(57)【要約】【課題】ヒトを含む被験動物に対して負担が少なく、神経変性疾患の兆候を比較的正確且つ容易に確認することのできる神経変性疾患の進行度合いを判定するキットを提供する。【解決手段】被験動物から採取した尿中及び／又は血液中のホモシステイン酸含量を調べることとした。また、被験動物から採取した第１の尿中のホモシステイン酸含量を、前記第１の尿の採取以前に前記被験動物より採取した第２の尿中のホモシステイン酸含量と比較して、前記第１の尿中のホモシステイン酸含量が、前記第２の尿中のホモシステイン酸含量より小さくなったことにより、その減少量が大きいほど前記被験動物の神経変性疾患が進行しているものと判定することにも特徴を有する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験動物から採取した尿中及び／又は血液中のホモシステイン酸含量を調べることを特徴とする神経変性疾患の検査方法。
【請求項２】
被験動物から採取した第１の尿中のホモシステイン酸含量を、前記第１の尿の採取以前に前記被験動物より採取した第２の尿中のホモシステイン酸含量と比較して、前記第１の尿中のホモシステイン酸含量が、前記第２の尿中のホモシステイン酸含量より小さくなったことにより、その減少量が大きいほど前記被験動物の神経変性疾患が進行しているものと判定することを特徴とする請求項１に記載の神経変性疾患の検査方法。
【請求項３】
被験動物から採取した第１の血液中のホモシステイン酸含量を、前記第１の血液の採取以前に前記被験動物より採取した第２の血液中のホモシステイン酸含量と比較して、前記第１の血液中のホモシステイン酸含量が、前記第２の血液中のホモシステイン酸含量より大きくなったことにより、その増加量が大きいほど前記被験動物の神経変性疾患が進行しているものと判定することを特徴とする請求項１又は請求項２に記載の神経変性疾患の検査方法。
【請求項４】
被験動物の神経変性疾患の進行度合いを、前記被験動物より採取した尿を用いて判定するためのキットであって、
前記尿と接触させる尿接触手段と、
前記尿接触手段に接触させた尿の中に含まれるホモシステイン酸を抗原とする抗ホモシステイン酸抗体と、
前記抗ホモシステイン酸抗体の前記尿中のホモシステイン酸への結合量に応じて変化する標識手段と、を備え、
前記尿中に含まれるホモシステイン酸に結合した前記抗ホモシステイン酸抗体が少ない程、前記標識手段の変化によって前記被験動物の神経変性疾患が進行していることを表示可能としたことを特徴とするキット。
【請求項５】
被験動物の神経変性疾患の進行度合いを、前記被験動物より採取した血液を用いて判定するためのキットであって、
前記血液又は前記血液より得られる血漿を接触させる接触手段と、
前記接触手段に接触させた血液又は血漿中に含まれるホモシステイン酸を抗原とする抗ホモシステイン酸抗体と、
前記抗ホモシステイン酸抗体の前記血液又は血漿中のホモシステイン酸への結合量に応じて変化する標識手段と、を備え、
前記血液又は血漿中に含まれるホモシステイン酸に結合した前記抗ホモシステイン酸抗体が多い程、前記標識手段の変化によって前記被験動物の神経変性疾患が進行していることを表示可能としたことを特徴とするキット。
【請求項６】
被験動物の神経変性疾患の進行度合いを判定するに際して、前記被験動物より採取した第１の尿中におけるホモシステイン酸の含有量と前記第１の尿の採取以前に前記被験動物より採取した第２の尿中のホモシステイン酸含有量とを比較して前記被験動物に対して非侵襲的に神経変性疾患の進行度合いを判定するための、少なくとも前記第１の尿中におけるホモシステイン酸の含有量と、前記第２の尿中におけるホモシステイン酸の含有量との比が分かるデータの使用。
【請求項７】
被験動物の神経変性疾患の進行度合いを判定するに際して、前記被験動物より採取した第１の血液中におけるホモシステイン酸の含量と前記第１の血液の採取以前に前記被験動物より採取した第２の血液中のホモシステイン酸含量とを比較して神経変性疾患の進行度合いを判定するための、少なくとも前記第１の血液中におけるホモシステイン酸の含量と、前記第２の血液中のホモシステイン酸含量との比が分かるデータの使用。
【請求項８】
被験動物より採取した尿及び／又は血液に含まれるホモシステイン酸の、神経変性疾患に対するバイオマーカーとしての使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、神経変性疾患の検査方法及び神経変性疾患の進行度合いを判定するキットに関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、アルツハイマー病（アルツハイマー型認知症）やレビー小体型認知症、脳血管性認知症などの変性性認知症は、神経変性疾患の代表的な症例として知られている。
【０００３】
例えば、これら神経変性疾患のうち、アルツハイマー病は、過去の出来事の記憶が失われてしまったり、新しい出来事を記憶するのが困難となる等の病状を示すのが特徴的である。
【０００４】
このような病状は、何等手立てを打たないままであると、経時的に徐々に進行することとなり、日常生活において極めて重大な支障を来すこととなってしまう場合がある。
【０００５】
したがって、早期にこれら神経変性疾患の兆候を確認し、病状の進行に対して有効な手立てを打つことが重要である。
【０００６】
そこで、患者を被験者として複数の質問を行うことにより、神経変性疾患の兆候や進行度合いを確認するテスト等が行われている（例えば、特許文献１参照。）。
【０００７】
このようなテストによれば、早期にできるだけ簡単にアルツハイマー病の診断を行うことができるとしている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】２０１０−１８７９５９号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
しかしながら、上記従来のテストでは、神経変性疾患の進行度合いを必ずしも迅速に把握するのが困難な場合があった。
【００１０】
そこで、比較的迅速に神経変性疾患の進行度合いを把握可能な判定手段や方法が望まれている。
【００１１】
また、神経変性疾患の研究においては、神経変性疾患の病態を示すマウスやラット等の非ヒト動物が用いられているが、これら研究用の非ヒト動物においても、容易且つ正確に神経変性疾患の兆候を確認することができれば、研究において極めて有用である。
【００１２】
本発明は、斯かる事情に鑑みてなされたものであって、ヒトを含む被験動物に対して負担が少なく、神経変性疾患の兆候を比較的正確且つ容易に確認することのできる神経変性疾患の検査方法及び進行度合いを判定するキットを提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
上記従来の課題を解決するために、請求項１に係る本発明では、被験動物から採取した尿中及び／又は血液中のホモシステイン酸含量を調べることとした。
【００１４】
また、請求項２に係る本発明では、請求項１に記載の神経変性疾患の検査方法において、被験動物から採取した第１の尿中のホモシステイン酸含量を、前記第１の尿の採取以前に前記被験動物より採取した第２の尿中のホモシステイン酸含量と比較して、前記第１の尿中のホモシステイン酸含量が、前記第２の尿中のホモシステイン酸含量より小さくなったことにより、その減少量が大きいほど前記被験動物の神経変性疾患が進行しているものと判定することに特徴を有する。
【００１５】
また、請求項３に係る本発明では、請求項１又は請求項２に記載の神経変性疾患の検査方法において、被験動物から採取した第１の血液中のホモシステイン酸含量を、前記第１の血液の採取以前に前記被験動物より採取した第２の血液中のホモシステイン酸含量と比較して、前記第１の血液中のホモシステイン酸含量が、前記第２の血液中のホモシステイン酸含量より大きくなったことにより、その増加量が大きいほど前記被験動物の神経変性疾患が進行しているものと判定することに特徴を有する。
【００１６】
また、請求項４に係る本発明では、被験動物の神経変性疾患の進行度合いを、前記被験動物より採取した尿を用いて判定するためのキットであって、前記尿と接触させる尿接触手段と、前記尿接触手段に接触させた尿の中に含まれるホモシステイン酸を抗原とする抗ホモシステイン酸抗体と、前記抗ホモシステイン酸抗体の前記尿中のホモシステイン酸への結合量に応じて変化する標識手段と、を備え、前記尿中に含まれるホモシステイン酸に結合した前記抗ホモシステイン酸抗体が少ない程、前記標識手段の変化によって前記被験動物の神経変性疾患が進行していることを表示可能とした。
【００１７】
また、請求項５に係る本発明では、被験動物の神経変性疾患の進行度合いを、前記被験動物より採取した血液を用いて判定するためのキットであって、前記血液又は前記血液より得られる血漿を接触させる接触手段と、前記接触手段に接触させた血液又は血漿中に含まれるホモシステイン酸を抗原とする抗ホモシステイン酸抗体と、前記抗ホモシステイン酸抗体の前記血液又は血漿中のホモシステイン酸への結合量に応じて変化する標識手段と、を備え、前記血液又は血漿中に含まれるホモシステイン酸に結合した前記抗ホモシステイン酸抗体が多い程、前記標識手段の変化によって前記被験動物の神経変性疾患が進行していることを表示可能とした。
【００１８】
また、請求項６に係る本発明では、被験動物の神経変性疾患の進行度合いを判定するに際して、前記被験動物より採取した第１の尿中におけるホモシステイン酸の含有量と前記第１の尿の採取以前に前記被験動物より採取した第２の尿中のホモシステイン酸含有量とを比較して前記被験動物に対して非侵襲的に神経変性疾患の進行度合いを判定するための、少なくとも前記第１の尿中におけるホモシステイン酸の含有量と、前記第２の尿中におけるホモシステイン酸の含有量との比が分かるデータを使用した。
【００１９】
また、請求項７に係る本発明では、被験動物の神経変性疾患の進行度合いを判定するに際して、前記被験動物より採取した第１の血液中におけるホモシステイン酸の含量と前記第１の血液の採取以前に前記被験動物より採取した第２の血液中のホモシステイン酸含量とを比較して神経変性疾患の進行度合いを判定するための、少なくとも前記第１の血液中におけるホモシステイン酸の含量と、前記第２の血液中のホモシステイン酸含量との比が分かるデータを使用した。
【００２０】
また、請求項８に係る本発明では、被験動物より採取した尿及び／又は血液に含まれるホモシステイン酸を、神経変性疾患に対するバイオマーカーとして使用した。
【発明の効果】
【００２１】
請求項１に係る本発明によれば、被験動物から採取した尿中及び／又は血液中のホモシステイン酸含量を調べることとしたため、ヒトを含む被験動物に対して負担が少なく、神経変性疾患の兆候を比較的正確且つ容易に確認することのできる神経変性疾患の検査方法を提供することができる。
【００２２】
また、請求項２に係る本発明によれば、被験動物から採取した第１の尿中のホモシステイン酸含量を、前記第１の尿の採取以前に前記被験動物より採取した第２の尿中のホモシステイン酸含量と比較して、前記第１の尿中のホモシステイン酸含量が、前記第２の尿中のホモシステイン酸含量より小さくなったことにより、その減少量が大きいほど前記被験動物の神経変性疾患が進行しているものと判定することとしたため、被験動物に対して負担が少なく、神経変性疾患の兆候や進行度合いを比較的正確且つ容易に確認することができる。
【００２３】
また、請求項３に係る本発明によれば、被験動物から採取した第１の血液中のホモシステイン酸含量を、前記第１の血液の採取以前に前記被験動物より採取した第２の血液中のホモシステイン酸含量と比較して、前記第１の血液中のホモシステイン酸含量が、前記第２の血液中のホモシステイン酸含量より大きくなったことにより、その増加量が大きいほど前記被験動物の神経変性疾患が進行しているものと判定することとしたため、被験非ヒト動物に対して負担が少なく、神経変性疾患の兆候や進行度合いを比較的正確且つ容易に確認することができる。
【００２４】
また、請求項４に係る本発明によれば、被験動物の神経変性疾患の進行度合いを、前記被験動物より採取した尿を用いて判定するためのキットであって、前記尿と接触させる尿接触手段と、前記尿接触手段に接触させた尿の中に含まれるホモシステイン酸を抗原とする抗ホモシステイン酸抗体と、前記抗ホモシステイン酸抗体の前記尿中のホモシステイン酸への結合量に応じて変化する標識手段と、を備え、前記尿中に含まれるホモシステイン酸に結合した前記抗ホモシステイン酸抗体が少ない程、前記標識手段の変化によって前記被験動物の神経変性疾患が進行していることを表示可能としたため、ヒトを含む被験動物に対して負担が少なく、神経変性疾患の兆候を比較的正確且つ容易に確認することのできる神経変性疾患の進行度合いを判定するキットを提供することができる。
【００２５】
また、請求項５に係る本発明によれば、被験動物の神経変性疾患の進行度合いを、前記被験動物より採取した血液を用いて判定するためのキットであって、前記血液又は前記血液より得られる血漿を接触させる接触手段と、前記接触手段に接触させた血液又は血漿中に含まれるホモシステイン酸を抗原とする抗ホモシステイン酸抗体と、前記抗ホモシステイン酸抗体の前記血液又は血漿中のホモシステイン酸への結合量に応じて変化する標識手段と、を備え、前記血液又は血漿中に含まれるホモシステイン酸に結合した前記抗ホモシステイン酸抗体が多い程、前記標識手段の変化によって前記被験動物の神経変性疾患が進行していることを表示可能としたため、ヒトを含む被験動物に対して負担が少なく、神経変性疾患の兆候を比較的正確且つ容易に確認することのできる神経変性疾患の進行度合いを判定するキットを提供することができる。
【００２６】
また、請求項６に係る本発明によれば、被験動物の神経変性疾患の進行度合いを判定するに際して、前記被験動物より採取した第１の尿中におけるホモシステイン酸の含有量と前記第１の尿の採取以前に前記被験動物より採取した第２の尿中のホモシステイン酸含有量とを比較して前記被験動物に対して非侵襲的に神経変性疾患の進行度合いを判定するための、少なくとも前記第１の尿中におけるホモシステイン酸の含有量と、前記第２の尿中におけるホモシステイン酸の含有量との比が分かるデータを使用したため、被験動物に対して負担が少なく、神経変性疾患の兆候や進行度合いを比較的正確且つ容易に確認することができる。
【００２７】
また、請求項７に係る本発明によれば、被験動物の神経変性疾患の進行度合いを判定するに際して、前記被験動物より採取した第１の血液中におけるホモシステイン酸の含量と前記第１の血液の採取以前に前記被験動物より採取した第２の血液中のホモシステイン酸含量とを比較して神経変性疾患の進行度合いを判定するための、少なくとも前記第１の血液中におけるホモシステイン酸の含量と、前記第２の血液中のホモシステイン酸含量との比が分かるデータを使用したため、被験動物に対して負担が少なく、神経変性疾患の兆候や進行度合いを比較的正確且つ容易に確認することができる。
【００２８】
また、請求項８に係る本発明によれば、被験動物より採取した尿及び／又は血液に含まれるホモシステイン酸を、神経変性疾患に対するバイオマーカーとして使用したため、被験動物に対して負担が少なく、神経変性疾患の兆候や進行度合いを比較的正確且つ容易に確認することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２９】
【図１】被験者の認知機能検査のスコアと尿中のホモシステイン酸濃度との関係を示したグラフである。
【図２】被験者の認知機能検査のスコアと血中のホモシステイン酸濃度との関係を示したグラフである。
【図３】被験者の尿中ホモシステイン酸濃度と血中ホモシステイン酸濃度との関係を示したグラフである。
【図４】抗原の合成過程を示した説明図である。
【図５】本実施形態に係るイムノクロマトキットの構成を示した説明図である。
【図６】ホモシステイン酸標品サンプルを測定したクロマトグラムである。
【図７】（ａ）は高濃度領域における検量線、（ｂ）は低濃度領域における検量線である。
【図８】尿サンプルを測定した際のクロマトグラムである。
【図９】血液サンプルを測定した際のクロマトグラムである。
【図１０】尿中ホモシステイン酸含量とMMSEスコアとの相関を示した説明図である。
【図１１】試験群女性又は男性被験者における相関を示した説明図である。
【図１２】血中ホモシステイン酸含量とMMSEスコアとの相関を示した説明図である。
【発明を実施するための形態】
【００３０】
本発明は、被験動物の神経変性疾患の検査方法、及び、被験動物の神経変性疾患の進行度合いを、前記被験動物より採取した尿や血液を用いて判定するためのキットを提供するものである。
【００３１】
本実施形態において説明する、神経変性疾患の検査方法、換言すれば、被験動物の神経変性疾患の進行度合いを判定する方法（以下、単に検査方法ともいう。）や、被験動物の神経変性疾患の進行度合いを、前記被験動物より採取した尿や血液を用いて判定するためのキット（以下、単に判定キットともいう。）は、本願発明者らの鋭意研究により得られた新たな知見に基づくものである。
【００３２】
そこで、発明の理解を容易とするために、まずはこれら新たな知見について図面を参照しながら説明する。
【００３３】
従来、神経変性疾患の発病原因は、一般に老人斑として知られているアミロイドβ４２が神経細胞の外に蓄積し、その後神経細胞内に繊維状の塊である神経原繊維であるタウと呼ばれるタンパクが蓄積し、その結果神経細胞の機能が障害されて神経細胞の死を迎えることにより起こると理解されている。
【００３４】
しかしながら、上述のアミロイドタンパクは、近年の研究によって健常者の脳内にも十分量蓄積していることが観察されている。
【００３５】
また、神経変性疾患の前駆症状であるMCI(Mild Cognitive Impairment)の患者や、神経変性疾患の患者においても、健常者と同様にアミロイドタンパクが蓄積していることが観察されている。
【００３６】
これらの事実から、なぜ健常者は、神経変性疾患の患者と同様にアミロイドタンパクが蓄積しているにもかかわらず、認知機能の正常性を保つことができるのかが問題となっている。
【００３７】
本願発明者は、この点について研究を重ねたところ、図１〜図３に示す結果が得られた。図１は被験者の認知機能検査（MMSE:Mini-Mental State Examination)のスコアと尿中のホモシステイン酸濃度との関係を示したグラフであり、図２は被験者の認知機能検査のスコアと血中のホモシステイン酸濃度との関係を示したグラフであり、図３は被験者の尿中ホモシステイン酸濃度と血中ホモシステイン酸濃度との関係を示したグラフである。
【００３８】
本発明者が尿中のホモシステイン酸濃度に着目したところ、図１に示すように、認知機能検査のスコアと尿中のホモシステイン酸濃度とは正の相関を示すことが分かった。
【００３９】
また、血中のホモシステイン酸濃度に着目したところ、図２に示すように、認知機能検査のスコアと血中のホモシステイン酸濃度とは逆の相関を示すことが分かった。
【００４０】
また、尿中及び血中のホモシステイン酸濃度を検討すると、図３に示すように、逆の相関を示すことが分かった。
【００４１】
これらの結果から、本発明者は、ホモシステイン酸が神経の変性において重要な役割を担っていることを見出した。
【００４２】
すなわち、図４に示すように、神経変性疾患に罹患している患者は、症状の進行に伴って尿中へのホモシステイン酸の排出が抑制され、血中のホモシステイン酸濃度が上昇する。
【００４３】
血中のホモシステイン酸濃度が上昇すると、血液脳関門（blood-brain barrier)を突破し、ホモシステイン酸が脳内に侵入する。
【００４４】
脳内においてアミロイドタンパクが神経変性作用を生起するためには、グルタメート系のNMDA受容体の活性化が必要であり、脳内に侵入したホモシステイン酸は、NMDA受容体のアゴニスト、換言すればNMDA受容体を刺激する伝達物質として機能するということが分かった。
【００４５】
また、本願発明者は、医学研究者として日頃から数多くの神経変性疾患患者と接してきている。このような中で、患者の自宅などにおいて、例えば家族らによって簡便に神経変性疾患の進行度合いを確認し一次スクリーニングを行うことができれば、早期に疾患を発見し、早期の治療に役立つと考えた。
【００４６】
また、このようにして一次スクリーニングを終えた患者が来院した際には、より定量的に尿中又は血中のホモシステイン酸含量を測定することで、医師や医療従事者によって、患者の神経変性疾患の進行度合いを容易且つ速やかに把握することが可能となると考えた。
【００４７】
また、前述したように、これら神経変性疾患の研究現場では、多くの試験動物を用いて研究が行われているが、従来より提案されている神経変性疾患のバイオマーカは、脳や脊髄にアクセスが必要であるなど極めて侵襲的な方法によって得られるものが多く、試験結果へのバイアスとなる可能性について懸念があった。
【００４８】
本発明は、本願発明者が上述のような状況やデータを踏まえ完成するに至ったものである。
【００４９】
すなわち、本発明に係る神経変性疾患の検査方法では、被験動物から採取した尿中及び／又は血液中のホモシステイン酸含量を調べることとした。
【００５０】
付言すれば、本発明は、被験動物から採取した尿中又は血液中におけるホモシステイン酸の検出を含む、前記被験動物における神経変性疾患の状態を判定する方法についての概念も包含するものである。
【００５１】
また、本発明に係る被験動物の神経変性疾患の進行度合いを、前記被験動物より採取した尿を用いて判定するためのキットは、前記尿と接触させる尿接触手段と、前記尿接触手段に接触させた尿の中に含まれるホモシステイン酸を抗原とする抗ホモシステイン酸抗体と、前記抗ホモシステイン酸抗体の前記尿中のホモシステイン酸への結合量に応じて変化する標識手段と、を備え、前記尿中に含まれるホモシステイン酸に結合した前記抗ホモシステイン酸抗体が少ない程、前記標識手段の変化によって前記被験動物の神経変性疾患が進行していることを表示可能とした。
【００５２】
また、被験動物の神経変性疾患の進行度合いを、前記被験動物より採取した血液を用いて判定するためのキットは、前記血液又は前記血液より得られる血漿を接触させる接触手段と、前記接触手段に接触させた血液又は血漿中に含まれるホモシステイン酸を抗原とする抗ホモシステイン酸抗体と、前記抗ホモシステイン酸抗体の前記血液又は血漿中のホモシステイン酸への結合量に応じて変化する標識手段と、を備え、前記血液又は血漿中に含まれるホモシステイン酸に結合した前記抗ホモシステイン酸抗体が多い程、前記標識手段の変化によって前記被験動物の神経変性疾患が進行していることを表示可能とした。
【００５３】
ここで神経変性疾患とは、神経細胞が障害を受けて神経死を招く疾患を総称するものである。このような疾患について具体的に示すならば、例えばヒトの場合、アルツハイマー病やレビー小体型認知症などの変性性認知症と解釈することができる。また、非ヒト動物の場合は、これらアルツハイマー病やレビー小体型認知症などの変性性認知症と同様の機序により発症する疾病であると解釈することができる。
【００５４】
また、本明細書において被験動物とは、ヒトと、非ヒト動物との両者を含む概念である。
【００５５】
本明細書において示す被験動物の神経変性疾患の進行度合いを判定するためのキットは、被験動物から得られた尿を用いるものと、被験動物から得られた血液を用いるものとがあるが、いずれも、尿中又は血中に含まれるホモシステイン酸の含量により判定を行う点に特徴を有している。
【００５６】
具体的には、被験動物の神経変性疾患の進行度合いを、前記被験動物より採取した尿を用いて判定するためのキットでは、前記尿と接触させる尿接触手段と、前記尿接触手段に接触させた尿の中に含まれるホモシステイン酸を抗原とする抗ホモシステイン酸抗体と、前記抗ホモシステイン酸抗体の前記尿中のホモシステイン酸への結合量に応じて変化する標識手段と、を備え、前記尿中に含まれるホモシステイン酸に結合した前記抗ホモシステイン酸抗体が少ない程、前記標識手段の変化によって前記被験動物の神経変性疾患が進行していることを表示可能としている。
【００５７】
尿は、被験動物から採取するに際し、被験動物に対して非侵襲的であることから、神経変性疾患の進行度合いの評価を行うときの被験動物への負担を飛躍的軽減することができる。
【００５８】
特に、被験動物がヒトである場合には、高齢者に対する負担を可及的防止することができる。また、被験動物が試験・研究等に用いられる非ヒト動物である場合には、非ヒト動物に対する侵襲の影響を排除しつつ、神経変性疾患の研究を行うことができる。
【００５９】
また、被験動物の神経変性疾患の進行度合いを、前記被験動物より採取した血液を用いて判定するためのキットでは、前記血液又は前記血液より得られる血漿を接触させる接触手段と、前記接触手段に接触させた血液又は血漿中に含まれるホモシステイン酸を抗原とする抗ホモシステイン酸抗体と、前記抗ホモシステイン酸抗体の前記血液又は血漿中のホモシステイン酸への結合量に応じて変化する標識手段と、を備え、前記血液又は血漿中に含まれるホモシステイン酸に結合した前記抗ホモシステイン酸抗体が多い程、前記標識手段の変化によって前記被験動物の神経変性疾患が進行していることを表示可能としている。
【００６０】
ここで、接触手段に接触させるサンプルは、血液（全血）又は血漿のいずれであっても良い。特に血漿を用いれば、すでに血球等が除かれているため、より円滑に評価を行うことができる。また、血漿も、トリクロロ酢酸(TCA)等を用いて除タンパク処理を行えば、より評価に適したサンプルとすることができる。
【００６１】
本実施形態に係る尿や血液を用いて判定するためのキットは、上述の構成を備えていれば特に限定されるものではなく、あらゆる形態にて提供されうるものである。
【００６２】
このようなキットとして一例を示すとすれば、イムノクロマト法を採用したキットや、ELISA(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay)を採用したキットなどを挙げることができる。
【００６３】
例えば、イムノクロマト法を採用したキットとして本実施形態に係る尿や血液を用いて判定するためのキットを実現した場合には、尿と接触させる尿接触手段や血液又は前記血液より得られる血漿を接触させる接触手段は、サンプルパッドの部分と解釈することができる。
【００６４】
また、イムノクロマト法を採用したキットの場合、尿や血液又は血漿中に含まれるホモシステイン酸を抗原とする抗ホモシステイン酸抗体は、コンジュゲートパッドの部分や、テストラインの部分に含まれることとなる。
【００６５】
また、イムノクロマト法を採用したキットの場合、抗ホモシステイン酸抗体の尿中や血液又は血漿中のホモシステイン酸への結合量に応じて変化する標識手段としては、例えば、コンジュゲートパッドに含まれる抗ホモシステイン酸抗体に結合させた金コロイド等の標識物質やメンブレン、メンブレン上にライン状に配置した抗ホモシステイン酸抗体等からなる一連のシステムと解することができる。
【００６６】
このように、本実施形態に係るキットにおいてイムノクロマト法を採用した場合には、保存安定性や判定の容易性が良好であり、特別な装置を必要とすることなく被験動物の神経変性疾患の進行度合いを、被験動物より採取した尿や血液又は血漿を用いて判定することができる。
【００６７】
一方、ELISA法を採用したキットとして本実施形態に係る尿や血液を用いて判定するためのキットを実現した場合には、尿と接触させる尿接触手段や血液又は前記血液より得られる血漿を接触させる接触手段は、マイクロプレート等に形成されたウェル等と解釈することができる。
【００６８】
また、ELISA法を採用したキットの場合、尿や血液又は血漿中に含まれるホモシステイン酸を抗原とする抗ホモシステイン酸抗体は、ウェル底部や、一次抗体として備えられることとなる。
【００６９】
また、ELISA法を採用したキットの場合、抗ホモシステイン酸抗体の尿中や血液又は血漿中のホモシステイン酸への結合量に応じて変化する標識手段としては、例えば、一次抗体又は二次抗体に結合させた酵素等の標識物質等と解することができる。
【００７０】
このように、本実施形態に係るキットにおいてELISA法を採用した場合には、定量性を良好とすることができ、被験動物の神経変性疾患の進行度合いを、被験動物より採取した尿や血液又は血漿を用いて判定することができる。
【００７１】
上述してきたように、本実施形態に係る尿や血液を用いて被験動物の神経変性疾患の進行度合いを判定するためのキットによれば、ヒトを含む被験動物に対して負担が少なく、神経変性疾患の兆候を比較的正確且つ容易に確認可能なキットとすることができる。すなわち、本発明は、被験動物から採取した尿中又は血液中におけるホモシステイン酸を検出するための抗ホモシステイン酸抗体を含む、神経変性疾患の診断薬を提供するものであるとも言える。
【００７２】
また、本願は、被験動物の神経変性疾患の進行度合いを同被験動物より採取した尿や血液を用いて判定する方法を提供するものでもある。
【００７３】
すなわち、本実施形態に係る神経変性疾患の検査方法では、被験動物から採取した尿中及び／又は血液中のホモシステイン酸含量を調べることとしている。
【００７４】
本実施形態に係る神経変性疾患の検査方法を実施するにあたって行われる尿中及び／又は血液中のホモシステイン酸含量の測定は特に限定されるものではない。例えば、前述のキットを使用しても良く、また、各種クロマトを行うことにより定量しても良い。
【００７５】
本実施形態に係る検査方法では、尿を用いて判定する方法においては、被験動物から採取した第１の尿中のホモシステイン酸含量を、前記第１の尿の採取以前に前記被験動物より採取した第２の尿中のホモシステイン酸含量と比較して、前記第１の尿中のホモシステイン酸含量が、前記第２の尿中のホモシステイン酸含量より小さくなったことにより、その減少量が大きいほど前記被験動物の神経変性疾患が進行しているものと判定する。
【００７６】
このことは、先に示した図１及び図３の結果に基づくものであり、尿へのホモシステイン酸の排出量が抑制される程、脳細胞への障害が進み、神経変性疾患が進行することに由来している。
【００７７】
このように、尿を用いて神経変性疾患の進行度合いを判定することができれば、被験動物に対して極めて非侵襲的に、被験動物の神経変性疾患の進行度合いを評価・判定することが可能となる。
【００７８】
また、別の視点によれば、本願は、被験動物の神経変性疾患の進行度合いを判定するに際して、前記被験動物より採取した第１の尿中におけるホモシステイン酸の含有量と前記第１の尿の採取以前に前記被験動物より採取した第２の尿中のホモシステイン酸含有量とを比較して前記被験動物に対して非侵襲的に神経変性疾患の進行度合いを判定するための、少なくとも前記第１の尿中におけるホモシステイン酸の含有量と、前記第２の尿中におけるホモシステイン酸の含有量との比が分かるデータを使用する発明を提供するものとも言える。
【００７９】
すなわち、上述のような尿中のホモシステイン酸のデータを神経変性疾患の進行度合いを判定に利用することにより、被験動物に対して極めて非侵襲的に、被験動物の神経変性疾患の進行度合いを評価・判定することが可能となるのである。
【００８０】
なお付言すれば、被験動物より採取した第１の尿中におけるホモシステイン酸の含有量と、第１の尿の採取以前に被験動物より採取した第２の尿中のホモシステイン酸含有量とを比較する場合にあっては、各サンプル中のホモシステイン酸含有比率が分かれば良く、必ずしも定量を必要としない。
【００８１】
例えば、各サンプルを高速液体クロマトグラフに供し、検量線と対比することなく（定量することなく）、ピーク面積同士を比較して、神経変性疾患の進行度合いを把握するようにしても良い。
【００８２】
すなわち、本明細書におけるホモシステイン酸含量とは、定量的な量をいうのは勿論のこと、比較対照サンプルに対して何倍などの比率についても含む概念である。
【００８３】
また、血液を用いて判定する方法においては、被験動物から採取した第１の血液中のホモシステイン酸含量を、前記第１の血液の採取以前に前記被験動物より採取した第２の血液中のホモシステイン酸含量と比較して、前記第１の血液中のホモシステイン酸含量が、前記第２の血液中のホモシステイン酸含量より大きくなったことにより、その増加量が大きいほど前記被験動物の神経変性疾患が進行しているものと判定する。
【００８４】
このことは、先に示した図２及び図３の結果に基づくものであり、血中にホモシステイン酸が多くなる程、脳細胞への障害が進み、神経変性疾患が進行することに由来している。
【００８５】
このように、血液を用いて神経変性疾患の進行度合いを判定することができれば、被験動物に対し、従来のバイオマーカーによる検査に比して非侵襲的に、被験動物の神経変性疾患の進行度合いを評価・判定することが可能となる。
【００８６】
また、別の視点によれば、本願は、被験動物の神経変性疾患の進行度合いを判定するに際して、前記被験動物より採取した第１の血液中におけるホモシステイン酸の含量と前記第１の血液の採取以前に前記被験動物より採取した第２の血液中のホモシステイン酸含量とを比較して神経変性疾患の進行度合いを判定するための、少なくとも前記第１の血液中におけるホモシステイン酸の含量と、前記第２の血液中のホモシステイン酸含量との比が分かるデータを使用する発明を提供するものとも言える。
【００８７】
すなわち、上述のような血中のホモシステイン酸含量のデータを神経変性疾患の進行度合いを判定に利用することによっても、被験動物に対し、従来のバイオマーカーによる検査に比して非侵襲的に、被験動物の神経変性疾患の進行度合いを評価・判定することが可能となるのである。
【００８８】
また、上述した血液中に含まれるホモシステイン酸含量と、尿中に含まれるホモシステイン酸含量との両者を加味して、神経変性疾患の診断、検査、発症可能性を検討するようにしても良い。
【００８９】
例えば、以下の工程（ａ）〜（ｄ）を含む、被験動物の神経変性疾患の検査法とすることで、より正確な判定を行うことが可能となる。
（ａ）被験動物から尿及び血液を採取する工程；
（ｂ）前記尿中及び血液中のホモシステイン酸を検出する工程；
（ｃ）前記尿中のホモシステイン酸含量と、前記血液中のホモシステイン酸含量とを比較する工程；
（ｄ）比較結果に基づき、神経変性疾患の発症可能性を判定する工程。
【００９０】
このように、本発明によれば、被験動物に対して負担が少なく、神経変性疾患の兆候を比較的正確且つ容易に神経変性疾患の進行度合いを検査できる。
【００９１】
換言すれば、本発明は、被験動物より採取した血中又は尿中に含まれるホモシステイン酸を、神経変性疾患のバイオマーカーとして使用することを提案するものであるとも言える。
【００９２】
すなわち、ホモシステイン酸からなる、神経変性疾患検出用バイオマーカーや、被験者より採取された尿中又は血液中のホモシステイン酸量を指標とした神経変性疾患の検査法も含む。
【００９３】
以下、本実施形態に係る神経変性疾患の検査方法や、被験動物の神経変性疾患の進行度合いを前記被験動物より採取した尿を用いて判定するためのキット、被験動物の神経変性疾患の進行度合いを判定するに際してのデータの使用について詳細に説明する。
【００９４】
〔１．抗ホモシステイン酸抗体の調製〕
まず、キットに使用する抗ホモシステイン酸抗体の調製を行った。
【００９５】
（抗原の調製）
抗体を作らせる動物に接種するための抗原を図４に示す方法により調製した。まず、L-ホモシステイン酸(L-Homocysteic acid) 0.27mmolに過剰量のグルタルアルデヒド（Glutaraldehyde）2.7mmolを反応させ、図４（ａ）に示すように、ホモシステイン酸のアミノ基をグルタルアルデヒドで修飾した（HCA-GA）。
【００９６】
次いで、得られたHCA-GAの過剰量をKLH（スカシ貝ヘモシアニン：keyhole limpet hemocyanin）上に複数存在するアミノ基と反応させて、図４（ｂ）に示すように、中間体を合成した。
【００９７】
そして、この中間体を還元した後、ゲル濾過により低分子を除き、図４（ｃ）に示すように、抗原としてのKLHとホモシステイン酸の複合体(HCA-G-KLH)を得た。
【００９８】
（抗体の調製）
つぎに、上記操作によって得られたHCA-G-KLHを抗原とし、ウサギを用いて免疫動物を作成し、２週間後に血液中にHCA-G-KLHに対する抗体を出現させた。
【００９９】
このウサギより得た血清を精製することにより、ウサギ由来の第１抗ホモシステイン酸抗体を得た。また、同様の操作を行って、第１抗ホモシステイン酸抗体と競合しない第２抗ホモシステイン酸抗体を得た。
【０１００】
〔２．キットの作成〕
次に、本実施形態に係る被験動物の神経変性疾患の進行度合いを前記被験動物より採取した尿や血液又は前記血液より得られる血漿を用いて判定するためのキットの作成を行った。本実施形態では、イムノクロマト法を採用したキットと、ELISA法を採用したキットの２種のキットの作成を行った。具体的には、それぞれ以下に示す通りである。
【０１０１】
（イムノクロマト法を利用したキットの作成）
図５に示すようなストリップ状のイムノクロマトキットＡの作成を行った。図５（ａ）は平面視におけるイムノクロマトキットＡを示した説明図であり、図５（ｂ）は側面視におけるイムノクロマトキットＡを示した説明図である。なお、本実施形態に係るイムノクロマトキットＡの構成は、従来より公知の一般的なイムノクロマトキットと略同様であるため、本発明に特徴的なホモシステイン酸抗体を用いている点以外については説明を省略する場合がある。
【０１０２】
図５（ａ）及び図５（ｂ）に示すように、イムノクロマトキットＡは、尿や血液又は血漿を検体として受け、同検体を均一に分配するためのサンプルパッド１０と、金コロイドにて標識した第１抗ホモシステイン酸抗体を含むコンジュゲートパッド１１と、テストライン１２ａ及びコントロールライン１２ｂが表示されるメンブレン１２と、検体の吸収材として機能する吸収パッド１３とで構成した。
【０１０３】
サンプルパッド１０は、尿を接触させる尿接触手段や、血液又は血漿を接触させる接触手段として機能する部位である。このサンプルパッド１０には、必要に応じてサンプル組成を変えるための試薬等を含浸させておいても良い。また、血液を接触させる接触手段として機能させる場合には、血球等をトラップさせるフィルターとしての役割を担うよう構成しても良い。
【０１０４】
テストライン１２ａの位置には、メンブレン１２上に第２ホモシステイン酸抗体が固定されており、尿や血液又は血漿の水分ともに展開される第１抗ホモシステイン酸抗体と結合したホモシステイン酸とサンドイッチ状に結合するよう構成した。
【０１０５】
また、コントロールライン１２ｂの位置には、メンブレン１２上に抗ウサギ抗体が固定されており、テストラインにてトラップされなかった第１抗ホモシステイン酸抗体が結合するように構成した。
【０１０６】
（ELISA法を利用したキットの作成）
ELISA法を利用したキットは、透明な底壁を有するELISA法用９６ウェルのサンプルプレートと、第２抗ホモシステイン酸抗体を含有する第１抗体試薬と、第２抗ホモシステイン酸に結合可能な抗ウサギ抗体を含有する第２抗体試薬と、抗ウサギ抗体に結合した酵素により発色する発色物質を含有させた発色試薬とを備えている。
【０１０７】
サンプルプレートの各ウェルの底壁内面には、第１抗ホモシステイン酸抗体が固定されており、ウェル内に収容した尿や血液又は血漿中に含まれるホモシステイン酸を捕捉可能に構成している。なお、各ウェルは、尿を接触させる尿接触手段や、血液又は血漿を接触させる接触手段として機能する部位である。
【０１０８】
〔３．ヒトにおけるキットの機能試験〕
上述したイムノクロマトキットＡ及びELISA法を利用したキットについて、それぞれ尿、血液、血漿を接触手段に接触させて、ホモシステイン酸が検出可能か否かについて検討を行った。
【０１０９】
サンプルは、健常者、軽度のアルツハイマー病と診断された神経変性疾患患者（以下、軽度患者という。）、中程度のアルツハイマー病と診断された神経変性疾患患者（以下、中程度患者という。）、重度のアルツハイマー病と診断された神経変性疾患患者（以下、重度患者という。）から得た尿、血液（全血）、血漿を用いた。なお、各患者の軽度、中程度、重度の度合いは、MMSEスコアによって分類されたものである。
【０１１０】
まず、予め各サンプルに含まれるホモシステイン酸含量について、高速液体クロマトグラフィーにて定量を行った。
【０１１１】
その結果、尿中のホモシステイン酸濃度は、健常者において最も高く、症状が重篤となるに従い減少していた。
【０１１２】
また、血液（全血）、血漿中のホモシステイン酸濃度は、健常者において最も低く、症状が重篤となるに従って増加していた。
【０１１３】
これらのことから、尿中に含まれるホモシステイン酸が少ない程、被験動物の神経変性疾患が進行していること、及び、血液又は血漿中に含まれるホモシステイン酸が多い程、被験動物の神経変性疾患が進行していることが示された。
【０１１４】
次に、イムノクロマトキットＡに各サンプルを供して試験を行った。その結果、前述の高速液体クロマトグラフィーでの定量結果と同様の変化がテストラインにおいて観察された。
【０１１５】
次に、ELISA法を利用したキットに各サンプルを供して試験を行った。発色試薬の発色変化を吸光度計にて計測した結果、前述の高速液体クロマトグラフィーでの定量結果と同様の変化が観察された。
【０１１６】
これらの結果から、本実施形態に係る被験動物の神経変性疾患の進行度合いを、前記被験動物より採取した尿を用いて判定するためのキットは、尿中に含まれるホモシステイン酸に結合した前記抗ホモシステイン酸抗体が少ない程、前記標識手段の変化によって前記被験動物の神経変性疾患が進行していることを表示可能であることが示された。
【０１１７】
また、本実施形態に係る被験動物の神経変性疾患の進行度合いを、前記被験動物より採取した血液を用いて判定するためのキットは、血液又は血漿中に含まれるホモシステイン酸に結合した前記抗ホモシステイン酸抗体が多い程、前記標識手段の変化によって前記被験動物の神経変性疾患が進行していることを表示可能であることが示された。
【０１１８】
〔４．ラットにおけるキットの機能試験〕
上述の〔３．ヒトにおけるキットの機能試験〕と同様にラットを用いて非ヒト動物における試験を行った。
【０１１９】
サンプルは、健常ラット、軽度の神経変性疾患ラット（以下、軽度ラットという。）、中程度の神経変性疾患ラット（以下、中程度ラットという。）、重度神経変性疾患ラット（以下、重度ラットという。）から得た尿、血液（全血）、血漿を用いた。なお、各患者の軽度、中程度、重度の度合いは、水迷路実験による記憶障害判定によって分類されたものである。
【０１２０】
その結果、ヒトにおける試験と同様の結果が得られた。これらの結果から、被験非ヒト動物の神経変性疾患の進行度合いを同被験非ヒト動物より採取した尿を用いて判定するにあたり、被験非ヒト動物の尿中におけるホモシステイン酸の含有量と、前記被験非ヒト動物の神経変性疾患罹患前における尿中のホモシステイン酸含有量とを比較して、前記被験非ヒト動物の尿中におけるホモシステイン酸の含有量が前記神経変性疾患罹患前における尿中のホモシステイン酸含有量より小さくなったことにより、その減少量が大きいほど前記被験非ヒト動物の神経変性疾患が進行しているものと判定可能であることが示された。
【０１２１】
また、被験非ヒト動物の神経変性疾患の進行度合いを同被験非ヒト動物より採取した血液を用いて判定するにあたり、被験非ヒト動物の血中におけるホモシステイン酸の含有量と、前記被験非ヒト動物の神経変性疾患罹患前における血中のホモシステイン酸含有量とを比較して、前記被験非ヒト動物の血中におけるホモシステイン酸の含有量が前記神経変性疾患罹患前における血中のホモシステイン酸含有量より大きくなったことにより、その増加量が大きいほど前記被験非ヒト動物の神経変性疾患が進行しているものと判定可能であることが示された。
【０１２２】
〔ヒト試験〕
次に、ヒトより採取した尿及び血液により行われた試験について説明する。試験プロトコルは、順天堂大学倫理委員会によって承認され、また、被験者からは書面による同意を得た。被験者の詳細を表１に示す。
【表１】
2013253781.tif 000003
【０１２３】
これら被験者より尿及び血液の採取を行った。採取した尿サンプルは、防腐剤を添加することなく−20℃で冷凍保存した。
【０１２４】
（尿中ホモシステイン酸含量の測定）
各尿サンプルは、まず比重の測定を行い、比重を1.020に調節した。その後、ECD検知器およびカラム(Shim-pack XR-ODS、島津製作所製）を備えた高速液体クロマトグラフィー(HPLC)に供することで、各サンプル尿中のホモシステイン酸含量の測定を行った。
【０１２５】
なお、HPLCに供する各サンプルは、水で10倍希釈したものを使用した。また尿中のホモシステイン酸含量の測定は、ブラインド条件下で行った。図６はホモシステイン酸標品サンプルを測定したクロマトグラムであり、図７（ａ）は高濃度領域における検量線、図７（ｂ）は低濃度領域における検量線である。また、図８に尿サンプルを測定した際の典型的なクロマトグラムを示す。
【０１２６】
（血液中のホモシステイン酸含量の測定）
各血液サンプルもまた、前処理を行った上で、前述の尿サンプルと同様にHPLC法により、ホモシステイン酸含量の測定を行った。図９に血液サンプルを測定した際の典型的なクロマトグラムを示す。
【０１２７】
（データの解析）
統計的有意性は、スチューデントのt検定によって評価した。また、Spearman analysisにて相関性の分析を行った。
【０１２８】
（結果）
上記分析の結果、尿中のホモシステイン酸含量は、アルツハイマー病の患者のMMSEスコアーと関連することが確認された。すなわち、図１０（ａ）及び図１０（ｂ）に示すように、MMSEスコアが低いほど、尿中におけるホモシステイン酸含量は減少する傾向が見られた。
【０１２９】
一方、対照群（コントロール群）では、尿中のホモシステイン酸含量と、MMSEスコアとの関係においては、関連を見出すことができなかった。
【０１３０】
特に、アルツハイマー病患者における尿中ホモシステイン酸含量とMMSEスコアとの相関性は、図１１（ａ）及び図１１（ｂ）に示すように、男性よりも女性においてより強まる傾向が見られた。
【０１３１】
また、前述の分析結果により、表２に示すように、試験群と対照群との間で尿中のホモシステイン酸含量について比較した場合、違いは統計的に有意(p<0.01)であるとの結果が得られた。
【表２】
2013253781.tif 000004
【０１３２】
また、尿中のホモシステイン酸含量と、血液サンプル中のホモシステイン酸含量とについて検討したところ、図３に示したように尿中のホモシステイン酸含量と、血液中のホモシステイン酸含量との間に逆の相関関係が示された(r=-0.6、p=0.007、n=19)。
【０１３３】
また、血液中のホモシステイン酸含量と、アルツハイマー病の患者のMMSEスコアーとの間には、図１２に示すように逆の相関関係(r=-0.79、p=0.0000518、n=19)があることが示された。
【０１３４】
上述してきたように、本発明に係る神経変性疾患の検査方法によれば、被験動物から採取した尿中及び／又は血液中のホモシステイン酸含量を調べることとしたため、ヒトを含む被験動物に対して負担が少なく、神経変性疾患の兆候を比較的正確且つ容易に確認することができる。
【０１３５】
また、本発明に係る被験動物の神経変性疾患の進行度合いを、前記被験動物より採取した尿を用いて判定するためのキットによれば、前記尿と接触させる尿接触手段と、前記尿接触手段に接触させた尿の中に含まれるホモシステイン酸を抗原とする抗ホモシステイン酸抗体と、前記抗ホモシステイン酸抗体の前記尿中のホモシステイン酸への結合量に応じて変化する標識手段と、を備え、前記尿中に含まれるホモシステイン酸に結合した前記抗ホモシステイン酸抗体が少ない程、前記標識手段の変化によって前記被験動物の神経変性疾患が進行していることを表示可能としたため、ヒトを含む被験動物に対して負担が少なく、神経変性疾患の兆候を比較的正確且つ容易に確認することのできる神経変性疾患の進行度合いを判定するキットを提供することができる。
【０１３６】
また、本発明に係る被験動物の神経変性疾患の進行度合いを、前記被験動物より採取した血液を用いて判定するためのキットによれば、前記血液又は前記血液より得られる血漿を接触させる接触手段と、前記接触手段に接触させた血液又は血漿中に含まれるホモシステイン酸を抗原とする抗ホモシステイン酸抗体と、前記抗ホモシステイン酸抗体の前記血液又は血漿中のホモシステイン酸への結合量に応じて変化する標識手段と、を備え、前記血液又は血漿中に含まれるホモシステイン酸に結合した前記抗ホモシステイン酸抗体が多い程、前記標識手段の変化によって前記被験動物の神経変性疾患が進行していることを表示可能としたため、ヒトを含む被験動物に対して負担が少なく、神経変性疾患の兆候を比較的正確且つ容易に確認することのできる神経変性疾患の進行度合いを判定するキットを提供することができる。
【０１３７】
最後に、上述した各実施の形態の説明は本発明の一例であり、本発明は上述の実施の形態に限定されることはない。このため、上述した各実施の形態以外であっても、本発明に係る技術的思想を逸脱しない範囲であれば、設計等に応じて種々の変更が可能であることは勿論である。
【０１３８】
本実施形態では、第１抗ホモシステイン酸抗体及び第２抗ホモシステイン酸抗体の調製を行う際にウサギを用いることとしたが、これに限定されるものではない。抗体の調製に一般的に使用される動物であれば、いずれであっても良い。
【０１３９】
また、例えば乳牛を免疫動物として乳中に第１抗ホモシステイン酸抗体及び第２抗ホモシステイン酸抗体を出現させるようにすれば、これらの抗体を容易に大量調製することも可能である。なお、イムノクロマトキットＡのコントロールラインに固定される抗体や、ELISA法を利用したキットにおける２次抗体は、ホモシステイン酸抗体と結合可能とすべく、免疫動物の種類に応じて変更するのは言うまでもない。
【符号の説明】
【０１４０】
１０  サンプルパッド
１１  コンジュゲートパッド
１２  メンブレン
１２ａ  テストライン
１２ｂ  コントロールライン
１３  吸収パッド
Ａ  イムノクロマトキット
【図１】
2013253781.tif 000005
【図２】
2013253781.tif 000006
【図３】
2013253781.tif 000007
【図４】
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【図５】
2013253781.tif 000009
【図６】
2013253781.tif 000010
【図７】
2013253781.tif 000011
【図８】
2013253781.tif 000012
【図９】
2013253781.tif 000013
【図１０】
2013253781.tif 000014
【図１１】
2013253781.tif 000015
【図１２】
2013253781.tif 000016