(57)【要約】      （修正有）【課題】トリプチセン誘導体の光学異性体混合物から、簡便な方法で、光学活性なトリプチセン誘導体を収率良く製造する方法を提供する。【解決手段】アシル化され得る官能基を有するトリプチセン誘導体の光学異性体混合物に、酵素を作用させて、光学異性体の一方を優先的にアシル化し、アシル化した光学異性体とアシル化しない光学異性体とを分離して、光学活性なトリプチセン誘導体を製造する。式中、Ｒ１〜Ｒ１４はそれぞれ独立に、アシル化され得る官能基を有する基等を示す。2013223458.tif 000017【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
アシル化され得る官能基を有するトリプチセン誘導体の光学異性体混合物に、酵素を作用させ、不斉アシル化することを特徴とする、光学活性なトリプチセン誘導体の製造方法。
【請求項２】
前記アシル化され得る官能基を有するトリプチセン誘導体が、下記式（Ｉ）で表される請求項１記載の製造方法。
【化１】
2013223458.tif 000016
（式中、Ｒ１〜Ｒ１４はそれぞれ独立に、アシル化され得る官能基を有する基、水素原子、置換基を有してもよいアルキル基、置換基を有してもよいアルケニル基、置換基を有してもよいアルキニル基、置換基を有してもよいアリール基、置換基を有してもよいヘテロアリール基、置換基を有してもよいアリールアルキル基、置換基を有してもよいヘテロアリールアルキル基、又はハロゲン基を示し、Ｒ１〜Ｒ８の少なくとも１つはアシル化され得る官能基を有する基である。）
【請求項３】
前記式（Ｉ）のＲ２とＲ６の両方又はＲ１とＲ５の両方がアシル化され得る官能基を有する基であり、その他の置換基にアシル化され得る官能基を有さない、請求項２記載の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、光学活性なトリプチセン誘導体の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
トリプチセンは、三個のベンゼン環が三枚羽根の歯車のように配置した構造をとり、ベンゼン環に非対称的に置換基が入ると光学活性になる。光学活性なトリプチセン誘導体は、医薬品や不斉触媒、機能材料等の原料として応用が期待されている。
【０００３】
ラセミ体のトリプチセン誘導体の合成法としては、アントラセンとキノンの付加物から誘導する方法（非特許文献１を参照）や、アントラニル酸誘導体のジアゾ化物からベンザインを生成させ、アントラセン誘導体と反応させる方法（特許文献１を参照）等が知られている。
【０００４】
光学活性なトリプチセン誘導体の合成法としては、上記の方法によって得られたラセミ体をジアステレオマー塩にし、これを分別結晶して光学活性体を得る方法（非特許文献２を参照）や、酵素を用いて不斉加水分解する方法（特許文献２を参照）が知られている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２００４−２１７５３６号公報
【特許文献２】特開２００６−１８７２２５号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ，１９４２年、６４巻、ｐ．２６４９−２６５３
【非特許文献２】Ｂｕｌｌｅｔｉｎ  ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｊａｐａｎ，１９６２年、３５巻、ｐ．８５３−８５７
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
しかし、分別結晶する方法は精製工程が煩雑であり、酵素を用いて不斉加水分解する方法では加水分解され得る官能基を持つトリプチセン誘導体からでないと光学活性体を得ることができなかった。
【０００８】
本発明は、以上の状況に鑑みてなされたものであり、トリプチセン誘導体の光学異性体混合物から、簡便な方法で、光学活性なトリプチセン誘導体を収率良く製造する方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、鋭意検討した結果、酵素を用いた不斉アシル化によって光学活性なトリプチセン誘導体を収率良く得られることを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１０】
すなわち、本発明は以下に示される通りのものである。
（１）  アシル化され得る官能基を有するトリプチセン誘導体の光学異性体混合物に、酵素を作用させ、不斉アシル化することを特徴とする、光学活性なトリプチセン誘導体の製造方法。
【００１１】
（２）  上記アシル化され得る官能基を有するトリプチセン誘導体が、下記式（Ｉ）で表される（１）記載の製造方法。
【化１】
2013223458.tif 000002
（式中、Ｒ１〜Ｒ１４はそれぞれ独立に、アシル化され得る官能基を有する基、水素原子、置換基を有してもよいアルキル基、置換基を有してもよいアルケニル基、置換基を有してもよいアルキニル基、置換基を有してもよいアリール基、置換基を有してもよいヘテロアリール基、置換基を有してもよいアリールアルキル基、置換基を有してもよいヘテロアリールアルキル基、又はハロゲン基を示し、Ｒ１〜Ｒ８の少なくとも１つはアシル化され得る官能基を有する基である。）
【００１２】
（３）  上記式（Ｉ）のＲ２とＲ６の両方又はＲ１とＲ５の両方がアシル化され得る官能基を有する基であり、その他の置換基にアシル化され得る官能基を有さない、（２）記載の製造方法。
【発明の効果】
【００１３】
本発明によれば、トリプチセン誘導体の光学異性体混合物から、簡便な方法で、光学活性なトリプチセン誘導体を収率良く製造することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
以下、本発明の実施形態について説明する。
＜トリプチセン誘導体の光学異性体混合物＞
本発明で用いられるトリプチセン誘導体の光学異性体混合物は、式（Ｉ）で表される化合物の光学異性体混合物である。
【００１５】
【化２】
2013223458.tif 000003
【００１６】
式中、Ｒ１〜Ｒ１４はそれぞれ独立に、アシル化され得る官能基を有する基、水素原子、置換基を有してもよいアルキル基、置換基を有してもよいアルケニル基、置換基を有してもよいアルキニル基、置換基を有してもよいアリール基、置換基を有してもよいヘテロアリール基、置換基を有してもよいアリールアルキル基、置換基を有してもよいヘテロアリールアルキル基、又はハロゲン基を示し、Ｒ１〜Ｒ８の少なくとも１つはアシル化され得る官能基を有する基である。
【００１７】
上記のアシル化され得る官能基とは、ヒドロキシ基、アミノ基、スルファニル基等が挙げられる。特にヒドロキシ基、アミノ基は本発明の酵素を用いるアシル化反応に好適である。
【００１８】
アシル化され得る官能基は、トリプチセン骨格に直接導入されていても、アシル化に関与しない炭素数０〜６を有する２価の置換基を介してトリプチセン骨格に導入されていてもよい。より好ましくは、トリプチセン骨格に直接導入されるか、又はアシル化に関与しない炭素数０〜３を有する２価の置換基を介してトリプチセン骨格に導入される。アシル化されうる官能基を有する基としては、ヒドロキシ基、ヒドロキシアルキル基、ヒドロキシアルコキシ基、アミノ基、アミノアルキル基、アミノアルコキシ基、スルファニル基、スルファニルアルキル基等が挙げられる。具体的には、ヒドロキシ基、ヒドロキシメチル基、ヒドロキシエチル基、ヒドロキシメトキシ基、アミノ基、アミノメチル基、アミノエチル基、アミノエトキシ基、スルファニル基、スルファニルメチル基、スルファニルエチル基等が挙げられる。
【００１９】
Ｒ１〜Ｒ１４のアルキル基としては、炭素数１〜１０のアルキル基が好ましく、炭素数１〜６のアルキル基がより好ましい。アルキル基は、直鎖であっても分岐であっても環状であってもよい。具体的には、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基等が挙げられる。
【００２０】
Ｒ１〜Ｒ１４のアルケニル基としては、炭素数１〜１０のアルケニル基が好ましく、炭素数１〜６のアルケニル基がより好ましい。具体的には、ビニル基、アリル基、シクロヘキサ−１−エン−１−イル基等が挙げられる。
【００２１】
Ｒ１〜Ｒ１４のアルキニル基としては、炭素数１〜１０のアルキニル基が好ましく、炭素数１〜６のアルキニル基がより好ましい。具体的には、エチニル基、プロパ−２−イン−１−イル基等が挙げられる。
【００２２】
Ｒ１〜Ｒ１４のアリール基としては、炭素数６〜２０の単環式又は多環式芳香族炭化水素基が好ましく、炭素数６〜１２の単環式又は多環式芳香族炭化水素基がより好ましい。具体的には、フェニル基、ナフチル基、ビフェニル基等が挙げられる。
【００２３】
Ｒ１〜Ｒ１４のヘテロアリール基としては、酸素原子、硫黄原子及び窒素原子から選ばれるヘテロ原子を１〜４個含む、環構成炭素数２〜９の単環式又は多環式芳香族複素環基が好ましく、環構成炭素数３〜５の単環式芳香族複素環基がより好ましい。具体的には、ピリジル基、ピラジル基、ピリミジニル基、ピリダジニル基、イミダゾリル基、ピラゾリル基、イソオキサゾリル基等が挙げられる。
【００２４】
Ｒ１〜Ｒ１４のアリールアルキル基としては、上記アリール基で置換された炭素数１〜６のアルキル基が好ましく、上記アリール基で置換された炭素数１〜４のアルキル基がより好ましい。具体的には、ベンジル基、フェネチル基、３−フェニルプロピル基、４−フェニルブチル基、１−フェニルエチル基、２−フェニルプロパン−２−イル基等が挙げられる。
【００２５】
Ｒ１〜Ｒ１４のヘテロアリールアルキル基としては、上記ヘテロアリール基で置換された炭素数１〜６のアルキル基が好ましく、上記ヘテロアリール基で置換された炭素数１〜４のアルキル基がより好ましい。具体的には、ピリジルメチル基、ピリジルエチル基、ピラジルメチル基、ピリミジニルメチル基、ピリダジニルメチル基、イミダゾリルメチル基、ピラゾリルメチル基等が挙げられる。
【００２６】
該アルキル基、アルケニル基、アルキニル基が有してもよい置換基としては、炭素数１〜４のアルコキシ基、ハロゲン基等が挙げられる。また、該アリール基、ヘテロアリール基、アリールアルキル基、ヘテロアリールアルキル基が有してもよい置換基としては、炭素数１〜６のアルキル基、炭素数１〜６のアルケニル基、炭素数１〜６のアルキニル基、炭素数１〜４のアルコキシ基、ハロゲン基等が挙げられる。
【００２７】
Ｒ１〜Ｒ１４のハロゲン原子は、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子が挙げられる。
【００２８】
本発明で用いられるトリプチセン誘導体は、式（Ｉ）において、Ｒ１〜Ｒ８の少なくとも１つはアシル化され得る官能基を有するが、好ましくは、Ｒ２とＲ６の両方又は、Ｒ１とＲ５の両方がアシル化され得る官能基を有する基であり、その他の置換基にアシル化され得る官能基を有さないことが好ましい。この位置にアシル化され得る官能基を有する基が置換されていると、酵素反応を進行させやすい。より好ましくは、Ｒ２とＲ６の両方又は、Ｒ１とＲ５の両方は、ヒドロキシメチル基又はアミノ基である。具体的には、（±）−２，６−ビス（ヒドロキシメチル）トリプチセン、（±）−１，５−ジアミノトリプチセン等が挙げられる。
【００２９】
本発明で用いられるトリプチセン誘導体の光学異性体混合物において、光学異性体の混合比は任意であり、１：１のラセミ体でもよく、一方の比率を高めたものを用いてもよい。
【００３０】
＜ラセミ体のトリプチセン誘導体の製造＞
本発明で用いられるラセミ体のトリプチセン誘導体は、置換アントラセンに、アントラニル酸と亜硝酸イソアミルを反応させて、トリプチセン骨格を形成させ、置換基を変換することにより製造することができる。
【００３１】
【化３】
2013223458.tif 000004
【００３２】
置換アントラセンの置換基としては、アルキル基、アシル基等が挙げられる。例えば、アルキル基を酸化してカルボキシル基とし、これを還元すればヒドロキシアルキル基へ変換できる。アシル基をアジ化ナトリウム、トリクロロ酢酸と反応させてアセチルアミノ基とし、これを加水分解すれば、アミノ基へ変換できる。ヒドロキシアルキル基をハロゲン化水素と反応させてハロゲン化アルキル基とし、これに水硫化ナトリウムを反応させれば、スルファニル基へ変換できる。このようにして、ヒドロキシ基、アミノ基、スルファニル基等のアシル化され得る官能基を有するトリプチセン誘導体を合成できる。
【００３３】
＜光学活性なトリプチセン誘導体の製造方法＞
本発明の光学活性なトリプチセン誘導体の製造方法は、式（Ｉ）で表されるトリプチセン誘導体の光学異性体混合物に、酵素を作用させ、光学異性体の一方を優先的にアシル化し、アシル化した光学異性体とアシル化しない光学異性体とを分離する方法である。
【００３４】
本発明で用いられる酵素は、上記式（Ｉ）で表されるトリプチセン誘導体のアシル化され得る官能基を認識し、光学異性体の一方を優先的にアシル化する能力を有する酵素であればよい。このような能力を有するアシル化酵素は、狭義のリパーゼを含む狭義のアシラーゼ、エステラーゼ、アシルアミダーゼを含むアミダーゼ、プロテアーゼ、エーテルヒドロラーゼ、グリコシダーゼ、チオエーテルヒドロラーゼ、ニトリルヒドロラーゼ等であり、ウシ、ブタ、ヒト等の動物由来でも、ヒマ等の植物由来でも、キサントモナス属、シュードモナス属、アスペルギルス属、キャンディダ属、フザリウム属、ジオトリカム属、ムコール属、ノカルディア属、ペニシリウム属、リゾプス属、サッカロマイセス属、アクロモバクター属、アシネトバクター属、アルカリジェネス属、クロモバクテリウム属、エシェリヒア属、スフィンゴモナス属、バチルス属、バークホルデリア属、モレキセラ属、ラクトバチルス属、スタフィロコッカス属、セラチア属、ヤロウイア属等に属する微生物由来でもかまわない。また、これらのアシル化酵素の遺伝子を組換えＤＮＡ技術により単離し、同じ属に属する宿主細胞又は異なる属に属する宿主細胞に導入することにより得られた形質転換体が産生するアシル化酵素でもよい。アシル化酵素の中でも、特にリパーゼが好ましく用いられる。
【００３５】
本発明で用いられるアシル化酵素は、それ自体を含有する微生物又は細胞の培養物の形で反応に利用してもよいが、該培養物又は当該アシル化酵素を含有する組織から分離して粗酵素や精製酵素等の形で反応に利用してもよい。このような粗酵素や精製酵素等は、例えば、１）超音波処理、２）ガラスビーズ又はアルミナを用いる摩砕処理、３）フレンチプレス処理、４）リゾチーム等の酵素処理、５）ワーリングブレンダー処理等により菌体、細胞、又は組織等を破砕し、得られた破砕物から６）硫安等を用いる塩析、７）有機溶媒、ポリエチレングリコール等の有機ポリマーによる沈澱、８）イオン交換クロマトグラフィ、疎水クロマトグラフィ、ゲル濾過クロマトグラフィ、アフィニティクロマトグラフィ等の各種のクロマトグラフィ、９）電気泳動等の通常の方法により調製することができる。また、アシル化酵素を、共有結合、イオン結合、吸着等により担体に結合させる担体結合法、高分子の網目構造の中に閉じ込める包括法等の固定化の方法によって不溶化し、反応液から容易に分離可能な状態に加工した固定物の形で利用することもできる。
【００３６】
具体的には、Ｌｉｐａｓｅ  ＰＳ  Ａｍａｎｏ  ＳＤ、Ｌｉｐａｓｅ  ＡＨ、Ｌｉｐａｓｅ  ＡＫ、ＰＰＬ、ＣＨＥ−ＸＥ、Ｌｉｐａｓｅ  ＡＹ、Ｌｉｐａｓｅ  ＦＶＬ、Ｌｉｐａｓｅ  Ｍ、ＣＣＬ、ＣＲＬ、Ｎｏｖｏｚｙｍ４３５、Ｌｉｐａｓｅ  ＰＳ  ＳＤ、ＬＩＰ３００、Ｌｉｐａｓｅ  ＡＹ−３０Ｇ、Ｌｉｐａｓｅ  ＯＦ、Ｌｉｐａｓｅ  Ａ  ａｍａｎｏ６等を用いることができる。この中でも特に、Ｎｏｖｏｚｙｍ４３５、Ｌｉｐａｓｅ  ＰＳ  Ａｍａｎｏ  ＳＤが好適である。
【００３７】
本発明で行う酵素反応の反応温度は、１０〜７０℃が可能であるが、酵素の至適温度と安定性の点から、２５〜５０℃の範囲がより好ましい。
【００３８】
本発明で行う酵素反応は緩衝液中で行うが、必要に応じ、トリプチセン誘導体を溶解するためにエタノール等の有機溶媒や界面活性剤、酵素の安定化剤を添加してもよい。緩衝液としては、ｐＨ５〜９の通常の緩衝液、例えばリン酸緩衝液、酢酸緩衝液、トリス−塩酸緩衝液、各種グッドバッファー等を挙げることができる。酵素の至適ｐＨと安定性の点から、ｐＨ６〜８で反応を行うことがより好ましい。
【００３９】
本発明で行う酵素反応の反応時間は、１時間から１週間であるが、６時間から３日間がより好ましい。
【００４０】
本発明で行う酵素反応の反応液から、反応生成物を回収する方法は、ジエチルエーテルや酢酸エチル等の有機溶媒を用いる抽出、分別蒸留、シリカゲルやイオン交換樹脂等を用いるカラムクマトグラフィを適宜用いることができる。特に、ジエチルエーテルを用いて抽出後、有機溶媒を減圧濃縮し、シリカゲルカラムクラマトグラフィで精製する方法が簡便に用いられる。
【００４１】
このようにして回収した光学活性なトリプチセン誘導体は、通常有機合成で用いられる方法により、他の光学活性なトリプチセン誘導体に変換することができる。例えば、回収された光学活性なアシル化トリプチセン誘導体をアルカリや酸によって加水分解すれば、対応する光学活性なアミノトリプチセン、光学活性なヒドロキシトリプチセン等へ変換することができる。
【００４２】
本発明では、アシル化酵素を用い、トリプチセン誘導体の光学異性体混合物から光学異性体の一方を優先的にアシル化させることにより光学活性なトリプチセン誘導体を製造したが、加水分解酵素を用いれば同様に光学異性体の一方を優先的に加水分解させて光学活性なトリプチセン誘導体を得ることができる。
【００４３】
＜土壌細菌を用いたトリプチセン誘導体の酸化反応による光学活性なトリプチセン誘導体の製造＞
酵素の代わりに、土壌から単離した微生物を用いても、トリプチセン誘導体の光学異性体混合物から、光学分割なトリプチセン誘導体を製造することができる。（±）−２，６−ビス（ヒドロキシメチル）トリプチセンを炭素源に増殖するシュードモナスニトロレデュセンスは（±）−１，５−ビス（ヒドロキシメチル）トリプチセンの一方の光学異性体を優先的に酸化する。
【００４４】
＜トリプチセン類のミセル化＞
トリプチセン誘導体は、置換基にアルキルアンモニウム塩を導入すれば、界面活性剤にもなり得、ミセルを形成することもある。
【実施例】
【００４５】
以下、本発明の実施例を説明するが、本発明の範囲はこれらの実施例に限定されるものではない。
［合成例１］
＜（±）−１，５−ジアミノトリプチセンの合成＞
【００４６】
【化４】
2013223458.tif 000005
【００４７】
５００ｍｌ三口フラスコに、ジクロロメタン２００ｍｌと乳鉢ですりつぶした塩化アルミニウム３６．０４４７ｇを加えた。これに氷浴下で塩化アセチル１４ｍｌを加え、撹拌した。更に氷浴下、アントラセン（１）１１．８２３４ｇを２〜３回に分けて加えた。そのあと、室温下で４時間撹拌し、反応を進行させたところ、反応の前後で反応溶液が赤色から黄色を帯びた茶色に変化した。
反応後、氷浴下で５０％塩酸を塩素が出なくなるまで加え、塩化アルミニウムを失活させた。次に、三口フラスコにイオン交換水を加え、ジクロロメタン層と、塩酸を含む水層に分離した。ジクロロメタン層をエバポレーターし、粗生成物である黄色い固体を得た。
この粗生成物を濃縮溶液にし、クロロホルムを溶媒として、シリカゲルカラムクロマトグラフィで精製した。粗生成物を溶媒クロロホルムで薄層クロマトグラフィに展開したとき、生成物はＲｆ値０．８２５付近である。Ｒｆ値０．２付近が未反応のアントラセン（無色）で、Ｒｆ値０．５付近が一置換体（うすい黄色）、Ｒｆ値０．９５付近が１，８位にアセチル基のついたアントラセン（赤褐色）である。
カラムクロマトグラフィで目的物を分取し、エバポレーターで溶媒を除去し、結晶化した結果、黄色い結晶である１，５−ジアセチルアントラセン（２）が収率３８．６％で得られた。物性値を以下に示す。
【００４８】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，ＴＭＳ，δ＝ｐｐｍ）δ：２．８２（６Ｈ，ｓ，−ＣＨ３），７．５３（２Ｈ，ｄｄ，−ＣＨ），８．０１（２Ｈ，ｄ，−ＣＨ），８．２６（２Ｈ，ｄ，−ＣＨ），９．５７（２Ｈ，ｓ，−ＣＨ）．
【００４９】
次に、１，５−ジアセチルアントラセン（２）２．０４５２ｇ、クロロホルム２０ｍｌを３００ｍｌ三口フラスコに入れた。これを還流管につなぎ、油浴温度１２０℃で還流した。これに、亜硝酸イソアミル１０．２ｍｌとアントラニル酸１０．４ｇを５回に分けて加えた。亜硝酸イソアミルとアントラニル酸をはじめに加えてから１０時間還流を続け、その後、放冷した。
次に、エタノール１１ｍｌと１０％水酸化ナトリウム９１ｍｌを加え、２０分間撹拌した。これをエバポレーターで濃縮して減量し、吸引濾過してくすんだ白色の濾物を得た。
濾物にトリエチレンジメチルエーテル２４．６ｍｌを加え、１２０℃で還流した。ここに無水マレイン酸１．６２５４ｇを加え、２０分間還流した後、放冷し、エタノール４．３ｍｌ、１０％水酸化ナトリウム水溶液６１ｍｌ加え、撹拌した。
次に、この溶液を氷浴下で冷却し、吸引濾過で濾物を得た。ここで得た濾物をクロロホルムにとかし、吸引濾過後、濾液を回収した。
この濾液を濃縮し、クロロホルム−ヘキサンから、再結晶し白色結晶が析出した。吸引濾過し、１，５−ジアセチルトリプチセン（３）を収率９５．２％で得ることができた。
【００５０】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，ＴＭＳ，δ＝ｐｐｍ）δ：２．６２（６Ｈ，ｓ，−ＣＨ３），６．７７（２Ｈ，ｓ，−ＣＨ），７．００−７．０２（２Ｈ，ｍ，−ＣＨ），７．０７（２Ｈ，ｔ，−ＣＨ），７．４２（４Ｈ，ｍ，−ＣＨ），７．６０（２Ｈ，ｄ，−ＣＨ）．
【００５１】
３００ｍｌ三口フラスコに、トリクロロ酢酸９．０９８９ｇと１，５−ジアセチルトリプチセン（３）を６０４．６ｍｇ加え、油浴温度７０℃で還流した。ここにアジ化ナトリウム６０５．４ｍｇを３〜４回に分けて加え、４８時間還流した。還流後、氷浴下でイオン交換水５００ｍｌを加え、半日ほど室温下で撹拌を続けた。析出物を吸引濾過し、粗生成物を得た。粗生成物をエタノールで再結晶し、白色結晶の１，５−ジアミドトリプチセン（４）を収率５７．７％で得た。
【００５２】
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，δ＝ｐｐｍ）δ：２．２５（ｓ，６Ｈ，−ＣＯＣＨ３），５．８２（ｓ，２Ｈ，−ＣＨ），７．００（ｔ，２Ｈ，−ＣＨ），７．０５（ｍ，２Ｈ，−ＣＨ），７．１３（ｄ，２Ｈ，−ＣＨ），７．３１（ｄ，２Ｈ，−ＣＨ），７．４８（ｍ，２Ｈ，−ＣＨ），９．７９（ｓ，２Ｈ，−ＮＨ）．
【００５３】
５００ｍｌフラスコに、１，５−ジアミドトリプチセン（４）を４０５．５ｍｇ、エタノールを２５６ｍｌ加えた。これを室温下撹拌し、塩酸１５０ｍｌを少しずつ加えた。更に１０分ほど室温下撹拌した後、油浴温度１２０℃で４８時間還流を行った。反応後、放冷し、エバポレーターで濃縮して減量し、ここにジエチルエーテルを２０ｍｌ、水酸化ナトリウム水溶液を加え、ｐＨ試験紙で溶液が塩基性になったことを確認した。ジエチルエーテルを更に加え、ジエチルエーテル層を抽出した。ジエチルエーテル層をエバポレーターで濃縮すると、褐色の濃縮液体が残った。これを、展開溶媒が酢酸エチル：ヘキサン＝１：１の混合溶媒のカラムクロマトグラフィにかけ、目的物を分離した。更に、エタノール−ヘキサンで再結晶したところ、（±）−１，５−ジアミノトリプチセン（５）を収率５５．５％で得ることができた。
【００５４】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，δ＝ｐｐｍ）δ：３．７７（ｓ，４Ｈ，−ＮＨ２），５．３９（ｓ，２Ｈ，−ＣＨ），６．４０（ｄ，２Ｈ，−ＣＨ），６．７８（ｔ，２Ｈ，−ＣＨ），６．８７（ｄ，２Ｈ，−ＣＨ），６．９７（ｍ，２Ｈ，−ＣＨ），７．３６（ｍ，２Ｈ，−ＣＨ）．
【００５５】
［実施例１］
＜１，５−ジアミノトリプチセンの不斉アシル化＞
【化５】
2013223458.tif 000006
【００５６】
１，５−ジアミノトリプチセン（５）６．０ｍｇ（２１．１×１０−３ｍｍｏｌ），酵素としてＮｏｖｏｚｙｍ４３５を２４０ＰＬＵ、又はＬｉｐａｓｅ  ＰＳ  Ａｍａｎｏ  ＳＤを５５２Ｕ、そして、アシルドナーとして酢酸ビニル  ０．４２２ｍｍｏｌ、アセトニトリル１．５ｍｌをスクリュー管にいれた。これを４０℃に保った水浴中で撹拌し、３時間毎に３０時間、反応の進行をＨＰＬＣで調べた。サンプルは５０μＬずつ抽出し、ジエチルエーテルとイオン交換水を加えてジエチルエーテル層を抽出、濾過し、得た濾液を濃縮した。これをＨＰＬＣで測定した。
ＨＰＬＣ条件：＊Ｃｈｉｒａｌ  ＨＰＬＣ（ＩＤ），ヘキサン：イソプロパノール＝７：３、流速１．０ｍｌ／ｍｉｎ
３０時間後の生成物の収率及び光学純度を表１に示す。
【００５７】
【表１】
2013223458.tif 000007
【００５８】
［合成例２］
＜（±）−２，６−ビス（ヒドロキシメチル）トリプチセンの合成＞
【化６】
2013223458.tif 000008
【００５９】
１Ｌ三口フラスコにベンジルアルコール（８）５２ｍＬ（０．５ｍｏｌ，１ｅｑ．）と、トルエン２１５ｍＬ（２．０ｍｏｌ，４ｅｑ．）を入れ、氷浴で系を０℃にしてしばらく撹拌した。その後、塩化アルミニウム２６６．６８ｇ（２．０ｍｏｌ，４ｅｑ．）をゆっくりと少量ずつ加えた。加え終わったら、オイルバスで１１０℃に加熱し、３時間撹拌した。反応後、砕いた氷を４５ｇ、水を３００ｍＬ、３５％ＨＣｌ溶液を２００ｍＬ加えて、冷やしながらしばらく撹拌を続けた。析出した結晶を吸引濾過し、水（５０ｍＬ×３）とヘキサン（５０ｍＬ×３）で洗浄した。取り出した粗結晶を乾燥させ、ヘキサンで数回洗浄したのち、少量の酢酸エチルで洗浄した。ここで得られた結晶を乾燥させると、２，６−ジメチルアントラセン（９）がきれいな灰色結晶として２３．８４２６ｇ（１１５．６ｍｍｏｌ、収率４６．２％）得られた。物性値を以下に示す。
【００６０】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，ＴＭＳ，δ＝ｐｐｍ）δ：２．５４（６Ｈ，ｓ，−ＣＨ３），７．２６（２Ｈ，ｄ，−ＣＨ），７．７２（２Ｈ，ｓ，−ＣＨ），７．８８（２Ｈ，ｄ，−ＣＨ），８．２６（２Ｈ，ｓ，−ＣＨ）．
【００６１】
２００ｍＬ二口フラスコに２，６−ジメチルアントラセン（９）を８７０．２ｍｇ（４．２ｍｍｏｌ，１ｅｑ．）を入れ、ジクロロメタン７０ｍＬで溶かした。オイルバスにて加熱還流をし、亜硝酸イソアミル２．５ｍＬ（１８．６ｍｍｏｌ，４ｅｑ．）とアントラニル酸２．４８６０ｇ（１８．１ｍｍｏｌ，４ｅｑ．）を１時間かけて交互に少しずつ滴下し、その後更に２時間還流した。反応後、常温まで冷却したらエバポレーターで溶媒を除去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィ（ジクロロメタン：クロロホルム＝１：１）で２，６−ジメチルトリプチセン（１０）を分取した。溶媒を除去し、９７３．２ｍｇ（３．４ｍｍｏｌ）の無色固体が得られた（収率８１．７％）。物性値を以下に示す。
【００６２】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，ＴＭＳ，δ＝ｐｐｍ）δ：２．２４（６Ｈ，ｓ，−ＣＨ３），５．３１（２Ｈ，ｓ，−ＣＨ），６．７７（２Ｈ，ｄ，−ＣＨ），６．９５（４Ｈ，ｄ，−ＣＨ），７．２２（２Ｈ，ｓ，−ＣＨ），７．３３（２Ｈ，ｄ，−ＣＨ）．
【００６３】
１００ｍＬナスフラスコに２，６−ジメチルトリプチセン（１０）を１１７．５ｍｇ（０．４２ｍｍｏｌ，１ｅｑ．）を入れ、ピリジン７ｍＬ、水１０ｍＬを加えて撹拌しながらウォーターバスで加熱し、溶液を沸騰させた。そこで、ＫＭｎＯ４  ５４６．２ｍｇ（３．５ｍｍｏｌ，８．３ｅｑ．）を少量ずつ加えたら、室温に戻して１６時間撹拌した。反応後、吸引濾過で析出した二酸化マンガンを取り除き、熱水で洗浄した。得られた濾液に氷冷下で３５％ＨＣｌ溶液を３０ｍＬ加えて、析出した粗結晶を吸引濾過で回収し、冷水で洗浄した。乾燥させた粗結晶をシリカゲルカラムクロマトグラフィ（ヘキサン：アセトン＝１：１）で精製し、ジクロロメタンとヘキサンで再結晶を行い、２，６−ジカルボキシトリプチセン（１１）の無色結晶１２６．７ｍｇ（０．３２ｍｍｏｌ、収率８９．０％）を得た。物性値を以下に示す。
【００６４】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，ＴＭＳ，δ＝ｐｐｍ）δ：５．５９（２Ｈ，ｓ，−ＣＨ），７．０７（２Ｈ，ｍ，−ＣＨ），７．４４−７．５０（４Ｈ，ｍ，−ＣＨ），７．８２（２Ｈ，ｍ，−ＣＨ），８．１１（２Ｈ，ｍ，−ＣＨ）．
【００６５】
２００ｍＬ二口フラスコに水素化アルミニウムリチウムを７０ｍｇ（２．１ｍｍｏｌ，６ｅｑ．）入れ、系内を真空ポンプで真空にし、窒素を注入して置換した。２，６−ジカルボキシトリプチセン（１１）９１．５ｍｇ（０．２９ｍｍｏｌ，１ｅｑ．）を無水ＴＨＦ２０ｍＬで溶かしたものをシリンジ（注射器）で少しずつ滴下した。室温下で６時間撹拌し、反応後に固相抽出を行って乾燥させると粗結晶が得られた。粗結晶をシリカゲルカラムクロマトグラフィ（ヘキサン：アセトン＝１：１）で精製し、ジクロロメタンとヘキサンで再結晶を行ったところ、（±）−２，６−ビス（ヒドロキシメチル）トリプチセン（１２）が無色の固体９２．９ｍｇ（０．３０ｍｍｏｌ，収率９６．０％）として得られた。物性値を以下に示す。
【００６６】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，ＴＭＳ，δ＝ｐｐｍ）δ：４．５８（４Ｈ，ｓ，−ＣＨ２），５．４２（２Ｈ，ｓ，−ＣＨ），６．９６−７．００（４Ｈ，ｍ，−ＣＨ），７．３４−７．４２（６Ｈ，ｍ，−ＣＨ）；
１３Ｃ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，δ＝ｐｐｍ）δ：５３．９（１Ｃ，−ＣＨ−），６５．３（１Ｃ，Ｃ−Ｏ）１２２．７，１２３．７，１２３．７，１２４．０，１２５．３（５Ｃ，ＡｒＣ−Ｈ，１３８．０（１Ｃ，ＡｒＣ−ＣＨ２ＯＨ），１４４．８，１４５．０，１４５．７（３Ｃ，ＡｒＣ−Ｃ）．
【００６７】
［実施例２］
＜（±）−２，６−ビス（ヒドロキシメチル）トリプチセンの不斉エステル化＞
【化７】
2013223458.tif 000009
【００６８】
９ｃｃスクリュー管瓶に（±）−２，６−ビス（ヒドロキシメチル）トリプチセン（（±）−１２）を１０ｍｇ入れ、乾燥アセトニトリル１．０ｍＬで溶かし、そこへＬｉｐａｓｅ  ＰＳ  Ａｍａｎｏ  ＳＤ  ２０ｍｇを加えてよく撹拌し、ヘキサン酸ビニルを３０μＬ加えたら、室温で２４時間撹拌した後、サンプルを採取し、ＨＰＬＣで生成物の反応率と光学純度を測定した。結果を表２に示す。
【００６９】
【表２】
2013223458.tif 000010
【００７０】
表２に示すように、９９％ｅｅを超える高光学純度のジオール化合物（１２）及びジエステル化合物（１４）を得ることができた。これらを単離し、Ｘ線構造解析を行ったところ、ジオールは（Ｓ，Ｓ）−（＋）体、ジエステルは（Ｒ，Ｒ）−（−）体であることがわかった。
【００７１】
［合成例３］
＜（±）２，６−ジカルボキシトリプチセンジブチルエステルの合成＞
【化８】
2013223458.tif 000011
【００７２】
合成例２において、中間体として得られた２，６−ジカルボキシトリプチセン（１１）を原料に用いる。５０ｍｌナスフラスコに、（±）−２，６−ジカルボキシトリプチセン（（±）１１）０．１９４２ｇ、１−ブタノール２０ｍｌ、濃硫酸１ｍｌを入れ、加熱還流した。ＴＬＣで反応の進行を確認し、還流を終了した。その後氷冷水に反応溶液を注ぎいれ、ジエチルエーテルで抽出し、抽出した層を水で２回洗浄した。エーテル層を取り出して硫酸マグネシウムで脱水、エバポレーターで濃縮した後、シリカゲルクロマトグラフィ（ヘキサン：アセトン＝１：１）で精製し（±）−２，６−ジカルボキシトリプチセンジブチルエステル（１５）を０．１９３２ｇ（収率８３．２％）得た。物性値を以下に示す。
【００７３】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，ＴＭＳ，δ＝ｐｐｍ）δ：１．３５（６Ｈ，ｔ），４．３２（４Ｈ，ｑ），５．５４（２Ｈ，ｓ），７．０３（４Ｈ，ｍ），７．４２（２Ｈ，ｍ），７．７５（２Ｈ，ｍ），８．０５（２Ｈ，ｍ）．
【００７４】
［参考例１］
＜（±）−２，６−ジカルボキシトリプチセンジブチルエステルの不斉加水分解＞
【化９】
2013223458.tif 000012
【００７５】
９ｃｃスクリュー管瓶に、（±）−２，６−ジカルボキシトリプチセンジブチルエステル（（±）−１５）を５ｍｇ、アセトニトリルを５００μｌ、０．１Ｍリン酸バッファーを１ｍｌ、Ｌｉｐａｓｅ  ＡＫを１５ｍｇ入れ、室温で撹拌した。７２時間後にジエチルエーテルで分液、抽出し、溶媒を除去した後、ＨＰＬＣにて測定を行った。収率と光学純度を表３に示す。
【００７６】
【表３】
2013223458.tif 000013
【００７７】
［参考例２］
＜土壌細菌によるトリプチセン類の不斉酸化＞
≪土壌細菌のスクリーニング≫
土壌や活性汚泥（７７サンプル）を単離源として、（±）−２，６−ビス（ヒドロキシメチル）トリプチセン（１２）を変換することができる新規微生物を単離するために、（±）−２，６−ビス（ヒドロキシメチル）トリプチセン（１２）が唯一の炭素源となるような培地（ＣＦＭＭ）を用いてスクリーニングを行った。
ＣＦＭＭプレート上に単離されている菌体を、試験管中のＬＢ培地３ｍｌに植菌し、インキュベーターを用いて２４時間振とう培養した。生育を確認できたら、試験管から培養液を１００μｌとり、５００ｍｌ三角フラスコ中のＬＢ培地１００ｍｌへ植菌し、同様に２４時間振とう培養した。
【００７８】
使用した培地の組成は以下の通りである。
ＣＦＭＭ培地
Ｎａ２ＨＰＯ４    ２．２ｇ／ｌ
ＫＨ２ＰＯ４    ０．８ｇ／ｌ
ＮＨ４ＮＯ３    ３．０ｇ／ｌ
ＣａＣｌ２・２Ｈ２Ｏ    ０．０１ｇ／ｌ
ＦｅＳＯ４・７Ｈ２Ｏ    ０．０１ｇ／ｌ
ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ    ０．０１ｇ／ｌ
２，６−ビス（ヒドロキシメチル）トリプチセン（５％（ｗｔ／ｖｏｌ））
０．１５  ｍｇ／ｍｌ
アガロース    １６ｇ／ｌ
ＬＢ培地
Ｂａｃｔｏ  ｔｒｙｐｔｏｎｅ    １０ｇ／ｌ
Ｙｅａｓｔ  ｅｘｔｒａｃｔ    ５ｇ／ｌ
ＮａＣｌ    １０ｇ／ｌ
【００７９】
ＯＤ６００を測定し、ＯＤ６００＝５．０となるように、ＬＢ培地で培養液を希釈した。培養液を試験管に２９７０μｌずつ分けとり、基質溶液を３０μｌそれぞれに加え、基質濃度を０．０５ｍｇ／ｍｌとした。振とう培養を行い、２４時間毎に培養液を試験管一本分抽出した。
更に、以下の手順で処理を行った。
１）食塩の入った遠心分離管に培養液を移し、塩析を起こした。
２）希塩酸で培養液をｐＨ＝１〜２に調整した。
３）ジエチルエーテル３ｍｌを加え、ボルテックスミキサーで１分間懸濁させた後、遠心分離を行い、上澄みを分取した。
４）下層に酢酸エチル３ｍｌを加え、抽出した。
５）再び下層に酢酸エチル３ｍｌを加え、抽出した。
有機相を回収し、フィルター濾過して、不純物を取り除いた。
濾液をエバポレーターにかけて溶媒を飛ばした後、酢酸エチル１００μｌを加え、これを、抽出サンプルとして、ＨＰＬＣによる解析を行ったところ、１サンプルで（±）−２，６−ビス（ヒドロキシメチル）トリプチセンの減少が確認された。
【００８０】
≪菌体の特定≫
上記で（±）−２，６−ビス（ヒドロキシメチル）トリプチセン（１２）の減少が確認された菌体について、アガロースゲル電気泳動にかけ鋳型を特定し、ＰＣＲをした。反応終了後、ＰＣＲ反応液の一部をアガロースゲル電気泳動し、ＤＮＡを切り出し、シークエンスしたところ、シュードモナスニトロレデュセンスであることがわかった。
【００８１】
≪（±）−１，５−ビス（ヒドロキシメチル）トリプチセンの不斉酸化≫
ＬＢ培地３ｍｌにＯＤ６００＝０．５１０、基質濃度０．０５ｍｇ／ｍｌとなるように、シュードモナスニトロレデュセンス、（±）−１，５−ビス（ヒドロキシメチル）トリプチセン（１９）を加えた。３０℃、３００ｒｐｍで培養したところ、６日後に光学純度５２．２％ｅｅの（Ｓ，Ｓ）−１，５−ビス（ヒドロキシメチル）トリプチセンが収率５２．４％で回収された。
【００８２】
≪（±）−２，６−ビス（ヒドロキシメチル）トリプチセンの不斉酸化≫
ＬＢ培地３ｍｌにＯＤ６００＝０．５１０、基質濃度０．０５ｍｇ／ｍｌとなるように、シュードモナスニトロレデュセンス、（±）−２，６−ビス（ヒドロキシメチル）トリプチセン（１２）を加えた。３０℃、３００ｒｐｍで培養したところ、６日後に光学純度９９．９％ｅｅの（Ｓ，Ｓ）−２，６−ビス（ヒドロキシメチル）トリプチセンが収率２４．２％で回収された。
【００８３】
［合成例４］
＜アルキルアンモニウム塩を有するトリプチセン誘導体の製造＞
【化１０】
2013223458.tif 000014
【００８４】
２００ｍｌ二口フラスコに合成例１で製造した１，５−ジアセチルトリプチセン（３）を２．０１ｇ、ジオキサン６０ｍｌを入れ、氷冷下で撹拌させた。ビーカーに水酸化カリウム２０．３４ｇ、臭素５ｍｌを混合したもの用意し、滴下ロートでゆっくりとフラスコ内へ滴下させた。滴下が終了したら室温で４時間撹拌した。反応に使われなかった臭素を失活させるために亜硫酸水素ナトリウム２ｇと水１００ｍｌ、ジエチルエーテル５０ｍｌを加え、分液ロートにて水層部分を抽出した。水層に希塩酸を加えて、ｐＨ＝１とし、ジエチルエーテルで抽出した。ジエチルエーテル相を飽和食塩水で洗い、濃縮して、減圧乾燥した。エタノールで再結晶し、白色結晶として１，５−ジカルボキシルトリプチセン（１８）を収率９０％で得た。
【００８５】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ，δ＝ｐｐｍ）δ：６．８５（２Ｈ，ｓ，−Ｃ−Ｈ），７．０３，７．０３，７．０４，７．０５（ｑ，Ａｒ−Ｈ），７．０８，７．１０，７．１２（ｔ，Ａｒ−Ｈ），７．４４，７．４５，７．４６，７．４６（ｑ，Ａｒ−Ｈ），７．５３，７．５５（ｄ，Ａｒ−Ｈ），７．６１，７．６２（ｄ，Ａｒ−Ｈ）．
【００８６】
次に、２００ｍｌ三口フラスコに水素化アルミニウムリチウム５４５．２ｍｇを入れ、窒素置換した。１，５−ジカルボキシルトリプチセン（１８）９７３．０ｍｇをテトラヒドロフラン１２０ｍｌに溶解し、フラスコに加え、６０℃で６時間撹拌した。その後、水素化アルミニウムリチウムを失活させるため１０％の水酸化カリウム水溶液１．９３ｍｌと水１．５５ｍｌを加え４時間撹拌を続けた。系内が白く濁った後に吸引濾過をして、濾液をエバポレーションし溶媒を除去した。得られた生成物をクロロホルムに溶解し再結晶した。更にシリカゲルカラムクラマトグラフィ（展開溶媒アセトン：ヘキサン＝１：１）で精製し、濃縮、減圧乾燥して１，５−ビス（ヒドロキシメチル）トルプチセン（１９）を収率８４％で得た。
【００８７】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，δ＝ｐｐｍ）δ：２．１７（２Ｈ，ｓ，ＯＨ），４．９０，４．９１（４Ｈ，ｄ，ＣＨ２），５．９２（２Ｈ，ｓ，ｂｒｉｄｇｅｈｅａｄ），６．９６−７．０１（６Ｈ，ｍ，Ａｒ−Ｈ），７．３８，７．３９，７．３９，７．４０（２Ｈ，ｄｄ，Ａｒ−Ｈ），７．４１，７．４２，７．４２，７．４３（２Ｈ，ｄｄ，Ａｒ−Ｈ）；
１３Ｃ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，δ＝ｐｐｍ）δ：３０．９（１Ｃ，−ＣＨ−），４４．２（１Ｃ，Ｃ−Ｏ），１０４．４，１０４．５，１０５．７，１０５．８，１０６．０（５Ｃ，ＡｒＣ−Ｈ）  ，  １１５．３（１Ｃ，ＡｒＣ−ＣＨ２ＯＨ），１２５．３，１２５．８，１２６．５（３Ｃ，ＡｒＣ−Ｃ）．
【００８８】
３０ｍｌナスフラスコに１，５−ビス（ヒドロキシメチル）トルプチセン（１９）を１８０ｍｌ入れ、９０℃に加熱した臭化水素水９ｍｌを加え２時間撹拌した。その後、吸引濾過、減圧乾燥し、石油エーテルで再結晶したところ、１，５−ビス（ブロモメチル）トリプチセン（２０）を収率９９％で得た。
【００８９】
１００ｍｌ二口フラスコ中に、１，５−ビス（ブロモメチル）トリプチセン（２０）２００ｍｇをクロロホルム中に溶解させた。Ｎ，Ｎ−ジメチル−ｎ−ドデシルアミン１．１８ｇのクロロホルム溶液をゆっくり滴下しながら１００℃で４２時間加熱還流を行った。その後、溶媒をエバポレーションで除去した。これにＮ，Ｎ−ジメチル−ｎ−ドデシルアミンを加えて溶解させ限外濾過を行った。クロロホルムで再結晶し、１，５−ビス（Ｎ，Ｎ−ジメチル−ｎ−ドデシルアンモニウム）トリプチセン（２１）を収率２７％で得た。
【００９０】
［合成例５］
＜アルキルアンモニウム塩を有するトリプチセン誘導体の製造＞
【化１１】
2013223458.tif 000015
【００９１】
２００ｍｌ二口フラスコに合成例２で製造した２，６−ジメチルトリプチセン（１０）０．５ｇ、Ｎ−ブロモスクシンイミド０．９５ｇ、過酸化ベンゾイル０．１３ｇ、四塩化炭素４０  ｍｌを入れ、加熱還流を行った。８０℃にて２時間、引き続き温度を１００℃に上げ２時間行った。減圧濾過にて沈殿物を取り除き、濾液をエバポレーターにて減圧濃縮し黄色粉末結晶を得た。次いでカラムクロマトグラフィ（展開溶媒クロロホルム）で精製し、濃縮して、２，６−ビス（ブロモメチル）トリプチセン（２２）を透明粉末結晶として０．９２ｇ（収率８５％）得た。ＨＰＬＣ純度は９１．９％だった。（ＨＰＬＣ  ＤＡＩＣＥＬ  Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ  ＩＡ，ヘキサン：２−プロパノール＝９：１、流速１．０ｍｌ／ｍｉｎ．，検出２５４．０ｎｍ）
【００９２】
１００ｍｌ三口フラスコに２，６−ビス（ブロモメチル）トリプチセン（２２）０．３０ｇ、クロロホルム２０ｍｌを入れ油浴温度１００℃にて加熱還流を行った。そこへクロロホルム２０ｍｌに溶かしたＮ，Ｎ−ジメチル−ｎ−ドデシルアミン１．４６ｇを１時間かけて滴下した。滴下開始より積算して４０時間加熱還流を続けた。反応物を減圧濃縮したところ、粘性黄色液体と、Ｎ，Ｎ−ジメチル−ｎ−ドデシルアミンとが層分離状態になった。氷浴して粘性黄色液体を粉末化し、限外濾過を行った。Ｎ，Ｎ−ジメチル−ｎ−ドデシルアミンで洗浄し、次いでヘキサンで洗浄し粗結晶を得た。メタノール＋酢酸エチルから再結晶し、２，６−ビス（Ｎ，Ｎ−ジメチル−ｎ−ドデシルアンモニウム）トリプチセン４００．２ｍｇを収率８３．１％で得た。物性値は以下の通りである。
【００９３】
ＨＰＬＣ純度  ９９．９％
融点    ２１８．５℃
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．７０（２Ｈ，ｓ），７．４０−７．２０（６Ｈ，ｍ），７．１０（２Ｈ，ｔ），５．３５（２Ｈ，ｄ），５．１８−４．９０（４Ｈ，ｑ），３．１５（１２Ｈ，ｄ），２．１８（６Ｈ，ｓ），１．７５（４Ｈ，ｔ），１．４０−１．２０（３２Ｈ，ｍ），０．８８（６Ｈ，ｔ）．