(57)【要約】【課題】口腔内に適用した場合に、歯肉への浸透性に優れ、歯肉のコラーゲン密度を増加させることができ、さらに種々の剤型における経時安定性に優れる新たなコラーゲン密度増強剤を提供する。【解決手段】中長鎖ポリリン酸からなる歯肉のコラーゲン密度増強剤およびそれを含有したコラーゲン密度増強剤組成物、並びに、歯肉のコラーゲン密度増強剤を口腔内に適用することによって歯肉のコラーゲン密度を増強させる歯肉のコラーゲン密度の増強方法とする。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
中長鎖ポリリン酸からなることを特徴とする歯肉のコラーゲン密度増強剤。
【請求項２】
前記中長鎖ポリリン酸が、平均重合度６０〜１３０の直鎖状ポリリン酸であることを特徴とする請求項１に記載の歯肉のコラーゲン密度増強剤。
【請求項３】
前記中長鎖ポリリン酸が、ポリリン酸塩であることを特徴とする請求項１または請求項２に記載の歯肉のコラーゲン密度増強剤。
【請求項４】
平均重合度が６０の中長鎖ポリリン酸を８０質量％以上、または、平均重合度が１３０の中長鎖ポリリン酸を５０質量％以上含有することを特徴とする請求項２または請求項３に記載の歯肉のコラーゲン密度増強剤。
【請求項５】
請求項１〜請求項４のいずれか１項の歯肉のコラーゲン密度増強剤と、界面活性剤とを含有することを特徴とする歯肉のコラーゲン密度増強組成物。
【請求項６】
前記界面活性剤が、ポリオキシエチレン・アルキルエーテル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ショ糖脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ポリソルベートから選択される１種以上のＨＬＢ１４以上の非イオン系界面活性剤であることを特徴とする請求項５に記載の歯肉のコラーゲン密度増強組成物。
【請求項７】
請求項１〜請求項４のいずれか１項の歯肉のコラーゲン密度増強剤を、口腔内に適用することによって歯肉のコラーゲン密度を増強させることを特徴とする歯肉のコラーゲン密度の増強方法。
【請求項８】
請求項１〜請求項４のいずれか１項の歯肉のコラーゲン密度増強剤を、界面活性剤の存在下で口腔内に適用させ、歯の表面に付着した歯垢への前記コラーゲン密度増強剤の浸透性を高めることを特徴とする請求項７に記載の歯肉のコラーゲン密度の増強方法。
【請求項９】
前記界面活性剤が、ポリオキシエチレン・アルキルエーテル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ショ糖脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ポリソルベートから選択される１種以上のＨＬＢ１４以上の非イオン系界面活性剤であることを特徴とする請求項８に記載の歯肉のコラーゲン密度の増強方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、歯肉のコラーゲン密度を増加させる新たなコラーゲン密度増強剤、歯肉のコラーゲン密度増強組成物および歯肉のコラーゲン密度の増強方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒトの皮膚組織は、線維芽細胞、表皮細胞等の細胞層と、細胞層を支持するコラーゲン、ヒアルロン酸等の真皮マトリックスとから構成されている。
コラーゲンは動物の体内で最も多く存在する繊維状の蛋白質であり、真皮、靱帯、腱、骨、軟骨などを構成する他、細胞間隙に存在しており、内臓や血管など全身に広く分布し、生存のために、必須の成分である。コラーゲンが不足すると血管の柔軟性が無くなり、高血圧や動脈硬化を起こすことや、骨密度が減少し、軟骨の弾力がなくなることで関節の変形などを引き起こす場合がある。また、皮膚や爪の柔軟性が損なわれ、肌のしわ、たるみを引き起こすことが知られている。
【０００３】
一般的に、コラーゲン密度を増加させる効果を持つものとしてアスコルビン酸（ビタミンＣ）が知られている（例えば、特許文献１，２参照）。このようなアスコルビン酸は、化粧品や医薬品、飲食物などの形態で使用され、皮膚に直接適用したり、経口摂取により消化の過程で体内に吸収させている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特表平１０−５０９７３５号公報
【特許文献２】特開２０１１−６３５６３号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、口腔内に適用した場合に、歯肉への浸透性に優れ、歯肉のコラーゲン密度を増加させることができ、さらに種々の剤型における経時安定性に優れる新たなコラーゲン密度増強剤、該コラーゲン密度増強剤を含む歯肉のコラーゲン密度増強組成物および歯肉のコラーゲン密度の増強方法を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、前記課題を解決するため鋭意研究を重ねた結果、中長鎖ポリリン酸が歯肉のコラーゲン密度を上昇させるという観点において有用であることを見出し、また、中長鎖ポリリン酸を界面活性剤と併用して用いることで中長鎖ポリリン酸の歯垢（プラーク）への浸透性が高まることを見出し、本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明の課題は下記（１）〜（９）により達成される。
（１）中長鎖ポリリン酸からなることを特徴とする歯肉のコラーゲン密度増強剤。
（２）前記中長鎖ポリリン酸が、平均重合度６０〜１３０の直鎖状ポリリン酸であることを特徴とする上記（１）に記載の歯肉のコラーゲン密度増強剤。
（３）前記中長鎖ポリリン酸が、ポリリン酸塩であることを特徴とする上記（１）または（２）に記載の歯肉のコラーゲン密度増強剤。
（４）平均重合度が６０の中長鎖ポリリン酸を８０質量％以上、または、平均重合度が１３０の中長鎖ポリリン酸を５０質量％以上含有することを特徴とする上記（２）または（３）に記載の歯肉のコラーゲン密度増強剤。
（５）上記（１）〜（４）のいずれか１項の歯肉のコラーゲン密度増強剤と、界面活性剤とを含有することを特徴とする歯肉のコラーゲン密度増強組成物。
（６）前記界面活性剤が、ポリオキシエチレン・アルキルエーテル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ショ糖脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ポリソルベートから選択される１種以上のＨＬＢ１４以上の非イオン系界面活性剤であることを特徴とする上記（５）に記載の歯肉のコラーゲン密度増強組成物。
（７）上記（１）〜（４）のいずれか１項の歯肉のコラーゲン密度増強剤を、口腔内に適用することによって歯肉のコラーゲン密度を増強させることを特徴とする歯肉のコラーゲン密度の増強方法。
（８）上記（１）〜（４）のいずれか１項の歯肉のコラーゲン密度増強剤を、界面活性剤の存在下で口腔内に適用させ、歯の表面に付着した歯垢への前記コラーゲン密度増強剤の浸透性を高めることを特徴とする上記（７）に記載の歯肉のコラーゲン密度の増強方法。
（９）前記界面活性剤が、ポリオキシエチレン・アルキルエーテル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ショ糖脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ポリソルベートから選択される１種以上のＨＬＢ１４以上の非イオン系界面活性剤であることを特徴とする上記（８）に記載の歯肉のコラーゲン密度の増強方法。
【発明の効果】
【０００７】
本発明の歯肉のコラーゲン密度増強剤は、口腔内に適用した際に歯肉への優れた浸透性を示し、歯肉でのコラーゲン密度上昇効果に優れる。したがって、歯周炎（歯肉炎）の抑制効果が十分に期待される。
また、本発明の歯肉のコラーゲン密度増強剤をＨＬＢ１４以上の非イオン系界面活性剤と併用することで歯垢への浸透性が高まり、歯垢を通過しやすくなるため、本発明の歯肉のコラーゲン密度増強剤が歯肉により浸透しやすくなり、歯肉のコラーゲン密度を高めることができる。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】ラットの歯周炎を組織学的に比較検討した際の計測部位を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
以下、本発明の歯肉のコラーゲン密度増強剤について詳細に説明する。
図１に示すように、歯７はエナメル質２、象牙質４、セメント質３および歯髄腔とで構成されており、歯槽骨６により支持されている。歯肉１は、歯冠の根元部分を取り巻いている口腔粘膜を指し、歯茎とも呼ばれる。歯肉は歯周組織の一つであり、付着歯肉、歯間乳頭、遊離歯肉等に分けられる。本発明のコラーゲン密度増強剤は、このような歯肉に対して適用するものである。
【００１０】
本発明の歯肉のコラーゲン密度増強剤は、中長鎖ポリリン酸からなり、有効成分として働き、歯肉の線維芽細胞に作用し、コラーゲン密度を増加させるものと考えられる。そして、中長鎖ポリリン酸は生体に対する安全性が高く、生体内で無毒なリン酸に分解される生分解性物質でもあるから、口腔内での使用に適している。
【００１１】
本発明において使用される中長鎖ポリリン酸は、オルトリン酸の脱水縮合によって２個以上のＰＯ４四面体が頂点の酸素原子を共有して直鎖状に連なった構造を有する直鎖状ポリリン酸である。
本発明において好適に使用される中長鎖ポリリン酸は、下記一般式（Ｉ）で表わされる直鎖状ポリリン酸であり、本発明において、中長鎖とは、ピロリン酸やトリポリリン酸のような短鎖のものを除き、それよりも長い鎖状のものをいう。
Ｈｎ＋２（ＰｎＯ３ｎ＋１）      ・・・（Ｉ）
上記一般式（Ｉ）中、ｎは４〜８００が好ましく、４〜５００がより好ましく、６０〜１３０が更に好ましい。一般式（Ｉ）において、ｎが４〜８００の直鎖状ポリリン酸であると歯肉のコラーゲン密度を効果的に増加させることができ、特にｎが６０〜１３０のポリリン酸は歯肉への浸透性に優れ、歯肉へのコラーゲン密度増強効果が高くなるため好ましい。なお、鎖長が８００以上のポリリン酸は水に難溶性であり、水溶液の形で存在しにくく、歯肉全体に浸透させにくいため、口腔内での使用には適さない。
【００１２】
本発明で好適に使用される鎖長（平均重合度）が６０〜１３０の中長鎖ポリリン酸は、次のように製造することができる。例えば、ヘキサメタリン酸塩を０．１〜１０質量％、好ましくは１０質量％となるように水に溶解する。このヘキサメタリン酸水溶液に、８０〜１００％エタノール、好ましくは９５％エタノールを、ヘキサメタリン酸溶液とエタノールとの混合後の全体液量の１／１０〜１／３量で、すなわちヘキサメタリン酸水溶液：エタノールが２：１〜９：１の体積比となる量で添加する。この混合溶液を十分に攪拌し、析出した沈殿物を遠心分離またはフィルター濾過等の分離方法を用いて水溶液成分と分離する。このようにして分離した沈殿物が中長鎖ポリリン酸となる。このポリリン酸を続いて７０％程度のエタノールにより洗浄し、その後乾燥させる。
ポリリン酸の鎖長を制御するには、ヘキサメタリン酸塩濃度、アルコール濃度及びヘキサメタリン酸水溶液／アルコール比を適宜選択することにより、鎖長が６０〜１３０のポリリン酸を調製することが出来る。
【００１３】
鎖状ポリリン酸の平均重合度の絶対値は、例えば、滴定法により計測できる。この方法は一種の末端基測定法であり、主に鎖状リン酸塩の分子量決定に用いられている。鎖状リン酸塩においては、末端基には１個の強酸性水素と１個の弱酸性水素があり、中間期には１個の強酸性水素がある。すなわち強酸性水素の量（ＳＡ）と弱酸性水素の量（ＷＡ）を求めることによって、次式より鎖状リン酸塩の平均重合度を求めることができる。すなわち、「平均重合度＝（２ＳＡ／ＷＡ）」である。また、平均分子量の相対値と分子量分布を求める方法としては、ＨＰＬＣを用いたゲル濾過クロマトグラフィーを挙げることができる。
【００１４】
本発明において、上記中長鎖ポリリン酸の水酸基の水素が金属と置換した分子構造を有するポリリン酸塩を使用してもよい。前記金属としては、例えば、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、銅、亜鉛、アルミニウム、バナジウム等が挙げられ、中でも口腔内で使用する事を考えると、人体に対する安全性や製剤中での安定性の面からナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩が好ましく、ナトリウム塩がより好ましい。
【００１５】
本発明に使用する中長鎖ポリリン酸又はその塩は、１種類であってもよいが、複数種の混合物であってもよい。複数種の中長鎖ポリリン酸又はその塩には、重合度の異なる中長鎖ポリリン酸又はその塩、分子構造の異なる中長鎖ポリリン酸又はその塩、及び金属イオンの異なる中長鎖ポリリン酸塩を包含する。また中長鎖ポリリン酸とその塩とを両方包含してもよい。
【００１６】
中長鎖ポリリン酸を複数種混合する場合、ポリリン酸の平均重合度に応じて適宜選択すればよいが、平均重合度が６０のポリリン酸が８０質量％以上、または、平均重合度が１３０のポリリン酸が５０質量％以上含有されていることが好ましい。平均重合度が６０のポリリン酸を８０質量％以上含有することで歯肉のコラーゲン密度を大幅に増加させることができ、また、平均重合度が１３０のポリリン酸を５０質量％以上含有することで歯肉のコラーゲン密度の増加に加えて、口腔内細菌に対する抗菌性を付与することができる。
【００１７】
本発明における口腔用組成物は歯肉のコラーゲン密度を増強する増強組成物であり、本発明の歯肉のコラーゲン密度増強剤を含有する。歯肉のコラーゲン密度増強組成物（口腔用組成物）は歯肉に直接適用できればその形態は特に限定されず、液状、ゲル状、ペースト状、ガム状などの形態を持つ。また剤型としては、洗口液、液状歯磨、潤製歯磨、練歯磨き等の歯磨類、塗布剤、トローチ剤、チューイングガム等が挙げられ、中でも、口腔用組成物を効率的に口腔内に行渡らせるという観点から、塗布剤や洗口液とすることが好ましい。
【００１８】
本発明において、歯肉のコラーゲン密度増強剤は、口腔用組成物中、０．５〜１０質量％含有し、０．５〜５質量％含有することが好ましく、０．５〜３質量％含有することがより好ましい。口腔用組成物中、歯肉のコラーゲン密度増強剤を０．５質量％以上含有させることで歯肉のコラーゲン密度を充分に増加させることができ、１０質量％以下であれば、コストの面や外観上安定であるため好ましい。
【００１９】
口腔用組成物は、種々の形態において用いる場合、本発明の歯肉のコラーゲン密度増強剤以外の成分は特に制限されるものではなく、発明の効果を損なわない限り、従来より口腔内用の医薬品や化粧料に配合されている各種成分を適宜選択して用いることができる。例えば、溶媒、界面活性剤、甘味剤、防腐剤、殺菌剤、抗炎症剤、色素、香料、ｐＨ調整剤、湿潤剤、増粘剤等を配合でき、これらの成分と水とを混合し製造できる。
【００２０】
溶媒としては、例えば、グリセリン、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ソルビトール、ポリグリセリン、ポリエチレングリコール、ジプロピレングリコール等の多価アルコール類、エタノール、プロパノール、ブタノール等の低級アルコール類などが挙げられ、グリセリン、プロピレングリコール、ソルビトール、エタノールなどが好適に用いられる。
【００２１】
水としては、例えば、精製水、イオン水、蒸留水などが挙げられる。
【００２２】
界面活性剤としては、例えば、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレン・ポリオキシプロピレンブロックポリマー、ポリオキシエチレン・ポリオキシプロピレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレン・アルキルエーテル、ポリオキシエチレン・アルキルフェニルエーテル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン高級アルコールエーテル、ポリオキシエチレン・ポリオキシプロピレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビット脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、ショ糖脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ポリソルベート、プロピレングリコール脂肪酸エステル等の非イオン系界面活性剤；ラウリル硫酸ナトリウム、ミリスチル硫酸ナトリウム、ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸塩、ラウロイルサルコシナトリウム、ミリストイルサルコシンナトリウム、アルキルエーテルカルボン酸塩、アルキルリン酸塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテルリン酸塩、Ｎ−アシルタウリン塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテルリン酸・リン酸塩、スルホン酸塩等のアニオン系界面活性剤；塩化アルキルトリメチルアンモニウム、塩化ジアルキルジメチルアンモニウム、塩化セチルピリジニウム、塩化ベンゼトニウム、塩化ベンザルコニウム、ポリオキシエチレンアルキルアミン・脂肪酸アミド等のカチオン系界面活性剤を挙げることができ、特に、歯垢を通過しやすくして、歯肉への本発明の歯肉のコラーゲン密度増強剤の浸透力を高めるという観点から、ＨＬＢが１４以上の非イオン系界面活性剤が好ましい。
【００２３】
甘味剤としては、例えば、サッカリンナトリウム、アスパルテーム、ステビオサイド、ステビアエキス、パラメトキシシンナミックアルデヒド、ネオヘスペリジルジヒドロカルコン、ぺリラルチン、スクラロース、キシリトール、マルチトール、マンニトールなどが挙げられる。
【００２４】
防腐剤としては、例えば、ブチルパラベン、エチルパラベン等のパラベン（パラオキシ安息香酸エステル）、安息香酸ナトリウム、安息香酸、ソルビン酸カリウム、サリチル酸、フェノキシエタノールなどが挙げられる。
【００２５】
殺菌剤としては、例えば、塩化デカリニウム、塩化ベンゼトニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化セチルピリジニウム、塩酸アルキルジアミノエチルグリシン、塩酸クロルヘキシジン、グルコン酸クロルヘキシジン、トリクロサン、イソプロピルメチルフェノール、チモール、ヒノキチオール、ラウロイルサルコシンナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、塩化リゾチームなどが挙げられる。
【００２６】
抗炎症剤としては、例えば、アミノカプロン酸、アラントイン及びその誘導体、グリチルリチン酸及びその誘導体、グリチルレチン酸及びその誘導体、アスコルビン酸及びその塩、ビタミンＥ（トコフェロール）、塩化リゾチーム等の消炎酵素、アズレンスルホン酸およびその塩、トラネキサム酸らが挙げられる。
【００２７】
色素としては、ニトロ系色素、アゾ染料、ニトロソ染料、トリフェニルメタン染料、キノリン染料、アントラキノン染料、インジゴ染料等の法定色素が挙げられる。これらの中でも水溶性のものが好ましく、具体的には、青色１号、黄色４号、赤色１０２号、緑色２０１号等が挙げられる。
【００２８】
香料としては、例えば、ペパーミント油、スペアミント油、アニス油、ユーカリ油、カシア油、クローブ油、タイム油、セージ油、ケイヒ油、ウインターグリーン油、ティーツリー油、レモン油、オレンジ油、ハッカ油、カルダモン油、コリアンダー油、マンダリン油、ライム油、ラベンダー油、ローズマリー油、ローレル油、カモミル油、キャラウェイ油、マジョラム油、ベイ油、レモングラス油、オリガナム油、パインニードル油、ネロリ油、ローズ油、ジャスミン油、グレープフルーツ油、スウィーティー油、柚油、イリスコンクリート、アブソリュートペパーミント、アブソリュートローズ、オレンジフラワー等の天然香料及び、これら天然香料の加工処理（前溜部カット、後溜部カット、分留、液−液抽出、エッセンス化、粉末香料化等）した香料、及び、メントール、カルボン、アネトール、シネオール、サリチル酸メチル、シンナミックアルデヒド、オイゲノール、３−ｌ−メントキシプロパン−１，２−ジオール、チモール、リナロール、リナリールアセテート、リモネン、メントン、メンチルアセテート、Ｎ−置換−パラメンタン−３−カルボキサミド、ピネン、シトラール、プレゴン、カルビールアセテート、アニスアルデヒド、メチルアンスラニレート、エチルメチルフェニルグリシデート、バニリン、ウンデカラクトン、ヘキサナール、ヘキセノール、シクロテン、フルフラール、トリメチルピラジン、エチルラクテート、エチルチオアセテート等の単品香料、更に、ストロベリーフレーバー、アップルフレーバー、バナナフレーバー、パイナップルフレーバー、グレープフレーバー、マンゴーフレーバー、バターフレーバー、ミルクフレーバー、フルーツミックスフレーバー、トロピカルフルーツフレーバー等の調合香料等、口腔用組成物に用いられる公知の香料素材を組み合わせて使用することができる。
【００２９】
口腔用組成物中のこれらの成分は、剤型の種類、歯肉のコラーゲン密度増強剤の配合量等に応じて適宜調整可能であり、当該技術分野で知られている配合量とすることができる。具体的には、例えば、洗口液の場合、溶媒は０〜３０質量％、界面活性剤は０．１〜５質量％、甘味剤は０．００１〜１０質量％、防腐剤は０．０１〜５質量％、殺菌剤は０．００１〜５質量％、抗炎症剤は０．００１〜５質量％、色素は０．００００１〜０．０１質量％、香料は０．０１〜２質量％程度使用するのが好ましい。
【００３０】
なお、本発明においては、口腔用組成物に界面活性剤を含有させることが好ましい。歯の表面には歯垢（プラーク）が付着している場合があり、歯垢には目視で確認可能な歯肉縁上歯垢の他に、外からは確認できない歯肉縁下歯垢がある。歯面に歯垢、特に歯肉縁下歯垢が存在すると歯肉のコラーゲン密度増強剤の歯肉への浸透が妨げられ十分な効果を得られない場合がある。そこで、本発明の歯肉のコラーゲン密度増強剤を界面活性剤の存在下で口腔内に適用すると、歯垢に対する浸透性が高まり、歯肉のコラーゲン密度増強剤が歯肉に浸透しやすくなるため、歯肉でのコラーゲン密度の上昇効果が得られる。
【００３１】
また、本発明の口腔用組成物は、さらにコラーゲンを同時に用いてもよい。コラーゲンの型は制限されるものではなく、Ｉ型〜Ｖ型或はそれ以外の何れのコラーゲンを配合しても良い。口腔用組成物にさらにコラーゲンを配合することで歯肉にコラーゲンを吸収させてコラーゲンの消失を抑制することができ、本発明のコラーゲン密度増強剤による歯肉のコラーゲンの活性効果をより高めることができる。
【００３２】
本発明の口腔用組成物に配合する増粘剤としては、キサンタンガム、グアーガム、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）等があげられる。口腔用組成物の粘度は特に限定されないが、歯肉に塗布した場合、歯肉への付着の観点から、粘度はＢ型粘度計（例えば、東機産業株式会社製ＲＢ−８０Ｈ）を用いて測定した粘度が、２５℃において１〜１０００ｍＰ・ｓの範囲であることが好ましく、１〜５００ｍＰ・ｓの範囲であることがより好ましい。粘度が１０００ｍＰ・ｓを超えると、製剤が歯肉全体に行き渡りにくく、浸透性が悪くなるなど口腔用組成物としての使用性が低下する場合がある。
【００３３】
本発明の歯肉のコラーゲン密度増強剤を口腔内に適用することによって、該歯肉のコラーゲン密度増強剤が歯肉へ浸透し、歯肉のコラーゲン密度を有意に増加させることができるため、それにより歯周炎（歯肉炎）の改善、予防の効果が期待できる。
【実施例】
【００３４】
以下に、本発明を実施例により更に具体的に説明するが、本発明の範囲はこれらの実施例に限定されるものではない。
【００３５】
＜中長鎖ポリリン酸の効果試験＞
実験的に惹起させたラットの歯周炎に対して、中長鎖ポリリン酸ナトリウムの濃度を変えて配合した検体を塗布し、その効果を組織学的に比較検討した。
【００３６】
（液剤検体の調製）
表１に示す処方により、検体１〜６を調製した。検体１は対照例である。検体２〜６は、殺菌剤を配合し、且つ中長鎖ポリリン酸ナトリウム（平均重合度６２．４）を０〜５質量％の範囲で濃度条件を変更したものである。
【００３７】
【表１】
2013121954.tif 000002
【００３８】
（実験方法）
８週齢のウィスター系雄性ラット３６匹を用い、Ｔｏｍｏｆｕｊｉ（ＦｒｅｅＲａｄｉｃ ＢｉｏｌＭｅｄ ２００９；４６：１６３−１６８）らの方法により、ラットの両側の上顎第二臼歯に絹糸を４週間巻いて、歯周炎を惹起させた。
実験期間開始時に、絹糸を除去し、ラットを６群（１群あたり６匹）に分けた。各群のラットそれぞれの両側の上顎第二臼歯口蓋側歯肉溝に、上記調製した検体１〜６をマイクロピペットを用いて１５μＬずつ塗布した。
塗布１０分後、滅菌した乾燥綿球で検体を拭き取った。
処置は１日１回、２週間行った。
【００３９】
（組織定量分析）
実験期間終了後、ジエチルエーテル（ナカライテスク株式会社製）による吸入麻酔でラットを屠殺した。左側上顎骨を取り出して４％パラホルムアルデヒド含有０．１Ｍリン酸緩衝液に浸漬固定、脱灰した後、パラフィン包埋の組織標本を作成し、ヘマトキシリン・エオジン染色およびマロリー染色を行った。
図１に示すように、ヘマトキシリン・エオジン染色標本では、歯７の歯根を囲む歯肉１の接合上皮５の直下の結合組織１１の単位面積（０．１ｍｍ×０．１ｍｍ）あたり２箇所の好中球数を測定した。
マロリー染色を行った標本では、歯根表面に接する歯肉１の結合組織１２における単位面積（０．１ｍｍ×０．１ｍｍ）あたりのコラーゲン面積率（密度）を測定した。画像解析ソフトとしてＷｉｎＲＯＯＦ（三谷商事株式会社）を用いた。
結果を表２に示す。
【００４０】
【表２】
2013121954.tif 000003
【００４１】
表２の結果より、接合上皮下の結合組織中の好中球数は、中長鎖ポリリン酸の配合濃度の増加にしたがって減少し、１％以上の濃度で、対照群との間に有意差が認められた（ρ＜０．０５）。また、歯根表面のコラーゲン密度の値は、中長鎖ポリリン酸の配合濃度の増加に伴い大きくなり、０．５％以上の濃度では，対照群との差が有意だった（ρ＜０．０５）。
これらのことから、好中球数の減少とコラーゲン密度の増加は、中長鎖ポリリン酸の配合濃度に伴って大きくなることがわかった。尚、検体２は好中球数の減少効果もコラーゲン密度の増加効果も見られず、実施例で用いた殺菌剤Ａには歯肉のコラーゲン密度増強効果が得られないことがわかる。歯肉の好中球数の減少とコラーゲン密度の増加は、いずれも歯周炎の改善時に観察される組織変化であることから、ポリリン酸に歯周炎（歯肉炎）を消退させる効果が期待できる。
【００４２】
＜中長鎖ポリリン酸の歯垢中浸透性試験１＞
界面活性剤との組み合わせについて、中長鎖ポリリン酸の歯垢への浸透性の効果の有無を検討した。尚、口腔細菌を培養した懸濁液を用いて菌層を作製し、このバイオフィルムを歯垢とみなして以下の試験を行った。
【００４３】
（液剤検体の調製）
液剤検体として、中長鎖ポリリン酸ナトリウム（平均重合度６２．４）を配合した下記検体７、８を調製した。
検体７：中長鎖ポリリン酸ナトリウム１％水溶液
検体８：中長鎖ポリリン酸ナトリウム１％＋界面活性剤（ポリオキシエチレン（１００）硬化ヒマシ油、商品名ＮＩＫＫＯＬＨＣＯ−１００、日光ケミカルズ株式会社製）０．１％水溶液
【００４４】
（試験方法）
ＢＨＩ培地（Brain Heart Infusion培地）中でＳ．ｍｕｔａｎｓ ＭＴ８１４８Ｒ株を、３７℃で、２４時間好気培養した。
菌体を蒸留水で２回洗浄し、濁度が１．０となるように適量のＰＢＳ（Phosphate buffered saline）に懸濁させた。直径１ｃｍ、高さ５．５ｃｍのシリンジの口部に孔径０．２２μｍ、直径１０ｍｍのミリポアフィルターを敷き、菌の懸濁液を２ｍＬ入れ、室温で３時間放置した。
液が通過した後、液剤検体を１ｍＬ入れ、３７℃で一晩放置した。シリンジを通過した液を集め、この液中に含まれるポリリン酸量を以下の方法により測定した。
コントロールとして、菌の懸濁液を通過させずに検体７、８のみを通過させたもの（コントロール１、２）について同様に試験を行い、ポリリン酸量を測定した。
【００４５】
（ポリリン酸の定量）
１）液剤検体を１ｍＬとり、硝酸（１ｍＬを２０ｍＬにメスアップ）１ｍＬと混和しガラス管（長さ１０．５ｃｍ、内径１．５ｃｍ）にとる。
２）ガラス管の開口部をラップフィルムで被覆し、１００℃に設定したドライバスで３０分間加熱し、加水分解する。放熱後、この液を全てＣ１８カートリッジカラム（ウォーターズ（Waters）社製、メタノールコンディショニングとして１００％メタノール、５０％メタノール、精製水の順に５ｍＬずつを通した）に通し、不溶性のものをトラップさせる。このとき通過した液はメスフラスコに回収する。その後、カラムにゆっくりと水を５ｍＬ、５０％メタノール５ｍＬを流してリン酸を出しきり、メスフラスコ中に回収し、正確に２０ｍＬにメスアップする。
３）検液１ｍＬとバナジン酸・モリブデン酸試液（食添収載）１ｍＬを混合して水を３ｍＬ加え、室温で３０分間の反応後、分光光度計で４００ｎｍの吸光度を測定する。
４）スタンダードは、リン酸一カリウム標準液（リン酸一カリウム４．３９４ｇを正確に量り、水を加えて溶かして正確に１Ｌとしたものである。本液１ｍＬはリン（Ｐ）１ｍｇを含む。）を５ｍＬとって１Ｌにメスアップする。これを１、２、３、４ｍＬとってバナジン酸・モリブデン酸試液１ｍＬを混合して水でトータル５ｍＬにして、３０分間反応させた後、４００ｎｍの吸光度を測定し、検量線を作成する。この検量線と検液の吸光度から検液１ｍＬ中のリン（Ｐ）の質量（ｍｇ）を求め、さらに下式により、五酸化リン（Ｐ２Ｏ５）の含量を求め、ポリリン酸量とする。
ポリリン酸量（％）＝検液１ｍＬ中のリン質量（ｍｇ）×２０×２．２９１４×１００
【００４６】
それぞれのポリリン酸量から、下記式により、ポリリン酸の浸透率（％）を求めた。結果を表３に示す。
浸透率（％）＝通過したポリリン酸／シリンジに加えたポリリン酸×１００
【００４７】
【表３】
2013121954.tif 000004
【００４８】
表３の結果からわかるように、中長鎖ポリリン酸の歯垢への浸透率は、検体７が８３．７％であったのに対し、検体８は９１．７％であり、８％上昇した。また、菌の懸濁液を通過させずに試験したコントロール１（中長鎖ポリリン酸のみの配合）とコントロール２（中長鎖ポリリン酸と界面活性剤との組み合わせ）では、ほぼ同じ浸透率であることが確認できた。このことから、中長鎖ポリリン酸と界面活性剤とを組み合わせることにより歯垢に対する浸透性が高まり、歯垢を通過しやすくなることがわかった。したがって、中長鎖ポリリン酸と界面活性剤とを組み合わせることで、歯垢に覆われた歯肉にもポリリン酸が浸透していき、コラーゲン密度の増強効果をもたらすと考えられる。
【００４９】
＜中長鎖ポリリン酸の歯垢中浸透性試験２＞
（液剤検体の調製）
液剤検体として、中長鎖ポリリン酸ナトリウム（平均重合度６０．０）を配合した下記検体９、１０を調製した。
検体９：中長鎖ポリリン酸ナトリウム１％水溶液
検体１０：中長鎖ポリリン酸ナトリウム１％＋界面活性剤（ポリオキシエチレンセチルエーテル、商品名ＮＩＫＫＯＬＢＣ−２５、日光ケミカルズ株式会社製）１％水溶液
【００５０】
（試験方法）
ＢＨＩ（Ｂｒａｉｎ Ｈｅａｒｔ Ｉｎｆｕｓｉｏｎ）培地中で、Ｓ．ｓｏｂｒｉｎｕｓ ＯＭＺ１７６株を、３７℃で２４時間好気培養した。１％Ｓｕｃｒｏｓｅを添加したＢＨＩ培地３０ｍＬに、前培養した菌液３００μＬを加え希釈菌液を調製した。
セルカルチャーインサート（Ｎｕｎｃ社製、ＰＣメンブレン、孔径０．４μｍ）を６ウェルプレートに設置し、ウェルにＢＨＩ培地（１％Ｓｕｃｒｏｓｅを添加）を３ｍＬ、セルカルチャーインサートに上記希釈菌液を２ｍＬ加え、３７℃で、２４時間静置した。その後、培地を除き、同様の操作を合計３回行い、厚みのあるバイオフィルム（人工歯垢）を作製した。培地を除いた後、生理食塩水でバイオフィルム（人工歯垢）を剥がさないように洗浄した。
次に、ウェルにイオン交換水を３ｍＬ、セルカルチャーインサート内に検体を１ｍＬ入れ、静置した。６、８時間後にウェル内の水を１ｍＬずつ採取し、この液中に含まれるポリリン酸量を以下の方法により測定した。
【００５１】
（ポリリン酸の定量）
１）検体を１ｍＬと硝酸（１ｍＬを２０ｍＬにメスアップ）１ｍＬとを混和しガラス管（長さ１０．５ｃｍ、内径１．５ｃｍ）にとる。
２）ガラス管の開口部をラップフィルムで被覆し、１００℃に設定したドライバスで３０分間加熱し、加水分解する。放熱後、この液を全てメスフラスコ中に回収し、正確に２０ｍＬにメスアップする。
３）得られた検液１ｍＬとバナジン酸・モリブデン酸試液（食添収載）１ｍＬを混合して９９．５％エタノールを３ｍＬ加え、室温で３０分間の反応後、分光光度計で４１０ｎｍの吸光度を測定する。
４）スタンダードは、リン酸一カリウム標準液（リン酸一カリウム４．３９４ｇを正確に量り、水を加えて溶かして正確に１Ｌとしたものである。本液１ｍＬはリン（Ｐ）１ｍｇを含む。）を１００、２５０、５００、１０００倍希釈したものをそれぞれ１ｍＬとってバナジン酸・モリブデン酸試液１ｍＬを混合して９９．５％エタノールを３ｍＬ加え、３０分間反応させた後、４１０ｎｍの吸光度を測定し、検量線を作成する。この検量線と検液の吸光度から検液１ｍＬ中のリン（Ｐ）の質量（ｍｇ）を求め、さらに下式により、五酸化リン（Ｐ２Ｏ５）の含量を求め、ポリリン酸量とする。
ポリリン酸量（％）＝検液１ｍＬ中のリン質量（ｍｇ）×２０×２．２９１４×１００
【００５２】
それぞれのポリリン酸量から、下記式により、ポリリン酸の浸透率（％）を求めた。結果を表４に示す。また、試験を５回繰り返したときの８時間後のポリリン酸の浸透率もあわせて表４に示す。
浸透率（％）＝通過したポリリン酸／インサート内に添加したポリリン酸×１００
【００５３】
【表４】
2013121954.tif 000005
【００５４】
表４の結果からわかるように、中長鎖ポリリン酸の歯垢への浸透率は、６時間後で、検体９が１６．７％であったのに対し、検体１０は２５．４％であり、８．７％上昇し、８時間後では、検体９が１９．１％であったのに対し、検体１０は２５．５％であり、６．４％上昇した。さらに、試験を５回行った平均において、８時間後で、検体９が２３．４％であったのに対し、検体１０は２８．９％であり、５．５%上昇した。このことから、中長鎖ポリリン酸と界面活性剤とを組み合わせることにより、厚みのあるプラークに対しても本発明の歯肉のコラーゲン密度増強剤の浸透性が高まり、歯垢を通過しやすくなることがわかった。
【００５５】
＜経時安定性評価＞
中長鎖ポリリン酸（平均重合度６２．４）を配合した液剤検体とアスコルビン酸（ビタミンＣ）を配合した液剤検体の経時安定性の比較を行った。
表５に示す処方により中長鎖ポリリン酸またはアスコルビン酸（ビタミンＣ）を配合した液剤検体１１〜１４を調製し、８０ｍＬ容の透明ペットボトルに８０ｍＬずつ充填したものを各５本準備した。これら検体を、暗所で、５℃条件、２５℃条件、４０℃条件、５０℃条件、及び５℃⇔４０℃サイクル条件で保管した。各温度条件下で保管した検体を、２週間経過時、１ヶ月経過時に下記試験に供した。結果を表６〜表９に示す。
【００５６】
【表５】
2013121954.tif 000006
【００５７】
（ｐＨ測定）
ｐＨ測定装置（商品名：ｐＨＭｅｔｅｒ ＨＭ−１４Ｐ、東亜ディーケーケー株式会社製）を用い、常温（２０℃）でのｐＨを測定した。
【００５８】
（色差値ΔＥ）
分光式色差計（日本電色工業株式会社製、Ｃｏｌｏｒ Ｍｅｔｅｒ ＺＥ２００）を用いて、Ｌ＊ａ＊ｂ＊の色調の測定値を求めた。具体的には、Ｌ＊、ａ＊、ｂ＊を測定し、色差ΔＥ＝√（ΔＬ＊２＋Δａ＊２＋Δｂ＊２）で色差を算出した（色差ΔＥ＝ΔＬ＊２＋Δａ＊２＋Δｂ＊２）１／２）。
【００５９】
（ポリリン酸の定量）
１）液剤検体を１ｍＬとり、硝酸（１ｇを２０ｍＬにメスアップ）１ｍＬと混和しガラス管（長さ１０．５ｃｍ、内径１．５ｃｍ）にとる。
２）ガラス管の開口部をラップフィルムで被覆し、１００℃に設定したドライバスで３０分間加熱し、加水分解する。放熱後、この液を全てＣ１８カートリッジカラム（ウォーターズ（Waters）社製、メタノールコンディショニングとして１００％メタノール、５０％メタノール、精製水の順に５ｍＬずつを通した）に通し、不溶性のものをトラップさせる。このとき通過した液はメスフラスコに回収する。その後、カラムにゆっくりと水を５ｍＬ、５０％メタノール５ｍＬを流してリン酸を出しきり、メスフラスコ中に回収し、正確に２０ｍＬにメスアップする。
３）検液１ｍＬとバナジン酸・モリブデン酸試液（食添収載）１ｍＬを混合して水を３ｍＬ加え、室温で３０分間の反応後、分光光度計で４００ｎｍの吸光度を測定する。
４）スタンダードは、リン酸一カリウム標準液（リン酸一カリウム４．３９４ｇを正確に量り、水を加えて溶かして正確に１Ｌとしたものである。本液１ｍＬはリン（Ｐ）１ｍｇを含む。）を５ｍＬとって１Ｌにメスアップする。これを１、２、３、４ｍＬとってバナジン酸・モリブデン酸試液１ｍＬを混合して水でトータル５ｍＬにして、３０分間反応させた後、４００ｎｍの吸光度を測定し、検量線を作成する。この検量線と検液の吸光度から検液１ｍＬ中のリン（Ｐ）の質量（ｍｇ）を求め、さらに下式により、五酸化リン（Ｐ２Ｏ５）の含量を求め、ポリリン酸量とする。
ポリリン酸量（％）＝検液１ｍＬ中のリン質量（ｍｇ）×２０×２．２９１４×１００
【００６０】
（ビタミンＣの定量）
１）液剤検体を１０倍希釈したものを５ｍＬとり、内標準溶液（２，５−ジヒドロ安息香酸水溶液（０．６ｇを１００ｍＬにメスアップ））５ｍＬ、水４０ｍＬを加えて試料溶液とする。
２）別にアスコルビン酸標準品を約０．１ｇ測り、メスフラスコにて水で１００ｍＬにメスアップする。これを５ｍＬとリ、内標準溶液５ｍＬ、水４０ｍＬを加えて標準溶液とする。
３）試料溶液および標準溶液各１０μＬにつき、次の操作条件で液体クロマトグラフ法による試験を実施し、内標準物質のピーク面積（Ｑｓ）に対するアスコルビン酸のピーク面積（Ｑｔ）の比Ｑｔ／Ｑｓを求める。
〔操作条件〕
検出器：紫外吸光光度計（波長２７４ｎｍ）
カラム：内径４．６ｍｍ、長さ１５０ｍｍのステンレス管に約５μｍのオクタデシルシリル化シリカゲルを充填したもの。
カラム温度：２５℃付近一定
移動相：２０ｍＭリン酸二水素Ｋ一リン酸（ｐＨ２．４）／メタノール（７５／２５）
流量：０．７ｍＬ／ｍｉｎ。内標準物質の保持時間が約１５分になるように設定。
４）下式により、アスコルビン酸の含量を求める。
アスコルビン酸の含量（ｍｇ）＝標準溶液中のアスコルビン酸の含量ａ（ｍｇ）×（Ｑｔ／Ｑｓ）×（１／１０）
【００６１】
（香味・外観）
４名のパネラーにより、香味と外観について官能評価した。香味は、試験開始時（初期）を基準にし、初期と比べて香味の変化のないものを「○」と判断した。また、目視で外観を確認し、オリ、濁り、析出の有無、および検体の色調の変化の有無を確認した。試験開始時（初期）と比較してオリ、濁り、析出のないものを「○」とし、また、色調の変化のないものを「○」、初期に比べて黄色へ変化したものを「黄変」と判断した。
【００６２】
【表６】
2013121954.tif 000007
【００６３】
【表７】
2013121954.tif 000008
【００６４】
【表８】
2013121954.tif 000009
【００６５】
【表９】
2013121954.tif 000010
【００６６】
表６および表７の結果より、中長鎖ポリリン酸を処方した検体１１、１２に関して、ポリリン酸量が１００％前後で推移しており、減少傾向や増加傾向は見られず安定であった。色差ΔＥに関してはほぼ変化がなく、外観上の変化も認められなかった。
表８および表９の結果より、ビタミンＣを処方した検体１３、１４は、ビタミンＣ量が初期から減少傾向を示し、検体１３は１ヶ月の保管で５０％程度に減少した。これはビタミンＣが分解したものと思われる。色差ΔＥに関しては２週間の保管でΔＥが５℃（冷蔵）で３を超え、２５℃（常温）では４を超えた。また、１ヶ月の保管でも高温になるほどΔＥは高くなった。また、外観上も透明から黄色へ大きく変化した。
【００６７】
これらの結果よりビタミンＣを配合した検体ではビタミンＣが水中で分解することで経時的に減少していくため、非常に不安定な製剤であるのに対し、中長鎖ポリリン酸を配合した検体では安定性に優れていることが確認された。
【００６８】
以下に、本発明の歯肉のコラーゲン密度増強剤を配合した口腔用組成物の処方例を示す。尚、配合量は質量（ｇ）である。
【００６９】
＜処方例１：歯磨剤の組成＞
グリセリン                                  １５．０
ソルビトール                                １５．０
ヒドロキシエチルセルロース                    １．０
炭酸水素カルシウム                          １０．０
グリチルリチン酸ジカリウム                    ０．４
中長鎖ポリリン酸ナトリウム                    ０．５
ポリオキシエチレン（１００）硬化ヒマシ油      １．０
香料                                          １．０
プロピレングリコール                          ３．０
精製水                                    １００ｇとなる量
【００７０】
＜処方例２：タブレット剤の組成＞
結晶セルロース                                ８．０
二酸化ケイ素                                  ０．５
ステアリン酸カルシウム                        ２．０
キシリトール                                １０．０
エリスリトール                              １０．０
アスパルテーム                                ０．２
中長鎖ポリリン酸ナトリウム                    ２．０
香料                                          ４．０
マルチトール                                ６３．３
【００７１】
＜処方例３：液状歯磨剤の組成＞
９５％エタノール                            １０．０
ポリオキシエチレン（１００）硬化ヒマシ油      ０．７
香料                                          ０．１
ヒドロキシエチルセルロース                    ０．６
プロピルパラベン                              ０．０１
メチルパラベン                                ０．０４
チモール                                      ０．０２
中長鎖ポリリン酸ナトリウム                    １．０
ｐＨ調整剤                                    ０．１
濃グリセリン                                １０．０
精製水                                    １００ｍＬとなる量
【００７２】
＜処方例４：洗口液の組成＞
９５％エタノール                            １０．０
ポリオキシエチレン（１００）硬化ヒマシ油      ０．２
香料                                          ０．０５
ブチルパラベン                                ０．０２
チモール                                      ０．０４
ラウロイルサルコシンナトリウム                ０．２
中長鎖ポリリン酸ナトリウム                    １．０
ソルビトール（７０）                          ５．０
グリチルリチン酸ジカリウム                    ０．０１
ｐＨ調整剤                                    ０．１５
濃グリセリン                                  ５．０
精製水                                    １００ｍＬとなる量
【００７３】
＜処方例５：洗口液の処方＞
９５％エタノール                              ５．０
ポリオキシエチレン（１００）硬化ヒマシ油      ０．１
香料                                          ０．０５
中長鎖ポリリン酸ナトリウム                    １．０
ｐＨ調整剤                                    ０．２０
濃グリセリン                                １０．０
精製水                                    １００ｍＬとなる量
【００７４】
＜処方例６：洗口液の処方＞
プロピレングリコール                          ２．０
ポリオキシエチレン（１００）硬化ヒマシ油      ０．５
香料                                          ０．０５
プロピルパラベン                              ０．０１
メチルパラベン                                ０．０４
イソプロピルメチルフェノール                  ０．０２
ラウリル硫酸ナトリウム                        ０．０２
中長鎖ポリリン酸ナトリウム                    ０．５
ｐＨ調整剤                                    ０．１
濃グリセリン                                １０．０
精製水                                    １００ｍＬとなる量
【産業上の利用可能性】
【００７５】
本発明のコラーゲン密度増強剤は歯肉のコラーゲン密度増強効果があるため、口腔内ヘルスケア用品分野での利用が期待される。
【符号の説明】
【００７６】
１    歯肉
２    エナメル質
３    セメント質
４    象牙質
５    接合上皮
６    歯槽骨
７    歯
１１  接合上皮直下の結合組織
１２  歯根表面の結合組織
【図１】
2013121954.tif 000011