(57)【要約】  本発明は、限定されないが癌マーカーを含む、組成物および癌の診断、探索、および治療方法に関する。特に、本発明は、前立腺癌の処置における診断、予後、及び決定に使用するためのＬＲＧ１タンパク質マーカーに関する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
前立腺癌の被験者に対し予後を提供するか、あるいは特定の治療処置のために前立腺癌の被験者を選択するための方法であって、
（ａ）インビトロアッセイを用いて、上記被験者からのサンプル中のＬＲＧ１ポリペプチドレベルを検出すること、及び
（ｂ）上記ＬＲＧ１ポリペプチドレベルを、関連した対照被験者または被験者群のＬＲＧ１ポリペプチドの参照レベルと比較すること、を含み、
上記参照に対し変化した上記ＬＲＧ１ポリペプチドの量は、病気の再発の指標、被験者の生存の指標、及び被験者が特定の治療を有する処置の候補となる指標からなる群から選択される指標を提供する、方法。
【請求項２】
上記参照レベルと比較した、生物学的サンプル中の上記ＬＲＧ１ポリペプチドの量の上昇は、上記被験者の生存可能性が減少したという指標である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
上記参照レベルと比較した、生物学的サンプル中の上記ＬＲＧ１ポリペプチドの量の上昇は、被験者が、アンドロゲン抑制療法または他の補助療法に加え放射線治療を有する処置の候補となる、あるいは、アンドロゲン抑制療法または他の補助療法と放射線治療とを組み合わせた処置に対し好ましく反応する可能性が高いという指標である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
上記インビトロアッセイは、イムノアッセイである、請求項１〜４の何れか１項に記載の方法。
【請求項５】
上記サンプルは、骨髄、血液、血清、血漿、尿、前立腺液、及び精液からなる群から選択される、請求項１〜４の何れか１項に記載の方法。
【請求項６】
上記サンプルは、前立腺癌細胞を含む、請求項１〜５の何れか１項に記載の方法。
【請求項７】
上記検出することは、上記サンプルを上記ＬＲＧ１と特異的に結合する試薬に接触させることを含む、請求項１〜６の何れか１項に記載の方法。
【請求項８】
上記試薬は、上記ＬＲＧ１と特異的に結合する抗体である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
さらに、１つ以上の付加的マーカーの存在、非存在、またはレベルを検出するステップを含む、請求項１〜８の何れか１項に記載の方法。
【請求項１０】
上記マーカーは、ＰＳＡ及び／またはＧＤＦ１５である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
上記被験者は、手術及び／または放射線治療を受けていた、請求項１〜１０の何れか１項に記載の方法。
【請求項１２】
上記参照レベルと比較した、生物学的サンプル中の上記ＬＲＧ１ポリペプチドの量の上昇は、上記被験者が、上記手術及び／または放射線治療後に前立腺に起因した死亡リスクが高いという指標である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
上記被験者は、アンドロゲン抑制療法及び放射線治療を組み合わせて受けていた、あるいは受けている、請求項１〜１２の何れか１項に記載の方法。
【請求項１４】
上記被験者の骨髄における上記ＬＲＧ１ポリペプチドの量の上昇は、前立腺癌の再発及び／または上記被験者の生存のリスクが増加するという指標である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
被験者の生存可能性の決定、または被験者が特定の治療を有する処置の候補となると決定するに際し、上記被験者のサンプル中のＬＲＧ１ポリペプチドの上昇したレベルを特異的に検出する試薬の使用。
【請求項１６】
上記試薬は、上記ＬＲＧ１と特異的に結合する抗体である、請求項１５に記載の使用。
【請求項１７】
上記サンプルは、前立腺癌細胞を含む、請求項１５に記載の使用。
【請求項１８】
上記サンプルは、骨髄、血液、血清、血漿、尿、前立腺液、及び精液からなる群から選択される、請求項１５に記載の使用。
【請求項１９】
上記参照レベルと比較した、生物学的サンプル中の上記ＬＲＧ１ポリペプチドの量の上昇は、上記被験者の生存可能性が減少したという指標である、請求項１５に記載の使用。
【請求項２０】
上記参照レベルと比較した、生物学的サンプル中の上記ＬＲＧ１ポリペプチドの量の上昇は、被験者が、アンドロゲン抑制療法または他の補助療法に加え放射線治療を有する処置の候補となる、あるいは、アンドロゲン抑制療法または他の補助療法と放射線治療とを組み合わせた処置に対し好ましく反応する可能性が高いという指標である、請求項１５に記載の使用。
【請求項２１】
さらに、１つ以上の付加的マーカーの存在、非存在、またはレベルを検出することを含む、請求項１５〜２０の何れか１項に記載の使用。
【請求項２２】
上記マーカーは、ＰＳＡ及び／またはＧＤＦ１５である、請求項２１に記載の使用。
【請求項２３】
上記被験者は、手術及び／または放射線治療を受けていた、請求項１５〜２２の何れか１項に記載の使用。
【請求項２４】
上記参照レベルと比較した、生物学的サンプル中の上記ＬＲＧ１ポリペプチドの量の上昇は、上記被験者が、上記手術及び／または放射線治療後に前立腺に起因した死亡リスクが高いという指標である、請求項２３に記載の使用。
【請求項２５】
上記被験者は、アンドロゲン抑制療法及び放射線治療を組み合わせて受けていた、あるいは受けている、請求項１５〜２２の何れか１項に記載の使用。
【請求項２６】
上記被験者の骨髄における上記ＬＲＧ１ポリペプチドの量の上昇は、前立腺癌の再発及び／または上記被験者の生存のリスクが増加する指標である、請求項２５に記載の使用。
【請求項２７】
被験者からのサンプル中のＬＲＧ１ポリペプチドレベルを検出するためのキットであって、
（ａ）ＬＲＧ１ポリペプチドを特異的に検出する試薬、及び
（ｂ）基準ゲージ、を含む、キット。
【請求項２８】
上記試薬は、抗体である、請求項２７に記載のキット。
【請求項２９】
上記基準ゲージは、非前立腺癌細胞サンプルにおけるＬＲＧ１のレベルである、請求項２７に記載のキット。
【請求項３０】
上記キットは、さらに、ＰＳＡ及び／またはＧＤＦ１５のレベルを検出するための試薬を含む、請求項２７に記載のキット。
【請求項３１】
上記キットは、さらに、被験者の生存の指標、上記被験者の前立腺癌の再発リスクが増加するという指標、及び被験者が特定の治療を有する処置の候補となる指標からなる群から選択された指標を提供するように構成された、コンピュータソフトウェア及びコンピュータプロセッサを含む、請求項２７に記載のキット。
【請求項３２】
（ａ）被験者からのサンプル中のＬＲＧ１ポリペプチドレベルを特異的に検出する試薬、
（ｂ）基準ゲージ、及び
（ｃ）被験者の生存の指標、上記被験者の前立腺癌の再発リスクが増加するという指標、及び被験者が特定の治療を有する処置の候補となる指標からなる群から選択された指標を提供するように構成された、コンピュータソフトウェア及びコンピュータプロセッサ、を含む、システム。
【請求項３３】
上記試薬は、抗体である、請求項３２に記載のシステム。
【請求項３４】
上記基準ゲージは、非前立腺癌細胞サンプルにおけるＬＲＧ１のレベルである、請求項３２に記載のシステム。
【請求項３５】
上記システムは、さらに、１つ以上の付加的マーカーの存在、非存在、またはレベルを検出する試薬を含む、請求項３２に記載のシステム。
【請求項３６】
上記マーカーは、ＰＳＡ及び／またはＧＤＦ１５である、請求項３５に記載のシステム。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（関連出願のクロスリファレンス）
本出願は、２０１５年１月５日に出願した係属中の米国仮出願第６２/０９９，８３７号に対する優先権を主張するものである。本出願には、上記仮出願の全体が参照により含まれる。
【０００２】
（発明の技術分野）
本発明は、限定されないが癌マーカーを含む、組成物および癌の診断、探索、および治療方法に関する。特に、本発明は、前立腺癌の処置における診断、予後、及び決定に使用するためのＬＲＧ１タンパク質マーカーに関する。
【０００３】
（発明の背景技術）
前立腺癌は、ノルウェー、多くの西ヨーロッパ、及びＵＳＡの男性において、最もよく起きる非上皮性の癌である。毎年、世界的に約９００万の症例が新たに診断され、前立腺癌により約２６０，０００人が死亡し、前立腺癌は、癌に関連する死亡の６番目の主要な原因として位置付けられている。人において、前立腺癌は、肺癌および結腸直腸癌に次いで、癌関連致死の３番目に最もよく起きる原因を示す。５０歳以下の人での発生は、まれであり、家系および遺伝子的疾病素質にしばしば強く関連する。発生率は、年齢に伴い顕著に上昇し、コホート群研究において、民族性が重要な危険因子であることが報告されている。限局性疾患に対する５年生存率は、１００％であるが、進行するに従い前記生存率が＜５０％に低下する。
【０００４】
少数の検出された症例（〜２０％）で起きる進行の長期間化（５〜１０年）と共に前立腺癌の高い発生率が原因で、診断時に、検出を早期に改善しリスク層別化を強固に改善する必要が喫緊にある。初期の処理（外科手術または放射線治療）から最も恩恵を受け、最も集中的な処置後追跡検査および再発に対し必要な付加的処置（例えば、抗アンドロゲン、アンドロゲン合成阻害剤、化学療法、ビームライン放射線治療）からも恩恵を受ける人々において、貴重な臨床的資源が可能な限り効率的な対象となることを確実にするために、これは重要である。
【０００５】
前立腺癌の最適な試験は、転移性の進行を予後するバイオマーカーと前立腺癌に対し考慮すべき特異性があるバイオマーカーとを組み合わせたパネルであり、生物的プロセスの保存によって癌の種類間でおそらく共有されている。多くの前立腺特異的バイオマーカーが報告されている。臨床的に適用された最も早期のものは、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）であった。前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）は、現在、血液試験にて主力となっている。しかし、このマーカーは、非癌性の前立腺組織にも基底的に発現するため、効率的に実行するためには、個々に対して基底レベルを確立すること、繰り返し試験、および識別閾値(decision thresholds)に対する注意深い配慮が必要である(Green et al, J Urol. 2013 Jan;189(1 Suppl):S2-S11)。それにも関わらず、この試験は、しばしば、針生検及び病理学的グレード分類（グリソンスコア）並びに病気の段階分けに対するゲートキーパー試験である。その後、ＰＳＡ試験を補強するために、他の前立腺癌特異的バイオマーカーが提案され、繰り返し生検において癌を同定する可能性を高める状況まできている。この状況において最も先行しているマーカーは、ＰＣＲに基づくアッセイにより検出され、ＰＣＡ３(Gittelman et al, J Urol. 2013 Jul;190(1):64-9)、およびＴＭＰＲＳＳ２−ＥＲＧ融合遺伝子(Yao et al, Tumour Biol. 2014 Mar;35(3):2157-66)である。前者は、現在、ＵＳＡにて臨床的に承認されている。それに対して、最新の予後のために臨床上のルーチンにバイオマーカーを採用することにおいて、これまで進展が全くなかった。それにも関わらず、現実には、そのようなマーカーがない場合、いくつかの状況において、高い発生率に起因して病気の過剰処置で高価になる可能性が著しくある。
【０００６】
前立腺癌予後を提供するためのさらなるマーカーが必要である。
【０００７】
（発明の概要）
本発明は、限定されないが癌マーカーを含む、組成物および癌の診断、探索、および治療方法に関する。特に、本発明は、前立腺癌の処置の診断、予後、及び決定に使用するためのＬＲＧ１タンパク質マーカーに関する。
【０００８】
例えば、いくつかの実施形態において、本発明は、前立腺癌の被験者に対し予後を提供するか、特定の治療処置のために前立腺癌の被検者を選択するための方法であって、（ａ）インビトロアッセイを用いて、上記被験者からのサンプル中のＬＲＧ１ポリペプチドレベルを検出すること、及び（ｂ）上記ＬＲＧ１ポリペプチドレベルをＬＲＧ１ポリペプチドの参照レベル（例えば、前立腺癌と診断されていない被験者におけるレベル、限局性前立腺癌を有する被験者におけるレベル、無痛性前立腺癌を有する被験者におけるレベル、または他の関連した対照）と比較すること、を含み、上記参照に対し変化した上記ＬＲＧ１ポリペプチドの量は、例えば、被験者の生存の指標、または、被験者が特定の治療を有する処置の候補となる、すなわち被験者が特定の治療を有する処置（例えば、放射線治療を組み合わせたアンドロゲン抑制療法）に対し好ましく反応する可能性が高いという指標から選択される指標を提供する。いくつかの実施形態において、上記参照レベルと比較した、生物学的サンプル中の上記ＬＲＧ１ポリペプチドの量の上昇は、上記被験者の生存可能性が減少したという指標である。いくつかの実施形態において、上記参照レベルと比較した、生物学的サンプル中の上記ＬＲＧ１ポリペプチドの量の上昇は、手術または放射線治療を有する処置後に病気の再発可能性が増加するという指標である。いくつかの実施形態において、上記参照レベルと比較した、生物学的サンプル中の上記ＬＲＧ１ポリペプチドの量の上昇は、被験者がより積極的な補助療法を有する処置の候補となるという指標である。いくつかの実施形態において、上記参照レベルと比較した、生物学的サンプル中の上記ＬＲＧ１ポリペプチドの量の上昇は、被験者がアンドロゲン抑制療法と放射線治療とを組み合わせた処置の候補となるという指標である。いくつかの実施形態において、上記インビトロアッセイは、イムノアッセイである。いくつかの実施形態において、上記サンプルは、例えば、骨髄、前立腺癌細胞、血液、血清、血漿、尿、前立腺液、または精液を含む。いくつかの実施形態において、上記検出することは、上記サンプルを上記ＬＲＧ１と特異的に結合する試薬（例えば、ＬＲＧ１と特異的に結合する抗体）に接触させることを含む。いくつかの実施形態において、１つ以上の付加的な前立腺癌マーカーの発現レベル（例えば、核酸レベルまたはポリペプチドレベル）がＬＲＧ１と組み合わせて決定される（例えば、１つ以上のＰＳＡ及びＧＤＦ１５／ＭＩＣ−２(Brown et al, Clin Cancer Res. 2009, 15(21):6658-64)、並びに／または他の前立腺特異的マーカー）。いくつかの実施形態において、上記被験者は、手術及び／または放射線治療を受けていたとともに、上記参照レベルと比較した、生物学的サンプル中の上記ＬＲＧ１ポリペプチドの量の上昇は、上記被験者が、上記手術及び／または放射線治療後に前立腺に起因した死亡(prostate-specific death)リスクが高いという指標である。いくつかの実施形態において、上記被験者は、アンドロゲン抑制療法及び放射線治療を組み合わせて受けていた、あるいは受けているとともに、上記被験者の骨髄における上記ＬＲＧ１ポリペプチドの量の上昇は、前立腺癌の再発及び／または上記被験者の���存のリスクが増加するという指標である。
【０００９】
他の実施形態は、被験者の生存可能性の決定、被験者の前立腺癌の増加した再発リスク、または被験者が特定の治療を有する処置の候補となると決定するに際し、上記被験者のサンプル中のＬＲＧ１ポリペプチドの上昇したレベルを特異的に検出する試薬の使用を提供する。
【００１０】
さらに他の実施形態は、被験者からのサンプル中のＬＲＧ１ポリペプチドレベルを検出するためのキット及び／またはシステムであって、（ａ）ＬＲＧ１ポリペプチドを特異的に検出する試薬、及び（ｂ）基準ゲージ、並びに、適宜、被験者の生存の指標、上記被験者の前立腺癌の再発リスクが増加するという指標、及び被験者が特定の治療を有する処置の候補となる指標からなる群から選択された指標を提供するように構成された、コンピュータソフトウェア及びコンピュータプロセッサ、を含むキット及び／またはシステムを提供する。
【００１１】
さらなる実施形態は、本明細書に記載されている。
【００１２】
（図面の説明）
図１Ａ〜Ｄは、ヤーヌス血清サンプル中のＬＲＧ１の濃度を示す。Ａ）血清サンプル中のＬＲＧ１の正規化されたスペクトルカウント。Ｂ）劣化した血清サンプル中のＬＲＧ１レベルのウエスタンブロットによる検証。Ｃ）血流の時点で前立腺癌の診断を受けていない３１人の男性、対、前立腺癌が検出された３１人の男性における、完全血清(full serum)サンプル中のＬＲＧ１のＥＬＩＳＡ測定。Ｄ）血清サンプル中のＬＲＧ１の濃度のＲＯＣ分析。
【００１３】
図２は、ＬＲＧ１の濃度が前立腺癌の特定の死亡率に対する危険性を規定することを示す。ＬＲＧ１の濃度に基づき４つのグループ（最も低いＬＲＧ１濃度のグループを示す第１四分位、最も高いＬＲＧ１濃度のグループを示す第４四分位）にグループ分けされた患者のカプランマイヤー生存分析。
【００１４】
図３Ａ〜Ｂは、前立腺癌患者のリスク層別化に対しＬＲＧ１が臨床モデルを改善することを示す。危険性が高いグループは、前立腺癌特異的な死亡率１０％の切り捨てで規定された。Ａ）年齢に伴う臨床モデル、ＰＳＡ、生検グリソンスコアおよびＴステージ。Ｂ）臨床モデルは、ＬＲＧ１の血漿濃度が追加される。
【００１５】
図４Ａ〜Ｃは、前立腺癌患者のリスク層別化に対しＬＲＧ１がＧＤＦ−１5を含む臨床モデルを改善することを示す。前立腺癌特異的な予想死亡率に基づき４つのグループにグループ分けされた患者のカプランマイヤー生存分析。Ａ）年齢に伴う臨床モデル、ＰＳＡ、生検グリソンスコアおよびＧＤＦ−１５。Ｂ）臨床モデルは、ＬＲＧ１の血漿濃度が追加される。Ｃ）ＧＤＦ−１５の代わりにＬＲＧ１を有する臨床モデル。
【００１６】
図５は、外科手術を行った患者（ＲＰ）の前立腺癌特異的生存率（ＰＣＳＳ）に対するＬＲＧ１の関連性を示すカプランマイヤープロットを示す。
【００１７】
図６は、放射線治療を行った患者の前立腺癌特異的生存率（ＰＣＳＳ）に対するＬＲＧ１の関連性を示すカプランマイヤープロットを示す。
【００１８】
図７Ａ〜Ｂは、トレーニング（コホート）（Ａ）および試験コホート（Ｂ）における、生化学的な無再発生存率に対するＬＲＧ１の関連性を示すカプランマイヤープロットを示す。
【００１９】
図８Ａ〜Ｂは、トレーニング（コホート）（Ａ）および試験コホート（Ｂ）における、全体的な生存率に対するＬＲＧ１の関連性を示すカプランマイヤープロットを示す。
【００２０】
（定義）
本発明の理解を容易にするため、いくつかの用語および語句は、以下のように定義される。
【００２１】
本明細書で使用される「検出する」、「検出している」、または「検出」という用語は、発見する、もしくは認識する一般的な行為、または、検出可能に標識された化合物の特異的な観察を表してもよい。
【００２２】
本明細書で用いられる「被験者」という用語は、本明細書に記載された診断方法を用いて選別される(screened)任意の生物を指す。このような生物としては、特に限定されないが、好ましくは、哺乳類（マウス、サル、ウマ、ウシ、ブタ、イヌ、ネコ等）、最も好ましは、ヒトが挙げられる。
【００２３】
本明細書で用いられる「診断される」という用語は、兆候および症状、または遺伝分析、病理分析、組織学的分析等による病気の識別を指す。
【００２４】
「癌の疑いのある被験者」は、初期診断（例えば、ＰＳＡレベルの量または増加を示すＣＴスキャン）を受けたが、癌のステージ、または、癌予後を示すＬＲＧ１ポリペプチドレベルの存在もしくは非存在が不明である個体を包含する。さらに、前記用語は、一度癌になった人々（例えば軽快した個人）を包含する。いくつかの実施形態では、「被験者」は、癌の疑いのある、あるいは癌と診断された被験者のコントロール（対照）である。
【００２５】
本明細書で用いられる「被験者において癌を特徴付ける」という用語は、被験者における、癌サンプルの一つ以上の特性の同定を指し、特に限定されないが、良性、前癌性、または癌性の組織の存在、癌のステージ、および被験者の予後を包含する。癌は、癌細胞におけるＬＲＧ１ポリペプチドレベルの同定により特徴付けられる。
【００２６】
本明細書で用いられる「被験者において前立腺サンプルを特徴付ける」という用語は、前立腺組織サンプルの一つ以上の特性の同定を指す（例えば、特に限定されないが、癌性組織の存在、ＬＲＧ１ポリペプチドのレベル、癌性である可能性が高い前癌性組織の存在、および、転移の可能性が高い前癌性組織の存在、再発の可能性が高い前癌性組織の存在、または前立腺癌特異的な死の他の可能性を包含する）。いくつかの実施形態では、組織は、ＬＲＧ１ポリペプチドレベルの同定により特徴付けられる。
【００２７】
本明細書で用いられる「癌のステージ」という用語は、癌の進行レベルの質的または量的な評価を指す。癌のステージを決定するのに用いる判定基準としては、特に限定されないが、腫瘍サイズおよび転移範囲（例えば局所的または離れている）が挙げられる。
【００２８】
本明細書で用いられる「精製した」または「精製するための」という用語は、サンプルから成分（例えば夾雑物）を除去することを指す。
【００２９】
本明細書で用いられる「サンプル」という用語は、その最も広い意味で使用される。一つの意味では、サンプルとしては、生物学的サンプルおよび環境的サンプルと同様に、任意のソースから得られる検体または培養液が挙げられる。生物学的サンプルとしては、動物（ヒトを含む）から得られてもよく、流体、固体、および組織を包含する。生物学的サンプルとしては、血漿、血清などといった、血液生成物が挙げられる。しかし、このような例は、本発明に適用可能なサンプルの種類を限定するものとして解釈されない。
【００３０】
（発明の詳細な説明）
本発明は、限定されないが癌マーカーを含む、組成物および癌の診断、探索、および治療方法に関する。特に、本発明は、前立腺癌の処置における診断、予後、及び決定に使用するためのＬＲＧ１タンパク質マーカーに関する。
【００３１】
前立腺癌は、年齢に有意に関連し一部の診断されるケースにおいて進行する、発生率が高い男性の癌である。有効な予後がないと、過剰な処置及び不必要な処置に関連する、社会的及び経済的なコストが著しくかかる。家族、患者及び医師において、改善された最新のリスク層別化により、医療介護の供給が行われ、ストレスが軽減されるであろう。
【００３２】
本発明の実施形態の開発中に行われた実験は、血液ベースの予後判定タンパク質マーカーＬＲＧ１を同定するために、サンプルコレクション及び補足データを使用した。ＬＲＧ１は、安価な市販のＥＬＩＳＡアッセイを用いて検出可能である。ＬＲＧ１は、診断時に吸引されたサンプルにおいて上昇している場合、高ステージの前立腺癌、高グレードの前立腺癌、及び最終的に死に至る前立腺癌に関連性があることが示された。具体的には、血液におけるＬＲＧ１レベルの上昇は、手術的処置及び放射線治療処置の両方の乏しい結果に関連する。このことは、そのような被験者が積極的な補助療法の候補であることを示す。さらに、高いＬＲＧ１を有する患者は、アンドロゲン抑制療法(androgen deprivation therapy)のみと対比して、顕著に、アンドロゲン抑制療法と放射線治療とを組み合わせた処置から恩恵を受けることが示された。最後に、骨髄におけるＬＲＧ１レベルは、アンドロゲン抑制療法と放射線治療とを組み合わせて処置された患者の結果（病気の再発及び全体の生存の両方）に関連することが示された。ＬＲＧ１は、リスク層別化と処置の意思決定との両方を促進することが可能な血液ベースの前立腺癌バイオマーカーの唯一の例である。ＬＲＧ１は、脈管形成及び内皮発生に関連するＴＧＦベータレセプタースーパーファミリーのリガンドである。
【００３３】
例えば、いくつかの実施形態において、本発明は、予後を提供するか、あるいは処置方針(a treatment course of action)を決定するか、あるいは前立腺癌と診断された被験者または前立腺癌の処置中の被験者について処置に対する応答を予測するのに使用するために、ＬＲＧ１ポリペプチドレベルを検出する組成物及び方法を提供する。
【００３４】
いくつかの実施形態において、ＬＲＧ１ポリペプチドレベルは、１つ以上の付加的な前立腺癌マーカー（例えば、ＰＳＡ及び／またはＧＤＦ１５／ＭＩＣ−１）と組み合わせて検出される。付加的な最適なマーカーとしては、特に限定されないが、ＡＭＡＣＲ／Ｐ５０４Ｓ（米国特許番号６，２６２，２４５）、ＰＣＡ３（米国特許番号７，００８，７６５）、ＰＣＧＥＭ１（米国特許番号６，８２８，４２９）、ｐｒｏｓｔｅｉｎ／Ｐ５０１Ｓ，Ｐ５０３Ｓ，Ｐ５０４Ｓ，Ｐ５０９Ｓ，Ｐ５１０Ｓ，ｐｒｏｓｔａｓｅ／Ｐ７０３Ｐ，Ｐ７１０Ｐ（米国特許公開番号２００３０１８５８３０、ＲＡＳ／ＫＲＡＳ（Bos, Cancer Res. 49:4682-89 (1989); Kranenburg, Biochimica et Biophysica Acta 1756:81-82 (2005)）、並びに米国特許番号５，８５４，２０６、６，０３４，２１８、及び７，２２９，７７４に開示されたもの（これらの特許公報それぞれの全体が参照により本願に含まれる）が挙げられる。他の癌、病気、感染症、及び代謝状態(metabolic condition)に対するマーカーもまた、マルチプレックス形式またはパネル形式の封入のために検討される。
【００３５】
本発明は、特定のポリペプチド検出方法に限定されない。任意の最適な方法が用いられてもよい。いくつかの実施形態において、イムノアッセイが用いられる。
【００３６】
イムノアッセイの例証的で非限定的な例としては、免疫沈降；ウエスタンブロット、ＥＬＩＳＡ、免疫組織化学、免疫細胞化学、フローサイトメトリー、およびイムノＰＣＲが挙げられるが、これらに限定されない。当業者に公知の様々な技術（例えば、比色定量、蛍光、化学発光、放射性）を用いて検出可能に標識されたポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体が、イムノアッセイにおける使用に適している。
【００３７】
免疫沈降は、抗原に特異的な抗体を用いて当該抗体を溶液外に沈降させる手法である。このプロセスは、複合体中にあると思われるタンパク質をターゲットにすることによって、細胞抽出物に存在するタンパク質複合体を同定するために用いることができる。バクテリアから最初に単離された不溶性の抗原結合タンパク質（プロテインＡおよびプロテインＧ等）によって複合体を溶液外に出す。抗体は、簡単に溶液外に単離することができるセファロースビーズに結合させることもできる。洗浄後、質量分析、ウエスタンブロッティングまたは複合体中の構成要素を同定するための他の任意の数の方法を用いて、沈殿物は分析され得る。
【００３８】
ウエスタンブロットまたはイムノブロットは、組織のホモジネートまたは抽出物の所定のサンプルにおけるタンパク質を検出する方法である。ゲル電気泳動を用いて、質量によって変性タンパク質を分離する。次いで、タンパク質をゲル外の膜（典型的には、ポリビニルジフルオライドまたはニトロセルロース）上に移し、目的のタンパク質に特異的な抗体を用いてタンパク質をプローブする。その結果、研究者は所定のサンプルにおけるタンパク質の量を調べ、いくつかの群の間のレベルを比較することができる。
【００３９】
ＥＬＩＳＡ（酵素免疫検定法（Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay）の略）は、サンプル中の抗体または抗原の存在を検出するための生化学的手法である。ＥＬＩＳＡは、最小量の２つの抗体（そのうち１つは抗原に特異的であり、もう１つは酵素と共役している）を利用する。二次抗体が発色原基質または蛍光原基質にシグナルを生成させ得る。ＥＬＩＳＡの変形型としては、サンドイットＥＬＩＳＡ、競合ＥＬＩＳＡ、およびＥＬＩＳＰＯＴが挙げられる。ＥＬＩＳＡは、サンプル中の抗原の存在および抗体の存在の何れかを評価するために行われ得るため、血清抗体濃度を決定するため、および抗原の存在を検出するための両方の有用なツールである。
【００４０】
免疫組織化学および免疫細胞化学は、それぞれ、組織または細胞中の抗原がそれらのそれぞれの抗体に結合する原理を通じて、組織切片または細胞中においてタンパク質を局在化させる過程を参照するものである。発色タグまたは蛍光タグで抗体をタグ化することによって可視化が可能でなる。発色タグの典型的な例としては、セイヨウワサビペルオキシダーゼおよびアルカリホスファターゼが挙げられるが、これらに限定されない。蛍光タグの典型的な例としては、フルオレッセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）またはフィコエリトリン（ＰＥ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００４１】
フローサイトメトリーは、流体の流れに懸濁された微小粒子を、計数し、評価し、分類する手法である。フローサイトメトリーでは、光学的／電子的検出装置を流れる単一細胞の物理的および／または化学的な特徴を同時にマルチパラメトリック分析することができる。単一の周波数または色の光線（例えば、レーザー）が、水力学的に焦点を合わせた流体の流れ上へ向けられる。流れが光線を通過する場所に多数の検出計が向けられる；１つは光線を伴うライン（前方散乱またはＦＳＣ）およびそれに対する複数の垂線（側方散乱（ＳＳＣ）および１以上の蛍光検出計）にある。ビームを通過する各懸濁粒子はいくつかの方法で光を散乱し、粒子における蛍光化学物質が、光源よりも低い周波数における放出光へと励起され得る。散乱光および蛍光の組み合わせが検出計によって拾われ、各検出計（各蛍光放出ピークに対して１つ）における輝度における変動を解析することによって、それぞれの粒子の物理的および化学的構造についての様々な事実を推定することが可能である。ＦＳＣは細胞体積と相関し、ＳＳＣは粒子の密度または内部の複雑性（例えば、核の形状、細胞質顆粒の量および種類、または膜の粗さ）と相関する。
【００４２】
イムノポリメラーゼ連鎖反応（ＩＰＣＲ）は、抗体に基づくイムノアッセイにおけるシグナル生成を増強させるために、核酸増幅技術を利用する。ＰＣＲのタンパク質同等物は存在しない、すなわち、核酸がＰＣＲの間に複製されるのと同様の方法でタンパク質は複製されないため、検出強度を増強する唯一の方法は、シグナルの増幅による。ターゲットのタンパク質は、オリゴヌクレオチドに直接または間接的に共役された抗体に結合させる。結合していない抗体は洗浄され、残りの結合したタンパク質は増幅されたそれらのオリゴヌクレオチドを有している。タンパク質の検出は、標準的な核酸検出方法（リアルタイム法が挙げられる）を用いた、増幅されたオリゴヌクレオチドの検出によって行われる。
【００４３】
ＬＲＧ１を検出するためのアッセイに有用な抗体は、（好ましくは特異的に）ＬＲＧ１を認識できるものであれば、任意のモノクローナルまたはポリクローナル抗体であってもよい。
【００４４】
さらに、本発明の実施形態は、サンプル中のＬＲＧ１のレベルまたは存在を検出するための試薬（例えば抗体）を含むキット及びシステムを提供する。いくつかの実施形態において、キット及びシステムは、ＬＲＧ１レベルの分析及び診断の提供、予後、または処置方針決定のためのコンピュータシステムを含む。
【００４５】
いくつかの実施形態において、コンピュータに基づく解析プログラムが、検出アッセイによって生成された生データ（例えば、ＬＲＧ１ポリペプチドのレベル）を、臨床医のための予測値のデータに変換するために用いられる。臨床医は、任意の適切な手段を用いて予測データにアクセスすることができる。このように、いくつかの実施形態において、本発明は、遺伝学または分子生物学の教育を受けていないであろう臨床医が生データを理解する必要がないというさらなる利益を提供する。当該データは、その最も有用な形態において臨床医に直接与えられる。次いで、臨床医は被験者のケアを最適化するために、当該情報を直ちに利用することができる。
【００４６】
本発明は、アッセイを行う研究所、情報提供者、医療関係者および被験者からまたはこれらへ、当該情報を受けること、処理すること、および伝達することを可能にする任意の方法を意図する。例えば、本発明のいくつかの実施形態において、サンプル（例えば、生検試料または血清または尿サンプル）は被験者から得られ、世界の任意の場所（例えば、被験者が住む国または情報が最後に使用された国とは異なる国）にあるプロファイリングサービス（例えば、医療施設における臨床検査室、ゲノムプロファイリングビジネス等）に提出され、生データが生成される。サンプルが組織または他の生物学的サンプルを含んでいる場合、被験者は、サンプルを得てプロファイリングセンターに送るために医療センターを訪れてもよいし、自分自身でサンプルを回収して（例えば、尿サンプル）それをプロファイリングセンターに直接送ってもよい。サンプルが以前に決定された生物学的情報を含んでいる場合、当該情報は被験者によってプロファイリングサービスに直接送られてもよい（例えば、情報を含む情報カードがコンピュータによってスキャンされ、電子通信システムを用いて当該データがプロファイリングセンターのコンピュータへ送られてもよい）。プロファイリングサービスによって一旦受け取られると、当該サンプルは処理されてプロファイル（特に被験者にとって望ましい診断情報または予後情報について）が生成される（すなわち、ＬＲＧ１ポリペプチドのレベル）。
【００４７】
次いで、プロファイルデータは治療する臨床医による解釈に適したフォーマットにおいて準備される。例えば、生データを提供する代わりに、準備されたフォーマットは、被験者についての診断またはリスク評価（例えば、ＬＲＧ１ポリペプチドのレベル）を、特定の治療オプションについての勧めに沿って表してもよい。当該データは、任意の適切な方法によって臨床医に表示されてもよい。例えば、いくつかの実施形態において、プロファイリングサービスは、臨床医のために（例えば、ケアの時点において）印刷することができるまたはコンピュータのモニター上で臨床医に表示することができる報告書を生成する。
【００４８】
いくつかの実施形態において、当該情報は、まず、ケアの時点において、または地方の施設において解析される。次いで、生データは、さらなる解析のための中心的処理施設に送られる、および／または、生データを臨床医もしくは患者に有用な情報に変換される。中心的処理施設は、プライバシー（全てのデータは共通のセキュリティプロトコルを用いて中心的施設に保管される）、スピード、およびデータ解析の均一性における優位性を提供する。次いで、中心的処理施設は、被験者の治療後のデータの末路を管理することができる。例えば、中心的施設は、電子通信システムを用いて、臨床医、被験者または研究者にデータを提供することができる。
【００４９】
いくつかの実施形態において、被験者は、電子通信システムを用いて当該データに直接アクセスすることができる。被験者は、結果に基づき、さらなる処置またはカウンセリングを選択してもよい。いくつかの実施形態において、当該データは研究目的で使用される。例えば、当該データは、特定の症状または疾患のステージの有用な指標として、または処置方針を決定するためのコンパニオン診断として、マーカーの算入または排除をさらに最適化するために用いられてもよい。
【００５０】
本明細書に記載された組成物、キット、システム、使用、及び方法は、前立腺癌と診断された被験者に対する処置方針の決定と同様に、前立腺癌の診断及び予後における使用を見出す。例えば、いくつかの実施形態において、本明細書に記載された組成物及び方法は、１つ以上の前立腺癌の再発リスク、前立腺癌の転移リスク、及び／または前立腺癌に特異的な死亡リスクの予後を提供するのに用いられる。いくつかの実施形態において、ＬＲＧ１レベルに沿ったこのような予後は、前立腺癌と診断された被験者の処置方針の決定（例えば、付加的な放射線治療及び／またはアンドロゲン抑制療法の利用、または注意深い経過観察）に用いられる。いくつかの実施形態において、（例えば、前立腺癌生検、尿サンプル、または骨髄サンプル中の）ＬＲＧ１レベルは、前立腺癌の処置前、処置中、または処置後の１つ以上の時間で試験される。いくつかの実施形態において、ＬＲＧ１レベルは、前立腺癌の処置方針を改変するのに用いられる（例えば、処置の停止、開始、または変更）。
【００５１】
〔実験例〕
以下の実施例は、本発明のある好ましい実施形態および態様を明示し、さらに説明するために提供され、その範囲を制限するものとは解釈されない。
【００５２】
（実施例１）
＜方法＞
＜患者サンプル＞
ヤーヌス血清バンク(Janus Serum Bank)
ヤーヌス血清バンク（ノルウェー癌登録(the Cancer Registry of Norway)所有）は、ノルウェー国内の健康及び病気の回顧的疫学研究のために、１９７２年に設立された。血液サンプルは、６１人の空腹でない参加者から得られ、血清は、次の標準的な方法により分離され、全てのサンプルが−２５℃で保管された。本研究用に一定量を調製するために、サンプルは、２回の解凍−冷凍サイクルに通した。６１の血液サンプル中、３１サンプルは、採血時に前立腺癌と診断されていない男性から回収され、３０サンプルは、前立腺癌の診断後に回収された。これらの中で、４０サンプルは、診断サンプリング前後で一致した、ネステッド対照群であった。
【００５３】
ＳＴＨＬＭ２
ＳＴＨＬＭ２コホートは、２０１０年１１月１日と２０１２年９月１日との間で、Ｋａｒｏｌｉｎｓｋａ大学研究所へ通ずる研究室及びストックホルム県のＡｌｅｒｉｓ  ＭｅｄｉｌａｂでのＰＳＡ試験のために参照された男性群からなる。全血を、ゲルなしのエチレンジアミン四酢酸チューブに回収し、血漿を遠心分離し、等分し、分析まで−８０℃で保管した。７６４人の参加者からの血漿サンプルが、分析のために、Ｋａｒｏｌｉｎｓｋａバイオバンクから得られた。完全な臨床データがある６６９人の参加者のうち、２６９人は、癌が検出されず、３７３人は、採血時に前立腺癌があった。
【００５４】
Ｃａｎｃｅｒ  Ｏｆ  Ｐｒｏｓｔａｔｅ  Ｓｗｅｄｅｎ
ＣＡｎｃｅｒ  Ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｉｎ  Ｓｗｅｄｅｎ（ＣＡＰＳ）は、２００１年３月と２００３年１０月との間に登録された参加者の研究に基づく集合である。スウェーデンのヴェステルボッテン県のBiobanken Norrから、２００人の参加者の血漿サンプルが引き抜かれ、代表的な４グループ、すなわち、５０の対照（１０年間の追跡調査で癌がない）、５０の診断前（１０年以内に癌）、５０の限局性癌（進行しない）、５０の悪性（１０年以内に前立腺癌が原因で死ぬ運命と診断）を、慎重に選択した。
【００５５】
ＳＰＣＧ７
Scandinavian Prostate Cancer Group Study 7(SPCG-7)は、局所的な放射線治療の有無で内分泌療法を比較し、さらに進行すると去勢する、開放されたフェーズＩＩＩ無作為化試験である。登録する患者の基準は、７６歳未満、平均余命が１０年よりも大きく、限局的に進行した前立腺癌（Ｔ１ｂ−、Ｔ２またはＴ３）、ＰＳＡが７０ｎｇ／ｍＬ未満、及び転移の証拠がない患者である。
【００５６】
多く存在する血清タンパク質の除去
全血清中のタンパク質のダイナミックレンジを減少し、これにより少量存在するタンパク質の検出限界を増加させるために、ProteoSpin（商標） Abundant Serum Depletion Kit(Norgen Biotek, 17300)を使用した。このキットは、イオン交換カラムによる、血清中にみられる最も多く存在するタンパク質（例えば、アルブミン、トランスフェリン、ハプトグロブリン、及びアルファ−アンチトリプシン）の除去に基づいている。簡単には、全血清をｄＨ２Ｏで希釈し、NanoDrop 1000 (Thermo Scientific)により測定して最終濃度３０μμｇ／μＬにした。そして、１０μＬの希釈前血清サンプルをカラムアクチベータバッファー４９０μＬに混合し、活性イオン交換カラムへ添加した。溶出ステップ前に、カラムに結合したタンパク質を２回洗浄した。多く存在する血清タンパク質が除去されたタンパク質溶出液を、中和し、分注し、下流の使用のため−８０℃で貯蔵した。
【００５７】
ナノＬＣ−ＬＴＱオービトラップ質量分析
除去された血清２．５μｇを質量分析にかけた。タンパク質は、溶液内トリプシン消化により、分解した。ペプチドは、ナノＬＣシステムに接続したＥＳＩ−オービトラップ質量分析計(LTQ Orbitrap XL, Thermo Scientific,ブレーメン，ドイツ)により分析した。ペプチドは、Ultimate 3000 nanoLC system (Dionex, サニーベールＣＡ)に注入する前に、C18ZipTips (Millipore, ビルリカ, MA, USA)により精製した。ペプチドを分離するために、１００ÅのＣ１８に３μｍ粒子(Dionex)が詰められたAcclaim PepMap 100 カラム（５０ｃｍ×７５μｍ）を使用した。流速３００ｎＬ／分で、溶剤Ｂの勾配７〜３５％で７７分、溶剤Ｂの勾配５０％で１０分、溶剤Ｂの勾配８０％で２分使用した。溶剤Ａは、０．１％ギ酸であり、溶剤Ｂは０．１％ギ酸／９０％ＡＣＮであった。質量分析計は、データ依存モードで作動し、オービトラップＭＳとＬＴＱ−ＭＳ／ＭＳ取得との間を自動的に切り替えた。実測フルスキャンＭＳスペクトル（Ｍ／ｚ３００〜２０００）は、（ＬＴＱで５０００００電荷のターゲット蓄積後）Ｍ／ｚ４００での分解能Ｒ＝６００００でのオービトラップで捕捉された。使用される方法により、ターゲット値１００００電荷で衝突誘起解離（ＣＩＤ）を用いた線状イオントラップの断片化のために、信号強度に依存した、最大６個までの最も強いイオンの連続的な分離が可能になる。正確な質量測定のため、ＭＳモードにおいてlock massオプションが可能であり、分析中、電気スプレイプロセスにて周囲空気から生成されたポリジメチルシクロシロキサンイオンが、内部の再校正のために使用される。ＭＳ／ＭＳのために既に選択されたターゲットイオンは、６０秒間で、動的に除外した。一般的な質量分析条件は、電気スプレイ電圧１．６ｋＶ、シース補助ガス流なしである。イオン選択閾値は、ＭＳ／ＭＳで５０００カウントであり、加えて、活性Ｑ値０．２５及び活性時間３０ｍｓがＭＳ／ＭＳに適用された。データは、Xcalibur v2.5.5を用いて得られ、Proteome Discoverer v1.0 or Scaffold v.3.5.2を用いて処理された。
【００５８】
データベース検索
タンデム質量スペクトルの抽出システム及びバージョンは、未知であった。電荷状態のデコンボルーションおよび脱同位体化（deisotoping）は行わなかった。ＭＳ／ＭＳスペクトルはすべて、Mascot（Matrix Science, London,UK；バージョン2.3.02）を用いて分析した。Mascotは、トリプシン消化の特異性を仮定して、SwissProt_2011_11_ database (Homo sapiens検索用, バージョン未知, 20252エントリー)を検索するように設定した。Mascotを、断片イオン質量許容誤差（mass tolerance）を０．６０Ｄａ、親イオン許容誤差１０．０ＰＰＭとして検索した。ｎ末端のアンモニアロス、アスパラギン及びグルタミンの脱アミド化、メチオニンの酸化、ｎ末端のアセチル化並びにシステインのプロピオンアミドが、Mascotにおける可変修飾と特定された。Scaffold（バージョンScaffold_3.6.5、Proteome Software Inc., Portland, OR）を、ＭＳ／ＭＳに基づくペプチドおよびタンパク質の同定を検証するために用いた。ペプチドの同定は、Peptide Prophetアルゴリズム（Keller, A et al Anal. Chem. 2002;74(20):5383-92）による特定で、95.0％を上回る確率でそれらが立証されたならば受け入れた。タンパク質の同定は、99.0％を上回る確率でそれらが立証され、かつ少なくとも2つの同定されたペプチドを含んでいたならば受け入れた。タンパク質の確率は、Protein Prophetアルゴリズム（Nesvizhskii, AI Anal Chem. 2003 Sep 1;75(17):4646-58）によって特定した。類似のペプチドを含み、MS／MS分析のみに基づいて鑑別することができなかったタンパク質は、最節約原理を満足するようにグループにまとめた。
【００５９】
ウエスタンブロッキング
ＢＣＡアッセイ(Pierce)によりタンパク質溶出物／除去された血清の濃度を決定し、中和溶出バッファーで均一化した。抽出物を、還元剤(Invitrogen)を有するＬＤＳ  ＮＵＰＡＧＥサンプルバッファーと混合し、７０℃で１０分間インキュベートした。等量の抽出物（レーンあたり１μｇタンパク質）を、Criterion４〜２０％勾配２６ウェルＴｒｉｓ−ＨＣｌゲル(Bio-Rad)上にロードし、プレート電極を有するCriterionブロッター(Bio-Rad)を用いて、冷却条件下で、５５Ｖで９０分間、０．４５μｍの活性化ＰＶＤＦメンブレン(Millipore)へウェットブロットした（４８ｍＭ  Ｔｒｉｓ，３９ｍＭグリシン，０．０２％ＳＤＳ，２０％ＭｅＯＨ）。トランスファー及びタンパク質ローディングの均等性は、０．１Ｍ  ＮａＯＨにより除去するＰｏｎｃｅａｕ  Ｓ染色(Sigma, P7170)により確認した。ＴＢＳ−Ｔｗｅｅｎ（０．０５％）の７．５％脱脂ミルク(Cell Signaling Technology)中で、メンブレンを４５分間ブロックし、続いて、ＬＲＧ１を認識する一次抗体(Sigma, HPA001888)で、５％  ＢＳＡ／ＴＢＳ−Ｔｗｅｅｎ（０．０５％）中で、４℃で、一晩インキュベートした。メンブレンを、ＴＢＳ−Ｔｗｅｅｎ（０．０５％）で１０分、３回洗浄し、続いて、５％  ＢＳＡ／ＴＢＳ−Ｔｗｅｅｎ（０．０５％）で１：２０００に希釈した抗ラビットＨＲＰ(Dako, P0448)で１時間インキュベートした。Novex（登録商標）ＥＣＬ化学発光基質試薬(Invitrogen, WP20005)でバンドを可視化し、ハイパーフィルム (GE Healthcare)及びディベロッパー (AGFA Curix-60)で検出した。バンドは、Image J software (Bio-Rad, version 4.6.5)を用いて定量化した。
【００６０】
ＬＲＧ１  ＥＬＩＳＡ
市販の固相サンドイッチＥＬＩＳＡキット(IBL International GmbH,ハンブルク,ドイツ)を用いて、血清／血漿サンプル中のＬＲＧ１のレベルを２回測定した。このアッセイは、１００ｎｇ／ｍｌに対して１．５６ｎｇ／ｍｌの感度を有する。２回測定間の平均イントラアッセイＣＶは、４．４％であり、０．３８〜１１．２８の範囲内であった。基準曲線の４パラメーターの曲線適合分析により、血清／血漿サンプル中のＬＲＧの濃度を算出した(Excel)。
【００６１】
統計分析
全ての統計分析を、SPSS v20(シカゴ,Ｉｌ,ＵＳＡ)またはPrism 5.0 (GraphPad)ソフトウェアを用いて行った。臨床データとしてＴステージ、グリソンスコアおよびＰＳＡがない全ての患者を分析から除外した。Kruskal-Wallis Ｔテストを行い、グループ間の有意性（ｐ＜０．０５）を評価した。対数変換した年齢、ＰＳＡ、及びＬＲＧ１値について、ロジスティック回帰を行うのに対し、Ｔステージ、National Institute for health and Care Excellence (NICE)により規定されたグリソンスコア及びリスクカテゴリーを、カテゴリーの変量として含めた（ＣＧ１７５:低リスクグリソンスコア（ＧＳ）２−６，ＰＳＡ＜１０ｎｇ／ｍＬ，腫瘍ステージ（Ｔ）１−２ａ，中間リスクＧＳ７，ＰＳＡ１０−２０ｎｇ／ｍＬ，Ｔ２ｂ，並びに高リスクＧＳ８−１０，ＰＳＡ＞２０ｎｇ／ｍＬ及びＴ≧２ｃ）。曲線下の領域（ＡＵＣ）を識別能と規定した受信者動作特性（ＲＯＣ）曲線分析により組み合わせた変量の識別能を算定するために、確率のスコアを用いた。ＳＴＨＬＭ２データから転移性障害の予測尺度を明らかにし、ＣＡＰＳサンプルで試験した。識別能は、ＲＯＣ分析により評価した。カプランマイヤーにより算定された前立腺癌特異的な死亡率のリスク統計において、ＬＲＧ１の追加値に対する適切なカットオフを規定するために、決定曲線分析を行った。
【００６２】
結果
スカンジナビアは、この研究をサポートするための、保健システム、バイオバンキング、癌登録が十分に統合された、世界のいくつかの地域の１つである。この研究では、血液サンプル中の前立腺バイオマーカーを同定するために、３つのコホートを用いた。臨床応用のために、生物学的流体にて検出可能なバイオマーカーは、侵襲性試験を最小限に最適化することを示す。この研究において、発見するコホートは、ヤーヌス血清バンクからのサンプルであった。ヤーヌス血清バンクは、多くの個人から長期間にわたって収集された多くのサンプルを含む、前向き母集団全体の血清バンクであり、ノルウェー癌登録を介して結果がリンクしている。前立腺癌(PCa)の前及び後と診断された６１サンプルを用いた。これらサンプルセットについて、キットを用いてタンパク質抽出処理を行い、多く存在する血清アルブミンを除去した。そして、タンパク質抽出物をＬＣ  ＭＳ／ＭＳ機器にかけ、診断後のケースと診断前のケースとの対比において、ペプチドカウントが強調され、かつ診断後のサンプルにおいてのみ同定されたタンパク質のペプチド検出に基づきデータを層別化した（図１Ａ）。そして、有効な抗体の入手可能性及び候補の癌に関する文献報告に基づく、さらなる検証のために、候補となるタンパク質を選択した（図１Ｂ）。ＬＲＧ１を優先した。このＬＲＧ１は、子宮体癌、結腸直腸癌、及び肺癌の乏しい予後に関連すると以前報告されている一方、前立腺癌バイオマーカーとして評価するか、あるいは前立腺癌と結びつける研究は以前になかった。さらに評価するため、市販のＥＬＩＳＡキットを用いて、ペプチドカウントが質量分析により認識できた診断後のケースで高いレベルで検出され、診断前後で顕著な統計上の識別を得たヤーヌス血清バンクの全サンプルをプロファイルした（図１Ｃ、Ｄ）。これら血清サンプル中のＬＲＧ１検出のためのＥＬＩＳＡの有用性を確認するため、詳細な臨床データ及び追跡を有する追加した２つのコホートからサンプルを得た。これらのうち１つ目は、ＳＴＨＬＭ２コホートであり、登録要件が６０歳以上であり、かつストックホルム／ゴットランドに在住する個人である、前向き母集団全体のコホートである。このコホートへの加入は、２０１０年に開始し、サンプルは、２０１２年から始まっている。このケースでのサンプルは、血漿サンプルであり、限られた追跡時間が原因で、死亡原因について入手可能なデータがない。しかし、上記コホートは、ＰＳＡ測定及び年齢と同様に、癌のグレード、ステージ、及び転移の状態についても、臨床データを有する。合計で、７６４サンプルを使用した。これら全てのパラメーターに対して、ＬＲＧ１の発現を評価した。ＬＲＧ１は、高いグレード、高いステージ、及び転移性／ノード陽性の癌の予測を改善した（表３）。ＬＲＧ１が全体として前立腺癌よりも有意に侵攻性疾患(aggressive disease)に関連するかもしれないという指標を考えると、より長い追跡時間を有する追加コホートに対するアクセスが得られた。この２つ目のコホート、ＣＡＰＳ（Ｐｒｏｓｔａｔｅ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｏｆ  Ｓｗｅｄｅｎ）は、生検に対する登録ポイントとしてＰＳＡ測定が使用される。ＰＳＡ後の最小追跡期間が１０年である２００の血漿サンプルが得られた。これらは、以下からなる、１グループ当り５０サンプルの４つのグループに再分割された。
・対照（ｎ＝５０）：１０年間の追跡で癌が未検出。
・診断前（ｎ＝５０）：１０年間の追跡内で前立腺癌(PCa)が検出。
・限局性前立腺癌（ｎ＝５０）：サンプリング時点で無痛性癌であり、１０年間の追跡の間進行しない。
・侵攻性の前立腺癌（ｎ＝５０）：サンプリング日から１０年以内の死亡に関連する前立腺癌。
【００６３】
この設定において、ＬＲＧ１は、それ自体、高いグレード、高いステージ、及びより重大な致命的な病気の、有意に高い識別器であった。ＥＬＩＳＡ測定に基づく、中間の発現四分位の選択及び実行により、多くのケースの高いリスクカテゴリー及び低いリスクカテゴリーへの正確な再分類が可能となり、より正確な臨床の意思決定においてこのマーカーの能力が増強した（図２）。また、ＰＳＡ、年齢、及びグリソングレードを組み合わせたとき、リスク層別化における、これらの能力がＬＲＧにより向上するとともに（図３）、以前報告された予後のバイオマーカーGDF15(MIC-1としても知られている)、脈管形成及び炎症に関連するＴＧＦベータスーパーファミリーリガンドの能力もＬＲＧ１により向上した（図４）。
【００６４】
次に、処置応答の予測物として、このマーカーを試験した。再発した病気に対する２次的な治療により、臨床治験において、一般的に、約４か月の生存期間の中央値に利点が生じ、Abiraterone(ＣＹＰ１７Ａ１阻害剤)及びEnzalutamide (アンドロゲンレセプター（ＡＲ）拮抗剤)といった新たな標的試薬が近年紹介されたにもかかわらず、この中央値の形態が少し改善される。ＡＲシグナリングは、上記病気の全てのステージにおいて活性化されたままであり、重要であるので、これらの試薬は投与される。しかし、いくつかの患者は、さらに、これらＡＲ標的試薬と他の非標的治療（放射線治療または化学療法）との組合せから恩恵を受け得る。しかし、現時点で、臨床医は、最新でこの決定をするための根拠がない。処置の意思決定に対するＬＲＧ１の関連性を評価するために、血液サンプルをＳＰＣＧ−７から得て、Radium Hospital/ICRにて、アンドロゲン抑制療法だけと放射線治療及びアンドロゲン抑制療法の組合せとで効果を比較する臨床治験を行った。放射線治療及びアンドロゲン抑制療法を組み合わせた処置アームはアンドロゲン抑制療法だけと対比して良好な結果であり、高レベルのＬＲＧ１は、この結果と有意に相関することが見出された（表７）。低レベルのＬＲＧ１を有する患者については、処置グループ間で有意な差がなかった。
【００６５】
【表１】
2018504595.tif 000003
【００６６】
【表２】
2018504595.tif 000004
【００６７】
【表３】
2018504595.tif 000005
【００６８】
【表４】
2018504595.tif 000006
【００６９】
【表５】
2018504595.tif 000007
【００７０】
【表６】
2018504595.tif 000008
【００７１】
【表７】
2018504595.tif 000009
【００７２】
（実施例２）
本実施例は、外科手術および放射線治療の後の結果に関するバイオマーカーとしてのＬＲＧ１について記載している。
【００７３】
ＰＣａを用いて診断された男性の大部分は、限局性癌を有している。これらの男性では、外科手術（前立腺全摘出術、ＲＰ（radical prostatectomy））または放射線治療などの治療処置を受け得るが、２０％を超える者が５年以内に臨床的に再発する。現在のところ、限局性前立腺癌を治療するときに、ＲＰの結果を予測し得る、血液に基づいたバイオマーカーは存在しない。それ故に、患者が異なる処置を選択するための更に効果的なバイオマーカー、および、無侵襲的な手段によって入手可能な好ましいバイオマーカー、が、強く求められている。
【００７４】
＜方法、および、コホート試験の特性＞
＜患者サンプル＞
ヤーヌス血清バンクに血清を提供している前立腺癌の患者８２人に基づいて、当該遡及的試験を行った。試験された臨床病理学的な変数には、サンプリング時の年齢、施術前の前立腺特異的抗原（prostate specific antigen（ＰＳＡ））のレベル、生検グリソンスコア、および、処置後における前立腺癌特異的な死亡、が含まれる。
【００７５】
＜統計分析＞
ＳＰＳＳ,ｖ.２２（ＩＢＭ, Ｃｈｉｃａｇｏ, ＩＬ）にて、統計分析を行った。各々の処置の種類に応じて、血清中のＬＲＧ１の中央濃度（median concentrations）に基づいて、患者を分類した。臨床的な終点（前立腺癌特異的な生存）にたどりつくための、累積確率におけるＬＲＧ１レベルのインパクトは、カプラン−マイヤー曲線（Kaplan-Meier curves）によって見積もられた。前立腺癌特異的な生存の独立予測因子を確立するために、コックス回帰を用いた。
【００７６】
＜患者コホートの基本特性＞
外科手術の群では、血清中に高濃度のＬＲＧ１が存在する患者と、低濃度の患者との間で、基本的な臨床的な病理特性を比較した場合、年齢、ベースラインＰＳＡ、グリソンスコア、腫瘍ステージ、リンパ節への転移、または、遠隔転移に関して有意差は認められなかった（各々、Ｐ＝０．４１、Ｐ＝０．２３、Ｐ＝０．０９、Ｐ＝０，２４、Ｐ＝０．４５および０．２４）（表８）。放射線治療を受けた患者の群では、有意に多くの患者において、ＬＲＧ１レベルが高い群において、周知のリンパ節転移が認められず、年齢、ベースラインＰＳＡ濃度、グリソンスコア、腫瘍ステージ、または、遠隔転移への他の有意な関連性は認められなかった（各々、Ｐ＝０．１６、Ｐ＝０．４８、Ｐ＝０．７６、Ｐ＝０．７８、ｐ＝０．３５）。放射線治療を受けた一般的な患者コホートは、外科手術を受けたコホートよりも、前立腺癌が、進行していた。
【００７７】
【表８】
2018504595.tif 000010
【００７８】
＜結果＞
＜外科手術＞
合計３２人の患者に対して、外科手術を施した。ＬＲＧ１の血清濃度に基づいて、患者を２つのグループに分類した（中央値に対して、高いグループ、および、低いグループ）。３人の患者（９．４％）は、後に、前立腺癌によって亡くなり、これら３人の患者は全て、ＬＲＧ１が高いグループに属していた（図５）。ＬＲＧ１が高いグループにおける危険率（hazard ratio）は、ＬＲＧ１が低いグループの危険率の８．４倍、高かった（ｐ＝０．０５）。このことは、外科手術の後の結果（前立腺癌特異的な死亡のリスク）の予測にとって、ＬＲＧ１が有用であることを示している。
【００７９】
＜放射線治療＞
２８人の患者に対して、放射線治療を施した。そして、これらの患者を、ＬＲＧ１の血清濃度に基づいて、同様に２つのグループに分類した（中央値に対して、高いグループ、および、低いグループ）。１２人の患者（４３％）は、後に、前立腺癌によって亡くなり、これらの患者では、４人が、ＬＲＧ１が低いグループに属し、８人が、ＬＲＧ１の濃度が中央値を超えるグループに属していた（図６）。ＬＲＧ１が高いグループの患者は、前立腺癌特異的な死亡のリスクが、２．４７倍、高かった（ｐ＝０．１３）。
【００８０】
更に、コックス回帰による多変量解析によって、ＬＲＧ１が、悪い結果（poor outcome）の独立予測因子であり（ｐ＝０．００５、表９）、かつ、このセッティングにおいて、ＰＳＡ（ｐ＝０．０６８）よりも好ましい予測因子である、ことが示された。このことは、放射線治療の後の結果（前立腺癌特異的な死亡のリスク）の予測にとって、ＬＲＧ１が有用であることを示している。
【００８１】
要約すれば、上述したデータは、外科手術および放射線治療の両方における後の結果（例えば、前立腺癌特異的な死亡のリスク）の予測にとって、処置前の高いＬＲＧ１レベルが有用であることを示している。ある実施形態では、ＬＲＧ１レベルによって前立腺癌特異的な死亡のリスクがより高いことが示された患者に対して、より積極的な治療（例えば、放射線治療と外科手術との組み合わせ、および、放射線治療とアジュバント療法（アンドロゲン欠乏療法（androgen deprivation therapy））との組み合わせ）が施される。
【００８２】
【表９】
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【００８３】
（実施例３）
本実施例は、アンドロゲン欠乏療法と放射線治療との組み合わせを受けている、限局的に進行した前立腺癌の患者における、改良された層別化（stratification）に関するバイオマーカーとしてのＬＲＧ１について記載している。
【００８４】
前立腺癌を患っている患者の略１５％は、「高リスク」の病気と診断され、「限局的進行（locally advanced）」と呼ばれる（Ｃｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ,  Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ２０１４, １１（６）：ｐ．３０８−２３）。限局的に進行したＰＣａを有する患者には、通常、治療のために、放射線治療（ＲＴ）とアンドロゲン欠乏療法（ＡＤＴ）とを組み合わせた処置が行われる。患者の２０％において、５年以内に再発が認められる。どの患者が再発する可能性を有しているか予測することは、非常に重要である。
【００８５】
本実施例は、進行性の表現型を有するＰＣａ患者に由来する血清および血漿の中で高発現（up-regulated）しているタンパク質である、ロイシンリッチ  アルファ−２−グリコプロテイン  １（Leucine-rich alpha-2-glycoprotein 1：ＬＲＧ１）について記載している。ＬＲＧ１は、肝臓および骨髄（bone marrow：ＢＭ）内で多く発現している３８ｋＤａのタンパク質であり、顆粒球の分化による急性期免疫応答の一部として機能するものであり、かつ、血管新生、移動および細胞接着を促進するものである（Ｏ’Ｄｏｎｎｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｂｉｏｌ  ２００２，７２（３）：４７８−８５；Ｋｏｂｅ  ｅｔ  ａｌ，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔ  Ｂｉｏｌ  ２００１，１１（６）：７２５−３２；Ｔａｋａｈａｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ  １９８５，８２（７）：１９０６−１０；Ｓａｉｔｏ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００２，１６８（３）：１０５０−９；Ｓｕｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔ  １９９５，８９（１）：７３−９；Ｃｕｍｍｉｎｇｓ  ｅｔ ａｌ，Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ２００６，１１（７）：１１２１−９.）。
【００８６】
ＰＣａにおける転移の原発部位は、骨髄内である。ＬＲＧ１は、骨髄内で多く発現しているので、骨髄内のＬＲＧ１のレベルが、遠隔転移が認められないＰＣａ患者においても予測能力を有しているか否か、および、ＡＤＴおよびＲＴに先立つ患者の層別化の助けになり得るか、調べた。
【００８７】
＜試験コホート、および、方法＞
＜トレーニングコホート（ＳＰＣＧ−７）＞
１９９８−２００５の間、限局的に進行した、リンパ節ネガティブなＰＣａを有する１２０人の患者が、オスロにおける「スカンジナビアの前立腺癌グループ（Scandinavian Prostate Cancer Group：ＳＰＣＧ）」−７  トライアルに、参加した。これらの患者のうちの７５人の患者を、無作為に３か月間のトライアルに供し、当該患者に、ＡＤＴおよびこれに次いでＲＴを行うネオアジュバント処置を施した。登録された全ての患者から、骨髄（ＢＭ）の血漿を採取した。
【００８８】
＜試験コホート（ＩＭＲＴ）＞
強度変調性放射線治療（Intensity-modulated radiotherapy：ＩＭＲＴ）は、前立腺および骨盤リンパ節を包含する、放射線治療である。２００４−２０１０の間、限局的に進行した、リンパ節ネガティブなＰＣａを有する４３人の患者が、３−６カ月のＡＤＴを受けた後に、ＩＭＲＴプロトコールに供された。当該トライアルに参加した４３人の患者から、骨髄の血漿を採取した。
【００８９】
＜ＥＬＩＳＡ解析＞
骨髄の血漿中のＬＲＧ１のレベルを、ＥＬＩＳＡ（ＩＢＬ−Ａｍｅｒｉｃａ）を用いて、製造者が推奨するように、評価した。
【００９０】
＜統計分析＞
ＳＰＳＳ,ｖ.２２（ＩＢＭ, Ｃｈｉｃａｇｏ, ＩＬ）にて、統計分析を行った。骨髄の血漿中のＬＲＧ１のレベルを、ＳＰＣＧ−７のコホートから採取した骨髄の血漿における中央値に基づいて、分類した。骨髄の血漿中のＬＲＧ１のレベルと、臨床的および組織病理学的な因子との間の関連性を、二分された変量（dichotomized variables）のために、カイ二乗検定（リニア  バイ  リニア  アソシエーション）によって解析した。臨床的な終点（全生存、および、癌特異的再発）にたどりつくための、累積確率における骨髄のＬＲＧ１レベルのインパクトは、カプラン−マイヤー曲線（Kaplan-Meier curves）によって見積もられ、まずＳＰＣＧ−７にて見積もられ、次いでＩＭＲＴにて見積もられた。
【００９１】
＜患者コホートの基本特性＞
トレーニングコホート（ＳＰＣＧ−７）では、骨髄中に高濃度のＬＲＧ１が存在する患者と、低濃度の患者との間で、基本的な臨床的な病理特性を比較した場合、年齢、ベースラインＰＳＡ、グリソンスコア、および、腫瘍ステージに関して有意差は認められなかった（各々、Ｐ＝０．６９、Ｐ＝０．５７、Ｐ＝０．３０、Ｐ＝０  ．６９）（表１０）。試験コホート（ＩＭＲＴ）では、ＬＲＧ１は、年齢の高さと関連し（Ｐ＜０．０００１）、ベースラインＰＳＡ濃度、グリソンスコア、および、腫瘍ステージに関して有意な関連性は認められなかった（各々、Ｐ＝１．００、Ｐ＝０．６６、Ｐ＝１．００）。
【００９２】
【表１０】
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【００９３】
＜結果＞
２つのコホート（ＳＰＣＧ−７（トレーニングコホート）およびＩＭＲＴ（試験コホート））において、限局的に進行した前立腺癌を患い、アンドロゲン欠乏療法と放射線治療との組み合わせを施されている患者から採取した骨髄の血漿中におけるＬＲＧ１の濃度を測定した。トレーニングコホートの骨髄の血漿中におけるＬＲＧ１の測定レベルの中央値を、予測閾値を設定するために用い、次いで、当該予測閾値を、試験コホート（ＩＭＲＴ）にて同様に測定されたサンプルに適用した。
【００９４】
試験コホートにおいて、ＡＤＴおよび放射線治療を施した合計７５人の患者のうち、１５人の患者（２２．７％）は、１４年間の間に、生物学的な再発を示した。骨髄の血漿中におけるＬＲＧ１の濃度に基づいて患者が層別化された後、ＬＲＧ１の濃度が中央値を超える患者（高）は、生物学的障害を有するリスクが１．４倍に増加し、ＬＲＧ１が低いグループの１６％（６／３７）に対して、２３％（９／３８）であった（図７Ａ）。ＩＭＲＴの独立したコホートの４３人の患者について、更に当該試験を行った。当該コホートでは、骨髄中のＬＲＧ１の濃度がより高いと、１２年の処置の間に、生物学的な再発において２．３倍高いリスクを示した。ＬＲＧ１が低いグループにおける再発頻度は９％（１／１１）であるのに対して、ＬＲＧ１が高いグループにおける再発頻度は１９％（６／３２）であった（図７Ｂ）。
【００９５】
更に、骨髄中のＬＴＧ１の予測値を、測定結果としての生存率によって評価したところ、生物学的な再発と同様の傾向を示した（図８）。トレーニングコホートでは、ＬＲＧ１が高いグループにおいて、３８人の患者のうち、１２人の患者が亡くなり（３２％）、一方、ＬＲＧ１が低いグループにおいて、３７人の患者のうち、７人の患者が亡くなった（１９％）。同様に、ＩＭＲＴコホートにおける５人全ての死亡者は、ＬＲＧ１が高いグループであった（５／３２、対、０／１２）。要約すれば、上述したデータは、骨髄中のＬＲＧ１のレベルによって、ＡＤＴおよびＲＴを組み合わせた治療の後の結果を、生物学的な再発および生存の両方について予測できることを示している。
【００９６】
全ての公開、特許、特許出願、および、明細書に記載したアクセッションナンバー（accession numbers）は、これらの全てが、参考として本明細書中に援用される。特定の実施形態と関連付けて本発明について説明したが、本発明はこのような特定の実施形態に不当に限定されないことが、理解されるべきである。本発明の組成および方法に対する様々な変更および変更物が、当業者にとって明らかであり、これらの様々な変更および変更物も、本発明の範囲に包含される。
【図面の簡単な説明】
【００９７】
【図１】ヤーヌス血清サンプル中のＬＲＧ１の濃度を示す。図１Ａ（ＦＩＧ．１Ａ）：血清サンプル中のＬＲＧ１の正規化されたスペクトルカウント。図１Ｂ（ＦＩＧ．１Ｂ）：劣化した血清サンプル中のＬＲＧ１レベルのウエスタンブロットによる検証。図１Ｃ（ＦＩＧ．１Ｃ）：血流の時点で前立腺癌の診断を受けていない３１人の男性、対、前立腺癌が検出された３１人の男性における、完全血清(full serum)サンプル中のＬＲＧ１のＥＬＩＳＡ測定。図１Ｄ（ＦＩＧ．１Ｄ）：血清サンプル中のＬＲＧ１の濃度のＲＯＣ分析。
【図２】図２は、ＬＲＧ１の濃度が前立腺癌の特定の死亡率に対する危険性を規定することを示す。ＬＲＧ１の濃度に基づき４つのグループ（最も低いＬＲＧ１濃度のグループを示す第１四分位、最も高いＬＲＧ１濃度のグループを示す第４四分位）にグループ分けされた患者のカプランマイヤー生存分析。
【図３】図３Ａ〜Ｂは、前立腺癌患者のリスク層別化に対しＬＲＧ１が臨床モデルを改善することを示す。危険性が高いグループは、前立腺癌特異的な死亡率１０％の切り捨てで規定された。Ａ）年齢に伴う臨床モデル、ＰＳＡ、生検グリソンスコアおよびＴステージ。Ｂ）臨床モデルは、ＬＲＧ１の血漿濃度が追加される。
【図４】図４Ａ〜Ｃは、前立腺癌患者のリスク層別化に対しＬＲＧ１がＧＤＦ−１5を含む臨床モデルを改善することを示す。前立腺癌特異的な予想死亡率に基づき４つのグループにグループ分けされた患者のカプランマイヤー生存分析。Ａ）年齢に伴う臨床モデル、ＰＳＡ、生検グリソンスコアおよびＧＤＦ−１５。Ｂ）臨床モデルは、ＬＲＧ１の血漿濃度が追加される。Ｃ）ＧＤＦ−１５の代わりにＬＲＧ１を有する臨床モデル。
【図５】図５は、外科手術を行った患者（ＲＰ）の前立腺癌特異的生存率（ＰＣＳＳ）に対するＬＲＧ１の関連性を示すカプランマイヤープロットを示す。
【図６】図６は、放射線治療を行った患者の前立腺癌特異的生存率（ＰＣＳＳ）に対するＬＲＧ１の関連性を示すカプランマイヤープロットを示す。
【図７】図７Ａ〜Ｂは、トレーニング（集団）（Ａ）および試験コホート（Ｂ）における、生化学的な無再発生存率に対するＬＲＧ１の関連性を示すカプランマイヤープロットを示す。
【図８】図８Ａ〜Ｂは、トレーニング（集団）（Ａ）および試験コホート（Ｂ）における、全体的な生存率に対するＬＲＧ１の関連性を示すカプランマイヤープロットを示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【手続補正書】
【提出日】平成29年9月5日(2017.9.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
前立腺癌と診断された被験者の前立腺癌に特異的な死亡のリスク増加の予後を決定する方法であって、
上記被験者からの血液サンプル中のＬＲＧ１ポリペプチドレベルを、ＬＲＧ１免疫グロブリンを用いたイムノアッセイで決定することを含み、
参照レベルと比較した、血液サンプル中の上記ＬＲＧ１ポリペプチドの量の上昇は、前立腺癌に特異的な死亡のリスク増加の指標である、方法。
【請求項２】
上記参照レベルと比較した、血液サンプル中の上記ＬＲＧ１ポリペプチドの量の上昇は、上記被験者が補助療法の候補となる指標である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
上記補助療法は、放射線治療がその後に続く手術である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
上記補助療法は、アンドロゲン抑制療法と組み合わせた放射線治療である、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
上記補助療法は、アンドロゲン抑制療法と組み合わせた放射線治療がその後に続く手術である、請求項２に記載の方法。
【請求項６】
さらに、１つ以上の付加的マーカーの存在、非存在、またはレベルを検出するステップを含む、請求項１〜５の何れか１項に記載の方法。
【請求項７】
上記マーカーは、ＰＳＡ及び／またはＧＤＦ１５である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前立腺癌と診断された被験者の予後を決定するためのイムノアッセイ法でのＬＲＧ１免疫グロブリンの使用であって、参照レベルと比較した、上記被験者の血液中のＬＲＧ１のレベル上昇は、手術及び／または放射線治療後に被験者が前立腺癌特異的に死亡するリスクが増加しているという指標である、使用。
【請求項９】
参照レベルと比較した、上記被験者の血液中の上記ＬＲＧ１のレベル上昇は、被験者が補助療法の候補であるという指標である、請求項８に記載の使用。
【請求項１０】
上記補助療法は、放射線治療がその後に続く手術である、請求項９に記載の使用。
【請求項１１】
上記補助療法は、アンドロゲン抑制療法と組み合わせた放射線治療である、請求項９に記載の使用。
【請求項１２】
上記補助療法は、アンドロゲン抑制療法と組み合わせた放射線治療がその後に続く手術である、請求項９に記載の使用。
【請求項１３】
前立腺癌と診断された被験者の予後を決定するためのイムノアッセイ法でのＬＲＧ１免疫グロブリンの使用であって、参照レベルと比較した、上記被験者の血液中のＬＲＧ１のレベル上昇は、上記被験者が補助療法の候補であるという指標である、使用。
【請求項１４】
上記補助療法は、放射線治療がその後に続く手術である、請求項１３に記載の使用。
【請求項１５】
上記補助療法は、アンドロゲン抑制療法と組み合わせた放射線治療である、請求項１３に記載の使用。
【請求項１６】
上記補助療法は、アンドロゲン抑制療法と組み合わせた放射線治療がその後に続く手術である、請求項１３に記載の使用。
【国際調査報告】
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