(57)【要約】【課題】ヒトやヒトを除く動物に安全に適用可能な、アルツハイマー病治療剤の作用を効率的に増強するとともに、アルツハイマー病治療剤の長期連用による作用の低下を防止するための経口用製剤を提供する。【解決手段】有効成分が、ヒトインターフェロン−α、及び、ヒトインターフェロン−β又はヒトインターフェロン−γからなる経口用剤により、アルツハイマー病治療剤の作用を相乗的に増強し且つアルツハイマー病治療剤の長期連用による作用の低下を防止する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトインターフェロン−α、及び、ヒトインターフェロン−β又はヒトインターフェロン−γを有効成分としてなることを特徴とする、アルツハイマー病治療剤の作用増強経口用剤。
【請求項２】
ヒトインターフェロン−α：ヒトインターフェロン−β又はヒトインターフェロン−γを、活性比で１：０．２５乃至２の割合で含有することを特徴とする、請求項１に記載の剤。
【請求項３】
ヒトインターフェロン−αの投与量として５０乃至４００国際単位／ｋｇヒト体重／回の投薬単位形態であることを特徴とする、請求項１又は２に記載の剤。
【請求項４】
１回の投薬単位形態の製剤中に、ヒトインターフェロン−αを１０，０００国際単位と、ヒトインターフェロン−βを１０，０００国際単位或いはヒトインターフェロン−γを５，０００国際単位とを含有することを特徴とする請求項１乃至３の何れか１項に記載の剤。
【請求項５】
ヒトインターフェロンα中のサブタイプα２とサブタイプα８の質量比が９：１乃至２：８のものを有効成分としてなることを特徴とする請求項１乃至４の何れか１項に記載の剤。
【請求項６】
アルツハイマー病治療剤が、コリンエステラーゼ阻害剤及び／又はブチリルコリンエステラーゼ阻害剤であることを特徴とする請求項１乃至５の何れか１項に記載の剤。
【請求項７】
コリンエステラーゼ阻害剤及び／又はブチリルコリンエステラーゼ阻害剤が、ドネペジル、リバスチグミン、ガランタミン及び下記化３で表される三核型ペンタメチン系シアニン色素から選ばれる何れか１種又は２種以上であることを特徴とする請求項６に記載の剤。
【化３】
2013018729.tif 000012
（式中、Ｒはエチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基又はｔｅｒｔ−ブチル基を表し、Ｘ−はヨウ素アニオン又は塩素アニオンを表す。）
【請求項８】
三核型ペンタメチン系シアニン色素が、下記化４で表される化合物であることを特徴とする請求項７に記載の剤。
【化４】
2013018729.tif 000013
【請求項９】
散剤、トローチ剤、顆粒剤、カプセル剤、液剤、舌下剤、フィルム剤、ゲル剤或いは錠剤の形態であることを特徴とする請求項１乃至８の何れか１項に記載の剤。
【請求項１０】
アルツハイマー病治療剤が単独ではアルツハイマー病に対する作用が認められない用量で用いられる際に適用されることを特徴とする、請求項１乃至９の何れか１項に記載の剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アルツハイマー病治療剤の作用増強剤に関わるものであり、詳細には、有効成分である複数種のインターフェロンと、必要に応じて製剤学的に許容される１種又は２種以上の他の成分とを含んでなる、アルツハイマー病治療剤の作用を増強するための経口用剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
アルツハイマー病（ＡＤ）は、神経細胞の損失に起因し言語障害、判断力、問題解決、計画、抽象的思考の問題、失行症、視覚機能欠損及び記憶障害を結果としてもたらす進行性認識機能障害（記憶、認知及び行動安定性の喪失）を特徴とする進行性神経変性障害であり、認知症原因の５割以上を占めている。斯かる疾患は、加齢に伴い発症率が増加するため、高齢化にともない、その患者数は年々増加している。
【０００３】
アルツハイマー病の発症は、最近の事象を思い出す能力の障害によって特徴づけられるものの、疾病の進行に伴い、その他の知的能力も衰え、異常な行動、妄想及び身体機能の制御喪失などが高頻度に認められる。アルツハイマー病は、神経細胞に変性を来たす重大な疾患であり、それに伴う病態や神経機能障害を改善するために、種々の化合物を有効成分とする治療剤が提案されてはいるものの（例えば、特許文献１乃至４）、実用化されているものはまだ少ない。日本国においては、わずかに、アルツハイマー病治療剤としてコリンエステラーゼ阻害作用を有するドネペジル、ガランタミン及びリバスチグミン、神経保護作用を有するメマンチンが厚生労働省から認可されているのみである。
【０００４】
アルツハイマー病は、通常、加齢とともに進行するので、その治療剤は長期連用が必須である。しかし、アルツハイマー病の主要な治療剤として既に臨床応用されているコリンエステラーゼ阻害剤は、長期連用により副作用が発生する場合や、半年以上の長期連用によりそのアルツハイマー病治療作用が低下する場合がある。
【０００５】
一方、インターフェロンは、その抗ウイルス活性や抗腫瘍活性に基づき、ウイルス性肝炎やある種の腫瘍の治療剤として臨床応用されている。また、クラミジアの感染を予防・排除するため、インターフェロン−α、インターフェロン−β、或いは、インターフェロン−γと抗生物質との併用療法や、インターフェロン−αとヒドロキシ安息香酸類又はヒドロキシ桂皮酸類とを併用する方法なども提案されている（特許文献５及び６）。
【０００６】
しかしながら、インターフェロン類を他の薬剤と併用する場合、あるいは、アルツハイマー治療剤を複数種併用する場合では、特に注射による投与等において大量投与による副作用発生が懸念される。また、アルツハイマー病はクラミジアの感染により必然的に生じるものではなく、抗クラミジア剤が必ずしもアルツハイマー病に有効な治療剤となるわけではない。
【０００７】
かかる状況にあって、医療現場では、患者にとって肉体的・精神的負担の少ない用法、用量で、アルツハイマー病や、それに伴う病態や臨床症状を効果的、且つ、安全に改善することができる医薬用の製剤の開発が切望されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】国際公開第１９９７／０３０７０３号
【特許文献２】特開平１１−２２８４１７号公報
【特許文献３】特開２００６−１４３７０８号公報
【特許文献４】特開２００６−３２１７３７号公報
【特許文献５】特表２００２−５１９３７４号公報
【特許文献６】特開２００５−０４７８９６号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、ヒト又はヒトを除く動物に安全に適用可能な、アルツハイマー病治療剤の作用を効率的に増強するとともに、アルツハイマー病治療剤の長期連用による治療効果の低下を防止するための製剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
上記目的を達成するため、本発明者は、既に臨床応用されているコリンエステラーゼ阻害作用を有するアルツハイマー病治療剤の作用の増強と、長期連用による治療効果の低下防止に着目して鋭意研究し、検索したところ、低用量のヒトインターフェロン−αと、ヒトインターフェロン−β又はヒトインターフェロン−γとを経口投与することにより、通常の臨床投与量よりも低用量のアルツハイマー病治療剤を用いた場合でもその作用が増強されるとともに、斯かる治療剤を長期間連用しても、その治療効果が低下することがないことを見いだした。さらに、低用量のアルツハイマー病治療剤と、低用量のヒトインターフェロンとを併用しても、患者のＱＯＬを低下させるような重篤な副作用は招来しないことも見出し本発明を完成した。
【００１１】
すなわち、本発明のアルツハイマー病治療剤の作用を増強するための経口用剤（以下、「アルツハイマー病治療剤の作用増強経口用剤」ともいう）の実施形態は次のとおりである。
（１）ヒトインターフェロン−α、及び、ヒトインターフェロン−β又はヒトインターフェロン−γ（言い換えれば、ヒトインターフェロン−α及びヒトインターフェロン−β、又は、ヒトインターフェロン−α及びヒトインターフェロン−γ）を有効成分としてなることを特徴とする、アルツハイマー病治療剤の作用増強経口用剤。
（２）ヒトインターフェロン−α：ヒトインターフェロン−β又はヒトインターフェロン−γを、活性比で１：０．２５乃至２の割合で含有することを特徴とする、（１）に記載の剤。
（３）ヒトインターフェロン−αの投与量として５０乃至４００国際単位／ｋｇヒト体重／回の投薬単位形態であることを特徴とする、（１）又は（２）に記載の剤。
（４）１回の投薬単位形態の製剤中に、ヒトインターフェロン−αを１０，０００国際単位と、ヒトインターフェロン−βを１０，０００国際単位或いはヒトインターフェロン−γを５，０００国際単位とを含有することを特徴とする（１）乃至（３）の何れか１つに記載の剤。
（５）ヒトインターフェロンα中のサブタイプα２とサブタイプα８の質量比が９：１乃至２：８（好ましくは８：２乃至４：６、特に好適には３：１）のものを有効成分としてなることを特徴とする（１）乃至（４）の何れか１つに記載の剤。
（６）アルツハイマー病治療剤が、コリンエステラーゼ阻害剤及び／又はブチリルコリンエステラーゼ阻害剤であることを特徴とする（１）乃至（５）の何れか１つに記載の剤。
（７）コリンエステラーゼ阻害剤及び／又はブチリルコリンエステラーゼ阻害剤が、ドネペジル、リバスチグミン、ガランタミン及び下記化１で表される三核型ペンタメチン系シアニン色素から選ばれる何れか１種又は２種以上であることを特徴とする（６）に記載の剤。
（８）三核型ペンタメチン系シアニン色素が、下記化２で表される化合物であることを特徴とする（７）に記載の剤。
（９）散剤、トローチ剤、顆粒剤、カプセル剤、液剤、舌下剤、フィルム剤、ゲル剤或いは錠剤の形態であることを特徴とする（１）乃至（８）の何れか１つに記載の剤。
（１０）アルツハイマー病治療剤が単独ではアルツハイマー病に対する作用が認められない用量で用いられる際に適用されることを特徴とする、（１）乃至（９）の何れか１つに記載の剤。
【００１２】
（１１）アルツハイマー病治療剤と同時に或いは時間差をつけて、ヒトインターフェロン−α、及び、ヒトインターフェロン−β又はヒトインターフェロン−γ（言い換えれば、ヒトインターフェロン−α及びヒトインターフェロン−β、又は、ヒトインターフェロン−α及びヒトインターフェロン−γ）を有効成分としてなる剤を経口投与することを特徴とするヒト又はヒトを除く動物でのアルツハイマー病治療剤の作用を増強する方法。
【発明の効果】
【００１３】
本発明によれば、アルツハイマー病治療剤の用量を通常の臨床投与量よりも低減でき、その作用が顕著に高められるうえ、生体に対する毒性を低減できる、その結果として、アルツハイマー病治療剤による副作用を生ずることなくアルツハイマー病及びそれに伴う臨床症状の改善をできるという顕著な効果を奏する。さらに、本発明は、アルツハイマー病治療剤を単独で長期連用した場合に発生する作用の低下も起こしにくい。さらに、本発明の有効成分は、低用量のインターフェロンなので、これを経口投与してもインターフェロンによる副作用もなく、アルツハイマー病治療剤と併用した場合にも、患者のＱＯＬを低下させるような副作用の発生は認められない。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
本発明でいうアルツハイマー病治療剤とは、アルツハイマー病やそれに伴う臨床症状の改善効果を有するものをいう。具体的には、既に臨床応用されているコリンエステラーゼ阻害剤を例示することができる。本発明でいうコリンエステラーゼ阻害剤とは、アルツハイマー病に特徴的な脳内の神経伝達物質であるアセチルコリンの減少を抑制し、アルツハイマー病の治療に使用される製剤をいい、コリンエステラーゼ及び／又はブチリルコリンエステラーゼの活性を抑制する物質又はそれを含有する組成物をいう。より具体的には、例えば、タクリン、ドネペジル、ガランタミン、リバスチグミン、イミノ−１，２，３，４−テトラヒドロシクロペント［ｂ］インドールカルバメート、Ｎ−ピリミジン４−アセチルアニリン誘導体、７−アリールオキシクマリン誘導体、Ｎ−プロパルギルアミノインダン及びＮ−プロパルギルフェネチルアミンなどのプロパルギルアミノカルバメート類やこれを含有する組成物などを例示することができる。また、コリンエステラーゼ阻害活性を有し、アルツハイマー病の治療効果を有する下記化１で表される三核型ペンタメチン系シアニン色素なども含まれる。
【００１５】
【化１】
2013018729.tif 000002
【００１６】
上記式中におけるＲで表されるアルキル基は炭素数が２乃至４であり、具体的には、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基のいずれかである。なお、Ｒで表されるアルキル基が直鎖で、かつ、炭素数が２又は３の三核型ペンタメチン系シアニン色素がより好ましく、アルキル基（Ｒ）の炭素数が２の色素が特に好ましい。Ｘ−は、ヨウ素アニオン又は塩素アニオンであり、インターフェロンの経口投与により増強されるアルツハイマー病治療効果の強さの点では、ヨウ素アニオンが好ましく、下記化２で表される色素（以下、「ＮＫ−４」と略記する）、或いは、その対アニオンが塩素イオンの色素がより好ましく、ＮＫ−４が特に好ましい。ちなみに、ＮＫ−４は、コリンエステラーゼ阻害活性を有し、スウェーデン型アルツハイマー病の原因遺伝子変異を導入したＡＰＰトランスジェニックマウス（ＡＰＰ  Ｔｇマウス）認知障害を改善する作用を有する化合物で（例えば、国際公開第２０１０／０８７３０６号参照）、市販の細胞賦活剤の有効成分として用いられている。
【００１７】
【化２】
2013018729.tif 000003
【００１８】
本発明のアルツハイマー病治療剤の作用増強経口用剤は、有効成分として、ヒトインターフェロン−αとともに、ヒトインターフェロン−β又はヒトインターフェロン−γを含有するものである（以下、単に「インターフェロン−α」、「インターフェロン−β」及び「インターフェロン−γ」ともいう）。本発明でいうインターフェロンαとは、ヒトの白血球又はリンパ芽球様細胞などの血液系細胞へセンダイウイルスなどのインターフェロン誘導剤を作用させることによって得られるインターフェロンである。インターフェロン−αの分子には多形性があり、インターフェロン−αの場合、インターフェロン−αに分類される分子は、アミノ酸配列の違いによって、サブタイプα１、サブタイプα２、サブタイプα５、サブタイプα６、サブタイプα７、サブタイプα８、サブタイプα１４、サブタイプωなどに分類されている。本発明においては、どのサブタイプのインターフェロン−αを用いてもよいが、とりわけ、サブタイプα２及びα８のインターフェロン−αはコリンエステラーゼ阻害剤の作用の増強効果に優れているので、サブタイプα２とα８とが、質量比で９：１乃至２：８のものを用いるのが望ましく、８：２乃至４：６のものがより望ましく、３：１のものが特に望ましい。本発明のコリンエステラーゼ阻害剤の作用の増強剤に配合するインターフェロン−αは、特定のサブタイプのものを組換えＤＮＡ技術により産生させたり、ヒト末梢血有核細胞又は培養株化されたヒト細胞から適宜の誘導剤を用いて生産させた後、クロマトグラフィーなどを用いて単離、精製し用いてもよいし、斯かるインターフェロン−αをポリエチレングリコールなどにより修飾して徐放化したインターフェロン−αを用いてもよい。また、市販のインターフェロン−α製剤を適宜希釈し用いることもできる。
【００１９】
本発明でいうインターフェロン−βとは、例えば、培養したヒト線維芽細胞にポリ−Ｉ：Ｃ（ｐｏｌｙ  Ｉ：Ｃ）などの誘導剤を加えて産生させた後、クロマトグラフィーなどを用いて単離、精製することにより、工業的に生産したものを用いることができる（例えば、特開昭５８−２０１７９４号公報参照）。また、組換えＤＮＡ技術を用いて、インターフェロン−βを、大腸菌、動物細胞、昆虫細胞、又は酵母などで発現させることにより、工業的に生産されたものを用いてもよいし、ポリエチレングリコールなどにより修飾して徐放化したインターフェロンを用いてもよい。また、市販のインターフェロン−β製剤を適宜希釈し用いてもよい。
【００２０】
本発明でいうインターフェロン−γとは、例えば、培養したヒト骨髄単球系細胞にリポポリサッカライドなどの誘導剤を加えて産生させた後、クロマトグラフィーなどを用いて単離、精製することにより、工業的に生産したものを用いることができる（例えば、特開昭６３−１５２９９３号公報参照）。また、組換えＤＮＡ技術を用い、インターフェロン−γを、大腸菌、動物細胞、昆虫細胞、又は酵母などで発現させた後、クロマトグラフィーなどを用いて単離、精製することにより、工業的に生産されたものを用いてもよいし、ポリエチレングリコールなどにより修飾して徐放化したインターフェロン−γを適宜希釈し用いてもよい。また、市販の製剤を適宜希釈し用いてもよい。
【００２１】
本発明のアルツハイマー病治療剤の作用増強経口用剤は、有効成分であるインターフェロン−α、及び、インターフェロン−β又はインターフェロン−γを単独で用いてもよいが、通常、本発明の範囲を逸脱しない範囲で、製剤学的に許容される医薬品分野、医薬部外品分野或いは食品分野や化粧品分野で用いることのできる成分の１種又は２種以上を配合した製剤の形態で提供される。
【００２２】
製剤学的に許容される成分としては、例えば、添加剤、賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、安定化剤、界面活性剤、防腐剤（抗菌剤）、香料、増粘剤、抗酸化剤、キレート剤、ビタミン類、アミノ酸類、水性媒体、糖質、水溶性高分子、ｐＨ調整剤、発泡剤、医薬品・医薬部外品・化粧品・食品用の添加剤など例示することができ、これらの成分の１種又は２種以上を適宜組み合わせて配合し、目的とする剤型に応じて、常法により製造されたものであればよい。
【００２３】
本発明のアルツハイマー病治療剤の作用増強経口用剤の有効成分であるインターフェロンは、対象とする製剤の組成やその使用目的を勘案し、原料の段階から製品が完成するまでの工程で配合すればよい。その方法としては、目的とする剤型に応じ、例えば、混和、混捏、溶解、融解、分散、懸濁、乳化、逆ミセル化、浸透、晶出、散布、塗布、付着、噴霧、被覆（コーティング）、注入、浸漬、固化、担持などの１種又は２種以上の方法が適宜に選ばれる。
【００２４】
本発明のアルツハイマー病治療剤の作用増強経口用剤の剤型としては、例えば、散剤、錠剤、トローチ剤、カプセル、顆粒剤、液剤、舌下剤、フィルム剤、ゲル剤などの経口投与可能な形態に調製し、そのままで、或いは、必要に応じて、食事、飲料などに混合・溶解したり、経口投与器やスプレーなどの投与補助器具を適宜に用いながら、常法にしたがって口腔内に投与すればよい。なお、散剤、カプセル、顆粒剤、錠剤などの形態の製剤の場合でも、通常は、口腔内で製剤を溶解する方法で投与するのが望ましい。
【００２５】
本発明のアルツハイマー病治療剤の作用増強経口用剤は、経口的に投与することにより、アルツハイマー病治療剤の作用を効果的に増強することができる。本発明のアルツハイマー病治療剤の作用増強経口用剤におけるインターフェロン−αの配合量は、アルツハイマー病治療剤とともにアルツハイマー病の患者に投与したとき、アルツハイマー病治療剤の作用を効果的に増強でき且つ副作用を発生しない用量であれば制限はなく、アルツハイマー病の患者の症状、重篤度、アルツハイマー病治療剤の種類、用量、用法、使用するインターフェロンの種類などにもよるが、通常、インターフェロン−αが２，５００乃至２０，０００国際単位／回、望ましく、１０，０００国際単位／回となるように、１日１回、若しくは、１週間に１乃至５回投与すればよく、通常は、アルツハイマー病治療剤の投与と同時に投与すればよい。
【００２６】
本発明によるアルツハイマー病治療剤の作用増強経口用剤の場合、インターフェロン−β又はインターフェロン−γ用量は、インターフェロン−αの用量に依存しており、インターフェロン−αと、インターフェロン−β又はインターフェロン−γとが、活性比で１：０．２５乃至２の割合で用いられる。インターフェロン−αとインターフェロン−βとを用いる場合、その活性比は１：０．５乃至１がより好ましく、１：１が特に好ましい。インターフェロン−αとインターフェロン−γとを用いる場合、その活性比は１：０．５が特に好ましい。
【００２７】
従って、本発明によるアルツハイマー病治療剤の作用増強経口用剤の場合、投薬単位形態の薬剤をも包含し、その投薬単位形態の薬剤とは、この発明の有効成分たるインターフェロンの、例えば、一日当たりの用量又はその整数倍（４倍まで）若しくはその約数（１／４まで）に相当する量を含有し、投与に適する物理的に分離可能な剤型にある薬剤を意味する。また、本発明によるアルツハイマー病治療剤の作用増強経口用剤は、有効成分としてインターフェロン−αと、インターフェロン−β又はインターフェロン−γとを必須の構成とするので、通常、その２種のインターフェロンの配合剤の形態で提供されるが、各々のインターフェロンを単独で含有する製剤を調製し、上記、用法、用量に従って、２剤を同時に、或いは、時間差をつけて投与することもできる。
【００２８】
ちなみに、本願においてインターフェロンの活性は、インターフェロンがシンドビスウイルスによるＦＬ細胞の細胞変性を抑制する度合をマイクロタイター法により測定し、その測定値を世界保健機関による各インターフェロンの型に対応する国際標準品を標準として算出される抗ウイルス活性の「国際単位」（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ｕｎｉｔｓ；ＩＵ）で表示している。なお、斯かる測定法においては、培養細胞を用いることに起因して不可避的な測定誤差が発生するので、インターフェロンの抗ウイルス活性に基づき算出される、上記インターフェロンの製剤への配合量やインターフェロン−αのサブタイプの構成比に数％程度の幅があることはいうまでもないことである。
【００２９】
本発明のアルツハイマー病治療剤の作用増強経口用剤を併用する場合のアルツハイマー病治療剤の用量は、その種類にもよるが、通常、その単独投与では、アルツハイマー病の治療効果や副作用が認められない範囲で設定される。具体的には、例えば、コリンエステラーゼ阻害剤の場合、通常の臨床投与量の１００分の１以下、好ましくは２００分の１以下が用いられ（例えば１００分の１乃至５００分の１、あるいは２００分の１乃至４００分の１など）、その用法は、１日１回乃至適宜間隔をあけて投与すればよく、好ましくは１日１回乃至３日に１回投与をすればよい。より具体的には、例えば、ドネペジル塩酸塩の場合、０．１５〜２．０μｇ／ｋｇ体重を３日に１回経口投与すればよく、化２で表される化合物の場合、１乃至５０ｎｇ／ｋｇ体重、好ましくは５乃至２０ｎｇ／ｋｇ体重を１日１回経口投与すればよい。本発明のアルツハイマー病治療剤の作用増強経口用剤を併用することにより、斯かる低用量でもアルツハイマー病治療剤によるアルツハイマー病治療作用が効果的に発揮され、しかも、アルツハイマー治療剤を長期連用してもその効果が低下することもない。アルツハイマー病治療剤を通常の臨床投与量で用いた場合、本発明によるアルツハイマー病治療剤の作用増強経口用剤と併用しても、その増強効果は認められず、単独投与の場合と同様に副作用や長期連用した場合、治療効果の低下が認められる場合がある。ちなみに、所定量の本発明のアルツハイマー病治療剤の作用増強経口用剤を投与した場合、或いは、通常の臨床投与量の１００分の１以下のコリンエステラーゼ阻害剤を、通常の用法で単独で投与した場合、何れの場合もアルツハイマー病の治療効果は全く認められない。また、アルツハイマー病治療剤を、通常の臨床投与量の１００分の１以下の用量で、単独で投与、或いは、所定量の本発明のアルツハイマー病治療剤の作用増強経口用剤と併用した場合、何れの場合も患者のＱＯＬに影響するような重篤な副作用は認められない。なお、本明細書でいうアルツハイマー病治療剤の「通常の臨床投与量」とは、対象とする化合物或いはそれを含む製剤を単独でヒトに投与した場合に、アルツハイマー病の治療効果が発揮される投与量を意味し、日本国或いは外国において所轄官庁より医薬品として製造承認されている製剤の場合、その製剤の承認された用量を意味する。
【００３０】
以下、本発明の実施例について述べるが、本発明はこれらの実施例のみに限定されるものではなく、本発明の技術的思想内においてこれらの様々な変形が可能である。
【実施例１】
【００３１】
アルツハイマー病治療剤の作用に及ぼすインターフェロンの経口投与の影響をヒトアルツハイマー型認知症のモデル系として汎用されているアミロイドβフラグメント投与マウスを用いて調べた。
【００３２】
＜被験試料＞
インターフェロン−αは市販のインターフェロン製剤（大塚製薬株式会社販売、商品名『オーアイエフ  注射用  ５００万ＩＵ』、インターフェロン−α含量：５００万国際単位／バイアル）を、０．５％（ｗ／ｗ）ヒト血清アルブミン含有生理食塩水を用い、１００μｌ中に下記表１に示す量が含まれるように希釈し用いた。インターフェロン−βは市販のインターフェロン製剤（第一製薬株式会社販売、商品名『フェロン』、インターフェロン−β含量：６００万国際単位／バイアル）を、０．５％（ｗ／ｗ）ヒト血清アルブミン含有生理食塩水を用い、１００μｌ中に下記表１に示す量が含まれるように希釈し用いた。インターフェロン−γは、市販のインターフェロン製剤（塩野義製薬株式会社販売、商品名『イムノマックス（注）３００』、インターフェロン−γ含量：３００万国際単位／バイアル）を、０．５％（ｗ／ｗ）ヒト血清アルブミン含有生理食塩水を用い、１００μｌ中に下記表１に示す量が含まれるように希釈し用いた。コリンエステラーゼ阻害剤として市販のドネペジル塩酸塩製剤（エーザイ株式会社販売、商品名『アリセプト  細粒０．５％』、ドネペジル塩酸塩含量：５ｍｇ／ｇ）を用い、生理食塩水を用いて１００μｌ中に下記表１に示す量が含まれるように希釈し用いた。対照１として、アミロイドβフラグメントを投与していないマウスに０．２５％（ｗ／ｗ）ヒト血清アルブミン含有生理食塩水（２００μｌ／匹）のみを投与した。対照２として、アミロイドβフラグメント投与マウスに０．２５％（ｗ／ｗ）ヒト血清アルブミン含有生理食塩水（２００μｌ／匹）のみを投与した。
【００３３】
＜実験方法＞
ＩＣＲマウス（日本チャールスリバー社販売、オス、５週齢、体重２５乃至３０ｇ）２６４匹を無作為に４匹ずつ６６群に分け、試験終了まで単独飼育した。抱水クロラール（シグマ社販売、３５０ｍｇ／ｋｇ体重、腹腔内投与）麻酔を施したマウスを、背面固定し、頭部正中切開を加え、骨縫合を確認した後、ブレグマの左側方１．０ｍｍ、後方０．５ｍｍに刺入点を定め、３ｍｍ刺入し、アミロイドβフラグメント（ＡｎａＳｐｅｃ社販売、β−Ａｍｙｌｏｉｄ２５−３５）溶液９ｎｍｏｌ／６μｌ／匹を脳室内に投与した（投与法は、『Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ』、第７０６巻、１８１−１９３頁（１９９６年）参照。）。投与には２８ゲージステンレス針（３ｍｍ）を装着したマイクロシリンジを用いた。刺入部位は、予めアミロイドβフラグメント溶液の代わりにエバンスブルー溶液（０．３μｇ／０．３μｌ）を投与し、左右前額断面の側脳室、背側第三脳室、腹側第三脳室などに着色が認められることを確認し決定した。投与後、頭皮を縫合し、翌日より、下記表１に示す組み合わせ及び投与量により、ドネペジル塩酸塩及びインターフェロンを単独又はこれらを組み合わせて、１日１回１３日間、マイクロタイターピペットを用いて経口投与した。ドネペジル塩酸塩及び／又はインターフェロン投与による、アミロイドβフラグメント投与により引き起こされる記憶力の低下を抑制する効果を確認するため、アミロイドβフラグメントを脳室内に投与して後１１乃至１４日目に、以下に示す水迷路試験による行動学的評価を行った。
【００３４】
＜水迷路試験法＞
直径１３０ｃｍの円形プールに、白色インクで着色した水を深さ２０ｃｍまで満たし、水槽用ヒーターで水温を２３±１℃に維持した。プールを４分割し一画の中央に、プールの側面から１０ｃｍの位置に避難用のプラットホームを水面下２ｃｍになるように設置した。このプラットホームの位置は、試験終了まで一定の場所とした。マウスをプールの側面に向けて水面上に放ち、水面下に隠れたプラットフォームに到着するまでの時間を計測した。スタート位置は、プールを４分割したいずれかの画分の中央部、壁面より１０ｃｍ離れた場所とし、試行毎にランダムに変更した。２分間自由にプラットフォームを探索させた後、マウスが２分以内にプラットフォームに到着できなかった場合は、プラットフォームへ誘導し、３０秒間プラットフォームに留まらせた後、ペーパータオルを敷いたケージに移した。２回目の試験は、１回目の試験終了１分後に開始した。２回の試行の平均値を１日の値とした。この試験を４日間連続で行ない、試験４日目に各々の群のマウスがプラットフォームに到着するまでに要した平均時間を、試験開始日の各々の群のマウスがプラットフォームに到着するまでに要した平均時間で除し、１００倍した値を、１００から減じて、プラットフォーム認識時間改善率（％）とした。
【００３５】
結果を下記表１に併せて示した。なお、表１には示さないが、対照２としてアミロイドβフラグメント投与マウスに０．２５％（ｗ／ｗ）ヒト血清アルブミン含有生理食塩水（２００μｌ／匹）のみを投与したマウスのプラットフォーム認識時間改善率（％）（以下、「認識時間改善率」という。）は１７％となった。この場合、認識時間改善率は、試験開始日にプラットホームの探索に要した時間が試験４日目にどれだけ短縮されたかを示す割合である。一度探索したプラットホームをマウスが記憶していれば、試験を繰り返すたびに認識時間改善率は上昇し、試験４日目に最大値となる。従って、アミロイドβフラグメント投与マウスに投与した物質のアルツハイマー病治療剤としての作用が強ければマウスの記憶力の低下が抑制されるため、認識時間改善率の低下が抑制され、正常マウス（対照１）の値に近くなる。逆に、その作用が弱ければ、マウスの記憶力の低下が抑制されないので、認識時間改善率は低下し、０．２５％（ｗ／ｗ）ヒト血清アルブミン含有生理食塩水のみを投与したアミロイドβフラグメント投与マウス（対照２）の値に近くなる。
【００３６】
【表１】
2013018729.tif 000004
【００３７】
表１から明らかなように、ドネペジル塩酸塩を０．５乃至５μｇ／ｋｇ体重投与したマウスに、インターフェロン−αを２００国際単位／ｋｇ体重又は４００国際単位／ｋｇ体重と、それと等量のインターフェロン−β又はインターフェロン−γを経口投与したマウスでは、０．２５％（ｗ／ｗ）ヒト血清アルブミン含有生理食塩水のみを投与したアミロイドβフラグメント投与マウス（対照２）に比べ、認識時間改善率の低下の有意の抑制が認められた。これに対し、ドネペジル塩酸塩を、単独で２００μｇ／ｋｇ体重投与したマウスでは、０．２５％（ｗ／ｗ）ヒト血清アルブミン含有生理食塩水を投与マウス（対照２）に比べ、認識時間改善率の有意の低下の抑制が認められたものの、５０μｇ／ｋｇ体重以下を投与したマウスの認識時間改善率は、対照２のマウスとほぼ同程度の値を示した。ドネペジル塩酸塩を２００μｇ／ｋｇ体重投与したマウスに、インターフェロン−α、インターフェロン−β又はインターフェロン−γを単独で、或いは、組み合わせて投与しても、ドネペジル塩酸塩を単独投与した場合以上の認識時間改善率の低下の抑制は認められなかった。また、本試験で用いた用量では、インターフェロン−α、インターフェロン−β或いはインターフェロン−γを単独投与しても、全く、認識時間改善率の改善は認められなかった。この結果は、通常の臨床投与量よりも低用量のドネペジル塩酸塩をアルツハイマー病の治療に用いる際に、インターフェロン−αとインターフェロン−β又はインターフェロン−γと併用することにより、ドネペジル塩酸塩を単独で２００μｇ／ｋｇ体重投与した場合と同等、或いは、それ以上のアルツハイマー病治療作用が得られることを示している。なお、ドネペジル塩酸塩とインターフェロンを組み合わせて投与したマウスに、死亡例、体重減、行動の異常等の副作用は全く認められなかった。ちなみに、本試験で設定したドネペジル塩酸塩６０μｇ／ｋｇ体重及び２００μｇ／ｋｇ体重の投与量は、日本国厚生労働省が、アルツハイマー型認知症における認知症症状の進行抑制に用いる医薬品として承認した製剤の、体重５０ｋｇのアルツハイマー型認知症患者に対する通常の臨床投与量に相当する用量である。また、具体的なデータは示さないが、ドネペジル塩酸塩を０．５乃至５μｇ／ｋｇ体重投与したマウスに、インターフェロン−αを２００国際単位／ｋｇ体重又は４００国際単位／ｋｇ体重と、それと等量のインターフェロン−β又はインターフェロン−γとを筋肉内投与したマウスの認識時間改善率は、０．２５％（ｗ／ｗ）ヒト血清アルブミン含有生理食塩水のみを投与したアミロイドβフラグメント投与マウス（対照２）と同程度であった。
【実施例２】
【００３８】
実施例１において、通常の臨床投与量の４００分の１量という低用量のドネペジル塩酸塩の投与時に、インターフェロン−αと、インターフェロン−β又はインターフェロン−γとを各々２００国際単位／ｋｇ体重又は４００国際単位／ｋｇ体重経口投与することにより、ドネペジル塩酸塩を単独で２００μｇ／ｋｇ体重の投与した場合と同等以上のアルツハイマー型認知症患者に対する治療効果が期待できることが明らかとなったので、本試験ではインターフェロン−αと、インターフェロン−β又はインターフェロン−γを併用する場合のドネペジル塩酸塩の有効投与量を決定する試験を行った。すなわち、インターフェロン−αと、インターフェロン−β及びインターフェロン−γ、並びに、ドネペジル塩酸塩の投与の組み合わせと投与量を下記表２に示すように設定した以外は、実施例１と全く同じ方法により試験を実施し、認識時間改善率を求めた。結果を下記表２に併せて示す。なお、表２には示さないが、０．２５％（ｗ／ｗ）ヒト血清アルブミン含有生理食塩水（２００μｌ／匹）のみを投与したアミロイドβフラグメント投与マウス（対照２）の認識時間改善率は１８％となった。
【００３９】
【表２】
2013018729.tif 000005
【００４０】
表２から明らかなように、ドネペジル塩酸塩を０．１５乃至２μｇ／ｋｇ体重投与したマウスに、インターフェロン−αを２００国際単位／ｋｇ体重又は４００国際単位／ｋｇ体重と、それと等量のインターフェロン−β又はインターフェロン−γとを投与したマウスでは、０．２５％（ｗ／ｗ）ヒト血清アルブミン含有生理食塩水のみを投与したアミロイドβフラグメント投与マウス（対照２）に比べ、認識時間改善率の有意の低下抑制が認められた。ドネペジル塩酸塩を０．０５μｇ／ｋｇ体重投与したマウスでは、インターフェロン併用による認識時間改善率の低下抑制は全く認められなかった。この結果及び実施例１の結果は、ドネペジル塩酸塩をインターフェロンと組み合わせて投与する場合の投与量は０．１５乃至５μｇ／ｋｇ体重が望ましく、０．１５乃至１μｇ／ｋｇ体重がより望ましく、０．５μｇ／ｋｇ体重が特に望ましいことを示している。なお、ドネペジル塩酸塩とインターフェロンを組み合わせて投与したマウスに、死亡例、体重減、行動の異常等の副作用は全く認められなかった。
【実施例３】
【００４１】
実施例２において、ドネペジル塩酸塩の有効投与量を決定したので、本試験では、インターフェロンの有効投与量を決定する試験を行った。すなわち、インターフェロン−αと、インターフェロン−β及びインターフェロン−γ、並びに、ドネペジル塩酸塩の投与の組み合わせと投与量を下記表３に示すように設定した以外は、実施例１と全く同方法により試験を実施し、認識時間改善率を求めた。結果を下記表３に併せて示す。なお、表３には示さないが、０．２５％（ｗ／ｗ）ヒト血清アルブミン含有生理食塩水（２００μｌ／匹）のみを投与したアミロイドβフラグメント投与マウス（対照２）の認識時間改善率は１６％となった。
【００４２】
【表３】
2013018729.tif 000006
【００４３】
表３から明らかなよう、ドネペジル塩酸塩を通常の臨床投与量の４００分の１に相当する０．５μｇ／ｋｇ体重と、インターフェロン−αを５０乃至４００国際単位／ｋｇ体重と、インターフェロン−β又はインターフェロン−γを５０乃至４００国際単位／ｋｇ体重経口投与したマウスでは、０．２５％（ｗ／ｗ）ヒト血清アルブミン含有生理食塩水のみを投与したアミロイドβフラグメント投与マウス（対照２）に比べ、認識時間改善率の有意の低下抑制が認められた。これに対し、インターフェロン−αを１０国際単位／ｋｇ体重又は２，０００国際単位／ｋｇ体重と、インターフェロン−β又はインターフェロン−γを１０又は２，０００国際単位／ｋｇ体重経口投与したマウスでは、ドネペジル塩酸塩を０．５μｇ／ｋｇ体重投与した場合でも、認識時間改善率の低下抑制は全く認められなかった。この結果は、ドネペジル塩酸塩をインターフェロンと組み合わせて投与する場合、ドネペジル塩酸塩の作用増強に必要なインターフェロンの投与量は、インターフェロン−αを５０乃至４００国際単位／ｋｇ体重と、インターフェロン−β又はインターフェロン−γを５０乃至４００国際単位／ｋｇ体重との併用が望ましいことを示している。なお、ドネペジル塩酸塩とインターフェロンを組み合わせて投与したマウスに、死亡例、体重減、行動の異常等の副作用は全く認められなかった。
【実施例４】
【００４４】
実施例３において、インターフェロンの有効投与量を決定したので、本試験では、インターフェロンの有効な配合割合を決定する試験を行った。すなわち、インターフェロン−αと、インターフェロン−β及びインターフェロン−γ、並びに、ドネペジル塩酸塩の投与の組み合わせと投与量を下記表４に示すように設定した以外は、実施例１と全く同じ方法により試験を実施し、認識時間改善率を求めた。結果を下記表４に併せて示す。なお、０．２５％（ｗ／ｗ）ヒト血清アルブミン含有生理食塩水（２００μｌ／匹）のみを投与したアミロイドβフラグメント投与マウス（対照２）の認識時間改善率は１６％となった。
【００４５】
【表４】
2013018729.tif 000007
【００４６】
表４から明らかなように、インターフェロン−α２００国際単位／ｋｇ体重と、インターフェロン−β又はインターフェロン−γを５０乃至４００国際単位／ｋｇ体重とを経口投与することにより、通常の臨床投与量よりも低用量のドネペジル塩酸塩を投与したマウスにおいて、０．２５％（ｗ／ｗ）ヒト血清アルブミン含有生理食塩水のみを投与したアミロイドβフラグメント投与マウス（対照２）に比べ、認識時間改善率の低下の有意の抑制が認められた。また、その抑制率は、インターフェロン−αを２００国際単位／ｋｇ体重とインターフェロン−βを１００乃至２００国際単位／ｋｇ体重、又は、インターフェロン−αを２００国際単位／ｋｇ体重とインターフェロン−γを１００国際単位／ｋｇ体重との投与でより高くなった。ドネペジル塩酸塩を０．０５μｇ／ｋｇ体重又は２０μｇ／ｋｇ体重投与したマウスでは、インターフェロン併用による認識時間改善率の低下抑制は全く認められなかった。この結果は、通常の臨床投与量よりも低用量のドネペジル塩酸塩をインターフェロンと組み合わせて投与する場合のインターフェロンの配合割合は、インターフェロン−αとインターフェロン−β又はインターフェロン−γとが、活性比で１：０．２５乃至２の比率が望ましいことを示している。さらに、インターフェロン−αとインターフェロン−βでは、その配合割合が、活性比で１：０．５乃至１がより望ましく、１：１が特に望ましいことを示している。また、インターフェロン−αとインターフェロン−γでは、その配合割合が、活性比で１：０．５がより望ましいことを示している。なお、ドネペジル塩酸塩とインターフェロンを組み合わせて投与したマウスに、死亡例、体重減、行動の異常等の副作用は全く認められなかった。
【実施例５】
【００４７】
実施例１乃至４により、コリンエステラーゼ阻害効果を有するアルツハイマー病治療剤を、通常の臨床投与量よりも低用量で用い、インターフェロン−αと、インターフェロン−β及びインターフェロン−γとを併用すると、斯かるアルツハイマー病治療の効果が増強されることが明らかとなったので、本試験では、ドネペジル塩酸塩以外のコリンエステラーゼ阻害活性を有し、アルツハイマー病治療効果が確認されている前記化２で表される化合物ＮＫ−４を投与する際に、インターフェロン−αと、インターフェロン−β又はインターフェロン−γを併用した場合の治療効果への影響を調べた。すなわち、インターフェロン−αと、インターフェロン−β又はインターフェロン−γ、並びに、ＮＫ−４の投与の組み合わせと投与量を下記表５に示すように設定した以外は、実施例１と全く同じ方法により試験を実施し、認識時間改善率を求めた。ＮＫ−４は、市販の細胞賦活剤（森田薬品工業株式会社販売、商品名『ルミン』、ＮＫ−４含量１００ｍｇ／錠）を、乳鉢ですりつぶし、炭酸水素ナトリウムを加えて倍散し、０．１ｇ／回経口投与した。結果を下記表５に併せて示す。なお、表５には示さないが、０．５％（ｗ／ｗ）ヒト血清アルブミン含有生理食塩水（１００μｌ／匹）のみを投与したアミロイドβフラグメント投与マウス（対照２）の認識時間改善率は１７％となった。ちなみに、ＮＫ−４の細胞賦活剤としての通常の臨床投与量は２μｇ／ｋｇ体重であり、アルツハイマー病治療効果を得るためには５００μｇ／ｋｇ体重の投与が必要と考えられる（国際公開第２０１０／０８７３０６号参照）。
【００４８】
【表５】
2013018729.tif 000008
【００４９】
表５から明らかなように、インターフェロン−αを２００国際単位／ｋｇ体重とインターフェロン−βを１００乃至４００国際単位／ｋｇ体重、又は、インターフェロン−αを２００国際単位／ｋｇ体重とインターフェロン−γを５０乃至２００国際単位／ｋｇ体重投与し、通常の臨床投与量よりも低い用量のＮＫ−４を投与した場合、アミロイドβフラグメント投与に起因する認識時間改善率の低下が有意に抑制された。この結果は、インターフェロン−αとインターフェロン−βを活性比で１：０．５乃至２、或いは、インターフェロン−αとインターフェロン−γを活性比で１：０．２５乃至１の配合割合で投与した場合、通常の臨床投与量より低用量のＮＫ−４投与によるアルツハイマー病治療剤の作用を効果的に増強できることを示している。また、斯かるインターフェロンによる増強には、インターフェロン−αとインターフェロン−βを活性比で１：１の配合割合とするか、或いは、インターフェロン−αとインターフェロン−γを活性比で１：０．５の配合割合とするのが望ましいことも示された。
【実施例６】
【００５０】
実施例５において、ドネペジル塩酸塩以外のコリンエステラーゼ阻害効果を有し、アルツハイマー病治療効果を有するＮＫ−４においても、通常の臨床投与量よりも低用量で用いる際に、インターフェロン−αと、インターフェロン−β及びインターフェロン−γとを併用することにより、そのアルツハイマー病治療作用が増強されることが明らかとなったので、本試験では、ドネペジル塩酸塩、ＮＫ−４以外のコリンエステラーゼ阻害活性を有し、国内或いは外国でアルツハイマー病治療剤として市販されているガラクタミン及びリバスチグミンにつき、インターフェロン−αと、インターフェロン−β及びインターフェロン−γとを併用した場合の影響を調べた。すなわち、インターフェロン−αと、インターフェロン−β及びインターフェロン−γ、並びに、市販のアルツハイマー病治療剤の投与の組み合わせと投与量を下記表６に示すように設定した以外は、実施例１と全く同じ方法により試験を実施し、認識時間改善率を求めた。ガラクタミンは、市販のガラクタミン臭化水素酸塩錠（武田薬品工業株式会社販売、商品名『レミニールＯＤ錠１２ｍｇ』、ガラクタミンとして１２ｍｇ／錠含有）を、乳鉢ですりつぶし、生理食塩水に溶解し、適宜希釈して、１００μｌ／回経口投与した。リバスチグミンは、市販の酒石酸リバスチグミン製剤（ノバリテイス株式会社（ＮＯＶＡＲＴＩＳ  ＡＧ）販売、商品名『Ｅｘｅｌｏｎ』、リバスチグミン含量６ｍｇ／錠））を、乳鉢で磨りつぶし、生理食塩水に溶解し、適宜希釈して、１００μｌ／回経口投与した。結果を下記表６に併せて示す。なお、表６には示さないが、０．２５％（ｗ／ｗ）ヒト血清アルブミン含有生理食塩水（２００μｌ／匹）のみを投与したアミロイドβフラグメント投与マウス（対照２）の認識時間改善率は１６％となった。
【００５１】
【表６】
2013018729.tif 000009
【００５２】
表６から明らかなように、インターフェロン−αを２００国際単位／ｋｇ体重とインターフェロン−βを１００乃至４００国際単位／ｋｇ体重、又は、インターフェロン−αを２００国際単位／ｋｇ体重とインターフェロン−γを５０乃至２００国際単位／ｋｇ体重投与し、通常の臨床投与量よりも低用量のガラタミン或いはリバスチグミンを投与した場合、アミロイドβフラグメント投与に起因するマウスの認識時間改善率の低下が有意に抑制された。この結果は、インターフェロン−αとインターフェロン−βを活性比で１：０．５乃至２、或いは、インターフェロン−αとインターフェロン−γを活性比で１：０．２５乃至１の配合割合で投与した場合、通常の臨床投与量より低用量のガラタミン或いはリバスチグミン投与によるアルツハイマー病治療作用を効果的に増強できることを示している。また、斯かるインターフェロンによるアルツハイマー病治療剤の作用の増強効果は、インターフェロン−αとインターフェロン−βを活性比で１：１の配合割合とするか、或いは、インターフェロン−αとインターフェロン−γを活性比で１：０．５の配合割合とするのが特に望ましいことも示された。
【実施例７】
【００５３】
ヒトアルツハイマー型認知症のモデル系として汎用されているスウェーデン型アルツハイマー病の原因遺伝子変異を導入した市販のＡＰＰトランスジェニックマウス（ＡＰＰ  Ｔｇマウス）の記憶力に及ぼす、インターフェロンとコリンエステラーゼ阻害剤との併用による長期連用の影響を、コリンエステラーゼ阻害剤としてドネペジル塩酸塩を用いて調べた。すなわち、ＡＰＰ  Ｔｇマウス（Ｔａｃｏｎｉｃ社販売、メス、１０週齢、体重１５乃至２３ｇ）４０匹を１０日間予備飼育した後、体重が均等になるように、４群各１０匹に分け、単独飼育とし、インターフェロン及びドネペジル塩酸塩を、下記表７に示す用量で週５回、１５ヶ月間投与した。対照１として遺伝子変異を導入していないマウス（野生型、メス、１０週齢、体重１５乃至２３ｇ）１０匹を１０日間予備飼育後、単独飼育とし、０．２５％（ｗ／ｗ）ヒト血清アルブミン含有生理食塩水を週５回、１５ヶ月間投与した。対照２としてＡＰＰ  Ｔｇマウスに０．２５％（ｗ／ｗ）ヒト血清アルブミン含有生理食塩水（２００μｌ／匹）のみを週５回、１５ヶ月間投与した。インターフェロン及び／又はドネペジル塩酸塩投与３ヶ月及び１５ヶ月に、実施例１と同一の方法により水迷路試験を実施し、試験４日目に各々の群のマウスがプラットフォームに到着するまでに要した平均時間を、試験開始日の各々の群のマウスがプラットフォームに到着するまでに要した平均時間で除し、１００倍した値を１００から減じて認識時間改善率（％）とした。なお、０．２５％（ｗ／ｗ）ヒト血清アルブミン含有生理食塩水（２００μｌ／匹）のみを投与したＡＰＰ  Ｔｇマウス（対照２）の、投与３ヶ月及び１５ヶ月における認識時間改善率は各々１５％及び１６％となった。
【００５４】
【表７】
2013018729.tif 000010
【００５５】
表７から明らかなように、インターフェロン−αを２００国際単位／ｋｇ体重とインターフェロン−βを２００国際単位／ｋｇ体重、又は、インターフェロン−αを２００国際単位／ｋｇ体重とインターフェロン−γを１００国際単位／ｋｇ体重投与し、通常の臨床投与量よりも低い用量のドネペジル塩酸塩（０．５μｇ／ｋｇ体重）を投与した場合、投与開始３ヶ月及び１５ヶ月において、アミロイドβ変異に起因する記憶障害による認識時間改善率の低下が有意に抑制された。これに対し、通常の臨床投与量（２００μｇ／ｋｇ体重）のドネペジル塩酸塩のみを投与した場合、投与開始３ヶ月及び１５ヶ月において、アミロイドβ変異に起因する記憶障害による認識時間改善率の低下が有意に抑制されたものの、投与１５ヶ月における認識時間改善率は、投与３ヶ月のときの約２分の１に低下し、ドネペジル塩酸塩による治療効果の低下が認められた。この結果は、通常の臨床投与量より低用量のドネペジル塩酸塩投与と、インターフェロン−αとインターフェロン−β又はインターフェロン−γの経口投与の併用により、ドネペジル塩酸塩のもつアルツハイマー病治療作用を効果的に増強できるだけでなく、ドネペジル塩酸塩を通常の臨床投与量で長期連用した場合に認められるアルツハイマー病治療作用の低下も抑制できることを示している。
【実施例８】
【００５６】
インターフェロン−αとインターフェロン−β又はインターフェロン−γを有効成分とする本発明による経口用製剤の安全性を確認する試験を実施した。すなわち、ＢＡＬＢ／ｃマウス（日本チャールスリバー株式会社販売、６週齢、雌、平均体重２０ｇ）３５匹を無作為に、５匹ずつ７群に分け、６群各５匹には、下記表８に示す投与量となるように、実施例１で用いたのと同じインターフェロンを、０．５％（ｗ／ｗ）ヒト血清アルブミン含有生理食塩水で希釈して、その何れかを２００μｌ／マウスで経口投与し、経過を２４時間観察した。残りの１群５匹には、対照として、０．５％（ｗ／ｗ）ヒト血清アルブミン含有生理食塩水のみを２００μｌ／マウス経口投与し、その経過を２４時間観察した。インターフェロン含有又は非含有０．５％（ｗ／ｗ）ヒト血清アルブミン含有生理食塩水投与２４時間後、常法により、血液及び尿を採取し、骨髄機能、腎機能及び肝機能の指標となる臨床検査を行った。結果を下記表８に併せて示す。
【００５７】
【表８】
2013018729.tif 000011
【００５８】
表８から明らかなように、投与直後から観察終了まで、外観的な変化は認められず、骨髄機能、腎機能及び肝機能の指標となる臨床検査値についても、対照のマウス（実験群１）と差は認められなかった。この結果は、インターフェロン−αとインターフェロン−βとを、各々２００乃至１００，０００国際単位／ｋｇ体重、或いは、インターフェロン−αとインターフェロン−γとを、各々２００乃至１００，０００国際単位／ｋｇ体重と１００乃至５０，０００国際単位／ｋｇ体重、ヒトに経口投与してもその安全性は極めて高いことを示している。
【００５９】
実施例１乃至８の結果は、インターフェロン−αとインターフェロン−β又はインターフェロン−γを有効成分として含有する経口用製剤が、通常の臨床投与量よりも低用量のアルツハイマー病治療剤、とりわけ、コリンエステラーゼ阻害剤をアルツハイマー病の治療に用いる際の作用の増強剤として極めて有用であることを示している。さらに、アルツハイマー病治療剤の作用増強剤としてのインターフェロン−αとインターフェロン−β又はインターフェロン−γの投薬形態は、５０乃至４００国際単位／ｋｇ体重／回の製剤が望ましいことを示している。さらに、斯かるアルツハイマー病治療剤の作用増強剤は、アルツハイマー病治療剤を通常の臨床投与量で長期連用した場合に生じる場合のある作用の低下を抑制できることも示している。また、斯かるアルツハイマー病治療剤の作用増強剤は、単独で経口投与しても、アルツハイマー病治療剤と併用しても、重篤な副作用を招来しない、安全な製剤である。
【実施例９】
【００６０】
市販のインターフェロン−α製剤（大塚製薬株式会社販売、商品名『オーアイエフ  注射用５００万ＩＵ』、インターフェロン−α含量：５００万国際単位／バイアル）を、添付されている注射水を加えて６００万国際単位／ｍｌとなるように溶解した。これとは別に市販のインターフェロン−β製剤（第一製薬株式会社販売、商品名『フェロン』、インターフェロン−β含量：６００万国際単位／バイアル）を、添付されている生理食塩水１ｍｌを加えて溶解した。これらの溶液０．５ｍｌずつを混合し、５０ｇの無水結晶マルトース（株式会社林原商事販売、商品名『ファイントース』）に均一に噴霧し、真空乾燥し、粉砕した後、篩にかけて粒度１００乃至５００μｍの粉状物を得た。粉状物にさらに適当量の無水結晶マルトースを均一に混合し、１ｇ当たりインターフェロン−αとインターフェロン−βとを各々約１０，０００国際単位含む散剤を得た。
【００６１】
また、市販のインターフェロン−α製剤（大塚製薬株式会社販売、商品名『オーアイエフ  注射用  ５００万ＩＵ』、インターフェロン−α含量：５００万国際単位／バイアル）を、添付されている注射水を加えて６００万国際単位／ｍｌとなるように溶解した。これとは別に市販のインターフェロン−γ製剤（塩野義製薬株式会社販売、商品名『イムノマックス（注）３００』、インターフェロン−γ含量：３００万国際単位／バイアル）を、添付の注射用水１ｍｌを加えて溶解した。これらの溶液０．５ｍｌずつを混合し、１００ｇの無水結晶マルトース（株式会社林原商事販売、商品名『ファイントース』）に均一に噴霧し、真空乾燥し、粉砕した後、篩にかけて粒度１００乃至５００μｍの粉状物を得た。粉状物にさらに適当量の無水結晶マルトースを均一に混合し、１ｇ当たりインターフェロン−α約１０，０００国際単位とインターフェロン−γ約５，０００国際単位と含む散剤を得た。
【００６２】
さらに、上記のようにして調製した粉末を、各々、常法により、造粒し、１ｇ当たりインターフェロン−αとインターフェロン−βとを各々約１０，０００国際単位含む顆粒剤、及び、１ｇ当たりインターフェロン−α約１０，０００国際単位とインターフェロン−γ約５，０００国際単位とを含む顆粒剤を得た。また同様に、調製した粉末を、各々、常法により、ハードカプセルに０．５ｇずつ充填し、１ｇ当たりインターフェロン−αとインターフェロン−βとを各々約１０，０００国際単位含むカプセル剤、及び、１ｇ当たりインターフェロン−α約１０，０００国際単位とインターフェロン−γ約５，０００国際単位とを含むカプセル剤を得た。
【００６３】
さらには、市販のインターフェロン−α製剤（大塚製薬販売、商品名『オーアイエフ  注射用１０００万ＩＵ』）に所定量の注射用水を加えて溶解した。これとは別に市販のインターフェロン−β製剤（第一製薬株式会社販売、商品名『フェロン』）に所定量の注射用蒸留水を加えて溶解した。これらの溶液の一部を、蒸留水にヒト血清アルブミンを１％（ｗ／ｖ）となるように溶解した溶液で希釈し、１ｇ当たりインターフェロン−αを６０，０００国際単位とインターフェロン−βを６０，０００国際単位とを含有する溶液を得た。この溶液３２質量部に対し、０．５質量部のツイーン８０（ポリオキシエチレンソルビタンモノオレアート）を１５．０質量部のエタノールに溶解して混合し、さらに、その混合物に０．５質量部のトリエタノールアミンを１５質量部のグリセリンに溶解して混合した後、少量のトリエタノールアミンを加えて、１ｍｌ当たりインターフェロン−αとインターフェロン−βを各々約２０，０００国際単位含む、ほぼ中性のゲル状製剤を得た。
【００６４】
さらには、市販のインターフェロン−α製剤（大塚製薬株式会社販売、商品名『オーアイエフ』）に所定量の注射用水を加えて溶解した。これとは別に市販のインターフェロン−γ製剤（塩野義製薬株式会社販売、商品名『イムノマックス（注）３００』）に所定量の注射用水を加えて溶解した。これらの溶液の一部を、蒸留水にヒト血清アルブミンを１％（ｗ／ｖ）となるように溶解した溶液で希釈し、１ｇ当たりインターフェロン−αを３０，０００国際単位とインターフェロン−γを１５，０００国際単位とを含有する溶液を得た。この溶液３２質量部に対し、０．５質量部のツイーン８０（ポリオキシエチレンソルビタンモノオレアート）を１５質量部のエタノールに溶解して混合し、さらに、その混合物に０．５質量部のトリエタノールアミンを１５質量部のグリセリンに溶解して混合した後、少量のトリエタノールアミンを加えて、１ｍｌ当たりインターフェロン−α約１０，０００国際単位とインターフェロン−γ約５，０００国際単位と含む、ほぼ中性のゲル状製剤を得た。
【００６５】
なお、これらの製剤は、適度の口腔内滞留時間を有し、アルツハイマー病の患者に飲ませ易い、粉末状、顆粒状又はゲル状のアルツハイマー病治療剤の作用増強剤であった。また、これらは、アルツハイマー病患者に、通常の臨床投与量の１００分の１以下の用量のアルツハイマー病の治療剤を投与する際、本品を散剤又は顆粒剤の場合は０．２５乃至１ｇ／回、カプセル剤の場合は１乃至２カプセル／回、ゲル状製剤の場合は０．２５乃至１ｍｌ／回経口投与することにより、アルツハイマー病治療剤の作用が増強され、重篤な副作用を招来することなく、アルツハイマー病及びそれに伴う臨床症状を改善することができる。また。斯かる用量でアルツハイマー病の治療剤と、本品を長期連用した場合でも、アルツハイマー病及びそれに伴う臨床症状の改善作用の低下は認められない。
【００６６】
これらのような、本発明によるアルツハイマー病治療剤の作用増強経口用剤は、通常の臨床投与量よりも低用量のアルツハイマー病治療剤の投与時に併用することにより、斯かるアルツハイマー病治療剤、とりわけ、コリンエステラーゼ阻害作用を有するアルツハイマー病治療剤の作用を増強することができるので、医薬品分野で利用することができる。
【００６７】
本発明を要約すれば、以下の通りである。
【００６８】
本発明は、ヒトやヒトを除く動物に安全に適用可能な、アルツハイマー病治療剤の作用を効率的に増強するとともに、アルツハイマー病治療剤の長期連用による作用の低下を防止するための経口用製剤の提供を目的とする。
【００６９】
そして、有効成分が、ヒトインターフェロン−α、及び、ヒトインターフェロン−β又はヒトインターフェロン−γからなる経口用剤により、アルツハイマー病治療剤の作用を相乗的に増強し且つアルツハイマー病治療剤の長期連用による作用の低下を防止する。