(57)【要約】【課題】コラーゲン合成を促進する混合光刺激方法及び混合光刺激装置を提供する。【解決手段】混合光刺激方法は、黄色発光ダイオードと赤色発光ダイオードとの組み合わせからなる発光ダイオード光源を準備するステップと、発光ダイオード光源により被験物を照射してコラーゲン合成を促進するステップとを含む。黄色発光ダイオードの輝度は１０００〜３５００ルクスである。赤色発光ダイオードの輝度は６０００〜９５００ルクスである。黄色発光ダイオードの数と赤色発光ダイオードの数との比率は０．５〜２：０．５〜２である。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
黄色発光ダイオードと赤色発光ダイオードとの組み合わせからなる発光ダイオード光源を準備するステップと、
前記発光ダイオード光源により被験物を照射してコラーゲン合成を促進するステップと、を含み、
前記黄色発光ダイオードの輝度は１０００〜３５００ルクスであり、前記赤色発光ダイオードの輝度は６０００〜９５００ルクスであり、前記黄色発光ダイオードの数と前記赤色発光ダイオードの数との比率は０．５〜２：０．５〜２であることを特徴とする混合光刺激方法。
【請求項２】
前記被験物は、線維芽細胞、マクロファージ又はそれらの組み合わせであることを特徴とする請求項１に記載の混合光刺激方法。
【請求項３】
前記黄色発光ダイオードの光波長範囲は５７０〜５９０ｎｍであり、
前記赤色発光ダイオードの光波長範囲は６２０〜７５０ｎｍであることを特徴とする請求項２に記載の混合光刺激方法。
【請求項４】
前記発光ダイオード光源の照射時間は５〜９０分間であることを特徴とする請求項３に記載の混合光刺激方法。
【請求項５】
ケーシング、光拡散シート、第１の光源モジュール及び制御モジュールを備えた混合光刺激装置であって、
前記ケーシングは、光取出し口が設けられた頂面と、側縁と、を有し、
前記光拡散シートは、前記ケーシングの光取出し口を覆い、
前記第１の光源モジュールは、前記ケーシングの収納空間内に配置され、第１の発光ダイオードを有し、前記第１の発光ダイオードは、前記光拡散シートの下方へ配置され、前記第１の発光ダイオードは、黄色発光ダイオードと赤色発光ダイオードとの組み合わせからなる光源であり、前記黄色発光ダイオードの輝度は１０００〜３５００ルクスであり、前記赤色発光ダイオードの輝度は６０００〜９５００ルクスであり、前記黄色発光ダイオードの数と前記赤色発光ダイオードの数との比率は０．５〜２：０．５〜２であり、
前記制御モジュールは、前記第１の光源モジュール及び電源モジュールと電気的に接続されることを特徴とする混合光刺激装置。
【請求項６】
前記電源モジュールは、外部電源であるか、前記ケーシングの前記収納空間内に配置されることを特徴とする請求項５に記載の混合光刺激装置。
【請求項７】
前記制御モジュールは、前記電源モジュールと電気的に接続するために用いる充電ソケットを含むことを特徴とする請求項６に記載の混合光刺激装置。
【請求項８】
前記制御モジュールは、前記ケーシングの表面に配置されて前記電源モジュールの電源供給を制御する電源スイッチを含むことを特徴とする請求項５に記載の混合光刺激装置。
【請求項９】
前記ケーシングの側縁には、光取出し孔が設けられることを特徴とする請求項５に記載の混合光刺激装置。
【請求項１０】
前記光取出し孔を覆う透光性プレートと、前記透光性プレートに対応して配置されて前記透光性プレートへ透過させる光線を出射する第２の光源モジュールと、をさらに備えることを特徴とする請求項９に記載の混合光刺激装置。
【請求項１１】
前記制御モジュールは、前記ケーシングの表面に配置され、前記第１の光源モジュール又は前記第２の光源モジュールを起動するモード切換スイッチを有することを特徴とする請求項１０に記載の混合光刺激装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、混合光刺激方法及び混合光刺激装置に関し、特に、コラーゲン合成を促進する混合光刺激方法及び混合光刺激装置に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚科では、薬物により患者の皮膚病（例えば、ニキビ等）を治療するのが一般的である。しかし薬物治療を行うと長期的には副作用を伴い、長期間服用した場合、身体に新陳代謝の負担が発生する上、治療効果が理想的でなく、再発の可能性があるため、患者の皮膚病を改善することができない虞がある。
【０００３】
近年、医療産業及び美容産業が発展し、研究結果によると、波長４００〜４７５ｎｍの青色光をニキビの治療に用いると、青色光がプロピオニバクテリウムアクネス（ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｎｅｓ）又は組織細胞内のコプロポルフィリン（ｃｏｐｒｏｐｏｒｐｈｙｒｉｎ）と作用して毒性モノ酸素（ｔｏｘｉｃ  ｍｏｎｏ−ｏｘｙｇｅｎ）及びフリーラジカルを発生させる上、細菌及び皮脂腺組織細胞の一部を破壊し、ニキビの炎症を防ぐことができる。他方、波長６００〜７５０ｎｍの赤色光、波長５５０〜６００ｎｍの黄色光及び波長５００〜５７０ｎｍの緑色光は、真皮層の線維芽細胞を刺激し、コラーゲン合成を促進し、皮膚が老化することを防ぐことができる。
このように、従来は、美容又は治療等の目的を達成するために、個々人の必要に応じて異なる波長光源を用いて光治療を行っていた（例えば、特許文献１及び２参照）。
【０００４】
上述の効果を得るために、現在メーカの大部分はレーザ光又はパルス光を使用し、これら２種類の光のエネルギ又は強度を用いて上述の効果を得ていたが、細胞に障害が起きやすかった。近来、上述の高強度光源を代替することができる一般の光源又は発光ダイオードの光源技術が積極的に開発されているが、発光ダイオードの光源は、エネルギが小さく、適宜な輝度でなければ効果を得ることができず、もし輝度が低すぎる場合、治療効果を得ることができなかった。反対に、光線の輝度が高すぎる場合、細胞に障害が起きやすい上、それに必要な装置の体積も大きくなるため、小型で軽量の携帯式光治療器を開発することができない上、１種類の光源しか使用することができなかった。
【０００５】
上述したことから明らかなように、異なる色の特定の輝度範囲を有する発光ダイオードを組み合わせることにより、コラーゲン合成を促進したり、人的コスト及び時間コストを減らし、患者の肌をきれいにすることができる混合光刺激方法及び混合光刺激装置の開発が求められていた。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】台湾登録番号Ｍ３０８０８０（請求の範囲等）
【特許文献２】台湾登録番号Ｍ３２３８９８（請求の範囲等）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の目的は、発光ダイオードから特定の輝度範囲である赤色光又は黄色光を出射し、線維芽細胞を刺激してコラーゲン合成を促進させるとともに、血液循環を促進し、細胞代謝を促進する混合光刺激方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
上記課題を解決するために、本発明の第１の形態によれば、混合光刺激方法は、黄色発光ダイオードと赤色発光ダイオードとの組み合わせからなる発光ダイオード光源を準備するステップと、発光ダイオード光源により被験物を照射してコラーゲン合成を促進するステップと、を含む。黄色発光ダイオードの輝度は１０００〜３５００ルクスである。赤色発光ダイオードの輝度は６０００〜９５００ルクスである。黄色発光ダイオードの数と赤色発光ダイオードの数との比率は０．５〜２：０．５〜２である。
【０００９】
従来技術では、通常、異なる波長のレーザ光又はパルス光を使用してニキビを治療したり、真皮層の線維芽細胞を刺激してコラーゲン合成を向上させるが、レーザ光又はパルス光の強度が非常に強くてその設備が非常に大きいため、一般の消費者は所有することが困難である。近年、発光ダイオードを光源として使用し、上述したようにコラーゲンを向上させる効果を得ることが期待されているが、従来、発光ダイオードの発光輝度及び混合光源が細胞に与える影響が研究されていないため、特定の輝度が設定されていない条件下において、従来方法により上述の効果を得ることができるか否かは分かっていない。逆に、本発明で述べる方法は、黄色光及び赤色光を出射する発光ダイオードを混合光源として用い、異なる輝度範囲に限定するため、線維芽細胞を刺激してコラーゲン合成を向上させることができる。
【００１０】
そのため、適宜な輝度を有する赤色光及び黄色光の発光ダイオードの混合光源を使用して適宜な時間で照射を行う場合、マクロファージ（ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ）を刺激して細胞のサイトカイン（ｃｙｔｏｋｉｎｅ）を放出し、線維芽細胞の分裂を促進するとともに、線維芽細胞を刺激してＤＮＡを合成し、増殖因子（Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ：ＦＧＦ）を分泌してコラーゲン合成を促進させる。被験物が体内細胞（例えば、真皮層内の線維芽細胞又はマクロファージ細胞）である場合、光が直接透過して皮膚に照射されると傷口が癒合されてアンチエージングの効果を得たり、被験物が体外細胞である場合、上述の処理を行った後、処理した細胞を生物体へ殖入して上述の効果を得る。このことから分かるように、本発明で述べる被験物とは、光刺激の物体である。
【００１１】
本発明の上述の混合光刺激方法では、被験物が線維芽細胞、マクロファージ細胞又はそれらの組み合わせであることが好ましい。本発明の好適な実施例において、被験物は線維芽細胞である。また、黄色発光ダイオードの光波長範囲は５７０〜５９０ｎｍであり、赤色発光ダイオードの光波長範囲は６２０〜７５０ｎｍである。赤色発光ダイオードと黄色発光ダイオードとからなる混合光源の照射時間は、上述の効果を得て被験物に障害が起きない限り、特に限定されず、赤色発光ダイオード及び黄色発光ダイオードから出射される光線の所定輝度に応じて調整することができる。例えば、輝度が高い場合、照射時間を短くして同等の効果を得たり、反対に、輝度が低い場合、照射時間を長くして同等の効果を得たりしてもよい。
【００１２】
例えば、赤色発光ダイオードが６０００〜９５００ルクスの輝度を有する光を出射し、黄色発光ダイオードが１０００〜３５００ルクスの輝度の光を出射する場合、照射時間は５〜９０分間である。例えば、上述の輝度範囲より高い場合、短時間では大きな影響は無いが、長時間の場合、輝度が高すぎて細胞に障害が起きる虞がある。反対に、輝度が小さすぎる場合、長時間使用したとしても効果を得ることはできない。
【００１３】
本発明のもう一つの目的は、特定の輝度範囲を有する赤色発光ダイオードと黄色発光ダイオードとからなる混合光源により、線維芽細胞を刺激してコラーゲン合成を促進するとともに、血液循環を促進し、細胞代謝を高めることができる混合光刺激装置を提供することにある。
【００１４】
上記課題を解決するために、本発明の第２の形態によれば、ケーシング、光拡散シート、第１の光源モジュール及び制御モジュールを備えた混合光刺激装置であって、ケーシングは、光取出し口が設けられた頂面と、側縁と、を有し、光拡散シートは、ケーシングの光取出し口を覆い、第１の光源モジュールは、ケーシングの収納空間内に配置され、第１の発光ダイオードを有し、第１の発光ダイオードは、光拡散シートの下方へ配置され、第１の発光ダイオードは、黄色発光ダイオードと赤色発光ダイオードとの組み合わせからなる光源であり、黄色発光ダイオードの輝度は１０００〜３５００ルクスであり、赤色発光ダイオードの輝度は６０００〜９５００ルクスであり、黄色発光ダイオードの数と赤色発光ダイオードの数との比率は０．５〜２：０．５〜２であり、制御モジュールは、第１の光源モジュール及び電源モジュールと電気的に接続されることを特徴とする混合光刺激装置が提供される。
【００１５】
以上述べたことから明らかなように、本発明の混合光刺激装置は、黄色光及び赤色光を出射させる発光ダイオードを混合光源として用い、様々な色の光線が対応した輝度範囲に限定されるため、本発明の混合光刺激装置により照射を行うと、線維芽細胞を刺激してコラーゲン合成を向上させることができる。
【００１６】
本発明の上述の混合光刺激装置において、電源モジュールは、外部電源でもよいし、ケーシングの収納空間中へ配置したりしてもよい。電源モジュールをケーシングの収納空間中に配置する場合、電源モジュールは、二次電池を含んだり一般の乾電池又はボタン電池が収納された構成により電源供給を行ったりしてもよい。一方、電源モジュールが外部電源であったり、ケーシングの収納空間中に配置する二次電池である場合、制御モジュールは、電源モジュールを制御モジュールへ電気的に接続する充電ソケットを選択的に含んでもよい。
【００１７】
これ以外に、本発明の上述の混合光刺激装置の制御モジュールは、ケーシングの表面に配置されて、電源モジュールの電源供給を制御する電源スイッチを選択的に含んでもよい。さらに、ケーシングは、混合光刺激装置の光リーク現象を減らすことができるように、光透過率が低い材料（例えば、反射性が高かったり密度が高かったりする材料）からなることが好ましい。さらに、当業者であれば分かるように、様々な構造設計により、混合光刺激装置の全体構造の密着度を高めて、混合光刺激装置の光リーク現象を減らしてもよい。
【００１８】
他方、本発明の上述の混合光刺激装置は、ケーシングの側縁に光取出し孔を選択的に設けてもよい。このような場合、混合光刺激装置は、光取出し孔を覆う透光性プレートと、透光性プレートに対応して配置されて透光性プレートへ光線を透過させる第２の光源モジュールと、をさらに含んでもよい。また、このような構成の場合、制御モジュールは、ケーシング表面に配置され、第１の光源モジュール又は第２の光源モジュールをオンするモード切換スイッチをさらに含んでもよい。言い換えると、モード切換スイッチは、第１の光源モジュールと第２の光源モジュールとの作動を切り換える。第１の光源モジュール及び第２の光源モジュール中で使用する発光ダイオードは、同じ色でもよいし異なる色でもよい。
【００１９】
本発明の上述した混合光刺激装置は、光取出し口に設けた光拡散シートにより出射される光を均一にし、治療光がユーザの目に直接照射されることを防ぎ、装置の光刺激効果の均一性を高める。言い換えると、元々、点光源であった発光ダイオードの光を拡散させて光取出し口の箇所で面光源を形成する。さらに、光取出し孔に設けた透光性プレートは、光拡散シートだけに限定されるわけではなく、もし光拡散シートである場合、上述の効果を得て、もし光拡散シートでない場合、点光源からの光線を直接透過させる。
【００２０】
本発明の上述の混合光刺激装置において、第１の光源モジュールと第２の光源モジュールとは交換してもよい。言い換えると、赤色発光ダイオードと黄色発光ダイオードとを組み合わせることにより、第１の光源モジュール及び第２の光源モジュールを構成してもよい。赤色光の比率を高める場合は、発光モジュール中の赤色発光ダイオードの数を増やす。これ以外に、第１の光源モジュール及び第２の光源モジュール中で使用する発光ダイオードを交換可能な方式に設計してもよい。言い換えると、黄色光の比率を高める場合は、光源モジュール上の発光ダイオードを黄色発光ダイオードへ交換する。
【００２１】
以上述べたことから明らかなように、本発明の混合光刺激方法及び混合光刺激装置は、様々な色の発光ダイオード（例えば、赤色発光ダイオードと黄色発光ダイオードとの組み合わせ）を使用し、光刺激作用を行うことができるため、コラーゲン合成を向上させたり、アンチエージングの効果を得たりすることができる。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】本発明の第１実施例に係る混合光刺激装置を示す斜視図である。
【図２】本発明の第１実施例に係る混合光刺激装置を示す側面図である。
【図３】本発明の第１実施例に係る混合光刺激装置を示すシステムブロック図である。
【図４】本発明の第２実施例に係る人線維芽細胞の生存率及びコラーゲン合成率を示すグラフである。
【図５】本発明の第２実施例に係る人線維芽細胞単位当りのコラーゲン合成率を示すグラフである。
【図６】本発明の第３実施例に係る人線維芽細胞の生存率及びコラーゲン合成率を示すグラフである。
【図７】本発明の第３実施例に係る人線維芽細胞単位当りのコラーゲン合成率を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
以下、本発明の実施例について図に基づいて説明する。なお、これによって本発明が限定されるものではない。
【００２４】
（第１実施例）
図１〜図３を参照する。図１は、本発明の第１実施例に係る混合光刺激装置を示す斜視図である。図２は、本発明の第１実施例に係る混合光刺激装置を示す側面図である。図３は、本発明の第１実施例に係る混合光刺激装置を示すシステムブロック図である。
【００２５】
図１〜図３に示すように、本発明の第１実施例に係る混合光刺激装置は、ケーシング１０、光拡散シート１４、透光性プレート１３、第１の光源モジュール４０、第２の光源モジュール５０及び制御モジュール３０を含む。
【００２６】
ケーシング１０には、各モジュールを収納するために用いる収納空間が形成されている。さらに、ケーシング１０は、頂面１１及び側縁１２を有する。頂面１１には、光取出し口１１１が設けられている。側縁１２には、光取出し孔１２１が設けられている。
【００２７】
頂面１１に設けられた光取出し口１１１は、光拡散シート１４により覆われる。側縁１２に設けられた光取出し孔１２１は、透光性プレート１３により覆われる。第２の光源モジュール５０は、透光性プレート１３に対応してケーシング１０の収納空間中に配置されるとともに、光線を出射して透光性プレート１３に透過させ、少なくとも１つの第２の発光ダイオード５１を有する。ここで、透光性プレート１３を単純に光を透過させるだけに用い、光を拡散させるために用いない場合は、第２の光源モジュール５０を点光源にしてもよい。
【００２８】
第１の光源モジュール４０は、ケーシング１０の収納空間中に配置され、アレイ状に配列された複数の第１の発光ダイオード４１を有する。第１の発光ダイオード４１は、光拡散シート１４の下方へ配置される。第１の発光ダイオード４１は、赤色発光ダイオードと黄色発光ダイオードとの組み合わせからなる光源であり、黄色発光ダイオードから出射されて光拡散シート１１を透過する光の輝度は１０００〜３５００ルクスであり、赤色発光ダイオードから出射されて光拡散シート１１を透過する光の輝度は６０００〜９５００ルクスであり、黄色発光ダイオードの数と赤色発光ダイオードの数との比率は０．５〜２：０．５〜２である。本実施例では、黄色発光ダイオードの数と赤色発光ダイオードの数との比率は１：１である。
【００２９】
制御モジュール３０は、第１の光源モジュール４０及び電源モジュール２０と電気的に接続される。制御モジュール３０は、電源モジュール２０と電気的に接続するために用いる充電ソケット３３と、ケーシング１０の表面に配置されて電源モジュール２０の電源供給を制御する電源スイッチ３１と、ケーシング１０の表面に配置されて第１の光源モジュール４０又は第２の光源モジュール５０を起動するモード切換スイッチ３２と、を含む。
【００３０】
電源モジュール２０は、外部電源でもよいし、ケーシング１０の収納空間中へ配置されてもよい。電源モジュール２０は、ケーシング１０の収納空間中に配置される。電源モジュール２０は、二次電池を含んだり一般の乾電池又はボタン電池が収納された構成により電源供給を行ってもよい。
【００３１】
そのため、上述の混合光刺激装置は、特定の輝度範囲を有する赤色発光ダイオードと黄色発光ダイオードとを混合した光線を出射させ、線維芽細胞を刺激してコラーゲン合成を促進したりするとともに、血液循環を促進し、細胞代謝を促進する。
【００３２】
（第２実施例）
以下、発光ダイオードから出射される輝度７８００ルクスの赤色光を利用し、人線維芽細胞の生存率と、コラーゲン分泌に与える影響と、について説明する。
【００３３】
まず、人線維芽細胞を含むＤＭＥＭ細胞培養液を４８ウェルプレート内へ加え、接種する細胞数を２×１０４個／ウェルにし、４８ウェル内の各ウェル内の培養液の総体積（細胞を含む）を計０．５ｍｌにし、ＣＯ２インキュベータにおいて２４時間培養した。その後、全ての培養液を取り出してから、ＰＢＳ緩衝液０．５ｍｌを加えて赤色発光ダイオード（７８００ルクス）を使用し、５、１０、１５、３０分間照射してから、ウェル内の全てのＰＢＳ緩衝液を取り出して０．５ｍｌの培養液を加えて２４時間培養し、上述の光刺激ステップを再び繰り返した。
【００３４】
その後、新しい培地０．５ｍｌへ交換して０．１２５ｍｌのＭＴＴ試薬を加え、３７℃、５％のＣＯ２の細胞インキュベータへ入れて４時間反応させた後、全ての培地を取り出し、０．５ｍｌのＤＭＳＯに溶解したホルマザン（ｆｏｒｍａｚａｎ）を加え、０．２ｍｌを９６ウェル内へ入れて、ＥＬＩＳＡ  Ｒｅａｄｅｒ（ＥＬＩＳＡ  Ｒｅａｄｅｒ  ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ  Ｍ２）により、ＯＤ５７０ｎｍのときの吸光度を測定した。細胞生存率の計算式は、細胞生存率（％）＝（照射後のＯＤ５７０／コントロールＯＤ５７０）×１００％であり、コントロールとは、混合光刺激装置で照射されない細胞を指す。
【００３５】
また、コラーゲン分析の検出方面に関しては、まず、人線維芽細胞を含むＤＭＥＭ細胞培養液を４８ウェルプレート内へ加え、接種した細胞数は２×１０４個／ウェルであり、４８ウェル内の各ウェル内の培養液の総体積（細胞を含む）は計０．５ｍｌであり、ＣＯ２インキュベータへ置いて２４時間培養した。その後、全ての培養液を取り出してから、ＰＢＳ緩衝液０．５ｍｌを加えて赤色発光ダイオード（７８００ルクス）を使用し、５、１０、１５、３０分間照射してから、ウェル内の全てのＰＢＳ緩衝液を取り出し、０．５ｍｌの培養液を加えて２４時間培養し、上述の光刺激ステップを再び繰り返した。
【００３６】
その後、ウェル内の培地を全て取り出し、１．５ｍｌのエッピンチューブへ入れた後、培養後の細胞のウェルへ０．５ｍｌ、０．５Ｍの酢酸水溶液（４℃）をそれぞれ加え、２０分間放置して、その中のコラーゲンを溶解した後、ウェル内の全ての水溶液を取り出して１．５ｍｌのエッペンチューブ内へ入れ、エッペンチューブへ５０μｌの酸中和剤（ａｃｉｄ  ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ  ｒｅａｇｅｎｔ：ｂｉｏｃｏｌｏｒ）、４℃、１００μｌの分離濃縮剤（ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  ＆  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ  ｒｅａｇｅｎｔ：ｂｉｏｃｏｌｏｒ）をそれぞれ加え、４℃の冷蔵庫に一晩置いた。その後、エッペンチューブを取り出して１２０００ｒｐｍで１０分間遠心させて上澄み液を取り除いてから、エッペンチューブ内に１ｍｌの呈色試験液（ｓｉｒｃｏｌ  ｄｙｅ  ｒｅａｇｅｎｔ：ｂｉｏｃｏｌｏｒ）を加えてエッペンチューブへ入れて３０分間、音波処理し、１２０００ｒｐｍで１０分間遠心処理した後、上澄み液を取り除いてから４℃、７５０μｌの酸塩洗浄剤（ａｃｉｄ−ｓａｌｔ  ｗａｓｈ  ｒｅａｇｅｎｔ：ｂｉｏｃｏｌｏｒ）を加え、その後、１２０００ｒｐｍで１０分間遠心して上澄み液を取り除き、エッピンチューブに２５０μｌのアルカリ剤（ａｌｋａｌｉ  ｒｅａｇｅｎｔ：ｂｉｏｃｏｌｏｒ）を加えてから、最後に各チューブから２００μｌを取り出して９６ウェル内へ入れ、５５５ｎｍの吸光度を測定した。コラーゲン生成率（％）＝（照射後のコラーゲン生成量／コントロールのコラーゲン生成量）×１００％において、コントロールとは、混合光刺激装置を使用せずに照射した細胞のことを指す。
【００３７】
上述の実験結果を図４及び図５に示す。図４は、輝度７８００ルクスの赤色発光ダイオードを人線維芽細部へ照射した後の細胞生存率及びコラーゲン生成率を表す。図５は、照射後の細胞単位当りのコラーゲン生成率を表す。図４は、５分間照射した後に、線維芽細胞の増殖を促進する効果を表し、コラーゲン含有量は、細胞の数が増えるに従い増加する。図５を参照する。図５に示すように、線維芽細胞の増殖により、細胞単位当りのコラーゲン生成量が減るが、照射時間の増加に伴い、線維芽細胞単位当りのコラーゲン生成量が次第に増える。
【００３８】
（第３実施例）
以下、発光ダイオードを利用して輝度が２２９０ルクスの黄色光を出射するときの人線維芽細胞の生存率と、コラーゲン分泌に与える影響と、について説明する。
【００３９】
まず、人線維芽細胞を含むＤＭＥＭ細胞培養液を４８ウェルプレート内へ加え、接種した細胞数は２×１０４個／ウェルであり、４８ウェル内の各ウェル内の培養液の総体積（細胞を含む）は計０．５ｍｌであり、ＣＯ２インキュベータへ置いて２４時間培養した。その後、全ての培養液を取り出してから、ＰＢＳ緩衝液０．５ｍｌを加えて黄色発光ダイオード（２２９０ルクス）を使用し、５、１０、１５、３０分間照射してから、ウェル内の全てのＰＢＳ緩衝液を取り出し、０．５ｍｌの培養液を加えて２４時間培養し、上述の光刺激ステップを再び繰り返した。
【００４０】
その後、新しい培地０．５ｍｌへ交換して０．１２５ｍｌのＭＴＴ試薬を加え、３７℃、５％のＣＯ２の細胞インキュベータへ入れて４時間反応させた後、全ての培地を取り出して０．５ｍｌのＤＭＳＯに溶解したホルマザン（ｆｏｒｍａｚａｎ）を加え、０．２ｍｌを９６ウェル内へ入れて、ＥＬＩＳＡ  Ｒｅａｄｅｒ（ＥＬＩＳＡ  Ｒｅａｄｅｒ  ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ  Ｍ２）により、ＯＤ５７０ｎｍのときの吸光度を測定した。細胞生存率の計算式は、細胞生存率（％）＝（照射後のＯＤ５７０／コントロールＯＤ５７０）×１００％であり、ここでコントロールとは、混合光刺激装置により照射されていない細胞を指す。
【００４１】
また、コラーゲン分析の検出方面に関しては、まず、人線維芽細胞を含むＤＭＥＭ細胞培養液を４８ウェルプレート内へ加え、接種した細胞数が２×１０４個／ウェルであり、４８ウェル内の各ウェル内の培養液の総体積（細胞を含む）は計０．５ｍｌであり、ＣＯ２インキュベータにおいて２４時間培養した。その後、全ての培養液を取り出してから、ＰＢＳ緩衝液０．５ｍｌを加えて黄色発光ダイオード（２２９０ルクス）を使用し、５、１０、１５、３０分間照射してから、ウェル内の全てのＰＢＳ緩衝液を取り出して、０．５ｍｌの培養液を加えて２４時間培養し、上述の光刺激ステップを再び繰り返した。
【００４２】
その後、ウェル内の培地を全て取り出し、１．５ｍｌのエッピンチューブへ入れた後、培養後の細胞のウェルへ０．５ｍｌの０．５Ｍの酢酸水溶液（４℃）をそれぞれ加え、２０分間放置して、その中のコラーゲンを溶解した後、ウェル内の全ての水溶液を取り出して１．５ｍｌのエッペンチューブ内へ入れ、エッペンチューブへ５０μｌの酸中和剤（ａｃｉｄ  ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ  ｒｅａｇｅｎｔ：ｂｉｏｃｏｌｏｒ）、４℃、１００μｌの分離濃縮剤（ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  ＆  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ  ｒｅａｇｅｎｔ：ｂｉｏｃｏｌｏｒ）をそれぞれ加え、４℃の冷蔵庫に一晩置いた。その後、エッペンチューブを取り出して１２０００ｒｐｍで１０分間遠心させて上澄み液を取り除いてから、エッペンチューブ中に１ｍｌの呈色試験液（ｓｉｒｃｏｌ  ｄｙｅ  ｒｅａｇｅｎｔ：ｂｉｏｃｏｌｏｒ）を加えて３０分間、音波処理し、１２０００ｒｐｍで１０分間遠心処理した後、上澄み液を取り除いてから４℃、７５０μｌの酸塩洗浄剤（ａｃｉｄ−ｓａｌｔ  ｗａｓｈ  ｒｅａｇｅｎｔ：ｂｉｏｃｏｌｏｒ）を加え、その後、１２０００ｒｐｍで１０分間遠心して上澄み液を取り除き、エッピンチューブに２５０μｌのアルカリ剤（ａｌｋａｌｉ  ｒｅａｇｅｎｔ：ｂｉｏｃｏｌｏｒ）を加えてから、最後に各チューブから２００μｌを取り出して９６ウェル内へ入れ、５５５ｎｍの吸光度を測定した。コラーゲン生成率（％）＝（照射後のコラーゲン生成量／コントロールのコラーゲン生成量）×１００％において、コントロールとは、混合光刺激装置により照射されていない細胞を指す。
【００４３】
上述の実験結果は図６及び図７に示す。図６は、輝度２２９０ルクスの黄色発光ダイオードを人線維芽細部へ照射した後の細胞生存率及びコラーゲン生成率を表す。図７は、照射後の細胞単位当りのコラーゲン生成率を表す。図６を参照する。図６は、５分間照射した後に、線維芽細胞の増殖を促進する効果を表し、コラーゲンの含有量は、細胞の数が増えるに従い増加する。図７を参照する。図７から分かるように、細胞単位当りのコラーゲン生成量は、５〜１０分間照射したときに最高に達する。
【００４４】
当該分野の技術を熟知するものが理解できるように、本発明の好適な実施例を前述の通り開示したが、これらは決して本発明を限定するものではない。本発明の主旨と領域を逸脱しない範囲内で各種の変更や修正を加えることができる。従って、本発明の特許請求の範囲は、このような変更や修正を含めて広く解釈されるべきである。
【符号の説明】
【００４５】
１０ ケーシング
１１ 頂面
１２ 側縁
１３ 透光性プレート
１４ 光拡散シート
２０ 電源モジュール
３０ 制御モジュール
３１ 電源スイッチ
３２ モード切換スイッチ
３３ 充電ソケット
４０ 第１の光源モジュール
４１ 第１の発光ダイオード
５０ 第２の光源モジュール
５１ 第２の発光ダイオード
１１１ 光取出し口
１２１ 光取出し孔
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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