(57)【要約】【課題】化学発癌剤による癌の発生を抑制するパパイア発酵物を提供する。【解決手段】  本発明は、パパイア発酵物を有効成分として含有する、腫瘍の成長を予防するための組成物であって、上記腫瘍の成長の予防効果が腹腔内投与よりも経口投与の方が高い組成物を提供する。本発明にかかる組成物は、侵襲性が高く負担が大きい腹腔内投与よりも侵襲性が低く負担の小さい経口投与により腫瘍の成長を予防することができる。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
パパイア発酵物を有効成分として含有する、腫瘍の成長を予防するための組成物であって、
前記腫瘍の成長の予防効果が腹腔内投与よりも経口投与の方が高い組成物。
【請求項２】
前記腫瘍の成長は、前記腫瘍の再発を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記腫瘍は、悪性腫瘍である、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記腫瘍は、外来性異物により誘導される、請求項１から３のいずれかに記載の組成物。
【請求項５】
前記外来性異物は、発癌性物質である、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
前記発癌性物質は、芳香族炭化水素である、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
パパイアを破砕する工程と、
前記パパイアに糖質を添加する工程と、
前記糖質が添加された前記パパイアを熟成又は発酵させる工程と、
熟成又は発酵させた前記パパイアから原液を得る工程と、
前記原液の前記糖質の濃度を調節する工程と、
前記糖質の濃度を調節した前記原液を静置熟成させて中間原料を得る工程と、
前記中間原料を発酵させる工程と、を含む、請求項1に記載の組成物の製造方法。
【請求項８】
請求項７に記載の製造方法より得られる、組成物。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
抗癌剤等による化学療法や、抗体を用いた生化学療法等により、以前に比べて癌の治療方法の選択肢は増えている。しかしながら、我が国における癌による死者数は年々増加し、我が国の2011年の統計によると病気による死因の第一位が癌である。
【０００２】
癌の種類は非常に多岐にわたる。そのため、同じ種類の癌であっても個体差があり、一つの治療方法だけでは治療できず、時には複数の治療方法を組み合わせたりもする。それでも、癌の完治は困難であり、毎年多くの患者が亡くなっている。
【０００３】
癌を治療することは未だ困難である。従って、癌の発生そのものを予防する方法が近年注目されている。癌の発生メカニズムも非常に多岐にわたる。癌の発生メカニズムのうちの１つは、活性酸素種による細胞傷害が導く細胞の癌化である。
【０００４】
活性酸素種は、その酸化作用により細胞膜脂質の酸化、蛋白質変性、酵素失活、DNAの損傷等を引き起こす。これにより、DNAに突然変異が生じることがあり、その結果、細胞の癌化が誘導される
【０００５】
通常、活性酸素種が体内で生成されても、体内にあるスーパーオキシドディスムターゼ(SOD)やカタラーゼ、グルタチオンペルオキシダーゼなどの酵素が作用し、活性酸素種が還元される。これにより、活性酸素種が消去される。しかしながら、活性酸素種が還元されるよりも早く活性酸素種が生成されるような状態が体内で起きると、活性酸素種が過剰になり、癌を含めた各種疾患を引き起こすと考えられている。
【０００６】
過剰な活性酸素種を消去する食品が近年注目されている。デザートやケーキ等の嗜好品とし好まれるパパイア(学名：Carica papaya Linn)の発酵物は、高いヒドロキシルラジカル消去活性を有することが知られている(特許文献１)。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特許4036385号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明者らは、パパイア果物発酵物には高いヒドロキシルラジカル消去活性を有することを発見し、パパイア果物発酵物は、癌の予防・改善に有効であることを見出した(特許文献１)。
【０００９】
しかしながら、上述したとおり、癌の発生メカニズムは非常に多岐にわたる。従って、活性酸素種以外にも細胞の癌化を誘導するものがある。活性酸素種以外では、例えば、チトクロームP-450による多環芳香族炭化水素(PAH)(例えば、ベンゾ[a]ピレン)の代謝により生じる活性化代謝物が細胞内で蛋白質や核酸等に結合することで癌化を引き起こすことが知られている。PAHは、化石燃料等の燃焼時に副産物として発生するため、環境汚染による発癌の原因物質の１つとされている。このような化学発癌剤は、活性酸素種とは異なるメカニズムにより癌化を引き起こす。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、化学発癌剤による癌の発生を抑制する食品について鋭意研究していたところ、予想外に、パパイア果物発酵物に化学発癌剤による癌の発生を抑制する能力を有する全く未知の効果を有することを発見した。更に、この効果は、腹腔内(ip)投与よりも経口投与の方がより効果的であるという驚くべき発見をした。これらの発見に基づいて更なる研究改良を重ね、本発明を完成した。
【００１１】
即ち、本発明は、パパイア発酵物を有効成分として含有する、腫瘍の成長を予防するための組成物であって、上記腫瘍の成長の予防効果が腹腔内投与よりも経口投与の方が高い組成物を提供する。本発明にかかる組成物は、侵襲性が高く負担が大きい腹腔内投与よりも侵襲性が低く負担の小さい経口投与により腫瘍の成長を予防することができる。
【００１２】
また、本発明によれば、パパイアを破砕する工程と、上記パパイアに糖質を添加する工程と、上記糖質が添加された上記パパイアを熟成又は発酵させる工程と、熟成又は発酵させた上記パパイアから原液を得る工程と、上記原液の上記糖質の濃度を調節する工程と、上記糖質の濃度を調節した上記原液を静置熟成させて中間原料を得る工程と、上記中間原料を発酵させる工程と、を含む、上記組成物の製造方法が提供される。
【００１３】
この方法によれば、後述する実施例で示す様に、パパイア発酵物を有効成分として含有する、腫瘍の成長を予防するための組成物であって、上記腫瘍の成長の予防効果が腹腔内投与よりも経口投与の方が高い、組成物が製造される。
【００１４】
また、本発明によれば、上記製造方法より得られる、組成物が提供される。
【００１５】
この製造方法により得られる組成物は、後述する実施例で示す様に、パパイア発酵物を有効成分として含有する、腫瘍の成長を予防するための組成物であって、上記腫瘍の成長の予防効果が腹腔内投与よりも経口投与の方が高い、組成物である。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】図1(a)は、3-メチルコラントレンを投与したマウスにおける腫瘍の発生率を経時的に測定して、カリカ群、グルコース群及び水群で比較したグラフである。図1(b)は、二回目の同実験を追試した18週目の発生率の棒グラフである。
【図２】図2は、マウスリンパ性白血病細胞株RLmale1を接種したマウスでの実験結果である。図2(a)は、540mg/200mlグルコースを飲用したマウスにおける腫瘍のサイズを経時的に測定したグラフである。図2(b)は、540mg/200mlカリカを飲用したマウスにおける腫瘍のサイズを経時的に測定したグラフである。図2(c)は、それぞれの平均腫瘍サイズを比較したグラフである。
【図３】図3は、マウスリンパ性白血病細胞株RLmale1を接種したマウスでの実験結果である。図3(a)は、180mg/200mlグルコースを飲用したマウスにおける腫瘍のサイズを経時的に測定したグラフである。図3(b)は、180mg/200mlカリカを飲用したマウスにおける腫瘍のサイズを経時的に測定したグラフである。図3(c)は、それぞれの平均腫瘍サイズを比較したグラフである。
【図４】図4は、マウスリンパ性白血病細胞株RLmale1を接種したマウスでの実験結果である。図4(a)は、100mg/250μlカリカを腹腔内投与したマウスにおける腫瘍のサイズを経時的に測定したグラフである。図4(b)は、100mg/250μlグルコースを腹腔内投与したマウスにおける腫瘍のサイズを経時的に測定したグラフである。図4(c)は、それぞれの平均腫瘍サイズを比較したグラフである。
【図５】図5は、マウスリンパ性白血病細胞株RLmale1を接種したマウスでの実験結果である。図5(a)は、360mg/200mlグルコースを飲用したマウスにおける腫瘍のサイズを経時的に測定したグラフである。図5(b)は、360mg/200mlカリカを飲用したマウスにおける腫瘍のサイズを経時的に測定したグラフである。図5(c)は、それぞれの平均腫瘍サイズを比較したグラフである。図5(d)は、図5(c)における18日目の平均腫瘍サイズの棒グラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
以下、本発明の実施の形態について、詳細に説明する。なお、同様な内容については、繰り返しの煩雑を避けるために、適時説明を省略する。
【００１８】
本発明の実施形態は、パパイア発酵物を有効成分として含有する、腫瘍の成長を予防するための組成物であって、上記腫瘍の成長の予防効果が腹腔内投与よりも経口投与の方が高い、組成物である。
【００１９】
本組成物によれば、腫瘍の成長を予防することができる。また、腫瘍の成長には、腫瘍の発生が含まれる。腫瘍の成長は、目視のみならず腫瘍マーカーを用いた生化学的な手法による結果から診断してもよい。
【００２０】
腫瘍とは、正常な増殖制御を欠いた増殖性細胞塊を意味する。腫瘍は良性腫瘍と悪性腫瘍があり、前癌腫性又は癌性の細胞又は組織を含む。良性腫瘍とは、腫瘍細胞の形態が正常細胞に近く、浸潤性や転移性のない腫瘍をいう。悪性腫瘍とは、腫瘍細胞の形態が正常細胞と異なり、浸潤性や転移性を示す腫瘍をいう。良性腫瘍として、例えば大腸腺腫を挙げることができる。また、悪性腫瘍として、例えば大腸癌や前立腺癌を挙げることができる。
【００２１】
通常、経口投与された薬物等は、消化管から吸収されると肝臓を経由した後に全身循環に入る。肝臓を経由すると薬物代謝酵素等の解毒作用により薬物が不活性化され、その作用が低減させられることがある(初回通過効果)。従って、薬物によっては初回通過効果を回避する目的で腹腔内投与又は静脈内投与する。これにより最初に肝臓を経由することなく高い濃度のままで全身循環に入ることができる。
【００２２】
上述の通り、薬物の効果は経口投与よりも腹腔内投与の方が一般的に高い。しかしながら、本組成物は、後述する実施例で示される通り、侵襲性が高く治療時の負担が大きい腹腔内投与よりもかかる負担が軽い経口投与の方が腫瘍の成長の予防効果が高い。これにより、患者への負担を軽くしつつ高い効果を有する組成物を提供することができる。
【００２３】
また別の実施形態においては、腫瘍の成長は、腫瘍の再発を含む。後述する実施例に記載されている通り、本組成物は、腫瘍の再発を予防することができる。従って、本組成物を使用し続けることで腫瘍の再発を予防することができる。
【００２４】
また別の実施形態においては、腫瘍は、悪性腫瘍である。この組成物によれば、浸潤性や転移性を示す腫瘍の成長を予防することができる。
【００２５】
また別の実施形態おいては、腫瘍は、外来性異物により誘導される。この組成物によれば、外来性異物により誘導される腫瘍を予防することができる。ここで、外来性異物とは、通常ヒトの体内に存在しない物質である。従って、生体内に取り込まれて排出されずに留まっている物質も外来性異物と言える。生体内へは、例えば、呼吸、飲食及び注射等による取り込みが考えられる。なお、外来性異物は、生体内に取り込まれた後に生体内の酵素等の働きにより修飾されたものや分解されたものも含まれる。
【００２６】
外来性異物は、産業活動等の結果として大気や水系に放出される化合物が一般的である。これらの多くは、人体に悪影響を及ぼす可能性があり、大気又は水系の放出が禁止又は排出濃度が規制されている。通常外来性異物を取り扱う場合は、かかる異物による汚染を防ぐために、防護マスクなどの保護装備を使用しての作業となる。しかしながら、偶発的な事故やミスによる汚染の可能性はゼロではない。従って、予防として本組成物を作業前から予め使用することで、事故やミスによる外来性異物の汚染から生体を守ることが可能になる。
【００２７】
また別の実施形態おいては、外来性異物は、発癌性物質である。この組成物によれば、発癌性物質により誘導される腫瘍を予防することができる。発癌性物質としては、例えば、国際がん研究機関(IARC)が公表する化学物質等が挙げられる。しかしながら、これらに限定されず、発癌性が確認されている物質をも含むことができる。なお、かかる発癌性物質は、生体内に取り込まれた後に生体内の酵素等の働きにより修飾されたものや分解されたものも含まれる。
【００２８】
また本実施形態おいては、発癌性物質は、芳香族炭化水素である。この組成物によれば、芳香族炭化水素類の発癌性物質により誘導される腫瘍を予防することができる。発癌性の芳香族炭化水素には、例えば、ダイオキシン類や多環芳香族炭化水素などが挙げられる。なお、かかる芳香族炭化水素は、生体内に取り込まれた後に生体内の酵素等の働きにより修飾されたものや分解されたものも含まれる。
【００２９】
ダイオキシン類としては、例えば、ハロゲン化ジベンゾジオキシン類やハロゲン化ジベンゾフラン類、ＰＣＢ類(例えば、オルト位以外に塩素原子が置換したコプラナーＰＣＢ類)等が挙げられる。
【００３０】
ハロゲン化ジベンゾジオキシン類の例としては、２，３，７，８−テトラクロロジベンゾ−Ｐ−ジオキシン、１，２，３，７，８−ペンタクロロジベンゾ−p−ジオキシン、１，２，３，４，７，８−ヘキサクロロジベンゾ−p−ジオキシン、１，２，３，４，６，７，８−ヘプタクロロジベンゾ−p−ジオキシン、１，２，３，４，６，７，８，９−オクタクロロジベンゾ−p−ジオキシン等が挙げられる。
【００３１】
ハロゲン化ジベンゾフラン類の例としては、２，３，７，８−テトラクロロジベンゾフラン、１，２，３，７，８−ペンタクロロジベンゾフラン、１，２，３，４，７，８−ヘキサクロロジベンゾフラン、１，２，３，４，６，７，８−ヘプタクロロジベンゾフラン、１，２，３，４，６，７，８，９−オクタクロロジベンゾフラン等が挙げられる。
【００３２】
ＰＣＢ類の例としては、３，３’，４，４’，５−テトラクロロビフェニル、３，３’，４，４’，５−ペンタクロロビフェニル、３，３’，４，４’，５，５’−ヘキサクロロビフェニル等が挙げられる。
【００３３】
多環芳香族炭化水素の例としては、ベンゾ[a]アントラセン、ジベンゾ[a,h]アントラセン、ベンゾ[a]ピレン及び3-メチルコラントレンが挙げられる。
【００３４】
＜パパイア発酵物を含有する組成物の製造方法＞
本実施形態は、パパイアを破砕する工程と、上記パパイアに糖質を添加する工程と、上記糖質が添加された上記パパイアを熟成又は発酵させる工程と、熟成又は発酵させた上記パパイアから原液を得る工程と、上記原液の上記糖質の濃度を調節する工程と、上記糖質の濃度を調節した上記原液を静置熟成させて中間原料を得る工程と、上記中間原料を発酵させる工程と、を含む、パパイア発酵物を有効成分として含有する、腫瘍の成長を予防するための組成物であって、上記腫瘍の成長の予防効果が腹腔内投与よりも経口投与の方が高い、組成物の製造方法である。
【００３５】
パパイアとは、パパイア科パパイア属の果実である「パパイア(学名:Carica papaya Linn)」をいい、果物として店頭にならんでいる黄色の成熟パパイアだけでなく、野菜として料理に用いられる緑色の未成熟パパイアも含まれる。パパイアは熱帯から亜熱帯にかけて広く栽培されているが、原産地を特に制限するものではなく、いずれも使用することが可能である。また、成熟又は未成熟を問わずいずれのパパイアを発酵の対象として使用することも可能であるが、野生の未成熟パパイアを用いるのが好適である。
【００３６】
パパイアは、発酵を容易にさせるために、破砕することが好ましい。破砕するパパイアは、ヘタ部分と果実の底部を除いたものを使用するのが好ましい。かかるヘタ部分と底部は、硬いため、発酵後に異物として残留する可能性があるためである。破砕方法は、粉砕後のパパイアがマッシュ又はペースト化できる方法であれば、特に限定しないが、粉砕、摩砕、又はその組合せを例示することができる。
【００３７】
パパイアに加える糖質の量は、使用するパパイアの重量の１０重量％〜５０重量％であってもよい。パパイアの破砕は、糖質の添加前でも添加後であってもよい。また、パパイアの破砕中に糖質を添加してもよい。
【００３８】
破砕され且つ糖質が添加されたパパイアは、発酵又は静置熟成が行われる。発酵又は静置熟成は、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５℃の何れかから選択される2つの温度の間であってもよい。かかる温度管理は、恒温培養器や恒温室等を用いて行なってもよく、上記温度条件に該当する場合は室温であってもよい。また、発酵又は静置熟成の期間は、4、5、6、7、8、9、10日の何れかから選択される2つの数字の間の期間であってもよい。
【００３９】
発酵又は静置熟成したパパイアから原液を得る方法は、固形物と液体とを分離できる方法であれば、特に限定しないが、例えばろ過による方法が挙げられる。ろ過の場合は、加圧ろ過や遠心ろ過をすることも可能である。
【００４０】
原液の糖質濃度を調節する。糖質の濃度は、４０％〜６０％であることが好ましい。糖質濃度の調節は、製造中に糖質濃度を測定してその結果に基づいて調節してもよく、糖質濃度を測定せずに過去の測定データに基づいて調節してもよい。
【００４１】
糖質濃度が調節された原液を静置熟成することで中間原料が得られる。この時の静置熟成の温度は、１５、１６、１７、１８、１９、２０℃の何れかから選択される2つの温度の間であってもよい。かかる温度管理は、恒温培養器や恒温室等を用いて行なってもよく、上記温度条件に該当する場合は室温であってもよい。また、静置熟成の期間は、7、8、9、10、11、12、13、14日の何れかから選択される2つの数字の間の期間であってもよい。
【００４２】
中間原料は、味噌用酵素、乳酸菌及びアミラーゼからなる群より選択される１又は複数の発酵体を加えることで発酵させることが好ましい。
【００４３】
本実施形態においてパパイアの発酵には酵母を用いることができる。用いる酵母としては、パパイアを発酵できるものであれば特に限定しないが、例としてカンジダ属(Candida)やピキア属(Pichia)、クリベロマイセス属(Kluyveromyces)、サッカロマイセス属(Saccharomyces)、シゾサッカロマイセス属(Schizosaccaromyces)等を挙げることができるが、好ましくは、サッカロマイセス属の酵母である。また、パパイアに付着又は存在する天然の酵母をそのまま発酵に用いてもよい。パパイアを発酵できるものであれば、通常の方法で凍結乾燥させ調製したもの又は冷蔵で保存しているものであってもよい。酵母発酵の至適条件は、各酵母依存的であり、製造工程の条件や目的製品の状態に合わせて使用方法及び条件を適宜選択することが可能である。さらには、１又は２種以上の酵母を同時又は逐次的に使用することも可能である。
【００４４】
本実施形態においてパパイアの発酵には乳酸菌を用いることができる。用いる乳酸菌としては、パパイアを発酵できるものであれば特に限定しないが、例としてストレプトコッカス属（Streptococcus）やラクトバチルス属（Lactobacillus）、ラクトコッカス属（Lactococcus）、ビフィドバクテリウム属（Bifidobacterium）、ロイコノストック属（Leuconostoc）、ペディオコッカス属（Pediococcus）などを挙げることができる。好ましくは、ストレプトコッカス属（Streptococcus）の乳酸菌である。また、パパイアに付着又は存在する天然の乳酸菌をそのまま発酵に用いてもよい。いずれの乳酸菌であっても、パパイアを発酵できるのであれば、通常の方法で凍結乾燥させ調製したもの又は冷蔵で保存しているものであってもよい。乳酸菌発酵の至適条件は、各乳酸菌依存的であり、製造工程の条件や目的製品の状態に合わせて使用方法及び条件を適宜選択することが可能である。さらには、１又は２種以上の乳酸菌を同時又は逐次的に使用することも可能である。
【００４５】
本実施形態においてパパイアの発酵にはアミラーゼを用いることができる。アミラーゼは澱粉中に含まれるアミロースやアミロペクチンのグリコシド結合を加水分解することができる消化酵素であり、目的とする製品の製造工程において充分な活性を有するものであれば、特段の制限を設けることはない。アミラーゼの至適条件は、使用する酵素依存的であり、製造工程の条件や目的製品の状態に合わせて使用する酵素を適宜選択することが可能である。さらには、１又は２種以上のアミラーゼを同時又は逐次的に使用することも可能である。
【００４６】
本実施形態においてパパイアの発酵には味噌用酵素を用いることができる。味噌用酵素とは、味噌や醤油等の発酵食品の製造に用いられるアスペルギルス属（Aspergillus）等の分泌物等を含む。アスペルギルス属に含まれる微生物としてアスペルギルス・オリゼーやアスペルギルス・ニガー、アスペルギルス・ソーエー等を一例として挙げることができる。好ましくは、アスペルギルス・オリゼーである。味噌用酵素は要求される目的製品の品質を満たすものであれば必ずしも精製されている酵素である必要はなく、粗精製のものでもあってもよく、更には菌体そのものを使用することも可能である。味噌用酵素の至適条件は、酵素依存的であり、製造工程の条件や目的製品の状態に合わせて使用方法及び条件を適宜選択することが可能である。さらには、１又は２種以上の味噌用酵素を同時又は逐次的に使用することも可能である。
【００４７】
微生物等の混入を防ぐ目的で発酵前にパパイアを低温殺菌(蒸気や熱湯等)や高温殺菌(加熱蒸気や熱湯等)、マイクロ波、高周波、赤外線、遠赤外線、紫外線、γ線、X線、電子線、オゾン殺菌等の殺菌処理を施すことも可能である。成熟パパイアを用いて発酵する場合は、微生物等による腐敗を引き起こしやすいことから殺菌処理を施すことが好適である。一方で、野生の未成熟パパイアを用いる場合は、未成熟パパイアに付着又は存在する微生物(酵母や乳酸菌等)が発酵に有益である場合には殺菌処理を施さないのが好適である。
【００４８】
発酵促進の目的で加える糖質は、澱粉やモルト、デキストラン、スクロース(蔗糖)、マルトース(麦芽糖)、グルコース(ブドウ糖)等を用いることが可能であるが、パパイアの酵素を不活性化し腐敗を防止する観点から、同じ質量の糖質でも細胞内浸透圧を高くし原形質膜分離を引き起こすことが可能である低分子の糖質を用いるのが好適であり、特に単糖であるグルコースを用いることが好適である。
【００４９】
別の実施形態においては、発酵後の中間原料に糖質を加えた後に乾燥させる工程を更に含む。これにより、乾燥したパパイア発酵物を得ることができる。
【００５０】
発酵後の中間原料に加える糖質の量は、発酵前の中間原料の重量の１から５倍の糖質を加えることが好ましい。乾燥方法は、特に限定しないが、熱による変性等が抑制できる風乾が好ましい。風乾時の温度は１５〜２０℃の範囲が好ましい。
【００５１】
別の実施形態においては、中間原料を発酵させる工程は、中間原料を第１の中間原料、第２の中間原料及び第３の中間原料の３つに分けて、
第１の中間原料の１．０〜５．０重量％の味噌用酵素を第１の中間原料に添加して混和した後に発酵させ、
第２の中間原料の３．０〜３０．０重量％の乳酸菌及び０．２〜１．０重量％の味噌用酵素を第２の中間原料に添加して混和した後に発酵させ、
第３の中間原料の０．５〜４．０重量％のアミラーゼを第３の中間原料に添加して混和した後に発酵させる工程である。これにより、１つの中間原料から発酵体が異なる複数の発酵物を得ることができる。
【００５２】
かかる発酵は、３５〜４５℃の間で行われることが好ましい。かかる温度管理は、恒温培養器や恒温室等を用いて行なってもよい。また、発酵時間は、好ましくは２０〜７２時間、より好ましくは４０〜５０時間である。
【００５３】
別の実施形態において、乾燥させた発酵後の中間原料を少なくとも６ヶ月間は、熟成させる工程を更に備える。
【００５４】
かかる熟成は、ガスバリヤー性の高いアルミ包材等に封入することで熟成させることが好ましい。
【００５５】
＜本実施形態における製造方法より得られる組成物＞
本実施形態は、パパイアを破砕する工程と、上記パパイアに糖質を添加する工程と、上記糖質が添加された上記パパイアを熟成又は発酵させる工程と、熟成又は発酵させた上記パパイアから原液を得る工程と、上記原液の上記糖質の濃度を調節する工程と、上記糖質の濃度を調節した上記原液を静置熟成させて中間原料を得る工程と、上記中間原料を発酵させる工程と、を含む、製造方法より得られる、パパイア発酵物を有効成分として含有する、腫瘍の成長を予防するための組成物であって、上記腫瘍の成長の予防効果が腹腔内投与よりも経口投与の方が高い、組成物である。
【００５６】
＜本実施形態における組成物の形態等＞
本実施形態においる組成物の形態は、乳白色の粉末であるが、そのままの形態で使用することも可能である。また他の形態として、散剤や錠剤、カプセル剤、軟カプセル剤、液剤、シロップ剤、丸剤等の任意の形態に調製することができるが、特にこれらに限定されるものではない。
【００５７】
本実施形態における組成物の1日の摂取量は、体重60kgのヒトを対象とする場合は、例えば、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、30g(乾燥重量換算)の何れかから選択される2つの重量の間であってもよい。また、上記基準を基に組成物の含有量を増減させることが好適である。本実施形態における組成物は安全性が高いことから、特段の摂取量上限値を設定することはない。
【００５８】
＜飲食物、健康食品又は飼料添加物＞
本実施形態における組成物は、ヒト以外にも使用することが可能である。対象となるヒ
ト以外の動物として、犬や猫等のペットや、牛や豚等の家畜、鶏や鶉等の家禽、鯛や鰻等
の養殖水産動物等に対しても使用することが可能である。
【００５９】
本実施形態における組成物を飲食物、健康食品又は飼料添加物（以下、飲食物等）として使用することができる。
【００６０】
本実施形態における組成物を飲食物又は健康食品として用いる場合に、本組成物をそのままの形態で使用することも可能であるが、他の形態を例示すると賦形剤(グルコースや澱粉、炭酸カルシウム等)や添加剤(グァーガムやグリシン等)、甘味料、酸味料、香味料、ビタミン又はミネラル等を組み合わせて顆粒や細粒、粉末、タブレット、ドロップ、トローチ、ゲル、シロップ、ドリンク等の形態とすることが挙げられる。
【００６１】
また、他の形態としてクッキーやケーキ、パン、チョコレート、羊羹、お汁粉、アイスクリーム、プリン、クラッカー、チップス等の菓子類、茶、コーヒー、ジュース、牛乳、アルコール等の飲料水、スパゲッティ、うどん、蕎麦、ラーメン等の麺類、ハム、ソーセージ、はんぺん、かまぼこ等の練り製品、ドレッシング、味噌、醤油、マヨネーズ、ふりかけ等の調味料、カレー、シチュー等のスープ類等が挙げられる。
【００６２】
本実施形態における組成物は飼料添加物として用いることも可能である。例示すると、家畜(牛や豚等)や家禽(鶏や鶉等)、養殖魚類(鯛や鰻等)、ペット類(犬や猫等)等の飼料に添加することができる。いずれの飼料に添加する場合であっても、本組成物をそのままの形態で添加することも可能であり、また顆粒や細粒、粉末、タブレット、カプセル等の形態で添加することも可能である。
【００６３】
以上、本発明の実施形態について述べたが、これらは本発明の例示であり、上記以外の様々な構成を採用することができる。
【実施例】
【００６４】
以下、実施例によって本発明を更に説明する。但し、下記の実施例は発明を例示する
ためのものであり、本発明をいかなる意味においても限定するものではない。
【００６５】
＜実施例１＞
1)パパイア発酵に用いる中間原料の製造例
白色の種子を有する野生の未成熟パパイア100kgを採取し、異物除去のため水洗いをした後、ヘタ部分及び果実の底部を除いた。パパイアを皮ごとスライスした後、粉砕し摩砕することでマッシュ品85kgを得た。マッシュ品にグルコース20kgを添加し、良く混和した後、30℃8日間静置することで熟成した混合物を得た。混合物を濾過することで残渣を除去して38kgの濾液を得た。濾液に、グルコース2kgを添加して、良く混和し、18℃で10日間静置熟成した。これにより40kgの中間原料を得た。
【００６６】
2）パパイア発酵物を含有する組成物の製造例
上記中間原料40kgを、20kg(中間原料1)、15kg(中間原料2)、5kg(中間原料3)に分け、中間原料1に味噌用酵素0.5kgを、中間原料2に乳酸菌0.5kg及び味噌用酵素0.1kgを、中間原料3にアミラーゼ0.1kgを添加し、良く混和し、40℃にて48時間発酵させることで、それぞれ発酵物1、2、3を得た。発酵物1にグルコース60kgを、発酵物2にグルコース30kgを、発酵物3にグルコース10kgを添加し、良く混和した後、18℃、1ヶ月間乾燥させ、粉砕し、組成物1、2及び3を得た。組成物1、2及び3を合わせて混合均質化し、ガスバリヤー製の高いアルミ包材内で6ヶ月以上熟成し、パパイア発酵物を含有する組成物(最終組成物)を100kg得た。
【００６７】
本実施例で使用する本組成物(以下、カリカと称する)の溶液は、経口摂取又は腹腔内投与する直前に調整した。例えば、540mg/200mlのカリカ溶液は、540mgの粉末カリカを200ml水に溶かして調整した。なお、本実施例で使用するパパイア発酵物を含有する組成物は、発酵過程で用いる糖質としてグルコースを選択しており、最終製品のグルコース濃度は試験をする上で無視できない量が含まれている。従って、本実施例においては、試験結果が、本組成物中に含まれるグルコースによる効果ではないこと明らかにする目的で陰性対照としてグルコース(片山化学)を用いることとした。
【００６８】
＜実施例２＞
＜メチルコラントレン試験＞
BALB/cマウス(メス)に対する発癌実験を行った。3-メチルコラントレンをオリーブオイルに溶解し、濃度が2mg/mlになるように調整した。各マウスの右脇腹を剃毛して上記濃度の3-メチルコラントレンを100μl(200μg/マウス)皮下に注射した。マウスを3つ群(水群、カリカ群、グルコース群)に分けて、１つの群が20匹(水群は、妊娠したマウスを3匹追加)になるようにした。なお、1つのケージには最大で5匹のマウスまでとした。3-メチルコラントレンの注射1か月前からカリカ群、グルコース群とも180mg/200mlを飲用し、注射後からカリカ群は360mg/200mlのカリカ溶液を、グルコース群は360mg/200mlのグルコース溶液に変え、水群は、そのまま200mlの水を飲用させた。これらの溶液は、全て自由摂取とした。注射箇所に腫瘍が発生しているか否かを毎週肉眼で観察した。腫瘍が発生した場合は、ノギスにより腫瘍の長径と短径を測定しサイズはその平均値(小数点以下四捨五入として表した。
【００６９】
表1は、3-メチルコラントレンを投与後、200mlの水を自由摂取させた群(水群)の腫瘍サイズを経時的に測定した結果である。投与後11週目の腫瘍発生率は、21.7%であり、17週目では、87%であった。
【表１】
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【００７０】
表2は、3-メチルコラントレンを投与後、360mg/200mlのグルコースを飲用させた群(グルコース群)の腫瘍サイズを経時的に測定した結果である。投与後11週目の腫瘍発生率は、45%であり、17週目では、85%であった。17週目の腫瘍発生率は、水群と差がほとんどなかった。
【００７１】
【表２】
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【００７２】
表3は、3-メチルコラントレンを投与後、360mg/200mlのカリカを飲用させた群(カリカ群)の腫瘍サイズを経時的に測定した結果である。投与後11週目の腫瘍発生率は、30%であり、17週目では、55%であった。
【００７３】
【表３】
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【００７４】
図1(a)は、表1から3までのデータを基に3-メチルコラントレンの投与後11週目から17週目までの腫瘍発生率をグラフに表したものである。その結果、水群とグルコース群は、3-メチルコラントレンの投与後17週目には、腫瘍発生率が80%を超えるのに対して、カリカ群は、17週目であっても50%台であり、抑制率は64％とより低い腫瘍発生率を示した。
【００７５】
同様の実験を各群25匹で再度行った。図1(b)は、3-メチルコラントレンの投与後18週目の腫瘍発生率を棒グラフにしたものである。水群は60%、グルコース群は64%である一方でカリカ群は43%であり、抑制率は72-67％となりより低い腫瘍発生率が再現された。
【００７６】
以上の結果、水群及びグルコース群との間に3-メチルコラントレンによる腫瘍発生率は有意な差が見られなかった。一方、カリカ群の場合は、3-メチルコラントレンによる腫瘍の発生率を低下させることが明らかとなった。よって、カリカには3-メチルコラントレンによる腫瘍の発生を抑制可能であることが2回の実験で明らかとなった。
【００７７】
＜マウスリンパ性白血病細胞株RLmale1腫瘍の皮下注射による実験＞
＜実施例３＞
＜540mg/200mlカリカの経口投与＞
マウスリンパ性白血病細胞株であるRLmale1腫瘍細胞を皮下注射したマウスを用いてパパイア発酵物の効果を確認する実験を行った。RLmale1腫瘍細胞を皮下注射する前に、各マウスは、1ヶ月間、180mg/200mlのカリカを自由摂取で飲用させた。この濃度は、60kgの成人に換算すると3gの本組成物を毎日摂取したのと同じ量となる。以下の実施例において、投与実験の前には、1ヶ月間、180mg/200mlのカリカを自由摂取で飲用させている。
【００７８】
カリカ群とグルコース群は、それぞれ5匹のマウスを用いて実験を行った。外科用髪剃を用いて各マウスの右脇腹を剃毛して、剃毛した右脇腹に対してRPIM(w/o FCS)液で調整した細胞数2x105のRLmale1腫瘍細胞を皮下に注射した。注射後、それぞれのマウスをケージに戻した。RLmale1腫瘍細胞を注射した日から、カリカ又はグルコースをそれぞれの濃度で飲用させた。
【００７９】
カリカ群は、540mg/200mlのカリカを自由摂取で飲用させた。この濃度は、60kgの成人に換算すると9gの本組成物を毎日摂取したのと同じ量となる。これに対応して、グルコース群は、540mg/200mlのグルコースを自由摂取で飲用させた。
【００８０】
注射箇所を毎日観察し腫瘍が発生した場合は、ノギスを用いて発生した腫瘍の平均値を測定した。表4は、グルコース群の腫瘍サイズ(mm)を経時的に測定した結果であり、その結果をグラフとして示しているのが図2(a)である。No.4のマウスは注射後33日目に腫瘍死した。実験は注射後36日目に終了させた。
【００８１】
【表４】
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【００８２】
表5は、カリカ群の腫瘍サイズ(mm)を経時的に測定した結果であり、そのデータを基に作成したグラフが図2(b)である。いずれのマウスも14日目において、腫瘍が消失した。注射後36日まで観察を続けたが、再発することはなかった。
【００８３】
【表５】
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【００８４】
図2(c)は、グルコース群とカリカ群の平均腫瘍サイズ(mm)をグラフ化したものである。この結果から、グルコース群よりもカリカ群の方が、腫瘍の成長を有意に抑制し、早期に回復していることが明らかとなった。また、再発も防止することができた。
【００８５】
＜実施例４＞
＜180mg/200mlカリカの経口投与＞
実施例３のカリカ及びグルコース摂取量の1/3の濃度で実験した。即ち、カリカ群は、180mg/200mlのカリカを自由摂取で飲用させた。この濃度は、60kgの成人に換算すると3gの本組成物を毎日摂取したのと同じ量となる。グルコース群は、180mg/200mlのグルコースを自由摂取で飲用させた。その他の実験条件は、実施例３と同様である。
【００８６】
表6は、グルコース群の腫瘍サイズ(mm)を経時的に測定した結果であり、表6を基にグラフ化したものが図3(a)である。全てのマウスは、22日目に腫瘍死した。
【００８７】
【表６】
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【００８８】
表7は、カリカ群の腫瘍サイズ(mm)を経時的に測定した結果であり、図3(b)は表7を基にグラフ化した図である。No.5のマウスは、19日目に、その他のマウスは、22日目に腫瘍死した。
【００８９】
【表７】
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【００９０】
図3(c)は、グルコース群とカリカ群の平均腫瘍サイズ(mm)をグラフ化したものである。両者はほぼ同一のグラフを描いている。この結果から、グルコース群とカリカ群との間に有意な差はなく、カリカの濃度が180mg/mlの場合は、腫瘍の成長予防に効果がないことが明らかとなった。
【００９１】
＜実施例５＞
＜腹腔内投与_100mg＞
カリカの腹腔内投与による効果を調べた。40%カリカ溶液(400mg/ml)になるように本組成物をPBS(リン酸バッファー生食水)に溶解しフィルター滅菌した。同様の方法により40%グルコース(400mg/ml)溶液を作成した。細胞数2x105のRLmale1腫瘍細胞を皮下に注射したマウスに対してそれぞれの溶液250μl(即ち、100mg)を2日毎に腹腔内投与した。
【００９２】
表8は40%カリカ溶液の腹腔内投与の結果を、表9にはグルコースの腹腔内投与の結果をまとめた表(腫瘍サイズ(mm))である。図4(a)は、表8のデータを基に、図4(b)は、表9を基にして作成したグラフである。カリカ溶液の腹腔内投与は、540mg/200mlの経口自由摂取(表5及び図2(b))に比べて腫瘍抑制効果が低く、またNo.1のマウスは、33日目に腫瘍死した。グルコース群は、No.5のマウスが33日目に腫瘍死した。図4(c)は、カリカ群及びグルコース群の腫瘍サイズ(mm)の平均をグラフ化したものである。両者の平均値に有意な差は見られなかった。
【００９３】
【表８】
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【００９４】
【表９】
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【００９５】
以上の結果から、本組成物は、腹腔内投与では腫瘍の成長をコントロールのグルコースよりも有意に抑制する効果が見られなかった。
【００９６】
通常、腹腔内投与は、静脈内注射同様、消化器官を通らずに速やかに全身循環に移行するため、肝臓等による代謝の影響を投与直後は受けにくいとされている。従って、投与量も経口投与に比べて少ない投与量で効果がある。しかしながら、本組成物は、腹腔内投与ではコントロールであるグルコースと有意な差が見られないことから、消化器官から血流に入るまでの間で代謝されることによって初めて腫瘍の発生及び成長の抑制を行い得る機能を発揮するプロドラッグである可能性が示唆された。
【００９７】
＜実施例６＞
＜360mg/200mlカリカの経口投与＞
実施例3のカリカ及びグルコース摂取量の2/3の濃度で実験した。即ち、カリカ群は、360mg/200mlのカリカを自由摂取で飲用させた。この濃度は、60kgの成人に換算すると6gの本組成物を毎日摂取したのと同じ量となる。グルコース群は、360mg/200mlのグルコースを自由摂取で飲用させた。その他の実験条件は、実施例３と同様である。
【００９８】
表10は、グルコース群の腫瘍サイズ(mm)を経時的に測定した結果であり、表10を基にグラフ化したものが図5(a)である。5匹中3匹は、回復せず、うち1匹は再発によるものであった。
【００９９】
【表１０】
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【０１００】
表11は、カリカ群の腫瘍サイズ(mm)を経時的に測定した結果であり、図5(b)は表11を基にグラフ化した図である。5匹中1匹は拒絶しなかったが、残りの4匹は注射後16から20日までに回復した。
【０１０１】
【表１１】
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【０１０２】
図5(c)は、グルコース群とカリカ群の平均腫瘍サイズ(mm)をグラフ化したものである。14日目からグルコース群とカリカ群との間に有意な差が見られ、18日目には顕著な差が見られた(図5(d))。
【０１０３】
以上の結果、1日当たりのカリカ摂取量が360mg/200mlのカリカ群は、コントロールのグルコース群と比較して、腫瘍の成長が抑制され早期に腫瘍から回復することが明らかとなった。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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