(57)【要約】【課題】ヒアルロン酸合成促進剤を提供する。【解決手段】ヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩を有効成分として含有するヒアルロン酸合成促進剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩を有効成分として含有することを特徴とするヒアルロン酸合成促進剤。
【請求項２】
ヒアルロン酸合成酵素の産生を促進する請求項１に記載のヒアルロン酸合成促進剤。
【請求項３】
ヒアルロン酸合成酵素のｍＲＮＡ発現を促進する請求項１または２に記載のヒアルロン酸合成促進剤。
【請求項４】
経口投与用である、請求項１ないし３のいずれかに記載のヒアルロン酸合成促進剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒアルロン酸合成促進剤に関する。より詳しくは、本発明はヒアルロン酸合成酵素の産生を促進するヒアルロン酸合成促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒアルロン酸は、皮膚、軟骨、関節液などに存在するムコ多糖類であり、その約半数が皮膚に存在する。ヒアルロン酸は、優れた保水力を有し、皮膚組織等においては、細胞外空間の構造維持、細胞への栄養供給物の拡散と老廃物の排出、さらには、細胞表面レセプタ−と相互作用し細胞分化などのシグナル伝達物質として働くことが知られている。また、ヒアルロン酸は、皮膚の弾力性又は粘弾性、保水性に深く関係し、加齢とともに減少することが知られている。ヒアルロン酸の減少は、乾燥肌となる原因とされ、皮膚のハリが衰え、シワやたるみなどの皮膚老化現象が起こりやすくなる。
このため、潤いやハリのある肌を維持する方法としては、一般的に、化粧料等の皮膚外用剤で外部より保湿成分としてのヒアルロン酸を補給する方法が用いられている（特許文献１）。
【０００３】
しかしながら、従来の化粧料は、皮膚表面における保湿効果を得られるだけであり、本質的に皮膚老化現象を抑制するには至っていない。
【０００４】
また、関節液中に含まれるヒアルロン酸は、関節軟骨の表面を覆い、関節機能の円滑な作動に役立っている。慢性関節リウマチや関節炎の場合、正常人関節液中のヒアルロン酸含量と比較して、ヒアルロン酸含量が低下することが知られている。このような疾患の治療法としては、一般的に、ヒアルロン酸ナトリウムの関節注入が行われている。
【０００５】
しかしながら、上記疾患の治療は長期にわたり、患者にとって負担が大きく、また注射部位に疼痛等が発生する場合があるため、日常的に容易に治療できるヒアルロン酸産生促進剤が望まれていた。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特表２０１１−５１３４８１号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、ヒアルロン酸合成酵素の産生を促進してヒアルロン酸量を増加させるヒアルロン酸合成促進剤を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、ヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩が、ヒアルロン酸合成を促進することを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００９】
すなわち、本発明は、
（１）ヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩を有効成分として含有することを特徴とするヒアルロン酸合成促進剤、
（２）ヒアルロン酸合成酵素の産生を促進する（１）に記載のヒアルロン酸合成促進剤、
（３）ヒアルロン酸合成酵素のｍＲＮＡ発現を促進する（１）または（２）に記載のヒアルロン酸合成促進剤、
（４）経口投与用である、（１）ないし（３）のいずれかに記載のヒアルロン酸合成促進剤、
である。
【発明の効果】
【００１０】
上記ヒアルロン酸合成促進剤によれば、ヒアルロン酸合成促進、特にヒアルロン酸合成酵素の産生を促進して生体内のヒアルロン酸量を増加させることができる。また、上記ヒアルロン酸合成促進剤によればヒアルロン酸合成酵素の遺伝子発現を促進することにより、ヒアルロン酸合成酵素の産生を促進することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
以下、図面を参照しつつ、本発明を詳細に説明する。なお、本発明において、格別に断らない限り、「部」は「質量部」を意味し、「％」は「質量％」を意味する。
【００１２】
１．ヒアルロン酸合成促進剤
本発明のヒアルロン酸合成促進剤は、ヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩を有効成分として含有することを特徴とする。
【００１３】
１．１．ヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩
本発明において、「ヒアルロン酸」とは、β−Ｄ−グルクロン酸とβ−Ｄ−Ｎ−アセチルグルコサミンとの二糖からなる繰り返し構成単位を１以上有する多糖類である。すなわち、ヒアルロン酸は、β−Ｄ−グルクロン酸の１位とβ−Ｄ−Ｎ−アセチル−グルコサミンの３位とが結合した２糖単位を少なくとも１個含む２糖以上のものである。また、「ヒアルロン酸の薬学的に許容される塩」としては、特に限定されないが、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、亜鉛塩、マグネシウム塩、アンモニウム塩等が挙げられる。
【００１４】
ヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩は、動物等の生体組織（例えば鶏冠、さい帯、皮膚、関節液等）から抽出されたものでもよく、あるいは、微生物、動物細胞または植物細胞を培養して得られたもの（例えばストレプトコッカス属の細菌等を用いた発酵法）、化学的または酵素的に合成されたもの等を使用することができる。
【００１５】
なお、本発明において使用するヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩の純度は、医薬品で使用できるレベルであればよく、好ましくは９０％以上であればよく、より好ましくは９５％以上であればよい。この純度は、カルバゾール硫酸法（例えば日本薬局方）にて測定されたグルクロン酸定量値から算出された値である。
【００１６】
カルバゾール硫酸法は、ホウ酸ナトリウム・硫酸溶液中にヒアルロン酸水溶液を加えて混和し、ヒアルロン酸を加熱分解した後冷却し、カルバゾール・エタノール溶液を加えて混和し、加熱後放冷した試料液の吸光度（５３０ｎｍ）を測定する方法である。同様に処理したＤ−グルクロノラクトンを用いて検量線を作成し、Ｄ−グルクロノラクトン換算値を算出した後、１．１０２を乗じてグルクロン酸定量値を求める。得られたグルクロン酸定量値に（ヒアルロン酸類の分子量／グルクロン酸の分子量）を乗じてヒアルロン酸類の含有量を算出する。
【００１７】
また、本発明のヒアルロン酸合成促進剤で使用するヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩の平均分子量は、ヒアルロン酸合成促進効果を十分に得られる点から、好ましくは１００万以下であり、より好ましくは４００〜８０万以下、さらに好ましくは５，０００〜５０万である。
【００１８】
なお、本発明で規定されるヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩の平均分子量は、以下の方法により測定される。
【００１９】
即ち、約０．０５ｇの精製ヒアルロン酸を精密に量り、０．２ｍｏｌ／Ｌ濃度の塩化ナトリウム溶液に溶かし、正確に１００ｍＬとした溶液及びこの溶液８ｍＬ、１２ｍＬ並びに１６ｍＬを正確に量り、それぞれに０．２ｍｏｌ／Ｌ濃度の塩化ナトリウム溶液を加えて正確に２０ｍＬとした溶液を試料溶液とする。この試料溶液及び０．２ｍｏｌ／Ｌ濃度の塩化ナトリウム溶液につき、日本薬局方（第十四改正）一般試験法の粘度測定法（第１法
毛細管粘度測定法）により３０．０±０．１℃で比粘度を測定し（式（１））、各濃度における還元粘度を算出する（式（２））。還元粘度を縦軸に、本品の換算した乾燥物に対する濃度（ｇ／１００ｍＬ）を横軸にとってグラフを描き、各点を結ぶ直線と縦軸との交点から極限粘度を求める。ここで求められた極限粘度をＬａｕｒｅｎｔの式（式（３））に代入し、平均分子量を算出する（T.C. Laurent, M. Ryan, A. Pietruszkiewicz,:B.B.A., 42, 476-485(1960)）。
（式１）
比粘度 ＝ {(試料溶液の所要流下秒数)/(0.2moｌ/L塩化ナトリウム溶液の所要流下秒数)}−1
（式２）
還元粘度 = 比粘度/(本品の換算した乾燥物に対する濃度（g/100mL）)
（式３）
極限粘度 ＝ ３．６×１０−４Ｍ０．７８
Ｍ：平均分子量
【００２０】
本発明のヒアルロン酸合成促進剤におけるヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩の含有量は、ヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩が有効成分として機能しうる量であればよく、通常１質量％以上であり、好ましくは５〜９５質量％である。
【００２１】
１．２．ヒアルロン酸の合成促進
本発明のヒアルロン酸合成促進剤は、ヒトまたはヒト以外の動物の体内でヒアルロン酸の合成を促進する。
【００２２】
ヒアルロン酸は、皮膚に存在する高分子多糖類であり、皮膚の弾力性又は粘弾性、保水性に深く関与する。また、ヒアルロン酸は加齢とともに減少するため、皮膚のハリの衰え、シワやたるみ等の皮膚老化現象に深く関係している。ヒトのヒアルロン酸合成に関与する酵素としては、３種類のヒアルロン酸合成酵素（HAS１、HAS２、HAS３）が存在する。ヒアルロン酸合成酵素の内、ヒアルロン酸合成酵素２（HAS２）は、主に真皮に存在する高分子ヒアルロン酸合成を制御し、皮膚のハリが衰え、シワやたるみなどの皮膚老化現象に大きな影響を与える。
【００２３】
本発明のヒアルロン酸合成促進剤に使用するヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩としては、表皮又は真皮中においてヒアルロン酸合成を促進するものであれば、特に限定されるものではないが、高分子ヒアルロン酸合成を促進するものが好ましい。また、高分子ヒアルロン酸合成量は、HAS２により制御されているため、HAS２を活性化する成分であれば、本発明のヒアルロン酸合成促進剤に使用するヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩として特段の限定なく使用することができる。これらのうち、より好ましいものとしては、HAS２のmRNA発現を促進させる作用を有するヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩が好ましい。
【００２４】
本発明のヒアルロン酸合成促進剤によるヒアルロン酸の合成促進を評価する方法としては、ヒアルロン酸産生量を評価できる方法であれば、特段の限定なく使用することができる。表皮又は真皮中の高分子ヒアルロン酸は、主にHAS２により産生されるため、表皮または真皮における高分子ヒアルロン酸合成促進作用は、HAS２の酵素活性を測定することにより代替することができる。本発明においては、HAS２の活性化作用を測定する方法であれば、特段の限定なく使用することができるが、より好ましいものとしては、HAS２のmRNA発現量の変化を測定することによりHAS２の活性化作用を測定する方法を使用することができる。また、ヒアルロン酸合成酵素発現量を測定する方法としては、ポリメラ−ゼ連鎖反応（polymerase
chain reaction、PCR）を利用したPCR法が好ましい。
【００２５】
本発明のヒアルロン酸合成促進剤に使用するヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩としては、真皮細胞に直接的に働きかけ真皮および表皮細胞のヒアルロン酸産生量を増加させるもの、または、経口摂取した場合に腸管上皮表面の受容体に結合し、それにより生じるサイトカイン等の情報伝達物質を介して間接的に作用し、真皮細胞のヒアルロン量を増加させる作用を有するものであれば、特段の限定なく使用することができる。
【００２６】
また、皮膚は常に紫外線に曝露されており、長年かつ繰り返しの紫外線曝露によって皮膚の光老化が促進される。特に、顔や手のような直接紫外線を浴びるケースが多い露出部の肌の老化原因はほとんどが光老化であると考えられている。したがって、顔や手においては、加齢によって起こる自然老化とともに光老化を抑制する必要がある。
【００２７】
光老化の主な症状としては、深いシワの形成や、しみの発生であるが、本発明のヒアルロン酸合成促進剤は、紫外線に暴露された皮膚においても、ヒアルロン酸の合成を促進することができ、光老化を抑制することが期待される。
【００２８】
また、関節液中に含まれるヒアルロン酸は、関節軟骨の表面を覆い、関節機能の円滑な作動に役立っている。慢性関節リウマチや関節炎の場合、正常人関節液中のヒアルロン酸含量と比較して、ヒアルロン酸含量が低下することが知られている。これらの疾患の治療法としては、例えば、ヒアルロン酸を関節に注射することによって、関節液中のヒアルロン酸含量を増やし、関節の炎症を抑える治療が行われている。
【００２９】
本発明のヒアルロン酸合成促進剤は、上記疾患の改善または予防に好適に使用することができる。また、本発明のヒアルロン酸合成促進剤は、経口投与されることが好ましく、経口的に摂取されることにより、ヒアルロン酸を注射した部位に疼痛等が発生することなく、関節液中のヒアルロン酸量を増やすことができる。
【００３０】
本発明のヒアルロン酸合成促進剤は、有効成分であるヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩以外に、本発明の効果を損なわない範囲で、その他の原料を含むことができる。そのような原料の例としては水、賦形剤、抗酸化剤、防腐剤、湿潤剤、粘稠剤、緩衝剤、吸着剤、溶剤、乳化剤、安定化剤、界面活性剤、滑沢剤、水溶性高分子、甘味料、矯味剤、酸味料、アルコール類等が挙げられる。
【００３１】
本発明のヒアルロン酸合成促進剤の剤形は特に限定されないが、本発明のヒアルロン酸合成促進剤を経口摂取する場合、例えば錠剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、カプセル剤、丸剤等の固形製剤、水剤、懸濁剤、シロップ剤、乳剤等の液剤等の経口投与剤が挙げられる。
【００３２】
ヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩は生体物質であるため、多量に摂取しても副作用がない、またはきわめて低いと考えられるが、本発明のヒアルロン酸合成促進剤として摂取するヒアルロン酸及び／またはその塩の量は、一日当たり１０ｍｇ〜１０００ｍｇ、好ましくは１００〜５００ｍｇを目安とすることができる。投与回数は、紫外線照射量や季節に応じて一日当たり一回もしくは複数回を選択できる。
【００３３】
２．ヒアルロン酸合成酵素の産生促進
本発明のヒアルロン酸合成促進剤は、ヒアルロン酸合成酵素の産生を促進することにより、ヒアルロン酸の合成を促進することができる。
ヒトのヒアルロン酸合成に関与する酵素としては、３種類のヒアルロン酸合成酵素（HAS１、HAS２、HAS３）が存在する。ヒアルロン酸合成酵素のうち、ヒアルロン酸合成酵素２（HAS２）は、主に真皮に存在する高分子ヒアルロン酸合成を制御し、皮膚のハリが衰え、シワやたるみなどの皮膚老化現象に大きな影響を与える。したがって、本発明のヒアルロン酸合成促進剤において、好ましいものとしては、HAS２を活性化させる作用を有するヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩が好ましい。
【００３４】
３．ヒアルロン酸合成酵素のｍＲＮＡ発現促進
本発明のヒアルロン酸合成促進剤は、ヒアルロン酸合成酵素のｍＲＮＡ発現を促進することにより、ヒアルロン酸の合成を促進することができる。
本発明のヒアルロン酸合成促進剤に使用するヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩としては、ＨＡＳ１、ＨＡＳ２、ＨＡＳ３のｍＲＮＡの発現を促進するものであれば特に限定されるものではないが、ＨＡＳ２のｍＲＮＡ発現を促進させる作用を有するヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩が好ましい。表皮細胞または真皮細胞におけるＨＡＳ２のｍＲＮＡ発現量を増加させることにより、表皮又は真皮細胞における高分子ヒアルロン酸産生量を増加させることができる。
【００３５】
４．経口投与用のヒアルロン酸合成促進剤
本発明のヒアルロン酸合成促進剤、本発明の一実施形態に係るヒアルロン酸合成酵素の産生促進剤、他の実施形態に係るヒアルロン酸合成酵素のｍＲＮＡ発現促進剤は、経口投与用途に好適に用いることができる。
【００３６】
潤いやハリのある肌を維持する方法としては、一般的に、化粧料等の皮膚外用剤で外部より保湿成分としてのヒアルロン酸を補給する方法が用いられているが、従来の化粧料は、皮膚表面における保湿効果を得られるだけであり、本質的に皮膚老化現象を抑制するには至っていない。
また、関節液中に含まれるヒアルロン酸は、関節軟骨の表面を覆い、関節機能の円滑な作動に役立っている。慢性関節リウマチや関節炎の場合、正常人関節液中のヒアルロン酸含量と比較して、ヒアルロン酸含量が低下することが知られている。このような疾患の治療法としては、一般的に、ヒアルロン酸ナトリウムの関節注入が行われているが、上記疾患の治療は長期にわたり、患者にとって負担が大きく、また注射部位に疼痛等が発生する場合があるため、日常的に容易に治療できるヒアルロン酸産生促進剤が望まれていた。
【００３７】
本発明の一実施形態に係る経口投与用のヒアルロン酸合成促進剤は、上記問題点を解決できるものであり、経口的に摂取するため、生体内で作用することができ、皮膚の内部から保湿効果を得られることができる。また、日常的に容易に摂取することができるため、上記関節疾患の治療における負担を軽減することができる。
【００３８】
５．実施例
以下、実施例によって本発明をさらに詳細に説明するが、本発明は実施例に限定されない。
【００３９】
５．１．実施例１（ヒト皮膚線維芽細胞におけるヒアルロン酸のＨＡＳ２発現促進作用（in vitro））
ヒト皮膚線維芽細胞におけるヒアルロン酸のＨＡＳ２発現促進作用を確認するために、ヒアルロン酸でヒト皮膚線維芽細胞を処理した場合におけるＨＡＳ２のｍＲＮＡ産生量の測定を以下の方法で行った。
【００４０】
線維芽細胞は、正常ヒト新生児皮膚線維芽細胞（エーディア株式会社から入手、以下「hFB」という）を使用した。増殖用培地にはDMEM培地 (D6046、SIGMA社)/１０％  FBS（SIGMA社）/1％ PSN
Antibiotic Mixture(GIBCO社製))を使用した。添加用培地には、フェノールレッドを含まない無血清DMEM培地(Dulbecco’s
Modified Eagle’s Medium (GIBCO社製：31053)/4mM L-glutamine/1mM sodium pyruvate/1%
PSN Antibiotic Mixture))を使用する。細胞は5％ CO2、37℃で培養した。
【００４１】
次に、hFBを6 cm
dish(IWAKI社製)に1.0×104cell/cm2の濃度で播種し、増殖用培地下で培養した。細胞がdishに対して90〜100％の被覆率となるまで増殖させた後、増殖用培地の血清成分を取り除くためにPBS（-）
2 mlで2回洗浄した後、直ちに滅菌した精製水に希釈した試薬を含む培地を3 ml添加した。ヒアルロン酸を精製水に対して1.0 mg/mlとなるように溶解したものを、添加用培地に対して0.01％v/v（終濃度は1μg/mL）の割合で添加した。その後、5％CO2、37℃インキュベータ内で培養した。
【００４２】
培養９時間後に細胞からＴＲＩｚｏｌ試薬（インビトロジェン株式会社）を用いｍＲＮＡを回収して、リアルタイムＰＣＲ機器（Ｔｈｅｒｍａｌ
Ｃｙｃｌｅｒ Ｄｉｃｅ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ Ｓｙｓｔｅｍ ＴＰ８００、タカラバイオ株式会社）を用いたＨＡＳ２のｍＲＮＡの定量を行った。まず、逆転写によってｍＲＮＡからｃＤＮＡを合成し、ｃＤＮＡを用いてＰＣＲ反応を行った。すなわち、熱変性（９５°、５秒）およびアニーリング（６０℃、３０秒）を４０回繰り返す増幅反応を行い、同時にＤＮＡに結合するＣｙｂｒＧｒｅｅｎの蛍光をモニタリングすることによってＤＮＡの増幅を測定し、対照のｍＲＮＡ量を１とした場合の定量を行った。
【００４３】
使用したヒアルロン酸の平均分子量は、３，０００および８，０００（いずれもキユーピー株式会社製）である。結果を表１に示す。
【００４４】
【表１】
2013180989.tif 000002
【００４５】
表１に示されるように、平均分子量が８，０００のヒアルロン酸を添加してから９時間後のｈＦＢ中のＨＡＳ２のｍＲＮＡ量は、増加することが確認され、対照の１．４９倍であった。
【００４６】
５．２．実施例２（ヒアルロン酸のＨＡＳ２発現促進作用（in vivo））
マウスにおけるヒアルロン酸のＨＡＳ２発現促進作用を確認するために、ヘアレスマウスにヒアルロン酸を蒸留水に溶解させた水溶液を経口投与した。
【００４７】
５．２．１．試験液の調製
試料は、平均分子量３０万のヒアルロン酸および平均分子量８，０００のヒアルロン酸（いずれも白色粉末、キユーピー株式会社製）を使用した。試料の投与量がそれぞれ２００ｍｇ／Ｋｇ／日となるように、マウスの平均体重及び平均飲水量から濃度を算出して、試験液を調製した。また、滅菌精製水を対照とした。
【００４８】
５．２．２．試験方法
Ｈｏｓ：ＨＲ−１系雄ヘアレスマウス（６週齢）を皮膚水分量、皮膚粘弾性、体重により有意差のないよう群分けを行い、試験液および対照の経口投与による影響を、各群ｎ＝６で行った（表２参照）。
【００４９】
マウスの背部全体に３回／週の頻度で、６週間ＵＶＢを照射した。総照射量は１回当たり２．８Ｊとした。試験期間中、１回／日の頻度で、試験液をヒアルロン酸として体重１ｋｇあたり２００ｍｇとなるように経口投与した。
【００５０】
【表２】
2013180989.tif 000003
【００５１】
５．２．３．ＨＡＳ２のｍＲＮＡ発現量
試験期間終了後、マウスの背部から切除した皮膚組織からＴＲＩｚｏｌ試薬（インビトロジェン株式会社）を用いｍＲＮＡを回収して、リアルタイムＰＣＲ機器（Ｔｈｅｒｍａｌ
Ｃｙｃｌｅｒ Ｄｉｃｅ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ Ｓｙｓｔｅｍ ＴＰ８００、タカラバイオ株式会社）を用いたＨＡＳ２のｍＲＮＡの定量を行った。まず、逆転写によってｍＲＮＡからｃＤＮＡを合成し、ｃＤＮＡを用いてＰＣＲ反応を行った。すなわち、熱変性（９５℃、５秒）およびアニーリング（６０℃、３０秒）を４０回繰り返す増幅反応を行い、同時にＤＮＡに結合するＣｙｂｒＧｒｅｅｎの蛍光をモニタリングすることによってＤＮＡの増幅を測定し、対照のｍＲＮＡ量を１とした場合の定量を行った。
結果をそれぞれ表３に示す。結果は、ＵＶ（−）対照群のｍＲＮＡ発現量に対する相対量として示す。
【００５２】
【表３】
2013180989.tif 000004
【００５３】
表３より、ＵＶ（＋）対照群では、ＵＶ（−）対照群と比較してＨＡＳ２のｍＲＮＡ量が増加しており、ＵＶＢ照射によるＨＡＳ２のｍＲＮＡの増加が認められた。一方、試験液（ヒアルロン酸溶液）の投与群では、いずれもｍＲＮＡ量が増加し、ＵＶ（＋）対照群と比較しても高値を示した。特に、試験液２投与群では、ＵＶ（−）対照群に対してｐ＜０．０１、ＵＶ（＋）対照群に対してｐ＜０．０５で有意にＨＡＳ２のｍＲＮＡ量が増加していた。
このように、ヒアルロン酸の経口投与により、ＨＡＳ２のｍＲＮＡ量が増加することが確認された。
【００５４】
５．２．４．皮膚の水分量
試験期間中、マウス背部の皮膚水分量の変化を測定した。皮膚水分量の測定には、ＳＫＩＣＯＮ−２００ＥＸ（アイ・ビイ・エス（株））を用いた。結果を表４に示す。
【００５５】
【表４】
2013180989.tif 000005
【００５６】
表４より、ＵＶ（＋）対照群では、ＵＶ（−）対照群と比較して皮膚水分量が減少しており、ＵＶＢ照射による皮膚水分量の減少が認められた。一方、試験液（ヒアルロン酸溶液）の投与群では、ＵＶＢ照射により皮膚水分量が減少したが、ＵＶ（＋）対照群と比較して高値を示した。特に、試験液１投与群では、３週間後および５週間後において、ＵＶ（＋）対照群に対してｐ＜０．０５で有意に高い皮膚水分量であった。また、試験液２投与群では、３週間後において、ＵＶ（＋）対照群に対してｐ＜０．０１で有意に高い皮膚水分量であり、５週間後において、ＵＶ（＋）対照群に対してｐ＜０．０５で有意に高い皮膚水分量であった。
【００５７】
以上の結果から、本発明のヒアルロン酸合成促進剤の経口投与により、ＨＡＳ２のｍＲＮＡ量が増加し、かつ、皮膚水分量することが確認された。
【００５８】
５．３．実施例３
平均分子量８，０００のヒアルロン酸をヒアルロン酸合成促進剤として使用して、内容物が下記の配合であるソフトカプセルを製した。
【００５９】
［配合割合］
ヒアルロン酸合成促進剤（平均分子量８，０００のヒアルロン酸）  ２０％
オリーブ油                                                    ５０％
ミツロウ                                                      １０％
中鎖脂肪酸トリグリセリド                                      １０％
乳化剤                                                        １０％
―――――――――――――――――――――――――――――――――――
１００％
【００６０】
５．４．実施例４
平均分子量３０万のヒアルロン酸をヒアルロン酸合成促進剤として使用して、下記の配合の散剤（顆粒剤）を製した。
【００６１】
［配合割合］
ヒアルロン酸合成促進剤（平均分子量３０万のヒアルロン酸）  １０％
乳糖                                                      ６０％
トウモロコシデンプン                                      ２５％
ヒプロメロース                                              ５％
――――――――――――――――――――――――――――――――
１００％
【００６２】
５．５．実施例５
平均分子量８，０００のヒアルロン酸をヒアルロン酸合成促進剤として使用して、下記の配合の錠剤を製した。
【００６３】
［配合割合］
ヒアルロン酸合成促進剤（平均分子量８，０００のヒアルロン酸）  ２５％
乳糖                                                          ２４％
結晶セルロース                                                ２０％
トウモロコシデンプン                                          １５％
デキストリン                                                  １０％
乳化剤                                                          ５％
二酸化ケイ素                                                    １％
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１００％