(57)【要約】【課題】本発明は、NPC1L1に結合し、コレステロール吸収を阻害する薬剤を提供することを課題とする。【解決手段】ホコツシ、ホコツシの抽出物を有効成分とするコレステロール吸収阻害剤。【選択図】図２
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ホコツシを配合したことを特徴とするコレステロール吸収阻害剤。
【請求項２】
ホコツシエキスを配合したことを特徴とするコレステロール吸収阻害剤。
【請求項３】
ホコツシエキスがバクチオール、イソババカルコン、ババキニンＡ、コリリフォルＡからなる群から選択される化合物のいずれか１以上を含有するコレステロール吸収阻害剤。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれかに記載されたコレステロール吸収阻害剤を有効成分とするアテローム性動脈硬化の予防又は改善剤。
【請求項５】
バクチオール、イソババカルコン、ババキニンＡ、コリリフォルＡから選択される１以上の物質を有効成分とするコレステロール吸収阻害剤。
【請求項６】
バクチオール、イソババカルコン、ババキニンＡ、コリリフォルＡから選択される１以上の物質を有効成分とするアテローム性動脈硬化の予防又は改善剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、コレステロール吸収阻害剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
血中コレステロールの上昇は冠状動脈性心疾患の主要な危険因子である。血中コレステロールを低下させるためには、基本的に、低コレステロールの食物、胆汁酸性の金属イオン封鎖剤（コレスチラミンおよびコレスチポール）、ニコチン酸（ナイアシン）、フィブラート類およびプロブコールなどに限られていた。しかしこれらの薬剤や療法には治療の限界があった。
近年、ロバスタチン、シンバスタチンおよびプラバスタチン（HMG-CoAレダクターゼ阻害剤）が、冠動脈および頸動脈におけるアテローム性病変の進行を遅延させることが確認された。さらにシンバスタチンおよびプラバスタチンが冠状動脈性心臓病のリスクを低下させることが明らかとなった。
【０００３】
動脈硬化疾患において、コレステリルエステルは、アテローム性病変の主要な構成成分であり、動脈壁細胞におけるコレステロールの主要な貯蔵形態である。このコレステリルエステルの形成は、食事性コレステロールの腸管吸収における重要なステップでもある。
小腸上皮細胞に取り込まれたコレステロールは、小腸上皮細胞内の小胞体にてコレステリルエステルに変換された後、カイロミクロンを形成して体内に吸収されることが知られている。従って、コレステリルエステルの形成阻害が、食事性コレステロールの腸管吸収を阻止することが推測され、これに伴う血中コレステロールの減少が、アテローム性病変形成の進行を抑制し、動脈硬化の予防や改善につながるものと考えられている。
【０００４】
またエゼチミブ（Ezetimibe）などの特定のヒドロキシ置換アゼチジノン（特許文献１：米国特許第５，７６７，１１５号明細書）は、アテローム性動脈硬化症の治療および予防におけるコレステロール低下剤として有用であることが知られている。エゼチミブのコレステロール低下作用は、ノックアウトマウスやトランスジェニックマウスの研究から、小腸のコレステロール吸収を担う小腸の膜蛋白質であるNiemann Pick Type C 1 like 1（以下NPC1L1という）とエゼチミブが結合することによるNPC1L1の機能阻害であることが明らかとなった（特許文献２：特開２０１０−２５２７９８号公報）。
従って、エゼチミブとNPC1L1の結合を阻害する物質は、消化管内のコレステロール吸収を阻害し、アテローム性動脈硬化を改善することが期待されている。
【０００５】
ホコツシ（補骨脂）は、マメ科（Leguminosae）のオランダビユ（Psoralea corylifolia L.）の成熟した果実を乾燥させることにより得られる生薬である。ホコツシは古来より、強壮、腎虚陽痿（インポテンツ）、泄瀉、遺尿、小便頻数、寒冷時の腰膝疼痛に対して用いられており、ニ神丸や補骨脂丸としても処方されている。また、ホコツシはエストロゲン様の作用を示す成分を有していることが知られている。エストロゲン分泌不足によって引き起こされる特有の症状（例えば更年期障害や骨粗鬆症など）に対して有効である（特許文献３：特開平９−２０８４８１号公報）。
【０００６】
しかし、ホコツシがコレステロールの吸収を阻害すること、あるいはNPC1L1にホコツシに含まれる成分が結合することは知られていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】米国特許第５，７６７，１１５号明細書
【特許文献２】特開２０１０−２５２７９８号公報
【特許文献３】特開平９−２０８４８１号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、NPC1L1に結合し、コレステロール吸収を阻害する薬剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは上記課題を解決するべく検討した結果、生薬のホコツシが、コレステロール吸収に係わるNPC1L1に強く結合することを見出した。さらにホコツシの抽出物に含有される複数の物質がNPC1L1と結合しコレステロール吸収を阻害することを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１０】
本発明の構成は次の通りである。
（１）ホコツシを配合したことを特徴とするコレステロール吸収阻害剤。
（２）ホコツシエキスを配合したことを特徴とするコレステロール吸収阻害剤。
（３）ホコツシエキスがバクチオール、イソババカルコン、ババキニンＡ、コリリフォルＡからなる群から選択される化合物のいずれか１以上を含有するコレステロール吸収阻害剤。
（４）（１）〜（３）のいずれかに記載されたコレステロール吸収阻害剤を有効成分とするアテローム性動脈硬化の予防又は改善剤。
（５）バクチオール、イソババカルコン、ババキニンＡ、コリリフォルＡから選択される１以上の物質を有効成分とするコレステロール吸収阻害剤。
（６）バクチオール、イソババカルコン、ババキニンＡ、コリリフォルＡから選択される１以上の物質を有効成分とするアテローム性動脈硬化の予防又は改善剤。
【発明の効果】
【００１１】
本発明により、コレステロール吸収阻害剤が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】ホコツシ抽出物３のコレステロール吸収阻害効果を示す図である。
【図２】ホコツシ抽出物６のコレステロール吸収阻害効果を示す図である。
【図３】ホコツシ抽出物４のコレステロール吸収阻害効果を示す図である。
【図４】ホコツシ抽出物３、４、５のコレステロール吸収阻害効果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
ホコツシは、マメ科（Leguminosae）のオランダビユ（Psoralea cory lifolia L.）の成熟した果実を乾燥させることにより得られる生薬であり、生薬末の他、エキスを使用することもできる。エキスは、水、低級脂肪族アルコール（メタノール、エタノール、イソプロピルアルコールなど）、低級脂肪族ケトン（アセトンなど）、あるいは、これらを含む溶媒により当業者が通常行う抽出処理により容易に製造することができる。製造したエキスは、加熱処理、凍結乾燥あるいは減圧乾燥等の処理により、濃縮エキスや乾燥エキスにすることができる。ホコツシは古来より漢方処方に配合されており、服用されていることから安全性は高い。またホコツシに含有されている各種成分のうち、NPC1L1にエゼチミブが結合することを阻害する物質として、バクチオール、イソババカルコン、ババキニンＡ、コリリフォルＡなどが関与していることが以下に示す試験例で明らかになった。これらの化合物は、ホコツシ中では相乗的に作用しているものと考えられる。
【００１４】
ホコツシの生薬末またはエキスは、そのままでも使用することができるが、必要ならば発明の効果を損なわない質的および量的範囲で、任意の担体（水溶性ビタミン、脂溶性ビタミン、ビタミン誘導体、ミネラル、生薬、生薬のエキス、有機酸、補酵素等）などと混合することができる。
【００１５】
本発明の阻害剤または予防もしくは改善剤は、通常使用される任意成分を含有する錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤、液剤などの剤形で経口により投与することができる。任意成分としては、例えば、賦形剤、結合剤、被覆剤、滑沢剤、糖衣剤、崩壊剤、増量剤、矯味矯臭剤、乳化・可溶化・分散剤、安定剤、ｐＨ調整剤、等張剤などが挙げられる。これらを常法に従って処理することにより、本発明の阻害剤等を製造することができる。
【００１６】
動脈硬化の予防または改善剤として使用する場合のホコツシの投与量は、年齢、性別、体重などによって異なるが、通常、原生薬換算で成人1日あたり約50mg〜100g、好ましくは500mg〜100gである。
【００１７】
なお、剤には、医薬品のみならず、医薬部外品、健康食品なども包含される。
【実施例】
【００１８】
以下に製造例および試験例を挙げ、本発明をさらに具体的に説明する。
【００１９】
（製造例１）
生薬として販売されていた中華人民共和国四川省を産地とするマメ科（Leguminosae）のオランダビユ（Psoralea corylifolia L.）の成熟した果実よりなる、ホコツシ乾燥物5gに対し、エタノール150mlを加えて抽出した後、ロータリーエバポレーターを用いて減圧濃縮し、乾固させエキス750mgを得た（抽出物１）。
上記抽出処理により得たエキスは、エキス収率15%、乾燥減量85%、原生薬対比6.6倍濃縮であった。
【００２０】
（製造例２）
製造例１で得たエキス490mgをG3000S（東ソー）吸着樹脂のオープンクロマトグラフィーに供し、30%、50%、70%、100%エタノール、アセトンの順で溶出し、200mgの70%エタノール溶出画分（抽出物２）と62mgの100％エタノール溶出画分を得た。
この抽出物２及び100％エタノール溶出画分をC18 Capcellpak 10×250mm（資生堂）を装着した分取用HPLCを用いて分画し、ピークを分取した。
移動相として水（A）、アセトニトリル（B）（Wako）を用いてB液55%（0-11分）、B液90%（12-15分）、B液100%（16-17分）、B液55%（18分）のグラジエンドより分取を行い、抽出物２から抽出物３を9mg、抽出物４を10mg、抽出物５を5.8mg、100％エタノール溶出画分から抽出物６を34.9mg回収した。
回収した物質はHPLC（日本分光）による保持時間や極大吸収波長、LC/MS/MS（Waters）による分子量、等を測定し、既知化合物との比較から同定した。また純度はHPLCを用いて算出した。
その結果、抽出物３はイソババカルコン（Isovabachalcone純度98%）、抽出物４はババキニンＡ（Bavachinin A 純度97%）、抽出物５はコリリフォルＡ（Corylifol A 純度97%）、抽出物６はバクチオール（Bakuchiol  純度99%）であった。
【００２１】
（試験例１）
製造例１、製造例２で得られたホコツシエキス各抽出物を、下記の試験法でNPC1L1とエゼチミブの結合に対する阻害活性を評価する試験を行った。
【００２２】
（１）ラットNPC1L1遺伝子のクローニング
ラット空腸由来1本鎖cDNA（ジェノスタッフ株式会社）を鋳型にiProof High-Fidelity DNA ポリメラーゼ（Biorad）を用いたPCR法により、5’端にHind  III、3’端にXba Iを付加したrNPC1L1全長を増幅し、Zero Blunt TOPO PCRクローニング キット（invitrogen）を用いてpCR4 Blunt TOPOベクターにクローニングした。クローニングしたDNA配列を配列表配列番号１に示す。
なお、rNPC1L1全長増幅に使用したプライマー及びPCR条件は次のとおりである。
Sense: 5’- aagcttaccatggcagctgcctggctgggatggc-3’  （配列番号２）
Antisense: 5’- tctagattagaacttttggtcacttttgggc-3’ （配列番号３）
【００２３】
PCR条件
１．98℃ 30秒、２．98℃ 10秒、３．68℃ 30秒、４．72℃ 1.5分、５．72℃ 10分、２〜４を35サイクル実施する。
【００２４】
（２）ラットNPC1L1安定発現細胞の作製
pCR4 Blunt TOPO rNPC1L1ベクターをHind III及びXba I処理し、アガロース電気泳動後、QIAquick Gel Extraction Kit（QIAGEN）を用いてrNPC1L1を抽出し、発現用ベクターpcDNA3.1（invitrogen）のHind III、Xba Iサイトにサブクローニングした。作製したpcDNA3.1 rNPC1L1の配列はプレミックスシーケンス解析サービス（タカラバイオ）を利用して確認を行った。
シーケンス用primer
Sense:5’-cactgcttactggcttatcg-3’ （配列番号４）
Sense:5’-gccttttatcagcgcagcttt-3’（配列番号５）
Sense:5’-aactctcaccccataccatc-3’ （配列番号６）
Sense:5’-cagtacttccagaacaaccg-3’ （配列番号７）
Sense:5’-ttctactcctacctgggtgt-3’ （配列番号８）
Sense:5’-cttcttccgcaagatatacgc-3’（配列番号９）
Sense:5’-ccacagcggaacagtttcat-3’ （配列番号１０）
Sense:5’-tccctcatcaaccttgtcac-3’ （配列番号１１）
Sense:5’-gtccatgcttcttgctgatg-3’ （配列番号１２）
【００２５】
次いで、ヒト腎臓由来HEK293細胞（ATCC）に、Fugene HD（Roche）を用いてpcDNA3.1 rNPC1L1をトランスフェクションし、最終濃度1mg/ml G418-sulfate（Wako）にてセレクションを行った。更に限界希釈法によりセレクションを行い、HEK/rNPC1L1安定発現細胞の単一クローンを得た。
【００２６】
（３）膜画分の調製
φ150mmdish（Nunc）にHEK293/rNPC1L1安定発現細胞を播種し、DMEM（Nacalai tesque）+10%FBS（Gibco）にてコンフルエントになるまで培養し、最終濃度4mM Sodium Butyrate（Sigma Aldrich）24時間処理後の細胞をCell Dissociation Buffer（invitrogen）を用いて回収した。800rpm、3分の遠心後、残査の細胞を8%Sucrose含有20mM HEPES/Tris Buffer（pH7.4）+proteinase inhibitor（Roche）に懸濁し、超音波を用いて破砕した。4000rpm、4℃、10分の遠心後、上清を48000rpm（125000G）、4℃、3時間、超遠心し、残査を膜画分として回収した。膜画分は160mM NaCl、5%Glycerol含有20mM HEPES/Tris Bufferに再懸濁し、BCA assay（Thermo Scientific Pierce）にて蛋白質濃度を定量後、使用するまで-80℃に保存した。
【００２７】
（４）結合阻害実験
96well plate（Nunc）に最終濃度25nM [3H]Ezetimibe-glucuronide（American Radiolabeled Chemicals, Inc.）、1.25mg/ml HEK/rNPC1L1由来膜蛋白質、各濃度の被験物質を緩衝液A（26mM NaHCO3、0.96mM NaH2PO4、5mM HEPES、5.5mM Glucose、117mM NaCl、5.4mM KCl、0.03% Sodium taurocholate、0.05% Digitonin、pH7.4）に加えTotal volume 30μlとなるよう調製し、室温、1時間反応させた。反応液はHarvester（PerkinElmer）を用いてUniFilter-96 GF/C（PerkinElmer）にトラップし、ミリQ水（ミリポア）を用いて遊離[3H]Ezetimibe-glucuronideを洗浄した。乾燥後、Microscint-20（PerkinElmer）を15μl/well添加し、Topcount（PerkinElmer）によりrNPC1L1と結合した[3H]Ezetimibe-glucuronideの放射活性を測定した。
【００２８】
（５）結果
ホコツシエタノール抽出物（抽出物１）、70%エタノール溶出画分（抽出物２）をそれぞれ、ジメチルスルホキシド（DMSO）（Nacalai tesque）に溶解し、最終濃度2mg/mlから8段階の2倍希釈系列を作製しIC50を算出した。
また抽出物３〜６も同様DMSOに溶解し、最終濃度2mg/mlから11段階の2倍希釈系列を作製しIC50を算出した。その結果を下記表１に示す。
【００２９】
【表１】
2013216648.tif 000003
【００３０】
各抽出物はいずれもエゼチミブがNPC1L1に結合する反応を強く抑制した。従ってエゼチミブと同様に、ホコツシ及びその成分が、コレステロール吸収に係わるNPC1L1に強く結合することを有することが確認できた。
【００３１】
（試験例２）
製造例１、製造例２で得られたホコツシエキス各抽出物のうち、抽出物３と抽出物６を用いて、消化管細胞におけるコレステロールの取り込み抑制を評価する試験を下記の試験法により行った。
【００３２】
（１）レンチウイルス溶液及びCaco2/rNPC1L1安定発現細胞の作製
レンチウイルス用ベクターpCDH-CMV-MCS-EF1-Puro（System Biosciences）のSwa I、Sgf Iサイトを利用して、同制限酵素サイトを付加したrNPC1L1全長をPCR法にて増幅し、サブクローニングした。pCDH-rNPC1L1、エンベロープベクターのpMD2.G（Addgene）、パッキングベクターのpsPAX2（Addgene）の3種のベクターをリポフェクション用試薬LTX（invitrogen）を用いて293T（ATCC）にトランスフェクションし、96時間後に培地を回収した。2500rpm、10分の遠心を2回行い、得られた上清を0.45μmのフィルター（ミリポア）を通し、レンチウイルス溶液を作製した。
ヒト大腸癌由来Caco2細胞（ATCC）にレンチウイルス溶液を添加して感染させ、更に限界希釈法を用いて最終濃度5μg/mlのpuromycin（Sigma Aldrich）にてセレクションを行いCaco2/rNPC1L1安定発現細胞の単一クローンを作製した。また、インサートDNAを含まないpCDH-CMV-MCS-EF1-Puroベクターを用いて同様の方法にて単一クローンを作製し、Caco2/mockとした。
【００３３】
（２）コレステロール取込み試験
上記のCaco2/mock及びCaco2/rNPC1L1安定発現細胞を12well plate（Falcon）に5×105cells/wellとなるよう播種し、2日置きに培地DMEM+10%FBSを交換して、オーバーコンフルエントの状態を14日間維持し、小腸様細胞に分化させた。DMEMにて細胞を洗浄後、最終濃度5mMタウロコール酸ナトリウム（Wako）、500μMオレイン酸（Sigma Aldrich）、10μMコレステロール（Sigma Aldrich）、1μCi/ml[3H]コレステロール（PerkinElmer）、各濃
度の被験物質を含有したDMEMミセル溶液を1ml/well添加し、37℃、1時間、処理した。DMEMにて洗浄後、無血清用カクテルITS（Thermo Fisher Scientific）含有DMEMに交換し、更に37℃、8時間、インキュベートし、エステル化を誘導した。PBS+で細胞を洗浄後、ヘキサン：イソプロパノール（3:2）（Nacalai tesque）混合液を用いて細胞から脂質を抽出
し、クロロホルム：メタノール（2:1）（Nacalai tesque）に置換後、全量をTLC（Roche）にスポットし、ヘキサン：ジエチルエーテル：酢酸（60:40:1）（Nacalai tesque）を用いて展開した。展開したTLCはヨウ素を用いて発色させ、分離した[3H]コレステロール、[3H]コレステロールエステルをかきとり、クリアゾルII（Nacalai tesque）に浸し、液体シンチレーションカウンター（ALOKA）を用いて放射活性を測定した。
また、脂質抽出後の細胞は、0.1%ドデシル硫酸ナトリウム（Nacalai tesque）、0.2N水酸化ナトリウム（Nacalai tesque）含有蒸留水を添加し、室温24時間処理後、BCA assayにて蛋白質濃度を測定した。細胞中に取り込まれ、エステル化されたコレステロールを蛋白質当りの量に換算して取り込み量とした。
【００３４】
（３）結果
ホコツシ抽出物３は試験最終濃度100μM、抽出物６は300、100、30μMとなるよう細胞に添加し、細胞内に取り込まれるコレステロールを測定した。測定結果を図１、図２に示す。
抽出物３は内在性human NPC1L1のみを発現する細胞、内在性に加え外来性rNPC1L1を発現する細胞のいずれも、エステル化されたコレステロール量が減少し、細胞内へのコレステロール取り込みを顕著に抑制した。特にrNPC1L1発現細胞においては顕著に抑制した。
抽出物６も内在性humanNPC1L1のみを発現する細胞、内在性に加え外来性rNPC1L1を発現する細胞のいずれも、エステル化されたコレステロール量が減少し、細胞内へのコレステロール取り込みを顕著に抑制した。またrNPC1L1発現細胞では濃度に依存して、細胞内への取り込みを抑制した。
【００３５】
（試験例３）
製造例１、製造例２で得られたホコツシエキス各抽出物のうち、抽出物４を用いて、消化管細胞におけるコレステロールの取り込み抑制を評価する試験を下記の試験法により行った。
【００３６】
（１）コレステロールの取り込み試験  1
上記のCaco2/mock及びCaco2/rNPC1L1安定発現細胞を12well plate（Falcon）に5×105cells/wellとなるよう播種し、2日置きに培地DMEM+10%FBSを交換して、オーバーコンフルエントの状態を14日間維持し、小腸様細胞に分化させた。DMEMにて細胞を洗浄後、最終濃度5mMタウロコール酸ナトリウム（Wako）、500μMオレイン酸（Sigma Aldrich）、10μMコレステロール（Sigma Aldrich）、1μCi/ml[3H]コレステロール（PerkinElmer）、各濃度の被験物質を含有したDMEMミセル溶液を1ml/well添加し、37℃、1時間、処理した。DMEMにて洗浄後、無血清用カクテルITS（Thermo Fisher Scientific）含有DMEMに交換し、更に37℃、8時間、インキュベートし、エステル化を誘導した。PBS+で細胞を洗浄後、ヘキサン：イソプロパノール（3:2）（Nacalai tesque）混合液を用いて細胞から脂質を抽出し、クロロホルム：メタノール（2:1）（Nacalai tesque）に置換後、全量をTLC（Roche）にスポットし、ヘキサン：ジエチルエーテル：酢酸（60:40:1）（Nacalai tesque）を用いて展開した。展開したTLCはヨウ素を用いて発色させ、分離した[3H]コレステロール、[3H]コレステロールエステルをかきとり、クリアゾルII（Nacalai tesque）に浸し、液体シンチレーションカウンター（ALOKA）を用いて放射活性を測定した。
また、脂質抽出後の細胞は、0.1%ドデシル硫酸ナトリウム（Nacalai tesque）、0.2N水酸化ナトリウム（Nacalai tesque）含有蒸留水を添加し、室温24時間処理後、BCA assayにて蛋白質濃度を測定した。細胞中に取り込まれ、エステル化されたコレステロールを蛋白質当りの量に換算して取り込み量とした。
【００３７】
（２）結果
ホコツシ抽出物4を試験最終濃度0、3、10、30μMとなるよう細胞に添加し、細胞内に取り込まれるコレステロールを測定した。測定結果を図３に示す。
抽出物４は内在性human NPC1L1のみを発現する細胞、および内在性に加え外来性rNPC1L1を発現する細胞のいずれも、ホコツシ抽出物の濃度に依存してエステル化されたコレステロール量が減少し、細胞内へのコレステロール取り込みを顕著に抑制した。
【００３８】
（試験例４）
上記の抽出物3、4、5を用いて消化管細胞におけるコレステロールの取り込み抑制を評価する試験を下記の試験法により行った。
【００３９】
（１）コレステロールの取り込み試験  2
上記のCaco2/rNPC1L1安定発現細胞を12well plate（Falcon）に5×105cells/wellとなるよう播種し、2日置きに培地DMEM+10%FBSを交換して、オーバーコンフルエントの状態を14日間維持し、小腸様細胞に分化させた。DMEMにて細胞を洗浄後、最終濃度5mMタウロコール酸ナトリウム（Wako）、500μMオレイン酸（Sigma Aldrich）、10μMコレステロール（Sigma Aldrich）、1μCi/ml[3H]コレステロール（PerkinElmer）、各濃度の被験物質を含有したDMEMミセル溶液を1ml/well添加し、37℃、2時間、処理した。1ml/well のPBS+にて細胞を2回洗浄後、0.1%ドデシル硫酸ナトリウム（Nacalai tesque）、0.2N水酸化ナトリウム（Nacalai tesque）含有蒸留水を1ml/well添加し、室温24時間処理した。その細胞溶解液100μlを、2mlのクリアゾルII（Nacalai tesque）に加え、液体シンチレーションカウンター（ALOKA）にて総[3H]コレステロールの放射活性を測定した。
【００４０】
（２）結果
ホコツシ抽出物3、4、5をそれぞれ試験最終濃度30μMとなるよう細胞に添加し、細胞内に取り込まれる総[3H]コレステロールの測定結果を図4に示す。
ホコツシ抽出物3、4、5はいずれも細胞内へのコレステロール取り込みを顕著に抑制した。
以上の試験例１〜試験例４の結果から、ホコツシの抽出物は、コレステロールの取り込みを抑制することが明らかとなった。
【図１】
2013216648.tif 000004
【図２】
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【図３】
2013216648.tif 000006
【図４】
2013216648.tif 000007
【配列表】
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