(57)【要約】【課題】  自動分析装置に備える分注装置において、微量の液体における分注精度は損なうことなく、幅広い分注量に対応可能な分注方法を提供すること。【解決手段】  吸引吐出手段を設けた分注部と、少なくとも前記分注部の昇降を自在に可能とする駆動部とを設けた、液体の分注を行なう分注装置において、前記駆動部による分注部の下降動作に割り当てる時間と前記分注部による液体の吸引動作に割り当てる時間との合計時間を固定した条件で、前記下降動作と前記吸引動作に割り当てる時間を、前記分注部による液体の吸引量に応じて決定し、前記決定した割り当て時間に基づき液体分注を行なうことで、前記課題を解決する。【選択図】  図２
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
吸引吐出手段を設けた分注部と、少なくとも前記分注部の昇降を自在に可能とする駆動部とを備えた、液体の分注を行なう分注装置による、液体の分注方法であって、
前記駆動部による分注部の下降動作に割り当てる時間と前記分注部による液体の吸引動作に割り当てる時間との合計時間を固定した条件で、前記下降動作と前記吸引動作に割り当てる時間を、前記分注部による液体の吸引量に応じて決定し、前記決定した割り当て時間に基づき液体の分注を行なう、前記方法。
【請求項２】
前記駆動部による分注部の下降動作に割り当てる時間と前記分注部による液体の吸引動作に割り当てる時間との合計時間を固定した条件で、
前記分注部により通常量の液体を分注するときの前記下降動作と前記吸引動作に割り当てる時間、および前記分注部により微量の液体を分注するときの前記下降動作と前記吸引動作に割り当てる時間を、それぞれ決定する際、
微量の液体を分注するときの前記下降動作に割り当てる時間を通常量の液体を分注するときの前記下降動作に割り当てる時間より長く割り当てる一方、微量の液体を分注するときの前記吸引動作に割り当てる時間を通常量の液体を分注するときの前記吸引動作に割り当てる時間より短く割り当てる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記駆動部による分注部の下降動作の際、前記分注部の接液状況による液面検知も同時に行なう、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
吸引吐出手段を設けた分注部と、少なくとも前記分注部の昇降を自在に可能とする駆動部とを備えた、液体の分注を行なう分注装置であって、
前記駆動部による分注部の下降動作に割り当てる時間と前記分注部による液体の吸引動作に割り当てる時間との合計時間を固定した条件で、前記下降動作と前記吸引動作に割り当てる時間を、前記分注部による液体の吸引量に応じて決定し、前記決定した割り当て時間に基づき液体の分注を行なうよう、前記分注部および前記駆動部を制御する制御部をさらに備えた、前記装置。
【請求項５】
前記分注部の接液状況を検知する液面検知部をさらに備えた請求項４に記載の分注装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、自動分析装置に備えた分注装置による液体の分注方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
種々の検査項目の１テスト分に対応する反応容器をサイクルタイムごとに供給する手段と、
前記反応容器への試料または試薬分注を行なう手段と、
前記反応容器を複数個収容し、前記反応容器に収容した溶液の反応を同時に処理可能な、反応手段と、
反応手段で反応後の溶液をサイクルタイムごとに測定し結果を出力する検出手段と、
を備えたシングルマルチ型自動分析装置が広く使用されている。前記分析装置を用いた測定では、検査項目が異なると、一般に異なる測定プロトコルが必要となる。そのため前記分析装置では、異なるプロトコルの全てを一律に許容できるようにタイムチャート（動作時間の割り当て）が設計されている。各手段は前記タイムチャートに従い、同期的かつ周期的に動作するよう制御される。
【０００３】
異なる測定プロトコルが要求する、試料分注量の広範囲な変動に対処するための装置の一例として、特許文献１に開示の装置がある。前記装置は、サンプリングに関わる処理工程、すなわちエア吸引−アームの移動−試料吸引−動作停止（待ち）−アームの移動−試料吐出−動作停止（待ち）−アームの移動−プローブ（ノズル）の洗浄、に至る工程に割り当てる時間の総和を一定としている。試料分注量が多い場合は、アーム移動速度またはエア吸引速度を速め、待ち時間を短縮することで、試料分注量が少ない場合と同じ総割り当て時間に収める。これにより、スループットの向上と試料分注制御の簡素化を図っている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２００７−２１２３９９号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
前述したように、シングルマルチ型自動分析装置は、異なる測定プロトコルの全てを一律に許容できるようにタイムチャートが設計されている。そのため試料吸引量が多量の場合における測定プロトコルでは、試料吸引に多くの時間が割り当てられる。それに伴い、プローブ（ノズル）を下方移動させる時間の割り当ては制限される。
【０００６】
試料や試薬などの液体を吸引し、反応容器に当該液体を吐出する分注装置は、通常
吸引吐出手段を設けた分注部（ノズル）と、
少なくとも前記分注部（ノズル）の昇降を自在に可能とする駆動部と、
を備えている。前記分注装置において、液体吸引量が多量の場合における測定プロトコルを採用すると、ノズルを下降動作させる時間が制限されるため、ノズルを下降させる速度は増大する。このためノズルを液面に浸漬させる際、吸引吐出手段による吸引を伴わない液体の侵入や、当該ノズル外側面への液体付着が生じる。この現象は、液体吸引量にかかわらず、ノズル下降速度が同じである限り生じるが、液体吸引量が少ないほど測定精度に及ぼす相対的影響は大きくなる。
【０００７】
本発明は、前記現象の解消を目的とするものである。すなわち本発明の目的は、統一したタイムチャートに基づき、液体（試料または試薬）の分注、試料と試薬との反応、反応液の検出、を自動で行なう自動分析装置に備える分注装置において、微量の液体における分注精度は損なうことなく、幅広い分注量に対応可能な分注方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
前記課題を解決するため、駆動部による分注部（ノズル）の下降動作、および分注部（吸引吐出手段）による液体吸引時間について検討を重ねた結果、本発明に到達した。
【０００９】
すなわち本発明の第一の態様は、
吸引吐出手段を設けた分注部と、少なくとも前記分注部の昇降を自在に可能とする駆動部とを備えた、液体の分注を行なう分注装置による、液体の分注方法であって、
前記駆動部による分注部の下降動作に割り当てる時間と前記分注部による液体の吸引動作に割り当てる時間との合計時間を固定した条件で、前記下降動作と前記吸引動作に割り当てる時間を、前記分注部による液体の吸引量に応じて決定し、前記決定した割り当て時間に基づき液体の分注を行なう、前記方法である。
【００１０】
また本発明の第二の態様は、
前記駆動部による分注部の下降動作に割り当てる時間と前記分注部による液体の吸引動作に割り当てる時間との合計時間を固定した条件で、
前記分注部により通常量の液体を分注するときの前記下降動作と前記吸引動作に割り当てる時間、および前記分注部により微量の液体を分注するときの前記下降動作と前記吸引動作に割り当てる時間を、それぞれ決定する際、
微量の液体を分注するときの前記下降動作に割り当てる時間を通常量の液体を分注するときの前記下降動作に割り当てる時間より長く割り当てる一方、微量の液体を分注するときの前記吸引動作に割り当てる時間を通常量の液体を分注するときの前記吸引動作に割り当てる時間より短く割り当てる、前記第一の態様に記載の方法である。
【００１１】
また本発明の第三の態様は、前記駆動部による分注部の下降動作の際、前記分注部の接液状況による液面検知も同時に行なう、前記第一または第二の態様に記載の方法である。
【００１２】
さらに本発明の第四の態様は、
吸引吐出手段を設けた分注部と、少なくとも前記分注部の昇降を自在に可能とする駆動部とを備えた、液体の分注を行なう分注装置であって、
前記駆動部による分注部の下降動作に割り当てる時間と前記分注部による液体の吸引動作に割り当てる時間との合計時間を固定した条件で、前記下降動作と前記吸引動作に割り当てる時間を、前記分注部による液体の吸引量に応じて決定し、前記決定した割り当て時間に基づき液体の分注を行なうよう、前記分注部および前記駆動部を制御する制御部をさらに備えた、前記装置である。
【００１３】
また本発明の第五の態様は、前記分注部の接液状況を検知する液面検知部をさらに備えた、前記第四の態様に記載の装置である。
【００１４】
以下、本発明を詳細に説明する。
【００１５】
本発明の分注方法および分注装置で分注する液体は、自動分析装置による測定で通常使用する液体であれば特に限定はなく、試料、試薬、分注水（試料の液性や粘性を均一するための液体）が例示できる。
【００１６】
本発明の装置における分注部としては、シリンジポンプといった液体を吸引吐出可能な手段を設けたパーマネントノズルや、シリンジポンプといった液体を吸引吐出可能な手段を設けたノズルヘッドにディスポーザブルチップを装着したものが例示できる。パーマネントノズルを用いた分注部は、分注毎にノズルを洗浄する必要があるものの、繰り返し使用できるためコスト面では好ましい。一方ディスポーザブルチップを用いた分注部は、試料の相互汚染（コンタミネーション）が防げるため、自動分析装置による信頼性の高い分析ができる点で好ましい。
【００１７】
なお、駆動部による分注部の下降動作の際、液面検知を行なうと、液体吸引を正確に行なえる点で好ましい。液面検知方法としては、本分野で通常用いられる、静電容量を利用した方法が例示できる。その場合、分注部自身が液面検知部として機能するよう、導電性材質を含む分注部とすると好ましい。パーマネントノズルを用いた分注部における、前記ノズルの好ましい態様として、導電性を有し、かつ長期間液体に接触しても腐食・変質しにくいステンレス鋼製の管体が例示できる。一方ディスポーザブルチップを用いた分注部における、前記チップの好ましい材質として、耐薬品性に優れた導電性プラスチック、例えばカーボン入りポリプロピレンや、金属メッキを施したプラスチックが例示できる。
【００１８】
本発明の分注方法は、駆動部による分注部の下降動作に割り当てる時間と分注部による液体の吸引動作に割り当てる時間との合計時間は固定にしつつ、前記下降動作と前記吸引動作に割り当てる時間を、分注部による液体の吸引量に応じて決定する（変動させる）ことを特徴としている。液体の吸引量に応じた、前記下降動作と前記吸引動作に割り当てる時間の決定（変動）は、吸引量に対しリニアに変動させてもよいし、ステップワイズに変動させてもよいが、ステップワイズに変動させたほうが制御が容易となるため好ましい。なお前記下降動作と前記吸引動作に割り当てる時間を決定する際、液体の吸引量が少ないほど前記下降動作に割り当てる時間を多くすると好ましい。その理由として、吸引量が少ないほど、前記下降動作に伴う、吸引吐出手段による吸引を伴わない液体の侵入や、吸引部外側面への液体付着の影響が相対的に大きくなるからである。具体例として、前記下降動作と前記吸引動作に割り当てる時間の決定（変動）を、通常量の液体を分注するときと微量の液体を分注するときの二段階で変動させる場合は、微量の液体を分注するときの前記下降動作に割り当てる時間を通常量の液体を分注するときの前記下降動作に割り当てる時間より長く割り当てる一方、微量の液体を分注するときの前記吸引動作に割り当てる時間を通常量の液体を分注するときの前記吸引動作に割り当てる時間より短く割り当てるようにすればよい。
【発明の効果】
【００１９】
本発明の分注方法は、吸引吐出手段を設けた分注部と、少なくとも前記分注部の昇降を自在に可能とする駆動部とを備えた、液体の分注を行なう分注装置において、前記駆動部による分注部の下降動作に割り当てる時間と前記分注部による液体の吸引動作に割り当てる時間との合計時間を固定した条件で、前記下降動作と前記吸引動作に割り当てる時間を、前記分注部による液体の吸引量に応じて決定し、前記決定した割り当て時間に基づき液体の分注を行なうことを特徴としている。
【００２０】
本発明の分注方法により、最大量の液体を吸引するために要する吸引吐出手段（例えばシリンジポンプ）の駆動時間と、微量の液体を吸引するために要する吸引吐出手段の駆動時間との差分の時間を、微量の液体を吸引するための前記下降動作に加えることができ、前記分注部の下降速度を低減させることができる。したがって、統一的なタイムチャート（時間制御）を採用しつつ、微量の液体を吸引する場合における、液面浸漬時の衝撃による、吸引吐出手段による吸引を伴わない液体の侵入や、吸引部外側面への液体付着を低減することができるため、微量液体吸引時の液体吸引精度の向上に貢献する。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】本発明の分注方法を利用した自動分析装置の構成例を示す模式図。
【図２】本発明の分注方法を利用した自動分析装置におけるタイムチャートの一例を示す図。（ａ）が通常量の試料を分注するときのタイムチャートであり、（ｂ）が微量の試料を分注するときのタイムチャートである。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
本発明の分注方法を利用した自動分析装置の一例を図１に示す。図１に示す自動分析装置１００は、
シリンジポンプ１３による吸引吐出手段を設けたピペットチップ１１を装着可能なノズルヘッド１２と、ピペットチップ１１を装着した状態でノズルヘッド１２を昇降（Ｚ軸動作）自在に駆動する分注アーム１４ａと、ピペットチップ１１を装着した状態でノズルヘッド１２を水平面（Ｘ軸、Ｙ軸もしくはθ軸動作）自在に駆動する分注アーム１４ｂと、ピペットチップ１１を装着したノズルヘッド１２に組み込まれた、静電容量により液面を検知する液面検知部１５と、を設けた分注装置１０と、
試料容器２０を設置する接地架台４０と、
反応容器３０と、
ピペットチップ１１を供給するピペットチップ供給部５０と、
使用済みのピペットチップを廃棄する、チップ外し治具６１を設けたピペットチップ廃棄部６０と、
分注水を供給する分注水供給部７０と、
を備えており、さらに分注手段１０には、
ノズルヘッド１２の下降操作に割り当てる時間とシリンジポンプ１３による液体吸引に割り当てる時間との合計時間を固定し、
シリンジポンプ１３による試料の吸引量に応じて、ノズルヘッド１２の下降操作に割り当てる時間とシリンジポンプ１３による試料吸引に割り当てる時間を決定し、
前記決定した割り当て時間に基づき、試料の分注を行なうよう制御する、
制御部１６も設けている。
【００２３】
図１の自動分析装置１００に備えた分注装置１０による試料分注の一例として、
分注アーム１４ｂによりノズルヘッド１２をピペットチップ供給部５０の位置に移動させ、
分注アーム１４ａによりノズルヘッド１２にピペットチップ１１を装着し、
分注アーム１４ｂによりピペットチップ１１を装着したノズルヘッド１２を分注水供給部７０の位置に移動させ、
分注アーム１４ａおよびシリンジポンプ１３により分注水を所定量吸引し、
分注アーム１４ｂによりピペットチップ１１を装着したノズルヘッド１２を試料容器２０の位置に移動させ、
分注アーム１４ａおよびシリンジポンプ１３により試料容器２０中の試料を所定量吸引し、
分注アーム１４ｂによりピペットチップ１１を装着したノズルヘッド１２を反応容器３０の位置に移動させ、
分注アーム１４ａおよびシリンジポンプ１３により吸引した試料および分注水を反応容器３０に吐出し、
分注アーム１４ｂによりピペットチップ１１を装着したノズルヘッド１２をピペットチップ廃棄部６０に移動させ、
治具６１によりノズルヘッド１２からピペットチップ１１を外し廃棄する、
方法があげられる。
【００２４】
図２は、シリンジポンプ１３により通常量または微量の試料を分注する際の、分注操作のタイムチャートを、通常量の試料を分注する場合（図２（ａ））と微量の試料を分注する場合（図２（ｂ））とで対比する形で示している。例えば、２０μＬ以上５０μＬ以下の通常量試料を分注する場合は、（ａ）に示すタイムチャートを使用し、５μＬ以上２０μＬ未満の微量試料を分注する場合は（ｂ）に示すタイムチャートを使用する。図２に示すタイムチャートは、図１に示す自動分析装置１００中、分注アーム１４ｂによるＹ軸操作、分注アーム１４ａによるＺ軸操作およびシリンジポンプ１３の操作に分けて記載しており、サイクルタイム１５秒間で０．１秒刻みの時間軸を有している。なお、図２に示すタイムチャートに記入した動作時間の意味は、その時間内に当該動作を実行し完了すればよいということであって、その時間内に当該動作を実行し続けなければならないという意味ではない。
【００２５】
図２に示すタイムチャートを用いて、図１に示す自動分析装置１００において、分注アーム１４ａによるピペットチップ１１の下降動作に割り当てる時間と、シリンジポンプ１３による試料吸引に割り当てる時間との配分を、試料吸引量に応じて変更した、本発明の分注方法を利用したときの操作手順を詳細に説明する。
【００２６】
（１）ピペットチップ１１の装着から試料容器２０への移動まで（（ａ）と（ｂ）とで共通の動作：０秒から８．３秒）
タイムチャート０．１秒から０．８秒までの０．７秒間で、分注アーム１４ｂによりノズルヘッド１２をＹ軸／Ｚ軸のホーム位置（不図示）からピペットチップ供給部５０に移動する。タイムチャート０．８秒から２．３秒までの１．５秒間で、分注アーム１４ａによりノズルヘッド１２の下降動作−ピペットチップ１１の装着−ピペットチップ１１を装着したノズルヘッド１２の上昇動作を行なう。タイムチャート２．３秒から３．０秒までの０．７秒間で分注アーム１４ｂによりＹ軸のホーム位置に一旦戻り、タイムチャート３．０秒から３．２秒までの０．２秒間で分注アーム１４ｂにより分注水供給部７０に移動する。ここで分注水とは、試料に所定量加えることで試料の液性や粘性を均一にし、測定結果を安定させるための水性液体をいう。
【００２７】
タイムチャート３．２秒から３．５秒までの０．３秒間でシリンジポンプ１３により空気を吸引する（吸引量は例えば６０μＬ）。ここで空気の吸引（エア吸引）操作を行なうのは、その後に吸引する分注水を、ピペットチップ１１内に残さず、完全に吐出するためである。タイムチャート３．５秒から３．７秒までの０．２秒間で分注アーム１４ａによりピペットチップ１１先端を分注水液面下の吸引深さまで浸漬する。タイムチャート３．７秒から４．３秒までの０．６秒間でシリンジポンプ１３により分注水を吸引（吸引量は例えば１２０μＬ）後、タイムチャート４．３秒から４．９秒までの０．６秒間で吸引した空気および分注水を吐出しピペットチップ１１内の軽い洗浄およびすすぎ（リンス）を行なう。ピペットチップ１１のリンス後、タイムチャート４．９秒から５．１秒までの０．２秒間で分注アーム１４ａによりＺ軸のホーム位置（不図示）に戻る。
【００２８】
タイムチャート５．１秒から５．４秒までの０．３秒間でシリンジポンプ１３によりエア吸引（吸引量は例えば６０μＬ）を行ない、０．２秒間動作停止（待ち）後、タイムチャート５．６秒から５．８秒までの０．２秒間で再び分注アーム１４ａによりピペットチップ１１先端を分注水液面下の吸引深さまで浸漬する。０．２秒間動作停止（待ち）後、タイムチャート６．０秒から６．６秒までの０．６秒間でシリンジポンプ１３により分注水を吸引（吸引量は例えば５０μＬ）する。０．５秒間動作停止（待ち）後、タイムチャート７．１秒から７．３秒までの０．２秒間で分注アーム１４ａによりピペットチップ１１を分注水液面下からＺ軸のホーム位置まで上昇させる。タイムチャート７．３秒から８．３秒までの１．０秒間で分注アーム１４ｂによりピペットチップ１１を装着したノズルヘッド１２を試料容器２０の位置（試料吸引位置）までＹ軸移動させる。
【００２９】
なお前述した、エア吸引（空気の吸引）後の待ち時間、分注水供給部７０における分注水浸漬後の待ち時間、分注水吸引後の待ち時間は、前記操作停止直後のバックラッシュ等の衝撃による吸引量のばらつきやノズル内の気液界面の乱れを避けることを目的に、状態が平衡化するまでの時間を確保したものである。以上（１）に示す、ピペットチップ１１のノズルヘッド１２への装着から試料容器２０の位置（試料吸引位置）へのＹ軸移動までの動作制御は試料の吸引量にかかわらず同じ制御が適用される。
【００３０】
（２）試料吸引のためのピペットチップ１１下降動作から試料吸引まで（（ａ）と（ｂ）とで異なる動作：８．３秒から９．９秒）
通常量（例えば、２０μＬ以上５０μＬ以下）の試料を分注する場合は、（ａ）に示すタイムチャートに基づき動作制御される。具体的には、タイムチャート８．３秒から８．９秒までの０．６秒間で液面検知部１５による液面検知を行ないつつ分注アーム１４ａによりピペットチップ１１を下降させ、ピペットチップ１１先端を吸引量に応じた深さまで浸漬させる。０．２秒間動作停止（待ち）後、タイムチャート９．１秒から９．９秒までの０．８秒間でシリンジポンプ１３により試料容器２０内の試料を一定量吸引する。
【００３１】
一方、微量（例えば、５μＬ以上２０μＬ未満）の試料を分注する場合は、（ｂ）に示すタイムチャートに基づき動作制御される。具体的には、液面検知部１５による液面検知および分注アーム１４ａによるピペットチップ１１の下降に１．０秒間（タイムチャート８．３秒から９．３秒まで）割り当て、シリンジポンプ１３による試料吸引に０．４秒間（タイムチャート９．５秒から９．９秒まで）割り当てる。すなわち、試料の吸引に要する時間は短縮し、短縮した分を液面検知およびピペットチップ１１下降動作に要する時間に回すことにより、液面検知時の衝撃による、シリンジポンプ１３の駆動を伴わない試料吸引またはピペットチップ１１外側面への試料付着を低減させることができる。
【００３２】
（３）試料吸引後の動作停止からピペットチップ１１廃棄まで（（ａ）と（ｂ）とで共通の動作：９．９秒から１５．０秒）
タイムチャート９．９秒から１０．４秒までの０．５秒間試料液面下での動作停止（待ち）後、タイムチャート１０．４秒から１１．０秒までの０．６秒間で分注アーム１４ａによりピペットチップ１１をＺ軸のホーム位置まで上昇させる。液だれ防止のためシリンジポンプ１３により０．１秒間エアを吸引後、タイムチャート１１．１秒から１１．９秒までの０．８秒間で分注アーム１４ｂによりピペットチップ１１を装着したノズルヘッド１２を反応容器３０の位置（試料分注位置）までＹ軸移動させる。タイムチャート１１．９秒から１２．２秒までの０．３秒間で分注アーム１４ａによりピペットチップ１１を分注高さまで下降させた後、タイムチャート１２．２秒から１２．８秒までの０．６秒間で吸引した試料および分注水を反応容器３０内に吐出する。
【００３３】
タイムチャート１２．８秒から１３．１秒までの０．３秒間で分注アーム１４ａによりピペットチップ１１をＺ軸のホーム位置まで上昇させた後、タイムチャート１３．１秒から１３．５秒までの０．４秒間で分注アーム１４ｂによりピペットチップ１１を装着したノズルヘッド１２をピペットチップ廃棄部６０の位置までＹ軸移動させる。タイムチャート１３．５秒から１３．９秒までの０．４秒間で分注アーム１４ａによりピペットチップ１１基端部をピペットチップ外し治具６１の下部まで下降後、タイムチャート１３．９秒から１４．０秒までの０．１秒間で分注アーム１４ｂにより治具６１と嵌合させ、タイムチャート１４．０秒から１４．２秒までの０．２秒間でノズルヘッド１２からピペットチップ１１を外しピペットチップ１１を廃棄する。最後にタイムチャート１４．２秒から１４．７秒までの０．５秒間で分注アーム１４ａ・１４ｂによりノズルヘッド１２をＹ軸／Ｚ軸のホーム位置に移動させる。以上（３）に示す、試料吸引後の動作停止からピペットチップ１１廃棄までの制御は、（１）と同様、試料の吸引量にかかわらず同じ制御が適用される。
【符号の説明】
【００３４】
１０：分注装置
１１：ピペットチップ
１２：ノズルヘッド
１３：シリンジポンプ
１４：分注アーム
１５：液面検知部
１６：制御部
２０：試料容器
３０：反応容器
４０：架台
５０：ピペットチップ供給部
６０：ピペットチップ廃棄部
６１：ピペットチップ外し治具
７０：分注水供給部
１００：自動分析装置
【図１】
2013134237.tif 000003
【図２】
2013134237.tif 000004