(57)【要約】      （修正有）【課題】安全で副作用の心配がなく、しかも手軽に用いることができる炎症性腸疾患抑制剤、および炎症性腸疾患抑制効果を有する飲食物の提供。【解決手段】ガラクツロン酸またはガラクツロン酸源を有効成分として含む炎症性腸疾患抑制剤、および炎症性腸疾患抑制効果を有する飲食物。該ガラクツロン酸源としては、果実酢、野菜酢、果実酒、果汁または野菜汁、あるいはその濃縮物または希釈物、特に、梨酢あるいはその濃縮物または希釈物であることが好ましい。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ガラクツロン酸またはガラクツロン酸源を有効成分として含む炎症性腸疾患抑制剤。
【請求項２】
ガラクツロン酸源として果実酢、野菜酢、果実酒、果汁または野菜汁、あるいはその濃縮物または希釈物を有効成分として含む請求項１記載の炎症性腸疾患抑制剤。
【請求項３】
ガラクツロン酸源が梨酢あるいはその濃縮物または希釈物である請求項２記載の炎症性腸疾患抑制剤。
【請求項４】
ガラクツロン酸またはガラクツロン酸源を、原材料に添加すること、製造工程において添加すること、あるいは製品に添加することを特徴とする、炎症性腸疾患抑制効果を有する飲食物の製造方法。
【請求項５】
ガラクツロン酸源が果実酢、野菜酢、果実酒、果汁または野菜汁、あるいはその濃縮物または希釈物である請求項４記載の方法。
【請求項６】
ガラクツロン酸源が梨酢あるいはその濃縮物または希釈物である請求項５記載の方法。
【請求項７】
請求項４〜６のいずれか１項に記載の方法により得られる飲食物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ガラクツロン酸を有効成分として含む炎症性腸疾患抑制剤ならびにガラクツロン酸を配合して得られる飲食物に関する。
【背景技術】
【０００２】
炎症性腸疾患（ＩＢＤ）は、小腸または大腸の粘膜固有層における炎症細胞浸潤を特徴とする慢性腸障害であり、一般的には、ＩＢＤといえば大腸炎とクローン病をさす。これらの疾患は、原因不明の慢性的な下痢や腸の痛みを伴い、寛解と再発を繰り返す。近年のＩＢＤ患者数は日本国内で年間約１４万人とされ、増加傾向にある。
【０００３】
ＩＢＤの治療としては、サラゾピリン、プレドニゾロン、免疫抑制剤、インフリキシマブの投薬、血球成分除去療法などが行われている。しかし、これらの薬剤を生涯かけて服用するケースも多い。そのうえ、これらの薬剤や療法は重大な副作用を有すること、高価であること、あるいは手軽に実施することができないことが問題となっている。また、重症例では大腸全摘出が行われることもある。これらの状況は患者のＱＯＬの面からも好ましくない。
【０００４】
最近になって、安全性が高く副作用が小さいものとして、天然由来の素材を疾病の抑制や治療に応用する試みが盛んに行われている。食物繊維の整腸作用はよく知られており、オリゴガラクツロン酸のＩＢＤの抑制効果についても報告がなされている（非特許文献１）。しかしながら、ガラクツロン酸の生理作用は不明であり、ましてやＩＢＤの抑制効果に関する報告はない。また、ＩＢＤ抑制効果が大きく、安全で副作用の心配がなく、しかも手軽に用いることができる天然由来物質の探索および開発が必要とされている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Li Liu et al. Carcinogenesis vol.31 no.10 pp.1822-1832, 2010
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
ＩＢＤ抑制効果に優れ、安全で副作用の心配がなく、しかも手軽に用いることができる天然由来物質の探索および開発を行う。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、上記事情に鑑みて鋭意研究を行った結果、意外なことに、ガラクツロン酸単体がＩＢＤ抑制効果を有することを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００８】
しかるに本発明は以下のものを提供する。
（１）ガラクツロン酸またはガラクツロン酸源を有効成分として含む炎症性腸疾患抑制剤。
（２）ガラクツロン酸源として果実酢、野菜酢、果実酒、果汁または野菜汁、あるいはその濃縮物または希釈物を有効成分として含む（１）記載の炎症性腸疾患抑制剤。
（３）ガラクツロン酸源が梨酢あるいはその濃縮物または希釈物である（２）記載の炎症性腸疾患抑制剤。
（４）ガラクツロン酸またはガラクツロン酸源を、原材料に添加すること、製造工程において添加すること、あるいは製品に添加することを特徴とする、炎症性腸疾患抑制効果を有する飲食物の製造方法。
（５）ガラクツロン酸源が果実酢、野菜酢、果実酒、果汁または野菜汁、あるいはその濃縮物または希釈物である（４）記載の方法。
（６）ガラクツロン酸源が梨酢あるいはその濃縮物または希釈物である（５）記載の方法。
（７）（４）〜（６）のいずれかに記載の方法により得られる飲食物。
（８）ガラクツロン酸またはガラクツロン酸源が添加された梨酢。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、ＩＢＤ抑制効果に優れ、安全で副作用の心配がなく、しかも手軽に用いることができる天然由来物質としてガラクツロン酸を用いることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】ガラクツロン酸をマウスに与えた場合のＩＢＤ抑制効果を示すグラフである。
【図２】ガラクツロン酸をマウスに与えた場合の大腸長さおよび大腸壁の肥厚の変化を示すグラフである。
【図３】ガラクツロン酸が２ｍｇ／マウス／日または４ｍｇ／マウス／日となるよう希釈した梨酢をマウスに与えた場合のＩＢＤ抑制効果を示すグラフである。
【図４】ガラクツロン酸が２ｍｇ／マウス／日または４ｍｇ／マウス／日となるよう希釈した梨酢をマウスに与えた場合の大腸長さおよび大腸壁の肥厚の変化を示すグラフである。
【図５】ＩＢＤを惹起したポジティブコントロールのマウス（左）およびガラクツロン酸が４ｍｇ／マウス／日となるよう希釈した梨酢を与えたＩＢＤ惹起マウス（右）の大腸壁のヘマトキシリン・エオシン染色写真である。
【図６】ＩＢＤを惹起したポジティブコントロールのマウス（左）およびガラクツロン酸（４ｍｇ／マウス／日）を与えたＩＢＤ惹起マウス（右）の大腸壁のヘマトキシリン・エオシン染色写真である。
【図７】ＩＢＤ非惹起マウスにガラクツロン酸が４ｍｇ／マウス／日となるよう希釈した梨酢を与えた場合（ＰＶ４−群）と与えなかった場合（ＮＣ−群）、およびＩＢＤ惹起マウスにガラクツロン酸が４ｍｇ／マウス／日となるよう希釈した梨酢を与えた場合（ＰＶ４＋群）と与えなかった場合（ＰＣ＋群）の、大腸壁のヘマトキシリン・エオシン染色スコアを比較したグラフである。
【図８】ＩＢＤ非惹起マウスにガラクツロン酸（４ｍｇ／マウス／日）を与えた場合（ｇａｌＵ４−群）と与えなかった場合（ＮＣ−群）、およびＩＢＤ惹起マウスにガラクツロン酸（４ｍｇ／マウス／日）を与えた場合（ｇａｌＵ４＋群）と与えなかった場合（ＰＣ＋群）の、大腸壁のヘマトキシリン・エオシン染色スコアを比較したグラフである。
【図９】ＩＢＤを惹起したマウス（ＰＣ＋群）およびガラクツロン酸が２ｍｇ／マウス／日または４ｍｇ／マウス／日となるよう希釈した梨酢を与えたＩＢＤ惹起マウス（ＰＶ２＋群、ＰＶ４＋群）の、大腸壁のヘマトキシリン・エオシン染色スコアを比較したグラフである。
【図１０】ＩＢＤを惹起したマウス（ＰＣ＋群）、ガラクツロン酸（４ｍｇ／マウス／日）を与えたＩＢＤ惹起マウス（ｇａｌＵ４＋群）、およびガラクツロン酸が４ｍｇ／マウス／日となるよう希釈した梨酢を与えたＩＢＤ惹起マウス（ＰＶ４＋群）の大腸壁のヘマトキシリン・エオシン染色スコアを比較したグラフである。
【図１１】ＮＣ−群（Ａ）、ＰＣ＋群（Ｂ）、ＰＶ２＋群（Ｃ）、ＰＶ４＋群（Ｄ）およびｇａｌＵ４＋群（Ｅ）の動物の大腸壁のＭＰＯ染色像である。ＭＰＯ陽性細胞を矢印で示す。
【図１２】ＩＢＤ非惹起マウスにガラクツロン酸が４ｍｇ／マウス／日となるよう希釈した梨酢を与えた場合（ＰＶ４−群）と与えなかった場合（ＮＣ−群）、およびＩＢＤ惹起マウスにガラクツロン酸が４ｍｇ／マウス／日となるよう希釈した梨酢を与えた場合（ＰＶ４＋群）と与えなかった場合（ＰＣ＋群）の、大腸壁のミエロペルオキシダーゼ染色スコアを比較したグラフである。
【図１３】ＩＢＤ非惹起マウスにガラクツロン酸（４ｍｇ／マウス／日）を与えた場合（ｇａｌＵ４−群）と与えなかった場合（ＮＣ−群）、およびＩＢＤ惹起マウスにガラクツロン酸（４ｍｇ／マウス／日）を与えた場合（ｇａｌＵ４＋群）と与えなかった場合（ＰＣ＋群）の、大腸壁のミエロペルオキシダーゼ染色スコアを比較したグラフである。
【図１４】ＩＢＤを惹起したマウス（ＰＣ＋群）およびガラクツロン酸が２ｍｇ／マウス／日または４ｍｇ／マウス／日となるよう希釈した梨酢を与えたＩＢＤ惹起マウス（ＰＶ２＋群、ＰＶ４＋群）の、大腸壁のミエロペルオキシダーゼ染色スコアを比較したグラフである。
【図１５】ＩＢＤを惹起したマウス（ＰＣ＋群）、ガラクツロン酸（４ｍｇ／マウス／日）を与えたＩＢＤ惹起マウス（ｇａｌＵ４＋群）、およびガラクツロン酸が４ｍｇ／マウス／日となるよう希釈した梨酢を与えたＩＢＤ惹起マウス（ＰＶ４＋群）の大腸壁のミエロペルオキシダーゼ染色スコアを比較したグラフである。
【図１６】ＩＢＤ非惹起マウスにガラクツロン酸が４ｍｇ／マウス／日となるよう希釈した梨酢を与えた場合（ＰＶ４−群）と与えなかった場合（ＮＣ−群）、およびＩＢＤ惹起マウスにガラクツロン酸が４ｍｇ／マウス／日となるよう希釈した梨酢を与えた場合（ＰＶ４＋群）と与えなかった場合（ＰＣ＋群）の、血中ＩＬ−６濃度を比較したグラフである。
【図１７】ＩＢＤ非惹起マウスにガラクツロン酸（４ｍｇ／マウス／日）を与えた場合（ｇａｌＵ４−群）と与えなかった場合（ＮＣ−群）、およびＩＢＤ惹起マウスにガラクツロン酸（４ｍｇ／マウス／日）を与えた場合（ｇａｌＵ４＋群）と与えなかった場合（ＰＣ＋群）の、血中ＩＬ−６濃度を比較したグラフである。
【図１８】ＩＢＤを惹起したマウス（ＰＣ＋群）およびガラクツロン酸が２ｍｇ／マウス／日または４ｍｇ／マウス／日となるよう希釈した梨酢を与えたＩＢＤ惹起マウス（ＰＶ２＋群、ＰＶ４＋群）の、血中ＩＬ−６濃度を比較したグラフである。
【図１９】ＩＢＤを惹起したマウス（ＰＣ＋群）、ガラクツロン酸（４ｍｇ／マウス／日）を与えたＩＢＤ惹起マウス（ｇａｌＵ４＋群）、およびガラクツロン酸が４ｍｇ／マウス／日となるよう希釈した梨酢を与えたＩＢＤ惹起マウス（ＰＶ４＋群）の、血中ＩＬ−６濃度を比較したグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
従来からペクチンなどの食物繊維の整腸作用については多くの報告がある。これらの食物繊維の整腸作用は、腸内で消化物を包み込む作用、および腸粘膜増殖作用によるものとされ、これらの作用は食物繊維が難消化性高分子であることに起因するものであると考えられている。また、ペクチンを構成するオリゴガラクツロン酸のＩＢＤの抑制効果についても報告されている。しかしオリゴガラクツロン酸も高分子であり、食物繊維と考えられている。
【００１２】
一方、本発明は、低分子であるガラクツロン酸が優れたＩＢＤ抑制効果を有するという意外な知見に基づいている。したがって、本発明は、１の態様において、ガラクツロン酸を有効成分として含むＩＢＤ抑制剤を提供する。ガラクツロン酸はペクチンに含まれる天然物質であるため、副作用の心配がなく連続・長期投与が可能であり、しかも効果的にＩＢＤを抑制する。ガラクツロン酸は、ペクチン含有材料またはペクチンを原料として、これを酵素や酸で加水分解することによって比較的簡単に得ることができる。
【００１３】
したがって、本発明は、１の態様において、ガラクツロン酸またはガラクツロン酸源を有効成分として含むＩＢＤ抑制剤を提供する。なお、本明細書において、ＩＢＤの抑制とは、ＩＢＤの治療および予防の双方を包含するものとする。ＩＢＤの治療とは、ＩＢＤの症状を緩和または消失させることをいう。ＩＢＤの予防とは、対象がＩＢＤに罹病しにくくすること、あるいは罹病しないようにすること、あるいは罹病しても症状を軽くすることを包含する。
【００１４】
ガラクツロン酸は、ポリガラクツロン酸の酸加水分解またはポリガラクツロナーゼのような酵素による分解で得られる。ポリガラクツロン酸はペクチン含有原料中のペクチンを分解して得ることができる。ペクチン含有原料としては、植物の果実が挙げられる。ペクチン含有量が多く好ましいペクチン含有原料としては、ナシ、リンゴ、チェリー、プラム、アプリコット、モモ、ウメ、スグリ、イチゴ、バナナ、ぶどう、スイカ、柿および柑橘類などの果実が挙げられる。より好ましいペクチン含有原料の例としては、ナシ、リンゴ、チェリー、プラム、アプリコット、モモ、ウメなどの果実および柑橘類の果実（特に皮）が挙げられる。これらのペクチン含有材料中のペクチンを分解することによりガラクツロン酸を得てもよい。ペクチンの分解は公知方法によればよく、例えば、ペクチナーゼ、ポリガラクツロナーゼ等の酵素処理により行うこともでき、酸処理にて行うこともできる。ガラクツロン酸の取得方法は上記の方法に限定されないことはいうまでもない。
【００１５】
本発明にて使用するガラクツロン酸は、遊離の形態であってもよく、塩の形態であってもよい。塩は、例えばナトリウム、カリウムなどの１価の金属あるいはカルシウムなどの２価の金属との間で形成されてもよい。
【００１６】
本発明のＩＢＤ抑制剤の有効成分として、カラクツロン酸のかわりにガラクツロン酸源を用いてもよい。ガラクツロン酸源とは、ガラクツロン酸を豊富に含有し、経口摂取可能な材料をいう。例えば、ペクチン含有材料中のペクチンを分解処理した材料またはその濃縮物を、本発明のＩＢＤ抑制剤のガラクツロン酸源として用いてもよい。また、上記のようなペクチン含有原料を加工して得られる飲食物またはその濃縮物または希釈物を、本発明のＩＢＤ抑制剤のガラクツロン酸源として用いてもよい。
【００１７】
本発明のＩＢＤ抑制剤のガラクツロン酸源としては、例えば果実酢、野菜酢、果実酒、果汁または野菜汁、あるいはその濃縮物または希釈物が挙げられるが、これらに限らない。本発明のＩＢＤ抑制剤のガラクツロン酸源として好ましいものの例としては、ナシ、リンゴ、チェリー、プラム、アプリコット、モモ、ウメ、スグリ、イチゴ、バナナ、ぶどう、スイカ、柿および柑橘類などの果実を原料とする果実酒または果実酢が挙げられる。これらの果実酒または果実酢を適宜濃縮または希釈して用いてもよい。好ましい果実酒は梨酒およびリンゴ酒であり、好ましい果実酢は梨酢およびリンゴ酢である。梨酢あるいはその濃縮物または希釈物が特に好ましい。果実酒や果実酢はガラクツロン酸以外の物質も含有するため、ガラクツロン酸との相加的または相乗的効果も期待でき、またガラクツロン酸の効果以外の効果も期待できる。
【００１８】
ペクチン含有原料中のペクチンを分解処理した材料やペクチン含有原料を加工して得られる飲食物の濃縮は、加熱法、真空蒸発法、凍結濃縮法、逆浸透濃縮法などの公知の方法・手段を用いて行うことができる。濃縮により、少ない体積で多くのガラクツロン酸を含む材料を提供することができる。
【００１９】
本発明のＩＢＤ抑制剤の剤形は、経口剤形であればいずれの剤形であってもよく、シロップやドリンク剤のごとき液剤、カプセル、錠剤、顆粒、粉末、舌下錠などであってもよい。これらの剤形は公知の手段・方法により製造することができる。一般的には、本発明のＩＢＤ抑制剤は、常套的な賦形剤や担体を用いることにより製剤される。
【００２０】
本発明のＩＢＤ抑制剤の投与量は、通常、ガラクツロン酸として成人１人あたり１日に約１ｇ〜約３０ｇであってもよく、好ましくは５ｇ〜２０ｇであるが、患者のＩＢＤの重さ、患者が受けている他の治療法、患者の健康状態等により、医師が適宜定めうる。
【００２１】
本発明のＩＢＤ抑制剤は、整腸作用を有することが知られている成分や消化剤、健胃成分、その他の成分を含んでいてもよい。例えば、従来の胃腸薬やＩＢＤ治療剤にガラクツロン酸、ガラクツロン酸源を含ませてもよい。
【００２２】
本発明は、さらなる態様において、ＩＢＤ抑制を必要とする対象にガラクツロン酸またはガラクツロン酸源を投与することを特徴とする、ＩＢＤ抑制方法を提供する。
【００２３】
本発明は、さらなる態様において、ＩＢＤ抑制剤を製造するためのガラクツロン酸またはガラクツロン酸源の使用を提供する。
【００２４】
本発明は、さらなる態様において、ＩＢＤ抑制に用いられるガラクツロン酸またはガラクツロン酸源を提供する。
【００２５】
本発明は、もう１つの態様において、ガラクツロン酸またはガラクツロン酸源を、原材料に添加すること、製造工程において添加すること、あるいは製品に添加することを特徴とする、炎症性腸疾患抑制効果を有する飲食物の製造方法を提供する。
【００２６】
上記の本発明の製造方法において、製品である飲食物にガラクツロン酸が配合されるようにする。そのためには、ガラクツロン酸を飲食物の原材料に添加してもよく、飲食物の製造工程において添加してもよく、あるいは製品に添加してもよい。ガラクツロン酸のかわりに、上で説明したガラクツロン酸源を、原材料に添加、製造工程において添加、あるいは製品に添加してもよい。ガラクツロン酸源に関しては、上で説明したとおりである。好ましいガラクツロン酸源の例は果実酢、野菜酢、果実酒、果汁または野菜汁、あるいはその濃縮物または希釈物であり、さらに好ましくは梨酢あるいはその濃縮物または希釈物である。
【００２７】
本発明は、さらにもう１つの態様において、上記方法により得られる飲食物を提供する。本発明により得られる飲食物はいかなる種類のものであってもよく、原材料、形状を問わない。ガラクツロン酸の配合は、ガラクツロン酸を飲食物の原材料に添加してもよく、飲食物の製造工程において添加してもよく、あるいは製品に添加してもよい。添加は、混合、混和、塗布または噴霧などの常套的な方法にて行われうる。ガラクツロン酸のかわりに、上で説明したガラクツロン酸源を飲食物に配合してもよい。ガラクツロン酸源に関しては、上で説明したとおりである。本発明により得られる飲食物は、本来含有しているガラクツロン酸よりも多くのガラクツロン酸を含有しているものであるか、あるいは本来ガラクツロン酸を含有していないものである。
【００２８】
飲食物へのガラクツロン酸の添加量は、通常、成人１人あたり１日に約１ｇ〜約３０ｇを経口摂取するように添加してもよく、好ましくは成人１人あたり１日に約５ｇ〜２０ｇを経口摂取するように添加してもよい。飲食物へのガラクツロン酸の添加量は上記の量に限定されず、飲食物の種類、摂取量、風味などを考慮して適宜増減することができる。
【００２９】
ガラクツロン酸またはガラクツロン酸源を添加した飲食物の例としては、ジュースやドレッシングなどが挙げられるが、これらに限定されない。果実酢や果実酒にカラクツロン酸を添加、補強してもよい。
【００３０】
以下に実施例を示して本発明をさらに詳細かつ具体的に説明するが、実施例は本発明を限定するものではない。
【実施例１】
【００３１】
Ｉ．実験方法および材料
実験は、８週齢のＣ５７ＢＬ／６マウス（メス）を用いて６日間にわたって行った。ＩＢＤ惹起群のマウスには実験開始日から６日間にわたり３％デキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ）を与えた。
【００３２】
各群の動物数は４または５匹であった。各群の略号は以下のとおりである。
ＮＣ−：ネガティブコントロール（水道水の自由飲水）
ＰＣ＋：ポジティブコントロール（ＤＳＳ  ３％水溶液の自由飲水）
ＧａｌＵ１＋：ガラクツロン酸量が１ｍｇ／ｈｅａｄ／ｄａｙ（動物１匹につき、１日当たり１ｍｇのガラクツロン酸を投与）となるよう水道水にて希釈し、さらにＤＳＳ  ３％に調整した水溶液を自由飲水
ＧａｌＵ２＋：ガラクツロン酸量が２ｍｇ／ｈｅａｄ／ｄａｙ（動物１匹につき、１日当たり２ｍｇのガラクツロン酸を投与）となるよう水道水にて希釈し、さらにＤＳＳ  ３％に調整した水溶液を自由飲水
ＧａｌＵ４＋：ガラクツロン酸量が４ｍｇ／ｈｅａｄ／ｄａｙ（動物１匹につき、１日当たり４ｍｇのガラクツロン酸を投与）となるよう水道水にて希釈し、さらにＤＳＳ  ３％に調整した水溶液を自由飲水
ＧａｌＵ７．５＋：ガラクツロン酸量が７．５ｍｇ／ｈｅａｄ／ｄａｙ（動物１匹につき、１日当たり７．５ｍｇのガラクツロン酸を投与）となるよう水道水にて希釈し、さらにＤＳＳ  ３％に調整した水溶液を自由飲水
ＧａｌＵ１５＋：ガラクツロン酸量が１５ｍｇ／ｈｅａｄ／ｄａｙ（動物１匹につき、１日当たり１５ｍｇのガラクツロン酸を投与）となるよう水道水にて希釈し、さらにＤＳＳ  ３％に調整した水溶液を自由飲水
ＧａｌＵ１−：ガラクツロン酸量が１ｍｇ／ｈｅａｄ／ｄａｙ（動物１匹につき、１日当たり１ｍｇのガラクツロン酸を投与）となるよう水道水にて希釈した水溶液を自由飲水
ＧａｌＵ２−：ガラクツロン酸量が２ｍｇ／ｈｅａｄ／ｄａｙ（動物１匹につき、１日当たり２ｍｇのガラクツロン酸を投与）となるよう水道水にて希釈した水溶液を自由飲水
ＧａｌＵ４−：ガラクツロン酸量が４ｍｇ／ｈｅａｄ／ｄａｙ（動物１匹につき、１日当たり４ｍｇのガラクツロン酸を投与）となるよう水道水にて希釈した水溶液を自由飲水
ＧａｌＵ７．５−：ガラクツロン酸量が７．５ｍｇ／ｈｅａｄ／ｄａｙ（動物１匹につき、１日当たり７．５ｍｇのガラクツロン酸を投与）となるよう水道水にて希釈した水溶液を自由飲水
ＧａｌＵ１５−：ガラクツロン酸量が１５ｍｇ／ｈｅａｄ／ｄａｙ（動物１匹につき、１日当たり１５ｍｇのガラクツロン酸を投与）となるよう水道水にて希釈した水溶液を自由飲水
ＰＶ２＋：梨酢原液を水道水で希釈してガラクツロン酸量が２ｍｇ／ｈｅａｄ／ｄａｙ（動物１匹につき、１日当たり２ｍｇのガラクツロン酸を投与）となるようにし、さらにＤＳＳ  ３％に調整した水溶液を自由飲水
ＰＶ４＋：梨酢原液を水道水で希釈してガラクツロン酸量が４ｍｇ／ｈｅａｄ／ｄａｙ（動物１匹につき、１日当たり４ｍｇのガラクツロン酸を投与）となるようにし、さらにＤＳＳ  ３％に調整した水溶液を自由飲水
ＰＶ２−：梨酢原液を水道水で希釈してガラクツロン酸量が２ｍｇ／ｈｅａｄ／ｄａｙ（動物１匹につき、１日当たり２ｍｇのガラクツロン酸を投与）となるようにした水溶液を自由飲水
ＰＶ４−：梨酢原液を水道水で希釈してガラクツロン酸量が４ｍｇ／ｈｅａｄ／ｄａｙ（動物１匹につき、１日当たり４ｍｇのガラクツロン酸を投与）となるようにした水溶液を自由飲水
【００３３】
実験期間中、臨床症状（体重、下痢、血便の程度）を毎日評価した。実験６日目にマウスから大腸を採材し、大腸長さおよび大腸の肥厚を測定した。疾病活性指数（DAI, disease activity index）を用いて動物の潰瘍性大腸炎を評価した。ＤＡＩはMelger et al., American Journal of Physiology Gastrointestinal and Liver Physiology, 288(6), G1328-1338に記載された方法に準じて評価した。評価基準を表１に示す。
【００３４】
【表１】
2013180958.tif 000002
【００３５】
大腸の組織学的スコアについても評価した。組織学的スコアの評価はヘマトキシリン・エオシン（ＨＥ）染色およびミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）染色を用いて行った。
【００３６】
大腸組織を１０％緩衝化ホルマリン中に固定した。各試料から切片（厚さ３ミクロン）を作成して、ヘマトキシリン−エオシン染色後に組織学的観察を行った。各得切片を顕微鏡観察し、組織学的評点を行った。組織学的評点は、Ohkawara et al. Scandinavian Journal of Gastroenterology, 40(9), 1049-1057 (2005)に記載されたようにして行った。評点付けの基準を表２に示す。組織学的評点は、各群３匹のマウスを用いて倍率１００倍にて１０個の視野において行った。合計３０個の視野の平均を各群の評点とした。ヘマトキシリン・エオシン染色による組織学的評価の基準を表２に示す。
【００３７】
【表２】
2013180958.tif 000003
【００３８】
ＭＰＯ染色は組織中への白血球侵入を示すものである。Schneidhelm et al. Clinical Chemistry, 55(8), 1462-1470 (2009)に記載された方法に従ってＭＰＯ染色を行った。各群３匹のマウスを用いて倍率４００倍にて２０個の視野において粘膜下組織層中のＭＰＯ陽性細胞をカウントした。合計６０個の視野を各群のＭＰＯ陽性細胞数とした。
【００３９】
血中サイトカイン濃度測定を次のようにして行った。実験６日目に５％イソフルレン吸入下にて（和光純薬工業（株）、大阪）で全身麻酔し開腹、腹大静脈から採血を行った。凝固後、５，０００ｒｐｍ、１，２００×ｇにて５分間遠心し、上清を血清として採取した。血清はサイトカイン測定まで−８０℃にて保存した。血清中のＩＬ−１β、ＩＬ−６濃度測定はＩＬ−１β(Mouse, ELISA Kit , Quantikine M, 2nd Generation, R&D Systems, Inc.USA)およびＩＬ−６(Mouse, ELISA Kit , Quantikine M, 2nd Generation, R&D Systems, Inc.USA)を用いて行った。なお測定は製品に同封されている説明書にしたがって実施した。
【００４０】
（８）統計学的分析
データを平均値±標準偏差として表した。1-way ANOVAおよびTukey-Kramer's testを用いて統計学的分析を行った。０．０５よりも小さいｐ値の場合に統計学的に有意であると見なした。
【００４１】
ＩＩ．結果
（１）ＤＡＩスコア、大腸長さおよび大腸壁の肥厚に及ぼすガラクツロン酸およびガラクツロン酸添加梨酢の影響
様々な量のカラクツロン酸をＩＢＤ惹起動物に与えてＤＡＩスコアを調べた。結果を図１に示す。ＧａｌＵ２＋群およびＧａｌＵ４＋群において有意なＤＡＩスコアの改善が見られ、特に、ＧａｌＵ４＋群において顕著なＤＡＩスコアの改善が見られた（６日目でＤＡＩスコア４．７）。ＧａｌＵ１＋群では有意なＤＡＩスコアの改善は見られなかった。ＧａｌＵ７．５＋群およびＧａｌＵ１５＋群においてもＤＡＩスコアは改善されなかった。したがって、ガラクツロン酸投与量には最適量があり、２ｍｇ／日／マウス付近あるいは４ｍｇ／日／マウス付近であることがわかった。
【００４２】
様々な量のカラクツロン酸を動物に与えて大腸長さおよび大腸壁の肥厚について調べた。結果を図２に示す。ガラクツロン酸の投与により、大腸長さが長くなる傾向が見られたが、大腸の肥厚については明らかではなかった。
【００４３】
梨酢投与群のＤＡＩについても調べた。ＰＶ２＋群およびＰＶ４＋群においてＤＡＩスコアを調べたところ、ＤＡＩスコアが有意に改善されることがわかった。特にＰＶ４＋群においてＤＡＩスコアの改善が顕著であった。６日目でＰＶ４＋群のＤＡＩスコアは５．１、ＰＶ２＋群のＤＡＩスコアは４．０、ＤＳＳのみ投与群のＤＡＩスコアは７．１であった。図３参照。
【００４４】
ｇａｌＵ２＋群、ｇａｌＵ４＋群、ＰＶ２＋群およびＰＶ４＋群間において、ＤＡＩスコアの変化に有意差は見られなかった（データ示さず）。
【００４５】
梨酢投与群であるＰＶ２＋群およびＰＶ４＋群において大腸長さおよび大腸壁の肥厚について調べた。結果を図４に示す。ＰＶ２＋群およびＰＶ４＋群のいずれにおいても大腸長さが有意に増加し、特にＰＶ４＋群において大腸長さの増加が顕著であった。また、ＰＶ２＋群およびＰＶ４＋群のいずれにおいても大腸壁の肥厚は抑制される傾向が示された。この結果は、梨酢中のカラクツロン酸以外の成分が症状の軽減に寄与している可能性を示すものである。
【００４６】
また、ガラクツロン酸のかわりに酢酸を動物に投与したところ、ＤＡＩスコアの増大（症状の悪化）、大腸長さの短縮、および大腸壁の肥厚の増大が見られ、酢酸は大腸炎の症状を悪化させることがわかった（データ示さず）。
【００４７】
（２）組織スコアリングに及ぼすガラクツロン酸およびガラクツロン酸添加梨酢の影響
図５はＰＣ＋群の動物の大腸壁のＨＥ染色像と、梨酢投与群であるＰＶ４＋群の動物の大腸壁のＨＥ染色像を比較したものである。図６は、ＰＶ４＋群の動物の大腸壁のＨＥ染色像と、ＧａｌＵ４＋群の動物の大腸壁のＨＥ染色像を比較したものである。表２に示す基準により評価したところ、ガラクツロン酸および梨酢はＨＥ染色スコアを改善することがわかった。
【００４８】
ＮＣ−群、ＰＣ＋群、ｇａｌＵ４＋群、ｇａｌＵ４−群、ＰＶ２＋群、ＰＶ４＋群およびＰＶ４−群のＨＥ染色スコアを比較した結果を図７〜図１０に示す。ＰＶ４＋群の動物のＨＥ染色スコアはＰＣ＋群と比較して有意に改善された（図７）。ｇａｌＵ４＋群の動物のＨＥ染色スコアはＰＣ＋群と比較して改善傾向を示した（図８）。ＰＶ２＋群およびＰＶ４＋群の動物では、ＰＶ４＋群の動物のほうが、ＨＥ染色スコアの改善が大きかった（図９）。ＰＶ４＋群の動物のＨＥ染色スコアと、ｇａｌＵ４＋群の動物のＨＥ染色スコアを比較すると、ＰＶ４＋群の動物のＨＥ染色スコアのほうが有意に改善され、ＰＶ４＋群のＨＥ染色スコアは約３．７、ｇａｌＵ４＋群のＨＥ染色スコアは約４．７であった（図１０）。
【００４９】
ＮＣ−群、ＰＣ＋群、ＰＶ２＋群、ＰＶ４＋群およびｇａｌＵ４＋群の動物の大腸壁のＭＰＯ染色像を調べた。図１１参照。ＤＳＳ投与によりＭＰＯ染色陽性細胞（矢印で示す）の数が増加することが認められた。ＰＶ４＋群は最も陽性細胞の数が抑えられていたが、同用量のガラクツロン酸を含むｇａｌＵ４＋群では陽性細胞の数はＰＣ＋群と比べて有意差は認められなかった。
【００５０】
ＮＣ−群、ＰＣ＋群、ｇａｌＵ４＋群、ｇａｌＵ４−群、ＰＶ２＋群、ＰＶ４＋群およびＰＶ４−群のＭＰＯ染色スコアを比較した結果を図７〜図１０に示す。ＰＶ４＋群の動物のＭＰＯ染色スコアはＰＣ＋群と比較して有意に改善された（図１２）。ｇａｌＵ４＋群の動物のＭＰＯ染色スコアはＰＣ＋群と比較して改善傾向を示した（図１３）。ＰＶ２＋群およびＰＶ４＋群の動物では、ＰＶ４＋群の動物のほうがＭＰＯ染色スコアの改善が大きく、ＭＰＯスコは約１４であった（図１４）。ＰＶ４＋群の動物のＭＰＯ染色スコアと、ｇａｌＵ４＋群の動物のＭＰＯ染色スコアを比較すると、ＰＶ４＋群の動物のＭＰＯ染色スコアのほうが有意に改善され、ＭＰＯスコアは約１２であった（図１５）。これらの組織学的研究から、梨酢中のカラクツロン酸以外の成分が症状の軽減に寄与している可能性が示された。
【００５１】
（３）血中サイトカイン濃度に及ぼすガラクツロン酸およびガラクツロン酸添加梨酢の影響
ＰＶ４＋群では炎症性サイトカインであるＩＬ−６の血中濃度がＰＣ＋群に比べて著しく低下していた（図１６）。ｇａｌＵ４＋群においても血中ＩＬ−６濃度のかなりの低下が見られた（図１７）。ＰＶ２＋群とＰＶ４＋群を比較すると、ＰＶ４＋群のほうが血中ＩＬ−６濃度の低下が大きかった（図１８）。ｇａｌＵ４＋群とＰＶ４＋群を比較すると、ＰＶ４＋群のほうが血中ＩＬ−６濃度の低下が大きく、約１４ｐｇ／ｍｌまで低下した（図１８）。この結果から、梨酢中のカラクツロン酸以外の成分が炎症性サイトカインの低減に寄与している可能性が示された。
【産業上の利用可能性】
【００５２】
本発明は、天然物であるガラクツロン酸をＩＢＤの抑制に使用するものであり、医薬品の分野、食品の分野等で利用可能である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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