(57)【要約】  本発明は、微細藻類、特に、スラウストキトリッド（ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｄ）の培養の分野にある。本発明は、タンパク質が豊富なスラウストキトリッドバイオマス、そのバイオマスを得るための方法、およびその用途に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
乾燥物質の重量に対して、重量で、少なくとも３５％のタンパク質を含んでなる、スラウストキトリッドのバイオマス。
【請求項２】
少なくとも４５％のタンパク質を含んでなる、請求項１に記載のバイオマス。
【請求項３】
少なくとも６０％のタンパク質を含んでなる、請求項１に記載のバイオマス。
【請求項４】
乾燥物質の重量に対して、重量で、２０％未満の脂質を含んでなる、請求項１〜３のいずれか一項に記載のバイオマス。
【請求項５】
１０％未満の脂質を含んでなる、請求項４に記載のバイオマス。
【請求項６】
前記スラウストキトリッドが、オーランチオキトリウム、アプラノキトリウム、ボトリオキトリウム、ジャポノキトリウム、オブロンギキトリウム、パリエティキトリウム、シゾキトリウム、シクヨイドキトリウム、スラウストキトリウムおよびウルケニアからなる群から選択される属であることを特徴とする、請求項１〜５のいずれか一項に記載のバイオマス。
【請求項７】
前記スラウストキトリッドが、オーランチオキトリウム・マングローヴァイＣＣＡＰ  ４０６２／２、オーランチオキトリウム・マングローヴァイＣＣＡＰ  ４０６２／３、オーランチオキトリウム・マングローヴァイＣＣＡＰ  ４０６２／４、オーランチオキトリウム・マングローヴァイＣＣＡＰ  ４０６２／５、オーランチオキトリウム・マングローヴァイＣＣＡＰ  ４０６２／６、オーランチオキトリウム・マングローヴァイＣＣＡＰ  ４０６２／１、シゾキトリウム種４０８７／３、シゾキトリウム種ＣＣＡＰ  ４０８７／１、シゾキトリウム種ＣＣＡＰ  ４０８７／４、シゾキトリウム種ＣＣＡＰ  ４０８７／５の種から選択されるものである、請求項６に記載のバイオマス。
【請求項８】
１％〜９５％の水分含量を有する、請求項１から７のいずれか一項に記載のバイオマス。
【請求項９】
７０％〜９０％の水分含量を有する、請求項８に記載のバイオマス。
【請求項１０】
１％〜１０％の水分含量を有する、請求項８に記載のバイオマス。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれか一項に定義されるバイオマスの製造方法であって、当該方法が、
ａ．炭素源、窒素源、リン源および塩を含む、所定の培養液中で、スラウストキトリッドを培養する第一工程であって、前記第一工程ａ）が、二つのサブ工程に分けられ、第一のサブ工程が、
ａ１）２０ｇ／Ｌ未満の培養液中の炭素源の含量が得られるまで、適切な培養液中で増殖させること含み、続いて第二のサブ工程が、
ａ２）少なくとも４０ｇ／Ｌの乾燥物質の培養密度が得られるまで、一つまたは複数の炭素源、窒素源および／またはリン源の濃縮溶液を、同時にまたは連続して、培養液に添加することを含むものである、第一工程と、
ｂ．第一工程で得られたバイオマスを、培養液から、前記バイオマスを分離することによって回収する第二工程と
を含んでなることを特徴とする、方法。
【請求項１２】
工程ａ２）において、炭素源の含量が０〜５０ｇ／Ｌの間で維持され、窒素源の含量が０．５〜５ｇ／Ｌの間で維持され、リン源の含量が０．５〜５ｇ／Ｌの間で維持される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
ｃ．第二工程において回収されたバイオマスを乾燥する第三工程を含むことを特徴とする、請求項１１または１２に記載の方法。
【請求項１４】
請求項１１〜１３のいずれか一項に記載の方法によって得られ得る、バイオマス。
【請求項１５】
ヒトまたは動物の化粧品または食品組成物の調製のための、請求項１〜１０または１４のいずれか一項に記載のバイオマス、または請求項１１〜１３に記載の方法によって得られるバイオマスの使用。
【請求項１６】
動物の能力を向上させるための、請求項１〜１０または１４のいずれか一項に記載のスラウストキトリッドバイオマス。
【請求項１７】
能力の向上が、食物摂取、体重増加または飼料要求率の測定によって評価される、請求項１６に記載のバイオマス。
【請求項１８】
請求項１〜１０または１４のいずれか一項に記載のバイオマス、または請求項１１〜１３に記載の方法によって得られるバイオマスを含む、ヒトまたは動物のための、化粧品または医薬組成物。
【請求項１９】
請求項１〜１０または１４のいずれか一項に記載のバイオマス、または請求項１１〜１３に記載の方法によって得られるバイオマスを含むことを特徴とする、食品。
【請求項２０】
請求項１〜８または１０のいずれか一項に記載のバイオマス、または請求項１３に記載の方法によって得られるバイオマスを、１％〜６０％含むことを特徴とする、家畜類の飼料。
【請求項２１】
請求項１〜８または１０のいずれか一項に記載のバイオマス、または請求項１３に記載の方法によって得られるバイオマスを、１％〜２０％含むことを特徴とする、請求項２０に記載の飼料。
【請求項２２】
請求項１〜８または１０のいずれか一項に記載のバイオマス、または請求項１３に記載の方法によって得られるバイオマスを、３％〜８％含むことを特徴とする、請求項２１に記載の飼料。
【請求項２３】
請求項１〜９のいずれか一項に記載のバイオマス、または請求項１１または１２に記載の方法によって得られるバイオマスを、１％〜４０％含むことを特徴とする、家畜類の飼料。
【請求項２４】
請求項１〜９のいずれか一項に記載のバイオマス、または請求項１１または１２に記載の方法によって得られるバイオマスを、５％〜１０％含むことを特徴とする、請求項２３に記載の飼料。
【請求項２５】
治療において用いられる、請求項１〜１０または１３のいずれか一項に記載のバイオマス、または請求項１１または１２に記載の方法によって得られるバイオマス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、微細藻類、特に、スラウストキトリッド（ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｄ）の培養の分野にある。タンパク質が豊富なスラウストキトリッドバイオマス、当該バイオマスを得るための方法、および食品におけるその使用を目的とする。
【背景技術】
【０００２】
植物タンパク質のいくつかの供給源は、動物およびヒトに、その代謝的に必要なアミノ酸を提供するものとして、直接または栄養補助食品として、ヒトまたは動物用食品の用途において公知である。食品を摂取することにより、これらのタンパク質の供給源は、動物またはヒトのために利用可能なアミノ酸の供給源となるよう意図される。
【０００３】
動物飼料において使用される植物タンパク質の最もよく知られた供給源は、油の抽出後に残った固体残渣である、通常、ダイズミールである。しかしながら、ダイズミールの使用は、その起源に関連していくつか不利な点がある。このミールは、通常、生物多様性をもたらす他の植物に損害を与えることから、ダイズの栽培が集中して行われている国から輸入される。さらにまた、多くの国は、遺伝子組み換え（ＧＭ）ダイズ品種の栽培を促進しており、これは、ミール中において非ＧＭダイズと混合されて見いだされ、遺伝子組換え生物（ＧＭＯ）を含まない植物起源の食品製品に対する需要の増加を満たすためには役に立たない。
【０００４】
遺伝子組み換え光合成微生物によるバイオマスベースの動物飼料が、ＷＯ２０１０／０５１４８９号に開示されている。ＧＭ微生物によって産生されるリコンビナント酵素は、動物飼料に適合するようバイオマスを分解する効果を有する。
【０００５】
植物タンパク質の他の供給源としては、とりわけヒト用の栄養補助食品用として、スピルリナおよびクロレラが知られている。
【０００６】
しかしながら、クロレラと同様に、スピルリナには生産性が低いという不利な点があり、これは、高収率の発酵槽での培養を難しくする。その培養は、従来の栄養補助食品の地域的・限定的な需要を満たすことを可能にするとして、食物タンパク質の供給源の、広範囲かつ経済的に実施可能であり、かつその品質が、動物およびヒトの食物用食品において、ダイズなどの一般的な供給源に置き換わることを可能にするような工業的製造の目的を満たす助けにはならないであろう。
【０００７】
逆に、原生生物は、発酵槽中でのそれらの工業的製造能力に関して公知であり、ＤＨＡまたはＥＰＡなどの多価不飽和脂肪酸が多い脂質を製造するために、長く利用されてきた。例えば、ＷＯ９７／３７０３２号、ＷＯ２０１５／００４４０２号またはＷＯ２０１２／１７５０２７号参照。しかしながら、得られたバイオマスは、脂質の抽出後を含めて、少なくとも高価な追加のタンパク質濃縮工程を必要とすることなく、食品中のタンパク質供給源としてのこれらの使用を可能にするのに十分なタンパク質含量を含有していない。さらにまた、油の抽出のために使用される方法は、残ったバイオマスを、とりわけ、それを食物摂取に適さないようにする有機溶媒で汚染する場合があり得る。
【０００８】
本発明の目的の一つは、ダイズなどの通常の供給源と置き換え可能な品質で、広範囲で、かつ経済的に実施可能な工業的製造の目的を満たす、動物またはヒトの食物用の新規なタンパク質の供給源を提供することである。
【０００９】
本発明は、特定の培養条件下で、高い多価不飽和脂肪酸の含量（とりわけ、ＤＨＡ、ＥＰＡ）を有する油の製造における用途に公知のスラウストキトリッド（ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｄｓ）が、大量のタンパク質の産生が可能な微生物であること、これらを、ダイズと同様に、特に動物飼料のために、食品タンパク質の供給源とすることが可能であることを示すものである。
【発明の概要】
【００１０】
したがって、本発明は、第一の目的として、乾燥物質の重量に対して、重量で、少なくとも３５％のタンパク質、好ましくは少なくとも４５％のタンパク質を含んでいてもよく、６０％超までのタンパク質、実際には７５％超までのタンパク質、特に４５％〜７５％のタンパク質の範囲であってもよい、スラウストキトリッドバイオマスを含む。
【００１１】
タンパク質の重量百分率は、タンパク質それ自体に関して、または前記タンパク質に含有されるアミノ酸に関して表される。
【００１２】
本発明の変形によれば、前記バイオマスは、乾燥物質の重量に対して、重量で、２０％未満の脂質、好ましくは１０％未満の脂質、より好ましくは７％未満の脂質をさらに含んでいてもよい。
【００１３】
好ましくは、本発明によれば、前記バイオマスは、乾燥物質の重量に対して、重量で、少なくとも３５％のタンパク質、好ましくは少なくとも４５％のタンパク質、より好ましくは４５％〜６０％のタンパク質、および、さらに乾燥物質の重量に対して、重量で、２０％未満の脂質、好ましくは１０％未満の脂質、より好ましくは７％未満の脂質を含んでいてもよい、スラウストキトリッドバイオマスである。
【００１４】
本発明は、上記および下記に定義されるバイオマスを製造するための方法にも関し、その方法は、
ａ．適切な培養液中で、タンパク質の産生を、乾燥物質の重量に対して、重量で、少なくとも３５％のタンパク質のレベルで促進することができ、かつ場合により、脂質の産生を、乾燥物質の重量に対して、重量で、２０％未満の脂質のレベルに制限する条件下、少なくとも４０ｇ／Ｌ乾燥物質、好ましくは少なくとも６０ｇ／Ｌ、より好ましくは少なくとも８０ｇ／Ｌの培養密度が得られるまで、ストラウストキトリッドを培養する第一工程；
ｂ．第一工程で得られたバイオマスを、培養液から、前記バイオマスを分離することによって回収する第二工程（採取）；そして、必要により、
ｃ．第二工程で回収したバイオマスを乾燥する第三工程；
を含むことを特徴とする。
【００１５】
本発明は、このようなバイオマスを含む、ヒトまたは動物の化粧品および食品、とりわけ食品の分野における、上記または下記に定義されるバイオマスの使用にも関する。
【００１６】
本発明は、治療において使用するための、本発明によるバイオマスにも関する。
【００１７】
本発明によるバイオマスを含む、ヒトまたは動物のための化粧品または医薬組成物、およびヒトまたは動物のための食品または食品組成物にも関する。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
本発明において、「バイオマス」という用語は、有利には、前述の原生生物を培養することにより製造される、本明細書に記載のタンパク質および場合により脂肪酸のレベルを有する一連のスラウストキトリッド細胞を指し、この細胞は、それらの物理的な完全性を維持してもよく、または維持しなくともよい。
【００１９】
したがって、当該バイオマスは、劣化したスラウストキトリッド細胞を０％〜１００％の範囲の量含んでいてもよいことが理解される。「劣化した」という用語は、前記スラウストキトリッド細胞が、改変されたそれらの構造および／または組成を有し得ることを意味する。例えば、これらは、乾燥工程または油採取工程を経ていてもよく、重要なことは、これらの細胞を含むバイオマスが、本明細書に記載の、タンパク質のレベル、および場合により脂肪酸のレベルを有するという点である。
【００２０】
本発明の好ましい実施形態によれば、バイオマスは、採取中または採取後に、そのアミノ酸組成を改変する処理を経ない。すなわち、採取後に前記バイオマスが付される処理は、そのアミノ酸組成を変更しない。特に、バイオマスは、タンパク質および／またはアミノ酸の濃縮の工程に付されない。すなわち、本発明によるバイオマス中に含有されるタンパク質、ペプチドおよびアミノ酸は、スラウストキトリッドの培養物にのみ由来する。スラウストキトリッドによって産生されないタンパク質またはアミノ酸は、とりわけ、酵母抽出物を含む培養液における前培養の場合において、培養液中に存在する可能性があることに留意すべきである。バイオマス中に存在し得るこれらのタンパク質の残量は、もし存在していたとしても、検出不可能な微量であり、タンパク質および／またはアミノ酸の濃縮を経ていないバイオマスの定義に含まれる。
【００２１】
本発明のより好ましい実施形態によれば、バイオマスは、そのアミノ酸および脂質の組成を改変する処理を経ていない。すなわち、採取後に前記バイオマスが付される処理は、そのアミノ酸および脂質の組成を変更しない。特に、脂質に対するアミノ酸の相対組成は実質的に一定のままである。
【００２２】
特定の場合において、本発明によるバイオマス中の劣化していないスラウストキトリッドは、劣化したスラウストキトリッドよりも優れた保存特性および消化特性を有することが観察された。本発明の好ましい形態の一つは、実質的に主要量が劣化していないスラウストキトリッドを含むバイオマスである。
【００２３】
本発明によれば、「劣化した」という用語は、例えば、均質化プロセスからもたらされる、例えば、溶解したスラウストキトリッドなどの、その構造的および／または化学的な完全性が変更され得るスラウストキトリッドを指す。
【００２４】
それにもかかわらず、一度産生されたものに比べて、前記バイオマスは、未加工で使用されてもよく、場合により、乾燥またはその使用に必要な任意の処理、とりわけ均質化に付されてもよいことは明らかである。
【００２５】
本発明によれば、前記バイオマスは、乾燥物質の重量に対して、重量で、１％〜９５％の水分含量を有していてもよい。
【００２６】
好ましくは、本発明の第一の変形によれば、前記バイオマスは乾燥物質の重量に対して、重量で、７０％〜９０％、好ましくは８０％〜８５％の水分含量を有していてもよい。
【００２７】
より好ましくは、本発明の第二の変形によれば、前記バイオマスは乾燥物質の重量に対して、重量で、１％〜１０％、好ましくは２％〜７％の水分含量を有していてもよい。
【００２８】
本発明によれば、前記スラウストキトリッドは、スラウストキトリアレス（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉａｌｅｓ）目、好ましくはスラウストキトリアセアエ（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉａｃｅａｅ）科、より好ましくはオーランチオキトリウム（Ａｕｒａｎｔｉｏｃｈｙｔｒｉｕｍ）属、アプラノキトリウム（Ａｐｌａｎｏｃｈｙｔｒｉｕｍ）属、ボトリオキトリウム（Ｂｏｔｒｙｏｃｈｙｔｒｉｕｍ）属、ジャポノキトリウム（Ｊａｐｏｎｏｃｈｙｔｒｉｕｍ）属、オブロンギキトリウム（Ｏｂｌｏｎｇｉｃｈｙｔｒｉｕｍ）属、パリエティキトリウム（Ｐａｒｉｅｔｉｃｈｙｔｒｉｕｍ）属、シゾキトリウム（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ）属、シクヨイドキトリウム（Ｓｉｃｙｏｉｄｏｃｈｙｔｒｉｕｍ）属、ストラウストキトリウム（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ）属およびウルケニア（Ｕｌｋｅｎｉａ）属を含む群から選択され得る属であってもよい。
【００２９】
スラウストキトリッドは、遺伝子組み換えではない微生物が非常に好ましい。ＧＭスラウストキトリッドを使用する場合、これらは、食品としての使用のためにバイオマスを劣化または消化することを可能にする、一または複数の酵素をコードする遺伝子を含有しない。
【００３０】
有利には、前記スラウストキトリッドは、アプラノキトリウム・ケルグエレンセ（Ａｐｌａｎｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｋｅｒｇｕｅｌｅｎｓｅ）；アプラノキトリウム・ミヌタ（Ａｐｌａｎｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｍｉｎｕｔａ）；アプラノキトリウム・ストッキノイ（Ａｐｌａｎｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｔｏｃｃｈｉｎｏｉ）；アプラノキトリウム種（Ａｐｌａｎｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＰＲ２４−１；オーランチオキトリウム・リマシヌム（Ａｕｒａｎｔｉｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｌｉｍａｃｉｎｕｍ）；オーランチオキトリウム・リマシヌム（Ａｕｒａｎｔｉｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｌｉｍａｃｉｎｕｍ）ＡＢ０２２１０７；オーランチオキトリウム・リマシヌム（Ａｕｒａｎｔｉｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｌｉｍａｃｉｎｕｍ）ＨＭ０４２９０９；オーランチオキトリウム・リマシヌム（Ａｕｒａｎｔｉｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｌｉｍａｃｉｎｕｍ）ＪＮ９８６８４２；オーランチオキトリウム・リマシヌム（Ａｕｒａｎｔｉｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｌｉｍａｃｉｎｕｍ）ＳＬ１１０１  ＪＮ９８６８４２；オーランチオキトリウム・マングローヴァイ（Ａｕｒａｎｔｉｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｍａｎｇｒｏｖｅｉ）；オーランチオキトリウム・マングローヴァイ（Ａｕｒａｎｔｉｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｍａｎｇｒｏｖｅｉ）ＤＱ３２３１５７；オーランチオキトリウム・マングローヴァイ（Ａｕｒａｎｔｉｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｍａｎｇｒｏｖｅｉ）ＤＱ３５６６５９；オーランチオキトリウム・マングローヴァイ（Ａｕｒａｎｔｉｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｍａｎｇｒｏｖｅｉ）ＤＱ３６７０４９；オーランチオキトリウム・マングローヴァイ（Ａｕｒａｎｔｉｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｍａｎｇｒｏｖｅｉ）ＣＣＡＰ  ４０６２／２；オーランチオキトリウム・マングローヴァイ（Ａｕｒａｎｔｉｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｍａｎｇｒｏｖｅｉ）ＣＣＡＰ  ４０６２／３；オーランチオキトリウム・マングローヴァイ（Ａｕｒａｎｔｉｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｍａｎｇｒｏｖｅｉ）ＣＣＡＰ  ４０６２／４；オーランチオキトリウム・マングローヴァイ（Ａｕｒａｎｔｉｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｍａｎｇｒｏｖｅｉ）ＣＣＡＰ  ４０６２／５；オーランチオキトリウム・マングローヴァイ（Ａｕｒａｎｔｉｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｍａｎｇｒｏｖｅｉ）ＣＣＡＰ  ４０６２／６；オーランチオキトリウム・マングローヴァイ（Ａｕｒａｎｔｉｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｍａｎｇｒｏｖｅｉ）ＣＣＡＰ  ４０６２／１；オーランチオキトリウム種（Ａｕｒａｎｔｉｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＡＢ０５２５５５；オーランチオキトリウム種（Ａｕｒａｎｔｉｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＡＢ０７３３０８；オーランチオキトリウム種（Ａｕｒａｎｔｉｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＡＴＣＣ  ＰＲＡ２７６  ＤＱ８３６６２８；オーランチオキトリウム種（Ａｕｒａｎｔｉｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＢＬ１０  ＦＪ８２１４７７；オーランチオキトリウム種（Ａｕｒａｎｔｉｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＬＹ  ２０１２  ＰＫＵ  Ｍｎ５  ＪＸ８４７３６１；オーランチオキトリウム種（Ａｕｒａｎｔｉｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＬＹ２０１２  ＪＸ８４７３７０；オーランチオキトリウム種（Ａｕｒａｎｔｉｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）Ｎ１−２７；オーランチオキト��ウム種（Ａｕｒａｎｔｉｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＳＤ１１６；オーランチオキトリウム種（Ａｕｒａｎｔｉｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＳＥＫ２０９  ＡＢ２９０５７４；オーランチオキトリウム種（Ａｕｒａｎｔｉｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＳＥＫ２１７  ＡＢ２９０５７２；オーランチオキトリウム種（Ａｕｒａｎｔｉｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＳＥＫ  ２１８  ＡＢ２９０５７３；オーランチオキトリウム種（Ａｕｒａｎｔｉｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）１８Ｗ−１３ａ；ボトリオキトリウム・ラジアツム（Ｂｏｔｒｙｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｒａｄｉａｔｕｍ）；ボトリオキトリウム・ラジアツム・ラグークマール（Ｂｏｔｒｙｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｒａｄｉａｔｕｍ  Ｒａｇｈｕｋｕｍａｒ）１６；ボトリオキトリウム・ラジアツム（Ｂｏｔｒｙｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｒａｄｉａｔｕｍ）ＳＥＫ３５３；ボトリオキトリウム種（Ｂｏｔｒｙｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）；ボトリオキトリウム種（Ｂｏｔｒｙｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＢＵＴＲＢＣ  １４３；ボトリオキトリウム種（Ｂｏｔｒｙｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ラグークマール（Ｒａｇｈｕｋｕｍａｒ）２９；オブロンギキトリウム・ミヌツム（Ｏｂｌｏｎｇｉｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｍｉｎｕｔｕｍ）；オブロンギキトリウム・マルチルジメンタリス（Ｏｂｌｏｎｇｉｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｍｕｌｔｉｒｕｄｉｍｅｎｔａｌｉｓ）；オブロンギキトリウム種（Ｏｂｌｏｎｇｉｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）；オブロンギキトリウム種（Ｏｂｌｏｎｇｉｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＳＥＫ３４７；パリエティキトリウム・サルカリアヌム（Ｐａｒｉｅｔｉｃｙｔｒｉｕｍ  ｓａｒｋａｒｉａｎｕｍ）；パリエティキトリウム・サルカリアヌム（Ｐａｒｉｅｔｉｃｙｔｒｉｕｍ  ｓａｒｋａｒｉａｎｕｍ）ＳＥＫ３５１；パリエティキトリウム・サルカリアヌム（Ｐａｒｉｅｔｉｃｙｔｒｉｕｍ  ｓａｒｋａｒｉａｎｕｍ）ＳＥＫ３６４；パリエティキトリウム種（Ｐａｒｉｅｔｉｃｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）；パリエティキトリウム種（Ｐａｒｉｅｔｉｃｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）Ｆ３−１；パリエティキトリウム種（Ｐａｒｉｅｔｉｃｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）Ｈ１−１４；パリエティキトリウム種（Ｐａｒｉｅｔｉｃｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＮＢＲＣ１０２９８４；フィトフトラ・インフェスタンス（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｉｎｆｅｓｔａｎｓ）；シゾキトリウム・アグレガタム（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ａｇｇｒｅｇａｔｕｍ）ＤＱ３２３１５９；シゾキトリウム・アグレガタム（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ａｇｇｒｅｇａｔｕｍ）ＤＱ３５６６６１；シゾキトリウム・アグレガタム（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ａｇｇｒｅｇａｔｕｍ）；シゾキトリウム・リマシヌム（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｌｉｍａｃｉｎｕｍ）；シゾキトリウム・リマシヌム（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｌｉｍａｃｉｎｕｍ）ＯＵＣ１６６  ＨＭ０４２９０７；シゾキトリウム・マングローヴァイ（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｍａｎｇｒｏｖｅｉ）；シゾキトリウム・マングローヴァイ（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｍａｎｇｒｏｖｅｉ）ＦＢ１；シゾキトリウム・マングローヴァイ（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｍａｎｇｒｏｖｅｉ）Ｆ���３；シゾキトリウム・マングローヴァイ（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｍａｎｇｒｏｖｅｉ）ＦＢ５；シゾキトリウム・ミヌツム（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｍｉｎｕｔｕｍ）；シゾキトリウム種（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＡＴＣＣ２０８８８  ＤＱ３６７０５０；シゾキトリウム種（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＫＧＳ２  ＫＣ２９７１３７；シゾキトリウム種（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＳＫＡ１０  ＪＱ２４８００９；シゾキトリウム種（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＡＴＣＣ  ２０１１１；シゾキトリウム種（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＡＴＣＣ  ２０８８８；シゾキトリウム種（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＡＴＣＣ  ２０１１１  ＤＱ３２３１５８＊；シゾキトリウム種（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＡＴＣＣ  ２０８８８  ＤＱ３５６６６０；シゾキトリウム種（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＡＴＣＣ  ２０８８９；シゾキトリウム種（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＡＴＣＣ  ２６１８５；シゾキトリウム種（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＢＲ２．１．２；シゾキトリウム種（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＢＵＣＡＡＡ  ０３２；シゾキトリウム種（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＢＵＣＡＡＡ  ０９３；シゾキトリウム種（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＢＵＣＡＣＤ  １５２；シゾキトリウム種（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＢＵＣＡＲＡ  ０２１；シゾキトリウム種（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＢＵＣＨＡＯ  １１３；シゾキトリウム種（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＢＵＲＡＢＱ  １３３；シゾキトリウム種（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＢＵＲＡＲＭ  ８０１；シゾキトリウム種（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＢＵＲＡＲＭ  ８０２；シゾキトリウム種（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＣＣＡＰ  ４０８７／３；シゾキトリウム種（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＣＣＡＰ  ４０８７／１；シゾキトリウム種（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＣＣＡＰ  ４０８７／４；シゾキトリウム種（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＣＣＡＰ  ４０８７／５；シゾキトリウム種（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＦＪＵ−５１２；シゾキトリウム種（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＫＨ１０５；シゾキトリウム種（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＫＫ１７−３；シゾキトリウム種（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＫＲ−５；シゾキトリウム種（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＰＪ１０．４；シゾキトリウム種（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＳＥＫ  ２１０；シゾキトリウム種（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＳＥＫ  ３４５；シゾキトリウム種（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＳＥＫ  ３４６；シゾキトリウム種（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＳＲ２１；シゾキトリウム種（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＴＩＯ０１；シクヨイドキトリウム・ミヌツム（Ｓｉｃｙｏｉｄｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｍｉｎｕｔｕｍ）ＳＥＫ３５４；シクヨイドキトリウム��ミヌツム（Ｓｉｃｙｏｉｄｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｍｉｎｕｔｕｍ）ＮＢＲＣ  １０２９７５；シクヨイドキトリウム・ミヌツム（Ｓｉｃｙｏｉｄｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｍｉｎｕｔｕｍ）ＮＢＲＣ  １０２９７９；スラウストキトリダエ種（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｉｄａｅ  ｓｐ．）ＢＵＲＡＢＧ１６２  ＤＱ１００２９５；スラウストキトリダエ種（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｉｄａｅ  ｓｐ．）ＣＧ９；スラウストキトリダエ種（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｉｄａｅ  ｓｐ．）ＬＹ２０１２  ＪＸ８４７３７８；スラウストキトリダエ種（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｉｄａｅ  ｓｐ．）ＭＢＩＣ１１０９３  ＡＢ１８３６６４；スラウストキトリダエ種（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｉｄａｅ  ｓｐ．）ＮＩＯＳ１  ＡＹ７０５７６９；スラウストキトリダエ種（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｉｄａｅ  ｓｐ．）＃３２  ＤＱ３２３１６１；スラウストキトリダエ種（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｉｄａｅ  ｓｐ．）＃３２  ＤＱ３５６６６３；スラウストキトリダエ種（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｉｄａｅ  ｓｐ．）ＲＴ４９  ＤＱ３２３１６７；スラウストキトリダエ種（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｉｄａｅ  ｓｐ．）ＲＴ４９  ＤＱ３５６６６９；スラウストキトリダエ種（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｉｄａｅ  ｓｐ．）ＲＴ４９；スラウストキトリダエ種（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｉｄａｅ  ｓｐ．）Ｔｈｅｌ２  ＤＱ３２３１６２；スラウストキトリダエ種（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｉｄａｅ  ｓｐ．）Ｔｈｅｌ２；スラウストキトリウム・アグレガタム（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ａｇｇｒｅｇａｔｕｍ）；スラウストキトリウム・アグレガタム（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ａｇｇｒｅｇａｔｕｍ）ＤＱ３５６６６２；スラウストキトリウム・アウレウム（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ａｕｒｅｕｍ）；スラウストキトリウム・アウレウム（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ａｕｒｅｕｍ）ＤＱ３５６６６６；スラウストキトリウム・ガエルトネリウム（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｇａｅｒｔｎｅｒｉｕｍ）；スラウストキトリウム・キンネイ（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｋｉｎｎｅｉ）；スラウストキトリウム・キンネイ（Ｔｈｒ
ａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｋｉｎｎｅｉ）ＤＱ３２３１６５；スラウストキトリウム・モチバム（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｍｏｔｉｖｕｍ）；スラウストキトリウム・マルチルジメンタレ（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｍｕｌｔｉｒｕｄｉｍｅｎｔａｌｅ）；スラウストキトリウム・パキデルマム（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｐａｃｈｙｄｅｒｍｕｍ）；スラウストキトリウム・ローゼウム（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｒｏｓｅｕｍ）；スラウストキトリウム種（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）１３Ａ４．１；スラウストキトリウム種（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＡＴＣＣ  ２６１８５；スラウストキトリウム種（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＢＬ１３；スラウストキトリウム種（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＢＬ１４；スラウストキトリウム種（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＢＬ２；スラウストキトリウム種（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＢＬ３；スラウストキトリウム種（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＢＬ４；スラウストキトリウム種（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＢＬ５；スラウストキトリウム種（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＢＬ６；スラウストキトリウム種（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＢＬ７；スラウストキトリウム種（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＢＬ８；スラウストキトリウム種（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＢＬ９；スラウストキトリウム種（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＢＰ３．２．２；スラウストキトリウム種（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＢＰ３．３．３；スラウストキトリウム種（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）カウディボラム（ｃａｕｄｉｖｏｒｕｍ）；スラウストキトリウム種（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＣＨＮ−１；スラウストキトリウム種（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＦＪＮ−１０；スラウストキトリウム種（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＨＫ１；スラウストキトリウム種（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＨＫ１０；スラウストキトリウム種（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＨＫ５；スラウストキトリウム種（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＨＫ８；スラウストキトリウム種（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＨＫ８ａ；スラウストキトリウム種（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＫＫ１７−３；スラウストキトリウム種（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＫＬ１；スラウストキトリウム種（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＫＬ２；スラウストキトリウム種（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＫＬ２ａ；スラウストキトリウム種（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＯＮＣ−Ｔ１８；スラウストキトリウム種（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＰＪＡ１０．２；スラウストキトリウム種（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＴＲ１．４；スラウストキトリウム種（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＴＲＲ２；スラウストキトリウム・ストリアタム（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｔｒｉａｔｕｍ）；スラウストキトリウム・ストリアタム（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｔｒｉａｔｕｍ）ＡＴＣＣ２４４７３；スラウストキトリウム・ストリアタム（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｔｒｉａｔｕｍ）ＤＱ３２３１６３；スラウストキトリウム・ストリアタム（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｔｒｉａｔｕｍ）ＤＱ３５６６６５；スラウストキトリウム・ビスルゲンス（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｖｉｓｕｒｇｅｎｓｅ）；ウルケニア・アモエボイデア（Ｕｌｋｅｎｉａ  ａｍｏｅｂｏｉｄｅａ）ＳＥＫ  ２１４；ウルケニア・プロフンダ（Ｕｌｋｅｎｉａ  ｐｒｏｆｕｎｄａ）；ウルケニア・プロフンダ（Ｕｌｋｅｎｉａ  ｐｒｏｆｕｎｄａ）ＢＵＴＲＢＧ  １１１；ウルケニア種（Ｕｌｋｅｎｉａ  ｓｐ．）；ウルケニア種（Ｕｌｋｅｎｉａ  ｓｐ．）ＡＴＣＣ  ２８２０７；ウルケニア・ビスルゲンシス（Ｕｌｋｅｎｉａ  ｖｉｓｕｒｇｅｎｓｉｓ）；ウルケニア・ビスルゲンシス（Ｕｌｋｅｎｉａ  ｖｉｓｕｒｇｅｎｓｉｓ）ＢＵＲＡＡＡ  １４１；ウルケニア・ビスルゲンシス（Ｕｌｋｅｎｉａ  ｖｉｓｕｒｇｅｎｓｉｓ）ＡＴＣＣ  ２８２０８の種から選択されてもよい。
【００３１】
好ましくは、本発明によれば、スラウストキトリッドは、オーランチオキトリウム（ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｄｓ）属およびＳｃｈｙｚｏｃｈｉｔｒｉｕｍ（シゾキトリウム）属から選択されてもよく、好ましくは、
ＣＣＡＰに２０１４年５月２０日に寄託されたオーランチオキトリウム・マングローヴァイ（Ａｕｒａｎｔｉｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｍａｎｇｒｏｖｅｉ）ＣＣＡＰ  ４０６２／２、
ＣＣＡＰに２０１４年５月２０日に寄託されたオーランチオキトリウム・マングローヴァイ（Ａｕｒａｎｔｉｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｍａｎｇｒｏｖｅｉ）ＣＣＡＰ  ４０６２／３、
ＣＣＡＰに２０１４年５月２０日に寄託されたオーランチオキトリウム・マングローヴァイ（Ａｕｒａｎｔｉｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｍａｎｇｒｏｖｅｉ）ＣＣＡＰ  ４０６２／４、
ＣＣＡＰに２０１４年５月２０日に寄託されたオーランチオキトリウム・マングローヴァイ（Ａｕｒａｎｔｉｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｍａｎｇｒｏｖｅｉ）ＣＣＡＰ  ４０６２／５、
ＣＣＡＰに２０１４年５月２０日に寄託されたオーランチオキトリウム・マングローヴァイ（Ａｕｒａｎｔｉｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｍａｎｇｒｏｖｅｉ）ＣＣＡＰ  ４０６２／６、
ＣＣＡＰに２０１３年６月２１日に寄託されたオーランチオキトリウム（Ａｕｒａｎｔｉｏｃｈｙｔｒｉｕｍ）ＣＣＡＰ  ４０６２／１、
ＣＣＡＰに２０１４年５月２０日に寄託されたシゾキトリウム種（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ）ＣＣＡＰ  ４０８７／３、
ＣＣＡＰに２０１２年２月２８日に寄託されたシゾキトリウム種（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ）ＣＣＡＰ  ４０８７／１、
ＣＣＡＰに２０１４年５月２０日に寄託されたシゾキトリウム種（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ）ＣＣＡＰ  ４０８７／４、および
ＣＣＡＰに２０１４年５月２０日に寄託されたシゾキトリウム種（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ）ＣＣＡＰ  ４０８７／５
の種から選択されてもよい。
【００３２】
全ての寄託は、ブダペスト条約の条項の下、ＣＣＡＰ（ＣＵＬＴＵＲＥ  ＣＯＬＬＥＣＴＩＯＮ  ＯＦ  ＡＬＧＡＥ  ＡＮＤ  ＰＲＯＴＯＺＯＡ（ＣＣＡＰ）、ＳＡＭＳ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ  Ｌｔｄ．、Ｓｃｏｔｔｉｓｈ  Ｍａｒｉｎｅ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、ＯＢＡＮ、Ａｒｇｙｌ  ＰＡ３７  １ＱＡ、英国）に行った。
【００３３】
本発明の好ましい変形によれば、前記バイオマスは、
−  オーランチオキトリウム（ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｄｓ）およびＳｃｈｙｚｏｃｈｉｔｒｉｕｍ（シゾキトリウム）の属から、好ましくは、オーランチオキトリウム・マングローヴァイ（Ａｕｒａｎｔｉｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｍａｎｇｒｏｖｅｉ）ＣＣＡＰ  ４０６２／２；オーランチオキトリウム・マングローヴァイ（Ａｕｒａｎｔｉｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｍａｎｇｒｏｖｅｉ）ＣＣＡＰ  ４０６２／３；オーランチオキトリウム・マングローヴァイ（Ａｕｒａｎｔｉｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｍａｎｇｒｏｖｅｉ）ＣＣＡＰ  ４０６２／４；オーランチオキトリウム・マングローヴァイ（Ａｕｒａｎｔｉｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｍａｎｇｒｏｖｅｉ）ＣＣＡＰ  ４０６２／５；オーランチオキトリウム・マングローヴァイ（Ａｕｒａｎｔｉｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｍａｎｇｒｏｖｅｉ）ＣＣＡＰ  ４０６２／６；オーランチオキトリウム・マングローヴァイ（Ａｕｒａｎｔｉｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｍａｎｇｒｏｖｅｉ）ＣＣＡＰ  ４０６２／１；シゾキトリウム種（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＣＣＡＰ  ４０８７／３；シゾキトリウム種（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＣＣＡＰ  ４０８７／１；シゾキトリウム種（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＣＣＡＰ  ４０８７／４；シゾキトリウム種（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＣＣＡＰ  ４０８７／５の種から選択されてもよい、スラウストキトリッド；ならびに
−  乾燥物質の重量に対して、重量で、少なくとも３５％のタンパク質、好ましくは少なくとも４５％のタンパク質（これは、６０％超までのタンパク質、実際には７５％超のタンパク質、特に４５％〜７５％のタンパク質の範囲であってもよい）のタンパク質含量；
−  乾燥物質の重量に対して、重量で、２０％未満、好ましくは１０％未満、よりに好ましくは７％未満の脂質含量；および
−  ７０％〜９０％、好ましくは８０％〜８５％の乾燥前の水分含量、または１％〜１０％、好ましくは２％〜７％の乾燥後の水分含量；を有する、
バイオマスであってもよい。
【００３４】
本発明は、目的として、
ａ）適切な培養液中で、タンパク質の産生を、少なくとも３５％のタンパク質、好ましくは少なくとも４５％のタンパク質（これは、６０％超までのタンパク質、実際には７５％超のタンパク質、特に、４５％〜７５％のタンパク質の範囲であってもよい）のレベルで、促進することができ、かつ場合により、脂質の産生を、乾燥物質の重量に対して、重量で、２０％未満の脂質、好ましくは１０％未満の脂質、より好ましくは７％未満の脂質のレベルに制限する条件下、少なくとも４０ｇ／Ｌ乾燥物質、好ましくは少なくとも６０ｇ／Ｌ、より好ましくは少なくとも８０ｇ／Ｌの培養密度が得られるまで、スラウストキトリッドを培養する第一工程；
ｂ）第一工程で得られたバイオマスを、培養液から、前記バイオマスを分離することによって回収する第二工程；ならびに、必要により、
ｃ）第二工程で回収したバイオマスを乾燥する第三工程；
を含む、前記に記載のバイオマスを製造するための方法も含む。
【００３５】
好ましくは、スラウストキトリッドを培養する工程ａ）は、培養液中、タンパク質の産生を促進し、かつ脂質の産生を制限するために適切な条件下、行われる。
【００３６】
本発明によれば、前記適切な培養液は、好ましくは、炭素源、窒素源、リン源および塩を含む、化学的に定義された培養液である。
【００３７】
本発明によれば、「化学的に定義された培養液」という用語は、それぞれの要素の内容が公知の培養液を指す。正確には、本発明は、豊富または複雑な有機物を含まない培養液を対象とする。「豊富または複雑な有機物」という表現は、未精製の有機物を指し、混合物の種々の成分の正確な組成および濃度が正確に公知ではなく、制御されておらず、かつ一つのバッチから別のバッチへの大きな変動性を有し得る、混合物として表される。豊富または複雑な有機物の例として、それぞれの成分が固定された濃度を有さない、タンパク質の加水分解反応の産物である酵母抽出物もしくはペプトン、または、例えば海洋無機塩もしくは他の複合成長剤などのミネラルが豊富な物質が挙げられる。
【００３８】
本発明によれば、前記定義の培養液は、カルシウム、コバルト、マンガン、マグネシウム、亜鉛、ニッケル、銅、カリウム、鉄およびナトリウム塩、ならびにこれらの混合物から選択される塩を含んでいてもよい。
【００３９】
有利には、前記塩は、塩化カルシウム、塩化コバルト、塩化マンガン、硫酸マグネシウム、硫酸亜鉛、硫酸ニッケル、硫酸銅、硫酸カリウム、硫酸鉄、モリブデン酸ナトリウム、亜セレン酸ナトリウム、塩化ナトリウムおよびこれらの混合物から選択されてもよい。
【００４０】
本発明の変形によれば、および使用される株によれば、培養液はまた、とりわけ海洋起源の特定の株に対しては、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）を含んでいてもよい。
【００４１】
この変形によれば、塩化ナトリウムを含んでいてもよい培養液を許容し得る海洋株の例として、シゾキトリウム種（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）株、特に、シゾキトリウム種（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＣＣＡＰ  ４０６２／３株が挙げられる。
【００４２】
本発明の別の変形によれば、および使用される株によれば、培養液は、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）を含まなくてもよく、３．５ｇ／Ｌ未満、好ましくは１ｇ／Ｌ未満、より好ましくは１０ｍｇ／Ｌ未満のナトリウムイオン、および１ｇ／Ｌ未満、好ましくは５００ｍｇ／Ｌ未満、より好ましくは２００ｍｇ／Ｌ未満の塩化物イオンを有する、非常に少量の塩化ナトリウムを少なくとも含んでいてもよい。
【００４３】
この変形によれば、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）を含んでいなくてもよい培養液、非常に少量の塩化ナトリウムを少なくとも含んでいてもよい培養液を許容し得る株の例として、オーランチオキトリウム・マングローヴァイ（Ａｕｒａｎｔｉｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｍａｎｇｒｏｖｅｉ）株、特に、オーランチオキトリウム・マングローヴァイ（Ａｕｒａｎｔｉｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｍａｎｇｒｏｖｅｉ）ＣＣＡＰ  ４０６２／５株が挙げられる。
【００４４】
本発明によれば、前記定義の培養液の炭素源は、一つもしくは複数の炭水化物、一つもしくは複数のアセテート、一つもしくは複数のアルコール、一つもしくは複数の錯体分子、または少なくとも二つのこれらの供給源の任意の割合の任意の混合物であってもよい。
【００４５】
本発明によれば、前記定義の培養液の前記窒素源は、一つもしくは複数の硝酸塩、一つもしくは複数のグルタミン酸塩、一つもしくは複数のアンモニウム塩、尿素、アンモニア、または少なくとも二つのこれらの供給源の任意の割合の任意の混合物から選択されてもよい。
【００４６】
本発明によれば、前記定義の培養液のリン源は、リン酸、リン酸塩、有利には、リン酸水素ナトリウム（Ｎａ２ＨＰＯ４）、もしくはリン酸二水素ナトリウム（ＮａＨ２ＰＯ４）、またはリン酸二水素カリウム（ＫＨ２ＰＯ４）もしくは、リン酸水素カリウム（Ｋ２ＨＰＯ４）、あるいは、少なくとも二つのこれらの供給源の任意の割合の任意の混合物から選択されてもよい。
【００４７】
本発明の変形によれば、前記培養液は、塩化マグネシウム、有利には、四水和物の形態（ＭｇＣｌ２・４Ｈ２Ｏ）；塩化カルシウム、有利には、二水和物の形態（ＣａＣｌ２・２Ｈ２Ｏ）；塩化コバルト六水和物（ＣｏＣｌ２・６Ｈ２Ｏ）；塩化マンガン（ＩＩ）四水和物（ＭｎＣｌ２・４Ｈ２Ｏ）；硫酸マグネシウム七水和物（ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ）；硫酸亜鉛七水和物（ＺｎＳＯ４・７Ｈ２Ｏ）；硫酸ニッケル六水和物（ＮｉＳＯ４・６Ｈ２Ｏ）；硫酸銅五水和物（ＣｕＳＯ４・５Ｈ２Ｏ）；硫酸カリウム（Ｋ２ＳＯ４）；硫酸鉄七水和物（ＦｅＳＯ４・７Ｈ２Ｏ）；ホウ酸（Ｈ３ＢＯ３）；エチレンジアミン四酢酸の二ナトリウム二水和物の形態（Ｎａ２ＥＤＴＡ・２Ｈ２Ｏ）；モリブデン酸ナトリウム二水和物（Ｎａ２ＭｏＯ４・２Ｈ２Ｏ）；亜セレン酸ナトリウム（Ｎａ２ＳｅＯ３）；ビタミンとして、チアミン、コバラミンもしくはビタミンＢ１２、パントテン酸塩もしくはビタミンＢ５；炭素源；窒素源；リン源を含んでいてもよい。
【００４８】
本発明の好ましい形態によれば、前記培養液中において、塩化マグネシウムは、０．００８〜０．０１２ｇ／Ｌ、有利には、０．００９〜０．０１１ｇ／Ｌの濃度であってよく；塩化カルシウムは、０．４０〜０．７０ｇ／Ｌ、有利には、０．５０〜０．６０ｇ／Ｌの濃度であってよく；塩化コバルト六水和物は、０．００００８〜０．０００１３ｇ／Ｌ、有利には、０．００００９〜０．０００１２ｇ／Ｌの濃度であってよく；塩化マンガン（ＩＩ）四水和物は、０．００８〜０．０１３ｇ／Ｌ、有利には、０．００９〜０．０１２ｇ／Ｌの濃度であってよく；硫酸マグネシウム七水和物は、６〜１０ｇ／Ｌ、有利には、７〜９ｇ／Ｌの濃度であってよく；硫酸亜鉛七水和物は、０．００８〜０．０１３ｇ／Ｌ、有利には、０．００９〜０．０１２ｇ／Ｌの濃度であってよく；硫酸ニッケル六水和物は、０．００４〜０．００７ｇ／Ｌ、有利には、０．００５〜０．００６ｇ／Ｌの濃度であってよく；硫酸銅五水和物は、０．００５〜０．００９ｇ／Ｌ、有利には、０．００６〜０．００８ｇ／Ｌの濃度であってよく；硫酸カリウムは、０．５〜３．５ｇ／Ｌ、有利には、１〜３ｇ／Ｌの濃度であってよく；硫酸鉄七水和物は、０．０３〜０．０５ｇ／Ｌ、有利には、０．０３５〜０．０４５ｇ／Ｌの濃度であってよく；ホウ酸は、０．０１５５〜０．０１９５ｇ／Ｌ、有利には、０．０１６５〜０．０１８５ｇ／Ｌの濃度であってよく；エチレンジアミン四酢酸の二ナトリウム二水和物の形態は、０．１０〜０．１４ｇ／Ｌ、有利には、０．１１〜０．１３ｇ／Ｌの濃度であってよく；モリブデン酸ナトリウム二水和物は、０．００００１〜０．０００３ｇ／Ｌ、有利には、０．００００５〜０．０００２ｇ／Ｌの濃度であってよく；亜セレン酸ナトリウムは、０．００００００１５〜０．００００１９ｇ／Ｌ、有利には、０．００００００１６〜０．００００００１８ｇ／Ｌの濃度であってよく；チアミンは、０．０１５〜０．０５ｇ／Ｌ、有利には、０．０２５〜０．０４ｇ／Ｌの濃度であってよく；コバラミンもしくはビタミンＢ１２は、０．０００４〜０．０００６５ｇ／Ｌ、有利には、０．０００４５〜０．０００６０ｇ／Ｌの濃度であってよく；パントテン酸塩もしくはビタミンＢ５は、０．００８〜０．０１３ｇ／Ｌ、有利には、０．００９〜０．０１２ｇ／Ｌの濃度であってよく；炭素源は、４５〜６５ｇ／Ｌ、有利には、５０〜６０ｇ／Ｌの濃度であってよく；窒素源は、７〜１１ｇ／Ｌ、有利には、８〜１０ｇ／Ｌの濃度であってよく；リン源は、２〜６ｇ／Ｌ、有利には、３〜５ｇ／Ｌの濃度であってよい。
【００４９】
より好ましくは、本発明によれば、前記培養液中において、塩化マグネシウムは、０．０１０８ｇ／Ｌの濃度であり；塩化カルシウムは、０．５５ｇ／Ｌの濃度であり；塩化コバルト六水和物（ＣｏＣｌ２・６Ｈ２Ｏ）は、０．０００１０８ｇ／Ｌの濃度であり；塩化マンガン（ＩＩ）四水和物は、０．０１０８ｇ／Ｌの濃度であり；硫酸マグネシウム七水和物は、８．０１ｇ／Ｌの濃度であり；硫酸亜鉛七水和物は、０．０１０８ｇ／Ｌの濃度であり；硫酸ニッケル六水和物は、０．００５６ｇ／Ｌの濃度であり；硫酸銅五水和物は、０．００７２ｇ／Ｌの濃度であり；硫酸カリウムは、２．０９ｇ／Ｌの濃度であり；硫酸鉄七水和物は、０．０４ｇ／Ｌの濃度であり；ホウ酸は、０．０１７５ｇ／Ｌの０．０１５５〜０．０１９５ｇ／Ｌ間で構成される濃度であり；エチレンジアミン四酢酸の二ナトリウム二水和物の形態は、０．１２ｇ／Ｌの濃度であり；モリブデン酸ナトリウム二水和物は、０．０００１０８ｇ／Ｌの濃度であり；亜セレン酸ナトリウムは、０．００００００１７３ｇ／Ｌの濃度であり；チアミンは、０．０３２ｇ／Ｌの濃度であり；コバラミンもしくはビタミンＢ１２は、０．０００５２ｇ／Ｌの濃度であり；パントテン酸塩もしくはビタミンＢ５は、０．０１０８ｇ／Ｌの濃度であり；炭素源は、５５ｇ／Ｌの濃度であり；窒素源は、９ｇ／Ｌの濃度であり；リン源は、４ｇ／Ｌの濃度である。
【００５０】
本発明によれば、方法の第一の培養工程ａ）は、いわゆる「バッチ式」の不連続方式、いわゆる「フェッドバッチ式」の半連続方式、または連続方式で行われてもよい。
【００５１】
本発明の具体的な実施形態によれば、第一工程は、ａ１）適切な培養液中での第一の増殖のサブ工程、続いて、ａ２）増殖を制限しない窒素およびリンのレベルを培養液中で維持するように、一つまたは複数の炭素源、窒素源および／またはリン源の濃縮溶液を、同時にまたは連続して、培養液に添加してもよい、第二の産生のサブ工程の、二つのサブ工程に分けられる。
【００５２】
好ましい実施形態によれば、増殖のサブ工程ａ１）は、２０ｇ／Ｌ未満の炭素源、より具体的にはグルコースの濃度が得られるまで行われる。
【００５３】
別の実施形態によれば、増殖のサブ工程ａ１）は、少なくとも２０ｇ／Ｌ、好ましくは少なくとも４０ｇ／Ｌ、より好ましくは少なくとも６０ｇ／Ｌ、さらにより好ましくは少なくとも８０ｇ／Ｌの培養密度が得られるまで行われる。
【００５４】
工程ａ２）における窒素源の非限定的なレベルは、有利には０．５〜５ｇ／Ｌ、好ましくは０．５〜２ｇ／Ｌであり、リン源の非限定的なレベルは、有利には０．５〜５ｇ／Ｌ、好ましくは０．５〜２ｇ／Ｌである。この工程ａ２）のために要求される炭素源の含量は、０〜２００ｇ／Ｌ、とりわけ、５または１０〜５０ｇ／Ｌであってもよい。好ましくは、サブ工程ａ２）における炭素源の含量は、０〜５０ｇ／Ｌ、より好ましくは０〜１０ｇ／Ｌである。
【００５５】
好ましくは、上記に定義されるサブ工程ａ１）およびａ２）に分割される第一工程ａ）の培養は、いわゆる「フェッドバッチ式」の半連続方式で行われる。
【００５６】
２０ｇ／Ｌ超、特に、８０ｇ／Ｌ超の密度で、スラウストキトリッドの増殖を可能にするための適切な方法および培養液は、当業者に周知である。
【００５７】
本発明によれば、培養は、任意の公知の培養技術、例えばフラスコまたは反応器中において行ってもよいだけでなく、発酵槽または前記技術を必要な培養条件で行うことを可能にすることを提供する、例えば、「流路」タイプのボウルのような、原生生物、特にスラウストキトリッドの増殖に適切な任意の容器中で行ってもよい。
【００５８】
好ましくは、培養は、発酵槽中での原生生物の培養のための公知の方法に従って、発酵槽中で行われる。
【００５９】
本発明によれば、前記バイオマスを回収するための方法の第二工程ｂ）は、要求される水分含量を有し得るバイオマスを得るための適切な条件下で行ってもよい。
【００６０】
原生生物の前記回収は、バイオマスの回収が可能な任意の技術、とりわけ、重量（ｇｒａｖｉｍｅｔｒｉｃ）ろ過もしくは減圧下でのろ過、遠心分離、デカンテーションの方法、または、さらに、沈殿と続く重量ろ過の方法によって行ってもよい。
【００６１】
本発明は、目的として、全てのそれらの変形において、上記に記載の本発明による方法によって得ることができるバイオマスも含む。
【００６２】
本発明は、目的として、ヒトまたは動物の化粧品、医薬品または食品の分野における、上記に記載のバイオマスの使用も含む。
【００６３】
特に、動物の能力を改善するための、上記および下記に記載の本発明によるスラウストキトリッドバイオマスの使用に関する。この能力の改善は、特に、食物摂取、体重増加または飼料要求率を測定することによって、評価してもよい。
【００６４】
動物の給餌において、家畜類の給餌、特に、集中的な家畜類の作業は、家畜またはペット、あるいは水族館の魚または鳥小屋もしくは飼育された鳥類などの、いわゆる「レジャー（ｌｅｉｓｕｒｅ）」動物とは区別される。
【００６５】
「家畜類」という用語は、とりわけ、放牧動物（特に、食肉、牛乳、チーズおよび皮革のために飼育されるウシ；食肉、羊毛およびチーズのために飼育されるヒツジ；ヤギ）、ブタ、ウサギ、家禽（ニワトリ、メンドリ、七面鳥、カモ、ガチョウなど）、ウシ科の一員（ポニー、ウマ、コウマ）、ヒトの活動（輸送、レジャー）もしくはその飼育を支援する動物、水生動物（例えば、魚、エビ、カキおよびムール貝）を指す。しかしながら、稚魚までの魚の飼料は、それを意図する飼料および飼料組成物を含む、養殖魚のものとは区別され得る。
【００６６】
哺乳動物、反芻動物も含むか、または含まない、家畜、ペットおよびレジャー動物は、鳥類および魚と区別される。これらは、特に、イヌおよびネコを含む。
【００６７】
本発明は、目的として、上記に記載の本発明によるバイオマスを含んでいてもよい、ヒトまたは動物のための、食品または食品組成物も含む。「食品」という用語は、ヒトまたは動物、特に、家畜類のための食品として使用され得る、任意の組成物を指す。
【００６８】
本発明によれば、食品は、乾燥されてもよく、形質転換されてもよい、バイオマスのみを含んでいてもよく、あるいは、例えば、食品保存剤、染料、調味料、ｐＨ調節剤、または、例えば、成長ホルモン、抗生物質などの医薬添加剤などの、ヒトまたは動物の食物摂取のための食品の分野において使用される、任意の他の添加剤、担体または補助剤と混合された、乾燥されてもよく、形質転換されてもよいバイオマスを含んでいてもよい。
【００６９】
本発明は、特に、動物、より具体的には家畜類のための飼料に関係する。これらの飼料は、典型的には、本発明によるバイオマスが組み込まれる、粉末、ペレットまたは残飯の形態であると思われる。「飼料」という用語は、動物に給餌するために使用され得るものを指す。
【００７０】
集中的な動物の飼育作業のために、飼料は、藻類のバイオマスに加えて、栄養基剤および栄養添加剤を含んでいてもよい。したがって、動物の飼料の割当量の必須部分は、「栄養基剤」および藻類のバイオマスからなる。この基剤は、例として、穀類、動物および／または植物起源のタンパク質および脂質の混合物からなる。
【００７１】
動物のための栄養基剤は、これらの動物の給餌に適合し、当業者にとって周知である。本発明の文脈において、これらの栄養基剤は、例えば、トウモロコシ、コムギ、エンドウおよびダイズを含む。これらの栄養基剤は、これらが意図する様々な動物種の要求に適合している。これらの栄養基剤は、ビタミン、無機塩およびアミノ酸などの栄養添加剤を既に含有していてもよい。
【００７２】
動物飼料において使用される添加剤は、飼料の特定の特徴を改善するため、例えば、その風味を増強するため、動物にとって飼料の原料物質をより消化性にするため、または動物を保護するために、添加されてもよい。これらは、大規模な集中的な飼育作業において頻繁に使用される。
【００７３】
動物飼料において使用される添加剤は、特に、以下のサブカテゴリーに分けることができる（出典：ＥＦＳＡ）：
−  技術的添加剤：例えば、保存剤、抗酸化剤、乳化剤、安定剤、酸味調整剤およびサイレージ添加剤；
−  知覚的添加剤：例えば、香味剤、染料；
−  栄養添加剤：例えば、ビタミン、アミノ酸および微量元素；
−  畜産学的添加物：例えば、消化性増強剤、腸内フローラ安定剤；
−  抗コクシジウム剤および抗ヒストモナス剤（殺虫剤）。
【００７４】
実施形態において、本発明は、本発明による方法によって得られる乾燥バイオマスを、１％〜６０％、好ましくは１％〜２０％、より好ましくは３％〜８％含む、家畜類の飼料に関する。
【００７５】
別の実施形態において、本発明は、本発明の方法によって得られる未乾燥バイオマスを、１％〜４０％、好ましくは５％〜１０％含む、家畜類の飼料に関する。
【００７６】
本発明の具体的な実施形態によれば、飼料は、家畜類、特に、ウシ、ヒツジ、ブタ、ウサギ、家禽およびウマを対象としている。
【００７７】
本発明の別の具体的な実施形態によれば、飼料は、特に、少なくとも稚魚段階までの魚、実際には養殖魚を含む、水生動物を対象としている。
【００７８】
本発明の別の具体的な実施形態によれば、飼料は、家畜、ペットおよび／またはレジャー動物を対象としている。
【００７９】
最後に、本発明の別の実施形態によれば、食品組成物は、ヒトを対象としている。
【００８０】
本発明は、目的として、上記に記載の本発明によるバイオマスを含む、ヒトまたは動物のための、化粧品または医薬組成物も含む。
【００８１】
本発明によれば、化粧品または医薬組成物は、乾燥されてもよく、形質転換されてもよい、バイオマスのみを含んでいてもよく、あるいは、例えば、保存剤、染料、ｐＨ調節剤などの、化粧品または医薬品の分野において使用される、任意の他の添加剤、担体または補助剤と混合された、乾燥されてもよく、形質転換されてもよいバイオマスを含んでいてもよい。
【００８２】
本発明は、目的として、治療、ならびに栄養不良の予防および治療における上記に記載のバイオマスの使用も含む。
【図面の簡単な説明】
【００８３】
【図１】２３日齢のニワトリにおける見かけの代謝エネルギー（ＡＭＥ）の測定の実験設計（試験１４ＡＬＧ０６９）。
【図２】ヒナ（７日齢および９日齢）の選択試験および食物摂取試験の実験設計（試験１４ＡＬＧ０８１）。
【図３】選択条件下（トウモロコシ−ダイズの飼料−対−５％、１０％および１５％の試験された微細藻類で置き換えた飼料）、７日齢での飼料の摂取の測定（試験１４ＡＬＧ０８１）。
【図４】選択条件下（トウモロコシ−ダイズの飼料−対−５％、１０％および１５％の試験された微細藻類で置き換えた飼料）、９日齢での飼料の摂取の測定（試験１４ＡＬＧ０８１）。
【図５】選択条件下（トウモロコシ−ダイズの飼料−対−５％、１０％および１５％の試験された微細藻類で置き換えた飼料）、二つの試験（７日および９日）にわたる、平均の相対飼料摂取の測定（試験１４ＡＬＧ０８１）。
【図６】対照のトウモロコシ−ダイズの食餌−対−５％、１０％および１５％の試験された微細藻類で置き換えた飼料を給餌された（選択条件下ではない）、０〜７日齢のヒナの成長能力（食物摂取、体重増加、飼料要求率）の測定（試験１４ＡＬＧ０８１）。
【図７】対照のトウモロコシ−ダイズの食餌−対−５％、１０％および１５％の試験された微細藻類で置き換えた飼料を給餌された（選択条件下ではない）、０〜９日齢のヒナの成長能力（食物摂取、体重増加、飼料要求率）の測定（試験１４ＡＬＧ０８１）。
【実施例】
【００８４】
本発明の他の態様および特徴は、以下の実施例の解釈することにより、かつそれを記載する添付の図面において、明らかにされる。
【００８５】
図１は、２３日齢のニワトリにおける見かけの代謝エネルギー（ＡＭＥ）の測定の実験設計を示す（試験１４ＡＬＧ０６９）。約３００羽の１日齢のオスのヒナ（ＲｏｓｓＰＭ３）を、同じ低密度の囲いに入れ、コムギ、トウモロコシおよびダイズミールを含有する標準のスターターを給餌した。１３日齢で、ニワトリを、体重測定および体重群に分ける前に、２時間、飢えさせる。このようにして、１２０羽のニワトリを、それらの体重に従って、選択し、個別の代謝ケージに入れ、実験処置の一つに割り当てる（食餌当たり２０反復）。
【００８６】
飼料および水は、試験中を通じて、自由に与える。実験飼料は、３．２ｍｍの直径のペレットとして与える。食餌および代謝ケージに７日間適応させた後、１７時間の絶食を挟む、全排泄物の回収期間を、２０日から２３日までの３日間行った。排泄物を、各日に個別に回収し、一緒にして、−２０℃で保管する。試験の最後に、回収した排泄物を凍結乾燥し、次いで、重量測定、粉砕（０．５ｍｍ）および分析の前に、水分含量を安定化するために、水の取り込みフェーズ（４８時間）の間、室温で放置する。
【００８７】
図２は、ヒナ（７日齢および９日齢）の選択試験および食物摂取試験の実験設計を示す（試験１４ＡＬＧ０８１）。二つの実験の試験を、並行して行った。 
【００８８】
１）試験１−選択試験：飼料の選択による試験のために、約２００羽の１日齢のオスのヒナ（ＲｏｓｓＰＭ３）を、分割された代謝ケージに、約２０羽の群で入れ、コムギ、トウモロコシおよびダイズミールを含有する標準のスターターを給餌した。６日齢で、ニワトリを、体重測定および体重群に分ける前に、２時間、飢えさせる。このようにして、１２０羽のニワトリを、選択し、３０個の分割された代謝ケージに、４羽の群で入れ、７日目に、それらの体重に従って実験処置の一つに割り当てる（処置あたり１０反復）。各ケージは、以下の三つの実験処置に対応する、異なる飼料を含有する二つの給餌皿を備える。
・処置１：トウモロコシ−ダイズスターター（給餌皿１）および５％微細藻類（給餌皿２）
・処置２：トウモロコシ−ダイズスターター（給餌皿１）および１０％微細藻類（給餌皿２）
・処置３：トウモロコシ−ダイズスターター（給餌皿１）および１５％微細藻類（給餌皿２）
【００８９】
飼料および水は、試験中を通じて、自由に与える。実験飼料は、３．２ｍｍの直径のペレットとして与える。食物摂取を、１時間ごとに切り替えるケージ内の給餌皿を用いて、７日齢および９日齢で、Ｔ０＋１ｈ、Ｔ０＋２ｈ、Ｔ０＋３ｈ、Ｔ０＋４ｈおよびＴ０＋６ｈに測定する。２回の食物摂取の測定の間（８日目）、動物は、コムギ−トウモロコシ−ダイズスターターを与えられる。
【００９０】
２）試験２−食物摂取の測定：第二の試験において、ヒナは、場合により、微細藻類が補給された、一種類の飼料のみが利用可能である（図６）。約４００羽の１日齢のオスのヒナ（ＲｏｓｓＰＭ３）を、体重測定し、体重群に分けた。２４０羽の選択された動物を、１日目に、均一な重量のブロックで（４ケージの１５ブロック）、実験飼料をそれぞれ有する、ケージあたり一つの給餌皿を有する６０個の分割されていないケージに、４羽の群で、入れる（飼料あたり１５反復）。各ケージにおいて、４羽のヒナを、個々に識別する。飼料および水は、試験中を通じて、自由に与える。実験飼料は、飼料の選択による試験１においても使用された微細藻類を、０％、５％、１０％または１５％補給したトウモロコシ−ダイズスターターである。個々の生体の体重を、１、７および９日齢で測定する。未摂取の飼料の重量を測定し、ケージあたりの食物摂取を、７および９日齢で測定する。０〜７日齢で、１０％の微細藻類を含有する飼料を給餌された動物は、対照および他の二つの補給された食餌と比較して、顕著に改善された体重増加を有する。
【００９１】
図３は、選択条件下（トウモロコシ−ダイズの飼料−対−５％、１０％および１５％の試験された微細藻類で置き換えた飼料）、７日齢での飼料の摂取の測定を示す（試験１４ＡＬＧ０８１）。
【００９２】
図４は、選択条件下（トウモロコシ−ダイズの飼料−対−５％、１０％および１５％の試験された微細藻類で置き換えた飼料）、９日齢での飼料の摂取の測定を示す（試験１４ＡＬＧ０８１）。
【００９３】
図５は、選択条件下（トウモロコシ−ダイズの飼料−対−５％、１０％および１５％の試験された微細藻類で置き換えた飼料）、二つの試験（７日および９日）にわたる、平均の相対飼料摂取の測定を示す（試験１４ＡＬＧ０８１）。
【００９４】
図６は、対照のトウモロコシ−ダイズの食餌−対−５％、１０％および１５％の試験された微細藻類で置き換えた飼料を給餌された（選択条件下ではない）、０〜７日齢のヒナの成長能力（食物摂取、体重増加、飼料要求率）の測定を示す（試験１４ＡＬＧ０８１）。
【００９５】
図７は、対照のトウモロコシ−ダイズの食餌−対−５％、１０％および１５％の試験された微細藻類で置き換えた飼料を給餌された（選択条件下ではない）、０〜９日齢のヒナの成長能力（食物摂取、体重増加、飼料要求率）の測定を示す（試験１４ＡＬＧ０８１）。
【００９６】
実施例１−株の培養
株の前培養：
オーランチオキトリウム・マングローヴァイ（Ａｕｒａｎｔｉｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｍａｎｇｒｏｖｅｉ）の前培養を、窒素源として、４ｇの酵母エキス、および炭素源として３０ｇのグルコースを含有する前培養の培養液中、温度管理された筐体内（２６℃）のシェーカー台（１４０ｒｐｍ）において準備する。４８時間のインキュベーション後、細胞を、３０００ｇで５分間遠心分離し、細胞ペレットを、酵母エキスもいずれの他のミネラル源または有機窒素源も含有していない、前培養の培養液でリンスする。この操作の目的は、酵母エキスの添加による、本培養中の任意のＮａ＋の供給を避けるためである。前培養は、本溶液の培養容積の１／１００（ｖ／ｖ）に相当する。シゾキトリウム種（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＣＣＡＰ  ４０６２／３株の場合において、２７ｇ／ＬのＮａＣｌを、この培養液に添加する。
【００９７】
培養のモニタリング：
総バイオマス濃度を、乾燥質量（ＧＦ／Ｆフィルター（Ｗｈａｔｍａｎ）上でのろ過、次いで、重量測定の前に少なくとも２４時間１０５℃のオーブン乾燥）を測定することによってモニターする。
【００９８】
総脂質およびＦＡＭＥ含量の分析を、文献（Ｆｏｌｃｈら、Ａ  ｓｉｍｐｌｅ  ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｏｔａｌ  ｌｉｐｉｄｓ  ｆｒｏｍ  ａｎｉｍａｌ  ｔｉｓｓｕｅｓ．Ｆｏｌｃｈ  Ｊ．ら、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．１９５７年５月；２２６（１）：４９７−５０９．；Ｙｏｋｏｙａｍａら、Ｔａｘｏｎｏｍｉｃ  ｒｅａｒｒａｎｇｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｇｅｎｕｓ  Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｅｎｓｕ  ｌａｔｏ  ｂａｓｅｄ  ｏｎ  ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ，ｃｈｅｍｏｔａｘｏｎｏｍｉｃ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ，ａｎｄ  １８Ｓ  ｒＲＮＡ  ｇｅｎｅ  ｐｈｙｌｏｇｅｎｙ（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉａｃｅａｅ，Ｌａｂｙｒｉｎｔｈｕｌｏｍｙｃｅｔｅｓ）：ｅｍｅｎｄａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ａｎｄ  ｅｒｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｕｒａｎｔｉｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ａｎｄ  Ｏｂｌｏｎｇｉｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｇｅｎ．Ｎｏｖ．；Ｍｙｃｏｓｃｉｅｎｃｅ，２００７年、４８巻、１９９−２１１頁）に慣行的に記載された方法に従って行う。
【００９９】
実施例１．１（比較）
オーランチオキトリウム・マングローヴァイ（Ａｕｒａｎｔｉｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｍａｎｇｒｏｖｅｉ）ＣＣＡＰ４０６２／５の培養を、コンピュータ制御の自動システムを使用するための、１〜２Ｌの発酵槽（バイオリアクター）中で、準備する。 
【０１００】
培養液の組成および添加溶液の組成は以下の通りである。
【表１】
2018528785.tif 000002
【表２】
2018528785.tif 000003
【０１０１】
系を、塩基（ＮａＯＨまたはＫＯＨ）および／または酸（硫酸溶液）を添加することによって、ｐＨを６に調整する。培養温度を２６℃に設定した。溶存酸素圧を、培養中にわたって、振とう速度（２５０〜１２００ｒｐｍ）、空気流速（０．２５〜１ｖｖｍ）または酸素流速（０．１〜０．５ｖｖｍ）により、培養液中で調整した。制御装置に組み入れられた調整パラメーターは、５％〜３０％の一定ｐＯ２を維持することを可能にする。培養時間は、２０〜１００時間、好ましくは２５〜９６時間、例えば、５０時間であった。
【０１０２】
培養中、３回の添加溶液１の添加を行っただけでなく、グルコースの濃度を２００ｍＭ〜５００ｍＭの間に維持するために、溶液２の添加を行った。
【０１０３】
実施例１．２（本発明）
オーランチオキトリウム・マングローヴァイ（Ａｕｒａｎｔｉｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｍａｎｇｒｏｖｅｉ）ＣＣＡＰ  ４０６２／５の培養を、実施例１．１に実質的に記載されたようにして、発酵槽中で準備する。
【０１０４】
手順を、動物飼料の開発の観点から問題を引き起こし得る、水酸化ナトリウムまたは水酸化カリウムによるｐＨ調整に関連するＮａ＋またはＫ＋の大量供給を避けるために、アンモニア（ＮＨ４ＯＨ）の添加によるｐＨ調整の方式の観点で修正する。細胞の培養のために必要な窒素の一部は、アンモニア（ＮＨ４ＯＨ）によるｐＨの調整により供給される。
【０１０５】
本実施例のために使用される培養液を、以下の第１表に記載する。実施例１．１に記載の培養液とは異なって、この化学的に定義された培養液は、栄養の制限なく、培養中にわたって、増殖を維持することを可能にする。
【表３】
2018528785.tif 000004
【０１０６】
物理的化学的パラメーターを、培養中に、ｐＨを５の設定の周辺で維持し、温度を３０℃の設定で、ｐＯ２を最大振とうおよび空気流速値に達するまで３０％の設定の周辺で維持する、組み込まれた調整器によって制御する。
【０１０７】
培養中、培養液中のグルコース濃度を２０ｇ／Ｌ〜５０ｇ／Ｌの間に維持するように、以下の第２表に記載の追加培養液の添加を行う。
【表４】
2018528785.tif 000005
【０１０８】
実施例１．３（本発明）
オーランチオキトリウム・マングローヴァイ（Ａｕｒａｎｔｉｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｍａｎｇｒｏｖｅｉ）ＣＣＡＰ  ４０６２／５の培養を、実施例１．１に実質的に記載された培養条件下、発酵槽中で準備する。
【０１０９】
手順を、培養液およびその添加の方式の観点で、修正する。
【０１１０】
培養を、以下の第３表に示す培養液において、バッチ方式で開始する。
【表５】
2018528785.tif 000006
【０１１１】
バイオマスが、培養液中で２０ｇ／Ｌに達したら、次いで、連続培養の方式を開始する。連続的に供給されるフィード溶液は、以下の第４表に記載されるものである。
【表６】
2018528785.tif 000007
【０１１２】
予備試験は、使用した希釈速度が、バイオマスのタンパク質含量を直接もたらすことを示した（結果は示さない）。本実施例について、使用した希釈速度は、０．１３ｈ−１であり、これは、使用した培養条件下での株の最大増殖速度の半分に相当する。
【０１１３】
実施例１．４（比較）
シゾキトリウム種（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＣＣＡＰ  ４０６２／３の培養を、初期の発酵槽の培養液および追加培養液について、それぞれ、２７ｇ／Ｌおよび３５．６ｇ／ＬのＮａＣｌを補給した培養液を用いて、実施例１．１に実質的に記載されたようにして、発酵槽中で準備する。
【０１１４】
実施例１．５（本発明）
シゾキトリウム種（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＣＣＡＰ  ４０６２／３の培養を、初期の発酵槽の培養液および追加培養液について、それぞれ、２７ｇ／Ｌおよび３５．６ｇ／ＬのＮａＣｌを補給した培養液を用いて、実施例１．２に実質的に記載されたようにして、発酵槽中で準備する。
【０１１５】
結果
【表７】
2018528785.tif 000008
【０１１６】
多価不飽和脂肪酸が濃縮された脂質の製造を意図する本分野の培養方法は、高タンパク含量（乾燥物質に対してアミノ酸のｗｔ％で表される）を有する組成物を得ることを可能にしないことに注目されたい。
【０１１７】
実施例２−動物の栄養摂取
実施例２．１（物質および方法）
オーランチオキトリウム・マングローヴァイ（Ａｕｒａｎｔｉｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  Ｍａｎｇｒｏｖｅｉ）ＣＣ４０６２／５株を、実施例１．２の条件下、培養した。これらの条件は、特に言及しない限り、以下の実施例において使用されるものである。
【０１１８】
２．１．１−バイオマス組成物：
微細藻類由来のバイオマスを、そのほぼ同じ組成物（水分（２００９年１月２７日の規則ＥＣ１５２／２００９に適合するＥＡＵ−Ｈ内測法（１０３℃／４時間）−ＳＮ）、加水分解による脂質（２００９年１月２７日の規則ＥＣ１５２／２００９−手順Ｂ−ＳＮ）、総アミノ酸濃度の総計に基づいて推定される粗タンパク質（指令９８／６４／ＥＣ、９／３／９９−標準ＮＦ  ＥＮ  ＩＳＯ１３９０３）、ミネラル物質（２００９年１月２７日の規則ＥＣ１５２／２００９−ＳＮ））、ならびに総エネルギー（ＮＦ  ＥＮ  １４９１８）、総繊維（ＡＯＡＣ９８５．２９−ＳＮ）、不溶性壁（ＣａｒｒｅおよびＢｒｉｌｌｏｕｅｔの方法（１９８９年、Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｗａｔｅｒ−ｉｎｓｏｌｕｂｌｅ  ｃｅｌｌ  ｗａｌｌｓ  ｉｎ  ｆｅｅｄｓ：  ｉｎｔｅｒｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｓｔｕｄｙ．Ｊｏｕｒｎａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｏｆｆｉｃｉａｌ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｓ，７２，４６３−４６７）による）、カルシウム（ＮＦ  ＥＮ  ＩＳＯ６８６９−２００２年３月−ＣＴ）、リン（２００９年１月２７日の規則ＥＣ１５２／２００９−ＣＴ）、塩化物（ＩＳＯ１８４１−２−１９９６年７月に適合する内測法−ＳＮ）、カリウム（内測法−ＩＣＰ０５／０７−ＳＮ）、ナトリウム（内測法−ＩＣＰ０５／０７−ＳＮ）および総アミノ酸濃度について、最初に分析した。
【０１１９】
２．１．２−盲腸切除された（ｃａｅｃｅｃｔｏｍｉｚｅｄ）若オンドリにおけるアミノ酸の消化性の測定：
並行して、この微細藻類を、盲腸切除された（ｃａｅｃｅｃｔｏｍｉｚｅｄ）若オンドリにおけるアミノ酸の消化性の測定のために、インビボで評価する（Ｇｒｅｅｎら、１９８７年）。動物（成体のＩｓａ  Ｂｒｏｗｎの若オンドリ）に、試験された成分（試験された微細藻類または対照のダイズミール）の一つで構成され、動物の要求に相当する１８％のタンパク質レベルを得るためにコムギデンプンを補給した、水でといた飼料を、強制的に給餌した。１処置あたり、個別のケージで飼われた１２羽の若オンドリを使用した。各動物は、２４時間飢えさせられた後、平均で１７１．２±１４．５ｇの水でといた飼料を与えられた。強制給餌後４８時間まで回収された排泄物を、処置あたり三つの排泄物を凍結乾燥するように、４羽の若オンドリの群で回収した。次いで、これらを、水分含量を安定化させるために、水の取り込みフェーズ（４８時間）の間、室温で放置し、次いで、重量測定し、粉砕し（０．５ｍｍ）、それらの非尿酸窒素含量およびそれらの総アミノ酸濃度について、Ｔｅｒｐｓｔｒａ法（Ｔｅｒｐｓｔｒａおよびｄｅ  Ｈａｒｔ、１９７４年）によって分析した（ＪＥＯＬ  ＡｍｉｎｏＴａｃ  ＪＬＣ−５００／Ｖ）。アミノ酸の内因性の損失は、同じ実験設計に基づくタンパク質不含の食餌を評価することによって、あらかじめ決定した。したがって、基礎内因性損失が補正された結果は、アミノ酸の標準化された回腸の消化性の係数として表され、計算され、以下の統計分析に付される。
【０１２０】
【数１】
2018528785.tif 000009
式中、ＤＩＳ（Ｘ）Ｆ：原料物質Ｆのアミノ酸Ｘの標準化された回腸の消化性の係数（％）；ＸＦ：原料物質中のアミノ酸の濃度（ｇ／１００ｇ）；ＸＥ：排泄物中のアミノ酸の濃度（ｇ／１００ｇ）；ＩＤ：消費された飼料の量（ｇ）；ＱＥ：排泄された量（ｇ）；ＬＦ：飼料中の原料物質の組み込み比；ＸＥＮＤ：アミノ酸Ｘの内因性損失（ｇ／１００ｇ）。
【０１２１】
実験の結果を、９５％の信頼区間を有する以下のモデルに従って、ＡＮＯＶＡ手順（ＸＬＳＴＡＴ  ２０１０．４．０２（著作権）Ａｄｄｉｎｓｏｆｔ  １９９５−２０１０）により、最初に、成分の効果について分析する。
【０１２２】
【数２】
2018528785.tif 000010
式中：Ｙ＝パラメーター
μ＝平均
ａｉ＝成分の効果
【０１２３】
それぞれの有意差について、平均を、ｐａｉｒｗｉｓｅ  ＦｉｓｈｅｒのＬＳＤ試験によって分析する。
【０１２４】
実施例２．２：４９時間培養したＣＣ４０６２／５株の組成
【０１２５】
ＣＣ４０６２／５株を、上記のようにして培養した。培養を４９時間で停止し、動物での予備消化性試験を行う目的のために、数キログラムの微細藻類由来のバイオマスを製造した。このバイオマスを、乾燥シリンダーで乾燥し、これは、フレーク状の形状を有する。これを「株４、４９時間培養物」として特定する。
【０１２６】
「微細藻類、株４、４９時間培養物」についての生化学的組成の結果を、以下の第５表に示し、全体の乾燥物質（ＤＭ）含量および補正された乾燥物質（ＤＭ）含量の両方で表す。
【表８】
2018528785.tif 000011
【０１２７】
これらの結果は、微細藻類が、対照のダイズミールのものよりもわずかに高い、総窒素関連物質（アミノ酸の総計）およびミネラル物質の組成を有することを示す。試験されたバイオマスのミネラル含量は、公表された最も低い濃度と比較可能であり、微細藻類の科、属および種に応じて、７％ＤＭから４３％ＤＭの範囲である。リンおよびカルシウム含量は、対照のダイズミールに対して、微細藻類中で、リンが２．３倍超、カルシウムが３．３倍少ない、反比例である。試験された「株４、４９時間培養物」は、デンプン蓄積を含有せず、その総糖類の濃度は、動物栄養で慣用されている原料物質と比較して、低い（１．４％ＤＭ）ままである。対照的に、その脂質含量は、ダイズミール（１１．２％−対−５．６％ＤＭ）のものより２倍高く、その総エネルギーは１２５ｋｃａｌ／ｋｇＤＭ高い。
【０１２８】
微細藻類壁は、植物起源の原料物質のものと異なる組成および構造を有し、むしろ、慣用されている繊維の分析には適切ではない。また、総食物繊維（ＴＤＦ）の分析（Ｐｒｏｓｋｙら、１９８８年）は、より制限が少ないという利点を有し、「微細藻類、株４、４９時間培養物」は、測定された水不溶性細胞壁（ＷＩＣＷ）残渣が５．２％ＤＭで、１７．４％ＤＭの総繊維の百分率（これは、比較として、ライ麦粒または大麦粒中で分析されるものに関する）を有する。
【０１２９】
第４表〜第８表で報告された総タンパク質濃度は、上記に記載の方法に従ってアッセイされたアミノ酸自体の総計に由来する。「微細藻類、株４、４９時間培養物」の総タンパク質の推定量としてのアミノ酸の総計は、５３．４％ＤＭ、より正確には、必須アミノ酸が２１．５％ＤＭ、非必須アミノ酸が３２．０％ＤＭに相当する。第６表は、微細藻類およびダイズミール中で分析され、アミノ酸の総価として、またはアミノ酸の総計に対して表された、アミノ酸濃度を示す。
【０１３０】
結果は、微細藻類が、比較的バランスのとれたアミノ酸プロファイルを有することを反映し、異なる微細藻類のアミノ酸プロファイルを、いわゆる従来のタンパク質源のものと比較する研究（Ｂｅｃｋｅｒ、２００７年）と一致する。
【０１３１】
通常、微細藻類の必須アミノ酸濃度は、ダイズミールにおいて測定されたものよりもわずかに高い（それぞれ、２１．５％ＤＭおよび２４．０％ＤＭ）。
【表９】
2018528785.tif 000012
【０１３２】
実施例２．３：バイオマスのアミノ酸の消化性の測定（４９時間培養されたＣＣ４０６２／５株）
盲腸切除された（ｃａｅｃｅｃｔｏｍｉｚｅｄ）若オンドリにおいて測定されたアミノ酸の標準化された回腸の消化性（ＳＩＤ）、および消化可能なアミノ酸濃度に関する結果を、第６表に表す。微細藻類の窒素の消化性およびアミノ酸の総計は、それぞれ、８０．１±０．３％および７８．４±１．０％であり、これは、対照のダイズミールより、９．５および１０．１ポイント低い。微細藻類のアルギニンおよびシスチンＳＩＤは、それぞれ、６１．０±０．８％および６０．９±３．７％の最も低い結果を有する。通常、微細藻類の必須アミノ酸の消化性の係数は、８０．７±１．８％（トレオニンＳＩＤ）〜８８．７±０．６％（ヒスチジンＳＩＤ）の範囲である。リジンの消化性は、８５．６±１．３％と測定される。これらの係数は、対照のダイズミールについて測定されたものより、約１．２（ヒスチジンＳＩＤ）〜７．４（トリプトファンＳＩＤ）ポイント低い。しかしながら、これらは、高い消化性の係数を反映しており、評価された微細藻類を良質のタンパク質源とみなすことを可能にする（すなわち、これらは、文献で報告された微細藻類のタンパク質の消化性の値より、約５５％〜７７％顕著に高い（Ｈｅｎｍａｎら、２０１２年）。
【０１３３】
実施例２．４：２２時間培養したＣＣ４０６２／５株の組成
ＣＣ４０６２／５株を、同条件下であるが、２２時間、培養した。これを「株４、２２時間培養物」として特定する。
【０１３４】
前述のように、このバイオマスを、乾燥シリンダーで乾燥し、これは、フレーク状の物理的形状を有する。
【０１３５】
ほぼ同じ組成物について、総エネルギー、総繊維、不溶性壁、カルシウム、リン、塩化物、カリウム、ナトリウムおよび総アミノ酸濃度を分析した。
【０１３６】
この「微細藻類、株４、２２時間培養物」の生化学的組成を、第７表に表す。結果を、全体の乾燥物質（ＤＭ）含量および補正された乾燥物質（ＤＭ）含量の両方で表す。
【０１３７】
「微細藻類、株４、２２時間培養物」は、対照のダイズミールおよび「微細藻類、株４、４９時間培養物」のものよりも、２．３および１．３ポイント高い、総窒素関連物質の組成（アミノ酸の総量）を有する。
【０１３８】
このミネラル物質含量は、より長時間の培養物に対して増加しているが、文献（Ｓｋｒｅｄｅら、２０１１年）に公表された値のより低い範囲内である濃度レベルにとどまる。
【０１３９】
リン／カルシウム比は、バランスがとれていない。リンおよびカルシウム含量は、対照のダイズミールに対して、微細藻類中で、リンが３．６倍超、カルシウムが３．６倍少ない、反比例である。最適化された株４（２２時間培養物）は、４９時間の培養よりも１．５倍超の総リンを含有する。脂質含量は、ダイズミールのものよりも高く（８％ＤＭ−対−５．６％ＤＭ）、結果は、デンプンも総糖類もこの株４におけるエネルギー貯蔵の形態で表されていないことを確認する。総エネルギーは、４６４１ｋｃａｌ／ｋｇＤＭ、または対照のダイズミールに対して３７１ｋｃａｌ／ｋｇＤＭ少ないと測定される。
【０１４０】
「微細藻類、株４、２２時間培養物」の総食物繊維（ＴＤＦ）は、測定された水不溶性細胞壁（ＷＩＣＷ）残渣を２．１％ＤＭ有する、１２．７％ＤＭと表される。並行して、残渣を以下のようにして推定した。Ｒ（％）＝１００−ミネラル物質（％）−総窒素関連物質（％）−脂質（％）−デンプン（％）−糖類（％）は、ＴＤＦ含量が、Ｒのものより１５．１ポイント低く、したがって、２７．８％ＤＭと推定されることを示す。これらの観察は、ミネラル物質、脂質、タンパク質および炭水化物の含量の総計によって説明されない、乾燥バイオマスの量が約２０％〜３０％であることを報告する他の研究（Ｌｉｅｖｅら、２０１２年）と一致する。
【０１４１】
「微細藻類、株４、２２時間培養物」は、比較として得たダイズミールよりも２ポイント高い脂質を有する（第７表）。
【表１０】
2018528785.tif 000013
【０１４２】
アミノ酸の総計は、ＤＭの５４．７％、より正確には、２３．９％ＤＭの必須アミノ酸および３０．８％ＤＭの非必須アミノ酸になる。第８表は、微細藻類およびダイズミールにおいて分析され、アミノ酸の総価として、またはアミノ酸の総計に対して表された、アミノ酸濃度を表す。結果は、微細藻類が、対照のダイズミールと比較して、比較的バランスのとれたアミノ酸プロファイルを有することを反映している。「微細藻類、株４、２２時間培養物」のグルタミン酸、アルギニンおよびアスパラギン酸は、それぞれ、２６．７５％、９．４８％および８．２６％の値（％総計ＡＡ）という、より高い割合を示す。リジン含量（％総計ＡＡ）は、対照ダイズミールのもの（６．１２％）に関して、５．９４％である。アルギニン、メチオニン、およびより少ない量のトレオニンは、ダイズミールのものより、試験された微細藻類タンパク質に対して、より強く寄与する（それぞれ、９．４８％対７．２９％、２．１３％対１．３６％、および４．２７％対４．０１％）。２２時間培養された微細藻類は、４９時間培養物より２．４ポイント多い必須酸を有するか、対照ダイズミールのものと同程度の量を有する。アルギニンを除き、必須アミノ酸は、アミノ酸の総量に対してより多い割合で存在する。
【０１４３】
「微細藻類、株４、２２時間培養物」は、ダイズのものよりも高いメチオニン、アルギニンおよびトレオニン含量を有するのに対して、リジンおよびバリン含量は、微細藻類由来のバイオマスにおいて、同等またはわずかに高い。
【０１４４】
実施例２．５：バイオマスのアミノ酸の消化性の測定（２２時間培養されたＣＣ４０６２／５株）
盲腸切除された（ｃａｅｃｅｃｔｏｍｉｚｅｄ）若オンドリにおけるアミノ酸の消化性の測定（Ｇｒｅｅｎら、１９８７年）を、上記の記載と同様にして、実施した（実施例２．３を参照）。
【０１４５】
盲腸切除された（ｃａｅｃｅｃｔｏｍｉｚｅｄ）若オンドリにおいて測定された「微細藻類、株４、２２時間培養物」のアミノ酸の標準化された回腸の消化性（ＳＩＤ）、および消化可能なアミノ酸濃度に関する結果を、第８表に表す。微細藻類の窒素の消化性およびアミノ酸の総計は、それぞれ、８５．７±０．７％および８７．１±０．４％であるか、または、対照のダイズミールのものより３．２（ｐ＝０．００８）および０．９（ｐ＝０．１９０）ポイント低い。４９時間培養物と比較して、「微細藻類、株４、２２時間培養物」のこの産物のアミノ酸の総計の消化性は、８．７ポイント顕著に増加する。消化性可能なリジン、メチオニン、アルギニン、トレオニンおよびバリンの濃度は、対照ダイズミールのものより高い。これらは、ダイズミールのものに対して、優位または同等の、試験された微細藻類の良質のタンパク質を反映している。
【０１４６】
若オンドリにおけるアミノ酸の消化性の測定の結果は、「微細藻類、株４、２２時間培養物」が、良質のタンパク質源であることを示す。タンパク質（アミノ酸の総計）の消化性は、単胃動物の給餌用に世界中で最も使用されているタンパク質源である、ダイズミールのものと同様である。
【０１４７】
さらにまた、使用される乾燥方法は、リジンについて測定された高い消化性の係数を考えると、タンパク質の品質を変性する要因であるとは思われない。
【０１４８】
「微細藻類、株４、４９時間培養物」の結果を「微細藻類、株４、２２時間培養物」のものと比較した場合に、タンパク質の品質が顕著に改善されることに注目することが重要である。とりわけ、タンパク質の消化性は、約９ポイント増加する。
【表１１】
2018528785.tif 000014
2018528785.tif 000015
【０１４９】
実施例２．６：２２時間培養されたＣＣ４０６２／５株の見かけの代謝エネルギー（ＡＭＥ）および窒素補正された見かけの代謝エネルギー（ＡＭＥｎ）の決定
微細藻類の「微細藻類、株４、２２時間培養物」の見かけの代謝エネルギー（ＡＭＥ）の測定を、３週齢のニワトリで行った（Ｂｏｕｒｄｉｌｌｏｎら、１９９０年）。トウモロコシ−ダイズベースおよびプレミックスからなる対照の食餌から始める、いわゆる置き換え方法を適用した。他の原料物質と同様に、３ｍｍに粉砕した微細藻類を、食餌中でプレミックスを一定に保ちながら、トウモロコシ−ダイズ混合物の代わりに、４％、８％、１２％、１６％および２０％の増加させた割合で組み込んだ。
【０１５０】
第９表は、対照のトウモロコシ−ダイズ飼料およびその明細の処方を表す（粗タンパク質＝１８％、見かけの代謝エネルギー＝３２００ｋｃａｌ／ｋｇ）。微細藻類で置き換えた飼料は、微細藻類が産生するＡＭＥ、消化可能なアミノ酸および生物学的に利用可能なリンに関する仮定に基づき、（とりわけ、エネルギー比に対するそれらのタンパク質において）最適なバランスがとれている。
【表１２】
2018528785.tif 000016
【０１５１】
食餌１：基本のトウモロコシ−ダイズ（９５．３２％）＋ビタミンおよびミネラルサプリメント（ＶＭＳ）（４．６８％）
食餌２：基本のトウモロコシ−ダイズ（９１．３２％）＋ＶＭＳ（４．６８％）＋微細藻類（４％）
食餌３：基本のトウモロコシ−ダイズ（８７．３２％）＋ＶＭＳ（４．６８％）＋微細藻類（８％）
食餌４：基本のトウモロコシ−ダイズ（８３．３２％）＋ＶＭＳ（４．６８％）＋微細藻類（１２％）
食餌５：基本のトウモロコシ−ダイズ（７９．３２％）＋ＶＭＳ（４．６８％）＋微細藻類（１６％）
食餌６：基本のトウモロコシ−ダイズ（７５．３２％）＋ＶＭＳ（４．６８％）＋微細藻類（２０％）
【０１５２】
この組み入れの勾配は、単純な線形回帰によって微細藻類のＡＭＥ値を評価することを可能にする。実験設計を図１に記載する。食餌の乾燥物質値は、評価期間の開始時および終了時に、飼料ペレットについて、粉砕後に測定した。最後に、完全飼料および糞を、熱量測定法によって、それらの総エネルギー（ＧＥ）含量について、個々に分析した。
【０１５３】
飼料のＡＭＥｎを以下のようにして計算する。
【数３】
2018528785.tif 000017
【数４】
2018528785.tif 000018
【０１５４】
式中、Ｉ：摂取された飼料の量（ｋｇＤＭ）；Ｅ：排泄物の量（ｋｇ）；ＧＥｉおよびＧＥｆ：摂取された飼料の総エネルギー（ｋｃａｌ／ｋｇＤＭ）および糞の総エネルギー（ｋｃａｌ／ｋｇ）；ＷＧ：評価期間中の体重増加。ＡＭＥ値は、最初に、動物組織中に含有される１８％のタンパク質に基づき、因子８．２２ｋｃａｌ／ｋｇＮを使用することによって、窒素補正した（ＨｉｌｌおよびＡｎｄｅｒｓｏｎ、１９５８年）。並行して、窒素補正の計算も、排泄物中の総窒素のアッセイに基づいて行った。同一の結果を与える二つの方法について、この報告においては、後者の方法が考慮される。異常値（平均から±２．５の標準偏差）を、分散の分析による処理（ＡＮＯＶＡ、ＳＡＳ  ９．１．３（著作権）２００２−２００３、ＳＡＳ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｉｎｃ．、Ｃａｒｙ、ＮＣ、米国）の前に、要因設計に従って、取り除いた。乾燥物質の消化性（ｄＤＭ）および窒素（ＤＣａ窒素）、リン（ＤＣａリン）、カルシウム（ＤＣａカルシウム）および脂質（ＤＣａ脂質）の見かけの消化性の係数を、それぞれの食餌について、同様の方法で計算する。
【０１５５】
これらの結果を、線形回帰（ＸＬＳＴＡＴ  ２０１０．４．０２（著作権）Ａｄｄｉｎｓｏｆｔ  １９９５−２０１０）により、以下のモデルに従って、分析した。
【数５】
2018528785.tif 000019
式中：Ｙｉ＝観察ｉの従属変数について観察された値
β０＝切片
βｊ＝回帰直線の傾き
Ｘｉｊ＝観察ｉについての変数ｊの値（微細藻類の組み込み％）
εｉ＝モデル誤差
【０１５６】
微細藻類の１００％組み込みのパラメーターの値を、予測モデルから外挿し、このようにして、微細藻類のＡＭＥおよびＡＭＥｎ、ならびにリンの見かけの消化性の係数を推定することを可能にする。
【０１５７】
第１０表は、対照のトウモロコシ−ダイズ飼料および置換された食餌Ｄ２〜Ｄ６の、乾燥物質の消化性、および窒素補正された見かけの代謝エネルギー（ＡＭＥｎ）の結果を表す。窒素（ＤＣａ窒素）、リン（ＤＣａリン）、カルシウム（ＤＣａカルシウム）および脂質（ＤＣａ脂質）の見かけの消化性の係数を、同様の方法によって推定した。
【表１３】
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【０１５８】
各種の食餌の乾燥物質の消化性は、それらのＡＭＥｎ値と強く相関する。トウモロコシ−ダイズの食餌Ｄ１のＡＭＥｎは、３３９８±５３ｋｃａｌ／ｋｇＤＭと測定される。結果は、食餌Ｄ２のＡＭＥｎ値がトウモロコシ−ダイズ対照のＡＭＥｎ値と同等であり、微細藻類で４％置き換えたものは、食餌のエネルギーの消化性に影響を与えないことを反映していることを示す。対照的に、微細藻類の８％またはそれ超の置き換えを起点として、ＡＭＥｎおよびＤＣａ窒素が、置き換えの百分率の増加とともに直線的に減少する（ｐ＜０．０００１）。
【０１５９】
４％〜１６％の微細藻類の添加は、１３〜２３日の期間にわたって、飼料要求率（ＦＣＲ）の減少を示す。しかしながら、ニワトリが、同様の体重増加に対して、摂取が少なく（Ｄ２を除く）、微細藻類の組み込みの百分率にもかかわらず、対照のトウモロコシ−ダイズの食餌について測定されたよりも高い傾向にあることにも注目すべきである（第１１表）。
【表１４】
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【０１６０】
「微細藻類、株４、２２時間培養物」のＡＭＥおよびＡＭＥｎ値（第１２表）は、それぞれ、２７８５ｋｃａｌ／ｋｇＤＭおよび２２９６ｋｃａｌ／ｋｇＤＭと測定される。これらの値は、それぞれ、２３０３±１３７、２３４８±２４８および２３６５±１７８ｋｃａｌ／ｋｇＤＭで、タンパク質クラスが４６、４８および５０の、ダイズミールのＡＭＥｎ測定値の平均インビボ基準値の範囲内であることに注目すべきである。このように、本微細藻類によって提供されるエネルギー供給は、標準的な品質のダイズミールのものと同等である。
【表１５】
2018528785.tif 000022
【０１６１】
実施例２．７：本発明によるバイオマスを含む飼料のヒナにおける選択および食物摂取の測定試験
以下に表すそれぞれの試験において、４つのイソ−エネルギー、イソ−タンパク質およびイソ−リジンの食餌（第１３表）となるように製剤を調整しながら、他の原料物質と同様に、「微細藻類、株４、２２時間培養物」を、３ｍｍに粉砕し、トウモロコシ−ダイズの食餌に５％、１０％および１５％の増加させた割合で組み込み、その組成を第１４表に示す。
【表１６】
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【表１７】
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【０１６２】
二つの実験の試験を、並行して行った（図２）。第一の試験（選択試験）において、食物摂取は、動物に、微細藻類で補給された飼料およびトウモロコシ−ダイズスターターの間の選択がある場合に、測定される。第二では（食物摂取の測定）、食物摂取は、動物が、微細藻類で場合により補給された一つの飼料のみが利用可能である場合に、測定される。
【０１６３】
試験１において、一つの給餌皿からの食物摂取が、各ケージ内で他方からの食物摂取に依存することを考慮して、７日齢および９日齢でのそれぞれの測定ポイントでの食物摂取データを、２点試験法の手順（ＸＬＳＴＡＴ  ２０１０．４．０２（著作権）Ａｄｄｉｎｓｏｆｔ  １９９５−２０１０）に従って分析した。
【０１６４】
試験２からの食物摂取および体重のデータを、９５％の信頼区間を有する以下のモデルに従って、ＡＮＯＶＡ手順（ＸＬＳＴＡＴ  ２０１０．４．０２（著作権）Ａｄｄｉｎｓｏｆｔ  １９９５−２０１０）により、飼料の効果について分析した。
【０１６５】
【数６】
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式中、Ｙ＝パラメーター
μ＝平均
ａｉ＝飼料の効果
ｂｉ＝阻害効果
【０１６６】
それぞれの有意差について、平均を、ｐａｉｒｗｉｓｅ  ＦｉｓｈｅｒのＬＳＤ試験によって分析する。
【０１６７】
１）試験１−選択試験
飼料の選択による試験のために、約２００羽の１日齢のオスのヒナ（ＲｏｓｓＰＭ３）を、分割された代謝ケージに、約２０羽の群で入れ、コムギ、トウモロコシおよびダイズミールを含有する標準のスターターを給餌した。６日齢で、ニワトリを、体重測定および体重群に分ける前に、２時間、飢えさせる。このようにして、１２０羽のニワトリを、選択し、３０個の分割された代謝ケージに、４羽の群で入れ、７日目に、それらの体重に従って実験処置の一つに割り当てる（処置あたり１０反復）。各ケージは、以下の三つの実験処置に対応する、異なる飼料を含有する二つの給餌皿を備える。
【０１６８】
・処置１：トウモロコシ−ダイズスターター（給餌皿１）および５％微細藻類（給餌皿２）
・処置２：トウモロコシ−ダイズスターター（給餌皿１）および１０％微細藻類（給餌皿２）
・処置３：トウモロコシ−ダイズスターター（給餌皿１）および１５％微細藻類（給餌皿２）
【０１６９】
飼料および水は、試験中を通じて、自由に与える。実験飼料は、３．２ｍｍの直径のペレットとして与える。食物摂取は、１時間ごとに切り替えるケージ内の給餌皿を用いて、７日齢および９日齢で、Ｔ０＋１ｈ、Ｔ０＋２ｈ、Ｔ０＋３ｈ、Ｔ０＋４ｈおよびＴ０＋６ｈに測定される。２回の食物摂取の測定の間（８日目）、動物は、ダイズ−トウモロコシ−ダイズスターターを与えられる。
【０１７０】
結果は、若い動物が、この組み込み割合にかかわらず、微細藻類を補給した飼料を拒絶しなかったことを示す（図３〜５を参照）。したがって、これらの量において、微細藻類は、嗜好性の問題を示さない。若いヒナでさえ、従来のトウモロコシ−ダイズ飼料と比較して、５％および１０％の微細藻類を補給した飼料を好む傾向があり（図５）、これは１５％の微細藻類を添加したときに、数字上、逆転する。
【０１７１】
２）試験２−食物摂取の測定
第二の試験において、ヒナは、場合により、微細藻類が補給された、１種類の飼料のみが利用可能である（図６）。約４００羽の１日齢のオスのヒナ（ＲｏｓｓＰＭ３）を、体重測定し、体重群に分けた。２４０羽の選択された動物を、１日目に、均一な重量のブロックで（４ケージの１５ブロック）、実験飼料をそれぞれ入れた、ケージあたり一つの給餌皿を有する６０個の分割されていないケージに、４羽の群で、入れる（飼料あたり１５反復）。各ケージにおいて、４羽のヒナを、個々に識別する。飼料および水は、試験中を通じて、自由に与える。実験飼料は、飼料の選択による試験１においても使用された微細藻類を、０％、５％、１０％または１５％補給したトウモロコシ−ダイズスターターである。個々の生体の体重を、１、７および９日齢で測定する。未摂取の飼料の重量を測定し、ケージあたりの食物摂取を、７および９日齢で測定する。０〜７日齢で、１０％の微細藻類を含有する飼料を給餌された動物は、対照および他の二つの補給された食餌に対して、顕著に改善された体重増加を有する。１０％補給された食餌について測定された飼料要求率は、対照および１５％補給された食餌に対して、顕著に改善されている（１．０８９対１．１５６）。さらにまた、微細藻類の補給は、トウモロコシ−ダイズ対照（それぞれ、対照および５％〜１５％補給された三つの食餌について、１２２．６ｇ、１２５．７ｇ、１３５．６ｇおよび１２４．６ｇ）と比較して、飼料の摂取に影響を与えない。
【０１７２】
０日から９日齢の全測定期間にわたって（図７）、体重増加および飼料要求率において、１０％微細藻類を補給した飼料の正の効果が確認される。
【０１７３】
（非選択条件下での）食物摂取の結果は、試験された「微細藻類、株４、２２時間培養物」が、０〜９日齢のヒナの能力に影響を及ぼすことなく、バランスがとれたトウモロコシ−ダイズ飼料中に１５％まで含有されてもよいことを示す。
【０１７４】
参考文献
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【国際調査報告】
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