(57)【要約】【課題】組織切片を位置および方向を容易にかつ正確に調節して基板に貼り付ける。【解決手段】基板の平坦面上に親水性の液体からなる親水性液層を形成する工程ＳＡ１と、親水性液層に組織切片を浮遊させる工程ＳＡ２と、親水性液層に浮遊した組織切片を基板に対して移動させて位置決めする工程ＳＡ４と、親水性液層を除去して位置決めした組織切片を平坦面に密着させる工程ＳＡ５とを含む標本作成方法を提供する。本発明によれば、親水性液層に浮遊した組織切片は基板に対して移動可能であるので、組織切片を基板に貼り付ける前に組織切片の基板に対する位置合わせおよび方向合わせを容易に行うことができる。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
基板の平坦面上に親水性の液体からなる親水性液層を形成する工程と、
前記親水性液層に組織切片を浮遊させる工程と、
前記親水性液層に浮遊した組織切片を前記基板に対して移動させて位置決めする工程と、
前記親水性液層を除去して位置決めした前記組織切片を前記平坦面に密着させる工程とを含む標本作成方法。
【請求項２】
前記位置決めする工程の前に、前記親水性の液体を他の親水性の液体に置換する工程を含む請求項１に記載の標本作成方法。
【請求項３】
前記他の親水性の液体が、前記組織切片を染色する染色液である請求項２に記載の標本作成方法。
【請求項４】
前記親水性の液体が、前記組織切片を固定する固定液である請求項１から請求項３のいずれかに記載の標本作成方法。
【請求項５】
前記浮遊させる工程の後に、前記親水性液層の上に有機溶剤からなる疎水性液層を形成する工程を含む請求項１から請求項４のいずれかに記載の標本作成方法。
【請求項６】
前記親水性液層を形成する工程が、前記親水性の液体を前記平坦面上に滴下することにより行われる請求項１から請求項５のいずれかに記載の標本作成方法。
【請求項７】
前記親水性液層を形成する工程が、前記平坦面に一端を密着して配置された筒部材内に前記親水性の液体を注入することにより行われる請求項１から請求項５のいずれかに記載の標本作成方法。
【請求項８】
前記位置決めする工程が、前記組織切片を観察手段によって拡大観察しながら行われる請求項１から請求項７のいずれかに記載の標本作成方法。
【請求項９】
前記組織切片を前記平坦面に密着させる工程が、液体を吸収する吸収部材を前記親水性液層に接触させることにより行われる請求項１から請求項８のいずれかに記載の標本作成方法。
【請求項１０】
複数の前記吸収部材を、前記親水性液層に対して該親水性液層の周方向に略均等に接触させる請求項９に記載の標本作成方法。
【請求項１１】
基板の平坦面上に形成された親水性の液体からなる親水性液層に浮遊した組織標本を拡大観察する観察手段と、
前記親水性液層を吸引して前記平坦面上から除去する吸引手段とを備える標本作成装置。
【請求項１２】
前記吸引手段が、前記親水性液層に対して該親水性液層の周方向に略均等に配置され液体を吸収する吸収部材を備える請求項１１に記載の標本作成装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、標本作成方法および標本作成装置に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
従来、組織から薄い組織切片を切り出し、切り出した組織切片をスライドガラス等の平坦な基板に貼り付けて病理標本等を作成する方法が知られている（例えば、非特許文献１参照。）。このように組織切片を基板によって支持することにより、厚さが数〜数十μｍと薄く柔らかい組織切片であっても固定や染色、観察等の操作を容易に行うことができる。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００３】
【非特許文献１】井関祥子、外１名、「免疫染色・イメージングのコツ」、株式会社羊土社、２００７年１２月１５日、ｐ．４１およびｐ．４４〜ｐ．４５
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかしながら、組織切片は形状が不安定であり容易に折り畳まれてしまうため、基板に貼り付ける位置や方向を細かく調節することが難しい。さらに、組織切片は容易に損傷してしまうため、一度基板に貼り付けた後は移動させることが難しい。したがって、組織切片の特定の領域を基板の特定の位置に合わせたり、組織構造の方向を基板に対して所定の方向に向けたりしたい場合に、位置や方向を正確に合わせることが困難であるという問題がある。
【０００５】
本発明は、上述した事情に鑑みてなされたものであって、組織切片を位置および方向を容易にかつ正確に調節して基板に貼り付けることができる標本作成方法および標本作成装置を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
上記目的を達成するため、本発明は以下の手段を提供する。
本発明は、基板の平坦面上に親水性の液体からなる親水性液層を形成する工程と、前記親水性液層に組織切片を浮遊させる工程と、前記親水性液層に浮遊した組織切片を前記基板に対して移動させて位置決めする工程と、前記親水性液層を除去して位置決めした前記組織切片を前記平坦面に密着させる工程とを含む標本作成方法を提供する。
【０００７】
本発明によれば、基板の平坦面上に形成した親水性液層に組織切片を浮遊させ、組織切片を基板に対して所望の位置および方向に移動させた後に親水性液層を除去することにより、組織切片を基板の平坦面に貼り付けて標本を作成することができることができる。
この場合に、親水性液層に浮遊した組織切片は基板に対して移動可能であるので、組織切片を基板に貼り付ける前に組織切片の基板に対する位置合わせおよび方向合わせを容易に行い、組織切片を所望の位置および方向で正確に基板に貼り付けることができる。
【０００８】
上記発明においては、前記位置決めする工程の前に、前記親水性の液体を他の親水性の液体に置換する工程を含むこととしてもよい。
このようにすることで、組織切片の位置決めに先立って他の親水性の液体により組織切片を処理することができる。
【０００９】
また、上記発明においては、前記他の親水性の液体が、前記組織切片を染色する染色液であることとしてもよい。
このようにすることで、組織切片を染色して組織切片に含まれる組織構造を可視化してから位置決めすることができる。
また、上記発明においては、前記親水性の液体が、前記組織切片を固定する固定液であることとしてもよい。
このようにすることで、作成された組織切片を迅速に固定することができる。
【００１０】
また、上記発明においては、前記浮遊させる工程の後に、前記親水性液層の上に有機溶剤からなる疎水性液層を形成する工程を含むこととしてもよい。
このようにすることで、組織切片がパラフィン包埋法により作成されている場合、パラフィンが疎水性液層に溶解することにより組織切片からパラフィンを除去することができる。
【００１１】
また、上記発明においては、前記親水性液層を形成する工程が、前記親水性の液体を前記平坦面上に滴下することにより行われることとしてもよい。
このようにすることで、親水性液層を容易に形成することができる。
【００１２】
また、上記発明においては、前記親水性液層を形成する工程が、前記平坦面に一端を密着して配置された筒部材内に前記親水性の液体を注入することにより行われることとしてもよい。
このようにすることで、基板の平坦面と筒部材の内周面とに囲まれた空間に親水性液層が形成される。これにより、基板の表面の性質に関わらず容易に親水性液層を形成することができる。また、筒部材の一端を平坦面上で摺動させることにより親水性液層に浮遊した組織切片を基板に対して容易に移動させることができる。
【００１３】
また、上記発明においては、前記位置決めする工程が、前記組織切片を観察手段によって拡大観察しながら行われることとしてもよい。
このようにすることで、組織切片の微小領域を基板に対して位置決めする場合であっても、組織切片と基板とを高い精度で位置決めすることができる。
【００１４】
また、上記発明においては、前記組織切片を前記平坦面に密着させる工程が、液体を吸収する吸収部材を前記親水性液層に接触させることにより行われることとしてもよい。
このようにすることで、親水性液層を容易にかつ十分に除去することができる。
また、上記発明においては、複数の前記吸収部材を、前記親水性液層に対して該親水性液層の周方向に略均等に接触させることとしてもよい。
このようにすることで、親水性液層が各方向に均等な勢いで吸引されるので、位置決めされた組織切片の位置を保持したまま親水性液層を除去することができる。
【００１５】
また、本発明は、基板の平坦面上に形成された親水性の液体からなる親水性液層に浮遊した組織標本を拡大観察する観察手段と、前記親水性液層を吸引して前記平坦面上から除去する吸引手段とを備える標本作成装置を提供する。
上記発明においては、前記吸引手段が、前記親水性液層に対して該親水性液層の周方向に略均等に配置され液体を吸収する吸収部材を備えることとしてもよい。
【発明の効果】
【００１６】
本発明によれば、組織切片を位置および方向を容易にかつ正確に調節して基板に貼り付けることができるという効果を奏する。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】本発明の第１の実施形態に係る標本作成方法を示すフローチャートである。
【図２】本発明の一実施形態に係る標本作成装置を示す全体構成図である。
【図３】図１の標本作成方法の（ａ）第２の工程、（ｂ）第４の工程、（ｃ）第５の工程における基板、液滴および組織切片を示す模式図と、（ｄ）基板とともに分割された組織切片を示す模式図である。
【図４】（ａ），（ｂ）は図２の標本作成装置が備える吸引手段の一例を示す図である。
【図５】図２の標本作成装置が備える吸引手段のもう１つの例を示す図である。
【図６】本発明の第２の実施形態に係る標本作成方法を示すフローチャートである。
【図７】親水性液層の形成に使用される筒部材を示す構成図である。
【図８】図６のステップにおける筒部材の内部を示す断面図である。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
以下に、本発明の第１の実施形態に係る標本作成方法について図１〜図５を参照して説明する。
本実施形態に係る標本作成方法は、凍結法により組織のブロックから切り出された組織切片の標本を作成する方法であり、図１に示されるように、固定液からなる液滴Ａを基板１の表面上に形成する第１の工程ＳＡ１と、液滴Ａの上に組織切片Ｂを浮遊させる第２の工程ＳＡ２と、固定液を染色液に置換する第３の工程ＳＡ３と、組織切片Ｂを基板１に対して位置決めする第４の工程ＳＡ４と、染色液を吸引して除去する第５の工程ＳＡ５と、組織切片Ｂを乾燥する第６の工程ＳＡ６とを含んでいる。
図２は、標本作成方法を実施する標本作成装置１０の一例を示す図である。
【００１９】
凍結法による組織切片Ｂは以下の手順で作成される。生体から採取された組織のブロックをパラホルムアルデヒド溶液等の固定液に浸漬することにより固定する。次に、固定した組織のブロックを、ティシューテックＯ．Ｃ．Ｔコンパウンド（サクラファインテックジャパン株式会社製）等の包埋材に浸漬し、冷却することにより包埋剤を凍結させる。次に、包埋剤が溶解しない低温下においてクリオスタットで組織のブロックを薄切することにより、組織切片Ｂが作成される。
【００２０】
第１の工程ＳＡ１は、ピペット等を使用して基板１上に固定液を滴下することにより行われる。これにより、基板１上に固定液の液滴Ａからなる親水性液層が形成される。固定液としては、例えば、エタノールと酢酸との混合液が使用される。基板１上に液滴Ａが安定に形成されるように、基板１の表面に適宜化学的な処理が施されていてもよい。
【００２１】
基板１としては、図３（ａ）に示されるように、平坦な両面を有し格子状の溝１ａが形成されたカバーガラスが使用される。このような基板１は、例えば、カバーガラスを伸縮性を有する粘着シート２に接着させた状態でガラス切りやダイサー等を使用して格子状の溝を形成し、粘着シート２をその表面方向に伸展させることにより溝１ａに沿ってカバーガラスを小片に分割し、粘着シート２を収縮させて溝１ａを閉じることにより作成される。
なお、本実施形態において使用される基板１は、組織切片Ｂを貼り付けるのに適した平坦面を有するものであれば特に制限はない。基板１に代えて、例えば、スライドガラスや未加工のカバーガラス等を使用してもよく、金属や樹脂等からなるものを使用してもよい。
【００２２】
第２の工程ＳＡ２は、図３（ａ）に示されるように、液滴Ａの上に組織切片Ｂを静かに載置することにより行われる。ここで、基板１をクリオスタット内に予め配置しておき、組織切片Ｂを切り出した後に迅速に液滴Ａ上に移動させることが好ましい。液滴Ａに組織切片Ｂを浮遊させた状態で基板１を所定時間静置することにより、組織切片Ｂが固定液によって後固定される。
【００２３】
第３の工程ＳＡ３は、ピペット等の吸引具や濾紙等の吸収部材によって固定液を一部を残して吸引した後に、残った液滴Ａにピペット等によって染色液を静かに供給することにより行われる。染色液としては、細胞核を染色するトルイジンブルー水溶液が使用される。このように、基板１と組織切片Ｂとの間に常に液体が存在するようにすることで、組織切片Ｂと基板１との密着を防いで組織切片Ｂを液体に浮遊した状態に維持することができる。第３の工程ＳＡ３の後に基板１を数分間静置することにより組織切片Ｂに含まれる細胞核が染色液によって染色され、細胞の分布を詳細に観察可能となる。
【００２４】
染色液に固定液が混在することが好ましくない場合には、固定液の一部を除去して洗浄液を供給する操作を数回繰り返すことにより固定液を十分に洗浄液に置換した後に、洗浄液を染色液に置換することとしてもよい。
【００２５】
第４の工程ＳＡ４は、図３（ｂ）に示されるように、組織切片Ｂの関心領域Ｘ、例えば、異常な形状の細胞核が分布する領域や細胞核の密度が異常である領域を基板１の溝２ａに対して適切な位置に移動させることにより行われる。具体的には、関心領域Ｘの面積が溝１ａで仕切られた１つの区画と略同等または１つの区画よりも小さい場合には、関心領域Ｘ全体が１つの区画内に配置されるように組織切片Ｂを位置決めする。関心領域Ｘの面積が１つの区画よりも大きい場合は、関心領域全体ができるだけ少数の区画内に納まるように位置決めする。また、関心領域Ｘが、例えば、管腔構造のように方向性のある形状を有している場合には、その方向が溝１ａの方向に沿うように組織切片Ｂをその面内で回転させる。
【００２６】
ここで、関心領域Ｘが微小である場合には、液滴Ａ’に浮遊している組織切片Ｂを観察手段４で拡大観察しながら組織切片Ｂを移動させてもよい。観察手段４としては、実体顕微鏡、マクロレンズを備えるカメラ、ルーペ等が用いられる。なお、図２において、符号５は基板１を載置するステージを示し、符号６は観察手段４によって取得される組織切片Ｂの拡大像を表示するモニタを示している。
【００２７】
組織切片Ｂを移動させる操作は、液滴Ａ’に液体を一方向から供給または吸引し、その供給または吸引による液体の流動によって行われる。または、マイクロマニピュレータによって操作される針やマイクロピペットの先端を組織切片Ｂに直接接触させて該組織切片Ｂを移動させてもよい。ここで、液滴Ａ’の量が比較的多い場合には、組織切片Ｂと基板１との位置が離れてしまうため、基板１の所望の位置に組織切片Ｂを正確に位置決めすることが難しい。このようなときは、液滴Ａ’の一部を除去してから組織切片Ｂの位置決めを行ってもよい。
【００２８】
第５の工程ＳＡ５は、標本作成装置１０が備える吸引手段３を使用して基板１上から染色液の液滴Ａ’を十分に除去することにより行われる。これにより、組織切片Ｂは、図３（ｃ）に示されるように、基板１の表面に密着させられる。
【００２９】
吸引手段３は、図４（ａ）に示されるように、液滴Ａ’を周方向に囲むように配置される環状の吸収部材３ａを備えている。吸引手段３に代えて、図４（ｂ）に示されるように、液滴Ａ’の周方向に略均等に間隔を空けて配置される複数（図示する例では２つ）の吸収部材３ｂを備えた吸引手段３’を使用してもよい。このような吸引手段３，３’によれば、吸収部材３ａ，３ｂを液滴Ａ’に接触させるだけで固定液を容易に吸引して除去することができる。また、液滴Ａ’が各方向に略均等な勢いで吸引されるので、浮遊している組織切片Ｂが吸引の勢いによって移動させられることを防ぐことができる。図中、符号３ｃ，３ｄは、吸収部材３ａ，３ｂをそれぞれ保持する保持部材である。吸収部材３ａ，３ｂは、例えば、スポンジやろ紙からなっていてもよく、膨潤性を有する乾燥ゲルからなっていてもよい。
【００３０】
また、吸引手段３”は、吸収部材３ａ，３ｂに代えてマイクロピペット３ｅを備えていてもよい。この場合も、図５に示されるように、複数（図示する例では４つ）のマイクロピペット３ｅの吸引口を液滴Ａ’の周方向に略均等な間隔で配置し、液滴Ａ’を各方向から均等に吸引するように構成されていることが好ましい。吸引手段３”は、マイクロピペット３ｅと共に、該マイクロピペット３ｅ内を吸引する吸引ポンプ（図示略）を備えていてもよい。
【００３１】
第６の工程ＳＡ６は、基板１を風乾することにより行われる。これにより、組織切片Ｂは基板１の表面に十分に堅固に密着する。組織切片Ｂを迅速に乾燥させるために、ドライヤーで冷風を組織切片Ｂに当てる等してもよい。以上の第１〜第６の工程ＳＡ１〜ＳＡ６により組織切片Ｂの標本を作成することができる。
【００３２】
このように、本実施形態によれば、染色後の組織切片Ｂが基板１に対して移動可能とされている。したがって、操作者は、染色された組織切片Ｂから関心領域Ｘの位置および方向を特定し、該関心領域Ｘが最小数の区画内におさまるように組織切片Ｂを基板１に対して容易にかつ正確に位置決めすることができるという利点がある。
【００３３】
このようにして作成された組織切片Ｂの標本は、粘着シート２が表面方向に伸展させられることにより、図３（ｄ）に示されるように、基板１とともに溝１ａに沿って複数の断片に分割される。そして、関心領域Ｘが貼り付いている基板１の小片を粘着シート２から剥離して回収することにより、組織切片Ｂから微小な関心領域Ｘを採取することができる。ここで、本実施形態によれば、関心領域Ｘと同一の小片に付着している関心領域Ｘ以外の領域の量を低減し、採取した関心領域Ｘに含まれる生体分子の解析精度を向上することができる。
【００３４】
次に、本発明の第２の実施形態に係る標本作成方法について図６〜図８を参照して説明する。本実施形態は、組織切片Ｂ’としてパラフィン包埋法により作成されたものを用いる点において第１の実施形態と異なる。
【００３５】
本実施形態に係る標本作成方法は、図６に示されるように、基板１’上に配置した筒部材７内に親水性液層Ｃを形成する第１の工程ＳＢ１と、親水性液層Ｃの上に組織切片Ｂ’を浮遊させる第２の工程ＳＢ２と、親水性液層Ｃの上に疎水性液層Ｄを形成する第３の工程ＳＢ３と、疎水性液層Ｄを除去する第４の工程ＳＢ４と、親水性液層Ｃを染色液に置換する第５の工程ＳＢ５と、組織切片Ｂ’を基板１’に対して位置決めする第６の工程ＳＢ６と、染色液を除去する第７の工程ＳＢ７と、組織切片Ｂ’を乾燥する第８の工程ＳＢ８とを含んでいる。
【００３６】
パラフィン包埋法による組織切片Ｂ’は以下の手順で作成される。生体から採取された組織のブロックをパラホルムアルデヒド溶液等の固定液に浸漬することにより固定する。次に、組織のブロックに含まれる固定液をエタノールを介して液化したパラフィンに置換した後、パラフィンを固化することにより組織をパラフィンに包埋する。次に、ミクロトームで組織のブロックを薄切することにより、組織切片Ｂ’が作成される。
【００３７】
第１の工程ＳＢ１は、図７に示されるように、筒部材７の一端を基板１’の表面に密着させて配置することにより基板１’表面と筒部材７の内周面とに囲まれた空間を筒部材７内に形成し、該空間に緩衝液等の親水性の液体を注入することにより行われる。本実施形態で使用される基板１’は、第１の実施形態における基板１であってもよく、未加工のスライドガラス等であってもよい。筒部材７は、外側から親水性液層Ｃおよび疎水性液層Ｄを観察できるように透明な材料からなる。また、筒部材７は、第２の工程ＳＢ２で使用されるキシレンやリモネン等の有機溶剤に耐性を有する材料、例えば、ガラスやメラミン樹脂、フッ素樹脂からなる。なお、筒部材７の形状は、図示されている円筒形状のものに限定されるものではなく、角筒形状等の他の形状のものでもよい。
【００３８】
符号８は、筒部材７の一端と基板１’との隙間の液密性を高めるためのパッキンである。パッキン８は、親水性液層Ｃにのみ接触するように操作すれば、キシレンやリモネン等の有機溶剤に耐性を有する必要はなく、ニトリルゴムやシリコーンゴム、クロロプレンゴム等からなっていてもよい。
【００３９】
第２の工程ＳＢ２は、筒部材７内の親水性液層Ｃの上に組織切片Ｂ’を静かに載置することにより行われる。パラフィン包埋法によって作成された組織切片Ｂ’は表面が疎水性を有するため、親水性液層Ｃの上に安定に浮遊する。
【００４０】
第３の工程ＳＢ３は、ピペット等を使用して筒部材７内に、組織切片Ｂ’に含まれているパラフィンを溶解するキシレンやリモネン等の有機溶剤を注入することにより行われる。これにより、組織切片Ｂ’は、図８に示されるように、親水性液層Ｃと疎水性液層Ｄとの界面に浮いた状態となり、疎水性液層Ｄにパラフィンが溶解することにより脱パラフィン処理が行われる。
第４の工程ＳＢ４は、筒部材７内からマイクロピペット等の吸引具によって疎水性液層Ｄを吸引することにより行われる。
【００４１】
第５の工程ＳＢ５は、第１の実施形態における第３の工程ＳＡ３と同様に、吸引具または吸収部材を使用して親水性液層Ｃを一部を残して除去した後に染色液を供給することにより行われる。
第６の工程ＳＢ６は、第１の実施形態における第４の工程ＳＡ４と同様に、必要に応じて観察手段４で組織切片Ｂ’を拡大観察しながら、組織切片Ｂ’内の関心領域（図示略）を基板１’の所望の位置に移動させることにより行われる。ここで、組織切片Ｂ’を比較的大きく移動させたいときには、筒部材７およびパッキン８を一体で基板１’上で摺動させてもよい。
【００４２】
第７の工程ＳＢ７は、マイクロピペット３ｅを備えた吸引手段３”により筒部材７内から親水性液層Ｃを十分に吸引することにより行われる。吸引手段３”は、図５に示されるように、複数のマイクロピペット３ｅを備え、これらのマイクロピペット３ｅの吸引口が親水性液層Ｃに対して周方向に略均等な間隔を空けて配置されるように構成されていることが好ましい。
第８の工程ＳＢ８は、筒部材７を基板１’から取り外した後、第１の実施形態における第６の工程ＳＡ６と同様にして行われる。以上の第１〜８の工程ＳＢ１〜ＳＢ８により組織切片Ｂ’の標本を作成することができる。
【００４３】
このように、本実施形態によれば、染色後の組織切片Ｂ’が基板１’に対して移動可能とされている。したがって、操作者は、染色された組織切片Ｂ’から関心領域の位置および方向を特定し、該関心領域を基板１’に対して所望の位置および方向に容易にかつ正確に位置決めして組織切片Ｂ’を貼り付けることができるという利点がある。
【００４４】
また、第１の実施形態と同じ基板１を使用した場合には、第３の工程ＳＢ３で使用される有機溶剤と粘着シート２との間に親水性液層Ｃが介在することにより、有機溶剤が溝１ａ内を介して粘着シート２に接触することにより粘着シート２が溶解することを防止することができる。また、基板１および組織切片Ｂ’を溝１ａに沿って分割して関心領域が付着した小片を採取したときに、関心領域と同時に採取される関心領域以外の領域の量を低減し、採取した関心領域に含まれる生体分子の解析精度を向上することができる。
【実施例】
【００４５】
次に、上述した実施形態の実施例について説明する。
本実施例においては、基板として、１０分間超音波洗浄することで親水性を付与したカバーガラス（マツナミ、１８ｍｍ角）を使用した。該カバーガラスを粘着シート（日東電工、ＵＥ−１１１ＡＪ）に貼り付け、円形のパッキン（二トリルゴム製、内径２７ｍｍ、外径３２ｍｍ、厚さ２ｍｍ）をカバーガラスを囲むように粘着シートに貼り付け、粘着シートとパッキンを２枚のアクリル板で挟み、２枚のアクリル板と粘着シートおよびパッキンとの位置を互いに固定した。パッキン側に配置されたアクリル板には、カバーガラスに対応する位置に直径約２０ｍｍの貫通孔を予め形成しておいた。
【００４６】
次に、カバーガラス上に、１００μＬの０．００５％トルイジンブルー水溶液をマイクロピペットを使用して滴下して液滴（親水性液層）を形成した。次に、凍結法で作成した組織切片をクリオスタット内においてカバーガラス上の液滴に浮遊させた。組織切片としては、ブタ結腸新鮮凍結のブロックからクリオスタット（ＨＹＲＡＸ  Ｃ５０、カールツァイス社製）で２０μｍの厚さに薄切したものを使用した。液滴に浮遊した組織切片に含まれる包埋材であるティシューテックＯ．Ｃ．Ｔ．コンパウンドは、迅速にトルイジンブルー溶液に溶解し、組織切片は液滴の液面に浮遊したままであった。
【００４７】
組織切片を液滴に浮遊させてから数分後、室温において組織切片を観察したところ、組織切片は染色されており、結腸組織の粘膜、筋層、漿膜を識別することができた。次に、マイクロピペットを使用して液滴から８０μＬ吸引することにより液滴の体積を減少させた。次に、染色されている粘膜の走行方向がカバーガラスの１辺と平行になるように、ピペットチップの先端によって組織切片を移動させた。次に、濾紙によって組織切片の周囲から染色液を吸引することにより残りの染色液を十分に除去した後、ドライヤーで室温の風を組織切片に３０分間送風することにより、組織切片を十分に乾燥させた。これにより、組織切片をカバーガラスの所望の位置および方向に密着させることができた。
【符号の説明】
【００４８】
１，１’  基板
２  粘着シート
３，３’，３”  吸引手段
３ａ，３ｂ  吸収部材
３ｃ，３ｄ  保持部材
３ｅ  マイクロピペット（吸収部材）
４  観察手段
５  ステージ
６  モニタ
７  筒部材
８  パッキン
１０  標本作成装置
Ａ，Ａ’  液滴（親水性液層）
Ｂ，Ｂ’  組織切片
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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