【手続補正書】
【提出日】平成26年4月16日(2014.4.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
(i) ＲＮＡバクテリオファージのウイルス様粒子と、(ii) 該ウイルス様粒子内にパッケージ化されるオリゴヌクレオチドとを含有してなる組成物であって、該組成物は、該組成物を作製するための方法により取得され、該方法は
(a) 該ＲＮＡバクテリオファージのコートタンパク質を準備する工程、
(b) オリゴヌクレオチドを準備する工程、
(i)  このとき、該オリゴヌクレオチドが少なくとも一つのポリＧ伸展を含み、そして、
(ii) このとき、該オリゴヌクレオチドが５０〜１１０％の相対的なピークのスタート時間を有するものであり、
(c)  混合物を生成する工程、このとき該混合物が以下を含有してなるものであり、
(i)   前記コートタンパク質、
(ii)  前記コートタンパク質の自己集合化を防ぐことが可能な薬剤、
(iii) 前記オリゴヌクレオチド
(d) 前記混合物から前記薬剤を除去する工程、そして、
(e) 前記コートタンパク質をウイルス様粒子内に自己集合化させる工程
を含む方法であり、相対的なピークのスタート時間がバクテリオファージＱβのキャプシドと比較したサイズ排除ＨＰＬＣにより測定されるものである、組成物。
【請求項２】
(i) ＲＮＡバクテリオファージのウイルス様粒子と、(ii) 該ウイルス様粒子内にパッケージ化されるオリゴヌクレオチドとを含有してなる組成物であって、該組成物は、該組成物を作製するための方法により取得され、該方法は
(a) 該ＲＮＡバクテリオファージのコートタンパク質を準備する工程、
(b) 該オリゴヌクレオチドを含有してなるヌクレオチド組成物を準備する工程、
前記オリゴヌクレオチドは５０〜１１０％の相対的なピークのスタート時間を有するものであり、該ヌクレオチド組成物は、該オリゴヌクレオチドを含有して成るヌクレオチド組成物を作製するための方法により取得され、該方法は
(w) 少なくとも一つのポリＧ伸展を含むオリゴヌクレオチドを溶液Ｉに準備する工程、このとき該溶液Ｉはアルカリ性ｐＨを有し、
(x) 以下の工程を含む解離によって、該オリゴヌクレオチドを解離する工程、
(i)   温度Ｉに溶液Ｉの温度を調節する、 該温度Ｉは４〜７０℃であり、
(ii)  該オリゴヌクレオチドが１１０％より上の相対的なピークのスタート時間になるまで、該温度Ｉにて該溶液Ｉ中で該オリゴヌクレオチドをインキュベートする、そして、
(iii) 温度ＩＩに該溶液Ｉの温度を調整する、該温度ＩＩは０〜７０℃であり、
(y) ｐＨ５〜８に該溶液ＩのｐＨを調整する工程、そして、
(z) 以下の工程を含む凝集によって、該オリゴヌクレオチドを凝集する工程、
(i)  ｐＨ５〜８であり、少なくとも２０ｍＭの陽イオンを含む溶液ＩＩに該オリゴヌクレオチドを準備する、このとき該陽イオンはＮａ＋、Ｋ＋、ＮＨ４＋、Ｌｉ＋、Ｃａ２＋及びＭｇ２＋からなる群から選択されるものであり、
(ii)  温度ＩＩＩに溶液ＩＩの温度を調整する、 該温度ＩＩＩは５０〜９９℃であり、
(iii) 該オリゴヌクレオチドが５０〜１１０％の相対的なピークのスタート時間になるまで、該温度ＩＩＩにて該溶液ＩＩ中で該オリゴヌクレオチドをインキュベートする、そして、
(iv)  温度ＩＶに溶液ＩＩの温度を調整する、該温度ＩＶは５０℃未満である、
(c)  混合物を生成する工程、このとき該混合物が以下を含有してなるものであり、
(i)   前記コートタンパク質、
(ii)  前記コートタンパク質の自己集合化を防ぐことが可能な薬剤、
(iii) 前記オリゴヌクレオチド
(d) 前記混合物から前記薬剤を除去する工程、そして、
(e) 前記コートタンパク質をウイルス様粒子に自己集合化させる工程
を含む方法であり、相対的なピークのスタート時間がバクテリオファージＱβのキャプシドと比較したサイズ排除ＨＰＬＣにより測定されるものである、組成物。
【請求項３】
前記溶液Ｉの温度を温度ＩＩに調節する工程が、少なくとも３．６℃／分の温度勾配で行われ、及び／又は、該溶液ＩＩの温度を温度ＩＶに調節する工程が、少なくとも３．６℃／分の温度勾配で行われる、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記溶液Ｉが８〜１３のｐＨを含む、請求項２又は３に記載の組成物。
【請求項５】
前記溶液Ｉが、アルカリ金属の水酸化物を含む、請求項２から４のいずれか一に記載の組成物。
【請求項６】
前記溶液Ｉの前記オリゴヌクレオチドの濃度が、５０μＭ〜２ｍＭである、請求項２から５のいずれか一に記載の組成物。
【請求項７】
前記溶液ＩＩの前記オリゴヌクレオチドの濃度が、５０μＭ〜２ｍＭ、好ましくは１００〜３００μＭ、最も好ましくは１７５μＭである、請求項２から６のいずれか一に記載の組成物。
【請求項８】
温度ＩＩＩにて溶液ＩＩ中で前記オリゴヌクレオチドをインキュベートする工程が、前記オリゴヌクレオチドが８０〜１１０％の相対的なピークのスタート時間になるまで行われる、請求項２から７のいずれか一に記載の組成物であって、相対的なピークのスタート時間がバクテリオファージＱβのキャプシドと比較したサイズ排除ＨＰＬＣにより測定されるものである組成物。
【請求項９】
前記オリゴヌクレオチドが、その５'末端に少なくとも３、最大１５のグアノシン体と、その３'末端に少なくとも３、最大の１５グアノシン体を含む、請求項２から８のいずれか一に記載の組成物。
【請求項１０】
前記オリゴヌクレオチドが、
(a) 「Ｇ４−４」GGGGGACGATCGTCGGGG (配列番号：２)、
(b) 「Ｇ５−５」GGGGGGACGATCGTCGGGGG (配列番号：３)、
(c) 「Ｇ６−６」GGGGGGGACGATCGTCGGGGGG (配列番号：４)、
(d) 「Ｇ７−７」GGGGGGGGACGATCGTCGGGGGGG (配列番号：５)、
(e) 「Ｇ８−８」GGGGGGGGGACGATCGTCGGGGGGGG (配列番号：６)、
(f) 「Ｇ９−９」GGGGGGGGGGACGATCGTCGGGGGGGGG (配列番号：７)、
(g) 「Ｇ１０」GGGGGGGGGGGACGATCGTCGGGGGGGGGG (配列番号：８)、
(h) 「Ｇ１１」GGGGGGGGGGGGACGATCGTCGGGGGGGGGGG (配列番号：９)
からなる群から選択される核酸配列を含む、請求項２から９のいずれか一に記載の組成物。
【請求項１１】
前記オリゴヌクレオチドが核酸配列「Ｇ１０」GGGGGGGGGGGACGATCGTCGGGGGGGGGG (配列番号：８)を含む、請求項２から１０のいずれか一に記載の組成物。
【請求項１２】
前記ＲＮＡバクテリオファージのウイルス様粒子が、ＲＮＡバクテリオファージＱβのウイルス様粒子である、請求項２から１１のいずれか一に記載の組成物。
【請求項１３】
前記ＲＮＡバクテリオファージのコートタンパク質が、(a) 配列番号：１０及び(b) 配列番号：１０と配列番号：１１の混合物からなる群から選択されるアミノ酸配列からなるＲＮＡバクテリオファージＱβのコートタンパク質である、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
前記ＲＮＡバクテリオファージのコートタンパク質が、配列番号：１０のアミノ酸配列からなるＲＮＡバクテリオファージＱβのコートタンパク質である、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１５】
前記混合物中の前記オリゴヌクレオチドと前記コートタンパク質のモル比が、０．５〜１．２である、請求項２から１４のいずれか一に記載の組成物。
【請求項１６】
前記薬剤が、尿素及びグアニジウムハイドロクロライドから選択される変性化化合物を含む、請求項２から１５のいずれか一に記載の組成物。
【請求項１７】
前記薬剤が還元剤を更に含む、請求項２から１６のいずれか一に記載の組成物。
【請求項１８】
前記混合物から前記薬剤を除去する工程が、第一のバッファによる第一バッファ交換によって行われ、このとき該第一バッファは塩化ナトリウムを含む、請求項２から１７のいずれか一に記載の組成物。
【請求項１９】
前記第一バッファ交換がメンブランにより行われ、該メンブランが５〜３０ｋＤの分子量カットオフを含む、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２０】
さらに、前記ウイルス様粒子を酸化剤と接触させる工程を含む、請求項２から１９のいずれか一に記載の組成物。