(57)【要約】【課題】優れた美白効果を有し、安定性および皮膚に対して安全性の高い新規な成分を有効成分とする美白剤を提供することを課題とする。【解決手段】海洋細菌の産生する酸性ムコ多糖類またはその生理学的に許容される塩もしくは誘導体を有効成分として含有する美白剤。【選択図】図１
2013249275.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の式（１）で示される構造の酸性ムコ多糖類またはそれらの生理学的に許容される塩もしくは誘導体を有効成分として含む美白剤。
【化１】
2013249275.tif 000013
（上記の構造式において、GlcNAcpはピラノース型Ｎ-アセチルグルコサミン残基を、GlcUApはピラノース型グルクロン酸残基を、Gluはグルタミン酸を、ＤはＤ型を、ＬはＬ型を、ｎはゲル濾過クロマトグラフィーで測定した平均分子量がプルランを標準として１００万〜１５０万であることを示す繰り返しの数をそれぞれ表す。）
【請求項２】
皮膚外用剤である請求項１に記載の美白剤。
【請求項３】
美容食品である請求項１に記載の美白剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、海洋細菌の産生する酸性ムコ多糖類を有効成分として配合した美白剤に関するものである。
【０００２】
さらに詳しくは、本発明は海洋細菌の産生する酸性ムコ多糖類またはその生理学的に許容される塩もしくは誘導体を有効成分として含有する美白剤に関するものであり、特にシミ、ソバカス等の予防または治療に有効であって、優れた美白効果を示すと共に保湿性に富み、安定性および皮膚に対する高い安全性を併せ持つ美白剤に関するものである。
【背景技術】
【０００３】
皮膚の着色の原因となるメラニン色素は、日焼け等により組織中にメラニンが産生することに起因していることが知られている。皮膚が日光に起因する紫外線の照射を受けると、皮膚内に存在しているチロシンが酵素チロシナーゼの作用により酵素的に酸化された後、数段階の反応を経て黒色のメラニンへ変化する過程がメラニン色素の生成過程である。
【０００４】
そして従来から、上記メラニンの生成を抑制し、皮膚の美白状態を維持せしめる美白用皮膚外用剤の組成物として、アルブチンなどのハイドロキノン誘導体、エラグ酸、アスコルビン酸およびその配糖体、コウジ酸およびその誘導体等が知られている。
【０００５】
しかしこれら美白用皮膚外用剤には、種々の問題点が残されており、実用性の面で問題があった。例えば、美白成分としてのコウジ酸は発ガンの恐れがあること、アルブチンなどのハイドロキノン誘導体は発疹、かぶれなど安全性に問題があった。また、動植物抽出物配合も知られてはいるが、その効果は満足出来るものではなかった。
【０００６】
そのため、優れた美白効果を示すと共に、安定性および皮膚に対する高い安全性を併せ持つ成分が求められていた。
【０００７】
一方、乳酸菌が産生するリン酸化多糖類や海洋細菌の作る多糖類に美白作用を持ち、美白剤としての有用性が開示されている（特許文献１〜４）。また、種々の海洋細菌が多糖類を産生することが知られている（特許文献５〜７、非特許文献１〜２）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特許２９７１０２７号
【特許文献２】特許３８０２０１１号
【特許文献３】特開２００８−１９４０２６号
【特許文献４】特開２００９−３４０９４号
【特許文献５】特許３０８３８５８号
【特許文献６】特許４３９０２５９号
【特許文献７】特願２０１２−５７１８５号
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】A.Shamsuddinら, Fisheries Science, 64,469-473,1998.
【非特許文献２】M.Matsudaら, Fisheries Science, 63, 983-988,1997.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は、上記の事情に鑑みなされたもので、優れた美白効果を有し、安定性および皮膚に対して安全性の高い新規な成分を有効成分とする美白剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者らは、ヒト皮膚美白剤として使用が可能な物質を求めて、鋭意研究を進めていたところ、抗ウイルス作用を有する物質として知られている海洋細菌が産生する酸性ムコ多糖類にメラノーマ細胞のメラニンの生成を抑制する効果があることを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１２】
即ち、本発明は（１）海洋細菌の産生する酸性ムコ多糖類またはその生理学的に許容される塩もしくは誘導体を有効成分として含有することを特徴とする美白剤に関する。
尚、本酸性ムコ多糖類としては、コベチア（Ｃｏｂｅｔｉａ）属に属し寄託番号がＦＥＲＭ Ｐ-２１２９７として寄託されている菌株またはその変異株の培養物より分離精製された酸性ムコ多糖類を用いることが好ましい。これら酸性ムコ多糖類は、本明細書において単に「本酸性ムコ多糖類」と表記する。
本発明の美白剤の有効成分として用いられる海洋細菌が産生する本酸性ムコ多糖類は、次の構造式で示される化合物である。
【００１３】
【化１】
2013249275.tif 000003
（上記の構造式において、GlcNAcpはピラノース型Ｎ-アセチルグルコサミン残基を、GlcUApはピラノース型グルクロン酸残基を、Gluはグルタミン酸を、ＤはＤ型を、ＬはＬ型を、ｎはゲル濾過クロマトグラフィーで測定した平均分子量がプルランを標準として１００万〜１５０万であることを示す繰り返しの数をそれぞれ表す。）
【００１４】
海洋細菌が産生する本酸性多糖類を有効成分とする美白剤は、Ｂ-１６メラノーマ細胞に対して、細胞毒性を示すことなくメラニン産生を抑制する。
【発明の効果】
【００１５】
本発明の有効成分である酸性ムコ多糖類は、Ｂ-１６メラノーマ細胞に対して、細胞毒性を示すことなくメラニン生成を抑制し，皮膚に美白作用をなすので、美白剤として安全で非常に有用である。しかも本酸性ムコ多糖類にはグルタミン酸という天然保湿因子が結合し、皮膚外用剤としての価値ある用件を備えている点でこれまでの多糖類にない有利な材料である。
本発明の有効成分である酸性ムコ多糖類はまた、美容食品などの経口用途にも用いることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】図１はマウスメラノーマ細胞の増殖およびメラニン生成に対する本酸性ムコ多糖類の影響を示したものである。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本発明は、上記知見に基づいて完成されたものであり、本酸性ムコ多糖類を有効成分として含有する美白用組成物に関するものである。
【００１８】
本酸性ムコ多糖類については、従来、その誘導体に抗ウイルス作用を有することが知られているが、これを美白剤として使用したという報告はないことからすると上記知見はまさに驚くべきものであった。
【００１９】
本発明において、美白剤とは、シミ、ソバカス等の予防または治療に有効な皮膚外用剤組成物または経口用組成物であって、化粧品や医薬部外品としてのローション、乳液、クリーム、パック剤、石鹸等の薬用化粧品、および医薬品としてのローション、乳液、クリーム、軟膏等の皮膚外用剤、ならびに美容食品や機能性食品などの経口剤を含むものである。
【００２０】
本発明の美白用皮膚外用剤組成物は、有効成分である本酸性ムコ多糖類と、皮膚外用剤に一般に用いられている各種成分、例えば、油分、界面活性剤、紫外線吸収剤、アルコール、保湿剤、防腐剤、殺菌剤、色剤、粉末、香料、増粘剤、緩衝剤などとを、その剤形にあわせ、本発明の効果を損なわない範囲で適宜配合することにより調製される。
本発明の美白用経口用組成物は、有効成分である本酸性ムコ多糖類と、経口用組成物に一般的に用いられている各種成分、例えば、賦形剤、防腐剤、色剤、香料などとを、その剤形にあわせ、本発明の効果を損なわない範囲で適宜配合することにより調製される。
【００２１】
本発明の美白用組成物に、本酸性ムコ多糖類を配合するに当たっては、これら化合物の美白作用ならびに皮膚の角質透過性等を考慮することが好ましく、一般にはこれら化合物を有効成分として少なくとも０．００１重量％以上、好ましくは０．０１〜２０．０重量％程度添加すればよい。必ずしも有効成分を単離して使用する必要はなく、必要に応じて本発明の効果を損なわない範囲で、本発明の化合物を含む粗精製物を使用することができる。
【００２２】
本発明の美白用皮膚外用剤の剤型は任意であり、例えば化粧水等の可溶化系、乳液またはクリーム等の乳化系、あるいは軟膏または分散液などの剤型をとることができる。
本発明の美白用経口剤の剤型は任意であり、例えば錠剤、カプセル剤、液剤、シロップ剤などの剤型をとることができる。
こうして所望の美白効果、例えば顔などのシミの発生を防ぐことができ、また既に生成しているシミの脱色に使用できる美白剤が提供される。
【００２３】
（有効成分）
本発明で使用される本酸性ムコ多糖類は、医薬として使用できる程度に精製されたものであれば、種々の方法で調製されたものを用いることができる。本ムコ多糖類の調製方法としては、各種の方法が知られている。例えば、海洋微生物を炭素源として蔗糖、窒素源としてペプトン、酵母エキスを含有する海水を寒天で固めた培地で培養して産生する多糖類を採取、精製して得ることができる。
【００２４】
より具体的には、例えば寒天平板培養では、炭素源として蔗糖、窒素源としてペプトン、酵母エキスを含有する多糖類生産用海水培地を寒天で固めた培地においてコベチア（Ｃｏｂｅｔｉａ）属に属し寄託番号がＦＥＲＭ Ｐ-２１２９７として寄託されている菌株またはその変異株を培養し、寒天平板上に生じた粘質物中の本酸性ムコ多糖類を分離、精製して得ることができる。
【００２５】
本酸性ムコ多糖類を産生する微生物を培養する基本培地としては、多糖類を産生しうる微生物が生育できるものであって、少なくとも炭素源と、窒素源と、各種無機塩と、および微量元素とを適量含有するものが用いられる。さらに好ましくは、前記基本培地として、コベチア（Ｃｏｂｅｔｉａ）属に属する微生物が生育できるものが用いられる。炭素源としては、グルコース、フラクトース、ガラクトース、シュクロース等の糖、あるいは糖蜜や廃糖蜜が挙げられる。炭素源として１種または２種以上を単独でまたは組み合わせて用いることができる。窒素源としては、硝酸塩、アンモニウム塩等の化合物やペプトン、酵母エキス、アミノ酸などの天然物が挙げられる。窒素源として１種または２種以上を単独でまたは組み合わせて用いることができる。無機塩としては、例えば、リン酸塩、マグネシウム塩、カリウム塩等が挙げられる。無機塩として１種または２種以上を単独でまたは組み合わせて用いることができる。固体培地の場合は寒天を用いる。
【００２６】
使用する培地、培地のｐＨ、培地への添加物、培養温度などは通常微生物の培養の際に用いられている条件をそのまま用いることができる。
【００２７】
本酸性ムコ多糖類の産生に用いられる微生物としては、多糖類を産生しうるものであれば特に制限なく使用することができる。好ましくは海洋微生物、さらに好ましくは本酸性ムコ多糖類を産生する能力のある海洋微生物が用いられる。具体的にはコベチア（Ｃｏｂｅｔｉａ）属細菌が挙げられ、より具体的にはコベチア（Ｃｏｂｅｔｉａ）属に属し寄託番号がＦＥＲＭ Ｐ-２１２９７として寄託されている菌株またはその変異株が挙げられる。本菌株は本発明者らが瀬戸内海において海水より分離した海洋性細菌であり、その分類学的特性は、上記特許文献７に記載されている。
【００２８】
本発明における培養条件は、培養時のｐＨは微生物が生育し、かつ多糖類を産生する範囲であれば制限されないが、通常は６から７．５の範囲のｐＨが好ましい。培養温度については微生物が生育し、かつ多糖類を産生する範囲であれば制限されないが、２５℃から３０℃の範囲が多糖類の産生には良好である。培養期間は培養のｐＨや温度により変化するが、通常２日から５日が適切である。
【００２９】
前記した培地と微生物を用いて従来法を用いて微生物を培養することにより、本発明の有効成分である本酸性ムコ多糖類が効率的に産生されることとなる。
【００３０】
本発明に用いられる本酸性ムコ多糖類は、構成糖のモル比がＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミン：Ｄ−グルクロン酸：Ｌ−グルタミン酸が２：１：１（モル濃度比）で、ゲル濾過クロマトグラフィーで測定した平均分子量がプルランを標準として１００〜１５０万であることが好ましい。構成成分の分析には、セルロースアセテート膜電気泳動、または高速液体クロマトグラフィーを用いることができる。この構成成分の分析には、多糖類を２Ｍのトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、または４Ｎ-ＨＣｌで１００℃、１２時間加水分解し、ロータリーエバポレイターでＴＦＡまたはＨＣｌを除いたものを検体とし、中性糖、ウロン酸、有機酸、アミノ酸およびアミノ糖の分析を行う。構成有機酸の分析にはこの他に酵素法を用いることができる。
【００３１】
本酸性ムコ多糖類の分子量の測定は、ゲル濾過クロマトグラフィー法を用いることができる。具体的には、Ａｓａｈｉｐａｋ ＧＦＡ-７Ｍ（昭和電工製）をカラムとする高速液体クロマトグラフィー（島津製）を使用し、０．１Ｍ-ＮａＣｌを移動相とし、分子量既知のプルラン（Ｓｈｏｄｅｘ ＳＴＡＮＤＡＲＤ ＫＩＴ Ｐ-８２、昭和電工製）を標準サンプルとして作成した分子量保持時間標準曲線を使用して測定することができる。
【００３２】
（有効成分の製造方法）
次に、本発明の美白剤の有効成分である本酸性ムコ多糖類の製造方法について、好ましい実施形態を挙げて説明する。尚、本酸性ムコ多糖類の生産方法は以下の製法に限定されない。
好ましい１実施形態としての本酸性ムコ多糖類の製造方法は、（ａ）前記培地において微生物を培養し多糖類を産生する工程と、（ｂ）産生された本酸性ムコ多糖類を抽出・回収する工程とを有する。
【００３３】
続いて、前記の実施形態を各工程毎に詳細に説明していく。
前記した本発明の培地を用いることが望ましく、その際に炭素源として蔗糖、窒素源としてペプトン、酵母エキスを用いることがより望ましい。
（ａ）前記培地において微生物を培養し多糖類を産生する工程
前記のようにして調製した培地を用いて微生物を培養して目的の多糖類を産生させるわけであるが、本酸性ムコ多糖類を得るためには微生物としてコベチア（Ｃｏｂｅｔｉａ）属の細菌を用いることが好ましい。さらに好ましくはコベチア（Ｃｏｂｅｔｉａ）属に属し寄託番号がＦＥＲＭ Ｐ-２１２９７として寄託されている菌株またはその変異株を用いることが望ましい。微生物として該菌株またはその変異株を用いることで、本酸性ムコ多糖類を効率的に産生することができる。
そして、以下に説明する抽出・回収工程を経ることにより高純度の本酸性ムコ多糖類を高収率で得ることが可能となる。
【００３４】
（ｂ）産生された所定の多糖類を抽出・回収する工程
上記製造方法で得られた培養液から本酸性ムコ多糖類を抽出する方法としては、従来公知の方法を用いることができる。例えば、培養液をそのまま、あるいは高温で殺菌した後で、遠心分離により菌体を除去し、これをそのまま、あるいは濃縮してから、２〜３倍量のエタノール、イソプロパノール、あるいはアセトン等を加え、沈殿を生じさせる。この沈殿物を再度、水あるいは１〜１５％塩化ナトリウム溶液に溶解させた後で、アルコール等による沈殿を２〜３回繰り返し、水で透析を行い、噴霧乾燥や凍結乾燥機等を用いて乾燥させることにより、本酸性ムコ多糖類を得る。これ以外にも電気透析法や限外濾過法も利用することができる。さらに精製するためには、イオン交換、ゲル濾過等の各種クロマトグラフィーや第４級アンモニウム塩による沈殿や塩析などを用いることができる。
【００３５】
かくして本酸性ムコ多糖類が産生および回収されることになる。本発明により得られる本酸性ムコ多糖類は特に制限なく種々の用途に使用されうるものであるが、好ましくは上述の美白剤として好適に用いられる。
【００３６】
ここで、本酸性ムコ多糖類は下記構造単位を有するものである。
【００３７】
【化２】
2013249275.tif 000004
（上記の構造式において、GlcNAcpはピラノース型Ｎ-アセチルグルコサミン残基を、GlcUApはピラノース型グルクロン酸残基を、Gluはグルタミン酸を、ＤはＤ型を、ＬはＬ型を、ｎはゲル濾過クロマトグラフィーで測定した平均分子量がプルランを標準として１００万〜１５０万であることを示す繰り返しの数をそれぞれ表す。）
【００３８】
本発明では、有効成分として少なくとも０．００１重量％以上、好ましくは、０．０１〜２０重量％の本酸性ムコ多糖類を美白剤に配合する。
この本酸性ムコ多糖類を有効成分として含有する外用美白剤は、通常使用されている皮膚外用剤基材を使用することにより、クリーム、乳液、化粧水等の適当な形態とすることができる。さらに、紫外線吸収剤、紫外線散乱剤、アルブチン等のメラニン合成抑制剤、その他の薬効成分、増粘剤、可塑剤、着色料、香料等、任意の添加物をこの美白剤に含有させることができる。なお、本発明の美白剤の有効成分である本酸性ムコ多糖類については、皮膚に対する毒性も刺激も無く、副作用も無い。また一般に多糖類には保湿効果があること、および本酸性ムコ多糖類には天然保湿因子のグルタミン酸が含まれていることからして、本酸性ムコ多糖類またはそれらの生理学的に許容される塩もしくは誘導体を有効成分として含む本発明の美白剤は、美白効果に加えて好ましい保湿効果を有することは当業者であれば容易に推測できるであろう。
この本酸性ムコ多糖類は、上述のように、美容食品や機能性食品などの美白用経口剤に配合することもできる。
【００３９】
以上本発明の美白剤について説明してきたが、本発明の美白剤のメラニン抑制効果を利用することにより、エビなどの変色防止剤といった食品添加物としても用いることも可能である。即ち、本発明の別の態様として、本酸性ムコ多糖類またはその生理学的に許容される塩もしくは誘導体を有効成分として含有することを特徴とする食品添加物が提供される。この場合、食品添加物の使用量は当業者の知識に基づき用途に応じて適宜定まるものである。
【実施例】
【００４０】
次に実施例を挙げ、本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれら実施例になんら制約されるものではない。尚、特記しない限り、百分率（％）は重量基準である。
【００４１】
（実施例１）
ペプトン０．５％、酵母エキス０．１％、蔗糖３％の組成を有し海水で調製した培地を、温度１２１℃としたオートクレーブ中で１５分間滅菌し、本菌株（ＦＥＲＭ Ｐ-２１２９７）の斜面培養から、１白金耳を試験管中の上記滅菌培地（１０ｍｌ）に接種し、２５℃の温度で２４時間静置培養を行い、次いでこの前培養液を５００ｍｌ容の三角フラスコ中に上記組成の培地１００ｍｌ（１２１℃、１５分間滅菌）に接種し、２５℃の温度で３日間の静置培養を行った。培養後培養液を遠心分離した後濾過助剤（ラヂオライト＃５００）を用いてＧＦ-７５濾紙（Ａｄｖａｎｔｅｃ）で濾過し、菌体を除いた培養濾過液から分子量５万カットの中空糸ＵＦ膜モジュール（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ社製）を備えた膜濾過装置により得られる高分子画分を短時間のうちに濃縮、脱塩回収し、活性炭処理し、凍結乾燥により粉末化した。膜濾過装置は東洋紡エンジニアリング社製ＳＹＬＳ-ＳＢ０４型を用いた。
このようにして得られた多糖画分については、セルロースアセテート膜電気泳動を用いて均一性を確認すると共に、ＤＥＡＥ-セルロースイオン交換カラムクロマト分析、化学分析、核磁気共鳴分析により、公知の本酸性ムコ多糖類であることを確認した。
【００４２】
（実施例２）
前培養までは実施例１と同様に処理し、次いでこの前培養液を５００ｍｌ容の三角フラスコ中に上記組成を有する海水から調製した滅菌培地１００ｍｌ（１２１℃、１５分間）に接種し、２５℃の温度で３日間振とう培養を行った。次いで培養液を遠心分離した後濾過助剤（ラヂオライト＃５００）を用いてＧＦ−７５濾紙（Ａｄｖａｎｔｅｃ）で濾過し、菌体を除いた培養濾液から分子量５万カットの中空糸ＵＦ膜モジュール（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ社製）を備えた膜濾過装置により得られる高分子画分を短時間のうちに濃縮、脱塩回収し、活性炭処理し、凍結乾燥により粉末化した。膜濾過装置は東洋紡エンジニアリング社製ＳＹＬＳ-ＳＢ０４型を用いた。このようにして得られた多糖画分については、セルロースアセテート膜電気泳動を用いて均一性を確認すると共に、ＤＥＡＥ-セルロースイオン交換カラムクロマト分析、化学分析、核磁気共鳴分析により、公知の本酸性ムコ多糖類であることを確認した。
【００４３】
（実施例３）
前培養までは実施例１と同様に処理し、上記実施例２で述べた培地に寒天を１．５％添加した寒天平板培地２５０ｍｌを平板（１８×２６ｃｍ）に広げて前培養液を塗沫し、２５℃の温度で４日間培養を行った。寒天平板の表面に生じた粘質物をかきとり、１％フェノール液に懸濁させ、遠心分離した後濾過助剤（ラヂオライト＃５００）を用いてＧＦ-７５濾紙で濾過し、菌体を除いた上澄液にエタノールを加えて沈殿する画分を集め、水に溶解後再度エタノールを加えて沈殿する画分を集め、水に溶解後透析した。次いで活性炭処理し、凍結乾燥により多糖画分を得た。尚、実用的な精製レベルとしては、培養濾過液から分子量５万カットの中空糸ＵＦ膜モジュール（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ社製）を備えた膜濾過装置により得られる高分子画分を短時間のうちに濃縮、脱塩回収し、活性炭処理し、凍結乾燥により粉末化した。膜濾過装置は東洋紡エンジニアリング社製ＳＹＬＳ-ＳＢ０４型を用いた。このようにして得られた多糖画分については、セルロースアセテート膜電気泳動を用いて均一性を確認すると共に、ＤＥＡＥ-セルロースイオン交換カラムクロマト分析、化学分析、核磁気共鳴分析により、公知の本酸性ムコ多糖類であることを確認した。
【００４４】
（実施例４）
（マウス培養細胞株によるメラニン生成抑制試験）
実施例１で得られた本酸性ムコ多糖類を使用して，メラノーマ細胞に対する細胞増殖と美白効果を調べ試料無添加の場合と比較して試料添加系での細胞増殖率，メラニン生成量を求めた。
【００４５】
（細胞培養）
（１）前培養したＢ１６Ｆ１０細胞を１２穴マルチウェルプレートの各ウェルに１．０ｘ１０４細胞／ウェルの細胞数に播種した。播種４８時間後、所定濃度の被験物質を含む０．５ｍＭテオフィリン含有ＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ培地に交換した。被験物質の濃度は、２５μg/ｍｌ、５０μg/ｍｌ、１００μg/ｍｌに設定した。各試料濃度毎に３ウェルを割り当てアッセイに供した（Ｎ＝３）。細胞増殖計数用のプレートとメラニン定量用のプレート２枚を１組として各試料のアッセイに使用した。培地交換後、７２時間培養を続けた。
（２）細胞増殖計数用プレートを用いて各ウェル内の細胞数（相対値）をＷＳＴ-１法を用い４５０ｎｍの吸光度を測定することにより、細胞の生育度を測定した。
【００４６】
（細胞中のメラニン量の測定方法）
Ｂ-１６メラノーマ細胞を培養し、細胞中に産生したメラニンをアルカリで溶解し、吸光度を測定することによりメラニン生成量を求めた。７２時間培養後のメラニン定量用のプレートを用いて各ウェル内の細胞を１０％トリクロロ酢酸溶液で処理した後にエタノール／エーテル（１：１（Ｖ／Ｖ））で処理した。
これに１Ｎ-ＮａＯＨ／１０％ＤＭＳＯ溶液を加え、メラニンを可溶化した後吸光度４７５ｎｍを測定した。合成メラニン（Ｓｉｇｍａ）を１Ｎ-ＮａＯＨ／１０％ＤＭＳＯ溶液に溶解した溶液を所定の濃度に希釈し標準液として使用し、本標準液と測定溶液の吸光度を比較することにより測定溶液中のメラニン含有量を算出した。（２）で求めたウェル内細胞数（相対値）と本ウェル内メラニン量から細胞内メラニン量（相対値）を計算した。これらの結果を図１に示す。
【００４７】
図１から明らかなように，本酸性多糖類の添加によりメラニン生成の抑制が認められた。また本酸性ムコ多糖類は，メラノーマ細胞の増殖抑制効果、すなわち細胞毒性は認められなかった。各濃度の本酸性多糖類の添加で細胞毒性に伴う細胞の形態の変化も見られなかった。即ち、本酸性ムコ多糖類は、細胞の生育に影響を与えない濃度範囲で美白作用を示すことが認められた。
【００４８】
本発明に係る美白剤は種々の剤型で使用されるが例示として溶液（例えば、美容液、化粧水など）、クリーム、乳液、石けん、乳化型ファンデーションおよび浴用剤の処方例を処方例１〜５として説明する。
【００４９】
（処方例１）
処方例１(美容液)
下記成分により常法でもって美容液を調製した。
【表１】
2013249275.tif 000005
【００５０】
（処方例２）
処方例２(クリーム)
下記成分Ａ、別に成分Ｂを加温溶解させてそれぞれＡ液およびＢ液とし、Ａ液にＢ液を加えて乳化し、撹拌しながら冷却し、クリームを調製した。
【表２】
2013249275.tif 000006
【００５１】
（処方例３）
処方例３(乳液)
下記成分Ａ、別に成分Ｂを加温溶解させてそれぞれＡ液およびＢ液とし、Ａ液にＢ液を加えて乳化し、撹拌しながら冷却し、乳液を調製した。
【表３】
2013249275.tif 000007
【００５２】
（処方例４）
処方例４(石けん)
石けん製造の常法により下記成分を混合して石けんを製造した。
【表４】
2013249275.tif 000008
【００５３】
（処方例５）
処方例５(乳化型ファンデーション)
下記成分Ａを充分に混合粉砕した粉末部Ａとし、成分ＢをＢ液、成分ＣをＣ液とする。Ｃ液を加温攪拌後、Ａを添加しホモミキサー処理し、さらに加温混合したＢ液を加えてホモミキサー処理する。攪拌しながら室温まで冷却して乳化型ファンデーションを調製した。
【表５】
2013249275.tif 000009
【００５４】
（処方例６）
処方例６(浴用剤)
下記成分により常法でもって浴用剤を調製した。
【表６】
2013249275.tif 000010
【００５５】
（処方例７）
処方例７(錠剤)
下記成分Ａをそれぞれ篩過して混合し、次に成分Ｂを添加して混合した。その後、常法により打錠して、全量が６００ｍｇの錠剤を得た。
【表７】
2013249275.tif 000011
【００５６】
（処方例８）
処方例８(清涼飲料)
下記成分により常法でもって清涼飲料を調製した。
【表８】
2013249275.tif 000012
【受託番号】
【００５７】
なお、本実施例１〜３において用いられた上記のＦＥＲＭ Ｐ-２１２９７菌株は、日本国独立行政法人産業技術総合研究所 特許生物寄託センター 〒３０５−８５６６ 日本国茨城県つくば市東１丁目１番地１中央第６ に寄託し、平成１９年５月１６日 受託番号ＦＥＲＭ Ｐ-２１２９７として受託されたものである。
【図１】
2013249275.tif 000014