(57)【要約】      （修正有）【課題】シアロ糖鎖を含む糖鎖試料を液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ-ＭＳ）で簡便かつ高感度に分析しうる方法を提供する。【解決手段】液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ−ＭＳ）におけるシアロ糖鎖の検出に用いる蛍光標識につき、一般的に用いられる２−アミノベンズアミド（２ＡＢ）標識からカチオン性蛍光標識である２−アミノピリジン（ＰＡ）標識に変更するとともに、液体クロマトグラフィー（ＬＣ）部分に用いるカラムにつき、一般的に用いられるアミド基やオクタデシル基が結合したカラムからトリアコンチル基が結合したカラムに変更することで、質量分析の感度を低下させずにシアロ糖鎖の分離を向上させることができ、これにより、シアロ糖鎖の異性体を識別して分析することが可能となる。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
シアロ糖鎖を含む糖鎖試料を液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ−ＭＳ）により分析する方法であって、糖鎖試料の標識としてカチオン性蛍光標識を用い、かつ、液体クロマトグラフィーのカラムとしてトリアコンチル基が結合したカラムを用いる方法。
【請求項２】
質量分析におけるシアロ糖鎖のイオン化法としてエレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）法を用いる、請求項１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、生体試料に含まれるシアロ糖鎖を含む糖鎖試料を液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ−ＭＳ）を用いて分析する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
生体組織や細胞に存在しているすべてのタンパク質を網羅的に解析するプロテオミクス研究はその解析技術の進歩と相俟って、近年急速に展開し、核酸（ＤＮＡ）、タンパク質に続く第三の生命鎖ともいわれている糖鎖の解析にも盛んに応用され始めている。糖鎖に着目した大規模解析（グライコミクス解析）としては、ヒト血清中の糖鎖を網羅的に解析した例がある（非特許文献１）。
【０００３】
糖鎖は電荷をもたない中性糖鎖、負電荷を有する酸性糖鎖に大別される。中性糖鎖に比べシアロ糖鎖に代表される酸性糖鎖は、プロテオミクス技術のベースとなる質量分析計を用いた分析が困難である。例えば、ＭＡＬＤＩ-ＴＯＦ-ＭＳを用いると、シアロ糖鎖におけるシアル酸が不安定であるため、分析時にシアル酸が分解したシグナルが検出される。
【０００４】
分析時のシアル酸の分解を抑制する方法として、シアル酸を化学修飾した後に分析する方法が報告されているが、全てのシアル酸を簡便に修飾する方法はない。また、ＭＡＬＤＩ法よりもイオン化がソフトなエレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）法によれば、シアル酸の脱離を抑制できることが知られているが、シアロ糖鎖の異性体を識別して分析することは困難であった。
【０００５】
一方、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）でシアロ糖鎖を分離できることが報告されている。また、高速液体クロマトグラフィーにおけるシアロ糖鎖の分離を向上させるために、溶媒に、塩を添加することが行われている（非特許文献２）。
【０００６】
しかしながら、高速液体クロマトグラフィーにより分離したシアロ糖鎖を質量分析により分析する場合、溶媒に添加した塩が質量分析の感度を低下させてしまう（非特許文献３）。このため、液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ-ＭＳ）によりシアロ糖鎖の異性体を識別して分析することは困難であった。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Miura  Y.  et  al.,  Trends  in  Glycoscience  and  Glycotechnology,  2008  Jan;20(111):17-27.
【非特許文献２】Ahn  J.  et  al.,  Journal of Chromatography B,  2010,  878, 403-408.
【非特許文献３】生命科学のための最新マススペクトロメトリー、原田健一、田口良、橋本豊、講談社、pp34-43、pp230-250
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、上記従来技術の有する課題に鑑みてなされたものであり、その目的は、シアロ糖鎖を含む糖鎖試料を液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ-ＭＳ）で簡便かつ高感度に分析しうる方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意検討を行った結果、液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ−ＭＳ）におけるシアロ糖鎖の検出に用いる蛍光標識につき、一般的に用いられる２−アミノベンズアミド（２ＡＢ）標識からカチオン性蛍光標識である２−アミノピリジン（ＰＡ）標識に変更するとともに、液体クロマトグラフィー（ＬＣ）部分に用いるカラムにつき、一般的に用いられるアミド基やオクタデシル基が結合したカラムからトリアコンチル基が結合したカラムに変更することで、質量分析の感度を低下させずにシアロ糖鎖の分離を向上させることができ、これにより、シアロ糖鎖の異性体を識別して分析することが可能となることを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１０】
従って、本発明は、シアロ糖鎖を含む糖鎖試料を液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ−ＭＳ）により分析する方法であって、糖鎖試料の標識としてカチオン性蛍光標識を用い、かつ、液体クロマトグラフィーのカラムとしてトリアコンチル基が結合したカラムを用いる方法を提供するものである。
【００１１】
また、本発明は、好ましい態様において、質量分析におけるシアロ糖鎖のイオン化法としてエレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）法を用いる、上記方法を提供するものである。
【発明の効果】
【００１２】
本発明により、液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ−ＭＳ）によるシアロ糖鎖含む糖鎖試料をの分析を、簡便かつ高感度で行うことが可能となった。これにより、例えば、シアロ糖鎖の異性体を識別して分析することが可能となった。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】ウシフェツイン由来のＮ型糖鎖を２−アミノピリジン（ＰＡ）標識し、トリアコンチル基が結合したカラムを用いて液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ−ＭＳ）を行い、得られた液体クロマトグラフィー（ＬＣ）のクロマトグラム（上）と、各ピークで検出された質量電荷比（ｍ／ｚ）の値が1003.85、1149.40、1186.41、1331.96、1477.51、1623.06である質量分析（ＭＳ）のクロマトグラム（下）を示す図である。
【図２】図１の上段の液体クロマトグラフィー（ＬＣ）のクロマトグラムでみられたピーク１から３についての質量分析（ＭＳ）のスペクトルを示す図である。
【図３】図１の上段の液体クロマトグラフィー（ＬＣ）のクロマトグラムでみられたピーク４から６の質量分析（ＭＳ）のスペクトルを示す図である。
【図４】図１の上段の液体クロマトグラフィー（ＬＣ）のクロマトグラムでみられたピーク７から９についての質量分析（ＭＳ）のスペクトルを示す図である。
【図５】図１の上段の液体クロマトグラフィー（ＬＣ）のクロマトグラムでみられたピーク１０から１２の質量分析（ＭＳ）のスペクトルを示す図である。
【図６】ウシフェツイン由来のＮ型糖鎖を２−アミノベンズアミド（２ＡＢ）標識し、アミド基が結合したカラムを用いて液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ−ＭＳ）を行い、得られた液体クロマトグラフィー（ＬＣ）のクロマトグラム（上）と、各ピークで検出された質量電荷比（ｍ／ｚ）の値が1024.86、1207.43、1170.41、1352.98、1498.52、1644.07である質量分析（ＭＳ）のクロマトグラム（下）を示す図である。
【図７】図４の上段の液体クロマトグラフィー（ＬＣ）のクロマトグラムでみられたピーク１から３の質量分析（ＭＳ）のスペクトルを示す図である。
【図８】図４の上段の液体クロマトグラフィー（ＬＣ）のクロマトグラムでみられたピーク４から６の質量分析（ＭＳ）のスペクトルを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
（シアロ糖鎖を含む糖鎖試料の調製）
本発明において、液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ−ＭＳ）に供する、シアロ糖鎖を含む糖鎖試料としては、その由来に特に制限はない。シアロ糖鎖を含む糖鎖試料は、例えば、以下の工程により効率的に調製することができる。
【００１５】
−生体試料から糖鎖を遊離する工程−
シアロ糖鎖を含む糖鎖の遊離に用いる生体試料としては、例えば全血、血清、血漿、尿、唾液、細胞、組織、ウイルス、植物組織などが挙げられる。また、本発明においては、精製された、あるいは未精製の糖タンパク質を用いることができる。試料は脱脂、脱塩、タンパク質分画、熱変性などの方法により前処理されていてもよい。
【００１６】
本発明においては、糖鎖遊離手段を用いて上記生体試料に含まれる糖鎖を含む分子（例えば、糖タンパク質）から糖鎖を遊離させることができる。糖鎖を遊離させる手段としては、Ｎ−グリコシダーゼあるいはＯ−グリコシダーゼを用いたグリコシダーゼ処理、ヒドラジン分解、アルカリ処理によるβ脱離などの方法を用いることができる。Ｎ型糖鎖の分析を行う場合は、Ｎ−グリコシダーゼを用いる方法が好ましい。グリコシダーゼ処理に先立って、トリプシンやキモトリプシンなどを用いてプロテアーゼ処理を行ってもよい。
【００１７】
−遊離した糖鎖を捕捉する工程−
糖鎖は生体内物質のなかで唯一、アルデヒド基をもつ物質である。すなわち、糖鎖は水溶液などの状態で環状のヘミアセタール型と、非環状型のアルデヒド型とが平衡で存在する。タンパク質や核酸、脂質など糖鎖以外の生体内物質にはアルデヒド基が含まれていない。このことから、アルデヒド基と特異的に反応して安定な結合を形成するヒドラジド基を有する捕捉担体を利用すれば、糖鎖のみを選択的に捕捉することが可能である。すなわち、遊離させた糖鎖のアルデヒド基を、その表面にヒドラジド基を有する固相担体に接触させ、ヒドラゾン結合により、糖鎖を担体に捕捉することができる。
【００１８】
糖鎖を捕捉するための担体としては、ポリマー粒子を用いることが好ましい。ポリマー粒子は、少なくとも表面の一部にヒドラジドを有した固体あるいはゲル粒子であることが好ましい。ポリマー粒子が固体粒子あるいはゲル粒子であれば、ポリマー粒子に糖鎖を捕捉させたのち、遠心分離やろ過などの手段によって容易に回収することができる。また、ポリマー粒子をカラムに充填して用いることも可能である。カラムに充填して用いる方法は、特に連続操作化の観点から重要となる。反応容器としてフィルタープレート（例えば、Millipore社製のMultiScreen  Solvinert  Filter  Plate）を用いることにより、複数のサンプルを同時に処理することが可能となり、例えばゲルろ過に代表されるカラム操作による従来の精製手段と比較して、糖鎖精製のスループットが大幅に向上される。
【００１９】
ポリマー粒子の形状は特に限定しないが、球状またはそれに類する形状が好ましい。ポリマー粒子が球状の場合、平均粒径は好ましくは０．０５〜１０００μｍであり、より好ましくは０．０５〜２００μｍであり、さらに好ましくは０．１〜２００μｍであり、最も好ましくは０．１〜１００μｍである。平均粒径が下限値未満では、ポリマー粒子をカラムに充填して用いる際、通液性が悪くなるために大きな圧力を加える必要がある。また、ポリマー粒子を遠心分離やろ過で回収することも困難となる。平均粒径が上限値を超えると、ポリマー粒子と試料溶液の接触面積が少なくなり、糖鎖捕捉の効率が低下する。本発明においては、ヒドラジド基含有ポリマー粒子である「BlotGlyco(Ｒ)」（住友ベークライト株式会社製、#BS-45603）を好適に用いることができる。
【００２０】
糖鎖を特異的に捕捉するポリマー粒子によって糖鎖を捕捉する際の反応系のｐＨは、好ましくは２〜９、より好ましくは２〜７であり、さらに好ましくは２〜６である。ｐＨ調整のためには、各種緩衝液を用いることができる。糖鎖捕捉時の温度は、好ましくは４〜９０℃、より好ましくは４〜８０℃、さらに好ましくは３０〜８０℃であり、最も好ましくは４０〜８０℃である。反応時間は適宜設定することができる。ポリマー粒子をカラムに充填して試料溶液を通過させてもよい。
【００２１】
ポリマー粒子を用いた場合、担体表面には糖鎖以外の莢雑物が非特異的に吸着しているため、これらを洗浄除去する必要がある。洗浄液としては、水、緩衝液、界面活性剤を含む水または緩衝液、有機溶剤などを適宜組み合わせて用いることが好ましい。特に好ましい形態は、界面活性剤を含む水または緩衝液で十分に洗浄したのち、有機溶剤で洗浄し、最後に水で洗浄する方法である。これらの洗浄により、非特異的吸着物がポリマー粒子表面から除去される。
【００２２】
担体上の余剰官能基は、例えば、無水酢酸などを利用して、キャッピングすることができる。
【００２３】
−捕捉した糖鎖を再遊離する工程−
ヒドラジド基とアルデヒド基との反応によって生じるヒドラゾン結合は、酸処理によって容易に切断されるため、糖鎖を捕捉したのち、糖鎖を担体から簡単に切り離すことができる。この工程では、捕捉担体に結合した糖鎖を再遊離するために、酸と有機溶媒の混合溶媒あるいは酸と水と有機溶媒の混合溶媒にて酸処理を行うことが好ましい。酸と水と有機溶媒の混合溶媒の場合、水の含有率は好ましくは０．１％〜９０％、より好ましくは０．１％〜８０％、さらに好ましくは０．１％〜５０％である。水の代わりに水性緩衝液を含有しても良い。緩衝液の濃度は好ましくは０．１ｍＭ〜１Ｍ、より好ましくは０．１ｍＭ〜５００ｍＭ、さらに好ましくは１ｍＭ〜１００ｍＭである。反応溶液のｐＨは好ましくは２〜９、より好ましくは２〜７であり、さらに好ましくは２〜６である。使用する酸は例えば、酢酸、ギ酸、トリフルオロ酢酸、塩酸、クエン酸、リン酸、硫酸が好ましく、より好ましくは酢酸、ギ酸、トリフルオロ酢酸、リン酸、さらに好ましくは酢酸、トリフルオロ酢酸である。反応温度に関しては４〜９０℃が好ましく、好ましくは２５〜９０℃で、さらに好ましくは４０〜９０℃である。反応時間は、１０分間〜２４時間、好ましくは１０分間〜８時間、より好ましくは１０分間〜３時間である。反応は、糖鎖を遊離させる反応を効率よく行う観点から、開放系で行って溶媒を完全に蒸発させることが好ましい。本工程により、精製された糖鎖試料を得ることができる。
【００２４】
（カチオン性蛍光色素による標識）
本発明においては、調製されたシアロ糖鎖を含む糖鎖試料に対し、カチオン性蛍光色素を作用させて標識する。カチオン性蛍光色素としては、例えば、２−アミノピリジン（ＰＡ）、２−アミノ−９（１０Ｈ）−アクリドン、５−アミノフルオレセイン、ダンシルエチレンジアミン、７−アミノ−４−メチルクマリン、７−アミノ−１−ナフトール、３−（アセチルアミノ）−６−アミノアクリジン、２−アミノ−６−シアノエチルピリジン、エチル  ｐ−アミノベンゾエート、及びｐ−アミノベンゾニトリルが挙げられるが、これらに制限されない。これらカチオン性蛍光色素による標識は、例えば、還元的アミノ化反応により行うことができる。
【００２５】
反応系においては、ｐＨが酸性から中性の条件であるのが好ましく、好ましくは２〜９、より好ましくは２〜８であり、さらに好ましくは２〜７である。反応温度に関しては４〜９０℃が好ましく、好ましくは２５〜９０℃で、さらに好ましくは４０〜９０℃である。カチオン性蛍光色素の濃度は、１ｍＭ〜１０Ｍであるのが好ましく、還元剤の濃度は、１ｍＭ〜１０Ｍであるのが好ましい。反応時間は、１０分間〜２４時間、好ましくは１０分間〜８時間、より好ましくは１０分間〜３時間である。
【００２６】
特に、カチオン性蛍光色素が２−アミノピリジンの場合、ｐＨが酸性から中性の条件で、好ましくは２〜９、より好ましくは２〜８であり、さらに好ましくは２〜７である。反応温度に関しては４〜９０℃、好ましくは３０〜９０℃で、さらに好ましくは４０〜８０℃である。２−アミノピリジンの濃度は１ｍＭ〜１０Ｍ、好ましくは１０ｍＭ〜１０Ｍで、さらに好ましくは１００ｍＭ〜１Ｍである。還元剤の濃度は、１ｍＭ〜１０Ｍ、好ましくは１０ｍＭ〜１０Ｍ、さらに好ましくは１００ｍＭ〜２Ｍである。反応時間は、１０分間〜２４時間、好ましくは１０分間〜８時間、さらに好ましくは１時間〜３時間である。
【００２７】
還元剤としては、例えば、シアノ水素化ホウ素ナトリウム、メチルアミンボラン、ジメチルアミンボラン、トリメチルアミンボラン、ピコリンボラン、ピリジンボランなどが使用可能であるが、ジメチルアミンボランを使用するのが反応性の面から考えて好ましい。
【００２８】
この反応後、得られる溶液には、標識された糖鎖の他に、過剰量加えた未反応のカチオン性蛍光色素や還元剤が存在するため、これら余剰試薬を除去することが好ましい。余剰試薬の除去としては、シリカカラムによる除去、ゲル濾過による除去、イオン交換樹脂による除去などが挙げられる。いずれの方法を用いても良いが、シアル酸の離脱を防ぐために使用する溶媒は中性であることが好ましい。
【００２９】
（標識されたシアロ糖鎖を含む糖鎖試料の液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ−ＭＳ）による分析）
本発明においては、標識されたシアロ糖鎖を含む糖鎖試料を液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ-ＭＳ）に供し、シアロ糖鎖を分離し検出する。
【００３０】
液体クロマトグラフィーのカラムとしては、トリアコンチル基が結合したカラムを用いる。これによりシアロ糖鎖の異性体を分離することが可能となる。
【００３１】
また、質量分析におけるシアロ糖鎖のイオン化法としては、エレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）法を用いることが好ましい。この方法は、ソフトなイオン化法であり、シアロ糖鎖からのシアル酸の脱離を抑制する上で有利である。
【００３２】
液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ-ＭＳ）により分析されたシアロ糖鎖は、質量電荷比（ｍ／ｚ）の値を読み取ることができ、そのピークが検出される。そして、質量電荷比やピーク強度（ピーク高さ、ピーク面積など任意の指標）から、糖鎖の定量や糖鎖の構造分析を行うことができる。
【００３３】
糖鎖の分析においては、各種データベース（例えば、GlycoMod、Glycosuiteなど）を利用することができる。上記質量分析によりピークとして検出された分子を、さらに質量分析に供することにより、より詳細な解析を行うこともできる。
【実施例】
【００３４】
以下、実施例及び比較例に基づいて本発明をより具体的に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
【００３５】
[実施例１]
シアロ糖鎖の異性体を含むことが知られているウシフェツインのＮ型糖鎖を、BlotGlycoキット（住友ベークライト株式会社製）のゲルに結合させた。ウシフェツイン由来のＮ型糖鎖が固定化されたゲルを、BlotGlycoキットの方法に従って洗浄した後、BlotGlycoキットの説明書に記載の条件に従い、ゲルに固定化させた糖鎖を遊離させ、遊離した糖鎖を２−アミノピリジン（ＰＡ）標識した。得られた標識シアロ糖鎖を液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ-ＭＳ）にて分析した。液体クロマトグラフィー（ＬＣ）の条件を表１に示す。
【００３６】
【表１】
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【００３７】
なお、表１のＡ液及びＢ液は、それぞれ移動相を構成する液体であり、これらＡ液とＢ液とを混合して移動相の極性を調整するようになっている。また、表１において、「Ｂ：ａ％（Ｔ1分）→Ｂ：ｂ％（Ｔ2分）」という記載は、Ｂ溶液の濃度を、（Ｔ2−Ｔ1）分間で、ａ％からｂ％まで変化させたことを意味する。ただし、Ｔ1，Ｔ2，ａ，ｂはそれぞれ実数を表わす。また、表１において％は体積を基準とした百分率を表わす。
【００３８】
ウシフェツイン由来のＮ型糖鎖を２−アミノピリジン（ＰＡ）標識し、トリアコンチル基が結合したカラムを用いて液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ-ＭＳ）を行い、図１の上段に示す液体クロマトグラフィー（ＬＣ）のクロマトグラムが得られる。図２から５で示されるようにピーク１〜１２の液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ−ＭＳ）のスペクトルより質量電荷比（ｍ／ｚ）の値が1003.85、1149.40、1186.41、1331.96、1477.51、1081.70、1623.06のシグナルが検出された。これらの質量電荷比（ｍ／ｚ）の値は、表２に示すように、ウシのフェツインに存在することが報告されているシアロ糖鎖を２−アミノピリジン（ＰＡ）標識したものに由来する値とほぼ一致する。これらの値で質量分析（ＭＳ）のクロマトグラムを作成すると、図１の下段で示されるように質量電荷比（ｍ／ｚ）の値が1003.85、1149.40、1186.41、1331.96、1477.51のシアロ糖鎖は２つ以上のピークがみられる。これらの結果より、シアロ糖鎖の異性体を分離できることが判明した。
【００３９】
【表２】
2013224885.tif 000004
【００４０】
[比較例１]
糖鎖の液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ-ＭＳ）は、２−アミノベンズアミド（２ＡＢ）標識したものを表３に示すような条件で行うのが一般的である。ウシフェツイン由来のＮ型糖鎖を２−アミノベンズアミド（２ＡＢ）標識し、アミド基が結合したカラムを用いて液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ-ＭＳ）を行うと、図６の上段に示す液体クロマトグラフィー（ＬＣ）のクロマトグラムが得られる。図７、８で示されるようにピーク１〜６の液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ−ＭＳ）のスペクトルより質量電荷比（ｍ／ｚ）の値が1024.86、1170.41、1207.43、1352.98、998.68、1498.52、1095.70、1644.07のシグナルが検出された。これらの質量電荷比（ｍ／ｚ）の値は、表４に示すようにウシのフェツインに存在することが報告されているシアロ糖鎖を２−アミノベンズアミド（２ＡＢ）標識したものに由来する値とほぼ一致する。これらの値で質量分析（ＭＳ）のクロマトグラムを作成すると、図６の下段で示されるように各質量電荷比（ｍ／ｚ）の値で１ピークしか検出されない。このように、従来法ではシアロ糖鎖の異性体を分離できないことが改めて確認できる。
【００４１】
【表３】
2013224885.tif 000005
【００４２】
なお、表３のＡ液及びＢ液は、それぞれ移動相を構成する液体であり、これらＡ液とＢ液とを混合して移動相の極性を調整するようになっている。また、表３において、「Ｂ：ａ％（Ｔ1分）→Ｂ：ｂ％（Ｔ2分）」という記載は、Ｂ溶液の濃度を、（Ｔ2−Ｔ1）分間で、ａ％からｂ％まで変化させたことを意味する。ただし、Ｔ1，Ｔ2，ａ，ｂはそれぞれ実数を表わす。また、表３において％は体積を基準とした百分率を表わす。
【００４３】
【表４】
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【産業上の利用可能性】
【００４４】
本発明によれば、シアロ糖鎖につき、異性体を識別して分析することが可能となるため、本発明は、例えば、シアロ糖鎖の異性体まで含めた解析による癌などの疾患の診断や、シアロ糖鎖を標的とした新たなバイオマーカーの開発、医薬品のスクリーニングや品質管理に有用である。従って、本発明は、例えば、医療分野において大きく貢献しうるものである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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