(57)【要約】本明細書では、ｍｉＲ−１７を標的とする修飾オリゴヌクレオチドを使用して、常染色体優性多発性嚢胞腎を含む多発性嚢胞腎の処置のための方法が提供される。【選択図】図１Ａ
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
多発性嚢胞腎の処置方法であって、８〜２５連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を、それを必要とする対象に投与することを含み、前記修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が、ｍｉＲ−１７と相補的である、前記方法。
【請求項２】
前記対象が、多発性嚢胞腎を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記対象が、多発性嚢胞腎を有すると疑われる、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記対象が、前記修飾オリゴヌクレオチドを投与する前に、多発性嚢胞腎を有すると診断されている、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記対象が、前記修飾オリゴヌクレオチドの投与前に、前記対象の腎臓、尿、または血液中のｍｉＲ−１７の増加したレベルを有すると判定された、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記多発性嚢胞腎が、常染色体劣性多発性嚢胞腎または常染色体優性多発性嚢胞腎である、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記多発性嚢胞腎が、常染色体優性多発性嚢胞腎である、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記対象が、ＰＫＤ１遺伝子の変異またはＰＫＤ２遺伝子の変異から選択される変異を有する、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記対象が、増加した両腎容積を有する、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記対象が、高血圧を有する、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記対象が、損なわれた腎機能を有する、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記対象が、腎機能の改善を必要とする、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記投与が、
ａ）前記対象の腎機能を改善し、
ｂ）前記対象の腎機能の悪化を遅延させ、
ｃ）前記対象の両腎容積を低減させ、
ｄ）前記対象の両腎容積の増加を減速させ、
ｅ）前記対象の嚢胞成長を阻害し、
ｆ）前記対象における嚢胞成長の増加を減速させ、
ｇ）前記対象の腎臓痛を低減させ、
ｈ）前記対象の腎臓痛の増加を減速させ、
ｉ）前記対象の腎臓痛の発症を遅延させ、
ｊ）前記対象の高血圧を低減し、
ｋ）前記対象の高血圧の悪化を減速させ、
ｌ）前記対象の高血圧の発症を遅延させ、
ｍ）前記対象の腎臓の線維化を低減させ、
ｎ）前記対象の前記腎臓における線維化の悪化を減速させ、
ｏ）前記対象の末期腎疾患の発症を遅延させ、
ｐ）前記対象の透析までの時間を遅延させ、
ｑ）前記対象の腎移植までの時間を遅延させ、かつ／または
ｒ）前記対象の平均余命を向上させる、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
前記投与が、
ａ）前記対象のアルブミン尿を低減させ、
ｂ）前記対象のアルブミン尿の悪化を減速させ、
ｃ）前記対象のアルブミン尿の発症を遅延させ、
ｄ）前記対象の血尿を低減させ、
ｅ）前記対象の血尿の悪化を減速させ、
ｆ）前記対象の血尿の発症を遅延させ、
ｇ）前記対象の血中尿素窒素を低減させ、
ｈ）前記対象の前記血液中のクレアチニンを低減させ、
ｉ）前記対象のクレアチニンクリアランスを改善し、
ｊ）前記対象のアルブミン：クレアチニン比を低減させ、
ｋ）前記対象の糸球体濾過量を改善し、
ｌ）前記対象の糸球体濾過量の悪化を減速させ、
ｍ）前記対象の前記尿中の好中球ゼラチナーゼ結合性リポカリン（ＮＧＡＬ）タンパク質を低減させ、かつ／または
ｎ）前記対象の前記尿中の腎障害分子−１（ＫＩＭ−１）タンパク質を低減させる、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
ａ）前記対象の両腎容積を測定すること、
ｂ）前記対象の高血圧を測定すること、
ｃ）前記対象の腎臓痛を測定すること、
ｄ）前記対象の前記腎臓の線維化を測定すること、
ｅ）前記対象の前記血液中の血中尿素窒素を測定すること、
ｆ）前記対象の前記血液中のクレアチニンを測定すること、
ｇ）前記対象のクレアチニンクリアランスを測定すること、
ｈ）前記対象のアルブミン尿を測定すること、
ｉ）前記対象のアルブミン：クレアチニン比を測定すること、
ｊ）前記対象の糸球体濾過量を測定すること、
ｋ）前記対象の前記尿中の好中球ゼラチナーゼ結合性リポカリン（ＮＧＡＬ）タンパク質を測定すること、及び／または
ｌ）前記対象の前記尿中の腎障害分子−１（ＫＩＭ−１）タンパク質を測定することを含む、先行請求項の１項に記載の方法。
【請求項１６】
前記両腎容積が、身長補正腎容積である、請求項９、１３、及び１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
前記嚢胞が、前記対象の１つ以上の腎臓に存在する、請求項１３に記載の方法。
【請求項１８】
前記嚢胞が、前記対象の前記肝臓に存在する、請求項１３に記載の方法。
【請求項１９】
降圧薬である少なくとも１つの追加療法を投与することを含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
アンギオテンシンＩＩ変換酵素（ＡＣＥ）阻害薬、アンギオテンシンＩＩ受容体遮断薬（ＡＲＢ）、利尿薬、カルシウムチャネル遮断薬、キナーゼ阻害薬、アドレナリン受容体アンタゴニスト、血管拡張薬、ベンゾジアゼピン、レニン阻害薬、アルドステロン受容体アンタゴニスト、エンドセリン受容体遮断薬、哺乳類ラパマイシン標的（ｍＴＯＲ）阻害薬、ホルモンアナログ、バソプレシン受容体２アンタゴニスト、アルドステロン受容体アンタゴニスト、透析、及び腎臓移植から選択される少なくとも１つの追加療法を投与することを含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
前記アンギオテンシンＩＩ変換酵素（ＡＣＥ）阻害薬が、カプトプリル、エナラプリル、リシノプリル、ベナゼプリル、キナプリル、ホシノプリル、ラミプリル及びから選択される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記アンギオテンシンＩＩ受容体遮断薬（ＡＲＢ）が、カンデサルタン、イルベサルタン、オルメサルタン、ロサルタン、バルサルタン、テルミサルタン、及びエプロサルタンから選択される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
前記バソプレシン受容体２アンタゴニストが、トルバプタンである、請求項２０に記載の方法。
【請求項２４】
前記アルドステロン受容体アンタゴニストが、スピロノラクトンである、請求項２０に記載の方法。
【請求項２５】
前記キナーゼ阻害薬が、ボスチニブ及びＫＤ０１９から選択される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２６】
前記ｍＴＯＲ阻害薬が、エベロリムス、ラパマイシン、及びシロリムスから選択される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２７】
前記ホルモンアナログが、ソマトスタチン及び副腎皮質刺激ホルモンから選択される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２８】
前記修飾オリゴヌクレオチドの前記核酸塩基配列が、ｍｉＲ−１７の前記核酸塩基配列（配列番号１）と、少なくとも９０％相補的であり、少なくとも９５％相補的であり、または１００％相補的である、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２９】
前記修飾オリゴヌクレオチドの前記核酸塩基配列が、前記核酸塩基配列５′−ＧＣＡＣＴＴＴＧ−３′（配列番号３）を含み、前記核酸塩基配列中の各Ｔが独立して、Ｔ及びＵから選択される、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３０】
前記修飾オリゴヌクレオチドが、８〜１２連結ヌクレオシドからなる、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３１】
前記修飾オリゴヌクレオチドが、１２〜２５連結ヌクレオシドからなる、請求項１〜２９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３２】
前記修飾オリゴヌクレオチドが、１５〜２５連結ヌクレオシドからなる、請求項１〜２９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３３】
前記修飾オリゴヌクレオチドが、１７〜２３連結ヌクレオシドからなる、請求項１〜２９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３４】
前記修飾オリゴヌクレオチドが、８、９、１０、１１、または１２連結ヌクレオシドからなる、請求項１〜２９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３５】
前記修飾オリゴヌクレオチドが、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５連結ヌクレオシドからなる、請求項１〜２９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３６】
前記修飾オリゴヌクレオチドが、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、または２２連結ヌクレオシドからなる、請求項１〜２９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３７】
前記修飾オリゴヌクレオチドが、１７、１８、１９、２０、２１、２２、または２３連結ヌクレオシドからなる、請求項１〜２９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３８】
前記修飾オリゴヌクレオチドが、少なくとも１つの修飾ヌクレオシドを含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３９】
前記修飾ヌクレオシドが、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシド、２′−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシド、及びＬＮＡヌクレオシドから選択される、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記修飾オリゴヌクレオチドが、少なくとも１つの修飾ヌクレオシド間連結を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４１】
前記修飾オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間連結が、修飾ヌクレオシド間結合である、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４２】
前記修飾ヌクレオシド間連結が、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結である、請求項４０または４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記化合物が、前記修飾オリゴヌクレオチドからなる、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４４】
治療的有効量の前記化合物を投与することを含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４５】
多発性嚢胞腎の処置のための、８〜２５連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドの使用であって、前記修飾オリゴヌクレオチドの前記核酸塩基配列が、ｍｉＲ−１７と相補的である、前記使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０１５年８月２６日に出願された米国仮出願第６２／２１０，０３１号の優先権の利益を主張するものであり、これは、任意の目的のために、全体として本明細書に参照として組み込まれる。
【０００２】
発明の分野
本明細書では、多発性嚢胞腎の処置のための方法及び組成物が提供される。
【背景技術】
【０００３】
多発性嚢胞腎は、複数の流体で満たされた嚢胞が腎臓及び体内の他の場所に発生する遺伝病である。多発性嚢胞腎は、常染色体劣性（ＡＲＰＫＤ）または常染色体優性（ＡＤＰＫＤ）として遺伝する可能性がある。常染色体優性多発性嚢胞腎は、ＰＫＤ１またはＰＫＤ２遺伝子の変異により引き起こされる。ＡＤＰＫＤは、６０歳までの５０％の患者において、嚢胞形成及び腎臓肥大が、腎不全、最終的に、末期腎疾患をもたらす進行性疾患である。ＡＤＰＫＤ患者は、生涯にわたる透析及び／または腎臓移植を必要とし得る。現時点では、ＡＤＰＫＤを処置するための承認治療薬はない。
【発明の概要】
【０００４】
本明細書では、８〜２５連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む治療的有効量の化合物を、それを必要とする対象に投与することを含む多発性嚢胞腎を処置するための方法が提供され、修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、ｍｉＲ−１７と相補的である。特定の実施形態では、対象は、多発性嚢胞腎を有する。特定の実施形態では、対象は、多発性嚢胞腎を有すると疑われる。
【０００５】
特定の実施形態では、対象は、修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を投与する前に、多発性嚢胞腎を有すると診断されている。一部の実施形態では、対象は、修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を投与する前に、対象の腎臓、尿、または血液中の増加したレベルのｍｉＲ−１７を有すると判定された。
【０００６】
特定の実施形態では、多発性嚢胞腎は、常染色体優性多発性嚢胞腎（ＡＤＰＫＤ）である。一部の実施形態では、多発性嚢胞腎は、常染色体劣性多発性嚢胞腎（ＡＲＰＫＤ）である。一部の実施形態では、対象は、ＰＫＤ１遺伝子の変異を有する。一部の実施形態では、対象は、ＰＫＤ２遺伝子の変異を有する。
【０００７】
特定の実施形態では、対象は、増加した両腎容積を有する。一部の実施形態では、対象は、高血圧を有する。一部の実施形態では、対象は、損なわれた腎機能を有する。一部の実施形態では、対象は、腎機能の改善を必要とする。
【０００８】
本明細書で提供される実施形態のいずれかでは、ｍｉＲ−１７と相補的な修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物の、多発性嚢胞腎を有する対象への投与は、対象における腎機能を改善し；対象の腎機能の悪化を遅延させ；対象の両腎容積を低減させ；対象の両腎容積の増加を減速させ；対象の嚢胞成長を阻害し；対象の嚢胞成長の増加を減速させ；対象の腎臓痛を低減させ；対象の腎臓痛の増加を減速させ；対象の腎臓痛の発症を遅延させ；対象の高血圧を低減させ；対象の高血圧の悪化を減速させ；対象の高血圧の発症を遅延させ；対象の腎臓の線維化を低減させ；対象の腎臓の線維化の悪化を減速させ；対象の末期腎疾患の発症を遅延させ；対象の透析までの時間を遅延させ；対象の腎移植までの時間を遅延させ：かつ／または対象の平均余命を向上させ得る。
【０００９】
本明細書で提供される実施形態のいずれかでは、ｍｉＲ−１７と相補的な修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物の、多発性嚢胞腎を有する対象への投与は、対象におけるアルブミン尿を低減させ、対象のアルブミン尿の悪化を減速させ；対象のアルブミン尿の発症を遅延させ；対象の血尿を低減させ；対象の血尿の悪化を減速させ；対象の血尿の発症を遅延させ；対象の血中尿素窒素を低減させ；対象の血液中のクレアチニンを低減させ；対象のクレアチニンクリアランスを改善し；対象のアルブミン：クレアチニン比を低減させ；対象の糸球体濾過量を改善し；対象の糸球体濾過量の悪化を減速させ；対象の尿中の好中球ゼラチナーゼ結合性リポカリン（ＮＧＡＬ）タンパク質を低減させ；かつ／または対象の尿中の腎障害分子−１（ＫＩＭ−１）タンパク質を低減させ得る。
【００１０】
本明細書で提供される実施形態のいずれかは、対象の両腎容積を測定すること；対象の高血圧を測定すること；対象の腎臓痛を測定すること；対象の腎臓の線維化を測定すること；対象の血液中の血中尿素窒素を測定すること；対象の血液中のクレアチニンを測定すること；対象のクレアチニンクリアランスを測定すること；対象のアルブミン尿を測定すること；対象のアルブミン：クレアチニン比を測定すること；対象の糸球体濾過量を測定すること；対象の尿中の好中球ゼラチナーゼ結合性リポカリン（ＮＧＡＬ）タンパク質を測定すること；及び／または対象の尿中の腎障害分子−１（ＫＩＭ−１）タンパク質を測定すること、を含んでもよい。
【００１１】
特定の実施形態では、両腎容積は、身長補正腎容積である。
【００１２】
特定の実施形態では、嚢胞は、対象の腎臓に存在する。一部の実施形態では、嚢胞は、対象の腎臓及び肝臓に存在する。
【００１３】
本明細書で提供される実施形態のいずれかは、抗高血圧薬である少なくとも１つの追加療法を投与することを含んでもよい。
【００１４】
本明細書で提供される実施形態のいずれかは、アンギオテンシンＩＩ変換酵素（ＡＣＥ）阻害薬、アンギオテンシンＩＩ受容体遮断薬（ＡＲＢ）、利尿薬、カルシウムチャネル遮断薬、キナーゼ阻害薬、アドレナリン受容体アンタゴニスト、血管拡張薬、ベンゾジアゼピン、レニン阻害薬、アルドステロン受容体アンタゴニスト、エンドセリン受容体遮断薬、哺乳類ラパマイシン標的（ｍＴＯＲ）阻害薬、ホルモンアナログ、バソプレシン受容体２アンタゴニスト、アルドステロン受容体アンタゴニスト、透析、及び腎臓移植から選択される少なくとも１つの追加療法を投与することを含んでもよい。
【００１５】
特定の実施形態では、バソプレシン受容体２アンタゴニストは、トルバプタンである。
【００１６】
特定の実施形態では、アンギオテンシンＩＩ変換酵素（ＡＣＥ）阻害薬は、カプトプリル、エナラプリル、リシノプリル、ベナゼプリル、キナプリル、ホシノプリル、ラミプリル、シラザプリル、ペリンドプリル、及びトランドラプリルから選択される。
【００１７】
特定の実施形態では、アンギオテンシンＩＩ受容体遮断薬（ＡＲＢ）は、カンデサルタン、イルベサルタン、オルメサルタン、ロサルタン、バルサルタン、テルミサルタン及びエプロサルタンから選択される。
【００１８】
特定の実施形態では、ＡＣＥ阻害薬は、０．５〜１ｍｇ／ｍ２／日、１〜６ｍｇ／ｍ２／日、１〜２ｍｇ／ｍ２／日、２〜４ｍｇ／ｍ２／日、または４〜８ｍｇ／ｍ２／日の範囲の用量で投与される。
【００１９】
特定の実施形態では、ＡＲＢは、６．２５〜１５０ｍｇ／ｍ２／日の範囲の用量で投与される。これらの実施形態のいずれかでは、ＡＲＢは、６．２５ｍｇ／ｍ２／日、１０ｍｇ／ｍ２／日、１２．５ｍｇ／ｍ２／日、１８．７５ｍｇ／ｍ２／日、３７．５ｍｇ／ｍ２／日、５０ｍｇ／ｍ２／日、または１５０ｍｇ／ｍ２／日の用量で投与される。
【００２０】
特定の実施形態では、少なくとも１つの追加療法は、アルドステロン受容体アンタゴニストである。特定の実施形態では、アルドステロン受容体アンタゴニストは、スピロノラクトンである。特定の実施形態では、スピロノラクトンは、１日当たり１０〜３５ｍｇの範囲の用量で投与される。特定の実施形態では、スピロノラクトンは、１日当たり２５ｍｇの用量で投与される。
【００２１】
特定の実施形態では、キナーゼ阻害薬は、ボスチニブ及びＫＤ０１９から選択される。
【００２２】
特定の実施形態では、ｍＴＯＲ阻害薬は、エベロリムス、ラパマイシン、及びシロリムスから選択される。
【００２３】
特定の実施形態では、ホルモンアナログは、ソマトスタチン及び副腎皮質刺激ホルモンから選択される。
【００２４】
本明細書で提供される実施形態のいずれかでは、修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、ｍｉＲ−１７の核酸塩基配列（配列番号１）と、少なくとも９０％相補的であり、少なくとも９５％相補的であり、または１００％相補的である。
【００２５】
本明細書で提供される実施形態のいずれかでは、修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、核酸塩基配列５′−ＧＣＡＣＴＴＴＧ−３′（配列番号３）を含み、核酸塩基配列中の各Ｔは独立して、Ｔ及びＵから選択される。
【００２６】
本明細書で提供される実施形態のいずれかでは、修飾オリゴヌクレオチドは、８〜２５、８〜１２、１２〜２５、１５〜２５、または１７〜２３連結ヌクレオシドからなる。本明細書で提供される実施形態のいずれかでは、修飾オリゴヌクレオチドは、８、９、１０、１１、または１２連結ヌクレオシドからなる。本明細書で提供される実施形態のいずれかでは、修飾オリゴヌクレオチドは、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５連結ヌクレオシドからなる。本明細書で提供される実施形態のいずれかでは、修飾オリゴヌクレオチドは、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５連結ヌクレオシドからなる。本明細書で提供される実施形態のいずれかでは、修飾オリゴヌクレオチドは、１７、１８、１９、２０、２１、２２、または２３連結ヌクレオシドからなる。
【００２７】
本明細書で提供される実施形態のいずれかでは、修飾オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの修飾ヌクレオシドを含む。修飾ヌクレオシドは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシド、２′−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシド、及びＬＮＡヌクレオシドから選択され得る。修飾オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの修飾ヌクレオシド間連結を含んでもよい。修飾オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間連結は、修飾ヌクレオシド間連結であり得る。特定の実施形態では、修飾ヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結である。
【００２８】
本明細書で提供される実施形態のいずれかでは、化合物は、修飾オリゴヌクレオチドからなる。
【００２９】
本明細書で提供される実施形態のいずれかでは、ｍｉＲ−１７と相補的な修飾オリゴヌクレオチドを含む治療的有効量の化合物が、対象に投与される。
【００３０】
本明細書では、多発性嚢胞腎の処置のために、８〜２５連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物の使用が提供され、修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、ｍｉＲ−１７と相補的である。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１Ａ】ｍｉＲ−１７〜９２ならびにそのパラログクラスターであるｍｉＲ−１０６ａ〜３６３及びｍｉＲ−１０６ｂ〜２５のゲノム機構。
【図１Ｂ】ｍｉＲ−１７、ｍｉＲ−１８、ｍｉＲ−１９、及びｍｉＲ−９２  ｍｉｃｒｏＲＮＡファミリー。
【図２Ａ】抗ｍｉＲ−１７を用いるＰｃｙマウスの処置は、腎重量対体重比の低減をもたらす。
【図２Ｂ】抗ｍｉＲ−１７用いるＰｃｙマウスの処置は、嚢胞指数をもたらす。
【発明を実施するための形態】
【００３２】
別途定義しない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者により一般に理解されるのと同じ意味を有する。具体的な定義が提供されない限り、本明細書に記載の分析化学、合成有機化学、ならびに医薬的及び薬学的化学に関連して利用される命名法、ならびにそれらの手順及び技術は、当該技術分野で周知かつ一般に使用されるものである。本明細書の用語の定義が複数ある場合は、このセクションの定義が優先される。化学合成、化学分析、薬剤調製、製剤、及び送達、ならびに対象の処置のために、標準的な技術が使用され得る。特定のこのような技術及び手順は、例えば、“Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ”  Ｅｄｉｔｅｄ  ｂｙ  Ｓａｎｇｖｉ  ａｎｄ  Ｃｏｏｋ，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  Ｄ．Ｃ．，１９９４；及び“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ′ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，”Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１８ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９０；に見出されることがあり、任意の目的のために本明細書で参照により組み込まれる。許可されている場合、別途記載のない限り、本明細書に全開示を通して言及された全ての特許、特許出願、公開出願及び刊行物、ＧＥＮＢＡＮＫ配列、ウェブサイト、ならびに他の公表された資料は、全体として参照により組み込まれる。ＵＲＬまたは他のこのような識別子若しくはアドレスに言及される場合、このような識別子が変わる可能性があり、インターネット上の特定の情報が変わる可能性があるが、同等の情報は、インターネットを検索することにより見出すことができることが理解される。それへの言及は、このような情報の入手可能性及び公的普及を表す。
【００３３】
本組成物及び方法が開示及び記載される前に、本明細書に使用される用語は、特定の実施形態を説明する目的のみのものであり、限定されることを意図するものではないことが理解されるべきである。明細書及び添付の特許請求の範囲に使用される場合、単数形の「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈に別途明示のない限り、複数の指示対象を含むことを留意しなければならない。
【００３４】
定義
「多発性嚢胞腎」または「ＰＫＤ」は、複数の嚢胞が少なくとも１つの腎臓に生じて、罹患した腎臓（複数可）の肥大及び腎機能の進行性喪失がもたらされる遺伝型の腎疾患である。
【００３５】
「常染色体優性多発性嚢胞腎」または「ＡＤＰＫＤ」は通常、ＰＫＤ１及び／またはＰＫＤ２遺伝子における１つ以上の遺伝子変異により引き起こされる。ＡＤＰＫＤの８５％は、１６番染色体に位置するＰＫＤ１の変異により引き起こされ、残りのＡＤＰＫＤ症例の大部分は、４番染色体に位置するＰＫＤ２の変異により引き起こされる。
【００３６】
「常染色体劣性多発性嚢胞腎」または「ＡＲＰＫＤ」は通常、６番染色体上に位置するＰＫＨＤ１遺伝子の１つ以上の遺伝子変異により引き起こされる。ＡＲＰＫＤを有する新生児の多くとも５０％が、子宮内腎疾患の合併症で死亡し、生き延びた者の約３分の１は、１０年以内に末期腎疾患（ＥＳＲＤ）を発生する。
【００３７】
「両腎容積」または「ＴＫＶ」は、核磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャン、または超音波（ＵＳ）イメージングにより決定され得る両腎容積の測定値であり、容積は、楕円体容積式（超音波の場合）などの標準的な方法により、または定量的立体解析若しくは境界トレース（ＣＴ／ＭＲＩの場合）により計算される。ＴＫＶは一般に、ＡＤＰＫＤ患者において徐々に増加し、腎機能の低下と相関して増加する。
【００３８】
「身長補正両腎容積」または「ＨｔＴＫＶ」は、単位高さ当たりの両腎容積の尺度である。ＨｔＴＫＶ値が≧６００ｍｌ／ｍの患者は、８年以内にステージ３の慢性腎疾患を発生すると予測される。
【００３９】
「腎臓痛」は、医療休暇、薬理学的処置（麻酔薬若しくは最後の手段の鎮痛薬）、または侵襲的介入を必要とする臨床的に有意な腎臓痛を意味する。
【００４０】
「悪化する高血圧」は、高血圧処置の増加を必要とする血圧の変化を意味する。
【００４１】
「線維化」は、器官または組織における過剰な線維性結合組織の形成または発生を意味する。
【００４２】
特定の実施形態では、線維化は、修復または反応プロセスとして生じる。
【００４３】
特定の実施形態では、線維化は、損傷または障害に応答して生じる。用語「線維化」は、器官または組織の正常な構成要素としての線維組織の形成とは対照的に、修復または反応プロセスとしての器官または組織における過剰な線維性結合組織の形成または発生と理解されるべきである。
「血尿」は、尿中の赤血球の存在を意味する。
【００４４】
「アルブミン尿」は、尿中の過剰のアルブミンの存在を意味し、正常アルブミン尿、正常高値アルブミン尿、微量アルブミン尿、及び顕性アルブミン尿を含むが、これらに限定されない。通常、足細胞、糸球体基底膜、及び内皮細胞からなる糸球体濾過の透過障壁は、血清タンパク質が尿中に漏出することを防ぐ。アルブミン尿は、糸球体濾過の透過障壁の障害を反映し得る。アルブミン尿は、２４時間尿試料、一晩尿試料、またはスポット尿試料から計算され得る。
【００４５】
「正常高値アルブミン尿」は、（ｉ）１５〜＜３０ｍｇの２４時間当たりのアルブミンの尿中への排泄、及び／あるいは（ｉｉ）男性では、１．２５〜＜２．５ｍｇ／ｍｍｏｌ（若しくは１０〜＜２０ｍｇ／ｇ）、または女性では、１．７５〜＜３．５ｍｇ／ｍｍｏｌ（若しくは１５〜＜３０ｍｇ／ｇ）のアルブミン／クレアチニン比を特徴とする上昇したアルブミン尿を意味する。
【００４６】
「微量アルブミン尿」は、（ｉ）３０〜３００ｍｇの２４時間当たりのアルブミンの尿中への排泄、及び／あるいは（ｉｉ）男性では、２．５〜＜２５ｍｇ／ｍｍｏｌ（若しくは２０〜＜２００ｍｇ／ｇ）、または女性では、３．５〜＜３５ｍｇ／ｍｍｏｌ（若しくは３０〜＜３００ｍｇ／ｇ）のアルブミン／クレアチニン比を特徴とする上昇したアルブミン尿を意味する。
【００４７】
「顕性アルブミン尿」は、３００ｍｇを超える２４時間当たりのアルブミンの尿中への排泄、及び／または（ｉｉ）男性では、＞２５ｍｇ／ｍｍｏｌ（若しくは＞２００ｍｇ／ｇ）、若しくは女性では、＞３５ｍｇ／ｍｍｏｌ（若しくは＞３００ｍｇ／ｇ）のアルブミン／クレアチニン比を特徴とする上昇したアルブミン尿を意味する。
【００４８】
「アルブミン／クレアチニン比」は、尿中クレアチニン（ｇ／ｄＬ）当たりの尿中アルブミン（ｍｇ／ｄＬ）の比を意味し、ｍｇ／ｇとして表される。特定の実施形態では、アルブミン／クレアチニン比は、スポット尿試料から計算されることがあり、２４時間にわたってアルブミン排泄の推定値として使用され得る。
【００４９】
「推定糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）」または「糸球体濾過量（ＧＦＲ）」は、腎臓が、どの程度クレアチニンを濾過するかの測定値を意味し、血液が、毎分どの程度糸球体を通過するかの推定値として使用される。正常な結果は、９０〜１２０ｍＬ／分／１．７３ｍ２の範囲であり得る。３ヶ月以上、６０ｍＬ／分／１．７３ｍ２未満のレベルは、慢性腎疾患の指標となり得る。１５ｍＬ／ｍｉｎ／１．７３ｍ２未満のレベルは、腎不全の指標となり得る。
【００５０】
「タンパク質尿症」は、尿中に過剰の血清タンパク質が存在することを意味する。タンパク尿は、２４時間当たり、＞２５０ｍｇのタンパク質の尿中への排泄、及び／または≧０．２０ｍｇ／ｍｇの尿タンパク質対クレアチニン比を特徴とし得る。タンパク尿と関連して上昇する血清タンパク質は、アルブミンを含むが、これらに限定されない。
【００５１】
「血中尿素窒素」または「ＢＵＮ」は、尿素形態の血液中の窒素量の尺度を意味する。肝臓は、タンパク質の消化の廃棄物として、尿素サイクルにおいて尿素を生成し、尿素は、腎臓により血液から除去される。正常なヒト成人の血液は、１００ｍｌの血液当たり７〜２１ｍｇ（７〜２１ｍｇ／ｄＬ）の間の尿素窒素を含有し得る。血中尿素窒素の測定は、腎臓の健康の指標として使用される。腎臓が、血液から尿素を正常に除去できない場合、対象のＢＵＮが上昇する。
【００５２】
「末期腎疾患（ＥＳＲＤ）」は、腎機能の完全またはほぼ完全な不全を意味する。
【００５３】
「損なわれた腎機能」は、正常な腎機能と比較して低減した腎機能を意味する。
【００５４】
「の悪化を減速させる」及び「悪化を減速させる」は、病状が、進行した状態に移行する速度を低減させることを意味する。
【００５５】
「透析までの時間を遅延させる」は、透析処置の必要性を遅延させるような十分な腎機能を維持することを意味する。
【００５６】
「腎移植への時間を遅延させる」は、腎臓移植の必要性を遅延させるような十分な腎機能を維持することを意味する。
【００５７】
「平均余命を向上させる」は、対象の疾患の１つ以上の症状を処置することにより対象の寿命を長くすることを意味する。
【００５８】
「対象」は、処置または治療のために選択されたヒトまたは非ヒト動物を意味する。
【００５９】
「それを必要とする対象」は、治療または処置を必要とすると確認される対象を意味する。
【００６０】
「有すると疑われる対象」は、疾患の１つ以上の臨床指標を示す対象を意味する。
【００６１】
「投与すること」は、対象に、医薬品または組成物を提供することを意味し、医療専門家による投与及び自己投与を含むが、これらに限定されない。
【００６２】
「非経口投与」は、注射または注入による投与を意味する。
【００６３】
非経口投与は、皮下投与、静脈内投与、及び筋肉内投与を含むが、これらに限定されない。
【００６４】
「皮下投与」は、皮膚直下への投与することを意味する。
【００６５】
「静脈内投与」は、静脈内への投与を意味する。
【００６６】
「付随投与する」は、２つ以上の薬剤を、同時に患者に、双方の薬理効果が現れる任意の仕方で同時投与することを指す。付随投与は、双方の薬剤が、単一の医薬組成物で、同じ剤形で、または同じ投与経路で、投与される必要はない。双方の薬剤の効果が、同時に現れる必要はない。効果は、一定期間わずかに重なり合う必要があり、同一の広がりを持つ必要はない。
【００６７】
「期間」は、活性または事象が継続する期間を意味する。特定の実施形態では、処置期間は、医薬品または医薬組成物の用量が投与される期間である。
【００６８】
「治療」は、疾患の処置方法を意味する。特定の実施形態では、治療は、１つ以上の医薬品の、疾患を有する対象への投与を含むが、これに限定されない。
【００６９】
「処置する」は、疾患の治癒または疾患の少なくとも１つの指標の改善に使用される１つ以上の具体的な手順を適用することを意味する。特定の実施形態では、具体的な手順は、１つ以上の医薬品の投与である。特定の実施形態では、ＰＫＤの処置は、両腎容積を低減させること、腎機能を改善すること、高血圧を低減させること、及び／または腎臓痛を低減させることを含むが、これに限定されない。
【００７０】
「を改善する」は、状態または疾患の少なくとも１つの指標の重症度を下げることを意味する。特定の実施形態では、改善は、状態または疾患の１つ以上の指標の進行における遅延化または減速化を含む。インジケータの重症度は、当業者らに既知の主観的または客観的尺度により判定され得る。
【００７１】
「発生のリスクがある」は、対象が、状態または疾患を発生する素因を有する状態を意味する。特定の実施形態では、状態または疾患を発生するリスクがある対象は、状態または疾患の１つ以上の症状を示すが、状態または疾患と診断される十分な数の症状を示さない。特定の実施形態では、状態または疾患を発生するリスクがある対象は、状態または疾患の１つ以上の症状を示すが、状態または疾患と診断されるのに必要な程度より低い。
【００７２】
「の発症を予防する」は、疾患または状態を発生するリスクのある対象において、状態または疾患の発生を予防することを意味する。特定の実施形態では、疾患または状態を発生するリスクのある対象は、すでに疾患または状態を有する対象が受けた処置と同様の処置を受ける。
【００７３】
「の発症を遅延させる」は、状態または疾患を発生するリスクのある対象の疾患または状態の発生を遅延させることを意味する。特定の実施形態では、疾患または状態を発生するリスクのある対象は、すでに疾患または状態を有する対象が受けた処置と同様の処置を受ける。
【００７４】
「治療薬」は、疾患の治癒、改善または予防に使用される医薬品を意味する。
【００７５】
「用量」は、単回投与で提供される医薬品の特定量を意味する。特定の実施形態では、用量は、２つ以上のボーラス、錠剤、または注射で投与され得る。例えば、皮下投与が所望される特定の実施形態では、所望の用量は、単回注射では容易に収容されない容積を必要とする。このような実施形態では、所望の用量を達成するために、２回以上の注射が使用され得る。特定の実施形態では、個体における注射部位反応を最小限に抑えるために、用量が、２回以上の注射で投与され得る。特定の実施形態では、用量は低速注入として投与される。
【００７６】
「投薬単位」は、医薬品が提供される形態を意味する。特定の実施形態では、投薬単位は、凍結乾燥されたオリゴヌクレオチドを含有するバイアルである。特定の実施形態では、投薬単位は、再構成されたオリゴヌクレオチドを含有するバイアルである。
【００７７】
「治療的有効量」は、動物に治療的有用性を提供する医薬品の量を指す。
【００７８】
「医薬組成物」は、医薬品を含む個体に投与するのに適した物質の混合物を意味する。例えば、医薬組成物は、滅菌水溶液を含んでもよい。
【００７９】
「医薬品」は、対象に投与された時に治療効果を提供する物質を意味する。
【００８０】
「活性薬剤成分」は、所望の効果を提供する医薬組成物中の物質を意味する。
【００８１】
「薬学的に許容される塩」は、本明細書で提供される化合物の生理学的及び薬学的に許容される塩、すなわち、化合物の所望の生物学的活性を保持し、対象に投与された場合に、望ましくない毒物学的影響を有さない塩を意味する。本明細書で提供される化合物の非限定例的な薬学的に許容される塩としては、ナトリウム及びカリウム塩形態が挙げられる。本明細書で使用される「化合物」という用語は、具体的に別途指示のない限り、その薬学的に許容される塩を含む。
【００８２】
「改善された器官機能」は、器官機能の正常範囲への変化を意味する。特定の実施形態では、器官機能は、対象の血液または尿中に見出される分子を測定することにより評価される。例えば、特定の実施形態では、腎機能の改善は、血中尿素窒素の低減、タンパク尿の低減、アルブミン尿の低減などにより測定される。
【００８３】
「許容可能な安全性プロファイル」は、臨床的に許容される限度内にある副作用のパターンを意味する。
【００８４】
「副作用」は、所望の効果以外の処置に起因する生理学的応答を意味する。特定の実施形態では、副作用は、注射部位反応、肝機能検査異常、腎機能異常、肝毒性、腎毒性、中枢神経系異常、及びミオパチーを含むが、これらに限定されない。このような副作用は、直接的または間接的に検出され得る。例えば、血清中のアミノトランスフェラーゼレベルの増加は、肝毒性または肝機能異常を示し得る。例えば、ビリルビンの増加は、肝毒性または肝機能異常を示し得る。
【００８５】
「対象服薬遵守」は、推奨または処方された療法の対象による厳守を意味する。
【００８６】
「を服薬遵守する」は、推奨された療法の対象による厳守を意味する。
【００８７】
「推奨療法」は、疾患の処置、改善、または予防のために医療専門家が推奨する処置を意味する。
【００８８】
本明細書で使用される「血液」という用語は、全血及び血液画分、例えば、血清及び血漿、を包含する。
【００８９】
「抗ｍｉＲ」は、ｍｉｃｒｏＲＮＡと相補的な核酸塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを意味する。特定の実施形態では、抗ｍｉＲは、修飾オリゴヌクレオチドである。
【００９０】
「ｍｉＲ−Ｘ」が特定のｍｉｃｒｏＲＮＡを示す「抗ｍｉＲ−Ｘ」は、ｍｉＲ−Ｘと相補的な核酸塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを意味する。特定の実施形態では、抗ｍｉＲ−Ｘは、ｍｉＲ−Ｘと完全に相補的（すなわち、１００％相補的）である。特定の実施形態では、抗ｍｉＲ−Ｘは、ｍｉＲ−Ｘと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％相補的である。特定の実施形態では、抗ｍｉＲ−Ｘは、修飾オリゴヌクレオチドである。
【００９１】
「ｍｉＲ−１７」は、核酸塩基配列ＣＡＡＡＧＵＧＣＵＵＡＣＡＧＵＧＣＡＧＧＵＡＧ（配列番号１）を有する成熟ｍｉＲＮＡを意味する。
【００９２】
「ｍｉＲ−１７ステムループ配列」は、核酸塩基配列ＧＵＣＡＧＡＡＵＡＡＵＧＵＣＡＡＡＧＵＧＣＵＵＡＣＡＧＵＧＣＡＧＧＵＡＧＵＧＡＵＡＵＧＵＧＣＡＵＣＵＡＣＵＧＣＡＧＵＧＡＡＧＧＣＡＣＵＵＧＵＡＧＣＡＵＵＡＵＧＧＵＧＡＣ（配列番号２）を有するステムループ配列を意味する。
【００９３】
「ｍｉＲ−１７  ２〜７シード配列」は、配列番号１の２〜７位の核酸塩基配列であるＡＡＡＧＵＧを意味する。
【００９４】
「ｍｉＲ−１７ファミリーメンバー」は、ｍｉＲ−１７  ２〜７シード配列を含む核酸塩基配列を有する成熟ｍｉＲＮＡを意味する。
【００９５】
「ｍｉＲ−１７ファミリー」は、それぞれがｍｉＲ−１７  ２〜７シード配列を含む核酸塩基配列を有するｍｉＲＮＡの群を意味する。
【００９６】
「標的核酸」は、オリゴマー化合物がハイブリダイズするように設計される核酸を意味する。
【００９７】
「標的化」は、標的核酸にハイブリダイズする核酸塩基配列の設計及び選択のプロセスを意味する。
【００９８】
「に標的化される」は、標的核酸へのハイブリダイゼーションを可能にする核酸塩基配列を有することを意味する。
【００９９】
「調節」は、機能、量、または活性の摂動を意味する。特定の実施形態では、調節は、機能、量、または活性の増加を意味する。特定の実施形態では、調節は、機能、量、または活性の減少を意味する。
【０１００】
「発現」は、遺伝子のコード化された情報が、細胞内に存在及び作用する構造に変換される任意の機能及びステップを意味する。
【０１０１】
「核酸塩基配列」は、任意の糖、連結、及び／または核酸塩基修飾と独立して、通常は５′→３′方向に列挙されたオリゴマー化合物または核酸中の連続した核酸塩基の順序を意味する。
【０１０２】
「連続核酸塩基」は、核酸中で互いに直接隣接する核酸塩基を意味する。
【０１０３】
「核酸塩基相補性」は、２核酸塩基が水素結合を介して非共有結合的に対合する能力を意味する。
【０１０４】
「相補的」は、１つの核酸が別の核酸またはオリゴヌクレオチドにハイブリダイズすることができることを意味する。特定の実施形態では、相補的は、標的核酸にハイブリダイズすることができるオリゴヌクレオチドを指す。
【０１０５】
「完全に相補的」は、オリゴヌクレオチドの各核酸塩基が、標的核酸中の対応する各位置で核酸塩基と対合することができることを意味する。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ｍｉｃｒｏＲＮＡと完全に相補的であり、すなわち、オリゴヌクレオチドの各核酸塩基は、ｍｉｃｒｏＲＮＡ中の対応する位置の核酸塩基と相補的である。修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉｃｒｏＲＮＡと完全に相補的であり得、ｍｉｃｒｏＲＮＡの長さよりも少ない数の連結ヌクレオシドを有する。例えば、オリゴヌクレオチドの各核酸塩基がｍｉｃｒｏＲＮＡ中の対応する位置の核酸塩基と相補的である１６連結ヌクレオシドを有するオリゴヌクレオチドは、ｍｉｃｒｏＲＮＡと完全に相補的である。特定の実施形態では、各核酸塩基がｍｉｃｒｏＲＮＡステムループ配列の領域内の核酸塩基と相補性を有するオリゴヌクレオチドは、ｍｉｃｒｏＲＮＡステムループ配列と完全に相補的である。
【０１０６】
「パーセント相補性」は、標的核酸の等しい長さの部分と相補的であるオリゴヌクレオチドの核酸塩基の百分率を意味する。パーセント相補性は、標的核酸中の対応する位置の核酸塩基と相補的であるオリゴヌクレオチドの核酸塩基の数を、オリゴヌクレオチド中の核酸塩基の総数で除することにより計算される。
【０１０７】
「パーセント同一性」は、第１の核酸中の核酸塩基の総数で除する、第２の核酸中の対応する位置の核酸塩基と同一である第１の核酸中の核酸塩基の数を意味する。特定の実施形態では、第１の核酸は、ｍｉｃｒｏＲＮＡであり、第２の核酸は、ｍｉｃｒｏＲＮＡである。特定の実施形態では、第１の核酸は、オリゴヌクレオチドであり、第２の核酸は、オリゴヌクレオチドである。
【０１０８】
「ハイブリダイズする」は、核酸塩基相補性を介して生じる相補的核酸のアニーリングを意味する。
【０１０９】
「ミスマッチ」は、第２の核酸の対応する位置の核酸塩基とＷａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ対合することができない第１の核酸の核酸塩基を意味する。
【０１１０】
核酸塩基配列の文脈における「同一」は、糖、連結、及び／または核酸塩基修飾と独立して、かつ存在する任意のピリミジンのメチル状態と独立して、同じ核酸塩基配列を有することを意味する。
【０１１１】
「ｍｉｃｒｏＲＮＡ」は、酵素Ｄｉｃｅｒによるｐｒｅ−ｍｉｃｒｏＲＮＡの切断の生成物である、１８〜２５の間の核酸塩基長の内因性ノンコーディングＲＮＡを意味する。成熟ｍｉｃｒｏＲＮＡの例は、ｍｉＲＢａｓｅ（ｈｔｔｐ：／／ｍｉｃｒｏｒｎａ．ｓａｎｇｅｒ．ａｃ．ｕｋ／）として知られるｍｉｃｒｏＲＮＡデータベースに見出される。特定の実施形態では、ｍｉｃｒｏＲＮＡは、「ｍｉｃｒｏＲＮＡ」または「ｍｉＲ」と略記される。
【０１１２】
「Ｐｒｅ−ｍｉｃｒｏＲＮＡ」または「ｐｒｅ−ｍｉＲ」は、Ｄｒｏｓｈａとして知られる二本鎖ＲＮＡ特異的リボヌクレアーゼによるｐｒｉ−ｍｉＲの切断の生成物であるヘアピン構造を有するノンコーディングＲＮＡを意味する。
【０１１３】
「ステムループ配列」は、ヘアピン構造を有し、かつ成熟ｍｉｃｒｏＲＮＡ配列を含有するＲＮＡを意味する。Ｐｒｅ−ｍｉｃｒｏＲＮＡ配列及びステムループ配列は、重複し得る。ステムループ配列の例は、ｍｉＲＢａｓｅ（ｈｔｔｐ：／／ｍｉｃｒｏｒｎａ．ｓａｎｇｅｒ．ａｃ．ｕｋ／）として知られるｍｉｃｒｏＲＮＡデータベースに見出される。
【０１１４】
「Ｐｒｉ−ｍｉｃｒｏＲＮＡ」または「ｐｒｉ−ｍｉＲ」は、二本鎖ＲＮＡ特異的リボヌクレアーゼＤｒｏｓｈａの基質であるヘアピン構造を有するノンコーディングＲＮＡを意味する。
【０１１５】
「ｍｉｃｒｏＲＮＡ前駆体」は、ゲノムＤＮＡに由来し、かつ１つ以上のｍｉｃｒｏＲＮＡ配列を含むノンコーディング構造化ＲＮＡを含む転写物を意味する。例えば、特定の実施形態では、ｍｉｃｒｏＲＮＡ前駆体は、ｐｒｅ−ｍｉｃｒｏＲＮＡである。特定の実施形態では、ｍｉｃｒｏＲＮＡ前駆体は、ｐｒｉ−ｍｉｃｒｏＲＮＡである。
【０１１６】
「ｍｉｃｒｏＲＮＡ制御転写物」は、ｍｉｃｒｏＲＮＡにより制御される転写物を意味する。
【０１１７】
「シード配列」は、成熟ｍｉｃｒｏＲＮＡ配列の５′末端の核酸塩基１〜９のうちの６〜８連続核酸塩基を含む核酸塩基配列を意味する。
【０１１８】
「シードマッチ配列」は、シード配列と相補的であり、かつシード配列と同じ長さである核酸塩基配列を意味する。
【０１１９】
「オリゴマー化合物」は、複数の連結モノマーサブユニットを含む化合物を意味する。オリゴマー化合物は、オリゴヌクレオチドを含む。
【０１２０】
「オリゴヌクレオチド」は、複数の連結ヌクレオシドを含む化合物を意味し、これらのそれぞれは、互いに独立して、修飾または非修飾である可能性がある。
【０１２１】
「天然に存在するヌクレオシド間連結」は、ヌクレオシドの間の３′→５′ホスホジエステル連結を意味する。
【０１２２】
「天然糖」は、ＤＮＡ（２′−Ｈ）またはＲＮＡ（２′−ＯＨ）に見出される糖を意味する。
【０１２３】
「ヌクレオシド間連結」は、隣接するヌクレオシドの間の共有連結を意味する。
【０１２４】
「連結ヌクレオシド」は、共有連結により結合しているヌクレオシドを意味する。
【０１２５】
「核酸塩基」は、別の核酸塩基と非共有的に対合することができる複素環式部分を意味する。
【０１２６】
「ヌクレオシド」は、糖部分に連結された核酸塩基を意味する。
【０１２７】
「ヌクレオチド」は、ヌクレオシドの糖部分に共有連結されたリン酸基を有するヌクレオシドを意味する。
【０１２８】
多数の連結ヌクレオシド「からなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物」は、特定数の連結ヌクレオシドを有する修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を意味する。従って、化合物は、さらなる置換基またはコンジュゲートを含んでもよい。別途表記のない限り、化合物は、修飾オリゴヌクレオチドのヌクレオシドを超えるさらなるヌクレオシドを含まない。例えば、別途表記のない限り、修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物は、修飾オリゴヌクレオチドにハイブリダイズされた相補鎖を含まない（すなわち、修飾オリゴヌクレオチドは、一本鎖修飾オリゴヌクレオチドである）。
【０１２９】
「修飾オリゴヌクレオチド」は、天然に存在する末端、糖、核酸塩基、及び／またはヌクレオシド間連結と比較して１つ以上の修飾を有するオリゴヌクレオチドを意味する。修飾オリゴヌクレオチドは、未修飾ヌクレオシドを含んでもよい。
【０１３０】
「一本鎖修飾オリゴヌクレオチド」は、相補鎖にハイブリダイズしない修飾オリゴヌクレオチドを意味する。
【０１３１】
「修飾ヌクレオシド」は、天然に存在するヌクレオシドからの任意の変化を有するヌクレオシドを意味する。修飾ヌクレオシドは、修飾糖及び非修飾核酸塩基を有し得る。修飾ヌクレオシドは、修飾糖及び修飾核酸塩基を有し得る。修飾ヌクレオシドは、天然糖及び修飾核酸塩基を有し得る。特定の実施形態では、修飾ヌクレオシドは、二環式ヌクレオシドである。特定の実施形態では、修飾ヌクレオシドは、非二環式ヌクレオシドである。
【０１３２】
「修飾ヌクレオシド間連結」は、天然に存在するヌクレオシド間連結からの任意の変化を意味する。
【０１３３】
「ホスホロチオエートヌクレオシド間結合」は、非架橋原子の１つが硫黄原子であるヌクレオシドの間の連結を意味する。
【０１３４】
「修飾糖部分」は、天然糖からの置換及び／または任意の変化を意味する。
【０１３５】
「非修飾核酸塩基」は、ＲＮＡまたはＤＮＡの天然に存在する複素環塩基：プリン塩基であるアデニン（Ａ）及びグアニン（Ｇ）、及びピリミジン塩基であるチミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）（５−メチルシトシンを含む）、及びウラシル（Ｕ）を意味する。
【０１３６】
「５−メチルシトシン」は、５位に結合したメチル基を含むシトシンを意味する。
【０１３７】
「非メチル化シトシン」は、５位に結合したメチル基を有さないシトシンを意味する。
【０１３８】
「修飾核酸塩基」は、非修飾核酸塩基ではない任意の核酸塩基を意味する。
【０１３９】
「糖部分」は、天然に存在するフラノシルまたは修飾糖部分を意味する。
【０１４０】
「修飾糖部分」は、置換糖部分または糖代用物を意味する。
【０１４１】
「２′−Ｏ−メチル糖」または「２′−ＯＭｅ糖」は、２′位にＯ−メチル修飾を有する糖を意味する。
【０１４２】
「２′−Ｏ−メトキシエチル糖」または「２′−ＭＯＥ糖」は、２′位にＯ−メトキシエチル修飾を有する糖を意味する。
【０１４３】
「２′−フルオロ」または「２′−Ｆ」は、２′位のフルオロ修飾を有する糖を意味する。
【０１４４】
「二環式糖部分」は、４〜７員環の２つの原子を結合させて、二環式構造をもたらす第２の環を形成する架橋を含む４〜７員環（フラノシルを含むがこれに限定されない）を含む修飾糖部分を意味する。特定の実施形態では、４〜７員環は、糖環である。特定の実施形態では、４〜７員環は、フラノシルである。このような特定の実施形態では、架橋は、フラノシルの２′−炭素及び４′−炭素を連結させる。非限定例示的な二環式糖部分としては、ＬＮＡ、ＥＮＡ、ｃＥｔ、Ｓ−ｃＥｔ、及びＲ−ｃＥｔが挙げられる。
【０１４５】
「架橋型核酸（ＬＮＡ）糖部分」は、４′フラノース環原子及び２′フラノース環原子の間に（ＣＨ２）−Ｏ架橋を含む置換糖部分を意味する。
【０１４６】
「ＥＮＡ糖部分」は、４′フラノース環原子及び２′フラノース環原子の間に（ＣＨ２）２−Ｏ架橋を含む置換糖部分を意味する。
【０１４７】
「束縛（Ｃｏｎｓｔｒａｉｎｅｄ）エチル（ｃＥｔ）糖部分」は、４′フラノース環原子及び２′フラノース環原子の間にＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ架橋を含む置換糖部分を意味する。特定の実施形態では、ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ架橋は、Ｓ配置で束縛される。特定の実施形態では、（ＣＨ２）２−Ｏは、Ｒ配置で束縛される。
【０１４８】
「Ｓ−ｃＥｔ糖部分」は、４′フラノース環原子及び２′フラノース環原子の間にＳ−束縛ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ架橋を含む置換糖部分を意味する。
【０１４９】
「Ｒ−ｃＥｔ糖部分」は、４′フラノース環原子及び２′フラノース環原子の間にＲ−束縛ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ架橋を含む置換糖部分を意味する。
【０１５０】
「２′−Ｏ−メチルヌクレオシド」は、２′−Ｏ−メチル糖修飾を有する２′−修飾ヌクレオシドを意味する。
【０１５１】
「２′−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシド」は、２′−Ｏ−メトキシエチル糖修飾を有する２′−修飾ヌクレオシドを意味する。２′−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドは、修飾または非修飾核酸塩基を含んでもよい。
【０１５２】
「２′−フルオロヌクレオシド」は、２′−フルオロ糖修飾を有する２′−修飾ヌクレオシドを意味する。２′−フルオロヌクレオシドは、修飾または非修飾核酸塩基を含んでもよい。
【０１５３】
「二環式ヌクレオシド」は、二環式糖部分を有する２′−修飾ヌクレオシドを意味する。二環式ヌクレオシドは、修飾または非修飾核酸塩基を有し得る。
【０１５４】
「ｃＥｔヌクレオシド」は、ｃＥｔ糖部分を含むヌクレオシドを意味する。ｃＥｔヌクレオシドは、修飾または非修飾核酸塩基を含んでもよい。
【０１５５】
「Ｓ−ｃＥｔヌクレオシド」は、Ｓ−ｃＥｔ糖部分を含むヌクレオシドを意味する。
【０１５６】
「Ｒ−ｃＥｔヌクレオシド」は、Ｒ−ｃＥｔ糖部分を含むヌクレオシドを意味する。
【０１５７】
「β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシド」は、天然に存在するＤＮＡヌクレオシドを意味する。
【０１５８】
「β−Ｄ−リボヌクレオシド」は、天然に存在するＲＮＡヌクレオシドを意味する。
【０１５９】
「ＬＮＡヌクレオシド」は、ＬＮＡ糖部分を含むヌクレオシドを意味する。
【０１６０】
「ＥＮＡヌクレオシド」は、ＥＮＡ糖部分を含むヌクレオシドを意味する。
【０１６１】
概要
多発性嚢胞腎（ＰＫＤ）は、流体で満たされた嚢胞が腎臓で発生し、腎臓肥大、腎不全、及び多くの場合末期腎疾患をもたらす、遺伝型の腎疾患である。嚢胞の過剰増殖は、ＰＫＤの顕著な病理学的特徴である。ＰＫＤの管理では、処置のための一次目標は、腎機能を維持し、かつ末期腎疾患（ＥＳＲＤ）の発症を予防することであり、それにより、ＰＫＤを有する対象の平均余命を向上させる。
【０１６２】
ｍｉｃｒｏＲＮＡのｍｉＲ−１７〜９２クラスターの複数のメンバーは、ＰＫＤのマウスモデルにおいて上方制御される。ＰＫＤのマウスモデルにおけるｍｉＲ−１７〜９２クラスターの遺伝的欠失は、腎臓嚢胞の成長を低減させ、腎機能を改善し、生存を延長する（Ｐａｔｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ，２０１３；１１０（２６）：１０７６５−１０７７０）。ｍｉＲ−１７〜９２クラスターは、６つの異なるｍｉｃｒｏＲＮＡを含有し、それぞれは、異なる配列：ｍｉＲ−１７、ｍｉＲ−１８ａ、ｍｉＲ−１９ａ、ｍｉＲ−１９−ｂ−１、及びｍｉＲ−９２ａ−１である。従って、クラスター全体の遺伝子欠失は、６つの異なるｍｉｃｒｏＲＮＡ遺伝子を欠失させる。この遺伝子欠失実験が実証していないことは、クラスター内のｍｉｃｒｏＲＮＡのサブセットの阻害がＰＫＤの臨床マーカーにおいて同じ改善をもたらすかどうかである。
【０１６３】
本明細書では、ｍｉＲ−１７に標的化された修飾オリゴヌクレオチドは、ＰＫＤの実験モデルにおいて腎機能を改善し、腎重量を低減させることが実証されている。さらに、ｍｉＲ−１７阻害は、ヒトドナーの嚢胞に由来する初代培養の増殖及び嚢胞成長も抑制した。これらのデータは、ｍｉＲ−１７に標的化された修飾オリゴヌクレオチドがＰＫＤの処置に有用であることを実証する。
【０１６４】
発明の特定の使用
本明細書では、多発性嚢胞腎（ＰＫＤ）の処置のための方法が提供され、方法は、ｍｉＲ−１７と相補的な修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を、ＰＫＤを有し、または有すると疑われる対象に投与することを含む。
【０１６５】
特定の実施形態では、対象は、修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物の投与前にＰＫＤを有すると診断されている。ＰＫＤの診断は、限定されないが、対象の家族歴、臨床的特徴（高血圧、アルブミン尿、血尿、及び損なわれたＧＦＲを含むが、これに限定されない）、ならびに腎臓イメージング試験（ＭＲＩ、超音波、及びＣＴスキャンを含むが、これらに限定されない）を含むパラメーターの評価により達成され得る。ＰＫＤの診断は、ＰＫＤ１、ＰＫＤ２、またはＰＫＨＤ１遺伝子のうちの１つ以上の変異についてのスクリーニングも含まれ得る。
【０１６６】
ＡＤＰＫＤを有し、または有すると疑われる対象は、ＰＫＤ１遺伝子の変異またはＰＫＤ２遺伝子の変異を有し得る。ＡＲＰＫＤを有し、または有すると疑われる対象は、ＰＫＨＤ１遺伝子の変異を有し得る。
【０１６７】
特定の実施形態では、対象は、増加した両腎容積を有する。特定の実施形態では、両腎容積は、身長補正両腎容積（ＨｔＴＫＶ）である。特定の実施形態では、対象は、高血圧を有する。特定の実施形態では、対象は、損なわれた腎機能を有する。特定の実施形態では、対象は、腎機能改善を必要とする。特定の実施形態では、対象は、損なわれた腎機能を有すると確認されている。
【０１６８】
特定の実施形態では、ＰＫＤを有する対象の腎臓中のｍｉＲ−１７のレベルは増加する。特定の実施形態では、投与前に、対象は、腎臓中のｍｉＲ−１７の増加したレベルを有すると判定されている。腎生検材料からのｍｉＲ−１７レベルが測定され得る。特定の実施形態では、投与前に、対象は、対象の尿または血液中のｍｉＲ−１７の増加したレベルを有すると判定されている。
【０１６９】
特定の実施形態では、ｍｉＲ−１７と相補的な修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物の投与は、１つ以上の臨床的に有益な結果をもたらす。特定の実施形態では、投与は、対象の腎機能を改善する。特定の実施形態では、投与は、対象の腎機能の悪化を遅延させる。特定の実施形態では、投与は、対象の両腎容積を低減させる。特定の実施形態では、投与は、対象の両腎容積の増加を減速させる。特定の実施形態では、投与は、身長補正両腎容積（ＨｔＴＫＶ）を低減させる。特定の実施形態では、投与は、ＨｔＴＫＶの増加を減速させる。
【０１７０】
特定の実施形態では、投与は、対象の嚢胞成長を阻害する。特定の実施形態では、投与は、対象の嚢胞成長の増加を減速させる。一部の実施形態では、嚢胞が、対象の腎臓に存在する。一部の実施形態では、嚢胞が、対象の肝臓及び腎臓の双方に存在する。
【０１７１】
特定の実施形態では、投与は、対象の腎臓痛を低減する。特定の実施形態では、投与は、対象の腎臓痛の増加を減速させる。特定の実施形態では、投与は、対象の腎臓痛の発症を遅延させる。
【０１７２】
特定の実施形態では、投与は、対象の高血圧を低減させる。特定の実施形態では、投与は、対象の高血圧の悪化を減速させる。特定の実施形態では、投与は、対象の高血圧の発症を遅延させる。
【０１７３】
特定の実施形態では、投与は、対象の腎臓の線維化を低減させる。特定の実施形態では、投与は、対象の腎臓の線維化を減速させる。
【０１７４】
特定の実施形態では、投与は、対象における末期腎疾患の発症を遅延させる。特定の実施形態では、投与は、対象の透析までの時間を遅延させる。特定の実施形態では、投与は、対象の腎移植の時間を遅延させる。特定の実施形態では、投与は、対象の平均余命を向上させる。
【０１７５】
特定の実施形態では、投与は、対象のアルブミン尿を低減させる。特定の実施形態では、投与は、対象のアルブミン尿の悪化を減速させる。特定の実施形態では、投与は、対象のアルブミン尿の発症を遅延させる。特定の実施形態では、投与は、対象の血尿を低減させる。特定の実施形態では、投与は、対象の血尿の悪化を減速させる。特定の実施形態では、投与は、対象の血尿の発症を遅延させる。特定の実施形態では、投与は、対象の血中尿素窒素を低減させる。特定の実施形態では、投与は、対象の血液中のクレアチニンを低減させる。特定の実施形態では、投与は、対象のクレアチニンクリアランスを改善する。特定の実施形態では、投与は、対象のアルブミン：クレアチニン比を低減させる。特定の実施形態では、投与は、対象の糸球体濾過量を改善する。特定の実施形態では、投与は、対象の糸球体濾過量の悪化を減速させる。一部の実施形態では、糸球体濾過量の悪化は、糸球体濾過量の低下率を計算することにより評価される。特定の実施形態では、投与は、対象の尿中の好中球ゼラチナーゼ結合性リポカリン（ＮＧＡＬ）タンパク質を低減させる。特定の実施形態では、投与は、対象の尿中の腎障害分子−１（ＫＩＭ−１）タンパク質を低減させる。
【０１７６】
本明細書で提供される実施形態のいずれかでは、対象は、対象の疾患の程度を評価する特定の検査にかけられてもよい。このような検査は、対象の両腎容積の測定；対象の高血圧の測定；対象の腎臓痛の測定；対象の腎臓の線維化の測定；対象の血中尿素窒素の測定；対象の血液中のクレアチニンを測定すること；対象の血液中のクレアチニンクリアランスを測定すること；対象のアルブミン尿を測定すること；対象のアルブミン：クレアチニン比を測定すること；対象の糸球体濾過量を測定すること；対象の尿中の好中球ゼラチナーゼ結合性リポカリン（ＮＧＡＬ）タンパク質の測定；及び／または対象の尿中の腎障害分子−１（ＫＩＭ−１）タンパク質の測定を含むが、これらに限定されない。
【０１７７】
特定の追加療法
多発性嚢胞腎または本明細書に列挙された状態のいずれかの処置は、複数の療法を含んでもよい。そのようなものであるから、本明細書で提供される特定の実施形態では、ｍｉＲ−１７と相補的な核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を投与することに加えて、少なくとも１つの療法を投与することを含む、多発性嚢胞腎を有し、または有すると疑われる対象を処置するための方法である。
【０１７８】
特定の実施形態では、少なくとも１つの追加療法は、医薬品を含む。
【０１７９】
特定の実施形態では、少なくとも１つの追加療法は、降圧薬である。降圧薬は、対象の血圧をコントロールするために使用される。
【０１８０】
特定の実施形態では、医薬品は、バソプレシン受容体２アンタゴニストである。特定の実施形態では、バソプレシン受容体２アンタゴニストは、トルバプタンである。
【０１８１】
特定の実施形態では、医薬品は、アンギオテンシンＩＩ受容体遮断薬（ＡＲＢ）を含む。特定の実施形態では、アンギオテンシンＩＩ受容体遮断薬は、カンデサルタン、イルベサルタン、オルメサルタン、ロサルタン、バルサルタン、テルミサルタン、またはエプロサルタンである。特定の実施形態では、ＡＲＢは、６．２５〜１５０ｍｇ／ｍ２／日の範囲の用量で投与される。これらの実施形態のいずれかでは、ＡＲＢは、６．２５ｍｇ／ｍ２／日、１０ｍｇ／ｍ２／日、１２．５ｍｇ／ｍ２／日、１８．７５ｍｇ／ｍ２／日、３７．５ｍｇ／ｍ２／日、５０ｍｇ／ｍ２／日、または１５０ｍｇ／ｍ２／日の用量で投与される。
【０１８２】
特定の実施形態では、医薬品は、アンギオテンシンＩＩ変換酵素（ＡＣＥ）阻害薬を含む。特定の実施形態では、ＡＣＥ阻害薬は、カプトプリル、エナラプリル、リシノプリル、ベナゼプリル、キナプリル、ホシノプリル、またはラミプリルである。特定の実施形態では、ＡＣＥ阻害薬は、０．５〜１ｍｇ／ｍ２／日、１〜６ｍｇ／ｍ２／日、１〜２ｍｇ／ｍ２／日、２〜４ｍｇ／ｍ２／日、または４〜８ｍｇ／ｍ２／日の範囲の用量で投与される。
【０１８３】
特定の実施形態では、医薬品は、利尿薬である。特定の実施形態では、医薬品は、カルシウムチャネル遮断薬である。
【０１８４】
特定の実施形態では、医薬品は、キナーゼ阻害薬である。特定の実施形態では、キナーゼ阻害薬は、ボスチニブまたはＫＤ０１９である。
【０１８５】
特定の実施形態では、医薬品は、アドレナリン受容体アンタゴニストである。
【０１８６】
特定の実施形態では、医薬品は、アルドステロン受容体アンタゴニストである。特定の実施形態では、アルドステロン受容体アンタゴニストは、スピロノラクトンである。特定の実施形態では、スピロノラクトンは、１日当たり１０〜３５ｍｇの範囲の用量で投与される。特定の実施形態では、スピロノラクトンは、１日当たり２５ｍｇの用量で投与される。
【０１８７】
特定の実施形態では、医薬品は、哺乳類ラパマイシン標的（ｍＴＯＲ）阻害薬である。特定の実施形態では、ｍＴＯＲ阻害薬は、エベロリムス、ラパマイシン、またはシロリムスである。
【０１８８】
特定の実施形態では、医薬品は、ホルモンアナログである。特定の実施形態では、ホルモンアナログは、ソマトスタチンまたは副腎皮質刺激ホルモンである。
【０１８９】
特定の実施形態では、追加療法は、抗線維化薬である。特定の実施形態では、抗線維化薬は、ｍｉＲ−２１と相補的な修飾オリゴヌクレオチドである。
【０１９０】
特定の実施形態では、追加療法は、透析である。特定の実施形態では、追加療法は、腎臓移植である。
【０１９１】
特定の実施形態では、医薬品は、抗炎症薬を含む。特定の実施形態では、抗炎症薬は、ステロイド性抗炎症薬である。特定の実施形態では、ステロイド性抗炎症薬は、コルチコステロイドである。特定の実施形態では、コルチコステロイドは、プレドニゾンである。特定の実施形態では、抗炎症薬は、非ステロイド性抗炎症薬である。特定の実施形態では、非ステロイド性抗炎症薬は、イブプロフェン、ＣＯＸ−１阻害薬、またはＣＯＸ−２阻害薬である。
【０１９２】
特定の実施形態では、医薬品は、線維形成誘導性シグナルに対する１つ以上の応答を遮断する医薬品である。
【０１９３】
特定の実施形態では、追加療法は、低用量シクロホスファミド、サイモスティムリン、ビタミン及び栄養補助食品（例えば、ビタミンＡ、Ｃ、Ｅ、β−カロチン、亜鉛、セレン、グルタチオン、コエンザイムＱ−１０、及びエキナシアを含む抗酸化薬）、ならびに抗原及びアジュバントの多量体提示を組み合わせたワクチン製剤を含むワクチン、例えば、免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭ）を含む身体の免疫系を増強する医薬品であり得る。
【０１９４】
特定の実施形態では、追加療法は、本発明の１つ以上の医薬組成物の副作用を処置または改善するように選択される。このような副作用は、注射部位反応、肝機能検査異常、腎機能異常、肝毒性、腎毒性、中枢神経系異常、及びミオパチーを含むが、これらに限定されない。例えば、血清中のアミノトランスフェラーゼレベルの増加は、肝毒性または肝機能異常を示し得る。例えば、ビリルビンの増加は、肝毒性または肝機能異常を示し得る。
【０１９５】
特定のｍｉｃｒｏＲＮＡ核酸塩基配列
本明細書に記載の修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−１７（配列番号１）またはその前駆体（配列番号２）と相補的な核酸塩基配列を有する。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの各核酸塩基は、ｍｉＲ−１７の核酸塩基配列またはその前駆体中の対応する位置のそれぞれの核酸塩基と塩基対合を受けることができる。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、ｍｉＲ−１７の核酸塩基配列またはその前駆体配列に対する１つ以上のミスマッチ塩基対を有することがあり、依然として、その標的配列にハイブリダイズすることができる。
【０１９６】
ｍｉＲ−１７配列がｍｉＲ−１７前駆体配列内に含有されるので、ｍｉＲ−１７と相補的な核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドはまた、ｍｉＲ−１７前駆体の領域と相補的である。
【０１９７】
特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−１７の長さに等しい多数の連結ヌクレオシドからなる。
【０１９８】
特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの連結ヌクレオシドの数は、ｍｉＲ−１７の長さよりも少ない。修飾オリゴヌクレオチドの各核酸塩基がｍｉＲ−１７の対応する位置の各核酸塩基と相補的である、ｍｉＲ−１７の長さよりも少ない数の連結ヌクレオシドを有する修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−１７配列の領域と完全に相補的な核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドであると考えられる。例えば、各ヌクレオ塩基が、２２核酸塩基長のｍｉＲ−１７の対応する位置と相補的である１９連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−１７の１９核酸塩基領域と完全に相補的である。このような修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−１７の１９核酸塩基セグメントと１００％の相補性を有し（または完全に相補的であり）、ｍｉＲ−１７と１００％相補的（または完全に相補的）であると考えられる。
【０１９９】
特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、シード配列と相補的な核酸塩基配列を含む。すなわち、修飾オリゴヌクレオチドは、シードマッチ配列を含む。特定の実施形態では、シード配列は、ヘキサマーシード配列である。このような特定の実施形態では、シード配列は、ｍｉＲ−１７の核酸塩基１〜６である。このような特定の実施形態では、シード配列は、ｍｉＲ−１７の核酸塩基２〜７である。このような特定の実施形態では、シード配列は、ｍｉＲ−１７の核酸塩基３〜８である。特定の実施形態では、シード配列は、ヘプタマーシード配列である。このような特定の実施形態では、ヘプタマーシード配列は、ｍｉＲ−１７の核酸塩基１〜７である。このような特定の実施形態では、ヘプタマーシード配列は、ｍｉＲ−１７の核酸塩基２〜８である。特定の実施形態では、シード配列は、オクタマーシード配列である。このような特定の実施形態では、オクタマーシード配列は、ｍｉＲ−１７の核酸塩基１〜８である。特定の実施形態では、オクタマーシード配列は、ｍｉＲ−１７の核酸塩基２〜９である。
【０２００】
ｍｉＲ−１７は、ｍｉＲ−１７ファミリーとして知られているｍｉｃｒｏＲＮＡファミリーのメンバーである。ｍｉＲ−１７ファミリーは、ｍｉＲ−１７、ｍｉＲ−２０ａ、ｍｉＲ−２０ｂ、ｍｉＲ−９３、ｍｉＲ−１０６ａ、及びｍｉＲ−１０６ｂを含む。ｍｉＲ−１７ファミリーの各メンバーは、核酸塩基配列５′−ＡＡＡＧＵＧ−３′または配列番号１の２位〜７位の核酸塩基配列であるｍｉＲ−１７シード領域を含む核酸塩基配列を有する。さらに、ｍｉＲ−１７ファミリーの各メンバーは、シード領域外で一部の核酸塩基配列同一性を共有する。従って、ｍｉＲ−１７と相補的な修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−１７に加えて、ｍｉＲ−１７ファミリーのｍｉｃｒｏＲＮＡを標的とし得る。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−１７ファミリーの２つ以上のｍｉｃｒｏＲＮＡを標的とする。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−１７ファミリーの３つ以上のｍｉｃｒｏＲＮＡを標的とする。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−１７ファミリーの４つ以上のｍｉｃｒｏＲＮＡを標的とする。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−１７ファミリーの５つ以上のｍｉｃｒｏＲＮＡを標的とする。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−１７ファミリーの６つのｍｉｃｒｏＲＮＡを標的とする。
【０２０１】
特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、核酸塩基配列５′−ＧＣＡＣＴＴＴＧ−３′（配列番号３）を含む。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、核酸塩基配列５′−ＡＧＣＡＣＴＴＴ−３′（配列番号４）を含む。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、核酸塩基配列５′−ＡＧＣＡＣＴＴＴＧ−３′（配列番号５）を含む。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、核酸塩基配列５′−ＡＡＧＣＡＣＴＴＴＧ−３′（配列番号６）を含む。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、核酸塩基配列５′−ＴＡＡＧＣＡＣＴＴＴＧ−３′（配列番号７）を含む。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、核酸塩基配列５′−ＧＴＡＡＧＣＡＣＴＴＴＧ−３′（配列番号８）を含む。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、核酸塩基配列５′−ＴＧＴＡＡＧＣＡＣＴＴＴＧ−３′（配列番号９）を含む。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、核酸塩基配列５′−ＣＴＧＴＡＡＧＣＡＣＴＴＴＧ−３′（配列番号１０）を含む。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、核酸塩基配列５′−ＡＣＴＧＴＡＡＧＣＡＣＴＴＴＧ−３′（配列番号１１）を含む。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、核酸塩基配列５′−ＣＡＣＴＧＴＡＡＧＣＡＣＴＴＴＧ−３′（配列番号１２）を含む。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、核酸塩基配列５′−ＧＣＡＣＴＧＴＡＡＧＣＡＣＴＴＴＧ−３′（配列番号１３）を含む。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、核酸塩基配列５′−ＴＧＣＡＣＴＧＴＡＡＧＣＡＣＴＴＴＧ−３′（配列番号１４）を含む。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、核酸塩基配列５′−ＣＴＧＣＡＣＴＧＴＡＡＧＣＡＣＴＴＴＧ−３′（配列番号１５）を含む。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、核酸塩基配列５′−ＣＣＴＧＣＡＣＴＧＴＡＡＧＣＡＣＴＴＴＧ−３′（配列番号１６）を含む。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、核酸塩基配列５′−ＡＣＣＴＧＣＡＣＴＧＴＡＡＧＣＡＣＴＴＴＧ−３′（配列番号１７）を含む。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、核酸塩基配列５′−ＣＡＣＣＴＧＣＡＣＴＧＴＡＡＧＣＡＣＴＴＴＧ−３′（配列番号１８）を含む。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、核酸塩基配列５′−ＣＴＡＣＣＴＧＣＡＣＴＧＴＡＡＧＣＡＣＴＴＴＧ−３′（配列番号１９）を含む。これらの実施形態のいずれかでは、修飾オリゴヌクレオチドは、配列番号３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、及び１８のいずれか１つから選択される核酸塩基配列からなる。各核酸塩基配列において、Ｔは独立して、Ｔ及びＵから選択される。
【０２０２】
特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−１７の核酸塩基配列またはその前駆体に対する１つのミスマッチを有する核酸塩基配列を有する。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−１７の核酸塩基配列またはその前駆体に対する２つのミスマッチを有する核酸塩基配列を有する。このような特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−１７の核酸塩基配列またはその前駆体に対する２つ以下のミスマッチを有する核酸塩基配列を有する。このような特定の実施形態では、ミスマッチ核酸塩基は、連続している。このような特定の実施形態では、ミスマッチ核酸塩基は、連続していない。
【０２０３】
特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの連結ヌクレオシドの数は、ｍｉＲ−１７の長さよりも大きい。このような特定の実施形態では、さらなるヌクレオシドの核酸塩基は、ｍｉＲ−１７ステムループ配列の核酸塩基と相補的である。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの連結ヌクレオシドの数は、ｍｉＲ−１７の長さよりも１大きい。このような特定の実施形態では、さらなるヌクレオシドは、オリゴヌクレオチドの５′末端にある。このような特定の実施形態では、さらなるヌクレオシドは、オリゴヌクレオチドの３′末端にある。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの連結ヌクレオシドの数は、ｍｉＲ−１７の長さよりも２大きい。このような特定の実施形態では、２つのさらなるヌクレオシドは、オリゴヌクレオチドの５′末端にある。このような特定の実施形態では、２つのさらなるヌクレオシドは、オリゴヌクレオチドの３′末端にある。このような特定の実施形態では、１つのさらなるヌクレオシドは、５′末端に位置しており、１つのさらなるヌクレオシドは、オリゴヌクレオチドの３′末端に位置する。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドの領域は、ｍｉＲ−１７の核酸塩基配列と完全に相補的であり得るが、修飾オリゴヌクレオチド全体は、ｍｉＲ−１７と完全に相補的ではない。例えば、ヌクレオシド１〜２２の核酸塩基が、２２核酸塩基長のｍｉＲ−１７の対応する位置にそれぞれ相補的である２４連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−１７の核酸塩基配列と完全に相補的であり、かつｍｉＲ−１７の核酸塩基配列と約９２％の全体的相補性を有する２２ヌクレオシド部分を有する。
【０２０４】
特定の修飾オリゴヌクレオチド
特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、８〜２５連結ヌクレオシドからなる。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、８〜１２連結ヌクレオシドからなる。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、１２〜２５連結ヌクレオシドからなる。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、１５〜２５連結ヌクレオシドからなる。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、１５〜１９連結ヌクレオシドからなる。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、１５〜１６連結ヌクレオシドからなる。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、１７〜２３連結ヌクレオシドからなる。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、１９〜２３連結ヌクレオシドからなる。
【０２０５】
特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、８連結ヌクレオシドからなる。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、９連結ヌクレオシドからなる。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、１０連結ヌクレオシドからなる。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、１１連結ヌクレオシドからなる。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、１２連結ヌクレオシドからなる。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、１３連結ヌクレオシドからなる。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、１４連結ヌクレオシドからなる。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、１５連結ヌクレオシドからなる。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、１６連結ヌクレオシドからなる。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、１７連結ヌクレオシドからなる。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、１８連結ヌクレオシドからなる。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、１９連結ヌクレオシドからなる。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、２０連結ヌクレオシドからなる。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、２１連結ヌクレオシドからなる。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、２２連結ヌクレオシドからなる。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、２３連結ヌクレオシドからなる。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、２４連結ヌクレオシドからなる。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、２５連結ヌクレオシドからなる。
【０２０６】
特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、１つ以上の５−メチルシトシンを含む。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの各シトシンは、５−メチルシトシンを含む。
【０２０７】
特定の修飾
特定の実施形態では、本明細書で提供されるオリゴヌクレオチドは、核酸塩基、糖、及び／またはヌクレオシド間連結に対する１つ以上の修飾を含んでもよく、よって、修飾オリゴヌクレオチドである。修飾核酸塩基、糖、及び／またはヌクレオシド間連結は、例えば、細胞取り込みの増強、他のオリゴヌクレオチドまたは核酸標的に対する親和性の増強、及びヌクレアーゼの存在下での安定性の増加、などの望ましい特性のために、非修飾形態よりも選択され得る。
【０２０８】
特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、１つ以上の修飾ヌクレオシドを含む。このような特定の実施形態では、修飾ヌクレオシドは、安定化ヌクレオシドである。安定化ヌクレオシドの例は、糖修飾ヌクレオシドである。
【０２０９】
特定の実施形態では、修飾ヌクレオシドは、糖修飾ヌクレオシドである。このような特定の実施形態では、糖修飾ヌクレオシドは、天然若しくは修飾複素環塩基部分及び／または天然若しくは修飾ヌクレオシド間連結をさらに含むことができ、糖修飾とは独立したさらなる修飾を含んでもよい。特定の実施形態では、糖修飾ヌクレオシドは、糖環が、天然リボースまたは２′−デオキシ−リボースの２′炭素で修飾された２′−修飾ヌクレオシドである。
【０２１０】
特定の実施形態では、２′−修飾ヌクレオシドは、二環式糖部分を有する。このような特定の実施形態では、二環式糖部分は、α立体配置のＤ糖である。このような特定の実施形態では、二環式糖部分は、β立体配置のＤ糖である。このような特定の実施形態では、二環式糖部分は、α立体配置のＬ糖である。このような特定の実施形態では、二環式糖部分は、β立体配置のＬ糖である。
【０２１１】
このような二環式糖部分を含むヌクレオシドは、二環式ヌクレオシドまたはＢＮＡと称される。特定の実施形態では、二環式ヌクレオシドは、下に示すような（Ａ）α−Ｌ−メチレンオキシ（４′−ＣＨ２−Ｏ−２′）ＢＮＡ；（Ｂ）β−Ｄ−メチレンオキシ（４′−ＣＨ２−Ｏ−２′）ＢＮＡ；（Ｃ）エチレンオキシ（４′−（ＣＨ２）２−Ｏ−２′）ＢＮＡ；（Ｄ）アミノオキシ（４′−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（Ｒ）−２′）ＢＮＡ；（Ｅ）オキシアミノ（４′−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−２′）ＢＮＡ；（Ｆ）メチル（メチレンオキシ）（４′−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２′）ＢＮＡ（束縛エチルまたはｃＥｔとも称される）；（Ｇ）メチレン−チオ（４′−ＣＨ２−Ｓ−２′）ＢＮＡ；（Ｈ）メチレン−アミノ（４′−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−２′）ＢＮＡ；（Ｉ）メチル炭素環式（４′−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）−２′）ＢＮＡ；（Ｊ）ｃ−ＭＯＥ（４′−ＣＨ（ＣＨ２−ＯＭｅ）−Ｏ−２′）ＢＮＡ、及び（Ｋ）プロピレン炭素環式（４′−（ＣＨ２）３−２′）ＢＮＡを含むが、これらに限定されない。
【化１】
2018528945.tif 000003
式中、ＢＸは、核酸塩基部分であり、Ｒは独立して、Ｈ、保護基、またはＣ１〜Ｃ１２アルキルである。
【０２１２】
特定の実施形態では、２′−修飾ヌクレオシドは、Ｆ、ＯＣＦ３、Ｏ−ＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、２′−Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｏ（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）２Ｎ−（ＣＨ３）２、及びＯ−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｈ）ＣＨ３から選択される２′−置換基を含む。
【０２１３】
特定の実施形態では、２′−修飾ヌクレオシドは、Ｆ、Ｏ−ＣＨ３、及びＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３から選択される２′−置換基を含む。
【０２１４】
特定の実施形態では、糖修飾ヌクレオシドは、４′−チオ修飾ヌクレオシドである。特定の実施形態では、糖修飾ヌクレオシドは、４′−チオ−２′−修飾ヌクレオシドである。４′−チオ修飾ヌクレオシドは、４′−Ｏが４′−Ｓで置換されたβ−Ｄ−リボヌクレオシドを有する。４′−チオ−２′−修飾ヌクレオシドは、２′−ＯＨが２′−置換基で置換された４′−チオ修飾ヌクレオシドである。好適な２′−置換基としては、２′−ＯＣＨ３、２′−Ｏ−（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３、及び２′−Ｆが挙げられる。
【０２１５】
特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、１つ以上のヌクレオシド間修飾を含む。このような特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間連結は、修飾ヌクレオシド間連結である。特定の実施形態では、修飾ヌクレオシド間連結は、リン原子を含む。
【０２１６】
特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのホスホロチオエートヌクレオシド間連結を含む。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結である。
【０２１７】
特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、１個以上の修飾核酸塩基を含む。特定の実施形態では、修飾核酸塩基は、５−ヒドロキシメチルシトシン、７−デアザグアニン、及び７−デアザアデニンから選択される。特定の実施形態では、修飾核酸塩基は、７−デアザ−アデニン、７−デアザグアノシン、２−アミノピリジン、及び２−ピリドンから選択される。特定の実施形態では、修飾核酸塩基は、２アミノプロピルアデニン、５−プロピニルウラシル、及び５−プロピニルシトシンを含む５−置換ピリミジン、６−アザピリミジン、ならびにＮ−２、Ｎ−６、及びＯ−６置換プリンから選択される。
【０２１８】
特定の実施形態では、修飾核酸塩基は、多環式複素環を含む。特定の実施形態では、修飾核酸塩基は、三環式複素環を含む。特定の実施形態では、修飾核酸塩基は、フェノキサジン誘導体を含む。特定の実施形態では、フェノキサジンは、Ｇ−クランプとして当該技術分野で既知の核酸塩基を形成するようにさらに修飾することができる。
【０２１９】
特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、得られるアンチセンスオリゴヌクレオチドの活性、細胞分布、または細胞取り込みを増強する１つ以上の部分にコンジュゲートされる。このような特定の実施形態では、部分は、コレステロール部分である。特定の実施形態では、この部分は、脂質部分である。コンジュゲーションのためのさらなる部分は、炭水化物、リン脂質、ビオチン、フェナジン、葉酸塩、フェナントリジン、アントラキノン、アクリジン、フルオレセイン、ローダミン、クマリン、及び色素を含む。特定の実施形態では、炭水化物部分は、Ｎ−アセチル−Ｄ−ガラクトサミン（ＧａｌＮａｃ）である。特定の実施形態では、コンジュゲート基は、オリゴヌクレオチドに直接結合される。特定の実施形態では、コンジュゲート基は、アミノ、ヒドロキシル、カルボン酸、チオール、不飽和（例えば、二重または三重結合）、８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸（ＡＤＯ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、６−アミノヘキサン酸（ＡＨＥＸまたはＡＨＡ）、置換Ｃ１〜１０アルキル、置換または非置換Ｃ２〜Ｃ１０アルケニル、及び置換または非置換Ｃ２〜Ｃ１０アルキニルから選択される連結部分により、修飾オリゴヌクレオチドに結合される。このような特定の実施形態では、置換基は、ヒドロキシル、アミノ、アルコキシ、カルボキシ、ベンジル、フェニル、ニトロ、チオール、チオアルコキシ、ハロゲン、アルキル、アリール、アルケニル、及びアルキニルから選択される。
【０２２０】
このような特定の実施形態では、化合物は、例えば、ヌクレアーゼ安定性などの特性を高めるために、修飾オリゴヌクレオチドの一方または両方の末端に結合される１つ以上の安定化基を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む。キャップ構造が、安定化基に含まれる。これらの末端修飾は、エキソヌクレアーゼ分解から修飾オリゴヌクレオチドを保護し、細胞内での送達及び／または局在化に役立つ可能性がある。キャップは、５′末端（５′キャップ）または３′末端（３′キャップ）に存在する可能性があり、または両方の末端に存在する可能性がある。キャップ構造は、例えば、逆位デオキシ脱塩基キャップを含む。
【０２２１】
特定の医薬組成物
本明細書では、医薬組成物が提供される。特定の実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、８〜２５連結ヌクレオシドからなり、かつｍｉＲ−１７と相補的な核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を含む。特定の実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、８〜１２連結ヌクレオシドからなり、かつｍｉＲ−１７と相補的な核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドからなる化合物を含む。特定の実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、１５〜２５連結ヌクレオシドからなり、かつｍｉＲ−１７と相補的な核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を含む。特定の実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、１７〜２３連結ヌクレオシドからなり、かつｍｉＲ−１７と相補的な核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を含む。
【０２２２】
好適な投与経路としては、経口、直腸、経粘膜、腸、経腸、局所、坐薬、吸入による、髄腔内、心臓内、脳室内、腹腔内、経鼻、鼻腔内、腫瘍内、ならびに非経口（例えば、静脈内、筋肉内、髄内、及び皮下）が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、髄腔内薬は、全身曝露よりはむしろ局所曝露を達成するように投与される。例えば、医薬組成物は、所望の効果の領域（例えば、腎臓）に直接注射され得る。
【０２２３】
特定の実施形態では、医薬組成物は、投薬単位の形態（例えば、錠剤、カプセル、ボーラスなど）で投与される。一部の実施形態では、医薬組成物は、２５ｍｇ〜８００ｍｇ、２５ｍｇ〜７００ｍｇ、２５ｍｇ〜６００ｍｇ、２５ｍｇ〜５００ｍｇ、２５ｍｇ〜４００ｍｇ、２５ｍｇ〜３００ｍｇ、２５ｍｇ〜２００ｍｇ、２５ｍｇ〜１００ｍｇ、１００ｍｇ〜８００ｍｇ、２００ｍｇ〜８００ｍｇ、３００ｍｇ〜８００ｍｇ、４００ｍｇ〜８００ｍｇ、５００ｍｇ〜８００ｍｇ、６００ｍｇ〜８００ｍｇ、１００ｍｇ〜７００ｍｇ、１５０ｍｇ〜６５０ｍｇ、２００ｍｇ〜６００ｍｇ、２５０ｍｇ〜５５０ｍｇ、３００ｍｇ〜５００ｍｇ、３００ｍｇ〜４００ｍｇ、及び４００ｍｇ〜６００ｍｇから選択される範囲内の用量の修飾オリゴヌクレオチドを含む。特定の実施形態では、このような医薬組成物は、２５ｍｇ、３０ｍｇ、３５ｍｇ、４０ｍｇ、４５ｍｇ、５０ｍｇ、５５ｍｇ、６０ｍｇ、６５ｍｇ、７０ｍｇ、７５ｍｇ、８０ｍｇ、８５ｍｇ、９０ｍｇ、９５ｍｇ、１００ｍｇ、１０５ｍｇ、１１０ｍｇ、１１５ｍｇ、１２０ｍｇ、１２５ｍｇ、１３０ｍｇ、１３５ｍｇ、１４０ｍｇ、１４５ｍｇ、１５０ｍｇ、１５５ｍｇ、１６０ｍｇ、１６５ｍｇ、１７０ｍｇ、１７５ｍｇ、１８０ｍｇ、１８５ｍｇ、１９０ｍｇ、１９５ｍｇ、２００ｍｇ、２０５ｍｇ、２１０ｍｇ、２１５ｍｇ、２２０ｍｇ、２２５ｍｇ、２３０ｍｇ、２３５ｍｇ、２４０ｍｇ、２４５ｍｇ、２５０ｍｇ、２５５ｍｇ、２６０ｍｇ、２６５ｍｇ、２７０ｍｇ、２７０ｍｇ、２８０ｍｇ、２８５ｍｇ、２９０ｍｇ、２９５ｍｇ、３００ｍｇ、３０５ｍｇ、３１０ｍｇ、３１５ｍｇ、３２０ｍｇ、３２５ｍｇ、３３０ｍｇ、３３５ｍｇ、３４０ｍｇ、３４５ｍｇ、３５０ｍｇ、３５５ｍｇ、３６０ｍｇ、３６５ｍｇ、３７０ｍｇ、３７５ｍｇ、３８０ｍｇ、３８５ｍｇ、３９０ｍｇ、３９５ｍｇ、４００ｍｇ、４０５ｍｇ、４１０ｍｇ、４１５ｍｇ、４２０ｍｇ、４２５ｍｇ、４３０ｍｇ、４３５ｍｇ、４４０ｍｇ、４４５ｍｇ、４５０ｍｇ、４５５ｍｇ、４６０ｍｇ、４６５ｍｇ、４７０ｍｇ、４７５ｍｇ、４８０ｍｇ、４８５ｍｇ、４９０ｍｇ、４９５ｍｇ、５００ｍｇ、５０５ｍｇ、５１０ｍｇ、５１５ｍｇ、５２０ｍｇ、５２５ｍｇ、５３０ｍｇ、５３５ｍｇ、５４０ｍｇ、５４５ｍｇ、５５０ｍｇ、５５５ｍｇ、５６０ｍｇ、５６５ｍｇ、５７０ｍｇ、５７５ｍｇ、５８０ｍｇ、５８５ｍｇ、５９０ｍｇ、５９５ｍｇ、６００ｍｇ、６０５ｍｇ、６１０ｍｇ、６１５ｍｇ、６２０ｍｇ、６２５ｍｇ、６３０ｍｇ、６３５ｍｇ、６４０ｍｇ、６４５ｍｇ、６５０ｍｇ、６５５ｍｇ、６６０ｍｇ、６６５ｍｇ、６７０ｍｇ、６７５ｍｇ、６８０ｍｇ、６８５ｍｇ、６９０ｍｇ、６９５ｍｇ、７００ｍｇ、７０５ｍｇ、７１０ｍｇ、７１５ｍｇ、７２０ｍｇ、７２５ｍｇ、７３０ｍｇ、７３５ｍｇ、７４０ｍｇ、７４５ｍｇ、７５０ｍｇ、７５５ｍｇ、７６０ｍｇ、７６５ｍｇ、７７０ｍｇ、７７５ｍｇ、７８０ｍｇ、７８５ｍｇ、７９０ｍｇ、７９５ｍｇ、及び８００ｍｇから選択される用量の修飾オリゴヌクレオチドを含む。このような特定の実施形態では、本発明の医薬組成物は、２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、５００ｍｇ、６００ｍｇ、７００ｍｇ、及び８００ｍｇから選択される修飾オリゴヌクレオチドの用量を含む。
【０２２４】
特定の実施形態では、医薬品は、好適な希釈剤、例えば、注射用の滅菌水または注射用の滅菌生理食塩水で再構成される滅菌凍結乾燥修飾オリゴヌクレオチドである。再構成された生成物は、生理食塩水への希釈後に、皮下注射または静脈内注入として投与される。凍結乾燥薬物製品は、注射用水または注射用生理食塩水で調製され、調製中に酸または塩基でｐＨ７．０〜９．０に調整され、かつ、次に、凍結乾燥された修飾オリゴヌクレオチドからなる。凍結乾燥された修飾オリゴヌクレオチドは、２５〜８００ｍｇのオリゴヌクレオチドであり得る。これは、２５、５０、７５、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４２５、４５０、４７５、５００、５２５、５５０、５７５、６００、６２５、６５０、６７５、７００、７２５、７５０、７７５、及び８００ｍｇの修飾凍結乾燥オリゴヌクレオチドを包含すると理解されている。さらに、一部の実施形態では、凍結乾燥修飾オリゴヌクレオチドは、２５ｍｇ〜８００ｍｇ、２５ｍｇ〜７００ｍｇ、２５ｍｇ〜６００ｍｇ、２５ｍｇ〜５００ｍｇ、２５ｍｇ〜４００ｍｇ、２５ｍｇ〜３００ｍｇ、２５ｍｇ〜２００ｍｇ、２５ｍｇ〜１００ｍｇ、１００ｍｇ〜８００ｍｇ、２００ｍｇ〜８００ｍｇ、３００ｍｇ〜８００ｍｇ、４００ｍｇ〜８００ｍｇ、５００ｍｇ〜８００ｍｇ、６００ｍｇ〜８００ｍｇ、１００ｍｇ〜７００ｍｇ、１５０ｍｇ〜６５０ｍｇ、２００ｍｇ〜６００ｍｇ、２５０ｍｇ〜５５０ｍｇ、３００ｍｇ〜５００ｍｇ、３００ｍｇ〜４００ｍｇ、及び４００ｍｇ〜６００ｍｇから選択される範囲内の量のオリゴヌクレオチドである。凍結乾燥薬物製品は、２ｍＬのタイプＩ透明ガラスバイアル（硫酸アンモニウム処理した）中にパッケージ化され、ブロモブチルゴムクロージャーで栓をされ、アルミニウムＦＬＩＰ−ＯＦＦ（登録商標）オーバーシールで密封され得る。
【０２２５】
特定の実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、技術分野で確立された使用レベルで、医薬組成物中に従来見出される他の補助構成成分をさらに含有してもよい。従って、例えば、組成物は、さらなる相溶性のある薬学的に活性な物質、例えば、止痒薬、収斂薬、局所麻酔薬、若しくは抗炎症薬、を含有してもよく、または本発明の、種々の剤形の組成物を物理的に製剤化するのに有用な添加材料、例えば、染料、着香剤、防腐剤、抗酸化剤、乳白剤、増粘剤、及び安定剤、を含有してもよい。しかし、このような物質は、添加される時、本発明の組成物の構成成分の生物学的活性を過度に阻害すべきではない。製剤は、滅菌し、必要に応じて、助剤、例えば、潤滑剤、防腐剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、浸透圧に影響を及ぼす塩、緩衝剤、着香剤、香味剤、及び／または芳香族物質などと混合することができ、これらは、製剤のオリゴヌクレオチド（複数可）と有害な相互作用をしない。
【０２２６】
脂質部分は、種々の方法で核酸治療に使用されている。一方法では、核酸は、カチオン性脂質及び中性脂質の混合物で作成された予め形成されたリポソームまたはリポプレックスに導入される。別の方法では、モノカチオン性またはポリカチオン性脂質を有するＤＮＡ複合体は、中性脂質の存在なしに形成される。特定の実施形態では、脂質部分は、医薬品の特定の細胞または組織への分布を増加させるように選択される。特定の実施形態では、脂質部分は、医薬品の脂肪組織への分布を増加させるように選択される。特定の実施形態では、脂質部分は、医薬品の筋肉組織への分布を増加させるように選択される。
【０２２７】
特定の実施形態では、ＩＮＴＲＡＬＩＰＩＤは、オリゴヌクレオチドを含む医薬組成物を調製するため使用される。Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄは、静脈内投与用に調製された脂肪エマルションである。それは、１０％の大豆油、１．２％の卵黄リン脂質、２．２５％のグリセリン、及び注射用水からなる。さらに、水酸化ナトリウムは、最終生成物のｐＨ範囲が６〜８．９になるようにｐＨを調整するために添加されている。
【０２２８】
特定の実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、ポリアミン化合物または核酸と複合体化された脂質部分を含む。特定の実施形態では、このような調製物は、１つ以上の化合物を含み、それぞれは個別に、式（Ｚ）により定義される構造またはその薬学的に許容される塩を有する。
【化２】
2018528945.tif 000004
式中、各Ｘａ及びＸｂは、各存在について、独立して、Ｃ１〜６アルキレンであり；ｎは、０、１、２、３、４、または５であり；各Ｒは独立して、Ｈであり、式中、調製物中の式（Ｚ）の化合物の分子の少なくとも約８０％におけるＲ部分の少なくともｎ＋２個は、Ｈではなく；ｍは、１、２、３、または４であり；Ｙは、Ｏ、ＮＲ２、またはＳであり；Ｒ１は、アルキル、アルケニル、またはアルキニルであり；これらのそれぞれは、１つ以上の置換基で任意に置換され；Ｒ２は、Ｈで、アルキル、アルケニル、またはアルキニルであり；これらのそれぞれは、１つ以上の置換基と任意に置換され；但し、ｎ＝０の場合、Ｒ部分の少なくともｎ＋３個は、Ｈではない。このような調製物は、ＰＣＴ公開ＷＯ／２００８／０４２９７３に記載されており、これは、脂質調製物の開示のために、本明細書に全体として参照により組み込まれる。特定のさらなる調製物は、Ａｋｉｎｃ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２６，５６１−５６９（０１  Ｍａｙ  ２００８）に記載されており、これは、脂質調製物の開示のために、本明細書に全体として参照により組み込まれる。
【０２２９】
特定の実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、１つ以上の修飾オリゴヌクレオチド及び１つ以上の賦形剤を含む。このような特定の実施形態では、賦形剤は、水、塩溶液、アルコール、ポリエチレングリコール、ゼラチン、ラクトース、アミラーゼ、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ケイ酸、粘性パラフィン、ヒドロキシメチルセルロース、及びポリビニルピロリドンから選択される。
【０２３０】
特定の実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、限定されないが、混合、溶解、顆粒化、糖衣化、微粒子化、乳化、カプセル化、封入、または錠剤化プロセスを含む既知の技術を使用して調製される。
【０２３１】
特定の実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、液体（例えば、懸濁液、エリキシル、及び／または溶液）である。このような実施形態の一部では、液体医薬組成物は、限定されないが、水、グリコール、油、アルコール、着香剤、防腐剤、及び着色剤を含む当該技術分野で既知の成分を使用して調製する。
【０２３２】
特定の実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、固体（例えば、粉末、錠剤、及び／またはカプセル）である。このような実施形態の一部では、１つ以上のオリゴヌクレオチドを含む固体医薬組成物は、限定されないが、デンプン、糖、希釈剤、造粒剤、滑沢剤、結合剤、及び崩壊剤を含む当該技術分野で既知の成分を使用して調製される。
【０２３３】
特定の実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、デポ剤として製剤化される。このような特定のデポ剤は通常、非デポ剤よりも作用が長い。特定の実施形態では、このような調製物は、移植（例えば、皮下若しくは筋肉内）または筋肉内注射により投与される。特定の実施形態では、デポ剤は、好適なポリマー材料若しくは疎水性材料（例えば、許容される油中のエマルション）またはイオン交換樹脂を使用して、あるいは難溶性誘導体、例えば、難溶性塩として、調製される。
【０２３４】
特定の実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、送達システムを含む。送達システムの例としては、リポソーム及びエマルションが挙げられるが、これらに限定されない。特定の送達システムは、疎水性化合物を含むものを含む特定の医薬組成物を調製するために有用である。特定の実施形態では、ジメチルスルホキシドなどの特定の有機溶媒が使用される。
【０２３５】
特定の実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、本発明の１つ以上の医薬品を、特定の組織または細胞タイプに送達するように設計された１つ以上の組織特異的送達分子を含む。例えば、特定の実施形態では、医薬組成物は、組織特異的抗体でコーティングされたリポソームを含む。
【０２３６】
特定の実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、持続放出システムを含む。このような持続放出系の非限定例は、固体疎水性ポリマーの半透過性マトリックスである。特定の実施形態では、徐放性システムは、その化学的性質に応じて、数時間、数日、数週間、または数ヶ月にわたって医薬品を放出し得る。
【０２３７】
特定の実施形態では、医薬組成物は、注射（例えば、静脈内、皮下、筋肉内など）による投与のために調製される。このような実施形態の一部では、医薬組成物は、担体を含み、水溶液、例えば、水、またはハンクス液、リンガー液、若しくは生理食塩水緩衝液などの生理学的に適合する緩衝液中で製剤化される。特定の実施形態では、他の成分（例えば、溶解性を補助する成分、または防腐剤として機能する成分）が含まれる。特定の実施形態では、注射用懸濁液は、好適な液体担体、懸濁剤などを使用して調製される。特定の注射用医薬組成物は、単位剤形、例えば、アンプルまたは複数用量容器で、提供される。注射用の特定の医薬組成物は、油性または水性ビヒクル中の懸濁液、溶液、またはエマルションであり、製剤化剤（ｆｏｒｍｕｌａｔｏｒｙ  ａｇｅｎｔｓ）、例えば、懸濁剤、安定剤、及び／または分散剤を含有し得る。注射用医薬組成物での使用に適する特定の溶媒は、親油性溶媒及び脂肪油、例えば、ゴマ油、合成脂肪酸エステル、例えば、オレイン酸エチルまたはトリグリセリド、ならびにリポソームを含むが、これらに限定されない。水性注射懸濁液は、懸濁液の粘度を増加させる物質、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、またはデキストランを含有し得る。任意に、このような懸濁液はまた、好適な安定剤または高濃度溶液の調製を可能にするため薬剤の溶解性を増加させる薬剤を含有してもよい。
【０２３８】
特定の実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、治療的有効量の修飾オリゴヌクレオチドを含む。特定の実施形態では、治療的有効量は、疾患の症状を予防、緩和、または改善するのに、または処置された対象の生存を延長するのに十分である。治療的有効量の決定は、十分に当業者らの能力の範囲内である。
【０２３９】
特定の実施形態では、本明細書で提供される１つ以上の修飾オリゴヌクレオチドは、プロドラッグとして製剤化される。特定の実施形態では、インビボ投与の際に、プロドラッグは、生物学的、薬学的、または治療的により活性な形態のオリゴヌクレオチドに化学的に変換される。特定の実施形態では、プロドラッグは、対応する活性形態よりも投与が容易であるので有用である。例えば、特定の場合では、プロドラッグは、対応する活性形態よりもより（例えば、経口投与により）バイオアベイラブルであり得る。特定の場合では、プロドラッグは、対応する活性形態と比較して改善された溶解性を有し得る。特定の実施形態では、プロドラッグは、対応する活性形態よりも水溶性が低い。特定の場合では、このようなプロドラッグは、細胞膜を横断する優れた送達を有し、水溶性は、移動性に有害である。特定の実施形態では、プロドラッグは、エステルである。このような特定の実施形態では、エステルは、投与時に、カルボン酸へ代謝的に加水分解される。特定の場合では、カルボン酸含有化合物は、対応する活性形態である。特定の実施形態では、プロドラッグは、酸性基に結合した短いペプチド（ポリアミノ酸）を含む。このような実施形態の一部では、ペプチドは、投与時に切断されて、対応する活性形態を形成する。
【０２４０】
特定の実施形態では、プロドラッグは、活性化合物がインビボ投与時に再生されるように、薬学的に活性な化合物を修飾することにより作成される。プロドラッグは、薬物の代謝安定性若しくは輸送特徴を変更するように、副作用若しくは毒性を阻害するように、薬物の風味を改善するように、または薬物の他の特徴若しくは特性を変更するように設計することができる。インビボでの薬力学的プロセス及び薬物代謝の知見により、当業者らは、薬学的に活性な化合物が知られると、化合物のプロドラッグを設計することができる（例えば、Ｎｏｇｒａｄｙ（１９８５）Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ａ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｐａｇｅｓ  ３８８−３９２を参照のこと）。
【０２４１】
特定のキット
本発明は、キットも提供する。一部の実施形態では、キットは、修飾オリゴヌクレオチドを含む本発明の１つ以上の化合物を含み、オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、ｍｉＲ−１７の核酸塩基配列と相補的である。化合物は、本明細書に記載のヌクレオシドパターンのいずれかを有することができる。一部の実施形態では、化合物は、バイアル内に存在することができる。複数の、例えば、１０のバイアルが、例えば、調剤パック中に存在することができる。一部の実施形態では、バイアルは、シリンジで利用可能にするために製造される。キットは、化合物を使用するための使用説明書も含有する可能性がある。
【０２４２】
一部の実施形態では、キットは、化合物の対象への投与のために使用され得る。このような場合、キットは、ｍｉＲ−１７と相補的な修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物に加えて、次の：注射器、アルコールスワブ、綿球、及び／またはガーゼパッドのうちの１つ以上をさらに含むことができる。一部の実施形態では、化合物は、バイアル内ではなく、予め充填された注射器（例えば、針ガード付きの２７ゲージ、１／２インチ針を有する単回用量注射器など）で存在することができる。複数の、例えば、１０の予め充填されたシリンジは、例えば、分配パック中に存在することができる。キットは、ｍｉＲ−１７と相補的な修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を投与するための使用説明書も含有することができる。
【０２４３】
特定の実験モデル
特定の実施形態では、本発明は、実験モデルにおいて本発明の修飾オリゴヌクレオチドを使用及び／または試験する方法を提供する。当業者らは、本発明の医薬品を評価するために、このような実験モデルのプロトコールを選択及び修正することができる。
【０２４４】
一般に、修飾オリゴヌクレオチドは最初に、培養細胞において試験される。好適な細胞型としては、修飾オリゴヌクレオチドの送達がインビボで所望される細胞型に関連するものが挙げられる。例えば、本明細書に記載の方法の試験に好適な細胞型は、初代または培養細胞を含む。
【０２４５】
特定の実施形態では、培養細胞において、修飾オリゴヌクレオチドがｍｉＲ−１７の活性を阻害する程度が、評価される。特定の実施形態では、ｍｉｃｒｏＲＮＡ活性の阻害は、ｍｉｃｒｏＲＮＡのレベルを測定することにより評価され得る。あるいは、予測または検証されたｍｉｃｒｏＲＮＡ制御転写物のレベルが測定され得る。ｍｉｃｒｏＲＮＡ活性の阻害は、ｍｉＲ−１７制御転写物、及び／またはｍｉＲ−１７制御転写物によりコードされるタンパク質の増加をもたらし得る。さらに、特定の実施形態では、特定の表現型の結果が測定され得る。
【０２４６】
いくつかの動物モデルは、ヒト疾患のモデルにおけるｍｉＲ−１７の試験のための当業者に利用可能である。多発性嚢胞腎のモデルは、Ｐｋｄ１及び／またはＰｋｄ２における変異及び／または欠失を有するモデル、ならびに他の遺伝子に変異を含むモデルを含むが、これらに限定されない。Ｐｋｄ１及び／またはＰｋｄ２における変異及び／または欠失を含むＰＫＤの非限定例的なモデルとしては、下垂体モデル、例えば、Ｐｋｄ１におけるミスセンス変異及びＰｋｄ２の低減した発現または不安定な発現を有するモデル；誘導性条件付きノックアウトモデル；及び条件付きノックアウトモデルが挙げられる。Ｐｋｄ１及びＰｋｄ２以外の遺伝子の変異を含む非限定例的なＰＫＤモデルとしては、Ｐｋｈｄ１、Ｎｅｋ８、Ｋｉｆ３ａ、及び／またはＮｐｈｐ３の変異を有するモデルが挙げられる。ＰＫＤモデルは、例えば、Ｓｈｉｂａｚａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍａｎ  Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．，２００８；１７（１１）：１５０５−１５１６；Ｈａｐｐｅ  ａｎｄ  Ｐｅｔｅｒｓ，Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｎｅｐｈｒｏｌ．，２０１４；１０（１０）：５８７−６０１；及びＰａｔｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ，２０１３；１１０（２６）：１０７６５−１０７７０に概説される。
【０２４７】
特定の定量アッセイ
特定の実施形態では、ｍｉｃｒｏＲＮＡレベルは、インビトロまたはインビボで細胞または組織中で定量される。特定の実施形態では、ｍｉｃｒｏＲＮＡレベルの変化は、マイクロアレイ分析により測定される。特定の実施形態では、ｍｉｃｒｏＲＮＡレベルの変化は、ＴａｑＭａｎ（登録商標）ｍｉｃｒｏＲＮＡアッセイ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）などのいくつかの市販のＰＣＲアッセイのうちの１つにより測定される。
【０２４８】
抗ｍｉＲまたはｍｉｃｒｏＲＮＡ模倣物を用いるｍｉｃｒｏＲＮＡ活性の調節は、ｍＲＮＡのマイクロアレイプロファイリングにより評価され得る。抗ｍｉＲまたはｍｉｃｒｏＲＮＡ模倣物により調節される（増加させるか、または減少させるかのいずれか）ｍＲＮＡの配列は、ｍｉｃｒｏＲＮＡの標的であるｍＲＮＡの調節を、ｍｉｃｒｏＲＮＡの標的でないｍＲＮＡの調節と比較するために、ｍｉｃｒｏＲＮＡシード配列について検索される。このように、抗ｍｉＲのｍｉＲ−１７との相互作用、またはｍｉＲ−１７模倣物のその標的との相互作用を評価することができる。抗ｍｉＲの場合、発現レベルが増加したｍＲＮＡは、抗ｍｉＲが相補的であるｍｉｃｒｏＲＮＡとのシードマッチを含むｍＲＮＡ配列についてスクリーニングされる。
【０２４９】
抗ｍｉＲ−１７化合物によるｍｉｃｒｏＲＮＡ活性の調節は、ｍＲＮＡ自体またはそこから転写されたタンパク質のいずれかのレベルを測定することにより、ｍｉＲ−１７のｍＲＮＡ標的のレベルを測定することにより評価され得る。ｍｉｃｒｏＲＮＡのアンチセンス阻害は一般に、ｍＲＮＡ及び／またはｍｉｃｒｏＲＮＡのｍＲＮＡ標的のタンパク質のレベルにおける増加をもたらす。
【実施例】
【０２５０】
次の実施例は、本発明の一部の実施形態を、より完全に説明するために提示される。しかし、それらは決して、本発明の広い範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。
【０２５１】
当業者ら、本発明の趣旨から逸脱することなく、種々の化合物を設計するためにこの発見の根本的な原理を容易に採用するであろう。
【０２５２】
実施例１：多発性嚢胞腎のモデルにおける抗ｍｉＲ−１７
Ｐｋｈｄ１／ｃｒｅ；Ｐｋｄ２Ｆ／Ｆマウスは自然に、多発性嚢胞腎を発生し、これらをＡＤＰＫＤのモデルとして使用した。Ｐａｔｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ，２０１３；１１０（２６）：１０７６５−１０７７０を参照のこと。
【０２５３】
ｍｉＲ−１７と相補的な修飾オリゴヌクレオチド（抗ｍｉＲ−１７化合物）を、ＡＤＰＫＤのＰｋｈｄ１／ｃｒｅ；Ｐｋｄ２Ｆ／Ｆマウスモデルにおいて試験した。野生型マウスを、対照マウスとして使用した。ｍｉＲ−１７とは無関係のｍｉＲＮＡと相補的なオリゴヌクレオチドを、特異性に対する処置対照（抗ｍｉＲ対照）として使用した。抗ｍｉＲ−１７化合物は、ＤＮＡ、２′−ＭＯＥ、及びＳ−ｃＥｔ糖部分を有する、１９連結ヌクレオシド（５′−ＣＴＧＣＡＣＴＧＴＡＡＧＣＡＣＴＴＴＧ−３′；配列番号１５）長の完全にホスホロチオエート化されたオリゴヌクレオチドであった。
【０２５４】
１０〜１２日齢で、性別が一致したマウスの同腹仔を、合計３回の１日用量の抗ｍｉＲ−１７（２０ｍｇ／ｋｇ）またはＰＢＳで処置した。１９日齢で、マウスを、第４の用量の抗ｍｉＲ−１７（２０ｍｇ／ｋｇ）またはＰＢＳで処置した。抗ｍｉＲ−１７を、皮下投与した。（１）Ｐｋｈｄ１／ｃｒｅ；Ｐｋｄ２Ｆ／Ｆマウス、ＰＢＳ投与、ｎ＝８；（２）Ｐｋｈｄ１／ｃｒｅ；Ｐｋｄ２Ｆ／Ｆマウス、抗ｍｉＲ−対照投与、ｎ＝８；（３）Ｐｋｈｄ１／ｃｒｅ；Ｐｋｄ２Ｆ／Ｆマウス、抗ｍｉＲ−１７投与、ｎ＝８。２８日目に、マウスを死亡させ、腎重量、嚢胞指数、腎機能、及び腎臓マーカーを測定した。統計的有意性を、ウェルチのｔ検定により計算した。
【０２５５】
抗ｍｉＲ−１７で処置したＰｋｈｄ１／ｃｒｅ；Ｐｋｄ２Ｆ／Ｆマウスの腎重量対体重の平均比は、抗ｍｉＲ−対照またはＰＢＳのみを投与したＰｋｈｄ１／ｃｒｅ；Ｐｋｄ２Ｆ／Ｆマウスにおける腎重量対体重の平均比よりも１７％低かった（ｐ＝０．０１７）。抗ｍｉＲ−１７で処置したＰｋｈｄ１／ｃｒｅ；Ｐｋｄ２Ｆ／Ｆマウスは、抗ｍｉＲ−対照またはＰＢＳを投与したＰｋｈｄ１／ｃｒｅ；Ｐｋｄ２Ｆ／Ｆマウスと比較して、嚢胞指数の平均６％低減を示した。但し、差異は、統計的に有意ではなかった（ｐ＝０．０７２）。嚢胞指数は、総腎面積と比較した嚢胞面積の組織学的測定値である。抗ｍｉＲ−１７で処置したＰｋｈｄ１／ｃｒｅ；Ｐｋｄ２Ｆ／Ｆマウスの平均血清クレアチニンレベルは、抗ｍｉＲ−対照またはＰＢＳを投与したＰｋｈｄ１／ｃｒｅ；Ｐｋｄ２Ｆ／Ｆマウスよりも２５％低かった。但し、結果は、統計的に有意ではなかった（ｐ＝０．０６９）。抗ｍｉＲ対照またはＰＢＳに対して、抗ｍｉＲ−１７で処置したＰｋｈｄ１／ｃｒｅ；Ｐｋｄ２Ｆ／Ｆマウスでは、Ｋｉｍ１の発現は３３％低減し（ｐ＝０．０２４）、抗ｍｉＲ対照またはＰＢＳに対して、抗ｍｉＲ−１７で処置したＰｋｈｄ１／ｃｒｅ；Ｐｋｄ２Ｆ／Ｆマウスでは、Ｎｇａｌ発現は３６％低減した（ｐ＝０．０２８）。最終的に、抗ｍｉＲ対照またはＰＢＳに対して、抗ｍｉＲ−１７で処置したＰｋｈｄ１／ｃｒｅ；Ｐｋｄ２Ｆ／Ｆマウスでは、血中尿素窒素（ＢＵＮ）レベルは２０％低減した（ｐ＝０．００６）。ＢＵＮは、腎機能の血液マーカーである。より高いＢＵＮは、不良な腎機能と相関する。ＢＵＮの低減は、腎障害及び腎損傷の低減、ならびに機能の改善の指標である。
【０２５６】
これらの結果は、抗ｍｉＲ−１７処置が、一次処置のエンドポイントである腎容積において、Ｐｋｈｄ１／ｃｒｅ；Ｐｋｄ２Ｆ／Ｆマウスの陽性結果をもたらすことを実証する。抗ｍｉＲ−１７処置は、Ｐｋｈｄ１／ｃｒｅ；Ｐｋｄ２Ｆ／Ｆマウスにおいて、ＢＵＮ及び腎障害ｍＲＮＡバイオマーカーＫｉｍ１及びＮｇａｌの発現も有意に低減させた。最終的に、抗ｍｉＲ−１７処置は、Ｐｋｈｄ１／ｃｒｅ；Ｐｋｄ２Ｆ／Ｆマウスにおいて、血清クレアチニンの低減及び嚢胞指数の低減に向かう傾向をもたらした。これらの結果は、抗ｍｉＲ対照では観察されず、それらが、具体的には、ｍｉＲ−１７阻害によるものであることが示された。
【０２５７】
実施例３：Ｐｋｈｄ１／ｃｒｅ；Ｐｋｄ２Ｆ／Ｆマウスの腎臓における抗ｍｉＲ分布
抗ｍｉＲ化合物を含むオリゴヌクレオチドは、腎臓内のいくつかの細胞型に分布することが知られている。Ｃｈａｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ．，２０１２，１２１ｒａ１８により報告されるように、Ｃｙ３標識抗ｍｉＲの正常マウスまたは腎障害に罹患しやすいマウス（片側性尿管閉塞、間質性線維化のモデル）のいずれかへの次の投与後、腎臓における最大蛍光強度は、近位尿細管上皮であった。内皮細胞、周皮細胞、筋線維芽細胞、及びマクロファージは全て、検出可能な量のＣｙ３標識抗ｍｉＲも含有していた。しかし、糸球体、特に、足場細胞は、化学的に修飾されたオリゴヌクレオチドの既知の分布と一致する有意な量の抗ｍｉＲを受け入れないようであった（Ｍａｓａｒｊｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，２００４，１４，２９９−３１０）。
【０２５８】
多発性嚢胞腎のマウスモデルにおける抗ｍｉＲの分布を調査するために、抗ｍｉＲ−１７化合物を、Ｐｋｈｄ１／ｃｒｅ；Ｐｋｄ２Ｆ／Ｆマウスの２つの異なる群である、１０日齢で開始する群（ｎ＝４；前被嚢形と考えられる）及び２１日齢で開始する群（ｎ＝４；嚢胞性と考えられる）、ならびに２１日齢で開始する野生型マウスの１群（ｎ＝４）に投与した。各群では、化合物を、３回用量で１日２０ｍｇ／ｋｇ投与した。最終投与の３日後に、マウスを死亡させ、腎臓を採取し、組織学的分析のために処理した。ホスホロチオエート化オリゴヌクレオチドを認識する抗体を使用して、抗ｍｉＲ−１７を検出した。
【０２５９】
抗ｍｉＲ−１７化合物に対するマーカーとしてのホスホロチオエート化オリゴヌクレオチドまたは集合管に対するマーカーとしてのドリコスビフロルス凝集素（ＤＢＡ）を認識する抗体を用いて、腎臓組織の切片を染色した。全ての群において、染色の大部分は、おそらく、近位尿細管上皮の集合管の外側に見出された。抗ｍｉＲ−１７は、多数の嚢胞がすでに腎臓に形成されていた後に投与された時でさえ、集合管嚢胞に送達された。集合管における染色は、嚢胞において、正常な集合管と比較して大きく見え、化合物の送達が病状と共に増加し得ることが示唆された。
【０２６０】
機能的送達を確認するために、ＲＴ−ｑＰＣＲを使用して、抗ｌｅｔ−７化合物により誘導される遺伝子発現変化を測定した。３６個のｌｅｔ−７標的遺伝子のパネルは、Ｐｋｈｄ１／ｃｒｅ；Ｐｋｄ２Ｆ／Ｆマウス及び抗ｌｅｔ−７を投与した野生型マウスの前被嚢形及び嚢胞腎の双方における発現において有意な増加を示した。
【０２６１】
これらの結果により、抗ｍｉＲ化合物を、嚢胞性腎臓にうまく送達して、ｍｉＲＮＡを阻害することができることが実証する。
【０２６２】
実施例３：ｍｉＲ−１７ファミリーメンバーの阻害
多数のｍｉｃｒｏＲＮＡは、シード配列同一性を共有し、それにより、ｍｉｃｒｏＲＮＡファミリーのメンバーである。ｍｉｃｒｏＲＮＡのシード領域が、標的特異性の決定因子であるので、ｍｉｃｒｏＲＮＡファミリーメンバーは多くの場合、同様のセットのメッセンジャーＲＮＡ標的を制御する。シード領域の外側では、ｍｉｃｒｏＲＮＡファミリーメンバーは、様々な程度の配列同一性を共有する。
【０２６３】
このようなファミリーの１つは、ｍｉＲ−１７、ｍｉＲ−２０ａ、ｍｉＲ−２０ｂ、ｍｉＲ−９３、ｍｉＲ−１０６ａ、及びｍｉＲ−１０６ｂを含むｍｉＲ−１７ファミリーである。本ｍｉｃｒｏＲＮＡファミリーの個々のｍｉｃｒｏＲＮＡは、３つの異なるｍｉｃｒｏＲＮＡクラスター内の３つの異なる染色体上に位置する。ｍｉＲ−１７及びｍｉＲ−２０ａは、ヒト１３番染色体上のｍｉＲ−１７〜９２クラスター内に存在し；ｍｉＲ−２０ｂ及びｍｉＲ−１０６ａは、ヒトＸ染色体上のｍｉＲ−１０６ａ〜３６３クラスター内に存在し、ｍｉＲ−９３及びｍｉＲ−１０６ｂは、ヒト７番染色体上のｍｉＲ−１０６ｂ〜２５クラスター内に存在する（図１Ａ）。これらの３つのクラスターのそれぞれは、ｍｉＲ−１７ファミリーのメンバーではない他のｍｉｃｒｏＲＮＡを含有し、それにより、ｍｉＲ−１７  ２〜７シード配列を含まない。しかし、これらのｍｉｃｒｏＲＮＡは、図１Ｂに示されるように、他のｍｉＲファミリーのメンバーである。ｍｉＲ−１７ファミリーメンバーは、図１Ｂに示され、ｍｉＲ−１７  ２〜７シード配列は太字である。ｍｉＲ−１８ファミリーメンバーのシード配列（ｍｉＲ−１８ａ及びｍｉＲ−１８ｂ）は、ｍｉＲ−１７  ２〜７シード配列と比較して、１核酸塩基の差異を含有するが、シード領域外では配列は異なる。
【０２６４】
ｍｉｃｒｏＲＮＡファミリーメンバー間の配列同一性のために、かつｍｉｃｒｏＲＮＡ配列と１００％未満の相補性を有する修飾オリゴヌクレオチドが依然として、そのｍｉｃｒｏＲＮＡの活性を阻害し得るので、ファミリーの第１メンバーの核酸塩基配列と１００％相補的な、かつファミリーの１つ以上の他のメンバーと１００％未満相補的である核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉｃｒｏＲＮＡファミリーの最初のメンバーの活性を阻害することに加えて、ファミリーの１つ以上の他のメンバーを阻害し得る。例えば、ｍｉＲ−１７（５’−ＣＴＧＣＡＣＴＧＴＡＡＧＣＡＣＴＴＴＧ−３’；配列番号１５）と１００％相補的な、かつｍｉＲ−１７ファミリーの他のメンバー（表１）と１００％未満相補的な核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−１７ファミリーのそれらの他のメンバーを阻害することが期待される。
【表１】
2018528945.tif 000005
【０２６５】
ｍｉＲ−１７ファミリーメンバーの阻害を試験するために、ルシフェラーゼレポーターアッセイを使用した。ルシフェラーゼ遺伝子の３′ＵＴＲと相補的なｍｉｃｒｏＲＮＡ結合部位を有する、ｍｉＲ−１７、ｍｉＲ−２０ａ、ｍｉＲ−２０ｂ、ｍｉＲ−９３、及びｍｉＲ−１０６ｂのそれぞれに対するルシフェラーゼレポータープラスミドを構築した。各ｍｉｃｒｏＲＮＡについて、ＨｅＬａ細胞を、ｍｉｃｒｏＲＮＡ模倣物及び同種のルシフェラーゼレポーターでトランスフェクトし、続いて、抗ｍｉＲ−１７でトランスフェクトした。ｍｉＲ−１７、ｍｉＲ−２０ａ、ｍｉＲ−２０ｂ、ｍｉＲ−９３、及びｍｉＲ−１０６ｂのそれぞれを、抗ｍｉＲ−１７化合物で阻害して、抗ｍｉＲ−１７及びｍｉｃｒｏＲＮＡ配列の間に存在するミスマッチがある時でも、抗ｍｉＲ−１７化合物が、ｍｉＲ−１７ファミリーの複数のメンバーを阻害することが実証された。
【０２６６】
別のアッセイであるｍｉｃｒｏＲＮＡポリソームシフトアッセイ（ｍｉＰＳＡ）により、抗ｍｉＲ−１７化合物が、ｍｉＲ−１７ファミリーの３つのメンバー、ｍｉＲ−１７、ｍｉＲ−２０ｂ、及びｍｉＲ−１０６ａに直接関与することが確認された（Ａｎｄｒｏｓａｖｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２０１５，４４：ｅ１３）。ｍｉＰＳＡは、活性ｍｉＲＮＡが、翻訳活性のある高分子量（ＨＭＷ）のポリソームにおいて、そのｍＲＮＡ標的に結合するという原理に依存するが、阻害されたｍｉＲＮＡは、低ＭＷ（ＬＭＷ）ポリソームに存在する。抗ｍｉＲを用いる処置は、ＨＭＷポリソームからＬＭＷポリソームへのｍｉｃｒｏＲＮＡのシフトをもたらす。従って、ｍｉＰＳＡは、相補的抗ｍｉＲによるｍｉｃｒｏＲＮＡ標的関与の直接測定を提供する。他方では、非ｍｉＲ−１７ファミリーは、ｍｉＲ−１８ａが、（単一のヌクレオチドＡ／Ｇの差異のみを有するｍｉＲ−１７及びｍｉＲ−１８シード配列により説明され得る）高用量時に高い交差反応性を予想外に示したという１つの例外を除いて、比較的に反応しなかったことを、Ａｎｄｒｏｓａｖｉｃｈらは、さらに確認した（図１）。
【０２６７】
従って、抗ｍｉＲ−１７化合物を用いる処置は、抗ｍｉＲ−１７及びｍｉｃｒｏＲＮＡ配列の間に存在するミスマッチがある時でも、ｍｉＲ−１７ファミリーの全てのメンバーを阻害する。
【０２６８】
実施例４：ヒトＡＤＰＫＤ嚢胞におけるｍｉＲ−１７阻害
ヒトＡＤＰＫＤ嚢胞由来の初代培養において、ｍｉＲ−１７阻害の効果を研究した。凍結したヒト初代ＡＤＰＫＤ細胞は、Ｋａｎｓａｓ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ（ＫＵＭＣ）のＲｅｓｅａｒｃｈ  Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｍｏｄｅｌｓ  Ｃｏｒｅにより提供された。上述したように、５％のＦＢＳ、５ｕｇ／ｍｌのインスリン、５ｕｇ／ｍｌのトランスフェリン、及び５ｎｇ／ｍｌの亜セレン酸ナトリウム（ＩＴＳ）（Ｌｏｎｚａ）を補充したＤＭＥＭ：Ｆ１２培地（Ｇｉｂｃｏ）中で、ヒト初代ＡＤＰＫＤ細胞を成長させた（Ｙａｍａｇｕｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｒｅｎａｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ，２０１０，２９９：Ｆ９４４−９５１）。
【０２６９】
増殖アッセイ
Ｃａ＋２及びＭｇ＋２不含ＰＢＳ中のトリプシンの１：１０希釈液を使用して、８０％コンフルエントで、ヒトＡＤＰＫＤ細胞をトリプシン処理した。細胞を、９６ウェルプレート中、２５００細胞／ウェルの密度で、製造者のプロトコールに従ってＲＮＡｉＭＡＸ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）でトランスフェクトした。処置は次の通りであった：
●抗ｍｉＲ−１７（３ｎＭ、１０ｎＭ、または３０ｎＭの用量で；各処置についてｎ＝５）
●対照オリゴヌクレオチド（表３に示す用量で；各処置についてｎ＝５）。対照処置を変えるために、２つの異なる対照群を使用した。ドナー１〜４、３、または５由来の培養物について、それぞれ３０ｎＭの単回用量で、対照オリゴヌクレオチドを試験した。ドナー５由来の細胞について、３つの異なる用量で、単一の対照オリゴヌクレオチドを試験した。
●ＲＮＡｉＭＡＸ（ｎ＝５）を用いるモックトランスフェクション
●ＰＢＳ（ｎ＝５）
【０２７０】
製造者のプロトコールに従って３日目にＭＴＴアッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して、細胞生存率を測定した。結果を表２に示す。各抗ｍｉＲ−１７処置群または対照オリゴヌクレオチド処置群の平均値を、モック処置群の平均値に正規化する。標準誤差を示す。ペアワイズ比較のためのＳｔｕｄｅｎｔのｔ検定または分散分析（ＡＮＯＶＡ）、続いて、複数比較のためのＴｕｋｅｙの事後検定を使用して、統計分析を実施した。Ｐ値は、次の通りである：＊はＰ＜０．０５を示し、＊＊はＰ＜０．０１を示し、＊＊＊はＰ＜０．００５を示し、＊＊＊＊はＰ＜０．００１を示す。抗ｍｉＲ−１７処置の場合、Ｐ値は、モック処置と比較して有意性を示す。対照オリゴヌクレオチド処置の場合、２つの異なるＰ値を示し、一方は、モック処置と比較して有意性を示し（表２のＰ値１）、他方は、３０ｎＭの抗ｍｉＲ−１７での処置と比較して有意性を示す（表２のＰ値２）。Ｎ．ｔ．は、試験せずを示す。
【０２７１】
抗ｍｉＲ−１７を用いる処置は、モックトランスフェクション処置と比較して、嚢胞上皮の増殖において用量依存的な低減を生じた。抗ｍｉＲ−１７を用いる処置とは異なり、対照オリゴヌクレオチド処置の大部分は一貫して、増殖を統計的に有意な量で低減させなかった。
【０２７２】
一例として、３０ｎＭの抗ｍｉＲ−１７を含むドナー１由来の嚢胞上皮培養物の処置は、モックトランスフェクションと比較して、細胞増殖を４７％低減させた（Ｐ＜０．０００１）が、対照オリゴヌクレオチドを用いる処置は、細胞増殖を統計的に有意な量で低減させなかった。さらに、同じドナー由来の嚢胞上皮培養物の場合、３０ｎＭの抗ｍｉＲ−１７での処置の、３つの対照処置のそれぞれとの比較は、抗ｍｉＲ−１７処置による細胞増殖における統計的に有意な低減も明らかにする（Ｐ＜０．０００１）。
【表２】
2018528945.tif 000006
【０２７３】
インビトロ嚢胞形成
ヒト初代ＡＤＰＫＤ細胞を、８０％コンフルエントまで成長させ、Ｃａ＋２及びＭｇ＋２不含ＰＢＳ中のトリプシンの１：１０希釈液を使用して、トリプシン処理をした。１日目に、６ウェルプレートフォーマット中で、ＲＮＡｉＭＡＸを使用して、細胞をトランスフェクトした。処置群は、次の通りである。
●１ｎＭ、５ｎＭ、または２０ｎＭの用量の抗ｍｉＲ−１７（各用量についてｎ＝３）
●５つの対照オリゴヌクレオチド、それぞれ２０ｎＭの用量（各対照オリゴヌクレオチドについてｎ＝３）
●ＲＮＡｉＭＡＸ（ｎ＝３）を用いるモックトランスフェクション
●ＰＢＳ
【０２７４】
トランスフェクションの２４時間後に、細胞をトリプシン処理して単細胞浮遊液とし、計数し、４：５の比のマトリゲルを加えた１３０μｌの培地中、４０００細胞／ウェル密度で９６ウェルプレートにプレーティングした。マトリゲル凝固時に、完全成長培地を、ウェルに添加した。プレーティングの８日後まで、７２時間毎に、培地を補充し、その時、嚢胞サイズ及び数を測定した。
【０２７５】
Ｏｌｙｍｐｕｓ  Ｄ８光学顕微鏡を使用して、嚢胞増殖について、各ウェルを検査した。７２ｄｐｉ、２４４８×１９２０ピクセルの２８個の２４ビットカラーＴＩＦＦ画像として、２８個の焦点面から、１５０μｍの間隔で、ウェルを見下ろして（Ｚ軸で）、Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＤＰ２６カメラ（Ｏｌｙｍｐｕｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を用いて、画像を記録した。ＥＢＩｍａｇｅ  Ｂｉｏｃｏｎｄｕｃｔｏｒ  ｐａｃｋａｇｅ  １５を使用したカスタムＲスクリプト（Ｒ  Ｃｏｒｅ  Ｔｅａｍ  ２０１５  Ｒ：統計的計算のための言語及び環境、Ｒ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ、オーストリーウィーン、ｗｗｗ．Ｒ−ｐｒｏｊｅｃｔ．ｏｒｇ）を使用して、各ウェルからの各焦点面の画像を処理した。このスクリプトは、自動化され、かつ再現可能な仕方で、嚢胞を検出し、全てのドナーにおいて、全てのマトリゲルアッセイに適用した。要約すると、人為的結果について、各画像をマスクし、高域透過型Ｌａｐｌａｃｉａｎフィルターを介してフィルタリングし、適応閾値を用いてセグメント化した。ピクセルダイレーション、穴埋め、及びピクセルエロージョンにより、セグメント化された画像中で検出された対象物をさらに処理した。各セグメント化された対象物のサイズ、半径、及び離心率統計値を収集した。対象物は、１５ピクセル以下の平均半径を有し、または２００ピクセルを超える対象物の平均半径若しくは半径の変動係数が０．２を超えるものであり、または検出された対象物の離心率が０．７５を超えた場合、フィルタリングで除外された。嚢胞が、多くの場合、焦点面間の距離よりも大きかったので、このような嚢胞を２回以上計数することは避けられた。１つの画像内の嚢胞対象物が、隣接する画像の同じｘ座標及びｙ座標内（例えば、ｚ軸上の１つの焦点面）にある場合、同じ嚢胞として、これを計数した。各ウェルの全ての画像を、ｚ軸上でこのように逐次的に処理した。最終的に、各嚢胞が球体であると仮定して、最大の対象物の平均半径に、４／３πｒ３を乗じることにより、各嚢胞の体積を推定した。
【０２７６】
結果を表３に示す。各抗ｍｉＲ−１７処置群または対照オリゴヌクレオチド処置群の平均値を、モック処置群の平均値に正規化する。標準誤差を示す。ペアワイズ比較のためのＳｔｕｄｅｎｔのｔ検定または分散分析（ＡＮＯＶＡ）、続いて、複数比較のためのＴｕｋｅｙの事後検定を使用して、統計分析を実施した。Ｐ値は、次の通りである：＊はＰ＜０．０５を示し、＊＊はＰ＜０．０１を示し、＊＊＊はＰ＜０．００５を示し、＊＊＊＊はＰ＜０．００１を示す。抗ｍｉＲ−１７処置の場合、Ｐ値は、モック処置と比較して有意性を示す。対照オリゴヌクレオチド処置の場合、２つの異なるＰ値を示し、一方は、モック処置と比較して有意性を示し（表３のＰ値１）、他方は、３０ｎＭの抗ｍｉＲ−１７での処置と比較して有意性を示す（表３のＰ値１）。
【０２７７】
抗ｍｉＲ−１７を用いる処置は、モックトランスフェクション処置と比較して、嚢胞数おいて用量依存的な低減を生じた。抗ｍｉＲ−１７を用いる処理とは異なり、対照オリゴヌクレオチド処置の大部分は一貫して、嚢胞数を統計的に有意な量で低減させなかった。
【０２７８】
一例として、３０ｎＭの抗ｍｉＲ−１７を含むドナー３由来の嚢胞上皮培養物の処置は、モックトランスフェクションと比較して、細胞増殖を６３％低減させた（Ｐ＜０．０００１）が、対照オリゴヌクレオチドを用いる処置は一貫して、嚢胞数を統計的に有意な量で低減させなかった。さらに、同じドナー由来の嚢胞数の場合、３０ｎＭの抗ｍｉＲ−１７での処置の、３つの対照処置のそれぞれとの比較は、抗ｍｉＲ−１７処置による細胞増殖における統計的に有意な低減も明らかにする（Ｐ＜０．０００１）。
【表３】
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【０２７９】
これらのデータは、抗ｍｉＲ−１７を用いる処置が、ヒトＡＤＰＫＤ患者由来の嚢胞の増殖を阻害することを実証している。
【０２８０】
実施例５：ＰＫＤのＰｃｙモデルにおける抗ｍｉＲ−１７
Ｎｐｈｐ３の変異を持つＰｃｙマウスは自然に、Ｐｋｈｄ１／ｃｒｅ；Ｐｋｄ２Ｆ／Ｆマウスで観察されたものよりも疾患の進行が遅い多発性嚢胞腎を発生する。ＰＣＹモデルは、ヒトＰＫＤのモデル、ならびに髄質性嚢胞腎／髄質嚢胞腎（ＮＰＨ／ＭＣＤ）複合体のモデルとして使用される。Ｐｃｙマウスモデルにおいて、ｍｉＲ−１７と相補的な修飾オリゴヌクレオチド（抗ｍｉＲ−１７化合物）を試験した。野生型マウスを、対照マウスとして使用した。ｍｉＲ−１７とは無関係のｍｉＲＮＡと相補的なオリゴヌクレオチドを、特異性に対する処置対照（抗ｍｉＲ対照）として使用した。抗ｍｉＲ−１７化合物は、ＤＮＡ、２′−ＭＯＥ、及びＳ−ｃＥｔ糖部分を有する、１９連結ヌクレオシド（５′−ＣＴＧＣＡＣＴＧＴＡＡＧＣＡＣＴＴＴＧ−３′；配列番号１５）長の完全にホスホロチオエート化されたオリゴヌクレオチドであった。
【０２８１】
Ｐｃｙマウス（ＣＤ１−ｐｃｙｌｕｓｍ）を、ＰｒｅＣｌｉｎＯｍｉｃから入手した。４週齢から、Ｐｃｙマウスを、抗ｍｉＲ−１７（皮下注射により５０ｍｇ／ｋｇ）またはＰＢＳで週に１回、合計２６用量処置した。抗ｍｉＲ−１７群は、１２匹のマウスを含有し、ＰＢＳ対照群は、１１匹のマウスを含有した。
【０２８２】
さらなる対照群は、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから入手した年齢が一致したＣＤ１マウスを含んでいた。ＣＤ１マウスに、週に１回、合計２６週間、ＰＢＳを皮下注射した。
【０２８３】
２６週間の処置期間の終了時に、マウスを死亡させ、１つの腎臓を抽出及び計量し、もう１つの腎臓を、組織学的分析のために処理した。血中尿素窒素（ＢＵＮ）及び血清クレアチニンを測定した。
【０２８４】
組織学的分析のために、１つの腎臓を、冷ＰＢＳ及び４％（重量／体積）のパラホルムアルデヒドで灌流し、次に、採取した。腎臓を、４％のパラホルムアルデヒドで２時間固定し、次に、切片化のためにパラフィンに包埋した。腎臓の矢状切片を、ヘマトキシリン及びエオシン（Ｈ＆Ｅ）で染色した。全ての画像処理ステップを、自動化し、自由に利用できるオープンソースソフトウェア：画像処理ツールのＥＢＩｍａｇｅ  Ｂｉｏｃｏｎｄｕｃｔｏｒパッケージ２及びＩｍａｇｅＭａｇｉｃｋ３セットの関数を使用したＲ１スクリプトで行った。Ａｐｅｒｉｏ  ＳＶＳフォーマットの腎臓のＨ＆Ｅ画像を、ＴＩＦＦ画像に変換し、最初のフレームを、画像解析のために保持した。最初に、画像セグメンテーションを使用して、総腎断面積を計算した。画像セグメンテーションを同様に使用して、腎臓嚢胞を含む全ての内部構造を見出した。フィルターを適用して、平均半径が３ピクセル未満の全ての対象物を除去した。嚢胞指数は、総腎面積で除した嚢胞に関連する画像面積である。個々の動物に対し縦方向及び横方向の腎臓切片について、嚢胞指数を別々に計算した。個々の動物の、組み合わせた嚢胞指数を、各処置群について比較した。
【０２８５】
ＰＢＳで処置したＣＤ１マウスの結果を使用して、非疾患モデルの各パラメーター（腎重量／体重比、嚢胞指数、血中尿素窒素、及び血清クレアチニン）に対するベンチマークを得た。予想通り、処置したＣＤ１マウスは、ＰＫＤに関連する病状を示さなかった。
【０２８６】
抗ｍｉＲ−１７で処置したＰｃｙマウスの腎重量対体重の平均比は、ＰＢＳのみを投与したＰｃｙマウスの腎重量対体重の平均比よりも１９％低かった（ｐ＝０．０００３）（図２Ａ）。抗ｍｉＲ−１７で処置したＰｃｙマウスは、ＰＢＳのみを投与したＰｃｙマウスと比較して、嚢胞指標において平均２８％の低減を示した（ｐ＝０．００８）（図２Ｂ）。ＢＵＮまたは血清クレアチニンに有意な変化は、観察されなかった。Ｄｕｎｎｅｔｔの多重比較補正後の一元ＡＮＯＶＡ分析のＰ値を示す。
【０２８７】
これらのデータは、ＰＫＤのさらなるモデルにおいて、抗ｍｉＲ−１７を用いる処置が腎重量及び嚢胞指数の低減をもたらすことを実証する。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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