(57)【要約】【課題】毛髪や頭皮の損傷、かぶれが少なく、且つ染色性に優れたケラチン繊維の染色方法及びケラチン繊維用染色剤を提供する。【解決手段】酸化染料と当該酸化染料を酸化できるオキシダーゼを用いるケラチン繊維の染色方法であって、オキシダーゼの等電点が６．５より大きいことを特徴とするケラチン繊維の染色方法及びこれに用いるケラチン繊維用染色剤である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
酸化染料と当該酸化染料を酸化できるオキシダーゼを用いるケラチン繊維の染色方法であって、オキシダーゼの等電点が６．５より大きいことを特徴とするケラチン繊維の染色方法。
【請求項２】
酸化染料と当該酸化染料を酸化できるオキシダーゼを含み、当該オキシダーゼの等電点が６．５より大きいことを特徴とするケラチン繊維用染色剤。
【請求項３】
ｐＨがケラチン繊維の等電点と配合されるオキシダーゼの等電点との間の値であることを特徴とする請求項２に記載のケラチン繊維用染色剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ケラチン繊維の染色方法及びケラチン繊維用染色剤に関し、更に詳しくは、頭髪を染色した場合でも毛髪や頭皮の損傷、かぶれが少なく、且つ染色性に優れたケラチン繊維の染色方法及びケラチン繊維用染色剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来より、染毛料等のケラチン繊維用染色剤としては、パラフェニレンジアミン等のジアミン系酸化染料と過酸化水素等の酸化剤を主要成分とした酸化型ケラチン繊維用染色剤が一般的に使用されている。酸化剤としては、従来は過酸化水素がよく用いられていたが、過酸化水素はその酸化作用が非常に強力であるため、アルカリと共に使用すれば、頭髪に対して使用した場合に毛髪や頭皮を損傷してしまう。また、ジアミン系酸化染料はアレルゲンとして作用するが、頭皮が損傷しているとジアミン系酸化染料が頭皮を透過しやすくなり、重篤なかぶれを誘発する問題を生じる。
このような問題を解消するため、近年では過酸化水素に替えてマルチ銅オキシダーゼの一種であるラッカーゼを配合したケラチン繊維用染色剤が提案されている（特許文献１、２）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特表２００２−５０９０９１号公報
【特許文献２】特開２００２−４７１４４号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかしながら、従来のオキシダーゼを頭髪用染色剤の酸化剤として使用した場合、過酸化水素を使用したものと比較して染色性が劣るため、これを補うために酸化染料を大量に配合する必要が生じるが、大量に使用すれば、頭皮に損傷がない場合でもジアミン系酸化染料が頭皮に浸透してしまい、結局、かぶれの問題は十分には解消されない。
【０００５】
そこで、オキシダーゼを使用した染色剤の染色性が低い原因について鋭意研究したところ、ヒト頭髪等のケラチン繊維は等電点が３．０〜５．５程度（通常は３．７前後）であり、オキシダーゼの等電点も同程度であるが、染毛工程はこれよりも高いｐＨの範囲（６. ５〜１１．０程度）で施されるためケラチン繊維とオキシダーゼが双方ともマイナスに帯電することになり、これが染色性に悪影響を与えていると考えられる。
詳述すれば、双方がマイナスに強く帯電していれば染色工程においてオキシダーゼとケラチン繊維は互いに反発するので、オキシダーゼはケラチン繊維から離れた位置で酸化染料を酸化発色させることになり、結局、発色した酸化染料分子はケラチン繊維からは遠く離れた位置に分布すると考えられる。従って、発色した酸化染料がケラチン繊維に吸着されにくくなり、染色後に薬液を洗い流す際に発色した酸化染料分子の多くが洗い流されてしまっていると推察される。
【０００６】
本発明者らは上記課題を解決するべく鋭意研究の結果、染毛工程においてオキシダーゼのマイナスの電荷が減少すれば、好ましくはプラスに帯電していれば、オキシダーゼとケラチン繊維の間の反発力が弱くなり、好ましくはオキシダーゼがケラチン繊維に吸着され、発色した酸化染料もケラチン繊維の近傍に分布するため酸化染料がケラチン繊維に吸着されやすくなって課題が解決できるとの知見を得、本発明を完成するに至った。
即ち本発明は、上記従来技術の問題点を解消し、ｐＨが高い環境で使用してもマイナスに荷電しにくいオキシダーゼを使用することにより、頭髪用として使用した場合でも使用時に毛髪や頭皮を損傷せず、かぶれが少ないだけでなく、染毛性に優れたケラチン繊維の染色方法及びケラチン繊維用染色剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
即ち、本発明の特徴は、酸化染料と当該酸化染料を酸化できるオキシダーゼを用いるケラチン繊維の染色方法であって、オキシダーゼの等電点が６．５より大きいケラチン繊維の染色方法である。
【０００８】
本発明の他の特徴は、酸化染料と当該酸化染料を酸化できるオキシダーゼを含み、当該オキシダーゼの等電点が６．５より大きいケラチン繊維用染色剤である。
【０００９】
本発明の更に他の特徴は、ｐＨがケラチン繊維の等電点と配合されるオキシダーゼの等電点との間の値である上記のケラチン繊維用染色剤である。
【発明の効果】
【００１０】
本発明のケラチン繊維の染色方法によれば、オキシダーゼの等電点を６．５より大きくしたので、染色工程においてオキシダーゼとケラチン繊維の反発力が弱まり、又は互いに吸引し、そこで酸化染料を酸化、発色させる。このため、発色した酸化染料がケラチン繊維の近傍に分布しやすくなり、ケラチン繊維に吸着されやすくなるので、染色性は極めて良好になる。
【００１１】
本発明のケラチン繊維用染色剤によれば、オキシダーゼの等電点を６．５より大きくしたので、アルカリ条件下で染色する場合にオキシダーゼはマイナスに荷電しにくくなり、好ましくはプラスに荷電する。従ってケラチン繊維とオキシダーゼの反発力を小さくする、又は互いに吸引させることができ、オキシダーゼがケラチン繊維の近傍で作用しやすくなって、発色した酸化染料もケラチン繊維の近傍に分布しやすくなるので、染色性を向上させることができる。
【００１２】
ケラチン繊維用染色剤のｐＨをケラチン繊維との等電点とオキシダーゼの等電点の間にすれば、オキシダーゼはプラスに荷電するので、オキシダーゼがマイナスに荷電したケラチン繊維に吸着されてその表面上で酸化染料を発色させる。その結果、発色した酸化染料はケラチン繊維の表面付近に分布するため、染料がケラチン繊維に吸着されやすくなり、染色性は極めて良好になる。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明において、ケラチン繊維とは毛髪、羊毛等のケラチンを主成分とする繊維が含まれ、また、前記毛髪には頭髪の他、毛髪からなるウイッグ等も含まれる。以下の記載において、ケラチン繊維として毛髪（頭髪）を例に挙げて説明する。
本発明のケラチン繊維の染色方法は、酸化染料と当該酸化染料を酸化できるオキシダーゼを用い、オキシダーゼの等電点が６．５より大きいことを特徴とする。
本発明のケラチン繊維用染色剤は、酸化染料と当該酸化染料を酸化できるオキシダーゼを含み、当該オキシダーゼの等電点が６．５より大きいことを特徴とする。
【００１４】
本発明に用いられる酸化染料としては、当該酸化染料を酸化できるオキシダーゼが存在するものであればどのようなものでも使用できる。具体的には、パラフェニレンジアミン、５−アミノオルトクレゾール、オルトアミノフェノール、メタアミノフェノール、パラアミノフェノール、２，４−ジアミノフェノール、２，６−ジアミノピリジン、５−（２−ヒドロキシエチルアミノ）−２−メチルフェノール、Ｎ，Ｎ−ビス（β−ヒドロキシ）−パラフェニレンジアミン硫酸塩、パラニトロ−オルトフェニレンジアミン、パラニトロ−２′，４′−ジアミノアゾベンゼン硫酸ナトリウム、トルエン−２，５−ジアミン、５−アミノオルトクレゾール硫酸塩、パラアミノフェノール硫酸塩、オルトクロロ−パラフェニレンジアミン硫酸塩、４，４′−ジアミノジフェニルアミン硫酸塩、パラメチルアミノフェノール硫酸塩、パラフェニレンジアミン硫酸塩、メタフェニレンジアミン硫酸塩、トルエン−２，５−ジアミン硫酸塩、２，４−ジアミノフェノキシエタノール塩酸塩、トルエン−２，５−ジアミン塩酸塩、メタフェニレンジアミン塩酸塩、２，４−ジアミノフェノール塩酸塩、３，３′−イミノジフェノール、パラフェニレンジアミン塩酸塩、Ｎ−フェニル−パラフェニレンジアミン塩酸塩、Ｎ−フェニル−パラフェニレンジアミン酢酸塩、１，５−ジヒドロキシナフタレン、トリレン−３，４−ジアミン、パラメチルアミノフェノール、Ｎ，Ｎ′−ビス（４−アミノフェニル）−２，５−ジアミノ−１，４−キノンジイミン、オルトアミノフェノール硫酸塩、２，４−ジアミノフェノール硫酸塩、メタアミノフェノール硫酸塩等が挙げられるが、基質特異性の関係でこの中でも特にパラフェニレンジアミン、パラアミノフェノール、オルトアミノフェノール、２，４−ジアミノフェノール、トルエン−２，５−ジアミンおよびこれらの塩等が好ましい。これらは単独で又は必要に応じ２種以上組み合わせて用いられる。
【００１５】
本発明においては、染料として、インドリン化合物や、インドール化合物を用いることもできる。
インドリン化合物としては特に限定されないが、例えば、インドリン、５，６−ジヒドロキシインドリン、Ｎ−メチル−５，６−ジヒドロキシインドリン、Ｎ−エチル−５，６−ジヒドロキシインドリン、Ｎ−ブチル−５，６−ジヒドロキシインドリン、４−ヒドロキシ−５−メトキシインドリン、６−ヒドロキシ−７−メトキシインドリン、６，７−ジヒドロキシインドリン、４，５−ジヒドロキシインドリン、４−メトキシ−６−ヒドロキシインドリン、Ｎ−ヘキシル−５，６−ジヒドロキシインドリン、２−メチル−５，６−ジヒドロキシインドリン、３−メチル−５，６−ジヒドロキシインドリン、４−ヒドロキシインドリン、２，３−ジメチル−５，６−ジヒドロキシインドリン、２−メチル−５−エチル−６−ヒドロキシインドリン、２−メチル−５−ヒドロキシ−６−β−ヒドロキシエチルインドリン、４−ヒドロキシプロピルインドリン、２−ヒドロキシ−３−メトキシインドリン、６−ヒドロキシ−５−メトキシインドリン、６−ヒドロキシインドリン、５−ヒドロキシインドリン、７−ヒドロキシインドリン、７−アミノインドリン、５−アミノインドリン、４−アミノインドリン、５，６−ジヒドロキシインドリンカルボン酸、１−メチル−５，６−ジヒドロキシインドリン、これらの塩類等を挙げることができる。これらは単独で又は必要に応じ２種以上組み合わせて用いられる。
【００１６】
インドール化合物としては特に限定されないが、例えば、４，５−ジヒドロキシインドール、５，６−ジヒドロキシインドール、６，７−ジヒドロキシインドール、Ｎ−メチル−５，６−ジヒドロキシインドール、Ｎ−エチル−５，６−ジヒドロキシインドール、Ｎ−ヘキシル−５，６−ジヒドロキシインドール、２−メチル−５，６−ジヒドロキシインドール、３−メチル−５，６−ジヒドロキシインドール、４−ヒドロキシインドール、２，３−ジメチル−５，６−ジヒドロキシインドール、２−メチル−５−エチル−６−ヒドロキシインドール、２−メチル−５−ヒドロキシ−６−β−ヒドロキシエチルインドール、４−ヒドロキシプロピルインドール、２−ヒドロキシ−３−メトキシインドール、４−ヒドロキシ−５−メトキシインドール、６−ヒドロキシ−７−メトキシインドール、６−ヒドロキシ−５−メトキシインドール、６−ヒドロキシインドール、５−ヒドロキシインドール、７−ヒドロキシインドール、７−アミノインドール、５−アミノインドール、４−アミノインドール、５，６−ジヒドロキシインド−ルカルボン酸、１−メチル−５，６−ジヒドロキシインドール、およびこれらの塩等を挙げることができる。これらは単独で又は必要に応じ２種以上組み合わせて用いられる。
【００１７】
本発明において使用できるオキシダーゼとしては、いずれかの酸化染料を酸化できることが必要である。このようなオキシダーゼとしては、具体的には銅エフレックスオキシダーゼ（ＣｕｅＯ）やラッカーゼ、ビリルビンオキシダーゼ（ＢＯＤ）等のマルチ銅オキシダーゼが例示できる。本発明で使用するオキシダーゼはさらに、等電点がケラチン繊維の等電点よりも高い必要がある。なお、ケラチン繊維の等電点は３．０〜５．５程度であり、通常は３．７前後なので、オキシダーゼの等電点は３．０以上である必要があり、好ましくは３．７以上、更に好ましくは５．５以上とされる。また、通常の場合、染毛工程におけるｐＨは６．５〜１１．０なので、通常の条件で染色時にマイナスに帯電しにくく、好ましくはプラスに帯電させるには、オキシダーゼの等電点が６．５より大きい必要がある。なお、よりマイナスに帯電しにくく、あるいはよりプラスに帯電しやすくするためには等電点をより高くする方が好ましく、具体的には７．０以上、さらに７．５以上とするのが好ましい。
また、通常の染毛条件で必ずプラスに帯電するようにしてもよく、このような観点からはオキシダーゼの等電点を１１．０より大きくしてもよい。
【００１８】
ただし、オキシダーゼの等電点を染毛工程におけるｐＨ（又は染毛剤のｐＨ）より２以上大きくしても、オキシダーゼがケラチン繊維に吸着される効果はそれ以上増大せず、等電点を高くするためのコストが嵩むだけなので、それ以下とするほうが好ましい。
具体的には、通常の染毛条件で必ずプラスに帯電するようにオキシダーゼの等電点を定める場合、１３. ０以下とするのが好ましい。
同様に、通常のオキシダーゼの至適ｐＨは７．０〜７．５なので、染毛工程におけるｐＨもその程度とするのが好ましいが、このような場合のオキシダーゼの等電点は９．５以下、あるいは９．０以下とするのが現実的である。
【００１９】
染毛工程におけるｐＨは、ケラチン繊維の等電点とオキシダーゼの等電点の間が好ましい。そのようにすれば、ケラチン繊維はマイナスに帯電するとともに、オキシダーゼはプラスに帯電するので、オキシダーゼはケラチン繊維に吸着される。但し、通常のオキシダーゼはｐＨ９．０〜９．５あたりで変質・失活するので、染毛工程におけるｐＨは、前記失活するｐＨよりも低くするほうが好ましい。但し、染色時のｐＨがオキシダーゼの等電点よりも高い場合でも、オキシダーゼの等電点を高くすることにより染色時のマイナスの電荷を減少させることができるので、ケラチン繊維との反発力が減少し、染色性も若干向上する。
なお、染毛工程を上記のｐＨの範囲で行いやすくするため、ケラチン繊維用染色剤自体のｐＨをケラチン繊維の等電点とオキシダーゼの等電点の間にするのが好ましい。
【００２０】
等電点が高いオキシダーゼは、例えば、通常のオキシダーゼのカルボキシ末端側に塩基性アミノ酸残基を４残基以上、好ましくは７残基以上、塩基性アミノ酸がヒスチジンのみからなる場合は７残基以上、好ましくは１０残基以上付加することにより得られる。付加する残基はリシン、アルギニン、ヒスチジンのいずれでも良いが、最も塩基性が高いアルギニンが好ましい。なお、カルボキシ末端側に付加するアミノ酸残基の中に塩基性でないアミノ酸残基が混入してもよいが、その分塩基性アミノ酸残基の数を増やして、全体として必要な等電点が保たれるようにする。
【００２１】
等電点が高いオキシダーゼを得る他の方法としては、オキシダーゼを構成するアミノ酸残基のうち特定のものを塩基性アミノ酸に置き換える方法が例示できる。置き換え可能なアミノ酸残基としては折り畳まれて立体構造が形成されたときに表面に出るものであって、且つ塩基性アミノ酸でなく（好ましくは酸性アミノ酸）、さらに置き換えても立体構造に大きな変化がないもの（酸化染料を酸化する機能に影響が出ないもの）が選択される。
【００２２】
カルボキシ末端に塩基性アミノ酸残基を付加されたオキシダーゼや、特定のアミノ酸残基が塩基性アミノ酸に置き換えられたオキシダーゼを得る方法は特に限定されないが、例えば所望のアミノ酸配列をコードする塩基配列を発現ベクターに組み込み、適当な宿主に導入して培養し、しかる後、得られた粗酵素液を精製する定法が全て好適に採用できる。
【００２３】
等電点が高いオキシダーゼを得る更に他の方法としては、オキシダーゼを化学修飾する方法が例示できる。具体的には、オキシダーゼとジアミン化合物とを緩衝剤中で脱水剤の存在下に約０℃〜４０℃の温度で１〜３０時間反応させ、反応終了後に反応混合物を濾過して生成したジアミン修飾体を分離すればよい。
この化学修飾に用いることができるジアミン化合物としては、１, ４−ジアミノブタン、１, ６−ジアミノヘキサン、１, ８−ジアミノオクタン、１, ４−ジアミノベンゼン、ｐ−キシレンジアミン、Ｎ, Ｎ−ビス（３−アミノプロピル）メチルアミン、ビス（アミノメチル）エーテル、ビス（３−アミノプロピル）エーテル、エチレングリコールビス（３−アミノプロピル）エーテル、４, ４ '−ジアミノジフエニルエーテル、４, ４ '−チオジアニリンが例示できる。
また、緩衝剤としてはホウ酸緩衝液、リン酸緩衝液などが使用でき、脱水剤としては１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド、Ｎ−エトキシカルボニル−２−エトキシ−１, ２−ジヒドロキノリンなどが使用できる。
【００２４】
本発明のケラチン繊維の染色方法及びケラチン繊維用染色剤には、必要に応じ、酸化染料以外の染料や色素を使用することもできる。これらの色素や染料としては、タール色素、ＨＣ染料、塩基性染料、直接染料等が例示でき、これらは単独で又は必要に応じ２種以上組み合わせて用いられる。これらの色素や染料を含有させることにより、多彩な色調に染毛することが可能である。
このようなタール色素としては、昭和４１年８月３１日公布の厚生省令第３０号「医薬品等に使用することができるタール色素を定める省令」によって指定されている色素が挙げられる。また、ＨＣ染料としては、ＨＣ青２、ＨＣ橙１、ＨＣ赤１、ＨＣ赤３、ＨＣ黄２、ＨＣ黄４等が挙げられ、塩基性染料としては、塩基性青９９、塩基性茶１６、塩基性茶１７、塩基性赤５１、塩基性赤７６、塩基性黄５７等が挙げられ、直接染料としては、２−アミノ−６−クロロ−４−ニトロフェノール、３−メチルアミノ−４−ニトロフェノキシエタノール、２−アミノ−３−ニトロフェノール、４−ヒドロキシプロピルアミノ−３−ニトロフェノール等が挙げられる。これらは単独で又は必要に応じ２種以上組み合わせて用いられる。
【００２５】
本発明のケラチン繊維の染色方法及びケラチン繊維用染色剤には、本発明の効果を損なわない範囲で、通常、化粧品やケラチン繊維用染色剤に常用される各種成分を使用することができる。
例えば、界面活性剤としては、塩化ラウリルトリメチルアンモニウム、塩化ステアリルトリメチルアンモニウム等のカチオン性界面活性剤；ポリオキシエチレンセチルエーテル、ポリオキシエチレンオレイルエーテル、ポリオキシエチレンベヘニルエーテル、ポリオキシエチレンヒマシ油、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ステアリン酸ソルビタン等のノニオン性界面活性剤；セチルアルコール、セトステアリルアルコール、ステアリルアルコール、ワセリン、パラフィン、流動パラフィン、パルミチン酸セチル、パルミチン酸オクチル等の油剤；キサンタンガム、サクシノグルカン、ヒドロキシプロピルグァーガム、カチオン化グァーガム等のグァーガム類、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カチオン化セルロース等のセルロース類等の増粘剤；１，３−ＢＧ、ＰＧ、ＤＰＧ、グリセリン等の保湿剤；ＥＤＴＡ、ＥＤＴＡ−２Ｎａ、ＥＤＴＡ−４Ｎａ、ヒドロキシエタンジホスホン酸等のキレート剤：パラベン、メチルイソチアゾリノン等の防腐剤；エタノール、イソプロピルアルコール等の溶剤；香料等で、これらは必要に応じ、任意に組み合わせて適宜配合することができる。
【００２６】
本発明のケラチン繊維用染色剤は一剤式でも多剤式でもよいが、本発明の場合、染料と酵素を混合しても酸素がなければ発色しないので、嫌気的条件化で保存すれば一剤式の染色剤として特に好適である。
剤型も液状、乳液状、クリーム状、ジェル状、泡状、エアロゾル状等、任意の剤型とすることができ、容器も袋入り、瓶入り、ポンプ式容器入り、チューブ入り、噴霧缶入り等、どのようなものでも採用できる。
【実施例】
【００２７】
以下、実施例及び比較例を挙げて本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれらにより何ら制限されないことは云うまでもない。なお、以下の記載において、％は重量％を意味する。
【００２８】
実施例１
染料中間体としてパラフェニレンジアミンを含む第１剤と、オキシダーゼを含む第２剤からなる２剤式のケラチン繊維用染色剤を作成した。
表１に示すように、第１剤はポリオキシエチレン硬化ひまし油２ｇ、乳酸１ｇ、ヒドロキシエチルセルロース１ｇ、モノエタノールアミン０．９ｇ、パラフェニレンジアミン１ｇ、及び合計２５ｇになるように精製水を加えて混合したものである。なお、第１剤のｐＨは９．８である。
第２剤は、国際公開ＷＯ２００７／０６３６１４の［０１０１］にｍＣｕｅＯ（１）として記載されているオキシダーゼ（本明細書ではｒＣｕｅＯと称する）を改変し、ヒスチジンタグに代えてカルボキシ末端に６個の連続したアルギニンを付加したｍＣｕｅＯの希釈液（使用時の濃度は０．５ｕｎｉｔｓ／ｇ）である。
なお、本実施例に使用したｍＣｕｅＯは、国際公開ＷＯ２００７／０６３６１４に記載された配列番号１４の塩基配列において、ヒスチジンタグをコードする部分を６個の連続したアルギニンをコードするものに変更したＤＮＡ塩基配列を発現ベクターｐＵＣ１８に組み込み、宿主Ｅ．ｃｏｌｉ  ＢＬ２１に導入して培養し、しかる後、得られた粗酵素液を定法で精製する方法により得られたものである。得られた酵素の等電点（ｐＩ）を測定したところ８．１であった。
【００２９】
実施例２
表１に示すように、第１剤にカップラーとしてレゾルシン０．５ｇが含まれる他は実施例１と同様にしてケラチン繊維用染色剤を作成した。
【００３０】
実施例３
表１に示すように、第１剤に染料中間体としてパラアミノフェノール０．３ｇが含まれる他は実施例１と同様にしてケラチン繊維用染色剤を作成した。
【００３１】
実施例４
表１に示すように、第１剤にカップラーとしてメタアミノフェノール０．３ｇが含まれる他は実施例１と同様にしてケラチン繊維用染色剤を作成した。
【００３２】
実施例５
表１に示すように、第１剤にカップラーとして塩酸２, ４ジアミノフェノキシエタノール０．２ｇが含まれる他は実施例１と同様にしてケラチン繊維用染色剤を作成した。
【００３３】
実施例６
表１に示すように、第１剤にカップラーとしてｐＡＯＣ（パラアミノオルトクレゾール）０．３ｇが含まれる他は実施例１と同様にしてケラチン繊維用染色剤を作成した。
【００３４】
実施例７
表１に示すように、モノエタノールアミンに代えて２８％アンモニア水３ｇを用いた他は実施例６と同様にしてケラチン繊維用染色剤を作成した。
【００３５】
【表１】
2013181023.tif 000002
【００３６】
「染毛試験」
上記した実施例１〜７のケラチン繊維用染色剤を用い、ビューラックス製白髪毛の１ｇ毛束に対して染毛試験を行った。
まず、前処理として、毛束を３８℃の流水で３０秒間水洗いして、１％ＳＤＳ液で１分間もみ洗いし、再び３８℃の流水で３０秒間水洗いしてＳＤＳ液を洗い流した後、風乾した。
次に、第１剤０．５ｇ及び第２剤１．５ｇを秤量してカップに入れて刷毛で混合し、混合液を刷毛で毛束に塗布した。毛束は扇状になるように広げ、できるだけ均一に塗布できるようにした。
塗布後、室温（２６．５℃）で１５分後放置した後、毛束を裏返して混合液を刷毛で均一に広げ、さらに室温で１５分間放置した。
その後、毛束を３８℃の流水で３０秒間水洗いしてケラチン繊維用染色剤を洗い流し、１％ＳＤＳ液を塗布してコームで２０回櫛通しして泡立てた後、３８℃の流水で流しながらコームで２０回櫛通しして１％ＳＤＳ液を洗い流した。洗浄後、水分をタオルで拭き取り、乾燥させた。
乾燥後、分光測色計（コニカミノルタ製、ＣＭ−２６００ｄ）でＬａｂ値を測定するとともに、未処理の白髪毛を基準とした色差ΔＥを算出した。結果を表２に示す。
表２に示すとおり、毛束は様々な色に染め上げられ、使用者が求める所望の色に頭髪を染色可能であることがわかる。
【００３７】
【表２】
2013181023.tif 000003
【００３８】
実施例８
第１剤のｐＨが９．０になるようにモノエタノールアミンの量を変更し、第２剤における酵素の濃度を０．２５ｕｎｉｔｓ／ｇにした他は実施例１と同様にして実施例８のケラチン繊維用染色剤を作成した。
【００３９】
比較例１
第２剤の酵素として、上記ｒＣｕｅＯを改変せずにそのまま使用した他は実施例８と同様にして、比較例１のケラチン繊維用染色剤を作成した。なお、ｒＣｕｅＯの等電点（ｐＩ）は６．５であった。
【００４０】
参考例１
第１剤として、パラフェニレンジアミン（ＰＰＤ）に代えて、５，６−ジヒドロキシインドール（５，６−ＤＨＩ）０．３ｇ配合したものを用い、第２剤の酵素としてＭｙｒｏｔｈｅｃｉｕｍ  ｖｅｒｒｕｃａｒｉａ由来の野生型ＢＯＤ（本明細書においてはｗｔＢＯＤと称する）をそのまま使用した他は実施例８と同様にして参考例１のケラチン繊維用染色剤を作成した。なお、ｗｔＢＯＤの等電点（ｐＩ）は４．０であった。
【００４１】
参考例２
酵素として、Ｍｙｒｏｔｈｅｃｉｕｍ  ｖｅｒｒｕｃａｒｉａ由来の野生型ＢＯＤにおいて、折り畳まれて立体構造が形成されたときに表面に出るものであって、且つ塩基性アミノ酸でなく、さらに置き換えても立体構造に大きな変化がないもの立体構造を変化させないアミノ酸残基を４個、アルギニンに置き換えてなるｒＢＯＤを使用した他は参考例１と同様にして、参考例２のケラチン繊維用染色剤を作成した。なお、ｒＢＯＤの等電点（ｐＩ）は４．９であった。
【００４２】
上記した実施例８、比較例１、参考例１及び２のケラチン繊維用染色剤を用い、上記染色試験と同様の方法で染色試験を行った。酵素の等電点及び試験結果を表３に示す。
表３に示されるとおり、等電点が高いマルチ銅オキシダーゼを用いれば、従来の等電点が低い場合と比較して、染色性が優れていることがわかる。
【００４３】
【表３】
2013181023.tif 000004
【００４４】
なお、上記実施例、比較例、参考例において、各酵素の濃度は以下の条件で測定し、調製した。
キュベット（１．５ｍＬ  ＵＶディスポセル、Ｔｏｐ社製）中で、２００ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ５．５）０．８７５ｍＬ、各酵素（ｒＣｕｅＯ、ｍＣｕｅＯ、ｗｔＢＯＤ、ｒＢＯＤ）水溶液（０．５ｍｇ／ｍＬ）０．０２５ｍＬ、及び、各基質溶液０．１ｍＬを混合し、分光光度計（ＵＶ−２４５９、ＳＨＩＭＡＤＺＵ社製）を用いて、各測定波長での吸光度の変化量を測定した（測定波長はパラフェニレンジアミンは４７０ｎｍ、５，６−ジヒドロキシインドールは３００ｎｍ）。
そして、既に判っている目標濃度（０．５及び０．２５ｕｎｉｔｓ／ｇ）におけるｗｔＣｕｅＯ及びｗｔＢＯＤの吸光度の変化量と比較し、この吸光度の変化量と同じになるように各酵素水溶液を希釈して目標濃度の酵素液とみなした。
【産業上の利用可能性】
【００４５】
本発明のケラチン繊維の染色方法及びケラチン繊維用染色剤は、酸化染料を等電点が高いオキシダーゼで酸化するため、毛髪や頭皮の損傷、かぶれが少ないばかりでなく、ケラチン繊維とオキシダーゼの反発力が小さく、或いは逆に吸着するのでケラチン繊維の近傍に発色したオキシダーゼが分布するので染色性に優れている。