(57)【要約】【課題】ビワ葉培養エキスとシクロデキストリンとの包接物の提供。【解決手段】ビワ葉の培養エキスとシクロデキストリンとの包接物、当該包接物を含む血糖値上昇抑制剤、機能性食品及び化粧品。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ビワ組織の培養エキスとシクロデキストリン又はその誘導体との包接物。
【請求項２】
ビワ組織がビワ葉である請求項１に記載の包接物。
【請求項３】
コロソリン酸、マスリン酸、トルメンティック酸、ウルソール酸、２α,19α-ジヒドロキシ-3-オキソウルス-12-エン-28-オイック酸、オレアノール酸及びフペンジック酸並びにそれらの薬学的に許容される塩からなる群から選ばれる少なくとも１つと、シクロデキストリン又はその誘導体との包接物。
【請求項４】
水溶性が非包接化ビワ葉培養エキスの水溶性よりも向上した、請求項１〜３のいずれか１項に記載の包接物。
【請求項５】
水溶性が向上することにより、腸管吸収性が非包接化ビワ葉培養エキスの腸管吸収性よりも向上した、請求項４に記載の包接物。
【請求項６】
腸管吸収性が向上することにより、包接物中の成分の血中移行量が非包接化ビワ葉培養エキス中の成分の血中移行量よりも増加した、請求項５に記載の包接物。
【請求項７】
包接物中の成分が血中に移行することにより、血糖値の上昇抑制効果を発揮する、請求項６に記載の包接物。
【請求項８】
ビワ組織の培養エキス、又は請求項１〜７のいずれか１項に記載の包接物を含む血糖値上昇抑制剤。
【請求項９】
ビワ組織がビワ葉である請求項８に記載の抑制剤。
【請求項１０】
血糖値が空腹時血糖値である請求項８又は９に記載の抑制剤。
【請求項１１】
少なくとも100mg/dlの空腹時血糖値を有するヒトに対して用いられることを特徴とする、請求項１０に記載の抑制剤。
【請求項１２】
ビワ組織の培養エキス、又は請求項１〜７のいずれか１項に記載の包接物を含む食品。
【請求項１３】
ビワ組織の培養エキス、又は請求項１〜７のいずれか１項に記載の包接物を含む化粧品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ビワ組織、特にビワ葉の培養エキスとシクロデキストリンとの包接物に関する。
【背景技術】
【０００２】
シクロデキストリン（CD）は、シクロデキストリングルカノトランスフェラーゼをとうもろこしや馬鈴薯デンプンに作用させることによって得られる、グルコースがα-1,4結合した環状オリゴ糖である。CDは、環の外側は親水性を示し、環の内側は疎水性を示しており、その疎水性空洞内に脂溶性物質を主とする各種分子を包み込む性質（包接作用）を有する。この包接作用によって、様々な薬理活性物質の特性改善を行うことができ、安定性、徐放性、可溶化、粉末化、吸湿性などの改善が期待されている（非特許文献１）。
また、対象となる物質の水溶性、安定性、生理活性向上などを目的として、種々の包接化合物に関する特許出願もなされている（特許文献１〜７）。
【０００３】
他方、コロソリン酸は、植物中に存在するトリテルペンであり、主にバナバ（Lagerstroemia speciosa)から得ることができる。コロソリン酸は血糖値を下げるほか、血糖値の再上昇を抑制することが知られており（非特許文献２: Antidiabetic activity of a standardized extract (Glucosol) from Lagerstroemia speciosa leaves in Type II diabetics. A dose-dependence study. Judy WV. et al., Journal of Ethnopharmacology 87:115 117, 2003）、ビワ葉の細胞懸濁培養物からコロソリン酸を多量に抽出する試みもなされている（特許文献８）。さらに、コロソリン酸及び／又はその他のトリテルペンとシクロデキストリンとを含む血糖値上昇抑制剤も知られており（特許文献９）、この特許文献９にはコロソリン酸及び／又はその他のトリテルペンはビワから抽出したエキスから単離できることが記載されている。
さらに、コロソリン酸を配合した皮膚化粧料を製造する試みもなされている（特許文献１０）。
【０００４】
しかしながら、上記血糖値上昇抑制剤や化粧料は、有効成分であるコロソリン酸及び／又はその他のトリテルペンを単離精製したものを用いる必要があるため、処理装置を必要とするほか処理作業に時間を要する。また、単離されたトリテルペン、特にトルメンティック酸は酸化安定性が低く、大気中での取り扱いにおいて劣化を生じるとの問題がある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特許第4859006号
【特許文献２】特開2010-24240号公報
【特許文献３】特開2012-19695号公報
【特許文献４】特開平8-259829号公報
【特許文献５】特開2010-174105号公報
【特許文献６】特開昭62-267261号公報
【特許文献７】特開2010-126492号公報
【特許文献８】特表2009-500013号公報
【特許文献９】特開2006-347967号公報
【特許文献１０】特開2006-265232号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】中田大介、寺尾啓二、ビタミン, 84巻2号（2月）2010, 61-70
【非特許文献２】Judy WV. et al., Journal of Ethnopharmacology 87:115, 117, 2003
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
コロソリン酸を単離精製することなく簡易に作製されたビワ組織の培養エキスが所定の薬理効果を奏するかどうかは明らかではない。また、ビワ組織の培養エキスを、シクロデキストリンを用いて包接化し、その包接物が、酸化安定性を有するかどうか、さらにはヒト腸管において、消化管内での可溶化が促進し、吸収力が高まるか否かは明らかではない。そこで本発明は、ビワ組織培養エキスとシクロデキストリンとの包接物を提供することを目的とする。また本発明は、前記包接物又はビワ組織培養エキスを含む血糖値上昇抑制剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者は、上記課題を解決するため鋭意研究を行った結果、ビワ組織培養エキスは血糖値の上昇を抑制し、また、ビワ組織培養エキスとシクロデキストリンとの包接物は、腸管において高い吸収性を示し、その結果、血糖値の低下作用を有することを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００９】
すなわち、本発明は以下の通りである。
（１） ビワ組織の培養エキスとシクロデキストリン又はその誘導体との包接物。
（２）ビワ組織がビワ葉である（１）に記載の包接物。
（３）コロソリン酸、マスリン酸、トルメンティック酸、ウルソール酸、２α,19α-ジヒドロキシ-3-オキソウルス-12-エン-28-オイック酸、オレアノール酸及びフペンジック酸並びにそれらの薬学的に許容される塩からなる群から選ばれる少なくとも１つと、シクロデキストリン又はその誘導体との包接物。
（４）水溶性が非包接化ビワ葉培養エキスの水溶性よりも向上した、（１）〜（３）のいずれか１項に記載の包接物。
（５） 水溶性が向上することにより、腸管吸収性が非包接化ビワ葉培養エキスの腸管吸収性よりも向上した、（４）に記載の包接物。
（６）腸管吸収性が向上することにより、包接物中の成分の血中移行量が非包接化ビワ葉培養エキス中の成分の血中移行量よりも増加した、（５）に記載の包接物。
（７）包接物中の成分が血中に移行することにより、血糖値の上昇抑制効果を発揮する、（６）に記載の包接物。
（８）ビワ組織の培養エキス、又は（１）〜（７）のいずれか１項に記載の包接物を含む血糖値上昇抑制剤。
（９）ビワ組織がビワ葉である（８）に記載の抑制剤。
（１０）血糖値が空腹時血糖値である（８）又は（９）に記載の抑制剤。
（１１）少なくとも100mg/dlの空腹時血糖値を有するヒトに対して用いられることを特徴とする、（１０）に記載の抑制剤。
【発明の効果】
【００１０】
本発明により、ビワ組織培養エキスとシクロデキストリンとの包接物が提供される。また本発明により、ビワ組織培養エキスを含む血糖値上昇抑制剤が提供される。
【００１１】
本発明の包接物は、消化管内での水溶性が非包接化ビワ葉培養エキスの水溶性よりも向上し、これにより腸管での吸収性が向上する。そして、包接物中の有効成分の血中移行量が非包接化ビワ葉培養エキス中の有効成分の血中移行量よりも高まり、その結果、血糖値、特に空腹時血糖値を低下させる作用を有する。さらに、本発明の包接物は酸化安定性を有する。従って、本発明の包接物は、血糖値上昇抑制を目的とした機能性食品等に極めて有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】ビワ葉培養エキスが空腹時血糖値を低下させることを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
以下、本発明を詳細に説明する。
１．概要
本発明は、ビワ組織の培養エキス自体、又はビワ組織の培養エキスとシクロデキストリンとの包接物であり、血糖値上昇抑制剤及び機能性食品等として使用することができるものである。
【００１４】
本実施例において、ビワ葉培養エキスを作製し、これをカプセル化してヒトに供したところ、当該ビワ葉培養エキスは血糖値の上昇抑制作用を有することを見出した。但し、ビワ葉培養エキスは水に不溶性又は難溶性であるため、腸管吸収性を得るためには大量のエキスを食する必要がある。これは製造コストが高くなるのみならず、需要者にとって負担にもなる。
【００１５】
そこで本発明においては、培養エキスの水溶性を高めて腸管吸収性を向上させるべく、ビワ葉培養エキスをシクロデキストリンで包接化した。その結果、少量のビワ葉培養エキスであっても有効成分の血中移行量を高めて血糖値の上昇を抑制することを見出した。これにより、ビワ葉培養エキスの製造コストを抑えることができ、需要者の負担も軽減される。
【００１６】
本発明においては、シクロデキストリンとビワ組織培養エキスとを混合することにより、ビワ組織培養エキス−シクロデキストリン包接物を作製する。ビワ組織培養エキス（例えばビワ葉培養エキス）は水に溶解しないが、シクロデキストリン包接物は水、水-アルコールに溶解する。あるいは、水、又は水性媒体中で分散性が良好である。本発明においては、α、β、γ-シクロデキストリンのいずれを用いても包接物は作製できるが、γ-シクロデキストリン包接物の水溶解性が最も高い点で好ましい。
また、本発明の包接物は腸管吸収性が向上しており、熱、酸素、pHなどに対する安定性が向上し、これに起因する効果効能の向上が期待される。
【００１７】
２．ビワ組織培養エキス
本発明において使用される植物はビワ（Eriobotrya japonica）である。
ビワは、バラ科の常緑高木であり、果実部は食用にされ、葉部は胃腸虚弱、神経痛、下痢等の治療等に用いられている。ビワは、日本、台湾、中国等に自生しており、これらの地域から容易に入手することができる。抽出原料として使用し得るビワの組織は、特に限定されるものではなく、例えば、葉部、枝部、樹皮部、幹部、茎部、果実部、種子部、花部等の地上部、根部又はこれらの部位の混合物等が挙げられるが、これらのうち葉部を用いることが好ましい。
【００１８】
本発明において使用されるビワ組織培養エキス、特にビワ葉培養エキスは、培養物からの抽出物であり、以下の手法により得ることができる。
まず、ビワの植物組織からカルスを誘導し、このカルスから懸濁培養用細胞株を作製する。次に、この細胞株を液体培地により懸濁培養する。そして得られた懸濁培養物から、培養エキスを抽出する。培養エキスは、植物の抽出に一般に用いられている抽出方法によって得ることができる。
ビワ組織のカルス誘導は、公知技術を参照して行うことができる（例えば特表2009-500013号公報）。
【００１９】
例えば、組織としてビワ葉を用いる場合、ビワ葉を表面殺菌した後、植物生長調節剤を含む栄養培地上で培養することによって行われる。栄養培地は、植物細胞の培養に幅広く使用される培地、例えば、ムラシゲ-スクーグ培地（MS培地）、ガンボーグ培地（B5培地）等を使用することができる。必要に応じて前記培地に各種添加剤を添加したり、成分のうちの一部を除去して使用することができる。前記添加剤としては、例えば天然オーキシンであるインドール-3-酢酸（IAA）、インドール-3-酪酸（IBA）、α-ナフタレン酢酸（NAA）などが挙げられる。
カルスの誘導に好ましい生育温度は20〜30℃であり、好ましくは22〜27℃である。
【００２０】
カルスが十分に成長した後、カルスを液体培地に移して液体懸濁培養を行うことにより、懸濁培養細胞株を誘導する。液体培養に使用される培地は、カルス誘導時に使用された培地と同一組成の培地のうち寒天などの固形化成分を除いたものを使用することができる。懸濁培養は、回分式培養、連続式培養、流加式培養など、公知手法により行なうことができ、また、培養条件も、カルスの誘導と同様の条件下で行うことができる。
【００２１】
懸濁培養後、遠心等により細胞を回収し、回収された細胞を用いてビワ組織培養エキスを抽出する。
抽出溶媒として、極性溶媒を使用することが好ましく、例えば、水、親水性有機溶媒等が挙げられ、これらを単独で又は２種以上を組み合わせて、室温又は溶媒の沸点以下の温度で使用することが好ましい。
【００２２】
抽出溶媒として使用し得る水としては、純水、水道水等が挙げられ、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、濾過、イオン交換、浸透圧調整、緩衝化等が含まれる。また、本発明において抽出溶媒として使用し得る水には、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
【００２３】
抽出溶媒として使用し得る親水性有機溶媒としては、炭素数１〜５の低級脂肪族アルコール（例えばメタノール、エタノール、イソプロパノール、ブタノール）のほか、低級脂肪族ケトン（アセトン、メチルエチルケトン等）、さらには炭素数２〜５の多価アルコール（1,3-ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等）が挙げられるが、食用に供することを考慮するとエタノールであることが好ましい。
【００２４】
２種以上の極性溶媒の混合液を抽出溶媒として使用する場合、その混合比は適宜調整することができる。例えば、水と低級脂肪族アルコールとの混合液を使用する場合には、低級脂肪族アルコール50〜100質量部に対して水0〜50質量部を混合することが好ましく、水と低級脂肪族ケトンとの混合液を使用する場合には、低級脂肪族ケトン50〜100質量部に対して水質量部0〜50を混合することが好ましく、水と多価アルコールとの混合液を使用する場合には、多価アルコール70〜100質量部対して水0〜30質量部を混合することが好ましい。
【００２５】
抽出処理は、抽出原料に含まれる可溶性成分を抽出溶媒に溶出させ得る限り特に限定はされず、常法に従って行うことができる。例えば、抽出原料の0.1〜10倍量（質量比）の抽出溶媒に抽出原料を浸漬し、常温又は還流加熱下で可溶性成分を抽出させた後、濾過して抽出残渣を除去することにより抽出液を得ることができる。得られた抽出液から溶媒を留去するとペースト状の濃縮物が得られ、この濃縮物をさらに乾燥すると乾燥物が得られる。
【００２６】
本発明において得られるビワ組織（例えばビワ葉）培養エキス中にはトリテルペンが約80〜90％の割合で含まれている。トリテルペンとしては、トルメンティック酸、コロソリン酸、マスリン酸、ウルソール酸、2α,19α-ジヒドロキシ-3-オキソウルス-12-エン-28-オイック酸、オレアノール酸、フペンジック酸などが挙げられる。また、培養エキス中には、その他に、植物ステロール、脂肪酸、リン脂質等が含まれる。
この培養エキスを、後述のシクロデキストリンを用いて包接化させる。
【００２７】
ビワ組織の培養エキスには各種トリテルペンが含まれており、これらを単離することなく組成物の状態で使用するが、本発明においては、トルメンティック酸、コロソリン酸、マスリン酸、ウルソール酸、2α,19α-ジヒドロキシ-3-オキソウルス-12-エン-28-オイック酸、オレアノール酸及びフペンジック酸からなる群から選ばれる少なくとも１つのトリテルペン、あるいはこれらの薬学的に許容される塩を単独で又は適宜組み合わせて包接化させることもできる。
【００２８】
単一物質では不安定なトリテルペンの場合は、他のトリテルペンとの混合物にすることで安定化することが可能である。この点、本発明においては、培養エキス中のトルメンティック酸の酸化安定性が向上していることが確認された。従って、トリテルペン（トルメンティック酸）は、培養エキス中に存在することにより、単離された場合と比較して酸化安定性が向上する。
【００２９】
上記トリテルペン単品は、ビワ組織培養エキスからＨＰＬＣ等の方法を用いて単離することができる。
また、上記トリテルペンの単品のうち、コロソリン酸、ウルソール酸、オレアノール酸は市販されており、購入することもできる（（株）常磐植物化学研究所、和光純薬工業等）。
【００３０】
薬学的に許容される塩として、アルカリとの塩を用いることができる。例えば、ナトリウム塩、カリウム塩などのアルカリ金属塩、カルシウム塩、マグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩、トリメチルアミン、トリエチルアミン、ピリジン、ピコリン、ジシクロヘキシルアミン、N, N’-ジベンジルエチレンジアミン、アルギニン、リジンなどの有機塩基塩、アンモニウム塩などを挙げることができる。
【００３１】
３．包接物
ビワ組織培養エキス−シクロデキストリン包接物の製造は、公知の方法を用いて行うことができる。
シクロデキストリン化合物としては、α−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、γ−シクロデキストリン等が挙げられ、中でもγ−シクロデキストリンが好ましい。
【００３２】
また、本発明においてはシクロデキストリンの誘導体を使用することもできる。シクロデキストリンの誘導体としては、化学修飾物、例えばヒドロキシプロピル化、アセチル化、トリアセチル化、メチル化、モノクロロトリアジノ化されたシクロデキストリンが挙げられる。これらの誘導体は、例えば市販品（シクロケム社）を購入して用いることもできる。
【００３３】
包接化する方法として、例えば混練法、液相混合法、溶媒蒸発法又は凍結乾燥法により包接物を形成させたのち、乾燥することにより製造することができるが、好ましくは混練法である（例えば、特許第4859006号公報）。
【００３４】
混練法は、常法に従って、例えば、混練機、乳鉢等を用いて、ビワ葉培養エキス、シクロデキストリン、並びに適量の水及び／又は有機溶剤を加えて、すりつぶしながら、ペースト状になるまで練り混ぜることによって行う。
【００３５】
使用する有機溶剤としては、エタノール、メタノール、THF（テトラヒドロフラン）、アセトン、酢酸エチル、ヘキサン、アセトニトリル、クロロホルム、ジクロロメタンなどを使用することができるが、食用に供することを考慮するとエタノールであることが好ましい。
【００３６】
液相混合法は、常法に従って、例えばフラスコ、反応釜などの容器内にビワ葉培養エキス、シクロデキストリン、有機溶媒及び／又は水を加え、水相中で激しく攪拌することによって行う。
【００３７】
溶媒蒸発法は、常法に従って、例えばロータリーエバポレーター等減圧可能な装置に、ビワ組織培養エキス、シクロデキストリン、有機溶媒及び／又は水を混合したのち、減圧して溶媒を留去することによって行う。
【００３８】
凍結乾燥法は、常法に従って、例えば凍結乾燥機を使って、ビワ組織培養エキス、シクロデキストリン、有機溶媒及び／又は水を混合したのち、減圧下で溶媒を留去することによって行う。
【００３９】
ビワ組織培養エキスとシクロデキストリンとの混合割合は、例えばビワ組織培養エキス１質量部に対し、シクロデキストリン0.1〜10質量部であり、水の量は特に限定されるものではなく、例えばシクロデキストリン１質量部に対し、0.001〜１質量部が好ましい。
【００４０】
包接化の温度条件は、ビワ組織培養エキスが変性しない温度条件下で行うことが好ましく、例えば４〜５０℃、好ましくは４〜２５℃である。
【００４１】
本発明においては、ビワ組織培養エキスを微細化し、平均粒子径１μm以下、好ましくは100nm以下の超微粒子製剤であるナノ粒子懸濁液を調製することにより、水溶性を改善することができる。この方法は、固体の溶解速度はその表面積に比例することを利用し、固体薬物を微細化することによりその表面積を増大させ、溶解速度を改善するというものである。溶解速度が向上することにより、腸管吸収性も向上する。
【００４２】
微細化の方法としては、乾式粉砕法で用いられる気流式粉砕機（ジェットミル）による方法、超臨界凍結造粒法、湿式粉砕法などが挙げられる。また、ナノマイザーを利用したナノオーダー粒子への微細化が可能である。
また、ビワ組織培養エキスの水溶性を高めるため、ミセルを形成させることもできる。
【００４３】
ミセルは、分子内に親水性部分と疎水性部分とを有する物質（両親媒性物質）を水に溶かしたときに、ある濃度（臨界ミセル濃度）以上で親水基を外に疎水基を内に向けて分子が集まってできた会合体である。
【００４４】
本発明においては、分散化剤で処理することで培養エキスをミセル化させることができる。分散化剤は特に限定されるものではないが、界面活性剤、高分子、糖類、アルコール類、グリセライド、酸、塩基、塩類等が挙げられる。より好ましくは、食用に用いられる乳化剤がよく、例えば、レシチン、リゾレシチン、グリセリン脂肪酸エステル、グリセリン有機酸脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ステアロイル乳酸カルシウム等を使用することができる。
【００４５】
本発明の包接物の水溶性は一般的な溶解度測定方法の他に、水溶液中のビワ組織培養エキス中のトリテルペン濃度をＨＰＬＣで定量することにより確認することができる。そして、溶解度測定時に水に溶解し、ＨＰＬＣクロマトグラムにトリテルペンピークが確認された場合、本発明の包接物の水溶性が、包接化されていないビワ葉培養エキス（非包接化ビワ葉培養エキスという）の水溶性よりも向上したと判断する。
【００４６】
また、本発明の包接物の腸管吸収性は、例えば腸管上皮細胞のモデルであるCaco-2細胞（ヒト結腸癌由来の細胞株）を用いてCaco-2細胞膜の管腔側に包接物溶液（例えば、ＨＢＳＳ緩衝液、培養液、人工消化溶液）を添加し、2-3時間放置した後、基底膜側に透過した溶液中のトリテルペン濃度をＬＣ／ＭＳで定量することにより確認することができる。Caco-2細胞での透過係数は腸管吸収やバイオアベイラビリティと相関するとされているため、薬物の消化管膜透過性のスクリーニングに利用できる。そして、ＬＣ／ＭＳで定量したトリテルペン濃度が非包接化ビワ葉培養エキスを用いた時より高値であるときは、本発明の包接物は、水溶性が向上することにより、腸管吸収性が非包接化ビワ葉培養エキスの腸管吸収性よりも向上したと判断する。
【００４７】
本発明の包接物中の成分（例えば各トリテルペン等）の血中移行性は、例えば摂取後の血中トリテルペン濃度をＬＣ／ＭＳを用いて測定することにより確認することができる。血中にはＬＣ／ＭＳ測定時に妨害となる物質が多く含まれているため、遠心分離で血清に分離し、血清から溶媒で抽出して妨害物質をさらに除去し、トリテルペンを濃縮することで測定することができる。そして、血中トリテルペン濃度が非包接化ビワ葉培養エキスを用いた時より高値であるときは、本発明の包接物中の成分は、腸管吸収性が向上することにより、包接物中の成分の血中移行量が非包接化ビワ葉培養エキスの成分の血中移行量よりも増加したと判断する。
【００４８】
本発明の包接物の水溶性が向上する、本発明の包接物の腸管吸収性が向上する、あるいは本発明の包接物中の成分の血中移行量が増加するということは、ビワ組織培養エキス自体を多量に食さなくても、少量で血糖値上昇抑制という目的の効果を発揮することを意味しており、少量かつ低価格で需要者に提供することができる。
【００４９】
４．空腹時血糖値抑制剤、食後血糖値上昇抑制剤、食品及び化粧品
（１）血糖値上昇抑制剤
本発明の血糖値上昇抑制剤は、ビワ組織培養エキス自体、又は本発明の包接物を含むものである。血糖値には食後血糖値及び空腹時血糖値が含まれ、本発明の血糖値上昇抑制剤はどちらの血糖値にも適用できるが、好ましくは、空腹時血糖値の上昇抑制を目的として使用される。
【００５０】
本発明の包接物は腸管吸収性に優れており、難溶性のビワ組織培養エキスの腸吸収性を非包接化ビワ葉培養エキスよりも高めることができる。その結果、ビワ組織培養エキスに含まれるコロソリン酸等の成分により、血糖値上昇を抑制することができる。
本発明の血糖値上昇抑制剤は、本発明のビワ組織培養エキス又は包接物をそのまま用いることもできるが、通常、適当な添加剤を混和し製剤化したものを使用することもできる。
【００５１】
上記添加剤としては、一般に医薬に使用される、賦形剤、結合剤、滑沢剤、崩壊剤、着色剤、矯味矯臭剤、乳化剤、界面活性剤、溶解補助剤、懸濁化剤、等張化剤、緩衝剤、防腐剤、抗酸化剤、安定化剤、吸収促進剤等を挙げることができ、所望により、これらを適宜組み合わせて使用することもできる。
【００５２】
本発明の血糖上昇抑制剤の剤型としては、経口用剤型、例えば散剤、顆粒剤、丸剤、ソフトカプセル、ハードカプセル、錠剤、チュアブル剤、速崩剤、シロップ、液剤等が挙げられる。これらの製剤は常法に従って調製することができる。
【００５３】
製剤化のために用いることができる添加剤としては、例えば大豆油、サフラワー油、オリーブ油、胚芽油、ひまわり油、グレープシード油、牛脂、いわし油等の動植物性油、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン、ソルビトール等の多価アルコール、ソルビタン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル等の界面活性剤、精製水、乳糖、デンプン、結晶セルロース、Ｄ−マンニトール、レシチン、アラビアゴム、ソルビトール液、糖液等の賦形剤、その他の甘味料、着色料、ｐＨ調整剤、香料などが例示できる。また、錠剤、顆粒剤は周知の方法でコーティングしてもよく、ゾル状又はゲル状物質等で包んでもよい。
【００５４】
血糖上昇抑制剤を使用する際、投与方法は経口投与が好ましい、また、投与の対象は特に限定されるものではなく、健常人であれば血糖値上昇の予防目的とすることができ、他方、高血糖値を有する被験者であれば血糖値を低下させることを目的とすることができる。例えば高血糖値を有する被験者の場合、少なくとも100mg/dlの空腹時血糖値を有するヒトに対して用いられる。好ましくは、空腹時血糖値が100〜140mg/dl、さらに好ましくは100〜126mg/dlのヒトに対して用いられることを特徴とする。
また、本発明の血糖値上昇抑制剤は、血糖値を正常の値の範囲よりも下げることなく、したがって、低血糖を発症させることなく、血糖上昇を抑制することができる。
【００５５】
本発明の血糖値上昇抑制剤の投与量は、症状の程度、患者又は被験者の年齢、性別、体重、投与時期及び投与間隔等によって異なり、特に限定されるものではない。
本発明のビワ組織（例えばビワ葉）培養エキス自体を投与する場合の投与量は、通常、成人（体重60 kg）１日あたり少なくとも90mg、95mg、100mg、110mg、120mg、130mg、140mg、150mg、160mg、170mg、180mg、190mg又は200mgであり、好ましくは90〜450mg、さらに好ましくは200〜450mg、特に好ましくは444mgであり、これを通常１日１回投与するか、1日２回〜3回に分けて投与することができる。
従って、本発明のビワ組織培養エキス自体を投与する場合の本発明の血糖値上昇抑制剤は、１日あたり少なくとも90mgのビワ葉培養エキスが、ヒトに対して１日１〜３回経口投与されるように用いられることを特徴とする。
【００５６】
本発明の包接物を投与する場合は、通常、成人（体重60 kg）１日あたり、ビワ組織培養エキス量として少なくとも10mg、11mg、12mg、13mg、14mg又は15mgであり、好ましくは15mg〜60mg、さらに好ましくは20〜40 mgであり、これを通常１日１回投与するか、1日２回〜3回に分けて投与することができる。
従って、本発明の包接物を投与する場合の本発明の血糖値上昇抑制剤は、１日あたり少なくとも10mgのビワ組織培養エキスがヒトに対して１日１〜３回経口投与されるように用いられることを特徴とする。
【００５７】
さらに、各トリテルペンを単独で又は適宜組み合わせて包接化し、その包接物を投与する場合の本発明の血糖値上昇抑制剤は、成人（体重60 kg）１日あたり、トリテルペン量として少なくとも8.8mg、9.6mg、10.5mg、11.4mg、12.3mg又は13.1mgであり、好ましくは13.1mg〜52.5mg、さらに好ましくは17.5〜35.0mgであり、これを通常１日１回投与するか、1日２回〜3回に分けて投与することができる。
従って、本発明の包接物を投与する場合の本発明の血糖値上昇抑制剤は、１日あたり少なくとも8.8mgのトリテルペン（単品又は組み合わせ）がヒトに対して１日１〜３回経口投与されるように用いられることを特徴とする。
【００５８】
（２）食品
本発明の食品は、ビワ組織培養エキス自体、又は本発明の包接物を含むものであり、特に空腹時血糖値の上昇抑制を目的とした機能性食品、サプリメント等として使用される。
本発明の包接物を含有する食品（特に機能性食品）の形態としては、例えばサプリメント（散剤、顆粒剤、ソフトカプセル、ハードカプセル、錠剤、チュアブル錠、速崩錠）が挙げられるが、その他にも、飲料（お茶、炭酸飲料、乳酸飲料、スポーツ飲料等）、菓子（グミ、ゼリー、ガム、チョコレート、クッキー、キャンデー等）、油、油脂食品（マヨネーズ、ドレッシング、バター、クリーム、マーガリン等）、調味料（ケチャップ、ソース等）、流動食、乳製品（牛乳、ヨーグルト、チーズ等）、パン類、麺類（うどん、そば、ラーメン、パスタ、焼きそば、きしめん、ソーメン、冷麦、ビーフン等）等が挙げられる。但し、これらの形態に限定されるものではない。
【００５９】
本発明の包接物を含有する機能性食品としては、必要に応じて各種栄養素、各種ビタミン類（ビタミンＡ、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、ビタミンＣ、ビタミンＥ等）、各種ミネラル類、食物繊維、多価不飽和脂肪酸、その他の栄養素（コエンザイムＱ１０、カルニチン、セサミン、α−リボ酸、イノシトール、Ｄ−カイロイノシトール、ピニトール、ホスファチジルセリン、ホスファチジルＤＨＡ、ホスファチジルイノシトール、タウリン、グルコサミン、コンドロイチン硫酸、Ｓ−アドノシルメチオニン等）、分散剤、乳化剤などの安定剤、甘味料、呈味成分（クエン酸、リンゴ酸等）、フレーバー、ローヤルゼリー、プロポリス、アガリクス等を配合することができる。また、ペパーミント、ベルガモット、カモミール、ラベンダー、タイム等のハーブ類を配合してもよい。またテアニン、デヒドロエピアンドステロン、メラトニンなどの素材を配合することもできる。
本発明の包接物を食品又はサプリメントとして使用する場合、用法及び用量として特に限定されるものではないが、血糖値上昇抑制剤の項で説明した用法及び用量を適用することができる。
【００６０】
（３）化粧品
本発明の化粧品は、ビワ組織培養エキス自体、又は本発明の包接物を含むものである。
本発明の包接物を含有する化粧品としては、クリーム、乳液、ローション、マイクロエマルジョンエッセンス、入浴剤等が挙げられ、香料等を混合してもよい。
本発明の包接物を化粧品として使用する場合、化粧品100gあたり1mg〜20g 、好ましくは10mg〜2.0g、より好ましくは100mg〜200mgの量を配合することができる。
以下、実施例により本発明をさらに具体的に説明する。但し、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
【実施例１】
【００６１】
ビワ葉培養エキスの製造
本実施例では、ビワ葉のカルス培養からエキスを抽出した。
ビワ葉のカルス培養は、特表2009-500013号公報の記載に準じて行なった。
培養物を乾燥させた後、50％エタノールで洗浄した。次にエタノールで抽出した後ろ過し、溶液部分を真空乾燥機で乾燥させ、これをビワ葉培養エキスとした。
得られたエキスを表１に示した方法により分析した結果、表１に示す組成を有することが示された。
【００６２】
【表１】
2013245213.tif 000002
【実施例２】
【００６３】
包接物の製造
（１）包接物１
実施例１で得られたビワ葉培養エキス100mg、5倍量のγ-シクロデキストリン500mg、THF-メタノール（容量比=20:1）2ml及びイオン交換水2mlを混合し、乳鉢で約20分間よく混練し、ペースト状とした。最終段階で添加した溶媒を殆ど揮発させ、残分（残った粉体状物）を真空乾燥機で5時間乾燥した。
【００６４】
（２）包接物２
ビワ葉培養エキス100mg、10倍量のβ-シクロデキストリン1g、THF-メタノール（容量比=20:1）2ml及びイオン交換水2mlを混合し、乳鉢で約20分間よく混練し、ペースト状とした。最終段階で添加した溶媒を殆ど揮発させ、残分（残った粉体状物）を真空乾燥機で5時間乾燥した。
作製した包接物と水溶解度との関係を表２に示す。
【００６５】
【表２】
2013245213.tif 000003
【００６６】
水溶解性において、「○」は0.05mg/ml以上0.5mg/ml以下（攪拌又は超音波によってよく溶ける）、「△」は0.01mg/ml以上0.05mg/ml以下（攪拌又は超音波又は加温によって溶ける）「×」は0.0mg/ml（拡散及び超音波又は加温によっても溶けない）ことを示す。「コントロール」は、包接化していないビワ葉培養エキス自体である。
ビワ葉培養エキス−シクロデキストリン包接物中のトリテルペン含量をHPLCで測定した結果、製造工程において分解せずに、理論通りの重量で水に溶解していることを確認した。
【実施例３】
【００６７】
＜製造例１＞
実施例１で作製したビワ葉培養エキスをカプセル化し、10カプセルあたりビワ葉培養エキス444mgを含むカプセル製剤を製造した。
10カプセルあたりの組成を表３に示す。
【００６８】
【表３】
2013245213.tif 000004
【実施例４】
【００６９】
血糖値上昇抑制作用
20歳以上64歳以下の健康成人男女を対象とし、ビワ葉培養エキスを食したときの空腹時血糖値の変動を調べた。
被験者数は22名で行ない、健常成人被験者11名（試験群１）、及び空腹時血糖値が100〜126 mg/dLの被験者11名（試験群２） として行なった。
試験は、医師の管理のもと、被験者のプライバシー及び個人情報の保護に十分配慮し、かつ、医療機関の倫理審査会による審査及び承認を得るとともに、被験者にはインフォームドコンセントを得た上で行なった。
【００７０】
試験食品として製造例１で製造されたカプセルを、被験者に１日10カプセル服用させた。1カプセル中に、ビワ葉培養エキスは44.4mgを含有する。実施期間は4週間行った。血糖値は通常の臨床検査法（ヘキソキナーゼ法）により測定した。
結果を図１に示す。
健常者（試験群１）では、空腹時の血糖が摂取開始４週目で0.4±5.8 mg/dL上昇した。
血糖値高めの被験者（試験群２）では、空腹時の血糖が摂取開始４週目で14.5±13.8 mg/dL低下した。
ビワ葉培養エキス444mg/日摂取によって、空腹時血糖値が有意に低下することを確認した。
本実施例により、空腹時血糖値を食品によって低下させることが示された。このような血糖値低下作用は、食品では初の例である。
【産業上の利用可能性】
【００７１】
本発明のビワ組織培養エキス、又は当該培養エキスとシクロデキストリンとの包接物は、腸管吸収性が高く、血糖値を低下させるための機能性食品として有用である。
【図１】
2013245213.tif 000005