(57)【要約】      （修正有）【課題】混和液の移し替えが容易に短時間で行えて、且つ低価格化及び乾燥作業の効率化が可能なd-ROMsテスト用の容器を提供する。【解決手段】第１試薬である酢酸緩衝液を収容する第１容器と、第２試薬である固化したクロモゲン２を収容する第２容器３０からなるｄ−ＲＯＭｓテスト用試薬容器であって、前記第１容器が容器本体とキャップで密封された正方形のチューブのキュベットであり、上記容器本体に前記酢酸緩衝液が収容されており、前記第２容器３０が上記第１容器のキャップと同一の形状であり、そのキャップの天面に設けられたライナー材１４に前記固化したクロモゲン２が付着され、上記キャップの上口をシール材１３で密封されている。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
第１試薬である酢酸緩衝液を収容する第１容器と、第２試薬である固化したクロモゲンを収容する第２容器からなるｄ−ＲＯＭｓテスト用試薬容器であって、
前記第１容器が容器本体とキャップで密封された正方形のチューブのキュベットであり、上記容器本体に前記酢酸緩衝液が収容されており、前記第２容器が上記第１容器であるキュベットのキャップと同一の形状であり、そのキャップに固化したクロモゲンが収容され、上記キャップの封口部がシール材で密封されていることを特徴とするｄ−ＲＯＭｓテスト用試薬容器。
【請求項２】
前記固化したクロモゲンが、前記キャップの天面に設けられたライナー材に付着していることを特徴とするｄ−ＲＯＭｓテスト用試薬容器。
【請求項３】
前記キュベットのキャップの容積が、該キュベットの容積の約１／３であることにより、従来のキュベットに収容されているクロモゲンと比べてその酸化を低減化することを特徴とする請求項１又は２に記載のｄ−ＲＯＭｓテスト用試薬容器。
【請求項４】
前記キャップの封口部を密封するヒートシール材が前記シール材の内面に設けられ、ヒートシールにより上記封口部が密封されていることを特徴とする請求項１乃至３の何れか一項に記載のｄ−ＲＯＭｓテスト用試薬容器。
【請求項５】
前記第１容器の容器本体の一方の対称面が透明であり、他方の対称面が凹凸の不透明であることを特徴とする請求項１乃至４の何れか一項に記載のｄ−ＲＯＭｓテスト用試薬容器。
【請求項６】
前記シール材がアルミ箔、アルミ箔及び樹脂フィルム又はアルミ箔及び複数の樹脂フィルムの多層のものであることを特徴とする請求項１乃至５の何れか一項に記載のｄ−ＲＯＭｓテスト用試薬容器。
【請求項７】
前記第１容器のキャップに換えて前記第２容器のキャップが被せられており、該第１容器に試薬液が収容されていることを特徴とする請求項１に記載のｄ−ＲＯＭｓテスト用試薬容器。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、被験者から採血した血液中のヒドロペルオキシドを測定して、濃度を呈色反応で計測し、生体内の酸化ストレス度を分析する試薬を収容するｄ−ＲＯＭｓテスト用試薬容器に関する。
【背景技術】
【０００２】
近時、世界の各地では活性酸素・フリーラジカルに関する研究が進められ、この活性酸素・フリーラジカルと老化や各種疾病との関連性が明白であるとされてきているが、このフリーラジカル自体は寿命が短く、高い反応性を有するため、生体内の状態を測定することは極めて困難なこととされていた。この方法を実行する分析装置は、大型のものでありその操作も複雑で価格も非常に高価であり、特定の一部施設にしか設置することができないものであった。一般的な病院、診療所等には設置することが難しいことから、それを利用できる被験者が特定されてしまい、誰もが利用できるものではなかった。しかし、イタリアのマウロ・カラテッリは、生体内の活性酸素・フリーラジカルのレベルを測定する方法を開発して上記困難な問題を解決した（特許文献１・2参照）。
【０００３】
上記分析装置は、マウロ・カラテッリによって開発されたd-ROMsテストにより酸化ストレス度を測定することができる。非特許文献１には以下に述べることが開示されている。上記d-ROMsテストは、血中の酸化代謝産物（Reactive Oxygen Metabolites : ROMs）に属する化学オキシダント種であるヒドロペルオキシド（ROOH）を測定して、光学測定法の一種で“光度計”を備えた上記分析装置を用いて測定できる検査法である。上記ヒドロペルオキシドの測定は、体内で生成されるフリーラジカルのレベルを測定することを意味するが、実際にはフリーラジカルは酸化ストレスの原因となる化学物質種の中のほんの一部にすぎず、酸化ストレスは、過酸化水素や次亜塩素酸などの他の化学物質からも誘発されるもので、これらの化学物質はフリーラジカルではない。そのため、酸化ストレスの原因となる全ての化学物質（ラジカルもラジカル以外の化学物質）も、“活性化学物質あるいはオキシダント化学物質種”に大きく分類されている。これを基礎にすると、酸化ストレスを総合的に評価するには、オキシダント化学物質種の総合的レベル （オキシダント状態、あるいはプロオキシダント状態）を測定する必要がある。
【０００４】
上記ヒドロペルオキシドは、生理的に重要で多様な有機分子（例えば、脂質、アミノ酸、ペプチド、タンパク質、ヌクレオチドなど）が酸化されることで生成される比較的安定した化学物質である。このヒドロペルオキシドは、特別な条件下、例えば、鉄イオンが存在する条件下で、フリーラジカルを生成することができる。このような特性があるため、ヒドロペルオキシドは、酸化的損傷が存在することの“証”と見なすことができるだけでなく、更に酸化的損傷の特異的“マーカー”としても、組織損傷の“増幅因子”（この物質がさらにフリーラジカルを生成できるため）としてもみなすことができる。
【０００５】
d-ROMsテストの一般的な手順は 、最初に、被験者の指先から指採血用ミクロベット（内壁ヘパリンコーティング）で１００μｌ程度の全血を採血し、遠心分離器で90秒間処理して血漿と血球に分離し、ｐH4.8の酢酸緩衝液が収容されたエッペンドルフチューブ（エッペンドルフ社製）に、２０μｌの血漿を添加して均一になるように転倒混和する（以下、その混和した液を「混和液」という）。次に、無色の発色液であるクロモゲン（芳香族アミンN,N-ジエチルパラフェニレンジアミン（DEPPD:Diacron社製品））をジェル化して固化したクロモゲン（以下、「固化クロモゲン」という）を収容したキュベットに、上記混和液を添加して均一に転倒混和させて試料液を得る。
得られた試料液を光度計（波長は505あるいは546nm）で吸光度の変化を5分間計測して、その測定結果が数値化され印刷される。
【０００６】
図３は、酢酸緩衝液１（以下、「第１試薬１」という）を収容する従来の容器であるエッペンドルフチューブ１０を示す図であり、このエッペンドルフチューブ１０は容器本体１１と着脱自在の密封用のキャップ１２から構成されている。上記エッペンドルフチューブ１０は、マイクロリットルからミリリットル程度の試料を扱うための小型試験管で、微量遠心機に装着して遠心分離に使えるものをいい、生化学・分子生物学などの試験・実験によく用いられる。
【０００７】
図３（ａ）はエッペンドルフチューブ１０の正面図であり、図３（ｂ）は断面図である。上記エッペンドルフチューブ１０はポリプロピレン製で肉厚に形成され、押圧されても凹むことはない。容器本体１１はその上部が円筒状で下方に行くにつれて円錐状に形成されている。その上端にはフランジ１１'が設けられており、そのフランジ１１'の上部にキャップ１２が設けられている。そのキャップ１２は上記フランジ１１'と連結部１２'を介して結合している。その連結部１２'の反対側には上記キャップ１２に係止部１２''が設けられており、その係止部１２''は上記フランジ１１'に係合している。そして、容器本体１１には第１試薬１が収容されている。
【０００８】
図４は、固化クロモゲン２（以下、「第２試薬２」という）を収容する従来の容器であるキュベット２０を示す図であり、このキュベット２０は容器本体２１とキャップ２２で密封された正方形の小さなチューブであり、分光器での実験の際にこのチューブへサンプルを入れて測定を行う。多くの場合この容器はガラス製又はプラスチック製であり、分光器での実験の際にこのチューブへサンプルを入れて測定を行う。図4（ａ）はキュベット２０の正面図であり、図4（ｂ）は容器本体１１の断面図である。クロモゲン２が酸化されないようにキャップ２２で密封されている。容器本体２１は、図4（ｂ）が示すように断面が正四角形状の直方体である。上記キュベットは、片側からもう片側へ一本の505あるいは546nmの波長の光線が通るように、対称の面だけが透明になっている。不透明な側には凹凸が設けられ手でつかむ部分として使いやすいようにしている。
上記キュベット２０の底部の隅に第２試薬２が付着されている。上記クロモゲンは精製水で溶かしてジェル化されており、その約２０μｌを上記直方体の底部の隅に付着させ、乾燥機で１週間掛けて精製水を飛ばして固化状態にして付着させる。
【０００９】
従来のエッペンドルフチューブ１０及びキュベット２０を用いて行われるd-ROMsテスト用の試薬液の生成作業を説明する。
エッペンドルフチューブ１０のフランジ１１'に係合している係止部１２''を上方に引き上げてキャップ１２を開き、被験者の指先から採血して分離した２０μｌの血漿を、第１試薬１が収容されている容器本体１１に添加して、キャップ１２を封鎖して第１試薬１に血漿が均一に分散するようにエッペンドルフチューブ１０を強く振って混和液を生成する。次に、キュベット２０のキャップ２２を回転させて容器本体２１から分離させ、そのクロモゲン２が収容されている容器本体２１に全ての混和液を移し替える必要がある。それは、試薬である第１試薬１と第２試薬２の比率が一定であれば光度計の測定結果に問題は生じないが、例えば、混和液がエッペンドルフチューブ１０の内壁に残った状態であると、第１試薬１と第２試薬２の比率が一定でなくなるために、光度計で測った測定結果が不正確になる恐れが生じる。そのために、上記容器本体２１に全ての混和液を移し替えるために、エッペンドルフチューブ１０の外壁を叩くなどして全ての混和液を移し替えなければならず、その移し替えには細心の注意が必要である。キャップ１２を締めてキュベット２０を２０〜３０回ほど転倒混和して均一に混和させて試料液を得る。そして、キュベット２０を光度計（波長は505あるいは546nm）で吸光度の変化を5分間計測する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】米国特許第６、３５５、４８９号明細書
【特許文献２】特開２００９−２５７９０９号公報
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】http://www.wismerll.co.jp/wis_news/wsn2007/wsm0716_02_01.html
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
上述した従来のキュベット２０及びエッペンドルフチューブ１０を用いて行われるd-ROMsテスト用の試薬液の生成作業では、エッペンドルフチューブ１０に収容されている第１試薬で生成した混和液を、第２試薬が収容されているキュベット２０に移し替えるときに、事前に決められた第１試薬１と第２試薬２の比率を保持するために、エッペンドルフチューブ１０の全ての混和液をキュベット２０に移し替える必要があり、その移し替えには細心の注意を払わなければならず時間のかかる作業であった。そのため、混和液の移し替えが容易に短時間で行えるd-ROMsテスト用の容器を開発することが望まれていた。また、エッペンドルフチューブ１０とキュベット２０の形状が異なるために製造費及び材料費が高く掛かり、d-ROMsテスト用の容器の低価格化が望まれていた。更に、微量なクロモゲンを固化して付着させるのに、乾燥機にその微量なクロモゲンに比べて遙かに体積の大きい容器本体２１を収納して１週間乾燥させるために、乾燥作業の効率化が望まれていた。
それ故に、本発明は、上記従来技術の問題点に鑑み、上記混和液の移し替えが容易に短時間で行えて、且つ低価格化及び乾燥作業の効率化が可能なd-ROMsテスト用の容器を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明者は、上記課題を解決するために鋭意検討を重ねた結果、本発明の第１容器のキャップが従来のキュベットのキャップと同一の形状であり、そのキャップの天面に設けられたライナー材に固化したクロモゲンを収容すること、そして、本発明の第２容器の容器本体に酢酸緩衝液を収容すること、即ち、従来のキュベットとそのキャップと同一の形状の容器を用いることで、上記課題を解決できることを見出して本発明を完成するに至った。
すなわち本発明は、以下の通りのものである。
上記課題を解決するために、請求項１に係るｄ−ＲＯＭｓテスト用試薬容器は、第１試薬である酢酸緩衝液を収容する第１容器と、第２試薬である固化したクロモゲンを収容する第２容器からなるｄ−ＲＯＭｓテスト用試薬容器であって、前記第１容器が容器本体とキャップで密封された正方形のチューブのキュベットであり、上記容器本体に前記酢酸緩衝液が収容されており、前記第２容器が上記第１容器であるキュベットのキャップと同一の形状であり、そのキャップに固化したクロモゲンが収容され、上記キャップの封口部がシール材で密封されていることを特徴とする。
請求項２に係るｄ−ＲＯＭｓテスト用試薬容器は、前記固化したクロモゲンが前記キャップの天面に設けられたライナー材に付着していることを特徴とする。
請求項３に係るｄ−ＲＯＭｓテスト用試薬容器は、前記キュベットのキャップの容積が、該キュベットの容積の約１／３であることにより、従来のキュベットに収容されているクロモゲンと比べてその酸化を低減化することを特徴とする。
請求項４に係るｄ−ＲＯＭｓテスト用試薬容器は、前記キャップの封口部を密封するヒートシール材が前記シール材の内面に設けられ、ヒートシールにより上記封口部が密封されていることを特徴とする。
請求項５に係るｄ−ＲＯＭｓテスト用試薬容器は、前記第１容器の容器本体の一方の対称面が透明であり、他方の対称面が凹凸の不透明であることを特徴とする。
請求項６に係るｄ−ＲＯＭｓテスト用試薬容器は、前記シール材がアルミ箔又はアルミ箔及び樹脂フィルムの二層のものであることを特徴とする。
請求項７に係るｄ−ＲＯＭｓテスト用試薬容器は、前記第１容器のキャップに換えて前記第２容器のキャップが被せられており、該第１容器に試薬液が収容されていることを特徴とする。
【発明の効果】
【００１４】
本発明の第２容器２０のキャップ２２と同じ形状のキャップ１２（本発明の第１容器３０）を備え、上記キャップ２２を同じ形状のキャップ１２に交換すること、そして、第２容器２０に第１試薬１を収容すること、これらのことで混和液を移し替えずに混和液と第２試薬２を均一に混和させて試料液を得ることが可能となった。
そして、従来のエッペンドルフチューブ１０とキュベット２０の形状が異なるために、製造費及び材料費が高く掛かったが、本発明のｄ−ＲＯＭｓテスト用試薬容器は、従来のキュベットとそのキャップを用いているので、d-ROMsテスト用容器の低価格化が可能となった。
更に、本発明のキャップ１２の容積は、第２試薬２を付着させた従来の容器本体２１の約１／３の容積であるために、乾燥機に収納できる上記キャップ１２は３倍に増加するので、クロモゲンを乾燥して固化する乾燥作業の効率化が約３倍良くなった。
また、本発明のキュベットのキャップの容積が、該キュベットの容積の約１／３であることにより、従来のキュベットに収容されているクロモゲンと比べてその酸化を低減化することが可能となった。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】第２試薬である固化クロモゲンを収容する第１容器を示す図である。
【図２】酢酸緩衝液である第１試薬を収容するキュベットである第２容器を示す図である。
【図３】酢酸緩衝液を収容する従来のエッペンドルフチューブを示す図である。
【図４】固化クロモゲンを収容する従来のキュベットを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本発明のｄ−ＲＯＭｓテスト用試薬容器の実施の最良形態を説明する。なお、本発明の上記試薬容器の部材が従来の上記試薬容器と同じ部材であれば、同一の符号を付して説明する。
図１は、第２試薬２である固化クロモゲンを収容する第２容器３０を示す図である。上記第２容器３０は、図２に示す第１容器２０のキャップ１２と同一の形状である。図１（ａ）は、第２容器３０の正面図であり、上記キャップ１２の封口部はアルミ箔等のキャップ状のシール材１３で密封されている。図１（ｂ）は、上記封口部からシール材１３を剥がしたキャップ１２とシール材１３の展開図である。キャップ１２の封口部を密封するヒートシール材が上記シール材１３の内面に設けられており、ヒートシールにより上記封口部が密封されている。シール材１３はアルミ箔以外に、アルミ箔及び樹脂フィルム又はアルミ箔及び複数の樹脂フィルムの多層のものであっても良い。
上記キャップ１２の天面には樹脂製のライナー材１４が設けられており、そのライナー材１４には上記第２試薬２が付着されている。図１（ｃ）は、図１（ｂ）の縦断面から見た側面図である。上記キャップ１２の天面に設けられたライナー材１４に上記第２試薬２が付着されている。上記第２試薬２を付着する場所はライナー材１４の中央に限定されるものではない。付着する場所は、ライナー材１４の中央以外の場所でも良いし、キャップ１２の内壁の側面に付着させても良い。また、ライナー材１４の形状は、各種の形状を用いても良く、図１の形状に限定されるものではない。
【００１７】
図２は、酢酸緩衝液である第１試薬１を収容するキュベットである第１容器２０を示す図である。図２（ａ）は第１容器２０の正面図であり、その第１容器２０は、容器本体２１とキャップ２２で密封された正方形のチューブであり、上記第１容器２０は、片側からもう片側へ一本の505nmの波長の光線が通るように、対称の面だけが透明になっている。不透明な側は手でつかむ部分として使いやすいように凹凸が設けられている。図２（ｂ）は第２容器２０の横断面図であり、容器本体２１に第１試薬１が収容されている。上記キャップ２２はその天面にライナー材が設けられている。
【００１８】
本発明の第２容器３０及び第１容器２０を用いて行われるd-ROMsテスト用の試薬液の生成作業を説明する。
第１容器２０のキャップ２２を回転させて密封状態を解除させ、被験者の指先から採血して分離した２０μｌの血漿を、酢酸緩衝液が収容されている容器本体２１に添加する。次に、第２容器３０のキャップ１２のシール材１３を剥がして、上記容器本体２１にそのキャップ１２を被せて回転させて密封させる。そして、第１試薬１に血漿が均一に分散されて混和液を生成すると共に、その混和液でライナー材１４に付着している第２試薬２を溶解させるために、第１容器２０を２０〜３０回ほど転倒混和させ、上記混和液が第２試薬２に接触することで第２試薬２の固化クロモゲンが溶解し、混和液中にクロモゲンが混和されて試料液が生成される。得られた試料液を光度計（波長は505あるいは546nm）で吸光度の変化を5分間計測する。
【００１９】
本発明の第１容器２０のキャップ２２と同じ形状のキャップ１２（本発明の第２容器３０）を備え、上記キャップ２２を同じ形状のキャップ１２に交換すること、そして、第１容器２０に第１試薬１を収容すること、これらのことで混和液を移し替えずに混和液と第２試薬２を均一に混和させて試料液を得ることが可能となった。そして、従来のエッペンドルフチューブ１０とキュベット２０の形状が異なるために、製造費及び材料費が高く掛かったが、第１容器２０のキャップ２２と同じ形状のキャップ１２を用いているので、d-ROMsテスト用容器の低価格化が可能となった。更に、本発明のキャップ１２の容積は、第２試薬２を付着させた従来の容器本体２１の約１／３の容積であるために、乾燥機に収納できる上記キャップ１２は３倍に増加するので、クロモゲンを乾燥して固化する乾燥作業の効率化が約３倍良くなった。また、本発明の試薬容器で生成した試薬液を光度計で測った結果が、従来のそれより、より安定した値が得られたことは、本発明のキャップ１２の容積が従来の容器の約１／３であることにより、キャップ１２に収容されているクロモゲンの酸化の低減化が図られたためと推測されるので、本発明の試薬容器が測定結果の精度を向上させている。
【符号の説明】
【００２０】
１    第１試薬（酢酸緩衝液）
２    第２試薬（固化クロモゲン）
１０  従来のエッペンドルフチューブ
１１  エッペンドルフチューブの容器本体
１２  エッペンドルフチューブのキャップ
２０  従来のキュベット
２１  キュベットの容器本体
２２  キュベットのキャップ
２０  本発明の第１容器（キュベット）
２１  本発明の第１容器の容器本体
２２  本発明の第１容器のキャップ
３０  本発明の第２容器
１２  本発明の第２容器のキャップ
１３  本発明のシール材
１４  ライナー材
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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