(57)【要約】      （修正有）【課題】レスベラトロール、フェルラ酸より強力な抗炎症剤、さらには該抗炎症剤を含有する食品、化粧品、医薬品、医薬部外品の提供。【解決手段】ポリフェノールである新規に合成した特定のレスベラトロール誘導体並びにこれらの薬学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる少なくとも１種の化合物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（１）：
【化１】
2013177340.tif 000007
及び式（２）：
【化２】
2013177340.tif 000008
で表されるレスベラトロール誘導体並びにこれらの薬学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる少なくとも１種の化合物を有効成分として含有することを特徴とする抗炎症剤。
【請求項２】
請求項１に記載の抗炎症剤を含有する食品、化粧品、医薬品又は医薬部外品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗炎症剤及びこれを含有する食品、化粧品、医薬品、医薬部外品に関し、詳細には、レスベラトロール誘導体を有効成分として含有する抗炎症剤及びこれを含有する食品、化粧品、医薬品、医薬部外品に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
近年、生活スタイルの変化や、ストレスの増大などに起因し、化学物質過敏症、花粉症、アトピー性皮膚炎、乾癬など炎症性疾患の罹患患者数が増大傾向にある。
これら炎症性疾患の多くはヒト腫瘍壊死因子（Ｈｕｍａｎ  Ｔｕｍｏｒ  Ｎｅｃｒｏｓｉｓ  Ｆａｃｔｏｒ−α：ｈＴＮＦ−α）に代表される内因性サイトカインの異常産生が原因であることが知られており、有用な抗炎症剤についていくつか提案されている。例えば、特許文献１や特許文献２ではイヌカラマツ、タブノキなどの樹木からの抽出物を有効成分とする抗炎症剤を提案しており、特許文献３では抗炎症作用のあるペプチド又はその酸付加塩、及び、担体を含む抗炎症剤、特許文献４ではビチス（Ｖｉｔｉｓ）属に属する植物の種子、サビアナタケ（Ｆｕｓｃｏｐｏｒｉａ）属に属するきのこ、マルス（Ｍａｌｕｓ）属に属する植物の果皮の抽出物を有効成分とするタイプ２ヘルパーＴ細胞型サイトカイン産生抑制剤、特許文献５では柿の葉、ヨモギ、杉の葉、ミント、ヘチマ、シラカバ、ブドウ種子、アマチャヅル、ギムネマ、グアバ、クコ、クマザサ、ジャスミン、スギナ、ドクダミ、ハトムギ、ビワの葉、モロヘイヤ、ウド、サフラン、クワ、ラフマ、ベニバナ、トチュウ、スズラン、ゼンマイ等の植物から抽出されるフラボノイド化合物を有効成分とするＴｈ２サイトカイン発現抑制剤が提案されている。
【０００３】
また、ブドウ果皮などに含まれるスチルベン誘導体のレスベラトロールや、米糠やジャガイモの皮層部に多く含まれるフェルラ酸などの化合物に炎症性サイトカイン産生抑制効果が見られるという報告もある（非特許文献１、２）。
【０００４】
しかしながら、例えば樹皮抽出物は被食経験の無さから経口摂取を行うことには不向きであり、また、被食経験が持たれている植物由来の抽出物についても、より当該活性が十分とはいえず、さらなる向上が求められている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２０００−２２６３２３号公報
【特許文献２】特許第４３１５２５５号公報
【特許文献３】特許第４２７８０２８号公報
【特許文献４】特開２００４−７５６１９号公報
【特許文献５】特開２００１−１１４６８６号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  １９９９  Ａｐｒ 15；５７（８）：９４１‐９．
【非特許文献２】Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｎｕｔｒ．４０，（２）９２−１００（２００７）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明者らは、前記の状況を鑑みて、より強力な生理活性を有するレスベラトロール誘導体を探索した結果、レスベラトロール、フェルラ酸を前駆物質として組み合わせ、合成したレスベラトロール誘導体中に、これらの前駆物質と比べて強力な抗炎症作用を見出し、本発明を完成するに至った。
【０００８】
したがって、本発明は、レスベラトロール、フェルラ酸と比べて優れた抗炎症剤を提供することを目的とする。また、本発明は、前記炎症剤を含有する食品、化粧品、医薬品、医薬部外品を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明の要旨は、
〔１〕式（１）：
【００１０】
【化１】
2013177340.tif 000002
【００１１】
及び式（２）：
【００１２】
【化２】
2013177340.tif 000003
【００１３】
で表されるレスベラトロール誘導体並びにこれらの薬学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる少なくとも１種の化合物を有効成分として含有することを特徴とする抗炎症剤、
〔２〕前記〔１〕記載の抗炎症剤を含有する食品、化粧品、医薬品又は医薬部外品
に関する。
【発明の効果】
【００１４】
本発明で用いるレスベラトロール誘導体又はその薬学的に許容可能な塩（以下、レスベラトロール誘導体という）は、前駆物質であるレスベラトロール、フェルラ酸と比べて、抗炎症作用に優れていることから、新規な抗炎症剤として有用である。
本発明の抗炎症剤は、食品、化粧品、医薬品又は医薬部外品に好適に使用することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
以下、本発明について詳細に説明する。
【００１６】
本発明で用いるレスベラトロール誘導体は、
式（１）：
【００１７】
【化３】
2013177340.tif 000004
【００１８】
、式（２）：
【００１９】
【化４】
2013177340.tif 000005
【００２０】
で表される化合物である。
【００２１】
前記レスベラトロール誘導体において、炭素−炭素２重結合は、トランス又はシスであってよく、レスベラトロール誘導体としてはシス体とトランス体との混合物を含む。
【００２２】
前記レスベラトロール誘導体の薬学的に許容可能な塩としては、例えば、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩；マグネシウム塩、カルシウム塩、バリウム塩等のアルカリ土類金属塩；アルミニウム塩；アルミニウムヒドロキシド塩等の金属ヒドロキシド塩；アルキルアミン塩、ジアルキルアミン塩、トリアルキルアミン塩、アルキレンジアミン塩、シクロアルキルアミン塩、アリールアミン塩、アラルキルアミン塩、複素環式アミン塩等のアミン塩；α−アミノ酸塩、ω−アミノ酸塩等のアミノ酸塩；ペプチド塩又はそれらから誘導される第１級、第２級、第３級若しくは第４級アミン塩等が挙げられる。これらの薬理的に許容し得る塩は、単独で又は２種以上を混合して用いることができる。
【００２３】
前記レスベラトロール誘導体は、レスベラトロール、フェルラ酸などの原料化合物を金属塩存在下で加熱処理することで得られる。
前記原料化合物は、天然由来のものであっても、化学合成された純度の高い化成品であっても良い。天然由来の原料化合物としては、完全に精製されたものである必要はなく、各原料化合物を含む混合物も使用できる。また、前記原料化合物には、塩類、エステル類等の誘導体も含まれるが、本発明では、これらの誘導体も原料として使用することができる。
前記原料化合物の誘導体としては、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩等の塩類、メチルエステル、エチルエステル等のエステル類が挙げられる。
ただし、前記レスベラトロール誘導体の生成効率や回収率を高める観点からは、前記原料化合物合計で５重量％以上含有された混合物が原料として望ましい。
【００２４】
前記原料化合物を適切な溶媒に溶解させる。この際、溶媒が水のみであれば原料化合物の水への溶解度が著しく低いために、水と有機溶媒の混合液や、有機溶媒のみに原料化合物を溶解させればよい。この場合、水と有機溶媒の配合比や、有機溶媒の種類には特に制限はなく、原料化合物が十分に溶解すれば良い。中でも、メタノールやエタノールのみの溶媒や、水とメタノール、水とエタノールの混合液を使用することが、安全性やコスト面から好ましい。原料化合物を含む反応後の組成物（反応物）を十分に精製せずに食品に使用する場合には、安全性や法規制の面から溶媒としてエタノールや含水エタノールを使用することが望ましい。
【００２５】
前記のようにして得られる原料化合物を含有する溶液中の原料化合物の濃度に特に制限はない。例えば、原料化合物の濃度が高いほど、溶媒使用量が少なくてすむ等のメリットもあるため、原料化合物の濃度は各々の溶媒に対し飽和する濃度近くになるように調整することが好ましい。
【００２６】
本発明では、原料化合物を反応させて目的のレスベラトロール誘導体を得るために、前記原料化合物を含有する溶液（以下、原料溶液）に金属塩を添加する。
【００２７】
前記金属塩としては、酸性塩、塩基性塩、正塩のいずれでもよく、また、単塩、複塩、錯塩のいずれでもよい。さらに、金属塩は１種類であっても、複数種類の混合物であってもよい。金属塩の例としては、食品添加物として認可されているものが安全性の面で好ましい。例えば、食品に添加することが認められているマグネシウム塩、カルシウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、亜鉛塩、銅塩等が挙げられる。
また、前記金属塩の混合物としては、例えば、ミネラルプレミックス（田辺製薬株式会社、グルコン酸亜鉛、クエン酸鉄アンモニウム、乳酸カルシウム、グルコン酸銅、リン酸マグネシウムを主成分としたミネラル混合物）のように金属塩を数種類含む混合物が挙げられる。また、複数の金属塩を含む混合物として、ミネラルウォーターも挙げることができる。
なお、前記原料溶液中における前記金属塩の含有量としては、目的のレスベラトロール誘導体を生成可能な量であればよく、特に限定はない。
【００２８】
前記金属塩存在下であれば、酸性条件下であってもアルカリ性条件下であってもレスベラトロール誘導体を生成する反応は進む。
ただし、得られるレスベラトロール誘導体の使用目的や精製、単離作業の有無、食品に添加する場合には味の面等を考慮して、適宜反応条件を選択することが望ましい。
【００２９】
次に、金属塩存在下で、前記原料溶液を加熱処理する。この加熱処理により、目的のレスベラトロール誘導体の生成反応を行う。前記生成反応を効率的に進ませるために、前記原料溶液の加熱温度は９０℃以上に調整することが好ましい。また、使用する溶媒の沸点から考えて、加圧加熱を行うことが望ましい。例えば、開放容器に原料溶液を入れ、溶媒の沸点を超える高温で前記容器を加熱する、密閉容器に原料溶液を入れて前記容器を加熱する、レトルト装置やオートクレーブを用いて加圧加熱する等、少なくとも部分的に溶液温度が９０℃以上に達するように加熱することが好ましい。目的のレスベラトロール誘導体の生成効率及び回収効率を高める点から、溶液温度が均一に９０℃〜１５０℃になることが、さらに好ましい。加熱時間も加熱温度と同様に限られたものではなく、効率的に目的の反応が進行する時間条件とすればよい。特に、加熱時間は加熱温度と溶媒量の兼ね合いによるものであり、加熱温度、溶媒量に応じた加熱時間にすることが望ましい。例えば、１３０℃付近で原料溶液を加熱する場合は、溶液温度が１３０℃になってから、５分〜２４時間の加熱を行うことが好ましい。また、加熱は、一度でも良いし、複数回に分けて繰り返し加熱しても良い。複数回に分けて原料溶液を加熱する場合、溶媒のみ又は金属塩を含有する溶媒を新たに追加して行うことが好ましい。
【００３０】
前記加熱処理によるレスベラトロール誘導体の生成反応の終了は、例えば、後述の実施例に記載するＨＰＬＣによる成分分析によりレスベラトロール誘導体の生成量を確認して判断すればよい。
【００３１】
また、安全な原料のみを用いた工程で前記レスベラトロール誘導体を製造した場合には、前記レスベラトロール誘導体を含む混合物の状態で後述のように食品、医薬品、医薬部外品又は化粧品に使用することが可能である。例えば、天然由来の原料化合物を含水エタノール溶媒に溶解し、ミネラルウォーターやミネラルプレミックスを用い、加熱処理した場合には、得られる液状の反応物を食品原料の一つとして使用することが可能である。
【００３２】
また、風味の改良やさらなる高機能化を望む場合は、前記反応物を濃縮してレスベラトロール誘導体の濃度を高める、あるいは前記反応物を精製しレスベラトロール誘導体の純品を得ることができる。前記濃縮や精製は、公知の方法で実施可能である。例えば、クロロホルム、酢酸エチル、エタノール、メタノール等の溶媒抽出法や炭酸ガスによる超臨界抽出法等で抽出してレスベラトロール誘導体を濃縮できる。また、カラムクロマトグラフィーを利用して濃縮や精製を施すことも可能である。また、前記濃縮や精製には、再結晶法や限外ろ過膜等の膜処理法も使用できる。
【００３３】
前記レスベラトロール誘導体を前記反応物から分離して回収する場合には、カラムクロマトグラフィー、ＨＰＬＣ等を用いてもよい。
【００３４】
また、前記濃縮物や精製物を、必要に応じて、減圧乾燥や凍結乾燥して溶媒を除去することで、粉末状の固形物を得ることができる。
【００３５】
本発明で使用する原料化合物の安全性は、すでに一般的に確認されていることから、本発明で得られるレスベラトロール誘導体の安全性も同様に優れたものであると考えられる。
【００３６】
以上のようにして得られるレスベラトロール誘導体類はいずれも、原料であるレスベラトロール、フェルラ酸に比べて、より強い抗炎症作用を有する。
したがって、前記レスベラトロール誘導体を有効成分として含有する抗炎症剤を提供することができる。
【００３７】
前記抗炎症剤は、前記レスベラトロール誘導体のみを含有していてもよいが、前記レスベラトロール誘導体をエタノール又はエタノール含有水溶液などの溶媒に溶解した液剤としたり、公知の方法で乳剤、懸濁剤としたりしてもよい。前記抗炎症剤中の前記レスベラトロール誘導体の含有量は、０．００１重量％以上であればよい。
【００３８】
また、本発明の抗炎症剤は、食品、化粧品、医薬品、医薬部外品等に配合して使用することもできる。
【００３９】
前記食品としては、例えば、飲料、アルコール飲料、ゼリー、菓子等、どのような形態のものでもよい。菓子類としては、その容量等から保存や携帯に優れた、ハードキャンディ、ソフトキャンディ、グミキャンディ、タブレット等が挙げられるが、特に限定はない。また、新規レスベラトロール誘導体をワインに添加することで、ワインの健康機能効果をさらに増強した新規なワインとすることもできる。この新規なワインのように、嗜好性と健康機能効果の双方を持ち合わせた飲食品は、社会ニーズの非常に高い飲食品として、健康嗜好対してますます高くなるニーズにも十分応えることができる飲食品である。また、新規レスベラトロール誘導体は、後述のように、抗炎症作用を有することから、口腔内の炎症に対する緩和を目的に、容易に摂取できるハードキャンディ、ソフトキャンディ、グミキャンディ、タブレットなどにすることができる。なお、食品には、機能性食品、健康食品、健康志向食品等も含まれる。
【００４０】
前記化粧品としては、クリーム、ローション、溶液、エアゾル、石鹸、シャンプー、リンス、洗顔クリーム等のスキンケア用品を例示できる。
【００４１】
前記医薬品としては、散剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、細粒剤、顆粒剤等の固形製剤、水剤、懸濁剤、乳剤等の液剤、ゲル剤等が挙げられる。錠剤、丸剤、細粒剤、顆粒剤、顆粒を含有するカプセル剤の顆粒は、必要により、ショ糖等の糖類、マルチトール等の糖アルコールで糖衣を施したり、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース等でコーティングを施してもよいし、胃溶性若しくは腸溶性物質のフィルムで被覆してもよい。また、製剤の溶解性を向上させるために、前記の製剤に公知の可溶化処理を施すこともできる。常法に基づいて、液剤を注射剤、点滴剤に配合して使用してもよい。
【００４２】
前記医薬部外品としては、口腔に用いられる医薬部外品、例えば、歯磨き、マウスウオッシュ、マウスリンス等が挙げられる。
【００４３】
本発明の抗炎症剤を用いて食品、化粧品、医薬品又は医薬部外品を調製する場合、本発明の効果が損なわれない範囲内で食品、化粧品、医薬品又は医薬部外品に通常用いられる成分を適宜任意に配合することができる。
例えば、食品の場合には、水、アルコール、澱粉質、蛋白質、繊維質、糖質、脂質、ビタミン、ミネラル、着香料、着色料、甘味料、調味料、安定剤、防腐剤のような食品に通常配合される原料又は素材と組み合わせることができる。
化粧品、医薬品又は医薬部外品の場合には、主剤、基材、界面活性剤、起泡剤、湿潤剤、増粘剤、透明剤、着香料、着色料、安定剤、防腐剤、殺菌剤等と組み合わせ、常法に基づいて、液状、軟膏状あるいはスプレー噴射可能な最終形態等にすることができる。
【００４４】
本発明の抗炎症剤を食品に添加する場合には、該食品中に対して、通常は０．００１〜２０重量％添加することが好ましい。
【００４５】
本発明の抗炎症剤を医薬用途で使用する場合、例えば、その摂取量は、所望の改善、治療又は予防効果が得られるような量であれば特に制限されず、通常その態様、患者の年齢、性別、体質その他の条件、疾患の種類並びにその程度等に応じて適宜選択される。１日当たり約０．１ｍｇ〜１，０００ｍｇ程度とするのがよく、これを１日に１〜４回に分けて摂取することができる。
【００４６】
本発明の抗炎症剤を化粧品又は医薬部外品に添加する場合には、該医薬部外品中に、通常０．００１〜３０重量％添加するのが好ましい。
【００４７】
また、本発明の抗炎症剤は、安全性に優れたものであるので、ヒトに対してだけでなく、例えば、非ヒト動物、例えば、ラット、マウス、モルモット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、サル、チンパンジー等の哺乳類、鳥類、両生類、爬虫類等の治療剤又は飼料に配合してもよい。飼料としては、例えばヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、ニワトリ等に用いる家畜用飼料、ウサギ、ラット、マウス等に用いる小動物用飼料、ウナギ、タイ、ハマチ、エビ等に用いる魚介類用飼料、イヌ、ネコ、小鳥、リス等に用いるペットフードが挙げられる。
【００４８】
次に、本発明を実施例に基づいて詳細に説明するが、本発明はかかる実施例にのみ限定されるものではない。
【実施例】
【００４９】
（実施例１：レスベラトロール誘導体ＵＨＡ４００３の生成及び単離・精製）
トランス−レスベラトロール（東京化成工業（株）製）７００ｍｇをエタノール１４ｍＬに溶解し、２．５％炭酸水素ナトリウム水溶液を１４ｍＬ加えて、レスベラトロール含有溶液（ｐＨ９．９）を得た。このレスベラトロール含有溶液をオートクレーブ（三洋電機製、「ＳＡＮＹＯ  ＬＡＢＯ  ＡＵＴＯＣＬＡＶＥ」、以下同じ）にて１３０℃、２０分間加熱した。次いで、１回目のオートクレーブ処理にて得られた反応溶液に、エタノール１４ｍＬと５．０％炭酸水素ナトリウム水溶液を１４ｍＬ加え、再度、オートクレーブにて１３０℃、２０分間加熱した。得られた反応溶液をＨＰＬＣで分析したところ、いくつかのピークで示される化合物が確認できた。
【００５０】
なお、前記ＨＰＬＣは以下条件にて行った。
カラム：逆相用カラム「Ｄｅｖｅｌｏｓｉｌ（登録商標）Ｃ−３０−ＵＧ−５」（４．６ｍｍｉ．ｄ．×２５０ｍｍ）
移動相：Ａ・・・Ｈ2Ｏ（０．１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）），  Ｂ・・・アセトニトリル（０．１％ＴＦＡ）
流速：１ｍＬ／ｍｉｎ
注入：１０μＬ
検出：２５４ｎｍ
勾配（容量％）：８０％Ａ／２０％Ｂから２０％Ａ／８０％Ｂまで３０分間、２０％Ａ／８０％Ｂから１００％Ｂまで５分間、１００％Ｂで１０分間（全て直線）
【００５１】
次いで、複数のピーク化合物を分取して、ＨＰＬＣ、高分解能ＦＡＢ−ＭＳ（Ｆａｓｔ Ａｔｏｍ Ｂｏｍｂａｒｄｍｅｎｔ−Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）、核磁気共鳴測定より純度、構造を確認し、上記ＨＰＬＣ分析条件において溶出時間１６分付近に見られるピークから前記式（１）で示すレスベラトロール誘導体（以下ＵＨＡ４００３）を得た。
【００５２】
（実施例２：レスベラトロール誘導体ＵＨＡ１１２５の生成及び単離・精製）
トランス−レスベラトロール１００ｍｇ、フェルラ酸（和光純薬工業（株）製）１００ｍｇをエタノール２ｍＬに溶解し、ミネラルウォーター（商品名「ゲロルシュタイナー」サッポロ飲料（株）製）２ｍＬを加え、レスベラトロール、フェルラ酸含有溶液（ｐＨ：４．８）を調製した。このレスベラトロール、フェルラ酸含有溶液をオートクレーブにて１３０℃、３０分間加熱した。得られた反応溶液をＨＰＬＣで分析したところ、いくつかのピークで示される化合物が確認され、これらのピーク化合物を分取して、ＨＰＬＣ、高分解能電子イオン化質量分析法（Ｅｌｅｃｔｒｏｎ  Ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ−Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）、核磁気共鳴測定より純度、構造を確認したところ、実施例１に記載したＨＰＬＣ分析条件にて溶出時間１５．６分付近に見られるピークから前記式（２）で示すレスベラトロール誘導体（以下ＵＨＡ１１２５）を得た。
【００５３】
（実施例３：レスベラトロール誘導体の抗炎症作用の検討）
ＴＨＰ−１細胞（ヒト単球系白血病細胞由来）を１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、ホルボールエステル（ＰＭＡ）（Ｓｉｇｍａ社）０．１μＭを含むＲＰＭＩ  １６４０培地（Ｓｉｇｍａ社）中にて５％ＣＯ2、３７℃、２４時間培養し、単球・マクロファージに分化誘導した。分化誘導後、レスベラトロール、フェルラ酸、実施例１、２で得られた各種レスベラトロール誘導体を各０．３７〜３０μＭとなるように添加し、さらにリポ多糖（Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ：ＬＰＳ、Ａｌｅｘｉｓ社）を１００ｎｇ／ｍＬの終濃度で添加し４８時間培養を行った。
培養上清中のヒト腫瘍壊死因子α（ｈＴＮＦ−α）はＥＬＩＳＡ（Ｅｎｚｙｍｅ  Ｌｉｎｋｅｄ  Ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ  Ａｓｓａｙ：酵素免疫測定法）にて測定を行い、比較した。
【００５４】
前記ＥＬＩＳＡは、マキシソープ・イムノプレート（９６ウェルタイプ、ＮＵＮＣ製）を用いて行った。抗ヒトＴＮＦ−α抗体（ａｂｃａｍ社）を５μｇ／ｍＬとなるようにＰＢＳ（−）バッファー（組成：塩化ナトリウム１３７ｍＭ，リン酸水素二ナトリウム８．１ｍＭ，塩化カリウム２．７ｍＭ，リン酸二水素カリウム１．５ｍＭ）で調整し、５０μＬずつ各ウェルにアプライした。４℃で１晩静置後、ＰＢＳ（−）バッファーで各ウェルを４００μＬ×３回で洗浄し、２０％イムノブロックを含むＰＢＳ（−）バッファー３００μＬを各ウェルにアプライした。２５℃で２時間静置した後に、ＰＢＳ（−）バッファーで各ウェルを４００μＬ×３回で洗浄し、各培養上清を５０μＬずつ各ウェルにアプライした。４℃で１時間静置した後に、ＰＢＳ（−）バッファーで各ウェルを４００μＬ×３回で洗浄し、抗ヒトＴＮＦ−α抗体（ａｂｃａｍ社）を０．５μｇ／ｍＬとなるようにＰＢＳ（−）／０．１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）で調整し、各ウェルにアプライした。２５℃で１時間静置した後に、ＰＢＳ（−）バッファーで各ウェルを４００μＬ×３回で洗浄し、Ａｎｔｉ−ＲａｂｂｉｔＩｇＧ抗体（ＨＲＰ標識）をＰＢＳ（−）／０．１％  ＢＳＡで適当量希釈し、５０μＬずつ各ウェルにアプライした。室温で１時間の静置後、ＰＢＳ（−）バッファーで各ウェルを４００μＬ×５回で洗浄し、３，３’，５，５’−テトラメチルベンヂジン（ＴＭＢ）ペルオキシダーゼ−酵素免疫測定（ＥＩＡ）−基質−キット試薬（Ｂｉｏ−ｒａｄ社製）を５０μＬずつ各ウェルにアプライした。適当な反応時間後に、０．５Ｍ  硫酸を２５μＬずつ各ウェルにアプライして反応を停止させた。最終的に４５０ｎｍで検出を行い、ＴＮＦ−α産生量を比較した。これらから得られたデータを基に算出したＴＮＦ−α産生阻害率と各化合物濃度の関係から、ＴＮＦ−αの産生を５０％阻害する濃度ＩＣ50（５０％阻害濃度：ｈａｌｆ  ｍａｘｉｍａｌ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）を算出した（表１）。
【００５５】
その結果、レスベラトロール、フェルラ酸添加時と比較して、各レスベラトロール誘導体（ＵＨＡ４００３、ＵＨＡ１１２５）添加時のＴＮＦ−α産生量が有意に抑制されていることが見いだされたことから、抗炎症剤の有効成分として顕著であることが示された。
【００５６】
【表１】
2013177340.tif 000006
【００５７】
以下、レスベラトロール誘導体含有エキス、含有エキス含んだ食品、レスベラトロール誘導体含有医薬品、レスベラトロール誘導体含有医薬部外品、レスベラトロール誘導体含有化粧品の実施例として、原料としてレスベラトロールを用いて得られるＵＨＡ４００３の配合例を記載するが、ＵＨＡ１１２５も同様に使用できることはもちろんである。
原料となるレスベラトロールとしては、葡萄の果実や種子やピーナッツの皮の抽出物、フェルラ酸としては食品添加物のフェルラ酸や米糠抽出物を用いればよいが、ＵＨＡ４００３やＵＨＡ１１２５が生成すれば良いことから、これらに限定されるものではない。
【００５８】
（実施例４：ＵＨＡ４００３含有エキスの調製）
合成吸着剤ＨＰ−２０（三菱化学社製）を充填したカラムを用い、エタノール濃度を段階的に上昇させたエタノール水溶液を通液し精製する常法により、グレープスキンエキスパウダー（マリーンバイオ株式会社製）２５０ｇから、２０ｇのレスベラトロールを得た。
得られたレスベラトロール２０ｇをエタノール４００ｍＬに溶解し、２．５％炭酸ナトリウム水溶液を４００ｍＬ加えて、レスベラトロール含有溶液（ｐＨ９．９）を得た。このレスベラトロール含有溶液をオートクレーブにて１３０℃、２０分間加熱した。次いで、１回目のオートクレーブ処理にて得られた反応溶液に、エタノール４００ｍＬと５．０％ＮａＨＣＯ3水溶液を４００ｍＬ加え、再度、オートクレーブにて１３０℃、２０分間加熱した。最終的に得られた反応溶液を減圧加熱させて乾固し、これをエタノールにより熱時還流し、次いで得られた反応混合物に含まれる不溶物をろ過により除去した後、ろ液を減圧加熱にて乾固させ、固形物を１５ｇ得た。実施例１と同様の手法で確認したところ得られた固形物中にはＵＨＡ４００３が０．９ｇ含有されていた。必要に応じてこの作業を繰り返した。
【００５９】
（実施例５：ＵＨＡ４００３を含有する食品）
実施例４で得たＵＨＡ４００３含有固形物１ｇをあらかじめ１００ｍＬのエタノールに溶解させ、これにパラチニット５００ｇ（パラチニット社製）、還元麦芽糖水飴（株式会社東和化成工業製、Ｂｘ７０）７１４ｇ（固形分５００ｇ）からなる糖液を真空釜で混合し、真空度―６００ｍｍＨｇの条件で１５５℃まで炊き上げた。これを冷却盤にあけ、約１００℃まで冷却した時点で、クエン酸１５ｇ、レモン香料１．１ｍＬ、色素１ｍＬを添加、混合後に固化してノンシュガーハードキャンディを得た。このノンシュガーハードキャンディは、菓子として食べ易いものであることはもちろん、定期的に摂取することで慢性炎症や口腔内炎症の軽減を期待した機能性食品として利用できる。
【００６０】
（実施例６：ＵＨＡ４００３を含有する医薬品）
実施例４で得たＵＨＡ４００３含有固形物をエタノールに溶解し、これを微結晶セルロースに添加して吸着させた後に、減圧乾燥させた。この吸着物を用いて常法に従い、打錠品を得た。処方は、ＵＨＡ４００３含有固形物を１０重量部、コーンスターチ２３重量部、乳糖１２重量部、カルボキシメチルセルロース８重量部、微結晶セルロース３２重量部、ポリビニルピロリドン４重量部、ステアリン酸マグネシウム３重量部、タルク８重量部の通りである。本打錠品は、炎症性サイトカインの異常産生治癒を目的とする医薬品として有効に利用できる。
【００６１】
（実施例７：ＵＨＡ４００３を含有する医薬部外品）
実施例４で得たＵＨＡ４００３含有固形物１．２ｇを１０ｍＬのエタノールに溶解し、これにタウリン２０ｇ、ビタミンＢ１硝酸塩０．１２ｇ、安息香酸ナトリウム０．６ｇ、クエン酸４ｇ及びポリビニルピロリドン１０ｇを溶解した精製水を混合した後、精製水で１０００ｍＬにメスアップした。なお、ｐＨは、希塩酸を用いて３．２に調整した。得られた溶液１０００ｍＬのうち５０ｍＬをガラス瓶に充填し、８０℃で３０分間加熱滅菌して、医薬部外品であるドリンク剤を完成させた。本ドリンク剤は、栄養補給の目的に加えて、炎症性サイトカインの異常産生を治癒することを目的とする医薬部外品として有効に利用できる。
【００６２】
（実施例８：ＵＨＡ４００３を含有する化粧品）
テトラオレイン酸ポリオキシエチレンソルビット１重量部、ポリオキシエチレンステアリルエーテル０．５重量部、親油型モノステアリン酸グリセリン１重量部、ピルビン酸０．５重量部、ステアリルアルコール０．５重量部、アボガド油１重量部、実施例４で得たＵＨＡ４００３含有固形物０．１重量部を混合し、常法に従って溶解させ、これに、乳酸ナトリウム１重量部、プロピレングリコール５重量部、カルボキシビニルポリマー０．１重量部、ごく少量の香料及び精製水８９．３重量部を加え、ホモゲナイザーにかけて乳化して、乳液を得た。本乳液は、ＵＨＡ４００３を含有することから、乾癬やアトピー性皮膚炎の皮膚疾患治療や予防効果をもつ薬用化粧品として有効に利用できる。