(57)【要約】本開示は、細胞外組織マトリックスから製造される組織製品を提供する。組織製品は、細胞増殖及び組織再生を支持する能力を維持しながら、選択された領域のマトリックスの圧縮係数を増大させるように選択領域で処理された無細胞の細胞外マトリックスを含むことができる。さらに、組織製品は、コラーゲン性またはポリマー性材料の骨格とともに組織の内殖を支持するコラーゲン含有材料を含むことができ、その結果、この組み合わせが、細胞増殖及び組織再生を支持する能力を維持しながら、所望の圧縮係数もしくは張力係数及び／または強度を有する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
患者に移植された場合に細胞内殖及び組織再生を支持することができるコラーゲン含有マトリックスを含む第１の成分；
３次元構造を含む第２の成分
を含む組織製品であって、ここでは、前記第１の成分が前記第２の成分の格子骨格中に包埋され、前記第２の成分が前記第１の成分の圧縮係数より大きい圧縮係数を有する、前記組織製品。
【請求項２】
前記第１の成分が脂肪細胞外組織マトリックスを含む、請求項１に記載の組織製品。
【請求項３】
前記第１の成分が真皮無細胞組織マトリックスを含む、請求項１に記載の組織製品。
【請求項４】
前記第２の成分が前記細胞外マトリックスに由来しないポリマーを含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組織製品。
【請求項５】
前記ポリマーが、ポリウレタン、分解性ポリエステル、ポリグリコール酸、ポリ乳酸、ポリカプロラクトン、ポリトリメチレンカーボネート及びコポリマー、ポリ酸無水物、ポリカーボネート、ポリエステルアミド、ポリホスファゼン、ポリオレフィン、非分解性ポリエステル、ナイロン、ポリアクリレート、シリコーン、チロシンベースポリマー、ポリヒドロキシアルカノエート、キチンまたはキトサンの少なくとも１つから選択される、請求項４に記載の組織製品。
【請求項６】
前記第１の成分及び前記第２の成分がそれぞれコラーゲンマトリックスを含み、前記第２の成分が、所望の圧縮係数をもたらすように架橋されている、請求項１〜３のいずれかに記載の組織製品。
【請求項７】
前記第１の成分及び前記第２の成分がそれぞれコラーゲンマトリックスを含み、前記第２の成分が前記第１の成分よりも高い密度のコラーゲン線維を有する、請求項１〜３のいずれかに記載の組織製品。
【請求項８】
前記第２の成分が、より高密度のコラーゲン線維を生成するように選択される領域で圧縮されている、請求項７に記載の組織製品。
【請求項９】
前記第１の成分及び前記第２の成分のそれぞれがコラーゲンマトリックスを含み、前記第２の成分がより高密度のコラーゲン線維を有し、前記第１の成分が微粉化コラーゲンを含む、請求項１〜３のいずれかに記載の組織製品。
【請求項１０】
前記第１の成分が非ミネラル化コラーゲンマトリックスを含み、前記第２の成分がミネラル化コラーゲンを含む、請求項１〜３のいずれかに記載の組織製品。
【請求項１１】
前記第２の成分が、直径が約５００ミクロン〜３０００ミクロンの間である孔を有する多孔性材料を含む、請求項１〜１０のいずれかに記載の組織製品。
【請求項１２】
前記多孔性材料が連続気泡発泡体である、請求項１１に記載の組織製品。
【請求項１３】
前記第１の材料がコラーゲンベースの材料である、請求項１２に記載の組織製品。
【請求項１４】
前記コラーゲンベースの材料が細胞外組織マトリックスである、請求項１３に記載の組織製品。
【請求項１５】
前記コラーゲンベースの材料を前記第２の材料の前記格子骨格内で懸濁させ、生成物を凍結乾燥することによって、前記製品が製造される、請求項１３または１４に記載の組織製品。
【請求項１６】
前記第１の材料がコラーゲン／グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）材料である、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の組織製品。
【請求項１７】
患者に移植された場合に細胞内殖及び組織再生を支持することができるコラーゲン含有細胞外組織マトリックスを含む第１の成分；ならびに
組織製品の全体にわたって間隔をおいて配置された一群のより高い係数の領域を含む前記組織製品であって、
ここでは、前記より高い係数の領域が前記コラーゲン含有細胞外マトリックスで形成され、より高密度の領域を生成するように処理されている、前記組織製品。
【請求項１８】
前記より高い係数の領域のそれぞれが共通の軸に沿って整列している、請求項１７に記載の組織製品。
【請求項１９】
前記細胞外組織マトリックスが無細胞の真皮マトリックスを含む、請求項１７または１８に記載の組織製品。
【請求項２０】
前記細胞外組織マトリックスが脂肪組織マトリックスを含む、請求項１７または１８に記載の組織製品。
【請求項２１】
前記一群のより高い係数の領域が圧縮及び架橋された細胞外マトリックス領域を含む、請求項１７〜２０のいずれかに記載の組織製品。
【請求項２２】
平らな支持体に設置された場合に平らな上面及び下面を有する材料のシートを含み、前記一群のより高い係数の領域が前記平らな面に垂直な共通の垂直な軸に沿って整列している領域を含む、請求項１７〜２０のいずれかに記載の組織製品。
【請求項２３】
平らな支持体に設置された場合に平らな上面及び下面を有する材料のシートを含み、前記一群のより高い係数の領域が前記平らな面に平行な方向に沿って形成される領域を含む、請求項１７〜２０のいずれかに記載の組織製品。
【請求項２４】
前記より高い係数の領域がより高い圧縮係数及びより高い張力係数の少なくとも１つを有する、請求項１７〜２３のいずれかに記載の組織製品。
【請求項２５】
前記より高い係数の領域がより高い圧縮係数及びより高い張力係数を有する、請求項１７〜２３のいずれかに記載の組織製品。
【請求項２６】
前記より高い係数の領域がより高い引張強度を有する、請求項１７〜２５のいずれかに記載の組織製品。
【請求項２７】
多孔性及び哺乳類の軟組織に移植された場合に細胞内殖を可能にするように選択される微細構造を有するコラーゲンベースの細胞外マトリックス材料を含む第１の生体適合性材料を選択すること；
前記第１の生体適合性材料の密度及び圧縮係数より大きい密度及び圧縮係数を有する第２の生体適合性材料を選択すること；
前記第１の生体適合性材料と前記第２の生体適合性材料から複合材料を形成すること
を含む、組織製品の製造方法。
【請求項２８】
前記第１の生体適合性材料と前記第２の生体適合性材料から複合材料を形成することが、前記第２の生体適合性材料の格子を調製すること、前記第１の生体適合性材料を前記格子内に配置することを含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記第１の生体適合性材料と前記第２の生体適合性材料から複合材料を形成することが、前記第１の生体適合性材料及び前記第２の生体適合性材料のうちの一方の液体懸濁液を調製すること；
前記第１の生体適合性材料及び前記第２の生体適合性材料のもう一方で形成される固形粒子を前記懸濁液に入れて混合物を形成すること；ならびに
前記混合物を乾燥することを含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
乾燥が凍結乾燥を含む、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記液体懸濁液が前記第２の生体適合性材料の懸濁液を含む、請求項２９〜３０のいずれかに記載の方法。
【請求項３２】
前記固形粒子が凍結した粒子である、請求項２９〜３１のいずれかに記載の方法。
【請求項３３】
前記材料を脱水熱処理にかけることをさらに含む、請求項２９〜３２のいずれかに記載の方法。
【請求項３４】
前記製品の少なくとも一部を架橋することをさらに含む、請求項２９〜３３のいずれかに記載の方法。
【請求項３５】
架橋が放射線、光または化学架橋剤への暴露の少なくとも１つによって行われる、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
患者に移植された場合に細胞内殖及び組織再生を支持することができるコラーゲン含有細胞外組織マトリックスを選択すること；ならびに
前記組織マトリックス全体にわたって間隔をおいて配置された一群のより高い係数の領域及びより高密度の領域を生成するように前記コラーゲン含有細胞外組織マトリックスを処理すること
を含む、組織製品の製造方法。
【請求項３７】
前記より高い係数の領域及びより高密度の領域のそれぞれが共通の軸に沿って整列している、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記細胞外組織マトリックスが無細胞の真皮マトリックスを含む、請求項３６または３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記細胞外組織マトリックスが脂肪組織マトリックスを含む、請求項３６または３７に記載の方法。
【請求項４０】
一群のより高い係数の領域及びより高密度の領域を生成するように前記コラーゲン含有細胞外組織マトリックスを処理することが前記領域を圧縮及び架橋することを含む、請求項３６〜３９のいずれかに記載の方法。
【請求項４１】
前記組織製品が、平らな支持体に設置された場合に平らな上面及び下面を有する材料のシートを含み、前記一群のより高い係数の領域が、前記平らな面に垂直な共通の垂直な軸に沿って整列している領域を含む、請求項３６〜４０のいずれかに記載の方法。
【請求項４２】
前記組織製品が、平らな支持体に設置された場合に平らな上面及び下面を有する材料のシートを含み、前記一群のより高い係数の領域が、前記平らな面に平行な方向に沿って形成される領域を含む、請求項３６〜４０のいずれかに記載の方法。
【請求項４３】
前記組織マトリックス全体にわたって間隔をおいて配置された一群のより高い係数の領域及びより高密度の領域を生成するように前記コラーゲン含有細胞外組織マトリックスを処理することが、より高い圧縮係数及びより高い張力係数の少なくとも１つを有する領域を生成するために行われる、請求項３６〜４２のいずれかに記載の方法。
【請求項４４】
前記より高い係数の領域がより高い圧縮係数及びより高い張力係数を有する、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記より高い係数の領域がより高い引張強度を有する、請求項３６〜４４のいずれかに記載の方法。
【請求項４６】
前記より高い係数の領域が、前記組織製品の一部に引張応力を加えることを含む方法によって形成される、請求項３６〜４４のいずれかに記載の方法。
【請求項４７】
移植の際に可変性のコラーゲン密度を有するためのデバイスであって、
細胞外組織マトリックスを含み、前記マトリックスが第１の寸法の第１の領域及び前記第１のものよりも大きな少なくとも１つの寸法を有する第２の領域を含み、ここでは、移植の際に、前記第２の領域が周辺組織によって最初に圧縮される傾向があり、それによって、デバイス内に高組織コラーゲン密度領域を生成する、前記デバイス。
【請求項４８】
前記細胞外組織マトリックスが真皮マトリックスまたは脂肪マトリックスを含む、請求項４７に記載のデバイス。
【請求項４９】
合成ポリマー材料基材；及び
前記合成ポリマー基材を包埋している無細胞組織マトリックス
を含み、前記無細胞組織マトリックスが脂肪組織マトリックスを含む、解剖学的欠陥を治療するためのデバイス。
【請求項５０】
前記合成ポリマー材料基材がポリプロピレンを含む、請求項４９に記載のデバイス。
【請求項５１】
前記合成ポリマー材料基材が、ポリウレタン、分解性ポリエステル、ポリグリコール酸、ポリ乳酸、ポリカプロラクトン、ポリトリメチレンカーボネート及びコポリマー、ポリ酸無水物、ポリカーボネート、ポリエステルアミド、ポリホスファゼン、ポリオレフィン、非分解性ポリエステル、ナイロン、ポリアクリレート、シリコーン、チロシンベースポリマー、ポリヒドロキシアルカノエート、キチンまたはキトサンの少なくとも１つから選択される、請求項４９に記載のデバイス。
【請求項５２】
前記無細胞組織マトリックスが、
脂肪組織を選択すること；
前記組織を処理して実質的にすべての細胞性物質を前記組織から除去すること；
前記組織を液体に懸濁させて懸濁液を形成すること；
前記懸濁液中に前記合成ポリマー材料基材を入れること；及び
前記懸濁液を凍結及び乾燥して、前記合成ポリマー材料基材を包埋している多孔性スポンジを形成すること
を含む方法によって形成される、請求項４９〜５１のいずれかに記載のデバイス。
【請求項５３】
前記方法が前記多孔性スポンジを安定化することをさらに含む、請求項５２に記載のデバイス。
【請求項５４】
前記多孔性スポンジを安定化することが前記多孔性スポンジを架橋することを含む、請求項５３に記載のデバイス。
【請求項５５】
前記多孔性スポンジを安定化することが前記多孔性スポンジを脱水熱処理にかけることを含む、請求項５３に記載のデバイス。
【請求項５６】
前記多孔性スポンジを架橋することが、化学的架橋、ｅ−ビーム放射による架橋、ガンマ線放射による架橋または紫外線放射線による架橋の少なくとも１つを行うことを含む、請求項５４に記載のデバイス。
【請求項５７】
前記合成ポリマー材料基材がメッシュである、請求項４９〜５６のいずれかに記載のデバイス。
【請求項５８】
脂肪組織を選択すること；
前記組織を処理して実質的にすべての細胞性物質を前記組織から除去すること；
前記組織を液体に懸濁させて懸濁液を形成すること；
前記懸濁液に合成ポリマー材料基材を入れること；及び
前記懸濁液を凍結及び乾燥して、前記合成ポリマー材料基材を包埋している多孔性スポンジを形成すること
を含む、治療デバイスの製造方法。
【請求項５９】
前記合成ポリマー材料基材がポリプロピレンを含む、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
前記合成ポリマー材料基材が、ポリウレタン、分解性ポリエステル、ポリグリコール酸、ポリ乳酸、ポリカプロラクトン、ポリトリメチレンカーボネート及びコポリマー、ポリ酸無水物、ポリカーボネート、ポリエステルアミド、ポリホスファゼン、ポリオレフィン、非分解性ポリエステル、ナイロン、ポリアクリレート、シリコーン、チロシンベースポリマー、ポリヒドロキシアルカノエート、キチンまたはキトサンの少なくとも１つから選択される、請求項５８に記載の方法。
【請求項６１】
前記方法が前記多孔性スポンジを安定化することをさらに含む、請求項５８〜６０のいずれかに記載の方法。
【請求項６２】
前記多孔性スポンジを安定化することが前記多孔性スポンジを架橋することを含む、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
前記多孔性スポンジを安定化することが前記多孔性スポンジを脱水熱処理にかけることを含む、請求項６１に記載の方法。
【請求項６４】
前記多孔性スポンジを架橋することが、化学的架橋、ｅ−ビーム放射による架橋、ガンマ線放射による架橋または紫外線放射による架橋の少なくとも１つを行うことを含む、請求項６２に記載の方法。
【請求項６５】
前記合成ポリマー材料基材がメッシュである、請求項５８〜６４のいずれかに記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１１９のもとで、２０１５年４月１６日に出願された米国仮特許出願第６２／１４８，５３２号及び２０１５年１月２１日に出願された米国仮特許出願第６２／１０５，９７１号に対する優先権を主張し、これらの両方は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本開示は組織製品に関し、より詳細には、細胞内殖及び組織再生を可能にしながら、所望の係数（圧縮性もしくは張力）または他の制御された機械的特性を提供するために、他の材料で改変されたまたは他の材料と組み合わされた組織マトリックスに関する。本開示は、線維密度が改変された（例えば、増大した）及び／または機械的特性が改変された１つまたは複数の領域を含む組織治療製品ならびにそのような製品の作製方法も含む。
【背景技術】
【０００３】
様々な組織由来製品が、病気にかかったまたは損傷した組織及び器官を再生、修復またはそうでなければ治療するのに使用されている。そのような製品としては、組織移植片及び／または処理された組織（例えば、細胞播種の有無にかかわらない、皮膚、腸または他の組織由来の無細胞組織マトリックス）を挙げることができる。そのような製品は、一般に、組織源（すなわち、それが由来する組織型及び動物）ならびに組織製品を製造するのに使用される処理パラメーターによって決まる特性を有する。組織製品は外科的用途及び／または組織の置換もしくは増大に使用されることが多いので、この製品は、選択された移植部位に望まれるように、組織の成長及び再生を支持しなければならない。
【０００４】
しかし、所望の生物学的特性を提供するために、細胞外組織マトリックスを含めた組織製品は、過度の線維化または瘢痕をともなわずに細胞内殖及び組織再生を促進するように、適切な多孔性及び化学組成を含めた、構造的及び機能的特性を有する必要がある。さらに、組織フィラーとして働くために、組織製品は、移植の際に望ましくない圧縮または変形を防止すると同時に、好ましい感触または美的な外観を可能にするように、十分な剛性を持つ必要がある。
【０００５】
しかし、ある種の用途については、無細胞組織マトリックスまたは合成材料などの現在利用可能な組織製品は、最適に満たない機械的特性を有する可能性があり、または移植後に（例えば、プロテアーゼ活性が原因で弱まることによって）非常に急速にインビボで変化する可能性がある。例えば、ある種の組織製品は、容易に圧縮されすぎて組織フィラーとして働くことができない可能性があり、またはある種の耐荷重性用途に必要とされる場合に弱まるか不十分な引張強度しか持たない可能性がある。
【０００６】
さらに、現行の細胞外マトリックス製品の設計は、いくつかの状態の治療について最適に満たない可能性がある。例えば、現行の設計は、軟組織の治療で使用するには硬すぎるか、または耐久性のある軟組織の再生に必要である体積及び孔径を保持するには柔らかすぎるか弾性がなさすぎるかのいずれかの可能性がある。さらに、耐久性のある再性軟組織フィラーは、外部の圧縮力に抵抗することによってその体積を維持し、同時に、硬い線維性組織またはミネラル化組織の代わりに軟組織（例えば脂肪）を用いてスキャフォールドを再配置させるために適切な細胞機械的キューを提供する必要がある。
【０００７】
さらに、いくつかの現行の細胞外マトリックス製品は、感触、伸縮性または柔軟性を含めた様々な機械的特性を有し得、これらは、いくつかの使用について改善することができる。例えば、いくつかのコラーゲンベースの材料または細胞外マトリックス製品は、いわゆる先端領域（ｔｏｅ−ｒｅｇｉｏｎ）において初期伸張を示し得る（Ｓｕｎらに対する米国特許公開第ＵＳ２００９０３０６７９０Ａ１号の図１を参照されたい）。さらに、ある種の用途については、この初期伸張は、耐荷重性用途のための移植の間に材料に張力を使用するためのさらなる労力を必要とする可能性があるので、望ましくない可能性がある。
【０００８】
本開示は、所望の圧縮性または張力係数を有し、改善された取扱い特性を含み、且つ／または細胞内殖及び組織再生を支持する能力を維持する、改善された組織製品を提供する。
【発明の概要】
【０００９】
本開示は、組織を治療するための改善されたデバイスを提供する。このデバイスは、様々な解剖学的部位において細胞内殖及び組織再生を可能にするために選択される１つまたは複数の（第１の）成分を含むことができる。さらに、デバイスは、１つまたは複数のさらなる（第２の）成分または密度、化学構造、強度、弾性係数及び多孔性の１つまたは複数のバリエーションを含む改変領域を含むことができる。第１の成分及び第２の成分は、所望の用途について（例えば、乳腺腫瘍摘出術または他の手術の間に除去された組織と置換する組織フィラーとして）選択される制御された巨視的機械的特性（例えば、制御された圧縮係数）を有する、（例えば、複合材料として）３次元構造に形成することができる。さらに、移植後の適切な期間にわたって所望の機械的特性を提供する間、デバイスは細胞内殖及び組織再生を可能にし得る。
【００１０】
様々な実施形態によれば、組織製品が提供される。この組織製品は、患者に移植された場合に細胞内殖及び組織再生を支持することができるコラーゲン含有マトリックスを含む第１の成分を含むことができる。さらに、組織製品は、３次元構造を含む第２の成分を含むことができ、ここでは、第１の成分は第２の成分中の格子骨格中に包埋され、第２の成分は第１の成分の圧縮係数より大きい圧縮係数を有する。
【００１１】
ある種の実施形態によれば、組織製品が提供される。この製品は、患者に移植された場合に細胞内殖及び組織再生を支持することができるコラーゲン含有細胞外組織マトリックスを含む第１の成分を含むことができる。さらに、製品は、第１の成分の全体にわたって間隔をおいて配置された一群のより高い係数の領域を含むことができ、より高い係数の領域はコラーゲン含有細胞外マトリックスで形成され、領域が組織製品の他の部分より高い密度のコラーゲン線維を有するように、処理されている。
【００１２】
さらに、本開示は、組織製品の製造方法を提供する。一実施形態によれば、この方法は、多孔性及び哺乳類の軟組織に移植された場合に細胞内殖を可能にするように選択される微細構造を有するコラーゲンベースの細胞外マトリックス材料を含む第１の生体適合性材料を選択することを含む。さらに、方法は、第１の生体適合性材料の密度及び圧縮係数より大きい密度及び圧縮係数を有する第２の生体適合性材料を選択することを含むことができる。方法は、第１の生体適合性材料と第２の生体適合性材料から複合材料を形成することをさらに含むことができる。
【００１３】
いくつかの実施形態では、組織製品の製造方法は、患者に移植された場合に細胞内殖及び組織再生を支持することができるコラーゲン含有細胞外組織マトリックスを選択すること、ならびにより高い係数及び／またはより高密度のコラーゲン線維を有する組織製品の全体にわたって間隔をおいて配置された一群の領域を生成するように、コラーゲン含有細胞外組織マトリックスを処理することを含むことができる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１Ａ】様々な例示的実施形態に従って製造された階層的多孔性組織マトリックスの透視図である。
【図１Ｂ】図１Ａの組織マトリックスの拡大図である。
【図１Ｃ】様々な例示的実施形態に従って製造された階層的多孔性組織マトリックスの透視図である。
【図２】様々な例示的実施形態に従って製造された別の階層的多孔性組織マトリックスの透視図である。
【図３Ａ】組織マトリックスの側面図及び階層的多孔性または圧縮抵抗性組織マトリックスを形成するための方法を示す図である。
【図３Ｂ】図３Ａに図示する方法に従って製造された階層的多孔性または圧縮抵抗性組織マトリックスの側面図である。
【図４Ａ】様々な実施形態に従って製造された、多孔性及び機械的特性（例えば、張力特性または圧縮特性）のバリエーションを有する組織マトリックスの側立面図である。
【図４Ｂ】様々な実施形態に従って製造された、多孔性及び機械的特性（例えば、張力特性または圧縮特性）のバリエーションを有する別の組織マトリックスの透視図である。
【図５Ａ】以下の実施例で記載する、移植より前の処理された脂肪組織のヘマトキシリン−エオジン（Ｈ＆Ｅ）染色したセクションを示す図である。
【図５Ｂ】以下の実施例で記載する、移植より前の処理された脂肪組織／ポリウレタン複合材料のＨ＆Ｅ染色したセクションを示す図である。
【図６Ａ】以下の実施例で記載する、外植後の処理された脂肪組織のＨ＆Ｅ染色したセクションを示す図である。
【図６Ｂ】以下の実施例で記載する、外植後の処理された脂肪組織のＨ＆Ｅ染色したセクションを示す図である。
【図７Ａ】以下の実施例で記載する、外植後のポリウレタン材料のＨ＆Ｅ染色したセクションを示す図である。
【図７Ｂ】以下の実施例で記載する、外植後のポリウレタン材料のＨ＆Ｅ染色したセクションを示す図である。
【図８Ａ】以下の実施例で記載する、外植後の処理された脂肪組織／ポリウレタン複合材料のＨ＆Ｅ染色したセクションを示す図である。
【図８Ｂ】以下の実施例で記載する、外植後の処理された脂肪組織／ポリウレタン複合材料のＨ＆Ｅ染色したセクションを示す図である。
【図９Ａ】組織マトリックスの側面図ならびにコラーゲン密度、機械的特性及び／または架橋のバリエーションを有する組織マトリックスを形成するための方法を示す図である。
【図９Ｂ】組織マトリックスの側面図ならびにコラーゲン密度、機械的特性及び／または架橋のバリエーションを有する組織マトリックスを形成するための方法を示す図である。
【図９Ｃ】図９Ａ〜９Ｂで図示される方法に従って製造された組織産物の側面図である。
【図１０Ａ】組織マトリックスの側面図ならびにコラーゲン密度、機械的特性及び／または架橋のバリエーションを有する組織マトリックスを形成するための方法を示す図である。
【図１０Ｂ】図１０Ａのマトリックスを使用して製造された組織マトリックスの側面図を示す図である。
【図１１Ａ】コラーゲン密度、機械的特性及び／または架橋のバリエーションを有する組織マトリックスを製造するための方法のステップを示す図である。
【図１１Ｂ】コラーゲン密度、機械的特性及び／または架橋のバリエーションを有する組織マトリックスを製造するための方法のステップを示す図である。
【図１１Ｃ】コラーゲン密度、機械的特性及び／または架橋のバリエーションを有する組織マトリックスを製造するための方法のステップを示す図である。
【図１１Ｄ】コラーゲン密度、機械的特性及び／または架橋のバリエーションを有する組織マトリックスを製造するための方法のステップを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
次に、本開示による特定の例示的実施形態について詳細に言及し、それらのうちのある実施形態は、添付の図面で図示する。可能な限り、同じまたは同様の部分を指すのに、図面全体にわたって同じ参照番号を使用する。
【００１６】
本出願では、特に記載のない限り単数形の使用は複数形を含む。本出願では、別段の記載がない限り、「ｏｒ（または）」の使用は「ａｎｄ／ｏｒ（及び／または）」を意味する。さらに、用語「ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ（含むこと）」ならびに「ｉｎｃｌｕｄｅｓ（含む）」及び「ｉｎｃｌｕｄｅｄ（含まれる）」などの他の形態の使用は、限定的ではない。本明細書に記載される任意の範囲は、端点及び端点間のすべての値を含むと理解される。
【００１７】
本明細書で使用される項の見出しは、構成上の目的のためだけであり、記載される主題を制限するものとして解釈されるべきでない。限定されないが、特許、特許出願、記事、書籍及び論文を含めた、本出願で引用されるすべての文献または文献の一部は、任意の目的のために、参照によりその全体が本明細書に明確に組み込まれる。
【００１８】
様々なヒト及び動物の組織を使用して、患者を治療するための製品を製造することができる。例えば、様々な疾患ならびに／または（例えば、外傷、手術、萎縮ならびに／もしくは長期の摩耗及び変性に由来する）構造的損傷が原因で損傷したまたは失われたヒト組織の再生、修復、増大、増強及び／または治療のための様々な組織製品が製造されてきた。そのような製品としては、例えば、無細胞組織マトリックス、組織同種移植片もしくは異種移植片及び／または再構成組織（すなわち、生存可能な材料を製造するために細胞が播種された、少なくとも部分的に脱細胞化された組織）を挙げることができる。
【００１９】
軟組織及び硬組織を治療するための様々な組織製品が製造されてきた。例えば、ＡＬＬＯＤＥＲＭ（登録商標）及びＳＴＲＡＴＴＩＣＥ（商標）（ＬＩＦＥＣＥＬＬ  ＣＯＲＰＯＲＡＴＩＯＮ，Ｂｒａｎｃｈｂｕｒｇ，ＮＪ）は、それぞれヒトの真皮及びブタの真皮でできている、２種の真皮無細胞組織マトリックスである。このような材料はある種のタイプの状態を治療するのに非常に有用であるが、異なる生物学的及び機械的特性を有する材料が、ある種の用途にとっては望ましい可能性がある。例えば、ＡＬＬＯＤＥＲＭ（登録商標）及びＳＴＲＡＴＴＩＣＥ（商標）は、構造的欠陥の治療を支援するために、及び／または（例えば、腹壁に関してもしくは乳房再建において）、組織へ支持を提供するために使用されてきており、これらの強度及び生物学的特性によって、これらは、そのような使用によく適するものになる。
【００２０】
しかし、そのような材料は、ある種の軟組織の欠陥の再生、修復、置換及び／または増大にとって理想的でない可能性がある。例えば、失われたまたは損傷した組織（脂肪または他の軟組織を含める）を置換するための改善された組織フィラーは、一部の患者にとって有益であり得る。さらに、いくつかの用途では、組織フィラーは、材料が細胞内殖及び再生を支持する能力を維持しながら、ある種の機械的特性を変化させることによって、改善され得る。したがって、細胞内殖及び再生を可能にする能力を維持しながら、１つまたは複数の組織スキャフォールドの機械的及び／または生物学的特性を変化させる、改善されたデバイス及び方法が提供される。
【００２１】
ある種の実施形態では、デバイスは、細胞レベルで細胞外マトリックス（ＥＣＭ）様機構を維持しながら外部の圧縮及び孔の崩壊に抵抗する、軟組織フィラーを含む。デバイスは、機械的勾配構造及び階層的多孔性構造を含むことができ、この構造では、比較的高い圧縮係数を有する領域が、そうでなければ軟質の細胞外マトリックス中に一定間隔をあけて分散しており、結果として、材料の１種または複数の成分の係数より高いマクロ機械的係数が生じる。
【００２２】
様々な実施形態によれば、組織製品が提供される。組織製品は、患者に移植された場合に細胞内殖及び組織再生を支持することができるコラーゲン含有マトリックスを含む第１の成分を含むことができる。さらに、組織製品は、３次元構造を含む第２の成分を含むことができ、ここでは、第１の成分は第２の成分中の格子骨格中に包埋され、第２の成分は第１の成分の圧縮係数より大きい圧縮係数を有する。
【００２３】
図１Ａは、様々な例示的実施形態に従って製造された階層的多孔性組織マトリックス１０の透視図である。図１Ｂは、図１Ａの組織マトリックスの拡大図である。示すように、組織マトリックス１０は第１の成分３０及び第２の成分２０を含む。第２の成分は３次元構造、例えば格子骨格を含むことができ、第１の成分は第２の成分２０の３次元構造内に包埋され得る。
【００２４】
第１の成分３０及び第２の成分２０は、様々な構造的、機械的及び／または生物学的特性の違いを有し得る。例えば、ある種の実施形態では、第１の成分３０は、細胞内殖及び組織再生を可能にすることができる多孔性材料を含むことができる。しかし、第１の成分３０はまた、第２の成分２０と比べて圧縮されやすくてもよい。
【００２５】
組織マトリックス１０のマクロ機械的特性を制御するために、第２の成分２０は、第１の成分３０よりも圧縮されにくくてもよい。すなわち、第２の成分はより高い圧縮係数を有してもよく、他の機械的、構造的または生物学的特性のバリエーションを有してもよい。例えば、ある種の実施形態では、第２の成分２０は第１の成分３０よりも高密度な材料で形成され、それによって、圧縮されにくい材料がもたらされ、この材料はまた、インビボでよりゆっくりと分解し得るか、再吸収され得る。
【００２６】
第１の成分３０及び第２の成分２０は、様々な適切な材料から形成することができる。例えば、一般に、どちらの成分も、ポリウレタン、ポリカプロラクトンまたはポリ乳酸などの生体吸収性合成材料から形成することができる。あるいは、どちらの成分も、限定されないが、ポリウレタン、分解性ポリエステル、ポリグリコール酸、ポリ乳酸、ポリカプロラクトン、ポリトリメチレンカーボネート及びコポリマー、ポリ酸無水物、ポリカーボネート、ポリエステルアミド、ポリホスファゼン、ポリオレフィン、非分解性ポリエステル、ナイロン、ポリアクリレート、シリコーン、チロシンベースポリマー、ポリヒドロキシアルカノエート、キチン、キトサンを含めた他のポリマーで形成されてもよい。さらに、どちらの成分も、例えば、細胞外マトリックス材料、微粉化細胞外マトリックス、精製コラーゲン、微粉化コラーゲン、脱繊維化（ｄｅｆｉｂｒｉｌｌａｔｅｄ）コラーゲン、粗コラーゲン束及び架橋（例えば、化学的架橋、熱架橋、光架橋または放射線誘導性架橋による（本明細書で使用する場合、光または放射線誘導性架橋は両方とも可視域の電磁放射線を指すことができ非可視放射線を使用した架橋、例えばガンマ線、ｅ−ビームまたは紫外線手段を含むこともできる）を制御するように処理されたコラーゲンを含めた様々な異なるコラーゲンベースの材料から形成されてもよい。適切な材料の様々な組み合わせを、より詳細に以下に記載する。
【００２７】
上記のように、第１の成分３０及び／または第２の成分２０は、細胞外マトリックス製品を含めた様々な異なる材料から形成することができる。例えば、成分２０、３０の一方または両方は、様々な異なるヒトまたは動物の組織に由来する無細胞組織マトリックスから形成することができる。適切な無細胞マトリックス材料としては、例えば、脂肪組織、真皮組織、結合組織（腱、靱帯、筋膜）、筋肉（平滑筋または横紋筋）、膀胱、肝臓、腎臓、膵臓、神経組織、脈管組織（動脈もしくは静脈）または他の軟組織の細胞外マトリックス及び脱ミネラル化骨マトリックスまたはミネラル化海綿骨を挙げることができる。
【００２８】
さらに、細胞外マトリックス材料が使用される場合は、多孔性、機械的特性（強度、圧縮性、弾性）ならびに／または生物学的特性（例えば、酵素感受性、インビボ分解速度及び／もしくは目的の治療部位の成長及び組織再生を支持する能力）を含めた所望の特性を制御するように、材料をさらに処理することができる。そのような処理としては、微粉化、再懸濁、架橋、脱脂、脱細胞化及び／または凍結乾燥を挙げることができる。脂肪材料及び真皮材料についての例示的処理法を、以下にさらに記載する。
【００２９】
材料の様々な組み合わせ例を以下に記載する。列挙される材料のいくつかは、本発明の意図された範囲を逸脱することなく、様々な実施形態で入れ替えることができることを理解されたい。
【００３０】
一実施形態では、第２の成分２０は、ポリウレタン、分解性ポリエステル、ポリグリコール酸、ポリ乳酸、ポリカプロラクトン、ポリトリメチレンカーボネート及びコポリマー、ポリ酸無水物、ポリカーボネート、ポリエステルアミド、ポリホスファゼン、ポリオレフィン、非分解性ポリエステル、ナイロン、ポリアクリレート、シリコーン、チロシンベースポリマー、ポリヒドロキシアルカノエート、キチン、キトサンなどの合成ポリマーを含有する連続気泡発泡体材料を含む。発泡体の孔は適切な大きさの範囲、例えば、５００マイクロメートル〜５０００マイクロメートルの間を有し得、所望の機械的特性に基づいて特定の組成物を選択することができる。さらに、治療される組織から細胞の内殖を可能にするように特定の孔径を選択することができる。例えば、１〜２０ミクロンの孔は神経軸索に使用することができ、１〜３００ミクロンの孔は脂肪細胞に使用することができる。
【００３１】
第２の成分２０内に包埋されることになる第１の成分３０は、より圧縮されやすい材料を含むことができる。例えば、第１の成分３０は、ポリマーの孔、非架橋コラーゲン、微粉化コラーゲン、非ミネラル化コラーゲン及び／またはコラーゲン−ｇａｇ混合物内に微粉化細胞外マトリックス（例えば、脂肪マトリックス、真皮マトリックス）の凍結乾燥された懸濁液を含むことができる。
【００３２】
別の実施形態では、第２の成分２０は架橋コラーゲンを含むことができ、第１の成分３０は、非架橋または軽架橋コラーゲン及び微粉化細胞外マトリックス（例えば、脂肪マトリックス、真皮マトリックス）の凍結乾燥された懸濁液をポリマーの孔、非架橋コラーゲン、微粉化コラーゲン、非ミネラル化コラーゲン及び／またはコラーゲン−ｇａｇ混合物内に含むことができる。そのため、第２の成分２０は圧縮性が低い傾向がある。
【００３３】
別の実施形態では、第２の成分２０は粗コラーゲン束を含み、第１の成分３０は、微粉化細胞外マトリックス（例えば、脂肪マトリックス、真皮マトリックス）、非架橋コラーゲン、微粉化コラーゲン、非ミネラル化コラーゲン及び／またはコラーゲン−ｇａｇ混合物の凍結乾燥された懸濁液を含むことができる。
【００３４】
別の実施形態では、第２の成分２０は絹またはセルロースなどの天然線維を含み、第１の成分３０は、微粉化細胞外マトリックス（例えば、脂肪マトリックス、真皮マトリックス）、非架橋コラーゲン、軽架橋コラーゲン、微粉化コラーゲン、非ミネラル化コラーゲン及び／またはコラーゲン−ｇａｇ混合物の凍結乾燥された懸濁液を含むことができる。
【００３５】
別の実施形態では、第２の成分２０はミネラル化コラーゲンを含み、第１の成分３０は、微粉化細胞外マトリックス（例えば、脂肪マトリックス、真皮マトリックス）、非架橋コラーゲン、軽架橋コラーゲン、微粉化コラーゲン、非ミネラル化コラーゲン及び／またはコラーゲン−ｇａｇ混合物の凍結乾燥された懸濁液を含むことができる。
【００３６】
さらに、第２の成分２０または第１の成分３０は、前述の材料の組み合わせから形成することができる。さらに、第１の成分３０と第２の成分２０のいずれかまたは両方は、機械的、構造的及び／または生物学的特性を変化させるように、組織マトリックス１０の形成に続いてまたはその前に処理されてもよい。例えば、一実施形態では、第２の成分２０を圧縮及び／または架橋して、その密度を増大させることができる。
【００３７】
いくつかの実施形態では、第１の成分は第２の成分の一部の中に包埋されるが、まだ、第２の成分の表面の大部分またはすべてを覆う。例えば、第２の成分は、合成ポリマー材料基材を含むことができ、第１の成分は無細胞組織マトリックスを含むことができる。
【００３８】
図１Ｃは、そのような一実施形態を図示する。示すように、図１Ｃのデバイスは、合成ポリマー材料基材３０’、及び基材３０’の開口部３１を充填しつつ組織マトリックスを被覆または包埋する材料２０’を含む。材料２０’は前述の組織マトリックスのうちのいずれかを含むことができ、同様に、基材は言及される合成物のうちのいずれかを含むことができる。一実施形態では、基材３０’はポリプロピレンメッシュを含み、材料２０’は脂肪組織マトリックスを含む。
【００３９】
基材３０’は、特別に設計されたメッシュ構造物または現在入手可能なメッシュ材料から形成することができる。あるいは、基材は、外科用縫合糸（例えば、ポリプロピレン縫合糸または生体再吸収性縫合糸などの細長い要素から形成することができる。
【００４０】
包埋材料はいくつかの方法で形成することができる。一実施形態では、材料２０’は、脂肪組織を選択すること；組織を処理して実質的にすべての細胞性物質を組織から除去すること；組織を液体に懸濁させて懸濁液を形成すること；懸濁液中に合成ポリマー材料基材を入れること；及び懸濁液を凍結及び乾燥して、合成ポリマー材料基材を包埋している多孔性スポンジを形成することによって形成される。
【００４１】
材料２０’を形成した後に、例えば、（例えば、化学的架橋、ＵＶ架橋、ｅ−ビーム架橋、ガンマ線架橋、Ｘ線架橋もしくは他の架橋方法を使用して）架橋することによって、または材料を脱水熱処理にかけることによって、材料２０’を安定化することができる。
【００４２】
上記のように、他の実施形態では、本明細書に開示されるデバイスは、より高密度の及びまたはより高い圧縮係数の領域を含むことができる。例えば、図２は、様々な例示的実施形態に従って製造された別の階層的多孔性組織マトリックス４０の透視図である。示すように、組織マトリックス４０は、患者に移植された場合に細胞内殖及び組織再生を支持することができるコラーゲン含有細胞外組織マトリックスを含む第１の成分５０；ならびに第１の成分５０の全体にわたって間隔をおいて配置された一群のより高い係数の領域６０を含み、ここでは、より高い係数の領域６０はコラーゲン含有細胞外マトリックスで形成され、より高密度の領域を生成するように処理されている。
【００４３】
組織マトリックス４０及びより高い係数の領域６０は、様々な構成を有し得る。例えば、示すように、組織マトリックス４０は可撓性シート様材料を含む。しかし、組織マトリックスは、所望の移植部位に基づいて選択される、箱形、立方体、ピラミッド状、卵形または不規則な形状を含めた様々な形状を含むことができることを理解されたい。
【００４４】
さらに、より高い係数の領域６０は、組織マトリックス４０内に様々な形状または構成を有し得る。例えば、いくつかの実施形態では、大部分またはすべてのより高い係数の領域６０は、共通の軸６２に沿って整列しており、それによって、共通の方向に沿った圧縮に対する抵抗性を与える。
【００４５】
図３Ａ〜３Ｂは、図２の組織マトリックス４０の製造方法を図示する。示すように、図３Ａでは、組織マトリックス４０は、材料のシート様断片を使用して形成することができ、第１の領域５０及び第２の領域９０を有する。第１の領域５０と第２の領域９０は、同じ材料で形成することができる（例えば、両方とも、無細胞の真皮、脂肪組織または他の適切な材料、例えば、コラーゲン、小腸または筋肉マトリックスのシートから形成される）が、異なる厚さ、Ｈ１及びＨ２を有し得る。
【００４６】
より高密度の領域を生成するために、より厚いＨ２を有する第２の領域を、材料の両側で圧縮力９２を加えることによって圧縮することができる。続いて、この圧縮領域を、例えば、放射線架橋、化学的架橋、熱架橋またはＵＶ架橋によって架橋して、圧縮され且つより高密度な構成で領域９０を安定化することができる。したがって、図３Ｂに示すように、組織マトリックスは、第１の領域５０及び第２のより高密度の領域６０を有する最終的な組織マトリックス４０に形成される。第２の領域６０は、第１の領域５０と比べて高い圧縮係数及び高い張力係数の少なくとも１つまたは両方を有するように形成することができる。そのため、第２の領域は、（例えば、組織フィラーとして移植した後に組織の体積を維持するために）圧縮に対して、及び／または（例えば、組織再生のために張力負荷下で使用される場合）断裂を防止するために、抵抗性を増大させることができる。
【００４７】
示すように、組織マトリックス４０は上面７２及び７６を有し、第２の領域６０は、上面及び下面に垂直な軸７６に沿ったカラムとして形成される。しかし、他の構成を使用してもよい。例えば、図４Ａは様々な実施形態に従って製造された、多孔性及び機械的特性（例えば、引張強度）のバリエーションを有する組織マトリックス１００の側立面図であり、図４Ｂは様々な実施形態に従って製造された、多孔性及び機械的特性（例えば、引張強度）のバリエーションを有する別の組織マトリックス１３０の透視図である。図４Ａの実施形態では、デバイスは、第１の領域１１０及び第２の領域１２０を含む。第２の領域１２０は、図３Ａに関して記載されたように生成されたより高密度の領域を含むことができるが、方向１２２に沿って細長いセクションを形成することができる。同様に、図４Ｂのデバイスは、第１の領域１４０及び第２の領域１５０を含むことができ、ここでは、第２の領域は、図３Ａについて記載される方法に従って処理されて、グリッド様形状でより高密度の領域を生成する。他の形状及び構成を、意図された使用に基づいて選択することができる。
【００４８】
ある種の実施形態では、本開示は、体内に移植した後に増大したコラーゲン密度及び／または圧縮抵抗性の領域を提供することができるデバイスを提供する。例えば、図９Ａ〜Ｂは、組織マトリックスの側面図ならびにコラーゲン密度、機械的特性及び／または架橋のバリエーションを有する組織マトリックスを形成するための方法を図示する。図９Ｃは、図９Ａ〜９Ｂで図示される方法に従って製造された組織産物の側面図である。
【００４９】
示すように、図９Ａは、Ｔ１の第１の領域５９２及びＴ２の第２の領域を有する曲面のついた（ｃｏｎｔｏｕｒｅｄ）組織マトリックスまたは他のスキャフォールド材料５９０を含み、ここでは、Ｔ２はＴ１より小さい。移植の際に、第１の領域Ｔ１は、周辺組織からの圧縮力５９５を受ける傾向があり、それによって、第１の領域５９４を圧縮から保護する。十分な圧縮の際に、第１の領域５９２はより高密度のコラーゲンの領域５９６を生成する。
【００５０】
第１の５９２領域及び第２の５９４領域は、同じ材料で形成され得、デバイスの生成は架橋または他の材料改変（適切な形状及び厚さを形成する以外）をともなわないが、機械的特性をさらに調整するために適切な改変を組み入れることができることが理解されよう。
【００５１】
上記のように、本明細書に開示され、図２〜４Ｂ及び９Ａ〜Ｃについて図示されるデバイスは、様々な形状を含むことができる。例えば、図１０Ａは組織マトリックスの側面図ならびにコラーゲン密度、機械的特性及び／または架橋のバリエーションを有する組織マトリックスを形成するための方法である。図１０Ｂは、図１０Ａのマトリックスを使用して製造された組織マトリックスの側面図である。
【００５２】
デバイス１０９０及び１０９０’は、様々な部位に移植するように構成されている、円形もしくは球形（または同様の３Ｄ構造）を含むことができる。さらに、デバイスは、第１の領域１０９２及び第２の領域１０９４を含むことができ、ここでは、第１の領域は、力１０９３を加える際に圧縮することができる、より大きな体積または面積を有する。
【００５３】
さらに、デバイス１０９０は、力１０９３を加えることによって圧縮し、図２〜４Ｂのデバイスについて記載されるように架橋して、より高密度且つ圧縮抵抗性である架橋されたセクション１０９６を有する、最終的なデバイス１０９０’を製造することができる。あるいは、デバイス１０９０を突き出ている領域１０９２に移植することができ、図１０Ｃのデバイスのように、移植の際に圧縮することができる。
【００５４】
より高密度の領域を生成するために圧縮力を与えることに加えて、架橋と併せて張力を使用することができる。例えば、図１１Ａ〜Ｄは、コラーゲン密度、機械的特性及び／または架橋のバリエーションを有する組織マトリックスを製造するためのさらなる方法を図示する。
【００５５】
示すように、より高密度の領域を有するデバイスを製造するために、組織マトリックスまたは他のスキャフォールド１１００を選択することができる（図１１Ａ）。選択される領域１１０８でコラーゲン線維密度を増大させるために、張力１１０４を加えて、中間材料１１００’を製造することができる（図１１Ｂ）。
【００５６】
続いて、張力を解除する前に圧縮力１１１０を加えることができ（図１１Ｃ）、それによってより高密度の領域を維持し、放射線１１２０を与えることによって、または別の適切な方法によって、架橋を行うことができる（図１１Ｄ）。
【００５７】
最終製品の包装の一部を形成する無菌遮蔽物中に材料が存在する間に、圧縮力１１１０を加えることができることに留意されたい。したがって、汚染の危険を冒さずに材料を架橋することができる。
【００５８】
図２〜３Ｂのデバイスは、より低密度の領域のマトリックス内に間隔をおいて配置されたより高密度の領域をともなって図示されるが、その逆が当てはまる可能性がある（すなわち、より高密度の領域のマトリックス内でより低密度の領域を形成することができる）ことも認識されるであろう。さらに、様々な領域の形状及び間隔のバリエーションを生成することができる。
【００５９】
さらに、図３Ａ〜３Ｂの方法は、領域５０の厚さＨ１を超える厚さＨ２を有するとして領域９０を図示するが、これは、そうである必要はない。例えば、デバイス４０は、最終的なデバイスが、圧縮後により薄くなってより高い密度をもたらすより高密度の領域６０を有するように、比較的一定の厚さを用いて使用することができる。
【００６０】
組織製品の製造方法
組織製品の製造方法を図２〜４Ｂで図示される材料について記載してきた。以下の説明は、図１Ａ〜１Ｂで図示される製品を製造するための適切な方法に関して、さらなる詳細を提供する。一実施形態では、方法は、多孔性及び哺乳類の軟組織に移植された場合に細胞内殖を可能にするように選択される微細構造を有するコラーゲンベースの細胞外マトリックス材料を含む第１の生体適合性材料を選択すること；第１の生体適合性材料の密度及び圧縮係数より大きい密度及び圧縮係数を有する第２の生体適合性材料を選択すること；ならびに第１の生体適合性材料と第２の生体適合性材料から複合材料を形成することを含む。
【００６１】
１つの方法では、第２の材料を、前もって形成された格子、例えば、合成ポリウレタンまたは他の許容可能な材料の格子中に形成することができ、これを、随意に、その特性を制御するために架橋または他の方法によって処理することできる。その後に、次いで、例えば前もって形成された格子中の流動性組成物を凍結乾燥または安定化することによって、前もって形成された格子中に第１の材料を直接形成することができる。
【００６２】
第２の方法では、第２の材料を液体懸濁液として提供することができ、第１の材料をビーズまたは粒子として提供することができる。第１の材料を液体懸濁液に入れることができ、この混合物を凍結乾燥して、第２の材料の格子中に包埋された第１の材料の断片を有する材料を製造することができる。
【００６３】
第３の方法では、第１の材料を液体懸濁液として提供することができ、第２の材料をビーズまたは粒子として提供することができる。第２の材料を液体懸濁液に入れることができ、この混合物を凍結乾燥して、第１の材料の格子中に包埋された第２の材料の断片を有する材料を製造することができる。
【００６４】
第４の方法では、第２の材料をビーズまたはロッドの凍結した懸濁液として提供することができ、これを第１の材料の線維で被覆することができる。組成物を所望の形状に圧縮することができ、圧縮した混合物を凍結乾燥することができる。
【００６５】
第５の方法では、第１の材料を、前もって形成された発泡体または組織マトリックスとして提供することができる。第２の材料を、第２の材料中に機械的に包埋され得る線維、支柱またはコイルとして提供することができる。
【００６６】
最後に、第６の方法では、第１の材料及び第２の材料を凍結ビーズとして提供することができ、材料を制御されたまたは無秩序な積み重ね方で混合し、凍結乾燥して、最終的な材料を形成することができる。
【００６７】
従来の凍結乾燥処理及び／または脱水熱処理を使用して、本明細書に記載の材料を乾燥して、小程度の架橋を提供することができる。さらにまたはあるいは、光架橋、放射線架橋及び／または化学的架橋を使用して材料を架橋することができる。
【００６８】
代替の実施形態及び組織製品の製造方法：組織成分の製造
上述したように、開示される組織製品は、所望の機械的及び生物学的特性を有するように処理されている様々な異なる合成的または生物学的材料を使用して製造することができる。
【００６９】
細胞外組織マトリックス（ＥＣＭ）ベースの材料から製品を形成することができる。例えば、骨組織（ｔｉｓｓｕｅ  ｂｏｎｅ）、皮膚、脂肪組織、真皮、腸、膀胱、腱、靱帯、筋肉、筋膜、脈管、神経、血管、肝臓、心臓、肺、腎臓及び軟骨組織のＥＣＭを使用して、組織製品の一部を形成することができる。真皮、小腸ベース、骨ベース及び脂肪組織のＥＣＭを含めた組織製品（例えば、処理されたＥＣＭ材料）を得るための様々な方法が当技術分野で知られている。適切なＥＣＭ材料は、例えば、Ｃｏｎｎｏｒらに対する米国特許公開第ＵＳ２０１２０３１０３６７Ａ１号及びＳｕｎらに対する米国特許第８，７３５，０５４号に記載されている。
【００７０】
脂肪組織を製造するための例示的方法はＵＳ２０１２／０３１０３６７Ａ１に記載されている。その中に記載されている方法は、上記のように、他の材料と合体させるための、または処理された、脂肪組織ベースの製品を製造するのに使用することができる。この方法は、一般に、脂肪組織を得ること；脂肪組織を機械的に処理して小片を得ること；さらに組織を処理して、実質的にすべての細胞性物質及び／または脂質を組織から除去すること；組織を溶液に再懸濁して、多孔性マトリックスまたはスポンジを形成すること；ならびに組織を架橋して安定な３次元構造を生成することを含む。
【００７１】
細胞性成分の除去を支援するため及び流動性の塊を生成するために、最初に組織を処理して小片を生成する。この材料を切断、粉砕、ブレンドまたは別の方法で機械的に処理して、組織の大きさを小さくする、及び／またはパテもしくは流動性材料を形成する。任意の反復性の切断、粉砕またはブレンド法を使用して、脂肪組織を処理することができる。例えば、一実施形態では、最初に組織を比較的小さな断片（例えば、約２ｃｍ×２ｃｍ）に切断する。次いで、この断片を水性懸濁液に入れ、これを、ブレードグラインダーまたは同様の器具で処理する。
【００７２】
処理後に、次いで、組織を処理して細胞性成分及び脂質を除去する。材料を洗浄することによって細胞性物質を除去することができる。例えば、いくつかの実施形態では、水または別の溶媒で材料をさらに希釈する。次いで、希釈した材料を遠心分離すると、遊離脂質及び細胞残屑は上部に流動するが、細胞外マトリックスタンパク質はペレットとして沈澱する。次いで、このタンパク質ペレットを再懸濁することができ、十分な量の脂質及び細胞性物質が除去されるまで、洗浄及び遠心分離を繰り返すことができる。ある場合には、実質的にすべての細胞性物質及び／または脂質が除去されるまで、この工程を繰り返す。
【００７３】
洗浄ステップの間、前及び／または後に、さらなる溶液または試薬を使用して材料を処理することができる。例えば、酵素、界面活性剤及び／または他の薬剤を１または複数のステップで使用して、細胞性物質もしくは脂質を除去する、抗原性物質を除去する、及び／または材料の細菌もしくは他のバイオバーデンを低減することができる。例えば、細胞及び脂質の除去を支援するために、ドデシル硫酸ナトリウムまたはＴＲＩＳなどの界面活性剤を使用する１または複数の洗浄ステップを含めることができる。さらに、核の物質、異種源からの抗原及び／またはウイルスの破壊を確実にするために、リパーゼ、ＤＮＡｓｅ、ＲＮＡｓｅ、アルファ−ガラクトシダーゼまたは他の酵素などの酵素を使用することができる。さらに、細胞性物質を除去するのを、及び細菌または感染性の可能性がある他の因子を破壊するのに役立てるために、過酢酸溶液及び／または過酸化物を使用することができる。
【００７４】
細胞性成分の除去後に、次いで、多孔性またはスポンジ様材料に材料を形成することができる。一般に、細胞外マトリックスを最初に水性溶媒に再懸濁する。材料が、注ぐことが可能な液体塊（ｌｉｑｕｉｄ  ｍａｓｓ）を形成するのを可能にするために、十分な量の溶媒を使用する。加える水の量は、最終的な材料の所望される多孔性に基づいて変動し得る。ある場合には、再懸濁した細胞外マトリックスを、粉砕、切断、ブレンドまたは他の方法によって、１回またはさらに複数回、機械的に処理することができ、処理した材料を１回または複数回遠心分離及び再懸濁して、（必要に応じて）さらに細胞性物質もしくは脂質を除去することができ、及び／または細胞外マトリックス懸濁液の粘性を制御することができる。
【００７５】
任意のさらなる洗浄及び粉砕ステップが一旦完了すれば、再懸濁した材料を容器または型に入れて、多孔性、スポンジ様製品を形成する。一般に、多孔性またはスポンジ様材料は、３次元マトリックスを多孔性構造に残すように材料を乾燥することによって形成される。いくつかの実施形態では、材料を凍結乾燥する。凍結乾燥は、一般に、型の形状に合致する３次元構造の生成を可能にし得る。ある場合には、材料を再懸濁することができ、上記のように、その懸濁液を他の材料と混合することができ、その混合物を乾燥して、脂肪成分を安定な構造に安定化し、その構造を形成することができる。例えば、一実施形態では、組織製品はポリウレタン発泡体を含み、脂肪マトリックス懸濁液をその発泡体に注ぎ、乾燥して、最終的な組織製品を形成する。
【００７６】
いくつかの実施形態では、材料を架橋する。いくつかの実施形態では、凍結乾燥後に材料を架橋する。しかし、凍結乾燥処理の前または間に材料を架橋することもできる。架橋は、様々な方法で行うことができる。一実施形態では、架橋は、グルタルアルデヒド、ゲネピン（ｇｅｎｅｐｉｎ）、カルボジイミド及びジイソシアネートなどの架橋剤と材料を接触させることによって達成される。さらに、架橋は、材料を加熱することによって行うことができる。例えば、いくつかの実施形態では、７０℃〜１２０℃の間に、または８０℃〜１１０℃の間に、または約１００℃に、または指定の範囲の間の任意の値に、減圧または真空下で材料を加熱することができる。さらに、紫外線照射、ガンマ線照射及び／または電子ビーム照射を含めた他の架橋方法を使用して、開示する製品のうちのいずれかを製造することができる。さらに、真空は必要でないが、架橋時間を短くすることができる。さらに、マトリックスタンパク質の融解が起こらない且つ／または十分な時間が架橋に与えられる限り、より低いまたはより高い温度を使用することができる。
【００７７】
組織製品の使用
様々な異なる解剖学的部位を治療するのに、本明細書に記載の組織製品を使用することができる。例えば、全体を通して論じられるように、本開示の組織製品は、圧縮を防止し、それによって、移植後の移植体の体積の維持を可能にする、複合材料から製造される。したがって、本組織製品は、ある種の組織部位に移植された場合に、他の組織型から製造される材料と比べて優れた再性能力を提供すると考えられる。ある場合には、主にまたはかなり脂肪組織である組織部位に組織製品を移植することができる。ある場合には、組織部位は、（例えば、切除された組織の増大、置換、または移植体周囲の配置の目的で）乳房を含むことができる。
【００７８】
さらに、組織体積の維持から恩恵を受ける任意の他の部位を選択することができる。例えば、体積の維持が所望される顔、殿部、腹部、股関節部、大腿または任意の他の部位の再建的なまたは美容的用途に組織製品を使用することができる。これらの部位のうちのいずれかでは、本組織を使用して、しわ、たるみまたは望まれない形状を低減または除去することができる。
【００７９】
胸部組織の置換または増大に使用される場合は、本組織は、他の組織製品を超える利点を提供することができる。例えば、本明細書中に開示された材料は、例えば乳腺腫瘍摘出術後に脂肪組織の内殖が自然な感じの胸部組織の再生を支持するのを可能にする成分の組み合わせで形成することができる。さらに、複合構造物は、経時的に移植体組織の体積維持を可能にするが、いくつかの他の現在入手可能な材料は、移植後の過度の体積喪失に悩まされており、それによって、最適に満たない美的な結果がもたらされる。
【実施例】
【００８０】
この研究は、３種の移植体：（１）処理された脂肪組織（ＡＴ）、（２）ポリウレタンスポンジ（ＰＵ）；及び（３）ＡＴで包埋したＰＵ（ＰＡＴ）のインビボ（皮下）での応答を調べるために行った。
【００８１】
ＡＴは、米国特許公開第２０１２／０３１０３６７Ａ１号（５頁の実施例を参照されたい）に記載されているように調製した。ヒト脂肪組織は、米国組織バンク協会（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｂａｎｋｓ）（ＡＡＴＢ）のすべての要求に従って、死体源から得た。真皮及び脂肪を含む全層試料は、ＡＡＴＢ公認の組織バンクから得た。脂肪組織を真皮から機械的に切除し、緩衝食塩水に入れ、処理するまで４℃で保った。
【００８２】
様々な厚さの脂肪組織を小片に切断した。ブレードグラインダーを使用して組織を細かく切り刻み、すべての脂肪断片が細かく切り刻まれるまで、この粉砕工程を繰り返した。
【００８３】
細かく切り刻んだ脂肪を水に懸濁し、遠心分離して、細胞残屑及び脂質からＡＴマトリックスを分離した。すべての材料が処理されるまで、遠心分離及びペレット化を繰り返した。すべてのＥＣＭペレットを一緒にして、水に再懸濁し、遠心分離によって３回洗浄した。
【００８４】
洗浄した脂肪ＥＣＭを水に再懸濁し、上記のように、遠心分離を使用して、この懸濁液を洗浄した。最終的なＥＣＭ懸濁液を遠心分離して、最終的な固く圧縮されたＥＣＭペレットを生成した。洗浄したＥＣＭペレットをゆっくりと水に再懸濁した。スラリーを型の中に分散させ、凍結乾燥し、続いて８０℃で２４時間ＤＨＴを行って、ＡＴを架橋し、安定化した。
【００８５】
凍結乾燥及びＤＨＴより前に、インチ当たり１０個の孔の市販のポリウレタン発泡体（ＰＵ）（ＵＦＰ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、３３１  Ｐａｔｔｅｒｓｏｎ  Ａｖｅｎｕｅ，Ｇｒａｎｄ  Ｒａｐｉｄｓ，ＭＩ  ４９５１２、部品番号８４６７）にＡＴのスラリーを浸潤させたことを除いては、ＡＴと同じ方法でＰＡＴを調製した。ＰＵスポンジを凍結乾燥し、ＤＨＴ処理して、ＰＡＴと同じ状態に確実に置いた。
【００８６】
本研究では、上記で特定した各材料のうちの１つを３匹の無胸腺ラットに皮下移植した。移植位置が移植の結果に影響を及ぼす可能性を説明するために、各移植型の位置をラットの間で変化させた。２８日目に移植体を除去した。評価は、おおよその体積を求めるための外植体の重量測定及び肉眼的及び組織学的観察から成っていた。
【００８７】
図５Ａは、以下の実施例で記載する、移植より前の処理された脂肪組織のヘマトキシリン−エオジン（Ｈ＆Ｅ）染色したセクションである。図５Ｂは、以下の実施例で記載する、移植より前の処理された脂肪組織／ポリウレタン複合材料のＨ＆Ｅ染色したセクションである。図６Ａ〜６Ｂは、以下の実施例で記載する、外植後の処理された脂肪組織のＨ＆Ｅ染色したセクションである。図７Ａ〜７Ｂは、以下の実施例で記載する、外植後のポリウレタン材料のＨ＆Ｅ染色したセクションである。図８Ａ〜８Ｂは、以下の実施例で記載する、外植後の処理された脂肪組織／ポリウレタン複合材料のＨ＆Ｅ染色したセクションである。
【００８８】
この結果によって、ＰＡＴはその体積の大部分を維持するが、ＡＴはその体積のおよそ半分を失うことが示された。組織学的検査によって、ＰＡＴ内のＡＴは移植前のその構造を保持するが、ＡＴ単独は開放性が低下する傾向がある（体積喪失を示す）ことが示された。ＳＭＥ推定によるＡＴに関する脂肪細胞の沈着は、３つの外植体の研究について４０〜８０％を超える間に及んだ。ＰＡＴに関する脂肪細胞の沈着は、３つの外植体について１０〜２０％の間であると推定された。ＰＡＴに関して沈着がより少ないのは、ＰＡＴの全体的な保持される厚さ及び体積がより大きい（これは、さらなる浸潤深度を必要とすると思われる）ことによって、部分的に説明することができる。最後に、ＰＡＴ内のＡＴは移植体への宿主結合組織の浸潤を防止した。この結合組織の浸潤は、ＰＵ単独の外植体の大部分で観察された。
【００８９】
外植後に、ＰＵ群及びＰＡＴ群は、ＡＴ群よりも有意に大きいと思われた。ＰＵ外植体及びＰＡＴ外植体の重量は、ＡＴ外植体の重量のおよそ２倍あった。移植体の最初の体積は、これらが０．８×０．８×１．２ｃｍの寸法を有していたので、およそ１．１５ｃｍ３であった。体液をともなう組織の密度がおよそ１ｇ／ｃｍ３であるので、グラムでの重量はおおよその体積に近い。したがって、ＰＡＴ群及びＰＵ群は、ＡＴと比較してそれらの体積を維持した。ＡＴ外植体は最も柔らかい感触を有しており、これは、ＡＴが移植より前により柔らかいことに基づいて予測されることである。ＰＵ外植体はＡＴよりもかなり硬く、また、ＰＡＴよりも硬かった。
【００９０】
ＡＴ群は、脂肪細胞沈着のパーセンテージが最も高かった。ＰＵの組織学的検査によって、３つすべての外植体について、移植体へのいくらかの筋肉浸潤が示された。この筋肉浸潤は、ＰＡＴまたはＡＴについては観察されなかった。ＰＵはまた、マクロ多孔性開放構造に予想される、外植体全体にわたる宿主結合組織の浸潤を有していた。ＰＵとＡＴの両方の端部への脂肪細胞の沈着があり、ＰＵではいくつかの外植体は他のものよりも多く示した。例えば、３つのＰＡＴ移植体の中の最も頑強な脂肪細胞浸潤を有するＰＡＴ外植体を示す図７を参照されたい。ＰＡＴ群は、ＡＴ組織が宿主結合組織の浸潤をブロックしたように思われるという点において、ＰＵと異なっていた。ＡＴ外植体は、脂肪組織が浸潤しなかった領域で移植体のコラーゲン構造の崩壊を示す。ＰＡＴのコラーゲン構造は維持されるように思われる。
【００９１】
全体的に見て、ＰＵと処理された脂肪組織の組み合わせは、これが、（ＡＴ産物のように）脂肪組織の内殖を可能にし、（ＰＵと異なって）結合組織の浸潤をブロックし、処理された脂肪組織単独よりも良好に移植体の体積を維持するという点において利点を提供する。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図９Ｃ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１１Ｃ】
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【図１１Ｄ】
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【国際調査報告】
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