(57)【要約】      （修正有）【課題】血栓症、及び血栓症に関連する末梢動静脈血栓症、肺塞栓症、心筋梗塞症、冠動脈閉塞症、脳血管閉塞症、網膜動静脈血栓症をはじめとする種々の疾患の予防ないし治療に有用な血液レオロジー改善剤、および該改善剤を含有する飲食品類並びに医薬組成物の提供。【解決手段】下式で表される３，５，７，３’，４’−ペンタメトキシフラボンを有効成分として含有血液レオロジー改善剤、および該改善剤を含有する飲食品類並びに医薬組成物。2013253047.tif 000006【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
３，５，７，３’，４’−ペンタメトキシフラボンを有効成分として含有することを特徴とする血液レオロジー改善剤。
【請求項２】
請求項１記載の血液レオロジー改善剤を含有することを特徴とする飲食品類。
【請求項３】
請求項１記載の血液レオロジー改善剤を含有することを特徴とする医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血液レオロジー改善剤、並びに該血液レオロジー改善剤を含有する飲食品類及び医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、黒ウコン（Kaempferia parviflora）の薬理作用が注目されている。本出願人は、黒ウコンの抽出物や乾燥物にキサンチンオキシダーゼ阻害作用及び５α−レダクターゼ阻害作用があることを報告している（特許文献１）。
【０００３】
血栓症は、血管内に血栓が形成され循環系における血流が閉塞するヒトの病態であって、末梢動静脈血栓症、肺塞栓症、心筋梗塞症、冠動脈閉塞症、脳血管閉塞症、網膜動静脈血栓症をはじめ種々の疾患に関連し病原因子として大きな問題となっている。
従来、血栓症の治療には、微生物由来のストレプトキナーゼ（ＳＫ）や、ヒト尿から得られるウロキナーゼ（ＵＫ）等が用いられてきた。
しかし、これらは、血中での半減期が２０分以内と極めて短く、よって一時的な効果しか期待できなかった。また、静脈注射されるため、ヒト尿或いは培養細胞から、ウィルス、発熱物質等を含まない目的物を取り出す必要があるので、原料の制約という問題もあった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２０１１−２３６１３３号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本出願人は、黒ウコンの抽出物或いは乾燥物に血液レオロジー改善作用があることを見出し、さらにその有効成分である化合物を同定することに成功した。本発明は、この有効成分を日常的に摂取できる飲食品類又は医薬品類に配合して使用することにより、血液レオロジーを改善し、血栓症、及び血栓症に関連する末梢動静脈血栓症、肺塞栓症、心筋梗塞症、冠動脈閉塞症、脳血管閉塞症、網膜動静脈血栓症をはじめとする種々の疾患を予防ないし治療することを目的としてなされたものである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
請求項１に係る発明は、３，５，７，３’，４’−ペンタメトキシフラボンを有効成分として含有することを特徴とする血液レオロジー改善剤に関する。
請求項２に係る発明は、請求項１記載の血液レオロジー改善剤を含有することを特徴とする飲食品類に関する。
請求項３に係る発明は、請求項１記載の血液レオロジー改善剤を含有することを特徴とする医薬組成物に関する。
【発明の効果】
【０００７】
請求項１に係る発明によれば、３，５，７，３’，４’−ペンタメトキシフラボンは安全性の高い化合物であるので、安全に毎日摂取することができ、これにより、血液レオロジーを改善し、血栓症を予防ないし治療することができる。これにより、血栓症に関連する種々の疾患（末梢動静脈血栓症、肺塞栓症、心筋梗塞症、冠動脈閉塞症、脳血管閉塞症、網膜動静脈血栓症等）を予防ないし治療することができる。
【０００８】
請求項２又は３に係る発明によれば、これら飲食品類及び医薬組成物は、安全性が高く、毎日摂取することができるので、日常的に血液レオロジーを改善することができる。従って、血栓症並びにこれに関連する種々の疾患を予防又は治療することができる。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】５，７，３’，４’−テトラメトキシフラボンのＥＩ−ＭＳである。
【図２】５，７，４’−トリメトキシフラボンのＥＩ−ＭＳである。
【図３】３，５，７，３’，４’−ペンタメトキシフラボンのＥＩ−ＭＳである。
【図４】５−ヒドロキシ−３，７，４’−トリメトキシフラボンのＥＩ−ＭＳである。
【図５】５，７，３’，４’−テトラメトキシフラボンのＮＭＲスペクトルである。
【図６】５，７，４’−トリメトキシフラボンのＮＭＲスペクトルである。
【図７】３，５，７，３’，４’−ペンタメトキシフラボンのＮＭＲスペクトルである。
【図８】５−ヒドロキシ−３，７，４’−トリメトキシフラボンのＮＭＲスペクトルである。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
以下、本発明に係る血液レオロジー改善剤、並びに該改善剤を含有する飲食品類及び医薬組成物について説明する。
【００１１】
本発明に係る血液レオロジー改善剤は、３，５，７，３’，４’−ペンタメトキシフラボンを有効成分として含有する。
【００１２】
３，５，７，３’，４’−ペンタメトキシフラボンは、下記（化１）の構造式を有する化合物である。
【００１３】
【化１】
2013253047.tif 000002
【００１４】
３，５，７，３’，４’−ペンタメトキシフラボンは、市販のものや合成品を用いることができ、或いは黒ウコン等の天然物から抽出、単離することによって得たものを用いることができる。
【００１５】
本発明は、メトキシフラボンのうち、特に３，５，７，３’，４’−ペンタメトキシフラボンに顕著に優れた血液レオロジー改善作用があることを見出したものであって、他のメトキシフラボンよりも優れた血液レオロジー改善作用を有する。
【００１６】
３，５，７，３’，４’−ペンタメトキシフラボンは、直接、飲食品類に調製することができる。また、医薬組成物として医薬品類に調製することができる。更に、飲食品類、医薬品類の添加剤もしくは配合剤として使用してもよく、通常用いられる添加剤又は配合剤に混合して用いてもよい。
【００１７】
配合比率は飲食品類、医薬品類によって適宜変更することができるが、０．１〜１００重量％で配合することが好ましく、１〜５０重量％で配合することがより好ましい。０．１重量％未満であると、血液レオロジーを十分に改善することができず、また５０重量％を超えて配合した場合、製品の形態が限定され好ましくないからである。
【００１８】
３，５，７，３’，４’−ペンタメトキシフラボンを配合する飲食品類としては、錠菓、飴、トローチ、ガム、ヨーグルト、アイスクリーム、プリン、ゼリー、ようかん、パン、クッキー、ビスケット、スナック、クラッカー、アルコール飲料、コーヒー飲料、ジュース、果汁飲料、炭酸飲料、清涼飲料水、牛乳、乳清飲料、乳酸菌飲料等が挙げられ、これらの飲食品類に３，５，７，３’，４’−ペンタメトキシフラボンを適量含有させて提供することができる。
３，５，７，３’，４’−ペンタメトキシフラボン配合の上記飲食品類は、常法により製造することができる。
【００１９】
上記した飲食品類は、例えば、ブドウ糖、果糖、ショ糖、マルトース、ソルビトール、ステビオサイド、ルブソサイド、コーンシロップ、乳糖、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸、乳酸、Ｌ−アスコルビン酸、ｄｌ−α−トコフェノール、エリソルビン酸ナトリウム、グリセリン、プロピレングリコール、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステルアラビアガム、カラギーナン、カゼイン、ゼラチン、ペクチン、寒天、ビタミンＢ類、ニコチン酸アミド、パントテン酸カルシウム、アミノ酸類、カルシウム塩類、色素、香料、保存剤等、通常の食品原料として使用されている添加剤を適宜配合して常法により製造することができる。
【００２０】
３，５，７，３’，４’−ペンタメトキシフラボンを医薬組成物とし、その医薬組成物を配合させる医薬品としては、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤、エキス剤等の経口医薬品、軟膏、眼軟膏、ローション、クリーム、貼付剤、坐剤、点眼薬、点鼻薬、注射剤等の非経口医薬品が挙げられ、これらの医薬品類に３，５，７，３’，４’−ペンタメトキシフラボンを適量含有させて提供することができる。
３，５，７，３’，４’−ペンタメトキシフラボン配合の上記医薬品類は、常法により製造することができる。
【００２１】
上記した医薬品類には、各種添加剤を適宜配合することができる。
使用する添加剤には特に制限はなく、通常用いられているものを使用することができ、その例としてはデンプン、乳糖、白糖、マンニトール、カルボキシメチルセルロース、コーンスターチ、無機塩等の固形担体、蒸留水、生理食塩水、ブドウ糖水溶液、エタノール等のアルコール、又はプロピレングリコール、ポリエチレングリコール等の液体担体、各種の動植物油、白色ワセリン、パラフィン、ロウ類等の油性担体等が挙げられる。
【実施例】
【００２２】
以下、実施例に基づき本発明を詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
【００２３】
＜抽出及び被検体の調製＞
黒ウコン（Kaempferia parviflora）の乾燥根茎を７０％メタノールで熱時抽出後、ろ過した残渣を７０％メタノールで再度熱時抽出した。得られた抽出液から、減圧下でメタノールを留去し、乾燥して得られた抽出物を被検体に供した。尚、検体の抽出は７０％エタノール用いて同様に調整した物も同じ成分、含量を示す為、検体として用いる事が出来る。
【００２４】
＜ＬＰＳ誘発病態モデルラットを用いた血液レオロジー試験＞
Ｗｉｓｔａｒ系ラット（８週齢、ｎ＝７）に被検体（０．２％ＣＭＣ−Ｎａ溶液に懸濁）を７日間、連日経口投与した。最終日の投与（経口投与７日目或いはヘパリンの静脈内投与）から１時間後に、Escherichia coli 055:B5からＷｅｓｔｐｈａｌ法にて精製したＬＰＳ（１ｍｇ／ｋｇ、生理食塩液に溶解）をペントバルビタール麻酔下、尾静脈投与した。その４時間後にペントバルビタール麻酔下、腹部大静脈から血液９容量に対して３．８％クエン酸ナトリウム１容量の割合で採血し、直ちに全血通過時間を測定した。血液をマイクロチャンネルアレイBloody 6-5（幅４．５μｍ、長さ３０μｍ、深さ４．５μｍ、８７３６本並列）を装填したＭＣ−ＦＡＮに付し、２０ｃｍの水柱圧下で全血５０μＬの通過時間を測定した。なお、全血通過時間の測定値は、直前に測定された生理食塩水１００μＬの通過時間を用いて、血液通過時間×１４秒／生理食塩液通過時間により、生理食塩液の通過時間が１４秒の場合に換算した。
【００２５】
表１は、被検体の全血通過時間を示す。
【００２６】
【表１】
2013253047.tif 000003
【００２７】
ＬＰＳを投与したラットの全血通過時間（１８１２秒）に対し、黒ウコン抽出物２００ｍｇ／ｋｇ及び５００ｍｇ／ｋｇ投与群の全血通過時間（それぞれ１４７２、９５２秒）は短縮された。この結果から、黒ウコン抽出物によりＬＰＳによる血液レオロジーの低下が抑制されたことがわかる。
【００２８】
＜画分１〜４の溶出＞
次に、黒ウコンの抽出物の有効成分となる化合物を同定するために、以下の操作を行った。
前述の方法により得られた黒ウコン抽出物を、シリカゲル（ＭＥＲＣＫ社製）を充填したカラムに供し、ｎ−ヘキサンとアセトンの混合溶媒（混合比７：３）により溶出させ、溶出画分１〜４を得た。
【００２９】
上記画分１〜４それぞれを、さらにシリカゲルカラムクロマトグラフィーに供した。
【００３０】
シリカゲル（ＭＥＲＣＫ社製）を充填したカラムに上記画分１を供し、ｎ−ヘキサンとアセトンとｎ−プロパノールの混合溶媒（混合比４：６：１）により溶出させ、溶出画分を得た。
画分２を同様のカラムに供し、ｎ−ヘキサンとアセトンの混合溶媒（混合比６：４）により溶出させ、溶出画分を得た。
画分４を同様のカラムに供し、ｎ−ヘキサンと酢酸エチルの混合溶媒（混合比９：１〜８：２）により溶出させ、溶出画分を得た。
【００３１】
画分１から化合物Ａ（５，７，３’，４’−テトラメトキシフラボン）及び化合物Ｂ（５，７，４’−トリメトキシフラボン）を単離した。
画分２から化合物Ｃ（３，５，７，３’，４’−ペンタメトキシフラボン）を単離した。
画分４から化合物Ｄ（５−ヒドロキシ−３，７，４’−トリメトキシフラボン）を単離した。
【００３２】
尚、上記化合物Ａ〜Ｄの構造式は、ＧＣ／ＭＳ（ＥＩ／ＭＳ）及びＮＭＲにより同定した。
図１〜４はそれぞれ、化合物Ａ〜ＤのＥＩ／ＭＳである。
図５〜８はそれぞれ、化合物Ａ〜ＤのＮＭＲスペクトルである。
解析結果を下記に示す。
【００３３】
化合物Ａ
GC/MS(EI/MS) m/z 342.3
メトキシ基  δ= 3.842(3H),3.861,3.876(6H),3.893(3H)
δ= 6.286,6.292(1H d),6.475,6.481(1H d),6.866,6.887(1H d)
δ=7.204,7.228,7.234(1H t)
化合物Ｂ
GC /MS(EI/MS) m/z 312.
メトキシ基  δ=3.835(3H s),3.868(3H s),3.909,3.919(3H d)
δ=6.315,6.321(1H d),6.504,6.510(1H d),6.568(1H s),6.929,6.936,6.941,6.953,6.958,6.965(2H)
δ=7.749,7.756,7.761,7.773,7.779,7.787(2H)
化合物Ｃ
GC /MS(EI/MS) m/z 372.4
メトキシ基  δ=3.841(3H),3.865(3H),3.898(3H),3.924(6H)
δ=6.292,6.297,6.302(1H t),6.453,6.458,6.463(1H t),6.926,6.948(1H d),7.674(1H s)
化合物Ｄ
GC /MS(EI/MS) m/z 328.1
メトキシ基  δ=3.819,3.835,3.841(6H t),3.869(3H s),δ=6.313,6.318,6.327(1H t),
δ=6.403,6.409(1H 
d),6.979,6.984,6.996,7.001,7.008(2H),8.033,8.038,8.050,8.055,8.062(2H)
【００３４】
上記解析結果より、化合物Ａ＝５，７，３’，４’−テトラメトキシフラボン、化合物Ｂ＝５，７，４’−トリメトキシフラボン、化合物Ｃ＝３，５，７，３’，４’−ペンタメトキシフラボン、化合物Ｄ＝５−ヒドロキシ−３，７，４’−トリメトキシフラボンであることがわかった。
【００３５】
＜抗トロンビン試験＞
抗トロンビン試験は、フィブリノーゲン液のトロンビンによる凝固時間を指標に行った。
即ち、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ−０．０５Ｍ  トリスアセテート緩衝液（ｐＨ７．４）に溶解した０．５％フィブリノーゲン液１．８ｍＬに、被検液０．１ｍＬを加え、１分後に０．２Ｕ／ｍＬのトロンビン溶液０．１ｍＬを添加することにより凝固反応を惹起し、フィブリノーゲン液が凝固するまでの時間を測定した。
被検液として、単離した５，７，３’，４’−テトラメトキシフラボン、３，５，７，３’，４’−ペンタメトキシフラボン、５，７，４’−トリメトキシフラボン、５−ヒドロキシ−３，７，４’−トリメトキシフラボン、５％ＤＭＳＯ／ｂｕｆｆｅｒ、及びヘパリンを用いた。
結果を下記表２に示す。
【００３６】
表２の結果より、メトキシフラボンの中でも、３，５，７，３’，４’−ペンタメトキシフラボンは、コントロールや他のメトキシフラボンと比較して、フィブリノーゲン凝固時間が長く、即ち抗トロンビン活性が高いことがわかる。
【００３７】
【表２】
2013253047.tif 000004
【００３８】
＜ユーグロブリン溶解時間による線溶系活性化試験＞
予備飼育（１週間）したWistar系雄ラット（８週令、各群７匹）に３，５，７，３’、４’−ペンタメトキシフラボンを経口投与（陽性対照薬のデキストラン硫酸ナトリウム生理食塩水溶液は採血の３０分前に静脈内投与）し、１時間後にペントバルビタール麻酔（３５ｍｇ／ｋｇ、腹腔内投与）下、腹部大静脈より３．８％クエン酸ナトリウムが１／１０量になるように採血した。採血した血液を４℃、１５２０×ｇで１０分間遠心分離して得た血漿をユーグロブリン溶解時間に供した。
得られた血漿０．７ｍLに冷水９．８ｍLを加え、４℃以下で炭酸ガスを５分間、液表面に吹きつけ、生じた沈渣を４℃、１５２０×ｇで１０分間遠心分離し、ユーグロブリン画分を得た。この画分を１／１５Nリン酸緩衝液（PBS）０．７ｍLに溶解後、トロンビン溶液（１２５U/ｍL,PBS溶液）０．０４ｍLを加えて凝固させ、３７℃でインキュベートし、フェブリンの凝固塊が完全に溶解するまでの時間を測定し、ユーグロブリン溶解時間（分）とした。
結果を下記表３に示す。
【００３９】
【表３】
2013253047.tif 000005
【００４０】
表３の結果から、３，５，７，３’，４’−ペンタメトキシフラボンが優れた線溶系活性を有することがわかる。
【００４１】
以上の結果より、３，５，７，３’，４’−ペンタメトキシフラボンが、非常に優れた血液レオロジー改善作用を有することがわかる。
【産業上の利用可能性】
【００４２】
本発明に係る血液レオロジー改善剤は、血栓症、及び血栓症に関連する種々の疾患（末梢動静脈血栓症、肺塞栓症、心筋梗塞症、冠動脈閉塞症、脳血管閉塞症、網膜動静脈血栓症等）を予防ないし治療可能な飲食品類、医薬品類に好適に利用される。
【図１】
2013253047.tif 000007
【図２】
2013253047.tif 000008
【図３】
2013253047.tif 000009
【図４】
2013253047.tif 000010
【図５】
2013253047.tif 000011
【図６】
2013253047.tif 000012
【図７】
2013253047.tif 000013
【図８】
2013253047.tif 000014