(57)【要約】      （修正有）【課題】Ｍ−ＣＳＦ活性を阻害するための治療用抗Ｍ−ＣＳＦ抗体の提供。【解決手段】Ｍ−ＣＳＦ、好ましくはヒトＭ−ＣＳＦに特異的に結合し、Ｍ−ＣＳＦを阻害するように機能する抗体およびその抗原結合部分の使用。また、ヒト抗Ｍ−ＣＳＦ抗体およびその抗原結合部分。また、キメラ抗体、二重特異性抗体、誘導体化抗体、単鎖抗体である抗体、または融合タンパク質の部分について、ヒト抗Ｍ−ＣＳＦ抗体に由来する単離された重鎖免疫グロブリンおよび軽鎖免疫グロブリン、ならびにそのような免疫グロブリンをコードする核酸分子。また、ヒト抗Ｍ−ＣＳＦ抗体、これらの抗体を含む組成物を作製する方法、ならびに診断および治療のためにこの抗体および組成物を使用する方法であり、さらに、ヒト抗Ｍ−ＣＳＦ抗体を含む、重鎖免疫グロブリン分子および／または軽鎖免疫グロブリン分子をコードする核酸分子の使用。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ループスを治療するための方法であって、それを必要とする対象に、治療有効量の、Ｍ−ＣＳＦに特異的に結合するヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合部分を投与するステップを含む方法。
【請求項２】
前記抗体または抗原結合部分が、
ａ）Ｍ−ＣＳＦのヒト分泌型アイソフォーム、およびＭ−ＣＳＦの膜結合型アイソフォームに結合する；
ｂ）ＧＭ−ＣＳＦまたはＧ−ＣＳＦに対するその選択性より、少なくとも１００倍大きいＭ−ＣＳＦに対する選択性を有する；
ｃ）１．０×１０−７Ｍ以下のＫＤでＭ−ＣＳＦに結合する；
ｄ）２．０×１０−４ｓ−１以下のＭ−ＣＳＦについてのオフ速度（Ｋｏｆｆ）を有する；または
ｅ）ヒトｃ−ｆｍｓの存在下でヒトＭ−ＣＳＦに結合する
特性のうちの少なくとも１つを有する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記抗体または抗原結合部分が、ｃ−ｆｍｓへの結合を遮断し、１．０×１０−７Ｍ以下のＫＤでＭ−ＣＳＦに結合する、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記抗体または抗原結合部分が、
ａ）抗体２５２、８８、１００、３．８．３、２．７．３、１．１２０．１、９．１４．４Ｉ、８．１０．３Ｆ、９．７．２ＩＦ、９．１４．４、８．１０．３、９．７．２、９．７．２Ｃ−Ｓｅｒ、９．１４．４Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ４、９．１４．４−ＣＧ２、９．１４．４−ＣＧ４、９．１４．４−Ｓｅｒ、９．７．２−Ｓｅｒ、８．１０．３−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ４、８．１０．３ＦＧ１、および９．１４．４Ｇ１からなる群から選択される抗体と、Ｍ−ＣＳＦへの結合について交差競合する；
ｂ）２５２、８８、１００、３．８．３、２．７．３、１．１２０．１、９．１４．４Ｉ、８．１０．３Ｆ、９．７．２ＩＦ、９．１４．４、８．１０．３、９．７．２、９．７．２Ｃ−Ｓｅｒ、９．１４．４Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ４、９．１４．４−ＣＧ２、９．１４．４−ＣＧ４、９．１４．４−Ｓｅｒ、９．７．２−Ｓｅｒ、８．１０．３−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ４、８．１０．３ＦＧ１、および９．１４．４Ｇ１からなる群から選択される抗体と、Ｍ−ＣＳＦへの結合について競合する
ｃ）抗体２５２、８８、１００、３．８．３、２．７．３、１．１２０．１、９．１４．４Ｉ、８．１０．３Ｆ、９．７．２ＩＦ、９．１４．４、８．１０．３、９．７．２、９．７．２Ｃ−Ｓｅｒ、９．１４．４Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ４、９．１４．４−ＣＧ２、９．１４．４−ＣＧ４、９．１４．４−Ｓｅｒ、９．７．２−Ｓｅｒ、８．１０．３−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ４、８．１０．３ＦＧ１、および９．１４．４Ｇ１からなる群から選択される抗体と同じＭ−ＣＳＦのエピトープに結合する；
ｄ）抗体２５２、８８、１００、３．８．３、２．７．３、１．１２０．１、９．１４．４Ｉ、８．１０．３Ｆ、９．７．２ＩＦ、９．１４．４、８．１０．３、９．７．２、９．７．２Ｃ−Ｓｅｒ、９．１４．４Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ４、９．１４．４−ＣＧ２、９．１４．４−ＣＧ４、９．１４．４−Ｓｅｒ、９．７．２−Ｓｅｒ、８．１０．３−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ４、８．１０．３ＦＧ１、および９．１４．４Ｇ１からなる群から選択される抗体と実質的に同じＫＤでＭ−ＣＳＦに結合する；および
ｅ）抗体２５２、８８、１００、３．８．３、２．７．３、１．１２０．１、９．１４．４Ｉ、８．１０．３Ｆ、９．７．２ＩＦ、９．１４．４、８．１０．３、９．７．２、９．７．２Ｃ−Ｓｅｒ、９．１４．４Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ４、９．１４．４−ＣＧ２、９．１４．４−ＣＧ４、９．１４．４−Ｓｅｒ、９．７．２−Ｓｅｒ、８．１０．３−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ４、８．１０．３ＦＧ１、および９．１４．４Ｇ１からなる群から選択される抗体と実質的に同じオフ速度でＭ−ＣＳＦに結合する
からなる群から選択される少なくとも１つの特性を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記抗体または抗原結合部分が、
ａ）シグナル配列を含まない、配列番号２に示された重鎖アミノ酸配列および配列番号４に示された軽鎖アミノ酸配列を含む抗体；
ｂ）シグナル配列を含まない、配列番号６に示された重鎖アミノ酸配列および配列番号８に示された軽鎖アミノ酸配列を含む抗体；
ｃ）シグナル配列を含まない、配列番号１０に示された重鎖アミノ酸配列および配列番号１２に示された軽鎖アミノ酸配列を含む抗体；
ｄ）シグナル配列を含まない、配列番号１４に示された重鎖アミノ酸配列および配列番号１６に示された軽鎖アミノ酸配列を含む抗体；
ｅ）シグナル配列を含まない、配列番号１８に示された重鎖アミノ酸配列および配列番号２０に示された軽鎖アミノ酸配列を含む抗体；
ｆ）シグナル配列を含まない、配列番号２２に示された重鎖アミノ酸配列および配列番号２４に示された軽鎖アミノ酸配列を含む抗体；
ｇ）シグナル配列を含まない、配列番号２６に示された重鎖アミノ酸配列および配列番号２８に示された軽鎖アミノ酸配列を含む抗体；
ｈ）シグナル配列を含まない、配列番号３８に示された重鎖アミノ酸配列および配列番号２８に示された軽鎖アミノ酸配列を含む抗体；
ｉ）シグナル配列を含まない、配列番号５４に示された重鎖アミノ酸配列および配列番号５６に示された軽鎖アミノ酸配列を含む抗体；
ｊ）シグナル配列を含まない、配列番号７４に示された重鎖アミノ酸配列および配列番号５６に示された軽鎖アミノ酸配列を含む抗体；
ｋ）シグナル配列を含まない、配列番号７８に示された重鎖アミノ酸配列および配列番号５６に示された軽鎖アミノ酸配列を含む抗体；
ｌ）シグナル配列を含まない、配列番号８２に示された重鎖アミノ酸配列および配列番号２８に示された軽鎖アミノ酸配列を含む抗体；
ｍ）シグナル配列を含まない、配列番号１０２に示された重鎖アミノ酸配列および配列番号２８に示された軽鎖アミノ酸配列を含む抗体；
ｎ）シグナル配列を含まない、配列番号３０に示された重鎖アミノ酸配列および配列番号３２に示された軽鎖アミノ酸配列を含む抗体；
ｏ）シグナル配列を含まない、配列番号３０に示された重鎖アミノ酸配列および配列番号４４に示された軽鎖アミノ酸配列を含む抗体；
ｐ）シグナル配列を含まない、配列番号５８に示された重鎖アミノ酸配列および配列番号６０に示された軽鎖アミノ酸配列を含む抗体；
ｑ）シグナル配列を含まない、配列番号６２に示された重鎖アミノ酸配列および配列番号６０に示された軽鎖アミノ酸配列を含む抗体；
ｒ）シグナル配列を含まない、配列番号９０に示された重鎖アミノ酸配列および配列番号４４に示された軽鎖アミノ酸配列を含む抗体；
ｓ）シグナル配列を含まない、配列番号９４に示された重鎖アミノ酸配列および配列番号６０に示された軽鎖アミノ酸配列を含む抗体；
ｔ）シグナル配列を含まない、配列番号９８に示された重鎖アミノ酸配列および配列番号３２に示された軽鎖アミノ酸配列を含む抗体；
ｕ）シグナル配列を含まない、配列番号３４に示された重鎖アミノ酸配列および配列番号３６に示された軽鎖アミノ酸配列を含む抗体；
ｖ）シグナル配列を含まない、配列番号４６に示された重鎖アミノ酸配列および配列番号４８に示された軽鎖アミノ酸配列を含む抗体；
ｗ）シグナル配列を含まない、配列番号５０に示された重鎖アミノ酸配列および配列番号５２に示された軽鎖アミノ酸配列を含む抗体；
ｘ）シグナル配列を含まない、配列番号６６に示された重鎖アミノ酸配列および配列番号５２に示された軽鎖アミノ酸配列を含む抗体；
ｙ）シグナル配列を含まない、配列番号７０に示された重鎖アミノ酸配列および配列番号５２に示された軽鎖アミノ酸配列を含む抗体；ならびに
ｚ）シグナル配列を含まない、配列番号８６に示された重鎖アミノ酸配列および配列番号４８に示された軽鎖アミノ酸配列を含む抗体
からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記抗体または抗原結合部分が、
ａ）モノクローナル抗体２５２、８８、１００、３．８．３、２．７．３、１．１２０．１、９．１４．４Ｉ、８．１０．３Ｆ、９．７．２ＩＦ、９．１４．４、８．１０．３、９．７．２、９．７．２Ｃ−Ｓｅｒ、９．１４．４Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ４、９．１４．４−ＣＧ２、９．１４．４−ＣＧ４、９．１４．４−Ｓｅｒ、９．７．２−Ｓｅｒ、８．１０．３−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ４、８．１０．３ＦＧ１、および９．１４．４Ｇ１からなる群から選択される抗体の重鎖から独立して選択される重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３；または
ｂ）モノクローナル抗体２５２、８８、１００、３．８．３、２．７．３、１．１２０．１、９．１４．４Ｉ、８．１０．３Ｆ、９．７．２ＩＦ、９．１４．４、８．１０．３、９．７．２、９．７．２Ｃ−Ｓｅｒ、９．１４．４Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ４、９．１４．４−ＣＧ２、９．１４．４−ＣＧ４、９．１４．４−Ｓｅｒ、９．７．２−Ｓｅｒ、８．１０．３−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ４、８．１０．３ＦＧ１、および９．１４．４Ｇ１からなる群から選択される抗体の軽鎖から独立して選択される軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
ａ）前記抗体もしくは抗原結合部分が、抗体２５２、８８、１００、３．８．３、２．７．３、１．１２０．１、９．１４．４Ｉ、８．１０．３Ｆ、９．７．２ＩＦ、９．１４．４、８．１０．３、９．７．２、９．７．２Ｃ−Ｓｅｒ、９．１４．４Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ４、９．１４．４−ＣＧ２、９．１４．４−ＣＧ４、９．１４．４−Ｓｅｒ、９．７．２−Ｓｅｒ、８．１０．３−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ４、８．１０．３ＦＧ１、および９．１４．４Ｇ１からなる群から選択される抗体の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み、
ｂ）前記抗体もしくは抗原結合部分が、抗体２５２、８８、１００、３．８．３、２．７．３、１．１２０．１、９．１４．４Ｉ、８．１０．３Ｆ、９．７．２ＩＦ、９．１４．４、８．１０．３、９．７．２、９．７．２Ｃ−Ｓｅｒ、９．１４．４Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ４、９．１４．４−ＣＧ２、９．１４．４−ＣＧ４、９．１４．４−Ｓｅｒ、９．７．２−Ｓｅｒ、８．１０．３−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ４、８．１０．３ＦＧ１、および９．１４．４Ｇ１からなる群から選択される抗体の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み、
ｃ）前記抗体が、（ａ）の重鎖および（ｂ）の軽鎖を含み、または
ｄ）前記抗体もしくは抗原結合部分が、（ａ）の重鎖および（ｂ）の軽鎖を含み、前記重鎖および軽鎖のＣＤＲアミノ酸配列が、同じ抗体から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記抗体または抗原結合部分が、
ａ）抗体２５２、８８、１００、３．８．３、２．７．３、１．１２０．１、９．１４．４Ｉ、８．１０．３Ｆ、９．７．２ＩＦ、９．１４．４、８．１０．３、９．７．２、９．７．２Ｃ−Ｓｅｒ、９．１４．４Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ４、９．１４．４−ＣＧ２、９．１４．４−ＣＧ４、９．１４．４−Ｓｅｒ、９．７．２−Ｓｅｒ、８．１０．３−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ４、８．１０．３ＦＧ１、および９．１４．４Ｇ１からなる群から選択される抗体の重鎖のＣＤＲ１の始端からＣＤＲ３の終端までのアミノ酸配列を含む重鎖
ｂ）抗体２５２、８８、１００、３．８．３、２．７．３、１．１２０．１、９．１４．４Ｉ、８．１０．３Ｆ、９．７．２ＩＦ、９．１４．４、８．１０．３、９．７．２、９．７．２Ｃ−Ｓｅｒ、９．１４．４Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ４、９．１４．４−ＣＧ２、９．１４．４−ＣＧ４、９．１４．４−Ｓｅｒ、９．７．２−Ｓｅｒ、８．１０．３−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ４、８．１０．３ＦＧ１、および９．１４．４Ｇ１からなる群から選択される抗体のＣＤＲ１の始端からＣＤＲ３の終端までのアミノ酸配列を含む軽鎖
ｃ）（ａ）の重鎖および（ｂ）の軽鎖；または
ｄ）重鎖および軽鎖の配列が同じ抗体から選択される、（ａ）の重鎖および（ｂ）の軽鎖
を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記モノクローナル抗体または抗原結合部分が、
ａ）抗体２５２、８８、１００、３．８．３、２．７．３、１．１２０．１、９．１４．４Ｉ、８．１０．３Ｆ、９．７．２ＩＦ、９．１４．４、８．１０．３、９．７．２、９．７．２Ｃ−Ｓｅｒ、９．１４．４Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ４、９．１４．４−ＣＧ２、９．１４．４−ＣＧ４、９．１４．４−Ｓｅｒ、９．７．２−Ｓｅｒ、８．１０．３−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ４、８．１０．３ＦＧ１、および９．１４．４Ｇ１からなる群から選択される抗体の、シグナル配列を含まない重鎖可変ドメイン（ＶＨ）アミノ酸配列
ｂ）抗体２５２、８８、１００、３．８．３、２．７．３、１．１２０．１、９．１４．４Ｉ、８．１０．３Ｆ、９．７．２ＩＦ、９．１４．４、８．１０．３、９．７．２、９．７．２Ｃ−Ｓｅｒ、９．１４．４Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ４、９．１４．４−ＣＧ２、９．１４．４−ＣＧ４、９．１４．４−Ｓｅｒ、９．７．２−Ｓｅｒ、８．１０．３−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ４、８．１０．３ＦＧ１、および９．１４．４Ｇ１からなる群から選択される抗体の、シグナル配列を含まない軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）アミノ酸配列
ｃ）（ａ）のＶＨアミノ酸配列および（ｂ）のＶＬアミノ酸配列；または
ｄ）ＶＨおよびＶＬが同じ抗体に由来する、（ａ）のＶＨアミノ酸配列および（ｂ）のＶＬアミノ酸配列
を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記抗体または抗原結合部分が、抗体２５２、８８、１００、３．８．３、２．７．３、１．１２０．１、９．１４．４Ｉ、８．１０．３Ｆ、９．７．２ＩＦ、９．１４．４、８．１０．３、９．７．２、９．７．２Ｃ−Ｓｅｒ、９．１４．４Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ４、９．１４．４−ＣＧ２、９．１４．４−ＣＧ４、９．１４．４−Ｓｅｒ、９．７．２−Ｓｅｒ、８．１０．３−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ４、８．１０．３ＦＧ１、および９．１４．４Ｇ１からなる群から選択される抗体のＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、またはＦＲ４アミノ酸配列の１つまたは複数を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記抗体または抗原結合部分の重鎖のＣ末端リシンが存在しない、請求項１から１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記抗体が、
ａ）シグナル配列を含まない、モノクローナル抗体２５２、８８、１００、３．８．３、２．７．３、１．１２０．１、９．１４．４Ｉ、８．１０．３Ｆ、９．７．２ＩＦ、９．１４．４、８．１０．３、９．７．２、９．７．２Ｃ−Ｓｅｒ、９．１４．４Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ４、９．１４．４−ＣＧ２、９．１４．４−ＣＧ４、９．１４．４−Ｓｅｒ、９．７．２−Ｓｅｒ、８．１０．３−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ４、８．１０．３ＦＧ１、もしくは９．１４．４Ｇ１の重鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一である重鎖アミノ酸配列；
ｂ）シグナル配列を含まない、モノクローナル抗体２５２、８８、１００、３．８．３、２．７．３、１．１２０．１、９．１４．４Ｉ、８．１０．３Ｆ、９．７．２ＩＦ、９．１４．４、８．１０．３、９．７．２、９．７．２Ｃ−Ｓｅｒ、９．１４．４Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ４、９．１４．４−ＣＧ２、９．１４．４−ＣＧ４、９．１４．４−Ｓｅｒ、９．７．２−Ｓｅｒ、８．１０．３−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ４、８．１０．３ＦＧ１、もしくは９．１４．４Ｇ１の軽鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一である軽鎖アミノ酸配列；または
ｃ）（ａ）の重鎖アミノ酸配列および（ｂ）の軽鎖アミノ酸配列
を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記抗体または抗原結合部分が、
ａ）シグナル配列を含まないモノクローナル抗体８．１０．３Ｆの重鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一である重鎖アミノ酸配列；
ｂ）モノクローナル抗体８．１０．３Ｆの軽鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一である軽鎖アミノ酸配列；
ｃ）（ａ）の重鎖アミノ酸配列および（ｂ）の軽鎖アミノ酸配列；または
ｄ）一緒に、抗体８．１０．３Ｆの重鎖アミノ酸配列および軽鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一である、重鎖アミノ酸配列および軽鎖アミノ酸配列
を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記抗体または抗原結合部分の重鎖アミノ酸配列が、シグナル配列を含まないモノクローナル抗体８．１０．３Ｆの重鎖アミノ酸配列と少なくとも９５％同一である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記抗体または抗原結合部分の軽鎖アミノ酸配列が、シグナル配列を含まないモノクローナル抗体８．１０．３Ｆの軽鎖アミノ酸配列と少なくとも９５％同一である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
前記抗体または抗原結合部分の重鎖アミノ酸配列および軽鎖アミノ酸配列の両方が一緒に、シグナル配列を含まないモノクローナル抗体８．１０．３Ｆの重鎖アミノ酸配列および軽鎖アミノ酸配列と少なくとも９５％同一である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１７】
前記抗体または抗原結合部分の重鎖アミノ酸配列が、シグナル配列を含まないモノクローナル抗体８．１０．３Ｆの重鎖アミノ酸配列と少なくとも９７％同一である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１８】
前記抗体または抗原結合部分の軽鎖アミノ酸配列が、シグナル配列を含まないモノクローナル抗体８．１０．３Ｆの軽鎖アミノ酸配列と少なくとも９７％同一である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１９】
前記抗体または抗原結合部分の重鎖アミノ酸配列および軽鎖アミノ酸配列の両方が一緒に、シグナル配列を含まないモノクローナル抗体８．１０．３Ｆの重鎖アミノ酸配列および軽鎖アミノ酸配列と少なくとも９７％同一である、請求項１３に記載の方法。
【請求項２０】
前記抗体がモノクローナル抗Ｍ−ＣＳＦ抗体８．１０．３Ｆである、請求項１に記載の方法。
【請求項２１】
前記抗体または抗原結合部分が、抗体８．１０．３Ｆの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３、および軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２２】
前記抗体または抗原結合部分が、抗体８．１０．３Ｆの可変重鎖および可変軽鎖部分を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２３】
前記ループスが全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）である、請求項１に記載の方法。
【請求項２４】
前記ループスがループス腎炎である、請求項１に記載の方法。
【請求項２５】
前記ループスが皮膚ループスである、請求項１に記載の方法。
【請求項２６】
ループスの治療における抗Ｍ−ＣＳＦ抗体の効力が、症状、生物マーカー、組織学的試料、および生理的状態から選択される状態の変化について、患者を検査することによって判定される、請求項１に記載の方法。
【請求項２７】
前記患者が、皮膚病変、タンパク尿症、リンパ節腫脹、血清Ｍ−ＣＳＦレベル、抗ｄｓＤＮＡ抗体レベル、ＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球集団、骨細胞マーカー、および腎臓の病態から選択される状態の変化について検査される、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
腎臓の病態が、マクロファージ浸潤、炎症性浸潤、タンパク質円柱、糸球体係蹄のサイズ、糸球体ＩｇＧ沈着、およびＣ３沈着から選択される状態を検査することによって判定される、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
患者を、表１Ｃ中の遺伝子、赤血球沈降速度（ＥＳＲ）、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）、補体（Ｃ３／Ｃ４）、Ｉｇレベル（ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＧ）、抗核抗体（ＡＮＡ）、可溶性核抗原（ＥＮＡ）、および抗ｄｓＤＮＡ抗体から選択される１つまたは複数の生物マーカーの変化について検査することができる、請求項２６に記載の方法。
【請求項３０】
ループスの治療を必要とする患者における、ループスの治療のための、請求項１から２３のいずれか一項に記載の抗Ｍ−ＣＳＦ抗体の使用。
【請求項３１】
前記ループスがＳＬＥである、請求項３０に記載の使用。
【請求項３２】
前記ループスがループス腎炎である、請求項３０に記載の使用。
【請求項３３】
前記ループスが皮膚ループスである、請求項３０に記載の使用。
【請求項３４】
ループスの治療用薬物の製造における、請求項１から２３のいずれか一項に記載の抗Ｍ−ＣＳＦ抗体の使用。
【請求項３５】
前記ループスがＳＬＥである、請求項３４に記載の使用。
【請求項３６】
前記ループスがループス腎炎である、請求項３４に記載の使用。
【請求項３７】
前記ループスが皮膚ループスである、請求項３４に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本願は、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれている、２０１１年１１月８日に出願された米国仮出願第６１／５５７，１７５号の利益を主張するものである。
【背景技術】
【０００２】
マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）は、コロニー刺激因子（ＣＳＦ）と呼ばれるタンパク質のファミリーのメンバーである。Ｍ−ＣＳＦは、ジスルフィド結合によって結合された２つのサブユニットから構成され、総分子量が４０ｋＤ〜９０ｋＤまで変化する、分泌型糖タンパク質または細胞表面糖タンパク質である（（Ｓｔａｎｌｅｙ  Ｅ．Ｒ．ら、Ｍｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．Ｄｅｖ．、４６：４〜１０（１９９７））。他のＣＳＦと同様に、Ｍ−ＣＳＦは、インターロイキン−１または腫瘍壊死因子−αなどのタンパク質に応答して、マクロファージ、単球、ならびに軟骨細胞および滑膜線維芽細胞などのヒト関節組織細胞によって産生される。Ｍ−ＣＳＦは、多能性造血前駆幹細胞からマクロファージコロニーの形成を刺激する（Ｓｔａｎｌｅｙ  Ｅ．Ｒ．ら、Ｍｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．Ｄｅｖ．、４６：４〜１０（１９９７））。
【０００３】
Ｍ−ＣＳＦは、典型的には、生物学的効果を発揮するために、その受容体であるｃ−ｆｍｓに結合する。ｃ−ｆｍｓは、５つの細胞外Ｉｇドメイン、１つの膜貫通型ドメイン、および２つのキナーゼドメインを含む細胞内ドメインを含有する。Ｍ−ＣＳＦがｃ−ｆｍｓに結合すると、この受容体は、ホモ二量体化し、ＪＡＫ／ＳＴＡＴ経路、ＰＩ３Ｋ経路、およびＥＲＫ経路を含めたシグナル伝達経路のカスケードを開始する。
【０００４】
Ｍ−ＣＳＦは、単球／マクロファージの機能、活性化、および生存の重要な制御因子である。いくつかの動物モデルにより、関節リウマチ（ＲＡ）、およびがんを含めた様々な疾患におけるＭ−ＣＳＦの役割が確認されている。マクロファージは、ＲＡにおける主要な効果細胞を含む。ＲＡにおける滑液マクロファージ浸潤の程度は、根底にある関節破壊の程度と密接に相関することが示されている。単球／マクロファージ、線維芽細胞、および内皮細胞によってリウマチ様関節内で内因的に産生されるＭ−ＣＳＦは、単球／マクロファージ系列の細胞に対して、その生存および骨を破壊する破骨細胞への分化を促進し、炎症促進性細胞機能、例えば、細胞毒性、スーパーオキシド生成、食作用、走化性、および二次的サイトカイン産生などを亢進するように作用する。例えば、ラットのストレプトコッカス・アガラクチアエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ）の超音波誘導による実験的関節炎モデルにおいて、Ｍ−ＣＳＦを用いて処置すると、病態が亢進する（Ａｂｄ，Ａ．Ｈ．ら、Ｌｙｍｐｈｏｋｉｎｅ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｒｅｓ．１０：４３〜５０（１９９１））。同様に、ＲＡのモデルである、コラーゲン誘発関節炎（ＣＩＡ）のマウスモデルにおいて、Ｍ−ＣＳＦを皮下注射すると、ＲＡの疾患症状が著しく憎悪する（Ｃａｍｐｂｅｌｌ  Ｉ．Ｋ．ら、Ｊ．Ｌｅｕｋ．Ｂｉｏｌ．６８：１４４〜１５０（２０００））。さらに、ＲＡおよび他の自己免疫疾患に非常にかかりやすいＭＲＬ／ｌｐｒマウスの基礎Ｍ−ＣＳＦ血清濃度は高い（Ｙｕｉ  Ｍ．Ａ．ら、Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１３９：２５５〜２６１（１９９１））。ＣＩＡの維持に内因性Ｍ−ＣＳＦが必要なことは、Ｍ−ＣＳＦ中和マウスモノクローナル抗体による、すでに罹患している疾患の重症度の著しい低減によって実証された（Ｃａｍｐｂｅｌｌ  Ｉ．Ｋ．ら、Ｊ．Ｌｅｕｋ．Ｂｉｏｌ．６８：１４４〜１５０（２０００））。
【０００５】
がんに関しては、アンチセンスオリゴヌクレオチドによってコロニー刺激因子を阻害すると、マクロファージ媒介ＥＣＭ分解を減速させることによって、マウスにおける胎生期腫瘍異種移植片および結腸腫瘍異種移植片中の腫瘍増殖が抑制される（Ｓｅｙｅｄｈｏｓｓｅｉｎ，Ａ．ら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、６２：５３１７〜５３２４（２００２））。
【０００６】
ｃ−ｆｍｓへのＭ−ＣＳＦの結合、およびその引き続く単球／マクロファージの活性化は、いくつかの疾患状態において重要である。ＲＡおよびがんに加えて、Ｍ−ＣＳＦ関連疾患状態の他の例には、単球／マクロファージ、および関連する細胞型が役割を果たす、骨粗鬆症、破壊性関節炎、アテローム発生、糸球体腎炎、川崎病、およびＨＩＶ−１感染が含まれる。例えば、破骨細胞は、マクロファージと同様であり、Ｍ−ＣＳＦによってある程度調節される。破骨細胞成熟の初期段階におけるＭ−ＣＳＦによって誘導される増殖シグナルおよび分化シグナルは、これらの引き続く骨中の破骨細胞活動に必須である。
【０００７】
局所的な骨侵食、およびよりびまん性の傍関節性骨粗鬆症の両方の形態での破骨細胞媒介骨量減少は、ＲＡにおける主要な解決されていない問題である。この骨量減少の結果には、関節変形、機能的障害、骨折のリスクの増大、および死亡率の上昇が含まれる。Ｍ−ＣＳＦは、破骨細胞形成に比類なく必須であり、関節炎の動物モデルにおいてこのサイトカインを実験的に遮断すると、関節破壊を阻止することに成功する。同様の破壊的な経路も、乾癬性関節炎などの他の形態の破壊性関節炎において働くことが知られており、同様のインターベンションの場を代表し得る。
【０００８】
閉経後骨量減少は、エストロゲン欠乏の結果として、過増殖性破骨細胞媒介骨吸収から骨形成が外れることに続いて、不完全な骨再形成をもたらす。阻止抗体を使用してＭ−ＣＳＦをインビボで中和すると、マウスにおいて、破骨細胞数の上昇、骨吸収の増大、および卵巣摘出によって誘導されて生じる骨量減少が完全に防止されることが示されている。
【０００９】
いくつかの一連の証拠により、アテローム発生、および動脈壁への機械的外傷後の増殖性内膜過形成における、Ｍ−ＣＳＦの中心的な役割が示されている。アテローム硬化性病変におけるすべての主要な細胞型は、Ｍ−ＣＳＦを発現することが示されており、これは、酸化されたリポタンパク質に曝されることによってさらに上方制御される。中和ｃ−ｆｍｓ抗体でＭ−ＣＳＦシグナル伝達を遮断すると、高脂肪食で維持されたアポリポタンパク質Ｅ欠乏マウスの大動脈根におけるマクロファージ由来泡沫細胞の蓄積が低減する。
【００１０】
実験的な糸球体腎炎およびヒト糸球体腎炎の両方において、糸球体のＭ−ＣＳＦの発現は、局所的なマクロファージの蓄積、活性化、および増殖と共局在化し、糸球体傷害およびタンパク尿症の程度と相関することが見出されている。Ｍ−ＣＳＦシグナル伝達を、その受容体のｃ−ｆｍｓに対する抗体を介して遮断すると、実験的な片側尿管閉塞によって誘導された腎臓炎症反応中のマウスにおける局所的なマクロファージ蓄積が著しく下方制御される。
【００１１】
川崎病（ＫＤ）は、原因が分かっていない急性の、熱性の小児血管炎である。その最も一般的で深刻な合併症は、動脈瘤性拡張の形態で冠血管系を巻き込む。血清Ｍ−ＣＳＦレベルが、急性期の川崎病において著しく上昇し、静脈内免疫グロブリンで処置された後に正常化する。巨細胞性動脈炎（ＧＣＡ）は、高齢者に主に発生する炎症性の血管障害であり、この障害では、Ｔ細胞およびマクロファージが中動脈および大動脈の壁を浸潤し、動脈閉塞に続発する失明および脳卒中を含む臨床的帰結に至る。ＧＣＡにおけるマクロファージの能動的関与は、血管病変部内のマクロファージ由来炎症性メディエーターのレベルの上昇の存在によって立証されている。
【００１２】
Ｍ−ＣＳＦは、インビトロで、ヒト単球由来マクロファージを、ＨＩＶ−１感染に対してより感受性にすることが報告されている。最近の研究では、Ｍ−ＣＳＦは、単球由来マクロファージが感染した状態になる頻度、感染細胞１個当たりに発現されるＨＩＶ  ｍＲＮＡの量、および感染培養液１つ当たりに発現されるプロウイルスＤＮＡのレベルを上昇させた。
【００１３】
様々な疾患におけるＭ−ＣＳＦの役割を考慮すると、Ｍ−ＣＳＦ活性を阻害するための方法が望まれる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１４】
【特許文献１】米国仮出願第６１／５５７，１７５号
【特許文献２】ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０２９３９０号
【特許文献３】ＷＯ２００５／０３０１２４
【特許文献４】国際特許出願第ＷＯ０３／４８７３１号
【特許文献５】米国特許第５，１５１，５１０号
【特許文献６】米国特許第５，９１６，７７１号
【特許文献７】米国特許第５，９３９，５９８号
【特許文献８】米国特許第５，９８５，６１５号
【特許文献９】米国特許第５，９９８，２０９号
【特許文献１０】米国特許第６，０７５，１８１号
【特許文献１１】米国特許第６，０９１，００１号
【特許文献１２】米国特許第６，１１４，５９８号
【特許文献１３】米国特許第６，１３０，３６４号
【特許文献１４】米国特許第６，１６２，９６３号
【特許文献１５】米国特許第６，１５０，５８４号
【特許文献１６】ＷＯ９１／１０７４１
【特許文献１７】ＷＯ９４／０２６０２
【特許文献１８】ＷＯ９６／３４０９６
【特許文献１９】ＷＯ９６／３３７３５
【特許文献２０】ＷＯ９８／１６６５４
【特許文献２１】ＷＯ９８／２４８９３
【特許文献２２】ＷＯ９８／５０４３３
【特許文献２３】ＷＯ９９／４５０３１
【特許文献２４】ＷＯ９９／５３０４９
【特許文献２５】ＷＯ００／０９５６０
【特許文献２６】ＷＯ００／０３７５０４
【特許文献２７】米国特許第５，９９４，６１９号
【特許文献２８】米国特許第５，５４５，８０７号
【特許文献２９】米国特許第５，５４５，８０６号
【特許文献３０】米国特許第５，５６９，８２５号
【特許文献３１】米国特許第５，６２５，１２６号
【特許文献３２】米国特許第５，６３３，４２５号
【特許文献３３】米国特許第５，６６１，０１６号
【特許文献３４】米国特許第５，７７０，４２９号
【特許文献３５】米国特許第５，７８９，６５０号
【特許文献３６】米国特許第５，８１４，３１８号
【特許文献３７】米国特許第５，５９１，６６９号
【特許文献３８】米国特許第５，６１２，２０５号
【特許文献３９】米国特許第５，７２１，３６７号
【特許文献４０】米国特許第５，７８９，２１５号
【特許文献４１】米国特許第５，６４３，７６３号
【特許文献４２】米国特許第５，１６８，０６２号
【特許文献４３】米国特許第４，５１０，２４５号
【特許文献４４】米国特許第４，９６８，６１５号
【特許文献４５】米国特許第６，５１７，５２９号
【特許文献４６】米国特許第４，３９９，２１６号
【特許文献４７】米国特許第４，６３４，６６５号
【特許文献４８】米国特許第５，１７９，０１７号
【特許文献４９】米国特許第４，９１２，０４０号
【特許文献５０】米国特許第４，７４０，４６１号
【特許文献５１】米国特許第４，９５９，４５５号
【特許文献５２】欧州特許第０２１６８４６号
【特許文献５３】欧州特許第０２５６０５５号
【特許文献５４】欧州特許第０３２３９９７号
【特許文献５５】欧州特許出願第８９３０３９６４．４号
【特許文献５６】米国特許第５，８２７，６９０号
【特許文献５７】米国特許第５，７５６，６８７号
【特許文献５８】米国特許第５，７５０，１７２号
【特許文献５９】米国特許第５，７４１，９５７号
【特許文献６０】米国特許第６，０４６，０３７号
【特許文献６１】ＵＳ５，９５９，１７７
【特許文献６２】米国特許６，４１７，４２９号
【特許文献６３】米国特許第５，２２３，４０９号
【特許文献６４】ＰＣＴ公開第ＷＯ９２／１８６１９号
【特許文献６５】ＰＣＴ公開第ＷＯ９１／１７２７１号
【特許文献６６】ＰＣＴ公開第ＷＯ９２／２０７９１号
【特許文献６７】ＰＣＴ公開第ＷＯ９２／１５６７９号
【特許文献６８】ＰＣＴ公開第ＷＯ９３／０１２８８号
【特許文献６９】ＰＣＴ公開第ＷＯ９２／０１０４７号
【特許文献７０】ＰＣＴ公開第ＷＯ９２／０９６９０号
【特許文献７１】ＰＣＴ公開第ＷＯ９３／０６２１３号
【特許文献７２】ＰＣＴ公開第ＷＯ９８／５２９７６号
【特許文献７３】ＰＣＴ公開第ＷＯ００／３４３１７号
【特許文献７４】ＰＣＴ公開第ＷＯ００／０９５６０号
【特許文献７５】ＷＯ９６／３３１７２
【特許文献７６】ＷＯ９６／２７５８３
【特許文献７７】欧州特許出願第９７３０４９７１．１
【特許文献７８】欧州特許出願第９９３０８６１７．２号
【特許文献７９】ＷＯ９８／０７６９７
【特許文献８０】ＷＯ９８／０３５１６
【特許文献８１】ＷＯ９８／３４９１８
【特許文献８２】ＷＯ９８／３４９１５
【特許文献８３】ＷＯ９８／３３７６８
【特許文献８４】ＷＯ９８／３０５６６
【特許文献８５】欧州特許公開第６０６，０４６号
【特許文献８６】欧州特許公開第９３１，７８８号
【特許文献８７】ＷＯ９０／０５７１９
【特許文献８８】ＷＯ９９／５２９１０
【特許文献８９】ＷＯ９９／５２８８９
【特許文献９０】ＷＯ９９／２９６６７
【特許文献９１】ＰＣＴ国際出願第ＰＣＴ／ＩＢ９８／０１１１３号
【特許文献９２】欧州特許出願第９９３０２２３２．１号
【特許文献９３】英国特許出願第９９１２９６１．１号
【特許文献９４】米国仮出願第６０／１４８，４６４号
【特許文献９５】米国特許第５，８６３，９４９号
【特許文献９６】米国特許第５，８６１，５１０号
【特許文献９７】欧州特許公開７８０，３８６号
【特許文献９８】ＷＯ９５／１９９７０
【特許文献９９】ＷＯ９８／１４４５１
【特許文献１００】ＷＯ９８／０２４３４
【特許文献１０１】米国特許第５，７４７，４９８号
【特許文献１０２】ＷＯ９９／２４４４０
【特許文献１０３】ＰＣＴ国際出願ＰＣＴ／ＩＢ９９／００７９７号
【特許文献１０４】ＷＯ９５／２１６１３
【特許文献１０５】ＷＯ９９／６１４２２
【特許文献１０６】米国特許第５，８３４，５０４号
【特許文献１０７】ＷＯ９８／５０３５６
【特許文献１０８】米国特許第５，８８３，１１３号
【特許文献１０９】米国特許第５，８８６，０２０号
【特許文献１１０】米国特許第５，７９２，７８３号
【特許文献１１２】ＷＯ９９／１０３４９
【特許文献１１３】ＷＯ９７／３２８５６
【特許文献１１４】ＷＯ９７／２２５９６
【特許文献１１５】ＷＯ９８／５４０９３
【特許文献１１６】ＷＯ９８／０２４３８
【特許文献１１７】ＷＯ９９／１６７５５
【特許文献１１８】ＷＯ９８／０２４３７
【特許文献１１９】ＷＯ９９／３５１４６
【特許文献１２０】ＷＯ９９／３５１３２
【特許文献１２１】ＷＯ９７／１３７６０
【特許文献１２２】米国特許第５，５８７，４５８号
【特許文献１２３】米国特許第５，８７７，３０５号
【特許文献１２４】米国特許第６，４６５，４４９号
【特許文献１２５】米国特許第６，２８４，７６４号
【非特許文献】
【００１５】
【非特許文献１】Ｓｔａｎｌｅｙ  Ｅ．Ｒ．ら、Ｍｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．Ｄｅｖ．、４６：４〜１０（１９９７）
【非特許文献２】Ａｂｄ，Ａ．Ｈ．ら、Ｌｙｍｐｈｏｋｉｎｅ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｒｅｓ．１０：４３〜５０（１９９１）
【非特許文献３】Ｃａｍｐｂｅｌｌ  Ｉ．Ｋ．ら、Ｊ．Ｌｅｕｋ．Ｂｉｏｌ．６８：１４４〜１５０（２０００）
【非特許文献４】Ｙｕｉ  Ｍ．Ａ．ら、Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１３９：２５５〜２６１（１９９１）
【非特許文献５】Ｃａｍｐｂｅｌｌ  Ｉ．Ｋ．ら、Ｊ．Ｌｅｕｋ．Ｂｉｏｌ．６８：１４４〜１５０（２０００）
【非特許文献６】Ｓｅｙｅｄｈｏｓｓｅｉｎ，Ａ．ら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、６２：５３１７〜５３２４（２００２）
【非特許文献７】Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、２版、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．（１９８９）
【非特許文献８】Ａｕｓｕｂｅｌら、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ（１９９２）
【非特許文献９】ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．（１９９０）
【非特許文献１０】Ｐｒｏｔｅｉｎｓ、Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ（Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ編、Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８４））
【非特許文献１１】Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（Ｃ．ＢｒａｎｄｅｎおよびＪ．Ｔｏｏｚｅ編、Ｇａｒｌａｎｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．（１９９１））
【非特許文献１２】Ｔｈｏｒｎｔｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ  ３５４：１０５（１９９１）
【非特許文献１３】Ｆａｕｃｈｅｒｅ、Ｊ．Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｒｅｓ．１５：２９（１９８６）
【非特許文献１４】ＶｅｂｅｒおよびＦｒｅｉｄｉｎｇｅｒ、ＴＩＮＳ、ｐ．３９２（１９８５）
【非特許文献１５】Ｅｖａｎｓら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３０：１２２９（１９８７）
【非特許文献１６】ＲｉｚｏおよびＧｉｅｒａｓｃｈ、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６１：３８７（１９９２）
【非特許文献１７】Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、７章（Ｐａｕｌ，Ｗ．編、２版、Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎ．Ｙ．（１９８９）
【非特許文献１８】Ｋａｂａｔ、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．（１９８７および１９９１））
【非特許文献１９】Ｃｈｏｔｈｉａ＆Ｌｅｓｋ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１〜９１７（１９８７）
【非特許文献２０】Ｃｈｏｔｈｉａら、Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７８〜８８３（１９８９）
【非特許文献２１】Ｗａｒｄら、Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４〜５４６（１９８９）
【非特許文献２２】Ｂｉｒｄら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３〜４２６（１９８８）
【非特許文献２３】Ｈｕｓｔｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９〜５８８３（１９８８）
【非特許文献２４】Ｈｏｌｌｉｇｅｒ  Ｐ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４〜６４４８（１９９３）
【非特許文献２５】Ｐｏｌｊａｋ  Ｒ．Ｊ．ら、Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ２：１１２１〜１１２３（１９９４）
【非特許文献２６】Ｂｏｗｉｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５３：１６４（１９９１）
【非特許文献２７】Ｊｏｎｓｓｏｎ  Ｕ．ら、Ａｎｎ．Ｂｉｏｌ．Ｃｌｉｎ．５１：１９〜２６（１９９３）
【非特許文献２８】Ｊｏｎｓｓｏｎ  Ｕ．ら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １１：６２０〜６２７（１９９１）
【非特許文献２９】Ｊｏｎｓｓｏｎ  Ｂ．ら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．８：１２５〜１３１（１９９５）
【非特許文献３０】Ｊｏｈｎｓｓｏｎ  Ｂ．ら、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９８：２６８〜２７７（１９９１）
【非特許文献３１】Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ−Ａ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（２版、Ｅ．Ｓ．ＧｏｌｕｂおよびＤ．Ｒ．Ｇｒｅｎ編、Ｓｉｎａｕｅｒ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ、Ｓｕｎｄｅｒｌａｎｄ、Ｍａｓｓ．（１９９１）
【非特許文献３２】ＬａＰｌａｎｃｈｅら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１４：９０８１（１９８６）
【非特許文献３３】Ｓｔｅｃら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１０６：６０７７（１９８４）
【非特許文献３４】Ｓｔｅｉｎら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１６：３２０９（１９８８）
【非特許文献３５】Ｚｏｎら、Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  ６：５３９（１９９１）
【非特許文献３６】Ｚｏｎら、Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｏｇｕｅｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ、８７〜１０８頁（Ｆ．Ｅｃｋｓｔｅｉｎ編、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｅｎｇｌａｎｄ（１９９１））
【非特許文献３７】ＵｈｌｍａｎｎおよびＰｅｙｍａｎ、Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ９０：５４３（１９９０）
【非特許文献３８】Ｐｅａｒｓｏｎ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．１８３：６３〜９８（１９９０）
【非特許文献３９】Ｐｅａｒｓｏｎ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１３２：１８５〜２１９（２０００）
【非特許文献４０】Ｐｅａｒｓｏｎ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．２６６：２２７〜２５８（１９９６）
【非特許文献４１】Ｐｅａｒｓｏｎ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７６：７１〜８４（１９９８）
【非特許文献４２】ＧＣＧ  Ｖｅｒｓｉｏｎ  ６．１
【非特許文献４３】Ｐｅａｒｓｏｎ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４３：３０７〜３１（１９９４）
【非特許文献４４】Ｇｏｎｎｅｔら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５６：１４４３〜４５（１９９２）
【非特許文献４５】Ａｌｔｓｃｈｕｌら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３〜４１０（１９９０）
【非特許文献４６】Ａｌｔｓｃｈｕｌら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９〜４０２（１９９７）
【非特許文献４７】Ｌｅｗｉｓ  Ｄ．Ａ．ら、Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ、６６（５）：５８５〜９５（１９９４）
【非特許文献４８】Ｇｒｅｅｎら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ７：１３〜２１（１９９４）
【非特許文献４９】Ｍｅｎｄｅｚら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  １５：１４６〜１５６（１９９７）
【非特許文献５０】ＧｒｅｅｎおよびＪａｋｏｂｏｖｉｔｓ、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８８：４８３〜４９５（１９９８）
【非特許文献５１】Ｂａｂｃｏｏｋ，Ｊ．Ｓ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９３：７８４３〜４８、１９９６
【非特許文献５２】Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓら、ＥＭＢＯ  Ｊ．、１３：３２４５〜３２６０（１９９４）
【非特許文献５３】Ｎｉｓｓｉｍら、ＥＭＢＯ  Ｊ．、１３：６９２〜６９８（１９９４）
【非特許文献５４】Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓら、ＥＭＢＯ  Ｊ．、１２：７２５〜７３４（１９９３）
【非特許文献５５】Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、５版、ＮＩＨ  Ｐｕｂｌ．Ｎｏ．９１−３２４２
【非特許文献５６】Ｈｏｇａｎら、Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｍｏｕｓｅ  Ｅｍｂｒｙｏ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  ２版、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ（１９９９）
【非特許文献５７】Ｊａｃｋｓｏｎら、Ｍｏｕｓｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ（２０００）
【非特許文献５８】Ｐｉｎｋｅｒｔ、Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  Ａｎｉｍａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ（１９９９）
【非特許文献５９】Ｆｕｃｈｓら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：１３７０〜１３７２（１９９１）
【非特許文献６０】Ｈａｙら、Ｈｕｍ．Ａｎｔｉｂｏｄ．Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ３：８１〜８５（１９９２）
【非特許文献６１】Ｈｕｓｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４６：１２７５〜１２８１（１９８９）
【非特許文献６２】ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２〜５５４（１９９０）
【非特許文献６３】Ｈａｗｋｉｎｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２６：８８９〜８９６（１９９２）
【非特許文献６４】Ｃｌａｃｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４〜６２８（１９９１）
【非特許文献６５】Ｇｒａｍら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：３５７６〜３５８０（１９９２）
【非特許文献６６】Ｇａｒｒａｄら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：１３７３〜１３７７（１９９１）
【非特許文献６７】Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら、Ｎｕｃ．Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ．１９：４１３３〜４１３７（１９９１）
【非特許文献６８】Ｂａｒｂａｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８８：７９７８〜７９８２（１９９１）
【非特許文献６９】Ａａｌｂｅｒｓｅ，Ｒ．Ｃ．およびＳｃｈｕｕｒｍａｎ、Ｊ．、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１０５：９〜１９（２００２）
【非特許文献７０】Ｉｌｌら、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．１０：９４９〜５７（１９９７）
【非特許文献７１】Ｍａｒｔｉｎら、ＥＭＢＯ  Ｊ．１３：５３０３〜９（１９９４）
【非特許文献７２】Ｈｏｌｌｉｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４〜６４４８（１９９３）
【非特許文献７３】Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら、ＥＭＢＯ  Ｊ．１０：３６５５〜３６５９（１９９１）
【非特許文献７４】Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ（補遺）７：５１〜５２（１９９２）
【非特許文献７５】Ｓｏｎｇｓｉｖｉｌａｉ＆Ｌａｃｈｍａｎｎ、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７９：３１５〜３２１（１９９０）
【非特許文献７６】Ｋｏｓｔｅｌｎｙら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１５４７〜１５５３（１９９２）
【非特許文献７７】Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ編、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９７８）
【非特許文献７８】ＧａｌｆｒｅおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．７３：３〜４６、１９８１
【非特許文献７９】Ｂａｂｃｏｏｋ，Ｊ．Ｓ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９３：７８４３〜４８、１９９６
【非特許文献８０】Ｚｉｅｇｌｅｒ−Ｈｅｉｔｂｒｏｃｋ  Ｈ．Ｗ．、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ  １７：４２４〜４２８（１９９６）
【非特許文献８１】Ｆｒａｎｋｅｎｂｅｒｇｅｒ，Ｍ．Ｔ．ら、Ｂｌｏｏｄ  ８７：３７３〜３７７（１９９６）
【非特許文献８２】Ｓａｌｅｈ  Ｍ．Ｎ．ら、Ｂｌｏｏｄ  ８５：２９１０〜２９１７（１９９５）
【非特許文献８３】Ｐｅｒｒｙら、Ｊ  Ｂｉｏｍｅｄ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１１：２７１６９４．電子出版２０１１年２月１４日
【非特許文献８４】Ｗａｔｓｏｎら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．１７６（６）：１６４５〜５６（１９９２）
【非特許文献８５】Ｍｉｈａｒａら、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．１０６（１）：９１〜１０１（２００２）
【非特許文献８６】Ｌｅｎｄａら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７３（７）：４６４４〜４７５４（２００４）
【非特許文献８７】Ｔｈｅｏｆｉｌｏｐｏｕｌｏｓ＆Ｄｉｘｏｎ、Ａｄｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．３７：２６９〜３９０（１９８５）
【非特許文献８８】Ｃａｍｐｂｅｌｌ  Ｉ．Ｋ．ら、Ｊ．Ｌｅｕｋ．Ｂｉｏｌ．６８：１４４〜１５０（２０００）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１６】
治療用抗Ｍ−ＣＳＦ抗体が決定的に必要である。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
本発明は、ヒトＭ−ＣＳＦに特異的に結合し、Ｍ−ＣＳＦアンタゴニストとして作用する、単離されたヒト抗体または抗原結合部分、および前記抗体または部分を含む組成物を提供する。
【００１８】
本発明は、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体の重鎖および／もしくは軽鎖、これらの可変領域、もしくはこれらの抗原結合部分、またはそのような治療に有効な本発明の抗体、抗体鎖もしくはその可変領域をコードする核酸分子、ならびに薬学的に許容できる担体を含む組成物も提供する。ある特定の実施形態では、この組成物は、治療剤または診断剤などの別の成分をさらに含むことができる。診断法および治療法も、本発明によって提供される。ある特定の実施形態では、この組成物は、特定の疾患または状態を治療または予防するのに必要な治療有効量で使用される。
【００１９】
本発明は、様々な疾患および状態、例えば、それだけに限らないが、ループス、炎症、がん、アテローム発生、神経学的障害、および心障害などを、有効量の本発明の抗Ｍ−ＣＳＦ抗体、またはその抗原結合部分や、前記抗体、またはこれらの重鎖および／もしくは軽鎖、可変領域、または抗原結合部分をコードする核酸を用いて治療または予防するための方法も提供する。
【００２０】
本発明は、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体、またはこれらの抗原結合部分を産生する、ハイブリドーマなどの単離された細胞株を提供する。
【００２１】
本発明は、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体の重鎖および／もしくは軽鎖、これらの可変領域、またはこれらの抗原結合部分をコードする核酸分子も提供する。
【００２２】
本発明は、核酸分子を含むベクターおよび宿主細胞、ならびに核酸分子によってコードされるポリペプチドを組換えで生成する方法を提供する。
【００２３】
抗Ｍ−ＣＳＦ抗体の重鎖および／もしくは軽鎖、またはこれらの抗原結合部分を発現する非ヒトトランスジェニック動物または植物も提供される。
【００２４】
抗Ｍ−ＣＳＦ抗体、またはこれらの抗原結合部分、組成物、細胞株、核酸分子、ベクター、宿主細胞、および抗Ｍ−ＣＳＦ抗体を使用して疾患を治療または予防する方法は、本明細書、ならびにその全体が参照により本明細書に組み込まれている、ＷＯ２００５／０３０１２４として公開されたＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０２９３９０号に完全に記載されている。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１Ａ】抗Ｍ−ＣＳＦ抗体が、経時的に、オスおよびメスのサルにおいて、総単球数の用量関連減少をもたらしたことを例示するグラフである。単球数は、Ａｂｂｏｔｔ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  Ｉｎｃ．のＣｅｌｌ  Ｄｙｎ  ｓｙｓｔｅｍを使用して、光散乱によって求めた。約５分の期間にわたって、ビヒクル、または３．７９ｍＬ／ｋｇの用量体積中、０、０．１、１、または５ｍｇ／ｋｇの抗体８．１０．３を投与して２４時間後から３週間後まで単球数をモニターした。図１Ａはオスのサルである。
【図１Ｂ】抗Ｍ−ＣＳＦ抗体が、経時的に、オスおよびメスのサルにおいて、総単球数の用量関連減少をもたらしたことを例示するグラフである。単球数は、Ａｂｂｏｔｔ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  Ｉｎｃ．のＣｅｌｌ  Ｄｙｎ  ｓｙｓｔｅｍを使用して、光散乱によって求めた。約５分の期間にわたって、ビヒクル、または３．７９ｍＬ／ｋｇの用量体積中、０、０．１、１、または５ｍｇ／ｋｇの抗体８．１０．３を投与して２４時間後から３週間後まで単球数をモニターした。図１Ｂはメスのサルについてのグラフである。
【図２Ａ】抗Ｍ−ＣＳＦ処置により、オスおよびメスのサルにおいて、ＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球の百分率が低減したことを例示するグラフである。約５分の期間にわたって、ビヒクル、または３．７９ｍＬ／ｋｇの用量体積中、０、０．１、１、または５ｍｇ／ｋｇの抗体８．１０．３を投与して０〜２１日後。試験した各サルについて、ＣＤ１４＋ＣＤ１６＋サブセット内の単球の百分率は、８．１０．３を注射した後の１日目、３日目、１７日目、１４日目、および２１日目に、それぞれ採血をした後に求めた。図２Ａはオスのサルである。
【図２Ｂ】抗Ｍ−ＣＳＦ処置により、オスおよびメスのサルにおいて、ＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球の百分率が低減したことを例示するグラフである。約５分の期間にわたって、ビヒクル、または３．７９ｍＬ／ｋｇの用量体積中、０、０．１、１、または５ｍｇ／ｋｇの抗体８．１０．３を投与して０〜２１日後。試験した各サルについて、ＣＤ１４＋ＣＤ１６＋サブセット内の単球の百分率は、８．１０．３を注射した後の１日目、３日目、１７日目、１４日目、および２１日目に、それぞれ採血をした後に求めた。図２Ｂはメスのサルである。
【図３Ａ】抗Ｍ−ＣＳＦ処置により、単球の検査前レベルと比較した場合、抗体８．１０．３Ｆおよび抗体９．１４．４Ｉのすべての用量で、総単球の変化率が減少したことを例示するグラフである。図３Ａは抗体８．１０．３Ｆを使用する実験から収集したデータを示す。
【図３Ｂ】抗Ｍ−ＣＳＦ処置により、単球の検査前レベルと比較した場合、抗体８．１０．３Ｆおよび抗体９．１４．４Ｉのすべての用量で、総単球の変化率が減少したことを例示するグラフである。図３Ｂは抗体９．１４．４Ｉを使用する実験から収集したデータを示す。
【図４】対応する可変領域遺伝子の生殖系列アミノ酸配列と比較した、２６の抗Ｍ−ＣＳＦ抗体に由来する軽鎖可変領域および重鎖可変領域の予測アミノ酸配列の配列アライメントを示す図である。抗体配列と生殖系列遺伝子配列の間の差異は、太字活字で示されている。ダッシュは、生殖系列からの変化がまったくないことを表す。各アライメントにおける下線を引いた配列は、左から右に、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、およびＦＲ４の配列を表す。
【図４Ａ】生殖系列ＶκＯ１２，Ｊκ３配列（配列番号：１０３）に対する抗体２５２の軽鎖可変領域の予測アミノ酸配列（配列番号４の残基２１〜１２７）のアライメントを示す図である。
【図４Ｂ】生殖系列ＶκＯ１２、Ｊκ３配列（配列番号１０３）に対する抗体８８の軽鎖可変領域の予測アミノ酸配列（配列番号８の残基２１〜１２７）のアライメントを示す図である。
【図４Ｃ】生殖系列ＶκＬ２、Ｊκ３配列（配列番号１０７）に対する抗体１００の軽鎖可変領域の予測アミノ酸配列（配列番号１２の残基２１〜１２７）のアライメントを示す図である。
【図４Ｄ】生殖系列ＶκＬ５、Ｊκ３配列（配列番号１０９）に対する抗体３．８．３の軽鎖可変領域の予測アミノ酸配列（配列番号１６の残基２３〜１３０）のアライメントを示す図である。
【図４Ｅ】生殖系列ＶκＬ５、Ｊκ４配列（配列番号１１７）に対する抗体２．７．３の軽鎖可変領域の予測アミノ酸配列（配列番号２０の残基２３〜１３０）のアライメントを示す図である。
【図４Ｆ】生殖系列ＶκＢ３、Ｊκ１配列（配列番号１１２）に対する抗体１．１２０．１の軽鎖可変領域の予測アミノ酸配列（配列番号２４の残基２１〜１３４）のアライメントを示す図である。
【図４Ｇ】生殖系列ＶＨ３−１１、ＤＨ７−２７  ＪＨ６配列（配列番号１０６）に対する抗体２５２の重鎖可変領域の予測アミノ酸配列（配列番号２の残基２０〜１３６）のアライメントを示す図である。
【図４Ｈ】生殖系列ＶＨ３−７、ＤＨ６−１３、ＪＨ４配列（配列番号１０５）に対する抗体８８の重鎖可変領域の予測アミノ酸配列（配列番号６の残基２０〜１３８）のアライメントを示す図である。
【図４Ｉ】生殖系列ＶＨ３−２３、ＤＨ１−２６、ＪＨ４配列（配列番号１０４）に対する抗体１００の重鎖可変領域の予測アミノ酸配列（配列番号１０の残基２０〜１４１）のアライメントを示す図である。
【図４Ｊ】生殖系列ＶＨ３−１１、ＤＨ７−２７、ＪＨ４配列（配列番号１０８）に対する抗体３．８．３の重鎖可変領域の予測アミノ酸配列（配列番号１４の残基２０〜１３５）のアライメントを示す図である。
【図４Ｋ】生殖系列ＶＨ３−３３、ＤＨ１−２６、ＪＨ４配列（配列番号１１０）に対する抗体２．７．３の重鎖可変領域の予測アミノ酸配列（配列番号１８の残基２０〜１３７）のアライメントを示す図である。
【図４Ｌ】生殖系列ＶＨ１−１８、ＤＨ４−２３、ＪＨ４配列（配列番号１１１）に対する抗体１．１２０．１の重鎖可変領域の予測アミノ酸配列（配列番号２２の残基２０〜１３９）のアライメントを示す図である。
【図４Ｍ】生殖系列ＶκＡ２７、Ｊκ４配列（配列番号１１４）に対する抗体８．１０．３の軽鎖可変領域の予測アミノ酸配列（配列番号４４の残基２１〜１２９）のアライメントを示す図である。
【図４Ｎ】生殖系列ＶＨ３−４８、ＤＨ１−２６、ＪＨ４ｂ配列（配列番号１１３）に対する抗体８．１０．３の重鎖可変領域の予測アミノ酸配列（配列番号３０の残基２０〜１４１）のアライメントを示す図である。
【図４Ｏ】生殖系列ＶκＯ１２、Ｊκ３配列（配列番号１０３）に対する抗体９．１４．４の軽鎖可変領域の予測アミノ酸配列（配列番号２８の残基２３〜１３０）のアライメントを示す図である。
【図４Ｐ】生殖系列ＶＨ３−１１、ＤＨ７−２７、ＪＨ４ｂ配列（配列番号１１６）に対する抗体９．１４．４の重鎖可変領域の予測アミノ酸配列（配列番号３８の残基２０〜１３５）のアライメントを示す図である。
【図４Ｑ】生殖系列ＶκＯ１２、Ｊκ３配列（配列番号１０３）に対する抗体９．７．２の軽鎖可変領域の予測アミノ酸配列（配列番号４８の残基２３〜１３０）のアライメントを示す図である。
【図４Ｒ】生殖系列ＶＨ３−１１、ＤＨ６−１３、ＪＨ６ｂ配列（配列番号１１５）に対する抗体９．７．２の重鎖可変領域の予測アミノ酸配列（配列番号４６の残基２０〜１３６）のアライメントを示す図である。
【図４Ｓ】生殖系列ＶκＯ１２  Ｊκ３配列（配列番号１０３）に対する抗体９．１４．４Ｉの軽鎖可変領域の予測アミノ酸配列（配列番号２８の残基２３〜１３０）のアライメントを示す図である。
【図４Ｔ】生殖系列ＶＨ３−１１、ＤＨ７−２７、ＪＨ４ｂ配列（配列番号１１６）に対する抗体９．１４．４Ｉの重鎖可変領域の予測アミノ酸配列（配列番号２６の残基２０〜１３５）のアライメントを示す図である。
【図４Ｕ】生殖系列ＶκＡ２７、Ｊκ４配列（配列番号１１４）に対する抗体８．１０．３Ｆの軽鎖可変領域の予測アミノ酸配列（配列番号３２の残基２１〜１２９）のアライメントを示す図である。
【図４Ｖ】生殖系列ＶＨ３−４８、ＤＨ１−２６、ＪＨ４ｂ配列（配列番号１１３）に対する抗体８．１０．３Ｆの重鎖可変領域の予測アミノ酸配列（配列番号３０の残基２０〜１４１）のアライメントを示す図である。
【図４Ｗ】生殖系列ＶκＯ１２、Ｊκ３配列（配列番号１０３）に対する抗体９．７．２ＩＦの軽鎖可変領域の予測アミノ酸配列（配列番号３６の残基２３〜１３０）のアライメントを示す図である。
【図４Ｘ】生殖系列ＶＨ３−１１、ＤＨ６−１３、ＪＨ６ｂ配列（配列番号１１５）に対する抗体９．７．２ＩＦの重鎖可変領域の予測アミノ酸配列（配列番号３４の残基２０〜１３６）のアライメントを示す図である。
【図４Ｙ】生殖系列ＶκＯ１２、Ｊκ３配列（配列番号１０３）に対する抗体９．７．２Ｃ−Ｓｅｒの軽鎖可変領域の予測アミノ酸配列（配列番号５２の残基２３〜１３０）のアライメントを示す図である。
【図４Ｚ】生殖系列ＶＨ３−１１、ＤＨ６−１３、ＪＨ６ｂ配列（配列番号１１５）に対する抗体９．７．２Ｃ−Ｓｅｒの重鎖可変領域の予測アミノ酸配列（配列番号５０の残基２０〜１３６）のアライメントを示す図である。
【図４ＡＡ】生殖系列ＶκＯ１２、Ｊκ３配列（配列番号１０３）に対する抗体９．１４．４Ｃ−Ｓｅｒの軽鎖可変領域の予測アミノ酸配列（配列番号５６の残基２３〜１３０）のアライメントを示す図である。
【図４ＢＢ】生殖系列ＶＨ３−１１、ＤＨ７−２７、ＪＨ４ｂ配列（配列番号１１６）に対する抗体９．１４．４Ｃ−Ｓｅｒの重鎖可変領域の予測アミノ酸配列（配列番号５４の残基２０〜１３５）のアライメントを示す図である。
【図４ＣＣ】生殖系列ＶκＡ２７、Ｊκ４配列（配列番号１１４）に対する抗体８．１０．３Ｃ−Ｓｅｒの軽鎖可変領域の予測アミノ酸配列（配列番号６０の残基２１〜１２９）のアライメントを示す図である。
【図４ＤＤ】生殖系列ＶＨ３−４８、ＤＨ１−２６、ＪＨ４ｂ配列（配列番号１１３）に対する抗体８．１０．３Ｃ−Ｓｅｒの重鎖可変領域の予測アミノ酸配列（配列番号５８の残基２０〜１４１）のアライメントを示す図である。
【図４ＥＥ】生殖系列ＶκＡ２７、Ｊκ４配列（配列番号１１４）に対する抗体８．１０．３−ＣＧ２の軽鎖可変領域の予測アミノ酸配列（配列番号６０の残基２１〜１２９）のアライメントを示す図である。
【図４ＦＦ】生殖系列ＶＨ３−４８、ＤＨ１−２６、ＪＨ４ｂ配列（配列番号１１３）に対する抗体８．１０．３−ＣＧ２の重鎖可変領域の予測アミノ酸配列（配列番号６２の残基２０〜１４１）のアライメントを示す図である。
【図４ＧＧ】生殖系列ＶκＯ１２、Ｊκ３配列（配列番号１０３）に対する抗体９．７．２−ＣＧ２の軽鎖可変領域の予測アミノ酸配列（配列番号５２の残基２３〜１３０）のアライメントを示す図である。
【図４ＨＨ】生殖系列ＶＨ３−１１、ＤＨ６−１３、ＪＨ６ｂ配列（配列番号１１５）に対する抗体９．７．２−ＣＧ２の重鎖可変領域の予測アミノ酸配列（配列番号６６の残基２０〜１３６）のアライメントを示す図である。
【図４ＩＩ】生殖系列ＶκＯ１２、Ｊκ３配列（配列番号１０３）に対する抗体９．７．２−ＣＧ４の軽鎖可変領域の予測アミノ酸配列（配列番号５２の残基２３〜１３０）のアライメントを示す図である。
【図４ＪＪ】生殖系列ＶＨ３−１１、ＤＨ６−１３、ＪＨ６ｂ配列（配列番号１１５）に対する抗体９．７．２−ＣＧ４の重鎖可変領域の予測アミノ酸配列（配列番号７０の残基２０〜１３５）のアライメントを示す図である。
【図４ＫＫ】生殖系列ＶκＯ１２、Ｊκ３配列（配列番号１０３）に対する抗体９．１４．４−ＣＧ２の軽鎖可変領域の予測アミノ酸配列（配列番号５６の残基２３〜１３０）のアライメントを示す図である。
【図４ＬＬ】生殖系列ＶＨ３−１１、ＤＨ７−２７、ＪＨ４ｂ配列（配列番号１１６）に対する抗体９．１４．４−ＣＧ２の重鎖可変領域の予測アミノ酸配列（配列番号７４の残基２０〜１３５）のアライメントを示す図である。
【図４ＭＭ】生殖系列ＶκＯ１２、Ｊκ３配列（配列番号１０３）に対する抗体９．１４．４−ＣＧ４の軽鎖可変領域の予測アミノ酸配列（配列番号５６の残基２３〜１３０）のアライメントを示す図である。
【図４ＮＮ】生殖系列ＶＨ３−１１、ＤＨ７−２７、ＪＨ４ｂ配列（配列番号１１６）に対する抗体９．１４．４−ＣＧ４の重鎖可変領域の予測アミノ酸配列（配列番号７８の残基２０〜１３５）のアライメントを示す図である。
【図４ＯＯ】生殖系列ＶκＯ１２、Ｊκ３配列（配列番号１０３）に対する抗体９．１４．４−Ｓｅｒの軽鎖可変領域の予測アミノ酸配列（配列番号２８の残基２３〜１３０）のアライメントを示す図である。
【図４ＰＰ】生殖系列ＶＨ３−１１、ＤＨ７−２７、ＪＨ４ｂ配列（配列番号１１６）に対する抗体９．１４．４−Ｓｅｒの重鎖可変領域の予測アミノ酸配列（配列番号８２の残基２０〜１３５）のアライメントを示す図である。
【図４ＱＱ】生殖系列ＶκＯ１２、Ｊκ３配列（配列番号１０３）に対する抗体９．７．２−Ｓｅｒの軽鎖可変領域の予測アミノ酸配列（配列番号４８の残基２３〜１３０）のアライメントを示す図である。
【図４ＲＲ】生殖系列ＶＨ３−１１、ＤＨ６−１３、ＪＨ６ｂ配列（配列番号１１５）に対する抗体９．７．２−Ｓｅｒの重鎖可変領域の予測アミノ酸配列（配列番号８６の残基２０〜１３６）のアライメントを示す図である。
【図４ＳＳ】生殖系列ＶκＡ２７、Ｊκ４配列（配列番号１１４）に対する抗体８．１０．３−Ｓｅｒの軽鎖可変領域の予測アミノ酸配列（配列番号４４の残基２１〜１２９）のアライメントを示す図である。
【図４ＴＴ】生殖系列ＶＨ３−４８、ＤＨ１−２６、ＪＨ４ｂ配列（配列番号１１３）に対する抗体８．１０．３−Ｓｅｒの重鎖可変領域の予測アミノ酸配列（配列番号９０の残基２０〜１４１）のアライメントを示す図である。
【図４ＵＵ】生殖系列ＶκＡ２７、Ｊκ４配列（配列番号１１４）に対する抗体８．１０．３−ＣＧ４の軽鎖可変領域の予測アミノ酸配列（配列番号６０の残基２１〜１２９）のアライメントを示す図である。
【図４ＶＶ】生殖系列ＶＨ３−４８、ＤＨ１−２６、ＪＨ４ｂ配列（配列番号１１３）に対する抗体８．１０．３−ＣＧ４の重鎖可変領域の予測アミノ酸配列（配列番号９４の残基２０〜１４１）のアライメントを示す図である。
【図４ＷＷ】生殖系列ＶκＯ１２  Ｊκ３配列（配列番号１０３）に対する抗体９．１４．４Ｇ１の軽鎖可変領域の予測アミノ酸配列（配列番号２８の残基２３〜１３０）のアライメントを示す図である。
【図４ＸＸ】生殖系列ＶＨ３−１１、ＤＨ７−２７、ＪＨ４ｂ配列（配列番号１１６）に対する抗体９．１４．４Ｇ１の重鎖可変領域の予測アミノ酸配列（配列番号１０２の残基２０〜１３５）のアライメントを示す図である。
【図４ＹＹ】生殖系列ＶκＡ２７、Ｊκ４配列（配列番号１１４）に対する抗体８．１０．３ＦＧ１の軽鎖可変領域の予測アミノ酸配列（配列番号３２の残基２１〜１２９）のアライメントを示す図である。
【図４ＺＺ】生殖系列ＶＨ３−４８、ＤＨ１−２６、ＪＨ４ｂ配列（配列番号１１３）に対する抗体８．１０．３ＦＧ１の重鎖可変領域の予測アミノ酸配列（配列番号９８の残基２０〜１４１）のアライメントを示す図である。
【図５】ループスのマウスＭＲＬ−ｌｐｒモデルにおけるリンパ節腫脹の発生に対する抗Ｍ−ＣＳＦ抗体の効果を表すグラフである。マウス（ｎ＝１０／群）に、１２週間にわたって、３回／週、食塩水（菱形）、抗Ｍ−ＣＳＦ  Ａｂ  ５Ａ１（正方形）、ＣＨＯＣＫ  ＩｇＧ１（三角形）、またはＣＴＬＡ−４Ｉｇ（×）を投与し、実施例に記載したようにリンパ節腫脹にスコアを付けた。＊抗ＭＣＳＦで処置した群は、食塩水で処置した群と有意に異なる（ｐ＜０．０５）。＊＊抗Ｍ  ＣＳＦで処置した群は、食塩水およびＣＴＬＡ−４Ｉｇで処置した群と有意に異なる（ｐ＜０．０５）。抗Ｍ  ＣＳＦ群は、ＣＨＯＣＫ  ＩｇＧ１で処置した群と有意に異ならない（ｐ＝０．０６５、６週目から１２週目）。
【図６】ループスのマウスＭＲＬ−ｌｐｒモデルにおける皮膚病変の発生に対する抗Ｍ−ＣＳＦ抗体の効果を表すグラフである。マウス（ｎ＝１群当たり１０）に、１２週間にわたって、３回／週、食塩水（菱形）、抗Ｍ−ＣＳＦ  Ａｂ  ５Ａ１（正方形）、ＣＨＯＣＫ  ＩｇＧ１（三角形）、またはＣＴＬＡ−４Ｉｇ（×）を投与し、実施例に記載したように皮膚病変にスコアを付けた。＊抗Ｍ  ＣＳＦで処置した群は、食塩水で処置した群と有意に異なる（ｐ＜０．０５）。＊＊抗Ｍ  ＣＳＦで処置した群は、食塩水およびＣＴＬＡ−４Ｉｇで処置した群と有意に異なる（ｐ＜０．０５）。抗Ｍ  ＣＳＦ群は、ＣＨＯＣＫ  ＩｇＧ１で処置した群と有意に異ならない（ｐ＝０．０６５、６週目から１２週目）。
【図７】ループスのマウスＭＲＬ−Ｌｐｒモデルにおける抗ｄｓＤＮＡ自己抗体の発生に対する抗Ｍ−ＣＳＦ抗体の効果を表すグラフである。抗ｄｓＤＮＡ抗体価を、食塩水（菱形）、ＣＴＬＡ−４Ｉｇ（正方形）、抗Ｍ  ＣＳＦ  Ａｂ  ５Ａ１（三角形）、またはＣＨＯＣＫ  ＩｇＧ１アイソタイプ対照（×）で処置したマウスについて４つの時点で求めた。＊ＣＴＬＡ−４Ｉｇは、食塩水および抗Ｍ  ＣＳＦと有意に異なる（ｐ＜０．０５）。＊＊抗Ｍ  ＣＳＦで処置した群は、ＣＨＯＣＫ  ＩｇＧ１で処置した群と有意に異なる（ｐ＜０．０５）。
【図８】ループスのマウスＭＲＬ−Ｌｐｒモデルにおける糸球体の核面積（ｇｌｏｍｅｒｕｌａｒ  ｎｕｃｌｅａｒ  ａｒｅａ）、およびＣ３沈着に対する抗Ｍ−ＣＳＦ抗体の効果を表すグラフである。糸球体の核面積（左）、およびＣ３沈着についての免疫組織化学的染色（右）は、食塩水、ＣＴＬＡ−４Ｉｇ、抗Ｍ  ＣＳＦ  Ａｂ  ５Ａ１、またはＣＨＯＣＫ  ＩｇＧ１アイソタイプ対照で処置したマウスについての試験終結時に回収した腎臓から顕微鏡で判定した。データのバーは、平均（ａｖｅｒａｇｅ  ｍｅａｎ）スコアを表し、線は、標準誤差である。
【図９Ａ】マウスＮＺＢＷＦ１／Ｊループスモデルのタンパク尿症の発症に対する抗Ｍ−ＣＳＦ抗体の効果を表すグラフである。食塩水（正方形）、ＣＨＯＣＫ  ＩｇＧ１アイソタイプ対照（三角形）、または抗Ｍ  ＣＳＦ抗体（円）で処置したマウスに、以下のスケールを使用してタンパク尿症についてスコアを付けた：０＝陰性；１＝微量、２＝＞３０ｍｇ／ｄＬ、３＝＞１００ｍｇ／ｄＬ、４＝＞３００ｍｇ／ｄＬ、および５＝＞２０００ｍｇ／ｄＬ。図９Ａは、隔週に測定した各群についての平均タンパク尿症スコアを表す。
【図９Ｂ】マウスＮＺＢＷＦ１／Ｊループスモデルのタンパク尿症の発症に対する抗Ｍ−ＣＳＦ抗体の効果を表すグラフである。食塩水（正方形）、ＣＨＯＣＫ  ＩｇＧ１アイソタイプ対照（三角形）、または抗Ｍ  ＣＳＦ抗体（円）で処置したマウスに、以下のスケールを使用してタンパク尿症についてスコアを付けた：０＝陰性；１＝微量、２＝＞３０ｍｇ／ｄＬ、３＝＞１００ｍｇ／ｄＬ、４＝＞３００ｍｇ／ｄＬ、および５＝＞２０００ｍｇ／ｄＬ。図９Ｂは、１０週目の個々のマウスのタンパク尿症スコアを表す。
【図１０Ａ】マウスＮＺＢＷＦ１／Ｊループスモデルにおける、抗ｄｓＤＮＡ抗体価の展開に対する抗Ｍ−ＣＳＦ抗体の効果を表すグラフである。抗ｄｓＤＮＡ抗体レベルは、食塩水（円）、ＣＨＯＣＫ  ＩｇＧ１アイソタイプ対照（三角形）、または抗Ｍ  ＣＳＦ抗体（菱形）で処置したマウスにおいて、実施例に記載したようにＥＬＩＳＡによって求めた。図１０Ａは、６週目の時点における抗体価を表す。
【図１０Ｂ】マウスＮＺＢＷＦ１／Ｊループスモデルにおける、抗ｄｓＤＮＡ抗体価の展開に対する抗Ｍ−ＣＳＦ抗体の効果を表すグラフである。抗ｄｓＤＮＡ抗体レベルは、食塩水（円）、ＣＨＯＣＫ  ＩｇＧ１アイソタイプ対照（三角形）、または抗Ｍ  ＣＳＦ抗体（菱形）で処置したマウスにおいて、実施例に記載したようにＥＬＩＳＡによって求めた。図１０Ｂは、１０週目の時点における抗体価を表す。
【図１１】マウスＮＺＢＷＦ１／Ｊループスモデルにおける、Ｍ−ＣＳＦの血清レベルに対する抗Ｍ−ＣＳＦ抗体の効果を表すグラフである。Ｍ−ＣＳＦの血清レベルは、食塩水（円）、アイソタイプ対照（正方形）、または抗Ｍ  ＣＳＦ（三角形）で処置したマウスからの試験終結時に収集した血清から、特異的ＥＬＩＳＡによって求めた。
【図１２】ＮＺＢＷＦ１／Ｊマウスの腎臓における、免疫複合体沈着およびマクロファージ浸潤に対する抗Ｍ−ＣＳＦ抗体の効果を表すグラフである。バーは、食塩水、ＣＨＯＣＫ  ＩｇＧ１対照、または抗Ｍ−ＣＳＦ抗体で処置したマウスについての群平均腎臓免疫組織化学的染色スコアを表し、線は、標準誤差を示す。
【図１３】健康な対象に単回静脈内溶液用量を投与した後の平均血清抗体８．１０．３Ｆ濃度時間プロファイルを表すグラフである。上のパネルおよび下のパネルは、それぞれ線形目盛りおよび片対数目盛りである。凡例は、ｍｇでの抗体用量である。７００時間後の濃度は、０（定量化の限界未満）であったか、３未満の対象を表した。
【図１４】健康な対象に単回静脈内溶液用量を投与した後の抗体８，１０．３ＦのＣｍａｘ（上のパネル）値およびＡＵＣ（０〜∞）（下のパネル）値を表すグラフである。左パネルは観測値を示し、右パネルは用量で正規化された値を示す。円は個々の対象であり、菱形は算術平均である。
【図１５】健康な対象に単回静脈内１００ｍｇ用量を投与した後の、平均の抗体８．１０．３Ｆ（白正方形）濃度、およびＭ−ＣＳＦ（×）濃度を表すグラフである。
【図１６】健康な対象に単回静脈内溶液用量を投与した後の、試験２８日目におけるＣＤ１４＋１６＋単球の用量応答を表すグラフである。
【図１７】健康な対象に単回１００ｍｇ静脈内溶液用量を投与した後の、ＣＤ１４＋１６＋単球の時間応答を表すグラフである。
【図１８】健康な対象に単回静脈内１００ｍｇ用量を投与した後の、平均の抗体８．１０．３Ｆ（白正方形）濃度およびＣＤ１４＋１６＋単球数（×）を表すグラフである。
【図１９】健康な対象に単回静脈内１００ｍｇ用量を投与した後の、平均の抗体８．１０．３Ｆ濃度（白正方形）およびｕＮＴＸ−１（×）を表すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
定義および一般的な技法
本明細書で別段の定義のない限り、本発明に関連して使用される科学用語および技術用語は、当業者によって一般に理解される意味を有するものとする。さらに、文脈による別段の要求のない限り、単数形の用語は、複数存在することを含むものとし、複数形の用語は、単数形を含むものとする。一般に、本明細書に記載される細胞培養および組織培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝学、ならびにタンパク質化学および核酸化学、ならびにハイブリダイゼーションに関連して使用される命名法、ならびにこれらの技法は、当技術分野で周知であり、一般に使用されている。
【００２７】
本発明の方法および技法は、別段の指定のない限り、当技術分野で周知であり、本明細書全体にわたって引用され、論じられる様々な一般的で具体的な参考文献に記載された従来方法によって一般に実施される。例えば、参照により本明細書に組み込まれている、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、２版、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．（１９８９）、ならびにＡｕｓｕｂｅｌら、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ（１９９２）、ならびにＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．（１９９０）を参照。酵素反応および精製技法は、当技術分野において一般に遂行されるように、または本明細書に記載されるように、製造者の仕様書に従って実施される。本明細書に記載される分析化学、合成有機化学、ならびに薬化学（ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）および薬化学（ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）に関連して使用される命名法、ならびにこれらの研究室手順および技法は、当技術分野において周知であり、一般に使用されるものである。化学合成、化学分析、医薬の調製、製剤、および送達、ならびに患者の治療について、標準的な技法が使用される。
【００２８】
以下の用語は、別段の指定のない限り、以下の意味を有すると理解されるものとする。
【００２９】
用語「ポリペプチド」は、天然タンパク質または人工タンパク質、タンパク質配列のタンパク質断片およびポリペプチド類似体を包含する。ポリペプチドは、モノマーであっても、ポリマーであってもよい。
【００３０】
用語「単離タンパク質」、「単離ポリペプチド」、または「単離抗体」は、その起源または派生源によって、以下のことの１つから４つを有するタンパク質、ポリペプチド、または抗体である。（１）その天然の状態において、それに付随する天然には一緒になっている成分と一緒になっていないこと、（２）同じ種に由来する他のタンパク質を含まないこと、（３）異なる種に由来する細胞によって発現されること、または（４）天然に存在しないこと。したがって、化学合成される、またはもともと起源とする細胞と異なる細胞系で合成されるポリペプチドは、その天然には一緒になっている成分から「単離されている」ことになる。タンパク質は、当技術分野で周知であるタンパク質精製技法を使用して、単離によって、天然には一緒になっている成分を実質的に含まないようにすることもできる。
【００３１】
単離抗体の例には、Ｍ−ＣＳＦを使用して親和性精製された抗Ｍ−ＣＳＦ抗体、インビトロでハイブリドーマまたは他の細胞株によって合成された抗Ｍ−ＣＳＦ抗体、およびトランスジェニックマウスに由来するヒト抗Ｍ−ＣＳＦ抗体が含まれる。
【００３２】
タンパク質またはポリペプチドは、試料のうちの少なくとも約６０〜７５％が単一種のポリペプチドを呈する場合、「実質的に純粋であり」、「実質的に均質であり」、または「実質的に精製されている」。ポリペプチドまたはタンパク質は、単量体であっても多量体であってもよい。実質的に純粋なポリペプチドまたはタンパク質は、一般的に、タンパク質試料の重量／重量で、約５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％、より通常には約９５％を構成し、好ましくは９９％超純粋となる。タンパク質の純度または均質性は、タンパク質試料のポリアクリルアミドゲル電気泳動、その後の当技術分野で周知である染色剤を用いてゲルを染色した後の単一のポリペプチドバンドの視覚化などの、当技術分野で周知であるいくつかの手段によって示すことができる。ある特定の目的のために、ＨＰＬＣ、または精製のための当技術分野で周知である他の手段を使用することによって、より高い分解能をもたらすことができる。
【００３３】
用語「ポリペプチド断片」は、本明細書において、アミノ末端欠失および／またはカルボキシ末端欠失を有するが、残っているアミノ酸配列が、天然に存在する配列中の対応位置と同一であるポリペプチドを指す。いくつかの実施形態では、断片の長さは、少なくとも５、６、８、または１０アミノ酸である。他の実施形態では、断片の長さは、少なくとも１４、少なくとも２０、少なくとも５０、または少なくとも７０、８０、９０、１００、１５０、もしくは２００アミノ酸である。
【００３４】
用語「ポリペプチド類似体」は、本明細書において、アミノ酸配列の一部と実質的な同一性を有するセグメントを含み、以下の特性、すなわち、（１）適当な結合条件下でのＭ−ＣＳＦへの特異的結合、（２）Ｍ−ＣＳＦを阻害する能力のうちの少なくとも１つを有するポリペプチドを指す。
【００３５】
一般的に、ポリペプチド類似体は、通常存在する配列に対して、保存的アミノ酸置換（または挿入または欠失）を含む。類似体の長さは一般的に、少なくとも２０または２５アミノ酸、好ましくは、少なくとも５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、または２００アミノ酸以上であり、多くの場合、完全長のポリペプチドの長さとなり得る。
【００３６】
ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合部分のアミノ酸置換は、（１）タンパク質分解への感受性を低減し、（２）酸化への感受性を低減し、（３）タンパク質複合体を形成するための結合親和性を変更し、または（４）そのような類似体の他の物理化学的特性もしくは機能的特性を付与または改変するものである。類似体は、通常存在するペプチド配列以外の配列の様々な突然変異タンパク質を含むことができる。例えば、単一または複数のアミノ酸置換（好ましくは保存的アミノ酸置換）を、通常存在する配列中、好ましくは、分子間接触を形成するドメイン（複数可）の外側のポリペプチドの一部中に行うことができる。
【００３７】
保存的アミノ酸置換は、親配列の構造特性を実質的に変化させるべきでなく、例えば、置換アミノ酸は、親配列中に存在する免疫グロブリン結合ドメインを構成する逆平行βシートを変更せず、または親配列を特徴づける他のタイプの二次構造を混乱させないべきである。一般に、グリシン類似体およびプロリン類似体は、逆平行のβシートにおいて使用されない。当技術分野で認められているポリペプチド二次構造ならびに三次構造の例は、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ、Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ（Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ編、Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８４））、Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（Ｃ．ＢｒａｎｄｅｎおよびＪ．Ｔｏｏｚｅ編、Ｇａｒｌａｎｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．（１９９１））、ならびにＴｈｏｒｎｔｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ  ３５４：１０５（１９９１）に記載されており、これらはそれぞれ、参照により本明細書に組み込まれている。
【００３８】
非ペプチド類似体は、鋳型ペプチドの特性と類似の特性を有する薬物として、医薬産業において一般に使用される。これらのタイプの非ペプチド化合物は、「ペプチド模倣体（ｐｅｐｔｉｄｅ  ｍｉｍｅｔｉｃ）」または「ペプチド模倣体（ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃ）」と呼ばれる。参照により本明細書に組み込まれている、Ｆａｕｃｈｅｒｅ、Ｊ．Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｒｅｓ．１５：２９（１９８６）、ＶｅｂｅｒおよびＦｒｅｉｄｉｎｇｅｒ、ＴＩＮＳ、３９２頁（１９８５）、ならびにＥｖａｎｓら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３０：１２２９（１９８７）。そのような化合物は、コンピュータ化された分子モデル化を活用して開発されることが多い。治療上有用なペプチドと構造的に同様なペプチド模倣体は、等価な治療効果または予防効果を生じさせるのに使用することができる。一般に、ペプチド模倣体は、ヒト抗体などのパラダイムポリペプチド（すなわち、所望の生化学的特性または薬理学的活性を有するポリペプチド）と構造的に同様であるが、当技術分野で公知の方法によって、−−ＣＨ２ＮＨ−−、−−ＣＨ２Ｓ−−、−−ＣＨ２−ＣＨ２−−、−−ＣＨ＝ＣＨ−−（ｃｉｓおよびｔｒａｎｓ）、−ＣＯＣＨ２−−、−−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２−−、および−ＣＨ２ＳＯ−−からなる群から選択される連結によって置換されていてもよい１つまたは複数のペプチド連結を有する。共通配列の１つまたは複数のアミノ酸の、同じタイプのＤ−アミノ酸との系統的な置換（例えば、Ｌ−リシンの代わりにＤ−リシン）も、より安定なペプチドを生成するのに使用することができる。さらに、共通配列または実質的に同一の共通配列の変形を含む拘束ペプチドは、当技術分野で公知の方法によって（参照により本明細書に組み込まれている、ＲｉｚｏおよびＧｉｅｒａｓｃｈ、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６１：３８７（１９９２））、例えば、ペプチドを環化させる分子内ジスルフィド架橋を形成することができる内部システイン残基を添加することによって生成することができる。
【００３９】
「抗体」は、インタクトな抗体、またはインタクトな抗体と、特異的結合について競合する抗原結合部分を指す。一般に、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、７章（Ｐａｕｌ，Ｗ．編、２版、Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎ．Ｙ．（１９８９））（すべての目的に関して、その全体が参照により組み込まれている）を参照。抗原結合部分は、組換えＤＮＡ技法、またはインタクトな抗体の酵素的切断もしくは化学的切断によって生成することができる。いくつかの実施形態では、抗原結合部分には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｖ、ｄＡｂ、および相補性決定領域（ＣＤＲ）の断片、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、キメラ抗体、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）、ならびにポリペプチドへの特異的抗原結合を付与するのに十分な抗体の少なくとも一部を含有するポリペプチドが含まれる。
【００４０】
Ｎ末端からＣ末端までに、成熟した軽鎖可変ドメインおよび成熟した重鎖可変ドメインはともに、領域ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、およびＦＲ４を含む。各ドメインに対するアミノ酸の割り当ては、Ｋａｂａｔ、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．（１９８７および１９９１））、Ｃｈｏｔｈｉａ＆Ｌｅｓｋ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１〜９１７（１９８７）、またはＣｈｏｔｈｉａら、Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７８〜８８３（１９８９）の定義に従う。
【００４１】
本明細書において、番号によって参照される抗体は、同じ番号のハイブリドーマから得られるモノクローナル抗体と同じである。例えば、モノクローナル抗体３．８．３は、ハイブリドーマ３．８．３から得られるものと同じ抗体である。
【００４２】
本明細書において、Ｆｄ断片は、ＶＨドメインおよびＣＨ１ドメインからなる抗体断片を意味し、Ｆｖ断片は、抗体の１本のアームのＶＬドメインおよびＶＨドメインからなり、ｄＡｂ断片（Ｗａｒｄら、Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４〜５４６（１９８９））は、ＶＨドメインからなる。
【００４３】
いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＬドメインとＶＨドメインが対になって、これらを１本のタンパク質鎖として作られることを可能にする合成リンカーを介して一価の分子を形成する単鎖抗体（ｓｃＦｖ）である。（Ｂｉｒｄら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３〜４２６（１９８８）、およびＨｕｓｔｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９〜５８８３（１９８８））。いくつかの実施形態では、抗体は、ダイアボディ、すなわち、ＶＨドメインおよびＶＬドメインは、１本のポリペプチド鎖上で発現されるが、短すぎて同じ鎖上の２つのドメインの間で対形成することを可能にできないリンカーを使用し、それによってドメインを別の鎖の相補ドメインと対形成させ、２つの抗原結合部位を作り出している二価の抗体である。（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ  Ｐ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４〜６４４８（１９９３）、およびＰｏｌｊａｋ  Ｒ．Ｊ．ら、Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ２：１１２１〜１１２３（１９９４）を参照）。いくつかの実施形態では、本発明の抗体に由来する１つまたは複数のＣＤＲを、共有結合的または非共有結合的に分子中に組み込むことによって、これをＭ−ＣＳＦに特異的に結合するイムノアドヘシンにすることができる。そのような実施形態では、ＣＤＲ（複数可）は、より大きいポリペプチド鎖の一部として組み込むことができ、別のポリペプチド鎖に共有結合的に連結されていてもよく、または非共有結合的に組み込まれていてもよい。
【００４４】
１つまたは複数の結合部位を有する実施形態では、結合部位は、互いに同一であってもよく、または異なっていてもよい。
【００４５】
本明細書において、用語「ヒト抗体」は、可変ドメイン配列および定常ドメイン配列がヒト配列である抗体を意味する。この用語は、ヒト遺伝子に由来するが、例えば、可能な免疫原性を減少させ、親和性を増大させ、望ましくない折り畳みを引き起こし得るシステインを排除するなどのために変更された配列を有する抗体を包含する。この用語は、ヒト細胞に典型的でないグリコシル化を与え得る、非ヒト細胞内で、組換えで生成されるそのような抗体を包含する。これらの抗体は、以下に記載されるように、様々な方法で調製することができる。
【００４６】
用語「キメラ抗体」は、本明細書において、２つ以上の異なる抗体に由来する領域を含む抗体を意味する。一実施形態では、ＣＤＲのうちの１つまたは複数は、ヒト抗Ｍ−ＣＳＦ抗体に由来する。別の実施形態では、ＣＤＲのうちのすべてがヒト抗Ｍ−ＣＳＦ抗体に由来する。別の実施形態では、１つを超えるヒト抗Ｍ−ＣＳＦ抗体に由来するＣＤＲが、キメラ抗体中で組み合わされる。例えば、キメラ抗体は、第１のヒト抗Ｍ−ＣＳＦ抗体の軽鎖に由来するＣＤＲ１、第２のヒト抗Ｍ−ＣＳＦ抗体の軽鎖に由来するＣＤＲ２、および第３のヒト抗Ｍ−ＣＳＦ抗体の軽鎖に由来するＣＤＲ３を含むことができ、重鎖に由来するＣＤＲは、１つまたは複数の他の抗Ｍ−ＣＳＦ抗体に由来し得る。さらに、フレームワーク領域は、ＣＤＲのうちの１つもしくは複数が採用される抗Ｍ−ＣＳＦ抗体のうちの１つ、または１つまたは複数の異なるヒト抗体に由来し得る。
【００４７】
抗体または免疫グロブリン分子の断片または類似体は、本明細書の教示に従って、当業者によって容易に調製することができる。断片または類似体の好適なアミノ末端およびカルボキシ末端は、機能ドメインの境界付近に存在する。構造ドメインおよび機能ドメインは、公共または専売の配列データベースに対して、ヌクレオチドおよび／またはアミノ酸の配列データを比較することによって同定することができる。好ましくは、コンピュータ化された比較方法が使用されることによって、公知の構造および／または機能の他のタンパク質中で起こる配列モチーフまたは予測されるタンパク質立体配座ドメインが同定される。折り畳んで公知の３次元構造になるタンパク質を同定するための方法は公知である。Ｂｏｗｉｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５３：１６４（１９９１）を参照。
【００４８】
用語「表面プラズモン共鳴」は、本明細書において、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）システム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ  ＡＢ、Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ  ａｎｄ  Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、Ｎ．Ｊ．）を使用して、バイオセンサー基質内でのタンパク質濃度の変化を検出することによって、リアルタイムの生体特異性相互作用の分析を可能にする光学現象を指す。さらなる説明については、Ｊｏｎｓｓｏｎ  Ｕ．ら、Ａｎｎ．Ｂｉｏｌ．Ｃｌｉｎ．５１：１９〜２６（１９９３）、Ｊｏｎｓｓｏｎ  Ｕ．ら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １１：６２０〜６２７（１９９１）、Ｊｏｎｓｓｏｎ  Ｂ．ら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．８：１２５〜１３１（１９９５）、およびＪｏｈｎｓｓｏｎ  Ｂ．ら、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９８：２６８〜２７７（１９９１）を参照。
【００４９】
用語「ＫＤ」は、特定の抗体−抗原相互作用の平衡解離定数を指す。
【００５０】
用語「エピトープ」は、免疫グロブリンまたはＴ細胞受容体に特異的に結合し、またはさもなければ分子と相互作用することができる任意のタンパク質決定基を含む。エピトープ決定基は、一般に、アミノ酸または糖側鎖などの分子の化学的に活性な表面集団からなり、一般に、特定の３次元構造特性、ならびに特定の電荷特性を有する。エピトープは、「線状」であっても、「立体構造的」であってもよい。線状エピトープでは、タンパク質と相互作用分子（抗体など）との相互作用点のすべては、タンパク質の主要なアミノ酸配列に沿って直線的に起こる。立体構造エピトープでは、相互作用点は、互いに離れている、タンパク質上のアミノ酸残基にわたって起こる。抗体は、解離定数が１ｍＭ以下、好ましくは１００ｎＭ以下、最も好ましくは１０ｎＭ以下であるとき、抗原に特異的に結合すると言われる。ある特定の実施形態では、ＫＤは、１ｐＭ〜５００ｐＭである。他の実施形態では、ＫＤは、５００ｐＭ〜１μＭである。他の実施形態では、ＫＤは、１μＭ〜１００ｎＭである。他の実施形態では、ＫＤは、１００ｍＭ〜１０ｎＭである。抗原上の所望のエピトープが求められると、例えば、本発明に記載される技法を使用して、そのエピトープに対する抗体を生成することが可能である。あるいは、発見プロセスの間に抗体を生成し、特徴づけると、望ましいエピトープについての情報を解明することができる。この情報から、次いで、同じエピトープへの結合について抗体を競合的にスクリーニングすることが可能である。これを実現するための手法は、互いに競合的に結合する抗体、例えば、抗原への結合について競合する抗体を見出すための交差競合試験を行うことである。その交差競合に基づく「ビニング」抗体についてのハイスループットプロセスは、国際特許出願第ＷＯ０３／４８７３１号に記載されている。
【００５１】
本明細書において、２０の従来のアミノ酸およびこれらの略語は、従来の使用法に従う。参照により本明細書に組み込まれている、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ−Ａ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（２版、Ｅ．Ｓ．ＧｏｌｕｂおよびＤ．Ｒ．Ｇｒｅｎ編、Ｓｉｎａｕｅｒ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ、Ｓｕｎｄｅｒｌａｎｄ、Ｍａｓｓ．（１９９１））を参照。
【００５２】
用語「ポリヌクレオチド」は、本明細書で参照される場合、リボヌクレオチド、もしくはデオキシヌクレオチドである、長さが少なくとも１０塩基のポリマー形態のヌクレオチド、またはいずれかのタイプのヌクレオチドの修飾形態を意味する。この用語は、一本鎖および二本鎖の形態を含む。
【００５３】
用語「単離ポリヌクレオチド」は、本明細書において、ゲノム、ｃＤＮＡ、もしくは合成起源のポリヌクレオチド、またはこれらのいくつかの組合せを意味し、その起源または派生源によって、「単離ポリヌクレオチド」は、以下のことの１つから３つを有する：（１）「単離ポリヌクレオチド」が天然において見出されるポリヌクレオチドのすべて、もしくは一部と一緒になっていないこと、（２）単離ポリヌクレオチドが天然において連結されていないポリヌクレオチドに作動可能に連結されていること、または（３）より大きい配列の一部として天然において存在しないこと。
【００５４】
用語「オリゴヌクレオチド」は、本明細書において、天然に存在するヌクレオチド、ならびに天然に存在するオリゴヌクレオチド連結および天然に存在しないオリゴヌクレオチド連結によって一緒に連結された修飾ヌクレオチドを含む。オリゴヌクレオチドは、２００塩基以下の長さを一般に構成するポリヌクレオチドのサブセットである。好ましくは、オリゴヌクレオチドは、長さが１０〜６０塩基、最も好ましくは、長さが１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０〜４０塩基である。オリゴヌクレオチドは通常、例えば、プライマーおよびプローブ用に一本鎖であるが、オリゴヌクレオチドは、例えば、遺伝子突然変異体の構築において使用するために、二本鎖であってもよい。本発明のオリゴヌクレオチドは、センスオリゴヌクレオチドまたはアンチセンスオリゴヌクレオチドとすることができる。
【００５５】
用語「天然に存在するヌクレオチド」は、本明細書において、デオキシリボヌクレオチドおよびリボヌクレオチドを含む。用語「修飾ヌクレオチド」は、本明細書において、修飾され、または置換された糖基などを有するヌクレオチドを含む。本明細書に参照される用語「オリゴヌクレオチド連結」は、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロセレノエート、ホスホロジセレノエート、ホスホロアニロチオエート、ホスホラニラデート（ｐｈｏｓｐｈｏｒａｎｉｌａｄａｔｅ）、ホスホロアミデートなどのオリゴヌクレオチド連結を含む。例えば、ＬａＰｌａｎｃｈｅら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１４：９０８１（１９８６）、Ｓｔｅｃら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１０６：６０７７（１９８４）、Ｓｔｅｉｎら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１６：３２０９（１９８８）、Ｚｏｎら、Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  ６：５３９（１９９１）、Ｚｏｎら、Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｏｇｕｅｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ、８７〜１０８頁（Ｆ．Ｅｃｋｓｔｅｉｎ編、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｅｎｇｌａｎｄ（１９９１））、米国特許第５，１５１，５１０号、ＵｈｌｍａｎｎおよびＰｅｙｍａｎ、Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ９０：５４３（１９９０）を参照。これらの開示は、参照により本明細書に組み込まれている。オリゴヌクレオチドは、必要に応じて、検出用の標識を含むことができる。
【００５６】
「作動可能に連結した」配列は、対象とする遺伝子と連続した発現制御配列、および対象とする遺伝子を制御するためにトランスで、またはある距離を置いて作用する発現制御配列の両方を含む。用語「発現制御配列」は、本明細書において、これらが連結されているコード配列の発現およびプロセシングを行うのに必要なポリヌクレオチド配列を意味する。発現制御配列は、適切な転写開始配列、転写終止配列、転写プロモーター配列、および転写エンハンサー配列、スプライシングシグナルおよびポリアデニル化シグナルなどの効率的なＲＮＡプロセシングシグナル、細胞質ｍＲＮＡを安定化させる配列、翻訳効率を亢進させる配列（すなわち、コザック共通配列）、タンパク質安定性を亢進させる配列、ならびに望まれる場合、タンパク質分泌を亢進させる配列を含む。そのような制御配列の性質は、宿主生物体に応じて異なり、原核生物では、そのような制御配列は、一般に、プロモーター、リボソーム結合部位、および転写終止配列を含み、真核生物では、一般に、そのような制御配列は、プロモーター、および転写終止配列を含む。用語「制御配列」は、最低でも、その存在が発現およびプロセシングに必須であるすべての成分を含むことが意図されており、その存在が有利である追加の成分、例えば、リーダー配列および融合パートナー配列も含むことができる。
【００５７】
用語「ベクター」は、本明細書において、これが連結されている別の核酸を輸送することができる核酸分子を意味する。いくつかの実施形態では、ベクターはプラスミド、すなわち、中に追加のＤＮＡセグメントを連結することができる環状二本鎖ＤＮＡループである。いくつかの実施形態では、ベクターはウイルスベクターであり、この場合、追加のＤＮＡセグメントを、ウイルスゲノム中に連結することができる。いくつかの実施形態では、ベクターは、これらが導入されている宿主細胞内で自立複製をすることができる（例えば、細菌の複製起点を有する細菌ベクター、およびエピソーム哺乳動物ベクター）。他の実施形態では、ベクター（例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞内に導入した後、宿主細胞のゲノム内に組み込むことができ、それによって、宿主ゲノムとともに複製される。さらに、ある特定のベクターは、これらが作動可能に連結されている遺伝子の発現を指示することができる。そのようなベクターは、「組換え発現ベクター」（または単に「発現ベクター」）と本明細書で呼ばれる。
【００５８】
用語「組換え宿主細胞」（または単に「宿主細胞」）は、本明細書において、組換え発現ベクターが導入された細胞を意味する。「組換え宿主細胞」および「宿主細胞」は、特定の対象細胞だけでなく、そのような細胞の子孫も意味することが理解されるべきである。突然変異または環境の影響によって、後に続く世代においてある特定の修飾が起こる場合があるので、そのような子孫は、実際には、親細胞と同一でない場合があるが、本明細書において、用語「宿主細胞」の範囲内に依然として含まれる。
【００５９】
本明細書で参照される用語「選択的にハイブリダイズする」は、検出可能な程度に、かつ特異的に結合することを意味する。本発明によるポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、およびこれらの断片は、非特異的核酸への感知できる量の検出可能な結合を最小にするハイブリダイゼーション条件および洗浄条件下で、核酸鎖に選択的にハイブリダイズする。「高ストリンジェンシー」または「高度にストリンジェントな」条件を使用することによって、当技術分野で公知であり、本明細書で論じられる選択的なハイブリダイゼーション条件を実現することができる。「高ストリンジェンシー」または「高度にストリンジェントな」条件の一例は、１つのポリヌクレオチドの別のポリヌクレオチドを用いたインキュベーションであり、この場合、４２℃のハイブリダイゼーション温度で、１２〜１６時間、６×ＳＳＰＥまたはＳＳＣ、５０％のホルムアミド、５×デンハート試薬、０．５％のＳＤＳ、１００μｇ／ｍｌの変性、断片化サケ精子ＤＮＡのハイブリダイゼーションバッファー中で、膜などの固体表面に１つのポリヌクレオチドを付け、その後１×ＳＳＣ、０．５％のＳＤＳの洗浄バッファーを使用して、５５℃で２回洗浄することができる。Ｓａｍｂｒｏｏｋら、上記、９．５０〜９．５５頁も参照。
【００６０】
核酸配列との関連で、用語「パーセント配列同一性」は、第１の連続した配列が、第２の連続した配列と、最大の対応について比較および整列される場合の残基の百分率を意味する。配列同一性比較の長さは、少なくとも約９ヌクレオチド、通常少なくとも約１８ヌクレオチド、より通常には少なくとも約２４ヌクレオチド、一般的に少なくとも約２８ヌクレオチド、より一般的には少なくとも約３２ヌクレオチド、好ましくは少なくとも約３６、４８、またはそれ以上のヌクレオチドのストレッチにわたる場合がある。ヌクレオチド配列同一性を測定するのに使用することができる、当技術分野で公知のいくつかの異なるアルゴリズムが存在する。例えば、ポリヌクレオチド配列は、ＦＡＳＴＡ、Ｇａｐ、またはＢｅｓｔｆｉｔを使用して比較することができ、これらは、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｐａｃｋａｇｅ  Ｖｅｒｓｉｏｎ  １０．０、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ（ＧＣＧ）、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎにおけるプログラムである。例えば、プログラムＦＡＳＴＡ２およびＦＡＳＴＡ３を含むＦＡＳＴＡは、クエリー配列および探索配列のベストオーバーラップ領域のアライメントおよびパーセント配列同一性をもたらす（参照により本明細書に組み込まれている、Ｐｅａｒｓｏｎ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．１８３：６３〜９８（１９９０）、Ｐｅａｒｓｏｎ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１３２：１８５〜２１９（２０００）、Ｐｅａｒｓｏｎ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．２６６：２２７〜２５８（１９９６）、Ｐｅａｒｓｏｎ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７６：７１〜８４（１９９８））。別段の指定のない限り、特定のプログラムまたはアルゴリズムについてデフォルトのパラメータが使用される。例えば、核酸配列同士間のパーセント配列同一性は、参照により本明細書に組み込まれている、ＧＣＧ  Ｖｅｒｓｉｏｎ  ６．１において提供されている、ＦＡＳＴＡを使用して、そのデフォルトのパラメータ（６のワードサイズ、スコアリングマトリックスについてＮＯＰＡＭ因子）を用いて、またはＧａｐを使用して、そのデフォルトのパラメータを用いて求めることができる。
【００６１】
ヌクレオチド配列への言及は、別段の指定のない限り、その相補体を包含する。したがって、特定の配列を有する核酸への言及は、その相補配列とともに、その相補鎖を包含することが理解されるべきである。
【００６２】
用語「パーセント配列同一性」は、比較される残基の数に対する同一残基の数の百分率として表される比を意味する。
【００６３】
用語「実質的な類似性」または「実質的な配列類似性」は、１つの核酸またはその断片を参照する場合、適切なヌクレオチド挿入または欠失を伴って、別の核酸（またはその相補鎖）と最適に整列されるとき、上記に論じたＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴ、またはＧａｐなどの、配列同一性の任意の周知のアルゴリズムによって測定される場合に、ヌクレオチド塩基の少なくとも約８５％、好ましくは少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％においてヌクレオチド配列同一性があることを意味する。
【００６４】
ポリペプチドに適用される場合、用語「実質的な同一性」は、２つのペプチド配列が、プログラムＧＡＰまたはＢＥＳＴＦＩＴなどによって、そのプログラムで供給されるデフォルトのギャップ重みを使用して最適に整列される場合、少なくとも７０％、７５％、８０％、または８５％の配列同一性、好ましくは少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を共有することを意味する。ある特定の実施形態では、同一でない残基位置は、保存的アミノ酸置換によって異なる。「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が、同様の化学的性質（例えば、電荷または疎水性）を伴う側鎖Ｒ基を有する別のアミノ酸残基によって置換されているものである。一般に、保存的アミノ酸置換は、タンパク質の機能的特性を実質的に変更しない。２つ以上のアミノ酸配列が保存的置換によって互いに異なる場合では、パーセント配列同一性は、置換の保存的性質について修正するために、上方に調整される場合がある。この調整を行うための手段は、当業者に周知である。例えば、Ｐｅａｒｓｏｎ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４３：３０７〜３１（１９９４）を参照。同様の化学的性質を伴う側鎖を有するアミノ酸の群の例として、１）脂肪族側鎖：グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、およびイソロイシン、２）脂肪族ヒドロキシル側鎖：セリン、およびトレオニン、３）アミド含有側鎖：アスパラギン、およびグルタミン、４）芳香族側鎖：フェニルアラニン、チロシン、およびトリプトファン、５）塩基性側鎖：リシン、アルギニン、およびヒスチジン、６）酸性側鎖：アスパラギン酸、およびグルタミン酸、ならびに７）硫黄含有側鎖：システイン、およびメチオニンが挙げられる。保存アミノ酸置換群は、バリン−ロイシン−イソロイシン、フェニルアラニン−チロシン、リシン−アルギニン、アラニン−バリン、グルタミン酸−アスパラギン酸、およびアスパラギン−グルタミンである。
【００６５】
あるいは、保存的な置換は、参照により本明細書に組み込まれている、Ｇｏｎｎｅｔら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５６：１４４３〜４５（１９９２）に開示されたＰＡＭ２５０対数尤度行列において正の値を有する任意の変化である。「適度に保存的な」置換は、ＰＡＭ２５０対数尤度行列において負でない値を有する任意の変化である。
【００６６】
ポリペプチドについての配列同一性は、一般的に、配列分析ソフトウェアを使用して測定される。タンパク質分析ソフトウェアは、保存的アミノ酸置換を含めた様々な置換、欠失、および他の修飾に割り当てられる類似性の尺度を使用して配列をマッチさせる。例えば、ＧＣＧは、「Ｇａｐ」および「Ｂｅｓｔｆｉｔ」などのプログラムを含み、これらは、プログラムに指定されたデフォルトのパラメータとともに使用することによって、生物の異なる種に由来する相同ポリペプチドなどの密接に関連したポリペプチド同士間、または野生型タンパク質とその突然変異タンパク質との間の配列相同性または配列同一性を求めることができる。例えば、ＧＣＧ  Ｖｅｒｓｉｏｎ  ６．１を参照。ポリペプチド配列も、ＦＡＳＴＡを使用して、デフォルトの、または推奨されるパラメータを使用して比較することができる。ＧＣＧ  Ｖｅｒｓｉｏｎ  ６．１．（ウィスコンシン大学  ＷＩ）を参照。ＦＡＳＴＡ（例えば、ＦＡＳＴＡ２およびＦＡＳＴＡ３）は、クエリー配列と探索配列の間のベストオーバーラップの領域のアライメントおよびパーセント配列同一性をもたらす（Ｐｅａｒｓｏｎ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．１８３：６３〜９８（１９９０）；Ｐｅａｒｓｏｎ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１３２：１８５〜２１９（２０００））。本発明の配列を様々な生物に由来する多数の配列を含むデータベースと比較する場合の別の好適なアルゴリズムは、プログラムとともに供給されるデフォルトのパラメータを使用する、コンピュータープログラムのＢＬＡＳＴ、特にｂｌａｓｔｐ、またはｔｂｌａｓｔｎである。例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３〜４１０（１９９０）、Ａｌｔｓｃｈｕｌら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９〜４０２（１９９７）を参照。
【００６７】
相同性について比較されるポリペプチドの長さは、一般に、少なくとも約１６アミノ酸残基、通常少なくとも約２０残基、より通常には少なくとも約２４残基、一般的に少なくとも約２８残基、好ましくは約３５残基超となる。多数の異なる生物に由来する配列を含むデータベースを探索する場合、アミノ酸配列を比較することが好ましい。
【００６８】
本明細書において、用語「標識」または「標識された」は、抗体中に別の分子を取り込むことを指す。一実施形態では、標識は、検出可能なマーカー、例えば、放射標識アミノ酸の取り込み、またはマークされたアビジンによって検出することができるビオチニル部分のポリペプチドへの結合（例えば、ストレプトアビジン含有蛍光マーカー、または光学法もしくは比色分析法によって検出することができる酵素活性）である。別の実施形態では、標識またはマーカーは、治療剤、例えば、薬物コンジュゲートまたは毒素とすることができる。標識化ポリペプチドおよび糖タンパク質の様々な方法が当技術分野で公知であり、これらを使用することができる。ポリペプチドについての標識の例として、それだけに限らないが、以下、すなわち、放射性同位体または放射性核種（例えば、３Ｈ、１４Ｃ、１５Ｎ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ）、蛍光標識（例えば、ＦＩＴＣ、ローダミン、ランタニド蛍光体）、酵素標識（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ）、化学発光マーカー、ビオチニル基、二次レポーター（例えば、ロイシンジッパー対配列、二次抗体についての結合部位、金属結合ドメイン、エピトープタグ）によって認識される所定のポリペプチドエピトープ、ガドリニウムキレートなどの磁性剤、百日咳毒素などの毒素、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、糖質コルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、およびピューロマイシン、ならびにこれらの類似体または相同体が挙げられる。いくつかの実施形態では、標識は、潜在的な立体障害を低減するために、様々な長さのスペーサーアームによって結合される。
【００６９】
本明細書および特許請求の範囲全体にわたって、単語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」もしくは「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などの変形は、明言した整数または整数の群を含むが、任意の他の整数または整数の群を排除しないことを暗示すると理解される。
【００７０】
ヒト抗Ｍ−ＣＳＦ抗体およびその特徴づけ
一実施形態では、本発明は、ヒト化抗Ｍ−ＣＳＦ抗体を提供する。別の実施形態では、本発明は、ヒト抗Ｍ−ＣＳＦ抗体を提供する。いくつかの実施形態では、ヒト抗Ｍ−ＣＳＦ抗体は、非ヒトトランスジェニック動物、例えば、ゲノムがヒト免疫グロブリン遺伝子を含み、その結果、げっ歯類がヒト抗体を産生するげっ歯類を免疫することによって生成される。
【００７１】
本発明の抗Ｍ−ＣＳＦ抗体は、ヒトκもしくはヒトλ軽鎖、またはこれらに由来するアミノ酸配列を含むことができる。κ軽鎖を含むいくつかの実施形態では、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）は、ヒトＶκＯ１２、ＶκＬ２、ＶκＬ５、ＶκＡ２７、またはＶκＢ３遺伝子、およびＪκ１、Ｊκ２、Ｊκ３、またはＪκ４遺伝子によって部分的にコードされる。本発明の特定の実施形態では、軽鎖可変ドメインは、ＶκＯ１２／Ｊκ３、ＶκＬ２／Ｊκ３、ＶκＬ５／Ｊκ３、ＶκＬ５／Ｊκ４、ＶκＡ２７／Ｊκ４、またはＶκＢ３／Ｊκ１遺伝子によってコードされる。
【００７２】
いくつかの実施形態では、Ｍ−ＣＳＦ抗体のＶＬは、生殖系列アミノ酸配列と比べて、１つまたは複数のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体のＶＬは、生殖系列アミノ酸配列と比べて、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、生殖系列からのこれらの置換の１つまたは複数は、軽鎖のＣＤＲ領域内にある。いくつかの実施形態では、生殖系列と比べたアミノ酸置換は、抗体２５２、８８、１００、３．８．３、２．７．３、１．１２０．１、９．１４．４Ｉ、８．１０．３Ｆ、９．７．２ＩＦ、９．１４．４、８．１０．３、９．７．２、９．７．２Ｃ−Ｓｅｒ、９．１４．４Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ４、９．１４．４−ＣＧ２、９．１４．４−ＣＧ４、９．１４．４−Ｓｅｒ、９．７．２−Ｓｅｒ、８．１０．３−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ４、８．１０．３ＦＧ１、または９．１４．４Ｇ１のＶＬの任意の１つまたは複数における、生殖系列と比べた置換と同じ位置の１つまたは複数におけるものである。例えば、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体のＶＬは、抗体８８のＶＬに見出される生殖系列と比較した１つまたは複数のアミノ酸置換、および抗体８８と同じＶΚ遺伝子を利用する抗体２５２のＶＬに見出される生殖系列と比較した他のアミノ酸置換を含有することができる。いくつかの実施形態では、アミノ酸変化は、同じ位置の１つまたは複数においてのものであるが、参照抗体におけるものと異なる突然変異を伴う。
【００７３】
いくつかの実施形態では、生殖系列と比べたアミノ酸変化は、抗体２５２、８８、１００、３．８．３、２．７．３、１．１２０．１、９．１４．４Ｉ、８．１０．３Ｆ、９．７．２ＩＦ、９．１４．４、８．１０．３、９．７．２、９．７．２Ｃ−Ｓｅｒ、９．１４．４Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ４、９．１４．４−ＣＧ２、９．１４．４−ＣＧ４、９．１４．４−Ｓｅｒ、９．７．２−Ｓｅｒ、８．１０．３−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ４、８．１０．３ＦＧ１、または９．１４．４Ｇ１のＶＬのいずれかと同じ位置の１つまたは複数で起こるが、変化は、参照抗体におけるアミノ酸と比べたそのような位置（複数可）での保守的アミノ酸置換を表す場合がある。例えば、これらの抗体のうちの１つにおける特定の位置が、生殖系列と比べて変化しており、グルタミン酸である場合、その位置においてアスパラギン酸で置換することができる。同様に、生殖系列と比較したアミノ酸置換がセリンである場合、その位置においてセリンをトレオニンで置換することができる。保存的アミノ酸置換は、上記に論じられている。
【００７４】
いくつかの実施形態では、ヒト抗Ｍ−ＣＳＦ抗体の軽鎖は、抗体２５２（配列番号４）、８８（配列番号８）、１００（配列番号１２）、３．８．３（配列番号１６）、２．７．３（配列番号２０）、１．１２０．１（配列番号２４）、９．１４．４Ｉ（配列番号２８）、８．１０．３Ｆ（配列番号３２）、９．７．２ＩＦ（配列番号３６）、９．１４．４（配列番号２８）、８．１０．３（配列番号４４）、９．７．２（配列番号４８）、９．７．２Ｃ−Ｓｅｒ（配列番号５２）、９．１４．４Ｃ−Ｓｅｒ（配列番号５６）、８．１０．３Ｃ−Ｓｅｒ（配列番号６０）、８．１０．３−ＣＧ２（配列番号６０）、９．７．２−ＣＧ２（配列番号５２）、９．７．２−ＣＧ４（配列番号５２）、９．１４．４−ＣＧ２（配列番号５６）、９．１４．４−ＣＧ４（配列番号５６）、９．１４．４−Ｓｅｒ（配列番号２８）、９．７．２−Ｓｅｒ（配列番号４８）、８．１０．３−Ｓｅｒ（配列番号４４）、８．１０．３−ＣＧ４（配列番号６０）、８．１０．３ＦＧ１（配列番号３２）、または９．１４．４Ｇ１（配列番号２８）のＶＬのアミノ酸配列と同じ、あるいは最大１、２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０個の保存的アミノ酸置換および／または合計で最大３個の非保存的アミノ酸置換を有する前記アミノ酸配列であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、軽鎖は、前述の抗体のいずれか１つのＣＤＲ１の最初からＣＤＲ３の最後までのアミノ酸配列を含む。
【００７５】
いくつかの実施形態では、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体の軽鎖は、本明細書に記載される生殖系列または抗体配列の少なくとも軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３を含む。別の実施形態では、軽鎖は、２５２、８８、１００、３．８．３、２．７．３、１．１２０．１、９．１４．４Ｉ、８．１０．３Ｆ、９．７．２ＩＦ、９．１４．４、８．１０．３、９．７．２、９．７．２Ｃ−Ｓｅｒ、９．１４．４Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ４、９．１４．４−ＣＧ２、９．１４．４−ＣＧ４、９．１４．４−Ｓｅｒ、９．７．２−Ｓｅｒ、８．１０．３−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ４、８．１０．３ＦＧ１、または９．１４．４Ｇ１から独立して選択される抗体のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３領域、あるいはそれぞれ、４個未満もしくは３個未満の保存的アミノ酸置換および／または合計で３個以下の非保存的アミノ酸置換を有するＣＤＲ領域を含むことができる。他の実施形態では、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体の軽鎖は、それぞれが、配列番号４、８、１２、１６、２０、２４、２８、３２、３６、４４、４８、５２、５６、もしくは６０から選択され、または配列番号３、７、１１、２７、３１、３５、４３、もしくは４７から選択されるＶＬ領域をコードする核酸分子によってコードされるＶＬ領域のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する抗体のＣＤＲ１，ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３領域から独立して選択される、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３を含む。抗Ｍ−ＣＳＦ抗体の軽鎖は、２５２、８８、１００、３．８．３、２．７．３、１．１２０．１、９．１４．４Ｉ、８．１０．３Ｆ、９．７．２ＩＦ、９．１４．４、８．１０．３、９．７．２、９．７．２Ｃ−Ｓｅｒ、９．１４．４Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ４、９．１４．４−ＣＧ２、９．１４．４−ＣＧ４、９．１４．４−Ｓｅｒ、９．７．２−Ｓｅｒ、８．１０．３−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ４、８．１０．３ＦＧ１、もしくは９．１４．４Ｇ１から選択されるＶＬ領域、または配列番号４、８、１２、１６、２０、２４、２８、３２、３６、４４、４８、５２、５６、もしくは６０のアミノ酸配列を含む抗体のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３領域を含むことができる。
【００７６】
いくつかの実施形態では、軽鎖は、抗体２５２、８８、１００、３．８．３、２．７．３、１．１２０．１、９．１４．４Ｉ、８．１０．３Ｆ、９．７．２ＩＦ、９．１４．４、８．１０．３、９．７．２、９．７．２Ｃ−Ｓｅｒ、９．１４．４Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ４、９．１４．４−ＣＧ２、９．１４．４−ＣＧ４、９．１４．４−Ｓｅｒ、９．７．２−Ｓｅｒ、８．１０．３−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ４、８．１０．３ＦＧ１、または９．１４．４Ｇ１のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３領域、あるいは４個未満もしくは３個未満の保存的アミノ酸置換および／または合計で３個以下の非保存的アミノ酸置換を有する前記ＣＤＲ領域を含む。
【００７７】
重鎖に関して、いくつかの実施形態では、重鎖アミノ酸配列の可変領域は、ヒトＶＨ３−１１、ＶＨ３−２３、ＶＨ３−７、ＶＨ１−１８、ＶＨ３−３３、ＶＨ３−４８遺伝子、およびＪＨ４、ＪＨ６、ＪＨ４ｂ、またはＪＨ６ｂ遺伝子によって部分的にコードされる。本発明の特定の実施形態では、重鎖可変領域は、ＶＨ３−１１／ＤＨ７−２７／ＪＨ６、ＶＨ３−７／ＤＨ６−１３／ＪＨ４、ＶＨ３−２３／ＤＨ１−２６／ＪＨ４、ＶＨ３−１１／ＤＨ７−２７／ＪＨ４、ＶＨ３−３３／ＤＨ１−２６／ＪＨ４、ＶＨ１−１８／ＤＨ４−２３／ＪＨ４、ＶＨ３−１１／ＤＨ７−２７／ＪＨ４ｂ、ＶＨ３−４８／ＤＨ１−２６／ＪＨ４ｂ、ＶＨ３−１１／ＤＨ６−１３／ＪＨ６ｂ、ＶＨ３−１１／ＤＨ７−２７／ＪＨ４ｂ、ＶＨ３−４８／ＤＨ１−６／ＪＨ４ｂ、またはＶＨ３−１１／ＤＨ６−１３／ＪＨ６ｂ遺伝子によってコードされる。いくつかの実施形態では、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体のＶＨは、生殖系列アミノ酸配列と比べて、１つまたは複数のアミノ酸置換、欠失、または挿入（付加）を含有する。いくつかの実施形態では、重鎖の可変ドメインは、生殖系列アミノ酸配列から１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、または１８個の突然変異を含む。いくつかの実施形態では、突然変異（複数可）は、生殖系列アミノ酸配列と比較して、非保存的置換である。いくつかの実施形態では、突然変異は、重鎖のＣＤＲ領域内にある。いくつかの実施形態では、アミノ酸変化は、抗体２５２、８８、１００、３．８．３、２．７．３、１．１２０．１、９．１４．４Ｉ、８．１０．３Ｆ、９．７．２ＩＦ、９．１４．４、８．１０．３、９．７．２、９．７．２Ｃ−Ｓｅｒ、９．１４．４Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ４、９．１４．４−ＣＧ２、９．１４．４−ＣＧ４、９．１４．４−Ｓｅｒ、９．７．２−Ｓｅｒ、８．１０．３−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ４、８．１０．３ＦＧ１、または９．１４．４Ｇ１のＶＨの任意の１つまたは複数における生殖系列からの突然変異と同じ位置の１つまたは複数で行われる。他の実施形態では、アミノ酸変化は、同じ位置の１つまたは複数においてのものであるが、参照抗体におけるものと異なる突然変異を伴う。
【００７８】
いくつかの実施形態では、重鎖は、抗体２５２（配列番号２）、８８（配列番号６）、１００（配列番号１０）、３．８．３（配列番号１４）、２．７．３（配列番号１８）、１．１２０．１（配列番号２２）、９．１４．４Ｉ（配列番号２６）、８．１０．３Ｆ（配列番号３０）、９．７．２ＩＦ（配列番号３４）、９．１４．４（配列番号３８）、８．１０．３（配列番号３０）、９．７．２（配列番号４６）、９．７．２Ｃ−Ｓｅｒ（配列番号５０）、９．１４．４Ｃ−Ｓｅｒ（配列番号５４）、８．１０．３Ｃ−Ｓｅｒ（配列番５８）、８．１０．３−ＣＧ２（配列番号６２）、９．７．２−ＣＧ２（配列番号６６）、９．７．２−ＣＧ４（配列番号７０）、９．１４．４−ＣＧ２（配列番号７４）、９．１４．４−ＣＧ４（配列番号７８）、９．１４．４−Ｓｅｒ（配列番号８２）、９．７．２−Ｓｅｒ（配列番号８６）、８．１０．３−Ｓｅｒ（配列番号９０）、８．１０．３−ＣＧ４（配列番号９４）、８．１０．３ＦＧ１（配列番号９８）、または９．１４．４Ｇ１（配列番号１０２）の可変ドメイン（ＶＨ）のアミノ酸配列、あるいは最大１、２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０個の保存的アミノ酸置換および／または合計で最大３個の非保存的アミノ酸置換を有する前記アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、重鎖は、前述の抗体のいずれか１つのＣＤＲ１の最初からＣＤＲ３の最後までのアミノ酸配列を含む。
【００７９】
いくつかの実施形態では、重鎖は、抗体２５２、８８、１００、３．８．３、２．７．３、１．１２０．１、９．１４．４Ｉ、８．１０．３Ｆ、９．７．２ＩＦ、９．１４．４、８．１０．３、９．７．２、９．７．２Ｃ−Ｓｅｒ、９．１４．４Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ４、９．１４．４−ＣＧ２、９．１４．４−ＣＧ４、９．１４．４−Ｓｅｒ、９．７．２−Ｓｅｒ、８．１０．３−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ４、８．１０．３ＦＧ１、または９．１４．４Ｇ１の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３領域、あるいはそれぞれ、８個未満、６個未満、４個未満、もしくは３個未満の保存的アミノ酸置換および／または合計で３個以下の非保存的アミノ酸置換を有する前記ＣＤＲ領域を含む。
【００８０】
いくつかの実施形態では、重鎖は、上述したように、本明細書に記載される抗体配列の生殖系列もしくは抗体のＣＤＲ３を含み、生殖系列配列のＣＤＲ１領域およびＣＤＲ２領域も含むことができ、またはそれぞれが、２５２、８８、１００、３．８．３、２．７．３、１．１２０．１、９．１４．４Ｉ、８．１０．３Ｆ、９．７．２ＩＦ、９．１４．４、８．１０．３、９．７．２、９．７．２Ｃ−Ｓｅｒ、９．１４．４Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ４、９．１４．４−ＣＧ２、９．１４．４−ＣＧ４、９．１４．４−Ｓｅｒ、９．７．２−Ｓｅｒ、８．１０．３−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ４、８．１０．３ＦＧ１、もしくは９．１４．４Ｇ１から選択される抗体の重鎖を含む抗体から独立して選択される抗体配列のＣＤＲ１およびＣＤＲ２を含むことができる。別の実施形態では、重鎖は、本明細書に記載される抗体配列のＣＤＲ３を含み、配列番号２、６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３８、４６、５０、５４、５８、６２、６６、７０、７４、７８、８２、８６、９０、９４、９８、もしくは１０２から選択され、または配列番号１、５、９、２５、２９、３３、３７、４５、９７、もしくは１０１から選択されるＶＨ領域をコードする核酸配列によってコードされるＶＨ領域のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域のＣＤＲ１領域およびＣＤＲ２領域からそれぞれ独立して選択されるＣＤＲ１領域およびＣＤＲ２領域も含むことができる。別の実施形態では、抗体は、上記に開示された軽鎖、および上記に開示された重鎖を含む。
【００８１】
行うことができる１つのタイプのアミノ酸置換は、化学反応性となり得る、抗体中の１つまたは複数のシステインを、別の残基例えば、限定することなく、アラニンまたはセリンなどに変更することである。一実施形態では、非カノニカルシステインの置換が存在する。置換は、抗体の可変ドメインのフレームワーク領域内、または定常ドメイン内とすることができる。別の実施形態では、システインは、抗体の非カノニカルな領域内にある。
【００８２】
行うことができる別のタイプのアミノ酸置換は、抗体中の任意の潜在的なタンパク質分解部位、特に、抗体の可変ドメインのＣＤＲ領域もしくはフレームワーク領域内、または定常ドメイン内にあるものを除去することである。システイン残基の置換およびタンパク質分解部位の除去により、抗体生成物中のいずれの異種混合のリスクも減少させ、したがってその均質性を増大させることができる。別のタイプのアミノ酸置換は、残基の一方または両方を変更することによる、潜在的なアミド分解部位を形成するアスパラギン−グリシン対の排除である。
【００８３】
いくつかの実施形態では、本発明の抗Ｍ−ＣＳＦ抗体の重鎖のＣ末端リシンは存在しない（Ｌｅｗｉｓ  Ｄ．Ａ．ら、Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ、６６（５）：５８５〜９５（１９９４））。本発明の様々な実施形態では、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体の重鎖および軽鎖は、シグナル配列を任意選択により含むことができる。
【００８４】
一態様では、本発明は、ヒト抗Ｍ−ＣＳＦモノクローナル抗体、およびこれらを産生するように工学的に作製された細胞株に関する。表１Ａに、重鎖および軽鎖の可変領域をコードする核酸の配列識別名（配列番号）、ならびにモノクローナル抗体：２５２、８８、１００、３．８．３、２．７．３、１．１２０．１、９．１４．４Ｉ、８．１０．３Ｆ、９．７．２ＩＦ、９．１４．４、８．１０．３、および９．７．２についての対応する予測アミノ酸配列を列挙する。追加の変異体抗体９．７．２Ｃ−Ｓｅｒ、９．１４．４Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ４、９．１４．４−ＣＧ２、９．１４．４−ＣＧ４、９．１４．４−Ｓｅｒ、９．７．２−Ｓｅｒ、８．１０．３−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ４、８．１０．３ＦＧ１、または９．１４．４Ｇ１は、当業者に公知の方法によって作製することができる。表１Ｂに、それぞれ抗体８．１０．３Ｆの重鎖、軽鎖、ならびに重鎖および軽鎖と比較した場合の、抗体２５２、８８、１００、３．８．３、２．７．３、１．１２０．１、９．７．２、９．１４．４、８．１０．３、８．１０．３Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ２、８．１０．３−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ４、ならびに８．１０．３ＦＧ１の重鎖、軽鎖、ならびに重鎖および軽鎖の両方のパーセントアミノ酸同一性を列挙する。
【００８５】
別の態様では、本発明は、モノクローナル抗体８，１０．３Ｆと実質的に同様である抗Ｍ−ＣＳＦモノクローナル抗体であって、この抗体の重鎖、または軽鎖、または重鎖および軽鎖の両方のアミノ酸配列が、それぞれ抗体８．１０．３Ｆの重鎖、または軽鎖、または重鎖および軽鎖の両方と、少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を共有するモノクローナル抗体に関する。
【００８６】
【表１】
2013100281.tif 000002
【００８７】
【表２】
2013100281.tif 000003
【００８８】
抗Ｍ−ＣＳＦ抗体のクラスおよびサブクラス
抗Ｍ−ＣＳＦ抗体のクラスおよびサブクラスは、当技術分野で公知の任意の方法によって求めることができる。一般に、抗体のクラスおよびサブクラスは、抗体の特定のクラスおよびサブクラスに特異的である抗体を使用して求めることができる。そのような抗体は、市販されている。クラスおよびサブクラスは、ＥＬＩＳＡ、またはウエスタンブロット、ならびに他の技法によって求めることができる。あるいは、クラスおよびサブクラスは、抗体の重鎖および／または軽鎖の定常ドメインのすべてまたは一部を配列決定し、免疫グロブリンの様々なクラスおよびサブクラスの公知のアミノ酸配列とこれらのアミノ酸配列を比較し、抗体のクラスおよびサブクラスを求めることによって求めることができる。
【００８９】
いくつかの実施形態では、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体は、モノクローナル抗体である。抗Ｍ−ＣＳＦ抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＡ、またはＩｇＤの分子とすることができる。好適な実施形態では、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体は、ＩｇＧであり、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４サブクラスである。他の好適な実施形態では、抗体は、サブクラスＩｇＧ２またはＩｇＧ４である。別の好適な実施形態では、抗体は、サブクラスＩｇＧ１である。
【００９０】
種選択性および分子選択性
本発明の別の態様では、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体は、種選択性および分子選択性の両方を実証する。いくつかの実施形態では、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体は、ヒト、カニクイザル、およびマウスのＭ−ＣＳＦに結合する。本明細書の教示に従うと、当技術分野で公知の方法を使用して抗Ｍ−ＣＳＦ抗体についての種選択性を判定することができる。例えば、ウエスタンブロット、ＦＡＣＳ、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、細胞増殖アッセイ、またはＭ−ＣＳＦ受容体結合アッセイを使用して種選択性を判定することができる。好適な実施形態では、細胞増殖アッセイ、またはＥＬＩＳＡを使用して種選択性を判定することができる。
【００９１】
別の実施形態では、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体は、ＧＭ−／Ｇ−ＣＳＦに対するその選択性より少なくとも１００倍大きいＭ−ＣＳＦに対する選択性を有する。いくつかの実施形態では、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体は、Ｍ−ＣＳＦ以外のいずれの他のタンパク質にもいかなる感知できる特異的結合も示さない。本明細書の教示に従って、当技術分野で公知の方法を使用して、Ｍ−ＣＳＦに対する抗Ｍ−ＣＳＦ抗体の選択性を判定することができる。例えば、ウエスタンブロット、ＦＡＣＳ、ＥＬＩＳＡ、またはＲＩＡを使用して選択性を判定することができる。
【００９２】
抗Ｍ−ＣＳＦ抗体によって認識されるＭ−ＣＳＦエピトープの同定
本発明は、Ｍ−ＣＳＦに結合し、同じエピトープと競合し、交差競合し、かつ／もしくは結合し、かつ／または（ａ）２５２、８８、１００、３．８．３、２．７．３、１．１２０．１、９．１４．４Ｉ、８．１０．３Ｆ、９．７．２ＩＦ、９．１４．４、８．１０．３、９．７．２、９．７．２Ｃ−Ｓｅｒ、９．１４．４Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ４、９．１４．４−ＣＧ２、９．１４．４−ＣＧ４、９．１４．４−Ｓｅｒ、９．７．２−Ｓｅｒ、８．１０．３−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ４、８．１０．３ＦＧ１、もしくは９．１４．４Ｇ１から選択される抗体、（ｂ）配列番号２、６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３８、４６、５０、５４、５８、６２、６６、７０、７４、７８、８２、８６、９０、９４、９８、もしくは１０２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む抗体、（ｃ）配列番号４、８、１２、１６、２０、２４、２８、３２、３６、４４、４８、５２、５６、もしくは６０のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む抗体、（ｄ）（ｂ）で定義された重鎖可変領域および（ｃ）で定義された軽鎖可変領域の両方を含む抗体と同じＫＤを有するＭ−ＣＳＦに結合するヒト抗Ｍ−ＣＳＦモノクローナル抗体を提供する。
【００９３】
当技術分野で公知の方法を使用することによって、抗体が、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体と同じエピトープに結合し、結合について競合し、結合について交差競合し、または同じＫＤを有するかどうかを判定することができる。一実施形態では、飽和条件下で本発明の抗Ｍ−ＣＳＦ抗体をＭ−ＣＳＦに結合させ、次いで試験抗体がＭ−ＣＳＦに結合する能力を測定する。試験抗体が、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体と同時にＭ−ＣＳＦに結合することができる場合、試験抗体は、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体と異なるエピトープに結合する。しかし、試験抗体が、同時にＭ−ＣＳＦ結合することができない場合、試験抗体は、同じエピトープ、重複エピトープ、またはヒト抗Ｍ−ＣＳＦ抗体によって結合されたエピトープにごく接近しているエピトープに結合する。この実験は、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、またはＦＡＣＳを使用して実施することができる。好適な実施形態では、実験は、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）を使用して実施される。
【００９４】
Ｍ−ＣＳＦへの抗Ｍ−ＣＳＦ抗体の結合親和性
本発明のいくつかの実施形態では、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体は、高い親和性でＭ−ＣＳＦに結合する。いくつかの実施形態では、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体は、１×１０−７Ｍ以下のＫＤでＭ−ＣＳＦに結合する。他の好適な実施形態では、抗体は、１×１０−８Ｍ、１×１０−９Ｍ、１×１０−１０Ｍ、１×１０−１１Ｍ、１×１０−１２Ｍ、またはそれ未満のＫＤでＭ−ＣＳＦに結合する。ある特定の実施形態では、ＫＤは１ｐＭ〜５００ｐＭである。他の実施形態では、ＫＤは、５００ｐＭ〜１μＭの間である。他の実施形態では、ＫＤは、１μＭ〜１００ｎＭの間である。他の実施形態では、ＫＤは、１００ｍＭ〜１０ｎＭの間である。さらにより好適な実施形態では、抗体は、２５２、８８、１００、３．８．３、２．７．３、１．１２０．１、９．１４．４Ｉ、８．１０．３Ｆ、９．７．２ＩＦ、９．１４．４、８．１０．３、９．７．２、９．７．２Ｃ−Ｓｅｒ、９．１４．４Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ４、９．１４．４−ＣＧ２、９．１４．４−ＣＧ４、９．１４．４−Ｓｅｒ、９．７．２−Ｓｅｒ、８．１０．３−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ４、８．１０．３ＦＧ１、または９．１４．４Ｇ１から選択される抗体と実質的に同じＫＤでＭ−ＣＳＦに結合する。別の好適な実施形態では、抗体は、２５２、８８、１００、３．８．３、２．７．３、１．１２０．１、９．１４．４Ｉ、８．１０．３Ｆ、９．７．２ＩＦ、９．１４．４、８．１０．３、９．７．２、９．７．２Ｃ−Ｓｅｒ、９．１４．４Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ４、９．１４．４−ＣＧ２、９．１４．４−ＣＧ４、９．１４．４−Ｓｅｒ、９．７．２−Ｓｅｒ、８．１０．３−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ４、８．１０．３ＦＧ１、もしくは９．１４．４Ｇ１から選択される抗体に由来する軽鎖のＣＤＲ２、および／または重鎖のＣＤＲ３を含む抗体と実質的に同じＫＤでＭ−ＣＳＦに結合する。さらに別の好適な実施形態では、抗体は、配列番号２、６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３８、４６、５０、５４、５８、６２、６６、７０、７４、７８、８２、８６、９０、９４、９８、もしくは１０２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む抗体、または配列番号４、８、１２、１６、２０、２４、２８、３２、３６、４４、４８、５２、５６、もしくは６０のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む抗体と実質的に同じＫＤでＭ−ＣＳＦに結合する。別の好適な実施形態では、抗体は、配列番号４、８、１２、１６、２０、２４、２８、３２、３６、４４、４８、５２、５６、もしくは６０のＶＬ領域のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域のＣＤＲ２を含み、ＣＤＲ１および／もしくはＣＤＲ３を任意選択により含むことができる抗体、または配列番号２、６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３８、４６、５０、５４、５８、６２、６６、７０、７４、７８、８２、８６、９０、９４、９８、もしくは１０２のＶＨ領域のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域のＣＤＲ３を含み、ＣＤＲ１および／もしくはＣＤＲ２を任意選択により含むことができる抗体と実質的に同じＫ��でＭ−ＣＳＦに結合する。
【００９５】
いくつかの実施形態では、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体は、低解離速度を有する。いくつかの実施形態では、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体は、２．０×１０−４ｓ−１以下のＫｏｆｆを有する。他の好適な実施形態では、抗体は、２．０×１０−５のＫｏｆｆ、または２．０×１０−６ｓ−１もしくはそれ未満のＫｏｆｆでＭ−ＣＳＦに結合する。いくつかの実施形態では、ｋｏｆｆは、本明細書に記載される抗体、例えば、２５２、８８、１００、３．８．３、２．７．３、１．１２０．１、９．１４．４Ｉ、８．１０．３Ｆ、９．７．２ＩＦ、９．１４．４、８．１０．３、９．７．２、９．７．２Ｃ−Ｓｅｒ、９．１４．４Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ４、９．１４．４−ＣＧ２、９．１４．４−ＣＧ４、９．１４．４−Ｓｅｒ、９．７．２−Ｓｅｒ、８．１０．３−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ４、８．１０．３ＦＧ１、または９．１４．４Ｇ１から選択される抗体などと実質的に同じである。いくつかの実施形態では、抗体は、（ａ）２５２、８８、１００、３．８．３、２．７．３、１．１２０．１、９．１４．４Ｉ、８．１０．３Ｆ、９．７．２ＩＦ、９．１４．４、８．１０．３、９．７．２、９．７．２Ｃ−Ｓｅｒ、９．１４．４Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ４、９．１４．４−ＣＧ２、９．１４．４−ＣＧ４、９．１４．４−Ｓｅｒ、９．７．２−Ｓｅｒ、８．１０．３−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ４、８．１０．３ＦＧ１、もしくは９．１４．４Ｇ１から選択される抗体の重鎖のＣＤＲ３を含み、ＣＤＲ１および／もしくはＣＤＲ２を任意選択により含むことができ、または（ｂ）２５２、８８、１００、３．８．３、２．７．３、１．１２０．１、９．１４．４Ｉ、８．１０．３Ｆ、９．７．２ＩＦ、９．１４．４、８．１０．３、９．７．２、９．７．２Ｃ−Ｓｅｒ、９．１４．４Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ４、９．１４．４−ＣＧ２、９．１４．４−ＣＧ４、９．１４．４−Ｓｅｒ、９．７．２−Ｓｅｒ、８．１０．３−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ４、８．１０．３ＦＧ１、もしくは９．１４．４Ｇ１から選択される抗体に由来する軽鎖のＣＤＲ２を含み、ＣＤＲ１および／もしくはＣＤＲ３を任意選択により含むことができる抗体と実質的に同じＫｏｆｆでＭ−ＣＳＦに結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号２、６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３８、４６、５０、５４、５８、６２、６６、７０、７４、７８、８２、８６、９０、９４、９８、もしくは１０２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む抗体、または配列番号４、８、１２、１６、２０、２４、２８、３２、３６、４４、４８、５２、５６、もしくは６０のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む抗体と実質的に同じＫｏｆｆでＭ−ＣＳＦに結合する。別の好適な実施形態では、配列番号４、８、１２、１６、２０、２４、２８、３２、３６、４４、４８、５２、５６、もしくは６０のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域のＣＤＲ２を含み、ＣＤＲ１および／もしくはＣＤＲ３を任意選択により含むことができる抗体、または配列番号２、６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３８、４６、５０、５４、５８、６２、６６、７０、７４、７８、８２、８６、９０、９４、９８、もしくは１０２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域のＣＤＲ３を含み、ＣＤＲ１および／もしくはＣＤＲ２を任意選択により含むことができる抗体と実質的に同じＫｏｆｆでＭ−ＣＳＦに結合する。
【００９６】
Ｍ−ＣＳＦに対する抗Ｍ−ＣＳＦ抗体の結合親和性および解離速度は、当技術分野で公知の方法によって求めることができる。結合親和性は、競合的ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、表面プラズモン共鳴によって測定することができる（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）技術を使用することによって）。解離速度は、表面プラズモン共鳴によって測定することができる。結合親和性および解離速度は、表面プラズモン共鳴によって測定されることが好ましい。結合親和性および解離速度は、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）技術を使用して測定されることがより好ましい。実施例６は、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）技術によって、抗Ｍ−ＣＳＦモノクローナル抗体の親和定数を求めるための方法を例示する。
【００９７】
抗Ｍ−ＣＳＦ抗体によるＭ−ＣＳＦ活性の阻害
ｃ−ｆｍｓへのＭ−ＣＳＦ結合の阻害
別の実施形態では、本発明は、ｃ−ｆｍｓ受容体へのＭ−ＣＳＦの結合を阻害し、ｃ−ｆｍｓの活性化を遮断または防止する抗Ｍ−ＣＳＦ抗体を提供する。好適な実施形態では、Ｍ−ＣＳＦはヒトＭ−ＣＳＦである。別の好適な実施形態では、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体はヒト抗体である。ＩＣ５０は、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、および細胞ベースアッセイ、例えば、細胞増殖アッセイ、全血単球形状変化アッセイ、または受容体結合阻害アッセイなどによって測定することができる。一実施形態では、抗体またはその部分は、細胞増殖アッセイによって測定される場合、８．０×１０−７Ｍ以下、好ましくは、３×１０−７Ｍ以下、またはより好ましくは、８×１０−８Ｍ以下のＩＣ５０で細胞増殖を阻害する。別の実施形態では、単球形状変化アッセイによって測定される場合のＩＣ５０は、２×１０−６Ｍ以下、好ましくは９．０×１０−７Ｍ以下、またはより好ましくは、９×１０−８Ｍ以下である。別の好適な実施形態では、受容体結合アッセイによって測定される場合のＩＣ５０は、２×１０−６Ｍ以下、好ましくは、８．０×１０−７Ｍ以下、またはより好ましくは、７．０×１０−８Ｍ以下である。実施例３、４、および５は、様々なタイプのアッセイを例示する。
【００９８】
別の態様では、本発明の抗Ｍ−ＣＳＦ抗体は、抗体の非存在下での細胞の増殖と比較して、少なくとも２０％、より好ましくは、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％、Ｍ−ＣＳＦに応答した単球／マクロファージ細胞増殖を阻害する。
【００９９】
抗体および抗体産生細胞株を生成する方法
免疫化
いくつかの実施形態では、ヒト抗体は、Ｍ−ＣＳＦ抗原を用いて、ヒト免疫グロブリンの重鎖遺伝子座および軽鎖遺伝子座のいくつか、またはすべてを非ヒト動物のゲノム中に含む非ヒト動物を免疫することによって生成される。好適な実施形態では、非ヒト動物は、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）動物（Ａｂｇｅｎｉｘ  Ｉｎｃ．、Ｆｒｅｍｏｎｔ、ＣＡ）である。使用することができる別の非ヒト動物は、Ｍｅｄａｒｅｘ（Ｍｅｄａｒｅｘ、Ｉｎｃ．、Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ、ＮＪ）によって作製されるトランスジェニックマウスである。
【０１００】
ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）マウスは、ヒト免疫グロブリンの重鎖遺伝子座および軽鎖遺伝子座の大きい断片を含み、マウス抗体産生が欠乏した、工学的に作製されたマウス系統である。例えば、Ｇｒｅｅｎら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ７：１３〜２１（１９９４）、ならびに米国特許第５，９１６，７７１号、同第５，９３９，５９８号、同第５，９８５，６１５号、同第５，９９８，２０９号、同第６，０７５，１８１号、同第６，０９１，００１号、同第６，１１４，５９８号、同第６，１３０，３６４号、同第６，１６２，９６３号、および同第６，１５０，５８４号を参照。ＷＯ９１／１０７４１、ＷＯ９４／０２６０２、ＷＯ９６／３４０９６、ＷＯ９６／３３７３５、ＷＯ９８／１６６５４、ＷＯ９８／２４８９３、ＷＯ９８／５０４３３、ＷＯ９９／４５０３１、ＷＯ９９／５３０４９、ＷＯ００／０９５６０、およびＷＯ００／０３７５０４も参照。
【０１０１】
別の態様では、本発明は、Ｍ−ＣＳＦ抗原を用いて、ヒト免疫グロブリン遺伝子座を含む非ヒトトランスジェニック動物を免疫することによって、非ヒト、非マウス動物から抗Ｍ−ＣＳＦ抗体を作製するための方法を提供する。上記に引用した文献に記載された方法を使用して、そのような動物を作製することができる。これらの文献に開示された方法は、米国特許第５，９９４，６１９号に記載されているように改変することができる。米国特許５，９９４，６１９号は、ブタおよびウシに由来する新規培養内部細胞塊（ＣＩＣＭ）細胞および細胞株、ならびに非相同ＤＮＡが挿入されたトランスジェニックＣＩＣＭ細胞を生成するための方法を記載している。クローン化トランスジェニック胚、胎仔、および子孫を作製するのに、ＣＩＣＭトランスジェニック細胞を使用することができる。’６１９特許は、非相同ＤＮＡを自分の子孫に伝達することができるトランスジェニック動物を作製する方法も記載している。好適な実施形態では、非ヒト動物は、ラット、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウシ、またはウマである。
【０１０２】
ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）マウスは、完全ヒト抗体の成人様ヒトレパートリーを生成し、抗原特異的ヒト抗体を産生する。いくつかの実施形態では、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）マウスは、ヒト重鎖遺伝子座およびκ軽鎖遺伝子座のメガベースサイズの生殖系列配置の酵母人工染色体（ＹＡＣ）断片の導入を通じて、ヒト抗体Ｖ遺伝子レパートリーの約８０％を含有する。他の実施形態では、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）マウスは、λ軽鎖遺伝子座のほぼすべてをさらに含有する。その開示が参照により本明細書に組み込まれている、Ｍｅｎｄｅｚら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  １５：１４６〜１５６（１９９７）、ＧｒｅｅｎおよびＪａｋｏｂｏｖｉｔｓ、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８８：４８３〜４９５（１９９８）、ならびにＷＯ９８／２４８９３を参照。
【０１０３】
いくつかの実施形態では、ヒト免疫グロブリン遺伝子を含む非ヒト動物は、ヒト免疫グロブリン「ミニ遺伝子座」を有する動物である。ミニ遺伝子座手法では、Ｉｇ遺伝子座から個々の遺伝子を含めることを通じて、外因性Ｉｇ遺伝子座が模倣される。したがって、１つまたは複数のＶＨ遺伝子、１つまたは複数のＤＨ遺伝子、１つまたは複数のＪＨ遺伝子、μ定常ドメイン、および第２の定常ドメイン（好ましくはγ定常ドメイン）が、動物内への挿入のためのコンストラクトに形成される。この手法は、とりわけ、参照により本明細書に組み込まれている、米国特許第５，５４５，８０７号、同第５，５４５，８０６号、同第５，５６９，８２５号、同第５，６２５，１２６号、同第５，６３３，４２５号、同第５，６６１，０１６号、同第５，７７０，４２９号、同第５，７８９，６５０号、同第５，８１４，３１８号、同第５，５９１，６６９号、同第５，６１２，２０５号、同第５，７２１，３６７号、同第５，７８９，２１５号、および同第５，６４３，７６３号に記載されている。
【０１０４】
別の態様では、本発明は、ヒト化抗Ｍ−ＣＳＦ抗体を作製するための方法を提供する。いくつかの実施形態では、非ヒト動物が、抗体産生を可能にする条件下で、以下に記載されるように、Ｍ−ＣＳＦ抗原を用いて免疫される。抗体産生細胞が動物から単離され、骨髄腫と融合されることによってハイブリドーマが生成され、対象とする抗Ｍ−ＣＳＦ抗体の重鎖および軽鎖をコードする核酸が単離される。これらの核酸は、当業者に公知の技法を使用し、さらに以下に記載されるように引き続いて工学的に作製されることによって、非ヒト配列の量が低減され、すなわち、ヒトにおける免疫応答を低減するために抗体がヒト化される。
【０１０５】
いくつかの実施形態では、Ｍ−ＣＳＦ抗原は、単離および／または精製されたＭ−ＣＳＦである。好適な実施形態では、Ｍ−ＣＳＦ抗原は、ヒトＭ−ＣＳＦである。いくつかの実施形態では、Ｍ−ＣＳＦ抗原は、Ｍ−ＣＳＦの断片である。いくつかの実施形態では、Ｍ−ＣＳＦ断片は、Ｍ−ＣＳＦの細胞外ドメインである。いくつかの実施形態では、Ｍ−ＣＳＦ断片は、Ｍ−ＣＳＦの少なくとも１つのエピトープを含む。他の実施形態では、Ｍ−ＣＳＦ抗原は、細胞表面上でＭ−ＣＳＦまたはその免疫原性断片を発現または過剰発現する細胞である。いくつかの実施形態では、Ｍ−ＣＳＦ抗原は、Ｍ−ＣＳＦ融合タンパク質である。Ｍ−ＣＳＦは、公知の技法を使用して、天然源から精製することができる。組換え型Ｍ−ＣＳＦは、市販されている。
【０１０６】
動物の免疫化は、当技術分野で公知の任意の方法によるものとすることができる。例えば、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ、１９９０を参照。非ヒト動物、例えば、マウス、ラット、ヒツジ、ヤギ、ブタ、ウシ、およびウマなどを免疫するための方法は、当技術分野で周知である。例えば、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、上記、ならびに米国特許第５，９９４，６１９号を参照。好適な実施形態では、Ｍ−ＣＳＦ抗原は、免疫応答を刺激するために、アジュバントとともに投与される。例示的なアジュバントには、完全もしくは不完全フロイントアジュバント、ＲＩＢＩ（ムラミルジペプチド）、またはＩＳＣＯＭ（免疫賦活性複合体）が含まれる。そのようなアジュバントは、限局性沈着の状態でポリペプチドを隔離することによって、ポリペプチドが急速に分散するのを保護することができ、またはこれらは、マクロファージに対して走化性である因子、および免疫系の他の成分を分泌するように宿主を刺激する物質を含有することができる。ポリペプチドが投与されている場合、免疫化スケジュールは、ポリペプチドの２回以上の投与を伴い、数週間にわたって広められることが好ましい。実施例１は、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）マウス中で抗Ｍ−ＣＳＦモノクローナル抗体を生成するための方法を例示する。
【０１０７】
抗体および抗体産生細胞株の生成
Ｍ−ＣＳＦ抗原を用いて動物を免疫した後、抗体および／または抗体産生細胞をその動物から得ることができる。いくつかの実施形態では、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体含有血清が、動物を出血させ、または屠殺することによって動物から得られる。血清は、動物から得られるままで使用することができ、免疫グロブリン画分を血清から得ることができ、または抗Ｍ−ＣＳＦ抗体を血清から精製することができる。
【０１０８】
いくつかの実施形態では、抗体産生不死化細胞株は、免疫動物から単離された細胞から調製される。免疫化後、動物が屠殺され、リンパ節および／または脾臓Ｂ細胞が不死化される。細胞を不死化する方法として、それだけに限らないが、細胞に発癌遺伝子をトランスフェクトすること、細胞に発癌性ウイルスを感染させること、不死化細胞を選択する条件下で細胞を培養すること、発癌性化合物または突然変異化合物（ｍｕｔａｔｉｎｇ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ）に細胞を曝すこと、不死化細胞、例えば、骨髄腫細胞と細胞を融合すること、および腫瘍抑制遺伝子を不活化することが挙げられる。例えば、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、上記を参照。骨髄腫細胞との融合が使用される場合、骨髄腫細胞は、免疫グロブリンポリペプチドを分泌しない（非分泌性細胞株）ことが好ましい。不死化細胞は、Ｍ−ＣＳＦ、その部分、またはＭ−ＣＳＦを発現する細胞を使用してスクリーニングされる。好適な実施形態では、初期スクリーニングは、酵素結合イムノアッセイ（ＥＬＩＳＡ）、またはラジオイムノアッセイを使用して実施される。ＥＬＩＳＡスクリーニングの例は、参照により本明細書に組み込まれているＷＯ００／３７５０４に示されている。
【０１０９】
抗Ｍ−ＣＳＦ抗体産生細胞、例えば、ハイブリドーマは、以下にさらに記載されるように、強固な増殖、高い抗体産生、および望ましい抗体特性を含めた望ましい特性について、選択、クローン化され、さらにスクリーニングされる。ハイブリドーマは、同系の動物において、免疫系を欠く動物、例えば、ヌードマウスにおいてインビボで、またはインビトロで、細胞培養で増殖させることができる。ハイブリドーマを選択し、クローニングし、増殖させる方法は、当業者に周知である。
【０１１０】
好適な実施形態では、免疫動物は、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現する非ヒト動物であり、脾臓Ｂ細胞は、この非ヒト動物と同じ種に由来する骨髄腫細胞株に融合される。より好適な実施形態では、免疫動物は、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）動物であり、骨髄腫細胞株は、非分泌性マウス骨髄腫である。さらにより好適な実施形態では、骨髄腫細胞株は、Ｐ３−Ｘ６３−ＡＧ８−６５３である。例えば、実施例１を参照。
【０１１１】
したがって、一実施形態では、本発明は、Ｍ−ＣＳＦに対するヒトモノクローナル抗体またはその断片を産生する細胞株を生成する方法であって、（ａ）Ｍ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦの部分、またはＭ−ＣＳＦを発現する細胞もしくは組織を用いて、本明細書に記載される非ヒトトランスジェニック動物を免疫するステップと、（ｂ）トランスジェニック動物にＭ−ＣＳＦに対する免疫応答をマウントさせるステップと、（ｃ）トランスジェニック動物からＢリンパ球を単離するステップと、（ｄ）Ｂリンパ球を不死化するステップと、（ｅ）不死化Ｂリンパ球の個々のモノクローナル集団を作り出すステップと、（ｆ）不死化Ｂリンパ球をスクリーニングすることによって、Ｍ−ＣＳＦに対する抗体を同定するステップとを含む方法を提供する。
【０１１２】
別の態様では、本発明は、ヒト抗Ｍ−ＣＳＦ抗体を産生するハイブリドーマを提供する。好適な実施形態では、ハイブリドーマは、上述したように、マウスハイブリドーマである。他の実施形態では、ハイブリドーマは、非ヒト、非マウス種、例えば、ラット、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウシ、またはウマなどにおいて生成される。別の実施形態では、ハイブリドーマは、ヒトハイブリドーマである。
【０１１３】
別の好適な実施形態では、トランスジェニック動物がＭ−ＣＳＦを用いて免疫され、初代細胞、例えば、脾臓細胞または末梢血細胞が免疫されたトランスジェニック動物から単離され、所望の抗原に特異的な抗体を産生する個々の細胞が同定される。各個々の細胞に由来するポリアデニル化ｍＲＮＡが単離され、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）が、可変領域配列にアニールするセンスプライマー、例えば、ヒト重鎖およびヒト軽鎖の可変領域遺伝子のＦＲ１領域のほとんどまたはすべてを認識する縮重プライマー、ならびに定常領域配列または連結領域配列にアニールするアンチセンスプライマーを使用して実施される。次いで、重鎖可変領域および軽鎖可変領域のｃＤＮＡがクローン化され、重鎖、およびκ定常ドメインまたはλ定常ドメインなどのそれぞれの免疫グロブリン定常領域を有するキメラ抗体として、任意の適当な宿主細胞、例えば、骨髄腫細胞において発現される。参照により本明細書に組み込まれている、Ｂａｂｃｏｏｋ、Ｊ．Ｓ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９３：７８４３〜４８、１９９６を参照。次いで、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体を、本明細書に記載されるように同定および単離することができる。
【０１１４】
別の実施形態では、Ｍ−ＣＳＦに対する様々な親和性を有する抗体のレパートリーを含有するライブラリーを提供するために、ファージディスプレイ技法を使用することができる。そのようなレパートリーを生成するために、免疫動物に由来するＢ細胞を不死化する必要はない。むしろ、一次Ｂ細胞を、ＤＮＡ源として直接使用することができる。発現ライブラリー、例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）中にトランスフェクトされたファージディスプレイライブラリーを調製するために、例えば、脾臓に由来するＢ細胞から得られるｃＤＮＡの混合物が使用される。得られる細胞は、Ｍ−ＣＳＦに対する免疫反応性について試験される。そのようなライブラリーから高親和性ヒト抗体を同定するための技法は、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓら、ＥＭＢＯ  Ｊ．、１３：３２４５〜３２６０（１９９４）、Ｎｉｓｓｉｍら、同書、６９２〜６９８頁、およびＧｒｉｆｆｉｔｈｓら、同書、１２：７２５〜７３４によって記載されている。最終的に、抗原に対して所望の規模の結合親和性を生じる、ライブラリーからのクローンが同定され、そのような結合に関与する生成物をコードするＤＮＡが回収され、標準的な組換え発現のために操作される。ファージディスプレイライブラリーも、以前に操作されたヌクレオチド配列を使用して構築し、同様の様式でスクリーニングすることができる。一般に、重鎖および軽鎖をコードするｃＤＮＡは、ファージライブラリーにおける生成のために、独立して供給され、または連結されることによって、Ｆｖ類似体を形成する。
【０１１５】
次いでファージライブラリーは、Ｍ−ＣＳＦに対して最高の親和性を有する抗体についてスクリーニングされ、遺伝物質が、適切なクローンから回収される。さらなるラウンドのスクリーニングにより、単離された元の抗体の親和性を増大させることができる。
【０１１６】
別の態様では、本発明は、ヒト抗Ｍ−ＣＳＦ抗体を生成するハイブリドーマを提供する。好適な実施形態では、ハイブリドーマは、上述したように、マウスハイブリドーマである。他の実施形態では、ハイブリドーマは、非ヒト、非マウス種、例えば、ラット、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウシ、またはウマなどにおいて生成される。別の実施形態では、ハイブリドーマは、ヒトハイブリドーマである。
【０１１７】
核酸、ベクター、宿主細胞、および抗体を作製する組換え方法
核酸
本発明は、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体をコードする核酸分子も包含する。いくつかの実施形態では、異なる核酸分子が、抗Ｍ−ＣＳＦ免疫グロブリンの重鎖および軽鎖をコードする。他の実施形態では、同じ核酸分子が、抗Ｍ−ＣＳＦ免疫グロブリンの重鎖および軽鎖をコードする。一実施形態では、核酸は、本発明のＭ−ＣＳＦ抗体をコードする。
【０１１８】
いくつかの実施形態では、軽鎖の可変ドメインをコードする核酸分子は、ヒトＶκＬ５、Ｏ１２、Ｌ２、Ｂ３、Ａ２７遺伝子、およびＪκ１、Ｊκ２、Ｊκ３、またはＪκ４遺伝子を含む。
【０１１９】
いくつかの実施形態では、軽鎖をコードする核酸分子は、生殖系列アミノ酸配列から１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個の突然変異を含むアミノ酸配列をコードする。いくつかの実施形態では、核酸分子は、生殖系列配列と比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０個の非保存的アミノ酸置換および／または１、２、もしくは３個の非保存的置換を含むＶＬアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む。置換は、ＣＤＲ領域、フレームワーク領域内であっても、定常ドメイン内であってもよい。
【０１２０】
いくつかの実施形態では、核酸分子は、抗体２５２、８８、１００、３．８．３、２．７．３、１．１２０．１、９．１４．４Ｉ、８．１０．３Ｆ、９．７．２ＩＦ、９．１４．４、８．１０．３、９．７．２、９．７．２Ｃ−Ｓｅｒ、９．１４．４Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ４、９．１４．４−ＣＧ２、９．１４．４−ＣＧ４、９．１４．４−Ｓｅｒ、９．７．２−Ｓｅｒ、８．１０．３−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ４、８．１０．３ＦＧ１、または９．１４．４Ｇ１のうちの１つのＶＬにおいて見出される変異と同一である、生殖系列配列と比較した１つまたは複数の変異体を含むＶＬアミノ酸配列をコードする。
【０１２１】
いくつかの実施形態では、核酸分子は、抗体２５２、８８、１００、３．８．３、２．７．３、１．１２０．１、９．１４．４、８．１０．３、または９．７．２のうちの１つのＶＬにおいて見出される生殖系列配列と比較して、少なくとも３つのアミノ酸突然変異をコードする。
【０１２２】
いくつかの実施形態では、核酸分子は、モノクローナル抗体２５２（配列番号４）、８８（配列番号８）、１００（配列番号１２）、３．８．３（配列番号１６）、２．７．３（配列番号２０）、１．１２０．１（配列番号２４）、９．１４．４Ｉ（配列番号２８）、８．１０．３Ｆ（配列番号３２）、９．７．２ＩＦ（配列番号３６）、９．１４．４（配列番号２８）、８．１０．３（配列番号４４）、９．７．２（配列番号４８）、９．７．２Ｃ−Ｓｅｒ（配列番号５２）、９．１４．４Ｃ−Ｓｅｒ（配列番号５６）、８．１０．３Ｃ−Ｓｅｒ（配列番号６０）、８．１０．３−ＣＧ２（配列番号６０）、９．７．２−ＣＧ２（配列番号５２）、９．７．２−ＣＧ４（配列番号５２）、９．１４．４−ＣＧ２（配列番号５６）、９．１４．４−ＣＧ４（配列番号５６）、９．１４．４−Ｓｅｒ（配列番号２８）、９．７．２−Ｓｅｒ（配列番号４８）、８．１０．３−Ｓｅｒ（配列番号４４）、８．１０．３−ＣＧ４（配列番号６０）、８．１０．３ＦＧ１（配列番号３２）、または９．１４．４Ｇ１（配列番号２８）のＶＬアミノ酸配列またはその部分をコードするヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、前記部分は、少なくともＣＤＲ２領域を含む。いくつかの実施形態では、核酸は、前記抗体の軽鎖ＣＤＲのアミノ酸配列をコードする。いくつかの実施形態では、前記部分は、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３を含む連続した部分である。
【０１２３】
いくつかの実施形態では、核酸分子は、配列番号４、８、１２、１６、２０、２４、２８、３２、３６、４４、４８、５２、５６、または６０のうちの１つの軽鎖アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む。いくつかの好適な実施形態では、核酸分子は、配列番号３、７、１１、２７、３１、３５、４３、もしくは４７の軽鎖ヌクレオチド配列、またはその部分を含む。
【０１２４】
いくつかの実施形態では、核酸分子は、図１に示したＶＬアミノ酸配列、または抗体２５２、８８、１００、３．８．３、２．７．３、１．１２０．１、９．１４．４Ｉ、８．１０．３Ｆ、９．７．２ＩＦ、９．１４．４、８．１０．３、９．７．２、９．７．２Ｃ−Ｓｅｒ、９．１４．４Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ４、９．１４．４−ＣＧ２、９．１４．４−ＣＧ４、９．１４．４−Ｓｅｒ、９．７．２−Ｓｅｒ、８．１０．３−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ４、８．１０．３ＦＧ１、もしくは９．１４．４Ｇ１のうちのいずれか１つのＶＬアミノ酸配列、または配列番号４、８、１２、１６、２０、２４、２８、３２、３６、４４、４８、５２、５６、もしくは６０のいずれか１つのアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるＶＬアミノ酸配列をコードする。本発明の核酸分子は、上述したものなどの高度にストリンジェントな条件下で、配列番号４、８、１２、１６、２０、２４、２８、３２、３６、４４、４８、５２、５６、もしくは６０の軽鎖アミノ酸配列をコードする核酸配列にハイブリダイズし、または配列番号３、７、１１、２７、３１、３５、４３、もしくは４７の軽鎖核酸配列を有する核酸を含む。
【０１２５】
別の実施形態では、核酸は、２５２、８８、１００、３．８．３、２．７．３、１．１２０．１、９．１４．４Ｉ、８．１０．３Ｆ、９．７．２ＩＦ、９．１４．４、８．１０．３、９．７．２、９．７．２Ｃ−Ｓｅｒ、９．１４．４Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ４、９．１４．４−ＣＧ２、９．１４．４−ＣＧ４、９．１４．４−Ｓｅｒ、９．７．２−Ｓｅｒ、８．１０．３−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ４、８．１０．３ＦＧ１、もしくは９．１４．４Ｇ１から選択される抗体の完全長軽鎖、または配列番号４、８、１２、１６、２０、２４、２８、３２、３６、４４、４８、５２、５６、もしくは６０のアミノ酸配列および軽鎖の定常領域を含む軽鎖、または突然変異を含む軽鎖をコードする。さらに、核酸は、配列番号３、７、１１、２７、３１、３５、４３、もしくは４７の軽鎖ヌクレオチド配列、および軽鎖の定常領域をコードするヌクレオチド配列、または突然変異を含む軽鎖をコードする核酸分子を含むことができる。
【０１２６】
別の好適な実施形態では、核酸分子は、ヒトＶＨ１−１８、３−３３、３−１１、３−２３、３−４８、もしくは３−７遺伝子配列、またはこれらに由来する配列を含む重鎖（ＶＨ）の可変ドメインをコードする。様々な実施形態では、核酸分子は、ヒトＶＨ１−１８遺伝子、ＤＨ４−２３遺伝子、およびヒトＪＨ４遺伝子、ヒトＶＨ３−３３遺伝子、ヒトＤＨ１−２６遺伝子、およびヒトＪＨ４遺伝子、ヒトＶＨ３−１１遺伝子、ヒトＤＨ７−２７遺伝子、およびヒトＪＨ４遺伝子、ヒトＶＨ３−１１遺伝子、ヒトＤＨ７−２７遺伝子、およびヒトＪＨ６遺伝子、ヒトＶＨ３−２３遺伝子、ヒトＤＨ１−２６遺伝子、およびヒトＪＨ４遺伝子、ヒトＶＨ３−７遺伝子、ヒトＤＨ６−１３遺伝子、およびヒトＪＨ４遺伝子、ヒトＶＨ３−１１遺伝子、ヒトＤＨ７−２７遺伝子、およびヒトＪＨ４ｂ遺伝子、ヒトＶＨ３−４８遺伝子、ヒトＤＨ１−２６遺伝子、およびヒトＪＨ４ｂ遺伝子、ヒトＶＨ３−１１遺伝子、ヒトＤＨ６−１３遺伝子、およびヒトＪＨ６ｂ遺伝子、またはヒト遺伝子に由来する配列を含む。
【０１２７】
いくつかの実施形態では、核酸分子は、ヒトＶ、Ｄ、またはＪ遺伝子の生殖系列アミノ酸配列と比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、または１８個の突然変異を含むアミノ酸配列をコードする。いくつかの実施形態では、前記突然変異は、ＶＨ領域内にある。いくつかの実施形態では、前記突然変異は、ＣＤＲ領域内にある。
【０１２８】
いくつかの実施形態では、核酸分子は、モノクローナル抗体２５２、８８、１００、３．８．３、２．７．３、１．１２０．１、９．１４．４Ｉ、８．１０．３Ｆ、９．７．２ＩＦ、９．１４．４、８．１０．３、９．７．２、９．７．２Ｃ−Ｓｅｒ、９．１４．４Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ４、９．１４．４−ＣＧ２、９．１４．４−ＣＧ４、９．１４．４−Ｓｅｒ、９．７．２−Ｓｅｒ、８．１０．３−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ４、８．１０．３ＦＧ１、または９．１４．４Ｇ１のＶＨに見出されるアミノ酸突然変異と同一である、生殖系列配列と比較して１つまたは複数のアミノ酸突然変異をコードする。いくつかの実施形態では、核酸は、上記に列挙したモノクローナル抗体のうちの１つにおいて見出される少なくとも３つのアミノ酸突然変異と同一である、生殖系列配列を比較して少なくとも３つのアミノ酸突然変異をコードする。
【０１２９】
いくつかの実施形態では、核酸分子は、抗体２５２（配列番号４）、８８（配列番号８）、１００（配列番号１２）、３．８．３（配列番号１６）、２．７．３（配列番号２０）、１．１２０．１（配列番号２４）、９．１４．４Ｉ（配列番号２８）、８．１０．３Ｆ（配列番号３２）、９．７．２ＩＦ（配列番号３６）、９．１４．４（配列番号２８）、８．１０．３（配列番号４４）、９．７．２（配列番号４８）、９．７．２Ｃ−Ｓｅｒ（配列番号５２）、９．１４．４Ｃ−Ｓｅｒ（配列番号５６）、８．１０．３Ｃ−Ｓｅｒ（配列番号６０）、８．１０．３−ＣＧ２（配列番号６０）、９．７．２−ＣＧ２（配列番号５２）、９．７．２−ＣＧ４（配列番号５２）、９．１４．４−ＣＧ２（配列番号５６）、９．１４．４−ＣＧ４（配列番号５６）、９．１４．４−Ｓｅｒ（配列番号２８）、９．７．２−Ｓｅｒ（配列番号４８）、８．１０．３−Ｓｅｒ（配列番号４４）、８．１０．３−ＣＧ４（配列番号６０）、８．１０．３ＦＧ１（配列番号３２）、もしくは９．１４．４Ｇ１（配列番号２８）のＶＨアミノ酸配列、または保存アミノ酸突然変異および／もしくは合計で３個以下の非保存的アミノ酸置換を有する前記配列の少なくとも一部をコードするヌクレオチド配列を含む。様々な実施形態では、配列は、１つまたは複数のＣＤＲ領域、好ましくは、ＣＤＲ３領域、３つすべてのＣＤＲ領域、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３を含む連続した部分、またはＶＨ領域全体をコードする。
【０１３０】
いくつかの実施形態では、核酸分子は、配列番号２、６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３８、４６、５０、５４、５８、６２、６６、７０、７４、７８、８２、８６、９０、９４、９８、または１０２のうちの１つのアミノ酸配列をコードする重鎖ヌクレオチド配列を含む。いくつかの好適な実施形態では、核酸分子は、配列番号１、５、９、２５、２９、３３、３７、４５、９７、または１０１の重鎖ヌクレオチド配列の少なくとも一部を含む。いくつかの実施形態では、前記部分は、ＶＨ領域、ＣＤＲ３領域、３つすべてのＣＤＲ領域、またはＣＤＲ１〜ＣＤＲ３を含む連続した領域をコードする。
【０１３１】
いくつかの実施形態では、核酸分子は、図４に示したＶＨアミノ酸配列、または配列番号２、６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３８、４６、５０、５４、５８、６２、６６、７０、７４、７８、８２、８６、９０、９４、９８、もしくは１０２のいずれか１つのＶＨアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるＶＨアミノ酸配列をコードする。本発明の核酸分子は、上述したものなどの高度にストリンジェントな条件下で、配列番号２、６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３８、４６、５０、５４、５８、６２、６６、７０、７４、７８、８２、８６、９０、９４、９８、もしくは１０２の重鎖アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列にハイブリダイズし、または配列番号１、５、９、２５、２９、３３、３７、４５、９７、もしくは１０１のヌクレオチド配列を有する核酸を含む。
【０１３２】
別の実施形態では、核酸は、２５２、８８、１００、３．８．３、２．７．３、１．１２０．１、９．１４．４Ｉ、８．１０．３Ｆ、９．７．２ＩＦ、９．１４．４、８．１０．３、９．７．２、９．７．２Ｃ−Ｓｅｒ、９．１４．４Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ４、９．１４．４−ＣＧ２、９．１４．４−ＣＧ４、９．１４．４−Ｓｅｒ、９．７．２−Ｓｅｒ、８．１０．３−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ４、８．１０．３ＦＧ１、もしくは９．１４．４Ｇ１から選択される抗体の完全長重鎖、または配列番号２、６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３８、４６、５０、５４、５８、６２、６６、７０、７４、７８、８２、８６、９０、９４、９８、もしくは１０２のアミノ酸配列および重鎖の定常領域を有する重鎖、または突然変異を含む重鎖をコードする。さらに、核酸は、配列番号１、５、９、２５、２９、３３、３７、４５、９７、もしくは１０１の重鎖ヌクレオチド配列、および軽鎖の定常領域をコードするヌクレオチド配列、または突然変異を含む重鎖をコードする核酸分子を含むことができる。
【０１３３】
抗Ｍ−ＣＳＦ抗体の重鎖もしくは全体の軽鎖、またはその一部をコードする核酸分子は、そのような抗体を産生する任意の源から単離することができる。様々な実施形態では、核酸分子は、Ｍ−ＣＳＦを用いて免疫された動物から単離されたＢ細胞、または抗Ｍ−ＣＳＦ抗体を発現するそのようなＢ細胞に由来する不死化細胞から単離される。抗体をコードするｍＲＮＡを単離する方法は、当技術分野で周知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋらを参照。ｍＲＮＡは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、または抗体遺伝子のｃＤＮＡクローニングにおいて使用するためのｃＤＮＡを生成するのに使用することができる。好適な実施形態では、核酸分子は、ハイブリドーマの融合パートナーの１つとして、非ヒトトランスジェニック動物に由来するヒト免疫グロブリン産生細胞を有するハイブリドーマから単離される。さらにより好適な実施形態では、ヒト免疫グロブリン産生細胞は、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）動物から単離される。別の実施形態では、ヒト免疫グロブリン産生細胞は、上述したように、非ヒト、非マウストランスジェニック動物に由来する。別の実施形態では、核酸は、非ヒト、非トランスジェニック動物から単離される。非ヒト、非トランスジェニック動物から単離される核酸分子は、例えば、ヒト化抗体のために使用することができる。
【０１３４】
いくつかの実施形態では、本発明の抗Ｍ−ＣＳＦ抗体の重鎖をコードする核酸は、任意の源に由来する重鎖定常ドメインをコードするヌクレオチド配列にインフレームで連結した、本発明のＶＨドメインをコードするヌクレオチド配列を含むことができる。同様に、本発明の抗Ｍ−ＣＳＦ抗体の軽鎖をコードする核酸分子は、任意の源に由来する軽鎖定常ドメインをコードするヌクレオチド配列にインフレームで連結した、本発明のＶＬドメインをコードするヌクレオチド配列を含むことができる。
【０１３５】
本発明のさらなる態様では、重（ＶＨ）鎖および軽（ＶＬ）鎖の可変ドメインをコードする核酸分子は、全長抗体遺伝子に「変換される」。一実施形態では、ＶＨドメインまたはＶＬドメインをコードする核酸分子は、ＶＨセグメントがベクター内でＣＨセグメント（複数可）に作動可能に連結され、ＶＬセグメントがベクター内でＣＬセグメントに作動可能に連結されるように、それぞれ重鎖定常（ＣＨ）ドメインまたは軽鎖（ＣＬ）定常ドメインをすでにコードしている発現ベクター中に挿入することによって、全長抗体遺伝子に変換される。別の実施形態では、ＶＨドメインおよび／またはＶＬドメインをコードする核酸分子は、標準的な分子生物学的技法を使用して、ＶＨドメインまたはＶＬドメインをコードする核酸分子を、ＣＨドメインおよび／またはＣＬドメインをコードする核酸分子に連結、例えば、ライゲートすることによって、全長抗体遺伝子に変換される。ヒト重鎖および軽鎖の免疫グロブリン定常ドメイン遺伝子の核酸配列は、当技術分野で公知である。例えば、Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、５版、ＮＩＨ  Ｐｕｂｌ．Ｎｏ．９１−３２４２、１９９１を参照。次いで、完全長の重鎖および／または軽鎖をコードする核酸分子は、これらが導入された細胞から発現させることができ、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体を単離することができる。
【０１３６】
核酸分子は、大量の抗Ｍ−ＣＳＦ抗体を組換えで発現させるのに使用することができる。核酸分子は、以下にさらに記載されるように、キメラ抗体、二重特異性抗体、単鎖抗体、イムノアドヘシン、ダイアボディ、突然変異抗体、および抗体誘導体を生成するのにも使用することができる。核酸分子が非ヒト、非トランスジェニック動物に由来する場合、核酸分子は、やはり以下に記載されるように、抗体のヒト化のために使用することができる。
【０１３７】
別の実施形態では、本発明の核酸分子は、特異的抗体配列についてのプローブまたはＰＣＲプライマーとして使用される。例えば、核酸は、診断法におけるプローブとして、または使用することができるＤＮＡの領域を増幅するため、とりわけ、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体の可変ドメインをコードする追加の核酸分子を単離するためのＰＣＲプライマーとして使用することができる。いくつかの実施形態では、核酸分子は、オリゴヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、対象とする抗体の重鎖および軽鎖の高度に可変な領域に由来する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、抗体２５２、８８、１００、３．８．３、２．７．３、もしくは１．１２０．１、または本明細書に記載されるこれらの変異体のＣＤＲのうちの１つまたは複数のすべて、または一部をコードする。
【０１３８】
ベクター
本発明は、本発明の抗Ｍ−ＣＳＦ抗体またはその抗原結合部分の重鎖をコードする核酸分子を含むベクターを提供する。本発明は、そのような抗体またはその抗原結合部分の軽鎖をコードする核酸分子を含むベクターも提供する。本発明はさらに、融合タンパク質、修飾抗体、抗体断片、およびこれらのプローブをコードする核酸分子を含むベクターを提供する。
【０１３９】
いくつかの実施形態では、本発明の抗Ｍ−ＣＳＦ抗体、または抗原結合部分は、上述したように得られる、部分的な、または完全長の軽鎖および重鎖をコードするＤＮＡを、遺伝子が、転写制御配列および翻訳制御配列などの必要な発現制御配列に作動可能に連結されるように、発現ベクター中に挿入することによって発現される。発現ベクターとして、プラスミド、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、植物ウイルス、例えば、カリフラワーモザイクウイルス、タバコモザイクウイルスなど、コスミド、ＹＡＣ、ＥＢＶ由来エピソームなどが挙げられる。抗体遺伝子は、ベクター内の転写制御配列および翻訳制御配列が、抗体遺伝子の転写および翻訳を調節するというその意図された機能を果たすように、ベクター中にライゲートされる。発現ベクターおよび発現制御配列は、使用される発現宿主細胞と適合性であるように選択される。抗体軽鎖遺伝子および抗体重鎖遺伝子は、別個のベクター中に挿入することができる。好適な実施形態では、両遺伝子は、同じ発現ベクター中に挿入される。抗体遺伝子は、標準的な方法（例えば、抗体遺伝子断片上の相補性制限部位とベクターのライゲーション、または制限部位がまったく存在しない場合、平滑末端ライゲーション）によって発現ベクター中に挿入される。
【０１４０】
好都合なベクターは、上述したように、ＶＨ配列またはＶＬ配列を容易に挿入し、発現させることができるように工学的に作製された適切な制限部位を有する、機能的に完全なヒトＣＨまたはヒトＣＬ免疫グロブリン配列をコードするものである。そのようなベクターでは、スプライシングは通常、挿入されたＪ領域内のスプライスドナー部位とヒトＣドメインに先行するスプライスアクセプター部位との間で、およびまた、ヒトＣＨエクソン内に存在するスプライス領域において起こる。ポリアデニル化および転写終止は、コード領域の下流の天然の染色体部位で起こる。組換え発現ベクターは、宿主細胞に由来する抗体鎖の分泌を促進するシグナルペプチドをコードすることもできる。抗体鎖遺伝子は、シグナルペプチドが、免疫グロブリン鎖のアミノ末端にインフレームで連結されるように、ベクター中にクローン化することができる。シグナルペプチドは、免疫グロブリンシグナルペプチド、または非相同シグナルペプチド（すなわち、非免疫グロブリンタンパク質に由来するシグナルペプチド）とすることができる。
【０１４１】
抗体鎖遺伝子に加えて、本発明の組換え発現ベクターは、宿主細胞中の抗体鎖遺伝子の発現を制御する調節配列を担持する。調節配列の選択を含めた発現ベクターの設計は、形質転換される宿主細胞の選択、望まれるタンパク質の発現のレベルなどの要因に依存し得ることが、当業者によって理解されるであろう。哺乳動物宿主細胞での発現に好適な調節配列は、哺乳動物細胞内で高レベルのタンパク質発現を指示するウイルスエレメント、例えば、レトロウイルスＬＴＲに由来するプロモーターおよび／またはエンハンサー、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）（ＣＭＶプロモーター／エンハンサーなど）、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）（ＳＶ４０プロモーター／エンハンサーなど）、アデノウイルス（例えば、アデノウイルス主要後期プロモーター（ＡｄＭＬＰ））、ポリオーマ、ならびに天然免疫グロブリンおよびアクチンプロモーターなどの強い哺乳動物プロモーターなどを含む。ウイルス調節エレメント、およびこれらの配列のさらなる説明については、例えば、米国特許第５，１６８，０６２号、米国特許第４，５１０，２４５号、および米国特許第４，９６８，６１５号を参照。プロモーターおよびベクターの説明、ならびに植物の形質転換を含めた、植物中で抗体を発現させるための方法は、当技術分野で公知である。例えば、参照により本明細書に組み込まれている米国特許第６，５１７，５２９号を参照。細菌性細胞または真菌細胞、例えば、酵母細胞中でポリペプチドを発現させる方法も当技術分野で周知である。
【０１４２】
抗体鎖遺伝子および調節配列に加えて、本発明の組換え発現ベクターは、宿主細胞内でのベクターの複製を調節する配列（例えば、複製起点）などの追加の配列、および選択可能マーカー遺伝子を担持することができる。選択可能マーカー遺伝子は、ベクターが導入されている宿主細胞の選択を促進する（例えば、米国特許第４，３９９，２１６号、同第４，６３４，６６５号、および同第５，１７９，０１７号を参照）。例えば、一般的に、選択可能マーカー遺伝子は、ベクターが導入されている宿主細胞に、薬物、例えば、Ｇ４１８、ハイグロマイシン、またはメトトレキセートなどに対する耐性を付与する。好適な選択可能マーカー遺伝子には、ジヒドロ葉酸還元酵素（ＤＨＦＲ）遺伝子（メトトレキセート選択／増幅を用いてｄｈｆｒ−宿主細胞で使用するため）、ネオマイシン耐性遺伝子（Ｇ４１８選択のため）、およびグルタミン酸合成酵素遺伝子が含まれる。
【０１４３】
非ハイブリドーマ宿主細胞、およびタンパク質を組換えで生成する方法
抗Ｍ−ＣＳＦ抗体をコードする核酸分子、およびこれらの核酸分子を含むベクターを、適当な哺乳動物、植物、細菌、または酵母の宿主細胞のトランスフェクションに使用することができる。形質転換は、宿主細胞中にポリヌクレオチドを導入するための任意の公知の方法によるものとすることができる。哺乳動物細胞中に非相同ポリヌクレオチドを導入するための方法は、当技術分野で周知であり、これらには、デキストラン媒介トランスフェクション、リン酸カルシウム沈殿、ポリブレン媒介トランスフェクション、プロトプラスト融合、電気穿孔、リポソーム内でのポリヌクレオチド（複数可）のカプセル化、および核内へのＤＮＡの直接微量注入が含まれる。さらに、核酸分子を、ウイルスベクターによって哺乳動物細胞中に導入することができる。細胞を形質転換する方法は、当技術分野で周知である。例えば、米国特許第４，３９９，２１６号、同第４，９１２，０４０号、同第４，７４０，４６１号、および同第４，９５９，４５５号を参照（これらの特許は、参照により本明細書に組み込まれている）。植物細胞を形質転換する方法は、例えば、アグロバクテリウム媒介形質転換、微粒子銃形質転換、直接注入、電気穿孔およびウイルス形質転換を含めて、当技術分野で周知である。細菌細胞および酵母細胞を形質転換する方法も、当技術分野で周知である。
【０１４４】
発現のための宿主として利用可能な哺乳動物細胞株は、当技術分野で周知であり、これらには、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）から入手可能な多くの不死化細胞株が含まれる。これらとして、とりわけ、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＮＳＯ、ＳＰ２細胞、ＨｅＬａ細胞、仔ハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞、サル腎細胞（ＣＯＳ）、ヒト肝細胞癌細胞（例えば、Ｈｅｐ  Ｇ２）、Ａ５４９細胞、およびいくつかの他の細胞株が挙げられる。特に優先される細胞株は、どの細胞株が高発現レベルを有するかを判定することによって選択される。使用することができる他の細胞株は、Ｓｆ９細胞などの昆虫細胞株である。抗体遺伝子をコードする組換え発現ベクターが哺乳動物宿主細胞中に導入される場合、抗体は、宿主細胞内での抗体の発現、より好ましくは、宿主細胞が増殖される培地中への抗体の分泌を可能にするのに十分な時間、宿主細胞を培養することによって生成される。抗体は、標準的なタンパク質精製法を使用して培地から回収することができる。植物宿主細胞には、例えば、タバコ（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ）、シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）、ウキクサ、トウモロコシ、コムギ、ジャガイモなどが含まれる。細菌宿主細胞には、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）およびストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）種が含まれる。酵母宿主細胞には、スキゾサッカロミセス・ポンベ（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｐｏｍｂｅ）、サッカロミセス・セレビシアエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、およびピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれる。
【０１４５】
さらに、細胞株からの本発明の抗体（またはこれに由来する他の部分）の発現は、いくつかの公知の技法を使用して亢進させることができる。例えば、グルタミン合成酵素遺伝子発現系（ＧＳ系）は、ある特定の条件下で発現を亢進させるための一般的な手法である。ＧＳ系は、欧州特許第０２１６８４６号、同第０２５６０５５号、および同第０３２３９９７号、ならびに欧州特許出願第８９３０３９６４．４号に関連して、全体的または部分的に論じられている。
【０１４６】
異なる細胞株によって、またはトランスジェニック動物において発現される抗体が、互いに異なるグリコシル化を有することとなることが可能である。しかし、本明細書に提供される核酸分子によってコードされる、または本明細書に提供されるアミノ酸配列を含むすべての抗体は、抗体のグリコシル化の状態またはパターンまたは修飾にかかわらず、本発明の一部である。
【０１４７】
トランスジェニック動物および植物
本発明の抗Ｍ−ＣＳＦ抗体はまた、対象とする免疫グロブリン重鎖配列および軽鎖配列についてトランスジェニックである哺乳動物または植物の産出、ならびにそれから回収可能な形態での抗体の生成を通じて、遺伝子導入で生成することができる。哺乳動物におけるトランスジェニックの生産に関連して、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体は、ヤギ、ウシ、または他の哺乳動物の乳中で生成し、これらから回収することができる。例えば、米国特許第５，８２７，６９０号、同第５，７５６，６８７号、同第５，７５０，１７２号、および同第５，７４１，９５７号を参照。いくつかの実施形態では、ヒト免疫グロブリン遺伝子座を含む非ヒトトランスジェニック動物が、上述したように、Ｍ−ＣＳＦ、またはその免疫原性部分を用いて免疫される。植物、酵母、または真菌／藻類中で抗体を作製するための方法は、例えば、米国特許第６，０４６，０３７号、およびＵＳ５，９５９，１７７に記載されている。
【０１４８】
いくつかの実施形態では、非ヒトトランスジェニック動物または植物は、標準的なトランスジェニック技法によって、動物または植物中に、本発明の抗Ｍ−ＣＳＦ抗体をコードする１つまたは複数の核酸分子を導入することによって生産される。Ｈｏｇａｎ、および米国特許６，４１７，４２９号、上記を参照。トランスジェニック動物を作製するのに使用されるトランスジェニック細胞は、胚性幹細胞または体細胞とすることができる。トランスジェニック非ヒト生物は、キメラ、非キメラヘテロ接合体、および非キメラホモ接合体とすることができる。例えば、Ｈｏｇａｎら、Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｍｏｕｓｅ  Ｅｍｂｒｙｏ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  ２版、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ（１９９９）、Ｊａｃｋｓｏｎら、Ｍｏｕｓｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ（２０００）、およびＰｉｎｋｅｒｔ、Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  Ａｎｉｍａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ（１９９９）を参照。いくつかの実施形態では、トランスジェニック非ヒト動物は、対象とする重鎖および／または軽鎖をコードするターゲティングコンストラクトによる、標的破壊および標的置換を有する。好適な実施形態では、トランスジェニック動物は、Ｍ−ＣＳＦ、好ましくはヒトＭ−ＣＳＦに特異的に結合する重鎖および軽鎖をコードする核酸分子を含み、発現する。いくつかの実施形態では、トランスジェニック動物は、単鎖抗体、キメラ抗体、またはヒト化抗体などの修飾抗体をコードする核酸分子を含む。抗Ｍ−ＣＳＦ抗体は、任意のトランスジェニック動物において作製することができる。好適な実施形態では、非ヒト動物は、マウス、ラット、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウシ、またはウマである。非ヒトトランスジェニック動物は、血液、乳、尿、唾液、涙、粘液、および他の体液中で、前記コードされたポリペプチドを発現する。
【０１４９】
ファージディスプレイライブラリー
本発明は、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体またはその抗原結合部分を生成するための方法であって、ファージ上にヒト抗体のライブラリーを合成するステップと、Ｍ−ＣＳＦまたはその部分を用いてライブラリーをスクリーニングするステップと、Ｍ−ＣＳＦに結合するファージを単離するステップと、ファージから抗体を得るステップとを含む方法を提供する。例として、ファージディスプレイ技法において使用するための抗体のライブラリーを調製するための一方法は、Ｍ−ＣＳＦまたはその抗原性部分を用いて、ヒト免疫グロブリン遺伝子座を含む非ヒト動物を免疫することによって免疫応答を作り出すステップと、免疫動物から抗体産生細胞を抽出するステップと、抽出された細胞からＲＮＡを単離するステップと、ＲＮＡを逆転写することによってｃＤＮＡを生成するステップと、プライマーを使用してｃＤＮＡを増幅するステップと、抗体がファージ上に発現されるようにファージディスプレイベクター中にｃＤＮＡを挿入するステップとを含む。本発明の組換え抗Ｍ−ＣＳＦ抗体を、このようにして得ることができる。
【０１５０】
本発明の組換え抗Ｍ−ＣＳＦヒト抗体は、組換えコンビナトリアル抗体ライブラリーをスクリーニングすることによって単離することができる。好ましくは、ライブラリーは、Ｂ細胞から単離されたｍＲＮＡから調製されるヒトＶＬｃＤＮＡおよびヒトＶＨｃＤＮＡを使用して生成される、ｓｃＦｖファージディスプレイライブラリーである。そのようなライブラリーを調製し、スクリーニングする方法は、当技術分野で公知である。ファージディスプレイライブラリーを生成するための市販のキットが存在する（例えば、ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ｐｈａｇｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｓｙｓｔｅｍ、カタログ番号２７−９４００−０１、およびＳｔｒａｔａｇｅｎｅ  ＳｕｒｆＺＡＰ（商標）ファージディスプレイキット、カタログ番号２４０６１２）。抗体ディスプレイライブラリーを生成し、スクリーニングするのに使用することができる他の方法および試薬も存在する（例えば、米国特許第５，２２３，４０９号、ＰＣＴ公開第ＷＯ９２／１８６１９号、同第ＷＯ９１／１７２７１号、同第ＷＯ９２／２０７９１号、同第ＷＯ９２／１５６７９号、同第ＷＯ９３／０１２８８号、同第ＷＯ９２／０１０４７号、同第ＷＯ９２／０９６９０号、Ｆｕｃｈｓら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：１３７０〜１３７２（１９９１）、Ｈａｙら、Ｈｕｍ．  Ａｎｔｉｂｏｄ．Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ３：８１〜８５（１９９２）、Ｈｕｓｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４６：１２７５〜１２８１（１９８９）、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２〜５５４（１９９０）、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓら、ＥＭＢＯ  Ｊ．１２：７２５〜７３４（１９９３）、Ｈａｗｋｉｎｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２６：８８９〜８９６（１９９２）、Ｃｌａｃｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４〜６２８（１９９１）、Ｇｒａｍら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：３５７６〜３５８０（１９９２）、Ｇａｒｒａｄら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：１３７３〜１３７７（１９９１）、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら、Ｎｕｃ．Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ．１９：４１３３〜４１３７（１９９１）、およびＢａｒｂａｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８８：７９７８〜７９８２（１９９１）を参照）。
【０１５１】
一実施形態では、所望の特性を有するヒト抗Ｍ−ＣＳＦ抗体を単離するために、本明細書に記載されるヒト抗Ｍ−ＣＳＦ抗体が最初に使用されることによって、ＰＣＴ公開第ＷＯ９３／０６２１３号に記載されているエピトープ刷り込み法を使用して、Ｍ−ＣＳＦに対する同様の結合活性を有するヒト重鎖配列およびヒト軽鎖配列が選択される。この方法において使用される抗体ライブラリーは、ＰＣＴ公開第ＷＯ９２／０１０４７号、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２〜５５４（１９９０）、およびＧｒｉｆｆｉｔｈｓら、ＥＭＢＯ  Ｊ．１２：７２５〜７３４（１９９３）に記載されているように調製し、スクリーニングされたｓｃＦｖライブラリーであることが好ましい。ｓｃＦｖ抗体ライブラリーは、抗原としてヒトＭ−ＣＳＦを使用してスクリーニングされることが好ましい。
【０１５２】
最初のヒトＶＬドメインおよびヒトＶＨドメインが選択された後、「ミックスアンドマッチ」実験が実施され、この実験において、最初に選択されたＶＬセグメントおよびＶＨセグメントの異なる対が、Ｍ−ＣＳＦ結合についてスクリーニングされることによって、好適なＶＬ／ＶＨ対組合せが選択される。さらに、抗体の品質をさらに改善するために、好適なＶＬ／ＶＨ対（複数可）のＶＬセグメントおよびＶＨセグメントを、天然の免疫応答の間の抗体の親和性成熟に関与するインビボ体細胞突然変異プロセスに類似したプロセスで、好ましくはＶＨおよび／またはＶＬのＣＤＲ３領域内で、ランダムに突然変異させることができる。このインビトロ親和性成熟は、得られるＰＣＲ産物が、ランダムな突然変異がＶＨおよび／またはＶＬのＣＤＲ３領域内に導入されたＶＨセグメントおよびＶＬセグメントをコードするように、ある特定の位置で、４つのヌクレオチド塩基のランダムな混合物で「スパイクされた」、それぞれＶＨのＣＤＲ３またはＶＬのＣＤＲ３に相補性のＰＣＲプライマーを使用して、ＶＨドメインおよびＶＬドメインを増幅することによって達成することができる。これらのランダムに突然変異したＶＨセグメントおよびＶＬセグメントは、Ｍ−ＣＳＦへの結合について再スクリーニングすることができる。
【０１５３】
組換え免疫グロブリンディスプレイライブラリーから本発明の抗Ｍ−ＣＳＦ抗体をスクリーニングおよび単離した後、選択された抗体をコードする核酸を、ディスプレイパッケージから（例えば、ファージゲノムから）回収し、標準的な組換えＤＮＡ技法によって他の発現ベクター中にサブクローン化することができる。必要に応じて、以下に記載されるように、本発明の他の抗体形態を作り出すために、核酸をさらに操作することができる。コンビナトリアルライブラリーのスクリーニングによって単離される組換えヒト抗体を発現させるために、上述したように、抗体をコードするＤＮＡが組換え発現ベクター中にクローン化され、哺乳動物宿主細胞内に導入される。
【０１５４】
クラススイッチング
本発明の別の態様は、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体のクラスまたはサブクラスを、別のクラスまたはサブクラスに変換するための方法を提供する。いくつかの実施形態では、ＣＬまたはＣＨをコードするいずれの核酸配列も含まない、ＶＬまたはＶＨをコードする核酸分子が、当技術分野で周知の方法を使用して単離される。次いで核酸分子は、所望の免疫グロブリンクラスまたはサブクラスに由来するＣＬまたはＣＨをコードする核酸配列に作動可能に連結される。これは、上述したように、ＣＬ鎖またはＣＨ鎖を含むベクターまたは核酸分子を使用して実現することができる。例えば、最初にＩｇＭであった抗Ｍ−ＣＳＦ抗体は、ＩｇＧにスイッチされたクラスになり得る。さらに、クラススイッチングは、１つのＩｇＧサブクラスから別のサブクラスに、例えば、ＩｇＧ１からＩｇＧ２に変換するのに使用することができる。所望のアイソタイプを含む本発明の抗体を生成するための別の方法は、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体の重鎖をコードする核酸および抗Ｍ−ＣＳＦ抗体の軽鎖をコードする核酸を単離するステップと、ＶＨ領域をコードする配列を単離するステップと、ＶＨ配列を所望のアイソタイプの重鎖定常ドメインをコードする配列にライゲートするステップと、細胞内で軽鎖遺伝子および重鎖コンストラクトを発現させるステップと、所望のアイソタイプを有する抗Ｍ−ＣＳＦ抗体を収集するステップとを含む。
【０１５５】
いくつかの実施形態では、本発明の抗Ｍ−ＣＳＦ抗体は、重鎖の２２８位（ＥＵ番号付けの慣例に従う）におけるセリンが、プロリンに変更されている。したがって、ＩｇＧ４のＦｃ領域におけるＣＰＳＣサブ配列はＣＰＰＣになり、これは、ＩｇＧ１におけるサブ配列である。（Ａａｌｂｅｒｓｅ、Ｒ．Ｃ．およびＳｃｈｕｕｒｍａｎ、Ｊ．、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１０５：９〜１９（２００２））。例えば、配列番号４６の残基２４３（これは、ＥＵ番号付けの慣例において残基２２８に対応する）におけるセリンは、プロリンになるはずである。同様に、配列番号３８の残基２４２（これは、ＥＵ番号付けの慣例において残基２２８に対応する）におけるセリンは、プロリンになるはずである。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ４抗体のフレームワーク領域は、生殖系列フレームワーク配列に逆突然変異する場合がある。いくつかの実施形態は、逆突然変異したフレームワーク領域、およびＦＣ領域におけるセリンからプロリンへの変化の両方を含む。例えば、表１Ａ中の配列番号５４（抗体９．１４．４Ｃ−Ｓｅｒ）および配列番号５８（抗体８．１０．３Ｃ−Ｓｅｒ）を参照。
【０１５６】
脱免疫化抗体
免疫原性が低減した抗体を生成する別の方法は、抗体の脱免疫化である。本発明の別の態様では、抗体は、例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ９８／５２９７６号、および同第ＷＯ００／３４３１７号（これらは、その全体が参照により本明細書に組み込まれている）に記載された技法を使用して脱免疫化することができる。
【０１５７】
突然変異抗体
別の実施形態では、核酸分子、ベクター、および宿主細胞を使用することによって、突然変異抗Ｍ−ＣＳＦ抗体を作製することができる。例えば、抗体の結合特性を変更するために、重鎖および／または軽鎖の可変ドメイン内で、抗体を突然変異させることができる。例えば、突然変異を、Ｍ−ＣＳＦについての抗体のＫＤを増減させるため、ｋｏｆｆを増減させるため、または抗体の結合特異性を変更するために、ＣＤＲ領域のうちの１つまたは複数内で行うことができる。部位特異的な突然変異誘発の技法は、当技術分野で周知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、およびＡｕｓｕｂｅｌら、上記を参照。好適な実施形態では、突然変異は、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体の可変ドメイン内の生殖系列と比較して変更されることが知られているアミノ酸残基において行われる。別の実施形態では、１つまたは複数の突然変異は、可変ドメインのＣＤＲ領域もしくはフレームワーク領域内、またはモノクローナル抗体２５２、８８、１００、３．８．３、２．７．３、１．１２０．１、９．１４．４Ｉ、８．１０．３Ｆ、９．７．２ＩＦ、９．１４．４、８．１０．３、９．７．２、９．７．２Ｃ−Ｓｅｒ、９．１４．４Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ４、９．１４．４−ＣＧ２、９．１４．４−ＣＧ４、９．１４．４−Ｓｅｒ、９．７．２−Ｓｅｒ、８．１０．３−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ４、８．１０．３ＦＧ１、もしくは９．１４．４Ｇ１の定常ドメイン内で、生殖系列と比較して変更されることが知られているアミノ酸残基において行われる。別の実施形態では、１つまたは複数の突然変異は、配列番号２、６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３８、４６、５０、５４、５８、６２、６６、７０、７４、７８、８２、８６、９０、９４、９８、もしくは１０２から選択され、または重鎖ヌクレオチド配列が配列番号１、５、９、２５、２９、３３、３７、４５、９７、もしくは１０１で表される重鎖アミノ酸配列の可変ドメインのＣＤＲ領域またはフレームワーク領域内で、生殖系列と比較して変更されることが知られているアミノ酸残基において行われる。別の実施形態では、１つまたは複数の突然変異は、配列番号４、８、１２、１６、２０、２４、２８、３２、３６、４４、４８、５２、５６、もしくは６０から選択され、または軽鎖ヌクレオチド配列が配列番号３、７、１１、２７、３１、３５、４３、もしくは４７で表される軽鎖アミノ酸配列の可変ドメインのＣＤＲ領域またはフレームワーク領域内で、生殖系列と比較して変更されることが知られているアミノ酸残基において行われる。
【０１５８】
一実施形態では、フレームワーク領域は、得られるフレームワーク領域（複数可）が対応する生殖系列遺伝子のアミノ酸配列を有するように突然変異させられる。突然変異をフレームワーク領域または定常ドメイン内で行うことによって、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体の半減期を延ばすことができる。例えば、参照により本明細書に組み込まれている、ＰＣＴ公開第ＷＯ００／０９５６０号を参照。フレームワーク領域または定常ドメインでの突然変異はまた、抗体の免疫原性を変更するため、別の分子への共有結合性結合もしくは非共有結合性結合のための部位を提供するため、または補体結合、ＦｃＲ結合、および抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）などの特性を変更するために行うことができる。本発明によれば、単一抗体は、可変ドメインのＣＤＲ領域もしくはフレームワーク領域の任意の１つまたは複数において、または定常ドメイン内で突然変異を有することができる。
【０１５９】
いくつかの実施形態では、突然変異前の抗Ｍ−ＣＳＦ抗体と比較して、突然変異抗Ｍ−ＣＳＦ抗体のＶＨドメインまたはＶＬドメイン内に、１〜８個（これらの間の任意の数を含む）のアミノ酸突然変異がある。上記のいずれにおいても、突然変異は、１つまたは複数のＣＤＲ領域内で起こり得る。さらに、突然変異のいずれも、保存的アミノ酸置換とすることができる。いくつかの実施形態では、定常ドメイン内に、５、４、３、２、または１個以下のアミノ酸変化がある。
【０１６０】
修飾抗体
別の実施形態では、別のポリペプチドに連結された本発明の抗Ｍ−ＣＳＦ抗体のすべてまたは一部を含む融合抗体またはイムノアドヘシンを作製することができる。好適な実施形態では、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体の可変ドメインのみが、ポリペプチドに連結される。別の好適な実施形態では、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体のＶＨドメインが第１のポリペプチドに連結される一方で、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体のＶＬドメインが第２のポリペプチドに連結され、この第２のポリペプチドは、ＶＨドメインとＶＬドメインが互いに相互作用することによって抗体結合部位を形成することができるような様式で第１のポリペプチドと会合する。別の好適な実施形態では、ＶＨドメインは、ＶＨドメインとＶＬドメインが互いに相互作用することができるようにリンカーによってＶＬドメインと離されている（後述の単鎖抗体を参照）。次いで、ＶＨ−リンカー−ＶＬ抗体は、対象とするポリペプチドに連結される。融合抗体は、Ｍ−ＣＳＦ−発現細胞または組織にポリペプチドを向けるのに有用である。ポリペプチドは、治療剤、例えば、毒素、成長因子、もしくは他の調節タンパク質などであってもよく、または診断剤、例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼなどの容易に可視化することができる酵素などであってもよい。さらに、２つ（またはそれ以上）の単鎖抗体が互いに連結された融合抗体を作り出すことができる。これは、１本のポリペプチド鎖上に二価抗体もしくは多価抗体を作り出したい場合、または二重特異性抗体を作り出したい場合に有用である。
【０１６１】
単鎖抗体、（ｓｃＦｖ）を作り出すために、ＶＨをコードするＤＮＡ断片およびＶＬをコードするＤＮＡ断片が、可動性リンカーをコードする、例えば、アミノ酸配列（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）３をコードする別の断片に作動可能に連結され、その結果、ＶＨ配列およびＶＬ配列が、ＶＬドメインとＶＨドメインが可動性リンカーによって連結された連続単鎖タンパク質として発現され得る。例えば、Ｂｉｒｄら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３〜４２６（１９８８）、Ｈｕｓｔｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９〜５８８３（１９８８）、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２〜５５４（１９９０）を参照。単鎖抗体は、１つのＶＨおよびＶＬが使用される場合、一価、２つのＶＨおよびＶＬが使用される場合、二価、２つを超えるＶＨおよびＶＬが使用される場合多価となり得る。Ｍ−ＣＳＦおよび別の分子に特異的に結合する二重特性抗体または多価抗体を生成することができる。
【０１６２】
他の実施形態では、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体コード核酸分子を使用して、他の修飾抗体を調製することができる。例えば、「カッパボディ（ｋａｐｐａ  ｂｏｄｙ）」（Ｉｌｌら、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．１０：９４９〜５７（１９９７））、「ミニボディ（ｍｉｎｉｂｏｄｙ）」（Ｍａｒｔｉｎら、ＥＭＢＯ  Ｊ．１３：５３０３〜９（１９９４））、「ダイアボディ」（Ｈｏｌｌｉｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４〜６４４８（１９９３））、または「ジャヌシン（Ｊａｎｕｓｉｎ）」（Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら、ＥＭＢＯ  Ｊ．１０：３６５５〜３６５９（１９９１）、およびＴｒａｕｎｅｃｋｅｒら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ（補遺）７：５１〜５２（１９９２））を、本明細書の教示に従って、標準的な分子生物学的技法を使用して調製することができる。
【０１６３】
二重特異性抗体または抗原結合断片は、ハイブリドーマの融合、またはＦａｂ’断片の連結を含めた、様々な方法によって生産することができる。例えば、Ｓｏｎｇｓｉｖｉｌａｉ＆Ｌａｃｈｍａｎｎ、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７９：３１５〜３２１（１９９０）、Ｋｏｓｔｅｌｎｙら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１５４７〜１５５３（１９９２）を参照。さらに、二重特異性抗体を「ダイアボディ」または「ジャヌシン」として形成することができる。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、Ｍ−ＣＳＦの２つの異なるエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、モノクローナル抗体２５２、８８、１００、３．８．３、２．７．３、１．１２０．１、９．１４．４Ｉ、８．１０．３Ｆ、９．７．２ＩＦ、９．１４．４、８．１０．３、または９．７．２に由来する第１の重鎖および第１の軽鎖、ならびに追加の抗体の重鎖および軽鎖を有する。いくつかの実施形態では、追加の軽鎖および重鎖も、上記に特定したモノクローナル抗体の１つに由来するが、第１の重鎖および軽鎖と異なる。
【０１６４】
いくつかの実施形態では、上述した修飾抗体は、本明細書に提供されるヒト抗Ｍ−ＣＳＦモノクローナル抗体、前記モノクローナル抗体のアミノ酸配列、または前記モノクローナル抗体をコードする核酸によってコードされる重鎖もしくは軽鎖に由来する可変ドメインまたはＣＤＲ領域のうちの１つまたは複数を使用して調製される。
【０１６５】
誘導体化抗体および標識抗体
本発明の抗Ｍ−ＣＳＦ抗体または抗原結合部分は、誘導体化し、または別の分子（例えば、別のペプチドまたはタンパク質）に連結することができる。一般に、抗体またはその部分は、Ｍ−ＣＳＦへの結合が、誘導体化または標識化によって悪影響を受けないように誘導体化される。したがって、本発明の抗体および抗体部分は、インタクトな形態および修飾形態の両方の本明細書に記載されるヒト抗Ｍ−ＣＳＦ抗体を含むことが意図されている。例えば、本発明の抗体または抗体部分は、１つまたは複数の他の分子実体、例えば、別の抗体（例えば、二重特異性抗体もしくはダイアボディ）、検出剤、細胞毒性薬、医薬品、および／または抗体もしくは抗体部分の別の分子（ストレプトアビジンコア領域もしくはポリヒスチジンタグなど）との会合を媒介することができるタンパク質もしくはペプチドなどに機能的に連結することができる（化学的カップリング、遺伝子融合、非共有結合性会合、またはその他の方法によって）。
【０１６６】
１つのタイプの誘導体化抗体は、２つ以上の抗体（例えば、二重特異性抗体を作り出すための、同じタイプまたは異なるタイプの）を架橋することによって生産される。適当な架橋剤には、適切なスペーサーによって離された２つの明確に反応性の基を有するヘテロ二官能性（例えば、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル）、またはホモ二官能性（例えば、スベリン酸ジスクシンイミジル）であるものが含まれる。そのようなリンカーは、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、Ｉｌｌから入手可能である。
【０１６７】
別のタイプの誘導体化抗体は、標識抗体である。本発明の抗体または抗原結合部分を誘導体化することができる有用な検出剤には、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、５−ジメチルアミン−１−ナフタレンスルホニルクロリド、フィコエリトリン、ランタニド蛍光体などを含めた蛍光化合物が含まれる。抗体は、検出に有用な酵素、例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ、グルコースオキシダーゼなどを用いて標識することもできる。抗体が検出可能な酵素で標識される場合、これは、見分けることができる反応生成物を生成するために酵素が使用する追加の試薬を添加することによって検出される。例えば、作用剤の西洋ワサビペルオキシダーゼが存在する場合、過酸化水素およびジアミノベンジジンを添加すると反応生成物が着色し、これは検出可能である。抗体はまた、ビオチンで標識し、アビジン結合またはストレプトアビジン結合の間接測定を通じて検出することができる。抗体は、二次レポーター（例えば、ロイシンジッパー対配列、二次抗体の結合部位、金属結合ドメイン、エピトープタグ）によって認識される所定のポリペプチドエピトープで標識することもできる。いくつかの実施形態では、標識は、潜在的な立体障害を低減するために、様々な長さのスペーサーアームによって結合される。
【０１６８】
抗Ｍ−ＣＳＦ抗体は、放射標識アミノ酸で標識することもできる。放射標識抗Ｍ−ＣＳＦ抗体は、診断目的および治療目的の両方で使用することができる。例えば、放射標識抗Ｍ−ＣＳＦ抗体は、Ｘ線または他の診断技法によって、Ｍ−ＣＳＦを発現する腫瘍を検出するのに使用することができる。さらに、放射標識抗Ｍ−ＣＳＦ抗体は、がん性細胞または腫瘍の毒素として治療的に使用することができる。ポリペプチドのための標識の例には、それだけに限らないが、以下の放射性同位体または放射性核種、すなわち、３Ｈ、１４Ｃ、１５Ｎ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、および１３１Ｉが含まれる。
【０１６９】
抗Ｍ−ＣＳＦ抗体は、化学基、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、メチル基もしくはエチル基、または炭水化物基で誘導体化することもできる。これらの基は、抗体の生物的特性を改善する、例えば、血清半減期を延ばし、または組織結合を増大させるのに有用である。
【０１７０】
医薬組成物およびキット
本発明は、関節リウマチ、骨粗鬆症、またはアテローム性動脈硬化症の治療を必要とする対象を治療するためのヒト抗Ｍ−ＣＳＦアンタゴニスト抗体を含む組成物にも関する。いくつかの実施形態では、治療の対象はヒトである。他の実施形態では、対象は、獣医学対象である。本発明のアンタゴニスト抗Ｍ−ＣＳＦ抗体によって治療することができる、単球が役割を果たす過剰増殖障害は、任意の組織または臓器を巻き込むことができ、これらとして、それだけに限らないが、脳腫瘍、肺がん、扁平上皮がん、膀胱がん、胃がん、膵がん、乳がん、頭部がん、頸部がん、肝がん、腎がん、卵巣がん、前立腺がん、結腸直腸がん、食道がん、婦人科がん、上咽頭がん、もしくは甲状腺がん、黒色腫、リンパ腫、白血病、または多発性骨髄腫を挙げることができる。特に、本発明のヒトアンタゴニスト抗Ｍ−ＣＳＦ抗体は、乳房、前立腺、結腸、および肺の癌を治療または予防するのに有用である。
【０１７１】
本発明は、全身性エリテマトーデス、ループス腎炎、および皮膚ループスを含めたループス、関節炎、乾癬性関節炎、ライター症候群、痛風、外傷性関節炎、風疹性関節炎ならびに急性滑膜炎、関節リウマチ、リウマチ様脊椎炎、強直性脊椎炎、骨関節炎、痛風関節炎、ならびに他の関節炎状態、敗血症、敗血症ショック、内毒素ショック、グラム陰性敗血症、毒素ショック症候群、アルツハイマー病、脳卒中、神経外傷、喘息、成人呼吸窮迫症候群、脳性マラリア、慢性炎症性肺疾患、珪肺症、肺サルコイドーシス、骨吸収疾患、骨粗鬆症、再狭窄、心臓および腎臓の再灌流傷害、血栓症、糸球体腎炎、糖尿病、移植片対宿主反応、同種移植片拒絶反応、炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、多発性硬化症、筋肉変性、湿疹、接触性皮膚炎、乾癬、日焼け、またはヒトを含めた哺乳動物における結膜炎からなる群から選択される状態を治療するための、そのような治療に有効な量の本発明のヒト抗Ｍ−ＣＳＦモノクローナル抗体ならびに薬学的に許容できる担体を含む組成物も包含する。
【０１７２】
治療では、本発明の１つまたは複数のアンタゴニスト抗Ｍ−ＣＳＦモノクローナル抗体、またはこれらの抗原結合断片を単独で、または薬学的に許容できる担体とともに投与することができる。本明細書において、「薬学的に許容できる担体」は、生理学的に適合性である、任意およびすべての溶媒、分散媒質、コーティング、抗菌薬および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などを意味する。薬学的に許容できる担体のいくつかの例は、水、食塩水、リン酸緩衝溶液、デキストロース、グリセロール、エタノールなど、ならびにこれらの組合せである。多くの場合では、組成物中に等張剤、例えば、糖、マンニトール、ソルビトールなどの多価アルコール、または塩化ナトリウムを含むことが好ましい。薬学的に許容できる物質の追加の例は、抗体の有効期間または有効性を亢進させる、湿潤剤、または軽微な量の補助物質、例えば、湿潤剤もしくは乳化剤など、保存剤、または緩衝液である。
【０１７３】
本発明の抗Ｍ−ＣＳＦ抗体、およびこれらを含む組成物は、１つまたは複数の他の治療剤、診断剤、または予防剤と組み合わせて投与することができる。追加の治療剤には、他の抗新生物薬、抗腫瘍薬、血管新生阻害剤、または化学療法剤が含まれる。そのような追加の薬剤は、同じ組成物中に含めても、別個に投与してもよい。いくつかの実施形態では、本発明の１つまたは複数の阻害性の抗Ｍ−ＣＳＦ抗体は、ワクチンとして、またはワクチンのアジュバントとして使用することができる。
【０１７４】
本発明の組成物は、様々な形態、例えば、液体、半固体、および固体の剤形、例えば、溶液（例えば、注射用溶液もしくは注入用溶液）、分散系または懸濁液、錠剤、ピル、粉末、リポソーム、および坐剤などであってもよい。好適な形態は、意図された投与方法および治療用途に依存する。典型的な好適な組成物は、ヒトの受動免疫に使用されるものと同様の組成物などの注射用溶液または注入用溶液の形態である。好適な投与方法は、非経口（例えば、静脈内、皮下、腹腔内、筋肉内）である。好適な実施形態では、抗体は、静脈内注入または静脈内注射によって投与される。別の好適な実施形態では、抗体は、筋肉内注射または皮下注射によって投与される。別の実施形態では、本発明は、Ｍ−ＣＳＦに特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分を用いて、治療を必要とする対象を治療する方法であって、（ａ）有効量の重鎖もしくはその抗原結合部分をコードする単離核酸分子、軽鎖もしくはその抗原結合部分をコードする単離核酸分子、または軽鎖および重鎖もしくはこれらの抗原結合部分をコードする核酸分子の両方を投与するステップと、（ｂ）核酸分子を発現させるステップとを含む方法を含む。
【０１７５】
治療用組成物は一般的に、滅菌状態であり、製造および貯蔵の条件下で安定でなければならない。組成物は、溶液、マイクロエマルジョン、分散系、リポソーム、または高薬物濃度に適した他の秩序構造として製剤化することができる。滅菌注射用溶液は、必要に応じて上記に列挙した成分の１つまたは組合せとともに、適切な溶媒中に必要量の抗Ｍ−ＣＳＦ抗体を組み込み、その後濾過滅菌することによって調製することができる。一般に、分散系は、基本分散媒、および上記に列挙したものからの必要とされる他の成分を含有する滅菌ビヒクル中に活性化合物を組み込むことによって調製される。滅菌注射用溶液を調製するための滅菌粉末の場合では、調製の好適な方法は、真空乾燥および凍結乾燥であり、それにより、活性成分と任意の追加の所望の成分の、先に滅菌濾過された溶液から、これらの粉末が得られる。溶液の適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングを使用することによって、分散系の場合において要求される粒径を維持することによって、かつ界面活性剤を使用することによって維持することができる。注射用組成物の吸収の延長は、吸収を遅延させる作用物質、例えば、モノステアリン酸塩およびゼラチンを組成物中に含めることによってもたらすことができる。
【０１７６】
本発明の抗体は、当技術分野で公知の様々な方法によって投与することができるが、多くの治療用途について、好適な投与の経路／方法は、皮下、筋肉内、または静脈内注入である。当業者によって理解されるように、投与の経路および／または方法は、所望の結果に応じて変化することになる。
【０１７７】
ある特定の実施形態では、抗体組成物、活性化合物は、急速な放出から抗体を保護する担体、例えば、インプラント、経皮パッチ、およびマイクロカプセル化送達系を含めた制御放出製剤などを用いて調製することができる。生分解性生体適合性ポリマー、例えば、エチレンビニルアセテート、ポリアンヒドリド、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸などを使用することができる。そのような製剤を調製するための多くの方法は、特許されており、当業者に一般に公知である。例えば、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ編、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９７８）を参照。
【０１７８】
ある特定の実施形態では、本発明の抗Ｍ−ＣＳＦ抗体は、例えば、不活性な希釈剤、または同化できる食用担体を用いて経口投与することができる。化合物（および必要に応じて他の成分）は、ハードもしくはソフトシェルゼラチンカプセル中に密閉し、圧縮して錠剤にし、または対象の飲食物中に直接組み込むことができる。経口治療投与について、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体は、賦形剤とともに組込み、摂取可能な錠剤、バッカル錠、トローチ、カプセル、エリキシル剤、懸濁液、シロップ、ウエハースなどの形態で使用することができる。非経口投与以外によって本発明の化合物を投与するために、化合物の不活性化を防止するための物質で化合物をコーティングし、または化合物をこの物質と同時投与することが必要である場合がある。
【０１７９】
追加の活性化合物は、組成物中に組み込むことができる。ある特定の実施形態では、本発明の抗Ｍ−ＣＳＦ抗体は、１つまたは複数の追加の治療剤と共製剤化および／または同時投与される。これらの薬剤には、他の標的に結合する抗体、抗新生物薬、抗腫瘍薬、化学療法剤、Ｍ−ＣＳＦを阻害するペプチド類似体、Ｍ−ＣＳＦに結合することができる可溶性ｃ−ｆｍｓ、Ｍ−ＣＳＦを阻害する１つまたは複数の化学剤、抗炎症剤、抗血液凝固剤、血圧を下げる薬剤（すなわち、アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤）などが含まれる。そのような併用療法は、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体ならびに同時投与される薬剤の投与量を少なくし、したがって、様々な単剤療法に関連する可能な毒性または合併症を回避する必要がある場合がある。
【０１８０】
本発明の阻害性の抗Ｍ−ＣＳＦ抗体およびこれらを含む組成物は、他の治療レジメンと組み合わせて、特に、がんのための放射線療法と組み合わせて投与することもできる。本発明の化合物は、抗がん剤、例えば、エンドスタチン、ならびにアンギオスタチン、または細胞毒性薬、例えば、アドリアマイシン、ダウノマイシン、ｃｉｓ−白金、エトポシド、タキソール、タキソテル、およびビンクリスチンなどのアルカロイドなど、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、ＶＥＧＦ阻害剤、ならびにメトトレキセートなどの代謝拮抗剤などと組み合わせて使用することもできる。
【０１８１】
本発明の化合物は、抗ウイルス剤、例えば、Ｖｉｒａｃｅｐｔ、ＡＺＴ、アシクロビル、およびファムシクロビルなど、ならびにＶａｌａｎｔなどの防腐化合物と組み合わせて使用することもできる。
【０１８２】
本発明の組成物は、「治療有効量」または「予防有効量」の本発明の抗体または抗原結合部分を含むことができる。「治療有効量」は、所望の治療効果を実現するのに必要な投与量および期間で有効な量を指す。抗体または抗体部分の治療有効量は、個体の疾患状態、年齢、性別、および体重、ならびに抗体または抗体部分の、個体において所望の応答を誘発する能力などの要因によって変化し得る。治療有効量は、抗体または抗体部分のいずれの毒性作用または有害作用よりも、治療的に有益な効果が勝っているものでもある。「予防有効量」は、所望の予防結果を実現するのに必要な投与量および期間で有効な量を指す。一般的に、予防用量は、疾患の前に、または疾患のより早い段階で対象に使用されるので、予防有効量は、治療有効量より少なくなる。
【０１８３】
投薬レジメンは、最適な所望の応答（例えば、治療的または予防的な応答）をもたらすように調整することができる。例えば、１回のボーラスを投与することができ、いくつかの分割量を、時間をかけて投与することができ、または治療状況の要求によって示唆される場合、用量を比例して増減することができる。投与を容易にし、投与量を均一にするために、単位剤形（ｄｏｓａｇｅ  ｕｎｉｔ  ｆｏｒｍ）で非経口組成物を製剤化することが特に有利である。単位剤形は、本明細書において、治療される哺乳動物対象用の単位投与量として適した物理的に別個のユニットを指し、各ユニットは、必要とされる薬学的担体とともに、所望の治療効果を生じるように計算された所定量の活性化合物を含有する。本発明の単位剤形の基準は、（ａ）抗Ｍ−ＣＳＦ抗体または部分のユニークな特徴、および実現される特定の治療効果または予防効果、ならびに（ｂ）個体における感受性の治療用のそのような抗体を調合する技術分野に固有の制限によって決定され、これらに直接依存する。
【０１８４】
本発明の抗体または抗体部分の治療有効量または予防有効量の例示的な、限定されない範囲は、０．０２５〜５０ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは０．１〜５０ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは０．１〜２５、０．１〜１０、または０．１〜３ｍｇ／ｋｇである。投与量値は、軽減される状態のタイプおよび重症度によって変化し得ることに留意されるべきである。任意の特定の対象について、具体的な投薬レジメンは、個体の要求、および組成物を投与し、または組成物の投与を監督する人の専門的な判断によって、時間をかけて調整されるべきであり、本明細書に示される投与量範囲は、例示的なだけであり、請求される組成物の範囲または実践を限定することは意図されていないことがさらに理解されるべきである。
【０１８５】
本発明の別の態様は、本発明の抗Ｍ−ＣＳＦ抗体または抗原結合部分、または、そのような抗体もしくは部分を含む組成物を含むキットを提供する。キットは、抗体または組成物に加えて、診断剤または治療剤を含むことができる。キットは、診断法または治療法において使用するための指示書も含むことができる。好適な実施形態では、キットは、抗体または抗体を含む組成物、および以下に記載される方法において使用することができる診断剤を含む。別の好適な実施形態では、キットは、抗体または抗体を含む組成物、および以下に記載される方法において使用することができる１つもしくは複数の治療剤を含む。本発明の一実施形態は、容器、炎症疾患を患っているヒトへの抗Ｍ−ＣＳＦ抗体の投与に対する指示書、または生体試料中のＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球数を測定するための指示書、および抗Ｍ−ＣＳＦ抗体を含むキットである。
【０１８６】
本発明はまた、哺乳動物における異常細胞増殖を阻害するための組成物であって、ある量の化学療法剤と組み合わせて、ある量の本発明の抗体を含み、化合物、塩、溶媒和物、またはプロドラッグの量、および化学療法剤の量が、一緒に、異常細胞増殖を阻害するのに有効である組成物に関する。多くの化学療法剤が当技術分野で公知である。いくつかの実施形態では、化学療法剤は、有糸分裂阻害剤、アルキル化剤、抗代謝産物、インターカレーティング抗生物質（ｉｎｔｅｒｃａｌａｔｉｎｇ  ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ）、成長因子阻害剤、細胞周期阻害剤、酵素、トポイソメラーゼ阻害剤、生物学的応答調節剤、抗ホルモン、例えば、抗アンドロゲン、および抗血管新生剤からなる群から選択される。
【０１８７】
血管新生阻害剤、例えば、ＭＭＰ−２（基質−メタロプロテイナーゼ２）阻害剤、ＭＭＰ−９（基質−メタロプロテイナーゼ９）阻害剤、およびＣＯＸ−ＩＩ（シクロオキシゲナーゼＩＩ）阻害剤などを、本発明の抗Ｍ−ＣＳＦ抗体とともに使用することができる。有用なＣＯＸ−ＩＩ阻害剤の例には、ＣＥＬＥＢＲＥＸ（商標）（セレコキシブ）、バルデコキシブ、およびロフェコキシブが含まれる。有用な基質メタロプロテイナーゼ阻害剤の例は、ＷＯ９６／３３１７２（１９９６年１０月２４日公開）、ＷＯ９６／２７５８３（１９９６年３月７日公開）、欧州特許出願第９７３０４９７１．１号（１９９７年７月８日出願）、欧州特許出願第９９３０８６１７．２号（１９９９年１０月２９日出願）、ＷＯ９８／０７６９７（１９９８年２月２６日公開）、ＷＯ９８／０３５１６（１９９８年１月２９日公開）、ＷＯ９８／３４９１８（１９９８年８月１３日公開）、ＷＯ９８／３４９１５（１９９８年８月１３日公開）、ＷＯ９８／３３７６８（１９９８年８月６日公開）、ＷＯ９８／３０５６６（１９９８年７月１６日公開）、欧州特許公開第６０６，０４６号（１９９４年７月１３日公開）、欧州特許公開第９３１，７８８号（１９９９年７月２８日公開）、ＷＯ９０／０５７１９（１９９０年５月３１日公開）、ＷＯ９９／５２９１０（１９９９年１０月２１日公開）、ＷＯ９９／５２８８９（１９９９年１０月２１日公開）、ＷＯ９９／２９６６７（１９９９年６月１７日公開）、ＰＣＴ国際出願第ＰＣＴ／ＩＢ９８／０１１１３号（１９９８年７月２１日出願）、欧州特許出願第９９３０２２３２．１号（１９９９年３月２５日出願）、英国特許出願第９９１２９６１．１号（１９９９年６月３日出願）、米国仮出願第６０／１４８，４６４号（１９９９年８月１２日出願）、米国特許第５，８６３，９４９号（１９９９年１月２６日発行）、米国特許第５，８６１，５１０号（１９９９年１月１９日発行）、および欧州特許公開７８０，３８６号（１９９７年６月２５日公開）に記載されており、これらのすべては、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。好適なＭＭＰ阻害剤は、関節痛を示さないものである。より好適なのは、他の基質メタロプロテイナーゼ（すなわち、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−４、ＭＭＰ−５、ＭＭＰ−６、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、およびＭＭＰ−１３）と比べて、ＭＭＰ−２および／またはＭＭＰ−９を選択的に阻害するものである。本発明において有用なＭＭＰ阻害剤のいくつかの具体例は、ＡＧ−３３４０、ＲＯ３２−３５５５、ＲＳ１３−０８３０、ならびに以下のリストに列挙されている化合物、すなわち、３−［［４−（４−フルオロ−フェノキシ）−ベンゼンスルホニル］−（１−ヒドロキシカルバモイル−シクロペンチル）−アミノ］−プロピオン酸；３−ｅｘｏ−３−［４−（４−フルオロ−フェノキシ）−ベンゼンスルホニルアミノ］−８−オキサ−ビシクロ［３．２．１］オクタン−３−カルボン酸ヒドロキシアミド；（２Ｒ，３Ｒ）１−［４−（２−クロロ−４−フルオロ−ベンジルオキシ）−ベンゼンスルホニル］−３−ヒドロキシ−３−メチル−ピペリジン−２−カルボン酸ヒドロキシアミド；４−［４−（４−フルオロ−フェノキシ）−ベンゼンスルホニルアミノ］−テトラヒドロ−ピラン−４−カルボン酸ヒドロキシアミド；３−［［４−（４−フルオロ−フェノキシ）−ベンゼンスルホニル］−（１−ヒドロキシカルバモイル−シクロブチル）−アミノ］−プロピオン酸；４−［４−（４−クロロ−フェノキシ）−ベンゼンスルホニルアミノ］−テトラヒドロ−ピラン−４−カルボン酸ヒドロキシアミド；（Ｒ）３−［４−（４−クロロ−フェノキシ）−ベンゼンスルホニルアミノ］−テトラヒドロ−ピラン−３−カルボン酸ヒドロキシアミド；（２Ｒ，３Ｒ）１−［４−（４−フルオロ−２−メチル−ベンジルオキシ）−ベンゼンスルホニル］−３−ヒドロキシ−３−メチル−ピペリジン−２−カルボン酸ヒドロキシアミド；３−［［４−（４−フルオロ−フェノキシ）−ベンゼンスルホニル］−（１−ヒドロキシカルバモイル−１−メチル−エチル）−アミノ］−プロピオン酸；３−［［４−（４−フルオロ−フェノキシ）−ベンゼンスルホニル］−（４−ヒドロキシカルバモイル−テトラヒドロ−ピラン−４−イル）−アミノ］−プロピオン酸；３−ｅｘｏ−３−［４−（４−クロロ−フェノキシ）−ベンゼンスルホニルアミノ］−８−オキサ−ビシクロ［３．２．１］オクタン−３−カルボン酸ヒドロキシアミド；３−ｅｎｄｏ−３−［４−（４−フルオロ−フェノキシ）−ベンゼンスルホニルアミノ］−８−オキサ−ビシクロ［３．２．１］オクタン−３−カルボン酸ヒドロキシアミド；及び（Ｒ）３−［４−（４−フルオロ−フェノキシ）−ベンゼンスルホニルアミノ］−テトラヒドロ−フラン−３−カルボン酸ヒドロキシアミド；ならびに前記化合物の薬学的に許容できる塩および溶媒和物である。
【０１８８】
本発明のヒト抗Ｍ−ＣＳＦモノクローナル抗体を含む化合物はまた、シグナル伝達阻害剤、例えば、ＥＧＦ−Ｒ（上皮成長因子受容体）応答を阻害することができる薬剤など、例えば、ＥＧＦ−Ｒ抗体、ＥＧＦ抗体、およびＥＧＦ−Ｒ阻害剤である分子など；ＶＥＧＦ（血管内皮成長因子）阻害剤、例えば、ＶＥＧＦ受容体、およびＶＥＧＦを阻害することができる分子など；ならびにｅｒｂＢ２受容体阻害剤、例えば、ｅｒｂＢ２受容体に結合する有機分子または抗体など、例えば、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（商標）（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．）とともに使用することができる。ＥＧＦ−Ｒ阻害剤は、例えば、ＷＯ９５／１９９７０（１９９５年７月２７日公開）、ＷＯ９８／１４４５１（１９９８年４月９日公開）、ＷＯ９８／０２４３４（１９９８年１月２２日公開）、および米国特許第５，７４７，４９８号（１９９８年５月５日発行）に記載されており、そのような物質は、本明細書に記載されるように、本発明において使用することができる。ＥＧＦＲ阻害剤として、それだけに限らないが、モノクローナル抗体Ｃ２２５、および抗ＥＧＦＲ  ２２Ｍａｂ（ＩｍＣｌｏｎｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ）、ＡＢＸ−ＥＧＦ（Ａｂｇｅｎｉｘ／Ｃｅｌｌ  Ｇｅｎｅｓｙｓ）、ＥＭＤ−７２００（Ｍｅｒｃｋ  ＫｇａＡ）、ＥＭＤ−５５９０（Ｍｅｒｃｋ  ＫｇａＡ）、ＭＤＸ−４４７／Ｈ−４７７（Ｍｅｄａｒｅｘ  Ｉｎｃ．およびＭｅｒｃｋ  ＫｇａＡ）、ならびに化合物ＺＤ−１８３４、ＺＤ−１８３８、およびＺＤ−１８３９（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ＰＫＩ−１６６（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＰＫＩ−１６６／ＣＧＰ−７５１６６（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＰＴＫ７８７（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＣＰ７０１（Ｃｅｐｈａｌｏｎ）、レフルノミド（Ｐｈａｒｍａｃｉａ／Ｓｕｇｅｎ）、ＣＩ−１０３３（Ｗａｒｎｅｒ  Ｌａｍｂｅｒｔ  Ｐａｒｋｅ  Ｄａｖｉｓ）、ＣＩ−１０３３／ＰＤ１８３，８０５（Ｗａｒｎｅｒ  Ｌａｍｂｅｒｔ  Ｐａｒｋｅ  Ｄａｖｉｓ）、ＣＬ−３８７，７８５（Ｗｙｅｔｈ−Ａｙｅｒｓｔ）、ＢＢＲ−１６１１（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｍａｎｎｈｅｉｍ  ＧｍｂＨ／Ｒｏｃｈｅ）、ナアミジンＡ（Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）、ＲＣ−３９４０−ＩＩ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）、ＢＩＢＸ−１３８２（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）、ＯＬＸ−１０３（Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏ．）、ＶＲＣＴＣ−３１０（Ｖｅｎｔｅｃｈ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）、ＥＧＦ融合毒素（Ｓｅｒａｇｅｎ  Ｉｎｃ．）、ＤＡＢ−３８９（Ｓｅｒａｇｅｎ／Ｌｉｌｇａｎｄ）、ＺＭ−２５２８０８（Ｉｍｐｅｒｉａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｆｕｎｄ）、ＲＧ−５０８６４（ＩＮＳＥＲＭ）、ＬＦＭ−Ａ１２（Ｐａｒｋｅｒ  Ｈｕｇｈｅｓ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｎｔｅｒ）、ＷＨＩ−Ｐ９７（Ｐａｒｋｅｒ  Ｈｕｇｈｅｓ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｎｔｅｒ）、ＧＷ−２８２９７４（Ｇｌａｘｏ）、ＫＴ−８３９１（Ｋｙｏｗａ  Ｈａｋｋｏ）、ならびにＥＧＦ−Ｒワクチン（Ｙｏｒｋ  Ｍｅｄｉｃａｌ／Ｃｅｎｔｒｏ  ｄｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉａ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ（ＣＩＭ））が挙げられる。これらおよび他のＥＧＦ−Ｒ−阻害剤を本発明において使用することができる��
【０１８９】
ＶＥＧＦ阻害剤、例えば、ＳＵ−５４１６およびＳＵ−６６６８（Ｓｕｇｅｎ  Ｉｎｃ．）、ＡＶＡＳＴＩＮ（商標）（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＳＨ−２６８（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ）、およびＮＸ−１８３８（ＮｅＸｓｔａｒ）も、本発明の化合物と組み合わせることができる。ＶＥＧＦ阻害剤は、例えば、ＷＯ９９／２４４４０（１９９９年５月２０日公開）、ＰＣＴ国際出願ＰＣＴ／ＩＢ９９／００７９７号（１９９９年５月３日出願）、ＷＯ９５／２１６１３（１９９５年８月１７日公開）、ＷＯ９９／６１４２２（１９９９年１２月２日公開）、米国特許第５，８３４，５０４号（１９９８年１１月１０日発行）、ＷＯ９８／５０３５６（１９９８年１１月１２日公開）、米国特許第５，８８３，１１３号（１９９９年３月１６日発行）、米国特許第５，８８６，０２０号（１９９９年３月２３日公開）、米国特許第５，７９２，７８３号（１９９８年８月１１日公開）、ＷＯ９９／１０３４９（１９９９年３月４日公開）、ＷＯ９７／３２８５６（１９９７年９月１２日公開）、ＷＯ９７／２２５９６（１９９７年６月２６日公開）、ＷＯ９８／５４０９３（１９９８年１２月３日公開）、ＷＯ９８／０２４３８（１９９８年１月２２日公開）、ＷＯ９９／１６７５５（１９９９年４月８日公開）、およびＷＯ９８／０２４３７（１９９８年１月２２日公開）に記載されており、これらのすべては、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。本発明において有用ないくつかの具体的なＶＥＦＧ阻害剤の他の例は、ＩＭ８６２（Ｃｙｔｒａｎ  Ｉｎｃ．）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．の抗ＶＥＧＦモノクローナル抗体、およびＲｉｂｏｚｙｍｅ  ａｎｄ  Ｃｈｉｒｏｎからのアンギオザイムという合成リボザイムである。これらおよび他のＶＥＧＦ阻害剤を、本明細書に記載されるように、本発明において使用することができる。ＥｒｂＢ２受容体阻害剤、例えば、ＧＷ−２８２９７４（Ｇｌａｘｏ  Ｗｅｌｌｃｏｍｅ  ｐｌｃ）、ならびにモノクローナル抗体ＡＲ−２０９（Ａｒｏｎｅｘ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｉｎｃ．）、および２Ｂ−１（Ｃｈｉｒｏｎ）などは、本発明の化合物、例えば、すべてその全体が参照により本明細書に組み込まれている、ＷＯ９８／０２４３４（１９９８年１月２２日公開）、ＷＯ９９／３５１４６（１９９９年７月１５日公開）、ＷＯ９９／３５１３２（１９９９年７月１５日公開）、ＷＯ９８／０２４３７（１９９８年１月２２日公開）、ＷＯ９７／１３７６０（１９９７年４月１７日公開）、ＷＯ９５／１９９７０（１９９５年７月２７日公開）、米国特許第５，５８７，４５８号（１９９６年１２月２４日発行）、および米国特許第５，８７７，３０５号（１９９９年３月２日発行）に示されたものとさらに組み合わせることができる。本発明において有用なＥｒｂＢ２受容体阻害剤は、米国特許第６，４６５，４４９号（２００２年１０月１５日発行）、および米国特許第６，２８４，７６４号（２００１年９月４日発行）にも記載されており、これらの両方は、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。上述のＰＣＴ出願、米国特許、および米国仮出願に記載されたｅｒｂＢ２受容体阻害剤の化合物および物質、ならびにｅｒｂＢ２受容体を阻��する他の化合物および物質は、本発明に従って、本発明の化合物とともに使用することができる。
【０１９０】
抗生存剤（ａｎｔｉ−ｓｕｒｖｉｖａｌ  ａｇｅｎｔ）には、抗ＩＧＦ−ＩＲ抗体、および抗インテグリン抗体などの抗インテグリン剤（ａｎｔｉ−ｉｎｔｅｇｒｉｎ  ａｇｅｎｔ）が含まれる。
【０１９１】
抗炎症剤を本発明の抗Ｍ−ＣＳＦ抗体とともに使用することができる。関節リウマチを治療するために、本発明のヒト抗Ｍ−ＣＳＦ抗体を、薬剤、例えば、ＴＮＦ薬（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（商標）、ＣＤＰ−８７０、およびＨＵＭＩＲＡ（商標）など）、ならびにＴＮＦ受容体免疫グロブリン分子（ＥＮＢＲＥＬ（商標）など）などのＴＮＦ−α阻害剤、ＩＬ−１阻害剤、受容体アンタゴニスト、または可溶性ＩＬ−１ｒａ（例えば、キネレットもしくはＩＣＥ阻害剤）、ＣＯＸ−２阻害剤（セレコキシブ、ロフェコキシブ、バルデコキシブ、およびエトリコキシブなど）、メタロプロテアーゼ阻害剤（好ましくはＭＭＰ−１３選択的阻害剤）、ｐ２Ｘ７阻害剤、α２δリガンド（ＮＥＵＲＯＴＩＮ（商標）およびＰＲＥＧＡＢＡＬＩＮ（商標）など）、低用量のメトトレキセート、レフルノミド、ヒドロキシクロロキン、ｄ−ペニシラミン、オーラノフィン、または非経口金もしくは経口金などと組み合わせることができる。本発明の化合物は、骨関節炎を治療するための既存の治療剤と組み合わせて使用することもできる。組合せで使用される適当な薬剤として、標準的な非ステロイド性抗炎症剤（以下、ＮＳＡＩＤ）、例えば、ピロキシカム、ジクロフェナクや、ナプロキセン、フルルビプロフェン、フェノプロフェン、ケトプロフェン、およびイブプロフェンなどのプロピオン酸、メフェナム酸などのフェナメート、インドメタシン、スリンダク、アパゾン、フェニルブタゾンなどのピラゾロン、アスピリンなどのサリチル酸エステル、セレコキシブ、バルデコキシブ、ロフェコキシブ、およびエトリコキシブなどのＣＯＸ−２阻害剤など、鎮痛薬ならびに関節内療法、例えば、コルチコステロイド、ならびにヒアルガンおよびシンビスクなどのヒアルロン酸などが挙げられる。
【０１９２】
抗血液凝固剤を本発明の抗Ｍ−ＣＳＦ抗体とともに使用することができる。抗血液凝固剤の例には、それだけに限らないが、ワルファリン（ＣＯＵＭＡＤＩＮ（商標））、ヘパリン、およびエノキサパリン（ＬＯＶＥＮＯＸ（商標））が含まれる。
【０１９３】
本発明のヒト抗Ｍ−ＣＳＦ抗体は、心血管薬、例えば、カルシウムチャネル遮断薬、スタチンなどの脂質低下剤、フィブレート、β遮断薬、Ａｃｅ阻害剤、アンギオテンシン−２受容体アンタゴニスト、および血小板凝集阻害剤などと組み合わせて使用することもできる。本発明の化合物は、ＣＮＳ剤、例えば、抗うつ剤（セルトラリンなど）、抗パーキンソン病薬（デプレニル、Ｌ−ドーパ、ＲＥＱＵＩＰ（商標）、ＭＩＲＡＰＥＸ（商標）や、セレギリンおよびラサギリンなどのＭＡＯＢ阻害剤、タスマーなどのｃｏｍＰ阻害剤、Ａ−２阻害剤、ドーパミン再取り込み阻害剤、ＮＭＤＡアンタゴニスト、ニコチンアゴニスト、ドーパミンアゴニスト、および神経型一酸化窒素合成酵素の阻害剤など）、ならびにドネペジル、タクリン、α２δＬＩＧＡＮＤＳ（ＮＥＵＲＯＴＩＮ（商標）およびＰＲＥＧＡＢＡＬＩＮ（商標）など）阻害剤、ＣＯＸ−２阻害剤、プロペントフィリン、またはメトリホネートなどの抗アルツハイマー薬などと組み合わせて使用することもできる。
【０１９４】
本発明のヒト抗Ｍ−ＣＳＦ抗体は、骨粗鬆症薬（ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ  ａｇｅｎｔ）、例えば、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、ラソフォキシフェン、またはフォソマックスなど、ならびに免疫抑制剤、例えば、ＦＫ−５０６およびラパマイシンなどと組み合わせて使用することもできる。
【０１９５】
有用な診断法
別の態様では、本発明は、診断法を提供する。抗Ｍ−ＣＳＦ抗体は、インビトロまたはインビボで生体試料中のＭ−ＣＳＦを検出するのに使用することができる。一実施形態では、本発明は、診断を必要とする対象において、Ｍ−ＣＳＦを発現する腫瘍の存在または位置を診断するための方法であって、対象中に抗体を注射するステップと、抗体が結合した場所を突き止めることによって、対象におけるＭ−ＣＳＦの発現を判定するステップと、対象における発現を、正常な参照対象または基準の発現と比較するステップと、腫瘍の存在または位置を診断するステップとを含む方法を提供する。
【０１９６】
抗Ｍ−ＣＳＦ抗体は、限定することなく、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、ＦＡＣＳ、組織免疫組織化学、ウエスタンブロット、または免疫沈降を含めた従来のイムノアッセイにおいて使用することができる。本発明の抗Ｍ−ＣＳＦ抗体は、ヒトに由来するＭ−ＣＳＦを検出するのに使用することができる。別の実施形態では、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体は、霊長類、例えば、カニクイザル、アカゲザル、チンパンジー、または類人猿などに由来するＭ−ＣＳＦを検出するのに使用することができる。本発明は、生体試料中のＭ−ＣＳＦを検出するための方法であって、生体試料を本発明の抗Ｍ−ＣＳＦ抗体と接触させるステップと、結合した抗体を検出するステップとを含む方法を提供する。一実施形態では、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体は、検出可能標識で直接標識される。別の実施形態では、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体（第１の抗体）は未標識であり、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体に結合することができる第２の抗体または他の分子が標識される。当業者に周知であるように、第１の抗体の特定の種およびクラスに特異的に結合することができる第２の抗体が選択される。例えば、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体がヒトＩｇＧである場合、二次抗体は、抗ヒト−ＩｇＧとすることができる。抗体に結合することができる他の分子には、限定することなく、プロテインＡおよびプロテインＧが含まれ、これらの両方は、例えば、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．から市販されている。
【０１９７】
抗体または二次抗体に適した標識は、上記に開示されており、様々な酵素、補欠分子族、蛍光物質、ルミネセンス物質、および放射性物質が含まれる。適当な酵素の例には、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、またはアセチルコリンエステラーゼが含まれ、適当な補欠分子族複合体の例には、ストレプトアビジン／ビオチン、およびアビジン／ビオチンが含まれ、適当な蛍光物質の例には、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、塩化ダンシル、またはフィコエリトリンが含まれ、ルミネセンス物質の例には、ルミノールが含まれ、適当な放射性物質の例には、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３５Ｓ、または３Ｈが含まれる。
【０１９８】
他の実施形態では、Ｍ−ＣＳＦは、検出可能な物質で標識されたＭ−ＣＳＦ標準、および未標識抗Ｍ−ＣＳＦ抗体を利用する競合イムノアッセイによって、生体試料中でアッセイすることができる。このアッセイでは、生体試料、標識Ｍ−ＣＳＦ標準、および抗Ｍ−ＣＳＦ抗体が合わされ、未標識抗体に結合した標識Ｍ−ＣＳＦ標準の量が求められる。生体試料中のＭ−ＣＳＦの量は、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体に結合した標識Ｍ−ＣＳＦ標準の量に反比例する。
【０１９９】
いくつかの目的のために、上記に開示したイムノアッセイを使用することができる。例えば、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体を、細胞内の、または細胞培養液中の細胞表面上の、または組織培養培地中に分泌されたＭ−ＣＳＦを検出するのに使用することができる。抗Ｍ−ＣＳＦ抗体は、細胞の表面上の、または様々な化合物で処理された組織培養培地中に分泌されたＭ−ＣＳＦの量を求めるのに使用することができる。この方法は、Ｍ−ＣＳＦの発現または分泌を阻害または活性化するのに有用な化合物を同定するのに使用することができる。この方法によれば、細胞の１つの試料は、試験化合物である時間処理され、一方別の試料は、未処理のままにされる。Ｍ−ＣＳＦの総レベルが測定される場合、細胞が溶解され、総Ｍ−ＣＳＦレベルが、上述したイムノアッセイの１つを使用して測定される。処理細胞対未処理細胞内のＭ−ＣＳＦの総レベルが比較されることによって、試験化合物の効果が判定される。
【０２００】
総Ｍ−ＣＳＦレベルを測定するためのイムノアッセイは、ＥＬＩＳＡ、またはウエスタンブロットである。Ｍ−ＣＳＦの細胞表面レベルが測定される場合、細胞は溶解されず、Ｍ−ＣＳＦ細胞の表面レベルは、上述したイムノアッセイの１つを使用して測定することができる。Ｍ−ＣＳＦの細胞表面レベルを求めるためのイムノアッセイは、ビオチンまたは１２５Ｉなどの検出可能標識で細胞表面タンパク質を標識するステップと、Ｍ−ＣＳＦを抗Ｍ−ＣＳＦ抗体で免疫沈降させ、次いで標識Ｍ−ＣＳＦを検出するステップとを含むことができる。Ｍ−ＣＳＦの局在化、例えば、細胞表面レベルを判定するための別のイムノアッセイは、免疫組織化学とすることができる。ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、ウエスタンブロット、免疫組織化学、内在性膜タンパク質の細胞表面標識化、および免疫沈降などの方法は、当技術分野で周知である。例えば、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、上記を参照。さらに、Ｍ−ＣＳＦの阻害または活性化について多数の化合物を試験するために、イムノアッセイをハイスループットスクリーニング用にスケールアップすることができる。
【０２０１】
分泌されたＭ−ＣＳＦレベルを測定するためのイムノアッセイの別の例は、本発明の抗体を使用する、抗原捕捉アッセイ、ＥＬＩＳＡ、免疫組織化学アッセイ、ウエスタンブロットなどであり得る。分泌されたＭ−ＣＳＦが測定される場合、細胞培地、または血清、尿、もしくは滑液などの体液を、分泌されたＭ−ＣＳＦについてアッセイすることができ、かつ／または細胞を溶解することによって、産生されたが、まだ分泌されていないＭ−ＣＳＦを放出させることができる。Ｍ−ＣＳＦの分泌レベルを求めるためのイムノアッセイは、ビオチンまたは１２５Ｉなどの検出可能標識で分泌タンパク質を標識するステップと、Ｍ−ＣＳＦを抗Ｍ−ＣＳＦ抗体で免疫沈降させ、次いで標識Ｍ−ＣＳＦを検出するステップとを含む。Ｍ−ＣＳＦの分泌レベルを求めるための別のアッセイは、（ａ）マイクロタイタープレートの表面に抗Ｍ−ＣＳＦ抗体を予め結合させるステップと、（ｂ）分泌されたＭ−ＣＳＦを含有する組織培養細胞培地または体液を、マイクロタイタープレートのウェルに添加することによって抗Ｍ−ＣＳＦ抗体に結合させるステップと、（ｃ）抗Ｍ−ＣＳＦ抗体を検出する抗体、例えば、ステップ（ａ）の抗Ｍ−ＣＳＦ抗体と異なるＭ−ＣＳＦのエピトープに結合するジゴキシゲニンで標識された抗Ｍ−ＣＳＦを添加するステップと、（ｄ）ペルオキシダーゼにコンジュゲートしたジゴキシゲニンに抗体を添加するステップと、（ｅ）定量化することによって、組織培養細胞培地または体液試料中の分泌されたＭ−ＣＳＦのレベルを求めることができる着色した反応生成物を生じるペルオキシダーゼ基質を添加するステップとを含むことができる。ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、ウエスタンブロット、免疫組織化学、および抗原捕捉アッセイなどの方法は、当技術分野で周知である。例えば、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、上記を参照。さらに、Ｍ−ＣＳＦの阻害または活性化について多数の化合物を試験するために、イムノアッセイをハイスループットスクリーニング用にスケールアップすることができる。
【０２０２】
本発明の抗Ｍ−ＣＳＦ抗体は、組織内、または組織に由来する細胞内の細胞表面Ｍ−ＣＳＦのレベルを求めるのにも使用することができる。いくつかの実施形態では、組織は患部組織に由来する。いくつかの実施形態では、組織は、腫瘍またはその生検とすることができる。この方法のいくつかの実施形態では、組織またはその生検を患者から切り取ることができる。次いで、組織または生検をイムノアッセイにおいて使用することによって、上記に論じた方法により、例えば、総Ｍ−ＣＳＦレベル、Ｍ−ＣＳＦの細胞表面レベル、またはＭ−ＣＳＦの局在化を求めることができる。
【０２０３】
この方法は、検出可能な程度に標識された抗Ｍ−ＣＳＦ抗体、またはこれらを含む組成物を、そのような診断検査を必要とする患者に投与するステップと、患者を画像分析にかけることによって、Ｍ−ＣＳＦを発現する組織の位置を求めるステップとを含むことができる。画像分析は、医学分野で周知であり、これには、限定することなく、Ｘ線分析、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、またはコンピュータ断層撮影（ＣＥ）が含まれる。抗体は、インビボイメージングに適した任意の作用物質、例えば、Ｘ線分析に使用することができるバリウムなどの造影剤、またはＭＲＩもしくはＣＥに使用することができるガドリニウムキレートなどの磁性造影剤を用いて標識することができる。他の標識化剤には、限定することなく、９９Ｔｃなどの放射性同位体が含まれる。別の実施形態では、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体は未標識であり、検出可能で、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体に結合することができる第２の抗体または他の分子を投与することによって画像化される。一実施形態では、対象とする組織がＭ−ＣＳＦを発現するかどうかを判定するために、患者から生検が得られる。
【０２０４】
本発明の抗Ｍ−ＣＳＦ抗体は、組織に由来する血清、尿、または滑液などの体液中のＭ−ＣＳＦの分泌レベルを求めるのに使用することもできる。いくつかの実施形態では、体液は患部組織に由来する。いくつかの実施形態では、体液は、腫瘍またはその生検に由来する。この方法のいくつかの実施形態では、体液は、患者から取り出される。次いでこの体液がイムノアッセイにおいて使用されることによって、上記に論じた方法により、分泌されたＭ−ＣＳＦのレベルが求められる。本発明の一実施形態は、Ｍ−ＣＳＦアンタゴニストの活性についてアッセイする方法であって、Ｍ−ＣＳＦアンタゴニストを霊長類対象またはヒト対象に投与するステップと、生体試料中のＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球数を測定するステップとを含む方法である。
【０２０５】
有用な治療法
別の実施形態では、本発明は、Ｍ−ＣＳＦ活性の阻害を必要とする患者に抗Ｍ−ＣＳＦ抗体を投与することによってＭ−ＣＳＦ活性を阻害するための方法を提供する。本明細書に記載される抗体のタイプのいずれも、治療的に使用することができる。好適な実施形態では、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体は、ヒト抗体、キメラ抗体、またはヒト化抗体である。別の好適な実施形態では、Ｍ−ＣＳＦはヒトであり、患者はヒト患者である。あるいは、患者は、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体が交差反応するＭ−ＣＳＦを発現する哺乳動物であってもよい。抗体は、獣医学目的のため、またはヒト疾患の動物モデルとして、抗体が交差反応するＭ−ＣＳＦを発現する非ヒト哺乳動物（すなわち、霊長類）に投与することができる。そのような動物モデルは、本発明の抗体の治療的有効性を評価するのに有用となり得る。
【０２０６】
本明細書において、用語「Ｍ−ＣＳＦ活性が有害である障害」は、障害を罹患している対象における高レベルのＭ−ＣＳＦの存在が、障害の病態生理に関与しており、もしくは障害の悪化の一因となる要因である、またはそうであると疑われることが示された疾患および他の障害を含むことが意図されている。そのような障害は、例えば、分泌された、および／もしくは細胞表面上のＭ−ＣＳＦのレベルの上昇、または障害を罹患している対象の罹患細胞もしくは罹患組織内のｃ−ｆｍｓのチロシン自己リン酸化の増大によって、立証することができる。Ｍ−ＣＳＦレベルの上昇は、例えば、上述したように、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体を使用して検出することができる。
【０２０７】
一実施形態では、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体は、ｃ−ｆｍｓを発現する腫瘍、またはＭ−ＣＳＦを分泌する腫瘍および／もしくは腫瘍の細胞表面上でＭ−ＣＳＦを発現する腫瘍を有する患者に投与することができる。腫瘍は、正常な組織より高いレベルのｃ−ｆｍｓまたはＭ−ＣＳＦを発現することが好ましい。腫瘍は、固形腫瘍であっても、リンパ腫などの非固形腫瘍であってもよい。より好適な実施形態では、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体は、ｃ−ｆｍｓを発現する腫瘍、Ｍ−ＣＳＦを発現する腫瘍、またはがん性であるＭ−ＣＳＦを分泌する腫瘍を有する患者に投与することができる。さらに、腫瘍は、がん性である場合がある。さらにより好適な実施形態では、腫瘍は、肺、乳房、前立腺、または結腸のがんである。別の好適な実施形態では、患者に投与される抗Ｍ−ＣＳＦ抗体は、ｃ−ｆｍｓ受容体にもはや結合しないＭ−ＣＳＦをもたらす。非常に好適な実施形態では、この方法により、腫瘍の重量もしくは体積は増大せず、または重量もしくは体積が減少する。別の実施形態では、この方法は、腫瘍細胞上のｃ−ｆｍｓに、Ｍ−ＣＳＦによって結合されないようにさせる。別の実施形態では、この方法は、腫瘍細胞上のＭ−ＣＳＦに、ｃ−ｆｍｓに結合させない。別の実施形態では、この方法は、腫瘍細胞上の分泌されたＭ−ＣＳＦに、ｃ−ｆｍｓに結合させない。好適な実施形態では、抗体は、２５２、８８、１００、３．８．３、２．７．３、１．１２０．１、９．１４．４Ｉ、８．１０．３Ｆ、９．７．２ＩＦ、９．１４．４、８．１０．３、９．７．２、９．７．２Ｃ−Ｓｅｒ、９．１４．４Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３Ｃ−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ２、９．７．２−ＣＧ４、９．１４．４−ＣＧ２、９．１４．４−ＣＧ４、９．１４．４−Ｓｅｒ、９．７．２−Ｓｅｒ、８．１０．３−Ｓｅｒ、８．１０．３−ＣＧ４、８．１０．３ＦＧ１、もしくは９．１４．４Ｇ１から選択され、またはこれらの重鎖、軽鎖、もしくは抗原結合領域を含む。別の実施形態では、抗体は、重鎖、軽鎖、または重鎖と軽鎖の両方を有し、それぞれ抗体８．１０．３Ｆの重鎖、軽鎖、または重鎖と軽鎖の両方と９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である抗Ｍ−ＣＳＦ抗体である。
【０２０８】
別の好適な実施形態では、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体は、不適切に高レベルのＭ−ＣＳＦを発現する患者に投与することができる。Ｍ−ＣＳＦの高レベル発現により、様々な一般的ながんに至る場合があることが当技術分野で知られている。一実施形態では、前記方法は、がん、例えば、脳腫瘍、扁平細胞がん、膀胱がん、胃がん、膵がん、乳がん、頭部がん、頸部がん、食道がん、前立腺がん、結腸直腸がん、肺がん、腎がん（ｒｅｎａｌ  ｃａｎｃｅｒ）、腎がん（ｋｉｄｎｅｙ  ｃａｎｃｅｒ）、卵巣がん、婦人科がん、または甲状腺がんなどの治療に関する。本発明の方法によって、本発明の化合物を用いて治療することができる患者は、例えば、肺がん、骨がん、膵がん、皮膚がん、頭頸部のがん、皮膚黒色腫もしくは眼内黒色腫、子宮がん、卵巣がん、直腸がん、肛門部のがん、胃がん、大腸がん、乳がん、婦人科腫瘍（例えば、子宮肉腫、ファロピウス管の癌、子宮内膜の癌、頚部の癌、膣の癌、もしくは外陰部の癌）、ホジキン病、食道のがん、小腸のがん、内分泌系のがん（例えば、甲状腺、副甲状腺、もしくは副腎のがん）、軟部組織の肉腫、尿道のがん、陰茎のがん、前立腺がん、慢性もしくは急性白血病、固形腫瘍（例えば、血液、骨髄、もしくはリンパ系以外の体組織のがんである、肉腫、癌、もしくはリンパ腫）、小児期の固形腫瘍、リンパ球性リンパ腫、膀胱のがん、腎臓もしくは尿管のがん（例えば、腎細胞癌、腎盂の癌）、または中枢神経系の新生物（例えば、原発性ＣＮＳリンパ腫、脊髄軸腫瘍、脳幹グリオーマ、もしくは下垂体腺腫）を有すると診断された患者が含まれる。より好適な実施形態では、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体は、乳がん、前立腺がん、肺がん、または大腸がんを有する患者に投与される。さらにより好適な実施形態では、この方法は、がんに異常に増殖することを停止させ、重量もしくは体積を増大させず、または重量もしくは体積を減少させる。
【０２０９】
別の好適な実施形態では、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体は、様々な炎症性障害または免疫不全に至る場合のある不適切に高レベルのＭ−ＣＳＦを発現する患者に投与することができる。そのような障害として、それだけに限らないが、ＳＬＥ、ループス腎炎、および皮膚ループスを含めたループス、関節炎、乾癬性関節炎、ライター症候群、痛風、外傷性関節炎、風疹性関節炎ならびに急性滑膜炎、関節リウマチ、リウマチ様脊椎炎、強直性脊椎炎、骨関節炎、痛風関節炎、ならびに他の関節炎状態、敗血症、敗血症ショック、内毒素ショック、グラム陰性敗血症、毒素ショック症候群、アルツハイマー病、脳卒中、神経外傷、喘息、成人呼吸窮迫症候群、脳性マラリア、慢性炎症性肺疾患、珪肺症、肺サルコイドーシス、骨吸収疾患、骨粗鬆症、再狭窄、心臓および腎臓の再灌流傷害、血栓症、糸球体腎炎、糖尿病、移植片対宿主反応、同種移植片拒絶反応、炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、多発性硬化症、筋肉変性、湿疹、接触性皮膚炎、乾癬、日焼け、ならびに結膜炎が挙げられる。
【０２１０】
抗体は１回投与される場合があるが、複数回投与されることがより好ましい。例えば、抗体は、毎日３回から、６カ月またはそれ以上に１回投与することができる。投与は、毎日３回、毎日２回、毎日１回、２日に１回、３日に１回、毎週１回、２週間に１回、毎月１回、２カ月に１回、３カ月に１回、および６カ月に１回などのスケジュールによるものとすることができる。抗体は、ミニポンプを介して持続的に投与することもできる。抗体は、経口、粘膜、頬側、鼻腔内、吸入可能、静脈内、皮下、筋肉内、非経口、腫瘍内、または局所の経路を介して投与することができる。抗体は、腫瘍もしくは炎症性の身体部分の部位に、腫瘍もしくは炎症性の身体部分中に、または腫瘍もしくは炎症性の身体部分の部位から遠位の部位に投与することができる。抗体は、１回、少なくとも２回、または少なくとも状態が治療、緩和、または治癒されるまでの期間投与することができる。抗体は一般に、抗体が腫瘍またはがんに増殖を停止させ、または重量もしくは体積を減少させるという条件で、腫瘍が存在する限り、あるいは炎症性の身体部分が治癒されるまで投与されることになる。抗体は一般に、上記に記載された医薬組成物の一部として投与されることになる。抗体の投与量は一般に、０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは０．５〜５０ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは１〜２０ｍｇ／ｋｇ、さらにより好ましくは１〜１０ｍｇ／ｋｇの範囲内となる。抗体の血清濃度は、当技術分野で公知の任意の方法によって測定することができる。
【０２１１】
別の態様では、様々な障害および疾患の治療または予防における抗Ｍ−ＣＳＦ抗体の効力は、様々な障害および疾患に関連した症状、様々な生物マーカー、組織の組織診断、および生理的状態の変化について患者を検査することによって判定することができる。そのような症状、生物マーカー、組織の組織診断、および状態は、判定する当業者の技量の範囲内である。例えば、患者におけるループスの治療または予防における抗Ｍ−ＣＳＦ抗体の効力は、ループスに関係した症状、例えば、皮膚病変、タンパク尿症、リンパ節腫脹、血清Ｍ−ＣＳＦレベル、抗ｄｓＤＮＡ抗体レベルなどの変化、ならびにマクロファージ浸潤、炎症性浸潤、タンパク質円柱（ｐｒｏｔｅｉｎａｃｅｏｕｓ  ｃａｓｔ）、糸球体係蹄のサイズ、糸球体のＩｇＧ沈着物、およびＣ３沈着物を検査することなどによる腎臓の病態の変化を分析または観察することを含む場合がある。ＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球などの単球集団の変化、およびｕＮＴＸ−１などの破骨細胞マーカーの変化も検査することができる。全身性ループス、皮膚ループス、およびループス腎炎についての生物マーカーとして、赤血球沈降速度（ＥＳＲ）、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）、補体（Ｃ３／Ｃ４）、Ｉｇレベル（ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＧ）、抗核抗体（ＡＮＡ）、可溶性核抗原（ｅｘｔｒａｃｔａｂｌｅ  ｎｕｃｌｅａｒ  ａｎｔｉｇｅｎ）（ＥＮＡ）、および抗ｄｓＤＮＡ抗体を挙げることができる。
【０２１２】
薬力学的な生物マーカーデータに加えて、原理証明生物マーカー（ｐｒｏｏｆ  ｏｆ  ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ  ｂｉｏｍａｒｋｅｒ）として、Ｍ−ＣＳＦ経路についてのマーカー、炎症促進性サイトカイン／ケモカイン、免疫細胞サブセット（Ｂ細胞、Ｔ細胞、およびＤＣ）、ならびに臨床試験全体にわたって採取される全血、血清、尿、および組織の試料に由来する他の疾患関連マーカーを挙げることができる。
【０２１３】
例えば、探索用血清生物マーカーパネルを使用することによって、サイトカイン、ケモカイン、およびＭ−ＣＳＦに関係する追加の血清タンパク質の血清レベル、単球、マクロファージ、ならびにループス（全身性、腎炎、および皮膚）活性を検査することができる。血清生物マーカーは、当業者に周知である標準的なイムノアッセイ技法によって検査することができる。サイトカイン／ケモカイン血清生物マーカーのパネルとして、例えば、ＩＦＮ−γ、ＩＦＮ−α、ＩＬ−１２、ＴＮＦ−α、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＴＧＦ−β、ＩＬ−１−α、ＩＬ−１−β、ＩＬ−２１、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆ、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ９、ＣＣＬ２、ＣＣＬ１９、ＲＡＮＴＥＳ、ＣＸＣＬ１１、ＣＣＬ７、ＣＣＬ３、ＣＸＣＬ１３、ＣＣＬ８、ＣＸＣＬ８、ＣＤ４０Ｌ、可溶性ＴＮＦＲ、および可溶性ＩＬ−１受容体アンタゴニストを挙げることができる。Ｍ−ＣＳＦ、単球、およびマクロファージ活性に関係するパネルとして、Ｍ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＲＡＮＫＬ、可溶性ＣＤ１４、およびネオプテリンが含まれる。皮膚ループス、全身性ループスに関係する血清生物マーカーのサブセットとして、Ｅ−セレクチン、ＢＡＦＦ、可溶性ＣＤ２７、可溶性ＣＤ１５４、およびＣＣＬ１７を挙げることができる。
【０２１４】
治療される患者に由来する尿を、尿生物マーカーのパネルの変化について検査することができ、このパネルとして、とりわけ、Ｍ−ＣＳＦ、ＭＣＰ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＣＣＬ３、およびＲＡＮＴＥＳを挙げることができる。
【０２１５】
抗Ｍ−ＣＳＦ抗体の曝露による循環免疫細胞レパートリーの変化を評価するために、治療されるヒト対象に由来する全血の蛍光活性化細胞分類（ＦＡＣＳ）も検査することができる。免疫細胞サブセットは、確立された表面マーカーの発現パターンによって定義することができる。例えば、Ｂ細胞サブセットのパネルは、総Ｂ細胞、ナイーブＢ細胞、メモリーＢ細胞（スイッチされていない、およびクラススイッチされた）、血漿細胞、ダブルネガティブＢ細胞、およびＩｇＤナイーブＢ細胞の評価を含むことができる。移行Ｂ細胞のパネルは、移行Ｂ細胞、未成熟Ｂ細胞、および胚中心Ｂ細胞を含むことができる。Ｔ細胞サブセットのパネルは、総Ｔ細胞、ＮＫ  Ｔ細胞、ＮＫ細胞、ナイーブＴ細胞、メモリーＴ細胞、セントラルメモリーＴ細胞、およびエフェクターメモリーＴ細胞を記述することができる。樹状細胞のパネルは、骨髄樹状細胞、ならびに形質細胞様樹状細胞を検査することができる。そのような細胞サブセットは、決定および検出する当業者の技量の範囲内である。
【０２１６】
さらに、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体の曝露によるＲＮＡ発現の変化を検査することができる。ＲＮＡは、治療される患者に由来する全血および組織生検試料から単離することができる。遺伝子発現は、例えば、標準的なＴａｑｍａｎ  ＲＴ−ｑＰＣＲ  ＴＬＤＡパネルアッセイ技法を介して、単離されたＲＮＡから定量化することができる。例えば、表１Ｃは、Ｍ−ＣＳＦ経路の関与、サイトカイン／ケモカイン活性、および疾患関連遺伝子発現に関連する標的遺伝子のパネルを列挙する。表１Ｃに列挙された遺伝子の１つまたは複数のＲＮＡ発現を検査することによって、治療の効力を判定することができる。
【０２１７】
例えば、皮膚ループス患者からの病変皮膚生検および非病変皮膚生検を、免疫組織化学（ＩＨＣ）およびＲＮＡプロファイリングによって、Ｍ−ＣＳＦ依存性変化について評価することができる。ＩＨＣによって検査される細胞集団は、マクロファージ、樹状細胞（ｐＤＣおよびｍＤＣ）、ならびにＴ細胞集団を含む。血清生物マーカーパネルに列挙された生物マーカーの追加のＩＨＣ染色は、対象となっている。皮膚生検から単離されたＲＮＡの発現分析により、表１Ｃに列挙された遺伝子の１つまたは複数を検査することができる。
【０２１８】
【表３−１】
2013100281.tif 000004
【０２１９】
【表３−２】
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【０２２０】
【表３−３】
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【０２２１】
【表３−４】
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【０２２２】
【表３−５】
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【０２２３】
【表３−６】
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【０２２４】
【表３−７】
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【０２２５】
別の態様では、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体は、治療が必要である患者に、他の治療剤、例えば、抗炎症剤、抗血液凝固剤、血圧を低下させ、または低減する薬剤、抗新生物薬または抗新生物分子などと同時投与することができる。一態様では、本発明は、哺乳動物における過剰増殖障害を治療するための方法であって、前記哺乳動物に、それだけに限らないが、有糸分裂阻害剤、アルキル化剤、抗代謝産物、インターカレート剤、成長因子阻害剤、細胞周期阻害剤、酵素、トポイソメラーゼ阻害剤、生物学的応答調節剤、抗ホルモン、キナーゼ阻害剤、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤、遺伝子治療剤（ｇｅｎｅｔｉｃ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ）、および抗アンドロゲンからなる群から選択される抗腫瘍薬と組み合わせて、治療有効量の本発明の化合物を投与するステップを含む方法に関する。より好適な実施形態では、抗体は、アドリアマイシンまたはタキソールなどの抗腫瘍薬とともに投与することができる。別の好適な実施形態では、抗体または併用療法は、放射線療法、化学療法、光力学的療法、手術、または他の免疫療法とともに投与される。さらに別の好適な実施形態では、抗体は、別の抗体とともに投与されることになる。例えば、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体は、腫瘍またはがん細胞増殖を阻害することが知られている抗体または他の薬剤、例えば、ｅｒｂＢ２受容体、ＥＧＦ−Ｒ、ＣＤ２０、またはＶＥＧＦを阻害する抗体また薬剤とともに投与することができる。
【０２２６】
追加の治療剤との抗体の同時投与（併用療法）は、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体および追加の治療剤を含む１つの医薬組成物の投与、および一方が抗Ｍ−ＣＳＦ抗体を含み、他方（複数可）が追加の治療剤（複数可）を含む、２つ以上の別個の医薬組成物の投与を包含する。さらに、同時投与または併用療法は、抗体および追加の治療剤が互いに同時に投与されることを一般に意味するが、これは、抗体および追加の治療剤が異なる時間に投与される場合も包含する。例えば、抗体は、３日に１回投与することができ、一方、追加の治療剤は、毎日１回投与される。あるいは、抗体は、追加の治療剤で障害を治療する前、またはこれに続いて投与することができる。同様に、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体の投与は、他の療法、例えば、放射線療法、化学療法、光力学的療法、手術、または他の免疫療法などの前、またはこれに続いて投与することができる。
【０２２７】
抗体および１つまたは複数の追加の治療剤（併用療法）は、１回、２回、または少なくとも状態が治療、緩和、または治癒されるまでの期間投与することができる。併用療法は、複数回投与されることが好ましい。併用療法は、毎日３回から６カ月に１回投与することができる。投与は、毎日３回、毎日２回、毎日１回、２日に１回、３日に１回、毎週１回、２週間に１回、毎月１回、２カ月に１回、３カ月に１回、および６カ月に１回などのスケジュールによるものとすることができ、またはミニポンプを介して持続的に投与することができる。併用療法は、経口、粘膜、頬側、鼻腔内、吸入可能、静脈内、皮下、筋肉内、非経口、腫瘍内、または局所の経路を介して投与することができる。併用療法は、腫瘍の部位から遠位の部位で投与することができる。併用療法は一般に、抗体が腫瘍もしくはがんに増殖を停止させ、または重量もしくは体積を減少させるという条件で、腫瘍が存在する限り投与されることになる。
【０２２８】
なおさらなる実施形態では、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体は、放射標識、免疫毒素、もしくは毒素で標識されており、または毒性ペプチドを含む融合タンパク質である。抗Ｍ−ＣＳＦ抗体または抗Ｍ−ＣＳＦ抗体融合タンパク質は、放射標識、免疫毒素、毒素、または毒性ペプチドをＭ−ＣＳＦ発現細胞に向ける。好適な実施形態では、放射標識、免疫毒素、毒素、または毒性ペプチドは、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体が標的細胞の表面上でＭ−ＣＳＦに結合した後、内部移行する。
【０２２９】
別の態様では、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体は、高レベルのＭ−ＣＳＦおよび／またはＭ−ＣＳＦが非がん性の状態または疾患に関連している非がん性状態を治療するのに使用することができる。一実施形態では、この方法は、高レベルのＭ−ＣＳＦおよび／またはＭ−ＣＳＦレベルもしくは活性によって引き起こされ、または悪化された非がん性病理状態を有する患者に抗Ｍ−ＣＳＦ抗体を投与するステップを含む。より好適な実施形態では、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体は、非がん性病理状態の進行を遅くする。より好適な実施形態では、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体は、少なくとも部分的に、非がん性病理状態を停止または逆転させる。
【０２３０】
遺伝子療法
本発明の核酸分子は、遺伝子療法を介して、この核酸分子の投与を必要とする患者に投与することができる。この療法は、インビボまたはエクスビボとすることができる。好適な実施形態では、重鎖および軽鎖の両方をコードする核酸分子が患者に投与される。より好適な実施形態では、核酸分子は、Ｂ細胞の染色体中に安定に組み込まれるように投与され、その理由は、これらの細胞は、抗体を産生するのに特殊化されているためである。好適な実施形態では、前駆体Ｂ細胞は、エクスビボでトランスフェクトまたは感染され、この細胞を再移植する必要のある患者に再移植される。別の実施形態では、前駆体Ｂ細胞または他の細胞は、対象とする細胞型に感染させることが知られているウイルスを使用して、インビボで感染される。遺伝子療法に使用される典型的なベクターは、リポソーム、プラスミド、およびウイルスベクターが含まれる。例示的なウイルスベクターは、レトロウイルス、アデノウイルス、およびアデノ随伴ウイルスである。インビボまたはエクスビボでの感染の後、治療される患者から試料を採取し、当技術分野で公知であり、または本明細書に論じられる任意のイムノアッセイを使用することによって、抗体発現レベルをモニターすることができる。
【０２３１】
好適な実施形態では、遺伝子療法の方法は、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体の重鎖またはその抗原結合部分をコードする単離核酸分子を投与するステップと、核酸分子を発現させるステップとを含む。別の実施形態では、遺伝子療法の方法は、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体の軽鎖またはその抗原結合部分をコードする単離核酸分子を投与するステップと、核酸分子を発現させるステップとを含む。より好適な方法では、遺伝子療法の方法は、本発明の抗Ｍ−ＣＳＦ抗体の重鎖またはその抗原結合部分をコードする単離核酸分子、および軽鎖またはその抗原結合部分をコードする単離核酸分子を投与するステップと、核酸分子を発現させるステップとを含む。遺伝子療法の方法は、タキソールまたはアドリアマイシンなどの別の抗がん剤を投与するステップも含むことができる。
【０２３２】
本発明をより良好に理解することができるように、以下の実施例を示す。これらの実施例は、実例の目的のためだけであり、いずれの様式においても、本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきでない。
【実施例１】
【０２３３】
抗Ｍ−ＣＳＦ抗体を産生する細胞株の生成
本発明の抗体を、以下のように調製、選択、およびアッセイした。
免疫化およびハイブリドーマ生成
生後８週〜１０週のＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）マウスを、腹腔内に、またはこれらの後足蹠に、ヒトＭ−ＣＳＦ（１０μｇ／用量／マウス）で免疫した。この投与を、３〜８週間の期間にわたって５〜７回繰り返した。融合の４日前に、マウスにＰＢＳ中のヒトＭ−ＣＳＦの最後の注射を投与した。免疫されたマウスからの脾臓およびリンパ節リンパ球を、非分泌性骨髄腫Ｐ３−Ｘ６３−Ａｇ８．６５３細胞株と融合させ、融合された細胞を、以前に記載されたようにＨＡＴ選択にかけた（ＧａｌｆｒｅおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．７３：３〜４６、１９８１）。すべてＭ−ＣＳＦ特異的ヒトＩｇＧ２抗体およびＭ−ＣＳＦ特異的ヒトＩｇＧ４抗体を分泌するハイブリドーマのパネルを回収した。抗体はまた、Ｂａｂｃｏｏｋ，Ｊ．Ｓ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９３：７８４３〜４８、１９９６に記載されているＸＥＮＯＭＡＸ（商標）技術を使用して生成した。本発明の抗体を産生するように工学的に作製された９つの細胞株をさらなる試験のために選択し、２５２、８８、１００、３．８．３、２．７．３、１．１２０．１、９．１４．４、８．１０．３、および９．７．２と呼んだ。このハイブリドーマを、２００３年８月８日に、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）、１０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｌｖｄ．、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ  ２０１１０−２２０９に、ブダペスト条約による条項下で寄託した。これらのハイブリドーマは、以下の受託番号に割り当てられた：
ハイブリドーマ３．８．３（ＬＮ１５８９１）    ＰＴＡ−５３９０
ハイブリドーマ２．７．３（ＬＮ１５８９２）    ＰＴＡ−５３９１
ハイブリドーマ１．１２０．１（ＬＮ１５８９３）    ＰＴＡ−５３９２
ハイブリドーマ９．７．２（ＬＮ１５８９４）    ＰＴＡ−５３９３
ハイブリドーマ９．１４．４（ＬＮ１５８９５）    ＰＴＡ−５３９４
ハイブリドーマ８．１０．３（ＬＮ１５８９６）    ＰＴＡ−５３９５
ハイブリドーマ８８−γ（ＵＣ２５４８９）    ＰＴＡ−５３９６
ハイブリドーマ８８−κ（ＵＣ２５４９０）    ＰＴＡ−５３９７
ハイブリドーマ１００−γ（ＵＣ２５４９１）    ＰＴＡ−５３９８
ハイブリドーマ１００−κ（ＵＣ２５４９２）    ＰＴＡ−５３９９
ハイブリドーマ２５２−γ（ＵＣ２５４９３）    ＰＴＡ−５４００
ハイブリドーマ２５２−κ（ＵＣ２５４９４）    ＰＴＡ−５４０１
【実施例２】
【０２３４】
遺伝子利用分析
モノクローナル抗体２５２、８８、１００、３．８．３、２．７．３、１．１２０．１、９．１４．４、８．１０．３、および９．７．２の重鎖および軽鎖をコードするＤＮＡをそれぞれのハイブリドーマ細胞株からクローン化し、ＤＮＡ配列を当業者に公知の方法によって決定した。さらに、ハイブリドーマ細胞株９．１４．４、８．１０．３、および９．７．２に由来するＤＮＡを、可変ドメイン中の特定のフレームワーク領域で突然変異させ、かつ／またはアイソタイプをスイッチすることによって、例えば、それぞれ９．１４．４Ｉ、８．１０．３Ｆ、および９．７．２ＩＦを得た。抗体の核酸配列および予測アミノ酸配列から、各抗体鎖についての遺伝子使用の同一性を求めた（「ＶＢＡＳＥ」）。表２に、本発明による選択された抗体の遺伝子利用を示す。
【０２３５】
【表４】
2013100281.tif 000011
【０２３６】
重鎖および軽鎖の特定の残基の突然変異誘発は、プライマーを設計し、製造者の指示書に従って、ＳｔｒａｔａｇｅｎｅからのＱｕｉｃｋＣｈａｎｇｅ  Ｓｉｔｅ  Ｄｉｒｅｃｔｅｄ  Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ  Ｋｉｔを使用して実施した。突然変異を自動配列決定によって確認し、突然変異を誘発されたインサートを発現ベクター中にサブクローン化した。発現ベクターをＨＥＫ２９３細胞中にトランスフェクトすることによって、特徴づけに十分な抗体を生成した。
【実施例３】
【０２３７】
Ｍ−ＣＳＦマウス単球細胞増殖アッセイ
インビトロアッセイを行うことによって、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体の存在下でのＭ−ＣＳＦ依存性マウス単球細胞増殖を測定して、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体による阻害の程度を判定した。
【０２３８】
アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）（Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ）からマウス単球細胞、Ｍ−ＮＦＳ−６０細胞を得、２ｍＭのＬ−グルタミン（ＡＴＣＣ）、１０％の熱失活ウシ胎児血清（ＦＢＳ）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）、０．０５ｍＭの２−メルカプトエタノール（Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ  ＭＯ）を含有するＲＰＭＩ−１６４０培地（アッセイ培地）中で、１５ｎｇ／ｍｌのヒトＭ−ＣＳＦとともに維持した。Ｍ−ＮＳＦ−６０細胞を、翌日用の５×１０４個、または２日で使用するための２．５×１０４個に分けた。アッセイで使用する前に、細胞をＲＰＭＩ−１６４０で３回洗浄し、計数し、アッセイ培地で体積を調整することによって、２×１０５細胞／ｍｌを得た。すべての条件を、９６ウェル処理済み組織培養プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＮＹ）内で、３通りで行った。各ウェルに、洗浄した細胞５０μｌ、２５μｌの体積中１００ｐＭまたは１０００ｐＭのＭ−ＣＳＦ、ならびにアセテート緩衝液（１４０ｍＭの塩化ナトリウム、２０ｍＭの酢酸ナトリウム、および０．２ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０、ｐＨ５．５）中の２５μｌの体積中様々な濃度の試験抗体または対照抗体の最終体積１００μｌを添加した。本発明の抗体を単独で、およびヒトＭ−ＣＦＳとともに試験した。プレートを、５％のＣＯ２とともに３７℃で２４時間（ｈｒｓ）インキュベートした。
【０２３９】
２４時間後に、１０μｌ／ウェルの０．５μＣｉの３Ｈ−チミジン（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）を添加し、３時間、細胞でパルスした。組み込まれたチミジンの量を検出するために、細胞を、湿潤済み（ｐｒｅ−ｗｅｔ）ユニフィルターＧＦ／Ｃフィルタープレート（Ｐａｃｋａｒｄ、Ｍｅｒｉｄｅｎ、ＣＴ）上に収集し、水で１０回洗浄した。プレートを一晩乾燥させた。ボトムシールをフィルタープレートに付けた。次に、１ウェル当たりＭｉｃｒｏｓｃｉｎｔ２０（Ｐａｃｋａｒｄ、Ｍｅｒｉｄｅｎ、ＣＴ）４５μｌを添加した。トップシールを付けた後、Ｔｒｉｌｕｘマイクロベータカウンター（Ｗａｌｌａｃ、Ｎｏｒｔｏｎ、ＯＨ）でプレートを計数した。
【０２４０】
これらの実験は、本発明の抗Ｍ−ＣＳＦ抗体が、Ｍ−ＣＳＦに応答してマウス単球細胞増殖を阻害することを実証する。さらに、様々な濃度の抗体を使用することによって、マウス単球細胞増殖の阻害についてのＩＣ５０を、抗体２５２、８８、１００、３．８．３、２．７．３、１．１２０．１、９．１４．４Ｉ、８．１０．３Ｆ、９．７．２ＩＦ、９．１４．４、８．１０．３、および９．７．２について求めた（細胞増殖アッセイ、表３ａおよび表３ｂ）。
【０２４１】
【表５】
2013100281.tif 000012
【０２４２】
【表６】
2013100281.tif 000013
【実施例４】
【０２４３】
ヒト全血単球活性化アッセイ
インビトロアッセイを行うことによって、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体の存在下でのＭ−ＣＳＦ依存性単球形状変化を測定して、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体が全血単球活性化を阻害することができるかどうか、および単球形状変化の阻害のその程度を判定した。
【０２４４】
９６ウェル組織培養プレートの個々のウェル中で、１０２ｐＭの抗Ｍ−ＣＳＦ抗体の最終濃度にするために、１．７ｎＭの抗Ｍ−ＣＳＦ  ６μｌ、およびヒト全血９４μｌを混合した。このプレートを、ＣＯ２組織培養インキュベーター内で、３７℃でインキュベートした。次に、プレートをインキュベーターから取り出した。各ウェルに、固定液（ＭｇＣｌ２またはＣａＣｌ２を含まないリン酸緩衝溶液中０．５％のホルマリン）１００μｌを添加し、プレートを室温で１０分間インキュベートした。各試料について、各ウェルからの１８０μｌ、および赤血球溶解緩衝液１ｍｌを混合した。管を２秒間ボルテックスした。次に、赤血球を溶解させるが、単球をインタクトなままにするために、試料を振盪水浴中で、３７℃で５分間インキュベートした。このインキュベーションの直後に、蛍光活性化細胞走査（ＦＡＣＳ）装置（ＢＤ  Ｂｅｃｋｍａｎ  ＦＡＣＳ）で試料を読み取り、ＦＡＣＳ  Ｓｔａｔｉｏｎ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｖｅｒｓｉｏｎ  ３．４を使用してデータを分析した。
【０２４５】
これらの実験は、本発明の抗Ｍ−ＣＳＦ抗体が、対照試料と比較して単球形状変化を阻害することを実証する。単球形状変化アッセイを使用して、ＩＣ５０を、抗体２５２、８８、１００、３．８．３、２．７．３、１．１２０．１、９．１４．４Ｉ、８．１０．３Ｆ、９．７．２ＩＦ、９．１４．４、８．１０．３、および９．７．２について求めた（ヒト全血単球活性化、表３ａおよび表３ｂ）。
【実施例５】
【０２４６】
ｃ−ｆｍｓ受容体結合阻害アッセイ
インビトロアッセイを行うことによって、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体の存在下でのＭ−ＣＳＦのｃ−ｆｍｓ受容体への結合を測定して、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体が、Ｍ−ＣＳＦのｃ−ｆｍｓ受容体への結合を阻害することができるかどうか、および阻害のその程度を判定した。
【０２４７】
マグネシウムまたはカルシウムを含まないダルベッコリン酸緩衝溶液中で維持された、ヒトｃ−ｆｍｓをトランスフェクトしたＮＩＨ−３Ｔ３細胞またはＭ−ＮＳＦ−６０細胞を洗浄した。５ｍＭのエチレン−ジアミン−テトラ−アセテート（ＥＤＴＡ）、ｐＨ７．４を用いて、ＮＩＨ−３Ｔ３細胞を組織培養プレートから取り出した。ＮＩＨ−３Ｔ３細胞を組織培養インキュベーターに１〜２分間戻し、フラスコ（複数可）をタップして細胞を放した。ＮＩＨ−３Ｔ３細胞およびＭ−ＮＳＦ−６０細胞を５０ｍｌの管に移し、反応緩衝液（５０ｍＭのＮ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ’−２−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）を含有する、炭酸水素ナトリウムを含まない１×ＲＰＭＩ、ｐＨ７．４）で２回洗浄した。次に、ＮＩＨ−３Ｔ３細胞を反応緩衝液中に再懸濁し、１．５×１０５細胞／ｍｌの最終濃度にした。Ｍ−ＮＳＦ−６０細胞を反応緩衝液中に再懸濁し、２．５×１０６細胞／ｍｌの最終濃度にした。
【０２４８】
アッセイのために、滅菌した０．４Ｍのスクロース溶液９μｌ、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）を含有するＲＰＭＩ−１６４０中、２００ｐＭの最終濃度の１２５Ｉ−Ｍ−ＣＳＦ（Ａｍｅｒｓｈａｍ、ＩＭＱ７２２８ｖ）１００μｌ、０．２％のウシ血清アルブミン、および２００ｎＭの最終濃度の未標識Ｍ−ＣＳＦ  １００μｌを、結合用管内で混合した。次に、５０μｌ／管の漸増濃度の試験抗体を添加した。抗体の非特異的結合を判定するために、試料を含め、これに２００ｎＭのＭ−ＣＳＦも添加した。対照管には、抗体を添加しなかった。次に、管１本当たり１５，０００個のＮＩＨ−３Ｔ３細胞または２５０，０００個のＭ−ＮＳＦ−６０細胞を添加した。すべての管を室温で３時間インキュベートし、１０，０００ｒｐｍで２分間、遠心分離にかけた。細胞ペレットを含有する管の先端部を切り離し、細胞に結合したＭ−ＣＳＦの量を、Ｐａｃｋａｒｄ  Ｃｏｂｒａ  ＩＩ  Ｇａｍｍａカウンターを使用して求めた。全結合から非特異的結合を減じることによって、特異的結合を求めた。すべてのアッセイを二通りに実施した。結合データを、コンピュータープログラムのＧｒａｐｈ  Ｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ２．０１を使用して分析した。
【０２４９】
これらの実験は、本発明の抗Ｍ−ＣＳＦ抗体が、対照試料と比較してＭ−ＣＳＦのｃ−ｆｍｓ受容体への結合を阻害することを実証する。さらに、様々な濃度の抗体を使用することによって、受容体結合の阻害についてのＩＣ５０を、抗体２５２、８８、１００、３．８．３、２．７．３、１．１２０．１、９．１４．４Ｉ、８．１０．３Ｆ、９．７．２ＩＦ、９．１４．４、８．１０．３、および９．７．２について求めた（受容体結合阻害アッセイ、表３ａおよび表３ｂ）。
【実施例６】
【０２５０】
ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）による抗Ｍ−ＣＳＦモノクローナル抗体の親和定数（ＫＤ）の判定
精製抗体の親和性測定を、製造者のプロトコールに従って、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）３０００機器を使用して、表面プラズモン共鳴によって実施した。
【０２５１】
抗体３．８．３、２．７．３、および１．１２０．１について、０．０００５％のＴｗｅｅｎ−２０を含有するダルベッコリン酸緩衝溶液中、２５℃で、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）３０００機器で実験を実施した。沈降速度実験から、またはアミノ酸配列から得られる理論吸光係数を使用して２８０ｎｍでの試料の波長を測定することによって、タンパク質濃度を得た。抗体の固定化された抗原への結合を測定する実験のために、標準的な直接アミンカップリング手順によってＢ１チップ上にＭ−ＣＳＦを固定化した。抗体試料を、３．８．３、２．７．３、および１．１２０．１について０．６９μＭで調製した。これらの試料を、おおよそ１００倍の濃度の範囲について、８．５ｎＭまたは２．８ｎＭに連続的に３倍希釈した。各濃度について、試料を、５μｌ／分の流量で４分間、二通りに注射した。解離を２０００秒間モニターした。ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）Ｂｉａｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアを使用して、単純な１：１結合モデルに、データを包括的にフィッティングした。すべての場合において、ｋｏｆｆを得るのにこの方法を使用し、このデータセットは、会合および解離データの包括的なフィッティングから得られるデータに十分に匹敵することが見出された。
【０２５２】
抗体２５２、８８、および１００について、ＨＢＳ−ＥＰ緩衝液（０．０１ＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、０．１５ＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、０．００５％の界面活性剤Ｐ２０）中、２５℃で、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）３０００機器で実験を実施した。抗体の固定化された抗原への結合を測定する実験のために、標準的な直接アミンカップリング手順によって、ＣＭ５研究グレードセンサーチップ上にＭ−ＣＳＦを固定化した。抗体試料を、抗体２５２および１００について１２．５ｎＭで、抗体８８について２５．０ｎＭで調製した。これらの試料を、おおよそ１５〜３０倍の濃度の範囲ついて、０．７８ｎＭに連続的に２倍希釈した。各濃度について、試料を、３０μｌ／分の流量で３分間、ランダムな順序で二通りに注射した。解離を３００秒間モニターした。ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）Ｂｉａｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアを使用して、単純な１：１結合モデルに、データを包括的にフィッティングした。すべての場合において、ｋｏｆｆを得るのにこの方法を使用し、このデータセットは、会合および解離データの包括的なフィッティングから得られるデータに十分に匹敵することが見出された。
【０２５３】
表４は、抗体２５２、８８、１００、３．８．３、２．７．３、および１．１２０．１についての結果を示す。
【０２５４】
【表７】
2013100281.tif 000014
【実施例７】
【０２５５】
８．１０．３ハイブリドーマ細胞からの８．１０．３抗体の産生
抗体８．１０．３は、３Ｌのスパージドスピナー（ｓｐａｒｇｅｄ  ｓｐｉｎｎｅｒ）で調製した。３Ｌのスパージドスピナーフラスコは、培養液が磁気プラットフォームで制御されたインペラで混合されたガラス容器である。スピナーは、５％のＣＯ２および空気を供給するためにガスラインに接続されている。８．１０．３ハイブリドーマ細胞を最初に解凍してＴ−２５細胞培養フラスコ中に入れた。スパージドスピナーに蒔くのに十分な数の細胞が存在するまで、細胞を徐々に増殖させた。
【０２５６】
２つの３Ｌのスパージドスピナーフラスコに、２つのスパージドフラスコ（ｓｐａｒｇｅｄ  ｆｌａｓｋ）について、表５に記した添加物を含むハイブリドーマ無血清培地中の８．１０．３ハイブリドーマ細胞を蒔いた。超低ＩｇＧ血清（Ｇｉｂｃｏ  カタログ番号１６２５０−０７８）、Ｌ−グルタミン（ＪＲＨ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  カタログ番号５９２０２−５００Ｍ）、非必須アミノ酸（Ｇｉｂｃｏ  カタログ番号１１１４０−０５０）、ペプトン（Ｄｉｆｃｏ  カタログ番号２１１６９３）、グルコース（ＪＴ  Ｂａｋｅｒ  カタログ番号１９２０−０７から調製した内製ストック）、および抗ｆｏａｍ  Ｃ（Ｓｉｇｍａ  カタログ番号Ａ−８０１１）についての濃度を、培地中のこれらの最終濃度で示す。各反応器中の体積の残りは、ハイブリドーマ無血清培地である。
【０２５７】
【表８】
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【０２５８】
培養物を１５日間増殖させ、生存能が２０％未満になったとき収集した。生存能は、自動細胞計数器（Ｃｅｄｅｘ、Ｉｎｎｏｖａｔｉｓ）を用いて、トリパンブルー排除法によって求めた。収集は、遠心分離、および後続の濾過によって遂行した。７０００ｒｐｍで１５分間遠心分離し、引き続いて滅菌した０．２２μｍの４’’Ｏｐｔｉｃａｐ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅフィルター（カタログ番号ＫＶＳＣＯ４ＨＢ３）を用いて濾過して、１０Ｌの滅菌したＴＣ−Ｔｅｃｈバッグ（カタログ番号Ｐ／Ｎ  １２４２０  Ｂａｇ  Ｓｔｙｌｅ  ＣＣ−１０−１１２４２０）中に入れた後、澄んだ上清を得た。次いで濾液を、以下の実施例において精製した。
【実施例８】
【０２５９】
抗Ｍ−ＣＳＦ抗体の精製
プロテインＡカラム（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ）を、３カラム体積の８Ｍの尿素を用いて洗浄し、その後、２０ｍＭのＴｒｉｓ（ｐＨ８）を用いて平衡化洗浄することよって準備した。実施例７からの最終濾液を、２％ｖ／ｖの１ＭのＴｒｉｓ  ｐＨ８．３および０．０２％のＮａＮ３でスパイクした後、重力ドリップモードを介してプロテインＡカラム上に装填した。装填が完了した後、５カラム体積の２０ｍＭのＴｒｉｓ（ｐＨ８）、その後５カラム体積の溶出緩衝液（０．１Ｍのグリシン  ｐＨ３．０）で樹脂を洗浄した。何らかの沈殿が認められたので、次いで１ＭのＴｒｉｓ  ｐＨ８．３の１０％ｖ／ｖのスパイクを溶出した抗体に加えた。次いで溶出したタンパク質を、溶出した物質の１００倍の体積量の透析緩衝液（１４０ｍＭのＮａＣｌ／２０ｍＭの酢酸ナトリウム  ｐＨ５．５）中に透析した。透析した後、抗体を、０．２２μｍのフィルターを用いて滅菌濾過し、さらに使用するまで貯蔵した。
【実施例９】
【０２６０】
サルの処置および単球数
１投与量群当たり１匹のオス、および１匹のメスのカニクイザルに、ビヒクルまたは抗体８．１０．３（実施例７および実施例８に記載したように調製）を、３．７９ｍＬ／ｋｇの投与体積中、０、０．１、１、または５ｍｇ／ｋｇで、約５分の期間をかけて静脈内投与した。臨床検査室分析用の血液試料を、投与後２４時間および７２時間に、ならびに３週間にわたって毎週収集した。Ａｂｂｏｔｔ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  Ｉｎｃ．のＣｅｌｌ  Ｄｙｎシステム（Ａｂｂｏｔｔ  Ｐａｒｋ、Ｉｌｌｉｎｏｉｓ）を使用して、光散乱によって単球数を求めた。
【０２６１】
すべての用量で、総単球の用量関連減少（約２５％〜８５％）（図１Ａおよび図１Ｂ）が観察された。０．１ｍｇ／ｋｇおよび１ｍｇ／ｋｇにおける単球数は、２週目までに対照レベル付近までリバウンドするように思われ、一方、５ｍｇ／ｋｇにおける単球数は、３週目で依然として減少していた。
【０２６２】
ＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球サブセット分析
ナトリウムヘパリンを含有するＶａｃｕｔａｉｎｅｒ管中に霊長類全血を抜き取った。各血液試料０．２ｍｌを、赤血球溶解緩衝液（Ｓｉｇｍａ）１０ｍｌを含有する１５ｍｌの円錐形ポリプロピレン遠心管に添加し、３７℃の水浴中で１５分間インキュベートした。次いでこの管を、Ｓｏｒｖａｌｌ  ＲＴ７遠心分離機で、１，２００ｒｐｍで５分間遠心分離した。上澄を吸引し、４℃のＦＡＣＳ緩衝液（ハンクス平衡塩溶液／２％のＦＢＳ／０．０２％のアジ化ナトリウム）１０ｍｌ中でペレットを再懸濁し、管を１，２００ｒｐｍで５分間再び遠心分離した。上澄を吸引し、４℃のＦＡＣＳ緩衝液８０μｌ、ＦＩＴＣコンジュゲート抗ヒトＣＤ１４モノクローナル抗体（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）１０μｌ、Ｃｙ５−ＰＥ−コンジュゲート抗ヒトＣＤ１６モノクローナル抗体（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）０．５μｌ、およびＰＥ−コンジュゲート抗ヒトＣＤ８９モノクローナル抗体（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）１０μｌからなる抗体カクテル中でペレットを再懸濁した。細胞懸濁液を氷上で２０分間インキュベートし、その後、４℃のＦＡＣＳ緩衝液１０ｍｌを添加し、細胞を以前のように遠心分離した。上澄を吸引し、ＦＡＣＳ緩衝液４００μｌ中で細胞ペレットを再懸濁し、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｅｒフローサイトメーター（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ、ＣＡ）で細胞を分析した。３０，０００細胞についてのデータを各試料から収集した。
【０２６３】
単球集団は、前方角光散乱と直交光散乱の組合せによって同定することができる。単球ゲート内の細胞を、ＣＤ１４およびＣＤ１６の発現についてさらに分析した。単球の２つの異なる集団が観察され、一方は、高レベルのＣＤ１４を発現し、ＣＤ１６発現（ＣＤ１４＋＋ＣＤ１６−）がほとんど、またはまったくなく、他方は、より低いレベルのＣＤ１４を発現するが、高レベルのＣＤ１６（ＣＤ１４＋ＣＤ１６＋）を発現し、ヒト末梢血において以前に記載された２つの単球サブセットと同様であった（Ｚｉｅｇｌｅｒ−Ｈｅｉｔｂｒｏｃｋ  Ｈ．Ｗ．、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ  １７：４２４〜４２８（１９９６））。試験した各霊長類について、ＣＤ１４＋ＣＤ１６＋サブセット内の単球の百分率を、各採血後、８．１０．３を注射した後の１日目、３日目、７日目、１４日目、および２１日目に求めた。
【０２６４】
一般に、８．１０．３で処置すると、ＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球の百分率が低減した（図２Ａおよび図２Ｂを参照）。８．１０．３抗体を投与されていないサルは、相対的に安定なＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球レベルを実証した。ＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球は、より高いレベルのＴＮＦ−αおよび他の炎症性サイトカインを産生するので、「炎症促進性」と呼ばれている（Ｆｒａｎｋｅｎｂｅｒｇｅｒ，Ｍ．Ｔ．ら、Ｂｌｏｏｄ  ８７：３７３〜３７７（１９９６））。従来のＣＤ１４＋＋ＣＤ１６−表現型から炎症促進性表現型への単球の分化は、Ｍ−ＣＳＦに依存することも報告されている（Ｓａｌｅｈ  Ｍ．Ｎ．ら、Ｂｌｏｏｄ  ８５：２９１０〜２９１７（１９９５））。
【実施例１０】
【０２６５】
サルの処置および単球数
１投与量群当たり３匹のオスのカニクイザルに、ビヒクル（２０ｍＭの酢酸ナトリウム、ｐＨ５．５、１４０ｍＭのＮａＣｌ）、精製抗体８．１０．３Ｆ、または精製抗体９．１４．４Ｉを、３．７９ｍＬ／ｋｇの投与体積中、０、１、または５ｍｇ／ｋｇで、約５分の期間をかけて静脈内投与した。サルは、年齢４〜９歳、および体重６〜１０ｋｇであった。臨床検査室分析用の血液試料を、２、４、８、１５、２３、および２９日に収集した。Ａｂｂｏｔｔ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  Ｉｎｃ．のＣｅｌｌ  Ｄｙｎシステム（Ａｂｂｏｔｔ  Ｐａｒｋ、Ｉｌｌｉｎｏｉｓ）を使用して、光散乱によって単球数を求めた。
【０２６６】
単球の試験前のレベルと比較して、抗体８．１０．３Ｆおよび抗体９．１４．４Ｉのすべての用量で、総単球の変化率の減少（図３Ａおよび図３Ｂ）が観察された（例えば、図３Ａおよび図３Ｂ中の４、８、１５、および２３日目を参照）。
【実施例１１】
【０２６７】
マウスループスモデルにおける抗Ｍ−ＣＳＦ抗体の効果
この実施例では、ループス様疾患の発生に対する、ラット抗マウスＭ−ＣＳＦ抗体によるＭ−ＣＳＦ中和の効果を、２つの別個のマウスモデル、すなわちＭＲＬ−ＦａｓｌｐｒおよびＮＺＢＷＦ１／Ｊにおいて試験した。抗Ｍ−ＣＳＦ抗体の効果は、ＭＲＬ−Ｆａｓｌｐｒマウスにおいて、疾患を低減することが以前に示されていたマウスＣＴＬＡ−４Ｉｇとも比較した。
【０２６８】
ヒト疾患を治療するためのいくつかの候補を、ヒト疾患と多くの同じ特徴を示すＳＬＥのマウスモデル（Ｐｅｒｒｙら、Ｊ  Ｂｉｏｍｅｄ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１１：２７１６９４．電子出版２０１１年２月１４日）において評価した。
【０２６９】
ＭＲＬ−Ｆａｓｌｐｒマウスは、循環抗二本鎖ＤＮＡ（ｄｓＤＮＡ）血清自己抗体の高い力価、糸球体内のＩｇＧ沈着、ならびに重度の疾患における、タンパク尿症、リンパ節腫脹、および皮膚病変を含めた、ヒトループスにおいて観察されるものと類似する症状を自発的に発症する。リンパ節腫脹の発生は、ダブルネガティブ（ＣＤ４−ＣＤ８−）Ｔ細胞およびＢ２２０＋Ｔ細胞の蓄積に起因する（Ｗａｔｓｏｎら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．１７６（６）：１６４５〜５６（１９９２））。細胞傷害性Ｔリンパ球抗原−４（ＣＴＬＡ−４）は、Ｔリンパ球活性化の調節に関与し、血清ＣＴＬＡ−４Ｉｇの存在は、自己反応性Ｂリンパ球増殖の減少、ＣＤ４＋Ｔリンパ球数の減少、およびＳＬＥのマウスモデルにおける有益な効果に関連する（Ｍｉｈａｒａら、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．１０６（１）：９１〜１０１（２００２））。Ｍ−ＣＳＦが欠乏したＭＲＬ−Ｆａｓｌｐｒは、腎炎から保護される（Ｌｅｎｄａら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７３（７）：４６４４〜４７５４（２００４））。
【０２７０】
ＮＺＢＷＦ１／Ｊモデルは、リンパ節腫脹、脾腫大、抗ｄｓＤＮＡ  ＩｇＧを含む血清抗核自己抗体の上昇を含めた、ループス患者のものと同等の重度のループス様表現型を発症するＮＺＢ系統とＮＺＷ系統の間のＦ１ハイブリッドによって生成される、ループスの最古の古典的モデルである。免疫複合体媒介糸球体腎炎は、生後５〜６カ月で明らかになり、１０〜１２カ月で腎不全および死亡に至る（Ｍｉｈａｒａら）。ヒトＳＬＥと同様に、ＮＺＢＷＦ１における疾患は、メスを選択して強く偏っている（Ｔｈｅｏｆｉｌｏｐｏｕｌｏｓ＆Ｄｉｘｏｎ、Ａｄｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．３７：２６９〜３９０（１９８５））。
【０２７１】
材料および方法
この実施例において使用される抗体および対照タンパク質を表６に要約する。
【０２７２】
【表９】
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【０２７３】
メスのＭＲＬ−ＦａｓｌｐｒおよびＮＺＢＷＦ１／Ｊ（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ、ＭＥ）を、Ｐｆｉｚｅｒの無病原体動物施設に収容した。マウスは、Ｐｆｉｚｅｒ動物管理使用委員会によって認可されたプロトコールに従って使用した。
【０２７４】
ＳＬＥの研究
ループス様疾患の発症に対するＭ−ＣＳＦ中和の効果を、ＳＬＥのＭＲＬ−ＦａｓｌｐｒモデルおよびＮＺＢＷＦ１／Ｊモデルの両方を使用して検査した。生後１０週のメスのＭＲＬ−Ｆａｓｌｐｒ、または生後２６週のメスのＮＺＢＷＦ１／Ｊマウスを、食塩水、１０ｍｇ／ｋｇの５Ａ１抗Ｍ−ＣＳＦ、ＣＨＯＣＫ  ＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体、またはＣＴＬＡ−４  Ｉｇ（ＭＲＬモデルのみ）で、１０週間にわたって腹腔内に（ＩＰ）１週間当たり３回処置した。ＭＲＬ−Ｆａｓｌｐｒマウスを、タンパク尿症、皮膚病変、およびリンパ節腫脹について隔週に検査し、ＮＺＢＷＦ１／Ｊマウスを、タンパク尿症について隔週に検査した。タンパク尿症を、Ａｌｂｕｓｔｉｘ（Ｂａｙｅｒ、Ｔａｒｒｙｔｏｗｎ、ＮＹ）を使用して測定し、０＝なし、１＝微量、２＝３０ｍｇ／ｄＬ、３＝１００ｍｇ／ｄＬ、４＝３００ｍｇ／ｄＬ、および５＝２０００ｍｇ／ｄＬである０〜５のスケールでスコアを付けた。リンパ節を触診し、リンパ節腫脹に、０＝なし、１＝小さい、２＝２つの異なる部位で中等度、３＝３つ以上の異なる部位で大きい、である０〜３のスケールでスコアを付けた。皮膚病変を全体の病態によって評価し、０＝なし、１＝小さい（顔、耳）、２＝中等度（＜２ｃｍ  顔、耳、および背中）、３＝重度（＞２ｃｍ  顔、耳、および背中）である０〜３のスケールでスコアを付けた。両モデル中の血清も隔週に収集し、酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）によって抗ｄｓＤＮＡ  ＩｇＧ血清抗体について検査した。試験の最後に、大脳、肺、および腎臓を、病理学のために１０％の非緩衝ホルマリン中に収集し、または免疫組織化学のために最適切削温度（ＯＣＴ）化合物中に凍結させた。
【０２７５】
抗ｄｓＤＮＡ血清抗体およびＭ−ＣＳＦのＥＬＩＳＡ
抗ｄｓＤＮＡ  ＩｇＧ血清抗体をＥＬＩＳＡによって測定した。簡単に言えば、Ｉｍｍｕｌｏｎ  １Ｂプレート（Ｔｈｅｒｍｏｌａｂ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ、ＭＡ）に、ＵＶを一晩照射し、次いで２μｇ／ｍＬの仔ウシ胸腺ＤＮＡ（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）を室温で１時間コーティングした。プレートをリン酸緩衝溶液（ＰＢＳ）と１％のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）でブロックし、希釈した血清試料を添加し（１：１００の希釈から開始）、マウスＩｇＧ抗体に対する西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）コンジュゲートヤギ抗体（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ、ＡＬ）を用いて結合した抗体を検出した。３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ；ＫＰＬ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）を使用してプレートを展開し、２Ｎの硫酸で反応を停止させた。吸光度を、ＳｏｆｔＭａｘ  ＰｒｏソフトウェアとともにＳｐｅｃｔｒａＭａｘ  Ｐｌｕｓ  ３８４  マイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ、Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ、ＣＡ）を使用して、４５０ｎｍで読み取った。任意単位の抗体を、罹患したＭＲＬ−ＦａｓｌｐｒまたはＮＺＢＷＦ１／Ｊマウスからプールした標準的な陽性対照血清を使用して求めた。Ｍ−ＣＳＦの血清レベルを、抗マウスＭ−ＣＳＦキット（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ；カタログ番号ＭＣ００）によって、製造者によって指定されたように求めた。
【０２７６】
組織診断
ＭＲＬ−ｌｐｒ試験において、腎臓を、病理学、ならびにＩｇ沈着およびＣ３沈着について検査した。左右の腎臓のホルマリン固定標本を、ヘマトキシリン−エオシン（Ｈ＆Ｅ）染色および過ヨウ素酸シッフ（ＰＡＳ；ヘマトキシリン対比染色を伴う）染色にかけた。左右の腎臓の標本はまた、液体窒素中で凍結させ、Ｃ３、ＩｇＧ、およびＩｇＭについて免疫組織化学的に染色した。すべての組織切片は、有資格獣医病理学者によって検査された。Ｆ４／８０で染色したマクロファージを、免疫組織化学によって検査した。
【０２７７】
結果
中和抗体、５Ａ１でＭ−ＣＳＦをブロックする効果を試験するために、生後８週のＭＲＬ−ｌｐｒマウスにおいて試験を設定した（例えば、Ｃａｍｐｂｅｌｌ  Ｉ．Ｋ．ら、Ｊ．Ｌｅｕｋ．Ｂｉｏｌ．６８：１４４〜１５０（２０００）、およびＡＴＣＣ番号ＣＲＬ−２７０２を参照）。マウスに、１２週間にわたって毎日、抗体（１０ｍｇ／ｋｇ）４００μｇで腹腔内に（ＩＰ）処置した。対照マウスに、同じ用量のアイソタイプ対照抗体、ＣＨＯＣＫ  ＩｇＧ１（例えば、ＡＴＣＣ番号ＨＢ−９４２１を参照）または食塩水で処置した。陽性対照として、マウスに、マウスＣＴＬＡ−４Ｉｇ（エフェクター機能ヌル突然変異を含有するマウスＩｇＧ２ａに融合したマウスＣＴＬＡ４の細胞外ドメイン）でも処置した。マウスを、抗ｄｓＤＮＡ血清抗体、タンパク尿症、皮膚病変、およびリンパ節腫脹について隔週に検査した。この試験設計を表７に概説する。
【０２７８】
【表１０】
2013100281.tif 000017
【０２７９】
図５に示したように、陽性対照のタンパク質ＣＴＬＡ−４Ｉｇおよび抗Ｍ−ＣＳＦ抗体で処置すると、ＭＲＬ−ｌｐｒマウスにおけるリンパ腫脹の重症度が有意に低減した。図６は、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体で処置すると、このモデルにおいて発症した皮膚病変の重症度も有意に低減したことを示す。興味深いことに、抗Ｍ−ＣＳＦでの処置は、ＭＲＬ−ｌｐｒマウスにおける皮膚病変の重症度を低減したＣＴＬＡ−４Ｉｇでの処置と対照的に、ＭＲＬ−ｌｐｒマウスにおける皮膚病変の発症を予防した。
【０２８０】
図７に示したように、マウスはまた、アイソタイプ対照で処置したマウスと比較した場合、この試験の１２週目の時点で、発生させた抗ｄｓＤＮＡ抗体はより少なく、一方、ＣＴＬＡ−４Ｉｇでの処置は、試験した４つの時点で抗ｄｓＤＮＡ抗体の発生を低減するのに非常に有効であった。
【０２８１】
この試験において、マウスは、有意なレベルのタンパク尿症を発症しなかった。したがって、腎機能は評価しなかった。顕微鏡的に、ＣＴＬＡ−４Ｉｇの投与のみが、炎症性浸潤の重症度、ならびにタンパク質円柱、糸球体係蹄のサイズ、糸球体の細胞充実度、ならびに糸球体ＩｇＧ沈着の発生および重症度に対する有益な効果と関連した。図８に示したように、ラット抗Ｍ−ＣＳＦ抗体の投与は、食塩水またはアイソタイプ対照の投与と比較して、糸球体の細胞充実度がより小さいこと、およびＣ３についての群平均免疫組織化学的染色スコアがわずかにより低いことに関連した。しかし、これは、測定した任意の他のパラメータに対するいずれの明らかな有益な効果にも関連しなかった。
【０２８２】
後続の試験では、ＮＺＢＷＦ１／Ｊモデルにおけるループス腎炎疾患の改善における抗Ｍ−ＣＳＦ抗体５Ａ１の効力を評価した。生後２６週のマウスに、１０週間にわたって毎週３回ＩＰで、対照Ｉｇまたは抗Ｍ−ＣＳＦまたは食塩水４００μｇ（１０ｍｇ／ｋｇ）で処置した。マウスに、タンパク尿症、体重増加／減少、および抗ｄｓＤＮＡ力価について、隔週にスコアを付けた。１０週間の投薬の後、腎臓を収集し、病理学および免疫複合体沈着について検査した。この試験設計を表８に記載する。
【０２８３】
【表１１】
2013100281.tif 000018
【０２８４】
図９に示したように、抗Ｍ−ＣＳＦの処置は、ＮＺＢＷＦ１／Ｊループスモデルにおいて、投薬して４週間後から始まって、試験の最後まで、アイソタイプ対照と比較した場合、タンパク尿症の発症に対して有意な効果を有した。しかし、Ｍ−ＣＳＦに対する抗体を用いた処置は、このモデルにおいて、免疫複合体沈着および腎臓損傷の一因となる抗ｄｓＤＮＡ自己抗体の発生に影響しなかった。図１０に示したように、抗ｄｓＤＮＡ抗体レベルは、投薬後６週間および１０週間の時点で、食塩水、アイソタイプ対照、および抗Ｍ−ＣＳＦで処置したマウスにおいて同様であった。図１１は、Ｍ−ＣＳＦ抗体で処置すると、ＥＬＩＳＡによって判定した場合、Ｍ−ＣＳＦの血清レベルが上昇し、抗体は、その標的と反応しており、血清中のＭ−ＣＳＦを隔離することを示していることを示す。
【０２８５】
試験の最後に収集し、免疫沈着物について染色した腎臓の顕微鏡検査は、図１２に示したように、処置した３つすべての群において同様のレベルのＩｇＧ、ＩｇＭ、およびＣ３の染色を示した。興味深いことに、抗Ｍ−ＣＳＦで処置したマウスから得た腎臓は、アイソタイプ対照で処置したマウスと比較した場合、マクロファージについての染色においてわずかな低減を示した（成熟マクロファージによって発現される膜貫通型タンパク質であるＦ４／８０陽性）。マクロファージについての腎臓のＦ４／８０染色は、すべてのマウスにおいて、髄質外部および内皮質内の間質細胞内に存在する。染色は、ＣＨＯＣＫ  ＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体を投与したマウスと比較して、食塩水またはラット抗Ｍ−ＣＳＦを投与したマウスにおいて、これらの位置内で、より少ない細胞内で存在し、Ｍ−ＣＳＦの遮断は、このモデルにおける腎臓内のマクロファージ浸潤に対して効果があったことを示す。抗Ｍ−ＣＳＦによる処置はまた、ＮＺＢＷＦ１／Ｊマウスの腎臓のタンパク質円柱、および尿細管の好塩基球増加、および腎臓の劣化を低減するように思われた。この知見は、ＣＨＯＣＫ  ＩｇＧ１アイソタイプ対照を投与したマウスと比較して、食塩水または抗Ｍ−ＣＳＦを投与した動物においてそれほど厳密ではない。
【実施例１２】
【０２８６】
試験設計
これは、健康な成人志願者において静脈内（ＩＶ）製剤として投与した、６つの単一用量レベルのヒトモノクローナル抗Ｍ−ＣＳＦ抗体８．１０．３Ｆの安全性および耐容性を調査する、６つの連続コホートにおける、無作為化、二重盲検（スポンサー非盲検）、プラセボ対照、用量漸増、平衡群間試験であった。
【０２８７】
対象の配置
合計４８対象をこの試験に登録した。コホート１から５の対象に、３、１０、３０、１００、または３００ｍｇの用量の抗体８．１０．３Ｆまたはプラセボを投与し、これらの対象を、投薬後３日間ＣＲＵ（臨床研究ユニット）に拘束し、開放し、予定した評価のためにＣＲＵに戻した。コホート６の対象を、１００ｍｇの抗体８．１０．３Ｆまたはプラセボで処置し、投薬後２１日間ＣＲＵに拘束し、開放し、予定した評価のためにＣＲＵに戻した。各用量レベルで、６対象を単一用量の抗体８．１０．３Ｆで処置し、２対象を単一用量のプラセボで処置した。登録したすべての対象が試験を完了した。
【０２８８】
薬物動態学的評価
Ａ）抗体８．１０．３Ｆの分析用の血清
抗体８．１０．３Ｆの分析用試料を、投与前、および２８日目までの投与後のプロトコールで指定された時間、ならびに２８日目後の各追加の外来通院時に収集した。静脈血３ｍＬを収集して、添加剤をまったく含有しない、適切にラベルを付けた管に入れ、収集して４０分以内に遠心分離し、血清を、収集して６０分以内に約−７０セ氏温度で凍結貯蔵した。
【０２８９】
検証された分析アッセイを使用して、ＰＰＤ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ（２２４４  Ｄａｂｎｅｙ  Ｒｏａｄ、Ｒｉｃｈｍｏｎｄ、ＶＡ２３２３０、ＵＳＡ）において、抗体８．１０．３Ｆについて血清試料を分析した。検証された高感度特異的酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を使用して、抗体８．１０．３Ｆ試料をアッセイした。血清標本を、アッセイするまで約−７０℃で貯蔵し、基質安定性データを確立して４３９日以内に試料をアッセイした。試料濃度は、４パラメータロジスティック方程式を使用してフィッティングされた較正検量線（３５．０ｎｇ／ｍＬ〜１６００ｎｇ／ｍＬの範囲にわたる）から内挿することによって求めた。定量化の上限（１６００ｎｇ／ｍＬ）を超える濃度を有するこれらの試料は、較正範囲に適切に希釈した。抗体８．１０．３ＦについてのＬＬＯＱ（定量化の下限）は、３５．０ｎｇ／ｍＬであった。ＬＬＯＱ未満の血清抗体８．１０．３Ｆ濃度を有する臨床標本は、＜３５．０ｎｇ／ｍＬと報告する。
【０２９０】
推定品質管理（ＱＣ）濃度と理論品質管理濃度の比（％）として表される日間アッセイ精度は、低度、中程度、高度の、および希釈したＱＣ試料について、−７．８１％〜２．２２％の範囲であった。ＱＣ試料の推定濃度の変動の日間係数（ｂｅｔｗｅｅｎ−ｄａｙ  ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ）（ＣＶ％）として表されるアッセイ精度は、低（７５．０ｎｇ／ｍＬ）濃度、中（３２０ｎｇ／ｍＬ）濃度、高（１２００ｎｇ／ｍＬ）濃度、および希釈（１２００ｎｇ／ｍＬ、１６０００ｎｇ／ｍＬ、および１６００００ｎｇ／ｍＬ）濃度について、１０％未満であった。
【０２９１】
Ｂ）薬物動態パラメータの計算
血清濃度−時間データの非コンパートメント分析を使用して、各処置について、各対象について、抗体８．１０．３ＦのＰＫパラメータ値を計算した。試験設計に、ＩＶ注入の間のＰＫ試料採取を含めなかった。抗体８．１０．３Ｆの予想される長期間のｔ１／２を考慮すると、注入の間の濃度−時間曲線下面積（ＡＵＣ）は、総ＡＵＣと比べて最小となることが予期された。したがって、注入の間および注入の最後に濃度を推定する試みはまったく行わなかった。
【０２９２】
ＬＬＯＱ未満の試料は、ゼロとして含めた。実際の試料収集時間をＰＫ分析に使用した。薬物動態パラメータ値は、ＷｉｎＮｏｎｌｉｎバージョン４．０．１を使用して計算した。
【０２９３】
薬力学的評価
Ａ）ＣＤ１４＋１６＋単球の分析用全血
ＣＤ１４＋１６＋単球の分析用試料を、投与前、ならびに２、４、７、１４、および２８日目に、ならびに２８日目後の各追加の外来通院時に収集した。静脈血３ｍＬを収集して、一方はリチウムヘパリンを含有し、他方はカリウムＥＤＴＡを含有する、２本の管のそれぞれに入れた。試料は、収集して２時間以内に分析した。Ｐｆｉｚｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｓａｆｅｔｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ＆Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ（ＤＳＲＤ）、ＰＧＲＤ、Ａｎｎ  Ａｒｂｏｒ、Ｍｉｃｈｉｇａｎにおいて、検証された高感度特異的フローサイトメトリーアッセイ（Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ  Ｆｌｏｗ  Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ）を使用して、ヒト末梢血中の単球亜集団（ＣＤ１４およびＣＤ１６）の割合について全血試料を分析した。光を散乱させ、蛍光シグナルを放出する細胞の能力に基づいて、単球亜集団を区別した。
【０２９４】
総合的な試料分析のためのアッセイの性能特性について、ＢＤ  ＣａｌｉＢＲＩＴＥビーズを使用することによって、機器の設定値を調整し、蛍光の補償を設定し、機器の感度を評価した後、単球サブセッティング−ＣＤ１４／１６アッセイをそれぞれ実行した。
【０２９５】
Ｂ）骨特異的アルカリホスファターゼ（ＢＳＡＰ）のための血清
ＢＳＡＰの分析用試料を、投与前、ならびに２、４、７、１４、および２８日目に、ならびに２８日目後の各追加の外来通院時に収集した。静脈血５ｍＬを収集して、添加剤をまったく含有しない管内に入れ、４０分以内に遠心分離し、ほぼ等体積の血清を２本の管に移し、収集して６０分以内に約−７０℃で凍結貯蔵した。
【０２９６】
Ｐａｃｉｆｉｃ  Ｂｉｏｍｅｔｒｉｃｓ  Ｉｎｃ．（ＰＢＩ）（２２０  Ｗｅｓｔ  Ｈａｒｒｉｓｏｎ  Ｓｔｒｅｅｔ、Ｓｅａｔｔｌｅ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  ９８１１９、ＵＳ）において、検証された分析アッセイを使用して、ＢＳＡＰ濃度について試料を分析した。検証された高感度特異的酵素免疫アッセイ（ＥＩＡ）を使用して、ＢＳＡＰ試料をアッセイした。検証の間のこの方法の性能を記録した。血清標本を、アッセイするまで約−７０℃で貯蔵し、検証の間に作成された安定性データを確立して３６５日以内に試料をアッセイした。試料濃度は、二次のフィッティング方程式を使用してフィッティングされた較正検量線から内挿することによって求めた。ＵＬＯＱ（１４０Ｕ／Ｌ）を超える濃度を有する試料は、較正範囲に適切に希釈した。ＢＳＡＰについて、観察された検出限界（ＬＯＤ）として表されるアッセイ感度は、０．４Ｕ／Ｌであった。ＬＯＤ未満の血清ＢＳＡＰ濃度を有する臨床標本は、検出限界未満として報告する。
【０２９７】
アッセイの性能特性を、ＱＣによって評価した。３つのレベルのＱＣを各実行に対して設定した。実行の合否基準は、３つのＱＣ結果のうちの２つは、２．０の標準偏差指数（ＳＤＩ）以内でなければならず、第３のＱＣ結果は、２．５ＳＤＩ以内でなければならない、であった。４つすべての試料分析の実行について、平均実行ＳＤＩ（ｍｅａｎ  ｒｕｎ  ＳＤＩ）は、ＱＣ試料について−１．１〜０．８の範囲であった。
【０２９８】
Ｃ）ＮＴＸ−１の分析用尿
尿ＮＴＸ−１を分析するための試料を、投与前、ならびに２、４、７、１４、および２８日目に、ならびに２８日目後の各追加の外来通院時に収集した。２日目の朝に排泄された尿を清潔な容器内に収集した。各時点で、ＮＴＸ−１のために、アリコート５ｍＬを収集した。探索用生物マーカー（ｅｘｐｌｏｒａｔｏｒｙ  ｂｉｏｍａｒｋｅｒ）のために、２つの追加の５ｍＬのアリコートを、予定通りに収集した。試料を約−７０℃で凍結させた。
【０２９９】
Ｐａｃｉｆｉｃ  Ｂｉｏｍｅｔｒｉｃｓ  Ｉｎｃ．（ＰＢＩ）（２２０  Ｗｅｓｔ  Ｈａｒｒｉｓｏｎ  Ｓｔｒｅｅｔ、Ｓｅａｔｔｌｅ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  ９８１１９、ＵＳＡ）において、検証された分析アッセイを使用して、尿のＩ型架橋コラーゲンのＮ−テロペプチド（ｕＮＴＸ−１）について尿試料を分析した。ＮＴＸ−１について、検証された高感度特異的ＥＬＩＳＡを使用し、尿クレアチニンについて、検証された動態学的Ｊａｆｆｅを使用して、ｕＮＴＸ−１試料をアッセイした。
【０３００】
尿標本を、アッセイするまで約−７０℃で貯蔵し、検証の間に作成された安定性データを確立して３６５日以内に試料をアッセイした。試料のＮＴＸ−１濃度は、４パラメータフィッティング方程式を使用してフィッティングされた較正検量線から内挿することによって求めた。尿クレアチニン値は、線形較正から求めた。ＵＬＯＱ（１リットル当たり３０００ｎＭ当量）を超えるＮＴＸ−１濃度を有する試料は、較正範囲に適切に希釈した。ＮＴＸ−１についてのＬＬＯＱとして表されるＮＴＸ−１アッセイ感度は、１リットル当たり４４．０ｎＭ当量であった。ＬＬＯＱ未満のＮＴＸ−１濃度を有する臨床標本は、検出限界未満として報告する。
【０３０１】
ＮＴＸ−１アッセイ値を、当量の骨コラーゲンに対して標準化した。これは、１リットル当たりのナノモルでの骨コラーゲン当量（ｎｍｏｌ  ＢＣＥ／Ｌ）で表される。尿クレアチニン分析によって、尿の希釈についてｕＮＴＸ−１アッセイ値を補正し、１リットル当たりのミリモルでのクレアチニン（ｍＭ  クレアチニン）当たり、１リットル当たりのナノモルでの骨コラーゲン当量（ｎＭ  ＢＣＥ）で表す。
【０３０２】
アッセイの性能特性を品質管理（ＱＣ）によって評価した。３つのレベルのＱＣを各実行に対して設定した。実行の合否基準は、３つのＱＣ結果のうちの２つは、２．０の標準偏差指数（ＳＤＩ）以内でなければならず、第３のＱＣ結果は、２．５ＳＤＩ以内でなければならない、であった。４つすべての試料分析の実行について、平均実行ＳＤＩは、ＮＴＸ−１のＱＣ試料について、−０．２〜０．８、尿クレアチニンのＱＣ試料について、−０．１〜０．２の範囲であった。
【０３０３】
Ｄ）総ヒトＭ−ＣＳＦの分析用Ｋ２ＥＤＴＡ血漿
探索用生物マーカーのために収集したＫ２ＥＤＴＡ血漿試料を、総Ｍ−ＣＳＦを分析するのに使用した。試料を、投与前、ならびに２、７、および２８日目に、ならびに２８日目後の各追加の外来通院時に収集した。静脈血試料１０ｍＬを、抗凝固剤としてカリウムＥＤＴＡ（Ｋ２ＥＤＴＡ）をまったく含有しない血液収集管に入れた。遠心分離した後、血漿を約−７０℃で凍結貯蔵した。Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．（６１４  ＭｃＫｉｎｌｅｙ  Ｐｌａｃｅ  ＮＥ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ  ５５４１３）からのＥＬＩＳＡアッセイキット（ＤＭＣ００）。定量的サンドイッチ酵素免疫アッセイ技法を、このアッセイにおいて使用し、アッセイ手順および極めて重要な試薬は、キットのインサートに従った。Ｋ２ＥＤＴＡ血漿標本は、アッセイするまで約−７０℃で貯蔵した。試料濃度は、４パラメータロジスティック方程式を使用してフィッティングされた較正検量線（３１．２ｐｇ／ｍＬ〜２０００ｐｇ／ｍＬの範囲にわたる）から内挿することによって求める。定量化の上限（２０００ｐｇ／ｍＬ）を超える濃度を有するこれらの試料は、較正範囲に適切に希釈した。Ｍ−ＣＳＦについての定量化の下限（ＬＬＯＱ）は、３１．２ｐｇ／ｍＬであった。ＬＬＯＱ未満の血清Ｍ−ＣＳＦ濃度を有する臨床標本は、＜３１．２ｐｇ／ｍＬと報告する。
【０３０４】
Ｐｆｉｚｅｒ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ−Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、ＰＧＲＤ、Ａｎｎ  Ａｒｂｏｒ、Ｍｉｃｈｉｇａｎにおいて、市販のものを使用して、Ｍ−ＣＳＦ濃度についてＫ２ＥＤＴＡ血漿試料を分析した。
【０３０５】
結果
Ａ）血清抗体８．１０．３Ｆの薬物動態
表９および表１０は、健康な患者における、単回ＩＶ用量を投与した後の血清抗体８．１０．３Ｆの薬物動態パラメータの要約を含む。各用量を投与した後の平均血清濃度−時間プロファイルを図１３に表す。Ｃｍａｘ値およびＡＵＣ値対抗体８．１０．３Ｆの用量のプロットを図１４に示す。
【０３０６】
健康な成人志願者に１時間かけて投与される抗体８．１０．３Ｆを１回注入した後、Ｃｍａｘは、用量に比例した様式で増大した。しかし、全身暴露の程度、ＡＵＣ（０−∞）は、３〜３００ｍｇの用量範囲にわたって、用量に比例した様式を超えて増大した。システムの非線形性のために、見かけ上の終端のｔ１／２（ＡＵＣ［０−∞］を計算するのに使用した）は、曝露の継続時間の意味のある測定値であると思われなかった。代わりに、抗体８．１０．３Ｆ濃度がすべての対象についてＬＬＯＱ未満であった試験日を、濃度−時間表の検査によって求めた。血清抗体８．１０．３Ｆ濃度は、３、１０、３０、１００、および３００ｍｇを投与した後、それぞれ、７、１４、２８、５６、および８４日目までにＬＬＯＱ未満であった。
【０３０７】
【表１２】
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【０３０８】
【表１３】
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【０３０９】
Ｂ）総血清Ｍ−ＣＳＦ
総（遊離の、および抗体８．１０．３Ｆが結合した）Ｍ−ＣＳＦ濃度を、用量および試験日によって表１１に提示し、図１５に１００ｍｇの用量について例示する。
【０３１０】
プラセボ処置群において、平均Ｍ−ＣＳＦ濃度は、ベースラインで０．２１ｎｇ／ｍＬであり、健康な成人志願者にプラセボを投与した後、最大８４日目まで、実質的に変化しなかった（範囲０．２１〜０．２８ｎｇ／ｍＬ）（表１１）。抗体８．１０．３Ｆを投与した後、最大平均Ｍ−ＣＳＦ濃度は、用量が増加するとともに増大した。総Ｍ−ＣＳＦのピーク濃度は、２日目または７日目に得られた。遊離リガンドと結合したリガンドの比を求めるために、抗体８．１０．３Ｆの平衡解離定数（ＫＤ  ２．８×１０−１０Ｍ）、ならびにＭ−ＣＳＦおよび抗体８．１０．３Ｆの濃度を使用して、その抗体８．１０．３Ｆが検出可能であった時間の間で、測定されたＭ−ＣＳＦリガンドの１００％が抗体８．１０．３Ｆに結合していたと計算された。Ｍ−ＣＳＦの試料採取頻度は、抗体８．１０．３Ｆの試料採取頻度ほど頻繁ではなかったが、Ｍ−ＣＳＦ濃度は、抗体８．１０．３Ｆと並行して低下し、Ｍ−ＣＳＦの一時的な増加は、引き続いて抗体−抗原複合体として解消されることを示した。
【０３１１】
【表１４】
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【０３１２】
Ｃ）ＣＤ１４＋１６＋単球
試験日２８日目のＣＤ１４＋１６＋単球数（ＣＤ１４ｂｒｉｇｈｔＣＤ１６＋およびＣＤ１４ｄｉｍＣＤ１６＋の和）についての用量応答を図１６に提示する。平均ＣＤ１４＋１６＋単球細胞数を、用量および試験日によって表１２に提示し、図１７および図１８に１００ｍｇの用量について例示する。５６日目の図１７中のデータは、コホート４について５６日目、およびコホート６について５２日目に行った測定を合わせている。ＣＤ１４＋１６＋細胞数データを提示するすべての図は、異常値とみなされた１回の観察を除外している。試験日２８日目の対象１０３１（１００ｍｇ）の報告値は、１７９．０細胞／ｍｃｌであった。
【０３１３】
抗体８．１０．３Ｆで処置すると、すべての用量について、末梢循環ＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球の絶対数が急速に低下し、４日目に約６０〜８０％の抑制の範囲の最下点を伴った。用量を増やすと、長い継続時間にわたってＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球の抑制が維持された。ＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球の絶対数は、３ｍｇおよび１０ｍｇの用量について１４日以内、３０ｍｇの用量について２８日以内、ならびに１００ｍｇおよび３００ｍｇの用量について５６日以内にベースラインに戻った。
【０３１４】
【表１５】
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【０３１５】
Ｄ）ＢＳＡＰおよびｕＮＴＸ−１
抗体８．１０．３Ｆを用いた処置は、破骨細胞の骨吸収活性のマーカーであるｕＮＴＸ−１の用量および時間依存減少を伴った。ｕＮＴＸ−１の減少速度は、ＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球より遅く、抑制からの回復は、より持続的であった。３０ｍｇ、１００ｍｇ、および３００ｍｇの用量群において、ｕＮＴＸ−１は、ベースライン値の６４．４％、６０．５％、および３９．９％の最小まで低下し、これはそれぞれ、７日目、１４日目、および２８日目に起こった。２８日目で、平均ｕＮＴＸ−１は、同じそれぞれの用量群について７８．０％、６９．４％、および３９．３％であった。ｕＮＴＸ−１は、≦１００ｍｇの用量について約５６日目までにベースラインに戻った。
【０３１６】
平均ｕＮＴＸ−１を、用量および試験日によって表１３に提示し、図１９に１００ｍｇの用量について例示する。
【０３１７】
ＢＳＡＰレベルは、最大１００ｍｇおよび１００ｍｇを含めた用量での処置によって影響されなかった。３００ｍｇにおいて、７日目から２８日目までＢＳＡＰが増大する傾向が認められ、その後、５６日目までにベースラインに戻った。しかし、３００ｍｇを投与された対象において観察された最大絶対値は、プラセボを含めた他の処置群において観察された最大絶対値と同等であった。
【０３１８】
【表１６】
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【０３１９】
考察
抗体８．１０．３Ｆは、健康な成人志願者に３〜３００ｍｇの単回静脈内用量を投与した後、一般的に耐容性良好であった。抗体８．１０．３Ｆで処置すると、薬力学的マーカーが急速に変化し、これらのマーカーは、薬物のクリアランス後に可逆性であった。機序についての主要生物マーカーは、循環ＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球数であり、これは、前臨床関節炎モデルにおける効力と関係していた。抗体８．１０．３Ｆのすべての用量により、ＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球が急速に低下し、４日目に約６０〜８０％の抑制の範囲の最下点を伴った。用量を増やすと、長い継続時間にわたってＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球の抑制が維持された。ＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球の絶対数は、この試験において、３ｍｇおよび１０ｍｇの用量について１４日以内、３０ｍｇの用量について２８日以内、ならびに１００ｍｇおよび３００ｍｇの用量について５６日以内にベースラインに戻った。
【０３２０】
サロゲート抗体を使用する全臨床モデルに基づくと、治療上の利益をもたらすと予測される用量は、ベースライン値の≦５０％のレベルにＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球の抑制を維持するものである。この試験において、≧３０ｍｇの用量は、循環ＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球をベースラインの５０％未満に、少なくとも１４日間抑制することができた。３０ｍｇの用量の中央値ＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球値は、それぞれ７日目、１４日目、および２８日目に、ベースラインの２５％、４６％、および１２０％であった。１００ｍｇの用量の中央値ＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球値は、それぞれ７日目、１４日目、および２８日目に、ベースラインの１９％、２６％、および６１％であった。ＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球は、投薬を繰り返してさらに低下させることができる。
【０３２１】
Ｍ−ＣＳＦを阻害すると、破骨細胞分化が阻害され、骨吸収の阻害に至ることが予測された。抗体８．１０．３Ｆを用いた処置は、ｕＮＴＸ−１の用量および時間依存減少を伴った。ｕＮＴＸ−１の減少速度は、ＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球より遅く、抑制からの回復は、より持続的であった。３０ｍｇ、１００ｍｇ、および３００ｍｇの用量群において、ｕＮＴＸ−１は、ベースライン値の６４．４％、６０．５％、および３９．９％の最小まで低下し、これはそれぞれ、７日目、１４日目、および２８日目に起こった。２８日目で、平均ｕＮＴＸ−１は、同じそれぞれの用量群について７８．０％、６９．４％、および３９．３％であった。ｕＮＴＸ−１は、≦１００ｍｇの用量について約５６日目までにベースラインに戻った。ＢＳＡＰレベルは、最大１００ｍｇおよび１００ｍｇを含めた用量での処置によって影響されなかった。３００ｍｇにおいて、７日目から２８日目までＢＳＡＰが増大する傾向が認められ、その後、５６日目までにベースラインに戻った。しかし、３００ｍｇを投与された対象において観察された最大絶対値は、プラセボを含めた他の処置群において観察された最大絶対値と同等であった。
【０３２２】
本明細書に引用したすべての刊行物および特許出願は、それぞれ個々の刊行物または特許出願が具体的かつ個々に、参照により組み込まれるように示されているように、参照により本明細書に組み込まれている。前述の発明を、理解を明確にする目的で、例示および実施例によってある程度詳細に説明してきたが、添付の特許請求の範囲の精神または範囲から逸脱することなく、これらにある特定の変更および改変を行うことができることが、本発明の教示を踏まえると、当業者に容易に明らかとなるであろう。
【０３２３】
配列
キー：
シグナルペプチド：下線を引いた小文字
ＣＤＲ１、２、３：下線を引いた大文字
可変ドメイン：大文字
定常ドメイン：小文字
生殖系列からの突然変異：太字
配列番号１
２５２の重鎖［γ鎖］ヌクレオチド配列
atggagttggggctgtgctggattttccttgttgctattataaaaggtgtccagtgtCAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCAAGCCTGGAGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTGACTACTACATGAGCTGGATCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTTCATACATTAGTGGTAGTGGTAGTACCATATACTACGCAGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGGGACAACGCCAAGAACTCACTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATCACTGTGCGAGAGCCCTGGGTGGGATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCAGCTtccaccaagggcccatccgtcttccccctggcgccctgctctagaagcacctccgagagcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgctctgaccagcggcgtgcacaccttcccagctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcaacttcggcacccagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagacagttgagcgcaaatgttgtgtcgagtgcccaccgtgcccagcaccacctgtggcaggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacgtgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccccgaggtccagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccacgggaggagcagttcaacagcacgttccgtgtggtcagcgtcctcaccgttgtgcaccaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaaggcctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaaaccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctaccccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacacctcccatgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa
配列番号２
２５２の重鎖［γ鎖］タンパク質配列
melglcwiflvaiikgvqcQVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWISYISGSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYHCARALGGMDVWGQGTTVTVSSAstkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssnfgtqtytcnvdhkpsntkvdktverkccvecppcpappvagpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstfrvvsvltvvhqdwlngkeykckvsnkglpapiektisktkgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppmldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk
配列番号３
２５２の軽鎖［κ鎖］ヌクレオチド配列
atgagggtccctgctcagctcctggggctcctgctactctggctccgaggtgccagatgtGACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAGCGGCTTTTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTACATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATTCAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGTCAACAGAGTTACAGTGTCCCATTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAACGAactgtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgctagcgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt
配列番号４
２５２の軽鎖［κ鎖］タンパク質配列
mrvpaqllgllllwlrgarcDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISGFLNWYQQKPGKAPKLLIYATSSLQSGVPFRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSVPFTFGPGTKVDIKRtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
配列番号５
８８の重鎖［γ鎖］ヌクレオチド配列
atggaatttgggctgtgctgggttttccttgttgctattttagaaggtgtccagtgtGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGTAGCTATTGGATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCCAACATAAAGCAAGATGGAAGTGAGAAATACTATGTGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCACTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCTCCGGGTATAGCAGCAGCTGGTAGGGCCTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCTtccaccaagggcccatccgtcttccccctggcgccctgctctagaagcacctccgagagcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgctctgaccagcggcgtgcacaccttcccagctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcaacttcggcacccagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagacagttgagcgcaaatgttgtgtcgagtgcccaccgtgcccagcaccacctgtggcaggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacgtgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccccgaggtccagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccacgggaggagcagttcaacagcacgttccgtgtggtcagcgtcctcaccgttgtgcaccaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaaggcctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaaaccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctaccccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacacctcccatgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa
配列番号６
８８の重鎖［γ鎖］タンパク質配列
mefglcwvflvailegvqcEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMSWVRQAPGKGLEWVANIKQDGSEKYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAPGIAAAGRAYWGQGTLVTVSSAstkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssnfgtqtytcnvdhkpsntkvdktverkccvecppcpappvagpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstfrvvsvltvvhqdwlngkeykckvsnkglpapiektisktkgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppmldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk
配列番号７
８８の軽鎖［κ鎖］ヌクレオチド配列
atgagggtccctgctcagctcctggggctcctgctactctggctccgaggtgccagatgtGACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTTGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGCCAAGTCAGGACATTAGCAGTTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATTAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGAGTTACAGTACCCCATTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAACGAactgtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgctagcgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt
配列番号８
８８の軽鎖［κ鎖］タンパク質配列
mrvpaqllgllllwlrgarcDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRPSQDISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPLRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPFTFGPGTKVDIKRtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
配列番号９
１００の重鎖［γ鎖］ヌクレオチド配列
atggagtttgggctccgctggatttttcttgtggctattttaaaaggtgtccagtgtGAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGCAGCTATGCCATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGGTCTCAGCTATTAGTGGTCGTGGTGGTAGGACATACTTCGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTTCTGTGCGGTAGAAGGCTATAGTGGGCGCTACGGATTTTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTAGTCACCGTCTCCTCAGCCtccaccaagggcccatcggtcttccccctggcgccctgctctagaagcacctccgagagcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgctctgaccagcggcgtgcacaccttcccagctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcaacttcggcacccagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagacagttgagcgcaaatgttgtgtcgagtgcccaccgtgcccagcaccacctgtggcaggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacgtgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccccgaggtccagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccacgggaggagcagttcaacagcacgttccgtgtggtcagcgtcctcaccgttgtgcaccaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaaggcctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaaaccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctaccccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacacctcccatgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa
配列番号１０
１００の重鎖［γ鎖］タンパク質配列
mefglrwiflvailkgvqcEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGRGGRTYFADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYFCAVEGYSGRYGFFDYWGQGTLVTVSSAstkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssnfgtqtytcnvdhkpsntkvdktverkccvecppcpappvagpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstfrvvsvltvvhqdwlngkeykckvsnkglpapiektisktkgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppmldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk
配列番号１１
１００の軽鎖［κ鎖］ヌクレオチド配列
atggaagccccagctcagcttctcttcctcctgctactctggctcccagataccactggaGAAATAGTGATGACGCAGTCTCCAGCCACCCTGTCTGTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCACCAGGGCCAGTGGTATCCCAGACAGGATCAGTGGCAGTGGGTCTGGAACAGAGTTCACTCTCATCATCAGCAGCCTGCAGTCTGAAGATTTTGCAGTTTATTACTGTCAGCAGTCTAATAACTGGCCATTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAACGAactgtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgctagcgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt
配列番号１２
１００の軽鎖［κ鎖］タンパク質配列
meapaqllfllllwlpdttgEIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRASGIPDRISGSGSGTEFTLIISSLQSEDFAVYYCQQSNNWPFTFGPGTKVDIKRtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
配列番号１４
３．８．３の重鎖［γ鎖］タンパク質配列
mefglswvflvaiikgvqcQVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWFSYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLSLQMNSLRAEDTAVYYCARGLTGDYWGQGTLVTVSSAstkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssnfgtqtytcnvdhkpsntkvdktverkccvecppcpappvagpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstfrvvsvltvvhqdwlngkeykckvsnkglpapiektisktkgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppmldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk
配列番号１６
３．８．３の軽鎖［κ鎖］タンパク質配列
mdmrvpaqllgllllwfpgsrcDIQMTQSPSSVSASVGDRVTISCRASQDISGWLAWYQQKPGKAPKLLISATSSLHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQTNSFPFTFGPGTKVDIKRtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
配列番号１８
２．７．３の重鎖［γ鎖］タンパク質配列
mefglswvflvallrgcqcQVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAFIWYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGYRVYFDYWGQGTLVTVSSAstkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtktytcnvdhkpsntkvdkrveskygppcpscpapeflggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvsqedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkglpssiektiskakgqprepqvytlppsqeemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflysrltvdksrwqegnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk
配列番号２０
２．７．３の軽鎖［κ鎖］タンパク質配列
mdmrvpaqllgllllwfpgsrcDIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQDISSWLAWYQRKPGKAPKLQIYAASSLESGVPSRFNGSGSGTDFTLSISSLQPEDFATYYCQQTNSFPLTFGGGTKVEIKRtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
配列番号２２
１．１２０．１の重鎖［γ鎖］タンパク質配列
mewtwsflflvaaatgahsQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYGISWVRQAPGQGLEWMGWISAYNGNTNYAQKLQDRVTMTTDTSTTTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRAYGANFFDYWGQGTLVTVSSAstkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssnfgtqtytcnvdhkpsntkvdktverkccvecppcpappvagpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstfrvvsvltvvhqdwlngkeykckvsnkglpapiektisktkgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppmldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk
配列番号２４
１．１２０．１の軽鎖［κ鎖］タンパク質配列
mvlqtqvfislllwisgaygDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSILFFSNNKNYLAWYRQKPGQPPNLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSSPWTFGQGTKVEIKRtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
配列番号２５
９．１４．４Ｉの重鎖［γ鎖］ヌクレオチド配列
atggagtttgggctgagctgggttttccttgttgctattataaaaggtgtCCAGTGTCAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCAAGCCTGGAGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTGACTACTATATGAGCTGGATCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGGTTTCATACATTAGTAGTAGTGGTAGTACCATATACTACGCAGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGGGACAACGCCAAGAACTCACTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGGCCTAACTGGGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCTtccaccaagggcccatccgtcttccccctggcgccctgctctagaagcacctccgagagcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgctctgaccagcggcgtgcacaccttcccagctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcaacttcggcacccagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagacagttgagcgcaaatgttgtgtcgagtgcccaccgtgcccagcaccacctgtggcaggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacgtgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccccgaggtccagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccacgggaggagcagttcaacagcacgttccgtgtggtcagcgtcctcaccgttgtgcaccaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaaggcctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaaaccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctaccccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacacctcccatgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa
配列番号２６
９．１４．４Ｉの重鎖［γ鎖］タンパク質配列
mefglswvflvaiikgvqcQVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWVSYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGLTGDYWGQGTLVTVSSAstkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssnfgtqtytcnvdhkpsntkvdktverkccvecppcpappvagpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstfrvvsvltvvhqdwlngkeykckvsnkglpapiektisktkgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppmldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk
配列番号２７
９．１４．４、９．１４．４Ｉ、９．１４．４−Ｓｅｒ、および９．１４．４−Ｇ１の軽鎖［κ鎖］ヌクレオチド配列
atggacatgagggtccccgctcagctcctggggctcctgctactctggctccgaggtgccagatgTGACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTCGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGCCAAGTCAGATCATTAGCAGTTTATTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCCATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGTAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGAGTTACAGTACCCCATTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAACGAactgtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt
配列番号２８
９．１４．４、９．１４．４Ｉ、９．１４．４−Ｓｅｒ、および９．１４．４−Ｇ１の軽鎖［κ鎖］タンパク質配列
mdmrvpaqllgllllwlrgarcDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRPSQIISSLLNWYQQKPGKAPKLLIHAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPFTFGPGTKVDIKRtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
配列番号３７
９．１４．４の重鎖［γ鎖］ヌクレオチド配列
atggagtttgggctgagctgggttttccttgttgctattataaaaggtgtCCAGTGTCAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCAAGCCTGGAGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTGACTACTATATGAGCTGGATCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGGTTTCATACATTAGTAGTAGTGGTAGTACCATATACTACGCAGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGGGACAACGCCAAGAACTCACTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGGCCTAACTGGGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCTtccaccaagggcccatccgtcttccccctggcgccctgctctagaagcacctccgagagcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgctctgaccagcggcgtgcacaccttcccagctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacgaagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagagagttgagtccaaatatggtcccccatgcccatcatgcccagcacctgagttcctggggggaccatcagtcttcctgttccccccaaaacccaaggacactctcatgatctcccggacccctgaggtcacgtgcgtggtggtggacgtgagccaggaagaccccgaggtccagttcaactggtacgtggatggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagttcaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaaggcctcccgtcctccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagagccacaggtgtacaccctgcccccatcccaggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctaccccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaggctaaccgtggacaagagcaggtggcaggaggggaatgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacacagaagagcctctccctgtctccgggtaaa
配列番号３８
９．１４．４の重鎖［γ鎖］タンパク質配列
mefglswvflvaiikgvqcQVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWVSYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGLTGDYWGQGTLVTVSSAstkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtktytcnvdhkpsntkvdkrveskygppcpscpapeflggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvsqedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkglpssiektiskakgqprepqvytlppsqeemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflysrltvdksrwqegnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk
配列番号５４
９．１４．４Ｃ−Ｓｅｒの重鎖［γ鎖］タンパク質配列
mefglswvflvaiikgvqcQVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWVSYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGLTGDYWGQGTLVTVSSAstkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtktytcnvdhkpsntkvdkrveskygppcppcpapeflggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvsqedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkglpssiektiskakgqprepqvytlppsqeemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflysrltvdksrwqegnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk
配列番号５６
９．１４．４Ｃ−Ｓｅｒ、９．１４．４−ＣＧ２、および９．１４．４−ＣＧ４の軽鎖［κ鎖］タンパク質配列
mdmrvpaqllgllllwlrgarcDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRPSQIISSLLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPFTFGPGTKVDIKRtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
配列番号７４
９．１４．４−ＣＧ２の重鎖［γ鎖］タンパク質配列
mefglswvflvaiikgvqcQVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWVSYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGLTGDYWGQGTLVTVSSAstkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssnfgtqtytcnvdhkpsntkvdktverkccvecppcpappvagpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstfrvvsvltvvhqdwlngkeykckvsnkglpapiektisktkgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppmldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk
配列番号７８
９．１４．４−ＣＧ４の重鎖［γ鎖］タンパク質配列
mefglswvflvaiikgvqcQVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWVSYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGLTGDYWGQGTLVTVSSAstkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtktytcnvdhkpsntkvdkrveskygppcpscpapeflggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvsqedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkglpssiektiskakgqprepqvytlppsqeemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflysrltvdksrwqegnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk
配列番号８２
９．１４．４−Ｓｅｒの重鎖［γ鎖］タンパク質配列
mefglswvflvaiikgvqcQVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWVSYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGLTGDYWGQGTLVTVSSAstkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtktytcnvdhkpsntkvdkrveskygppcppcpapeflggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvsqedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkglpssiektiskakgqprepqvytlppsqeemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflysrltvdksrwqegnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk
配列番号１０１
９．１４．４Ｇ１の重鎖（γ鎖）ヌクレオチド配列
atggagtttgggctgagctgggttttccttgttgctattataaaaggtgtccagtgtCAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCAAGCCTGGAGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTGACTACTATATGAGCTGGATCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGGTTTCATACATTAGTAGTAGTGGTAGTACCATATACTACGCAGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGGGACAACGCCAAGAACTCACTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGGCCTAACTGGGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCTtccaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagaaagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggatgagctgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaatag
配列番号１０２
９．１４．４Ｇ１の重鎖（γ鎖）タンパク質配列
mefglswvflvaiikgvqcQVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWVSYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGLTGDYWGQGTLVTVSSAstkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk
配列番号２９
８．１０．３および８．１０．３Ｆの重鎖［γ鎖］ヌクレオチド配列
atggagttggggctgtgctgggttttccttgttgctattttagaaggtgtccagtgtGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGTTTTAGTATGACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGAAAGGGGCTGGAGTGGGTTTCATACATTAGTAGTAGAAGTAGTACCATATCCTACGCAGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATGCCAAGAACTCACTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGACGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGAGATCCTCTTCTAGCGGGAGCTACCTTCTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCCtccaccaagggcccatcggtcttccccctggcgccctgctccaggagcacctccgagagcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgctctgaccagcggcgtgcacaccttcccagctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcaacttcggcacccagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagacagttgagcgcaaatgttgtgtcgagtgcccaccgtgcccagcaccacctgtggcaggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacgtgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccccgaggtccagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccacgggaggagcagttcaacagcacgttccgtgtggtcagcgtcctcaccgttgtgcaccaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaaggcctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaaaccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctaccccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacacctcccatgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa
配列番号３０
８．１０．３および８．１０．３Ｆの重鎖［γ鎖］タンパク質配列
melglcwvflvailegvqcEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSFSMTWVRQAPGKGLEWVSYISSRSSTISYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRDEDTAVYYCARDPLLAGATFFDYWGQGTLVTVSSAstkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssnfgtqtytcnvdhkpsntkvdktverkccvecppcpappvagpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstfrvvsvltvvhqdwlngkeykckvsnkglpapiektisktkgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppmldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk
配列番号３１
８．１０．３ＦＧ１および８．１０．３Ｆの軽鎖［κ鎖］ヌクレオチド配列
atggaaaccccagcgcagcttctcttcctcctgctactctggctcccagataccaccggaGAATTTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGTTACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCTCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAACGAactgtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt
配列番号３２
８．１０．３ＦＧ１および８．１０．３Ｆの軽鎖［κ鎖］タンパク質配列
metpaqllfllllwlpdttgEFVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPLTFGGGTKVEIKRtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
配列番号４３
８．１０．３および８．１０．３−Ｓｅｒの軽鎖［κ鎖］ヌクレオチド配列
atggaaaccccagcgcagcttctcttcctcctgctactctggctcccagataccaccggaGAATTTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGTTACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGTAGTGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCTCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAACGAactgtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt
配列番号４４
８．１０．３および８．１０．３−Ｓｅｒの軽鎖［κ鎖］タンパク質配列
metpaqllfllllwlpdttgEFVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFVVYYCQQYGSSPLTFGGGTKVEIKRtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
配列番号５８
８．１０．３Ｃ−Ｓｅｒの重鎖［γ鎖］タンパク質配列
melglcwvflvailegvqcEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSFSMTWVRQAPGKGLEWVSYISSRSSTISYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRDEDTAVYYCARDPLLAGATFFDYWGQGTLVTVSSAstkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtktytcnvdhkpsntkvdkrveskygppcppcpapeflggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvsqedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkglpssiektiskakgqprepqvytlppsqeemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflysrltvdksrwqegnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk
配列番号６０
８．１０．３−ＣＧ２、８．１０．３−ＣＧ４、および８．１０．３Ｃ−Ｓｅｒの軽鎖［κ鎖］タンパク質配列
metpaqllfllllwlpdttgEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPLTFGGGTKVEIKRtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
配列番号６２
８．１０．３−ＣＧ２の重鎖［γ鎖］タンパク質配列
melglcwvflvailegvqcEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSFSMTWVRQAPGKGLEWVSYISSRSSTISYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRDEDTAVYYCARDPLLAGATFFDYWGQGTLVTVSSAstkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssnfgtqtytcnvdhkpsntkvdktverkccvecppcpappvagpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstfrvvsvltvvhqdwlngkeykckvsnkglpapiektisktkgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppmldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk
配列番号９０
８．１０．３−Ｓｅｒの重鎖［γ鎖］タンパク質配列
melglcwvflvailegvqcEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSFSMTWVRQAPGKGLEWVSYISSRSSTISYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRDEDTAVYYCARDPLLAGATFFDYWGQGTLVTVSSAstkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtktytcnvdhkpsntkvdkrveskygppcppcpapeflggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvsqedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkglpssiektiskakgqprepqvytlppsqeemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflysrltvdksrwqegnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk
配列番号９４
８．１０．３−ＣＧ４の重鎖［γ鎖］タンパク質配列
melglcwvflvailegvqcEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSFSMTWVRQAPGKGLEWVSYISSRSSTISYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRDEDTAVYYCARDPLLAGATFFDYWGQGTLVTVSSAstkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtktytcnvdhkpsntkvdkrveskygppcpscpapeflggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvsqedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkglpssiektiskakgqprepqvytlppsqeemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflysrltvdksrwqegnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk
配列番号９７
８．１０．３ＦＧ１の重鎖ヌクレオチド配列
atggagttggggctgagctgggttttccttgttgctattataaaaggtgtccagtgtGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGTTTTAGTATGACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGAAAGGGGCTGGAGTGGGTTTCATACATTAGTAGTAGAAGTAGTACCATATCCTACGCAGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATGCCAAGAACTCACTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGACGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGAGATCCTCTTCTAGCGGGAGCTACCTTCTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCCtccaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagaaagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggatgagctgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaatag
配列番号９８
８．１０．３ＦＧ１の重鎖（γ鎖）タンパク質配列
melglcwvflvailegvqcEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSFSMTWVRQAPGKGLEWVSYISSRSSTISYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRDEDTAVYYCARDPLLAGATFFDYWGQGTLVTVSSAstkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk
配列番号３３
９．７．２ＩＦの重鎖［γ鎖］ヌクレオチド配列
atggagtttgggctgagctgggttttccttgttgctattataaaaggtgtccagtgtcAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCAAGCCTGGAGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTGACTACTACATGAGCTGGATCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTTTCATACATTAGTAGTAGTGGTAGTACCATATACTACGCAGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGGGACAACGCCAAGAATTCACTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGGCGTATAGGAGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCAGCTtccaccaagggcccatccgtcttccccctggcgccctgctctagaagcacctccgagagcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgctctgaccagcggcgtgcacaccttcccagctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcaacttcggcacccagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagacagttgagcgcaaatgttgtgtcgagtgcccaccgtgcccagcaccacctgtggcaggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacgtgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccccgaggtccagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccacgggaggagcagttcaacagcacgttccgtgtggtcagcgtcctcaccgttgtgcaccaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaaggcctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaaaccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctaccccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacacctcccatgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa
配列番号３４
９．７．２ＩＦの重鎖［γ鎖］タンパク質配列
mefglswvflvaiikgvqcQVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWVSYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRIGGMDVWGQGTTVTVSSAstkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssnfgtqtytcnvdhkpsntkvdktverkccvecppcpappvagpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstfrvvsvltvvhqdwlngkeykckvsnkglpapiektisktkgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppmldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk
配列番号３５
９．７．２ＩＦの軽鎖［κ鎖］ヌクレオチド配列
atggacatgagggtccccgctcagctcctggggctcctgctactctggctccgaggtgccagatgtGACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAGCGGCTTTTTAATTTGGTATCAGCAGAGACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTACATCCAGTTTACAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGAGTTACAGTACCCCATTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAACGAactgtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt
配列番号３６
９．７．２ＩＦの軽鎖［κ鎖］タンパク質配列
mdmrvpaqllgllllwlrgarcDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISGFLIWYQQRPGKAPKLLIYATSSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPFTFGPGTKVDIKRtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
配列番号４５
９．７．２の重鎖［γ鎖］ヌクレオチド配列
atggagtttgggctgagctgggttttccttgttgctattataaaaggtgtccagtgtcAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCAAGCCTGGAGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTGACTACTACATGAGCTGGATCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTTTCATACATTAGTAGTAGTGGTAGTACCATATACTACGCAGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGGGACAACGCCAAGAATTCACTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGGCGTATAGGAGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCAGCTtccaccaagggcccatccgtcttccccctggcgccctgctctagaagcacctccgagagcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgctctgaccagcggcgtgcacaccttcccagctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacgaagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagagagttgagtccaaatatggtcccccatgcccatcatgcccagcacctgagttcctggggggaccatcagtcttcctgttccccccaaaacccaaggacactctcatgatctcccggacccctgaggtcacgtgcgtggtggtggacgtgagccaggaagaccccgaggtccagttcaactggtacgtggatggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagttcaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaaggcctcccgtcctccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagagccacaggtgtacaccctgcccccatcccaggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctaccccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaggctaaccgtggacaagagcaggtggcaggaggggaatgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacacagaagagcctctccctgtctccgggtaaa
配列番号４６
９．７．２の重鎖［γ鎖］タンパク質配列
mefglswvflvaiikgvqcQVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWVSYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRIGGMDVWGQGTTVTVSSAstkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtktytcnvdhkpsntkvdkrveskygppcpscpapeflggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvsqedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkglpssiektiskakgqprepqvytlppsqeemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflysrltvdksrwqegnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk
配列番号４７
９．７．２および９．７．２−Ｓｅｒの軽鎖［κ鎖］ヌクレオチド配列
atggacatgagggtccccgctcagctcctggggctcctgctactctggctccgaggtgccagatgtGACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAGCGGCTTTTTAATTTGGTATCAGCAGAGACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTACATCCAGTTTACAAAGTGGGGTCCCATTAAGGTTCAGTGGCAGTGAATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGAGTTACAGTACCCCATTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAACGAactgtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt
配列番号４８
９．７．２および９．７．２−Ｓｅｒの軽鎖［κ鎖］タンパク質配列
mdmrvpaqllgllllwlrgarcDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISGFLIWYQQRPGKAPKLLIYATSSLQSGVPLRFSGSESGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPFTFGPGTKVDIKRtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
配列番号５０
９．７．２Ｃ−Ｓｅｒの重鎖［γ鎖］タンパク質配列
mefglswvflvaiikgvqcQVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWVSYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAIRIGGMDVWGQGTTVTVSSAstkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtktytcnvdhkpsntkvdkrveskygppcppcpapeflggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvsqedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkglpssiektiskakgqprepqvytlppsqeemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflysrltvdksrwqegnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk
配列番号５２
９．７．２Ｃ−Ｓｅｒ、９．７．２−ＣＧ２、および９．７．２−ＣＧ４の軽鎖［κ鎖］タンパク質配列
mdmrvpaqllgllllwlrgarcDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISGFLIWYQQKPGKAPKLLIYATSSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPFTFGPGTKVDIKRtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
配列番号６６
９．７．２−ＣＧ２の重鎖［γ鎖］タンパク質配列
mefglswvflvaiikgvqcQVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWVSYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAIRIGGMDVWGQGTTVTVSSAstkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssnfgtqtytcnvdhkpsntkvdktverkccvecppcpappvagpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstfrvvsvltvvhqdwlngkeykckvsnkglpapiektisktkgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppmldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk
配列番号７０
９．７．２−ＣＧ４の重鎖［γ鎖］タンパク質配列
mefglswvflvaiikgvqcQVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWVSYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARIGGMDVWGQGTTVTVSSAstkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtktytcnvdhkpsntkvdkrveskygppcpscpapeflggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvsqedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkglpssiektiskakgqprepqvytlppsqeemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflysrltvdksrwqegnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk
配列番号８６
９．７．２−Ｓｅｒの重鎖［γ鎖］タンパク質配列
mefglswvflvaiikgvqcQVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWVSYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRIGGMDVWGQGTTVTVSSAstkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtktytcnvdhkpsntkvdkrveskygppcppcpapeflggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvsqedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkglpssiektiskakgqprepqvytlppsqeemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflysrltvdksrwqegnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk
【図１−１】
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【図１−２】
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【図２−１】
2013100281.tif 000026
【図２−２】
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【図３−１】
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【図３−２】
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【図４−１】
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【図４−２】
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【図４−３】
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【図４−４】
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【図４−５】
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【図４−６】
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【図４−７】
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【図４−８】
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【図４−９】
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【図４−１０】
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【図４−１１】
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【図４−１２】
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【図４−１３】
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【図４−１４】
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【図４−１５】
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【図４−１６】
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【図４−１７】
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【図４−１８】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【配列表】
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【外国語明細書】
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