(57)【要約】      （修正有）【課題】高純度ジアシルグリセロールの製造方法を提供。【解決手段】〔工程Ａ〕グリセリン１モルを、５〜２０質量倍の有機溶媒中、４−ジメチルアミノピリジン又はイミダゾール０．０５〜０．３０モル当量、及び２５℃において液体であるアミン１．０〜２．０モル当量の存在下、総炭素数６〜９のシリル系保護剤０．２〜０．５モル当量と反応させ、モノシリル化グリセロールを得る、〔工程Ｂ〕モノシリル化グリセロールと、炭素数１０〜２４の脂肪酸を縮合し、モノシリル化ジアシルグリセロールを得る、〔工程Ｃ〕モノシリル化ジアシルグリセロールのシリル基を脱保護して、粗ジアシルグリセロールを得る、〔工程Ｄ〕炭素数６〜８の飽和炭化水素系非極性溶剤と炭素数２〜４の２価アルコールから選ばれる極性溶剤を使用し、粗ジアシルグリセロールから、モノアシルグリセロールと脂肪酸を除去する、工程を含む、ジアシルグリセロールの製造方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
〔工程Ａ〕
グリセリン１モルを、グリセリンに対し５〜２０質量倍の有機溶媒中、４−ジメチルアミノピリジン又はイミダゾール０．０５〜０．３０モル当量、及び２５℃において液体であるアミン１．０〜２．０モル当量の存在下、総炭素数６〜９のシリル系保護剤０．２〜０．５モル当量と反応させ、モノシリル化グリセロールを得る工程、
〔工程Ｂ〕
前記モノシリル化グリセロールと、炭素数１０〜２４の脂肪酸を、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩を用いて縮合し、モノシリル化ジアシルグリセロールを得る工程、
〔工程Ｃ〕
前記モノシリル化ジアシルグリセロールのシリル基を脱保護し、粗ジアシルグリセロールを得る工程、
〔工程Ｄ〕
炭素数６〜８の飽和炭化水素系溶剤から選択される非極性溶剤と、炭素数２〜４の２価アルコールから選択される極性溶剤を使用した液液抽出により、粗ジアシルグリセロールから、モノアシルグリセロールと脂肪酸を除去する工程、
を含む、ジアシルグリセロールの製造方法。
【請求項２】
工程Ａにおける有機溶媒が、２０℃における比誘電率が３０以上の非プロトン性極性溶媒である、請求項１に記載のジアシルグリセロールの製造方法。
【請求項３】
工程Ａにおける２５℃において液体のアミンが、トリエチルアミン、ジエチルアミン、ジイソプロピルアミン、及びジイソプロピルエチルアミンの１種又は２種以上である、請求項１又は２に記載のジアシルグリセロールの製造方法。
【請求項４】
工程Ｃの脱保護においてｐ−トルエンスルホン酸を使用し、その使用量がモノシリル化ジアシルグリセロールに対して０．１〜０．５モル当量である、請求項１〜３のいずれか１項に記載のジアシルグリセロールの製造方法。
【請求項５】
前記炭素数１０〜２４の脂肪酸が、シス型不飽和脂肪酸である、請求項１〜４のいずれか１項に記載のジアシルグリセロールの製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ジアシルグリセロールの製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ジアシルグリセロールのような両親媒性物質は、水溶液中又は有機溶媒中、もしくは水−有機溶媒の混合溶液中で自己組織化し、ミセル、ラメラ相、ヘキサゴナル相、キュービック相、逆ヘキサゴナル相、逆キュービック相などのリオトロピック液晶相や、リポソーム等の特異な会合体を形成することが知られている。このような会合体は、ドラッグデリバリー用ベクターとしての利用が研究されているが、会合形態を安定に制御するために、高純度なジアシルグリセロールが求められている。
【０００３】
ジアシルグリセロールの製造方法には、グリセリンと脂肪酸を原料とし、化学的に縮合する方法がある。しかし、この方法ではジアシルグリセロールを選択的に合成することができないため、生成物には、モノアシルグリセロールやトリアシルグリセロールが含まれている。これらの不純物は、ジアシルグリセロールと物性が酷似しているため、高純度のジアシルグリセロールを得るには、カラム精製や蒸留を行う必要があるが、カラム精製は、大量の溶剤と充填剤が必要となるため、大量生産には適していない。また、蒸留を行うために高温にした場合、蒸留中にエステル交換が生じ、モノアシルグリセロールやトリアシルグリセロールが副生するため、ジアシルグリセロールを高純度に回収することは困難だった。
【０００４】
特許文献１では、１−モノアシルグリセロールの３位の水酸基を保護し、２位の水酸基をＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）でエステル化した後、無水酢酸存在下で脱保護することで、モノアセチル化ジアシルグリセロールが得られることが報告されている。この製造方法において、脱保護時に無水酢酸を加えなければ、ジアシルグリセロールが製造できる可能性がある。しかし、カルボジイミドによる縮合では、活性エステルからの転位物（Ｎ−アシル尿素）が副生することが知られており（非特許文献１）、ことに、ＤＣＣのような非極性のカルボジイミドを使用した場合に生成する転位物は、目的物であるジアシルグリセロールと極性が近いため分離が難しく、高純度化は困難であると考えられる。そのため、同文献の方法に準じてジアシルグリセロールが製造できたとしても、ドラッグデリバリー用ベクターとしての用途には、安定性の点で望ましいものではない。
【０００５】
その他のジアシルグリセロールの製造方法として、グリシドールの水酸基をエステル化した後に、カルボン酸塩を加え加熱することで、オキシラン環が開環し、ジアシルグリセロールが得られることが報告されている（特許文献２）。しかし、オキシラン環の開環は高温・塩基性条件での反応であるため、アシル基がシス型不飽和脂肪酸残基であった場合には、不飽和結合の異性化により、不純物が副生する。
【０００６】
酵素反応を利用し、グリセリン又はモノアシルグリセロールのエステル化や、トリアシルグリセロールの加水分解によってジアシルグリセロールを得る方法もある。しかし、酵素は高価であり、反応時間も長い。また、特殊な設備を要する場合があるため、工業的規模の生産には、有利とはいえない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特表２００９―５０１７８８号公報
【特許文献２】特開平６―１９９９６２号公報
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，５０,２，３９４ (１９８５)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、上記現状に鑑みてなされたものであり、トリアシルグリセロールとモノアシルグリセロールの含有量がそれぞれ１質量％以下である、高純度ジアシルグリセロールの製造方法を提供することを、解決すべき課題としたものである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、鋭意研究の結果、反応工程を適切に結合するとともに、適切な反応資材を選択することによって、前期課題が解決されることを見いだすに至った。すなわち、本発明は、以下の工程を含む、ジアシルグリセロールの製造方法である。
〔工程Ａ〕
グリセリン１モルを、グリセリンに対し５〜２０質量倍の有機溶媒中、４−ジメチルアミノピリジン又はイミダゾール０．０５〜０．３０モル当量、及び２５℃において液体であるアミン１．０〜２．０モル当量の存在下、総炭素数６〜９のシリル系保護剤０．２〜０．５モル当量と反応させ、モノシリル化グリセロールを得る工程、
〔工程Ｂ〕
前記モノシリル化グリセロールと、炭素数１０〜２４の脂肪酸を、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩を用いて縮合し、モノシリル化ジアシルグリセロールを得る工程、
〔工程Ｃ〕
前記モノシリル化ジアシルグリセロールのシリル基を脱保護し、粗ジアシルグリセロールを得る工程、
〔工程Ｄ〕
炭素数６〜８の飽和炭化水素系溶剤から選択される非極性溶剤と、炭素数２〜４の２価アルコールから選択される極性溶剤を使用した液液抽出により、粗ジアシルグリセロールから、モノアシルグリセロールと脂肪酸を除去する工程、
を含む、ジアシルグリセロールの製造方法。
【発明の効果】
【００１１】
本発明の製造方法によれば、反応工程を適切に結合し、溶媒や縮合剤等を適切に選定したことにより、トリアシルグリセロールとモノアシルグリセロールの生成が抑制され、縮合剤に由来して副生するＮ−アシル尿素、あるいは原料脂肪酸等も、効率よく除去することができる。トリアシルグリセロール、モノアシルグリセロール、及び原料脂肪酸の含有量は、それぞれ１質量％以下まで、容易に低減できることから、高純度のジアシルグリセロールの工業的製法として、極めて有用である。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明における工程Ａは、有機溶媒中で、グリセリンと総炭素数６〜９のシリル系保護剤を、４-ジメチルアミノピリジン又はイミダゾールと、２５℃において液体のアミン存在下で反応させ、モノシリル化グリセロールを得る工程である。
【００１３】
工程Ａに用いる有機溶媒は、ジシリル化グリセロールの副生を防ぐために、グリセリンの溶解度が高い溶媒を使用する。つまり、融点２０℃以下、沸点５０℃以上であって、２０℃における比誘電率が３０以上の非プロトン性極性溶媒である。
具体的にはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、アセトニトリル、Ｎ−メチルピロリドン、ニトロベンゼン、ニトロメタン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、アセトアミド、ホルムアミド、炭酸エチレン、炭酸プロピレンなどが挙げられるが、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、アセトニトリルが好ましく、特にアセトニトリルが好ましい。
溶媒の使用量は、グリセリンの質量に対して５質量倍より少ないとグリセリン濃度が高くなるためジシリル体の副生量が増加し、２０質量倍より多いと反応系が大きくなり製造効率が低下するので、５〜２０質量倍であり、好ましくは６〜１０質量倍である。
【００１４】
工程Ａに用いるシリル系保護剤としては、三つの炭化水素基を有する塩化シリルを使用するが、それらの総炭素数が９を超えると立体障害の影響により脱保護が困難になる。しかし、総炭素数が６よりも少ないと水洗等により容易に脱離してしまうため、三つの炭化水素基の総炭素数が６〜９の塩化シリルを使用する。具体的には塩化ブチルジメチルシリル、塩化ベンジルジメチルシリル、塩化トリエチルシリル、塩化イソプロピルジエチルシリル、塩化トリイソプロピルシリル、塩化ブチルジメチルシリル、塩化tert−ブチルジメチルシリル、塩化テキシルジメチルシリルなどが挙げられる。これらの中では塩化トリイソプロピルシリル、塩化ブチルジメチルシリル、塩化tert−ブチルジメチルシリルが好ましく、特に塩化tert−ブチルジメチルシリルが好ましい。
また、シリル系保護剤の使用量は、グリセリン１モルに対して０．２モル当量より少ないと目的物の生成量が低下し、０．５モル当量より多いとジシリル体の副生量が増加してしまうため、０．２〜０．５モル当量であり、好ましくは０．３〜０．４モル当量である。
【００１５】
工程Ａではシリル化反応を促進するために、触媒として４−ジメチルアミノピリジン、又はイミダゾールを使用する。特に４−ジメチルアミノピリジンが好ましい。また、４−ジメチルアミノピリジン又はイミダゾールの使用量は、グリセリン１モルに対して０．０５モル当量より少ないと触媒としての効果が低いため好ましくない。また、０．３モル当量より増加しても増加量に見合った効果が得られないので好ましくない。よって０．０５〜０．３モル当量であり、好ましくは０．０６〜０．１モル当量である。
【００１６】
工程Ａにおける２５℃で液体のアミンは、副生する塩酸を捕捉するためと、グリセリンの溶解度を高め、系中を均一な溶液にするために必要である。具体的にはトリエチルアミン、ジエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチルエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジエチルメチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチルイソプロピルアミン、ジイソプロピルアミン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、モルフォリン、ピペリジン、ピロリジン、ピロール、ピリジンなどが挙げられるが、トリエチルアミン、ジエチルアミン、ジイソプロピルアミン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンが好ましく、特にトリエチルアミンが好ましい。２５℃で液体のアミンの使用量は、グリセリン１モルに対して１．０モル当量より少ないと系中が不均一になってしまうため好ましくない。また、２．０モル当量より多いと、反応系が大きくなり、製造効率が低下するため好ましくない。よって、１．０〜２．０モル当量であり、１．３〜１．５モル当量が好ましい。
【００１７】
本発明における工程Ｂは、前記モノシリル化グリセロールと炭素数１０〜２４の脂肪酸を、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩を用いて縮合し、モノシリル化ジアシルグリセロールを得る工程である。
【００１８】
工程Ｂに用いる脂肪酸は、炭素数１０〜２４の脂肪酸を用いることができるが、得られるジアシルグリセロールの用途の観点から、人間の体温で液晶相を形成するシス型不飽和結合を有する脂肪酸が好ましく、特に炭素数１４〜２０のシス型不飽和結合を有する脂肪酸が好ましい。このような脂肪酸としてはミリストレイン酸、パルミトレイン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、エイコセン酸、エイコサジエン酸、エイコサトリエン酸、アラキドン酸などが挙げられるが、パルミトレイン酸、オレイン酸、リノール酸が好ましく、特にオレイン酸が好ましい。また、使用する脂肪酸は、純度が高い方が体内での挙動を安定に制御できるため、９５％以上が好ましく、特に９９％以上が好ましい。
さらに脂肪酸の使用量は、モノシリル化グリセロール１モルに対して１．５モル当量より少ないとモノシリル化モノアシルグリセロールが増加する。その結果、工程Ｃにおいてモノアシルグリセロール生成量が増加し、これを除去するためには工程Ｄの抽出精製回数が増加してしまう。また、２．０モル当量より多いと未反応の脂肪酸量が増加し、工程Ｄの抽出精製回数が増加してしまうので好ましくない。よって、１．５〜２．０モル当量が好ましく、１．７〜１．８モル当量がより好ましい。
【００１９】
工程Ｂでは、縮合剤として、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩を使用する。カルボジイミドを使用した縮合では、Ｎ−アシル尿素が副生することが知られているが、ジシクロヘキシルカルボジイミド、ジイソプロピルカルボジイミド等の低極性のカルボジイミドを用いた場合、副生するＮ−アシル尿素も低極性であり、同じく低極性であるジアシルグリセロールからの除去は困難である。
他方、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩を使用すると、副生するＮ−アシル尿素は極性溶媒に易溶であるため抽出で容易に除去できる。１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩の使用量は、モノシリル化グリセロール１モルに対して１．５モル当量より少ないと、モノシリル化モノアシルグリセロールが増加する。その結果、工程Ｃにおいてモノアシルグリセロール生成量が増加し、高純度のジアシルグリセロールを得るためには工程Ｄの抽出精製回数が増加してしまうので好ましくない。また、２．２モル当量より増加しても特に効果がないので好ましくない。よって１．５〜２．２モル当量が好ましく、１．８〜２．０モル当量がより好ましい。
【００２０】
本発明における工程Ｃは、前記モノシリル化ジアシルグリセロールのシリル基を脱保護し、粗ジアシルグリセロールを得る工程である。
【００２１】
工程Ｃでは、酸性触媒を使用することができる。具体的にはメタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸ピリジニウム塩、トリフルオロ酢酸、トリフルオロメタンスルホン酸、カンファースルホン酸などが挙げられるが、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸ピリジニウム塩が好ましく、特にｐ−トルエンスルホン酸が好ましい。
酸性触媒の使用量は、モノシリル化ジアシルグリセロール１モルに対して０．１モル当量より少ないと反応が遅くなり、０．５モル当量より多いとアシル基が脱離し、ジアシルグリセロールの生成量が減少するので好ましくない。よって０．１〜０．５モル当量が好ましく、０．３〜０．４モル当量がより好ましい。また酸性触媒の代わりに、テトラブチルアンモニウムフルオリド、フッ化水素、フッ化セシウムなどのフッ素イオンを遊離する化合物を使用して脱保護を行うことも可能であるが、その場合、フッ素イオンを遊離する化合物は、１．０モル当量以上必要であり、酸性触媒の方が少量で高い脱離能を有しているため、酸性触媒の方が好ましい。
【００２２】
工程Ｃにおいては、モノシリル化ジアシルグリセロールを溶解し、且つ水と相溶する非プロトン性の溶媒を使用する。具体的にはテトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、１，３−ジオキソラン、エチレングリコールジメチルエーテル、ジエチレングリコールジメチルエーテル、アセトニトリル、アセトン、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミドなどが挙げられるが、テトラヒドロフラン、アセトニトリル、アセトンが好ましく、特にテトラヒドロフランが好ましい。
溶媒の使用量は、モノシリル化ジアシルグリセロールの質量に対して２．５質量倍より少ないと、溶液の粘度が高く、攪拌が困難であるため好ましくない。また１０．０質量倍よりも多いと、反応系が大きくなり、製造効率が低下するため好ましくない。よって２．５〜１０．０質量倍が好ましく、２．５〜５．０質量倍がより好ましい。
【００２３】
工程Ｃにおいて酸性触媒を使用する場合は、系中に水を加えると脱保護が早く進行する。水の使用量は、モノシリル化ジアシルグリセロールの質量に対して０．０５質量倍よりも少ないと水を加えたことによる効果が現れず、０．５質量倍よりも多いとモノシリル化ジアシルグリセロールが分層し、反応速度が低下するため好ましくない。よって０．０５〜０．５質量倍が好ましく、０．１〜０．３質量倍がより好ましい。
【００２４】
工程Ｃにおいて、酸性触媒を使用した脱保護時の反応温度は、高すぎるとアシル基が脱離しやすくなり、低すぎると脱保護が進行しにくくなる。よって０〜１００℃が好ましく、２０〜６０℃がより好ましく、４０〜５０℃が特に好ましい。
【００２５】
本発明における工程Ｄは、炭素数６〜８の飽和炭化水素系溶剤と、炭素数２〜４の２価アルコールを使用した液液抽出により、粗ジアシルグリセロールから、モノアシルグリセロールと脂肪酸を除去する工程である。
【００２６】
工程Ｄにおいて使用される炭素数６〜８の飽和炭化水素系溶剤としては、ヘキサン、ヘプタン、オクタン、２−メチルペンタン、３−メチルペンタン、イソオクタンなどが挙げられ、これらの１種を選択するか、又は２種以上を併用しても良い。これらの中では、ヘキサン、ヘプタン、オクタンが好ましく、特にヘキサンが好ましい。炭素数６〜８の飽和炭化水素系溶剤の使用量は、モノシリル化ジアシルグリセロールの質量に対して２質量倍より少ないと分層性が悪いため好ましくない。また１０質量倍より多いと、工程Ｄでの体積が大きくなり製造効率が低下するため好ましくない。よって２〜１０質量倍が好ましく、３〜５質量倍がさらに好ましい。
【００２７】
工程Ｄにおいて使用する炭素数２〜４の２価アルコールとしては、エチレングリコール、１，２−プロパンジオール、１，３−プロパンジオール、１，２−ブタンジオール、１，３−ブタンジオール、１，４−ブタンジオール、２，３−ブタンジオールなどが挙げられ、これらの１種を選択するか、又は２種以上を併用しても良い。これらの中では、エチレングリコール、１，２−プロパンジオール、１，２−ブタンジオールが好ましく、特に、１，２−プロパンジオールが好ましい。
炭素数２〜４の２価アルコールの使用量は、モノシリル化ジアシルグリセロールの質量に対して２質量倍より少ないと分層性が悪いため好ましくない。また、１０質量倍より多いと、工程Ｄでの体積が大きくなり製造効率が低下するため好ましくない。よって、２〜１０質量倍であり、好ましくは３〜５質量倍である。
工程Ｄ終了後のジアシルグリセロール中のモノアシルグリセロール含有量、又は脂肪酸含有量が所望の量より多い場合は、工程Ｄを繰り返し行ってもよい。
【実施例】
【００２８】
以下、実施例により本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はこれによって限定されるものではない。
比較例として、１−モノアシルグリセロールからモノアセチル化ジアシルグリセロールを製造する特許文献１に記載の方法に準じ、その最終工程におけるアセチル化を除外して、ジオレオイルグリセロールを製造する方法を示した。
（実施例１）
［工程Ａ］モノｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルグリセロールの合成
５００ｍｌ四つ口フラスコに、グリセリン３２．０ｇ（３４８ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン４９．２ｇ（４８６ｍｍｏｌ、１．４０モル当量）、４−ジメチルアミノピリジン２．８ｇ（２３ｍｍｏｌ、０．０７モル当量）、アセトニトリル１２８ｇ（４．０質量倍）を加え、均一になるまで攪拌した。反応溶液を氷浴で１５℃以下に冷却し、塩化ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル２１．０ｇ（１３９ｍｍｏｌ、０．４０モル当量）をアセトニトリル８０ｇ（２．５質量倍） に溶解した溶液を、約３０分かけて滴下した。その後、氷浴を外し、２５±５℃で１時間攪拌した。反応溶液を４０℃減圧下で濃縮し、残渣をクロロホルム４８０ｇに溶解した。イオン交換水４８０ｇで二回水洗し、有機層を無水硫酸マグネシウム５．０ｇで脱水した後、ろ過、濃縮し、モノｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルグリセロールを得た（モル収量：２１．５ｇ、１０４ｍｍｏｌ、モル収率：３０％）。
得られたモノｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルグリセロールをＴＬＣ（展開溶媒：クロロホルム／メタノール＝９５／５（ｖ／ｖ）、過マンガン酸カリウム発色）で分析し、モノｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルグリセロールの純度が約９０％であることを確認した。
［工程Ｂ］モノｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−ジオレオイルグリセロールの合成
２００ｍｌ四つ口フラスコに、モノｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルグリセロール２０．０ｇ（９７ｍｍｏｌ）、塩化メチレン８０．０ｇ（４．０重量倍）、オレイン酸（Ｅｘｔｒａ Ｏｌｅｉｎ９９、日油品）４９．３ｇ（１７５ｍｍｏｌ、１．８０モル当量）、４−ジメチルアミノピリジン４．７ｇ（３９ｍｍｏｌ、０．４０モル当量）を加え室温、窒素気流下で溶液が均一になるまで攪拌した。そこに、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩３７．２ｇ（１９４ｍｍｏｌ、２．００モル当量）を加え、室温で攪拌した。１時間後、１Ｎ塩酸６０．０ｇで１回、２５ｗｔ％食塩水６０．０ｇで２回抽出した後、無水硫酸マグネシウム４．０ｇで脱水した。その後、ろ過、濃縮を行い、モノｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−ジオレオイルグリセロールを得た（収量：６３．２ｇ、８６ｍｍｏｌ、モル収率：８９％）。
得られたモノｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−ジオレオイルグリセロールを、ＴＬＣ（展開溶媒：クロロホルム、リン酸硫酸銅発色）で分析し、モノｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−ジオレオイルグリセロールの純度が、約９５％であることを確認した。
［工程Ｃ］粗ジオレオイルグリセロールの合成
３００ｍｌ四つ口フラスコに還流管を設置し、モノｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−ジオレオイルグリセロール６０．０ｇ（８２ｍｍｏｌ）、テトラヒドロフラン１５３．０ｇ（２．５５質量倍）、蒸留水９．０ｇ（４９９ｍｍｏｌ、０．１５質量倍）を加えた。さらにｐ−トルエンスルホン酸一水和物５．４ｇ（２８ｍｍｏｌ、０．３４モル当量）を加え、窒素気流下で４０℃に昇温し、攪拌した。５時間後、放冷し、トリエチルアミン６．４ｇ（６３ｍｍｏｌ、０．７７モル当量）を加えた。３０分攪拌後に、ヘキサン１８０ｇ（３．０質量倍）を加え、２５ｗｔ％食塩水１８０ｇで２回水洗し、粗ジオレオイルグリセロールのヘキサン溶液（２２７ｇ）を得た。
［工程Ｄ］粗ジオレオイルグリセロールの精製
工程Ｃで得られた粗ジオレオイルグリセロールのヘキサン溶液（２２７ｇ）を１Ｌ枝付きフラスコに移して、１，２−プロパンジオール１８０ｇ（３．０質量倍）で５回抽出を行い、下層（１，２−プロパンジオール層）を廃棄した。さらに２５ｗｔ％食塩水１８０ｇで２回水洗を行った後、硫酸マグネシウム６．０ｇで脱水、ろ過後、濃縮し、ジオレオイルグリセロールを得た（収量：３１．１ｇ、５０ｍｍｏｌ、モル収率：６１％）。
【００２９】
（比較例１）
［工程１］モノｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−モノオレオイルグリセロールの合成
２００ｍｌ四つ口フラスコに、モノオレオイルグリセロール（１０．０ｇ、２８．０ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン（１００ｍｌ、１０容量倍）、及びイミダゾール（３．８ｇ、５６．１ｍｍｏｌ、２．００モル当量）を入れた後、０℃に冷却した。次に、塩化ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（５．１ｇ、３３．７ｍｍｏｌ、１．２０モル当量）を入れて窒素気流下で２時間攪拌した。反応混合物をろ過した後、減圧下で溶媒を除去し、精製水（５０ｍｌ）とヘプタン（４５ｍｌ）を入れて抽出した。分離された有機層を精製水（２４ｍｌ）でもう一度抽出した後、無水硫酸マグネシウムで脱水させてろ過した後、溶媒を減圧蒸留してモノｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−モノオレオイルグリセロールを得た（収量：１３．２ｇ、２８．０ｍｍｏｌ、モル収率：１００％）。
［工程２］モノｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−ジオレオイルグリセロールの合成
２００ｍｌ四つ口フラスコに、モノｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−モノオレオイルグリセロール（１３．０ｇ、２７．６ｍｍｏｌ）、ヘプタン（６６ｍｌ）、オレイン酸（８．２ｇ、２９．０ｍｍｏｌ、１．０５モル当量）及びジメチルアミノピリジン（０．０３ｇ、０．２８ｍｍｏｌ、０．０１モル当量）を加えた。そこにジシクロヘキシルカルボジイミド（５．９８ｇ、２９．０ｍｍｏｌ、１．０５モル当量）を投入して室温、窒素気流下で３時間攪拌した。生成したジシクロヘキシル尿素をろ過してモノｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−ジオレオイルグリセロールのヘプタン溶液（６２ｇ）を得た。
［工程３］粗ジオレオイルグリセロールの合成
モノｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−ジオレオイルグリセロールのヘプタン溶液を２００ｍｌ四つ口フラスコに移し、ジクロロメタン（１４ｍｌ）、三フッ化ホウ素・ジエチルエーテル（４．２０ｍｌ、３３．４ｍｍｏｌ、１．２１モル当量）を加えて、室温、窒素気流下で１２時間攪拌した。反応混合物にヘプタン（１１５ｍｌ）を入れて、冷却した精製水（１１５ｍｌ）をゆっくり加えて有機層を回収した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（２９ｍｌ）及び精製水（１１５ｍｌ）の混合溶液で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで脱水し、ろ過、濃縮して、粗ジオレオイルグリセロールを得た（収量：１６．８ｇ、２７．１ｍｍｏｌ、モル収率：９８％）。
［工程４］粗ジオレオイルグリセロールの精製
工程３で得られた粗ジオレオイルグリセロールをヘキサン（６０ｇ、３．０質量倍）に溶解し、１，２−プロパンジオール（６０ｇ、３．０質量倍）で１５回抽出した。下層（１，２−プロパンジオール層）を廃棄し、２５ｗｔ％食塩水６０ｇで２回水洗した後、硫酸マグネシウム６．０ｇで脱水、ろ過後、濃縮し、ジオレオイルグリセロールを得た（収量：６．７ｇ、１０．８ｍｍｏｌ、モル収率：３９％）。
【００３０】
（ＴＬＣによる分析）
得られたジオレオイルグリセロールをクロロホルムに溶解し、２０ｍｇ／ｍｌ溶液を調製した。これをシリカゲルプレート（ＭＥＲＣＫ製、Ｓｉｌｉｃａ  ｇｅｌ  ６０）に５μｌ（１００μｇ）スポットした。さらに同じプレートに、不純物標品として、オレイン酸、及びモノオレオイルグリセロールの０．５ｍｇ／ｍｌ溶液をそれぞれ１〜５μｌ（０．５〜２．５μｇ）スポットし、クロロホルム（アミレン含有）／メタノール＝９５／５（ｖ／ｖ）の溶媒で８ｃｍ程度展開した。その後プレートを乾燥させ、リン酸硫酸銅水溶液を噴霧し、オーブンで加熱して発色させた。Ｒｆ＝０．５に現れるオレイン酸と、Ｒｆ＝０．２５に現れるモノオレオイルグリセロールのスポット面積を不純物標品と比較し、不純物量を確認した。同様にトリオレオイルグリセロール（展開溶媒：クロロホルム（アミレン含有）のみ）、Ｎ−アシル尿素（展開溶媒：クロロホルム（アミレン含有）／メタノール＝９９／１）の量を確認した。
【００３１】
分析結果を表１に記す。実施例１では、工程Ｄの抽出精製を５回繰り返すことで、トリオレオイルグリセロール、モノオレオイルグリセロール、脂肪酸の含有量が１質量％以下で、純度９５％以上のジオレオイルグリセロールを製造することができた。また、精製後のＮ‐アシル尿素の残存は確認されなかった。
他方、比較例１では、縮合剤としてジシクロヘキシルカルボジイミドを使用したため、副生したＮ−アシル尿素を除去することができず、目的物であるジオレオイルグリセロールの純度が低下した。また、強酸により脱保護したことによってジオレオイルグリセロールの一部が分解し、モノオレオイルグリセロールとオレイン酸の副生量が増加した。プロパンジオールによる抽出を１５回行うことで、モノオレオイルグリセロール、オレイン酸の含有量をそれぞれ１質量％以下に低減することができたが、Ｎ−アシル尿素の含有量は低減できなかった。
【００３２】
【表１】
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