【誤訳訂正書】
【提出日】平成26年3月25日(2014.3.25)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００８】
幾つかの実施態様では、個体は、自己免疫疾患を有するか、又は自己免疫疾患を有すると診断されている。幾つかの実施態様では、個体は、炎症性腸疾患(クローン病、潰瘍性大腸炎、及び不確定大腸炎等)を有するか、又は炎症性腸疾患(クローン病、潰瘍性大腸炎、及び不確定大腸炎等)を有すると診断されている。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１０】
幾つかの実施態様では、抗ＣＤ８３アゴニスト抗体はモノクローナル抗体である。幾つかの実施態様では、抗ＣＤ８３アゴニスト抗体は抗原結合断片であり、例えばＦａｂ、Ｆａｂ’-ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、及び（Ｆａｂ’）２断片からなる群から選択される断片である。幾つかの実施態様では、抗ＣＤ８３アゴニスト抗体はヒト化抗体である。幾つかの実施態様では、抗ＣＤ８３アゴニスト抗体はヒト抗体である。幾つかの実施態様では、抗ＣＤ８３アゴニスト抗体はキメラ抗体である。幾つかの実施態様では、抗ＣＤ８３アゴニスト抗体は、配列番号：３１のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｈ１、配列番号：３２のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｈ２、及び配列番号：３３のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｈ３を重鎖可変ドメイン、及び／又は配列番号：３７のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｌ１、配列番号：３８のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｌ２、及び配列番号：３９のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｌ３を含んでなる軽鎖可変ドメインを有する。幾つかの実施態様では、抗ＣＤ８３アゴニスト抗体は、配列番号：３０のアミノ酸配列を含んでなる重鎖可変ドメイン、及び／又は配列番号：３６のアミノ酸配列を含んでなる軽鎖可変ドメインを有する。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１３】
またここで提供されるものは、（ａ）配列番号：３１のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｈ１；（ｂ）配列番号：３２のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｈ２；（ｃ）配列番号：３３のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｈ３；（ｄ）配列番号：３７のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｌ１；（ｅ）配列番号：３８のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｌ２；（ｆ）配列番号：３９のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｌ３から成る群から選択される少なくとも１、２、３、４、５又は６つの超可変領域（ＨＶＲ）を含んでなる可変ドメインを含んでなる単離された抗ＣＤ８３抗体である。またここで提供されるものは、次の６つのＨＶＲ配列（ａ）配列番号：３１のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｈ１；（ｂ）配列番号：３２のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｈ２；（ｃ）配列番号：３３のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｈ３；（ｄ）配列番号：３７のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｌ１；（ｅ）配列番号：３８のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｌ２；（ｆ）配列番号：３９のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｌ３、を含んでなる重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含んでなる単離された抗ＣＤ８３抗体である。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１４】
幾つかの実施態様では、抗体は、（ａ）配列番号：３１のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｈ１、（ｂ）配列番号：３２のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｈ２、及び（ｃ）配列番号：３３のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｈ３を有する。幾つかの実施態様では、抗体は、（ａ）配列番号：３７のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｌ１、（ｂ）配列番号：３８のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｌ２、及び（ｃ）配列番号：３９のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｌ３を更に有する。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１５】
幾つかの実施態様では、抗体は、（ａ）配列番号：３７のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｌ１、（ｂ）配列番号：３８のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｌ２、及び（ｃ）配列番号：３９のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｌ３を有する。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１９】
またここで提供されるものは、抗ＣＤ８３抗体を作成する方法において、ここに記載の抗ＣＤ８３抗体をコードする核酸の発現に適した条件下で、ここに記載の宿主細胞を培養することを含んでなる前記方法である。幾つかの実施態様では、該方法は宿主細胞によって産生された抗ＣＤ８３抗体を回収することを更に含んでなる。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２１】
【図１】図１は、ＣＤ８３が、ＣＤ８３を発現している細胞の表面でのホモタイプ結合に関与したことを示す。（ａ）安定的に形質移入されたＣＨＯ-ｈＣＤ８３細胞の表面上に発現されたＣＤ８３をフローサイトメトリーによって定量化した。（ｂ）ＭＵＴＺ-３由来成熟ＤＣ上に発現されたＣＤ８３の発現をフローサイトメトリーによって定量化した。（ｃ及びｄ）ＣＤ８３．ｆｃはＣＨＯ-ｈＣＤ８３及び成熟ＤＣに結合した。
【図２】図２は、ＣＤ８３がＣＤ８３．ｆｃの結合に必要であったことを示す。（ａ）ＣＤ８３．ｆｃはＣＨＯ-ｈＣＤ８３細胞に結合したが、結合は抗ＣＤ８３抗体によって阻止され、フローサイトメトリーによって定量化した。（ｂ）１８Ｓに対して正規化した全ＲＮＡのｔａｑｍａｎ解析によって示される、ＭＵＴＺ-３成熟ＤＣにおけるＣＤ８３に特異的なｓｉＲＮＡ（ｓｉＣＤ８３）の効果。（ｃ）ＣＤ８３は、非標的化（ｓｉＮＴＣ）ｓｉＲＮＡで処理された成熟ＤＣの表面に発現されたが、ｓｉＣＤ８３で処理された成熟ＤＣには発現されなかった。（ｄ）ＣＤ８３．ｆｃはｍＤＣに結合したが、結合はｓｉＣＤ８３処理によって抑止された。（ｅ）ＣＤ８３のノックダウンは成熟ＤＣにおいてＭＨＣＩＩの表面発現を低下させた。（ｆ）ＣＤ８３のノックダウンは成熟ＤＣにおいてＣＤ８６の表面発現を変更しなかった。
【図３】図３は１０Ｘでの顕微鏡画像を提供し、ＣＤ８３発現が懸濁培養物において細胞凝集となったことを示す。（ａ）コントロールＣＨＯ細胞は凝集しなかった。（ｂ）ＣＤ８３を発現する細胞は懸濁培養物中においてクラスタを形成した。（ｃ）ＣＤ８３．ｆｃタンパク質でのＣＨＯ-ｈＣＤ８３細胞の前処理は凝集を阻止した。（ｄ）Ｉｇコントロールタンパク質でのＣＨＯ-ｈＣＤ８３細胞の前処理は凝集を阻止しなかった。
【図４】図４はＣＤ８３．ｆｃ又はＨＢ１５ｅ抗体での成熟ＤＣにおけるＣＤ８３処理が、表面活性化マーカーＣＤ８３及びＨＬＡ-ＤＲの発現を減少させたことを示す。
【図５】ＥＬＩＳＡデータはＣＤ８３処理されたヒト単球由来ＤＣにおける変化したサイトカイン放出を示した。（ａ及びｃ）炎症促進性サイトカインＩＬ１２-ｐ４０及びＭＣＰ-１は、ＣＤ８３．ｆｃ又はＨＢ１５ｅ抗体処理により減少した。（ｂ）抗炎症性サイトカインＩＬ-１ｒａはＣＤ８３処理ＤＣにおいて有意に増加した。（ｄ）ＩＬ-８はＣＤ８３処理又はコントロール処理ＤＣ間で違いを見せなかった。*は値が有意に異なることを示す；* ｐ＜０．０１、* ｐ＜０．００１。グラフは少なくとも４の異なるドナーを表す。
【図６】ＥＬＩＳＡデータはＣＤ８３処理されたＭＵＴＺ-３由来ＤＣにおける変化したサイトカイン放出を示した。（ａ及びｃ）炎症促進性サイトカインＩＬ１２-ｐ４０及びＭＣＰ-１は、ＣＤ８３．ｆｃ又はＨＢ１５ｅ抗体処理により減少した。（ｂ）抗炎症性サイトカインＩＬ-１ｒａはＣＤ８３処理ＤＣにおいて有意に増加した。（ｄ）ＩＬ-８はＣＤ８３処理又はコントロール処理ＤＣ間で違いを見せなかった。各ウェルからの上澄部を三重に実行した。
【図７】図７は、ＣＤ８３．ｆｃ又はＨＢ１５ｅ抗体でのＤＣにおけるＣＤ８３処理が創傷治癒に関与する遺伝子のアップレギュレーションとなったことを示し、ｇａｐｄｈに対して正規化したｖｃａｎ、ｓｐｏｃｋ２、及びｆｂｎ２のＴａｑｍａｎ ｑＰＣＲ解析により提供された。平均相対発現（２＾ΔＣＴ）＋ＳＥＭ。
【図８】図８は、ＣＤ８３ホモタイプ相互作用がトランスで生じ、ＤＣにおける抗炎症性反応を媒介することを示す。（ａ及びｂ）サイトカイン産生のＥＬＩＳＡ測定は、ＣＤ８３を過剰発現するＣＨＯ細胞のｍＤＣとの共培養が、炎症促進性サイトカインＩＬ１２-ｐ４０及びＭＣＰ-１の放出を阻害したことを示した。（ｃ）ＣＤ８３ノックアウト（ＣＤ８３ＫＯ）及び野生型（ＷＴ）同腹子から生成された成熟マウス骨髄由来ＤＣ（ＢＭＤＣ）（灰色バー）は、２４時間のＬＰＳ刺激後、類似レベルのＩＬ-１２ｐ４０を生成した。（ｄ）ＷＴ成熟ＢＭＤＣと共に培養した未熟ＢＭＤＣは、ＣＤ８３欠失成熟ＢＭＤＣと共に培養したものより有意に少ないＩＬ-１２ｐ４０を生成した。ｐ＝０．０３７２。
【図９】図９はＣＤ８３ホモタイプ相互作用がＤＣにおける抗炎症性反応を媒介したことを示す。（ａ）ＣＤ８３のｓｉＲＮＡノックダウンはＣＤ８３．ｆｃ又はＨＢ１５ｅ抗体に対する反応を抑止し、ＭＣＰ-１のＥＬＩＳＡによって示された。（ｂ）完全長ＣＤ８３及び細胞質内切断型ＣＤ８３に関するＣＤ８３レンチウィルス発現の図。（ｃ）ＭＣＰ-１産生のＥＬＩＳＡは、細胞質内切断型ＣＤ８３の発現がＣＤ８３．ｆｃタンパク質の阻害作用を阻止したことを示した。
【図１０】図１０は、抗体架橋結合が、ＤＣにおけるＣＤ８３細胞質内ドメインを介した抗炎症性反応の作動に十分であったことを示す。（ａ）ＣＤ８３キメラレンチウィルス発現コンストラクトの図であり、ＣＤ８３膜貫通部に融合されたＣＤ７９ａの細胞外ドメイン及び完全長又は切断型細胞質内ドメインを描く。（ｂ）ＩＬ１２-ｐ４０産生のＥＬＩＳＡは、切断型キメラの過剰発現が抗ＣＤ７９ａ抗体に対するＤＣ反応を阻害したことを示した。
【図１１】図１１は、ＣＤ８３がＣ末端に抗炎症性反応を媒介するクラスＩＩＩ ＰＤＺリガンドモチーフを有することを示す。（ａ）ＣＤ８３細胞質内ドメインの最後の１５アミノ酸のアミノ酸配列比較図は、保存されたクラスＩＩＩ ＰＤＺリガンドモチーフを示した。（ｂ）Ｃ末端ＰＤＺリガンドモチーフＶ２０５Ａ変異体のＣＤ８３レンチウィルス発現コンストラクトの図。（ｃ）ＭＣＰ-１産生のＥＬＩＳＡは、Ｖ２０５Ａ ＰＤＺリガンドモチーフ変異体の発現がＣＤ８３．ｆｃタンパク質の阻害作用を阻止したことを示した。
【図１２】図１２は、ＣＤ８３ホモタイプ相互作用の免疫抑制作用が、ｐ３８ ＭＡＰＫ及びｍＴＯＲシグナル伝達経路によって媒介されたことを示す。（ａ−ｃ）は、ＨＢ１５ｅ抗体処理がｍＴＯＲ、ｐ３８及びＣＲＥＢのリン酸化の有意な低下となったことを示した。（ｄ）ＨＢ１５ｅ抗体処理は、ＴＮＦ経路によって活性化されるＳＴＡＴ３のリン酸化を阻害しなかった。（ｅ）ウェスタンブロット解析は、ＨＢ１５ｅ抗体処理によるｐ３８リン酸化の低下を確認した。（ｆ）ＳＴＡＴ３のリン酸化にＨＢ１５ｅ抗体処理による有意な差異は見られなかった。全ｐ３８及びＳＴＡＴ３をローディングコントロールとして使用した。
【図１３】図１３は、結腸におけるＣＤ８３過剰発現が、固有層におけるＤＣ上の表面活性化マーカーのダウンレギュレーションとなったことを示す。（ａ）ＣＤ８３遺伝子導入マウスを作成するために使用した遺伝子導入コンストラクトの図。（ｂ）免疫組織化学染色は、結腸上皮における導入遺伝子の発現を示した。（ｃ及びｅ）ＣＤ８３遺伝子導入マウスの結腸及び脾臓から単離されたＤＣ上の表面マーカーの発現をＦＡＣＳによって定量化し、平均蛍光強度（ＭＦＩ）として測定した。（ｄ及びｆ）ＣＤ８３遺伝子導入マウスの結腸又は脾臓いずれにおいても、Ｔ細胞表面活性化マーカーにおける有意な差は見られなかった。（ｇ）Ｔａｑｍａｎ ｑＰＣＲ解析は、ＣＤ８３遺伝子導入マウスから単離されたＤＣにおける創傷治癒遺伝子発現の増加を示した。
【図１４】図１４は、ＣＤ８３遺伝子導入マウスから単離されたＤＣサブセットを分析するためのＦＡＣＳゲートストラテジーを示し、これはＣＤ８３導入遺伝子がＤＣサブセット産生に何の効果も持たなかったことを示した。（ａ及びｂ）ＭＨＣＩＩ＋及びＣＤ１１ｃ ｈｉ発現によるＤＣのゲーティング。（ｃ）Ｔ細胞のゲーティング。（ｄ及びｅ）結腸及び脾臓から単離されたＤＣサブセットのフローサイトメトリー解析。
【図１５】ＣＤ８３過剰発現は、デキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ）誘導性大腸炎からマウスを保護した。（ａ）は、ＤＳＳで処理された場合の、野生型マウスと比較したＣＤ８３遺伝子導入マウスにおけるより少ない体重減少を示す。（ｂ）ＤＳＳ誘導大腸炎を有するマウスの結腸切片のヘマトキシリン及びエオシン染色。（ｃ）野生型及びＣＤ８３遺伝子導入マウスの組織学スコア。（ｄ）野生型同腹子と比較した、ＤＳＳで処理されたＣＤ８３遺伝子導入マウスにおける血清サイトカインレベルのＥＬＩＳＡ。（ｅ）野生型同腹子と比較した、ＤＳＳで処置したＣＤ８３Ｔｇマウスからの結腸固有層中ＤＣにおけるＩＬ-１２ｐ４０遺伝子発現のｑＰＣＲ。
【図１６】図１６はＤＣにおけるＣＤ８３のノックアウトが大腸炎を悪化させたことを示す。（ａ）ＣＤ８３コンディショナルノックアウトストラテジーの図。（ｂ）脾臓におけるＴＣＲｂ＋リンパ球に関してゲーティングしたＦＡＣＳプロット。脾臓に、ＣＤ８３ｆｌ／ｆｌＣＤ１１ｃ-Ｃｒｅマウスは４８．６％のＣＤ４陽性Ｔ細胞を有し、ＣＤ８３ｗｔ／ｗｔＣＤ１１ｃ-Ｃｒｅマウスは４８．１％のＣＤ４陽性Ｔ細胞を有した。（ｃ）ＣＤ８３ｗｔ／ｗｔＣＤ１１ｃ-Ｃｒｅ（黒線）及びＣＤ８３ｆｌ／ｆｌＣＤ１１ｃ-Ｃｒｅ（灰色線）マウスの脾臓ＤＣにおけるＣＤ８３の相対発現を表すヒストグラム。（ｄ）ＣＤ８３ｆｌ／ｆｌＣＤ１１ｃ-Ｃｒｅ及びＣＤ８３ｗｔ／ｗｔＣＤ１１ｃ-ＣｒｅマウスにおけるＤＳＳ大腸炎生存率。コンディショナルノックアウト動物は有意に低下した生存率を有した（ログランク検定、ｐ＝０．０１８６）。（ｅ）８日目の体重は、ＣＤ８３ｗｔ／ｗｔＣＤ１１ｃ-Ｃｒｅ同腹子と比較してＣＤ８３ｆｌ／ｆｌＣＤ１１ｃ-Ｃｒｅマウスにおいて有意に低かった。（ｆ）動物の肛門周囲の明らかな血（frank blood）の発生。ＣＤ８３ｆｌ／ｆｌＣＤ１１ｃ-Ｃｒｅの１００％が７日目までに明らかな潜血（overt occult blood）を有した。ＣＤ８３ｗｔ／ｗｔＣＤ１１ｃ-Ｃｒｅ同腹子において明らかな血は観察されなかった。
【図１７】図１７は抗ヒトＣＤ８３抗体がＣＤ８３を発現する細胞に結合したことを示す。フローサイトメトリーによる定量化は、抗ＣＤ８３抗体（ａ）３５Ｇ１０、（ｂ）４０Ａ１１、（ｃ）５４ＡＤ１、（ｄ）５９Ｇ１０、（ｅ）７５Ａ１、及び（ｆ）７Ｃ７がヒトＣＤ８３を発現するＣＨＯ細胞（黒線）に特異的に結合するが、マウスＣＤ８３を発現する細胞（破線）には結合しないことを示す。（ｇ）抗ＣＤ８３抗体６０Ｂ１０はヒトＣＤ８３を発現するＣＨＯ細胞に結合し、またマウスＣＤ８３を発現するＣＨＯ細胞との交差反応も見せた。親ＣＨＯ細胞株（中実灰色ヒストグラム）には結合は見られなかった。
【図１８】図１８は抗マウスＣＤ８３抗体がマウスＣＤ８３を発現するＣＨＯ細胞に結合したことを示す。フローサイトメトリーによる定量化は、抗ＣＤ８３抗体（ａ）４２Ｃ６及び（ｂ）３９Ａ２は、マウスＣＤ８３を発現するＣＨＯ細胞に特異的に結合したが（破線）、親ＣＨＯ細胞株には結合しなかった（中実灰色ヒストグラム）ことを示す。
【図１９】図１９は抗ＣＤ８３抗体が炎症促進性サイトカインの産生を有意に低減したことを示す。（ａ）ＥＬＩＳＡ解析は、アイソタイプコントロール抗体（ＩＳＯ）の使用と比較して、抗ＣＤ８３抗体６０Ｂ１０、３５Ｇ１０、４０Ａ１１又は７Ｃ７がｍＤＣからのＭＣＰ-１の産生を有意に低減したことを示した；*は値がアイソタイプコントロール処置と有意に異なることを示す。それぞれｐ＝０．０３０３、ｐ＝０．０３０９、ｐ＝０．０３６９、ｐ＝０．０２４７。５４Ｄ１、５９Ｇ１０、又は７５Ａ１抗体を与えられた細胞に有意な差異は見られなかった。（ｂ）マウス骨髄由来ＤＣ（ＢＭＤＣ）におけるＩＬ-１２ｐ４０発現の定量的ＰＣＲ解析は、抗ＣＤ８３抗体３９Ａ２又は４２Ｃ６が、アイソタイプコントロール抗体の使用と比較して、ＬＰＳ誘導性ＣＤ８３発現を有意に低減したことを示す。ＩＬ-１２ｐ４０発現をβアクチンに正規化した。各シンボルは独立マウスからの細胞を表す。*，ｐ＝０．０３７２；†，ｐ＝０．０４３８。
【図２０】図２０は抗ＣＤ８３抗体がＤＳＳ誘導大腸炎からマウスを保護したことを示す。抗ＣＤ８３抗体を与えられたマウスは、抗ｇＤコントロール抗体又はＤＳＳのみを与えられたマウスと比較して、有意に低減された組織学的スコアを有した：３９Ａ２、平均＝５．３、**はｐ＝０．００１１を示す；４２Ｃ６、平均＝５．５、†はｐ＝０．００１５を示す；６０Ｂ１０、平均＝５．４、*はｐ＝０．００５９を示す。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３０】
ここで使用される場合、「防止」なる用語は、個体における疾患の発生又は再発に対する予防を与えることを含む。個体は、自己免疫疾患に罹り易い、感受性である、又は自己免疫疾患を展開する危険性があり得るが、まだ該疾患と診断されていない。
【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３１】
ここで使用される場合、自己免疫疾患を展開する危険性がある個体とは、ここに記載の治療方法の前に、検出可能な疾患又は疾患の症状を有し得、又は表示検出可能な疾患又は疾患の症状を有し得る。「危険性がある」とは、個体が、当技術分野で知られる、自己免疫疾患の発生と相関する測定可能なパラメーターである一又は複数のリスクファクターを有することを意味する。一又は複数のこれらのリスクファクターを有する個体は、一又は複数のこれらのリスクファクターを持たない個体と比べ、疾患を発生するより高い確率を有する。
【誤訳訂正１０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１０２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１０２】
幾つかの実施態様では、抗ＣＤ８３抗体は、ヒトＣＤ８３の細胞外領域に特異的に結合する。幾つかの実施態様では、ヒトＣＤ８３は、
2013150592.tif 000001
に由来する成熟アミノ酸配列を有する。
【誤訳訂正１１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１０５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１０５】
幾つかの実施態様では、抗ＣＤ８３抗体は、（ａ）配列番号：３１のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｈ１；（ｂ）配列番号：３２のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｈ２；（ｃ）配列番号：３３のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｈ３；（ｄ）配列番号：３７のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｌ１；（ｅ）配列番号：３８のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｌ２；及び（ｆ）配列番号：３９のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｌ３から選択される少なくとも１、２、３、４、５又は６つのＨＶＲを有する。
【誤訳訂正１２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１０６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１０６】
幾つかの実施態様では、抗ＣＤ８３抗体は、（ａ）配列番号：３１のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｈ１；（ｂ）配列番号：３２のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｈ２；（ｃ）配列番号：３３のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｈ３；（ｄ）配列番号：３７のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｌ１；（ｅ）配列番号：３８のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｌ２；及び（ｆ）配列番号：３９のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｌ３を含んでなる６つのＨＶＲを有する。
【誤訳訂正１３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１０７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１０７】
幾つかの実施態様では、抗ＣＤ８３抗体は、（ａ）配列番号：３１のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｈ１；（ｂ）配列番号：３２のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｈ２；及び（ｃ）配列番号：３３のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｈ３から選択される少なくとも１、少なくとも２、又は全３つのＶＨ ＨＶＲ配列を有する。一実施態様では、抗体は、配列番号：３３のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｈ３を有する。別の実施態様では、抗体は、配列番号：３３のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｈ３及び配列番号：３９のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｌ３を有する。更なる実施態様では、抗体は、配列番号：３３のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｈ３、配列番号：３９のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｌ３、及び配列番号：３２のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｈ２を有する。更なる実施態様では、抗体は、（ａ）配列番号：３１のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｈ１；（ｂ）配列番号：３２のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｈ２；及び（ｃ）配列番号：３３のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｈ３を有する。
【誤訳訂正１４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１０８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１０８】
幾つかの実施態様では、抗ＣＤ８３抗体は、（ａ）配列番号：３７のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｌ１；（ｂ）配列番号：３８のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｌ２；及び（ｃ）配列番号：３９のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｌ３から選択される少なくとも１、少なくとも２、又は全３つのＶＬ ＨＶＲ配列を有する。一実施態様では、抗体は、（ａ）配列番号：３７のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｌ１；（ｂ）配列番号：３８のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｌ２；及び（ｃ）配列番号：３９のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｌ３を有する。
【誤訳訂正１５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１０９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１０９】
幾つかの実施態様では、抗ＣＤ８３抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号：３１のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｈ１、（ｉｉ）配列番号：３２のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号：３３のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｈ３から選択される少なくとも１、少なくとも２、又は全３つのＶＨ ＨＶＲ配列を含んでなるＶＨドメイン；及び（ｂ）（ｉ）配列番号：３７のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｌ１；（ｉｉ）配列番号：３８のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｌ２；及び（ｉｉｉ）配列番号：３９のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｌ３から選択される少なくとも１、少なくとも２、又は全３つのＶＬ ＨＶＲ配列を含んでなるＶＬドメインを有する。
【誤訳訂正１６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１１０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１１０】
幾つかの実施態様では、抗ＣＤ８３抗体は、（ａ）配列番号：３１のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｈ１；（ｂ）配列番号：３２のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｈ２；（ｃ）配列番号：３３のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｈ３；（ｄ）配列番号：３７のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｌ１；（ｅ）配列番号：３８のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｌ２；及び（ｆ）配列番号：３９のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｌ３を有する。
【誤訳訂正１７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１１２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１１２】
幾つかの実施態様では、抗ＣＤ８３抗体において、配列番号：３０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を有する抗体が提供される。ある実施態様では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一性を有するＶＨ配列は基準配列に対して置換（例えば保存的置換）、挿入、又は欠失を有するが、この配列を含んでなる抗ＣＤ８３抗体はＣＤ８３に結合する能力を保持する。ある実施態様では、全部で１から１０のアミノ酸が、配列番号：３０において置換、挿入及び／又は欠失されている。ある実施態様では、置換、挿入、及び／又は欠失は、ＨＶＲの外の領域（すなわちＦＲ）において生じる。場合によっては、抗ＣＤ８３抗体は、配列番号：３０におけるＶＨ配列を有し、該配列の翻訳後修飾を含む。特定の実施態様では、ＶＨは、（ａ）配列番号：３１のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｈ１、（ｂ）配列番号：３２のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｈ２、及び（ｃ）配列番号：３３のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｈ３から選択される１、２又は３つのＨＶＲを有する。
【誤訳訂正１８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１１３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１１３】
幾つかの実施態様では、抗ＣＤ８３抗体において、配列番号：３６のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を有する抗体が提供される。ある実施態様では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一性を有するＶＬ配列は基準配列に対して置換（例えば保存的置換）、挿入、又は欠失を有するが、この配列を含んでなる抗ＣＤ８３抗体はＣＤ８３に結合する能力を保持する。ある実施態様では、全部で１から１０のアミノ酸が、配列番号：３６において置換、挿入及び／又は欠失されている。ある実施態様では、置換、挿入、及び／又は欠失は、ＨＶＲの外の領域（すなわちＦＲ）において生じる。場合によっては、抗ＣＤ８３抗体は、配列番号：３６におけるＶＬ配列を有し、該配列の翻訳後修飾を含む。特定の実施態様では、ＶＬは、（ａ）配列番号：３７のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｌ１、（ｂ）配列番号：３８のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｌ２、及び（ｃ）配列番号：３９のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｌ３から選択される１、２又は３つのＨＶＲを有する。
【誤訳訂正１９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１３４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１３４】
酵母における誘発的プロモーターは、増殖条件によって転写が制御される付加的効果を有する。例示的な誘発的プロモーターは、アルコールデヒドロゲナーゼ２、イソチトクロムＣ、酸ホスファターゼ、窒素代謝と関連する分解性酵素、メタロチオネイン、グリセルアルデヒド-３-リン酸デヒドロゲナーゼ、及びマルトース及びガラクトースの利用を支配する酵素のプロモーター領域を含む。酵母の発現に好適に用いられるベクターとプロモーターは欧州特許７３６５７に更に記載されている。また酵母エンハンサーも酵母プロモーターと共に好適に用いられる。
【誤訳訂正２０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１３７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１３７】
（５）エンハンサーエレメント成分
より高等の真核生物による、抗体又はその断片をコードしているＤＮＡの転写は、ベクター中にエンハンサー配列を挿入することによってしばしば増強される。哺乳動物遺伝子由来の多くのエンハンサー配列が現在知られている(グロビン、エラスターゼ、アルブミン、α-フェトプロテイン及びインスリン)。しかしながら、典型的には、当業者は、真核細胞ウィルス由来のエンハンサーを用いるであろう。例としては、複製起点の後期側のＳＶ４０エンハンサー(１００−２７０塩基対)、サイトメガロウィルス初期プロモーターエンハンサー、複製起点の後期側のポリオーマエンハンサー及びアデノウィルスエンハンサーが含まれる。真核生物プロモーターの活性化のための増強要素については、Yaniv, Nature, 297:17-18 (1982)もまた参照のこと。エンハンサーは、抗体又は抗体断片コード配列の５'又は３'位でベクター中にスプライシングされうるが、好ましくはプロモーターの５'位に位置している。
【誤訳訂正２１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１７０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１７０】
（３）ヒト化抗体
本発明の抗体（抗ＣＤ８３アゴニスト抗体等）又は抗体断片には、さらにヒト化又はヒト抗体が含まれる。非ヒト(例えばマウス)抗体のヒト化形とは、キメライムノグロブリン、イムノグロブリン鎖あるいはその断片(例えばＦａｂ、Ｆａｂ'-ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆ(ａｂ')２又は抗体の他の抗原結合サブ配列)であって、非ヒトイムノグロブリン由来の最小配列を含むものである。ヒト化抗体はレシピエントの相補性決定領域(ＣＤＲ)の残基が、所望の特異性、親和性及び能力を有するマウス、ラット、ハムスター、又はウサギのような非ヒト種(ドナー抗体)のＣＤＲの残基によって置換されたヒトイムノグロブリン(レシピエント抗体)を含む。ある場合には、ヒトイムノグロブリンのＦｖフレームワーク残基は、対応する非ヒト残基によって置換されている。また、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にも、移入されたＣＤＲもしくはフレームワーク配列にも見出されない残基を含んでいてもよい。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つの、また典型的には２つの可変ドメインの全てを実質的に含み、この場合、ＣＤＲ領域の全て若しくは実質的に全てが、非ヒトイムノグロブリンのものに相当し、ＦＲ領域の全て若しくは実質的に全てが、ヒトイムノグロブリンコンセンサス配列である。ヒト化抗体は、最適には免疫グロブリン定常領域(Ｆｃ)、典型的にはヒトのイムノグロブリンの定常領域の少なくとも一部も含む。Jones等, Nature, 321:522-525 (1986); Riechmann等, Nature, 332:323-329 (1988); 及びPresta, Curr. Op Struct. Biol., 2:593-596 (1992)。
【誤訳訂正２２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１８０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１８０】
抗体断片を生産するために様々な技術が開発されている。伝統的には、これらの断片は、完全な抗体のタンパク分解性消化を介して誘導されていた(例えば、Morimotoら, Journal of Biochemical and Biophysical Methods 24:107-117 (1992)及びBrennanら, Science, 229:81(1985)を参照されたい)。しかしながら、これらの断片は現在は組換え宿主細胞により直接生産することが可能であり、例えば上で検討したＣＤ８３に対する抗体をコードする核酸を使用する。Ｆａｂ、Ｆｖ及びｓｃＦｖ抗体断片はすべて大腸菌内で発現され分泌されるため、これら断片を大量に産生することが容易である。抗体断片は上記した抗体ファージライブラリーから単離することができる。あるいは、Ｆａｂ'-ＳＨ断片は大腸菌から直接回収することができ、化学的に結合してＦ(ａｂ')２断片を形成することができる(Carterら, Bio/Technology 10:163-167(1992))。他のアプローチ法では、Ｆ(ａｂ')２断片を組換え宿主細胞培養から直接分離することができる。インビボ半減期が延長したＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２抗体断片の産生は米国特許第５，８６９，０４６号に記載されている。他の実施態様では、選択抗体は単鎖Ｆｖ断片(ｓｃＦＶ)である。国際公開第９３／１６１８５号；米国特許第５，５７１，８９４号；及び米国特許第５，５８７，４５８号を参照のこと。また、抗体断片は、例えば米国特許第５，６４１，８７０号に記載されているような「直鎖状抗体」であってもよい。このような直鎖状抗体断片は単一特異性又は二重特異性であってよい。
【誤訳訂正２３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１８３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１８３】
異なったアプローチ法では、所望の結合特異性を有する抗体可変ドメイン(抗原-抗体結合部位)を免疫グロブリン定常ドメイン配列と融合させる。該融合は好ましくは、少なくともヒンジの一部、ＣＨ２及びＣＨ３領域を含む免疫グロブリン重鎖定常ドメインとの融合である。軽鎖の結合に必要な部位を含む第一の重鎖定常領域(ＣＨ１)を、融合の少なくとも一つに存在させることが望ましい。免疫グロブリン重鎖の融合、望まれるならば免疫グロブリン軽鎖をコードしているＤＮＡを、別個の発現ベクター中に挿入し、適当な宿主生物に同時に形質移入する。これにより、組立に使用される三つのポリペプチド鎖の等しくない比率が最適な収率をもたらす態様において、三つのポリペプチド断片の相互の割合の調節に大きな融通性が与えられる。しかし、少なくとも二つのポリペプチド鎖の等しい比率での発現が高収率をもたらすとき、又はその比率が特に重要性を持たないときは、２または３個全てのポリペプチド鎖のためのコード化配列を一つの発現ベクターに挿入することが可能である。
【誤訳訂正２４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１８８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１８８】
組換え細胞培養から直接的に二価抗体断片を作成し単離する様々な技術もまた記述されている。例えば、二価ヘテロ二量体はロイシンジッパーを使用して生産されている。Kostelnyら, J.Immunol. 148(5):1547-1553 (1992)。Ｆｏｓ及びＪｕｎタンパク質からのロイシンジッパーペプチドを遺伝子融合により二つの異なった抗体のＦａｂ'部分に結合させる。抗体ホモダイマーをヒンジ領域で還元してモノマーを形成し、ついで再酸化して抗体ヘテロダイマーを形成する。Hollingerら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993)により記述された「ダイアボディ」技術は二重特異性／二価抗体断片を作成する別のメカニズムを提供した。断片は、同一鎖上の２つのドメイン間の対形成を可能にするには十分に短いリンカーにより軽鎖可変ドメイン(ＶＬ)に重鎖可変ドメイン(ＶＨ)を結合してなる。従って、一つの断片のＶＨ及びＶＬドメインは他の断片の相補的ＶＬ及びＶＨドメインと強制的に対形成させられ、２つの抗原結合部位を形成する。単鎖Ｆｖ(ｓＦｖ)ダイマーの使用により二重特異性／二価抗体断片を製造する他の方策もまた報告されている。Gruberら, J.Immunol. 152:5368 (1994)を参照されたい。
【誤訳訂正２５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１９２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１９２】
（９）エフェクター機能の操作
エフェクター機能を変更及び／又は抗体の血清半減期を増加するように本発明の抗体を改変することが所望されうる。例えば、定常領域のＦｃ受容体結合部位が、特定のＦｃ受容体、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及び／又はＦｃγＲＩＩＩに対する結合親和性を除去又は低減するように改変又は変異されうる。幾つかの実施態様では、エフェクター機能は、抗体のＦｃ領域（例えば、ＩｇＧのＣＨ２において）のＮ-グリコシル化を除去することによって損なわれる。幾つかの実施態様では、エフェクター機能は、ヒトＩｇＧの２３３−２３６、２９７、及び／又は３２７−３３１等の領域を修飾することによって損なわれ、ＰＣＴＷＯ９９／５８５７２及びArmour等, Molecular Immunology 40: 585-593 (2003); Reddy等, J. Immunology 164:1925-1933 (2000)に記載される。
【誤訳訂正２６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２０６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２０６】
（１０）他の抗体修飾
本発明の抗体又は抗体断片は、当技術分野で知られ容易に入手可能である更なる非タンパク質性部分を持つよう更に修飾されることができる。好ましくは、抗体の誘導体化に適した部分は水溶性ポリマーである。水溶性ポリマーの非制限的な例は、限定するものではないが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ-１、３-ジオキソラン、ポリ-１,３,６-トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマー又はランダムコポリマー）、及びデキストラン又はポリ（ｎ-ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチレンポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、及びその混合を含む。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中のその安定性により製造において利点を有しうる。ポリマーは、任意の分子量であり得、分岐又は非分岐でありうる。抗体に結合されるポリマーの数は様々であり得、一以上のポリマーが結合される場合は、それらは同じもしくは異なる分子であってもよい。一般に、誘導体化に使用されるポリマーの数及び／又はタイプは考察に基づいて決定されることが可能であり、限定するものではないが、改良される抗体の特定の特性又は機能、抗体誘導体が決められた条件下の治療で使用されるかどうか等を含む。このような技術及び多の適切な製剤は、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th Ed., Alfonso Gennaro, Ed., Philadelphia College of Pharmacy and Science (2000)に開示されている。
【誤訳訂正２７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２５０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２５０】
実施例１．ＣＤ８３は細胞表面でのホモタイプ結合に関与する
細胞表面上に発現されるＣＤ８３に可溶性ＣＤ８３が結合するか決定するために、アミノ酸配列
ＴＰＥＶＫＶＡＣＳＥＤＶＤＬＰＣＴＡＰＷＤＰＱＶＰＹＴＶＳＷＶＫＬＬＥＧＧＥＥＲＭＥＴＰＱＥＤＨＬＲＧＱＨＹＨＱＫＧＱＮＧＳＦＤＡＰＮＥＲＰＹＳＬＫＩＲＮＴＴＳＣＮＳＧＴＹＲＣＴＬＱＤＰＤＧＱＲＮＬＳＧＫＶＩＬＲＶＴＧＣＰＡＱＲＫＥＥＴＦＫＫＹＧＲＡＱＶＴＤＫＡＡＨＹＴＬＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号：３）
を含んでなるＣＤ８３．ｆｃを生成し、ＣＨＯ細胞（ＣＨＯ-ｈＣＤ８３）上に安定的に発現されるヒトＣＤ８３、又はＭＵＴＺ-３由来成熟樹状細胞（ｍＤＣ）上で発現される内因性ＣＤ８３の何れかに結合するその能力を評価した。安定ＣＨＯ-ｈＣＤ８３細胞株の産生のための発現ベクターを生成するために、Ｎ末端ＨＩＳタグヒトＣＤ８３（ｈＣＤ８３）をコードするＤＮＡ断片を、位置ＸｂａＩ及びＸｈｏＩで、ネオマイシン耐性プラスミド、ｐＲＫｎｅｏ(Crowley等, Proc Natl Acad Sci USA., 90(11):5021-5025, 1993)にクローニングしてｈＣＤ８３．ｐＲＫｎｅｏを生成した。ＣＨＯ細胞をＦｕｇｅｎｅ(Roche)を使用してｈＣＤ８３．ｐＲＫｎｅｏで形質移入し、上位１０％のＣＤ８３陽性細胞をＦＡＣＳで選別し、次いでＧ４１８（４００μｇ／ｍｌ；ＧＩＢＣＯ）を用いて選択し、安定ＣＨＯ-ｈＣＤ８３細胞株を生成した。ＭＵＴＺ-３細胞から未熟ＤＣ（ｉＤＣ）を得るため、細胞を、１５０ｎｇ／ｍｌのｒｈＧＭ-ＣＳＦ及び５０ｎｇ／ｍｌのｒｈＩＬ-４を含有するＭＥＭα＋ｇｌｕｔａｍａｘ／２０％加熱不活性化ＦＢＳにおいて培養した。ＤＣを、２５ｎｇ／ｍｌのｒｈＩＬ-１ｂ、１００ｎｇ／ｍｌのｒｈＩＬ-６、５０ｎｇ／ｍｌのｒｈＴＮＦα及び１μｇ／ｍｌのＰＧＥ-２を含有するサイトカインカクテルを用いて、ＣＤ８３の表面発現に対して成熟させた。
【誤訳訂正２８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２５２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２５２】
ＣＤ８３．ｆｃ結合に細胞表面ＣＤ８３が必要か確認するために、ＣＨＯ-ｈＣＤ８３細胞を１μｇ／ｍｌの抗ＣＤ８３抗体（ＨＢ１５ｅ; Santa Cruz Biotechnology）でインキュベートし、これがＣＤ８３．ｆｃ結合を阻止するか決定した。データ解析は、ＣＤ８３．ｆｃはＣＨＯ-ｈＣＤ８３細胞(黒線)に結合するが、結合は、アイソタイプコントロール(灰色線)ではなくＨＢ１５ｅ（破線）によってブロックされることを示した（図２Ａ）。ＣＤ８３．ｆｃ結合のためのＣＤ８３発現の必要性を、ＣＤ８３を発現していないＭＵＴＺ-３由来ＤＣにおいて更に検定した。ＭＵＴＺ-３ ｉＤＣを、１５０ｎｇ／ｍｌのｒｈＧＭ-ＣＳＦ及び５０ｎｇ／ｍｌのｒｈＩＬ-４を含有するＭＥＭα＋ｇｌｕｔａｍａｘ／２０％加熱不活性化ＦＢＳにおける培養の４日後、ＣＤ８３を標的にするＡｃｃｅｌｌ ｓｉＲＮＡ(Cat. No. E-012680; Dharmacon)又は非標的化コントロール(Cat. No. D-001910; Dharmacon)で形質移入した。ＭＵＴＺ-３ ｉＤＣを、１０ｕＭのｓｉＲＮＡを含有し、３％加熱不活性化ＦＢＳ、１５０ｎｇ／ｍｌのＧＭ-ＣＳＦ及び５０ｎｇ／ｍｌのＩＬ-４で補充されたAccell delivery media(Cat. No. B-005000; Dharmacon)において、５％ＣＯ２で３７°Ｃで７２時間インキュベートした。７日目、上述したようにｍＤＣを産生するために成熟刺激でＤＣを処理した。ｓｉＲＮＡ媒介によるＣＤ８３ ＲＮＡ及びタンパク質発現ノックダウンの効果を、それぞれｔａｑｍａｎ ｑＰＣＲ並びにウエスタンブロット（全細胞溶解物）によって評価した。１８Ｓに正規化した、非標的化コントロール（ｓｉＮＴＣ）ｓｉＲＮＡ又はＣＤ８３特異的ｓｉＲＮＡ（ｓｉＣＤ８３）で処理したＭＵＴＺ-３ ｍＤＣからの全ＲＮＡの分析は、ＣＤ８３ ｓｉＲＮＡで形質移入されたＤＣが、ＣＤ８３ ＲＮＡレベルの有意なダウンレギュレーションを呈することを実証した（図２Ｂ）。ＭＵＴＺ-３ ｍＤＣにおけるＣＤ８３のノックダウンを、ＣＤ８３に対する蛍光色素コンジュゲート抗体で細胞を染色し、フローサイトメトリーによって細胞を解析することによって確認した。データ解析及び全結合を示すヒストグラムの構築は、ＣＤ８３は、ｓｉＮＴＣで処理されたｍＤＣの表面に発現されるが（黒線）、ｓｉＣＤ８３で処理されたｉＤＣ（灰色線）又は成熟ＤＣ（破線）では発現されないことを示した（図２Ｃ）。中実ヒストグラムはアイソタイプコントロールを示す。ＣＤ８３発現のノックダウンの確認の後、ｉＤＣ、ｓｉＮＴＣ ｍＤＣ、及びｓｉＣＤ８３ ｍＤＣを、上述のようにＰＥ-標識ＣＤ８３．Ｆｃ又は標識ＩｇＧ．Ｆｃコントロールタンパク質でインキュベートし、フローサイトメトリーに課した。データ解析は、ＣＤ８３．ｆｃはｓｉＮＴＣ ｍＤＣに結合するが、ｉＤＣ又はｓｉＣＤ８３ ｍＤＣに結合しないことを実証し、成熟ＤＣに対するＣＤ８３．ｆｃ結合がＣＤ８３発現を必要とすることを示した（図２Ｄ）。ＣＤ８３のノックダウンはまた、ＭＨＣＩＩの低下した発現をもたらしたが、ＣＤ８６等の他の活性マーカーには何の変化もなかった（図２Ｅ及びＦ）。
【誤訳訂正２９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２５３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２５３】
ＣＤ８３がホモタイプ結合を通した細胞対細胞接着を媒介するか決定するために、ｈＣＤ８３を発現するＣＨＯ細胞において細胞凝集を検定した。ＣＨＯ細胞及びＣＨＯ-ｈＣＤ８３細胞を２ｍＭのＥＤＴＡでフラスコから脱離させ、洗浄し、２％ＦＢＳ／１０ｍＭＥＤＴＡを含有するがＣａ２＋又はＭｇ２＋を欠くＨＢＳＳに再懸濁させた。その後、細胞を１０６／ｍｌで再懸濁させ、７０μｍフィルターを通過させて、低接着１０ｃｍ培養皿にプレーティングするための単個細胞浮遊液を得た。軌道プラットフォームシェーカーにおける３７℃で９０分間のインキュベーションの後、細胞を４％のＰＦＡで固定して細胞凝集を評価した。細胞の顕微鏡イメージングは、ＣＤ８３発現を欠くコントロールＣＨＯ細胞は凝集せず、ｈＣＤ８３を発現するＣＨＯ-ｈＣＤ８３細胞は懸濁培養中でクラスターを形成したことを示した（図３Ａ及びＢ）。１μｇのＣＤ８３．ｆｃタンパク質でのＣＨＯ-ｈＣＤ８３細胞の前処理は凝集を阻止したが、Ｉｇコントロールでの処理は阻止しなかった（図３Ｃ及びＤ）。これらの結果は、ＣＤ８３の表面発現が細胞対細胞接着に十分であり、この相互作用はホモタイプ結合に対する競合のため可溶性ＣＤ８３の添加により阻止できることを示す。
【誤訳訂正３０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２５４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２５４】
実施例２．ＤＣの可溶性ＣＤ８３処理は、ＤＣ成熟及び炎症促進性サイトカイン放出の阻害により抗炎症性表現型となる。
可溶性ＣＤ８３処理によりＤＣに誘導される免疫反応を特徴付けるために、ｍＤＣ表面活性化マーカーへのＣＤ８３処理の効果を評価した。ＭＵＴＺ-３細胞からｉＤＣを得るために、細胞を１５０ｎｇ／ｍｌのｒｈＧＭ-ＣＳＦ及び５０ｎｇ／ｍｌのｒｈＩＬ-４を含有するＭＥＭα＋ｇｌｕｔａｍａｘ／２０％加熱不活性化ＦＢＳにおいて６日間培養した。ｉＤＣを、２５ｎｇ／ｍｌのｒｈＩＬ-１β、１００ｎｇ／ｍｌのｒｈＩＬ-６、５０ｎｇ／ｍｌのｒｈＴＮＦα及び１μｇ／ｍｌのＰＧＥ-２を含有する成熟刺激サイトカインカクテルで処理した。１０μｇ／ｍｌのＣＤ８３．ｆｃ、１μｇ／ｍｌのＨＢ１５ｅ、又はコントロールＩｇＧ．ｆｃでのｍＤＣの処理を成熟刺激と同時に行った。ＭＵＴＺ-３由来ｍＤＣにおける細胞表面活性化マーカー、ＣＤ８３及びＨＬＡ-ＤＲ（ＭＨＣＩＩ）の発現を、ＣＤ８３又はＭＨＣＩＩに対する蛍光色素コンジュゲート抗体で細胞を染色し、フローサイトメトリーによって細胞を分析することによって検査した。非特異的染色のレベルを決定するために、標識アイソタイプ適合抗体を使用した。データ解析及び全結合を示すヒストグラム構築は、ＣＤ８３及びＭＨＣＩＩはＭＵＴＺ-３由来ｍＤＣで発現されたが（黒線）、ｉＤＣ（中実線ヒストグラム）では低レベルであることを示した（図４）。中実非線ヒストグラムはアイソタイプコントロールを表す。ＣＤ８３及びＭＨＣＩＩ双方の発現は、ＣＤ８３．ｆｃ（灰色線）又はＨＢ１５ｅ（破線）処置で低減され、ＣＤ８３処理がｍＤＣにおける表面活性化マーカーの発現を低減することを示す。
【誤訳訂正３１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２５５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２５５】
ＤＣはサイトカインの生成を介し免疫反応を調節することが知られているため、可溶性ＣＤ８３処理のＤＣへの効果を、処理されたヒト単球由来ＤＣ（ＭＤＤＣ）からのサイトカイン分泌の検出によって評価した。ＭＤＤＣを複数ドナーの全血から単離し、成熟させるためにＣＤ８３．Ｆｃ又はＨＢＩ５ｅの有無においてサイトカインを用いて刺激した。単離及び処理のために、ヒト全血をＰＢＳで希釈し、Ｆｉｃｏｌｌ Ｐａｑｕｅ（ＧＥ healthcare）上に重層し３０分間１５００ｒｐｍで回転させた。白血球層を取り除き、ＰＢＳで洗浄した。単球をHuman monocyte isolation kit II (Miltenyi)を用いて単離し、１２５ｎｇ／ｍｌのｒｈＩＬ-４及び５０ｎｇ／ｍｌのｒｈＧＭ-ＣＳＦ(R&D systems)を含有するＲＰＭ／１０％ＦＢＳ／１Ｘｐｅｎ／ｓｔｒｅｐにおいて６日間培養した。未熟ＤＣを得るために、培地を一日おきに変えた。１０μｇ／ｍｌＣＤ８３．Ｆｃ又は１μｇ／ｍｌ抗ＣＤ８３抗体（ＨＢＩ５ｅ；Santa Cruz）を用いた全処理は成熟刺激と同時に行った。細胞培養上澄部をＤＣの成熟後４８時間で集め、分泌されたサイトカインを、標準の製造者の指示に従って、ＭＣＰ-１、ＩＬ１２-ｐ４０及びＩＬ-８(Invitrogen)、並びにＩＬ-１ｒａ(Cell Sciences)についてキットを使用してＥＬＩＳＡによって解析した。ＤＣによって分泌されたサイトカインの解析は、成熟刺激を共に用いたＣＤ８３．Ｆｃでの処理が、ＤＣサイトカインの分泌を変化させ、ＩＬ-１受容体に結合し下流の炎症性シグナル伝達をブロックするインターロイキン-１受容体アンタゴニスト（ＩＬ-１ｒａ）を増加し（図５Ｂ）、炎症促進性サイトカイン単球走化性タンパク質-１（ＭＣＰ-１）及びインターロイキン-１２（ｌＬ-１２ｐ４０）のサブユニットβの産生を低下させた（図５Ａ及びＣ）。ＣＤ８３．Ｆｃ又はＨＢＩ５ｅを用いた処理は、炎症性サイトカインＩＬ-８の産生に何の効果も持たなかった（図５Ｄ）。
【誤訳訂正３２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２５６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２５６】
可溶性ＣＤ８３処理によりＤＣに誘発された免疫反応を更に特徴付けるために、ｍＤＣによる炎症促進性サイトカイン分泌へのＣＤ８３処置の効果を評価した。ＭＵＴＺ-３細胞から未熟ＤＣを得るために、細胞を１５０ｎｇ／ｍｌのｒｈＧＭ-ＣＳＦ及び５０ｎｇ／ｍｌのｒｈＩＬ-４を含有するＭＥＭα＋ｇｌｕｔａｍａｘ／２０％加熱不活性化ＦＢＳにおいて６日間培養した。ＤＣを、２５ｎｇ／ｍｌのｒｈＩＬ-１β、１００ｎｇ／ｍｌのｒｈＩＬ-６、５０ｎｇ／ｍｌのｒｈＴＮＦａ及び１μｇ／ｍｌのＰＧＥ-２を含有するサイトカインカクテルを用い、ＣＤ８３の表面発現について成熟させた。１０μｇ／ｍｌのＣＤ８３．ｆｃ、１μｇ／ｍｌのＨＢ１５ｅ、又はコントロールＩｇＧ．ｆｃでのｍＤＣの処理を成熟刺激と同時に行った。細胞培養上澄部をＤＣの成熟後４８時間で集め、分泌されたサイトカインを、標準の製造者の指示に従って、ＭＣＰ-１、ＩＬ１２-ｐ４０及びＩＬ-８キット(Invitrogen)、並びにＩＬ-１ｒａ(Cell Sciences)を使用してＥＬＩＳＡによって解析した。ＤＣによって分泌されたサイトカインの解析は、炎症促進性サイトカインＭＣＰ-１（図６Ａ）及びＩＬ-１２ｐ４０（図６Ｃ）が、ＣＤ８３．Ｆｃ又はＨＢＩ５ｅ処理によりｍＤＣにおいて低下されたことを示した。対照的に、抗炎症性サイトカインＩＬ-１ｒａは、ＣＤ８３処理ｍＤＣにおいて有意に増加された（図６Ｂ）。放出ＩＬ-８のレベルは、ＣＤ８３処理又はコントロール処理ｍＤＣ間に差異を示さなかった（図６Ｄ）。各ウェルからの上澄部を３重で実施し、*は値が有意に異なることを示す、*ｐ＜０．０ｌ、**ｐ＜０．００１。各ドットは個々のウェルの平均を表す。グラフは少なくとも３回の独立実験の代表である。
【誤訳訂正３３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２５８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２５８】
実施例３．可溶性ＣＤ８３処理は、創傷治癒に関与する遺伝子のアップレギュレーションとなる。
ＣＤ８３．ｆｃ又はＨＢ１５ｅで処理されたＤＣに誘導される遺伝子発現における変更を更に特徴づけるため、処理後、ＤＣから単離されたＲＮＡにマイクロアレイ分析を実施した。マイクロアレイに関する統計解析をR project(http://r-project.org)及びBioconductor project(http://bioconductor.org)からのソフトウェアを使用して行った。バックグラウンド減算マイクロアレイデータを、アレイ内でＬＯＥＳＳ正規化、アレイ間で分位数正規化した。次いで、正規化データをｌｏｇ２変換し、プローブをBioconductorの「ｇｅｎｅｆｉｌｔｅｒ」パッケージを使用してフィルター処理した（例えば、Ｅｎｔｒｅｚ遺伝子にマッピングされるプローブのみ保持される）。次に、５０％最小可変プローブを除去する非特異的フィルターを使用した(Bourgon等, Proc Natl Acad Sci USA., 107(21):9546-51, 2010)。異なって発現される遺伝子を同定するために、ｌｉｍｍａパッケージを使用して(Smyth., Stat Appl Genet Mol Biol., 3:Article 3, 2004)、減衰ｔ検定を算出した。線形モデルを、未熟及び成熟ＤＣ間、並びにＣＤ８３連結サンプル（ＣＤ８３ｆｃ-及びＨＢ１５ｅ-処理成熟ＤＣ）及びコントロールサンプル（ＩｇＧ-及び非処理成熟ＤＣ）間の異なる発現に対して試験した。false discovery rate（ＦＤＲ）をBenjamini-Hochberg法を使用して算出した。０．０１未満のＦＤＲを有する場合、遺伝子は異なって発現されると考えた。５つの異なるドナーからのＤＣの分析は、ＣＤ８３．ｆｃ及びＨＢ１５ｅ処理細胞が分離し、未処理ｍＤＣ並びにｉＤＣから独立してクラスタとなることを示し、処理が創傷治癒に関与する遺伝子のアップレギュレーションとなることを示した。マイクロアレイデータを、ＣＤ８３．ｆｃ又はＨＢ１５ｅで処理したｍＤＣからの単離された全ＲＮＡのｔａｑｍａｎ ｑＰＣＲ分析によって確認した（図７）。ｇａｐｄｈに対する正規化後、遺伝子発現解析は、創傷治癒に関与する遺伝子ｖｃａｎ、ｓｐｏｃｋ２、及びｆｂｎ２がアップレギュレートされたことを示した。示した平均相対発現は２＾ΔＣＴ＋標準誤差（ＳＥＭ）である。これらのインビトロ結果は、可溶性ＣＤ８３処理が、炎症性疾患により引き起こされる組織損傷の治癒のための、正常な細胞増殖及び遊走を促進しうることを示す。
【誤訳訂正３４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２５９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２５９】
実施例４．ＣＤ８３ホモタイプ相互作用は抗炎症性反応を媒介する。
抗炎症性反応を調節するＣＤ８３相互作用を更に特徴付けるために、ＤＣを、ｈＣＤ８３を過剰発現するＣＨＯ細胞と共培養した時に、抗炎症性反応についてモニタした。ＭＵＴＺ-３細胞からｉＤＣを得るために、細胞を１５０ｎｇ／ｍｌのｒｈＧＭ-ＣＳＦ及び５０ｎｇ／ｍｌのｒｈＩＬ-４を含有するＭＥＭα＋ｇｌｕｔａｍａｘ／２０％加熱不活性化ＦＢＳにおいて６日間培養した。生成されたｉＤＣを、コントロールＣＨＯ細胞株又はヒトＣＤ８３を安定に発現するＣＨＯ細胞と共培養した。その後、混合細胞の培養物を未処理か、もしくは２５ｎｇ／ｍｌのｒｈＩＬ-１β、１００ｎｇ／ｍｌのｒｈＩＬ-６、５０ｎｇ／ｍｌのｒｈＴＮＦα及び１μｇ／ｍｌのＰＧＥ-２を含有するサイトカインカクテルで処理してｍＤＣを生成した。細胞培養上澄み液をＤＣの成熟４８時間後収集し、分泌されたサイトカインＩＬ１２-ｐ４０及びＭＣＰ-１を標準の製造者指示に従ってＥＬＩＳＡ(Invitrogen)によって分析した。分泌されたＩＬ１２-ｐ４０及びＭＣＰ-１レベルの分析は、炎症促進性サイトカインの放出が、ＣＤ８３発現を欠くＣＨＯ細胞と比較して、ｈＣＤ８３を発現するＣＨＯ細胞と共培養されたｍＤＣにおいて有意に低減されることを示した（図８Ａ及びＢ）。このデータは、ＣＤ８３がトランスホモタイプ相互作用に関与して抗炎症性反応を媒介することが可能であることを実証する。このデータは、ＣＤ８３が、抗炎症性反応を媒介するためにトランスホモタイプ相互作用に関与することが可能なことを示す。これらの結果は、複数ドナーの全血から単離されたヒト単球由来ＤＣ（ＭＤＤＣ）を使用して確認した。刺激後、ＣＨＯ-ｈＣＤ８３細胞と共に培養したＤＣは、ＣＤ８３発現を欠くＣＨＯ細胞と共に培養したものより有意に少ないＩＬ１２-ｐ４０を産生した。
【誤訳訂正３５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２６１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２６１】
細胞表面ＣＤ８３との相互作用を必要とするＣＤ８３処理により媒介される抗炎症性反応を検証するために、ＣＤ８３を発現していないＤＣにおいて処理を検定した。ＭＵＴＺ-３ ｉＤＣを、１５０ｎｇ／ｍｌのｒｈＧＭ-ＣＳＦ及び５０ｎｇ／ｍｌのｒｈＩＬ-４を含有するＭＥＭα＋ｇｌｕｔａｍａｘ／２０％加熱不活性化ＦＢＳにおける培養の４日後、ＣＤ８３を標的にするＡｃｃｅｌｌ ｓｉＲＮＡ(Cat. No. E-012680; Dharmacon)又は非標的化コントロール(Cat. No. D-001910; Dharmacon)で形質移入した。ＭＵＴＺ-３ ｉＤＣを、１０ｕＭのｓｉＲＮＡを含有し、３％加熱不活性化ＦＢＳ、１５０ｎｇ／ｍｌのＧＭ-ＣＳＦ及び５０ｎｇ／ｍｌのＩＬ-４で補充されたAccell delivery media(Cat. No. B-005000; Dharmacon)において、５％ＣＯ２で３７°Ｃで７２時間インキュベートした。７日目、ｉＤＣを、２５ｎｇ／ｍｌのｒｈＩＬ-１β、１００ｎｇ／ｍｌのｒｈＩＬ-６、５０ｎｇ／ｍｌのｒｈＴＮＦα及び１μｇ／ｍｌのＰＧＥ-２を含有するサイトカインカクテルで処理してｍＤＣを生成した。１０μｇ／ｍｌのＣＤ８３．ｆｃ、１μｇ／ｍｌのＨＢ１５ｅ、又はコントロールＩｇＧ．ｆｃでのｍＤＣの処理を成熟刺激と同時に行った。細胞培養上澄部をＤＣの成熟後４８時間で集め、分泌されたサイトカインを、標準の製造者の指示に従って、ＭＣＰ-１キット(Invitrogen)を使用してＥＬＩＳＡによって解析した。ＤＣによって放出されたＭＣＰ-１の解析は、ＣＤ８３のｓｉＲＮＡノックダウン（ｓｉＣＤ８３）がＣＤ８３．ｆｃ及びＨＢ１５ｅ抗体への反応を抑止したことを示した（図９）。従って、このデータは、ＣＤ８３処理による抗炎症性反応を媒介するために細胞表面にＣＤ８３が必要であることを示す。これらの結果は分泌されたＩＬ-１２ｐ４０の検出によって確認された。ｍＤＣによって放出されたＩＬ-１２ｐ４０の解析は、ＣＤ８３のｓｉＲＮＡノックダウン（ｓｉＣＤ８３）がＣＤ８３．ｆｃ及びＨＢ１５ｅ抗体への反応を抑止したことを示した。
【誤訳訂正３６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２６２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２６２】
ＣＤ８３処理中の抗炎症性反応がホモタイプ結合、及び細胞表面ＣＤ８３を介した下流シグナル伝達を必要とするか決定するために、細胞質内切断型ＣＤ８３コンストラクトを発現するＤＣにおいて処理を評価した。ＣＤ８３レンチウイルス発現コンストラクトはｐＧＣＭＶ．ＩＲＥＳ．ｅＧＦＰ(pGIPZ誘導体; Openbiosystems)から得られ、完全長ｈＣＤ８３遺伝子（ＣＤ８３ＦＬ）又は細胞質領域（Δ１７２−２０５）切断ｈＣＤ８３遺伝子のセグメントをＰＣＲ増幅し、これらの断片をＸｈｏＩ／ＥｃｏＲＩクローニング部位に挿入することによって作成した（図９Ｂ）。ＤＣの感染のためのレンチウィルスを生成するために、２９３Ｔ細胞をゼラチン化された１０ｃｍの培養皿に１Ｘ１０７で播種し、８０−９０％の培養密度に達するまで〜２０時間増殖させた。培地を５ｍｌのＤＭＥＭ、１０％ＦＢＳ、２ｍＭのＬ-グルタミンで補充し、３７℃で６時間、Lipofectamine 2000 (Invitrogen)を使用して、１：２．３：０．２のモル比で５μｇ発現プラスミド、デルタ８．９及びＶＳＶＧを含有するＤＮＡミックスで細胞を形質移入した。形質移入培地を６ｍｌの通常の増殖培地で補充し、細胞を更に４０時間３７℃でインキュベートした。上澄部を回収し、０．４５μｍのtube top filter(Corning)を通して濾過することによって精製し、製造者の指示に従ってLenti-X-concentrator(Clonetech)を使用して濃縮した。ＭＵＴＺ-３細胞を、ＭＥＭα＋Ｇｌｕｔａｍａｘ／２０％加熱不活性化ＦＢＳ／１５％ＨＴＢ-９馴化培地を含有する維持培地における２４ウェル培養プレートに０．５ｘ１０６／ｍｌで播種した。ポリブレン及び濃縮レンチウィルス上澄み部をそれぞれ４μｇ／ｍｌの最終濃度及び１０のＭＯＩで細胞に加えた。細胞を、室温で３０分間Allegra X-12R卓上遠心分離機において１８００ｒｐｍでスピンさせ、次いで３７℃で一晩インキュベートした。レンチウィルスを含有する培地を除去し、新鮮な維持培地と交換した。２−３日の培養後、上位１０％のＧＦＰ陽性細胞を選別し、１５０ｎｇ／ｍｌのｒｈＧＭ-ＣＳＦ及び５０ｎｇ／ｍｌのｒｈＩＬ-４で補充されたＭＥＭα＋Ｇｌｕｔａｍａｘ／２０％加熱不活性化ＦＢＳにおいて６日間培養し、ｉＤＣとして使用した。細胞を４８時間、成熟刺激、並びにＣＤ８３．Ｆｃ、ＨＢ１５ｅ又はアイソタイプコントロールで処理した。その後、上澄み部を収集し、ＭＣＰ-１放出をＥＬＩＳＡによって解析した。分泌されたＭＣＰ-１の解析は、完全長ＣＤ８３のレンチウィルス過剰発現は、ＣＤ８３．ｆｃ又はＨＢ１５ｅへのｍＤＣ反応を阻害しなかったが、細胞質切断型ＣＤ８３の発現はＣＤ８３処理の抗炎症性作用を阻止したことを示した（図９Ｃ）。これらの結果を分泌されたＩＬ-１２ｐ４０の検出によって確認した。分泌されたＩＬ-１２ｐ４０の解析は、完全長ＣＤ８３のレンチウィルス過剰発現は、ＣＤ８３．ｆｃ又はＨＢ１５ｅへのｍＤＣ反応を阻害しなかったが、細胞質切断型ＣＤ８３の発現はＣＤ８３処理の抗炎症性作用を阻止したことを示した。
【誤訳訂正３７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２６５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２６５】
ＣＤ８３ホモタイプ相互作用の免疫抑制作用が更なるシグナル伝達経路によって媒介されるか決定するために、ＣＤ８３．ｆｃ又はＨＢ１５ｅで５分間処理されたｍＤＣからの細胞溶解物にホスホキナーゼアッセイを実施した。ヒトホスホキナーゼアッセイ(R&D systems)を、製造者の指示に従って実施した。簡単には、ＭＵＴＺ-３ ＤＣを冷却ＰＢＳで洗浄し、Ｌｙｓｉｓ Ｂｕｆｆｅｒ６において可溶化させ、４℃で３０分間揺動させた。溶解物を１４，０００Ｘｇで５分間遠心分離し、Ｂｒａｄｆｏｒｄ(Bio-Rad)による全タンパク質の分析のために上澄部を新しい管に移した。二重にスポッティングされた４６の抗体を有するアレイ膜を１時間室温でブロックし、次いで希釈細胞溶解物で一晩４℃でインキュベートした。膜を洗浄し、次いで検出抗体を用い２時間室温でインキュベートした。洗浄後、膜をStreptavidin-HRPにおいて３０分間室温でインキュベートし、ＥＣＬ Ｐｌｕｓ試薬(Amersham)での検出の前に再び洗浄した。膜をFUJI FILM Image Reader LAS-3000に露出し、平均強度をMulti Gauge v3.1(FUJI FILM)によって分析した。ＨＢ１５ｅ処理はｍＴＯＲ、ｐ＝０．０４６（図１２Ａ）、ｐ３８、ｐ＝０．００８（図１２Ｂ）並びにＣＲＥＢ、ｐ＝０．０１０４（図１２Ｃ）のリン酸化において有意な低下となった。対照的に、ＨＢ１５ｅ抗体処理は、成熟刺激の要素であるＴＮＦαのＴＮＦ受容体結合によって活性化されるＳＴＡＴ３のリン酸化を阻害しなかった（図１２Ｄ）。ＣＤ８３．Ｆｃ又はαＣＤ８３（ＨＢ１５ｅ）で処理したヒト単球由来ＤＣ（ＭＤＤＣ）からの全細胞溶解物のウェスタンブロット解析は、リン酸化ｐ３８ＭＡＰＫ（図１２Ｅ）の低下を確証したが、ＳＴＡＴ３リン酸化に有意な効果を示さなかった（図１２Ｆ）。これらの新規な発見は、ＣＤ８３ホモタイプ相互作用の抗炎症性作用がｐ３８ ＭＡＰＫ並びにｍＴＯＲタンパク質シグナル伝達によって媒介されたことを示す。
【誤訳訂正３８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２７３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２７３】
細胞表面ＣＤ８３のアゴニスト抗ＣＤ８３抗体による結合：
樹状細胞上の細胞表面ＣＤ８３に結合する抗体を同定するために、生成された抗体の結合親和性をフローサイトメトリー分析によってスクリーニングした。簡単には、未熟樹状細胞（ｉＤＣ）をサイトカインカクテルで処理して、ＤＣ成熟及びＣＤ８３の表面発現を誘導した。固定及びフローサイトメトリーの前に、ｍＤＣを、ＤＣ成熟刺激と同時に生成された抗体で処理した。ｍＤＣの表面に発現されたＣＤ８３に特異的に結合する抗体をフローサイトメトリーデータを分析することによって同定した。あるいは、生成された抗ＣＤ８３抗体を細胞凝集アッセイを使用してスクリーニングした。簡単には、ｈＣＤ８３（ＣＨＯ-ｈＣＤ８３）を発現するＣＨＯ細胞を２ｍＭのＥＤＴＡを用いてフラスコから脱離させ、洗浄し、２％ＦＢＳ／１０ｍＭＥＤＴＡを含有するがＣａ２＋又はＭｇ２＋を欠くＨＢＳＳ培地に再懸濁させた。その後細胞を、１０６／ｍｌで再懸濁させ、７０μｍフィルターを通過させて、低接着１０ｃｍ培養皿にプレーティングするための単個細胞浮遊液を得た。その後、ＣＨＯ-ｈＣＤ８３細胞を生成された抗体で処理し、４％のＰＦＡでの固定の前に、３７℃で９０分間、軌道プラットフォームシェーカーでインキュベートした。ＣＤ８３ホモタイプ結合の競合によりＣＨＯ-ｈＣＤ８３細胞の凝集を阻止する抗体を、細胞の顕微鏡イメージングによって同定した。これらの抗体は、それらのヒトＣＤ８３に対する結合及びアゴニスト活性について更に特徴付けられてもよい。
【誤訳訂正３９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２８０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２８０】
実施例１１．抗ＣＤ８３抗体はｍＤＣからの炎症促進性サイトカインの放出を低減する。
樹状細胞（ＤＣ）を、抗ＣＤ８３抗体６０Ｂ１０、３５Ｇ１０、４０Ａ１１、５４Ｄ１、５９Ｇ１０、７５ＡＩ、又は７Ｃ７で処理した場合の抗炎症性反応についてモニタした。アッセイでは、単球由来樹状細胞を未熟ＤＣ（ｉＤＣ）のまま残すか、又は２５ｎｇ／ｍｌのｒｈＩＬ-１β、１００ｎｇ／ｍｌのｒｈＩＬ-６、５０ｎｇ／ｍｌのｒｈＴＮＦα及び１μｇ／ｍｌのＰＧＥ-２を含有するサイトカインカクテルで処理して成熟ＤＣ（ｍＤＣ）を生成した。成熟ＤＣを１０μｇ／ｍｌの示した抗ＣＤ８３抗体で処理し、４８時間インキュベートした。インキュベート後、細胞培養上澄部を集め、分泌された炎症促進性サイトカインを標準の製造者の指示に従ってＥＬＩＳＡ（Invitrogen）によって解析した。分泌サイトカインレベルの解析は、炎症促進性サイトカインＭＣＰ-ｌの放出が、抗ＣＤ８３抗体６０Ｂ１０、３５Ｇ１０、４０Ａ１１、又は７Ｃ７で処理したｍＤＣにおいて有意に低減されたことを示した（図１９）。抗ＣＤ８３抗体５４Ｄ１、５９Ｇ１０、又は７５ＡＩでの処理は、ｍＤＣからのＭＣＰ-ｌの産生を有意には低減しなかった（図１９Ａ）。
【誤訳訂正４０】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】請求項１８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【請求項１８】
抗ＣＤ８３アゴニスト抗体が、（ａ）配列番号：３１のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｈ１、（ｂ）配列番号：３２のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｈ２、及び（ｃ）配列番号：３３のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｈ３を含んでなる重鎖可変ドメイン、及び（ａ）配列番号：３７のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｌ１、（ｂ）配列番号：３８のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｌ２、及び（ｃ）配列番号：３９のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｌ３を含んでなる軽鎖可変ドメインを有する請求項１−１７の何れか一項に記載の方法。
【誤訳訂正４１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】請求項２３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【請求項２３】
（ａ）配列番号：３１のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｈ１；
（ｂ）配列番号：３２のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｈ２；
（ｃ）配列番号：３３のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｈ３；
（ｄ）配列番号：３７のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｌ１；
（ｅ）配列番号：３８のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｌ２；
（ｆ）配列番号：３９のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｌ３
から成る群から選択される少なくとも１、２、３、４、５又は６つの超可変領域（ＨＶＲ）を含んでなる可変ドメインを含んでなる単離された抗ＣＤ８３抗体。
【誤訳訂正４２】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】請求項２４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【請求項２４】
以下の６つのＨＶＲ配列：
（ａ）配列番号：３１のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｈ１；
（ｂ）配列番号：３２のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｈ２；
（ｃ）配列番号：３３のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｈ３；
（ｄ）配列番号：３７のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｌ１；
（ｅ）配列番号：３８のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｌ２；
（ｆ）配列番号：３９のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｌ３
を含んでなる重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含んでなる単離された抗ＣＤ８３抗体。
【誤訳訂正４３】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】請求項２５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【請求項２５】
抗体が、（ａ）配列番号：３１のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｈ１、（ｂ）配列番号：３２のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｈ２、及び（ｃ）配列番号：３３のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｈ３を有する請求項２３又は２４に記載の抗体。
【誤訳訂正４４】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】請求項２６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【請求項２６】
抗体が、（ａ）配列番号：３７のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｌ１、（ｂ）配列番号：３８のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｌ２、及び（ｃ）配列番号：３９のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｌ３を更に含んでなる請求項２５に記載の抗体。
【誤訳訂正４５】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】請求項２７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【請求項２７】
抗体が、（ａ）配列番号：３７のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｌ１、（ｂ）配列番号：３８のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｌ２、及び（ｃ）配列番号：３９のアミノ酸配列を含んでなるＨＶＲ-Ｌ３を有する請求項２３又は２４に記載の抗体。
【誤訳訂正４６】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】請求項３７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【請求項３７】
抗ＣＤ８３抗体を作成する方法において、抗ＣＤ８３抗体をコードする核酸の発現に適した条件下で請求項３５の宿主細胞を培養することを含んでなる前記方法。