(57)【要約】      （修正有）【課題】食習慣があり安全であるアブラツノザメを利用して、骨粗鬆症の発症メカニズムを踏まえて、副作用が少なく、長期投与可能な骨芽細胞の増殖を促進し、骨形成を目的とした治療や予防に効果を有する素材を提供すること。【解決手段】アブラツノザメ頭部軟骨またはその脱脂物を有効成分として用い、投与により血中カルシウム値を低下させることなく骨芽細胞活性レベルを２０〜３０％も改善し、また破骨細胞活性レベルを２０％も改善させることのできる骨リモデリング改善剤とする。また、アブラツノザメ頭部軟骨またはその脱脂物を有効成分として用い、骨形成促進剤や骨形成促進食品、骨粗鬆症予防食品とする。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
アブラツノザメ頭部軟骨またはその脱脂物を有効成分とする骨リモデリング改善剤。
【請求項２】
アブラツノザメ頭部軟骨またはその脱脂物を有効成分とし、投与により血中カルシウム値を低下させることなく骨芽細胞活性レベルを２０％以上改善させることのできる、骨リモデリング改善剤。
【請求項３】
アブラツノザメ頭部軟骨またはその脱脂物を有効成分とし、投与により血中カルシウム値を低下させることなく骨芽細胞活性レベルを２０ ％以上改善し、また破骨細胞活性レベルを２０％以上改善させることのできる、骨リモデリング改善剤。
【請求項４】
前記アブラツノザメ頭部軟骨またはその脱脂物を５重量％以上含有していることを特徴とする、請求項２または３に記載の骨リモデリング改善剤。
【請求項５】
アブラツノザメ頭部軟骨またはその脱脂物を有効成分とする骨形成促進剤。
【請求項６】
前記アブラツノザメ頭部軟骨またはその脱脂物を５重量％以上含有していることを特徴とする、請求項５に記載の骨形成促進剤。
【請求項７】
アブラツノザメ頭部軟骨またはその脱脂物を有効成分とする骨形成促進食品。
【請求項８】
前記アブラツノザメ頭部軟骨またはその脱脂物を５重量％以上含有していることを特徴とする、請求項７に記載の骨形成促進食品。
【請求項９】
アブラツノザメ頭部軟骨またはその脱脂物を有効成分とする、骨粗鬆症予防食品。
【請求項１０】
アブラツノザメ頭部軟骨またはその脱脂物を有効成分とする、動物用骨リモデリング改善剤。
【請求項１１】
アブラツノザメ頭部軟骨またはその脱脂物を有効成分とする、動物用骨形成促進剤。
【請求項１２】
アブラツノザメ頭部軟骨またはその脱脂物を有効成分とする、動物用骨形成促進食品。
【請求項１３】
アブラツノザメ頭部軟骨またはその脱脂物を有効成分とする、動物用骨粗鬆症予防食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はアブラツノザメ頭部軟骨由来の骨リモデリング（骨代謝回転）改善剤、骨形成促進剤、骨形成促進食品および骨粗鬆症予防食品に係り、特に、食習慣があり安全であるアブラツノザメ由来成分を有効成分として用いた骨リモデリング改善剤、骨粗鬆症予防食品等に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
骨粗鬆症は鬆（す）が入ったように骨密度が低下して骨がもろくなる疾患であり、骨密度低下によってわずかな衝撃でも骨折をしやすくなる。女性ホルモンであるエストロゲンやプロゲステロンが大きな影響因子であるため、殊に中高年女性にとっては注意を要する疾患である。なお、骨芽細胞・破骨細胞の活性化に影響しているホルモンには、性ホルモン（男性ホルモン、女性ホルモン）、副甲状腺ホルモン、カルシトニン、ビタミンＤがある。
【０００３】
骨粗鬆症は、がん、脳卒中あるいは心筋梗塞のようにそれ自体でもって生命をおびやかす病気ではない。しかしながら、骨粗鬆症による骨折から要介護状態になる人は少なくない。特に寝たきりの状態になった患者の場合、生活の質は著しく低下せざるを得なくなる。したがって、骨粗鬆症を有効に予防し、あるいは治療することのできる技術が待ち望まれており、また、従来から種々研究されている。
【０００４】
このうち特許文献１には、副作用が少なく食品・医薬品等として利用可能な骨粗鬆症の予防剤・改善剤を提供することを目的とした、すじ肉部を除去したサメ肉またはその脱脂物を有効成分とする骨粗鬆症の予防剤・治療剤が開示されている。これは、サメ肉中でコラーゲンを多く含んでいると考えられる結合組織いわゆるすじ肉(fascia)と、それ以外の部位の肉(muscle)とを、閉経後骨粗鬆症モデルラットに別々に投与したところ、すじ肉以外のmuscle部位に、優れた骨密度増加作用、骨強度増強作用および骨密度維持作用が認められたことに基づくものである。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２００８−２９７２９２号公報「骨粗鬆症の予防又は改善剤」
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかし、サメ肉は魚肉練り製品の原料として多く用いられており、また今後の世界的人口急増に伴い悪化が懸念される食糧供給の観点からは、特許文献１に開示されたようなサメ肉の食用外用途開発よりも、廃棄量軽減にもつながる非食用部位の有効利用を研究する方がより望ましい。かかる理由により、種々の健康食品や医薬品の素材に利用されているコンドロイチン硫酸が、多くサメ軟骨を原料として製造されていることは、今後も推奨されることである。
【０００７】
しかしながら、コンドロイチン硫酸またはサメ軟骨を利用することによって上述した骨粗鬆症をより効果的に予防・治療・改善する技術は、未だに存在しない。つまり、骨粗鬆症の発症メカニズムには骨形成を行う骨芽細胞と骨破壊を行う破骨細胞の両者が関与するとされているところ、かかる知見に基づく技術的提案はなされていない現状である。
【０００８】
一方、従来利用されているサメ素材のほとんどはヨシキリザメであり、北東北沿岸で水揚げされているアブラツノザメについては、サメ肉のすり身利用に関する技術的提案はなされているものの(特開平６−３０３９４５)、その他の部位においては大部分が廃棄処理されており、未利用部位の有効利用が求められている。
【０００９】
そこで本発明が解決しようとする課題は、かかる従来技術の状況を踏まえ、食習慣があり安全であるアブラツノザメを利用し、骨粗鬆症の発症メカニズムを踏まえて骨芽細胞活性と破骨細胞活性を正常化し、骨形成を目的とした治療や予防に効果を有する、副作用が少なくかつ長期投与可能な骨リモデリング改善剤、骨形成促進剤、骨形成促進食品および骨粗鬆症予防食品を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
さて、本願出願人の一名は先年、サメ頭部軟骨からのコンドロイチン−蛋白質複合体の調製方法を確立し、開示した(特開２００９−１８５２６３)。これは、アブラツノザメの頭部軟骨を原料としてコンドロイチン−蛋白質複合体を調製する技術である。当該調製方法によって得られたコンドロイチン−蛋白質複合体粉末の重量組成は、ムコ多糖類(コンドロイチン硫酸)２９．２％、コラーゲン３５％、蛋白質６５％であり、従前と比較して有効成分（コンドロイチン硫酸）が高濃度に含有された製品を得ることができる。
【００１１】
本願発明者は、このアブラツノザメ頭部軟骨由来成分を、骨形成に関与する骨芽細胞活性化剤として利用できないかと考え、閉経後骨粗鬆症モデルラットを対象として長期投与におけるオステオカルシン量の変化を測定した。その結果、骨芽細胞活性化剤としての有効性を発見した。そしてかかる発見に基づいて、骨リモデリング（骨破壊と骨形成からなる骨代謝回転が繰り返されることで骨が再構成されること）を改善可能であることに想到し、本発明を完成するに至った。すなわち、上記課題を解決するための手段として本願で特許請求される発明、もしくは少なくとも開示される発明は、以下のとおりである。
【００１２】
〔１〕  アブラツノザメ頭部軟骨またはその脱脂物を有効成分とする骨リモデリング改善剤。
〔２〕  アブラツノザメ頭部軟骨またはその脱脂物を有効成分とし、投与により血中カルシウム値を低下させることなく骨芽細胞活性レベルを２０％以上改善させることのできる、骨リモデリング改善剤。
〔３〕  アブラツノザメ頭部軟骨またはその脱脂物を有効成分とし、投与により血中カルシウム値を低下させることなく骨芽細胞活性レベルを２０％以上改善し、また破骨細胞活性レベルを２０％以上改善させることのできる、骨リモデリング改善剤。
〔４〕  前記アブラツノザメ頭部軟骨またはその脱脂物を５重量％以上含有していることを特徴とする、〔２〕または〔３〕に記載の骨リモデリング改善剤。
〔５〕  アブラツノザメ頭部軟骨またはその脱脂物を有効成分とする骨形成促進剤。
〔６〕  前記アブラツノザメ頭部軟骨またはその脱脂物を５重量％以上含有していることを特徴とする、〔５〕に記載の骨形成促進剤。
〔７〕  アブラツノザメ頭部軟骨またはその脱脂物を有効成分とする骨形成促進食品。
〔８〕  前記アブラツノザメ頭部軟骨またはその脱脂物を５重量％以上含有していることを特徴とする、〔７〕に記載の骨形成促進食品。
〔９〕  アブラツノザメ頭部軟骨またはその脱脂物を有効成分とする、骨粗鬆症予防食品。
〔１０〕  アブラツノザメ頭部軟骨またはその脱脂物を有効成分とする、動物用骨リモデリング改善剤。
〔１１〕  アブラツノザメ頭部軟骨またはその脱脂物を有効成分とする、動物用骨形成促進剤。
〔１２〕  アブラツノザメ頭部軟骨またはその脱脂物を有効成分とする、動物用骨形成促進食品。
〔１３〕  アブラツノザメ頭部軟骨またはその脱脂物を有効成分とする、動物用骨粗鬆症予防食品。
【発明の効果】
【００１３】
本発明のアブラツノザメ頭部軟骨由来の骨リモデリング改善剤、骨形成促進剤、骨形成促進食品および骨粗鬆症予防食品は上述のように構成されるため、これによれば、骨形成を目的とした治療や予防に効果を有する骨リモデリング改善剤等を、食習慣があり安全なアブラツノザメを原料として、その由来成分を有効成分として製造し、提供することができる。しかも本発明の骨リモデリング改善剤等は骨粗鬆症の発症メカニズムを的確に踏まえて得られるものであり、副作用が少なく、長期投与可能である。そして、骨芽細胞の活性を促進し、骨芽細胞活性と破骨細胞活性のバランスを正常状態に近づけることによって骨形成を目的とした治療や予防を効果的に行うことができる。
【００１４】
従来のＣ ａ 強化食を用いるのみでは、骨芽細胞と破骨細胞を正常活性化レベルに維持させることはできない。つまり骨粗鬆症予防および骨形成を図ろうとする時、カルシウム摂取のみでは、骨密度の維持を図ることはある程度できたとしても骨形成・骨吸収バランスの正常維持させることまではできない。また骨芽細胞活性と破骨細胞活性のバランスは骨粗鬆症未治療状態と同レベルにとどまり、血中カルシウム濃度も低レベルの値にとどまるということである。
【００１５】
しかし、本発明に係るアブラツノザメ頭部軟骨またはその脱脂物の一例であるところのアブラツノザメ頭部軟骨粉末を投与することによって、骨芽細胞レベルを２０〜３０％も改善し、また破骨細胞活性レベルを２０％も改善させることが確認できた。すなわち、アブラツノザメ頭部軟骨由来成分を用いる本発明の骨リモデリング改善剤等は、血中カルシウム濃度を維持する機能と骨芽細胞活性レベルと破骨細胞活性レベルの改善作用とを併せ備えたものであり、優れた骨形成促進効果と骨粗鬆症予防効果を実現することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】エストラジオール（Ｅ２）定量分析結果を示すグラフである。
【図２】オステオカルシン定量分析結果を示すグラフである。
【図３】ＴＲＡＰ−５ｂ定量分析結果を示すグラフである。
【図４】血清生化学検査結果のグラフである（総タンパク（ＴＰ）、アルブミン（ＡＬＢ）、尿素窒素（ＢＵＮ）およびクレアチニン（ＣＲＥ））。
【図５】血清生化学検査結果のグラフである（ナトリウム（Ｎａ）、カリウム（Ｋ）、クロール（Ｃｌ）およびカルシウム（Ｃａ））。
【図６】血清生化学検査結果のグラフである（リン（ＩＰ）、アスパラギン酸アミノ基転移酵素（ＡＳＴ）、アラニンアミノ基転移酵素（ＡＬＴ）および乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ））。
【図７】血清生化学検査結果のグラフである（アミラーゼ（ＡＭＹ）、γ-グルタミン酸転移酵素（γ−ＧＴ）、総コレステロール（Ｔ−ＣＨＯ）および中性脂質（ＴＧ））。
【図８】血清生化学検査結果のグラフである（ＨＤＬコレステロール（ＨＤＬ−Ｃ）、総ビリルビン（Ｔ−ＢＩＬ）および血糖（ＧＬＵ））。
【図９】病理組織学検査での正常コントロール ＭＦ投与群（Ｎｏｒｍａｌ＿ＭＦ）と骨粗鬆症モデル  １０．０％アブラツノザメ頭部軟骨粉末混合ラット飼育用固形飼料投与群（ＯＶＸ＿ＭＦ＋１０％ＳＢ）のＨＥ染色標本像である。
【図１０】両側大腿骨単純Ｘ 線撮影写真である。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本発明について、さらに詳細に説明する。
上述のとおり本発明の骨芽細胞活性化剤は、アブラツノザメ頭部軟骨由来成分、またはその脱脂物を有効成分とするものであり、その投与によって、血中カルシウム値を低下させることなく骨芽細胞活性レベルを２０〜３０％も改善し、また破骨細胞活性レベルを２０％も改善させることができる。アブラツノザメ頭部軟骨由来成分を得る方法は、上述の文献(特開２００９−１８５２６３)開示の方法によればよい。
【００１８】
脱脂物を得るための脱脂方法は、たとえば、エタノール、アセトン、エーテル、ヘキサン等の適当な有機溶媒を単独もしくは適宜に組み合わせた溶媒中にアブラツノザメ頭部軟骨由来物を浸漬し、常温前後の温度で数時間、連続撹拌処理するなど、従来公知の技術を適宜用いることができる。また、有機溶液からの脱脂物の分離には、遠心分離、濾過等の従来公知の方法を適宜用いればよい。
【００１９】
得られたアブラツノザメ頭部軟骨由来成分またはその脱脂物は、優れた骨芽細胞増殖促進効果を有するため、これを有効量含有せしめることによって、骨粗鬆症予防剤、骨粗鬆症治療剤、または骨粗鬆症改善剤とすることができる。さらに、同様にして骨粗鬆症の予防、治療または改善に有効な食品、医薬部外品、医薬品等とすることもできる。
【００２０】
本発明の骨リモデリング改善剤、骨形成促進剤は、特定の剤形に限定されず、錠剤、顆粒剤、細粒剤、カプセル剤あるいはトローチ剤等の経口用固形製剤や、内服液剤、シロップ剤等の経口用液体製剤等、従来公知の適宜の剤形とすることができる。また、固形製剤、液体製剤いずれの場合も、他の添加材料や具体的な製造方法等についても、従来の方法を適宜用いればよい。
【００２１】
本発明のアブラツノザメ頭部軟骨またはその脱脂物を有効成分とする骨形成促進食品は、日常的な摂取可能に形成される。したがって、日常生活の中での骨粗鬆症の予防、改善効果を得ることができる。なお、本発明に係る食品は、麺等の穀物加工食品・菓子類・油脂およびその加工食品・調味料・各種飲料といった一般飲食料品はもちろんのこと、いわゆる健康食品や特定保健用食品、さらには医薬部外品に属するものも広く含む。また、これらの食品には従来通り適宜の副材料や添加物を使用可能であり、また具体的な製造方法等についても従来の方法を適宜用いればよい。
【００２２】
本発明において、アブラツノザメ頭部軟骨またはその脱脂物の配合は、骨芽細胞活性化剤、骨形成促進剤または具体的な骨形成促進食品、といった形態に応じ要求される適切な範囲内で、任意になされればよい。アブラツノザメ頭部軟骨またはその脱脂物の摂取量は、年齢、症状等によっても異なるが、１日食事摂取重量に対して１０%の混合を上限とした安全性試験において、生化学試験および病理組織学試験上の安全性が確認されている。
【００２３】
また、本発明の骨芽細胞活性化剤等はヒトにおける骨粗鬆症を適用対象と想定して研究に取り組んだ結果完成されたものであるが、本発明の原理は愛玩動物を初めとする動物にも、同様に応用することができる。したがって、アブラツノザメ頭部軟骨またはその脱脂物を有効成分とする、動物用骨芽細胞活性化剤、動物用骨形成促進剤、および動物用骨形成促進食品もまた、本発明の範囲内である。なお、動物用の骨芽細胞活性化剤等製造においても、ヒト分野に関して述べた如く、従来公知の技術を適宜用いることができる。
【実施例】
【００２４】
以下、本発明を実施例によってさらに詳細に説明するが、本発明がかかる実施例に限定されるものではない。なお実施例は、本願発明者が本発明に至った研究、すなわち骨粗鬆症モデル動物を用いての「骨粗鬆症予防効果実験」経過の概要を記すものである。骨粗鬆症モデル動物としては、雌ラットから卵巣を摘出して閉経後と同じエストロゲン欠乏状態にしたモデルラット（ＯＶＸ）を用いた。本モデルラットを用いことによって、骨粗鬆症予防効果・改善効果を判定することが可能だからである。  
【００２５】
＜１．ＳＤラット雌を用いた骨粗鬆症モデルラットの作製＞
実験には、８週齢ＳＤラット雌を用いた。１週間の馴化飼育後に両側卵巣を摘出し、エストロゲン欠乏状態による閉経後骨粗鬆症モデルラット（ＯＶＸ）を作製した。
【００２６】
＜２．飼料の調製と飼育方法＞
サメ頭部軟骨からのコンドロイチン−蛋白質複合体の調製方法（特許公開２００９−１８５２６３）に基づいて得られたアブラツノザメ頭部軟骨粉末を、ラット飼育用固形飼料（ＭＦ）に、最終濃度が１．２％、５．０％、１０．０％濃度（重量）となるよう混合させて、特別飼育飼料を作製した。対照として、ラット飼育用固形飼料（ＭＦ）に炭酸カルシウムを２％濃度にて混合させた飼育飼料を作製した。なお、ＭＦはオリエンタル酵母工業株式会社製ラット用固形飼料を用いた。
【００２７】
本モデルラットにラット飼育用固形飼料（ＯＶＸ＿ＭＦ）、２％Ｃａ混合ラット飼育用固形飼料（ＯＶＸ＿ＭＦ＋２％Ｃａ）、１．２％アブラツノザメ頭部軟骨粉末混合ラット飼育用固形飼料（ＯＶＸ＿ＭＦ＋１％ＳＢ）、５％アブラツノザメ頭部軟骨粉末混合ラット飼育用固形飼料（ＯＶＸ＿ＭＦ＋１％ＳＢ）、１０％アブラツノザメ頭部軟骨粉末混合ラット飼育用固形飼料（ＭＦ＋１０％ＳＢ）を１２週間または２４週間、自由摂取させた。
【００２８】
また対照として、卵巣を摘出しないＳＤラット８週齢雌を用い、ラット飼育用固形飼料（Ｎｏｒｍａｌ＿ＭＦ）を自由摂取させた。これらモデルラット計５群、対象群１群、合計６群を実験に供した。なお、後述する各図（グラフ）では、各実験群を下記のようにも記載する（（  ）内の記載は省略される場合がある）。
・正常コントロール  ＭＦ投与群：Ｎｏｒｍａｌ＿ＭＦ
・骨粗鬆症モデル  ＭＦ投与群：ＯＶＸ＿ＭＦ
・骨粗鬆症モデル  ２％Ｃａ混合ラット飼育用固形飼料投与群：（ＯＶＸ＿ＭＦ＋２％Ｃａ） 
・骨粗鬆症モデル  １．２％アブラツノザメ頭部軟骨粉末混合ラット飼育用固形飼料投与群：（ＯＶＸ＿ＭＦ＋１％ＳＢ） 
・骨粗鬆症モデル  ５．０％アブラツノザメ頭部軟骨粉末混合ラット飼育用固形飼料投与群：（ＯＶＸ＿ＭＦ＋１％ＳＢ）
・骨粗鬆症モデル  １０．０％アブラツノザメ頭部軟骨粉末混合ラット飼育用固形飼料投与群：（ＯＶＸ＿ＭＦ＋１０％ＳＢ）
【００２９】
＜３．評価方法＞
１２週間または２４週間の自由摂取期間終了後、ラット腹部大動脈から血液を採取し、血清を分離して、生化学検査および骨粗鬆症バイオマーカー検査、エストラジオール（Ｅ２）定量分析を行った。以下、具体的に述べる。
【００３０】
生化学検査は、日立７１５０型自動分析装置を用い、総タンパク（ＴＰ）、アルブミン（ＡＬＢ）、尿素窒素（ＢＵＮ）、クレアチニン（ＣＲＥ）、 ナトリウム（Ｎａ）、カリウム（Ｋ）、クロール（Ｃｌ）、カルシウム（Ｃａ）、リン（ＩＰ）、アスパラギン酸アミノ基転移酵素（ＡＳＴ）、アラニンアミノ基転移酵素（ＡＬＴ）、乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）、アミラーゼ（ＡＭＹ）、γ-グルタミン酸転移酵素（γ−ＧＴ）、総コレステロール（Ｔ−ＣＨＯ）、中性脂質（ＴＧ）、ＨＤＬコレステロール（ＨＤＬ−Ｃ）、総ビリルビン（Ｔ−ＢＩＬ）および血糖（ＧＬＵ）を測定した。
【００３１】
骨粗鬆症バイオマーカー検査は、オステオカルシン（Ｏｓｔｅｏｃａｌｃｉ ｎ：ＯＣ）の定量分析をタカラバイオ株式会社製Ｒａｔ  Ｇｌａ−Ｏｓｔｅｏｃａｌｃｉｎ  Ｈｉｇｈ  Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  ＥＩＡ  ＫｉｔによりＥＩＡ法を用いて行った。また破骨細胞血中濃度マーカーとして、ＴＲＡＰ−５ｂ（骨型酒石酸抵抗性酸性フォスファターゼ）の定量分析をニットーボーメディカル株式会社製ＥＩＡラットＴＲＡＰ−５ｂによりＥＩＡ法を用いて行った。エストラジオール（Ｅ２）定量分析はＥＬＩＳＡ法を用いて行った。
【００３２】
また、本発明に係る投与飼料の安全性を評価するため、ラットの検死後に各臓器を摘出して病理組織学的検索を行った。摘出した臓器は１０％中性緩衝ホルマリンにて４８時間固定後、パラフィンブロック包埋を作製した。４μｍの薄切切片を作成し、ＨＥ染色を行い、光学顕微鏡下で組織学的変化を観察した。
【００３３】
本発明に係る骨密度を評価するため、ラットの検死後にラット両側大腿骨を採取し、単純Ｘ線画像を撮影した。
【００３４】
＜４．結果＞
４．−１  エストラジオール（Ｅ２）
図１はエストラジオール（Ｅ２）定量分析結果を示すグラフである。図示するように正常ラット群（Ｎｏｒｍａｌ＿ＭＦ）と骨粗鬆症モデル  ＭＦ投与群（ＯＶＸ＿ＭＦ）では有意にエストラジオールの値が低下し、両側卵巣摘出による骨粗鬆症の進行がバイオマーカーから確認された。
【００３５】
４．−２  オステオカルシン（Ｇｌａ−ＯＣ）
図２は、オステオカルシン定量分析結果を示すグラフである。図示するように、骨粗鬆症モデル  ２％Ｃａ混合ラット飼育用固形飼料投与群（ＯＶＸ＿ＭＦ＋２％Ｃａ）は、骨粗鬆症モデル  ＭＦ投与群ラット群（ＯＶＸ＿ＭＦ）と同程度のオステオカルシン活性を示したが、これは対照の正常コントロール  ＭＦ投与群（Ｎｏｒｍａｌ＿ＭＦ）と比較して１５０〜１６０％もの発現量であった。一方、骨粗鬆症モデル  ５％アブラツノザメ頭部軟骨粉末混合ラット飼育用固形飼料投与群（ＯＶＸ＿ＭＦ＋５％ＳＢ）では、正常コントロール  ＭＦ投与群（Ｎｏｒｍａｌ＿ＭＦ）と比較して１１０〜１２０％の発現量を示し、正常な発現量に近く、統計学的検定により本発明（５％アブラツノザメ頭部軟骨粉末）による著明な骨芽細胞バイオマーカー改善効果（２０〜３０％）が認められた。
【００３６】
４．−３  ＴＲＡＰ−５ｂ
図３は、ＴＲＡＰ−５ｂ定量分析結果を示すグラフである。図示するように、骨粗鬆症モデル  ２％Ｃａ混合ラット飼育用固形飼料投与群（ＯＶＸ＿ＭＦ＋２％Ｃａ）は、骨粗鬆症モデル  ＭＦ投与群ラット群（ＯＶＸ＿ＭＦ）と同程度のＴＲＡＰ−５ｂ活性を示したが、これは対照の正常コントロール  ＭＦ投与群（Ｎｏｒｍａｌ＿ＭＦ）と比較して７０％の活性であった。一方、骨粗鬆症モデル  ５％アブラツノザメ頭部軟骨粉末混合ラット飼育用固形飼料投与群（ＯＶＸ＿ＭＦ＋５％ＳＢ）では、正常コントロール  ＭＦ投与群（Ｎｏｒｍａｌ＿ＭＦ）と比較して９０％の発現量を示し、正常な発現量に近く、統計学的検定により本発明（５％アブラツノザメ頭部軟骨粉末）による著明な破骨細胞バイオマーカー改善効果（２０％）が認められた。
【００３７】
４．−４  生化学検査
図４〜８には、１２週間投与における血清生化学検査結果のグラフを示す。このうちカルシウム値においては、骨粗鬆症モデル  ２％Ｃａ混合ラット飼育用固形飼料投与群（ＯＶＸ＿ＭＦ＋２％Ｃａ）の血中カルシウム値は骨粗鬆症モデル  ＭＦ投与群ラット群（ＯＶＸ＿ＭＦ）と同レベルであり、正常コントロール  ＭＦ投与群（Ｎｏｒｍａｌ＿ＭＦ）と比較し低値を示した。一方、１％アブラツノザメ頭部軟骨粉末混合ラット飼育用固形飼料投与群（ＯＶＸ＿ＭＦ＋５％ＳＢ）、５％アブラツノザメ頭部軟骨粉末混合ラット飼育用固形飼料投与群（ＯＶＸ＿ＭＦ＋５％ＳＢ）においてはいずれも、正常コントロール  ＭＦ投与群（Ｎｏｒｍａｌ＿ＭＦ）と同レベルを示した。
【００３８】
つまり本発明によれば、正常と同レベルの血中Ｃａ値を維持できることが示された。なお、その他の生化学検査項目は各投与群において正常値を示した。２４週間投与においても同様の結果が得られた。１％アブラツノザメ頭部軟骨粉末混合ラット飼育用固形飼料投与群（ＯＶＸ＿ＭＦ＋５％ＳＢ）、５％アブラツノザメ頭部軟骨粉末混合ラット飼育用固形飼料投与群（ＯＶＸ＿ＭＦ＋５％ＳＢ）、１０％アブラツノザメ頭部軟骨粉末混合ラット飼育用固形飼料投与群（ＯＶＸ＿ＭＦ＋１０％ＳＢ）のすべてのアブラツノザメ頭部軟骨粉末投与群において、生化学検査項目は基準値内を示し、生化学的検査での安全性が確認された。
【００３９】
４．−５  病理組織学的検索
図９には、病理組織学検査での正常コントロール  ＭＦ投与群（Ｎｏｒｍａｌ＿ＭＦ）と骨粗鬆症モデル  １０．０％アブラツノザメ頭部軟骨粉末混合ラット飼育用固形飼料投与群（ＯＶＸ＿ＭＦ＋１０％ＳＢ）のＨＥ染色標本像を示す。１２週間投与と２４週間投与のいずれにおいても、正常コントロール  ＭＦ投与群（Ｎｏｒｍａｌ＿ＭＦ）、骨粗鬆症モデル  ＭＦ投与群（ＯＶＸ＿ＭＦ）、骨粗鬆症モデル  ２％Ｃａ混合ラット飼育用固形飼料投与群（ＯＶＸ＿ＭＦ＋２％Ｃａ）、骨粗鬆症モデル  １．２％アブラツノザメ頭部軟骨粉末混合ラット飼育用固形飼料投与群（ＯＶＸ＿ＭＦ＋１％ＳＢ）、骨粗鬆症モデル  ５．０％アブラツノザメ頭部軟骨粉末混合ラット飼育用固形飼料投与群（ＯＶＸ＿ＭＦ＋１％ＳＢ）、骨粗鬆症モデル  １０．０％アブラツノザメ頭部軟骨粉末混合ラット飼育用固形飼料投与群（ＯＶＸ＿ＭＦ＋１０％ＳＢ）のすべての投与群において形態学的異常は認められなかった。
【００４０】
４．−６  両側大腿骨単純Ｘ 線画像
図１０は、両側大腿骨単純Ｘ 線撮影写真である。上から順に、正常コントロール  ＭＦ投与群（Ｎｏｒｍａｌ＿ＭＦ）、骨粗鬆症モデル  ＭＦ投与群（ＯＶＸ＿ＭＦ）、骨粗鬆症モデル  １．２％アブラツノザメ頭部軟骨粉末混合ラット飼育用固形飼料投与群（ＯＶＸ＿ＭＦ＋１％ＳＢ）の写真である。図示するように、骨端部を比較すると、本発明に係る実験群においては正常のものと同等に骨密度が高かった。したがって、アブラツノザメ頭部軟骨粉末１％ のみの投与であっても、２４週間の投与によって骨端部での骨密度低下は認められず、正常と同等に骨密度は維持されており、骨粗鬆症予防効果が認められた。
【産業上の利用可能性】
【００４１】
本発明の骨リモデリング改善剤、骨形成促進剤および骨形成促進食品によれば、骨形成を目的とした治療や予防に効果を有する、副作用が少なくて長期投与可能な骨リモデリング改善剤等を、食習慣があり安全なアブラツノザメを原料として、その由来成分を有効成分として提供できる。したがって、健康福祉・医療・飲食料品など、関連する産業分野において利用性の高い発明である。
【００４２】
なお本発明の骨リモデリング改善剤等は、ヒトにおける骨粗鬆症を適用対象と想定して完成されたものであるが、動物にも適用可能である。特に愛玩動物の需要増大および関連産業の拡大傾向が今後も予想されており、本発明はその点からも産業上利用性の高い発明である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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