【誤訳訂正書】
【提出日】平成26年7月17日(2014.7.17)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
個人の心血管の健康状態を決定する方法であって、
ａ）前記個人の血液サンプルから、心筋トロポニンＩ（ｃＴｎＩ）又は心筋トロポニンＴ（ｃＴｎＴ）の血中、血清中、又は血漿中濃度を、２０ｐｇ／ｍｌ未満の検出限界を有するアッセイで測定することと、
ｂ）前記測定された濃度を、正常な個人群における１０％以下の変動係数（ＣＶ）に対応するｃＴｎＩの９９パーセンタイル濃度を表す予め決められた閾値濃度と比較することと、
ｃ）前記ｃＴｎＩ濃度が前記閾値濃度よりも高いときに、前記個人における心臓損傷を決定することと、
を含む、方法。
【請求項２】
前記サンプル中におけるｃＴｎＩ又はｃＴｎＴ濃度が、１０ｐｇ／ｍＬ未満の検出限界のアッセイで検出される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記サンプル中におけるｃＴｎＩ又はｃＴｎＴ濃度が、３ｐｇ／ｍＬ未満の検出限界のアッセイで検出される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
個人における心臓損傷の進行を決定する方法であって、
ａ）個人から得た一連の血、血清、又は血漿サンプル中のｃＴｎＩ又はｃＴｎＴのレベルを、２０ｐｇ／ｍｌ未満の検出限界を有するアッセイで検出することと、
ｂ）前記一連のサンプル中のｃＴｎＩ又はｃＴｎＴの検出されたレベルを、正常な個人群における１０％以下の変動係数（ＣＶ）に対応するｃＴｎＩ又はｃＴｎＴの９９パーセンタイル濃度を表す予め決められた閾値濃度と比較することと、
ｃ）前記ｃＴｎＩ又はｃＴｎＴの検出されたレベルが前記閾値レベル以上であるが、前記一連の血液サンプルを通して減少しているとき、前記心臓損傷が治癒しつつあると決定し、前記ｃＴｎＩ又はｃＴｎＴの検出されたレベルが前記閾値レベル以上であり、前記一連の血液サンプルを通して増加しているとき、前記心臓損傷が悪化していると決定することと、
を含む、方法。
【請求項５】
前記一連のサンプル中におけるｃＴｎＩ又はｃＴｎＴのレベルが、１０ｐｇ／ｍＬ未満の検出限界のアッセイで検出される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記一連のサンプル中におけるｃＴｎＩ又はｃＴｎＴのレベルが、３ｐｇ／ｍＬ未満の検出限界のアッセイで検出される、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記閾値濃度が７ｐｇ／ｍＬ以下である、請求項１又は４に記載の方法。
【請求項８】
前記閾値濃度が８ｐｇ／ｍＬ以下である、請求項１又は４に記載の方法。
【請求項９】
前記閾値濃度が９ｐｇ／ｍＬ以下である、請求項１又は４に記載の方法。
【請求項１０】
前記閾値濃度が１０ｐｇ／ｍＬ以下である、請求項１又は４に記載の方法。
【請求項１１】
以前の心臓事象についての患者の評価における使用のための請求項１の方法であって、
前記検出されたｃＴｎＩ又はｃＴｎＴが前記閾値濃度よりも高いときに、前記患者が心臓事象を受けていた疑いがある、方法。
【請求項１２】
心筋梗塞の臨床的徴候のある前記患者を救急処置室に収容してから約５時間以内に前記測定が行われる、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
血液サンプルが、ストレス試験の間か、ストレス試験の後に少なくとも１回取られた、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
ａ）ストレス試験を実施する前に、血液サンプルからｃＴｎＩ又はｃＴｎＴの血清又は血漿濃度を測定することと、
ｂ）前記個人に対してストレス試験を実施することと、
ｃ）前記ストレス試験の間又は後に取られたサンプルからｃＴｎＩ又はｃＴｎＴのストレスで誘起された濃度を測定することと、
ｄ）前記ストレス試験の前のｃＴｎＩ又はｃＴｎＴ濃度と、前記ストレス試験の間又は後のｃＴｎＩ又はｃＴｎＴ濃度と、を比較し、かつ前記閾値と比較することと、
をさらに含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記心筋トロポニンの濃度が、心筋トロポニン複合体、心筋トロポニン断片、リン酸化心筋トロポニン、酸化心筋トロポニン、又はそれらの組み合わせの濃度である、請求項１又は４に記載の方法。
【請求項１６】
前記心筋トロポニンの濃度が、全心筋トロポニンと比較される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記濃度が、トロポニンの単分子、複合体、又は断片を検出することを含む方法により決定される、請求項１又は４に記載の方法。
【請求項１８】
前記トロポニン又はトロポニン複合体を蛍光部分を含む標識で標識することをさらに含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記蛍光部分は、当該部分の励起波長におけるレーザー放出光によって誘導されたときに約２００個の光子を放出することが可能であり、
前記レーザーは前記分子を含む直径５ミクロンのスポットに集光され、
前記レーザーによって前記スポットに向けられた全エネルギーが約３マイクロジュール以下である、
請求項１８に記載の方法。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００６】
一部の実施形態では、本発明は、個体において診断、予後診断、または治療方法を決定するための方法であって、ｉ）個体から得た試料中の心筋トロポニンの濃度を決定するか、あるいは一連の試料中の心筋トロポニンの濃度を決定する工程であって、試料中の心筋トロポニンの検出限界が約５０ｐｇ／ｍｌ未満である心筋トロポニンアッセイにより濃度を決定する工程と、ｉｉ）試料中の濃度または一連の試料中の濃度に基づいて個体における診断、予後診断、または治療方法を決定する工程とを含む方法を提供する。本発明の方法の一部の実施形態では、工程ｉｉ）は、濃度または一連の濃度をその濃度の正常値と比較すること、濃度または一連の濃度を予め決められた閾値レベルと比較すること、濃度または一連の濃度をベースライン値と比較すること、および一連の濃度について濃度の変化率を決定することなどの分析を含む。本発明の方法の一部の実施形態では、工程ｉｉ）は、試料中のトロポニン濃度を予め決められた閾値濃度と比較して、試料濃度が閾値レベルよりも高い場合は、診断、予後診断、または治療方法を決定することを含む。本発明の方法の一部の実施形態では、閾値濃度は、正常な個体群でトロポニンの９９パーセンタイル濃度を決定し、９９パーセンタイル濃度で閾値濃度を設定することによって決定する。本発明の方法の一部の実施形態では、心臓ストレス（cardiac stress）試験の間または後に、少なくとも１つの試料を採取する。本発明の方法の一部の実施形態では、心筋トロポニンは、心筋トロポニンＩおよび心筋トロポニンＴからなる群から選択される。本発明の方法の一部の実施形態では、心筋トロポニンは心筋トロポニンＩである。本発明の方法の一部の実施形態では、心筋トロポニンの濃度は全（total）心筋トロポニンの濃度である。本発明の方法の一部の実施形態では、心筋トロポニンの濃度は、心筋トロポニン複合体、心筋トロポニン断片、リン酸化心筋トロポニン、酸化心筋トロポニン、またはそれらの組合せの濃度である。本発明の方法の一部の実施形態では、心筋トロポニンの濃度を全心筋トロポニンと比較する。本発明の方法の一部の実施形態では、診断、予後診断、または治療方法は、心筋梗塞の診断、予後診断、または治療方法である。本発明の方法の一部の実施形態では、診断、予後診断、または治療方法は、心筋梗塞の危険度レベルの危険度層化を含む。本発明の方法の一部の実施形態では、濃度または一連の濃度は、個体が心筋虚血症もしくは梗塞またはその可能性を指し示す１つ以上の症状を医療従事者に示したときに、またはその近くに決定される。一部の実施形態では、１つ以上の症状は、胸部痛、胸部圧、腕部痛、異常なＥＫＧ、異常な酵素レベルまたは息切れであることができる。一部の実施形態では、濃度は、トロポニンの単一分子またはその複合体もしくは断片を検出することを含む方法で決定される。一部の実施形態では、本発明の方法は、トロポニンまたはトロポニン複合体を、蛍光部分を含む標識で標識することを含む。本発明の方法の一部の実施形態では、蛍光部分は、該部分の励起波長で発光するレーザーによって刺激されたときに少なくとも約２００個の光子を放出することができ、レーザーは蛍光部分を含む直径５ミクロンのスポッ��に集束され、レーザーによってスポットに向けられる全エネルギーは約３マイクロジュール以下である。本発明の方法の一部の実施形態では、蛍光部分は少なくとも１つの置換インドリウム環系を含む分子を含み、該インドリウム環の３位炭素上の置換基は化学反応性基または共役基を含む。本発明の方法の一部の実施形態では、蛍光部分は、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ５３２、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６４７、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６８０またはＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ７００からなる群から選択される色素を含む。本発明の方法の一部の実施形態では、蛍光部分はＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６４７を含む。本発明の方法の一部の実施形態では、標識はトロポニンの結合相手をさらに含む。一部の実施形態では、結合相手はトロポニンに特異的な抗体を含む。一部の実施形態では、抗体はポリクローナル抗体である。本発明の方法の一部の実施形態では、本方法は、トロポニンまたはトロポニン複合体を固体支持体上に捕捉する工程をさらに含む。本発明の方法の一部の実施形態では、固体支持体はマイクロタイタープレートまたは常磁性ビーズであることができる。本発明の方法の一部の実施形態では、固体支持体は、固体支持体に結合するトロポニンまたはトロポニン複合体に特異的な捕捉相手を含む。本発明の方法の一部の実施形態では、固体支持体への捕捉相手の結合は非共有結合性である。本発明の方法の一部の実施形態では、固体支持体への捕捉相手の結合は共有結合性である。本発明の方法の一部の実施形態では、捕捉相手の共有結合は、捕捉相手が特定の方向で固体支持体と結合するものである。本発明の方法の一部の実施形態では、特定の方向は、捕捉相手へのトロポニンまたはトロポニン複合体の特異的結合の最大化に役立つ。本発明の方法の一部の実施形態では、工程ｉ）は個体の別の指標を評価することをさらに含み、工程ｉｉ）は、トロポニン濃度および試料中の非トロポニンマーカーの別の指標の評価に基づいて、あるいは一連の試料中の濃度に基づいて、個体において診断、予後診断、または治療方法を決定することを含む。一部の実施形態では、別の指標は、心筋虚血症または梗塞の臨床指標である。一部の実施形態では、別の指標は、試料中または一連の試料中の１つ以上の非トロポニンマーカーの濃度である。本発明の方法の一部の実施形態では、１つ以上のマーカーは、心虚血のマーカーまたは炎症のマーカーおよびプラーク不安定性のマーカーである。一部の実施形態では、１つ以上の心虚血マーカーは、クレアチンキナーゼ（ＣＫ）およびその心筋分画ＣＫ心筋バンド（ＭＢ）、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ、乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）、α−ヒドロキシ酪酸デヒドロゲナーゼ、ミオグロビン、グルタミン酸オキザロ酢酸トランスアミナーゼ、グリコーゲンホスホリラーゼＢＢ、未結合の遊離脂肪酸、心臓型脂肪酸結合タンパク質（Ｈ−ＦＡＢＰ）、虚血修飾（ischemia-modified）アルブミン、ミオシン軽鎖１もしくはミオシン軽鎖２であることができる。本発明の方法の一部の実施形態では、１つ以上のマーカーは、心筋傷害の１つ以上の特異的マーカーを含む。本発明の方法の一部の実施形態では、診断、予後診断、または治療方法は、心筋梗塞で���ない状態の診断、予後診断、または治療方法である。一部の実施形態では、その状態は心臓毒性である。一部の実施形態では、心臓毒性は個体への薬剤投与に伴う。本発明の方法の一部の実施形態では、状態は、急性リウマチ熱、アミロイド沈着症、心臓外傷（挫傷、切除（ablation）、ペーシング、ファイヤリング、電気除細動、カテーテル挿入、および心臓手術を含む）、再かん流傷害、うっ血性心不全、末期腎不全、ＩＩ型糖原貯蔵症（ポンペ病）、心臓移植、輸血性ヘモシデローシスによる異常ヘモグロビン症、妊娠性高血圧を含む高血圧、しばしば不整脈を伴う低血圧症、甲状腺機能低下症、心筋炎、心膜炎、手術後の非心臓手術、肺動脈塞栓症および敗血症からなる群から選択される。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４９】
ＩＶ．心筋トロポニンの高感度分析
一態様では、本発明は、ｉ）分子、断片、または複合体を、存在する場合には標識で標識する工程と、ｉｉ）標識の有無を検出する工程であって、標識の存在の検出は試料中の心筋トロポニンの単一分子、断片、または複合体の存在を示す工程とにより、試料中の心筋トロポニンの単一分子またはその断片もしくは複合体の有無を判定するための方法である。本明細書で用いる「心筋トロポニンの分子」には、翻訳後修飾の形態（例えばリン酸化した形態）ならびに酸化したまたは化学的に変化した形態を含む特定のタイプの心筋トロポニンの天然アミノ酸配列全体を実質的に含む分子が含まれる。本明細書で用いる分子の「断片」には、分子全体についての修飾を含む、天然アミノ酸配列全体より短い心筋トロポニンの分子が含まれる。本明細書で用いる心筋トロポニン分子の「複合体」には、１つ以上の他の分子または物質と関連する（例えば、１つ以上の他の心筋トロポニン分子と関連する）心筋トロポニン分子または断片が含まれる。一部の実施形態では、この方法は、約１００、８０、６０、５０、４０、３０、２０、１５、１２、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１、０．９、０．８、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２、０．１ｐｇ／ｍｌ未満の検出限界でトロポニンを検出することが可能である。一部の実施形態では、この方法は、約１００ｐｇ／ｍｌ未満の検出限界でトロポニンを検出することが可能である。一部の実施形態では、この方法は、約５０ｐｇ／ｍｌ未満の検出限界でトロポニンを検出することが可能である。一部の実施形態では、この方法は、約２０ｐｇ／ｍｌ未満の検出限界でトロポニンを検出することが可能である。一部の実施形態では、この方法は、約１０ｐｇ／ｍｌ未満での検出限界でトロポニンを検出することが可能である。一部の実施形態では、この方法は、約５ｐｇ／ｍｌ未満での検出限界でトロポニンを検出することが可能である。一部の実施形態では、この方法は、約３ｐｇ／ｍｌ未満での検出限界でトロポニンを検出することが可能である。一部の実施形態では、この方法は、約１ｐｇ／ｍｌ未満での検出限界でトロポニンを検出することが可能である。検出限界は、米国国立標準技術研究所標準品などの好適な標準品、例えばｃＴｎｌ標準品を用いることによって決定することができる。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５１】
検出用の心筋トロポニンのタイプは、本明細書に記載の通りであり、例えばｃＴｎＴ、ｃＴｎｌ、全心筋トロポニン（例えば、全ｃＴｎｌまたは全ｃＴｎＴ）または心筋トロポニンの遊離体、複合体、または断片である。一部の実施形態では、全心筋トロポニンが検出および／または定量化される。一部の実施形態では、全ｃＴｎＴが検出される。一部の実施形態では、全ｃＴｎｌが検出および／または定量化される。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７７】
本発明の機器および方法の非常に高い感度に寄与する特徴は、標識を検出および計数する方法であり、該方法は、一部の実施形態では、検出する単一分子に結合するか、あるいはより典型的には検出すべき単一分子に対応する。簡潔に述べると、キャピラリーの所与のインタロゲーション空間に対し、標識に用いられる蛍光部分に好適な励起波長の光を放出するレーザーからのＥＭ放射線を所定の時間享受させ、その時間の間に放出された光子を検出することにより、キャピラリーを通って流れるプロセシング試料を効果的に分けて一連の検出事象とする。各々の所定時間は「ビン(bin)」である。所定のビンにおいて検出された光子の総数が予め決められた閾値レベルを超える場合、検出事象がそのビンに対して登録される；すなわち標識が検出されている。光子の総数が予め決められた閾値レベルでない場合は、検出事象は登録されない。一部の実施形態では、プロセシング試料の濃度は十分に希薄であるので、パーセント値の大きい検出事象では、該検出事象はウインドウを通過した標識がたった１個であることを表しているが、このことはオリジナルの試料中の単一の対象の分子に相当し、すなわちいつくかの数の検出事象は単一のビンにおいて標識が２つ以上であることを表す。一部の実施形態では、プロセシング試料中のより高い濃度の標識、すなわち２つ以上の標識が単一の（single）検出事象として検出される確率がもはや重要ではないとはいえない濃度の標識を正確に検出できるようにするために、さらなる精製が適用される。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００８０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００８０】
したがって、キャピラリーフローセルを通って標識が流れるとき、標識はレーザー光線によって照射されて光子のバースト（burst）を生成する。標識によって放出される光子は、試料に存在するバックグラウンドノイズ量の原因となる予め決められた閾値エネルギーレベルを上回るエネルギーを有する光子のバーストだけを考慮に入れることにより、バックグラウンドの光またはバックグラウンドノイズ放射から識別される。バックグラウンドノイズは、典型的には、例えば試料、分析用の試料を調製するのに用いられる緩衝液または希釈液に存在する非標識の粒子に固有の蛍光によって生成される低周波の発光、ラマン散乱、および電気ノイズを含む。一部の実施形態では、バックグラウンドノイズに割り当てられた値を、複数のビンにおいて検出されるバックグラウンドシグナルノイズの平均として計算するが、これは所定の長さの時間の間にインタロゲーション空間において検出された光子シグナルの測定値である。したがって一部の実施形態では、バックグラウンドノイズを、その試料に特異的な数として、各試料について計算する。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１６９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１６９】
Ｂ．診断、予後診断、または治療方法の決定
一部の実施形態では、工程ｉｉ）は、前記濃度または一連の濃度を前記濃度の正常値と比較すること、前記濃度または一連の濃度を予め決められた閾値レベルと比較すること、前記濃度または一連の濃度をベースライン値と比較すること、または前記一連の濃度について濃度の変化率を決定することを含む。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１７０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１７０】
一部の実施形態では、工程ｉｉ）は、前記試料中の前記トロポニン濃度を予め決められた閾値濃度と比較すること、および試料濃度が閾値レベルよりも高い場合は、診断、予後診断、または治療方法を決定することを含む。閾値濃度は、例えば、個体群でトロポニンの９９パーセンタイル濃度を決定し、前記９９パーセンタイル濃度で閾値濃度を設定することによって決定することができる。この一例は、実施例に提供されている。