(57)【要約】本発明は、一連の完全組み換え型多量体化形態の免疫グロブリンＦｃに関し、これにより、免疫細胞受容体に多価免疫グロブリンＦｃを提示する。融合タンパク質は、ストラドマーと呼ばれる、ホモ二量体画分及び高次多量体画分の両方として存在する。本発明は、多量体化を増加させ、補体に優先的に結合し、かつ疾患の治療及び予防において有用である、ストラドマーに関する。本発明は、１つ以上のヒト免疫グロブリンＦｃドメインと、１つ以上の多量体化ドメインとを含む生物活性融合タンパク質生物模倣型分子に関し、融合タンパク質のＦｃドメイン部分は、１つ以上の点変異を含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）１つ以上の点変異を有する少なくとも１つのＩｇＧ１  Ｆｃドメインであって、前記１つ以上の点変異が、前記ＩｇＧ１  Ｆｃドメインの２６７、２６８、及び／または３２４位のうちの少なくとも１つに対応する、ＩｇＧ１  Ｆｃドメインと、
（ｂ）少なくとも１つの多量体化ドメインと、を含む、ストラドマー（ｓｔｒａｄｏｍｅｒ）単位。
【請求項２】
前記Ｆｃドメインが、２６７、２６８、及び３２４位に点変異を含む、請求項１に記載のストラドマー単位。
【請求項３】
前記Ｆｃドメインが、点変異Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔを含む、請求項１に記載のストラドマー単位。
【請求項４】
前記Ｆｃドメインが、２９７位に点変異を更に含む、請求項１に記載のストラドマー単位。
【請求項５】
前記Ｆｃドメインが、点変異Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｎ２９７Ａ、及びＳ３２４Ｔを含む、請求項４に記載のストラドマー単位。
【請求項６】
前記Ｆｃドメインが、２３４及び２３５位に点変異を更に含む、請求項１に記載のストラドマー単位。
【請求項７】
前記Ｆｃドメインが、点変異Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔを含む、請求項６に記載のストラドマー単位。
【請求項８】
前記Ｆｃドメインが、２３４、２３５、及び２９７位に点変異を更に含む、請求項１に記載のストラドマー単位。
【請求項９】
前記Ｆｃドメインが、点変異Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｎ２９７Ａ、及びＳ３２４Ｔを含む、請求項８に記載のストラドマー単位。
【請求項１０】
前記Ｆｃドメインが、２３３、２３４、及び２３５位に点変異を、ならびに２３６位にアミノ酸の欠失を更に含む、請求項１に記載のストラドマー単位。
【請求項１１】
前記Ｆｃドメインが、点変異Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔを含む、請求項１０に記載のストラドマー単位。
【請求項１２】
前記Ｆｃドメインが、２３３、２３４、２３５、及び２９７位に点変異を、ならびに２３６位にアミノ酸の欠失を更に含む、請求項１に記載のストラドマー単位。
【請求項１３】
前記Ｆｃドメインが、点変異Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｎ２９７Ａ、及びＳ３２４Ｔを含む、請求項１２に記載のストラドマー単位。
【請求項１４】
前記Ｆｃドメインが、２６５位に点変異を更に含む、請求項１に記載のストラドマー単位。
【請求項１５】
前記Ｆｃドメインが、点変異Ｄ２６５Ａ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔを含む、請求項１４に記載のストラドマー単位。
【請求項１６】
前記Ｆｃドメインが、２３８位に点変異を更に含む、請求項１に記載のストラドマー単位。
【請求項１７】
前記Ｆｃドメインが、点変異Ｐ２３８Ｄ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔを含む、請求項１６に記載のストラドマー単位。
【請求項１８】
前記Ｆｃドメインが、２３８及び２９７位に点変異を更に含む、請求項１に記載のストラドマー単位。
【請求項１９】
前記Ｆｃドメインが、点変異Ｐ２３８Ｄ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｎ２９７Ａ、及びＳ３２４Ｔを含む、請求項１８に記載のストラドマー単位。
【請求項２０】
前記Ｆｃドメインが、２３６位に点変異を更に含む、請求項１に記載のストラドマー単位。
【請求項２１】
前記Ｆｃドメインが、点変異Ｇ２３６Ｒ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔを含む、請求項２０に記載のストラドマー単位。
【請求項２２】
前記Ｆｃドメインが、２３３及び２３６位に点変異を更に含む、請求項１に記載のストラドマー単位。
【請求項２３】
前記Ｆｃドメインが、点変異Ｅ２３３Ｐ、Ｇ２３６Ｒ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔを含む、請求項２２に記載のストラドマー単位。
【請求項２４】
前記Ｆｃドメインが、２３３、２３６、及び３２８位に点変異を更に含む、請求項１に記載のストラドマー単位。
【請求項２５】
前記Ｆｃドメインが、点変異Ｅ２３３Ｐ、Ｇ２３６Ｒ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、及びＬ３２８Ｆを含む、請求項２４に記載のストラドマー単位。
【請求項２６】
前記Ｆｃドメインが、２３８及び２６５位に点変異を更に含む、請求項１に記載のストラドマー単位。
【請求項２７】
前記Ｆｃドメインが、点変異Ｐ２３８Ｄ、Ｄ２６５Ｇ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔを含む、請求項２６に記載のストラドマー単位。
【請求項２８】
前記Ｆｃドメインが、点変異Ｐ２３８Ｄ、Ｄ２６５Ｗ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔを含む、請求項２６に記載のストラドマー単位。
【請求項２９】
前記Ｆｃドメインが、３２８位に点変異を更に含む、請求項１に記載のストラドマー単位。
【請求項３０】
前記Ｆｃドメインが、点変異Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、及びＬ３２８Ｆを含む、請求項２９に記載のストラドマー単位。
【請求項３１】
前記Ｆｃドメインが、２３３、２３４、２３５、２９７、及び３２８位に点変異を、ならびに２３６位にアミノ酸の欠失を更に含む、請求項１に記載のストラドマー単位。
【請求項３２】
前記Ｆｃドメインが、点変異Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｎ２９７Ａ、Ｓ３２４Ｔ、及びＬ３２８Ｆを含む、請求項３１に記載のストラドマー単位。
【請求項３３】
前記Ｆｃドメインが、２３３、２６８、及び／または３２４位に点変異を更に含む、請求項１に記載のストラドマー単位。
【請求項３４】
前記Ｆｃドメインが、点変異Ｅ２３３Ｐ、Ｈ２６８Ｆ、及び／またはＳ３２４Ｔを含む、請求項３３に記載のストラドマー単位。
【請求項３５】
前記Ｆｃドメインが、２９７位に点変異を更に含む、請求項３３または３４に記載のストラドマー単位。
【請求項３６】
前記２９７位の点変異が、Ｎ２９７ＡまたはＮ２９７Ｑ以外の点変異である、請求項３５に記載のストラドマー単位。
【請求項３７】
前記Ｆｃドメインが、２９９位に点変異を更に含み、前記点変異が、Ｔ２９９Ｓ及びＴ２９９Ｃ以外の点変異である、請求項３３または３４に記載のストラドマー単位。
【請求項３８】
前記Ｆｃドメインが、点変異Ｔ２９９Ａを更に含む、請求項３３または３４に記載のストラドマー単位。
【請求項３９】
前記Ｆｃドメインが、点変異Ｅ２３３Ｐ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔと、点変異Ｓ２６７Ｅ以外の２６７位の点変異と、を含む、請求項３３に記載のストラドマー単位。
【請求項４０】
前記Ｆｃドメインが、２９７位に点変異を更に含む、請求項３３または３９に記載のストラドマー単位。
【請求項４１】
前記２９７位の点変異が、Ｎ２９７ＡまたはＮ２９７Ｑ以外の点変異である、請求項４０に記載のストラドマー単位。
【請求項４２】
前記Ｆｃドメインが、２９９位に点変異を更に含み、前記点変異が、Ｔ２９９Ｓ及びＴ２９９Ｃ以外の点変異である、請求項３９または４０に記載のストラドマー単位。
【請求項４３】
前記Ｆｃドメインが、点変異Ｔ２９９Ａを更に含む、請求項３９または４０に記載のストラドマー単位。
【請求項４４】
前記Ｆｃドメインが、２３３及び２３６位に点変異を更に含む、請求項１に記載のストラドマー単位。
【請求項４５】
前記Ｆｃドメインが、点変異Ｅ２３３Ｐ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔと、Ｓ２６７Ｅ以外の２６７位の点変異と、Ｇ２３６Ｒ以外の２３６位の点変異と、を含む、請求項４４に記載のストラドマー単位。
【請求項４６】
前記Ｆｃドメインが、２９７位に点変異を更に含む、請求項４４または４５に記載のストラドマー単位。
【請求項４７】
前記２９７位の点変異が、Ｎ２９７ＡまたはＮ２９７Ｑ以外の点変異である、請求項４６に記載のストラドマー単位。
【請求項４８】
前記Ｆｃドメインが、２９９位に点変異を更に含み、前記点変異が、Ｔ２９９Ｓ及びＴ２９９Ｃ以外の点変異である、請求項４５または４６に記載のストラドマー単位。
【請求項４９】
前記Ｆｃドメインが、点変異Ｔ２９９Ａを更に含む、請求項４５または４６に記載のストラドマー単位。
【請求項５０】
前記Ｆｃドメインが、以下、
ａ．２３３位、
ｂ．２３５位、
ｃ．２３６位、
ｄ．２６７位、
ｅ．２６８位、
ｆ．２９７位、
ｇ．２９９位、または
ｈ．３２４位のうちの３つ以上に点変異を更に含む、請求項１に記載のストラドマー単位。
【請求項５１】
前記Ｆｃドメインが、以下、
ａ．２３３位、
ｂ．２３５位（２３５Ｈを除く）、
ｃ．２３６位（２３６Ｒを除く）、
ｄ．２６７位（２６７Ｅを除く）、
ｅ．２６８位、
ｆ．２９７位（２９７Ａを除く）、もしくは代替的に２９９位、及び／または
ｇ．３２４位のうちの３つ以上に点変異を更に含む、請求項１に記載のストラドマー単位。
【請求項５２】
前記Ｆｃドメインが、ＩｇＧ１のＥＥＭまたはＤＥＬ多型のいずれかを含む、請求項１に記載のストラドマー単位。
【請求項５３】
前記Ｆｃドメインが、点変異Ｅ２３３Ｐ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔを含む、請求項１に記載のストラドマー単位。
【請求項５４】
前記Ｆｃドメインが、２９７位にＮ２９７ＡまたはＮ２９７Ｑ以外の点変異を更に含む、請求項５３に記載のストラドマー単位。
【請求項５５】
前記Ｆｃドメインが、２９９位に点変異を更に含む、請求項５３に記載のストラドマー単位。
【請求項５６】
前記Ｆｃドメインが、点変異Ｓ２９９Ａを更に含む、請求項５３に記載のストラドマー単位。
【請求項５７】
前記Ｆｃドメインが、点変異Ｅ２３３Ｐ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔと、Ｓ２６７Ｅではない２６７位の点変異と、を含む、請求項１に記載のストラドマー単位。
【請求項５８】
前記Ｆｃドメインが、２９７位にＮ２９７ＡまたはＮ２９７Ｑ以外の点変異を更に含む、請求項５７に記載のストラドマー単位。
【請求項５９】
前記Ｆｃドメインが、２９９位に点変異を更に含む、請求項５７に記載のストラドマー単位。
【請求項６０】
前記Ｆｃドメインが、点変異Ｓ２９９Ａを更に含む、請求項５７に記載のストラドマー単位。
【請求項６１】
前記Ｆｃドメインが、点変異Ｅ２３３Ｐ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔと、Ｓ２６７Ｅではない２６７位の点変異と、Ｇ２３６Ｒではない２３６位の点変異と、を含む、請求項１に記載のストラドマー単位。
【請求項６２】
前記Ｆｃドメインが、２９７位にＮ２９７ＡまたはＮ２９７Ｑ以外の点変異を更に含む、請求項６１に記載のストラドマー単位。
【請求項６３】
前記Ｆｃドメインが、２９９位に点変異を更に含む、請求項６１に記載のストラドマー単位。
【請求項６４】
前記Ｆｃドメインが、点変異Ｓ２９９Ａを更に含む、請求項６１に記載のストラドマー単位。
【請求項６５】
前記多量体化ドメインが、ＩｇＧ２ヒンジ、イソロイシンジッパー、及びＧＰＰドメインからなる群から選択され、前記ストラドマー単位を多量体化することができる、請求項１に記載のストラドマー単位。
【請求項６６】
ストラドマー単位であって、前記多量体化ドメインが、前記ストラドマー単位の多量体を形成する、請求項１に記載のストラドマー単位。
【請求項６７】
ストラドマー単位であって、前記ストラドマー単位の前記多量体が、高次多量体である、請求項６６に記載のストラドマー単位。
【請求項６８】
前記ストラドマー単位が、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、及び／またはＦｃγＲＩＩＩと比較して、補体への優先的結合を呈する、請求項１に記載のストラドマー単位。
【請求項６９】
前記ストラドマー単位が、低親和性Ｆｃγ受容体への低減した結合を呈する、請求項１に記載のストラドマー単位。
【請求項７０】
前記ストラドマー単位が、２９７、２９８、または２９９に変異を含み、Ｃ１ｑに結合し、ＣＤＣを阻害し、かつＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、及び／またはＦｃγＲＩＩＩへの結合を保持する、請求項１に記載のストラドマー単位。
【請求項７１】
前記ストラドマー単位が、２６７、２６８、及び／または３２４位のうちの１つ以上に点変異を含まない同一の構造のストラドマーと比較して、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及び／またはＦｃγＲＩＩＩへの低減した結合を呈する、請求項１に記載のストラドマー単位。
【請求項７２】
前記ストラドマーが、アミノからカルボキシ末端にかけて、リーダー配列と、ＩｇＧ１ヒンジ、ＩｇＧ１ＣＨ２、及びＩｇＧ１  ＣＨ３を含むＦｃドメインと、ＩｇＧ２ヒンジと、を含む、請求項１に記載のストラドマー単位。
【請求項７３】
前記ストラドマーが、配列番号１０〜１６、１８〜６３、及び６５〜７７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項７２に記載のストラドマー単位。
【請求項７４】
前記ストラドマーが、アミノからカルボキシ末端にかけて、リーダー配列と、ＩｇＧ２ヒンジと、ＩｇＧ１ヒンジと、ＩｇＧ１  ＣＨ２及びＩｇＧ１  ＣＨ３を含むＦｃドメインと、を含む、請求項１に記載のストラドマー単位。
【請求項７５】
前記ストラドマーが、配列番号１７及び６４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項７４に記載のストラドマー単位。
【請求項７６】
請求項１〜７５のいずれか１項に従う２つ以上のストラドマー単位を含む、クラスターストラドマー。
【請求項７７】
補体媒介疾患、抗体媒介疾患、自己免疫疾患、炎症性疾患、アレルギー、または血液障害を治療または予防する方法であって、治療または予防を必要とする対象に請求項１に記載のストラドマーを投与することを含む、方法。
【請求項７８】
前記抗体媒介疾患が、グッドパスチャー病；臓器移植拒絶；視神経脊髄炎；神経性筋強直症；辺縁系脳炎；モルヴァン症候群；重症筋無力症；ランバート・イートン筋無力症症候群；自律神経性ニューロパチー；アルツハイマー病；アテローム動脈硬化症；パーキンソン病；全身硬直症候群または過剰驚愕症；再発性自然流産；ヒューズ症候群；全身性エリテマトーデス；自己免疫性小脳性運動失調症；強皮症、シェーグレン症候群を含む結合組織病；多発性筋炎；リウマチ性関節炎；結節性多発性動脈炎；ＣＲＥＳＴ症候群；心内膜炎；橋本甲状腺炎；混合性結合組織病；チャネル病；小児自己免疫性溶連菌関連性精神神経障害（ＰＡＮＤＡＳ）；Ｎ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸受容体、特に、ＮＲ１、コンタクチン関連タンパク質２、ＡＭＰＡＲ、ＧｌｕＲ１／ＧｌｕＲ２、グルタミン酸デカルボキシラーゼ、ＧｌｙＲアルファ１ａ、アセチルコリン受容体、ＶＧＣＣ  Ｐ／Ｑ型、ＶＧＫＣ、ＭｕＳＫ、ＧＡＢＡ（Ｂ）Ｒに対する抗体に関連する臨床病態；アクアポリン−４；及び天疱瘡からなる群から選択される、請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
前記自己免疫疾患が、リウマチ性関節炎である、請求項７７に記載の方法。
【請求項８０】
前記自己免疫疾患が、自己免疫関連視力低下または難聴である、請求項７７に記載の方法。
【請求項８１】
前記補体媒介疾患が、重症筋無力症；溶血性尿毒症症候群（ＨＵＳ）；非定型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）；発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）；視神経脊髄炎；同種移植片の抗体媒介拒絶；膜性腎症を含む腎症疾患；ならびに膜性増殖性糸球体腎炎（ＭＰＧＮ）及びループス腎炎を含む腎炎疾患からなる群から選択される、請求項７７に記載の方法。
【請求項８２】
前記血液障害が、鎌状赤血球症である、請求項７７に記載の方法。
【請求項８３】
前記ストラドマーが、静脈内に、皮下に、経口に、腹腔内に、舌下に、頬側に、経皮に、真皮下埋め込みによって、または筋肉内に投与される、請求項７７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１５年７月２４日に出願された米国仮出願第６２／１９６，４７８号に対する優先権を主張し、その内容全体が、参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
電子的に提出されたテキストファイルの説明
本明細書とともに電子的に提出されたテキストファイルの内容全体が、参照により本明細書に組み込まれる：配列表のコンピュータ可読形式のコピー（ファイル名：ＧＬＩＫ＿０１５＿０１ＷＯ＿ＳｅｑＬｉｓｔ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ、記録日付：２０１６年７月２２日、ファイルサイズ１９３キロバイト）。
【０００３】
本発明は一般に、免疫学、自己免疫、炎症、及び腫瘍免疫学の分野に関する。より具体的には、本発明は、改変されたＦｃ受容体結合、及び補体系の要素への保持または改良された結合を呈する免疫グロブリンＦｃドメインを含む、生物活性生物模倣型分子、そのような生物模倣物を含む組成物、ならびにそのような生物模倣物を作製し、使用する方法に関する。本発明は更に、補体媒介疾患、自己免疫疾患、炎症性疾患、血液障害、及び癌などの病理学的病態の治療または予防に関する。
【背景技術】
【０００４】
補体系は、標的細胞溶解及び抗原の食作用に関与する免疫系の一部分である。現在既知である３つの主要な補体経路には、古典的経路、代替経路、及びレクチン結合経路が存在する。古典的補体経路は、タンパク質Ｃ１ｑが、インタクト免疫グロブリンＩｇＭの１つ以上の分子、またはインタクト免疫グロブリンＩｇＧ１、ＩｇＧ２、もしくはＩｇＧ３の少なくとも２つの分子に結合すると活性化される（Ｊａｎｅｗａｙ’ｓ  Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ，８ｔｈ  Ｅｄ．，Ｍｕｒｐｈｙ  ｅｄ．，Ｇａｒｌａｎｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０１２，Ｃｈａｐｔｅｒ１０）。補体活性化は、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）をもたらす。モノクローナル抗体のＦｃ領域内の改変は、補体結合の親和性を改良または減少させることが示されている（Ｍｏｏｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，ＭＡｂｓ．２（２）：１８１−９（２０１０）。しかしながら、この研究はモノクローナル抗体の文脈において行われているために、少なくとも部分的にはＦａｂの標的特異性に依存したものであり、結合力の文脈を有さないものであった。
【０００５】
過剰な補体活性化及び／または沈着は有害であり得、重症筋無力症、溶血性尿毒症症候群（ＨＵＳ）、及び発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）を含む多くの疾患と関連付けられている。脳の老化は、補体成分Ｃ１ｑのレベルの劇的な増加と関連付けられている（Ｓｔｅｐｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，１４Ａｕｇｕｓｔ２０１３，３３（３３）：１３４６０−１３４７４）。補体系は、アセチルコリン受容体抗体関連重症筋無力症の病理発生に深く関与している（Ｔｕｚｕｎ  ａｎｄ  Ｃｈｒｉｓｔａｄｏｓｓ，Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ  Ｒｅｖ．２０１３Ｊｕｌ；１２（９）：９０４−１１．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ａｕｔｒｅｖ．２０１３．０３．００３）。免疫学的、遺伝学的、及びタンパク質生化学的研究からのいくつかの発見は、補体系が加齢黄斑変性の病因において重要な役割を果たすことを示している（Ｗｅｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｔｓｃｈ  Ａｒｚｔｅｂｌ  Ｉｎｔ．，２０１４Ｆｅｂ；１１１（８）：１３３−１３８．ｄｏｉ：１０．３２３８／ａｒｚｔｅｂｌ．２０１４．０１３３）。補体の古典的経路及び代替経路が、リウマチ性関節炎の間、及びリウマチ性関節炎の動物モデルにおいて病理学的に活性化されるという、強力な証拠が存在する（Ｏｋｒｏｊ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ  Ｍｅｄ．２００７；３９（７）：５１７−３０）。
【０００６】
古典的経路、改変経路、及びレクチン経路は連続的様式で活性化され、３つ全ての経路が全身性疾患に関与する。補体系の活性化は、全身性自己免疫疾患の病理発生に関与している。古典的経路を介した活性化は、長い間、クリオグロブリン血症性血管炎及び全身性エリテマトーデスなどの免疫複合体媒介疾患において認識されている（Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ，２００９；ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｊａｕｔ．２００９．１１．０１４）。改変経路及びレクチン経路の両方を通した補体活性化は、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病腎症及びＩｇＡ腎症を有する患者において見出される（Ｈｉｓａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ  Ｊ  Ｋｉｄｎｅｙ  Ｄｉｓ２００５；４５：２９５ｅ３０２）。成人ネフローゼ症候群の最も一般的な原因の１つである膜性腎症における補体の重要性は、十分に説明されている。膜性腎症は、糸球体上皮下免疫沈着物によって特徴付けられる。膜性腎症の実験的モデルであるヘイマン腎炎における研究は、これらの沈着物が補体を局所的に活性化して、有足細胞損傷、細胞骨格再組織化の極致、スリット膜の喪失、及びタンパク尿を引き起こすことを実証している（Ｂｅｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  Ｒｏｌｅ  ｏｆ  Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｉｎ  Ｍｅｍｂｒａｎｏｕｓ  Ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ．Ｓｅｍｉｎ  Ｎｅｐｈｒｏｌ２０１３Ｎｏｖ；３３（６）：５３１−４２）。
【０００７】
補体の活性化は非常に複雑なプロセスであり、プロセスが最初に理解されたと考えられてから数十年後も、依然としてカスケードの新たな成分が発見されている。古典的経路の補体カスケードの第１のステップは、抗体へのＣ１ｑの結合である。（Ｎａｔｕｒｅ．１９８８Ａｐｒ２１；３３２（６１６６）：７３８−４０；Ｔｈｅ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｓｉｔｅ  ｆｏｒ  Ｃ１ｑ  ｏｎ  ＩｇＧ．Ｄｕｎｃａｎ  ＡＲ，Ｗｉｎｔｅｒ  Ｇ．）。
【０００８】
Ｃ３またはＣ３ｂへの非凝集抗体の結合は、血漿中の補体活性化を通して発生するとは考えられていないが、主に活性化産物Ｃ３ｂ２とＩｇＧとの複合体によって維持されると考えられている（Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００６Ｊａｎ；４３（１−２）：２−１２．Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｒｅｖｉｓｉｔｅｄ．Ｌｕｔｚ  ＨＵ，Ｊｅｌｅｚａｒｏｖａ  Ｅ）。しかしながら、ＩｇＧ抗体を含有する免疫凝集体による補体の代替経路の活性化中、Ｃ３ｂのアルファ’鎖は、ＩｇＧの重鎖のＦｄ部分（すなわち、Ｆａｂ断片内に含まれる重鎖の部分）内の１つまたは２つの部位で共有結合され得る（Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｊ．Ｍａｙ１，１９８１；１９５（２）：４７１−４８０）．Ｔｈｅ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｏｆ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ  Ｃ３ｔｏ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ａｎｔｉｇｅｎ  ａｇｇｒｅｇａｔｅｓ  ａｆｔｅｒ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ  ｐａｔｈｗａｙ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｓｅｒｕｍ．Ｋ  Ｊ  Ｇａｄｄ  ａｎｄ  Ｋ  Ｂ  Ｒｅｉｄ）。補体成分Ｃ４ａ、Ｃ３ａ、Ｃ５ａ、及び膜侵襲複合体は歴史的に、一般に補体切断産物またはアナフィラトキシンと呼ばれている。しかしながら、現在の文献は、Ｃ４ａ（Ｘｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ１２（２０１２）１５８−１６８）、Ｃ３ａ（Ｃｏｕｌｔｈａｒｄ  ａｎｄ  Ｗｏｏｄｒｕｆｆ，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ２０１５；１９４：３５４２−３５４８）、ならびにＣ５ａ（Ｎｉｓｈｉｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｐｈｅｒｅｓｉｓ  ａｎｄ  Ｄｉａｌｙｓｉｓ１３（６）：５０９−５１４及びＧｅｒａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２８０（４８）：３９６７７−３９６８０，Ｄｅｃｅｍｂｅｒ２，２００５）が、特定の状況において抗炎症性であり、カスケードの増大と関連付けられないことを明白にしている。
【０００９】
現在市場で支配的な補体媒介疾患の治療のための療法は、Ｃ５に結合し、Ｃ５ａ及びＣ５ｂ−９へのその切断を阻害して、補体カスケード下流の進行ならびに関連する炎症性及び血栓性応答を部分的に阻害する、抗Ｃ５抗体エクリズマブである。しかしながら、それは、Ｃ１ｑ、Ｃ１Ｒ、Ｃ１Ｓ、Ｃ１様複合体などの上流補体成分に対して、または補体カスケード成分Ｃ５の上流にあり、疾患の治療の優先的な標的であり得るレクチン経路、古典的経路、及び代替経路の成分である、Ｃ４、Ｃ４ａ、Ｃ４ｂ、Ｃ２、Ｃ１、Ｃ４ｂ２、Ｃ２ｂ、Ｃ４ｂ２ａ、Ｃ３、Ｃ３ａ、もしくはＣ３ｂに対して、直接的な影響を有さない。対照的に、正常な免疫グロブリン及びモノクローナル抗体は、Ｃ５の上流のＣ１ｑ及び他の標的に結合する。したがって、当該技術分野において、上流補体カスケード成分の結合、及び結果的な補体カスケードの調節を通して補体媒介疾患を治療するための、改善された方法に対する必要性が存在する。当該技術分野において、親和性だけでなく結合力をもって六量体Ｃ１ｑに結合し、かつ更にそれを低親和性Ｆｃ受容体に結合する著しい結合力なく行う、免疫グロブリンＦｃ含有化合物によって補体媒介疾患を治療するための、改善された方法に対する更なる必要性が存在する。
【００１０】
未変性免疫グロブリンＩｇＧ１  Ｆｃは天然において１３個以上のリガンドに結合し、そのうちの１つは補体因子Ｃ１ｑである。他のＩｇＧ１  Ｆｃリガンドは、標準Ｆｃ受容体、新生児受容体ＦｃＲｎ、鉄、タンパク質Ａ、ＦｃＲＬ１−６、ＴＲＩＭ２１、及びＤＣ−ＳＩＧＮを非限定的に含む。可溶性ホモ二量体ＩｇＧ１は天然において、低すぎて機能的ではない親和性（ＣＡ  Ｄｉｅｂｏｌｄｅｒ  ｅｔ．  ａｌ．Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  Ｉｓ  Ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｂｙ  ＩｇＧ  Ｈｅｘａｍｅｒｓ  Ａｓｓｅｍｂｌｅｄ  ａｔ  ｔｈｅ  Ｃｅｌｌ  Ｓｕｒｆａｃｅ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｍａｒ２０１４；３４３（６１７６）：１２６０−１２６３）及び高い解離速度（Ｇａｂｏｒｉａｕｄ  ｅｔ．ａｌ．Ｔｈｅ  ｃｒｙｓｔａｌ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｇｌｏｂｕｌａｒ  ｈｅａｄ  ｏｆ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃ１ｑ  ｐｒｏｖｉｄｅｓ  ａ  ｂａｓｉｓ  ｆｏｒ  ｉｔｓ  ｖｅｒｓａｔｉｌｅ  ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ．  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２００３Ｎｏｖ２１；２７８（４７）：４６９７４−８２）をもってＣ１ｑに結合する。しかしながら、ＩｇＧ１がそのＦａｂを通して抗原標的に固定される場合、高次構造変化が発生し（Ｍ．Ｏｄａ  ｅｔ．ａｌ．Ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｏｆ  ａｌｌｏｓｔｅｒｉｃ  ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ  ｃｈａｎｇｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｃｏｎｓｔａｎｔ  ｒｅｇｉｏｎ  ｕｐｏｎ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｂｉｎｄｉｎｇ．Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００３）１５（３）：４１７−４２６）、Ｃ１ｑへの結合親和性が増加する。
【００１１】
更に、ＩｇＧ１が抗原の部位に蓄積するにつれて、複数の免疫グロブリンＦｃがＣ１ｑに提示され、抗原結合部位でのより強力な結合をもたらす。Ｃ１ｑは６個のＦｃ結合部位を有する六量体であるため（ＫＢ  Ｒｅｉｄ．Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ｏｆ  Ｃ１ｑ．Ｂｅｈｒｉｎｇ  Ｉｎｓｔ  Ｍｉｔｔ．１９８９Ｊｕｌ；（８４）：８−１９）、凝集ＩｇＧ１の結合は結合力の高いものとなる（Ｄｉｅｂｏｌｄｅｒ，２０１４）。したがって、密に結合したＩｇＧ１は、結果として得られる抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）及び抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）を有する架橋Ｆｃ受容体にとって利用可能であることに加えて、ホモ二量体免疫グロブリンの親和性だけでなく、補体依存性細胞傷害をもたらす結合力にもよって、Ｃ１ｑに結合する。六量体Ｃ１ｑへの、結合Ｆｃのクラスターの結合の結果として得られる機能的応答は、Ｃ１ｑＣ１ｒＣ１ｓの形成ならびにＣ４〜Ｃ４ａ及びＣ４ｂの切断を伴う、古典的補体経路の活性化である。非常に低い濃度で天然に（Ｓｏｌｔｉｓ  ａｎｄ  Ｈａｓｚ．Ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ  ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎａｔｉｖｅ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ  ｉｎ  ｈｙｐｏａｌｂｕｍｉｎｅｍｉｃ  ｓｅｒｕｍ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｌａｂ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９８２Ｏｃｔ；９（１）：１３−７）、及びプールされたヒト静脈内免疫グロブリン（ＩＶＩＧ）（Ａ．  Ｈｅｒｒｅｒａ  ｅｔ．ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｒｅｅ  ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌｌｙ  ａｖａｉｌａｂｌｅ  ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ．Ｊ．Ａｌｌ  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，８４（１）：５５６−５６１）内の両方に存在するＩｇＧ１の可溶性凝集体は、未結合の多価ＩｇＧ１  Ｆｃを、低親和性Ｆｃ受容体及びＣ１ｑを含むそのリガンドに提示する。それによって、ＩｇＧ１の可溶性（すなわち、細胞に結合していない）凝集体は、結合力をもって六量体Ｃ１ｑに結合する。ＩｇＧ１の可溶性凝集体（すなわち、細胞に結合していない）への可溶性Ｃ１ｑの結合は、ＣＤＣの阻害を含む、補体カスケードの下流活性化を阻害し得る。
数万の供血者からプールされる、プールされたヒトＩＶＩＧは、未変性ＩｇＧ１の可溶性凝集体の天然効果を模倣するＩｇＧ１凝集体の非常に少ない可変部分（０．１〜５％）を含有する。ＩＶＩＧはＣ１ｑに結合し、重症筋無力症などの補体媒介疾患において臨床的に有用であることが実証されている。しかしながら、ＩＶＩＧは、血液産物であることに付随する全てのリスクを有し、組み換え産生されず、不良に制御された量のＩｇＧ１凝集体を有し、補体媒介疾患を治療するには不活性の画分で主に構成される。その上、ＩＶＩＧ治療はまた、低親和性Ｆｃ受容体への結合によって、多くの場合望まれない炎症促進性応答をもたらす（Ａｎｄｒｅｓｅｎ  ｅｔ．ａｌ．Ｐｒｏｄｕｃｔ  ｅｑｕｉｖａｌｅｎｃｅ  ｓｔｕｄｙ  ｃｏｍｐａｒｉｎｇ  ｖａｒｉｏｕｓ  ｈｕｍａｎ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ−Ｇ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ２０００；４０：７２２−７３０及びＧｈｉｅｌｍｅｔｔｉ  ｅｔ．ａｌ．Ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｗｈｏｌｅ  ｂｌｏｏｄ．Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ４３（２００６）９３９−９４９）。Ｃ１ｑに強力に結合することによって補体シンクとして作用しながら、同時に低親和性Ｆｃ受容体を含む天然リガンドよりも補体成分に優先的に結合することによって望まれない炎症促進性応答を回避する、凝集可溶性ＩｇＧ１  Ｆｃの天然プロセスを模倣する、新規で一貫性した組み換え産生された療法に対する必要性が存在する。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１２】
【非特許文献１】Ｊａｎｅｗａｙ’ｓ  Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ，８ｔｈ  Ｅｄ．，Ｍｕｒｐｈｙ  ｅｄ．，Ｇａｒｌａｎｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０１２，Ｃｈａｐｔｅｒ１０
【非特許文献２】Ｍｏｏｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，ＭＡｂｓ．２（２）：１８１−９（２０１０）
【非特許文献３】Ｓｔｅｐｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，１４Ａｕｇｕｓｔ２０１３，３３（３３）：１３４６０−１３４７４
【非特許文献４】Ｔｕｚｕｎ  ａｎｄ  Ｃｈｒｉｓｔａｄｏｓｓ，Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ  Ｒｅｖ．２０１３Ｊｕｌ；１２（９）：９０４−１１．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ａｕｔｒｅｖ．２０１３．０３．００３
【非特許文献５】Ｗｅｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｔｓｃｈ  Ａｒｚｔｅｂｌ  Ｉｎｔ．，２０１４Ｆｅｂ；１１１（８）：１３３−１３８．ｄｏｉ：１０．３２３８／ａｒｚｔｅｂｌ．２０１４．０１３３
【非特許文献６】Ｏｋｒｏｊ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ  Ｍｅｄ．２００７；３９（７）：５１７−３０
【非特許文献７】Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ，２００９；ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｊａｕｔ．２００９．１１．０１４
【非特許文献８】Ｈｉｓａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ  Ｊ  Ｋｉｄｎｅｙ  Ｄｉｓ２００５；４５：２９５ｅ３０２
【非特許文献９】Ｂｅｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  Ｒｏｌｅ  ｏｆ  Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｉｎ  Ｍｅｍｂｒａｎｏｕｓ  Ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ．Ｓｅｍｉｎ  Ｎｅｐｈｒｏｌ２０１３Ｎｏｖ；３３（６）：５３１−４２
【非特許文献１０】Ｎａｔｕｒｅ．１９８８Ａｐｒ２１；３３２（６１６６）：７３８−４０；Ｔｈｅ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｓｉｔｅ  ｆｏｒ  Ｃ１ｑ  ｏｎ  ＩｇＧ．Ｄｕｎｃａｎ  ＡＲ，Ｗｉｎｔｅｒ  Ｇ．
【非特許文献１１】Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００６Ｊａｎ；４３（１−２）：２−１２．Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｒｅｖｉｓｉｔｅｄ．Ｌｕｔｚ  ＨＵ，Ｊｅｌｅｚａｒｏｖａ  Ｅ
【非特許文献１２】Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｊ．Ｍａｙ１，１９８１；１９５（２）：４７１−４８０）．Ｔｈｅ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｏｆ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ  Ｃ３ｔｏ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ａｎｔｉｇｅｎ  ａｇｇｒｅｇａｔｅｓ  ａｆｔｅｒ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ  ｐａｔｈｗａｙ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｓｅｒｕｍ．Ｋ  Ｊ  Ｇａｄｄ  ａｎｄ  Ｋ  Ｂ  Ｒｅｉｄ
【非特許文献１３】Ｘｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ１２（２０１２）１５８−１６８）、Ｃ３ａ（Ｃｏｕｌｔｈａｒｄ  ａｎｄ  Ｗｏｏｄｒｕｆｆ，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ２０１５；１９４：３５４２−３５４８）
【非特許文献１４】Ｎｉｓｈｉｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｐｈｅｒｅｓｉｓ  ａｎｄ  Ｄｉａｌｙｓｉｓ１３（６）：５０９−５１４及びＧｅｒａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２８０（４８）：３９６７７−３９６８０，Ｄｅｃｅｍｂｅｒ２，２００５
【非特許文献１５】ＣＡ  Ｄｉｅｂｏｌｄｅｒ  ｅｔ．  ａｌ．Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  Ｉｓ  Ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｂｙ  ＩｇＧ  Ｈｅｘａｍｅｒｓ  Ａｓｓｅｍｂｌｅｄ  ａｔ  ｔｈｅ  Ｃｅｌｌ  Ｓｕｒｆａｃｅ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｍａｒ２０１４；３４３（６１７６）：１２６０−１２６３
【非特許文献１６】Ｇａｂｏｒｉａｕｄ  ｅｔ．ａｌ．Ｔｈｅ  ｃｒｙｓｔａｌ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｇｌｏｂｕｌａｒ  ｈｅａｄ  ｏｆ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃ１ｑ  ｐｒｏｖｉｄｅｓ  ａ  ｂａｓｉｓ  ｆｏｒ  ｉｔｓ  ｖｅｒｓａｔｉｌｅ  ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ．  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２００３Ｎｏｖ２１；２７８（４７）：４６９７４−８２
【非特許文献１７】Ｍ．Ｏｄａ  ｅｔ．ａｌ．Ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｏｆ  ａｌｌｏｓｔｅｒｉｃ  ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ  ｃｈａｎｇｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｃｏｎｓｔａｎｔ  ｒｅｇｉｏｎ  ｕｐｏｎ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｂｉｎｄｉｎｇ．Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００３）１５（３）：４１７−４２６
【非特許文献１８】ＫＢ  Ｒｅｉｄ．Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ｏｆ  Ｃ１ｑ．Ｂｅｈｒｉｎｇ  Ｉｎｓｔ  Ｍｉｔｔ．１９８９Ｊｕｌ；（８４）：８−１９）、凝集ＩｇＧ１の結合は結合力の高いものとなる（Ｄｉｅｂｏｌｄｅｒ，２０１４
【非特許文献１９】Ｓｏｌｔｉｓ  ａｎｄ  Ｈａｓｚ．Ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ  ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎａｔｉｖｅ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ  ｉｎ  ｈｙｐｏａｌｂｕｍｉｎｅｍｉｃ  ｓｅｒｕｍ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｌａｂ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９８２Ｏｃｔ；９（１）：１３−７
【非特許文献２０】Ａ．  Ｈｅｒｒｅｒａ  ｅｔ．ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｒｅｅ  ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌｌｙ  ａｖａｉｌａｂｌｅ  ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ．Ｊ．Ａｌｌ  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，８４（１）：５５６−５６１
【非特許文献２１】Ａｎｄｒｅｓｅｎ  ｅｔ．ａｌ．Ｐｒｏｄｕｃｔ  ｅｑｕｉｖａｌｅｎｃｅ  ｓｔｕｄｙ  ｃｏｍｐａｒｉｎｇ  ｖａｒｉｏｕｓ  ｈｕｍａｎ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ−Ｇ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ２０００；４０：７２２−７３０
【非特許文献２２】Ｇｈｉｅｌｍｅｔｔｉ  ｅｔ．ａｌ．Ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｗｈｏｌｅ  ｂｌｏｏｄ．Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ４３（２００６）９３９−９４９
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明は、１つ以上のヒト免疫グロブリンＦｃドメインと、１つ以上の多量体化ドメインとを含む生物活性融合タンパク質生物模倣型分子に関し、融合タンパク質のＦｃドメイン部分は、１つ以上の点変異を含む。一態様において、生物模倣型分子は、正常な非凝集ヒト免疫グロブリンＦｃと比較して、１つ以上の補体成分に優先的に結合する。いくつかの実施形態において、１つ以上の補体成分への優先的結合は、正常な非凝集免疫グロブリンＦｃまたは代替的に正常な凝集免疫グロブリンＦｃと比較して、標準Ｆｃ受容体への低減した結合を有する生物模倣型のＦｃドメインによって達成される。いくつかの実施形態において、生物活性融合タンパク質生物模倣型分子は、ストラドマー（ｓｔｒａｄｏｍｅｒ）単位を含む。生物活性融合タンパク質生物模倣物を含む組成物、及びそれを使用するための方法が提供される。
【００１４】
一態様において、本開示は、ＩｇＧ１  Ｆｃドメインの２６７、２６８、及び／または３２４位のうちの少なくとも１つに対応する１つ以上の点変異を有する、少なくとも１つのＩｇＧ１  Ｆｃドメインを含むストラドマー単位を提供する。いくつかの実施形態において、ストラドマー単位は、少なくとも１つの多量体化ドメインを更に含む。いくつかの実施形態において、２６７位のアミノ酸は、セリン（Ｓｅｒ、Ｓ）から任意の他のアミノ酸に変異される。更なる実施形態において、２６７位のアミノ酸は、グルタミン酸（Ｇｌｕ、Ｅ）に変異される。いくつかの実施形態において、２６８位のアミノ酸は、ヒスチジン（Ｈｉｓ、Ｈ）から任意の他のアミノ酸に変異される。更なる実施形態において、２６８位のアミノ酸は、フェニルアラニン（Ｐｈｅ、Ｆ）に変異される。いくつかの実施形態において、３２４位のアミノ酸は、セリンから任意の他のアミノ酸に変異される。更なる実施形態において、３２４位のアミノ酸は、スレオニン（Ｔｈｒ、Ｔ）に変異される。いくつかの実施形態において、ストラドマー単位のＦｃドメインは、２６７、２６８、及び３２４位に点変異を含む。更なる実施形態において、Ｆｃドメインは、点変異Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔを含む。
【００１５】
いくつかの実施形態において、ストラドマー単位は、２６７、２６８、及び／または３２４位に点変異を含み、２３３及び／または２３４及び／または２３５及び／または２３６及び／または２３８及び／または２６５及び／または２９７及び／または２９９及び／または３２８位に少なくとも１つの点変異を更に含む、アミノ酸配列を有するＩｇＧ１  Ｆｃドメインを含む。一実施形態において、２９７位のアミノ酸は、アスパラギン（Ａｓｎ、Ｎ）から任意の他のアミノ酸に変異される。更なる一実施形態において、２９７位のアミノ酸は、アラニン（Ａｌａ、Ａ）に変異される。一実施形態において、２９９位のアミノ酸は、スレオニン（Ｔ）からセリンまたはシステイン以外の任意の他のアミノ酸に変異される。更なる一実施形態において、２９９位のアミノ酸は、アラニン（Ａｌａ、Ａ）に変異される。一実施形態において、２３８位のアミノ酸は、プロリン（Ｐｒｏ、Ｐ）から任意の他のアミノ酸に変異される。更なる一実施形態において、２３８位のアミノ酸は、アスパラギン酸（Ａｓｐ、Ｄ）に変異される。一実施形態において、２３３位のアミノ酸は、グルタミン酸（Ｇｌｕ、Ｅ）から任意の他のアミノ酸に変異される。更なる一実施形態において、２３３位のアミノ酸は、プロリン（Ｐｒｏ、Ｐ）に変異される。別の実施形態において、２３６位のアミノ酸は、グリシン（Ｇｌｙ、Ｇ）から任意の他のアミノ酸に変異される。更なる一実施形態において、２３６位のアミノ酸は、アルギニン（Ａｒｇ、Ｒ）に変異される。一実施形態において、２３６位のアミノ酸は、欠失される。一実施形態において、２３４位のアミノ酸は、ロイシン（Ｌｅｕ、Ｌ）から任意の他のアミノ酸に変異される。更なる一実施形態において、２３４位のアミノ酸は、バリン（Ｖａｌ、Ｖ）またはアラニン（Ａｌａ、Ａ）に変異される。別の実施形態において、２３５位のアミノ酸は、ロイシン（Ｌｅｕ、Ｌ）から任意の他のアミノ酸に変異される。更なる一実施形態において、２３５位のアミノ酸は、アラニン（Ａｌａ、Ａ）に変異される。一実施形態において、２６５位のアミノ酸は、アスパラギン酸（Ａｓｐ、Ｄ）から任意の他のアミノ酸に変異される。更なる一実施形態において、２６５位のアミノ酸は、アラニン（Ａｌａ、Ａ）に変異される。別の実施形態において、２６５位のアミノ酸は、トリプトファン（Ｔｒｐ、Ｗ）に変異される。一実施形態において、２９７位のアミノ酸は、アスパラギン（Ａｓｎ、Ｎ）から任意の他のアミノ酸に変異される。一実施形態において、２９７位のアミノ酸は、アラニン（Ａｌａ、Ａ）に変異される。一実施形態において、２９７位のアミノ酸は、グルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）に変異される。一実施形態において、２９９位のアミノ酸は、スレオニン（Ｔｈｒ、Ｔ）からセリン（Ｓｅｒ、Ｓ）またはシステイン（Ｃｙｓ、Ｃ）以外の任意の他のアミノ酸に変異される。一実施形態において、２９９位のアミノ酸は、アラニンに変異される。一実施形態において、２９８位のアミノ酸は、プロリン以外の任意のアミノ酸に変異される。一実施形態において、３２８位のアミノ酸は、ロイシン（Ｌｅｕ、Ｌ）から任意の他のアミノ酸に変異される。更なる一実施形態において、３２８位のア���ノ酸は、フェニルアラニン（Ｐｈｅ、Ｆ）に変異される。
【００１６】
いくつかの実施形態において、ストラドマー単位のＦｃドメインは、２６７、２６８、２９７、及び３２４位に点変異を含む。更なる実施形態において、Ｆｃドメインは、点変異Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｎ２９７Ａ、及びＳ３２４Ｔを含む。
【００１７】
いくつかの実施形態において、ストラドマー単位のＦｃドメインは、２３４、２３５、２６７、２６８、及び３２４位に点変異を含む。更なる実施形態において、Ｆｃドメインは、点変異Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔを含む。
【００１８】
いくつかの実施形態において、ストラドマー単位のＦｃドメインは、２３４、２３５、２６７、２６８、２９７、及び３２４位に点変異を含む。更なる実施形態において、Ｆｃドメインは、点変異Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｎ２９７Ａ、及びＳ３２４Ｔを含む。
【００１９】
いくつかの実施形態において、ストラドマー単位のＦｃドメインは、２３３、２３４、２３５、２６７、２６８、及び３２４位に点変異を、ならびに２３６位にアミノ酸の欠失を含む。更なる実施形態において、Ｆｃドメインは、点変異Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔ、ならびに２３６位にアミノ酸の欠失を含む。
【００２０】
いくつかの実施形態において、ストラドマー単位のＦｃドメインは、２３３、２３４、２３５、２６７、２６８、２９７、及び３２４位に点変異を含む。更なる実施形態において、Ｆｃドメインは、点変異Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｎ２９７Ａ、及びＳ３２４Ｔを含む。
【００２１】
いくつかの実施形態において、ストラドマー単位のＦｃドメインは、２６５、２６７、２６８、及び３２４位に点変異を含む。更なる実施形態において、Ｆｃドメインは、点変異Ｄ２６５Ａ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔを含む。
【００２２】
いくつかの実施形態において、ストラドマー単位のＦｃドメインは、２３８、２６７、２６８、及び３２４位に点変異を含む。更なる実施形態において、Ｆｃドメインは、点変異Ｐ２３８Ｄ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔを含む。
【００２３】
いくつかの実施形態において、ストラドマー単位のＦｃドメインは、２３８、２６７、２６８、２９７、及び３２４位に点変異を含む。更なる実施形態において、Ｆｃドメインは、点変異Ｐ２３８Ｄ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｎ２９７Ａ、及びＳ３２４Ｔを含む。
【００２４】
いくつかの実施形態において、ストラドマー単位のＦｃドメインは、２３６、２６７、２６８、及び３２４位に点変異を含む。更なる実施形態において、Ｆｃドメインは、点変異Ｇ２３６Ｒ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔを含む。
【００２５】
いくつかの実施形態において、ストラドマー単位のＦｃドメインは、２３３、２３６、２６７、２６８、及び３２４位に点変異を含む。更なる実施形態において、Ｆｃドメインは、点変異Ｅ２３３Ｐ、Ｇ２３６Ｒ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔを含む。
【００２６】
いくつかの実施形態において、ストラドマー単位のＦｃドメインは、２３３、２３６、２６７、２６８、３２４、及び３２８位に点変異を含む。更なる実施形態において、Ｆｃドメインは、点変異Ｅ２３３Ｐ、Ｇ２３６Ｒ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、及びＬ３２８Ｆを含む。
【００２７】
いくつかの実施形態において、ストラドマー単位のＦｃドメインは、２３８、２６５、２６７、２６８、及び３２４位に点変異を含む。更なる実施形態において、Ｆｃドメインは、点変異Ｐ２３８Ｄ、Ｄ２６５Ｇ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔを含む。他の実施形態において、Ｆｃドメインは、点変異Ｐ２３８Ｄ、Ｄ２６５Ｗ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔを含む。
【００２８】
いくつかの実施形態において、ストラドマー単位のＦｃドメインは、２６７、２６８、３２４、及び３２８位に点変異を含む。更なる実施形態において、Ｆｃドメインは、点変異Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、及びＬ３２８Ｆを含む。
【００２９】
いくつかの実施形態において、ストラドマー単位のＦｃドメインは、２３３、２３４、２３５、２６７、２６８、２９７、３２４、及び３２８位に点変異を、ならびに２３６位にアミノ酸の欠失を含む。更なる実施形態において、Ｆｃドメインは、点変異Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｎ２９７Ａ、Ｓ３２４Ｔ、及びＬ３２８Ｆ、ならびに２３６位にアミノ酸の欠失を含む。
【００３０】
いくつかの実施形態において、ストラドマー単位のＦｃドメインは、２３３、２６８、及び３２４位に点変異を含む。更なる実施形態において、Ｆｃドメインは、点変異Ｅ２３３Ｐ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔを含む。
【００３１】
いくつかの実施形態において、ストラドマー単位のＦｃドメインは、２３３、２６８、２９７、及び３２４位に点変異を含む。更なる実施形態において、Ｆｃドメインは、点変異Ｅ２３３Ｐ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、及び２９７位にＮ２９７ＡまたはＮ２９７Ｑ以外の点変異を含む。
【００３２】
いくつかの実施形態において、ストラドマー単位のＦｃドメインは、２３３、２６８、２９９、及び３２４位に点変異を含む。更なる実施形態において、Ｆｃドメインは、点変異Ｅ２３３Ｐ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、ならびに２９９位にＴ２９９Ｓ及びＴ２９９Ｃ以外の点変異を含む。いくつかの実施形態において、ストラドマー単位のＦｃドメインは、点変異Ｅ２３３Ｐ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、及びＴ２９９Ａを含む。
【００３３】
いくつかの実施形態において、ストラドマー単位のＦｃドメインは、２３３、２６８、３２４、及び２６７位に点変異を含む。いくつかの実施形態において、ストラドマー単位のＦｃドメインは、点変異Ｅ２３３Ｐ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、及び２６７位に点変異Ｓ２６７Ｅ以外の点変異を含む。
【００３４】
いくつかの実施形態において、ストラドマー単位のＦｃドメインは、２３３、２６８、３２４、２６７、及び２９７位に点変異を含む。更なる実施形態において、ストラドマー単位のＦｃドメインは、点変異Ｅ２３３Ｐ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔと、２６７位に点変異Ｓ２６７Ｅ以外の点変異と、２９７位に点変異Ｎ２９７Ａ及びＮ２９７Ｑ以外の点変異とを含む。更なる実施形態において、ストラドマー単位のＦｃドメインは、２３３、２６８、３２４、２６７、及び２９７位に変異を含む。更なる実施形態において、ストラドマー単位のＦｃドメインは、点変異Ｅ２３３Ｐ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔと、２６７位に点変異Ｓ２６７Ｅ以外の点変異と、２９７位に点変異Ｎ２９７Ａ及びＮ２９７Ｑ以外の点変異と、２９９位に点変異Ｔ２９９Ｓ及びＴ２９９Ｃ以外の点変異とを含む。更なる実施形態において、２９９位の変異は、Ｔ２９９Ａである。
【００３５】
いくつかの実施形態において、ストラドマー単位のＦｃドメインは、２３３、２６８、３２４、２６７、及び２３６位に点変異を含む。いくつかの実施形態において、ストラドマー単位のＦｃドメインは、点変異Ｅ２３３Ｐ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔと、２６７位にＳ２６７Ｅ以外の点変異と、２３６位にＧ２３６Ｒ以外の点変異とを含む。
【００３６】
いくつかの実施形態において、ストラドマー単位のＦｃドメインは、２３３、２６８、３２４、２６７、２３６、及び２９７位に点変異を含む。いくつかの実施形態において、ストラドマー単位のＦｃドメインは、点変異Ｅ２３３Ｐ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔと、２６７位にＳ２６７Ｅ以外の点変異と、２３６位にＧ２３６Ｒ以外の点変異と、２９７位にＮ２９７Ａ及びＮ２９７Ｑ以外の点変異とを含む。
【００３７】
いくつかの実施形態において、ストラドマー単位のＦｃドメインは、２３３、２６８、３２４、２６７、２３６、及び２９９位に点変異を含み、２９９位の点変異は、Ｔ２９９Ｓ及びＴ２９９Ｃ以外の点変異である。いくつかの実施形態において、ストラドマー単位のＦｃドメインは、点変異Ｅ２３３Ｐ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔと、２６７位にＳ２６７Ｅ以外の点変異と、２３６位にＧ２３６Ｒ及びＴ２９９Ａ以外の点変異とを含む。
【００３８】
いくつかの実施形態において、ストラドマー単位のＦｃドメインは、２６７、２６８、及び／または３２４位のうちの少なくとも１つに点変異を含み、２３３、２３５、２３６、２６７、２６８、２９７、２９９、及び／または３２４位のうちの３つ以上に点変異を更に含む。いくつかの実施形態において、ストラドマー単位のＦｃドメインは、２６７、２６８、及び／または３２４位のうちの少なくとも１つに点変異を含み、２３３、２３５（Ｌ２３５Ｈ以外）、２３６（２３６Ｒ以外）、２６７（Ｓ２６７Ｅ以外）、２６８、２９７（Ｎ２９７Ａ以外）、もしくは代替的に２９９、及び／または３２４のうちの３つ以上に点変異を更に含む。
【００３９】
一実施形態において、ストラドマーは多量体化ドメインを含み、多量体化ドメインは、ＩｇＧ２ヒンジ、イソロイシンジッパー、及びＧＰＰドメインからなる群から選択され、ストラドマー単位を多量体化することができる。いくつかの実施形態において、多量体化ドメインは、該ストラドマー単位の多量体を形成する。更なる実施形態において、該ストラドマー単位の多量体は、高次多量体である。
【００４０】
いくつかの実施形態において、ストラドマーは、アミノからカルボキシ末端にかけて、リーダー配列と、ＩｇＧ１ヒンジ、ＩｇＧ１  ＣＨ２、及びＩｇＧ１  ＣＨ３を含むＦｃドメインと、ＩｇＧ２ヒンジとを含み、ストラドマーは、本明細書に提供される１つ以上の点変異を含む。更なる一実施形態において、リーダー配列は、発現時に切断される。したがって、別の実施形態において、アミノからカルボキシ末端にかけて、ＩｇＧ１ヒンジ、ＩｇＧ１  ＣＨ２、及びＩｇＧ１  ＣＨ３を含むＦｃドメインと、ＩｇＧ２ヒンジとを含むストラドマーが提供され、ストラドマーは、本明細書に提供される１つ以上の点変異を含む。一実施形態において、ストラドマーは、配列番号１０〜１６、１８〜６３、及び６５〜７７からなる群から選択されるアミノ酸配列、またはその機能的バリアントを含む。
【００４１】
いくつかの実施形態において、ストラドマーは、アミノからカルボキシ末端にかけて、リーダー配列と、ＩｇＧ２ヒンジと、ＩｇＧ１ヒンジ、ＩｇＧ１  ＣＨ２、及びＩｇＧ１  ＣＨ３を含むＦｃドメインとを含み、ストラドマーは、本明細書に提供される１つ以上の点変異を含む。更なる一実施形態において、リーダー配列は、発現時に切断される。したがって、別の実施形態において、アミノからカルボキシ末端にかけて、ＩｇＧ２ヒンジと、ＩｇＧ１ヒンジ、ＩｇＧ１  ＣＨ２、及びＩｇＧ１  ＣＨ３を含むＦｃドメインとを含むストラドマーが提供され、ストラドマーは、本明細書に提供される１つ以上の点変異を含む。一実施形態において、ストラドマーは、配列番号１７及び配列番号６４からなる群から選択されるアミノ酸配列、またはその機能的バリアントを含む。
【００４２】
いくつかの実施形態において、ストラドマーは、アミノからカルボキシ末端にかけて、リーダー配列と、ＩｇＧ２ヒンジと、ＩｇＧ１  ＣＨ２及びＩｇＧ１  ＣＨ３を含むＦｃドメインとを含み、ストラドマーは、本明細書に提供される１つ以上の点変異を含む。更なる一実施形態において、リーダー配列は、発現時に切断される。したがって、別の実施形態において、アミノからカルボキシ末端にかけて、ＩｇＧ２ヒンジと、ＩｇＧ１  ＣＨ２及びＩｇＧ１  ＣＨ３を含むＦｃドメインとを含むストラドマーが提供され、ストラドマーは、本明細書に提供される１つ以上の点変異を含む。
【００４３】
一実施形態において、ストラドマー単位は、１つ以上のアミノ酸リンカー配列を更に含む。更なる一実施形態において、リンカーは、切断可能である。更なる一実施形態において、リンカーは、プロテアーゼ感受性である。一実施形態において、リンカーは、主に細胞内にあるプロテアーゼによって切断される。更なる一実施形態において、リンカーは、主にゴルジ及び小胞体内に存在するプロテアーゼによって切断される。一実施形態において、リンカーは、フューリンによって切断される。別の実施形態において、リンカーは、主に器官特異的プロテアーゼであるプロテアーゼ（例えば、脳関連プロテアーゼであるニューロプシンなど）によって切断される。別の実施形態において、リンカーは、主に腫瘍特異的プロテアーゼであるプロテアーゼ（例えば、メタロプロテイナーゼ９及びウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子など）によって切断される。
【００４４】
いくつかの実施形態において、ストラドマー単位は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ（ＦｃγＲＩＩａ及び／もしくはＦｃγＲＩＩｂを含む）、ならびに／またはＦｃγＲＩＩＩと比較して、補体への優先的結合を呈する。特定の実施形態において、ストラドマー単位は、低親和性Ｆｃγ受容体への低減した結合を呈する。他の実施形態において、ストラドマー単位は、２６７、２６８、及び／または３２４位のうちの１つ以上に点変異を含まない同一の構造のストラドマーと比較して、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ（ＦｃγＲＩＩａ及び／もしくはＦｃγＲＩＩｂを含む）、ならびに／またはＦｃγＲＩＩＩへの低減した結合を呈する。
【００４５】
特定の実施形態において、ストラドマー単位は、２９７、２９８、または２９９に変異を含み、Ｃ１ｑへの結合を保持し、ＣＤＣを阻害し、かつＦｃγＲＩまたは低親和性Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、及び／またはＦｃγＲＩＩＩを含む）への結合を保持する。
【００４６】
一態様において、本開示は、本明細書に開示される２つ以上のストラドマー単位を含む、クラスターストラドマーを提供する。例えば、いくつかの実施形態において、本開示は、２６７、２６８、及び／または３２４位に点変異を含むアミノ酸配列を有するＩｇＧ１  Ｆｃドメインを含む、２つ以上のストラドマー単位を含む、クラスターストラドマーを提供する。更なる実施形態において、２つ以上のストラドマー単位は、２３３及び／または２３４及び／または２３５及び／または２３６及び／または２３８及び／または２６５及び／または２９７及び／または２９９及び／または３２８位に少なくとも１つの点変異を更に含む。いくつかの実施形態において、２つ以上のストラドマー単位は、２３６位にアミノ酸の欠失を含む。
【００４７】
いくつかの実施形態において、本明細書に提供されるストラドマーは、補体媒介疾患、自己免疫疾患、炎症性疾患、アレルギー、Ｂ細胞媒介疾患、抗体媒介疾患、腎障害、及び血液障害を含むが、これらに限定されない、疾患または障害を治療または予防するために使用される。
【００４８】
いくつかの実施形態において、抗体媒介疾患は、グッドパスチャー病；臓器移植拒絶；視神経脊髄炎；神経性筋強直症；辺縁系脳炎；モルヴァン線維性舞踏病症候群；重症筋無力症；ランバート・イートン筋無力症症候群；自律神経性ニューロパチー；アルツハイマー病；アテローム動脈硬化症；パーキンソン病；全身硬直症候群または過剰驚愕症；再発性自然流産；ヒューズ症候群；全身性エリテマトーデス；自己免疫性小脳性運動失調症；強皮症、シェーグレン症候群を含む結合組織病；多発性筋炎；リウマチ性関節炎；結節性多発性動脈炎；ＣＲＥＳＴ症候群；心内膜炎；橋本甲状腺炎；混合性結合組織病；チャネル病；小児自己免疫性溶連菌関連性精神神経障害（ＰＡＮＤＡＳ）；Ｎ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸受容体、特に、ＮＲ１、コンタクチン関連タンパク質２、ＡＭＰＡＲ、ＧｌｕＲ１／ＧｌｕＲ２、グルタミン酸デカルボキシラーゼ、ＧｌｙＲアルファ１ａ、アセチルコリン受容体、ＶＧＣＣ  Ｐ／Ｑ型、ＶＧＫＣ、ＭｕＳＫ、ＧＡＢＡ（Ｂ）Ｒに対する抗体に関連する臨床病態；アクアポリン−４；及び天疱瘡からなる群から選択される。いくつかの実施形態において、自己免疫疾患は、関節炎である。
【００４９】
いくつかの実施形態において、補体媒介疾患は、重症筋無力症；溶血性尿毒症症候群（ＨＵＳ）；非定型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）；発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）；視神経脊髄炎；同種移植片の抗体媒介拒絶；膜性腎症を含む腎症；ならびに膜性増殖性糸球体腎炎（ＭＰＧＮ）及びループス腎炎を含む腎炎からなる群から選択される。
【００５０】
いくつかの実施形態において、血液障害は、ヘモグロビンＳＳ、ヘモグロビンＳＣ、ヘモグロビンＳβ０サラセミア、ヘモグロビンＳβ＋サラセミア、ヘモグロビンＳＤ、及びヘモグロビンＳＥを含む、鎌状赤血球症などの貧血である。いくつかの実施形態において、炎症性障害は、加齢黄斑変性、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症、またはパーキンソン病である。
【００５１】
いくつかの実施形態において、本明細書に提供されるストラドマーは、それを必要とする対象に投与される。更なる実施形態において、本明細書に提供されるストラドマーは、静脈内に、皮下に、経口に、腹腔内に、舌下に、頬側に、経皮に、真皮下埋め込みによって、または筋肉内に投与される。
【００５２】
いくつかの実施形態において、本開示は、自己免疫関連視力低下または難聴（騒音性難聴もしくは加齢性難聴など）の治療または予防において有用なストラドマーを提供する。別の実施形態において、提供されるストラドマーは、蝸牛または他の補聴器の埋め込みなどのデバイス埋め込みに関連する炎症または自己免疫性応答の低減において有用である。
【図面の簡単な説明】
【００５３】
【図１】バイオレイヤー干渉法（ＦｏｒｔｅＢｉｏ  Ｏｃｔｅｔ）によって測定される、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩＩａ、またはＦｃＲｎへのストラドマーＧＬ−２０４５の結合を示す。
【図２】Ｇ０４５ｃ及び補体優先ストラドマーＧ９９７の、各Ｆｃ受容体の最大応答単位（ＲＵｍａｘ）、Ｃ１ｑ  ＥＬＩＳＡ、及びＣＤＣ阻害データのレーダーグラフである。これらの説明の各レーダーグラフは、Ｏｃｔｅｔバイオレイヤー干渉法の出力から生じる結合曲線の視覚的読み取りから生成されている。
【図３】バイオレイヤー干渉法によって測定される、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩＩａ、及びＦｃＲｎへのストラドマーＧ９９７の結合を示す。
【図４Ａ】Ｇ０４５ｃ及び補体優先ストラドマーＧ９９８の、各Ｆｃ受容体のＲＵｍａｘ、Ｃ１ｑ  ＥＬＩＳＡ、及びＣＤＣ阻害データのレーダーグラフを提供する。
【図４Ｂ】Ｇ０４５ｃならびに補体優先ストラドマーＧ９９７及びＧ９９８の、各Ｆｃ受容体の３００秒間でのＲＵ（ＲＵ３００ｓ）のレーダーグラフを提供する。
【図５】バイオレイヤー干渉法によって測定される、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩＩａ、及びＦｃＲｎへのストラドマーＧ９９８の結合を示す。
【図６Ａ】Ｇ０４５ｃならびに補体優先ストラドマーＧ１０２２及びＧ１０３３の、各Ｆｃ受容体のＲＵｍａｘ、Ｃ１ｑ  ＥＬＩＳＡ、及びＣＤＣ阻害データのレーダーグラフを提供する。
【図６Ｂ】Ｇ０４５ｃならびに補体優先ストラドマーＧ１０２２及びＧ１０３３の、各Ｆｃ受容体の３００秒間でのＲＵ（ＲＵ３００ｓ）のレーダーグラフを提供する。
【図７Ａ】Ｇ０４５ｃ及び一般化ストラドマーＧ１０３２の、各Ｆｃ受容体のＲＵｍａｘ、Ｃ１ｑ  ＥＬＩＳＡ、及びＣＤＣ阻害データのレーダーグラフを提供する。
【図７Ｂ】Ｇ０４５ｃ及び一般化ストラドマーＧ１０３２の、各Ｆｃ受容体の３００秒間でのＲＵ（ＲＵ３００ｓ）のレーダーグラフを提供する。
【図８Ａ】Ｇ０４５ｃ及び一般化ストラドマーＧ１０２３の、各Ｆｃ受容体のＲＵｍａｘ、Ｃ１ｑ  ＥＬＩＳＡ、及びＣＤＣ阻害データのレーダーグラフを提供する。
【図８Ｂ】Ｇ０４５ｃ及び一般化ストラドマーＧ１０２３の、各Ｆｃ受容体の３００秒間でのＲＵ（ＲＵ３００ｓ）のレーダーグラフを提供する。
【図９Ａ】Ｇ０４５ｃ及び補体優先ストラドマーＧ１００６の、各Ｆｃ受容体のＲＵｍａｘ、Ｃ１ｑ  ＥＬＩＳＡ、及びＣＤＣ阻害データのレーダーグラフを提供する。
【図９Ｂ】Ｇ０４５ｃ及び補体優先ストラドマーＧ１００６の、各Ｆｃ受容体の３００秒間でのＲＵ（ＲＵ３００ｓ）のレーダーグラフを提供する。
【図１０Ａ】Ｇ０４５ｃ及び補体優先ストラドマーＧ１０２７の、各Ｆｃ受容体のＲＵｍａｘ、Ｃ１ｑ  ＥＬＩＳＡ、及びＣＤＣ阻害データのレーダーグラフを提供する。
【図１０Ｂ】Ｇ０４５ｃ及び補体優先ストラドマーＧ１０２７の、各Ｆｃ受容体の３００秒間でのＲＵ（ＲＵ３００ｓ）のレーダーグラフを提供する。
【図１１Ａ】Ｇ０４５ｃ及び補体優先ストラドマーＧ１００３の、各Ｆｃ受容体のＲＵｍａｘ、Ｃ１ｑ  ＥＬＩＳＡ、及びＣＤＣ阻害データのレーダーグラフを提供する。
【図１１Ｂ】Ｇ０４５ｃ及び補体優先ストラドマーＧ１００３の、各Ｆｃ受容体の３００秒間でのＲＵ（ＲＵ３００ｓ）のレーダーグラフを提供する。
【図１２Ａ】Ｇ０４５ｃ及び補体優先ストラドマーＧ９８９の、各Ｆｃ受容体のＲＵｍａｘ、Ｃ１ｑ  ＥＬＩＳＡ、及びＣＤＣ阻害データのレーダーグラフを提供する。
【図１２Ｂ】Ｇ０４５ｃ及び補体優先ストラドマーＧ９８９の、各Ｆｃ受容体の３００秒間でのＲＵ（ＲＵ３００ｓ）のレーダーグラフを提供する。
【図１３】バイオレイヤー干渉法によって測定される、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩＩａ、及びＦｃＲｎへのストラドマーＧ９８９の結合を示す。
【図１４Ａ】Ｇ０４５ｃ及び補体優先ストラドマーＧ９９０の、各Ｆｃ受容体のＲＵｍａｘ、Ｃ１ｑ  ＥＬＩＳＡ、及びＣＤＣ阻害データのレーダーグラフを提供する。
【図１４Ｂ】Ｇ０４５ｃ及び補体優先ストラドマーＧ９９０の、各Ｆｃ受容体の３００秒間でのＲＵ（ＲＵ３００ｓ）のレーダーグラフを提供する。
【図１５】バイオレイヤー干渉法によって測定される、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩＩａ、及びＦｃＲｎへのストラドマーＧ９９０の結合を示す。
【図１６Ａ】Ｇ０４５ｃ及び補体優先ストラドマーＧ９９４の、各Ｆｃ受容体のＲＵｍａｘ、Ｃ１ｑ  ＥＬＩＳＡ、及びＣＤＣ阻害データのレーダーグラフを提供する。
【図１６Ｂ】Ｇ０４５ｃ及び補体優先ストラドマーＧ９９４の、各Ｆｃ受容体の３００秒間でのＲＵ（ＲＵ３００ｓ）のレーダーグラフを提供する。
【図１７】バイオレイヤー干渉法によって測定される、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩＩａ、及びＦｃＲｎへのストラドマーＧ９９４の結合を示す。
【図１８Ａ】Ｇ０４５ｃ及び補体優先ストラドマーＧ９９６の、各Ｆｃ受容体のＲＵｍａｘ、Ｃ１ｑ  ＥＬＩＳＡ、及びＣＤＣ阻害データのレーダーグラフを提供する。
【図１８Ｂ】Ｇ０４５ｃ及び補体優先ストラドマーＧ９９６の、各Ｆｃ受容体の３００秒間でのＲＵ（ＲＵ３００ｓ）のレーダーグラフを提供する。
【図１９】（パネル上列）バイオレイヤー干渉法によって測定される、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩＩａ、またはＦｃＲｎへのストラドマーＧ９９６の結合を示す。（パネル下列）マウスＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩ、及びＦｃγＲＩＶへのストラドマーＧ９９６の結合をまた示す。
【図２０Ａ】Ｇ０４５ｃ及び補体優先ストラドマーＧ１０４２の、各Ｆｃ受容体のＲＵｍａｘ、Ｃ１ｑ  ＥＬＩＳＡ、及びＣＤＣ阻害データのレーダーグラフを提供する。
【図２０Ｂ】Ｇ０４５ｃ及び補体優先ストラドマーＧ１０４２の、各Ｆｃ受容体の３００秒間でのＲＵ（ＲＵ３００ｓ）のレーダーグラフを提供する。
【図２１】バイオレイヤー干渉法によって測定される、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａ、及びＦｃγＲＩＩａへのストラドマーＧ１０４２の結合を示す。
【図２２Ａ】Ｇ０４５ｃ及び補体優先ストラドマーＧ１０４３の、各Ｆｃ受容体のＲＵｍａｘ、Ｃ１ｑ  ＥＬＩＳＡ、及びＣＤＣ阻害データのレーダーグラフを提供する。
【図２２Ｂ】Ｇ０４５ｃ及び補体優先ストラドマーＧ１０４３の、各Ｆｃ受容体の３００秒間でのＲＵ（ＲＵ３００ｓ）のレーダーグラフを提供する。
【図２３】バイオレイヤー干渉法によって測定される、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａ、またはＦｃγＲＩＩａへのストラドマーＧ１０４３の結合を示す。
【図２４Ａ】Ｇ０４５ｃ及び補体優先ストラドマーＧ１０４６の、各Ｆｃ受容体のＲＵｍａｘ、Ｃ１ｑ  ＥＬＩＳＡ、及びＣＤＣ阻害データのレーダーグラフを提供する。
【図２４Ｂ】Ｇ０４５ｃ及び補体優先ストラドマーＧ１０４６の、各Ｆｃ受容体の３００秒間でのＲＵ（ＲＵ３００ｓ）のレーダーグラフを提供する。
【図２５】バイオレイヤー干渉法によって測定される、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａ、またはＦｃγＲＩＩａへのストラドマーＧ１０４６の結合を示す。
【図２６Ａ】Ｇ０４５ｃ及び補体優先ストラドマーＧ１０５０の、各Ｆｃ受容体のＲＵｍａｘ、Ｃ１ｑ  ＥＬＩＳＡ、及びＣＤＣ阻害データのレーダーグラフを提供する。
【図２６Ｂ】Ｇ０４５ｃ及び補体優先ストラドマーＧ１０５０の、各Ｆｃ受容体の３００秒間でのＲＵ（ＲＵ３００ｓ）のレーダーグラフを提供する。
【図２７】バイオレイヤー干渉法によって測定される、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａ、及びＦｃγＲＩＩａへのストラドマーＧ１０５０の結合を示す。
【図２８Ａ】Ｇ０４５ｃ及び一般化ストラドマーＧ１０４９の、各Ｆｃ受容体のＲＵｍａｘ、Ｃ１ｑ  ＥＬＩＳＡ、及びＣＤＣ阻害データのレーダーグラフを提供する。
【図２８Ｂ】Ｇ０４５ｃ及び一般化ストラドマーＧ１０４９の、各Ｆｃ受容体の３００秒間でのＲＵ（ＲＵ３００ｓ）のレーダーグラフを提供する。
【図２９】バイオレイヤー干渉法によって測定される、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａ、及びＦｃγＲＩＩａへのストラドマーＧ１０４９の結合を示す。
【図３０Ａ】Ｇ０４５ｃ及び補体優先ストラドマーＧ１０２５の、各Ｆｃ受容体のＲＵｍａｘ、Ｃ１ｑ  ＥＬＩＳＡ、及びＣＤＣ阻害データのレーダーグラフを提供する。
【図３０Ｂ】Ｇ０４５ｃ及び補体優先ストラドマーＧ１０２５の、各Ｆｃ受容体の３００秒間でのＲＵ（ＲＵ３００ｓ）のレーダーグラフを提供する。
【図３１Ａ】ＥＬＩＳＡアッセイにおいて増加濃度のストラドマーでの吸光度によって測定される、Ｃ１ｑへの、陰性対照Ｇ００１、親ストラドマーＧＬ−２０４５、Ｇ９９３、Ｇ９９７、Ｇ９９８、Ｇ９９６、及びＧ９９４の結合を示す。
【図３１Ｂ】試験したストラドマーのそれぞれの、対数変換データ及びＥＣ５０値を示す。ＥＣ５０値は、μｇ／ｍＬで示す。
【図３２】ＥＬＩＳＡアッセイにおいて増加濃度のストラドマーでの吸光度によって測定される、補体成分Ｃ３への、陰性対照Ｇ００１、親ストラドマーＧＬ−２０４５、Ｇ９９４、Ｇ９９６、Ｇ９９７、及びＧ９９８の結合を示す。上パネルは対数変換吸光度データを示し、下パネルは非対数変換吸光度データを示す。
【図３３】ＥＬＩＳＡアッセイにおいて増加濃度のストラドマーでの吸光度によって測定される、補体成分Ｃ３ｂへの、陰性対照Ｇ００１、親ストラドマーＧＬ−２０４５、Ｇ９９７、Ｇ９９８、及びＧ９９４の結合を示す。
【図３４】ＥＬＩＳＡアッセイにおいて増加濃度のストラドマーでの吸光度によって測定される、補体成分Ｃ４への、陰性対照Ｇ００１、親ストラドマーＧＬ−２０４５、Ｇ９９６、Ｇ９９７、Ｇ９９８、及びＧ９９４の結合を示す。
【図３５】ＥＬＩＳＡアッセイにおいて増加濃度のストラドマーでの吸光度によって測定される、補体成分Ｃ５への、陰性対照Ｇ００１、親ストラドマーＧＬ−２０４５、Ｇ９９６、Ｇ９９７、Ｇ９９８、及びＧ９９４の結合を示す。
【図３６Ａ】ヒトＩｇＧ１、ＤＥＬ（図３６Ａ、配列番号３）、及びＥＥＭ（図３６Ｂ、配列番号２）多形の配列を提供する。
【図３６Ｂ】ヒトＩｇＧ１、ＤＥＬ（図３６Ａ、配列番号３）、及びＥＥＭ（図３６Ｂ、配列番号２）多形の配列を提供する。
【図３７】腎炎の動物モデルにおける、試験ストラドマーを投与した動物での、タンパク尿の著しい減少を示す。
【図３８Ａ】抗Ｔｈｙ１抗体を介して糸球体腎炎を誘導した後の罹患ＰＢＳ対照動物（図３８Ａ）、及び４０ｍｇ／ｋｇのＧ９９８を受けた動物（図３６Ｂ）の組織学的分析を示す。図３８Ａにおいて、（Ｇ）は、肥厚化した基底膜を有する糸球体を指し、（Ｂ）は、好塩基性尿細管及び間質浸潤物を指し、矢印は、タンパク質性流体で拡張した尿細管を指す。図３６Ｂは、Ｇ９９８治療動物における、損傷していない糸球体及び尿細管を示す。
【図３８Ｂ】抗Ｔｈｙ１抗体を介して糸球体腎炎を誘導した後の罹患ＰＢＳ対照動物（図３８Ａ）、及び４０ｍｇ／ｋｇのＧ９９８を受けた動物（図３６Ｂ）の組織学的分析を示す。図３８Ａにおいて、（Ｇ）は、肥厚化した基底膜を有する糸球体を指し、（Ｂ）は、好塩基性尿細管及び間質浸潤物を指し、矢印は、タンパク質性流体で拡張した尿細管を指す。図３６Ｂは、Ｇ９９８治療動物における、損傷していない糸球体及び尿細管を示す。
【図３９】対照治療としてＰＢＳを受けた動物（２群）または４０ｍｇ／ｋｇのＧ０９９８を受けた動物（４群）における、腎臓組織の組織学的分析のグラフ表示を提供する。
【図４０】ＰＢＳ対照動物、抗Ｔｈｙ１抗体を受けなかった非罹患対照動物、及びＧ９９４（４０ｍｇ／ｋｇ）、Ｇ９９８（４０ｍｇ／ｋｇもしくは８０ｍｇ／ｋｇ）、またはＧ１０３３（４０ｍｇ／ｋｇ）を受けた動物における、血中尿素窒素（ＢＵＮ）レベルを提供する。グラフ上に提供されるＰ値は、対照罹患ＰＢＳ動物に関連するものである。
【図４１】抗Ｆｘ１ａのみを受けた対照動物、０日目に抗Ｆｘ１ａ及びＧ９９８を受けた動物、ならびに０日目に抗Ｆｘ１ａ及び１日目にＧ９９８を受けた動物における、タンパク尿（ｍｇ／２４時間）を示す。
【図４２】その時間の示される化合物の単回用量後のラットにおける、Ｇ９９４、Ｇ９９８、またはＧ１０３３のレベル（μｇ／ｍＬ）を示す。
【図４３】Ｇ９９４（左パネル）、Ｇ９９８（中間パネル）、またはＧ１０３３（右パネル）の単回用量後のラット血液中の補体活性を示す。
【図４４Ａ】Ｇ９９４（左パネル）、Ｇ９９８（中間パネル）、及びＧ１０３３（右パネル）のそれぞれの、薬物レベル（ｘ軸上μｇ／ｍＬ）と補体活性（ｙ軸上％）との間の相関性を提供する。図４４Ａは、各補体優先ストラドマーの研究において収集された全てのデータ点を提供する。図４４は、曲線のより低い部分（より低い薬物濃度）に注目する。
【図４４Ｂ】Ｇ９９４（左パネル）、Ｇ９９８（中間パネル）、及びＧ１０３３（右パネル）のそれぞれの、薬物レベル（ｘ軸上μｇ／ｍＬ）と補体活性（ｙ軸上％）との間の相関性を提供する。図４４Ａは、各補体優先ストラドマーの研究において収集された全てのデータ点を提供する。図４４は、曲線のより低い部分（より低い薬物濃度）に注目する。
【図４５】０時間、用量の０、１、２、４、１２、２４、４８、７２、１４４、２１６、及び３１２時間後に測定される、補体優先化合物の単回用量後のカニクイザルにおける、Ｇ９９４、Ｇ９９８、またはＧ１０３３の薬物レベル（μｇ／ｍＬ）を示す。
【図４６】Ｇ９９４（左パネル）、Ｇ９９８（中間パネル）、またはＧ１０３３（右パネル）の単回用量後の、経時的な補体活性（細胞死％）を示す。
【図４７Ａ】この研究において試験した化合物のそれぞれの、薬物レベルと補体活性との間の相関性を示す。図４７Ａは、この実験において収集された全てのデータ点を示し、図４７Ｂは、より低い薬物濃度での曲線の最初の部分を示す。Ｇ９９４について、ｘ軸切片値は、２％及び４％の血清について１４４及び１６８μｇ／ｍｌである。相関性のＲ２値は、０．８６６及び０．８３５である。Ｇ９９８について、ｘ切片値は、２％及び４％の血清について４２５及び３４７μｇ／ｍｌであり、Ｒ２値は０．９２５及び０．７４３である。Ｇ１０３３について、ｘ切片は３４６及び３７９μｇ／ｍｌであり、Ｒ２値は０．５８４及び０．７１４である。
【図４７Ｂ】この研究において試験した化合物のそれぞれの、薬物レベルと補体活性との間の相関性を示す。図４７Ａは、この実験において収集された全てのデータ点を示し、図４７Ｂは、より低い薬物濃度での曲線の最初の部分を示す。Ｇ９９４について、ｘ軸切片値は、２％及び４％の血清について１４４及び１６８μｇ／ｍｌである。相関性のＲ２値は、０．８６６及び０．８３５である。Ｇ９９８について、ｘ切片値は、２％及び４％の血清について４２５及び３４７μｇ／ｍｌであり、Ｒ２値は０．９２５及び０．７４３である。Ｇ１０３３について、ｘ切片は３４６及び３７９μｇ／ｍｌであり、Ｒ２値は０．５８４及び０．７１４である。
【図４８Ａ】試験した誘導体ストラドマー化合物（Ｇ９９４またはＧ９９８）が基づく親化合物ＧＬ−２０４５のように、誘導体ストラドマー化合物が多量体を形成することを示すゲルである。化合物ＧＬ−２０４５、Ｇ９９４、Ｇ１１０３、Ｇ１０８８、Ｇ１０８９、Ｇ１１０４、Ｇ１０８２、Ｇ１１０５、及びＧ１１０６を、図４８Ａに示す。化合物ＧＬ−２０４５、Ｇ９９４、Ｇ１１０２、Ｇ１１００、Ｇ１１０１、Ｇ１１２５、Ｇ１１０８、Ｇ１１０９、及びＧ１０８４を、図４８Ｂに示す。化合物ＧＬ−２０４５、Ｇ９９８、及びＧ１１０７を、図４８Ｃに示す。化合物ＧＬ−２０４５、Ｇ９９４、Ｇ１１１０、Ｇ１１１１、Ｇ１１１２、Ｇ１１１４、Ｇ１１１５、Ｇ１１１６、Ｇ１１１７、Ｇ１１１８、及びＧ１１１９を、図４８Ｄに示す。化合物ＧＬ−２０４５、Ｇ９９４、Ｇ１１２０、Ｇ１１２１、Ｇ１１２２、Ｇ１１２３、Ｇ１１２４、Ｇ１１２８、Ｇ１１２９、Ｇ１１３０、及びＧ１１３１を、図４８Ｅに示す。化合物ＧＬ−２０４５、Ｇ９９８、Ｇ１０７１ｄ２、Ｇ１０６８、Ｇ１０９４、Ｇ１０９２、Ｇ１０９６、Ｇ１０９３、及びＧ１０９５を、図４８Ｆに示す。化合物ＧＬ−２０４５、Ｇ９９８、Ｇ１０６９、Ｇ１０７０、Ｇ１１３２、Ｇ１０７５、及びＧ１０７５を、図４８Ｇに示す。
【図４８Ｂ】同上
【図４８Ｃ】同上
【図４８Ｄ】同上
【図４８Ｅ】同上
【図４８Ｆ】同上
【図４８Ｇ】同上
【図４９】ＥＬＩＳＡアッセイにおいて増加濃度のストラドマーでの吸光度によって測定される、補体成分Ｃ３（左上パネル）、Ｃ３ｂ（右上パネル）、Ｃ５（左下パネル）、またはＣ４（右下パネル）への、ＩｇＧ１  Ｆｃである陰性対照Ｇ００１、ストラドマーＧＬ−２０４５、または補体優先ストラドマーＧ９９４、Ｇ９９８、もしくはＧ１０３３の結合を示す
【図５０Ａ】バイオレイヤー干渉法（ＦｏｒｔｅＢｉｏ  Ｏｃｔｅｔ）によって測定される、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、またはＦｃγＲＩＩＩへのストラドマーＧ１１０３、Ｇ１０８８、Ｇ１０８９、Ｇ１１０４、Ｇ１０８２、Ｇ１１０５、及びＧ１１０６の結合を示す。
【図５０Ｂ】バイオレイヤー干渉法（ＦｏｒｔｅＢｉｏ  Ｏｃｔｅｔ）によって測定される、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、またはＦｃγＲＩＩＩへのストラドマーＧ１１０３、Ｇ１０８８、Ｇ１０８９、Ｇ１１０４、Ｇ１０８２、Ｇ１１０５、及びＧ１１０６の結合を示す。
【図５０Ｃ】バイオレイヤー干渉法（ＦｏｒｔｅＢｉｏ  Ｏｃｔｅｔ）によって測定される、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、またはＦｃγＲＩＩＩへのストラドマーＧ１１０３、Ｇ１０８８、Ｇ１０８９、Ｇ１１０４、Ｇ１０８２、Ｇ１１０５、及びＧ１１０６の結合を示す。
【図５１Ａ】バイオレイヤー干渉法（ＦｏｒｔｅＢｉｏ  Ｏｃｔｅｔ）によって測定される、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、またはＦｃγＲＩＩＩへのストラドマーＧ１１０２、Ｇ１１００、Ｇ１１０１、Ｇ１１２５、Ｇ１１０８、Ｇ１１０９、及びＧ１０８４の結合を示す。
【図５１Ｂ】バイオレイヤー干渉法（ＦｏｒｔｅＢｉｏ  Ｏｃｔｅｔ）によって測定される、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、またはＦｃγＲＩＩＩへのストラドマーＧ１１０２、Ｇ１１００、Ｇ１１０１、Ｇ１１２５、Ｇ１１０８、Ｇ１１０９、及びＧ１０８４の結合を示す。
【図５１Ｃ】バイオレイヤー干渉法（ＦｏｒｔｅＢｉｏ  Ｏｃｔｅｔ）によって測定される、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、またはＦｃγＲＩＩＩへのストラドマーＧ１１０２、Ｇ１１００、Ｇ１１０１、Ｇ１１２５、Ｇ１１０８、Ｇ１１０９、及びＧ１０８４の結合を示す。
【図５２Ａ】バイオレイヤー干渉法（ＦｏｒｔｅＢｉｏ  Ｏｃｔｅｔ）によって測定される、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、またはＦｃγＲＩＩＩへのストラドマーＧ１１００、Ｇ１１１１、Ｇ１１１２、Ｇ１１１３、Ｇ１１１４、Ｇ１１１５、Ｇ１１１６、Ｇ１１１７、Ｇ１１１８、Ｇ１１１９、Ｇ１１２０、Ｇ１１２１、Ｇ１１２２、Ｇ１１２３、Ｇ１１２４、Ｇ１１２８、Ｇ１１２９、Ｇ１１３０、及びＧ１１３１の結合を示す。
【図５２Ｂ】同上
【図５２Ｃ】同上
【図５２Ｄ】同上
【図５２Ｅ】同上
【図５２Ｆ】同上
【図５２Ｇ】同上
【図５３Ａ】バイオレイヤー干渉法（ＦｏｒｔｅＢｉｏ  Ｏｃｔｅｔ）によって測定される、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、またはＦｃγＲＩＩＩへのストラドマーＧ１０７１ｄ２、Ｇ１０６８、Ｇ１０９４、Ｇ１０９２、Ｇ１０９６、Ｇ１１０７、Ｇ１０９３、及びＧ１０９５の結合を示す。
【図５３Ｂ】バイオレイヤー干渉法（ＦｏｒｔｅＢｉｏ  Ｏｃｔｅｔ）によって測定される、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、またはＦｃγＲＩＩＩへのストラドマーＧ１０７１ｄ２、Ｇ１０６８、Ｇ１０９４、Ｇ１０９２、Ｇ１０９６、Ｇ１１０７、Ｇ１０９３、及びＧ１０９５の結合を示す。
【図５３Ｃ】バイオレイヤー干渉法（ＦｏｒｔｅＢｉｏ  Ｏｃｔｅｔ）によって測定される、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、またはＦｃγＲＩＩＩへのストラドマーＧ１０７１ｄ２、Ｇ１０６８、Ｇ１０９４、Ｇ１０９２、Ｇ１０９６、Ｇ１１０７、Ｇ１０９３、及びＧ１０９５の結合を示す。
【図５４Ａ】バイオレイヤー干渉法（ＦｏｒｔｅＢｉｏ  Ｏｃｔｅｔ）によって測定される、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、またはＦｃγＲＩＩＩへのストラドマーＧ１０６９、Ｇ１０７０、Ｇ１１３２、Ｇ１０７４、及びＧ１０７５の結合を示す。
【図５４Ｂ】バイオレイヤー干渉法（ＦｏｒｔｅＢｉｏ  Ｏｃｔｅｔ）によって測定される、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、またはＦｃγＲＩＩＩへのストラドマーＧ１０６９、Ｇ１０７０、Ｇ１１３２、Ｇ１０７４、及びＧ１０７５の結合を示す。
【図５５Ａ】ビヒクル対照（０μｇ／ｍＬのＧ０１９、Ｇ９９４、もしくはＧ１０３３）、または０．０２μｇ／ｍＬ〜２０００μｇ／μＬの範囲の用量のＧ０１９、Ｇ９９４、及びＧ１０３３での治療の２０時間後の、単離ＰＢＭＣからのＩＬ１Ｒα誘導を示す。全ての標準受容体に結合するＧ０１９を、陽性対照として使用した。
【図５５Ｂ】ビヒクル対照（０μｇ／ｍＬのＧ０１９、Ｇ９９４、もしくはＧ１０３３）、または０．０２μｇ／ｍＬ〜２０００μｇ／μＬの範囲の用量のＧ０１９、Ｇ９９４、及びＧ１０３３での治療の４時間後の、単離ＰＢＭＣからのＴＮＦα誘導を示す。全ての標準受容体に結合するＧ０１９を、陽性対照として使用した。
【図５６】ＥＬＩＳＡによって測定される、補体優先ストラドマーのＣ１ｑ結合を示す。
【図５７】Ｇ９９４、Ｇ９９８、Ｇ１０３３、ＰＢＳ対照、デキサメタゾンで治療した関節炎のＣＩＡモデル、または治療していない対照における、ルイスラットの平均足首直径を示す。
【図５８Ａ】図５６に示される選択補体優先化合物、Ｇ１０８８、Ｇ１１２９、Ｇ１０８２、Ｇ１０９２、及びＧ１１０２（図５８Ａ）、及びＧ１０６９、Ｇ１１１４、及びＧ１０７５（図５８Ｂ）のＣ１ｑ結合データを示す。
【図５８Ｂ】図５６に示される選択補体優先化合物、Ｇ１０８８、Ｇ１１２９、Ｇ１０８２、Ｇ１０９２、及びＧ１１０２（図５８Ａ）、及びＧ１０６９、Ｇ１１１４、及びＧ１０７５（図５８Ｂ）のＣ１ｑ結合データを示す。
【図５９】バイオレイヤー干渉法によって測定される、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩｂ、及びＦｃγＲＩＩＩａへのストラドマーＧ９９９及びＧ９９６の結合を示す。
【図６０】Ｇ９９９及びＧ９９６のＣＤＣ阻害データを示す。ＣＤ２０は、ＣＤ２０抗体の添加を意味する。「６％」は、６％の血清補体の添加を意味する。対照は、細胞プラスＧ９９６（５０及び１００μｇ／ｍｌ）のみの添加、細胞プラス血清（「＋６％」）、ならびに細胞プラス血清プラス抗体（「細胞＋ＣＤ２０＋６％」）を含む。
【図６１】Ｇ９９４のＣＤＣ阻害データを示す。ＣＤ２０は、ＣＤ２０抗体の添加を意味する。「６％」は、６％の血清補体の添加を意味する。対照は、細胞プラスＧ９９６（５０及び１００μｇ／ｍｌ）のみの添加、細胞プラス血清（「＋６％」）、ならびに細胞プラス血清プラス抗体（「細胞＋ＣＤ２０＋６％」）を含む。
【図６２】Ｇ９９８のＣＤＣ阻害データを示す。ＣＤ２０は、ＣＤ２０抗体の添加を意味する。「６％」は、６％の血清補体の添加を意味する。対照は、細胞プラスＧ９９６（５０及び１００μｇ／ｍｌ）のみの添加、細胞プラス血清（「＋６％」）、ならびに細胞プラス血清プラス抗体（「細胞＋ＣＤ２０＋６％」）を含む。
【図６３】Ｇ１０３３のＣＤＣ阻害データを示す。ＣＤ２０は、ＣＤ２０抗体の添加を意味する。「６％」は、６％の血清補体の添加を意味する。対照は、細胞プラスＧ９９６（５０及び１００μｇ／ｍｌ）のみの添加、細胞プラス血清（「＋６％」）、ならびに細胞プラス血清プラス抗体（「細胞＋ＣＤ２０＋６％」）を含む。
【発明を実施するための形態】
【００５４】
本明細書に記載される免疫調節化合物のための合理的分子設計へのアプローチは、補体への保持された、優先的な、または改良された結合を呈する免疫学的に活性な生物模倣物（複数可）の、組み換え及び／または生化学的作製を含む。一実施形態において、本明細書に提供される組成物は、Ｆｃ受容体への結合に対して補体への結合の比率を増加させることによって補体結合を改良する。一実施形態において、本明細書に提供される組成物は、１つまたはいくつかのＦｃγＲへの結合の低下または欠如を呈する。別の実施形態において、本明細書に提供される組成物は、ＦｃＲｎへの結合の低下または欠如を呈する。一実施形態において、本明細書に提供される組成物は補体に結合し、ＦｃＲｎだけでなく特定のＦｃγＲへの結合の低下または欠如も呈する。本明細書に提供される組成物は、例えば、補体媒介疾患及び補体関連疾患の治療に対して有用性を有する。本明細書に提供される組成物はまた、多量体化も呈する。一実施形態において、本明細書に提供される組成物は、以前に記載されている生物模倣物と比較して、保持または改良された多量体化を呈する。
【００５５】
ＷＯ２００８／１５１０８８は、自己免疫疾患及び他の炎症性病態を含む病理学的病態の治療のための、ストラドマーの個々の成分間に制限部位及び親和性タグを含む短配列を含む、ｈＩＶＩＧの高次多量体化免疫グロブリンＦｃ生物模倣物（ストラドマーとして知られる生物活性高次多量体）を作製するための、連結免疫グロブリンＦｃドメインの使用を開示する。ＷＯ２００８／１５１０８８及び米国特許第８，６８０，２３７号を参照されたく、これらのそれぞれの内容全体が、参照により組み込まれる。ＷＯ２０１２／０１６０７３は、個々の成分が、制限部位または親和性タグによって分離されるのではなく、むしろ直接連結されるストラドマーを開示する。ＷＯ２０１２／０１６０７３及び米国出願公開第２０１３／０１５６７６５号を参照されたく、これらのそれぞれの内容全体が、参照により組み込まれる。ＷＯ２０１２／０１６０７３はまた、ＩｇＧ１Ｆｃドメインを含み、ＩｇＧ２ヒンジ多量体化ドメインがそのＣ末端に直接連結される、ストラドマー（ＧＬ−２０４５）の多量体化も具体的に開示し、これは、Ｎ末端連結構築物（Ｇ０１９、ＷＯ２００８／１５１０８８に記載）と比較して、改良された多量体化及び補体結合を呈する。本明細書に開示されるストラドマー単位は、ＧＬ−２０４５のＦｃ領域内に１つ以上の点変異を含み、以前に記載されている分子と比較して、標準Ｆｃガンマ受容体結合と比較して改良された補体結合及び／または選択的もしくは増加した補体結合のいずれかをもたらす。
【００５６】
Ｇ０４５ｃ及びＧ０１９は、以前に記載されている（ＷＯ２０１２／０１６０７３を参照されたい）。Ｇ０４５ｃの構造はＩｇＧ１ヒンジ−ＩｇＧ１ＣＨ２  ＩｇＧ１  ＣＨ３−ＩｇＧ２ヒンジであり、Ｇ０４５ｃは配列番号７及び８として提供される。
【００５７】
「Ｇ０４５ｃ」、「ＧＬ−２０４５」という用語は、本明細書において互換的に使用される。Ｇ０４５ｃは、構造：ＩｇＧ１ヒンジ−ＩｇＧ１ＣＨ２  ＩｇＧ１  ＣＨ３−ＩｇＧ２ヒンジを有する。本明細書で使用される場合、「Ｇ０４５ｃ背景上のストラドマー」などという用語は、ＩｇＧ１ヒンジ−ＩｇＧ１ＣＨ２  ＩｇＧ１  ＣＨ３−ＩｇＧ２ヒンジ（配列番号７または８）の構造を有するストラドマーを指す。Ｇ０１９の構造は、ＩｇＧ２ヒンジ−ＩｇＧ１ヒンジ−ＩｇＧ１  ＣＨ２−ＩｇＧ１  ＣＨ３である。本明細書で使用される場合、「Ｇ０１９背景上のストラドマー」などという用語は、ＩｇＧ２ヒンジ−ＩｇＧ１ヒンジ−ＩｇＧ１  ＣＨ２−ＩｇＧ１  ＣＨ３（配列番号９）の構造を有するストラドマーを指す。当業者は、ＧＬ−２０４５及びＧ０１９の両方のアミノ酸配列が、成熟タンパク質の発現時に切断されるアミノ末端リーダー配列（配列番号１）を含むことを理解するだろう。
【００５８】
完全抗体分子のＦｃ領域内の変異は、抗体特徴及び機能に関して予想可能な結果を有する。例えば、Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２７６；６５９１（２００１）を参照されたい。特に、Ｍｏｏｒｅらは、モノクローナル抗体のＦｃ領域内の三重変異Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及び／またはＳ３２４Ｔが、標準Ｆｃγ受容体またはＦｃＲｎ結合と比較して、モノクローナル抗体の補体結合の比率を確実に増加させることを実証している（Ｍａｂｓ２：２；１８（２０１０））。しかしながら、本発明者らは、三重変異Ｓ２６７Ｅ／Ｈ２６８Ｆ／Ｓ３２４Ｔを含む、多量体化ストラドマーのＦｃ領域内の変異Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及び／またはＳ３２４Ｔが、実際に、かつ非常に驚くべきことに、Ｃ１ｑへの結合の欠乏と関連付けられるため、標準Ｆｃγ受容体結合と比較して、補体結合の比率を増加させない、化合物を本明細書に開示する（例えば、Ｇ９９９、Ｇ１０２４、Ｇ１０３０、Ｇ１０３１、Ｇ１０４０、Ｇ１０４４、及びＧ１０４８）。
【００５９】
Ｃ１ｑ結合を増加させ、それによってＣＤＣを増加させる、モノクローナル抗体に対する特異的変異（Ｍｏｏｒｅらによって記載されている、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及び／またはＳ３２４Ｔなど）は十分に確立されている（Ｍｏｏｒｅ  ｅｔ．ａｌ．２０１０）。本発明者らは、ストラドマーの多量体化の文脈において、これらの同一の変異を組み込むことによって、ＣＤＣが増加しないことだけでなく、固有のＣＤＣが一切ないこととも関連付けられる、多数の化合物を記載する。更に、かつこれらの変異が、ｍＡｂの文脈においてＣＤＣの増加と関連付けられることを驚くことに仮定すると、本発明者らは、これらの同一の変異を組み込む本発明の化合物が、実際に濃度依存的様式でＣＤＣを阻害することを本明細書において実証する（例えば、Ｇ９９４、Ｇ９９８、及び多くの他のもの、図６１〜６３）。
【００６０】
更に、抗体の文脈において、Ｆｃドメインの２９７位に導入される点変異は、高親和性及び低親和性標準Ｆｃγ受容体への結合を減少させることが報告されている（Ｒｏｂｅｒｔ  Ｌ．Ｓｈｉｅｌｄｓ，ｅｔ  ａｌ．Ｈｉｇｈ  Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ  Ｍａｐｐｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｓｉｔｅ  ｏｎ  Ｈｕｍａｎ  ＩｇＧ１  ｆｏｒ  ＦｃγＲＩ，ＦｃγＲＩＩ，ＦｃγＲＩＩＩ，ａｎｄ  ＦｃＲｎ  ａｎｄ  Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  ＩｇＧ１Ｖａｒｉａｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ｉｍｐｒｏｖｅｄ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  ｔｏ  ｔｈｅ  ＦｃγＲ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，Ｆｅｂ２００１；２７６：６５９１−６６０４）。同様に、モノクローナル抗体の文脈において、Ｆｃドメインの２９９位に導入される点変異は、ＦｃγＲへの結合に可変的に影響を与え（例えば、ＦｃγＲＩＩＩａへの結合を低減し、ＦｃγＲＩＩａ結合を維持する）、更にＣ１ｑへの結合阻害することが示されている（Ｓａｚｉｎｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．Ａｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｅｄ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｇ１ｖａｒｉａｎｔｓ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅｌｙ  ｅｎｇａｇｅ  ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ  Ｆｃ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．２００８Ｄｅｃ２３；１０５（５１）：２０１６７−２０１７２；ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０８５７５７）。特定の多量体化ストラドマーの文脈において、Ｆｃドメインまたは２９７位の点変異は、低親和性標準Ｆｃγ受容体への結合のＦｃドメインをもたらした。しかしながら、特定のストラドマーにおいて、２９９位の変異は、予想されるＦｃγＲへの結合の減少はもたらさないが、むしろ、全ての標準ＦｃγＲへのＦｃ結合の保持または改良をもたらす。
【００６１】
加えて、２３６及び３２８位の二重変異（Ｔａｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ１１９；２０７４（２０１２））または２３３位の変異（Ｓｈｉｅｌｄｓ，ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．，２７６（９）：６５９１（２００１）は、標準ＦｃγＲへの抗体または免疫グロブリンＦｃ結合を低減することが示されている。２３６及び３２８位の二重変異は、ＦｃγＲＩへの抗体または免疫グロブリン結合を排除する（Ｔａｉ  ｅｔ  ａｌ．２０１２）ことが更に示されているが、しかしながら、本発明者らは、驚くべきことに、多量体化ストラドマーならびに２６７及び／または２６８及び／または３２４位の補体改良変異の文脈において、ＦｃγＲＩ結合が特定の多量体化ストラドマーにおいて予想外に保持されることを見出した。加えて、２３３及び２３６位の二重変異（Ｅ２３３Ｐ及びＧ２３６Ｒ）は、全ての標準Ｆｃ受容体への結合を低減することが予想されるが、しかしながら、本発明者らは、これらの２つの位置の変異を含むいくつかの変異の組み合わせが、未変異の対応するストラドマーと比較して、予想外に保持または増加された１つ以上のＦｃ受容体への結合をもたらすことを見出した。加えて、３２８位の変異（Ｌ３２８Ｆ）は、ＦｃγＲＩＩｂへの結合のみを増加させるこが予想されていたが（Ｃｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ４５；３９２６（２００８））、しかしながら、本発明者らは、驚くべきことに、３２８位の変異を含むストラドマーが、少なくとも２６７、２６８、及び３２４位に追加の変異を有するストラドマーの文脈において、予想不可能な方法で１つ以上の他の標準ＦｃγＲへの結合の増加をもたらすことを見出した。更に、２３８位の変異は、ＦｃγＲＩＩｂへの結合を増加させ、ＦｃγＲＩ及びＦｃγＲＩＩａへの結合を減少させることが予想される（Ｍｉｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｄｅｓｉｇｎ，ａｎｄ  Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ｐ．１−１０（２０１３））一方で、２６５位の変異は、全ての標準ＦｃγＲ結合を低減させることが予想される。しかしながら、本発明者らは、驚くべきことに、多量体化ストラドマーならびに２６７及び／または２６８及び／または３２４位の補体改良変異の文脈において、２３８及び２６５位の変異が、特定の多量体化ストラドマーにおいてＦｃγＲＩＩａへの頑強な結合をもたらすことを見出した。したがって、本発明者らは、驚くべきことに、例えば、モノクローナル抗体における標準結合を低減もしくは排除するため、またはＣ１ｑ結合を改変するための抗体機能の修飾を教示する文献における変異が、多量体化ストラドマーの文脈においては、同一の影響を有さないことを見出した。
【００６２】
更に、ストラドマーの文脈においてすら、変異の影響は同様に予想不可能である。例えば、本明細書に記載されるように、２つのストラドマーが、１つ以上の特定の位置での１つ以上の変異以外に互いに同一である場合、その変異が構造的に類似したアミノ酸に対するものである場合ですら、２つのストラドマーは大いに異なる機能的特徴を有し得る。加えて、ＷＯ２０１２／０１６０７３は、驚くべきことに、ＧＬ−２０４５及びＧ０１９が全く同一の成分を有し、かつ実際にはＩｇＧ１  Ｆｃドメインに対するＩｇＧ２ヒンジ領域の位置以外には全く同一の分子であるという事実に関わらず、これらの分子は、補体結合に関して大いに異なる活性を呈することを開示する。両方の分子は多量体化し、Ｆｃ受容体に結合する。際だったことに、ＧＬ−２０４５は、補体結合及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）阻害だけでなく、全てのＦｃ受容体への頑強な結合を呈する一方で、Ｇ０１９は、補体への結合も、ＣＤＣの阻害もしない。同様に、全く同一の変異がＧＬ−２０４５及びＧ０１９になされる場合、結果は完全に異なるもの、及び実際には反対のものであり得る。一例として、化合物９９６及び９９９はともに、追加の変異Ｇ２３６Ｒだけでなく、Ｃ１ｑ結合を増加させることが予想される、Ｍｏｏｒｅらに開示される三重変異（Ｓ２６７Ｅ／Ｈ２６８Ｆ／Ｓ３２４Ｔ）も内部に持つ。しかしながら、ＧＬ−２０４５の文脈において、この変異は、標準Ｆｃγ受容体（Ｇ９９６）よりもＣ１ｑ結合を優先的に保持する一方で、Ｇ０１９において、Ｃ１ｑへの結合（Ｇ９９９）は存在しない。さもなければ特徴がはっきりした変異であるものにおける、この機能の二分は、多量体化ストラドマーの文脈においてなされる変異が予想不可能であることを強調する。
【００６３】
更に、モノクローナル抗体が、それらのＦｃγＲ及び補体標的に対する親和性を有し、これが変異を導入することによって上方制御または下方制御され得る一方で、ストラドマーは、ＦｃγＲ及び補体に多価Ｆｃを提示し、したがって、それらの標的に結合するために結合力により重度に依存する。対照的に、モノクローナル抗体は、それらのＦｃドメインを通した強力な結合は有さない。これらの特徴は、ストラドマー及びモノクローナル抗体が、構造においてだけでなく、機能及び有用性においても本質的に異なるという事実を強調する。
【００６４】
したがって、分子の任意の領域内のいかなる変異または変異の組の、多量体化ストラドマーの活性に対する影響も、モノクローナル抗体に関する文献に基づいては予想することができない。したがって、当該技術分野において、抗体に対して特定の影響（例えば、抗原特異性を有する抗体の文脈において、特定のＦｃγＲへの結合を増加または減少させる変異など）を有することが既知であるアミノ酸変異の影響は、ストラドマーの文脈においては、予想することができない。同様に、点変異Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａは、Ｃ１ｑへのＦｃ結合を減少させることが説明されている（ＷＯ２０１５／１３２３６４、Ａｒｄｕｉｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６５（２）：４５６−４６３（２０１５）、Ｂｏｙｌｅ  ｅｔ  ａｌ，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，４２（３）：５８０−５９０（２０１５）を参照されたい）。しかしながら、本発明者らは、驚くべきことに、本発明の生物模倣物へのこれらの変異の導入が、Ｃ１ｑ結合の保持または改良をもたらすことを見出した（例えば、Ｇ１０３３及びＧ１０３２）。
【００６５】
本発明者らは、それらの親生物模倣物（例えば、ＧＬ−２０４５またはＧ０１９）と比較して、Ｆｃ受容体結合と比較して補体結合の比率が増加される、免疫学的に活性な生物模倣物を特定することを目指す。一実施形態において、本発明の生物模倣物は、Ｃ１ｑへの保持または改良された結合を呈する。一実施形態において、本発明の生物模倣物は、Ｃ１ｑ、Ｃ１ｒ、Ｃ１ｓ、Ｃ４、Ｃ４ａ、Ｃ３、Ｃ３ａ、Ｃ４ｂ２ａ３ｂ、Ｃ３ｂ、Ｃ５、Ｃ５ａ、Ｃ５ｂ、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、及び／またはＣ９を非限定的に含む補体系の成分に結合し、それによって「補体シンク」としての役割を果たし得る。本明細書で使用される場合、「補体シンク」とは、Ｃ１ｑまたは補体カスケードの別の上流成分に結合し、補体系の下流活性化を予防する現象を指す。一実施形態において、本発明の生物模倣物は、Ｃ５ｂ−９膜侵襲複合体の上流の補体系の成分に結合する。一実施形態において、本発明の生物模倣物は、Ｃ５ａの上流の補体系の成分に結合する。一実施形態において、本発明の生物模倣物は、Ｃ５ａ及び膜侵襲複合体の減少を呈する。一実施形態において、本発明の生物模倣物は、低減されたＦｃγＲＩ及び／またはＦｃγＲＩＩａ及び／またはＦｃγＲＩＩｂ及び／またはＦｃγＲＩＩＩ結合、ならびに保持または改良された補体結合を呈する。一実施形態において、本発明の生物模倣物は、低減したＦｃＲｎ結合、及び保持または改良された補体結合を呈する。更なる一実施形態において、本発明の生物模倣物は、保持または改良された補体結合、ならびに低減した標準ＦｃγＲ結合及び低減したＦｃＲｎ結合を呈する。一実施形態において、本発明の生物模倣物は、保持または改良された補体結合及び１つ以上の標準ＦｃγＲへの選択的結合（例えば、ＦｃγＲＩＩｂへの結合ではなくＦｃγＲＩへの結合もしくはＦｃγＲＩへの結合ではなくＦｃγＲＩＩｂへの結合）、または改良された補体結合及びＦｃＲｎへの選択的結合を呈する。
【００６６】
いくつかの実施形態において、本発明の生物模倣物及び組成物は、自然免疫グロブリンＩｇＧ１と比較して、補体経路の成分の改良された結合の利点を有する。自然免疫グロブリンＩｇＧ１と比較した、補体経路の成分の改良された結合の程度は、実際には非常に著しいものであり得、特定の状況下でヒトにおいて発生し得る凝集ＩｇＧ１への補体経路の成分の結合に接近するか、またはそれを凌ぐ。いくつかの実施形態において、本発明の生物模倣物及び組成物は、自然免疫グロブリンＩｇＧ１と比較して、補体経路の成分の保持された結合の利点を有し、Ｆｃ受容体及び他のリガンドの結合は低下する。
【００６７】
いくつかの実施形態において、本発明の生物模倣物及び組成物は、自然免疫グロブリンＩｇＧ１、静脈内免疫グロブリン（ＩＶＩＧ）、免疫グロブリン凝集体が濃縮されたヒト血漿について観察される標準Ｆｃ受容体結合、または点変異を有さない親生物模倣型組成物と比較して、優先的補体結合の利点を有する。そのような優先的結合は、会合の改良、解離の低下、結合力の証拠、またはより低い濃度での類似した結合を非限定的に特徴とし得る。いくつかの実施形態において、本発明の生物模倣物及び組成物自然免疫グロブリンＩｇＧ１、静脈内免疫グロブリン（ＩＶＩＧ）、免疫グロブリン凝集体が濃縮されたヒト血漿について観察される標準Ｆｃ受容体結合、または点変異を有さない親生物模倣型組成物と比較して、改良された補体結合の利点を有する。いくつかの実施形態において、本発明の補体結合生物模倣物及び組成物は、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を阻害する。いくつかの実施形態において、本発明の補体結合生物模倣物及び組成物は、ＦｃγＲＩ及び／またはＦｃγＲＩＩａ及び／またはＦｃγＲＩＩｂ及び／またはＦｃγＲＩＩＩへの結合の低減または機能的欠如によって、ＣＤＣを阻害する。いくつかの実施形態において、本発明の補体結合生物模倣物及び組成物は、補体成分（複数可）、Ｃ１ｑ及び／またはＣ４及び／またはＣ４ａ及び／またはＣ３及び／またはＣ３ａ及び／またはＣ５及び／またはＣ５ａに結合する。いくつかの実施形態において、本発明の補体結合生物模倣物及び組成物は、Ｃ３ｂに結合する。いくつかの実施形態において、本発明の生物模倣物及び組成物は、補体分子、例えば、Ｃ１ｑ、Ｃ３、またはＣ３ｂに結合して、補体系の活性化を予防または低減し、細胞溶解、炎症、または血栓症などの下流補体媒介機能を予防または低減する。いくつかの実施形態において、本発明の生物模倣物及び組成物は、Ｃ４ａ、Ｃ３ａ、及び／またはＣ５ａのレベルの増加と関連付けられ、これらのレベルの増加は、抗炎症性または抗血栓性臨床プロファイルと関連付けられる。
【００６８】
いくつかの実施形態において、本発明の補体結合生物模倣物及び組成物は、インタクト免疫グロブリン及び／または以前に記載されている補体結合組成物と比較して、改良された多量体化の更なる利点を有する。別の実施形態において、本発明の生物模倣物及び組成物は、全てまたは特定の標準ＦｃγＲへの結合の低減または欠如の追加の利点を有する。いくつかの実施形態において、本発明の補体結合生物模倣物及び組成物は、インタクト免疫グロブリンと同一または改良された補体結合、インタクト免疫グロブリンまたは未変異の親化合物と比較して、改良された多量体化及び１つ以上の標準ＦｃγＲへの結合の低下の利点を有する。他の実施形態において、本発明の補体結合生物模倣物及び組成物は、改良された補体結合、改良された多量体化、及びＦｃγＲＩＩＩａへの結合の低下の利点を有する。いくつかの実施形態において、本発明の補体結合生物模倣物及び組成物は、保持または改良された補体結合を呈し、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、またはＦｃγＲＩＩＩへの結合を保持する。一実施形態において、本発明の補体結合生物模倣物及び組成物は、保持または改良された補体結合を呈し、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合は保持するが、いかなる有意な程度であれども、いかなる他の標準低親和性ＦｃγＲへの結合も保持しない（例えば、本明細書に記載されるストラドマーＧ１０３３）。一実施形態において、本発明の補体結合生物模倣物及び組成物は、保持または改良された補体結合を呈し、ＦｃＲｎ及びＦｃγＲＩへの結合は保持するが、いかなる有意な程度であれども、いかなる活性化低親和性標準ＦｃγＲへの結合も保持しない（例えば、本明細書に記載されるストラドマーＧ９９４及びＧ９９８）。一実施形態において、本発明の補体結合生物模倣物及び組成物は、保持または改良された補体結合を呈し、ＦｃγＲＩ及び／またはＦｃγＲＩＩｂへの結合は保持するが、いかなる他の標準ＦｃγＲへの結合も保持しない（例えば、本明細書に記載されるストラドマーＧ９９４）。一実施形態において、本発明の補体結合生物模倣物及び組成物は、保持または改良された補体結合を呈し、ＦｃＲｎ及びＦｃγＲＩへの結合は保持するが、低親和性活性化受容体ＦｃγＲＩＩａ及び／またはＦｃγＲＩＩＩａへの結合の低下を有する（例えば、本明細書に記載されるストラドマーＧ９９７、Ｇ１００３、及びＧ１０２２）。別の実施形態において、本発明の補体結合生物模倣物及び組成物は、保持または改良された補体結合を呈し、ＦｃγＲＩＩｂへの結合は保持するが、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、またはＦｃγＲＩＩＩａを含む他の標準ＦｃγＲへの結合の低下を有する（例えば、本明細書に記載されるストラドマーＧ９９６及びＧ１００３）。
【００６９】
別の実施形態において、本発明の補体結合生物模倣物及び組成物は、保持または改良された補体結合を呈し、ＦｃγＲＩＩｂへの結合は保持するが、いかなる他の標準低親和性ＦｃγＲへの結合も保持しない（例えば、Ｇ９９４及びＧ９９８）。したがって、一態様において、本発明の生物模倣物及び組成物は、ＦｃγＲへの結合の比較的な減少または欠如とともに、いずれの場合も、未変性非凝集免疫グロブリンＩｇＧ１に対して及び／または親生物模倣物に対して、保持もしくは改良された補体結合の利点を有するか、または選択された活性化もしくは阻害性ＦｃγＲへの結合の利点を有する。したがって、一実施形態において、本発明の生物模倣物及び組成物は、自然免疫グロブリンＩｇＧ１または親生物模倣物と比較して、保持または改良された補体結合を呈する。
【００７０】
一実施形態において、本発明の生物模倣物及び組成物は、自然免疫グロブリンＩｇＧ１または親生物模倣物もしくは組成物と比較して、補体依存性細胞傷害などの修飾されたエフェクター機能を有し得る。一実施形態において、本発明の生物模倣物及び組成物は、自然免疫グロブリンＩｇＧ１、ＩＶＩＧ、または親生物模倣物もしくは組成物と比較して、補体分子への保持または改良された結合を呈する。更なる一実施形態において、生物模倣物及び組成物は、自然免疫グロブリンＩｇＧ１、ＩＶＩＧ、または親生物模倣物もしくは組成物と比較して、保持または改良されたＣ１ｑ結合を呈する。いくつかの実施形態において、本発明は、Ｃ１ｑ、Ｃ４、Ｃ４ａ、Ｃ３、Ｃ３ａ、Ｃ３ｂ、Ｃ５、またはＣ５ａに結合して、補体依存性細胞傷害または細胞溶解などの下流補体媒介機能を低減または予防することができる、生物模倣物を提供する。他の実施形態において、本発明は、自然免疫グロブリンＩｇＧ１、ＩＶＩＧ、または親生物模倣物と比較して、改変された標準Ｆｃ結合とともに、保持または改良されたＣ１ｑ結合、及び等価または改良されたＣＤＣを呈する、生物模倣物を提供する。
【００７１】
一実施形態において、本発明の生物模倣物及び組成物は、自然免疫グロブリンＩｇＧ１または親生物模倣物と比較して、１つ以上の標準Ｆｃ受容体への結合の減少とともに、保持または改良された補体結合、及び類似したＦｃＲｎ結合を呈する。一実施形態において、本発明の生物模倣物及び組成物は、自然免疫グロブリンＩｇＧ１または親生物模倣物と比較して、保持または改良された補体結合、及びより長い半減期を呈する。一実施形態において、かつ理論によって拘束されるものではないが、本発明の生物模倣物は、自然免疫グロブリンＩｇＧ１または親生物模倣物と比較して、ＦｃＲｎによる内部移行によって可能となるより長い機能的半減期を有し、これは、生物模倣物のより後での放出、及びその遅延または延長した生物学的効果を可能にする。別の実施形態において、本発明の生物模倣物及び組成物は、自然免疫グロブリンＩｇＧ１または親生物模倣物と比較して、保持または改良された補体結合、及びより短い半減期を呈する。一実施形態において、本発明の生物模倣物及び組成物は、自然免疫グロブリンＩｇＧ１または親生物模倣物と比較して、保持または改良された補体の除去を呈する。したがって、いくつかの実施形態において、本発明は、自然免疫グロブリンＩｇＧ１、ＩＶＩＧ、または親生物模倣物と比較して、減少した半減期を有し、かつ更にＣ１ｑまたは他の補体成分に結合して、膜侵襲複合体の形成及び下流補体媒介機能（細胞溶解など）を低減または予防することができる、生物模倣物を提供する。
【００７２】
Ｃ１ｑには、コラーゲン様基部によって中央柄に接続される６つの頭部が存在し（Ｒｅｉｄ  Ｋ．Ｂ．Ｍ．＆Ｐｏｒｔｅｒ，Ｒ．Ｒ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．１５５，１９−２３（１９７６））、単離された頭部は、抗体のＦｃ部分に、１００マイクロモルの親和性で、ある程度弱く結合する（Ｈｕｇｈｅｓ−Ｊｏｎｅｓ，Ｎ．Ｃ．＆Ｇａｒｄｎｅｒ，Ｂ．Ｍｏｌｅｃ  Ｉｍｍｕｎ．１６，６９７−７０１（１９７９））。抗原表面上での複数のエピトープへの抗体の結合は、抗体を凝集する。この凝集は、Ｃ１ｑ分子のＣ１ｑ頭部のうちのいくつかの結合を促進し、約１０ｎＭの改良された親和性をもたらす（Ｂｕｒｔｏｎ，Ｄ．Ｒ．Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎ．２２，１６１−２０６（１９８５））。対照的に、本発明の補体優先結合多量体化ストラドマー及び一般化多量体化ストラドマーは、Ｃ１ｑに多価Ｆｃを提示し、それによって、１つ以上の標準Ｆｃ受容体よりも補体成分に優先的に結合するＦｃによって、補体成分を多量体化ストラドマー中のストラドマー単位に強力に結合する。この様式において、本発明の補体優先多量体化ストラドマー及び一般化ストラドマーは、これらのストラドマーがＦａｂを有さず（かつそのためＦｃのＦＤ部分を有さない）、凝集抗体のように抗原表面上の複数のエピトープに結合することができないにも関わらず、Ｃ１ｑへの保持または改良された結合親和性及び／または結合力を示すことができ、補体シンクとして挙動する。一実施形態において、本発明の補体優先多量体化ストラドマーは、六量体Ｃ１ｑに、４、５、６、７、８個、またはそれ以上の機能的Ｆｃを提示し、緩徐な解離速度及びＣＤＣの機能的阻害をもって、強力な結合を引き起こす。同様に、本発明の補体優先多量体化ストラドマー及び一般化ストラドマーは、補体シンクとして挙動して、Ｃ４、Ｃ４ａ、Ｃ３、Ｃ３ａ、Ｃ３ｂ、Ｃ５、またはＣ５ａへの保持または改良された結合親和性及び／または結合力を示すことができる。この様式において、本発明の生物模倣物は、ＩＶＩＧ内の凝集体のＦｃ部分または凝集抗体と同様に、補体成分Ｃ１ｑ、Ｃ４、Ｃ４ａ、Ｃ３、Ｃ３ａ、Ｃ３ｂ、Ｃ５、またはＣ５ａに結合することができる一方で、インタクト単離免疫グロブリンのＦｃ部分は、これらの補体成分に対する低い結合親和性を有し、それらに対する結合力を有さない。
【００７３】
モノクローナル抗体のＦｃドメインの２６７、２６８、及び／または３２４位の特定の一重、二重、または三重変異、ならびに特に三重変異Ｓ２６７Ｅ／Ｈ２６８Ｆ／Ｓ３２４Ｔは、標準Ｆｃγ受容体またはＦｃＲｎ結合と比較して、モノクローナル抗体の補体結合の比率を増加させることが報告されており（Ｍｏｏｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，ＭＡｂｓ２；１８１（２０１０））、以前には補体結合の増加は、標的抗原への抗体Ｆａｂの事前の結合、その後、Ｃ１ｑ結合に依存すると考えられていた。しかしながら、本発明者らは、驚くべきことに、三重変異Ｓ２６７Ｅ／Ｈ２６８Ｆ／Ｓ３２４Ｔを含む、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及び／またはＳ３２４Ｔ位の変異が、多量体化ストラドマーの文脈において、予想外に補体結合を減少させるか、補体結合を増加させるか、または補体結合を選択的に保持することを見出し、これは、モノクローナル抗体における記載されるこれらの変異の影響が、多量体化ストラドマーの文脈における影響を全く予想しないことを実証した。更に、本発明の多量体化ストラドマーにおいて、補体結合の増加が驚くべきことに実証された場合、これは、多量体化ストラドマーにおけるＦａｂの欠如に関わらず発生したことになる。一実施形態において、本発明の補体優先多量体化ストラドマーは、Ｆａｂ抗原標的化とは独立して、Ｃ１ｑに結合する。一実施形態において、モノクローナル抗体とは対照的に、本発明の補体優先多量体化ストラドマーは、ストラドマーが細胞に結合することなく、Ｃ１ｑに結合する。したがって、一態様において、本開示は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及び／またはＳ３２４Ｔ位に点変異を含む多量体化ストラドマーを提供する。したがって、本開示は、Ｃ１ｑに良好に結合し、ＣＤＣを阻害する、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及び／またはＳ３２４Ｔ位に点変異を含む多量体化ストラドマー（１１０２など）を提供する。しかしながら、対照的に、本開示はまた、Ｃ１ｑに良好に結合しないか、またはＣＤＣを良好に阻害しない、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及び／またはＳ３２４Ｔ位に点変異を含む多量体化ストラドマー（Ｇ１１０６．Ｇ９９９、Ｇ１０２４、Ｇ１０３０、Ｇ１０３１、Ｇ１０４０、Ｇ１０４４、及びＧ１０４８など）も提供する。したがって、モノクローナル抗体においてＣ１ｑへの結合を増加させる点変異Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及び／またはＳ３２４Ｔは、多量体化ストラドマーの文脈において、特に追加の変異の文脈において、予想不可能な影響を有する。いくつかの実施形態において、本開示は、２３３、２３４、２３５、２３６、２３８、２６５、２９７、２９９、３２８位のうちの１つ以上の点変異、及び／または２３６位のアミノ酸の欠失だけでなく、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔ位の点変異も含む、多量体化ストラドマーを更に提供する。
【００７４】
一態様において、本発明は、保持または改良された補体結合を呈する生物模倣物を提供し、生物模倣物は、２６７及び／または２６８及び／または３２４位の点変異を含むＦｃドメインを含む。更なる一実施形態において、Ｆｃドメインは、以下の点変異、Ｓ２６７Ｅ及び／またはＨ２６８Ｆ及び／またはＳ３２４Ｔのうちの更に１つを含む。更なる一実施形態において、Ｆｃドメインは、以下の点変異、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔを含む。
【００７５】
一実施形態において、補体結合生物模倣物はＦｃドメインを含み、Ｆｃドメインは２６７及び／または２６８及び／または３２４位に点変異を含み、かつＦｃドメインは２９７、２９８、及び／または２９９位に点変異を更に含む。２９７、２９８、及び／または２９９位に変異を含むＦｃドメインは、これらの位置での変異がＩｇＧ  Ｆｃの正常なグリコシル化パターンを改変するため、本明細書において「非グリコシル化（ａｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｅｄ）変異体」または「非グリコシル化（ａｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ）変異体」と呼ばれる。これらの変異が最初に特徴付けられる、モノクローナル抗体の文脈において、非グリコシル化変異体は、改変されたグリコシル化パターンの結果として、標準ＦｃγＲへの正常な免疫グロブリンＦｃの結合を減少または排除する。しかしながら、多量体化ストラドマーの文脈において、これらの変異は予想可能ではない。特定の多量体化ストラドマーにおいて、ＦｃγＲ結合は、親生物模倣物と比較して減少する（例えば、Ｇ９９８）。しかしながら、特定の他の多量体化ストラドマーにおいて、ＦｃγＲ結合は、未変異の親化合物と比較して、非グリコシル化変異体において保持または改良される（例えば、Ｇ１０６８）。
【００７６】
一実施形態において、補体結合生物模倣物はＦｃドメインを含み、Ｆｃドメインは２６７及び／または２６８及び／または３２４位に点変異を含み、かつＦｃドメインは２３３及び／または２３４及び／または２３５及び／または２３６及び／または２３８及び／または２６５及び／または２９７及び／または２９９位に点変異を更に含む。
【００７７】
本明細書で使用される場合、「１つの（ａ）」または「１つの（ａｎ）」という用語の使用は、特許請求の範囲及び／または本明細書において、「含む」という用語と組み合わせて使用される場合、「１つ」を意味し得るが、「１つ以上」、「少なくとも１つ」、及び「１つまたは２つ以上」の意味とも一貫する。
【００７８】
本明細書で使用される場合、「生物模倣物」、「生物模倣型分子」、「生物模倣型化合物」という用語、及び関連する用語は、プールされたヒト静脈内免疫グロブリン（「ｈＩＶＩＧ」）、モノクローナル抗体、または抗体のＦｃ断片などの別の化合物の機能を模倣する、人為的化合物を指す。「生物活性」生物模倣物は、それらの天然に存在する対応物と同一または類似した生物活性を持つ化合物である。「天然に存在する」とは、通常、生物において見出される、分子またはその一部分を意味する。天然に存在するとは、実質的に天然に存在することも意味する。「免疫学的に活性な」生物摸倣物は、抗体、サイトカイン、インターロイキン、及び当該技術分野において既知である他の免疫学的分子などの、天然に存在する免疫学的に活性な分子と同一または類似した免疫学的活性を呈する生物摸倣物である。好ましい実施形態において、本発明の生物模倣物は、本明細書に定義されるストラドマーである。本明細書で使用される場合、「親生物模倣物」は、本明細書に記載される化合物（例えば、ＧＬ−２０４５及びＧ０１９）の基盤として使用される未変異の生物模倣物を指す。
【００７９】
本明細書で使用される場合、「補体」という用語は、文献において補体系または補体カスケードと呼ばれることのある、補体カスケードのタンパク質のいずれかを指す。本明細書で使用される場合、「補体結合」または「補体への結合」という用語は、補体カスケードの成分のいずれかの結合を指す。補体カスケードの成分は、当該技術分野において既知であり、例えば、Ｊａｎｅｗａｙ’ｓ  Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ，８ｔｈ  Ｅｄ．，Ｍｕｒｐｈｙ  ｅｄ．，Ｇａｒｌａｎｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０１２に説明されている。現在既知である３つの主要な補体経路には、古典的経路、代替経路、及びレクチン結合経路が存在する。古典的補体経路は、タンパク質Ｃ１ｑが、インタクト免疫グロブリンＩｇＭの１つ以上の分子、またはインタクト免疫グロブリンＩｇＧ１、ＩｇＧ２、もしくはＩｇＧ３の少なくとも２つの分子に結合すると活性化される。補体活性化は、補体依存性細胞溶解をもたらす。過剰な補体活性化は有害であり得、重症筋無力症、溶血性尿毒症症候群（ＨＵＳ）、及び発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）を含むいくつかの疾患と関連付けられている。本明細書で使用される場合、「補体優先」とは、他の受容体（例えば、ＦｃγＲまたはＦｃＲｎ）への結合と比較して、より高度の補体カスケードの１つ以上の成分の結合を指す。いくつかの実施形態において、本明細書に提供されるストラドマーは、補体優先ストラドマーである。いくつかの実施形態において、本明細書に提供されるストラドマーは、一般化ストラドマーである。本明細書において、「一般化ストラドマー」とは、補体カスケードの１つ以上の成分に結合し、標準Ｆｃ受容体及び／または新生児受容体ＦｃＲｎのそれぞれにも結合するストラドマーを指す。
【００８０】
本明細書で使用される場合、「補体媒介疾患」及び「補体関連疾患」とは、補体系が役割を果たす疾患及び病態を指す。例えば、補体媒介疾患としては、補体系の活性化の異常を伴う疾患が挙げられる。いくつかの実施形態において、補体媒介疾患は、補体カスケードの阻害によって、治療、予防、または低減することができる。補体関連疾患は、当該技術分野において既知であり、重症筋無力症、溶血性尿毒症症候群（ＨＵＳ）、非定型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、志賀毒素大腸菌関連溶血性尿毒症症候群（ＳＴＥＣ−ＨＵＳ）、全身性血栓性微小血管症（ＴＭＡ）、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、視神経脊髄炎、再発性視神経脊髄炎（ＮＭＯ）、移植同種移植片の抗体媒介拒絶、バラケル−ジーモンス症候群、喘息、エリテマトーデス、自己免疫性心臓疾患、多発性硬化症、炎症性腸疾患、虚血再灌流障害、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、脊髄損傷、Ｈ因子（Ｙ４０２Ｈ）関連黄斑変性、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、伝性血管性浮腫、ならびに膜性増殖性糸球体腎炎（ＭＰＧＮ）、膜性腎症、リウマチ性関節炎（ＲＡ）、急性呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）、心肺バイパス手術中の補体活性化、皮膚筋炎、天疱瘡、ループス腎炎、糸球体腎炎及び脈管炎、ＩｇＡ腎症、急性腎不全、クリオグロブリン血症、抗リン脂質抗体症候群、ブドウ膜炎、糖尿病網膜症、血液透析、慢性閉塞性肺症候群（ＣＯＰＤ）、ならびに誤嚥性肺炎を非限定的に含む。補体関連疾患はまた、様々な他の自己免疫性、炎症性、免疫学的、神経学的、リウマチ性、または感染病原体関連疾患を含み得る。
【００８１】
「直接連結される」とは、介在配列または外来配列（例えば、ＤＮＡまたはクローニング断片中の制限酵素認識部位の挿入に由来するアミノ酸配列）なく、互いに接続された２つの配列を意味する。当業者は、「直接連結される」は、多量体化能力に実質的に影響がない限り、アミノ酸の付加または除去を包含することを理解するだろう。
【００８２】
「相同」とは、所与の核酸またはアミノ酸配列の配列全体にわたる同一性を意味する。例えば、「８０％相同」とは、所与の配列が主張される配列と約８０％の同一性を共有し、挿入、欠失、置換、及びフレームシフトを含み得ることを意味する。当業者は、配列アラインメントが、配列の全長にわたる同一性を決定するための挿入及び欠失を考慮するために行われ得ることを理解するだろう。
【００８３】
本明細書を通して、ＩｇＧ重鎖中の残基の番号付けは、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）にあるようなＥＵインデックスのものであり、これは、参照により本明細書に明確に組み込まれる。「ＫａｂａｔにあるようなＥＵインデックス」とは、ヒトＩｇＧ１のＥＵ抗体の番号付けを指す。図３６Ａ及び３６Ｂを参照されたい。
【００８４】
ＤＥＬ多形及びＥＥＭ多形と呼ばれる、２つのＩｇＧ１のヒト多形が存在する。ＤＥＬ多形は、３５６位にＤ及び３５８位にＬを有し、ＥＥＭ多形は、３５６位にＥ及び３５８位にＭを有する（Ｋａｂａｔ番号付け、図３６Ａ及び３６Ｂを参照されたい）。本明細書に提供されるストラドマーは、ＤＥＬまたはＥＥＭ  ＩｇＧ１多形のいずれかを含み得る。したがって、特定の変異体についての文章が、ＤＥＬ多型の文脈において明示的に作製される場合ですら、当業者は、同一の変異をＥＥＭ多形に対して行って、同一の結果を得ることができることを理解するだろう。例えば、化合物Ｇ９９４及びＧ９９８をそれぞれ、ＤＥＭ多型及びＥＥＭ多型をもって構築し、機能的差異について評価した。機能的差異は観察されなかった。具体的には、それぞれの化合物の各多型について、Ｃ１ｑへの結合及びＣＤＣの阻害は実質的に同一であった。
【００８５】
一実施形態において、本発明の免疫学的に活性な生物模倣物は、ストラドマーである。本発明の免疫学的に活性な化合物は、ホモ二量体の多量体である。一実施形態において、各ホモ二量体は、補体に結合する能力を持つ。したがって、多量体化される場合、免疫学的に活性な生物模倣物は、それぞれが補体に結合する能力持つ、少なくとも２つのホモ二量体を含有する。
【００８６】
以下の段落では、構造的にも機能的にも本発明の生物模倣物の構成ブロックを定義し、その後、生物摸倣物自体を定義する。しかしながら、最初に、上述のように、本発明の生物摸倣物のそれぞれが、少なくとも１つのＦｃドメイン及び１つの多量体化ドメインを有することに留意することが役立つ。最小でも、Ｆｃドメイン及び多量体化ドメインのそれぞれは、機能的Ｆｃ受容体または補体結合部位と、結果として得られるホモ二量体を多量体化することができる多量体化ドメインとを形成するために会合する２つのペプチド鎖またはアーム（単量体）を含む、二量体ポリペプチドである（またはより大きなポリペプチドの二量体領域である）。したがって、本明細書に論じられる個々の断片及びドメインの機能的形態は一般に、二量体（または多量体）形態で存在する。本明細書に論じられる個々の断片及びドメインの単量体は、機能的二量体構造を形成するために、第２の鎖またはアームと会合しなければならない単一鎖またはアームである。
【００８７】
Ｆｃ断片
「Ｆｃ断片」は、免疫グロブリンのカルボキシ末端に常に見出されるタンパク質領域またはタンパク質折り畳み構造を説明するために使用される専門用語である。Ｆｃ断片は、不完全かつ不十分なプロセスである酵素消化、例えばパパイン消化の使用を通して、モノクローナル抗体のＦａｂ断片から単離することができる（Ｍｉｈａｅｓｃｏ  Ｃ  ａｎｄ  Ｓｅｌｉｇｍａｎｎ  Ｍ．Ｐａｐａｉｎ  Ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ  Ｆｒａｇｍｅｎｔｓ  Ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  ＩｇＭ  Ｇｌｏｂｕｌｉｎｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｖｏｌ１２７，４３１−４５３（１９６８）を参照されたい）。（抗原結合ドメインを含有する）Ｆａｂ断片と合わさって、Ｆｃ断片は、本明細書において完全な抗体を意味する、ホロ抗体を構成する。Ｆｃ断片は、抗体の重鎖のカルボキシ末端部分からなる。Ｆｃ断片中の鎖のそれぞれは、約２２０〜２６５アミノ酸長であり、鎖は、多くの場合ジスルフィド結合を介して連結される。Ｆｃ断片は、多くの場合１つ以上の独立した構造的折り畳みまたは機能的サブドメインを含有する。特に、Ｆｃ断片は、本明細書においてＦｃγ受容体に結合する最小構造として定義されるＦｃドメインを包含する。単離Ｆｃ断片は、二量体化される２つのＦｃ断片の単量体から構成される（例えば、本明細書において更に定義される、抗体の重鎖の２つのカルボキシ末端部分）。２つのＦｃ断片の単量体が会合する場合、結果として得られるＦｃ断片は、補体及び／またはＦｃ受容体結合活性を有する。
【００８８】
Ｆｃ部分断片
「Ｆｃ部分断片」とは、抗体の全Ｆｃ断片未満を含むが、Ｆｃ受容体結合活性及び／または補体結合活性を含む、Ｆｃ断片と同一の活性を有するのに十分な構造を保持するドメインである。したがって、Ｆｃ部分断片は、Ｆｃ部分ドメインが由来する抗体のアイソタイプによって、ヒンジ領域の一部分もしくは全て、ＣＨ２ドメインの一部分もしくは全て、ＣＨ３ドメインの一部分もしくは全て、及び／またはＣＨ４ドメインの一部分もしくは全てを欠いてもよい。Ｆｃ部分断片の別の例としては、ＩｇＧ１のＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含む分子が挙げられる。この例において、Ｆｃ部分断片は、ＩｇＧ１に存在するヒンジドメインを欠く。Ｆｃ部分断片は、２つのＦｃ部分断片の単量体から構成される。本明細書において更に定義されるように、２つのそのようなＦｃ部分断片の単量体が会合する場合、結果として得られるＦｃ部分断片は、Ｆｃ受容体結合活性及び／または補体結合活性を有する。
【００８９】
Ｆｃドメイン
本明細書で使用される場合、「Ｆｃドメイン」は、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）に結合する、またはそれによって結合され得る、（より大きなポリペプチドの文脈における）最小領域または（単離タンパク質の文脈における）最小タンパク質折り畳み構造を説明する。Ｆｃ断片及びＦｃ部分断片の両方において、Ｆｃドメインは、分子をＦｃ受容体に結合させる最小結合領域である。Ｆｃドメインは、Ｆｃ受容体によって結合される別個のホモ二量体ポリペプチドに限定され得る一方で、Ｆｃドメインが、Ｆｃ断片の一部分または全て、ならびにＦｃ部分断片の一部分または全てであり得ることも明らかだろう。本発明において、「Ｆｃドメイン」という用語が使用される場合、２つ以上のＦｃドメインを意味するものとして当業者に認識されるだろう。Ｆｃドメインは、２つのＦｃドメインの単量体から構成される。本明細書において更に定義されるように、２つのそのようなＦｃドメインの単量体が会合する場合、結果として得られるＦｃドメインは、Ｆｃ受容体結合活性及び／または補体結合活性を有する。したがって、Ｆｃドメインは、補体及び／またはＦｃ受容体に結合することができる二量体構造である。本明細書に記載されるストラドマーは、ストラドマーが補体及び／またはＦｃ受容体に結合する能力を改変する１つ以上の変異を含む、Ｆｃドメインを含む。
【００９０】
Ｆｃ部分ドメイン
本明細書で使用される場合、「Ｆｃ部分ドメイン」は、Ｆｃドメインの一部分を説明する。Ｆｃ部分ドメインとしては、個々の重鎖定常領域ドメイン（例えば、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、及びＣＨ４ドメイン）、ならびに異なる免疫グロブリンクラス及びサブクラスのヒンジ領域が挙げられる。したがって、本発明のヒトＦｃ部分ドメインとしては、ＩｇＧ１のＣＨ１ドメイン、ＩｇＧ１のＣＨ２ドメイン、ＩｇＧ１のＣＨ３ドメイン、ならびにＩｇＧ１及びＩｇＧ２のヒンジ領域が挙げられる。他の種における対応するＦｃ部分ドメインは、その種に存在する免疫グロブリン及びその命名に依存するだろう。好ましくは、本発明のＦｃ部分ドメインは、ＣＨ１、ＣＨ２、ならびにＩｇＧ１のヒンジドメイン及びＩｇＧ２のヒンジドメインを含む。本発明のＦｃ部分ドメインは、これらのドメイン及びヒンジのうちの２つ以上の組み合わせを更に含んでもよい。しかしながら、本発明の個々のＦｃ部分ドメイン及びその組み合わせは、ＦｃＲに結合する能力を欠く。したがって、Ｆｃ部分ドメイン及びその組み合わせは、Ｆｃドメイン未満を含む。Ｆｃ部分ドメインは、ともに連結されて、補体及び／またはＦｃ受容体結合活性を有するペプチドを形成し、したがって、Ｆｃドメインを形成してもよい。本発明において、Ｆｃ部分ドメインは、本明細書に定義される本発明の生物摸倣物を作製するための構成ブロックとして、Ｆｃドメインとともに使用される。各Ｆｃ部分ドメインは、２つのＦｃ部分ドメインの単量体から構成される。２つのそのようなＦｃ部分ドメインの単量体が会合する場合、Ｆｃ部分ドメインが形成される。
【００９１】
上述のように、Ｆｃ断片、Ｆｃ部分断片、Ｆｃドメイン、及びＦｃ部分ドメインのそれぞれは、二量体タンパク質またはドメインである。したがって、これらの分子のそれぞれは、二量体タンパク質またはドメインを形成するために会合する２つの単量体から構成される。ホモ二量体形態の特徴及び活性を上記に論じたが、単量体ペプチドを以下に論じる。
【００９２】
Ｆｃ断片の単量体
本明細書で使用される場合、「Ｆｃ断片の単量体」は、別のＦｃ断片の単量体と会合される場合、Ｆｃ断片を含む単鎖タンパク質である。したがって、Ｆｃ断片の単量体は、ホロ抗体のＦｃ断片を構成する抗体の重鎖のうちの１つのカルボキシ末端部分である（例えば、ＩｇＧのヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン、及びＣＨ３ドメインを含む重鎖の近接部分）。一実施形態において、Ｆｃ断片の単量体は、最小でも、近接して連結してペプチドを形成する、１鎖のヒンジ領域（ヒンジ単量体）、１鎖のＣＨ２ドメイン（ＣＨ２ドメイン単量体）、及び１鎖のＣＨ３ドメイン（ＣＨ３ドメイン単量体）を含む。一実施形態において、ＣＨ２、ＣＨ３、及びヒンジドメインは、異なるアイソタイプに由来する。特定の一実施形態において、Ｆｃ断片の単量体は、ＩｇＧ２ヒンジドメイン、ならびにＩｇＧ１  ＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含有する。
【００９３】
Ｆｃドメインの単量体
本明細書で使用される場合、「Ｆｃドメインの単量体」は、別のＦｃドメインの単量体と会合される場合、補体に結合することができるＦｃドメインを含む単鎖タンパク質を説明する。２つのＦｃドメインの単量体の会合は、１つのＦｃドメインを作製する。
【００９４】
一実施形態において、本発明のＦｃドメインの単量体は、ＷＯ２００８／１５１０８８に記載の、以前に記載されているＦｃドメインの単量体が外来配列を含有したようには、外来配列を含有しない。代わりに、本発明のＦｃドメインの単量体は、１つの末端（例えば、Ｆｃ単量体のＮ末端）のリーダー配列（例えば、配列番号１）、及び他の末端（例えば、Ｆｃ単量体のＣ末端）の多量体化ドメイン（例えば、配列番号４、５、または６）に直接連結される。当業者は、構築物がリーダー配列を有して産生される一方で、この配列は後に切断されることを認識するだろう。したがって、好ましい実施形態において、成熟タンパク質は、リーダー配列を含有しないだろう。
【００９５】
一実施形態において、Ｆｃドメインの単量体は、アミノからカルボキシ末端にかけて、ＩｇＧ１ヒンジ、ＩｇＧ１ＣＨ２、及びＩｇＧ１  ＣＨ３を含むＦｃドメインと、ＩｇＧ２ヒンジ（Ｇ０４５ｃ背景）とを含み、単量体は、Ｆｃドメイン内に１つ以上の点変異を含む。別の実施形態において、Ｆｃドメインの単量体は、アミノからカルボキシ末端にかけて、ＩｇＧ２ヒンジ、ＩｇＧ１ヒンジ、ＩｇＧ１  ＣＨ２、及びＩｇＧ１  ＣＨ３（Ｇ０１９背景）を含むＦｃドメインを含み、Ｆｃ単量体は、Ｆｃドメイン内に１つ以上の点変異を含む。別の実施形態において、Ｆｃドメインの単量体は、アミノからカルボキシ末端にかけて、ＩｇＧ２ヒンジ、ＩｇＧ１  ＣＨ２、及びＩｇＧ１  ＣＨ３（Ｇ０５１背景）を含むＦｃドメインを含み、Ｆｃ単量体は、Ｆｃドメイン内に１つ以上の点変異を含む。
【００９６】
ストラドマー
特定の実施形態において、本発明の生物模倣型は、ストラドマーを含む。本発明のストラドマーは、補体に結合することができる生物模倣型化合物であり、好ましくは、著しく改善された補体結合を実証する。好ましい一実施形態において、本発明のストラドマーは、増加した補体結合対１つ以上の標準Ｆｃ受容体の結合の比率を呈する。ストラドマーは、４つの異なる物理的高次構造、つまり、連続、クラスター、コア、またはＦｃ断片を有し得る。明白であるように、上記に論じられるＦｃ断片、Ｆｃ部分断片、Ｆｃドメイン、及びＦｃ部分ドメインは、様々なストラドマー高次構造の構築に使用される。更に、ホモ二量体ストラドマー単位を形成するために最初に産生され、かつその後、多量体化ドメイン（例えば、ＩｇＧ２ヒンジ）の包含を通して多量体化して、本発明のクラスターストラドマーである多量体構造を形成するのは、これもまた上記に論じられる個々のＦｃドメインの単量体及びＦｃ部分ドメインの単量体である。具体的なストラドマーは、ＷＯ２００８／１５１０８８及びＷＯ２０１２／０１６０７３に詳細に説明されており、これらの両方の内容全体が、参照により組み込まれる。Ｆｃγ受容体への補体結合及び／またはＦｃＲｎ結合の比率は、２３３及び／または２３４及び／または２３５及び／または２３６及び／または２３８及び／または２６５及び／または２９７及び／または２９９位のうちの１つ以上での追加の変異によって更に改良することができる。
【００９７】
ストラドマー単位単量体
本明細書で使用される場合、「ストラドマー単位単量体」またという用語は、少なくとも第２のストラドマー単位単量体と会合される場合、少なくとも１つのＦｃドメインを含むホモ二量体ストラドマー単位を形成する、単一の近接ペプチド分子を指す。好ましい実施形態において、ストラドマー単位は、２つの会合したストラドマー単量体から構成される一方で、ストラドマーはまた、３つ以上のストラドマー単量体を含有してもよい。
【００９８】
ストラドマー単位単量体は、「ストラドマー単位」を形成するために別のストラドマー単位単量体と会合される場合、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４個以上のＦｃドメインを形成するアミノ酸配列を有し得る。ストラドマー単位単量体は、ストラドマー単位を形成するために別のストラドマー単位単量体と会合される場合、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４個以上のＦｃ部分ドメインを形成するアミノ酸配列を更に有し得る。
【００９９】
ストラドマー単位の文脈において、Ｆｃドメイン及びＦｃ部分ドメインを形成するストラドマー単位単量体の領域は単に、ストラドマー単位単量体分子の連続する領域のカルボキシ末端からアミノ末端にかけて配置され得る。特定のＦｃドメインの単量体及びストラドマー単位単量体を含むＦｃ部分ドメインの単量体の配置は、重要ではない。しかしながら、配置は、２つのストラドマー単位単量体の会合時に２つの機能的Ｆｃドメインの形成を可能にしなくてはならない。一実施形態において、本発明のストラドマーは、ＩｇＧ１  Ｆｃ単量体のＮ末端とリーダーペプチド（配列番号１）Ｃ末端との間、及びＩｇＧ１  ＦｃのＣ末端と多量体化ドメイン  ＩｇＧ２ヒンジ（配列番号４）のＮ末端との間に直接連結を含有する。
【０１００】
明確化の一例として、当業者は、示される点変異を含む本発明のストラドマー分子が、所望される点変異及び多量体化領域を有するＦｃドメインの単量体をコードするポリヌクレオチド分子を調製することによって構築され得ることを理解するだろう。そのようなポリヌクレオチド分子は発現ベクターに挿入されてもよく、これを使用して、細菌の集団を変換するか、または哺乳動物細胞の集団をトランスフェクトすることができる。その後、ストラドマー単位単量体は、変換された細菌またはトランスフェクトされた哺乳動物細胞を適切な培養条件下で培養することによって産生され得る。例えば、安定してトランスフェクトされた細胞のプールを継続するクローン細胞株は、ジェネティシン／Ｇ４１８を有する細胞を選択することによって達成することができる。あるいは、細胞は、本発明のストラドマーをコードするＤＮＡ（例えば、配列番号１０〜７７のいずれか１つに従うストラドマーをコードするＤＮＡ）で、ＣＭＶプロモーターの制御下、一過的にトランスフェクトされてもよい。その後、発現したストラドマー単量体は、ストラドマー単量体もしくは単位の自己凝集時、またはストラドマー間単量体連結を使用するストラドマー単量体の会合時のいずれかに、機能的ストラドマー単位及びストラドマーを形成し得る。その後、発現したストラドマーは、例えば、タンパク質Ａまたはタンパク質Ｇカラムを使用する親和性カラムクロマトグラフィーによって、細胞培養培地から精製され得る。当業者は、核酸構築物に含まれるリーダーペプチドは、ストラドマー単位単量体ペプチドの産生の促進だけのために使用され、成熟タンパク質の発現時に切断されることを理解するだろう。したがって、本発明の生物活性生物模倣物は、リーダーペプチドを含まない。
【０１０１】
クラスターストラドマー
一実施形態において、本開示に従って使用されるストラドマーは、クラスターストラドマーである。「クラスターストラドマー」は、中央部分である「頭部」及び２つ以上の「脚部」を有する放射状形態を有する生物模倣物であり、各脚部は、少なくとも１つのＦｃガンマ受容体及び／または補体に結合することができる１つ以上のＦｃドメインを含む。クラスターストラドマーはまた、ストラドマーの多量体化をもたらす多量体化ドメインの存在のために「多量体化ストラドマー」としても知られている。したがって、１つのストラドマー単量体分子上に複数のＦｃドメインを含有する連続ストラドマーは、その分子がまた少なくとも１つの多量体化ドメインも含有する限り、依然クラスターストラドマーまたは多量体化ストラドマーとして分類され得る。各クラスターストラドマーは、それぞれが「クラスターストラドマー単位」と呼ばれる２つ以上のホモ二量体タンパク質から構成される。各クラスターストラドマー単位は、少なくとも１つの多量体化する領域、及び少なくとも１つの機能的Ｆｃドメインを含む「脚部」領域から構成される。多量体化領域は、別のクラスターストラドマー単位によって多量体化されると、クラスターストラドマー「頭部」を作製する。脚部領域は、各脚部領域内のＦｃドメインに存在するだけ多くの補体分子に結合することが可能であり得る。例えば、脚部領域は、各脚部領域内にＦｃドメインに存在するだけ多くのＣ１ｑ分子に結合し得る。したがって、クラスターストラドマーは２つ以上のＣ１ｑ分子に結合し、したがって、下流補体媒介溶解を予防することができる生物模倣型化合物である。本発明の特に強力な生物模倣型は、Ｃ１ｑ分子の６つ全ての頭部に結合することができる。
【０１０２】
多量体化領域は、二量体タンパク質を更に多量体化させるペプチド配列であってもよく、あるいは多量体化領域は、二量体タンパク質の多量体化を改良するグリコシル化であってもよい。ペプチド多量体化領域の例としては、ＩｇＧ２ヒンジ、ＩｇＥ  ＣＨ２ドメイン、イソロイシンジッパー、コラーゲンググリシン−プロリン−プロリン反復（「ＧＰＰ」）、及び亜鉛フィンガーが挙げられる。グリコシル化変化は、アミノ酸置換または培養物条件の結果であるかに関わらず、本発明の生物模倣物の多量体化にも影響を与え得る。ペプチド多量体化に対するグリコシル化の影響は、当該技術分野において十分に説明されている（例えば、Ｒｏｌｅ  ｏｆ  Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  ｉｎ  Ｍｕｌｔｉｍｅｒｉｃ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  Ｆａｃｔｏｒ  ＶＩＩＩ／Ｖ  ｏｎ  Ｗｉｌｌｅｂｒａｎｄ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｐｒｏｔｅｉｎ．Ｈａｒｖｅｙ  Ｒ．Ｇｒａｌｎｉｃｋ，Ｓｙｂｉｌ  Ｂ．Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ａｎｄ  Ｍａｒｇａｒｅｔ  Ｅ．Ｒｉｃｋ．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ，Ｖｏｌ．８０，Ｎｏ．９，［Ｐａｒｔ１：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ］（Ｍａｙ１，１９８３），ｐｐ．２７７１−２７７’４、Ｍｕｌｔｉｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｏｌｌａｇｅｎ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｏｆ  ｖｉｔｒｏｎｅｃｔｉｎ  ｉｓ  ｍｏｄｕｌａｔｅｄ  ｂｙ  ｉｔｓ  ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ．Ｋｉｍｉｅ  Ａｓａｎｕｍａ，Ｆｕｍｉｏ  Ａｒｉｓａｋａ  ａｎｄ  Ｈａｒｕｋｏ  Ｏｇａｗａ．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｎｇｒｅｓｓ  Ｓｅｒｉｅｓ  Ｖｏｌｕｍｅ１２２３，Ｄｅｃｅｍｂｅｒ２００１，Ｐａｇｅｓ９７−１０１）。
【０１０３】
多量体化領域は、ペプチドを二量体化または多量体化させるペプチド配列であり得、ＩｇＧ２ヒンジ、ＩｇＥ  ＣＨ２ドメイン、イソロイシンジッパー、コラーゲンＧＰＰ、及び亜鉛フィンガーを含む。当該技術分野において既知であるように、ヒトＩｇＧ２のヒンジ領域は、共有結合二量体を形成し得る（Ｙｏｏ，Ｅ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７０，３１３４−３１３８（２００３）、Ｓａｌｆｅｌｄ  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．  ２５，１３６９−１３７２（２００７））。ＩｇＧ２の二量体形成は、潜在的に、Ｃ−Ｃ結合によってＩｇＧ２ヒンジ構造を通して媒介され（Ｙｏｏら、２００３）、これは、ヒンジ構造が単独で二量体形成を媒介し得ることを示唆する。しかしながら、ヒト血清中に見出されるＩｇＧ２二量体の量は限定されている。ホモ二量体の二量体として存在しているＩｇＧ２の量は、全ＩｇＧ２の１０％未満であることが推定されている（Ｙｏｏら、２００３）。更に、ホモ二量体の二量体を超えたＩｇＧ２の多量体化の定量的証拠は存在しない。（Ｙｏｏら、２００３）。つまり、未変性ＩｇＧ２は、ヒト血清中で高次多量体化を形成することが見出されていない。ＩｇＧ２ヒンジ含有ストラドマー（すなわち、ＷＯ２０１２／０１６０７３に記載されるＧ０４５ｃ及びＧ０１９）は、高次多量体中に存在し、ＩｇＧ２ヒンジ相互作用が可変かつ動的であるヒト血清中の未変性ＩｇＧ２とは異なり、Ｇ０４５ｃは、分析的超遠心分離、及び３７℃、湿度１００％での３ヶ月間の安定性研究によって、非還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルを証拠として、高度に安定した多量体を形成することが実証されている。更に、ＩｇＧ２ヒンジ含有ストラドマー調製物中の多量体の量が、約１０％の二量体よりも著しく多く、かつＩｇＧ２についてはヒト血清中で多量体が観察されないこともまた、驚くべきことである。例えば、二量体、三量体、四量体、及びホモ二量体のより高次の多量体を含む、多量体である補体優先ストラドマーのパーセントは２０％を超え、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％すらも超え得る。
【０１０４】
ヒトＩｇＧ２ヒンジ単量体のアミノ酸配列は、次の通りである：ＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号４）。配列番号４の４つのシステインのいずれか１つの変異は、ストラドマーの多量体化の大幅な低下に関連付けられ得る。ＩｇＧ２ヒンジ単量体の２つのＣ−Ｘ−Ｘ−Ｃ部分が存在する。したがって、本発明のストラドマー単量体は、Ｆｃドメインの単量体とともに、ＩｇＧ２ヒンジ単量体の完全な１２個のアミノ酸配列、または４つのアミノ酸コアのいずれかもしくはその両方の、いずれかを含み得る。コア構造のＸ−Ｘは任意のアミノ酸であり得る一方で、好ましい一実施形態において、Ｘ−Ｘ配列はＶ−ＥまたはＰ−Ｐである。当業者は、ＩｇＧ２ヒンジ単量体が、ＩｇＧ２ヒンジ配列の全て、ならびにＩｇＧ２  ＣＨ２及びＣＨ３ドメインの単量体配列の一部もしくは全てを含む、コアの４つのアミノ酸構造に加えて、ヒンジ配列の任意の部分から構成され得ることを理解するだろう。理論によって拘束されるものではないが、ＩｇＧ２ヒンジ多量体化ドメインは、ストラドマー単量体の任意の部分と相互作用することによって多量体を形成することができる。つまり、１つのストラドマー単量体のＩｇＧ２ヒンジは、別のストラドマー単量体のＩｇＧ２ヒンジに結合し、それによって、天然のＩｇＧ１  Ｆｃと比較して、Ｆｃ受容体への増加した機能的結合を保持しながら、ホモ二量体の二量体または高次多量体を形成することができる。あるいは、１つのストラドマー単量体のＩｇＧ２ヒンジドメインは、別のストラドマー単量体のＩｇＧ１ヒンジに結合し、それによって、天然のＩｇＧ１  Ｆｃと比較して、Ｆｃ受容体への増加した機能的結合を保持しながら、ホモ二量体の二量体または高次多量体を形成することができる。１つのストラドマー単量体のＩｇＧ２ヒンジドメインが、ＩｇＧ１  Ｆｃドメインの別の部分、すなわち、別のストラドマー単量体のＣＨ２またはＣＨ３ドメインに結合して、天然のＩｇＧ１  Ｆｃと比較して、増加したＦｃ受容体への機能的結合を保持しながら、ホモ二量体の二量体または高次多量体を形成することもまた可能である。
【０１０５】
ロイシン及びイソロイシンジッパーはまた、多量体化領域としても使用され得る。ロイシン及びイソロイシンジッパー（コイルドコイルドメイン）は、タンパク質の二量体、三量体、及び四量体の形成を促進することが知られている（Ｈａｒｂｕｒｙ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ２６２：１４０１−１４０７（１９９３）、Ｏ’Ｓｈｅａ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ２４３：５３８（１９８９））。イソロイシンジッパーが三量体を形成する天然の傾向を利用することによって、クラスターストラドマーが産生され得る。
【０１０６】
当業者は、異なる種類のロイシン及びイソロイシンジッパーが使用され得ることを理解する一方で、好ましい一実施形態において、記載されるように（Ｍｏｒｒｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４４：３１１２−３１２１（２００７）、Ｈａｒｂｕｒｙ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ２６２：１４０１−１４０７（１９９３））修飾されたＧＣＮ４転写制御因子に由来するイソロイシンジッパーが使用される：
【化１】
2018528167.tif 000002
このイソロイシンジッパー配列は、Ｆｃドメインの単量体の多量体化に使用することができるいくつかの可能な配列のうちの唯一のものである。配列番号５に示される配列全体が使用されてもよい一方で、配列の下線部分は、本発明のクラスターストラドマーに使用することができるイソロイシンジッパーのコア配列を表す。したがって、本発明のストラドマー単量体は、１つ以上のＦｃドメインの単量体とともに、イソロイシンジッパーの完全なアミノ酸配列または２８個のアミノ酸コアのいずれかを含み得る。当業者はまた、イソロイシンジッパーが、２８個のコアのアミノ酸構造に加えて、ジッパーの任意の部分から構成され得、したがって、２９個以上であるが、配列全体未満のアミノ酸から構成され得ることも理解するだろう。
【０１０７】
ＧＰＰは、コラーゲンタンパク質をもたらす（タンパク質結合）ヒトコラーゲンに見出されるアミノ酸配列である。当業者は、異なる種類のＧＰＰ反復が多量体化ドメインとして使用され得ることを理解する一方で、好ましい一実施形態において、記載される（Ｆａｎ  ｅｔ  ａｌ  ＦＡＳＥＢ  Ｊｏｕｒｎａｌ３７９６ｖｏｌ．２２  ２００８）グリシン−プロリン−プロリン反復が使用される（配列番号６）。このグリシン−プロリン−プロリン反復配列は、Ｆｃドメインの単量体の多量体化に使用することができるいくつかの可能な配列のうちの唯一のものである。配列番号６に示される配列全体が使用されてもよい一方で、異なる長さの反復を使用して、Ｆｃドメインの単量体を多量体化することも可能であり得る。同様に、ＧＰＰ反復内に異なるアミノ酸を含有する反復もまた、置換され得る。
【０１０８】
本明細書に開示されるストラドマー及び他の生物模倣型分子は、ヒトを含む様々な種のいずれかに由来し得ることが理解される。実際、本発明のいずれか１つの生物摸倣型分子におけるＦｃドメインまたはＦｃ部分ドメインは、２つ以上（例えば、２つ、３つ、４つ、５つ以上）の種の免疫グロブリンに由来し得る。しかしながら、それらは一般に、単一種に由来するだろう。加えて、本明細書に開示される方法のいずれか（例えば、治療方法）が、任意の種に適用され得ることが理解されるだろう。一般に、対象となる種に適用される生物模倣物の成分は全て、その種に由来するだろう。しかしながら、全ての成分が異なる種のものであるか、または２つ以上の種（関連する方法が適用される種を含む、もしくは含まない）からのものである生物摸倣物もまた、使用されてもよい。
【０１０９】
本発明のストラドマー及び他の生物模倣物のＦｃドメイン及びＦｃ部分ドメインを含む、特定のＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、及びＣＨ４ドメイン、ならびにヒンジ領域は、それらが由来する免疫グロブリンサブクラス、及び生物の両方に関して、独立して選択され得る。したがって、本明細書に開示されるストラドマー及び他の生物模倣物は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＡｌ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、及びＩｇＭ、マウスＩｇＧ２ａ、またはイヌＩｇＡもしくはＩｇＢなどの様々な免疫グロブリン型に独立して由来する、Ｆｃドメイン及び部分Ｆｃドメインを含み得る。同様に、各Ｆｃドメイン及び部分Ｆｃドメインは、非ヒト霊長類（例えば、サル、ヒヒ、及びチンパンジー）、ヒト、マウス、ラット、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、ブタ、ウサギ、ヤギ、シカ、ヒツジ、フェレット、スナネズミ、モルモット、ハムスター、コウモリ、鳥類（例えば、ニワトリ、シチメンチョウ、及びアヒル）、魚類、ならびに爬虫類を含む様々な種、好ましくは、哺乳動物種に由来して、種特異的またはキメラストラドマー分子を産生し得る。
【０１１０】
個々のＦｃドメイン及び部分Ｆｃドメインもまた、ヒト化され得る。当業者は、異なるＦｃドメイン及び部分Ｆｃドメインが異なる種類の機能性を提供することを理解するだろう。例えば、ＦｃＲｎは、ＩｇＧ免疫グロブリンに特異的に結合し、他のクラスの免疫グロブリンに良好には結合しない。当業者はまた、様々な有害な結果が、ＩｇＡ注入と関連付けられるアナフィラキシーなどの特定のＩｇドメインの使用と関連付けられ得ることも理解するだろう。本明細書に開示される生物模倣物は一般に、そのような作用を回避するように設計されるべきであるが、特定の状況において、そのような作用が望ましい場合がある。
【０１１１】
本発明はまた、ＦｃドメインまたはＦｃ部分ドメインの天然に存在するアミノ酸配列とは異なるアミノ酸を有するＦｃドメイン及びＦｃ部分ドメインを含むストラドマーも包含する。本発明の生物模倣型化合物中に包含するのが好ましいＦｃドメインは、補体に対する測定可能な特異的結合親和性を有する。多数のＦｃドメイン及びＦｃドメインの単量体の一次アミノ酸配列及びＸ線結晶学構造が、当該技術分野において利用可能である。例えば、Ｗｏｏｆ  ＪＭ，Ｂｕｒｔｏｎ  ＤＲ．Ｈｕｍａｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｆｃ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  ｉｌｌｕｍｉｎａｔｅｄ  ｂｙ  ｃｒｙｓｔａｌ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ．Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００４Ｆｅｂ；４（２）：８９−９９を参照されたい。Ｆｃγ受容体結合能を有する代表的なＦｃドメインとしては、ヒトＩｇＧ１に由来するＦｃドメイン（配列番号２または３）が挙げられる。これらの未変性配列は、機能的な配列の部位特異的変異誘発のマッピングを含む、広範な構造−機能分析に供されている。これらの事前の構造−機能研究及び利用可能な結晶学データに基づいて、当業者は、補体結合能を保ちながら、機能的Ｆｃドメイン配列バリアントを設計することができる。例えば、システイン残基は、単量体間のジスルフィド結合を改良するために付加されても、ストラドマーホモ二量体の相互作用を改変するために欠失されてもよい。更に、当業者は、改良された補体結合能を保ちながら、機能的Ｆｃドメイン配列バリアントを設計すること、または更に一層改良された補体結合能を有する機能的Ｆｃドメイン配列バリアントを設計することができる。
【０１１２】
アミノ酸変化は、Ｆｃドメインの配列を通して見出されても、Ｆｃドメインを含む特定のＦｃ部分ドメインに孤立されてもよい。本発明のストラドマーまたは生物模倣物中に使用されるＦｃドメインの機能的バリアントは、未変性Ｆｃドメインに対して少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するだろう。同様に、本発明のストラドマーまたは生物模倣物中に使用されるＦｃドメインの機能的バリアントは、未変性Ｆｃ部分ドメインに対して少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するだろう。
【０１１３】
当業者は、本発明が、本発明のＦｃ断片の単量体、Ｆｃ部分断片の単量体、ストラドマー単量体、及び他の単量体の構築においてＦｃドメインの単量体の機能的バリアントの使用を更に包含することを理解するだろう。Ｆｃドメインの単量体の機能的バリアントは、未変性Ｆｃドメインの単量体配列に対して少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するだろう。
【０１１４】
同様に、本発明はまた、本発明のＦｃ断片の単量体、Ｆｃドメインの単量体、ストラドマー単量体、及び他の単量体の構築における、Ｆｃ部分ドメインの単量体の機能的バリアントの使用も包含する。Ｆｃ部分ドメインの単量体の機能的バリアントは、未変性Ｆｃ部分ドメインの単量体配列に対して少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するだろう。
【０１１５】
アミノ酸変化は、ＦｃＲｎまたは標準Ｆｃγ受容体へのストラドマーの結合親和性を減少させるか、増加させるか、または未変化のまま維持することができる。好ましくは、そのようなアミノ酸変化は保存アミノ酸置換であるが、そのような変化は欠失、付加、及び他の置換を含む。保存アミノ酸置換は、典型的には、以下のグループ（つまり、グリシン及びアラニン；バリン、イソロイシン、及びロイシン；アスパラギン酸及びグルタミン酸；アスパラギン、グルタミン、セリン、及びスレオニン；リジン、ヒスチジン、及びアルギニン；ならびにフェニルアラニン及びチロシン）内の変化を含む。加えて、アミノ酸変化は、例えば、システイン残基の付加によって、多量体の強度を改良することができる。
【０１１６】
本明細書で使用される場合、「機能的バリアント」という用語は、相同性によって基準配列に関連付けられ、基準配列と同一の生物学的効果を媒介することができる（ポリペプチドの場合）か、または基準配列によってコードされるポリペプチドと同一の生物学的効果を媒介することができるポリペプチドをコードする（ポリヌクレオチドの場合）、配列を指す。例えば、本明細書に記載される生物模倣物のいずれかの機能的バリアントは、特定の相同性または同一性を有し、単球またはＤＣを免疫調節することができるだろう。機能的配列バリアントは、ポリヌクレオチド及びポリペプチドの両方を含む。配列同一性は一般に、初期設定のパラメータ（つまり、フィルタ−オン、重み行列−ＢＬＯＳＵＭ６２、配列長−３、Ｅ値−１０、ギャップコスト−１１，１、及びアラインメント−５０）で動作するＢＬＡＳＴ２．０（Ｂａｓｉｃ  Ｌｏｃａｌ  Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  Ｓｅａｒｃｈ  Ｔｏｏｌ）を使用して評価される。いくつかの実施形態において、機能的バリアントは、本明細書に提供されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０１１７】
未変性Ｆｃドメインのアミノ酸配列の組成に加えて、Ｆｃドメインの炭水化物含有量は、Ｆｃドメイン構造に重要な役割を果たすことが知られている。例えば、Ｒｏｂｅｒｔ  Ｌ．Ｓｈｉｅｌｄｓ，ｅｔ  ａｌ．Ｌａｃｋ  ｏｆ  Ｆｕｃｏｓｅ  ｏｎ  Ｈｕｍａｎ  ＩｇＧ１Ｎ−Ｌｉｎｋｅｄ  Ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ  Ｉｍｐｒｏｖｅｓ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  ｔｏ  Ｈｕｍａｎ  ＦｃγＲＩＩＩ  ａｎｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｔｏｘｉｃｉｔｙ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，Ｊｕｌ２００２；２７７：２６７３３−２６７４０（ｄｏｉ：１０．１０７４／ｊｂｃ．Ｍ２０２０６９２００）、Ａｎｎ  Ｗｒｉｇｈｔ  ａｎｄ  Ｓｈｅｒｉｅ  Ｌ．Ｍｏｒｒｉｓｏｎ．Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  Ｃ２−Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｎ  Ｉｇ  Ｅｆｆｅｃｔｏｒ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ：Ｓｔｕｄｉｅｓ  ｗｉｔｈ  Ｃｈｉｍｅｒｉｃ  Ｍｏｕｓｅ−Ｈｕｍａｎ  ＩｇＧ１Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｉｎ  Ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ  Ｍｕｔａｎｔｓ  ｏｆ  Ｃｈｉｎｅｓｅ  Ｈａｍｓｔｅｒ  Ｏｖａｒｙ  Ｃｅｌｌｓ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，Ａｐｒ１９９８；１６０：３３９３−３４０２を参照されたい。炭水化物含有量は、例えば、特定の細胞株またはインビトロ酵素修飾を含む特定のタンパク質発現系を使用して、制御することができる。したがって、本発明は、ドメインが得られるホロ抗体の未変性炭水化物含有量を有するＦｃドメインを含むストラドマー、及び改変された炭水化物含有量を有するそれらの生物模倣型化合物を含む。別の実施形態において、ストラドマーの多量体成分は、同一のストラドマーのホモ二量体性成分と比較して、異なるグリコシル化パターンを特徴とする。一実施形態において、補体結合ストラドマーは、グリコシル化パターンは改変しないが、標準Ｆｃ受容体結合及び／またはＦｃＲｎ受容体結合を低減または排除する、変異を含む。
【０１１８】
補体優先ストラドマーの好ましい実施形態
本明細書に記載される補体優先ストラドマーは、増加した補体結合対Ｆｃ受容体結合の比率を提供する。したがって、本明細書に提供される補体優先ストラドマーは、いくつかの実施形態において、「補体優先ストラドマー」または「補体結合ストラドマー」と呼ばれる。いくつかの実施形態において、本明細書に提供されるストラドマーは、補体カスケードの１つ以上の成分に結合し、ＦｃγＲのそれぞれにも結合する「一般化ストラドマー」である。
【０１１９】
２６７、２６８、及び３２４位に点変異を有するＧ０４５ｃ背景上のストラドマー（配列番号１３）は、本明細書ではＧ９９７と呼ばれる。いくつかの実施形態において、Ｇ９９７は、驚くべきことに、ＦｃγＲＩ、阻害性受容体ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃＲｎへの結合の保持、ならびに活性化受容体ＦｃγＲＩＩａ及びＦｃγＲＩＩＩａへの結合の著しい低下とともに、強いＣ１ｑ結合及びＣＤＣ阻害を呈する。
【０１２０】
２６７、２６８、２９７、及び３２４位に点変異を有するＧ０４５ｃ背景上のストラドマー（配列番号１４または１５）は、本明細書ではＧ９９８と呼ばれる。Ｆｃ変異Ｎ２９７Ａを含む（が、２６７、２６８、または３２４位には変異がない）多量体化ストラドマーは、高い親和性及び結合力なくＣ１ｑに結合し、ＣＤＣの適度の阻害は実証するが、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、またはＦｃγＲＩＩＩａへの認識可能な結合は実証しない。対照的かつ驚くべきことに、本発明者らは、変異Ｎ２９７Ａを含むＧＬ−２０４５骨格上のストラドマー（Ｇ９９８と指定されるストラドマー）の文脈におけるＦｃ変異Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及び／またはＳ３２４Ｔの更なる導入が、Ｃ１ｑ結合を著しく、かつＣＤＣの阻害を更に改良することを見出した。更に一層驚くべきことに、結果として得られる化合物は、ＦｃγＲＩＩｂに強力に結合する。したがって、いくつかの実施形態において、Ｇ９９８は、驚くべきことに、活性化受容体ＦｃγＲＩＩａ及びＦｃγＲＩＩＩａへの結合の著しい低下とともに、親ストラドマーＧ０４５ｃよりも更に強いＣ１ｑ結合及びＣＤＣ阻害、ならびにＧ０４５ｃと比較して、完全に保持されたＦｃＲｎ結合及びほぼ保持されたＦｃγＲＩ結合、ならびに阻害性受容体ＦｃγＲＩＩｂへの結合の部分的保持を呈する。これらの変異が予想外であることを強調することに、同一の系列の変異が、Ｃ末端多量体化ドメインを有するストラドマー（ＧＬ−２０４５）とは対照的に、Ｎ末端多量体化ドメインを有するストラドマー（Ｇ０１９）になされる場合、Ｃ１ｑへのこの優先的結合は完全に抑止される（化合物Ｇ９９９を参照されたい）。いくつかの実施形態において、本開示は、２６７、２６８、２９７、及び３２４位に点変異を有し、２５３、３１０、及び４３５位に変異を更に含む、ストラドマーを提供する。その上更なる実施形態において、本開示は、２３３、２３４、２３５、２５３、２６７、２６８、２９７、２９９、３１０、３２４、及び４３５位に変異を、ならびにＧ２３６位にアミノ酸の欠失を含む、ストラドマーを提供する。したがって、いくつかの実施形態において、本開示は、以下の変異、つまり、Ｉ２５３Ａ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｎ２９７Ａ、Ｈ３１０Ａ、Ｓ３２４Ｔ、及びＨ４３５Ａを含む、ストラドマー、または以下の変異、つまり、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ｉ２５３Ａ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｎ２９７Ａ、Ｔ２９９Ａ、Ｈ３１０Ａ、Ｓ３２４Ｔ、及びＨ４３５Ａ、ならびにＧ２３６の欠失を含む、ストラドマーを提供する。いくつかの実施形態において、結果として得られるストラドマーは、配列番号１４または１５に従うストラドマーのＣ１ｑ結合及びＣＤＣ阻害を保持し、配列番号１４または１５に従うストラドマーと比較して、ＦｃγＲＩＩｂ及び／またはＦｃγＲＩへのより少ない結合を実証する。
【０１２１】
２３４、２３５、２６７、２６８、２９７、及び３２４位に点変異を有するＧ０４５ｃ背景上のストラドマー（配列番号２１または２２）は、本明細書ではＧ１０３３と呼ばれる。いくつかの実施形態において、Ｇ１０３３は、（例えば、Ｎ２９７Ａ及びＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ変異に照らして）驚くべきことに、強いＣ１ｑ結合及びＣＤＣ阻害に加えて、ＦｃγＲＩ及びＦｃγＲＩＩａへのいくらかの結合を保持する。
【０１２２】
２３３、２３６、２６７、２６８、及び３２４位に点変異を有するＧ０４５ｃ背景上のストラドマー（配列番号１０または１１）は、本明細書ではＧ９９４と呼ばれる。いくつかの実施形態において、Ｇ９９４は、活性化受容体ＦｃγＲＩＩａ及びＦｃγＲＩＩＩａへの有意な結合は有さずに、ＦｃγＲＩ及びＦｃＲｎへの頑強な結合、ならびにＦｃγＲＩＩｂへの最小の結合を保持する。これらの結果は、２３３または２３６位の変異が、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａ、及びＦｃＲｎへの結合の抑止をもたらしたことを開示する、Ｓｈｉｅｌｄｓら（Ｓｈｉｅｌｄｓ，ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．，２７６（９）：６５９１（２００１））を考慮すると、特に驚くべきものであった。これらの結果は、ストラドマーの文脈において、所与の点変異が予想できないことを更に強調する。Ｆｃ変異Ｅ２３３Ｐ及びＧ２３６Ｒを含む（が、２６７、２６８、または３２４位には変異を含まない）多量体化ストラドマーは、高い親和性及び結合力なくＣ１ｑに結合するが、ＣＤＣの認識可能な阻害、及びＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、またはＦｃγＲＩＩＩａへの認識可能な結合は有さない。対照的かつ驚くべきことに、本発明者らは、Ｅ２３３Ｐ及びＧ２３６Ｒ変異を含むストラドマー（Ｇ９９４と指定されるストラドマー）の文脈におけるＦｃ変異Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及び／またはＳ３２４Ｔの更なる導入が、ＦｃγＲＩＩｂへのいくらかの結合を保持しながら、Ｃ１ｑ結合及びＣＤＣの阻害を更に改良することを見出した。
【０１２３】
２３３、２３４、２３５、２６７、２６８、２９７、及び３２４位に点変異を有し、Ｇ２３６が欠損したＧ０４５ｃ背景上のストラドマー（配列番号１９）は、本明細書ではＧ１０２２と呼ばれる。いくつかの実施形態において、Ｇ１０２２は、驚くべきことに、Ｃ１ｑに結合し、ＣＤＣを阻害し、かつＦｃγＲＩＩａへの強い結合及びＦｃγＲＩＩｂへの適度の結合を保持するが、非常に驚くべきことに、高親和性ＦｃγＲＩへの結合は保持しない。
【０１２４】
２３４、２３５、２６７、２６８、及び３２４位に点変異を有するＧ０４５ｃ背景上のストラドマー（配列番号６３）は、本明細書ではＧ１０３２と呼ばれる。いくつかの実施形態において、Ｇ１０３２は、驚くべきことに、Ｃ１ｑに結合し、かつ全ての標準Ｆｃ受容体への頑強な結合及びＦｃＲｎへの中程度に頑強な結合もまた保持しながら、ＣＤＣを阻害する。
【０１２５】
２３３、２３４、２３５、２６７、２６８、及び３２４位に点変異を有し、Ｇ２３６が欠損したＧ０４５ｃ背景上のストラドマー（配列番号６２）は、本明細書ではＧ１０２３と呼ばれる。いくつかの実施形態において、Ｇ１０２３は、驚くべきことに、Ｃ１ｑに結合し、かつ全ての標準Ｆｃ受容体への頑強な結合を保持しながら、ＣＤＣを阻害した。
【０１２６】
２６５、２６７、２６８、及び３２４位に点変異を有するＧ０４５ｃ背景上のストラドマー（配列番号１８）は、本明細書ではＧ１００６と呼ばれる。いくつかの実施形態において、Ｇ１００６は、驚くべきことに、Ｃ１ｑに結合し、かつ全ての標準Ｆｃ受容体への結合を低減することが予想される２６５位の変異にも関わらず、ＦｃγＲＩ及びＦｃＲｎへの頑強な結合及びＦｃγＲＩＩａへの中程度の結合を保持しながら、ＣＤＣを阻害した。
【０１２７】
２３８、２６７、２６８、２９７、及び３２４位に点変異を有するＧ０４５ｃ背景上のストラドマー（配列番号２０）は、本明細書ではＧ１０２７と呼ばれる。いくつかの実施形態において、Ｇ１０２７は、驚くべきことに、Ｃ１ｑに結合し、かつＣＤＣを阻害するが、２３８及び２９７位の変異にも関わらず、標準Ｆｃ受容体結合は排除せず、ＦｃγＲＩ及びＦｃＲｎへの頑強な結合ならびにＦｃγＲＩＩａ及びＦｃγＲＩＩｂへの適度の結合を保持する。
【０１２８】
２３６、２６７、２６８、及び３２４位に点変異を有するＧ０４５ｃ背景上のストラドマー（配列番号１２）は、本明細書ではＧ９９６と呼ばれる。いくつかの実施形態において、Ｇ９９６は、驚くべきことに、Ｃ１ｑ結合及びＣＤＣ阻害に加えて、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、及びＦｃγＲＩＩｂに結合する。また驚くべきことに、Ｇ９９６は、マウスにおける標準結合を呈さず、これによりげっ歯類における純粋なＣＤＣ阻害を評価するための理想的な化合物となっている。Ｇ９９６とは対照的に、Ｆｃ変異Ｇ２３６Ｒを含む（が、２６７、２６８、または３２４位には変異を含まない）多量体化ストラドマーはＧ９９０と指定され、高い親和性及び結合力なくＣ１ｑに結合するが、ＣＤＣの認識可能な阻害は有さない。Ｇ９９０はまた、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、またはＦｃγＲＩＩＩａへの認識可能な結合も有さない。驚くべきことに、本発明者らは、Ｇ９９０の文脈におけるＦｃ変異Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及び／またはＳ３２４Ｔの更なる導入が、Ｃ１ｑ結合及びＣＤＣの阻害を更に改良することを見出した。更に一層驚くべきことに、Ｇ９９６は、ＦｃγＲＩＩｂに非常に強力に結合する。
【０１２９】
２３３、２３６、２６７、２６８、３２４、及び３２８位に点変異を有するＧ０４５ｃ背景上のストラドマー（配列番号２３）は、本明細書ではＧ１０４２と呼ばれる。いくつかの実施形態において、Ｇ１０４２は、驚くべきことに、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、及びＦｃγＲＩＩｂに頑強に結合する。したがって、３２８位の変異の追加（２３３、２３６、２６７、２６８、及び３２４位に点変異を有するＧ９９４と、Ｇ１０４２を比較されたい）は、驚くべきことに、３２８位の変異はＦｃγＲＩＩｂへの結合のみを増加することが予想されるという事実にも関わらず、ＦｃγＲＩＩａ及びＦｃγＲＩＩｂの両方への頑強な結合をもたらした。
【０１３０】
点変異Ｐ２３８Ｄ、Ｄ２６５Ｇ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔを有するＧ０４５ｃ背景上のストラドマー（配列番号２４）は、本明細書ではＧ１０４３と呼ばれる。いくつかの実施形態において、Ｇ１０４３は、驚くべきことに、２３８及び２６５位の変異はＦｃγＲＩＩａ及びＦｃγＲＩへの結合を低減することが予想されるという事実にも関わらず、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、及びＦｃγＲＩに頑強に結合する。
【０１３１】
点変異Ｐ２３８Ｄ、Ｄ２６５Ｗ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔを有するＧ０４５ｃ背景上のストラドマー（配列番号２５）は、本明細書ではＧ１０４６と呼ばれる。いくつかの実施形態において、Ｇ１０４６は、驚くべきことに、ＦｃγＲＩに頑強に結合し、ＦｃγＲＩＩａへの結合も増加させる。２３８位の変異は、ＦｃγＲＩＩａ結合よりもむしろＦｃγＲＩＩｂ結合を増加させることが予想されるため、この結果は驚くべきものであった。
【０１３２】
２３３、２３４、２３５、２６７、２６８、２９７、３２４、及び３２８位に点変異、ならびに２３６位のアミノ酸の欠失を有するＧ０４５ｃ背景上のストラドマー（配列番号２６）は、本明細書ではＧ１０５０と呼ばれる。いくつかの実施形態において、Ｇ１０５０は、ＦｃγＲＩＩａ及びＦｃγＲＩＩｂに頑強に結合する。驚くべきことに、高親和性ＦｃγＲＩへの結合は失われた一方で、低親和性ＦｃγＲＩＩへの結合は保持された。
【０１３３】
点変異Ｐ２３８Ｄ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔを有するＧ０４５ｃ背景上のストラドマー（配列番号２７）は、本明細書ではＧ１０２５と呼ばれる。いくつかの実施形態において、Ｇ１０２５は、驚くべきことに、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、及びＦｃγＲＩＩｂに頑強に結合する。２３８位の変異は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、及びＦｃγＲＩＩＩａへの結合を減少させることが予想されるが、ＦｃγＲＩＩＩａへの結合のみが減少したため、この結果は驚くべきものであった。更に一層驚くべきことに、同一の組の変異が、Ｃ末端連結ＧＬ−２０４５ストラドマーではなく、Ｎ連結多量体化ドメインを有するストラドマー（Ｇ１０２４）上になされる場合、この補体優先結合は、完全に抑止される。これは、多量体化ストラドマーの文脈におけるこれらの変異の予想不可能な性質を再び強調する。
【０１３４】
いくつかの実施形態において、本開示は、Ｇ０１９（アミノからカルボキシ末端にかけて、ＩｇＧ２ヒンジ−ＩｇＧ１ヒンジ−ＩｇＧ１  ＣＨ２  ＩｇＧ１  ＣＨ３）の骨格を有し、Ｆｃドメイン内に１つ以上の点変異を含むストラドマーを提供する。２６７、２６８、及び３２４位に点変異を有する結果として得られるストラドマー（配列番号１７）は、本明細書ではＧ１００３と呼ばれる。いくつかの実施形態において、親化合物Ｇ０１９が受容体と結合力に基づく相互作用をすることができる高次多量体を形成するにも関わらずＧ１００３は、驚くべきことに、親ストラドマーが最小のＣ１ｑ結合を呈し、ＣＤＣ阻害は呈さないという事実にも関わらず、Ｃ１ｑへの結合及びＣＤＣの頑強な阻害を呈した。
【０１３５】
２６７、２６８、３２４、及び３２８位に点変異を有するＧ０１９背景上のストラドマー（配列番号６４）は、本明細書ではＧ１０４９と呼ばれる。いくつかの実施形態において、Ｇ１０４９は、驚くべきことに、補体阻害及びＣ１ｑ結合活性とともに、全ての標準ＦｃγＲへの頑強な結合を呈する。
【０１３６】
驚くべき発見において、本発明者らは、モノクローナル抗体への補体親和性を増加させるものとして説明されている特定のＦｃ変異が、ＦｃγＲＩＩｂへの認識可能な結合を有さない多量体化ストラドマーのＦｃ領域に付加される場合、結果として得られる化合物が、ＦｃγＲＩＩｂへの回復することを発見した。例えば、Ｇ９９４、Ｇ９９６、及びＧ９９８はそれぞれ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔ変異の欠乏を除いては同一の変異を有する対応するストラドマーが、強力なＦｃγＲＩＩｂ結合を呈さなかったという事実にも関わらず、時には強力にＦｃγＲＩＩｂに結合する。
【０１３７】
補体優先ストラドマーＧ９９４及びＧ９９８のいずれかに基づいて、追加のストラドマーを生成した。Ｇ９９４に由来する第１の組のストラドマーにおいて、Ｇ９９４変異Ｅ２３３Ｐ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔは保持され、２６７位は野生型（セリン）であり、２３６位（（Ｇ９９４にあるような）アルギニンまたはアルギニンに類似したアミノ酸のいずれか）に様々な変異がなされた。これらのストラドマーを、Ｇ１１０３、Ｇ１０８８、Ｇ１０８９、Ｇ１１０４、Ｇ１０８２、Ｇ１１０５、及びＧ１１０６と呼んだ。これらのストラドマーがＦｃγＲ及び補体Ｃ１ｑに結合する程度は大幅かつ予想外に変動し、これはＧ９９４ストラドマーの文脈における２３６位の変異が予想不可能な影響を有することを示す。Ｇ９９４に由来する第２の組のストラドマーにおいて、Ｇ９９４変異Ｅ２３３Ｐ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔは保持され、２３６位は野生型（グリシン）であり、２６７位（（Ｇ９９４にあるような）グルタミン酸またはグルタミン酸に類似したアミノ酸のいずれか）に様々な変異がなされた。これらのストラドマーを、Ｇ１１０２、Ｇ１１００、Ｇ１１０１、Ｇ１１２５、Ｇ１１０８、Ｇ１１０９、及びＧ１０８４と呼んだ。繰り返すと、このストラドマーがＦｃγＲ及び補体Ｃ１ｑに結合した程度は大幅かつ予想外に変動し、これは２３６位と同様にＧ９９４ストラドマーの文脈における２６７位の変異が予想不可能な影響を有することを示す。次の組のＧ９９４系ストラドマーにおいて、２３６及び２６７位の変異の組み合わせを試験し、Ｇ１１１０、Ｇ１１１１、Ｇ１１１２、Ｇ１１１４、Ｇ１１１５、Ｇ１１１６、Ｇ１１１７、Ｇ１１１８、Ｇ１１１９、Ｇ１１２０、Ｇ１１２１、Ｇ１１２２、Ｇ１１２３、Ｇ１１２４、Ｇ１１２８、Ｇ１１２９、Ｇ１１３０、及びＧ１１３１と呼んだ。これらのストラドマーのＦｃγＲ及び補体結合プロファイルもまた、予想不可能であった。
【０１３８】
Ｇ９９８の誘導体もまた調製し、試験した。第１の組のＧ９９８誘導体において、Ｇ９９８変異Ｈ２６８Ｆ及びＳ３２４Ｔは保持され、２６７位は野生型（セリン）であるか、またはセリンに類似したアミノ酸に変異されるかのいずれかであり、２９９位の変異（Ｔ２９９Ａ）が付加された。これらの化合物を、Ｇ１０７１ｄ２、Ｇ１０６８、Ｇ１０９４、Ｇ１０９２、Ｇ１０９６、Ｇ１１０７、Ｇ１０９３、及びＧ１０９５と呼んだ。Ｔ２９９Ａ変異は、脱グリコシル化部位を破壊するように設計された。ストラドマー構造及び他の変異の文脈において、この変異がＦｃγＲ結合を低減する程度は予想不可能であった。加えて、２６７位の異なる変異は有さないが、Ｇ９９８の（グリコシル化のための）Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、及びＮ２９７Ａ変異を有するＧ９９８の誘導体を生成した。これらの化合物を、Ｇ１０６９、Ｇ１０７０、Ｇ１１３２、Ｇ１０７４、及びＧ１０７５と呼び、これらもまた、予想不可能なＦｃγＲ及び補体結合プロファイルも呈した。際だったことに、この群内の化合物のうちの１つ（Ｇ１０６９）のみが、ＦｃγＲ結合を排除しながら補体結合を保持した。したがって、この化合物が補体優先ストラドマーであった。
【０１３９】
いくつかの実施形態において、Ｇ９９４、Ｇ９９８、Ｇ１０３３、Ｇ１０２２、Ｇ１０３２、Ｇ１０２３、Ｇ１００６、Ｇ１０２７、Ｇ９９６、または別の補体優先多量体化ストラドマーは、例えば、急性溶血（例えば、新生児溶血性疾患におけるもの）、自己免疫性溶血性貧血、薬物誘導性溶血性貧血、後天性溶血性貧血、輸血反応／同種免疫溶血性貧血、感染性溶血性貧血（例えば、細菌性（ライム病、チフス、ロッキー山紅斑熱、野兎病、エーリキア症）、ウイルス性（髄膜脳炎及び出血熱）、ならびに原生動物性（バベシア症）マダニ媒介疾患を含む、マダニ媒介疾患と関連付けられるもの、あるいは黒水熱、デング熱、チクングニア、ジカ、もしくはエボラウイルスを含む、マラリアなどの蚊媒介疾患と関連付けられるもの）、毒素関連溶血性貧血（例えば、ヘビ毒、有毒化学物質、もしくはマダニ毒素に由来するもの）、悪性高血圧症、熱傷、またはライ症候群などの急性病態を有する対象に投与される。いくつかの実施形態において、Ｇ９９８、Ｇ９９４、Ｇ１０３３、Ｇ１０２２、Ｇ１０３２、Ｇ１０２３、Ｇ１００６、Ｇ１０２７、Ｇ９９６補体優先多量体化ストラドマーは、静脈内投与を介して、それを必要とする対象に投与される。
【０１４０】
いくつかの実施形態において、Ｇ９９８、Ｇ９９４、Ｇ１０３３、Ｇ１０２２、Ｇ１０３２、Ｇ１０２３、Ｇ１００６、Ｇ１０２７、Ｇ９９６補体優先多量体化ストラドマーは、慢性疾患または病態を有する対象に投与される。慢性疾患及び病態としては、例えば、腎臓病態、黄斑変性、慢性溶血（例えば、発作性夜間ヘモグロビン尿症）、機械的溶血（例えば、人工心臓弁、心肺バイパス機、もしくは血管中に使用される他のデバイス、セロハン膜による、もしくはそれによらない血液透析、妊娠高血圧腎症もしくは子癇発作、または血栓性血小板減少性紫斑病に由来するもの）、遺伝性球状赤血球症、楕円赤血球症、ピルビン酸キナーゼ欠乏性、Ｇ６ＰＤ欠乏性、鎌状赤血球貧血、サラセミア、遺伝性溶血性貧血、溶血性尿毒症症候群、補体消費を伴う免疫複合体障害（例えば、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、混合型クリオグロブリン血症、らい腫性ハンセン病、及び菌血症ショック）、原発性胆汁性肝硬変、セリアック病、多発性骨髄腫、ならびに蕁麻疹様血管炎が挙げられる。いくつかの実施形態において、Ｇ９９４は、皮下投与を介して、それを必要とする対象に投与される。
【０１４１】
いくつかの実施形態において、Ｇ９９８、Ｇ９９４、Ｇ１０３３、Ｇ１０２２、Ｇ１０３２、Ｇ１０２３、Ｇ１００６、Ｇ１０２７、Ｇ９９６補体優先多量体化ストラドマーは、腎臓病態を有する対象に投与される。腎臓病態としては、膜性増殖性糸球体腎炎、メサンギウム増殖性糸球体腎炎、突発増殖性糸球体腎炎、巣状糸球体硬化症、巣状分節性糸球体硬化症、菲薄基底膜病、腎炎、ループス腎炎、繊維状糸球体腎炎、イムノタクトイド糸球体腎炎、ブライト病、ベルジェ病／ＩｇＡ腎症、腎硬化症、ネフローゼ、ネフローゼ症候群、膜性腎症、膜性腎症、感染後糸球体腎炎、尿細管壊死、薬物誘導性腎毒性、及びグッドパスチャー症候群が非限定的に挙げられる。
【０１４２】
したがって、本発明者らは、未変性Ｆｃドメイン配列を有する親ストラドマーと比較して、頑強なＣ１ｑ結合及びＦｃγＲへの結合の低減を呈することによって補体優先活性を呈する個々のストラドマーが生成され得ること、しかし、Ｃ１ｑ結合及びＦｃγＲ結合に関して個々の各ストラドマーが有する活性は、変異がモノクローナル抗体に対して有する影響に基づいては全く予想不可能であることを見出した。
【０１４３】
本開示によって包含される例示的なストラドマーのアミノ酸配列を、表１に提供する。変異されたアミノ酸を、表に示す（灰色で強調したテキスト）。
【表１−１】
2018528167.tif 000003
【表１−２】
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【表１−３】
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【表１−４】
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【表１−５】
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【表１−６】
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【表１−７】
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【表１−８】
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【表１−９】
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【表１−１０】
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【表１−１１】
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【表１−１２】
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【表１−１３】
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【表２−１】
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【表２−２】
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【表２−３】
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【表２−４】
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【０１４４】
モノクローナル抗体エクリズマブ（抗Ｃ５抗体）などの補体結合タンパク質は、当該技術分野において、補体媒介疾患の治療として補体経路を遮断する試みにおいて使用されている。本発明の生物模倣型は、特定のＦｃドメイン変異を通して、補体成分、例えば、Ｃ１ｑへの結合の増加を達成する。例えば、本発明の生物模倣型は、ＩｇＧ１  Ｆｃドメインの２６７及び／または２６８及び／または３２４位に点変異を含む。補体結合本発明の生物模倣型は、野生型ＩｇＧ１  Ｆｃドメインと比較して、しばしば本発明の生物模倣物中に含まれる変異を記載する文献によって予想されない方法で、ＦｃＲｎ、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及び／またはＦｃγＲＩＩＩへの改変された結合を更に呈する。したがって、一実施形態において、本発明の生物模倣物は、多量体化することができ、正常な非凝集免疫グロブリンと比較して、増加した１つ以上の標準ＦｃγＲへの補体結合及び／またはＦｃＲｎ結合の比率を呈する補体優先ストラドマーである。更なる一実施形態において、本発明の生物模倣物は、多量体化することができ、正常な凝集免疫グロブリンと比較して、増加した１つ以上の標準ＦｃγＲへの補体結合及び／またはＦｃＲｎ結合の比率を呈する補体優先ストラドマーである。更なる一実施形態において、本発明の生物模倣物は、多量体化することができ、そのＦｃドメイン内に同一の変異を含むモノクローナル抗体と比較して、増加した１つ以上の標準ＦｃγＲへの補体結合及び／またはＦｃＲｎ結合の比率を呈する補体優先ストラドマーである。更なる一実施形態において、本発明の生物模倣物は、未変性ＩｇＧ、ＩＶＩＧ、または親ストラドマーと比較して、改変された半減期を有する。
【０１４５】
本明細書で使用される場合、「ＦｃγＲ」及び「Ｆｃγ受容体」という用語は、ＦｃガンマＲＩ、ＲＩＩ、及びＲＩＩＩファミリーの全てのメンバーを包含する。Ｆｃγ受容体は、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）；ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）ならびにそのアイソタイプ及びアロタイプ（ＦｃγＲＩＩａ  ＬＲ、ＦｃγＲＩＩａ  ＨＲ、ＦｃγＲＩＩｂ、及びＦｃγＲＩＩｃ）；ＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）及びそのアイソタイプ（ＦｃγＲＩＩＩａ及びＦｃγＲＩＩＩｂ）を含むが、ヒトにおいてこれらに限定されない、低親和性及び高親和性Ｆｃγ受容体を含む。当業者は、Ｄａｖｉｓ，ｅｔ  ａｌ．（２００４）“Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  Ｂ  ｃｅｌｌ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｍｏｕｓｅ  Ｆｃ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｈｏｍｏｌｏｇｓ，”Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１６（９）：１３４３−１３５３に記載されるものなどのＦｃγＲ及びＦｃγＲ相同体に関して、本明細書に提供される本開示が、未だ発見されていない、将来のＦｃγＲならびに関連するアイソタイプ及びアロタイプに適用されることを認識するだろう。
【０１４６】
特異的結合は一般に、結合アッセイにおいて、後の非標識リガンドの過剰によって置換可能である標識されたリガンドの量として定義される。しかしながら、これは、当該技術分野において十分に確立されている特異的結合を評価する他の手段（例えば、Ｍｅｎｄｅｌ  ＣＭ，Ｍｅｎｄｅｌ  ＤＢ，‘Ｎｏｎ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ’ｂｉｎｄｉｎｇ．Ｔｈｅ  ｐｒｏｂｌｅｍ，ａｎｄ  ａ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｊ．１９８５Ｍａｙ１５；２２８（ｌ）：２６９−７２）を除外しない。特異的結合は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）を通して市販）またはバイオレイヤー干渉法（ＦｏｒｔｅＢｉｏを通して市販）などの、当該技術分野において周知である様々な方法で測定して、免疫学的に活性な生物模倣物の会合定数及び解離定数の両方を特性付けることができる（Ａｓｉａｎ  Ｋ，Ｌａｋｏｗｉｃｚ  ＪＲ，Ｇｅｄｄｅｓ  Ｃ．Ｐｌａｓｍｏｎ  ｌｉｇｈｔ  ｓｃａｔｔｅｒｉｎｇ  ｉｎ  ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ：ｎｅｗ  ｓｅｎｓｉｎｇ  ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ，ｖｉｓｉｏｎｓ  ａｎｄ  ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ．  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ２００５，９：５３８−５４４）。
【０１４７】
「凝集未変性ＩｇＧの免疫学的活性」とは、ＩｇＧ凝集体への免疫系の曝露時に、免疫系の機能に影響を与える多量体化ＩｇＧの特性を指す。未変性多量体化ＩｇＧの具体的な特性としては、ＦｃγＲへの特異的結合の改変、免疫細胞の表面上でのＦｃγＲの架橋、または抗体依存性細胞媒介細胞傷害（ＡＤＣＣ）、食作用（ＡＤＣＰ）、もしくは補体固定などの多量体化ＩｇＧのエフェクター機能性が挙げられる（例えば、Ｎｉｍｍｅｒｊａｈｎ  Ｆ，Ｒａｖｅｔｃｈ  ＪＶ．Ｔｈｅ  ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ＩｇＧ：ｔｈｅ  ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ  ＩｇＧ  ｐａｒａｄｏｘ．Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．２００７；２０４：１１−１５、Ａｕｇｅｎｅｒ  Ｗ，Ｆｒｉｅｄｍａｎ  Ｂ，Ｂｒｉｔｔｉｎｇｅｒ  Ｇ．Ａｒｅ  ａｇｇｒｅｇａｔｅｓ  ｏｆ  ＩｇＧ  ｔｈｅ  ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ｐａｒｔ  ｏｆ  ｈｉｇｈ−ｄｏｓｅ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  ａｄｕｌｔ  ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ  ｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｏｐｅｎｉｃ  ｐｕｒｐｕｒａ（ＩＴＰ）Ｂｌｕｔ．１９８５；５０：２４９−２５２、Ａｒａｓｅ  Ｎ，Ａｒａｓｅ  Ｈ，Ｐａｒｋ  ＳＹ，Ｏｈｎｏ  Ｈ，Ｒａ  Ｃ，Ｓａｉｔｏ  Ｔ．Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ＦｃＲｇａｍｍａ  ｉｓ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  ｆｏｒ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｓｉｇｎａｌ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ＮＫＲ−Ｐｌ（ＣＤ１６１）ｉｎ  ｎａｔｕｒａｌ  ｋｉｌｌｅｒ（ＮＫ）ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  ＮＫｌ．１＋Ｔ  ｃｅｌｌｓ．Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．１９９７；１８６：１９５７−１９６３、Ｔｅｅｌｉｎｇ  ＪＬ，Ｊａｎｓｅｎ−Ｈｅｎｄｒｉｋｓ  Ｔ，Ｋｕｉｊｐｅｒｓ  ＴＷ，ｅｔ  ａｌ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ  ｄｅｐｅｎｄｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｇ  ｄｉｍｅｒｓ：ｓｔｕｄｉｅｓ  ｉｎ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｉｍｍｕｎｅ  ｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｏｐｅｎｉａ．Ｂｌｏｏｄ．２００１；９８：１０９５−１０９９、Ａｎｄｅｒｓｏｎ  ＣＦ，Ｍｏｓｓｅｒ  ＤＭ．Ｃｕｔｔｉｎｇ  ｅｄｇｅ：ｂｉａｓｉｎｇ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｂｙ  ｄｉｒｅｃｔｉｎｇ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｔｏ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｆｃ  ｇａｍｍａ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ．  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００２；１６８：３６９７−３７０１、Ｊｅｆｆｅｒｉｓ  Ｒ，Ｌｕｎｄ  Ｊ．Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ｓｉｔｅｓ  ｏｎ  ｈｕｍａｎ  ＩｇＧ−Ｆｃ  ｆｏｒ  ＦｃγＲ：ｃｕｒｒｅｎｔ  ｍｏｄｅｌｓ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ．  ２００２；８２：５７、Ｂａｎｋｉ  Ｚ，Ｋａｃａｎｉ  Ｌ，Ｍｕｌｌａｕｅｒ  Ｂ，ｅｔ  ａｌ．Ｃｒｏｓｓ−Ｌｉｎｋｉｎｇ  ｏｆ  ＣＤ３２Ｉｎｄｕｃｅｓ  Ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  Ｍｏｎｏｃｙｔｅ−Ｄｅｒｉｖｅｄ  Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  Ｃｅｌｌｓ  Ｖｉａ  ＮＦ−｛ｋａｐｐａ｝Ｂ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｐａｔｈｗａｙ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００３；１７０：３９６３−３９７０、Ｓｉｒａｇａｍ  Ｖ，Ｂｒｉｎｅ  Ｄ，Ｃｒｏｗ  ＡＲ，Ｓｏｎｇ  Ｓ，Ｆｒｅｅｄｍａｎ  Ｊ，Ｌａｚａｒｕｓ  ＡＨ．Ｃａｎ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｗｉｔｈ  ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ  ｆｏｒ  ｓｏｌｕｂｌｅ  ａｎｔｉｇｅｎｓ  ｍｉｍｉｃ  ｔｈｅ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ  ＩｇＧ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  ｄｉｓｅａｓｅ？Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．２００５；ｌ１５：１５５−１６０を参照されたい）。これらの特性は一般に、ホモ二量体ＩｇＧの特性に対する比較によって評価される。
【０１４８】
本明細書に記載されるように、高次多量体が、免疫応答の改変において有効であると見出されている一方で、ホモ二量体はまた、有効な免疫調節因子でもある。理論によって拘束されるものではないが、ホモ二量体は、経時的に高次多量体の強力な結合を調節し、インビボで高次多量体を形成することが可能であり得ると考えられる。理論によって拘束されるものではないが、本発明の多量体は、結合した標的から緩徐に解離し、それらの標的を発現する免疫細胞内に内部移行し、その免疫細胞の活性化状態または成熟速度を、長期間または可能性としては永久に改変する可能性があるとも考えられる。本明細書に記載される多量体化実験は、さもなければ純粋なホモ二量体の集団が、低レベルの血液またはウシ胎仔血清の存在下で多量体化することができることを示す。したがって、高次多量体は、免疫応答を調節する上でホモ二量体画分よりも有効である一方で、本発明の天然に連結したストラドマーのホモ二量体画分もまた、部分的には、低レベルの血液または血清の存在下でのホモ二量体の多量体化を通して、有効な免疫調節因子であり得る。したがって、「高次多量体」とは、インビボで形成されるホモ二量体を超えた多量体だけでなく、対象への注射前に溶液中で形成されるホモ二量体を超えた多量体も意味する。
【０１４９】
「免疫調節活性」、「免疫応答の調節」、「免疫系の調節」、及び「免疫調節」は、その細胞型内の細胞型の成熟または他の細胞型への成熟を含む、１つ以上の免疫細胞の活性、能力、及び相対数を変更することによって、免疫系を改変することを意味する。例えば、免疫調節は、免疫応答の抑制または活性化であり得る。例えば、一態様において、免疫調節は、Ｔ細胞またはＢ細胞における非応答性または耐性の誘導を意味し得る。本明細書で使用される場合、「耐性」という用語は、Ｔ細胞もしくはＢ細胞または免疫応答全体における状態を指し、この状態では、Ｔ細胞もしくはＢ細胞または他の免疫細胞が、その同族抗原、または通常は応答する、抗原、エピトープ、もしくは他のシグナルに応答しない。別の例として、メモリーＢ細胞の免疫調節は、特定の抗体の産生の同時減少を伴う、ある特定のメモリーＢ細胞の選択的アポトーシスをもたらす可能性がある。別の例として、免疫調節活性は、ＩＬ−６及びＩＬ−８などの自己免疫疾患において一般に上昇する、炎症促進性サイトカインまたはサイトカインの減少をもたらす可能性がある。別の例として、免疫調節活性は、後のＴＧＦ−ベータの分泌及び切断を伴う、ＮＫＴ細胞の活性化をもたらす可能性がある。受容体の活性化を予防するために免疫細胞受容体を遮断することもまた、「免疫調節」の内に包含され、別に「阻害免疫調節」と呼ばれ得る。別の態様において、免疫調節は、免疫応答の改良または活性化であり得る。例えば、免疫調節は、Ｔ細胞またはＢ細胞の活性化を意味し得る。別の例として、未成熟単球の免疫調節は、より成熟した単球、樹状細胞、マクロファージ、または破骨細胞のより大きな集団をもたらすことができ、これらの全てが未成熟単球に由来するものである。別の例として、ＮＫ細胞の免疫調節は、改良された抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）をもたらす可能性がある。別の例として、免疫調節活性は、ＣＤ８β＋／ＣＤ１１ｃ＋細胞などの、さもなければ高レベルでは発現されない可能性がある表現型を有する細胞集団の増加をもたらす可能性がある。例えば、免疫細胞受容体は、免疫学的に活性な生物模倣物によって結合され、細胞内シグナリングを活性化して、別に「免疫調節の活性化」と呼ばれる様々な免疫細胞の変化を誘導することができる。
【０１５０】
樹状細胞の調節は、例えば、樹状細胞の表面上でのＣＤ８６及び／またはＣＤ１ａの発現の誘導によって、Ｔ細胞への抗原提示を促進または阻害し得る。ＣＤ１ａは、抗原提示細胞、特に樹状細胞の表面上に発現されるＭＨＣ−クラスＩ関連糖タンパク質である。ＣＤ１ａは、Ｔ細胞への脂質抗原の提示に関与する。ＣＤ８６もまた、抗原提示細胞上に発現され、Ｔ細胞に同時刺激を提供する。ＣＤ８６は、それぞれ活性化シグナル及び阻害シグナルを送る、Ｔ細胞の表面上のＣＤ２８及びＣＴＬＡ−４の両方に対するリガンドである。したがって、ＣＤ８６及びその同族受容体の発現のレベルは、耐性または特定の免疫応答のどちらが誘導されるかを決定する。好ましい一実施形態において、本発明のストラドマーは、部分的には抗原提示細胞、特に樹状細胞の表面上にＣＤ８６及びＣＤ１ａの発現を誘導することによって、免疫応答を調節することができる。一実施形態において、調節された樹状細胞は、抗原特異的ストラドマーの抗原に特異的な免疫細胞と相互作用する。
【０１５１】
単球の成熟の調節とは、成熟ＤＣ、マクロファージ、または破骨細胞への単球の分化を指す。分化は、成熟の速度または指向を促進するように、及び／または分化を受ける単球の数を増加するように、調節され得る。あるいは、分化は、分化の速度及び／または分化を受ける細胞の数に関して低減され得る。
【０１５２】
本明細書で使用される場合、「単離された」ポリペプチドまたはペプチドという用語は、天然に存在する対応物を有さないか、あるいは例えば、膵臓、肝臓、脾臓、卵巣、精巣、筋肉、関節組織、神経組織、消化器組織、または乳房組織もしくは腫瘍組織（例えば、乳癌組織）などの組織、または血液、血清、もしくは尿などの体液において天然にそれに付随する成分から分離または精製されているかのいずれかの、ポリペプチドまたはペプチドを指す。典型的には、ポリペプチドまたはペプチドは、それが、天然に関連付けられるタンパク質及び他の天然に存在する有機分子を含まない、少なくとも７０乾燥重量％である場合に、「単離された」と見なされる。好ましくは、本発明のポリペプチド（またはペプチド）の調製物は、それぞれ、本発明の少なくとも８０乾燥重量％、より好ましくは少なくとも９０乾燥重量％、及び最も好ましくは少なくとも９９乾燥重量％のポリペプチド（ペプチド）である。化学的に合成されるポリペプチドまたはペプチドは、その性質上、それに天然に付随する成分から分離されるため、合成ポリペプチドまたはペプチドは「単離される」。
【０１５３】
本発明の単離されたポリペプチド（またはペプチド）は、例えば、天然源から（例えば、組織もしくは体液から）抽出することによって、ポリペプチドもしくはペプチドをコードする組み換え核酸の発現によって、または化学合成によって得ることができる。それが天然に起源を持つ供給源とは異なる細胞系において産生されるポリペプチドまたはペプチドは、それに天然に付随する成分を必ずしも含まないため、「単離される」。好ましい一実施形態において、本発明の単離されたポリペプチドは、ＩｇＧ１  Ｆｃ単量体及びＩｇＧ２ヒンジ多量体化ドメインに対応する配列（配列番号４）、イソロイシン多量体化ドメイン（配列番号５）、またはＧＰＰ多量体化ドメイン（配列番号６）のみを含有し、タンパク質のクローニングまたは精製を補助し得るいかなる更なる配列（すなわち、導入された制限酵素認識部位または精製タグ）も含有しない。単離または精製の程度は、任意の適切な方法、例えば、カラムクロマトグラフィー、ポリアクリルアミドゲル電気泳動、またはＨＰＬＣ分析によって測定することができる。
【０１５４】
薬学的組成物
本明細書に記載されるストラドマー組成物の投与は、経口的、非経口的、または局所的に、任意の一般的な経路を介したものである。例示的な経路としては、経口、経鼻、頬側、直腸、膣、眼、皮下、筋肉内、腹腔内、静脈内、動脈内、腫瘍内、脊髄内、髄腔内、関節内、動脈内、くも膜下、舌下、口腔粘膜、気管支、リンパ管、子宮内、皮下、腫瘍内、縫合糸などの埋め込み型デバイス上もしくは埋め込み型ポリマーなどの埋め込み型デバイス内への統合、硬膜内、皮質内、または皮膚が挙げられるが、これらに限定されない。そのような組成物は通常、本明細書に記載される薬学的に許容される組成物として投与されるだろう。好ましい一実施形態において、単離されたストラドマーは、静脈内または皮下投与される。
【０１５５】
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体」という用語は、任意及び全ての溶剤、分散媒、コーティング剤、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤、ならびに吸収遅延剤などを含む。薬学的に活性な物質のためのそのような媒質及び薬剤の使用は、当該技術分野において周知である。任意の従来の媒質または薬剤が本発明のベクターまたは細胞と不適合である場合を除いて、治療組成物中でのその使用が企図される。補助的な活性成分もまた、組成物中に組み込まれてもよい。
【０１５６】
本発明のストラドマー組成物は、中性または塩の形態で製剤化され得る。薬学的に許容される塩としては、（タンパク質の遊離アミノ基とともに形成された）酸添加塩、ならびに例えば、塩酸もしくはリン酸などの無機酸、または酢酸、シュウ酸、酒石酸、及びマンデル酸などの有機酸とともに形成されたものが挙げられる。遊離カルボキシル基とともに形成された塩はまた、例えば、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、または水酸化第二鉄などの無機塩基、ならびにイソプロピルアミン、トリメチルアミン、ヒスチジン、及びプロカインなどの有機塩基に由来してもよい。
【０１５７】
減菌注射溶液は、必要量のストラドマーを、必要に応じて上記に列挙される様々な他の成分を有する適切な溶剤に組み込み、その後、濾過減菌することによって調製される。いくつかの実施形態において、滅菌注射溶液は、筋肉内、皮下、静脈内投与のために製剤化される。一般に、分散液は、様々な減菌活性成分を、基本的な分散媒及び上記に列挙されるものからの必要とされる他の成分を含有する滅菌ビヒクル中に組み込むことによって調製される。滅菌注射溶液の調製のための滅菌粉末の場合、好ましい調製方法は、活性成分に、その事前に滅菌濾過された溶液からの任意の所望される追加成分を加えた粉末をもたらす真空乾燥及び凍結乾燥技術である。
【０１５８】
更に、一実施形態は、経口投与に好適なストラドマー組成物であり、不活性希釈剤とともに、またはそれなしで薬学的に許容される担体中に提供される。担体は、同化可能または食用であるべきであり、液体、半固体、すなわち、ペースト、または固体担体を含む。任意の従来の媒質、薬剤、希釈剤、または担体が、レシピエント、またはそれに含有されるストラドマー調製物の治療有効性に対して有害である場合を除いて、本発明の方法の実践に使用するための経口投与可能なストラドマー組成物中でのその使用は適切である。担体または希釈剤の例としては、脂肪、油、水、生理食塩溶液、脂質、リポソーム、樹脂、結合剤、及び充填剤など、またはそれらの組み合わせが挙げられる。本明細書で使用される場合、「経口投与」という用語は、経口、頬側、経腸、または胃内投与を含む。
【０１５９】
一実施形態において、ストラドマー組成物は、任意の簡便かつ実用的な様式で、すなわち、溶液、懸濁、乳化、混合、カプセル封入、マイクロカプセル封入、及び吸収などによって担体と組み合わされる。そのような手順は、当業者にとって通例である。
【０１６０】
特定の一実施形態において、粉末形態のストラドマー組成物は、半固体もしくは固体担体と組み合わされるか、または完全に混合される。混合は、粉砕などの任意の簡便な様式で実行することができる。胃を通した治療活性の損失、すなわち、胃内での変性から組成物を保護するために、安定剤もまた、混合プロセスにおいて添加されてもよい。経口投与可能な組成物中で使用するための安定剤の例としては、緩衝液、胃酸の分泌に対する拮抗薬、アミノ酸（グリシン及びリジンなど）、炭水化物（デキストロース、マンノース、ガラクトース、フルクトース、ラクトース、スクロース、マルトース、ソルビトール、マンニトールなど）、ならびにタンパク質分解性酵素阻害剤などが挙げられる。より好ましくは、経口投与される組成物について、安定剤はまた、胃酸の分泌に対する拮抗薬も含んでもよい。
【０１６１】
更に、半固体または固体の担体と組み合わされる経口投与用のストラドマー組成物は、硬質もしくは軟質ゼラチンカプセル、錠剤、またはピルへと更に製剤化され得る。より好ましくは、ゼラチンカプセル、錠剤、またはピルは、腸溶コーティングされる。腸溶コーティングは、ｐＨが酸性である胃または腸上部内での組成物の変性を予防する。すなわち、米国特許第５，６２９，００１号を参照されたい。小腸に到達すると、その中の塩基性ｐＨがコーティングを溶解し、組成物が放出されて、腸の細胞、例えば、パイエル板Ｍ細胞と相互作用するのを可能にする。
【０１６２】
別の実施形態において、粉末形態のストラドマー組成物は、免疫学的に活性な生物模倣物をカプセル封入するか、もしくは免疫学的に活性な生物模倣物が結合されるナノ粒子を作製する材料と組み合わされるか、または完全に混合される。各ナノ粒子は、１００ミクロン以下のサイズを有するだろう。ナノ粒子は、さもなければ経口的に生体利用可能ではないであろう免疫学的に活性な生物模倣物の消化器吸収を可能にする粘膜付着特性を有し得る。
【０１６３】
別の実施形態において、粉末組成物は、安定剤とともに、またはそれなしで、液体担体（すなわち、水または生理食塩溶液など）と組み合わされる。
【０１６４】
使用され得る特定のストラドマー製剤は、カリウムを含まない低張リン酸系緩衝液中の免疫学的に活性な生物模倣型タンパク質の溶液であり、緩衝液の組成は次の通りである：６ｍＭのリン酸二水素ナトリウム一水和物、９ｍＭのリン酸水素ナトリウム七水和物、５０ｍＭの塩化ナトリウム、ｐＨ７．０＋／−０．１。低張緩衝液中の免疫学的に活性な生物模倣型タンパク質の濃度は、１０マイクログラム／ｍｌ〜１００ミリグラム／ｍｌの範囲であり得る。この製剤は、任意の投与経路（例えば、静脈内投与であるが、これに限定されない）を介して投与され得る。
【０１６５】
更に、半固体の担体と組み合わされる局所投与用のストラドマー組成物は、クリームまたはゲル軟膏へと更に製剤化され得る。ゲル軟膏を形成するための好ましい担体は、ゲルポリマーである。本発明のゲル組成物の製造に使用される好ましいポリマーとしては、カルボポール、カルボキシメチルセルロース、及びプルロニックポリマーが挙げられるが、これらに限定されない。具体的には、粉末Ｆｃ多量体組成物は、皮膚上または皮膚下の疾患の治療のための皮膚への適用のために、０．５重量／容量％〜５重量／容量％の強度のＣａｒｂｏｐｏｌ９８０などの重合剤を含有する水性ゲルと組み合わされる。本明細書で使用される場合、用語「局所投与」という用語は、皮膚、表皮、皮下、または粘膜表面への適用を含む。
【０１６６】
更に、ストラドマー組成物は、皮下または真皮下埋め込み用のポリマーへと製剤化され得る。埋め込み型薬物注入ポリマーの好ましい製剤は、一般に安全と見なされる薬剤であり、例えば、架橋デキストラン（Ｓａｍａｎｔｈａ  Ｈａｒｔ，Ｍａｓｔｅｒ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｔｈｅｓｉｓ，“Ｅｌｕｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ  ｆｒｏｍ  ａ  Ｎｏｖｅｌ  Ｃｒｏｓｓ−Ｌｉｎｋｅｄ  Ｄｅｘｔｒａｎ  Ｇｅｌ：Ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ”Ｖｉｒｇｉｎｉａ  Ｐｏｌｙｔｅｃｈｎｉｃ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ａｎｄ  Ｓｔａｔｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｊｕｎｅ８，２００９）、デキストラン−チラミン（Ｊｉｎ，ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｔｉｓｓｕｅ  Ｅｎｇ．Ｐａｒｔ  Ａ．１６（８）：２４２９−４０）、デキストラン−ポリエチレングリコール（Ｊｕｋｅｓ，ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｔｉｓｓｕｅ  Ｅｎｇ．Ｐａｒｔ  Ａ．，１６（２）：５６５−７３）、またはデキストラン−グルタルアルデヒド（Ｂｒｏｎｄｓｔｅｄ，ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，５３：７−１３）を含み得る。当業者は、ポリマーまたはヒドロゲル内に固定されたストラドマーを組み込み、孔径を所望の直径に制御することで、多くの類似したポリマー及びヒドロゲルが形成され得ることを理解するだろう。
【０１６７】
製剤化時、溶液は、投薬製剤と適合する様式で、かつ症状の改善または治療をもたらすのに治療的に有効である量で投与される。製剤は、摂取可能な溶液及び薬物放出カプセルなどの様々な剤形で容易に投与される。治療される対象の病態によって、投薬量にいくらかの変動が生じ得る。投与責任者は、いずれにしても、個々の対象の適切な用量を決定することができる。更に、ヒトへの投与について、調製物は、ＦＤＡ生物製剤評価研究センター（ＦＤＡ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）の基準によって要求される減菌性、一般的な安全性、及び純度基準を満たす。
【０１６８】
投与経路は、治療される疾患の位置及び性質により天然に変動し、例えば、皮内、経皮、真皮下、非経口、経鼻、静脈内、筋肉内、鼻腔内、皮下、経皮、気管内、腹腔内、腫瘍内、灌流、洗浄、直接注射、及び経口投与を含み得る。
【０１６９】
一実施形態において、ストラドマーは、静脈内に、皮下に、経口に、腹腔内に、舌下に、頬側に、経皮に、直腸に、真皮下埋め込みによって、または筋肉内に投与される。特定の実施形態において、ストラドマーは、静脈内に、皮下に、または筋肉内に投与される。一実施形態において、ストラドマーは、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１０００ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。更なる一実施形態において、ストラドマーは、約０．１ｍｇ／Ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇで投与される。また更なる一実施形態において、ストラドマーは、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇで投与される。尚更なる一実施形態において、ストラドマーは、約１ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇで投与される。尚更なる一実施形態において、ストラドマーは、約５ｍｇ／ｋｇ〜約１５ｍｇ／ｋｇで投与される。ストラドマーは、少なくとも少なくとも１日１回、毎週、隔週、または毎月投与されてもよい。第１の投薬相が第２の投薬相の約０．１％〜約３００％を含む、二相投薬レジメンが使用されてもよい。
【０１７０】
更なる一実施形態において、ストラドマーは、１つ以上の追加の医薬製剤及び／または治療薬の投与前、投与中、または投与後に投与される。更なる一実施形態において、追加の薬学的に活性な薬剤は、ステロイド；モノクローナル抗体、融合タンパク質、または抗サイトカインなどの生物学的抗自己免疫薬；非生物学的抗自己免疫薬；免疫抑制剤；抗生物質；及び抗ウイルス剤；サイトカイン；または別様に免疫調節因子として作用することが可能な薬剤を含む。尚更なる一実施形態において、ステロイドは、プレドニゾン、プレドニゾロン、コルチゾン、デキサメタゾン、モメタゾン、テストステロン、エストロゲン、オキサンドロロン、フルチカゾン、ブデソニド、ベクラメタゾン、アルブテロール、またはレバルブテロールである。尚更なる一実施形態において、モノクローナル抗体は、エクリズマブ、インフリキシマブ、アダリムマブ、リツキシマブ、トシリズマブ、ゴリムマブ、オファツムマブ、ＬＹ２１２７３９９、ベリムマブ、ベルツズマブ、メポリズマブ、ネシツムマブ、ニボルマブ、ジヌツキシマブ、セクキヌマブ、エボロクマブ、ブリナツモマブ、ペムブロリズマブ、ラムシルマブ、ベドリズマブ、シルツキシマブ、オビヌツズマブ、アドトラスツズマブ（ａｄｏｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ）、ラキシバクマブ、ペルツズマブ、ブレンツキシマブ、イピラムマブ（ｉｐｉｌｕｍｕｍａｂ）、デノスマブ、カナキヌマブ、ウステキヌマブ、カツマキソマブ、ラニビズマブ、パニツムマブ、ナタリズマブ、ベバシズマブ、セツキシマブ、エファリズマブ、オマリズマブ、トイツモマブ（ｔｏｉｔｕｍｏｍａｂ）−Ｉ１３１、アレムツズマブ、ゲムツズマブ、トラスツズマブ、パリビズマブ、バシリキシマブ（ｂａｓｉｌｉｘｕｍａｂ）、ダクリズマブ、アブシキシマブ、ムロノノマブ（ｍｕｒｏｎｏｎｏｍａｂ）、またはセルトリズマブである。尚更なる一実施形態において、融合タンパク質は、エタネルセプトまたはアバタセプトである。尚更なる一実施形態において、抗サイトカイン生物製剤は、アナキンラである。尚更なる一実施形態において、抗リウマチ非生物学的薬物は、シクロホスファミド、メトトレキサート、アザチオプリン、ヒドロキシクロロキン、レフルノミド、ミノサイクリン、有機金化合物、ホスタマチニブ、トファシチニブ、エトリコキシブ、またはスルファサラジンである。尚更なる一実施形態において、免疫抑制剤は、シクロスポリンＡ、タクロリムス、シロリムス、ミコフェノール酸モフェチル、エベロリムス、ＯＫＴ３、抗胸腺細胞グロブリン、バシリキシマブ、ダクリズムマブ（ｄａｃｌｉｚｕｍｕｍａｂ）、またはアレムツズマブである。尚更なる一実施形態において、ストラドマーは、化学療法薬の投与前、投与中、または投与後に投与される。尚更なる一実施形態において、ストラドマー及び追加の治療薬は、ともに投与される場合、治療的相乗効果を示す。一実施形態において、ストラドマーは、追加の治療薬の投与前に投与される。別の実施形態において、ストラドマーは、追加の治療薬の投与と同時に投与される。尚別の実施形態において、ストラドマーは、追加の治療薬の投与後に投与される。
【０１７１】
一実施形態において、ストラドマーは、埋め込み型デバイスに共有結合的に固定されて、投与される。一実施形態において、ストラドマーは、縫合糸に固定される。別の実施形態において、ストラドマーは、移植片またはステントに固定される。別の実施形態において、ストラドマーは、心臓弁、整形外科的関節置換、または埋め込まれた電子リードに固定される。別の実施形態において、ストラドマーは、埋め込み型マトリックス内に固定され、包埋される。好ましい一実施形態において、ストラドマーは、埋め込み型ヒドロゲル内に固定され、包埋される。一実施形態において、ヒドロゲルは、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリアクリル酸ナトリウム、またはアクリル酸ポリマーから構成される。更なる一実施形態において、ストラドマーは、免疫細胞が進入して、固定されたストラドマーと相互作用し、その後、循環に戻るのを可能にするのに十分な大きさの孔径を有するヒドロゲル内に固定されて、投与される。更なる一実施形態において、ヒドロゲルの孔径は、５〜５０ミクロンである。好ましい一実施形態において、ヒドロゲルの孔径は、２５〜３０ミクロンである。
【０１７２】
別の実施形態において、ストラドマーは、種特異的またはキメラストラドマー分子を用いて、ヒト、非ヒト霊長類（例えば、サル、ヒヒ、及びチンパンジー）、マウス、ラット、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、ブタ、ウサギ、ヤギ、シカ、ヒツジ、フェレット、スナネズミ、モルモット、ハムスター、コウモリ、鳥類（例えば、ニワトリ、シチメンチョウ、及びアヒル）、魚類、ならびに爬虫類を治療するために投与される。別の実施形態において、ヒトは、成人または子供である。尚別の実施形態において、ストラドマーは、補体媒介疾患を予防するために投与される。更なる一実施形態において、ストラドマーは、ペット及び家畜におけるワクチン関連自己免疫病態を予防するために投与される。
【０１７３】
本明細書で使用される場合、「非経口投与」という用語は、化合物が腸を介した吸収を伴うことなく対象に吸収される任意の投与形態を含む。本発明において使用される例示的な非経口投与としては、筋肉内、静脈内、腹腔内、腫瘍内、眼内、経鼻、または関節内投与が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１７４】
加えて、本発明のストラドマーは任意で、別の医薬品の前、その間、またはその後に投与されてもよい。例えば、驚くべきことに、本発明のストラドマー及びプレドニゾロンの同時投与が、ストラドマー組成物またはプレドニゾロン単独で観察されるよりも相乗的に優れた結果を達成することが見出されている（ＷＯ２０１２／０１６０７３）。
【０１７５】
以下は、具体的な例示的疾患について示される、様々な医薬製剤カテゴリー、及び好ましい投与経路の具体的な例である。
【０１７６】
頬側または舌下溶解性錠剤：狭心症、結節性多発性動脈炎。
【０１７７】
静脈内、筋肉内、または皮下：重症筋無力症、溶血性尿毒症症候群（ＨＵＳ）、非定型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、膜性腎症、視神経脊髄炎、同種移植片の抗体媒介拒絶、膜性増殖性糸球体腎炎（ＭＰＧＮ）、ループス腎炎、特発性血小板減少性紫斑病、封入体筋炎、異常タンパク性ＩｇＭ脱髄性多発ニューロパチー、壊死性筋膜炎、天疱瘡、壊疽、皮膚筋炎、肉芽腫、リンパ腫、敗血症、再生不良性貧血、多系統臓器不全、多発性骨髄腫及び意義不明のモノクローナル免疫グロブリン血症、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー、炎症性ミオパチー、血栓性血小板減少性紫斑病、貧血、腫瘍、溶血性貧血、脳炎、脊髄炎、ヒトＴ細胞リンパ球向性ウイルス１型に特に関連する脊髄症、白血病、多発性硬化症及び視神経炎、喘息、表皮壊死融解症、ランバート・イートン筋無力症症候群、重症筋無力症、ニューロパチー、ブドウ膜炎、ギラン・バレー症候群、移植片対宿主病、全身硬直症候群、抗Ｙｏ抗体を伴う傍腫瘍性小脳変性症、傍腫瘍性脳脊髄症及び抗Ｈｕ抗体を伴う感覚性ニューロパチー、全身性血管炎、全身性エリテマトーデス、自己免疫性糖尿病ニューロパチー、急性特発性自律神経障害ニューロパチー、フォークト・小柳・原田症候群、多巣性運動ニューロパチー、抗／ＧＭｌ関連下位運動ニューロン症候群、脱髄、膜性増殖性糸球体腎炎、心筋症、川崎病、リウマチ性関節炎、ならびにエヴァンス症候群ＩＭ−ＩＴＰ、ＣＩＤＰ、ＭＳ、皮膚筋炎、重症筋無力症、筋ジストロフィー。本明細書で使用される場合、「静脈内投与」という用語は、静脈内注射または注入を介して、本発明の化合物または組成物を全身循環に送達するための全ての技術を含む。
【０１７８】
皮膚ゲル、ローション、クリーム、またはパッチ：白斑、帯状疱疹、挫瘡、口唇炎。
【０１７９】
直腸坐剤、ゲル、または注入：潰瘍性大腸炎、痔核炎症。
【０１８０】
ピル、トローチ剤、カプセル封入、または腸溶コーティングを伴う経口：クローン病、セリアック病、過敏性腸症候群、炎症性肝疾患、バレット食道。
【０１８１】
皮質内：癲癇、アルツハイマー病、多発性硬化症、パーキンソン病、ハンチントン病。
【０１８２】
腹腔内注入または埋め込み：子宮内膜症。
【０１８３】
膣内ゲルまたは坐剤：細菌性、トリコモナス性、または真菌性膣炎。
【０１８４】
医療デバイス：冠動脈ステント上へのコーティング、人工関節。
【０１８５】
補体優先ストラドマーの治療用途
一実施形態において、補体媒介疾患もしくは病態などの疾患もしくは病態の治療または予防方法であって、ＩｇＧ１  Ｆｃドメイン及び多量体化ドメインを含むストラドマーを、それを必要とする対象に投与することを含み、ストラドマーが、増加した補体結合対Ｆｃ受容体結合の割合を呈する、方法が提供される。更なる一実施形態において、ストラドマーは、ＦｃγＲへの結合の低減もしくは欠如、及び／またはＦｃＲｎ結合への結合の低減もしくは欠如を呈し、かつ補体への改良された結合または優先的結合を呈する。更なる一実施形態において、ストラドマーは、Ｃ１ｑへの改良された結合または優先的結合を呈する。
【０１８６】
合理的な設計ならびにインビトロ及びインビボでの検証に基づいて、本発明のストラドマーは、炎症性疾患及び障害、特に補体媒介疾患及び障害の治療のための、ならびにアレルギー、癌、自己免疫疾患、感染性疾患、及び炎症性疾患のための生物免疫療法などの様々な他の文脈における免疫機能の改変のための、重要な生物製剤としての役割を果たすだろう。本明細書に開示される免疫学的に活性な補体優先生物模倣物による治療に好適な医学的病態としては、補体活性の増加または不適切な補体活性を含む、補体活性化または補体媒介エフェクター機能によって引き起こされるか、またはそれに関連付けられる任意の疾患が挙げられる。そのような医学的病態は、エクリズマブなどの補体結合薬で現在または以前に治療されているものを含む。エクリズマブは、補体タンパク質Ｃ５（古典的補体経路においてＣ１及びＣ１ｑの下流にある補体タンパク質）に結合し、その切断及び後の補体媒介細胞溶解を阻害する。本発明の生物模倣物は、当該技術分野において既知である他の補体結合薬に対する、安全かつ有効な代替物を提供する。例えば、いくつかの実施形態において、本発明の生物模倣物は、古典的補体経路のＣ１複合体における第１の下位単位であるＣ１ｑに結合する。免疫学的に活性な補体優先生物模倣物による治療に好適な医学的病態としては、重症筋無力症、溶血性尿毒症症候群（ＨＵＳ）、非定型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、視神経脊髄炎、同種移植片の抗体媒介拒絶、黄斑変性、鎌状赤血球症、及び膜性増殖性糸球体腎炎（ＭＰＧＮ）が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書に記載される免疫学的に活性な補体優先生物模倣物による治療に好適な追加の医学的病態は、現在通例的にｈＩＶＩＧを含む広域免疫抑制療法によって治療されているもの、または自己免疫性血球減少症、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー、ギラン・バレー症候群、重症筋無力症、抗第ＶＩＩＩ因子自己免疫疾患、皮膚筋炎、脈管炎、及びブドウ膜炎などの、ｈＩＶＩＧが臨床的に有用であると見出されているもの（Ｆ．Ｇ．ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｍｅｃｈｅ，Ｐ．Ｉ．Ｓｃｈｍｉｔｚ，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２６，Ｇ１１２３（１９９２）、Ｐ．Ｇａｊｄｏｓ  ｅｔ  ａｌ，Ｌａｎｃｅｔ  ｉ，４０６（１９８４）、Ｙ．Ｓｕｌｔａｎ，Ｍ．Ｄ．Ｋａｚａｔｃｈｋｉｎｅ，Ｐ．Ｍａｉｓｏｎｎｅｕｖｅ，Ｕ．Ｅ．Ｎｙｄｅｇｇｅｒ，Ｌａｎｃｅｔ  ｉｉ，７６５（１９８４）、Ｍ．Ｃ．Ｄａｌａｋａｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２９，１９９３（１９９３）、Ｄ．Ｒ．Ｊａｙｎｅ，Ｍ．Ｊ．Ｄａｖｉｅｓ，Ｃ．Ｊ．Ｆｏｘ，Ｃ．Ｍ．Ｂｌａｃｋ，Ｃ．Ｍ．Ｌｏｃｋｗｏｏｄ，Ｌａｎｃｅｔ３３７，１１３７（１９９１）、Ｐ．ＬｅＨｏａｎｇ，Ｎ．Ｃａｓｓｏｕｘ，Ｆ．Ｇｅｏｒｇｅ，Ｎ．Ｋｕｌｌｍａｎｎ，Ｍ．Ｄ．Ｋａｚａｔｃｈｋｉｎｅ，Ｏｃｕｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｎｆｌａｍｍ．８，４９（２０００）を参照されたい）、ならびにモノクローナル抗体が使用され得るか、もしくは臨床用途において既に使用されている、癌または炎症性疾患病態を含む。本発明の主題である、化合物によって効果的に治療され得るそれらの中に含まれる��態は、サイトカインネットワークの不均衡を伴う炎症性疾患、病原性自己抗体もしくは自己侵襲的Ｔ細胞によって媒介される自己免疫性障害、または慢性再発性の自己免疫性、炎症性、もしくは感染性疾患もしくはプロセスの急性期もしくは慢性期を含む。
【０１８７】
加えて、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、アルツハイマー病、パーキンソン病、心筋梗塞、脳卒中、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、ヒト免疫不全ウイルス関連炎症、副腎白質ジストロフィー、ならびに癲癇障害、特にラスムッセン症候群、ウエスト症候群、及びレノックス・ガストー症候群を含むウイルス感染後の脳炎に関連付けられると考えられるものなどの、補体に関与する炎症性成分を有する他の医学的病態が、ストラドマーによる治療から恩恵を受けるだろう。
【０１８８】
本明細書に記載される単離されたストラドマーを使用する療法に対する一般的なアプローチは、治療有効量の単離された免疫学的に活性な生物摸倣物を疾患または病態を有する対象に投与して、治療をもたらすことである。いくつかの実施形態において、疾患または病態は、サイトカインネットワークの不均衡を伴う炎症性疾患、病原性自己抗体もしくは自己侵襲的Ｔ細胞によって媒介される自己免疫性障害、または慢性再発性の疾患もしくはプロセスの急性期または慢性期として広く分類され得る。
【０１８９】
本明細書で使用される場合、「治療する」及び「治療」という用語は、対象が疾患もしくは病態、または疾患もしくは病態の症状の改善を有するように、治療有効量の本発明のストラドマーを対象に投与することを指す。改善は、疾患もしくは病態、または疾患もしくは病態の症状の任意の改善または治療である。改善は、観察可能または測定可能な改善であっても、対象の一般的な健康感覚の改善であってもよい。したがって、当業者は、治療が疾患病態を改善し得るが、疾患の完全な治癒ではない可能性があることを理解する。具体的には、対象における改善は、炎症の減少；Ｃ反応性タンパク質などの炎症研究用マーカーの減少；自己抗体などの自己免疫マーカーの改善、または血小板数、白血球数、もしくは赤血球数などの改善、発疹もしくは紫斑の減少、衰弱、しびれ、もしくは刺痛の減少、高血糖症の患者におけるグルコースレベルの増加、関節痛、炎症、腫れ、もしくは分解の減少、痙攣及び下痢の頻度及び量の減少、狭心症の減少、組織炎症の減少、または発作頻度の減少のうちの１つ以上によって証拠付けられる、自己免疫の減少；癌腫瘍負荷量の減少、腫瘍の進行までの時間の増加、癌の痛みの減少、生存期間の増加または生活の質の改善；あるいは骨粗鬆症の進行の遅延または改善のうちの１つ以上を含み得る。
【０１９０】
本明細書で使用される場合、「治療有効量」という用語は、疾患または病態の症状の改善または治療をもたらす量を指す。
【０１９１】
本明細書で使用される場合、「予防」とは、疾患の症状の完全な予防、疾患の症状の発症の遅延、または後に発症した疾患症状の重症度の低下を意味し得る。
【０１９２】
本明細書で使用される場合、「対象」という用語は、本発明のストラドマーが本明細書に記載される方法に従って投与される、任意の哺乳動物対象を意味するように取られる。特定の一実施形態において、本開示の方法は、ヒト対象を治療するために用いられる。本開示の方法はまた、非ヒト霊長類（例えば、サル、ヒヒ、及びチンパンジー）、マウス、ラット、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、ブタ、ウサギ、ヤギ、シカ、ヒツジ、フェレット、スナネズミ、モルモット、ハムスター、コウモリ、鳥類（例えば、ニワトリ、シチメンチョウ、及びアヒル）、魚類、ならびに爬虫類を治療して、種特異的またはキメラストラドマー分子を産生するために用いられてもよい。
【０１９３】
一実施形態において、本発明のストラドマーは、他の補体結合分子と比較して、優れた安全性及び有効性を提供する。更なる一実施形態において、本発明のストラドマーは、抗Ｃ５抗体エクリズマブと比較して、優れた安全性及び有効性を呈する。
【０１９４】
補体阻害は、抗体媒介疾患を減少させることが実証されている（例えば、Ｓｔｅｇａｌｌ  ｅｔ  ａｌ．Ｔｅｒｍｉｎａｌ  Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  Ｄｅｃｒｅａｓｅｓ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｒｅｊｅｃｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｓｅｎｓｉｔｉｚｅｄ  Ｒｅｎａｌ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  Ｒｅｃｉｐｉｅｎｔｓ．Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ２０１１Ｎｏｖ；１１（１）：２４０５−２４１３−Ｅｐｕｂ２０１１Ｓｅｐｔ２２；ＤＯＩ：１０．１１１１／ｊ．１６００−６１４３．２０１１．０３７５７．ｘを参照されたい）。本発明のストラドマーはまた、抗体によって媒介される疾患または病態を治療するためにも使用することができる。自己抗体は、多くの既知の自己免疫疾患を媒介し、多数の他の自己免疫疾患においてある役割を果たす可能性が高い。本発明のストラドマーが使用され得る、認識されている抗体媒介疾患としては、グッドパスチャー病を含む抗糸球体基底膜抗体媒介腎炎；臓器移植における抗ドナー抗体（ドナー特異的同種抗体）；視神経脊髄炎における抗アクアポリン−４抗体；神経性筋強直症、辺縁系脳炎、及びモルヴァン症候群における抗ＶＧＫＣ抗体；重症筋無力症における抗ニコチン性アセチルコリン受容体及び抗ＭｕＳＫ抗体；ランバート・イートン筋無力症症候群における抗ＶＧＣＣ抗体；多くの場合腫瘍に関連する辺縁系脳炎における抗ＡＭＰＡＲ抗体及び抗ＧＡＢＡ（Ｂ）Ｒ抗体；全身硬直症候群または過剰驚愕症における抗ＧｌｙＲ抗体；再発性自然流産、ヒューズ症候群、及び全身性エリテマトーデスにおける抗リン脂質抗体、抗カルジオリピン抗体、及び抗β２糖タンパク質抗体；全身硬直症候群、自己免疫性小脳性運動失調症、または辺縁系脳炎における抗グルタミン酸デカルボキシラーゼ抗体；多くの場合卵巣奇形腫に関連するが、非傍腫瘍性でもあり得る、多くの場合青年及び子供における、顕著な運動障害を伴う辺縁及び皮質下特徴の両方を含む、新たに記載された症候群における抗ＮＭＤＡ受容体抗体；全身性エリテマトーデスにおける抗二本鎖ＤＮＡ抗体、抗一本鎖ＤＮＡ抗体、抗ＲＮＡ抗体、抗ＳＭ抗体、及び抗Ｃ１ｑ抗体；抗Ｒｏ、抗Ｌａ、抗Ｓｃｌ７０、抗Ｊｏ−１を含む、強皮症、シェーグレン症候群、及び多発性筋炎を含む結合組織病における抗細胞核抗体及び抗核小体抗体；リウマチ性関節炎における抗リウマトイド因子抗体；結節性多発性動脈炎における抗Ｂ型肝炎表面抗原抗体；ＣＲＥＳＴ症候群における抗セントロメア抗体；心内膜炎における、またはそのリスクとしての抗連鎖球菌抗体；橋本甲状腺炎における抗サイログロブリン抗体、抗甲状腺ペルオキシダーゼ抗体、及び抗ＴＳＨ受容体抗体；混合性結合組織病及び全身性エリテマトーデスにおける抗Ｕ１ＲＮＰ抗体；ならびに天疱瘡における抗デスモグレイン抗体及び抗ケラチノサイト抗体が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１９５】
特に、本発明のストラドマーは、うっ血性心不全（ＣＨＦ）、血管炎、酒さ、挫瘡、湿疹、心筋炎及び心筋の他の病態、全身性エリテマトーデス、糖尿病、脊椎症、滑膜線維芽細胞、ならびに骨髄間質；骨喪失；パジェット病、骨巨細胞腫；多発性骨髄腫；乳癌；廃用性骨減少症；栄養失調、歯周病、ゴーシェ病、ランゲルハンス細胞組織球症、脊髄損傷、急性化膿性関節炎、骨軟化症、クッシング症候群、単骨性線維性骨異形成症、多骨性線維性骨異形成症、歯周再建、及び骨折；サルコイドーシス；溶骨性骨癌、肺癌、腎臓癌、及び直腸癌；骨転移、骨痛管理、及び液性悪性高カルシウム血症、強直性脊椎炎、ならびに他の脊椎関節症；移植拒絶、ウイルス感染、血液腫瘍、及び腫瘍様病態、例えば、ホジキンリンパ腫；非ホジキンリンパ腫（バーキットリンパ腫、小リンパ球性リンパ腫／慢性リンパ球性白血病、菌状息肉腫、マントル細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、毛様細胞白血病、及びリンパ形質細胞性白血病）、リンパ球前駆細胞の腫瘍（Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病／リンパ腫及びＴ細胞急性リンパ芽球性白血病／リンパ腫を含む）、胸腺腫、成熟Ｔ細胞及びＮＫ細胞の腫瘍（末梢Ｔ細胞白血病、成人Ｔ細胞白血病／Ｔ細胞リンパ腫、及び大顆粒リンパ球性白血病を含む）、ランゲルハンス細胞組織球症、骨髄腫瘍（急性骨髄性白血病（成熟を伴うＡＭＬ、分化を伴わないＡＭＬ、急性前骨髄球性白血病、急性骨髄単球性白血病、及び急性単球性白血病を含む）など）、骨髄異形成症候群、及び慢性骨髄増殖性疾患（慢性骨髄性白血病を含む）、中枢神経系の腫瘍、例えば、脳腫瘍（神経膠腫、神経芽細胞腫、星状細胞腫、髄芽腫、上衣腫、及び網膜芽細胞腫）、固形腫瘍（鼻咽頭癌、基底細胞癌、膵癌、胆管癌、カポジ肉腫、精巣癌、子宮癌、膣癌、もしくは子宮頸癌、卵巣癌、原発性肝癌、または子宮内膜癌）、血管系の腫瘍（血管肉腫及び血管周囲細胞腫））、または他の癌を含むが、これらに限定されない病態を治療するために使用することができる。
【０１９６】
本明細書において、「癌」とは、典型的には、未制御の細胞成長を特徴とする、哺乳動物における生理学的病態を指すか、またはそれを説明する。癌の例としては、細胞腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫（脂肪肉腫、骨原性肉腫、血管肉腫、内皮肉腫（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓａｒｃｏｍａ）、平滑筋肉腫、脊索腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫（ｌｙｍｐｈａｎｇｉｏｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓａｒｃｏｍａ）、横紋筋肉腫、線維肉腫、粘液肉腫、軟骨肉腫を含む）、神経内分泌腫瘍、中皮腫、滑膜腫、神経鞘腫、髄膜腫、腺癌、黒色腫、及び白血病またはリンパ性悪性腫瘍が挙げられるが、これらに限定されない。そのような癌のより具体的な例としては、扁平上皮細胞癌（例えば、上皮扁平上皮細胞癌）、肺癌（ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ）（小細胞肺癌（ｓｍａｌｌ−ｃｅｌｌ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ）、非小細胞肺癌、肺腺癌及び肺扁平上皮癌、小細胞肺癌（ｓｍａｌｌ  ｃｅｌｌ  ｌｕｎｇ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）を含む）、腹膜の癌、肝細胞癌、胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ  ｃａｎｃｅｒ）または胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ  ｃａｎｃｅｒ）（消化管癌を含む）、膵癌、膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌（ｌｉｖｅｒ  ｃａｎｃｅｒ）、膀胱癌、肝細胞癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌または子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌（ｋｉｄｎｅｙ  ｃａｎｃｅｒ）または腎臓癌（ｒｅｎａｌ  ｃａｎｃｅｒ）、前立腺癌、外陰部癌、甲状腺癌、肝細胞癌、肛門癌、陰茎癌、精巣癌、食道癌、胆道腫瘍、ユーイング腫瘍、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支癌、腎細胞癌、肝細胞癌、胆管癌、絨毛腫、精上皮腫、胎生期癌、ウィルムス腫瘍、精巣腫瘍、肺癌（ｌｕｎｇ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、膀胱癌、上皮内癌、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽細胞腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起神経膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫、ワルデンストレーム高ガンマグロブリン血症、骨髄異形成疾患、重鎖病、神経内分泌腫瘍、神経鞘腫、及び他の癌腫、ならびに頭頸部癌が挙げられる。
【０１９７】
本発明のストラドマーは、自己免疫疾患を治療するために使用することができる。本明細書で使用される場合、「自己免疫疾患」という用語は、８０を超える様々な群の疾患及び病態を指す。これらの疾患及び病態の全てにおいて、根本的な問題は、身体の免疫系が身体自体を攻撃することである。自己免疫疾患は、結合組織、神経、筋肉、内分泌系、皮膚、血液、ならびに呼吸器系及び消化器系を含む、全ての主要な身体系に影響を与える。自己免疫疾患はとしては、例えば、全身性エリテマトーデス、リウマチ性関節炎、多発性硬化症、重症筋無力症、及び１型糖尿病が挙げられる。
【０１９８】
本発明の組成物及び方法を使用して治療可能な疾患または病態は、鎌状赤血球症、特発性血小板減少性紫斑病、同種免疫性／自己免疫性血小板減少症、後天性免疫性血小板減少症、自己免疫性好中球減少症、自己免疫性溶血性貧血、パルボウイルスＢ１９関連赤血球無形成、後天性抗第ＶＩＩＩ因子自己免疫、後天性フォン・ヴィルブランド病、多発性骨髄腫及び意義不明のモノクローナル免疫グロブリン血症、敗血症、再生不良性貧血、赤芽球癆、ダイアモンド・ブラックファン貧血、新生児溶血性疾患、免疫媒介好中球減少症、血小板輸血不応状態、新生児の輸血後紫斑病、溶血性尿毒症症候群、全身性血管炎、血栓性血小板減少性紫斑病、またはエヴァンス症候群を含むが、これらに限定されない、血液免疫学的プロセスであり得る。
【０１９９】
疾患または病態はまた、ギラン・バレー症候群、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー、異常タンパク性ＩｇＭ脱髄性多発ニューロパチー、ランバート・イートン筋無力症症候群、重症筋無力症、多巣性運動ニューロパチー、抗／ＧＭｌ関連下位運動ニューロン症候群、脱髄、多発性硬化症及び視神経炎、全身硬直症候群、抗Ｙｏ抗体を伴う傍腫瘍性小脳変性症、傍腫瘍性脳脊髄症、抗Ｈｕ抗体を伴う感覚性ニューロパチー、癲癇、脳炎、脊髄炎、ヒトＴ細胞リンパ球向性ウイルス１型に特に関連する脊髄症、自己免疫性糖尿病ニューロパチー、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、または急性特発性自律神経障害ニューロパチーを含むが、これらに限定されない、神経免疫学的プロセスでもあり得る。
【０２００】
疾患または病態はまた、難聴または視力低下に関連する炎症または自己免疫でもあり得る。例えば、疾患または病態は、騒音性難聴または加齢性難聴などの自己免疫関連難聴であっても、補聴器（例えば、蝸牛埋め込み）などのデバイスの埋め込みに関連付けられるものであってもよい。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される組成物は、デバイスの埋め込みの前、それと同時、またはその後に対象に投与されてもよい。
【０２０１】
疾患または病態はまた、川崎病、リウマチ性関節炎、フェルティー症候群、ＡＮＣＡ陽性血管炎、自発性多発性筋炎、皮膚筋炎、抗リン脂質候群、再発性自然流産、全身性エリテマトーデス、若年性特発性関節炎、レイノー病、ＣＲＥＳＴ症候群、またはブドウ膜炎を含むが、これらに限定されない、リウマチ性疾患プロセスでもあり得る。
【０２０２】
疾患または病態はまた、中毒性表皮壊死融解症、壊疽、肉芽腫、自己免疫性皮膚水疱病（尋常性天疱瘡、水疱性類天疱瘡、及び落葉性天疱瘡を含む）、白斑、連鎖球菌毒素ショック症候群、強皮症、全身性硬化症（びまん性及び限局型皮膚全身性硬化症を含む）、またはアトピー性皮膚炎（特にステロイド依存性）を含むが、これらに限定されない、皮膚免疫学的疾患プロセスでもあり得る。
【０２０３】
疾患または病態はまた、封入体筋炎、壊死性筋膜炎、炎症性ミオパチー、筋炎、抗デコリン（ＢＪ抗原）筋炎、傍腫瘍性壊死性筋炎、Ｘ連鎖性空胞化筋炎、ペナシラミン誘導性多発性筋炎、アテローム性動脈硬化症、冠動脈疾患、または心筋症を含むが、これらに限定されない、筋骨格免疫学的疾患プロセスでもあり得る。
【０２０４】
疾患または病態はまた、悪性貧血、自己免疫性慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、セリアック病、疱疹状皮膚炎、特発性肝硬変、反応性関節炎、クローン病、ウィップル病、潰瘍性大腸炎、または硬化性胆管炎を含むが、これらに限定されない、消化器免疫学的疾患プロセスでもあり得る。
【０２０５】
疾患または病態はまた、移植片対宿主病、移植片の抗体媒介拒絶、骨髄移植後拒絶、感染性疾患後の炎症、リンパ腫、白血病、腫瘍、喘息、抗ベータ細胞抗体を伴う１型糖尿病、シェーグレン症候群、混合性結合組織病、アジソン病、フォークト・小柳・原田症候群、膜性増殖性糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、橋本甲状腺炎、ウェゲナー肉芽腫症、顕微鏡的多発動脈炎（ｍｉｃｒｏｐｏｌｙａｒｔｅｒｉｔｓ）、チャーグ・ストラウス症候群、結節性多発性動脈炎、または多系統臓器不全でもあり得る。
【０２０６】
本明細書で使用される場合、「アレルギー」とは、ＩｇＥによって媒介される全ての免疫反応、及びＩｇＥ媒介反応を模倣する反応を含む。アレルギーは、ＩｇＥ免疫応答またはＩｇＥ様免疫応答を引き起こす、タンパク質、ペプチド、炭水化物、及びこれらの組み合わせを含むアレルゲンによって誘導される。例示的なアレルギーとしては、ナッツアレルギー、花粉アレルギー、及び虫刺されアレルギーが挙げられる。例示的なアレルゲンとしては、ツタウルシ及びオークのウルシオール；ハウスダスト抗原；カバノキ花粉成分Ｂｅｔ  ｖ１及びＢｅｔ  ｖ２；セロリの１５ｋｄ抗原；リンゴ抗原Ｍａｌ  ｄ１；モモのＰｒｕ  ｐ３；チモシー牧草花粉アレルゲンＰｈｌ  ｐ１；ライグラスのＬｏｌ  ｐ３、Ｌｏｌ  ｐＩ、またはＬｏｌ  ｐＶ；ギョウギシバのＣｙｎ  ｄ１；イエダニアレルゲン、イエダニｄｅｒ  ｐ１、ｄｅｒ  ｐ２、またはｄｅｒ  ｆ１；グルテンのα−グリアジン及びγ−グリアジンエピトープ；ハチ毒ホスホリパーゼＡ２；ピーナッツのＡｒａ  ｈ１、Ａｒａ  ｈ２、及びＡｒａ  ｈ３エピトープが挙げられる。
【０２０７】
疾患または病態は、糸球体疾患及び／または腎炎であり得る。メサンギウム増殖は、ＩｇＡ腎症、消散する感染症後糸球体腎炎、及びいくつかの続発性糸球体疾患（ループス腎炎、シェーンライン・ヘノッホ紫斑病、リウマチ性関節炎、肝硬変、アルポート症候群、及び糖尿病性腎症など）を含む多くのヒト糸球体疾患の一般的な特徴である。疾患は、異なる程度のメサンギウム細胞過形成及びメサンギウムマトリックス拡大を特徴とする。進行性の症例では、これらの細胞変化は、様々な免疫性、中毒性、代謝性、機械的、及び炎症性媒介物による損傷の結果として、糸球体毛細管狭小化、硬化症、莢膜接着をもたらし得る。いくつかの実験モデルが開発されているものの、メサンギウム増殖の研究に最も広く使用されているモデルは、抗胸腺細胞（抗Ｔｈｙ−１）モデルとなっている（Ｙａｍａｍｏｔｏ  ａｎｄ  Ｗｉｌｓｏｎ，“Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  ａｎｄ  ｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｏｆ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｍｅｓａｎｇｉａｌ  ｃｅｌｌ  ｄａｍａｇｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｒａｔ．”Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ３２；５１４−２４（１９８７）、Ｊｅｆｆｅｒｓｏｎ  ＪＡ  ｅｔ  ａｌ，“Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｍｅｓａｎｇｉａｌ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ｇｌｏｍｅｒｕｌｏｎｅｐｈｒｉｔｉｓ（ｔｈｅ  ａｎｔｉ  Ｔｈｙ−１．１ｍｏｄｅｌ）．”Ｊ．Ｎｅｐｈｒｏｌ１２；２９７−３０７（１９９９））。腎症の別のモデルは、近位尿細管上皮画分（Ｆｘ１Ａ）を有する動物の免疫化を伴う（Ｐｒｏｂｅｔｅｘ，Ｓａｎ  Ａｎｔｏｎｉｏ  Ｔｅｘａｓ）。Ｆｘ１Ａを有するラットの免疫化は、ヒト疾患に対する明らかな類似点とともに、上皮下の免疫沈着物及びタンパク尿を特徴とする免疫複合体「膜性」腎炎を誘導する（Ｈｅｙｍａｎｎ  Ｗ．ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｓｏｃ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．１００：６６０−６４（１９５９）、Ｅｄｇｉｎｇｔｏｎ  ＴＳ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１２７；５５５（１９６８））。Ｆｘ１Ａは、糸球体上皮細胞によって産生される腎炎惹起性抗原である、巨大糖タンパク質ｇｐ３３０（メガリン）を含有する。抗Ｆｘ１Ａ抗体の投与は、２つの相、つまり、１）外因的に投与された抗体によって誘導される急性腎炎を呈する、異種相、及び２）糸球体構造体内に植え付けられた外因的（異種）ヒツジ免疫グロブリンに対する宿主自身の応答の産生を特徴とする、慢性自己相によって定義される腎炎を引き起こす。抗Ｆｘ１Ａ膜性腎症モデルは、上皮下沈着物及びタンパク尿を引き起こす。受動的ヘイマン腎炎モデル及びこのモデルにおける補体関与は、他で概説されている（Ｊｅｆｆｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．“Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｍｏｄｅｌｓ  ｏｆ  Ｍｅｍｂｒａｎｏｕｓ  Ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ，”Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ．Ｔｏｄａｙ  Ｄｉｓ．Ｍｏｄｅｌｓ７（１−２）：２７−３３（２０１０）。
【０２０８】
本発明は、感染病原体によって引き起こされる疾患の治療に有効な方法及び組成物を更に含む。感染病原体としては、細菌性、菌性、寄生虫性、及びウイルス性病原体が挙げられるが、これらに限定されない。そのような感染病原体の例としては、以下、ブドウ球菌、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌、大腸菌、連鎖球菌科、ナイセリア科（ｎｅｉｓｓｅｒｉａａｃｅａｅ）、球菌、腸内細菌科、腸球菌、バンコマイシン耐性腸球菌、クリプトコッカス、ヒストプラズマ、アスペルギルス、シュードモナス科、ビブリオ科、カンピロバクター、パスツレラ科、ボルデテラ、フランシセラ、ブルセラ、レジオネラ科、バクテロイデス科、グラム陰性桿菌、クロストリジウム、コリネバクテリウム、プロピオニバクテリウム、グラム陽性桿菌、炭疽菌、アクチノミセス、ノカルジア、マイコバクテリア、トレポネーマ、ボレリア、レプトスピラ、マイコプラズマ、ウレアプラズマ、リケッチア、クラミジア、カンジダ、全身性真菌症、日和見真菌症、原生動物、線形動物、吸虫、条虫、アデノウイルス、ヘルペスウイルス（例えば、単純ヘルペスウイルス及びエプスタイン・バーウイルス、ならびに帯状疱疹ウイルスを含む）、ポックスウイルス、パポーウイルス、肝炎ウイルス（例えば、Ｂ型肝炎ウイルス及びＣ型肝炎ウイルスを含む）、パピローマウイルス、オルソミクソウイルス（例えば、インフルエンザＡ、インフルエンザＢ、及びインフルエンザＣを含む）、パラミクソウイルス、コロナウイルス、ピコルナウイルス、レオウイルス、トガウイルス、フラビウイルス、ブニヤウイルス科、ラブドウイルス、ロタウイルス、呼吸系発疹ウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、ならびにレトロウイルスが挙げられる。例示的な感染性疾患としては、カンジダ症、カンジダ血症、アスペルギルス症、連鎖球菌性肺炎、連鎖球菌性の皮膚及び中咽頭の病態、グラム陰性敗血症、結核、単核球症、インフルエンザ、呼吸器合胞体ウイルスによって引き起こされる呼吸器疾患、マラリア、住血吸虫症、ならびにトリパノソーマ症が挙げられるが、これらに限定されない。本発明は、細菌性、菌性、寄生虫性、及びウイルス性病原体によって引き起こされるものを含むが、これらに限定されない、感染性疾患の治療に有効な方法及び組成物を含む。例示的な感染性疾患としては、カンジダ症、カンジダ血症、アスペルギルス症、連鎖球菌性肺炎、連鎖球菌性の皮膚及び中咽頭の病態、グラム陰性敗血症、結核、単核球症、インフルエンザ、呼吸器合胞体ウイルスによって引き起こされる呼吸器疾患、マラリア、住血吸虫症、ならびにトリパノソーマ症が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２０９】
別の実施形態において、本明細書に記載されるストラドマーは、血液が患者から引き出され、患者に再び導入される前に約１時間半〜約３時間の期間、ストラドマー（複数可）と一過的に接触するプライミング系において利用することができる。この形態の細胞療法において、患者自身のエフェクター細胞を、エキソビボでマトリックス上に固定されるストラドマーに曝露して、エフェクター細胞のストラドマーへの曝露を通してエフェクター細胞を調節する。その後、調節されたエフェクター細胞を含む血液が再び患者に注入される。そのようなプライミング系は、多数の臨床的及び治療的用途を有し得る。
【０２１０】
本明細書に開示されるストラドマーはまた、様々な文脈における免疫系応答を改変して、免疫応答プロファイルにおける特定の変化に影響を与えるように容易に適用することもできる。対象における免疫応答の改変または調節とは、免疫応答の比率または成分を増加、減少、または変更することを指す。例えば、サイトカインの産生または分泌レベルは、ＦｃγＲと、補体に結合し、それらの受容体と相互作用するように設計されたストラドマーとの適切な組み合わせとともに、補体を標的とすることによって、所望に応じて増加または減少させることができる。抗体産生がまた増加または減少されても、２つ以上のサイトカインまたは免疫細胞受容体の比率が変更されても、追加の種類のサイトカインまたは抗体の産生が引き起こされてもよい。
【０２１１】
好ましい一実施形態において、自己免疫性または炎症性疾患を有する対象は、本明細書に記載される治療有効量のストラドマーを対象に投与するステップを含むことで、彼らの免疫応答が改変され、治療有効量のストラドマーは、対象における免疫応答を改変する。理想的には、この介入は、対象における疾患または病態を治療する。改変された免疫応答は、応答の増加または減少であってもよく、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−８、ＩＬ−２３、ＩＬ−７、ＩＬ−４、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１７、ＴＮＦ−アルファ、及びＩＦＮ−アルファのうちのいずれかのレベルを含む、サイトカインレベルの改変を伴ってもよい。好ましい一実施形態において、療法に応答して、Ｉｌ−６またはＩＬ−８が減少する。特に好ましい一実施形態において、療法に応答して、ＩＬ−６及びＩＬ−８が減少する。しかしながら、本発明は、記載される生物摸倣物のいかなる特定の作用機構によっても限定されない。改変された免疫応答は、対象における改変された自己抗体レベルであってもよい。改変された免疫応答は、対象における改変された自己侵襲的Ｔ細胞レベルであってもよい。
【０２１２】
例えば、自己免疫疾患におけるＴＮＦ−アルファの産生量の低減は、治療効果を有し得る。この実用的な用途は、尋常性乾癬、リウマチ性関節炎、乾癬性関節炎、クローン病、潰瘍性大腸炎、及び強直性脊椎炎を治療することが臨床的に証明されている抗ＴＮＦ−アルファ抗体療法（例えば、ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標））である。これらの自己免疫疾患は異なる病因を有するが、炎症及び免疫細胞活性に関連する疾患プロセスの重要な免疫学的成分を共有する。同様に、ＴＮＦ−アルファ産生を低減させるように設計されたストラドマーは、これら及び多くの他の自己免疫疾患に有効だろう。改変された免疫応答プロファイルはまた、例えば、対象自身の組織を標的とする自己抗体の抗体産生の低減、または対象における自己侵襲的Ｔ細胞レベルの改変をもたらすための、直接的または間接的な調節であってもよい。例えば、多発性硬化症は、インターフェロンベータ療法によって治療することができる、自己反応性Ｔ細胞を伴う自己免疫障害である。例えば、Ｚａｆｒａｎｓｋａｙａ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ｂｅｔａ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｒｅｄｕｃｅｓ  ＣＤ４＋ａｎｄ  ＣＤ８＋Ｔ−ｃｅｌｌ  ｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ２００７Ｍａｙ；１２１（ｌ）：２９−３９−Ｅｐｕｂ２００６Ｄｅｃ１８を参照されたい。同様に、自己反応性Ｔ細胞レベルを低減させるためのストラドマー設計は、多発性硬化症に有効であり、自己反応性Ｔ細胞を伴う他の自己免疫疾患に有効であり得る。
【０２１３】
本明細書に記載されるストラドマーを使用して、樹状細胞、マクロファージ、破骨細胞、単球、もしくはＮＫ細胞を含む免疫細胞からの共刺激分子の発現を調節すること、またはこれらの同一の免疫細胞において、分化、成熟、もしくはサイトカイン（インターロイキン−１２（ＩＬ−１２）を含む）分泌を阻害すること、またはインターロイキン−１０（ＩＬ−１０）、もしくはインターロイキン−６（ＩＬ−６）、もしくはＩＬ１−ＲＡを含むサイトカイン分泌を増加することができる。当業者はまた、免疫細胞を免疫学的に活性な生物模倣物に曝露し、免疫細胞機能の調節を測定することにより、免疫学的に活性な生物模倣物の有効性を検証することもでき、免疫細胞は、樹状細胞、マクロファージ、破骨細胞、または単球である。一実施形態において、免疫細胞は、インビトロで免疫学的に活性な生物模倣物に曝露され、細胞表面受容体またはサイトカイン産生の量を決定するステップを更に含み、細胞表面受容体またはサイトカイン産生の量の変化は、免疫細胞機能の調節を示す。別の実施形態において、免疫細胞は、自己免疫疾患のモデル動物においてインビボで免疫学的に活性な生物模倣物に曝露され、自己免疫疾患の改善の程度を評価するステップを更に含む。
【０２１４】
本明細書に記載されるストラドマーはまた、デバイスの成分としても使用することができる。例えば、いくつかの実施形態において、本明細書に提供されるストラドマーは、医療用移植片などのデバイス上にコーティングされてもよい。例えば、ストラドマーは、例えば、ブドウ膜炎または黄斑変性における眼内用途のため、浸透を改良し、薬物放出を延長するために、冠動脈ステント上にコーティングされても、ナノ粒子療法の一部であってもよい。本明細書に記載されるストラドマーはまた、診断の成分としても使用することができる。いくつかの実施形態において、当業者は、どの患者においてストラドマーの使用が特に有益であり得るかを決定することによって、療法を個別化することができる。例えば、当業者は、患者の免疫細胞を免疫学的に活性な生物模倣物に曝露し、フローサイトメトリーまたはサイトカインプロファイルによって免疫細胞の活性化または成熟の調節を測定して、高応答者を特定してもよい。
【０２１５】
本明細書に引用される全ての参考文献の全体が、参照により組み込まれる。
【実施例】
【０２１６】
実施例１−補体優先ストラドマー
補体優先結合ストラドマーを生成するために、様々なアプローチを取った。Ｆｃドメインに少なくとも１つの点変異が導入されたストラドマーを生成し、この変異は補体結合を改良した。具体的には、ＷＯ２０１２／０１６０７３に記載されるＧＬ−２０４５ストラドマーのＦｃドメインの２６７、２６８、及び３２４位に以下の変異、つまり、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔを行った。いくつかのストラドマーにおいて、追加の変異を行って、ＦｃγＲ結合及び／またはＦｃＲｎ結合を改変することによって補体結合対標準ＦｃγＲ結合の比率を更に増加させた。例示的なストラドマーのアミノ酸配列を、上記の表１及び表２に示す。
【０２１７】
生成した各ストラドマーについて、標準ＦｃγＲ結合、ｐＨ７．４でのＦｃＲｎ結合、補体Ｃ１ｑ結合、及びＣＤＣ阻害のレベルを決定し、親ストラドマーＧ０４５ｃ（ＩｇＧ１ヒンジ−ＩｇＧ１ＣＨ２  ＩｇＧ１  ＣＨ３−ＩｇＧ２ヒンジ）と比較した。加えて、いくつかの化合物を、他の補体カスケード成分への結合について評価した。
【０２１８】
ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩＩａ、またはＦｃＲｎへの、補体優先ストラドマーまたは親ストラドマーＧ０４５ｃの結合を評価した。ＦｏｒｔｅＢｉｏ  Ｏｃｔｅｔ機器を使用して、バイオレイヤー干渉法によって、解離のＲＵ値を測定した。Ｈｉｓタグ受容体タンパク質を、１×動態分析緩衝液中、センサチップに結合させ、その後、選択される精製ストラドマーを含有する１×動態緩衝液にセンサチップを移すことによって、受容体／タンパク質の結合速度を測定した。１×動態緩衝液にセンサチップを移すことによって、解離速度を測定し、ＦｏｒｔｅＢｉｏソフトウェアを使用して、測定された最大結合からＲＵ値を計算した。バイオレイヤー干渉法は、バイオセンサチップ表面上に固定化されたリガンドと溶液中の分析物との間の結合を検出する。結合が生じるとき、それはバイオセンサチップでの光学的厚さの増加を引き起こし、これは（「ＲＵ」の応答単位として検出される）波長シフトをもたらす。最大結合レベル（ＲＵ  ｍａｘ）は、センサ表面上のリガンドの量を飽和させる平衡での試料結合の可能性のある最大量である。ＲＵ３００は３００秒間の解離後の残基試料結合であり、試験リガンドからの試験物品の解離速度を特徴付けるのに有用である。
【０２１９】
化合物を特徴付けるために、５つのＦｃ受容体に対するバイオレイヤー干渉法による最大結合（ＲＵ  ｍａｘ）、Ｃ１ｑへのＥＬＩＳＡ結合、及びＣＤＣの阻害を、本明細書に提供されるデータに示す。解離速度の差異を示すために、５つのＦｃ受容体に対する化合物の３００秒間でのＲＵもまた提供する。ＲＵ  ｍａｘ及びＲＵ３００の両方について、いずれの場合も、ＦｏｒｔｅＢｉｏによって生成された会合及び解離のプロットから絶対値の視覚的読み取りを行い、その後、応答を０−１０の尺度上で正規化し、０は応答なしであり、１０はその時点で全ての試験された化合物にわたってその受容体またはリガンドについて観察された最大応答（それぞれＲＵ  ｍａｘまたはＲＵ３００）であった。
【０２２０】
Ｃ１ｑ結合について、９６ウェルプレートを、ＰＢＳ中、Ｃ１ｑ（Ｓｉｇｍａカタログ番号：Ｃ１７４０、１μｇ／ｍｌ）で一晩コーティングした。コーティングの後、プレートを標準洗浄緩衝液（１×ＰＢＳ＋０．０５％のＴｗｅｅｎ２０）で３回洗浄し、ブロッキング緩衝液（１％のＢＳＡ＋１×ＰＢＳ＋０．０５％のＴｗｅｅｎ２０）で、室温で２時間ブロッキングした。ブロッキングの後、プレートをブロッキング緩衝液中に希釈した化合物（１００μＬ／ウェル）とともにインキュベートし、標準洗浄緩衝液で３回洗浄した。１：５０００のビオチン化抗ヒトＩｇＧ１（カタログ番号５５５８６９、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）及びストレプトアビジン−ＨＲＰ（カタログ番号７１００−０５、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）（１００μｌ／ウェル）とともに室温で１時間インキュベートし、その後、洗浄緩衝液で３回洗浄し、その後、製造業者のプロトコルに従う標準ＴＭＢ法を使用して１５分間発色させることによって、Ｃ１ｑ結合化合物を検出した。吸光度を４５０ｎｍで読み取った。
【０２２１】
Ｇ０４５ｃの例示的なＦｃ受容体結合データを、図１に提供する。
【０２２２】
Ｇ９９７は、Ｇ０４５ｃ骨格に挿入された３つの変異（Ｓ２６７Ｅ／Ｈ２６８Ｆ／Ｓ３２４Ｔ）を有するストラドマーである。図２に示されるように、結果として得られるストラドマーは、親Ｇ０４５ｃと比較して増加したＣ１ｑ結合、及びＧ０４５ｃと比較してわずかに低下したＦｃγＲＩＩａ及びＦｃγＲＩＩＩａ結合を呈し、ＣＤＣ阻害には影響がなかった。Ｇ９９７のＦｃ受容体結合データもまた、図３に提供する。
【０２２３】
次に、Ｇ９９８を構築した。Ｇ９９８は、Ｇ９９７と比較して、アミノ酸２９７位に追加の変異を含有する。具体的には、Ｇ９９８のＧ０４５ｃ骨格には、４つの変異（Ｓ２６７Ｅ／Ｈ２６８Ｆ／Ｓ３２４Ｔ／Ｎ２９７Ａ）が挿入されている。Ｇ９９８の三重変異は強いＣ１ｑ結合及びＣＤＣ阻害を回復させ、活性化受容体ＦｃγＲＩＩａ及びＦｃγＲＩＩＩａへの結合は排除され、ＦｃγＲＩＩｂへの結合は低下した一方で、ＦｃＲｎ結合は親ストラドマーＧ０４５ｃと比較して低下しなかった（図４Ａ）。また、驚くべきことに、Ｎ２９７Ａ変異にも関わらず、ＦｃγＲＩへの結合はＧ９９８において完全に保持された。Ｇ９９７、Ｇ９９８、及びＧ０４５ｃの標準ＦｃγＲ及びＦｃＲｎ結合のＲＵ３００の比較を、図４Ｂに提供する。Ｎ２９７Ａ変異とともに生じる非グリコシル化を考慮すると、Ｇ９９７による阻害性受容体ＦｃγＲＩＩｂへの結合の保持は、驚くべきものであった。Ｇ９９７と比較して、Ｇ９９８のＲＵ  ｍａｘでＦｃγＲＩＩｂ結合は著しく低下したものの、ＲＵ３００データに示されるように、Ｇ９９８はＦｃγＲＩＩｂから非常に緩徐に解離する（図４Ｂ）。Ｇ９９８のＦｃ受容体結合データもまた、図５に提供する。
【０２２４】
特定の化合物Ｇ１０３３及びＧ１０２２もまた、生成した。具体的には、Ｇ１０３３のＧ０４５ｃ骨格には、６つの変異（Ｓ２６７Ｅ／Ｈ２６８Ｆ／Ｓ３２４Ｔ／Ｎ２９７Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ）が挿入されており、Ｇ１０２２のＧ０４５ｃ骨格には、７つの変異（Ｓ２６７Ｅ／Ｈ２６８Ｆ／Ｓ３２４Ｔ／Ｎ２９７Ａ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ及びＧ２３６欠失）が挿入されている。Ｇ１０３３及びＧ１０２２の標準ＦｃγＲ及びＦｃＲｎのＲＵｍａｘデータ、Ｃ１ｑ結合、及びＣＤＣ阻害を、図６Ａに提供する。Ｇ１０３３は、ＦｃγＲＩＩｂまたはＦｃγＲＩＩＩａへの認識可能な結合なく、Ｃ１ｑ及びＦｃＲｎに結合し、ＣＤＣを阻害する。驚くべきことに、Ｎ２９７Ａ変異によるこの化合物の脱グリコシル化にも関わらず、ＦｃγＲＩ及びＦｃγＲＩＩａへのいくらかの結合が保持される。この化合物中、Ｇ１０２２は、ＦｃγＲＩまたはＦｃγＲＩＩＩａへのいかなる認識可能な結合もなく、Ｃ１ｑに結合し、ＣＤＣを阻害し、ＦｃγＲＩＩｂへのわずかな結合が保持され、ＦｃγＲＩＩａ及びＦｃＲｎへの適度な結合が保持される。低親和性ですら、高親和性ＦｃγＲＩ受容体に対するストラドマーの固有の結合力ため、Ｇ１０２２中でのＦｃγＲＩ結合の排除は驚くべきものであった。したがって、これらの変異を含有する他のストラドマー中で保持されたＦｃγＲＩ結合に基づくと、Ｇ１０２２中の変異の組み合わせを通したＦｃγＲＩ結合の排除は、予想外であった。例えば、Ｇ９９８中の変異の組み合わせ（Ｓ２６７Ｅ／Ｈ２６８Ｆ／Ｓ３２４Ｔ／Ｎ２９７Ａ）は、ＦｃγＲＩ結合の喪失をもたらさなかった。低親和性Ｆｃ受容体への結合及びＣＤＣ阻害が保持されたストラドマー中で、ＦｃγＲＩへの結合が排除され得ることは、特に驚くべきものであった。Ｇ０４５ｃ、Ｇ１０２２、及びＧ１０３３の標準ＦｃγＲ及びＦｃＲｎのＲＵ３００データの比較を、図６Ｂに提供する。
【０２２５】
Ｇ１０３２のＧ０４５ｃ骨格には、５つの変異（Ｓ２６７Ｅ／Ｈ２６８Ｆ／Ｓ３２４Ｔ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ）が挿入されている。ＦｃγＲ結合のＲＵｍａｘ、ＦｃＲｎ結合のＲＵｍａｘ、Ｃ１ｑ結合、及びＣＤＣ阻害を図７Ａに示し、ＦｃＲのＲＵ３００データを図７Ｂに示す。驚くべきことに、Ｇ１０３２がＣ１ｑに結合し、ＣＤＣを阻害した一方で、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ変異にも関わらず、全ての標準Ｆｃ受容体への頑強な結合が保持され、ＦｃＲｎへの中程度に頑強な結合が保持された。
【０２２６】
Ｇ１０２３は、６つの変異（Ｓ２６７Ｅ／Ｈ２６８Ｆ／Ｓ３２４Ｔ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ）及び２３６位にＧの欠失を有する。ＦｃγＲ結合のＲＵｍａｘ、ＦｃＲｎ結合のＲＵｍａｘ、Ｃ１ｑ結合、及びＣＤＣ阻害を図８Ａに示し、ＦｃＲのＲＵ３００データを図８Ｂに示す。Ｇ１０２３はＣ１ｑに結合し、ＣＤＣを阻害し、全ての標準Ｆｃ受容体への頑強な結合が保持され、ＦｃＲｎへの中程度に頑強な結合が保持された。驚くべきことに、Ｇ１０２３がＣ１ｑに結合し、ＣＤＣを阻害した一方で、Ｅ２２３、Ｌ２３４Ｖ、及びＬ２３５Ａ変異ならびにＧ２３６の欠失（かつＮ２９７Ａ変異を介した脱グリコシル化の不在下）にも関わらず、全ての標準Ｆｃ受容体への頑強な結合が保持された。
【０２２７】
Ｇ１００６は、４つの変異（Ｓ２６７Ｅ／Ｈ２６８Ｆ／Ｓ３２４Ｔ／Ｄ２６５Ａ）を有する。ＦｃγＲ結合のＲＵｍａｘ、ＦｃＲｎ結合のＲＵｍａｘ、Ｃ１ｑ結合、及びＣＤＣ阻害を図９Ａに示し、ＦｃＲのＲＵ３００データを図９Ｂに示す。このストラドマーはＣ１ｑに結合し、ＣＤＣを阻害し、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、及び（より少ない程度まで）ＦｃγＲＩＩｂへの結合が保持された。Ｄ２６５Ａは全ての標準Ｆｃ受容体への結合を低減するものとして説明されているものの、ＦｃγＲＩへの頑強な結合が保持され、ＦｃγＲＩＩａへの中程度の結合が保持されたため、この結果は驚くべきものであった。ＦｃγＲＩＩＩａ結合は排除され、ＦｃＲｎへの中程度に頑強な結合が保持された（図９Ａ）。
【０２２８】
Ｇ１０２７は、５つの変異（Ｐ２３８Ｄ／Ｓ２６７Ｅ／Ｈ２６８Ｆ／Ｓ３２４Ｔ／Ｎ２９７Ａ）を有する。Ｇ１０２７のＦｃγＲ結合のＲＵｍａｘ、ＦｃＲｎ結合のＲＵｍａｘ、Ｃ１ｑ結合、及びＣＤＣ阻害を図１０Ａに示し、ＦｃＲのＲＵ３００データを図１０Ｂに示す。このストラドマーはＣ１ｑに結合し、ＣＤＣを阻害し、ＦｃγＲＩへの頑強な結合を保持し、ＦｃγＲＩＩａ及びＦｃγＲＩＩｂへの低下した結合ならびにＦｃＲｎへの中程度の結合を呈し、ＦｃγＲＩＩＩａ結合を排除した。Ｐ２３８Ｄ及びＮ２９７Ａ変異にも関わらず、このストラドマーにおいて標準Ｆｃ受容体結合が排除されなかったという事実は、驚くべき結果であった。
【０２２９】
Ｇ１００３をＧ０１９背景（ＩｇＧ２ヒンジ−ＩｇＧ１ヒンジ−ＩｇＧ１  ＣＨ２  ＩｇＧ１  ＣＨ３）上に構築し、これは３つの変異（Ｓ２６７Ｅ／Ｈ２６８Ｆ／Ｓ３２４Ｔ）を有する。このストラドマーの結果を、図１１Ａ及び１１Ｂに提供する。このストラドマーは、Ｃ１ｑに結合し、ＣＤＣを阻害した。加えて、このストラドマーは、ＦｃγＲＩ及びＦｃγＲＩＩｂへの頑強な結合、ＦｃγＲＩＩａへの低下した結合、ならびにＦｃＲｎへの中程度に頑強な結合を呈した。Ｇ０１９親ストラドマーは、最小のＣ１ｑ結合を呈し、ＣＤＣの有意な阻害は呈さない。したがって、この親ストラドマーへの三重変異の組み込みが、親Ｇ０１９と同一の一般構造及び多量体化パターンを有するが、Ｃ１ｑへの結合及びＣＤＣの頑強な阻害を有する化合物をもたらしたという事実は、特に驚くべきものであった。ＧＬ−２０４５骨格内に組み込まれた同一の変異（Ｓ２６７Ｅ／Ｈ２６８Ｆ／Ｓ３２４Ｔ）（Ｇ９９８をもたらす）が実質的に異なる結合活性を実証したという事実は、更に一層驚くべきものである。Ｇ９９７及びＧ１００３は、同一の変異を有する同一のドメインを持ち、親化合物（それぞれＧ０４５ｃ及びＧ０１９）のＣ１ｑ結合及びＣＤＣ阻害が著しく異なるにも関わらず、一般に同一の結合特質を示す。これらの比較は、多量体化ストラドマーの文脈において、所与の変異の組が予想できないことを更に強調する。
【０２３０】
Ｇ９８９はＧ０４５ｃ背景上にあり、２つの変異（Ｅ２３３Ｐ／Ｇ２３６Ｒ）を含有し、標準結合を低減するように生成された。しかしながら、驚くべきことに、このストラドマーは、標準結合の低減だけでなく、Ｃ１ｑ結合及びＣＤＣの喪失も呈した（図１２Ａ、１２Ｂ、及び１３）。
【０２３１】
したがって、これもまたＧ０４５ｃ背景上にあるが、単一の変異（Ｇ２３６Ｒ）のみを含有するＧ９９０を生成した。驚くべきことに、Ｇ２３６Ｒ変異は単独で、標準結合を減少させ、最小のＣ１ｑ結合を保持した（図１４Ａ、１４Ｂ、及び１５）。
【０２３２】
これらの驚くべき結果に基づいて、Ｃ１ｑ結合の更なる増加を試みるため、Ｇ９９４を生成した。Ｇ９９４は、Ｇ０４５ｃ背景上に作製され、５つの変異（Ｅ２３３Ｐ／Ｇ２３６Ｒ／Ｓ２６７Ｅ／Ｈ２６８Ｆ／Ｓ３２４Ｔ）を有する。しかしながら、驚くべきことに、Ｇ９９４が、それが基づいていたＧ９８９ストラドマーの失われた補体結合及びＣＤＣ阻害を回復した一方で、Ｓ２６７Ｅ／Ｈ２６８Ｆ／Ｓ３２４Ｔ三重変異の付加は、ＦｃγＲＩ及びＦｃγＲＩＩｂの結合の回復をもたらした（図１６Ａ、１６Ｂ、及び１７）。したがって、補体結合を増加させることが報告される三重変異の付加はまた、ストラドマーの文脈において、標準Ｆｃ受容体結合の増加ももたらした。
【０２３３】
したがって、次に、Ｇ９９４を、Ｃ１ｑ結合及びＣＤＣ阻害を保持し、標準結合よりも補体結合の特異性を得る試みにおけるプラットフォームとして使用した。具体的には、Ｇ０４５ｃ背景上にあり、４つの変異（Ｇ２３６Ｒ／Ｓ２６７Ｅ／Ｈ２６８Ｆ／Ｓ３２４Ｔ）を有するＧ９９６を生成した。予想外に、Ｇ９９６は、ＦｃγＲＩＩａ及びＦｃγＲＩＩｂへの更なる結合を得たが、活性化受容体ＦｃγＲＩＩＩａへの結合は得なかった。したがって、Ｇ９９６は、Ｃ１ｑに結合し、ＣＤＣを阻害し、ＦｃγＲＩＩＩａを除く全てのＦｃ受容体に結合する（図１８Ａ、１８Ｂ、及び１９、上パネル）。しかしながら、これもまた驚くべきことに、Ｇ９９６は、マウスにおいて標準結合を呈さず、これによりげっ歯類における純粋なＣＤＣ阻害を評価するための理想的な化合物となっている（図１９、下３つのパネル）。
【０２３４】
Ｇ１０４２はＧ０４５ｃ背景上にあり、６つの変異（Ｅ２３３Ｐ、Ｇ２３６Ｒ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、及びＬ３２８Ｆ）を有する。したがって、Ｇ１０４２は、それが、ＦｃγＲＩＩｂへの結合を増加させることが予想される変異Ｌ３２８Ｆを含むという点において、Ｇ９９４とは異なる。驚くべきことに、Ｇ１０４２は、ＦｃγＲＩＩｂだけでなく、ＦｃγＲＩ及びＦｃγＲＩＩａへの強い結合ももたらした（図２０Ａ、２０Ｂ、及び２１）。
【０２３５】
Ｇ１０４３及びＧ１０４６はそれぞれＧ０４５ｃ背景上にあり、それぞれ５つの変異（それぞれＰ２３８Ｄ／Ｄ２６５Ｇ／Ｓ２６７Ｅ／Ｈ２６８Ｆ／Ｓ３２４Ｔ及びＰ２３８Ｄ／Ｄ２６５Ｗ／Ｓ２６７Ｅ／Ｈ２６８Ｆ／Ｓ３２４Ｔ）を有する。これらのストラドマーの両方について、他の変異に対してＰ２３８Ｄ変異の付加は、驚くべきことに、ＦｃγＲＩＩａへの結合をもたらした（図２２〜２５）。両方のストラドマーは、２３８位の変異のため、ＦｃγＲＩＩｂへの結合を増加させ、ＦｃγＲＩＩａへの結合を減少させたことが予想されていたが、しかしながら、驚くべきことに、Ｇ１０４３は、ＦｃγＲＩＩａ及びＦｃγＲＩＩｂの両方への結合を呈し（図２２Ａ、２２Ｂ、及び２３）、Ｇ１０４６は、ＦｃγＲＩＩａへの結合は呈したが、ＦｃγＲＩＩｂへの結合は呈さなかった（図２４Ａ、２４Ｂ、及び２５）。
【０２３６】
Ｇ１０５０はＧ０４５ｃ背景上にあり、８つの変異及び２３６位に欠失を有する（Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｓ２６７Ｅ／Ｈ２６８Ｆ／Ｎ２９７Ａ／Ｓ３２４Ｔ／Ｓ３２８Ｆ、及び２３６位の欠失）。これらの変異は、（Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａの変異、及び２３６の欠失のため）ＦｃγＲＩＩａ及びＦｃγＲＩＩＩへの結合を低減または排除したことが予想されていたが、（３２８位の変異のため）ＦｃγＲＩＩｂへの結合は保持したが、しかしながら、驚くべきことに、Ｇ１０５０は、ＦｃγＲＩＩａ及びＦｃγＲＩＩｂへの結合は呈するが、ＦｃγＲＩまたはＦｃγＲＩＩＩへの結合は呈さない（図２６Ａ、２６Ｂ、及び２７）。
【０２３７】
Ｇ１０４９はＧ０１９背景上にあり、４つの変異（Ｓ２６７Ｅ／Ｈ２６８Ｆ／Ｓ３２４Ｔ／Ｌ３２８Ｆ）を有する。したがって、Ｇ１００３と比較して、Ｇ１０４９は、Ｌ３２８Ｆに追加の変異を有し、これは、ＦｃγＲＩＩｂへの結合のみを増加させることが予想されていた。しかしながら、驚くべきことに、Ｇ１０４９は、全ての標準ＦｃγＲへの強い結合を呈し（図２８Ａ、２８Ｂ、及び２９）、非常に驚くべきことに、Ｃ１ｑへの強い結合及びＣＤＣの阻害を実証する（一方で、Ｇ０１９はこれを実証しない）。したがって、Ｃ１ｑへの強い結合及びＣＤＣの阻害が、Ｇ０１９背景構造を有するストラドマー中の点変異を介して達成され得ることは、特に驚くべきことであった。
【０２３８】
Ｇ１０２５はＧ０４５ｃ背景上にあり、４つの変異（Ｐ２３８Ｄ／Ｓ２６７Ｅ／Ｈ２６８Ｆ／Ｓ３２４Ｔ）を有する。２３８位の変異は、ＦγＲＩＩｂへの結合を増加させ、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、及びＦｃγＲＩＩＩａへの結合を減少させることが予想されていたが、しかしながら、驚くべきことに、ＦｃγＲＩＩＩａへの結合のみが減少し、このストラドマーは、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩ、及びＦｃγＲＩＩａへの頑強な結合を保持した（図３０Ａ及び３０Ｂ）。
【０２３９】
この研究の結果の全体的な要約を、表３に提供する。
【表３】
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【０２４０】
実施例２−補体優先ストラドマーは、Ｃ１ｑへの保持または改良された結合を呈する
親ＧＬ−２０４５またはＦｃ陰性対照Ｇ００１と比較した、ストラドマーＧ９９４、Ｇ９９６、Ｇ９９７、及びＧ９９８間のＣ１ｑ結合の比較を、図３１に提供する。図３１Ａは、増加濃度の示されるストラドマーの吸光度を示し、図３１Ｂは、試験したストラドマーのそれぞれの、対数変換データ及びＥＣ５０値を示す。Ｅｃ５０値は、μｇ／ｍＬで示す。合わせると、データは、ストラドマーＧ９９７、Ｇ９９８、Ｇ９９６、及びＧ９９４が、Ｇ００１（ＩｇＧ１  Ｆｃ対照）と比較して優れたＣ１ｑ結合を呈し、親ストラドマーＧＬ−２０４５と比較して優れたＣｌｑ結合を呈することを実証する。
【０２４１】
まとめると、この研究の結果は、本明細書に提供されるストラドマーが、Ｃ１ｑへの結合、及びＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及び／またはＦｃγＲＩＩＩへの最小の結合または結合の欠如を呈することを実証する。
【０２４２】
実施例３−補体優先ストラドマーのＣ３結合
Ｃ３への補体優先ストラドマーの結合を評価するための研究を実行した。
【０２４３】
９６ウェルプレートをＣ３補体成分（Ｑｕｉｄｅｌ、番号Ａ４０１、ＰＢＳ中１μｇ／ｍｌ）で、４℃で一晩コーティングし、その後、３００μｌのＰＢＳ１×  ０．１％のＴｗｅｅｎ２０で３回洗浄した。プレートをＰＢＳ１×  ＋２％のＢＳＡ＋０．０５％のＴｗｅｅｎ２０で、室温で２時間ブロッキングした。試験される化合物（ＧＬ−２０４５、Ｇ００１、Ｇ９９７、Ｇ９９８、Ｇ９９４、またはＧ９９６）を、ブロッキング緩衝液中、１００μｇ／ｍｌで開始して、１：１で０．７８１２５μｇ／ｍｌまで下げた、結合したＣ３とともに室温で２時間インキュベートし、その後、３回洗浄した（３００μｌのＰＢＳ１×  ０．１％のＴｗｅｅｎ２０）。Ｃ３と相互作用する化合物を、１：１０及び１：５０のＰＢＳ−ＢＳＡ−Ｔ（１００μｌ／ウェル）中、ビオチンマウス抗ヒトＩｇＧ１（ＢＤ番号５５５  ８６９）＋ストレプトアビジン−ＨＲＰ（カタログ番号：７１００−０５、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）１／５０００（それぞれ）によって室温で１時間検出し、その後、４回洗浄した（３００μｌのＰＢＳ１×  ０．１％のＴｗｅｅｎ２０）。１ウェル当たり１００μｌのＴＭＢ基質試薬で２０分間発色させ、５０μｌのＨ２ＳＯ４（１Ｍ）で反応を停止させ、４５０／６５０ｎｍで吸光度を読み取る。
【０２４４】
この研究の結果を、図３２に示す。陰性対照Ｇ００１及びストラドマーＧ９９６は、Ｃ３には結合しなかった。Ｇ９９７は、陰性対照及び親ＧＬ−２０４５ストラドマーと比較して、中程度のレベルのＣ３結合を呈した。Ｇ９９４、ＧＬ−２０４５、及びＧ９９８は、最高のＣ３結合を呈した。
【０２４５】
実施例４−補体優先ストラドマーのＣ３ｂ、Ｃ４、及びＣ５結合
Ｃ３ｂ、Ｃ４、及びＣ５への補体優先ストラドマーの結合を評価するための研究を実行した。
【０２４６】
Ｃ３ｂ結合について、９６ウェルプレートをＣ３ｂ補体成分（ＧｅｎＷａｙ  Ｂｉｏｔｅｃｈ番号ＧＷＢ−８ＢＡ９９４、ＰＢＳ中１μｇ／ｍｌ）でコーティングした。１ウェル当たり１００μｌのＣ３ｂ補体成分を添加し、４℃で一晩インキュベートし、その後、３回洗浄した（３００μｌのＰＢＳ１×  ０．１％のＴｗｅｅｎ２０）。プレートをブロッキング緩衝液（ＰＢＳ１×  ＋２％のＢＳＡ＋０．０５％のＴｗｅｅｎ２０）中で、室温で２時間ブロッキングし、その後、３回洗浄した（３００μｌのＰＢＳ１×  ０．１％のＴｗｅｅｎ２０）。試験される化合物（Ｇ００１、ＧＬ−２０４５、Ｇ９９７、Ｇ９９８、またはＧ９９４）を、ブロッキング緩衝液中、１００μｇ／ｍｌで開始し、１：１で０．７８１２５μｇ／ｍｌまで希釈される希釈度で、Ｃ３ｂと室温で４時間反応させ、その後、３回洗浄した（３００μｌのＰＢＳ１×  ０．１％のＴｗｅｅｎ２０）。ブロッキング緩衝液１００μｌ中、ビオチン化マウス抗ヒトＩｇＧ１（ＢＤ番号５５５  ８６９）＋ストレプトアビジン−ＨＲＰ（カタログ番号：７１００−０５、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）１／５０００（それぞれ）によって結合した化合物を室温で１時間検出した。ＴＭＢ基質試薬を用いて室温で２０分間発色させ、５０μｌのＨ２ＳＯ４（１Ｍ）で反応を停止させた。吸光度を４５０／６５０ｎｍで読み取った。
【０２４７】
Ｃ４結合について、９６ウェルプレートをＣ４補体成分（Ｑｕｉｄｅｌ番号Ａ４０２、ＰＢＳ中１μｇ／ｍｌ）でコーティングした。１ウェル当たり１００μｌのＣ４補体成分を添加し、４℃で一晩インキュベートし、その後、３回洗浄した（３００μｌのＰＢＳ１×  ０．１％のＴｗｅｅｎ２０）。プレートをブロッキング緩衝液（ＰＢＳ１×  ＋２％のＢＳＡ＋０．０５％のＴｗｅｅｎ２０）中で、室温で２時間ブロッキングし、その後、３回洗浄した（３００μｌのＰＢＳ１×  ０．１％のＴｗｅｅｎ２０）。試験される化合物（Ｇ００１、ＧＬ−２０４５、Ｇ９９６、Ｇ９９７、Ｇ９９８、またはＧ９９４）を、ブロッキング緩衝液中、１００μｇ／ｍｌで開始し、１：１で０．７８１２５μｇ／ｍｌまで希釈される希釈度で、Ｃ４と室温で４時間反応させ、その後、３回洗浄した（３００μｌのＰＢＳ１×  ０．１％のＴｗｅｅｎ２０）。ブロッキング緩衝液１００μｌ中、ビオチン化マウス抗ヒトＩｇＧ１（ＢＤ番号５５５  ８６９）＋ストレプトアビジン−ＨＲＰ（カタログ番号：７１００−０５、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）１／５０００（それぞれ）によって結合した化合物を室温で１時間検出した。ＴＭＢ基質試薬を用いて室温で２０分間発色させ、５０μｌのＨ２ＳＯ４（１Ｍ）で反応を停止させた。吸光度を４５０／６５０ｎｍで読み取った。
【０２４８】
Ｃ５結合について、９６ウェルプレートをＣ５補体成分（Ｑｕｉｄｅｌ番号Ａ４０３、ＰＢＳ中１μｇ／ｍｌ）でコーティングした。１ウェル当たり１００μｌのＣ５補体成分を添加し、４℃で一晩インキュベートし、その後、３回洗浄した（３００μｌのＰＢＳ１×  ０．１％のＴｗｅｅｎ２０）。プレートをブロッキング緩衝液（ＰＢＳ１×  ＋２％のＢＳＡ＋０．０５％のＴｗｅｅｎ２０）中で、室温で２時間ブロッキングし、その後、３回洗浄した（３００μｌのＰＢＳ１×  ０．１％のＴｗｅｅｎ２０）。試験される化合物（Ｇ００１、ＧＬ−２０４５、Ｇ９９６、Ｇ９９７、Ｇ９９８、またはＧ９９４）を、ブロッキング緩衝液中、１００μｇ／ｍｌで開始し、１：１で０．７８１２５μｇ／ｍｌまで希釈される希釈度で、Ｃ５と室温で４時間反応させ、その後、３回洗浄した（３００μｌのＰＢＳ１×  ０．１％のＴｗｅｅｎ２０）。ブロッキング緩衝液１００μｌ中、ビオチン化マウス抗ヒトＩｇＧ１（ＢＤ番号５５５  ８６９）＋ストレプトアビジン−ＨＲＰ（カタログ番号：７１００−０５、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）１／５０００（それぞれ）によって結合した化合物を室温で１時間検出した。ＴＭＢ基質試薬を用いて室温で２０分間発色させ、５０μｌのＨ２ＳＯ４（１Ｍ）で反応を停止させた。吸光度を４５０／６５０ｎｍで読み取った。
【０２４９】
この研究の結果を、図３３（Ｃ３ｂ補体成分）、図３４（Ｃ４補体成分）、及び図３５（Ｃ５補体成分）に示す。陰性対照Ｇ００１は、Ｃ３ｂ、Ｃ４、またはＣ５には結合しなかった。親ストラドマーＧＬ−２０４５はＣ５に結合したが、Ｃ３ｂまたはＣ４への結合は呈さなかった。対照的に、補体優先ストラドマーＧ９９４、Ｇ９９７、及びＧ９９８はそれぞれ、Ｃ５だけでなくＣ４にも結合した。
【０２５０】
実施例５−抗Ｔｈｙ１モデルにおける、腎炎の補体優先ストラドマー治療
Ｔｈｙ−１腎炎モデル（抗Ｔｈｙ−１誘導性メサンギウム増殖性糸球体腎炎）において、補体優先ストラドマーを評価した。このモデルにおいて、胸腺細胞（ＡＴＳ）に対する抗体は、ラットメサンギウム細胞上に存在する表面Ｔｈｙ−１抗原に反応性である（Ｙａｍａｍｏｔｏ１９８７及びＪｅｆｆｅｒｓｏｎ１９９９）。ＡＴＳの投与は、補体依存性メサンギウム融解、その後、注射後５日以内にピークになり、経時的に消散する急速なメサンギウム増殖性糸球体腎炎を誘導する。
【０２５１】
ウィスターラット（ｎ＝８）にマウス抗ラットＣＤ９０（Ｔｈｙ１．１）（Ｃｅｄａｒ  Ｌａｎｅ）を注射して、糸球体腎炎を誘導することによって、０日目に疾患を誘導した。０、２、４、及び６日目に、動物に４０ｍｇ／ｋｇのＧ９９８、８０ｍｇ／ｋｇのＧ９９８、８０ｍｇ／ｋｇのＧ９９４、または８０ｍｇ／ｋｇのＧ１０３３を投与した。対照非罹患動物は、抗Ｔｈｙ１抗体または他の治療を受けなかった。１ｍｇ／ｋｇの陽性対照タクロリムスを筋肉内に投薬し、−９日目に開始して抗血清注射まで毎日投薬した。０日目の投薬は、抗血清注射の４時間前であった。投薬前ならびに抗血清注射の３、５、７、及び９日後に尿を収集した。研究終了時にラットから腎臓を収集し、組織学的分析のために１０％のホルマリン中に固定した。血清ＢＵＮ分析のために血清を収集した。
【０２５２】
この研究の結果を、図３７、３８Ａ、３８Ｂ、３９、及び４０ならびに表４に提供する。図３７において、グラフ下の表は、ＰＢＳ対照マウスと比較したＰ値を提供する。３つの試験化合物Ｇ９９４、Ｇ９９８、及びＧ１０３３のそれぞれは、タンパク尿を減少させた。図３８Ａ及び３８Ｂは、罹患ＰＢＳ対照マウス（図３８Ａ）及び４０ｍｇ／ｋｇのＧ９９８で治療したマウス（図３８Ｂ）の組織学的分析を示す。表４及び図３９は、ＰＢＳ対照群（表３において２群と示される）及び４０ｍｇ／ｋｇのＧ９９８群（表３において４群と示される）内のそれぞれの動物の組織学的分析の定量化を提供する。表４に示される結果を、図３９にグラフとして提供する。
【表４】
2018528167.tif 000021
【０２５３】
９日目に、各動物から血清を収集し、血中尿素窒素（ＢＵＮ）について分析した。罹患ＰＢＳ対照動物と比較して、補体優先ストラドマーによる治療を受けた動物のそれぞれにおいてＢＵＮは著しく減少し、これは、糸球体濾過率、及びしたがって疾患の改善の改善を示した（図４０）。
【０２５４】
実施例６−受動的ヘイマン腎炎モデルにおける、腎炎の補体優先ストラドマー治療
抗Ｆｘ１ａ血清（Ｐｒｏｂｅｔｅｘカタログ番号ＰＴＸ−００２Ｓ）を注射することによって、０日目にラットにおいて疾患を誘導した。０日目の抗血清注射の２時間前（０日目用量）、または抗血清注射の１日後である１日目（１日目用量）に、Ｇ９９８を６０ｍｇ／ｋｇで投薬し、投薬を１週間に２回、３週間にわたって継続した。ビヒクル対照マウスは、抗Ｆｘ１ａ血清のみを受けた。投薬前ならびに抗血清注射の１、２、及び３週間後に尿を収集し、タンパク尿について評価した。
【０２５５】
この研究の結果を、図４１に提供する。２１日目までに、両方のＧ９９８群が、対照動物と比較して、タンパク尿の著しい低減を呈した（０日目のＧ９９８群ではｐ＝０．０２２０、１日目のＧ９９８群ではｐ＝０．０１４５）。
【０２５６】
実施例７−ラットにおける補体優先化合物の薬物レベル及び機能的半減期
単回用量後のラットにおける補体優先ストラドマーＧ９９４、Ｇ９９８、及びＧ１０３３の半減期を測定するための研究を行った。異なる時点で取得した血液試料中の補体活性を評価することによって、機能的半減期を測定した。血液試料を、薬物標的である補体因子ｃ１ｑのレベルについて、及び薬物のどの画分及びＣ１ｑが結合されているかを評価するためにも測定した。
【０２５７】
スプラーグ・ドーリーラット（１群当たり４匹の動物）に、単回用量の化合物Ｇ９９４、Ｇ９９８、またはＧ１０３３（６０ｍｇ／ｋｇ）を静脈内に与えた。投薬前、試験化合物投与の１、４、及び８時間後に、後眼窩出血によって各動物から血液試料（１．２〜１．４ｍｌ）を予冷したヘパリン処理済みの管内に収集した。血液試料は、１、２、４、７、及び１０日目にも収集した。
【０２５８】
ＥＬＩＳＡによって、血漿試料中の薬物レベルを測定した。このＥＬＩＳＡアッセイにおいて、化合物Ｇ９９４、Ｇ９９８、Ｇ１０３３中のＩｇＧ１  Ｆｃを、プレートの表面上に吸着された抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ抗体（Ｔｈｅｒｍｏ番号ＭＡ１−８３２４０）と反応させた。未結合の試料タンパク質を洗浄によって除去した後、ストレプトアビジン西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ番号７１００−０５）と共役したビオチン化抗ヒトＩｇＧ１（ＢＤ番号５５５８６９）を添加した。ＨＲＰ共役抗体は、事前に結合したＩｇＧ１と複合体を形成する。発色基質（ＴＭＢ、ＢＤ番号５５５２１４）を添加することによって、複合体をアッセイした。サル血清中に混合し、試料希釈度について補正した同一の化合物から作製した検量線から、血清試料中のＧ９９４、Ｇ９９８、及びＧ１０３３の量を内挿した。
【０２５９】
インビトロ補体依存性細胞傷害アッセイを使用して、ラット血漿試料中の補体活性を測定した。簡潔には、Ｗｉｌｌ２細胞を発現するＣＤ−２０を、細胞培地中、ＣＤ−２０モノクローナル抗体とともに３７Ｃで２０分間インキュベートし、その後、細胞を遠心沈殿し、新鮮な培地中に再懸濁する。細胞を９６ウェルプレートに分配し、その後、異なる時点に由来するラット血漿を細胞懸濁液に添加し、プレートを３７℃で３時間インキュベートした。各ウェルにＣｙｔｏｔｏｘ  Ａｓｓａｙ  Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を添加し、プレートを暗所、室温で１５分間インキュベートした。Ｐｒｏｍｅｇａ  ＧｌｏＭａｘ  ｌｕｍｉｎｏｍｅｔｅｒ上で発光を読み取り、細胞死を計算した。このアッセイにおいて、異なる血漿レベルで補体活性を測定し、２％及び４％血漿の値を分析に使用した。
【０２６０】
無抗体対照試料の減算後の、投薬前試料中の補体活性に対する、各試料中の補体活性パーセントを計算した。
【０２６１】
この研究の結果を、図４２〜４５に提供する。図４２は、Ｇ９９４、Ｇ９９８、及びＧ１０３３の半減期を提供する。Ｇ９９４は、この実験において試験した他の２つの化合物よりも著しく長い半減期を有した。化合物Ｇ９９４は、ラット血液中で、延長された期間、補体活性を排除した。Ｇ９９４の投薬後の補体活性は、９６時間（４日間）まで低いままであり、１０日目には正常レベルの約５０％であった。化合物Ｇ９９８及びＧ１０３３は、ラットにおいて幾分より短い半減期を呈した。化合物Ｇ９９８について、投薬前補体レベルの約５０％が２日目に存在した。化合物Ｇ１０３３について、機能的半減期は２〜４日目の間であった。
【０２６２】
図４３は、Ｇ９９４、Ｇ９９８、またはＧ１０３３の単回用量後のラット血液中の補体活性を提供する。このアッセイにおいて、補体活性は、２％または４％の血漿レベルで測定される細胞死のパーセントとして表される。図４４Ａ及び４４Ｂは、補体優先化合物Ｇ９９４、Ｇ９９８、及びＧ１０３３のそれぞれの薬物レベルと補体活性との間の相関性を提供する。図４４Ａはこの研究において収集された全てのデータ点を提供し、図４４Ｂはより低い薬物濃度データ点に注目する（Ｇ９９４及びＧ９９８では０〜２５０μｇ／ｍｌ、及びＧ１０３３では０〜１５０μｇ／ｍｌ）。ラット血液中の補体活性を排除するのに必要とされる薬物レベルを、推定ｘ妨害レベルから推定した。Ｇ９９４について、２％及び４％の血清のｘ妨害値は、１６４及び１７０μｇ／ｍｌである。相関性のＲ２値は、０．６９６及び０．５５８である。Ｇ９９８について、２％及び４％の血清のｘ妨害値は１５８及び１９３μｇ／ｍｌであり、Ｒ２値は０．５１９及び０．５６０である。Ｇ１０３３について、ｘ妨害は８８及び１０９μｇ／ｍｌであり、Ｒ２値は０．６１２及び０．６４８である。
【０２６３】
推定ｘ妨害レベルから、約１００〜２００μｇ／ｍｌの化合物Ｇ９９４及びＧ９９８が補体活性を排除するのに必要とされる。化合物Ｇ１０３３について、補体活性を排除するのに必要とされるおよその量は、１００μｇ／ｍｌである。
【０２６４】
実施例８−カニクイザルにおける薬物動態研究
補体優先化合物の単回用量後のカニクイザルにおける、Ｇ９９４、Ｇ９９８、またはＧ１０３３の半減期を測定するための研究を行った。
【０２６５】
カニクイザル（１群当たり３匹の動物）に、単回用量の化合物Ｇ９９４、Ｇ９９８、またはＧ１０３３（２８ｍｇ／ｋｇ）を皮下に与えた。投薬前ならびに用量の１、２、４、１２、２４、４８、７２、１４４、２１６、及び３１２時間後に、各動物から血液試料（約３ｍｌ）を血清分離管に収集した。ＥＬＩＳＡによって、血清試料中の薬物レベルを測定した。このＥＬＩＳＡアッセイにおいて、化合物Ｇ９９４、Ｇ９９８、Ｇ１０３３中のＩｇＧ１  Ｆｃを、プレートの表面上に吸着された抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ抗体（Ｔｈｅｒｍｏ番号ＭＡ１−８３２４０）と反応させる。未結合の試料タンパク質を洗浄によって除去した後、ストレプトアビジン西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ番号７１００−０５）と共役したビオチン化抗ヒトＩｇＧ１（ＢＤ番号５５５８６９）を添加した。ＨＲＰ共役抗体は、事前に結合したＩｇＧ１と複合体を形成する。発色基質（ＴＭＢ、ＢＤ番号５５５２１４）を添加することによって、複合体をアッセイした。サル血清中に混合し、試料希釈度について補正した同一の化合物から作製した検量線から、血清試料中のＧ９９４、Ｇ９９８、及びＧ１０３３の量を内挿した。
【０２６６】
インビトロ補体依存性細胞傷害アッセイを使用して、カニクイザル血清試料中の補体活性を測定した。簡潔には、Ｗｉｌｌ２細胞を発現するＣＤ−２０を、細胞培地中、ＣＤ−２０モノクローナル抗体とともに３７Ｃで２０分間インキュベートし、その後、細胞を遠心沈殿し、新鮮な培地中に再懸濁した。細胞を９６ウェルプレートに分配し、その後、異なる時点に由来する血清を細胞懸濁液に添加し、プレートを３７℃で３時間インキュベートした。各ウェルにＣｙｔｏｔｏｘ  Ａｓｓａｙ  Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を添加し、プレートを暗所、室温で１５分間インキュベートした。Ｐｒｏｍｅｇａ  ＧｌｏＭａｘ  ｌｕｍｉｎｏｍｅｔｅｒ上で発光を読み取り、細胞死を計算した。このアッセイにおいて、異なる血清レベルで補体活性を測定し、２％及び４％血漿の値を分析に使用した。
【０２６７】
無抗体対照試料の減算後の、投薬前試料中の補体活性に対する、試料中の補体活性パーセントを計算した。
【０２６８】
この研究の結果を、図４５〜４７に提供する。図４５は、化合物の単回用量の後の試験した補体優先ストラドマーのそれぞれの薬物レベルを示す。Ｇ９９４は、化合物Ｇ９９８及びＧ１０３３よりも著しく低いピーク濃度に到達しが、それらよりも著しく長い半減期を有した。図４６は、Ｇ９９４（左パネル）、Ｇ９９８（中間パネル）、またはＧ１０３３（右パネル）の単回用量後の、経時的な補体活性（細胞死％）を示す。図４７Ａ及び４７Ｂは、この研究において試験した化合物のそれぞれの、薬物レベルと補体活性との間の相関性を示す。図４７Ａは、この実験において収集された全てのデータ点を示し、図４７Ｂは、より低い薬物濃度での曲線の最初の部分を示す。
【０２６９】
化合物Ｇ９９４、Ｇ９９８、及びＧ１０３３の単回用量後の、補体活性化を示すＣ４ａ、Ｃ３ａ、及びＣ５ａのレベルを決定するための研究もまた、実行した。市販のＥＬＩＳＡを使用して、上述のように収集した血清試料から、Ｃ４ａ、Ｃ３ａ、及びＣ５ａのそれぞれの濃度を決定する。これらの研究の結果は、Ｃ４ａ、Ｃ３ａ、及び／またはＣ５ａの濃度の減少によって決定される、Ｇ９９４、Ｇ９９８、またはＧ１０３３のいずれかの単回用量後の、経時的な補体活性化の減少を示すだろう。
【０２７０】
補体優先化合物の単回用量後に残っている補体活性の分析は、化合物Ｇ９９４がカニクイザル血液中で、延長された期間、補体活性を排除することを示した。Ｇ９９４の投薬後の補体活性は、３１２時間目（１３日目）まで低いままであった。化合物Ｇ９９８及びＧ１０３３は、カニクイザルにおいて幾分より短い半減期を呈した。化合物Ｇ９９８について、投薬前補体レベルの約５０％が６日目に存在した。化合物Ｇ１０３３について、機能的半減期は９〜１３日目の間であるようだった。全ての化合物について、補体活性は血液中に約４時間残っていた。理論によって拘束されることを望むものではないが、これは、皮下投薬化合物の比較的緩徐な吸収によるものであり得る。
【０２７１】
薬物レベルと補体活性との間の相関性の分析（図４７Ｂ）を使用して、カニクイザル血液中の補体活性を排除するのに必要とされる薬物レベルを推定した。推定ｘ妨害レベルから、約１５０μｇ／ｍｌの化合物Ｇ９９４が補体活性を排除するのに必要とされる。化合物Ｇ９９８及びＧ１０３３について、およその量は、３００〜４００μｇ／ｍｌである。
【０２７２】
上述のようにＧ９９４、Ｇ９９８、またはＧ１０３３で治療したカニクイザルに由来する血清試料中のＣ１ｑレベルを測定する。Ｃ１ｑ  ＥＬＩＳＡを介して、定量的測定を評価する。血清試料を、共免疫沈降法を介して分析して、化合物によって結合されるＣ１ｑの画分もまた決定する。薬物に結合するＣ１ｑの画分を決定するために、Ｃ１ｑに対する捕捉抗体を使用してＣ１ｑ  ＥＬＩＳＡを実行し、その後、補体優先薬のヒトＩｇＧ１部分への抗体結合を検出した。これは、薬物−Ｃ１ｑ複合体を捕捉し、定量化するだろう。その後、Ｃ１ｑ抗体を捕捉抗体及び検出抗体の両方として使用して、Ｃ１ｑ  ＥＬＩＳＡにおいて上記の同一のＥＬＩＳＡからの上清を試験して、試料中の未結合のＣ１ｑを定量化するだろう。
【０２７３】
実施例９−補体優先ストラドマーＧ９９４、Ｇ９９６、及びＧ１０３３のＣ３、Ｃ３ｂ、Ｃ４、及びＣ５結合
Ｃ３、Ｃ３ｂ、Ｃ４、及びＣ５への補体優先ストラドマーの結合を評価するための追加の研究を実行した。９６ウェルプレートを、１ウェル当たりＰＢＳ１００μｌ中の補体成分（Ｃ３ではＱｕｉｄｅｌ番号Ａ４０１、１μｇ／ｍｌ；Ｃ３ｂではＧｅｎＷａｙ  Ｂｉｏｔｅｃｈ番号ＧＷＢ−８ＢＡ９９４、１μｇ／ｍｌ；Ｃ４ではＱｕｉｄｅｌ番号Ａ４０２、１μｇ／ｍｌ；及びＣ５ではＱｕｉｄｅｌ  Ａ４０３、１μｇ／ｍｌ）で、４Ｃで一晩コーティングし、その後、３回洗浄した（３００μｌのＰＢＳ１×  ０．１％のＴｗｅｅｎ２０）。プレートをブロッキング緩衝液（ＰＢＳ１×  ＋２％のＢＳＡ＋０．０５％のＴｗｅｅｎ２０）中で、室温で２時間ブロッキングし、その後、３回洗浄した（３００μｌのＰＢＳ１×  ０．１％のＴｗｅｅｎ２０）。化合物を、ブロッキング緩衝液中、１００μｇ／ｍｌで開始して、１：１で希釈して、補体成分に室温で２時間反応させ、その後、３回洗浄した（３００μｌのＰＢＳ１×  ０．１％のＴｗｅｅｎ２０）。ブロッキング緩衝液１００μｌ中、ビオチン化マウス抗ヒトＩｇＧ１（ＢＤ番号５５５  ８６９）＋ストレプトアビジン−ＨＲＰ（カタログ番号：７１００−０５、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）それぞれ１／５０００によって結合した化合物を室温で１時間検出した。ＴＭＢ基質試薬を用いて室温で２０分間発色させ、５０μｌのＨ２ＳＯ４（１Ｍ）で反応を停止させ、吸光度の読み取りは４５０／６５０ｎｍであった。
【０２７４】
この研究の結果を、図４９に提供する。補体優先ストラドマーＧ９９４、Ｇ９９８、及びＧ１０３３の全てが、補体因子Ｃ３、Ｃ３ｂ、Ｃ４、及びＣ５のそれぞれに結合した。加えて、Ｇ１０３３は、直接結合アッセイにおいて、ＧＬ−２０４５または他の補体優先ストラドマーＧ９９４及びＧ９９８と比較して、これらの補体因子への著しく高い結合を呈した。
【０２７５】
実施例１０。補体優先ストラドマーＧ９９４、Ｇ９９６、及びＧ１０３３のサイトカイン誘導
単離末梢血単核球（ＰＭＢＣ）から、Ｇ９９４及びＧ１０３３のサイトカイン誘導を評価するための追加の研究を実行した。１００ｍＬのヒト血液を、ヘパリンコーティングした収集管内に収集した。１０ｍＬのアリコートの血液を５０ｍＬの円錐管に移し、１０ｍＬのＰＢＳで希釈し、その後、穏やかに混合した。２０ｍＬの希釈した血液試料を、５０ｍＬの円錐管内、１５ｍＬのＦｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ  ＰＬＵＳ上に層状にし、４００×ｇ、１８〜２０℃で３０〜４０分間遠心分離する。遠心分離後、パスツールピペットを使用して上層を除去し、リンパ球層を未撹乱のまま界面に残した。リンパ球層を清潔な５０ｍＬの円錐管に移し、３０ｍＬのＰＢＳを添加した。希釈したリンパ球層を、６０〜１００×ｇ、１８〜２０℃で１０分間遠心分離した。遠心分離後、上清を除去し、３０ｍＬのＰＢＳ中で細胞を洗浄し、再度遠心分離した。細胞ペレットを、１０％のウシ胎仔血清（ＦＢＳ）で補助した１〜２ｍＬのＲＰＭＩ培地中に再懸濁した。細胞を計数し、５×１０６個の細胞／管で管内にアリコートし、試験材料（Ｇ０１９、Ｇ９９４、またはＧ１０３３）とともに４または２４時間インキュベートした。市販のＥＬＩＳＡキットによって、４時間目及び２０時間目のサイトカインレベルを決定した。
【０２７６】
この研究の結果を、図５５Ａ及び５５Ｂに示す。Ｇ１０３３またはＧ９９４のいずれも、炎症促進性サイトカインＴＮＦαは誘導しなかった（図５５Ｂ）。同様に、２つの化合物のいずれも、抗炎症性サイトカインＩＬ−１Ｒαは誘導しなかった（図５５Ａ）。（補体には結合しないが標準受容体には結合する）Ｇ０１９が両方のサイトカインを誘導したため、これは、Ｇ１０３３及びＧ９９４が、標準ＦｃγＲへの結合不能によるものである可能性が高い。
【０２７７】
実施例１１−確立された関節炎の治療のための補体優先ストラドマー
雌のルイスラットにおいて、確立されたＩＩ型コラーゲン関節炎において生じる腫れを阻害する上での、Ｇ９９４、Ｇ９９８、及びＧ１０３３の有効性を決定するために、コラーゲン誘導性関節炎（ＣＩＡ）研究を実行した。ラットに、ブタＩＩ型コラーゲンを皮内／皮下（ＩＤ／ＳＣ）注射して、関節炎を誘導した。その後、１１、１３、及び１４日目に、ラットにリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ対照）、Ｇ９９４（４０ｍｇ／ラット）、Ｇ９９８（４０ｍｇ／ラット）、またはＧ１０３３（４０ｍｇ／ラット）を静脈内（ＩＶ）投薬した。１１〜１６日目に、陽性対照を経口（ＰＯ）経路によって基準化合物デキサメタゾン（Ｄｅｘ、０．０７５ｍｇ／ｋｇ）で毎日（ＱＤ）治療した。治療は、研究完了後まで盲検であった。有効性評価は、足首ノギス測定に基づいた（図５７）。
【０２７８】
これらの研究は、補体優先化合物、Ｇ９９４、Ｇ９９８、及びＧ１０３３が、関節炎のルイスラットのＣＩＡモデルにおいて炎症を低減することを示す。
【０２７９】
実施例１２−Ｇ９９４またはＧ９９８に由来するストラドマー
Ｇ９９４の配列を塩基配列として使用して追加のストラドマーを生成して、追加の補体優先ストラドマーを特定し、試験するだけでなく、特定の残基での変異の機能も評価した。Ｇ９９４（配列番号１０または１１）は、Ｇ０４５ｃ背景及び２３３、２３６、２６７、２６８、及び３２４位に点変異を有するストラドマーである。具体的には、Ｇ９９４は、以下の変異、Ｅ２２３Ｐ、Ｇ２３６Ｒ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔを有する。
【０２８０】
２３６位の変異の機能を分析するために、２６７位に野生型アミノ酸（セリン）が存在するストラドマーを生成し、２３６位を（Ｇ９９４にあるような）アルギニンまたはアルギニンに類似した残基のいずれかに変異させ、残りのＧ９９４変異（Ｅ２３３Ｐ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔ）は存在した。生成した化合物を、以下の表５に提供する。
【表５】
2018528167.tif 000022
【０２８１】
驚くべきことに、アルギニンまたはアルギニンに類似したアミノ酸への、２３６位の変異は、Ｇ９９４と比較して、標準結合及び補体結合を改変した。グルタミン酸またはアスパラギン酸への２３６位の変異（それぞれＧ１１０３及び１１０４）は、標準ＦｃγＲへの高い結合をもたらし、Ｃ１ｑへの高い結合を保持し、ＣＤＣを阻害した。したがって、化合物Ｇ１１０３及びＧ１１０４は、親ストラドマー（Ｇ０４５ｃ）と比較して、増加した標準結合及びＣ１ｑ結合を有する一般的ストラドマーであると見なすことができる。逆に、グルタミン、ヒスチジン、またはアスパラギンへの２３６位の変異（それぞれＧ１０８８、１０８２、及び１１０５）は、標準結合の低減をもたらした一方で、高いＣ１ｑ結合及びＣＤＣの阻害は保持した。したがって、化合物１０８８、１０８２、及び１１０５は、Ｇ９９４、Ｇ９９８、及びＧ１０３３と類似した治療適用性を有する補体優先ストラドマーであると見なすことができる。リジンへの２３６位の変異（Ｇ１１０６）は、ＦｃγＲＩ結合を除いて、Ｃ１ｑ結合及び標準結合を除去し、ＣＤＣの阻害不能をもたらした。
【０２８２】
２６７位の変異の機能を分析するために、２３６位に野生型アミノ酸（グリシン）が存在するストラドマーを生成し、２３６位を（Ｇ９９４にあるような）グルタミン酸またはグルタミン酸に類似した残基のいずれかに変異させ、残りのＧ９９４変異（Ｅ２３３Ｐ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔ）は存在した。生成した化合物を、以下の表６に提供する。
【表６】
2018528167.tif 000023
【０２８３】
アスパラギンへの２６７位の変異（Ｇ１１０８）は、標準結合の減少をもたらした一方で、高程度のＣ１ｑ結合及びＣＤＣ阻害は維持した。したがって、Ｇ１１０８は、Ｇ９９４、Ｇ９９８、及びＧ１０３３と類似した治療適用性を有する補体優先ストラドマーであると見なすことができる。しかしながら、グルタミン、アスパラギン酸、ヒスチジン、またはグルタミン酸への２６７位の変異（それぞれＧ１１０２、１１０１、１１２５、及び１１０９）は、改良された標準結合をもたらした一方で、高いＣ１ｑ結合及びＣＤＣ阻害は保持した。したがって、Ｇ１１０２、１１０１、１１２５、及び１１０９は、親と比較して、増加したＣ１ｑ結合を有する一般的ストラドマーであると見なすことができる。あるいは、アルギニンまたはリジンへの２６７位の変異（それぞれ１１００及び１０８４）は、標準結合の低減及びＣ１ｑ結合の低減、ならびにＣＤＣを阻害不能の両方をもたらした。
【０２８４】
２３６及び２６７位の組み合わせの変異の機能を分析するために、２３６位を（Ｇ９９４にあるような）アルギニンまたはアルギニンに構造的に類似したアミノ酸に変異させ、２６７位を（Ｇ９９４にあるような）グルタミン酸またはグルタミン酸に構造的に類似したアミノ酸に変異させたストラドマーを生成し、残りのＧ９９４変異（Ｅ２３３Ｐ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔ）は存在した。生成した化合物を、以下の表７に提供する。
【表７−１】
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【表７−２】
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【０２８５】
驚くべきことに、２３６及び２６７位の同時変異は、独立したいずれかの位の変異と比較して、異なる効果を有した。Ｅ２３３Ｐ／Ｈ２６８Ｆ／Ｓ３２４Ｔ（Ｇ１１２９）の文脈おけるＧ２６３Ｎ／Ｓ２６７Ｅの組み合わせは、ＦｃγＲＩＩＩａへの結合の低減、ならびにＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、及びＦｃγＲＩＩｂへの結合の保持及び改良をもたらした。したがって、Ｇ１１２９は、補体優先ストラドマーであると見なすことができる。Ｇ２３６Ｄ／Ｓ２６７Ｑ、Ｇ２３６Ｑ／Ｓ２６７Ｄ、及びＧ２３６Ｄ／Ｓ２６７Ｄ点変異（それぞれＧ１１１１、Ｇ１１１４、及びＧ１１１７）の組み合わせは、親ストラドマーまたはＧ９９４と比較して、増加した標準結合をもたらし、高いＣ１ｑ結合及びＣＤＣ阻害の維持もまたもたらした。したがって、Ｇ１１１１、Ｇ１１１４、及びＧ１１１７は、親ストラドマーＧ０４５ｃと比較して、改良された治療有効性に対する潜在性を有する一般的ストラドマーであると見なすことができる。あるいは、Ｇ２３６Ｄ／Ｓ２６７Ｒ、Ｇ２３６Ｒ／Ｓ２６７Ｒ、Ｇ２３６Ｅ／Ｓ２６７Ｒ、Ｇ２３６Ｈ／Ｓ２６７Ｋ、Ｇ２３６Ｒ／Ｓ２６７Ｋ、Ｇ２３６Ｒ／Ｓ２６７Ｑ、Ｇ２３６Ｄ／Ｓ２６７Ｋ、Ｇ２３６Ｈ／Ｓ２６７Ｑ、Ｇ２３６Ｑ／Ｓ２６７Ｒ、Ｇ２３６Ｎ／Ｓ２６７Ｋ、またはＧ２３６Ｒ／Ｓ２６７Ｎ（それぞれＧ１１１０、Ｇ１１１２、Ｇ１１１５、Ｇ１１１６、Ｇ１１１９、Ｇ１１２０、Ｇ１１２１、Ｇ１１２２、Ｇ１１２３、Ｇ１１３０、及びＧ１１３１）の組み合わせは全て、標準結合の減少及びＣ１ｑへの結合の減少、ならびにＣＤＣ阻害の低減の両方をもたらした。Ｇ２３６Ｋ／Ｓ２６７Ｋ及びＧ２３６Ｋ／Ｓ２６７Ｎ（それぞれＧ１１２４及びＧ１１２８）の組み合わせなどのいくつかの例において、点変異は、改良された標準結合及びＣ１ｑへの結合の減少をもたらした。
【０２８６】
塩基配列としてＧ９９８の配列、及び２９９位の変異（Ｔ２９９Ａ）を使用して、追加のストラドマーもまた生成して、この文脈における特定の残基での変異の機能を評価した。Ｇ９９８（配列番号１４または１５）は、Ｇ０４５ｃ背景及び２６７、２６８、２９７、及び３２４位に点変異を有するストラドマーである。具体的には、Ｇ９９８は、以下の変異、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｎ２９７Ａ、及びＳ３２４Ｔを有する。コンセンサスグリコシル化部位はＮＸＴであり、Ｎは残基２９７である。２９７残基は、糖残基を共有結合的に連結する。本明細書に記載される追加のストラドマーのＴ２９９Ａ変異は、非グリコシル化タンパク質を提供することが意図され、２９９位のアミノ酸変異は、タンパク質がグリコシル化されないようにコンセンサスグリコシル化部位を破壊するが、２９７連結残基はインタクトのまま残すように設計される。したがって、（２６７位のアミノ酸が（Ｇ９９８にあるような）グルタミン酸もしくはグルタミン酸に類似したアミノ酸配列に変異されたか、または野生型セリン残基から変異されなかったかであり、２６８及び３２４位のアミノ酸がＧ９９８にあるように変異され、２９７位のアミノ酸は変異されず、かつスレオニンからアラニンへの変異が２９９位に付加された）以下の表８に提供される化合物を生成し、試験した。
【表８】
2018528167.tif 000026
【０２８７】
驚くべきことに、標準結合の抑止をもたらすはずであるＴ２９９Ａ変異の包含は、Ｓ２６７Ｒ（Ｇ１０９６）変異またはＳ２６７Ｋ（Ｇ１０９３）変異のいずれかの文脈のＦｃγＲ結合に影響を与えたにすぎなかった。Ｇ１０９６及びＧ１０９３の両方において、Ｃ１ｑへの結合もまた低減され、おそらくＣ１ｑ結合の欠乏のために、いずれの化合物もＣＤＣを阻害することができなかった。Ｔ２９９Ａ変異を含有する他の化合物（１０７１ｄ２、Ｇ１０６８、Ｇ１０９４、Ｇ１０９２、及びＧ１１０７）は、ＦｃγＲ及びＣ１ｑの両方への改良された結合を実証した。したがって、Ｇ１０６８、Ｇ１０９４、Ｇ１０９２、及びＧ１１０７は、親ストラドマーＧ０４５ｃと比較して、改良された治療有効性に対する潜在性を有する一般的ストラドマーであると見なすことができる。驚くべきことに、１７１２ｄ２がＣＤＣを阻害できなかったように、Ｃ１ｑへの強い結合は必ずしもＣＤＣの阻害とは相関しなかった。Ｇ１０９５は、Ｔ２９９Ａ変異及びＳ２６７Ｎ変異を含有し、この組み合わせは、Ｃ１ｑ結合及びＣＤＣ阻害を保持しながら、標準結合のわずかな減少をもたらした。したがって、Ｇ１０９５は、Ｇ９９４、Ｇ９９８、及びＧ１０３３と類似した治療適用性を有する補体優先ストラドマーであると見なすことができる。
【０２８８】
追加のＧ９９８系ストラドマーを生成し、試験して、この文脈における２６７変異の機能を更に評価した。これらの変異体は、Ｇ９９８におけるように、２６８、３２４、及び２９７位に変異を含有し、以下の表９に示されるように、２６７位に野生型セリンまたはアミノ酸置換のいずれかを有する。これらのストラドマーは、２９９位に変異を有さない。
【表９】
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【０２８９】
予想通り、表９のストラドマーは、Ｎ２９７Ａ非グリコシル化変異による標準結合の低減を実証した。驚くべきことに、２６７位の野生型セリン（Ｇ１０６９）、Ｓ２６７Ｄ点変異、またはＳ２６７Ｑ点変異（それぞれＧ１０７４及びＧ１０７５）はまた、改良されたＣ１ｑ結合及び標準結合の低減ももたらした。したがって、Ｇ１０６９、Ｇ１０７４、及びＧ１０７５は、Ｇ９９４、Ｇ９９８、及びＧ１０３３と類似した治療適用性を有する補体優先ストラドマーであると見なすことができる。Ｓ２６７Ｋ（Ｇ１０７０）変異及びＳ２６７Ｒ（１１３２）変異は、ＦｃγＲ結合の低減だけでなく、Ｃ１ｑ結合の低減及びＣＤＣの阻害不能ももたらした。
【０２９０】
Ｇ９９４及びＧ９９８に由来する化合物をゲル上で泳動させて、多量体化を評価した。３μｇのそれぞれの試料を１５０Ｖで約１．２時間泳動させた。２０ｍＭのヨードアセトアミドを添加し、その後、試料を１０時間インキュベートしてから、ゲル上に充填した。結果を図４８Ａ〜Ｇに提供し、これらの図は、Ｇ９９４及びＧ９９８と同様に、化合物Ｇ１１０３、Ｇ１０８８、Ｇ１０８９、Ｇ１１０４、Ｇ１０８２、Ｇ１１０５、Ｇ１１０６、Ｇ１１０２、Ｇ１１００、Ｇ１１０１、Ｇ１１２５、Ｇ１１０８、Ｇ１１０９、Ｇ１０８４、Ｇ１１０７、Ｇ１１１０、Ｇ１１１１、Ｇ１１１２、Ｇ１１１４、Ｇ１１１５、Ｇ１１１６、Ｇ１１１７、Ｇ１１１８、Ｇ１１１９、Ｇ１１２０、Ｇ１１２１、Ｇ１１２２、Ｇ１１２３、Ｇ１１２４、Ｇ１１２８、Ｇ１１２９、Ｇ１１３０、Ｇ１１３１、Ｇ１０７１ｄ２、Ｇ１０６８、Ｇ１０９４、Ｇ１０９２、Ｇ１０９６、Ｇ１０９３、Ｇ１０９５、Ｇ１０６９、Ｇ１０７０、Ｇ１１３２、Ｇ１０７５、及びＧ１０７５が多量体を形成することを示す。
【０２９１】
表５〜９の各ストラドマーについて、実施例１に記載される方法に従って、標準ＦｃγＲ結合、補体Ｃ１ｑ結合、及びＣＤＣ阻害のレベルを決定した。これらの結果を、表１０に要約する。
【表１０−１】
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【表１０−２】
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【表１０−３】
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【０２９２】
実施例１３−減少したＣ１ｑ及び標準ＦｃγＲ結合を有するストラドマー
Ｓ２６７Ｅ／Ｈ２６８Ｆ／Ｓ３２４Ｔ三重変異を含む追加の化合物を生成して、追加の補体優先変異体を生成した。
【０２９３】
Ｇ１００１（配列番号７８）はＧ０１９背景上にあり、４つの変異（Ｓ２６７Ｅ／Ｈ２６８Ｆ／Ｓ３２４Ｔ／Ｎ２９７Ａ）を含有する。驚くべきことに、Ｇ０１９親化合物の文脈において、Ｎ２９７Ａ変異をＧ１００３に導入して、Ｇ１００１をもたらすことによるグリコシル化の除去は、三重変異Ｓ２６７Ｅ／Ｈ２６８Ｆ／Ｓ３２４Ｔの存在下ですら、予想される標準結合の喪失に加えて、Ｃ１ｑ結合の喪失に予想外に関連付けられる（Ｍｏｏｒｅら）。この驚くべき発見はＧ０４５ｃ親化合物の文脈においては再現されず、これによって、Ｎ２９７Ａ変異をＧ９９７に導入して、Ｇ９９８をもたらすことによるグリコシル化の除去は、予想される標準結合の喪失に関連付けられるが、完全なＣ１ｑ結合及びＣＤＣ阻害は保持される。したがって、Ｇ９９８及びＧ１００１は同一の変異を有する同一のドメインを持ち、ＩｇＧ２ヒンジの位置においてのみ異なるものの、それらは、実質的に同一の標準Ｆｃ受容体結合を実証するが、著しく異なるＣ１ｑ結合及びＣＤＣ阻害を実証する。これらの比較は、多量体化ストラドマーの文脈において、所与の変異の組が予想できないことを更に強調する。
【０２９４】
Ｇ９９９（配列番号７９）は、４つの点変異（Ｇ２３６Ｒ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔ）を含む、Ｇ０１９背景上のストラドマーであり、Ｃ１ｑ結合の低減及びＣＤＣの阻害不能を実証した。上述のように、Ｇ９９９は、Ｆｃドメインに対するＩｇＧ２ヒンジの位置においてのみＧ９９６と異なるという点において、これは驚くべきものである。しかし、これら２つの化合物は、Ｃ１ｑに結合しＣＤＣを阻害する反対の能力を呈する（Ｇ９９９はどちらもすることができない一方で、Ｇ９９６は高いＣ１ｑ結合を呈し、ＣＤＣを阻害する）。この比較は、多量体化ストラドマーの文脈において、所与の変異の組が予想できないことを更に強調する。
【０２９５】
Ｇ１０２４（配列番号８０）は、４つの点変異（Ｐ２３８Ｄ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ）を含む、Ｇ０１９背景上のストラドマーである。
【０２９６】
Ｇ１０３０（配列番号８１）は、７つの点変異及び２３６の欠失（Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３６Ｄｅｌ、Ｎ２９７Ａ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ）を含む、ＧＬ−２０４５背景上のストラドマーである。
【０２９７】
Ｇ１０３１（配列番号８２）は、６つの点変異（Ｅ２３３Ｐ、Ｇ２３６Ｒ、Ｄ２６５Ａ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、Ｎ２９７Ａ）を含む、ＧＬ−２０４５背景上のストラドマーである。
【０２９８】
Ｇ１０４０（配列番号８３）は、８つの点変異及び２３６位の欠失（Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３６Ｄｅｌ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、Ｌ３２８Ｆ、Ｎ２９７Ａ）を含む、ＧＬ−２０４５背景上のストラドマーである。
【０２９９】
Ｇ１０４４（配列番号８４）は、５つの点変異（Ｐ２３８Ｄ、Ｄ２６５Ｃ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ）を含む、ＧＬ−２０４５背景上のストラドマーである。
【０３００】
Ｇ１０４５（配列番号８５）は、５つの点変異（Ｐ２３８Ｄ、Ｄ２６５Ｐ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ）を含む、ＧＬ−２０４５背景上のストラドマーである。
【０３０１】
Ｇ１０４８（配列番号８６）は、５つの点変異（Ｇ２３６Ｒ、Ｌ３２８Ｆ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ）を含む、Ｇ０１９背景上のストラドマーである。
【０３０２】
Ｇ１０４７（配列番号８７）は、５つの点変異（Ｐ２３８Ｄ、Ｌ３２８Ｆ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ）を含む、ＧＬ−２０４５背景上のストラドマーである。
【表１１】
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【０３０３】
驚くべきことに、Ｓ２６７Ｅ／Ｈ２６８Ｆ／Ｓ３２４Ｔ三重変異を含むにも関わらず、表１１に列挙されるストラドマーはＣ１ｑに結合せず、ＣＤＣを阻害しなかったため、多量体化ストラドマーの文脈において、所与の点変異の組が予想できないことを更に強調した。ＦｃγＲ及びＦｃＲｎへの結合、Ｃ１ｑへの結合、ならびにＣＤＣの阻害を決定する実験の結果を、表１２に要約する。
【表１２】
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【０３０４】
実施例１４−鎌状赤血球症の補体優先ストラドマー治療
Ｔｕｒｈａｎ  ｅｔ  ａｌｌ（２００４）Ｂｌｏｏｄ１０３：２３９７及びＣｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ（２００８）Ｂｌｏｏｄ１１１：９１５に詳細に記載される鎌状赤血球症のマウスモデルにおいて、補体優先ストラドマーＧ９９４、Ｇ９９８、Ｇ１０３３、Ｇ１０２２、Ｇ１０３２、Ｇ１０２３、Ｇ１００６、Ｇ１０２７、及びＧ９９６を評価する。簡潔には、生後１２〜１６週間の雄のＳＣＤマウス（Ｔｏｗｎｅｓ  ＳＳマウス、ホモ接合型Ｈｂａｔｍ１（ＨＢＡ）Ｔｏｗ及びホモ接合型Ｈｂｂｔｍ２（ＨＢＧ１，ＨＢＢ＊）Ｔｏｗ（Ｍ２１遺伝子型）をランダムに群に割り当て、外科的準備の２０分前に、生理食塩水、ＩＶＩＧ（４００ｍｇ／ｋｇ）、ｈＩｇＧ１（４００ｍｇ／ｋｇ）、アルブミン（４００ｍｇ／ｋｇ）、またはストラドマー（Ｇ０４５ｃ、Ｇ９９４、Ｇ９９８、Ｇ１００３、及びＧ１０３３、６０ｍｇ／ｋｇ）のいずれかとともに（静脈内）投薬する。精巣挙筋細静脈中の好中球接着、ローリング、及び血小板好中球凝集を分析する。末端血液を引き出した後、血漿を収集して、ｓＥ−セレクテイン（ｓｅｌｅｃｔｅｉｎ）、ｓＰ−セレクチング（ｓｅｌｅｃｔｉｎｇ）、ｓＶＣＡＭ−１、及びｓＩＣＡＭ−１を含むマーカーを分析する。
【０３０５】
この研究の結果は、Ｇ９９４、Ｇ９９８、Ｇ１０３３、Ｇ１０２２、Ｇ１０３２、Ｇ１０２３、Ｇ１００６、Ｇ１０２７、及びＧ９９６がＳＳＲＢＣ−ＷＢＣ相互作用／ＷＢＣ／分を著しく減少させ、ＷＢＣ／分または画分パーセントによるローリング流動を著しく増加させ、かつ対照と比較して、治療した群の累積生存期間を著しく改善することを示す。したがって、補体優先ストラドマーは、鎌状赤血球症を効果的に治療する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１３】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１５】
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【図１６Ａ】
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【図１６Ｂ】
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【図１７】
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【図１８Ａ】
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【図１８Ｂ】
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【図１９】
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【図２０Ａ】
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【図２０Ｂ】
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【図２１】
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【図２２Ａ】
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【図２２Ｂ】
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【図２３】
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【図２４Ａ】
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【図２４Ｂ】
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【図２５】
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【図２６Ａ】
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【図２６Ｂ】
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【図２７】
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【図２８Ａ】
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【図２８Ｂ】
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【図２９】
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【図３０Ａ】
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【図３０Ｂ】
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【図３１Ａ】
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【図３１Ｂ】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６Ａ】
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【図３６Ｂ】
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【図３７】
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【図３８Ａ】
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【図３８Ｂ】
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【図３９】
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【図４０】
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【図４１】
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【図４２】
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【図４３】
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【図４４Ａ】
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【図４４Ｂ】
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【図４５】
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【図４６】
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【図４７Ａ】
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【図４７Ｂ】
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【図４８Ａ】
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【図４８Ｂ】
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【図４８Ｃ】
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【図４８Ｄ】
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【図４８Ｅ】
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【図４８Ｆ】
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【図４８Ｇ】
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【図４９】
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【図５０Ａ】
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【図５０Ｂ】
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【図５０Ｃ】
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【図５１Ａ】
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【図５１Ｂ】
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【図５１Ｃ】
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【図５２Ａ】
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【図５２Ｂ】
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【図５２Ｃ】
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【図５２Ｄ】
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【図５２Ｅ】
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【図５２Ｆ】
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【図５２Ｇ】
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【図５３Ａ】
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【図５３Ｂ】
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【図５３Ｃ】
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【図５４Ａ】
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【図５４Ｂ】
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【図５５Ａ】
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【図５５Ｂ】
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【図５６】
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【図５７】
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【図５８Ａ】
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【図５８Ｂ】
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【図５９】
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【図６０】
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【図６１】
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【図６２】
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【図６３】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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