(57)【要約】【課題】粗コレステロール中に含まれる不純物のうち、ＨＰＬＣによる分析においてコレステロールより保持時間の長い不純物を効率よく低減する方法を提供する。本発明によれば、従来技術では低減が困難な粗コレステロール中の不純物を、工業的に適用可能なバッチ式の再結晶の操作で効率よく低減することができる。【解決手段】粗コレステロールに含まれる不純物を、炭素数３〜５のアルコールからなる溶媒を用いて再結晶させることにより除去することを特徴とするコレステロールの精製方法。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
粗コレステロールに含まれる不純物を、炭素数３〜５のアルコールからなる溶媒を用いて再結晶させることにより除去することを特徴とするコレステロールの精製方法。
【請求項２】
前記溶媒が、１−ブタノール、２−ブタノール、１−プロパノール、３−ペンタノールから選ばれる少なくとも１種類のアルコールである、請求項１に記載のコレステロールの精製方法。
【請求項３】
前記粗コレステロールに含まれるコレステロール成分の含有割合が８０重量％以上である、請求項１または２に記載のコレステロールの精製方法。
【請求項４】
前記不純物を、前記粗コレステロールの２〜６倍重量の前記溶媒を用いて再結晶させる、請求項１〜３のいずれかに記載のコレステロールの精製方法。
【請求項５】
前記不純物を、前記溶媒に溶解させた後に冷却して再結晶させることにより除去する、請求項１〜４のいずれかに記載のコレステロールの精製方法。
【請求項６】
前記不純物を除去した後に、前記溶媒を減圧条件下で蒸発させることにより除去する、請求項１〜５のいずれかに記載のコレステロールの精製方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、粗コレステロール中に含まれる不純物のうち、高速液体クロマトグラフィー（以下「ＨＰＬＣ」ともいう。）による分析においてコレステロール（以下「ＣＨＯＬ」ともいう。）より保持時間（以下「ＲＴ」ともいう。）の長い不純物を、１−ブタノール等の特定のアルコールを溶媒に用いて精製し効率よく低減する方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
医薬、化粧品、飼料分野に広く用いられているコレステロールは羊毛脂、魚油および高等動物の脳を原料として製造されているが、大部分は羊毛脂を原料として生産されている。羊毛脂からのコレステロールの製造方法としては、溶解度の差を利用した溶剤分別法、コレステロールと金属との付加物を形成せしめその溶解度が低いことを利用する付加物法、カラムクロマト法などが知られている。
【０００３】
しかしながら、いずれの方法も単独では充分な精製がなされないため、各々の方法でコレステロールを濃縮した後、最終的には再結晶を行うことにより純度を上げている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２００２−０８０４９３号公報
【特許文献２】特開平６−１１６５８４号公報
【特許文献３】特開昭５２−０７１５００号公報
【特許文献４】特開昭６２−１４５０９９号公報
【特許文献５】特開平６−２３９８８３号公報
【特許文献６】特開２００２−１０５０９７号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
市場で入手できるコレステロールの市販品１０サンプルをＨＰＬＣにより分析した結果、純度は８５．０〜９６．２％であり、１０種類以上の不純物が検出される。
【０００６】
この分析条件において検出される不純物は、コレステロールより保持時間の短い不純物がほとんどで、これらの不純物は従来の製造法で比較的効率よく低減が可能である。
【０００７】
一方、コレステロール（ＲＴ＝１４．２分）より保持時間の長い不純物は２種類で、これらの不純物（それぞれ「不純物Ａ」、「不純物Ｂ」と称する。）を合わせた不純物（Ａ＋Ｂ）は、ＣＨＯＬ：不純物（Ａ＋Ｂ）＝９１.４４〜９９.９１：８.５６〜０.０９の割合で粗コレステロール中に含まれている。そして、この不純物（Ａ＋Ｂ）は従来の製造法では低減が困難であり、通常の再結晶によってもごくわずかずつしか除去出来ない。
【０００８】
近年、コレステロールを原料とした誘導体が多くの分野で使用されており、電材、医薬の分野では特に高純度の製品が要求される。よって０.１％レベルの不純物が問題視されるため、コレステロール（非誘導体）の段階で低減する必要がある。
【０００９】
また、コレステロールは羊毛脂、魚油および高等動物の脳を原料として製造されているため、不純物組成は不安定であり、含有する不純物を効率よく低減する必要がある。
【００１０】
従来の製造法でコレステロールの純度を向上させようとすると再結晶を繰り返していくことになるが、再結晶を繰り返しても不純物Ａ，Ｂの低減率は１０％に満たない。
【００１１】
例えば、コレステロールの市販品（ＣＨＯＬ：不純物（Ａ＋Ｂ）＝９９．８４：０.１５）を原料として、一般的にコレステロールの精製で用いられるエタノールを溶媒として再結晶を３回繰り返しても、ＣＨＯＬ：不純物（Ａ＋Ｂ）＝９９．８６：０.１４にしかならず、不純物（Ａ＋Ｂ）の低減率は７％であった。
【００１２】
本発明は、かかる現状に鑑み、粗コレステロール中に含まれる不純物のうち、ＨＰＬＣによる分析においてコレステロールより保持時間の長い不純物を効率よく低減する方法を提供することを目的としたものである。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明に係るコレステロールの精製方法は、粗コレステロールに含まれる不純物を、炭素数３〜５のアルコールからなる溶媒を用いて再結晶させることにより除去することを特徴とする方法からなる。
【００１４】
このようなコレステロールの精製方法において、前記溶媒が、１−ブタノール、２−ブタノール、１−プロパノール、３−ペンタノールから選ばれる少なくとも１種類のアルコールであることが好ましい。
【００１５】
また、前記粗コレステロールに含まれるコレステロール成分の含有割合が８０重量％以上であることが好ましい。
【００１６】
また、前記不純物を、前記粗コレステロールの２〜６倍重量の前記溶媒を用いて再結晶させることが好ましい。
【００１７】
また、前記不純物を、前記溶媒に溶解させた後に冷却して再結晶させることにより除去することが好ましい。
【００１８】
また、前記不純物を除去した後に、前記溶媒を減圧条件下で蒸発させることにより除去することが好ましい。
【発明の効果】
【００１９】
本発明によれば、従来技術では低減が困難な粗コレステロール中の不純物を、工業的に適用可能なバッチ式の再結晶の操作で効率よく低減することができる。
【００２０】
具体的には、粗コレステロール中の不純物Ａ，Ｂを、１−ブタノール等の特定アルコールを溶媒に用いた冷却晶析により、１回の再結晶で２０〜５０％の低減が可能である。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】本発明の一実施態様に係るコレステロールの精製方法の概略フローである。
【図２】粗コレステロールのＨＰＬＣ分析結果を示す溶出曲線である。
【図３】図１の概略フローにより精製されたコレステロールのＨＰＬＣ分析結果を示す溶出曲線である。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
以下に本発明の実施態様を詳細に説明する。
【００２３】
本実施態様において、原料の粗コレステロール（市販品）のＨＰＬＣ純度は８０％以上である。
【００２４】
本実施態様において、コレステロールの純度はＨＰＬＣ分析により測定する。
【００２５】
再結晶に用いる有機溶媒は１−ブタノールが最も好ましく、２−ブタノール、１−プロパノール、および３−プロパノールも用いることができる。
【００２６】
再結晶の操作としては、原料コレステロールを溶媒に加熱条件下で溶解させたのち、冷却晶析を行なえばよい。
【００２７】
本実施態様で使用する設備はバッチ式で再結晶できる装置であればよい。
【００２８】
溶媒の使用量は、粗コレステロールに対して２〜６重量倍、好ましくは３〜４重量倍である。
【００２９】
溶解温度は使用する溶媒種と溶媒量に合わせて温度範囲を選定すればよく、例えば３０〜９０℃、好ましくは５０〜８０℃である。
【００３０】
冷却温度はコレステロールの濃度に合わせて結晶が析出する温度に範囲を選定すればよいが、好ましくは０〜３０℃である。
【００３１】
再結晶の後に析出した結晶を濾別後、洗浄する溶媒はメタノール等の低沸点溶媒が望ましい。
【実施例】
【００３２】
以下、実施例を挙げつつ本発明を更に詳しく説明する。純度の測定はＨＰＬＣ法を採用し、ピーク面積％の比率（ＨＰＬＣ ａｒｅａ％比）から純度を求めた。
【００３３】
装置  ：ＬＣ−２０１０Ｃ（島津製作所）
検出器：ＵＶ  ２１０ｎｍ
カラム：Ｉｎｅｒｔｓｉｌ  ＯＤＳ−３（ジーエルサイエンス株式会社）
液相  ：メタノール  １００％（高速液体クロマトグラフィー用メタノール）
温度条件：カラム温度；４０℃
サンプル：１％エチレングリコールジメチルエーテル（以下「ＥＧＤＭＥ」ともいう。）溶液、１０μＬ注入
送液速度：１.０ｍｌ
分析時間：３０分
【００３４】
不純物Ａと不純物Ｂとを合わせた不純物（Ａ＋Ｂ）の低減率は以下のようにして算出する。
【００３５】
まず、ＨＰＬＣ ａｒｅａ％比（ＣＨＯＬ）＋ＨＰＬＣ ａｒｅａ％比（不純物Ａ）＋ＨＰＬＣａｒｅａ％比（不純物Ｂ）が１００％となるように、各ＨＰＬＣ ａｒｅａ％比の値を正規化する。
【００３６】
次に、精製前後のＨＰＬＣ ａｒｅａ％比（不純物Ａ）＋ＨＰＬＣ ａｒｅａ％比（不純物Ｂ）の差分を、精製前のＨＰＬＣ ａｒｅａ％比（不純物Ａ）＋ＨＰＬＣ ａｒｅａ％比（不純物Ｂ）で割ることにより、精製前後の不純物（Ａ＋Ｂ）の低減率を算出する。
【００３７】
［実施例１］
粗コレステロール（原料ａ；純度８４.５％）（ＣＨＯＬ：不純物（Ａ＋Ｂ）＝９１.４４：８.５７）５ｇに１−ブタノールを４重量倍加え５０〜６０℃に３０分間加熱溶解させた後、２０〜３０℃に冷却し、この温度を保ちながら３０分放置した。
【００３８】
３０分後、濾紙を用いてろ過を行い、析出物を分離した。
【００３９】
分離した析出物を０.５重量倍のメタノールで洗浄した後、減圧乾燥機にて溶媒を留去し、精製コレステロールを６.６ｇ得た。
【００４０】
得られたコレステロールの純度は９１.２％（ＣＨＯＬ：不純物（Ａ＋Ｂ）＝９４.２２：５.７８）であり、不純物（Ａ＋Ｂ）の低減率は３３％であった。試験結果を表１に示す。
【００４１】
【表１】
2013184929.tif 000003
【００４２】
［実施例２］
粗コレステロール（原料ｂ；純度９６.２％）（ＣＨＯＬ：不純物（Ａ＋Ｂ）＝９９.８４：０.１５）２５０ｇに１−ブタノールを４重量倍加え６０〜７０℃に３０分間加熱溶解させた後、２０〜３０℃に冷却し、この温度を保ちながら３０分放置した。
【００４３】
３０分後、濾紙を用いてろ過を行い、析出物を分離した。
【００４４】
分離した析出物を０.５重量倍のメタノールで洗浄した後、減圧乾燥機にて溶媒を留去し、精製コレステロールを１６３ｇ得た。
【００４５】
得られたコレステロールの純度は９８.０％（ＣＨＯＬ：不純物（Ａ＋Ｂ）＝９９.８８：０.１２）であり、不純物（Ａ＋Ｂ）の低減率は２０％であった。
【００４６】
［実施例３］
実施例２で得られたコレステロール（原料ｃ）１００ｇに１−ブタノールを４重量倍加え６０〜７０℃に３０分間加熱溶解させた後、２０〜３０℃に冷却し、この温度を保ちながら３０分放置した。３０分後、濾紙を用いてろ過を行い、析出物を分離した。
【００４７】
分離した析出物を０.５重量倍のメタノールで洗浄した後、減圧乾燥機にて溶媒を留去し、精製コレステロールを６８ｇ得た。
【００４８】
得られたコレステロールの純度は９８.９％（ＣＨＯＬ：不純物（Ａ＋Ｂ）＝９９.９３：０.０７）であり、不純物（Ａ＋Ｂ）の低減率は４２％であった。
【００４９】
［実施例４］
粗コレステロール（原料ｄ；純度８６.７％）（ＣＨＯＬ：不純物（Ａ＋Ｂ）＝９２.９２：７.０８）５０ｇに２−ブタノールを４重量倍加え５０〜６０℃に３０分間加熱溶解させた後、１０〜２０℃に冷却し、この温度を保ちながら３０分放置した。
【００５０】
３０分後、濾紙を用いてろ過を行い、析出物を分離した。
【００５１】
分離した析出物を０.５重量倍のメタノールで洗浄した後、減圧乾燥機にて溶媒を留去し、精製コレステロールを１８.６ｇ得た。
【００５２】
得られたコレステロールの純度は９０.８％（ＣＨＯＬ：不純物（Ａ＋Ｂ）＝９４.５４：５.４６）であり、不純物（Ａ＋Ｂ）の低減率は２３％であった。
【００５３】
［実施例５］
粗コレステロール（原料ｅ；純度８５.１％）（ＣＨＯＬ：不純物（Ａ＋Ｂ）＝９１.７９：８.２１）５０ｇに１−プロパノールを４重量倍加え６０〜７０℃に３０分間加熱溶解させた後、１０〜２０℃に冷却し、この温度を保ちながら３０分放置した。
【００５４】
３０分後、濾紙を用いてろ過を行い、析出物を分離した。
【００５５】
分離した析出物を０.５重量倍のメタノールで洗浄した後、減圧乾燥機にて溶媒を留去し、精製コレステロールを３０.２ｇ得た。
【００５６】
得られたコレステロールの純度は９０.９％（ＣＨＯＬ：不純物（Ａ＋Ｂ）＝９３.４９：６.５１）であり、不純物（Ａ＋Ｂ）の低減率は２１％であった。
【００５７】
［実施例６］
粗コレステロール（原料ｆ；純度８４.５％）（ＣＨＯＬ：不純物（Ａ＋Ｂ）＝９１.６４：８.３６）２５ｇに３−ペンタノールを３重量倍加え４０〜５０℃に３０分間加熱溶解させた後、１０〜２０℃に冷却し、この温度を保ちながら３０分放置した。
【００５８】
３０分後、濾紙を用いてろ過を行い、析出物を分離した。
【００５９】
分離した析出物を０.５重量倍のメタノールで洗浄した後、減圧乾燥機にて溶媒を留去し、精製コレステロールを７.６ｇ得た。
【００６０】
得られたコレステロールの純度は９０.４％（ＣＨＯＬ：不純物（Ａ＋Ｂ）＝９４.０８：５.９２）であり、不純物（Ａ＋Ｂ）の低減率は２９％であった。
【００６１】
［比較例１］
粗コレステロール（原料ａ；純度８４.５％）（ＣＨＯＬ：不純物（Ａ＋Ｂ）＝９１.４４：８.５７）１５ｇにエタノールを４重量倍加え７０〜７５℃にて３０分間加熱溶解させた後、２０〜３０℃に冷却し、この温度を保ちながら３０分放置した。
【００６２】
３０分後、濾紙を用いてろ過を行い、析出物を分離した。
【００６３】
分離した析出物を０.５重量倍のメタノールで洗浄した後、減圧乾燥機にて溶媒を留去し、精製コレステロールを９.８ｇ得た。
【００６４】
得られたコレステロールの純度は８７.５％（ＣＨＯＬ：不純物（Ａ＋Ｂ）＝９１.４７：８.５３）であり、不純物（Ａ＋Ｂ）の低減率は０.５％であった。試験結果を表２に示す。
【００６５】
【表２】
2013184929.tif 000004
【００６６】
［比較例２］
粗コレステロール（原料ｂ；純度９６.２％）（ＣＨＯＬ：不純物（Ａ＋Ｂ）＝９９.８４：０.１５）５０ｇにエタノールを４重量倍加え７０〜７５℃にて３０分間加熱溶解させた後、２０〜３０℃に冷却し、この温度を保ちながら３０分放置した。
【００６７】
３０分後、濾紙を用いてろ過を行い、析出物を分離した。
【００６８】
分離した析出物を０.５重量倍のメタノールで洗浄した後、減圧乾燥機にて溶媒を留去し、精製コレステロールを４２ｇ得た。
【００６９】
得られたコレステロールの純度は９６.８％（ＣＨＯＬ：不純物（Ａ＋Ｂ）＝９９.８６：０.１４）であり、不純物（Ａ＋Ｂ）の低減率は７％であった。
【００７０】
［比較例３］
比較例２で得られたコレステロール（原料ｇ）３０ｇにエタノールを４重量倍加え７０〜７５℃にて３０分間加熱溶解させた後、２０〜３０℃に冷却。この温度を保ちながら３０分放置した。３０分後、濾紙を用いてろ過を行い、析出物を分離した。
【００７１】
分離した析出物を０.５重量倍のメタノールで洗浄した後、減圧乾燥機にて溶媒を留去し、精製コレステロールを２６ｇ得た。
【００７２】
得られたコレステロールの純度は９７.３％（ＣＨＯＬ：不純物（Ａ＋Ｂ）＝９９.８７：０.１３）であり、不純物（Ａ＋Ｂ）の低減率は７％であった。
【００７３】
［比較例４］
比較例３で得られたコレステロール（原料ｈ）２５ｇにエタノールを４重量倍加え７０〜７５℃にて３０分間加熱溶解させた後、２０〜３０℃に冷却し、この温度を保ちながら３０分放置した。３０分後、濾紙を用いてろ過を行い、析出物を分離した。
【００７４】
分離した析出物を０.５重量倍のメタノールで洗浄した後、減圧乾燥機にて溶媒を留去し、精製コレステロールを２２ｇ得た。
【００７５】
得られたコレステロールの純度は９７.５％（ＣＨＯＬ：不純物（Ａ＋Ｂ）＝９９.８６：０.１４）であり、不純物（Ａ＋Ｂ）の低減率は−８％であった。
【００７６】
［比較例５］
粗コレステロール（原料ｉ；純度８５.６％）（ＣＨＯＬ：不純物（Ａ＋Ｂ）＝９２.０６：７.９４）５０ｇに１−ヘキサノールを３重量倍加え５０〜６０℃にて３０分間加熱溶解させた後、１０〜１５℃に冷却し、この温度を保ちながら３０分放置した。
【００７７】
３０分後、濾紙を用いてろ過を行い、析出物を分離した。
【００７８】
分離した析出物を０.５重量倍のメタノールで洗浄した後、減圧乾燥機にて溶媒を留去し、精製コレステロールを２４.５ｇ得た。
【００７９】
得られたコレステロールの純度は８８.９％（ＣＨＯＬ：不純物（Ａ＋Ｂ）＝９１.３６：８.６４）であり、不純物（Ａ＋Ｂ）の低減率は−９％であった。
【００８０】
［比較例６］
粗コレステロール（原料ｊ；純度８５.５％）（ＣＨＯＬ：不純物（Ａ＋Ｂ）＝９２.０９：７.９１）２５ｇに１−ヘプタノールを３重量倍加え３０〜４０℃にて３０分間加熱溶解させた後、１０〜２０℃に冷却し、この温度を保ちながら３０分放置した。
３０分後、濾紙を用いてろ過を行い、析出物を分離した。
【００８１】
分離した析出物を０.５重量倍のメタノールで洗浄した後、減圧乾燥機にて溶媒を留去し、精製コレステロールを１１.１ｇ得た。
【００８２】
得られたコレステロールの純度は８８.４％（ＣＨＯＬ：不純物（Ａ＋Ｂ）＝９１.１３：８.８７）であり、不純物（Ａ＋Ｂ）の低減率は−１２％であった。
【００８３】
［比較例７］
粗コレステロール（原料ｋ；純度８４.３％）（ＣＨＯＬ：不純物（Ａ＋Ｂ）＝９０.７６：９.２４）１０ｇにメタノールを８重量倍加えスラリー状態で３０分間加熱還流させた後、２０〜３０℃に冷却し、この温度を保ちながら３０分放置した。
【００８４】
３０分後、濾紙を用いてろ過を行い、析出物を分離した。
【００８５】
分離した析出物を０.５重量倍のメタノールで洗浄した後、減圧乾燥機にて溶媒を留去し、精製コレステロールを８.２ｇ得た。
【００８６】
得られたコレステロールの純度は８８.６％（ＣＨＯＬ：不純物（Ａ＋Ｂ）＝９０.６５：９.３５）であり、不純物（Ａ＋Ｂ）の低減率は−１％であった。
【００８７】
［比較例８］
粗コレステロール（原料ｋ；純度８４.３％）（ＣＨＯＬ：不純物（Ａ＋Ｂ）＝９０.７６：９.２４）１０ｇにテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）を１重量倍加え５０〜６０℃にて３０分間加熱溶解させた後、メタノールを３重量倍添加し、希釈しながら結晶を析出させた。その後、２０〜３０℃に冷却し、この温度を保ちながら３０分放置した。
【００８８】
３０分後、濾紙を用いてろ過を行い、析出物を分離した。
【００８９】
分離した析出物を０.５重量倍のメタノールで洗浄した後、減圧乾燥機にて溶媒を留去し、精製コレステロールを６.４ｇ得た。
【００９０】
得られたコレステロールの純度は８７.２％（ＣＨＯＬ：不純物（Ａ＋Ｂ）＝９０.１１：９.８９）であり、不純物（Ａ＋Ｂ）の低減率は−７％であった。
【００９１】
［比較例９］
粗コレステロール（原料ｋ；純度８４.３％）（ＣＨＯＬ：不純物（Ａ＋Ｂ）＝９０.７６：９.２４）１０ｇにキシレンを４重量倍加え５５〜６０℃にて３０分間加熱溶解させた後、２０〜３０℃に冷却し、この温度を保ちながら３０分放置した。
【００９２】
３０分後、濾紙を用いてろ過を行い、析出物を分離した。
【００９３】
分離した析出物を０.５重量倍のメタノールで洗浄した後、減圧乾燥機にて溶媒を留去し、精製コレステロールを１.６ｇ得た。
【００９４】
得られたコレステロールの純度は８８.３％（ＣＨＯＬ：不純物（Ａ＋Ｂ）＝８９.５２：１０.４８）であり、不純物（Ａ＋Ｂ）の低減率は−１３％であった。
【００９５】
［比較例１０］
粗コレステロール（原料ｋ；純度８４.３％）（ＣＨＯＬ：不純物（Ａ＋Ｂ）＝９０.７６：９.２４）１０ｇにＭＥＫを４重量倍加え５０〜６０℃にて３０分間加熱溶解させた後、２０〜３０℃に冷却し、この温度を保ちながら３０分放置した。
【００９６】
３０分後、濾紙を用いてろ過を行い、析出物を分離した。
【００９７】
分離した析出物を０.５重量倍のメタノールで洗浄した後、減圧乾燥機にて溶媒を留去し、精製コレステロールを３.８ｇ得た。
得られたコレステロールの純度は８８.２％（ＣＨＯＬ：不純物（Ａ＋Ｂ）＝９０.５６：９.４４）であり、不純物（Ａ＋Ｂ）の低減率は−２％であった。
【００９８】
［比較例１１］
粗コレステロール（原料ｋ；純度８４.３％）（ＣＨＯＬ：不純物（Ａ＋Ｂ）＝９０.７６：９.２４）１０ｇにヘキサンを４重量倍加え６０〜７０℃にて３０分間加熱溶解させた後、２５〜３０℃に冷却し、この温度を保ちながら３０分放置した。
【００９９】
３０分後、濾紙を用いてろ過を行い、析出物を分離した。
【０１００】
分離した析出物を０.５重量倍のメタノールで洗浄した後、減圧乾燥機にて溶媒を留去し、精製コレステロールを６.２ｇ得た。
【０１０１】
得られたコレステロールの純度は８６.７％（ＣＨＯＬ：不純物（Ａ＋Ｂ）＝９０.８３：９.１７）であり、不純物（Ａ＋Ｂ）の低減率は１％であった。
【０１０２】
［実施例７］
装置  ：ＬＣ−２０１０Ｃ（島津製作所）
検出器：ＵＶ  ２１０ｎｍ
カラム：Ｉｎｅｒｔｓｉｌ  ＯＤＳ−３（ジーエルサイエンス株式会社）
液相  ：メタノール  １００％（高速液体クロマトグラフィー用メタノール）
温度条件：カラム温度；４０℃
サンプル：１％ＥＧＤＭＥ溶液、１０μＬ注入
送液速度：１.０ｍｌ
分析時間：３０分
【０１０３】
保持時間が５分以上かつ１４．２分（コレステロールの保持時間）未満である不純物（短ＲＴの不純物（合計））や、保持時間が１４．２分を超える不純物（長ＲＴの不純物（Ａ＋Ｂ））の低減率は以下のようにして算出する。
【０１０４】
なお、検出されるピークの内、保持時間が５分より短いピークは溶媒ピークと考えられるため除外して算出する。
【０１０５】
まず、ＨＰＬＣ ａｒｅａ％比（ＣＨＯＬ）＋ＨＰＬＣ ａｒｅａ％比（短ＲＴの不純物（合計））＋ＨＰＬＣａｒｅａ％比（長ＲＴの不純物（Ａ＋Ｂ））が１００％となるように、各ＨＰＬＣ ａｒｅａ％比の値を正規化する。  
【０１０６】
次に、精製前後のＨＰＬＣ ａｒｅａ％比（短ＲＴの不純物（合計））の差分を、精製前のＨＰＬＣ ａｒｅａ％比（短ＲＴの不純物（合計））で割ることにより、精製前後の不純物（短ＲＴの不純物（合計））の低減率を算出する。
【０１０７】
同様にして、精製前後のＨＰＬＣ ａｒｅａ％比（長ＲＴの不純物（Ａ＋Ｂ））の差分を、精製前のＨＰＬＣ ａｒｅａ％比（長ＲＴの不純物（Ａ＋Ｂ））で割ることにより、精製前後の不純物（長ＲＴの不純物（Ａ＋Ｂ））の低減率を算出する。
【０１０８】
粗コレステロール（原料ａ；純度８４.５％）（短ＲＴの不純物（合計）：ＣＨＯＬ：長ＲＴの不純物（Ａ＋Ｂ）＝７.０５：８４.９９：７.９６）５ｇに１−ブタノールを４重量倍加え５０〜６０℃に３０分間加熱溶解させた後、２０〜３０℃に冷却し、この温度を保ちながら３０分放置した。
【０１０９】
３０分後、濾紙を用いてろ過を行い、析出物を分離した。
【０１１０】
分離した析出物を０.５重量倍のメタノールで洗浄した後、減圧乾燥機にて溶媒を留去し、精製コレステロールを６.６ｇ得た。
【０１１１】
得られたコレステロールの純度は９１.２％（短ＲＴの不純物（合計）：ＣＨＯＬ：長ＲＴの不純物（Ａ＋Ｂ）＝３.２２：９１.１９：５.５９）であり、短ＲＴの不純物（合計）の低減率は５４％、長ＲＴの不純物（Ａ＋Ｂ）の低減率は３０％であった。
【０１１２】
［比較例１２］
粗コレステロール（原料ａ；純度８４.５％）（短ＲＴの不純物（合計）：ＣＨＯＬ：長ＲＴの不純物（Ａ＋Ｂ）＝７.０５：８４.９９：７.９６）１５ｇにエタノールを４重量倍加え７０〜７５℃にて３０分間加熱溶解させた後、２０〜３０℃に冷却し、この温度を保ちながら３０分放置した。
【０１１３】
３０分後、濾紙を用いてろ過を行い、析出物を分離した。
【０１１４】
分離した析出物を０.５重量倍のメタノールで洗浄した後、減圧乾燥機にて溶媒を留去し、精製コレステロールを９.８ｇ得た。
【０１１５】
得られたコレステロールの純度は８７.５％（短ＲＴの不純物（合計）：ＣＨＯＬ：長ＲＴの不純物（Ａ＋Ｂ）＝４.３４：８７.５０：８.１６）であり、短ＲＴの不純物（合計）の低減率は３８％、長ＲＴの不純物（Ａ＋Ｂ）の低減率は−３％であった。
【０１１６】
短ＲＴの不純物（合計）および長ＲＴの不純物（Ａ＋Ｂ）の挙動を表３に示す。
【０１１７】
【表３】
2013184929.tif 000005
【０１１８】
以下において、実際の工場での工程イメージ、プロセスの全体像について説明する。
【０１１９】
使用設備：
（１）コンデンサー付随の晶析缶：３ｍ３（精製すべき粗コレステロールの５vol倍以上の容量であればよい。）
（２）遠心分離機
（３）ろ液受け槽（晶析缶と同等以上の容量ならよい）
（４）乾燥機
【０１２０】
本発明の一実施態様に係るコレステロールの精製方法の概略フローを図１に示す。
【０１２１】
フローは(i)溶解工程、(ii)冷却晶析工程、(ii)遠心分離工程、(iv)乾燥工程からなり、具体的には以下の通りである。
【０１２２】
粗コレステロール５００kｇと１−ブタノール２０００ｋｇを晶析缶に投入する。
【０１２３】
晶析缶を加温し缶内のスラリー溶液の温度を６０〜７０℃に昇温させた後、缶内の液が均一に溶解したのを目視で確認する。溶解後３０分、この温度を保ちながら放置する。
【０１２４】
その後、晶析缶の冷却を開始する。冷却は５［℃／時間］以上の冷却速度にて徐々に行う。
【０１２５】
内温が４５℃に到達したら、予め精製しておいたコレステロール５００ｇを種晶として投入する。
【０１２６】
種晶投入後、４０〜４５℃の温度を保ち結晶が析出することを確認する。
【０１２７】
結晶の析出が確認できた後、この温度を保ちながら３０分放置し、さらに２５℃まで冷却を行う。液温が２５℃まで到達したら２０〜２５℃にて３０分放置する。その後遠心分離により結晶を取り出す。
【０１２８】
次に遠心分離機内で母液を濾過したwet精製結晶にメタノールを５００ｋｇ用いて洗浄する。遠心分離で取得したwet精製結晶は乾燥機に投入し、溶媒除去後、精製コレステロールを取得する。
【０１２９】
以下において、溶媒量や溶解条件、析出条件などのより好ましい条件につき説明する。
【０１３０】
本実施態様において、原料の粗コレステロール（市販品）のＨＰＬＣ純度は９０％以上である。
【０１３１】
本実施態様において、コレステロールの純度はＨＰＬＣ分析により測定する。
【０１３２】
再結晶に用いる有機溶媒は１−ブタノールが最も好ましく、２−ブタノール、１−プロパノール、および３−プロパノールも用いることができる。
【０１３３】
再結晶の操作としては、原料コレステロールを溶媒に加熱条件下で溶解させたのち、冷却晶析を行なえばよい。
【０１３４】
本実施態様で使用する設備はバッチ式で再結晶できる装置であればよい。
【０１３５】
溶媒の使用量は、粗コレステロールに対して２〜６重量倍、好ましくは３〜４重量倍である。
【０１３６】
溶解温度は使用する溶媒種と溶媒量に合わせて温度範囲を選定すればよく、例えば３０〜９０℃、好ましくは６０〜７０℃である。
【０１３７】
溶解を確認後、冷却晶析を行うが、冷却速度は５［℃／時間］以上の冷却速度にて徐々に冷却するのがよい。
【０１３８】
冷却温度はコレステロールの濃度に合わせて結晶が析出する温度に範囲を選定すればよいが、好ましくは０〜３０℃である。
【０１３９】
再結晶の後に析出した結晶を濾別後、洗浄する溶媒はメタノール等の低沸点溶媒が望ましい。
【０１４０】
以下、溶媒に１−ブタノールを用いた場合の最も好ましい条件について説明する。
【０１４１】
溶媒の使用量はコレステロールに対して４重量倍であり、溶解温度は６０〜６５℃である。溶解を確認後、５［℃／時間］以上の冷却速度にて徐々に冷却し、液温が４５℃に到達したら、あらかじめ精製したコレステロールを種晶として粗コレステロールに対して０.１％重量倍以上を添加した後、さらに冷却する。結晶は４０〜４５℃で析出し、結晶が析出したらその温度で３０分以上保持する。
【０１４２】
その後さらに２５℃まで冷却を行う。液温が２５℃まで到達したら２０〜２５℃にて３０分放置する。
【０１４３】
その後、濾過により結晶を取り出す。濾過したwet精製結晶はメタノールを粗コレステロールに対して１重量倍用いて洗浄する。
【０１４４】
取得したwet精製結晶は乾燥機に投入し、溶媒を除去し精製コレステロールを取得する。
【０１４５】
図２、図３は、それぞれ図１の概略フローによる精製前、精製後のコレステロール試料をＨＰＬＣ分析した結果を示す溶出曲線である。
【産業上の利用可能性】
【０１４６】
本発明に係るコレステロールの精製方法は、コレステロールを高純度で精製するために広く利用可能である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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