(57)【要約】【課題】アルコール摂取に起因する海馬神経活動の低下を抑制するための手段を提供する。【解決手段】本発明は、クルクミンを有効成分として含有する、アルコール摂取に起因する海馬神経活動の低下の抑制剤に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
クルクミンを有効成分として含有する、アルコール摂取に起因する海馬の神経活動の低下の抑制剤。
【請求項２】
クルクミンが、クルクミン含有ウコン抽出物として含有される、請求項１のアルコール摂取に起因する海馬の神経活動の低下の抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、クルクミンを有効成分として含有する、アルコール摂取に起因する海馬の神経活動の低下の抑制剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
飲酒によるアルコール摂取は、古来より世界中で親しまれている習慣であり、ストレス発散及びコミュニケーションの円滑化等の効能が認められている。しかしながら、アルコールを過剰に摂取した場合、倦怠感のような疲労を感じたり、その場の記憶がとぎれたり、一時的に物覚えが悪くなるような症状がしばしば起こる。
【０００３】
特許文献1は、葛花乾燥物の抽出エキスからなる脳記憶機能低下症状回復剤を記載する。当該文献は、葛花乾燥物の抽出エキスと経口用賦形剤からなる経口用製剤が、アルコールにより誘因される痴呆又は健忘症状を回復させるために使用し得ることを記載する。
【０００４】
特許文献2は、アルコール摂取によって引き起こされる疲労を改善するためのアルコール性疲労改善剤を記載する。当該文献は、アルコール性疲労改善剤の有効成分として、オルニチン又はその塩、並びに場合によりウコン、発酵ウコンエキス及びクルクミンから選択される追加の成分を記載する。
【０００５】
ウコンのような薬用植物の抽出物は、アルコール摂取に起因する症状の改善だけでなく、様々な薬理効果を有することが知られている。特許文献3は、冬虫夏草又はウコン等を有効成分として含有する認知・記憶機能低下軽減剤を記載する。
【０００６】
特許文献4は、アスタキサンチン及び／又はそのエステルと、イチョウ葉エキス、冬虫夏草又はウコン等の薬用植物とを含む、認知行動能力の向上剤を記載する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開2006-206556号公報
【特許文献２】特開2011-105698号公報
【特許文献３】特開2010-126529号公報
【特許文献４】特開2010-270095号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、アルコール摂取に起因する海馬の神経活動の低下の抑制剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者は、前記課題を解決するための手段を種々検討した結果、ウコンに含有される天然色素化合物であるクルクミンが、アルコール摂取に起因する海馬の神経細胞の活動低下抑制活性を有することを見出し、本発明を完成した。
【００１０】
すなわち、本発明の要旨は以下の通りである。
（１）クルクミンを有効成分として含有する、アルコール摂取に起因する海馬の神経活動の低下の抑制剤。
（２）クルクミンが、クルクミン含有ウコン抽出物として含有される、（１）のアルコール摂取に起因する海馬の神経活動の低下の抑制剤。
【発明の効果】
【００１１】
本発明により、アルコール摂取に起因する海馬の神経活動の低下を抑制することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】クルクミン経口投与後の海馬CA1領域の神経活動の経時変化を示す図である。白色の四角印：標準食生理的食塩水摂取群；白色の丸印：標準食アルコール摂取群；黒色の丸印：40％クルクミン混合食アルコール摂取群；各測定時間（5分間）における平均値と標準誤差（SEM、棒状の垂線）とを示す。縦軸：生理的食塩水又はアルコール摂取前（-57.5〜-2.5分）のNREM期の海馬CA1領域の神経活動の発火頻度の平均値を100％としたときの変化率（％）；横軸：アルコール摂取時からの経過時間（分）；網掛け部分の時間領域（0〜5分）：アルコール摂取時間（5分間）；＊（within群）：生理的食塩水又はアルコール摂取前（-57.5〜-2.5分）の平均値との有意差（P <0.05）；＃（between群）：標準食生理的食塩水摂取群との有意差（P <0.05）；＄（between群）：標準食アルコール摂取群との有意差（P <0.05）を示す。
【図２】クルクミン経口投与後の血漿中クルクミン濃度の経時変化を示す図である。各測定時における平均値（黒色の丸印）と標準誤差（SEM、棒状の垂線）とを示す。縦軸：血漿中クルクミン濃度（μg/ml）；横軸：アルコール摂取時からの経過時間（分）；網掛け部分の時間領域（0〜5分）：アルコール摂取時間（5分間）；＊（within群）：クルクミン経口投与前（-310分）の平均値との有意差を示す（P <0.05）。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
以下、本発明の好ましい実施形態について詳細に説明する。
＜1. ウコン及びクルクミン＞
本発明の海馬神経活動低下抑制剤は、クルクミン（(1E,6E)-1,7-ビス(4-ヒドロキシ-3-メトキシフェニル)-1,6-ヘプタジエン-3,5-ジオン）を有効成分として含有する。クルクミンは、ショウガ科植物のウコン（ターメリック、Curcuma longa）の根茎に多く含有される天然色素化合物である。
【００１４】
クルクミンは、強い抗酸化作用及び発ガンプロモーター抑制作用等の生物活性を有することが知られている。
【００１５】
以下において詳細に説明するように、本発明者らは、クルクミンがアルコール摂取に起因する海馬の神経活動の低下を抑制する効果を有することを見出した。
【００１６】
クルクミンとしては、ウコン等のクルクミン含有植物から単離されたものを利用することができる。或いは、クルクミンとして、人為的に合成されたものを用いてもよい。クルクミンは必ずしも単離精製された状態で用いられる必要はなく、クルクミンを含有する植物や、該植物の抽出物などの、任意のクルクミン含有素材として用いられてもよい。クルクミン含有素材としては天然由来のものが好ましい。
【００１７】
クルクミンを含有する植物としてはウコン等が挙げられる。クルクミンを含有する植物としては、クルクミンを含有する植物の部位（例えばウコンの根茎）の原型の状態、或いは適当な寸法又は形状にカットした形態、或いは粉砕物の形態のものを使用することができる。これらの任意の形状の植物は、適宜乾燥されたものであってもよい。クルクミンを含有する植物の抽出物としては、上記の植物からクルクミンを溶解可能な抽出媒体を用いて抽出される、クルクミン含有抽出物が挙げられる。クルクミンを溶解可能な抽出媒体は典型的には有機溶媒であるが、超臨界二酸化炭素等の超臨界流体であってもよい。クルクミンを溶解可能な有機溶媒としては、ヘキサン、アセトン、メタノール、エタノール、イソプロパノール、プロピレングリコール、アセトニトリル、酢酸エチル、動植物油脂等が挙げられ、これらの有機溶媒は２種以上混合された混合溶媒として用いられてもよい。
【００１８】
クルクミン含有ウコン抽出物としては典型的には、ウコン色素として呼ばれるものが挙げられる。ウコン色素は、ウコンの根茎の乾燥品より、温時エタノールで、熱時油脂若しくはプロピレングリコールで、又は室温時〜熱時ヘキサン若しくはアセトンで抽出して得られるものであり、主色素はクルクミン類で黄色を呈するものを挙げることができる。
【００１９】
クルクミン含有ウコン抽出物は、典型的には、抽出物全量（乾燥物換算の全量）に対して1〜80重量％のクルクミンを含む。
【００２０】
クルクミン含有ウコン抽出物は、必要に応じて抽出媒体を除去した後、そのままの形態で本発明の海馬神経活動低下抑制剤の有効成分として用いてもよいし、該抽出物から、更に、溶媒分画、カラムクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー（HPLC）及び／又は再結晶等の分離手段によってクルクミンを分離又は濃縮した画分として用いてもよい。本明細書において、「クルクミン含有ウコン抽出物」は、抽出媒体を介して抽出されたクルクミン含有ウコン抽出物自体だけでなく、クルクミン含有ウコン抽出物からクルクミンを分離又は濃縮した前記画分の形態も包含する。
【００２１】
クルクミン又はクルクミン含有素材は、上記方法によって自ら調製して使用してもよいし、予め調製された製品を購入等して使用してもよい。
【００２２】
＜2. 記憶と脳機能＞
本明細書において、「記憶」とは、個体が新しい情報の入力を受けたとき（経験）、新しい経験が保存され（保持）、且つその経験が意識又は行為の中に再生されることを意味する。すなわち、記憶は、「情報の入力」、「保持」及び「再生」の過程からなる一連のプロセスを意味する。また、「記憶力」とは、個体が新しい情報を記憶し得る能力を意味する。
【００２３】
通常、「記憶」は、時間軸的指標に基づき、短期記憶及び長期記憶に分類される。また、記憶の再生過程に基づき、陳述記憶及び手続き記憶に分類される。ここで、「陳述記憶」とは、記憶の内容を意識下でイメージとして再現でき、且つ具体的に陳述することにより再生できる記憶を意味し、「手続き記憶」とは、意識下で再現できないが、自然に体が動くという行為により再生できる記憶を意味する。
【００２４】
個体の記憶は、主として脳によって行われる。記憶に関わる脳器官は数多くあるが、特に海馬体及び大脳連合野が重要な器官である。このうち、海馬体は、海馬台、アンモン角（海馬）及び歯状回からなり、海馬はさらに、海馬台に近い順に、CA1，CA2, CA3及びCA4領域に分類される。
【００２５】
現在のところ、記憶と脳器官との関係は完全に明らかにされていないが、陳述記憶に関しては、海馬が、短期記憶の形成及び保持だけでなく、長期記憶への変換過程を担っており、大脳連合野が、海馬から受け渡された長期記憶を保持していると考えられている。
【００２６】
＜3. 海馬神経活動低下抑制剤＞
本発明者らは、ラットにアルコールを摂取させると、アルコール摂取前と比較して、一時的に海馬CA1領域の神経活動が有意に低下することを見出した。そして、驚くべきことに、クルクミンを摂取した場合には、アルコール摂取後の海馬CA1領域の神経活動の低下が抑制されることを見出し、本発明の海馬神経活動低下抑制剤を完成するに至った。なお、海馬CA1領域の神経活動は、実施例に示すように、神経活動電位に基づいて評価することができる。
【００２７】
本発明の海馬神経活動低下抑制剤は、個体におけるアルコール摂取に起因する海馬（特に海馬CA1領域）の神経活動の低下に起因する状態（例えばアルコール摂取に起因する記憶力の低下）を抑制又は改善することを意図して、飲食品、医薬品（医薬部外品に分類されるものも含む。以下同じ）等の形態で摂取又は投与することができる。アルコール摂取に起因して低下する記憶力としては、短期記憶に関する記憶力が挙げられる。
【００２８】
本発明の海馬神経活動低下抑制剤の有効成分であるクルクミンは、経口摂取すると体内に吸収され、血液中に移行して全身に運搬される。クルクミンの経口摂取（又は経口投与）時から体内の各器官へ運搬されるまでに要する時間は、クルクミンの摂取量（又は投与量）、剤形及び個体の生物学的指標（年齢、性別及び体重等）等に依存して様々であるが、通常、クルクミンを経口摂取（又は経口投与）すると、クルクミンは直ちに血液中に移行する。このため本発明の海馬神経活動低下抑制剤は、アルコール摂取の前、後又は摂取中のいずれかの時に摂取（又は投与）すればよい。摂取（又は投与）されたクルクミンの有効量が体内に吸収されるのに要する時間を考慮すると、本発明の海馬神経活動低下抑制剤は、アルコール摂取の前に摂取（又は投与）されることが好ましく、アルコール摂取の12時間前〜0分前に摂取（又は投与）されることがより好ましい。上記の条件で本発明の海馬神経活動低下抑制剤を個体が摂取（又は個体に投与）することにより、アルコール摂取に起因する海馬の神経活動の低下を実質的に抑制することが可能となる。
【００２９】
本発明の海馬神経活動低下抑制剤は飲食品、医薬品等の形態で用いることができる。特に、飲食品、医薬品等の形態で経口摂取される経口摂取用剤であることが好ましいが、これには限定されず、他の経路、例えば静脈内投与、髄腔内投与、皮下投与、舌下投与、経直腸投与、経腟投与、点眼、経鼻、吸入、経皮投与、経皮的吸収等の経路で投与される剤であってもよい。
【００３０】
本発明の海馬神経活動低下抑制剤は、全体がクルクミン又はクルクミン含有素材（例えば上述のクルクミン含有植物やその抽出物）のみからなるものであってもよいし、クルクミン又はクルクミン含有素材と、本発明の目的において許容される他の成分とを含む組成物であってもよい。
【００３１】
本発明の海馬神経活動低下抑制剤に含有される他の成分は飲食品、医薬品等の最終的な形態において許容される成分である限り特に限定されない。
【００３２】
本発明の海馬神経活動低下抑制剤の形状は、特に限定されずに液状、固形状または半固形状であることができる。
【００３３】
本発明の海馬神経活動低下抑制剤は、上述のクルクミン又はクルクミン含有素材と、必要に応じて上記他の成分とを、通常の方法で組み合わせて配合し、製造することができる。
【００３４】
前記飲食品の態様は限定されず、健康食品、栄養補助食品、栄養機能食品、特定保健用食品等の態様であることができる。前記飲食品は、クルクミン又はクルクミン含有素材と、飲食品として許容される他の成分、例えば、果糖ブドウ糖液糖、環状オリゴ糖、酸味料、増粘剤、イノシトール、香料、ナイアシン、酸化防止剤、ビタミン類、甘味料、水等とを含むことができる。
【００３５】
前記医薬品の剤形は特に限定されず、例えば、カプセル剤、錠剤、顆粒剤、注射剤、座薬、貼付剤、軟膏、細粒剤、カプレット、散剤、液剤、トローチなどの剤形が挙げられる。医薬品は、クルクミン又はクルクミン含有素材を、薬剤学的に許容される他の製剤素材、例えば、賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、結合剤、酸化防止剤、着色剤、凝集防止剤、吸収促進剤、溶解補助剤、安定化剤などと適宜組み合わせて製剤化することにより製造することができる。
【００３６】
本発明の海馬神経活動低下抑制剤が適用される個体は、哺乳動物、特にヒトであることが好ましい。
【００３７】
本発明の海馬神経活動低下抑制剤の摂取量（又は投与量）は特に限定されず、個体が摂取（又は個体に投与）することにより、アルコール摂取に起因する海馬神経活動の低下を実質的に抑制し得るクルクミンの有効量に対応する量であれば特に限定されない。クルクミンの有効量の具体的な値は、対象個体の生物学的指標（年齢、性別及び体重等）等に応じて適宜決定すればよいが、血中クルクミン濃度が0.05〜0.5μg/mlとなる量であるのが好ましい。より具体的には、１日当たりのクルクミン量として、個体の体重1 kg当たり0.1〜320mgの範囲を例示することができ、0.5〜55mgの範囲であることがより好ましい。この範囲のクルクミン量は、経口摂取の場合に特に有効である。発明の海馬神経活動低下抑制剤の摂取（又は投与）は１日に１回ないし数回に分けて行うことができる。
【実施例】
【００３８】
以下、実施例を用いて本発明をさらに具体的に説明する。但し、本発明の技術的範囲はこれら実施例に限定されるものではない。
【００３９】
＜1.実験動物の管理＞
実験には、Wistar系雄ラットを用い、室温24℃、湿度60％に設定された施設で飼育した。
【００４０】
＜2.測定用電極、カテーテルの体内留置手術＞
［2-1：海馬神経活動と海馬領域血流量同時測定用電極留置手術］
脳波位固定装置（STOELTING）に海馬神経活動測定用電極を固定した。ブレグマの位置より右に2.2 mm、尾の方へ3.8 mmを電極挿入地点とし、4本のステンレス線硬質直線と2本のガラスファイバーからなる海馬領域血流量同時測定用電極を脳表面からの深さが2.0 mm〜3.0 mmになるまで挿入した。神経活動を確認の後、デンタルセメントにて固定した。
【００４１】
［2-2：薬物投与用カテーテル体内留置手術］
頸静脈より、ビニールチューブとファイコンチューブにより作成されたカテーテルを留置した後、1000 U/mlのヘパリンナトリウム（ヘパリンナトリウム  ナカライテスク（株））でロックした。
【００４２】
［2-3：手術後の管理］
縫合部に抗菌性物質製剤（フランセチン・T・パウダー  持田製薬（株））を散布した。麻酔から完全に目覚めた後、術後食としてイチゴゼリー（ゼリーエース  イチゴ味  ハウス食品（株））を与えた。
【００４３】
＜3. 実験1：海馬CA1神経活動測定実験＞
［3-1：実験プロトコール］
術後2日間の回復期を設け、実験を開始した。実験は1匹のラットに対し、以下の3実験を、乱数表を用いて無作為に決定し行った。
・標準飼料を摂取させた後に生理的食塩水を投与した実験（以下、標準食生理的食塩水摂取群）；
・標準飼料を摂取させた後に20％アルコール溶液を投与した実験（以下、標準食アルコール摂取群）；及び
・40％クルクミン混合食を摂取させた後に20％アルコール溶液を投与した実験（以下、クルクミン混合食アルコール摂取群）。
【００４４】
実験は、3実験ともに以下のように行った。
・絶飲絶食…摂取18時間前
・飼料投与…摂取3時間30分前
・絶飲絶食開始…摂取1時間30分前
・測定開始…摂取1時間前
・生理的食塩水又は20％アルコール溶液摂取（5分間かけて投与）
・測定終了…摂取3時間後
【００４５】
［3-2：実験環境］
実験は、室温24℃に管理されたチャンバー（TABAI ESPEC）内で行った。
【００４６】
［3-3：飼料投入］
実験当日の8時30分〜10時30分の2時間、以下の種類の飼料を実験毎に摂取させた。
・標準食生理的食塩水摂取群：標準飼料
・標準食アルコール摂取群：標準飼料
・クルクミン混合食アルコール摂取群：40％クルクミン混合飼料
【００４７】
［3-4：データの記録］
生体電気アンプで増幅した海馬神経活動の電位は、8chモニター（VC-680G（株）日本光電）で原形波を確認した。海馬神経活動の出力は、A/D変換ボード（National InstrymentsSBC-68）を介してコンピューター（Dell XPS600）に取り込んだ。コンピュータでは、Recorder（Plexon Inc）にデータを記録した。
【００４８】
［3-5：データの解析］
Recorder（Plexon Inc）にて計測した1秒間に生じた海馬神経活動の発火頻度を、Offline Sorter（Plexon Inc）のコンポーネント解析によりノイズを計測値から外し、Neuroxplorer（Plexon Inc）にて、Excelデータに変換した。アルコール又は生理的食塩水投与による海馬神経活動の変化を比較するため、出現時間が比較的長く、出力信号が安定している、実験毎の投与前のNREM期の海馬神経活動を100％とし、変化率で示した。そして、5分間の平均値で示した。
【００４９】
有意差検定は二要因の分散（ANOVA）を用いて、実験内と実験間でそれぞれ行った。分散に差がある場合は、個々の平均値について多重比較検定（Fisher-LSD）を行った。
有意差検定は以下を行った。
・標準食生理的食塩水摂取群、標準食アルコール摂取群、40％クルクミン混合食アルコール摂取群それぞれにおいて摂取前の平均値との比較；
・標準食生理的食塩水摂取群と標準食アルコール摂取群との比較；
・標準食生理的食塩水摂取群と40％クルクミン混合食アルコール摂取群との比較；
・標準食アルコール摂取群と40％クルクミン混合食アルコール摂取群との比較。
【００５０】
クルクミン摂取後の海馬CA1領域の神経活動の経時変化を図1に示す。
図1に示すように、標準食生理的食塩水摂取群の海馬CA1神経活動は、アルコール摂取前と比較して、有意な差は見られなかった。
【００５１】
標準食アルコール摂取群の海馬CA1神経活動は、アルコール摂取後7.5分で58±4％に低下したが、その後徐々に上昇し、摂取後177.5分後で88±7％に達し、アルコール摂取後2.5分〜177.5分で有意（P＜0.05）に低い値だった。
【００５２】
40％クルクミン混合食アルコール摂取群の海馬CA1神経活動は、アルコール摂取後7.5分後で69±6％に低下したが、その後徐々に上昇し、アルコール摂取前と比較して、アルコール摂取後2.5分〜152.5分で有意（P＜0.05）に低い値だった。
【００５３】
標準食アルコール摂取群は、標準食生理的食塩水摂取群と比較して、アルコール摂取後2.5分〜172.5分で有意（P＜0.05）に低い値だった。
【００５４】
40％クルクミン混合食アルコール摂取群は、標準食生理的食塩水摂取群と比較して、アルコール摂取後2.5分〜152.5分で有意（P＜0.05）に低い値だった。
【００５５】
40％クルクミン混合食アルコール摂取群は、標準食アルコール摂取群と比較して、アルコール摂取後62.5分〜122.5分及び162.5分〜172.5分で有意（P＜0.05）に高い値だった。
【００５６】
＜4. 実験2：血中クルクミン濃度の測定＞
［4-1：採血実験プロトコール］
薬物投与用カテーテル留置手術を行い、術後2日間の回復期を設け、実験を開始した。実験は1匹のラットで1実験行い、以下の2種類の対照群に分けて行った。
・標準飼料を摂取させ、20％アルコール溶液を投与した群（以下標準食アルコール摂取群とする）；及び
・40％クルクミン混合飼料を摂取させ、20％アルコール溶液を投与した群（以下クルクミン混合食アルコール摂取群とする）。
【００５７】
実験プロトコールに即したプロトコールは、以下の通りとした。
・絶食開始（18：00）…飼料投与14時間前
・採血1（7：50）…飼料投与10分前
・エサ投与（8：00）
・絶飲絶食開始（10：00）
・採血2（11：50）…アルコール投与10分前
・アルコール投与（12：00）
・採血3（12：30）…アルコール投与30分後
・採血4（13：00）…アルコール投与1時間後
・採血5（14：00）…アルコール投与2時間後
・採血6（15：00）…アルコール投与3時間後
・エサ，水自由摂取（15：00〜）
【００５８】
［4-2：実験方法］
上記のプロトコールに即して、採血を行った。その後、遠心分離を行い血漿をセラムチューブに入れ、-40℃の冷凍庫（PF-1000  東京理化器械（株））にて保存した。
【００５９】
[4-3：分析]
血漿中クルクミン濃度は、HPLC（アジレント・テクノロジー（株））にて測定した。HPLC測定条件は、カラム：L-column2 ODS（化学物質評価研究機構）、移動相：3%酢酸水、アセトニトリル、メタノール、流速：0.3ml/分、注入量：10μl、検出：425nmで行った。
【００６０】
クルクミン投与後の血漿中クルクミン濃度の経時変化を図2に示す。
40％クルクミン混合食アルコール摂取群のアルコール摂取前310分（飼料投入前）の血漿クルクミン濃度は、0μg/mLだったが、アルコール摂取前10分（飼料投入後230分）の血漿クルクミン濃度は0.22μg/mLに上昇し、アルコール摂取後180分で0.10μg/mLを維持していた。
【００６１】
統計検定の結果、40％クルクミン混合食アルコール摂取群の血漿クルクミン濃度は、アルコール摂取前310分（飼料投入前）と比較してアルコール摂取前10分（飼料投入後230分）、アルコール摂取後30分、60分、120分、180分で有意（P＜0.05）に高い値だった。
【図１】
2013166734.tif 000002
【図２】
2013166734.tif 000003