(57)【要約】【課題】有効成分として抗老化作用を発揮する化合物を水溶化させた状態で含有し、高い保存性及び高い皮膚浸透性を示す皮膚外用剤を提供すること。【解決手段】タンパク質粒子及びプテロスチルベンを含有する皮膚外用剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
タンパク質粒子及びプテロスチルベンを含有する皮膚外用剤。
【請求項２】
抗老化剤として使用する、請求項１に記載の皮膚外用剤。
【請求項３】
タンパク質粒子の平均粒子サイズが１０〜１０００ｎｍである、請求項１又は２に記載の皮膚外用剤。
【請求項４】
タンパク質の質量に対して０.１〜１００質量％のプテロスチルベンを含有する、請求項１〜３の何れか１項に記載の皮膚外用剤。
【請求項５】
タンパク質がコラーゲン、ゼラチン、酸処理ゼラチン、アルブミン、オバルブミン、カゼイン、トランスフェリン、グロブリン、フィブロイン、フィブリン、ラミニン、フィブロネクチン、又はビトロネクチンからなる群より選ばれる少なくとも一種である、請求項１〜４の何れか１項に記載の皮膚外用剤。
【請求項６】
タンパク質がカゼインである、請求項１〜５の何れか１項に記載の皮膚外用剤。
【請求項７】
プテロスチルベンを内包するカゼイン粒子を含む、請求項１〜６の何れか１項に記載の皮膚外用剤。
【請求項８】
更に、カロテノイド系化合物を含有する請求項１〜７の何れか１項に記載の皮膚外用剤。
【請求項９】
抗しわ剤として使用する、請求項１〜８の何れか１項に記載の皮膚外用剤。
【請求項１０】
ＮＦ−κＢ抑制剤、又はＭＭＰ−２抑制剤として使用する、請求項１〜９の何れか１項に記載の皮膚外用剤。
【請求項１１】
タンパク質粒子及びプテロスチルベンを有効成分として含有する抗老化剤。
【請求項１２】
タンパク質粒子及びプテロスチルベンを有効成分として含有する抗しわ剤。
【請求項１３】
タンパク質粒子及びプテロスチルベンを有効成分として含有するＮＦ−κＢ抑制剤。
【請求項１４】
タンパク質粒子及びプテロスチルベンを有効成分として含有するＭＭＰ−２抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、プテロスチルベンを有効成分として含有する皮膚外用剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚の老化の原因は多様であり、紫外線、乾燥、外的因子、加齢などが挙げられる。近年、皮膚の老化を誘導する因子として、マトリックスメタロプロテアーゼの関与が指摘されている。マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰとも称する）はタンパク質分解酵素であり、細胞外マトリックスの構成タンパク質の分解及び再構築に関与している。ＭＭＰの１種であるマトリックスメタロプロテアーゼ−２（ＭＭＰ−２）（ｍａｔｒｉｘ  ｍｅｔａｌｌｏｐｅｐｔｉｄａｓｅ  ２  ，ｇｅｌａｔｉｎａｓｅ  Ａ，  ７２ｋＤａ  ｇｅｌａｔｉｎａｓｅ，  ７２ｋＤａ  ｔｙｐｅ  ＩＶ  ｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅ）は、細胞外マトリックスのゼラチン、皮膚基底膜の主成分である４型コラーゲンを含む各種コラーゲン、ラミニン、フィブロネクチン、プロテオグリカン及びエラスチンなどの多様な基質を切断し、皮膚の老化に関与することが知られている。従って、ＭＭＰ−２活性の阻害は、皮膚の老化を防止・改善するために重要であると考えられる。
【０００３】
通常ＭＭＰ２はＰｒｏ体で産生されるが、コラーゲン等の分解活性を持たない。しかし、ＵＶ刺激などによって産生されるＴＮＦがＮＦ−κＢ経路を活性化することで、Ｐｒｏ体を活性化体に変化させることが示唆されている（非特許文献１）。また、ＮＦ−κＢ自体の活性を押さえることが皮膚の状態を若返らせることができることが実験的に証明されており（非特許文献２）、これはＭＭＰ−２の活性化を含む老化による変化をＮＦ−κＢ抑制により改善していることが示唆されている。
【０００４】
一方、紫外線を照射することにより一重項酸素が発生することが知られている。一重項酸素は、生体分子と反応することで組織の損傷等の悪影響を及ぼし、その結果として皮膚の老化を促進するといわれている。
【０００５】
そのため、生体内で発生した一重項酸素を除去する物質の探索が行われてきた。一重項酸素を除去する物質として、カロテノイド系の化合物が有用とされている。しかし、完全に除去しきれない一重項酸素は、生体内でフリーラジカルに変換され、更に生体物質を破壊し、皮膚老化にも大きな影響を及ぼす。このフリーラジカルを除去するにはポリフェノール系の化合物が有用であるといわれている。
【０００６】
ポリフェノール系の化合物であるヒドロキシスチルベンは、抗酸化物質として知られている。例えば、特許文献１には、レスベラトロール（５−パラヒドロキシスチリルレゾルシノール）及びカゼインを含む複合体が記載されており、これを医薬品、化粧品、食品又は飼料用サプリメントなどに使用することが記載されている。さらに、特許文献２には、レスベラトロールを有効成分として含有する、ＭＭＰ−２阻害剤が記載されている。特許文献２には、カゼインやゼラチンなどのタンパク質粒子に内包させたレスベラトロールをＭＭＰ−２阻害剤として使用することが記載されている。
しかし、レスベラトロール自体は、保存性が低く分解により着色するという問題や、水溶性が低いという問題、さらに皮膚浸透性が低いという問題などがあった。
【０００７】
一方、プテロスチルベン［４−［（Ｅ）‐２‐（３，５−ジメトキシフェニル）ビニル］フェノール、４−［（Ｅ）‐３，５−ジメトキシスチリル］フェノール、（Ｅ）‐３，５−ジメトキ‐４’−ヒドロキシスチルベン、又は（Ｅ）−３’，５’‐ジメトキシスチルベン‐４‐オールとも称する］は、レスベラトロールと同様に抗酸化活性を有することが知られている。また、非特許文献３には、プテロスチルベンが、ＮＦ−κＢの活性化を阻害し、これによりマクロファージにおける炎症性のｉＮＯＳ及びＣＯＸ−２遺伝子発現が抑制されることが記載されている。
しかし、プテロスチルベンが、抗老化を目的として皮膚外用剤に配合された例はない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特表２０１０−５００３０３号公報
【特許文献２】特開２０１１−４６６６０号公報
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉ．  ２００１  Ｊａｎ；１１４（Ｐｔ  １）：１３１−１３９
【非特許文献２】Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．  ２００７  Ｄｅｃ  １５；２１（２４）：３２４４−５７．  Ｅｐｕｂ  ２００７  Ｎｏｖ  ３０
【非特許文献３】Ｍｉｎ−Ｈｓｉｕｎｇ  Ｐａｎ，  ｅｔ  ａｌ，  Ｊ．  Ａｇｒｉｃ．  Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ  ２００８．  ５６．  ７５０２−７５０９
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明の課題は、有効成分として抗老化作用を発揮する化合物を水溶化させた状態で含有し、高い保存性及び高い皮膚浸透性を示す皮膚外用剤を提供することを解決すべき課題とした。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者らは上記の課題を解決すべく鋭意研究を行った結果、プテロスチルベン及びタンパク質粒子を混在させることによって、プテロスチルベンを水溶化できると同時に、得られたプテロスチルベン及びタンパク質粒子を含有する溶液が、高い保存性及び高い皮膚浸透性を示すことを見出し、本発明を完成した。
【００１２】
本発明によれば、タンパク質粒子及びプテロスチルベンを含有する皮膚外用剤が提供される。
好ましくは、タンパク質粒子の平均粒子サイズは１０〜１０００ｎｍである。
好ましくは、本発明の皮膚外用剤は、タンパク質の質量に対して０.１〜１００質量％のプテロスチルベンを含有する。
好ましくは、タンパク質はコラーゲン、ゼラチン、酸処理ゼラチン、アルブミン、オバルブミン、カゼイン、トランスフェリン、グロブリン、フィブロイン、フィブリン、ラミニン、フィブロネクチン、又はビトロネクチンからなる群より選ばれる少なくとも一種である。
【００１３】
好ましくは、本発明の皮膚外用剤は、抗老化剤である。
好ましくは、本発明の皮膚外用剤は、抗しわ剤である。
好ましくは、本発明の皮膚外用剤は、ＮＦ−κＢ抑制剤、又はＭＭＰ−２抑制剤である。
【００１４】
更に本発明によれば、タンパク質粒子及びプテロスチルベンを含有する抗しわ剤が提供される。
更に本発明によれば、タンパク質粒子及びプテロスチルベンを含有するＮＦ−κＢ抑制剤が提供される。
更に本発明によれば、タンパク質粒子及びプテロスチルベンを含有するＭＭＰ−２抑制剤が提供される。
【００１５】
更に本発明によれば、タンパク質粒子及びプテロスチルベンを含有する皮膚外用剤を対象者に投与することを含む、老化を抑制する方法が提供される。
更に本発明によれば、タンパク質粒子及びプテロスチルベンを含有する皮膚外用剤を対象者に投与することを含む、しわを抑制する方法が提供される。
更に本発明によれば、タンパク質粒子及びプテロスチルベンを含有する皮膚外用剤を対象者に投与することを含む、ＮＦ−κＢを抑制する方法が提供される。
更に本発明によれば、タンパク質粒子及びプテロスチルベンを含有する皮膚外用剤を対象者に投与することを含む、ＭＭＰ−２を抑制する方法が提供される。
【００１６】
更に本発明によれば、皮膚外用剤の製造のための、タンパク質粒子及びプテロスチルベンの使用が提供される。
更に本発明によれば、抗老化剤の製造のための、タンパク質粒子及びプテロスチルベンの使用が提供される。
更に本発明によれば、抗しわ剤の製造のための、タンパク質粒子及びプテロスチルベンの使用が提供される。
更に本発明によれば、ＮＦ−κＢ抑制剤の製造のための、タンパク質粒子及びプテロスチルベンの使用が提供される。
更に本発明によれば、ＭＭＰ−２抑制剤の製造のための、タンパク質粒子に及びプテロスチルベンの使用が提供される。
【発明の効果】
【００１７】
本発明の皮膚外用剤においては、プテロスチルベン及びタンパク質粒子を含むことにより、プテロスチルベンを水溶化することができる。本発明の皮膚外用剤は、長期間保存しても着色せず、熱やｐＨに対して高い安定性を示す。また、本発明の皮膚外用剤は、高い皮膚浸透性を示し、皮膚外用剤として有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】レスベラトロール内包カゼイン水溶液及びプテロスチルベン内包カゼイン水溶液について皮膚浸透性を評価した結果を示す図である。
【図２】レスベラトロール内包カゼイン水溶液及びプテロスチルベン内包カゼイン水溶液についての着色試験の結果を示す図である。
【図３】レスベラトロール内包カゼイン水溶液の経時安定性を調べた結果を示す図である。
【図４】プテロスチルベン内包カゼイン水溶液の経時安定性を調べた結果を示す図である。
【図５】レスベラトロールとプテロスチルベンを用いたＮＦ−κＢ阻害試験の結果を示す図である。
【図６】レスベラトロールとプテロスチルベンを用いたＭＭＰ−２阻害試験の結果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
以下、本発明の実施の形態についてさらに具体的に説明する。
本発明の皮膚外用剤は、抗老化剤として使用することができる。
さらに、本発明の抗老化剤は、抗しわ剤、ＮＦ−κＢ抑制剤又はＭＭＰ−２抑制剤として使用することができる。以下、本明細書において「抗老化剤」と称する場合には、本発明の抗しわ剤、ＮＦ−κＢ抑制剤又はＭＭＰ−２抑制剤をも包含する意味で使用するものとする。
本発明の皮膚外用剤は、タンパク質粒子に内包されているプテロスチルベンを有効成分として含有する。プテロスチルベンは、下記の構造を有する。
【００２０】
【化１】
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【００２１】
プテロスチルベンは、Ｓａｂｉｎｓａ社から商業的に得ることができ、和光純薬工業株式会社、東京化成工業株式会社又はＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社から粗製形で得ることができる。
【００２２】
本発明で用いるプテロスチルベンは、ＮＦ−κＢ及びＭＭＰ−２を抑制することができ、これにより抗老化作用を発揮することができる。
【００２３】
本発明の皮膚外用剤は、プテロスチルベン及びタンパク質粒子を含有する。
本発明の抗老化剤は、０．０１〜５０質量％のタンパク質粒子を含有することが好ましく、０．１〜１０質量％のタンパク質粒子を含有することがさらに好ましい。プテロスチルベンは、タンパク質の質量に対して、０.１〜１００質量％が好ましく、０.１〜５０質量％がさらに好ましい。
【００２４】
本発明において、プテロスチルベンは、タンパク質粒子の形成時に添加してもよいし、タンパク質粒子の作成後に添加してもよい。
【００２５】
本発明で用いるタンパク質粒子の平均粒子サイズは、通常は１〜１０００ｎｍであり、好ましくは１０〜１０００ｎｍであり、より好ましくは１０〜５００ｎｍであり、より好ましくは１０〜２５０ｎｍであり、よりさらに好ましくは１０〜１００ｎｍであり、特に好ましくは２０〜４０ｎｍである。
【００２６】
本発明で用いるタンパク質粒子の平均粒径は、市販の粒度分布計等で測定することが出来る。
粒度分布測定法としては、光学顕微鏡法、共焦点レーザー顕微鏡法、電子顕微鏡法、原子間力顕微鏡法、静的光散乱法、レーザー回折法、動的光散乱法、遠心沈降法、電気パルス計測法、クロマトグラフィー法、超音波減衰法等が知られており、それぞれの原理に対応した装置が市販されている。
【００２７】
本発明のタンパク質粒子の粒径測定では、粒径範囲及び測定の容易さから、動的光散乱法適応することが好ましい。動的光散乱法を用いた市販の測定装置としては、ナノトラックＵＰＡ（日機装（株））、動的光散乱式粒径分布測定装置ＬＢ−５５０（（株）堀場製作所）、濃厚系粒径アナライザーＦＰＡＲ−１０００（大塚電子（株））等が挙げられる。
【００２８】
本発明で用いるタンパク質の種類は特に限定されないが、リジン残基およびグルタミン残基を有するタンパクが好ましく、分子量１万から１００万のタンパク質を用いることが好ましい。
タンパク質として具体例を列挙するが、本発明においてはこれらの化合物に限定されるものではない。コラーゲン、ゼラチン、酸処理ゼラチン、アルブミン、オバルブミン、カゼイン、トランスフェリン、グロブリン、フィブロイン、フィブリン、ラミニン、フィブロネクチン、又はビトロネクチンからなる群より選ばれる少なくとも一種を使用することができる。
また、タンパク質の由来は特に限定するものではなく、牛、豚、魚、植物および遺伝子組み換え体のいずれも用いることができる。
【００２９】
遺伝子組み換えゼラチンとしては、例えばＥＰ１０１４１７６Ａ２号、米国特許６９９２１７２号に記載のものを用いることができるがこれらに限定されるものではない。
好ましくは、カゼイン、酸処理ゼラチン、コラーゲン、又はアルブミンであり、最も好ましくはカゼイン、又は酸処理ゼラチンである。
本発明でカゼインを用いる場合、カゼインの由来は特に限定されず、乳由来であっても、豆由来であってもよく、α−カゼイン、β−カゼイン、γ−カゼイン、κ−カゼインおよびそれらの混合物を使用することができる。カゼインは、単独で、または２種以上を組み合わせて用いることができる。
【００３０】
本発明に用いられるタンパク質は、単独で使用してもよいし、２種以上を組み合わせて用いることもできる。
【００３１】
本発明では、タンパク質粒子の形成中及び／又は形成後にタンパク質を架橋処理することができる。上記した架橋処理は、酵素を用いることができる。酵素としては、タンパクの架橋作用が知られているものであれば特に制限されず、その中で好ましいものはトランスグルタミナーゼである。
【００３２】
トランスグルタミナーゼは、哺乳類由来のものであっても、微生物由来のものであってもよく、遺伝子組み換え体を用いることができる。具体的には、味の素（株）製アクティバシリーズ、試薬として発売されている哺乳類由来のトランスグルタミナーゼ、例えば、オリエンタル酵母工業（株）製、Ｕｐｓｔａｔｅ  ＵＳＡ  Ｉｎｃ．製、Ｂｉｏｄｅｓｉｇｎ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ製などのモルモット肝臓由来トランスグルタミナーゼ、ヤギ由来トランスグルタミナーゼ、ウサギ由来トランスグルタミナーゼ、ヒト由来リコンビナントトランスグルタミナーゼなどが挙げられる。
【００３３】
本発明において架橋処理のために用いられる酵素の量は、タンパク質の種類に応じて適宜設定することが出来るが、標準的には、タンパク質の質量に対して、０.１〜１００質量％程度を添加することができ、好ましくは、１〜５０質量％を添加することができる。
【００３４】
酵素による架橋反応の時間は、タンパク質の種類、タンパク質粒子サイズに応じて適宜設定することができるが、標準的には、１〜７２時間であればよく、好ましくは、２〜２４時間であればよい。
【００３５】
酵素による架橋反応の温度は、タンパク質の種類、タンパク質粒子サイズに応じて適宜設定することができるが、標準的には、０〜８０℃であればよく、好ましくは、２５〜６０℃であればよい。
【００３６】
本発明に用いられる酵素は単独で、または２種以上を組み合わせて用いることができる。
【００３７】
本発明で用いるタンパク質粒子は、特許文献特開平６−７９１６８号公報、又はＣ．Ｃｏｅｓｔｅｒ著、ジャーナル・ミクロカプスレーション、２０００年、１７巻、p.１８７−１９３に記載の方法に準じて作製することができるが、架橋方法としてグルタルアルデヒドの代わりに酵素を用いることが好ましい。
【００３８】
また、本発明においては、酵素架橋処理を有機溶媒中で行うことが好ましい。ここで用いる有機溶媒は一般的な皮膚外用剤に添加される溶媒、例えばエタノール、イソプロパノール、ブチレングリコール、グリセロールなどの水溶性有機溶媒が好ましい。
さらに、本発明においては、架橋処理後に有機溶媒を留去し、水分散することが好ましい。有機溶媒を留去前に水を加えてもよく、留去後に水を加えても良い。
【００３９】
本発明の皮膚外用剤には、脂質（リン脂質など）、アニオン性多糖、カチオン性多糖、アニオン性タンパク質、カチオンタンパク質、又はシクロデキストリンから選択される１種以上の成分を添加することもできる。脂質（リン脂質など）、アニオン性多糖、カチオン性多糖、アニオン性タンパク質、カチオンタンパク質、及びシクロデキストリンの添加量は特に限定されないが、一般的にはタンパク質の質量に対して０.１〜１００質量％の量で添加することができる。本発明の皮膚外用剤においては、上記成分とタンパク質の比を変えることよって、徐放速度を調整することができる。
【００４０】
本発明に用いることができるリン脂質として具体例を列挙するが、本発明においてはこれらの化合物に限定されるものではない。ホスファチジルコリン（レシチン）、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルグリセロール、ジホスファチジルグリセロール、スフィンゴミエリンなどが挙げられる。
【００４１】
本発明に用いることができるアニオン性多糖とはカルボキシル基、硫酸基又はリン酸基等の酸性極性基を有する多糖類である。以下に具体例を列挙するが、本発明においてはこれらの化合物に限定されるものではない。コンドロイチン硫酸、デキストラン硫酸、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルデキストラン、アルギン酸、ペクチン、カラギーナン、フコイダン、アガロペクチン、ポルフィラン、カラヤガム、ジェランガム、キサンタンガム、ヒアルロン酸類等が挙げられる。
【００４２】
本発明に用いることができるカチオン性多糖とは、アミノ基等の塩基性極性基を有する多糖類である。以下に具体例を列挙するが、本発明においてはこれらの化合物に限定されるものではない。キチン、キトサンなどのグルコサミンやガラクトサミンを構成単糖として含むものなどが挙げられる。
【００４３】
本発明に用いることができるアニオン性タンパク質とは等電点が生理的ｐＨよりも塩基性側にあるタンパク質およびリポタンパク質である。具体例を列挙するが、本発明においてはこれらの化合物に限定されるものではない。ポリグルタミン酸、ポリアスパラギン酸、リゾチーム、チトクロムＣ、リボヌクレアーゼ、トリプシノーゲン、キモトリプシノーゲン、α−キモトリプシンなどが挙げられる。
【００４４】
本発明に用いられるカチオンタンパク質とは等電点が生理的ｐＨよりも酸性側にあるタンパク質およびリポタンパク質である。具体例を列挙するが、本発明においてはこれらの化合物に限定されるものではない。ポリリジン、ポリアルギニン、ヒストン、プロタミン、オバルブミンなどが挙げられる。
【００４５】
本発明のタンパク質粒子としては、カゼインを用いることが好ましく、プテロスチルベンをカゼイン粒子に内包させる形態が好ましい。プテロスチルベンを内包したカゼイン粒子は、生体内への吸収性が高い。
【００４６】
プテロスチルベンを内包するタンパク質粒子は、例えば、特開２００８−１７９５５１号等に記載の公知の方法を用いて作製することができる。
具体的には、カゼインを塩基性水性媒体に混合し、酸性水性媒体中に注入する方法と、カゼインを塩基性水性媒体に混合し、攪拌しながら、ｐＨを下降させる方法が挙げられる。
【００４７】
本発明の一例としては、下記の工程（ａ）から（ｃ）によって作製されるカゼイン粒子を用いることができる。
（ａ）カゼインをpH８以上１１未満の塩基性水性媒体に混合する工程；
（ｂ）工程（ａ）で得た溶液にプテロスチルベンを添加する工程；及び
（ｃ）工程（ｂ）で得た溶液をｐＨ３．５〜７．５の酸性水性媒体に注入する工程；
【００４８】
本発明の別の例としては、下記の工程（ａ）から（ｃ）によって作製されるカゼイン粒子を用いることができる。
（ａ）カゼインをpH８以上１１未満の塩基性水性媒体に混合する工程；
（ｂ）工程（ａ）で得た溶液にプテロスチルベンを添加する工程；及び
（ｃ）工程（ｂ）で得た溶液のｐＨを等電点からｐＨ１以上離れたｐＨまで下降させる工程；
【００４９】
上記において、プテロスチルベンは水を含まない系で分散してもよく、分散後に水性媒体を添加しても分散できる。即ち、上記において、工程（ｂ）を工程（ａ）の前に行ってもよい。
【００５０】
本発明においては、所望のサイズのカゼイン粒子を作製できる。また、疎水性の活性成分とカゼイン疎水性部分の相互作用を利用して、カゼイン粒子内に活性成分を内包できる。さらに、これらの粒子は水溶液中で安定に存在することが見出された。
【００５１】
カゼインを塩基性水性媒体に混合し、酸性水性媒体中に注入する方法としては、シリンジを用いて行うことが簡便で好ましいが、注入速度、溶解性、温度、撹拌状態を満足する方法であれば特に限定しない。一般的には、注入速度は、１〜１００ｍＬ／ｍｉｎで注入することができる。
【００５２】
カロテノイド系化合物とは、天然に存在する黄色から赤のテルペノイド類の色素で、植物類、藻類、及びバクテリアに見つけることができる。カロテノイド系化合物としては、炭化水素類（カロチン類）及びそれらの酸化アルコール誘導体類（キサントフィル類）が挙げられる。それらとして、アクチニオエリスロール、アスタキサンチン、ビキシン、カンタキサンチン、カプサンチン、カプソルビン、β−８´−アポ−カロテナール（アポカロテナール）、β−１２´−アポ´−カロテナール、α−カロチン、β−カロチン、”カロチン”（α−及びβ−カロチン類の混合物）、γ−カロチン、β−クリプトキサンチン、ルテイン、リコピン、ビオレリトリン、ゼアキサンチン、及びそれらのうちヒドロキシル又はカルボキシルを含有するもののエステル類が挙げられる。カロテノイド系化合物の多くは、シス及びトランス異性体の形で天然に存在するが、合成物はしばしばラセミ混合物である。カロチン類は一般に植物素材から抽出する。
【００５３】
本発明では、カロテノイド系の化合物として、アスタキサンチン及びリコピンの少なくとも１つを含有することが好ましく、アスタキサンチン及びリコピンの両方を含むことがより好ましい。含有量として、タンパク質の質量に対して０.１〜１００質量％のカロテノイド系化合物を含有することが好ましい。アスタキサンチン及びリコピンの両方を含む場合、その比率は、アスタキサンチン１００質量部に対して、リコピン０．１〜１０００質量部を含有することが好ましい。アスタキサンチン及びリコピンを特定の量で含有することにより、アスタキサンチン及びリコピンの分解、及び、リコピン結晶の系中における析出が効果的に抑制される。その結果、本発明の組成物は優れた保存安定性を有するものとなる。
【００５４】
リコピン（場合によって、「リコペン（lycopene）」と称される場合がある）は、化学式Ｃ４０Ｈ５６（分子量５３６．８７）のカロテノイドであり、カロテノイドの一種カロテン類に属する４７４ｎｍ（アセトン）に吸収極大を示す赤色色素である。
リコピンには、分子中央の共役二重結合のｃｉｓ−、ｔｒａｎｓ−の異性体も存在し、例えば、全ｔｒａｎｓ−、９−ｃｉｓ体と１３−ｃｉｓ体などが挙げられるが、本発明においては、これらのいずれであってもよい。
【００５５】
リコピンはそれを含有する天然物から分離・抽出されたリコピン含有オイルやリコピン含有ペーストとして、本発明の組成物に含まれていてもよい。
リコピンは、天然においてはトマト、柿、スイカ、ピンクグレープフルーツに含まれており、上記のリコピン含有オイルはこれらの天然物から分離・抽出されたものであってもよい。製品での形態は、オイルタイプ、乳化液タイプ、ペーストタイプ、粉末タイプの４種類が知られている。
また、本発明で用いられるリコピンは、前記抽出物、また、更にこの抽出物を必要に応じて適宜精製したものでもよく、また、合成品であってもよい。
【００５６】
本発明におけるリコピンの特に好ましい形態としては、トマトパルプから抽出された脂溶性抽出物である。該トマトパルプから抽出された脂溶性抽出物は、組成物中における安定性、品質、生産性の点から特に好ましい。
ここで、トマトパルプから抽出された脂溶性抽出物とは、トマトを粉砕して得られた粉砕物を遠視分離して得られたパルプ状の固形物から、油性溶剤を用いて抽出された抽出物を意味する。
脂溶性抽出物であるリコピンとしては、リコピン含有オイル又はペーストとして広く市販されているトマト抽出物を用いることができ、例えば、サンブライト（株）より販売されているＬｙｃ−Ｏ−Ｍａｔｏ  １５％、Ｌｙｃ−Ｏ−Ｍａｔｏ  ６％、協和発酵工業（株）より販売されているリコピン１８等が挙げられる。
【００５７】
塩基性水性媒体の温度は、適宜設定することができるが、標準的には、０〜８０℃にすることができ、好ましくは、２５〜７０℃にすることができる。酸性水性媒体の温度は、適宜設定することができるが、標準的には、０〜８０℃にすることができ、好ましくは、２５〜６０℃にすることができる。
攪拌速度は、適宜設定することができるが、標準的には、１００〜３０００ｒｐｍにすることができ、好ましくは、２００〜２０００ｒｐｍである。
【００５８】
カゼインを塩基性水性媒体に混合し、攪拌しながら、ｐＨを下降させる方法としては、酸を滴下するのが簡便で好ましいが、溶解性、温度、撹拌状態を満足する方法であれば特に限定しない。
塩基性水性媒体の温度は、適宜設定することができるが、標準的には、０〜８０℃にすることができ、好ましくは、２５〜７０℃にすることができる。攪拌速度は、適宜設定することができるが、標準的には、１００〜３０００ｒｐｍにすることができ、好ましくは、２００〜２０００ｒｐｍにすることができる。
【００５９】
カゼイン粒子を作製するために用いられる水性媒体には、有機酸または有機塩基の水溶液、無機酸または無機塩基の水溶液、又は緩衝液を挙げることができる。具体的には、クエン酸、アスコルビン酸、グルコン酸、カルボン酸、酒石酸、コハク酸、酢酸、フタル酸、トリフルオロ酢酸、モルホリノエタンスルホン酸、２−〔４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニル〕エタンスルホン酸のような有機酸；トリス（ヒドロキシメチル）、アミノメタン、アンモニアのような有機塩基；塩酸、過塩素酸、炭酸のような無機酸；燐酸ナトリウム、燐酸カリウム、水酸化カルシウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化マグネシウムのような無機塩基を用いた水溶液が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００６０】
上述した水性媒体の濃度は、約１０ｍＭから約１Ｍが好ましい。より好ましくは、約２０ｍＭから約２００ｍＭである。
塩基性水性媒体のｐＨは、８以上が好ましく、８〜１２が好ましい。より好ましくはｐＨ９〜１１である。ｐＨが高すぎると加水分解の懸念や取り扱い上の危険性があるため、上述の範囲が好ましい。
【００６１】
本発明において、カゼインをｐＨ８以上の塩基性水性媒体に混合させる温度は、０〜８０℃が好ましく、１０〜６０℃が好ましい。より好ましくは、２０〜４０℃である。
本発明に用いる酸性水性媒体のｐＨは、急激なｐＨ変化を防ぐ点からｐＨ３．５〜７．５であることが好ましく、ｐＨ５〜６であることがより好ましい。
【００６２】
本発明の皮膚外用剤には、更にカロテノイド系の化合物を含むことができる。カロテノイド系化合物及びプテロスチルベンを総合的に併用し、補う構成をとることで皮膚中の抗酸化ネットワークを強化し、本発明の効果を助長することが期待される。
【００６３】
本発明の皮膚外用剤は、皮膚などの老化を抑制することができる。本発明の皮膚外用剤は、皮膚に適用した場合の安全性・浸透性に優れているため、皮膚外用剤として有用である。また、本発明の皮膚外用剤は、抗しわ剤、ＮＦ−κＢ抑制剤又はＭＭＰ−２抑制剤として使用することができる。例えば、本発明の皮膚外用剤は、化粧料に配合して用いることもできる。化粧料には、本発明の皮膚外用剤のみを配合してもよいし、その他の有効成分を組み合わせて配合してもよい。
【００６４】
本発明の皮膚外用剤はさらに、添加物を含むことができる。添加物としては特に限定することはないが、抗酸化成分、活性酸素除去剤、抗炎症剤、アンチエイジング剤、コラーゲン合成促進剤、抗しわ剤、ビタミン剤、ミネラル、アミノ酸類、抗菌剤、紫外線吸収剤、保湿剤、柔軟剤、経皮吸収促進剤、無痛化剤、防腐剤、酸化防止剤、色素剤、増粘剤、香料、又はｐＨ調整剤から選択される１種以上のものを使用することができる。
【００６５】
本発明の抗老化剤の剤型は特に限定されないが、例えば、液剤、湿布剤、塗布剤、ゲル剤、軟膏剤、クリーム剤、エアゾール剤、ローション剤、エッセンス、粉剤、泡剤、化粧水、ボディーソープ、石鹸、粧料などを挙げることができる。軟膏剤、クリーム剤などの剤型で使用する場合には、必要に応じて、懸濁剤又は安定剤などを添加してもよい。
【００６６】
本発明の抗老化剤の投与方法としては、経皮・経粘膜投与が挙げられる。
【００６７】
本発明の皮膚外用剤の投与量は、使用者の体重、疾患の状態などに応じて適宜設定することができるが、一般的には、１回の投与につき、有効成分であるプテロスチルベンの投与量として１μｇ〜５０ｍｇ／ｃｍ２程度を投与することができ、好ましくは２．５μｇ〜１０ｍｇ／ｃｍ２程度を投与することができる。
【００６８】
以下の実施例により本発明を更に具体的に説明するが、本発明の範囲はこれらの実施例に限定されるものではない。
【実施例】
【００６９】
実施例１：プテロスチルベンを内包するカゼイン粒子の調製
プテロスチルベンを、１，３−ブチレングリコールで５％(w/w)となるように溶解し、プテロスチルベン溶液を得た。
同様に、レスベラトロールを１，３−ブチレングリコールで５％(w/w)となるように溶解し、レスベラトロール溶液を得た。
カゼインを、同量の１，３−ブチレングリコール中に分散し、ｐＨ１１に調整した１％（ｗ／ｗ）  約５０ｍＭクエン酸Ｎａを添加して、カゼイン分散液を得た。このカゼインナノ分散液のｐＨは７．２であった。
【００７０】
上記で得られたカゼイン分散液に、プテロスチルベン溶液又はレスベラトロール溶液を１／１０量（質量比）添加して、マグネティックスターラーでよく攪拌・分散した。得られた溶液はカゼインを０．９質量％、プテロスチルベン又はレスベラトロールを約０．０３質量％含む溶液であった。その後、０．２２μｍ程度のフィルターに供し、より透明で均一なプテロスチルベン又はレスベラトロールを内包するカゼイン粒子含有分散物を得た。得られたカゼイン粒子含有分散物の作製直後の外観は、均一透明であり、平均粒子径は２７．５ｎｍであった。なお、レスベラトロールの０．０３質量％含有する水溶液では、作製直後で既に白濁（７００ｎｍにおける吸光度＜Ｏ．Ｄ．７００ｎｍ＞が０．１以上）であった。
【００７１】
なおカゼイン粒子の平均粒径は、濃厚系粒径アナライザーＦＰＡＲ−１０００（大塚電子（株））を用いて測定した値であり、具体的には、以下のよう計測した値を採用する。即ち、粒径の測定方法は、試料に含まれるカゼインの濃度が０．１質量％になるように純水で希釈を行い、石英セルを用いて測定を行う。粒径は、分散媒屈折率として１．３３３（純水）、分散媒の粘度として純水の粘度を設定した時の体積平均径として求めた。作製直後のプテロスチルベンを内包するカゼイン粒子は、安定に水溶化できた。
【００７２】
実施例２：内包率試験
実施例１で作成したレスベラトロール（Ｒｅｓ）およびプテロスチルベン（ＰＴＥＲ）内包カゼイン溶液を1ｇ量りとり超遠心分離（ＨＩＴＡＣＨＩ  １００,０００Ｇ、６０分間）した。内包済みのカゼインを沈殿させた上澄みをＨＰＬＣで定量することにより水溶液中の未結合分を定量した。処方適用分との比率を計算し、漏出率（％）を表１に示す。結合率は、１００−漏出率（％）で計算した。
ＨＰＬＣ条件
カラム：Ｃ１８  ５μｍ  ４．６ｍｍ×２５０ｍｍ
流量：１ｍｌ／ｍｉｎ
カラム温度：４０℃
検出波長：３１０ｎｍ
展開液：アセトニトリル／水＝２０／８０（容量比。酢酸０．１容量（体積）％、トリエタノールアミン０．１容量（体積）％を含む）
【００７３】
【表１】
2013075851.tif 000003
【００７４】
実施例３：浸透速度解析（皮膚浸透性の評価）
皮膚浸透性の評価は、皮膚透過試験によって行った。
対象の皮膚はヘアレスラット（８週齢）を購入して使用した（石川実験動物、埼玉）。２７ｍｍ径のバイオプシーでヘアレスラット腹部を円形に打ち抜いたものをフランツセル（Ｈａｎｓｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）に固定した。ＰＢＳで１時間還流した後、レセプター液を、７ｍＬの３０ｖ／ｖ％エタノール配合ＰＢＳに置換した。実施例１で作成したプテロスチルベン内包カゼイン粒子及びレスベラトロール内包カゼイン粒子０．９ｍＬに１０倍濃度のＰＢＳ（ｐＨ ７．２−７．４）０．１ｍｌを添加した製剤１ｍＬをそれぞれドナー液に添加した。製剤はＰＢＳでドナーとレセプター液の塩強度を調整したものを用いた。
【００７５】
レセプター液を攪拌しながら、ウォータージャケットを用いて３２℃に保ち、経時的にレセプター液を回収した。このレセプター液を下記条件で高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析し透過したプテロスチルベンおよびレスベラトロールを定量した。
【００７６】
試験時においてネガティブコントロールとしてＰＢＳ液、対照として一般的な可溶化剤であるＰＥＧ４０硬化ひまし油（ＨＣＯ−４０；ニッコーケミカル）でプテロスチルベンおよびレスベラトロールを可溶化した溶液（以下、ＨＣＯ−４０可溶化物と称する）を用いた。ＨＣＯ−４０可溶化物は約０．０３質量％のプテロスチルベンおよびレスベラトロールを含むように調整した。
ＨＰＬＣ条件
カラム：Ｃ１８  ５μｍ  ４．６ｍｍ×２５０ｍｍ
流量：１ｍｌ／ｍｉｎ
カラム温度：４０℃
検出波長：３１０ｎｍ
展開液：アセトニトリル／水＝２０／８０（容量比。酢酸０．１容量（体積）％、トリエタノールアミン０．１容量（体積）％を含む）
【００７７】
それぞれの製剤における皮膚透過率は、以下の皮膚透過計数（Ｐ値）によって行った。Ｐ値の計算式は以下のとおりである。なお計算式において、Ｄ＝拡散係数、Ｋ＝分配係数、Ｃ＝薬物濃度、Ｌ＝膜厚、Ｊ＝フラックス、Ｐ＝透過係数、をそれぞれ示す。レセプター液中のプテロスチルベンおよびレスベラトロールの経時による浸透結果を、図１に示す。
【００７８】
【化２】
2013075851.tif 000004
【００７９】
図１に示されるように、プテロスチルベン内包カゼインによる水系皮膚外用剤は比較例HCO-40可溶化物に比べ著しく皮膚浸透速度が上昇した。また、同じくカゼインに内包したレスベラトロール内包カゼインと比べても、極めて高い皮膚浸透性を有することが分かる。
【００８０】
実施例４：着色試験（加速経時保存→着色を吸光度で比較）
実施例１で作成したレスベラトロール（ＲＥＳ）及びプテロスチルベン（ＰＴＥＲ）内包カゼイン液のｐＨ を、皮膚外用剤として一般的に好まれるｐＨ であるｐＨ６、ｐＨ７又はｐＨ８に６Ｎ塩酸および８Ｎ水酸化ナトリウムを用いることで変化させて５０℃３ヶ月で着色具合を観察した。着色具合は吸収波長４００ｎｍ吸光度変化を経時的に測定した。結果を図２に示す。
【００８１】
皮膚外用剤として好まれるｐＨ６−８の範囲内ではレスベラトロール内包カゼイン水溶液はｐＨが高くなるほどに着色が進み、商品として不適切であった。着色が肉眼でもわかるＯＤ４００ｎｍ＝０．１以上への到達時間を近似曲線から計算した値を表２に示す。表２の結果からもプテロスチルベン内包カゼインは皮膚外用剤として好ましいことがわかる。
【００８２】
【表２】
2013075851.tif 000005
【００８３】
実施例５：安定性試験（ＨＰＬＣ）
実施例１で作成したレスベラトロール内包カゼイン溶液およびプテロスチルベン内包カゼイン溶液を各温度の恒温槽で３６日間経時した。この時の分解を上記条件で高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析し定量した。結果を図５及び図６に示す。
図３及び図４に示す結果の通り、レスベラトロール内包カゼイン溶液と比較して、プテロスチルベン内包カゼイン溶液は高い安定性を示した。
【００８４】
実施例６：ＮＦ−κＢ核移行試験
ＮＦ−κＢは常に産生され、すぐに分解される。しかし、紫外線などの刺激がきた場合、速やかに核に移行し機能することが知られている。本実施例の核移行試験はウエスタンブロット（以下ＷＢ）により解析した。
線維芽細胞をＴ２５（培養面積２５ｃｍ２）に１００×１０４の細胞を播種して、一日ＦＢＳ無しに順可した。その後、最終濃度１０ｕＭになるようにレスベラトロールおよびプテロスチルベンをＤＭＳＯで溶解して培養液に添加して３時間前培養した。ＰＢＳで２回洗浄した。その後５０ｎｇ／ｍｌのＴＮＦで４５分間刺激したのちトリプシンを作用させて細胞を回収した。トリプシンを遠心で除き、その後ＰＢＳで２回洗浄した。そのサンプルを核タンパク質抽出試薬であるＮｕｃＢｕｓｔｅｒ（Ｎｏｖａｇｅｎ）で分画し、核分画と細胞質分画に分けた。方法は製品の説明書に従った。分画したタンパク質をＢｒａｄｆｏｒｄ法（ＤＯＪＩＮＤＯ）を用いて定量して、各４μｇ分づつ当量のＳＤＳ  Ｂｕｆｆｅｒ（ＢＩＯ−ＲＡＤ）で熱処理し、変性させた後ＳＤＳ−ＰＡＧＥ（ＡＴＴＯ）により分画し、ＰＶＤＦメンブレン（ＡＴＴＯ）に３０分間転写した。
【００８５】
転写後、３０分間、５％スキムミルク（和光純薬）でブロッキングした後、０．１％Ｔｗｅｅｎ配合ＰＢＳ（以下ＴＰＢＳ）で１０分間３回洗浄した。すぐに、ＴＰＢＳにＰｒｉｍａｒｙ  ａｎｔｉｂｏｄｙ：  ＮＦ−  κ  Ｂ  ｐ６５  Ｒａｂｂｉｔ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  （ＥＰＩＴＯＭＩＣＳ）を１／５０００希釈して、抗体反応を室温１時間実施した。その後、ＴＰＢＳで１０分間３回洗浄した。さらに、ＴＰＢＳにＳｅｃｏｎｄａｒｙ  ａｎｔｉｂｏｄｙ：Ａｎｔｉ−Ｒａｂｂｉｔ  ＩｇＧ  （ｗｈｏｌｅ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ）-Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｐｒｏｄｕｃｅｄ  ｉｎ  ｇｏａｔ（ｓｉｇｍａ  ）を１／５０００倍希釈した液中で３０分間室温で反応させた。ＴＰＢＳで１０分間３回洗浄したのち、化学発光検出試薬であるＥＬＣ  Ｐｌｕｓ（ＧＥヘルスケア）中で５分間反応させて、ＬＡＳ−３０００（富士フイルム）で１分間露光して検出した。なお、画像解析にはＭｕｌｔｉ  Ｇａｇｅ３．０（富士フイルム）を利用して定量化した。結果を図５に示す。
【００８６】
図５に示す結果から分かるように、レスベラトロールおよびプテロスチルベンはそれぞれＴＮＦ刺激におけるＮＦ−κＢの各蓄積量を減らすことができた。さらに、この効果はレスベラトロールに比べてプテロスチルベンの方が高い。
【００８７】
実施例７：ＭＭＰ２活性化阻害試験
本実施例のＭＭＰ２活性化試験はウエスタンブロット（以下ＷＢ）により解析した。
培養後の線維芽細胞を２．６×１０６の濃度に懸濁した液１．９５ｍｌに対してＣｅｌｌｍａｔｒｉｘ（新田ゼラチン）を２．４ｍｌ，再構成緩衝液（新田ゼラチン）を０．３ｍｌ、１０×ＭＥＭ（新田ゼラチン）を０．３ｍｌの割合で低温条件下で攪拌した。これを４８穴プレート（コーニング）に１．６ｍｌずつ分注した。３７℃で３０分間静置することでコラーゲンラティスモデルを作成した。ゲルが固まった後、一日ＦＢＳ無しに培地にて馴化した後、５ｎｇ／ｍｌのＴＮＦで４５分間刺激した後、最終濃度１０μＭになるようにレスベラトロールおよびプテロスチルベンをＤＭＳＯで溶解して培養液に添加して６８時間培養した。６８時間後、上澄みを回収した。回収した上澄み体積に対して１／１０当量のゼラチンアフィニティービーズ（ＧＥヘルスケア）を供して、１時間攪拌した。その後、１２０００回転、１０分間でビーズを沈殿させて、上澄みを破棄して、さらに洗浄液５００ｕｌを加えて再度攪拌した。この操作を３回繰り返し、セルマトリックス成分を除去、活性化型ＭＭＰ−２を濃縮した。最後に１×ＳＤＳ  Ｂｕｆｆｅｒ（ＢＩＯ−Ｒａｄ）を上澄みの１／１０当量加えて熱変性し、遠心して上澄みをサンプルとした。分画したサンプルをＢｒａｄｆｏｒｄ法（ＤＯＪＩＮＤＯ）を用いて定量して、各０．１μｇ分ずつＳＤＳ−ＰＡＧＥ（ＡＴＴＯ）により９０分間分画し、ＰＶＤＦメンブレン（ＡＴＴＯ）に３０分間転写した。
【００８８】
転写後、３０分間、５％スキムミルク（和光純薬）でブロッキングした後、０．１％Ｔｗｅｅｎ配合ＰＢＳ（以下ＴＰＢＳ）で１０分間３回洗浄した。すぐに、ＴＰＢＳにＰｒｉｍａｒｙ  ａｎｔｉｂｏｄｙ：抗ＭＭＰ−２抗体（アブカム社）を１／５０００希釈して、抗体反応を室温１時間実施した。その後、ＴＰＢＳで１０分間３回洗浄した。さらに、ＴＰＢＳにＳｅｃｏｎｄａｒｙ  ａｎｔｉｂｏｄｙ：  Ａｎｔｉ−Ｒａｂｂｉｔ  ＩｇＧ  （ｗｈｏｌｅ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ）-Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｐｒｏｄｕｃｅｄ  ｉｎ  ｇｏａｔ（ｓｉｇｍａ  ）を１／５０００倍希釈した液中で３０分間室温で反応させた。ＴＰＢＳで１０分間３回洗浄したのち、化学発光検出試薬であるＥＬＣ  Ｐｌｕｓ（ＧＥヘルスケア）中で５分間反応させて、ＬＡＳ−３０００（富士フイルム）で１分間露光して検出した。なお、画像解析にはＭｕｌｔｉ  Ｇａｇｅ３．０（富士フイルム）を利用して定量化した。結果を図６に示す。
【００８９】
図６に示す結果から分かるように、レスベラトロールおよびプテロスチルベンはそれぞれＴＮＦ刺激におけるＭＭＰ―２の活性化量を減らすことができた。
【００９０】
【表３】
2013075851.tif 000006
【００９１】
実施例１４：抗シワ乳液
（成分）                                                （％）
プテロスチルベン内包カゼイン                            １．３
スクワラン                                              ８．０
ホホバ油                                                ７．０
パラアミノ安息香酸グリセリル                            １．０
リン酸アスコルビルマグネシウム                          ０．５
セチルアルコール                                        １．５
グリセリンモノステアレート                              ２．０
ポリオキシエチレンセチルエーテル                        ３．０
ポリオキシエチレンソオルビタンモノオレート              ２．０
１，３−ブチレングリコール                              １．０
グリセリン                                              ２．０
１，２‐ペンタンジオール                                ３．０
コラーゲン                                              １．０
クエン酸ナトリウム                                      １．０
香料                                                    適量
精製水                                                  残量
【００９２】
実施例１５：抗シワクリーム
（成分）                                                  （％）
プテロスチルベン内包カゼイン                            １．５
セトステアリルアルコール                                ３．０
グリセリン脂肪酸エステル                                ２．０
モノオレイン酸ポリオキシエチレン（２０）ソルビタン      １．０
モノステアリン酸ソルビタン                              １．０
Ｎ−ステアロイル−Ｎ−メチルタウリンナトリウム          ０．５
ワセリン                                                ５．０
ジメチルポリシロキサン（１００ｍＰａ・ｓ）              ３．０
トリ−２−エチルヘキサン酸グリセリル                    ２０．０
アスタキサンチン                                        ０．０５
乳酸                                                    １．０
ジプロピレングリコール                                  １０．０
クエン酸ナトリウム                                      ０．５
リン酸アスコルビルマグネシウム                          ０．１
酸化チタン                                              ０．１
香料                                                    適量
エデト酸２ナトリウム                                    ０．０３
パラオキシ安息香酸エチル                                ０．０５
精製水                                                  残量
【００９３】
実施例１６：ジェリー様抗シワ美容液
（成分）                                                      （％）
ブチレングリコール                                             ５.０
プテロスチルベン内包カゼイン                                   １．１
グリセリン                                                     ７．０
（ＰＥＧ-２４０／デシルテトラデセス-２０／ＨＤＩ）コポリマー   １．０
アスタキサンチン（ヘマトコッカス藻抽出物）                     ０．０５
セラミド                                                       １．０
コラーゲン                                                     ０．５
水溶性コラーゲン                                               ０．５
パルミチン酸アスコルビルリン酸３ナトリウム                     ０．０１
ダマスクバラ花油                                               適量
ＰＥＧ６０水添ヒマシ油                                         適量
ビタミンＥ                                                     ０．０１
トリ（カプリル酸/カプリン酸）グリセリル                        ０．１
リン酸Ｎａ                                                     ０．８
水酸化ナトリウム                                               適量
フェノキシエタノール                                           ０．１
水                                                             残量
【００９４】
実施例１７：錠剤
（成分）                                                      （％）
乳糖                                                          ４８．０
結品セルロース                                                ３１．０
でんぷん分解物                                                  ９．０
ショ糖脂肪酸エステル                                            ５．０
プテロスチルベン内包カゼイン                                    ６．０
クエン酸ナトリウム                                              １．０
【００９５】
実施例１８：ソフトカプセル
（成分）                                                      （％）
食用大豆油                                                    ４１．４
グリセリン脂肪酸エステル                                      １２．０
ミツロウ                                                        ５．０
プテロスチルベン内包カゼイン                                    １．３
クエン酸ナトリウム                                              ０．３
【００９６】
実施例１９：清涼飲料水
（成分）                                                      （％）
果糖ブドウ糖液糖                                              ３０．０
オレンジ果汁                                                  ２０．０
プテロスチルベン内包カゼイン                                    ２．０
クエン酸ナトリウム                                              ０．５
乳化剤                                                          ０．５
香料                                                            適量
精製水                                                          残量
【図１】
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【図２】
2013075851.tif 000008
【図３】
2013075851.tif 000009
【図４】
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【図５】
2013075851.tif 000011
【図６】
2013075851.tif 000012