(57)【要約】【課題】抗菌性を有するＴ−フラクションの製造方法の提供。【解決手段】イソα酸を５０℃より高い温度で加熱する工程を含む製造方法によりＴ−フラクションが製造される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
イソα酸を５０℃より高い温度で加熱する工程を含む、イソα酸の分解成分（Ｔ−フラクション）の製造方法。
【請求項２】
加熱する工程が酸性条件下で行われる、請求項１に記載の製造方法。
【請求項３】
請求項１または２に記載の製造方法により製造されたＴ−フラクションを含む、抗菌性組成物。
【請求項４】
抗菌性がペクチネイタス属菌および／またはラクトバチルス属菌に対する抗菌性である、請求項３に記載の抗菌性組成物。
【請求項５】
請求項３または４に記載の抗菌性組成物を含む、抗菌性素材。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、イソα酸の分解成分（Ｔ−フラクション）の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
微生物の中には、ビール中で生育することができるものが存在し、それらはビール混濁菌と呼ばれる。ビール混濁菌は、濁らせたり、硫黄臭を発したりして、ビール品質を著しく低下させる場合がある。ビール混濁菌等の微生物増殖を抑制させるための一つの方策として、ホップが用いられることが知られている。
【０００３】
しかしながら、ホップのイソα酸の分解成分（Ｔ−フラクション）に、抗菌成分が含まれることについて全く知られておらず、まして簡便な方法によりＴ−フラクションが製造されることや、当該Ｔ−フラクションを含む抗菌性組成物については全く知られていなかった（例えば、特許文献１、特許文献２、および特許文献３参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】ＷＯ９９／９８４２号公報
【特許文献２】特開平１１−２２１０６４号公報
【特許文献３】特開２００８−２２８６３４号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、Ｔ−フラクションの製造方法および当該製造方法により製造されたＴ−フラクションを含む抗菌性組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、イソα酸を特定の温度で加熱することにより、イソα酸の分解成分（Ｔ−フラクション）が製造されることを見出した。本発明はこの知見に基づくものである。
【０００７】
すなわち、本発明によれば以下の発明が提供される。
（１）イソα酸を５０℃より高い温度で加熱する工程を含む、Ｔ−フラクションの製造方法。
（２）加熱する工程が酸性条件下で行われる、（１）に記載の製造方法。
（３）（１）または（２）に記載の製造方法により製造されたＴ−フラクションを含む、抗菌性組成物。
（４）抗菌性がペクチネイタス属菌および／またはラクトバチルス属菌に対する抗菌性である、（３）に記載の抗菌性組成物。
（５）（３）または（４）に記載の抗菌性組成物を含む、抗菌性素材。
【０００８】
本発明の製造方法は、抗菌性を有するＴ−フラクションを製造できる点で有利である。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】Ｔ−フラクションの高速液体クロマトグラフィ分析チャートを表す。縦軸のｍＡＵは２７０ｎｍの吸収強度を電気変換した単位を表す。
【発明の具体的説明】
【００１０】
Ｔ−フラクションの製造方法
本発明によれば、イソα酸を５０℃より高い温度で加熱することにより、Ｔ−フラクションを製造することが可能となる。
【００１１】
本発明において、イソα酸は、ホップに含まれる成分であり、ホップから抽出して、精製してもよく、また合成してもよいが、市販されているものを用いてもよく、またホップ中のα酸の異性化によって生成してもよい。市販されているイソα酸としては、例えば、スタイナー社製（米国）のイソα酸含有量３０％（重量比）溶液が挙げられる。
【００１２】
ここで、本発明によれば、イソα酸（イソフムロン化合物）は、イソフムロン、イソアドフムロン、イソコフムロン、イソポストフムロン、イソプレフムロン、テトラハイドロイソフムロン、テトラハイドロイソアドフムロン、テトラハイドロイソコフムロン、テトラハイドロイソプレフムロン、およびテトラハイドロイソポストフムロンを含む意味で用いられ、イソフムロン、イソアドフムロン、および／またはイソコフムロンが含有されていることが好ましい。
【００１３】
本発明の加熱工程は、５０℃より高い温度で加熱する工程であれば特に限定されないが、好ましくは１００℃以上で加熱する工程である。加熱工程における加熱時間は、わずかな時間（例えば、１分）であってもよいが、１０分以上であることがより好ましい。より収率よく、Ｔ−フラクションを製造するためには、１０〜１８０分の間加熱することがさらに好ましい。
【００１４】
本発明の好ましい態様によれば、加熱工程は、１００℃以上で、かつ１０分以上の加熱工程であり、より好ましくは、１００℃以上で、かつ１０〜１８０分間の加熱である。この時間の範囲内で加熱を行うことにより、より収率よくＴ−フラクションを製造することができる。
【００１５】
より好ましい別の態様によれば、当該加熱する工程は、酸性条件下で行うことが好ましい。酸性条件下であれば特に限定されないが、ｐＨ１〜５であることが好ましく、より好ましくはｐＨ３である。酸性条件下とすることができれば特に限定されないが、例えばリン酸、クエン酸、または乳酸を用いることができる。
【００１６】
上記製造方法により製造されたＴ−フラクションの量は、公知のいずれの方法により測定してもよいが、好ましくは高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）分析により測定することができる。
【００１７】
製造されたＴ−フラクション量を測定するための高速液体クロマトグラフィの分析条件としては、例えば、以下の条件を用いて行うことができ、高速液体クロマトグラフィに使用されるカラムは逆相カラムであれば特に限定されないが、Ｃ１８カラム（好ましくは、粒径５μｍ×内径４.６ｍｍ×カラム長１５０ｍｍの形態のものが好ましい）が好ましい。Ｃ１８カラムとしては、例えば、Ａｌｌｔｉｍａ  ８８０５２（オルテック社製）（粒径５μｍ×内径４.６ｍｍ×カラム長１５０ｍｍ）などが挙げられる。
【００１８】
＜高速液体クロマトグラフィ分析用試料調製条件＞
Ｔ−フラクションを添加した試料１０ｍｌに、１ｍｌの３Ｎ塩酸を加えた後、２０ｍｌのイソオクタンを加え、振とう、静置する。この溶液は水溶層と、有機溶媒層(イソオクタン)との二層に分離し、有機溶媒層から１０ｍｌを採取する。採取した溶液を、窒素ガス噴霧下で完全に乾燥させ固体化する。これに内部標準物質βフェニルカルコン１２ｍｇと、エタノール溶液４４０ｍｌとの混合溶液を１ｍｌ加え、溶解したものを高速液体クロマトグラフィ分析用試料とする。
＜高速液体クロマトグラフィ分析条件＞
・カラム：Ｃ１８カラム（粒径５μｍ×内径４.６ｍｍ×カラム長１５０ｍｍ）
・移動相Ａの組成：蒸留水：リン酸＝１０００：０．０２(v/v)＋ＥＤＴＡ０．０２％(w/v)
・移動相Ｂの組成：アセトニトリル
・グラジエントプログラムは以下の通りである：
分析開始時においては、移動相Ａの割合を７０％、移動相Ｂの割合を３０％とし、リテンションタイム（保持時間：Ｒ．Ｔ．）が１５分までに移動相Ａの割合が７０％から６０％、移動相Ｂの割合が３０％から４０％となるように、連続かつ直線的なグラジエントを行い、リテンションタイムが１５〜２２分の間は移動相Ａの割合を６０％、移動相Ｂの割合を４０％とし、リテンションタイムが２５分までに、移動相Ａの割合が６０％から４８％、移動相Ｂの割合が４０％から５２％となるように、連続かつ直線的なグラジエントを行い、リテンションタイムが２５〜４５分の間は移動相Ａの割合を４８％、移動相Ｂの割合を５２％とする。
・移動相流速：毎分１．８ｍｌ（流速一定）
・検出波長：２７０ｎｍ
【００１９】
【表１】
2013135651.tif 000002
【００２０】
本発明の製造方法により製造されたＴ−フラクションの量は、上記高速液体クロマトグラフィ分析用試料調製条件、高速液体クロマトグラフィ条件により調整、分析を実施し、６〜１２分あるいはイソα酸のピークよりも早く検出されるピーク中で検出強度(mAU)（縦軸）が他のピークよりも高い２本のピークで、各々のリテンションタイムが内部標準物質βフェニルカルコンより３３分±０．６分、３０分±０．７分早く検出されるピーク面積の総和を、内部標準物質βフェニルカルコンのピーク面積で除したピーク面積比（Ｔ−フラクション内標比）に基づいて、求めることができる。Ｔ−フラクション内標比は、以下の式により表される：
Ｔ−フラクション内標比＝（Ｔ−フラクションのピーク面積）／（内部標準物質のピーク面積）・・・（Ｉ）
【００２１】
高速液体クロマトグラフィ分析の際に用いられる内部標準物質は、特に限定されないが、Ｔ−フラクションともに、βフェニルカルコンを用いることが好ましい。高速液体クロマトグラフィ分析用試料は、例えば、以下のように調製することができる。
＜高速液体クロマトグラフィ分析用試料調製条件＞
Ｔ−フラクションを添加した試料１０ｍｌに、１ｍｌの３Ｎ塩酸を加えた後、２０ｍｌのイソオクタンを加え、振とう、静置する。この溶液は水溶層と、有機溶媒層(イソオクタン)との二層に分離し、有機溶媒層から１０ｍｌを採取する。採取した溶液を、窒素ガス噴霧下で完全に乾燥させ固体化する。これに内部標準物質βフェニルカルコン１２ｍｇと、エタノール４４０ｍｌとの混合溶液を１ｍｌ加え、溶解したものを高速液体クロマトグラフィ分析用試料とする。
【００２２】
抗菌性組成物
本発明の抗菌性組成物は、イソα酸を５０℃より高い温度で加熱する工程を含む製造方法により製造されたＴ−フラクションを含む抗菌性組成物であれば特に限定されないが、当該抗菌性がペクチネイタス属菌および／またはラクトバチルス属菌に対するものであることが好ましい。
【００２３】
ペクチネイタス属菌は、本発明の効果を奏する限り特に限定されないが、好ましくはペクチネイタス・フリシンジェンシスまたはペクチネイタス・セレビシフィラスであり、より好ましくはペクチネイタス・フリシンジェンシスである。
【００２４】
ラクトバチルス属菌は、本発明の効果を奏する限り特に限定されないが、好ましくはラクトバチルス・ブレビスまたはラクトバチルス  リンドネリであり、より好ましくはラクトバチルス・ブレビスである。
【００２５】
本発明の抗菌性組成物中に、Ｔ−フラクションの量が、抗菌性組成物を下記分析条件：
＜高速液体クロマトグラフィ分析用試料調製条件＞
Ｔ−フラクションを添加した試料１０ｍｌに、１ｍｌの３Ｎ塩酸を加えた後、２０ｍｌのイソオクタンを加え、振とう、静置する。この溶液は水溶層と、有機溶媒層(イソオクタン)との二層に分離し、有機溶媒層から１０ｍｌを採取する。採取した溶液を、窒素ガス噴霧下で完全に乾燥させ固体化する。これに内部標準物質βフェニルカルコン１２ｍｇと、エタノール溶液４４０ｍｌとの混合溶液を１ｍｌ加え、溶解したものを高速液体クロマトグラフィ分析用試料とする。
＜高速液体クロマトグラフィ分析条件＞
・カラム：Ｃ１８カラム（粒径５μｍ×内径４.６ｍｍ×カラム長１５０ｍｍ）
・移動相Ａの組成：蒸留水：リン酸＝１０００：０．０２(v/v)＋ＥＤＴＡ０．０２％(w/v)
・移動相Ｂの組成：アセトニトリル
・グラジエントプログラムは以下の通りである：
分析開始時においては、移動相Ａの割合を７０％、移動相Ｂの割合を３０％とし、リテンションタイムが１５分までに移動相Ａの割合が７０％から６０％、移動相Ｂの割合が３０％から４０％となるように、連続かつ直線的なグラジエントを行い、リテンションタイムが１５〜２２分の間は移動相Ａの割合を６０％、移動相Ｂの割合を４０％とし、リテンションタイムが２５分までに、移動相Ａの割合が６０％から４８％、移動相Ｂの割合が４０％から５２％となるように、連続かつ直線的なグラジエントを行い、リテンションタイムが２５〜４５分の間は移動相Ａの割合を４８％、移動相Ｂの割合を５２％とする
・移動相流速：毎分１．８ｍｌ（流速一定）
・検出波長：２７０ｎｍ
により高速液体クロマトグラフィ分析に付した場合、βフェニルカルコンのピーク面積に対するＴ−フラクションのピーク面積の比（Ｔ−フラクション内標比）が０．１３以上となることが好ましい。
【００２６】
本発明の抗菌性組成物は、必要に応じて、添加物を含有することができる。添加物としては、例えば、ｐＨ調整剤、酸化防止剤、界面活性剤、防腐剤、水等を適宜加えることができる。但し。これらの添加物を加えた場合であっても、Ｔ−フラクションの抗菌活性に影響を与えないことがより好ましい。
【００２７】
本発明の抗菌性組成物は、抗菌スペクトルが広く、グラム陽性菌のみならず、グラム陰性菌に対しても抗菌作用を示すため、抗菌性を要求される様々な用途に用いることができる。特に限定するものではないが、本発明の抗菌性組成物は、本発明の抗菌性組成物をそのまま用いてもよいが、例えば、食品、飲料、化粧品、口腔用組成物等の医薬部外品、抗菌繊維や抗菌樹脂等の抗菌性素材、およびペットフード等に添加して使用してもよい。これらの中でも、特に飲料が好ましい。本発明の抗菌性組成物を添加できる飲料としては、特に限定されないが、例えば、水、お茶、炭酸飲料、またはジュースが挙げられ、中でも、ビール様飲料が好ましく、特に好ましくは完全無アルコール麦芽飲料等の非発酵麦芽飲料を含まない発酵麦芽飲料であることが好ましい。
【００２８】
ビール様飲料とは、通常にビールを製造した場合、すなわち、酵母等による発酵に基づいてビールを製造した場合に得られるビール特有の味わい、香りを有する飲料をいい、例えば、ビール、発泡酒、リキュール等の発酵麦芽飲料や、完全無アルコール麦芽飲料等の非発酵麦芽飲料が挙げられる。また、ビール様飲料である限り、麦芽飲料に限定されるものではない。
【００２９】
本発明の好ましい態様によれば、上記抗菌性組成物を含む抗菌性素材を用いることができる。抗菌性素材としては、特に限定されないが、例えば、シャツ等の衣料、医療用シーツや内装材、生理用ナプキンや使い捨てオムツ等の保健衛生用品の表面材等に用いられる抗菌性繊維、台所用品等に用いられる抗菌樹脂、建築用資材として用いられるコーキング剤等が挙げられる。
【実施例】
【００３０】
以下の例に基づいて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらの例に限定されるものではない。
【００３１】
Ｔ−フラクション生成試験
イソα酸含有量３０％（重量比）溶液（スタイナー社製、米国）を用いて、重量比０．５％水溶液を作成し、かつ乳酸を用いてｐＨ３の酸性状態とした後、かつ該溶液の処理温度、処理時間を下記表２の通りにして、Ｔ−フラクションが生成される条件を検討した。
【００３２】
【表２】
2013135651.tif 000003
【００３３】
Ｔ−フラクションの抗菌効果
植菌試験用Ｔ−フラクション抽出液の調製
異性化ホップエキス（スタイナー社製（米国））を蒸留水に０．５％溶解させた後に、溶解液を乳酸によりｐＨ３．０に調整した。該溶解液を１３５℃で、２０分間オートクレーブ処理した処理液をＴ−フラクション抽出液とした。
【００３４】
Ｔ−フラクション抽出液添加による植菌試験（ペクチネイタス・フリシンジェンシス）
市販品のビールに上記Ｔ−フラクション抽出液を添加し、ビール混濁菌であるペクチネイタス・フリシンジェンシス（入手先：ドイツ微生物寄託機関（Deutsche Sammlung von Microorganismen und Zellkulturen GmbH（ＤＳＭ）））の増殖抑制効果を得る成分値の範囲を探索した。抽出液の各添加水準は、下記に示した表３の通りであった。
【００３５】
さらに、１．０×１０４ＣＦＵ／ｍｌレベルでペクチネイタス・フリシンジェンシスを植菌し、１４日間３０℃で培養後、生菌数を確認した。試験の結果を表３に示す。
【００３６】
【表３】
2013135651.tif 000004
【００３７】
Ｔ−フラクション抽出液添加による植菌試験（ラクトバチルス・ブレビス）
市販品のビールに上記Ｔ−フラクション抽出液を添加し、ビール混濁菌であるラクトバチルス・ブレビス（入手先：ドイツ微生物寄託機関（Deutsche Sammlung von Microorganismen und Zellkulturen GmbH（ＤＳＭ））の増殖抑制効果を確認した。抽出液の各添加水準は、下記に示した表４の通りであった。
【００３８】
さらに、１．０×１０４ＣＦＵ／ｍｌレベルでラクトバチルス・ブレビスを植菌し、１４日間３０℃で培養後、生菌数を確認した。試験の結果を表４に示す。
【００３９】
【表４】
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【００４０】
高速液体クロマトグラフィ分析のための試料の調製
Ｔ−フラクションを添加した各試料１０ｍｌに、１ｍｌの３Ｎ塩酸を加えた後、２０ｍｌのイソオクタンを加え、振とう、静置した。この溶液は、水溶層と、有機溶媒層(イソオクタン)との二層に分離し、有機溶媒層から１０ｍｌを採取した。採取した溶液を、窒素ガス噴霧下で完全に乾燥させ固体化させた。これに内部標準物質βフェニルカルコン１２ｍｇと、エタノール４４０ｍｌとの混合溶液を１ｍｌ加え、溶解したものを高速液体クロマトグラフィ分析用試料とした。
【００４１】
高速液体クロマトグラフィ分析によるＴ−フラクション内標比の算出
高速液体クロマトグラフィの分析条件は、以下の通りである。
＜高速液体クロマトグラフィ分析条件＞
・カラム：Ａｌｌｔｉｍａ８８０５２（オルテック社製）（粒径５μｍ×内径４.６ｍｍ×カラム長１５０ｍｍ）
・サンプル注入量１０μｌ
・移動相Ａの組成：蒸留水：リン酸＝１０００：０．０２(v/v)＋ＥＤＴＡ０．０２％(w/v)
・移動相Ｂの組成：アセトニトリル
・グラジエントプログラムは以下の通りである（表５参照）：
分析開始時においては、移動相Ａの割合を７０％、移動相Ｂの割合を３０％とし、リテンションタイムが１５分までに移動相Ａの割合が７０％から６０％、移動相Ｂの割合が３０％から４０％となるように、連続かつ直線的なグラジエントを行い、リテンションタイムが１５〜２２分の間は移動相Ａの割合を６０％、移動相Ｂの割合を４０％とし、リテンションタイムが２５分までに、移動相Ａの割合が６０％から４８％、移動相Ｂの割合が４０％から５２％となるように、連続かつ直線的なグラジエントを行い、リテンションタイムが２５〜４５分の間は移動相Ａの割合を４８％、移動相Ｂの割合を５２％とした。
・移動相流速：毎分１．８ｍｌ（流速一定）
・検出波長：２７０ｎｍ
【００４２】
【表５】
2013135651.tif 000006
【００４３】
高速液体クロマトグラフィ用カラム（Ａｌｌｔｉｍａ  ８８０５２（オルテック社製）（粒径５μｍ×内径４.６ｍｍ×カラム長１５０ｍｍ）を用いて、蒸留水：リン酸＝１０００：０．０２(v/v)＋ＥＤＴＡ０．０２％(w/v)で作成した移動相Ａ、アセトニトリルトリルの移動相Ｂを、上記表５のグラジエントプログラムのとおり、高速液体クロマトグラフィ分析を行った場合において、リテンションタイムが６〜１２分あるいはイソα酸のピークよりも早く検出されるピークの中で検出強度(mAU)（縦軸）が他のピークよりも高い２本のピークで、各々のリテンションタイムが内部標準物質βフェニルカルコンより３３分±０．６分、３０分±０．７分早く検出されるピーク面積を総和し、「Ｔ−フラクション」と表記し、内部標準物質βフェニルカルコンのピーク面積の総和を「内部標準物質（βフェニルカルコン）」と表記した（図１参照）。
【００４４】
表３および４中のＴ−フラクション内標比は、上記式（Ｉ）に基づき、算出した。
【図１】
2013135651.tif 000007