(57)【要約】  水和度、弾力、および／または質感を改善するために皮膚を処置する注射可能な組成物および方法が本明細書に開示される。組成物は、低分子量ヒアルロン酸を用いて作られた架橋ヒアルロン酸マトリックスに基づく。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＨＡ材料の総質量を基準として５０質量％を超える、少なくとも７０質量％の、または少なくとも約９０質量％の、約０．２０ＭＤａから約０．９９ＭＤａの間、好ましくは約４００，０００Ｄａから約８００，０００Ｄａの間の質量平均分子量を有する低分子量ＨＡ材料を用いて作られた架橋ＨＡマトリックスを含むヒアルロン酸（ＨＡ）ゲルを含む、皮膚の表在性陥凹の外観を低減させるための注射可能な組成物であって、
組成物のＨＡ濃度が、約１７．０ｍｇ／ｇ未満、例えば約１０．０ｍｇ／ｇ〜約１４．０ｍｇ／ｇ、好ましくは約１２ｍｇ／ｇであり、
架橋ＨＡマトリックスが、１，４−ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ）、１，２−ビス（２，３−エポキシプロポキシ）エチレン、および１−（２，３−エポキシプロピル）−２，３−エポキシシクロヘキサンからなる群から選択される架橋剤で架橋されており、
組成物が、好ましくは抗酸化剤またはビタミンを含有せず、
組成物が、皮膚に導入されてから少なくとも約３ヶ月間、皮膚の表在性陥凹が低減された外観を維持する、注射可能な組成物。
【請求項２】
皮膚に導入されてから少なくとも約６ヶ月間、好ましくは少なくとも約９ヶ月間または１２ヶ月間、皮膚の表在性陥凹が低減された外観を維持する、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
未架橋ＨＡを、好ましくは組成物の総質量を基準として１０質量％未満または５質量％未満の量で含む、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
マンニトールおよびビタミンＣ誘導体の少なくとも１つをさらに含むか、またはリドカインを好ましくは組成物の約０．１質量％から約５質量％の間、例えば０．３質量％の量でさらに含む、請求項１から３に記載の組成物。
【請求項５】
マンニトールが、組成物の総質量を基準として約０．３質量％から約０．９質量％の間の量で存在する、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
ビタミンＣ誘導体がアスコルビン酸２−グルコシドである、請求項４に記載の組成物。
【請求項７】
アスコルビン酸２−グルコシドが、組成物の総質量を基準として約０．３質量％から約０．６質量％の間の量で存在する、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
組成物の総質量を基準として、約０．９質量％のマンニトールおよび約０．６質量％のアスコルビン酸２−グルコシドをさらに含む、請求項１から４に記載の組成物。
【請求項９】
架橋ＨＡマトリックスを含むヒアルロン酸（ＨＡ）ゲル、
マンニトールおよびビタミンＣ誘導体の少なくとも１つ
を含む、皮膚の表在性陥凹の外観を低減させるため、または、皮膚の質を改善するための注射可能な組成物であって、
組成物のＨＡ濃度が、約１７．０ｍｇ／ｇ未満、例えば約１０．０ｍｇ／ｇ〜約１４．０ｍｇ／ｇ、好ましくは約１２．０ｍｇ／ｇであり、
組成物が、皮膚に導入されてから少なくとも約３ヶ月間、皮膚の表在性陥凹が低減された外観または改善された皮膚の質を維持する、注射可能な組成物。
【請求項１０】
架橋ＨＡマトリックスが、ＨＡ材料の総質量を基準として５０質量％を超える、少なくとも７０質量％の、または少なくとも９０質量％の約０．２０ＭＤａから約０．９９ＭＤａの間の質量平均分子量、好ましくは約４００，０００Ｄａから約８００，０００Ｄａの間の質量平均分子量を有する低分子量ＨＡ材料を用いて作られる、請求項９に記載の注射可能な組成物。
【請求項１１】
架橋ＨＡマトリックスが、１，４−ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ）、１，２−ビス（２，３−エポキシプロポキシ）エチレン、および１−（２，３−エポキシプロピル）−２，３−エポキシシクロヘキサンからなる群から選択される架橋剤で架橋されている、請求項９から１１に記載の注射可能な組成物。
【請求項１２】
皮膚に導入されてから少なくとも約６ヶ月間、少なくとも約９ヶ月間、または少なくとも約１２ヶ月間、皮膚の表在性陥凹が低減された外観または改善された皮膚の質を維持する、請求項９から１１に記載の組成物。
【請求項１３】
リドカインを、好ましくは組成物の約０．１質量％から約５質量％の間、例えば０．３質量％の量でさらに含む、請求項９から１２に記載の組成物。
【請求項１４】
マンニトールが、組成物の総質量を基準として約０．３質量％から約０．９質量％の間の量で存在する、請求項９から１３に記載の組成物。
【請求項１５】
ビタミンＣ誘導体がアスコルビン酸２−グルコシドである、請求項９から１４に記載の組成物。
【請求項１６】
アスコルビン酸２−グルコシドが、組成物の総質量を基準として約０．３質量％から約０．６質量％の間の量で存在する、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
マンニトールおよびビタミンＣ誘導体の少なくとも１つが、組成物の総質量を基準として、約０．９質量％で存在するマンニトールおよび約０．６質量％で存在するビタミンＣ誘導体の両方を含む、請求項９から１３に記載の組成物。
【請求項１８】
ビタミンＣ誘導体がアスコルビン酸２−グルコシドである、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
皮膚の質感、水和度、および弾力の少なくとも１つを改善する方法における使用のための組成物であって、方法が、
架橋ＨＡマトリックスの総質量を基準として５０質量％を超える、少なくとも７０質量％の、または少なくとも約９０質量％の、約０．２０ＭＤａから約０．９９ＭＤａの間、好ましくは約４００，０００Ｄａから約８００，０００Ｄａの間の質量平均分子量を有する低分子量ＨＡ材料を用いて作られた架橋ＨＡマトリックスを含有するヒアルロン酸（ＨＡ）ゲルを含む前記組成物の複数の離間した注射を、単回の処置セッションで皮膚領域に導入することにより皮膚の領域を処置することを含み、
架橋ＨＡマトリックスが、１，４−ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ）、１，２−ビス（２，３−エポキシプロポキシ）エチレン、および１−（２，３−エポキシプロピル）−２，３−エポキシシクロヘキサンからなる群から選択される架橋剤で架橋されており、
組成物のＨＡ濃度が、約１７．０ｍｇ／ｇ未満、例えば約１０．０ｍｇ／ｇ〜約１４．０ｍｇ／ｇ、好ましくは約１２．０ｍｇ／ｇであり、
注射が、約５ｍｍから約２０ｍｍの間、例えば５ｍｍまたは１０ｍｍの間隔で離間しており、
処置された皮膚が、処置によって、少なくとも約３ヶ月間、改善された質感、水和度、および弾力の少なくとも１つを維持する、組成物。
【請求項２０】
ＨＡ材料の総質量を基準として５０質量％を超える、少なくとも７０質量％の、または少なくとも約９０質量％の、約０．２０ＭＤａから約０．９９ＭＤａの間、好ましくは約４００，０００Ｄａから約８００，０００Ｄａの間の質量平均分子量を有する低分子量ＨＡ材料を用いて作られた架橋ＨＡマトリックスを含有するヒアルロン酸（ＨＡ）ゲルを含む組成物の複数の離間した注射を、単回の処置セッションで皮膚領域に導入することにより皮膚の領域を処置することを含む、皮膚の質感、水和度、および弾力の少なくとも１つを改善する非治療的方法であって、
架橋ＨＡマトリックスが、１，４−ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ）、１，２−ビス（２，３−エポキシプロポキシ）エチレン、および１−（２，３−エポキシプロピル）−２，３−エポキシシクロヘキサンからなる群から選択される架橋剤で架橋されており、
組成物のＨＡ濃度が、約１７．０ｍｇ／ｇ未満、例えば約１０．０ｍｇ／ｇ〜約１４．０ｍｇ／ｇ、好ましくは約１２．０ｍｇ／ｇであり、
注射が、約５ｍｍから約２０ｍｍの間、例えば５ｍｍまたは１０ｍｍの間隔で離間しており、
処置された皮膚が、処置によって、少なくとも約３ヶ月間、改善された質感、水和度、および弾力の少なくとも１つを維持する、非治療的方法。
【請求項２１】
処置された皮膚が、処置によって、少なくとも約６ヶ月間、少なくとも約９ヶ月間、または少なくとも約１２ヶ月間、改善された質感、水和度、および弾力の少なくとも１つを維持する、請求項１９に記載の使用のための組成物または請求項２０に記載の非治療的方法。
【請求項２２】
処置された皮膚が、処置によって、少なくとも約６ヶ月間、少なくとも約９ヶ月間、または少なくとも約１２ヶ月間、改善された質感、水和度、および弾力の少なくとも１つを維持する、請求項１９もしくは２１に記載の使用のための組成物または請求項２０もしくは２１に記載の非治療的方法。
【請求項２３】
注射が１注射当たり約５μＬ〜約１００μＬの量で導入される、請求項１９および２１から２２に記載の使用のための組成物または請求項２０から２２に記載の非治療的方法。
【請求項２４】
処置に要する時間が約４５分以下である、請求項１９および２１から２３に記載の使用のための組成物または請求項２０から２３に記載の非治療的方法。
【請求項２５】
注射が２８Ｇから３３Ｇのゲージを有する針を通して送達される、請求項１９および２１から２４に記載の使用のための組成物または請求項２０から２４に記載の非治療的方法。
【請求項２６】
組成物がマンニトールおよびビタミンＣ誘導体の少なくとも１つをさらに含む、または組成物が抗酸化剤もしくはビタミンを含まない、および／または組成物がリドカインを好ましくは組成物の約０．１質量％から約５質量％の間、例えば０．３質量％の量でさらに含む、請求項１９および２１から２５に記載の使用のための組成物または請求項２０から２５に記載の非治療的方法。
【請求項２７】
マンニトールが、組成物の総質量を基準として約０．３質量％から約０．９質量％の間の量で存在する、請求項１９および２１から２６に記載の使用のための組成物または請求項２０から２６に記載の非治療的方法。
【請求項２８】
ビタミンＣ誘導体がアスコルビン酸２−グルコシドである、請求項１９から２７に記載の使用のための組成物または請求項２０から２７に記載の非治療的方法。
【請求項２９】
アスコルビン酸２−グルコシドが、組成物の総質量を基準として約０．３質量％から約０．６質量％の間の量で存在する、請求項２８に記載の使用のための組成物または請求項２８に記載の非治療的方法。
【請求項３０】
皮膚の滑らかさ、水和度、および弾力の少なくとも１つを増加させる方法における使用のための組成物であって、方法が、
皮膚領域に、約０．５ｍｍから約５．０ｍｍの間、好ましくは約１．０ｍｍから約４．０ｍｍ、より好ましくは約１．５ｍｍから約３．０ｍｍの注入深さで、ＢＤＤＥ架橋ＨＡと未架橋ＨＡとを含有するヒアルロン酸（ＨＡ）ゲルを含む前記組成物の複数の離間した注射を単回の処置セッションで導入することを含み、
組成物のＨＡ濃度が、約１７．０ｍｇ／ｇ未満、例えば約１０．０ｍｇ／ｇから約１４．０ｍｇ／ｇ、好ましくは約１２．０ｍｇ／ｇであり、
注射が、１注射当たり約５μＬから約１００μＬの量で導入され、
注射が、２８Ｇから３３Ｇのゲージを有する針を通して送達され、
注射が、約５ｍｍから約２０ｍｍの間、例えば５ｍｍまたは１０ｍｍの間隔で離間しており、
皮膚領域が、処置によって、少なくとも約６ヶ月間、少なくとも約９ヶ月間、または少なくとも約１２ヶ月間、増加した滑らかさ、水和度、および／または弾力を維持する、組成物。
【請求項３１】
皮膚領域に、約０．５ｍｍから約５．０ｍｍの間、好ましくは約１．０ｍｍから約４．０ｍｍ、より好ましくは約１．５ｍｍから約３．０ｍｍの注入深さで、ＢＤＤＥ架橋ＨＡと未架橋ＨＡとを含有するヒアルロン酸（ＨＡ）ゲルを含む組成物の複数の離間した注射を単回の処置セッションで導入することを含む、皮膚の滑らかさ、水和度、および弾力の少なくとも１つを増加させる非治療的方法であって、
組成物のＨＡ濃度が、約１７．０ｍｇ／ｇ未満、例えば約１０．０ｍｇ／ｇから約１４．０ｍｇ／ｇ、好ましくは約１２．０ｍｇ／ｇであり、
注射が、１注射当たり約５μＬから約１００μＬの量で導入され、
注射が、２８Ｇから３３Ｇのゲージを有する針を通して送達され、
注射が、約５ｍｍから約２０ｍｍの間、例えば５ｍｍまたは１０ｍｍの間隔で離間しており、
皮膚領域が、処置によって、少なくとも約６ヶ月間、少なくとも約９ヶ月間、または少なくとも約１２ヶ月間、増加した滑らかさ、水和度、および／または弾力を維持する、非治療的方法。
【請求項３２】
組成物がマンニトールおよびビタミンＣ誘導体の少なくとも１つをさらに含む、または組成物が抗酸化剤もしくはビタミンを含まない、ならびに／または、組成物がリドカインを好ましくは組成物の約０．１質量％から約５質量％の間、例えば０．３質量％の量でさらに含む、請求項３０に記載の使用のための組成物または請求項３１に記載の非治療的方法。
【請求項３３】
約０．２０ＭＤａから約０．９９ＭＤａの間、好ましくは約４００，０００Ｄａから約８００，０００Ｄａの間の質量平均分子量を有する低分子量ＨＡ材料を用いて作られた架橋ＨＡマトリックスを含むヒアルロン酸（ＨＡ）ゲルを含む、皮膚の滑らかさ、水和度、および弾力の少なくとも１つを増加させるための組成物であって、
組成物のＨＡ濃度が、約１７．０ｍｇ／ｇ未満、例えば約１０．０ｍｇ／ｇから約１４．０ｍｇ／ｇ、好ましくは１２．０ｍｇ／ｇであり、
組成物が、処置によって、複数の離間した組成物の注射を含む単回の処置セッションで皮膚に導入されてから少なくとも約６ヶ月間、少なくとも約９ヶ月間、または少なくとも約１２ヶ月間、増加した滑らかさ、水和度、および／または弾力を維持し、注射が、１注射当たり約５μＬから約１００μＬの量で導入され、２８Ｇから３３Ｇ、好ましくは３２Ｇのゲージを有する針を通して送達され、約５ｍｍから約２０ｍｍの間、例えば５ｍｍまたは１０ｍｍの間隔で離間している、組成物。
【請求項３４】
組成物がマンニトールおよびビタミンＣ誘導体の少なくとも１つをさらに含む、または、組成物が抗酸化剤もしくはビタミンを含まない、ならびに／または、組成物がリドカインを好ましくは組成物の約０．１質量％から約５質量％の間、例えば０．３質量％の量でさらに含む、請求項３３に記載の組成物。
【請求項３５】
架橋ＨＡマトリックスが、ＨＡ材料の総質量を基準として５０質量％を超える、少なくとも７０質量％の、または少なくとも約９０質量％の前記低分子量ＨＡ材料を用いて作られる、請求項３３から３４に記載の組成物。
【請求項３６】
架橋ＨＡマトリックスが、１，４−ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ）、１，２−ビス（２，３−エポキシプロポキシ）エチレン、および１−（２，３−エポキシプロピル）−２，３−エポキシシクロヘキサンからなる群から選択される架橋剤で架橋されている、請求項３３から３５に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一般に、注射可能な組成物に関し、より詳細には、皮膚の小じわを処置するためのヒアルロン酸ベース組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
顔全体または他の主要な皮膚の表面領域の皮膚の質を改善するための現在の注射可能な処置の選択肢は、複数の処置セッション（典型的には、３〜４週間毎に３〜４回の処置）を必要とし、効果持続期間が比較的短い。
皮膚は表皮と真皮で構成されている。最も外側の表皮は、下層に基底膜を有する重層扁平上皮からなる。ここには血管は含まれておらず、真皮からの拡散により栄養が与えられる。表皮を構成する主な細胞型は角化細胞であり、メラニン形成細胞およびランゲルハンス細胞も存在する。皮膚のこの層は、体内に水分を保持し、有害な化学物質や病原体の侵入を防ぐ役割を担っている。
真皮は表皮の下に位置し、血管、神経、毛包、平滑筋、腺、およびリンパ組織などの数多くの構造を含んでいる。真皮（ｄｅｒｍｉｓまたはｃｏｒｉｕｍ）は、典型的には３〜５ｍｍの厚さであり、ヒト皮膚の主要構成要素である。これは、結合組織の網状構造、主に、支持力をもたらすコラーゲン原線維と柔軟性をもたらす弾性組織とで構成される。主な細胞型は、線維芽細胞、脂肪細胞（脂肪貯蔵庫）、および大食細胞である。ヒアルロン酸（ＨＡ）は、真皮組成物の一部であり、細胞外マトリックスの主成分である。
【０００３】
顔面加齢は、皮膚内の固有の変化、重力の影響、皮膚に作用する顔面筋（動線）、軟部組織の損失または移動、および骨の損失、および組織弾性の損失といういくつかの因子の結果として起こる。表皮が薄くなり始めると皮膚が老化し、真皮との接合部が平坦になる。コラーゲンは人が老化するにつれて減少し、皮膚膨圧を与えるコラーゲンの束が緩み、強度を失う。皮膚が弾力を失うと、伸びへの抵抗能が低下する。重力、筋肉の引っ張り、および組織の変化と相まって皮膚にしわができ始める。水分損失および細胞間の結合の破壊もまた、皮膚のバリア機能を低下させ、これは、皮膚の毛穴の大きさを増大させ得る。
眼がしばしば加齢の徴候を示す最初の顔面特徴であることはよく知られている。眼の周りは皮膚がより薄いため、眼の周りでは顔面の残りの部分よりも皮膚変化が早く起こる。ここの皮膚は含まれる腺が少なく、目を瞬く、細める、こする、向けるという動きに絶え間なくさらされている。頬が垂れ始めると中顔面が老化し鼻唇溝が生じる。鼻唇溝は鼻側部から口角まで走る線である。下顔面領域では顔面が老化するにつれて顔面組織が下降する。この結果いわゆる「笑いじわ」が生じる。これらおよび他のひだおよびしわは、一般的に、皮膚に失われたボリュームを与えることによってひだおよびしわの外観を低減する美容用顔面充填材の皮下（ｓｕｂｄｅｒｍａｌ）および経皮（ｄｅｒｍａｌ）注射によって処置される。
【０００４】
ヒアルロン酸（ＨＡ）は、ヒアルロナン（ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ）としても知られており、現在、最も一般的に用いられている皮膚充填材成分の１つである。ヒアルロン酸は天然に存在する水溶性多糖、具体的にはグリコサミノグリカンであり、これは細胞外マトリックスの主要成分であり、動物組織に広く分布している。ヒアルロン酸がすべての種および組織において同一構造であることにより、この多糖は健康および医学におけるバイオ材料として用いるのに理想的な物質となっている。
ＨＡは優れた生体適合性を有し、コラーゲンとは異なって移植前にいかなる皮膚試験も必要としない。さらに、ＨＡは大量の水に結合する能力を有し、そのため軟部組織の優れた増容積剤となる。
インビボにおけるその寿命を高めるために、皮膚充填材のＨＡは一般に架橋されている。化学的に架橋されたＨＡは、非架橋のＨＡを適切な反応条件下で架橋剤と反応させることによって形成される。
【０００５】
高粘度のＨＡベース皮膚充填材、例えば、高度に架橋され、および／または、高分子量ＨＡから構成され、および／または、高ＨＡ濃度を有するものは、体内でより長く存続する傾向があることが一般に認められている。逆に、低粘度のＨＡベース皮膚充填材、例えば、より軽度に架橋され、および／または、低分子量ＨＡから構成され、および／または、低ＨＡ濃度を有するものは、体内での存続期間がより短い場合がある。当然ながら、針による高粘性材料の注入は相対的により困難であり、一般に、相対的に低粘性の材料の注入よりもゲージの低い針（例えば、２７Ｇまたは３０Ｇに比べて２１Ｇまたは２３Ｇ）が必要である。高ゲージ針（すなわち、細い針）による注入が簡単であり、かつ、体内での存続期間が長いＨＡベース組成物を開発することは困難であることが立証されている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、注射可能な組成物に関し、より詳細には、皮膚への皮内（ｉｎｔｒａｄｅｒｍａｌ）注射のための注射可能な組成物に関する。組成物および方法は、表在性皮膚陥凹（ｓｕｐｅｒｆｉｃｉａｌ  ｓｋｉｎ  ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ）の充填ならびに／または皮膚の質および外観の改善により、改善された皮膚の外観および質を提供する。一態様では、組成物および方法は、改善された皮膚の質感、増加した皮膚水和度、および増加した弾力の少なくとも１つを提供する。
一態様では、本組成物は、ヒアルロン酸（ＨＡ）およびＨＡの医薬として許容される塩、例えばヒアルロン酸ナトリウム（ＮａＨＡ）に基づく。本発明の持続性が長く注射性の高い組成物の多くは、比較的低分子量のＨＡを用いて作られた架橋ＨＡマトリックスを含む。いくつかの実施形態では、組成物は比較的低濃度のＨＡを有する。有利には、本明細書で提供される組成物の多くは、より長い作用持続期間を有する。例えば、従来の皮内注射処置法で一般的であるように３〜４週間毎に複数の処置を繰り返し必要とするのではなく、本明細書で提供される本組成物および本方法の多くは、３ヶ月間、４ヶ月間、６ヶ月間から１年間、またはそれ以上の作用持続期間を有する。
【０００７】
本発明の広範な態様において、一般に、低分子量ＨＡ材料を含有するか、本質的に低分子量ＨＡ材料からなるＨＡゲルを含む組成物が提供される。ＨＡ成分は、５０質量％を超える、例えば少なくとも７０質量％の、例えば約９０質量％の低分子量ＨＡを含む。低分子量ＨＡ材料は、約０．２０ＭＤａから約０．９９ＭＤａ以下、例えば約０．４ＭＤａから約０．８ＭＤａの質量平均分子量を有する。
いくつかの実施形態では、ＨＡゲルは、高分子量ＨＡ、すなわち、少なくとも約１．０ＭＤａから約４．０ＭＤａの分子量を有するＨＡ材料をさらに含有し得る。一般に、高分子量ＨＡ材料を含む本発明の実施形態では、高分子量ＨＡ材料の質量平均分子量は、低分子量ＨＡ材料の質量平均分子量の少なくとも２倍である。
【０００８】
ＨＡゲルのＨＡは架橋されていてもよい。例えば、ＨＡは、適切な架橋剤によって化学的に架橋されていてもよい。いくつかの実施形態では、架橋剤は、１，４−ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ）、または１，４−ビス（２，３−エポキシプロポキシ）ブタン、または１，４−ビスグリシジルオキシブタン（これらはすべて、ＢＤＤＥとして一般的に知られている）、１，２−ビス（２，３−エポキシプロポキシ）エチレン、および１−（２，３−エポキシプロピル）−２，３−エポキシシクロヘキサンからなる群より選択される。
いくつかの実施形態では、組成物は、約１０．０ｍｇ／ｇから最大約１７．０ｍｇ／ｇのＨＡ濃度を有する。いくつかの実施形態では、ＨＡ濃度は、約１７．０ｍｇ／ｇ未満、例えば約１５．０ｍｇ／ｇ未満である。いくつかの実施形態では、ＨＡ濃度は、約１０．０ｍｇ／ｇから約１４．０ｍｇ／ｇの間である。いくつかの実施形態では、ＨＡ濃度は、約１０．０ｍｇ／ｇ、約１１．０ｍｇ／ｇ、約１２．０ｍｇ／ｇ、約１３．０ｍｇ／ｇ、または約１４．０ｍｇ／ｇである。
【０００９】
本発明の別の態様では、本組成物を用いて皮膚を処置する方法が提供される。例えば、皮膚の１つもしくは複数の質を改善する、または皮膚の外観もしくは質感を改善する方法が提供される。
一態様では、皮膚の乾燥、質感もしくは荒れ、および／または弾力を処置する方法が提供される。該方法は、一般に、架橋ＨＡを含有するヒアルロン酸（ＨＡ）ゲルを含む組成物の複数の離間した注射を皮膚の領域に導入することによって、該領域を処置することを含み、処置された皮膚は、処置によって、例えば、少なくとも約３ヶ月間から約１年間、またはそれ以上の長期の持続期間にわたり、改善された水和度、より滑らかな質感、または増加した弾力を維持する。特に有利な実施形態では、導入するステップは、単回の処置セッションのみで実施され、それによって、効果持続期間を維持するために処置を繰り返す必要がなくなる。
いくつかの実施形態では、導入するステップは、約２ｍｍから約３０ｍｍの間の間隔で離間した注射で組成物を導入することを含む。例えば、導入するステップは、約５ｍｍから約２０ｍｍの間、または約１０ｍｍから約１５ｍｍの間隔で離間した注射で組成物を導入することを含む。いくつかの実施形態では、組成物は、約５００μｍから約２０００μｍの間の注入深さ、例えば、約１０００μｍの深さに導入される。好ましい実施形態では、組成物は、約０．５ｍｍから約５．０ｍｍの間、好ましくは約１．０ｍｍから約４．０ｍｍ、より好ましくは約１．５ｍｍから約３．０ｍｍの注入深さで導入される。一般に、より深い注射は改善された水和度の結果をもたらす。
別の態様では、本発明は、架橋ＨＡを含有するヒアルロン酸（ＨＡ）ゲルを含む組成物の複数の離間した注射を皮膚の領域に導入することによって、該領域を処置することを含む、皮膚の荒れを処置する方法を提供し、処置された皮膚は、処置によって、少なくとも約３ヶ月間、少なくとも約４ヶ月間、少なくとも約６ヶ月間、または少なくとも約１２ヶ月間、より滑らかな質感を維持する。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】コルネオメトリーに用いたバッチＣ１の外植片を、４×１０μＬの注射可能な製品で（四角注射）、各注射点を０．５ｃｍずつ離して処置した。コルネオメトリーに用いたバッチＣ２の外植片を、４×１０μＬの注射可能な製品で（四角注射）、各注射点を１ｃｍずつ離して処置した。
【図２】各バッチについてのコルネオメトリーの測定値を示す図である。
【図３】各バッチについてのコルネオメトリーの測定値を示す図である。
【図４】３人のドナーについてのコルネオメトリー測定値の結果を３つの値の平均として表した図である。
【図５】３人のドナーについてのコルネオメトリー測定値の結果を３つの値の平均として表した図である。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
数値の文脈において「約」という用語は、当業者によって容易に理解されるものであり、好ましくは、特定値が±１０％まで修正され得ることを意味する。範囲の端点に関して、修飾語「約」は、好ましくは、下端点を１０％まで減少させ、上端点を１０％まで増加させ得ることを意味する。本出願で開示される各数値または範囲は絶対的であり得る、すなわち、修飾語「約」が削除され得ることも企図される。
ＨＡの「分子量」を表す本明細書中のすべての数字は、質量平均分子量（Ｍｗ）をダルトンで示すものとして理解される。
ＨＡの分子量は、固有粘度測定値から、以下のＭａｒｋ  Ｈｏｕｗｉｎｋの関係式：
固有粘度（ｍ3／ｋｇ）＝９．７８×１０-5×Ｍｗ0.690
を用いて算出される。
【００１２】
固有粘度は、欧州薬局方（ＨＡモノグラフＮ°１４７２、０１／２００９）に規定の手順に従って測定される。
本明細書で使用される高分子量ＨＡは、少なくとも約１００万（１．０  ｍｉｌｌｉｏｎ）ダルトン（Ｍｗ≧１０6Ｄａまたは１ＭＤａ）から約５．０ＭＤａの分子量を有するＨＡ材料を表す。例えば、本組成物中の高分子量ＨＡは、約１．５ＭＤａから約３．０ＭＤａの範囲の分子量を有してもよく、または高分子量ＨＡは約２．０ＭＤａの質量平均分子量を有してもよい。別の例では、高分子量ＨＡは約３．０ＭＤａの分子量を有してもよい。別の例では、高分子量ＨＡは、上に示したＭａｒｋ  Ｈｏｕｗｉｎｋの関係式に従って算出した場合の固有粘度１．３５ｍ3／ｋｇに相当する約１ＭＤａ、１．５ＭＤａ（１．３５ｍ3／ｋｇ）、２ＭＤａ（２．１８ｍ3／ｋｇ）、３ＭＤａ（２．８８ｍ3／ｋｇ）、５ＭＤａ（４．１０ｍ3／ｋｇ）、０．２ＭＤａ（０．４４ｍ3／ｋｇ）、０．４ＭＤａ（０．７２ｍ3／ｋｇ）、０．８ＭＤａ（１．１ｍ3／ｋｇ）、０．９９ＭＤａ（１．３４ｍ3／ｋｇ）の分子量を有し得る。
【００１３】
本明細書で使用される低分子量ＨＡは、約１．０ＭＤａ未満の分子量を有するＨＡ材料を表す。低分子量ＨＡは、約２００，０００Ｄａ（０．２ＭＤａ）から１．０ＭＤａ未満、例えば約４００，０００Ｄａから約８００，０００Ｄａ、例えば約３８６，０００Ｄａ（０．３８６ＭＤａ）から約７４０，０００Ｄａ（０．７４ＭＤａ）の分子量を有することができる。いくつかの実施形態では、架橋ＨＡマトリックスを製造するために使用される低分子量ＨＡは、０．９９ＭＤａ以下である。
好ましくは、低分子量ＨＡと高分子量ＨＡとの混合物は二峰性分子量分布を有する。混合物はまた、多峰性（ｍｕｌｔｉ−ｍｏｄａｌ）分子量分布を有していてもよい。
【００１４】
本発明の一態様において、組成物は、高分子量成分および低分子量成分を有するＨＡを含み、高分子量成分は、低分子量成分の質量平均分子量の少なくとも２倍の質量平均分子量を有する。
例えば、本発明のこの態様に係る組成物は、約５００，０００Ｄａの質量平均分子量を有する低分子量成分と、約１．０ＭＤａまたは少なくとも約１．０ＭＤａの質量平均分子量を有する高分子量成分とを含むことができる。
別の例では、本発明に係る組成物は、約８００，０００Ｄａの質量平均分子量を有する低分子量成分と、約１．６ＭＤａまたは少なくとも約１．６ＭＤａの質量平均分子量を有する高分子量成分とを含むことができる。
架橋度は、ＨＡ二糖単位に対する架橋剤の最終質量比によって測定される。
【００１５】
本明細書で使用される未架橋ＨＡは、相互に架橋されていない個々のＨＡポリマー分子を指す。非架橋ＨＡは一般に水溶性のままである。
本明細書において、皮膚を処置するための組成物、例えば、皮膚の外観または質を改善するために、例えば、水和度、質感、および／または弾力を改善するために皮内に導入することができる注射可能な組成物が提供される。この組成物はまた、皮膚の小じわの処置および表在性皮膚陥凹（ｓｕｐｅｒｆｉｃｉａｌ  ｃｕｔａｎｅｏｕｓ  ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ）の低減にも効果的であり得る。これらの組成物の製造方法、ならびに、これらの組成物を使用する処置方法も提供される。組成物は、ヒアルロン酸（ＨＡ）およびＨＡの医薬として許容される塩、例えばヒアルロン酸ナトリウム（ＮａＨＡ）に基づく。
本明細書で使用する場合、ヒアルロン酸（ＨＡ）は、その任意のヒアルロン酸塩を指すことができ、これらに限定されるものではないが、ヒアルロン酸ナトリウム（ＮａＨＡ）、ヒアルロン酸カリウム、ヒアルロン酸マグネシウム、ヒアルロン酸カルシウム、およびそれらの組み合わせが挙げられる。ＨＡおよびその医薬として許容される塩のいずれも本発明に使用することができる。
【００１６】
一般に、本組成物のいくつかにおけるＨＡの濃度は、約１０．０ｍｇ／ｇから最大約１７．０ｍｇ／ｇである。いくつかの実施形態では、ＨＡ濃度は約１７．０ｍｇ／ｇ未満、例えば約１５．０ｍｇ／ｇ未満である。いくつかの実施形態では、ＨＡ濃度は、約１０．０ｍｇ／ｇから約１４．０ｍｇ／ｇである。いくつかの実施形態では、ＨＡ濃度は、約１０．０ｍｇ／ｇ、約１１．０ｍｇ／ｇ、約１２．０ｍｇ／ｇ、約１３．０ｍｇ／ｇ、または約１４．０ｍｇ／ｇである。
本発明の組成物のいくつかは、追加の薬剤、例えば組成物の注射時に経験される痛みを緩和するのに有効な量の麻酔剤を含む。麻酔剤は、アムブカイン、アモラノン、アミロカイン、ベノキシネート、ベンゾカイン、ベトキシカイン、ビフェナミン、ブピバカイン、ブタカイン、ブタンベン、ブタニリカイン、ブテタミン、ブトキシカイン、カルチカイン、クロロプロカイン、コカエチレン、コカイン、シクロメチカイン、ジブカイン、ジメチソキン、ジメトカイン、ジペロドン、ジサイクロミン、エクゴニジン、エクゴニン、塩化エチル、エチドカイン、ベータ−ユーカイン、ユープロシン、フェナルコミン、フォルモカイン（ｆｏｒｍｏｃａｉｎｅ）、ヘキシルカイン、ヒドロキシテトラカイン、ｐ−アミノ安息香酸イソブチル、ロイシノカインメシレート、レボキサドロール、リドカイン、メピバカイン、メプリルカイン、メタブトキシカイン、塩化メチル、ミルテカイン、ナエパイン、オクタカイン（ｏｃｔｏｃａｉｎｅ）、オルソカイン（ｏｒｔｈｏｃａｉｎｅ）、オキセサゼイン、パルエトキシカイン（ｐａｒｅｔｈｏｘｙｃａｉｎｅ）、フェナカイン、フェノール、ピペロカイン、ピリドカイン、ポリドカノール、プラモキシン、プリロカイン、プロカイン、プロパノカイン、プロパラカイン、プロピポカイン、プロポキシカイン、シュードコカイン（ｐｓｅｕｄｏｃｏｃａｉｎｅ）、ピロカイン、ロピバカイン、サリチルアルコール、テトラカイン、トリカイン、トリメカイン、ゾラミン、およびそれらの塩の群から選択することができる。一実施形態では、少なくとも１つの麻酔剤はリドカイン、例えばリドカインＨＣｌの形態にあるものである。本明細書に記載の組成物は、組成物の約０．１質量％から約５質量％、例えば、組成物の約０．２質量％から約１．０質量％のリドカイン濃度を有し得る。一実施形態では、組成物は組成物の約０．３質量％（ｗ／ｗ％）のリドカイン濃度を有する。
【００１７】
いくつかの実施形態では、組成物は、有益な添加剤、例えば抗酸化剤をさらに含む。いくつかの実施形態では、組成物は、例えば、マンニトールを含む。マンニトールは、約０．１質量％から約２．０質量％、または約０．３質量％から約０．９質量％の量で存在し得る。いくつかの実施形態では、マンニトールは、約１．０質量％未満、約１．０質量％以下、または約１．０質量％の量で存在する。いくつかの実施形態では、マンニトールは約０．９質量％の量で存在する。他の実施形態では、マンニトールは、約０．１質量％、または約０．２質量％、または約０．３質量％、または約０．４質量％、または約０．５質量％、または約０．６質量％、または約０．７質量％、または約０．８質量％、または約０．９質量％、または約１．０質量％の量で存在する。他の実施形態では、マンニトールは、約１．０質量％を超える量で存在する。いくつかの実施形態では、マンニトールは、約１．０質量％から約５．０質量％の量で存在する。
【００１８】
いくつかの実施形態では、組成物は、ビタミン、例えばビタミンＣをさらに含む。より好ましい実施形態では、ビタミンはビタミンＣの誘導体または安定化形態、例えばアスコルビン酸２−グルコシドである。ビタミンは、約０．１質量％から約２．０質量％、または約０．２質量％から約１．０質量％、または約０．３質量％から約０．６質量％の量で存在し得る。いくつかの実施形態では、ビタミンＣは、約０．６質量％の量で存在する。他の実施形態では、ビタミンＣ誘導体は、約０．１質量％、または約０．２質量％、または約０．３質量％、または約０．４質量％、または約０．５質量％、または約０．６質量％、または約０．７質量％、または約０．８質量％、または約０．９質量％、または約１．０質量％の量で存在する。他の実施形態では、ビタミンＣ誘導体は１．０％を超える量で存在する。いくつかの実施形態では、ビタミンＣ誘導体は約１．０質量％から約５．０質量％の量で存在する。
【００１９】
いくつかの実施形態では、組成物は、マンニトールおよびアスコルビン酸２−グルコシドの組み合わせをさらに含む。これらの実施形態のいくつかでは、マンニトールは１．０質量％以下、例えば０．９質量％の量で存在し、アスコルビン酸２−グルコシドは約０．６質量％の量で存在する。
【００２０】
いくつかの実施形態では、組成物は抗酸化剤またはビタミンを含まない。例えば、いくつかの実施形態では、組成物は、架橋剤で架橋されたヒアルロン酸および水を含むか、本質的にそれらからなる。これらの組成物は、リドカインなどの麻酔剤を含んでいても含んでいなくてもよい。
【００２１】
本製品および本組成物は、好ましくは滅菌形態で提供される。組成物は、従来の方法、例えばオートクレーブを用いて滅菌することができる。例えば、組成物は、組成物を少なくとも約１２０℃から約１３０℃の温度、および／または少なくとも１平方インチ当たり約１２ポンド（ＰＳＩ：ｐｏｕｎｄ  ｐｅｒ  ｓｑｕａｒｅ  ｉｎｃｈ）から約２０ＰＳＩの圧力に、少なくとも約１分から約１５分暴露することにより滅菌することができる。
組成物の製造方法は、乾燥ＨＡ繊維または粉末の形態の原料ＨＡ材料を提供するステップを含む。原料ＨＡ材料は、ＨＡ、その塩、および／またはそれらの混合物であってよい。好ましい実施形態では、ＨＡ材料は、ＮａＨＡの繊維または粉末、例えば、細菌由来のＮａＨＡ繊維を含む。本明細書のいくつかの態様において、ＨＡ材料は動物由来であってもよい。ＨＡ材料は、ＨＡと、少なくとも１つの他の多糖類、例えばグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）とを含む原材料の組み合わせであってもよい。
本発明の広範な態様において、組成物のＨＡ材料は、約５％から約９５％の低分子量ＨＡと、高分子量ＨＡを含むＨＡ材料の残部とを用いて作られた架橋ＨＡマトリックスを含むことができる。
【００２２】
本発明のいくつかの実施形態では、本組成物を製造するために使用されるＨＡ材料は、ほぼ全体が、低分子量ＨＡを含むか、低分子量ＨＡからなる。いくつかの実施形態では、本組成物を製造するために使用されるＨＡ材料のほぼ１００％が上に定義したような低分子量ＨＡであり得る。他の実施形態では、組成物を製造するために使用されるＨＡ材料は、上に定義したような比較的高分子量のＨＡと比較的低分子量のＨＡとの組み合わせを含む。ある実施形態では、組成物中のＨＡ材料の少なくとも約５０質量％、例えば少なくとも約７０質量％、例えば少なくとも約９０質量％またはそれ以上が、上に定義したような低分子量ＨＡであり、ＨＡの残部は高分子量ＨＡである。一実施形態では、組成物は、９０：１０の低分子量ＨＡ対高分子量ＨＡ比を用いて製造される。すなわち、これらの実施形態の組成物は、ＨＡの約９０質量％が低分子量ＨＡである高分子量ＨＡと低分子量ＨＡとの組み合わせを用いて製造される。
【００２３】
一実施形態では、純粋な乾燥ＮａＨＡ繊維をアルカリ性溶液中で水和させて未架橋ＮａＨＡゲルを生成する。このステップでは、ＮａＨＡを水和するために、任意の適切なアルカリ性溶液、例えば、これらに限定されないが、水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ）、水酸化カリウム（ＫＯＨ）、重炭酸ナトリウム（ＮａＨＣＯ3）、水酸化リチウム（ＬｉＯＨ）などを含有する水溶液を用いることができる。別の実施形態では、適切なアルカリ性溶液は、ＮａＯＨを含有する水溶液である。得られるアルカリ性ゲルは７．５を超えるｐＨを有することとなる。得られるアルカリ性ゲルは、９を超えるｐＨ、または１０を超えるｐＨ、または１１を超えるｐＨ、または１２を超えるｐＨ、または１３を超えるｐＨを有し得る。
【００２４】
製造プロセスにおける次のステップは、水和したアルカリ性ＮａＨＡゲルを適切な架橋剤で架橋するステップを含む。架橋剤は、多糖類およびそれらの誘導体をヒドロキシル基を介して架橋するのに適していることが知られている任意の薬剤であってよい。適切な架橋剤としては、これらに限定されるものではないが、１，４−ブタンジオールジグリシジルエーテル（または１，４−ビス（２，３−エポキシプロポキシ）ブタンまたは１，４−ビスグリシジルオキシブタン、これらはすべてＢＤＤＥとして一般的に知られている）、１、２−ビス（２，３−エポキシプロポキシ）エチレン、および１−（２，３−エポキシプロピル）−２，３−エポキシシクロヘキサンが挙げられる。複数の架橋剤または異なる架橋剤の使用は、本開示の範囲から除外されない。一実施形態では、本明細書に記載のＨＡゲルはＢＤＤＥを用いて架橋される。
架橋ステップは、当業者に知られている任意の手法を使用して実施することができる。当業者であれば、ＨＡの性質に応じて架橋の条件を最適化する方法、および最適化された程度まで架橋を行う方法を理解している。
【００２５】
別の実施形態では、ＨＡの架橋は、架橋剤、例えばＢＤＤＥを含有するアルカリ性溶液中で、高分子量繊維と低分子量繊維との組み合わせを水和することによって、ＨＡ繊維の水和中に達成される。
本組成物のＨＡ成分における架橋度は、少なくとも約１％、最大約２０％ＢＤＤＥ／ＨＡ、質量／質量（ｗ／ｗ）であり、例えば約４質量％から約１２質量％、例えば約１０質量％、例えば約８質量％、例えば約６質量％、例えば約５質量％、例えば約４質量％である。
水和した架橋ＨＡゲルは、所望のＨＡ濃度とするために膨潤させてもよい。このステップは、例えば、ＨＣｌなどの酸を含有する水溶液を添加することによって、架橋された水和ＨＡゲルを中和することにより達成することができる。次いで、ゲルをリン酸緩衝食塩（ＰＢＳ）液中で膨潤させる。
【００２６】
ゲルは、リン酸緩衝液に対する透析、またはアルコール沈殿などの従来の手法により精製して、架橋した材料を回収し、材料のｐＨを安定化させ、任意の未反応の架橋剤を除去してもよい。組成物は均質になるように混合される。好ましくは、均質化ステップは、制御されたせん断力でゲルを混合、撹拌、または叩解して実質的に均質な混合物を得ることを含む。いくつかの実施形態では、混合中または混合後にリン酸緩衝液を添加して、最終組成物中のＨＡを所望の濃度とする。
【００２７】
いくつかの実施形態では、（例えば、リドカインＨＣｌの形態の）リドカインまたは別の適切な麻酔剤が組成物に添加される。例えば、精製された実質的に中性ｐＨのゲルのｐＨは、ゲルがわずかにアルカリ性になるように調整して、ゲルのｐＨが約７．２を超える、例えば約７．５〜約８．０となるようにする。あるいは、ゲルをアルカリ性になるように調整して、ゲルのｐＨが約９を超える、例えば約１０．０〜約１１．０となるようにする。このステップは、任意の適切な手段、例えば、希ＮａＯＨ、ＫＯＨ、ＮａＨＣＯ3もしくはＬｉＯＨ、または当業者に知られている任意の他のアルカリ性分子、溶液および／もしくは緩衝化組成物を適切な量でゲルに添加することによって達成することができる。例えば、いくつかの実施形態では、リドカインＨＣｌは粉末形態で提供され、注射用水（ＷＦＩ）を用いて可溶化される。次いでリドカインを（わずかに）アルカリ性のゲルに添加する。次いで、所望により、非架橋ＨＡをリドカイン含有ゲルに添加してもよい。例えば、一実施形態では、望ましいＨＡ濃度は約１２．０ｍｇ／ｇである。リドカインを含む組成物は、組成物の約０．１質量％から約５質量％、例えば、組成物の総質量を基準として約０．３質量（またはｗ／ｗ）％のリドカイン濃度を有し得る。未架橋ＨＡを含む組成物は、組成物の１０質量％未満または５質量％未満、例えば、好ましくは約０．５質量％から約１．５質量％、例えば、組成物の総質量を基準として約０．９〜１．０％の未架橋ＨＡ濃度を有し得る。未架橋ＨＡは、好ましくは高い分子量を有する。
【００２８】
組成物は、送達装置、例えば注射器に導入される。本明細書において有用な注射器としては、粘性の皮膚充填材組成物を送達することができる当該技術分野で知られている任意の注射器が挙げられる。注射器は、約０．４ｍＬから約３ｍＬ、約０．５ｍＬから約１．５ｍＬ、または約０．８ｍＬから約１．０ｍＬの内部容積を有し得る。
他の実施形態では、組成物は、マルチプルマイクロデポー（ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｉｃｒｏｄｅｐｏｔ）注射を用いて皮膚の比較的浅く表層の表面へ組成物を送達するのに適した注入装置に導入される。
本組成物を送達するために使用される針のゲージとしては、約１８Ｇから約４０Ｇのゲージが挙げられる。いくつかの実施形態では、組成物を送達するための針は、約２５Ｇから約３３Ｇ、例えば、約３１Ｇから約３３Ｇまたは約３２Ｇから約３３Ｇである。いくつかの実施形態では、組成物は、２８Ｇ、２９Ｇ、３０Ｇ、３２Ｇ、または３３Ｇのゲージを有する針を使用して送達される。
【００２９】
本発明の別の態様では、本組成物を用いて皮膚を処置する方法が提供される。例えば、皮膚の１つ以上の品質を改善する、または皮膚の外観もしくは質感を改善する方法が提供される。
一態様では、皮膚の乾燥、質感もしくは荒れ、および／または弾力を処置する方法が提供される。該方法は、一般に、架橋ＨＡを含有するヒアルロン酸（ＨＡ）ゲルを含む組成物の複数の離間した注射を皮膚の領域に導入することによって該領域を処置することを含み、処置された皮膚が、処置によって、例えば、少なくとも約３ヶ月間から約１年、またはそれ以上の長期の持続期間にわたり、改善された水和度、より平滑な質感、または増加した弾力を維持する。
特に有利な実施形態では、導入するステップは、単回の処置セッションのみで実施され、それにより、効果持続期間を維持するために処置を繰り返す必要性がなくなる。
本発明の一態様では、皮膚領域への組成物の複数の注射を含む処置セッション中に組成物を皮膚に導入することを含む、皮膚を処置する方法が提供される。
一実施形態では、処置セッションは、患者が施術者を１回訪問することを含む。処置セッション中に、皮膚、例えば特定の皮膚領域に、複数の注射を投与することができる。
【００３０】
単回の処置セッションの複数の注射は、例えば、２〜約５００注射、約５０〜約２００注射を含むことができる。いくつかの実施形態では、処置セッションは、例えば、皮膚領域への少なくとも２注射、少なくとも１０注射、少なくとも２０注射、少なくとも４０注射、少なくとも６０注射、少なくとも８０注射、少なくとも１００注射、少なくとも１４０注射、少なくとも１８０注射、少なくとも２００注射、少なくとも３００注射、少なくとも４００注射、少なくとも５００注射、またはそれ以上を含む。
いくつかの実施形態では、処置セッションに要する時間は、１処置領域当たり、約４５分以下、約３０分以下、約１５分以下、または約１０分以下である。処置領域は、本組成物および本方法で処置される皮膚領域と定義される。処置領域は、顔、首、またはデコルテの少なくとも１つの皮膚領域を含むか、それらからなるものであってよい。処置領域はまた、顔面、首、またはデコルテ以外の皮膚の領域、例えば手の甲、膝、肘、前腕、ふくらはぎ、大腿部、背中の皮膚領域、または本組成物および本方法を使用して処置することができ、それによって恩恵を受け得るまたは改善され得る他の任意の皮膚の領域を含むか、それらからなるものであってもよい。
【００３１】
いくつかの実施形態では、導入するステップは、組成物を約２ｍｍから約３０ｍｍの間隔で離間した注射で導入することを含む。例えば、導入するステップは、組成物を約５ｍｍから約２０ｍｍの間隔で離間した注射で導入するステップを含む。いくつかの実施形態では、導入するステップは、組成物を約１０ｍｍから約１５ｍｍの間隔で離間した注射で導入することを含む。
【００３２】
いくつかの実施形態では、注射は皮膚の非常に浅い深さに提供される。例えば、いくつかの実施形態では、組成物は、約２０００μｍ以下の深さに導入される。例えば、注射は、約５００μｍから約２０００μｍ、約８００μｍから約１６００μｍ、または約１０００μｍから約１２００μｍの深さに提供され得る。好ましい実施形態では、組成物は、約０．５ｍｍから約５．０ｍｍ、好ましくは約１．０ｍｍから約４．０ｍｍ、より好ましくは約１．５ｍｍから約３．０ｍｍの注入深さに導入される。一実施形態では、注射は、１注射当たり約１μＬから約２００μＬ、例えば約５μＬから約１００μＬ、１注射当たり例えば約２０μＬから約８０μＬ、例えば約４０μＬから約６０μＬの量で導入される。いくつかの実施形態では、注射は、１注射当たり約５μＬから約５００μＬ、１注射当たり約１０μＬから約４００μＬ、約５０μＬから約２００μＬ、または約１００μＬの量で導入される。
【００３３】
いくつかの実施形態では、注射は、少なくとも２７Ｇ、例えば２８Ｇ、３０Ｇ、または３２Ｇのゲージを有する針を通して送達される。
好都合には、処置方法は、比較的短い時間持続する単回の処置セッションを含むか、該単回の処置セッションからなるものとすることができる。いくつかの実施形態では、処置される皮膚領域をカバーする処置セッションは、皮膚領域への複数の皮内注射を含み、処置セッションに要する時間は約４５分以下である。いくつかの実施形態では、処置セッションに要する時間は約３０分以下である。さらに他の実施形態では、処置セッションに要する時間は、約２０分以下、または約１５分以下、または約１０分以下である。
【００３４】
また、皮膚の荒れを処置する方法も提供され、該方法は、架橋ＨＡを含有するヒアルロン酸（ＨＡ）ゲルを含む組成物を複数の離間した注射で皮膚領域に導入することによって該領域を処置することを含み、処置された皮膚は、処置によって、少なくとも約３ヶ月間、少なくとも約４ヶ月間、少なくとも約６ヶ月間、少なくとも約９ヶ月間、または少なくとも約１２ヶ月間、より滑らかな質感を維持する。
【００３５】
特定の実施形態では、本発明の組成物は、１２ｍｇ／ｍｌの濃度の１，４−ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ）で架橋された非動物由来のヒアルロン酸（ＨＡ）ゲルの無菌生理学的溶液を含む。組成物は、未処置の表在性皮膚陥凹と比較した場合の皮膚の質感の改善、ならびに滑らかさ、水和度、および弾力などの皮膚の質の改善として測定される表在性皮膚陥凹の処置に有用である。特定の実施形態では、処置方法としては、標的となる解剖学的領域にわたる３２Ｇ針を使用した真皮内への注射、例えばデポー（ｄｅｐｏｔ）注射が挙げられる。標的となる解剖学的領域としては、顔の皮膚領域および首の皮膚領域が挙げられる。皮膚の外観の改善、例えば、非処置の皮膚と比較した場合の陥凹、小じわ、および、平らでないまたは荒れた質感の外観の低減が患者にとって著しく顕著となり得、また、わずか４５分間、またはわずか３０分間、またはわずか２０分間、またはわずか１５分間、またはそれ以下の単回の処置セッションの後、少なくとも４ヶ月間、６ヶ月間、９ヶ月間、または１２ヶ月間の持続期間にわたり改善が持続し得る。皮膚の質感の改善は適切な尺度を使用して評価することができる。適切な機器を用いて水和度および弾力の皮膚の質の測定を行うことができ、また、ベースライン、すなわち未処置の皮膚と比較することができる。他の評価方法、例えば、ＦＡＣＥ  ＱおよびＧＡＩＳを利用して、対象および研究者の満足度をそれぞれ評価することができる。特定の実施形態では、処置後の製品の作用持続期間は少なくとも約４ヶ月間、例えば約６ヶ月間である。
【００３６】
組成物にリドカインを添加すると、いくつかの実施形態では、処置領域の痛みが低減される。しかしながら、いくつかの実施形態では、リドカインに対するアレルギーおよび疼痛感受性に関する患者のニーズに対応するために、組成物はリドカインを含まない。
別の実施形態は、皮膚における滑らかさ、水和度、および弾力の少なくとも１つを増加させる方法であって、皮膚領域に、約５００μｍから約５０００μｍの深さで、ＢＤＤＥ架橋ＨＡと未架橋ＨＡとを含有するヒアルロン酸（ＨＡ）ゲルを含む組成物の複数の離間した注射を単回の処置セッションで導入することを含む方法を提供し、注射は、１注射当たり約５μＬから約１００μＬの量で導入され、注射は２８Ｇから３３Ｇのゲージを有する針を通して送達され、注射は約５ｍｍから約２０ｍｍの間隔で離間している。
いくつかの実施形態では、皮膚領域は、処置によって、少なくとも約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、約６ヶ月間、９ヶ月間、１２ヶ月間、またはそれ以上、増加した滑らかさ、水和度、および／または弾力を維持する。
別の実施形態では、皮膚の滑らかさ、水和度、および弾力の少なくとも１つを増加させるための組成物が提供され、該組成物は、約４００，０００Ｄａから約８００，０００Ｄａの質量平均分子量を有する低分子量ＨＡ材料を用いて作られた架橋ＨＡマトリックスを含むヒアルロン酸（ＨＡ）ゲルを含み、組成物のＨＡ濃度は約１０．０ｍｇ／ｇから約１４．０ｍｇ／ｇであり、組成物は、処置によって、複数の離間した組成物の注射を含む単回の処置セッションで皮膚に導入されてから少なくとも約６ヶ月間、増加した滑らかさ、水和度、および／または弾力を維持し、注射は、１注射当たり約５μＬから約１００μＬの量で導入され、２８Ｇから３３Ｇのゲージを有する針を通して送達され、約５ｍｍから約２０ｍｍの間隔で離間している。皮膚領域は、処置によって、少なくとも約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、約６ヶ月間、９ヶ月間、１２ヶ月間、またはそれ以上、増加した滑らかさ、水和度、および／または弾力を維持し得る。組成物は、マンニトールおよびビタミンＣの少なくとも１つをさらに含んでもよい。いくつかの実施形態では、マンニトールおよびビタミンＣ誘導体の両方が組成物中に存在する。
【００３７】
組成物は、０．１Ｈｚで測定した場合、約５０〜２００Ｐａ、例えば１００〜１５０Ｐａまたは１２０Ｐａの、５Ｈｚで測定した場合、約１００〜３００Ｐａ、例えば１５０〜２００Ｐａまたは１７５Ｐａのゲル硬度Ｇ’を伴う。ゲル硬度を測定する方法は当該技術分野で知られている。ゲル硬度は皮膚充填材の柔らかさの指標である。
【００３８】
組成物はさらに、０．１Ｈｚで測定した場合、約１０〜１００Ｐａ、例えば１５〜４０Ｐａまたは２０Ｐａの、５Ｈｚで測定した場合、約１０〜１００Ｐａ、例えば２０〜４０Ｐａまたは３０Ｐａのゲル粘度Ｇ”を伴う。粘度を測定する方法は当該技術分野で知られている。
【００３９】
組成物はまた、約５〜２０Ｎ、例えば１０〜１５Ｎまたは１２Ｎの圧縮率を伴う。圧縮率を測定するための方法は当該技術分野で知られている。圧縮率は、皮膚充填材の変形抵抗の指標である。一般に、圧縮率が低いほど充填材のリフトスプレダビリティ（ｌｉｆｔ  ｓｐｒｅａｄｉｂｉｌｉｔｙ）が低くなり、すなわち、充填材が、より深い注射およびボリュームの復元により好適なより高い圧縮率を有する充填材に比べて、顔面または首の表面のしわおよびひだの処置により適したものとなる。
【実施例】
【００４０】
（例１）
フリーラジカル分解試験により、（ＨＡの主な分解経路の１つである）フリーラジカルによるＨＡ鎖の分解に対するゲル試料の耐性を評価することができる。フリーラジカル分解試験は、本組成物の３つの異なるバッチで行った。得られた結果を表１に示す。すべての測定値が一致することが判明した（ＣＶｒ＜１０％）。
【表１】
2018504448.tif 000002
【００４１】
バッチ間変動は３つの異なるバッチで約３％であり、分解時間の平均値は４９８５秒である（表２）。
【表２】
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【００４２】
（例２）
３７歳の女性は、加齢、乾燥した気候、および／または生涯にわたる太陽／風への曝露により、荒れた、乾燥した顔面皮膚を呈する。医師は、皮内、マイクロデポー注射によって、本明細書に記載の組成物を投与する。処置は、３２Ｇ／４ｍｍ針を用いた１皮膚領域当たり１０から約１００回の浅層注射からなる。処置される皮膚領域は、顔、首、およびデコルテである。処置セッションは、患者のすべての皮膚領域全体で、初回注射から最後の注射まで約４０分間続く。各処置領域に、適切な量の組成物を離間した注射で投与する。例えば顔面領域には、およそ約１０ｍｍから約１５ｍｍの間隔で離間した浅層単回注射によって投与される約２ｍＬから約３ｍＬの組成物を投与する。首は約１ｍＬから２ｍＬの組成物で処置し、注射はおよそ１５ｍｍから約２０ｍｍの間隔で離間している。処置後、処置された皮膚の領域を、視覚、触覚、および圧迫の感覚によって検査する。処置の開始時および終了時に写真評価を行う。患者は医師に処置が最小限の不快感しかもたらさなかったことを報告する。患者は処置直後に日常活動に戻る。処置された右手の皮膚の小さな領域に斑状出血が見られるが、これは抗炎症クリームの塗布後数日で解決する。患者はフォローアップ評価のために処置の４ヶ月後に医師のもとに再度来院する。フォローアップ評価来院の前には、患者に対してさらなる充填材の注射やメソセラピー処置は行わない。フォローアップ来院時の客観的検査では、処置によって、表皮の質感の改善、乾燥の減少、および皮膚の明るさの改善がもたらされている。これらの改善は、写真による記録である程度明らかである。処置された皮膚領域を穏やかに触診すると、水和度、柔軟性、弾力、およびトーンが向上しているものと見受けられる。患者は、自己評価アンケートの記入によって、処置への高い満足度を表す。患者は処置された領域が改善され、その結果に非常に満足していると主張する。興味深いことに、これらの良好な結果は、単回の処置セッションのみに基づいて達成され、反復注射、「トップアップ（ｔｏｐ−ｕｐｓ）」、または処置セッションとフォローアップ来院との間の追加の注射処置は行われていない。
【００４３】
（例３）
ヒト生体皮膚外植片の表皮および真皮構造に対する注射可能な組成物の水和度をコルネオメトリー（ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｒｙ）測定により評価した。すなわち、ＣＭ８２５  Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ（登録商標）（ＣＯＵＲＡＧＥ  ＆  ＫＨＡＺＡＫＡ）を使用して、角質層の最も外側の皮膚層の保湿レベルを測定した。Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ（登録商標）の動作原理は、コンデンサの形態に設計された検出器の電気容量の変化に基づいている。皮膚と接触した測定ヘッドの表面では、皮膚の保湿レベルに従ってその電気容量が変化する。Ｄ０（＝０日目）では、ＡＵ（任意単位）で表される電気表皮容量が皮膚水和度の指標となる。本開示に係る以下の組成物を測定した。
【００４４】
【表３】
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製品は試験期間中室温で保存されている。
【００４５】
外植片の調製：４５歳の白人女性由来の腹部形成術において、９個の外植片を調製した。外植片を、湿潤、５％−ＣＯ2雰囲気中、３７℃でＢＥＭ培地（ＢＩＯ−ＥＣ’ｓ  Ｅｘｐｌａｎｔｓ  Ｍｅｄｉｕｍ）中で生存させた。外植片は３バッチに振り分けた（Ｎｂ＝数）。
【００４６】
【表４】
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【００４７】
製品適用：コルネオメトリーに用いたバッチＣ１の外植片を、４×１０μＬの注射可能な製品で（四角注射）、各注射点を０．５ｃｍずつ離して処置した（図１を参照されたい）。コルネオメトリーに用いたバッチＣ２の外植片を、４×１０μＬの注射可能な製品で（四角注射）、各注射点を１ｃｍずつ離して処置した（図１を参照されたい）。未処置対照には何ら処置をしなかった。
コルネオメトリー：Ｄ０、Ｄ２、Ｄ７、およびＤ９における外植片について、ＣＭ８２５  Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ（登録商標）（ＣＯＵＲＡＧＥ  ＆  ＫＨＡＺＡＫＡ）を使用して、皮膚の水和度の指標である表皮静電容量を評価した。測定は直径１ｃｍのプローブを用いて四角形の外植片の中央で行った。測定を１０回行い、平均値をコルネオメーターによって計算する。
サンプリング：Ｄ０において、バッチＴ０からの３個の外植片を採取し、２つの部分に切断し、半分を−８０℃で凍結させ、半分をホルモルに固定した。Ｄ２、Ｄ７、およびＤ９において、各バッチから３個の外植片を採取し、同じ方法で処理した。
【００４８】
統計分析：統計分析は、スチューデントｔ検定に従って行った。スチューデントｔ検定は、２つのバッチが有意に異なる確率「ｐ」を与える。２つのバッチ間の差は、ｐ＜０．０５（*）であれば有意であり、したがって２つのバッチについて９５％の確率で有意差があり、または、ｐ＜０．０１（**）であれば有意であり、したがって２つのバッチについて９９％の確率で有意差がある。
【００４９】
結果：各バッチについてのコルネオメトリーの測定値（図２および３も参照されたい）
【表５】
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【００５０】
コルネオメトリーにより、製品Ｐｃｌについて、コルネオメトリー値が、Ｄ２において４４．０％**対Ｔ、Ｄ７において３４．９％**対Ｔ、およびＤ９において４３．６％**対Ｔ高いことが示される。製品Ｐｃ２について、コルネオメトリー値は、Ｄ２において３０．７％*対Ｔ、Ｄ７において３８．６％**対Ｔ、およびＤ９において４１．９％**対Ｔ高い。（スチューデントｔ検定によると、*ｐ＜０．０５（９５％）で有意；**ｐ＜０．０１（９９％）で有意）。本開示に係る組成物は、試験した条件（Ｐｃ１およびＰｃ２それぞれについて各々０．５ｃｍまたは１ｃｍの間隔をあけた１０μＬの４ヶ所の注射）にかかわらず良好な水和活性を示し、これにより、皮膚水和度を増加させる表皮静電容量値の強い増加が誘導される。
【００５１】
（例３）
ヒトの生体皮膚外植片の表皮および真皮構造に対する本開示に係る注射可能な組成物の皮膚水和度を追加のコルネオメトリー測定によって評価した。以下の組成物を測定した。
【表６】
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製品は試験期間中室温で保存されている。
【００５２】
外植片の調製：第１ドナーについては、５９歳の白人女性からの腹部形成術において１．５ｃｍ×２ｃｍの大きさの９個の外植片を調製した。第２のドナーについては、４２歳の白人の女性からの腹部形成術において１．５ｃｍ×２ｃｍの大きさの９個の外植片を調製した。第３のドナーについては、５２歳の白人女性からの腹部形成術において１．５ｃｍ×２ｃｍの大きさの９個の外植片を調製した。各ドナーについて、９個の外植片を以下のように３バッチに振り分けた。
【００５３】
【表７】
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【００５４】
製品適用：Ｄ０において、３×５０μＬの製品Ｐ１またはＰ２を長方形の外植片（１．５×２ｃｍ）の真皮に針で注入した。未処置対照には何ら処置をしなかった。
Ｄ１、Ｄ２、Ｄ５、およびＤ７に培地の半量（１ｍｌ）を交換した。
コルネオメトリー：外植片について、Ｄ０、Ｄ１、Ｄ２、およびＤ８にＣＭ８２５  Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ（登録商標）（ＣＯＵＲＡＧＥ＆ＫＨＡＺＡＫＡ）を使用して皮膚水和度の指標である表皮静電容量を評価した。
【００５５】
結果：３人のドナーについてのコルネオメトリー測定値の結果を３つの値の平均として表した（図４および５も参照されたい）。
【表８】
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【００５６】
３人のドナーについて、コルネオメトリーは、製品Ｐ１が、Ｄ１においてＤ０と比較してコルネオメトリー値の１５％の増加を誘導し、Ｄ２において１８％まで増加し続け、Ｄ８において２２％まで増加することを示す。製品Ｐ２は、Ｄ０からＤ１への３７％の急速な増加を誘導し、Ｄ２からＤ８まで増加し続けて４９％に達する。これらの実験条件によると、また、Ｄ８（ＴＪ８）のブランクバッチと比較すると、以下のとおり結論づけることができる。
【００５７】
【表９】
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【００５８】
概して、この試験の実験条件下において、これらの結果は、本開示による製品（Ｐ２）が製品Ｐ１および未処置対照Ｔと比較して８日目（Ｄ８）の角質層において皮膚水和度の増加を示すことを示す。
本発明をある程度の詳細事項を伴って説明し例示してきたが、本開示は例としてのみなされたものであり、当業者であれば、以下に請求される本発明の範囲から逸脱することなく、部品、工程および要素の組み合わせおよび配置に関して数多くの変更を用いることができることが理解される。
【００５９】
本発明を以下の実施形態によりさらに説明することができる。
１．皮膚の表在性陥凹の外観を低減するのに有用な注射可能な組成物であって、組成物は、
約０．２０ＭＤａから約０．９９ＭＤａの質量平均分子量を有する低分子量ＨＡ材料を用いて作られた架橋ＨＡマトリックスを含むヒアルロン酸（ＨＡ）ゲルを含み、
組成物のＨＡ濃度は約１７．０ｍｇ／ｇ未満であり、
組成物は、皮膚に導入されてから少なくとも約３ヶ月間、皮膚の表在性陥凹が低減された外観を維持する、注射可能な組成物。
２．組成物が、皮膚に導入されてから少なくとも約６ヶ月間、皮膚の表在性陥凹が低減された外観を維持する、項目１の組成物。
３．組成物が、皮膚に導入されてから少なくとも約９ヶ月間、皮膚の表在性陥凹が低減された外観を維持する、項目１の組成物。
４．マンニトールおよびビタミンＣ誘導体の少なくとも１つをさらに含む、項目１の組成物。
５．マンニトールが約０．３％質量％から約０．９質量％の量で存在する、項目４の組成物。
６．ビタミンＣ誘導体がアスコルビン酸２−グルコシドである、項目４の組成物。
７．アスコルビン酸２−グルコシドが約０．３質量％から約０．６質量％の量で存在する、項目６の組成物。
８．約０．９質量％のマンニトールおよび約０．６質量％のアスコルビン酸２−グルコシドをさらに含む、項目１の組成物。
９．低分子量ＨＡ材料の質量平均分子量が約４００，０００Ｄａから約８００，０００Ｄａである、項目１の組成物。
１０．架橋ＨＡマトリックスが、１，４−ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ）、１，４−ビス（２，３−エポキシプロポキシ）ブタン、１，４−ビスグリシジルオキシブタン、１，２−ビス（２，３−エポキシプロポキシ）エチレン、および１−（２，３−エポキシプロピル）−２，３−エポキシシクロヘキサンからなる群から選択される架橋剤で架橋されている、項目１の組成物。
【００６０】
１１．ＨＡ濃度が約１０．０ｍｇ／ｇから約１４．０ｍｇ／ｇである、項目１の組成物。
１２．ＨＡ濃度が約１２．０ｍｇ／ｇである、項目１の組成物。
１３．皮膚の表在性陥凹の外観を低減させるため、または皮膚の質を改善させるために有用な注射可能な組成物であって、組成物は、
架橋ＨＡマトリックスを含むヒアルロン酸（ＨＡ）ゲル、
マンニトールおよびビタミンＣ誘導体の少なくとも１つ
を含み、
組成物のＨＡ濃度は約１７．０ｍｇ／ｇ未満であり、
組成物は、皮膚に導入されてから少なくとも約３ヶ月間、皮膚の表在性陥凹が低減された外観または改善された皮膚の質を維持する、注射可能な組成物。
１４．組成物が、皮膚へ導入されてから少なくとも約６ヶ月間、皮膚の表在性陥凹が低減された外観または改善された皮膚の質を維持する、項目１３の組成物。
１５．組成物が、皮膚へ導入されてから少なくとも約９ヶ月間、皮膚の表在性陥凹が低減された外観または改善された皮膚の質を維持する、項目１３の組成物。
１６．マンニトールが約０．３質量％から約０．９質量％の量で存在する、項目１３の組成物。
１７．ビタミンＣ誘導体がアスコルビン酸２−グルコシドである、項目１３の組成物。
１８．アスコルビン酸２−グルコシドが約０．３質量％から約０．６質量％の量で存在する、項目１７の組成物。
１９．マンニトールおよびビタミンＣ誘導体の少なくとも１つが、約０．９質量％で存在するマンニトールおよび約０．６質量％で存在するビタミンＣ誘導体の両方を含む、項目１３の組成物。
２０．ビタミンＣ誘導体がアスコルビン酸２−グルコシドである、項目１９の組成物。
【００６１】
２１．ＨＡ濃度が約１０．０ｍｇ／ｇから約１４．０ｍｇ／ｇである、項目１３の組成物。
２２．ＨＡ濃度が約１２．０ｍｇ／ｇである、項目１３の組成物。
２３．皮膚の質感、水和度、および弾力の少なくとも１つを改善する方法であって、方法は、
架橋ＨＡを含有するヒアルロン酸（ＨＡ）ゲルを含む組成物の複数の離間した注射を単回の処置セッションで皮膚領域に導入することによって皮膚の領域を処置することを含み、
組成物のＨＡ濃度は約１７．０ｍｇ／ｇ未満であり、
処置された皮膚は、処置によって、少なくとも約３ヶ月間、改善された質感、水和度、および弾力の少なくとも１つを維持する、方法。
２４．処置された皮膚が、処置によって、少なくとも約６ヶ月間、改善された質感、水和度、および弾力の少なくとも１つを維持する、項目２３の方法。
２５．処置された皮膚が、処置によって、少なくとも約１２ヶ月間、改善された質感、水和度、および弾力の少なくとも１つを維持する、項目２３の方法。
２６．ＨＡ濃度が約１０．０ｍｇ／ｇから約１４．０ｍｇ／ｇである、項目２３の方法。
２７．ＨＡ濃度が約１２．０ｍｇ／ｇである、項目２３の方法。
２８．注射が約５ｍｍから約２０ｍｍの間隔で離間している、項目２３の方法。
２９．注射が１注射当たり約５μＬから約１００μＬの量で導入される、項目２３の方法。
３０．処置に要する時間が約４５分以下である、項目２３の方法。
【００６２】
３１．注射が２８Ｇから３３Ｇのゲージを有する針を通して送達される、項目２３の方法。
３２．組成物がマンニトールおよびビタミンＣ誘導体の少なくとも１つをさらに含む、項目２３の方法。
３３．マンニトールが約０．３質量％から約０．９質量％の量で存在する、項目２３の方法。
３４．ビタミンＣ誘導体がアスコルビン酸２−グルコシドである、項目２３の方法。
３５．アスコルビン酸２−グルコシドが約０．３質量％から約０．６質量％の量で存在する、項目３４の方法。
【００６３】
３６．皮膚の滑らかさ、水和度、および弾力の少なくとも１つを増加させる方法であって、
皮膚領域に、約０．５〜約４．０ｍｍまたは約０．５〜約５．０ｍｍの深さで、ＢＤＤＥ架橋ＨＡと未架橋ＨＡとを含有するヒアルロン酸（ＨＡ）ゲルを含む組成物の複数の離間した注射を単回の処置セッションで導入することを含み、
注射は、１注射当たり約５μＬから約１００μＬの量で導入され、
注射は、２８Ｇから３３Ｇのゲージを有する針を通して送達され、
注射は、約５ｍｍから約２０ｍｍの間隔で離間しており、そして
皮膚領域は、処置によって、少なくとも約６ヶ月間、増加した滑らかさ、水和度、および／または弾力を維持する、方法。
３７．組成物がマンニトールおよびビタミンＣ誘導体の少なくとも１つをさらに含む、項目３６の方法。
３８．皮膚の滑らかさ、水和度、および弾力の少なくとも１つを増加させるための組成物であって、
約４００，０００Ｄａから約８００，０００Ｄａの質量平均分子量を有する低分子量ＨＡ材料を用いて作られた架橋ＨＡマトリックスを含有するヒアルロン酸（ＨＡ）ゲルを含み、
組成物のＨＡ濃度は約１０．０ｍｇ／ｇから約１４．０ｍｇ／ｇであり、
組成物は、処置によって、複数の離間した組成物の注射を含む単回の処置セッションで皮膚に導入されてから少なくとも約６ヶ月間、増加した滑らかさ、水和度および／または弾力を維持し、注射は、１注射当たり約５μＬから約１００μＬの量で導入され、２８Ｇから３３Ｇのゲージを有する針を通して送達され、約５ｍｍから約２０ｍｍの間隔で離間している、組成物。
３９．組成物がマンニトールおよびビタミンＣ誘導体の少なくとも１つをさらに含む、項目３８の組成物。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際調査報告】
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