(57)【要約】  【課題】皮膚や粘膜による刺激を緩和できるＴＲＰＡ１活性抑制剤、及び皮膚又は粘膜の刺激感緩和剤の提供。  【解決手段】下記式（１）〔式中、Ｒ1及びＲ3はそれぞれ独立して水素原子又は炭素数１〜３のアルキル基を示し、Ｒ2は炭素数１〜６のアルキル基を示し、Ｒ4は水素原子、メチル基又はエチル基を示し、点線と実線の二重線は単結合又は二重結合を示す。〕で表される化合物を有効成分とするＴＲＰＡ１活性抑制剤、皮膚又は粘膜の刺激感緩和剤。【化１】2013155172.tif 000033【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（１）
【化１】
2013155172.tif 000030
〔式中、Ｒ1及びＲ3はそれぞれ独立して水素原子又は炭素数１〜３のアルキル基を示し、Ｒ2は炭素数１〜６のアルキル基を示し、Ｒ4は水素原子、メチル基又はエチル基を示し、点線と実線の二重線は単結合又は二重結合を示す。〕
で表される化合物を有効成分とするＴＲＰＡ１活性抑制剤。
【請求項２】
下記式（１）
【化２】
2013155172.tif 000031
〔式中、Ｒ1及びＲ3はそれぞれ独立して水素原子又は炭素数１〜３のアルキル基を示し、Ｒ2は炭素数１〜６のアルキル基を示し、Ｒ4は水素原子、メチル基又はエチル基を示し、点線と実線の二重線は単結合又は二重結合を示す。〕
で表される化合物を有効成分とする皮膚又は粘膜の刺激感緩和剤。
【請求項３】
刺激感原因物質による皮膚又は粘膜の感覚刺激を緩和する請求項２記載の刺激感緩和剤。
【請求項４】
刺激感原因物質が防腐剤、防腐助剤又はアンモニアである請求項３記載の刺激感緩和剤。
【請求項５】
下記式（１）
【化３】
2013155172.tif 000032
〔式中、Ｒ1及びＲ3はそれぞれ独立して水素原子又は炭素数１〜３のアルキル基を示し、Ｒ2は炭素数１〜６のアルキル基を示し、Ｒ4は水素原子、メチル基又はエチル基を示し、点線と実線の二重線は単結合又は二重結合を示す。〕
で表される化合物を用いることを特徴とする、皮膚又は粘膜の刺激感緩和方法。
【請求項６】
刺激感原因物質による皮膚又は粘膜の感覚刺激を緩和する請求項５記載の刺激感緩和方法。
【請求項７】
刺激感原因物質が防腐剤、防腐助剤又はアンモニアである請求項６記載の刺激感緩和方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＴＲＰＡ１活性抑制剤及び刺激感緩和剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
感覚は、外部から受けた刺激が電気信号に変換され、神経細胞を通じて脳に伝達されることで生じる。外部刺激を電気信号に変換するには、その外部刺激を感知する受容体の存在が必要である。
ＴＲＰＡ１は、一過性受容器電位（ＴＲＰ）イオンチャネルのスーパーファミリーに属する非選択性陽イオンチャネルであり、侵害受容ニューロンにおいて低温受容器（17℃）として見出された（非特許文献１）。その後、ＴＲＰＡ１は、マスタードオイルやそれに含まれるアリルイソチオシアネート（ＡＩＴＣ）、シナモン、ガーリック、メチルサリチレート、オイゲノール等に反応する化学受容体であること、更には低温と機械刺激、化学刺激に応答する痛み受容体であることが報告されている（非特許文献２及び３)。
【０００３】
また、最近では、パラベン類やアルカリ剤がＴＲＰＡ１に応答し、ＴＲＰＡ１で形質転換させた細胞を用いてパラベン類やアルカリ剤の刺激を抑制する物質をスクリーニングできること（特許文献１及び２）が報告されている。
【０００４】
斯様に、ＴＲＰＡ１は皮膚や粘膜の侵害受容器であり、様々な刺激によって活性化されることから、ＴＲＰＡ１の活性を抑制することは、刺激による痛みの軽減に有効であると考えられ、これまでに、被験物質とＡＩＴＣを、ＴＲＰＡ１を発現する細胞に接触させて、ＡＩＴＣによりＴＲＰＡ１を介して引き起こされる細胞内カルシウムイオン濃度の変化を測定することにより、刺激（痛み）抑制物質の探索・評価がなされ、刺激抑制物質が見出されている（非特許文献４）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２００８−７９５２８号公報
【特許文献２】特開２００９−８２０５３号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Story et al. 2003, Cell 112, 819-829
【非特許文献２】Kwan et al. 2006, Neuron 50, 277-289
【非特許文献３】日本薬理学雑誌、第１２４巻、第２１９頁−第２２７頁、２００４年、社団法人  日本薬理学会発行
【非特許文献４】Molecular Pain 2008, 4:48
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、皮膚や粘膜に対する感覚刺激を緩和できるＴＲＰＡ１活性抑制剤、及び皮膚又は粘膜の刺激感緩和剤を提供することに関する。
【０００８】
本発明者らは、ＴＲＰＡ１の活性を抑制する素材について検討したところ、下記式（１）で表される化合物が、ＴＲＰＡ１の活性を抑制し、刺激感原因物質による皮膚や粘膜に対する刺激感の緩和に有効であることを見出した。
【０００９】
すなわち本発明は、以下の１）〜３）に係るものである。
１）下記式（１）で表される化合物を有効成分とするＴＲＰＡ１活性抑制剤。
２）下記式（１）で表される化合物を有効成分とする皮膚又は粘膜の刺激感緩和剤。
３）下記式（１）で表される化合物を用いることを特徴とする、皮膚又は粘膜の刺激感緩和方法。
【００１０】
【化１】
2013155172.tif 000002
【００１１】
〔式中、Ｒ1及びＲ3はそれぞれ独立して水素原子又は炭素数１〜３のアルキル基を示し、Ｒ2は炭素数１〜６のアルキル基を示し、Ｒ4は水素原子、メチル基又はエチル基を示し、点線と実線の二重線は単結合又は二重結合を示す。〕
【発明の効果】
【００１２】
本発明のＴＲＰＡ１活性抑制剤及び皮膚又は粘膜の刺激感緩和剤は、ＴＲＰＡ１の活性化を効果的に抑制するという作用を有する。したがって、本発明のＴＲＰＡ１活性抑制剤、皮膚又は粘膜の刺激感緩和剤を、防腐剤、防腐助剤、アンモニア等の刺激感原因物質を含有する各種組成物と共に使用することにより、当該刺激感原因物質による刺激感や痛みを緩和することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】化合物１のＴＲＰＡ１活性抑制効果（用量依存性）を示すグラフ。
【図２】各種ＴＲＰＡ１刺激物質によるＴＲＰＡ１活性化に対する化合物１の効果を示すグラフ。
【図３】防腐剤および防腐助剤によるＴＲＰＡ１活性化作用を示すグラフ。
【図４】防腐剤による感覚刺激に対する化合物１の効果を示すグラフ。
【図５】本発明化合物のＴＲＰＡ１活性抑制効果（用量依存性）を示すグラフ。（Ａ）：化合物１０、化合物１、（Ｂ）：化合物３、化合物４、（Ｃ）：化合物７、化合物８、化合物２
【発明を実施するための形態】
【００１４】
本発明の式（１）において、Ｒ1及びＲ3で示される炭素数１〜３のアルキル基としては、直鎖又は分岐の何れでもよく、具体的にはメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基が挙げられ、このうちメチル基が好ましい。
Ｒ1及びＲ3は、共に水素原子、或いはいずれか一方が炭素数１〜３のアルキル基（好ましくはメチル基）であるのが好ましい。
【００１５】
Ｒ2で示される炭素数１〜６のアルキル基としては、直鎖又は分岐の何れでもよく、例えばメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、ｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｎ−ヘキシル基等が挙げられ、このうち炭素数１〜３のアルキル基が好ましく、メチル基、エチル基がより好ましい。
【００１６】
本発明の式（１）で表される化合物のうち好ましい態様としては、Ｒ1が水素原子又はメチル基であり、Ｒ2がメチル基又はエチル基であり、Ｒ3が水素原子であり、Ｒ4がメチル基又はエチル基である場合が挙げられる。
【００１７】
Ｒ1及びＲ3が共に水素原子であり、Ｒ2及びＲ4が共にメチル基であり、点線と実線の二重線が単結合である化合物、すなわち2−メチル−4−フェニル−1−ペンタノール（化合物１）は、残香性の高い香料してスキンケア、柔軟剤などに使用されている物質であり、「Pamplefleur」として市販されている。
【００１８】
更に、本発明の式（１）で表される化合物において、点線と実線の二重線が二重結合である場合には、シス体（Ｚ体）及びトランス体（Ｅ体）が存在する。また、置換基の種類や組み合わせによって、ｄ体−、ｌ体−等の光学異性体及び回転異性体等の異性体が存在し得る。本発明においては、当該各異性体の混合物や単離されたものの何れをも包含する。
【００１９】
本発明の式（１)で表される化合物は、公知の方法（例えば、J. Org. Chem. 2005, 70, 1281-1290）に準じて化学合成することができる。例えば、下記反応式に示すように、塩基の存在下、Ａで示されるカルボニル化合物とホスホノカルボン酸トリエステル等を縮合させてα、β不飽和エステル体Ｂとし、これをＬｉＡｌＨ4等を用いた還元反応に付してアルコール体Ｃとすること、更にはこれを水素化して飽和のアルコール体Ｄとすること、更にはこれをＴＥＭＰＯとヨードベンゼンジアセテート等を用いた酸化反応に付してアルデヒド体Ｅとすること、グリニャール試薬等のアルキル化剤を用いてアルキル基を導入して化合物Fとすることにより合成することができる。
【００２０】
【化２】
2013155172.tif 000003
【００２１】
〔式中、Ｒ1〜Ｒ4は前記したものと同じ〕
【００２２】
また、2−メチル−4−フェニル−1−ペンタノールについては、市販の「pamplefleur」（IFF社）等を使用することもできる。
【００２３】
式（１)で表される化合物のより好適な化合物としては、後記表1に記載の化合物を例示することができ、このうちＴＲＰＡ１活性抑制作用の点から、２−メチル−４−フェニル−１−ペンタノール（化合物１）、（Ｅ）−２−エチル−４−フェニル−２−ペンテン−１−オール（化合物２）、（Ｚ）−２−エチル−４−フェニル−２−ペンテン−１−オール（化合物３）、２−エチル−４−フェニル−１−ペンタノール（化合物４）、（Ｅ）−２−エチル−４−フェニル−２−ヘキセン−１−オール（化合物７）、（Ｚ）−２−エチル−４−フェニル−２−ヘキセン−１−オール（化合物８）、（Ｅ）−２−メチル−４−フェニル−２−ペンテン−１−オール（化合物１０）が好ましい。
【００２４】
本発明の式（１)で表される化合物は、後記実施例に示すように、種々のＴＲＰＡ１刺激物質と共に、ＴＲＰＡ１を形質導入した細胞（ＴＲＰＡ１発現細胞）に接触させた場合に、刺激物質による細胞内の陽イオン量の流入を抑制するというＴＲＰＡ１活性抑制作用を有する（実施例１−４、７−８）。また、本発明の式（１)で表される化合物を、ＴＲＰＡ１を活性化する防腐剤と共に皮膚に塗布した場合、防腐剤や刺激臭に対する感覚刺激性を緩和する効果を発揮する（実施例５及び６）。
したがって、本発明の式（１)で表される化合物はＴＲＰＡ１活性抑制剤、及びＴＲＰＡ１を介して引き起こされる皮膚や粘膜に対する刺激感や痛みの緩和に有効な、皮膚又は粘膜の刺激感緩和剤となり得る。
【００２５】
ここで、「ＴＲＰＡ１の活性抑制」とは、受容体であるＴＲＰＡ１の活性を抑制すること、具体的にはＴＲＰＡ１刺激物質（アゴニスト）がＴＲＰＡ１に結合することによって発現する活性、例えばイオン流束の調節能（例えば、細胞外から細胞内へのカルシウムイオン、ナトリウムイオンなどの陽イオンの輸送能など）、膜電位の調節能（例えば、電流の発生能など）を抑制或いは阻害することを云う。
ここで、ＴＲＰＡ１刺激物質としては、例えば、アリルイソチオシアネート（ＡＩＴＣ）、アンモニア、ブラジキニン、シンナムアルデヒド、４−ヒドロキシノネナール、アリシン、アクロレイン、メントール、メチルサリチレート、オイゲノール、パラベン類、フェノキシエタノール、ブチルカルバミン酸ヨウ化プロピニル（ＩＰＢＣ）、トリクロサン、ベンジルアルコールなどが挙げられる。
【００２６】
尚、本発明の式（１)で表される化合物によるＴＲＰＡ１の活性の抑制効果は、例えば、ＴＲＰＡ１発現細胞を用い、式（１)で表される化合物の存在下にＴＲＰＡ１刺激物質（例えばＡＩＴＣ）と接触させたＴＲＰＡ１発現細胞内におけるカルシウムイオン濃度と、式（１)で表される化合物の非存在下でＴＲＰＡ１刺激物質と接触させたＴＲＰＡ１発現細胞内におけるカルシウムイオン濃度との差異を比較すること等によって評価することができる。
【００２７】
また、「皮膚又は粘膜の刺激感緩和」とは、ＴＲＰＡ１を介して引き起こされる皮膚や粘膜に対する刺激感や痛みを抑制又は低減することを意味し、より具体的には、上述したＴＲＰＡ１刺激物質とされる化学物質によって引き起こされる、感覚刺激を抑制又は低減することが挙げられる。ここでいう好適なＴＲＰＡ１刺激物質としては、皮膚や粘膜に対して刺激感を与える可能性がある化学物質（「刺激感原因物質」という）、例えば、パラベン類、フェノキシエタノール、ブチルカルバミン酸ヨウ化プロピニル（ＩＰＢＣ）、トリクロサン等の防腐剤、ベンジルアルコール等の防腐助剤、アンモニア、アクロレイン、メントール、メチルサリチレート、オイゲノール等が挙げられる。
なお、ここでいう、「粘膜」としては、口腔、咽喉、鼻腔、耳腔、結膜嚢等が挙げられる。
刺激感緩和効果は、後記実施例に示すような官能評価により測定してもよく、又は上記のＴＲＰＡ１発現細胞を用いた細胞内カルシウムイオン濃度の変化を以て評価することもできる。
【００２８】
本発明のＴＲＰＡ１活性抑制剤及び皮膚又は粘膜の刺激感緩和剤は、例えば、上述した刺激感原因物質を含有する組成物（皮膚洗浄剤、頭髪洗浄剤、メイクアップ剤、入浴剤、パーマネントウェーブ用剤、染毛剤、石鹸類、台所用洗剤、洗濯用洗剤、歯磨類等の化粧品、医薬部外品、医薬品、生活用品等）に配合すること、或いは組み合わせること、例えば、刺激感原因物質を含有する組成物と別個に調製して同時或いは順次組み合わせることにより使用され、それにより当該刺激感原因物質により引き起こされる感覚刺激を緩和できる。
【００２９】
ＴＲＰＡ１活性抑制剤及び皮膚又は粘膜の刺激感緩和剤は、本発明の式（１)で表される化合物を単独で用いたものであってもよく、あるいは油分、色素、香料、防腐剤、キレート剤、顔料、酸化防止剤、ビタミン、ミネラル、甘味料、調味料、保存料、結合剤、増量剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、分散剤、緩衝剤、被膜剤、担体、希釈剤等の、医薬品、化粧品、医薬部外品、生活用品等の各種製剤に用いられる添加剤や賦形剤等と組み合わせた組成物であってもよい。またそれらの形態も特に限定されず、例えば溶液、エマルジョン、サスペンジョン、ゲル、固形、粉体、粒体、エアゾールなど、任意の形態に調製できる。
【００３０】
本発明のＴＲＰＡ１活性抑制剤及び皮膚又は粘膜の刺激感緩和剤を、刺激感原因物質を含有する組成物と共に用いる場合、ＴＲＰＡ１活性抑制剤及び皮膚又は粘膜の刺激感緩和剤の使用量は、刺激感緩和効果を有する限り特に限定されないが、例えば、刺激感原因物質１質量部に対し、本発明の式（１)で表される化合物を好ましくは０．０１質量部以上、より好ましくは０．１質量部以上、そして好ましくは１０質量部以下、より好ましくは１質量部以下の割合とすることができる。例えば、刺激感原因物質１質量部に対し、好ましくは０．０１〜１０質量部、より好ましくは０．１〜１質量部の割合とすることができる。
【００３１】
上述した実施形態に関し、本発明においてはさらに以下の態様が開示される。
＜１＞下記式（１）で表される化合物を有効成分とするＴＲＰＡ１活性抑制剤。
＜２＞下記式（１）で表される化合物を有効成分とする皮膚又は粘膜の刺激感緩和剤。
＜３＞ＴＲＰＡ１活性抑制剤を製造するための下記式（１）で表される化合物の使用。
＜４＞皮膚又は粘膜の刺激感緩和剤を製造するための下記式（１）で表される化合物の使用。
＜５＞ＴＲＰＡ１活性抑制に使用するための下記式（１）で表される化合物。
＜６＞皮膚又は粘膜の刺激感緩和に使用するための下記式（１）で表される化合物。
＜７＞下記式（１）で表される化合物を用いることを特徴とする、ＴＲＰＡ１活性抑制方法。
＜８＞下記式（１）で表される化合物を用いることを特徴とする、皮膚又は粘膜の刺激感緩和方法。
＜９＞上記＜２＞、＜４＞、＜６＞又は＜８＞において、感覚刺激の緩和は、刺激感原因物質による皮膚又は粘膜の感覚刺激の緩和である。
＜１０＞上記＜９＞において、刺激感原因物質は、防腐剤、防腐助剤又はアンモニアである。
＜１１＞上記＜５＞、＜６＞、＜７＞又は＜８＞において、下記式（１）で表される化合物は、刺激感原因物質を含有する組成物に配合すること、或いは当該組成物と組み合わせることにより使用するものである。
＜１２＞上記＜１１＞において、下記式（１)で表される化合物を、刺激感原因物質１質量部に対し、好ましくは０．０１質量部以上、より好ましくは０．１質量部以上、そして好ましくは１０質量部以下、より好ましくは１質量部以下の割合で使用するものである。
【００３２】
【化３】
2013155172.tif 000004
【００３３】
〔式中、Ｒ1及びＲ3はそれぞれ独立して水素原子又は炭素数１〜３のアルキル基を示し、Ｒ2は炭素数１〜６のアルキル基を示し、Ｒ4は水素原子、メチル基又はエチル基を示し、点線と実線の二重線は単結合又は二重結合を示す。〕
【実施例】
【００３４】
製造例
以下に、表１に示す本発明の化合物（化合物２〜１２）及び比較化合物の製造例を示す。尚、化合物１（２−メチル−４−フェニル−１−ペンタノール）は、市販の「pamplefleur」（IFF社）を購入した。
また、1Ｈ−ＮＭＲスペクトルは、ＣＨＣｌ3（７．２４）を内部標準物質として用いて、Ｂｒｕｋｅｒ社製Ａｖａｎｃｅ−６００により測定し、13ＣＮＭＲスペクトルは、ＣＨＣｌ3（７７．０）を内部標準物質として用いて、Ｂｒｕｋｅｒ社製Ａｖａｎｃｅ−６００により測定した。
【００３５】
【表１】
2013155172.tif 000005
【００３６】
製造例１  化合物２〜４の合成
（１）水素化ナトリウム（純度５５％、１９５ｍｇ）をテトラヒドロフラン（１５ｍＬ）に懸濁し、２−ホスホノ酪酸トリエチル（１．３３ｍＬ）を加え、室温・窒素雰囲気下、３０分撹拌した。反応液に２−フェニルプロピオンアルデヒド（ａ）（３００ｍｇ）をテトラヒドロフラン（５ｍＬ）に溶解したものを加え、さらに１５時間撹拌した。反応液に飽和塩化アンモニウム水溶液とヘキサンを加え、ヘキサン層を減圧乾燥後、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製し、（Ｅ）−α,β不飽和エステル体（ｂ）（３５．９ｍｇ）および（Ｚ）−α,β不飽和エステル体（ｃ）（３９６．４ｍｇ）を得た。
【００３７】
【化４】
2013155172.tif 000006
【００３８】
（２）ＬｉＡｌＨ4（９．６ｍｇ）をテトラヒドロフラン（１ｍＬ）に懸濁し、（１）で得られた（Ｅ）−α,β不飽和エステル体（ｂ）（２３．５ｍｇ）をテトラヒドロフラン（０．５ｍＬ）に溶解したものを加え、０℃で３０分撹拌した。反応液に水（２０μＬ）、１５％水酸化ナトリウム水溶液（２０μＬ）、水（６０μＬ）の順で加え、１日撹拌し、不溶物を濾過した。濾液を減圧乾燥後、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製し、（Ｅ）−２−エチル−４−フェニル−２−ペンテン−１−オール（化合物２）（１４．０ｍｇ）を得た。
【００３９】
【化５】
2013155172.tif 000007
【００４０】
化合物２のＮＭＲスペクトルを以下に示す。
1HNMR (600 MHz, CDCl3) δ 7.30-7.26 (m, 2H), 7.25-7.22 (m, 2H), 7.19-7.15 (m, 1H), 5.52 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 4.04 (s, 2H), 3.72 (dq, J = 9.8, 7.0 Hz, 1H), 2.24-2.13 (m, 2H), 1.34 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 1.00 (t, J = 7.5 Hz, 3H);
13CNMR (150 MHz, CDCl3) δ 146.7, 139.5, 131.2, 128.6, 127.0, 126.1, 66.7, 37.6, 22.6, 21.4, 13.5.
【００４１】
（３）ＬｉＡｌＨ4（１５１ｍｇ）をテトラヒドロフラン（９ｍＬ）に懸濁し、（１）で得られた（Ｚ）−α,β不飽和エステル体（ｃ）（３７１ｍｇ）をテトラヒドロフラン（６ｍＬ）に溶解したものを加え、０℃で３０分撹拌した。反応液に水（２００μＬ）、１５％水酸化ナトリウム水溶液（２００μＬ）、水（６００μＬ）の順で加え、１日撹拌し、不溶物を濾過した。濾液を減圧乾燥後、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製し、（Ｚ）−２−エチル−４−フェニル−２−ペンテン−１−オール（化合物３）（２５８ｍｇ）を得た。
【００４２】
【化６】
2013155172.tif 000008
【００４３】
化合物３のＮＭＲスペクトルを以下に示す。
1HNMR (600 MHz, CDCl3) δ 7.30-7.26 (m, 2H), 7.23-7.21 (m, 2H), 7.19-7.15 (m, 1H), 5.44 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 4.20 (d, J = 11.9 Hz, 1H), 4.17 (d, J = 11.9 Hz, 1H), 3.79 (dq, J = 9.5, 6.9 Hz, 1H), 2.14 (q, J = 7.4 Hz, 2H), 1.33 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 1.03 (t, J = 7.4 Hz, 3H);
13CNMR (150 MHz, CDCl3) δ 146.8, 139.0, 132.5, 128.5, 126.8, 126.0, 60.7, 37.5, 27.8, 23.0, 12.7.
【００４４】
（４）で得られた化合物３（８０．１ｍｇ）を酢酸エチル（８ｍＬ）に溶解し、窒素雰囲気下でＰｄ／Ｃ（１０％、４０．０ｍｇ）を加えた後、系内を水素ガスで置換して室温で３時間撹拌した。反応液をセライト濾過し、濾液を減圧乾燥後、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製し、２−エチル−４−フェニル−１−ペンタノール（ｄｒ＝６５：３５、化合物４）（５３．８ｍｇ）を得た。
【００４５】
【化７】
2013155172.tif 000009
【００４６】
化合物４のＮＭＲスペクトルを以下に示す。
1HNMR (600 MHz, CDCl3) δ 7.29-7.25 (m, 2H), 7.19-7.15 (m, 3H), 3.53 (d, J = 4.9 Hz, 1.3H), 3.45 (dd, J = 5.5, 1.3 Hz, 0.7H), 2.84-2.75 (m, 1H), 1.65 (ddd, J = 13.8, 8.9, 5.7 Hz, 0.35H), 1.61-1.52 (m, 1.3H), 1.47 (ddd, J = 13.8, 7.7, 6.3 Hz, 0.35H), 1.39-1.26 (m, 3H), 1.23 (d, J = 7.2 Hz, 1.05H), 1.22 (d, J = 7.1 Hz, 1.95H), 0.85 (t, J = 7.4 Hz, 1.05H), 0.82 (t, J = 7.4 Hz, 1.95H);
13CNMR (150 MHz, CDCl3) δ 147.5 (2C), 128.4 (2C), 127.0, 126.9, 125.9 (2C), 65.3, 64.8, 39.6, 39.4 (2C), 39.0, 37.4, 37.3, 23.7, 23.1 (3C), 10.9, 10.7.
【００４７】
製造例２  化合物５及び６の合成
（１）２−フェニル−１−ブタノール（ｄ）（１．００ｇ）をジクロロメタン（３３ｍＬ）に溶解し、ヨードベンゼンジアセテート（４．０８ｇ）およびＴＥＭＰＯ（２０８ｍｇ）を加え、室温・窒素雰囲気下、１．５時間撹拌した。反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、チオ硫酸ナトリウム水溶液、ヘキサンを加え、ヘキサン層を減圧乾燥後、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製し、アルデヒド（ｅ）（６４０ｍｇ）を得た。
水素化ナトリウム（純度５５％、８９．９ｍｇ）をテトラヒドロフラン（７ｍＬ）に懸濁し、２−ホスホノプロピオン酸トリエチル（０．５６ｍＬ）を加え、室温・窒素雰囲気下、３０分撹拌した。反応液に、上述のようにして得られたアルデヒド（ｅ）（１５３ｍｇ）をテトラヒドロフラン（２ｍＬ）に溶解したものを加え、さらに１４時間撹拌した。反応液に飽和塩化アンモニウム水溶液とヘキサンを加え、ヘキサン層を減圧乾燥後、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製し、α,β不飽和エステル体（ｆ）（Ｅ／Ｚ＝１：２、１６０ｍｇ）を得た。
また、同様に水素化ナトリウム（純度５５％、９０．７ｍｇ）をテトラヒドロフラン（７ｍＬ）に懸濁し、２−ホスホノ酪酸トリエチル（０．６２ｍＬ）を加え、室温・窒素雰囲気下、３０分撹拌した。反応液に、アルデヒド（ｅ）（１５４ｍｇ）をテトラヒドロフラン（２ｍＬ）に溶解したものを加え、さらに１４時間撹拌した。反応液に飽和塩化アンモニウム水溶液とヘキサンを加え、ヘキサン層を減圧乾燥後、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製し、α,β不飽和エステル体（ｇ）（Ｅ／Ｚ＝１：４、１５２ｍｇ）を得た。
【００４８】
【化８】
2013155172.tif 000010
【００４９】
（２）ＬｉＡｌＨ4（６５．４ｍｇ）をテトラヒドロフラン（５ｍＬ）に懸濁し、（１）で得られたα,β不飽和エステル体（ｆ）（１６０ｍｇ）をテトラヒドロフラン（１ｍＬ）に溶解したものを加え、０℃で３０分撹拌した。反応液に水（１００μＬ）、１５％水酸化ナトリウム水溶液（１００μＬ）、水（３００μＬ）の順で加え、１日撹拌し、不溶物を濾過した。濾液を減圧乾燥後、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製し、２−メチル−４−フェニル−２−ヘキセン−１−オール（Ｅ／Ｚ＝３：７、化合物５）（９９．６ｍｇ）を得た。
【００５０】
【化９】
2013155172.tif 000011
【００５１】
化合物５のＮＭＲスペクトルを以下に示す。
1HNMR (600 MHz, CDCl3) δ 7.29-7.25 (m, 2H), 7.20-7.14 (m, 3H), 5.54 (d, J = 9.6 Hz, 0.3H), 5.43 (d, J = 9.8 Hz, 0.7H), 4.15 (s, 1.4H), 3.99 (s, 0.6H), 3.45-3.40 (m, 0.7H), 3.41-3.36 (m, 0.3H), 1.80 (d, J = 1.3 Hz, 2.1H), 1.75-1.57 (m, 2H), 1.70 (d, J = 1.2 Hz, 0.9H), 0.84 (t, J = 7.4 Hz, 0.9H), 0.83 (d, J = 7.4 Hz, 2.1H);
13CNMR (150 MHz, CDCl3) δ 145.7, 145.4, 134.6, 134.4, 132.5, 129.9, 128.5, 128.4, 127.3, 127.2, 126.0, 125.9, 68.8, 61.9, 45.7, 45.5, 30.1, 29.8, 21.5 (2C), 14.0, 12.2.
【００５２】
（３）（２）で得られた化合物５（５４．６ｍｇ）を酢酸エチル（３ｍＬ）に溶解し、窒素雰囲気下でＰｄ／Ｃ（１０％、２７．３ｍｇ）を加えた後、系内を水素ガスで置換して室温で１時間撹拌した。反応液をセライト濾過し、濾液を減圧乾燥後、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製し、２−メチル−４−フェニル−１−ヘキサノール（ｄｒ＝１：１、以下、化合物６）（２２．７ｍｇ）を得た。
【００５３】
【化１０】
2013155172.tif 000012
【００５４】
化合物６のＮＭＲスペクトルを以下に示す。
1HNMR (600 MHz, CDCl3) δ 7.28-7.25 (m, 2H), 7.18-7.12 (m, 3H), 3.49 (dd, J = 10.5, 4.9 Hz, 0.5H), 3.38 (dd, J = 10.5, 6.4 Hz, 0.5H), 3.34 (dd, J = 10.5, 5.8 Hz, 0.5H), 3.30 (dd, J = 10.5, 6.2 Hz, 0.5H), 2.54-2.48 (m, 1H), 1.73-1.27 (m, 5H), 0.87 (d, J = 6.4 Hz, 1.5H), 0.84 (d, J = 6.8 Hz, 1.5H), 0.75 (t, J = 7.3 Hz, 1.5H), 0.73 (t, J = 7.3Hz, 1.5H);
13CNMR (150 MHz, CDCl3) δ 145.8, 145.3, 128.2 (2C), 127.7, 127.6, 125.9 (2C), 68.8, 67.6, 45.1, 45.0, 40.1, 39.7, 33.3, 33.2, 30.8, 29.8, 17.5, 16.0, 12.2, 12.1.
【００５５】
製造例３  化合物７及び８の合成
ＬｉＡｌＨ4（５２．２ｍｇ）をテトラヒドロフラン（５ｍＬ）に懸濁し、製造例２（１）で得られたα,β不飽和エステル体（ｇ）（１３６ｍｇ）をテトラヒドロフラン（１ｍＬ）に溶解したものを加え、０℃で３０分撹拌した。反応液に水（８０μＬ）、１５％水酸化ナトリウム水溶液（８０μＬ）、水（２４０μＬ）の順で加え、１日撹拌し、不溶物を濾過した。濾液を減圧乾燥後、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製し、２−エチル−４−フェニル−２−ヘキセン−１−オール（Ｅ／Ｚ＝１：４）（８４．６ｍｇ）を得た。得られた化合物（混合物）（２０．０ｍｇ）をＯＤＳ−ＨＰＬＣ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ  ＯＤＳ−３、５０％アセトニトリル／０．１％ギ酸水溶液）によって精製し、（Ｅ）−２−エチル−４−フェニル−２−ヘキセン−１−オール（化合物７）（３．４ｍｇ）および（Ｚ）−２−エチル−４−フェニル−２−ヘキセン−１−オール（化合物８）（１３．６ｍｇ）を得た。
【００５６】
【化１１】
2013155172.tif 000013
【００５７】
化合物７のＮＭＲスペクトルを以下に示す。
1HNMR (600 MHz, CDCl3) δ 7.28-7.25 (m, 2H), 7.20-7.14 (m, 3H), 5.51 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 4.04 (s, 2H), 3.39 (dt, J = 9.8, 7.4 Hz, 1H), 2.16 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 1.76-1.68 (m, 1H), 1.67-1.59 (m, 1H), 0.97 (t, J = 7.6 Hz, 3H), 0.84 (t, J = 7.4 Hz, 3H);
13CNMR (150 MHz, CDCl3) δ 145.5, 140.3, 129.9, 128.4, 127.3, 125.9, 66.7, 45.4, 30.0, 21.3, 13.2, 12.3.
化合物８のＮＭＲスペクトルを以下に示す。
1HNMR (600 MHz, CDCl3) δ 7.29-7.25 (m, 2H), 7.20-7.14 (m, 3H), 5.44 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 4.19 (d, J = 11.9 Hz, 2H), 4.13 (d, J = 11.9 Hz, 1H), 3.46 (m, 1H), 2.14 (m, 2H), 1.76-1.68 (m, 1H), 1.66-1.58 (m, 1H), 1.03 (t, J = 7.5 Hz, 3H), 0.84 (t, J = 7.4 Hz, 3H);
13CNMR (150 MHz, CDCl3) δ 145.8, 140.1, 131.3, 128.5, 127.2, 126.0, 60.7, 45.3, 30.3, 28.0, 12.8, 12.2.
【００５８】
製造例４  化合物９の合成
（１）１−フェニル−２−プロパノール（ｈ）（４２８ｍｇ）をジクロロメタン（１６ｍＬ）に溶解し、モレキュラーシーブス４Ａ（４００ｍｇ）、Ｎ−メチルモルホリン（１．１０ｇ）、テトラプロピルアンモニウムペルルテナート（１１０ｍｇ）を加え、室温・窒素雰囲気下、２４時間撹拌した。反応液をシリカゲルショートカラムを用いて濾過し、濾液を減圧乾燥後、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製し、ケトン（ｉ）（１０２ｍｇ）を得た。
水素化ナトリウム（純度５５％、８１．２ｍｇ）をテトラヒドロフラン（５ｍＬ）に懸濁し、２−ホスホノプロピオン酸トリエチル（０．４８ｍＬ）を加え、室温・窒素雰囲気下、３０分撹拌した。反応液に、上述のようにして得られたケトン（ｉ）（１００ｍｇ）をテトラヒドロフラン（２ｍＬ）に溶解したものを加え、さらに２２時間撹拌した。反応液に飽和塩化アンモニウム水溶液とヘキサンを加え、ヘキサン層を減圧乾燥後、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製し、α,β不飽和エステル体（ｊ）（Ｅ／Ｚ＝１：１、９７．６ｍｇ）を得た。
【００５９】
【化１２】
2013155172.tif 000014
【００６０】
（２）ＬｉＡｌＨ4（３７．６ｍｇ）をテトラヒドロフラン（３ｍＬ）に懸濁し、（１）で得られたα,β不飽和エステル体（ｊ）（８６．５ｍｇ）をテトラヒドロフラン（１ｍＬ）に溶解したものを加え、０℃で３０分撹拌した。反応液に水（５０μＬ）、１５％水酸化ナトリウム水溶液（５０μＬ）、水（１５０μＬ）の順で加え、１日撹拌し、不溶物を濾過した。濾液を減圧乾燥後、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製し、アリルアルコール体 (ｋ)（Ｅ／Ｚ＝１：１、４９．４ｍｇ）を得た。
【００６１】
【化１３】
2013155172.tif 000015
【００６２】
（３）（２）で得られたアリルアルコール体 (ｋ)（３０．０ｍｇ）を酢酸エチル（３ｍＬ）に溶解し、窒素雰囲気下でＰｄ／Ｃ（１０％、１５．０ｍｇ）を加えた後、系内を水素ガスで置換して室温で１時間撹拌した。反応液をセライト濾過し、濾液を減圧乾燥後、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製し、２，３−ジメチル−４−フェニル−１−ブタノール（ｄｒ＝３：２、化合物９）（１７．４ｍｇ）を得た。
【００６３】
【化１４】
2013155172.tif 000016
【００６４】
化合物９のＮＭＲスペクトルを以下に示す。
1HNMR (600 MHz, CDCl3) δ 7.28-7.24 (m, 2H), 7.18-7.13 (m, 3H), 3.68 (dd, J = 10.5, 5.8 Hz, 0.4H), 3.55-3.44 (m, 1.6H), 2.76 (dd, J = 13.4, 4.8 Hz, 0.4H), 2.64 (dd, J = 13.5, 6.8 Hz, 0.6H), 2.44 (dd, J = 13.5, 8.4 Hz, 0.6H), 2.26 (dd, J = 13.4, 9.9 Hz, 0.4H), 2.01-1.94 (m, 0.6H), 1.90-1.83 (m, 0.4H), 1.70-1.62 (m, 1H), 0.97 (d, J = 7.0 Hz, 1.2H), 0.87 (d, J = 6.9 Hz, 1.8H), 0.82 (d, J = 7.0 Hz, 1.2H), 0.77 (d, J = 6.9 Hz, 1.8H);
13CNMR (150 MHz, CDCl3) δ 141.7, 141.4, 129.1, 129.0, 128.2 (2C), 125.7 (2C), 66.7, 65.9, 41.4, 40.3, 39.4, 38.8, 36.9, 35.4, 16.6, 14.0, 13.7, 11.1.
【００６５】
製造例５  化合物１０の合成
（１）２−フェニルプロピオンアルデヒド（ａ）（３００ｍｇ）をテトラヒドロフラン（１０ｍＬ）に溶解し、２−（トリフェニルホスホラニリデン）プロピオン酸エチル（１．７０ｇ）を加え、室温・窒素雰囲気下、２４時間撹拌した。反応液に水およびヘキサン／酢酸エチルを加え、有機層を減圧乾燥後、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製し、（Ｅ）−α,β不飽和エステル体（ｌ）（２６１ｍｇ）を得た。
【００６６】
【化１５】
2013155172.tif 000017
【００６７】
（２）ＬｉＡｌＨ4（２２７ｍｇ）をテトラヒドロフラン（１０ｍＬ）に懸濁し、（１）で得られた（Ｅ）−α,β不飽和エステル体（ｌ）（２６１ｍｇ）をテトラヒドロフラン（２ｍＬ）に溶解したものを加え、０℃で３０分撹拌した。反応液に水（２００μＬ）、１５％水酸化ナトリウム水溶液（２００μＬ）、水（６００μＬ）の順で加え、１日撹拌し、不溶物を濾過した。濾液を減圧乾燥後、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製し、（Ｅ）−２−メチル−４−フェニル−２−ペンテン−１−オール（化合物１０）（１１５ｍｇ）を得た。
【００６８】
【化１６】
2013155172.tif 000018
【００６９】
化合物１０のＮＭＲスペクトルを以下に示す。
1HNMR (600 MHz, CDCl3) δ 7.29-7.26 (m, 2H), 7.23-7.21 (m, 2H), 7.18-7.15 (m, 1H), 5.55 (dq, J = 9.4, 1.3 Hz, 1H), 3.99 (s, 2H), 3.69 (dq, J = 9.4, 6.9 Hz, 1H), 1.72 (d, J = 1.3 Hz, 3H), 1.32 (d, J = 6.9 Hz, 3H);
13CNMR (150 MHz, CDCl3) δ 146.4, 133.7, 131.2, 128.4, 126.9, 126.0, 68.7, 37.7, 22.1,  13.8.
【００７０】
製造例６  化合物１１の合成
ＬｉＡｌＨ4（３０．６ｍｇ）をテトラヒドロフラン（２ｍＬ）に懸濁し、２−メチル−４−フェニル−１−ブタン酸（ｍ）（４７．９ｍｇ）をテトラヒドロフラン（０．５ｍＬ）に溶解したものを加え、０℃で３０分撹拌した。反応液に水（５０μＬ）、１５％水酸化ナトリウム水溶液（５０μＬ）、水（１５０μＬ）の順で加え、１日撹拌し、不溶物を濾過した。濾液を減圧乾燥後、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製し、２−メチル−４−フェニル−１−ブタノール（化合物１１）（１６．５ｍｇ）を得た。
【００７１】
【化１７】
2013155172.tif 000019
【００７２】
化合物１１のＮＭＲスペクトルを以下に示す。
1HNMR (600 MHz, CDCl3) δ 7.28-7.25 (m, 2H), 7.19-7.14 (m, 3H), 3.51 (dd, J = 10.5, 5.8 Hz, 1H), 3.45 (dd, J = 10.5, 6.4 Hz, 1H), 2.69 (ddd, J = 13.7, 10.4, 5.6 Hz, 1H), 2.58 (ddd, J = 13.7, 10.2, 6.4 Hz, 1H), 1.78-1.71 (m, 1H), 1.69-1.61 (m, 1H), 1.46-1.39 (m, 1H), 0.97 (d, J = 6.8 Hz, 3H);
13CNMR (150 MHz, CDCl3) δ 142.6, 128.3 (2C), 125.7, 68.1, 35.3, 34.9, 33.2, 16.5.
【００７３】
製造例７  化合物１２の合成
（１）化合物１（５３２ｍｇ）をジクロロメタン（２０ｍＬ）に溶解し、ヨードベンゼンジアセテート（２．８８ｇ）およびＴＥＭＰＯ（９３．２ｍｇ）を加え、室温・窒素雰囲気下、１．５時間撹拌した。反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、チオ硫酸ナトリウム水溶液、酢酸エチルを加え、酢酸エチル層を減圧乾燥後、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製し、アルデヒド（ｎ）（３６１ｍｇ）を得た。
【００７４】
【化１８】
2013155172.tif 000020
【００７５】
（２）（１）で得られたアルデヒド（ｎ）（３１．１ｍｇ）をテトラヒドロフラン（２ｍＬ）に溶解し、０℃・窒素雰囲気下で臭化メチルマグネシウム（３Ｍ  ｉｎ  ジエチルエーテル、０．０８８ｍＬ）を加え、そのまま３０分撹拌した。反応液に飽和塩化アンモニウム水溶液および酢酸エチルを加え、酢酸エチル層を減圧乾燥後、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製し、３−メチル−５−フェニル−２−ヘキサノール（ｄｒ＝３：２：２：２、化合物１２）（２４．５ｍｇ）を得た。
【００７６】
【化１９】
2013155172.tif 000021
【００７７】
化合物１２のＮＭＲスペクトルを以下に示す。
1HNMR (600 MHz, CDCl3) δ 7.30-7.26 (m, 2H), 7.21-7.15 (m, 3H), 3.74 (qd, J = 6.4, 4.0 Hz, 0.33H), 3.67 (qd, J = 6.3, 5.2 Hz, 0.22H), 3.59 (qd, J = 6.4, 4.2 Hz, 0.22H), 3.55 (qd, J = 6.3, 5.0 Hz, 0.22H), 2.84-2.74 (m, 1H), 1.85-1.74 (m, 0.44H), 1.69-1.55 (m, 0.78H), 1.51-1.45 (m, 0.33H), 1.45-1.34 (m, 1H), 1.32-1.16 (m, 0.44H), 1.24 (d, J = 7.0 Hz, 0.67H), 1.24 (d, J = 6.9 Hz, 0.67H), 1.22 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 1.21 (d, J = 7.0 Hz, 0.67H), 1.12-1.09 (m, 1.67H), 1.06 (d, J = 6.4 Hz, 0.67H), 1.04 (d, J = 6.3 Hz, 0.67H), 0.87-0.83 (m, 3H);
13CNMR (150 MHz, CDCl3) δ 148.2, 148.1, 146.9 (2C), 128.4 (3C), 128.3, 127.1, 127.0, 126.9, 126.8, 125.9 (3C), 125.8, 72.0, 71.6 (2C), 70.9, 41.6, 41.4, 40.7, 40.6, 37.7, 37.4 (2C), 37.2 (3C), 37.1 (2C), 24.1, 24.0, 21.7, 21.4, 20.2, 19.7, 19.2, 18.9.
【００７８】
比較化合物の製造
（１）ＬｉＡｌＨ4（３０．０ｍｇ）をテトラヒドロフラン（２ｍＬ）に懸濁し、４−フェニル−１−ペンタン酸（ｏ）（４６．９ｍｇ）をテトラヒドロフラン（０．５ｍＬ）に溶解したものを加え、０℃で３０分撹拌した。反応液に水（５０μＬ）、１５％水酸化ナトリウム水溶液（５０μＬ）、水（１５０μＬ）の順で加え、１日撹拌し、不溶物を濾過した。濾液を減圧乾燥後、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製し、４−フェニル−１−ペンタノール（比較化合物１）（８．１ｍｇ）を得た。
【００７９】
【化２０】
2013155172.tif 000022
【００８０】
比較化合物１のＮＭＲスペクトルを以下に示す。
1HNMR (600 MHz, CDCl3) δ 7.29-7.25 (m, 2H), 7.18-7.15 (m, 3H), 3.57 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 2.68 (qt, J = 7.0, 7.0 Hz, 1H), 1.66-1.59 (m, 2H), 1.55-1.46 (m, 1H), 1.44-1.37 (m, 1H), 1.24 (d, J = 7.0 Hz, 3H);
13CNMR (150 MHz, CDCl3) δ 147.3, 128.3, 126.9, 125.9, 63.0, 39.8, 34.4, 30.9, 22.4.
【００８１】
（２）４−フェニル−１−ブタノール（比較化合物２）は市販品（東京化成：Ｐ１２７５）を用いた。
【００８２】
【化２１】
2013155172.tif 000023
【００８３】
実施例１  TRPA1活性抑制作用（１）
（１）ヒトTRPA1安定発現株の作製
ヒトTRPA1遺伝子は、その全長をOpen biosystems社よりｐENTR２２３．１に挿入された状態で購入した。購入したエントリーベクターよりTRPA1遺伝子を発現用ベクターｐｃDNA３．２−Ｖ５／ＤＥＳＴ（インビトロジェン社）へサブクローニングし、リポフェクトアミン２０００（インビトロジェン社）によりＨＥＫ２９３細胞へ形質導入した。形質導入された細胞をＧ−４１８（４５０μｇ／ｍｌ；プロメガ社）を含有するＤＭＥＭ培地中で増殖させることにより選抜した。なおＨＥＫ２９３細胞は内在性ＴＲＰＡ１を発現しないため、ＴＲＰＡ１形質導入株に対する対照（コントロール）として使用できる。
【００８４】
（２）カルシウムイメージング
蛍光カルシウムイメージング法を用いてＨＥＫ２９３細胞へ形質導入したＴＲＰＡ１活性の測定を行った。まず培養したＴＲＰＡ１発現細胞をポリ−Ｄ−リジンコートされた９６ウェルプレート（ＢＤファルコン社）に播種（３００００細胞／ウェル）し、３７℃で一晩、インキュベートした後、培養液を除去し、リンガー液に溶解させたＦｌｕｏ４−ＡＭ（２μｇ／ｍｌ；同仁化学社）を添加し、３７℃で６０分間インキュベートした。その後、Ｆｌｕｏ４−ＡＭ液を除去し、ウェルにリンガー液を添加して蛍光プレートリーダー（ＦＤＳＳ３０００；浜松ホトニクス社）にセットした。装置庫内温度２４℃にした状態で励起波長４８０ｎｍで励起させたときの蛍光イメージを検出波長５２０ｎｍにてＣＣＤカメラで検出した。測定は１秒毎に４分間行い、測定開始１５秒後にＦＤＳＳ３０００内蔵の分注器によりＴＲＰＡ１刺激物質であるアリルイソチオシアネートおよび試験素材（2−メチル−4−フェニル−1−ペンタノール（化合物１））をそれぞれ終濃度３０μＭおよび０．０１%で添加し、その後の蛍光強度の変化によりＴＲＰＡ１活性を評価した。ＴＲＰＡ１活性は刺激物質添加後の蛍光強度のピーク（Ｆpeak）を刺激物質添加前の蛍光強度（F0）で除算した蛍光強度比（Ratio；Fpeak／F0）で表した。対照としてＴＲＰＡ１を形質導入していないＨＥＫ２９３細胞に同様の物質を添加し、その際の蛍光強度比（Ratio293）を算出し、刺激物質による活性がTRPA1活性化に由来することを確認した。
【００８５】
（３）アリルイソチオシアネートに対するＴＲＰＡ１活性抑制評価
アリルイソチオシアネートによるＴＲＰＡ１活性化に対する化合物１の効果を検証するため、アリルイソチオシアネート（３０μＭ）およびエタノール（０．０１％；溶媒コントロール）を添加した際のＴＲＰＡ１活性に対する化合物１の抑制作用（活性抑制率；％）を評価した。アリルイソチオシアネート（刺激物質）（３０μＭ）と化合物１（試験素材）（０．０１％）を混合し添加することによるＴＲＰＡ１活性抑制作用は下記の式により算出した。
〔数１〕
TRPA1活性抑制率（％）＝（１−（（刺激物質＋試験素材添加によるRatio）−（刺激物質＋試験素材添加によるRatio293））／（（刺激物質＋エタノール添加によるRatio）−（刺激物質＋エタノール添加によるRatio293）））×１００
【００８６】
（４）アリルイソチオシアネートによるＴＲＰＡ１活性化抑制作用
アリルイソチオシアネート３０μＭによるＴＲＰＡ１活性化に対する化合物１の効果（活性抑制率）を表２に示す。2−メチル−4−フェニル−1−ペンタノールは、公知ＴＲＰＡ１活性抑制素材であるｄ−カンファーと比して効果の強いＴＲＰＡ１活性抑制素材であることが示された。
【００８７】
【表２】
2013155172.tif 000024
【００８８】
実施例２  ＴＲＰＡ１活性抑制作用（２）
2−メチル−4−フェニル−1−ペンタノール（化合物１）のＴＲＰＡ１活性抑制効果について、用量依存性を検証した。アリルイソチオシアネート３０μＭによるＴＲＰＡ１活性化に対する化合物１  １−１００μＭの効果を測定した（図１）。その結果、2−メチル−4−フェニル−1−ペンタノールによるＴＲＰＡ１活性抑制効果に用量依存性が認められ、そのＩＣ50値は１７．９μＭであった。
【００８９】
実施例３  ＴＲＰＡ１活性抑制作用（３）
2−メチル−4−フェニル−1−ペンタノール（化合物１）のＴＲＰＡ１活性抑制作用について、アリルイソチオシアネート以外のＴＲＰＡ１刺激物質によるＴＲＰＡ１活性に対する作用を検証した。
ＴＲＰＡ１刺激物質としてシンナムアルデヒド、４−ヒドロキシノネナール、アリシンおよびｌ−メントールを用意し、それぞれ２０μＭ（シンナムアルデヒド）、３０μＭ（４−ヒドロキシノネナール）、３００ｎＭ（アリシン）、２００μＭ（ｌ−メントール）により引き起こされるＴＲＰＡ１活性化に対する化合物１の効果を検証した。結果を表３及び図２に示す。
【００９０】
【表３】
2013155172.tif 000025
【００９１】
その結果、シンナムアルデヒド、４−ヒドロキシノネナール、アリシンおよびｌ−メントールのいずれの刺激物質によるＴＲＰＡ１活性化に対しても化合物１による抑制効果が確認された。
【００９２】
実施例４  防腐剤によるＴＲＰＡ１活性化作用及びその抑制作用
防腐剤あるいは防腐助剤として使用される原料によるＴＲＰＡ１活性化作用とそれらに対する2−メチル−4−フェニル−1−ペンタノール（化合物１）の効果を検証するため、防腐剤としてフェノキシエタノール（２０−３０ｍＭ）、ブチルカルバミン酸ヨウ化プロピニル（ＩＰＢＣ）（０．０３−０．１ｍＭ）、トリクロサン（０．１−０．３ｍＭ）および防腐助剤としてベンジルアルコール（２０−３０ｍＭ）によるＴＲＰＡ１活性化作用を評価した。さらにフェノキシエタノール（２０ｍＭ）、ＩＰＢＣ（０．０３ｍＭ）、トリクロサン（０．１ｍＭ）およびベンジルアルコール（２０ｍＭ）で刺激した際の化合物１（０．１−０．５ｍＭ）による活性抑制率を測定した。結果を図３に示す。
【００９３】
図３より、フェノキシエタノール、ＩＰＢＣ、トリクロサン、およびベンジルアルコール、のいずれも用量依存的にＴＲＰＡ１を活性化することが示された。さらに化合物１による活性抑制効果を検証したところ、活性抑制効果を確認した（表４）。
【００９４】
【表４】
2013155172.tif 000026
【００９５】
実施例５  2−メチル−4−フェニル−1−ペンタノール（化合物１）によるヒト皮膚感覚刺激性低減効果
（１）試験対象者の選抜
皮膚感覚刺激性を評価するため、高感受性女性（1%乳酸感受性有、電流知覚閾値低値、敏感肌意識及びアレルギー疾患既往歴有）２２名（２０-５９歳）を対象とした。
（２）防腐剤に対する感覚刺激性評価
洗顔後、恒温恒湿室（室温２０℃、湿度５０％前後）に入室し２０分間の馴化を行った後、綿棒を用いて３７℃に加温した蒸留水３００μｌを片側の頬部から鼻脇にかけて塗布した。塗布後１、２．５、５、８分後に下記違和感基準値に従い申告された違和感（痛み）の程度（強さ）を記録した。
【００９６】
0.0  ；何も感じない
0.5  ；わずかに感じられる
1.0  ；少しの違和感
1.5  ；少し〜多少の違和感
2.0  ；多少の違和感
2.5  ；多少〜かなりの違和感
3.0  ；かなりの違和感
【００９７】
８分後に蒸留水をふき取り、防腐剤溶液（０．２%メチルパラベン（ＭＰ）＋０．３５％フェノキシエタノール（Ｐｈｅ）水溶液）３００μｌを同部位に塗布し、同様に違和感の程度を記録した。次に、防腐剤溶液をふき取り、蒸留水塗布側の同部位に試験素材溶液（防腐剤溶液＋０．０５％化合物１）  ３００μｌを塗布し、同様に違和感の程度を記録した。違和感値の最大値を抽出し、Wｉｌｌｃｏｘｏｎ（ウィルコクソン）符号順位検定法により検定を行った。結果を図４に示す。
【００９８】
図４より、蒸留水塗布と比較して防腐剤塗布により違和感（痛み）のスコアの有意な上昇が認められ、そして化合物１により違和感（痛み）が低減することが示された。
【００９９】
実施例６  2−メチル−4−フェニル−1−ペンタノール（化合物１）による刺激臭低減効果
（１）方法
アンモニア刺激の評価専門パネル（１５０〜２００ｐｐｍ濃度のアンモニア蒸気に対し、はっきりと刺激を感じ、かつ、刺激強度の評価を繰り返し行っても同一スコアを提示するパネル）５名に対し、１００ｍｌガラス瓶中（気温２５℃、湿度４５％）で５時間以上、揮発、飽和させた試験香料（化合物１）を１分間、嗅がせた直後から１０分間のアンモニア臭気（刺激感）の評価を行った。アンモニアは２８％アンモニア水（２０μl）を含浸させた綿球を５０ｍｌシリンジ内で１２時間以上揮発・飽和させた。アンモニア臭（刺激感）の強さは７段階尺度（０〜６）を用いた。比較例評価は、試験香料を嗅がずに行った。
【０１００】
（２）評価尺度０；刺激なし、１；ごくわずかに感じる、２；弱く感じる、３；はっきり感じる、４；強く感じる、５；かなり強く感じる、６；非常に強く感じる
【０１０１】
（３）結果アンモニア臭（刺激感）のスコアの平均値（小数点以下四捨五入）を表５に示した。
【０１０２】
【表５】
2013155172.tif 000027
【０１０３】
表５より、試験香料の吸入により、アンモニア臭（刺激感）が低減し、さらにその効果は吸入後５分間持続することが示された。
【０１０４】
実施例７  ＴＲＰＡ１活性化抑制作用の評価
実施例１と同様にして、アリルイソチオシアネート５.０及び１０μＭによるＴＲＰＡ１活性化に対する、以下に示す本発明の化合物及び比較化合物（各１００μＭ）及びｄ−ｃｍｐｈｏｒ（１００μＭ、５００μＭ）のＴＲＰＡ１活性化抑制効果（活性抑制率）を評価した（表６）。
【０１０５】
【表６】
2013155172.tif 000028
【０１０６】
表６より、本発明化合物は、公知のＴＲＰＡ１活性抑制素材であるｄ−カンファーと比して効果の強いＴＲＰＡ１活性抑制素材であることが示された。
【０１０７】
実施例８  ＴＲＰＡ１活性抑制作用（２）
２−メチル−４−フェニル−１−ペンタノール（化合物１）、（Ｅ）−２−エチル−４−フェニル−２−ペンテン−１−オール（化合物２）、（Ｚ）−２−エチル−４−フェニル−２−ペンテン−１−オール（化合物３）、２−エチル−４−フェニル−１−ペンタノール（化合物４）、（Ｅ）−２−エチル−４−フェニル−２−ヘキセン−１−オール（化合物７）、（Ｚ）−２−エチル−４−フェニル−２−ヘキセン−１−オール（化合物８）、及び（Ｅ）−２−メチル−４−フェニル−２−ペンテン−１−オール（化合物１０）のＴＲＰＡ１活性抑制効果について、用量依存性を検証した。
アリルイソチオシアネート５．０μＭによるＴＲＰＡ１活性化に対する各化合物の効果を測定し（図５）、各化合物のＩＣ50値を表７に示す。その結果、各化合物によるＴＲＰＡ１活性抑制効果に容量依存性が認められた。
【０１０８】
【表７】
2013155172.tif 000029
【図１】
2013155172.tif 000034
【図２】
2013155172.tif 000035
【図３】
2013155172.tif 000036
【図４】
2013155172.tif 000037
【図５】
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