(57)【要約】      （修正有）【課題】光学異性体分離用充填剤。【解決手段】多糖誘導体が担体に担持されてなる光学異性体用分離剤であって、前記多糖誘導体が、多糖の水酸基またはアミノ基の水素原子の少なくとも一部が下記式（Ｉ）または（ＩＩ）で表される置換基で置換されたものである、光学異性体用分離剤。−(Ｃ＝Ｏ)(Ｎ−Ｈ）Ｃ6Ｒ1Ｒ2Ｒ3Ｒ4Ｒ5（Ｉ）。−(Ｃ＝Ｏ)(Ｎ−Ｈ）Ｃ6Ｈ3Ｒ6Ｒ7（ＩＩ）。前記多糖が、アミロース又はセルロースである。前記担体が、シリカゲルである。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
多糖の水酸基またはアミノ基の水素原子の少なくとも一部が下記式（Ｉ）で表される置換基で置換されてなる、多糖誘導体。
【化１】
2013164294.tif 000010
［式中、Ｒ1〜Ｒ5のうち、２以上のＲが、独立してフッ素、塩素、臭素及びヨウ素からなるハロゲン原子の群から選ばれるハロゲン原子であり、式（Ｉ）において、ハロゲン原子は２種以上存在し、ハロゲン原子ではないＲは、水素、炭素数１〜１２のアルキル基、炭素数１〜１２のアルコキシ基、シアノ基、炭素数１〜８のアシル基、炭素数１〜８のアシルオキシ基、ヒドロキシ基、炭素数１〜１２のアルコキシカルボニル基、炭素数１〜１５のアラルキル基、ニトロ基、アミノ基及び炭素数が合計で１〜８のアルキルアミノ基よりなる群から選択される原子又は基である。］
【請求項２】
前記式（Ｉ）が、下記式（ＩＩ）で表される置換基である、請求項１に記載の多糖誘導体。
【化２】
2013164294.tif 000011
［式中、Ｒ6及びＲ7は、それぞれ独立して、フッ素、塩素、臭素及びヨウ素からなるハロゲン原子の群から選ばれるハロゲン原子であり、Ｒ6とＲ7は同一のハロゲン原子ではない。］
【請求項３】
前記式（ＩＩ）において、Ｒ6がフッ素であり、Ｒ7が塩素であり、Ｒ6及びＲ7で置換されていない芳香族環上の水素は無置換である、請求項２に記載の多糖誘導体。
【請求項４】
前記式（Ｉ）または（ＩＩ）で表される置換基が、３−クロロ−５−フルオロフェニルカルバモイル基である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の多糖誘導体。
【請求項５】
前記多糖がアミロース又はセルロースである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の多糖誘導体。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか一項に記載の多糖誘導体が担体に担持されてなる、光学異性体用分離剤。
【請求項７】
前記担体がシリカゲルである、請求項６に記載の光学異性体用分離剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、多糖誘導体及びそれを含有する光学異性体分離用充填剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来から、クロマトグラフィーによる光学分割は、分析化学、有機化学、医学、薬学など多方面で非常に注目されており、多くのキラル固定相が世界中で報告されている。特に光学活性高分子であるセルロースやアミロースを化学的に修飾したエステル誘導体やカルバメート誘導体等は、キラル固定相として高い光学分割能を有し、これを用いたクロマトグラフィー用充填剤が広く知られている。これらの多糖誘導体を用いたクロマトグラフィー用充填剤は、カラムへの充填率を高め、ハンドリングを容易にし、機械的強度を高める等の目的から、シリカゲル等の担体に担持させた状態で使用されている。
【０００３】
例えば、特許文献１には、フェニルカルバメートの芳香族環の水素の一部がハロゲン（フッ素または塩素）で置換された置換基により、セルロースの水酸基が修飾されてなるセルロース誘導体が記載されており、これをシリカゲルに吸着させた分離剤が記載されている。
一方、特許文献２は、フェニルカルバメートの芳香族環の水素の一部が、フッ素、アルキル基、またはアルコキシ基で置換された置換基により、セルロースまたはアミロースの水酸基が修飾されたセルロース誘導体及びアミロース誘導体を開示している。そして、これらの多糖誘導体をシリカ等の担体に担持させたクロマトグラフィー用の充填剤が記載されている。このような技術ではさらなる光学異性体分離能が求められている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特公平４−４２３７１号公報
【特許文献２】特開２００５−３１５６６８号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、光学分離能に優れた光学異性体分離用充填剤及びそれに用いられる多糖誘導体を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は上記実情に鑑みてなされたものであり、本発明者は鋭意研究の結果、多糖の水酸基またはアミノ基に、２種以上のハロゲンで芳香族環上の水素が置換された特定のフェニルカルバモイル基を導入した多糖誘導体を作製し、これを含有する光学異性体用分離剤を作製した結果、この分離剤がより高い光学分離能を奏することを見出した。すなわち、本発明の要旨は以下の通りである。
【０００７】
＜１＞  多糖の水酸基またはアミノ基の水素原子の少なくとも一部が下記式（Ｉ）で表される置換基で置換されてなる、多糖誘導体。
【化１】
2013164294.tif 000002
［式中、Ｒ1〜Ｒ5のうち、２以上のＲが、独立してフッ素、塩素、臭素及びヨウ素からなるハロゲン原子の群から選ばれるハロゲン原子であり、式（Ｉ）において、ハロゲン原子は２種以上存在し、ハロゲン原子ではないＲは、水素、炭素数１〜１２のアルキル基、炭素数１〜１２のアルコキシ基、シアノ基、炭素数１〜８のアシル基、炭素数１〜８のアシルオキシ基、ヒドロキシ基、炭素数１〜１２のアルコキシカルボニル基、炭素数１〜１５のアラルキル基、ニトロ基、アミノ基及び炭素数が合計で１〜８のアルキルアミノ基よりなる群から選択される原子又は基である。］
＜２＞  前記式（Ｉ）が、下記式（ＩＩ）で表される置換基である、＜１＞に記載の多糖誘導体。
【化２】
2013164294.tif 000003
［式中、Ｒ6及びＲ7は、それぞれ独立して、フッ素、塩素、臭素及びヨウ素からなるハロゲン原子の群から選ばれるハロゲン原子であり、Ｒ6とＲ7は同一のハロゲン原子ではない。］
＜３＞  前記式（ＩＩ）において、Ｒ6がフッ素であり、Ｒ7が塩素であり、Ｒ6及びＲ7で置換されていない芳香族環上の水素は無置換である、＜２＞に記載の多糖誘導体。
＜４＞  前記式（Ｉ）または（ＩＩ）で表される置換基が、３−クロロ−５−フルオロフェニルカルバモイル基である、＜１＞〜＜３＞のいずれかに記載の多糖誘導体。
＜５＞  前記多糖がアミロース又はセルロースである、＜１＞〜＜４＞のいずれかに記載の多糖誘導体。
＜６＞  ＜１＞〜＜５＞のいずれかに記載の多糖誘導体が担体に担持されてなる、光学異性体用分離剤。
＜７＞  前記担体がシリカゲルである、＜６＞に記載の光学異性体用分離剤。
【０００８】
本発明の多糖誘導体は、多糖の水酸基またはアミノ基の水素原子の少なくとも一部が下記式（Ｉ）で表される置換基で置換されたものである。
【化３】
2013164294.tif 000004
［式中、Ｒ1〜Ｒ5のうち、２以上のＲが、独立してフッ素、塩素、臭素及びヨウ素からなるハロゲン原子の群から選ばれるハロゲン原子であり、式（Ｉ）において、ハロゲン原子は２種以上存在し、ハロゲン原子ではないＲは、水素、炭素数１〜１２のアルキル基、炭
素数１〜１２のアルコキシ基、シアノ基、炭素数１〜８のアシル基、炭素数１〜８のアシルオキシ基、ヒドロキシ基、炭素数１〜１２のアルコキシカルボニル基、炭素数１〜１５のアラルキル基、ニトロ基、アミノ基及び炭素数が合計で１〜８のアルキルアミノ基よりなる群から選択される原子又は基である。］
【０００９】
前記多糖は、水酸基又はアミノ基を有する多糖であれば特に限定されない。このような多糖としては、例えばβ−１，４−グルカン（セルロース）、α−１，４−グルカン（アミロース、アミロペクチン）、α−１，６−グルカン（デキストラン）、β−１，６−グルカン（プスツラン）、β−１，３−グルカン（カードラン、シゾフィラン）、α−１，３−グルカン、β−１，２−グルカン（Ｃｒｏｗｎ  Ｇａｌｌ多糖）、β−１，４−ガラクタン、β−１，４−マンナン、α−１，６−マンナン、β−１，２−フラクタン（イヌリン）、β−２，６−フラクタン（レバン）、β−１，４−キシラン、β−１，３−キシラン、β−１，４−キトサン、β−１，４−Ｎ−アセチルキトサン（キチン）、プルラン、アガロース、アルギン酸、α−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、γ−シクロデキストリン、ニゲラン、及びアミロースを含有する澱粉等が挙げられる。
【００１０】
この中で、好ましくは、高純度の多糖を容易に得ることのできるセルロース、アミロース、β−１，４−キトサン、キチン、β−１，４−マンナン、β−１，４−キシラン、イヌリン、カードラン、プルラン、α−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、γ−シクロデキストリン、ニゲランなどであり、さらに好ましくは、セルロース、アミロース、プルラン、ニゲランである。
【００１１】
多糖の数平均重合度（１分子中に含まれるピラノース又はフラノース環の平均数）は、好ましくは５以上、より好ましくは１０以上であり、特に上限はないが、１０００以下であることが取り扱いの容易さの点で好ましく、より好ましくは５〜１０００、更に好ましくは１０〜１０００、特に好ましくは１０〜５００である。
【００１２】
本発明の多糖誘導体は、上記のようにその多糖の水酸基またはアミノ基の水素原子の少なくとも一部が上記式（Ｉ）で表される置換基で置換されたものである。
上記式（Ｉ）で表される置換基は、その芳香族環上の水素が、少なくとも２種以上のハロゲン原子で置換されている。このような置換基で多糖の水酸基またはアミノ基の水素原子を置換された多糖誘導体を光学異性体用分離剤の原料として用いると、光学分割能が向上する。
上記式（Ｉ）で表される置換基において、芳香族環上の置換される水素の位置は、２か所であることが好ましく、その位置は、３位及び４位、３位及び５位、２位及び３位、２位及び4位、２位及び５位であることが好ましく、そのハロゲンの組み合わせは、塩素及
びフッ素、臭素及びフッ素、臭素及び塩素、塩素及びヨウ素、臭素及びヨウ素、フッ素及びヨウ素を好ましく例示できる。
また、その際、ハロゲンで置換されていない芳香族環上の水素は無置換であることが好ましい。
【００１３】
なお、多糖の水酸基またはアミノ基の水素原子の少なくとも一部とは、多糖が、上記のような少なくとも２位及び３位に水酸基またはアミノ基を有するものであれば、２位のみ、３位のみ、または２位及び３位の両方の水酸基またはアミノ基が置換されていることをいう。２位及び３位以外にも例えば６位に水酸基を有する多糖であれば、６位のみが式（Ｉ）で表される置換基で置換されていてもよい。式（Ｉ）で表される置換基で水酸基またはアミノ基の水素原子を置換する方法については後述する。
【００１４】
前記式（Ｉ）で表される置換基は、下記式（ＩＩ）で表される置換基であることがより好ましい。
【化４】
2013164294.tif 000005
［式中、Ｒ6及びＲ7は、それぞれ独立して、フッ素、塩素、臭素及びヨウ素からなるハロゲン原子の群から選ばれるハロゲン原子であり、Ｒ6とＲ7は同一のハロゲン原子ではない。］
【００１５】
前記式（Ｉ）または（ＩＩ）で表される置換基により、多糖の水酸基またはアミノ基の水素原子を置換する方法については、以下のようなものが挙げられる。
芳香族環上の水素が上記式（Ｉ）のＲ1〜Ｒ5で置換されたフェニルイソシアネート化合物を、塩化リチウムを溶解させたＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ-メチル−２−ピロ
リドン及び１，３−ジメチル−２−イミダゾリジノンで例示されるアミド系溶媒に溶解させ、この溶液に多糖を加え、適当な温度及び時間（２０〜１００℃、１〜２４時間）で反応を起こさせることで、フェニルイソシアネート化合物のイソシアネート基と多糖の水酸基またはアミノ基とを反応させる。
上記アミド系溶媒の他にも、例えばピリジンを用いることもできる。
【００１６】
上記フェニルイソシアネート化合物は、例えば以下の（１）または（２）のような方法で得ることができる。
【００１７】
（１）芳香族環上の水素が上記（Ｉ）で表される置換基で置換された安息香酸を原料として用い、これをアセトンに溶解させ、低温（０〜５℃）でトリエチルアミンとクロロギ酸エチルを加え、その後アジ化ナトリウムを加えてさらに撹拌することでアジ化物を得る。その後、溶媒を減圧留去によって除去し、トルエンに溶解させて再び減圧留去させることによって、目的とするイソシアネート化合物を得ることができる。
【００１８】
（２）トリホスゲンをジクロロメタンのような適当な溶媒に仕込み、芳香族環上の水素が上記（Ｉ）で表される置換基で置換されたアニリン誘導体と、ピリジン及びジクロロメタンのような溶媒とを、低温０〜１０℃で滴下する。これらの滴下後に還流を行い、ピリジンを滴下し、これにさらにトルエンを加える。これを濃縮後さらにトルエンを加えて冷却することで、ピリジン塩酸塩を晶析させ、ろ別する。ろ液を濃縮し蒸留精製することで目的のイソシアネート化合物を析出させて得ることができる。
【００１９】
本発明の多糖誘導体において、上記式（Ｉ）または（ＩＩ）で表される置換基で置換されていない水酸基またはアミノ基は、上記式（Ｉ）または（ＩＩ）で表される基以外の基で置換されていてもよい。
そのような置換基としては、フェニルカルバモイル基、ジクロロフェニルカルバモイル基、ジメチルフェニルカルバモイル基が好ましく例示でき、より具体的には、３，５−ジクロロフェニルカルバモイル基及び３，５−ジメチルフェニルカルバモイル基が好ましく例示できる。
このような置換基を多糖の水酸基またはアミノ基に導入するには、上記式（Ｉ）または（ＩＩ）で表される置換基を導入する方法と同じ方法を用いることができる。すなわち、上記カルバモイル基を形成するために用いるイソシアネート化合物のイソシアネートと多糖の水酸基またはアミノ基とを反応させることで、式（Ｉ）または（ＩＩ）で表される置換基以外の置換基を導入することができる。
【００２０】
また、本発明の多糖誘導体において、多糖の水酸基またはアミノ基の水素原子は、上記カルバモイル基以外の基で置換されてもよい。そのような置換基としては、下記式（ＩＩＩ）や（ＩＶ）で表される置換基が挙げられる。
−ＣＯ−Ｒ  （ＩＩＩ）
−Ｒ        （ＩＶ）
上記式（ＩＩＩ）及び（ＩＶ）中、Ｒは、独立して、ヘテロ原子を含んでもよい脂肪族又は芳香族炭化水素基であり、置換基をさらに有していてもよい。前記脂肪族炭化水素基としては、炭素数が１〜３０の直鎖状又は分岐状の脂肪族炭化水素基が挙げられ、例えばメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、オクチル、ドデシル、オクタデシル、アダマンチル、及びノルボルニル等が挙げられる。また前記芳香族炭化水素基としては、炭素数が６〜３０の縮合環状を含む芳香族炭化水素基が挙げられ、例えばフェニル、インデニル、ナフチル、アンスリル、フェナンスリル、フルオレニル、ピレニル、ビフェニル、及びターフェニル等が挙げられる。
【００２１】
前記Ｒが有していてもよい置換基としては、例えば、炭素数１〜１２のヘテロ原子を含んでもよい炭化水素、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシ、ニトロ、アミノ、及びジ（炭素数１〜８のアルキル）アミノ基（すなわち炭素数１〜８のアルキル基を置換基として有するアミノ基）からなる群から選ばれた一又は二以上の置換基が挙げられる。
【００２２】
前記式（ＩＩＩ）で表される置換基による置換では、例えばCellulose Vol.11, p.255-263,  2004に記載されているように、リン酸水素二ナトリウムや炭酸ナトリウム等の低分子塩の存在下における前記式（ＩＩＩ）に対応するカルボン酸エステルと前記多糖の水酸基とのエステル交換反応によって行うことができる。前記エステル交換反応におけるカルボン酸エステルの導入に有効な触媒としては、中性若しくは弱酸性、又は弱アルカリ性のリン酸水素塩、硫酸塩、クロライド、ブロマイド等や、アルカリ性の炭酸塩、炭酸水素塩、酢酸塩、リン酸塩等を用いることができる。特にリン酸水素二ナトリウム、炭酸ナトリウムの他、塩化アンモニウム（ＮＨ4Ｃｌ）、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）、ナトリウム
シトレイト、リン酸カリウム（Ｋ3ＰＯ4）、酢酸マグネシウム、炭酸カリウム（Ｋ2ＣＯ3）、酢酸ナトリウム等が好ましく用いられる。
【００２３】
前記式（ＩＶ）で表される置換基による置換では、ジオキサン又はピリジン中で水酸化カリウムやカリウムｔ−ブトキシドを塩基として用い、対応するハロゲン化物と多糖の水酸基又はアミノ基とを適当な条件で反応させることによって行うことができる。
【００２４】
なお、前記一般式（Ｉ）または（ＩＩ）で表される置換基により置換される多糖の水酸基またはアミノ基の位置については特に制限されるものではなく、多糖において前記式（Ｉ）または（ＩＩ）で表される置換基で置換されていない水酸基またはアミノ基が存在する場合には、その未置換の水酸基またはアミノ基は、前記式（ＩＩＩ）または（ＩＶ）で表される置換基で置換されてもよい。
なお、国際公開第２００８−０２９７８５号に示される技術を用い、多糖の水酸基またはアミノ基が式（Ｉ）または（ＩＩ）で表される置換基以外の置換基によっても置換がなされる場合には、所望の位置に所望の置換基を導入することができる。
【００２５】
上記のように、前記式（Ｉ）〜（ＩＶ）で表される置換基は、これらの置換基による光学分割能の効果が得られる範囲であれば、前記構成単位において該当する位置の水酸基又はアミノ基の全てにおいて置き換えられていなくてもよいが、前記式（Ｉ）または（ＩＩ）で表される置換基を含む置換基により、多糖の水酸基またはアミノ基の全てが置換されていることが好ましい。
前記一般式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表される置換基の、本発明の多糖誘導体への導入率は、７０〜１００％が好ましく、８０〜１００％がより好ましく、１００％が特に好ましい
。
【００２６】
尚、前記導入率（％）は以下のように定義される。すなわち、本発明の多糖誘導体において、前記式で表される置換基を前記構成単位における水酸基又はアミノ基に置き換えたものとしたときの前記構成単位の水酸基又はアミノ基の総数に対する、本発明の多糖誘導体における前記式で表される置換基の総数の割合である。導入率は、置換基の種類及び結合位置の一方又は両方を識別できるＮＭＲや元素分析等の公知の分析方法を利用して求めることができ、また置換基の種類又は置換基の結合位置に応じて求めることができる。
【００２７】
前記導入率は、例えば、本発明の多糖誘導体において、前記式で表される置換基を水酸基のみに置き換えた場合には、置換後の多糖の総水酸基数に対する前記一般式（Ｉ）〜（ＩＶ）で表される置換基の数の比率に１００を乗じた数値であり、前記式で表される置換基をアミノ基のみに置き換えた場合には、置換後の多糖の総アミノ基数に対する前記式（Ｉ）〜（ＩＶ）で表される置換基の数の比率に１００を乗じた数値であり、前記式で表される置換基を水酸基及びアミノ基に置き換えた場合には、置換後の多糖の総水酸基数と総アミノ基数の合計に対する前記式（Ｉ）〜（ＩＶ）で表される置換基の数の合計の比率に１００を乗じた数値である。
【００２８】
本発明の光学異性体用分離剤は、本発明の多糖誘導体のみから構成されていてもよいし、シリカゲル等の担体と、この担体に担持される本発明の多糖誘導体とから構成されていてもよいし、またカラム管に一体的に収容される一体型の形態であってもよいし、カラム管に充填される粒子の形態であってもよい。本発明の光学異性体用分離剤は、本発明の多糖誘導体を用いる以外は、多糖誘導体を含有する公知の光学異性体用分離剤と同様に作製され得る。
【００２９】
より具体的には、本発明の多糖誘導体を担体に担持させるか、又は前記多糖誘導体自体を破砕、又は公知の方法により球状粒子化（例えば、特開平７−２８５８８９号公報）することにより光学異性体用分離剤を作製することができる。なお、ここでいう担持とは、担体上に前記多糖誘導体が固定化されていることである。担持する方法には公知の担持方法を適用することができ、前記多糖誘導体と担体との間の物理的な吸着、前記多糖誘導体と担体との間の化学結合、前記多糖誘導体同士の化学結合、前記多糖誘導体及び担体の一方又は両方と第三成分との化学結合、前記多糖誘導体への光照射、ラジカル反応等の方法を適用することができる（例えば、特開平６−９３００２号公報参照）。
【００３０】
担体としては、多孔質有機担体及び多孔質無機担体が挙げられ、好ましくは多孔質無機担体である。多孔質担体の平均孔径は１ｎｍ〜１００μｍが好ましく、５ｎｍ〜５μｍがより好ましい。多孔質有機担体として適当なものは、ポリスチレン、ポリアクリルアミド、ポリアクリレート等からなる高分子物質であり、多孔質無機担体として適当なものは、シリカ、アルミナ、ジルコニア、マグネシア、ガラス、カオリン、酸化チタン、ケイ酸塩、ヒドロキシアパタイトなどである。また、上記多孔質無機担体の形態としては、粒子状の担体だけでなく、有機無機複合体のように網目状になった無機系担体や、特開２００５−１７２６８号公報又は特開２００６−１５０２１４号公報等に記載の、カラム管に保持され得る円柱状の一体型無機系担体も含まれる。
【００３１】
特に好ましい担体はシリカゲルであり、シリカゲルの粒径は１μｍ〜１ｍｍ、好ましくは１μｍ〜３００μｍ、更に好ましくは１μｍ〜１００μｍである。また、担体は、前記多糖誘導体との親和性を良くしたり、担体自身の表面の特性を改質するための処理を施したものを用いても良い。表面処理の方法としてはアミノプロピルシランなどの有機シラン化合物によるシラン化処理やプラズマ重合による表面処理方法がある。担体上への前記多糖誘導体の担持量は、光学異性体用分離剤１００重量部に対して、１〜１００重量部が好
ましく、更に５〜６０重量部が好ましく、特に１０〜４０重量部が望ましい。
【００３２】
また前記多糖誘導体自体を破砕又は球状粒子化するとき、乳鉢等を用いることで得られた破砕状又は球状の多糖誘導体は、分級して粒度を揃えておくことが望ましい。
【００３３】
本発明の光学異性体用分離剤は、ＨＰＬＣの光学異性体用分離剤として用いる場合には公知の方法（例えばスラリー充填法など）によりカラムに充填して用いることができる。本発明の多糖誘導体は、ＨＰＬＣ以外にもガスクロマトグラフィー用、電気泳動用、特にキャピラリーエレクトロクロマトグラフィー用（ＣＥＣ用）、ＣＺＥ（キャピラリーゾーン電気泳動）法、ＭＥＫＣ（ミセル動電クロマト）法のキャピラリーカラムの充填剤としても使用することができる。
【実施例】
【００３４】
以下に、実施例をあげて、本発明について更に詳細に説明を加えるが、本発明の範囲がかかる実施例にのみ限定されないことはいうまでもない。
【００３５】
＜製造例１＞
（１）３−クロロ−５−フルオロフェニルイソシアネートの合成
冷却管付きの１Ｌ四つ口フラスコ反応装置に、窒素雰囲気下、トリホスゲン（１８．９ｇ，６３．７ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン（２９５ ｇ）を仕込み、５℃に冷却した。３
−クロロ−５−フルオロアニリン（２５．０ｇ，１７１．８ｍｍｏｌ）、ピリジン（２２．８ｇ，２８８．２ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン（１４８ｇ）の混合液を９℃以下で滴下した。滴下終了後、１.５時間還流、冷却した。ＮＭＲで原料消失を確認後、ピリジン（
７．３ ｇ，９２．３ ｍｍｏｌ）を１０℃以下で滴下した。１Ｌナスフラスコに反応液を移液し、トルエン（４５０ｇ）を添加した。反応液を濃縮した。さらにトルエン（４５０ｇ）を添加し、１０℃以下に冷却した。析出したピリジン塩酸塩をろ過した。ろ液を濃縮後、濃縮液を蒸留精製することにより、目的物（無色澄明液体）を取得した（沸点：７２℃／１０ｔｏｒｒ、収量１５g、収率５１％）。
【００３６】
＜実施例１：セルロース系充填剤の作成＞
（２）セルロース  トリス（３−クロロ−５−フルオロフェニルカルバメート）の合成
窒素雰囲気下、セルロース（２．００ｇ）と３−クロロ−５−フルオロフェニルイソシアネート（９．２２ｇ,セルロース水酸基に対して１.４５当量）とを、乾燥ピリジン４９ｇ中で、ピリジン還流温度下、２４時間攪拌し、その後アセトニトリル１．２Ｌに注ぎ込んだ。析出した固体をろ取した。これをテヒドロフラン４７ｍＬに溶解し、アセトニトリル０．９４Ｌに注ぎ込んだ。析出した固体をろ取し、真空乾燥（６０℃）を行った。その結果、目的物６．４８ｇ（収率７８％）を得た。得られた白色固体について、有機元素分析装置を用いた炭素、水素及び窒素元素の分析結果を以下の表１に示す。なお、表中の％は重量％を示す。
【００３７】
【表１】
2013164294.tif 000006
【００３８】
（３）シリカゲルの表面処理
多孔質シリカゲル（粒径５μｍ）について、公知の方法により、３−アミノプロピルトリエトキシシランと反応させることにより、前記多孔質シリカゲルにアミノプロピルシラ
ン処理（ＡＰＳ処理）を施した。
【００３９】
（４）セルロース  トリス（３−クロロ−５−フルオロフェニルカルバメート）のシリカゲル担持型充填剤の作製
上記で得たセルロース  トリス（３−クロロ−５−フルオロフェニルカルバメート） 
０．８ｇをテトラヒドロフラン６．４ｍＬに溶解させ、このポリマードープを均一に上記（３）のシリカゲル３．２ｇに塗布した。塗布後、テトラヒドロフランの減圧留去を行うことで、物理的吸着により、目的のセルロース  トリス（３−クロロ−５−フルオロフェニルカルバメート）担持型充填剤を得た。
【００４０】
（５）作製した充填剤を充填したＨＰＬＣ用カラムの作製
上記（４）で作製したセルロース  トリス（３−クロロ−５−フルオロフェニルカルバメート）担持型充填剤を、長さ２５ｃｍ、内径０．４６ｃｍのステンレス製カラムにスラリー充填法で充填し、ＨＰＬＣ用カラムを作製した。
【００４１】
＜実施例２：アミロース系充填剤の作製＞
（６）アミロース  トリス（３−クロロ−５−フルオロフェニルカルバメート）の合成
窒素雰囲気下、アミロース（２．００ｇ）に塩化リチウム（１．３１ｇ）とＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（１７．４ｍＬ）を添加し、９０℃で加熱溶解した。溶解液を冷却後、ピリジン（８．０ｍＬ）、４−ジメチルアミノピリジン（０．９０ｇ）、３−クロロ−５−フルオロフェニルイソシアネート（９．７１ｇ，アミロース水酸基に対して１.５３
当量）を添加し、９０℃で２４時間攪拌した。その後ｎ−ヘキサン／２−プロパノール＝９０／１０（１．７Ｌ）に注ぎ込んだ。析出した固体をろ取した。これをテヒドロフラン３７ｍＬに溶解し、ｎ−ヘキサン／２−プロパノール＝９０／１０（０．７４Ｌ）に注ぎ込んだ。析出した固体をろ取し、真空乾燥(６０℃)を行った。その結果、目的物７．７４ｇ（収率９３％）を得た。得られた白色固体について、有機元素分析装置を用いた炭素、水素及び窒素元素の分析結果を以下の表２に示す。なお、表中の％は重量％を示す。
【００４２】
【表２】
2013164294.tif 000007
【００４３】
（７）アミロース  トリス（３−クロロ−５−フルオロフェニルカルバメート）のシリカゲル担持型充填剤の作製
上記で得たアミロース  トリス（３−クロロ−５−フルオロフェニルカルバメート） 
１．０ｇをテトラヒドロフラン ６ｍＬに溶解させ、このポリマードープを均一に上記（
３）のシリカゲル４ｇに塗布した。塗布後、テトラヒドロフランの減圧留去を行うことで、物理的吸着により、目的のアミロース  トリス（３−クロロ−５−フルオロフェニルカルバメート）担持型充填剤を得た。
【００４４】
（８）作製した充填剤を充填したＨＰＬＣ用カラムの作製
上記（７）で作製したアミロース  トリス（３−クロロ−５−フルオロフェニルカルバメート)担持型充填剤を、長さ２５ｃｍ、内径０．４６ｃｍのステンレス製カラムにスラ
リー充填法で充填し、ＨＰＬＣ用カラムを作製した。
【００４５】
＜比較例１＞
実施例１において、セルロース誘導体の作製時に３−クロロ−５−フルオロフェニルイソシアネートの代わりに３，５−ジクロロフェニルイソシアネートを用いたこと以外は実
施例１と同様の材料、手順により、比較例１のＨＰＬＣ用カラムを作製した。
【００４６】
＜比較例２＞
実施例１において、セルロース誘導体の作製時に３−クロロ−５−フルオロフェニルイソシアネートの代わりに３，５−ジフルオロフェニルイソシアネートを用いたこと以外は実施例１と同様の材料、手順により、比較例２のＨＰＬＣ用カラムを作製した。
【００４７】
＜比較例３＞
実施例２において、アミロース誘導体の作製時に３−クロロ−５−フルオロフェニルイソシアネートの代わりに３，５−ジクロロフェニルイソシアネートを用いたこと以外は実施例２と同様の材料、手順により、比較例３のＨＰＬＣ用カラムを作製した。
【００４８】
＜比較例４＞
実施例２において、アミロース誘導体の作製時に３−クロロ−５−フルオロフェニルイソシアネートの代わりに３，５−ジフルオロフェニルイソシアネートを用いたこと以外は実施例１と同様の材料、手順により、比較例４のＨＰＬＣ用カラムを作製した。
【００４９】
実施例１、比較例１及び２のＨＰＬＣ用カラムを用い、液体クロマトグラフィー法により、表３に示す化合物の不斉識別能力（分離係数α値）の評価を行った。なお、α値は以下で示すように、保持係数（k1'）から算出した。ＨＰＬＣで用いた条件は表３に記載の
とおりであった。
【００５０】
保持係数（ｋ1’）
ｋ1’＝［（対掌体の保持時間）−（デッドタイム）］／デッドタイム）
（デッドタイムは、Ｔｒｉ−ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌｂｅｚｅｎｅの溶出時間をデッドタイムとした。）
分離係数（α）
α＝（より強く保持される対掌体の保持係数）／（より弱く保持される対掌体の保持係数）
【００５１】
【表３】
2013164294.tif 000008
【００５２】
なお、表３中、各略称は以下のものを示す。ｔ−SO：トランス−スチルベンオキサイド、ＴＦＡＥ:２，２，２−トリフルオロ−１−（９−アントリル）エタノール、ＮＥＯＨ:１−（１−ナフタレン）エタノール、ＣｏＡＣ：コバルト（ＩＩＩ）アセチルアセトネート、Ｂｉｎａｐｈ：１，１’−ビ−２−ナフトール
【００５３】
実施例２、比較例３及び４のＨＰＬＣ用カラムを用い、液体クロマトグラフィー法により、表４に示す化合物の不斉識別能力（分離係数α値）の評価を行った。α値は上記で示した式に従い算出した。ＨＰＬＣで用いた条件は表４に記載のとおりであった。表４で示すＴＲ−Ｂａｓｅはトレガー塩基を示す。
【表４】
2013164294.tif 000009
【００５４】
表３および４で示す通り、本発明の多糖誘導体（２種以上のハロゲン原子で芳香族環上の水素が置換されたフェニルカルバモイル基で置換された多糖誘導体）を用いた光学異性体用分離剤を用いた場合には、１種のみのハロゲン原子で芳香族環上の水素が置換されたフェニルカルバモイル基で置換された多糖誘導体を用いた光学異性体用分離剤を用いた場合に比べ、良好な光学分割能を示すことが明らかとなった。
【産業上の利用可能性】
【００５５】
本発明の光学異性体用分離剤に用いたときに、既存の光学異性体用分離剤と同程度かそれ以上の実用性を有しており、さらには光学分割対象のラセミ体によっては既存の光学異性体用分離剤よりも高い光学分割能を示す。したがって、本発明の多糖誘導体及び光学異性体用分離剤は、既存の光学異性体用分離剤では分離が不十分であった光学異性体の分離の可能性を有しており、例えばそのような光学異性体が用いられる新薬の開発に利用することができる。