(57)【要約】【課題】タデスミレの個体増殖ないし生残率の増大に寄与が期待できるタデスミレの発芽処理方法を提供すること。【解決手段】タデスミレの発芽処理方法。タデスミレから採取した種子を実質的に無栄養で保湿雰囲気に保持して、    1)高温域を15℃〜25℃として、所定温度で３〜１ヶ月保持する高温処理、    2)中温域を5℃〜15℃として、所定温度で2.5〜1.5ヶ月保持する中温処理、    3)低温域を１℃〜5℃として、所定温度で４〜２ヶ月保持する低温処理、  からなる三段温度処理および昇温処理からなる多段発芽処理を１サイクルとして、該多段発芽処理を１サイクル以上、前記種子が発根・発芽し、根が所定長に伸長するまで繰り返す。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
タデスミレの発芽処理方法であって、
タデスミレから採取した種子を実質的に無栄養で保湿雰囲気に保持して、
1)高温域を15℃〜25℃として、所定温度で３〜１ヶ月保持する高温処理
2)中温域を5℃〜15℃として、所定温度で2.5〜1.5ヶ月保持する中温処理
3)低温域を１℃〜5℃として、所定温度で４〜２ヶ月保持する低温処理
からなる三段温度処理および昇温処理からなる多段発芽処理を１サイクルとして、該多段発芽処理を１サイクル以上、前記種子が発根・発芽し、根が所定長に伸長するまで繰り返す、
ことを特徴とするタデスミレの発芽処理方法。
【請求項２】
前記三段温度処理を、
1)高温域を15℃〜20℃として、所定温度で３〜２ヶ月保持する高温処理、
2)中温域を10±１℃として、２ヶ月保持する中温処理、
3)低温域を１℃〜5℃として、所定温度で４〜２ヶ月保持する低温処理、
とすることを特徴とする請求項１記載のタデスミレの発芽処理方法。
【請求項３】
タデスミレの発芽処理方法であって、
タデスミレから採取した乾燥種子を実質的に無栄養で保湿雰囲気に保持して、
1)高温域を15℃〜25℃として、所定温度で３〜１ヶ月保持す高温処理、
2)低温域を１℃〜5℃として、所定温度で４〜２ヶ月保持する低温処理、
からなる二段温度処理及び昇温処理からなる多段発芽処理を１サイクルとして、該多段発芽処理を１サイクル以上、前記種子が発根・発芽し、根が所定長に伸長するまで繰り返す、
ことを特徴とするタデスミレの発芽処理方法。
【請求項４】
前記二段温度処理を、
1)高温域を15℃〜20℃として、所定温度で３〜２ヶ月保持する高温処理
3)低温域を１℃〜5℃として、所定温度で４〜２ヶ月保持する低温処理
とすることを特徴とする請求項３記載のタデスミレの発芽処理方法。
【請求項５】
前記種子を乾燥状態で３ｍｇ以上のものとすることを特徴とする請求項１〜４のいずれかに記載のタデスミレの発芽処理方法。
【請求項６】
前記昇温処理を２回目以降の前記高温処理に含めて、該高温処理を、所定長さの根の伸長により中止することを特徴とする請求項１〜５のいずれかに記載のタデスミレの発芽処理方法。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれかに記載の発芽処理方法を経て根が所定長に伸長した発芽タデスミレを、育苗用土に移植して育苗することを特徴とするタデスミレの育苗方法。
【請求項８】
前記根の所定長が５ｍｍ以上であることを特徴とする請求項７記載のタデスミレの育苗方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、タデスミレの発芽処理方法及びその育苗方法に関する。
【０００２】
なお、「発根」とは、「植物の根が発生・生育すること」を意味し、「発芽」とは、「休眠状態にあった芽が発育を始めること」を意味する。
【０００３】
そして、種子培養の場合、組織培養と異なり、発根と同時的に発芽が見られる。このため、「発根率」と「発芽率」は同一となるが、「発根」の方がわずかに先行し目視判定し易いため、本明細書における試験例では、「発芽」の有無は「発根」で判定した。
【背景技術】
【０００４】
非特許文献１において、「タデスミレ」に係る下記記載がある。
【０００５】
「タデスミレ（Viola thibaudieri）は、スミレ科の多年生草本で、高さ３０〜５０ｃｍの地上茎にタデ類の葉に似た葉と白色の花をつける。本種は、本州中部に限定的に分布し、環境省のレッドリスト（2007年）では、絶滅危惧１Ｂ類にリストされている。タデスミレは種子繁殖により更新するが、自生地では実生および小型個体に乏しいとの報告もあることから、タデスミレの個体群の維持や保全上、実生の生育適地を明らかにすることが重要と考えられる。」
【０００６】
そして、「タデスミレ」は、世界で長野県の一部地域にのみ生育する希少植物であるところから、長野県希少動植物保護条例で特別指定動植物にも指定されている。このため、長野県内の環境保護団体が自生地の監視など積極的な保護活動を行っている。
したがって、タデスミレを増殖させる技術の開発が要望されている。
【０００７】
しかし、上記文献に記載されている如く、タデスミレは、その生理生態が未解明である、難発芽植物とされ、個体増殖に成功した事例は、本発明者らは、寡聞にして知らない。
【０００８】
なお、本発明の特許性に影響を与えるものではないが、スミレ属等の増殖技術に関連する先行技術文献として、特許文献１・２等が存在する。
【０００９】
特許文献１では、スミレ等の種子を植物成長剤及び水に接触させる薬剤付与及び種子含水率調整工程と、この工程で処理された種子を定温保存することからなる発芽の改善方法が提案されている。
【００１０】
特許文献２では、組織培養で得られたスミレ族植物の幼苗を容器内に移植し、特定の温度・日長条件で前期育苗培養後、さらに特定の温度・光照射条件で後期育苗培養することにより開花させる方法が記載されている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１１】
尾関他「絶滅危惧種タデスミレの実生の発生サイトと定着条件」日本生態学会第55回全国大会講演要旨集、2008年3月14日
【特許文献】
【００１２】
【特許文献１】特開2004-129614号公報
【特許文献２】特開平06-078641号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
本発明は、上記にかんがみて、タデスミレの個体増殖ないし生残率の増大に寄与が期待できるタデスミレの発芽処理方法及びその育苗方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意開発に努力をする過程で、タデスミレのさく果から採取した種子を、特定の温度で、段階的な定温管理をすれば、発根・発芽種子が得られ、該発根・発芽種子は用土に移植して育苗することにより安定して発育し、定植可能ないし栽培可能なタデスミレ苗が得られることを知見して、下記構成のタデスミレの発芽処理方法に想到した。
【００１５】
本発明に係るタデスミレの発芽処理方法の一つは、
タデスミレの発芽処理方法であって、
タデスミレから採取した種子を実質的に無栄養で保湿雰囲気に保持して、
1)高温域を15℃〜25℃として、所定温度で３〜１ヶ月保持する高温処理
2)中温域を5℃〜15℃として、所定温度で2.5〜1.5ヶ月保持する中温処理
3)低温域を１℃〜5℃として、所定温度で４〜２ヶ月保持する低温処理
からなる三段温度処理および昇温処理からなる多段発芽処理を１サイクルとして、該多段発芽処理を１サイクル以上、前記種子が発根・発芽するまで繰り返す、
ことを特徴とする。
【００１６】
本発明に係るタデスミレの発芽処理方法の他の一つは、
タデスミレの発芽処理方法であって、
タデスミレから採取した乾燥種子を実質的に無栄養で保湿雰囲気に保持して、
1)高温域を15℃〜25℃として、所定温度で３〜１ヶ月保持する高温処理
2)低温域を１℃〜5℃として、所定温度で４〜２ヶ月保持する低温処理
からなる二段温度処理及び昇温処理からなる多段発芽処理を１サイクルとして、該多段発芽処理を１サイクル以上、前記種子が発根・発芽し、根が所定長に伸長するまで繰り返す、
ことを特徴とする。
【００１７】
そして、本発明のタデスミレの育苗方法は、前記発芽処理方法を経て根が所定長に伸長した発芽タデスミレを、育苗用土に移植して育苗することを特徴とするものである。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】本発明に係るタデスミレの発芽処理方法（三段温度処理）の概略流れ図である。
【図２】（１）〜（６）は、本発明のタデスミレの発芽処理における各工程（段階）の写真である。
【図３】（１）・（２）は、本発明の三段温度処理による発芽処理した場合の、各種子重量における発根率および腐敗率を示すヒストグラムである。
【図４】二段温度処理における高温処理における各温度と各処理との組み合わせた各例における発根率を示す三次元ヒストグラムである。
【図５】本発明の三段温度処理における中温処理の有無における外皮裂開率の違いを示すヒストグラムである。
【図６】本発明の二段温度処理における低温処理の１℃および５℃における各処理期間ごとの発根率を示すヒストグラムである。
【図７】本発明の二段温度処理後の昇温処理の各処理温度による発根率を示すグラフ図である。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
以下、本発明の実施形態について説明する。
【００２０】
本発明のタデスミレの発芽処理方法は、基本的に（１）種子採取・選別、（２）三段温度処理又は二段温度処理、（３）昇温処理の各工程要素からなる多段処理を１サイクルとして、種子が発根・発芽するまで１サイクル以上繰り返すものである。
【００２１】
（１）種子採取・選別工程
(1-1)タデスミレ生育地では開放由来のさく果は７月中旬ごろ、閉鎖花由来のさく果は７〜９月ごろ形成される。そして、発芽処理する種子は完熟状態が望ましいため、さく果が裂開する直前にさく果ごと採取する。
【００２２】
(1-2)採取さく果を室温乾燥させる。すると、さく果は、１〜数日で自然に裂開し、種子が飛散する。種子は勢いよく飛散するため、閉じ空間を形成できる容器（紙の封筒や布袋等通気性のある柔らかい素材が良い。）に入れておき、種子を採取する。なお、採取した種子は、採取後すぐに発芽処理を開始するのが望ましい。乾燥状態のまま長期間保管すると発芽しにくくなる。
【００２３】
(1-3)未熟種子は途中で腐敗してしまい発根・発芽しないため、完熟種子を選別する。しかし、未熟種子は完熟種子と外観では区別できないため、種子重量（質量）を測定して選別する。採取後室温で1週間程度乾燥させて、種子重量３ｍｇ以上、望ましくは3.５〜５ｍｇの種子を選別する（図３参照）。
【００２４】
図３は、採取したタデスミレ種子８０粒について重量選別せずに、種子重量と発芽能力の関係試験（予備試験）の結果であり、（１）・（２）から、３ｍｇ未満では腐敗してしまい、発根・発芽しないことが分かった。腐敗率・発根率との合計不足分は、未発根・発芽の種子率である。なお、予備試験における発芽処理の条件は、２０℃×２ヶ月→５℃×６ヶ月→１５℃×２１日（腐敗が発生した時点で処理中止。）とした。
【００２５】
（２）発根・発芽処理工程
(2-1)三段温度処理
前記種子を実質的に無栄養で保湿雰囲気に保持して、
1)高温域を15℃〜25℃にして、所定温度で３〜１ヶ月保持する高温処理、
2)中温域を5℃〜15℃にして、所定温度で2.5〜1.5ヶ月保持する中温処理、
3)低温域を１℃〜5℃にして、所定温度で４〜２ヶ月保持する低温処理、
からなる三段温度処理を１回又は２回施す。
【００２６】
より望ましくは、前記三段温度処理を、
1)高温域を15℃〜20℃にして、所定温度で３〜２ヶ月保持する高温処理、
2)中温域を10±１℃にして、２ヶ月保持する中温処理、
3)低温域を１℃〜5℃にして、所定温度で４〜２ヶ月保持する低温処理、
とする。
【００２７】
具体的には、採取して乾燥させた種子（図２(１)）は、
高温処理終了後：吸水してひとまわり大きくなる（図２(２)）。
中温処理終了後：内皮に包まれた胚が生長し、裂開した外皮からはみ出すようになる（図２(３)）。
低温処理終了後：外観は中温処理後と殆ど変わらないが、低温による休眠打破が行われている（図２(４)）。
【００２８】
ここで、開放花由来種子の方が休眠は浅く、１サイクルでも発芽する。閉鎖花由来種子は休眠が深く１サイクルでは発根・発芽せず、２サイクルで発根・発芽することが多い。
【００２９】
なお、上記において、中温処理をなくして低温処理と高温処理の繰り返しとする二段温度処理としても、後述の実施例（試験例）に示す如く、タデスミレ種子の発根・発芽をさせることできる。そのときの温度条件・処理時間は同様とする。二段温度処理の場合は、条件によっては、種子が、急激な温度変化にさらされ、発根・発芽にバラツキや遅れが発生するおそれがある。
【００３０】
(2-2)昇温処理
上記三段温度処理又は二段温度処理を施した種子を昇温処理する所定温度（通常、高温域内の温度）に戻して、種子は昇温により、内皮を破って、発根・発芽種子となる（図２(５)）。
【００３１】
処理時間は、前記三段温度処理又は二段温度処理の条件乃至組合わせによるが、通常、１〜３週間とする。その期間内で発根・発芽しない場合は、そのまま高温処理に移り、再度、三段温度処理又は二段処理を行う。
【００３２】
昇温処理は、上記発根・発芽種子の根が、５mm以上、望ましくは１０mm以上に伸長するまで行なうことが望ましい。根が短いと、乾燥状態になったとき、枯死しやすい。
【００３３】
（３）育苗工程
発根・発芽種子は、直ちに育苗用土に移植後、人工的な夜・昼環境に置くと、数日程度で地上部の伸長がみられる。即ち、発芽部位から子葉が展開する（図２(６)）。
【００３４】
移植は、種子の頭が地面すれすれになるように植える。根が短い時に乾燥すると枯死してしまうので注意が必要である。育苗用土（栽培用土）は、特に限定されない。
【００３５】
上記人工的な夜・昼環境は、例えば、夜：15℃（暗条件10時間）→昼：20℃（明条件14時間、5000lx）を繰り返す。すると、数日程度で子葉が見られる。
【００３６】
その後は、そのまま、栽培するか又はある程度の大きさ（例えば、地上部背丈２〜９ｃｍ）に育苗して、シカ食害対策・害虫対策を実施して現地移植（定植）する。こうして、タデスミレを増殖させて、絶滅の危機の回避が可能となる。
【実施例】
【００３７】
以下、本発明の発芽処理方法における、最適な処理条件を求めた実施例（試験例）について説明する。
【００３８】
各試験において共通する事項を下記する。
【００３９】
＜定温器による温度管理＞
1)試験種子は、採取したさく果を、封筒に入れ開放状態で室温放置して、乾燥させて裂開するまで待って（１〜数日間）、種子を回収（採取）する。なお、 (1)の「種子重量と発芽能力の関係試験」以外の試験は、選別した３〜５ｍｇの種子について行なった。
【００４０】
2)各試験体（供試体）は、蒸留水で湿らせた濾紙を敷いたプラスチックシャーレ（直径：３６mm）に、上記1)で採取した種子を１個ずつ載せて、パラフィン製フィルムを巻いて密閉して調製した。
【００４１】
3)上記試験体（シャーレ）をインキュベータ（定温器）「EYELA  MTI−２０２」（東京理科器械株式会社商品名）に載置して、設定温度に温度管理して所定時間保持する。光条件は全期間暗黒とした。
【００４２】
その際、
・一週間に一回観察を行い、水が足りない場合は、水を足して濾紙が乾かないように管理する。
・カビ等が発生した場合は、湿らせた濾紙に種子表面をこすり付けて、カビをふき取るか、種子表面を水で洗い流してカビを除去する。また、同時に汚れた濾紙を取り除き、新しい濾紙に交換する。
・腐敗した種子はすみやかに取り除く。
【００４３】
＜育苗処理＞
1)育苗用土は、腐葉土２、赤玉土１、鹿沼土0.5、バーミキュライト0.5の配合土を用いた。
【００４４】
なお、用土は、乾燥すると葉がしおれたまま戻らなくなるので、用土を乾燥しないように潅水する必要がある。また、液肥を２週間に1回程度施肥した。
【００４５】
2)移植後、育苗工程時の温度・照度・時間条件は、夜：15℃（暗条件10時間）→昼：20℃（明条件14時間、5000lx）を繰り返した。
【００４６】
（１）高温処理試験
処理条件を設定温度１５・２０・２５℃として、各所定温度で１・２・３ヶ月高温処理を行った後、中温処理なしで、低温処理：5℃×4ヶ月→昇温処理：15℃×21日を行なって発根率を求めた。
【００４７】
その結果を示す図４から、条件：１５℃×３ヶ月のとき発根率：45.5%、又は条件：２０℃×２ヶ月のとき発根率：38.5％と高いことが分かった。
【００４８】
中温処理なしの二段温度処理でも、発根・発芽させることができることが確認できた。
【００４９】
（２）中温処理試験
処理条件を、(a)高温処理：２０℃×２ヶ月後→低温：５℃×２ヶ月、(b)高温処理：２０℃×２ヶ月→中温処理：１０℃×２ヶ月→５℃×４ヶ月、の後、それぞれ、昇温処理：１５℃×２１日行なって、外皮裂開率を求めた。
【００５０】
その結果を示す図５から、中温処理がない場合は、発根・発芽がばらついたり、遅れたりすることが予測される。
【００５１】
（３）低温処理試験
処理条件を、高温：１５℃×3.５ヶ月→低温→昇温：１５℃×21日において、低温処理を設定温度：１℃又は５℃において、処理時間：２・３・４ヶ月として試験を行った。
【００５２】
試験結果を示す図６から１〜５℃×２ヶ月では処理時間が不足、低温処理の条件は、１〜５℃×３〜４ヶ月必要であることが分かった。
【００５３】
（４）昇温処理試験
処理条件を、高温処理：２０℃×３ヶ月→低温処理：５℃×4ヶ月→昇温処理：２１日とした場合において、昇温処理の設定温度を１５・２０・２５℃とした。
【００５４】
その結果を示す図７から、１５〜２５℃の範囲内では、温度による差は小さいことが確認できた。
【００５５】
なお、表１は、発根・発芽に必要な段階温度処理の最適条件・可能条件（発芽率１０％以上）を纏めたものを示す。
【００５６】
【表１】
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【図１】
2013192543.tif 000004
【図３】
2013192543.tif 000005
【図４】
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【図５】
2013192543.tif 000007
【図６】
2013192543.tif 000008
【図７】
2013192543.tif 000009
【図２】
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