(57)【要約】      （修正有）【課題】商業的可能性を有しているブロッコリー植物の均一な品種の提供。【解決手段】ブロッコリー雑種RX05900099およびその親系統の種子および植物を提供する。即ち、ブロッコリー雑種RX05900099およびその親系統の植物、種子および組織培養物、ならびにかかる植物をそれ自身と、または別のブロッコリー植物、例えば別の遺伝子型を有する植物と交雑することにより作成されるブロッコリー植物を生産する方法、および、かかる交雑によって生産される種子および植物に関する。さらに、かかる植物の部分、例えば、花粉、胚珠、小花、花らい球、および植物の細胞を含む。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
その種子のサンプルが ATCC 受託番号 PTA-12482 の下に寄託されているブロッコリー系統 BRM-53-3944SI の少なくとも第一のセットの染色体を含むブロッコリー植物。
【請求項２】
その種子のサンプルが ATCC 受託番号 PTA-12482 の下に寄託されているブロッコリー系統 BRM-53-3944SI の少なくとも第一のセットの染色体を含む種子。
【請求項３】
自殖系統である、請求項１の植物。
【請求項４】
雑種である、請求項１の植物。
【請求項５】
自殖系統である、請求項２の種子。
【請求項６】
雑種である、請求項２の種子。
【請求項７】
該雑種植物が、その種子のサンプルが ATCC 受託番号 PTA-12603 の下に寄託されているブロッコリー雑種 RX 05900099 である、請求項４の植物。
【請求項８】
その種子のサンプルが ATCC 受託番号 PTA-12603 の下に寄託されているブロッコリー雑種 RX 05900099 の種子として定義される、請求項６の種子。
【請求項９】
系統 BRM-53-3944SI の種子として定義される、請求項２の種子。
【請求項１０】
請求項１の植物の植物体の部分。
【請求項１１】
葉、胚珠、小花、花粉、花らい球または細胞としてさらに定義される、請求項１０の植物体の部分。
【請求項１２】
請求項７のブロッコリー植物の全ての生理学的および形態学的特徴を有するブロッコリー植物。
【請求項１３】
請求項１の植物の再生可能な細胞の組織培養物。
【請求項１４】
胚、成長点、子葉、花粉、葉、葯、根、根端、雌ずい、花、種子および柄からなる群より選択される植物体の部分からの細胞またはプロトプラストを含む、請求項１３の組織培養物。
【請求項１５】
請求項１３の組織培養物から再生されるブロッコリー植物。
【請求項１６】
以下の工程を含む、請求項１の植物を栄養繁殖させる方法:
(a)増殖することができる組織を請求項１の植物から収集する工程; 
(b)該組織を培養して、増殖したシュートを得る工程; および
(c)該増殖したシュートを発根させて、発根した小植物体を得る工程。
【請求項１７】
該発根した小植物体から少なくとも第一の植物を生育させることをさらに含む、請求項１６の方法。
【請求項１８】
以下の工程を含む、所望の形質をブロッコリー系統に導入する方法:
(a)その種子のサンプルが ATCC 受託番号 PTA-12482 の下に寄託されている系統 BRM-53-3944SI の植物を、所望の形質を含む第二のブロッコリー植物と交雑して、F1 子孫を作成する工程;
(b)該所望の形質を含む F1 子孫を選択する工程; 
(c)該選択された F1 子孫を、系統 BRM-53-3944SI の植物と戻し交雑して、戻し交雑子孫を作成する工程; 
(d)該所望の形質ならびにブロッコリー系統 BRM-53-3944SI の生理学的および形態学的特徴を含む戻し交雑子孫を選択する工程; および
(e)工程 (c) および (d) を３回以上繰り返して、該所望の形質を含む選択された第４代以上の戻し交雑子孫を作成する工程。
【請求項１９】
請求項１８の方法によって作成されるブロッコリー植物。
【請求項２０】
付加された形質を含む植物を作成する方法であって、該形質を付与する導入遺伝子を、その種子のサンプルがそれぞれ ATCC 受託番号 PTA-12603 および ATCC 受託番号 PTA-12482 の下に寄託されている雑種 RX 05900099 または系統 BRM-53-3944SI の植物へ導入することを含む方法。
【請求項２１】
請求項２０の方法によって作成される植物。
【請求項２２】
導入遺伝子を含む、請求項１の植物。
【請求項２３】
該導入遺伝子が、雄性不稔、除草剤耐性、昆虫抵抗性、有害生物抵抗性、病害抵抗性、改変された脂肪酸代謝、環境ストレス耐性、改変された炭水化物代謝および改変されたタンパク質代謝からなる群より選択される形質を付与するものである、請求項２２の植物。
【請求項２４】
単一遺伝子座変換を含む、請求項１の植物。
【請求項２５】
該単一遺伝子座変換が、雄性不稔、除草剤耐性、昆虫抵抗性、有害生物抵抗性、病害抵抗性、改変された脂肪酸代謝、環境ストレス耐性、改変された炭水化物代謝および改変されたタンパク質代謝からなる群より選択される形質を付与するものである、請求項２４の植物。
【請求項２６】
以下の工程を含む、雑種 RX 05900099 または系統 BRM-53-3944SI の少なくとも１つに由来する植物の種子を生産する方法:
(a)雑種 RX 05900099 または系統 BRM-53-3944SI のブロッコリー植物を、それ自身または第二のブロッコリー植物と交雑する工程; ここで、該雑種および系統の種子のサンプルはそれぞれ ATCC 受託番号 PTA-12603 および ATCC 受託番号 PTA-12482 の下に寄託されている; および
(b)雑種 RX 05900099 または系統 BRM-53-3944SI に由来するブロッコリー植物の種子を形成させる工程。
【請求項２７】
以下の工程をさらに含む、請求項２６の方法:
(c)該雑種 RX 05900099 または BRM-53-3944SI に由来するブロッコリー種子から生育した植物を自殖して、雑種 RX 05900099 または系統 BRM-53-3944SI に由来するさらなるブロッコリー種子を生産する工程;
(d)工程(c)の雑種 RX 05900099 または系統 BRM-53-3944SI に由来するさらなるブロッコリー種子を生育させて、雑種 RX 05900099 または系統 BRM-53-3944SI に由来するさらなるブロッコリー植物を生産する工程; および
(e) (c) および (d) の交雑および生育工程を繰り返して、少なくとも第一の、雑種 RX 05900099 または系統 BRM-53-3944SI に由来するさらなるブロッコリー植物を生産する工程。
【請求項２８】
第二のブロッコリー植物が、ブロッコリー自殖系統である、請求項２６の方法。
【請求項２９】
系統 BRM-53-3944SI を系統 BRM-53-3950CMS と交雑することを含む請求項２６の方法であって、該系統の種子のサンプルがそれぞれ ATCC 受託番号 PTA-12482 および ATCC 受託番号 PTA-12479 の下に寄託されているものである、方法。
【請求項３０】
以下の工程をさらに含む、請求項２７の方法:
(f)雑種 RX 05900099 または BRM-53-3944SI に由来するさらなるブロッコリー植物を第二のブロッコリー植物と交雑して、雑種子孫植物の種子を生産する工程。
【請求項３１】
請求項７の植物の植物体の部分。
【請求項３２】
葉、胚珠、小花、花粉、花らい球または細胞としてさらに定義される、請求項３１の植物体の部分。
【請求項３３】
請求項１の植物をそれ自身または第二のブロッコリー植物と交雑する工程、および種子を形成させる工程を含む、ブロッコリー種子を生産する方法。
【請求項３４】
以下の工程を含む、ブロッコリーを生産する方法:
(a)成熟まで栽培された請求項１の植物を得る工程; および
(b)該植物からブロッコリーを収穫する工程。
【請求項３５】
単一遺伝子座変換を含む子孫植物を作成する方法であって、単一遺伝子座変換を含む系統 BRM-53-3950CMS の植物を得る工程、および該植物を第二のブロッコリー植物と交雑する工程を含み、ここで、該系統 BRM-53-3950CMS の種子のサンプルが ATCC 受託番号 PTA-12479 の下に寄託されている、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は、2012年1月31日出願の米国仮出願第61/593,246号に基づく優先権を主張し、該仮出願の全開示事項は参照により本明細書に取り込まれる。
【０００２】
発明の分野
本発明は、植物育種の分野に関し、より具体的には、ブロッコリー雑種 RX 05900099 ならびに親ブロッコリー系統 BRM-53-3944SI および BRM-53-3950CMS の作出に関する。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
野菜育種の目標は、様々な望ましい形質を単一の品種/雑種の中に結集させることである。かかる望ましい形質としては、より高い収量、昆虫または病気に対する抵抗性、環境ストレスに対する耐性および栄養価を含む、生産者および/または消費者にとって有益と考えられるあらゆる形質が挙げられる。
【０００４】
育種技術は、植物の受粉方法を利用するものである。２つの一般的な受粉方法がある: ある花の花粉が同じ花または同じ植物もしくは植物品種の別の花に移動する場合、植物は自家受粉する。花粉が異なる植物品種の花からのものである場合、植物は他家受粉する。
【０００５】
自家受粉し、何世代にもわたってタイプについて選択された植物は、ほとんど全ての遺伝子座においてホモ接合性となり、固定された(true breeding)子孫、すなわちホモ接合性植物の均一な集団を生成する。異なる遺伝子型を有する２つのホモ接合性植物間の交雑は、多くの遺伝子座がヘテロ接合性である雑種植物の均一な集団を生成する。逆に、各々が多数の遺伝子座においてヘテロ接合性である２つの植物の交雑は、遺伝的に異なっており均一でない雑種植物の集団を生成する。こうして得られる非均一性により、能力は予測不可能なものになる。
【０００６】
均一な品種の作出には、ホモ接合性の自殖性植物の作出、これら自殖性植物の交雑、および該交雑の評価が必要である。系統育種および反復選抜は、育種集団から自殖性植物を作出するために用いられている育種方法の例である。これら育種方法は、２以上の植物または他の様々な広範囲の源からの遺伝的背景を集めて育種プールとし、該プールから、自殖および所望の表現型の選択によって新たな系統および雑種が作出される。新たな系統および雑種は、それらのうちいずれが商業的可能性を有しているかを決定するために評価される。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
発明の概要
一つの側面において、本発明は RX 05900099 と命名された雑種ブロッコリー植物、ブロッコリー系統 BRM-53-3944SI またはブロッコリー系統 BRM-53-3950CMS を提供する。かかる植物の全ての 生理学的および形態学的特徴を有するブロッコリー植物も提供される。例えば花粉、胚珠、小花、花らい球、および植物の細胞を含む、これらブロッコリー植物の部分も提供される。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明の別の側面において、追加された遺伝形質を含むブロッコリー雑種 RX 05900099 ならびに/またはブロッコリー系統 BRM-53-3944SI および BRM-53-3950CMS の植物が提供される。該遺伝形質は、例えば優性または劣性アレルである遺伝子座を含み得る。本発明の一つの態様において、ブロッコリー雑種 RX 05900099 ならびに/またはブロッコリー系統 BRM-53-3944SI および BRM-53-3950CMS の植物は、単一遺伝子座変換(single locus conversion)を含むものとして定義される。本発明の特定の態様において、追加された遺伝子座は、１以上の形質、例えば除草剤耐性、昆虫抵抗性、病害抵抗性および改変された炭水化物代謝を付与する。さらなる態様において、形質は、戻し交雑によって系統のゲノム中に導入される天然の遺伝子、天然のまたは誘導された突然変異、または遺伝子組み換え技術によって植物またはそのいずれかの前の世代の先祖に導入される導入遺伝子によって付与され得る。形質転換によって導入される場合、遺伝子座は、単一の染色体位置に組み込まれる１以上の遺伝子を含み得る。
【０００９】
本発明はまた、ブロッコリー雑種 RX 05900099 ならびに/またはブロッコリー系統 BRM-53-3944SI および BRM-53-3950CMS の種子にも関する。本発明のブロッコリー種子は、特定の態様において、ブロッコリー雑種 RX 05900099 ならびに/またはブロッコリー系統 BRM-53-3944SI および BRM-53-3950CMS の本質的に均質なブロッコリー種子の集団として提供され得る。本質的に均質な種子の集団は、一般的に、実質的な数の他の種子を含まないものである。したがって、雑種 RX 05900099 ならびに/またはブロッコリー系統 BRM-53-3944SI および BRM-53-3950CMS の種子は、本発明の特定の態様において、全種子の少なくとも約 98%、99% またはそれ以上を含む、全種子の少なくとも約 97% を形成するものとして提供され得る。種子集団は、RX 05900099 と命名されたブロッコリー植物ならびに/またはブロッコリー系統 BRM-53-3944SI および BRM-53-3950CMS の本質的に均質な集団を提供するために、別々に生育させ得る。
【００１０】
本発明のさらに別の側面において、雑種 RX 05900099 のブロッコリー植物ならびに/またはブロッコリー系統 BRM-53-3944SI および BRM-53-3950CMS の再生可能な細胞の組織培養物が提供される。該組織培養物は、好ましくは、出発植物の生理学的および形態学的特徴の全てを発現することができるブロッコリー植物を再生することができ、かつ、出発植物と実質的に同じ遺伝子型を有する植物を再生することができるものである。雑種 RX 05900099 ならびに/またはブロッコリー系統 BRM-53-3944SI および BRM-53-3950CMS の生理学的および形態学的特徴のいくつかの例としては、本明細書内の表に示される形質が挙げられる。かかる組織培養物における再生可能な細胞は、例えば胚、成長点、子葉、花粉、葉、葯、根、根端、雌ずい、花、種子および柄から得られ得る。さらに、本発明は、本発明の組織培養物から再生されるブロッコリー植物、すなわち雑種 RX 05900099 ならびに/またはブロッコリー系統 BRM-53-3944SI および BRM-53-3950CMS の全ての生理学的および形態学的特徴を有する植物を提供する。
【００１１】
本発明のさらに別の側面において、ブロッコリー種子、植物およびその部分を生産する方法であって、第一の親ブロッコリー植物を第二の親ブロッコリー植物と交雑することを一般的に含み、該第一または第二の親ブロッコリー植物の少なくとも一方がブロッコリー系統 BRM-53-3944SI またはブロッコリー系統 BRM-53-3950CMS の植物である方法が提供される。これらの方法は、雑種ブロッコリー種子または植物を調製するための方法であって、第一のブロッコリー植物を異なる別個の遺伝子型を有する第二のブロッコリー植物と交雑して、その親の一方としてブロッコリー系統 BRM-53-3944SI またはブロッコリー系統 BRM-53-3950CMS の植物を有する雑種を提供する方法としてさらに例証され得る。これらの方法において、交雑は種子の生産をもたらす。種子生産は、該種子が回収されるか否かに関わらず生じる。
【００１２】
本発明の一つの態様において、"交雑"における最初の工程は、例えば媒介昆虫によって媒介される受粉が起こるよう、多くの場合近接させて、第一および第二の親ブロッコリー植物の種子を播くことを含む。あるいは、花粉は手作業で移動させてもよい。植物が自家受粉する場合、受粉は、植物の栽培以外に人間の直接的介入を必要とすることなく起こり得る。
【００１３】
第二の工程は、第一および第二の親ブロッコリー植物の種子を、花を有する植物となるまで栽培しまたは生育させることを含み得る。第三の工程は、例えば花を除雄すること(即ち、花粉を死滅させるかまたは除去すること)によって、植物の自家受粉を防止することを含み得る。
【００１４】
雑種交雑の第四の工程は、第一および第二の親ブロッコリー植物の間の他家受粉を含み得る。さらに別の工程は、親ブロッコリー植物の少なくとも一方から種子を回収することを含む。回収された種子は、ブロッコリー植物または雑種ブロッコリー植物を生産するために生育させることができる。
【００１５】
本発明はまた、第一の親ブロッコリー植物を第二の親ブロッコリー植物と交雑することを含み、該第一または第二の親ブロッコリー植物の少なくとも一方がブロッコリー雑種 RX 05900099 ならびに/またはブロッコリー系統 BRM-53-3944SI および BRM-53-3950CMS の植物である方法によって生産されるブロッコリー種子および植物を提供する。本発明の一つの態様において、該方法によって生産されるブロッコリー種子および植物は、本発明に従ってある植物を別の異なる植物と交雑することによって生産される一代(F1)雑種のブロッコリー種子および植物である。本発明はさらに、かかる F1 雑種ブロッコリー植物の植物体の部分、およびその使用方法を考慮する。したがって、本発明の特定の例示的態様は、F1 雑種ブロッコリー植物およびその種子を提供する。
【００１６】
さらに別の側面において、本発明は、雑種 RX 05900099 ならびに/またはブロッコリー系統 BRM-53-3944SI および BRM-53-3950CMS に由来する植物を生産する方法であって、以下の工程を含む方法を提供する: (a) 雑種 RX 05900099 ならびに/またはブロッコリー系統 BRM-53-3944SI および BRM-53-3950CMS に由来する子孫植物を作成する工程であって、雑種 RX 05900099 ならびに/またはブロッコリー系統 BRM-53-3944SI および BRM-53-3950CMS の植物を第二の植物と交雑することを含む工程; および (b) 該子孫植物をそれ自身または第二の植物と交雑して後代の子孫植物の種子を生産する工程。さらなる態様において、該方法は以下の工程をさらに含み得る: (c) 該後代の子孫植物の種子から後代の子孫植物を生育させ、該後代の子孫植物をそれ自身または第二の植物と交雑する工程; および、該工程をさらに 3-10 世代の間反復して雑種 RX 05900099 ならびに/またはブロッコリー系統 BRM-53-3944SI および BRM-53-3950CMS に由来する植物を生産する工程。雑種 RX 05900099 ならびに/またはブロッコリー系統 BRM-53-3944SI および BRM-53-3950CMS に由来する植物は自殖系統であり得、上記反復される交雑工程は、自殖系統を作出するのに十分な自殖を含むものとして定義し得る。該方法において、工程 (b) および (c) に従って継続される交雑の間、工程 (c) から得られる特定の植物を選択することが望ましい場合もある。１以上の望ましい形質を有する植物を選択することにより、雑種 RX 05900099 ならびに/またはブロッコリー系統 BRM-53-3944SI および BRM-53-3950CMS に由来し、該系統/雑種の該望ましい形質のいくつかのみならず潜在的に他の選択された形質をも有する植物が得られる。
【００１７】
特定の態様において、本発明は、以下の工程を含む、食品または飼料を生産する方法を提供する: (a) 成熟まで栽培された、ブロッコリー雑種 RX 05900099 ならびに/または ブロッコリー系統 BRM-53-3944SI および BRM-53-3950CMS の植物を得る工程、および (b) 該植物の組織を回収する工程。
【００１８】
本発明のさらに別の態様において、ブロッコリー雑種 RX 05900099 ならびに/またはブロッコリー系統 BRM-53-3944SI および BRM-53-3950CMS の遺伝的相補体(genetic complement)が提供される。"遺伝的相補体"の語句は、その発現が表現型、本願においてはブロッコリー植物または該植物の細胞もしくは組織の表現型を規定する、ヌクレオチド配列の集合体をいうために用いられる。したがって、遺伝的相補体は細胞、組織または植物体の遺伝的構成を表すものであり、雑種の遺伝的相補体は雑種の細胞、組織または植物体の遺伝的構成を表す。したがって、本発明は、本明細書に開示するブロッコリー植物の細胞の遺伝的相補体を有するブロッコリー植物細胞、ならびにかかる細胞を含む植物、種子および植物体を提供する。
【００１９】
植物の遺伝的相補体は、遺伝マーカーのプロファイルによって、および遺伝的相補体の発現に特徴的な表現型形質の発現、例えばアイソザイム分類プロファイルによって評価し得る。雑種 RX 05900099 ならびに/またはブロッコリー系統 BRM-53-3944SI および BRM-53-3950CMS を、多くの周知の技術、例えば単純配列長多型(Simple Sequence Length Polymorphisms)(SSLPs)(Williams et al.、Nucleic Acids Res.、1 8:6531 6535、1990)、ランダム増幅多型DNA(Randomly Amplified Polymorphic DNAs)(RAPDs)、DNA増幅フィンガープリンティング(DNA Amplification Fingerprinting)(DAF)、配列特性増幅領域(Sequence Characterized Amplified Regions)(SCARs)、任意プライムポリメラーゼ連鎖反応(Arbitrary Primed Polymerase Chain Reaction)(AP-PCR)、増幅断片長多型(Amplified Fragment Length Polymorphisms)(AFLPs)(引用によりその全体が本明細書中に具体的に取り込まれる EP 534 858)、および一塩基多型(Single Nucleotide Polymorphisms)(SNPs)(Wang et al.、Science、280:1077-1082、1998)のいずれかによって同定できることが理解される。
【００２０】
さらに別の側面において、本発明は、本発明のブロッコリー植物の半数体遺伝的相補体と第二のブロッコリー植物、好ましくは別の異なるブロッコリー植物の半数体遺伝的相補体との組み合わせによって形成される、ブロッコリー植物の細胞、組織、植物体および種子に代表される雑種遺伝的相補体を提供する。別の側面において、本発明は、本発明の雑種遺伝的相補体を含む組織培養物から再生されるブロッコリー植物を提供する。
【００２１】
さらに別の側面において、本発明は、ブロッコリー雑種 RX 05900099 ならびに/またはブロッコリー系統 BRM-53-3944SI および BRM-53-3950CMS の植物の遺伝子型を決定する方法であって、該植物のゲノム中において少なくとも第一の多型を検出することを含む方法を提供する。該方法は、特定の態様において、植物のゲノム中における複数の多型を検出することを含み得る。該方法は、複数の多型を検出する工程の結果をコンピュータ読み取り可能な媒体上で選別することをさらに含み得る。本発明はさらに、かかる方法によって生成されるコンピュータ読み取り可能な媒体を提供する。
【００２２】
本発明の一つの側面に関して本明細書中に記載したあらゆる態様は、特に断りのない限り、本発明の他の側面にも適用される。
【００２３】
"約"の用語は、ある値が、該値を決定するために採用された装置または方法についての平均の標準偏差を含むことを示すために用いられる。特許請求の範囲における"または"の用語の使用は、選択肢のみに言及することが明示されるか、または選択肢が相互に排他的である場合を除き、"および/または"を意味するために用いられる。特許請求の範囲において、"含む"の用語または他の開放型用語(open language)と共に用いる場合、特に断りのない限り、"ある"および"ひとつの"の用語は"１つ以上"を意味する。"含む"、"有する"および"包含する"の用語は、開放型の連結動詞である。これらの動詞の１以上のあらゆる形態または時制、例えば"含む"、"含んでいる"、"有する"、"有している"、"包含する"および"包含している"もまた開放型である。例えば、１以上の工程を"含む"、"有する"または"包含する"いかなる方法も、それら１以上の工程のみを有するものには限定されず、他の記載されていない工程をもカバーする。同様に、１以上の形質を"含む"、"有する"または"包含する"いかなる植物も、それら１以上の形質のみを有するものには限定されず、他の記載されていない形質をカバーする。
【００２４】
本発明の他の目的、特徴および利点は、以下の詳細な説明から明らかになるであろう。しかし、本発明の精神および範囲内における様々な変更および改変がかかる詳細な説明から当業者にとって明らかなものとなるため、該詳細な説明および提供されるいかなる具体例も、本発明の特定の態様を示すものではあるが、説明のみを目的として提供されているものであることは理解されるべきである。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
発明の詳細な説明
本発明は、ブロッコリー雑種 RX 05900099 ならびに/またはブロッコリー系統 BRM-53-3944SI および BRM-53-3950CMS の植物、種子および派生物に関する方法および組成物を提供する。雑種 RX 05900099 は、親系統 BRM-53-3944SI および BRM-53-3950CMS の交雑によって生産された。該親系統は、環境の影響の範囲内で均一性および安定性を示す。該親系統を交雑することにより、雑種 RX 05900099 の均一な植物を得ることができる。
【００２６】
雑種 RX 05900099 は、隆起した(raised)花らい球を有さないが、収穫が容易なきれいな茎を有する。雑種 RX 05900099 は比較的均一に成熟するため、標準的なブロッコリー品種と比較して収穫時の切断(harvest cut)をあまり必要としない。均一な状態においては、一回の(機械)収穫すら選択肢となる。
【００２７】
A. ブロッコリー雑種 RX 05900099 の起源および育種履歴
雑種 RX 05900099 の親は、BRM-53-3944SI および BRM-53-3950CMS である。
【００２８】
BRM 53-3950CMS としても知られる親系統 BRM-53-3950CMS は、以下の育種工程によって作出された:
【００２９】
2013153746.tif 000002
【００３０】
BRM 53-3944SI としても知られる親系統 BRM-53-3944SI は、以下の育種工程によって作出された:
【００３１】
2013153746.tif 000003
【００３２】
B. ブロッコリー雑種 RX 05900099、ブロッコリー系統 BRM-53-3944SI およびブロッコリー系統 BRM-53-3950CMS の生理学的および形態学的特徴
本発明の一つの側面において、ブロッコリー雑種 RX 05900099 およびその親系統の生理学的および形態学的特徴を有する植物が提供される。かかる植物の生理学的および形態学的特徴の説明を、表 1-3 に示す。
【００３３】
【表１−１】
2013153746.tif 000004
【表１−２】
2013153746.tif 000005
【表１−３】
2013153746.tif 000006
【表１−４】
2013153746.tif 000007
【表１−５】
2013153746.tif 000008
【００３４】
【表２−１】
2013153746.tif 000009
【表２−２】
2013153746.tif 000010
【表２−３】
2013153746.tif 000011
【表２−４】
2013153746.tif 000012
【表２−５】
2013153746.tif 000013
【表２−６】
2013153746.tif 000014
【００３５】
【表３−１】
2013153746.tif 000015
【表３−２】
2013153746.tif 000016
【表３−３】
2013153746.tif 000017
【表３−４】
2013153746.tif 000018
【表３−５】
2013153746.tif 000019
【表３−６】
2013153746.tif 000020
【００３６】
C. ブロッコリー植物の育種
本発明の一つの側面は、ブロッコリー系統 BRM-53-3944SI および BRM-53-3950CMS を交雑することを含む、ブロッコリー雑種 RX 05900099 の種子を生産する方法に関する。あるいは、本発明の他の態様において、雑種 RX 05900099、系統 BRM-53-3944SI、または系統 BRM-53-3950CMS は、それ自身と、またはあらゆる第二の植物と交雑させ得る。かかる方法は、雑種 RX 05900099 ならびに/またはブロッコリー系統 BRM-53-3944SI および BRM-53-3950CMS の増殖のために用いることができ、あるいは雑種 RX 05900099 ならびに/またはブロッコリー系統 BRM-53-3944SI および BRM-53-3950CMS に由来する植物を生産するために用いることができる。雑種 RX 05900099 ならびに/またはブロッコリー系統 BRM-53-3944SI および BRM-53-3950CMS に由来する植物は、特定の態様において、新規ブロッコリー品種の作出のために用い得る。
【００３７】
１以上の出発品種を用いる新品種の作出は、当該技術分野において周知である。本発明に従えば、雑種 RX 05900099 を交雑した後、かかる周知の方法に従って複数世代にわたる育種を行うことによって、新品種を作出し得る。新品種は、あらゆる第二の植物との交雑によって作出し得る。新規系統を作出するために交雑すべき第二の植物を選択する際には、それ自身が１以上の選択された望ましい特徴を示すか又は雑種組合せにおいて望ましい特徴を示す植物を選択することが望ましい場合もある。最初の交雑を行った後、自殖および選択を行って新品種を作出する。均一な系統の作出のためには、５世代以上の自殖および選択を行うことが多い。
【００３８】
新品種の均一な系統は、倍加半数体の方法によっても作出し得る。この技術は、複数世代の自殖および選択を必要とせずに、固定された系統の作出を可能にする。この方法においては、固定された系統をわずか１世代で作出することができる。半数体胚は、小胞子、花粉、葯培養または子房培養から作成し得る。次いで、半数体胚は、自発的に、又は化学処理(例えばcolchicine処理)によって、倍加し得る。あるいは、半数体胚を半数体植物へと生育させて、染色体倍加を誘導する処理を行っても良い。いずれの場合においても、稔性のホモ接合性植物が得られる。本発明において、ホモ接合性系統を得るために、かかる技術のいずれかを本発明の植物およびその子孫に関して用いることができる。
【００３９】
自殖性植物を改良するために戻し交雑を用いることもできる。戻し交雑は、特定の望ましい形質を、１つの自殖性または非自殖性の源から、該形質を欠いている自殖系統へ移す。これは、例えば、優れた自殖系統(A)(反復親)を、対象とする形質に関する１以上の適切な遺伝子座を有するドナー自殖系統(非反復親)に最初に交雑することによって達成することができる。次いで、かかる交雑の子孫を優れた反復親(A)と戻し交雑し、その後、得られた子孫を非反復親から移すべき所望の形質について選択する。所望の形質についての選択を伴う５世代以上の戻し交雑の後、子孫は移入された特徴を有するが、ほとんどの又はほぼ全ての他の遺伝子座に関して優れた親と同様である。移入された形質に関して純粋な育種子孫を得るため、最後の戻し交雑世代を自殖するのがよい。
【００４０】
本発明の植物は、該植物の遺伝的背景の非常に優れた特性に基づく新規系統の作出に特に適している。新規ブロッコリー系統を作出するために RX 05900099 ならびに/またはブロッコリー系統 BRM-53-3944SI および BRM-53-3950CMS と交雑すべき第二の植物を選択する際には、通常、それ自身が１以上の選択された望ましい特徴を示すか又は雑種組合せにおいて望ましい特徴を示す植物を選択することが好ましい。望ましい形質の例としては、特定の態様において、高い種子収量、高い種子発芽、実生の生命力、高い収量、病原耐性または抵抗性、ならびに土壌および気候条件への適応性が挙げられる。本発明によって作出されるブロッコリー植物の新規系統に導入し得る形質の他の例は、消費者志向の形質、例えば花らい球の形状、栄養価および食味である。
【００４１】
D.本発明のさらなる態様
本発明の特定の態様において、少なくとも第一の所望の遺伝形質を含むよう改変された本明細書に記載される植物が提供される。かかる植物は、一つの態様において、戻し交雑と呼ばれる植物育種技術によって作出し得るものであり、ここで、戻し交雑技術によって植物に移入される遺伝子座に加えて、ある品種の本質的に全ての形態学的および生理学的特徴が回復される。本明細書において用いる一遺伝子座変換植物(single locus converted plant)の用語は、戻し交雑と呼ばれる植物育種技術によって作出されるブロッコリー植物をいい、ここで、戻し交雑技術によってある品種に移入される単一の遺伝子座に加えて、該品種の本質的に全ての形態学的および生理学的特徴が回復される。本質的に全ての形態学的および生理学的特徴とは、戻し交雑または導入遺伝子の直接導入の間に生じ得る偶然の変異形質以外の、同じ環境において比較した場合に違いを示す(otherwise present)植物の特徴が回復されることを意味する。
【００４２】
既存の品種を改良するため、又は既存の品種に特徴を導入するために、戻し交雑法を本発明と共に用いることができる。所望の特徴に関する遺伝子座を提供する親ブロッコリー植物は、非反復親またはドナー親と称される。かかる用語は、非反復親が戻し交雑プロトコールにおいて一度だけ用いられ、反復されないことを意味する。非反復親からの１以上の遺伝子座が移入される親ブロッコリー植物は、戻し交雑プロトコールにおいて数巡の間用いられるため、反復親として知られる。
【００４３】
通常の戻し交雑プロトコールにおいては、対象とする元の品種(反復親)を、移入すべき対象とする単一の遺伝子座を保有する第二の品種(非反復親)と交雑する。次いで、かかる交雑から得られた子孫を反復親と再度交雑し、非反復親から移入された単一の遺伝子座に加えて変換された植物において反復親の本質的に全ての形態学的および生理学的特徴が回復されたブロッコリー植物が得られるまで、該工程を繰り返す。
【００４４】
適切な反復親の選択は、戻し交雑手法の成功のために重要な工程である。戻し交雑プロトコールの目的は、元の品種における単一の形質または特徴を変化させるか又は置換することである。これを達成するため、所望の遺伝子以外の残部の本質的に全てを保持し、それにより元の品種の所望の生理学的および形態学的構成を保持しつつ、反復品種の単一の遺伝子座を、非反復親からの所望の遺伝子座によって改変または置換する。特定の非反復親の選択は、戻し交雑の目的に依存する; 主な目的の一つは、何らかの商業的に望ましい形質を植物に付加することである。正確な戻し交雑プロトコールは、変化させる特徴または形質、ならびに反復および非反復親の間の遺伝的距離に依存する。戻し交雑法は、移入される特徴が優性のアレルである場合には単純化されるが、劣性のアレル、または付加的(additive)アレル(劣性および優性の間)も移入することができる。この場合、所望の特徴がうまく移入されたかどうかを決定するため、子孫の検定を導入することが必要となり得る。
【００４５】
一つの態様において、本明細書に記載される植物が反復親である戻し交雑の子孫ブロッコリー植物は、(i)非反復親からの所望の形質および(ii)同じ環境条件において生育させた場合に 5% の有意性レベルで決定される、反復親の全ての生理学的および形態学的特徴を含む。
【００４６】
新品種は、２種より多くの親から作出することもできる。改変戻し交雑として知られる方法は、戻し交雑の間に異なる反復親を用いる。改変戻し交雑は、元の反復親を特定のより望ましい特徴を有する品種によって置換するために用いることができ、あるいは、複数の親を用いて、各々から異なる望ましい特徴を得ることもできる。
【００４７】
特定の形質に関連する分子マーカーの開発により、さらなる形質を、例えば本明細書に記載される確立された生殖系列に付加することが可能であり、最終的な結果として、新しい１または複数の形質の付加を有する実質的に同じ基礎的遺伝資源(germplasm)が得られる。例えば Moose and Mumm、2008 (Plant Physiology、147: 969-977)等に記載される分子育種は、単一または複数の形質または QTL を精鋭(elite)系統に組み込むためのメカニズムを提供する。かかる分子育種により促進される、精鋭系統への１または複数の形質の移動は、隣接または関連するマーカーのアッセイを用いる取り込まれたゲノム断片の同定のメカニズムによる、対象とする特定の形質に関連する特定のゲノム断片の精鋭系統への組み込みを含み得る。本明細書に記載される態様において、例えば、１つ、２つ、３つまたは４つのゲノム上の座を、かかる方法によって精鋭系統へ組み込み得る。追加の遺伝子座を含むこの精鋭系統を別の親精鋭系統とさらに交雑して雑種子孫を作成する場合、少なくとも８つの別々の追加の遺伝子座を該雑種に組み込むことができる。これらの追加の遺伝子座は、例えば、病害抵抗性等の形質または果実品質の形質を付与し得る。一つの態様において、各々の遺伝子座は別々の形質を付与し得る。別の態様において、雑種において形質を付与するために、遺伝子座は、ホモ接合性であって且つ各親系統に存在する必要がある場合もある。さらに別の態様において、所望の形質の単一の頑強な表現型を付与するために、複数の遺伝子座を組み合わせることができる。
【００４８】
新規自殖系統の作出においては通常選択されないが戻し交雑技術によって改良することができる多くの単一遺伝子座形質が同定されている。単一遺伝子座形質は、遺伝子組み換えによるものであっても、そうでなくてもよい; これらの形質の例としては、これらに限定されないが、除草剤抵抗性、細菌性、真菌性またはウイルス性病害に対する抵抗性、昆虫抵抗性、改変された脂肪酸または炭水化物代謝、および変化した栄養価が挙げられる。これらは、通常核を介して遺伝する遺伝子を含む。
【００４９】
単一の遺伝子座が優性形質として働く場合、直接選択を適用し得る。かかる選択工程のため、戻し交雑の前に、最初の交雑の子孫をウイルス抵抗性および/または対応する遺伝子の存在についてアッセイする。選択により、所望の遺伝子および抵抗性形質を有さないあらゆる植物が排除され、該形質を有する植物のみがその後の戻し交雑において用いられる。次いで、かかる工程を、全てのさらなる戻し交雑世代について反復する。
【００５０】
育種のためのブロッコリー植物の選択は必ずしも植物の表現型に依存するわけではなく、代わりに遺伝学的調査に基づくものであってもよい。例えば、目的の形質に遺伝的に密接に連鎖する適切な遺伝マーカーを利用することができる。これらのマーカーの１つを、特定の交雑の子孫における形質の有無を同定するために用いることができ、また、継続される育種の間、子孫の選択において用いることができる。この技術は一般に、マーカー利用選抜(marker assisted selection)と称される。植物における目的の形質の相対的有無を同定することができるあらゆる他のタイプの遺伝マーカーまたは他のアッセイも、育種にとって有用である。マーカー利用選抜の手順は、当該技術分野において周知である。かかる方法は、劣性形質および可変性の表現型の場合、あるいは常套のアッセイがより高価であるか、時間を要するか、もしくは他に不利な点を有する場合に、特に有用である。本発明において用い得る遺伝マーカーのタイプとしては、必ずしもこれらに限定されないが、単純配列長多型(SSLP)(Williams et al.、Nucleic Acids Res.、1 8:6531 6535、1990)、ランダム増幅多型DNA(RAPD)、DNA増幅フィンガープリンティング(DAF)、配列特性増幅領域(SCAR)、任意プライムポリメラーゼ連鎖反応(AP-PCR)、増幅断片長多型(AFLP)( 引用によりその全体が本明細書中に具体的に取り込まれる EP 534 858)、および一塩基多型(SNP)(Wang et al.、Science、280:1077-1082、1998)が挙げられる。
【００５１】
E.遺伝子工学によって得られる植物
戻し交雑によって、および直接的に植物に導入することができる多くの有用な形質は、遺伝的形質転換技術によって導入されるものである。そのため、遺伝的形質転換は、選択された導入遺伝子を本発明の植物に挿入するために用いることができ、あるいは戻し交雑によって導入し得る導入遺伝子の調製のために用いることができる。当業者に周知であり且つ多くの作物種に適用可能な植物の形質転換方法としては、これらに限定されないが、エレクトロポレーション、微粒子銃、アグロバクテリウム媒介形質転換、およびプロトプラストによる直接DNA取り込みが挙げられる。
【００５２】
エレクトロポレーションによる形質転換を行うために、細胞の懸濁培養等の脆弱な組織、または胚形成カルスを用いてもよく、あるいは、未熟な胚または他の組織化された組織を直接形質転換してもよい。この技術においては、選択した細胞の細胞壁を、ペクチン分解酵素(ペクトリアーゼ(pectolyase))に暴露することによって部分的に分解するか、または制御された方法で組織を機械的に傷つけるのがよい。
【００５３】
形質転換 DNA セグメントを植物細胞へ送達するための効率的な方法は、微粒子銃である。この方法においては、粒子を核酸で被覆し、推進力によって細胞内へ送達する。代表的な粒子としては、タングステン、白金、および好ましくは金によって構成されるものが挙げられる。撃ち込み(bombardment)のために、懸濁状態の細胞をフィルターまたは固形培地上で濃縮する。あるいは、未熟な胚または他の標的細胞を固形培地上に準備してもよい。撃たれる細胞を、適切な距離でマクロプロジェクタイル(macroprojectile)停止プレートの下に置く。
【００５４】
加速によって植物細胞に DNA を送達する方法の例示的態様は、DNA または細胞で被覆された粒子を、スクリーン、例えばステンレス鋼または Nytex のスクリーンを通して、標的細胞で被覆された表面上へ推進させるために用い得る遺伝子銃粒子送達システム(Biolistics Particle Delivery System)である。該スクリーンは、粒子が受け手の細胞に大きな凝集塊として送達されないよう、該粒子を分散させる。微粒子銃の技術は広く適用可能であり、事実上あらゆる植物種を形質転換するために用い得るものである。
【００５５】
アグロバクテリウム媒介移入は、植物細胞へ遺伝子座を導入するために広く適用できる別のシステムである。該方法の利点は、DNA を植物組織全体に導入することができ、それによりプロトプラストからインタクトな植物を再生させる必要を回避できることである。近代のアグロバクテリウム形質転換ベクターは、大腸菌およびアグロバクテリウムにおいて複製する能力があり、容易な操作を可能にしている(Klee et al.、Bio-Technology、3(7):637-642、1985)。さらに、アグロバクテリウム媒介遺伝子導入用のベクターにおける近年の技術進歩により、様々なポリペプチドをコードする遺伝子を発現することができるベクターの構築を促進するよう、ベクター中の遺伝子および制限部位の配置が改良されている。記載されるベクターは、挿入されるポリペプチドコード遺伝子の直接発現のためのプロモーターおよびポリアデニル化部位と隣接する便利なマルチリンカー領域を有している。さらに、武装(armed)および非武装(disarmed)両方の Ti 遺伝子を含むアグロバクテリウムを、形質転換のために用いることができる。
【００５６】
アグロバクテリウム媒介形質転換が効率的である植物系統においては、遺伝子座移入の容易かつ定義された性質のため、これが最適な方法である。DNA を植物細胞へ導入するためのアグロバクテリウム媒介植物組込みベクターの使用は、当該技術分野において周知である(Fraley et al.、Bio/Technology、3:629-635、1985; 米国特許第5,563,055号)。
【００５７】
リン酸カルシウム沈殿、ポリエチレングリコール処理、エレクトロポレーション、およびこれらの処理の組み合わせに基づく方法を用いて、植物プロトプラストの形質転換を達成することもできる(例えば、Potrykus et al.、Mol. Gen. Genet.、199:183-188、1985; Omirulleh et al.、Plant Mol. Biol.、21(3):415-428、1993; Fromm et al.、Nature、312:791-793、1986; Uchimiya et al.、Mol. Gen. Genet.、204:204、1986; Marcotte et al.、Nature、335:454、1988 を参照)。植物の形質転換および外来性遺伝因子の発現は、Choi et al. (Plant Cell Rep.、13: 344-348、1994)および Ellul et al. (Theor. Appl. Genet.、107:462-469、2003)に例示されている。
【００５８】
多数のプロモーターが、これらに限定されないが、選択可能なマーカー、点数化可能なマーカー、有害生物(pest)耐性、病害抵抗性、栄養強化のための遺伝子、および農業上興味の対象となるあらゆる他の遺伝子を含むあらゆる目的遺伝子の、植物遺伝子発現のために有用である。植物遺伝子発現に有用な構成的プロモーターの例としては、これらに限定されないが、単子葉植物(例えば Dekeyser et al.、Plant Cell、2:591、1990; Terada and Shimamoto、Mol. Gen. Genet.、220:389、1990 を参照)を含むほとんどの植物組織において構成的な高レベル発現をもたらすカリフラワーモザイクウイルス(CaMV) P-35S プロモーター(例えば Odel et al.、Nature、313:810、1985 を参照); CaMV 35S プロモーターの直列重複バージョン、増強された 35S プロモーター(P-e35S)、ノパリン合成酵素プロモーター(An et al.、Plant Physiol.、88:547、1988)、オクトピン合成酵素プロモーター(Fromm et al.、Plant 細胞、1:977、1989); および米国特許第5,378,619号に記載のゴマノハグサモザイクウイルス(P-FMV)プロモーターおよび P-FMV のプロモーター配列が直列に重複した FMV プロモーターの増強されたバージョン(P-eFMV)、カリフラワーモザイクウイルス 19S プロモーター、サトウキビ桿状ウイルスプロモーター、ツユクサ黄斑ウイルスプロモーター、ならびに植物細胞において発現することが知られている他の植物 DNA ウイルスプロモーターが挙げられる。
【００５９】
環境、ホルモン、化学および/または発育シグナルに応答して調節される様々な植物遺伝子プロモーターを、植物細胞における作動可能に連結した遺伝子の発現のために用いることもでき、該プロモーターの例としては、(1) 熱 (Callis et al.、Plant Physiol.、88:965、1988)、(2) 光 (例えば、エンドウマメ rbcS-3A プロモーター、Kuhlemeier et al.、Plant Cell、1:471、1989; トウモロコシ rbcS プロモーター、Schaffner and Sheen、Plant Cell、3:997、1991; またはクロロフィルa/b-結合タンパク質プロモーター、Simpson et al.、EMBO J.、4:2723、1985)、(3) ホルモン、例えばアブシジン酸 (Marcotte et al.、Plant Cell、1:969、1989)、(4) 傷 (例えば、wunl、Siebertz et al.、Plant Cell、1:961、1989); または (5) 化学物質、例えばジャスモン酸メチル、サリチル酸、またはセーフナー(Safener)によって調節されるプロモーターが挙げられる。器官特異的プロモーター(例えば、Roshal et al.、EMBO J.、6:1155、1987; Schernthaner et al.、EMBO J.、7:1249、1988; Bustos et al.、Plant Cell、1:839、1989)を用いることも有利であり得る。
【００６０】
本発明の植物へ導入し得る代表的な核酸としてはinclude、例えば、別の種からの DNA 配列または遺伝子、または同じ種に由来するかもしくは同じ種の中に存在するが、伝統的な繁殖または育種技術ではなく遺伝子操作法によって受容細胞へ取り込まれる遺伝子または配列が挙げられる。しかし、“外来性”の用語は、形質転換される細胞に通常は存在しない遺伝子、またはおそらく単に形質転換する DNA セグメントもしくは遺伝子において見出されるのと同じ形や構造等において存在しない遺伝子、または通常存在し、天然の発現パターンとは異なる様式で発現させること、例えば、過剰発現させることを望む遺伝子をも意味する。したがって、“外来性”遺伝子または DNA の用語は、同様の遺伝子が受容細胞中に既に存在しているかどうかに関わらず、受容細胞に導入されるあらゆる遺伝子または DNA セグメントを意味する。外来性 DNA に含まれる DNA の型には、植物細胞に既に存在している DNA、別の植物からの DNA、異なる生物からの DNA、または外部で生成された DNA、例えば遺伝子のアンチセンスメッセージ(antisense message)を含む DNA 配列、または遺伝子の合成もしくは改変されたバージョンをコードする DNA 配列が含まれ得る。
【００６１】
数千とは言わないまでも数百の異なる遺伝子が知られており、これらは潜在的に本発明のブロッコリー植物へ導入することができるであろう。ブロッコリー植物へ導入するために選択し得る特定の遺伝子および対応する表現型の非限定的な例としては、昆虫耐性のための１以上の遺伝子、例えばバチルス・チューリンゲンシス(Bacillus thuringiensis)(B.t.)遺伝子、有害生物耐性、例えば真菌性病害制御のための遺伝子、除草剤耐性、例えばグリホサート耐性をもたらす遺伝子、および質の改良、例えば収量、栄養強化、環境またはストレス耐性、または植物の生理、生育、発達、形態または植物の生産物におけるあらゆる望ましい変化のための遺伝子が挙げられる。例えば、構造遺伝子には、これらに限定されないが、引用により全体が本明細書に取り込まれる WO 99/31248、引用により全体が本明細書に取り込まれる米国特許第5,689,052号、引用により全体が本明細書に取り込まれる米国特許第5,500,365号および第5,880,275号に記載される Bacillus 昆虫制御タンパク質遺伝子を含む、昆虫耐性をもたらすあらゆる遺伝子が包含される。別の態様において、構造遺伝子は、これらに限定されないが、引用により全体が本明細書に取り込まれる米国特許第5,633,435号に記載されるアグロバクテリウム CP4 株のグリホサート抵抗性 EPSPS 遺伝子 (aroA:CP4)、または引用により全体が本明細書に取り込まれる米国特許第5,463,175号に記載されるグリホサート酸化還元酵素遺伝子(GOX)を含む遺伝子によってもたらされる、除草剤グリホサートに対する耐性をもたらすことができる。
【００６２】
あるいは、DNA をコードする配列は、内在性遺伝子の発現の標的化された抑制を引き起こす非翻訳(non-translatable) RNA 分子をコードすることによって、例えばアンチセンスまたはコサプレッションに媒介されるメカニズムを介して、これらの表現型に影響を及ぼすことができる (例えば、Bird et al.、Biotech. Gen. Engin. Rev.、9:207、1991 を参照)。RNA は、所望の内在性 mRNA 産物を切断するよう操作された触媒性 RNA 分子(即ち、リボザイム)であってもよい(例えば、Gibson and Shillito、Mol. Biotech.、7:125,1997 を参照)。したがって、興味のある表現型または形態の変化をもたらすタンパク質または mRNA を生産するあらゆる遺伝子が、本発明の実行のために有用である。
【００６３】
F.定義
本明細書中の説明および表において、多くの用語が用いられる。明細書および特許請求の範囲の明確かつ一貫した理解を提供するために、以下の定義を提供する:
【００６４】
アレル: 遺伝子座の１以上の代替形態のいずれかであり、そのアレルのすべてが１つの形質または特徴に関連する。二倍体の細胞または生物においては、所与の遺伝子の２つのアレルが１対の相同染色体上の対応する遺伝子座を占める。
【００６５】
戻し交雑: 育種家が、雑種子孫、例えば一代雑種(F1)を、該雑種子孫の親の一方と繰り返し交雑する過程。戻し交雑は、ある遺伝的背景からの１以上の単一遺伝子座変換を別の遺伝的背景の中へ導入するために用いることができる。
【００６６】
交雑: ２つの親植物を交配すること。
【００６７】
他家受粉: 異なる植物からの２つの配偶子の結合による受精。
【００６８】
二倍体: ２セットの染色体を有する細胞または生物。
【００６９】
除雄(Emasculate): 植物の雄性器官を除去すること、または細胞質もしくは核の遺伝因子または雄性不稔をもたらす化学物質を用いて該器官を不活化すること。
【００７０】
酵素: 生物学的反応において触媒として働く分子。
【００７１】
F1 雑種: ２つの非同質遺伝子(nonisogenic)植物の交雑の第一世代子孫。
【００７２】
遺伝子型: 細胞または生物の遺伝的構成。
【００７３】
半数体: 二倍体における２セットの染色体のうちの１セットを有する細胞または生物。
【００７４】
連鎖: 同じ染色体上のアレルが、それらの伝達が独立である場合に偶然によって期待されるよりも頻繁に、一緒に分離する傾向にある現象。
【００７５】
マーカー: 環境分散の要素が全く無い、即ち遺伝率が１である、容易に検出できる表現型であり、好ましくは共優性の様式で遺伝する(二倍体ヘテロ接合体における遺伝子座の両方のアレルが容易に検出できる)もの
【００７６】
表現型: 遺伝子発現の現れである、細胞または生物の検出可能な特徴。
【００７７】
量的形質遺伝子座(QTL): 量的形質遺伝子座(QTL)とは、通常連続的に分布する数的に表すことができる形質をある程度制御する遺伝子座をいう。
【００７８】
抵抗性: 本明細書において、“抵抗性”および“耐性”の用語は、特定の有害生物、病原体、非生物的影響または環境条件に対して症状を示さない植物を説明するために互換的に用いられる。これらの用語は、いくらか症状を示すが、市場性のある生産物を許容可能な収量で生産することができる植物を説明するためにも用いられる。抵抗性または耐性と称される植物には、単に、該植物の発育が阻止され収量が現象しても、依然として作物を生産し得るという意味でそう称されるものも存在する。
【００７９】
再生: 組織培養物からの植物の発生。
【００８０】
王立園芸協会(RHS)カラーチャート値: RHS カラーチャートは、あらゆる色の正確な同定を可能にする標準化された基準である。該チャート上の色の名前は、その色相(hue)、輝度(brightness)および彩度(saturation)を表す。色は、例えば Yellow-Orange Group 19A または Red Group 41B のように、グループ名、シートの番号および記号を同定することにより、RHS カラーチャートによって的確に命名される。
【００８１】
自家受粉: 同じ植物の葯から柱頭への花粉の移動。
【００８２】
単一遺伝子座変換植物: 戻し交雑と呼ばれる植物育種技術によって作出され、戻し交雑技術を介しておよび/または遺伝的形質転換によって品種へ導入される単一遺伝子座の特徴に加えて、ブロッコリー品種の本質的に全ての所望の形態学的および生理学的特徴が回復している植物。
【００８３】
実質的に等価: 比較した場合に、平均から統計学的に有意な差異(例えば、p=0.05)を示さない特徴。
【００８４】
組織培養物: 同一のもしくは異なる型の単離された細胞または植物体の部分へと組織化されたかかる細胞の集合を含む組成物。
【００８５】
導入遺伝子: 形質転換によってブロッコリー植物のゲノム中へ導入された配列を含む遺伝子座。
【００８６】
G.寄託情報
上記のおよび特許請求の範囲に記載するブロッコリー雑種 RX 05900099 ならびに系統 BRM-53-3944SI および BRM-53-3950CMS の寄託は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（American Type Culture Collection(ATCC)、10801 University Blvd.、Manassas、VA 20110-2209）に行った。寄託を行った日は、それぞれ２０１２年２月２４日、２０１２年２月２日、および２０１２年２月２日である。ブロッコリー雑種 RX 05900099 ならびに自殖親系統 BRM-53-3944SI および BRM-53-3950CMS の寄託された種子の受託番号は、それぞれ、ATCC 受託番号 PTA-12603、ならびに ATCC 受託番号 PTA-12482 および ATCC 受託番号 PTA-12479 である。特許が付与されれば、該寄託についての全ての制限は解除され、該寄託は 37 C.F.R. §1.801-1.809 の全ての要件を満たすよう意図される。該寄託は、30 年の期間、または最後の請求の後 5 年間、または特許の有効期間のいずれか長い期間の間、寄託機関において維持され、その期間中において必要であれば交換される。
【００８７】
前述の発明は、明確化および理解のため、例証および実施例によってある程度詳細に説明したが、添付の特許請求の範囲によってのみ制限され、本発明の範囲内においていくらかの変更および修正が行われ得ることは自明である。
【００８８】
本明細書において引用した全ての参考文献は、引用によって明確に本明細書に取り込まれる。
【外国語明細書】
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