(57)【要約】【課題】美白剤などの皮膚外用剤に好適に用いることができるサルオガセ（Usnea）属地衣類抽出物の製造方法を提供する。【解決手段】サルオガセ属地衣類を、アルコール含有率が７０体積％を超えるアルコール水溶液を用いて抽出し、得られた抽出物に対して低温保存処理及び加水処理からなる群より選ばれる１種以上の処理を行う抽出物の製造方法であって、前記処理後のウスニン酸の残存率が５０％未満である、ウスニン酸低含有サルオガセ属地衣類の抽出物の製造方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
サルオガセ（Usnea）属地衣類を、アルコール含有率が７０体積％を超えるアルコール水溶液を用いて抽出し、得られた抽出物に対して低温保存処理及び加水処理からなる群より選ばれる１種以上の処理を行う抽出物の製造方法であって、前記処理後のウスニン酸の残存率が５０％未満である、ウスニン酸低含有サルオガセ属地衣類抽出物の製造方法。
【請求項２】
サルオガセ（Usnea）属地衣類を、アルコール含有率が７０体積％を超えるアルコール水溶液を用いて抽出し、得られた抽出物に対して低温保存処理及び加水処理からなる群より選ばれる１種以上の処理を行う、ジフラクタ酸高含有かつウスニン酸低含有サルオガセ属地衣類抽出物の製造方法。
【請求項３】
前記アルコール水溶液がエタノール水溶液である、請求項１又は２記載の製造方法。
【請求項４】
前記サルオガセ属地衣類がナガサルオガセ（Usnea longissima）又はヨコワサルオガセ（Usnea diffracta  Vain.）である、請求項１〜３のいずれか記載の製造方法。
【請求項５】
得られた抽出物中のウスニン酸含有量を質量基準で１とした場合、ジフラクタ酸含有量が２以上である、請求項２〜５のいずれか記載の製造方法。
【請求項６】
サルオガセ（Usnea）属地衣類を、アルコール含有率が７０体積％を超えるアルコール水溶液を用いて抽出し、得られた抽出物に対して低温保存処理及び加水処理からなる群より選ばれる１種以上の処理を行う、エンドセリン作用抑制剤の製造方法。
【請求項７】
前記アルコール水溶液がエタノール水溶液である、請求項６記載の製造方法。
【請求項８】
前記サルオガセ属地衣類がナガサルオガセ（Usnea longissima）又はヨコワサルオガセ（Usnea diffracta  Vain.）である、請求項６又は７記載の製造方法。
【請求項９】
得られたエンドセリン作用抑制剤中のウスニン酸含有量を質量基準で１とした場合、ジフラクタ酸含有量が２以上である、請求項６〜８のいずれか記載の製造方法。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか記載の製造方法により得られるサルオガセ（Usnea）属地衣類抽出物又はエンドセリン作用抑制剤を有効成分とする、美白剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、サルオガセ（Usnea）属地衣類抽出物の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
エンドセリンは、内皮細胞由来のペプチドホルモンで、受容体を通して種々の細胞や組織に作用する。例えば、血管平滑筋細胞等において細胞内カルシウム濃度上昇を引き起こすことが知られている（非特許文献１）。
近年、エンドセリンが表皮メラノサイト（メラニン細胞）に対し細胞内カルシウム濃度上昇を促し、細胞内のシグナル伝達系を介して細胞増殖を促進するとともに、メラニン合成の律速酵素であるチロシナーゼの活性を増強することが報告されている（非特許文献２参照）。また、エンドセリンは表皮角化細胞（ケラチノサイト）が産生するメラノサイト活性化因子の１つであること（非特許文献３）、紫外線誘導性色素沈着や老人性色素斑形成の重要な要因であることが報告されている（非特許文献４、５）。
このようなエンドセリンの生体作用から、エンドセリンの作用を抑制しうる物質は、メラニン生成や色素沈着等を抑制し、美白剤として有用である。
【０００３】
一方、ウメノキゴケ（Parmeliaceae）科サルオガセ属の地衣類の抽出物がメラニン生成阻害作用を有することが知られている（特許文献１〜３、並びに非特許文献６参照）。なお、特許文献１〜３には、メラニン生成阻害物質の製造方法として、地衣類を培養し、その培養物を凍結乾燥した後０℃〜１５℃の温度で溶媒抽出することが記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開平４−２８２３１９号公報
【特許文献２】特開平４−２８２３２０号公報
【特許文献３】特開平４−２８２３２１号公報
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Hirata  Y．et  al.，Biochem．Biophys．Res．Commun.，1988，vol．154，p．868-875
【非特許文献２】Yada  Y．et  al.，J．Biol．Chem.，1991，vol．266，p．18352-18357
【非特許文献３】Imokawa  G．et  al.，J．Biol．Chem.，1992，vol．267，p．24675-24680
【非特許文献４】Imokawa  G．et  al.，J．Invest．Dermatol.，1995，vol．105，p．32-37
【非特許文献５】Kadono  S．et  al.，J．Invest．Dermatol.，2001，vol．116，p．571-577
【非特許文献６】Moo-Sung  Kim  et  al.，J．Microbiology，2007，vol．45，p．578-582
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、美白剤などの皮膚外用剤に好適に用いることができるサルオガセ属地衣類抽出物又はエンドセリン作用抑制剤の製造方法の提供を課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは上記課題に鑑み、サルオガセ属地衣類抽出物からの美白成分の探求と、当該成分を高濃度に含有しうる抽出方法について鋭意検討を行った。その結果、サルオガセ属地衣類抽出物に含まれ、下記式で表されるジフラクタ酸が、エンドセリンの作用によって引き起こされるメラノサイト内のカルシウム（イオン）濃度上昇の抑制効果を有することを見出した。
【０００８】
【化１】
2013253060.tif 000002
【０００９】
さらに、本発明者らは、美白剤などの皮膚外用剤に好適に用いることができる、サルオガセ属地衣類の抽出条件について検討を行った。その結果、アルコール含有率が７０体積％を超えるアルコール水溶液を抽出溶媒として使用してサルオガセ属地衣類を抽出すると、下記式で表されるウスニン酸の含有が認められ、抽出溶媒のアルコール含有率の増加に伴い、ウスニン酸濃度も上昇することを見出した。
【００１０】
【化２】
2013253060.tif 000003
【００１１】
前記ウスニン酸は、肝毒性物質として知られている（例えば、Frankos  VH（January  2005），"NTP  nomination  for  usnic  acid  and  Usnea  barbata  herb"，National  Toxicology  Program，http://ntp.niehs.nih.gov/ntp/htdocs/Chem_Background/ExSumPdf/UsnicAcid.pdf参照）。したがって、サルオガセ属地衣類抽出物がエンドセリン抑制作用やメラニン生成阻害作用を有していたとしても、ウスニン酸の含有量も高いサルオガセ属地衣類抽出物は、安全性の観点から美白剤などの皮膚外用剤に用いることは問題である。
【００１２】
サルオガセ属地衣類は、ジフラクタ酸やウスニン酸を含有することが知られている（例えば、Phytochemistry，1987，vol．26，No．12，p．3181-3185；Bull．Kochi．Gakuen  College.，1992，vol．23，p．687(9)-697(19)参照）。
そこで、美白剤などの皮膚外用剤に好適に用いることができ、毒性を有するウスニン酸の含有量を選択的に低減した、サルオガセ属地衣類抽出物又はエンドセリン作用抑制剤が得られる製造方法について検討を行った。その結果、アルコール含有率が７０体積％を超えるアルコール水溶液を抽出溶媒として用い調製したサルオガセ属地衣類の抽出物について、低温保存処理や加水処理を行うことにより、肝毒性物質であるウスニン酸濃度が有意に低下し、美白剤などの皮膚外用剤に好適に用いることができるサルオガセ属地衣類抽出物又はエンドセリン作用抑制剤が得られるとの知見を得た。
本発明はこれらの知見に基づいて完成するに至ったものである。
【００１３】
すなわち、本発明は、サルオガセ属地衣類を、アルコール含有率が７０体積％を超えるアルコール水溶液を用いて抽出し、得られた抽出物に対して低温保存処理及び加水処理からなる群より選ばれる１種以上の処理を行う抽出物の製造方法であって、前記処理後のウスニン酸の残存率が５０％未満である、ウスニン酸低含有サルオガセ属地衣類抽出物の製造方法に関する。
また、本発明は、サルオガセ属地衣類を、アルコール含有率が７０体積％を超えるアルコール水溶液を用いて抽出し、得られた抽出物に対して低温保存処理及び加水処理からなる群より選ばれる１種以上の処理を行う、ジフラクタ酸高含有かつウスニン酸低含有サルオガセ属地衣類抽出物の製造方法に関する。
【００１４】
また、本発明は、サルオガセ属地衣類を、アルコール含有率が７０体積％を超えるアルコール水溶液を用いて抽出し、得られた抽出物に対して低温保存処理及び加水処理からなる群より選ばれる１種以上の処理を行う、エンドセリン作用抑制剤の製造方法に関する。
【００１５】
さらに、本発明は、前記製造方法により得られるサルオガセ属地衣類抽出物又はエンドセリン作用抑制剤を有効成分とする、美白剤に関する。
【発明の効果】
【００１６】
本発明の製造方法により得られるサルオガセ属地衣類抽出物及びエンドセリン作用抑制剤は、肝毒性物質であるウスニン酸の含有量が低減されている。したがって、本発明の製造方法は、美白剤などの皮膚外用剤に好適に用いることができるサルオガセ属地衣類抽出物又はエンドセリン作用抑制剤を製造することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本明細書において、特に断らない限り、本発明とは下記第１及び第２の実施態様のすべてを包含する意味である。
【００１８】
本発明の第１の実施態様は、サルオガセ属地衣類を、アルコール含有率が７０体積％を超えるアルコール水溶液を用いて抽出し、得られた抽出物に対して低温保存処理及び加水処理からなる群より選ばれる１種以上の処理（本明細書において、「ウスニン酸の選択的低減処理」ともいう）を行う抽出物の製造方法であって、前記処理後のウスニン酸の残存率が５０％未満である、ウスニン酸低含有サルオガセ属地衣類抽出物の製造方法である。当該方法により、肝毒性物質であるウスニン酸の含有量が低いサルオガセ属地衣類抽出物が得られる。
また、本発明の第２の実施態様は、サルオガセ属地衣類を、アルコール含有率が７０体積％を超えるアルコール水溶液を用いて抽出し、得られた抽出物に対して低温保存処理及び加水処理からなる群より選ばれる１種以上の処理を行う、ジフラクタ酸高含有かつウスニン酸低含有サルオガセ属地衣類抽出物又はエンドセリン作用抑制剤の製造方法である。当該方法により、エンドセリン作用抑制効果を有するジフラクタ酸を高濃度で含有し、肝毒性物質であるウスニン酸の含有量が低い、サルオガセ属地衣類抽出物又はエンドセリン作用抑制剤が得られる。
このようにして得られるサルオガセ属地衣類抽出物及びエンドセリン作用抑制剤は、美白効果などを発揮し得る医薬品、医薬部外品、化粧料等に好適に用いることができる。
【００１９】
本明細書において、「ウスニン酸低含有サルオガセ属地衣類抽出物」とは、本発明で規定する抽出溶媒を用いて抽出したサルオガセ属地衣類抽出物に含まれるウスニン酸含有量と比較して、当該抽出物に対してさらに低温保存処理及び加水処理からなる群より選ばれる１種以上の処理を行って得られるサルオガセ属地衣類抽出物中のウスニン酸の含有量の割合が低減されていることを意味する。
また、本発明の第１の実施態様における「前記処理後のウスニン酸の残存率が５０％未満である」とは、前記ウスニン酸の選択的低減処理後の抽出物中のウスニン酸含有量を、希釈分を考慮し、ウスニン酸の選択的低減処理前の含有量に換算した場合、ウスニン酸の選択的低減処理後の抽出物中のウスニン酸含有量がウスニン酸の選択的低減処理処理前の抽出物中のウスニン酸含有量の５０％未満に低減されていることを意味する。
【００２０】
本発明の第２の実施態様における「ジフラクタ酸高含有サルオガセ属地衣類抽出物」とは、同条件で抽出を行った場合、本発明で規定する抽出溶媒を用いて抽出したサルオガセ属地衣類抽出物中のジフラクタ酸含有量が、本発明で規定する抽出溶媒よりもアルコール含有率の低い抽出溶媒を用いて抽出した抽出物中のジフラクタ酸含有量よりも多いことを意味し、同一の溶媒種を用いて同条件で抽出した場合にアルコール含有率を変化させたときの抽出物中のジフラクタ濃度を比較したものである。
また、本発明の第２の実施態様において、前記サルオガセ属地衣類抽出物及びエンドセリン作用抑制剤に含まれるジフラクタ酸は塩の形態で存在してもよい。ジフラクタ酸の塩としては特に限定されないが、例えば、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩、カルシウム塩、マグネシウム塩等のアルカリ土類金属塩、トリメチルアミン、トリエチルアミン等のアルキルアミン塩及び４級アンモニウム塩、トリエタノールアミン、ジエタノールアミン、モノエタノールアミン等のアルカノールアミン塩、又はリジン、ヒスチジン、アルギニン等のアミノ酸塩などが挙げられ、好ましくは、アルカリ金属塩、アルカノールアミン塩、アミノ酸塩である。
【００２１】
本発明で用いるサルオガセ属地衣類は、ウメノキゴケ（Parmeliaceae）科の地衣類である。本発明では、天然に存在するサルオガセ属地衣類を採取して用いてもよいし、市販品を入手して用いてもよい。本発明に用いられるサルオガセ属地衣類としては特に制限はなく、ナガサルオガセ（Usnea longissima）、ヨコワサルオガセ（Usnea diffracta  Vain.）、フジサルオガセ（Usnea trichodeoides）、ニセフジサルオガセ（Usnea pseudomontis-fuji）、クシノハサルオガセ（Usnea pectinata）などが挙げられる。本発明で用いる前記サルオガセ属地衣類としては、ナガサルオガセ、ヨコワサルオガセ、フジサルオガセ、ニセフジサルオガセ及びクシノハサルオガセからなる群より選ばれる１種又は２種以上が好ましく、ナガサルオガセ及びヨコワサルオガセからなる群より選ばれる１種又は２種がより好ましく、ナガサルオガセ又はヨコワサルオガセがさらに好ましい。
本発明において、前記サルオガセ属地衣類の全ての任意の部位（全体、地衣体、仮根、シリア、臍状体（さいじょうたい）等）を用いることができ、各部位を複数組み合わせて用いてもよい。また地位培養細胞（菌細胞、藻細胞、又は両者の混在した未分化共生培養組織）を用いることもできる。本発明において、サルオガセ属地衣類を抽出するには、地衣体を用いるのが好ましい。
本発明に用いるサルオガセ属地衣類は、天然に存在するそのままの状態でもよいが、抽出効率を高めるために、乾燥、凍結乾燥、細断、粉砕などの処理を施したものを用いるのが好ましい。
【００２２】
本発明の製造方法においては、アルコール含有率が７０体積％を超えるアルコール水溶液を抽出溶媒として用いる。
本発明において抽出溶媒として用いるアルコール水溶液としては、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、ブタノール等の低級アルコール類（好ましくは、炭素数１〜４の低級アルコール類）の水溶液、1,2-ブタンジオール、1,3-ブタンジオール、1,4-ブタンジオール、2,3-ブタンジオール、エチレングリコール、プロピレングリコール、1,3-ブチレングリコール等の多価アルコール類の水溶液が挙げられる。本発明では、これらの溶媒を単独で用いても、２種以上を組み合わせて用いてもよい。本発明においては、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール等の低級アルコール類の水溶液を用いるのが好ましく、メタノール又はエタノールの水溶液を用いるのがより好ましく、エタノール水溶液がさらに好ましい。
本発明において抽出溶媒として用いるアルコール水溶液のアルコール含有率は８０体積％を超えるのが好ましく、９０体積％以上がより好ましく、９５体積％以上がさらに好ましい。
【００２３】
サルオガセ属地衣類の抽出条件については特に制限はなく、使用する抽出溶媒によって適宜設定できる。例えば、抽出温度は、０℃以上が好ましく、５℃以上がより好ましく、５０℃以下が好ましく、４０℃以下がより好ましく、２０℃以下がさらに好ましい。あるいは、０〜５０℃が好ましく、５〜４０℃がより好ましく、５〜２０℃がさらに好ましい。抽出時間は、１時間以上が好ましく、１日以上がより好ましく、２０日以下が好ましく、７日以下がより好ましい。あるいは、１時間〜２０日間が好ましく、１〜７日間がより好ましい。抽出効率を上げるため、抽出の際に攪拌を行ったり、溶媒中でホモジナイズ処理を行ってもよい。なお、抽出溶媒の使用量に特に制限はないが、抽出原料のサルオガセ属地衣類に対し質量比で１倍量以上であることが好ましく、５倍量以上であることがより好ましく、５０倍量以下であることが好ましく、３０倍量以下であることがより好ましい。あるいは、１〜５０倍量であることが好ましく、５〜３０倍量であることがより好ましい。
【００２４】
上記溶媒で抽出して得られた抽出物はそのままウスニン酸の選択的低減処理に使用してもよいが、必要に応じて更に適当な分離手段、例えばゲル濾過、クロマトグラフィー、精密蒸留等により活性の高い画分を分画してもよい。あるいは、得られた抽出物の溶媒を別の溶媒（例えば、アルコール水溶液）に置換してもよい。本発明の製造方法に用いられる溶媒抽出後の抽出物には、このようにして得られた各種抽出物、その希釈液、その濃縮液、その精製物又はそれらの乾燥末等が包含される。
【００２５】
本発明では、アルコール含有率が７０体積％を超えるアルコール水溶液を用いてサルオガセ属地衣類を抽出し、得られた抽出物を低温保存処理及び加水処理からなる群より選ばれる１種以上の処理を行う。
本発明では、前記ウスニン酸の選択的低減処理を単独で用いてもよいし、２種以上を組合わせて用いてもよく、これらの処理工程を繰返し行ってもよい。また、本発明の第１の実施態様において、サルオガセ属地衣類抽出物のウスニン酸の残存率を５０％未満とするため、前記ウスニン酸の選択的低減処理の順序、回数などを適宜設計・変更することができる。
【００２６】
ウスニン酸の選択的低減処理としての低温保存処理について説明する。
ウスニン酸は結晶性が高く、水溶液に対する溶解性が低く、低温では析出しやすい。そのため、本発明で規定する抽出溶媒を用いて抽出したサルオガセ属地衣類抽出物を低温保存すると、ウスニン酸が溶けにくくなりウスニン酸の結晶が析出する。このようにして析出したウスニン酸を常法により除去することで、サルオガセ属地衣類抽出物からのウスニン酸の選択的低減が可能となる。
保存温度としては−１０℃以上が好ましく、−５℃以上がより好ましく、５℃以下が好ましい。あるいは、−１０〜５℃が好ましく、−５〜５℃がより好ましい。また、保存時間としては１時間以上が好ましく、３時間以上がより好ましく、６時間以上がさらに好ましく、４０日以下が好ましく、１４日以下がより好ましく、７日以下がより好ましい。あるいは、１時間〜４０日間が好ましく、３時間〜１４日間がより好ましく、６時間〜７日間がさらに好ましい。
【００２７】
ウスニン酸の選択的低減処理としての加水処理について説明する。
ウスニン酸は結晶性が高く、水溶液に対する溶解性が低い。そのため、本発明で規定する抽出溶媒を用いて抽出したサルオガセ属地衣類抽出物を含水率の高い溶液中で保存すると、ウスニン酸が溶けにくくなりウスニン酸の結晶が析出する。このようにして析出したウスニン酸を常法により除去することで、サルオガセ属地衣類抽出物からのウスニン酸の選択的低減が可能となる。
サルオガセ属地衣類抽出物に対する加水量としては特に制限はなく、加水後のアルコール含有率が２５体積％以上となるように加水するのが好ましく、３０体積％以上となるように加水するのがさらに好ましく、５０体積％以下となるように加水するのが好ましく、４５体積％以下となるように加水するのがさらに好ましい。あるいは、加水後のアルコール含有率が２５〜５０体積％となるように加水するのが好ましく、３０〜４５体積％となるように加水するのがさらに好ましい。
【００２８】
本発明において、ウスニン酸の選択的低減処理により、サルオガセ属地衣類抽出物に含まれる、エンドセリン作用抑制剤、メラニン生成阻害剤、美白剤などの有効成分の含有量が低下しても、ウスニン酸の残存率が十分に低減されていればよい。例えば、本発明の第２の実施態様において、ウスニン酸の選択的低減処理によりサルオガセ属地衣類抽出物中のジフラクタ酸含有量が低下しても、ジフラクタ酸の残存率に対してウスニン酸の残存率が十分に低ければよい。
【００２９】
本発明において、前記アルコール水溶液を用いた抽出、前記加水処理、及び前記低温保存処理をこの順で行うことが好ましい。また、前記アルコール水溶液を用いた抽出、前記低温保存処理、前記加水処理、及び前記低温保存処理をこの順で行うことも好ましい。
【００３０】
本発明の製造方法により得られるサルオガセ属地衣類抽出物において、ウスニン酸に対するジフラクタ酸の含有比率に特に制限はないが、得られたサルオガセ属地衣類抽出物又はエンドセリン作用抑制剤中のウスニン酸含有量を質量基準で１とした場合、ジフラクタ酸含有量が２以上であるのが好ましく、１０以上がより好ましい。また、ウスニン酸の絶対量に特に制限はないが、ウスニン酸含有量は３００ｐｐｍ以下であることが好ましく、２００ｐｐｍ以下であることがさらに好ましい。
【００３１】
後述の実施例で示すように、本発明により、ウスニン酸の含有量を十分に低下させたサルオガセ属地衣類抽出物を得ることができる。また、本発明の第２の実施態様によれば、ジフラクタ酸の含有量が高くウスニン酸の含有量が低いサルオガセ属地衣類抽出物及びエンドセリン作用抑制剤を得ることができる。
サルオガセ属地衣類抽出物は、メラニン生成阻害作用や後述の実施例で示すエンドセリン作用抑制効果を有する。また、ジフラクタ酸もエンドセリン作用抑制効果を有する。したがって、本発明の製造方法により得られるサルオガセ属地衣類抽出物及びエンドセリン作用抑制剤はメラノサイトに対するエンドセリンの作用を抑制することでメラニン生成を抑制しうるため、エンドセリン抑制剤、メラニン生成阻害剤など、美白効果を奏する皮膚外用剤に用いることができる。なお、本明細書において「美白（作用）」とは、メラニン色素生成や色素沈着を抑え、余分なメラニンのない本来の透明な肌色に戻すこと、または皮膚の黒化若しくはシミ・ソバカス等の色素沈着を防止、抑制することを意味する。また、肝毒性物質であるウスニン酸の含有量が少ないため、前記サルオガセ属地衣類抽出物及びエンドセリン作用抑制剤は安全性が高く美白剤などの皮膚外用剤として好適に用いることができる。
【００３２】
本発明により得られるサルオガセ属地衣類抽出物は、そのままエンドセリン作用抑制剤又は美白剤として用いてもよい。また、本発明により得られるサルオガセ属地衣類抽出物と、例えば酸化チタン、炭酸カルシウム、蒸留水、乳糖、デンプン等の適当な液体または固体の賦形剤または増量剤とを混合して用いてもよい。さらには、その他のエンドセリン作用抑制剤、その他の美白剤、保湿剤、酸化防止剤、紫外線吸収剤、界面活性剤、増粘剤、色材種、油性物質、高分子化合物、防腐剤、粉体、色素、香料、乳化安定剤、pH調整剤等、通常の美白剤に用いられる成分と混合して用いてもよい。
なお、本発明の第１の実施態様により得られるサルオガセ属地衣類抽出物をエンドセリン作用抑制剤又は美白剤に用いる場合、ジフラクタ酸を有効成分とせず、他の成分を有効成分としてもよい。また、本発明の第２の実施態様により得られるサルオガセ属地衣類抽出物をエンドセリン作用抑制剤又は美白剤に用いる場合、ジフラクタ酸のみを有効成分としてもよいし、ジフラクタ酸と他の成分と組み合わせて有効成分としてもよい。
【００３３】
本発明の方法により得られるエンドセリン作用抑制剤及び本発明の美白剤は、皮膚化粧料、外用医薬品、外用医薬部外品等として皮膚等に適用することができ、その剤型も水溶液系、可溶化系、乳化系、粉末系、ゲル系、軟膏系、クリーム、水−油２層系、水−油−粉末３層系など、幅広い形態をとり得る。例えば、洗顔料、化粧水、乳液、クリーム、ローション、ジェル、エッセンス（美容液）、パック、マスク、ファンデーション、軟膏、シート状製品等の形態が挙げられる。
【００３４】
本発明の方法により得られるエンドセリン作用抑制剤及び本発明の美白剤におけるサルオガセ属地衣類抽出物の含有量に特に制限はなく、有効成分濃度に依存して適宜設定することができる。
また、本発明の方法により得られるエンドセリン作用抑制剤及び本発明の美白剤の使用量に特に制限はなく、有効成分の含有量により異なるが、例えばクリーム状、軟膏状の場合、皮膚面１ｃｍ2当たり０．１μｇ以上が好ましく、５μｇ以下が好ましい。あるいは、皮膚面１ｃｍ2当たり０．１〜５μｇが好ましい。液状製剤の場合、皮膚面１ｃｍ2当たり０．１μｇ以上が好ましく、１０μｇ以下が好ましい。あるいは、皮膚面１ｃｍ2当たり０．１〜１０μｇが好ましい。
【００３５】
上述した実施形態に関し、本発明はさらに以下の抽出物の製造方法、エンドセリン作用抑制剤、美白剤、方法及び使用を開示する。
【００３６】
＜１＞サルオガセ属地衣類を、アルコール含有率が７０体積％を超える、好ましくは８０体積％を超える、より好ましくは９０体積％以上、さらに好ましくは９５体積％以上、のアルコール水溶液を用いて抽出し、得られた抽出物に対して低温保存処理及び加水処理からなる群より選ばれる１種以上の処理を行う抽出物の製造方法であって、前記処理後のウスニン酸の残存率が５０％未満である、ウスニン酸低含有サルオガセ属地衣類抽出物の製造方法。
【００３７】
＜２＞サルオガセ属地衣類を、アルコール含有率が７０体積％を超える、好ましくは８０体積％を超える、より好ましくは９０体積％以上、さらに好ましくは９５体積％以上、のアルコール水溶液を用いて抽出し、得られた抽出物に対して低温保存処理及び加水処理からなる群より選ばれる１種以上の処理を行う、ジフラクタ酸高含有かつウスニン酸低含有サルオガセ属地衣類抽出物の製造方法。
【００３８】
＜３＞前記アルコール水溶液がエタノール水溶液である、前記＜１＞又は＜２＞項記載の製造方法。
＜４＞前記サルオガセ属地衣類がナガサルオガセ、ヨコワサルオガセ、フジサルオガセ、ニセフジサルオガセ及びクシノハサルオガセからなる群より選ばれる少なくとも１種である、前記＜１＞〜＜３＞項のいずれか記載の製造方法。
＜５＞前記サルオガセ属地衣類がナガサルオガセ又はヨコワサルオガセである、前記＜１＞〜＜４＞項のいずれか記載の製造方法。
＜６＞前記アルコール水溶液を用いた抽出、前記加水処理、及び前記低温保存処理をこの順で行う、前記＜１＞〜＜５＞項のいずれか記載の製造方法。
＜７＞前記アルコール水溶液を用いた抽出、前記低温保存処理、前記加水処理、及び前記低温保存処理をこの順で行う、前記＜１＞〜＜５＞項のいずれか記載の製造方法。
＜８＞得られた抽出物中のウスニン酸含有量を質量基準で１とした場合、ジフラクタ酸含有量が２以上、好ましくは１０以上、である、前記＜２＞〜＜７＞項のいずれか記載の製造方法。
【００３９】
＜９＞サルオガセ属地衣類を、アルコール含有率が７０体積％を超える、好ましくは８０体積％を超える、より好ましくは９０体積％以上、さらに好ましくは９５体積％以上、のアルコール水溶液を用いて抽出し、得られた抽出物に対して低温保存処理及び加水処理からなる群より選ばれる１種以上の処理を行う、エンドセリン作用抑制剤の製造方法。
【００４０】
＜１０＞前記アルコール水溶液がエタノール水溶液である、前記＜９＞項記載の製造方法。
＜１１＞前記サルオガセ属地衣類がナガサルオガセ、ヨコワサルオガセ、フジサルオガセ、ニセフジサルオガセ及びクシノハサルオガセからなる群より選ばれる少なくとも１種である、前記＜９＞又は＜１０＞項記載の製造方法。
＜１２＞前記サルオガセ属地衣類がナガサルオガセ又はヨコワサルオガセである、前記＜９＞〜＜１１＞項のいずれか記載の製造方法。
＜１３＞前記アルコール水溶液を用いた抽出、前記加水処理、及び前記低温保存処理をこの順で行う、前記＜９＞〜＜１２＞項のいずれか記載の製造方法。
＜１４＞前記アルコール水溶液を用いた抽出、前記低温保存処理、前記加水処理、及び前記低温保存処理をこの順で行う、前記＜９＞〜＜１２＞項のいずれか記載の製造方法。
＜１５＞得られたエンドセリン作用抑制剤中のウスニン酸含有量を質量基準で１とした場合、ジフラクタ酸含有量が２以上、好ましくは１０以上、である、前記＜９＞〜＜１４＞項のいずれか記載の製造方法。
【００４１】
＜１６＞前記＜１＞〜＜１５＞項のいずれか記載の製造方法により得られるサルオガセ属地衣類の抽出物又はエンドセリン作用抑制剤を有効成分とする、美白剤。
【００４２】
＜１７＞エンドセリン作用抑制剤又は美白剤としての、前記＜１＞〜＜８＞項のいずれか記載の製造方法により得られるサルオガセ属地衣類抽出物の使用。
＜１８＞エンドセリン作用抑制剤又は美白剤の製造のための、前記＜１＞〜＜８＞項のいずれか記載の製造方法により得られるサルオガセ属地衣類抽出物の使用。
＜１９＞前記＜１＞〜＜８＞項のいずれか記載の製造方法により得られるサルオガセ属地衣類抽出物を、エンドセリン作用抑制剤又は美白剤として使用する方法。
＜２０＞前記＜１＞〜＜８＞項のいずれか記載の製造方法により得られるサルオガセ属地衣類抽出物を用いる、エンドセリン作用抑制方法。
＜２１＞前記＜１＞〜＜８＞項のいずれか記載の製造方法により得られるサルオガセ属地衣類抽出物を用いる、美白方法。
＜２２＞メラノサイト内のカルシウムイオン濃度の上昇を抑制してエンドセリン作用を抑制する、前記＜１７＞〜＜２１＞項のいずれか記載の使用又は方法。
＜２３＞前記サルオガセ属地衣類抽出物を化粧料の形態で適用する、前記＜１７＞〜＜２２＞項のいずれか記載の使用又は方法。
【００４３】
＜２４＞美白剤としての、前記＜９＞〜＜１５＞項のいずれか記載の製造方法により得られるエンドセリン作用抑制剤の使用。
＜２５＞美白剤の製造のための、前記＜９＞〜＜１５＞項のいずれか記載の製造方法により得られるエンドセリン作用抑制剤の使用。
＜２６＞前記＜９＞〜＜１５＞項のいずれか記載の製造方法により得られるエンドセリン作用抑制剤を、美白剤として使用する方法。
＜２７＞前記＜９＞〜＜１５＞項のいずれか記載の製造方法により得られるエンドセリン作用抑制剤を用いる、美白方法。
＜２８＞メラノサイト内のカルシウムイオン濃度の上昇を抑制してエンドセリン作用を抑制する、前記＜２４＞〜＜２７＞項のいずれか記載の使用又は方法。
＜２９＞前記エンドセリン作用抑制剤を化粧料の形態で適用する、前記＜２４＞〜＜２８＞項のいずれか記載の使用又は方法。
【実施例】
【００４４】
以下、本発明を実施例に基づきさらに詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
【００４５】
製造例１  ジフラクタ酸の製造
ナガサルオガセ（新和物産社より購入）５０ｇと５０体積％エタノール水溶液１Ｌとを混合して２０℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物８９１ｍＬ（固形分３．１０ｇ）を得た。この抽出物中の固形分５５．３ｍｇをＨＰＬＣで分画し、ジフラクタ酸５．１０ｍｇ（収率９．２２％）を得た。
単離成分の構造解析は、ＮＭＲにより行った。単離成分のＮＭＲスペクトルデータが文献で報告されているジフラクタ酸のスペクトルデータ（Phytochemistry，1987，Vol．26，No．12，p．3181-3185参照）とほぼ一致したことから、単離された成分はジフラクタ酸であると同定した。なお、ＮＭＲによる構造解析の結果を表１に示す。
【００４６】
【表１】
2013253060.tif 000004
【００４７】
製造例２  ナガサルオガセ抽出物の製造
ナガサルオガセの地位体（新和物産社より入手）５０ｇと９５体積％エタノール溶液１Ｌとを混合して４０℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物７５９．３ｇ（蒸発残分０．４２０（ｗ／ｖ）％）を得た。
得られたナガサルオガセ抽出物８ｍＬと蒸留水１１ｍＬとを混合してエタノールの体積が４０％となるよう希釈し、加水処理後のナガサルオガセ抽出物を得た。さらに、加水処理後のナガサルオガセ抽出物を−５℃で１２日間保存後ろ過し、加水・低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物１３．４ｇ（蒸発残分０．１１４（ｗ／ｖ）％）を得た。
得られた加水・低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物は、溶媒を留去後、固形分濃度が１ｗ/ｖ％となるようＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）に溶解し評価に用いた。
【００４８】
製造例３  ヨコワサルオガセ抽出物１の調製
ヨコワサルオガセの地位体（ハイケム社より入手）５ｇと、５０体積％エタノール水溶液１００ｍＬとを混合して、４０℃で８日間抽出後濾過し、ヨコワサルオガセ抽出物１（７８．２６ｇ）を得た（蒸発残分０．５６％）。
【００４９】
製造例４  ヨコワサルオガセ抽出物２の調製
ヨコワサルオガセの地位体（ハイケム社より入手）５ｇと、８０体積％1,3-ブタンジオール水溶液１００ｍＬとを混合して、４０℃で８日間抽出後濾過し、ヨコワサルオガセ抽出物２（８７．０７ｇ）を得た（蒸発残分０．１４％）。
【００５０】
参考例  ジャーマンカミツレ抽出物の調製
ジャーマンカミツレ（和名：カミツレ、新和物産社より入手）の花部４０ｇと、５０体積％エタノール水溶液４００ｍＬとを混合して、室温で１４日間抽出後ろ過し、ジャーマンカミツレ抽出物（２２１ｍＬ）を得た（蒸発残分２．６３％）。
【００５１】
試験例  エンドセリン作用抑制効果の検証
ジフラクタ酸、ナガサルオガセ抽出物、ヨコワサルオガセ抽出物及びジャーマンカミツレ抽出物について、下記の評価系を用いてエンドセリン作用抑制効果を検証した。なお、エンドセリンはメラノサイトに作用してカルシウム濃度を上昇させ、メラニン産生を増加させることが知られており（Yada  Y．et  al.，J．Biol．Chem.，1991，vol．266，p．18352-18357；Imokawa  G．et  al.，J．Biol．Chem.，1992，vol．267，p．24675-24680など参照）、エンドセリンの当該作用を抑制する物質は美白成分として有用である。
【００５２】
正常ヒト新生児表皮由来メラノサイト（ＮＨＥＭｓ；クラボウ社製）を、蛍光検出用の９６穴プレートに３×１０4ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ（２００μＬ／ｗｅｌｌ）で播種し、５％ＣＯ2下にて３７℃で培養した。培地には、ＰＭＡ（−）の増殖用添加剤（ＨＭＧＳ）を含むＭｅｄｉｕｍ  ２５４を用いた。
３日間培養後、培養プレートからデカントで培地を除去し、細胞内Ｃａ2++測定試薬Fluo4-AMを含むアッセイバッファーに置換し、３７℃で１時間インキュベートした。次に、ＦＤＳＳ（Functional  Drug  Screening  System）機器において測定開始２０秒後に所定濃度のジフラクタ酸のエタノール溶液、ナガサルオガセ抽出物のエタノール溶液、ヨコワサルオガセ抽出物のジメチルスルホキシド溶液又はジャーマンカミツレ抽出物のエタノール溶液で１分間前処理した後、リガンドであるエンドセリン（ＥＴ−１、終濃度１００ｎＭ）を添加し、Fluo4-AMの蛍光をＥｘ．４８０ｎｍ／Ｅｍ．５４０ｎｍの測定波長で測定開始から５分後まで経時的に検出した。
コントロールにおけるFluo4-AMの蛍光増加比（Max．ratio-Min．ratio）を１００とした場合の相対値（％）で、各化合物又は抽出物における、エンドセリン刺激による細胞内カルシウム（カルシウムイオン）濃度上昇率（％）を算出し、エンドセリン作用抑制効果を評価した。なお、コントロールとして、５０体積％エタノール水溶液又はジメチルスルホキシドを添加したものを用いた。
その結果を表２に示す。
【００５３】
【表２】
2013253060.tif 000005
【００５４】
ジャーマンカミツレ抽出物は、エンドセリンの作用によるメラノサイトのＣａ濃度上昇を抑制し、メラニン産生を抑制することが知られている（例えば、Pigment  Cell  Res.，1997，vol．10，p．218-228参照）。表２から明らかなように、ジャーマンカミツレ抽出物を添加した系では、濃度依存的なカルシウム濃度上昇抑制作用が確認された。特に濃度が１ｖ／ｖ％の系では、２０％以上もカルシウム濃度上昇が抑制され、優れたエンドセリン抑制作用が確認された。
これに対して、表２から明らかなように、ジフラクタ酸、ナガサルオガセ抽出物又はヨコワサルオガセ抽出物を添加した系では、エンドセリン刺激によるメラノサイト内のカルシウム濃度上昇がに抑制された。すなわち、ジフラクタ酸、並びにナガサルオガセ及びヨコワサルオガセなどのサルオガセ属地衣類の抽出物は、公知の美白成分であるジャーマンカミツレ抽出物と同等またはそれ以上の、優れたエンドセリン抑制作用を有し、美白成分として有用であることがわかる。
【００５５】
比較例１
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと２０体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して２０℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物２０１．４９ｇ（蒸発残分０．１７２（ｗ／ｖ）％）を得た。
【００５６】
比較例２
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと３０体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して２０℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物１９９．９０ｇ（蒸発残分０．１４６（ｗ／ｖ）％）を得た。
【００５７】
比較例３
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと６０体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して２０℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物１９８．６９ｇ（蒸発残分０．２４２（ｗ／ｖ）％）を得た。
【００５８】
比較例４
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと８０体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して２０℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物１８５．６ｇ（蒸発残分０．２１６（ｗ／ｖ）％）を得た。
【００５９】
比較例５
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと９０体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して２０℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物１８３．４ｇ（蒸発残分０．１９２（ｗ／ｖ）％）を得た。
【００６０】
比較例６
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと９５体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して４０℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物１８５．０６ｇ（蒸発残分０．２６６（ｗ／ｖ）％）を得た。
【００６１】
ジフラクタ酸濃度及びウスニン酸濃度の測定
上記比較例１〜６で得られた各ナガサルオガセ抽出物中のジフラクタ酸含有量及びウスニン酸含有量を、ＨＰＬＣを用いて下記の条件で分析した。測定に用いた装置及び測定条件は下記のとおりである。
測定機器(HPLC)：Agilent  Technologies  Open  LAB  CDS  LC02-1260、オートサンプラーG1329B  1260  ALS、カラムオーブンG1316A  1260  TCC、検出器G1315D  1260  DAD  VL、ポンプG1312B  1260  Bin  pump、G1379B  1260  μ-Degasser
＜HPLC分析条件＞
流速：０．７５ｍＬ/ｍｉｎ
使用したカラム：Inertsil  ODS-3  ５μｍ(GL  Science)、3.0I.D.×１５０ｍｍ
検出波長：２５４ｎｍ
カラム温度：４０℃
移動相：
Ａ：0.1%トリフルオロ酢酸含有水溶液、Ｂ：0.1%トリフルオロ酢酸含有メタノール
０〜１０分：70%Ｂ
１０〜１５分：70％Ｂ→100%Ｂ
１５〜２０分：100％Ｂ
結果を表３に示す。
【００６２】
【表３】
2013253060.tif 000006
【００６３】
表３の結果から明らかなように、抽出溶媒としてアルコール含有率の高いアルコール水溶液を使用すれば、ジフラクタ酸含有量が十分に高いナガサルオガセの抽出物を得ることができる。しかし、その際、ウスニン酸含有量も上昇する（比較例３〜６）。また、アルコール含有率の低い抽出溶媒を用いてナガサルオガセを抽出すると、ウスニン酸含有量は低いがジフラクタ酸含有量も大きく低下してしまう（比較例１〜２）。そのため、得られる抽出物は皮膚外用剤に好適に用いることはできない。
【００６４】
比較例７
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）５０ｇと９５体積％エタノール水溶液１Ｌとを混合して２０℃で７日間抽出後ろ過し、加水・低温保存処理前のナガサルオガセ抽出物７６２．２ｇ（蒸発残分０．３０６（ｗ／ｖ）％）を得た。
【００６５】
実施例１
比較例７で得られた加水・低温保存処理前のナガサルオガセ抽出物８ｍＬと蒸留水１１ｍＬとを混合してエタノールの体積が４０％となるよう希釈し、加水処理後のナガサルオガセ抽出物を得た。
さらに、加水処理後のナガサルオガセ抽出物を−５℃で１２日間保存後ろ過し、加水・低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物１３．５ｇ（蒸発残分０．０８４（ｗ／ｖ）％）を得た。
【００６６】
加水・低温保存処理前のナガサルオガセ抽出物、加水処理後のナガサルオガセ抽出物及び加水・低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物について、前記と同様の方法によりジフラクタ酸含有量及びウスニン酸含有量を測定した。その結果を表４に示す。なお、加水処理後のナガサルオガセ抽出物に含まれるジフラクタ酸含有量及びウスニン酸含有量の理論値も併せて表４に示す。さらに、加水・低温保存処理前のナガサルオガセ抽出物に含まれるウスニン酸含有量に対するウスニン酸の残存率も表４に示す。
【００６７】
【表４】
2013253060.tif 000007
【００６８】
比較例８
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）５０ｇと９５体積％エタノール水溶液１Ｌとを混合して４０℃で７日間抽出後ろ過し、加水・低温保存処理前のナガサルオガセ抽出物７５９．３ｇ（蒸発残分０．４２０（ｗ／ｖ）％）を得た。
【００６９】
実施例２
比較例８で得られた加水・低温保存処理前のナガサルオガセ抽出物８ｍＬと蒸留水１１ｍＬとを混合してエタノールの体積が４０％となるよう希釈し、加水処理後のナガサルオガセ抽出物を得た。
さらに、加水処理後のナガサルオガセ抽出物を−５℃で１２日間保存後ろ過し、加水・低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物１３．４ｇ（蒸発残分０．１１４（ｗ／ｖ）％）を得た。
【００７０】
加水・低温保存処理前のナガサルオガセ抽出物、加水処理後のナガサルオガセ抽出物及び加水・低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物について、前記と同様の方法によりジフラクタ酸含有量及びウスニン酸含有量を測定した。その結果を表５に示す。なお、加水処理後のナガサルオガセ抽出物に含まれるジフラクタ酸含有量及びウスニン酸含有量の理論値も併せて表５に示す。さらに、加水・低温保存処理前のナガサルオガセ抽出物に含まれるウスニン酸含有量に対するウスニン酸の残存率も表５に示す。
【００７１】
【表５】
2013253060.tif 000008
【００７２】
比較例９
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと９５体積％エタノール水溶液２００ｍLとを混合して２０℃で７日間抽出後ろ過し、加水・低温保存処理前のナガサルオガセ抽出物１４９．１ｇ（蒸発残分０．１６２（ｗ／ｖ）％）を得た。
【００７３】
実施例３
比較例９で得られた加水・低温保存処理前のナガサルオガセ抽出物を−５℃で３７日間保存後、ろ過することにより低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物１４０．１ｇ（蒸発残分０．１３６（ｗ／ｖ）％）を得た。
得られた低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物１００ｍＬと蒸留水１３７．５ｍＬとを混合してエタノールの体積が４０％となるよう希釈し、加水処理後のナガサルオガセ抽出物を得た。
さらに、加水処理後のナガサルオガセ抽出物を−５℃で６日間保存後ろ過し、加水・低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物２０６．０ｇ（蒸発残分０．０６（ｗ／ｖ）％）を得た。
【００７４】
加水・低温保存処理前のナガサルオガセ抽出物、低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物、加水処理後のナガサルオガセ抽出物、及び加水・低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物について、前記と同様の方法によりジフラクタ酸含有量及びウスニン酸含有量を測定した。その結果を表６に示す。なお、加水処理後のナガサルオガセ抽出物に含まれるジフラクタ酸含有量及びウスニン酸含有量の希釈後の理論値も併せて表６に示す。さらに、加水・低温保存処理前のナガサルオガセ抽出物に含まれるウスニン酸含有量に対するウスニン酸の残存率も表６に示す。
【００７５】
【表６】
2013253060.tif 000009
【００７６】
比較例１０
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと９５体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して３０℃で７日間抽出後ろ過し、加水・低温保存処理前のナガサルオガセ抽出物１５０．８ｇ（蒸発残分０．２１８（ｗ／ｖ）％）を得た。
【００７７】
実施例４
比較例１０で得られた加水・低温保存処理前のナガサルオガセ抽出物を−５℃で３７日間保存後、ろ過することにより、低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物１３７．２ｇ（蒸発残分０．１６６（ｗ／ｖ）％）を得た。
得られた低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物１００ｍＬと蒸留水１３７．５ｍＬとを混合してエタノールの体積が４０％となるよう希釈し、加水処理後のナガサルオガセ抽出物を得た。
さらに、加水処理後のナガサルオガセ抽出物を−５℃で６日間保存後ろ過し、加水・低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物２０４．３ｇ（蒸発残分０．０５（ｗ／ｖ）％）を得た。
【００７８】
加水・低温保存処理前のナガサルオガセ抽出物、低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物、加水処理後のナガサルオガセ抽出物、及び加水・低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物について、前記と同様の方法によりジフラクタ酸含有量及びウスニン酸含有量を測定した。その結果を表７に示す。なお、加水処理後のナガサルオガセ抽出物に含まれるジフラクタ酸含有量及びウスニン酸含有量の理論値も併せて表７に示す。さらに、加水・低温保存処理前のナガサルオガセ抽出物に含まれるウスニン酸含有量に対するウスニン酸の残存率も表７に示す。
【００７９】
【表７】
2013253060.tif 000010
【００８０】
比較例１１
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと９５体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して４０℃で７日間抽出後ろ過し、加水・低温保存処理前のナガサルオガセ抽出物１４９．４ｇ（蒸発残分０．２６６（ｗ／ｖ）％）を得た。
【００８１】
実施例５
比較例１１で得られた加水・低温保存処理前のナガサルオガセ抽出物を−５℃で３３日間保存後、ろ過することにより、低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物１３９．７ｇ（蒸発残分０．１９６（ｗ／ｖ）％）を得た。
得られた低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物１００ｍＬと蒸留水１３７．５ｍＬとを混合してエタノールの体積が４０％となるよう希釈し、加水処理後のナガサルオガセ抽出物を得た。
さらに、加水処理後のナガサルオガセ抽出物を−５℃で３日間保存後ろ過し、加水・低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物２０５．７ｇ（蒸発残分０．０６（ｗ／ｖ）％）を得た。
【００８２】
加水・低温保存処理前のナガサルオガセ抽出物、低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物、加水処理後のナガサルオガセ抽出物、及び加水・低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物について、前記と同様の方法によりジフラクタ酸含有量及びウスニン酸含有量を測定した。その結果を表８に示す。なお、加水処理後のナガサルオガセ抽出物に含まれるジフラクタ酸含有量及びウスニン酸含有量の理論値も併せて表８に示す。さらに、加水・低温保存処理前のナガサルオガセ抽出物に含まれるウスニン酸含有量に対するウスニン酸の残存率も表８に示す。
【００８３】
【表８】
2013253060.tif 000011
【００８４】
比較例１２
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと９５体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して２０℃で３日間抽出後ろ過し、加水・低温保存処理前のナガサルオガセ抽出物１４６．１４ｇ（蒸発残分０．２６６（ｗ／ｖ）％）を得た。
【００８５】
実施例６
比較例１２で得られた加水・低温保存処理前のナガサルオガセ抽出物１３９．６２ｇを−５℃で３日間保存後、ろ過することにより、低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物１３３．６１ｇ（蒸発残分０．２４８（ｗ／ｖ）％）を得た。
得られた低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物１００ｍＬと蒸留水１３７．５ｍＬとを混合してエタノールの体積が４０％となるよう希釈し、加水処理後のナガサルオガセ抽出物を得た。
さらに、加水処理後のナガサルオガセ抽出物を−５℃で３日間保存後ろ過し、加水・低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物２０１．５８ｇ（蒸発残分０．０９（ｗ／ｖ）％）を得た。
【００８６】
加水・低温保存処理前のナガサルオガセ抽出物、低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物、加水処理後のナガサルオガセ抽出物、及び加水・低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物について、前記と同様の方法によりジフラクタ酸含有量及びウスニン酸含有量を測定した。その結果を表９に示す。なお、加水処理後のナガサルオガセ抽出物に含まれるジフラクタ酸含有量及びウスニン酸含有量の理論値も併せて表９に示す。さらに、加水・低温保存処理前のナガサルオガセ抽出物に含まれるウスニン酸含有量に対するウスニン酸の残存率も表９に示す。
【００８７】
【表９】
2013253060.tif 000012
【００８８】
比較例１３
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと９５体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して４０℃で７日間抽出後ろ過し、加水・低温保存処理前のナガサルオガセ抽出物１４３．５２ｇ（蒸発残分０．４１０（ｗ／ｖ）％）を得た。
【００８９】
実施例７
比較例１３で得られた加水・低温保存処理前のナガサルオガセ抽出物１４１．５０ｇを−５℃で２日間保存後、ろ過することにより、低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物１３２．３１ｇ（蒸発残分０．３５８（ｗ／ｖ）％）を得た。
得られた低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物１００ｍＬと蒸留水１３７．５ｍＬとを混合してエタノールの体積が４０％となるよう希釈し、加水処理後のナガサルオガセ抽出物を得た。
さらに、加水処理後のナガサルオガセ抽出物を−５℃で３日間保存後ろ過し、加水・低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物１９７．０ｇ（蒸発残分０．１０４（ｗ／ｖ）％）を得た。
【００９０】
加水・低温保存処理前のナガサルオガセ抽出物、低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物、加水処理後のナガサルオガセ抽出物、及び加水・低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物について、前記と同様の方法によりジフラクタ酸含有量及びウスニン酸含有量を測定した。その結果を表１０に示す。なお、加水処理後のナガサルオガセ抽出物に含まれるジフラクタ酸含有量及びウスニン酸含有量の理論値も併せて表１０に示す。さらに、加水・低温保存処理前のナガサルオガセ抽出物に含まれるウスニン酸含有量に対するウスニン酸の残存率も表１０に示す。
【００９１】
【表１０】
2013253060.tif 000013
【００９２】
表４〜１０の結果から明らかなように、アルコール含有率が７０体積％を超えるアルコール水溶液を抽出溶媒として用いてサルオガセ属地衣類を抽出物しただけでは、抽出物中のウスニン酸含有量は非常に高い。これに対して、ウスニン酸の選択的低減処理を行なうことにより、ウスニン酸含有量を選択的に低減することができる。さらに、サルオガセ属地衣類抽出物に含まれるジフラクタ酸の含有量をある程度保持したままウスニン酸含有量を選択的に低減することができ、ウスニン酸の選択的低減処理前の抽出物と比較した場合、ジフラクタ酸濃度がウスニン酸濃度よりもさらに高くなった抽出物が得られる。
【００９３】
比較例１４
ヨコワサルオガセ（ハイケム社より入手）１０ｇと１０体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して２０℃で５日間抽出後ろ過し、ヨコワサルオガセ抽出物１７０．２４ｇ（蒸発残分０．３４８（ｗ／ｖ）％）を得た。
【００９４】
比較例１５
ヨコワサルオガセ（ハイケム社より入手）１０ｇと５０体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して４０℃で４日間抽出後ろ過し、ヨコワサルオガセ抽出物１６２．１８ｇ（蒸発残分０．３４８（ｗ／ｖ）％）を得た。
【００９５】
比較例１６
ヨコワサルオガセ（ハイケム社より入手）１０ｇと５０体積％1,3-ブタンジオール水溶液２００ｍＬとを混合して２０℃で５日間抽出後ろ過し、ヨコワサルオガセ抽出物１６６．６１ｇ（蒸発残分０．２５０（ｗ／ｖ）％）を得た。
【００９６】
比較例１７
ヨコワサルオガセ（ハイケム社より入手）１０ｇと９５体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して２０℃で４日間抽出後ろ過し、ヨコワサルオガセ抽出物１４６．４５ｇ（蒸発残分０．４０２（ｗ／ｖ）％）を得た。
【００９７】
比較例１８
ヨコワサルオガセ（ハイケム社より入手）１０ｇと９５体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して４０℃で４日間抽出後ろ過し、ヨコワサルオガセ抽出物１４３．９５ｇ（蒸発残分０．２８８（ｗ／ｖ）％）を得た。
【００９８】
ジフラクタ酸濃度及びウスニン酸濃度の測定
上記比較例１４〜１８で得られた各ヨコワサルオガセ抽出物中のジフラクタ酸含有量及びウスニン酸含有量を、前記と同様の方法により測定した。その結果を表１１に示す。
【００９９】
【表１１】
2013253060.tif 000014
【０１００】
表１１の結果から明らかなように、抽出溶媒としてアルコール含有率の高いアルコール水溶液を使用すれば、ジフラクタ酸含有量が十分に高いヨコワサルオガセの抽出物を得ることができる。しかし、その際、ウスニン酸含有量も上昇する（比較例１５、１７及び１８）。また、アルコール含有率の低い抽出溶媒を用いてナガサルオガセを抽出すると、ウスニン酸含有量は低いがジフラクタ酸含有量も大きく低下してしまう（比較例１４及び１６）。そのため、得られる抽出物は皮膚外用剤に好適に用いることはできない。
【０１０１】
実施例８
比較例１７で得られた抽出物（加水・低温保存処理前のヨコワサルオガセ抽出物）８１．０５ｇを−５℃で３日間保存後、ろ過することにより、低温保存処理後のヨコワサルオガセ抽出物７５．０２ｇ（蒸発残分０．２７２（ｗ／ｖ）％）を得た。
得られた低温保存処理後のヨコワサルオガセ抽出物５０ｍＬと蒸留水６８．７５ｍＬとを混合してエタノールの体積が４０％となるよう希釈し、加水処理後のヨコワサルオガセ抽出物を得た。
さらに、加水処理後のヨコワサルオガセ抽出物を−５℃で４日間保存後ろ過し、加水・低温保存処理後のヨコワサルオガセ抽出物９８．９７ｇ（蒸発残分０．０８（ｗ／ｖ）％）を得た。
【０１０２】
加水・低温保存処理前のヨコワサルオガセ抽出物、低温保存処理後のヨコワサルオガセ抽出物、加水処理後のヨコワサルオガセ抽出物、及び加水・低温保存処理後のヨコワサルオガセ抽出物について、前記と同様の方法によりジフラクタ酸含有量及びウスニン酸含有量を測定した。その結果を表１２に示す。なお、加水処理後のヨコワサルオガセ抽出物に含まれるジフラクタ酸含有量及びウスニン酸含有量の理論値も併せて表１２に示す。さらに、加水・低温保存処理前のヨコワサルオガセ抽出物に含まれるウスニン酸含有量に対するウスニン酸の残存率も表１２に示す。
【０１０３】
【表１２】
2013253060.tif 000015
【０１０４】
比較例１９
ヨコワサルオガセ（ハイケム社より入手）１０ｇと９５体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して２０℃で４日間抽出後ろ過し、加水・低温保存処理前のヨコワサルオガセ抽出物１４６．４５ｇ（蒸発残分０．４０２（ｗ／ｖ）％）を得た。
【０１０５】
実施例９
比較例１９で得られた加水・低温保存処理前のヨコワサルオガセ抽出物５０ｍＬと蒸留水６８．７５ｍＬとを混合してエタノールの体積が４０％となるよう希釈し、加水処理後のヨコワサルオガセ抽出物を得た。
さらに、加水処理後のヨコワサルオガセ抽出物を−５℃で２日間保存後ろ過し、加水・低温保存処理後のヨコワサルオガセ抽出物１０１．１５ｇ（蒸発残分０．０６２（ｗ／ｖ）％）を得た。
【０１０６】
加水・低温保存処理前のヨコワサルオガセ抽出物、加水処理後のヨコワサルオガセ抽出物、及び加水・低温保存処理後のヨコワサルオガセ抽出物について、前記と同様の方法によりジフラクタ酸含有量及びウスニン酸含有量を測定した。その結果を表１３に示す。なお、加水処理後のヨコワサルオガセ抽出物に含まれるジフラクタ酸含有量及びウスニン酸含有量の理論値も併せて表１３に示す。さらに、加水・低温保存処理前のヨコワサルオガセ抽出物に含まれるウスニン酸含有量に対するウスニン酸の残存率も表１３に示す。
【０１０７】
【表１３】
2013253060.tif 000016
【０１０８】
比較例２０
ヨコワサルオガセ（ハイケム社より入手）１０ｇと９５体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して４０℃で４日間抽出後ろ過し、加水・低温保存処理前のヨコワサルオガセ抽出物１４３．９５ｇ（蒸発残分０．２８８（ｗ／ｖ）％）を得た。
【０１０９】
実施例１０
比較例２０で得られた加水・低温保存処理前のヨコワサルオガセ抽出物５０ｍＬと蒸留水６８．７５ｍＬとを混合してエタノールの体積が４０％となるよう希釈し、加水処理後のヨコワサルオガセ抽出物を得た。
さらに、加水処理後のヨコワサルオガセ抽出物を−５℃で２日間保存後ろ過し、加水・低温保存処理後のヨコワサルオガセ抽出物１００．１５ｇ（蒸発残分０．１０２（ｗ／ｖ）％）を得た。
【０１１０】
加水・低温保存処理前のヨコワサルオガセ抽出物、加水処理後のヨコワサルオガセ抽出物、及び加水・低温保存処理後のヨコワサルオガセ抽出物について、前記と同様の方法によりジフラクタ酸含有量及びウスニン酸含有量を測定した。その結果を表１４に示す。なお、加水処理後のヨコワサルオガセ抽出物に含まれるジフラクタ酸含有量及びウスニン酸含有量の理論値も併せて表１４に示す。さらに、加水・低温保存処理前のヨコワサルオガセ抽出物に含まれるウスニン酸含有量に対するウスニン酸の残存率も表１４に示す。
【０１１１】
【表１４】
2013253060.tif 000017
【０１１２】
表１２〜１４の結果から明らかなように、アルコール含有率が７０体積％を超えるアルコール水溶液を抽出溶媒として用いてサルオガセ属地衣類を抽出物しただけでは、抽出物中のウスニン酸含有量は非常に高い。これに対して、ウスニン酸の選択的低減処理を行なうことにより、ウスニン酸含有量を選択的に低減することができる。さらに、サルオガセ属地衣類抽出物に含まれるジフラクタ酸の含有量をある程度保持したままウスニン酸含有量を選択的に低減することができ、ウスニン酸の選択的低減処理前の抽出物と比較した場合、ジフラクタ酸濃度がウスニン酸濃度よりもさらに高くなった抽出物が得られる。
【０１１３】
（処方例）
前記実施例で得られた抽出物を有効成分とする、下記に示す組成のローション、乳液、美容液及びクリームの形態の美白剤を常法により各々調製出来る。
【０１１４】
１．ローションの調製
（組成）                                                        （配合：質量％）
1,3-ブチレングリコール                                              ８．０
グリセリン                                                          ５．０
エタノール                                                          ３．０
実施例１で得られたナガサルオガセ抽出物（加水・低温保存処理後品）    ３．０
カミツレエキス                                                      ３．０
キキョウエキス                                                      １．０
チョウジエキス                                                      １．０
キサンタンガム                                                      ０．１
ヒアルロン酸                                                        ０．１
リン酸二ナトリウム                                                  ０．１
リン酸二水素ナトリウム                                              ０．１
アスコルビン酸2-グルコシド                                          ２．０
精製水                                                              残部
香料                                                                適量
防腐剤                                                              適量
【０１１５】
２．乳液の調製
（組成）                                                        （配合：質量％）
実施例２で得られたナガサルオガセ抽出物（加水・低温保存処理後品）    １．０
カミツレエキス                                                      １．０
キキョウエキス                                                      １．０
アルテアエキス                                                      ２．０
スクワラン                                                          ３．０
オリブ油                                                            ３．０
グリセリン                                                          ５．０
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（エチレンオキサイドの付加モル数：40）１．０
カルボキシビニルポリマー                                            ０．２
水酸化カリウム                                                      ０．１
キサンタンガム                                                      ０．２
エデト酸二ナトリウム                                                ０．０２
精製水                                                              残部
防腐剤                                                              適量
【０１１６】
３．美容液の調製
（組成）                                                        （配合：質量％）
実施例３で得られたナガサルオガセ抽出物（低温保存処理後品）          １．０
カミツレエキス                                                      １．０
キキョウエキス                                                      １．０
チョウジエキス                                                      １．０
カルボキシビニルポリマー                                            ０．２
アクリル酸・メタクリル酸アルキル共重合体                            ０．２
水酸化カリウム                                                      ０．２
キサンタンガム                                                      ０．１
ヒアルロン酸                                                        ０．２
クエン酸ナトリウム                                                  ０．１５
クエン酸                                                            ０．０３
グリセリン                                                          １０．０
1,3-ブチレングリコール                                              ５．０
エデト酸二ナトリウム                                                ０．０５
精製水                                                              残部
防腐剤                                                              適量
香料                                                                適量
【０１１７】
４．美容液の調製
（組成）                                                        （配合：質量％）
実施例５で得られた加水・低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物        ３．０
カミツレエキス                                                      １．０
チョウジエキス                                                      １．０
キキョウエキス                                                      １．０
キサンタンガム                                                      ０．２
カルボキシメチルセルロース                                          ０．２
カルボキシビニルポリマー                                            ０．２
水酸化カリウム                                                      ０．１
クエン酸                                                            ０．０３
クエン酸ナトリウム                                                  ０．１５
グリセリン                                                          ５．０
プロピレングリコール                                                ３．０
ポリエチレングリコール（分子量１５００）                            １．０
モノステアリン酸ポリエチレングリコール                              ０．５
精製水                                                              残部
防腐剤                                                              適量
【０１１８】
５．クリームの調製
（組成）                                                        （配合：質量％）
実施例１で得られたナガサルオガセ抽出物（加水処理後品）              ３．０
カミツレエキス                                                      ２．０
キキョウエキス                                                      ２．０
チョウジエキス                                                      ２．０
メチルポリシロキサン                                                ３．０
スクワラン                                                          ２．０
ジカプリン酸ネオペンチルグリコール                                  ３．０
ステアリルアルコール                                                １．５
セタノール                                                          １．０
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（エチレンオキサイドの付加モル数：60）０．５
アクリル酸・メタクリル酸アルキル共重合体                            ０．３
水酸化カリウム                                                      ０．１５
キサンタンガム                                                      ０．１
エデト酸二ナトリウム                                                ０．０５
精製水                                                              残部
防腐剤                                                              適量
香料                                                                適量