(57)【要約】【課題】日常的に使用でき、紫外線曝露によって促進される血管新生をともなう皮膚状態の悪化、特にシワ形成を抑制するための組成物を開発する。【解決手段】本発明は、Ｄ−メチオニンと、その誘導体及び／又は塩とからなる群から選択される１種類又は２種類以上の化合物を含む、紫外線曝露によって促進される血管新生を抑制するための組成物を提供する。前記紫外線はＵＶ−Ｂの場合がある。前記血管新生は、トロンボスポンジン（ＴＨＢＳ）の発現増大、及び／又は、血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）の発現低下によって抑制される場合がある。前記組成物は、皮膚外用剤と、化粧品と、シワ抑制剤と、皮膚疾患用医薬品と、食品との場合がある。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｄ−メチオニンと、その誘導体及び／又は塩とからなる群から選択される１種類又は２種類以上の化合物を含むことを特徴とする、紫外線曝露によって促進される血管新生を抑制するための組成物。
【請求項２】
前記紫外線はＵＶ−Ｂであることを特徴とする、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記血管新生は、トロンボスポンジン（ＴＨＢＳ）の発現増大、及び／又は、血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）の発現低下によって抑制されることを特徴とする、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項４】
皮膚外用剤として用いられることを特徴とする、請求項１ないし３のいずれか１つに記載の組成物。
【請求項５】
化粧品であることを特徴とする、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
シワ抑制剤であることを特徴とする、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
皮膚疾患用医薬品として用いられることを特徴とする、請求項４に記載の組成物。
【請求項８】
前記皮膚疾患は、皮膚がん、及び、酒さからなる群から選択される少なくとも１つの疾患であることを特徴とする、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
食品として用いられることを特徴とする、請求項１ないし３のいずれか１つに記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｄ−メチオニンと、その誘導体及び／又は塩とからなる群から選択される１種類又は２種類以上の化合物を含む、紫外線曝露によって促進される血管新生を抑制するための組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
紫外線は、約３２０ｎｍより長い長波長域紫外線（ＵＶ−Ａ）と、約３２０〜約２８０ｎｍの中波長域紫外線（ＵＶ−Ｂ）と、約２８０ｎｍより短い短波長域紫外線（ＵＶ−Ｃ）とに分類される。このうちＵＶ−Ｃはオゾン層に吸収されるので地上に達する太陽光には含まれない。ＵＶ−Ａはオゾン層に吸収されず、ＵＶ−Ｂはオゾン層に部分的にしか吸収されないため、両方とも地上に達する太陽光に含まれる。しかし、皮膚傷害の主な原因はＵＶ−Ｂであると考えられている。ＵＶ−Ｂは、ＵＶ−Ａと比較して１０００分の１の光量で皮膚傷害を起こすためである。
【０００３】
これまで、紫外線がマウスに長期間照射されると、シワ形成が促進することが知られている。また、紫外線曝露によって促進される血管新生を抑制することによって、皮膚状態の悪化、特に、シワ形成を抑制できることが報告されている（非特許文献１）。なお、紫外線曝露及び血管新生が関与する疾患には、皮膚がん、酒さ等が挙げられる（特許文献１）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特表第２０１１−５１４８９１号公開公報
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｙａｎｏ，Ｋ．ら、Ｊ  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．、１１８：８００（２００２）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
従来、皮膚状態の悪化、特に、シワ形成の抑制及び／又は改善のために、コラーゲン産生促進組成物、ヒアルロン酸産生促進組成物、マトリクス分解酵素（ＭＭＰ）産生抑制組成物等が用いられてきた。しかし、これらの組成物は、血管新生を抑制することができないため、紫外線曝露によって促進される血管新生をともなう皮膚状態の悪化を抑制できない。そこで、日常的に使用でき、紫外線曝露によって促進される血管新生をともなう皮膚状態の悪化、特にシワ形成を抑制するための組成物を開発する必要がある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、Ｄ−メチオニンと、その誘導体及び／又は塩とからなる群から選択される１種類又は２種類以上の化合物を含む、紫外線曝露によって促進される血管新生を抑制するための組成物を提供する。
【０００８】
本発明の組成物において、前記紫外線はＵＶ−Ｂの場合がある。
【０００９】
本発明の組成物において、前記血管新生は、トロンボスポンジン（ＴＨＢＳ）の発現増大、及び／又は、血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）の発現低下によって抑制される場合がある。前記ＴＨＢＳはＴＨＢＳ１の場合がある。前記ＶＥＧＦはＶＥＧＦ−Ａの場合がある。
【００１０】
本発明の組成物は皮膚外用剤として用いられる場合がある。
【００１１】
本発明の組成物において、前記皮膚外用剤は化粧品の場合がある。
【００１２】
本発明の組成物において、前記皮膚外用剤はシワ抑制剤の場合がある。
【００１３】
本発明の組成物において、前記皮膚外用剤は皮膚疾患用医薬品として用いられる場合がある。
【００１４】
本発明の組成物において、前記皮膚疾患は、皮膚がん、酒さ等からなる群から選択される少なくとも１つの疾患の場合がある。
【００１５】
本発明の組成物は食品として用いられる場合がある。
【００１６】
本発明は、Ｄ−メチオニンと、その誘導体及び／又は塩とからなる群から選択される１種類又は２種類以上の化合物を含む、紫外線曝露によって促進される血管新生を抑制するための組成物を投与するステップを含む、紫外線曝露によって促進される血管新生をともなう皮膚疾患を治療及び／又は予防する方法を提供する。前記皮膚疾患は、皮膚がん、酒さ等からなる群から選択される少なくとも１つの疾患の場合がある。前記方法において、Ｄ−メチオニンと、その誘導体及び／又は塩とからなる群から選択される１種類又は２種類以上の化合物を含む、紫外線曝露によって促進される血管新生を抑制するための組成物は、皮膚外用剤と、皮膚疾患用治療剤及び皮膚疾患用予防剤を含む皮膚疾患用医薬品との場合がある。前記紫外線はＵＶ−Ｂの場合がある。前記血管新生は、トロンボスポンジン（ＴＨＢＳ）の発現増大、及び／又は、血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）の発現低下によって抑制される場合がある。前記ＴＨＢＳはＴＨＢＳ１の場合がある。前記ＶＥＧＦはＶＥＧＦ−Ａの場合がある。
【００１７】
本発明は、Ｄ−メチオニンと、その誘導体及び／又は塩とからなる群から選択される１種類又は２種類以上の化合物を含む、紫外線曝露によって促進される血管新生を抑制するための組成物を投与するステップを含む、紫外線曝露によって促進される血管新生をともなう皮膚状態の悪化を防止するための美容方法を提供する。前記美容方法において、Ｄ−メチオニンと、その誘導体及び／又は塩とからなる群から選択される１種類又は２種類以上の化合物を含む、紫外線曝露によって促進される血管新生を抑制するための組成物は、化粧品、シワ抑制剤を含む皮膚外用剤と、食品との場合がある。前記紫外線はＵＶ−Ｂの場合がある。前記血管新生は、トロンボスポンジン（ＴＨＢＳ）の発現増大、及び／又は、血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）の発現低下によって抑制される場合がある。前記ＴＨＢＳはＴＨＢＳ１の場合がある。前記ＶＥＧＦはＶＥＧＦ−Ａの場合がある。
【００１８】
本明細書において「皮膚状態の悪化」とは、シワを含む皮膚のトラブルの発生及び／又は亢進をいう。
【００１９】
本明細書において「シワ」とは、肌のトラブルの一種であって、皮表の線状陥没が作り出す紋様が、特定の領域に集中して、かつ、大きさ及び配列の不規則性をもって存在する状態を指す。
【００２０】
本明細書において「血管新生」とは、新たな血管が既存の血管から形成される現象をいう。
【００２１】
本明細書において「血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）」とは、血管内皮細胞の増殖、前記内皮細胞からの生理活性物質産生の誘導等を行う増殖因子であって、脈管形成及び血管新生のアクチベーターとして作用する。ＶＥＧＦファミリーには、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ｂ、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ−Ｄ、ＶＥＧＦ−Ｅ、ＰＬＧＦ−１及びＰＬＧＦ−２が含まれる。また、ＶＥＧＦ−Ａ及びＶＥＧＦ−Ｂには、アイソフォームが存在する。
【００２２】
本明細書において「トロンボスポンジン（ＴＨＢＳ）」とは、細胞外マトリックスと会合し、さまざまな生物学的機能を発揮する分泌タンパク質をいう。トロンボスポンジン（ＴＨＢＳ）ファミリーには、ＴＨＢＳ１、ＴＨＢＳ２、ＴＨＢＳ３、ＴＨＢＳ４が含まれる。前記ＴＨＢＳ１及びＴＨＢＳ２は、脈管形成及び血管新生のインヒビターとしての機能を有し、正常な皮膚では、主に真皮−表皮間の基底膜領域に存在する。
【００２３】
本発明において、ＴＨＢＳ及びＶＥＧＦの発現量は、角化細胞におけるＴＨＢＳ及びＶＥＧＦのｍＲＮＡの量の他、角化細胞におけるＴＨＢＳ及びＶＥＧＦの転写活性を含む。前記角化細胞におけるＴＨＢＳ及びＶＥＧＦのｍＲＮＡの量は、ＲＴ−ＰＣＲ法、ノザンブロット法その他の固相雑種形成法を含むがこれらに限定されない方法によって測定される。前記角化細胞におけるＴＨＢＳ及びＶＥＧＦの転写活性は、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）、β−ガラクトシダーゼ（ＬａｃＺ）、ルシフェラーゼ（Ｌｕｃ）、緑蛍光タンパク質（ＧＦＰ）その他のレポータータンパク質が、ＴＨＢＳ及びＶＥＧＦの遺伝子発現制御領域によって駆動されるコンストラクトを角化細胞に一時的又は永続的に導入することによって測定されるのが典型的である。
【００２４】
本発明において、ＴＨＢＳ及びＶＥＧＦの発現量は、測定するときの細胞の数又は全タンパク量によって標準化された絶対値として決定される場合がある。あるいは、同じ数の細胞が、複数の同一容器、例えば、ウェル、ディッシュ、フラスコ等に播種される場合には、被験処理条件における培養後の容器１つあたりのＴＨＢＳ及びＶＥＧＦの発現量は、被験処理前の前記角化細胞のＴＨＢＳ及びＶＥＧＦの発現量を基準とする相対値で表される場合がある。さらに、本発明において、ＴＨＢＳ及びＶＥＧＦの発現量は、同じ数の細胞が、複数の同一容器、例えば、ウェル、ディッシュ、フラスコ等に播種される場合には、同一条件で処理された容器１つあたりの対照遺伝子の発現量で標準化される場合がある。前記対照遺伝子は、いわゆるハウスキーピング遺伝子を含むが、これらに限らず、例えば遺伝子発現アレイチップ等の手段で見つけることができる。本発明において、ハウスキーピング遺伝子は、２８ＳｒＲＮＡ、１８ＳｒＲＮＡ、グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ（Ｇ６ＰＤ）、グリセルアルデヒド３−リン酸デヒドロゲナーゼ（Ｇ３ＰＤＨ）、β−アクチン等を含むが、これらに限定されない。
【００２５】
血管新生は、当業者に周知な方法で定量された血管面積に基づいて評価される場合がある。前記血管面積が定量される場合には、免疫組織化学染色が市販の抗体を用いて行われる場合がある。前記抗体は血管を特異的に認識する抗体であればよく、抗汎内皮細胞抗原モノクローナル抗体（カタログ番号５５０５６３、日本ベクトン・ディッキンソン株式会社）を含むが、これに限定されない。前記血管面積は、商業的に利用可能なサービス、ソフトフェア等を用いて定量される場合がある。例えば、前記サービスは、血管新生キット画像解析サービス（倉敷紡績株式会社）の場合がある。前記ソフトフェアは、血管新生キット定量ソフトウェア（倉敷紡績株式会社）、画像解析ソフトフェア（ＩＰＬａｂソフトフェア  バージョン４．０、株式会社  ソリューション  システムズ）等の場合がある。前記血管新生は、被験処理前の血管面積と、被験処理後の血管面積とを比較するか、被験処理後の各実験群の血管面積それぞれを比較するかによって評価される場合がある。前記血管新生は、血管面積以外の他の指標を用いて評価されてもかまわないし、血管面積と他の指標とを組み合わせて評価されてもかまわない。
【００２６】
ＴＨＢＳ及びＶＥＧＦの発現量の統計処理と、血管面積の統計処理とは、当業者に周知な方法を用いて行うことができる。
【００２７】
本明細書においてＤ−メチオニンの「塩」とは、Ｄ−メチオニンの紫外線曝露によって促進される血管新生を抑制する効果を損なわないことを条件として、金属塩、アミン塩等を含むいずれかの塩をいう。前記金属塩は、アルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩等を含む場合がある。前記アミン塩は、トリエチルアミン塩、ベンジルアミン塩等を含む場合がある。
【００２８】
本明細書においてＤ−メチオニンの「誘導体」とは、Ｄ−メチオニンの紫外線曝露によって促進される血管新生を抑制する効果を損なわないことを条件として、Ｄ−メチオニン分子が、アミノ基か、カルボキシル基か、側鎖かにおいて、いずれかの原子団と共有結合したものを指す。前記いずれかの原子団は、Ｎ−フェニルアセチル基、４，４’−ジメトキシトリチル（ＤＭＴ）基等のような保護基と、タンパク質、ペプチド、糖、脂質、核酸等のような生体高分子と、ポリスチレン、ポリエチレン、ポリビニル、ポリエステル等のような合成高分子と、エステル基等のような官能基とを含むがこれらに限定されない。前記エステル基は、例えば、メチルエステル、エチルエステルその他の脂肪族エステルか、芳香族エステルかを含む場合がある。
【００２９】
アミノ酸には光学異性体としてＬ−体とＤ−体とがあるが、天然のタンパク質はＬ−アミノ酸がペプチド結合したものであり、細菌の細胞壁などの例外を除きＬ−アミノ酸のみが利用されていることから、ヒトを始めとする哺乳類にはＬ−アミノ酸のみが存在し、Ｌ−アミノ酸のみを利用していると考えられてきた。（木野内忠稔ら、蛋白質  核酸  酵素、５０：４５３−４６０  （２００５）、レーニンジャーの新生化学［上］第２版  ｐｐ１３２−１４７  （１９９３）  廣川書店、ハーパー・生化学  原書２２版  ｐｐ２１−３０（１９９１）  丸善）したがって、従前より、学術的にも産業的にもアミノ酸としてはＬ−アミノ酸のみが専ら使用されてきた。
【００３０】
例外的にＤ−アミノ酸が使用されるケースとしては、細菌に産生させる抗生物質の原料として使用する場合、およびアミノ酸を化学合成した際に等量得られるＬ−アミノ酸とＤ−アミノ酸混合物からＬ−アミノ酸のみを分取するコストを省くために、そのままＤＬ−アミノ酸混合物としてＤ−アミノ酸を使用している食品添加物の例がある。しかし、生理活性を有する物質として、Ｄ−アミノ酸だけを産業的に使用している例は従来なかった。
【００３１】
これまで、Ｄ−セリンは大脳、海馬に局在し、脳内のＮＭＤＡ受容体の調節因子であることが明らかにされている。また、Ｄ−アスパラギン酸は精巣や松果体に局在が認められ、ホルモン分泌の制御に関与していることが示されている（特開２００５−３５５８号公報）。さらに、Ｄ−メチオニンは、紫外線曝露時のＩＬ−８の発現誘導を抑制することが示されている（特願２０１０−２２２６５４号明細書）。しかし、以下の実施例に示すように、Ｄ−メチオニンが、ＴＨＢＳ１の発現を増大させ、ＶＥＧＦ−Ａの発現を低下させることによって紫外線曝露時の血管新生を抑制するできることはこれまで知られていなかった。したがって、本発明のＤ−メチオニンを含む、紫外線曝露によって促進される血管新生を抑制するための組成物は新規発明である。
【００３２】
近年、ｄｄＹマウスに１０ｍＭのＤ−アミノ酸水溶液を２週間自由摂取させた後、各器官でＤ−アミノ酸濃度を測定したところ、松果体では松果体１腺あたり３−１０００ｐｍｏｌであり、脳組織では湿重量１グラムあたり２−５００ｎｍｏｌであることが報告された（Ｍｏｒｉｋａｗａ，Ａ．ら、Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄｓ，３２：１３−２０（２００７））。これに基づいて、以下に説明する本発明の組成物に含まれるＤ−メチオニンの１日摂取量の下限が算出された。
【００３３】
本発明のＤ−メチオニンは、以下の実施例に示すとおり、角化細胞に対して１００μＭの濃度でＴＨＢＳ１の発現を増大させ、ＶＥＧＦ−Ａの発現を低下する効果を有する。また本発明のＤ−メチオニンは、マウスに対して０．１５％溶液の塗布で、紫外線曝露によって促進される血管新生を抑制する効果を有する。したがって、本発明の組成物に含まれるＤ−メチオニンの量は、この濃度のＤ−メチオニンが生体皮膚組織の細胞に送達されることを条件として、いかなる含有量であってもかまわない。本発明の組成物が外用剤の場合におけるＤ−メチオニンの含有量は、本発明の組成物全量中０．０００００１５質量％から５０質量％か配合可能な最大質量濃度かまでの範囲であればよい。すなわち前記組成物が外用剤の場合におけるメチオニンの含有量は、０．０００００３質量％〜３０質量％が好ましく、０．００００３質量％〜３質量％が最も好ましい。本発明の組成物が内服剤の場合におけるＤ−メチオニンの含有量は、０．００００００１重量％〜１００重量％の範囲であればよい。本発明の組成物が内服剤の場合におけるＤ−メチオニンの含有量は、０．０００００１重量％〜８０重量％が好ましく、０．００００１重量％〜６０重量％であることが最も好ましい。なお、本発明の組成物に含まれるＤ−メチオニンの一日摂取量の下限は、体重１ｋｇあたり０．０１ｎｇであればよく、０．１ｎｇが好ましく、１ｎｇがより好ましい。
【００３４】
本発明の皮膚外用剤は、有効成分として、Ｄ−メチオニン、Ｄ−メチオニンの塩及び／又は生体内で薬物代謝酵素その他によってＤ−メチオニンを放出できる誘導体のみを使用して調製することも可能であるが、通常本発明の効果を損なわない範囲で、医薬部外品を含む化粧品や医薬品等の皮膚外用剤等に用いられる他の成分を、必要に応じて適宜配合することができる。前記他の成分（任意配合成分）としては、例えば、油、界面活性剤、粉末、色材、水、アルコール類、増粘剤、キレート剤、シリコーン類、酸化防止剤、紫外線吸収剤、保湿剤、香料、各種薬効成分、防腐剤、ｐＨ調整剤、中和剤等が挙げられる。
【００３５】
本発明の皮膚外用剤は、例えば軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、浴用剤等、従来の化粧品及びシワ抑制剤に用いるものであればいずれでもよく、剤型は特に問わない。
【００３６】
本発明の医薬品は、Ｄ−メチオニン、Ｄ−メチオニンの塩及び／又は生体内で薬物代謝酵素その他によってＤ−メチオニンを放出できる誘導体に加えて、Ｄ−メチオニンの紫外線曝露によって促進される血管新生を抑制する効果を損なわないことを条件として、さらに１種類又は２種類以上の薬学的に許容される添加物を含む場合がある。前記添加物は、希釈剤及び膨張剤と、結合剤及び接着剤と、滑剤と、流動促進剤と、可塑剤と、崩壊剤と、担体溶媒と、緩衝剤と、着色料と、香料と、甘味料と、防腐剤及び安定化剤と、吸着剤と、当業者に知られたその他の医薬品添加剤とを含むが、これらに限定されない。
【００３７】
本発明の食品は、Ｄ−メチオニン、Ｄ−メチオニンの塩及び／又は生体内で薬物代謝酵素その他によってＤ−メチオニンを放出できる誘導体に加えて、Ｄ−メチオニンの紫外線曝露によって促進される血管新生を抑制する効果を損なわないことを条件として、調味料、着色料、保存料その他の食品として許容される成分を含む場合がある。
【００３８】
本発明の食品は、例えば、キャンディー、クッキー、味噌、フレンチドレッシング、マヨネーズ、フランスパン、醤油、ヨーグルト、ふりかけ、調味料・納豆のたれ、納豆、もろみ黒酢等、従来食品に用いるものであればいずれでもよく、前記例示に限定されるものでない。
【００３９】
本明細書において言及される全ての文献はその全体が引用により本明細書に取り込まれる。
【図面の簡単な説明】
【００４０】
【図１】ＴＨＢＳ１のｍＲＮＡの発現量を示すグラフ。
【図２】ＶＥＧＦ−ＡのｍＲＮＡの発現量を示すグラフ。
【図３】紫外線照射後の血管新生に対するＤ−メチオニンの効果を示す写真。
【図４】紫外線照射後の表皮直下２００μｍの血管面積を示すグラフ。
【発明を実施するための形態】
【００４１】
以下に説明する本発明の実施例は例示のみを目的とし、本発明の技術的範囲を限定するものではない。本発明の技術的範囲は請求の範囲の記載によってのみ限定される。本発明の趣旨を逸脱しないことを条件として、本発明の変更、例えば、本発明の構成要件の追加、削除及び置換を行うことができる。
【００４２】
以下の実施例は、アメリカ国立衛生研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ（ＮＩＨ））のガイドラインに従って資生堂リサーチセンターの倫理委員会によって承認された後に実施された。
【実施例１】
【００４３】
Ｌ−及びＤ−メチオニンによる紫外線照射時のＴＨＢＳ１及びＶＥＧＦ−Ａの発現量の変化
１．材料及び方法
（１）細胞培養
細胞は、市販のヒト新生児表皮角化細胞（Ｃｒｙｏ  ＮＨＥＫ−Ｎｅｏ、三光純薬）が用いられた。前記細胞は１ｘ１０５個／ウェルとなるように市販の培養プレート（カタログ番号３５３０４６、日本ベクトン・ディッキンソン株式会社）に播種された。前記細胞は、市販の無血清培地（Ｄｅｆｉｎｅｄ  Ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ−ＳＦＭ、Ｇｉｂｃｏ、ライフテクノロジーズジャパン株式会社）（以下、「基本培地」という。）を用いて、３７°Ｃ、５％ＣＯ２及び飽和水蒸気雰囲気下で１日間培養された。その後、前記細胞は、１００μＭのＬ−又はＤ−メチオニンが添加された基本培地（以下、「Ｌ−メチオニン添加群」及び「Ｄ−メチオニン添加群」という。）２ｍＬで１日間培養された。対照としては、Ｌ−及びＤ−メチオニンの代わりにリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）が添加された基本培地（以下、「ＰＢＳ添加群」という。）が用いられた。
【００４４】
（２）ｉｎ  ｖｉｔｒｏ紫外線の照射
紫外線（ＵＶ―Ｂ）照射は、自作の紫外光露光装置（紫外線蛍光灯、東芝メディカルサプライ  ＴＯＲＥＸ  ＦＬ２０Ｓ−Ｅ−３０／ＤＭＲ、２本）を用いて、培養プレートの蓋を除去した状態で該培養プレートの４０ｃｍ上部から２８０ｎｍないし３２０ｎｍの紫外線を３０ｍＪ／ｃｍ２で照射して実施された。紫外線量はＵＶ  ＲＡＤＩＯＭＥＴＥＲ  ＵＶＲ−３０３６／Ｓ（株式会社トプコン）を用いて測定された。紫外線照射された細胞は、３７°Ｃ、５％ＣＯ２及び飽和水蒸気雰囲気下で１６時間培養された。
【００４５】
（３）ＴＨＢＳ１及びＶＥＧＦ−Ａの発現量の定量
培地はアスピレーターで除去され、各ウェルそれぞれが、ＰＢＳ  ２ｍＬで２回洗浄された。ＲＮＡがＲＮｅａｓｙ  Ｐｒｏｔｅｃｔ  Ｋｉｔ（７４１０４、株式会社キアゲン）を用いて各ウェルの細胞それぞれから製造者の指示に従って抽出された。ｃＤＮＡが定法に従って作成され、定量リアルタイムＰＣＲで用いられた。前記定量リアルタイムＰＣＲには、ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ（登録商標）ＦａｓｔＳｔａｒｔ  ＤＮＡ  ＭａｓｔｅｒＰＬＵＳ  ＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎ  Ｉ（カタログ番号０３  ５１５  ８８５  ００１、ロシュ・ダイアグノスティックス株式会社）が用いられた。ＴＨＢＳ１及びＶＥＧＦ−Ａから転写されたｍＲＮＡ由来のｃＤＮＡの断片を増幅するために、配列番号１及び２と、配列番号３及び４とに列挙されるヌクレオチド配列からなる順方向及び逆方向プライマーの対それぞれが用いられた。Ｇ３ＰＤＨから転写されたｍＲＮＡ由来のｃＤＮＡの断片を増幅するために、配列番号５及び６に列挙されるヌクレオチド配列からなる順方向及び逆方向プライマーの対が用いられた。ＰＣＲの反応条件は、９５°Ｃ、１５分間を１回と、９５°Ｃ、１５秒間、６５°Ｃ、２０秒間及び７２°Ｃ、２０秒間を４２回とであった。ＴＨＢＳ１及びＶＥＧＦ−ＡのｍＲＮＡの発現量は、ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｖｅｒ．３．５（ロシュ・ダイアグノスティックス株式会社）で解析され、Ｇ３ＰＤＨのｍＲＮＡの発現量で標準化された。
【００４６】
２．結果
（１）ＴＨＢＳ１の発現
図１は、ＴＨＢＳ１のｍＲＮＡの発現量を示すグラフである。誤差棒それぞれは、同一条件のウェル３個のｍＲＮＡの発現量を決定した実験１回の値の標準誤差を示す。Ｄ−メチオニン添加群のＴＨＢＳ１のｍＲＮＡの発現量は、ＰＢＳ添加群と比較して増大した。
【００４７】
（２）  ＶＥＧＦ−Ａの発現
図２は、ＶＥＧＦ−ＡのｍＲＮＡの発現量を示すグラフである。誤差棒それぞれは、同一条件のウェル３個のｍＲＮＡの発現量を決定した実験１回の値の標準誤差を示す。ｐ値は、スチューデントｔ検定で算出された。図中の「＊＊」の記載はｐ値が１％未満であり、図中の「＊」の記載はｐ値が５％未満であり、図中の「＋」の記載はｐ値が１０％未満であることを示す。Ｌ−メチオニン添加群及びＤ−メチオニン添加群のＶＥＧＦ−ＡのｍＲＮＡの発現量は、ＰＢＳ添加群と比較して統計的に有意に低下した。
【実施例２】
【００４８】
紫外線照射時のＤ−メチオニン塗布による血管新生の変化
１．材料及び方法
（１）実験動物
５週齢の雄・雌性ＨＲ−１ヘアレスマウス（株式会社星野試験動物飼育所）が用いられた。
【００４９】
（２）ｉｎ  ｖｉｖｏ紫外線の照射
紫外線（ＵＶ−Ｂ）は、シュワルツらの方法（Ｈａｒａｔａｋｅ  Ａ．ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１０８：７６９−７７５，１９９７．）を一部変更して、紫外線を繰り返し照射する方法（Ｎａｇａｎｕｍａ  Ｍ．ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．Ｓｃｉ．２５：２９−３５，２００１．Ｓｃｈｗａｒｔｚ  Ｅ．Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．９１：１５８−１６１，１９８８．）に準じて照射された。簡潔には、前記ＵＶ−Ｂは、自作の紫外光露光装置（紫外線蛍光灯、東芝メディカルサプライ  ＴＯＲＥＸ  ＦＬ２０Ｓ−Ｅ−３０／ＤＭＲ、２本）を用いて、前記マウスの背部に週３回、１０週間照射された。開始時の照射量は３６ｍＪ／ｃｍ２／回であり、２週目以降の照射量は徐々に増大し、１０週目の照射量は２１６ｍＪ／ｃｍ２／回であった。総照射量は４．６Ｊ／ｃｍ２であった。紫外線照射量はＵＶ  ＲＡＤＩＯＭＥＴＥＲ  ＵＶＲ−３０３６／Ｓ（株式会社トプコン）を用いて測定された。
【００５０】
（３）Ｄ−メチオニンの塗布
Ｄ−メチオニンの塗布の実験群では、０．１５％のＤ−メチオニンが、１回あたり１００μＬ、１日１回、週５日、１０週間、紫外線照射部に塗布された。
【００５１】
（４）血管新生の評価
紫外線照射の終了後、薄切切片が作製され、免疫組織化学染色が行われた。薄切切片の作製及び免疫組織化学染色は、当業者に周知の標準的な方法に従って行われた。前記免疫組織化学染色では、抗汎内皮細胞抗原モノクローナル抗体（カタログ番号５５０５６３、日本ベクトン・ディッキンソン株式会社）が用いられた。血管新生を評価するために、顕微鏡観察下で撮影した組織画像中の血管面積が、画像解析ソフトフェア（ＩＰＬａｂソフトフェア  バージョン４．０、株式会社  ソリューション  システムズ）を用いて定量された。
【００５２】
２．結果
（１）皮膚状態の観察
図３は、紫外線照射後の血管新生に対するＤ−メチオニンの効果を示す写真である。マウスの表皮は、紫外線非照射かつＤ−メチオニン非塗布の実験群（以下、「紫外線非照射条件」という。）と比較して、紫外線照射かつＤ−メチオニン非塗布の実験群（以下、「紫外線照射条件」という。）と、紫外線照射かつＤ−メチオニン塗布の実験群（以下、「Ｄ−メチオニン塗布条件」という。）とでは厚かった。また真皮での血管新生は、紫外線照射条件と比較して、Ｄ−メチオニン塗布条件では低かった。
【００５３】
（２）血管面積の定量
図４は、紫外線照射後の表皮直下２００μｍの血管面積を示すグラフである。各実験条件の誤差棒は同一条件で４−５回繰り返した実験結果の測定値の標準偏差を示す。また、スチューデントｔ検定において、アステリスク（＊）はｐ値が５％未満であり、アステリスク（＊＊＊）は０．１％未満であることを示す。血管面積（μｍ２）は、紫外線非照射条件では約９００μｍ２であり、紫外線照射条件では約２３００μｍ２であり、Ｄ−メチオニン塗布条件では約１６００μｍ２であった。以上の結果から、Ｄ−メチオニンは、紫外線曝露によって促進される血管新生を統計的に有意に抑制することが示された。
【００５４】
結論
本実施例の実験結果から、Ｄ−メチオニンは、紫外線照射後、ＴＨＢＳ１のｍＲＮＡの発現量を増大させ、ＶＥＧＦ−ＡのｍＲＮＡの発現量を統計的に有意に低下した。また、Ｄ−メチオニンは紫外線曝露時の血管新生を抑制した。そこで本発明のＤ−メチオニンを含む組成物は、紫外線曝露によって促進される血管新生をともなう皮膚状態の悪化、特にシワ形成を抑制できることが示唆された。
【実施例３】
【００５５】
配合例１（乳液製剤）
（組成物）                        配合量（質量％）
Ｄ−メチオニン                            ０．４２
ベヘニルアルコール                        ０．２
セタノール                                ０．５
グリセリンモノ脂肪酸エステル              １．８
硬化ヒマシ油ＰＯＥ（６０）                １．０
白色ワセリン                              ２．０
流動パラフィン                          １０．０
ミリスチン酸イソプロピル                  ３．０
メチルポリシロキサン（６ｃｓ）            １．５
濃グリセリン                            １３．０
ジプロピレングリコール                    ２．０
カルボキシビニルポリマー                  ０．２５
ヒアルロン酸ナトリウム                    ０．００５
水酸化カリウム                            適量
乳酸                                      適量
エデト酸ナトリウム                        適量
エチルパラベン                            適量
精製水                                    残余

１００．０００
【００５６】
配合例２（貼付剤）
（組成物）                            配合量（質量％）
Ｄ−メチオニン                                  ０．３
ポリアクリル酸                                  ３．０
ポリアクリル酸ナトリウム                        ２．５
ゼラチン                                        ０．５
カルボキシメチルセルロースナトリウム            ４．０
ポリビニルアルコール                            ０．３
濃グリセリン                                  １４．０
１，３−ブチレングリコール                    １２．０
水酸化アルミニウム                              ０．１
エデト酸ナトリウム                              ０．０３
メチルパラベン                                  ０．１
精製水                                          残余

１００．００
【００５７】
配合例３（錠剤）
（組成物）                            配合量（ｍｇ／１錠中）
Ｄ−メチオニン                                ３６０．５
乳糖                                          １０２．４
カルボキシメチルセルロースカルシウム            ２９．９
ヒドロキシプロピルセルロース                      ６．８
ステアリン酸マグネシウム                          ５．２
結晶セルロース                                  １０．２

５１５．０  
【００５８】
配合例４（錠剤）
（組成物）                          配合量（ｍｇ／１錠中）
ショ糖エステル                                ７０
結晶セルロース                                ７４
メチルセルロース                              ３６
グリセリン                                    ２５
Ｄ−メチオニン                              ４７５
Ｎ−アセチルグルコサミン                    ２００
ヒアルロン酸                                １５０
ビタミンＥ                                    ３０
ビタミンＢ６                                  ２０
ビタミンＢ２                                  １０
α−リポ酸                                    ２０
コエンザイムＱ１０                            ４０
セラミド（コンニャク抽出物）                  ５０
Ｌ−プロリン                                ３００

１５００    
【００５９】
配合例５（ソフトカプセル）
（組成物）                      配合量（ｍｇ／１カプセル中）
食用大豆油                                ５３０
トチュウエキス                              ５０
ニンジンエキス                              ５０
Ｄ−メチオニン                            １００
ローヤルゼリー                              ５０
マカ                                        ３０
ＧＡＢＡ                                    ３０
ミツロウ                                    ６０
ゼラチン                                  ３７５
グリセリン                                １２０
グリセリン脂肪酸エステル                  １０５

１５００
【００６０】
配合例６（ソフトカプセル）
（組成物）                        配合量（ｍｇ／１カプセル中）
玄米胚芽油                                ６５９
Ｄ−メチオニン                            ５００
レスベラトロール                              １
ハス胚芽エキス                            １００
エラスチン                                １８０
ＤＮＡ                                      ３０
葉酸                                        ３０

１５００
【００６１】
配合例７（顆粒）
（組成物）                      配合量（ｍｇ／１包中）
Ｄ−メチオニン                          ４００
ビタミンＣ                              １００
大豆イソフラボン                        ２５０
還元乳糖                                ３００
大豆オリゴ糖                              ３６
エリスリトール                            ３６
デキストリン                              ３０
香料                                      ２４
クエン酸                                  ２４

１２００
【００６２】
配合例８（ドリンク）
（組成物）                        配合量（ｇ／６０ｍＬ中）
トチュウエキス                              １．６
ニンジンエキス                              １．６
Ｄ−メチオニン                              １．６
還元麦芽糖水飴                            ２８
エリスリトール                              ８
クエン酸                                    ２
香料                                        １．３
Ｎ−アセチルグルコサミン                    １
ヒアルロン酸Ｎａ                            ０．５
ビタミンＥ                                  ０．３
ビタミンＢ６                                ０．２
ビタミンＢ２                                ０．１
α−リポ酸                                  ０．２
コエンザイムＱ１０                          １．２
セラミド（コンニャク抽出物）                ０．４
Ｌ−プロリン                                ２
精製水                                      残余

６０
【００６３】
配合例９（キャンディー）
（組成物）                      配合量（重量％）
砂糖                                  ５０
水飴                                  ４８
Ｄ−メチオニン                          １
香料                                    １

１００
【００６４】
配合例１０（クッキー）
（組成物）                        配合量（重量％）
薄力粉                                  ４５．０
バター                                  １７．５
グラニュー糖                            ２０．０
Ｄ−メチオニン                            ４．０
卵                                      １２．５
香料                                      １．０

１００．０
【００６５】
配合例１０（クッキー）の製造方法
バターを撹拌しながらグラニュー糖を徐々に添加し、卵、Ｄ−メチオニン及び香料を添加して撹拌する。十分に混合した後、均一に振るった薄力粉を加えて低速で撹拌し、塊状で冷蔵庫で寝かせる。その後、成型し１７０°Ｃ、１５分間焼成しクッキーとする。
【００６６】
配合例１１（味噌）
（組成物）                    配合量（ｇ）
大豆                              １０００
米麹                              １０００
塩                                  ４２０
Ｄ−メチオニン                      １５８
水                                    残余

４０００
【００６７】
配合例１１（味噌）の製造方法
米こうじと塩とをよく混ぜ合わせる。洗浄した大豆を３倍量の水に一晩つけた後に水を切り、新しい水を加えながら煮込み、ざるにあける。煮汁（種水）を集め、Ｄ−メチオニンを１０％ｗ／ｖとなるように溶解する。煮あがった豆を直ちにすりつぶし、塩を混ぜた米麹を加えて、上記のＤ−メチオニンを溶解した種水を足しながら粘土程の固さになるまでむらなく混ぜ合わせる。団子状に丸めたものを桶に隙間のない様に隅々まで、しっかりと詰め込み、表面を平らにしてラップで覆い密封する。３箇月後に容器を移し変え、表面を平らにしてラップで覆う。なお、Ｄ−メチオニンを種水に加える代わりに、Ｄ−メチオニンを多く産生する米麹を用いてもよい。前記米麹を得るには、特開２００８−１８５５５８に記載の方法でＤ−メチオニンを定量することにより選抜することができる。また、市販の味噌にＤ−メチオニン又はその塩を加えてもよい。
【００６８】
配合例１２（フレンチドレッシング）
（組成物）                      配合量（ｇ）
サラダ油                            ２７．０
酢                                  ３０．０
塩化ナトリウム                        ０．９
Ｄ−メチオニン                        １．１
胡椒                                  １．０

６０．０  
【００６９】
配合例１２（フレンチドレッシング）の製造方法
酢に塩化ナトリウム及びメチオニンを加えた後に、よく攪拌して溶解する。サラダ油を加えて、よく攪拌し胡椒を加える。
【００７０】
配合例１３（マヨネーズ）
（組成物）                      配合量（ｇ）
サラダ油                          １３４．０
酢                                    ５
塩化ナトリウム                        ０．９
Ｄ−メチオニン                        １
卵黄                                １８
砂糖                                  ０．２
胡椒                                  ０．９

１６０．０
【００７１】
配合例１３（マヨネーズ）の製造方法
卵黄（室温）に酢、塩化ナトリウム、Ｄ−メチオニン及び胡椒を加えて、泡立て器で十分に攪拌する。サラダ油を少しずつ加えながら攪拌を継続してエマルジョンにする。最後に砂糖を加えて攪拌する。
【００７２】
配合例１４（フランスパン）
（組成物）                      配合量（ｇ）
強力粉                              １４０
薄力粉                                ６０
塩化ナトリウム                          ３
砂糖                                    ６
Ｄ−メチオニン                          ２
ドライイースト                          ４
ぬるま湯                            １２８

３４３
【００７３】
配合例１４（フランスパン）の製造方法
ぬるま湯に砂糖１ｇ及びドライイーストを入れて予備発酵させる。強力粉、薄力粉、塩化ナトリウム、砂糖５ｇ及びＤ−メチオニンをボウルに入れ、その中に予備発酵させたイーストを入れる。十分捏ねた後に球状にして３０°Ｃで一次発酵させる。生地を再度捏ねてから休ませた後に適当な形に整形して電子発酵機を用いて最終発酵させる。クープを入れて２２０°Ｃのオーブンで３０分間焼く。
【００７４】
配合例１５（醤油）
（組成物）                        配合量（ｇ）
市販の醤油                            ９８０
Ｄ−メチオニン                          ２０

１０００
【００７５】
配合例１５（醤油）の製造方法
市販の醤油にＤ−メチオニンを加えてよく攪拌する。また、Ｄ−メチオニンやその塩を加える代わりに、Ｄ−メチオニンを多く産生する麹を用いて醤油を醸造してもよい。前記米麹を得るには、特開２００８−１８５５５８に記載の方法でメチオニンを定量することにより選抜することができる。また、市販の醤油にＤ−メチオニンの塩を加えてもよい。
【００７６】
配合例１６（ヨーグルト）
（組成物）                        配合量（ｇ）
牛乳                                  ８８０
Ｌ．ブルガリカス菌                      ５０
Ｓ．サーモフィルス菌                    ５０
Ｄ−メチオニン                          ２０

１０００
【００７７】
配合例１６（ヨーグルト）の製造方法
４０°Ｃ〜４５°Ｃで発酵させる。他の市販の種菌を用いてもよく、市販のヨーグルトにＤ−メチオニンを加えてもよい。また、Ｄ−メチオニンやその塩を加える代わりに、Ｄ−メチオニンを多く産生する菌を用いてもよい。前記菌を得るには、特開２００８−１８５５５８に記載の方法でメチオニンを定量することにより選抜することができる。また、市販のヨーグルトにＤ−メチオニンの塩を加えてもよい。
【００７８】
配合例１７（ふりかけ）
（組成物）                    配合量（ｇ）
Ｄ−メチオニン                      ５０
のり                                １５
Ｌ−グルタミン酸Ｎａ                １０
塩化ナトリウム                        ２
煎りごま                            １０
さば削り節                          １０
砂糖                                  １
醤油                                  ２

１００
【００７９】
配合例１８（調味料・納豆のたれ）
（組成物）                    配合量（ｇ）
市販の納豆のたれ                    ９
Ｄ−メチオニン                      １

１０
【００８０】
配合例１９（納豆）
（組成物）                        配合量（ｇ）
市販の納豆                            １９．９
Ｄ−メチオニン                          ０．１

２０
【００８１】
配合例１９（納豆）の製造方法
市販の納豆にＤ−メチオニン又はその塩を加える代わりに、Ｄ−メチオニンを多く産生する菌を用いて納豆を作ってもよい。前記菌を得るには、特開２００８−１８５５５８に記載の方法でＤ−メチオニンを定量することにより選抜することができる。
【００８２】
配合例２０（もろみ黒酢）
（組成物）                  配合量（ｇ）
市販のもろみ黒酢                  ９００
Ｄ−メチオニン                    １００

１０００
【００８３】
配合例２０（もろみ黒酢）の製造方法
市販の酢、黒酢にＤ−メチオニン又はその塩を加える代わりに、Ｄ−メチオニンを多く産生する菌を用いて酢、黒酢、もろみを作ってもよい。前記菌を得るには、特開２００８−１８５５５８に記載の方法でメチオニンを定量することにより選抜することができる。
【００８４】
配合例２１（クリーム）
（組成物）                                      配合量（質量％）
流動パラフィン                                            ３
ワセリン                                                  １
ジメチルポリシロキサン                                    １
ステアリルアルコール                                      １．８
ベヘニルアルコール                                        １．６
グリセリン                                                ８
ジプロピレングリコール                                    ５
マカデミアナッツ油                                        ２
硬化油                                                    ３
スクワラン                                                ６
ステアリン酸                                              ２
ヒドロキシステアリン酸コレステリル                        ０．５
２−エチルヘキサン酸セチル                                ４
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油                            ０．５
自己乳化型モノステアリン酸グリセリン                      ３
水酸化カリウム                                            ０．１５
ヘキサメタリン酸ナトリウム                                ０．０５
トリメチルグリシン                                        ２
α−トコフェロール  ２−Ｌ−アスコルビン酸
リン酸ジエステルカリウム    １
酢酸トコフェロール                                        ０．１
Ｄ−メチオニン                                            ４
パラベン                                                  適量
エデト酸３ナトリウム                                      ０．０５
４−ｔ−ブチル−４’−メトキシジベンゾイルメタン          ０．０５
ジパラメトキシ桂皮酸モノ−２−エチルヘキサン酸グリセリル  ０．０５
色剤                                                      適量
カルボキシビニルポリマー                                  ０．０５
精製水                                                    残余

１００．００
【００８５】
配合例２２（ボディー用クリーム）
（組成物）                                      配合量（質量％）
ジメチルポリシロキサン                                    ３
デカメチルシクロペンタシロキサン                        １３
ドデカメチルシクロヘキサシロキサン                      １２
ポリオキシエチレン・メチルポリシロキサン共重合体          １
エタノール                                                ２
イソプロパノール                                          １
グリセリン                                                ３
ジプロピレングリコール                                    ５
ポリエチレングリコール６０００                            ５
ヘキサメタリン酸ナトリウム                                ０．０５
酢酸トコフェロール                                        ０．１
Ｄ−メチオニン                                            ３
ウイキョウエキス                                          ０．１
ハマメリスエキス                                          ０．１
ニンジンエキス                                            ０．１
Ｌ−メントール                                            適量
パラオキシ安息香酸エステル                                適量
エデト酸三ナトリウム                                      ０．０５
ジモルホリノピリダジノン                                  ０．０１
トリメトキシ桂皮酸メチルビス（トリメチルシロキシ）
シリルイソペンチル  ０．１
黄酸化鉄                                                  適量
チタン酸コバルト                                          適量
ジメチルジステアリルアンモニウムヘクトライト              １．５
ポリビニルアルコール                                      ０．１
ヒドロキシエチルセルロース                                ０．１
トリメチルシロキシケイ酸                                  ２
香料                                                      適量
精製水                                                    残余

１００．００
【００８６】
配合例２３（ジェル剤）
（組成物）                                        配合量（質量％）
ジメチルポリシロキサン                                    ５
グリセリン                                                ２
１，３−ブチレングリコール                                ５
ポリエチレングリコール１５００                            ３
ポリエチレングリコール２００００                          ３
オクタン酸セチル                                          ３
クエン酸                                                  ０．０１
クエン酸ナトリウム                                        ０．１
ヘキサメタリン酸ナトリウム                                ０．１
グリチルリチン酸ジカリウム                                ０．１
Ｄ−メチオニン                                            ２
酢酸トコフェロール                                        ０．１
オウゴンエキス                                            ０．１
ユキノシタエキス                                          ０．１
エデト酸三ナトリウム                                      ０．１
キサンタンガム                                            ０．３
アクリル酸・メタクリル酸
アルキル共重合体（ペミュレンＴＲ−２）        ０．０５
寒天末                                                    １．５
フェノキシエタノール                                      適量
ジブチルヒドロキシトルエン                                適量
精製水                                                    残余

１００．００
【００８７】
配合例２４（ピールオフマスク）
（組成物）                                      配合量（質量％）
エタノール                                              １０
１，３−ブチレングリコール                                ６
ポリエチレングリコール４０００                            ２
オリーブ油                                                １
マカデミアナッツ油                                        １
ヒドロキシステアリン酸フィトステリル                      ０．０５
乳酸                                                      ０．０５
乳酸ナトリウム                                            ０．１
Ｌ−アスコルビン酸硫酸エステル２ナトリウム                ０．１
α−トコフェロール  ２−Ｌ−アスコルビン酸
リン酸ジエステルカリウム    ０．１
Ｄ−メチオニン                                            ４
魚コラーゲン                                              ０．１
コンドロイチン硫酸ナトリウム                              ０．１
カルボキシメチルセルロースナトリウム                      ０．２
ポリビニルアルコール                                    １２
パラオキシ安息香酸エステル                                適量
香料                                                      適量
精製水                                                    残余

１００．００
【００８８】
配合例２５（含浸マスク）
（組成物）                            配合量（質量％）
グリセリン                                    １
１，３−ブチレングリコール                    ８
キシリット                                    ２
ポリエチレングリコール１５００                ２
ローズマリー油                                ０．０１
セージ油                                      ０．１
クエン酸                                      ０．０２
クエン酸ナトリウム                            ０．０８
ヘキサメタリン酸ナトリウム                    ０．０１
ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン    ０．１
Ｄ−メチオニン                                ０．５
バーチエキス                                  ０．１
ラベンダー油                                  ０．０１
キサンタンガム                                ０．０５
カルボキシビニルポリマー                      ０．１５
パラオキシ安息香酸エステル                    適量
精製水                                        残余

１００．００
【００８９】
配合例２６（乳液）
（組成物）                                  配合量（質量％）
流動パラフィン                                      ７
ワセリン                                            ３
デカメチルシクロペンタシロキサン                    ２
ベヘニルアルコール                                  １．５
グリセリン                                          ５
ジプロピレングリコール                              ７
ポリエチレングリコール１５００                      ２
ホホバ油                                            １
イソステアリン酸                                    ０．５
ステアリン酸                                        ０．５
ベヘニン酸                                          ０．５
テトラ２−エチルヘキサン酸ペンタエリスリット        ３
２−エチルヘキサン酸セチル                          ３
モノステアリン酸グリセリン                          １
モノステアリン酸ポリオキシエチレングリセリン        １
水酸化カリウム                                      ０．１
ヘキサメタリン酸ナトリウム                          ０．０５
グリチルレチン酸ステアリル                          ０．０５
Ｄ−メチオニン                                      １
ローヤルゼリーエキス                                ０．１
酵母エキス                                          ０．１
酢酸トコフェロール                                  ０．１
アセチル化ヒアルロン酸ナトリウム                    ０．１
エデト酸三ナトリウム                                ０．０５
４−ｔ−ブチル−４’−メトキシジベンゾイルメタン    ０．１
パラメトキシ桂皮酸２−エチルヘキシル                ０．１
カルボキシビニルポリマー                            ０．１５
パラベン                                            適量
香料                                                適量
精製水                                              残余

１００．００
【００９０】
配合例２７（乳液）
（組成物）                                配合量（質量％）
ジメチルポリシロキサン                            ２
ベヘニルアルコール                                １
バチルアルコール                                  ０．５
グリセリン                                        ５
１，３−ブチレングリコール                        ７
エリスリトール                                    ２
硬化油                                            ３
スクワラン                                        ６
テトラ２−エチルヘキサン酸ペンタエリスリット      ２
イソステアリン酸ポリオキシエチレングリセリル      １
モノステアリン酸ポリオキシエチレングリセリン      １
Ｄ−メチオニン                                    ０．３
水酸化カリウム                                    適量
ヘキサメタリン酸ナトリウム                        ０．０５
フェノキシエタノール                              適量
カルボキシビニルポリマー                          ０．１
精製水                                            残余

１００．００
【００９１】
配合例２８（化粧水）
（組成物）                                        配合量（質量％）
エチルアルコール                                          ５
グリセリン                                                １
１，３−ブチレングリコール                                ５
ポリオキシエチレンポリオキシプロピレン
デシルテトラデシルエーテル      ０．２
ヘキサメタリン酸ナトリウム                                ０．０３
トリメチルグリシン                                        １
ポリアスパラギン酸ナトリウム                              ０．１
α−トコフェロール  ２−Ｌ−アスコルビン酸
リン酸ジエステルカリウム    ０．１
チオタウリン                                              ０．１
Ｄ−メチオニン                                            ４
ＥＤＴＡ３ナトリウム                                      ０．１
カルボキシビニルポリマー                                  ０．０５
水酸化カリウム                                            ０．０２
フェノキシエタノール                                      適量
香料                                                      適量
精製水                                                    残余

１００．００
【００９２】
配合例２９（化粧水）
（組成物）                              配合量（質量％）
エタノール                                      １０
ジプロピレングリコール                            １
ポリエチレングリコール１０００                    １
ポリオキシエチレンメチルグルコシド                １
ホホバ油                                          ０．０１
トリ２−エチルヘキサン酸グリセリル                ０．１
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油                    ０．２
ジイソステアリン酸ポリグリセリル                  ０．１５
Ｎ−ステアロイル−Ｌ−グルタミン酸ナトリウム      ０．１
クエン酸                                          ０．０５
クエン酸ナトリウム                                ０．２
水酸化カリウム                                    ０．４
グリチルリチン酸ジカリウム                        ０．１
塩酸アルギニン                                    ０．１
Ｌ−アスコルビン酸  ２−グルコシド                ２
Ｄ−メチオニン                                    ０．５
エデト酸三ナトリウム                              ０．０５
パラメトキシ桂皮酸２−エチルヘキシル              ０．０１
ジブチルヒドロキシトルエン                        適量
パラベン                                          適量
海洋深層水                                        ３
香料                                              適量
精製水                                            残余

１００．００
【００９３】
配合例３０（エアゾール尿素外用剤原液）
（組成物）                          配合量（質量％）
エタノール                                １５．０
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油５０          １．５
ジフェンヒドラミン                          １．０
ジブカイン                                  ２．０
酢酸トコフェロール                          ０．５
Ｄ−メチオニン                              ０．１
イソステアリン酸                            ０．１
１，３−ブチレングリコール                  ３．０
ポリエチレングリコール４００                ３．０
カンフル                                    ０．０５
尿素                                      ２０．０
精製水                                      残余

１００．００
【００９４】
配合例３１（エアゾール尿素噴射剤）
（組成物）                      配合量（質量％）
エアゾール尿素外用剤原液              ６５．０
ジメチルエーテル                      ３５．０

１００．００
【００９５】
配合例３１（エアゾール尿素噴射剤）の充填方法
エアゾール尿素外用剤原液及びジメチルエーテルを内面テフロン（登録商標）コート処理耐圧エアゾールアルミ缶に充填してエアゾール剤を調製する。
【図１】
2013177356.tif 000002
【図２】
2013177356.tif 000003
【図３】
2013177356.tif 000004
【図４】
2013177356.tif 000005
【配列表】
2013177356000001.app