(57)【要約】【課題】芽胞を形成し、過酢酸／過酸化水素製剤に強い抵抗性を持つパエニバチルス属細菌やバチルス・セレウスなどの有害菌に対する有効な過酢酸含有殺菌組成物を提供する。【解決手段】従来の過酢酸製剤を用いても、耐薬品性の高い芽胞形成菌であるパエニバチルス属細菌やバチルス・セレウスに関しては、殺菌が難しいことが知られている。芽胞形成菌であるバチルス・セレウスやパエニバチルス属細菌に対し、過酸化水素分解酵素を利用して過酢酸平衡組成物中の過酸化水素含有比率を低くした過酢酸組成物が高い殺菌効果を示すことを見出し、短時間での処理でも有効な過酢酸含有殺菌組成物を完成させた。  【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
過酢酸濃度が１５００ｐｐｍ以上でかつ過酢酸／過酸化水素比が７以上、または過酢酸濃度が１９００ｐｐｍ以上でかつ過酢酸／過酸化水素比が４以上、または過酢酸濃度が２５００ｐｐｍ以上でかつ過酢酸／過酸化水素比が３以上、または過酢酸濃度が３２００ｐｐｍ以上でかつ過酢酸／過酸化水素比が２以上である、過酢酸・過酸化水素・酢酸および過酸化水素分解酵素を含むパエニバチルス属細菌およびバチルス・セレウスに対する過酢酸含有殺菌組成物。
【請求項２】
０．５Ｕ．Ｔ／ｍｌ以上の過酸化水素分解酵素を含む、請求項１に記載のパエニバチルス属細菌およびバチルス・セレウスに対する過酢酸含有殺菌組成物。
【請求項３】
７．５Ｕ．Ｔ／ｍｌ以上の過酸化水素分解酵素を含む、請求項２に記載のパエニバチルス属細菌およびバチルス・セレウスに対する過酢酸含有殺菌組成物。
【請求項４】
１５００ｐｐｍ以上の過酢酸と０．５Ｕ．Ｔ／ｍｌ以上の過酸化水素分解酵素を含み、過酸化水素を含まないパエニバチルス属細菌およびバチルス・セレウスに対する過酢酸含有殺菌組成物。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれかに記載の過酢酸含有殺菌組成物を用いる、パエニバチルス属細菌およびバチルス・セレウスに対する殺菌方法。
【請求項６】
殺菌処理を６０℃〜９５℃で行うことを特徴とする、請求項５に記載の殺菌方法。
【請求項７】
殺菌処理を５秒〜６０秒で行うことを特徴とする、請求項５に記載の殺菌方法。
【請求項８】
過酸化水素と酢酸の平衡反応によって成される過酢酸過酸化水素混合物に、０．５Ｕ．Ｔ／ｍｌ以上となるよう過酸化水素分解酵素を添加して過酸化水素を分解することで製造する、パエニバチルス属細菌およびバチルス・セレウスに対する過酢酸含有殺菌組成物の製造方法。
【請求項９】
過酸化水素と酢酸の平衡反応によって成される過酢酸過酸化水素混合物に、７．５Ｕ．Ｔ／ｍｌ以上となるよう過酸化水素分解酵素を添加して過酸化水素を分解することで製造する、パエニバチルス属細菌およびバチルス・セレウスに対する過酢酸含有殺菌組成物の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は食品・醸造・医療産業等の多くの分野で、製造装置や容器・包装資材等の殺菌・洗浄等の目的で幅広く使用される過酢酸殺菌組成物に関する。さらに、詳細には各種飲料食品関連および医療機器類に使用される過酢酸殺菌組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
過酢酸製剤は低濃度でも殺菌力が強く即効性があり、抗菌スペクトルが広く、細菌芽胞、カビ、酵母等にも優れた効果を示す事から、殺菌処置が必要とされる食品・飲料産業場面で広く使用されている。しかし、従来の過酢酸製剤を用いても、耐薬品性の高い芽胞形成菌であるバチルス・セレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｅｒｅｕｓ）に関しては、殺菌が難しいことが知られている。
【０００３】
このバチルス・セレウスに対し、過酢酸組成物中の過酢酸濃度を５００〜３０００ｐｐｍとし、かつ過酸化水素／過酢酸比率を０．７以下に低く抑えた過酢酸組成物が、有効な殺菌性を示す事が開示されている。（特許文献１および非特許文献１）特許文献１では、一般的な過酢酸１０％、過酸化水素１５％を含む過酢酸系殺菌剤（したがって過酸化水素／過酢酸比率は１．５）を水で希釈して過酢酸濃度が５００〜３０００ｐｐｍのものを調製すると記載されている。同文献には、該調製液の過酸化水素／過酢酸比率を０．７以下にする方法については何ら記載がないが、実施例１では、その調製液にさらに過酸化水素を加えて所望の過酸化水素／過酢酸比のサンプルを調製すると記載されている。
しかし、上記の過酢酸組成物に単に水を加えて希釈するという方法では、過酢酸と過酸化水素の比率は変化せず、過酸化水素／過酢酸比は１．５のままであり、また、それに過酸化水素をさらに加えるという方法では過酸化水素濃度が上昇するだけで、いずれにしても過酢酸濃度を５００〜３０００ｐｐｍとし、かつ過酸化水素／過酢酸比率を０．７以下に低く抑えた過酢酸組成物は得られない。
また、近年、各種飲料食品関連では、この過酢酸製剤に対し強い抵抗性を示すパエニバチルス（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ）属細菌等の耐性菌の問題が顕在化してきている。（特許文献２）
【０００４】
また、過酢酸組成物においてカタラーゼ酵素を用いて過酸化水素を低減し、食品パッケージの殺菌処理を行う際に該組成物中に蓄積する過酸化水素および過酸を減少せしめ、過酢酸組成物の交換などのコスト・労力・手間などを省く方法が報告されている。（特許文献３）しかし、該報告では、用いるカタラーゼ酵素の使用量が、単純な重量濃度で規定されており、過酸化水素の分解能を定量的に表す力価で表示されていない。カタラーゼなどの一般的な酵素は、生体から精製するため不純物等を含んだり、経時変化で失活したりするので、活性を直接表す力価以外で使用量を規定しても確実に効果を得ることは難しい。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】ＷＯ２００７／１４８４１０号公報
【特許文献２】特開２００９−１１３８５８号公報
【特許文献３】特表２０１１−５１７９４６号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】防菌防黴  ２００６年７月号  ３９７〜４００ページ
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、バチルス・セレウスやパエニバチルス属細菌などの芽胞形成菌に対して、短時間で高い殺菌効果を示す過酢酸含有殺菌組成物を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、耐薬品性の高い芽胞形成菌であるバチルス・セレウスやパエニバチルス属細菌に対し、過酢酸平衡組成物中の過酸化水素含有比率を低くした過酢酸組成物が高い殺菌効果を示すことを見出した。そこで、鋭意検討した結果、過酸化水素分解酵素を利用して効率よく過酢酸／過酸化水素比を高めることにより、本発明のバチルス・セレウスやパエニバチルス属細菌に有効な過酢酸含有殺菌組成物を完成させた。
【０００９】
すなわち、本発明は以下の構成を有する。
【００１０】
過酢酸・過酸化水素・酢酸および過酸化水素分解酵素を含み、過酢酸濃度が１５００ｐｐｍ以上でかつ過酢酸／過酸化水素比が７以上、または過酢酸濃度が１９００ｐｐｍ以上でかつ過酢酸／過酸化水素比が４以上、または過酢酸濃度が２５００ｐｐｍ以上でかつ過酢酸／過酸化水素比が３以上、または過酢酸濃度が３２００ｐｐｍ以上でかつ過酢酸／過酸化水素比が２以上である、パエニバチルス属細菌およびバチルス・セレウスに対する過酢酸含有殺菌組成物。
【００１１】
０．５Ｕ．Ｔ／ｍｌ以上の過酸化水素分解酵素を含む、段落［００１０］に記載のパエニバチルス属細菌およびバチルス・セレウスに対する過酢酸含有殺菌組成物。
【００１２】
７．５Ｕ．Ｔ／ｍｌ以上の過酸化水素分解酵素を含む、段落［００１１］に記載のパエニバチルス属細菌およびバチルス・セレウスに対する過酢酸含有殺菌組成物。
【００１３】
１５００ｐｐｍ以上の過酢酸と０．５Ｕ．Ｔ／ｍｌ以上の過酸化水素分解酵素を含み、過酸化水素を含まないパエニバチルス属細菌およびバチルス・セレウスに対する過酢酸含有殺菌組成物。
【００１４】
段落［００１０］〜［００１３］のいずれかに記載の過酢酸含有殺菌組成物を用いる、パエニバチルス属細菌およびバチルス・セレウスに対する殺菌方法。
【００１５】
殺菌処理を６０℃〜９５℃で行うことを特徴とする、段落［００１４］に記載の殺菌方法。
【００１６】
殺菌処理を５秒〜６０秒で行うことを特徴とする、段落［００１４］に記載の殺菌方法。
【００１７】
過酸化水素と酢酸の平衡反応によって成された過酢酸過酸化水素混合物に、０．５Ｕ．Ｔ／ｍｌ以上となるよう過酸化水素分解酵素を添加して過酸化水素を分解することで製造する、パエニバチルス属細菌およびバチルス・セレウスに対する過酢酸含有殺菌組成物の製造方法。
【００１８】
過酸化水素と酢酸の平衡反応によって成された過酢酸過酸化水素混合物に、７．５Ｕ．Ｔ／ｍｌ以上となるよう過酸化水素分解酵素を添加して過酸化水素を分解することで製造する、パエニバチルス属細菌およびバチルス・セレウスに対する過酢酸含有殺菌組成物の製造方法。
【００１９】
以下、本発明を詳しく説明する。
通常、過酢酸は過酸化水素と酢酸との平衡反応により生成され、該平衡組成物中の過酸化水素含有比率を低くすることで、芽胞形成菌であるバチルス・セレウスやパエニバチルス属細菌に有効な殺菌効果を発揮するが、その生成に当たり、過酸化水素と酢酸の極端な比率を用いる事は、経済性や安全性の面から見て好ましくない。製造の際に、過酸化水素の比率を極端に下げて過酢酸／過酸化水素の比率が著しく高い過酢酸組成物を得ようとすると、結果として酢酸濃度の高い平衡組成となり、危険性が高まるため扱いにくいものとなる。危険性を回避するために、希釈して過酢酸濃度を下げた低濃度過酢酸組成物とすれば、輸送・保管などの経済的な面から実用に合わないものとなる。
【００２０】
本発明の過酢酸含有殺菌組成物の製造方法は、一般的な過酢酸組成物の調製工程と、それに続く過酸化水素分解酵素の添加により過酢酸／過酸化水素比を高める工程からなる。
過酢酸組成物の調製方法としては、安全性や経済性、また調製時間の速さなどから適切な方法を選択すればよい。また、市販の過酢酸製剤を利用してもよい。
具体的には、酢酸と過酸化水素を十分に混合して適度な温度条件下で数日から数週間ほど静置する方法が例示できる。この調製過程は、濃度において（［過酢酸］・［水］）／（［酢酸］・［過酸化水素］）＝Ｋ（平衡定数）で表される平衡反応であるため、混合の際に酢酸と過酸化水素の量を適切に調整することで、求める過酢酸濃度となる過酢酸組成物が得られる。平衡に達した状態では、常に過酢酸・過酸化水素・酢酸・水を含む。
この調製方法の変法に、グリセリン酢酸エステルと過酸化水素から過酢酸組成物を得る方法などがある。
【００２１】
こうして得た過酢酸組成物に過酸化水素分解酵素を作用させて含まれる過酸化水素を分解し、本発明の過酢酸含有殺菌組成物を得る。
本発明に用いる過酸化水素分解酵素は、糸状菌などから抽出した各種カタラーゼが使用できるが、過酢酸組成物中で酵素活性を発現・維持でき、速やかに過酸化水素を分解して所望のレベルにまで減じることができるものが望ましい。具体的には、アスクスーパー２５（商品名、三菱ガス化学（株）製）などが例示できる。
【００２２】
ここで留意しなくてはならないことは、過酢酸組成物が、過酸化水素・酢酸・過酢酸・水の平衡によって形成されている点である。そのため、本発明の過酢酸含有殺菌組成物においても、添加した過酸化水素分解酵素によって過酸化水素が減少した後、あるいは減少中においても、その状態から経時によって、徐々に過酢酸が水と反応して過酸化水素と酢酸に戻り、平衡定数Kで規定される濃度状態の過酸化水素・酢酸・過酢酸・水の組成物となってしまう。この平衡定数Kで規定される状態では、ほとんどの場合、その過酢酸濃度と過酢酸／過酸化水素比は、もはや本発明のそれらからは外れ、バチルス・セレウスやパエニバチルス属細菌に対して十分な殺菌効果を有さない可能性が高い。
【００２３】
また、不用意に低濃度の過酸化水素分解酵素で過酸化水素を分解しようとすれば、分解に長時間を要するうえに、目的の過酢酸／過酸化水素比に達する前に組成物成分やｐＨによって過酸化水素分解酵素が失活し、所望の過酢酸／過酸化水素比に達することが出来ない恐れもある。
【００２４】
したがって、本発明においては、添加した過酸化水素分解酵素によってできるだけ速やかに過酸化水素が分解されることが望まれる。そのためには、分解しようとする過酸化水素の濃度と、使用する過水分解酵素が過酸化水素・酢酸・過酢酸存在下でどの程度酵素活性を示すかを勘案して、過酸化水素分解酵素の添加濃度を決めることが好ましい。そうした条件によって異なってくるが、一般的にその添加濃度としては０．５Ｕ．Ｔ／ｍｌ以上が好ましく、より好ましくは５Ｕ．Ｔ／ｍｌ以上、さらに好ましいのは７．５Ｕ．Ｔ／ｍｌ以上である。特に、含まれる過酸化水素の濃度がより高いほど、より高濃度となるよう過酸化水素分解酵素を加えるほうが、短時間での調製という面から好ましい。
【００２５】
本発明の過酢酸含有殺菌組成物の製造に当たっては、過酢酸組成物に過酸化水素分解酵素を添加して過酸化水素を減じた後、過酢酸濃度が本発明の範囲で所望のレベルになるまで水等で希釈してもよく、あるいは過酢酸組成物を所望の過酢酸濃度にまで希釈しておいた後、過酸化水素分解酵素を添加して過酸化水素を減じて、本発明の過酢酸／過酸化水素比と成してもよい。
【００２６】
さらに、バチルス・セレウスやパエニバチルス属細菌に対する殺菌効果の点、また過酸化水素分解酵素によって減じた過酢酸／過酸化水素比が、経時による平衡反応によって戻り、本発明のレンジを外れるまでの可使時間をできるだけ長くするという点からも、本発明における過酢酸／過酸化水素比はできるだけ高いほうが好ましい。具体的には、過酢酸濃度が１５００ｐｐｍ以上では過酢酸／過酸化水素比が７以上、過酢酸濃度が１９００ｐｐｍ以上では過酢酸／過酸化水素比が４以上、過酢酸濃度が２５００ｐｐｍ以上では過酢酸／過酸化水素比が３以上、さらに過酢酸濃度が３０００ｐｐｍ以上では過酢酸／過酸化水素比が２以上である。バチルス・セレウスやパエニバチルス属細菌に対する殺菌効果の点からもっとも好ましいのは、実質的に過酸化水素が全量分解された過酢酸含有殺菌組成物である。
【００２７】
本発明の目的から見た場合、過酢酸濃度が高くかつ過酢酸／過酸化水素比が高いほど、殺菌効果は高い傾向にあるが、取扱性や経済性の観点から過酢酸濃度は１５００ｐｐｍ〜１２０００ｐｐｍが好ましく、より好ましい濃度は１９００ｐｐｍ〜１００００ｐｐｍ、さらに好ましい濃度は２５００ｐｐｍ〜１００００ｐｐｍ、もっとも好ましいのは３０００ｐｐｍ〜８０００ｐｐｍである。
【００２８】
本発明の過酢酸含有殺菌組成物を用いて殺菌処理を行う際の条件としては、該過酢酸含有殺菌組成物が芽胞などの菌体に作用する時間・温度として、より長時間・より高温が好ましい。
しかし、食品飲料容器の殺菌処理などにおいて、作業の効率性や容器の耐熱性等の実用性を考慮すれば、作用時間としては５秒〜１２０秒が好ましく、より好ましくは５秒〜６０秒、さらに好ましくは５秒〜１５秒である。また、殺菌処理の温度としては、６０℃〜９５℃が好ましく、より好ましくは６５℃〜９０℃、さらに好ましくは６５℃〜７５℃である。
【００２９】
また、本発明の過酢酸含有殺菌組成物の使用形態には特に制限は無く、用いる対象・装置設備・状況に応じて最適な形態をとればよい。たとえば、容器の殺菌処理の場合、対象容器を本組成物に浸漬する方法が例示できる。あるいは、容器表面を洗浄するように本組成物を流動させる方法が例示できる。また、適量の本組成物を容器表面に噴霧する方法が例示できる。処理後は、残留している本組成物が十分に除かれるよう、対象物を清浄な無菌水等で洗浄するのが望ましい。処理後の本組成物は特段の支障がない限り再使用することができるが、過酢酸濃度の低下等に留意する必要がある。
【００３０】
また、本発明の過酢酸含有殺菌組成物に対し、その目的・用途に応じて、添加物等を加えてもよい。ただし、特に過酢酸の分解を引き起こす金属類・化合物類の添加は避けなければならない。また、食品飲料関係の場合、その添加剤の使用が人体などに安全か否かに留意する必要がある。
添加剤としては、安定化剤として１−ヒドロキシエチリデン−１，１−ジホスホン酸、アミノトリメチレンホスホン酸、ピロリン酸、２，６−ピリジンジカルボン酸などが挙げられる。また、殺菌助剤としては、ベンジルアルコール、２−フェノキシエタノール、ヘキサノール、ヘプタノール、フェニルエチルアルコール、クロロブタノール、プロピレングリコール、１，５−ペンタンジオール、ヘキシレングリコール、ｐ−エチルフェノール、ｐ−プロピルフェノール、ショ糖グリセリンエステル、ソルビトール、グリセリントリ酢酸エステル、クロロ酢酸、ギ酸、ギ酸ナトリウムなどが挙げられる。洗浄助剤としては、一般的な界面活性剤であれば、特に制限されない。目的に応じてアニオン系、カチオン系、あるいはノニオン系界面活性剤から１種または２種以上を選択すればよいが、特に好ましくは、第２級アルキルスルホン酸ナトリウムまたはアルキルベンゼンスルホン酸とポリオキシエチレンラウリルエーテル硫酸ナトリウム（ＬＥＳ７０％）を８５：１５の割合で配合したものである。
【００３１】
なお、詳細なメカニズムは不明だが、過酢酸も過酸化水素も、その酸化作用によって殺菌効果を生じ、その効果は、過酢酸や過酸化水素が菌体・芽胞の膜を透過することで発揮されるものと考えられている。本発明において、バチルス・セレウスやパエニバチルス属細菌への過酢酸の殺菌効果に対し、現象的には過酸化水素が阻害的に作用するが、その阻害作用は同時存在下で拮抗的に生じるものであり、過酸化水素により菌体を事前処理し、その後過酸化水素を除き、あらためて過酢酸単独で処理した場合には、過酢酸の殺菌効果を阻害しない。したがって、本発明の目的からは、前述のとおり過酸化水素の含有率は限りなくゼロに近いことが望ましく、過酸化水素の含有率が下がれば下がるほど、低濃度の過酢酸でもこれらの菌への殺菌効果を発揮できる。ただし、バチルス・セレウスやパエニバチルス属細菌以外の雑菌によっても汚染された容器等の殺菌で、それらの雑菌も殺菌のターゲットとしたい場合、それらの菌は往々にして過酸化水素のほうに感受性が高いものも多く、ある程度の過酸化水素が含有されていたほうが総合的な殺菌効果という面でメリットがある。したがって、使用目的・場面に応じて過酢酸／過酸化水素濃度比を調整することが望ましい。
【発明の効果】
【００３２】
本発明による過酢酸含有殺菌組成物は、その優れた殺菌力から、パエニバチルス属細菌やバチルス・セレウスを含む菌類・微生物の混入・増殖が問題となる分野・用途で使用でき、たとえば、食品関連、無菌包装容器、設備機器・容器類、室内環境殺菌、医療関連、高水準消毒・内視鏡・透析ライン・その他医療機器類・院内環境殺菌、リネン関連、農・漁業関連設備器具類、病原菌殺菌などで用いることが出来る。
【発明を実施するための形態】
【実施例】
【００３３】
過酢酸組成物は、以下のようにして調製した。
３５％過酸化水素と、氷酢酸または８０％酢酸を適量混合し、さらに０．３％となるようピロリン酸を加えて攪拌し、均一な溶液とした。これを４０℃温浴中に３日間静置した。さらに室温で３日間静置して所望の過酢酸組成物を得た。
該方法で、３５％過酸化水素：５２．３％、８０％酢酸：４７．４％、ピロリン酸：０．３％とした場合、過酢酸濃度は１２．１％、過酸化水素は１２．９％、  酢酸は２８％であり、過酢酸／過酸化水素濃度は０．９であった。また、過酸化水素と酢酸の比率を変えて、過酢酸１０％・過酸化水素１７％・酢酸２１％、および過酢酸７．５％・過酸化水素２．６％・酢酸５８．１％となる過酢酸組成物も作成した。
こうして調製した過酢酸組成物を、必要に応じて水で適宜希釈して用いた。
【００３４】
なお、過酢酸の濃度は以下の方法によって求めた。
（１）トータルパーオキサイド濃度の測定
過酢酸を含む溶液０．１ｇに純水約２０ｍｌを加え、（１＋９）硫酸１０ｍｌ、１Ｎヨウ化カリウム溶液１０ｍｌ、０．５％モリブデン酸アンモニウム溶液１〜２滴を加えてＮ／１０チオ硫酸ナトリウム標準液で滴定した。
（２）過酸化水素濃度の測定
同じ過酢酸を含む溶液０．１ｇに純水約２０ｍｌを加え、（１＋９）硫酸１０ｍｌ、フェロイン指示薬２〜３滴を加えてＮ／１０硫酸セリウム標準液で滴定した。
過酢酸濃度は、次式により、（１）トータルパーオキサイド濃度から（２）過酸化水素濃度を引いた値を過酢酸に換算して求めた。
過酢酸濃度（％）＝（トータルパーオキサイド濃度％−過酸化水素濃度％）×７６／３４
【００３５】
過酸化水素分解酵素として市販のカタラーゼ酵素を用い、それによる過酸化水素の分解は、以下の手順によって行った。
調製した過酢酸組成物にアスクスーパー２５（商品名、三菱ガス化学（株）製）を添加し、４０℃に放置して含まれる過酸化水素の分解を行った。添加したカタラーゼの濃度は、０．１３Ｕ．Ｔ／ｍｌ〜２．６Ｕ．Ｔ／ｍｌであった。
【００３６】
なお、カタラーゼの力価は次のようにして求めることができる。
（１）過酸化水素３５％溶液０．１１ｇを０．０５Ｍリン酸緩衝液（リン酸二水素カリウム（ＫＨ２ＰＯ４）６．８ｇ、リン酸水素二カリウム（Ｋ２ＨＰＯ４）８．７１ｇを純水に溶解させて１０００ｍｌに調製する）で１００ｇに調整して基礎溶液とし、あらかじめ３０℃に加温した。
（２）１００ｍｌガラス瓶にカタラーゼの１０,０００倍希釈液１ｍｌを入れ、５分間、３０℃に加温した。該カタラーゼ希釈液１ｍｌに基礎溶液５ｍｌを入れ、正確に５分間反応させた。
（３）５分経過後（１+９）硫酸２ｍｌを加え、反応を停止させた。
（４）１Ｎヨウ化カリウム１ｍｌ、１％モリブデン酸アンモニウム溶液１滴を加え、澱粉指示薬を用いてＮ／２００チオ硫酸ナトリウム溶液で滴定した。
（５）Ｂｌａｎｋとして、基礎溶液５ｍｌにＤＭＷ１ｍｌを加え、（３）（４）の操作を行った。
（６）上記条件で１分間に１μＭのＨ２Ｏ２を分解する酵素量を１Ｕ．Ｔとした。
【００３７】
殺菌効果の検証には、バチルス・セレウス、パエニバチルス属細菌および芽胞形成菌であるバチルス・サブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）を用いた。
【００３８】
本発明の過酢酸含有殺菌組成物の殺菌効果の指標として、Ｄ６５≦０．０５（分）かつ処理時間０．２５分（１５秒）でＣＦＵ（Ｃｏｌｏｎｙ
Ｆｏｒｍｉｎｇ Ｕｎｉｔ）＝０とした。
ここで、Ｄ値（１Ｄ）とは、一定の温度において被実験組成物で殺菌処理を行った場合に、対象微生物の初菌数（当初芽胞数）（Ｎ０）と生残菌数（Ｎ）の比（Ｎ／Ｎ０）が１／１０となるのに要する処理時間（分）である。本発明では、６５℃におけるＤ値を殺菌力の指標とした。
【００３９】
また、非耐熱のＰＥＴボトル無菌充填に関して、ボトリング各社で用いられている処理温度、過酢酸濃度、処理時間はそれぞれ異なるが、一般的には処理温度５３℃〜６５℃、処理時間１０秒〜２０秒で行なわれている事から、所用殺菌時間を０．２５分（１５秒）以内として評価した。
【００４０】
（殺菌試験法）
（１）２０ｍｌ容滅菌済みビーカーに、過酢酸組成物の試験液９ｍｌを分取した。
（２）６５℃の温浴中に設置し、攪拌しながら５分間保持した。
（３）芽胞液１ｍｌを接種し、所定時間経過後に１ｍｌを採取して、氷冷した不活化剤９ｍｌと直ちに混和した。
（４）段階希釈し、標準寒天培地（日水製薬製）で混釈後、３５℃・２日間培養した。
（５）コロニー数をカウントして生残菌数とし、Ｄ値を算出した。
【００４１】
（実施例１）
［カタラーゼ酵素による過酸化水素の分解］
以下に、カタラーゼの添加量と過酢酸（ＰＡＡ）／過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）比の経時変化の結果を示す。
【００４２】
【表１】
2013213017.tif 000002
【００４３】
（実施例２〜１６、比較例１〜１０）
［殺菌力の評価］
パエニバチルス属細菌としてパエニバチルス・チベンシス（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｈｉｂｅｎｓｉｓ）を用い、さまざまな過酢酸／過酸化水素比の過酢酸含有殺菌組成物について、その殺菌性を検討した。
以下に、その結果を示す。
【００４４】
【表２】
2013213017.tif 000003
【００４５】
【表３】
2013213017.tif 000004
【００４６】
【表４】
2013213017.tif 000005
【００４７】
【表５】
2013213017.tif 000006
【００４８】
【表６】
2013213017.tif 000007
【００４９】
【表７】
2013213017.tif 000008
【００５０】
上記の結果より、本発明の、過酢酸濃度が１５００ｐｐｍ以上でかつ過酢酸／過酸化水素比が７以上、または過酢酸濃度が１９００ｐｐｍ以上でかつ過酢酸／過酸化水素比が４以上、または過酢酸濃度が２５００ｐｐｍ以上でかつ過酢酸／過酸化水素比が３以上、または過酢酸濃度が３２００ｐｐｍ以上でかつ過酢酸／過酸化水素比が２以上である過酢酸含有殺菌組成物は、パエニバチルス・チベンシスに対して必要かつ十分な殺菌力を示した。
【産業上の利用可能性】
【００５１】
本発明による過酢酸組成物は、食品関連、無菌包装容器、設備機器・容器類、室内環境殺菌、医療関連、高水準消毒・内視鏡・透析ライン・その他医療機器類・院内環境殺菌、リネン関連、農・漁業関連設備器具類、病原菌殺菌などの分野・用途で、パエニバチルス属細菌やバチルス・セレウスを含む有害菌の殺菌操作に有効な組成物である。