(57)【要約】【課題】簡単にかつ優れた精度で多量の糖鎖を分離精製することができる糖鎖精製装置および糖鎖精製方法を提供すること。【解決手段】糖鎖精製装置１は、糖鎖を含有する溶液中から糖鎖を精製する装置であり、第１の上側プレート１００と、第２の上側プレート１００’と、第１の下側プレート３００と、第２の下側プレート２００と、第１の上側プレート１００および第２の上側プレート１００’のうちの一方の上側プレートと、第１の下側プレート３００および第２の下側プレート２００のうちの一方の下側プレートとを上下に配置して組み立てた状態で支持する支持体７００とで構成されたプレート組立体１０と、プレート組立体１０が載置されるステージ３と、プレート組立体１０を加熱する加熱手段６とを備えている。そして、プレート組立体１０は、ステージ３上で、第１の下側プレート３００と第２の下側プレート２００とが交換され得る。【選択図】図１
2013081939.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
糖鎖を含有する溶液中から糖鎖を精製する際に用いられる複数のウェルを有するプレートを備えるプレート組立体と、該プレート組立体が載置されるステージと、該ステージ上の前記プレート組立体に対し、液体を吸引・吐出するノズルを有する分注手段と、前記ステージ上の前記プレート組立体と前記ノズルとを相対的に移動させる移動手段とを備える糖鎖精製装置であって、
前記プレート組立体を加熱する加熱手段を備え、
前記プレート組立体は、板状をなし、その上面に開口する凹部で構成され、該凹部の底部を貫通する貫通孔が形成された複数の第１のウェルと、該各第１のウェルの貫通孔をそれぞれ覆うように設置された第１のフィルタとを有する第１の上側プレートと、
板状をなし、その上面に開口する凹部で構成され、該凹部の底部を貫通する貫通孔が形成された複数の第２のウェルと、該各第２のウェルの貫通孔をそれぞれ覆うように設置され、前記第１のフィルタと異なる第２のフィルタとを有する第２の上側プレートと、
板状をなし、その上面に開口する凹部で構成された１つの第１の貯留部を有する第１の下側プレートと、
板状をなし、その上面に開口する凹部で構成された複数の第２の貯留部を有する第２の下側プレートと、
前記第１の上側プレートおよび前記第２の上側プレートのうちの一方の上側プレートと、前記第１の下側プレートおよび前記第２の下側プレートのうちの一方の下側プレートとを上下に配置して組み立てた状態で支持する支持体とを備え、
前記プレート組立体は、前記ステージ上で、前記第１の下側プレートと前記第２の下側プレートとが交換され得ることを特徴とする糖鎖精製装置。
【請求項２】
前記第１の下側プレートと前記第２の下側プレートとの交換が行われるときには、前記加熱手段の作動が停止する請求項１に記載の糖鎖精製装置。
【請求項３】
前記プレート組立体は、前記支持体に前記第１の上側プレートが支持され、前記第１の下側プレートが支持された第１の状態と、
前記第１の状態から前記第１の下側プレートと前記第２の下側プレートとが交換され、該第２の下側プレートが前記支持体に支持された第２の状態と、
前記第２の状態から前記第１の上側プレートと前記第２の上側プレートとが交換され、該第２の上側プレートが前記支持体に支持され、前記第２の下側プレートと前記第１の下側プレートとが交換され、該第１の下側プレートが前記支持体に支持された第３の状態と、
前記第３の状態から前記第１の下側プレートと前記第２の下側プレートとが交換され、該第２の下側プレートが前記支持体に支持された第４の状態とを取り得る請求項１または２に記載の糖鎖精製装置。
【請求項４】
前記第１の状態では、前記各第１のウェルは、その貫通孔を介して、前記第１の貯留部と一括して連通しており、
前記第２の状態では、前記各第１のウェルは、その貫通孔を介して、前記各第２の貯留部とそれぞれ連通しており、
前記第３の状態では、前記各第２のウェルは、その貫通孔を介して、前記第１の貯留部と一括して連通しており、
前記第４の状態では、前記各第２のウェルは、その貫通孔を介して、前記各第２の貯留部とそれぞれ連通している請求項３に記載の糖鎖精製装置。
【請求項５】
当該糖鎖精製装置は、前記各第１のウェルにそれぞれ前記糖鎖と特異的に結合する捕捉担体を供給する第１の工程と、
前記各第１のウェルにそれぞれ前記溶液を前記ノズルから分注して、該溶液と前記捕捉担体とを接触させ、該捕捉担体上に前記糖鎖を捕捉する第２の工程と、
前記捕捉担体に結合した糖鎖以外の物質を除去する第３の工程と、
前記捕捉担体に結合した糖鎖を再遊離させる第４の工程と、
再遊離した前記糖鎖を前記捕捉担体と分離して精製する第５の工程とを順に行なうよう構成され、
前記第１の工程、前記第２の工程および前記第３の工程では、前記プレート組立体を前記第１の状態とし、前記第４の工程では、前記プレート組立体を前記第２の状態とし、前記第５の工程では、前記プレート組立体を順に前記第３の状態、前記第４の状態とする請求項４に記載の糖鎖精製装置。
【請求項６】
前記加熱手段は、前記第１の工程、前記第２の工程、前記第３の工程、前記第４の工程および前記第５の工程の各工程で、前記プレート組立体または前記第１の上側プレートに対する加熱温度を変更可能に構成されている請求項１ないし５のいずれかに記載の糖鎖精製装置。
【請求項７】
前記加熱手段は、前記ステージに埋設されたヒータを有する請求項１ないし６のいずれかに記載の糖鎖精製装置。
【請求項８】
前記加熱手段は、ヒータを有する恒温槽である請求項１ないし６のいずれかに記載の糖鎖精製装置。
【請求項９】
前記支持体は、前記一方の上側プレートを支持する上側支持部材と、該上側支持部材と別体で構成され、前記一方の下側プレートを支持する下側支持部材とを有し、
前記上側支持部材と前記下側支持部材とは、前記上側支持部材が前記一方の上側プレートを支持し、前記下側支持部材が前記一方の下側プレートを支持した状態で、分解・組立可能に構成されている請求項１ないし８のいずれかに記載の糖鎖精製装置。
【請求項１０】
前記第１の下側プレートと前記第２の下側プレートとの交換は、前記上側支持部材と前記下側支持部材とが分解された状態で行なわれる請求項９に記載の糖鎖精製装置。
【請求項１１】
前記プレート組立体では、前記一方の上側プレートの下面と前記一方の下側プレートの上面とが離間して配置され、その離間距離が０．５ｍｍ以上１０ｍｍ以下である請求項１ないし１０のいずれかに記載の糖鎖精製装置。
【請求項１２】
前記第１のフィルタは、多孔性フィルムまたは不織布で構成されている請求項１ないし１１のいずれかに記載の糖鎖精製装置。
【請求項１３】
前記第１のフィルタの目開きは、０．１〜５０μｍである請求項１２に記載の糖鎖精製装置。
【請求項１４】
前記第２のフィルタは、シリカゲルで構成されている請求項１ないし１３のいずれかに記載の糖鎖精製装置。
【請求項１５】
前記分注手段は、ポンプと、該ポンプと前記ノズルとを連結するチューブとを有する請求項１ないし１４のいずれかに記載の糖鎖精製装置。
【請求項１６】
前記移動手段は、前記ノズルを水平方向に移動させる水平方向移動機構と、ノズルを鉛直方向に移動させる鉛直方向移動機構とを有する請求項１ないし１５のいずれかに記載の糖鎖精製装置。
【請求項１７】
前記ステージには、前記第１の下側プレートが複数枚重ねて載置される第１の下側プレート載置部と、前記第２の下側プレートが複数枚重ねて載置される第２の下側プレート載置部とが設けられている請求項１ないし１６のいずれかに記載の糖鎖精製装置。
【請求項１８】
前記ノズルを洗浄する洗浄槽をさらに備える請求項１ないし１７のいずれかに記載の糖鎖精製装置。
【請求項１９】
請求項５に記載の糖鎖精製装置を用いて、前記糖鎖を精製する方法であって、
前記第４の工程において、前記捕捉担体に結合した糖鎖を再遊離させるとともに、該糖鎖をラベル化試薬でラベル化することを特徴とする糖鎖精製方法。
【請求項２０】
前記第４の工程で、前記捕捉担体からの前記糖鎖の再遊離の後に、前記糖鎖をラベル化試薬でラベル化する請求項１９に記載の糖鎖精製方法。
【請求項２１】
前記ラベル化試薬は、芳香族アミンで構成される蛍光物質である請求項２０に記載の糖鎖精製方法。
【請求項２２】
再遊離した前記糖鎖を含む前記溶液における前記蛍光物質の濃度は、０．５ｍｏｌ／Ｌ以上である請求項２１に記載の糖鎖精製方法。
【請求項２３】
前記蛍光物質は、２−Ａｍｉｎｏｂｅｎｚａｍｉｄｅ、２−Ａｍｉｎｏｂｅｎｚｏｉｃ  ａｃｉｄ、８−Ａｍｉｎｏｐｙｒｅｎｅ−１，３，６−ｔｒｉｓｕｌｆｏｎａｔｅ、８−Ａｍｉｎｏｎａｐｈｔｈａｌｅｎｅ−１，３，６−ｔｒｉｓｕｌｐｈｏｎａｔｅ、２−Ａｍｉｎｏ９（１０Ｈ）−ａｃｒｉｄｏｎｅ、５−Ａｍｉｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ、Ｄａｎｓｙｌｅｔｈｙｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｅ、７−Ａｍｉｎｏ−４−ｍｅｔｈｙｌｃｏｕｍａｒｉｎｅ、３−Ａｍｉｎｏｂｅｎｚｏｉｃ  ａｃｉｄ、７−Ａｍｉｎｏ−１−ｎａｐｈｔｈｏｌ、３−（Ａｃｅｔｙｌａｍｉｎｏ）−６−ａｍｉｎｏａｃｒｉｄｉｎｅから選ばれる少なくとも１種である請求項２１または２２に記載の糖鎖精製方法。
【請求項２４】
前記捕捉担体は、ヒドラジド基またはオキシルアミノ基を有するポリマー粒子である請求項１９ないし２３のいずれかに記載の糖鎖精製方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、糖鎖精製装置および糖鎖精製方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
糖鎖とは、グルコース、ガラクトース、マンノース、フコース、キシロース、Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｎ−アセチルガラクトサミン、シアル酸等の単糖およびこれらの誘導体がグリコシド結合によって鎖状に複数結合した分子の総称である。
【０００３】
糖鎖は、非常に多様性に富んでおり、天然に存在する生物が有する様々な機能に関与する物質である。糖鎖は生体内でタンパク質や脂質等に結合した複合糖質として存在することが多く、生体内の重要な構成成分の一つである。生体内の糖鎖は細胞間情報伝達、タンパク質の機能や相互作用の調整等に深く関わっていることが明らかになりつつある。
【０００４】
糖鎖を有する生体高分子としては、例えば、細胞の安定化に寄与する植物細胞の細胞壁のプロテオグリカン、細胞の分化、増殖、接着、移動等に影響を与える糖脂質、および細胞間相互作用や細胞認識に関与している糖タンパク質等が挙げられるが、これらの高分子の糖鎖が、互いに機能を代行、補助、増幅、調節、あるいは阻害しあいながら高度で精密な生体反応を制御する機構が次第に明らかにされつつある。さらに、このような糖鎖と細胞の分化増殖、細胞接着、免疫、および細胞の癌化との関係が明確にされれば、この糖鎖工学と、医学、細胞工学、あるいは臓器工学とを密接に関連させて新たな展開を図ることが期待できる（非特許文献１）。
【０００５】
特に細胞表面に存在する糖鎖は、様々な生体反応の足場として重要な役割をしている事が明らかとなってきた。例えば、レセプターとの相互作用異常による疾病の発生、あるいはエイズウイルスやインフルエンザウイルス等の感染、病原性大腸菌Ｏ１５７の毒素やコレラ毒素の細胞への侵入に関わるとされている。また、ある種の癌細胞では特異的な糖鎖が細胞表面に現れる等、細胞表面糖鎖は細胞に個性をあたえる重要な分子とされている。
【０００６】
これらの解析のため、糖鎖構造解析の技術が開発されており、これらの技術は、複合糖質からの糖鎖切り出し、糖鎖の分離精製、糖鎖の標識化等の工程を組み合わせたものであるが、これらの工程はきわめて煩雑である。
【０００７】
さらに、糖鎖の分離精製には、例えば、イオン交換樹脂、逆相クロマトグラフィ、活性炭、ゲル濾過クロマトグラフィ等の手法が用いられるが、これらの分離手段は糖を特異的に認識する方法ではないので、莢雑物（ペプチド、タンパク質等）の混入が避けられず、また糖鎖の構造によって回収率に差異が生じることが多い。
【０００８】
また、クロマトグラフィで糖鎖を高精度に分離する場合には、糖鎖にピリジルアミノ化等の蛍光標識を施す必要があり、煩雑な操作が必要となる。そして、蛍光標識した糖鎖を分析するには、標識後の反応液中より未反応の２−アミノピリジン等の夾雑物を除き、この標識化糖鎖を精製することが必要である。
【０００９】
一般には、標識化糖鎖と夾雑物の分子量の差を利用してゲルろ過を行い、夾雑物を除去する。しかしながら、この方法は器具を多く用いる点と、操作に多くの時間を要する点から、多数の試料を短時間に処理するのは困難である。
【００１０】
また、簡易な方法として共沸により夾雑物を留去する方法も試みられているが、十分に夾雑物を除去するのは難しい。
【００１１】
さらに、糖鎖構造と各種疾患の関係を調べるためには、統計的処理が可能な多数の検体の糖鎖構造を調べる必要がある。
【００１２】
上述したような従来法では、糖鎖を分離するために、煩雑な工程を経る必要があり、膨大なコストと時間が必要となるため、簡単にかつ優れた精度で多量の糖鎖を分離精製する手段が求められていた。
【００１３】
さらに、糖鎖に蛍光標識を施す方法は、種々開発されている（例えば、特許文献１、２、３）が、その標識化効率は１００％ではなく、１つのサンプルに標識された糖鎖とされていない糖鎖が混在していた。この状況は、高速液体クロマトグラフィ(ＨＰＬＣ)や、キャピラリー電気泳動法（ＣＥ法）を用いて蛍光検出している際には大きな問題とならないが、質量分析法により糖鎖を分析する際にピークが複雑化するという問題点があった。また、標識化効率が悪い場合、ＨＰＬＣやＣＥによる分析においても、感度が低下するという問題が生じる可能性があった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１４】
【特許文献１】特開平７−２０１３１号公報
【特許文献２】特開２００６−０９８３６７号公報
【特許文献３】特開２００８−３０９５０１号公報
【非特許文献】
【００１５】
【非特許文献１】糖鎖生物学入門  化学同人  ２００５年１１月１日発行  第１版
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１６】
本発明の目的は、簡単にかつ優れた精度で多量の糖鎖を分離精製することができる糖鎖精製装置、および、かかる装置を用いた糖鎖精製方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
このような目的は、下記（１）〜（２４）の本発明により達成される。
（１）  糖鎖を含有する溶液中から糖鎖を精製する際に用いられる複数のウェルを有するプレートを備えるプレート組立体と、該プレート組立体が載置されるステージと、該ステージ上の前記プレート組立体に対し、液体を吸引・吐出するノズルを有する分注手段と、前記ステージ上の前記プレート組立体と前記ノズルとを相対的に移動させる移動手段とを備える糖鎖精製装置であって、
前記プレート組立体を加熱する加熱手段を備え、
前記プレート組立体は、板状をなし、その上面に開口する凹部で構成され、該凹部の底部を貫通する貫通孔が形成された複数の第１のウェルと、該各第１のウェルの貫通孔をそれぞれ覆うように設置された第１のフィルタとを有する第１の上側プレートと、
板状をなし、その上面に開口する凹部で構成され、該凹部の底部を貫通する貫通孔が形成された複数の第２のウェルと、該各第２のウェルの貫通孔をそれぞれ覆うように設置され、前記第１のフィルタと異なる第２のフィルタとを有する第２の上側プレートと、
板状をなし、その上面に開口する凹部で構成された１つの第１の貯留部を有する第１の下側プレートと、
板状をなし、その上面に開口する凹部で構成された複数の第２の貯留部を有する第２の下側プレートと、
前記第１の上側プレートおよび前記第２の上側プレートのうちの一方の上側プレートと、前記第１の下側プレートおよび前記第２の下側プレートのうちの一方の下側プレートとを上下に配置して組み立てた状態で支持する支持体とを備え、
前記プレート組立体は、前記ステージ上で、前記第１の下側プレートと前記第２の下側プレートとが交換され得ることを特徴とする糖鎖精製装置。
【００１８】
（２）  前記第１の下側プレートと前記第２の下側プレートとの交換が行われるときには、前記加熱手段の作動が停止する上記（１）に記載の糖鎖精製装置。
【００１９】
（３）  前記プレート組立体は、前記支持体に前記第１の上側プレートが支持され、前記第１の下側プレートが支持された第１の状態と、
前記第１の状態から前記第１の下側プレートと前記第２の下側プレートとが交換され、該第２の下側プレートが前記支持体に支持された第２の状態と、
前記第２の状態から前記第１の上側プレートと前記第２の上側プレートとが交換され、該第２の上側プレートが前記支持体に支持され、前記第２の下側プレートと前記第１の下側プレートとが交換され、該第１の下側プレートが前記支持体に支持された第３の状態と、
前記第３の状態から前記第１の下側プレートと前記第２の下側プレートとが交換され、該第２の下側プレートが前記支持体に支持された第４の状態とを取り得る上記（１）または（２）に記載の糖鎖精製装置。
【００２０】
（４）  前記第１の状態では、前記各第１のウェルは、その貫通孔を介して、前記第１の貯留部と一括して連通しており、
前記第２の状態では、前記各第１のウェルは、その貫通孔を介して、前記各第２の貯留部とそれぞれ連通しており、
前記第３の状態では、前記各第２のウェルは、その貫通孔を介して、前記第１の貯留部と一括して連通しており、
前記第４の状態では、前記各第２のウェルは、その貫通孔を介して、前記各第２の貯留部とそれぞれ連通している上記（３）に記載の糖鎖精製装置。
【００２１】
（５）  当該糖鎖精製装置は、前記各第１のウェルにそれぞれ前記糖鎖と特異的に結合する捕捉担体を供給する第１の工程と、
前記各第１のウェルにそれぞれ前記溶液を前記ノズルから分注して、該溶液と前記捕捉担体とを接触させ、該捕捉担体上に前記糖鎖を捕捉する第２の工程と、
前記捕捉担体に結合した糖鎖以外の物質を除去する第３の工程と、
前記捕捉担体に結合した糖鎖を再遊離させる第４の工程と、
再遊離した前記糖鎖を前記捕捉担体と分離して精製する第５の工程とを順に行なうよう構成され、
前記第１の工程、前記第２の工程および前記第３の工程では、前記プレート組立体を前記第１の状態とし、前記第４の工程では、前記プレート組立体を前記第２の状態とし、前記第５の工程では、前記プレート組立体を順に前記第３の状態、前記第４の状態とする上記（４）に記載の糖鎖精製装置。
【００２２】
（６）  前記加熱手段は、前記第１の工程、前記第２の工程、前記第３の工程、前記第４の工程および前記第５の工程の各工程で、前記プレート組立体または前記第１の上側プレートに対する加熱温度を変更可能に構成されている上記（１）ないし（５）のいずれかに記載の糖鎖精製装置。
【００２３】
（７）  前記加熱手段は、前記ステージに埋設されたヒータを有する上記（１）ないし（６）のいずれかに記載の糖鎖精製装置。
【００２４】
（８）  前記加熱手段は、ヒータを有する恒温槽である上記（１）ないし（６）のいずれかに記載の糖鎖精製装置。
【００２５】
（９）  前記支持体は、前記一方の上側プレートを支持する上側支持部材と、該上側支持部材と別体で構成され、前記一方の下側プレートを支持する下側支持部材とを有し、
前記上側支持部材と前記下側支持部材とは、前記上側支持部材が前記一方の上側プレートを支持し、前記下側支持部材が前記一方の下側プレートを支持した状態で、分解・組立可能に構成されている上記（１）ないし（８）のいずれかに記載の糖鎖精製装置。
【００２６】
（１０）  前記第１の下側プレートと前記第２の下側プレートとの交換は、前記上側支持部材と前記下側支持部材とが分解された状態で行なわれる上記（９）に記載の糖鎖精製装置。
【００２７】
（１１）  前記プレート組立体では、前記一方の上側プレートの下面と前記一方の下側プレートの上面とが離間して配置され、その離間距離が０．５ｍｍ以上１０ｍｍ以下である上記（１）ないし（１０）のいずれかに記載の糖鎖精製装置。
【００２８】
（１２）  前記第１のフィルタは、多孔性フィルムまたは不織布で構成されている上記（１）ないし（１１）のいずれかに記載の糖鎖精製装置。
【００２９】
（１３）  前記第１のフィルタの目開きは、０．１〜５０μｍである上記（１２）に記載の糖鎖精製装置。
【００３０】
（１４）  前記第２のフィルタは、シリカゲルで構成されている上記（１）ないし（１３）のいずれかに記載の糖鎖精製装置。
【００３１】
（１５）  前記分注手段は、ポンプと、該ポンプと前記ノズルとを連結するチューブとを有する上記（１）ないし（１４）のいずれかに記載の糖鎖精製装置。
【００３２】
（１６）  前記移動手段は、前記ノズルを水平方向に移動させる水平方向移動機構と、ノズルを鉛直方向に移動させる鉛直方向移動機構とを有する上記（１）ないし（１５）のいずれかに記載の糖鎖精製装置。
【００３３】
（１７）  前記ステージには、前記第１の下側プレートが複数枚重ねて載置される第１の下側プレート載置部と、前記第２の下側プレートが複数枚重ねて載置される第２の下側プレート載置部とが設けられている上記（１）ないし（１６）のいずれかに記載の糖鎖精製装置。
【００３４】
（１８）  前記ノズルを洗浄する洗浄槽をさらに備える上記（１）ないし（１７）のいずれかに記載の糖鎖精製装置。
【００３５】
（１９）  上記（５）に記載の糖鎖精製装置を用いて、前記糖鎖を精製する方法であって、
前記第４の工程において、前記捕捉担体に結合した糖鎖を再遊離させるとともに、該糖鎖をラベル化試薬でラベル化することを特徴とする糖鎖精製方法。
【００３６】
（２０）  前記第４の工程で、前記捕捉担体からの前記糖鎖の再遊離の後に、前記糖鎖をラベル化試薬でラベル化する上記（１９）に記載の糖鎖精製方法。
【００３７】
（２１）  前記ラベル化試薬は、芳香族アミンで構成される蛍光物質である上記（２０）に記載の糖鎖精製方法。
【００３８】
（２２）  再遊離した前記糖鎖を含む前記溶液における前記蛍光物質の濃度は、０．５ｍｏｌ／Ｌ以上である上記（２１）に記載の糖鎖精製方法。
【００３９】
（２３）  前記蛍光物質は、２−Ａｍｉｎｏｂｅｎｚａｍｉｄｅ、２−Ａｍｉｎｏｂｅｎｚｏｉｃ  ａｃｉｄ、８−Ａｍｉｎｏｐｙｒｅｎｅ−１，３，６−ｔｒｉｓｕｌｆｏｎａｔｅ、８−Ａｍｉｎｏｎａｐｈｔｈａｌｅｎｅ−１，３，６−ｔｒｉｓｕｌｐｈｏｎａｔｅ、２−Ａｍｉｎｏ９（１０Ｈ）−ａｃｒｉｄｏｎｅ、５−Ａｍｉｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ、Ｄａｎｓｙｌｅｔｈｙｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｅ、７−Ａｍｉｎｏ−４−ｍｅｔｈｙｌｃｏｕｍａｒｉｎｅ、３−Ａｍｉｎｏｂｅｎｚｏｉｃ  ａｃｉｄ、７−Ａｍｉｎｏ−１−ｎａｐｈｔｈｏｌ、３−（Ａｃｅｔｙｌａｍｉｎｏ）−６−ａｍｉｎｏａｃｒｉｄｉｎｅから選ばれる少なくとも１種である上記（２１）または（２２）に記載の糖鎖精製方法。
【００４０】
（２４）  前記捕捉担体は、ヒドラジド基またはオキシルアミノ基を有するポリマー粒子である上記（１９）ないし（２３）のいずれかに記載の糖鎖精製方法。
【発明の効果】
【００４１】
本発明によれば、簡単にかつ優れた精度で糖鎖を分離精製することができる。さらに、複数の第１のウェルや複数の第２のウェルにそれぞれ供給された液体（溶液）を一括して処理することができるため、一度の精製処理で、多量の糖鎖を精製することができるようになる。
【図面の簡単な説明】
【００４２】
【図１】本発明の糖鎖精製装置の第１実施形態を示す斜視図である。
【図２】図１に示す糖鎖精製装置が備えるプレート組立体を示す斜視図である。
【図３】図２に示すプレート組立体の分解斜視図である。
【図４】図２中のＢ−Ｂ線断面図（プレート組立体の第１の状態を示す断面図）である。
【図５】図２中のＢ−Ｂ線断面図（プレート組立体の第２の状態を示す断面図）である。
【図６】図２中のＢ−Ｂ線断面図（プレート組立体の第３の状態を示す断面図）である。
【図７】図２中のＢ−Ｂ線断面図（プレート組立体の第４の状態を示す断面図）である。
【図８】図１に示す糖鎖精製装置で糖鎖を精製する工程を順に示す断面図（図１中の矢印Ａ方向から見た断面図）である。
【図９】図１に示す糖鎖精製装置で糖鎖を精製する工程を順に示す断面図（図１中の矢印Ａ方向から見た断面図）である。
【図１０】図１に示す糖鎖精製装置で糖鎖を精製する工程を順に示す断面図（図１中の矢印Ａ方向から見た断面図）である。
【図１１】図１に示す糖鎖精製装置で糖鎖を精製する工程を順に示す断面図（図１中の矢印Ａ方向から見た断面図）である。
【図１２】図１に示す糖鎖精製装置で糖鎖を精製する工程を順に示す断面図（図１中の矢印Ａ方向から見た断面図）である。
【図１３】図１に示す糖鎖精製装置で糖鎖を精製する工程を順に示す断面図（図１中の矢印Ａ方向から見た断面図）である。
【図１４】図１に示す糖鎖精製装置で糖鎖を精製する工程を順に示す断面図（図１中の矢印Ａ方向から見た断面図）である。
【図１５】図１に示す糖鎖精製装置で糖鎖を精製する工程を順に示す断面図（図１中の矢印Ａ方向から見た断面図）である。
【図１６】図１に示す糖鎖精製装置で糖鎖を精製する工程を順に示す断面図（図１中の矢印Ａ方向から見た断面図）である。
【図１７】図１に示す糖鎖精製装置で糖鎖を精製する工程を順に示す断面図（図１中の矢印Ａ方向から見た断面図）である。
【図１８】図１に示す糖鎖精製装置で糖鎖を精製する工程を順に示す断面図（図１中の矢印Ａ方向から見た断面図）である。
【図１９】図１に示す糖鎖精製装置で糖鎖を精製する工程を順に示す断面図（図１中の矢印Ａ方向から見た断面図）である。
【図２０】図１に示す糖鎖精製装置で糖鎖を精製する工程を順に示す断面図（図１中の矢印Ａ方向から見た断面図）である。
【図２１】図１に示す糖鎖精製装置で糖鎖を精製する工程を順に示す断面図（図１中の矢印Ａ方向から見た断面図）である。
【図２２】本発明の糖鎖精製装置の第２実施形態を示す斜視図である。
【図２３】本発明の糖鎖精製装置の第３実施形態を示す斜視図である。
【発明を実施するための形態】
【００４３】
以下、本発明の糖鎖精製装置および糖鎖精製方法を添付図面に示す好適な実施形態に基づいて詳細に説明する。
【００４４】
＜第１実施形態＞
図１は、本発明の糖鎖精製装置の第１実施形態を示す斜視図、図２は、図１に示す糖鎖精製装置が備えるプレート組立体を示す斜視図、図３は、図２に示すプレート組立体の分解斜視図、図４〜図７は、それぞれ、図２中のＢ−Ｂ線断面図（図４は、プレート組立体の第１の状態を示し、図５は、プレート組立体の第２の状態を示し、図６は、プレート組立体の第３の状態を示し、図７は、プレート組立体の第４の状態を示す）、図８〜図２１は、それぞれ、図１に示す糖鎖精製装置で糖鎖を精製する工程を順に示す断面図（図１中の矢印Ａ方向から見た断面図）である。なお、以下では、説明の都合上、図１〜図２１中の上側を「上」または「上方」、下側を「下」または「下方」と言う。また、水平方向であって装置の横方向（前後方向）をｘ軸方向、水平方向であって前記ｘ軸方向に対し垂直な方向（装置の左右方向）をｙ軸方向、鉛直方向（上下方向）をｚ軸方向と言う。
【００４５】
図１に示す糖鎖精製装置（以下単に「精製装置」と言う）１は、糖鎖を含有する溶液（以下「糖鎖含有液」と言う）２３中から糖鎖を精製する糖鎖精製方法で用いられる装置である。精製装置１は、ステージ３と、ステージ３に載置されるプレート組立体１０と、ステージ３上のプレート組立体１０に対して液体を分注する機能を有する分注手段４と、ステージ３上のプレート組立体１０に対して分注手段４のノズル（ピペッタ）４１を移動する移動手段５と、ステージ３上のプレート組立体１０をステージ３ごと加熱する加熱手段６と、ノズル４１を洗浄する洗浄槽７と、分注手段４、移動手段５および加熱手段６の作動を制御する機能を有するコントロールパネル１１とを備えている。以下、各部の構成について説明する。
【００４６】
図２、図３に示すように、プレート組立体１０は、第１の上側プレート（マルチウェルフィルタプレート）１００と、第２の上側プレート（クリーンアッププレート）１００’と、第１の下側プレート（廃液トレイ）３００と、第２の下側プレート（マルチウェルプレート）２００と、調整板（スペーサ）６００と、支持体７００とを備え、これら部材同士を分解・組立可能なものである。そして、プレート組立体１０は、各プレートの選択により、４つの組立状態を取り得る。４つの組立状態としては、図４に示す第１の状態と、図５に示す第２の状態と、図６に示す第３の状態と、図７に示す第４の状態とがある。
【００４７】
第１の状態では、第１の上側プレート１００および第２の上側プレート１００’のうちの第１の上側プレート１００が選択され、第１の下側プレート３００および第２の下側プレート２００のうちの第１の下側プレート３００が選択されている。そして、選択された第１の上側プレート１００および第１の下側プレート３００は、上下に配置されるように組み立てられ、支持体７００に支持される。
【００４８】
第２の状態では、第１の上側プレート１００および第２の上側プレート１００’のうちの第１の上側プレート１００が選択され、第１の下側プレート３００および第２の下側プレート２００のうちの第２の下側プレート２００が選択されている。そして、選択された第１の上側プレート１００および第２の下側プレート２００は、上下に配置されるように組み立てられ、支持体７００に支持される。
【００４９】
第３の状態では、第１の上側プレート１００および第２の上側プレート１００’のうちの第２の上側プレート１００’が選択され、第１の下側プレート３００および第２の下側プレート２００のうちの第１の下側プレート３００が選択されている。そして、選択された第２の上側プレート１００’および第１の下側プレート３００は、上下に配置されるように組み立てられ、支持体７００に支持される。
【００５０】
第４の状態では、第１の上側プレート１００および第２の上側プレート１００’のうちの第２の上側プレート１００’が選択され、第１の下側プレート３００および第２の下側プレート２００のうちの第２の下側プレート２００が選択されている。そして、選択された第２の上側プレート１００’および第２の下側プレート２００は、上下に配置されるように組み立てられ、支持体７００に支持される。
【００５１】
ステージ３は、ｙ軸方向に長い平板状をなすものであり、その上面が複数の領域に分けられている。図１に示すように、ステージ３は、プレート組立体載置部３１と、第１の上側プレート載置部３２と、第２の上側プレート載置部３３と、第１の下側プレート載置部３４と、第２の下側プレート載置部３５と、洗浄槽載置部３６と、処理液載置部３７とに分けられている。
【００５２】
プレート組立体載置部３１は、ステージ３の長手方向のほぼ中央部に位置し、１組のプレート組立体１０が載置される領域である。プレート組立体載置部３１に載置されたプレート組立体１０上の糖鎖含有液２３から糖鎖が精製される。
【００５３】
第１の上側プレート載置部３２は、精製装置１に向かってステージ３の右側手前に位置し、第１の上側プレート１００が１枚以上重ねて載置される領域である。第１の上側プレート載置部３２に載置された各第１の上側プレート１００は、それぞれ、未使用のものであり、交換に用いられる。
【００５４】
第２の上側プレート載置部３３は、精製装置１に向かって第１の上側プレート載置部３２よりもさらに右側に位置し、第２の上側プレート１００’が１枚以上重ねて載置される領域である。第２の上側プレート載置部３３に載置された各第２の上側プレート１００’は、それぞれ、未使用のものであり、交換に用いられる。
【００５５】
第１の下側プレート載置部３４は、精製装置１に向かって第２の上側プレート載置部３３よりもさらに奥側に位置し、第１の下側プレート３００が１枚以上重ねて載置される領域である。第１の下側プレート載置部３４に載置された各第１の下側プレート３００は、それぞれ、未使用のものであり、交換に用いられる。
【００５６】
第２の下側プレート載置部３５は、精製装置１に向かって第１の上側プレート載置部３２よりもさらに奥側に位置し、第２の下側プレート２００が１枚以上重ねて載置される領域である。第２の下側プレート載置部３５に載置された各第２の下側プレート２００は、それぞれ、未使用のものであり、交換に用いられる。
【００５７】
なお、精製装置１では、各プレートの交換は、精製装置１を操作する操作者の手作業により行なわれる。
また、プレート組立体１０の詳細な構成については、後述する。
【００５８】
洗浄槽載置部３６は、精製装置１に向かってステージ３の左側手前に位置し、洗浄槽７が載置される領域である。洗浄槽載置部３６に載置された洗浄槽７は、図示にしない固定機構により固定される。
【００５９】
処理液載置部３７は、精製装置１に向かって洗浄槽載置部３６よりもさらに左側に位置し、各種液体（処理液）がそれぞれ貯留されたマルチウェルプレート８１、タンク８２〜８７が載置される領域である。
【００６０】
ステージ３の構成材料としては、特に限定されず、例えば、ステンレス鋼、アルミニウムやアルミニウム合金などの各種金属材料を用いることができる。
【００６１】
分注手段４は、ノズル４１と、ノズル４１を支持、固定するノズルヘッド４４と、ポンプ４２と、ノズル４１とポンプ４２とを連結するチューブ４３と有している。
【００６２】
ノズル４１は、先端（下端）が開口した管状部材で構成されている。このノズル４１は、ポンプ４２の作動により、先端開口部４１１を介して液体を吸引・吐出することができる。なお、ノズル４１は、図１に示す構成では１本であるが、これに限定されず、例えば、複数本配置されていてもよい。
【００６３】
ポンプ４２は、例えば歯車ポンプやベーンポンプであり、ステージ３から立設する壁部１２の裏側に配置されている。
【００６４】
チューブ４３は、ノズル４１とポンプ４２とを連結している。これにより、ノズル４１とポンプ４２とがチューブ４３を介して連通する。また、チューブ４３は、可撓性を有し、移動手段５の作動によってノズル４１が移動した際、その移動に追従することができる。
【００６５】
移動手段５は、ｘ軸方向移動機構（水平方向移動機構）５１と、ｙ軸方向移動機構（水平方向移動機構）５２と、ｚ軸方向移動機構（鉛直方向移動機構）５３とを有している。
【００６６】
ｘ軸方向移動機構５１、ｙ軸方向移動機構５２、ｚ軸方向移動機構５３は、それぞれ、例えば、モータ（図示せず）と、モータに連結されたボールネジ（図示せず）と、ボールネジに連結されたリニアガイド（図示せず）とで構成されている。
【００６７】
そして、ノズル４１は、ノズルヘッド４４を介してｚ軸方向移動機構５３に支持されており、当該ｚ軸方向移動機構５３によってｚ軸方向に移動することができる。
【００６８】
また、ｘ軸方向移動機構５１は、ｚ軸方向移動機構５３ごとノズル４１を支持している。これにより、ノズル４１は、ｚ軸方向移動機構５３とともにｘ軸方向に移動することができる。
【００６９】
さらに、ｙ軸方向移動機構５２は、ｘ軸方向移動機構５１を介して、ｚ軸方向移動機構ごとノズル４１を支持している。これにより、ノズル４１は、ｘ軸方向移動機構５１、ｚ軸方向移動機構５３とともにｙ軸方向に移動することができる。
【００７０】
このような構成の移動手段５により、ノズル４１がプレート組立体１０とマルチウェルプレート８１、タンク８２〜８７との間を往復することができる。
【００７１】
加熱手段６は、ステージ３のプレート組立体載置部３１の直下に埋設されたヒータ６１を有している。ヒータ６１は、通電により発熱するニクロム線等のような電熱線をリング状に巻回して構成されたものである。また、ヒータ６１は、平面視でプレート組立体１０を包含している、すなわち、平面視でその内側にプレート組立体１０が配置される。
【００７２】
このようなヒータ６１が作動、すなわち、発熱することにより、その熱がステージ３、プレート組立体１０の支持体７００（第２の支持台（下側支持部材）５００、第１の支持台（上側支持部材）４００）を順に伝わり、第１の上側プレート１００上の液体を加熱して蒸発させることができる（図９（５）、図１２（１４）参照）。
【００７３】
また、ヒータ６１がステージ３に埋設されていることにより、精製装置１の操作者が誤ってヒータ６１に触れるのを確実に防止することができる。これにより、ヒータ６１が発熱していたとしても、操作者が火傷を負うのを防止または抑止することができる。
【００７４】
また、加熱手段６は、ステージ３のプレート組立体載置部３１上の温度を検出し、その検出結果に応じて、ヒータ６１に印可される電圧を制御することができるよう構成されている。これにより、精製装置１で行なわれる各工程（第１の工程、第２の工程、第３の工程、第４の工程および第５の工程）で、プレート組立体１０に対する加熱温度を変更して、最適な温度とすることができ、優れた精度で糖鎖を精製するのに寄与する。
【００７５】
洗浄槽７は、有底筒状をなす部材で構成され、その内側に、ノズル４１を洗浄する洗浄液７１を貯留することができる。ノズル４１は、プレート組立体１０からマルチウェルプレート８１やタンク８２〜８７に向かう途中で、毎回、洗浄槽７内に挿入され、当該洗浄槽７中の洗浄液７１で洗浄される。これにより、例えばプレート組立体１０でのコンタミネーションを防止することができる。
【００７６】
また、精製装置１では、洗浄液７１は、ノズル４１を洗浄するごとに、すなわち、使用されるごとに、未使用ものに交換されるよう構成されている。これにより、前記コンタミネーションを確実に防止することができる。
【００７７】
洗浄液７１としては、特に限定されず、例えば、精製水（蒸留水）、メタノール、エタノールに代表されるアルコール類を用いることができる。また、洗浄槽７を２つ以上設置しておき、２種類以上の洗浄液７１で連続的に洗浄することもできる。
【００７８】
コントロールパネル１１は、ステージ３上の第１の上側プレート載置部３２の近傍に配置されている。コントロールパネル１１には、表示部および操作部（入力部）としての液晶画面１１１が設置されている。そして、液晶画面１１１には、例えば精製装置１の各種動作条件を設定する入力画面等が表示される。操作者は、液晶画面１１１を指で触れることにより、各種動作条件の設定等を行なうことができる。この設定により、分注手段４、移動手段５および加熱手段６の作動がそれぞれ制御される。
【００７９】
前述したように、ステージ３のプレート組立体載置部３１には、１組のプレート組立体１０が載置される。図２、図３に示すように、このプレート組立体１０は、第１の上側プレート１００と、第２の上側プレート１００’と、第１の下側プレート３００と、第２の下側プレート２００と、調整板６００と、支持体７００とを備えている。また、プレート組立体１０は、図４に示す第１の状態と、図５に示す第２の状態と、図６に示す第３の状態と、図７に示す第４の状態との４つの組立状態を取り得る。そして、前記４つの組立状態に応じて、支持体７００は、第１の支持台４００で第１の上側プレート１００または第２の上側プレート１００’を支持するとともに、第２の支持台５００で第１の下側プレート３００または第２の下側プレート２００を支持する。
【００８０】
図３に示すように、第１の上側プレート１００は、その全体形状が平板状をなし、その厚さ方向（上下方向）に設けられた、すなわち、その上面１０８に開口する凹部で構成された複数（本実施形態では９６個）のウェル（第１のウェル）１０１を備えている。これらのウェル１０１は、行列状（ｘ軸方向に１２行、ｙ軸方向に８列）に配置されており、糖鎖含有液２３中から糖鎖を精製する際に用いられる。
【００８１】
図３、図４に示すように、これらのウェル１０１は、それぞれ、その下側に底部１０３を備える構成をなしており、さらに、この底部１０３のほぼ中心部に当該底部１０３を貫通する貫通孔１０４が設けられている。これにより、この貫通孔１０４を介した、ウェル１０１に供給（収納）された液体の外部への流出が、底部１０３側から許容される。
【００８２】
貫通孔１０４の孔径は、好ましくは０．１〜１ｍｍ程度、より好ましくは０．２〜０．７ｍｍ程度に設定される。
【００８３】
さらに、各ウェル１０１の下側（底部１０３側）には、それぞれ、その貫通孔１０４を塞ぐ（覆う）ように、膜状のフィルタ（第１のフィルタ）１０５が配置されている。このフィルタ１０５と貫通孔１０４の孔径との関係により、第１の上側プレート１００の静置時には、ウェル１０１に供給された液体が貫通孔１０４を介して、その外部へ流出することが阻害される（阻止される）。これに対して、後述するように、第１の上側プレート１００を第１の支持台４００に装着して、吸引ポンプ１３を用いて、第２の支持台５００が有する凹部５０５内を吸引した際には、前記液体のフィルタ１０５の透過（通過）が許容される。そのため、前記液体が貫通孔１０４を介して、その外部に、底部１０３側から流出される。
【００８４】
フィルタ１０５の素材としては、特に限定されないが、例えば、多孔性フィルムおよび不織布等が挙げられる。また、その構成材料としては、ポリテトラフルオロエチレン、セルロースエステル、フッ化ビニリデン、ポリカーボネート、ポリエチレン、ポリプロピレンおよびナイロン等が挙げられ、これらのうちの１種または２種以上を組み合わせて用いることができる。
【００８５】
なお、このフィルタ１０５には、親水処理が施されているのが好ましい。これにより、前記液体の透過性の向上を図ることができる。この親水処理は、例えば、プラズマ処理、コロナ放電、グラフト処理、酸処理などに代表される表面改質、または、界面活性剤、水溶性シリコン、ポリプロピレングリコール等を付与（塗布）等することにより行うことができる。
【００８６】
フィルタ１０５が備える細孔の孔径、すなわち、フィルタ１０５の目開きは、好ましくは０．１〜５０μｍ程度、より好ましくは０．２〜２０μｍ程度、さらに好ましくは０．４〜１０μｍに設定される。これにより、前記液体に含まれる液状成分の透過は許容されるとともに、後述するようなポリマー粒子２０の透過は確実に許容されなくなる。
【００８７】
第２の上側プレート１００’は、その全体形状が平板状をなし、その厚さ方向（上下方向）に設けられた、すなわち、その上面１０８’に開口する凹部で構成された複数（本実施形態では９６個）のウェル（第２のウェル）１０１’を備えている。これらのウェル１０１’は、第１の上側プレート１００のウェル１０１と同様に、行列状（ｘ軸方向に１２行、ｙ軸方向に８列）に配置されており、糖鎖含有液２３中から糖鎖を精製する際に用いられる。
【００８８】
図６、図７に示すように、これらのウェル１０１’は、それぞれ、その下側に底部１０３’を備える構成をなしており、さらに、この底部１０３’のほぼ中心部に当該底部１０３’を貫通する貫通孔１０４’が設けられている。これにより、この貫通孔１０４’を介した、ウェル１０１’に供給（収納）された液体の外部への流出が、底部１０３’側から許容される。
【００８９】
さらに、各ウェル１０１の下側（底部１０３側）には、それぞれ、その貫通孔１０４を塞ぐ（覆う）ようにフィルタ（第２のフィルタ）１０６が配置されている。これにより、第２の上側プレート１００’の静置時には、ウェル１０１’に供給された液体が貫通孔１０４’を介して、その外部へ流出することが阻害される（阻止される）。これに対して、後述するように、第２の上側プレート１００’を第１の支持台４００に装着して、吸引ポンプ１３を用いて、第２の支持台５００の凹部５０５内を吸引した際には、前記液体のフィルタ１０６の透過（通過）が許容される。そのため、前記液体が貫通孔１０４’を介して、その外部に、底部１０３’側から流出される。
【００９０】
フィルタ１０６は、フィルタ１０５と異なる構成材料で構成され、捕捉機能、すなわち、捕捉対象物が異なる。フィルタ１０６は、例えば、シリカゲルで構成されている。
【００９１】
以上のような第１の上側プレート１００、第２の上側プレート１００’は、支持体７００の第１の支持台４００に装着される。
【００９２】
図３〜図７に示すように、第１の支持台４００は、平板状をなし、その中央部で開口する開口部４０２を備える底部４０１と、底部４０１の外縁に沿って上方に突出するように設けられた上側外壁４０３と、底部４０１の外縁に沿って下方に突出するように設けられた下側外壁４０４とを有している。
【００９３】
そして、上側外壁４０３で囲まれた凹部４０５が形成され、この凹部４０５内に第１の上側プレート１００または第２の上側プレート１００’を挿入することで、当該挿入された上側プレートが第１の支持台４００により支持される。
【００９４】
また、底部４０１の開口部４０２の縁部に沿って溝が設けられており、この溝に対応するようにパッキン（シール部材）４０７が配置されている。これにより、凹部４０５内に第１の上側プレート１００または第２の上側プレート１００’を挿入した際に、開口部４０２とその外部との連通が遮断される。
【００９５】
なお、上側外壁４０３は、対向する２つの長辺の中央部において、厚さ方向（上下方向）に直交する方向に開口部４０８を有する構成をなしており、これにより、凹部４０５内に挿入（載置）された第１の上側プレート１００または第２の上側プレート１００’を取り出す際に、開口部４０８に指を入れて、当該凹部４０５内に挿入された上側プレートを持ち上げることができ、その取り出し作業を容易に行なうことができる。
【００９６】
さらに、下側外壁４０４で囲まれた凹部４０６が形成され、この凹部４０６の内周面に沿って、後述する第２の支持台５００が有する突出部５０２を挿入することで、第２の支持台５００上に第１の支持台４００が固定される。
【００９７】
なお、本実施形態では、上側外壁４０３の外周面と下側外壁４０４の外周面とが、一体的に形成されていることで、１つの平坦面により構成されている。
【００９８】
図４、図６に示すように、第１の下側プレート３００は、その全体形状が平板状をなし、その上面３０２に開口する１つの凹部（第１の貯留部）３０１を有する。
【００９９】
図３に示すように、第１の下側プレート３００は、凹部３０１が形成された凹部形成部３０３と、この凹部形成部３０３の周囲を取り囲むように配置されたフレーム部３０４とを有する構成をなしており、凹部形成部３０３の厚さは、フレーム部３０４の厚さより厚くなっている。これにより、凹部形成部３０３の上面３０２は、フレーム部２０５の上面から突出する。この凹部形成部３０３の平面視形状は、第１の支持台４００の開口部４０２に挿入可能な大きさに設定されている。従って、第２の支持台５００の凹部５０５内に第１の下側プレート３００を配置した状態（図４、図６参照）で、第２の支持台５００上に第１の支持台４００を載置すると、凹部形成部３０３を、第１の支持台４００の開口部４０２内に挿入させることができる。
【０１００】
なお、ウェル形成部２０２の上面３０２は、前述したようにフレーム部２０５の上面から突出しているが、これに限定されず、フレーム部２０５の上面と同じ高さであってもよい。この場合も、糖鎖を確実に分離精製することができる。
【０１０１】
図５、図７に示すように、第２の下側プレート２００は、第１の下側プレート３００と同様に、その全体形状が平板状をなし、その厚さ方向（上下方向）に設けられた、すなわち、その上面２０４に開口する凹部で構成された複数（本実施形態では９６個）のウェル（第２の貯留部）２０１を備えている。これらのウェル２０１は、行列状（ｘ軸方向に１２行、ｙ軸方向に８列）に配置されている。
【０１０２】
これらのウェル２０１は、それぞれ、その下側に底部２０３を備えている。これにより、ウェル２０１に供給（収納）された液体がその内部に貯留される。
【０１０３】
また、図３に示すように、第２の下側プレート２００は、複数のウェル２０１が形成されたウェル形成部２０２と、このウェル形成部２０２の周囲を取り囲むように配置されたフレーム部２０５とを有する構成をなしており、ウェル形成部２０２の厚さは、フレーム部２０５の厚さより厚くなっている。これにより、ウェル形成部２０２の上面は、フレーム部２０５の上面から突出する。このウェル形成部２０２の平面視形状は、第１の支持台４００の開口部４０２に挿入可能な大きさに設定されている。従って、第２の支持台５００の凹部５０５内に第２の下側プレート２００を配置した状態（図５、図７参照）で、第２の支持台５００上に第１の支持台４００を載置すると、ウェル形成部２０２を、第１の支持台４００の開口部４０２内に挿入させることができる。
【０１０４】
調整板６００は、第１の下側プレート３００または第２の下側プレート２００に先立って、第２の支持台５００が備える凹部５０５内に挿入して用いられるものである。
【０１０５】
この調整板６００は、平板状をなしており、その厚さの異なるものが複数枚用意されている。
【０１０６】
そして、凹部５０５内に挿入する第１の下側プレート３００、第２の下側プレート２００の種類に応じて、適切な厚さの調整板６００を選択することで、第１の状態で第１の上側プレート１００と第１の下側プレート３００とをできる限り接近させることができ、第２の状態で第１の上側プレート１００と第２の下側プレート２００とをできる限り接近させることができ、第３の状態で第２の上側プレート１００’と第１の下側プレート３００とをできる限り接近させることができ、第４の状態で第２の上側プレート１００’と第２の下側プレート２００とをできる限り接近させることができる。特に、第２の状態で第１の上側プレート１００と第２の下側プレート２００とをできる限り接近させることができ、第４の状態で第２の上側プレート１００’と第２の下側プレート２００とをできる限り接近させることができるのは、後述する工程で有効である。
【０１０７】
第２の支持台５００は、第１の下側プレート３００または第２の下側プレート２００を支持するための部材である。図４〜図７に示すように、第２の支持台５００は、第１の支持台４００と別体で構成され、平板状をなす底部５０１と、底部５０１の外縁に沿って上方に突出するように設けられた外壁５０３とを有している。
【０１０８】
このような外壁５０３で取り囲まれることにより、その内側に凹部５０５が形成され、この凹部５０５内に第１の下側プレート３００または第２の下側プレート２００を挿入することで、第１の下側プレート３００または第２の下側プレート２００が第２の支持台５００により支持される。
【０１０９】
また、外壁５０３は、外壁５０３の内縁に沿って上方に突出する突出部５０２を有している。この突出部５０２は、第１の支持台４００が備える凹部４０６の内周面に沿って、挿入し得るように設定されており、これにより、第２の支持台５００上に第１の支持台４００を載置した際に、突出部５０２が第１の支持台４００の凹部４０６に挿入されることで、第２の支持台５００上に第１の支持台４００が固定される。
【０１１０】
外壁５０３の上面には、突出部５０２を取り囲むように溝が設けられており、この溝に対応するようにパッキン（シール部材）５０７が配置されている。これにより、第２の支持台５００上に第１の支持台４００を載置した際に、第１の支持台４００、第２の支持台５００同士間での外部との連通が遮断される。
【０１１１】
さらに、図３に示すように、外壁５０３は、外壁５０３の側面に、凹部５０５に貫通する貫通孔５０６を有している。図１に示すように、貫通孔５０６には、ステージ３から立設する壁部１２の裏側でポンプ４２に隣接して配置され、真空ポンプで構成された吸引ポンプ１３が、チューブ１４を介して、連結されている。これにより、吸引ポンプ１３を作動させることで、凹部５０５内を減圧することができる。
【０１１２】
なお、第１の上側プレート１００、第２の上側プレート１００’、第１の下側プレート３００、第２の下側プレート２００の構成材料としては、特に限定されないが、例えば、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、ポリテトラフルオロエチレン等の樹脂材料が挙げられ、これらのうちの１種または２種以上を組み合わせて用いることができる。
【０１１３】
また、第１の支持台４００、第２の支持台５００の構成材料としては、前記樹脂材料を用いることができるが、例えばステンレス鋼等のＦｅ系合金、ＣｕまたはＣｕ系合金、ＡｌまたはＡｌ系合金のような金属系材料、アルミナ、アパタイト、窒化アルミのようなセラミックス系材料等が挙げられ、これらのうちの１種または２種以上を組み合わせて用いることができる。第１の支持台４００、第２の支持台５００の構成材料として金属材料を用いることにより、ヒータ６１からの熱がステージ３、第２の支持台５００、第１の支持台４００を順に伝わり、第１の上側プレート１００上の液体を確実に加熱して蒸発させることができる（図９（５）、図１２（１４）参照）。
【０１１４】
次に、プレート組立体１０での第１の状態、第２の状態、第３の状態、第４の状態について説明する。プレート組立体１０を第１の状態、第２の状態、第３の状態、第４の状態のいずれの状態とするのかは、当該プレート組立体１０が、後述する精製装置１で糖鎖を精製する各工程のうちのどの工程を経ているのかで選択される。
【０１１５】
なお、プレート組立体１０では、第１の上側プレート１００のウェル１０１同士のピッチと、第２の上側プレート１００’のウェル１０１’同士のピッチと、第２の下側プレート２００のウェル２０１同士のピッチとは、互いに同じ大きさに設定されている。
【０１１６】
図４に示すように、第１の状態では、第１の支持台４００の凹部４０５に第１の上側プレート１００が挿入され、さらに第２の支持台５００の凹部５０５に調整板６００および第１の下側プレート３００が挿入され、この状態で、第２の支持台５００上に、第１の支持台４００が載置される。このとき、第１の下側プレート３００の凹部形成部３０３が第１の支持台４００の開口部４０２に挿入され、さらに、第２の支持台５００の突出部５０２が第１の支持台４００の凹部４０６に挿入される。
【０１１７】
このような組立により、第１の上側プレート１００の各ウェル１０１は、その貫通孔１０４を介して、第１の下側プレート３００の凹部３０１と一括して連通しており、この状態で、第２の支持台５００上に第１の支持台４００が固定される。
【０１１８】
また、かかる状態では、パッキン５０７により、第１の支持台４００、第２の支持台５００同士間での外部との連通が遮断され、パッキン４０７により、第１の支持台４００と第１の上側プレート１００との間での連通が遮断される。これにより、第１の上側プレート１００と、第１の支持台４００と、第２の支持台５００とで形成される（画成される）内部空間９ａを、外部に対して閉鎖された閉鎖空間とすることができる。
【０１１９】
そして、貫通孔５０６に連結された吸引ポンプ１３を作動させて、内部空間９ａ（凹部５０５）を減圧することで、当該内部空間９ａをその外部に対して負圧とすることができる。そのため、第１の上側プレート１００の各ウェル１０１内では、それぞれ、フィルタ１０５を介して、その上下で圧力差が生じることから、この圧力差によって、ウェル１０１内の液体がフィルタ１０５を透過する。従って、各ウェル１０１から貫通孔１０４を介して液体を流出させて、第１の下側プレート３００の凹部３０１内に一括して貯留することができる。
【０１２０】
なお、ウェル１０１内の液体がフィルタ１０５を透過するには、本実施形態ではフィルタ１０５の下側をその上側より負圧とする圧力差を利用しているが、これに限定されず、例えば、フィルタ１０５の上側に位置する液体に遠心力や、重力を作用させることによっても可能である。例えば、ウェル１０１内の液体の粘度等が比較的低く、当該液体がフィルタ１０５を容易に透過する場合には、重力すなわち自由落下により、液体がフィルタ１０５を透過するようにすることができる。
【０１２１】
図５に示すように、第２の状態では、第１の支持台４００の凹部４０５に第１の上側プレート１００が挿入され、さらに第２の支持台５００の凹部５０５に調整板６００および第２の下側プレート２００が挿入され、この状態で、第２の支持台５００上に、第１の支持台４００が載置されている。このとき、第２の下側プレート２００のウェル形成部２０２が第１の支持台４００の開口部４０２に挿入され、さらに、第２の支持台５００の突出部５０２が第１の支持台４００の凹部４０６に挿入される。
【０１２２】
このような組立により、第１の上側プレート１００の各ウェル１０１は、その貫通孔１０４を介して、第２の下側プレート２００のウェル２０１とそれぞれ連通しており、この状態で、第２の支持台５００上に第１の支持台４００が固定される。
【０１２３】
また、第２の状態でも、内部空間９ａを、外部に対して閉鎖された閉鎖空間とすることができる。そして、貫通孔５０６に連結された吸引ポンプ１３を作動させて、内部空間９ａ（凹部５０５）を減圧することで、各ウェル１０１から貫通孔１０４を介して液体を流出させることができる。その結果、各ウェル１０１から流出した液体を、第２の下側プレート２００のウェル２０１にそれぞれ独立して貯留することができる。
【０１２４】
図６に示すように、第３の状態では、第１の支持台４００の凹部４０５に第２の上側プレート１００’が挿入され、さらに第２の支持台５００の凹部５０５に調整板６００および第１の下側プレート３００が挿入され、この状態で、第２の支持台５００上に、第１の支持台４００が載置される。このとき、第１の状態と同様に、第１の下側プレート３００の凹部形成部３０３が第１の支持台４００の開口部４０２に挿入され、さらに、第２の支持台５００の突出部５０２が第１の支持台４００の凹部４０６に挿入される。
【０１２５】
このような組立により、第２の上側プレート１００’の各ウェル１０１’は、その貫通孔１０４’を介して、第１の下側プレート３００の凹部３０１と一括して連通しており、この状態で、第２の支持台５００上に第１の支持台４００が固定される。
【０１２６】
また、かかる状態では、パッキン５０７により、第１の支持台４００、第２の支持台５００同士間での外部との連通が遮断され、パッキン４０７により、第１の支持台４００と第２の上側プレート１００’との間での連通が遮断される。これにより、第２の上側プレート１００’と、第１の支持台４００と、第２の支持台５００とで形成される（画成される）内部空間９ｂを、外部に対して閉鎖された閉鎖空間とすることができる。
【０１２７】
そして、貫通孔５０６に連結された吸引ポンプ１３を作動させて、内部空間９ｂ（凹部５０５）を減圧することで、当該内部空間９ｂをその外部に対して負圧とすることができる。そのため、第２の上側プレート１００’の各ウェル１０１’内では、それぞれ、フィルタ１０６を介して、その上下で圧力差が生じることから、この圧力差によって、ウェル１０１’内の液体がフィルタ１０６を透過する。従って、各ウェル１０１’から貫通孔１０４’を介して液体を流出させて、第１の下側プレート３００の凹部３０１内に一括して貯留することができる。
【０１２８】
図７に示すように、第４の状態では、第１の支持台４００の凹部４０５に第２の上側プレート１００’が挿入され、さらに第２の支持台５００の凹部５０５に調整板６００および第２の下側プレート２００が挿入され、この状態で、第２の支持台５００上に、第１の支持台４００が載置されている。このとき、第２の下側プレート２００のウェル形成部２０２が第１の支持台４００の開口部４０２に挿入され、さらに、第２の支持台５００の突出部５０２が第１の支持台４００の凹部４０６に挿入される。
【０１２９】
このような組立により、第２の上側プレート１００’の各ウェル１０１’は、その貫通孔１０４’を介して、第２の下側プレート２００のウェル２０１とそれぞれ連通しており、この状態で、第２の支持台５００上に第１の支持台４００が固定される。
【０１３０】
また、第４の状態でも、内部空間９ｂを、外部に対して閉鎖された閉鎖空間とすることができる。そして、貫通孔５０６に連結された吸引ポンプ１３を作動させて、内部空間９ｂ（凹部５０５）を減圧することで、各ウェル１０１’から貫通孔１０４’を介して液体を流出させることができる。その結果、各ウェル１０１’から流出した液体を、第２の下側プレート２００のウェル２０１にそれぞれ独立して貯留することができる。
【０１３１】
前述したように、プレート組立体１０では、調整板６００により、第１の状態で第１の上側プレート１００の下面１０９と第１の下側プレート３００の上面３０２とをできる限り接近させて、これらの離間距離ｄ１をできる限り小さく設定することができる。第２の状態でも、第１の上側プレート１００の下面１０９と第２の下側プレート２００の上面２０４とをできる限り接近させて、これらの離間距離ｄ２をできる限り小さく設定することができる。第３の状態でも、第２の上側プレート１００’の下面１０９’と第１の下側プレート３００の上面３０２とをできる限り接近させて、これらの離間距離ｄ３をできる限り小さく設定することができる。第４の状態でも、第２の上側プレート１００’ の下面１０９’と第２の下側プレート２００の上面２０４とをできる限り接近させて、これらの離間距離ｄ４をできる限り小さく設定することができる。
【０１３２】
そして、特に第２の状態で、貫通孔１０４を通過した液体がたとえ飛散したとしても、各ウェル１０１に対応する、第２の下側プレート２００のウェル２０１内に当該液体を高効率に供給する（回収する）ことができる。これと同様に、第４の状態でも、貫通孔１０４’を通過した液体がたとえ飛散したとしても、各ウェル１０１’に対応する、第２の下側プレート２００のウェル２０１内に当該液体を高効率に供給することができる。
【０１３３】
なお、離間距離ｄ１〜ｄ４としては、特に限定されず、例えば、好ましくは１０ｍｍ以下、より好ましくは０．５ｍｍ以上、１０ｍｍ以下、さらに好ましくは０．５ｍｍ以上、３ｍｍ以下に設定される。離間距離ｄ１〜ｄ４をかかる範囲内に設定することにより、前記効果をより顕著に発揮させることができる。
【０１３４】
また、図７（図６も同様）に示すように、第２の上側プレート１００’の底面（下面１０９’）には、各貫通孔１０４’を囲むようにリング状の突起部１０７が突出形成されているのが好ましい。突起部１０７が形成されていることにより、貫通孔１０４’を通過した液体を第２の下側プレート２００のウェル２０１内に向かって導くことができ、よって、該液体をさらに高効率に回収することができる。
【０１３５】
次に、精製装置１で糖鎖を精製する工程について、図８〜図２１を参照しつつ説明するが、その前に、「糖鎖」と「糖鎖と特異的に結合する捕捉担体」とについて説明する。
【０１３６】
ここでは、糖鎖は、当該糖鎖を備える糖タンパク質から得られる場合を一例に挙げる。糖タンパク質を含む試料としては、特に限定されないが、例えば、全血、血清、血漿、尿、唾液、細胞、組織等の生体試料が挙げられる。
【０１３７】
そして、この試料を、例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ（ＳＤＳ変性ポリアクリルアミドゲル電気泳動）や、等電点電気泳動とＳＤＳ−ＰＡＧＥを組み合わせた二次元電気泳動等の所定処理を施すことにより、ゲル中において試料に含まれる糖タンパク質を分離する。その後、ゲル内に保持されている糖タンパク質から、糖鎖遊離手段を用いて糖鎖を遊離させる。糖鎖を遊離させる手段としては、特に限定されないが、例えば、Ｎ−グリコシダーゼまたはＯ−グリコシダーゼを用いたグリコシダーゼ処理、ヒドラジン分解、アルカリ処理によるβ脱離等の方法を用いることができる。この糖鎖遊離処理後のゲルを取り出し、このゲルを、例えば水等の洗浄液を用いてリンスすることで、遊離された糖鎖をゲルから洗浄液中に溶出させる。そして、洗浄液中においてゲルを沈殿させた後、この上清を回収することで、糖鎖含有液２３を得る。この糖鎖含有液２３は、複数（本実施形態では９６個）のウェル８１１を有するマルチウェルプレート８１内にそれぞれ予め貯留されている。
【０１３８】
なお、糖鎖の遊離は、本実施形態では電気泳動処理を用いているが、これに限定されず、例えば、アフィニティークロマトグラフィー処理またはイオン交換クロマトグラフィー処理を用いてもよい。また、前記試料からの糖タンパク質の精製を省略してもよい場合には、前記試料に含まれる糖タンパク質に対して直接糖鎖を遊離させる処理を施すようにしてもよい。
【０１３９】
また、糖鎖は、生体内物質のなかで唯一、アルデヒド基をもつ物質である。すなわち、糖鎖は、水溶液等の状態で環状のヘミアセタール型と、非環状型のアルデヒド型とが平衡で存在する物質である。
【０１４０】
これに対して、タンパク質、核酸および脂質等の糖鎖以外の生体内物質には、通常、アルデヒド基が含まれていない。
【０１４１】
このことから、アルデヒド基と特異的に反応して安定な結合を形成する官能基を有する捕捉担体を利用すれば、糖鎖のみを選択的に捕捉することが可能である。
【０１４２】
アルデヒド基と特異的に反応する官能基としては、例えば、ヒドラジド基、オキシルアミノ基、アミノ基、セミチオカルバジド基およびそれらの誘導体が好ましく、ヒドラジド基またはオキシルアミノ基がより好ましく用いられる。オキシルアミノ基とアルデヒド基との反応によって生じるオキシム結合、およびヒドラジド基とアルデヒド基との反応によって生じるヒドラゾン結合は、酸処理等によって容易に切断されるため、糖鎖を捕捉したのち、糖鎖を担体から簡単に切り離すことができる。
【０１４３】
なお、一般的に，生理活性物質の捕捉・担持にはアミノ基が多用されているが、アミノ基とアルデヒド基の反応によって生じる結合（シッフ塩基）は結合力が弱いため、還元剤等を用いた二次処理が必要であることから、アミノ基は糖鎖の捕捉には好ましくない。
【０１４４】
糖鎖を捕捉するための担体としては、ポリマー粒子を用いることが好ましい。さらに、このポリマー粒子は、少なくとも表面の一部に糖鎖のアルデヒド基と特異的に反応する官能基を有した固体またはゲル粒子であることが好ましい。
【０１４５】
ポリマー粒子が固体粒子またはゲル粒子であれば、ポリマー粒子に糖鎖を捕捉させた後に、第１の上側プレート１００が備えるウェル１０１を用いて、かかる粒子を容易に回収することができる。
【０１４６】
このようなポリマー粒子としては、例えば、下記一般式（１）で表されるものが挙げられる。
【０１４７】
【化１】
2013081939.tif 000003
【０１４８】
精製装置１では、糖鎖と特異的に結合する捕捉担体として、ポリマー粒子２０を用い、ポリマー粒子２０上に糖鎖を捕捉する。
【０１４９】
ポリマー粒子２０は、当該ポリマー粒子２０を純水２１中に分散させた粒子分散液２２としてタンク８２に予め貯留されている。
【０１５０】
なお、ポリマー粒子２０の形状は、特に限定されないが、例えば、球状またはそれに類する形状が好ましい。ポリマー粒子２０が球状の場合、平均粒径は、好ましくは０．０５〜１０００μｍ程度、より好ましくは０．０５〜２００μｍ程度、さらに好ましくは０．１〜２００μｍ程度、最も好ましくは０．１〜１００μｍ程度に設定される。平均粒径が下限値未満では、ポリマー粒子２０を遠心分離やろ過で回収することが困難となるおそれがある。また、平均粒径が上限値を超えると、ポリマー粒子２０と、後述する試料溶液との接触面積が少なくなり、糖鎖捕捉の効率が低下するおそれがある。
【０１５１】
さて、精製装置１では、以下の「捕捉担体供給工程（第１の工程）」、「糖鎖捕捉工程（第２の工程）」、「物質除去工程（第３の工程）」、「再遊離工程（第４の工程）」、「糖鎖精製工程（第５の工程）」が順に行なわれる。また、これらの工程の間に、必要に応じて、１以上の任意の目的の工程が行なわれる。
【０１５２】
捕捉担体供給工程は、第１の上側プレート１００の各ウェル１０１にそれぞれ糖鎖と特異的に結合する捕捉担体（ポリマー粒子２０）を供給する工程である。この捕捉担体供給工程では、プレート組立体１０を第１の状態として用いる。
【０１５３】
糖鎖捕捉工程は、第１の上側プレート１００の各ウェル１０１にそれぞれ糖鎖含有液２３をノズル４１から分注して、糖鎖含有液２３とポリマー粒子２０とを接触させ、ポリマー粒子２０上に糖鎖を捕捉する工程である。この糖鎖捕捉工程では、捕捉担体供給工程に引き続き、プレート組立体１０を第１の状態として用いる。
【０１５４】
物質除去工程は、ポリマー粒子２０に結合した糖鎖以外の物質を除去する工程である。この物質除去工程では、プレート組立体１０を第１の状態として用いる。
【０１５５】
再遊離工程は、ポリマー粒子２０に結合した糖鎖を再遊離させる工程である。この再遊離工程では、物質除去工程に引き続き、プレート組立体１０を第１の状態として用いる。
【０１５６】
糖鎖精製工程は、再遊離した糖鎖をポリマー粒子２０と分離して精製する工程である。この糖鎖精製工程では、プレート組立体１０を順に第２の状態、第３の状態、第４の状態として用いる。第２の状態は、ステージ３上で、第１の状態のプレート組立体１０から、第１の下側プレート３００と第２の下側プレート２００とを交換して、当該第２の下側プレート２００を第２の支持台５００（支持体７００）に支持することによりなる。第３の状態は、第２の状態のプレート組立体１０から、第１の上側プレート１００と第２の上側プレート１００’とを交換して、当該第２の上側プレート１００’が第１の支持台４００（支持体７００）を支持し、第２の下側プレート２００と第１の下側プレート３００とを交換して、当該第１の下側プレート３００を第２の支持台５００（支持体７００）に支持することによりなる。また、第４の状態は、第３の状態のプレート組立体１０から、第１の下側プレート３００と第２の下側プレート２００とを交換して、当該第２の下側プレート２００が第２の支持台５００（支持体７００）に支持することによりなる。
【０１５７】
［１］  捕捉担体供給工程
［１−１（プレート組立体載置）］  図８（１）に示すように、プレート組立体１０を第１の状態とし、当該プレート組立体１０をステージ３（プレート組立体載置部３１）上に載置する。なお、ステージ３に埋設されているヒータ６１の作動は、未だ停止している。
【０１５８】
［１−２（粒子分散液吸引）］  また、ノズル４１を、粒子分散液２２が貯留されているタンク８２内に挿入し、その状態でポンプ４２を作動させる。これにより、ノズル４１の先端開口部４１１を介して当該ノズル４１内に粒子分散液２２が吸引される。
【０１５９】
［１−３］そして、移動手段５を作動させて、粒子分散液２２を吸引したノズル４１をプレート組立体１０上に移動させる。また、この移動に伴って、プレート組立体１０の第１の上側プレート１００の各ウェル１０１にそれぞれ粒子分散液２２（ポリマー粒子２０）を供給する（分注する）。
【０１６０】
［２］  吸引工程
次に、図８（２）に示すように、吸引ポンプ１３を作動させて、プレート組立体１０の内部空間９ａを負圧とし、これにより、各ウェル１０１内の粒子分散液２２をそれぞれ吸引する。
【０１６１】
これにより、各ウェル１０１では、それぞれ、粒子分散液２２中の純水２１はフィルタ１０５を透過する。これに対して、フィルタ１０５の細孔径と、ポリマー粒子２０の粒径との関係により、ポリマー粒子２０はフィルタ１０５を透過することができない。そのため、フィルタ１０５を透過した純水２１が、貫通孔１０４を介して、第１の下側プレート３００（凹部３０１）内に選択的に供給される。
【０１６２】
その結果、図８（３）に示すように、ポリマー粒子２０が第１の上側プレート１００のウェル１０１内に単独で充填された状態となる。
【０１６３】
［３］  ノズル洗浄工程
次に、移動手段５を作動させて、ノズル４１を、洗浄液７１が充填された洗浄槽７内に挿入し、その状態でポンプ４２を作動させる。これにより、ノズル４１の先端開口部４１１を介して洗浄液７１が出入りを繰り返し、ノズル４１が洗浄される。
【０１６４】
［４］  糖鎖捕捉工程
［４−１（糖鎖含有液吸引）］  次に、移動手段５を作動させて、ノズル４１を、糖鎖含有液２３が貯留されているマルチウェルプレート８１のウェル８１１内に挿入し、その状態でポンプ４２を作動させる。これにより、ノズル４１の先端開口部４１１を介して当該ノズル４１内に糖鎖含有液２３が吸引される。糖鎖含有液２３は、アセトニトリルに代表される揮発性の有機溶剤およびｐＨ調整剤としての酸（酢酸等）を含んでいてもよい。
【０１６５】
［４−２（糖鎖含有液供給）］  そして、図９（４）に示すように、移動手段５を作動させて、糖鎖含有液２３を吸引したノズル４１をプレート組立体１０上に移動させる。また、この移動に伴って、プレート組立体１０の第１の上側プレート１００の各ウェル１０１にそれぞれ糖鎖含有液２３を供給する（分注する）。
【０１６６】
［４−３（糖鎖含有液加熱）］  次に、図９（５）に示すように、ヒータ６１を作動させる。これにより、ヒータ６１の熱がステージ３、第２の支持台５００、第１の支持台４００、第１の上側プレート１００を順に伝わり、第１の上側プレート１００上の糖鎖含有液２３が加熱される。この加熱は、糖鎖含有液２３が乾燥するまで、一定の温度範囲（加熱温度）に保たれる。
【０１６７】
これにより、ポリマー粒子２０と、糖鎖含有液２３中に含まれる糖鎖とが反応し、ポリマー粒子２０上に糖鎖が捕捉される。
【０１６８】
この際の反応系のｐＨは、好ましくは２〜９、より好ましくは２〜７であり、さらに好ましくは２〜６である。なお、ｐＨ調整は、例えば、第１の上側プレート１００の各ウェル１０１の糖鎖含有液２３に、各種緩衝液または有機溶媒を添加することにより行うことができる。
【０１６９】
糖鎖捕捉時の温度は、好ましくは４〜１００℃程度、より好ましくは２５〜９０℃程度、さらに好ましくは３０〜８０℃程度、最も好ましくは６０〜８０℃程度の温度範囲に保たれるように設定する。
【０１７０】
また、反応時間、すなわち、糖鎖含有液２３が乾燥するまでの時間は、かかる温度範囲に設定した場合、通常、０．１〜３時間程度、好ましくは、０．６〜２時間程度に設定される。
【０１７１】
かかる条件で、ポリマー粒子２０と糖鎖とを反応させることで、ポリマー粒子２０上に糖鎖が確実に捕捉されることとなる。
【０１７２】
なお、本実施形態のように、糖鎖含有液２３が乾燥するまで加熱する構成とすることにより、ポリマー粒子２０と糖鎖との反応率の向上を確実に図ることができる。
【０１７３】
また、ポリマー粒子２０がヒドラジド基を有するものである場合、ヒドラジド基と、糖鎖が有する還元末端との間で、下記式（２）で表される反応が進行することで、ポリマー粒子２０上に糖鎖が捕捉される。
【０１７４】
【化２】
2013081939.tif 000004
【０１７５】
以上のように、第１の状態のプレート組立体１０を用いることで、第１の上側プレート１００の各ウェル１０１内では、供給された液体の反応を進行させることができる。さらに、プレート組立体１０の内部空間９ａの吸引により、ウェル１０１に供給した液体中に含まれる固定成分と、液状成分との分離を容易に行うことができる。
【０１７６】
［５］  ノズル洗浄工程
次に、移動手段５を作動させて、ノズル４１を、洗浄液７１が充填された洗浄槽７内に挿入し、その状態でポンプ４２を作動させる。これにより、ノズル４１の先端開口部４１１を介して洗浄液７１が出入りを繰り返し、ノズル４１が洗浄される。
【０１７７】
［６］  使用済み第１の下側プレート交換工程
［６−１（プレート組立体分解）］  図１０（６）に示すように、精製装置１の操作者は、ステージ３上でプレート組立体１０の支持体７００を、第１の上側プレート１００を支持した第１の支持台４００と、使用済みの（純水２１が貯留された）第１の下側プレート３００を支持した第２の支持台５００とに分解する。この分解操作は、第１の支持台４００を第１の上側プレート１００ごと持ち上げることにより、行なわれる。
【０１７８】
［６−２（第１の下側プレート取り外し）］  次に、図１０（７）に示すように、第２の支持台５００から使用済みの第１の下側プレート３００を取り除く。
【０１７９】
［６−３（第１の下側プレート装填）］  次に、図１０（８）に示すように、空の第２の支持台５００に未使用の第１の下側プレート３００を装填する。
【０１８０】
［６−４（プレート組立体組み立て）］  次に、図１０（９）に示すように、未使用の第１の下側プレート３００が装填された第２の支持台５００上に、第１の上側プレート１００を支持した第１の支持台４００を重ね、プレート組立体１０を再度第１の状態とする。
【０１８１】
なお、本工程［５］を行なうときには、ヒータ６１の作動を停止する。第１の下側プレート３００の交換は、操作者の手作業によるので、当該操作者が火傷を負うのを確実に防止することができる。
【０１８２】
［７］  物質除去工程
ここで、上記のように捕捉担体としてポリマー粒子２０を用いた場合、ポリマー粒子２０に捕捉された糖鎖以外の物質（以下、この物質を「洗浄物質」ということもある）としては、例えば、ポリマー粒子２０に捕捉されなかった糖鎖の他、ポリマー粒子２０の表面に、非特異的に吸着している糖鎖以外の莢雑物（タンパク質、ペプチド、脂質等）が挙げられる。
【０１８３】
そのため、本工程［７］では、これらの物質を洗浄液２４で洗浄することで除去する。洗浄液２４としては、特に限定されないが、水、各種緩衝液、各種有機溶媒等が挙げられ、これらを適宜組み合わせて用いることができる。
【０１８４】
［７−１（洗浄液吸引）］  まず、移動手段５を作動させて、ノズル４１を、洗浄液２４が貯留されているタンク８３内に挿入し、その状態でポンプ４２を作動させる。これにより、ノズル４１の先端開口部４１１を介して当該ノズル４１内に洗浄液２４が吸引される。
【０１８５】
［７−２（洗浄液供給）］  そして、図１１（１０）に示すように、移動手段５を作動させて、洗浄液２４を吸引したノズル４１をプレート組立体１０上に移動させる。また、この移動に伴って、プレート組立体１０の第１の上側プレート１００の各ウェル１０１にそれぞれ洗浄液２４を供給する（添加する）。
【０１８６】
［７−３（洗浄液吸引）］  次に、図１１（１１）に示すように、吸引ポンプ１３を作動させて、プレート組立体１０の内部空間９ａを負圧とし、これにより、各ウェル１０１内の洗浄液２４をそれぞれ吸引する。
【０１８７】
その結果、洗浄液２４をフィルタ１０５を透過させることができ、図１１（１２）に示すように、第１の上側プレート１００にポリマー粒子２０を残存させた状態で、第１の上側プレート１００から選択的に洗浄液２４を、第１の下側プレート３００内に除去することができるとともに、洗浄液２４中に溶解した洗浄物質を除去することができる。
【０１８８】
図１１（１０）〜（１２）に示す作動を、複数回繰り返して行うことで、洗浄物質を洗浄液２４中に溶解させた状態で、第１の下側プレート３００に分離することができるため、洗浄物質を糖鎖が捕捉されたポリマー粒子２０から確実に除去することができる。
【０１８９】
なお、この場合、まず水または緩衝液を洗浄液２４として用いて十分にポリマー粒子２０を洗浄したのち、さらに有機溶媒の洗浄液２４で洗浄し、必要に応じてこれら洗浄液２４による洗浄を繰り返し行い、最後に有機溶媒の洗浄液２４で洗浄するのが好ましい。これにより、洗浄物質、特に、非特異的にポリマー粒子２０の表面に吸着する夾雑物をより確実に除去することができるようになる。
【０１９０】
［８］  ノズル洗浄工程
次に、移動手段５を作動させて、ノズル４１を、洗浄液７１が充填された洗浄槽７内に挿入し、その状態でポンプ４２を作動させる。これにより、ノズル４１の先端開口部４１１を介して洗浄液７１が出入りを繰り返し、ノズル４１が洗浄される。
【０１９１】
［９］  再遊離工程
ここでは、ポリマー粒子２０に結合した糖鎖を再遊離させるとともに、この糖鎖を別の化合物（以下、「化合物Ａ」と言うこともある。）に置換する、すなわち、化合物Ａで糖鎖をラベル化する。なお、この化合物Ａとしては、蛍光物質、吸光物質および放射性物質等を備えるラベル化試薬が好ましく用いられる。
【０１９２】
［９−１（化合物含有液吸引）］  まず、移動手段５を作動させて、ノズル４１を、化合物Ａを含有する化合物含有液２５が貯留されているタンク８４内に挿入し、その状態でポンプ４２を作動させる。これにより、ノズル４１の先端開口部４１１を介して当該ノズル４１内に化合物含有液２５が吸引される。
【０１９３】
［９−２（化合物含有液供給）］そして、図１２（１３）に示すように、移動手段５を作動させて、化合物含有液２５を吸引したノズル４１をプレート組立体１０上に移動させる。また、この移動に伴って、プレート組立体１０の第１の上側プレート１００の各ウェル１０１にそれぞれ化合物含有液２５を供給する。
【０１９４】
第１の上側プレート１００のウェル１０１内に添加する化合物Ａの添加量は、糖鎖が捕捉されたポリマー粒子２０に対して、過剰量となっているのが好ましい。これにより、次で化合物含有液２５を加熱した際における糖鎖に対する化合物Ａの置換率の向上を図ることができる。
【０１９５】
具体的には、化合物Ａの添加量は、ポリマー粒子２０が有する糖鎖と特異的に反応する官能基量に対して、好ましくは１．５倍量以上、より好ましくは３倍量以上、さらに好ましくは５倍量以上であり、最も好ましくは１０倍量以上に設定される。
【０１９６】
［９−３（化合物含有液加熱）］  次に、図１２（１４）に示すように、ヒータ６１を作動させる。これにより、第１の上側プレート１００上の化合物含有液２５が加熱される。この加熱は、化合物含有液２５が乾燥するまで、一定の温度範囲（加熱温度）に保たれる。
【０１９７】
これにより、捕捉された糖鎖はポリマー粒子２０から切り離され、それとほぼ同時に糖鎖に化合物Ａが付加することとなるため、糖鎖は化合物Ａでラベル化されることとなる。以下、化合物Ａでラベル化された糖鎖を「ラベル化糖鎖」と言うこともある。
【０１９８】
また、この際の反応系のｐＨは、好ましくは２〜９、より好ましくは２〜７であり、さらに好ましくは２〜６である。なお、ｐＨ調整は、例えば、第１の上側プレート１００の各ウェル１０１にそれぞれ化合物含有液２５を供給した後に、各種緩衝液を添加することにより行うことができる。
【０１９９】
ラベル化時の温度は、好ましくは４〜１００℃程度、より好ましくは２５〜９０℃程度、さらに好ましくは３０〜８０℃程度、最も好ましくは６０〜８０℃程度の温度範囲に保たれるように設定する。
【０２００】
また、反応時間、すなわち溶液が乾燥するまでの時間は、かかる温度範囲に設定した場合、通常、０．１〜３時間程度、好ましくは、０．６〜２時間程度に設定される。
かかる条件で、ラベル化を行うことで、糖鎖が確実に化合物Ａによりラベル化される。
【０２０１】
なお、本実施形態のように、化合物含有液２５が乾燥するまで加熱する構成とすることにより、糖鎖と化合物Ａとの反応率の向上を確実に図ることができる。
【０２０２】
なお、化合物Ａとしては、アミノオキシ基またはヒドラジド基を有する化合物が好ましく用いられ、ポリマー粒子２０がヒドラジド基を有するものである場合、特に、下記化学式（３）で表されるN-aminooxyacetyl-tryptophanyl（arginine methyl ester）が好ましく用いられる。
【０２０３】
【化３】
2013081939.tif 000005
【０２０４】
［１０］  ノズル洗浄工程
次に、移動手段５を作動させて、ノズル４１を、洗浄液７１が充填された洗浄槽７内に挿入し、その状態でポンプ４２を作動させる。これにより、ノズル４１の先端開口部４１１を介して洗浄液７１が出入りを繰り返し、ノズル４１が洗浄される。
【０２０５】
［１１］  第１・第２下側プレート交換工程
［１１−１（プレート組立体分解）］  図１３（１５）に示すように、精製装置１の操作者は、ステージ３上でプレート組立体１０の支持体７００を、第１の上側プレート１００を支持した第１の支持台４００と、純水２１と洗浄液２４との混合液が貯留された第１の下側プレート３００を支持した第２の支持台５００とに分解する。この分解操作は、第１の支持台４００を第１の上側プレート１００ごと持ち上げることにより、行なわれる。
【０２０６】
［１１−２（第１の下側プレート取り外し）］  次に、図１３（１６）に示すように、第２の支持台５００から第１の下側プレート３００を取り除く。
【０２０７】
［１１−３（第２の下側プレート装填）］  次に、図１３（１７）に示すように、空の第２の支持台５００に未使用の第２の下側プレート２００を装填する。
【０２０８】
［１１−４（プレート組立体組み立て）］  次に、図１３（１８）に示すように、未使用の第２の下側プレート２００が装填された第２の支持台５００上に、第１の上側プレート１００を支持した第１の支持台４００を重ね、プレート組立体１０を第２の状態とする。
【０２０９】
なお、本工程［１１］を行なうときには、ヒータ６１の作動を停止する。第１の下側プレート３００と第２の下側プレート２００との交換は、操作者の手作業によるので、当該操作者が火傷を負うのを確実に防止することができる。
【０２１０】
［１２］  糖鎖精製工程
ここで、上記のようにポリマー粒子２０に捕捉された糖鎖を再遊離させることで、ラベル化糖鎖を得た場合、化合物Ａでラベル化された糖鎖以外に、第１の上側プレート１００中に含まれる物質としては、糖鎖が遊離したポリマー粒子２０および糖鎖のラベル化に使用されなかった化合物Ａ（以下、「未使用化合物Ａ」と言うこともある。）が挙げられる。
【０２１１】
そのため、本工程［１２］では、これらポリマー粒子２０および未使用化合物Ａを除去することで、ラベル化糖鎖の精製を行う。
【０２１２】
［１２−１（溶解液吸引）］  まず、移動手段５を作動させて、ノズル４１を、乾燥したラベル化糖鎖を溶解し得る液剤である溶解液２６が貯留されているタンク８５内に挿入し、その状態でポンプ４２を作動させる。これにより、ノズル４１の先端開口部４１１を介して当該ノズル４１内に溶解液２６が吸引される。この溶解液２６としては、特に限定されるものではないが、水、各種緩衝液、各種有機溶剤等が挙げられる。
【０２１３】
［１２−２（溶解液供給）］  そして、図１４（１９）に示すように、移動手段５を作動させて、溶解液２６を吸引したノズル４１をプレート組立体１０上に移動させる。また、この移動に伴って、プレート組立体１０の第１の上側プレート１００の各ウェル１０１にそれぞれ溶解液２６を供給する。
【０２１４】
［１２−３（溶解液吸引）］  次に、図１４（２０）に示すように、吸引ポンプ１３を作動させて、プレート組立体１０の内部空間９ａを負圧とし、これにより、各ウェル１０１内の溶解液２６をそれぞれ吸引する。これにより、第１の上側プレート１００の各ウェル１０１では、それぞれ、溶解液２６がフィルタ１０５を透過する。
【０２１５】
そして、図１４（２１）に示すように、第１の上側プレート１００の各ウェル１０１では、ポリマー粒子２０を残存させた状態となっており、このウェル１０１に対応する、第２の下側プレート２００のウェル２０１では、溶解液２６が貯留されている。また、その際には、溶解液２６中に溶解したラベル化糖鎖も第２の下側プレート２００のウェル２０１に移動させることができる。その結果、ラベル化糖鎖とポリマー粒子２０とが分離される。また、未使用化合物Ａも、通常、溶解液２６に対して溶解性を示すため、溶解液２６に溶解した状態で、第２の下側プレート２００のウェル２０１に移動する。
【０２１６】
［１２−４（ノズル洗浄）］  次に、移動手段５を作動させて、ノズル４１を、洗浄液７１が充填された洗浄槽７内に挿入し、その状態でポンプ４２を作動させる。これにより、ノズル４１の先端開口部４１１を介して洗浄液７１が出入りを繰り返し、ノズル４１が洗浄される。
【０２１７】
［１２−５（プレート組立体分解）］  図１５（２２）に示すように、精製装置１の操作者は、ステージ３上でプレート組立体１０の支持体７００を、第１の上側プレート１００を支持した第１の支持台４００と、溶解液２６が貯留された第２の下側プレート２００を支持した第２の支持台５００とに分解する。この分解操作は、第１の支持台４００を第１の上側プレート１００ごと持ち上げることにより、行なわれる。
【０２１８】
［１２−６（第１の上側プレート取り外し）］  次に、図１５（２３）に示すように、第１の支持台４００を第２の支持台５００の隣に載置して、第１の支持台４００から、使用済みの（ポリマー粒子２０が残留した）第１の上側プレート１００を取り除く。
【０２１９】
［１２−７（第２の上側プレート装填）］  次に、図１５（２４）に示すように、空の第１の支持台４００に未使用の第２の上側プレート１００’を装填する。
【０２２０】
［１２−８（洗浄液移し換え）］  次に、図１６（２５）および（２６）に示すように、移動手段５を作動させつつ、ノズル４１を用いて、第２の下側プレート２００のｍ行ｎ列のウェル２０１内の溶解液２６を、未使用の第２の上側プレート１００’のｍ行ｎ列（ウェル２０１と同じ行列）のウェル１０１’に移し換える（本実施形態では、ｍは１〜１２までの整数であり、ｎは１〜８までの整数である）。
【０２２１】
［１２−９（第２の下側プレート取り外し）］  次に、図１７（２７）に示すように、第２の支持台５００から第２の下側プレート２００を取り除く。
【０２２２】
［１２−１０（第１の下側プレート装填）］  次に、図１７（２８）に示すように、空の第２の支持台５００に未使用の第１の下側プレート３００を装填する。
【０２２３】
［１２−１１（プレート組立体組み立て）］  次に、図１７（２９）に示すように、未使用の第１の下側プレート３００が装填された第２の支持台５００上に、第２の上側プレート１００’を支持した第１の支持台４００を重ね、プレート組立体１０を第３の状態とする。
【０２２４】
［１２−１２（溶解液吸引）］  次に、図１８（３０）に示すように、吸引ポンプ１３を作動させて、プレート組立体１０の内部空間９ｂを負圧とし、これにより、各ウェル１０１’内の溶解液２６をそれぞれ吸引する。
【０２２５】
この際、フィルタ１０６をアセトニトリル等の非水溶媒で希釈した溶解液２６が透過するため、当該溶解液２６に含まれるラベル化糖鎖と未使用化合物Ａとは、シリカゲルで構成されたフィルタ１０６に吸着する。フィルタ１０６（シリカゲル）への吸着力は、未使用化合物Ａよりもラベル化糖鎖の方が高い。したがって、図１８（３１）に示すように、第１の下側プレート３００（凹部３０１）内には、未使用化合物Ａの一部が溶解液２６とともに流入する（貯留される）。なお、フィルタ１０６には、ラベル化糖鎖と、溶解液２６に含まれていた未使用化合物Ａのうちの、前記第１の下側プレート３００内に流入した未使用化合物Ａの一部を除く残りの未使用化合物Ａとが吸着した状態となっている。
【０２２６】
［１２−１３（非水溶媒吸引）］  次に、移動手段５を作動させて、ノズル４１を、アセトニトリル等の非水溶媒２７が貯留されているタンク８６内に挿入し、その状態でポンプ４２を作動させる。これにより、ノズル４１の先端開口部４１１を介して当該ノズル４１内に非水溶媒２７が吸引される。
【０２２７】
［１２−１４（非水溶媒供給）］  そして、図１９（３２）に示すように、移動手段５を作動させて、非水溶媒２７を吸引したノズル４１をプレート組立体１０上に移動させる。また、この移動に伴って、プレート組立体１０の第２の上側プレート１００’の各ウェル１０１’にそれぞれ非水溶媒２７を供給する。
【０２２８】
［１２−１５（非水溶媒吸引）］  次に、図１９（３３）に示すように、吸引ポンプ１３を作動させて、プレート組立体１０の内部空間９ｂを負圧とし、これにより、各ウェル１０１’内の非水溶媒２７をそれぞれ吸引する。これにより、第２の上側プレート１００’の各ウェル１０１’では、それぞれ、非水溶媒２７がフィルタ１０６を透過する。この際、図１９（３４）に示すように、フィルタ１０６に吸着した状態となっている未使用化合物Ａのほとんどが、フィルタ１０６から洗い流されて、すなわち、除去されて、非水溶媒２７ともに第１の下側プレート３００内に流入する。なお、未使用化合物Ａが若干フィルタ１０６に吸着していたとしても、その量は、後述するＨＰＬＣや質量分析装置での測定時に、実質的に影響のない程度である。また、フィルタ１０６には、依然としてラベル化糖鎖が吸着した状態となっている。
【０２２９】
［１２−１６（ノズル洗浄）］  次に、移動手段５を作動させて、ノズル４１を、洗浄液７１が充填された洗浄槽７内に挿入し、その状態でポンプ４２を作動させる。これにより、ノズル４１の先端開口部４１１を介して洗浄液７１が出入りを繰り返し、ノズル４１が洗浄される。
【０２３０】
［１２−１７（プレート組立体分解）］  図２０（３５）に示すように、精製装置１の操作者は、ステージ３上でプレート組立体１０の支持体７００を、第２の上側プレート１００’を支持した第１の支持台４００と、溶解液２６と非水溶媒２７との混合液が貯留された第１の下側プレート３００を支持した第２の支持台５００とに分解する。この分解操作は、第１の支持台４００を第２の上側プレート１００’ごと持ち上げることにより、行なわれる。
【０２３１】
［１２−１８（第１の下側プレート取り外し）］  次に、図２０（３６）に示すように、第２の支持台５００から第１の下側プレート３００を取り除く。
【０２３２】
［１２−１９（第２の下側プレート装填）］  次に、図２０（３７）に示すように、空の第２の支持台５００に未使用の第２の下側プレート２００を装填する。
【０２３３】
［１２−２０（プレート組立体組み立て）］  次に、図２０（３８）に示すように、未使用の第２の下側プレート２００が装填された第２の支持台５００上に、第２の上側プレート１００’を支持した第１の支持台４００を重ね、プレート組立体１０を第４の状態とする。
【０２３４】
［１２−２１（水吸引）］  次に、移動手段５を作動させて、ノズル４１を、水２８が貯留されているタンク８７内に挿入し、その状態でポンプ４２を作動させる。これにより、ノズル４１の先端開口部４１１を介して当該ノズル４１内に水２８が吸引される。
【０２３５】
［１２−２２（水供給）］  そして、図２１（３９）に示すように、移動手段５を作動させて、水２８を吸引したノズル４１をプレート組立体１０上に移動させる。また、この移動に伴って、プレート組立体１０の第２の上側プレート１００’の各ウェル１０１’にそれぞれ水２８を供給する。
【０２３６】
［１２−２３（水吸引）］  次に、図２１（４０）に示すように、吸引ポンプ１３を作動させて、プレート組立体１０の内部空間９ｂを負圧とし、これにより、各ウェル１０１’内の水２８をそれぞれ吸引する。これにより、第２の上側プレート１００’の各ウェル１０１’では、それぞれ、水２８がフィルタ１０６を透過する。この際、図２１（４１）に示すように、フィルタ１０６に吸着した状態となっているラベル化糖鎖が、フィルタ１０６から剥離して、水２８とともに第２の下側プレート２００のウェル２０１内に流入する、すなわち、精製（分離）される。
【０２３７】
［１２−２４（ノズル洗浄）］  次に、移動手段５を作動させて、ノズル４１を、洗浄液７１が充填された洗浄槽７内に挿入し、その状態でポンプ４２を作動させる。これにより、ノズル４１の先端開口部４１１を介して洗浄液７１が出入りを繰り返し、ノズル４１が洗浄される。
【０２３８】
以上のような工程を経ることで、プレート組立体１０を用いて、化合物Ａでラベル化された糖鎖が精製される。
【０２３９】
また、化合物Ａでラベル化された糖鎖は、MALDI-TOF MSに代表される質量分析、さらに高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）等の手法で分析することができる。特に、糖鎖が前述した化学式（３）で表されるN-aminooxyacetyl-tryptophanyl(arginine methyl ester)でラベル化されている場合、MALDI-TOF MSを用いて高感度分析を行うことができる。また、糖鎖が例えば２−アミノベンズアミドでラベル化されている場合、ＨＰＬＣを用いて高感度分析が可能である。
【０２４０】
このような精製装置１によれば、ステージ３上のプレート組立体１０に対し、第１の上側プレート１００と第２の上側プレート１００’とを交換することができるとともに、第１の下側プレート３００と第２の下側プレート２００とを交換することができる。
【０２４１】
特に、前記のように、第１の支持台４００と第２の支持台５００とは、第１の支持台４００が第１の上側プレート１００または第２の上側プレート１００’を支持し、第２の支持台５００が第１の下側プレート３００または第２の下側プレート２００を支持した状態で、分解・組立可能に構成されている。そして、第１の支持台４００と第２の支持台５００とが分解された状態で、第１の上側プレート１００と第２の上側プレート１００’との交換と、第１の下側プレート３００と第２の下側プレート２００との交換とをそれぞれ行なうことができ、その後の組立も容易に行なうことができる。
【０２４２】
このように精製装置１では、プレート交換をステージ３上で容易かつ迅速に行なうことができるよう構成されている。
【０２４３】
これにより、各工程での使用に適するように、ステージ３上のプレート組立体１０を第１の状態〜第４の状態のうちのいずれかの状態に容易かつ確実にすることができ、よって、簡単にかつ優れた精度で多量の糖鎖を分離精製することができる。
【０２４４】
なお、［７］物質除去工程の直後か、または［９］再遊離工程の直前に、捕捉担体（ポリマー粒子２０）が備える官能基を失活させる工程が行なわれるのが好ましい。この工程では、前記工程［４］において、糖鎖の捕捉に用いられなかった、捕捉担体が備える官能基（糖鎖のアルデヒド基と特異的に反応する官能基）を失活させる。これにより、捕捉担体に糖鎖以外の不純物が化学的に結合するのを確実に防止することができるため、糖鎖の精製率の向上を図ることができる。
【０２４５】
捕捉担体が備える官能基の失活は、例えば、前記官能基を失活させる機能を有する失活液を、捕捉担体に接触させ、静置することにより行うことができる。失活液としては、特に限定されないが、官能基がヒドラジド基である場合、例えば、無水酢酸、無水コハク酸等の酸無水物が挙げられる。これにより、官能基を容易に失活させることができる。
【０２４６】
反応条件としては、失活液：１０％無水酢酸／メタノール、温度：常温（室温）、静置時間：３０分間が好ましいが、これに限定されることはない。また、プレート組立体１０を第１の状態として使用する。
【０２４７】
また、［１２−４（ノズル洗浄）］と［１２−５（プレート組立体分解）］との間に、「非水溶媒供給」が行なわれるのが好ましい。この非水溶媒供給とは、アセトニトリルを第１の上側プレート１００の各ウェル１０１に供給し、吸引することをいう。この非水溶媒供給により、ウェル１０１内に残っているラベル化糖鎖を残らず第２の下側プレート２００に回収する（洗い流す）とともに、第２の下側プレート２００に溜まっているラベル化糖鎖溶液をアセトニトリル溶液に調製することができる。なお、アセトニトリルを加えることにより、溶液の疎水性が上がるため、ラベル化糖鎖（親水性）が、シリカゲルで構成されたフィルタ１０６（親水性）に保持され易くなる。ラベル化糖鎖が水溶液の状態では、フィルタ１０６に保持され難い。通常、アセトニトリル含量が９０％以上（好ましくは９５％）となるように調製される。
【０２４８】
＜第２実施形態＞
図２２は、本発明の糖鎖精製装置の第２実施形態を示す斜視図である。
【０２４９】
以下、この図を参照して本発明の糖鎖精製装置および糖鎖精製方法の第２実施形態について説明するが、前述した実施形態との相違点を中心に説明し、同様の事項はその説明を省略する。
本実施形態は、加熱手段の構成が異なること以外は前記第１実施形態と同様である。
【０２５０】
図２２に示す本実施形態の精製装置１では、ステージ３からヒータ６１（加熱手段６）が省略されており、それに代えて、加熱手段６Ａは、ステージ３と異なる位置に配置されたチャンバ６２と、チャンバ６２内を加熱するヒータ６３とを備えたものとなっている。
【０２５１】
チャンバ６２は、箱状をなし、第１の上側プレート１００が出し入れられる口部６４１を有するチャンバ本体６４と、口部６４１を開閉する扉６５とを有している。
【０２５２】
また、ヒータ６３は、チャンバ６２内に配置され、通電により発熱するニクロム線等のような電熱線で構成されている。
【０２５３】
そして、第１の上側プレート１００のウェル１０１内の液体を加熱したいときには、精製装置１の操作者は、第１の上側プレート１００をチャンバ６２内に移して、ヒータ６３を作動させ、その加熱を行なうことができる。
【０２５４】
＜第３実施形態＞
図２３は、本発明の糖鎖精製装置の第３実施形態を示す斜視図である。
【０２５５】
以下、この図を参照して本発明の糖鎖精製装置および糖鎖精製方法の第３実施形態について説明するが、前述した実施形態との相違点を中心に説明し、同様の事項はその説明を省略する。
本実施形態は、加熱手段の構成が異なること以外は前記第１実施形態と同様である。
【０２５６】
図２３に示す本実施形態の精製装置１では、ステージ３からヒータ６１（加熱手段６）が省略されており、それに代えて、加熱手段６Ｂは、ステージ３のプレート組立体載置部３１に隣接して配置され、熱媒体が充填された凹部６６１を有する加熱装置本体６６と、凹部６６１内を加熱するヒータ６７とを備えた恒温槽（ヒートブロック）である。なお、熱媒体としては、特に限定されず、例えば、水等のような液体を用いることができる。
【０２５７】
加熱装置本体６６は、図中の上方に向かって開口した凹部６６１を有している。この凹部６６１に熱媒体を充填して、その充填状態のまま第１の上側プレート１００を収納することができる。
【０２５８】
また、ヒータ６７は、凹部６６１の外側に配置され、通電により発熱するニクロム線等のような電熱線で構成されている。このヒータ６７の熱は、熱媒体を介して第１の上側プレート１００に伝達される。
【０２５９】
そして、第１の上側プレート１００のウェル１０１内の液体を加熱したいときには、精製装置１の操作者は、熱媒体が充填された凹部６６１に第１の上側プレート１００を移して、ヒータ６７を作動させ、その加熱を行なうことができる。
【０２６０】
＜第４実施形態＞
以下、本発明の糖鎖精製装置および糖鎖精製方法の第４実施形態について説明するが、前述した実施形態との相違点を中心に説明し、同様の事項はその説明を省略する。
【０２６１】
本実施形態は、再遊離工程では、再遊離とラベル化とのタイミングがズレている、すなわち、再遊離の後にラベル化すること以外は前記第１実施形態と同様である。
【０２６２】
本工程では、化合物Ａとして、芳香族アミンで構成される蛍光物質が用いられる。
化合物Ａとして、このような芳香族アミンを用いた場合、ポリマー粒子２０上に捕捉された糖鎖は、まずポリマー粒子２０から切り離されて再遊離した後に、化合物Ａによりラベル化されることとなる。
【０２６３】
以下、化合物Ａとして芳香族アミンを用いて、糖鎖を化合物Ａでラベル化する場合について説明する。
【０２６４】
［９−１’］まず、ノズル４１を用いて、糖鎖を再遊離させる糖鎖遊離液を、糖鎖が捕捉されたポリマー粒子２０が充填された第１の上側プレート１００の各ウェル１０１内に添加する（供給する）。
【０２６５】
［９−２’］次に、ヒータ６１を作動させて糖鎖遊離液を加熱することで、添加した糖鎖遊離液が乾燥するまで、糖鎖遊離液を一定の温度範囲に保つ。これにより、捕捉された糖鎖がポリマー粒子２０から切り離されることで、糖鎖は再遊離する。
【０２６６】
この際の反応系のｐＨは、好ましくは２〜９、より好ましくは２〜７であり、さらに好ましくは２〜６である。このｐＨ調整が、前記工程［９−１’］における糖鎖遊離液の添加により行われ、各種緩衝液が糖鎖遊離液として用いられる。
【０２６７】
糖鎖遊離時の温度は、好ましくは４〜１００℃程度、より好ましくは２５〜９０℃程度、さらに好ましくは３０〜８０℃程度、最も好ましくは６０〜８０℃程度の温度範囲に保たれるように設定する。
【０２６８】
また、反応時間、すなわち溶液（糖鎖遊離液）が乾燥するまでの時間は、かかる温度範囲に設定した場合、通常、０．１〜３時間程度、好ましくは、０．６〜２時間程度に設定される。
【０２６９】
かかる条件で、糖鎖の再遊離を行うことで、糖鎖がポリマー粒子２０から確実に切り離される。
【０２７０】
なお、本実施形態のように、糖鎖遊離液が乾燥するまで加熱する構成とすることにより、糖鎖の遊離率の向上を確実に図ることができる。
【０２７１】
［９−３’］次に、化合物Ａとして芳香族アミンを含有する化合物含有液２５を、ポリマー粒子２０から糖鎖が遊離している、マルチウェルフィルタプレート１００のウェル１０１内にノズル４１を用いて添加する。
【０２７２】
芳香族アミン（化合物Ａ）としては、特に限定されないが、例えば、２−Ａｍｉｎｏｂｅｎｚａｍｉｄｅ、２−Ａｍｉｎｏｂｅｎｚｏｉｃ  ａｃｉｄ、８−Ａｍｉｎｏｐｙｒｅｎｅ−１，３，６−ｔｒｉｓｕｌｆｏｎａｔｅ、８−Ａｍｉｎｏｎａｐｈｔｈａｌｅｎｅ−１，３，６−ｔｒｉｓｕｌｐｈｏｎａｔｅ、２−Ａｍｉｎｏ９（１０Ｈ）−ａｃｒｉｄｏｎｅ、５−Ａｍｉｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ、Ｄａｎｓｙｌｅｔｈｙｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｅ、７−Ａｍｉｎｏ−４−ｍｅｔｈｙｌｃｏｕｍａｒｉｎｅ、３−Ａｍｉｎｏｂｅｎｚｏｉｃ  ａｃｉｄ、７−Ａｍｉｎｏ−１−ｎａｐｈｔｈｏｌおよび３−（Ａｃｅｔｙｌａｍｉｎｏ）−６−ａｍｉｎｏａｃｒｉｄｉｎｅ等が挙げられる。中でも２−ａｍｉｎｏｂｅｎｚａｍｉｄｅまたは２−ａｍｉｎｏｂｅｎｚｏｉｃ  ａｃｉｄであるのが好ましい。これらの化合物は、試薬としての入手、反応の簡便性から好適に用いられる。
【０２７３】
また、芳香族アミンとして２−ａｍｉｎｏｂｅｎｚａｍｉｄｅまたは２−ａｍｉｎｏｂｅｎｚｏｉｃ  ａｃｉｄを用いる場合、一般的な条件では０．３５ｍｏｌ／Ｌで使用されるが、本工程では、化合物含有液２５添加後のウェル１０１内の溶液、すなわち、再遊離した糖鎖を含む溶液における芳香族アミンの濃度は、好ましくは０．５ｍｏｌ／Ｌ以上、より好ましくは１．４ｍｏｌ／Ｌ以上に設定される。これにより、化合物Ａによる糖鎖の標識効率を向上させることが可能となる。ただし、濃度が３ｍｏｌ／Ｌ以上になると、後の糖鎖精製工程において、反応に使用されなかった芳香族アミン（化合物Ａ）を除去するのが困難となるおそれがあるため、最も好ましい濃度は１．４ｍｏｌ／Ｌ以上３ｍｏｌ／Ｌ以下に設定される。
【０２７４】
また、液量に関して、ウェル１０１内に充填されたポリマー粒子２０で規定する場合、通常はポリマー粒子２０が浸る程度の液量、例えば、５ｍｇのポリマー粒子２０に対して５０μＬ程度に設定されるが、液量（容量）を倍量の１００μＬ程度に設定するのが好ましい。これにより、化合物Ａによる糖鎖の標識効率を向上させることが可能となる。ただし、液量は１００μＬを超えても良いが、一定量を超えると、後の糖鎖精製工程において、反応に使用されなかった芳香族アミン（化合物Ａ）を除去するのが困難となるおそれがあるため、最も好まし液量は１００μＬ〜２００μＬの間に設定される。
【０２７５】
より具体的には、芳香族アミンとして２−ａｍｉｎｏｂｅｎｚａｍｉｄｅを用いる場合、ウェル１０１内に、1.4 M 2-Aminobenzamid, 1 M sodium cyanoborohydrideの濃度になるように３０％酢酸／ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解させた溶液１００μＬを化合物含有液２５として添加する。
【０２７６】
［９−４’］次に、ヒータ６１を作動させて化合物含有液２５を加熱することで、化合物含有液２５を一定の温度範囲に保つ。これにより、ポリマー粒子２０から再遊離している糖鎖は化合物Ａと反応し、その結果、糖鎖は化合物Ａでラベル化されることとなる。
【０２７７】
この際の反応系のｐＨは、好ましくは２〜９、より好ましくは２〜７であり、さらに好ましくは２〜６である。
【０２７８】
ラベル化時の温度は、好ましくは０〜１００℃程度、より好ましくは４〜９５℃程度、さらに好ましくは３０〜９０℃程度の温度範囲に保たれるように設定する。
【０２７９】
また、反応時間は、かかる温度範囲に設定した場合、通常、０．１〜２０時間程度、好ましくは、０．６〜１２時間程度に設定される。
【０２８０】
より具体的には、芳香族アミンとして２−ａｍｉｎｏｂｅｎｚａｍｉｄｅを用いた場合、化合物含有液２５を３０〜７０℃の温度範囲で加熱して、１〜１０時間程度、反応する。
かかる条件で、ラベル化を行うことで、糖鎖が確実に化合物Ａによりラベル化される。
【０２８１】
以上のような工程［９−１’］〜［９−４’］によっても、糖鎖が化合物Ａでラベル化される。
【０２８２】
以上、本発明の糖鎖精製装置および糖鎖精製方法を図示の実施形態について説明したが、本発明は、これに限定されるものではなく、糖鎖精製装置を構成する各部は、同様の機能を発揮し得る任意の構成のものと置換することができる。また、任意の構成物が付加されていてもよい。
【０２８３】
また、分注手段のノズルは、前記各実施形態ではノズルヘッドに固定されているが、これに限定されず、ノズルヘッドに着脱自在に装着されていてもよい。
【０２８４】
また、移動手段は、前記各実施形態ではステージ上のプレート組立体に対して分注手段のノズルを移動するよう構成されていたが、これに限定されず、ノズルに対してステージ上のプレート組立体を移動するよう構成されていてもよい。
【０２８５】
また、糖鎖精製装置は、前記各実施形態ではプレート組立体において、上側プレート（第１の上側プレート、第２の上側プレート）の各ウェルが有するフィルタの下側を、その上側より負圧とすることでフィルタに液体を透過させる構成としたが、これに限定されず、フィルタの上側を、その下側より正圧とすることでフィルタに液体を透過させる構成のものであってもよい。
【０２８６】
また、プレート組立体は、ステージ上で、第１の上側プレートと第２の上側プレートとが交換され得るが、その交換は、ステージ上でなくてもよい。
【０２８７】
また、プレートの移動およびプレート組立体の分解、着脱を、前記各実施形態では精製装置の操作者（作業者）の手作業で行ったが、これに限定されず、例えば、ロボットアーム等の手段を用いて自動化してもよい。
また、糖鎖精製装置全体が、内部を加熱可能なチャンバ内に格納されていてもよい。
【符号の説明】
【０２８８】
１            糖鎖精製装置（精製装置）
３            ステージ
３１          プレート組立体載置部
３２          第１の上側プレート載置部
３３          第２の上側プレート載置部
３４          第１の下側プレート載置部
３５          第２の下側プレート載置部
３６          洗浄槽載置部
３７          処理液載置部
４            分注手段
４１          ノズル（ピペッタ）
４１１        先端開口部
４２          ポンプ
４３          チューブ
４４          ノズルヘッド
５            移動手段
５１          ｘ軸方向移動機構（水平方向移動機構）
５２          ｙ軸方向移動機構（水平方向移動機構）
５３          ｚ軸方向移動機構（鉛直方向移動機構）
６、６Ａ、６Ｂ  加熱手段
６１          ヒータ
６２          チャンバ
６３          ヒータ
６４          チャンバ本体
６４１        口部
６５          扉
６６          加熱装置本体
６６１        凹部
６７          ヒータ
７            洗浄槽
７１          洗浄液
８１          マルチウェルプレート
８１１        ウェル
８２、８３、８４、８５、８６、８７  タンク
９ａ、９ｂ    内部空間
１０          プレート組立体
１１          コントロールパネル
１１１        液晶画面
１２          壁部
１３          吸引ポンプ
１４          チューブ
２０          ポリマー粒子
２１          純水
２２          粒子分散液
２３          糖鎖含有液（溶液）
２４          洗浄液
２５          化合物含有液
２６          溶解液
２７          非水溶媒
２８          水
１００        第１の上側プレート（マルチウェルフィルタプレート）
１００’      第２の上側プレート（クリーンアッププレート）
１０１        ウェル（第１のウェル）
１０１’      ウェル（第２のウェル）
１０３、１０３’  底部
１０４、１０４’  貫通孔
１０５        フィルタ（第１のフィルタ）
１０６        フィルタ（第２のフィルタ）
１０７        突起部
１０８、１０８’  上面
１０９、１０９’  下面
２００        第２の下側プレート（マルチウェルプレート）
２０１        ウェル（第２の貯留部）
２０２        ウェル形成部
２０３        底部
２０４        上面
２０５        フレーム部
３００        第１の下側プレート（廃液トレイ）
３０１        凹部（第１の貯留部）
３０２        上面
３０３        凹部形成部
３０４        フレーム部
４００        第１の支持台（上側支持部材）
４０１        底部
４０２        開口部
４０３        上側外壁
４０４        下側外壁
４０５、４０６  凹部
４０７        パッキン（シール部材）
４０８        開口部
５００        第２の支持台（下側支持部材）
５０１        底部
５０２        突出部
５０３        外壁
５０５        凹部
５０６        貫通孔
５０７        パッキン（シール部材）
６００        調整板（スペーサ）
７００        支持体
ｄ１、ｄ２、ｄ３、ｄ４  離間距離
【図１】
2013081939.tif 000006
【図２】
2013081939.tif 000007
【図３】
2013081939.tif 000008
【図４】
2013081939.tif 000009
【図５】
2013081939.tif 000010
【図６】
2013081939.tif 000011
【図７】
2013081939.tif 000012
【図８】
2013081939.tif 000013
【図９】
2013081939.tif 000014
【図１０】
2013081939.tif 000015
【図１１】
2013081939.tif 000016
【図１２】
2013081939.tif 000017
【図１３】
2013081939.tif 000018
【図１４】
2013081939.tif 000019
【図１５】
2013081939.tif 000020
【図１６】
2013081939.tif 000021
【図１７】
2013081939.tif 000022
【図１８】
2013081939.tif 000023
【図１９】
2013081939.tif 000024
【図２０】
2013081939.tif 000025
【図２１】
2013081939.tif 000026
【図２２】
2013081939.tif 000027
【図２３】
2013081939.tif 000028