(57)【要約】【課題】  本発明は、皮膚について高い保湿効果を有し、かつ皮膚の水分量を高めることが可能なヒアルロン酸組成物、およびこれを含む皮膚外用剤である。【解決手段】  平均分子量が１００，０００以下の低分子ヒアルロン酸および／またはその塩とカチオン化ヒアルロン酸および／またはその塩の含有割合が質量比で５：９５〜８０：２０になるように含有する酸組成物であって、前記低分子ヒアルロン酸および／またはその塩と前記カチオン化ヒアルロン酸および／またはその塩をヒアルロン酸換算で合計１質量％となるように調製した前記ヒアルロン酸組成物の水溶液は、沈殿物を生じることなく水に溶解していることを特徴とするヒアルロン酸組成物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
平均分子量が１００，０００以下の低分子ヒアルロン酸および／またはその塩とカチオン化ヒアルロン酸および／またはその塩の含有割合が質量比で５：９５〜８０：２０であるヒアルロン酸組成物であって、
前記低分子ヒアルロン酸および／またはその塩と前記カチオン化ヒアルロン酸および／またはその塩をヒアルロン酸換算で合計１質量％となるように調製した前記ヒアルロン酸組成物の水溶液が、沈殿物を生じることなく水に溶解していることを特徴とするヒアルロン酸組成物。
【請求項２】
前記低分子ヒアルロン酸および／またはその塩の平均分子量が４００〜５０，０００である請求項１に記載のヒアルロン酸組成物。
【請求項３】
平均分子量が１００，０００超のヒアルロン酸および／またはその塩をさらに含有する請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
請求項１ないし３のいずれか１項に記載のヒアルロン酸組成物を含有する皮膚外用剤。
【請求項５】
請求項１ないし３のいずれか１項に記載のヒアルロン酸組成物を使用する皮膚水分量の増加方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、低分子ヒアルロン酸およびカチオン化ヒアルロン酸を含有するヒアルロン酸組成物、これを用いた皮膚外用剤、およびこれを使用する皮膚水分量の増加方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒアルロン酸は、鶏冠、さい帯、皮膚、軟骨、硝子体、関節液などの生体組織中に広く分布するムコ多糖であり、その高い保湿機能により、化粧料の成分として広く利用されている。
【０００３】
しかしながら、一般的に皮膚外用剤として使用されているヒアルロン酸は高分子の多糖類であるため、生体内に吸収されにくい。例えば、ヒアルロン酸を皮膚に塗布することにより、皮膚からの水分の蒸散を防ぐことはできるが、ヒアルロン酸は高分子（平均分子量：５０万〜２００万）であるため、皮膚組織へ浸透しにくく、大部分が皮膚の表面に留まるのみである。したがって、洗顔や入浴等により皮膚表面のヒアルロン酸が洗い流されると、皮膚の保湿効果が持続しにくい。
【０００４】
そこで、皮膚に浸透しやすいヒアルロン酸として、重量平均分子量７０万以上１５０万以下のヒアルロン酸およびヒアルロン酸オリゴ糖を含有する組成物が記載されている（特許文献１）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２０１１−５７６０７号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかしながら、特許文献１に記載された組成物の場合、表皮における角質間隙からの浸透性を高めるために開発されたものではあるが、皮膚の保湿効果は十分なものとは言い難かった。
【０００７】
本発明の目的は、皮膚について高い保湿効果を有するヒアルロン酸組成物、これを含む皮膚外用剤、およびこれを使用する皮膚水分量の増加方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、
（１）平均分子量が１００，０００以下の低分子ヒアルロン酸および／またはその塩とカチオン化ヒアルロン酸および／またはその塩の含有割合が質量比で５：９５〜８０：２０であるヒアルロン酸組成物であって、
前記低分子ヒアルロン酸および／またはその塩と前記カチオン化ヒアルロン酸および／またはその塩をヒアルロン酸換算で合計１質量％となるように調製した前記ヒアルロン酸組成物の水溶液が、沈殿物を生じることなく水に溶解していることを特徴とするヒアルロン酸組成物、
（２）前記低分子ヒアルロン酸および／またはその塩の平均分子量が４００〜５０，０００である（１）に記載のヒアルロン酸組成物、
（３）平均分子量が１００，０００超のヒアルロン酸および／またはその塩をさらに含有する（１）または（２）に記載の組成物、
（４）（１）ないし（３）のいずれか１項に記載のヒアルロン酸組成物を含有する皮膚外用剤、
（５）（１）ないし（３）のいずれか１項に記載のヒアルロン酸組成物を使用する皮膚水分量の増加方法、
である。
【発明の効果】
【０００９】
上記ヒアルロン酸組成物を皮膚に塗布した場合、皮膚の水分量を高めることができるため、皮膚を瑞々しい状態に保つことができる。
また、上記ヒアルロン酸組成物は、通常の平均分子量が１００，０００超のヒアルロン酸が有する保湿効果をさらに高めることができる。そのため、保湿剤として当該平均分子量が１００，０００超ヒアルロン酸を含有する皮膚外用剤に上記ヒアルロン酸組成物を含有させることで、保湿剤の配合量を増やすことなく、保湿効果を高めることが可能である。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
以下、本発明の一実施形態に係る低分子ヒアルロン酸および／またはその塩とカチオン化ヒアルロン酸および／またはその塩を含有するヒアルロン酸組成物、およびこれを含む皮膚外用剤について詳細に説明する。なお、本発明において「％」は「質量％」、「部」は質量部を意味する。
【００１１】
１．ヒアルロン酸組成物
１．１．低分子ヒアルロン酸および／またはその塩
本実施形態に係るヒアルロン酸組成物は、平均分子量が１００，０００以下の低分子ヒアルロン酸および／またはその塩を含む。
上記低分子ヒアルロン酸および／またはその塩の平均分子量は、皮膚水分量の増加効果が優れている点で、４００〜５０,０００であるのが好ましく、１，０００〜３０，０００であるのがより好ましい。
【００１２】
１．１．１．平均分子量
本発明において、ヒアルロン酸および／またはその塩の平均分子量は、以下の方法にて測定された値である。
【００１３】
即ち、約０．０５ｇのヒアルロン酸および／またはその塩（本品）を精密に量り、０．２ｍｏｌ／Ｌ濃度の塩化ナトリウム溶液に溶かし、正確に１００ｍＬとした溶液およびこの溶液８ｍＬ、１２ｍＬ並びに１６ｍＬを正確に量り、それぞれに０．２ｍｏｌ／Ｌ濃度の塩化ナトリウム溶液を加えて正確に２０ｍＬとした溶液を試料溶液とする。この試料溶液および０．２ｍｏｌ／Ｌ濃度の塩化ナトリウム溶液につき、日本薬局方（第十五改正）一般試験法の粘度測定法（第１法
毛細管粘度計法）により３０．０±０．１℃で比粘度を測定し（式（Ａ））、各濃度における還元粘度を算出する（式（Ｂ））。還元粘度を縦軸に、本品の換算した乾燥物に対する濃度（ｇ／１００ｍＬ）を横軸にとってグラフを描き、各点を結ぶ直線と縦軸との交点から極限粘度を求める。ここで求められた極限粘度をＬａｕｒｅｎｔの式（式（Ｃ））に代入し、平均分子量を算出する（T.C. Laurent, M. Ryan, A. Pietruszkiewicz,:B.B.A., 42, 476-485(1960)）。
【００１４】
（式Ａ）
比粘度 ＝ {試料溶液の所要流下秒数)/(０．２ｍｏｌ／Ｌ塩化ナトリウム溶液の所要流下秒数)}−1
【００１５】
（式Ｂ）
還元粘度（ｄＬ／ｇ）＝
比粘度/(本品の換算した乾燥物に対する濃度ｇ／１００ｍＬ))
【００１６】
（式Ｃ）
極限粘度（ｄＬ／ｇ）＝３．６×１０−４Ｍ０．７８
Ｍ：平均分子量
【００１７】
１．１．２．低分子ヒアルロン酸および／またはその塩の製造方法
上記低分子ヒアルロン酸および／またはその塩の製造に使用される原料ヒアルロン酸および／またはその塩は、動物等の生体組織（例えば、鶏冠、さい帯、皮膚、関節液など）から抽出されたものでもよく、または、微生物、動物細胞もしくは植物細胞を培養して得られたもの（例えばストレプトコッカス属の細菌等を用いた発酵法）、化学的または酵素的に合成されたものなどを使用することができる。
【００１８】
上記低分子ヒアルロン酸および／またはその塩を製造する方法は、特に限定されるわけではなく、原料ヒアルロン酸から公知の加水分解方法を用いて行うことができる。例えば、酵素等を用いてヒアルロン酸を低分子化する方法、酸またはアルカリ条件下で低分子化する方法などが挙げられる。中でも、得られた低分子ヒアルロン酸および／またはその塩の分離精製が容易であって、低コストで収率良く製造することが出来る点から、酸性含水媒体中にヒアルロン酸および／またはその塩を分散させることにより製造するのが好ましい。
【００１９】
上記低分子ヒアルロン酸および／またはその塩としては、精製物、具体的にはヒアルロン酸および／またはその塩の純度が９０％以上のものが好ましい。純度が９０％未満の低分子ヒアルロン酸および／またはその塩を用いた場合、低分子ヒアルロン酸および／またはその塩とカチオン化ヒアルロン酸および／またはその塩を含有するヒアルロン酸組成物の保湿効果が低下する場合があるため好ましくない。
【００２０】
１．２．カチオン化ヒアルロン酸および／またはその塩
本実施形態に係るヒアルロン酸組成物は、カチオン化ヒアルロン酸および／またはその塩を含む。
【００２１】
１．２．１．カチオン化ヒアルロン酸および／またはその塩の製造方法
上記カチオン化ヒアルロン酸および／またはその塩の製造に使用される原料ヒアルロン酸および／またはその塩は、平均分子量が、使用後の保湿感、および皮膚外用剤への配合のしやすさの点で、８００〜２５０万であるのがより好ましく、５万〜２００万であるのがさらに好ましい。
【００２２】
本発明の皮膚外用剤に使用されるカチオン化ヒアルロン酸および／またはその塩は、原料ヒアルロン酸および／またはその塩を塩基性含水媒体中でカチオン化剤と反応させる工程によって得られる。上記方法によれば、例えば、原料ヒアルロン酸および／またはその塩を水に溶解させてカチオン化剤と反応させる場合と比較して、製造工程の効率を高めることができる。
【００２３】
上記カチオン化ヒアルロン酸および／またはその塩の製造方法において、原料ヒアルロン酸および／またはその塩を塩基性含水媒体中でカチオン化剤と反応させる工程では、原料ヒアルロン酸および／またはその塩は、塩基性含水媒体中に分散させた状態でカチオン化剤と反応させることが好ましい。ここで、反応条件（時間、温度等）を調製することにより、カチオン化の度合いを調製することができる。
【００２４】
使用可能なカチオン化剤としては、第四級アンモニウム含有基を含有するカチオン化剤が好ましい。例えば、２，３−エポキシプロピルトリアルキルアンモニウムハライド（グリシジルトリアルキルアンモニウム塩）および３−ハロゲノ−２−ヒドロキシプロピルトリアルキルアンモニウムハライド等の第四級アンモニウム基を含有するカチオン化剤が挙げられる。かかるカチオン化剤は単独でも、あるいは二種以上を組み合わせて使用してもよい。なかでも、カチオン化剤は、３−クロロ−２−ヒドロキシプロピルトリメチルアンモニウムクロリドおよびグリシジルトリメチルアンモニウムクロリドもしくはいずれか一方であることが好ましい。
【００２５】
１．３．低分子ヒアルロン酸および／またはその塩とカチオン化ヒアルロン酸および／またはその塩の含有割合
本実施形態に係るヒアルロン酸組成物は、低分子ヒアルロン酸および／またはその塩とカチオン化ヒアルロン酸および／またはその塩の含有割合が質量比で５：９５〜８０：２０、好ましくは１０：９０〜７５：２５、より好ましくは２０：８０〜４０：６０である。
本実施形態に係るヒアルロン酸組成物は、低分子ヒアルロン酸および／またはその塩とカチオン化ヒアルロン酸および／またはその塩の含有割合が上記質量比であることにより、皮膚中の水分量を高めることができる。
【００２６】
本実施形態に係るヒアルロン酸組成物の製造方法は、ヒアルロン酸および／またはその塩とカチオン化ヒアルロン酸および／またはその塩を含む組成物を得ることができる方法であれば、特に限定されるものではない。例えば、ヒアルロン酸および／またはその塩を含有する溶液と、カチオン化ヒアルロン酸および／またはその塩を含有する溶液とを混合し、噴霧乾燥、凍結乾燥等により乾燥処理を施した後、必要に応じて粉砕を行う方法や、ヒアルロン酸および／またはその塩を含有する粉末と、カチオン化ヒアルロン酸および／またはその塩を含有する粉末とを粉体混合し、粉末状の組成物を得る方法等が挙げられる。
なお、本実施形態に係るヒアルロン酸組成物は、ヒアルロン酸および／またはその塩を含有する溶液と、カチオン化ヒアルロン酸および／またはその塩を含有する溶液とを混合して得ることもできるが、当該混合溶液は、沈殿物を生じることなくヒアルロン酸組成物が水に溶解しており、皮膚用外用剤に好適に用いることができる。
【００２７】
２．皮膚外用剤
本実施形態に係る皮膚外用剤は、上記ヒアルロン酸組成物を含有する。例えば、本実施形態に係る皮膚外用剤は、上記ヒアルロン酸組成物を保湿剤として含有することができる。また、本実施形態に係る皮膚外用剤は、上記ヒアルロン酸組成物を固形分換算で、通常０．００１〜５％含有する。含有量が０．００１％未満では、満足な保湿効果が得られないため、使用時の皮膚の乾燥を改善することができない恐れがある。含有量が５％を超えると、粘度が高くなりすぎ皮膚全体に伸ばしにくくなる恐れがある。
【００２８】
本実施形態に係る皮膚外用剤の態様は特に限定されないが、例えば、皮膚用化粧料が挙げられる。上記ヒアルロン酸組成物を皮膚用化粧料に使用することにより、皮膚水分量増加効果が高いため、皮膚に潤いを長期間付与し、皮膚のかさつき感を改善することができる。本実施形態に係る皮膚用化粧料の態様としては、例えば、洗顔料、洗浄料、化粧水（例えば、美白化粧水）、クリーム（例えば、バニシングクリーム、コールドクリーム）、乳液、美容液、パック（例えば、ゼリー状ピールオフタイプ、ペースト状拭き取りタイプ、粉末状洗い流しタイプ）、クレンジング、ファンデーション、口紅、リップクリーム、リップグロス、リップライナー、頬紅、シェービングローション、アフターサンローション、デオドラントローション、ボディローション（ハンドケアローション、フットケアローションを含む）、ボディオイル、石鹸、入浴剤が挙げられる。
【００２９】
本実施形態に係る皮膚用外用剤によれば、上記ヒアルロン酸組成物を含有することにより、皮膚の水分量を高くすることができるため、皮膚に潤いを与えることができる。
【００３０】
本実施形態に係る皮膚外用剤には、平均分子量が１００，０００超のヒアルロン酸および／またはその塩を含むことが好ましい。平均分子量が１００，０００超のヒアルロン酸は、保湿機能を有するが保湿効果の持続性は十分ではない。本発明に係るヒアルロン酸組成物を、平均分子量が１００，０００超のヒアルロン酸を含有する組成物に添加することにより、当該ヒアルロン酸の保湿機能を高め、保湿効果を持続させることができる。具体的には、当該ヒアルロン酸の０．１％水溶液を皮膚に塗布したときの皮膚水分量と比較して、当該ヒアルロン酸と本発明に係るヒアルロン酸組成物とを混合した混合物の０．１％水溶液を皮膚に塗布したときの皮膚水分量が高くなる。平均分子量が１００，０００超のヒアルロン酸と、本発明に係るヒアルロン酸組成物における低分子ヒアルロン酸および／またはその塩とカチオン化ヒアルロン酸および／またはその塩の合計含有量との配合比は特に限定されないが、保湿効果を持続させる点から、質量比で５：９５〜８０：２０、好ましくは１０：９０〜７０：３０が好ましい。
【００３１】
本実施形態に係る皮膚外用剤にはさらに、以下の成分が配合されていてもよい。前記成分としては、カチオン化多糖類（例えば、カチオン化ヒドロキシエチルセルロース、カチオン化グアーガム、カチオン化澱粉、カチオン化ローカストビーンガム、カチオン化デキストラン、カチオン化キトサン、カチオン化ハチミツ等）、アニオン界面活性剤（例えば、アルキルベンゼンスルホン酸塩、ポリオキシアルキレンアルキルエーテル硫酸エステル塩、アルキル硫酸エステル塩、オレフィンスルホン酸塩、脂肪酸塩、ジアルキルスルホコハク酸塩等）、非イオン界面活性剤（例えば、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油誘導体等）、陽イオン界面活性剤（例えば、アルキルトリメチルアンモニウム塩、ジアルキルジメチルアンモニウム塩、アルキルピリジニウム塩、塩化ステアリルトリメチルアンモニウム等）、両性界面活性剤（例えば、アルキルベタイン、アルキルアミドプロピルベタイン、イミダゾリニウムベタイン、卵黄レシチン、大豆レシチン等）、油分（例えば、シリコーン、シリコーン誘導体、流動パラフィン、スクワラン、ミツロウ、カルナバロウ、オリーブ油、アボガド油、ツバキ油、ホホバ油、馬油等）、保湿剤（例えば、ヒアルロン酸ジメチルシラノール、セラミド、ラウロイルグルタミン酸ジフィトステリルオクチルドデシル、フィトグリコーゲン、加水分解卵殻膜、トレハロース、グリセリン、アテロコラーゲン、ソルビトール、マルチトール、１，３−ブチレングリコール等）、高級脂肪酸（例えば、ラウリン酸、ベヘニン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、イソステアリン酸、オレイン酸等）、高級アルコール（例えば、セチルアルコール、ステアリルアルコール、ベヘニルアルコール、イソステアリルアルコール、バチルアルコール等）、多価アルコール（例えば、グリセリン、ジグリセリン、１，３−プロパンジオール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ペンチレングリコール、アルカンジオール等）、増粘剤（例えば、セルロースエーテル、カルボキシビニルポリマー、キサンタンガム、パルミチン酸デキストリン等）、両性高分子樹脂化合物（例えば、ベタイン化ジアルキルアミノアルキルアクリレート共重合体等）、カチオン性高分子樹脂化合物（例えば、ビニルピロリドン／ジメチルアミノエチルメタクリレート共重合体カチオン化物、ポリジメチルジアリルアンモニウムハライド型カチオン性ポリマー等）、防腐剤（例えば、メチルパラベン、エチルパラベン、ブチルパラベン、プロピルパラベン、フェノキシエタノール等）、酸化防止剤（例えば、トコフェノール、ＢＨＴ等）、金属封鎖剤（例えば、エデト酸塩、エチドロン酸塩等）、紫外線吸収剤（例えば、ベンゾフェノン誘導体、パラアミノ安息香酸誘導体、メトキシ桂皮酸誘導体等）、紫外線反射剤（例えば、酸化チタン、酸化亜鉛等）、タンパク質加水分解物（例えば、ケラチンペプチド、コラーゲンペプチド、大豆ペプチド、コムギペプチド、ミルクペプチド、シルクペプチド、卵白ペプチド等）、アミノ酸（例えば、アルギニン、グルタミン酸、グリシン、アラニン、ヒドロキシプロリン、システイン、セリン、Ｌ−テアニン等）、天然物エキス（クジンエキス、カジルエキス、テンチカエキス、海草エキス、ユーカリエキス、ローヤルゼリーエキス、ローズマリーエキス、ブナの木エキス等）、その他の機能性成分（コエンザイムＱ１０、アルブチン、ポリクオタニウム５１、エラスチン、白金ナノコロイド、パルミチン酸レチノール、パンテノール、アラントイン、ジラウロイルグルタミン酸リシンナトリウム、リン酸アスコルビルマグネシウム、Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシド、エラグ酸、コウジ酸、リノール酸、トラネキサム酸等）、リン脂質ポリマー、香料、色素が挙げられる。
【００３２】
３．皮膚水分量
本発明において、皮膚の水分量は高周波コンダクタンス変換方式の水分測定器により測定できる。皮膚表皮角質の水分含有率とコンダクタンスは高い相関性をもっていることが知られており、一般的に水分含有率が高いと表皮角質のコンダクタンスは大きくなる。
【００３３】
４．実施例
以下、実施例によって本発明をさらに詳細に説明するが、本発明は実施例に限定されない。
【００３４】
４．１．実施例１
４．１．１．ヒアルロン酸組成物の製造
（低分子ヒアルロン酸の調製）
本実施例では、原料として、鶏冠より抽出、精製したヒアルロン酸ナトリウム微粉末を準備した。この原料ヒアルロン酸ナトリウムの平均分子量は約２１０万、純度９７％であった。
【００３５】
まず、３００ｍＬ容ビーカーに、０．５％硫酸含有８０％含水アセトン（酸性含水媒体）１１０Ｌを満たし、攪拌しながら液温が６０℃となるよう加熱した。ここで、８０％含水アセトンは、アセトンを８０（Ｗ／Ｗ）％含有し、水を２０（Ｗ／Ｗ）％含有するものであり、０．５％硫酸含有８０％含水アセトンは、硫酸を０．５（Ｗ／Ｗ）％含有し、８０％含水アセトンを９９．５（Ｗ／Ｗ）％含有するものである。６０℃に達温後、攪拌しながら、準備した原料ヒアルロン酸ナトリウム微粉末６ｇをタンクに投入した。硫酸含有含水アセトンの温度を６０℃に維持するように加熱を行いながら、原料ヒアルロン酸ナトリウム微粉末が分散状態となるように攪拌した。
【００３６】
次に、１５分間攪拌してから静置した後、上澄みの硫酸含有含水アセトンをデカンテーションにより除去することにより、沈殿物を得た。得られた沈殿物に、予め６０℃に加熱した０．５％硫酸含有８０％含水アセトン１１０ｍＬを加え、同様に６０℃に加熱しながら攪拌を１５分間行い、この操作を合計３回繰り返した。
【００３７】
次いで、硫酸含有含水アセトンを除去した後に得られた沈殿物に８０％含水アセトン１１０ｍＬを加え、硫酸除去の目的で１５分間の攪拌を行なった。硫酸の残留がなくなるまでこの操作を繰り返した。
【００３８】
さらに、含水アセトンをデカンテーションにより除去して残留物を得た。この残留物について遠心分離処理を行うことにより含水アセトンをさらに除去した後、真空乾燥機を用いて室温で６時間脱溶媒を行った。
【００３９】
以上の工程により、白色微粉末の低分子ヒアルロン酸５．３ｇ（収率約８８％）を得た。この低分子ヒアルロン酸は、ウベローデ粘度計を用いて測定された１％水溶液の動粘度が１．５ｍｍ２／ｓであり、極限粘度より換算した分子量が９，０００であった。
【００４０】
（カチオン化ヒアルロン酸の調製）
１Ｌ容ビーカーに、ヒアルロン酸ナトリウム（キユーピー株式会社製、平均分子量２００万）２０ｇ、５％水酸化ナトリウム２０ｍＬ、８０％含水エタノール１８０ｍＬ、およびグリシジルトリメチルアンモニウムクロリド（ＧＴＡ（有効成分約８０％、水分約２０％））３０ｍＬを添加し、撹拌子を用いて撹拌しながら、４０℃で１時間反応させた。
次に、デカンテーションにより液を除去して、固形物（カチオン化ヒアルロン酸を含む）を得た。
【００４１】
次いで、食塩水４００ｍＬを加え、固形物を溶解させた。固形物が完全に溶解したことを確認した後、エタノール６００ｍＬを添加して、カチオン化ヒアルロン酸を沈殿させた。デカンテーションにより液を除去した後、８０％含水エタノール５００ｍＬを添加して１５分間撹拌し、さらに、含水エタノールをデカンテーションにより除去して沈殿物を得た。この操作を３回繰り返し、沈殿物に残存するカチオン化剤（ＧＴＡ）および食塩を除去した。
【００４２】
次いで、遠心分離処理を行うことにより含水エタノールをさらに除去した後、真空乾燥機を用いて、６０℃にて減圧で５時間加熱乾燥を行った。
これにより、白色粉末のカチオン化ヒアルロン酸２０．５ｇを得た。このカチオン化ヒアルロン酸の窒素含有率を測定し、上述の計算式によって求めたカチオン化度は０．２７であった。
【００４３】
（ヒアルロン酸組成物の製造）
上記の方法で得られた低分子ヒアルロン酸とカチオン化ヒアルロン酸とを含有割合が質量比で５０：５０となるように粉体混合を行い、本発明のヒアルロン酸組成物を得た。
【００４４】
４．１．２．試験例１
本発明のヒアルロン酸組成物をヒトに経皮投与して、保湿効果の持続性の評価を行った。より具体的には、本発明のヒアルロン酸組成物を被験者の上腕部に塗布し、２４時間後経過後の皮膚の水分量を測定し、対照（ヒアルロン酸単独）との比較を行った。
【００４５】
４．１．３．使用した試料
試験液１：実施例１で得られたヒアルロン酸組成物の１％水溶液
試験液２：分子量１２０万のヒアルロン酸（キユーピー株式会社製）の１％水溶液
試験液３：アセチル化ヒアルロン酸の１％水溶液
なお、上記試験液１は沈殿物を生じることなく水に溶解していた。
【００４６】
４．１．４．測定機器
水分量測定器：商品名「ＳＫＩＣＯＮ−２００」，Ｉ．Ｂ．Ｓ．Ｃｏ．，ＬＴＤ製
試料塗布前の皮膚水分量測定値を０としたときの各時間における皮膚水分量の変化量を算出した。
【００４７】
被験者（成人１０名：男性５名、女性５名）の右腕前腕部を石鹸で洗浄後、２ｃｍ×２ｃｍの試料塗布エリアを設定し、室温２０〜２５℃、湿度４５〜５５％の環境下で２０分間安静後、試料塗布前の皮膚水分量を測定した。その後、試験液１〜３をそれぞれ２０μＬずつ均一に塗布し、塗布部位の皮膚の水分量を水分量測定器にて測定した。水分量の測定は、塗布直前、塗布後２０分、４０分、１２０分、２４０分、３６０分、２４時間経過時にそれぞれ行った。なお、測定は各エリア４回ずつ行った。
その結果を表１に示す。表１に示される数値は、皮膚水分変化量であり、塗布直前の皮膚水分量を０としたときの皮膚水分量の変化量である。また、表１に示される数値は、被験者１０名の平均の数値である。また、各時間においてFisherのPLSD法による多重比較検定を行い、危険率ｐ＜０．０５で有意差ありと判定した。
【００４８】
【表１】
2013181001.tif 000002
【００４９】
表１によれば、試験液１を塗布した場合、試験液２、３を塗布した場合と比較して、皮膚の水分量を多く保持できることが確認された。
【００５０】
４．２．実施例２
分子量１８０万のヒアルロン酸を以下の割合になるように実施例１で得られたヒアルロン酸組成物と混合し、実施例２を得た。
【００５１】
実施例２のヒアルロン酸組成物
実施例１のヒアルロン酸組成物        ５０部
分子量１８０万のヒアルロン酸        ５０部
【００５２】
４．３．実施例３
分子量１８０万のヒアルロン酸を以下の割合になるように実施例１で得られたヒアルロン酸組成物と混合し、実施例３を得た。
【００５３】
実施例３のヒアルロン酸組成物
実施例１のヒアルロン酸組成物        ６０部
分子量１８０万のヒアルロン酸        ４０部
【００５４】
４．４．試験例２
前記試験例１と同様の方法で、本発明のヒアルロン酸組成物をヒトに経皮投与して、保湿効果の持続性の評価を行った。
【００５５】
４．４．１．使用した試料
試験液４：実施例２で得られたヒアルロン酸組成物の０．１％水溶液
試験液５：実施例３で得られたヒアルロン酸組成物の０．１％水溶液
試験液６：分子量１２０万のヒアルロン酸（キユーピー株式会社製）の０．１％水溶液
なお、上記試験液４および５は沈殿物を生じることなく水に溶解していた。
【００５６】
４．４．２．測定機器
水分量測定器：商品名「ＳＫＩＣＯＮ−２００」，Ｉ．Ｂ．Ｓ．Ｃｏ．，ＬＴＤ製
【００５７】
被験者（成人１４名：男性９名、女性５名）の左腕前腕部を石鹸で洗浄後、２ｃｍ×２ｃｍの試料塗布エリアを設定し、室温２０〜２５℃、湿度４５〜５５％の環境下で２０分間安静後、試料塗布前の皮膚水分量を測定した。その後、試験液４〜６をそれぞれ２０μＬずつ均一に塗布し、塗布部位の皮膚の水分量を水分量測定器にて測定した。水分量の測定は、塗布直前、塗布後１０分、２０分、４０分、６０分、１２０分経過時にそれぞれ行った。なお、測定は各エリア８回ずつ行い、最大値、最小値を除いた６回の平均を採用した。
その結果を表２に示す。表２に示される数値は、皮膚水分変化量であり、塗布直前の皮膚水分量を０としたときの皮膚水分量の変化量である。また、表２に示される数値は、被験者１４名の平均の数値である。また、各時間において塗布前との比較はDunnettの多重比較検定、群間の比較はTukeyの多重比較検定を行い、危険率ｐ＜０．０５で有意差ありと判定した。
【００５８】
【表２】
2013181001.tif 000003
【００５９】
表２によれば、試験液４、５を塗布した場合、試験液６を塗布した場合と比較して、皮膚の水分量を多く保持できることが確認された。
【００６０】
４．５．実施例４
本実施例では、以下に記す処方にて、実施例１で得られたヒアルロン酸組成物を配合した皮膚外用剤として、化粧水を調製した。
ヒアルロン酸組成物（実施例１）                      ０．２％
アセチル化ヒアルロン酸                              ０．１％
コンドロイチン硫酸                                  ０．１％
コラーゲンペプチド                                  ０．１％
１，３−ブチレングリコール                          ５．０％
グリセリン                                          ３．０％
イソステアリルアルコール                            ０．１％
酢酸トコフェロール                                  ０．１％
ＰＯＥ（２０）ソルビタンモノラウリル酸エステル      ０．５％
ＰＯＥ（１５）ラウリルアルコールエーテル            ０．５％
ピロリドンカルボン酸亜鉛                            ０．１％
エチルパラベン                                      ０．１％
メチルパラベン                                    ０．１５％
エタノール                                          ５．０％
香料                                                    適量
精製水                                                  残量
【００６１】
４．６．実施例５
本実施例では、以下に記す処方にて、実施例１で得られたヒアルロン酸組成物を配合した皮膚外用剤として、乳液を調製した。
ヒアルロン酸組成物（実施例１）                ０．３％
ペンチレングリコール                          ５．０％
グリセリン                                    ３．０％
スクワラン                                    ５．０％
ステアリン酸                                  ０．５％
ステアリルアルコール                          ２．０％
ワセリン                                      ４．０％
ステアリン酸ソルビタン                        １．０％
ＰＯＥ（１０）モノステアリン酸エステル        １．０％
カルボキシビニルポリマー                      ０．５％
ポリクオタニウム−５１                        ０．１％
メチルパラベン                              ０．１５％
プロピルパラベン                              ０．１％
水酸化カリウム                                ０．１％
ＢＨＴ                                      ０．０２％
ＥＤＴＡ−２ナトリウム                      ０．０２％
香料                                              適量
精製水                                            残量
【００６２】
４．７．実施例６
本実施例では、以下に記す処方にて、実施例１で得られたヒアルロン酸組成物を配合した皮膚外用剤として、クリーム（エモリエントクリーム）を調製した。
ヒアルロン酸組成物（実施例１）                ０．５％
ポリエチレングリコール                        ４．０％
１，３−プロパンジオール                      ６．０％
スクワラン                                  １１．０％
ジメチコン                                    １．０％
セタノール                                    ６．０％
ステアリン酸                                  ２．０％
水添ココグリセリル                            ４．０％
トリカプリリン                                ８．０％
モノステアリン酸グリセリン                    ３．０％
ＰＯＥ（２０）セチルアルコールエーテル        ２．０％
コエンザイムＱ１０                          ０．０３％
セラミド                                      ０．１％
ジラウロイルグルタミン酸リシンナトリウム      ０．１％
ＥＤＴＡ−２ナトリウム                      ０．０２％
プロピルパラベン                              ０．１％
メチルパラベン                              ０．１５％
香料                                              適量
精製水                                            残量
【００６３】
４．８．実施例７
本実施例では、以下に記す処方にて、実施例１で得られたヒアルロン酸組成物を配合した皮膚外用剤として、美容液（美白保湿エッセンス）を調製した。
ヒアルロン酸組成物（実施例１）                      ０．８％
１，３−ブチレングリコール                          ５．０％
グリセリン                                          １．５％
ＰＯＥソルビタンモノステアリン酸エステル            １．０％
ソルビタンモノステアリン酸エステル                  ０．５％
キサンタンガム                                      ０．２％
アルギン酸ナトリウム                                ０．２％
カルボキシビニルポリマー                            ０．２％
水酸化カリウム                                      ０．１％
オリーブ油                                          ０．２％
トコフェロール                                      ０．１％
ＥＤＴＡ−２ナトリウム                            ０．０２％
アルギニン                                        ０．１５％
グリチルリチン酸ジカリウム                        ０．０５％
アルブチン                                          ０．２％
パルミチン酸レチノール                              ０．２％
クジンエキス                                        ０．２％
海藻エキス                                          ０．２％
トラネキサム酸                                      ０．１％
エラスチン                                          ０．１％
コラーゲン                                          ０．１％
リン酸アスコルビン酸マグネシウム                    ０．１％
クエン酸ナトリウム                                  １．０％
クエン酸                                            ０．１％
プロピルパラベン                                    ０．１％
メチルパラベン                                    ０．１５％
香料                                                    適量
精製水                                                  残量
【００６４】
４．９．実施例８
本実施例では、以下に記す処方にて、実施例１で得られたヒアルロン酸組成物を配合した皮膚外用剤として、美容液パック（ペースト状ピールオフタイプを調製した。
ヒアルロン酸組成物（実施例１）                      ０．５％
ポリ酢酸ビニルエマルジョン                        １７．０％
ポリビニルアルコール                              １１．０％
ソルビトール                                        ５．０％
ポリエチレングリコール４００                        ５．０％
スクワラン                                          ２．５％
ＰＯＥソルビタンモノステアリン酸エステル            １．０％
酸化チタン                                          ４．０％
タルク                                              ８．０％
エタノール                                          ８．０％
メチルパラベン                                    ０．１５％
香料                                                    適量
精製水                                                  残量
【００６５】
４．１０．実施例９
本実施例では、以下に記す処方にて、実施例１で得られたヒアルロン酸組成物を配合した皮膚外用剤として、洗顔料（クレンジングフォーム）を調製した。
ヒアルロン酸組成物（実施例１）                      ０．２％
グリセリン                                        １０．０％
ポリエチレングリコール４００                      １５．０％
ジプロピレングリコール                            １０．０％
ラウロイルグルタミン酸ナトリウム                  ２０．０％
ＰＯＥ（２）モノステアリン酸エステル                ５．０％
パーム脂肪酸グルタミン酸ナトリウム                  ８．０％
アルキルベタイン                                    ２．０％
ＥＤＴＡ−２ナトリウム                            ０．０２％
プロピルパラベン                                    ０．１％
メチルパラベン                                    ０．１５％
香料                                                    適量
精製水                                                  残量
【００６６】
４．１１．実施例１０
本実施例では、以下に記す処方にて、実施例１で得られたヒアルロン酸組成物を配合した皮膚外用剤として、サンスクリーン（乳液）を調製した。
ヒアルロン酸組成物（実施例１）                      ０．２％
１，３−ブチレングリコール                          ３．０％
ジプロピレングリコール                              ３．０％
シクロメチコン                                      ５．０％
ジメチコン                                          ５．０％
セタノール                                          １．０％
ワセリン                                            １．０％
メトキシケイヒ酸オクチル                            ５．０％
酸化チタン                                          ２．０％
酸化亜鉛                                            ２．０％
ステアリン酸ソルビタン                              １．０％
ＰＯＥ（２０）ソルビタンモノステアリン酸エステル    １．０％
フェノキシエタノール                                ０．８％
メチルパラベン                                      ０．１％
香料                                                    適量
精製水                                                  残量
【００６７】
４．１２．実施例１１
本実施例では、以下に記す処方にて、実施例１で得られたヒアルロン酸組成物を配合した皮膚外用剤として、リップクリームを調製した。
ヒアルロン酸組成物（実施例１）                      ０．１％
マイクロクリスタリンワックス                        １．５％
セレシン                                          １２．０％
スクワラン                                        １０．０％
デカメチルテトラシロキサン                        １０．０％
リンゴ酸ジイソステアリル                            ５．０％
キャンデリラロウ                                    ２．０％
ワセリン                                            ８．０％
ヒドロキシステアリン酸グリセリル                    ２．０％
メントール                                        ０．０５％
流動パラフィン                                      １．０％
酢酸トコフェロール                                  ０．１％
トコフェロール                                    ０．０５％
プロピルパラベン                                    ０．１％
香料                                                    適量
精製水                                                  残量
【００６８】
４．１３．実施例１２
本実施例では、以下に記す処方にて、実施例１で得られたヒアルロン酸組成物を配合した皮膚外用剤として、シャンプーを調製した。
ヒアルロン酸組成物（実施例１）                            ０．２％
ＰＯＥ（２０）ラウリルエーテル硫酸ナトリウム            １１．０％
ラウロイルアスパラギン酸ナトリウム                      １０．０％
ヤシ油脂肪酸アミドプロピルベタイン                        ４．０％
ヤシ油脂肪酸モノエタノールアミド                          ２．０％
ＥＤＴＡ−２ナトリウム                                    ０．１％
安息香酸ナトリウム                                        ０．２％
フェノキシエタノール                                      ０．８％
メチルパラベン                                            ０．１％
香料                                                          適量
精製水                                                        残量
【００６９】
４．１４．実施例１３
本実施例では、以下に記す処方にて、実施例１で得られたヒアルロン酸組成物を配合した皮膚外用剤として、ヘアコンディショナーを調製した。
ヒアルロン酸組成物（実施例１）                            ０．３％
ステアリルアルコール                                      ４．０％
セタノール                                                １．５％
ヒドロキシエチルウレア                                    １．０％
アミノプロピルジメチコン                                  １．５％
ジメチコン                                                ０．５％
加水分解シルク                                            １．０％
１，３−ブチレングリコール                                １．０％
グリセリン                                                ３．０％
２−エチルヘキサン酸セチル                                ２．０％
ミリスチン酸イソセチル                                    ０．４％
Ｌ−アルギニン                                            ０．１％
トレハロース                                              ０．１％
ソルビトール                                              ０．１％
ケラチンペプチド                                          ０．１％
ＰＯＥ（４）ステアリルエーテル                            １．０％
ステアリン酸ジメチルアミノプロピルアミド                  ３．０％
塩化ジステアリルジメチルアンモニウム                      ０．２％
安息香酸ナトリウム                                        ０．３％
フェノキシエタノール                                      ０．８％
メチルパラベン                                            ０．１％
香料                                                          適量
精製水                                                        残量