(57)【要約】【課題】  ＩＣＧのようなアニオン性の官能基を有する親水性色素が漏出しにくい粒子を提供することを目的とする。【解決手段】  ＩＣＧのようなアニオン性の官能基を有する色素と、鉄イオン（Ｆｅ２＋またはＦｅ３＋）、亜鉛イオンのような多価の金属イオンと、ポリオール化合物と、を有することを特徴とする粒子。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
アニオン性の官能基を有する色素と、多価の金属イオンと、ポリオール化合物と、を有することを特徴とする粒子。
【請求項２】
アニオン性の官能基を有する色素と、多価の金属イオンと、疎水性のポリマーとを有することを特徴とする粒子。
【請求項３】
前記アニオン性の官能基を有する色素がインドシアニングリーンであることを特徴とする請求項１または２に記載の粒子。
【請求項４】
前記多価の金属イオンが、カルシウムイオン、マグネシウムイオン、マンガンイオン、錫イオン、亜鉛イオン、鉄イオンのうち少なくともいずれか一種であることを特徴とする請求項１乃至３のいずれか一項に記載の粒子。
【請求項５】
前記ポリオール化合物がタンニン酸、デキストラン、ヘパリン、ヘパリンナトリウムのいずれかであることを特徴とする請求項１に記載の粒子。
【請求項６】
前記粒子がさらに分散安定化剤を有することを特徴とする請求項１乃至５のいずれか一項に記載の粒子。
【請求項７】
請求項１乃至６に記載のいずれかの粒子と分散媒とを有することを特徴とする光音響イメージング用造影剤。
【請求項８】
請求項１乃至６に記載のいずれかの粒子と分散媒とを有することを特徴とするセンチネルリンパ節用造影剤。
【請求項９】
アニオン性の官能基を有する色素と、多価の金属イオンとを有することを特徴とする光音響イメージング用造影剤。
【請求項１０】
アニオン性の官能基を有する色素と、多価の金属イオンの塩と、疎水性のポリマーと、有機溶媒との混合液Ａを得る工程と、前記混合液Ａと水とを混合する工程とを有する粒子の製造方法であって、前記有機溶媒がジメチルスルホキシドであることを特徴とする粒子の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、粒子及び前記粒子を有する光音響イメージング用造影剤、センチネルリンパ節用造影剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
近年、非侵襲的に診断ができるイメージング方法として光音響イメージングが注目されている。
【０００３】
光音響イメージング法は、光を照射された測定対象の分子が放出する熱が起こす体積膨張により生じる音響波の強度と音響波の発生位置を検出することで、測定対象の画像を得る方法である。光音響イメージング法において、測定対象部位からの音響波の強度を大きくするための造影剤として色素を用いることができる。
【０００４】
光を吸収することで、音響波を発する色素としてインドシアニングリーン（Ｉｎｄｏｃｙａｎｉｎｅ  Ｇｒｅｅｎ、以下、ＩＣＧと略すことがある）が知られている。なお、本明細書において、ＩＣＧとは下記の化学式（１）の構造で示される化合物を指す。
【０００５】
【化１】
2013224289.tif 000002
【０００６】
ただし、対イオンはＮａ＋でなくともよく、Ｈ＋あるいはＫ＋でもよい。
【０００７】
ここで、非特許文献１には、ポリビニルアルコール（Ｐｏｌｙｖｉｎｙｌ  ａｌｃｏｈｏｌ、ＰＶＡ）を界面活性剤にしてエマルジョン溶媒拡散法によって得たＩＣＧ含有乳酸−グリコール酸共重合体（ｐｏｌｙ（ｌａｃｔｉｄｅ−ｃｏ−ｇｌｙｃｏｌｉｄｅ、以下ＰＬＧＡと略すことがある）粒子が開示されている。
【０００８】
一方、近年早期癌の発見率が向上し、早期癌の切除手術が行われる機会も増加している。一般に、早期癌の手術においては、病変部（癌細胞）に加え、病変部の周囲に存在する転移が疑われるリンパ節を切除するか否かの判断が重要になる。
【０００９】
癌がリンパ節に転移する場合は、ランダムに転移が生じることは少なく、一定のパターンに従って、病変部からリンパ管を経て、リンパ節に転移することが示唆されている。癌の原発巣からリンパ管に入った癌細胞が最初に到達するリンパ節がセンチネルリンパ節（Ｓｅｎｔｉｎｅｌ  Ｌｙｍｐｈ  Ｎｏｄｅ、本明細書において、ＳＬＮと略すことがある）であり、リンパ節に転移がある場合には、癌細胞の移動経路の上流であるＳＬＮに転移があると考えられる。
【００１０】
そのため、ＳＬＮに造影剤を集積させ、精度良く検出する技術が求められている。
【００１１】
ここで、特許文献１には、ＳＬＮを検出するために、ＩＣＧを蛍光イメージング用造影剤として用いる例が報告されている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１２】
【非特許文献１】Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌｏｇｙ  Ｂ：Ｂｉｏｌｏｇｙ，７４（２００４）２９−３８
【特許文献】
【００１３】
【特許文献１】特開２００１−２９９６７６
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
しかし、非特許文献１に開示されたＩＣＧ含有ＰＬＧＡ粒子は、ＩＣＧがアニオン性の官能基を有する親水性の色素であるため、血清などの水溶液中では、ＩＣＧが漏出するという問題があった。そこで本発明は、ＩＣＧのようなアニオン性の官能基を有する親水性色素が漏出しにくい粒子を提供することを目的とする。
【００１５】
また、特許文献１においては、ＩＣＧを単独で投与することにより、ＳＬＮの検出を行っている。しかし、本発明者らは、ＩＣＧを単独で投与するとＳＬＮへの集積量が少ないという課題を見出した。ＳＬＮへの集積量が少ないと、光音響イメージング法によってＳＬＮを検出する場合、信号強度が小さいと考えられる。ＳＬＮへの集積量が少ない理由は、ＩＣＧが低分子化合物であるがために、体外への排出が早いからであると考えられる。そこで、本発明は、ＳＬＮへの集積量が多い光音響イメージング用造影剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
第一の本発明に係る粒子は、アニオン性の官能基を有する色素と、多価の金属イオンと、ポリオール化合物とを有することを特徴とする。
【００１７】
第二の本発明に係る粒子は、アニオン性の官能基を有する色素と、多価の金属イオンと疎水性のポリマーとを有することを特徴とする。
【００１８】
第三の本発明に係る光音響イメージング用造影剤は、アニオン性の官能基を有する色素と、多価の金属イオンとを有することを特徴とする。
【００１９】
第四の本発明に係るＳＬＮ用造影剤は、アニオン性の官能基を有する色素と、多価の金属イオンとを有することを特徴とする。
【発明の効果】
【００２０】
本発明は、ＩＣＧのようなアニオン性の官能基を有する親水性色素が漏出しにくい粒子、光音響イメージング用造影剤、ＳＬＮ用造影剤を、提供することが出来る。
【００２１】
また、本発明は、ＳＬＮへの集積量が多く、検出信号が大きい、ＳＬＮ用造影剤、光音響イメージング用造影剤を提供することが出来る。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】本発明の実施形態１に係る粒子について説明するための図である。
【図２】本発明の実施形態２に係る粒子について説明するための図である。
【図３】本発明の実施形態４に係る粒子について説明するための図である。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
以下、本発明の実施形態について説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００２４】
最初に、実施形態１〜４で共通の内容について説明する。
【００２５】
（アニオン性の官能基を有する色素）
本実施形態においてアニオン性の官能基を有する色素は、特に限定されないが、６００ｎｍ乃至１３００ｎｍの範囲から選択される少なくとも１つの波長におけるモル吸光係数が１０６Ｍ−１ｃｍ−１以上であることが好ましい。
【００２６】
前記アニオン性の官能基を有する色素としては、アニオン性の官能基を有する、アジン系色素、アクリジン系色素、トリフェニルメタン系色素、キサンテン系色素、ポルフィリン系色素、シアニン系色素、フタロシアニン系色素、スチリル系色素、ピリリウム系色素、アゾ系色素、キノン系色素、テトラサイクリン系色素、フラボン系色素、ポリエン系色素、ＢＯＤＩＰＹ（登録商標）系色素、インジゴイド系色素、タール系色素を挙げることが出来る。前記アニオン性の官能基を有する色素は、ナトリウム塩、あるいは、カリウム塩であってもよい。
【００２７】
前記シアニン系色素としては、例えば、ＩＣＧ、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）系色素（インビトロジェン社製）、Ｃｙ（登録商標）系色素（ＧＥ  ヘルスケア  バイオサイエンス社製）、ＩＲ−７８３、ＩＲ−８０６、ＩＲ−８２０（シグマ  アルドリッチ  ジャパン株式会社製）、ＩＲＤｙｅ  ８００ＣＷ、ＩＲＤｙｅ  ８００ＲＳ（登録商標）（ＬＩ−ＣＯＲ社製）、ＡＤＳ７８０ＷＳ、ＡＤＳ７９５ＷＳ、ＡＤＳ８３０ＷＳ、ＡＤＳ８３２ＷＳ（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｄｙｅ  Ｓｏｕｒｃｅ社製）を挙げることが出来る。前記インジゴイド系色素としては、例えば、インジゴカルミンを挙げることが出来る。また、前記タール系色素としては、例えば、パテントブルーを挙げることが出来る。
【００２８】
本実施形態における粒子、光音響イメージング用造影剤、ＳＬＮ用造影剤は、上記アニオン性の官能基を有する色素を１種類のみ有していてもよく、複数種類有していてもよい。
【００２９】
（多価の金属イオン）
本実施形態における多価の金属イオンとしては２価以上の金属イオンであれば特に限定されない。
【００３０】
また、アニオン性の官能基を有する色素の原料物質が、ナトリウム塩、カリウム塩等である場合は、多価の金属イオンとしては、塩の水への溶解性がナトリウムイオン、カリウムイオン等より小さいものであることが好ましい。なぜなら、塩の水への溶解性が小さい金属イオンを用いることにより、金属イオンの交換が起こり、アニオン性の官能基を有する色素の難溶化が進むからである。
【００３１】
本実施形態における多価の金属イオンは、鉄イオン（Ｆｅ２＋またはＦｅ３＋）、亜鉛イオン、錫イオン、マンガンイオン、マグネシウムイオン、カルシウムイオン、アルミニウムイオンのうち少なくともいずれか一種である。多価の金属イオンとしては、鉄イオン（Ｆｅ３＋）、アルミニウムイオンが好ましい。なぜなら、価数が３価以上であれば、アニオン性の官能基を有する色素と多点で結合を形成でき、より安定性の高い粒子ができると考えられるからである。
【００３２】
本実施形態における粒子、光音響イメージング用造影剤、ＳＬＮ用造影剤は、上記多価の金属イオンを１種類のみ有していていもよく、複数種類有していてもよい。
【００３３】
前記鉄イオンを有する粒子、光音響イメージング用造影剤、ＳＬＮ用造影剤を調製する際に用いる金属含有試薬としては、塩化鉄（ＩＩＩ）、塩化鉄（ＩＩ）を挙げることが出来る。
【００３４】
前記亜鉛イオンを有する粒子、光音響イメージング用造影剤、ＳＬＮ用造影剤を調製する際に用いる金属含有試薬としては、塩化亜鉛、酢酸亜鉛を挙げることが出来る。
【００３５】
前記スズイオンを有する粒子、光音響イメージング用造影剤、ＳＬＮ用造影剤を調製する際に用いる金属含有試薬としては、塩化スズを挙げることが出来る。
【００３６】
前記マンガンイオンを有する粒子、光音響イメージング用造影剤、ＳＬＮ用造影剤を調製する際に用いる金属含有試薬としては、塩化マンガンを挙げることが出来る。
【００３７】
前記マグネシウムイオンを有する粒子、光音響イメージング用造影剤、ＳＬＮ用造影剤を調製する際に用いる金属含有試薬としては、塩化マグネシウムを挙げることが出来る。
【００３８】
前記カルシウムイオンを有する粒子、光音響イメージング用造影剤、ＳＬＮ用造影剤を調製する際に用いる金属含有試薬としては、塩化カルシウムを挙げることが出来る。
【００３９】
前記アルミニウムイオンを有する粒子、光音響イメージング用造影剤、ＳＬＮ用造影剤を調製する際に用いる金属含有試薬としては、塩化アルミニウムを挙げることが出来る。
【００４０】
これらの金属含有試薬は、単独で使用してもよく、任意に混合して使用してもよい。
【００４１】
（製造に用いる溶媒）
本実施形態に係る粒子、光音響イメージング用造影剤、ＳＬＮ用造影剤の製造方法としては、種々の方法を利用することが出来る。
上記の製造方法で用いる溶媒としては、有機系溶媒、水系溶媒が挙げられる。有機系溶媒としては、ヘキサン、シクロへキサン、ヘプタン等の炭化水素類、アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル等のエーテル類、ジクロロメタン、クロロホルム、四塩化炭素、ジクロロエタン、トリクロロエタン等のハロゲン化炭化水素類、ベンゼン、トルエン等の芳香族炭化水素、酢酸エチル、酢酸ブチル等のエステル類、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシドなどの非プロトン性極性溶媒類、ピリジン誘導体を挙げることが出来る。また、水系溶媒としては、ＰＢＳ、ＨＥＰＥＳといった緩衝液、水を挙げることが出来る。これらの溶媒は、単独で使用してもよく、任意に混合して使用してもよい。
【００４２】
（粒子分散液中からの有機溶媒留去）
上記の製造方法において、有機溶媒を用いた場合には、粒子分散液中からの有機溶媒留去することも可能である。
留去は、従来知られる何れの方法でも実施可能であるが、加熱によって除去する方法、あるいはエバポレーター等の減圧装置を利用した方法を挙げることができる。
加熱による除去の場合の加熱温度は、粒子の収率が低下する高次凝集が防げれば特に限定されないが、好ましい温度は０℃以上８０℃以下の範囲である。
但し、留去は、本発明の目的を達成できる範囲において上記手法に限定されない。
【００４３】
（粒子分散液の精製）
調製した粒子分散液の精製は、従来知られる何れの方法でも実施可能であるが、サイズ排除カラムクロマトグラフィー法、限外濾過法、透析法、遠心分離法を挙げることが出来る。
但し、精製は、本発明の目的を達成できる範囲において上記手法に限定されない。
【００４４】
（粒子形状、粒子サイズ）
本実施形態に係る粒子、光音響イメージング用造影剤、ＳＬＮ用造影剤は、上記のアニオン性の官能基を有する色素や多価の金属イオンが集合した固体、すなわち、粒子であればどのような形状でもよく、真球状、楕円状、平面状、一次元のひも状などのいずれでもよい。
本実施形態に係る粒子、光音響イメージング用造影剤、ＳＬＮ用造影剤のサイズ（粒径）は特に制限されないが、１ｎｍ以上１０００ｎｍ以下であることが好ましく、１０ｎｍ乃至５００ｎｍであることがさらに好ましい。１０００ｎｍ以下である場合、血管中で血栓を形成しにくい。
【００４５】
以下に、各実施形態について説明する。
【００４６】
（実施形態１）
本発明に係る粒子は、アニオン性の官能基を有する色素と、多価の金属イオンと、ポリオール化合物とを有することを特徴とする。
【００４７】
本明細書において、ポリオール化合物とは、ヒドロキシル基を２つ以上有する化合物を指す。
【００４８】
アニオン性の官能基を有する色素と、多価の金属イオンとがイオン結合または配位結合し、多価の金属イオンとポリオール化合物がイオン結合または配位結合することで、粒子を形成する。このように粒子を形成することで、アニオン性の官能基を有する色素のもつ負電荷が、多価の金属イオンのもつ正電荷の一部によってキャンセルされる。さらに、多価の金属イオンのもつ正電荷の残りの一部が、ポリオール化合物の有するヒドロキシル基から水素原子が解離して生じた負電荷によってキャンセルされる。このように、本実施形態に係る粒子中のアニオン性の官能基を有する色素は、アニオン性の官能基を有する色素のもつ負電荷がキャンセルされているため、疎水性が高くなり、水との親和性が低くなっていると考えられる。そのため、本実施形態に係る粒子は、アニオン性の官能基を有する色素が漏出しにくい。
【００４９】
上記のように粒子が形成される理由を、図１を用いて説明する。図１では、アニオン性の官能基を有する色素としてＩＣＧを、多価の金属イオンとして亜鉛（ＩＩ）イオン（Ｚｎ２＋）を用いた例を示した。亜鉛（ＩＩ）イオンは、２価の正電荷を有するため、ＩＣＧの有する２つのスルホン酸基（アニオン性の官能基）の負電荷に引き寄せられ、イオン結合する。また、図１で示すように、亜鉛（ＩＩ）イオンは、１つのＩＣＧだけでなく、２つのＩＣＧのそれぞれのスルホン酸基に結合することもあるため、ＩＣＧ同士が近づく（図１（ａ））。ＩＣＧ同士が近づくと、疎水性が高まり、他の亜鉛（ＩＩ）イオンが結合したＩＣＧや、他のＩＣＧが集まる（図１（ｂ））。このようにして亜鉛（ＩＩ）イオンが結合したＩＣＧなどが集まって粒子を形成する。また、アニオン性の官能基を有する色素にイオン結合または配位結合した多価の金属イオンの一部は、正電荷が余り、その正電荷にポリオール化合物の有するヒドロキシル基から水素原子が解離して生じた負電荷が引き寄せられイオン結合または配位結合する。このようにして、より安定性の高い粒子が形成される。したがって、ポリオール化合物が存在することにより、より安定性の高い粒子が形成されるため、アニオン性の官能基を有する色素は、水の相へと移行しにくい、つまり、粒子から漏出しにくい構成となる。
【００５０】
なお、上記のイオン結合や配位結合の有無は、Ｉｎｆｒａｒｅｄ  Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ（ＩＲ）のスペクトルのピークシフトを見ることで確認することができる。
【００５１】
本実施形態における粒子は、アニオン性の官能基を有する色素を１種類有していても、複数種類有していてもよい。また、本実施形態における粒子は、多価の金属イオンを１種類有していても、複数種類有していてもよい。また、本実施形態における粒子は、ポリオール化合物を１種類有していても、複数種類有していてもよい。
【００５２】
（ポリオール化合物）
本実施形態におけるポリオール化合物としては、ヒドロキシル基を２つ以上有する化合物であれば特に限定されない。
【００５３】
本実施形態におけるポリオール化合物の平均分子量は５００以上、１００００００以下であることが好ましく、１０００以上６０００００以下であることがさらに好ましい。
【００５４】
本実施形態におけるポリオール化合物として、デキストラン（下記化学式（２））、ヘパリン（下記化学式（３））、プルランといった多糖類、タンニン酸といったポリフェノール類、あるいは、これらの誘導体を用いることができる。
【００５５】
【化２】
2013224289.tif 000003
【００５６】
【化３】
2013224289.tif 000004
【００５７】
（粒子中の構成材料割合）
本実施形態に係る粒子を１００重量％としたときに、多価の金属イオンは、０．０１重量％以上２０．０重量％以下であることが好ましく、０．１重量％以上１０．０重量％以下であることがさらに好ましい。多価の金属イオンが２０．０重量％以下である場合、生体毒性が小さいと考えられる。
【００５８】
本実施形態に係る粒子がポリオール化合物を有する場合、粒子の重量を１００重量％としたときに、ポリオール化合物が１．０重量％以上７５．０％以下であることが好ましく、５．０％以上５０．０％以下であることがさらに好ましい。ポリオール化合物が１．０重量％以上である場合、粒子の生体内での安定性が十分であると考えられる。
【００５９】
（粒子の製造方法）
本実施形態に係る粒子の製造方法としては、公知の方法を利用することが出来る。例えば、ポリオール化合物、アニオン性の官能基を有する色素、多価の金属イオンを溶媒に溶解し、混合することにより粒子を析出させる方法を挙げることが出来る。
【００６０】
本製造方法においては、従来公知の攪拌方法によって粒子を調製することが可能である。
【００６１】
（製造方法における各種材料組成割合）
上記の製造方法において、使用するアニオン性官能基を有する色素の溶液（２）と、多価の金属イオンの溶液（３）の体積比の範囲としては、粒子を回収することが出来る範囲であれば特に限定はない。好ましくは、上記（２）の溶液と上記（３）の溶液の体積比が、０．００１乃至１０００となる範囲である。
【００６２】
また、アニオン性の官能基を有する色素の濃度は、アニオン性の官能基を有する色素が溶解する範囲であれば特に限定されない。アニオン性の官能基を有する色素の好ましい濃度として、０．０００５以上３００ｍｇ／ｍｌ以下とすることができる。
【００６３】
また、（２）に対する（３）のそれぞれに含まれる溶質のモル比としては、０．０１当量以上１００当量以下が好ましく、０．１当量以上１０当量以下であることがさらに好ましい。
【００６４】
上記の製造方法において、使用するポリオール化合物の溶液（１）と、アニオン性の官能基を有する色素の溶液（２）の体積比としては、粒子を回収することが出来れば特に限定はない。好ましくは、上記（１）の溶液と上記（２）の溶液の体積比が、０．００１乃至１０００となる範囲である。
【００６５】
また、使用する多価の金属イオン溶液（３）とアニオン性官能基を有する色素溶液（２）の体積比としては、粒子を回収することが出来れば特に限定はない。好ましくは、（２）の溶液と（３）の溶液の体積比が、０．００１乃至１０００となる範囲である。
【００６６】
また、アニオン性の官能基を有する色素の濃度はこれらが溶解する範囲であれば特に限定されない。アニオン性の官能基を有する色素の好ましい濃度として、０．０００５以上３００ｍｇ／ｍｌ以下とすることができる。
【００６７】
また、（２）に対する（１）、（３）のそれぞれに含まれる溶質のモル比としては、０．０１当量以上１００当量以下であることが好ましく、０．１当量以上１０当量以下であることがさらに好ましい。
【００６８】
（実施形態２）
本発明に係る粒子は、アニオン性の官能基を有する色素と、多価の金属イオンと疎水性のポリマーとを有することを特徴とする。
【００６９】
アニオン性の官能基を有する色素と、多価の金属イオンとがイオン結合し、前記色素と前記金属イオンが結合したものが、疎水性のポリマーで被覆されることで粒子を形成する。このように、アニオン性の官能基を有する色素のもつ負電荷が、多価の金属イオンのもつ正電荷の一部によってキャンセルされるため、疎水性が高くなり、アニオン性の官能基を有する色素と水との親和性が低くなっていると考えられる。そのため、本実施形態に係る粒子は、アニオン性の官能基を有する色素が漏出しにくい。また、疎水性のポリマーが前記色素と前記金属イオンとを被覆するため、本実施形態に係る粒子は、アニオン性の官能基を有する色素が漏出しにくい。
【００７０】
なお、アニオン性の官能基を有する色素と多価の金属イオンとがイオン結合したもの、アニオン性の官能基を有する色素、多価の金属イオン、の集合体は、疎水性のポリマーによって被覆されて粒子を形成していると考えられるが、一部は、粒子の表面に存在していると考えられる。
【００７１】
上記のように粒子が形成される理由を、図２を用いて説明する。図２では、アニオン性の官能基を有する色素としてＩＣＧを、多価の金属イオンとして亜鉛（ＩＩ）イオン（Ｚｎ２＋）を、疎水性のポリマーとして、ＰＬＧＡを用いた例を示した。亜鉛（ＩＩ）イオンは、２価の正電荷を有するため、ＩＣＧの有する２つのスルホン酸基の負電荷に引き寄せられ、イオン結合する。また、図２で示すように、亜鉛（ＩＩ）イオンは、１つのＩＣＧだけでなく、２つのＩＣＧのそれぞれのスルホン酸基に結合することもあるため、ＩＣＧ同士が近づく（図２（ａ））。ＩＣＧ同士が近づくと、疎水性が高まり、他の亜鉛（ＩＩ）イオンが結合したＩＣＧや、他のＩＣＧが集まる（図２（ｂ））。また、ＰＬＧＡが、ＩＣＧと多価の金属イオンとがイオン結合したもの、ＩＣＧ、多価の金属イオン、の集合体を被覆するため、アニオン性の官能基を有する色素は、水と接触しにくくなり、水の相へと移行しにくい。
【００７２】
なお、上記のイオン結合や配位結合の有無は、ＩＲのスペクトルのピークシフトを見ることで確認することができる。
【００７３】
本実施形態における粒子は、アニオン性の官能基を有する色素を１種類有していても、複数種類有していてもよい。また、本実施形態における粒子は、多価の金属イオンを１種類有していても、複数種類有していてもよい。本実施形態における粒子は、疎水性のポリマーを１種類有していても、複数種類有していてもよい。また、本実施形態に係る粒子は、表面に分散安定化剤を有していてもよい。分散安定化剤を用いることで、粒子を水中で凝集しにくくすることができる。
【００７４】
（疎水性のポリマー）
本実施形態における疎水性のポリマーは、水に不溶または難溶で、かつ水中で膨潤しないポリマーであれば特に限定されない。
【００７５】
本実施形態における疎水性のポリマーとしては、炭素数６以下のヒドロキシカルボン酸から選ばれるモノマー１種からなるホモポリマーまたは前記モノマー２種以上からなるコポリマー、ＰＬＧＡ、ポリスチレンおよびポリメタクリル酸等を挙げることができる。また、これらのポリマーの誘導体も適用可能である。
【００７６】
これらのポリマーの平均分子量は２，０００以上１，０００，０００以下であることが好ましく、１０，０００以上６００，０００以下であることがさらに好ましい。
【００７７】
これらのポリマーは、単独でも複数種類を混合して用いても良い。
【００７８】
（分散安定化剤）
本実施形態において分散安定化剤としては、界面活性剤や親水性ポリマーを用いることが出来る。
【００７９】
前記の界面活性剤としては、例えば、部分加水分解ポリビニルアルコール（化学式（４）、以下ＰＶＡと略すことがある）、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、アルキル硫酸塩、リン脂質、ポリオキシエチレンソルビタン系脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロック共重合体を挙げることが出来る。
【００８０】
前記ポリオキシエチレンソルビタン系脂肪酸エステルとしては、Ｔｗｅｅｎ２０、Ｔｗｅｅｎ４０、Ｔｗｅｅｎ６０、Ｔｗｅｅｎ８０を挙げることが出来る。
【００８１】
前記リン脂質としては、アミノ基、ＮＨＳ基、マレイミド、メトキシ基のいずれかの官能基とＰＥＧ鎖を有するホスファチジル系リン脂質を挙げることができる。
【００８２】
ホスファチジル系リン脂質としては、３−（Ｎ−ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌｏｘｙｇｌｕｔａｒｙｌ）  ａｍｉｎｏｐｒｏｐｙｌ，ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ−ｃａｒｂａｍｙｌ  ｄｉｓｔｅａｒｏｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌ−ｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ（ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＮＨＳ）、Ｎ−（３−ｍａｌｅｉｍｉｄｅ−１−ｏｘｏｐｒｏｐｙｌ）  ａｍｉｎｏｐｒｏｐｙｌ  ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ−ｃａｒｂａｍｙｌ  ｄｉｓｔｅａｒｏｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌ−ｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ（ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＭＡＬ）、Ｎ−（ａｍｉｎｏｐｒｏｐｙｌ  ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ）−ｃａｒｂａｍｙｌ  ｄｉｓｔｅａｒｏｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌ−ｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ（ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＮＨ２）、Ｎ−（Ｃａｒｂｏｎｙｌ−ｍｅｔｈｏｘｙｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ  ２０００）−１，２−ｄｉｓｔｅａｒｏｙｌ−ｓｎ−ｇｌｙｃｅｒｏ−３−ｐｈｏｓｐｈｏｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ，ｓｏｄｉｕｍ  ｓａｌｔ（ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ  ＤＳＰＥ−０２０ＣＮ）、Ｎ−（Ｃａｒｂｏｎｙｌ−ｍｅｔｈｏｘｙｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ  ５０００）−１，２−ｄｉｓｔｅａｒｏｙｌ−ｓｎ−ｇｌｙｃｅｒｏ−３−ｐｈｏｓｐｈｏｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ，  ｓｏｄｉｕｍ  ｓａｌｔ（ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ  ＤＳＰＥ−０５０ＣＮ）を挙げることができる。
【００８３】
ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロック共重合体としては、化学式（５）で表される化合物が挙げられる。化学式（５）においてｘ、ｚはそれぞれ独立に７０以下１１０以下の整数でり、７５以下１０６以下の整数であることが好ましい。また、化学式（５）において、ｙは２０以上８０以下の整数であり、３０以上７０以下の整数であることが好ましい。化学式（５）においてｘ及びｚが７５、ｙが３０であるものとしてプルロニック（登録商標）Ｆ６８（化学式（５））、化学式（５）においてｘ及びｚが１０６、ｙが７０であるものとしてプルロニック（登録商標）Ｆ１２７を挙げることができる。
【００８４】
前記親水性ポリマーとしては、例えば、デキストラン（化学式（２））、デンプン、ヘパリン（化学式（３））などの多糖類を挙げることができる。また、ヘパリンのナトリウム塩であるヘパリンナトリウムを用いることもできる。
【００８５】
これらの分散安定化剤は、単独でも任意に混合して用いても良い。
【００８６】
【化４】
2013224289.tif 000005
【００８７】
（粒子の製造方法）
本実施形態に係る粒子の製造方法は、アニオン性の官能基を有する色素と、多価の金属塩と、疎水性のポリマーと、有機溶媒との混合液Ａを得る工程と、前記混合液Ａと水とを混合する工程とを有する粒子の製造方法であって、前記有機溶媒がジメチルスルホキシド（Ｄｉｍｅｔｈｙｌ  ｓｕｌｆｏｘｉｄｅ、以下ＤＭＳＯと略すことがある）であることを特徴とする。
【００８８】
従来の粒子の製造方法の１つは、アニオン性の官能基を有する色素と有機溶媒の混合液を、水に分散させて粒子を調製するというものであった。
【００８９】
しかしこの方法では、アニオン性の官能基を有する色素を溶解させるための有機溶媒としてメタノールなど水と混じりやすい溶媒を用いなくてはならなかった。
【００９０】
その結果、アニオン性の官能基を有する色素が溶解したメタノールを水に分散させるときに、色素が水の相に移動してしまうという問題があった。
【００９１】
本実施形態に係る粒子の製造方法は、アニオン性の官能基を有する色素と、多価の金属イオンとをＤＭＳＯに溶解し、ＤＭＳＯ中で配位結合あるいはイオン結合させる。
【００９２】
従来の粒子の製造方法のもう１つは、アニオン性の官能基を有する薬剤を酢酸亜鉛を用いて水に不溶性の塩にし、アセトンに溶解させることで粒子を調製している。
【００９３】
しかしこの方法は、アセトンに溶けないＩＣＧのような色素については適用できない方法である。
【００９４】
本実施形態に係る粒子の製造方法は、アセトンを用いずに粒子を調製できるので、ＩＣＧのような色素を適用することができる方法である。
【００９５】
本実施形態に係る粒子の製造方法の一例は、アニオン性の官能基を有する色素と、多価の金属イオンの塩と、疎水性のポリマーと、有機溶媒との混合液を、水を主成分とする分散媒に分散し、前記有機溶媒を前記の水を主成分とする分散媒に溶解拡散させ、前記分散媒に分散した前記有機溶媒を蒸発などによって留去することで粒子を得る方法である。また、最終的に得られる粒子が分散安定性の高いものであるようにするために、前記混合液と分散安定化剤を含有する分散媒と前記混合液とを混合してもよい。
【００９６】
具体的な製造方法としては、従来公知の技術が利用可能で、例えば、ナノエマルション法、ナノプリシピテーション法を挙げることが出来る。
【００９７】
ナノエマルション法においては、従来公知の乳化方法によってエマルションを調製することが可能である。従来公知の方法とは例えば、断続振盪法、プロペラ型撹拌機、タービン型撹拌機等のミキサーを利用する撹拌法、コロイドミル法、ホモジナイザー法、超音波照射法等がある。これらの方法は単独で用いることも、あるいは複数を組み合わせて用いることも可能である。また、エマルションは１段階の乳化によって調製しても良いし、多段階の乳化によって調製しても良い。ただし、乳化方法は本発明の目的を達成出来る範囲において上記手法に限定されない。
【００９８】
ナノプリシピテーション法においては、従来公知の撹拌方法によって粒子を調製することが可能である。
【００９９】
（製造方法における各種材料組成割合）
ナノエマルション法において、使用する分散安定化剤水溶液と有機溶媒の重量比としては、水中油（Ｏ／Ｗ）型のエマルションを形成することが出来れば特に限定はない。有機溶媒と水溶液の重量比が１：２以上１：１０００以下となることが好ましい。
【０１００】
ナノプリシピテーション法において、使用する分散安定化剤水溶液と有機溶媒の重量比としては、粒子を回収することが出来れば特に限定はない。有機溶媒と分散安定化剤水溶液の重量比が１：１以上１：１０００以下となることが好ましい。
【０１０１】
有機溶媒中における疎水性のポリマーおよびアニオン性の官能基を有する色素の濃度は、これらが溶解する範囲であれば特に限定されない。好ましい濃度として、疎水性のポリマーについては０．３以上１００ｍｇ／ｍＬ以下とすることが出来る。また、アニオン性の官能基を有する色素の好ましい濃度として、０．０００５以上３００ｍｇ／ｍＬ以下とすることが出来る。
【０１０２】
有機溶媒中におけるアニオン性の官能基を有する色素と疎水性のポリマーの重量比は、好ましくは１００：１以上１００：１０００以下の範囲である。
【０１０３】
また、有機溶媒中における多価の金属イオンの塩の濃度は、これらが溶解する範囲であれば特に限定されない。好ましい濃度として、０．００１以上１００ｍｇ／ｍＬ以下とすることが出来る。さらに、有機溶媒中における親水性色素と金属イオンの重量比は、好ましくは１００：１以上１：１０００以下の範囲である。
【０１０４】
（分散安定化剤水溶液）
分散安定化剤水溶液に含まれる分散安定化剤の濃度は、これらが溶解する範囲であれば特に限定されない。例えば、水溶液中に含まれるポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロック共重合体については、０．０１ｍｇ／ｍＬ以上３００ｍｇ／ｍＬ以下とすることが出来る。
【０１０５】
（実施形態３）
本発明に係る光音響イメージング用造影剤は、アニオン性の官能基を有する色素と、多価の金属イオンとを有することを特徴とする。
【０１０６】
本実施形態に係る光音響イメージング用造影剤は、アニオン性の官能基を有する色素と、多価の金属イオンとがイオン結合または配位結合することで、粒子を形成する。形成された粒子は、低分子化合物に比べて粒径が大きい。
【０１０７】
本実施形態における光音響イメージング用造影剤は、アニオン性の官能基を有する色素を１種類有していても、複数種類有していてもよい。
【０１０８】
また、本実施形態における光音響イメージング用造影剤は、多価の金属イオンを１種類有していても、複数種類有していてもよい。
【０１０９】
また、本実施形態における光音響イメージング用造影剤は、さらにポリオール化合物を有することが好ましい。ポリオール化合物は、前記多価の金属イオンと結合し、粒子を形成する。本実施形態における光音響イメージング用造影剤は、ポリオール化合物を１種類有していても、複数種類有していてもよい。
【０１１０】
なお、上記のイオン結合や配位結合の有無は、ＩＲのスペクトルのピークシフトを見ることで確認することができる。
【０１１１】
（光音響イメージング用造影剤用  粒子中の構成材料割合）
本実施形態に係る粒子を１００重量％としたときに、多価の金属イオンは、０．０１重量％以上２０．０重量％以下であることが好まく、０．１重量％以上１０．０重量％以下であることがさらに好ましい。
【０１１２】
多価の金属イオンが２０．０重量％以下である場合、生体毒性が小さいと考えられる。
本実施形態に係る粒子がポリオール化合物を有する場合、粒子の重量を１００重量％とし
たときに、ポリオール化合物が１．０重量％以上７５．０％以下であることが好ましく、
５．０％以上５０．０％以下であることがさらに好ましい。ポリオール化合物がポリオー
ル化合物が１．０重量％以上である場合、粒子の生体内での安定性が十分であると考えら
れる。
【０１１３】
（光音響イメージング用造影剤用  粒子の製造方法）
本実施形態に係る粒子の製造方法としては、公知の方法を利用することが出来る。例えば、アニオン性の官能基を有する色素、多価の金属イオンを溶媒に溶解し、混合することにより粒子を析出させる方法を挙げることが出来る。
【０１１４】
本製造方法においては、従来公知の攪拌方法によって粒子を調製することが可能である。
【０１１５】
上記の製造方法において、使用するアニオン性官能基を有する色素の溶液（２）と、多価の金属イオンの溶液（３）の体積比の範囲としては、粒子を回収することが出来る範囲であれば特に限定はない。好ましくは、（２）の溶液と（３）の溶液の体積比が、０．００１乃至１０００となる範囲である。
【０１１６】
また、アニオン性の官能基を有する色素の濃度は、アニオン性の官能基を有する色素が溶解する範囲であれば特に限定されない。アニオン性の官能基を有する色素の好ましい濃度として、０．０００５以上３００ｍｇ／ｍｌ以下とすることができる。
【０１１７】
また、（２）対する（３）のモル比としては、０．０１当量以上１００当量以下が好ましく、０．１当量以上１０当量以下であることがさらに好ましい。
【０１１８】
また、使用する多価の金属イオン溶液（３）とアニオン性官能基を有する色素溶液（２）の体積比としては、粒子を回収することが出来れば特に限定はない。好ましくは、（３）の溶液と（２）の溶液の体積比が、０．００１乃至１０００となる範囲である。
【０１１９】
また、アニオン性の官能基を有する色素の濃度はこれらが溶解する範囲であれば特に限定されない。アニオン性の官能基を有する色素の好ましい濃度として、０．０００５以上３００ｍｇ／ｍｌ以下とすることができる。
【０１２０】
また、ポリオール化合物を用いる場合は、実施形態１と同様の条件で粒子を作製し、光音響イメージング用造影剤用  粒子として利用することが可能である。
【０１２１】
（実施形態４）
本発明に係るセンチネルリンパ節用造影剤（以下、ＳＬＮ用造影剤、と略すことがある）は、アニオン性の官能基を有する色素と、多価の金属イオンとを有することを特徴とする。
【０１２２】
本実施形態に係るＳＬＮ用造影剤は、アニオン性の官能基を有する色素と、多価の金属イオンとがイオン結合または配位結合することで、粒子を形成する。形成された粒子は、低分子化合物に比べて粒径が大きい。また、粒径が大きくなるにつれて、リンパ管での移動速度が遅くなる。そのため、低分子化合物を単独で使用する場合に比べて、ＳＬＮより下流のリンパ節への移動が遅くなり、ＳＬＮへの集積量が多くなると考えられる。ＳＬＮへの集積量が多いと、ＳＬＮから得られる光音響信号が大きいため、光音響イメージング法によって画像化した場合、ＳＬＮの鮮明な画像を得ることができる。
【０１２３】
上記のように粒子が形成される理由を図３を用いて説明する。図３では、アニオン性の官能基を有する色素としてＩＣＧを、多価の金属イオンとして亜鉛（ＩＩ）イオン（Ｚｎ２＋）を用いた例を示した。亜鉛（ＩＩ）イオンは、２価の正電荷を有するため、ＩＣＧの有する２つのスルホン酸基の負電荷に引き寄せられ、イオン結合する。また、図３で示すように、亜鉛（ＩＩ）イオンは、１つのＩＣＧだけでなく、２つのＩＣＧのそれぞれのスルホン酸基に結合することもあるため、ＩＣＧ同士が近づく（図３（ａ））。ＩＣＧ同士が近づくと、疎水性が高まり、他の亜鉛（ＩＩ）イオンが結合したＩＣＧや、他のＩＣＧが集まる（図３（ｂ））。このようにして亜鉛（ＩＩ）イオンが結合したＩＣＧなどが集まって粒子を形成する。
【０１２４】
なお、上記のイオン結合や配位結合の有無は、ＩＲのスペクトルのピークシフトを見ることで確認することができる。
【０１２５】
本実施形態に係るＳＬＮ用造影剤は、後述する実施例で示す通り、ＳＬＮに多く集積するため、ＳＬＮの造影に好適に用いられる。また、本実施形態に係るＳＬＮ用造影剤は、さらにポリオール化合物を有することが好ましい。また、アニオン性の官能基を有する色素にイオン結合または配位結合した多価の金属イオンの一部は、正電荷が余り、その正電荷に、ポリオール化合物の有するヒドロキシル基から水素原子が解離して生じた負電荷が引き寄せられイオン結合または配位結合する。このようにして、より安定な粒子が形成される。
【０１２６】
つまり、ポリオール化合物が存在することにより、より安定性の高い粒子が形成され、アニオン性の官能基を有する色素が水の相へと移行しにくい構成となる。
【０１２７】
以下に、光音響イメージング用造影剤、光音響イメージング法について説明する。
【０１２８】
（光音響イメージング用造影剤）
本実施形態に係る光音響イメージング用造影剤は、上記の本実施形態に係る粒子と、分散媒を有する。上記の分散媒は、液状の物質であり、例えば生理食塩水、注射用蒸留水、リン酸緩衝生理食塩水（Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｂｕｆｆｅｒｅｄ  ｓａｌｉｎｅ、以下ＰＢＳと略すことがある）などが挙げられる。また本実施形態に係る光音響イメージング用造影剤は、必要に応じて薬理上許容できる添加物を有していても良い。
【０１２９】
本実施形態に係る光音響イメージング用造影剤は、上記粒子を上記分散媒に予め分散させておいてもよいし、本実施形態に係る粒子と分散媒とをキットにしておき、生体内に投与する前に粒子を分散媒に分散させて使用してもよい。
【０１３０】
（光音響イメージング法）
本実施形態に係る光音響イメージング用造影剤は、光音響イメージング法に用いることができる。なお、本明細書において、光音響イメージングは、光音響トモグラフィー（断層撮影法）を含む概念である。本実施形態に係る光音響イメージング用造影剤を用いた光音響イメージング法は、本実施形態に係る光音響イメージング用造影剤を検体もしくは前記検体から得られる試料に投与する工程と、前記検体もしくは前記検体から得られる試料にパルス光を照射する工程と、前記検体内もしくは前記検体から得られる試料内に存在する前記粒子由来の光音響信号を測定する工程と、を少なくとも有することを特徴とする。
【０１３１】
本実施形態に係る光音響イメージング用造影剤を用いた光音響イメージング法の一例は以下の通りである。すなわち、本実施形態に係る光音響イメージング用造影剤を検体に投与し、あるいは前記検体より得られた臓器等の試料に添加する。なお、前記検体とは、ヒト、実験動物やペット等の哺乳類、その他、特に限定されることなく、あらゆる生物を指し、前記検体より得られた試料としては、臓器、組織、組織切片、細胞、細胞溶解物などを挙げることができる。前記粒子の投与あるいは添加後、前記検体等に対し近赤外波長域のレーザーパルス光を照射する。
【０１３２】
本実施形態に係る光音響イメージング法において、照射される光の波長は使用するレーザー光源により選択することが可能である。本実施形態に係る光音響イメージング法においては、効率良く音響信号を取得するために、生体内における光の吸収、拡散の影響が少ない「生体の窓」と呼ばれる６００ｎｍ乃至１３００ｎｍの、近赤外光領域の波長の光を照射することが好ましい。
【０１３３】
本実施形態に係る光音響イメージング用造影剤からの光音響信号（音響波）を、音響波検出器、例えば圧電トランスデューサで検出し、電気信号に変換する。この音響波検出器より得られた電気信号に基づき、前記検体等の内の吸収体の位置や大きさ、あるいはモル吸光係数などの光学特性値分布を計算することができる。例えば、光音響イメージング用造影剤が基準とする閾値以上で検出されれば、その検体に標的分子、あるいは、前記標的分子を産生する部位が存在すると推定され、または、前記試料に前記標的分子が存在する、あるいは、前記試料の由来となる前記検体に前記標的分子を産生する部位が存在すると推定することができる。
【実施例】
【０１３４】
以下に、本発明の特徴をさらに明らかにするために実施例に沿って本発明を説明するが、本発明は、これらの実施例に限定されるものではなく、材料、組成条件、反応条件等、同様な機能、効果を有する光音響イメージング用造影剤が得られる範囲で自由に変えることが出来る。
【０１３５】
（回収方法）
遠心分離操作は、微量高速冷却遠心機（株式会社トミー精工製、ＭＸ−３００）を用いて行った。超遠心分離操作は、小形超遠心機（日立工機株式会社製、ＣＳ１５０ＧＸＬ）を用いて行った。
【０１３６】
（分析方法）
粒径測定は、動的光散乱解析装置（大塚電子株式会社製、ＥＬＳＺ−２）を用いて行った。光源として半導体レーザーを用いて測定を行い、キュムラント径の値を粒径として採用した。
吸光度測定は、ＵＶ−ＶＩＳ−ＮＩＲ測定装置（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ社製、Ｌａｍｂｄａ  Ｂｉｏ  ４０）を用いて行った。
ＮＭＲ測定は、（Ｂｒｕｋｅｒ社製、ＡＶＡＮＣＥ  ５００；共鳴周波数：５００ＭＨｚ；測定核種：１Ｈ；測定温度：室温；溶媒：重水）を用いて行った。
金属イオン定量は、ＩＣＰ−ＡＥＳ測定装置（ＳＰＥＣＴＲＯ社製、ＣＩＲＯＳ）を用いて行った。
【０１３７】
（光音響特性評価例）
光音響信号の計測は、パルスレーザー光をサンプルに照射し、サンプルから光音響信号を圧電素子を用いて検出し、高速プリアンプで増幅後、デジタルオシロスコープで取得した。具体的な条件は以下の通りである。光源として、チタンサファイアレーザ（Ｌｏｔｉｓ製）を用いた。波長は７９０ｎｍ、エネルギー密度は１２ｍＪ／ｃｍ２、パルス幅は２０ナノ秒、パルス繰返しは１０Ｈｚの条件とした。超音波トランスデューサとしては、型式Ｖ３０３（Ｐａｎａｍｅｔｒｉｃｓ−ＮＤＴ製）を用いた。中心帯域は１ＭＨｚ、エレメントサイズはΦ０．５ｍｍ、測定距離は２５ｍｍ（Ｎｏｎ−ｆｏｃｕｓ）、アンプは＋３０ｄＢ（超音波プリアンプ  Ｍｏｄｅｌ  ５６８２  オリンパス製）の条件である。測定容器としては、ポリスチレン製キュベットで、光路長０．１ｃｍ、サンプル容量は約２００μｌであった。計測器は、ＤＰＯ４１０４（テクトロニクス製）を用いて、トリガー：光音響光をフォトダイオードで検出、Ｄａｔａ  ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎ：１２８回（１２８パルス）平均の条件で測定を行った。
【０１３８】
（粒子当たりのモル吸光係数算出方法）
ＮＭＲ測定、吸光度測定、金属イオン定量により、サンプル中の各構成材料の固体重量を算出した。・・・（Ａ）
各構成材料の密度を１（ｇ／ｃｍ３）と仮定し、各粒子の粒径から１粒子当たりの重量を算出した。・・・（Ｂ）
（Ａ）、（Ｂ）の結果より、各サンプル溶液中の粒子濃度を算出した。・・・（Ｃ）
吸光度測定の結果と、（Ｃ）の結果より、粒子当たりのモル吸光係数を算出した。
【０１３９】
（ウシ胎児血清（ＦＢＳ）中における粒子内ＩＣＧ保持性能評価）
調製した粒子の色素（ＩＣＧなど）保持性能を比較するために、ＦＢＳ（インビトロジェン社製）を用いて評価を行った。サンプル２００μＬを１８００μＬのＦＢＳに分散し、３６℃で静置した。
【０１４０】
１日後、分散液を２８８０００Ｇで超遠心分離を行い、上澄み液を回収した。分散液と上澄み液の吸光度測定を行った。
粒子内色素残存率は、以下の式に基づいて算出した。
粒子内色素残存率＝（１−上澄み液の吸光度／分散液の吸光度）×１００
【０１４１】
（ＳＬＮへの集積評価方法）
ＳＬＮへの移行はマウス膝窩リンパ節を用いて評価した。マウス後肢の足の裏からプローブを投与しており、膝窩リンパ節への集積評価を行うことで、ＳＬＮへの集積評価モデルとすることが可能である。サンプル１０ｕＬをマウス後肢の足底皮下から投与した。２４時間後、マウス膝窩リンパ節を摘出した。摘出したマウス膝窩リンパ節の破砕抽出液の吸光度測定を行った。
集積率は、以下の式に基づいて算出した。
集積率＝摘出マウス膝窩リンパ節の吸光度／投与サンプル相当量の吸光度×１００
【０１４２】
（実施例１）
本実施例において、アニオン性の官能基を有する色素としてＩＣＧを使用し、金属塩化物として、塩化鉄（ＩＩＩ）六水和物を使用した。
【０１４３】
まず、ＩＣＧ（一般財団法人  医薬品医療機器レギュラトリーサイエンス財団製）７．０ｍｇを１０ｍＭ  の２−［４−（２−Ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌ）−１−ｐｉｐｅｒａｚｉｎｙｌ］ｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ  ａｃｉｄの緩衝液（インビトロジェン社製）（以下、単にＨＥＰＥＳと略すことがある）４．０ｍＬに溶解させた。
【０１４４】
ＩＣＧに対して、２．０当量の塩化鉄（ＩＩＩ）六水和物（和光純薬工業株式会社製）４．９ｍｇを１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ８．０ｍＬに溶解させた。
ＩＣＧに対して、１．０当量のタンニン酸（キシダ化学株式会社製）１３．０ｍｇを１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ４．０ｍＬに溶解させた。
タンニン酸溶液を撹拌しながら、ＩＣＧ溶液を添加した。その後、塩化鉄溶液を添加して、粒子分散液を調製した。
得られた粒子分散液を、４℃、２００００Ｇ、４５分間遠心分離することにより回収した。
回収した粒子を、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳを用いて洗浄を行った。その後、４℃、２００００Ｇ、４５分間遠心分離することにより回収した。回収した粒子は１０ｍＭのＨＥＰＥＳに再分散させた。
得られた粒子分散液を、孔径０．４５μｍのフィルターでろ過して、粒子１を得た。
【０１４５】
（実施例２）
塩化鉄（ＩＩＩ）六水和物を塩化亜鉛（ＩＩ）（キシダ化学株式会社製）に変更した以外は、実施例１と同様に合成し、粒子２を得た。
【０１４６】
（実施例３）
塩化鉄（ＩＩＩ）六水和物を塩化アルミニウム（ＩＩＩ）（キシダ化学株式会社製）に変更した以外は、実施例１と同様に合成し、粒子３を得た。
【０１４７】
（実施例４）
塩化鉄（ＩＩＩ）六水和物を塩化マグネシウム（ＩＩ）六水和物（キシダ化学株式会社製）に変更した以外は、実施例１と同様に合成し、粒子４を得た。
【０１４８】
（実施例５）
塩化鉄（ＩＩＩ）六水和物を塩化カルシウム（ＩＩ）（ナカライテスク株式会社製）に変更した以外は、実施例１と同様に合成し、粒子５を得た。
【０１４９】
（実施例６）
塩化鉄（ＩＩＩ）六水和物を塩化銅（ＩＩ）（キシダ化学株式会社製）に変更した以外は、実施例１と同様に合成し、粒子６を得た。
【０１５０】
表１に、上記で得られた粒子１乃至６における、用いた多価の金属イオン、吸収極大波長、粒径、粒子当たりのモル吸光係数、粒子当たりの光音響信号強度（波長７９０ｎｍ）を示す。粒子当たりのモル吸光係数、粒子当たりの光音響信号強度は、粒径が１００ｎｍと仮定し換算して比較した。なお、表１中のＥ＋ｘは１０のＸ乗を表す。例えば、７．９Ｅ＋１０は７．９×１０１０を意味する。表２以降についても同様である。
【０１５１】
【表１】
2013224289.tif 000006
【０１５２】
（実施例７）
ＩＣＧ（一般財団法人  医薬品医療機器レギュラトリーサイエンス財団製）３．５ｍｇを超純水２．０ｍＬに溶解させた。
ＩＣＧに対して、０．５当量の塩化鉄（ＩＩＩ）六水和物（和光純薬工業株式会社製）０．６ｍｇを超純水４．０ｍＬに溶解させた。
ＩＣＧに対して、０．１当量のデキストラン（東京化成工業株式会社製）６．４ｍｇを超純水２．０ｍＬに溶解させた。
デキストラン溶液を撹拌しながら、ＩＣＧ溶液を添加した。その後、塩化鉄溶液を添加して、粒子分散液を調製した。
得られた粒子分散液を、４℃、２００００Ｇ、４５分間遠心分離することにより回収した。回収した粒子を、超純水を用いて洗浄を行った。その後、４℃、２００００Ｇ、４５分間遠心分離することにより回収した。回収した粒子は超純水に再分散させた。
得られた粒子分散液を、孔径０．４５μｍのフィルターでろ過して、粒子７を得た。
【０１５３】
（実施例８）
塩化鉄（ＩＩＩ）六水和物を塩化亜鉛（ＩＩ）（キシダ化学株式会社製）に変更した以外は、実施例７と同様に合成し、粒子８を得た。
【０１５４】
（実施例９）
塩化鉄（ＩＩＩ）六水和物を塩化アルミニウム（ＩＩＩ）（キシダ化学株式会社製）に変更した以外は、実施例７と同様に合成し、粒子９を得た。
【０１５５】
（実施例１０）
塩化鉄（ＩＩＩ）六水和物を塩化マグネシウム（ＩＩ）六水和物（キシダ化学株式会社製）に変更した以外は、実施例７と同様に合成し、粒子１０を得た。
【０１５６】
表２に、上記で得られた粒子７乃至１０における、用いた多価の金属イオン、吸収極大波長、粒径、粒子当たりのモル吸光係数、粒子当たりの光音響信号強度（波長７９０ｎｍ）を示す。粒子当たりのモル吸光係数、粒子当たりの光音響信号強度は、粒径が１００ｎｍと仮定し換算して比較した。
【０１５７】
【表２】
2013224289.tif 000007
【０１５８】
（実施例１１）
ＩＣＧ（一般財団法人  医薬品医療機器レギュラトリーサイエンス財団製）５．５ｍｇ、ＩＣＧに対して、１．０当量の塩化鉄（ＩＩＩ）六水和物  ２．０ｍｇをＤＭＳＯ２．０ｍＬに溶解させた。
１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（インビトロジェン社製）にＮａＣｌを添加し、０．３Ｍ  ＮａＣｌ溶液を調製した。更に、デキストラン（東京化成工業株式会社）６０ｍｇを溶解させた。
デキストラン溶液を撹拌しながら、ＩＣＧ、鉄含有溶液を添加して、粒子分散液をした。
得られた粒子分散液を、４℃、２００００Ｇ、２０分間遠心分離することにより回収した。回収した粒子を、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳを用いて再分散を行った。
回収した粒子分散液を、孔径５．５、１．２、０．８、０．４５μｍのフィルターでろ過して、粒子１１を得た。
【０１５９】
（実施例１２）
デキストラン（東京化成工業株式会社）をヘパリンナトリウム（下記の化学式（６）東京化成工業株式会社製）に変更した以外は、実施例１１と同様に合成し、粒子１２を得た。
【０１６０】
【化５】
2013224289.tif 000008
【０１６１】
（実施例１３）
塩化鉄（ＩＩＩ）六水和物を塩化カルシウム（ＩＩ）（ナカライテスク株式会社製）に変更した以外は、実施例１１と同様に合成し、粒子１３を得た。
【０１６２】
（実施例１４）
塩化鉄（ＩＩＩ）六水和物を塩化マグネシウム（ＩＩ）六水和物（キシダ化学株式会社製）に変更した以外は、実施例１１と同様に合成し、粒子１４を得た。
【０１６３】
（実施例１５）
塩化鉄（ＩＩＩ）六水和物を塩化マンガン（ＩＩ）四水和物に変更した以外は、実施例１１と同様に合成し、粒子１５を得た。
【０１６４】
（実施例１６）
塩化鉄（ＩＩＩ）六水和物を塩化スズ（ＩＩ）二水和物に変更した以外は、実施例１１と同様に合成し、粒子１６を得た。
【０１６５】
表３に、上記で得られた粒子１１乃至１６を調製する際に用いた多価の金属イオン、吸収極大波長、得られた粒子の粒径、粒子当たりのモル吸光係数、粒子当たりの光音響信号強度（波長７９０ｎｍ）を示す。粒子当たりのモル吸光係数、粒子当たりの光音響信号強度は、粒径が１００ｎｍと仮定し換算して比較した。
【０１６６】
【表３】
2013224289.tif 000009
【０１６７】
（実施例１７）
ＩＣＧをインジゴカルミン（東京化成株式会社製）に変更した以外は、実施例１と同様に合成し、粒子１７を得た。
【０１６８】
（実施例１８）
ＩＣＧをインジゴカルミン（東京化成株式会社製）に変更した以外は、実施例３と同様に合成し、粒子１８を得た。
【０１６９】
（実施例１９）
ＩＣＧをパテントブルー（和光純薬株式会社製）に変更した以外は、実施例１と同様に合成し、粒子１９を得た。
【０１７０】
（実施例２０）
ＩＣＧをパテントブルー（和光純薬株式会社製）に変更した以外は、実施例３と同様に合成し、粒子２０を得た。
【０１７１】
表４に、上記で得られた粒子１７、１８、１９、２０を調製する際に用いた多価の金属イオン、吸収極大波長、得られた粒子の粒径、粒子当たりのモル吸光係数、粒子内色素残存率を示す。粒子当たりのモル吸光係数は、粒径が１００ｎｍと仮定し換算して比較した。
【０１７２】
【表４】
2013224289.tif 000010
【０１７３】
（実施例２１）
実施例１と同様の方法で粒子分散液を調製した。本実施例では、得られた粒子分散液を、４℃、２００００Ｇ、４５分間遠心分離する際に、沈降しなかった溶液成分を、４℃、７２１００Ｇ、１５分間、超遠心分離することにより、実施例１で得た粒子１よりさらに小粒径の粒子２１を得た。
【０１７４】
（実施例２２）
実施例２１で超遠心分離した際に、沈降しなかった溶液成分を、４℃、４５１０００Ｇ、１５分間、超遠心分離することにより、実施例２１で得た粒子２１よりさらに小粒径の粒子２２を得た。
【０１７５】
表５に、上記で得られた粒子２１、２２を調製する際に用いたアニオン性の官能基を有する色素、多価の金属イオンなど、得られた粒子の粒子あたりのモル吸光係数などを示す。粒子当たりのモル吸光係数は、粒径が１００ｎｍと仮定し換算して比較した。
【０１７６】
【表５】
2013224289.tif 000011
【０１７７】
（実施例Ａ１）
＜有機溶媒溶液の調製＞
日本薬局方外標準品インドシアニングリーン標準品（医薬品医療機器レギュラーサイエンス財団製）（以下、単にＩＣＧという）５．５ｍｇ、塩化鉄（ＩＩＩ）六水和物（和光純薬工業製）（以下、塩化鉄（ＩＩＩ）と略す）２ｍｇ、ＰＬＧＡ５０２０（和光純薬工業製）（以下、ＰＬＧＡと略す）８０ｍｇを２ｍＬのＤＭＳＯ（キシダ化学製）に溶解して有機溶媒溶液とした。ただし、ＩＣＧに対して鉄原子は１当量となるようにした。
得られた溶液は緑色の透明な溶液であった。
【０１７８】
＜分散安定化剤分散液の調製＞
１Ｍの２−［４−（２−Ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌ）−１−ｐｉｐｅｒａｚｉｎｙｌ］ｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ  ａｃｉｄ（ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ製）（以下、ＨＥＰＥＳと略す）を超純水で希釈して１０ｍＭとし、ＮａＣｌが０．３Ｍになるように添加した。この溶液に界面活性剤としてプルロニックＦ６８（シグマ製）を１．５ｇ添加して、分散安定化剤分散液を調製した。
【０１７９】
＜粒子分散液の調製＞
分散安定化剤分散液をマグネチックスターラーで撹拌しながら有機溶媒溶液を滴下し、粒子分散液を調製した。
【０１８０】
＜粒子分散液の精製＞
上記工程で得られた粒子分散液を微量高速遠心機（トミー精工製、ＭＸ−３００）にて４℃で、２０，０００ｇ、２０分間遠心し、上清を取り除くことで余剰の界面活性剤を除去した。残った沈殿に１０ｍＭ−ＨＥＰＥＳを添加し、粒子再分散液を得た。この粒子再分散液を、５．０μｍ、１．２μｍ、０．８μｍ、０．４５μｍ、０．２２μｍのフィルターで順次濾過し、粒子Ａ１を得た。
【０１８１】
（実施例Ａ２）
プルロニックＦ６８の代わりにＰＶＡ（アルドリッチ製・商品名：Ｍｏｗｉｏｌ  ４−８８）（加水分解率８６．７〜８８．７モル％）を使用した。該ポリビニルアルコール濃度４重量％の１０ｍＭ−ＨＥＰＥＳ溶液を用いた以外は実施例Ａ１と同様に合成し、粒子Ａ２を得た。
【０１８２】
（実施例Ａ３）
プルロニックＦ６８の代わりにデキストラン（東京化成工業製）（分子量４０Ｋ）６０ｍｇを用いた以外は実施例Ａ１と同様に合成し、粒子Ａ３を得た。
【０１８３】
（実施例Ａ４）
プルロニックＦ６８の代わりにヘパリンナトリウム（東京化成工業製）６０ｍｇを用いた以外は実施例Ａ１と同様に合成し、粒子Ａ４を得た。
【０１８４】
（実施例Ａ５）
塩化鉄（ＩＩＩ）の代わりに塩化カルシウム（ナカライテスク製）を用いた以外は実施例Ａ３と同様に合成し、粒子Ａ５を得た。
【０１８５】
（実施例Ａ６）
塩化鉄（ＩＩＩ）の代わりに塩化マグネシウム六水和物（キシダ化学製）を用いた以外は実施例Ａ３と同様に合成し、粒子Ａ６を得た。
【０１８６】
（実施例Ａ７）
塩化鉄（ＩＩＩ）の代わりに塩化マンガン（ＩＩ）四水和物（キシダ化学製）を用いた以外は実施例Ａ３と同様に合成し、粒子Ａ７を得た。
【０１８７】
（実施例Ａ８）
塩化鉄（ＩＩＩ）の代わりに塩化スズ（ＩＩ）二水和物（キシダ化学製）を用いた以外は実施例Ａ３と同様に合成し、粒子Ａ８を得た。
【０１８８】
（実施例Ａ９）
塩化鉄（ＩＩＩ）の代わりに塩化亜鉛（キシダ化学製）を用いた以外は実施例Ａ３と同様に合成し、粒子Ａ９を得た。
【０１８９】
（比較例Ａ１）
塩化鉄（ＩＩＩ）を使用しない以外は実施例Ａ１と同様に合成した。
【０１９０】
（比較例Ａ２）
ＰＬＧＡを使用しない以外は実施例Ａ１と同様に合成した。
【０１９１】
（比較例Ａ３）
ＰＬＧＡを使用しない以外は実施例Ａ２と同様に合成した。
【０１９２】
表Ａ１に、調製した各粒子の、粒径、ＩＣＧ利用効率である。ＩＣＧ利用効率は、回収した粒子に含まれるＩＣＧ量をＩＣＧ仕込み量で除することによって算出した。
【０１９３】
【表Ａ１】
2013224289.tif 000012
【０１９４】
表Ａ１の結果から、いずれの粒子も、内部に高濃度のＩＣＧを含有していることが明らかになった。
【０１９５】
次に、表Ａ２に、粒子Ａ１乃至Ａ９について、粒子あたりのモル吸光係数、波長７１０ｎｍにおける粒子あたりの光音響信号強度、９０％血清中での安定性を示す。
【０１９６】
粒子あたりのモル吸光係数、粒子あたりの光音響信号強度は、粒径を１００ｎｍに換算して比較した。なお、表中のＥ＋ｘは１０のＸ乗を表す。例えば、３．６Ｅ＋０９は３．６×１０９を意味する。
【０１９７】
【表Ａ２】
2013224289.tif 000013
【０１９８】
いずれの粒子も、近赤外波長領域の光の吸収が大きく、光音響大きかった。
【０１９９】
次に、粒子Ａ１乃至Ａ４およびＡ９、また、比較例Ａ１で作製した粒子について、９０％血清中での色素保持率評価を行なった。併せて、比較例Ａ２、Ａ３の結果を表Ａ３に示す。
【０２００】
【表Ａ３】
2013224289.tif 000014
【０２０１】
実施例Ａ１乃至Ａ４および実施例Ａ９の結果から明らかなように、多価の金属イオンを添加すると９０％血清中で３７℃、２４時間の条件に置いた後でも、粒子中のＩＣＧを高濃度に保持していることが確認出来た。
【０２０２】
また、比較例Ａ１で作製した造影剤の結果から明らかなように、多価の金属イオンを添加しない条件では、９０％血清中で３７℃、２４時間の条件に置くと、粒子中のＩＣＧ保持率は低いことがわかった。
【０２０３】
また、比較例Ａ２およびＡ３の結果から明らかなように、上記の製造方法では、多価の金属イオンを添加しても疎水性のポリマーを添加しない条件では粒子が得られなかった。
【０２０４】
以上の結果から、アニオン性の官能基を有する近赤外色素・多価金属イオン・疎水性のポリマーマトリクスから成る本発明の粒子は、粒子にアニオン性の官能基を有する色素であるＩＣＧを高濃度に集積させることが可能であり、９０％血清中で３７℃、２４時間の条件に置いても粒子中の色素含有率を低下させることがなく、従来技術に比較して光音響信号が強い光音響イメージング用造影剤を提供することが出来る。
【０２０５】
（実施例Ｂ１）
ＩＣＧ（一般財団法人  医薬品医療機器レギュラトリーサイエンス財団製）３．５ｍｇを超純水２．０ｍＬに溶解させた。ＩＣＧに対して、０．５当量の塩化鉄（ＩＩＩ）六水和物（和光純薬工業株式会社製）０．６ｍｇを超純水４．０ｍＬに溶解させた。
【０２０６】
ＩＣＧ溶液を撹拌しながら、塩化鉄溶液を添加して、粒子分散液を作製した。得られた粒子分散液を、４℃、２００００Ｇ、４５分間遠心分離することにより回収した。回収した粒子を、超純水を用いて洗浄を行った。その後、４℃、２００００Ｇ、４５分間遠心分離することにより回収した。回収した粒子は超純水に再分散させた。得られた粒子分散液を、孔径０．４５マイクロメートルのフィルターでろ過して、光音響イメージング造影剤Ｂ１を得た。
【０２０７】
（実施例Ｂ２）
塩化鉄（ＩＩＩ）六水和物を塩化亜鉛（ＩＩ）（キシダ化学株式会社製）に変更した以外は、実施例Ｂ１と同様に合成し、光音響イメージング用造影剤Ｂ２を得た。
【０２０８】
（実施例Ｂ３）
ＩＣＧ７．０ｍｇを１０ｍＭ  ２−［４−（２−Ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌ）−１−ｐｉｐｅｒａｚｉｎｙｌ］ｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ  ａｃｉｄ（ＨＥＰＥＳ）緩衝液（インビトロジェン社製）（以下、単にＨＥＰＥＳと略すことがある）４．０ｍＬに溶解させた。ＩＣＧに対して、２．０当量の塩化鉄（ＩＩＩ）六水和物４．９ｍｇを１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ８．０ｍＬに溶解させた。ＩＣＧに対して、１．０当量のタンニン酸（キシダ化学株式会社製）１３．０ｍｇを１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ４．０ｍＬに溶解させた。タンニン酸溶液を撹拌しながら、ＩＣＧ溶液を添加した。その後、塩化鉄溶液を添加して、粒子分散液を作製した。得られた粒子分散液を、４℃、２００００Ｇ、４５分間遠心分離することにより回収した。回収した粒子を、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳを用いて洗浄を行った。その後、４℃、２００００Ｇ、４５分間遠心分離することにより回収した。回収した粒子は１０ｍＭのＨＥＰＥＳに再分散させた。得られた粒子分散液を、孔径０．４５マイクロメートルのフィルターでろ過して、光音響イメージング造影剤Ｂ３を得た。
【０２０９】
（実施例Ｂ４）
塩化鉄（ＩＩＩ）六水和物を塩化亜鉛（ＩＩ）に変更した以外は、実施例Ｂ３と同様に合成し、光音響イメージング用造影剤Ｂ４を得た。
【０２１０】
（実施例Ｂ５）
ＩＣＧ３．５ｍｇを超純水２．０ｍＬに溶解させた。ＩＣＧに対して、０．５当量の塩化鉄（ＩＩＩ）六水和物０．６ｍｇを超純水４．０ｍＬに溶解させた。ＩＣＧに対して、０．１当量のデキストラン（東京化成工業株式会社製）６．４ｍｇを超純水２．０ｍＬに溶解させた。デキストラン溶液を撹拌しながら、ＩＣＧ溶液を添加した。その後、塩化鉄溶液を添加して、粒子分散液を作製した。得られた粒子分散液を、４℃、２００００Ｇ、４５分間遠心分離することにより回収した。回収した粒子を、超純水を用いて洗浄を行った。その後、４℃、２００００Ｇ、４５分間遠心分離することにより回収した。回収した粒子は超純水に再分散させた。得られた粒子分散液を、孔径０．４５マイクロメートルのフィルターでろ過して、光音響イメージング造影剤Ｂ５を得た。
【０２１１】
（実施例Ｂ６）
塩化鉄（ＩＩＩ）六水和物を塩化亜鉛（ＩＩ）に変更した以外は、実施例Ｂ５と同様に合成し、光音響イメージング用造影剤Ｂ６を得た。
【０２１２】
（比較例Ｂ１）
１ｍＭのＩＣＧ水溶液を調製し、実験に用いた。
【０２１３】
（比較例Ｂ２）
ＩＣＧに対して、ヒト血清アルブミン（シグマアルドリッチ社製）を２．４当量添加し、ＩＣＧとして１ｍＭになるように調製し、ＩＣＧとアルブミンからなる複合体（ＩＣＧ−アルブミン複合体）を得た。
【０２１４】
（評価）
上記ＳＬＮ評価例に従って、実施例Ｂ１からＢ６で調製した光音響イメージング用造影剤及び、比較例Ｂ１、Ｂ２で調製した各試薬の、ＳＬＮへの集積量比の算出を行った。結果を表Ｂ１にまとめた。なお、表Ｂ１において、集積量比とは、比較例Ｂ１で使用したＩＣＧ水溶液の集積率を１としたときの、各光音響イメージング用造影剤やＩＣＧ−アルブミン複合体の集積率を表す。上記の集積率を算出するために測定した吸光度測定において用いた波長も表Ｂ１にまとめた。
【０２１５】
また、得られた光音響イメージング用造影剤や試薬の粒径、粒子あたりのモル吸光係数（Ｍ−１  ｃｍ−１）、粒子あたりの光音響信号強度（Ｖ  Ｊ−１  Ｍ−１）についても、表Ｂ１に示した。なお、表中のＥ＋ｘは１０のＸ乗を表す。例えば、２．４Ｅ＋１０は２．４×１０１０を意味する。
【０２１６】
【表Ｂ１】
2013224289.tif 000015
【０２１７】
上記実施例及び比較例から、アニオン性の官能基を有する色素であるＩＣＧと多価の金属イオンからなる光音響イメージング用造影剤は、ＩＣＧ単独に比べてＳＬＮへの集積量が多いことがわかった。
【０２１８】
（実施例Ｃ１）
表Ｃ１に、上記で得られた粒子１、２、３、７、８、９、Ｂ１、Ｂ２のＩＲ測定結果を示す。表Ｃ１で示されるＩＲ測定結果より、アニオン性の官能基を有する色素に由来するピークのシフトが見られたことから、イオン結合や配位結合等の相互作用が示唆された。
【０２１９】
【表Ｃ１】
2013224289.tif 000016
【図１】
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【図２】
2013224289.tif 000018
【図３】
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