(57)【要約】【課題】抗マラリア活性の高い化合物、特に薬剤耐性マラリアに対しても有効な化合物及びその用途を提供することを課題とする。【解決手段】以下の化学式で表される抗マラリア活性化合物が提供される。但し、式中のmは1〜5であり、nは1〜5であり、R1は非置換又は置換のキノリニル基を表し、R2はH、CH3又はCH2NH2を表す。【化１】2013237614.tif 000042【選択図】図２
2013237614.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の化学式１で表される抗マラリア活性化合物：
【化１】
2013237614.tif 000031
但し、式中のmは1〜5であり、nは1〜5であり、R1は非置換又は置換のキノリニル基を表し、R2はH、CH3又はCH2NH2を表し、R3は以下の化学式２又は３で表され；
【化２】
2013237614.tif 000032
【化３】
2013237614.tif 000033
但し、式中のR4は２個以上の環が縮合した環状基である。
【請求項２】
化学式２及び３中のR4が芳香族基である、請求項１に記載の抗マラリア活性化合物。
【請求項３】
化学式２及び３中のR4が２個の環が縮合した芳香族基である、請求項１に記載の抗マラリア活性化合物。
【請求項４】
化学式２及び３中のR4が非置換又は置換のナフチル基、アントリル基、フェナントリル基又はキノリニル基である、請求項１に記載の抗マラリア活性化合物。
【請求項５】
化学式１中のR3が、以下の化学式４で表される、請求項１に記載の抗マラリア活性化合物。
【化４】
2013237614.tif 000034
【請求項６】
化学式１中のR3が、以下の化学式５で表される、請求項１に記載の抗マラリア活性化合物。
【化５】
2013237614.tif 000035
【請求項７】
化学式１中のR3が、以下の化学式６で表される、請求項１に記載の抗マラリア活性化合物。
【化６】
2013237614.tif 000036
【請求項８】
化学式１中のR1が以下の化学式５で表される、請求項１〜７のいずれか一項に記載の抗マラリア活性化合物。
【化７】
2013237614.tif 000037
但し、式中のR5及びR6は互いに独立にH、Cl、CH3又はCF3である。
【請求項９】
化学式１中のR１が以下の化学式８〜１１のいずれかの化学式で表される、請求項７に記載の抗マラリア活性化合物。
【化８】
2013237614.tif 000038
【化９】
2013237614.tif 000039
【化１０】
2013237614.tif 000040
【化１１】
2013237614.tif 000041
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか一項に記載の抗マラリア活性化合物又はその薬学的に許容可能な塩を有効成分として含有する抗マラリア薬。
【請求項１１】
請求項１０に記載の抗マラリア薬を対象に投与するステップを含む、マラリアの予防又は治療方法。
【請求項１２】
抗マラリア薬を製造するための、請求項１〜９のいずれか一項に記載の抗マラリア活性化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は抗マラリア活性化合物及びその利用に関する。
【背景技術】
【０００２】
マラリアは、毎年数億人が感染しそのうち数百万人が死亡するといわれる人類最大の寄生原虫感染症である。この脅威は熱帯では有史以前より続いているが、これまで熱帯、亜熱帯が主な感染地域であったのが、地球温暖化により温帯にまで拡大が懸念されており、さらに従来薬に対する耐性種の蔓延も重なり、新たに効果的な医薬の開発が急務となっている。
【０００３】
マラリアの治療薬としてクロロキン、キニーネ、メフロキン、アルテミシニンなどが用いられるが、いずれも強い副作用がある。クロロキンは他の薬剤と比較して副作用が少ないため、マラリアの予防や治療の第１選択薬として使われることが多いが、近年、クロロキン耐性マラリア種の蔓延が大きな問題となっている。また、最近では他の薬剤に対する耐性も発生しており、多剤耐性への対処も急務である。
【０００４】
尚、本願発明者らの研究グループは、ヘムに対する親和性に注目して設計した化合物群が抗マラリア活性を示すことを報告した（特許文献１、非特許文献１）。一方、特許文献２には、抗マラリア活性を示す化合物としてN,N’−ビス（キノリン-4-イル）ジアミン誘導体が開示されている（特許文献２）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】国際公開第２００７／０９７４５０号パンフレット
【特許文献２】国際公開第９５／３５２８７号パンフレット
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】中部公立３大学新技術説明会資料集（２００７年１１月２日）、６３頁〜６７頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の課題は、抗マラリア活性の高い化合物、特に薬剤耐性マラリアに対しても有効な化合物及びその用途を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
上記課題を解決すべく本発明者は研究を進めた。その結果、抗マラリア活性に優れ、しかもクロロキン耐性マラリア株に対しても活性を示す化合物を見出した。当該化合物の抗マラリア活性は既存のマラリア薬を凌駕するものであった。また、特筆すべきことに、当該化合物は、マラリア原虫を感染させたマウス（感染モデル）の生存率を飛躍的に改善するという、驚異的な治療効果を示した。
主として上記知見に基づき、以下の発明を提供する。
［１］以下の化学式１で表される抗マラリア活性化合物：
【化１】
2013237614.tif 000003
但し、式中のmは1〜5であり、nは1〜5であり、R1は非置換又は置換のキノリニル基を表し、R2はH、CH3又はCH2NH2を表し、R3は以下の化学式２又は３で表され；
【化２】
2013237614.tif 000004
【化３】
2013237614.tif 000005
但し、式中のR4は２個以上の環が縮合した環状基である。
［２］化学式２及び３中のR4が芳香族基である、［１］に記載の抗マラリア活性化合物。
［３］化学式２及び３中のR4が２個の環が縮合した芳香族基である、［１］に記載の抗マラリア活性化合物。
［４］化学式２及び３中のR4が非置換又は置換のナフチル基、アントリル基、フェナントリル基又はキノリニル基である、［１］に記載の抗マラリア活性化合物。
［５］化学式１中のR3が、以下の化学式４で表される、［１］に記載の抗マラリア活性化合物。
【化４】
2013237614.tif 000006
［６］化学式１中のR3が、以下の化学式５で表される、［１］に記載の抗マラリア活性化合物。
【化５】
2013237614.tif 000007
［７］化学式１中のR3が、以下の化学式６で表される、［１］に記載の抗マラリア活性化合物。
【化６】
2013237614.tif 000008
［８］化学式１中のR1が以下の化学式７で表される、［１］〜［７］のいずれか一項に記載の抗マラリア活性化合物。
【化７】
2013237614.tif 000009
但し、式中のR5及びR6は互いに独立にH、Cl、CH3又はCF3である。
［９］化学式１中のR１が以下の化学式８〜１１のいずれかの化学式で表される、［８］に記載の抗マラリア活性化合物。
【化８】
2013237614.tif 000010
【化９】
2013237614.tif 000011
【化１０】
2013237614.tif 000012
【化１１】
2013237614.tif 000013
［１０］［１］〜［９］のいずれか一項に記載の抗マラリア活性化合物又はその薬学的に許容可能な塩を有効成分として含有する抗マラリア薬。
［１１］［１０］に記載の抗マラリア薬を対象に投与するステップを含む、マラリアの予防又は治療方法。
［１２］抗マラリア薬を製造するための、［１］〜［９］のいずれか一項に記載の抗マラリア活性化合物の使用。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】uro-2Qの合成スキーム。
【図２】2-(2-ナフタレン)アクリル酸（ａ）及びNaph-2Q（ｂ）の構造。
【図３】In vitro薬剤感受性試験及び毒性評価の結果。薬剤感受性マラリア及び薬剤耐性マラリアに対する各種化合物の効果を比較した。また、MRC-5細胞に対する毒性も併せて示した。＊：薬剤耐性株、＊＊：薬剤感受性株、＊＊＊：検出できず。
【図４】In vitro薬剤感受性試験の結果（一部抜粋）。薬剤感受性マラリア及び薬剤耐性マラリアに対するNaph-2Qの効果を、既存の抗マラリア薬（クロロキン）と比較した。縦軸はIC50。
【図５】In vivo評価の結果。マラリア感染マウスに各化合物を投与し、阻害活性を比較した。po：皮下投与、sc：経口投与。
【図６】In vivo評価の結果。各化合物を投与したマラリア感染マウスの生存率を比較した。po：皮下投与、sc：経口投与。
【図７】In vivo評価の結果。各化合物を投与したマラリア感染マウスの平均生存日数を比較した。po：皮下投与、sc：経口投与。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本発明の第１の局面は抗マラリア活性化合物に関する。本発明の抗マラリア活性化合物は以下の化学式（化学式１）で表される。
【化１】
2013237614.tif 000014
但し、式中のmは1〜5であり、nは1〜5であり、R1は非置換又は置換のキノリニル基を表す。R2はH、CH3又はCH2NH2を表す。また、R3は以下の化学式（化学式２又は３）で表される。好ましくは、化学式３で表される化合物である。尚、式中のR4は２個以上の環が縮合した環状基である。
【化２】
2013237614.tif 000015
【００１１】
【化３】
2013237614.tif 000016
【００１２】
R1が置換されている場合の置換位置は特に限定されない。２以上の位置で置換されていてもよい。置換基としてCl、Br、I、CH3、CF3、OCH3等を例示できる。置換は、例えば、活性の向上、溶解度（特に水溶性）の向上、毒性の低減、代謝速度の調節等の目的で行われる。
【００１３】
ここで、医薬（即ち抗マラリア薬）の有効成分として使用される場合の体内動態を考慮すれば低分子量の化合物であることが好ましいことから、m及びnの数値は小さい方がよい。そこでm及びnは好ましくは1〜3であり、より好ましくは1又は2である。また、m及びnを等しくし、リンカーとしてのアミンが対称性を持つようにすることが好ましい。このように設計すれば合成上有利である。
【００１４】
一態様では、化学式２及び３中のR4が芳香族基である。芳香族基の中でも２個又は３個の環が縮合した芳香族基が好ましく、特に非置換又は置換のナフチル基、アントリル基、フェナントリル基又はキノリニル基であることが好ましい。その理由は、大きなπ電子共役系を有するため、やはり大きなπ電子共役系を有するヘムとの相互作用が強いからである。より好ましくは、R4は２個の環が縮合した芳香族基（例えばナフチル基又はキノリニル基）である。置換されている場合の置換位置は特に限定されない。２以上の位置で置換されていてもよい。置換基としてCl、Br、I、CH3、CF3、OCH3等を例示できる。置換は、例えば、活性の向上、溶解度（特に水溶性）の向上、毒性の低減、代謝速度の調節等の目的で行われる。本態様の具体的化合物の例では、R3が、以下の化学式４〜６のいずれかで表される。
【化４】
2013237614.tif 000017
【化５】
2013237614.tif 000018
【化６】
2013237614.tif 000019
【００１５】
一態様では、化学式１中のR1が以下の化学式７で表される。但し、式中のR5及びR6は互いに独立にH、Cl、CH3又はCF3である。
【化７】
2013237614.tif 000020
【００１６】
R1の具体例を以下に示す（化学式８〜１１）。
【化８】
2013237614.tif 000021
【化９】
2013237614.tif 000022
【化１０】
2013237614.tif 000023
【化１１】
2013237614.tif 000024
【００１７】
別の一態様では、化学式１中のR1が以下の化学式１２で表される。但し、式中のR6及びR7は互いに独立にH、Cl、CH3又はCF3である。
【化１２】
2013237614.tif 000025
【００１８】
本願が提供する化合物の具体例（Naph-2Q、ac-quino-2Q、Naph-3Q、NAC-2Q）を以下に示す。尚、当該化合物の合成方法及び活性評価の結果の詳細は後述する。
【化１３】
2013237614.tif 000026
【化１４】
2013237614.tif 000027
【化１５】
2013237614.tif 000028
【化１６】
2013237614.tif 000029
【００１９】
本発明の他の局面は、上で示した抗マラリア活性化合物、又はその塩を有効成分とする抗マラリア薬に関する。ここでの塩は薬学的に許容可能な限りその種類は特に限定されず、塩酸、リン酸、硫酸、硝酸、ホウ酸等との塩（無機酸塩）や、ギ酸、酢酸、乳酸、フマル酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸等との塩（有機酸塩）をその例として挙げることができる。これらの塩の調製は慣用手段によって行なうことができる。
【００２０】
有効成分の製剤化は常法に従って行うことができる。製剤化する場合には、製剤上許容される他の成分（例えば、担体、賦形剤、崩壊剤、緩衝剤、乳化剤、懸濁剤、無痛化剤、安定剤、保存剤、防腐剤、生理食塩水など）を含有させることができる。賦形剤としては乳糖、デンプン、ソルビトール、D-マンニトール、白糖等を用いることができる。崩壊剤としてはデンプン、カルボキシメチルセルロース、炭酸カルシウム等を用いることができる。緩衝剤としてはリン酸塩、クエン酸塩、酢酸塩等を用いることができる。乳化剤としてはアラビアゴム、アルギン酸ナトリウム、トラガント等を用いることができる。懸濁剤としてはモノステアリン酸グリセリン、モノステアリン酸アルミニウム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ラウリル硫酸ナトリウム等を用いることができる。無痛化剤としてはベンジルアルコール、クロロブタノール、ソルビトール等を用いることができる。安定剤としてはプロピレングリコール、ジエチリン亜硫酸塩、アスコルビン酸等を用いることができる。保存剤としてはフェノール、塩化ベンザルコニウム、ベンジルアルコール、クロロブタノール、メチルパラベン等を用いることができる。防腐剤としては塩化ベンザルコニウム、パラオキシ安息香酸、クロロブタノール等と用いることができる。
【００２１】
製剤化する場合の剤型も特に限定されず、例えば錠剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、カプセル剤、シロップ剤、注射剤、外用剤、及び座剤などとして調製できる。このように製剤化した本発明の薬剤はその形態に応じて経口投与又は非経口投与（静脈内、動脈内、皮下、筋肉、腹腔内注射など）によって対象に適用され得る。ここでの「対象」は特に限定されず、ヒト、及びヒト以外の哺乳動物（ペット動物、家畜、実験動物を含む。具体的には例えばマウス、ラット、モルモット、ハムスター、サル、ウシ、ブタ、ヤギ、ヒツジ、イヌ、ネコ、ニワトリ、ウズラ等である）を含む。好適には、本発明の抗マラリア薬はヒトに対して適用される。
【００２２】
本発明の抗マラリア薬はマラリア感染者又は潜在的マラリア感染者（治療的使用）、或いはマラリアに感染するおそれのある者（予防的使用）に適用される。このように治療目的の他、予防目的で本発明の抗マラリア薬を使用することもできる。
【００２３】
本発明の抗マラリア薬における有効成分の含量は一般に剤型によって異なるが、所望の投与量を達成できるように例えば約0.001重量％〜約95重量％とする。
【００２４】
本発明の他の局面では以上の抗マラリア薬を使用したマラリアに対する予防方法又は治療方法（以下、これら二つの方法をまとめて「治療方法等」という）が提供される。本発明の治療方法等は、上記本発明の抗マラリア薬を生体に投与するステップを含む。投与経路は特に限定されず例えば経口、静脈内、皮内、皮下、筋肉内、腹腔内、経皮、経粘膜などを挙げることができる。これらの投与経路は互いに排他的なものではなく、任意に選択される二つ以上を併用することもできる（例えば、経口投与と同時に又は所定時間経過後に静脈注射等を行う等）。尚、投与が容易である点から経口投与によることが好ましい。
【００２５】
抗マラリア薬の投与量は症状、投与対象の年齢、性別、及び体重などによって異なるが、当業者であれば適宜適当な投与量を設定することが可能である。例えば、成人（体重約60kg）を対象として一日当たりの有効成分量が約1mg〜約1000mg、好ましくは約20mg〜500mgとなるよう投与量を設定することができる。投与スケジュールとしては例えば一日一回〜数回、二日に一回、或いは三日に一回などを採用できる。投与スケジュールの設定においては、投与対象の病状や薬剤の効果持続時間などを考慮することができる。
【実施例】
【００２６】
１．各化合物の合成
（１）アミノキノリンの調製（図１(ａ)）
原料として4,7-ジクロロキノリン、炭素鎖の長さの異なるトリアミンを用い、無溶媒にて70℃で攪拌した。混合物をカラムクロマトグラフィーで分離精製し、n=2のアミノキノリン（2Q）を収率57%で得た。同様にして、n=3のアミノキリン（3Q）を収率50%で得た。
【００２７】
（２）N-(2-{[2-(7-クロロ-キノリン-4-イルアミノ)エチル]メチルアミノ}エチル)-3-(1H-イミダゾール-4-イル)アクリルアミド：（uro-2Q）の合成（図１(b)）
ウロカニン酸 138 mg (1 mmol)を蒸留THFに溶解させ、ここに縮合剤CDI 200 mg (1.3 mmol)を加え撹拌。二時間後、蒸留THFに溶解させた2Q 278 mg (1 mmol)を追加し、撹拌を続けた。overnightで反応後、反応液を桐山ロートで濾過した。ろ液を減圧濃縮後、黄色オイルをHPLCにより精製した。収率31％。
【００２８】
（３）2-(2-ナフチル)アクリル酸の合成（参考：James B. Summers.; Hormoz. Mazdiyasni.; James H. Holms.; James D. Ratajczyk.; Richard D. Dyer.; George W. Carter  J. Med. Chem. 1987, 30, 574-580.）
マロン酸(1.9 g, 18.2 mmol)と2-ナフチルアルデヒド(1.25 g, 8.0 mmol)をピリジン(5 mL)に溶解させ3時間加熱還流した。室温まで冷却後、反応混合物を2N HCl(50 ml)に注ぐと、すぐに生成物が析出した。固体を濾取し、エタノールから再結晶して無色結晶の2-(2-ナフチル)アクリル酸（図２（ａ））を得た(482 mg, 30%)。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 12.5 (brs,1H), 7.5-8.2 (m, 8H) 6.68 (d, 1H). FAB, m/z (NBA) 199 (M+1)+
【００２９】
（４）Naph-2Qの合成
DMF(5 mL)に2-(2-ナフチル)アクリル酸(396 mg, 2.0 mmol)およびカルボニルジイミダゾール(324 mg, 2.0 mmol)を加え、溶液をアルゴン下2時間室温で攪拌した。この溶液に2Q(417 mg 1.5 mmol)を加え、溶液をさらに20時間アルゴン下室温で攪拌した。溶媒を減圧留去後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで分離精製を行った(MeOH : CH2Cl2 = 1:9)。ジクロロメタンで再結晶を行い無色針状晶の目的物（Naph-2Q、図２（ｂ））を得た(150 mg, 23 %)。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.39 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 8.22 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 8.10 (m, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.95 (m, 2H),7.24 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.69 (dd, J =7.4, 2.0 Hz, 1H), 7.55 (m ,2H), 7.35 (dd, J = 9.0, 2.2 Hz, 1H), 7.07 (m, 1H), 6.77 (d, J = 15.7 Hz, 1H) ), 6.51 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 2.71 (m, 4H), 2.55 (m, 4H), 2.31 (s, 3H). FAB, m/z (NBA) 459 (M+1)+, 461 (M+3)+
【００３０】
（５）ac-quino-2Qの合成
2-(2-キノリニル)アクリル酸 (181 mg, 0.9 mmol)とHBTU (410 mg,1.08 mmol)を10mlのナスフラスコに入れて真空乾燥した。Ar置換した後、シリンジでDMF1.3 mlを加えた。さらに、トリエチルアミン0.15 ml (1.03 mmol)と0.6 mlのDMFに溶解させた2Q（201 mg, 0.72 mmol）を加え、室温で17時間撹拌した。アルミナカラムクロマトグラフィーで分離精製を行い(CH2Cl2:CH3OH＝99：1)溶媒を減圧留去した。その後、GPCによる分離精製を行い、溶媒を減圧留去して目的物を得た。（27.2 mg, 8.2%）1H NMR (CDCl3, 400 MHz),δ8.51 (d, J=5.4 Hz,1H),δ8.17 (d, J=8.4 Hz,1H),δ8.06 (d, J=8.8 Hz,1H),δ7.84-7.72 (m,5H),δ7.58-7.54 (m, 1H),δ7.41(d, J=8.4 Hz, 1H),δ7.24 (dd, J=2.3, 8.9 Hz, 1H),δ7.03 (d, J=15.2 Hz, 1H),δ6.37(d, J=5.4 Hz, 1H),δ3.62-3.53 (m, 2H),δ3.35 (dd, J=4.8, 11.4 Hz, 2H), δ2.85 (t, J=5.8 Hz, 2H),δ2.72-2.67 (m, 2H),δ2.36 (s, 1H).FAB, m/z(グリセリン) 462(M+1)+. EI-HRMS C26H26ON5Cl Calcd for 459.18259, Found 459.18205.
【００３１】
（６）Naph-3Qの合成
2-(2-ナフチル)アクリル酸（0.1823 g, 0.92 mmol）、HBTU（0.431 g, 1.11 mmol）とNaHCO3 (0.093 g, 1.11 mmol)を10 mlのナスフラスコに入れ真空乾燥させた。Ar置換した後、DMF（脱水）（0.2 ml）に溶解させた3B（0.183 g, 0.60 mmol）をシリンジで加え、室温で1時間撹拌した。溶媒を減圧加熱留去した後、Na2CO3飽和溶液(40 ml)を加えて、CH2Cl2（50 ml×3回）で振り取りした。CH2Cl2層をNa2SO4にて乾燥させてから溶媒を減圧留去した。さらに、アルミナカラムクロマトグラフィーで分離精製を行い(CH2Cl2:CH3OH:＝99.7:0.3)溶媒を減圧留去し、目的物を得た (57.5 mg, 19.7%)。1H NMR (CD3OD,400 MHz),δ8.33 (d, J=5.7 Hz, 1H),δ8.03 (d, J=9.0, 1H),δ7.92 (s, 1H),δ7.87-7.82 (m, 3H),δ7.73 (d, J=2.2 Hz, 1H),δ7.69-7.64 (m, 2H),δ7.51-7.49 (m, 2H),δ7.36 (dd, J=2.2, 9.0 Hz ,1H),δ6.67 (d, J=15.8 Hz, 1H),δ6.53 (d, J=5.7 Hz, 1H),δ3.12 (t, J=7.0 Hz, 2H),δ3.36 (t, J=6.9 Hz, 2H),δ2.58(t, J=7.2 Hz, 2H),δ2.52 (t, J=7.5 Hz, 2H),δ2.32 (s, 3H),δ1.98-1.91 (m, 2H),δ1.84-1.77 (m, 2H). EI-HRMS C29H31ON4Cl Calcd for 486.21864, Found 486.22138.
【００３２】
（７）NAC-2Qの合成
2-ナフタレンカルボン酸クロリド（0.190 g, 1.00 mmol）のTHF (2 ml)溶液を、2Q（0.284 g, 1.02 mmol）、ピリジン（350 ml）のTHF (25 ml)溶液にシリンジで加え、室温で17時間撹拌した。溶媒を減圧加熱留去し、黄白色の固体410 mgを得た。これを、HPLC (GPC)で精製後、さらにアルミナカラムクロマトグラフィーで分離精製を行い(CH2Cl2:CH3OH:Et3N＝94:5:1)、白色固体の目的物NAC-2Qを得た (191 mg, 44.2%)。1H NMR (CDCl3,600 MHz),δ8.48 (d, J=5.4 Hz, 1H),δ8.17 (s, 1H),δ7.68 (dd, J=7.8 Hz,1.8 Hz 1H),δ7.71 (dd, J=7.8 Hz, 4.8 Hz, 2H),δ7.59 (ddd, J=6.9 Hz,6.9 Hz, 1.2 Hz, 1H),δ7.51 (ddd, J=6.9 Hz, 6.9 Hz, 1.2 Hz, 1H),δ7.43 (d, J=5.4 Hz, 1H),δ6.71 (dd, J=8.4, 2.1 Hz ,1H), δ6.63 (brs, 1H),δ6.35 (d, J=4.8 Hz, 1H),δ3.69 (dd, J=12 Hz,5.4 Hz, 2H),δ3.35 (dd, J=10.8 Hz,4.5 Hz, 2H),δ2.87 (t, J=6 Hz, 2H),δ2.76 (t, J=6 Hz, 2H). EI-MS m/z 432.
【００３３】
２．合成した化合物の評価
（１）In vitro薬剤感受性試験及び毒性評価
培養熱帯熱マラリア原虫(Plasmodium falciparum)の薬剤耐性株(K1 strain)を用い、Maklerらの方法（Makler, M. et al., Am. J. Med. Hyg. 48:739-741,1993）に準じ、In vitro薬剤感受性試験を行った。10%ヒト血漿含有RPMII640培地を用い、培養条件は3%02、4%C02、93%N2の混合ガス中、37℃とした。まず、前培養した熱帯熱マラリア原虫を初期感染率が0.5〜1.0%となるように非感染赤血球で希釈し、96穴培養プレートに190μl分注した。続いて、各ウェルにサンプル溶液（試験化合物のDMSO溶液）10μlを添加し、72時間培養した後、培養プレートを凍結した。翌日、凍結融解し、原虫から遊離した乳酸脱水素酵素（lactate dehydrogenase）をMalstat試薬にて呈色反応後、プレートリーダーにて原虫の酵素活性を比色定量した。原虫の増殖阻害活性(IC50値)は、薬剤添加群の吸光度及びコントロール群の吸光度から算出した。
【００３４】
一方、同様の方法により、各化合物について、マラリア原虫の薬剤感受性株(FCR3)を用いた薬剤感受性試験を行った。また、ヒト胎児肺由来正常繊維芽細胞MRC-5を用いて各化合物の細胞毒性(IC50値)を評価し、マラリア原虫とMRC-5細胞間の毒性比(Selectivity index）を求めた。尚、試験方法の詳細はK. Otoguro et al., J. Antibiot., 54:658-663(2001)を参照されたい。
【００３５】
試験結果を図３に示す。Naph-2Qは薬剤感受性株及び薬剤耐性株に対して高い活性を示した。注目すべきことに、Naph-2Qの活性はクロロキンよりも高く、しかも特に薬剤耐性株に対して有効である（図３、図４）。また、Naph-2Qの毒性は比較的低い（図３）。一方、ac-quino-2Qも良好な活性を示し、特に薬剤耐性株に対して有効であった。尚、比較に使用した化合物の構造を以下に示す。
【化１７】
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（２）マラリア感染マウスに対する治療効果（in vivoでの評価）
極めて高い選択毒性を示した化合物Naph-2Qの治療効果をマラリア感染マウスを用いて評価した。まず、ネズミマラリア原虫（P. berghei N、薬剤感受性株）を感染させた赤血球を経静脈的に接種したマウス（５匹／一群、感染原虫数:2×106）に３日間、10%DMSOに溶解した試験化合物を皮下又は経口投与した（１回／日）。コントロール群には10%DMSOを投与した。投与最終日の翌日に尾静脈から採血し、原虫感染赤血球率（parasitaemia）を調べ、ED50値及びED90値を算出した。また、経時的にマウスの状態を観察し、生存日数を記録した。
【００３６】
試験結果を図５〜７に示す。Naph-2Qは皮下投与で極めて高い治療効果を発揮した（図５〜７）。Naph-2Qの治療効果は、現在最も有効とされる抗マラリア薬アーテスネート（Artesunate）の治療効果を凌駕した（図５）。Naph-2Qの皮下投与が生存率を飛躍的に改善した点は注目に値する（図６、７）。尚、Naph-2Qはヒト細胞に対して毒性が比較的低い点でも優れた化合物といえる。
【産業上の利用可能性】
【００３７】
本発明の化合物はヘムに対して高親和性を有し、優れた抗マラリア活性を発揮する。また、本発明の化合物は薬剤耐性マラリアに対しても有効である。本発明の化合物を有効成分とする抗マラリア薬はマラリア感染に対して高い予防・治療効果を発揮し得る。本抗マラリア薬には、特に、既存の抗マラリア薬に耐性を示すマラリアへの適用が期待される。
【００３８】
この発明は、上記発明の実施の形態及び実施例の説明に何ら限定されるものではない。特許請求の範囲の記載を逸脱せず、当業者が容易に想到できる範囲で種々の変形態様もこの発明に含まれる。
本明細書の中で明示した論文、公開特許公報、及び特許公報などの内容は、その全ての内容を援用によって引用することとする。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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