(57)【要約】【課題】フコキサンチンを蓄積した牡蠣から、フコキサンチンを分解させることなく、牡蠣特有のタウリン、グリコーゲン、亜鉛などの有効成分とともに、効率的、且つ、簡便に抽出できる、牡蠣エキスの製造方法を提供すること。【解決手段】工程（Ａ）および（Ｂ）を含む牡蠣エキスの製造方法：  工程（Ａ）：フコキサンチンを含有する牡蠣から、エタノールと水とをエタノール／水の量比で５５／４５〜１００／０含む溶媒を用いて、５０℃未満にて抽出し抽出物を得る工程；および  工程（Ｂ）：工程（Ａ）で得られる抽出物を固液分離して抽出残渣と抽出液を得る工程。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
工程（Ａ）および（Ｂ）を含む牡蠣エキスの製造方法：
工程（Ａ）：フコキサンチンを含有する牡蠣から、エタノールと水とをエタノール／水の量比で５５／４５〜１００／０含む溶媒を用いて、５０℃未満にて抽出し抽出物を得る工程；および
工程（Ｂ）：工程（Ａ）で得られる抽出物を固液分離して抽出残渣と抽出液を得る工程。
【請求項２】
工程（Ａ）における溶媒の量が、牡蠣１００質量部に対し１００質量部以上である請求項１に記載の製造方法。
【請求項３】
工程（Ｂ）において、抽出液の濃縮および／または乾燥を行う、請求項１または２に記載の製造方法。
【請求項４】
工程（Ｃ）、（Ｄ）および（Ｅ）を更に含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の製造方法：
工程（Ｃ）：工程（Ｂ）で得られる抽出残渣を温水で抽出し、抽出物を得る工程；
工程（Ｄ）：工程（Ｃ）で得られる抽出物を固液分離して抽出残渣と抽出液を得る工程；および
工程（Ｅ）：工程（Ｂ）で得られる抽出液と工程（Ｄ）で得られる抽出液を混合して混合物を得る工程。
【請求項５】
工程（Ｃ）における温水は、５０℃以上の温水である、請求項４に記載の製造方法。
【請求項６】
工程（Ｃ）における温水の量が、牡蠣１００質量部に対し５０質量部以上である、請求項４または５に記載の製造方法。
【請求項７】
工程（Ｅ）において、
工程（Ｂ）で得られる、抽出液、濃縮後の処理物、乾燥後の処理物、ならびに、濃縮および乾燥後の処理物と、
工程（Ｄ）で得られる、抽出液、濃縮後の処理物、乾燥後の処理物、ならびに、濃縮および乾燥後の処理物と
を混合して、混合物を得る、請求項３〜６のいずれか一項に記載の製造方法。
【請求項８】
工程（Ｅ）において、
工程（Ｂ）で得られる抽出液と工程（Ｄ）で得られる抽出液とを混合後に濃縮および／または乾燥を行う、請求項３〜７のいずれか一項に記載の製造方法。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれか一項に記載の製造方法で得られる牡蠣エキスを含有する飲食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、牡蠣エキスの製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
牡蠣の抽出物である牡蠣エキスは、タウリン、グリコーゲン、亜鉛などの有効成分を含むので、健康食品、機能性食品、栄養補助食品などとして有用である。
【０００３】
有効成分をより豊富に含む牡蠣エキスを得るための技術が、種々報告されている。例えば、特許文献１には、濃度の異なる有機溶媒で抽出して濃度２０乃至４５（Ｗ／Ｗ）％に濃縮した牡蠣肉のエキスを、それぞれ混ぜ合わせて、濃度３０乃至８０（Ｗ／Ｗ）％のエタノール液に浸して沈殿エキスを生成、回収、乾燥する、牡蠣肉エキスの製造方法が記載されている。特許文献２には、牡蠣肉を４０℃乃至５０℃の温水に浸す第１抽出工程、さらにアルコール溶液に浸す第２抽出工程、第１及び第２抽出工程で得られる牡蠣肉エキスを２０乃至４５（Ｗ／Ｗ）％に濃縮する濃縮工程、濃縮したそれぞれの牡蠣肉エキスを混ぜ合わせる混合工程、混ぜ合わされた牡蠣肉エキスを濃度３０乃至８０（Ｗ／Ｗ）％のエタノール液に浸して沈殿エキスを生成する生成工程、並びに、沈殿エキスを回収する回収工程を備える牡蠣肉エキスの製造方法が記載されている。
【０００４】
一方、特許文献３には、微細藻類を主餌料とし牡蠣類を飼育する、食味の優れた牡蠣類の生産方法が記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開平１０−１３６９４７号公報
【特許文献２】特開平１０−１３６９４６号公報
【特許文献３】特開平６−１０５６５８号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
微細藻類の一種である珪藻は、フコキサンチンを含有している。しかしフコキサンチンを含む微細藻類を食べた牡蠣の体内にフコキサンチンが蓄積することは知られていなかった。また係る牡蠣から牡蠣エキスを得るにあたり、特許文献１および２に記載の方法を適用した場合には、牡蠣の体内に蓄積したフコキサンチンを十分に回収することができなかった。
【０００７】
本発明の目的は、フコキサンチンを蓄積した牡蠣から、フコキサンチンを分解させることなく、牡蠣特有のタウリン、グリコーゲン、亜鉛などの有効成分とともに、効率的、且つ、簡便に抽出できる、牡蠣エキスの製造方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、以下の発明を提供する。
〔１〕工程（Ａ）および（Ｂ）を含む牡蠣エキスの製造方法：
工程（Ａ）：フコキサンチンを含有する牡蠣から、エタノールと水とをエタノール／水の量比で５５／４５〜１００／０含む溶媒を用いて、５０℃未満にて抽出し抽出物を得る工程；および
工程（Ｂ）：工程（Ａ）で得られる抽出物を固液分離して抽出残渣と抽出液を得る工程。
〔２〕工程（Ａ）における溶媒の量が、牡蠣１００質量部に対し１００質量部以上である上記〔１〕に記載の製造方法。
〔３〕工程（Ｂ）において、抽出液の濃縮および／または乾燥を行う、上記〔１〕または〔２〕に記載の製造方法。
〔４〕工程（Ｃ）、（Ｄ）および（Ｅ）を更に含む、上記〔１〕〜〔３〕のいずれか一項に記載の製造方法：
工程（Ｃ）：工程（Ｂ）で得られる抽出残渣を温水で抽出し、抽出物を得る工程；
工程（Ｄ）：工程（Ｃ）で得られる抽出物を固液分離して抽出残渣と抽出液を得る工程；および
工程（Ｅ）：工程（Ｂ）で得られる抽出液と工程（Ｄ）で得られる抽出液を混合して混合物を得る工程。
〔５〕工程（Ｃ）における温水は、５０℃以上の温水である、上記〔４〕に記載の製造方法。
〔６〕工程（Ｃ）における温水の量が、牡蠣１００質量部に対し５０質量部以上である、上記〔４〕または〔５〕に記載の製造方法。
〔７〕工程（Ｅ）において、
工程（Ｂ）で得られる、抽出液、濃縮後の処理物、乾燥後の処理物、ならびに、濃縮および乾燥後の処理物と、
工程（Ｄ）で得られる、抽出液、濃縮後の処理物、乾燥後の処理物、ならびに、濃縮および乾燥後の処理物と
を混合して、混合物を得る、上記〔３〕〜〔６〕のいずれか一項に記載の製造方法。
〔８〕工程（Ｅ）において、
工程（Ｂ）で得られる抽出液と工程（Ｄ）で得られる抽出液とを混合後に濃縮および／または乾燥を行う、上記〔３〕〜〔７〕のいずれか一項に記載の製造方法。
〔９〕上記〔１〕〜〔８〕のいずれか一項に記載の製造方法で得られる牡蠣エキスを含有する飲食品。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、フコキサンチンを蓄積した牡蠣から、フコキサンチンを効率よく回収することができ、牡蠣特有のタウリン、グリコーゲン、亜鉛などの有効成分と共にフコキサンチンを含む牡蠣エキスが得られる。このため、本発明において得られる牡蠣エキスは、幅広い効能を有する健康食品となりうる可能性が期待される。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本明細書において「％」は、特に断らない限り「質量％」を示す。
【００１１】
本発明の牡蠣エキスの製造方法は、上記の工程（Ａ）および（Ｂ）を含む：
工程（Ａ）：フコキサンチンを含有する牡蠣から、エタノールと水とをエタノール／水の量比で５５／４５〜１００／０含む溶媒を用いて、５０℃未満にて抽出し抽出物を得る工程；および
工程（Ｂ）：工程（Ａ）で得られる抽出物を固液分離して抽出残渣と抽出液を得る工程。
【００１２】
工程（Ａ）においては、フコキサンチンを含有する牡蠣から、エタノールと水とをエタノール／水の量比で５５／４５〜１００／０含む溶媒を用いて、５０℃未満にて抽出し抽出物を得る。
【００１３】
工程（Ａ）において、牡蠣はイタボガキ科（Ｏｓｔｒｅｉｄａｅ）の牡蠣、例えば、マガキ属（Ｃｒａｓｓｏｓｔｒｅａ）に属する牡蠣、イタボガキ属（Ｏｓｔｒｅａ）に属する牡蠣が挙げられる。具体的には、マガキ（Ｃｒａｓｓｏｓｔｒｅａ  ｇｉｇａｓ）、イワガキ（Ｃｒａｓｓｏｓｔｒｅａ  ｎｉｐｐｏｎａ）、スミノエガキ（Ｃｒａｓｓｏｓｔｒｅａ  ａｒｉａｋｅｓｉｓ）、イタボガキ（Ｏｓｔｒｅａ  ｄｅｎｓｅｌａｍｅｌｌｏｓａ）、ヨーロッパヒラガキ（Ｏｓｔｒｅａ  ｅｄｕｌｉｓ）、太平洋カキ（Ｏｓｔｒｅａ  Ｌａｐｅｒｏｕｓｉ）、大連湾カキ（Ｏｓｔｒｅａ  Ｔａｌｉｅｎｅｈａｎｅｎｓｉｓ）、近江カキ（Ｏｓｔｒｅａ  ｒｉｖｕｌａｒｉｓ）、摺カキ（Ｏｓｔｒｅａ  ｃｕｃｕｌｌａｔａ）などを用いることができる。牡蠣の年齢、性別などについて特に制限はない。
【００１４】
牡蠣は、フコキサンチンを含有する。フコキサンチン（Ａｃｅｔｉｃ  ａｃｉｄ［（１Ｓ，３Ｒ）−３−ｈｙｄｒｏｘｙ−４−［（３Ｅ，５Ｅ，７Ｅ，９Ｅ，１１Ｅ，１３Ｅ，１５Ｅ）−１８−［（１Ｓ，４Ｓ，６Ｒ）−４−ｈｙｄｒｏｘｙ−２，２，６−ｔｒｉｍｅｔｈｙｌ−７−ｏｘａｂｉｃｙｃｌｏ〔４．１．０〕ｈｅｐｔａｎ−１−ｙｌ］−３，７，１２，１６−ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌ−１７−ｏｘｏｏｃｔａｄｅｃａ−１，３，５，７，９，１１，１３，１５−ｏｃｔａｅｎｙｌｉｄｅｎｅ］−３，５，５−ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌ］ｅｓｔｅｒ）は、非プロビタミンＡ類のカロテノイドの一種であり、以下の式で表されるとおり、アレン構造、エポキシドおよびヒドロキシル基を有している。フコキサンチンはその構造中に含まれる１以上の水素原子に代えて置換基を有する、いわゆる誘導体（例えば、フコキサンチノール）であってもよい。また、フコキサンチンは塩の形態であってもよい。
【００１５】
【化１】
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【００１６】
塩としては、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、ヨウ化水素酸塩、硝酸塩、リン酸塩等の無機酸塩、クエン酸塩、シュウ酸塩、酢酸塩、ギ酸塩、プロピオン酸塩、安息香酸塩、トリフルオロ酢酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、又はパラトルエンスルホン酸塩等の有機酸塩；ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、アンモニウム塩等の無機塩基塩、トリエチルアンモニウム塩、トリエタノールアンモニウム塩、ピリジニウム塩、ジイソプロピルアンモニウム塩等の有機塩基塩；アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸などのアミノ酸塩が挙げられる。
【００１７】
フコキサンチンを含有する牡蠣とは、体内にフコキサンチンを含有する牡蠣を意味する。フコキサンチンを含有する牡蠣における、フコキサンチン含量は特には限定されないが、牡蠣の重量に対するフコキサンチンの重量として、通常は５ｐｐｍ以上、好ましくは１０ｐｐｍ以上、より好ましくは１５ｐｐｍ以上、更に好ましくは２０ｐｐｍ以上である。上限は特に限定されないが、通常１５０ｐｐｍ以下である。フコキサンチンを含有する牡蠣としては、フコキサンチンを２０〜１５０ｐｐｍ含む牡蠣であることが更に好ましい。牡蠣のフコキサンチンの含有量は、実施例の分析法の項目（１）の条件に従って測定することができる。
【００１８】
フコキサンチンを含有する牡蠣を作出する方法は特には限定されないが、例えば、牡蠣にフコキサンチンを含む飼料を摂取させる方法、遺伝子組み換え技術などによりフコキサンチン産生に関与する酵素遺伝子を導入する方法などが挙げられるが、牡蠣にフコキサンチンを含む飼料を摂取させる方法が好ましい。フコキサンチンを含む飼料は例えば、フコキサンチンを含む天然飼料（微細藻類、植物プランクトンなど）であってもよいし、フコキサンチンを配合した人工飼料であってもよいが、天然飼料であることが好ましく、フコキサンチンを含む微細藻類であることが好ましい。フコキサンチンを含む微細藻類（植物プランクトン、ｍｉｃｒｏａｌｇａｅ）としては、フコキサンチンを含む珪藻類が好ましく、例えば、キートセラス（例えばキートセラス・カルシトランス（Ｃｈａｅｔｏｃｅｒｏｓ  ｃａｌｃｉｔｒａｎｓ）、キートセラス・グラシリス（Ｃｈａｅｔｏｃｅｒｏｓ  ｇｒａｃｉｌｉｓ））、フィスチュリフェラ（例えば、フィスチュリフェラ  サプロフィラ（Ｆｉｓｔｕｌｉｆｅｒａ  ｓａｐｒｏｐｈｉｌａ）、フィスチュリフェラ  ペリキュロサ（Ｆｉｓｔｕｌｉｆｅｒａ  ｐｅｌｌｉｃｕｌｏｓａ）などが挙げられる。藻類の中では海水に住むものが好ましい。フコキサンチンを含む飼料の投与条件については適宜調整することができる。例えば、フコキサンチンを含む飼料を、１週間以上投与する。そして、通常の飼料にて飼育後、必要に応じて一定期間絶食させ、フコキサンチンを含む飼料を、１週間以上投与することが好ましい。給餌量、給餌以外の牡蠣の飼育条件についても特に制限はなく、適宜水温、ｐＨ等を調整することができる。例えば給餌量は限定されないが、牡蠣が摂食する量以上の量を給餌することが好ましい。また、水温は通常１５〜３０℃の範囲で調整され得る。さらに、水のｐＨは通常、７．５〜８．５の範囲で調整され得る。水中には空気を通気することが好ましく、流水させることが好ましい。
【００１９】
牡蠣からの抽出を行う際には、下記をそのまま用いてもよいし、いったん冷凍した状態の牡蠣を解凍して用いてもよい。また、必要に応じて細分して用いてもよく、細分してから抽出することが好ましい。
【００２０】
工程（Ａ）においては抽出溶媒としてエタノールと水とを含む溶媒を用いる。この溶媒において、エタノール／水の量比は５５／４５〜１００／０である。この範囲であることによりフコキサンチンを効率よく抽出することができる。
【００２１】
抽出時の温度は、フコキサンチンの分解を防ぐ観点から、５０℃未満であり、４５℃以下であることが好ましい。抽出温度の下限は、抽出率を保持できる観点から、２０℃以上であることが好ましい。温度は、抽出溶媒の添加時の温度を調整すればよい。
【００２２】
溶媒の量は特に限定されず、牡蠣が浸る程度の量を適宜選択できるが、抽出率を向上させる観点からは、牡蠣１００質量部に対する溶媒の量が１００質量部以上、好ましくは２００質量部以上であることが好ましい。また、上限は特に限定されないが、抽出効率を保持する観点から、牡蠣１００質量部に対する溶媒の量が１０００質量部以下であることが好ましく、８００質量部以下であることがより好ましい。中でも、牡蠣１００質量部に対する溶媒の量が１００〜１０００質量部であることが好ましく、２００〜８００質量部であることがより好ましい。
【００２３】
抽出時間は特に限定されないが、通常は１５分以上、好ましくは３０分以上である。上限は通常２４０分以下、好ましくは１２０以下である。抽出時には必要に応じて撹拌を行ってもよい。
【００２４】
工程（Ｂ）においては、工程（Ａ）で得られる抽出物を固液分離し、抽出残渣と抽出液を得る。固液分離はろ過、圧搾、静置、遠心分離などにより行うことができ、ろ過または遠心分離により行うことが好ましい。
【００２５】
抽出液はそのまま牡蠣エキスとして用いてもよく、またはそのまま以下説明する工程（Ｃ）に供してもよいが、その前に必要に応じて濃縮、乾燥、粉砕などを行ってもよい。
【００２６】
濃縮は、濃縮後の濃縮物の固形分が好ましくは１０％以上、より好ましくは２０％以上となるように行うことができる。濃縮の方法は特に限定されないが、例えば減圧留去、加熱蒸発（たとえば、常圧下で）、膜分離などにより行うことができ、より低い温度で濃縮できることから、減圧により行うことが好ましい。濃縮装置としては、例えば、減圧撹拌槽、フラッシュ蒸発機、薄膜蒸発機、蒸発缶などが挙げられるが、いずれの装置を用いてもよい。
【００２７】
濃縮の際の温度条件は、フコキサンチンの分解を十分に防ぎフコキサンチンの残存率を保持できる観点から、６０℃以下であることが好ましい。下限は特に限定されないが、通常は室温以上、好ましくは３５℃以上、より好ましくは４０℃以上に設定することができる。
【００２８】
抽出液をそのまま牡蠣エキスとして用いる場合には、濃縮後に、通常は乾燥処理を行う。乾燥の方法は特に限定されず、例えば、ドラム乾燥、噴霧乾燥、凍結乾燥、真空乾燥、窒素ブローによる乾燥等、いずれの方法であってもよい。
【００２９】
本発明の製造方法においては、さらに以下の工程（Ｃ）、（Ｄ）および（Ｅ）を行うことが好ましい：
工程（Ｃ）：工程（Ｂ）で得られる抽出残渣を、温水で抽出し、抽出物を得る工程；
工程（Ｄ）：工程（Ｃ）で得られる抽出物を固液分離して抽出残渣と抽出液を得る工程；および
工程（Ｅ）：工程（Ｂ）で得られる抽出液と工程（Ｄ）で得られる抽出液を混合して混合物を得る工程。
【００３０】
工程（Ｃ）においては、工程（Ｂ）で得られる抽出残渣を、温水（５０〜９０℃）で抽出し、抽出物を得る。
【００３１】
工程（Ｃ）においては抽出溶媒として、温水を用いる。温水は５０℃以上であることが好ましく、６０℃以上であることがより好ましく、７０℃以上であることが更に好ましい。上限は９０℃以下であることが好ましく、８５℃以下であることがより好ましく、８０℃以下であることがより好ましい。温水は５０〜９０℃であることが好ましい。
【００３２】
温水の量は特に限定されず、牡蠣が浸る程度の量を適宜選択できるが、抽出率を向上させる観点からは、牡蠣１００質量部に対し温水の量が５０質量部以上、好ましくは１００質量部以上であることが好ましい。また、上限は特に限定されないが、抽出効率を保持する観点から、牡蠣１００質量部に対し１０００質量部以下であることが好ましく、５００質量部以下であることがより好ましい。溶媒の量は、牡蠣１００質量部に対し５０〜１０００質量部であることが好ましく、１００〜５００質量部であることがより好ましい。
【００３３】
抽出時間は特に限定されないが、通常は３０分以上、好ましくは６０分以上である。上限は通常３００分以下、好ましくは１２０分以下である。抽出時には必要に応じて撹拌を行ってもよい。
【００３４】
工程（Ｄ）においては、工程（Ｃ）で得られる抽出物を固液分離して抽出残渣と抽出液を得る。固液分離はろ過、圧搾、静置、遠心分離などにより行うことができ、ろ過または遠心分離により行うことが好ましい。
【００３５】
抽出液はそのまま、以下説明する工程（Ｅ）に供してもよいが、その前に必要に応じて濃縮、乾燥、粉砕などを行ってもよい。
【００３６】
濃縮は、濃縮後の濃縮物の固形分が好ましくは１０％以上、より好ましくは２０％以上となるように行うことができる。濃縮の方法は特に限定されないが、例えば減圧留去、加熱蒸発（たとえば、常圧下で）、膜分離などにより行うことができ、より低い温度で濃縮できることから、減圧により行うことが好ましい。濃縮装置としては、例えば、減圧撹拌槽、フラッシュ蒸発機、薄膜蒸発機、蒸発缶などが挙げられるが、いずれの装置を用いてもよい。
【００３７】
濃縮の際の温度条件は、フコキサンチンの分解を十分に防ぎフコキサンチンの残存率を保持できる観点から、６０℃以下であることが好ましい。下限は特に限定されないが、通常は室温以上、好ましくは３５℃以上、より好ましくは４０℃以上に設定することができる。
【００３８】
本発明の方法においては、工程（Ｂ）の後に、工程（Ｃ）及び（Ｄ）とは別に、工程（Ｆ）および（Ｇ）の組み合わせを行ってもよい。
工程（Ｆ）：工程（Ｂ）で得られる抽出残渣を、エタノールと水とを含む溶媒を用いて抽出し、抽出物を得る工程
工程（Ｇ）：工程（Ｆ）で得られる抽出物を固液分離し、抽出残渣と抽出液を得る工程
【００３９】
工程（Ｆ）においては、エタノールと水とを含む溶媒を用いる。この溶媒はエタノールと水とを含めばよく、それ以外の条件は特に限定されないが、工程（Ａ）で用いる溶媒、すなわち、エタノールと水とをエタノール／水の量比で５５／４５〜１００／０含む溶媒であることが好ましい。エタノール／水の量比の好ましい範囲、抽出時間については、工程（Ａ）に関して説明したのと同様である。工程（Ｆ）は工程（Ａ）の条件に準じて行ってもよいし、一部または全部において異なる条件を採用して行ってもよい。
【００４０】
工程（Ｇ）における固液分離の条件は、工程（Ｂ）および工程（Ｄ）にて説明したのと同様の条件に準じて行えばよい。工程（Ｇ）における固液分離条件は、それぞれ工程（Ｇ）で得られる抽出液について必要に応じて濃縮を行ってもよいこと、及び該濃縮の好ましい条件については、工程（Ｂ）および工程（Ｄ）にて説明したのと同様である。
【００４１】
工程（Ｅ）においては、工程（Ｂ）で得られる抽出液と工程（Ｄ）で得られる抽出液を混合して混合物を得る。工程（Ｂ）で得られる抽出液と工程（Ｄ）で得られる抽出液の混合比率は特に限定されず、工程（Ｂ）で得られる抽出液と工程（Ｄ）で得られる抽出液をそのまま（すなわち各工程で得られる抽出液を計量せずにそのまま）混合し得る。好ましくは工程（Ｂ）で得られる抽出液／工程（Ｄ）で得られる抽出液＝２０／１〜１／１であり、１０／１〜３／２であることがより好ましい。
【００４２】
工程（Ｆ）および工程（Ｇ）を行う場合には、工程（Ｅ）においては、工程（Ｂ）で得られる抽出液と工程（Ｄ）で得られる抽出液と工程（Ｇ）で得られる抽出液とを混合して混合物を得る。工程（Ｂ）で得られる抽出液と工程（Ｄ）で得られる抽出液と工程（Ｇ）で得られる抽出液の混合比率は特に限定されず、工程（Ｂ）で得られる抽出液と工程（Ｄ）で得られる抽出液と工程（Ｇ）で得られる抽出液とをそのまま（すなわち各工程で得られる抽出液を計量せずにそのまま）混合し得る。好ましくは工程（Ｇ）で得られる抽出液／工程（Ｄ）で得られる抽出液＝２０／１〜１／１であり、１０／１〜３／２であることがより好ましい。
【００４３】
工程（Ｅ）においては、工程（Ｂ）で得られる抽出液および工程（Ｄ）で得られる抽出液を、並びに、工程（Ｆ）および工程（Ｇ）を行う場合には、これらのほかにさらに工程（Ｇ）で得られる抽出液を混合するが、それぞれの抽出液の濃縮および／または乾燥後の処理物どうしを混合してもよい。すなわち、工程（Ｂ）で得られる、抽出液、濃縮後の処理物、乾燥後の処理物、ならびに、濃縮および乾燥後の処理物と、工程（Ｄ）で得られる、抽出液、濃縮後の処理物、乾燥後の処理物、ならびに、濃縮および乾燥後の処理物と、を混合してもよい。または、工程（Ｂ）で得られる抽出液と工程（Ｇ）で得られる抽出液の混合液、その濃縮後の処理物、乾燥後の処理物、ならびに濃縮および乾燥後の処理物と、工程（Ｄ）で得られる、抽出液、濃縮後の処理物、乾燥後の処理物、ならびに、濃縮および乾燥後の処理物と、を混合してもよい。
【００４４】
工程（Ｂ）で得られる抽出液と工程（Ｄ）で得られる抽出液とを混合する場合には、混合物をそのまま牡蠣エキスとしてもよいが、さらに濃縮および／または乾燥を行うことが好ましい。
【００４５】
濃縮は、濃縮後の濃縮物の固形分が好ましくは１０％以上、より好ましくは２０％以上となるように行うことができる。濃縮の方法は特に限定されないが、例えば減圧留去、加熱（たとえば、常圧下で）、膜分離などにより行うことができ、減圧により行うことが好ましく、減圧により行うことがより好ましい。濃縮装置としては、例えば、減圧撹拌槽、フラッシュ蒸発機、薄膜蒸発機、蒸発缶などが挙げられるが、いずれの装置を用いてもよい。
【００４６】
濃縮の際の温度条件は、フコキサンチンの分解を十分に防ぎフコキサンチンの残存率を保持できる観点から、６０℃以下であることが好ましい。下限は特に限定されないが、通常は室温以上、好ましくは３５℃以上、より好ましくは４０℃以上に設定することができる。
【００４７】
乾燥の方法は特に限定されず、例えば、ドラム乾燥、噴霧乾燥、凍結乾燥、真空乾燥、窒素ブローによる乾燥等、いずれの方法であってもよい。
【００４８】
本発明の製造方法により得られる牡蠣エキスは、そのままの形態で、または、必要に応じて牡蠣エキス以外の成分（薬理学的に許容される基剤）と共に、最終製品（例えば、飲食品、医薬部外品など）として用いることができる。また、飲食品用の添加剤、医薬部外品用の添加剤として用いることができる。薬理学的に許容される基剤は、本発明の目的を損なわない限り、特に限定されない。例えば、賦形剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、コーティング剤、着色剤、発色剤、矯味剤、着香剤、酸化防止剤、防腐剤、呈味剤、酸味剤、甘味剤、強化剤、ビタミン剤、膨張剤、増粘剤、界面活性剤などの中から、製剤に必要な諸特性（例えば、製剤安定性）を損なわないものであって、最終製品（例えば、医薬部外品、飲食品）の剤形に応じたものを１種または２種以上選択することができる。また、他の製造方法により得られる牡蠣エキスを併用してもよい。
【００４９】
本発明の製造方法により得られる牡蠣エキスの投与形態は特に限定されない。例えば、経口投与（例えば、口腔内投与、舌下投与など）、非経口投与（静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、経皮投与、経鼻投与、経肺投与など）などが挙げられる。これらの中でも侵襲性の少ない投与形態が好ましく、経口投与であることがより好ましい。
【００５０】
本発明の製造方法により得られる牡蠣エキスの剤形は、飲食品および医薬部外品のいずれとするかによって適宜決定することができ、特に限定されない。経口投与される際の剤形の例としては、液状（液剤）、シロップ状（シロップ剤）、錠剤（錠剤）、カプセル状（カプセル剤）、粉末状（顆粒、細粒）、ソフトカプセル状（ソフトカプセル剤）、液状（液剤）、シロップ状（シロップ剤）、固形状、半液体状、クリーム状、ペースト状が挙げられる。
【００５１】
本発明の製造方法により得られる牡蠣エキスの摂取対象者は特に限定されないが、例えば、疲労を感じている対象者、体力の衰えを感じている対象者、肥満であることを気にしている対象者、その他、牡蠣エキスに含まれるフコキサンチン、タウリン、グリコーゲン、亜鉛などによる効能を期待する対象者に適している。また、特段の不安などがない対象者であっても、健康の保持増進などを目的として日常的に摂取することができる。なお、フコキサンチンには抗酸化作用、抗肥満（脂肪細胞減少効果）、抗糖尿、血管新生作用があることが知られているので（国際公開第２００６／１２６３２５号など、日本水産学会誌、７４（２），２６１−２６２（２００８）など）。従来の牡蠣エキスにはフコキサンチンが含まれていないのでこれらの効果は期待できなかったが、本発明の製造方法により得られる牡蠣エキスにはこれらの効果が期待できるため、付加価値が高い飲食品として有用である。
【００５２】
本発明の製造方法により得られる牡蠣エキスは、各種飲食品として利用することができる。例えば、飲料（清涼飲料、炭酸飲料、栄養飲料、粉末飲料、果実飲料、乳飲料、ゼリー飲料など）、菓子類（クッキー、ケーキ、ガム、キャンディー、タブレット、グミ、饅頭、羊羹、プリン、ゼリー、アイスクリーム、シャーベットなど）、水産加工品（かまぼこ、ちくわ、はんぺんなど）、畜産加工品（ハンバーグ、ハム、ソーセージ、ウィンナー、チーズ、バター、ヨーグルト、生クリーム、チーズ、マーガリン、発酵乳など）、スープ（粉末状スープ、液状スープなど）、主食類（ご飯類、麺（乾麺、生麺）、パン、シリアルなど）、調味料（マヨネーズ、ショートニング、ドレッシング、ソース、たれ、しょうゆなど）が挙げられる。更に、本発明の製造方法により得られる牡蠣エキスは、健康食品、機能性食品、栄養補助食品（サプリメント）、特定保健用食品、医療用食品、病者用食品、乳児用食品、介護用食品、高齢者用食品等の飲食品として利用することもでき、健康食品、機能性食品として利用することが好ましい。
【実施例】
【００５３】
調製例１
１週間絶食させた牡蠣（マガキ）成体に珪藻（キートセラス・カルシトランス）を１週間餌料として投与した。１週間後にサンプリングを行い、重量を測定した後、開殻してむき身とした。むき身は冷凍して保存した。
【００５４】
実施例１
・エタノール抽出→濃縮→乾燥
解凍した生牡蠣１００ｇにエタノール７２０ｇを加えて、攪拌しながら４５℃、３０分保持した。その後、抽出液をろ過して、抽出液と牡蠣残さを分離した。抽出液を５０℃減圧下、固形分２０〜３０％まで濃縮した。濃縮液を減圧乾固させ、牡蠣エキスを得た。
【００５５】
実施例２
・（エタノール抽出＋温水抽出）→濃縮→混合→乾燥
解凍した生牡蠣１００ｇにエタノール６００ｇを加えて、攪拌しながら４０℃、３０分保持した。得られる抽出物をろ過して、抽出液Ａ１と牡蠣残さＢ１を分離した。
【００５６】
次に、牡蠣残渣Ｂ  ８０ｇに水２００ｇを加えて、８０℃、６０分加熱した。得られる抽出物をろ過して、抽出液Ｃ１と牡蠣残さＤ１を分離した。
【００５７】
抽出液Ａ１と抽出液Ｃ１を混合し、４０℃減圧下で固形分約３０％まで濃縮して濃縮液Ｅ１  ３２ｇを得た。その後、減圧乾固させ、牡蠣エキスを得た。
【００５８】
実施例３および４
使用する溶媒の量、溶媒におけるエタノール／水比率、および抽出温度を、それぞれ表１に示す条件とした以外は、実施例２と同様の方法で実施した。
【００５９】
比較例１
・（エタノール抽出＋温水抽出）→濃縮→混合→乾燥
解凍した生牡蠣１００ｇに水２００ｇを加えて、８０℃で６０分煮込んだ。抽出物をろ過して、抽出液Ｃ２と抽出残渣Ｄ２を分離した。
【００６０】
抽出残渣Ｄ２にエタノール４００ｇを加えて、４０℃、３０分攪拌した。得られた抽出物をろ過して、抽出液Ａ２と牡蠣残さＢ２を分離した。抽出液Ａ２と抽出液Ｃ１を４０℃減圧下で固形分約３０％まで濃縮し、濃縮液Ｅ２を得た。濃縮液Ｅ２を減圧乾固させ、牡蠣エキスを得た。
【００６１】
比較例２および３
使用する溶媒（量、エタノール／水比率）および抽出温度を表１に示す条件に変化させた以外は、実施例２と同様の方法で実施した。
【００６２】
（分析法）
（１）フコキサンチン（ＦＸ）の分析法
生牡蠣に含まれるフコキサンチン重量は下記のようにして測定した。むき身を凍結乾燥後、ミキサーで粉砕した。粉末状の牡蠣にアセトン１００ｍｌを添加後、３時間撹拌し、ろ過して得られた抽出液を乾固させた。乾燥物をメタノール（ＭｅＯＨ）で全量を溶解させてＦＸ濃度５０〜１００ｐｐｍになるように調整し、ＨＰＬＣ−ＵＶ法により測定した。
【００６３】
抽出されたフコキサンチン重量は、牡蠣エキスにＨＰＬＣ−ＵＶ法を適用して測定した。
【００６４】
〔ＨＰＬＣ−ＵＶ測定条件〕
分離カラム：Ｉｎｅｒｔｓｉｌ  ＯＤＳ−３（５μｍ，４．６ｍｍＩ．Ｄ．×１５０ｍｍ）
移動相：メタノール／水＝８５／１５
流速：１．０ｍＬ／分
オーブン温度：６０℃
注入量：１０μＬ
検出：４４０ｎｍ（ＵＶ）
【００６５】
（２）グリコーゲンの分析法
生牡蠣に含まれるグリコーゲン重量および抽出されたグリコーゲン重量は、それぞれ、生牡蠣および牡蠣エキスにフェノール硫酸法を適用して測定した。
【００６６】
すなわち、抽出されたグリコーゲン重量は以下のようにして測定した。牡蠣エキスの一部（牡蠣１個分に相当する液量）を乾固させ、水２０ｍＬで希釈して、希釈液Ａを調整した。希釈液Ａをさらに１％に水で希釈した。５０ｍｌビーカーに先ほど希釈した１％液とフェノール溶液を各々１ｍｌを加えて、振り混ぜた。そこに硫酸５ｍｌを一定時間で加えて、１０秒間激しく攪拌させた。室温で３０分間静置させ、分光光度計で４９０ｎｍの吸光度を分析した。同様にしてグルコース１０、５０、１００、２００ｐｐｍの水溶液を調製したものを上記のように反応させ、検量線を作成した。
【００６７】
一方、生牡蠣に含まれるグリコーゲン重量の測定は、以下のようにして測定した。牡蠣むき身１個をラボミルサーでミンチ状にした。１０％トリクロロ酢酸水溶液２００ｍｌを加え、１時間攪拌後、一夜放置した。その後ろ過を行い、５％トリクロロ酢酸５０ｍｌで２回で洗浄した。ろ液に水を加えて正確に５００ｍｌにし、この溶液を希釈液Ｂとした。上記抽出されたグリコーゲン重量の測定において、希釈液Ａの代わりに希釈液Ｂを用いたほかは同様に、グリコーゲン重量の測定を行った。
【００６８】
（３）タウリンの分析法
生牡蠣に含まれるタウリン重量および抽出されたタウリン重量は、それぞれ、生牡蠣および牡蠣エキスにＨＰＬＣプレカラム法を適用して測定した。
【００６９】
抽出されたタウリン重量は以下のようにして測定した。上記項目（２）で説明した希釈液Ａを、さらに２０％に水で希釈した。希釈液０．１５ｇ、緩衝溶液（炭酸Ｎａ、炭酸水素Ｎａ）６００μＬを混ぜ、ＤａｂｓＣｌ−アセトン液６００μＬを加えた。その後７０℃で１２分間加熱した。室温冷却後、ろ過して分析サンプルとした。ＨＰＬＣの測定条件は以下の通りとした。
【００７０】
一方、生牡蠣に含まれるタウリン重量の測定は、以下のようにして測定した。牡蠣むき身１個をラボミルサーでミンチ状にした。水溶液４０ｍｌを加え、１時間攪拌後ろ過を行い、ろ液にスルホサリチル酸２水和物４ｇを加えて再度１時間攪拌した。ついで６０００ｒｐｍで５分間遠心し、上澄み液を分取し、分取された溶液を溶液Ｃとした。抽出されたタウリン重量の測定において、希釈液Ａの代わりに溶液Ｃを用いたほかは同様に、タウリン重量の測定を行った。
【００７１】
〔ＨＰＬＣ条件〕
・カラム：ＯＤＳ−３（ＧＬサイエンス）
・展開溶媒：（Ａ）３５ｍｍｏｌ／Ｌ酢酸Ｎａ  （Ｂ）アセトニトリル
（Ａ）／（Ｂ）＝８５／１５（０分）→７５／２５（１５分）→
３０／７０（４５分）→８５／１５（５０分）Ｇｒａｄｉｅｎｔ
・検出器：ＵＶ
・測定波長：４６５ｎｍ
・流量：１．０ｍＬ／分．
・カラムオーブン：４０℃
・注入量：５μＬ
【００７２】
（定義）
・フコキサンチン回収率（％）＝
（抽出されたフコキサンチン重量）/（生牡蠣に含まれるフコキサンチン重量）×１００
【００７３】
・タウリン回収率（％）＝
（抽出されたタウリン重量）／（生牡蠣に含まれるタウリン重量）×１００
【００７４】
・グリコーゲン回収率（％）＝
（抽出されたタウリン重量）／（生牡蠣に含まれるタウリン重量）×１００
【００７５】
各成分の回収率を表３の評価基準に従って評価した。更に、各評価を表４の評価基準に従って点数化し、それらの合計点数を算出して、表５の評価基準に従って総合評価を行った。各実施例の結果を表１および表２に示す。
【００７６】
【表１】
2013192514.tif 000003
【００７７】
【表２】
2013192514.tif 000004
【００７８】
【表３】
2013192514.tif 000005
【００７９】
【表４】
2013192514.tif 000006
【００８０】
【表５】
2013192514.tif 000007
【００８１】
表１および２より明らかな通り、比較例１〜３と比較して実施例１〜４においては各成分が高効率でバランスよく回収され、中でもフコキサンチン回収率は高い数値であった。
【００８２】
これらの結果は、本発明の製造方法により、フコキサンチンを蓄積した牡蠣から、フコキサンチンを、牡蠣特有のタウリン、グリコーゲンなどの有効成分と共に効率的、且つ、簡便に抽出できることを示している。