(57)【要約】【課題】  ポリメラーゼ連鎖反応とそれに伴う電気泳動および電気泳動像の解析を簡便迅速かつ安全に行うためのポリメラーゼ連鎖反応試薬混合液および試薬キットの提供を課題とする。【解決手段】  ポリメラーゼ連鎖反応用緩衝液成分に、核酸増幅の材料となる核酸塩基、比重増加剤の効果を有する炭化水素系化合物、電気泳動進行の指標となる青色色素、核酸に結合し蛍光を発するインターカレーター蛍光色素を、ポリメラーゼ連鎖反応を阻害しない濃度で配合したポリメラーゼ連鎖反応試薬混合液を提供することにより、上記課題を解決する。さらに、遮光効果のあるアルミパウチ）、２倍濃度に調製したポリメラーゼ連鎖反応試薬を充填したマイクロチューブ２、ポリメラーゼ連鎖反応用プラスチックプレート３、シーリングキャップ４、ピペットチップ５により試薬キットを作成することにより、上記課題を解決する。【選択図】図１
0003163051.tif 000002
【実用新案登録請求の範囲】
【請求項１】
ポリメラーゼ連鎖反応に適した酵素緩衝液成分と核酸塩基に加えて、比重増加剤、青色色素、および蛍光色素を含むことを特徴とする、ポリメラーゼ連鎖反応用試薬混合液および試薬キット。
【請求項２】
前項の試薬混合液および試薬キットであって、酵素緩衝液成分と核酸塩基を含まず、比重増加剤、青色色素、および蛍光色素を含むことを特徴とする、ポリメラーゼ連鎖反応用試薬混合液および試薬キット。
【考案の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】  本考案は、生物より抽出されるデオキシリボ核酸を鋳型としてポリメラーゼ連鎖反応により特定遺伝子部分を増幅する試薬混合液および試薬キットであって、ポリメラーゼ連鎖反応終了後に比重増加剤と電気泳動進行の指標となる青色色素からなる「ローディングダイ」を添加混合することなく電気泳動に供することができ、さらに電気泳動終了後に蛍光色素による染色をすることなく紫外線照射による電気泳動像の解析を行うことができることを特徴とする試薬混合液および試薬キットに係わる。
【背景技術】
【０００２】  核酸ポリメラーゼを利用して、生物のＤＮＡ（デオキシリボ核酸）の特定の部分を増幅する、ポリメラーゼ連鎖反応は当業者によく知られている。通常この方法ではアガロースゲルなどを用いた電気泳動により増幅断片の存在および断片長の確認作業が行われる。この作業には、１．反応液に、比重増加剤と電気泳動進行の指標となる青色色素からなる「ローディングダイ」を添加混合する、２．ゲル電気泳動を行う、３．臭化エチジウム等の蛍光色素溶液に浸漬して染色する、４．紫外線照射装置に載せ、ＤＮＡを確認し泳動像を写真撮影する、という工程により行われる。
【考案の開示】
【考案が解決しようとする課題】
【０００３】  上記工程の中で３．については、発がん性のある臭化エチジウム等の化学物質を高濃度で含む染色剤溶液を扱うため危険が伴う。染色には通常３０分〜１時間を要する。泳動槽から染色槽への移し替えは手間がかかるばかりでなく、複数のゲルの取り違い、裏表の間違いなど人為的ミスの原因になる。また、染色水槽の設置に際しては飛沫による汚染を防ぐために周囲に一定のスペースを確保する等の対策を講じる必要がある。また１．については、反応数が非常に多い場合には、手間と時間とピペットチップ等消耗品のコストが無視できない。
本考案の目的は、生物より抽出されるデオキシリボ核酸を鋳型としてポリメラーゼ連鎖反応により特定遺伝子部分を増幅する実験を行う際に、反応終了後に「ローディングダイ」を添加混合することなくそのまま電気泳動に供することができ、さらに電気泳動終了後に臭化エチジウム等の蛍光色素による染色をすることなく紫外線照射による電気泳動像の解析を行うことができるポリメラーゼ連鎖反応試薬混合液および試薬キットを提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００４】  本考案は、核酸ポリメラーゼに適した増幅反応緩衝液の成分に、核酸増幅の材料となる核酸塩基、比重増加の効果を有する炭水化物系化合物、電気泳動進行の指標となる青色色素、さらに核酸に結合して蛍光を発するインターカレーター蛍光色素を、ポリメラーゼによる核酸増幅反応を阻害しない濃度で添加することにより調製される、ポリメラーゼ連鎖反応試薬混合液および試薬キットを提供することにより、上記課題を解決する。
上記の構成によれば、核酸ポリメラーゼを利用して、生物のＤＮＡの特定部分を増幅し、増幅産物の電気泳動を行い、電気泳動後にそのままトランスイルミネータに乗せて遺伝子増幅の状態を観察および写真撮影することが可能となり、簡便かつ安全な遺伝子解析実験が達成される。
【考案の効果】
【０００５】  上述のように、本考案の試薬混合液および試薬キットは、ポリメラーゼ連鎖反応後の電気泳動および電気泳動像解析を、従来よりも簡便迅速かつ安全に実施することを可能とする。
【図面の簡単な説明】
【０００６】
【図１】本考案のポリメラーゼ連鎖反応試薬混合液および試薬キットの一実施例を示す全体図である
【考案を実施するための形態】
【０００７】  ポリメラーゼ連鎖反応用緩衝液成分に、核酸増幅の材料となる核酸塩基、比重増加剤の効果を有する炭水化物系化合物、電気泳動進行の指標となる青色色素、核酸に結合し蛍光を発するインターカレーター蛍光色素を、ポリメラーゼ反応を阻害しない濃度で配合することにより、ポリメラーゼ反応試薬混合液を作成する。作成したポリメラーゼ反応試薬混合液を内包したポリプロピレン製１．５ｍｌ容マイクロチューブ、ポリメラーゼ連鎖反応の支持体となる反応用プラスチックプレート、反応中の蒸発を防ぐためのポリプロピレン製シーリングキャップ、液量測定および混合のためのピペットチップを、遮光効果のあるアルミパウチ（ジップ付きポリ袋）により外装することにより、ポリメラーゼ連鎖反応試薬キットを作成する。
【実施例】
【０００８】    以下、添付図面に従って一実施例を説明する。１は遮光効果のあるアルミパウチ（ジップ付きポリ袋）である。２は２倍濃度に調製したポリメラーゼ連鎖反応試薬混合液を内包したポリプロピレン製１．５ｍｌ容マイクロチューブである。３はポリメラーゼ連鎖反応の支持体となる反応用プラスチックプレートである。４は反応中の蒸発を防ぐためのポリプロピレン製シーリングキャップである。５は液量測定および混合のためのピペットチップである。
【符号の説明】
【０００９】１      外装用遮光袋
２      ポリメラーゼ連鎖反応試薬混合液
３      反応用プレート
４      シーリングキャップ
５      ピペットチップ
【図１】
0003163051.tif 000003
【手続補正書】
【提出日】平成22年7月6日(2010.7.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】実用新案登録請求の範囲
【補正対象項目名】請求項１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項１】
核酸増幅試験を行うための試薬キットであり、少なくとも、比重増加剤、青色色素、および蛍光色素を含む試薬混合液を入れた容器と、遮光袋より構成される、試薬キット。
【手続補正２】
【補正対象書類名】実用新案登録請求の範囲
【補正対象項目名】請求項２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項２】
試薬混合液に酵素緩衝液成分、核酸塩基、および核酸増幅酵素をさらに含む、請求項１に記載の試薬キット。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００１】本考案は、生物より抽出されるデオキシリボ核酸を鋳型としてポリメラーゼ連鎖反応により特定遺伝子部分を増幅する試薬混合液および試薬キットであって、ポリメラーゼ連鎖反応終了後に比重増加剤と電気泳動進行の指標となる青色色素からなる「ローディングダイ」を添加混合することなく電気泳動に供することができ、さらに電気泳動終了後に蛍光色素による染色をすることなく紫外線照射による電気泳動像の解析を行うことができることを特徴とする試薬キットに係わる。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００３】上記工程の中で３．については、発がん性のある臭化エチジウム等の化学物質を高濃度で含む染色剤溶液を扱うため危険が伴う。染色には通常３０分〜１時間を要する。泳動槽から染色槽への移し替えは手間がかかるばかりでなく、複数のゲルの取り違い、裏表の間違いなど人為的ミスの原因になる。また、染色水槽の設置に際しては飛沫による汚染を防ぐために周囲に一定のスペースを確保する等の対策を講じる必要がある。また１．については、反応数が非常に多い場合には、手間と時間とピペットチップ等消耗品のコストが無視できない。  本考案の目的は、生物より抽出されるデオキシリボ核酸を鋳型としてポリメラーゼ連鎖反応により特定遺伝子部分を増幅する実験を行う際に、反応終了後に「ローディングダイ」を添加混合することなくそのまま電気泳動に供することができ、さらに電気泳動終了後に臭化エチジウム等の蛍光色素による染色をすることなく紫外線照射による電気泳動像の解析を行うことができる試薬キットを提供することにある。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００４】本考案は、核酸ポリメラーゼに適した増幅反応緩衝液の成分に、核酸増幅の材料となる核酸塩基、比重増加の効果を有する炭水化物系化合物、電気泳動進行の指標となる青色色素、さらに核酸に結合して蛍光を発するインターカレーター蛍光色素を、ポリメラーゼによる核酸増幅反応を阻害しない濃度で添加することにより調製される、ポリメラーゼ連鎖反応試薬混合液を構成要素とする試薬キットを提供することにより、上記課題を解決する。  上記の構成によれば、核酸ポリメラーゼを利用して、生物のＤＮＡの特定部分を増幅し、増幅産物の電気泳動を行い、電気泳動後にそのままトランスイルミネータに乗せて遺伝子増幅の状態を観察および写真撮影することが可能となり、簡便かつ安全な遺伝子解析実験が達成される。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００５】上述のように、本考案の試薬キットは、ポリメラーゼ連鎖反応後の電気泳動および電気泳動像解析を、従来よりも簡便迅速かつ安全に実施することを可能とする。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００６】
【図１】本考案の核酸増幅試験用試薬キットの一実施例を示す全体図である。