷由来のアラビノガラクタンプロテインの糖鎖構造を示した図である。Ａは主鎖の部分構造を、Ｂは主鎖の部分構造Ａに結合する側鎖の部分構造を、Ｃ、Ｄ、Ｅはそれぞれ側鎖Ｂに結合する部分構造を示す。
【図２】図２は、白甘藷由来のアラビノガラクタンプロテインがＺｕｃｋｅｒ Ｆａｔｔｙラットにおける血中トリグリセライド濃度に及ぼす影響を示す図である。図中のアスタリスクは、対照群と比較して有意差が認められたことを示す。
【図３】図３は、白甘藷由来のアラビノガラクタンプロテインがＺｕｃｋｅｒ Ｆａｔｔｙラットにおける血中遊離脂肪酸濃度に及ぼす影響を示す図である。図中のアスタリスクは、対照群と比較して有意差が認められたことを示す。
【図４】図４は、白甘藷由来のアラビノガラクタンプロテインがＫＫＡｙマウスにおける血中トリグリセライド濃度に及ぼす影響を示す図である。図中のアスタリスクは、対照群と比較して有意差が認められたことを示す。
【図５】図５は、白甘藷由来のアラビノガラクタンプロテインがＫＫＡｙマウスにおける血中総コレステロール濃度に及ぼす影響を示す図である。図中のアスタリスクは、対照群と比較して有意差が認められたことを示す。
【図６】図６は、白甘藷由来のアラビノガラクタンプロテインがＴＳＯＤマウスにおける血中トリグリセライド濃度に及ぼす影響を示す図である。図中のアスタリスクは、対照群と比較して有意差が認められたことを示す。
【図７】図７は、白甘藷由来のアラビノガラクタンプロテインがＴＳＯＤマウスにおける血中高分子アディポネクチン濃度に及ぼす影響を示す図である。図中のアスタリスクは、対照群と比較して有意差が認められたことを示す。
【図８】図８は、白甘藷由来のアラビノガラクタンプロテインがＴＳＯＤマウスにおける血中高分子アディポネクチン濃度比に及ぼす影響を示す図である。図中のアスタリスクは、対照群と比較して有意差が認められたことを示す。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本発明の血中脂質降下剤又は高分子アディポネクチン産生促進剤は、いずれも白甘藷由来のアラビノガラクタンプロテイン及び／又は当該アラビノガラクタンプロテインを含む白甘藷の水系抽出物を有効成分とする。
【００１８】
有効成分であるアラビノガラクタンプロテイン（ＡＧＰ）は、９０〜９５質量％の糖鎖と、５〜１０質量％のタンパク質とからなる約１０〜１５万Ｄａの分子量を有する糖タンパクである。その糖鎖は主としてラムノース、アラビノース、ガラクトース及びグルクロン酸で構成され、その構成比は０.６〜１.２：３.５〜４.５：６.５〜７.５：０.８〜１.６（モル比）である。ＡＧＰを構成するタンパク質は１７種のアミノ酸から構成され、ヒドロキシプロリン、セリン及びアラニンが主要な構成アミノ酸であって、その構成比は、１３〜２５：１０〜１５：１３〜２０（モル％）である。
【００１９】
当該ＡＧＰは、白甘藷、主としてその皮部及び／又は塊根部の抽出物から得られる。白甘藷は、その学名をIpomoea Batatas spといい、さつま芋（ヒルガオ科の草本Ipomoea Batatas Poiret）の一種である。本発明においては、白甘藷の塊茎、特にその皮から得られたものが好ましく用いられる。しかし、以下の構造を有するものであれば、白甘藷及びその近縁植物から得られたものに限られるものではない。
【００２０】
抽出溶媒は水系溶媒が好ましく用いられる。水系溶媒とは、水やメタノール、エタノール、イソプロパノール（直鎖、分岐鎖を問わない）、ブタノールなど水と混和可能な有機溶媒である。抽出には、これらの水系溶媒の１種又は２種以上が用いられる。抽出方法は特に限定されず、浸漬などの公知の方法が用いられる。また、抽出は加温して行うこともできるが、室温〜４０℃の温度で行うのが好ましい。４０℃を超えた加温を行うと不溶成分が抽出液に多く含まれることになるからである。
【００２１】
ＡＧＰは、抽出された溶媒から公知の分離手段によって分離精製される。分離手段として、液−液分配法や液体クロマトグラフィなどのカラムクロマトグラフィが例示される。白甘藷からの単離・精製方法として、例えば、非特許文献９に示された方法が例示される。さらに具体的に言うと、白甘藷の皮又は塊根部の抽出物を煮沸して生じた沈殿物を除去した後、水及び０.０１〜１Ｎ塩化ナトリウム溶液のイオン強度に相当するイオン強度を有する溶離液を用いた陰イオン交換クロマトグラフィ、好ましくは溶離液のイオン強度を次第に変化させるグラジエントクロマトグラフィによって分離精製される。得られたＡＧＰは、血中脂質降下剤又は高分子アディポネクチン産生促進剤の有効成分として用いられる。その他に、脂質異常症、動脈硬化、高血圧などのいわゆる生活習慣病やメタボリックシンドロームの予防や改善を目的とした健康食品（特定保健用食品を含む）の製造に用いられる。もっとも、効能を標榜するしないに関係なく、おやつや飲料などの各種食品の製造のための添加物として使用することもできる。
【００２２】
本発明において血中脂質降下作用とは、ヒトやその他哺乳動物における血中のＴＧ濃度を低下させることであって、ＡＧＰは正常値よりも高い血中ＴＧ濃度を低下させることに有効である。また、本発明において高分子アディポネクチン産生促進作用は、ヒトやその他哺乳動物における血中の高分子アディポネクチン量を増加させることであって、ＡＧＰは血中における総アディポネクチン量における高分子アディポネクチン量の割合を増加させることに有効である。ここで、総アディポネクチン量とは３量体（低分子アディポネクチン）、６量体（中分子アディポネクチン）、１２〜１８量体（高分子アディポネクチン）を含むアディポネクチンの総量を意味し、高分子アディポネクチン量とは１２〜１８量体のアディポネクチン量を意味する。
【００２３】
本発明に係る血中脂質降下剤及び高分子アディポネクチン産生促進剤は、精製されたＡＧＰであり、ＡＧＰの粗精製物であり、ＡＧＰを含む白甘藷の抽出物であり、これらの混合物でもあり得る。また、ＡＧＰ、ＡＧＰの粗精製物、ＡＧＰを含む白甘藷の抽出物の少なくとも何れかと薬理学的に不活性な賦形剤のような担体を含む組成物であり得る。当該組成物は、担体の他に乳化剤、甘味料、保存料、酸化防止剤、増粘安定剤、防腐剤等の添加剤を適宜含み得る。
【００２４】
組成物は医薬品であり、あるいは食品、好ましくはいわゆる健康食品であり得る。ここで、健康食品とは、血中脂質を低下させることを目的として摂取され、血中脂質の低下作用を発揮する食品ないし高分子アディポネクチンの産生を促進させることを目的として摂取され、高分子アディポネクチンの産生促進作用を発揮する食品を意味し、これらの作用効果の標榜が公的に認められた食品（いわゆる特定保健用食品）でもあり得る。
【００２５】
組成物の形態は、特に制約されず、錠剤であり、顆粒剤であり、散剤であり、チュアブル錠であり、カプセル剤であり、液剤であり、ゼリーであり、飴やガムであり得る。
【００２６】
当該組成物中におけるＡＧＰ含有量の下限は、０.００００１質量％であり、０.００００１質量％であり、０.０００１質量％であり、０.００１質量％であり、０.０１質量％であり、０.０５質量％であり、０.１質量％であり得る。また、その上限は、９９.９９９９質量％であり、９９.９９９質量％であり、９９.９９質量％であり、９９.９質量％であり、９９質量％であり、９０質量％であり、８０質量％であり、７０質量％であり、５０質量
％であり、３０質量％であり、２０質量％であり、１０質量％であり、５質量％であり得る。
【００２７】
ＡＧＰの摂取量は、血中ＴＧ値を正常と考えられる範囲に維持可能な量、あるいは血中高分子アディポネクチン濃度を上昇させ得る量であり、適用対象や症状によって適宜増減され得る。ＡＧＰの１日摂取量は、体重１ｋｇ当たり０.００１ｎｇ〜１０ｇ、具体的には、その下限は体重１ｋｇ当たり０.００１ｎｇであり、０.０１ｎｇであり、０．１ｎｇであり、１ｎｇであり、０.０１ｍｇであり、０.１ｍｇであり、０.５ｍｇであり、１ｍｇであり、５ｍｇであり、１０ｍｇであり、５０ｍｇであり、１００ｍｇであり、２００ｍｇであり得る。また、その上限は、体重１ｋｇ当たり１０ｇであり、５ｇであり、２ｇであり、１ｇであり、５００ｍｇであり得る。
【００２８】
以下、下記の実施例に基づいてさらに本発明を詳細に説明するが、下記の実施例は例示であって、本発明は下記の実施例に限定されないのは言うまでもない。
【実施例１】
【００２９】
〔ＡＧＰの分析〕
白甘藷の皮部破砕物又は皮部乾燥粉末１ｋｇに対し水１０Ｌを加え、４０℃に加温して１時間撹拌抽出した。得られた混合液は、遠心分離（８,０００ ｒｐｍ／３０分間）後、濾別し抽出液を得た。残渣に更に水を加えて同一の操作を繰り返した。
【００３０】
得られた抽出液（約９Ｌ）は、減圧下にて４Ｌまで濃縮された。その後、この濃縮液につき加熱処理（９０〜１００℃）を行った。具体的には、得られた濃縮液をビーカーに移し、湯浴中にて１５分程度撹拌した。生じた沈殿を遠心分離（８,０００ｒｐｍ／３０分間）により濾別除去した。得られた濾液につき、ダイアライシスメンブランｓｉｚｅ３６（分画分子量：１４,０００、和光純薬工業株式会社製）を用い、脱イオン水中にて４℃で３日間脱塩を行った。ここで得られた透析内液につき、陰イオン交換クロマトグラフィを用いて精製を行った。具体的には、表１に記載の分離条件下にて操作を行い、精製ＡＧＰを得た（１.２ｇ、収率０.１２％）。
【表１】
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【００３１】
得られた白甘藷由来ＡＧＰの分子量は、多角度光散乱検出器及びサイズ排除クロマトグラフィ（ＳＥＣ−ＭＡＬＬＳ：ＤＡＷＮ-Ｅ, Ｗｙａｔｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を用いた測定から、約１３万であった。ＡＧＰを構成する糖は、アセチル誘導体化後のＧＣ分析及びギ酸及びトリフルオロ酢酸による完全加水分解後のＨＰＡＥＣ−ＰＡＤ分析から、表２に示す４種の糖から構成されることが明らかとなった。
【表２】
2013043865.tif 000004
【００３２】
構成アミノ酸は、６Ｍ塩酸による酸加水分解後（１１０℃、２２時間）、アミノ酸分析計（Ｌ−８８００，日立製作所）により確認した。その結果、ＡＧＰを構成するタンパク質はハイドロキシプロリン、アラニン及びセリンを主とする計１７種のアミノ酸から構成されることが明らかとなった。アミノ酸分析結果を表３に示した。
【表３】
2013043865.tif 000005
【００３３】
更に、各糖残基の結合様式を明らかにするため、メチル化分析を行った。メチル化分析の分析条件は、表４に示した。
【表４】
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【００３４】
その結果、末端α−Ａｒａｆ、１,５結合−α−Ａｒａｆ、１,３結合−β−Ｇａｌｐ、１,６結合−β−Ｇａｌｐ及び１,３,６結合−β−Ｇａｌｐ残基を含む８種類の結合様式を有することが明らかとなった。
【００３５】
次いで、各糖残基の連結パターンを明らかにするため、各種ＮＭＲスペクトル（1Ｈ、13Ｃ−ＮＭＲ、1Ｈ−1Ｈ ＣＯＳＹ、ＨＯＨＡＨＡ、ＨＭＱＣ、ＨＭＢＣ）を用い解析した。その結果、白甘藷由来ＡＧＰの糖鎖部分は図１に示す部分構造から構成されることが明らかとなった。すなわち、当該糖鎖部分は、図１に示す部分構造Ａ：（１→３）−β−Ｄ−ガラクタンからなる主鎖に、次の側鎖がＯ−６位に結合した構造を有する。この側鎖は、部分構造Ｂ：（１→６）−β−Ｄ−ガラクタンからなり、Ｏ-３位に部分構造Ｃ及びＤ、Ｏ−６位に部分構造Ｅが結合した構造を有する。
【００３６】
〔Ｚｕｃｋｅｒ ｆａｔｔｙ ラットに対する脂質代謝改善作用〕
試験開始前に、明暗周期（７：００−１９：００照明ＯＮの１２時間周期）、温度２３〜２４℃、湿度６０〜７０％の条件下で、５週齢の雄性Ｚｕｃｋｅｒ ｆａｔｔｙラットを１週間予備飼育した。その後、ラットを２群（各群１０匹）に分け、それぞれ対照群（精製水）及び白甘藷由来ＡＧＰ投与群とした。白甘藷由来ＡＧＰの投与量は２０ｍｇ／ｋｇである。ゾンデを用いて、１日１回１２週間、ＡＧＰを経口投与した。試験期間中の飼料及び飲料水の摂取はともに自由とした。投与開始以降２週間ごとに、ＡＧＰ投与後１６時間絶食させたマウスの尾静脈から採血した。得られた血漿を用い、血中ＴＧ及び血中遊離脂肪酸（以下、ＮＥＦＡ）を測定し、脂質代謝改善作用を評価した。ともに、市販されるキットを用いて測定を行った（ＴＧ：トリグリセライドＥ−テストワコー、ＮＥＦＡ：ＮＥＦＡ  Ｃ−テストワコー、いずれも和光純薬工業株式会社製）。
【００３７】
血中ＴＧの測定結果及びＮＥＦＡの測定結果をそれぞれ図２、図３に示す。測定結果は、全て平均値±標準誤差で示され、図中のアスタリスクはＳｔｕｄｅｎｔ'ｓ ｔ−検定による対照群との比較結果を示し、一つのアスタリスク（*）は危険率ｐ<０.０５で有意差が認められたことを、２つのアスタリスク（**）は危険率ｐ<０.０１で有意差が認められたことを、３つのアスタリスク（***）は危険率ｐ<０.００１で有意差が認められたことを意味する。
【００３８】
図２に示されたように、白甘藷由来ＡＧＰ投与群の血中ＴＧ濃度は、常に対照群よりも低く推移し、投与２週後、６週後及び１２週後には対照群と比較して有意に低い値を示した（投与２週後及び６週後：ｐ<０.０５、投与１２週後：ｐ<０.０１）。図３に示されたように、白甘藷由来ＡＧＰ投与群のＮＥＦＡは、投与２週後に対照群と比較して有意に低い値を示し（ｐ<０.０５）、その後、投与８週後まで対照群よりも低く推移しながらも、ほぼ同様な挙動を示した。ＡＧＰの投与１０週後及び１２週後までは、有意に低い値を示した（投与１０週後：ｐ<０.０５、投与１２週後：ｐ<０.００１）。
【００３９】
〔ＫＫＡｙマウスに対する血中ＴＧ低下作用〕
試験開始前に、明暗周期（７：００−１９：００照明ＯＮの１２時間周期）、温度２３〜２４℃、湿度６０〜７０％の条件下で、５週齢の雄性ＫＫＡｙマウスを１週間予備飼育した。その後、ラットを２群（各群８匹）に分け、それぞれ対照群（精製水）及び白甘藷由来ＡＧＰ投与群とした。白甘藷由来ＡＧＰの投与量は２０ｍｇ／ｋｇである。ゾンデを用いて、１日１回、５週間、ＡＧＰを経口投与した。試験期間中の飼料及び飲料水の摂取はともに自由とした。投与開始以降２週間ごとに、１６時間絶食させたマウスの尾静脈から採血した。得られた血漿を用い、血中ＴＧ及び総コレステロール（以下、Ｔ−Ｃｈｏ）を測定した。ともに、市販されるキットを用いて測定を行った（ＴＧ:トリグリセライドＥ−テストワコー、Ｔ−Ｃｈｏ：コレステロールＥ−テストワコー、いずれも和光純薬工業株式会社製）。
【００４０】
血中ＴＧの測定結果及びＴ−Ｃｈｏの測定結果をそれぞれ図４、図５に示す。測定結果は、全て平均値±標準誤差で示され、図中のアスタリスクはＳｔｕｄｅｎｔ'ｓ ｔ−検定による対照群との比較結果を示し、一つのアスタリスク（*）は危険率ｐ<０.０５で有意差が認められたことを、２つのアスタリスク（**）は危険率ｐ<０.０１で有意差が認められたことを意味する。
【００４１】
図４に示されたように、白甘藷由来ＡＧＰ投与群の血中ＴＧ濃度は、投与４週後、５週後に対照群よりも有意に低い値を示した（投与４週後：ｐ<０.０５、投与５週後：ｐ＜０.０１）。また、図５に示されたように、白甘藷由来ＡＧＰ投与群の血中Ｔ−Ｃｈｏ濃度は、対照群よりも低く推移したが、有意な差は認められなかった。投与前後を比較した場合、対照群が投与前の１７６.５±１１.３ｍｇ／ｄＬから最終投与後の１８４.８±９.６ ｍｇ／ｄＬ（＋８.３ｍｇ／ｄＬ）と推移したのに対し、白甘藷由来ＡＧＰ投与群は投与前の１６１.９±１６.８ｍｇ／ｄＬから投与後の１５９.５±１３.８ ｍｇ／ｄＬ（−２.４ｍｇ／ｄＬ）と推移した。血中Ｔ−Ｃｈｏ濃度には有意な減少は観察されず、ＡＧＰはＣｈｏ代謝にはほとんど影響を及ぼさないと考えられる。
【００４２】
〔Ｔｓｕｍｕｒａ, Ｓｕｚｕｋｉ, Ｏｂｅｓｅ, Ｄｉａｂｅｔｅｓマウスに対する血中ＴＧ低下作用及び高分子アディポネクチン産生促進作用〕
試験開始前に、明暗周期（７：００−１９：００照明ＯＮの１２時間周期）、温度２３〜２４℃、湿度６０〜７０％の条件下で、５週齢の雄性Ｔｓｕｍｕｒａ, Ｓｕｚｕｋｉ, Ｏｂｅｓｅ, Ｄｉａｂｅｔｅｓマウス（以下、「ＴＯＳＤマウス」と言う）を１週間予備飼育した。その後、ＴＯＳＤマウスを３群（各群６匹）に分け、それぞれ対照群（精製水）及び白甘藷由来ＡＧＰ投与群（低用量群と高用量群）とした。低用量群の白甘藷由来ＡＧＰの投与量は２ｍｇ／ｋｇ、高低用量群の白甘藷由来ＡＧＰの投与量は２０ｍｇ／ｋｇである。ゾンデを用いて、１日１回、８週間ＡＧＰを経口投与した。試験期間中の飼料及び飲料水の摂取はともに自由とした。８週間の投与後に、１６時間絶食させたマウスの尾静脈から採血した。得られた血漿を用い、血中ＴＧ、総アディポネクチン（以下、「Ｔ−Ａｄｉｐｏ」と言う）及び高分子アディポネクチン（以下、「ＨＭＷ−Ａｄｉｐｏ」と言う）を測定した。これらは、市販されるキットを用いて測定を行った（ＴＧ：トリグリセライドＥ−テストワコー  ＜和光純薬工業株式会社製＞、Ｔ−Ａｄｉｐｏ：マウス／ラット  アディポネクチン  ＥＬＩＳＡキット  ＜大塚製薬株式会社製＞、ＨＭＷ−Ａｄｉｐｏ：マウス／ラット  高分子アディポネクチン  ＥＬＩＳＡキット  ＜株式会社シバヤギ製＞）。
【００４３】
血中ＴＧの測定結果及びＨＭＷ−Ａｄｉｐｏの測定結果をそれぞれ図６〜８に示す。測定結果は、全て平均値±標準誤差で示され、図中のアスタリスクはＤｕｎｎｅｔｔ'ｓ検定による対照群との比較結果を示し、一つのアスタリスク（*）は危険率ｐ<０.０５で有意差が認められたことを、２つのアスタリスク（**）は危険率ｐ<０.０１で有意差が認められたことを意味する。
【００４４】
図６に示されたように、低用量群の血中ＴＧ濃度は、対照群と比較して低下傾向（ｐ＜０.１）を示したが、有意な差はみられなかった。一方、高用量群の血中ＴＧ濃度は、投与８週後に対照群に比べて有意に低い値を示した（ｐ<０.０５）。図７に示されたように、低用量群及び高用量群はそれぞれ、投与８週後に対照群に比べてそれぞれ血中ＨＭＷ−Ａｄｉｐｏ濃度が有意に高い値を示した（低用量群：ｐ＜０.０５及び高用量群：ｐ＜０.０１）。一方、この時のＴ-Ａｄｉｐｏ濃度は、対照群の６.７０±０.５３μｇ／ｍＬに対し、低用量群のそれは６.８８±０.８０μｇ／ｍＬ、高用量群のそれは５.９８±０.６６μｇ／ｍＬであり、対照群と比較して有意な差は認められなかった。また、図８に示されたように血中の総アディポネクチン濃度に対するＨＭＷ−Ａｄｉｐｏ濃度の比（ＨＭＷ−Ａｄｉｐｏ濃度／Ｔ-Ａｄｉｐｏ濃度）は、低用量群のそれは０.１７±０.０１、高用量群のそれは０.２６±０.０３であり、低用量群及び高用量群共に、対照群と比較してそれぞれ有意に高い値を示していた（低用量群：ｐ＜０.０５及び高用量群：ｐ＜０.０１）。
【００４５】
Ｚｕｃｋｅｒ ｆａｔｔｙ ラットは、エネルギー消費や摂食抑制にかかわるレプチンの受容体が変異したモデルであり、過食とともにエネルギー代謝が抑制される結果、顕著な体重増加や耐糖能異常、高インスリン血症を発症する。また、ＫＫＡＹラットは、レプチンの受容体は維持されているが、レプチンシグナルの伝達系に障害があるラットである。ＫＫＡＹラットにおける症状やその機序は、Ｚｕｃｋｅｒ ｆａｔｔｙ ラットのそれと類似する。これらは生活習慣病の一つである糖尿病モデル動物であり、血中ＴＧ濃度が上昇したメタボリックシンドローム患者における血中ＴＧ降下作用を観察する上では好適である。ＴＳＯＤマウスは、内臓脂肪を蓄積しやすく、その結果、インスリン抵抗性が進行し、糖尿病を誘発する。このマウスは、ヒトにおけるメタボリックシンドロームに近い症状を示す。
【００４６】
このように、本発明に係るＡＧＰは、高血糖症状や肥満症状などヒトにおけるメタボリックシンドロームに近い症状を示すモデル動物において、血中のＴＧ濃度を低下させ、血中の高分子アディポネクチン濃度を高める作用を有することが示された。なお、データは示されていないが、本発明のＡＧＰにはリパーゼ阻害作用は認められず、当該ＡＧＰの血中ＴＧ濃度の低下作用は脂質の吸収抑制作用によるものとは考えられない。
【産業上の利用可能性】
【００４７】
本発明によると、白甘藷由来のＡＧＰを有効成分とする新規な血中脂質降下剤及び高分子量アディポネクチン産生促進剤が提供される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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