(57)【要約】【課題】睡眠障害を改善し、又は睡眠を促進し得る物質の提供。【解決手段】短鎖脂肪酸、その塩若しくはそのエステル、及びニコチンアミドからなる群より選択される少なくとも１種を有効成分とする睡眠改善剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
短鎖脂肪酸、その塩若しくはそのエステル、及びニコチンアミドからなる群より選択される少なくとも１種を有効成分とする睡眠改善剤。
【請求項２】
短鎖脂肪酸、その塩若しくはそのエステル、及びニコチンアミドからなる群より選択される少なくとも１種を有効成分とする睡眠促進剤。
【請求項３】
短鎖脂肪酸、その塩若しくはそのエステル、及びニコチンアミドからなる群より選択される少なくとも１種を有効成分とするは睡眠障害改善剤。
【請求項４】
有効成分がプロピオン酸、酪酸又はそれらの塩である、請求項１〜３のいずれか１項記載の剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、良好な睡眠をもたらすことができる睡眠改善剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
睡眠は、ヒトにとって重要な行為である。しかし、最近の生活リズムの乱れ、ストレス、運動不足等により睡眠不足、不眠等の症状を訴えるヒトが増加している。このような睡眠障害は、昼間の集中力の低下や自律神経失調症を引き起こし、生活の質（ＱＯＬ）の低下の原因ともなる。
【０００３】
睡眠障害を改善するための各種組成物が開発されている。例えば、ビタミンＢ１２（特許文献１）、各種プレバイオティクス又はプロバイオティクス（特許文献２）、食物繊維（特許文献３〜４）、テアニン（特許文献５〜７）、γ−アミノ酪酸（特許文献６〜７）を含む、睡眠障害改善用の組成物が知られている。また特許文献８には、ベンゾオキサゾール誘導体によりヒスタミン−３受容体を調節することによって睡眠障害を改善し得ることが記載されている。しかしながら、より優れた睡眠改善効果を有する素材の開発がさらに求められている。
【０００４】
酪酸等の短鎖脂肪酸は、消化管上皮細胞の主要なエネルギー源として知られている（非特許文献１）。ニコチンアミドはビタミンＢ群（ＶＢ３、ナイアシン）の１つである。
【０００５】
しかし、これらの物質が実際に個体の睡眠障害を改善し、又は睡眠を促進し得ることは知られていなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２００６−３２１７４２号公報
【特許文献２】特開２００６−１６０６９７号公報
【特許文献３】特開２００６−９６７１５号公報
【特許文献４】特開２００８−２８５４４１号公報
【特許文献５】特開２００５−２８９９４８号公報
【特許文献６】国際公開公報第２００５／０９７１０１号パンフレット
【特許文献７】国際公開公報第２００７／１２５８８３号パンフレット
【特許文献８】特表２０１１−５０７８８４号公報
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】健康の科学シリーズ８  糖と健康、学会センター関西、学会出版センター、１９９８年：ｐｐ８５−１１０
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、睡眠障害を改善、又は睡眠を促進し得る物質の提供に関する。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、睡眠を促進することができる素材について検討したところ、短鎖脂肪酸、それらの塩若しくはそのエステル、又はニコチンアミドに睡眠を促進し、睡眠障害を改善する作用があることを見出した。
【００１０】
すなわち、本発明は、短鎖脂肪酸、その塩若しくはそのエステル、及びニコチンアミドからなる群より選択される少なくとも１種を有効成分とする睡眠改善剤を提供する。
また本発明は、短鎖脂肪酸、その塩若しくはそのエステル、及びニコチンアミドからなる群より選択される少なくとも１種を有効成分とする睡眠促進剤を提供する。
また本発明は、短鎖脂肪酸、その塩若しくはそのエステル、及びニコチンアミドからなる群より選択される少なくとも１種を有効成分とする睡眠障害改善剤を提供する。
【発明の効果】
【００１１】
本発明の睡眠改善剤は、睡眠を促進することで良好な睡眠をもたらすことができるので、不眠症等の睡眠障害の改善に有用である。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明の睡眠改善剤は、短鎖脂肪酸、その塩若しくはそのエステル、及びニコチンアミドからなる群より選択される少なくとも１種を有効成分とする。本明細書において以下、当該短鎖脂肪酸、その塩若しくはそのエステル及びニコチンアミドをまとめて、本発明の成分と称することがある。本発明において、上記本発明の成分は、各々単独で用いられてもよく、又は任意の組み合わせで用いられてもよい。
【００１３】
上記短鎖脂肪酸としては、炭素数２〜５の短鎖脂肪酸、例えば、酢酸、プロピオン酸、酪酸、イソ酪酸、吉草酸、及びイソ吉草酸が挙げられ、上記短鎖脂肪酸の塩としては、薬学的に許容される塩であれば特に制限はなく、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、アンモニウム塩、アミン等の有機塩基との塩（例えば、メチルアミン塩、トリエタノールアミン塩、カフェイン塩）、塩基性アミノ酸塩（例えば、アルギニン塩、リジン塩）等が挙げられる。上記短鎖脂肪酸又はその塩は、対応するアルコールやアルデヒドの酸化等の方法によって製造するか、又は市販品（例えば、Sodium butyrate：和光純薬工業）を購入することによって入手可能である。
【００１４】
上記短鎖脂肪酸のエステルとしては、アルコール類とのエステル（例えば、octyl butyrate：和光純薬工業）、グルコースやショ糖に代表される小糖類とのエステル（例えば、sucrose octaacetate：シグマ）、デンプンや食物繊維に代表される多糖類とのエステル（例えば、Bajka BH et al. Nutr Res 30: 427-434, 2010に記載の方法で調製されるもの）等が挙げられ、消化管内及び／又は生体内で容易に短鎖脂肪酸を遊離できる構造の化合物であればよい。
【００１５】
このうち、本発明において好ましい短鎖脂肪酸、又はその塩若しくはそのエステルとしては、プロピオン酸、酪酸、及びそれらの塩若しくはエステルが挙げられ、プロピオン酸ナトリウム及び酪酸ナトリウムがより好ましい。上記短鎖脂肪酸及びその塩若しくはそのエステルは、本発明において単独で使用されてもよく、又は任意の組み合わせで用いられてもよい。
【００１６】
上記ニコチンアミドは、アルキルピリジンの硝酸酸化等の方法によって製造するか、又は市販品（例えば、nicotinamide：和光純薬工業）を購入することによって入手可能である。
【００１７】
上記本発明の成分は、睡眠を促進することにより個体の睡眠を改善する。本明細書において、「睡眠改善」とは、寝つきが良くなる、不眠が改善される、睡眠状態が深くなる、覚醒後の気分が良くなる等の基準により評価され得る状態であり、好ましくは、「睡眠健康危険度総得点」が減少することであり得る。
「睡眠健康危険度総得点」は、第１因子：睡眠維持障害関連因子、第２因子：睡眠随伴症（パラソムニア）関連因子、第３因子：睡眠時無呼吸関連因子、第４因子：起床困難関連因子及び第５因子：入眠障害関連因子から構成される各因子について、所定の質問項目に付した評点を集計して求める［ジャーナル・オブ・サイコソマティック・リサーチ（Journal of Psychosomatic Research）、2004年，第56巻，p.465-477］。睡眠健康危険度総
得点は、得点が高い程、睡眠健康に問題がある（危険度が高い）ことを示している。
本発明の睡眠改善剤は、睡眠健康危険度総得点を低下させる効果を発揮し得る。
【００１８】
あるいは、睡眠改善効果は、ショウジョウバエ（Drosophila）モデルを用いて評価することができる。ショウジョウバエは、従来、睡眠−覚醒研究のモデルとして使用されている動物である（Ho et al., Method Enzymol, 393, 772-793, 2005; Shaw et al., Science, 287, 1834-1837, 2000; Hendricks et al., Neuron, 25, 129-138, 2000;  Kume et al., J Neurosci, 25, 7377-7384, 2005; Seugnet et al., J Neurosci, 29, 7148-7157, 2009; Huber et al., Sleep 27, 628-639, 2004; 実験医学  24(4), 484-490, 2006; 細胞工学  27(5), 467-471, 2008）。ショウジョウバエは、睡眠類似行動として知られる不動状態を示すことが観察されている。この行動は、概日リズムの制御を受けており、またカフェインで減少し、抗ヒスタミン薬等の薬物で増加するなど、薬物に対して睡眠と同様の応答を示すことが報告されている。さらに、睡眠と同様、加齢による減少傾向を示すことも報告されている。
従って、ショウジョウバエの睡眠類似行動（不動状態）を延長させる作用を有する物質は、睡眠を促進して睡眠健康危険度総得点を低下させる効果を有する物質、すなわち、睡眠改善効果を有する物質として評価することができる。
【００１９】
またあるいは、睡眠改善効果は、マウス等の動物から脳波、筋電図、心電図、体温、血圧、行動（locomotion）などを測定し、当該動物の睡眠量を調べることによって評価することができる。睡眠の評価は、標準判定方法（Rechtschaffen A. & Kales A., A Manual of Standardized Terminology, Techniques and Scoring System for Sleep Stages of Human Subjects., Public Health Service: Washington DC, 1968）に従って行うことができる。具体的には、動物からの脳波等の測定データに基づいて睡眠ポリグラフを作成し、睡眠ポリグラフのエポック（例えば4〜60秒間）毎に、行動（locomotion）の有無、脳波（δ波）の振幅、脳波のθ波成分比（θ/（δ+θ））などに基づいて、動物の状態を覚醒、ノンレム睡眠、レム睡眠の各ステージとして判別すればよい。睡眠ポリグラフに基づく覚醒又は睡眠の判別は、睡眠解析研究用プログラム：SleepSign（登録商標）（キッセイコムテック株式会社）等により自動で行うことができる。上記判別の結果、睡眠ステージを増加させた物質は、睡眠改善効果を有する物質として評価することができる。
【００２０】
上記本発明の成分は、後記実施例に示すように、ショウジョウバエの睡眠類似行動、またはマウスの睡眠を延長させる作用を有しており、従って睡眠を促進する睡眠改善剤として有用である。従って、上記本発明の成分からなる群より選択される少なくとも１種を、睡眠促進のため、又は睡眠改善のために使用することができ、さらには睡眠障害の改善に使用することができる。当該使用は、ヒト若しくは非ヒト動物における使用であり得、また治療的使用であっても非治療的使用であってもよい。
なお本明細書において、「非治療的」とは、医療行為、すなわち治療による人体への処置行為を含まない概念である。
【００２１】
従って、本発明は、短鎖脂肪酸、その塩若しくはそのエステル、及びニコチンアミドからなる群より選択される少なくとも１種を有効成分とする睡眠改善剤を提供する。
上記本発明の剤は、実質的に短鎖脂肪酸、その塩若しくはそのエステル、及びニコチンアミドからなる群より選択される少なくとも１種から構成されていてもよい。
【００２２】
上記本発明の成分は、睡眠促進のため、睡眠改善のため、又は睡眠障害の改善のための組成物、医薬、医薬部外品、飲食品、飼料、又は飲食品若しくは飼料の原料に素材として配合することができ、あるいはそれらの製造のために使用することができる。上記組成物、医薬、医薬部外品、飲食品、飼料、又は飲食品若しくは飼料の原料は、ヒト又は非ヒト動物用として製造され、又は使用され得る。上記本発明の成分は、当該組成物、医薬、医薬部外品、飲食品、飼料、又は飲食品若しくは飼料の原料に素材として配合され、睡眠促進のため、睡眠改善のため、又は睡眠障害の改善のための有効成分であり得る。
【００２３】
上記医薬又は医薬部外品は、上記本発明の成分を有効成分として含有する。当該医薬又は医薬部外品は、任意の投与形態で投与され得る。投与形態は、経口投与でも非経口投与でもよい。例えば、経口投与形態としては、錠剤、被覆錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤のような固形投薬形態、ならびにエリキシル、シロップおよび懸濁液のような液体投薬形態が挙げられ、非経口投与形態としては、注射、輸液、経皮、経粘膜、経鼻、経腸、吸入、坐剤、ボーラス、貼布剤等が挙げられる。このうち、経口投与形態が好ましい。
【００２４】
上記医薬や医薬部外品は、上記本発明の成分を単独若しくは組み合わせて含有していてもよく、又はさらに薬学的に許容される担体と組み合わせて含有していてもよい。斯かる担体としては、例えば、賦形剤、被膜剤、結合剤、増量剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、希釈剤、分散剤、緩衝剤、浸透圧調整剤、ｐＨ調整剤、乳化剤、防腐剤、安定剤、酸化防止剤、着色剤、紫外線吸収剤、保湿剤、増粘剤、活性増強剤、抗炎症剤、殺菌剤、矯味剤、矯臭剤等が挙げられる。また、当該医薬や医薬部外品は、上記本発明の成分の睡眠改善作用が失われない限り、他の有効成分や薬理成分を含有していてもよい。
【００２５】
上記医薬又は医薬部外品は、上記本発明の成分から、あるいは必要に応じて上記担体及び／又は他の有効成分や薬理成分を組みあわせて、常法により製造することができる。当該医薬又は医薬部外品における上記本発明の成分の含有量は、合計量として、０．０００１〜２０質量％であればよいが、０．００１〜１０質量％が好ましく、０．０１〜５質量％がより好ましい。
【００２６】
上記飲食品や飼料は、睡眠改善の機能を有し、当該機能を必要に応じて表示した飲食品、機能性飲食品、病者用飲食品、特定保健用飲食品、ペットフード等であり得る。
上記飲食品の種類は特に限定されない。飲料としては、例えば、果汁飲料、炭酸飲料、茶系飲料、コーヒー飲料、乳飲料、アルコール飲料、清涼飲料等、あらゆる飲料が挙げられる。食品の形態は、固形、半固形、液状等の任意の形態であってもよく、また錠剤形態、丸剤形態、タブレット、カプセル形態、液剤形態、シロップ形態、粉末形態、顆粒形態等であってもよい。例えば、食品としては、パン類、麺類、パスタ、ゼリー状食品、各種スナック類、ケーキ類、菓子類、アイスクリーム類、スープ類、乳製品、冷凍食品、インスタント食品、その他加工食品、調味料、サプリメント等が挙げられる。上記飼料の種類も特に限定されず、任意の動物のための飼料であってよく、その形態も上記食品の場合と同様に任意の形態であり得る。
【００２７】
上記飲食品若しくは飼料、又はそれらの原料は、上記本発明の成分を単独若しくは組み合わせて含有していてもよく、又はさらに他の食材や、溶剤、軟化剤、油、乳化剤、防腐剤、香科、安定剤、着色剤、酸化防止剤、保湿剤、増粘剤等の添加剤を組み合わせて含有していてもよい。当該飲食品若しくは飼料中の上記本発明の成分の含有量は、合計量として、０．０００１〜２０質量％であり、０．００１〜１０質量％とするのが好ましく、０．０１〜５質量％とするのがより好ましい。
【００２８】
あるいは、上記本発明の成分からなる群より選択される少なくとも１種は、睡眠促進のため、睡眠改善のため、又は睡眠障害の改善のために、それらを必要とする対象に有効量で投与される。あるいは、上記本発明の成分からなる群より選択される少なくとも１種は、睡眠促進、睡眠改善、又は睡眠障害の改善のために、それらを必要とする対象に有効量で摂取される。上記投与又は摂取は、治療的に行われても、非治療的に行われてもよい。
【００２９】
投与又は摂取する対象としては、睡眠改善を必要とする動物であり得る。動物は、好ましくはヒト又は非ヒト哺乳動物であり、より好ましくはヒトである。
【００３０】
好ましい投与量及び摂取量は、対象の種、体重、性別、年齢、状態又はその他の要因に従って変動し得る。投与の用量、経路、間隔、及び摂取の量や間隔は、当業者によって適宜決定され得る。例えば、ヒトに経口投与又は摂取させる場合、投与又は摂取量は、上記本発明の成分の合計量として、成人１人当たり、２０μｇ〜２０００ｍｇ／日とすることが好ましく、２００μｇ〜１０００ｍｇ／日がより好ましく、２ｍｇ〜５００ｍｇ／日がさらに好ましく、２０ｍｇ〜２００ｍｇ／日がなお好ましい。
【実施例】
【００３１】
以下、実施例を示し、本発明をより具体的に説明する。
【００３２】
実施例１  ショウジョウバエにおける睡眠改善作用の評価
（１）ショウジョウバエの調製
ショウジョウバエの野生種（Ｃａｎｔｏｎ−Ｓ）を、雄１０匹、雌１０匹の割合でショウジョウバエの飼育用エサを入れた飼育バイアルに入れ、１２時間の明暗サイクル下、２５℃で繁殖させた。約７〜１０日後に蛹が黒く色づき羽化直前の状態になったら、親バエを飼育バイアルから取り出した。
新しく羽化したハエは、約１２時間までは交尾できないので、羽化後１２時間以内に二酸化炭素麻酔下、処女メス（ｖｉｒｇｉｎ  ｆｅｍａｌｅ）を、新しいエサの入ったバイアルに集めた。処女メスの収集は羽化開始から３〜４日程度の間に行い、ショウジョウバエの行動量評価（ｌｏｃｏｍｏｔｏｒ  ａｃｔｉｖｉｔｙ）は、羽化後３〜６日の成虫（処女メス）を用いて行った。
【００３３】
（２）被験試料の調製
グルコース（５重量％、アルドリッチ）、寒天（２重量％、三井製糖）を含む水溶液を先に調製し、このグルコース寒天溶液に以下の濃度で試験物質を溶解させて、被験試料とした。非水溶性の試験物質については、予めエタノールに溶解させた後、グルコース寒天溶液にエタノールの量が容量で１０％の割合になるように混合した。被験試料中のグルコースおよび寒天の量は全て同量になるよう調整した。
（被験試料１）酪酸Ｎａ（和光純薬）  １０ｍｇ／ｍｌ
（被験試料２）プロピオン酸Ｎａ（和光純薬）  １０ｍｇ／ｍｌ
（被験試料３）ニコチンアミド（和光純薬）  ３ｍｇ／ｍｌ
グルコース寒天溶液の組成：グルコース５ｇ、寒天２ｇ、水１００ｍｌ
被験試料の溶液に、１０ｍｌあたり４０μｌのボーキニン（ショウジョウバエのエサに使われる防腐剤、Ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル１０ｇを１００％エタノール１００ｍｌに溶解させたもの）を添加した。対照としては、試験物質を含まないグルコース寒天溶液を用いた。調製した各被験試料を、２００μｌのＰＣＲチューブに１００μｌ入れ、以下の行動量測定実験に使用した。
【００３４】
（３）行動量測定
装置：
ＤＡＭ（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ）２システム（ＴｒｉＫｉｎｅｔｉｃｓ社、ＵＳＡ）；複数のガラス管を備え、各ガラス管の中央、長軸方向に赤外線ビームを貫通させることができる。各ガラス管にはショウジョウバエを１匹ずつ入れる。ガラス管内でショウジョウバエが赤外線ビームを横切ることでビームが遮られた回数がカウントされる。１分間あたりの回数をカウントすることでショウジョウバエの行動量を計測する。
【００３５】
測定手順：
ＤＡＭ２システムを用いて、以下の手順でショウジョウバエの休息（睡眠）−活動（覚醒）リズムを測定した。
ＤＡＭ２用ガラス管（長さ：５５ｍｍ、外径：５ｍｍ、内径：３ｍｍ）の一端に脱脂綿を詰め、穴を塞いだ（ショウジョウバエが逃げず、かつ空気が通る程度に脱脂綿を詰める）。開放されたガラス管の口から、上記（１）で調製したショウジョウバエを１匹、吸虫管を使ってガラス管の中に入れ、その後開放された口を、上記（２）で調製した被験試料の入ったＰＣＲチューブで塞いだ。このショウジョウバエが入ったガラス管をＤＡＭ２装置にセットした。
行動量測定は、１２時間の明暗サイクル（明：ＡＭ８：００〜ＰＭ７：５９、暗：ＰＭ８：００〜ＡＭ７：５９）、温度２５℃の環境下で行った。装置をセットした日は装置に対するショウジョウバエの馴化期間とし、翌日のＡＭ８：００から７日後のＡＭ７：５９までの７日分の行動量を測定した。
【００３６】
（４）データ解析
（３）で測定された行動量から、以下の手順でショウジョウバエの休息（睡眠）−活動（覚醒）リズムを決定した。
行動カウントが連続して１０分以上ゼロである期間を、ショウジョウバエの休息（睡眠）と定義した。休息（睡眠）期間（時間）を３０分毎に算出し、その休息時間の割合（休息割合）を求めた。
休息割合（％）  ＝  休息時間（分）／３０分×１００
個体ごとに、上記の３０分毎の休息割合を７日間分算出した（４８×７データ）。その後、休息割合の平均を１日毎に算出し（７データ）、さらにそれら（７データ）を平均することで各個体の「全日の休息割合」を計算した。各群の個体のデータの平均（「全日の平均休息割合」）を対照群と比較することにより、被験試料の睡眠改善効果を評価した。
【００３７】
（５）結果
結果を下記表１に示す。酪酸Ｎａ、プロピオン酸Ｎａ、及びニコチンアミドは、いずれもショウジョウバエの全日の平均休息割合を有意に増加させた。これらの物質は睡眠を促進する睡眠改善剤として有効である。
【００３８】
【表１】
2013082671.tif 000002
【００３９】
実施例２  マウスにおける睡眠改善作用の評価
（１）試験動物
７週齢のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（日本クレア）を購入し、マウス用市販飼料を給餌して、施設への馴化を１週間実施した。飼育環境は、温度２３±２℃、相対湿度５５±１０％、１２ｈの明暗サイクル（ＡＭ７：００オン）下であった。施設への馴化期間及び実験期間を通じ、飼料及び水へのアクセスは制限しなかった。
睡眠ポリグラフ測定用の電極留置手術後より、動物は個別ケージに入れ、対照食あるいは実験食を３週間給餌した（各群：ｎ＝４）。
対照食：ＡＩＮ−７６飼料（ビタミン、ミネラルはＡＩＮ−９３配合を使用）
実験食：ＡＩＮ−７６飼料（ビタミン、ミネラルはＡＩＮ−９３配合を使用）において、コーンスターチ０．５重量％を、０．５重量％の酪酸Ｎａ（和光純薬工業）で置き換えた飼料（コーンスターチのもともとの配合割合は１５．０重量％であるので、最終的な実験食はコーンスターチ１４．５重量％と酪酸Ｎａ０．５重量％を含む。）
【００４０】
（２）動物への睡眠ポリグラフ記録用電極の留置
８週齢、体重２０〜２５ｇのオスマウスに記録用電極を留置した。マウスは、ペントバルビタール麻酔（５０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内[i.p.]投与）下、睡眠ポリグラフ記録に必要な脳波用および筋電用電極が慢性的に埋め込まれた。脳波用電極として直径１ｍｍのステンレス製精密ネジ２本を頭蓋骨中に挿入した。ネジの挿入位置は、大脳皮質領域のブレグマ（ｂｒｅｇｍａ）から横に１．５ｍｍ、前方に１ｍｍの位置、およびラムダ（ｌａｍｂｄａ）から横に１．５ｍｍ、前方に１ｍｍの位置とした。また、筋電を測定する電極としてテフロン（登録商標）皮膜により絶縁されたステンレス製ワイヤーを、２本、平行に僧帽筋に留置した。すべての電極はマイクロコネクターに接続され，デンタルセメントにより頭蓋骨上に固定された。
マウスは、十分な回復期間をとった後、手術後３週目（１５日目）に個別に睡眠ポリグラフ用ケージ（透明アクリル製ケージ）に移され、記録用ケーブルを結線した。記録用ケーブルへの馴化を６日間行った後、手術後２１日目のマウスから、２４時間の睡眠ポリグラフを記録した。
【００４１】
（３）睡眠ポリグラフの記録と解析
脳波および筋電は、動物の行動を制限しないように設計されたスリップリングを経由して記録された。脳波及び筋電のシグナルは、増幅後、フィルター（脳波：０．５〜３０Ｈｚ；筋電：２０〜２００Ｈｚ）を通して１２８Ｈｚのサンプリング速度でデジタル化されて記録された。記録データは、睡眠解析研究用プログラム「ＳｌｅｅｐＳｉｇｎ（登録商標）」（キッセイコムテック株式会社）を用いてオフライン自動解析され、１０秒エポック毎に、標準判定方法（Rechtschaffen A. & Kales A., 1968、上述）に従って覚醒、ノンレム睡眠、レム睡眠に判別された。
自動解析では、予め筋電強度の最低値を設定し、それより高い筋電強度が検出されたエポックを活動的覚醒（active wake）ステージと判別した。活動的覚醒ステージと判別されなかったエポックのうち、予め設定した脳波（δ波）の最低振幅値よりも高い振幅のδ波が検出されたエポックをノンレム睡眠ステージと判定し、一方、脳波のθ波成分比（θ/（δ+θ））が５０％以上あるエポックをレム睡眠ステージと判定し、ノンレム睡眠及びレム睡眠ステージの何れにも入らないエポックを安静時覚醒（quiet wakefulness）ステージと判定した。活動的覚醒ステージと安静時覚醒ステージは、まとめて覚醒ステージとした。
その後、自動解析による各エポックの判別結果を目視的に再検討し、必要であれば、結果を修正した。個体ごとに、全日および暗期（活動期）中での覚醒、ノンレム睡眠及びレム睡眠の割合を求めた。
【００４２】
（４）結果
暗期（活動期）後半（６ｈ）のノンレム睡眠割合は、対照食群に比較して実験食群で有意に増加していた。さらに全日及び暗期（活動期）のレム睡眠割合も、対照食群に比較して実験食群で有意に増加していた（表２）。以上の結果は、酪酸Ｎａを摂取することでマウスの睡眠が促進されることを示している。
【００４３】
【表２】
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