(57)【要約】【課題】パラゴムノキ（Ｈｅｖｅａ ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）の根白腐れ病を制御することができるトリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）属菌、これを用いた植物病原菌防除剤及び土壌改良剤、並びに、植物病原菌防除方法及び土壌改良方法を提供する。【解決手段】本発明のトリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）属菌は、パラゴムノキの根白腐れ病菌に対して拮抗性を有する。本発明の植物病原菌防除剤は、本発明のトリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）属菌の培養物、湿菌体、又は乾燥菌体を含有する。本発明の土壌改良剤は、本発明のトリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）属菌の培養物、湿菌体、又は乾燥菌体を含有する。本発明の植物病原菌防除方法は、本発明の植物病原菌防除剤を土壌に処理する工程を有する。本発明の土壌改良方法は、本発明の土壌改良剤を土壌に処理する工程を有する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
パラゴムノキ（Ｈｅｖｅａ ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）の根白腐れ病菌に対して拮抗性を有することを特徴とするトリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）属菌。
【請求項２】
生物農薬として用いられる請求項１に記載のトリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）属菌。
【請求項３】
前記根白腐れ病菌は、リジドポラス・ミクロポラス（Ｒｉｇｉｄｏｐｏｒｕｓ  ｍｉｃｒｏｐｏｒｕｓ）である請求項１又は２に記載のトリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）属菌。
【請求項４】
トリコデルマ・スピラレ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｓｐｉｒａｌｅ）又はトリコデルマ・エリナセウム（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｅｒｉｎａｃｅｕｍ）である請求項１〜３のいずれか一項に記載のトリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）属菌。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか一項に記載のトリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）属菌の培養物、湿菌体、又は乾燥菌体を含有することを特徴とする植物病原菌防除剤。
【請求項６】
請求項５に記載の植物病原菌防除剤を土壌に処理する工程を有することを特徴とする植物病原菌防除方法。
【請求項７】
請求項１〜４のいずれか一項に記載のトリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）属菌の培養物、湿菌体、又は乾燥菌体を含有することを特徴とする土壌改良剤。
【請求項８】
請求項７に記載の土壌改良剤を土壌に処理する工程を有することを特徴とする土壌改良方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、トリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）属菌、これを用いた植物病原菌防除剤及び土壌改良剤、並びに、植物病原菌防除方法及び土壌改良方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
天然ゴムは、主にパラゴムノキ（Ｈｅｖｅａ ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）の乳管細胞内で造られているラテックスという乳液を加工することにより製造される。天然ゴムは、ゴム製品の主原料として、様々な用途において幅広くかつ大量に用いられている。
このラテックス採取を目的として、パラゴムノキの生育に適した気候区において、パラゴムノキの植林が行われている。かかる気候区は、パラゴムノキに感染する病原菌の生育においても適しており、パラゴムノキに病原菌が感染することによりもたらされる根白腐れ病が、ゴム農園におけるパラゴムノキの栽培に深刻な被害を与えている。
【０００３】
根白腐れ病は、パラゴムノキの根に破壊的なダメージを与える病気である。この根白腐れ病の主な病原菌として、リジドポラス・ミクロポラス（Ｒｉｇｉｄｏｐｏｒｕｓ  ｍｉｃｒｏｐｏｒｕｓ）が知られている。
リジドポラス・ミクロポラス（Ｒｉｇｉｄｏｐｏｒｕｓ  ｍｉｃｒｏｐｏｒｕｓ）は、担子菌門に属し、感染したパラゴムノキの根に巨大な子実体を形成する。
【０００４】
従来、パラゴムノキにおける根白腐れ病は、感染した根の焼却による物理的除去方法、又は殺菌剤による化学的除去方法により制御されていた。
しかしながら、これらの方法では、根白腐れ病にかかったパラゴムノキを回復させるのに手遅れの場合が多々あり、確実に根白腐れ病を制御する方法が望まれていた。
【０００５】
これに対して、根白腐れ病の制御系の改良発展には、病原菌であるリジドポラス・ミクロポラス（Ｒｉｇｉｄｏｐｏｒｕｓ  ｍｉｃｒｏｐｏｒｕｓ）の遺伝的多様性を理解することが重要であり、例えば非特許文献１において、リジドポラス・ミクロポラス（Ｒｉｇｉｄｏｐｏｒｕｓ  ｍｉｃｒｏｐｏｒｕｓ）の遺伝的多様性と病原性の関係を解析する試みがなされている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｓａｉｔｈｏｎｇ  Ｋら、Ａｆｒ．  Ｊ．  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．  Ｒｅｓ．、第３巻、第６４１〜６４８頁、２００９年
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
しかしながら、非特許文献１に記載された解析結果からは、地理的分布と遺伝的多様性との間に相関が確認されたが、病原性と遺伝的多様性の間には明確な相関性が確認されず、かかる解析結果を根白腐れ病の制御方法に応用するには、更なる知見を必要としている。
【０００８】
本発明は、上記事情に鑑みてなされたものであって、パラゴムノキの根白腐れ病を制御することができるトリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）属菌、これを用いた植物病原菌防除剤及び土壌改良剤、並びに、植物病原菌防除方法及び土壌改良方法を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、上記課題を解決すべく鋭意研究した結果、パラゴムノキの根白腐れ病菌に対して拮抗性を有するトリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）属菌を見出し、本発明を完成させた。
【００１０】
すなわち、本発明は、下記の特徴を有するトリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）属菌、これを用いた植物病原菌防除剤及び土壌改良剤、並びに、植物病原菌防除方法を提供するものである。
（１）パラゴムノキ（Ｈｅｖｅａ ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）の根白腐れ病菌に対して拮抗性を有することを特徴とするトリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）属菌。
（２）生物農薬として用いられる（１）に記載のトリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）属菌。
（３）前記根白腐れ病菌は、リジドポラス・ミクロポラス（Ｒｉｇｉｄｏｐｏｒｕｓ  ｍｉｃｒｏｐｏｒｕｓ）である（１）または（２）に記載のトリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）属菌。
（４）トリコデルマ・スピラレ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｓｐｉｒａｌｅ）又はトリコデルマ・エリナセウム（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｅｒｉｎａｃｅｕｍ）である（１）〜（３）のいずれかに記載のトリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）属菌。
（５）（１）〜（４）のいずれかに記載のトリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）属菌の培養物、湿菌体、又は乾燥菌体を含有することを特徴とする植物病原菌防除剤。
（６）（５）に記載の植物病原菌防除剤を土壌に処理する工程を有することを特徴とする植物病原菌防除方法。
（７）（１）〜（４）のいずれかに記載のトリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）属菌の培養物、湿菌体、又は乾燥菌体を含有することを特徴とする土壌改良剤。
（８）（７）に記載の土壌改良剤を土壌に処理する工程を有することを特徴とする土壌改良方法。
【発明の効果】
【００１１】
本発明によれば、根白腐れ病菌によるパラゴムノキ（Ｈｅｖｅａ ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）の病害を抑制することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】対峙培養により測定された実施例及び比較例におけるリジドポラス・ミクロポラス（Ｒｉｇｉｄｏｐｏｒｕｓ  ｍｉｃｒｏｐｏｒｕｓ）の生育阻害率の結果である。
【図２】対峙培養１５日後の実施例及び比較例における培養シャーレの写真である。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
［トリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）属菌］
本発明のトリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）属菌は、パラゴムノキ（Ｈｅｖｅａ ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）の根白腐れ病菌に対して拮抗性を有する。
パラゴムノキは、ラテックス（主にポリイソプレン）を産生し、乳管細胞を有するトウダイグサ科の植物である。パラゴムノキは、工業用天然ゴム原料として汎用されている。
根白腐れ病菌の主な病原菌は、リジドポラス・ミクロポラス（Ｒｉｇｉｄｏｐｏｒｕｓ  ｍｉｃｒｏｐｏｒｕｓ）であるため、本発明のトリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）属菌は、リジドポラス・ミクロポラス（Ｒｉｇｉｄｏｐｏｒｕｓ  ｍｉｃｒｏｐｏｒｕｓ）に対して拮抗性を有することが好ましい。
【００１４】
根白腐れ病菌に対して拮抗性を有する菌をスクリーニングする方法として、対峙培養法により拮抗の有無を定性測定する方法が挙げられる。
後述する実施例において、対峙培養法によりリジドポラス・ミクロポラス（Ｒｉｇｉｄｏｐｏｒｕｓ  ｍｉｃｒｏｐｏｒｕｓ）に拮抗性を有する菌をスクリーニングしたところ、トリコデルマ・スピラレ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｓｐｉｒａｌｅ）やトリコデルマ・エリナセウム（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｅｒｉｎａｃｅｕｍ）といったトリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）属菌が同定された。
トリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）属菌は、植物病原菌に寄生する特徴があることが知られており（Ｒ．Ｗｅｉｎｄｉｎｇ、Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ、第２２巻、第８３７〜８４５頁、１９３２年）、土壌伝染性植物病原菌をはじめとする他の微生物に対して拮抗的な作用を示すことが報告されている。
【００１５】
従来、根白腐れ病菌の病害防除には、化学物質である農薬が用いられていたが、自然環境の保護に対する要求が高まっており、毒性の低い植物病原性防除剤が注目されている。従って、根白腐れ病に対して拮抗性を有する本発明のトリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）属菌は、生物農薬として用いられることが好ましい。
【００１６】
［植物病原菌防除剤］
本発明の植物病原菌防除剤は、本発明のトリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）属菌の培養物、湿菌体、又は乾燥菌体を含有する。
本発明のトリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）属菌の培養方法としては、ＰＤ（ポテト・デキストロース）ブロースに、該トリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）属菌を接種して、約２８℃の温度でジャーファーメンターを用いて、好気的状態で、２日〜４日程度培養する方法が挙げられる。係る培養方法によってトリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）属菌の数を増殖させることにより、本発明の植物病原菌防除剤は、根白腐れ病菌に対してより効果的な防除作用を示す。
【００１７】
本発明の植物病原菌防除剤が含有する培養物とは、増殖させた本発明のトリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）属菌を含む液体培地そのままのものである。かかる培養物には、培養液中に含まれる培地成分や培養によって生成した二次代謝産物が含まれている。これらがパラゴムノキに与える影響を防止するため、本発明の植物病原菌防除剤は、水で１００〜１０００倍に希釈して用いられることが好ましい。
【００１８】
本発明の植物病原菌防除剤が含有する湿菌体とは、培養液を遠心分離により集菌したものを、適宜、純水等で洗浄したものである。湿菌体は、培養物と異なり、培地成分等を含んでいない。しかし、本発明の植物病原菌防除剤は、パラゴムノキに均一に散布する観点から、やはり水で１００〜１０００倍に希釈して用いられることが好ましい。
【００１９】
本発明の植物病原菌防除剤が含有する乾燥菌体とは、培養液を遠心分離により集菌したものを、乾燥固形物にしたものである。かかる乾燥固形物は、５〜３０質量％の水分含量になるまで半乾燥されたものが好ましい。乾燥処理は、本発明のトリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）属菌の生育に悪影響を与えない温度下で行われることが好ましい。
【００２０】
また、本発明の植物病原菌防除剤は、本発明のトリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）属菌の培養物、湿菌体、又は乾燥菌体を滅菌した固体培地に接種して一定期間培養したものであってもよい。
【００２１】
また、本発明の植物病原菌防除剤は、上述した固体培地に培養した固体培養物を吸着剤に吸着させたものであってもよい。吸着剤としては、バーミキュライト、ゼオライト等の吸着性鉱物材料；木炭、活性炭素等の炭類；化学合成されたポリマー等を挙げることができる。
【００２２】
また、本発明の植物病原菌防除剤は、殺虫剤、殺ダニ剤、除草剤、他の殺菌剤等を含んでいてもよい。
【００２３】
［土壌改良剤］
本発明の土壌改良剤は、本発明のトリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）属菌の培養物、湿菌体、又は乾燥菌体を含有するものであれば、上述した本発明の植物病原菌防除剤に堆肥やその他土壌改良成分を添加したものであってもよい。
堆肥としては、例えば、培地と発酵菌からなるものが挙げられ、培地としては、米糠、フスマ、酒粕、焼酎粕大豆粕等の単独物又は混合物が挙げられる。
本発明の土壌改良剤が、堆肥を含有する場合には、根白腐れ病菌に対して拮抗性を付与することに加えて、土壌に肥料効果を付与することができる。
また、その他土壌改良成分として、泥炭、腐植酸資材、ポリビニルアルコール系資材等の土壌改良資材；植物生長調節剤等が挙げられる。
本発明の土壌改良剤は、本発明の植物病原菌防除剤を、発酵の完了した堆肥に加えたものであっても、堆肥の原料に、本発明の植物病原菌防除剤を加えて、堆肥の発酵と同時に本発明のトリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）属菌の増殖を行わせたものであってもよい。
【００２４】
［植物病原菌防除方法］
本発明の植物病原菌防除方法は、本発明の植物病原菌防除剤を土壌に処理する工程を有する。本発明の植物病原菌防除方法としては、本発明のトリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）属菌の培養物又は湿菌体を水で１００〜１０００倍に希釈したものを病害土壌に散布する方法；本発明のトリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）属菌の培養物又は湿菌体を固体培地に接種した固体培養物を病害土壌に施す方法；上記固体培養物を吸着材に吸着させてなる防除材を病害土壌に施す方法；本発明のトリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）属菌の乾燥菌体を病害土壌に散布する方法等が挙げられる。
本発明の植物病原菌防除剤の施用方法としては、地上液体散布、地上固形散布、空中液剤散布、空中固形散布等が挙げられる。
【００２５】
［土壌改良方法］
本発明の土壌改良方法は、本発明の土壌改良剤を土壌に処理する工程を有する。かかる工程を有することにより、根白腐れ病菌の病害を抑制できることに加えて、病害土壌に肥料効果を付与することができる。
【実施例】
【００２６】
次に実施例を示して本発明をさらに詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
【００２７】
［対峙培養法によるリジドポラス・ミクロポラス（Ｒｉｇｉｄｏｐｏｒｕｓ  ｍｉｃｒｏｐｏｒｕｓ）に対する拮抗性試験］
インドネシアにおけるブリヂストン社のゴム農園から採取された土壌を用いて、以下の拮抗性試験を行った。尚、当該ゴム農園において、土壌採取は、それぞれ場所（区画１〜４）を変えて行った。
〈実施例１〉
ＰＤＡ培地（ポテト・デキストロース・アガー培地）に、リジドポラス・ミクロポラス、又はＳａｍｐｌｅ１（区画１由来の土壌）を、２８℃で５日間、それぞれ培養した。
【００２８】
オートクレーブ滅菌したＰＤＡ培地を分注した直径９ｃｍのシャーレの外周から１ｃｍ内側の位置に、培養したリジドポラス・ミクロポラスを滅菌した直径５ｍｍのコルクボーラーで培地ごと打ち抜いて接種した。
次いで、リジドポラス・ミクロポラスを接種した位置と対称の位置に、培養したＳａｍｐｌｅ１を滅菌した直径５ｍｍのコルクボーラーで培地ごと打ち抜いて接種し、２８℃で５日間、１０日間、１５日対峙培養した。リジドポラス・ミクロポラス及びＳａｍｐｌｅ１の生育総面積中のＳａｍｐｌｅ１の生育面積の割合を、生育阻止率として算出した。５日間、１０日間、１５日の生育阻止率の結果を図１に示す。１５日間培養後の培養シャーレの写真を図２（ａ）に示す。
尚、生育面積は、透明なシートに５ｍｍ間隔のマス目をひき、これをシャーレ上にかぶせてマス目を数えることにより計算した。
【００２９】
〈実施例２〉
Ｓａｍｐｌｅ１に代えて、Ｓａｍｐｌｅ２（区画２由来の土壌）を用いた以外は、実施例１と同様の方法で対峙培養した。リジドポラス・ミクロポラス及びＳａｍｐｌｅ２の生育総面積中のＳａｍｐｌｅ２の生育面積の割合を、生育阻止率として算出した。５日間、１０日間、１５日の生育阻止率の結果を図１に示す。１５日間培養後の培養シャーレの写真を図２（ｂ）に示す。
【００３０】
〈比較例１〉
Ｓａｍｐｌｅ１に代えて、Ｓａｍｐｌｅ３（区画３由来の土壌）を用いた以外は、実施例１と同様の方法で対峙培養した。リジドポラス・ミクロポラス及びＳａｍｐｌｅ３の生育総面積中のＳａｍｐｌｅ３の生育面積の割合を、生育阻止率として算出した。５日間、１０日間、１５日の生育阻止率の結果を図１に示す。１５日間培養後の培養シャーレの写真を図２（ｃ）に示す。
【００３１】
〈比較例２〉
Ｓａｍｐｌｅ１に代えて、Ｓａｍｐｌｅ４（区画４由来の土壌）を用いた以外は、実施例１と同様の方法で対峙培養した。リジドポラス・ミクロポラス及びＳａｍｐｌｅ４の生育総面積中のＳａｍｐｌｅ４の生育面積の割合を、生育阻止率として算出した。５日間、１０日間、１５日の生育阻止率の結果を図１に示す。１５日間培養後の培養シャーレの写真を図２（ｄ）に示す。
【００３２】
図１に示されるように、Ｓａｍｐｌｅ１及び２由来の土壌から培養された菌（実施例１及び２）は、対峙培養５日後から８５％以上の生育阻止率を示すことが確認された。一方、Ｓａｍｐｌｅ３及び４由来の土壌から培養された菌（比較例１及び２）は、対峙培養の期間を経るにつれて生育阻止率が低下し、対峙培養１５日後には、生育阻止率が６５％を下回ることが確認された。
【００３３】
Ｓａｍｐｌｅ１〜４から単離された菌株の分生胞子及び分生胞子茎の形態的特性を顕微鏡で観察した。さらに、それぞれの菌株からＰｒｅｐＭａｎ  Ｕｌｔｒａ  Ｒｅａｇｅｎｔ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）を用いてＤＮＡ抽出を行い、抽出ＤＮＡを鋳型として、リボソーマルＤＮＡのＩｎｔｅｒｎａｌ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｂｅｄ  Ｓｐａｃｅｒ保存領域中の非特異的プライマー配列（ＩＴＳ１: ５’−ＴＣＣＧＴＡＧＧＴＧＡＡＣＣＴＧＣＧＧ−３’、ＩＴＳ４：５’−ＴＣＣＴＣＣＧＣＴＴＡＴＴＧＡＴＡＴＧＣ−３’）を用いてＰＣＲでＤＮＡ断片を得た。得られたＤＮＡ断片について、ＡＢＩ  ｐｒｉｓｍ  ３１３０  ｇｅｎｅｔｉｃ  ａｎａｌｙｚｅｒ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）を用いてシークエンシングし、ＤＮＡ配列を解析した。Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）のＢｌａｓｔ検索で登録データとの相同性を比較した結果、Ｓａｍｐｌｅ１は、トリコデルマ・スピラレ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｓｐｉｒａｌｅ）と確認され、Ｓａｍｐｌｅ２は、トリコデルマ・エリナセウム（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｅｒｉｎａｃｅｕｍ）と確認され、Ｓａｍｐｌｅ３〜４は、トリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）属菌でないことが確認された。各Ｓａｍｐｌｅの同定結果を表１に示す。
尚、表１のＩＮＨＩＮＢＩＴＩＯＮ欄は、図１と同様、対峙培養１５日後の生育阻害率をします。＋−は５０％〜６０％の阻害率を示し、＋は６０％〜７０％の阻害率を示し、＋＋は７０％〜８０％の阻害率を示し、＋＋＋は９０％〜１００％の阻害率を示す。
【００３４】
【表１】
2013255428.tif 000002
【００３５】
以上の結果から、本発明によれば、根白腐れ病菌によるパラゴムノキの病害を抑制することができることが明らかである。
【図１】
2013255428.tif 000003
【図２】
2013255428.tif 000004