(57)【要約】      （修正有）【課題】測定対象分子の修飾を行うことなく、容易に且つ効率よく、質量分析におけるイオン化効率を向上させることができる物質を提供する。【解決手段】炭素数４〜１４のアルキルアルコールである質量分析用マトリックスの添加剤。好ましくは、α−シアノ−４−ヒドロキシケイ皮酸、２，５−ジヒドロキシ安息香酸、及びシナピン酸からなる群から選ばれる質量分析用マトリックスに添加され、疎水性ペプチドの質量分析に用いられる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
炭素数４〜１４のアルキルアルコールである質量分析用マトリックスの添加剤。
【請求項２】
α−シアノ−４−ヒドロキシケイ皮酸、２，５−ジヒドロキシ安息香酸、及びシナピン酸からなる群から選ばれる質量分析用マトリックスに添加される、請求項１に記載の添加剤。
【請求項３】
疎水性ペプチドの質量分析に用いられる、請求項１又は２に記載の添加剤。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の質量分析用マトリックスの添加剤を用いた質量分析法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医療及び創薬分野において応用されうるＭＡＬＤＩ−ＭＳ（マトリックス支援レーザー脱離イオン化質量分析）アプリケーションに関する。より具体的には、本発明は、質量分析用マトリックスの添加剤であるアルコールに関する。
【背景技術】
【０００２】
ＭＡＬＤＩ（マトリックス支援レーザー脱離イオン化）質量分析法において、測定対象分子の効率的なイオン化を実現する条件が探索されている。
例えば、特開２００５−３２６３９１号公報（特許文献１）に、疎水性ペプチドを予め２−ニトロベンゼンスルフェニル基によって修飾し、α−シアノ−３−ヒドロキシケイ皮酸（3-CHCA）、３−ヒドロキシー４−ニトロ安息香酸（3H4NBA）、又はそれらの混合物をマトリックスとして用いた質量分析を行うことで、一般的マトリックスであるα−シアノ−４−ヒドロキシケイ皮酸（4-CHCA）や２，５−ジヒドロ安息香酸（DHB）に比べ、疎水性ペプチドを効率よくイオン化する方法が記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開２００５−３２６３９１号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
上記のＭＡＬＤＩ質量分析法においては、測定対象分子の修飾が行われる場合にはある程度のイオン化促進効果が得られるが、修飾が行われない場合には、イオン化効率は十分でない。
このように、特に疎水性ペプチドのようなＭＡＬＤＩイオン化が難しい分子種は、従来の方法によってもイオン化効率が低いという問題がある。
本発明の目的は、測定対象分子の修飾を行うことなく、容易に且つ効率よく、質量分析におけるイオン化効率を向上させることができる物質を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは鋭意検討の結果、特定のアルコールが、マトリックスとしては機能しないが、マトリックスの添加剤として用いられることによって本発明の目的を達成することができるものであることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００６】
本発明は、以下の発明を含む。
（１）
炭素数４〜１４のアルキルアルコールである質量分析用マトリックスの添加剤。
好ましくは、前記アルキルアルコールの炭素は、８〜１４、より好ましくは８〜１０である。
好ましくは、前記アルキルアルコールは、直鎖アルコールである。
好ましくは、前記アルキルアルコールは、第一級アルコールである。
（２）
α−シアノ−４−ヒドロキシケイ皮酸、２，５−ジヒドロキシ安息香酸、及びシナピン酸からなる群から選ばれる質量分析用マトリックスに添加される、（１）に記載の添加剤。
（３）
疎水性ペプチドの質量分析に用いられる、（１）又は（２）に記載の添加剤。
（４）
（１）〜（３）のいずれかに記載の質量分析用マトリックスの添加剤を用いた質量分析法。
【発明の効果】
【０００７】
本発明により、測定対象分子（特に疎水性ペプチド）のイオン化効率を向上させることができるマトリックス添加剤を提供することができる。
本発明により、測定対象分子（特に疎水性ペプチド）の質量分析測定による検出感度向上を達成することができる。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
本発明は、質量分析用マトリックスの添加剤として用いられるアルキルアルコールである。アルキルアルコールの炭素数は４以上、好ましくは４〜１４、より好ましくは８〜１４、さらにより好ましくは８〜１０である。アルキルアルコールのアルキル基部分は、直鎖及び分岐鎖であることを問わない。アルキルアルコールは、第一級アルコールであることが好ましいが、第二級アルコール及び第三級アルコールであってもよい。本発明においては、例えば質量分析対象が疎水性化合物である場合、アルキルアルコールは、疎水性度がより高いものがより好ましい傾向にある。
【０００９】
本発明のアルコールは、単独では測定対象のイオン化能力はないため、マトリックスとしては機能しない。しかしながら、マトリックスと混合して使用されることによって、マトリックスによる測定対象のイオン化能力を増強し、検出限界の向上を図ることができる。
【００１０】
本発明の添加剤と共に使用されるマトリックスとしては特に限定されない。一般的なマトリックスから当業者によって適宜選択されてよいが、例えば、α−シアノ−４−ヒドロキシケイ皮酸、２，５−ジヒドロ安息香酸、及びシナピン酸からなる群から選ばれることができる。
【００１１】
本発明の添加剤を用いる質量分析対象は特に限定されない。例えば、分子量が５００〜３００００、好ましくは１０００〜１００００の分子でありうる。好ましくは、質量分析対象は疎水性物質である。疎水性物質の疎水性の程度としては特に限定されるものではなく、様々な公知の疎水性指標や疎水性度算出法に基づいて当業者によって適宜決定することができる。例えば、疎水性物質の疎水性の程度は、当業者がＢＢインデックス（Bull and Breese Index）によって疎水性と判断しうる程度であればよい。より具体的には、ＢＢインデックスは例えば１０００以下、好ましくはー１０００以下でありうる。
【００１２】
本発明においては、特に疎水性ペプチド（本発明においては、ペプチドにはタンパク質も含まれる）のイオン化能増強効果が高い。具体的には、ペプチドを構成するアミノ酸に、より疎水性度の高いアミノ酸残基を、より多く含むものである。例えば疎水性アミノ酸としては、イソロイシン、ロイシン、バリン、アラニン、フェニルアラニン、プロリン、メチオニン、トリプトファン、グリシンなどが挙げられる。また、システイン、チロシンなどを含むこともある。
【００１３】
本発明の添加剤とマトリックスとの組み合わせの比率は特に制限はないが、例えば以下のような量的関係で組み合わせることができる。
例えば、添加剤を質量分析用マトリックスの０．０１〜５０倍、好ましくは０．０１〜１倍のモル比で組み合わせることができる。
【００１４】
本発明の添加剤は、通常、マトリックスとの混合溶液に調製される。マトリックスと添加剤との混合溶液は、通常、マトリックス溶液と添加剤溶液とをそれぞれ調製しておき、両溶液を混合することによって調製することができる。溶媒としては、例えば、アセトニトリル−TFA（トリフルオロ酢酸）水溶液、アセトニトリル水溶液、TFA水溶液などを用いることができる。アセトニトリル−TFA水溶液におけるアセトニトリルの濃度は例えば１０〜９０体積％であり、トリフルオロ酢酸の濃度は例えば０．０５〜１体積％でありうる。
【００１５】
添加剤は、例えば、０．５〜５０ｍｇ/ｍｌ、好ましくは５〜１０ｍｇ/ｍｌ、例えば５ｍｇ/ｍｌの溶液に調製することができる。マトリックスは、例えば、１ｍｇ/ｍｌ〜飽和濃度、好ましくは１〜１０ｍｇ/ｍｌ、例えば１０ｍｇ/ｍｌの溶液に調製することができる。これら添加剤溶液及びマトリックス溶液は、例えば、１０：１〜１：１０、１０：１〜１：１又は１：１〜１：１０、例えば１：１０の体積比で混合することができる。
【実施例】
【００１６】
以下に実施例を示し、本発明を具体的に説明するが、本発明は下記の実施例に制限されるものではない。
［実施例１］
本実施例においては、長鎖アルコールを、マトリックスであるα−シアノ−４−ヒドロキシケイ皮酸（CHCA）の添加剤として用い、疎水性ペプチド（Humanin；BBインデックスは-5800）の測定を行った。長鎖アルコールとしては、1-オクタノール(C8-OH)、1-デカノール(C10-OH)、1-ドデカノール(C12-OH)及び1-テトラデカノール(C14-OH)を用いた。比較用として、従来のマトリックスCHCAを単独で用いた測定も行った。
【００１７】
（１）4-CHCA 10mg/mL (50%ACN/0.05%TFA water(%は体積を基準とする。以下において同様)と、長鎖アルコール(50%ACN/0.05%TFA water)とを1/10(v/v)で混合した。得られたマトリックス溶液を、それぞれ、C8-OH/CHCA(1/10)、C10-OH/CHCA(1/10)、C12-OH/CHCA(1/10)、及びC14-OH/CHCA(1/10)と記載する。
（２）疎水性ペプチドのHumanin 20a〜2pmol/μL (50%ACN/0.05%TFA water)溶液を作成した。
（３）MALDIプレ−ト上に(2)の試料溶液と(1)のマトリックス溶液それぞれとを0.5μLずつ滴下し混合した(on-target mix法)。
（４）AXIMA Performance (島津製作所)のリニアTOF、ポジティブ及びネガティブモ−ドで計測した。
【００１８】
（比較用）
（１）CHCAの10 mg/mL (50%ACN/0.05%TFA water)溶液を作成した。
（２）疎水性ペプチドHumaninの20a〜2pmol/μL 50%ACN/0.05%TFA waterを作成した。
（３）MALDIプレ−ト上に(2)の試料溶液と(1)のマトリックス溶液とを0.5μLずつ滴下し混合した(on-target mix法)。
（４）AXIMA Performance (島津製作所)のリニアTOF、ポジティブ及びネガティブモ−ドで計測した。
【００１９】
CHCA単独で使用した場合に比べ、長鎖アルコールを添加剤として使用することにより、ポジティブ（pos）及びネガティブ（neg）の両モ−ドで、感度向上が確認された。特に、C8-OH/CHCA (1/10)及びC10-OH/CHCA(1/10)を用いた場合は検出限界（fmol/well）が1/10となり、すなわち10倍の感度向上効果が確認された（表１）。
【００２０】
【表１】
2013134102.tif 000002