(57)【要約】      （修正有）【課題】ヒト又は動物におけるセシウム等の金属による細胞障害を防止する薬剤の提供。【解決手段】下記一般式で表されるピロロキノリンキノン又はその塩。2013166738.tif 000008［一般式１中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3は、それぞれ独立して、水素原子、フェニル基、炭素数１〜６のアルキル基、アラルキル基、アルキルアリール基、アルケニル基及びアルキニル基から選ばれる。］【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（I）で表されるピロロキノリンキノン又はその塩を有効成分とする金属障害防止剤。
【化１】
2013166738.tif 000007
（ただし、一般式１中Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3は、それぞれ独立して、水素原子、フェニル基、炭素数１〜６のアルキル基、アラルキル基、アルキルアリール基、アルケニル基及びアルキニル基から選ばれる。）
【請求項２】
金属障害がセシウム障害であることを特徴とする請求項１記載の防止剤。
【請求項３】
ピロロキノリンキノンの塩がアルカリ金属塩であることを特徴とする請求項２に記載の防止剤。
【請求項４】
ピロロキノリンキノンのアルカリ金属塩がジナトリウム塩であることを特徴とする請求項３に記載の防止剤。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれかに記載の防止剤が配合された金属障害防止食品。
【請求項６】
請求項１〜４のいずれかに記載の防止剤を金属に対して重量比で１×１０ー４〜０．７倍量添加することを特徴とする金属障害の防止法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ピロロキノリンキノンを用いたデドックスに関する。
【背景技術】
【０００２】
ピロロキノリンキノン（以下、ＰＱＱと略すことがある。）類は新しいビタミンの可能性があることが提案されて注目を集めている。細菌に限らず、真核生物のカビ、酵母に存在し、補酵素として重要な働きを行っている。近年までに、細胞の増殖促進作用、抗白内障作用、肝臓疾患予防治療作用、創傷治癒作用、抗アレルギ−作用、逆転写酵素阻害作用およびグリオキサラ−ゼＩ阻害作用−制癌作用など多くの生理活性が明らかにされている。このＰＱＱ類は、有機化学的合成法および発酵法などにより製造することが可能である。
【０００３】
ＰＱＱは鉛、インジュウム、バナジュウムの解毒として機能することが報告されており（特許文献１）、当該解毒機能はＰＱＱとこれら金属とのキレート効果によるものと考えられている。キレート作用は遷移金属を中心に広く適用される方法で、一つの分子内に金属イオンと結合する部位を多く有することが必要である。キレート剤と称される物質は結合部位が多くあることを特徴としており、前記の解毒作用もこの効果によると考えられている。
【０００４】
一方、アルカリ金属へのキレート作用については弱い相互作用に形状認識をおこなうクラウンエーテル等では報告されているが、一般的なキレート試薬であるポリカルボン酸、代表的なＥＤＴＡではアルカリ金属では対象とされていない。実際、EDTAのキレート安定度定数（生成定数）LogKMLは遷移金属であるPb2+で18.04であるのに対し、Cs+では0.15でしかなく、キレート効果の対象にはなっていない（非特許文献１）。
アルカリ金属の中でも特にセシウムは、近年、さらに原子力事故等による放射性物質の拡散の内、最も量が多く、食品としての使用に適していないとして、除去方法が求められている。また、そのイオン自身の障害についても防止する方法が求められている。しかし、先に述べた様に、アルカリ金属は一般的なキレート試薬によるキレート効果の対象となっておらず、また一般的に知られているゼオライトやイオン交換樹脂によってセシウムを除去することは食品分野において好ましくない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】米国特許第５４６０８１９号明細書
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】DOJINDO LABORATORIES 27th Edition /Catalog 2010/2011,  p300-301 株式会社同仁化学研究所
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の課題はピロロキノリンキノンを用いて金属による障害を防止する組成物及びその方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究した結果、以下に示す項目によって、金属による障害の防止を見出し、本発明を完成させるに至った。
〔１〕下記一般式（I）で表されるピロロキノリンキノン又はその塩を有効成分とする金属障害防止剤。
【化１】
2013166738.tif 000002
（ただし、一般式１中Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3は、それぞれ独立して、水素原子、フェニル基、炭素数１〜６のアルキル基、アラルキル基、アルキルアリール基、アルケニル基及びアルキニル基から選ばれる。）
〔２〕金属障害がセシウム障害であることを特徴とする〔１〕記載の防止剤。
〔３〕ピロロキノリンキノンの塩がアルカリ金属塩であることを特徴とする〔３〕に記載の防止剤。
〔４〕ピロロキノリンキノンのアルカリ金属塩がジナトリウム塩であることを特徴とする〔２〕に記載の防止剤。
〔５〕〔１〕〜〔４〕のいずれかに記載の防止剤が配合された金属障害防止食品。
〔６〕〔１〕〜〔４〕のいずれかに記載の防止剤を金属に対して重量比で１×１０ー４〜０．７当量添加することを特徴とする金属障害の防止法。
【発明の効果】
【０００９】
本発明により、金属による障害を防止することが可能である。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本発明の金属障害防止剤は、一般式１の構造で表されるピロロキノリンキノン又はその塩であり、金属による障害を防止することを可能とする。
【化２】
2013166738.tif 000003
（一般式１において、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して、水素原子、フェニル基、炭素数１〜６のアルキル基、アラルキル基、アルキルアリール基、アルケニル基及びアルキニル基から選ばれる。）
塩はアルカリ金属であればよく、特に限定されないが、フリー体、ジナトリウム体、ジカリウム体が入手しやすい。より好ましくは、特に使用しやすいジナトリウム塩である。
【００１１】
本発明の金属障害防止剤は、金属による障害、具体的にはアルカリ金属による障害、より具体的にはセシウムによる障害を防止することを可能とする。セシウム等の金属による障害は細胞レベルな障害または機能的な障害を意味する。すなわち、細胞増殖障害及びこれらに起因する機能障害の諸症状を意味する。
金属障害防止剤の１日当たりの投与量は、金属の濃度に合わせて投与すればよく、金属に対してＰＱＱ又はその塩を重量比で１×１０ー４〜０．７倍量添加することが好ましい。
【００１２】
本発明の金属障害防止剤は、ヒト用または動物用として、医薬品、医薬部外品として若しくは食品、機能性食品又は飼料等に添加、配合して使用することができる。ここでいう機能性食品とは、健康食品、栄養補助食品、栄養機能食品、栄養保健食品等、健康の維持あるいは食事にかわり栄養補給の目的で摂取する食品を意味している。
【００１３】
具体的な形態としてはカプセル剤、タブレット、チュアブル、錠剤、細粒剤、顆粒剤、粉剤、ドリンク剤、カプレット、口腔内溶解型錠剤、注射剤、内服用液剤等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。好ましくは錠剤又はカプセル剤である。
【００１４】
本発明の金属障害防止剤の製品化には、通常用いられる種々の添加剤を配合することができる。添加剤としては例えば、安定化剤、界面活性剤、可溶化剤、緩衝剤、甘味剤、矯味剤、懸濁化剤、抗酸化剤、清涼化剤、着香剤・香料、乳化剤、ｐＨ調整剤、分散剤、芳香剤、防腐剤、保存剤等が挙げられる。
【００１５】
安定化剤としては、例えばアジピン酸、アスコルビン酸、Ｌ−アスコルビン酸ナトリウム、Ｌ−アスパラギン酸、Ｌ−アスパラギン酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、Ｌ−アルギニン、安息香酸ナトリウム、イノシトール、エデト酸ナトリウム、エリソルビン酸、エリソルビン酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、グリシン、グリセリン、グリセリン脂肪酸エステル、軽質無水ケイ酸、酢酸トコフェロール、ゼラチン、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール、無水クエン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセリン、リン酸水素ナトリウム等が挙げられる。
【００１６】
界面活性剤としては、コレステロール、ショ糖脂肪酸エステル、ステアリルアルコール、セスキオレイン酸ソルビタン、セタノール、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール、ポリソルベート、マクロゴール、モノオレイン酸ソルビタン、モノステアリン酸グリセリン、モノラウリン酸ソルビタン、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウロマクロゴール等が挙げられる。
【００１７】
可溶化剤としては、Ｌ−アスパラギン酸、Ｌ−アルギニン、安息香酸ナトリウム、エタノール、塩化ナトリウムソルビタン脂肪酸エステル、炭酸水素ナトリウム、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール、ポリソルベート、ポリビニルアルコール、Ｄ−マンニトール、無水エタノール等を例示することができる。
【００１８】
緩衝剤としては、アスコルビン酸、Ｌ−アスパラギン酸マグネシウム、アミノエチルスルホン酸、Ｌ−アルギニン、安息香酸、安息香酸ナトリウム、クエン酸、クエン酸カルシウム、クエン酸ナトリウム、クエン酸二ナトリウム、グリシン、炭酸水素ナトリウム、乳酸、ブドウ糖、無水クエン酸、無水クエン酸ナトリウム、無水リン酸一水素ナトリウム、メタリン酸ナトリウム、リン酸水素ナトリウム、リン酸二カリウム、リン酸二水素カリウム、リン酸二水素ナトリウム等を使用することができる。
【００１９】
甘味剤としては、アスパルテーム、アマチャ、カンゾウ、果糖、果糖ブドウ糖液、ブドウ糖果糖液糖、還元麦芽糖水アメ、グリチルリチン酸二カリウム、グリチルリチン酸モノアンモニウム、高果糖液糖、ブドウ糖、水アメ、乳糖、白糖、精製白糖、ハチミツ、サッカリン、サッカリンナトリウム、ステビア、スクラロース、エリスリトール、キシリトール、Ｄ−ソルビトール、マルチトール、マルトース、Ｄ−マンニトール、単シロップ等を挙げることができる。
【００２０】
矯味剤としては、アスコルビン酸、Ｌ−アスパラギン酸、ＤＬ−アラニン、５′−イノシン酸二ナトリウム、ウイキョウ、塩化ナトリウム、オレンジ油、カカオ末、カンフル、グリシン、グリセリン、Ｌ−グルタミン酸、サフラン、酒石酸、ショウキョウ、Ｄ−ソルビトール、ハッカ、アジピン酸、フマル酸、ペパーミント、ボルネオール、メントール、リュウノウ、緑茶末、リンゴ果汁、リンゴ酢、レモン油、ローズ油、ローヤルゼリー等を使用することができる。
【００２１】
懸濁化剤としては、例えばアラビアゴム、カラギーナン、カルボキシビニルポリマー、カンテン、キサンタンガム、グリセリン脂肪酸エステル、酸化チタン、ショ糖脂肪酸エステル、ステリアルアルコール、ステアリン酸アルミニウム、セタノール、精製ゼラチン、ソルビタン脂肪酸エステル、大豆レシチン、プロピレングリコール脂肪酸エステル、ペクチン、プロピレングリコール、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリエチレングリコール、メチルセルロース、モノステアリン酸グリセリン、流動パラフィン等を挙げることができる。
【００２２】
抗酸化剤としては、アスコルビン酸、Ｌ−アスコルビン酸ステアリン酸エステル、亜硫酸水素ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、エリソルビン酸、塩酸システイン、酢酸トコフェロール、大豆レシチン、ブチルヒドロキシアニソール、没食子酸プロピル等を挙げることができる。
【００２３】
清涼化剤としては、ゲラニオール、ハッカ水、ハッカ油、ボルネオール、メントール、ミント等が挙げることができる。
【００２４】
着香剤・香料としては、ウイキョウ、エチルバニリン、エチルマルトール、オレンジ、カンフル、ケイヒ、シュガーフレーバー、シンナムアルデヒド、チェリーフレーバー、トウヒチンキ、ハッカ、バニラフレーバー、バニリン、ビターエッセンス、フルーツフレーバー、フレーバーＧＩ、ベルモットフレーバー、ミックスフレーバー、ミントフレーバー、メントール、ユーカリ油、リュウノウ、レモンパウダー、レモン油、ロジン、ローズ油等を挙げることができる。
【００２５】
乳化剤としては、カラギーナン、カルボキシビニルポリマー、カルメロースナトリウム、グァーガム、グリセリン脂肪酸エステル、ジステアリン酸ポリエチレングリコール、ショ糖脂肪酸エステル、ステアリルアルコール、ステアリン酸、セタノール、ゼラチン、ソルビタン脂肪酸エステル、大豆レシチン、ヒドロキシプロピルセルロース、プロピレングリコール、プロピレングリコール脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール、ポリソルベート、ミリスチルアルコール、モノステアリン酸グリセリン、モノラウリン酸ソルビタン、ラウリル硫酸ナトリウム等が挙げられる。
【００２６】
ｐＨ調整剤としては、希塩酸、クエン酸ナトリウム、グリシン、コハク酸、酢酸、酒石酸、水酸化ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸ナトリウム、フマル酸一ナトリウム、リン酸、リン酸三ナトリウム、リン酸水素ナトリウム、リン酸二カリウム、リン酸二水素ナトリウム等が挙げられる。
【００２７】
分散剤としては、アミノアルキルメタクリレートポリマーＲＳ、アラビアゴム、オレイン酸、カルボキシビニルポリマー、カルメロースナトリウム、グリセリン、結晶セルロース、コリンリン酸塩、レシチン、セスキオレイン酸ソルビタン、デキストリン、トウモロコシデンプン、トリオレイン酸ソルビタン、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、モノステアリン酸グリセリン、ラウリル硫酸ナトリウム、流動パラフィン等を使用することができる。
【００２８】
芳香剤としては、ウイキョウ、エチルバニリン、オレンジ油、カンフル、ケイヒ、ショウキョウ、ジンコウ、チョウジ、ハッカ、バニラ、バニリン、ボルネオール、マルトール、メントール、ユーカリ、リュウノウ、レモン、ローズ水等を挙げることができる。
防腐剤としては、アミノエチルスルホン酸、安息香酸、安息香酸ナトリウム、エタノール、エデト酸ナトリウム、カンテン、クエン酸ナトリウム、サリチル酸ナトリウム、ソルビン酸、パラオキシ安息香酸イソプロピル、パラオキシ安息香酸エチル、メントール等が挙げることが出来る。
【００２９】
保存剤としては、安息香酸ナトリウム、エタノール、エデト酸ナトリウム、グリセリン、サリチル酸、サリチル酸ナトリウム、Ｄ−ソルビトール、ソルビン酸、パラオキシ安息香酸イソブチル、パラオキシ安息香酸エチル、パラオキシ安息香酸ブチル、パラオキシ安息香酸メチル、プロピレングリコール等を挙げることができる。
【実施例】
【００３０】
以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明の技術的範囲はこれらの例示に限定されるものではない。
【００３１】
ＰＱＱは三菱ガス化学製ＰＱＱジナトリウム塩粉末を用い、使用する直前に蒸留水に溶解して使用した。チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ細胞）を使用して行った。培地はα―ＭＥＭ培地（ＧＩＢＣＯ）に牛胎児血清（ＦＢＳ）を１０％添加したものに、抗生物質（大日本住友製薬製  ペニシリン５０００μｇ／ＭＬーストレプトマイシン５０００ＩＵ）を１％添加したものを使用した。培養は二酸化炭素５％添加した飽和水蒸気下３７℃で行った。
前処理後、３７℃で培養したＣＨＯ細胞をトリプシン処理でシャーレからはがした。はがした細胞は遠心分離で取り出し、培地を加えた。これを血球計算盤に入れ、細胞の数を数えた。９６穴プレートを使用し、穴に５０００個細胞を入れ、培地１００μＬ/穴で一晩培養した。
【００３２】
実施例１
一晩培養後の細胞に培地に最終濃度として塩化セシウム３ｍｇ／ＭＬになるように培地に溶かし、ＰＱＱは０．２４μg／ＭＬになるように加えた。1日後、培地を抜き、２回培地で洗浄後、細胞数計測をＷＳＴ（doujinn Cell Counting kit 8）を使用し、プレートリーダーによる吸光度測定で行った。このときの吸光度は細胞数に比例する。
その結果を表１に示す。
【００３３】
実施例２−４
添加するＰＱＱ濃度を表１に示すように各々変えた他、実施例１と同様に実験を行った。その結果を表１に示す。
【００３４】
比較例１  ＰＱＱ無添加
一晩培養後の細胞に培地に最終濃度として塩化セシウム３ｍｇ／ＭＬになるように培地に加え、ＰＱＱは加えなかった。1日後、培地を抜き、２回培地で洗浄後、細胞数計測をＷＳＴ（doujinn Cell Counting kit 8）を使用し、プレートリーダーによる吸光度測定で行った。表１に結果を示す。
【００３５】
比較例２
添加するＰＱＱ濃度を２５０μg／ＭＬになるように加えた他、実施例１と同様の操作を行った。
【００３６】
参考例１  塩化セシウム無添加
一晩培養後の細胞に培地に最終濃度として塩化セシウムとＰＱＱは加えなかった他は、実施例１と同様の処理を行った。表１に結果を示す。
【表１】
2013166738.tif 000004
培地に塩化セシウム３ｍｇ／ＭＬ存在下で、細胞は増殖阻害を受けていた。ＰＱＱは増殖阻害からの回復を０．２４から１２５μg／ＭＬの濃度で行っていることが分かった。このようにキレート性がないといわれる金属類への障害に関してもＰＱＱは有効であることが分かった。
【００３７】
塩化カリウム添加
塩化セシウムを塩化カリウムに変えて実施例1と同様の実験を行った。表２に結果を示す。これより、塩化カリウムにおいても効果がみられた。
【表２】
2013166738.tif 000005
【００３８】
Ｃｒ(アセチルアセトン)３錯体添加
実施例１と同様に細胞を使用し、塩化セシウムの代わりに同仁化学製Ｃｒ(アセチルアセトン)３錯体をジメチルスルホキシドに溶かし、２２ｍｇ／ＭＬになるように加えた。その結果を表３に示す。これより、重金属の一つであるクロムによる障害に対しても有効であった。
【表３】
2013166738.tif 000006
【産業上の利用可能性】
【００３９】
本発明は、ヒト又は動物向けの医薬、食品又は飼料の有効成分とすることができる。