(57)【要約】  改良された治療効能、ｉｎ  ｖｉｖｏ半減期ならびに取り除かれたＦｃＲ結合および／または補体結合／活性化を有する改良された抗ＣＤ１５４抗体が本明細書で提供される。寛容を誘導し、自己免疫、炎症、移植レシピエント、線維症およびアレルギー障害を含む免疫疾患を処置するためのこれらの抗体の使用が本明細書で開示される。
2018528258.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト化抗ヒトＣＤ１５４抗体であって、該ヒト化抗ヒトＣＤ１５４抗体は配列番号１５の可変重ポリペプチドおよび配列番号２０の可変軽ポリペプチドを含まないという条件で、（ｉ）図２Ａ〜２Ｃに示される配列番号１５、１７および１８から選択される配列を有するポリペプチドを含むまたはからなる可変重ポリペプチド、ならびに（ｉｉ）図２Ａ〜２Ｃに示される配列番号２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０および３１から選択される配列を有するポリペプチドを含むまたはからなる可変軽ポリペプチドを含む前記ヒト化抗ヒトＣＤ１５４抗体。
【請求項２】
ヒト化抗ヒトＣＤ１５４抗体であって、（ｉ）図１Ａ〜Ｃに示される配列番号１の配列を有するポリペプチドを含むまたはからなる可変重ポリペプチド、および（ｉｉ）図１Ａ〜Ｃに示される配列番号２の配列を有するポリペプチドを含むまたはからなる可変軽ポリペプチドを含む前記ヒト化抗ヒトＣＤ１５４抗体。
【請求項３】
Ｃ１Ｑに結合するならびにＦｃγＲ２および／またはＦｃγＲ３に結合する能力を欠くＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４定常領域を含む、請求項１または２に記載の抗ヒトＣＤ１５４抗体。
【請求項４】
Ｃ１Ｑに結合するならびにＦｃγＲ２および／またはＦｃγＲ３に結合する能力を欠くヒトＩｇＧ１定常領域を含む、請求項１または２に記載の抗ヒトＣＤ１５４抗体。
【請求項５】
前記ヒトＩｇＧ１定常領域がＥ２６９ＲおよびＫ３２２Ａ突然変異（Ｋａｂａｔに従った番号付け）を含む、請求項４に記載のヒト化抗ヒトＣＤ１５４抗体。
【請求項６】
図１Ａ〜Ｃに示される配列番号３および配列番号２のＩｇＧ１軽および重定常領域を含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載のヒト化抗ヒトＣＤ１５４抗体。
【請求項７】
抗体がＩｇＧ１アイソタイプであり、抗体のＦｃ領域が、ＦｃＲｎ結合を損なう突然変異、グリコシル化を損なうもしくは除去する突然変異またはＦｃγＲ２もしくはＦｃγＲ３のようなＦｃＲもしくは別のＦｃＲに結合する抗体の能力を損なうもしくは補体への結合を損なう別の突然変異などのエフェクター機能に影響を与える少なくとも１つの他の突然変異を導入するようにさらに変異導入されている、請求項１〜６のいずれか１項に記載のヒト化抗ヒトＣＤ１５４抗体。
【請求項８】
抗体がＩｇＧ１アイソタイプであり、抗体のＦｃ領域が、Ｅ２３３Ｐおよび／もしくはＤ２６５Ａ突然変異または表１、２もしくは３に同定されているＦｃ突然変異のいずれかをさらに導入するように変異導入されている、請求項１〜７のいずれか１項に記載のヒト化抗ヒトＣＤ１５４抗体。
【請求項９】
抗体がＩｇＧ１アイソタイプであり、抗体のＦｃ領域がＥ２３３Ｐ突然変異を導入するように変異導入されている、請求項１〜８のいずれか１項に記載のヒト化抗ヒトＣＤ１５４抗体。
【請求項１０】
抗体のＦｃ領域がｉｎ  ｖｉｖｏ半減期を改善する１つまたはそれよりも多い他の突然変異を導入するようにさらに変異導入されている、請求項１〜９のいずれか１項に記載のヒト化抗ヒトＣＤ１５４抗体。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載の少なくとも１つのヒト化抗ヒトＣＤ１５４抗体の治療または予防有効量を含む医薬組成物。
【請求項１２】
抗原、細胞、組織、または器官をさらに含む、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
抗原が自己抗原、アレルゲン、炎症剤、薬物、またはＨＬＡがマッチしていない（アロ）もしくは異種（非ヒト）のドナー細胞である、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
請求項１〜１３のいずれか１項に記載の抗体または組成物を使用する、免疫抑制または免疫療法の方法。
【請求項１５】
請求項１〜１３のいずれか１項に記載の抗体または組成物を投与することによりアレルギー、炎症性、もしくは自己免疫疾患を持つ対象または移植レシピエントを処置する方法。
【請求項１６】
場合により遺伝的に操作されていることがあるドナー組織、器官、または細胞の移植前、同時または後に請求項１〜１３のいずれか１項に記載の抗体または組成物を投与することにより対象においてＧＶＨＤを処置するまたは予防する方法。
【請求項１７】
細胞がＣＡＲ−ＴまたはＮＫ細胞である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
請求項１〜１３のいずれか１項に記載の抗体または組成物を投与することにより寛容または延長された抗原特異的免疫抑制を誘発する方法。
【請求項１９】
方法が、それに対して寛容または延長された免疫抑制を誘発しようとしている抗原を含む細胞、抗原、組織、または器官の投与をさらに含む、請求項１８に記載の前記方法。
【請求項２０】
請求項１〜１３のいずれか１項に記載の抗体または組成物を投与することを含む遺伝子、細胞、組織または器官治療の方法。
【請求項２１】
処置される状態が、乾癬、関節リウマチ、乾癬性関節炎、卵巣炎、ループスもしくはＳＬＥ、糖尿病、ＩＢＤ、クローン病、ＩＴＰ、甲状腺炎、関節リウマチ、重症筋無力症、全身性エリテマトーデス、グレーブス病、特発性血小板減少性紫斑病、溶血性貧血、真性糖尿病、炎症性腸疾患、クローン病、多発性硬化症、乾癬、薬物誘発性自己免疫疾患、または薬物誘発性ループスから選択される、請求項１５に記載の方法。
【請求項２２】
細胞治療または器官もしくは骨髄移植において使用するための骨髄、器官もしくは免疫細胞を処置する方法であって、前記骨髄、器官、組織または免疫細胞を請求項１〜１３のいずれか１項に記載の抗体または組成物と一緒にインキュベートすることを含む前記方法。
【請求項２３】
処置された骨髄、組織、器官または免疫細胞がドナーおよび／またはレシピエントＴ細胞を含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
それを必要とする患者において血栓性イベントを誘発することなく寛容を誘導する方法であって、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の抗体または組成物の有効量を患者に投与することを含む前記方法。
【請求項２５】
抗原の投与をさらに含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
抗原が自己抗原、アレルゲン、炎症剤、薬物、またはＨＬＡがマッチしていない（アロ）ドナー細胞である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
患者が移植された細胞、器官または組織を受けることになっているまたは受けたことがある、請求項２４〜２６に記載の方法。
【請求項２８】
薬物が治療抗体、受容体、融合タンパク質、ホルモン、成長因子またはサイトカインなどのバイオ医薬品である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
請求項１〜１３のいずれか１項に記載の抗体または組成物の有効量を投与することによりＴ細胞媒介自己免疫疾患を処置する方法。
【請求項３０】
請求項１〜１３のいずれか１項に記載の抗体または組成物の有効量を投与することによりＢ細胞媒介自己免疫疾患を処置する方法。
【請求項３１】
疾患が、関節リウマチ、重症筋無力症、全身性エリテマトーデス、グレーブス病、ハンチントン病、特発性血小板減少性紫斑病、溶血性貧血、真性糖尿病、パーキンソン病、乾癬、アジソン病、多発性硬化症、ループス、および薬物誘発性自己免疫疾患、例えば、薬物誘発性ループスから選択される自己免疫疾患である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３２】
抗原の投与を含む、請求項２９〜３１に記載の方法。
【請求項３３】
請求項１〜１３のいずれか１項に記載の抗体または組成物の有効量を投与することにより、ＧＶＨＤ、骨髄移植（ＢＭＴ）多発性硬化症、ループス、ＩＴＰ、関節リウマチ、喘息、ＩＢＤまたは別の炎症性腸疾患を処置するまたは予防する方法。
【請求項３４】
ＣＤ４０シグナル伝達により全体的にまたは部分的に媒介されるヒト状態、障害もしくは疾患、または前述のいずれかの症状を処置するための方法であって、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の抗体または組成物の有効量を投与することを含む前記方法。
【請求項３５】
ヒト状態、障害または疾患が炎症性、アレルギー、もしくは自己免疫応答または線維症である、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
ヒト状態、障害または疾患がループス腎炎、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、脊椎関節炎、薬物誘発性エリテマトーデス、炎症性腸疾患、クローン病、乾癬および多発性硬化症から選択される、請求項３４または３５に記載の方法。
【請求項３７】
ヒト状態、障害または疾患がアレルギー性接触皮膚炎、汎発性脱毛症、アナフィラクトイド紫斑病喘息、重症喘息、代謝性喘息、アレルギー性喘息、アトピー性皮膚炎、疱疹状皮膚炎、持久性隆起性紅斑、輪状紅斑、多形性紅斑；結節性紅斑、アレルギー性肉芽腫症、環状肉芽腫、顆粒球減少症、過敏性肺炎、角膜炎、ネフローゼ症候群、オーバーラップ症候群、鳩飼病、特発性多発神経炎、蕁麻疹、ブドウ膜炎、若年性皮膚筋炎、および白斑から選択される、請求項３４に記載の方法。
【請求項３８】
ヒト状態、障害もしくは疾患がアレルギー性気管支肺アスペルギルス症；自己免疫溶血性貧血；黒色表皮腫；アレルギー性接触皮膚炎；アジソン病；アトピー性皮膚炎；円形脱毛症；汎発性脱毛症；アミロイドーシス；アナフィラクトイド紫斑；アナフィラキシー様反応；再生不良性貧血；血管浮腫、遺伝性；血管浮腫、特発性；強直性脊椎炎；動脈炎、頭蓋の；動脈炎、巨細胞；動脈炎、高安の；動脈炎、側頭部の；喘息；毛細血管拡張性運動失調症；自己免疫性卵巣炎；自己免疫性精巣炎；自己免疫性多腺内分泌不全症；ベーチェット病；ベルジェ病；バージャー病；水疱性天疱瘡；カンジダ症、慢性皮膚粘膜；カプラン症候群；心筋梗塞後症候群；心膜切開後症候群；心炎；セリアックスプルー；シャーガス病；チェディアック・東症候群；チャーグ・ストラウス病；コーガン症候群；寒冷凝集素病；クレスト症候群；クローン病；クリオグロブリン血症；原因不明の線維化性胞隔炎；疱疹状皮膚炎；皮膚筋炎；真性糖尿病；ダイアモンド・ブラックファン症候群；ディジョージ症候群；円板状エリテマトーデス；好酸球性筋膜炎；上強膜炎；持久性隆起性紅斑；輪状紅斑；多形性紅斑；結節性紅斑；家族性地中海熱；フェルティ症候群；肺線維症；糸球体腎炎、アナフィラクトイド；糸球体腎炎、自己免疫性；糸球体腎炎、連鎖球菌感染後；糸球体腎炎、移植後；糸球体症、膜性；グッドパスチャー症候群；移植片対宿主病；顆粒球減少症、免疫介在性；環状肉芽腫；肉芽腫症、アレルギー性；肉芽腫筋炎；グレーブス病；橋本甲状腺炎；新生児溶血性疾患；ヘモクロマトーシス、特発性；ヘノッホ・シェーンライン紫斑病；肝炎、慢性活動性および慢性進行性；組織球症ｘ；好酸球増加症候群；特発性血小板減少性紫斑病；ヨブ症候群；若年性皮膚筋炎；若年性関節リウマチ（若年性慢性関節炎）；川崎病；角膜炎；乾性角結膜炎；ランドリー・ギラン・バレー・ストロール症候群；ハンセン病、らい腫型；レフレル症候群；ライエル症候群；ライム病；リンパ腫様肉芽腫症；肥満細胞症、全身性；混合性結合組織病；多発単神経炎；マックル・ウェルズ症候群；皮膚粘膜リンパ節症候群；皮膚粘膜リンパ節症候群；多中心性網組織球症；多発性硬化症；重症筋無力症；菌状息肉症；壊死性血管炎、全身性；ネフローゼ症候群；オーバーラップ症候群；脂肪織炎；発作性寒冷ヘモグロビン尿症；発作性夜間ヘモグロビン尿症；類天疱瘡；天疱瘡；紅斑性天疱瘡；落葉状天疱瘡；尋常性天疱瘡；鳩飼病；間質性肺炎、過敏性；結節性多発動脈炎；リウマチ性多発筋痛症；多発性筋炎；多発神経炎、特発性；ポルトガル家族性多発ニューロパチー；子癇前症／子癇；原発性胆汁性肝硬変；進行性全身性硬化症（強皮症）；乾癬；乾癬性関節炎；肺胞蛋白症；肺線維症、レーノー現象／症候群；リーデル甲状腺炎；ライター症候群、再発性多発軟骨炎；リウマチ熱；関節リウマチ；サルコイドーシス；強膜炎；硬化性胆管炎；血清病；セザリー症候群；シェーグレン症候群；スティーブンス・ジョンソン症候群；スチル病；亜急性硬化性全脳炎；交感性眼炎；全身性エリテマトーデス；移植拒絶；潰瘍性大腸炎；未分化結合織疾患；蕁麻疹、慢性；蕁麻疹、寒冷；ブドウ膜炎；白斑；ウェーバー・クリスチャン病；ウェゲナー肉芽腫症；ならびにウィスコット・アルドリッチ症候群から選択される、請求項３４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は２０１５年７月１４日提出の米国特許仮出願第６２／１９２２６９号；２０１５年７月２８日提出の米国特許仮出願第６２／１９７９６６号；および２０１６年１月１１日提出の米国特許仮出願第６２／２７７２０１号のそれぞれの優先権を主張する。これらの仮出願の内容は参照によってその全体を組み入れる。
【０００２】
本発明は減少した毒性および機能的特性を有する改良された抗ＣＤ１５４（ＣＤ１５４）抗体ならびに免疫療法、とりわけ、炎症性障害、アレルギー、自己免疫、移植、およびがんの処置におけるその使用に関する。特に、本発明は、ｉｎ  ｖｉｖｏで血栓形成または凝固反応を誘発せず、免疫寛容の誘導および体液性免疫の遮断のような所望の治療特性を誘発する親和性が改善され機能的活性のある高親和性抗ＣＤ１５４抗体を提供する。
【０００３】
本発明は減少した毒性および機能的特性を有する改良された抗ＣＤ１５４（ＣＤ１５４）抗体ならびに免疫療法、とりわけ、炎症性障害、アレルギー、自己免疫、移植、およびがんの処置におけるその使用に関する。特に、本発明は、ｉｎ  ｖｉｖｏで血栓形成または凝固反応を誘発せず、免疫寛容の誘導および体液性免疫の遮断のような所望の治療特性を誘発する親和性が改善され機能的活性のある高親和性抗ＣＤ１５４抗体を提供する。
【背景技術】
【０００４】
ＣＤ４０Ｌ（ＣＤ１５４）は、マウス、非ヒト霊長類（ＮＨＰ）およびヒトにおける自己免疫、移植片拒絶および他の免疫関連疾患での高度に検証され価値のある治療標的である。数多くの第ＩＩ相臨床試験で、αＣＤ１５４はｉｎ  ｖｉｖｏでＣＤ１５４の活性を効果的に遮断し疾患を改善することが明らかにされてきた。αＣＤ１５４は免疫応答に対するその影響の点で他のすべての治療薬とは異なり、マウスとサルの両方で実証されたようにαＣＤ１５４は機能的免疫寛容を誘導することができる、僅かしかない治療薬の１つである。マウスでは、ほぼすべての自己免疫疾患モデルを、αＣＤ１５４療法を用いて効果的に改善することができ（非特許文献１；非特許文献２；非特許文献３；および非特許文献４）、長期の寛解が観察される。
【０００５】
ＮＨＰでは、永久同種免疫寛容は、αＣＤ１５４を含む短期の処置を使用して達成することができる（非特許文献５；非特許文献６）。
【０００６】
さらに、ヒトでの第ＩＩ相臨床試験により、αＣＤ１５４がＳＬＥ（非特許文献７）、多発性硬化症（予備的データ参照）および特発性血小板減少症（非特許文献７）で効果的であることが示されてきた。したがって、αＣＤ１５４は、長期の臨床的有用性のある短期治療介入を可能にする独特の薬物である。その失敗は効能ではなく、予想外の毒性に起因するものであった。
【０００７】
１９９０年代初期、ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  ａｎｄ  Ｂｉｏｇｅｎ  Ｉｎｃ．（現在ではＢｉｏｇｅｎ  Ｉｄｅｃ）は、２つの異なるαＣＤ１５４  ｍＡｂを複数の第Ｉ／ＩＩ相臨床試験に送り出した。ＩＤＥＣが開発した抗体（ＩＤＥＣ−１３１）はダートマス大学で開発されたマウス抗ヒトＣＤ１５４抗体に由来するヒト化ＩｇＧ１であった。この抗体およびヒト化変異体は、特許文献１、特許文献２、特許文献３、特許文献４、および特許文献５に開示されており、前記文献の内容はすべて参照により本明細書に組み入れる。初期の適応症は、前記薬物が高度に効果的であることを実証していたが、別の抗ＣＤ１５４の毒性のせいで臨床開発の継続は妨げられた。この試験では、観察された毒性には患者における血栓塞栓症イベントの誘導が含まれた。毒性懸念に基づいて、すべての試験が中止され、効能を維持し毒性を減少させるｍＡｂの再設計に向けて努力が傾けられた。
【０００８】
毒性の減少は達成されたが、αＣＤ１５４  ｍＡｂの効能および寛容誘導能力はかなり減少してしまった（非特許文献８）。
【０００９】
Ｂｉｏｇｅｎ−ＩｄｅｃおよびＵＣＢは最近、安全性が改善されたと伝えられている抗ＣＤ１５４抗体の開発を報告した。具体的には、彼らは、ＣＤＰ−７６５７またはルプリズマブと呼ばれるペグ化抗ヒトＣＤ１５４  Ｆａｂを産生したことを報告した。Ｆａｂは典型的には極めて短いｉｎ  ｖｉｖｏ半減期（すなわち、約４〜８時間）を有するので、このＦａｂはその薬物動態特性を改善することになった。しかし、臨床的に有効であると伝えられているが、伝えられるところによればこの抗体が示す効力は低い。さらに、Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｍｅｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂは、ＣＤ１５４に対する特異性を含むドメイン抗体−Ｆｃ融合タンパク質の開発を報告している。伝えられるところによれば、この融合タンパク質はマウス疾患モデル、特にＫＬＨチャレンジモデルおよびＮＺＢ×ＮＺＷ  ＳＬＥ（ループス）モデルにおいて効能を示している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】米国特許第６００１３５８号
【特許文献２】米国特許第６４４０４１８号
【特許文献３】米国特許第６５０６３８３号
【特許文献４】米国特許第７０７４４０６号
【特許文献５】米国特許第７１２２１８７号
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Ｎｏｅｌｌｅ、Ｒ．Ｊ．、Ｍａｃｋｅｙ、Ｍ．、Ｆｏｙ、Ｔ．、Ｂｕｈｌｍａｎｎ、Ｊ．ａｎｄ  Ｂｕｒｎｓ、Ｃ．、「ＣＤ４０  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｌｉｇａｎｄ  ｉｎ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ」、Ａｎｎ  Ｎ  Ｙ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  １９９７年  ８１５：３８４〜３９１頁
【非特許文献２】Ｍａｃｋｅｙ、Ｍ．Ｆ．、Ｂａｒｔｈ、Ｒ．Ｊ．、Ｊｒ．ａｎｄ  Ｎｏｅｌｌｅ、Ｒ．Ｊ．、「Ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ＣＤ４０／ＣＤ１５４  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｐｒｉｍｉｎｇ、ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ、ａｎｄ  ｅｆｆｅｃｔｏｒ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｅｌｐｅｒ  ａｎｄ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ」、Ｊ  Ｌｅｕｋｏｃ  Ｂｉｏｌ  １９９８年．６３：４１８〜４２８頁
【非特許文献３】Ｎｏｅｌｌｅ、Ｒ．Ｊ．、「ＣＤ４０  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｌｉｇａｎｄ  ｉｎ  ｃｅｌｌ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ」、Ａｇｅｎｔｓ  Ａｃｔｉｏｎｓ  Ｓｕｐｐｌ  １９９８年．４９：１７〜２２頁
【非特許文献４】Ｑｕｅｚａｄａ、Ｓ．Ａ．、Ｊａｒｖｉｎｅｎ、Ｌ．Ｚ．、Ｌｉｎｄ、Ｅ．Ｆ．ａｎｄ  Ｎｏｅｌｌｅ、Ｒ．Ｊ．、「ＣＤ４０／ＣＤ１５４  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  ａｔ  ｔｈｅ  Ｉｎｔｅｒｆａｃｅ  ｏｆ  Ｔｏｌｅｒａｎｃｅ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ」、Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００４年．２２：３０７〜３２８頁
【非特許文献５】Ｋｅｎｙｏｎ、Ｎ．Ｓ．、Ｃｈａｔｚｉｐｅｔｒｏｕ、Ｍ．、Ｍａｓｅｔｔｉ、Ｍ．、Ｒａｎｕｎｃｏｌｉ、Ａ．、Ｏｌｉｖｅｉｒａ、Ｍ．、Ｗａｇｎｅｒ、Ｊ．Ｌ．、Ｋｉｒｋ、Ａ．Ｄ．、Ｈａｒｌａｎ、Ｄ．Ｍ．、Ｂｕｒｋｌｙ、Ｌ．Ｃ．ａｎｄ  Ｒｉｃｏｒｄｉ、Ｃ．、「Ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｎｔｒａｈｅｐａｔｉｃ  ｉｓｌｅｔ  ａｌｌｏｇｒａｆｔｓ  ｉｎ  ｒｈｅｓｕｓ  ｍｏｎｋｅｙｓ  ｔｒｅａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  ａｎｔｉ−ＣＤ１５４」、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．、ＵＳＡ  １９９９年．９６：８１３２〜８１３７頁
【非特許文献６】Ｋｉｒｋ、Ａ．Ｄ．、Ｂｕｒｋｌｙ、Ｌ．Ｃ．、Ｂａｔｔｙ、Ｄ．Ｓ．、Ｂａｕｍｇａｒｔｎｅｒ、Ｒ．Ｅ．、Ｂｅｒｎｉｎｇ、Ｊ．Ｄ．、Ｂｕｃｈａｎａｎ、Ｋ．、Ｆｅｃｈｎｅｒ、Ｊ．Ｈ．、Ｊｒ．、Ｇｅｒｍｏｎｄ、Ｒ．Ｌ．、Ｋａｐｅｎ、Ｒ．Ｌ．、Ｐａｔｔｅｒｓｏｎ、Ｎ．Ｂ．、Ｓｗａｎｓｏｎ、Ｓ．Ｊ．、Ｔａｄａｋｉ、Ｄ．Ｋ．、ＴｅｎＨｏｏｒ、Ｃ．Ｎ．、Ｗｈｉｔｅ、Ｌ．、Ｋｎｅｃｈｔｌｅ、Ｓ．Ｊ．ａｎｄ  Ｈａｒｌａｎ、Ｄ．Ｍ．、「Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｗｉｔｈ  ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ａｇａｉｎｓｔ  ＣＤ１５４  ｐｒｅｖｅｎｔｓ  ａｃｕｔｅ  ｒｅｎａｌ  ａｌｌｏｇｒａｆｔ  ｒｅｊｅｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｎｏｎｈｕｍａｎ  ｐｒｉｍａｔｅｓ」、Ｎａｔ  Ｍｅｄ  １９９９年．５：６８６〜６９３頁
【非特許文献７】Ｓｉｄｉｒｏｐｏｕｌｏｓ、Ｐ．Ｉ．ａｎｄ  Ｂｏｕｍｐａｓ、Ｄ．Ｔ．、「Ｌｅｓｓｏｎｓ  ｌｅａｒｎｅｄ  ｆｒｏｍ  ａｎｔｉ−ＣＤ１５４  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｉｎ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｌｕｐｕｓ  ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ  ｐａｔｉｅｎｔｓ」、Ｌｕｐｕｓ  ２００４年、１３：３９１〜３９７頁
【非特許文献８】Ｆｅｒｒａｎｔ、Ｊ．Ｌ．、Ｂｅｎｊａｍｉｎ、Ｃ．Ｄ．、Ｃｕｔｌｅｒ、Ａ．Ｈ．、Ｋａｌｌｅｄ、Ｓ．Ｌ．、Ｈｓｕ、Ｙ．Ｍ．、Ｇａｒｂｅｒ、Ｅ．Ａ．、Ｈｅｓｓ、Ｄ．Ｍ．、Ｓｈａｐｉｒｏ、Ｒ．Ｉ．、Ｋｅｎｙｏｎ、Ｎ．Ｓ．、Ｈａｒｌａｎ、Ｄ．Ｍ．、Ｋｉｒｋ、Ａ．Ｄ．、Ｂｕｒｋｌｙ、Ｌ．Ｃ．ａｎｄ  Ｔａｙｌｏｒ、Ｆ．Ｒ．、「Ｔｈｅ  ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｆｃ  ｅｆｆｅｃｔｏｒ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  ａｎｔｉ−ＣＤ１５４  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ｄｅｐｅｎｄｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｎａｔｕｒｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ｃｈａｌｌｅｎｇｅ」、Ｉｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００４年  １６：１５８３〜１５９４頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
前述にかかわらず、改良された抗ＣＤ１５４抗体、すなわち、安全かつ効果的であり、優れた効力および薬物動態特性を含む抗ＣＤ１５４抗体の著しい必要性が当技術分野にはまだ存在する。本発明はこれらの目標を達成している。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
ヒト治療において使用するための改良された効能、安全性および薬物動態を有する抗ＣＤ１５４抗体を提供するのが本発明の目的である。
【００１４】
さらに具体的には、（ｉ）図２Ａ〜２Ｃに示される配列番号１５、１７および１８から選択される配列を有するポリペプチドを含むまたはからなる可変重ポリペプチド、ならびに（ｉｉ）図２Ａ〜２Ｃに示される配列番号２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０および３１から選択される配列を有するポリペプチドを含むまたはからなる可変軽ポリペプチドを含むヒト化抗ヒトＣＤ１５４抗体を提供するのが本発明の目的であるが、ただし、ヒト化抗ヒトＣＤ１５４抗体は配列番号１５の可変重ポリペプチドおよび配列番号２０の可変軽ポリペプチドを含まない。
【００１５】
さらに、（ｉ）図１Ａ〜Ｃに示される配列番号１の配列を有するポリペプチドを含むまたはからなる可変重ポリペプチド、および（ｉｉ）図１Ａ〜Ｃに示される配列番号２の配列を有するポリペプチドを含むまたはからなる可変軽ポリペプチドを含むヒト化抗ヒトＣＤ１５４抗体を提供するのが本発明の目的である。
【００１６】
さらに、Ｃ１Ｑに結合するならびにＦｃγＲ２および／またはＦｃγＲ３に結合する能力を欠くＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４定常領域を含む前の３つの段落に記載されている抗ヒトＣＤ１５４抗体を提供するのが本発明の目的である。
【００１７】
さらに、Ｃ１Ｑに結合するならびにＦｃγＲ２および／またはＦｃγＲ３に結合する能力を欠くヒトＩｇＧ１定常領域を含む前の４つの段落に記載されている抗ヒトＣＤ１５４抗体を提供するのが本発明の目的である。
【００１８】
さらに、Ｅ２６９ＲおよびＫ３２２Ａ突然変異（Ｋａｂａｔに従った番号付け）を含むヒトＩｇＧ１定常領域を含む前の５つの段落に記載されている抗ヒトＣＤ１５４抗体を提供するのが本発明の目的である。
【００１９】
さらに、図１Ａ〜Ｃに示される配列番号３および配列番号２のＩｇＧ１軽および重定常領域を含む前の段落のいずれかに従ったヒト化抗ヒトＣＤ１５４抗体を提供するのが本発明の目的である。
【００２０】
さらに、前の段落のいずれかに従ったヒト化抗ヒトＣＤ１５４抗体であって、抗体がＩｇＧ１アイソタイプであり、抗体のＦｃ領域が、ＦｃＲｎ結合を損なう突然変異、グリコシル化を損なうもしくは除去する突然変異またはＦｃγＲ２もしくはＦｃγＲ３などのＦｃＲもしくは別のＦｃＲに結合する抗体の能力を損なうもしくは補体への結合を損なう別の突然変異のようなエフェクター機能に影響を与える少なくとも１つの他の突然変異を導入するようにさらに変異導入されている前記ヒト化抗ヒトＣＤ１５４抗体を提供するのが本発明の目的である。
【００２１】
さらに、前の段落のいずれかに従ったヒト化抗ヒトＣＤ１５４抗体であって、抗体がＩｇＧ１アイソタイプであり、抗体のＦｃ領域が、Ｅ２３３Ｐおよび／もしくはＤ２６５Ａ突然変異または表１、２もしくは３に同定されているＦｃ突然変異のいずれかをさらに導入するように変異導入されている前記ヒト化抗ヒトＣＤ１５４抗体を提供するのが本発明の目的である。
【００２２】
さらに、前の段落のいずれかに従ったヒト化抗ヒトＣＤ１５４抗体であって、抗体がＩｇＧ１アイソタイプであり、抗体のＦｃ領域がＥ２３３Ｐ突然変異を導入するように変異導入されている前記ヒト化抗ヒトＣＤ１５４抗体を提供するのが本発明の目的である。
【００２３】
さらに、前の段落のいずれかに従ったヒト化抗ヒトＣＤ１５４抗体であって、抗体のＦｃ領域がｉｎ  ｖｉｖｏ半減期を改善する１つまたはそれ以上の他の突然変異を導入するようにさらに変異導入されている前記ヒト化抗ヒトＣＤ１５４抗体を提供するのが本発明の目的である。
【００２４】
さらに、前の段落のいずれかに従った少なくとも１つのヒト化抗ヒトＣＤ１５４抗体の治療的または予防的有効量を含む医薬組成物を提供するのが本発明の目的である。
【００２５】
さらに、前の段落のいずれかに従った少なくとも１つのヒト化抗ヒトＣＤ１５４抗体の治療的または予防的有効量を含む医薬組成物であって、抗原、細胞、組織、または器官をさらに含む前記医薬組成物を提供するのが本発明の目的である。
【００２６】
さらに、前の段落のいずれかに従った少なくとも１つのヒト化抗ヒトＣＤ１５４抗体の治療的または予防的有効量を含む医薬組成物であって、自己抗原、アレルゲン、炎症剤、薬物、またはＨＬＡがマッチしていない（アロ）もしくは異種（非ヒト）のドナー細胞をさらに含む前記医薬組成物を提供するのが本発明の目的である。
【００２７】
さらに、前の段落のいずれかに従った抗体または組成物を使用する免疫抑制の方法または免疫療法を提供するのが本発明の目的である。
【００２８】
さらに、前の段落のいずれかに従った抗体または組成物を投与することによりアレルギー、炎症性、もしくは自己免疫疾患を持つ対象または移植レシピエントを処置する方法を提供するのが本発明の目的である。
【００２９】
さらに、場合により遺伝的に操作されていることがあるドナー組織、器官、または細胞、例えば、ＣＡＲ−Ｔ（キメラ抗原受容体Ｔ細胞）またはＮＫ（ナチュラルキラー）細胞の移植前、同時または後に前の段落のいずれかに従った抗体または組成物を投与することにより対象においてＧＶＨＤを処置するまたは予防する方法を提供するのが本発明の目的である。
【００３０】
さらに、前の段落のいずれかに従った抗体または組成物を投与することにより寛容または延長された抗原特異的免疫抑制を誘発する方法であって、場合によりそれに対して寛容または延長された免疫抑制を誘発しようとしている抗原を含む細胞、抗原、組織、または器官の投与をさらに含む前記方法を提供するのが本発明の目的である。
【００３１】
さらに、前の段落のいずれかに従った抗体または組成物を投与することを含む、遺伝子、細胞、組織または器官治療の方法を提供するのが本発明の目的である。
【００３２】
さらに、前の段落のいずれかに従った抗体または組成物を投与することにより、乾癬、関節リウマチ、乾癬性関節炎、卵巣炎、ループスもしくはＳＬＥ、糖尿病、ＩＢＤ、クローン病、ＩＴＰ、甲状腺炎、関節リウマチ、重症筋無力症、全身性エリテマトーデス、グレーブス病、特発性血小板減少性紫斑病、溶血性貧血、真性糖尿病、炎症性腸疾患、クローン病、多発性硬化症、乾癬、薬物誘発性自己免疫疾患、または薬物誘発性ループスから選択される状態を処置する方法を提供するのが本発明の目的である。
【００３３】
さらに、細胞治療または器官もしくは骨髄移植において使用するための骨髄、器官もしくは免疫細胞を処置する方法であって、前記骨髄、器官、組織または免疫細胞を前の段落のいずれかに従った抗体または組成物と一緒にインキュベートすることを含み、例えば、処置された骨髄、組織、器官または免疫細胞がドナーおよび／またはレシピエントＴ細胞を含む、前記方法を提供するのが本発明の目的である。
【００３４】
さらに、それを必要とする患者において血栓性イベントを誘発することなく寛容を誘導する方法であって、前の段落のいずれかに従った抗体または組成物の有効量を患者に投与することを含み、場合により抗原、例えば、自己抗原、アレルゲン、炎症剤、薬物、またはＨＬＡがマッチしていない（アロ）ドナー細胞を投与することをさらに含む前記方法を提供するのが本発明の目的である。
【００３５】
さらに、移植された細胞、器官または組織を受けることになっているまたは受けたことがある患者において寛容、延長された免疫またはＴもしくはＢ細胞抑制を誘導する方法であって、例えば、薬物が治療抗体、受容体、融合タンパク質、ホルモン、成長因子またはサイトカインなどのバイオ医薬品である、前記方法を提供するのが本発明の目的である。
【００３６】
さらに、前の段落のいずれかに従った抗体または組成物の有効量を投与することによりＴ細胞媒介自己免疫障害を処置する方法を提供するのが本発明の目的である。
【００３７】
さらに、前の段落のいずれかに従った抗体または組成物の有効量を投与することによりＢ細胞媒介自己免疫障害を処置する方法を提供するのが本発明の目的である。
【００３８】
さらに、前の段落のいずれかに従った抗体または組成物の有効量を投与することにより、関節リウマチ、重症筋無力症、全身性エリテマトーデス、グレーブス病、ハンチントン病、特発性血小板減少性紫斑病、溶血性貧血、真性糖尿病、パーキンソン病、乾癬、アジソン病、多発性硬化症、ループス、および薬物誘発性自己免疫疾患、例えば、薬物誘発性ループスから選択される自己免疫疾患を処置する方法を提供するのが本発明の目的である。
【００３９】
さらに、前の段落のいずれかに従って処置する方法であって、抗原の投与を含む前記方法を提供するのが本発明の目的である。
【００４０】
さらに、前の段落のいずれかに従った抗体または組成物の有効量を投与することにより、ＧＶＨＤ、骨髄移植（ＢＭＴ）、多発性硬化症、ループス、ＩＴＰ、関節リウマチ、喘息、ＩＢＤまたは別の炎症性腸障害を処置するまたは予防する方法を提供するのが本発明の目的である。
【００４１】
ＣＤ４０シグナル伝達により全体的にまたは部分的に媒介されるヒト状態、障害もしくは疾患、または前述のいずれかの症状を処置するための方法であって、前の段落のいずれかに従った抗体または組成物の有効量を投与することを含み、例えば、ヒト状態、障害もしくは疾患が炎症性、アレルギー、もしくは自己免疫応答もしくは線維症である、またはヒト状態、障害もしくは疾患がループス腎炎、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、脊椎関節炎、薬物誘発性エリテマトーデス、炎症性腸疾患、クローン病、乾癬および多発性硬化症から選択される、またはヒト状態、障害もしくは疾患がアレルギー性接触皮膚炎、汎発性脱毛症、アナフィラクトイド紫斑病喘息、重症喘息、代謝性喘息、アレルギー性喘息、アトピー性皮膚炎、疱疹状皮膚炎、持久性隆起性紅斑、輪状紅斑、多形性紅斑；結節性紅斑、アレルギー性肉芽腫症、環状肉芽腫、顆粒球減少症、過敏性肺炎、角膜炎、ネフローゼ症候群、オーバーラップ症候群、鳩飼病、特発性多発神経炎、蕁麻疹、ブドウ膜炎、若年性皮膚筋炎、および白斑から選択される、またはヒト状態、障害もしくは疾患がアレルギー性気管支肺アスペルギルス症；自己免疫溶血性貧血；黒色表皮腫；アレルギー性接触皮膚炎；アジソン病；アトピー性皮膚炎；円形脱毛症；汎発性脱毛症；アミロイドーシス；アナフィラクトイド紫斑；アナフィラキシー様反応；再生不良性貧血；血管浮腫、遺伝性；血管浮腫、特発性；強直性脊椎炎；動脈炎、頭蓋の；動脈炎、巨細胞；動脈炎、高安の；動脈炎、側頭部の；喘息；毛細血管拡張性運動失調症；自己免疫性卵巣炎；自己免疫性精巣炎；自己免疫性多腺内分泌不全症；ベーチェット病；ベルジェ病；バージャー病；水疱性天疱瘡；カンジダ症、慢性皮膚粘膜；カプラン症候群；心筋梗塞後症候群；心膜切開後症候群；心炎；セリアックスプルー；シャーガス病；チェディアック・東症候群；チャーグ・ストラウス病；コーガン症候群；寒冷凝集素病；クレスト症候群；クローン病；クリオグロブリン血症；原因不明の線維化性胞隔炎；疱疹状皮膚炎；皮膚筋炎；真性糖尿病；ダイアモンド・ブラックファン症候群；ディジョージ症候群；円板状エリテマトーデス；好酸球性筋膜炎；上強膜炎；持久性隆起性紅斑；輪状紅斑；多形性紅斑；結節性紅斑；家族性地中海熱；フェルティ症候群；肺線維症；糸球体腎炎、アナフィラクトイド；糸球体腎炎、自己免疫性；糸球体腎炎、連鎖球菌感染後；糸球体腎炎、移植後；糸球体症、膜性；グッドパスチャー症候群；移植片対宿主病；顆粒球減少症、免疫介在性；環状肉芽腫；肉芽腫症、アレルギー性；肉芽腫筋炎；グレーブス病；橋本甲状腺炎；新生児溶血性疾患；ヘモクロマトーシス、特発性；ヘノッホ・シェーンライン紫斑病；肝炎、慢性活動性および慢性進行性；組織球症ｘ；好酸球増加症候群；特発性血小板減少性紫斑病；ヨブ症候群；若年性皮膚筋炎；若年性関節リウマチ（若年性慢性関節炎）；川崎病；角膜炎；乾性角結膜炎；ランドリー・ギラン・バレー・ストロール症候群；ハンセン病、らい腫型；レフレル症候群；ライエル症候群；ライム病；リンパ腫様肉芽腫症；肥満細胞症、全身性；混合性結合組織病；多発単神経炎；マックル・ウェルズ症候群；皮膚粘膜リンパ節症候群；皮膚粘膜リンパ節症候群；多中心性網組織球症；多発性硬化症；重症筋無力症；菌状息肉症；壊死性血管炎、全身性；ネフローゼ症候群；オーバーラップ症候群；脂肪織炎；発作性寒冷ヘモグロビン尿症；発作性夜間ヘモグロビン尿症；類天疱瘡；天疱瘡；紅斑性天疱瘡；落葉状天疱瘡；尋常性天疱瘡；鳩飼病；間質性肺炎、過敏性；結節性多発動脈炎；リウマチ性多発筋痛症；多発性筋炎；多発神経炎、特発性；ポルトガル家族性多発ニューロパチー；子癇前症／子癇；原発性胆汁性肝硬変；進行性全身性硬化症（強皮症）；乾癬；乾癬性関節炎；肺胞蛋白症；肺線維症、レーノー現象／症候群；リーデル甲状腺炎；ライター症候群、再発性多発軟骨炎；リウマチ熱；関節リウマチ；サルコイドーシス；強膜炎；硬化性胆管炎；血清病；セザリー症候群；シェーグレン症候群；スティーブンス・ジョンソン症候群；スチル病；亜急性硬化性全脳炎；交感性眼炎；全身性エリテマトーデス；移植拒絶；潰瘍性大腸炎；未分化結合織疾患；蕁麻疹、慢性；蕁麻疹、寒冷；ブドウ膜炎；白斑；ウェーバー・クリスチャン病；ウェゲナー肉芽腫症；ならびにウィスコット・アルドリッチ症候群から選択される、前記方法を提供するのが本発明の目的である。
【図面の簡単な説明】
【００４２】
【図１−１】図１Ａ〜１Ｃは、ＩＤＥＣ−１３１に由来した本発明の抗ＣＤ１５４抗体のアミノ酸配列を示す図である。図中、重と軽鎖ポリペプチド両方の可変領域残基はボールドで示され、ＣＤＲは黄色で強調され、親和性成熟突然変異残基は下線が施され、Ｆｃ突然変異（Ｅ→ＲおよびＫ→Ａ）赤色と下線で示されている。
【図１−２】図１−１の続き。
【図１−３】図１−２の続き。
【図２−１】図２Ａ〜２Ｃは、異なる改変ＩｇＧ１定常領域ならびにＩＤＥＣ−１３１由来の改変軽および重鎖配列ならびにその親マウス抗体を整列させている図である。
【図２−２】図２−１の続き。
【図２−３】図２−２の続き。
【図３】図３は、本発明のヒト化抗ヒトＣＤ１５４抗体（図ではおよび本出願では「ＩＮＸ０２１」と呼ばれる）の結合をＣＤ１５４発現ジャーカット細胞へのその結合能力についてＩＤＥＣ−１３１と比較するＢＩＡｃｏｒｅ結合アッセイの結果を示す図である。示されているように、本発明の抗体は、ＣＤ１５４（ジャーカット細胞上で発現されている）に対する結合親和性の増加がＩＤＥＣ−１３１と比べて約５倍である。
【図４】図４は、本発明の抗体（「ＩＮＸ０２１」）がＩＤＥＣ−１３１よりも強力にＴ細胞ＣＤ１５４駆動Ｂ細胞活性化を推進することを示す実験結果の図である。
【図５】図５は、ＩＮＸ０２１と同じ突然変異（Ｋ３２２ＡおよびＥ２６９Ｒ）を含有するヒトＩｇＧ抗マウスＣＤ１５４抗体のＦｃＲ突然変異体が皮膚寛容モデルで寛容を誘導することを示す実験結果の図である。
【図６】図６は、ＩＮＸ０２１の免疫複合体がマウスまたはヒト血小板の凝集または活性化をｉｎ  ｖｉｔｒｏでは誘導しないことを示す実験結果の図である。
【図７】図７Ａ〜７Ｄは、ＩＮＸ０２１が陽性対照抗体と比べて血小板活性化または血小板に対する他の効果を誘発しないことを示す実験結果の図である。図７ＡはＩＮＸ０２１が血栓性ストレスを誘発しないことを示しており、図７ＢはＩＮＸ０２１が、肺塞栓が観察されないことにより証明されるように、血小板凝集も凝固も引き起こさないことを示しており、図７ＣはＩＮＸ０２１が循環血小板の数に影響を与えないことを示しており、図７ＤはＦｃγＲＩＩａ  Ｔｇマウスで観察されるこの抗体の観察された利点をまとめている。
【図８】図８Ａおよび８Ｂは、ＦｃＲ結合および補体活性を減少させるまたは除去するＦｃ突然変異（ＩＮＸ０２１に含有されるＥ２６９ＲおよびＫ３２２Ａ突然変異）を含有する抗マウスＣＤ１５４  ＩｇＧ１抗体が動物モデルにおいて免疫抑制性であることを示す図である。図８Ａはこれらの突然変異を含有する抗ＣＤ１５４抗体がＥＡＥを抑制することを示しており、図８Ｂはこれらの突然変異を含有する抗ＣＤ１５４抗体が体液性免疫を抑制し、ミエリン／オリゴデンドロサイト糖タンパク質（「ＭＯＧ」）に応答して寛容を誘導することを示している。
【図９】図９は、Ｔ細胞誘導Ｂ細胞活性化に対するＩＮＸ０２１を含むＩＤＥＣ−１３１の異なる抗体変異体の効果をＣＤ８６発現に基づいて比較している図である。その効果は変わりやすく、増加した結合親和性が、より優れた効力、すなわち、免疫抑制活性と必ずしも相関していないことを示している。
【図１０】図１０Ａおよび１０Ｂは、ＩｇＧおよびＩｇＭ抗体の産生に対するＩＮＸ０２１およびキメラ５ｃ８抗体の効果をＫＬＨアッセイにおいて比較している図である。図１０ＡはＩｇＧに対するＩＮＸ０２１およびキメラ５ｃ８抗体の効果を比較し、図１０ＢはＩｇＭに対するＩＮＸ０２１およびキメラ５ｃ８抗体の効果を比較している。
【図１１】図１１Ａおよび１１Ｂは、胚中心スコアーに対する溶媒、ＩＮＸ０２１および５ｃ８抗体の効果を比較している図である。図１１Ａは胚スコアー比較を示しており、図１１Ｂは処置された動物の脾臓およびリンパ節（ＬＮ）での胚中心の数および細胞充実性の程度を比較するヒストグラムを含有する。
【図１２】図１２は別の抗ＣＤ１５４抗体（Ｂｉｏｇｅｎ／ＵＣＢのペグ化αＣＤ１５４Ｆａｂ）を用いた公表された結果と比べた観察された病変頻度をまとめている表である。
【発明を実施するための形態】
【００４３】
本発明を詳細に開示することに先立って、以下の定義を提供する。別の方法で定義されていなければ、本明細書で使用される専門および科学用語はすべて、本発明が属する分野の当業者に一般的に理解されているのと同じ意味を有する。
【００４４】
本発明に関して本明細書で使用される用語「抗体」は、単離された組換えもしくは合成抗体、抗体コンジュゲートまたは抗体誘導体を含む。用語「抗体」は、別の方法で示されるまたは文脈から理解されることがなければ、抗原結合断片を含む、抗体断片を含むことが意図される場合が多い。抗原結合断片は特異的結合を巡って無傷の抗体と競合する。一般的には、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｃｈ．７（Ｐａｕｌ、Ｗ．、ｅｄ．、２ｎｄ  ｅｄ．Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎ．Ｙ．（１９８９））を参照されたい。抗原結合断片は組換えＤＮＡ技法によりまたは無傷の抗体の酵素的もしくは化学的切断により産生してもよい。いくつかの実施形態では、抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）２、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ’）３、Ｆｄ、Ｆｖ、ドメイン抗体（ｄＡｂ）、他の一価および二価断片、相補性決定領域（ＣＤＲ）断片、一本鎖抗体（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂ、およびｓｃＦａｂδＣ）、キメラ抗体、ダイアボディ、トリアボディ、ミニボディ、ナノボディ、およびポリペプチドに特異的抗原結合を与えるのに十分な抗体の少なくとも一部を含有するポリペプチド、ならびに前述のものの融合物および誘導体を含む。例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ  ａｎｄ  Ｈｕｄｓｏｎ、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２３：１１２６〜１１３６頁（２００５）およびＨｕｓｔ  ｅｔ  ａｌ．、ＢＭＣ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  ７：１４（２００７）を参照されたい。
【００４５】
別の方法で述べられていなければまたは文脈から別なふうに意味されている場合には、本発明の「抗体」は抗体全体およびその任意の抗原結合断片、抗体コンジュゲート（すなわち、機能的部分にコンジュゲートしているまたは会合している抗体またはその抗原結合断片）を含む、１つまたはそれ以上の改変（例えば、アミノ酸挿入、欠失、置換、翻訳後修飾またはその欠如、等）を含有することがある抗体誘導体または変異体を含む。抗体コンジュゲートを含む抗体誘導体は、ＣＤ１５４に特異的に結合する本発明の抗原結合断片を基盤にしてもよいし含んでいてもよい。さらに、上述の抗体実施形態はマウス、ハムスター、ヤギ、ウサギ、キメラ、ヒト化、または完全ヒト抗体、断片、誘導体、もしくはコンジュゲートでもよい。本発明のある特定の態様では、用語「抗体」は上に列挙される抗体実施形態のうちの１つまたはそれ以上を除外することがあることは理解されており；そのような状態は当業者には明らかになる。
【００４６】
用語「エフェクター機能」とは、免疫系のタンパク質および／または細胞に結合する抗体のＦｃまたは定常領域の機能的能力のことである。エフェクター機能が低下した抗体およびそのような抗体を操作するための方法は当技術分野では周知であり（例えば、国際公開第０５／１８５７２号、国際公開第０５／０３１７５号、および米国特許第６２４２１９５号参照）、本明細書でさらに詳細に説明される。典型的なエフェクター機能は補体タンパク質（例えば、補体タンパク質Ｃ１ｑ）、および／またはＦｃ受容体（ＦｃＲ）（例えば、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩＩ、および／またはＦｃγＲＩＩＩｂ）に結合する能力を含む。前述の分子のうちの１つまたはそれ以上に結合できる機能的意義は、限定せずに、オプソニン化、食作用、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）および／またはエフェクター細胞調節を含む。エフェクター機能の低下とは、減少した、類似する、同一の、または増加した結合親和性を有するにもかかわらず、抗体の可変領域（またはその断片）の抗原結合活性を維持しつつ、その同族受容体へのまたは補体タンパク質もしくはエフェクター細胞へのＦｃの結合により少なくとも部分的に誘導される生化学的または細胞活性のうちの１つまたはそれ以上の低下のことである。本発明の特定の抗体は低下したエフェクター機能を示す。エフェクター機能、例えば、Ｆｃ受容体または補体タンパク質へのＦｃの結合の低下は減少倍率（例えば、１．５倍、２倍、などの減少）の点から表すことができ、例えば、当技術分野で公知の結合アッセイを使用して決定される結合活性のパーセント減少に基づいて計算してもよい（例えば、国際公開第０５／１８５７２号参照）。
【００４７】
文脈から別の方法で要求されることがなければ、単数形用語には複数形を含ませ、複数形用語には単数形を含ませる。
【００４８】
本明細書および特許請求の範囲全体を通じて、単語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」もしくは「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」のような変形は述べられた整数または整数の群の包含を意味するが、他の任意の整数または整数の群の排除を意味しないと理解される。
【００４９】
用語「ＣＤ１５４」とは、活性化されたＴ細胞上で発現されるリガンドのことである。ＣＤ１５４は、ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）、ＣＤ４０カウンター受容体（ＣＤ４０ＣＲ）、ｇｐ３９、Ｔ−ＢＡＭ、Ｔ−細胞活性化分子、ＴＲＡＦ、ＴＮＦ関連活性化タンパク質（ＴＲＡＰ）、および腫瘍壊死因子リガンドスーパーファミリーメンバー５（ＴＮＦＳＦ５）などの当技術分野ではいくつかの他の名称で知られている（Ｇａｕｃｈａｔ  ｅｔ  ａｌ．、１９９３年  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．３１５：２５９〜２６６頁；Ｇｒａｆ  ｅｔ  ａｌ．１９９２年、Ｅｕｒｏｐ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎ．２２：３１９１〜３１９４頁；Ｈｏｌｌｅｎｂａｕｇｈ  ｅｔ  ａｌ．、１９９２年  ＥＭＢＯ  Ｊ．１１：４３１３〜４３２１頁）。これらの用語は本出願全体を通じて互換的に使用されている。本発明の、抗体を含む、ＣＤ１５４結合タンパク質は、ヒトＣＤ１５４に特異的に結合し、交差反応し、したがって、他の種のＣＤ１５４に特異的に結合することがある。ある特定の実施形態では、本発明の、抗体を含む、ＣＤ１５４結合タンパク質は、ヒトＣＤ１５４、マウスＣＤ１５４または非ヒト霊長類ＣＤ１５４に特異的に結合する。
【００５０】
用語「抗ＣＤ１５４抗体」は、例えば、バクテリオファージにより発現される抗体のような、組換えＤＮＡ技術を使用して産生される合成抗体または組換え抗体も包含する。用語「抗ＣＤ１５４抗体」は、抗体をコードするＤＮＡ分子の合成により産生された抗体、およびＤＮＡ分子が抗体タンパク質または抗体を特定するアミノ酸配列を発現する抗体を含むと解釈されるべきであり、そのＤＮＡまたはアミノ酸配列は、当技術分野で利用可能であり周知である合成ＤＮＡまたはアミノ酸配列技術を使用して得られている。
【００５１】
本明細書の「ＦｃＲ結合を除去するまたは減少させるおよび毒性を除去する突然変異（単数または複数）」とは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでおよび／またはｉｎ  ｖｉｖｏで血小板減少症または血栓症または凝固を除去するまたは減少させる突然変異（単数または複数）のことである。ＦｃＲ結合を除去するまたは減少させ他のＦｃエフェクター機能に影響を与える（障害するまたは増強する）ように改変してもよい、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４を含む異なるヒト抗体型のＦｃまたは定常領域の部位は当技術分野では周知である。ヒトＩｇＧ１  Ｆｃまたは定常領域で改変してもよい例となる突然変異は表１〜３におよび以下の実施例に同定されている。
【００５２】
「補体機能を除去するまたは低下させおよび寛容誘導特性を維持する突然変異（単数または複数）」とは、ヒト定常領域、好ましくは、ヒトＩｇＧ１もしくはＩｇＧ３定常領域を含有するヒト、キメラ、またはヒト化抗体であって、そのＦｃ領域が補体結合を除去するまたは実質的に減少させるために１つまたはそれ以上の部位で変異導入されている前記ヒト、キメラ、またはヒト化抗体での突然変異（単数または複数）のことである。好ましくは、そのような突然変異は、ｉｎ  ｖｉｖｏで寛容を誘導する抗体の能力に認識できるほどの影響を与えることはない。これは、皮膚移植モデルなどの適切な寛容モデルを使用して確立することができる。補体結合を除去するまたは減少させるように改変してもよく、他のＦｃエフェクター機能に影響を与えてもよい（障害するまたは増強する）、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４を含む異なるヒト抗体型のＦｃまたは定常領域での部位は当技術分野では周知である。ＩｇＧ１で改変してもよい例となる部位は表１〜３および以下の実施例に同定されている。
【００５３】
「患者」とはヒトでも非ヒトでも意味することができ、好ましくは哺乳動物である。好ましい実施形態では、本発明は、突然変異されたＩｇＧ１またはＩｇＧ３定常領域を含有するヒト治療に適した抗ヒトＣＤ１５４抗体であって、そのような突然変異は血小板減少症もしくは血栓症もしくは凝固反応のような毒性もしくは安全性への懸念または補体反応に付随する毒性を除去するまたは実質的に阻害し、好ましくは、そのような抗体はｉｎ  ｖｉｖｏで寛容または延長された体液性抑制を誘導する能力を保持している、前記抗ヒトＣＤ１５４抗体を産生する。
【００５４】
本明細書で使用されるように、「対象」とは、生物、または、例えば、培養された細胞株、生検、血液サンプル、もしくは細胞を含有する液体サンプルを含む、それに由来する細胞サンプル、組織サンプルもしくは器官サンプルのことである。多くの例では、対象またはそれに由来するサンプルは複数の細胞型を含む。一実施形態では、サンプルは、例えば、腫瘍と正常細胞の混合物を含む。一実施形態では、サンプルは少なくとも１０％、１５％、２０％、以下参照、９０％、または９５％の腫瘍細胞を含む。生物は、ウシ、ブタ、マウス、ラット、ニワトリ、ネコ、イヌ、等のような動物を含むがこれらに限定されない動物であってよく、通常は、ヒトなどの哺乳動物である。
【００５５】
本発明に関係してその種々の文法上の形での用語「処置する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」とは、疾患状態、疾患進行、疾患原因物質（例えば、細菌またはウイルス）、または他の異常な状態の有害作用を予防する（すなわち、化学防御）、治癒する、元に戻す、減弱する、軽減する、最小化する、抑制する、または停止することである。例えば、処置は、疾患の症状（すなわち、必ずしもあらゆる症状ではない）を軽減するまたは疾患の進行を減弱することを含んでもよい。
【００５６】
抗ＣＤ１５４抗体が潜在的に本明細書で使用される治療効果のある、「自己免疫の処置または予防」またはがん、感染、炎症、アレルギー、移植、移植片対宿主病および他の状態などの別の疾患状態を「処置するまたは予防する」とは、前記疾患の進行を部分的にまたは全体的に阻害する、遅延する、または予防することである。がんの場合、これは、哺乳動物、例えば、ヒトにおいてがん転移を処置するもしくは阻害する；がん転移を含むがんの再発を阻害する、遅延するもしくは予防する；またはがんの発症もしくは発生を予防する（化学防御）ことを意味する。さらに、本発明の方法は、がんに罹ったヒト患者の処置のために実行してもよい。しかし、前記方法は他の哺乳動物におけるがんの処置にも効果的である可能性もある。好ましい実施形態では、主題の抗体を使用して、それを必要とする対象において、自己免疫、アレルギー、炎症、移植、ＧＶＨＤ、骨髄移植（ＢＭＴ）を処置し、抗原特異的寛容または延長された抗原特異的免疫抑制、特にＴ細胞および／もしくはＢ細胞の分化、活性化および／もしくは増殖の抑制を誘導する。好ましい適応症は、多発性硬化症、ループスもしくはＳＬＥ、ＩＴＰ、ＩＢＤ、クローン病、炎症性腸疾患、クローン病、乾癬、ブドウ膜炎、関節リウマチ、喘息、ＧＶＨＤ、骨髄移植、糖尿病、関節リウマチ、乾癬性関節炎、乾癬、細胞移植、組織移植、器官移植、骨髄移植、細胞および遺伝子治療、卵巣炎ならびに甲状腺炎を含む。
【００５７】
本明細書で使用されるように、用語「治療有効量」とは、状態、例えば、自己免疫、アレルギー、炎症、ＧＶＨＤもしくは移植を処置する、または自己抗原、アレルゲン、炎症誘導薬、移植された細胞、組織、もしくは器官などの抗原に対する、もしくはバイオ医薬品、例えば、治療抗体、Ｉｇ融合タンパク質、ホルモン、成長因子、もしくは他の治療タンパク質もしくはポリペプチドなどの薬物に対する免疫応答、特に、Ｔ細胞もしくはＢ細胞抗体応答を減らすもしくは除去するのに必要な治療レジメンにおける処置の量を限定することを意図されている。
【００５８】
本明細書で使用されるように、用語「予防有効量」とは、状態、または疾患の進行および症状、例えば、自己免疫、アレルギー、炎症、ＧＶＨＤまたは抗移植、薬物もしくは拒絶応答を予防するのに必要な治療レジメンにおける処置の量を限定することを意図されている。
【００５９】
本発明は、ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ（現在は、ＢｉｏｇｅｎＩＤＥＣ）により開発されたヒト化抗体ＩＤＥＣ−１３１に由来したヒト治療において使用するための改良された抗ＣＤ１５４抗体を提供する。ＩＤＥＣ−１３１は、２５℃でのＢＩＡｃｏｒｅによる検出ではヒトＣＤ１５４に１５１ｐｍのＫＤで結合する高親和性抗体である。
【００６０】
ＩＤＥＣ−１３１は、米国特許第５７４７０３７号に開示されているマウス抗ヒトＣＤ１５４抗体（２４−３１）に由来したヒトＩｇＧ１アイソタイプのヒト化抗ＣＤ１５４抗体である。市販されている２４−３１を分泌するハイブリドーマ細胞株はアメリカ合衆国培養細胞系統保存機関に寄託され、寄託された細胞株はＡＴＣＣ受託番号ＨＢ１７１２と命名された。
【００６１】
ＩＤＥＣ−１３１の配列、ならびに種々のアレルギー、自己免疫および炎症性適応症を処置する際の、ならびにＴおよびＢ細胞媒介免疫応答を抑制するためのその使用は、米国特許第６００１３５８号、米国特許第６４４０４１８号、米国特許第６５０６３８３号、米国特許第７０７４４０６号および米国特許第７１２２１８７号に開示されている。ＴおよびＢ細胞免疫に対するその強力な免疫抑制効果および高親和性を含むその特性に基づいて、ＩＤＥＣ−１３１はヒト臨床試験へと進められた。特に、ＩＤＥＣ−１３１は、２つの自己免疫適応症、すなわち、特発性血小板減少症紫斑病（「ＩＴＰ」）および寛解／再発型多発性硬化症（「ＲＲ−ＭＳ」）を処置するためにＩＤＥＣにより後援されるヒト臨床試験において使用されてきた。ＩＤＥＣ−１３１を用いたこれらの臨床試験はある程度の臨床的効能試験を示したが（比較的少数の患者で極めて早期にであったが）、これもマウス抗ヒトＣＤ１５４抗体（コロンビア大学のＳｅｔｈ  Ｌｅｄｅｒｍａｎにより単離されたマウス５ｃ８抗体）に由来する、Ｂｉｏｇｅｎが開発した別のＩｇＧ１抗ヒトＣＤ１５４抗体がヒト患者において有害作用を誘発したことが報告された後、この臨床試験は停止された。特に、Ｂｉｏｇｅｎキメラ化５ｃ８抗体が臨床試験で使用されると、この抗体は有害血栓形成イベント（「ＴＥ」）を招いて臨床試験で数人に患者の脳卒中および死亡をもたらした。本発明は、ＩＤＥＣ−１３１との比較において、薬物動態の他の利点を得るとともにこれらの問題に取り組んでいる。
【００６２】
これとは対照的に、本発明は、ＩＤＥＣ−１３１同様にヒトＩｇＧ１アイソタイプであるが、そのＦｃ領域がＦｃＲ結合と補体活性化の両方を除去するように操作されている、ＩＤＥＣ−１３１由来のヒト化変異抗ヒトＣＤ１５４抗体を提供する。特に、その定常領域はＥ２６９ＲおよびＫ３２２Ａ突然変異を含有するように操作されている（これらの突然変異残基はＫａｂａｔ抗体番号付け方式に従って番号付けされている）。これらの突然変異はそれぞれ減少したＦｃγＲＩＩａおよびＣ１ｑ結合を生じる。特に、得られる改変抗体は、制限されたＦｃＲ／Ｃ１ｑ結合を有し、すなわち、この抗体は血小板上のＦｃγＲ２にもＦｃγＲ３にも結合せず、補体に結合せず活性化もしない。これとは対照的に、ＦｃＲｎへのその結合は影響を受けない。下に開示され、本明細書で開示される実験データにより支持されるように、これらの突然変異を含有する抗ＣＤ１５４  ＩｇＧ１抗体は、異なる実験モデルにおいてアッセイされる場合、マウスまたはヒト血小板上でｉｎ  ｖｉｔｒｏでもｉｎ  ｖｉｖｏでもいかなる検出可能な血栓形成促進性活性を示さない。
【００６３】
さらに、ＩＤＥＣ−１３１の可変重および軽配列は親和性成熟によりさらに操作された。親和性成熟は、その所望の免疫抑制特性をまだ維持しつつ、ＩＤＥＣ−１３１と比べて得られる抗ヒトＣＤ１５４抗体の結合親和性を増強することを期待して実行された。しかし、言及したように、ＩＤＥＣ−１３１は既にヒトＣＤ１５４に対して強い結合親和性を有し（１６１ｐｍ）、異なるモデル（ＥＡＥ、体液性免疫抑制およびアロ特異的寛容モデル）において強力に免疫抑制性であるために、この結果は保証されていたもの到底なかった。
【００６４】
多くの実験および連続的スクリーニング法の後、ＩＤＥＣ−１３１と比べて改良された親和性を有するヒト化抗体（ＩＮＸ０２を含む）を産生するＩＤＥＣ−１３１の可変重および軽鎖の突然変異版が得られた。具体的には、ＩＮＸ０２１が１２の他の変異体と同様に得られた。これらのヒト化変異体は評価され、ＩＮＸ０２１はその有利な結合に基づいて（ヒトＣＤ１５４に対する親和性がＩＤＥＣ−１３１の約５倍）ヒト治療の主要候補として選択され、ＩＮＸ０２１はＩＤＥＣ−１３１と比べておよび他の変異体と比べても優れた機能的（免疫抑制）特性も有している。
【００６５】
図１Ａ〜Ｃ（本発明のヒト化ＩｇＧ１抗ヒトＣＤ１５４抗体、ＩＮＸ０２１の配列を含有する）に示されるように、この抗体は重鎖ＣＤＲ３に２つの突然変異、軽鎖ＣＤＲ１に３つの突然変異および軽鎖ＣＤＲ３に２つの突然変異（ＩＤＥＣ−１３１と比べて）を含有する。したがって、合計で７つのＣＤＲ残基が改変されていた。下に示されるように意外にも、得られたヒト化抗ヒトＣＤ１５４抗体はヒトＣＤ１５４に、以前述べられたようにそれ自体がヒトＣＤ１５４に非常に高親和性で結合する親抗体の約５倍の親和性で結合する。単一のＣＤＲ改変でさえ抗体結合親和性に劇的な影響を与えてしまうことがあるので、これは驚きである。さらに、既に比較的高い親和性の抗体の親和性が改良されうることは予測可能ではない。
【００６６】
この改変されたヒト化抗体は異なるｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏモデルでアッセイされる場合、非常に強力な免疫抑制特性を有する。具体的には、ＩＮＸ０２１は体液性免疫、ＥＡＥを強力に抑制し、アロ特異的寛容または延長された抗原特異的Ｔ細胞非応答性を誘導する。下に示されるように、ＩＮＸ０２１は、ＩＤＥＣ−１３１と比べてＴ細胞ＣＤ１５４駆動Ｂ細胞活性化のより強力な阻害を誘発する。
【００６７】
したがって、本発明の抗体は（ＩＤＥＣ−１３１と比べて）
（ｉ）ヒトＣＤ１５４に対してＩＤＥＣ−１３１の５倍の結合親和性を有する、
（ｉｉ）ＩＤＥＣ−１３１と比べてより強力に免疫抑制活性を誘発する、
（ｉｉｉ）ＩＤＥＣ−１３１同様に、ＴおよびＢ（体液性）免疫を抑制し、例えば、ＥＡＥを抑制し、アロ特異的寛容を誘導し、ならびに
（ｉｖ）ＦｃＲおよびＣ１ｑ結合を実質的に減らすＦｃ領域内の突然変異のせいでＩＤＥＣ−１３１と比べて改良された安全性プロファイルを示し、その結果、マウスまたはヒト血小板上でｉｎ  ｖｉｔｒｏでもｉｎ  ｖｉｖｏでもいかなる検出可能な血栓形成促進性活性も示さない。
【００６８】
これらの組み合わせた特性に基づいて、主題の抗ヒトＣＤ１５４抗体はヒト治療において使用するのによく適している。なぜならば、主題の抗ヒトＣＤ１５４抗体は患者において増強された安全性プロファイルを示すはずであり、ＩＤＥＣ−１３１よりも強力であり、したがって、より効果的であるはずだからである。この抗体の増強された結合親和性は皮下投与を介したその投与を促進すると見込まれる。これは慢性的ヒト適応症を処置する際のその潜在的使用に有益である。
【００６９】
さらに、主題の抗体は、無傷である、すなわち、完全長ＩＧｇ１を含むので、Ｂｉｏｇｅｎ／ＵＣＢにより開発中のペグ化ＦａｂにおよびＢｒｉｓｔｏｌ  Ｍｅｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂにより開発中のＣＤ１５４特異的ディアボディに薬物動態上のおよび安全性の利点を提供することができる。
【００７０】
さらに、主題の抗体はより高い効力を有するため、潜在的に抗体を投与する回数がもっと少なくて済むので、これは投薬をさらに増強する可能性がある。これが重要なのは、主題の抗体の適用は大半が、いかなる効果的な治療レジメンにも繰返し投薬が必要となる慢性的ヒト自己免疫、アレルギーまたは炎症性適応症の処置を目的とするからである。特に、本発明の抗体はＢまたはＴ細胞免疫抑制が治療的に望ましい処置によく適しているはずである。
【００７１】
したがって、本出願では、出願者は、ヒト免疫療法において使用するための改良された親和性および他の薬物動態特性を有する新規の改良されたヒト化抗ヒトＣＤ１５４抗体であって、ヒト患者において毒性を誘発しないはずであり、特にこれらの抗体はヒト対象において血小板凝集または血栓塞栓イベントを誘発しないはずであり、さらに、補体に結合して活性化することがさらにできないことに基づいて、ＡＤＣＣまたはＣＤＣ媒介細胞傷害性をさらに媒介しないはずである前記ヒト化抗ヒトＣＤ１５４抗体を提供する。実施例に示されるように、本発明の抗体は、ＩＤＥＣ−１３１および以前ヒト治療に使用された別のＣＤ１５４抗体と比べてかなり改良された機能的、薬物動態的特性を有する。したがって、この抗体は、ヒト治療において使用された場合には、臨床的利益を提供するはずである。
【００７２】
本発明の抗体ＩＮＸ０２１はそれぞれＦｃγＲ２および３結合、ならびにＣ１ｑ結合を減少させる２つの突然変異を含有するが、他のＦｃ受容体もしくは補体への結合をさらに減少させるまたは他のエフェクター機能を変化させてもよいＦｃ領域中の他の突然変異を導入してもよいことがさらに想定されている。他の考えられる突然変異の例は当技術分野では公知であり、例えば、Ｓｈｉｅｌｄｓ  ＲＬ、Ｎａｍｅｎｕｋ  ＡＫ、Ｈｏｎｇ  Ｋ、ｅｔ  ａｌ．、（「Ｈｉｇｈ  ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｍａｐｐｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｓｉｔｅ  ｏｎ  Ｈｕｍａｎ  ＩｇＧ１  ｆｏｒ  Ｆｃ  ｆｏｒ  ＦｃγＲＩ、Ｆｃ  ｆｏｒ  ＦｃγＲＩＩ、Ｆｃ  ｆｏｒ  ＦｃγＲＩＩＩ、ａｎｄ  ＦｃＲｎ」）はＦｃγＲについてＦｃへの結合が障害されているＩｇＧ１変異体の設計を報告している。（Ｊ  Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２００１年；２７６：６５９１〜６０４頁）。さらに、米国特許出願公開第２００７／０２３７７６７号および米国特許出願公開第２０１０／０１０４５６４号はＦｃＲ結合を除去するＦｃ変異誘発を記載している。さらに、特異的Ｆｃ突然変異およびその効果は下の表１〜３に収載されている。これらの突然変異は例示的なものであり、とりわけ、ＦｃＲ結合、補体結合、グリコシル化、ＡＤＣＣ活性、ＣＤＣ活性、ＦｃＲＮ結合のようなＦｃエフェクター機能を促進するまたは障害することが知られている他の突然変異およびその組合せを包含することは意図されていない。
【００７３】
【表１】
2018528258.tif 000003
【００７４】
【表２】
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【００７５】
【表３】
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【００７６】
安全性、機能上および薬物動態上の特性のこの組合せに基づいて、本発明のヒト化抗ヒトＣＤ１５４  ＩｇＧ１抗体を使用すれば、アレルギー、自己免疫、移植（アロまたは異種器官、細胞、組織移植）および炎症性状態のような、Ｔおよび／またはＢ細胞活性化、分化および増殖の抑制が治療的に望ましい状態を処置するまたは予防することができる。その特定の非限定的例は、例として、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、他の形態のループス、自己免疫血小板減少症（ＩＴＰ）、腎移植、皮膚および膵島移植、関節リウマチ、サルコイドーシス、乾癬性関節炎、クローン病、炎症性腸疾患、クローン病、ＣＯＰＤ、喘息、糖尿病、甲状腺炎、移植片対宿主病、骨髄（ＢＭ）または造血幹細胞移植、ならびにアテローム性動脈硬化症を含む。同様に、ＩＮＸ０２１を含むこれらの変異体の一部は、ｉｎ  ｖｉｖｏで寛容を誘発する能力を含む、増加した、効力の効能を有する。
【００７７】
実験データにより証明されるように、ＩＮＸ０２１を含む本発明の抗体の特に想定される適用は、抗薬物反応、特に、バイオ医薬品ならびに治療抗体、融合タンパク質、ホルモン、成長因子、酵素、ペプチド、抗生物質、抗ウイルス薬、および同類の物のような他の薬物に対して誘発される抗薬物反応を軽減するまたは予防することを目的とする。このおかげで、これらの薬物はもっと長い期間投与することが可能になる可能性があり、薬物に応答する患者の数を増やす可能性があり、および／または薬物未治療患者における効能を促進する可能性がある。
【００７８】
本明細書で考察されるように、ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域および他のヒト定常領域の他の部位は、補体結合および／または活性化ならびにＦｃＲ結合に関与していることが知られている。したがって、記載されている突然変異は、補体結合およびＦｃＲ結合のうちの１つまたは両方の消失をもたらす、ＩｇＧ１もしくはＩｇＧ３または他の抗体のＦｃ領域における適切な突然変異の例である。
【００７９】
補体結合突然変異αＣＤ１５４変異体またはその変異体の寛容誘導または延長された（ＴまたはＢ）免疫抑制効果は、長期寛容がαＣＤ１５４および同種抗原の投与により誘導される、ハプロミスマッチの皮膚同種移植生存のよく研究されたモデルにおいて評価してもよい。しかし、他の寛容モデルを代わりに使用して、αＣＤ１５４補体欠損および／またはＦｃＲ欠損変異体（突然変異したＦｃ領域を含有する）の寛容を誘導する能力を評価してもよい。
【００８０】
ＦｃＲ突然変異αＣＤ１５４の血栓塞栓性活性は、ＮＨＰで観察されるイベントを再現するヒトＦｃγＲＩＩＡ受容体を発現しているマウスモデルにおいて試験してもよい（Ｆｅｒｒａｎｔ、Ｊ．Ｌ．、Ｂｅｎｊａｍｉｎ、Ｃ．Ｄ．、Ｃｕｔｌｅｒ、Ａ．Ｈ．、Ｋａｌｌｅｄ、Ｓ．Ｌ．、Ｈｓｕ、Ｙ．Ｍ．、Ｇａｒｂｅｒ、Ｅ．Ａ．、Ｈｅｓｓ、Ｄ．Ｍ．、Ｓｈａｐｉｒｏ、Ｒ．Ｉ．、Ｋｅｎｙｏｎ、Ｎ．Ｓ．、Ｈａｒｌａｎ、Ｄ．Ｍ．、Ｋｉｒｋ、Ａ．Ｄ．、Ｂｕｒｋｌｙ、Ｌ．Ｃ．ａｎｄ  Ｔａｙｌｏｒ、Ｆ．Ｒ．、「Ｔｈｅ  ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｆｃ  ｅｆｆｅｃｔｏｒ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  ａｎｔｉ−ＣＤ１５４  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ｄｅｐｅｎｄｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｎａｔｕｒｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ｃｈａｌｌｅｎｇｅ」、Ｉｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００４年、１６：１５８３〜１５９４頁）。そのようなマウスでは、αＣＤ１５４（抗マウスＣＤ１５４）を用いて処置すると肺血栓を誘導し、したがって、突然変異ヒトＦｃ領域（突然変異ＩｇＧ１定常領域）を含有する抗ＣＤ１５４抗体においてＦｃＲ結合が消失すると、血栓の形成が除去されるまたは認識できるほど減少する。これをまたは比較可能なモデルを使用すれば、αＣＤ１５４療法に付随する毒性に対する特定のＦｃ突然変異の効果を判定することができる。
【００８１】
その上、ＩＤＥＣ−１３１に由来する本発明の突然変異ＣＤ１５４特異的抗体は、ＣＤ１５４／ＣＤ４０シグナル伝達を含むＣＤ１５４の効果を弱める、またはＣＤ４０へのＣＤ１５４結合を遮断するもしくは阻害すれば治療的に効果的である可能性があり、疾患の症状を減らす可能性があるいかなる状態の処置および予防のためにも使用してよい。その例は、アレルギー、自己免疫、がん、移植、ＧＶＨＤ、炎症性および他の状態、特に、寛容の誘導および／または体液性免疫もしくはＴ細胞免疫の抑制が治療的に望ましい状態の処置を含む。具体的な例は、多発性硬化症、関節リウマチ、炎症性腸疾患、クローン病、甲状腺炎、エリテマトーデス、自己免疫血小板減少症、糖尿病、移植片対宿主病、細胞療法、器官および組織移植、例えば、皮膚、腎臓、膵臓、骨髄、アテローム動脈硬化症、ならびに体液性またはＴ細胞抑制が望ましい他の状態を含む。
【００８２】
ＣＤ１５４を標的とし改良された安全性特性を有する主題の抗体は、大きな治療潜在力がある。なぜならば、ＣＤ１５４は、広い範囲の自己免疫および移植片関連疾患において免疫介入の極めて魅力的な標的であるからである。現在まで試験されたマウスでの自己免疫疾患の実質的にすべてのモデルが、αＣＤ１５４処置により治療的に改善されている。単にＣＤ１５４−ＣＤ４０相互作用を遮断することを超えて、αＣＤ１５４療法は免疫寛容を誘導する。ＣＤ４０−ＣＤ１５４相互作用を遮断することによる移植拒絶の予防は、皮膚（Ｇｏｒｄｏｎ、Ｅ．Ｊ．、Ｍａｒｋｅｅｓ、Ｔ．Ｇ．、Ｐｈｉｌｌｉｐｓ、Ｎ．Ｅ．、Ｎｏｅｌｌｅ、Ｒ．Ｊ．、Ｓｈｕｌｔｚ、Ｌ．Ｄ．、Ｍｏｒｄｅｓ、Ｊ．Ｐ．、Ｒｏｓｓｉｎｉ、Ａ．Ａ．ａｎｄ  Ｇｒｅｉｎｅｒ、Ｄ．Ｌ．、「Ｐｒｏｌｏｎｇｅｄ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｏｆ  ｒａｔ  ｉｓｌｅｔ  ａｎｄ  ｓｋｉｎ  ｘｅｎｏｇｒａｆｔｓ  ｉｎ  ｍｉｃｅ  ｔｒｅａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｄｏｎｏｒ  ｓｐｌｅｎｏｃｙｔｅｓ  ａｎｄ  ａｎｔｉ−ＣＤ１５４  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ」、Ｄｉａｂｅｔｅｓ  １９９８年、４７：１１９９〜１２０６頁；Ｍａｒｋｅｅｓ、Ｔ．Ｇ．、Ｐｈｉｌｌｉｐｓ、Ｎ．Ｅ．、Ｎｏｅｌｌｅ、Ｒ．Ｊ．、Ｓｈｕｌｔｚ、Ｌ．Ｄ．、Ｍｏｒｄｅｓ、Ｊ．Ｐ．、Ｇｒｅｉｎｅｒ、Ｄ．Ｌ．ａｎｄ  Ｒｏｓｓｉｎｉ、Ａ．Ａ．、「Ｐｒｏｌｏｎｇｅｄ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｏｆ  ｍｏｕｓｅ  ｓｋｉｎ  ａｌｌｏｇｒａｆｔｓ  ｉｎ  ｒｅｃｉｐｉｅｎｔｓ  ｔｒｅａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｄｏｎｏｒ  ｓｐｌｅｎｏｃｙｔｅｓ  ａｎｄ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｔｏ  ＣＤ４０  ｌｉｇａｎｄ」、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  １９９７年、６４：３２９〜３３５頁；Ｊａｒｖｉｎｅｎ、Ｌ．Ｚ．、Ｂｌａｚａｒ、Ｂ．Ｒ．、Ａｄｅｙｉ、Ｏ．Ａ．、Ｓｔｒｏｍ、Ｔ．Ｂ．ａｎｄ  Ｎｏｅｌｌｅ、Ｒ．Ｊ．、「ＣＤ１５４  ｏｎ  ｔｈｅ  ｓｕｒｆａｃｅ  ｏｆ  ＣＤ４＋ＣＤ２５＋  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ  ｔｏ  ｓｋｉｎ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  ｔｏｌｅｒａｎｃｅ」、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ２００３年、７６：１３７５〜１３７９頁；Ｑｕｅｚａｄａ、Ｓ．Ａ．、Ｆｕｌｌｅｒ、Ｂ．、Ｊａｒｖｉｎｅｎ、Ｌ．Ｚ．、Ｇｏｎｚａｌｅｚ、Ｍ．、Ｂｌａｚａｒ、Ｂ．Ｒ．、Ｒｕｄｅｎｓｋｙ、Ａ．Ｙ．、Ｓｔｒｏｍ、Ｔ．Ｂ．ａｎｄ  Ｎｏｅｌｌｅ、Ｒ．Ｊ．、「Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  ｄｏｎｏｒ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ  ｔｏｌｅｒａｎｃｅ：ｐｒｅｅｍｐｔｉｖｅ  ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｌｏｎａｌ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｅｘｈａｕｓｔｉｏｎ  ｖｉａ  ｉｎｄｉｒｅｃｔ  ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ」Ｂｌｏｏｄ  ２００３年、１０２：１９２０〜１９２６年；Ｆｒｌｅｔａ、Ｄ．、Ｌｉｎ、Ｊ．Ｔ．、Ｑｕｅｚａｄａ、Ｓ．Ａ．、Ｗａｄｅ、Ｔ．Ｋ．、Ｂａｒｔｈ、Ｒ．Ｊ．、Ｎｏｅｌｌｅ、Ｒ．Ｊ．ａｎｄ  Ｗａｄｅ、Ｗ．Ｆ．、「Ｄｉｓｔｉｎｃｔｉｖｅ  ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｖｅｒｓｕｓ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ａｎｔｉ−ＣＤ４０  ｍＡｂ−ｍａｔｕｒｅｄ  ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｍｉｃｅ」Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ  ２００３年、２６：７２〜８４年；Ｑｕｅｚａｄａ、Ｓ．、Ｅｃｋｅｒｔ、Ｍ．、Ｓｃｈｎｅｄ、Ａ．、Ｎｏｅｌｌｅ、Ｒ．Ｊ．ａｎｄ  Ｂｕｒｎｓ、Ｃ．、「Ｄｉｓｔｉｎｃｔ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  ａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎｔｉ−ＣＤ１５４  ｉｎ  ｅａｒｌｙ  ｖｅｒｓｕｓ  ｌａｔｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｍｕｒｉｎｅ  ｌｕｐｕｓ  ｎｅｐｈｒｉｔｉｓ」Ａｒｔｈ  Ｒｈｅｕｍ．２００３年；Ｅｌｓｔｅｒ、Ｅ．Ａ．、Ｘｕ、Ｈ．、Ｔａｄａｋｉ、Ｄ．Ｋ．、Ｍｏｎｔｇｏｍｅｒｙ、Ｓ．、Ｂｕｒｋｌｙ、Ｌ．Ｃ．、Ｂｅｒｎｉｎｇ、Ｊ．Ｄ．、Ｂａｕｍｇａｒｔｎｅｒ、Ｒ．Ｅ．、Ｃｒｕｚａｔａ、Ｆ．、Ｍａｒｘ、Ｒ．、Ｈａｒｌａｎ、Ｄ．Ｍ．ａｎｄ  Ｋｉｒｋ、Ａ．Ｄ．、「Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｗｉｔｈ  ｔｈｅ  ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  ＣＤ１５４−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ，  ｈｕ５Ｃ８，  ｐｒｅｖｅｎｔｓ  ａｃｕｔｅ  ｒｅｊｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｒｉｍａｒｙ  ｓｋｉｎ  ａｌｌｏｇｒａｆｔｓ  ｉｎ  ｎｏｎｈｕｍａｎ  ｐｒｉｍａｔｅｓ  ，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ」、２００１年、７２：１４７３〜１４７８年）、膵島（Ｂｅｎｄａ、Ｂ．、Ｌｊｕｎｇｇｒｅｎ、Ｈ．Ｇ．、Ｐｅａｃｈ、Ｒ．、Ｓａｎｄｂｅｒｇ、Ｊ．Ｏ．ａｎｄ  Ｋｏｒｓｇｒｅｎ、Ｏ．、「Ｃｏ−ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ｉｎ  ｉｓｌｅｔ  ｘｅｎｏｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ：  ＣＴＬＡ４Ｉｇ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｉｎ  ＣＤ４０  ｌｉｇａｎｄ−ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ  ｍｉｃｅ」Ｃｅｌｌ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ２００２年、１１：７１５〜７２０頁）、骨髄（Ｗｅｋｅｒｌｅ、Ｔ．ａｎｄ  Ｓｙｋｅｓ、Ｍ．、「Ｍｉｘｅｄ  ｃｈｉｍｅｒｉｓｍ  ａｎｄ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ｔｏｌｅｒａｎｃｅ」Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２００１年、５２：３５３〜３７０１９、および種々の他の移植器官（Ｃａｍｉｒａｎｄ、Ｇ．、Ｃａｒｏｎ、Ｎ．Ｊ．、Ｔｕｒｇｅｏｎ、Ｎ．Ａ．、Ｒｏｓｓｉｎｉ、Ａ．Ａ．ａｎｄ  Ｔｒｅｍｂｌａｙ、Ｊ．Ｐ．、「Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｗｉｔｈ  ａｎｔｉ−ＣＤ１５４  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ａｎｄ  ｄｏｎｏｒ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ  ｐｒｅｖｅｎｔｓ  ａｃｕｔｅ  ｒｅｊｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｙｏｂｌａｓｔ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ」、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ２００２年、７３：４５３〜４６１頁；Ｔｕｎｇ、Ｔ．Ｈ．、Ｍａｃｋｉｎｎｏｎ、Ｓ．Ｅ．ａｎｄ  Ｍｏｈａｎａｋｕｍａｒ、Ｔ．、「Ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ  ｌｉｍｂ  ａｌｌｏｇｒａｆｔ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｕｓｉｎｇ  ａｎｔｉ−ＣＤ１５４  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｉｎ  ａ  ｍｕｒｉｎｅ  ｍｏｄｅｌ」、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ、２００３年、７５：６４４〜６５０頁）への長期寛容の誘導について繰り返し実証されてきた。さらに、ＮＨＰでのαヒトＣＤ１５４は同種間皮膚移植への長期寛容を誘導することが示されてきた。
【００８３】
本発明の抗体を産生するための本発明の方法の概要
本発明の抗体の合成のための例となる方法
ハムスターαマウスＣＤ１５４もしくはＩＤＥＣ−１３１または本明細書に開示される変異体のＶＨおよびＶＬをコードするＤＮＡはクローニングされ、ヒトγ１  ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３領域をコードするＤＮＡにまたは本明細書に開示されるＩｇＧ１変異体に融合された。ヌクレオチド配列はＭｅｇａｂａｃｅ（商標）配列分析器を使用して確認された。ＭＲ１変異体のそれぞれの重と軽鎖の両方を含有するプラスミド発現ベクター、ｐＥＥ１２はＮＳ０細胞にトランスフェクトされ、産生物はプロテインＡクロマトグラフィーにより精製された。
【００８４】
本発明の抗体のＣＤ１５４への結合
ＣＤ１５４抗体変異体の結合活性の比較は、マウスＣＤ１５４をトランスフェクトされたＣＨＯ細胞へのその結合によって判定された。ＣＤ１５４発現ＣＨＯ細胞は、非標識αＣＤ１５４重鎖変異体またはアイソタイプがマッチした抗体の存在下、４℃で１時間ビオチン標識αＣＤ１５４と一緒にインキュベートされる。ビオチン化ＭＲ１の結合はストレプトアビジンコンジュゲート蛍光色素を使用して検出され、フローサイトメトリーが実行される。変異体による阻害のパーセントは、ＭＲ１染色細胞の平均蛍光強度の減少を記録することにより決定することができる。
【００８５】
ＥＬＩＳＡを使用する抗体半減期
ＥＬＩＳＡまたはＢｉａｃｏｒｅを使用して、αヒトＩｇＧ１変異体のｉｎ  ｖｉｖｏ半減期を決定することができる。ｈＩｇＧ１の血清中濃度は、設定時間、例えば、投与後１ヶ月で決定してもよい。
【００８６】
ＦｃＲへの変異体の結合
ＦｃＲへの変異ＩｇＧ１  ｍＡｂの結合は、固相アッセイにより判定してもよい。手短に述べれば、Ｍａｘｉｓｏｒｂ  ＥＬＩＳＡプレートをマウスまたはヒトＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ、またはＦｃγＲＩＩＩＡ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）で被覆することができる。変異体のビオチン化版を作製することができる。結合は、酵素結合アビジンを使用して比色検出により判定することができる。結合の減少は、ＷＴ分子と比べて変異体について判定される。
【００８７】
ヒトＣ１ｑへのαＣＤ１５４  ｍＡｂの結合
これは公知のまたは本明細書に記載される方法を使用して成し遂げられる。精製されたヒトＣ１ｑは、ＭＲ１またはＩＤＥＣ−１３１のＩｇＧ１変異体がＭａｘｉｓｏｒｂ  ＥＬＩＳＡプレート上に吸収されているウェル内に滴定してもよい。結合したＣ１ｑはＨＲＰ−ニワトリ抗Ｃ１ｑを用いて検出される。すべての変異体は、記載されている通りに（Ｆｅｒｒａｎｔ、Ｊ．Ｌ．、Ｂｅｎｊａｍｉｎ、Ｃ．Ｄ．、Ｃｕｔｌｅｒ、Ａ．Ｈ．、Ｋａｌｌｅｄ、Ｓ．Ｌ．、Ｈｓｕ、Ｙ．Ｍ．、Ｇａｒｂｅｒ、Ｅ．Ａ．、Ｈｅｓｓ、Ｄ．  Ｍ．、Ｓｈａｐｉｒｏ、Ｒ．Ｉ．、Ｋｅｎｙｏｎ、Ｎ．Ｓ．、Ｈａｒｌａｎ、Ｄ．  Ｍ．、Ｋｉｒｋ、Ａ．Ｄ．、Ｂｕｒｋｌｙ、Ｌ．Ｃ．ａｎｄ  Ｔａｙｌｏｒ、Ｆ．Ｒ．、「Ｔｈｅ  ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｆｃ  ｅｆｆｅｃｔｏｒ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  ａｎｔｉ−ＣＤ１５４  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ｄｅｐｅｎｄｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｎａｔｕｒｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ｃｈａｌｌｅｎｇｅ」、Ｉｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００４年、１６：１５８３〜１５９４頁；およびＴａｙｌｏｒ、Ｐ．Ａ．、Ｌｅｅｓ、Ｃ．Ｊ．、Ｗｉｌｓｏｎ、Ｊ．Ｍ．、Ｅｈｒｈａｒｄｔ、Ｍ．Ｊ．、Ｃａｍｐｂｅｌｌ、Ｍ．Ｔ．、Ｎｏｅｌｌｅ、Ｒ．Ｊ．ａｎｄ  Ｂｌａｚａｒ、Ｂ．Ｒ．、「Ｃｏｍｂｉｎｅｄ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｃａｌｃｉｎｅｕｒｉｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｒ  ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ  ｗｉｔｈ  ａｎｔｉ−ＣＤ４０Ｌ  ｍＡｂ  ｏｎ  ａｌｌｏｅｎｇｒａｆｔｍｅｎｔ  ｕｎｄｅｒ  ｎｏｎｍｙｅｌｏａｂｌａｔｉｖｅ  ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ」、Ｂｌｏｏｄ  ２００２年、１００：３４００〜３４０７頁）ＷＴ  ＩｇＧ１  ＭＲ１へのＣ１ｑの結合と比較される。
【００８８】
突然変異αＣＤ１５４  ｍＡｂを用いた寛容の誘導
寛容または延長された免疫抑制を誘発する抗ＣＤ１５４抗体の能力は、公知のおよび具体的には本明細書に記載される方法により判定することができる。本発明者らの研究所で産生されたハムスター抗マウスＣＤ１５４であるＭＲ１は、本発明者らが明らかにしてきたように（Ｑｕｅｚａｄａ、Ｓ．Ａ．、Ｆｕｌｌｅｒ、Ｂ．、Ｊａｒｖｉｎｅｎ、Ｌ．Ｚ．、Ｇｏｎｚａｌｅｚ、Ｍ．、Ｂｌａｚａｒ、Ｂ．Ｒ．、Ｒｕｄｅｎｓｋｙ、Ａ．Ｙ．、Ｓｔｒｏｍ、Ｔ．Ｂ．ａｎｄ  Ｎｏｅｌｌｅ、Ｒ．Ｊ．、「Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  ｄｏｎｏｒ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ  ｔｏｌｅｒａｎｃｅ：  ｐｒｅｅｍｐｔｉｖｅ  ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｌｏｎａｌ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｅｘｈａｕｓｔｉｏｎ  ｖｉａ  ｉｎｄｉｒｅｃｔ  ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ」、Ｂｌｏｏｄ  ２００３年、１０２：１９２０〜１９２６頁；Ｑｕｅｚａｄａ、Ｓ．Ａ．、Ｂｅｎｎｅｔｔ、Ｋ．、Ｂｌａｚａｒ、Ｂ．Ｒ．、Ｒｕｄｅｎｓｋｙ、Ａ．Ｙ．、Ｓａｋａｇｕｃｈｉ、Ｓ．ａｎｄ  Ｎｏｅｌｌｅ、Ｒ．Ｊ．、「Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｕｎｄｅｒｌｙｉｎｇ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  ａｎｔｉ−ＣＤ１５４−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｇｒａｆｔ  ｔｏｌｅｒａｎｃｅ：  ｔｈｅ  ｉｎｔｅｒｐｌａｙ  ｏｆ  ｃｌｏｎａｌ  ａｎｅｒｇｙ  ａｎｄ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ」Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００５年、１７５：７７１〜７７９頁；Ｒｏｓｓｉｎｉ、Ａ．Ａ．、Ｐａｒｋｅｒ、Ｄ．Ｃ．、Ｐｈｉｌｌｉｐｓ、Ｎ．Ｅ．、Ｄｕｒｉｅ、Ｆ．Ｈ．、Ｎｏｅｌｌｅ、Ｒ．Ｊ．、Ｍｏｒｄｅｓ、Ｊ．Ｐ．ａｎｄ  Ｇｒｅｉｎｅｒ、Ｄ．Ｌ．、「Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｔｏｌｅｒａｎｃｅ  ｔｏ  ｉｓｌｅｔ  ａｌｌｏｇｒａｆｔｓ」Ｃｅｌｌ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  １９９６年、５：４９〜５２頁）長命の移植免疫寛容をいつも決まって誘導する。
【００８９】
寛容は同種抗原（ドナー脾臓細胞の形態で）とαＣＤ１５４の同時投与により誘導される。ヒト化ＩｇＧ１形態のＭＲ１も移植片寛容を誘導することが明らかにされており（２４）、したがって、ＷＴγ１変異体は寛容誘導の陽性対照としての役目を果たすことになる。補体に結合する能力を失っているＭＲ１の突然変異版は移植片寛容を誘導するその能力について試験されることになる。
【００９０】
皮膚移植はＭａｒｋｅｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（１２）により使用された技法の修正版として実行される。手短に述べれば、同年齢の雄ＣＢ６Ｆ１マウスを脾臓細胞（ＤＳＴ）と皮膚移植片両方のドナーとして使用する。レシピエントＣ５７ＢＬ／６マウスは、−３、−５および−７日目に５００μＬのハンクス平衡塩類溶液中５×１０７ＤＳＴ細胞をまたはなしで尾静脈注射により（静脈内に）および腹腔内に、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中ＷＴまたは突然変異αＣＤ１５４または対照免疫グロブリン、ハムスターまたはヒト、（ＨＩｇＧ１）を５００μｇ注射される。マウスは、週当たり３回、その後実験継続期間、適切な抗体（２５０μｇ／注射）で処置を受ける。０日目、レシピエントマウスはケタミンおよびキシラジンのそれぞれをグラム体重当たり５０μｇ腹腔内に注射して（ＰＢＳ中１５ｍｇ／ｍＬ）麻酔をかけ、ＣＢ６Ｆ１皮膚移植片は確立した方法を使用して調製される。拒絶は、残っている皮膚移植片が２０％未満になる日と定義される。動物は１００日間皮膚移植片拒絶について評価される。さらに、寛容群ごとに、皮膚移植片は１００日目に採取され、白血球浸潤物について組織化学により評価され、測定された細胞数／面積に基づいてスコアー化される。最後に、突然変異αＣＤ１５４  ｍＡｂを用いた体液性免疫のこの系で以前発表されたように（Ｍａｒｋｅｅｓ、Ｔ．Ｇ．、Ｐｈｉｌｌｉｐｓ、Ｎ．Ｅ．、Ｎｏｅｌｌｅ、Ｒ．Ｊ．、Ｓｈｕｌｔｚ、Ｌ．Ｄ．、Ｍｏｒｄｅｓ、Ｊ．Ｐ．、Ｇｒｅｉｎｅｒ、Ｄ．Ｌ．ａｎｄ  Ｒｏｓｓｉｎｉ、Ａ．Ａ．、「Ｐｒｏｌｏｎｇｅｄ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｏｆ  ｍｏｕｓｅ  ｓｋｉｎ  ａｌｌｏｇｒａｆｔｓ  ｉｎ  ｒｅｃｉｐｉｅｎｔｓ  ｔｒｅａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｄｏｎｏｒ  ｓｐｌｅｎｏｃｙｔｅｓ  ａｎｄ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｔｏ  ＣＤ４０  ｌｉｇａｎｄ」、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  １９９７年、６４：３２９〜３３５頁、Ｍａｒｋｅｅｓ、Ｔ．、Ｐｈｉｌｌｉｐｓ、Ｎ．、Ｇｏｒｄｏｎ、Ｅ．、Ｎｏｅｌｌｅ、Ｒ．Ｊ．、Ｍｏｒｄｅｓ、Ｊ．Ｐ．、Ｇｒｅｉｎｅｒ、Ｄ．Ｌ．ａｎｄ  Ｒｏｓｓｉｎｉ、Ａ．Ａ．、「Ｉｍｐｒｏｖｅｄ  ｓｋｉｎ  ａｌｌｏｇｒａｆｔ  ｔｏｌｅｒａｎｃｅ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｗｉｔｈ  ｄｏｎｏｒ  ｓｐｌｅｎｏｃｙｔｅｓ  ａｎｄ  ａｎ  ｅｘｔｅｎｄｅｄ  ｃｏｕｒｓｅ  ｏｆ  ａｎｔｉ−ＣＤ１５４  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ」、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  Ｐｒｏｃ  １９９８年、３０：２４４４〜２４４６頁；Ｍａｒｋｅｅｓ、Ｔ．Ｇ．、Ａｐｐｅｌ、Ｍ．Ｃ．、Ｎｏｅｌｌｅ、Ｒ．Ｊ．、Ｍｏｒｄｅｓ、Ｊ．Ｐ．、Ｇｒｅｉｎｅｒ、Ｄ．Ｌ．ａｎｄ  Ｒｏｓｓｉｎｉ、Ａ．Ａ．、「Ｔｏｌｅｒａｎｃｅ  ｔｏ  ｉｓｌｅｔ  ｘｅｎｏｇｒａｆｔｓ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ｄｕａｌ  ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｏ−ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ」、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  １９９６年、２８：８１４〜８１５頁）、誘導された寛容が抗原特異的であることを確実にするために、第三者移植（Ｈ−２Ｋ皮膚）が寛容化マウス（選択群中）に移植される。
【００９１】
寛容に対する補体およびＦｃＲ突然変異の影響を測定することに加えて、一次および二次体液性免疫応答の発生に対する抗体処置の影響も以前記載された通りにアッセイされる。手短に述べれば、マウス（４／群）はＣＦＡ中ニワトリ卵白アルブミン（２００μｇ／マウス）で免疫され、ＭＲ１変異体（２００μｇ／マウス×３回／週）で処置される。７、１４および２１日目、ＩｇＭおよびＩｇＧ抗ＯＶＡは標準化抗ＯＶＡ  ＥＬＩＳＡにより測定され、抗ＯＶＡの血清中濃度が定量される。
【００９２】
本発明のαＣＤ１５４  ｍＡｂを用いた毒性研究
αＣｄ１５４の血栓形成活性は、ヒトＦｃγＲＩＩＡを発現するマウスを使用するマウスモデルで実証されてきた。このモデルは、抗ヒトＣＤ１５４の無傷の形態とアグリコシル化形態の両方を使用するＮＨＰにおける毒性所見に匹敵する。手短に述べれば、マウスはｓＣＤ１５４のあらかじめ作られた免疫複合体（ＩＣ）（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）およびαＣＤ１５４のそれぞれの変異体（１３８μｇのｍＡｂおよび５０μｇ  Ａｇ、１対３（ｍＡｂ／Ａｇ）化学量論比でおおよそ５００ｎＭ  ＩＣ）を注射される。注射に続いて、混合物が血栓溶解性である場合、マウスは延長された失見当識、浅い呼吸、および移動性障害を示すことになる。この活性を示しているマウスは血小板数が著しく減少すると予想される。６０分後、肺が収穫され、ホルマリンに固定され、薄片にされＨ＆Ｅ染色される。マウスの肺切片は血栓症の証拠（血管内血栓により測定される）について評価され、血栓／切片の数が計数される。マウスごとに、１０の切片が計数され、血栓の総数が、ＩｇＧ１  ＭＲ１の種々の変異体で処置されたすべての群にわたり比較される。さらに、全血小板数（安楽死時の心臓穿刺により収穫される）はフローサイトメトリーにより評価され、血栓形成性である抗体を使用すると８０％低下すると予想される。これらの所見により、ＭＲ１変異体（ＦｃＲ結合（Ｎ３２５Ｌ、Ｋ３２６Ｖ、Ｅ２６９Ｒ））のうちのどれが血栓形成性であるのか、ＦｃＲ結合の変化がこの活性を変化させるのかどうかが判定される。
【００９３】
Ｔ細胞媒介自己免疫疾患、実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）の発生を遮断する
雌Ｃ５７ＢＬ／６マウス生後５〜８週間は、５ｍｇ／ｍｌの結核菌を補充されたＣＦＡ中に乳化されたＭＯＧ３５−５５ペプチド２００μｇで皮下に免疫される。マウスは免疫化時におよび４８時間後に２５０ｎｇの百日咳毒素を用いた腹腔内注射を受ける。７日後、マウスは百日咳毒素なしでＭＯＧ／ＣＦＡを用いた同一の追加免役を受ける。臨床疾患は通常免疫化後１６日目と２０日目の間で始まる。マウスは、実験持続期間（５０日）ＭＲ１変異体、ヒトＩｇＧ（変異体についての対照として）、ハムスターＩｇ（ＭＲ１についての対照として）またはハムスターＭＲ１（２００μｇ／マウス  ３×／週）をそれぞれ投与される。
【００９４】
臨床評価。マウスは以下の通り：０、ＥＡＥの検出可能な兆候なし；０．５、ぐったりした遠位尾；１、完全にぐったりした尾；１．５、ぐったりした尾および後肢脱力；２、片側部分的後肢麻痺；２．５、両側部分的後肢麻痺；３、完全両側後肢麻痺；３．５、完全後肢麻痺および片側前肢麻痺；４、前肢と後肢の両方の完全麻痺；５、死亡で週当たり４回スコアー化される。４よりも大きいが５よりも小さなスコアーのマウスは安楽死させる。
【００９５】
毒性の判定
本発明に従った所望の抗体は、開示された血栓性動物モデルでは毒性が大幅に低下するまたは毒性がなくなる。上記のモデルを使用すれば、定常領域の重鎖がＥ２６９Ｒ突然変異およびＫ３２２Ａ突然変異（Ｋａｂａｔ番号付け方式に従って）を含有するＩｇＧ１  抗ＣＤ１５４抗体は血小板凝集を誘発しないことが明らかにされる。
【００９６】
効能の判定
効能（寛容の誘導）は前記の皮膚移植片寛容モデルにおいて評価してもよい。
【００９７】
本発明の抗ｈＣＤ１５４抗体の製薬および診断使用
本発明の一実施形態では、抗ＣＤ１５４抗体、または該抗体を含む医薬組成物は対象での免疫応答を阻害することができる。本発明の抗体、または本発明の医薬組成物は効果的阻害量で対象に投与される。
【００９８】
ある特定の実施形態では、抗ＣＤ１５４抗体、または該抗体を含む医薬組成物の「有効阻害量」とは、それが投与される対象においてＣＤ１５４−ＣＤ４０相互作用を阻害するのに効果的である任意の量である。「阻害量」を決定する方法は当業者には周知であり、関係対象のタイプ、対象の大きさおよび年齢ならびに送達される特定の治療薬の薬物動態特性を含むがこれらに限定されない要因に依拠する。
【００９９】
本発明の別の特定の実施形態では、本発明の抗ＣＤ１５４抗体、または該抗体を含む医薬組成物は、ＣＤ１５４−ＣＤ４０相互作用を阻害することにより免疫応答を阻害することができる。
【０１００】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＣＤ１５４抗体、または該抗体を含む医薬組成物は炎症を阻害することができる。本発明の目的のために、炎症応答は、浮腫および食作用白血球の遊走での毛細血管拡張の結果として、発赤、腫脹、熱および疼痛を特徴とする。炎症応答のいくつかの例は；関節炎、接触皮膚炎、高ＩｇＥ症候群、炎症性腸疾患、アレルギー性喘息、および特発性炎症疾患を含む。特発性炎症疾患は、例えば、乾癬およびループス（例えば、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、薬剤誘発性エリテマトーデス、およびループス腎炎）を含む。例えば、Ｇａｌｌｉｎ  １９８９年、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｃｈａｐｔｅｒ  ２６、Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ、２ｄ  Ｅｄ．、７２１〜７３３頁、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋを参照されたい。本発明は、個人における全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）の症状を処置するまたは予防する方法であって、本発明の抗ＣＤ１５４抗体を、ＳＬＥの症状を処置するまたは予防するのに効果的な量で個人に投与することを含む前記方法を提供する。
【０１０１】
関節炎のいくつかの例は；関節リウマチ、非リウマチ性炎症性関節炎、ライム病に付随する関節炎および炎症性変形性関節炎を含む。特発性炎症疾患のいくつかの例は；乾癬および全身性ループスを含む。本発明の一実施形態では、抗ＣＤ１５４抗体、または該抗体を含む医薬組成物は、移植された器官の対象による拒絶を阻害することができる。
【０１０２】
本発明のさらに具体的な実施形態では、本発明の抗ＣＤ１５４抗体、または該抗体を含む医薬組成物は、移植された心臓、腎臓、肝臓、皮膚、膵島細胞または骨髄の対象による拒絶を阻害することができる。
【０１０３】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＣＤ１５４抗体、または該抗体を含む医薬組成物は、対象において移植片対宿主病を阻害することができる。
【０１０４】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＣＤ１５４抗体、または該抗体を含む医薬組成物は、対象において、アレルギー応答、例えば、枯草熱またはペニシリンもしくは他の薬物へのアレルギーを阻害することができる。
【０１０５】
一態様では、ＩＮＸ０２１を含む主題の抗ＣＤ１５４抗体は、抗薬物反応、特に、バイオ医薬品ならびに治療抗体、融合タンパク質、ホルモン、成長因子、酵素、ペプチド、抗生物質、抗ウイルス薬、および同類の物のような他の薬物に対する抗薬物反応を軽減するまたは予防するのに有用である。このおかげで、これらの薬物はもっと長い期間投与することが可能になる可能性があり、該薬物に応答する患者の数を増やす可能性があり、および／または薬物未治療患者における効能を促進する可能性がある。その例は当技術分野では公知であり、ヒュミラ、エンブレル、リツキサン、ゾレア、ハーセプチン、およびアバスチンを含む。
【０１０６】
主題の抗ＣＤ１５４抗体を使用してそれに対する抗薬物応答を予防するまたは軽減することができる治療抗体の他の例は、以下のもの：３Ｆ８、８Ｈ９、アバゴモマブ（Ａｂａｇｏｖｏｍａｂ）、アブシキシマブ、アビツズマブ（Ａｂｉｔｕｚｕｍａｂ）、アブリルマブ（Ａｂｒｉｌｕｍａｂ）、アクトクスマブ（Ａｃｔｏｘｕｍａｂ）、アダリムマブ、アデカツムマブ（Ａｄｅｃａｔｕｍｕｍａｂ）、アデュカヌマブ、アファセビクマブ（Ａｆａｓｅｖｉｋｕｍａｂ）、アフェリモマブ、アフツズマブ、アラシズマブペゴ（Ａｌａｃｉｚｕｍａｂ  ｐｅｇｏ）、ＡＬＤ５１８、アレムツズマブ、アリロクマブ、アルツモマブペンテテート（Ａｌｔｕｍｏｍａｂ  ｐｅｎｔｅｔａｔｅ）、アマツキシマブ、アナツモマブマフェナトックス（Ａｎａｔｕｍｏｍａｂ  ｍａｆｅｎａｔｏｘ）、アネツマブラブタンシン（Ａｎｅｔｕｍａｂ  ｒａｖｔａｎｓｉｎｅ）、アニフロルマブ（Ａｎｉｆｒｏｌｕｍａｂ）、アンルキンズマブ（Ａｎｒｕｋｉｎｚｕｍａｂ）、アポリズマブ、アルシツモマブ、アスクリンバクマブ（Ａｓｃｒｉｎｖａｃｕｍａｂ）、アセリズマブ（Ａｓｅｌｉｚｕｍａｂ）、アテゾリズマブ、アチヌマブ（Ａｔｉｎｕｍａｂ）、アツリツマブ（Ａｔｌｉｚｕｍａｂ（＝トシリズマブ））、アトロリムマブ（Ａｔｏｒｏｌｉｍｕｍａｂ）、アベルマブ、バピネオズマブ、バシリキシマブ、バビツキシマブ、ベクツモマブ（Ｂｅｃｔｕｍｏｍａｂ）、ベゲロマブ（Ｂｅｇｅｌｏｍａｂ）、ベリムマブ、ベンラリズマブ（Ｂｅｎｒａｌｉｚｕｍａｂ）、ベルチリムマブ（Ｂｅｒｔｉｌｉｍｕｍａ）、ベシレソマブ、ベバシズマブ、ベズロトクスマブ（Ｂｅｚｌｏｔｏｘｕｍａｂ）、ビシロマブ（Ｂｉｃｉｒｏｍａｂ）、ビマグルマブ、ビメキズマブ（Ｂｉｍｅｋｉｚｕｍａｂ）、ビバツズマブメルタンシン（Ｂｉｖａｔｕｚｕｍａｂ  ｍｅｒｔａｎｓｉｎｅ）、ブレセルマブ（Ｂｌｅｓｅｌｕｍａｂ）、ブリナツモマブ、ブロンツベトマブ（Ｂｌｏｎｔｕｖｅｔｍａｂ）、ブロソズマブ（Ｂｌｏｓｏｚｕｍａｂ）、ボコシズマブ、ブレンツキシマブベドチン、ブリアキヌマブ、ブロダルマブ、ブロルシズマブ（Ｂｒｏｌｕｃｉｚｕｍａｂ）、ブロンチクツズマブ（Ｂｒｏｎｔｉｃｔｕｚｕｍａｂ）、カリバリズマブ（Ｃａｂｉｒａｌｉｚｕｍａｂ）、カナキヌマブ、カンツズマブメルタンシン、カンツズマブラブタンシン（Ｃａｎｔｕｚｕｍａｂ  ｒａｖｔａｎｓｉｎｅ）、カプラシズマブ（Ｃａｐｌａｃｉｚｕｍａｂ）、カプロマブペンデチド（Ｃａｐｒｏｍａｂ  ｐｅｎｄｅｔｉｄｅ）、カルルマブ（Ｃａｒｌｕｍａｂ）、カロツキシマブ（Ｃａｒｏｔｕｘｉｍａｂ）、カツマキソマブ（Ｃａｔｕｍａｘｏｍａｂ）、ＣＢＲ９６−ドキソルビシン免疫コンジュゲート、セデリズマブ（Ｃｅｄｅｌｉｚｕｍａｂ）、セルグツズマブアムナロイキン（Ｃｅｒｇｕｔｕｚｕｍａｂ  ａｍｕｎａｌｅｕｋｉｎ）、セルトリズマブベゴル、セツキシマブ、Ｃｈ．１４．１８、シタツズマブボダトックス（Ｃｉｔａｔｕｚｕｍａｂ  ｂｏｇａｔｏｘ）、シズツムマブ、クラザキズマブ（Ｃｌａｚａｋｉｚｕｍａｂ）、クレノリキシマブ、クリバツズマブテトラキセタン（Ｃｌｉｖａｔｕｚｕｍａｂ  ｔｅｔｒａｘｅｔａｎ）、コドリツズマブ���Ｃｏｄｒｉｔｕｚｕｍａｂ）、コルツキシマブラブタンシン（Ｃｏｌｔｕｘｉｍａｂ  ｒａｖｔａｎｓｉｎｅ）、コナツムマブ（Ｃｏｎａｔｕｍｕｍａｂ）、コンシズマブ（Ｃｏｎｃｉｚｕｍａｂ）、クレネズマブ、クロンタブ（Ｃｒｏｔｅｄｕｍａｂ）、ＣＲ６２６１、ダセツズマブ、ダクリズマブ、ダロツズマブ（Ｄａｌｏｔｕｚｕｍａｂ）、ダピロリズマブペゴル（Ｄａｐｉｒｏｌｉｚｕｍａｂ  ｐｅｇｏｌ）、ダラツムマブ、デクトレクマブ（Ｄｅｃｔｒｅｋｕｍａｂ）、デムシズマブ（Ｄｅｍｃｉｚｕｍａｂ）、デニンツズマブマホドチン（Ｄｅｎｉｎｔｕｚｕｍａｂ  ｍａｆｏｄｏｔｉｎ）、デノスマブ、デルロツキシマブビオチン（Ｄｅｒｌｏｔｕｘｉｍａｂ  ｂｉｏｔｉｎ）、デツモマブ（Ｄｅｔｕｍｏｍａｂ）、ジヌツキシマブ、ディリダブマブ（Ｄｉｒｉｄａｖｕｍａｂ）、ダピロリズマブペゴル（Ｄａｐｉｒｏｌｉｚｕｍａｂ  ｐｅｇｏｌ）、ダラツムマブ、デクトレクマブ（Ｄｅｃｔｒｅｋｕｍａｂ）、デムシズマブ（Ｄｅｍｃｉｚｕｍａｂ）、デニンツズマブマホドチン（Ｄｅｎｉｎｔｕｚｕｍａｂ  ｍａｆｏｄｏｔｉｎ）、デノスマブ、デルロツキシマブビオチン（Ｄｅｒｌｏｔｕｘｉｍａｂ  ｂｉｏｔｉｎ）、デツモマブ（Ｄｅｔｕｍｏｍａｂ）、ジヌツキシマブ、ディリダブマブ（Ｄｉｒｉｄａｖｕｍａｂ）、ドマグロズマブ（Ｄｏｍａｇｒｏｚｕｍａｂ）、ドルリモマブアリトクス（Ｄｏｒｌｉｍｏｍａｂ  ａｒｉｔｏｘ）、ドロジツマブ、デュリゴツマブ（Ｄｕｌｉｇｏｔｕｍａｂ）、デュピルマブ、デュルバルマブ、デュシギツマブ（Ｄｕｓｉｇｉｔｕｍａｂ）、エクロメキシマブ（Ｅｃｒｏｍｅｘｉｍａｂ）、エクリズマブ、エドバコマブ（Ｅｄｏｂａｃｏｍａｂ）、エドレコロマブ、エファリズマブ、エフングマブ（Ｅｆｕｎｇｕｍａｂ）、エルデルマブ（Ｅｌｄｅｌｕｍａｂ）、エルゲムツマブ（Ｅｌｇｅｍｔｕｍａｂ）、エドレコロマブ、エファリズマブ、エフングマブ、エルデルマブ（Ｅｌｄｅｌｕｍａｂ）、エルゲムツマブ（Ｅｌｇｅｍｔｕｍａｂ）、エロツズマブ、エルシリモマブ（Ｅｌｓｉｌｉｍｏｍａｂ）、エマクツズマブ（Ｅｍａｃｔｕｚｕｍａｂ）、エミベツズマブ（Ｅｍｉｂｅｔｕｚｕｍａｂ）、エミシズマブ、エナバツズマブ（Ｅｎａｖａｔｕｚｕｍａｂ）、エンフォーツマブベドチン（Ｅｎｆｏｒｔｕｍａｂ  ｖｅｄｏｔｉｎ）、エンリモマブペゴル（Ｅｎｌｉｍｏｍａｂ  ｐｅｇｏｌ）、エノビリツズマブ（Ｅｎｏｂｌｉｔｕｚｕｍａｂ）、エノキズマブ（Ｅｎｏｋｉｚｕｍａｂ）、エンシツキシマブ（Ｅｎｓｉｔｕｘｉｍａｂ）、エピツモマブシツキセタン（Ｅｐｉｔｕｍｏｍａｂ  ｃｉｔｕｘｅｔａｎ）、エプラツズマブ（Ｅｐｒａｔｕｚｕｍａｂ）、エルリズマブ（Ｅｒｌｉｚｕｍａｂ）、エルツマキソマブ（Ｅｒｔｕｍａｘｏｍａｂ）、エタラシズマブ（Ｅｔａｒａｃｉｚｕｍａｂ）、エトロリズマブ（Ｅｔｒｏｌｉｚｕｍａｂ）、エビナクマブ（Ｅｖｉｎａｃｕｍａｂ）、エボロクマブ、エキスビビルマブ（Ｅｘｂｉｖｉｒｕｍａｂ）、ファノレソマブ（Ｆａｎｏｌｅｓｏｍａｂ）、ファラリモマブ（Ｆａｒａｌｉｍｏｍａｂ）、ファーレツズマブ、ＦＢＴＡ０５、フェルビズマブ（Ｆｅｌｖｉｚｕｍａｂ）、フェザキヌマブ（Ｆｅｚａｋｉｎｕｍａｂ）、フィバツズマブ（Ｆｉｂａｔｕｚｕｍａｂ）、フィクラツズマブ（Ｆｉｃｌａｔｕｚｕｍａｂ）、フィギツムマブ、フィリブマブ（Ｆｉｒｉｖｕｍａｂ）、フランボツマブ（Ｆｌａｎｖｏｔｕｍａｂ）、フレチクマブ（Ｆｌｅｔｉｋｕｍａｂ）、フォントリズマブ、フォラルマブ（Ｆｏｒａｌｕｍａｂ）、フォラビルマブ（Ｆｏｒａｖｉｒｕｍａｂ）、フレソリムマブ（Ｆｒｅｓｏｌｉｍｕｍａｂ）、フルラヌマブ（Ｆｕｌｒａｎｕｍａｂ）、フツキシマブ（Ｆｕｔｕｘｉｍａｂ）、
ガルカネズマブ（Ｇａｌｃａｎｅｚｕｍａｂ）、ガリキシマブ、ガニツマブ、ガンテネルマブ、ガビリモマブ（Ｇａｖｉｌｉｍｏｍａｂ）、ゲムツズマブオゾガマイシン、ゲボキズマブ、ギレンツキシマブ（Ｇｉｒｅｎｔｕｘｉｍａｂ）、グレムバツムマブベドチン（Ｇｌｅｍｂａｔｕｍｕｍａｂ  ｖｅｄｏｔｉｎ）、ゴリムマブ、ゴミリキシマブ（Ｇｏｍｉｌｉｘｉｍａｂ）、グセルクマブ（Ｇｕｓｅｌｋｕｍａｂ）、イバリズマブ（Ｉｂａｌｉｚｕｍａｂ）、イブリツモマブチウキセタン、イクルクマブ（Ｉｃｒｕｃｕｍａｂ）、イダルシズマブ、イゴボマブ（Ｉｇｏｖｏｍａｂ）、ＩＭＡＢ３６２、イマルマブ（Ｉｍａｌｕｍａｂ）、イムシロマブ（Ｉｍｃｉｒｏｍａｂ）、イムガツズマブ（Ｉｍｇａｔｕｚｕｍａｂ）、インクラクマブ（Ｉｎｃｌａｃｕｍａｂ）、インダツキシマブラブタンシン（Ｉｎｄａｔｕｘｉｍａｂ  ｒａｖｔａｎｓｉｎｅ）、インデュサツマブベドチン（Ｉｎｄｕｓａｔｕｍａｂ  ｖｅｄｏｔｉｎ）、イネビリズマブ（Ｉｎｅｂｉｌｉｚｕｍａｂ）、インフリキシマブ、インテツムマブ（Ｉｎｔｅｔｕｍｕｍａｂ）、イノリモマブ、イノツズマブオゾガマイシン、イピリムマブ、イラツムマブ（Ｉｒａｔｕｍｕｍａｂ）、イサツキシマブ、イトリズマブ、イキセキズマブ、ケリキシマブ、ラベツズマブ、ランブロリズマブ、ラムパリズマブ（Ｌａｍｐａｌｉｚｕｍａｂ）、ラナデルマブ（Ｌａｎａｄｅｌｕｍａｂ）、ラプリツキシマブエムタンシン（Ｌａｐｒｉｔｕｘｉｍａｂ  ｅｍｔａｎｓｉｎｅ）、レブリキズマブ、レンダリズマブ（Ｌｅｎｄａｌｉｚｕｍａｂ）、レンジルマブ（Ｌｅｎｚｉｌｕｍａｂ）、レルデリムマブ（Ｌｅｒｄｅｌｉｍｕｍａｂ）、レクサツムマブ、リビビルマブ（Ｌｉｂｉｖｉｒｕｍａｂ）、リファスツズマブベドチン（Ｌｉｆａｓｔｕｚｕｍａｂ  ｖｅｄｏｔｉｎ）、リゲリズマブ（Ｌｉｇｅｌｉｚｕｍａｂ）、リロトマブサテトラキセタン（Ｌｉｌｏｔｏｍａｂ  ｓａｔｅｔｒａｘｅｔａｎ）、リンツズマブ、リリルマブ（Ｌｉｒｉｌｕｍａｂ）、ロデルシズマブ（Ｌｏｄｅｌｃｉｚｕｍａｂ）、ロキベトマブ（Ｌｏｋｉｖｅｔｍａｂ）、ロルボツズマブメルタンシン（Ｌｏｒｖｏｔｕｚｕｍａｂ  ｍｅｒｔａｎｓｉｎｅ）、ルカツムマブ（Ｌｕｃａｔｕｍｕｍａｂ）、ルリズマブペゴル（Ｌｕｌｉｚｕｍａｂ  ｐｅｇｏｌ）、ルミリキシマブ、ルムレツズマブ（Ｌｕｍｒｅｔｕｚｕｍａｂ）、マパツズマブ、マルジェツキシマブ（Ｍａｒｇｅｔｕｘｉｍａｂ）、マスリモマブ（Ｍａｓｌｉｍｏｍａｂ）、マブリリムマブ（Ｍａｖｒｉｌｉｍｕｍａｂ）、マツズマブ、メポリズマブ、メテリムマブ（Ｍｅｔｅｌｉｍｕｍａｂ）、ミラツズマブ、ミンレツモマブ（Ｍｉｎｒｅｔｕｍｏｍａｂ）、ミルベツキシマブソラブタンシン（Ｍｉｒｖｅｔｕｘｉｍａｂ  ｓｏｒａｖｔａｎｓｉｎｅ）、ミツモマブ（Ｍｉｔｕｍｏｍａｂ）、モガムリズマブ、モナリズマブ（Ｍｏｎａｌｉｚｕｍａｂ）、モロリムマブ（Ｍｏｒｏｌｉｍｕｍａｂ）、モタビズマブ、モキセツモマブパスドトクス（Ｍｏｘｅｔｕｍｏｍａｂ  ｐａｓｕｄｏｔｏｘ）、ムロモナブ−ＣＤ３、ナコロマブタフェナトクス（Ｎａｃｏｌｏｍａｂ  ｔａｆｅｎａｔｏｘ）、ナミルマブ（Ｎａｍｉｌｕｍａｂ）、ナプツ��マブエスタフェナトクス、ナラツキシマブエムタンシン（Ｎａｒａｔｕｘｉｍａｂ  ｅｍｔａｎｓｉｎｅ）、ナルナツマブ（Ｎａｒｎａｔｕｍａｂ）、ナタリズマブ、ナビシキシズマブ（Ｎａｖｉｃｉｘｉｚｕｍａｂ）、ナビブマブ（Ｎａｖｉｖｕｍａｂ）、ネバクマブ、ネシツムマブ、ネモリズマブ（Ｎｅｍｏｌｉｚｕｍａｂ）、ネレリモマブ（Ｎｅｒｅｌｉｍｏｍａｂ）、ネスバクマブ（Ｎｅｓｖａｃｕｍａｂ）、ニモツズマブ、ニモツズマブ、ニモツズマブ、ニボルマブ、ノフェツモマブメルペンタン（Ｎｏｆｅｔｕｍｏｍａｂ  ｍｅｒｐｅｎｔａｎ）、オビルトキサキシマブ（Ｏｂｉｌｔｏｘａｘｉｍａｂ）、オビヌツズマブ、オカラツズマブ（Ｏｃａｒａｔｕｚｕｍａｂ）、オクレリズマブ、オデュリモマブ（Ｏｄｕｌｉｍｏｍａｂ）、オファツムマブ、オララツマブ、オロキズマブ（Ｏｌｏｋｉｚｕｍａｂ）、オンツキシズマブ（Ｏｎｔｕｘｉｚｕｍａｂ）、オピシヌマブ（Ｏｐｉｃｉｎｕｍａｂ）、オポルツズマブモナトクス（Ｏｐｏｒｔｕｚｕｍａｂ  ｍｏｎａｔｏｘ）、オレゴボマブ、オルチクマブ（Ｏｒｔｉｃｕｍａｂ）、オテリキシズマブ、オトレルツズマブ（Ｏｔｌｅｒｔｕｚｕｍａｂ）、オキセルマブ（Ｏｘｅｌｕｍａｂ）、オザネズマブ（Ｏｚａｎｅｚｕｍａｂ）、オゾラリズマブ（Ｏｚｏｒａｌｉｚｕｍａｂ）、
パギバキシマブ、パリビズマブ、パムレブルマブ（Ｐａｍｒｅｖｌｕｍａｂ）、パニツムマブ、パンコマブ（Ｐａｎｋｏｍａｂ）、パノバクマブ（Ｐａｎｏｂａｃｕｍａｂ）、パルサツズマブ（Ｐａｒｓａｔｕｚｕｍａｂ）、パスコリズマブ（Ｐａｓｃｏｌｉｚｕｍａｂ）、パソツキシズマブ（Ｐａｓｏｔｕｘｉｚｕｍａｂ）、パテクリズマブ（Ｐａｔｅｃｌｉｚｕｍａｂ）、パトリツマブ（Ｐａｔｒｉｔｕｍａｂ）、ペムブロリズマブ、ペムツモマブ（Ｐｅｍｔｕｍｏｍａｂ）、ペラキズマブ（Ｐｅｒａｋｉｚｕｍａｂ）、ペラキズマブ、ペルツズマブ、パキセリズマブ、ピナツズマブベドチン（Ｐｉｎａｔｕｚｕｍａｂ  ｖｅｄｏｔｉｎ）、ピンツモマブ（Ｐｉｎｔｕｍｏｍａｂ）、プラクルマブ（Ｐｌａｃｕｌｕｍａｂ）、プロザリズマブ（Ｐｌｏｚａｌｉｚｕｍａｂ）、ポガリズマブ（Ｐｏｇａｌｉｚｕｍａｂ）、ポラツズマブベドチン（Ｐｏｌａｔｕｚｕｍａｂ  ｖｅｄｏｔｉｎ）、ポネズマブ、プレザリズマブ（Ｐｒｅｚａｌｉｚｕｍａｂ）、プリリキシマブ（Ｐｒｉｌｉｘｉｍａｂ）、プリトキサキシマブ（Ｐｒｉｔｏｘａｘｉｍａｂ）、プリツムマブ（Ｐｒｉｔｕｍｕｍａｂ）、ＰＲＯ１４０、クイリズマブ（Ｑｕｉｌｉｚｕｍａｂ）、ラコツモマブ（Ｒａｃｏｔｕｍｏｍａｂ）、ラドレツマブ（Ｒａｄｒｅｔｕｍａｂ）、ラフィビルマブ（Ｒａｆｉｖｉｒｕｍａｂ）、ラルパンシズマブ（Ｒａｌｐａｎｃｉｚｕｍａｂ）、ラムシルマブ、ラニビズマブ、ラキシバクマブ、レファネズマブ（Ｒｅｆａｎｅｚｕｍａｂ）、レガビルマブ、レスリズマブ、リロツムマブ、リヌクマブ（Ｒｉｎｕｃｕｍａｂ）、リツキシマブ、リババズマブペゴル（Ｒｉｖａｂａｚｕｍａｂ  ｐｅｇｏｌ）、ロバツムマブ（Ｒｏｂａｔｕｍｕｍａｂ）、ロレデュマブ（Ｒｏｌｅｄｕｍａｂ）、ロモソズマブ、ロンタリズマブ（Ｒｏｎｔａｌｉｚｕｍａｂ）、ロバルピツズマブテシリン（Ｒｏｖａｌｐｉｔｕｚｕｍａｂ  ｔｅｓｉｒｉｎｅ）、ロベリズマブ（Ｒｏｖｅｌｉｚｕｍａｂ）、ルプリズマブ（Ｒｕｐｌｉｚｕｍａｂ）、サシツズマブゴビテカン（Ｓａｃｉｔｕｚｕｍａｂ  ｇｏｖｉｔｅｃａｎ）、サマリズマブ（Ｓａｍａｌｉｚｕｍａｂ）、サペリズマブ（Ｓａｐｅｌｉｚｕｍａｂ）、サリルマブ、サツモマブペンデチド（Ｓａｔｕｍｏｍａｂ  ｐｅｎｄｅｔｉｄｅ）、セクキヌマブ、セリバンツマブ（Ｓｅｒｉｂａｎｔｕｍａｂ）、セトキサキシマブ（Ｓｅｔｏｘａｘｉｍａｂ）、セビルマブ（Ｓｅｖｉｒｕｍａｂ）、シブロツズマブ（Ｓｉｂｒｏｔｕｚｕｍａｂ）、ＳＧＮ−ＣＤ１９Ａ、ＳＧＮ−ＣＤ３３Ａ、シファリムマブ（Ｓｉｆａｌｉｍｕｍａｂ）、シルツキシマブ、シムツズマブ（Ｓｉｍｔｕｚｕｍａｂ）、シプリズマブ、シルクマブ（Ｓｉｒｕｋｕｍａｂ）、ソフィツズマブベドチン（Ｓｏｆｉｔｕｚｕｍａｂ  ｖｅｄｏｔｉｎ）、ソラネズマブ、ソリトマブ（Ｓｏｌｉｔｏｍａｂ）、ソネプシズマブ（Ｓｏｎｅｐｃｉｚｕｍａｂ）、ソンツズマブ（Ｓｏｎｔｕｚｕｍａｂ）、スタムルマブ（Ｓｔａｍｕｌｕｍａｂ）、スレソマブ（Ｓｕｌｅｓｏｍａｂ）、スビズマブ（Ｓｕｖｉｚｕｍａｂ）、タバルマブ（Ｔａｂａｌｕｍａｂ）、タカツズマブテトラキセタン（Ｔａｃａｔｕｚｕｍａｂ  ｔｅｔｒａｘｅｔａｎ）、タド��ズマブ（Ｔａｄｏｃｉｚｕｍａｂ）、タリズマブ、タムツベトマブ（Ｔａｍｔｕｖｅｔｍａｂ）、タネズマブ、タプリツモマブパプトクス（Ｔａｐｌｉｔｕｍｏｍａｂ  ｐａｐｔｏｘ）、タレクスツマブ（Ｔａｒｅｘｔｕｍａｂ）、テフィバズマブ（Ｔｅｆｉｂａｚｕｍａｂ）、テリモマブアリトクス（Ｔｅｌｉｍｏｍａｂ  ａｒｉｔｏｘ）、テナツモマブ（Ｔｅｎａｔｕｍｏｍａｂ）、テネリキシマブ（Ｔｅｎｅｌｉｘｉｍａｂ）、テプリズマブ、テプロツムマブ（Ｔｅｐｒｏｔｕｍｕｍａｂ）、テプロツムマブ、テシドルマブ（Ｔｅｓｉｄｏｌｕｍａｂ）、テツロマブ（Ｔｅｔｕｌｏｍａｂ）、テゼペルマブ（Ｔｅｚｅｐｅｌｕｍａｂ）、ＴＧＮ１４１２、チシリムマブ（Ｔｉｃｉｌｉｍｕｍａｂ）（＝トレメリムマブ（ｔｒｅｍｅｌｉｍｕｍａｂ））、チルドラキズマブ（Ｔｉｌｄｒａｋｉｚｕｍａｂ）、ティガツズマブ、ティモルマブ（Ｔｉｍｏｌｕｍａｂ）、ティソツマブベドチン（Ｔｉｓｏｔｕｍａｂ  ｖｅｄｏｔｉｎ）、ＴＮＸ−６５０、トシリズマブ（アトリズマブ（ａｔｌｉｚｕｍａｂ））、トラリズマブ（Ｔｏｒａｌｉｚｕｍａｂ）、トサトクスマブ（Ｔｏｓａｔｏｘｕｍａｂ）、トシツモマブ、トベツマブ（Ｔｏｖｅｔｕｍａｂ）、トラロキヌマブ（Ｔｒａｌｏｋｉｎｕｍａｂ）、トラスツズマブ、トラスツズマブエムタンシン、ＴＲＢＳ０７、トレガリズマブ（Ｔｒｅｇａｌｉｚｕｍａｂ）、トレメリムマブ、トレボグルマブ（Ｔｒｅｖｏｇｒｕｍａｂ）、ツコツズマブセルモロイキン（Ｔｕｃｏｔｕｚｕｍａｂ  ｃｅｌｍｏｌｅｕｋｉｎ）、ツビルマブ（Ｔｕｖｉｒｕｍａｂ）、ウブリツキシマブ（Ｕｂｌｉｔｕｘｉｍａｂ）、ウロクプルマブ、ウレルマブ（Ｕｒｅｌｕｍａｂ）、ウルトキサズマブ、ウステキヌマブ、バダスツキシマブタリリン（Ｖａｄａｓｔｕｘｉｍａｂ  ｔａｌｉｒｉｎｅ）、バンドルツズマブベドチン（Ｖａｎｄｏｒｔｕｚｕｍａｂ  Ｖｅｄｏｔｉｎ）、バンチクツマブ（Ｖａｎｔｉｃｔｕｍａｂ）、バヌシズマブ（Ｖａｎｕｃｉｚｕｍａｂ）、バパリキシマブ（Ｖａｐａｌｉｘｉｍａｂ）、バルリルマブ（Ｖａｒｌｉｌｕｍａｂ）、バテリズマブ（Ｖａｔｅｌｉｚｕｍａｂ）、ベパリモマブ（Ｖｅｐａｌｉｍｏｍａｂ）、ベセンクマブ（Ｖｅｓｅｎｃｕｍａｂ）、ビジリズマブ、ボバリリズマブ（Ｖｏｂａｒｉｌｉｚｕｍａｂ）、ボロシキシマブ、ボルセツズマブマホドチン（Ｖｏｒｓｅｔｕｚｕｍａｂ  ｍａｆｏｄｏｔｉｎ）、ボツムマブ（Ｖｏｔｕｍｕｍａｂ）、クセンツズマブ（Ｘｅｎｔｕｚｕｍａｂ）、サルツムマブ、ザノリムマブ、ザツキシマブ（Ｚａｔｕｘｉｍａｂ）、ジラリムマブ（Ｚｉｒａｌｉｍｕｍａｂ）、およびゾリモマブアリトクス（Ｚｏｌｉｍｏｍａｂ  ａｒｉｔｏｘ）を含む。
【０１０７】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＣＤ１５４抗体、または該抗体を含む医薬組成物は、自己免疫疾患に罹っている対象において自己免疫応答を阻害することができる。いくつかの実施形態では、自己免疫応答は、関節リウマチ、重症筋無力症、全身性エリテマトーデス、グレーブス病、特発性血小板減少症紫斑病、溶血性貧血、真性糖尿病、炎症性腸疾患、クローン病、多発性硬化症、乾癬、薬物誘発性自己免疫疾患、または薬物誘発性ループスからなる群から選択される状態に付随するまたは由来する。ある特定の実施形態では、自己免疫応答は、全身性エリテマトーデスに付随するまたは由来する。
【０１０８】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＣＤ１５４抗体、または該抗体を含む医薬組成物は、感染症に由来する自己免疫応答に罹っている対象において自己免疫応答を阻害することができる。
【０１０９】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＣＤ１５４抗体、または該抗体を含む医薬組成物は、ライター症候群、脊椎関節炎、ライム病、ＨＩＶ感染、梅毒、または結核に由来する自己免疫応答に罹っている対象において自己免疫応答を阻害することができる。
【０１１０】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＣＤ１５４抗体、または該抗体を含む医薬組成物は、対象において線維症を阻害することができる。
【０１１１】
線維症のいくつかの例は：肺線維症および線維性疾患を含む。肺線維症のいくつかの例は：成人呼吸促迫症候群に続発する肺線維症、薬物誘発性肺線維症、特発性肺線維症、または過敏性肺炎を含む。線維性疾患のいくつかの例は：Ｃ型肝炎；Ｂ型肝炎；硬変；毒性障害に続発する肝臓の硬変；薬物に続発する肝臓の硬変；ウイルス感染に続発する肝臓の硬変；および自己免疫疾患に続発する肝臓の硬変を含む。
【０１１２】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＣＤ１５４抗体、または該抗体を含む医薬組成物は胃腸疾患を阻害することができる。胃腸疾患のいくつかの例は：食道蠕動低下、炎症性腸疾患（クローン病および潰瘍性大腸炎を含む）、胃炎、コラーゲン大腸炎（リンパ球性大腸炎および顕微鏡的大腸炎を含む）、セリアック病（グルテン腸症、セリアックスプルー、またはグルテン不耐症）、および強皮症を含む。
【０１１３】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＣＤ１５４抗体、または該抗体を含む医薬組成物は血管疾患を阻害することができる。血管疾患のいくつかの例は：アテローム動脈硬化症、腎動脈疾患、リンパ浮腫、虚血性障害、および再灌流障害を含む。全身性エリテマトーデスまたはクリオグロブリン血症のような膠原血管／免疫複合疾患も含まれる。
【０１１４】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＣＤ１５４抗体、または該抗体を含む医薬組成物は、Ｔ細胞がん、例えば、Ｔ細胞白血病またはリンパ腫に罹っている対象においてＴ細胞腫瘍細胞の増殖を阻害することができる。そのような抗ＣＤ１５４抗体、または該抗体を含む医薬組成物は、その対象においてＴ細胞腫瘍細胞の増殖を阻害するのに効果的な量で対象に投与することができる。
【０１１５】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＣＤ１５４抗体、または該抗体を含む医薬組成物は、ヒトＴ細胞白血球ウイルス１型（ＨＴＬＶＩ）による対象のＴ細胞のウイルス感染を阻害することができる。そのような抗ＣＤ１５４抗体、または該抗体を含む医薬組成物は、ウイルス感染を阻害するのに効果的な量で対象に投与することができる。
【０１１６】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＣＤ１５４抗体、または該抗体を含む医薬組成物は、本発明の抗体が特異的に結合するＣＤ１５４タンパク質を発現する対象における腫瘍細胞または新生物細胞を画像化することができる。対象において腫瘍細胞または新生物細胞を画像化するための方法は：腫瘍細胞または新生物細胞の表面で抗体とタンパク質の間の複合体の形成を可能にする条件下で、有効量の本発明の抗ＣＤ１５４抗体、または該抗体を含む組成物を対象に投与する工程；および形成された任意の抗体／タンパク質複合体を画像化し、それによって対象において任意の腫瘍細胞または新生物細胞を画像化する工程を含む。
【０１１７】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＣＤ１５４抗体、または該抗体を含む医薬組成物は、本発明の抗体が特異的に結合するＣＤ１５４タンパク質を発現する対象における腫瘍細胞または新生物細胞の存在を検出することができる。対象において腫瘍細胞または新生物細胞の存在を検出するための１つのそのような方法は：抗体とタンパク質の間の複合体の形成を可能にする条件下で、有効量の本発明の抗ＣＤ１５４抗体、または該抗体を含む医薬組成物を対象に投与する工程；対象からいかなる非結合の画像化剤も除去する工程；および形成された任意の抗体／タンパク質複合体の存在を検出する工程であって、そのような複合体の存在が対象において腫瘍細胞または新生物細胞の存在を示す、工程を含む。
【０１１８】
医薬組成物
本発明は、本発明に記載されるＣＤ１５４結合タンパク質、例えば、抗ＣＤ１５４抗体を含む医薬組成物を提供する。
【０１１９】
本発明の一実施形態では、医薬組成物は本発明の少なくとも１つの抗ＣＤ１５４抗体を含む。
【０１２０】
本発明の抗ＣＤ１５４抗体または該抗体を含む医薬組成物は、血栓塞栓症イベントを含む、血栓症を引き起こさず、したがって、ヒト治療によく適している。
【０１２１】
そのような医薬組成物は、薬学的に許容される担体、アジュバンド、送達媒体、緩衝剤および／または安定化剤のうちの任意の１つまたはそれ以上をさらに含んでいてもよい。本発明の抗体の処方および投与のための例となる技法は、例えば、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、Ｐａ．、ｌａｔｅｓｔ  ｅｄｉｔｉｏｎに見出せる。
【０１２２】
本発明のさらに具体的な実施形態では、薬学的に許容される担体は、リン酸緩衝生理食塩水、生理食塩水、水、クエン酸／ショ糖／Ｔｗｅｅｎ製剤および乳濁剤、例えば、油／水乳濁剤である。
【０１２３】
本発明の一実施形態では、医薬組成物は該組成物に対する宿主免疫応答を減らすまたは予防するように、マイクロカプセルデバイスで送達することができる。本発明の抗体または抗体断片のような結合剤は、例えば、リポソームのような膜または他の被包性もしくは免疫保護された送達媒体にマイクロカプセル化されて送達してもよい。
【０１２４】
本発明の一実施形態では、医薬組成物は無菌注射可能調製物、例えば、無菌注射可能水性または油性懸濁液の形態でもよい。この懸濁液は、適切な分散剤、湿潤剤、および懸濁剤を使用する当技術分野で公知の技法に従って処方してもよい。
【０１２５】
本発明の一実施形態では、医薬組成物は経口的に、局所的にまたは静脈内に送達してもよい。全身的に投与される場合、治療組成物は無菌で、実質的に発熱物質がなく、ｐＨ、等張性、および安定性を十分に配慮している非経口的に許容される溶液であるべきである。例えば、医薬調製物はヒト治療薬としての投与に適するように発熱物質が実質的にない。これらの条件は当業者には公知である。
【０１２６】
本発明のさらに具体的な実施形態では、経口投与については、医薬組成物は適切なカプセル、錠剤、水性懸濁液または水溶液で処方される。経口投与のための組成物の固体製剤は、コーンスターチ、ゼラチン、ラクトース、アカシア、ショ糖、微結晶性セルロース、カオリン、マンニトール、リン酸二カルシウム、炭酸カルシウム、塩化ナトリウム、またはアルギン酸のような適切な担体または賦形剤を含有することが可能である。使用可能な崩壊剤は、限定せずに、微結晶性セルロース、コーンスターチ、グルコール酸ナトリウムデンプン、およびアルギン酸を含む。使用可能な錠剤用結合剤は、アカシア、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリビニルピロリドン（Ｐｏｖｉｄｏｎｅ（商標））、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ショ糖、デンプン、およびエチルセルロースを含む。使用可能な潤滑剤はステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、シリコーン油、タルク、ワックス、油、およびコロイド状シリカを含む。
【０１２７】
本発明のさらに具体的な実施形態では、局所適用については、医薬組成物は適切な軟膏で処方してもよい。局所使用のための組成物の製剤のいくつかの例は：活性成分ならびに種々の支持物および媒体を含有する、ドロップ、チンキ剤、ローション剤、クリーム、溶液、および軟膏を含む。
【０１２８】
本発明の一実施形態では、局所半固体軟膏製剤は典型的には、医薬クリームベースのような担体中約１から２０％、例えば、５から１０％の活性成分の濃度を含む。
【０１２９】
本発明の一実施形態では、吸入および経皮組成物のための医薬組成物も容易に調製することが可能である。治療組成物は、例えば、液体または粉末エアゾール（凍結乾燥した）として鼻または肺を通じて投与することが可能である。
【０１３０】
本発明の一実施形態では、水または他の水性溶媒で調製される経口投与のための医薬組成物の液体製剤は、メチルセルロース、アルギン酸、トラガント、ペクチン、ケルギン（ｋｅｌｇｉｎ）、カラゲナン、アカシア、ポリビニルピロリドン、およびポリビニルアルコールのような種々の懸濁剤を含有することが可能である。本発明の医薬組成物の液体製剤は、活性化合物（複数可）と共に、湿潤剤、甘味料、ならびに着色および香味剤を含有する溶液、乳濁剤、シロップおよびエリキシル剤も含むことが可能である。医薬組成物の種々の液体および粉末製剤は、処置される哺乳動物の肺への吸入のための従来法により調製することが可能である。
【０１３１】
本発明の一実施形態では、注射用の医薬組成物の液体製剤は、植物油、ジメチルアセトアミド、ジメチルホルムアミド、乳酸エチル、炭酸エチル、イソプロピルミリステート、エタノール、ポリオール、すなわち、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコール、および同類の物のような種々の担体を含むことが可能である。いくつかの実施形態では、組成物はシトレート／ショ糖／Ｔｗｅｅｎ担体を含む。静脈内注射では、組成物の水溶性版を点滴法により投与することが可能であり、それにより抗真菌薬および生理的に許容される賦形剤を含有する医薬製剤が注入される。生理的に許容される賦形剤は、例えば、５％のブドウ糖、０．９％の生理食塩水、リンゲル液または他の適切な賦形剤を含むことが可能である。適切な不溶性型の組成物は水性ベースまたは長鎖脂肪酸のエステル、例えば、オレイン酸エチルのような薬学的に許容される油ベース中の懸濁液として調製し投与することが可能である。
【０１３２】
本発明の一実施形態では、医薬組成物は、薬学的に許容される担体中約０．１から９０重量％（１から２０％または１から１０％のような）の本発明の抗ＣＤ１５４抗体を含む。
【０１３３】
本発明の一実施形態では、それぞれの医薬組成物中の本発明の抗ＣＤ１５４抗体の最適パーセントは処方それ自体ならびに特定の病態および関連する治療レジメンにおいて望まれる治療効果に従って変化する。製剤処方は当技術分野では十分に確立している。医薬の分野の当業者に公知である従来法を使用して医薬組成物を対象に投与することが可能である。
【０１３４】
したがって、本発明の医薬組成物は持続放出性製剤に関係する。持続放出性、または制御放出または徐放性とは、ポリペプチドまたは抗体薬のような活性薬物を対象への投与に続いて一定期間にわたり放出する薬物製剤のことである。一定範囲の所望の期間（例えば、薬物製剤に応じて、分、時間、日、週またはもっと長い）にわたり起こることができるポリペプチド薬物の持続放出は、実質的に全投薬単位が血流を介して即時吸収または即時分布に利用可能である標準製剤とは異なる。持続放出性製剤は、ある特定の実施形態では、例えば、８時間またはそれよりも長く、１２時間またはそれよりも長く、２４時間またはそれよりも長く、３６時間またはそれよりも長く、４８時間またはそれよりも長く、６０時間またはそれよりも長く、７２時間またはそれよりも長く、８４時間またはそれよりも長く、９６時間またはそれよりも長く、または例えば１週間でさえまたは２週間もしくはそれよりも長く、例えば、１か月またはそれよりも長く持続される単回投与からのあるレベルの循環する薬物をもたらすことがある。持続放出性組成物は本発明の抗ＣＤ１５４抗体を含んでいてもよい。
【０１３５】
本発明のいくつかの実施形態では、医薬組成物は別の免疫抑制性または免疫調節性化合物をさらに含む。例えば、そのような免疫抑制性または免疫調節性化合物は以下の：ＣＤ２８を介してＴ細胞同時刺激シグナル伝達を妨害する薬剤；カルシニューリンシグナル伝達を妨害する薬剤、コルチコステロイド、抗増殖性薬剤、ならびにＣＤ４５、ＣＤ２、ＩＬ２Ｒ、ＣＤ４、ＣＤ８およびＲＡＮＫ  ＦｃＲ、Ｂ７、ＣＴＬＡ４、ＴＮＦ、ＬＴβおよびＶＬＡ−４を含むがこれらに限定されない、免疫細胞の表面で発現されるタンパク質に特異的に結合する抗体のうちの１つでもよい。
【０１３６】
本発明のいくつかの実施形態では、免疫抑制性または免疫調節性化合物はタクロリムス、シロリムス、ミコフェノール酸モフェチルもしくはその活性型ミコフェノール酸、ミゾリビン、デオキシスパガリン、ブレキナルナトリウム、レフルノミド、ラパマイシンまたはアザスピランである。
【０１３７】
本発明の他の実施形態では、本発明の抗体または該抗体を含む医薬組成物は容器、パッケージもしくはディスペンサー単独に、または投与のためのラベルおよび説明書と一緒のキットの一部として含むことができる。
【０１３８】
投与および送達経路
本発明の抗ＣＤ１５４抗体および本発明の医薬組成物は医学的に許容できるいかなる様式でも対象に投与することができる。本発明の目的では、「投与」とは当業者に公知である抗体、抗体断片または医薬組成物を投与する標準法のうちのいずれでも意味し、本明細書に提供される実施例に限定されるべきではない。
【０１３９】
本発明のいくつかの実施形態では、本発明の抗ＣＤ１５４抗体および本発明の医薬組成物は注射により対象の静脈内に、皮下に、腹腔内に、筋肉内に、髄内に、脳室内に、硬膜外内に（ｉｎｔｒａｅｐｉｄｕｒａｌｌｙ）、動脈内に、血管内に、関節内に、滑膜内に、胸骨内に（ｉｎｔｒａｓｔｅｒｎａｌｌｙ）、くも膜下腔内に、肝臓内に（ｉｎｔｒａｈｅｐａｔｉｃａｌｌｙ）、脊髄内に、腫瘍内に、頭蓋内に；腸内、肺内、経粘膜、子宮内もしくは舌下投与経路により、または局所的に、例えば、炎症もしくは腫瘍成長の部位に投与してもよい。
【０１４０】
本発明のいくつかの実施形態では、本発明の抗ＣＤ１５４抗体および本発明の医薬組成物は経口的にもしくは経鼻的に、または吸入、眼部、直腸、もしくは局所的経路により投与してもよい。
【０１４１】
さらに具体的な実施形態では、本発明の抗ＣＤ１５４抗体および本発明の医薬組成物はカプセル、錠剤、水性懸濁液または水溶液の形態で対象に経口的に投与してもよい。
【０１４２】
さらに具体的な実施形態では、本発明の抗ＣＤ１５４抗体および本発明の医薬組成物は、クリーム、軟膏または同類の物の適用により対象に局所的に投与してもよい。
【０１４３】
本発明の他の実施形態では、本発明の抗ＣＤ１５４抗体および本発明の医薬組成物は、ネブライザー、乾燥粉末吸入器または定量噴霧式吸入器の使用を通じて吸入により投与してもよい。
【０１４４】
本発明のさらなる実施形態では、本発明の抗ＣＤ１５４抗体および本発明の医薬組成物は、持続放出投与により、手術中に直接貼り付けられる浸蝕性移植片のデポ注射のような手段により、または注入ポンプもしくは生体適合性持続放出移植片の対象への埋め込みにより対象に投与してもよい。
【０１４５】
さらに具体的な実施形態では、本発明の抗ＣＤ１５４抗体および本発明の医薬組成物は、１、３、もしくは６ヶ月デポ注射可能なまたは生分解性物質および方法を使用することによりのような注入可能なデポ投与経路により対象に投与してもよい。
【０１４６】
さらに具体的な実施形態では、本発明の抗ＣＤ１５４抗体および本発明の医薬組成物は、抗体、抗体誘導体または医薬組成物を含有する経皮パッチを対象の皮膚に貼り付け、一般にはパッチ当たり１から５時間パッチを対象の皮膚に接触したままにしておくことにより対象に投与してもよい。
【０１４７】
本発明の他の実施形態では、本発明の抗ＣＤ１５４抗体および本発明の医薬組成物は、医学的に許容できる体重当たりの任意の用量および任意の投与頻度で対象に投与してもよい。許容できる投与量は約０．０１から２００ｍｇ／ｋｇ対象体重までの範囲を含む。
【０１４８】
主題の抗ＣＤ１５４抗体は、免役に対する所望の効果、すなわち、ＴもしくはＢ細胞免疫の抑制を誘発するのに効果的な量で、またはＴもしくはＢ細胞免疫の抑制が治療的に望ましい疾患の症状を予防する、処置するもしくは改善するのに効果的な量で対象に投与される。言及したように、これらの状態は特定の自己免疫、炎症およびアレルギー適応症を含む。
【０１４９】
抗体の全投与用量は代わりに０．０１、０．１、１、５、１０、１５、２０、２５、５０、１００もしくはそれよりも多いｍｇ含んでいてもよく、または前述のｍｇ値の間に介在する任意の量を含んでいてもよい。本発明の好ましい実施形態では、本明細書に記載される抗ＣＤ１５４抗体またはその結合断片、ならびに前記抗体断片の組合せは、１６週もしくはそれよりも少ない週ごとに１回、８週もしくはそれよりも少ない週ごとに１回、または４週ごとに、毎月、隔週もしくはそれよりも少ない期間に１回のような、２６週もしくはそれよりも少ない週ごとに１回の頻度でレシピエント対象に投与してもよい。
【０１５０】
本発明の抗体または医薬組成物を使用する方法のうちのいずれにおいても、抗体または医薬組成物は毎日、２、３、４、５もしくは６日ごとに、毎週、毎月またはその任意の一部もしくは複数倍で、一回量もしくは複数回量で対象に投与してもよく、さらに当業者により決定される毎日から隔月までに及ぶ間隔で繰り返し対象に投与してもよい。
【０１５１】
本発明の抗体または医薬組成物を使用する方法のうちのいずれにおいても、抗体または該抗体を含む医薬組成物は、数日もしくは数週間から対象の生涯に及ぶ医学的に必要とされるのと同じ期間、間隔を置いてそれを必要とする対象に投与してもよい。さらなる実施形態では、本発明の抗ＣＤ１５４抗体および本発明の医薬組成物は、毎日から隔月までに及ぶ間隔で繰り返し対象に投与してもよい。
【０１５２】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＣＤ１５４抗体および本発明の医薬組成物は、所望の総１日量を達成するために、必要に応じて１日当たり複数回投与で投与することが可能である。処置方法の有効性は障害の公知の徴候または症状について対象をモニターすることにより評価することが可能である。
【０１５３】
本発明のすべての実施形態では、所望の効果をもたらすのに効果的である本発明の抗ＣＤ１５４抗体および本発明の医薬組成物の投与量および投与速度は、処置する疾患の性質、対象の大きさおよび年齢、処置の目標、使用される特定の医薬組成物、活性剤の薬物動態、および処置担当医の判断のような種々の要因に依拠することになる。
【０１５４】
効果的な投与量は、例えば、年齢、性別、妊娠状態、肥満度指数、除脂肪体重、組成物が与えられる状態（単数または複数）、組成物の代謝または耐性に影響を与える可能性のあるレシピエント対象の他の健康状態、レシピエント対象のＩＬ−６のレベル、および組成物への耐性（例えば、組成物に対する抗体を発現している患者から生じる）のようなレシピエント対象特性に依拠することがあることは理解されている。当業者であれば、例えば、本明細書の開示およびＧｏｏｄｍａｎ、Ｌ．Ｓ．、Ｇｉｌｍａｎ、Ａ．、Ｂｒｕｎｔｏｎ、Ｌ．Ｌ．、Ｌａｚｏ、Ｊ．Ｓ．、＆Ｐａｒｋｅｒ、Ｋ．Ｌ．（２００６）、Ｇｏｏｄｍａｎ＆Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  ｔｈｅ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  ｂａｓｉｓ  ｏｆ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ．Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ；Ｈｏｗｌａｎｄ、Ｒ．Ｄ．、Ｍｙｃｅｋ、Ｍ．Ｊ．、Ｈａｒｖｅｙ、Ｒ．Ａ．、Ｃｈａｍｐｅ、Ｐ．Ｃ．、＆Ｍｙｃｅｋ、Ｍ．Ｊ．（２００６）．Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ’ｓ  ｉｌｌｕｓｔｒａｔｅｄ  ｒｅｖｉｅｗｓ．Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ：Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ；ａｎｄ  Ｇｏｌａｎ、Ｄ．Ｅ．（２００８）．Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ：ｔｈｅ  ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃ  ｂａｓｉｓ  ｏｆ  ｄｒｕｇ  ｔｈｅｒａｐｙ．Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、Ｐａ．、［ｅｔｃ．］：Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓの教えにより導かれる日常実験を通じて効果的な投与量および投与頻度を決定することができると考えられる。
【０１５５】
したがって、本発明の抗ＣＤ１５４抗体および本発明の医薬組成物は、その意図される目的を達成するのに効果的な量で投与される。治療有効量とは、疾患の症状を予防する、軽減するもしくは改善するまたは処置中の対象の生存を延長するのに効果的な抗体の量のことでもよい。治療有効量は主題の抗体の投与の用量および投与スケジュールを変えることにより達成してもよい。
【０１５６】
本発明の抗ＣＤ１５４抗体および本発明の医薬組成物は、１日の処置で投与された外来性抗原のような、対象が短期間曝露される抗原に対する免疫応答を予防するようなある特定の適応症に対して単回投与量として投与してもよい。そのような治療の例は、本発明の抗体断片を、治療薬、例えば、抗原性医薬品、アレルゲンもしくは血液製剤、または遺伝子治療ベクターと一緒に同時投与することを含むと考えられる。移植された組織に対するまたは慢性的に投与されている抗原性医薬品に対する免疫反応を制御するような、抗原が慢性的に存在する適応症では、本発明の抗体断片または医薬組成物は、数日もしくは数週間から対象の生涯に及ぶ医学的に必要とされるのと同じ期間、間隔を置いて投与される。
【０１５７】
本明細書に記載される方法のうちのいずれにおいても、抗体または医薬組成物は第二の薬剤と一緒に対象に投与してもよい。ある特定の実施形態では、薬剤は、例えば、免疫調節剤または免疫抑制剤のような治療薬である。免疫調節剤または免疫抑制剤は以下の：
（ａ）ＣＤ２８を介したＴ細胞同時刺激シグナル伝達を妨害する薬剤；
（ｂ）カルシニューリンシグナル伝達を妨害する薬剤、
（ｃ）コルチコステロイド、
（ｄ）抗増殖性薬剤；ならびに
（ｅ）ＣＤ４５、ＣＤ２、ＩＬ２Ｒ、ＣＤ４、ＣＤ８およびＲＡＮＫ  ＦｃＲ、Ｂ７、ＣＴＬＡ４、ＴＮＦ、ＬＴβおよびＶＬＡ−４を含むがこれらに限定されない、免疫細胞の表面で発現されるタンパク質に特異的に結合する抗体
のうちのいずれでもよい。
【０１５８】
免疫抑制または免疫調節化合物は、例えば、タクロリムス、シロリムス、ミコフェノール酸モフェチル、ミゾリビン、デオキシスパガリン、ブレキナルナトリウム、レフルノミド、ラパマイシンまたはアザスピランでもよい。抗体および二次薬剤の投与は同時でも逐次でもよい。いくつかの例では、本発明の１つまたはそれよりも多い核酸を、それを必要とする対象に投与するのが有利なことがある。周知の方法に従って本発明の少なくとも１つの核酸を投与する工程を含む本発明の治療および診断法は本発明の範囲に含まれる。
【０１５９】
本発明の一実施形態では、上記の方法により処置することが可能である対象（複数可）は動物である。好ましくは、動物は哺乳動物である。治療してもよい哺乳動物の例は、ヒト、非ヒト霊長類、齧歯類（ラット、マウス、ハムスターおよびモルモットを含む）、ウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、イヌおよびネコを含むがこれらに限定されない。好ましくは、哺乳動物はヒトである。
【０１６０】
本発明は以下の実施例に基づけばもっとよく理解される場合がある。しかし、当業者であれば、考察されている特定の方法および結果は本明細書に記載される本発明を説明しているだけであることは容易に認識するであろう。
【０１６１】
以下の実施例は当業者に、主題の発明をどのように作製および使用するのかを完全に開示し説明するために述べられており、本発明と見なされるものの範囲を限定することを意図してはいない。使用される数字（例えば、量、温度、濃度、等）に関して正確さを保証するよう努力を重ねてきたが、いくつかの実験誤差および偏差は見込んでおくべきである。別の方法で示されていなければ、部は重量部であり、分子量は平均分子量であり、温度は摂氏度であり、圧力は大気圧またはほぼ大気圧である。
【実施例】
【０１６２】
実施例１：ヒトＣＤ１５４に対してより高い親和性（より低いＫＤ値）を有する抗体変異体の設計
本出願では、本発明者らは、ヒト治療、特にＴおよびＢ細胞免疫の抑制が治療的に望ましい治療適応症における使用を目的とする図１Ａ〜Ｃに含有される配列を有する新規のヒト化抗ヒトＣＤ１５４  ＩｇＧ１抗体を記載している。前述の通り、この抗体は、親和性成熟と変異誘発法の組合せ使用によりならびにＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩＩおよびＣ１ｑ（補体結合）を除去するためのＩＤＥＣ−１３１のＩｇＧ１  Ｆｃ領域の改変によりＩＤＥＣ−１３１から派生させた。
【０１６３】
特に、ＩＤＥＣ−１３１の重と軽可変領域の両方における種々の組合せのＣＤＲ残基は、ヒトＣＤ１５４に対する改良された結合親和性を有するＩＤＥＣ−１３１の変異体を得る目的で変異導入された。これらの実験により多数の変異体が得られた。圧倒的な数のこれらの変異体は、ＩＤＥＣ−１３１より良好にヒトＣＤ１５４に結合することはなく、むしろヒトＣＤ１５４に対する結合親和性は同じであるか悪化していた（結果は示されず）。
【０１６４】
これらの実験により、同定され図２Ａ〜２Ｃおよび３に示される可変軽および重鎖配列を含有する１１のヒト化変異体が得られた。次に、ヒトＣＤ１５４に対するこれらの変異体のそれぞれの結合親和性はＢｉａｃｏｒｅによりスクリーニングされた。Ｂｉａｃｏｒｅアッセイは以下に示す通りに実行された。
【０１６５】
ＢＩＡＣＯＲＥアッセイ
機器：Ｂｉａｃｏｒｅ３０００
アッセイ緩衝液−１０ｎＭのＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．４）、１５０ｎＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、０．０５％のＰ２０（ポリオキシエチレンソルビタン）
再生緩衝液−１０ｍＭのグリシンＨＣｌ（ｐＨ１．７５）
コンジュゲーション緩衝液−１０ｎＭの酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５）
流速−リガンド捕捉のために流速は５μｌ／分。動態解析のための流速は３０μｌ／分。
【０１６６】
手順
結合実験は２５℃、Ｂｉａｃｏｒｅ３００上で実行した。抗体はフローセル２（１０００ＲＵの組合せ＃２３）およびフローセル４（１０００ＲＵのＥＷＴ＃１３１）上に直接固定化し、ＣＤ１５４抗原をチップ上に流した。試験抗体への抗原の結合はリアルタイムでモニターした。観察されたｋｏｎから、変異体ごとにｋｏｆｆおよびＫｄが決定された。
【０１６７】
スコアリング解析を特定の分析物濃度を使用して実行した。試験濃度では、リガンド結合親和性が比較的弱くても結合は観察されるはずである。完全動態（Ｆｕｌｌ  ｋｉｎｅｔｉｃｓ）は公知の方法により実行してもよい。急速なオフ速度での分子相互作用では、定常状態動態を使用してＫＤ値を決定してもよい。
【０１６８】
カイ二乗（χ２）解析を実行して解析の正確さを判定してもよい。１〜２内のχ２は有意と見なされ、１未満は高度に有意と見なされる。このスクリーニングにより著しく改良された結合親和性を有する、すなわち、ＩＤＥＣ−１３１と比べて４〜５倍になったいくつかの配列変異体が同定された。前述のように、この成果は、ＩＤＥＣ−１３１が１５１ｐｍの結合親和性またはＫＤを有するのでひどく予想外であった。この結果はさらに驚くべきものであった。なぜならば、ＩＤＥＣ−１３１は、ＣＤ１５４に対するその強力な結合親和性に基づいていくつかの異なる候補ヒト化配列の間から主要臨床候補として選択されたからであった。
【０１６９】
下に示されるように、ＩＤＥＣ−１３１に由来し、わずか２６ｐｍから５７ｐｍに及ぶＫＤ値を有するヒト化抗ＣＤ１５４抗体が得られた。本出願において変異体２１、変異体２２、変異体２３、変異体２４、変異体２５、変異体２６、変異体２７、変異体２８、変異体２９、変異体３０および変異体３１として同定されているこれらの変異体の重および軽可変配列のアミノ酸配列は図２に含有されている。
【０１７０】
表４は、Ｂｉａｃｏｒｅにより決定されるこれらの変異体の異なる結合親和性をまとめている。
【０１７１】
【表４】
2018528258.tif 000006
【０１７２】
実施例２：ＳＣ投与のためのヒトＣＤ１５４に対してより高い親和性（より低いＫＤ値）を有する抗体変異体の使用
上の表に示されているように、主要候補＃２１として選択された変異体は２９ｐＭのＫＤを有し、この値はＩＤＥＣ−１３１の４．７倍である。この親和性改良は、そのおかげでこの抗体を皮下に投与することが可能になるはずなので意義深い。ＩＤＥＣ−１３１を用いた以前の研究では１０ｍｇ／ｋｇ超でヒトの臨床的効能が、または分析目的では２０ｍｇ／ｋｇの上限が明らかにされていた。これに基づいて、ヒトの平均体重を約８０ｋｇと仮定すると、用量有効量は以下の通りに計算することができる。
１０ｍｇ／ｋｇ×８０ｋｇ＝８００ｍｇ用量
【０１７３】
しかし、使用するための抗体製剤は通例、１００ｎｇ／ｍｌを超えない（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｓｃｉｅｎｃｅｄｉｒｅｃｔ．ｃｏｍ／ｓｃｉｅｎｃｅ／ａｒｔｉｃｌｅ／ｐｉｉ／Ｓ０１６９４０９Ｘ０６０００８９５）。
【０１７４】
さらに、ｓ．ｑ．投与のための典型的な耐量容積は約０．５〜５ｍｌに及ぶ（３ｍＬよりも大きな容積は「大」と見なされる）。したがって、ＩＤＥＣ−１３１の有効薬量は約８ｍＬを必要とすると考えられる（計算は下を参照されたい）。この投与量容積はｓ．ｑ．医薬標準を優に超えている。
（１０ｍｇ／ｋｇ×８０ｋｇ）／１００ｍｇ／ｍｌ＝８ｍＬ
【０１７５】
これとは対照的に、変異体＃２１（ＩＮＸ０２１）は約５分の１であるＫＤを有する（すなわち、ＣＤ１５４により大きな親和性で結合する）ので、この変異体が同じ効能を達成するのに必要な薬物は５分の１になると考えられる。下に示されるように、これは約１．６ｍｌの投与量容積に換算されると考えられ、この量は患者に対するｓ．ｑ．注射についての十分に医学慣例のレベル内にある。
（２ｍｇ／ｋｇ×８０ｋｇ）／１００ｍｇ／ｍｌ＝１．６ｍＬ
【０１７６】
したがって、ＩＤＥＣ−１３１と違って、ＩＮＸ０２１はｓ．ｑ．経路を介した投与に十分適しているはずである。
【０１７７】
実施例３：本発明に従った抗ＣＤ１５４抗体の効力の比較
図４は、Ｔ細胞ＣＤ１５４駆動Ｂ細胞活性化の阻害を検出する実験の結果を模式的に描いている。図に含有されるこれらの結果は、改良された効力、すなわち、ＩＤＥＣ−１３１と比べた場合、ＩＮＸ０２１のほうがＴ細胞ＣＤ１５４駆動Ｂ細胞活性化をより大きく阻害していることを示している。
【０１７８】
実施例４：寛容を誘発する本発明の抗体の能力
図５は、ＩＮＸ０２１に含有されるのと同じＦｃ突然変異（Ｅ２６９ＲおよびＫ３２２Ａ）を含有する抗マウスＣＤ１５４  ＩｇＧ１抗体が前述の皮膚試験において寛容を誘導することができることを実証する実験結果を示している。したがって、これらの突然変異したＩｇＧ１定常領域を含有する抗ヒトＣＤ１５４抗体は、ヒト患者において寛容を誘発しＣＤ１５４のその他の効果を遮断するはずである。
【０１７９】
実施例６：ＩＮＸ０２１はｉｎ  ｖｉｔｒｏで血小板凝集を誘発しない
図６は、ＦｃＲ結合を減少させるまたは除去する突然変異を含有するＩＮＸ０２１抗体は、主題のＩＮＸ０２１抗体とコラーゲンの免疫複合体を使用するアッセイにおいて血小板凝集をｉｎ  ｖｉｔｒｏで誘導しないことを明らかにした実験結果を示している。これらのｉｎ  ｖｉｔｒｏ実験は、１６または２０分間にわたるＦｃＲ突然変異体の免疫複合体は単離されたマウス血小板でもヒト血小板でもその活性化または凝集を誘導しないことを明らかにした。これとは対照的に、同じアッセイにおいて、対照５ｃ８抗体は血小板凝集を引き起こした。
【０１８０】
実施例７：本発明に従った抗ＣＤ１５４抗体はｉｎ  ｖｉｖｏで血小板凝集を誘発しない
図７Ａ〜Ｄは、ＩＮＸ０２１がｉｎ  ｖｉｖｏで血小板を活性化せず、血小板凝集を誘導せず、血小板数に影響を与えない（を減少しない）ことを実証する実験結果を示している。図７Ａでの実験は、ＩＮＸ０２１が、陽性対照と比べた場合、血栓性ストレスを誘導しないし血小板を活性化もしないことを示している。図７Ｂでの実験は、ＩＮＸ０２１が、陽性対照と比べた場合、循環している血小板の数に影響を与えないことを示している。図７Ｃでの実験は、ＩＮＸ０２１が、陽性対照と比べた場合、肺での血餅（塞栓）の形成を誘発しないことを示している。図７Ｄは、ｉｎ  ｖｉｖｏでのＩＮＸ０２１の利点、すなわち、ＩＮＸ０２１は血小板数を減らさず、血小板を活性化せず、血小板ストレスを引き起こさず、血餅の形成を誘導しないことをまとめている。
【０１８１】
実施例８：自己免疫モデルにおける本発明に従った抗ＣＤ１５４抗体の使用
図８Ａ〜Ｂにまとめられている実験は、ＦｃＲ結合を減少させるまたは除去するＦｃ突然変異をＩＮＸ０２１中に含有する抗ヒト化抗ＣＤ１５４  ＩｇＧ１抗体は異なる自己免疫または炎症性モデルにおいて活性であることを示している。
【０１８２】
図８Ａでの実験は、ＩＮＸ０２１中にＦｃ突然変異を含有するヒトＣＤ１５４  ＩｇＧ１抗体が、約２０日間にわたりＥＡＥを強力に抑制することを示している。図８Ｂでの実験は、ＩＮＸ０２１中にＦｃ突然変異を含有するヒト化抗ＣＤ１５４  ＩｇＧ１抗体が、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（「ＭＯＧ」）に対する体液性免疫を親抗体と比較できるほど強力に抑制することを示している。
【０１８３】
実施例９：Ｔ細胞誘導されるＢ細胞活性化を抑制するその能力に関するＩＮＸ０２１を含むＩＤＥＣ−１３１変異体の試験
図９での実験は、本発明に従った異なる抗体変異体、すなわち、変異体＃２１（ＩＮＸ０２１）〜＃３１のＴ細胞誘導Ｂ細胞活性化を抑制する効果をＣＤ８６発現に基づいて比較する。これらの実験では、本発明に従った抗体変異体の抑制効果は、混合リンパ球反応において比較された。読み出しは活性化されたＢ細胞によるＣＤ８６発現であった。図に示されるように、よりよいＫＤ値を有する抗体はＭＬＲ反応において必ずしも改良された機能的効果と相関しなかった。ＩＮＸ０２１は他の変異体と比べて優れた免疫抑制特性を有していた。
【０１８４】
実施例１０：ＩＮＸ０２１毒性研究およびＴ細胞依存性抗体応答（ＴＤＡＲ）測定
ヒト治療における使用のためのその適合性を評価するために、本発明の抗体ＩＮＸ０２１は、ＣＲＬおよびハーバード施設でアカゲザルでの８週間非ＧＬＰ毒性研究において試験された。研究デザインは下の表に示されている。この研究の目標は、非ヒト霊長類（ＮＨＰ）でのＩＮＸ９２１の安全性および効能を評価することであった。
【０１８５】
【表５】
2018528258.tif 000007
【０１８６】
【表６】
2018528258.tif 000008
【０１８７】
図１０Ａ〜ＢはＫＬＨアッセイにおいてＩｇＧおよびＩｇＭ抗体の産生に対するＩＮＸ０２１およびキメラ５ｃ８抗体の効果を比較する。図１０ＡはＩｇＧに対するその効果を比較し、図１０ＢはＩｇＭに対するその効果を比較している。
【０１８８】
図１１Ａ〜Ｂは胚中心スコアーに対する溶媒、ＩＮＸ０２１および５ｃ８抗体に効果を比較している。図１１Ａは胚スコアー比較を示し、図１１Ｂは、処置された動物の脾臓およびリンパ節（ＬＮ）での胚中心の数および細胞充実性の度合いを比較するヒストグラムを含有している。
【０１８９】
図１２は、別の抗ＣＤ１５４抗体（Ｂｉｏｇｅｎ／ＵＣＢのペグ化αＣＤ１５４  Ｆａｂ）を用いた公表されている結果と比べた観察された病変頻度をまとめている。
【０１９０】
これらの結果は、ＩＮＸ０２１がヒト治療において安全で効果的であるはずであることを示している。
【０１９１】
実施例１１：ＩＮＸ０２１はＮＨＰでの抗薬物抗体（ＡＤＡ）応答を抑制する
前の実施例で考察されたＩＮＸ０２１毒性／ＴＤＡＲ実験中、すべてのコホートにおいてＡＤＡの存在を測定した。すべての動物でのＴＤＡＲ応答は抑制されており、可溶性抗原に対する抗体応答がＩＮＸ０２１処置された動物において予防されている可能性があることを示唆していた。これを調べるため、８週間のＩＮＸ０２１または５Ｃ８注射に続いてアカゲザルでＡＤＡ応答を測定した。ＩＮＸ０２１群の最も低い用量（１ｍｇ／ｋｇ）で１頭を除くすべての動物がいかなる検出可能なＡＤＡも発現しなかった。
【０１９２】
方法：
アカゲザルでのＩＮＸ０２１およびｃｈ５Ｃ８に対する抗体の検出（ＥＬＩＳＡ）
２Ｎの硫酸の調製（停止液）
調製される２Ｎの硫酸１０００ｍＬごとに、５００ｍＬの４Ｎ硫酸と５００ｍＬの蒸留水を組合せ、よくかき混ぜる。調製の日付から１年間の有効期限または個々の成分ごとの製造業者の有効期限でいずれか早いほうが指定される。溶液は室温（１７℃から２７℃）で保存される。
【０１９３】
被覆された９６ウェルプレートの調製
これらのプロトコルでは、試験材料とはアカゲザルまたはカニクイザルの血清を含有するサンプル、陽性対照を含有するサンプル、および／またはブランクのことである。
【０１９４】
プロトコル
１．希釈液としてコーティング緩衝液（０．２炭酸重炭酸緩衝液）を使用してＩＮＸ０２１またはｃｈ５Ｃ８を有する１．０ｐｇ／ｍＬコーティング液を調製する。
２．９６ウェルの透明ポリスチレンプレート（複数可）のそれぞれのウェルに１００ｐＬのコーティング液を添加し、カバーする。
３．プレート（複数可）を２℃から８℃で１２から２４時間インキュベートする。
４．プレート（複数可）のそれぞれのウェルからコーティング液を吸引（除去）し、次にそれぞれのウェルを３×３００ｐＬの１×ＰＢＳ−Ｔで洗浄する。
５．プレート（複数可）のそれぞれのウェルに２００ｐＬのブロッカーカゼインを添加し、カバーする。
６．プレートを１時間±５分間インキュベートする。
７．プレート（複数可）のそれぞれのウェルからブロッカーカゼインを吸引し、次にそれぞれのウェルを３×３００ｐＬの１×ＰＢＳ−Ｔで洗浄する。
８．洗浄後直ちにプレート（複数可）を使用する（洗浄の完了から２時間以内にプレーティングを完了する）。日付プレート調製物の有効期限の割り当ては完成した。
【０１９５】
ＩＮＸ０２１またはｃｈ５Ｃ８に対する抗体の検出のためのアッセイ手順
これらの実験プロトコルでは、「試験材料」とはアカゲザルまたはカニクイザルの血清を含有するサンプル、陽性対照を含有するサンプル、および／またはブランクのことである。部屋／周囲温度は１７℃から２７℃である。
【０１９６】
プロトコル
１．ＩＮＸ０２１またはｃｈ５Ｃ８被覆プレート（複数可）の適切なウェル（複数可）に１００ｐＬのそれぞれの試験材料を添加し、プレートシール材でカバーする。
２．プレートテンプレートを使用して試験材料の配置を記録する。
３．試験材料をＩＮＸ０２１またはｃｈ５Ｃ８被覆プレート（複数可）と一緒に室温で１時間±５分間インキュベートする。
【０１９７】
分析手順
１．プレート（複数可）のそれぞれのウェルから試験材料を吸引し、次にプレート（複数可）のそれぞれのウェルを３×３００ｐＬの１×ＰＢＳ−Ｔで洗浄する。
２．１００ｐＬの０．１２５ｐｇ／ｍＬ  ＩＮＸ０２１−ＢＩＯＴＩＮまたは１．０ｐｇ／ｍＬ  ｃｈ５Ｃ８−ＢＩＯＴＩＮをプレート（複数可）のそれぞれのウェルに添加し、プレートシール材でカバーする。
３．プレート（複数可）を室温で１時間±５分間インキュベートする。
４．プレート（複数可）のそれぞれのウェルからＩＮＸ０２１−ＢＩＯＴＩＮまたはｃｈ５Ｃ８−ＢＩＯＴＩＮを吸引（除去）し、次にプレート（複数可）のそれぞれのウェルを３×３００ｐＬの１×ＰＢＳ−Ｔで洗浄する。
５．１００ｐＬの０．１ｐｇ／ｍＬ  ＳＡ−ＨＲＰをプレート（複数可）のそれぞれのウェルに添加し、カバーする。
６．プレート（複数可）を室温で３０分間±５分間インキュベートする。
７．プレート（複数可）のそれぞれのウェルからＳＡ−ＨＲＰを吸引（除去）し、次にプレート（複数可）のそれぞれのウェルを３×３００ｐＬの１×ＰＢＳ−Ｔで洗浄する。
８．１００ｐＬのＴＭＢをプレート（複数可）のそれぞれのウェルに添加する。
９．プレート（複数可）を室温で２０分間±５分間インキュベートする。
１０．１００ｐＬの２Ｎ  硫酸をプレート（複数可）のそれぞれのウェルに添加する。
１１．分析の３０分以内にマイクロプレート分光光度計を使用して４５０ｎｍでプレート（複数可）を読み取る。
【０１９８】
全体データ整理
すべての試験材料で、別の方法で記述されていなければ、平均Ａ４５０、標準偏差、および％差（ｎ＝２の場合）またはＣＶ％（ｎ＞３の場合）を計算して、分散を評価する。ＣＶ％の代わりに％差が計算される場合は、すべてのＣＶ％判定基準は％差値に適用する。３つまたはそれよりも多いウェルの試験材料が分析される場合、ＣＶ％が概略した基準を通過しなければ、ウェルを１つ除外してもよい。
％ＣＶ：ｒ標準偏差＞平均値×１００
％差：ｒ値Ａ−値Ｂｖ平均値×１００
【０１９９】
最大標準残差（Ｍａｘｉｍｕｍ  Ｎｏｒｍｅｄ  Ｒｅｓｉｄｕａｌ）（ＭＮＲ）解析を実行してブランクＴＳ上５％レベルで分散を評価し、最大で２つの外れ値Ａ４５０ブランク試験サンプル（ＴＳ）値を取り除く。平均Ａ４５０は外れ値を取り除いていないすべての値から計算される。技術的ミスのせいで追加のウェルを除外することもある。
【０２００】
プレート特異的カットポイント（ｐｌａｔｅ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｃｕｔ  ｐｏｉｎｔ）（ＰＳＣＰ）は、全体カットポイント（ＣＰ）×ブランクＴＳ平均Ａ４５０（外れ値なし）＝ＰＳＣＰとして計算される。
【０２０１】
全体判定基準
ブランクＴＳが２つよりも多い外れ値を有する場合、そのプレートは失敗であり再分析するべきである。ＭＮＲ解析のためには、外れ値および技術的エラーのせいでマスクされたウェルを隠した後で少なくとも５つのブランクＴＳ  Ａ４５０が残らなければならない。以下の方程式：ＭＮＲブランクＴＳ値−平均ブランクＴＳを使用してＭＮＲ値を計算する。
【０２０２】
標準偏差ｘＶｎ−１
ＭＮＲ値が臨界値よりも大きい場合はその値は外れ値であると判定される。臨界値は：ｎ＝１２＝０．７２７、ｎ＝１１＝０．７４５、ｎ＝１０＝０．７６３、ｎ＝９＝０．７８３、ｎ＝８＝０．８０４、ｎ＝７＝０．８２５、ｎ＝６＝０．８４４、およびｎ＝５＝０．８５８として定義される。外れ値はすべて隠される。
【０２０３】
外れ値除去後のブロッカーカゼインブランクおよびブランクＴＳ平均Ａ４５０はＬＰＣ  Ａ＜＜０未満であるべきである。プレート特異的カットポイント（ＰＳＣＰ）は：ＰＳＣＰ＝ＣＦ  ＊ブランクＴＳグローバル平均（外れ値なし）として計算される。補正因子（ＣＦ）は研究ファイルに追加される。ＬＰＣ平均Ａ４５０はＰＳＣＰを超えていなければならない。そうでない場合は、その設定でのＬＰＣは失敗である。
【０２０４】
アッセイ緩衝液ブランクＣＶ％は３０％未満であるべきである。アッセイ緩衝液ブランクが上に収載される基準を通過しない場合は、データを利用することが可能かどうかを判定するために科学審査中にプレートは評価される。
【０２０５】
それぞれのＰＣセットの平均Ａ４５０についてＨＰＣ＞ＭＰＣ＞ＬＰＣ。ＰＣレベルの少なくとも３分の２は判定基準を満たしており、それぞれのＰＣレベルでの少なくとも１つのＰＣは判定基準内でなければならない。
【０２０６】
２つ組みのプレート間の試験サンプル％差は２５％未満であるべきである。試験サンプルがこの基準を通過しない場合は、サンプルは再分析される。
【０２０７】
陽性対照、ブランクＴＳおよびアッセイ緩衝液ブランクの調製
１００％アカゲザル血清（ＲＨＳ）またはカニクイザル血清に代用陽性対照抗体をスパイクとして加えることにより陽性対照を調製する。１００％マトリックス中の陽性対照はブロッカーカゼインで１０倍に希釈して適切な作業濃度および１０％マトリックスを産生する。それぞれのＰＣセットは互いに独立して調製し、それぞれのプレート上で分析される。分析当日、ＰＣはそれぞれのプレート上で分析される。
【０２０８】
それぞれのプレートは２セットのＰＣ  ＬＰＣ（５０ｎｇ／ｍＬ）、ＭＰＣ（２５０ｎｇ／ｍＬ）およびＨＰＣ（１０００ｎｇ／ｍＬ）を含有する。ブランクＴＳも、ブロッカーカゼインで希釈された１０％マトリックスの最終濃度で調製される。１２ウェルのブランクＴＳはそれぞれのプレート上で実行する。ブロッカーカゼインはそれぞれのプレート上で少なくとも２ウェルで実行する。すべての試験材料は、別の方法で述べられていなければ、最小の２ウェルで分析する。
【０２０９】
スクリーニングアッセイ
スクリーニングでは、サンプルはブロッカーカゼインに１／１０で希釈し、セクション７．０に記載される手順によって分析する。サンプル分析中の、研究サンプルの平均吸光度値はＰＳＣＰと比較され、平均吸光度値がＰＳＣＰ超の場合は潜在的に陽性として、平均吸光度値がＰＳＣＰ未満の場合は陰性として報告される。
【０２１０】
結果
すべての動物においてＴＤＡＲ応答は抑制されており、可溶性抗原に対する抗体応答がＩＮＸ０２１処置動物では予防できることを示唆していた。これを調べるため、８週間のＩＮＸ０２１、または５Ｃ８注射に続いてアカゲザルでＡＤＡ応答を測定した。ＩＮＸ０２１群の最も低い用量（１ｍｇ／ｋｇ）で１頭を除くすべての動物がいかなる検出可能なＡＤＡも発現していなかった。したがって、本発明の抗体ＩＮＸ０２１を使用すれば、例えば、バイオ医薬品、例えば、治療抗体、融合タンパク質および同類の物などの免疫原性薬に対する体液性免疫を抑制することができる。
【０２１１】
出願中に引用される参考文献
以下の参考文献が引用されている。すべての参考文献の内容は参照により本明細書に組み入れる。
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【０２１２】
本発明の背景、詳細な説明、および実施例において引用されるそれぞれの文書（特許、特許出願、雑誌論文、要約、手引書、書籍、または他の開示を含む）のすべての開示は参照によりその全体を本明細書に組み入れる。
【０２１３】
上の詳細な説明に照らして本発明にこれらのおよび他の変化を加えることが可能である。一般に、以下の特許請求の範囲では、使用される用語は本発明を明細書および特許請求の範囲に開示される特定の実施形態に限定すると解釈するべきではない。したがって、本発明は開示により限定されず、代わりに、本発明の範囲は以下の特許請求の範囲すべてにより決定されることになる。
【０２１４】
本発明は、特に前述の説明および実施例に記載される方法以外の方法で実行してもよい。本発明の数多くの改変および変化は、上の教えに照らして可能であり、したがって、添付の特許請求の範囲内にある。
【図１−１】
2018528258.tif 000009
【図１−２】
2018528258.tif 000010
【図１−３】
2018528258.tif 000011
【図２−１】
2018528258.tif 000012
【図２−２】
2018528258.tif 000013
【図２−３】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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