(57)【要約】本明細書において、運動精子ドメイン含有タンパク質２（Ｍｏｔｉｌｅ  Ｓｐｅｒｍ  Ｄｏｍａｉｎ  ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ２（ＭＯＳＰＤ２））の阻害剤を用いた、炎症性疾患または障害を処置する、予防する、またはその発生率を低下させる方法、及び細胞における１種または複数種の活性を阻害する、防止する、またはその発生率を低下させる方法が開示される。ＭＯＳＰＤ２の阻害剤、及びＭＯＳＰＤ２阻害剤を含有する医薬組成物もまた開示される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
炎症性疾患または障害を処置または予防する方法であって、その必要がある対象に、運動精子ドメイン含有タンパク質２（Ｍｏｔｉｌｅ  Ｓｐｅｒｍ  Ｄｏｍａｉｎ  ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ２（ＭＯＳＰＤ２））の阻害剤の治療有効量を投与することを含む、前記方法。
【請求項２】
前記阻害剤は、ポリペプチド、ＤＮＡ、またはＲＮＡである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記阻害剤は、（ｉ）ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドに特異的に結合する単離結合分子であるか、（ｉｉ）ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドのリガンドに特異的に結合する単離結合分子であるか、（ｉｉｉ）ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドに対して産生された抗血清であるか、（ｉｖ）可溶性ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドであるか、または（ｖ）ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドの細胞外ドメインを含む、本質的にそれからなる、もしくはそれからなる可溶性ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドである、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記阻害剤は、ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドに特異的に結合する抗体である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記阻害剤は、ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドに特異的に結合する抗体の抗原結合断片である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記抗体は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、マウス抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体である、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｓｄＦｖ断片、ＶＨドメイン、またはＶＬドメインである、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
前記阻害剤は、ストリンジェントな条件下でＭＯＳＰＤ２ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列にハイブリダイズする、ＲＮＡｉ、ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、アンチセンスＤＮＡ、デコイ分子、デコイＤＮＡ、二本鎖ＤＮＡ、一本鎖ＤＮＡ、複合ＤＮＡ、被包ＤＮＡ、ウイルスＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、ネイキッドＲＮＡ、被包ＲＮＡ、ウイルスＲＮＡ、二本鎖ＲＮＡ、ＲＮＡ干渉を起こすことができる分子、またはそれらの組み合わせである、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドは、配列番号１〜４のいずれか１つと少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一である配列を有する、請求項２〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドは、配列番号５〜８のいずれか１つと少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一である配列によりコードされる、請求項２〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記炎症性疾患または障害は、特発性炎症性疾患もしくは障害、慢性炎症性疾患もしくは障害、急性炎症性疾患もしくは障害、自己免疫疾患もしくは障害、感染性疾患もしくは障害、炎症性悪性疾患もしくは障害、炎症性移植関連疾患もしくは障害、炎症性変性疾患もしくは障害、過敏症と関連した疾患もしくは障害、炎症性心血管疾患もしくは障害、炎症性脳血管疾患もしくは障害、末梢血管疾患もしくは障害、炎症性腺性疾患もしくは障害、炎症性胃腸疾患もしくは障害、炎症性皮膚疾患もしくは障害、炎症性肝疾患もしくは障害、炎症性神経疾患もしくは障害、炎症性筋骨格疾患もしくは障害、炎症性腎疾患もしくは障害、炎症性生殖疾患もしくは障害、炎症性全身性疾患もしくは障害、炎症性結合組織疾患もしくは障害、壊死、炎症性インプラント関連疾患もしくは障害、炎症性加齢プロセス、免疫不全疾患もしくは障害、または炎症性肺疾患もしくは障害である、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記過敏症は、Ｉ型過敏症、ＩＩ型過敏症、ＩＩＩ型過敏症、ＩＶ型過敏症、即時型過敏症、抗体媒介性過敏症、免疫複合体媒介性過敏症、Ｔリンパ球媒介性過敏症、遅延型過敏症、ヘルパーＴリンパ球媒介性過敏症、細胞傷害性Ｔリンパ球媒介性過敏症、ＴＨ１リンパ球媒介性過敏症、またはＴＨ２リンパ球媒介性過敏症である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記炎症性心血管疾患または障害は、閉塞性疾患もしくは障害、粥状動脈硬化、心臓弁疾患、狭窄症、再狭窄、ステント内狭窄、心筋梗塞、冠動脈疾患、急性冠症候群、うっ血性心不全、狭心症、心筋虚血、血栓症、ウェゲナー肉芽腫症、高安動脈炎、川崎症候群、抗第ＶＩＩＩ因子自己免疫疾患もしくは障害、壊死性小型血管炎、顕微鏡的多発血管炎、チャーグ・ストラウス症候群、微量免疫型巣状壊死性糸球体腎炎、半月体形成性糸球体腎炎、抗リン脂質抗体症候群、抗体誘導性心不全、血小板減少性紫斑病、自己免疫性溶血性貧血、心臓自己免疫、シャーガス病もしくは障害、または抗ヘルパーＴリンパ球自己免疫である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
前記炎症性脳血管疾患または障害は、脳卒中、脳血管炎症、脳出血、または椎骨動脈不全である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
前記末梢血管疾患または障害は、壊疽、糖尿病性脈管障害、虚血性腸疾患、血栓症、糖尿病性網膜症、または糖尿病性腎症である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１６】
前記自己免疫疾患または障害は、慢性関節リウマチ、若年性関節リウマチ、全身性紅斑性狼瘡、強皮症、混合性結合組織疾患、結節性多発動脈炎、多発性筋炎／皮膚筋炎、シェーグレン症候群、ベーチェット病、多発性硬化症、自己免疫性糖尿病、橋本病、乾癬、原発性粘液水腫、悪性貧血、重症筋無力症、慢性活動性肝炎、自己免疫性溶血性貧血、特発性血小板減少性紫斑病、ブドウ膜炎、血管炎、またはヘパリン起因性血小板減少症である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１７】
前記炎症性腺性疾患または障害は、膵臓疾患もしくは障害、Ｉ型糖尿病、甲状腺疾患もしくは障害、グレーブス病もしくは障害、甲状腺炎、特発性自己免疫性甲状腺炎、橋本甲状腺炎、特発性粘液水腫、卵巣自己免疫、自己免疫性抗精子不妊症、自己免疫性前立腺炎、またはＩ型多腺性自己免疫症候群である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１８】
前記炎症性胃腸疾患または障害は、大腸炎、回腸炎、クローン病、慢性炎症性腸疾患、炎症性腸症候群、炎症性腸疾患、セリアック病、潰瘍性大腸炎、潰瘍、皮膚潰瘍、褥瘡、胃潰瘍、消化管潰瘍、口腔内潰瘍、鼻咽頭潰瘍、食道潰瘍、十二指腸潰瘍、または胃腸潰瘍である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１９】
前記炎症性皮膚疾患または障害は、ざ瘡、自己免疫性水疱性皮膚症もしくは障害、尋常性天疱瘡、水疱性類天疱瘡、落葉状天疱瘡、接触性皮膚炎、または薬疹である、請求項１１に記載の方法。
【請求項２０】
前記炎症性肝疾患または障害は、自己免疫性肝炎、肝硬変、または胆汁性肝硬変である、請求項１１に記載の方法。
【請求項２１】
前記炎症性神経疾患または障害は、多発性硬化症、アルツハイマー病、パーキンソン病、重症筋無力症、運動ニューロパチー、ギラン・バレー症候群、自己免疫性ニューロパチー、ランバート・イートン筋無力症症候群、傍腫瘍性神経疾患もしくは障害、傍腫瘍性小脳萎縮症、非傍腫瘍性スティフ・マン症候群、進行性小脳萎縮症、ラスムッセン脳炎、筋萎縮性側索硬化症、シデナム舞踏病、ジル・ドゥ・ラ・トゥレット症候群、自己免疫性多腺性内分泌不全症、異常免疫性（ｄｙｓｉｍｍｕｎｅ）ニューロパチー、後天性神経性筋強直症、多発性関節拘縮症、ハンチントン病、ＡＩＤＳ関連認知症、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症、脳卒中、炎症性網膜疾患もしくは障害、炎症性眼疾患もしくは障害、視神経炎、海綿状脳症、片頭痛、頭痛、群発性頭痛、またはスティフ・マン症候群である、請求項１１に記載の方法。
【請求項２２】
前記炎症性結合組織疾患または障害は、デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）、自己免疫性筋炎、原発性シェーグレン症候群、平滑筋自己免疫疾患もしくは障害、筋炎、腱炎、靱帯炎、軟骨炎、関節炎、滑膜炎、手根管症候群、関節炎、関節リウマチ、変形性関節症、強直性脊椎炎、骨格炎、自己免疫性耳疾患もしくは障害、または自己免疫性内耳疾患もしくは障害である、請求項１１に記載の方法。
【請求項２３】
前記炎症性腎疾患または障害は、自己免疫性間質性腎炎である、請求項１１に記載の方法。
【請求項２４】
前記炎症性生殖疾患または障害は、反復流産、卵巣嚢胞、または月経関連疾患もしくは障害である、請求項１１に記載の方法。
【請求項２５】
前記炎症性全身性疾患または障害は、全身性紅斑性狼瘡、全身性硬化症、敗血症性ショック、毒素性ショック症候群、または悪液質である、請求項１１に記載の方法。
【請求項２６】
前記感染性疾患または障害は、慢性感染性疾患もしくは障害、亜急性感染性疾患もしくは障害、急性感染性疾患もしくは障害、ウイルス性疾患もしくは障害、細菌性疾患もしくは障害、原虫性疾患もしくは障害、寄生虫性疾患もしくは障害、真菌性疾患もしくは障害、マイコプラズマ疾患もしくは障害、壊疽、敗血症、プリオン病もしくは障害、インフルエンザ、結核、マラリア、後天性免疫不全症候群、または重症急性呼吸器症候群である、請求項１１に記載の方法。
【請求項２７】
前記炎症性移植関連疾患または障害は、移植片拒絶、慢性移植片拒絶、亜急性移植片拒絶、急性移植片拒絶、超急性移植片拒絶、または移植片対宿主病もしくは障害である、請求項１１に記載の方法。
【請求項２８】
前記インプラントは、義装具インプラント、乳房インプラント、シリコーンインプラント、歯科インプラント、陰茎インプラント、心臓インプラント、人工関節、骨折修復装置、骨置換インプラント、薬物送達インプラント、カテーテル、ペースメーカー、人工心臓、人工心臓弁、薬物放出インプラント、電極、または人工呼吸器の管である、請求項１１に記載の方法。
【請求項２９】
前記炎症性肺疾患または障害は、喘息、アレルギー性喘息、肺気腫、慢性閉塞性肺疾患もしくは障害、サルコイドーシス、または気管支炎である、請求項１１に記載の方法。
【請求項３０】
前記炎症性疾患または障害は、線維症である、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３１】
前記炎症性疾患または障害は、慢性自己免疫性疾患または慢性炎症性疾患を罹患している対象における血管炎症である、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３２】
前記慢性自己免疫性疾患または慢性炎症性疾患は、乾癬である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記血管炎症は、心血管疾患、末梢血管疾患、冠動脈疾患、脳血管疾患、腎動脈狭窄症、虚血性疾患、または大動脈瘤と関連している、請求項３１に記載の方法。
【請求項３４】
前記血管炎症は、虚血性心疾患、粥状動脈硬化、急性冠症候群、不安定狭心症、安定狭心症、または脳卒中と関連している、請求項３１に記載の方法。
【請求項３５】
前記血管炎症は、頸動脈の炎症である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３６】
前記血管炎症は、大動脈の炎症である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３７】
前記炎症性疾患または障害は、インプラントと関連した炎症である、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３８】
前記インプラントと関連した炎症は、局所的炎症または全身性炎症反応である、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記インプラントは、シリコーン、生理食塩水、金属、プラスチック、または重合体インプラントである、請求項３７または３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記インプラントは、美容インプラント、義装具インプラント、皮下インプラント、経皮インプラント、骨置換インプラント、または骨折修復装置である、請求項３７〜３９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４１】
前記インプラントは、薬物送達インプラントまたは薬物放出インプラントである、請求項３７〜３９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４２】
前記インプラントは、人工関節、人工心臓、人工心臓弁、人工睾丸、乳房インプラント、歯科インプラント、眼インプラント、蝸牛インプラント、陰茎インプラント、心臓インプラント、カテーテル、埋込型排尿調節装置、ペースメーカー、電極、ヘルニア支持装置、または人工呼吸器の管である、請求項３７〜３９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４３】
前記炎症性疾患または障害は、肝炎である、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４４】
前記炎症性疾患または障害は、脂肪性肝炎である、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４５】
前記炎症性疾患または障害は、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）である、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４６】
前記炎症性疾患または障害は、糸球体腎炎である、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４７】
前記炎症性疾患または障害は、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）である、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４８】
前記炎症性疾患または障害は、骨粗鬆症である、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４９】
前記対象は、ヒトである、請求項１〜４８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５０】
細胞における１種または複数種の活性を阻害する方法であって、その必要がある対象に、ＭＯＳＰＤ２の阻害剤の治療有効量を投与することを含み、前記１種または複数種の活性は、以下：白血球遊走、白血球化学走性、ケモカインシグナル伝達経路、ＥＧＦ受容体リン酸化、ＥＲＫリン酸化、ＡＫＴリン酸化、及びＦＡＫリン酸化のうちの１種または複数種である、前記方法。
【請求項５１】
前記阻害剤は、ポリペプチド、ＤＮＡ、またはＲＮＡである、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記白血球遊走は、単球の遊走である、請求項５０に記載の方法。
【請求項５３】
少なくとも白血球化学走性及びケモカインシグナル伝達経路が阻害される、請求項５０に記載の方法。
【請求項５４】
前記白血球化学走性は、単球の化学走性である、請求項５０または５３に記載の方法。
【請求項５５】
ケモカインシグナル伝達経路の前記阻害は、ＥＲＫリン酸化及び／またはＡＫＴリン酸化の阻害である、請求項５０または５３に記載の方法。
【請求項５６】
前記白血球化学走性は、２種以上のケモカインまたはケモカイン受容体により誘導される、請求項５０または５３に記載の方法。
【請求項５７】
前記阻害剤は、（ｉ）ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドに特異的に結合する単離結合分子であるか、（ｉｉ）ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドのリガンドに特異的に結合する単離結合分子であるか、（ｉｉｉ）ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドに対して産生された抗血清であるか、（ｉｖ）可溶性ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドであるか、または（ｖ）ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドの細胞外ドメインを含む、本質的にそれからなる、もしくはそれからなる可溶性ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドである、請求項５０〜５６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５８】
前記阻害剤は、ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドに特異的に結合する抗体である、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
前記阻害剤は、ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドに特異的に結合する抗体の抗原結合断片である、請求項５７に記載の方法。
【請求項６０】
前記抗体は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、マウス抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体である、請求項５８に記載の方法。
【請求項６１】
前記抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｓｄＦｖ断片、ＶＨドメイン、またはＶＬドメインである、請求項５９に記載の方法。
【請求項６２】
前記阻害剤は、ストリンジェントな条件下でＭＯＳＰＤ２ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列にハイブリダイズする、ＲＮＡｉ、ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、アンチセンスＤＮＡ、デコイ分子、デコイＤＮＡ、二本鎖ＤＮＡ、一本鎖ＤＮＡ、複合ＤＮＡ、被包ＤＮＡ、ウイルスＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、ネイキッドＲＮＡ、被包ＲＮＡ、ウイルスＲＮＡ、二本鎖ＲＮＡ、ＲＮＡ干渉を起こすことができる分子、またはそれらの組み合わせであるか、あるいは遺伝子編集系である、請求項５０〜５６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６３】
前記ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドは、配列番号１〜４のいずれか１つと少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一である配列を有する、請求項５１〜６１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６４】
前記ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドは、配列番号５〜８のいずれか１つと少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一である配列によりコードされる、請求項５１〜６１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６５】
前記対象は、ヒトである、請求項５０〜６４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６６】
ＭＯＳＰＤ２を阻害する、単離ポリペプチド。
【請求項６７】
（ｉ）ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドに特異的に結合する、（ｉｉ）ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドのリガンドに特異的に結合する、（ｉｉｉ）ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドに対して産生された抗血清である、（ｉｖ）可溶性ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドである、または（ｖ）ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドの細胞外ドメインを含むか、本質的にそれからなるか、もしくはそれからなる可溶性ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドである、請求項６６に記載の単離ポリペプチド。
【請求項６８】
前記ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドは、配列番号１〜４のいずれか１つと少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一である配列を有する、請求項６６または６７に記載の単離ポリペプチド。
【請求項６９】
前記ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドは、配列番号５〜８のいずれか１つと少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であるヌクレオチド配列によりコードされる、請求項６６または６７に記載の単離ポリペプチド。
【請求項７０】
請求項６６〜６９のいずれか１項に記載の単離ポリペプチド、及び薬学上許容される担体を含む、医薬組成物。
【請求項７１】
ＭＯＳＰＤ２を阻害する単離ポリペプチド、及び薬学上許容される担体を含む、医薬組成物。
【請求項７２】
全身投与または局所投与に適した、請求項７０または７１に記載の医薬組成物。
【請求項７３】
経鼻投与、経口投与、または腹腔内投与に適した、請求項７０または７１に記載の医薬組成物。
【請求項７４】
静脈内投与、筋肉内投与、または皮下投与に適した、請求項７０または７１に記載の医薬組成物。
【請求項７５】
細胞のＭＯＳＰＤ２を阻害する方法であって、前記細胞を、有効量のＭＯＳＰＤ２阻害剤と接触させることを含み、前記ＭＯＳＰＤ２阻害剤は、式Ｉ：
2018528178.tif 000024
による構造を有する酸化リン脂質、またはその薬学上許容される塩、水和物、もしくは溶媒和物を含み、
式中、
ｎは、１〜６の整数であり、ｎが１である場合、Ｃｎ、Ｂｎ、Ｒｎ、及びＹは存在せず、かつＣ１は、Ｒ’ｎと結合しており、
Ｂ１、Ｂ２、…Ｂｎ−１、及びＢｎのそれぞれは、独立して、酸素、硫黄、窒素、リン、及びケイ素からなる群より選択され、前記窒素、リン、及びケイ素のそれぞれは、アルキル、ハロ、シクロアルキル、アリール、ヒドロキシ、チオヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオアリールオキシ、チオアルコキシ、及びオキソからなる群より選択される１つの置換基で置換されていてもよく、
Ａ１、Ａ２、…Ａｎ−１、及びＡｎのそれぞれは、独立して、ＣＲ’’Ｒ’’’、Ｃ＝Ｏ、及びＣ＝Ｓからなる群より選択され、
Ｙは、水素、アシル、アルキル、アリール、シクロアルキル、カルボキシ、糖、リン酸、ホスホリルコリン、ホスホリルエタノールアミン、ホスホリルセリン、ホスホリルカルジオリピン、ホスホリルイノシトール、エチルホスホコリン、ホスホリルメタノール、ホスホリルエタノール、ホスホリルプロパノール、ホスホリルブタノール、ホスホリルエタノールアミン−Ｎ−ラクトース、ホスホエタノールアミン−Ｎ−グルタル酸、ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（プロピレングリコール）］、ホスホイノシトール−４−ホスファート、ホスホイノシトール−４，５−ビホスホナート、ホスホイノシトール−４，５−ビスホスファート、ピロホスファート、ホスホエタノールアミン−ジエチレントリアミン−ペンタアセタート、ジニトロフェニル−ホスホエタノールアミン、ホスホグリセロール、及び一般式：
2018528178.tif 000025
を有する部分からなる群より選択され、
式中、
Ｂ’及びＢ’’のそれぞれは、独立して、硫黄及び酸素からなる群より選択され、かつ
Ｄ’及びＤ’’のそれぞれは、独立して、水素、アルキル、アミノ置換アルキル、シクロアルキル、ホスホナート、及びチオホスホナートからなる群より選択され、かつ
Ｘ１、Ｘ２、…Ｘｎ−１のそれぞれは、独立して、一般式ＩＩ：
2018528178.tif 000026
を有する飽和または不飽和の炭化水素であり、
式中、ｍは、１〜２６の整数であり、かつ
Ｚは、
2018528178.tif 000027
からなる群より選択され、
式中、Ｗは、酸素及び硫黄からなる群より選択され、
Ｘ１、Ｘ２、…Ｘｎ−１のうち少なくとも１つは、水素以外のＺを含み、
かつ、
Ｒ１、Ｒ’１、Ｒ２、…Ｒｎ−１、Ｒｎ、Ｒ’ｎのそれぞれ、Ｒ’’及びＲ’’’のそれぞれ、ならびにＲａ、Ｒ’ａ、Ｒｂ、Ｒ’ｂ、…Ｒｍ−１、Ｒ’ｍ−１、Ｒｍ、及びＲ’ｍのそれぞれは、独立して、結合、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ハロ、トリハロメチル、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、ホスホナート、ホスファート、ホスフィニル、スルホニル、スルフィニル、スルホンアミド、アミド、カルボニル、チオカルボニル、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、Ｃ−カルバマート、Ｎ−カルバマート、Ｃ−チオカルボキシ、Ｓ−チオカルボキシ、及びアミノからなる群より選択されるか、あるいは、Ｒ１、Ｒ’１、Ｒ２、…Ｒｎ−１、Ｒｎ、及びＲ’ｎのうち少なくとも２つ、及び／またはＲａ、Ｒ’ａ、Ｒｂ、Ｒ’ｂ、…Ｒｍ−１、Ｒ’ｍ−１、Ｒｍ、及びＲ’ｍのうち少なくとも２つは、少なくとも１つの四員、五員、または六員の芳香族環、ヘテロ芳香族環、脂環式環、またはヘテロ脂環式環を形成し、あるいはその薬学上許容される塩、水和物、または溶媒和物を形成する、前記方法。
【請求項７６】
前記酸化リン脂質は、式ＩＩＩ：
2018528178.tif 000028
による構造を有するか、またはその薬学上許容される塩、水和物、もしくは溶媒和物を有し、
式中、ｎは、１〜４から選択される整数であり、
Ｂ１、各Ｂ２、及びＢ３は、独立して、酸素、硫黄、及びＮＲ４からなる群より選択され、式中、Ｒ４は、水素、アルキル、シクロアルキル、アリール、及びアシルから選択され、
Ａ１及び各Ａ２は、独立して、ＣＲｅＲｅｅ、ＣＲｅ＝ＣＲｅｅ、Ｃ＝Ｏ、及びＣ＝Ｓからなる群より選択され、式中、Ｒｅ及びＲｅｅは、独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、及びヘテロアリールから選択され、
Ｙは、水素、アシル、アルキル、アリール、シクロアルキル、カルボキシ、糖、リン酸、ホスホリルコリン、ホスホリルエタノールアミン、ホスホリルセリン、ホスホリルカルジオリピン、ホスホリルイノシトール、エチルホスホコリン、ホスホリルメタノール、ホスホリルエタノール、ホスホリルプロパノール、ホスホリルブタノール、ホスホリルエタノールアミン−Ｎ−ラクトース、ホスホエタノールアミン−Ｎ−グルタル酸、ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（プロピレングリコール）］、ホスホイノシトール−４−ホスファート、ホスホイノシトール−４，５−ビスホスファート、ピロホスファート、ホスホエタノールアミン−ジエチレントリアミン−ペンタアセタート、ジニトロフェニル−ホスホエタノールアミン、ホスホグリセロール、及び一般式：
2018528178.tif 000029
を有する部分からなる群より選択され、式中、Ｂ及びＢａのそれぞれは、独立して、硫黄及び酸素からなる群より選択され、かつＤ及びＤａは、独立して、水素、アルキル、アミノアルキル、シクロアルキル、ホスホナート、及びチオホスホナートからなる群より選択され、
Ｘ１及び各Ｘ２は、独立して、飽和または不飽和の直鎖または分岐炭化水素であり、Ｘ１及びＸ２のうち少なくとも１つは、
2018528178.tif 000030
からなる群より選択される酸化部分Ｚで置換され、式中、Ｗは、酸素または硫黄であり、かつＲｄ及びＲｄｄは、独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、及びヘテロアリールから選択され、
Ｒ１、Ｒ１ａ、各Ｒ２、Ｒ３、及びＲ３ａは、独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ハロ、トリハロメチル、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、ホスホナート、ホスファート、ホスフィニル、スルホニル、スルフィニル、スルホンアミド、アミド、カルボニル、チオカルボニル、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、Ｃ−カルバマート、Ｎ−カルバマート、Ｃ−チオカルボキシ、Ｓ−チオカルボキシ、及びアミノからなる群より選択され、Ｒ１、Ｒ１ａ、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ３ａのうち少なくとも２つは、結合して四員、五員、または六員の芳香族環、ヘテロ芳香族環、脂環式環、またはヘテロ脂環式環を形成してもよい、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
前記酸化リン脂質は、式ＩＩＩによる構造を有し、かつ式ＩＩＩ中のＸ１及び各Ｘ２は、独立して、一般式ＩＶ：
2018528178.tif 000031
を有し、
式中、ｍは、１〜２６から選択される整数であり、
Ｚは、
2018528178.tif 000032
からなる群より選択され、
式中、Ｗは、酸素または硫黄であり、かつＲｄ及びＲｄｄは、独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、及びヘテロアリールから選択され、かつＸ１及びＸ２のうち少なくとも１つは、水素以外のＺを含み、かつ
Ｒａ、Ｒａａ、各Ｒｂ、各Ｒｂｂ、Ｒｃ、及びＲｃｃは、独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ハロ、トリハロメチル、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、ホスホナート、ホスファート、ホスフィニル、スルホニル、スルフィニル、スルホンアミド、アミド、カルボニル、チオカルボニル、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、Ｃ−カルバマート、Ｎ−カルバマート、Ｃ−チオカルボキシ、Ｓ−チオカルボキシ、及びアミノからなる群より選択され、Ｒａ、Ｒａａ、Ｒｂ、Ｒｂｂ、Ｒｃ、及びＲｃｃのうち少なくとも２つは、結合して四員、五員、または六員の芳香族環、ヘテロ芳香族環、脂環式環、またはヘテロ脂環式環を形成してもよい、請求項７６に記載の方法。
【請求項７８】
式Ｉ中のｎは３であるか、または式ＩＩＩ中のｎは１である、請求項７５〜７７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７９】
Ｙは、水素、アシル、アルキル、アリール、シクロアルキル、カルボキシ、糖、リン酸、ホスホリルコリン、ホスホリルエタノールアミン、ホスホリルセリン、ホスホリルカルジオリピン、ホスホリルイノシトール、エチルホスホコリン、ホスホリルメタノール、ホスホリルエタノール、ホスホリルプロパノール、ホスホリルブタノール、ホスホリルエタノールアミン−Ｎ−ラクトース、ホスホエタノールアミン−Ｎ−グルタル酸、ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（プロピレングリコール）］、ホスホイノシトール−４−ホスファート、ホスホイノシトール−４，５−ビスホスファート、ピロホスファート、ホスホエタノールアミン−ジエチレントリアミン−ペンタアセタート、ジニトロフェニル−ホスホエタノールアミン、及びホスホグリセロールからなる群より選択される、請求項７５〜７８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８０】
Ｙは、水素、ホスホリルコリン、及びホスホリルエタノールアミンからなる群より選択される、請求項７５〜７９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８１】
Ｂ１、Ｂ２、及びＢ３のそれぞれは、酸素である、請求項７５〜８０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８２】
Ｚは、
2018528178.tif 000033
であり、式中、Ｗは、酸素である、請求項７５〜８１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８３】
前記酸化リン脂質は、式ＩＩＩａ：
2018528178.tif 000034
による構造を有するか、またはその薬学上許容される塩、水和物、もしくは溶媒和物を有し、
式中、Ｂ１、Ｂ２、及びＢ３は、独立して、酸素及び硫黄から選択され、
Ａ１及びＡ２は、独立して、ＣＨ２、ＣＨ＝ＣＨ、Ｃ＝Ｏ、及びＣ＝Ｓからなる群より選択され、
Ｙは、水素、アシル、アルキル、アリール、シクロアルキル、カルボキシ、糖、リン酸、ホスホリルコリン、ホスホリルエタノールアミン、ホスホリルセリン、ホスホリルカルジオリピン、ホスホリルイノシトール、エチルホスホコリン、ホスホリルメタノール、ホスホリルエタノール、ホスホリルプロパノール、ホスホリルブタノール、ホスホリルエタノールアミン−Ｎ−ラクトース、ホスホエタノールアミン−Ｎ−グルタル酸、ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（プロピレングリコール）］、ホスホイノシトール−４−ホスファート、ホスホイノシトール−４，５−ビスホスファート、ピロホスファート、ホスホエタノールアミン−ジエチレントリアミン−ペンタアセタート、ジニトロフェニル−ホスホエタノールアミン、及びホスホグリセロールからなる群より選択され、
Ｒ１、Ｒ１ａ、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ３ａは、独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ハロ、トリハロメチル、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、ホスホナート、ホスファート、ホスフィニル、スルホニル、スルフィニル、スルホンアミド、アミド、カルボニル、チオカルボニル、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、Ｃ−カルバマート、Ｎ−カルバマート、Ｃ−チオカルボキシ、Ｓ−チオカルボキシ、及びアミノからなる群より選択され、Ｒ１、Ｒ１ａ、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ３ａのうち少なくとも２つは、結合して四員、五員、または六員の芳香族環、ヘテロ芳香族環、脂環式環、またはヘテロ脂環式環を形成してもよく、
かつ、Ｘ１及びＸ２は、独立して、飽和または不飽和の直鎖または分岐炭化水素であり、Ｘ１及びＸ２のうち少なくとも１つは、
2018528178.tif 000035
から選択される式を有する酸化部分Ｚで置換され、
式中、Ｗは、酸素または硫黄であり、かつＲｄ及びＲｄｄは、独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、及びヘテロアリールから選択される、請求項７５に記載の方法。
【請求項８４】
Ｒ１、Ｒ１ａ、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ３ａは、それぞれ水素である、請求項８３に記載の方法。
【請求項８５】
Ｘ１及びＸ２は、独立して、式ＩＶａ：
2018528178.tif 000036
による構造を有し、
式中、ｍは、１〜２６から選択される整数であり、
Ｒａ、Ｒａａ、各Ｒｂ、各Ｒｂｂ、Ｒｃ、及びＲｃｃは、独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ハロ、トリハロメチル、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、ホスホナート、ホスファート、ホスフィニル、スルホニル、スルフィニル、スルホンアミド、アミド、カルボニル、チオカルボニル、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、Ｃ−カルバマート、Ｎ−カルバマート、Ｃ−チオカルボキシ、Ｓ−チオカルボキシ、及びアミノからなる群より選択され、Ｒａ、Ｒａａ、Ｒｂ、Ｒｂｂ、Ｒｃ、及びＲｃｃのうち少なくとも２つは、結合して四員、五員、または六員の芳香族環、ヘテロ芳香族環、脂環式環、またはヘテロ脂環式環を形成してもよく、
Ｚは、
2018528178.tif 000037
からなる群より選択され、
式中、Ｗは、酸素または硫黄であり、かつＲｄ及びＲｄｄは、独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、及びヘテロアリールから選択され、Ｘ１及びＸ２のうち少なくとも１つは、水素以外のＺを含む、請求項８３または８４に記載の方法。
【請求項８６】
Ｚは
2018528178.tif 000038
であり、かつＷは酸素である、請求項８３〜８５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８７】
Ｙは、水素、ホスホリルコリン、及びホスホリルエタノールアミンからなる群より選択される、請求項８３〜８６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８８】
Ｂ１、Ｂ２、及びＢ３のそれぞれは、酸素である、請求項８３〜８７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８９】
前記酸化リン脂質は、式ＶＩ：
2018528178.tif 000039
による構造を有し、
式中、Ａ１は、ＣＨ２、ＣＨ＝ＣＨ、及びＣ＝Ｏからなる群より選択され、Ａ２は、存在しないか、またはＣＨ２であり、Ｘ１は、炭素原子を１〜３０個有するアルキルであり、Ｘ２は、
2018528178.tif 000040
であり、
式中、
Ｅは、存在しないか、または炭素原子を１〜２４個有するアルキル鎖であり、
Ｆは、水素、ヒドロキシ、アルキル、アルコキシ、ハライド、アセトキシ、及びアリールからなる群より選択され、かつ
Ｚは、
2018528178.tif 000041
からなる群より選択され、式中、Ｒｄは、Ｈ、アルキル、及びアリールから選択され、かつ
Ｙは、水素、アルキル、アリール、リン酸、ホスホリルコリン、ホスホリルエタノールアミン、ホスホリルセリン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルカルジオリピン、ホスファチジルイノシトール、ホスホリルカルジオリピン、ホスホリルイノシトール、エチルホスホコリン、ホスホリルメタノール、ホスホリルエタノール、ホスホリルプロパノール、ホスホリルブタノール、ホスホリルエタノールアミン−Ｎ−ラクトース、ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（プロピレングリコール）］、ホスホイノシトール−４−ホスファート、ホスホイノシトール−４，５−ビスホスファート、ピロホスファート、ホスホエタノールアミン−ジエチレントリアミン−ペンタアセタート、ジニトロフェニル−ホスホエタノールアミン、ホスホグリセロールからなる群より選択される、請求項７５に記載の方法。
【請求項９０】
Ｘ１は、炭素原子を１０〜３０個有するアルキルである、請求項８９に記載の方法。
【請求項９１】
Ｅは、炭素原子を１〜１０個有するアルキルである、請求項８９または９０に記載の方法。
【請求項９２】
Ｙは、ホスホコリンである、請求項８９〜９１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９３】
前記酸化リン脂質は、
2018528178.tif 000042
またはその薬学上許容される塩である、請求項７５〜９２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９４】
前記酸化リン脂質は、
2018528178.tif 000043
またはその薬学上許容される塩である、請求項７５〜９３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９５】
前記抗体またはその抗原結合断片は、ＭＯＳＰＤ２に約１０−６Ｍ〜約１０−１２Ｍの結合親和性（ＫＤ）で結合する、請求項４〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９６】
前記ＭＯＳＰＤ２は、ヒトＭＯＳＰＤ２である、請求項４〜７のいずれか１項または請求項９５に記載の方法。
【請求項９７】
前記抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１に従って付番された、ヒトＭＯＳＰＤ２の以下のアミノ酸領域：約５０８〜約５１７、約５０１〜約５１４、約２３３〜約２４１、約５０９〜約５１７、約２１２〜約２２１、約１３〜約２４、約５０５〜約５１７、約５０５〜約５１４、約８９〜約１００、約５０６〜約５１７、約２３３〜約２４５、約５０４〜約５１４、約１２８〜約１３６、約２１８〜約２２６、約１５〜約２４、約８３〜約９６、約４２〜約５０、約４６２〜４７４、約３４０〜約３５１、約５０４〜約５１７、約４６２〜約４７０、約３２７〜約３３７、約２１〜約３２、約２１７〜約２２６、約５１０〜約５１７、約１７８〜約１９０、約４９７〜約５０９、約５０４〜約５１６、約６４〜約７７、約５０４〜約５１５、約１４７〜約１５９、約５０３〜約５１５、約８８〜約９７、約２０８〜約２１８、約１７８〜約１９１、約５０２〜約５１５、約５０３〜約５１６、約４９７〜約５０５、約５００〜約５０９、約１８９〜約２０２、約１８９〜約１９７、約５０５〜約５１６、約１〜約６３、約８２〜約２３９、約９３〜約２３４、約３２７〜約４４５、約３２７〜約４３１、及び約４９７〜約５１７の１つまたは複数に特異的に結合する、請求項４〜７、９５、及び９６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９８】
前記抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１に従って付番された、ヒトＭＯＳＰＤ２の以下のアミノ酸領域：約５０５〜約５１５、約５００〜約５１５、約２３０〜約２４０、約５１０〜約５２０、約２１０〜約２２０、約１５〜約２５、約５０５〜約５２０、約５０５〜約５１５、約９０〜約１００、約５０５〜約５２５、約２３０〜約２４５、約５０５〜約５１０、約１３０〜約１４０、約２２０〜約２３０、約１５〜約３０、約８０〜約９５、約４０〜約５０、約４６０〜約４７５、約３４０〜約３５０、約５００〜約５１５、約４６０〜約４７０、約３２５〜約３３５、約２０〜約３５、約２１５〜約２２５、約５１０〜約５２０、約１７５〜約１９０、約５００〜約５１０、約５０５〜約５３０、約６０〜約７５、約５００〜約５２０、約１４５〜約１６０、約５０２〜約５１５、約８５〜約１００、約２０５〜約２２０、約１７５〜約１９０、約５００〜約５０５、約５００〜約５２５、約４９５〜約５０５、約４９５〜約５１０、約１９０〜約２００、約１９０〜約１９８、約５０２〜約５１５、約１〜約６０、約８０〜約２４０、約９０〜約２３５、約３３０〜約４４５、約３３０〜約４３０、及び約４９５〜約５１５の１つまたは複数に特異的に結合する、請求項４〜７及び９５〜９７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９９】
前記抗体は、ＩｇＧ分子、ＩｇＭ分子、ＩｇＥ分子、ＩｇＡ分子、もしくはＩｇＤ分子であるか、またはそれらに由来する、請求項４〜７及び９５〜９８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１００】
前記抗体は、Ｆｃ領域を含む、請求項４〜７及び９５〜９９のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、運動精子ドメイン含有タンパク質２（Ｍｏｔｉｌｅ  Ｓｐｅｒｍ  Ｄｏｍａｉｎ  ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ２（ＭＯＳＰＤ２））の阻害剤を用いた、抗炎症プロセス、例えば、細胞における１種もしくは複数種の活性、または１つもしくは複数の炎症性疾患もしくは障害を処置する、防止・予防する、またはその発生率を低下させる方法に関する。本発明は、１種または複数種のＭＯＳＰＤ２阻害剤を含む医薬組成物にも関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
白血球は、感染症及び異物に対する身体の防御に関与する免疫系の細胞である。単球は、白血球の一種であり、自然及び適応免疫、免疫監視、ならびに粒子除去で重要な役割を担う。組織には単球のサブセットが「常在して」おり、炎症刺激とは無関係に動員されて定常状態監視、創傷治癒、及び炎症の消散を補佐しているものの、ヒトの循環単球の大部分（８０〜９０％）は、「炎症性」と分類される。循環単球は、炎症刺激を感知して血管またはリンパ管内皮を通じて末梢へと迅速に遊走することができ、そこで、マクロファージ及び樹状細胞（ＤＣ）へと分化することができる。分化した細胞は、さらなる細胞サブセットと連携して炎症を促進する。宿主防御で必要な役割を果たすにも関わらず、単球は、粥状動脈硬化、関節リウマチ（ＲＡ）、及び多発性硬化症（ＭＳ）をはじめとする複数の炎症性疾患の決定的メディエーターとして同定されている。
【０００３】
ケモカイン受容体及び接着分子は、白血球輸送の調節に重要な役割を果たす。白血球系列及びサブセットで差次的に発現するケモカイン受容体、すなわちＧタンパク質共役型受容体（ＧＰＣＲ）の複雑なアレイは、様々な条件下でどの型の細胞をどの組織に遊走させるかを調節する。ケモカインすなわち走化性サイトカインは、白血球及び間質細胞の遊走及び活性化を調節する分泌タンパク質である。ケモカインがケモカイン受容体と結合すると、ＭＡＰＫ／ＥＲＫ経路及びＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ経路などのシグナル伝達経路が活性化され、その結果、それぞれＥＲＫ及びＡＫＴがリン酸化される。炎症性単球の場合、骨髄を出て内皮細胞の単層を横断し（血管外漏出）循環系に入ること（血管内異物侵入）及び炎症組織へと遊走することは、ケモカインＣ−Ｃモチーフリガンド（ＣＣＬ）２（単球走化性タンパク質１、ＭＣＰ−１としても知られる）及びＣＣＬ７（ＭＣＰ−３）による活性化に反応した、Ｃ−Ｃモチーフ受容体２（ＣＣＲ２）シグナル伝達に依存する。他方で、常在性単球の非炎症組織への恒常的遊走は、ＣＣＬ３（マクロファージ炎症性タンパク質１α、ＭＩＰ−１αとしても知られる）及びケモカイン（Ｃ−Ｘ３−Ｃモチーフ）リガンド１（ＣＸ３ＣＬ１）に主に依存する。
【０００４】
炎症部位に向かう炎症細胞遊走（例えば、白血球走化作用）の阻害は、慢性疾患を処置するための抗炎症性アプローチとして魅力的である。慢性炎症組織における望ましくない単球及び／またはマクロファージの蓄積を抑制することは、治療上有効な可能性があり、それに応じて、遊走阻害剤は、動物モデル及び臨床試験で有益な治療結果を実証してきた。それにも関わらず、ケモカイン及びケモカイン受容体アンタゴニストを用いた複数の臨床試験が第ＩＩ相で失敗しており、これは恐らく、標的受容体の重複性ならびに多発性硬化症及び関節リウマチなど異質な疾患の複雑さによる。
【０００５】
その上さらに、炎症の阻害は、骨粗鬆症の処置にも関連する。なぜなら、炎症は、骨代謝に影響を及ぼし、骨粗鬆症を誘発するからである。
【０００６】
運動精子ドメイン含有タンパク質２（ＭＯＳＰＤ２）は、５１８アミノ酸長の、高度に保存されたタンパク質であり、ヒトとマウスの間で９０％の相同性がある。バイオインフォマティック解析から、ＭＯＳＰＤ２は、細胞性レチンアルデヒド結合タンパク質（ＣＲＡＬＢＰ）及びＴＲＩＯタンパク質にちなんで名付けられたＣＲＡＬ−ＴＲＩＯ領域を含有することが示されている。ＭＯＳＰＤ２は、線虫主要精子タンパク質と構造的に関連した領域及び１つの膜貫通領域も含有する。ＭＯＳＰＤ２の生体機能については、まだ述べられたことがない。
【発明の概要】
【０００７】
本発明は、いくつかの実施形態において、運動精子ドメイン含有タンパク質２（ＭＯＳＰＤ２）の阻害剤を用いた、炎症性疾患または障害を処置する、予防する、またはその発生率を低下させる方法に関し、及びＭＯＳＰＤ２阻害剤を用いた、細胞における１種または複数種の活性を阻害または防止する方法に関する。いくつかの実施形態において、本発明は、炎症性疾患または障害を処置する、予防する、またはその発生率を低下させる方法を含む、様々な処置または予防方法に関し、そのような方法は、その必要がある対象に、ＭＯＳＰＤ２阻害剤の治療有効量を投与することを含む。他の実施形態において、本発明は、細胞における１種または複数種の活性を阻害する、防止する、またはその発生率を低下させる方法に関し、本方法は、その必要がある対象に、ＭＯＳＰＤ２阻害剤の治療有効量を投与することを含み、１種または複数種の活性は、以下のうちの１種または複数種である：ＭＯＳＰＤ２発現、炎症細胞遊走（例えば、白血球または単球の遊走）、化学遊走（例えば、白血球または単球の化学遊走）、ケモカインシグナル伝達経路、ＥＲＫリン酸化、及びＡＫＴリン酸化。いくつかの実施形態において、ＭＯＳＰＤ２阻害剤は、抗体またはその抗原結合断片である。他の実施形態において、抗体は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、マウス抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体である。いくつかの実施形態において、本発明は、細胞におけるＭＯＳＰＤ２を阻害する様々な方法に関し、そのような方法は、細胞を、有効量のＭＯＳＰＤ２阻害剤と接触させることを含む。
【０００８】
いくつかの実施形態において、ＭＯＳＰＤ２阻害剤は、酸化リン脂質などの小分子である。１つの好適な実施形態において、ＭＯＳＰＤ２阻害剤は、ＶＢ−２０１である。いくつかの実施形態において、ＭＯＳＰＤ２阻害剤は、酸化リン脂質ではないＭＯＳＰＤ２阻害剤である。いくつかの実施形態において、ＭＯＳＰＤ２阻害剤は、ＶＢ−２０１ではないＭＯＳＰＤ２阻害剤である。いくつかの実施形態において、ＭＯＳＰＤ２阻害剤は、細胞表面（例えば、炎症細胞表面）上に発現したＭＯＳＰＤ２に結合する。
【０００９】
他の実施形態において、本発明は、ＭＯＳＰＤ２を阻害するポリペプチド、及びＭＯＳＰＤ２を阻害するポリペプチドを含有する医薬組成物にも関する。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、抗体またはその抗原結合断片である。
【００１０】
いくつかの実施形態において、単離抗体またはその抗原結合断片は、ＭＯＳＰＤ２と特異的に結合する。他の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、約１０−６Ｍ〜約１０−１２Ｍの平衡解離定数（ＫＤ）でＭＯＳＰＤ２に結合する。他の実施形態において、ＭＯＳＰＤ２は、ヒトＭＯＳＰＤ２である。他の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１に従って付番された、ヒトＭＯＳＰＤ２の以下のアミノ酸領域の１つまたは複数に特異的に結合する：約５０８〜約５１７、約５０１〜約５１４、約２３３〜約２４１、約５０９〜約５１７、約２１２〜約２２１、約１３〜約２４、約５０５〜約５１７、約５０５〜約５１４、約８９〜約１００、約５０６〜約５１７、約２３３〜約２４５、約５０４〜約５１４、約１２８〜約１３６、約２１８〜約２２６、約１５〜約２４、約８３〜約９６、約４２〜約５０、約４６２〜４７４、約３４０〜約３５１、約５０４〜約５１７、約４６２〜約４７０、約３２７〜約３３７、約２１〜約３２、約２１７〜約２２６、約５１０〜約５１７、約１７８〜約１９０、約４９７〜約５０９、約５０４〜約５１６、約６４〜約７７、約５０４〜約５１５、約１４７〜約１５９、約５０３〜約５１５、約８８〜約９７、約２０８〜約２１８、約１７８〜約１９１、約５０２〜約５１５、約５０３〜約５１６、約４９７〜約５０５、約５００〜約５０９、約１８９〜約２０２、約１８９〜約１９７、約５０５〜約５１６、約１〜約６３、約８２〜約２３９、約９３〜約２３４、約３２７〜約４４５、約３２７〜約４３１、及び約４９７〜約５１７。
【００１１】
いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１に従って付番された、ヒトＭＯＳＰＤ２の以下のアミノ酸領域の１つまたは複数に特異的に結合する：約５０５〜約５１５、約５００〜約５１５、約２３０〜約２４０、約５１０〜約５２０、約２１０〜約２２０、約１５〜約２５、約５０５〜約５２０、約５０５〜約５１５、約９０〜約１００、約５０５〜約５２５、約２３０〜約２４５、約５０５〜約５１０、約１３０〜約１４０、約２２０〜約２３０、約１５〜約３０、約８０〜約９５、約４０〜約５０、約４６０〜約４７５、約３４０〜約３５０、約５００〜約５１５、約４６０〜約４７０、約３２５〜約３３５、約２０〜約３５、約２１５〜約２２５、約５１０〜約５２０、約１７５〜約１９０、約５００〜約５１０、約５０５〜約５３０、約６０〜約７５、約５００〜約５２０、約１４５〜約１６０、約５０２〜約５１５、約８５〜約１００、約２０５〜約２２０、約１７５〜約１９０、約５００〜約５０５、約５００〜約５２５、約４９５〜約５０５、約４９５〜約５１０、約１９０〜約２００、約１９０〜約１９８、約５０２〜約５１５、約１〜約６０、約８０〜約２４０、約９０〜約２３５、約３３０〜約４４５、約３３０〜約４３０、及び約４９５〜約５１５。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
本発明のいくつかの実施形態を、あくまでも例として、添付の図面を参照しながら本明細書中説明する。ここで詳細な図面に関して特に、強調しておきたいのは、示される事項が例示であって、本発明の実施形態を図で説明することを目的とすることである。
【００１３】
【図１】ＭＯＳＰＤ２に対する低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈ−ＲＮＡ）（ｓｈ−ＭＯＳＰＤ２）で得られた運動精子ドメイン含有タンパク質２（ＭＯＳＰＤ２）ｍＲＮＡ発現の阻害を示す。Ｕ９３７細胞を、対照レンチウイルス粒子（ｓｈ−対照）またはＭＯＳＰＤ２の３つの異なるｍＲＮＡ領域に向けられたレンチウイルス粒子（Ｓｈ−ＭＯＳＰＤ２＃１２、＃２５、＃４２、＃６２、及び＃９６と付記）で形質導入した。細胞でのＭＯＳＰＤ２  ｍＲＮＡ発現を、定量的ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を用いて評価し、β−アクチン発現を用いて正規化した。ｓｈ−対照と比較したｓｈ−ＭＯＳＰＤ２でのＭＯＳＰＤ２発現の減少パーセンテージを示す。
【図２】ＲＡＮＴＥＳにより誘導されるＵ９３７細胞遊走に対するＭＯＳＰＤ２阻害の効果を示す。対照レンチウイルス粒子（レンチｓｈ−対照）またはｓｈ−ＭＯＳＰＤ２（レンチｓｈ−ＭＯＳＰＤ２）で形質導入されたＵ９３７細胞を、トランスウェルアッセイでＲＡＮＴＥＳに向かう遊走について試験した。示されている結果は、３つ組のウェルの遊走細胞の平均パーセンテージ±標準偏差である。＊ｐ＜０．０５。
【図３】ＲＡＮＴＥＳにより誘導されるＵ９３７細胞遊走に対するＭＯＳＰＤ２阻害のさらなる効果を示す。対照レンチウイルス粒子（レンチｓｈ−対照）または遺伝子転写物の異なる領域に向けられたｓｈ−ＭＯＳＰＤ２（レンチｓｈ−ＭＯＳＰＤ２）（レンチｓｈ＃２５またはレンチｓｈ＃４２またはレンチ＃９６）で形質導入されたＵ９３７細胞を、溶媒（Ｓｏｌ）で処理し、次いでトランスウェルアッセイでＲＡＮＴＥＳに向かう遊走について試験した。示されている結果は、３つ組のウェルの遊走細胞の平均パーセンテージ±標準偏差である。
【図４】ＲＡＮＴＥＳで活性化した後のリン酸化ＥＲＫ（ｐ−ＥＲＫ）レベル及びリン酸化ＡＫＴ（ｐ−ＡＫＴ）レベルに対するＭＯＳＰＤ２阻害の効果を示すウエスタンブロットの画像である。対照レンチウイルス粒子（レンチｓｈ−対照）またはｓｈ−ＭＯＳＰＤ２（レンチｓｈ−ＭＯＳＰＤ２＃２５またはレンチｓｈ−ＭＯＳＰＤ２＃４２）で形質導入されたＵ９３７細胞を、ＲＡＮＴＥＳで２分間または５分間処理した。熱ショックタンパク質９０（ＨＳＰ９０）の発現も、ローディング対照として示してある。
【図５】ケモカインにより誘導されるＵ９３７細胞遊走に対するＭＯＳＰＤ２阻害の効果を示す。対照レンチウイルス粒子（レンチｓｈ−対照）またはレンチｓｈ−ＭＯＳＰＤ２レンチウイルス粒子（レンチｓｈ−ＭＯＳＰＤ２）で形質導入されたＵ９３７細胞を、トランスウェルアッセイでＭＣＰ−３、ＭＣＰ−１、ＲＡＮＴＥＳ、及びＳＤＦ−１に向かう遊走について試験した。示されている結果は、３つ組のウェルの遊走細胞の平均パーセンテージ±標準偏差である。＊ｐ＜０．０５。
【図６】ケモカインで活性化した後のリン酸化ＥＲＫ（ｐ−ＥＲＫ）レベル及びリン酸化ＡＫＴ（ｐ−ＡＫＴ）レベルに対するＭＯＳＰＤ２阻害の効果を示すウエスタンブロットの画像である。対照レンチウイルス粒子（ｓｈ−対照）またはｓｈ−ＭＯＳＰＤ２で形質導入されたＵ９３７細胞を、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＣＰ−３、ＭＣＰ−１、及びＳＤＦ−１で処理した。チューブリン（Ｔｕｂ）の発現も、ローディング対照として示してある。
【図７】Ｕ９３７細胞増殖に対するＭＯＳＰＤ２阻害の効果を示す。対照レンチウイルス粒子（レンチｓｈ−対照、−◆−）またはｓｈ−ＭＯＳＰＤ２レンチウイルス粒子（レンチｓｈ−ＭＯＳＰＤ２、−■−）で形質導入されたＵ９３７細胞を播種し、３日間連続して２４時間ごとに計数した（１日目、２日目、及び３日目）。示されている結果は、３つ組の１日あたりの細胞数の平均±標準偏差である。
【図８】図８Ａ〜８Ｂは、単離ウサギポリクローナルα−ＭＯＳＰＤ２抗体が、内因性ヒトＭＯＳＰＤ２を検出し沈殿させることを示すウエスタンブロットの画像である。図８Ａでは、対照またはｓｈ−ＭＯＳＰＤ２レンチウイルス粒子（それぞれ、レンチｓｈ−対照またはレンチｓｈ−ＭＯＳＰＤ２）で形質導入されたＵ９３７細胞から細胞溶解液を調製した。試料をゲルにロードし、単離α−ＭＯＳＰＤ２抗体でブロッティングした。ローディング対照としてＨＳＰ９０の発現も測定した。図８Ｂでは、単離α−ＭＯＳＰＤ２抗体または対照としてのウサギＩｇＧを用いて、Ｕ９３７細胞溶解液で免疫沈降を行った。得られる沈殿物を、単離α−ＭＯＳＰＤ２抗体で免疫ブロッティングし、続いてヤギ抗ウサギ抗体−ＨＲＰとともにインキュベートすることにより、分析した。
【図９】形質移入されたＨＥＫ２９３細胞の表面上にＭＯＳＰＤ２が発現することを示すヒストグラムである。図９では、ＨＥＫ２９３細胞を、空ベクターまたはＨＡ−ｒｈＭＯＳＰＤ２プラスミド（ＭＯＳＰＤ２−ＨＡ）を用いて形質移入した。形質移入された細胞を収集し、抗ＨＡ−ＰＥ抗体で染色した。ＭＯＳＰＤ２の発現を、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を用いて評価した。
【図１０】ＭＯＳＰＤ２が、末梢血から単離されたヒトＣＤ１４単球の膜画分に局在していることを示す画像である。図１０は、抗ＭＯＳＰＤ２抗体を用いた、ヒトＣＤ１４単球の細胞内タンパク質画分ならびに膜画分（Ｍ）及び細胞質画分（Ｃ）の分析に基づいている。抗ＥＲＫまたは抗ＭＨＣクラスＩ抗体を、それぞれ、細胞質タンパク質及び膜タンパク質の分画純度を評価するために使用した。
【図１１】ＶＢ−２０１が、ヒトＣＤ１４単球の細胞溶解液由来のＭＯＳＰＤ２に結合することを示すウエスタンブロットの画像である。標識化ＶＢ−２０１またはＶＢ−２２１（ＯＢ２０１またはＯＢ２２１）を細胞溶解液に加え、タンパク質を沈殿させた。試料をゲル上で泳動し、ＴＬＲ２及びＭＯＳＰＤ２に対してブロッティングし、結果を図１１に示した。
【図１２】ヘマグルチニン（ＨＡ）について陽性染色されたＨＥＫ２９３細胞が、ＯＢ２０１には強く結合するが、ＯＢ２２１にはそうならないことを示すヒストグラムである。すなわち、図１２は、ＶＢ−２０１が、ＨＡタグ付ＭＯＳＰＤ２発現ベクターで形質移入されたＨＥＫ２９３細胞の表面上のＭＯＳＰＤ２に結合することを示す。図１２では、ＨＥＫ２９３細胞を、標識化ＶＢ−２０１またはＶＢ−２２１（ＯＢ２０１またはＯＢ２２１）とともにインキュベートし、続いてストレプトアビジン−ＡＰＣ染色した。
【図１３】ＭＯＳＰＤ２を過剰発現する細胞との結合について一次スクリーニングした結果同定された１７種の抗ＭＯＳＰＤ２  Ｆ（ａｂ’）２モノクローナル抗体（ｍＡｂ）クローンの一覧である。ＭＯＳＰＤ２結合について酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）を用いてクローンをさらに分析した結果、バックグラウンドの５倍超高いＯ．Ｄ．値を有する１２種のクローンが同定された（図１３中の＊）。
【図１４】図１４Ａ〜図１４Ｂは、２つの代表的な抗ＭＯＳＰＤ２  Ｆ（ａｂ’）２ｍＡｂクローンと、ＭＯＳＰＤ２を過剰発現する細胞との結合を示す。
【図１５】図１５Ａ〜図１５Ｄは、ＭＯＳＰＤ２の細胞発現特異性及び局在性を示す。
【図１６】図１６Ａ〜図１６Ｃは、ＭＯＳＰＤ２が、炎症組織に浸潤した単球で発現することを示す。
【図１７】図１７Ａ〜図１７Ｂは、ＭＯＳＰＤ２が、ＩＦＮ−ガンマ誘導性ＳＴＡＴ１リン酸化（ｐ−Ｓｔａｔ１）またはＰＭＡ媒介性ＥＲＫ１／２リン酸化（ｐ−ＥＲＫ１／２）のそれぞれに影響を及ぼさないことを示す。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
発明の詳細な説明
本発明の実施形態を詳細に説明する前に、当然のことながら、本発明は、その応用において、以下の説明または実施例による例示に記載される詳細に限定されない。本発明は、他の実施形態のものであること、あるいは様々な方法で実施または実行することが可能である。同じく、当然のことながら、本明細書中使用される表現及び用語は、説明を目的とするものであって、制限するものとして見なされるべきではない。
【００１５】
一般定義
「ｃｏｍｐｒｉｓｅ（含む）」、「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ（含む）」、「ｉｎｃｌｕｄｅ（含む）」、「ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ（含む）」、「有する」という用語、及びそれらの同根語は、「〜を含むが、〜に限定されない」ことを意味する。
【００１６】
「〜からなる」、は、「〜を含み、〜に限定される」ことを意味する。
【００１７】
「本質的に〜からなる」という用語は、ある組成の指定された物質、またはある方法の指定された工程、及びその物質または方法の基本的な特徴に実質的に影響を及ぼさない追加の物質または工程を意味する。
【００１８】
「例示」という単語は、本明細書中、「例、事例、または例図として機能すること」を意味するのに使用される。「例示」として記載される実施形態はどれでも、他の実施形態よりも好ましいまたは有利であると見なされることは必ずしもなく、及び／または他の実施形態の特徴を取り入れることを必ずしも排除しない。
【００１９】
「任意選択で」という単語は、本明細書中、「いくつかの実施形態では提供されるが、他の実施形態では提供されないこと」を意味するのに使用される。本発明の特定の実施形態のどれでも、複数の「任意選択の」特性を、そのような特性が矛盾しない限り、含むことができる。
【００２０】
本明細書中使用される場合、単数形の「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈で特に明白に指示されない限り、複数への言及を含む。例えば、「１種類の化合物」または「少なくとも１種類の化合物」は、複数の化合物を、それらの混合物も含めて、含む場合がある。
【００２１】
本明細書中使用される場合、本発明に関連して量を修飾する「約」という用語は、定法の試験及び取り扱いを通じて、そのような試験及び取り扱いでの故意ではない誤りを通じて、本発明で使用する成分の製造、原料、または純度の差異を通じて、などにより、生じる可能性がある数量の変動を示す。「約」という用語により修飾されているか否かにかかわらず、請求項は、列挙された量の等価物を含む。１つの実施形態において、「約」という用語は、記載される数値から１０％以内にあることを意味する。別の実施形態において、「約」という用語は、記載される数値から５％以内にあることを意味する。
【００２２】
本明細書全体を通じて、本発明の様々な実施形態は、範囲形式で提示することができる。当然のことながら、範囲形式での記載は、利便性及び簡潔さのためにすぎず、本発明の範囲に対する柔軟性のない制限として見なされるべきではない。したがって、ある範囲の記載は、具体的に開示される全ての可能なサブ範囲ならびにその範囲内の個々の数値を含むと見なされるべきである。例えば、ある範囲の記載は、例えば１〜６であれば、１〜３、１〜４、１〜５、２〜４、２〜６、３〜６などのようなサブ範囲、ならびにその範囲内の個々の数値、例えば、１、２、３、４、５、及び６を具体的に開示したと見なされるべきである。これは、範囲の広さにかかわらず当てはまる。
【００２３】
本明細書中使用される場合、「方法」という用語は、所定の任務を達成するための、様式、手段、技法、及び手順を示し、化学、薬理学、生物学、生化学、及び医薬分野の当業者に既知であるか、あるいは該当業者により既知の様式、手段、技法、及び手順から容易に開発することができるかのいずれかである、様式、手段、技法、及び手順が挙げられるが、それらに限定されない。
【００２４】
本明細書中使用される場合、「処置する」という用語は、症状の進行を抑止する、実質的に阻害する、遅らせる、または逆転させる、症状の臨床徴候または美観的徴候を実質的に緩和する、あるいは症状の臨床徴候または美観的徴候の出現を実質的に予防することを含む。
【００２５】
本明細書中使用される場合、「ＭＯＳＰＤ２」は、運動精子ドメイン含有タンパク質２として分類される任意のポリペプチドを示す。ＭＯＳＰＤ２の例として、配列番号１〜４のポリペプチド、またはそれらの任意の変異体（例えば、配列番号１〜４のいずれか１つと少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一の配列を有するもの）が挙げられるが、これらに限定されない。ＭＯＳＰＤ２の他の例として、配列番号５〜８のいずれか１つのポリヌクレオチド、またはそれらの任意の変異体（例えば、配列番号５〜８のいずれか１つと少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一のポリヌクレオチド）によりコードされるポリペプチドが挙げられるが、これらに限定されない。ＭＯＳＰＤ２をコードするポリヌクレオチド配列は、当該分野で既知の方法により、特定生命体での発現に関してコドン最適化を行うことができる。ＭＯＳＰＤ２の他の例は、当業者に既知であるもののような公的データベースを検索することにより（例えば、ＢＬＡＳＴ）同定することが可能である。
【００２６】
本明細書中使用される場合、「ＭＯＳＰＤ２の活性」または「ＭＯＳＰＤ２活性」は、運動精子ドメイン含有タンパク質２が持つ任意の既知の機能または本明細書中記載される機能を含む。そのような活性として、例えば、炎症細胞遊走（例えば、白血球または単球の遊走）の調節、化学走性、ケモカイン誘導性白血球遊走すなわち化学走性、ケモカイン受容体シグナル伝達経路、成長因子シグナル伝達経路、ＥＧＦ受容体リン酸化、ＥＲＫリン酸化、ＡＫＴリン酸化、ＦＡＫリン酸化、または炎症が挙げられる。
【００２７】
本明細書中使用される場合、「炎症細胞」として、白血球、顆粒球、好中球、好塩基球、好酸球、単球、マクロファージ、または肥満細胞が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２８】
本明細書中使用される場合、「化学走性」は、化学刺激に反応した細胞の運動を示す。化学走性として、単球などの炎症細胞がケモカインに向かって動くことが挙げられるが、これに限定されない。
【００２９】
本明細書中使用される場合、「ＭＯＳＰＤ２の阻害剤」及び「ＭＯＳＰＤ２阻害剤」は、ＭＯＳＰＤ２の活性を下方制御する任意の化合物を示す。阻害剤は、例えば、ポリペプチド、ＤＮＡ、またはＲＮＡであることが可能である。ＭＯＳＰＤ２の阻害は、例えば、感染によるＭＯＳＰＤ２の異所性過剰発現によっても生じる可能性があり、ＭＯＳＰＤ２の阻害剤またはＭＯＳＰＤ２阻害剤は、この種の阻害も包含することが意図される。阻害剤は、例えば、ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドと特異的に結合する分子であるか、ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドのリガンドと特異的に結合する分子であるか、ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドに対して産生された抗血清であるか、可溶性ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドであるか、またはＭＯＳＰＤ２ポリペプチドの細胞外ドメインを含む、本質的にそれからなる、もしくはそれからなる可溶性ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドであることも可能である。阻害剤は、例えば、ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドと特異的に結合する抗体またはＭＯＳＰＤ２ポリペプチドと特異的に結合する抗体の抗原結合断片であることも可能である。阻害剤は、ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列にハイブリダイズする、例えば、ＲＮＡｉ、ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、アンチセンスＤＮＡ、デコイ分子、デコイＤＮＡ、二本鎖ＤＮＡ、一本鎖ＤＮＡ、複合ＤＮＡ、被包ＤＮＡ、ウイルスＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、ネイキッドＲＮＡ、被包ＲＮＡ、ウイルスＲＮＡ、二本鎖ＲＮＡ、ＲＮＡ干渉を生じさせることができる分子、またはそれらの組み合わせであることも可能である。阻害剤は、ＭＯＳＰＤ２の活性を下方制御する小分子化学物質であることも可能である。
【００３０】
阻害剤は、例えば、クラスター化した規則的な配置の短い回文配列リピート（ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ  ｒｅｇｕｌａｒｌｙ  ｉｎｔｅｒｓｐａｃｅｄ  ｓｈｏｒｔ  ｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃ  ｒｅｐｅａｔ）、すなわちＣＲＩＳＰＲ−ＣＡＳ９系であることも可能である。ＣＲＩＳＰＲ−ＣＡＳ９系は、文献に記載されており、例えば、ＣＡＳ９及びガイドＲＮＡを含むことができる。他の遺伝子編集技法も文献に記載されており、同じく使用することができる。
【００３１】
「抗体」または抗体の「抗原結合断片」として、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、マウス抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体、一本鎖抗体、エピトープ結合断片、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、及びＦ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、一本鎖抗体、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、軽鎖可変領域（ＶＬ）または重鎖可変領域（ＶＨ）ドメイン、ＶＬまたはＶＨドメインいずれかを含む断片、及びＦａｂ発現ライブラリーにより産生された断片が挙げられるが、これらに限定されない。抗体または抗体の抗原結合断片は、免疫グロブリン分子の任意の種類（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、及びＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）、またはサブクラスのものであることが可能である。抗体の抗原結合断片を作製する方法は、既知であり、例えば、抗体の化学的消化またはプロテアーゼ消化が挙げられる。
【００３２】
抗体の「定常領域」は、単独または組み合わせいずれかでの抗体軽鎖の定常領域または抗体重鎖の定常領域を示す。
【００３３】
「Ｆｃ領域」という用語は、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するのに使用される。「Ｆｃ領域」は、天然型配列Ｆｃ領域の場合も変異型Ｆｃ領域の場合もある。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は変わる可能性があるものの、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、通常、Ｃｙｓ２２６、またはＰｒｏ２３０の位置のアミノ酸残基からカルボキシ末端までの一続きとして定義される。Ｆｃ領域の残基の付番は、ＫａｂａｔにあるとおりのＥＵインデックスによるものである。Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．，１９９１。免疫グロブリンのＦｃ領域は、一般に、２つの定常ドメイン、ＣＨ２及びＣＨ３を含む。
【００３４】
「特異的に結合する」とは、一般に、抗体またはその断片、変異体、もしくは誘導体が、その抗原結合ドメインによりエピトープに結合すること、及びその結合が、抗原結合ドメインとエピトープとの間に何かしらの相補性を必要とすることを意味する。この定義によれば、抗体またはその断片、変異体、もしくは誘導体は、その抗原結合ドメインを介してあるエピトープと結合することが、無作為の無関係なエピトープに結合するよりも容易である場合に、そのエピトープに「特異的に結合する」と言われる。
【００３５】
本明細書中使用される場合、「エピトープ」は、抗体が特異的に結合することができる、抗原の局所領域を示す。エピトープは、例えば、ポリペプチドの近接アミノ酸であることも可能であるし（直鎖または近接エピトープ）、またはエピトープは、例えば、１つまたは複数のポリペプチドの２つ以上の非近接領域が一緒になることも可能である（立体構造エピトープ、非直鎖エピトープ、非連続エピトープ、または非近接エピトープ）。ある特定の実施形態において、抗体が結合するエピトープは、文献及び本明細書中記載される方法、例えば、ＮＭＲ分光測定、Ｘ線回折結晶構造解析、ＥＬＩＳＡアッセイ、質量分析（例えば、ＭＡＬＤＩ質量分析）と合わせた水素／重水素交換、アレイに基づくオリゴペプチドスキャニングアッセイ、及び／または変異誘発マッピング（例えば、部位指向性変異誘発マッピング）などにより決定することができる。
【００３６】
「同一性パーセント」という用語は、当該分野で既知であるとおり、配列を比較することで決定されるとおりの２つ以上のポリペプチド配列または２つ以上のポリヌクレオチド配列間の関連性である。当該分野では、「同一性」及び「配列同一性」は、場合によっては、ポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列間のペプチドまたはヌクレオチドの並び方の一致により決定されるとおりのそのような配列間の配列関連性の程度も意味する。「同一性」及び「類似性」は、既知の方法及び公的に利用可能なリソースにより容易に計算可能であり、そのようなものとして以下が挙げられるが、それらに限定されない：（１）Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．，Ｅｄ．）Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ：ＮＹ（１９８８）、（２）Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｐｒｏｊｅｃｔｓ（Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｗ．，Ｅｄ．）Ａｃａｄｅｍｉｃ：ＮＹ（１９９３）、（３）Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄａｔａ，Ｐａｒｔ  Ｉ（Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．，ａｎｄ  Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ｈ．Ｇ．，Ｅｄｓ．）Ｈｕｍａｎｉａ：ＮＪ（１９９４）、（４）Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（ｖｏｎ  Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ．，Ｅｄ．）Ａｃａｄｅｍｉｃ（１９８７）、及び（５）Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐｒｉｍｅｒ（Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．ａｎｄ  Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．，Ｅｄｓ．）Ｓｔｏｃｋｔｏｎ：ＮＹ（１９９１）。
【００３７】
ポリヌクレオチドは、一本鎖形の核酸断片が、適切な温度及び溶液イオン強度条件下で、他の核酸断片にアニールすることができる場合に、該他のポリヌクレオチドと「ハイブリダイズする」ことができる。ハイブリダイゼーション及び洗浄条件は、周知であり、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，２ｎｄ  ｅｄ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ：Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９８９）、その中の特に第１１章及び表１１．１に例示されている（本明細書中、その全体が参照により援用される）。温度及び溶液イオン強度条件は、ハイブリダイゼーションの「ストリンジェンシー」を決定する。ストリンジェンシー条件は、中程度に類似した断片（関連性の遠い生命体由来の相同な配列など）から高度に類似した断片（関連性の近い生命体由来の機能性酵素を複製する遺伝子など）までをスクリーニングするように調節することができる。ハイブリダイゼーション後の洗浄が、ストリンジェンシー条件を決定する。ストリンジェントな条件のセットの一例は、最初に６×ＳＳＣ、０．５％ＳＤＳを室温で１５分間、次いで２×ＳＳＣ、０．５％ＳＤＳを４５℃で３０分間で繰り返し、次いで０．２×ＳＳＣ、０．５％ＳＤＳを５０℃で３０分間で２回繰り返す一連の洗浄を用いる。ストリンジェントな条件の別のセットの例は、より高温を使用するもので、洗浄は上記のものと同一であるが、ただし最後の２回の０．２×ＳＳＣ、０．５％ＳＤＳで３０分間洗浄時の温度が６０℃に上げられた。ストリンジェントな条件のこのセットは、２回の０．１×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、６５℃での最終洗浄を追加することにより「高度にストリンジェントな条件」へと変更することができる。ストリンジェントな条件のさらなるセットの例は、例えば、０．１×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、６５℃でハイブリダイゼーション、及び２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、続いて０．１×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳで洗浄を含む。
【００３８】
ハイブリダイゼーションは、２つの核酸が相補配列を含有していることを必要とするが、ハイブリダイゼーションのストリンジェンシー次第で、塩基間のミスマッチが起こり得る。核酸をハイブリダイズするのに適切なストリンジェンシーは、核酸の長さ及び相補性の程度に依存し、これらは当該分野で周知の変数である。２つのヌクレオチド配列間の類似性または相同性の度合いが高くなるほど、これらの配列を有する核酸のハイブリッドのＴｍ値も高くなる。核酸ハイブリダイゼーションの相対的安定性（Ｔｍが高いことに相当する）は、以下の順序で低下する：ＲＮＡ：ＲＮＡ、ＤＮＡ：ＲＮＡ、ＤＮＡ：ＤＮＡ。１００ヌクレオチド長を超えるハイブリッドについては、Ｔｍの計算式が導かれている（Ｓａｍｂｒｏｏｋら、９．５０〜９．５１を参照）。それより短い核酸、すなわち、オリゴヌクレオチドを用いたハイブリダイゼーションについては、ミスマッチの位置がより重要になり、オリゴヌクレオチドの長さが、その特異性を決定する（Ｓａｍｂｒｏｏｋら、上記、１１．７〜１１．８を参照）。１つの実施形態において、ハイブリダイズ可能な核酸の長さは、少なくとも約１０ヌクレオチドである。他の実施形態において、ハイブリダイズ可能な核酸の最短の長さは、少なくとも約１５ヌクレオチド、または少なくとも約２０ヌクレオチドである。
【００３９】
本明細書全体を通じて使用される場合、「アルキル」という用語は、飽和脂肪族炭化水素を示し、これには直鎖基及び分岐鎖基が含まれる。いくつかの実施形態において、アルキル基は、１〜２０個の炭素原子を有する。本明細書中、数値範囲、例えば、「１〜２０」などが述べられる場合はいつでも、その基（この場合はアルキル基）が、１個の炭素原子、２個の炭素原子、３個の炭素原子などから上限２０個も含めて、その個数まで炭素原子を含有することができることを意味する。いくつかの実施形態において、アルキルは、１〜１０個の炭素原子を有する中程度の大きさのアルキルである。いくつかの実施形態において、アルキルは、１〜４個の炭素原子を有する低級アルキルである。アルキル基は、置換されている場合も非置換の場合もある。置換されている場合、置換基として、例えば、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロ脂環式、ハロ、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、スルフィニル、スルホニル、シアノ、ニトロ、アジド、スルホニル、スルフィニル、スルホンアミド、ホスホニル、ホスフィニル、オキソ、カルボニル、チオカルボニル、尿素、チオ尿素、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、Ｃ−アミド、Ｎ−アミド、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、スルホンアミド、及びアミノが可能であり、これらの用語は本明細書中定義されるとおりである。
【００４０】
「シクロアルキル」基は、全てが炭素の単環式または縮合した環（すなわち、隣接する炭素原子対を共有する環）基を示し、縮合した複数の環のうち１つは完全共役π電子系を持たない。シクロアルキル基の限定ではなく例として、シクロプロパン、シクロブタン、シクロペンタン、シクロペンテン、シクロヘキサン、シクロヘキサジエン、シクロヘプタン、シクロヘプタトリエン、及びアダマンタンがある。シクロアルキル基は、置換されている場合も非置換の場合もある。置換されている場合、置換基として、例えば、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロ脂環式、ハロ、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、スルフィニル、スルホニル、シアノ、ニトロ、アジド、スルホニル、スルフィニル、スルホンアミド、ホスホニル、ホスフィニル、オキソ、カルボニル、チオカルボニル、尿素、チオ尿素、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、Ｃ−アミド、Ｎ−アミド、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、スルホンアミド、及びアミノが可能であり、これらの用語は本明細書中定義されるとおりである。
【００４１】
「アルケニル」基は、少なくとも２個の炭素原子及び少なくとも１つの炭素炭素二重結合からなるアルキル基を示す。
【００４２】
「アルキニル」基は、少なくとも２個の炭素原子及び少なくとも１つの炭素炭素三重結合からなるアルキル基を示す。
【００４３】
「アリール」基は、完全共役π電子系を持つ、全てが炭素の単環式または縮合した環の多環式（すなわち、隣接する炭素原子対を共有する環）基を示す。アリール基の限定ではなく例として、フェニル、ナフタレニル、及びアントラセニルがある。アリール基は、置換されている場合も非置換の場合もある。置換されている場合、置換基として、例えば、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロ脂環式、ハロ、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、スルフィニル、スルホニル、シアノ、ニトロ、アジド、スルホニル、スルフィニル、スルホンアミド、ホスホニル、ホスフィニル、オキソ、カルボニル、チオカルボニル、尿素、チオ尿素、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、Ｃ−アミド、Ｎ−アミド、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、スルホンアミド、及びアミノが可能であり、これらの用語は本明細書中定義されるとおりである。
【００４４】
「ヘテロアリール」基は、環（複数可）中に１個または複数の、例えば、窒素、酸素、及び硫黄などの原子を有し、さらに完全共役π電子系を持つ、単環式または縮合した環（すなわち、隣接する炭素原子対を共有する環）基を示す。ヘテロアリール基の限定ではなく例として、ピロール、フラン、チオフェン、イミダゾール、オキサゾール、チアゾール、ピラゾール、ピリジン、ピリミジン、キノリン、イソキノリン、及びプリンが挙げられる。ヘテロアリール基は、置換されている場合も非置換の場合もある。置換されている場合、置換基として、例えば、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロ脂環式、ハロ、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、スルフィニル、スルホニル、シアノ、ニトロ、アジド、スルホニル、スルフィニル、スルホンアミド、ホスホニル、ホスフィニル、オキソ、カルボニル、チオカルボニル、尿素、チオ尿素、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、Ｃ−アミド、Ｎ−アミド、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、スルホンアミド、及びアミノが可能であり、これらの用語は本明細書中定義されるとおりである。
【００４５】
「ヘテロ脂環式」基は、環（複数可）中に１個または複数の、例えば、窒素、酸素、及び硫黄などの原子を有する、単環式または縮合した環の基を示す。これらの環は、１つまたは複数の二重結合も有する場合がある。しかしながら、これらの環は、完全共役π電子系を持たない。ヘテロ脂環式は、置換されている場合も非置換の場合もある。置換されている場合、置換基として、例えば、孤立電子対、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロ脂環式、ハロ、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、スルフィニル、スルホニル、シアノ、ニトロ、アジド、スルホニル、スルフィニル、スルホンアミド、ホスホニル、ホスフィニル、オキソ、カルボニル、チオカルボニル、尿素、チオ尿素、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、Ｃ−アミド、Ｎ−アミド、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、スルホンアミド、及びアミノが可能であり、これらの用語は本明細書中定義されるとおりである。代表例として、ピペリジン、ピペラジン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロピラン、モルホリノなどがある。
【００４６】
「アルコキシ」基は、本明細書中定義されるとおり、−Ｏ−アルキル及び−Ｏ−シクロアルキル基の両方を示す。
【００４７】
「アリールオキシ」基は、本明細書中定義されるとおり、−Ｏ−アリール及び−Ｏ−ヘテロアリール基の両方を示す。
【００４８】
「チオアルコキシ」基は、本明細書中定義されるとおり、−Ｓ−アルキル基及び−Ｓ−シクロアルキル基の両方を示す。
【００４９】
「チオアリールオキシ」基は、本明細書中定義されるとおり、−Ｓ−アリール及び−Ｓ−ヘテロアリール基の両方を示す。
【００５０】
「カルボニル」基は、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ基を示し、式中、Ｒは、本明細書中定義されるとおりの、水素、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール（環炭素を通じて結合）、またはヘテロ脂環式（環炭素を通じて結合）である。
【００５１】
「アルデヒド」基は、カルボニル基を示し、式中、Ｒは、水素である。
【００５２】
「チオカルボニル」基は、−Ｃ（＝Ｓ）−Ｒ基を示し、式中、Ｒは、本明細書中定義されるとおりである。
【００５３】
「Ｃ−カルボキシ」基は、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ基を示し、式中、Ｒは、本明細書中定義されるとおりである。
【００５４】
「Ｏ−カルボキシ」基は、ＲＣ（＝Ｏ）−Ｏ−基を示し、式中、Ｒは、本明細書中定義されるとおりである。
【００５５】
「オキソ」基は、＝Ｏ基を示す。
【００５６】
「カルボン酸」基は、Ｃ−カルボキシル基を示し、式中、Ｒは、水素である。
【００５７】
「ハロ」基は、フッ素、塩素、臭素、またはヨウ素を示す。
【００５８】
「トリハロメチル」基は、−ＣＸ３基を示し、式中、Ｘは、本明細書中定義されるとおりのハロ基である。
【００５９】
「スルフィニル」基は、−Ｓ（＝Ｏ）−Ｒ基を示し、式中、Ｒは、本明細書中定義されるとおりである。
【００６０】
「スルホニル」基は、−Ｓ（＝Ｏ）２−Ｒ基を示し、式中、Ｒは、本明細書中定義されるとおりである。
【００６１】
「Ｓ−スルホンアミド」基は、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＲ２基を示し、式中、各Ｒは、本明細書中定義されるとおりである。
【００６２】
「Ｎ−スルホンアミド」基は、ＲＳ（＝Ｏ）２−ＮＲ基を示し、式中、各Ｒは、本明細書中定義されるとおりである。
【００６３】
「Ｏ−カルバミル」基は、−ＯＣ（＝Ｏ）−ＮＲ２基を示し、式中、各Ｒは、本明細書中定義されるとおりである。
【００６４】
「Ｎ−カルバミル」基は、ＲＯＣ（＝Ｏ）−ＮＲ−基を示し、式中、各Ｒは、本明細書中定義されるとおりである。
【００６５】
「Ｏ−チオカルバミル」基は、−ＯＣ（＝Ｓ）−ＮＲ２基を示し、式中、各Ｒは、本明細書中定義されるとおりである。
【００６６】
「Ｎ−チオカルバミル」基は、ＲＯＣ（＝Ｓ）ＮＲ−基を示し、式中、各Ｒは、本明細書中定義されるとおりである。
【００６７】
「アミノ」基は、−ＮＲ２基を示し、式中、各Ｒは、本明細書中定義されるとおりである。
【００６８】
「Ｃ−アミド」基は、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ２基を示し、式中、各Ｒは、本明細書中定義されるとおりである。
【００６９】
「Ｎ−アミド」基は、ＲＣ（＝Ｏ）−ＮＲ−基を示し、式中、各Ｒは、本明細書中定義されるとおりである。
【００７０】
「尿素」基は、−ＮＲＣ（＝Ｏ）−ＮＲ２基を示し、式中、各Ｒは、本明細書中定義されるとおりである。
【００７１】
「グアニジノ」基は、−ＲＮＣ（＝Ｎ）−ＮＲ２基を示し、式中、各Ｒは、本明細書中定義されるとおりである。
【００７２】
「グアニル」基は、Ｒ２ＮＣ（＝Ｎ）−基を示し、式中、各Ｒは、本明細書中定義されるとおりである。
【００７３】
「ホスホニル」または「ホスホナート」という用語は、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ）２基を示し、各Ｒは、本明細書中定義されるとおりである。
【００７４】
「ホスファート」という用語は、−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ）２基を示し、各Ｒは、本明細書中定義されるとおりである。
【００７５】
「リン酸」は、各Ｒが水素であるリン酸基である。
【００７６】
「ホスフィニル」という用語は、−ＰＲ２基を示し、各Ｒは、本明細書中定義されるとおりである。
【００７７】
「チオ尿素」という用語は、−ＮＲ−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＲ−基を示し、各Ｒは、本明細書中定義されるとおりである。
【００７８】
「糖」という用語は、鎖式糖単位または環状糖単位（例えば、ピラノースまたはフラノース系単位）いずれかの、１つまたは複数の糖単位を示し、特に記載がない限り、任意の単糖、二糖、及び少糖を包含する。
【００７９】
「塩」という用語は、内部塩及び外部塩両方を含む。いくつかの実施形態において、塩は内部塩である、すなわち、双性イオン構造である。いくつかの実施形態において、塩は外部塩である。いくつかの実施形態において、外部塩は、適切な対イオンを有する薬学上許容される塩である。医薬用途に適した対イオンは、当該分野で既知である。
【００８０】
「ＶＢ−２０１」という用語は、１−ヘキサデシル−２−（４’−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリンを示す。本発明の実施形態に従って、ＶＢ−２０１は、１−ヘキサデシル−２−（４’−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリンのキラル鏡像異性体、すなわち、（Ｒ）鏡像異性体（（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（４’−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）または（Ｓ）鏡像異性体（（Ｓ）−１−ヘキサデシル−２−（４’−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）のいずれか、あるいはそれらの混合物（例えば、ラセミ体）の場合がある。例示の実施形態に従って、ＶＢ−２０１は、（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（４’−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンである。当業者には当然のことながら、ＶＢ−２０１を（Ｒ）鏡像異性体または（Ｓ）鏡像異性体と指定することは、鏡像異性体純度が１００％であることを必要とせず、そうではなくて、ＲまたはＳ異性体としていずれかの１種の鏡像異性体が実質的に濃縮されていることを示す（例えば、鏡像異性体過剰率が少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、またはそれより高い）。いくつかの実施形態において、ＶＢ−２０１は、鏡像異性体過剰率が少なくとも９０％である（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（４’−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンである。ＯＢ２０１という用語は、実施例のセクションで記載されるとおりの卵白アルブミン結合ＶＢ−２０１を示す。
【００８１】
「ＶＢ−２２１」という用語は、１−（２’−オクチル）ドデシル−２−（４’−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリンを示す。本発明の実施形態に従って、ＶＢ−２２１は、１−（２’−オクチル）ドデシル−２−（４’−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリンのキラル鏡像異性体、すなわち、（Ｒ）鏡像異性体または（Ｓ）鏡像異性体のいずれか、あるいはそれらの任意の混合物（例えば、ラセミ体）の場合がある。例示の実施形態に従って、ＶＢ−２２１は、（Ｒ）−１−（２’−オクチル）ドデシル−２−（４’−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンである。同様に、当業者には当然のことながら、ＶＢ−２２１を（Ｒ）鏡像異性体または（Ｓ）鏡像異性体と指定することは、鏡像異性体純度が１００％であることを必要とせず、そうではなくて、ＲまたはＳ異性体としていずれかの１種の鏡像異性体が実質的に濃縮されていることを示す（例えば、鏡像異性体過剰率が少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、またはそれより高い）。いくつかの実施形態において、ＶＢ−２２１は、鏡像異性体過剰率が少なくとも９０％である（Ｒ）−１−１−（２’−オクチル）ドデシル−２−（４’−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンである。ＯＢ２２１という用語は、実施例のセクションで記載されるとおりの卵白アルブミン結合ＶＢ−２２１を示す。
【００８２】
当然ながら、本発明のある特長は、明確にするために別々の実施形態の文脈で記載されるとしても、それらは、１つの実施形態中に組み合わせて提供される場合もある。反対に、本発明の様々な特長は、簡潔さのため１つの実施形態の文脈で記載されるとしても、それらは、別々にまたは任意の適切な部分的組み合わせで、または本発明の任意の他の記載される実施形態で適切なように提供される場合がある。様々な実施形態の文脈で記載されるある特定の特長は、その実施形態がそれらの要素なしでは作動不能でない限り、それらの実施形態の必須の特長と見なされることはない。
【００８３】
ＭＯＳＰＤ２及びＭＯＳＰＤ２阻害剤
本出願は、部分的には、運動精子ドメイン含有タンパク質２（ＭＯＳＰＤ２）の生物学的機能の同定に基づく。ＭＯＳＰＤ２の阻害は、単球が、種々のケモカインに向かって遊走するのを阻害し、ケモカイン受容体シグナル伝達経路の活性化を遮断することがわかっている。これらの結果は、ＭＯＳＰＤ２が、白血球及び単球の遊走に極めて重要であること、ならびにその活性の遮断が炎症を阻害し、炎症性疾患及び障害に治療効果を有することを示す。
【００８４】
本発明のいくつかの実施形態は、ＭＯＳＰＤ２の阻害剤に、またはＭＯＳＰＤ２の阻害剤を含む方法及び組成物に関する。いくつかの実施形態において、阻害剤は、ＭＯＳＰＤ２を阻害する単離結合分子である。他の実施形態において、阻害剤は、ポリペプチド、ＤＮＡ、またはＲＮＡである。他の実施形態において、阻害剤は、ＭＯＳＰＤ２に特異的に結合するポリペプチドである。他の実施形態において、阻害剤は、ＭＯＳＰＤ２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片である。他の実施形態において、阻害剤は、ＲＮＡサイレンシング作用剤である。
【００８５】
他の実施形態において、ＭＯＳＰＤ２の阻害剤は、ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片である。他の実施形態において、抗体は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、マウス抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、または一本鎖抗体である。他の実施形態において、抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｓｄＦｖ断片、ＶＨドメイン、またはＶＬドメインである。
【００８６】
いくつかの実施形態において、本発明は、ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドに特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合断片に関する。いくつかの実施形態において、本明細書中記載される、ＭＯＳＰＤ２（例えば、ヒトＭＯＳＰＤ２）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片は、ＶＨ、ＶＬ、またはＶＨ及びＶＬを含む。他の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、定常領域を含む。
【００８７】
いくつかの実施形態において、ＶＨ、ＶＬ、またはＶＨ及びＶＬは、１つまたは複数の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨは、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの実施形態において、ＶＬは、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３、またはそれらの任意の組み合わせを含む。
【００８８】
いくつかの実施形態において、ＶＨ、ＶＬ、またはＶＨ及びＶＬは、１つまたは複数のフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨは、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、ＦＲ４、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの実施形態において、ＶＬは、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、ＦＲ４、またはそれらの任意の組み合わせを含む。
【００８９】
特定の実施形態において、ＭＯＳＰＤ２（例えば、ヒトＭＯＳＰＤ２）に特異的に結合する本明細書中記載される抗体またはその抗原結合断片は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＨ、ならびにＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【００９０】
他の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、定常領域を含む。いくつかの実施形態において、軽鎖の定常領域は、ヒトカッパ軽鎖定常領域またはヒトラムダ軽鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、重鎖の定常領域は、ヒトガンマ重鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。ヒト定常領域配列の非限定的な例が報告されてきており、例えば、米国特許第５，６９３，７８０号、及びＫａｂａｔ，ＥＡ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）を参照。いくつかの実施形態において、定常領域アミノ酸配列は、天然ヒト配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％配列同一性があるように修飾されている（例えば、１つ、２つ、またはそれより多いアミノ酸置換）。
【００９１】
別の態様において、本明細書中提供されるのは、ＭＯＳＰＤ２のエピトープ（例えば、ヒトＭＯＳＰＤ２のエピトープ）を認識するまたはこれに結合する抗体またはその抗原結合断片である。別の態様において、本明細書中提供されるのは、本明細書中記載される抗体（例えば、実施例５または８に記載される抗体）と同一のＭＯＳＰＤ２（例えば、ヒトＭＯＳＰＤ２）のエピトープまたは重複するエピトープを認識するまたはこれに結合する抗体またはその抗原結合断片である。別の態様において、抗体またはその抗原結合断片は、ＭＯＳＰＤ２のエピトープを複数種（例えば、２種、３種、４種、５種、または６種のエピトープ）認識する。
【００９２】
ある特定の実施形態において、ＭＯＳＰＤ２のエピトープは、文献に記載される１つまたは複数の方法、例えば、ＮＭＲ分光測定、Ｘ線回折結晶構造解析、ＥＬＩＳＡアッセイ、質量分析（例えば、ＭＡＬＤＩ質量分析）と合わせた水素／重水素交換、アレイに基づくオリゴペプチドスキャニングアッセイ、及び／または変異誘発マッピング（例えば、部位指向性変異誘発マッピング）などにより決定することができる。Ｘ線結晶構造解析の場合、結晶化は、文献に記載される方法を用いて達成することができる（例えば、Ｇｉｅｇｅ  Ｒ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  Ｄ  Ｂｉｏｌ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  ５０（Ｐｔ４）：３３９−３５０、ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ  Ａ（１９９０）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  １８９：１−２３、Ｃｈａｙｅｎ  ＮＥ（１９９７）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ５：１２６９−１２７４、ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ  Ａ（１９７６）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２５１：６３００−６３０３）。抗体：抗原結晶は、周知のＸ線回折技法を用いて調べることができ、Ｘ−ＰＬＯＲ（Ｙａｌｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、１９９２、頒布はＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎｓ、Ｉｎｃ．による、例えば、Ｍｅｔｈ  Ｅｎｚｙｍｏｌ（１９８５）ｖｏｌｕｍｅｓ  １１４  ＆  １１５，ｅｄｓ  Ｗｙｃｋｏｆｆ  ＨＷ  ｅｔ  ａｌ．、米国特許出願第２００４／００１４１９４号）、及びＢＵＳＴＥＲ（Ｂｒｉｃｏｇｎｅ  Ｇ（１９９３）Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  Ｄ  Ｂｉｏｌ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  ４９（Ｐｔ  １）：３７−６０、Ｂｒｉｃｏｇｎｅ  Ｇ（１９９７）Ｍｅｔｈ  Ｅｎｚｙｍｏｌ  ２７６Ａ：３６１−４２３，ｅｄ  Ｃａｒｔｅｒ  ＣＷ、Ｒｏｖｅｒｓｉ  Ｐ  ｅｔ  ａｌ．，（２０００）Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  Ｄ  Ｂｉｏｌ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  ５６（Ｐｔ１０）：１３１６−１３２３を参照）などのコンピューターソフトウェアを用いて精緻化することができる。変異誘発マッピング試験は、文献に記載される方法を用いて達成することができる。例えば、Ｃｈａｍｐｅ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９５）上記、及びアラニンスキャニング変異誘発技法を含む変異誘発技法の説明についてＣｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ＢＣ  ＆  Ｗｅｌｌｓ  ＪＡ（１９８９）上記、を参照。特定の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片のエピトープは、アラニンスキャニング変異誘発試験を用いて決定される。抗体のエピトープ特性決定は、Ｒａｖｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２８８：１９７６０−１９７７２（２０１３）に提示される方法によっても決定することができる。
【００９３】
また、ＭＯＳＰＤ２（例えば、ヒトＭＯＳＰＤ２）の同一のまたは重複するエピトープを認識するまたはそれに結合する抗体またはそれらの抗原結合断片は、免疫アッセイなどの定法技法を用いて、例えば、１つの抗体が持つ、別の抗体と標的抗原との結合を遮断する能力の表示、すなわち、競合結合アッセイにより、同定することができる。競合結合は、試験対象の免疫グロブリンが参照抗体と共通抗原との、例えばＭＯＳＰＤ２などとの特異的結合を阻害するアッセイにおいて、決定することができる。複数種類の競合結合アッセイが、記載されてきており、例えば、固相直接または間接放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）、固相直接または間接酵素免疫測定（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合アッセイ（Ｓｔａｈｌｉ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８３）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ  ９：２４２−２５３を参照）、固相直接ビオチンアビジンＥＩＡ（Ｋｉｒｋｌａｎｄ  ＴＮ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８６）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １３７：３６１４−９を参照）、固相直接標識化アッセイ、固相直接標識化サンドイッチアッセイ（Ｈａｒｌｏｗ  Ｅ  ＆  Ｌａｎｅ  Ｄ，（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓを参照）、Ｉ−１２５標識を用いる固相直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｒｅｌ  ＧＡ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２５（１）：７−１５を参照）、固相直接ビオチンアビジンＥＩＡ（Ｃｈｅｕｎｇ  ＲＣ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９０）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  １７６：５４６−５２）、及び直接標識化ＲＩＡ（Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒ  Ｇ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９０）Ｓｃａｎｄ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３２：７７−８２）がある。典型的には、そのようなアッセイは、固体表面または細胞に結合して保持されている精製抗原（例えば、ヒトＭＯＳＰＤ２などのＭＯＳＰＤ２）、未標識の試験免疫グロブリン、及び標識化参照免疫グロブリンの使用を含む。競合阻害は、試験免疫グロブリンの存在下で、固体表面または細胞と結合した標識の量を決定することにより、測定することができる。通常、試験免疫グロブリンは過剰に存在する。通常、競合抗体が過剰に存在する場合、競合抗体は、参照抗体と共通抗原との特異的結合を、少なくとも５０〜５５％、５５〜６０％、６０〜６５％、６５〜７０％、７０〜７５％、またはそれ以上阻害する。競合結合アッセイは、標識化抗原または標識化抗体いずれかを用いる多数の異なる様式で構成することができる。このアッセイの一般的形式では、抗原は９６ウェルプレートに固定される。次いで、未標識抗体が持つ標識化抗体と抗原の結合を遮断する能力を、放射性標識または酵素標識を用いて測定する。さらなる詳細について、例えば、Ｗａｇｅｎｅｒ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８３）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １３０：２３０８−２３１５、Ｗａｇｅｎｅｒ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８４）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ６８：２６９−２７４、Ｋｕｒｏｋｉ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９０）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ５０：４８７２−４８７９、Ｋｕｒｏｋｉ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９２）Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｎｖｅｓｔ  ２１：５２３−５３８、Ｋｕｒｏｋｉ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（１���９２）Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  １１：３９１−４０７及びＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｅｄ  Ｈａｒｌｏｗ  Ｅ  ＆  Ｌａｎｅ  Ｄ  ｅｄｉｔｏｒｓ上記、ｐｐ．３８６−３８９を参照。
【００９４】
１つの実施形態において、表面プラズモン共鳴（ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標））を用いて、例えば、Ａｂｄｉｃｈｅ  ＹＮ  ｅｔ  ａｌ．，（２００９）Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ３８６：１７２−１８０に記載されるものなどの「タンデムアプローチ」により競合アッセイを行うが、これによれば、ＭＯＳＰＤ２抗原をチップ、例えば、ＣＭ５センサーチップなどの表面に固定し、次いで抗ＭＯＳＰＤ２抗体を、チップ全体に行き渡らせる。抗体またはその抗原結合断片が、本明細書中記載される抗ＭＯＳＰＤ２抗体またはその抗原結合断片と競合するかどうかを決定するため、抗ＭＯＳＰＤ２抗体またはその抗原結合断片を最初にチップ表面全体に行き渡らせて飽和させ、次いで、競合する可能性がある抗体を加える。次いで、競合抗体の結合を、非競合対照との比較で決定し定量することができる。
【００９５】
ある特定の態様において、競合ＥＬＩＳＡアッセイなどの競合結合アッセイにおいて２種の抗体が、同一のまたは立体的に重複するエピトープを認識する場合、競合結合アッセイを用いて、抗体またはその抗原結合断片が、参照抗体としての別の抗体、例えば、本質的に同一のエピトープまたは重複するエピトープと結合する抗体により、例えば用量依存式に、競合的に遮断されるかどうか決定することができ、アッセイは、標識化抗原または標識化抗体いずれかを用いて、あらゆる異なる様式で構成することができる。特定の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、本明細書中記載される抗体（例えば、実施例５または８のもの）、またはそのキメラもしくはＦａｂ抗体、または本明細書中記載される抗体（例えば、実施例５または８のもの）のＶＨ  ＣＤＲ及びＶＬ  ＣＤＲを含む抗体を用いる競合結合アッセイで試験することができる。
【００９６】
したがって、ある特定の態様において、本明細書中提供されるのは、当業者に既知のまたは本明細書中記載されるアッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡ競合アッセイ、表面プラズモン共鳴、またはＳｃａｔｃｈａｒｄ分析）を用いて決定されるとおりの、ＭＯＳＰＤ２（例えば、ヒトＭＯＳＰＤ２）との結合に関して本明細書中記載される抗体（例えば、実施例５または８のもの）と競合する（例えば、用量依存式で）抗体またはその抗原結合断片である。
【００９７】
いくつかの実施形態において、本発明の抗ＭＯＳＰＤ２抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１（アミノ酸残基１〜５１８）に従って付番された、ＭＯＳＰＤ２の以下のアミノ酸領域（エピトープ）の１つまたは複数と特異的に結合する：５０８〜５１７、５０１〜５１４、２３３〜２４１、５０９〜５１７、２１２〜２２１、１３〜２４、５０５〜５１７、５０５〜５１４、８９〜１００、５０６〜５１７、２３３〜２４５、５０４〜５１４、１２８〜１３６、２１８〜２２６、１５〜２４、８３〜９６、４２〜５０、４６２〜４７４、３４０〜３５１、５０４〜５１７、４６２〜４７０、３２７〜３３７、２１〜３２、２１７〜２２６、５１０〜５１７、１７８〜１９０、４９７〜５０９、５０４〜５１６、６４〜７７、５０４〜５１５、１４７〜１５９、５０３〜３１５、８８〜９７、２０８〜２１８、１７８〜１９１、５０２〜５１５、５０３〜５１６、４９７〜５０５、５００〜５０９、１８９〜２０２、１８９〜１９７、５０５〜５１６、１〜６３、８２〜２３９、９３〜２３４、３２７〜４４５、３２７〜４３１、及び４９７〜５１７。
【００９８】
いくつかの実施形態において、本発明の抗ＭＯＳＰＤ２抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１（アミノ酸残基１〜５１８）に従って付番された、ＭＯＳＰＤ２の以下のアミノ酸領域（エピトープ）の１つまたは複数に特異的に結合する：約５０８〜約５１７、約５０１〜約５１４、約２３３〜約２４１、約５０９〜約５１７、約２１２〜約２２１、約１３〜約２４、約５０５〜約５１７、約５０５〜約５１４、約８９〜約１００、約５０６〜約５１７、約２３３〜約２４５、約５０４〜約５１４、約１２８〜約１３６、約２１８〜約２２６、約１５〜約２４、約８３〜約９６、約４２〜約５０、約４６２〜約４７４、約３４０〜約３５１、約５０４〜約５１７、約４６２〜約４７０、約３２７〜約３３７、約２１〜約３２、約２１７〜約２２６、約５１０〜約５１７、約１７８〜約１９０、約４９７〜約５０９、約５０４〜約５１６、約６４〜約７７、約５０４〜約５１５、約１４７〜約１５９、約５０３〜約５１５、約８８〜約９７、約２０８〜約２１８、約１７８〜約１９１、約５０２〜約５１５、約５０３〜約５１６、約４９７〜約５０５、約５００〜約５０９、約１８９〜約２０２、約１８９〜約１９７、約５０５〜約５１６、約１〜約６３、約８２〜約２３９、約９３〜約２３４、約３２７〜約４４５、約３２７〜約４３１、及び約４９７〜約５１７。
【００９９】
いくつかの実施形態において、本発明の抗ＭＯＳＰＤ２抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１（アミノ酸残基１〜５１８）に従って付番された、ＭＯＳＰＤ２の以下のアミノ酸領域（エピトープ）の１つまたは複数に特異的に結合する：約５０５〜約５１５、約５００〜約５１５、約２３０〜約２４０、約５１０〜約５２０、約２１０〜約２２０、約１５〜約２５、約５０５〜約５２０、約５０５〜約５１５、約９０〜約１００、約５０５〜約５２５、約２３０〜約２４５、約５０５〜約５１０、約１３０〜約１４０、約２２０〜約２３０、約１５〜約３０、約８０〜約９５、約４０〜約５０、約４６０〜約４７５、約３４０〜約３５０、約５００〜約５１５、約４６０〜約４７０、約３２５〜約３３５、約２０〜約３５、約２１５〜約２２５、約５１０〜約５２０、約１７５〜約１９０、約５００〜約５１０、約５０５〜約５３０、約６０〜約７５、約５００〜約５２０、約１４５〜約１６０、約５０２〜約５１５、約８５〜約１００、約２０５〜約２２０、約１７５〜約１９０、約５００〜約５０５、約５００〜約５２５、約４９５〜約５０５、約４９５〜約５１０、約１９０〜約２００、約１９０〜約１９８、約５０２〜約５１５、約１〜約６０、約８０〜約２４０、約９０〜約２３５、約３３０〜約４４５、約３３０〜約４３０、及び約４９５〜約５１５。
【０１００】
いくつかの実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合断片は、約１０−６Ｍ〜約１０−１２Ｍ、またはそれらの値のうちの任意の範囲（例えば、約１０−７Ｍ〜約１０−１２、１０−８Ｍ〜約１０−１２Ｍ、約１０−９Ｍ〜約１０−１２Ｍ、約１０−１０Ｍ〜約１０−１２Ｍ、約１０−１１Ｍ〜約１０−１２Ｍ、約１０−６Ｍ〜約１０−１１Ｍ、約１０−７Ｍ〜約１０−１１Ｍ、約１０−８Ｍ〜約１０−１１Ｍ、約１０−９Ｍ〜約１０−１１Ｍ、約１０−１０Ｍ〜約１０−１１Ｍ、約１０−６Ｍ〜約１０−１０Ｍ、約１０−７Ｍ〜約１０−１０Ｍ、約１０−８Ｍ〜約１０−１０Ｍ、約１０−９Ｍ〜約１０−１０Ｍ、約１０−６Ｍ〜約１０−９Ｍ、約１０−７Ｍ〜約１０−９Ｍ、約１０−８Ｍ〜約１０−９Ｍ、約１０−６Ｍ〜約１０−８Ｍ、または約１０−７Ｍ〜約１０−８）の抗体抗原平衡解離定数（ＫＤ）でＭＯＳＰＤ２と結合する。他の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、ＫＤが約１０−６Ｍ、約１０−７Ｍ、約１０−８Ｍ、約１０−９Ｍ、約１０−１０Ｍ、約１０−１１Ｍ、または約１０−１２Ｍである。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合断片は、ＭＯＳＰＤ２上の１つまたは複数のエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、ＫＤは、Ｓｃａｔｃｈａｒｄ分析、表面プラズモン共鳴、または本明細書中記載される他の方法により、いくつかの実施形態において、３７℃で決定される。
【０１０１】
いくつかの実施形態において、本発明の抗体または抗原結合断片は、約１０３１／Ｍｓ〜約１０６１／Ｍｓ、またはそれらの値のうちの任意の範囲（例えば、約１０４１／Ｍｓ〜約１０６１／Ｍｓ、または１０５１／Ｍｓ〜約１０６１／Ｍｓ）のＫｏｎでＭＯＳＰＤ２と結合する。他の実施形態において、抗体または抗原結合断片は、Ｋｏｎが約１０３１／Ｍｓ、約１０４１／Ｍｓ、約１０５１／Ｍｓ、または約１０６１／Ｍｓである。
【０１０２】
いくつかの実施形態において、本発明の抗体または抗原結合断片は、約１０−３１／ｓ〜約１０−６１／ｓ、またはそれらの値のうちの任意の範囲（例えば、約１０−４１／ｓ〜約１０−６１／ｓ、または１０−５１／ｓ〜約１０−６１／ｓ）のＫｏｆｆでＭＯＳＰＤ２と結合する。他の実施形態において、抗体または抗原結合断片は、Ｋｏｆｆが約１０−３１／ｓ、約１０−４１／ｓ、約１０−５１／ｓ、または約１０−６１／ｓである。
【０１０３】
いくつかの実施形態において、抗体は、ＩｇＧ分子、ＩｇＭ分子、ＩｇＥ分子、ＩｇＡ分子、もしくはＩｇＤ分子、またはそれらに由来する。他の実施形態において、抗体は、Ｆｃ領域を含む。
【０１０４】
いくつかの実施形態において、本発明は、本明細書中記載される抗体または抗原結合断片、及び薬学上許容される担体を含む医薬組成物に関する。他の実施形態において、本発明は、本明細書中記載される疾患または障害を処置する、予防する、またはその発生率を低下させる方法に関し、本方法は、その必要がある対象に、本明細書中記載される抗体またはその抗原結合断片または本明細書中記載される医薬組成物の治療有効量を投与することを含む。
【０１０５】
本発明のさらなる実施形態において、ＭＯＳＰＤ２の阻害及びＭＯＳＰＤ２活性の下方制御は、転写及び／または翻訳に干渉する様々な分子［例えば、ＲＮＡサイレンシング作用剤（例えば、アンチセンス、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、マイクロＲＮＡ）、リボザイム、及びＤＮＡザイム］を用いてゲノム及び／または転写レベルで、あるいは、例えば、アンタゴニスト、ポリペプチド切断酵素、タンパク質活性に干渉する小分子（例えば、競合リガンド）などを用いてタンパク質レベルで、もたらされる可能性がある。
【０１０６】
以下に、ＭＯＳＰＤ２などの標的の発現レベル及び／または活性を下方制御することができる作用剤の例を列挙する。
【０１０７】
ＭＯＳＰＤ２の阻害は、例えば、感染によるＭＯＳＰＤ２の異所性過剰発現により生じる場合もあり、ＭＯＳＰＤ２の阻害剤またはＭＯＳＰＤ２阻害剤は、この種の阻害も包含することが意図される。
【０１０８】
ＭＯＳＰＤ２の下方制御は、遺伝子編集によっても達成することができる。遺伝子編集は、例えば、クラスター化した規則的な配置の短い回文配列リピート、すなわちＣＲＩＳＰＲ−ＣＡＳ９系を用いて行うことができる。ＣＲＩＳＰＲ−ＣＡＳ９系は、文献に記載されており、例えば、ＣＡＳ９及びガイドＲＮＡを含むことができる。他の遺伝子編集技法も文献に記載されており、同じく使用することができる。
【０１０９】
ＭＯＳＰＤ２の下方制御は、ＲＮＡサイレンシングによっても達成することができる。本明細書中使用される場合、「ＲＮＡサイレンシング」という語句は、該当するタンパク質コード遺伝子の発現の阻害すなわち「サイレンシング」をもたらすＲＮＡ分子により媒介される一群の調節機構［例えば、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）、転写遺伝子サイレンシング（ＴＧＳ）、転写後遺伝子サイレンシング（ＰＴＧＳ）、クエリング（ｑｕｅｌｌｉｎｇ）、共抑制、及び翻訳抑制］を示す。ＲＮＡサイレンシングは、植物、動物、真菌を含む多くの種類の生命体で観察されてきている。
【０１１０】
本明細書中使用される場合、「ＲＮＡサイレンシング作用剤」という用語は、標的遺伝子の発現を特異的に阻害する、すなわち「サイレンシング」することができるＲＮＡを示す。いくつかの実施形態において、ＲＮＡサイレンシング作用剤は、転写後サイレンシング機構を通じてｍＲＮＡ分子の完全プロセシング（例えば、全翻訳及び／または発現）を防止することができる。ＲＮＡサイレンシング作用剤として、非コードＲＮＡ分子、例えば、対になった鎖を含むＲＮＡ二重鎖、ならびにそのような小さな非コードＲＮＡを生じさせることが可能な前駆ＲＮＡが挙げられる。ＲＮＡサイレンシング作用剤の例として、ｄｓＲＮＡ、例えば、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、及びｓｈＲＮＡが挙げられる。１つの実施形態において、ＲＮＡサイレンシング作用剤は、ＲＮＡ干渉を誘導することができる。別の実施形態において、ＲＮＡサイレンシング作用剤は、翻訳抑制を媒介することができる。
【０１１１】
ＲＮＡ干渉は、動物における、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）が媒介する配列特異的転写後遺伝子サイレンシングのプロセスを示す。植物における、これに該当するプロセスは、一般に、転写後遺伝子サイレンシングまたはＲＮＡサイレンシングと称され、真菌ではクエリングとも称される。転写後遺伝子サイレンシングのプロセスは、外来遺伝子の発現を防止するのに使用される進化的に保存された細胞防御機構であると考えられ、多種多様な植物相及び動物門に一般的に共有される。そのような外来遺伝子発現からの防御は、ウイルス感染に由来する、またはトランスポゾンエレメントの宿主ゲノムへの無作為組み込みに由来する二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）の産生に反応して、相同な一本鎖ＲＮＡまたはウイルスゲノムＲＮＡを特異的に破壊する細胞反応を介して、進化してきた可能性がある。
【０１１２】
本発明のいくつかの実施形態は、ｍＲＮＡからのタンパク質発現を下方制御するためのｄｓＲＮＡの使用を企図する。
【０１１３】
「ｓｉＲＮＡ」という用語は、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）経路を誘導する低分子量抑制性ＲＮＡ二重鎖（一般に１８〜３０塩基対）を示す。典型的には、ｓｉＲＮＡは、中心の１９ｂｐ二重鎖領域及び末端の対称な２塩基３’−オーバーハングを持つ２１量体として化学合成されるが、２５〜３０塩基長の化学合成ＲＮＡ二重鎖が、同一位置で、２１量体に比べて１００倍にも上る高い作用強度を有する可能性があることが最近報告された。ＲＮＡｉを引き起こす上でＲＮＡが長い方が作用強度が上昇したという観察結果は、生成物（２１量体）ではなくて基質（２７量体）とともにダイサーを提供することに由来すると理論付けられ、これによりｓｉＲＮＡ二重鎖をＲＩＳＣに入れる速度または効率が改善されると理論付けられる。
【０１１４】
二本鎖干渉ＲＮＡ（例えば、ｓｉＲＮＡ）の鎖は、接続してヘアピンまたはステムループ構造を形成する場合がある（例えば、ｓｈＲＮＡまたはｓｈ−ＲＮＡ）。すなわち、上記のとおり、本発明のいくつかの実施形態のＲＮＡサイレンシング作用剤は、低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）の場合もある。
【０１１５】
「ｓｈＲＮＡ」または「ｓｈ−ＲＮＡ」という用語は、本明細書中使用される場合、第一及び第二領域の相補配列を含むステムループ構造を有するＲＮＡ作用剤を示し、これらの領域の相補性の度合い及び方向は、これらの領域間の塩基対形成が生じるのに十分であり、第一及び第二領域はループ領域により接続されていて、ループは、ループ領域内のヌクレオチド（またはヌクレオチド類似体）間に塩基対形成がないことに由来する。ループ中のヌクレオチド数は、３〜２３、または５〜１５、または７〜１３、または４〜９、または９〜１１の間の個数であり、上限及び下限の個数を含む。ループ中のヌクレオチドのいくつかは、ループ中の他のヌクレオチドとの塩基対相互作用に関与する可能性がある。
【０１１６】
当然ながら、本発明のいくつかの実施形態のＲＮＡサイレンシング作用剤は、ＲＮＡのみを含有する分子に限定される必要はなく、化学修飾されたヌクレオチド及び非ヌクレオチドをさらに包含する。
【０１１７】
いくつかの実施形態において、本明細書中提供されるＲＮＡサイレンシング作用剤は、細胞透過性ペプチドと機能的に会合することができる。本明細書中使用される場合、「細胞透過性ペプチド」とは、血漿及び／または細胞の核膜を横断する膜透過性複合体の輸送と関連したエネルギー非依存性（すなわち、非エンドサイトーシス）移行性質を与える短い（約１２〜３０残基）アミノ酸配列または機能的モチーフを含むペプチドである。
【０１１８】
別の実施形態に従って、ＲＮＡサイレンシング作用剤は、ｍｉＲＮＡまたはその模倣物の場合がある。
【０１１９】
「マイクロＲＮＡ」、「ｍｉＲＮＡ」、「ｍｉＲ」という用語は、同義語であり、約１９〜２８ヌクレオチド長の非コード一本鎖ＲＮＡ分子の集団を示し、これらは遺伝子発現を調節する。ｍｉＲＮＡは、広範囲の生命体で見つかり、発生、恒常性、及び疾患の原因で役割を果たすことが示されている。
【０１２０】
「マイクロＲＮＡ模倣物」という用語は、ＲＮＡｉ経路に入って遺伝子発現を調節することができる合成非コードＲＮＡを示す。ｍｉＲＮＡ模倣物は、内因性マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）の機能を模倣するものであり、成熟二本鎖分子または模倣前駆体（例えば、またはプレｍｉＲＮＡ）として設計することができる。ｍｉＲＮＡ模倣物は、修飾または非修飾ＲＮＡ、ＤＮＡ、ＲＮＡ−ＤＮＡハイブリッド、または代替核酸化学物質（例えば、ＬＮＡまたは２’−Ｏ、４’−Ｃ−エチレン−架橋核酸（ＥＮＡ））で構成することができる。成熟二本鎖ｍｉＲＮＡ模倣物の場合、二重領域の長さは、１３〜３３、１８〜２４、または２１〜２３ヌクレオチドで変わる可能性がある。ｍｉＲＮＡは、合計で少なくとも５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、または４０ヌクレオチドを含むことも可能である。ｍｉＲＮＡの配列は、プレｍｉＲＮＡの最初の１３〜３３ヌクレオチドであることが可能である。ｍｉＲＮＡの配列は、プレｍｉＲＮＡの最後の１３〜３３ヌクレオチドであることも可能である。
【０１２１】
標的を下方制御することができる別の作用剤は、標的のｍＲＮＡ転写物またはＤＮＡ配列を特異的に切断することができるＤＮＡザイム分子である。ＤＮＡザイムは、一本鎖及び二本鎖標的配列の両方を切断することができる一本鎖ポリヌクレオチドである。（Ｂｒｅａｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １９９５；２：６５５、Ｓａｎｔｏｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １９９７；９４３：４２６２。）ＤＮＡザイムの一般モデル（「１０〜２３」モデル）が提案されてきている。「１０〜２３」ＤＮＡザイムは、１５のデオキシリボヌクレオチドからなる触媒ドメインを有し、このドメインに隣接して、２つのそれぞれ７〜９つのデオキシリボヌクレオチドからなる基質認識ドメインを有する。この種のＤＮＡザイムは、プリン：ピリミジン接続部でその基質ＲＮＡを効果的に切断することができる。（Ｓａｎｔｏｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，；Ｋｈａｃｈｉｇｉａｎ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．２００２；４：１１９−１２１。）
【０１２２】
標的の下方制御は、標的をコードするｍＲＮＡ転写物と特異的にハイブリダイズすることができるアンチセンスポリヌクレオチドを用いることによっても、もたらすことができる。
【０１２３】
標的を下方制御することができる別の作用剤は、標的をコードするｍＲＮＡ転写物を特異的に切断することができるリボザイム分子である。リボザイムは、関心対象のタンパク質をコードするｍＲＮＡを切断することにより遺伝子発現を配列特異的に阻害する目的で使用が増えつつある。（Ｗｅｌｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１９９８；９：４８６−９６。）
【０１２４】
標的を下方制御することができる別の作用剤は、標的に結合及び／または標的を切断する任意の分子である。そのような分子として、標的のアンタゴニストまたは標的の抑制性ペプチドが可能である。
【０１２５】
当然ながら、標的の少なくとも触媒部分または結合部分の非機能的類似体も、標的を下方制御する作用剤として使用することができる。
【０１２６】
標的を下方制御するために本発明のいくつかの実施形態に併せて使用することができる別の作用剤は、標的活性化または基質結合を防止する分子である。
【０１２７】
いくつかの実施形態において、所定のタンパク質標的の阻害剤は、タンパク質に結合することにより、タンパク質に結合する化合物（例えば、基質、調節タンパク質）に結合することにより、及び／またはタンパク質をコードするオリゴヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）に結合することにより、タンパク質を阻害する。
【０１２８】
いくつかの実施形態において、ＭＯＳＰＤ２の阻害剤は、小分子（例えば、８００Ｄａ未満の分子量を特徴とする）である。いくつかの実施形態において、小分子ＭＯＳＰＤ２阻害剤は、トコフェロールまたはその誘導体（例えば、アルファ−トコフェロール、ベータ−トコフェロール、ガンマ−トコフェロール、デルタ−トコフェロール）、トリテルペン（例えば、スクアレン）、ビタミンＡまたはその誘導体（例えば、レチンアルデヒド）、ホスファチジルグリセリド（例えば、ホスファチジルイノシトール）、あるいはリン脂質（例えば、ホスファチジルコリン、酸化リン脂質）である。
【０１２９】
いくつかの実施形態において、小分子ＭＯＳＰＤ２阻害剤は、式Ｉ：
2018528178.tif 000002
による構造を有する酸化リン脂質、またはその薬学上許容される塩、水和物、もしくは溶媒和物であり、
式中、
ｎは、１〜６の整数であり、ｎが１である場合、Ｃｎ、Ｂｎ、Ｒｎ、及びＹは存在せず、かつＣ１は、Ｒ’ｎと結合しており、
Ｂ１、Ｂ２、…Ｂｎ−１、及びＢｎのそれぞれは、独立して、酸素、硫黄、窒素、リン、及びケイ素からなる群より選択され、この窒素、リン、及びケイ素のそれぞれは、アルキル、ハロ、シクロアルキル、アリール、ヒドロキシ、チオヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオアリールオキシ、チオアルコキシ、及びオキソからなる群より選択される１つの置換基で置換されていてもよく、
Ａ１、Ａ２、…Ａｎ−１、及びＡｎのそれぞれは、独立して、ＣＲ’’Ｒ’’’、Ｃ＝Ｏ、及びＣ＝Ｓからなる群より選択され、
Ｙは、水素、アシル、アルキル、アリール、シクロアルキル、カルボキシ、糖、リン酸、ホスホリルコリン、ホスホリルエタノールアミン、ホスホリルセリン、ホスホリルカルジオリピン、ホスホリルイノシトール、エチルホスホコリン、ホスホリルメタノール、ホスホリルエタノール、ホスホリルプロパノール、ホスホリルブタノール、ホスホリルエタノールアミン−Ｎ−ラクトース、ホスホエタノールアミン−Ｎ−グルタル酸、ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（プロピレングリコール）］、ホスホイノシトール−４−ホスファート、ホスホイノシトール−４，５−ビホスホナート、ホスホイノシトール−４，５−ビスホスファート、ピロホスファート、ホスホエタノールアミン−ジエチレントリアミン−ペンタアセタート、ジニトロフェニル−ホスホエタノールアミン、ホスホグリセロール、及び一般式：
2018528178.tif 000003
を有する部分からなる群より選択され、
式中、
Ｂ’及びＢ’’のそれぞれは、独立して、硫黄及び酸素からなる群より選択され、かつ
Ｄ’及びＤ’’のそれぞれは、独立して、水素、アルキル、アミノ置換アルキル、シクロアルキル、ホスホナート、及びチオホスホナートからなる群より選択され、かつ
Ｘ１、Ｘ２、…Ｘｎ−１のそれぞれは、独立して、一般式ＩＩ：
2018528178.tif 000004
を有する飽和または不飽和の炭化水素であり、
式中、ｍは、１〜２６の整数であり、かつ
Ｚは、
2018528178.tif 000005
からなる群より選択され、
式中、Ｗは、酸素及び硫黄からなる群より選択され、
Ｘ１、Ｘ２、…Ｘｎ−１のうち少なくとも１つは、水素以外のＺを含み、
かつ、
Ｒ１、Ｒ’１、Ｒ２、…Ｒｎ−１、Ｒｎ、Ｒ’ｎのそれぞれ、Ｒ’’及びＲ’’’のそれぞれ、ならびにＲａ、Ｒ’ａ、Ｒｂ、Ｒ’ｂ、…Ｒｍ−１、Ｒ’ｍ−１、Ｒｍ、及びＲ’ｍのそれぞれは、独立して、結合、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ハロ、トリハロメチル、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、ホスホナート、ホスファート、ホスフィニル、スルホニル、スルフィニル、スルホンアミド、アミド、カルボニル、チオカルボニル、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、Ｃ−カルバマート、Ｎ−カルバマート、Ｃ−チオカルボキシ、Ｓ−チオカルボキシ、及びアミノからなる群より選択されるか、あるいは、Ｒ１、Ｒ’１、Ｒ２、…Ｒｎ−１、Ｒｎ、及びＲ’ｎの少なくとも２つ、及び／またはＲａ、Ｒ’ａ、Ｒｂ、Ｒ’ｂ、…Ｒｍ−１、Ｒ’ｍ−１、Ｒｍ、及びＲ’ｍの少なくとも２つは、少なくとも１つの四員、五員、または六員の芳香族環、ヘテロ芳香族環、脂肪族環、またはヘテロ脂環式環を形成し、あるいはその薬学上許容される塩、水和物、または溶媒和物を形成する。本明細書中記載される実施形態のいずれかにおいても、酸化リン脂質は、任意の比の立体異性体混合物として存在することが可能であり、例えば、ＲもしくはＳ異性体など１種の鏡像異性体が実質的に濃縮されたもの（例えば、鏡像異性体過剰率が少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくはそれ以上である）として、または２種の鏡像異性体の混合物（例えば、ラセミ混合物）として、及び／または１種のジアステレオマーが実質的に濃縮されたもの（例えば、ジアステレオマー過剰率が少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくはそれ以上である）として、または２種以上のジアステレオマーの混合物として存在することが可能である。
【０１３０】
１つの実施形態において、本開示の方法のいずれかにおいて有用な酸化リン脂質は、式ＩＩＩ：
2018528178.tif 000006
による構造を有するか、またはその薬学上許容される塩、水和物、もしくは溶媒和物を有する。
【０１３１】
式ＩＩＩ中、ｎは、１〜４から選択される整数である。
【０１３２】
式ＩＩＩ中、Ｂ１、各Ｂ２、及びＢ３は、独立して、酸素、硫黄、及びＮＲ４からなる群より選択され、式中、Ｒ４は、水素、アルキル、シクロアルキル、アリール、及びアシルから選択される。
【０１３３】
式ＩＩＩ中、Ａ１及び各Ａ２は、独立して、ＣＲｅＲｅｅ、ＣＲｅ＝ＣＲｅｅ、Ｃ＝Ｏ、及びＣ＝Ｓからなる群より選択され、式中、Ｒｅ及びＲｅｅは、独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、及びヘテロアリールから選択される。
【０１３４】
式ＩＩＩ中、Ｙは、水素、アシル、アルキル、アリール、シクロアルキル、カルボキシ、糖、リン酸、ホスホリルコリン、ホスホリルエタノールアミン、ホスホリルセリン、ホスホリルカルジオリピン、ホスホリルイノシトール、エチルホスホコリン、ホスホリルメタノール、ホスホリルエタノール、ホスホリルプロパノール、ホスホリルブタノール、ホスホリルエタノールアミン−Ｎ−ラクトース、ホスホエタノールアミン−Ｎ−グルタル酸、ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（プロピレングリコール）］、ホスホイノシトール−４−ホスファート、ホスホイノシトール−４，５−ビスホスファート、ピロホスファート、ホスホエタノールアミン−ジエチレントリアミン−ペンタアセタート、ジニトロフェニル−ホスホエタノールアミン、ホスホグリセロール、及び以下の一般式：
2018528178.tif 000007
を有する部分からなる群より選択され、
式中、
Ｂ及びＢａのそれぞれは、独立して、硫黄及び酸素からなる群より選択され、かつ
Ｄ及びＤａは、独立して、水素、アルキル、アミノアルキル、シクロアルキル、ホスホナート、及びチオホスホナートからなる群より選択される。
【０１３５】
式ＩＩＩ中、Ｘ１及び各Ｘ２は、独立して、飽和または不飽和の直鎖または分岐炭化水素であり、Ｘ１及びＸ２のうち少なくとも１つは、
2018528178.tif 000008
からなる群より選択される酸化部分Ｚで置換され、式中、Ｗは、酸素または硫黄であり、かつＲｄ及びＲｄｄは、独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、及びヘテロアリールから選択される。
【０１３６】
式ＩＩＩの１つの実施形態において、Ｘ１及び各Ｘ２は、独立して、一般式ＩＶ：
2018528178.tif 000009
を有する。
【０１３７】
式ＩＶ中、ｍは、１〜２６から選択される整数である。
【０１３８】
式ＩＶ中、Ｚは、
2018528178.tif 000010
からなる群より選択され、式中、Ｗは、酸素または硫黄であり、かつＲｄ及びＲｄｄは、独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、及びヘテロアリールから選択され、
Ｘ１及びＸ２のうち少なくとも１つは、水素以外のＺを含む。
【０１３９】
式ＩＩＩ及び式ＩＶ中、Ｒ１、Ｒ１ａ、各Ｒ２、Ｒ３、Ｒ３ａ、Ｒａ、Ｒａａ、各Ｒｂ、各Ｒｂｂ、Ｒｃ、及びＲｃｃは、独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ハロ、トリハロメチル、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、ホスホナート、ホスファート、ホスフィニル、スルホニル、スルフィニル、スルホンアミド、アミド、カルボニル、チオカルボニル、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、Ｃ−カルバマート、Ｎ−カルバマート、Ｃ−チオカルボキシ、Ｓ−チオカルボキシ、及びアミノからなる群より選択され、Ｒ１、Ｒ１ａ、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ３ａのうち少なくとも２つは、結合して四員、五員、または六員の芳香族環、ヘテロ芳香族環、脂環式環、またはヘテロ脂環式環を形成してもよく、かつＲａ、Ｒａａ、Ｒｂ、Ｒｂｂ、Ｒｃ、及びＲｃｃのうち少なくとも２つは、結合して四員、五員、または六員の芳香族環、ヘテロ芳香族環、脂環式環、またはヘテロ脂環式環を形成してもよい。
【０１４０】
式ＩＩＩの１つの実施形態において、ｎは、１または２である。式ＩＩＩの別の実施形態において、ｎは１である。
【０１４１】
式ＩＩＩの１つの実施形態において、Ｙは、水素、アシル、アルキル、アリール、シクロアルキル、カルボキシ、糖、リン酸、ホスホリルコリン、ホスホリルエタノールアミン、ホスホリルセリン、ホスホリルカルジオリピン、ホスホリルイノシトール、エチルホスホコリン、ホスホリルメタノール、ホスホリルエタノール、ホスホリルプロパノール、ホスホリルブタノール、ホスホリルエタノールアミン−Ｎ−ラクトース、ホスホエタノールアミン−Ｎ−グルタル酸、ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（プロピレングリコール）］、ホスホイノシトール−４−ホスファート、ホスホイノシトール−４，５−ビスホスファート、ピロホスファート、ホスホエタノールアミン−ジエチレントリアミン−ペンタアセタート、ジニトロフェニル−ホスホエタノールアミン、及びホスホグリセロールからなる群より選択される。
【０１４２】
式ＩＩＩの別の実施形態において、Ｙは、水素、ホスホリルコリン、及びホスホリルエタノールアミンからなる群より選択される。
【０１４３】
式ＩＩＩの別の実施形態において、Ｙは、ホスホリルコリン、及びホスホリルエタノールアミンからなる群より選択される。
【０１４４】
式ＩＩＩの１つの実施形態において、Ｙは、ホスホリルコリンである。
【０１４５】
式ＩＩＩの１つの実施形態において、Ｚは、
2018528178.tif 000011
である。式ＩＩＩの別の実施形態において、Ｚは、カルボン酸基である。
【０１４６】
式ＩＩＩのさらなる実施形態において、ｎは１であり、かつＹはホスホリルコリンである。
【０１４７】
式ＩＩＩのさらなる実施形態において、Ｂ１、Ｂ２、及びＢ３のそれぞれは、酸素である。
【０１４８】
式ＩＩＩのさらなる実施形態において、ｎは１であり、Ｙはホスホリルコリンであり、かつＢ１、Ｂ２、及びＢ３のそれぞれは、酸素である。
【０１４９】
１つの実施形態において、本開示の方法のいずれかにおいて有用な酸化リン脂質は、式ＩＩＩａ：
2018528178.tif 000012
による構造を有するか、またはその薬学上許容される塩、水和物、もしくは溶媒和物を有する。
【０１５０】
式ＩＩＩａ中、Ｂ１、Ｂ２、及びＢ３は、独立して、酸素及び硫黄から選択される。
【０１５１】
式ＩＩＩａ中、Ａ１及びＡ２は、独立して、ＣＨ２、ＣＨ＝ＣＨ、Ｃ＝Ｏ、及びＣ＝Ｓからなる群より選択される。
【０１５２】
式ＩＩＩａ中、Ｙは、水素、アシル、アルキル、アリール、シクロアルキル、カルボキシ、糖、リン酸、ホスホリルコリン、ホスホリルエタノールアミン、ホスホリルセリン、ホスホリルカルジオリピン、ホスホリルイノシトール、エチルホスホコリン、ホスホリルメタノール、ホスホリルエタノール、ホスホリルプロパノール、ホスホリルブタノール、ホスホリルエタノールアミン−Ｎ−ラクトース、ホスホエタノールアミン−Ｎ−グルタル酸、ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（プロピレングリコール）］、ホスホイノシトール−４−ホスファート、ホスホイノシトール−４，５−ビスホスファート、ピロホスファート、ホスホエタノールアミン−ジエチレントリアミン−ペンタアセタート、ジニトロフェニル−ホスホエタノールアミン、及びホスホグリセロールからなる群より選択される。
【０１５３】
式ＩＩＩａ中、Ｒ１、Ｒ１ａ、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ３ａは、独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ハロ、トリハロメチル、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、ホスホナート、ホスファート、ホスフィニル、スルホニル、スルフィニル、スルホンアミド、アミド、カルボニル、チオカルボニル、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、Ｃ−カルバマート、Ｎ−カルバマート、Ｃ−チオカルボキシ、Ｓ−チオカルボキシ、及びアミノからなる群より選択され、Ｒ１、Ｒ１ａ、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ３ａのうち少なくとも２つは、結合して四員、五員、または六員の芳香族環、ヘテロ芳香族環、脂環式環、またはヘテロ脂環式環を形成してもよく、かつＲａ、Ｒａａ、Ｒｂ、Ｒｂｂ、Ｒｃ、及びＲｃｃのうち少なくとも２つは、結合して四員、五員、または六員の芳香族環、ヘテロ芳香族環、脂環式環、またはヘテロ脂環式環を形成してもよい。
【０１５４】
式ＩＩＩａ中、Ｘ１及びＸ２は、独立して、飽和または不飽和の直鎖または分岐炭化水素であり、Ｘ１及びＸ２のうち少なくとも１つは、
2018528178.tif 000013
から選択される式を有する酸化部分Ｚで置換され、式中、Ｗは、酸素または硫黄であり、かつＲｄ及びＲｄｄは、独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、及びヘテロアリールから選択される。
【０１５５】
式ＩＩＩａの１つの実施形態において、Ｘ１及びＸ２は、独立して、式ＩＶａ：
2018528178.tif 000014
による構造を有する。
【０１５６】
式ＩＶａ中、ｍは、１〜２６から選択される整数である。
【０１５７】
式ＩＶａ中、Ｒａ、Ｒａａ、各Ｒｂ、各Ｒｂｂ、Ｒｃ、及びＲｃｃは、独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ハロ、トリハロメチル、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、ホスホナート、ホスファート、ホスフィニル、スルホニル、スルフィニル、スルホンアミド、アミド、カルボニル、チオカルボニル、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、Ｃ−カルバマート、Ｎ−カルバマート、Ｃ−チオカルボキシ、Ｓ−チオカルボキシ、及びアミノからなる群より選択され、Ｒａ、Ｒａａ、Ｒｂ、Ｒｂｂ、Ｒｃ、及びＲｃｃのうち少なくとも２つは、結合して四員、五員、または六員の芳香族環、ヘテロ芳香族環、脂環式環、またはヘテロ脂環式環を形成してもよい。
【０１５８】
式ＩＶａ中、Ｚは、
2018528178.tif 000015
からなる群より選択され、式中、Ｗは、酸素または硫黄であり、かつＲｄ及びＲｄｄは、独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、及びヘテロアリールから選択され、Ｘ１及びＸ２のうち少なくとも１つは、水素以外のＺを含む。
【０１５９】
式ＩＩＩａの１つの実施形態において、Ｚは、
2018528178.tif 000016
である。式ＩＩＩａの別の実施形態において、Ｚは、カルボン酸基である。
【０１６０】
式ＩＩＩａの１つの実施形態において、Ｙは、水素、アシル、アルキル、アリール、シクロアルキル、カルボキシ、糖、リン酸、ホスホリルコリン、ホスホリルエタノールアミン、ホスホリルセリン、ホスホリルカルジオリピン、ホスホリルイノシトール、エチルホスホコリン、ホスホリルメタノール、ホスホリルエタノール、ホスホリルプロパノール、ホスホリルブタノール、ホスホリルエタノールアミン−Ｎ−ラクトース、ホスホエタノールアミン−Ｎ−グルタル酸、ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（プロピレングリコール）］、ホスホイノシトール−４−ホスファート、ホスホイノシトール−４，５−ビスホスファート、ホスホエタノールアミン−ジエチレントリアミン−ペンタアセタート、ジニトロフェニル−ホスホエタノールアミン、及びホスホグリセロールからなる群より選択される。
【０１６１】
式ＩＩＩａの１つの実施形態において、Ｙは、水素、ホスホリルコリン、及びホスホリルエタノールアミンからなる群より選択される。
【０１６２】
式ＩＩＩａの別の実施形態において、Ｙは、ホスホリルコリン、及びホスホリルエタノールアミンからなる群より選択される。
【０１６３】
式ＩＩＩａの１つの実施形態において、Ｙは、ホスホリルコリンである。
【０１６４】
式ＩＩＩａのさらなる実施形態において、Ｂ１、Ｂ２、及びＢ３のそれぞれは、酸素である。
【０１６５】
式ＩＩＩａのさらなる実施形態において、Ｙは、ホスホリルコリンであり、Ｂ１、Ｂ２、及びＢ３のそれぞれは、酸素である。
【０１６６】
式ＩＩＩａの１つの実施形態において、酸化リン脂質は、式Ｖ：
2018528178.tif 000017
による構造を有し、式中、Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３、Ａ１、Ａ２、Ｘ１、Ｘ２、及びＹは、式ＩＩＩａについて定義したとおりである。
【０１６７】
１つの実施形態において、式ＶのＢ１、Ｂ２、Ｂ３のそれぞれは、酸素であり、かつ酸化リン脂質は、式ＶＩ：
2018528178.tif 000018
による構造を有する。
【０１６８】
式ＶＩ中、Ａ１は、ＣＨ２、ＣＨ＝ＣＨ、及びＣ＝Ｏからなる群より選択される。１つの例において、式ＶＩのＡ１は、ＣＨ２である。
【０１６９】
式ＶＩ中、Ａ２は、存在しないか、またはＣＨ２である。
【０１７０】
式ＶＩ中、Ｘ１は、炭素原子を１〜３０個有するアルキルである。
【０１７１】
式ＶＩ中、Ｘ２は、
2018528178.tif 000019
であり、
式中、
Ｅは、存在しないか、または炭素原子を１〜２４個有するアルキル鎖であり、
Ｆは、水素、ヒドロキシ、アルキル、アルコキシ、ハライド、アセトキシ、及びアリールからなる群より選択され、かつ
Ｚは、
2018528178.tif 000020
からなる群より選択され、式中、Ｒｄは、Ｈ、アルキル、及びアリールから選択される。
【０１７２】
式ＶＩ中、Ｙは、水素、アルキル、アリール、リン酸、ホスホリルコリン、ホスホリルエタノールアミン、ホスホリルセリン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルカルジオリピン、ホスファチジルイノシトール、ホスホリルカルジオリピン、ホスホリルイノシトール、エチルホスホコリン、ホスホリルメタノール、ホスホリルエタノール、ホスホリルプロパノール、ホスホリルブタノール、ホスホリルエタノールアミン−Ｎ−ラクトース、ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（プロピレングリコール）］、ホスホイノシトール−４−ホスファート、ホスホイノシトール−４，５−ビスホスファート、ピロホスファート、ホスホエタノールアミン−ジエチレントリアミン−ペンタアセタート、ジニトロフェニル−ホスホエタノールアミン、ホスホグリセロールからなる群より選択される。
【０１７３】
式ＶＩの１つの実施形態において、Ｘ１は、炭素原子を１０〜３０個有する、または炭素原子を８〜３０個有するアルキルである。
【０１７４】
式ＶＩの１つの実施形態において、Ｅは、炭素原子を１〜１０個有する、または炭素原子を１〜４個有するアルキルである。
【０１７５】
式ＶＩの１つの実施形態において、Ｙは、ホスホリルコリンである。
【０１７６】
式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＩＩａ、Ｖ、及びＶＩの各炭素原子は、キラルまたは非キラル炭素原子であり、各キラル炭素原子は、Ｓ配置を有することもＲ配置を有することも可能である。
【０１７７】
１つの好適な実施形態において、酸化リン脂質は、１−ヘキサデシル−２−（４’−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリンである。別の好適な実施形態において、酸化リン脂質は、（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（４’−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンである。
【０１７８】
１つの好適な実施形態において、酸化リン脂質は、
2018528178.tif 000021
またはその薬学上許容される塩である。
【０１７９】
１つの好適な実施形態において、酸化リン脂質は、
2018528178.tif 000022
またはその薬学上許容される塩である。
【０１８０】
本明細書中記載される小分子ＭＯＳＰＤ２阻害剤は、本明細書中記載される方法のいずれにおいても、単一作用剤として、単独で使用することもできるし、別の作用剤（例えば、別のＭＯＳＰＤ２阻害剤）と併用して使用することもできる。本明細書中記載される実施形態のいずれかにおいて、有用な小分子ＭＯＳＰＤ２阻害剤として、ＶＢ−２２１と比較した場合にＭＯＳＰＤ２（例えば、単球の細胞表面のヒトＭＯＳＰＤ２）のより強力な阻害剤であるもの、例えば、ＶＢ−２２１のＩＣ５０値よりも低いＩＣ５０値を有するものが挙げられる。より好ましくは、有用な小分子ＭＯＳＰＤ２阻害剤として、ＶＢ−２０１と比較した場合にＭＯＳＰＤ２（例えば、単球の細胞表面のヒトＭＯＳＰＤ２）と同等またはそれより強力な阻害剤であるもの、例えば、ＶＢ−２０１よりも低いＩＣ５０値を有するものが挙げられる。当業者には当然のことながら、ＩＣ５０値は、所定の生体プロセス（またはプロセスの要素、すなわち、酵素、細胞、細胞受容体、または微生物）を半分阻害するために特定の薬物または他の物質（阻害剤）がどのくらい必要かを示す。ＩＣ５０値を決定する方法は、当該分野で既知である。
【０１８１】
小分子ＭＯＳＰＤ２阻害剤（本明細書中記載されるとおり）が医薬組成物に含まれて、単一作用剤として単独で、または他の作用剤と併用で、対象に投与される場合、小分子ＭＯＳＰＤ２阻害剤（例えば、ＶＢ−２０１）は、その投与がＭＯＳＰＤ２（例えば、ヒトＭＯＳＰＤ２）の１種または複数種の活性（例えば、ＭＯＳＰＤ２発現、炎症細胞遊走（例えば、白血球または単球の遊走）、化学走性（例えば、白血球または単球の化学走性）、ケモカインシグナル伝達経路、ＥＧＦ受容体リン酸化、ＥＲＫリン酸化、ＡＫＴリン酸化）の少なくとも１０％（例えば、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、またはそれ以上）の阻害を引き起こす量で存在する。いくつかの実施形態において、小分子ＭＯＳＰＤ２阻害剤のヒト対象への投与は、ヒトＭＯＳＰＤ２の１種または複数種の活性の少なくとも１０％（例えば、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、またはそれ以上）の阻害を引き起こす。１つの態様において、小分子ＭＯＳＰＤ２阻害剤の投与は、ＭＯＳＰＤ２の１種または複数種の活性、例えば、炎症細胞遊走の調節、ケモカインシグナル伝達経路、成長因子シグナル伝達経路、ＥＧＦ受容体リン酸化、ＥＲＫリン酸化、ＡＫＴリン酸化、及び／またはＦＡＫリン酸化の、約１０％〜１００％、約１０％〜約９９％、約１０％〜約９５％、約１０％〜約９０％、約１０％〜約８５％、約１０％〜約８０％、約１０％〜約７０％、約２０％〜約９９％、約２０％〜約９５％、約２０％〜約９０％、約２０％〜約８５％、約２０％〜約８０％、約３０％〜約９５％、約３０％〜約９０％、約３０％〜約８５％、約３０％〜約８０％、約４０％〜約９５％、約４０％〜約９０％、約４０％〜約８５％、約４０％〜約８０％、約５０％〜約９５％、約５０％〜約９０％、約５０％〜約８５％、約５０％〜約８０％、約６０％〜約９５％、約６０％〜約９０％、約６０％〜約８５％、または約６０％〜約８０％の阻害を引き起こす。好ましくは、小分子ＭＯＳＰＤ２阻害剤は、ＶＢ−２０１である。
【０１８２】
いくつかの実施形態において、所定のタンパク質の阻害剤は、そのタンパク質に、及び／またはそのタンパク質をコードするオリゴヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）に結合することにより、そのタンパク質を阻害する。
【０１８３】
他の実施形態において、ＭＯＳＰＤ２阻害剤は、（ｉ）ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドに特異的に結合する単離結合分子であるか、（ｉｉ）ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドのリガンドに特異的に結合する単離結合分子であるか、（ｉｉｉ）ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドに対して産生された抗血清であるか、（ｉｖ）可溶性ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドであるか、または（ｖ）ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドの細胞外ドメインを含む、本質的にそれからなる、もしくはそれからなる可溶性ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドである。
【０１８４】
さらに他の実施形態において、阻害剤は、ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドに特異的に結合する抗体である。他の実施形態において、阻害剤は、ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドに特異的に結合する抗体の抗原結合断片である。他の実施形態において、抗体は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、マウス抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、または一本鎖抗体である。他の実施形態において、抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｓｄＦｖ断片、ＶＨドメイン、またはＶＬドメインである。
【０１８５】
いくつかの実施形態において、阻害剤は、ＭＯＳＰＤ２（例えば、ヒトＭＯＳＰＤ２）に特異的に結合する本明細書中記載される抗体またはその抗原結合断片であり、ＶＨ、ＶＬ、またはＶＨ及びＶＬを含む。他の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、定常領域を含む。
【０１８６】
いくつかの実施形態において、ＶＨ、ＶＬ、またはＶＨ及びＶＬは、１つまたは複数の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨは、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの実施形態において、ＶＬは、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３、またはそれらの任意の組み合わせを含む。
【０１８７】
いくつかの実施形態において、ＶＨ、ＶＬ、またはＶＨ及びＶＬは、１つまたは複数のフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨは、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、ＦＲ４、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの実施形態において、ＶＬは、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、ＦＲ４、またはそれらの任意の組み合わせを含む。
【０１８８】
特定の実施形態において、ＭＯＳＰＤ２（例えば、ヒトＭＯＳＰＤ２）に特異的に結合する本明細書中記載される抗体またはその抗原結合断片は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＨ、ならびにＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１８９】
他の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、定常領域を含む。いくつかの実施形態において、軽鎖の定常領域は、ヒトカッパ軽鎖定常領域またはヒトラムダ軽鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、重鎖の定常領域は、ヒトガンマ重鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。ヒト定常領域配列の非限定的な例が報告されてきており、例えば、米国特許第５，６９３，７８０号、及びＫａｂａｔ，ＥＡ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）を参照。いくつかの実施形態において、定常領域アミノ酸配列は、天然ヒト配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％配列同一性があるように修飾されている（例えば、１つ、２つ、またはそれより多いアミノ酸置換）。別の態様において、本明細書中提供されるのは、ＭＯＳＰＤ２のエピトープ（例えば、ヒトＭＯＳＰＤ２のエピトープ）を認識するまたはこれに結合する抗体またはその抗原結合断片である。別の態様において、本明細書中提供されるのは、本明細書中記載される抗体（例えば、実施例１または８に記載される抗体）と同一のＭＯＳＰＤ２（例えば、ヒトＭＯＳＰＤ２）のエピトープまたは重複するエピトープを認識するまたはこれに結合する抗体またはその抗原結合断片である。別の態様において、抗体またはその抗原結合断片は、ＭＯＳＰＤ２のエピトープを複数種（例えば、２種、３種、４種、５種、または６種のエピトープ）認識する。
【０１９０】
ある特定の実施形態において、ＭＯＳＰＤ２のエピトープは、文献に記載される１つまたは複数の方法、例えば、ＮＭＲ分光測定、Ｘ線回折結晶構造解析、ＥＬＩＳＡアッセイ、質量分析（例えば、ＭＡＬＤＩ質量分析）と合わせた水素／重水素交換、アレイに基づくオリゴペプチドスキャニングアッセイ、及び／または変異誘発マッピング（例えば、部位指向性変異誘発マッピング）などにより決定することができる。Ｘ線結晶構造解析の場合、結晶化は、文献に記載される方法を用いて達成することができる（例えば、Ｇｉｅｇｅ  Ｒ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  Ｄ  Ｂｉｏｌ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  ５０（Ｐｔ４）：３３９−３５０、ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ  Ａ（１９９０）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  １８９：１−２３、Ｃｈａｙｅｎ  ＮＥ（１９９７）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ５：１２６９−１２７４、ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ  Ａ（１９７６）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２５１：６３００−６３０３）。抗体：抗原結晶は、周知のＸ線回折技法を用いて調べることができ、Ｘ−ＰＬＯＲ（Ｙａｌｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，１９９２、頒布はＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎｓ、Ｉｎｃ．による、例えば、Ｍｅｔｈ  Ｅｎｚｙｍｏｌ（１９８５）ｖｏｌｕｍｅｓ  １１４  ＆  １１５，ｅｄｓ  Ｗｙｃｋｏｆｆ  ＨＷ  ｅｔ  ａｌ．、米国特許出願第２００４／００１４１９４号）、及びＢＵＳＴＥＲ（Ｂｒｉｃｏｇｎｅ  Ｇ（１９９３）Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  Ｄ  Ｂｉｏｌ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  ４９（Ｐｔ  １）：３７−６０、Ｂｒｉｃｏｇｎｅ  Ｇ（１９９７）Ｍｅｔｈ  Ｅｎｚｙｍｏｌ  ２７６Ａ：３６１−４２３，ｅｄ  Ｃａｒｔｅｒ  ＣＷ，Ｒｏｖｅｒｓｉ  Ｐ  ｅｔ  ａｌ．，（２０００）Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  Ｄ  Ｂｉｏｌ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  ５６（Ｐｔ１０）：１３１６−１３２３を参照）などのコンピューターソフトウェアを用いて精緻化することができる。変異誘発マッピング試験は、文献に記載される方法を用いて達成することができる。例えば、Ｃｈａｍｐｅ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９５）上記、及びアラニンスキャニング変異誘発技法を含む変異誘発技法の説明についてＣｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ＢＣ  ＆  Ｗｅｌｌｓ  ＪＡ（１９８９）上記、を参照。特定の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片のエピトープは、アラニンスキャニング変異誘発試験を用いて決定される。抗体のエピトープ特性決定は、Ｒａｖｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２８８：１９７６０−１９７７２（２０１３）に提示される方法によっても決定することができる。
【０１９１】
また、ＭＯＳＰＤ２（例えば、ヒトＭＯＳＰＤ２）の同一のまたは重複するエピトープを認識するまたはそれに結合する抗体またはそれらの抗原結合断片は、免疫アッセイなどの定法技法を用いて、例えば、１つの抗体が持つ、別の抗体と標的抗原との結合を遮断する能力の表示、すなわち、競合結合アッセイにより、同定することができる。競合結合は、試験対象の免疫グロブリンが参照抗体と共通抗原との、例えばＭＯＳＰＤ２などとの特異的結合を阻害するアッセイにおいて、決定することができる。複数種類の競合結合アッセイが、記載されてきており、例えば、固相直接または間接放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）、固相直接または間接酵素免疫測定（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合アッセイ（Ｓｔａｈｌｉ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８３）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ  ９：２４２−２５３を参照）、固相直接ビオチンアビジンＥＩＡ（Ｋｉｒｋｌａｎｄ  ＴＮ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８６）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １３７：３６１４−９を参照）、固相直接標識化アッセイ、固相直接標識化サンドイッチアッセイ（Ｈａｒｌｏｗ  Ｅ  ＆  Ｌａｎｅ  Ｄ，（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓを参照）、Ｉ−１２５標識を用いる固相直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｒｅｌ  ＧＡ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２５（１）：７−１５を参照）、固相直接ビオチンアビジンＥＩＡ（Ｃｈｅｕｎｇ  ＲＣ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９０）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  １７６：５４６−５２）、及び直接標識化ＲＩＡ（Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒ  Ｇ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９０）Ｓｃａｎｄ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３２：７７−８２）がある。典型的には、そのようなアッセイは、固体表面または細胞に結合して保持されている精製抗原（例えば、ヒトＭＯＳＰＤ２などのＭＯＳＰＤ２）、未標識の試験免疫グロブリン、及び標識化参照免疫グロブリンの使用を含む。競合阻害は、試験免疫グロブリンの存在下で、固体表面または細胞と結合した標識の量を決定することにより、測定することができる。通常、試験免疫グロブリンは過剰に存在する。通常、競合抗体が過剰に存在する場合、競合抗体は、参照抗体と共通抗原との特異的結合を、少なくとも５０〜５５％、５５〜６０％、６０〜６５％、６５〜７０％、７０〜７５％、またはそれ以上阻害する。競合結合アッセイは、標識化抗原または標識化抗体いずれかを用いる多数の異なる様式で構成することができる。このアッセイの一般的形式では、抗原は９６ウェルプレートに固定される。次いで、未標識抗体が持つ標識化抗体と抗原の結合を遮断する能力を、放射性標識または酵素標識を用いて測定する。さらなる詳細について、例えば、Ｗａｇｅｎｅｒ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８３）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １３０：２３０８−２３１５、Ｗａｇｅｎｅｒ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８４）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ６８：２６９−２７４、Ｋｕｒｏｋｉ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９０）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ５０：４８７２−４８７９、Ｋｕｒｏｋｉ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９２）Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｎｖｅｓｔ  ２１：５２３−５３８、Ｋｕｒｏｋｉ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（１���９２）Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  １１：３９１−４０７及びＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｅｄ  Ｈａｒｌｏｗ  Ｅ  ＆  Ｌａｎｅ  Ｄ  ｅｄｉｔｏｒｓ上記、ｐｐ．３８６−３８９を参照。
【０１９２】
１つの実施形態において、表面プラズモン共鳴（ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標））を用いて、例えば、Ａｂｄｉｃｈｅ  ＹＮ  ｅｔ  ａｌ．，（２００９）Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ３８６：１７２−１８０に記載されるものなどの「タンデムアプローチ」により競合アッセイを行うが、これによれば、ＭＯＳＰＤ２抗原をチップ、例えば、ＣＭ５センサーチップなどの表面に固定し、次いで抗ＭＯＳＰＤ２抗体を、チップ全体に行き渡らせる。抗体またはその抗原結合断片が、本明細書中記載される抗ＭＯＳＰＤ２抗体またはその抗原結合断片と競合するかどうかを決定するため、抗ＭＯＳＰＤ２抗体またはその抗原結合断片を最初にチップ表面全体に行き渡らせて飽和させ、次いで、競合する可能性がある抗体を加える。次いで、競合抗体の結合を、非競合対照との比較で決定し定量することができる。
【０１９３】
ある特定の態様において、競合ＥＬＩＳＡアッセイなどの競合結合アッセイにおいて２種の抗体が、同一のまたは立体的に重複するエピトープを認識する場合、競合結合アッセイを用いて、抗体またはその抗原結合断片が、参照抗体としての別の抗体、例えば、本質的に同一のエピトープまたは重複するエピトープと結合する抗体により、例えば用量依存式に、競合的に遮断されるかどうか決定することができ、アッセイは、標識化抗原または標識化抗体いずれかを用いて、あらゆる異なる様式で構成することができる。特定の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、本明細書中記載される抗体（例えば、実施例のもの）、またはそのキメラもしくはＦａｂ抗体、または本明細書中記載される抗体（例えば、実施例のもの）のＶＨ  ＣＤＲ及びＶＬ  ＣＤＲを含む抗体を用いる競合結合アッセイで試験することができる。
【０１９４】
したがって、ある特定の態様において、本明細書中提供されるのは、当業者に既知のまたは本明細書中記載されるアッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡ競合アッセイ、表面プラズモン共鳴、またはＳｃａｔｃｈａｒｄ分析）を用いて決定されるとおりの、ＭＯＳＰＤ２（例えば、ヒトＭＯＳＰＤ２）への結合に関して本明細書中記載される抗体（例えば、実施例のもの）と競合する（例えば、用量依存式で）抗体またはその抗原結合断片である。
【０１９５】
いくつかの実施形態において、本発明の抗ＭＯＳＰＤ２抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１（アミノ酸残基１〜５１８）に従って付番された、ＭＯＳＰＤ２の以下のアミノ酸領域（エピトープ）の１つまたは複数に特異的に結合する：５０８〜５１７、５０１〜５１４、２３３〜２４１、５０９〜５１７、２１２〜２２１、１３〜２４、５０５〜５１７、５０５〜５１４、８９〜１００、５０６〜５１７、２３３〜２４５、５０４〜５１４、１２８〜１３６、２１８〜２２６、１５〜２４、８３〜９６、４２〜５０、４６２〜４７４、３４０〜３５１、５０４〜５１７、４６２〜４７０、３２７〜３３７、２１〜３２、２１７〜２２６、５１０〜５１７、１７８〜１９０、４９７〜５０９、５０４〜５１６、６４〜７７、５０４〜５１５、１４７〜１５９、５０３〜３１５、８８〜９７、２０８〜２１８、１７８〜１９１、５０２〜５１５、５０３〜５１６、４９７〜５０５、５００〜５０９、１８９〜２０２、１８９〜１９７、５０５〜５１６、１〜６３、８２〜２３９、９３〜２３４、３２７〜４４５、３２７〜４３１、及び４９７〜５１７。
【０１９６】
いくつかの実施形態において、本発明の抗ＭＯＳＰＤ２抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１（アミノ酸残基１〜５１８）に従って付番された、ＭＯＳＰＤ２の以下のアミノ酸領域（エピトープ）の１つまたは複数に特異的に結合する：約５０８〜約５１７、約５０１〜約５１４、約２３３〜約２４１、約５０９〜約５１７、約２１２〜約２２１、約１３〜約２４、約５０５〜約５１７、約５０５〜約５１４、約８９〜約１００、約５０６〜約５１７、約２３３〜約２４５、約５０４〜約５１４、約１２８〜約１３６、約２１８〜約２２６、約１５〜約２４、約８３〜約９６、約４２〜約５０、約４６２〜約４７４、約３４０〜約３５１、約５０４〜約５１７、約４６２〜約４７０、約３２７〜約３３７、約２１〜約３２、約２１７〜約２２６、約５１０〜約５１７、約１７８〜約１９０、約４９７〜約５０９、約５０４〜約５１６、約６４〜約７７、約５０４〜約５１５、約１４７〜約１５９、約５０３〜約５１５、約８８〜約９７、約２０８〜約２１８、約１７８〜約１９１、約５０２〜約５１５、約５０３〜約５１６、約４９７〜約５０５、約５００〜約５０９、約１８９〜約２０２、約１８９〜約１９７、約５０５〜約５１６、約１〜約６３、約８２〜約２３９、約９３〜約２３４、約３２７〜約４４５、約３２７〜約４３１、及び約４９７〜約５１７。
【０１９７】
いくつかの実施形態において、本発明の抗ＭＯＳＰＤ２抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１（アミノ酸残基１〜５１８）に従って付番された、ＭＯＳＰＤ２の以下のアミノ酸領域（エピトープ）の１つまたは複数に特異的に結合する：約５０５〜約５１５、約５００〜約５１５、約２３０〜約２４０、約５１０〜約５２０、約２１０〜約２２０、約１５〜約２５、約５０５〜約５２０、約５０５〜約５１５、約９０〜約１００、約５０５〜約５２５、約２３０〜約２４５、約５０５〜約５１０、約１３０〜約１４０、約２２０〜約２３０、約１５〜約３０、約８０〜約９５、約４０〜約５０、約４６０〜約４７５、約３４０〜約３５０、約５００〜約５１５、約４６０〜約４７０、約３２５〜約３３５、約２０〜約３５、約２１５〜約２２５、約５１０〜約５２０、約１７５〜約１９０、約５００〜約５１０、約５０５〜約５３０、約６０〜約７５、約５００〜約５２０、約１４５〜約１６０、約５０２〜約５１５、約８５〜約１００、約２０５〜約２２０、約１７５〜約１９０、約５００〜約５０５、約５００〜約５２５、約４９５〜約５０５、約４９５〜約５１０、約１９０〜約２００、約１９０〜約１９８、約５０２〜約５１５、約１〜約６０、約８０〜約２４０、約９０〜約２３５、約３３０〜約４４５、約３３０〜約４３０、及び約４９５〜約５１５。
【０１９８】
いくつかの実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合断片は、約１０−６Ｍ〜約１０−１２Ｍ、またはそれらの値のうちの任意の範囲（例えば、約１０−７Ｍ〜約１０−１２、１０−８Ｍ〜約１０−１２Ｍ、約１０−９Ｍ〜約１０−１２Ｍ、約１０−１０Ｍ〜約１０−１２Ｍ、約１０−１１Ｍ〜約１０−１２Ｍ、約１０−６Ｍ〜約１０−１１Ｍ、約１０−７Ｍ〜約１０−１１Ｍ、約１０−８Ｍ〜約１０−１１Ｍ、約１０−９Ｍ〜約１０−１１Ｍ、約１０−１０Ｍ〜約１０−１１Ｍ、約１０−６Ｍ〜約１０−１０Ｍ、約１０−７Ｍ〜約１０−１０Ｍ、約１０−８Ｍ〜約１０−１０Ｍ、約１０−９Ｍ〜約１０−１０Ｍ、約１０−６Ｍ〜約１０−９Ｍ、約１０−７Ｍ〜約１０−９Ｍ、約１０−８Ｍ〜約１０−９Ｍ、約１０−６Ｍ〜約１０−８Ｍ、または約１０−７Ｍ〜約１０−８）の抗体抗原平衡解離定数（ＫＤ）でＭＯＳＰＤ２と結合する。他の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、ＫＤが約１０−６Ｍ、約１０−７Ｍ、約１０−８Ｍ、約１０−９Ｍ、約１０−１０Ｍ、約１０−１１Ｍ、または約１０−１２Ｍである。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合断片は、ＭＯＳＰＤ２上の１つまたは複数のエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、ＫＤは、Ｓｃａｔｃｈａｒｄ分析、表面プラズモン共鳴、または本明細書中記載される他の方法により、いくつかの実施形態において、３７℃で決定される。
【０１９９】
いくつかの実施形態において、本発明の抗体または抗原結合断片は、約１０３１／Ｍｓ〜約１０６１／Ｍｓ、またはそれらの値のうちの任意の範囲（例えば、約１０３１／Ｍｓ〜約１０５１／Ｍｓ、約１０４１／Ｍｓ〜約１０５１／Ｍｓ、約１０４１／Ｍｓ〜約１０６１／Ｍｓ、約１０５１／Ｍｓ〜約１０６１／Ｍｓ、または約１０３１／Ｍｓ〜約１０４１／Ｍｓ）のＫｏｎでＭＯＳＰＤ２に結合する。他の実施形態において、抗体または抗原結合断片は、Ｋｏｎが約１０３１／Ｍｓ、約１０４１／Ｍｓ、約１０５１／Ｍｓ、または約１０６１／Ｍｓである。
【０２００】
いくつかの実施形態において、本発明の抗体または抗原結合断片は、約１０−３１／ｓ〜約１０−６１／ｓ、またはそれらの値のうちの任意の範囲（例えば、約１０−３１／ｓ〜約１０−５１／ｓ、約１０−４１／ｓ〜約１０−５１／ｓ、約１０−４１／ｓ〜約１０−６１／ｓ、約１０−５１／ｓ〜約１０−６１／ｓ、または約１０−３１／ｓ〜約１０−４１／ｓ）のＫｏｆｆでＭＯＳＰＤ２に結合する。他の実施形態において、抗体または抗原結合断片は、Ｋｏｆｆが約１０−３１／ｓ、約１０−４１／ｓ、約１０−５１／ｓ、または約１０−６１／ｓである。
【０２０１】
さらに他の実施形態において、阻害剤は、ＲＮＡｉ、ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、アンチセンスＤＮＡ、デコイ分子、デコイＤＮＡ、二本鎖ＤＮＡ、一本鎖ＤＮＡ、複合ＤＮＡ、被包ＤＮＡ、ウイルスＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、ネイキッドＲＮＡ、被包ＲＮＡ、ウイルスＲＮＡ、二本鎖ＲＮＡ、ＲＮＡ干渉を起こすことができる分子、またはそれらの組み合わせである。いくつかの実施形態において、阻害剤は、ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列にハイブリダイズする。いくつかの実施形態において、ハイブリダイゼーションは、ストリンジェントな条件下または高度にストリンジェントな条件下のものである。
【０２０２】
いくつかの実施形態において、阻害剤は、クラスター化した規則的な配置の短い回文配列リピート、すなわちＣＲＩＳＰＲ−ＣＡＳ９系である。
【０２０３】
さらなる実施形態において、ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドは、配列番号１〜４のいずれか１つと少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％同一の配列を有する。他の実施形態において、ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドは、配列番号１〜４のいずれか１つと少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一の配列を有する。他の実施形態において、ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドは、配列番号１〜４のいずれか１つと約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％同一性の配列を有する。他の実施形態において、ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドは、配列番号１〜４のいずれか１つと７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性の配列を有する。他の実施形態において、ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドは、配列番号１〜４のいずれか１つと約７５％〜１００％同一の、またはそれらの値のうちの任意の範囲、例えば、配列番号１〜４のいずれか１つと約８０％〜１００％同一性、約８５％〜１００％同一性、約９０％〜１００％同一性、約９５％〜１００％同一性、約９６％〜１００％同一性、約９７％〜１００％同一性、約９８％〜１００％同一性、約９９％〜約１００％同一性、約７５％〜約９９％同一性、約８０％〜約９９％同一性、約８５％〜約９９％同一性、約９０％〜約９９％同一性、約９５％〜約９９％同一性、約９６％〜約９９％同一性、約９７％〜約９９％同一性、約９８％〜約９９％同一性、約９９％〜約１００％同一性、約７５％〜約９５％同一性、約８０％〜約９５％同一性、約８５％〜約９５％同一性、または約９０％〜約９５％同一性の配列を有する。
【０２０４】
本発明のさらなる実施形態において、ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドは、配列番号５〜８のいずれか１つと少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％同一性のポリヌクレオチド配列によりコードされる。他の実施形態において、ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドは、配列番号５〜８のいずれか１つと少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一性のポリヌクレオチド配列によりコードされる。他の実施形態において、ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドは、配列番号５〜８のいずれか１つと約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％同一性のポリヌクレオチド配列によりコードされる。他の実施形態において、ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドは、配列番号１〜４のいずれか１つと７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一のポリヌクレオチド配列によりコードされる。他の実施形態において、ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドは、配列番号５〜８のいずれか１つと約７５％〜１００％同一性の、またはそれらの値のうちの任意の範囲、例えば、配列番号５〜８のいずれか１つと約８０％〜１００％同一性、約８５％〜１００％同一性、約９０％〜１００％同一性、約９５％〜１００％同一性、約９６％〜１００％同一性、約９７％〜１００％同一性、約９８％〜１００％同一性、約９９％〜約１００％同一性、約７５％〜約９９％同一性、約８０％〜約９９％同一性、約８５％〜約９９％同一性、約９０％〜約９９％同一性、約９５％〜約９９％同一性、約９６％〜約９９％同一性、約９７％〜約９９％同一性、約９８％〜約９９％同一性、約９９％〜約１００％同一性、約７５％〜約９５％同一性、約８０％〜約９５％同一性、約８５％〜約９５％同一性、または約９０％〜約９５％同一性のポリヌクレオチド配列によりコードされる。
【０２０５】
医薬組成物
本発明の他の実施形態は、ＭＯＳＰＤ２の阻害剤を含む医薬組成物に関する。いくつかの実施形態において、医薬組成物は、ＭＯＳＰＤ２の阻害剤、及び薬学上許容される担体を含む。他の実施形態において、医薬組成物は、ＭＯＳＰＤ２の阻害剤（例えば、本明細書中記載される抗体または抗体の抗原結合断片）の治療有効量を含む。
【０２０６】
他の実施形態において、ＭＯＳＰＤ２の阻害剤は、抗体または抗体の抗原結合断片であり、治療有効量は、約１μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、またはそれらの値のうちの任意の範囲（例えば、約２μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、約３μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、約４μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、約５μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、約６μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、約７μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、約８μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、約９μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、約１μｇ／ｍｌ〜約９μｇ／ｍｌ、約２μｇ／ｍｌ〜約９μｇ／ｍｌ、約３μｇ／ｍｌ〜約９μｇ／ｍｌ、約４μｇ／ｍｌ〜約９μｇ／ｍｌ、約５μｇ／ｍｌ〜約９μｇ／ｍｌ、約６μｇ／ｍｌ〜約９μｇ／ｍｌ、約７μｇ／ｍｌ〜約９μｇ／ｍｌ、約８μｇ／ｍｌ〜約９μｇ／ｍｌ、約１μｇ／ｍｌ〜約８μｇ／ｍｌ、約２μｇ／ｍｌ〜約８μｇ／ｍｌ、約３μｇ／ｍｌ〜約８μｇ／ｍｌ、約４μｇ／ｍｌ〜約８μｇ／ｍｌ、約５μｇ／ｍｌ〜約８μｇ／ｍｌ、約６μｇ／ｍｌ〜約８μｇ／ｍｌ、約７μｇ／ｍｌ〜約８μｇ／ｍｌ、約１μｇ／ｍｌ〜約７μｇ／ｍｌ、約２μｇ／ｍｌ〜約７μｇ／ｍｌ、約３μｇ／ｍｌ〜約７μｇ／ｍｌ、約４μｇ／ｍｌ〜約７μｇ／ｍｌ、約５μｇ／ｍｌ〜約７μｇ／ｍｌ、約６μｇ／ｍｌ〜約７μｇ／ｍｌ、約１μｇ／ｍｌ〜約６μｇ／ｍｌ、約２μｇ／ｍｌ〜約６μｇ／ｍｌ、約３μｇ／ｍｌ〜約６μｇ／ｍｌ、約４μｇ／ｍｌ〜約６μｇ／ｍｌ、約５μｇ／ｍｌ〜約６μｇ／ｍｌ、約１μｇ／ｍｌ〜約５μｇ／ｍｌ、約２μｇ／ｍｌ〜約５μｇ／ｍｌ、約３μｇ／ｍｌ〜約５μｇ／ｍｌ、約４μｇ／ｍｌ〜約５μｇ／ｍｌ、約１μｇ／ｍｌ〜約４μｇ／ｍｌ、約２μｇ／ｍｌ〜約４μｇ／ｍｌ、約３μｇ／ｍｌ〜約４μｇ／ｍｌ、約１μｇ／ｍｌ〜約３μｇ／ｍｌ、約２μｇ／ｍｌ〜約３μｇ／ｍｌ、または約１μｇ／ｍｌ〜約２μｇ／ｍｌ）である。他の実施形態において、ＭＯＳＰＤ２の阻害剤は、抗体または抗体の抗原結合断片であり、治療有効量は、約１μｇ／ｍｌ、約２μｇ／ｍｌ、約３μｇ／ｍｌ、約４μｇ／ｍｌ、約５μｇ／ｍｌ、約６μｇ／ｍｌ、約７μｇ／ｍｌ、約８μｇ／ｍｌ、約９μｇ／ｍｌ、または約１０μｇ／ｍｌである。
【０２０７】
いくつかの実施形態において、ＭＯＳＰＤ２の阻害剤は、抗体または抗体の抗原結合断片であり、治療有効量は、約１０ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、またはそれらの値のうちの任意の範囲（例えば、約１５ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、約３５ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ〜約３５ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ〜約３５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ〜約３５ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ〜約３５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ〜約３５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ、または約１０ｍｇ／ｋｇ〜約１５ｍｇ／ｋｇ）である。他の実施形態において、ＭＯＳＰＤ２の阻害剤は、抗体または抗体の抗原結合断片であり、治療有効量は、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約３５ｍｇ／ｋｇ、または約４０ｍｇ／ｋｇである。
【０２０８】
いくつかの実施形態において、ＭＯＳＰＤ２の阻害剤（例えば、抗体またはその抗原結合断片）は、ＭＯＳＰＤ２阻害剤の投与が、ＭＯＳＰＤ２（例えば、ヒトＭＯＳＰＤ２）の１種または複数種の活性（例えば、ＭＯＳＰＤ２発現、炎症細胞遊走（例えば、白血球または単球の遊走）、化学走性（例えば、白血球または単球の化学走性）、ケモカインシグナル伝達経路、ＥＧＦ受容体リン酸化、ＥＲＫリン酸化、及びＡＫＴリン酸化）の少なくとも１０％（例えば、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、またはそれ以上）の阻害を引き起こすような量で存在する。いくつかの実施形態において、ヒト対象へのＭＯＳＰＤ２阻害剤の投与は、ヒトＭＯＳＰＤ２の１種または複数種の活性の少なくとも１０％（例えば、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、またはそれ以上）の阻害を引き起こす。
【０２０９】
別の態様において、ＭＯＳＰＤ２阻害剤（例えば、抗ＭＯＳＰＤ２抗体またはその抗原結合断片）の投与は、ＭＯＳＰＤ２の１種または複数種の活性、例えば、炎症細胞遊走の調節、ケモカインシグナル伝達経路、成長因子シグナル伝達経路、ＥＧＦ受容体リン酸化、ＥＲＫリン酸化、ＡＫＴリン酸化、及び／またはＦＡＫリン酸化などの、約１０％〜１００％、約１０％〜約９９％、約１０％〜約９５％、約１０％〜約９０％、約１０％〜約８５％、約１０％〜約８０％、約１０％〜約７０％、約２０％〜約９９％、約２０％〜約９５％、約２０％〜約９０％、約２０％〜約８５％、約２０％〜約８０％、約３０％〜約９５％、約３０％〜約９０％、約３０％〜約８５％、約３０％〜約８０％、約４０％〜約９５％、約４０％〜約９０％、約４０％〜約８５％、約４０％〜約８０％、約５０％〜約９５％、約５０％〜約９０％、約５０％〜約８５％、約５０％〜約８０％、約６０％〜約９５％、約６０％〜約９０％、約６０％〜約８５％、または約６０％〜約８０％の阻害を引き起こす。
【０２１０】
本明細書中使用される場合、「医薬組成物」は、本明細書中記載されるとおりの１種または複数種の作用剤（例えば、ＭＯＳＰＤ２阻害剤、またはＭＯＳＰＤ２阻害剤と本明細書中記載される１種または複数種の他の作用剤の組み合わせ）、あるいはその生理学的に許容される塩またはプロドラッグを他の化学成分と合わせて含む製剤を示し、他の化学成分として、薬学上許容される担体、賦形剤、滑沢剤、緩衝剤、抗菌剤、増量剤（例えば、マンニトール）、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸または重亜硫酸ナトリウム）などが挙げられるが、これらに限定されない。医薬組成物の目的は、作用剤（複数可）を対象に投与しやすくすることである。
【０２１１】
本明細書中使用される場合、対象に「投与」または「投与する」は、医師または他の医療専門家が、対象に本発明の医薬組成物を処方する行為を含むが、これに限定されない。
【０２１２】
本明細書中、「薬学上許容される担体」という語句は、対象に対して目立った刺激を引き起こさず、かつ本明細書中記載される作用剤（複数可）の生物活性及び性質を抑制しない担体または希釈剤を示す。
【０２１３】
本明細書中使用される場合、「担体」という用語は、治療薬を投与するときに一緒に用いられる希釈剤、アジュバント、賦形剤、またはビヒクルを示す。
【０２１４】
本明細書中、「賦形剤」という用語は、活性成分の投与をさらに促進するために医薬組成物に添加される不活性物質を示す。
【０２１５】
いくつかの実施形態において、ＭＯＳＰＤ２阻害剤を含む医薬組成物は、さらに、１種または複数種の追加活性作用剤を含む。
【０２１６】
２種以上の作用剤を医薬組成物として投与する場合、各作用剤は、任意選択で、別々の組成物で投与することも、及び／または異なる投与経路を介して投与することもできる。各作用剤に可能な投与経路として、独立して、非経口投与、経粘膜投与、直腸投与、頬側投与、及び／または吸入（例えば、本明細書中記載されるとおり）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２１７】
いくつかの実施形態において、医薬組成物は、全身投与または局所投与に適する。他の実施形態において、医薬組成物は、経鼻投与、経口投与、または腹腔内投与に適する。他の実施形態において、医薬組成物は、静脈内投与、筋肉内投与、または皮下投与に適する。
【０２１８】
炎症及び炎症性疾患または炎症性障害を処置する、予防する、またはその発生率を低下させる方法
本発明の実施形態は、炎症を処置する、予防する、またはその発生率を低下させる方法に関し、本方法は、ＭＯＳＰＤ２の阻害剤を投与することを含む。いくつかの実施形態において、本発明は、炎症性疾患または障害を処置する、予防する、またはその発生率を低下させる方法に関し、本方法は、ＭＯＳＰＤ２の阻害剤を投与することを含む。他の実施形態において、本方法は、その必要がある対象に、ＭＯＳＰＤ２の阻害剤の治療有効量を投与することを含む。
【０２１９】
本方法のいくつかの実施形態において、ＭＯＳＰＤ２の阻害剤は、本明細書中記載される抗体または抗体の抗原結合断片である。例えば、抗体またはその抗原結合断片は、抗体抗原平衡解離定数（ＫＤ）が１０−６Ｍ〜約１０−１２Ｍ、またはそれらの値のうちの任意の範囲（例えば、約１０−７Ｍ〜約１０−１２、１０−８Ｍ〜約１０−１２Ｍ、約１０−９Ｍ〜約１０−１２Ｍ、約１０−１０Ｍ〜約１０−１２Ｍ、約１０−１１Ｍ〜約１０−１２Ｍ、約１０−６Ｍ〜約１０−１１Ｍ、約１０−７Ｍ〜約１０−１１Ｍ、約１０−８Ｍ〜約１０−１１Ｍ、約１０−９Ｍ〜約１０−１１Ｍ、約１０−１０Ｍ〜約１０−１１Ｍ、約１０−６Ｍ〜約１０−１０Ｍ、約１０−７Ｍ〜約１０−１０Ｍ、約１０−８Ｍ〜約１０−１０Ｍ、約１０−９Ｍ〜約１０−１０Ｍ、約１０−６Ｍ〜約１０−９Ｍ、約１０−７Ｍ〜約１０−９Ｍ、約１０−８Ｍ〜約１０−９Ｍ、約１０−６Ｍ〜約１０−８Ｍ、または約１０−７Ｍ〜約１０−８）であることが可能である。他の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、ＫＤが約１０−６Ｍ、約１０−７Ｍ、約１０−８Ｍ、約１０−９Ｍ、約１０−１０Ｍ、約１０−１１Ｍ、または約１０−１２Ｍである。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合断片は、ＭＯＳＰＤ２上の１つまたは複数のエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、ＫＤは、Ｓｃａｔｃｈａｒｄ分析、表面プラズモン共鳴、または本明細書中記載される他の方法により、いくつかの実施形態において、３７℃で決定される。
【０２２０】
いくつかの実施形態において、本発明の抗体または抗原結合断片は、約１０３１／Ｍｓ〜約１０６１／Ｍｓ、またはそれらの値のうちの任意の範囲（例えば、約１０３１／Ｍｓ〜約１０５１／Ｍｓ、約１０４１／Ｍｓ〜約１０５１／Ｍｓ、約１０４１／Ｍｓ〜約１０６１／Ｍｓ、約１０５１／Ｍｓ〜約１０６１／Ｍｓ、または約１０３１／Ｍｓ〜約１０４１／Ｍｓ）のＫｏｎでＭＯＳＰＤ２に結合する。他の実施形態において、抗体または抗原結合断片は、Ｋｏｎが約１０３１／Ｍｓ、約１０４１／Ｍｓ、約１０５１／Ｍｓ、または約１０６１／Ｍｓである。
【０２２１】
いくつかの実施形態において、本発明の抗体または抗原結合断片は、約１０−３１／ｓ〜約１０−６１／ｓ、またはそれらの値のうちの任意の範囲（例えば、約１０−３１／ｓ〜約１０−５１／ｓ、約１０−４１／ｓ〜約１０−５１／ｓ、約１０−４１／ｓ〜約１０−６１／ｓ、約１０−５１／ｓ〜約１０−６１／ｓ、または約１０−３１／ｓ〜約１０−４１／ｓ）のＫｏｆｆでＭＯＳＰＤ２に結合する。他の実施形態において、抗体または抗原結合断片は、Ｋｏｆｆが約１０−３１／ｓ、約１０−４１／ｓ、約１０−５１／ｓ、または約１０−６１／ｓである。
【０２２２】
本方法のいくつかの実施形態において、ＭＯＳＰＤ２の阻害剤は、抗体または抗体の抗原結合断片であり、治療有効量は、約１μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、またはそれらの値のうちの任意の範囲（例えば、約２μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、約３μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、約４μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、約５μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、約６μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、約７μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、約８μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、約９μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、約１μｇ／ｍｌ〜約９μｇ／ｍｌ、約２μｇ／ｍｌ〜約９μｇ／ｍｌ、約３μｇ／ｍｌ〜約９μｇ／ｍｌ、約４μｇ／ｍｌ〜約９μｇ／ｍｌ、約５μｇ／ｍｌ〜約９μｇ／ｍｌ、約６μｇ／ｍｌ〜約９μｇ／ｍｌ、約７μｇ／ｍｌ〜約９μｇ／ｍｌ、約８μｇ／ｍｌ〜約９μｇ／ｍｌ、約１μｇ／ｍｌ〜約８μｇ／ｍｌ、約２μｇ／ｍｌ〜約８μｇ／ｍｌ、約３μｇ／ｍｌ〜約８μｇ／ｍｌ、約４μｇ／ｍｌ〜約８μｇ／ｍｌ、約５μｇ／ｍｌ〜約８μｇ／ｍｌ、約６μｇ／ｍｌ〜約８μｇ／ｍｌ、約７μｇ／ｍｌ〜約８μｇ／ｍｌ、約１μｇ／ｍｌ〜約７μｇ／ｍｌ、約２μｇ／ｍｌ〜約７μｇ／ｍｌ、約３μｇ／ｍｌ〜約７μｇ／ｍｌ、約４μｇ／ｍｌ〜約７μｇ／ｍｌ、約５μｇ／ｍｌ〜約７μｇ／ｍｌ、約６μｇ／ｍｌ〜約７μｇ／ｍｌ、約１μｇ／ｍｌ〜約６μｇ／ｍｌ、約２μｇ／ｍｌ〜約６μｇ／ｍｌ、約３μｇ／ｍｌ〜約６μｇ／ｍｌ、約４μｇ／ｍｌ〜約６μｇ／ｍｌ、約５μｇ／ｍｌ〜約６μｇ／ｍｌ、約１μｇ／ｍｌ〜約５μｇ／ｍｌ、約２μｇ／ｍｌ〜約５μｇ／ｍｌ、約３μｇ／ｍｌ〜約５μｇ／ｍｌ、約４μｇ／ｍｌ〜約５μｇ／ｍｌ、約１μｇ／ｍｌ〜約４μｇ／ｍｌ、約２μｇ／ｍｌ〜約４μｇ／ｍｌ、約３μｇ／ｍｌ〜約４μｇ／ｍｌ、約１μｇ／ｍｌ〜約３μｇ／ｍｌ、約２μｇ／ｍｌ〜約３μｇ／ｍｌ、または約１μｇ／ｍｌ〜約２μｇ／ｍｌ）である。他の実施形態において、ＭＯＳＰＤ２の阻害剤は、抗体または抗体の抗原結合断片であり、治療有効量は、約１μｇ／ｍｌ、約２μｇ／ｍｌ、約３μｇ／ｍｌ、約４μｇ／ｍｌ、約５μｇ／ｍｌ、約６μｇ／ｍｌ、約７μｇ／ｍｌ、約８μｇ／ｍｌ、約９μｇ／ｍｌ、または約１０μｇ／ｍｌである。
【０２２３】
本方法のいくつかの実施形態において、ＭＯＳＰＤ２の阻害剤は、抗体または抗体の抗原結合断片であり、治療有効量は、約１０ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、またはそれらの値のうちの任意の範囲（例えば、約１５ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、約３５ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ〜約３５ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ〜約３５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ〜約３５ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ〜約３５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ〜約３５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ、または約１０ｍｇ／ｋｇ〜約１５ｍｇ／ｋｇ）である。他の実施形態において、ＭＯＳＰＤ２の阻害剤は、抗体または抗体の抗原結合断片であり、治療有効量は、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約３５ｍｇ／ｋｇ、または約４０ｍｇ／ｋｇである。
【０２２４】
本方法のいくつかの実施形態において、ＭＯＳＰＤ２の阻害剤（例えば、抗体またはその抗原結合断片）は、ＭＯＳＰＤ２（例えば、ヒトＭＯＳＰＤ２）の１種または複数種の活性（例えば、ＭＯＳＰＤ２発現、炎症細胞遊走（例えば、白血球または単球の遊走）、化学走性（例えば、白血球または単球の化学走性）ケモカインシグナル伝達経路、ＥＧＦ受容体リン酸化、ＥＲＫリン酸化、及びＡＫＴリン酸化）の、少なくとも１０％（例えば、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、またはそれ以上）の阻害を引き起こす。いくつかの実施形態において、ヒト対象へのＭＯＳＰＤ２阻害剤の投与は、ヒトＭＯＳＰＤ２の１種または複数種の活性の少なくとも１０％（例えば、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、またはそれ以上）の阻害を引き起こす。
【０２２５】
別の態様において、ＭＯＳＰＤ２阻害剤（例えば、抗ＭＯＳＰＤ２抗体またはその抗原結合断片）の投与は、ＭＯＳＰＤ２の１種または複数種の活性、例えば、炎症細胞遊走の調節、ケモカインシグナル伝達経路、成長因子シグナル伝達経路、ＥＧＦ受容体リン酸化、ＥＲＫリン酸化、ＡＫＴリン酸化、及び／またはＦＡＫリン酸化の約１０％〜１００％、約１０％〜約９９％、約１０％〜約９５％、約１０％〜約９０％、約１０％〜約８５％、約１０％〜約８０％、約１０％〜約７０％、約２０％〜約９９％、約２０％〜約９５％、約２０％〜約９０％、約２０％〜約８５％、約２０％〜約８０％、約３０％〜約９５％、約３０％〜約９０％、約３０％〜約８５％、約３０％〜約８０％、約４０％〜約９５％、約４０％〜約９０％、約４０％〜約８５％、約４０％〜約８０％、約５０％〜約９５％、約５０％〜約９０％、約５０％〜約８５％、約５０％〜約８０％、約６０％〜約９５％、約６０％〜約９０％、約６０％〜約８５％、または約６０％〜約８０％の阻害を引き起こす。
【０２２６】
本方法の他の実施形態において、対象は、哺乳類またはヒトである。
【０２２７】
本方法の他の実施形態において、炎症性疾患または障害は、特発性炎症性疾患もしくは障害、慢性炎症性疾患もしくは障害、急性炎症性疾患もしくは障害、自己免疫疾患もしくは障害、感染性疾患もしくは障害、炎症性悪性疾患もしくは障害、炎症性移植関連疾患もしくは障害、炎症性変性疾患もしくは障害、過敏症と関連した疾患もしくは障害、炎症性心血管疾患もしくは障害、炎症性脳血管疾患もしくは障害、末梢血管疾患もしくは障害、炎症性腺性疾患もしくは障害、炎症性胃腸疾患もしくは障害、炎症性皮膚疾患もしくは障害、炎症性肝疾患もしくは障害、炎症性神経疾患もしくは障害、炎症性筋骨格疾患もしくは障害、炎症性腎疾患もしくは障害、炎症性生殖疾患もしくは障害、炎症性全身性疾患もしくは障害、炎症性結合組織疾患もしくは障害、壊死、炎症性インプラント関連疾患もしくは障害、炎症性加齢プロセス、免疫不全疾患もしくは障害、または炎症性肺疾患もしくは障害である。
【０２２８】
いくつかの実施形態において、過敏症は、Ｉ型過敏症、ＩＩ型過敏症、ＩＩＩ型過敏症、ＩＶ型過敏症、即時型過敏症、抗体媒介性過敏症、免疫複合体媒介性過敏症、Ｔリンパ球媒介性過敏症、遅延型過敏症、ヘルパーＴリンパ球媒介性過敏症、細胞傷害性Ｔリンパ球媒介性過敏症、ＴＨ１リンパ球媒介性過敏症、またはＴＨ２リンパ球媒介性過敏症である。
【０２２９】
他の実施形態において、炎症性心血管疾患または障害は、閉塞性疾患もしくは障害、粥状動脈硬化、心臓弁疾患、狭窄症、再狭窄、ステント内狭窄、心筋梗塞、冠動脈疾患、急性冠症候群、うっ血性心不全、狭心症、心筋虚血、血栓症、ウェゲナー肉芽腫症、高安動脈炎、川崎症候群、抗第ＶＩＩＩ因子自己免疫疾患もしくは障害、壊死性小型血管炎、顕微鏡的多発血管炎、チャーグ・ストラウス症候群、微量免疫型巣状壊死性糸球体腎炎、半月体形成性糸球体腎炎、抗リン脂質抗体症候群、抗体誘導性心不全、血小板減少性紫斑病、自己免疫性溶血性貧血、心臓自己免疫、シャーガス病もしくは障害、または抗ヘルパーＴリンパ球自己免疫である。
【０２３０】
他の実施形態において、炎症性脳血管疾患または障害は、脳卒中、脳血管炎症、脳出血、または椎骨動脈不全である。
【０２３１】
他の実施形態において、末梢血管疾患または障害は、壊疽、糖尿病性脈管障害、虚血性腸疾患、血栓症、糖尿病性網膜症、または糖尿病性腎症である。
【０２３２】
いくつかの実施形態において、自己免疫疾患または障害は、慢性関節リウマチ、若年性関節リウマチ、全身性紅斑性狼瘡、強皮症、混合性結合組織疾患、結節性多発動脈炎、多発性筋炎／皮膚筋炎、シェーグレン症候群、ベーチェット病、多発性硬化症、自己免疫性糖尿病、橋本病、乾癬、原発性粘液水腫、悪性貧血、重症筋無力症、慢性活動性肝炎、自己免疫性溶血性貧血、特発性血小板減少性紫斑病、ブドウ膜炎、血管炎、またはヘパリン起因性血小板減少症である。
【０２３３】
いくつかの実施形態において、炎症性腺性疾患または障害は、膵臓疾患もしくは障害、Ｉ型糖尿病、甲状腺疾患もしくは障害、グレーブス病もしくは障害、甲状腺炎、特発性自己免疫性甲状腺炎、橋本甲状腺炎、特発性粘液水腫、卵巣自己免疫、自己免疫性抗精子不妊症、自己免疫性前立腺炎、またはＩ型多腺性自己免疫症候群である。
【０２３４】
いくつかの実施形態において、炎症性胃腸疾患または障害は、大腸炎、回腸炎、クローン病、慢性炎症性腸疾患、炎症性腸症候群、炎症性腸疾患、過敏性腸症候群、慢性炎症性腸疾患、セリアック病、潰瘍性大腸炎、潰瘍、皮膚潰瘍、褥瘡、胃潰瘍、消化管潰瘍、口腔内潰瘍、鼻咽頭潰瘍、食道潰瘍、十二指腸潰瘍、または胃腸潰瘍である。
【０２３５】
いくつかの実施形態において、炎症性皮膚疾患または障害は、ざ瘡、自己免疫性水疱性皮膚症もしくは障害、尋常性天疱瘡、水疱性類天疱瘡、落葉状天疱瘡、接触性皮膚炎、または薬疹である。
【０２３６】
いくつかの実施形態において、炎症性肝疾患または障害は、自己免疫性肝炎、肝硬変、または胆汁性肝硬変である。
【０２３７】
いくつかの実施形態において、炎症性神経疾患または障害は、多発性硬化症、アルツハイマー病、パーキンソン病、重症筋無力症、運動ニューロパチー、ギラン・バレー症候群、自己免疫性ニューロパチー、ランバート・イートン筋無力症症候群、傍腫瘍性神経疾患もしくは障害、傍腫瘍性小脳萎縮症、非傍腫瘍性スティフ・マン症候群、進行性小脳萎縮症、ラスムッセン脳炎、筋萎縮性側索硬化症、シデナム舞踏病、ジル・ドゥ・ラ・トゥレット症候群、自己免疫性多腺性内分泌不全症、異常免疫性（ｄｙｓｉｍｍｕｎｅ）ニューロパチー、後天性神経性筋強直症、多発性関節拘縮症、ハンチントン病、ＡＩＤＳ関連認知症、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症、脳卒中、炎症性網膜疾患もしくは障害、炎症性眼疾患もしくは障害、視神経炎、海綿状脳症、片頭痛、頭痛、群発性頭痛、またはスティフ・マン症候群である。
【０２３８】
いくつかの実施形態において、炎症性結合組織疾患または障害は、デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）、自己免疫性筋炎、原発性シェーグレン症候群、平滑筋自己免疫疾患もしくは障害、筋炎、腱炎、靱帯炎、軟骨炎、関節炎、滑膜炎、手根管症候群、関節炎、関節リウマチ、変形性関節症、強直性脊椎炎、骨格炎、自己免疫性耳疾患もしくは障害、または自己免疫性内耳疾患もしくは障害である。
【０２３９】
いくつかの実施形態において、炎症性腎疾患または障害は、自己免疫性間質性腎炎である。
【０２４０】
いくつかの実施形態において、炎症性生殖疾患または障害は、反復流産、卵巣嚢胞、または月経関連疾患もしくは障害である。
【０２４１】
いくつかの実施形態において、炎症性全身性疾患または障害は、全身性紅斑性狼瘡、全身性硬化症、敗血症性ショック、毒素性ショック症候群、または悪液質である。
【０２４２】
いくつかの実施形態において、感染性疾患または障害は、慢性感染性疾患もしくは障害、亜急性感染性疾患もしくは障害、急性感染性疾患もしくは障害、ウイルス性疾患もしくは障害、細菌性疾患もしくは障害、原虫性疾患もしくは障害、寄生虫性疾患もしくは障害、真菌性疾患もしくは障害、マイコプラズマ疾患もしくは障害、壊疽、敗血症、プリオン病もしくは障害、インフルエンザ、結核、マラリア、後天性免疫不全症候群、または重症急性呼吸器症候群である。
【０２４３】
いくつかの実施形態において、炎症性移植関連疾患または障害は、移植片拒絶、慢性移植片拒絶、亜急性移植片拒絶、急性移植片拒絶、超急性移植片拒絶、または移植片対宿主病もしくは障害である。
【０２４４】
いくつかの実施形態において、インプラントは、義装具インプラント、乳房インプラント、シリコーンインプラント、歯科インプラント、陰茎インプラント、心臓インプラント、人工関節、骨折修復装置、骨置換インプラント、薬物送達インプラント、カテーテル、ペースメーカー、人工心臓、人工心臓弁、薬物放出インプラント、電極、または人工呼吸器の管である。
【０２４５】
いくつかの実施形態において、炎症性肺疾患または障害は、喘息、アレルギー性喘息、肺気腫、慢性閉塞性肺疾患もしくは障害、サルコイドーシス、または気管支炎である。
【０２４６】
他の実施形態において、炎症性疾患または障害は、線維症である。
【０２４７】
いくつかの実施形態において、炎症性疾患または障害は、慢性自己免疫性疾患または慢性炎症性疾患を罹患している対象における血管炎症である。いくつかの実施形態において、慢性自己免疫性疾患または慢性炎症性疾患は、乾癬である。いくつかの実施形態において、血管炎症は、心血管疾患、末梢血管疾患、冠動脈疾患、脳血管疾患、腎動脈狭窄症、虚血性疾患、または大動脈瘤と関連している。いくつかの実施形態において、血管炎症は、虚血性心疾患、粥状動脈硬化、急性冠症候群、不安定狭心症、安定狭心症、または脳卒中と関連している。他の実施形態において、血管炎症は、頸動脈の炎症である。他の実施形態において、血管炎症は、大動脈の炎症である。
【０２４８】
いくつかの実施形態において、炎症性疾患または障害は、インプラントと関連した炎症である。いくつかの実施形態において、インプラントと関連した炎症は、局所的炎症または全身性炎症反応である。いくつかの実施形態において、インプラントは、シリコーン、生理食塩水、金属、プラスチック、または重合体インプラントである。いくつかの実施形態において、インプラントは、美容インプラント、義装具インプラント、皮下インプラント、経皮インプラント、骨置換インプラント、または骨折修復装置である。いくつかの実施形態において、インプラントは、薬物送達インプラントまたは薬物放出インプラントである。他の実施形態において、インプラントは、人工関節、人工心臓、人工心臓弁、人工睾丸、乳房インプラント、歯科インプラント、眼インプラント、蝸牛インプラント、陰茎インプラント、心臓インプラント、カテーテル、埋込型排尿調節装置、ペースメーカー、電極、ヘルニア支持装置、または人工呼吸器の管である。
【０２４９】
他の実施形態において、炎症性疾患または障害は、肝炎または脂肪性肝炎である。いくつかの実施形態において、炎症性疾患または障害は、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）である。いくつかの実施形態において、炎症性疾患または障害は、糸球体腎炎である。いくつかの実施形態において、炎症性疾患または障害は、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）である。
【０２５０】
炎症は、骨代謝に影響を及ぼし、骨粗鬆症を誘発するため、骨粗鬆症もまた、本発明の炎症性疾患または障害の一例である。したがって、本発明のいくつかの実施形態において、炎症性疾患または障害は、骨粗鬆症である。
【０２５１】
１種または複数種の細胞活性を阻害または防止する方法
本発明の実施形態は、細胞における１種または複数種の活性を阻害または防止する方法にも関し、本方法は、ＭＯＳＰＤ２の阻害剤を投与することを含む。いくつかの実施形態において、本方法は、その必要がある対象に、ＭＯＳＰＤ２の阻害剤の治療有効量を投与することを含む。
【０２５２】
いくつかの実施形態において、ＭＯＳＰＤ２の阻害剤は、本明細書中記載される抗体または抗体の抗原結合断片である。例えば、抗体またはその抗原結合断片は、抗体抗原平衡解離定数（ＫＤ）が約１０−６Ｍ〜約１０−１２Ｍ、またはそれらの値のうちの任意の範囲（例えば、約１０−７Ｍ〜約１０−１２Ｍ、１０−８Ｍ〜約１０−１２Ｍ、約１０−９Ｍ〜約１０−１２Ｍ、約１０−１０Ｍ〜約１０−１２Ｍ、約１０−１１Ｍ〜約１０−１２Ｍ、約１０−６Ｍ〜約１０−１１Ｍ、約１０−７Ｍ〜約１０−１１Ｍ、約１０−８Ｍ〜約１０−１１Ｍ、約１０−９Ｍ〜約１０−１１Ｍ、約１０−１０Ｍ〜約１０−１１Ｍ、約１０−６Ｍ〜約１０−１０Ｍ、約１０−７Ｍ〜約１０−１０Ｍ、約１０−８Ｍ〜約１０−１０Ｍ、約１０−９Ｍ〜約１０−１０Ｍ、約１０−６Ｍ〜約１０−９Ｍ、約１０−７〜約１０−９、約１０−８Ｍ〜約１０−９Ｍ、約１０−６Ｍ〜約１０−８、または約１０−７Ｍ〜約１０−８Ｍ）であることが可能である。他の実施形態において、ＭＯＳＰＤ２の阻害剤は、ＫＤが約１０−６Ｍ、約１０−７Ｍ、約１０−８Ｍ、約１０−９Ｍ、約１０−１０Ｍ、約１０−１１Ｍ、または約１０−１２Ｍである抗体または抗体の抗原結合断片である。いくつかの実施形態において、ＫＤは、Ｓｃａｔｃｈａｒｄ分析、表面プラズモン共鳴、または本明細書中記載される他の方法により、いくつかの実施形態において、３７℃で決定される。
【０２５３】
いくつかの実施形態において、本発明の抗体または抗原結合断片は、ＭＯＳＰＤ２に、約１０３１／Ｍｓ〜約１０６１／Ｍｓ、またはそれらの値のうちの任意の範囲（例えば、約１０３１／Ｍｓ〜約１０５１／Ｍｓ、約１０４１／Ｍｓ〜約１０５１／Ｍｓ、約１０４１／Ｍｓ〜約１０６１／Ｍｓ、約１０５１／Ｍｓ〜約１０６１／Ｍｓ、または約１０３１／Ｍｓ〜約１０４１／Ｍｓ）のＫｏｎで結合する。他の実施形態において、抗体または抗原結合断片は、Ｋｏｎが約１０−３１／Ｍｓ、約１０−４１／Ｍｓ、約１０−５１／Ｍｓ、または約１０−６１／Ｍｓである。
【０２５４】
いくつかの実施形態において、本発明の抗体または抗原結合断片は、ＭＯＳＰＤ２に、約１０−３１／ｓ〜約１０−６１／ｓ、またはそれらの値のうちの任意の範囲（例えば、約１０−３１／ｓ〜約１０−５１／ｓ、約１０−４１／ｓ〜約１０−５１／ｓ、約１０−４１／ｓ〜約１０−６１／ｓ、約１０−５１／ｓ〜約１０−６１／ｓ、または約１０−３１／ｓ〜約１０−４１／ｓ）のＫｏｆｆで結合する。他の実施形態において、抗体または抗原結合断片は、Ｋｏｆｆが約１０−３１／ｓ、約１０−４１／ｓ、約１０−５１／ｓ、または約１０−６１／ｓである。
【０２５５】
いくつかの実施形態において、ＭＯＳＰＤ２の阻害剤は、抗体または抗体の抗原結合断片であり、治療有効量は、約１μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、またはそれらの値のうちの任意の範囲（例えば、約２μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、約３μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、約４μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、約５μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、約６μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、約７μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、約８μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、約９μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、約１μｇ／ｍｌ〜約９μｇ／ｍｌ、約２μｇ／ｍｌ〜約９μｇ／ｍｌ、約３μｇ／ｍｌ〜約９μｇ／ｍｌ、約４μｇ／ｍｌ〜約９μｇ／ｍｌ、約５μｇ／ｍｌ〜約９μｇ／ｍｌ、約６μｇ／ｍｌ〜約９μｇ／ｍｌ、約７μｇ／ｍｌ〜約９μｇ／ｍｌ、約８μｇ／ｍｌ〜約９μｇ／ｍｌ、約１μｇ／ｍｌ〜約８μｇ／ｍｌ、約２μｇ／ｍｌ〜約８μｇ／ｍｌ、約３μｇ／ｍｌ〜約８μｇ／ｍｌ、約４μｇ／ｍｌ〜約８μｇ／ｍｌ、約５μｇ／ｍｌ〜約８μｇ／ｍｌ、約６μｇ／ｍｌ〜約８μｇ／ｍｌ、約７μｇ／ｍｌ〜約８μｇ／ｍｌ、約１μｇ／ｍｌ〜約７μｇ／ｍｌ、約２μｇ／ｍｌ〜約７μｇ／ｍｌ、約３μｇ／ｍｌ〜約７μｇ／ｍｌ、約４μｇ／ｍｌ〜約７μｇ／ｍｌ、約５μｇ／ｍｌ〜約７μｇ／ｍｌ、約６μｇ／ｍｌ〜約７μｇ／ｍｌ、約１μｇ／ｍｌ〜約６μｇ／ｍｌ、約２μｇ／ｍｌ〜約６μｇ／ｍｌ、約３μｇ／ｍｌ〜約６μｇ／ｍｌ、約４μｇ／ｍｌ〜約６μｇ／ｍｌ、約５μｇ／ｍｌ〜約６μｇ／ｍｌ、約１μｇ／ｍｌ〜約５μｇ／ｍｌ、約２μｇ／ｍｌ〜約５μｇ／ｍｌ、約３μｇ／ｍｌ〜約５μｇ／ｍｌ、約４μｇ／ｍｌ〜約５μｇ／ｍｌ、約１μｇ／ｍｌ〜約４μｇ／ｍｌ、約２μｇ／ｍｌ〜約４μｇ／ｍｌ、約３μｇ／ｍｌ〜約４μｇ／ｍｌ、約１μｇ／ｍｌ〜約３μｇ／ｍｌ、約２μｇ／ｍｌ〜約３μｇ／ｍｌ、または約１μｇ／ｍｌ〜約２μｇ／ｍｌ）である。他の実施形態において、ＭＯＳＰＤ２の阻害剤は、抗体または抗体の抗原結合断片であり、治療有効量は、約１μｇ／ｍｌ、約２μｇ／ｍｌ、約３μｇ／ｍｌ、約４μｇ／ｍｌ、約５μｇ／ｍｌ、約６μｇ／ｍｌ、約７μｇ／ｍｌ、約８μｇ／ｍｌ、約９μｇ／ｍｌ、または約１０μｇ／ｍｌである。
【０２５６】
いくつかの実施形態において、ＭＯＳＰＤ２の阻害剤は、抗体または抗体の抗原結合断片であり、治療有効量は、約１０ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、またはそれらの値のうちの任意の範囲（例えば、約１５ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、約３５ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ〜約３５ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ〜約３５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ〜約３５ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ〜約３５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ〜約３５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ、または約１０ｍｇ／ｋｇ〜約１５ｍｇ／ｋｇ）である。他の実施形態において、ＭＯＳＰＤ２の阻害剤は、抗体または抗体の抗原結合断片であり、治療有効量は、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約３５ｍｇ／ｋｇ、または約４０ｍｇ／ｋｇである。
【０２５７】
いくつかの実施形態において、ＭＯＳＰＤ２の阻害剤（例えば、抗体またはその抗原結合断片）は、ＭＯＳＰＤ２（例えば、ヒトＭＯＳＰＤ２）の１種または複数種の活性（例えば、ＭＯＳＰＤ２発現、炎症細胞遊走（例えば、白血球または単球の遊走）、化学走性（例えば、白血球または単球の化学走性）、ケモカインシグナル伝達経路、ＥＧＦ受容体リン酸化、ＥＲＫリン酸化、ＡＫＴリン酸化、及び／またはＦＡＫリン酸化）の、少なくとも約１０％（例えば、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、またはそれ以上）の阻害を引き起こす。いくつかの実施形態において、ヒト対象へのＭＯＳＰＤ２阻害剤の投与は、ヒトＭＯＳＰＤ２の１種または複数種の活性の少なくとも約１０％（例えば、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、またはそれ以上）の阻害を引き起こす。
【０２５８】
いくつかの実施形態において、１種または複数種の活性は、以下のうちの１種または複数種である：ＭＯＳＰＤ２発現、炎症細胞の遊走、化学走性、ケモカインシグナル伝達経路、ＥＲＫリン酸化、ＡＫＴリン酸化、及び／またはＦＡＫリン酸化。いくつかの実施形態において、これらの活性のうち少なくとも２種、少なくとも３種、少なくとも４種、少なくとも５種、または全てが阻害される。
【０２５９】
いくつかの実施形態において、少なくとも白血球化学走性及びケモカインシグナル伝達経路が阻害される。他の実施形態において、ケモカインシグナル伝達経路の阻害は、ＥＲＫリン酸化及び／またはＡＫＴリン酸化の阻害である。他の実施形態において、化学走性は、２種以上のケモカインまたはケモカイン受容体により誘導される。
【０２６０】
いくつかの実施形態において、炎症細胞は、例えば、白血球、顆粒球、好中球、好塩基球、好酸球、単球、マクロファージ、または肥満細胞である。
【０２６１】
他の実施形態において、化学走性は、炎症細胞、例えば、白血球または単球などと関連する。
【０２６２】
いくつかの実施形態において、ケモカインは、ＣＣＬ１４、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２７、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ−８、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ１１、ＣＸＣＬ１０、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１７、またはＣＣＬ２２である。他の実施形態において、遊走または化学走性は、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＣＰ−３、ＭＣＰ−１、及びＳＤＦ−１の１種または複数種により誘導される。
【実施例】
【０２６３】
ここで以下の実施例を参照して、上記の説明と共に、非限定的な様式で本発明のいくつかの実施形態を例示する。
【０２６４】
材料及び方法
ＭＯＳＰＤ２阻害
Ｕ９３７単球細胞株（ＣＲＬ−１５９３．２）を、アメリカ培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ）（Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ）から入手した。細胞（２ｍｌ中、２×１０６個）を、１５ｍｌ試験管に入れた。対照レンチウイルス粒子（２×１０５個のウイルス粒子）（ＳＨＣ２０２Ｖ、Ｓｉｇｍａ、Ｉｓｒａｅｌ）またはＭＯＳＰＤ２  ｓｈ−ＲＮＡを含有するレンチウイルス粒子（２×１０６個のウイルス粒子、Ｓｉｇｍａ）を細胞に添加し、次いでこれらを、８μｇ／ｍｌのポリブレン（Ｓｉｇｍａ）の存在下、６０分間、２０００ｒｐｍ、室温で遠心した。人工ｓｈＲＮＡヘアピン配列及びＭＯＳＰＤ２上のそれらに対応する標的配列を、配列番号９〜１４に提示する。次いで、細胞を、グルタミン、１０％ウシ胎仔血清（ＦＣＳ）、及びペニシリン／ストレプトマイシンを含有するＲＰＭＩ培地の入った６ウェルプレートに播種した（これらは全てＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ（Ｂｅｉｔ  Ｈａｅｍｅｋ、Ｉｓｒａｅｌ）製）。７２時間後、形質導入された細胞を選択するために、ピューロマイシン（４μｇ／ｍｌ、Ｓｉｇｍａ）を含有する新たな培地を加えた。
【０２６５】
細胞遊走トランスウェルアッセイ
ケモカイン誘導性細胞遊走を試験するため、ＲＡＮＴＥＳ（ＣＣＬ５、１００ｎｇ／ｍｌ）、ＭＣＰ−１（ＣＣＬ２、１００ｎｇ／ｍｌ）、ＭＣＰ−３（ＣＣＬ７、１００ｎｇ／ｍｌ）、またはＳＤＦ−１（ＣＸＣＬ１２、２５ｎｇ／ｍｌ）（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ、Ｉｓｒａｅｌ）を、０．５％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を補充したＲＰＭＩ−１６４０培地に溶解させ、ＱＣＭ２４ウェル、５ｍｍ孔、遊走アッセイプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ−Ｃｏｓｔａｒ、Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＮＹ）の下段チャンバーに入れた。Ｕ９３７細胞（３×１０５個）を、対照レンチウイルス粒子またはＭＯＳＰＤ２  ｓｈ−ＲＮＡ（ｓｈ−ＭＯＳＰＤ２）含有レンチウイルス粒子で形質導入し、上段チャンバーに播種し、２〜４時間インキュベートした。続いて、下段の区画に遊走した細胞数を、蛍光標識細胞分取法（ＦＡＣＳ）により測定した。
【０２６６】
ウエスタンブロット法
ｓｈ−対照またはｓｈ−ＭＯＳＰＤ２レンチウイルスで形質導入されたＵ９３７細胞（１０６個）を、０．５％ＦＣＳ（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ、Ｂｅｉｔ  Ｈａｅｍｅｋ、Ｉｓｒａｅｌ）を含有するＲＰＭＩ培地中で３時間飢餓状態に置き、次いでＲＡＮＴＥＳ（１００ｎｇ／ｍｌ）、ＭＩＰ−１α（１００ｎｇ／ｍｌ）、ＭＣＰ−３（１００ｎｇ／ｍｌ）、またはＳＤＦ−１（２５ｎｇ／ｍｌ）で５分間活性化した。細胞を、１：１００のジチオトレイトール（ＤＴＴ）、ホスファターゼ、及びプロテアーゼ阻害剤（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を含有する溶解緩衝液で洗浄及び再懸濁した。試料を、プレキャストＣｒｉｔｅｒｉｏｎＴＧＸゲル（Ｂｉｏ−Ｒａｄ、Ｈｅｍｅｌ  Ｈｅｍｐｓｔｅａｄ、ＵＫ）にロードし、ニトロセルロース膜に移した。ブロットを、トリス緩衝生理食塩水・Ｔｗｅｅｎ２０（ＴＢＳＴ）中の５％乳またはウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）で１時間ブロッキングし、続いて一次抗体及び二次抗体と共にインキュベートした。ＥＣＬキット（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して、膜を現像した。免疫ブロッティングのため、以下の抗体を使用した。
【０２６７】
一次抗体：抗チューブリン（１：４０００）抗体及び抗リン酸化細胞外制御キナーゼ（ｐ−ＥＲＫ１／２）（Ｔｈｒ１８３及びＴｙｒ１８５、１：４０００）抗体を、Ｓｉｇｍａ（Ｉｓｒａｅｌ）から購入した。抗リン酸化ＡＫＴ（Ｓｅｒ４７３、１：１０００）抗体を、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇから購入した。抗熱ショックタンパク質９０（ＨＳＰ９０）（１：１０００）抗体を、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｄａｌｌａｓ、ＴＸ）から購入した。
【０２６８】
二次抗体：西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）ロバ抗ウサギ（１：５０００）抗体及びＨＲＰヤギ抗マウス（１：５０００）抗体を、Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ（Ｗｅｓｔ  Ｇｒｏｖｅ、ＰＡ）から購入した。
【０２６９】
Ｑ−ＰＣＲ
ＭＯＳＰＤ２阻害を測定するため、ＲＮｅａｓｙミニキット（Ｑｉａｇｅｎ、Ｖａｌｅｎｃｉａ、ＣＡ）を使用して、対照レンチウイルス粒子またはｓｈ−ＭＯＳＰＤ２含有レンチウイルス粒子で形質導入されたＵ９３７細胞からＲＮＡを抽出した。ｃＤＮＡ調製のため、２μｇのＲＮＡを、ｑＳｃｒｉｐｔ反応ミックス及びｑＳｃｒｉｐｔ逆転写酵素（Ｑｕａｎｔａ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）と混合した。反応物をサーマルサイクラー（ＢｉｏＲａｄ、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、ＣＡ）に入れ、メーカーの取扱説明書に従ってランプログラムを設定した。ヒトＭＯＳＰＤ２用プライマーのセット、ＲＮＡレベルを正規化するための２８Ｓ（Ｂｉｏｓｅａｒｃｈ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｐｅｔａｌｕｍａ、ＣＡ）、及びＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎ  ＰＣＲ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｗａｒｒｉｎｇｔｏｎ、ＵＫ）を用いて、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ７３００リアルタイムＰＣＲシステム（Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ、ＮＹ）でリアルタイムＰＣＲ反応を行った。
【０２７０】
ＭＯＳＰＤ２形質移入
ＨＥＫ２９３細胞を、ｊｅｔＰＲＩＭＥ形質移入試薬（Ｐｏｌｙｐｌｕｓ  ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ、Ｆｒａｎｃｅ）を用いて、空のプラスミドまたはヘマグルチニン（ＨＡ）タグ付ヒトＭＯＳＰＤ２をコードするプラスミドで４８時間形質移入した。形質移入効率を、抗ＨＡ−ＰＥ（ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ、Ｇｅｒｍａｎｙ）抗体を用いて、フローサイトメトリーにより測定した。
【０２７１】
ヒト単球の単離
Ｓｈｅｂａ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ（Ｒａｍａｔ  Ｇａｎ、Ｉｓｒａｅｌ）の施設内倫理委員会に従って、健康な男性提供者から静脈血試料を得た。５０ｍｌのＬｅｕｃｏｓｅｐ試験管（Ｇｒｅｉｎｅｒ  Ｂｉｏ−Ｏｎｅ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）をＦｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ  ＰＬＵＳ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｓｗｅｄｅｎ）上に単離した。細胞を、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）（Ｂｅｉｔ  Ｈａｅｍｅｋ、Ｉｓｒａｅｌ）中で洗浄し、ＰＢＳ及び０．５％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含有する緩衝液中、ヒトＣＤ１４マイクロビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ、Ｂｅｒｇｉｓｃｈ  Ｇｌａｄｂａｃｈ、Ｇｅｒｍａｎｙ）とともに、４℃で１５分間インキュベートした。
【０２７２】
細胞下分画
細胞内タンパク質分画キット（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて、メーカーの取扱説明書に従って細胞区画の分画を行った。
【０２７３】
細胞増殖
対照レンチウイルス粒子またはｓｈ−ＭＯＳＰＤ２含有レンチウイルス粒子で形質導入されたＵ９３７細胞を、グルタミン、１０％ＦＣＳ、及びペニシリン／ストレプトマイシンを含有するＲＰＭＩ培地を含む６ウェルプレートに播種した（１ウェルあたり１０４個）（これらは全てＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ（Ｂｅｉｔ  Ｈａｅｍｅｋ、Ｉｓｒａｅｌ）製）。細胞を、３日間連続で２４時間ごとに３つ組のウェルでＦＡＣＳにより計数した。
【０２７４】
実施例１
ＭＯＳＰＤ２とケモカイン誘導性単球遊走
単球遊走におけるＭＯＳＰＤ２の役割を評価するため、ＭＯＳＰＤ２  ｍＲＮＡの３つの異なる領域に向けられたｓｈ−ＲＮＡを含有するレンチウイルス粒子（ｓｈ−ＭＯＳＰＤ２）を用いて、材料及び方法のセクションで記載したとおりＵ９３７細胞においてＭＯＳＰＤ２発現をサイレンシングした。細胞中のＭＯＳＰＤ２  ｍＲＮＡ発現を、定量的ＰＣＲ（Ｑ−ＰＣＲ）を用いて評価し、対照としてのβ−アクチン発現に対して正規化した。図１は、試験したｓｈ−ＭＯＳＰＤ２全てが、ヒトＭＯＳＰＤ２のｍＲＮＡ発現レベルを大幅に低下させたことを示す。次いで、対照レンチウイルス粒子またはｓｈ−ＭＯＳＰＤ２レンチウイルス粒子で形質導入されたＵ９３７細胞を、トランスウェル遊走アッセイを用いて、ケモカイン、すなわちＲＡＮＴＥＳに向かう遊走について試験した。図２及び図３は、ＲＡＮＴＥＳにより誘導された細胞遊走が、ＭＯＳＰＤ２がサイレンシングされていない細胞と比較して、ｓｈ−ＭＯＳＰＤ２で形質導入された細胞において、有意に阻害されたことを示す。
【０２７５】
実施例２
ＭＯＳＰＤ２、ＥＲＫリン酸化、及びＡＫＴリン酸化
ＥＲＫ及びＡＫＴのリン酸化に対するＭＯＳＰＤ２阻害の効果を試験することにより、ケモカイン誘導性シグナル伝達経路の活性化に対するＭＯＳＰＤ２阻害の効果を測定した。対照レンチウイルス粒子またはｓｈ−ＭＯＳＰＤ２レンチウイルス粒子で形質導入されたＵ９３７細胞を、ＲＡＮＴＥＳで２分間または５分間処理し、次いで、ウエスタンブロットによりリン酸化ＥＲＫ及びＡＫＴについて分析した。熱ショックタンパク質９０（ＨＳＰ９０）を、ローディング対照として用いた。図４は、ＭＯＳＰＤ２の阻害が、ＥＲＫ及びＡＫＴのＲＡＮＴＥＳ誘導性リン酸化をほぼ完全に消失させたことを示す。
【０２７６】
実施例３
ＭＯＳＰＤ２とケモカイン受容体駆動性シグナル伝達
他のケモカインに対するＭＯＳＰＤ２阻害の効果も試験した。対照レンチウイルス粒子またはｓｈ−ＭＯＳＰＤ２レンチウイルス粒子で形質導入されたＵ９３７細胞を、トランスウェルアッセイでＭＣＰ−３、ＭＣＰ−１、ＲＡＮＴＥＳ、及びＳＤＦ−１に向かう遊走について試験し、ウエスタンブロットによりリン酸化ＥＲＫ及びＡＫＴのレベルについて試験した。図５は、ＭＯＳＰＤ２阻害が、全ての試験したケモカインにより誘導される細胞遊走を有意に阻害したことを示す。さらに、図６は、ＭＯＳＰＤ２の阻害が、全ての試験したケモカインにより誘導されるＥＲＫ及びＡＫＴのリン酸化をほぼ完全に消失させたことを示す。そのため、遊走及びシグナル伝達に対するＭＯＳＰＤ２阻害の効果は、一つのケモカインまたはケモカイン受容体経路に限定されない。
【０２７７】
実施例４
ＭＯＳＰＤ２とＵ９３７細胞増殖
Ｕ９３７細胞増殖に対するＭＯＳＰＤ２阻害の効果も試験した。対照レンチウイルス粒子またはｓｈ−ＭＯＳＰＤ２レンチウイルス粒子で形質導入されたＵ９３７細胞を、方法及び材料で記載したとおりに播種し、３日間連続して２４時間ごとに計数した。図７は、ＭＯＳＰＤ２阻害が、Ｕ９３７増殖に影響しなかったことを示し、このことは、遊走及びシグナル伝達に対するＭＯＳＰＤ２阻害の効果が、ケモカイン受容体の下流の細胞内プロセスの阻害により生じるのであって、単球活性全般を阻害することによるのではないことを示唆する。
【０２７８】
実施例５
抗ＭＯＳＰＤ２抗体
抗ＭＯＳＰＤ２ポリクローナル抗体を、以下の方法に従って作製した。
【０２７９】
材料及び方法
ヘマグルチニン（ＨＡ）タグ付組換えヒトＭＯＳＰＤ２（ＨＡ−ｒｈＭＯＳＰＤ２）の作製及び精製
ＥｃｏＲＩ及びＸｂａＩ制限部位を用いて、全長ヒトＭＯＳＰＤ２  ｃＤＮＡを、レンチウイルスプラスミドベクターｐＬＶＸ−ＥＦ１α−ＩＲＥＳ−Ｐｕｒｏ（Ｃｌｏｎｅｔｅｃｈ、ＣＡ）に挿入した。ＥｃｏＲＩ制限部位を用いて、ＨＡタグ
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をコードするオリゴヌクレオチドを、ＭＯＳＰＤ２のＮ末端領域に挿入した。形質導入のため、Ａ２０５８黒色腫細胞（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１１１４７、ＶＡ）を、８μｇ／ｍｌのポリブレン（Ｓｉｇｍａ、Ｉｓｒａｅｌ）及びＨＡ−ｒｈＭＯＳＰＤ２発現ベクター含有レンチウイルス粒子の存在下、６０分間、２０００ｒｐｍで、室温で回転させた。次いで、細胞を６ウェルプレートに播種した。７２時間後、形質導入された細胞を選択するために、ピューロマイシン（４μｇ／ｍｌ、Ｓｉｇｍａ、Ｉｓｒａｅｌ）を含有する新たな培地を加えた。ＨＡ−ｒｈＭＯＳＰＤ２を精製するため、Ａ２０５８形質導入細胞を、Ｍ−ＰＥＲ哺乳類タンパク質抽出試薬（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で溶解させ、抗ＨＡアガロースビーズ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に通した。グリシンまたはチオシアン酸ナトリウムを用いて、ビーズからＨＡ−ｒｈＭＯＳＰＤ２を溶出させ、続いてＰＢＳに対して十分に透析した。
【０２８０】
α−ＭＯＳＰＤ２ポリクローナル抗体の作製及び単離
ウサギを、完全フロイントアジュバントに乳化させたＨＡ−ｒｈＭＯＳＰＤ２約０．５ｍｇで免疫化し、続いて３週間ごとに、不完全フロイントアジュバントに乳化させたＨＡ−ｒｈＭＯＳＰＤ２約０．２５ｍｇを用いた追加免疫を３回行った。各追加免疫の１週間後に血清を収集して、抗体免疫原性及び力価を評価した。タンパク質Ａ／Ｇビーズ（ＳａｎｔａＣｒｕｚ、ＣＡ）を用いて、α−ＭＯＳＰＤ２抗体を血清から単離した。
【０２８１】
結果
ウサギポリクローナルα−ＭＯＳＰＤ２抗体は、内因性ヒトＭＯＳＰＤ２を検出し沈殿させる
単離したα−ＭＯＳＰＤ２ポリクローナル抗体を、それらの内因性ヒトＭＯＳＰＤ２を検出し沈殿させる能力について評価した。対照またはｓｈ−ＭＯＳＰＤ２レンチウイルス粒子で形質導入されたＵ９３７細胞から細胞溶解液を調製した。試料を、単離したα−ＭＯＳＰＤ２抗体（１：５０００に希釈）を用いてウエスタンブロットにより分析した。ＨＳＰ９０の発現を、ローディング対照として測定した。Ｕ３９７細胞溶解液の免疫沈降も、単離したα−ＭＯＳＰＤ２抗体または対照としてのウサギＩｇＧ（１０μｇ）を用いて行った。得られる沈殿物を、単離したα−ＭＯＳＰＤ２抗体を用いて免疫ブロッティングし、続いて、ヤギ抗ウサギ抗体−ＨＲＰ（１：５０００）とともにインキュベーションすることにより分析した。図８は、単離したα−ＭＯＳＰＤ２抗体が、Ｕ９３７細胞において内因的に発現したＭＯＳＰＤ２を容易に検出し（図８Ａ）免疫沈降させる（図８Ｂ）ことを示す。
【０２８２】
実施例６
ＭＯＳＰＤ２細胞内局在性
ＭＯＳＰＤ２の細胞内局在性を、方法及び材料で記載したとおりに空プラスミドまたはＨＡタグ付ヒトＭＯＳＰＤ２プラスミドで形質移入されたＨＥＫ２９３細胞を用いて調べた。次いで、ＨＥＫ２９３細胞を、表面染色のみを可能にする条件下（洗浄剤なし）で、抗ＨＡ抗体で染色した。図９は、ＨＡタグ付ヒトＭＯＳＰＤ２プラスミドで形質移入された細胞が、細胞形質膜上に該タンパク質を発現したことを示す。内因性ＭＯＳＰＤ２が細胞膜にも局在化できるかどうかを決定するため、初代ヒトＣＤ１４単球から細胞内画分を単離し、ＭＯＳＰＤ２の存在について試験した（方法及び材料を参照）。図１０の結果は、ＭＯＳＰＤ２が膜で見出されること、及び細胞質画分では見出されないことを示す。ＥＲＫ及びＭＨＣクラスＩ抗体を用いて、それぞれ、細胞質画分及び膜画分の純度を実証した。
【０２８３】
実施例７
ＶＢ−２０１はＭＯＳＰＤ２を阻害する
ＶＢ−２０１及びＶＢ−２２１の標識化
ＶＢ−２０１及びＶＢ−２２１を、以下のとおりビオチンで標識した。ＶＢ−２０１、ＶＢ−２２１、及び卵白アルブミン（ＯＶＡ、Ｓｉｇｍａ、Ｉｓｒａｅｌ）を、０．１ＭのＭＥＳ緩衝液（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）に溶解させ、ＥＤＣ［１−エチル−３−（ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドＨＣｌ］（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて、１００（ＶＢ−２０１／ＶＢ−２２１）：１（ＯＶＡ）：２４０（ＥＤＣ）のモル比で、室温で２〜３時間コンジュゲートさせた。その後、試料を１０ｋＤａ透析カセット（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に移し、ＰＢＳに対して一晩透析した。次いで、卵白アルブミンが結合したＶＢ−２０１（ＯＢ２０１）及びＶＢ−２２１（ＯＢ２２１）を、ＥＤＣを用いて、１（ＯＢ２０１／ＯＢ２２１）：１００（アミン−ＰＥＧ２−ビオチン）：７００（ＥＤＣ）のモル比で、アミン−ＰＥＧ２−ビオチンとコンジュゲートさせた（０．１ＭのＭＥＳ緩衝液中）。反応を、室温で２〜３時間進行させ、その後、試料を再び１０ｋＤａ透析カセットに移して、ＰＢＳに対して一晩透析した。
【０２８４】
フローサイトメトリーによるＶＢ−２０１及びＶＢ−２２１の細胞表面結合特異性
ストレプトアビジン−ＡＰＣ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）を用いて、フローサイトメトリー実験で、標識化ＶＢ−２０１またはＶＢ−２２１の結合を検出した。
【０２８５】
沈殿
１：１００のプロテアーゼ阻害剤及びホスファターゼ阻害剤を含有する１％ＮＰ−４０溶解緩衝液を用いて細胞を溶解させ、続いて氷上で２０分間インキュベートし、最大速度で１５分遠心した。試料を、溶媒、ＯＢ２０１、またはＯＢ２２１とともに、ローテ―ター中４℃で一晩インキュベートした。ストレプトアビジンアガロースビーズ（Ｓｉｇｍａ、Ｉｓｒａｅｌ）を２時間加えた。ＤＴＴを含まない溶解緩衝液を用いて、室温で１０分間タンパク質の溶出を行った。試料のロード、移行、及び免疫ブロッティングを、上記のとおり行った。
【０２８６】
結果
ＶＢ−２０１は、表面に発現したＭＯＳＰＤ２と結合する
ＶＢ−２０１は、インビトロ及びインビボで単球の遊走を阻害することが、既に示されていた。しかしながら、ＶＢ−２０１の誘導体であるＶＢ−２２１は、ヒト単球において、ケモカイン誘導性のシグナル伝達及び遊走を阻害しなかった。標識化ＶＢ−２０１及びＶＢ−２２１を用いて、ヒト単球由来のタンパク質を沈殿させ、質量分析法により差次的表示を調べた。質量分析結果から、ＭＯＳＰＤ２は、ＶＢ−２０１に強く結合するが、ＶＢ−２２１にはそうではないことが明らかとなった。
【０２８７】
これらの結果をさらに検証するため、標識化ＶＢ−２０１及びＶＢ−２２１をヒトＣＤ１４単球由来の細胞溶解物に使用した。次いで、試料を、抗ＭＯＳＰＤ２及びＴＬＲ２でプローブ標識した。ＶＢ−２０１及びＶＢ−２２１は、同等な強度でＴＬＲ２を沈殿させたものの、ＶＢ−２０１は、ＶＢ−２２１よりも顕著に強くＭＯＳＰＤ２を沈殿させた（図１１）。これらの結果も、ＶＢ−２０１がＭＯＳＰＤ２と結合することを示す。
【０２８８】
ＶＢ−２０１が、細胞表面上に発現したときの天然型ＭＯＳＰＤ２と結合できるかどうかを評価するための試験も行った。すなわち、ＨＥＫ２９３細胞を、ＨＡタグ付ヒトＭＯＳＰＤ２をコードするプラスミドで形質移入し、次いで、標識化ＶＢ−２０１またはＶＢ−２２１で染色した。図１２は、ＭＯＳＰＤ２を発現する細胞を標識化ＶＢ−２０１が大いに染色した（ＨＡ陽性）のに対し、標識化ＶＢ−２２１では弱い染色しか検出されなかったことを示す。まとめると、これらの結果は、ＶＢ−２０１は、細胞表面に発現したヒトＭＯＳＰＤ２と結合できることを示す。
【０２８９】
実施例８
抗ＭＯＳＰＤ２（Ｆａｂ’）２モノクローナル抗体の作製
抗ＭＯＳＰＤ２（Ｆａｂ’）２モノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、ＨｕＣＡＬ  ＰＬＡＴＩＮＵＭ（登録商標）プラットフォーム（Ｂｉｏ−Ｒａｄ  ＡｂＤ  Ｓｅｒｏｔｅｃ、ＧｍｎＨ）を用いて得た。このプラットフォームは、一揃いのファージディスプレイされたヒトＦａｂを含有する。
【０２９０】
手短に述べると、ヒトＦｃと融合したＭＯＳＰＤ２の細胞外領域の組換えタンパク質を、固相支持体に固定した。ファージ粒子上に提示されたＨｕＣＡＬ（登録商標）ライブラリーを、固定された抗原とともにインキュベートした。全面洗浄により非特異的抗体を除去し、還元剤を加えることにより特異的抗体ファージを溶出させた。抗体ＤＮＡをプールとして単離し、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）発現ベクターにサブクローニングして、二価Ｆ（ａｂ’）２ｍＡｂを作製した。コロニーをピックアップして、マイクロタイタープレートで成長させた。培養物を溶解させて、抗体分子を遊離させ、ＥＬＩＳＡ及びＦＡＣＳにより特異的抗原結合についてスクリーニングした。一工程アフィニティークロマトグラフィーを用いて特有抗体を発現させて精製し、次いで、特異性についてＥＬＩＳＡ及びＦＡＣＳにより再度試験した。
【０２９１】
図１３は、ＭＯＳＰＤ２を過剰発現する細胞との結合についての一次スクリーニング後に同定された１７種の抗ＭＯＳＰＤ２  Ｆ（ａｂ’）２モノクローナル抗体クローンを列挙する。ＭＯＳＰＤ２結合についてＥＬＩＳＡでクローンをさらに分析した結果、バックグラウンドの５倍超の値を有するクローンが１２種同定された（図１３中の＊）。
【０２９２】
実施例９
抗ＭＯＳＰＤ２  Ｆ（ａｂ’）２  ｍＡｂは、細胞で過剰発現したヒトＭＯＳＰＤ２と結合する
Ａ２０５８黒色腫細胞を、ＨＡタグ付ヒトＭＯＳＰＤ２で形質移入して、ＭＯＳＰＤ２を過剰発現する細胞を作製した。
【０２９３】
次いで、実施例８で同定された１２種の抗体クローンとＭＯＳＰＤ２との結合を、これらの細胞を用いてフローサイトメトリーにより試験した。具体的には、１０５個の細胞を、１００μｌのＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ＋２％ＦＣＳ＋０．０２％アジ化ナトリウム）中、２．５μｇのＦ（ａｂ’）２  ｍＡｂとともに、４℃で１時間、インキュベートした。次いで、細胞を洗浄し、ＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁し、Ａｌｅｘａ−Ｆｌｕｏｒ６４７コンジュゲート（Ｆａｂ’）２ヤギ抗ヒトＩｇＧ、Ｆ（ａｂ’）２１：２００（カタログ番号１０９−６０６−０９７、Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ、ＰＡ）を用いて、４℃で３０分間染色した。細胞を洗浄し、ＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁し、ＦＡＣＳ−Ｃａｌｉｂｕｒ装置で分析した。
【０２９４】
全てのクローンが、細胞を陽性に染色した。２種のクローンについて代表的な染色を図１４Ａ〜図１４Ｂに示す。実施例８でＥＬＩＳＡを用いて陽性クローンとして同定されなかったクローンは、陰性対照として用いた。
【０２９５】
実施例１０
ＭＯＳＰＤ２の細胞発現特異性及び局在性の明確化
異なる免疫細胞サブ集団の分析から、ＭＯＳＰＤ２は、Ｔリンパ球及びＢリンパ球よりもＣＤ１４＋単球で優勢に発現することが示された（図１５Ａ）。ＭＯＳＰＤ２  ｍＲＮＡ発現レベルを測定するため、ＲＮｅａｓｙミニキット（Ｑｉａｇｅｎ、ＶａｌｅｎＶＢａ、ＣＡ）を用いて、ＲＮＡを細胞から抽出した。ｃＤＮＡ調製のため、２μｇのＲＮＡをｑＳｃｒｉｐｔ反応ミックス及びｑＳｃｒｉｐｔ逆転写酵素（Ｑｕａｎｔａ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）と混合した。反応物を、サーマルサイクラー（ＢｉｏＲａｄ、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、ＣＡ）に入れ、メーカーの取扱説明書に従ってランをプログラムした。ヒトＭＯＳＰＤ２用プライマーのセット、ＲＮＡレベルを正規化するための２８Ｓ（ＢＩＯＳＥＡＲＣＨ  ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＩＥＳ、Ｐｅｔａｌｕｍａ、ＣＡ）、及びＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎ  ＰＣＲ  Ｍａｓｔｅｒミックス（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｗａｒｒｉｎｇｔｏｎ、ＵＫ）を用いて、リアルタイムＰＣＲ反応を、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ７３００リアルタイムＰＣＲシステム（Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ、ＮＹ）で行った。
【０２９６】
ＭＯＳＰＤ２は、１つの膜貫通領域及び１残基長の細胞内テイルを持つ形質膜タンパク質であると予想される。細胞区画の分画、及びヒト単球の免疫蛍光染色、及びＨＡタグ付ＭＯＳＰＤ２を過剰発現するように形質移入されたＨＥＫ２９３細胞のフローサイトメトリー（上記の方法に従って行われる）から、ＭＯＳＰＤ２は、ヒト単球の形質膜上に発現する細胞表面タンパク質であることが、明らかとなった（それぞれ、図１５Ｂ〜図１５Ｄ）。
【０２９７】
実施例１１
ＭＯＳＰＤ２は、炎症組織に浸潤した単球で発現する
ホルマリン固定した組織を脱水し、パラフィンに包埋し、４μｍの切片にした。免疫染色は、Ｂｅｎｃｈｍａｒｋ  ＸＴ染色モジュール（Ｖｅｎｔａｎａ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）で十分に較正した。切片を脱ロウし再水和させた後、それぞれ１：８０及び１：１００に希釈した抗ＣＤ１６３（Ｃｅｌｌ  Ｍａｒｑｕｅ、Ｒｏｃｋｌｉｎ、ＵＳＡ、ＭＲＱ−２６）または抗ＭＯＳＰＤ２を加えて、４０分間静置した。抗ＣＤ１６３染色は、ＵｌｔｒａＶｉｅｗ汎用アルカリホスファターゼ赤色検出キット（Ｖｅｎｔａｎａ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、７６０−５０１）を用いて検出し、抗ＭＯＳＰＤ２染色は、ＵｌｔｒａＶｉｅｗ汎用ＤＡＢ検出キット（Ｖｅｎｔａｎａ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、７６０−５００）を用いて検出した。二重染色を適用した場合、ＭＯＳＰＤ２染色を先に行い、続いてＣＤ１６３染色を行った。スライドを、ヘマトキシリン（Ｖｅｎｔａｎａ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）で対比染色した。自動染色のランが完了した後、スライドを７０％エタノール、９５％エタノール、及び１００％エタノールに順次入れ、各回１０秒間脱水を行った。カバーを乗せる前に、切片を１０秒間キシレンに入れて透徹し、エンテランを用いてマウントした。ＭＯＳＰＤ２及びＣＤ１６３染色したスライドをＯｌｙｍｐｕｓ  ＢＸ５１顕微鏡で観察した。画像は、Ｎｉｋｏｎ  Ｄｉｇｉｔａｌ  Ｓｉｇｈｔカメラ及びＮＩＳ  Ｅｌｅｍｅｎｔｓ  Ｉｍａｇｉｎｇソフトウェアを用いて撮影した。
【０２９８】
図１６Ａ〜図１６Ｃに示すとおり、ＭＯＳＰＤ２は、様々な炎症組織に浸潤した単球で発現する。図１６Ａは、関節リウマチ患者由来の滑膜を、ＣＤ１６３、ＭＯＳＰＤ２、またはＣＤ１６３及びＭＯＳＰＤ２両方について染色したものを示す。図１６Ｂは、アテローム硬化性頸動脈組織を、ＣＤ１６３、ＭＯＳＰＤ２、またはＣＤ１６３及びＭＯＳＰＤ２両方について染色したものを示す。図１６Ｃは、浸潤性乳管癌乳房組織をＭＯＳＰＤ２について染色したものを示す。濃い色の矢印は、腫瘍細胞の陽性染色を示す。薄い色の矢印は、浸潤性単球の染色を示す。
【０２９９】
実施例１２
ＭＯＳＰＤ２は、ＩＦＮ−ガンマ誘導性活性化またはＰＫＣ媒介性活性化に影響を及ぼさない
ＭＯＳＰＤ２を標的とすることは、単球の遊走以外の生体機能を損ねなかった。Ｕ９３７単球株の細胞を、上記のとおりｓｈ−レンチ対照またはｓｈ−レンチＭＯＳＰＤ２ウイルス粒子で形質導入し、ＩＦＮ−ガンマまたはＰＭＡで処理した。処理した細胞のウエスタンブロット分析は、ＭＯＳＰＤ２のサイレンシングが、下流のシグナル伝達マーカーのＩＦＮ−ガンマまたはＰＭＡによるリン酸化を変更しなかったことを示した（それぞれ、図１７Ａ及び図１７Ｂ）。これらの結果は、ＭＯＳＰＤ２が単球遊走を特異的に促進することを示唆する。
【０３００】
実施例１３
抗ＭＯＳＰＤ２抗体のエピトープマッピング
抗ＭＯＳＰＤ２抗体がヒトＭＯＳＰＤ２上で特異的に結合する可能性があるエピトープ（複数可）を決定するため、本明細書中記載されるとおり、ストレプトアビジン（ＳＡ）チップにあらかじめ固定されたＳＡを介してＮ末端ビオチン化ＭＯＳＰＤ２断片を捕捉し、ＭＯＳＰＤ２表面全体にわたって測定される抗ＭＯＳＰＤ２抗体の結合動態を測定することにより（ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）３０００（商標）表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）システム、Ｂｉａｃｏｒｅ、Ｉｎｃ．、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ  ＮＪ）、様々なヒトＭＯＳＰＤ２断片に対する結合親和性を測定する。ＢＩＡｃｏｒｅアッセイは、ＨＢＳ−ＥＰランニング緩衝液（１０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、１５０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、０．００５％ｖ／ｖのポリソルベートＰ２０）中で行われる。Ｎ−ビオチン化ＭＯＳＰＤ２をＨＢＳ−ＥＰ緩衝液中で０．００１ｍｇ／ｍＬ未満の濃度まで希釈して、これを、ＳＡセンサーチップ全体に、様々な接触時間を用いて注入することにより、ＭＯＳＰＤ２表面を調製する。捕捉レベルが＜５０反応単位（ＲＵ）に相当する低容量表面を、高分解能動態試験用に用い、一方、高容量表面（約８００ＲＵのＭＯＳＰＤ２捕捉）は、濃度試験、スクリーニング、及び溶液親和性測定に用いる。
【０３０１】
抗体Ｇ１  Ｆａｂを２倍または３倍の希釈幅で系列希釈して、１μＭ〜０．１ｎＭの範囲の濃度にする（推定Ｋｄの０．１〜１０倍を目的とする）ことにより、動態データを得る。試料は、典型的には、１００μＬ／分で１分間注入し、少なくとも１０分の解離時間を持たせる。各結合サイクル後に、表面を、２５ｍＭのＮａＯＨ含有２５％ｖ／ｖエタノールで再生させる。表面は、このサイクルを数百回行っても耐える。全濃度系列（ｔｉｔｒａｔｉｏｎ  ｓｅｒｉｅｓ）（典型的には２つ組で作製される）を、ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎプログラムを用いて、包括的に１：１ラングミュア結合モデルに当てはめた。この結果、各結合相互作用について結合及び解離動態速度定数（それぞれ、Ｋｏｎ及びＫｏｆｆ）の特有の対が得られ、その比が平衡解離定数（ＫＤ＝Ｋｏｆｆ／Ｋｏｎ）となる。
【０３０２】
抗ＭＯＳＰＤ２抗体は、配列番号１に従って付番された（アミノ酸残基１〜５１８）、ヒトＭＯＳＰＤ２の以下のアミノ酸領域の１つまたは複数に特異的に結合する可能性がある：５０８〜５１７、５０１〜５１４、２３３〜２４１、５０９〜５１７、２１２〜２２１、１３〜２４、５０５〜５１７、５０５〜５１４、８９〜１００、５０６〜５１７、２３３〜２４５、５０４〜５１４、１２８〜１３６、２１８〜２２６、１５〜２４、８３〜９６、４２〜５０、４６２〜４７４、３４０〜３５１、５０４〜５１７、４６２〜４７０、３２７〜３３７、２１〜３２、２１７〜２２６、５１０〜５１７、１７８〜１９０、４９７〜５０９、５０４〜５１６、６４〜７７、５０４〜５１５、１４７〜１５９、５０３〜３１５、８８〜９７、２０８〜２１８、１７８〜１９１、５０２〜５１５、５０３〜５１６、４９７〜５０５、５００〜５０９、１８９〜２０２、１８９〜１９７、５０５〜５１６、１〜６３、８２〜２３９、９３〜２３４、３２７〜４４５、３２７〜４３１、及び４９７〜５１７。
【０３０３】
実施例１４
さらなる抗ＭＯＳＰＤ２抗体
実施例５（ポリクローナル抗体）または実施例８（モノクローナル抗体）に記載される方法に従って、１つまたは複数のＭＯＳＰＤ２エピトープを認識するさらなる抗ＭＯＳＰＤ２抗体を作製する。
【０３０４】
簡単に述べると、実施例１４でＭＯＳＰＤ２エピトープとして同定されたＭＯＳＰＤ２の部分を、ヒトＦｃと融合させて、固相支持体に固定する。ファージ粒子上に提示されたＨｕＣＡＬ（登録商標）ライブラリー（ＨｕＣＡＬ  ＰＬＡＴＩＮＵＭ（登録商標）Ｐｌａｔｆｏｒｍ、Ｂｉｏ−Ｒａｄ  ＡｂＤ  Ｓｅｒｏｔｅｃ、ＧｍｎＨ）を、固定された抗原とともにインキュベートする。全面洗浄により非特異的抗体を除去し、還元剤を加えて特異的抗体ファージを溶出させる。抗体ＤＮＡをプールとして単離し、大腸菌発現ベクターにサブクローニングして、二価Ｆ（ａｂ’）２  ｍＡｂを作製する。コロニーをピックアップし、マイクロタイタープレートで成長させる。培養物を溶解させて、抗体分子を遊離させ、ＥＬＩＳＡ及びＦＡＣＳにより特異的抗原結合についてスクリーニングする。一工程アフィニティークロマトグラフィーを用いて特有抗体を発現させて精製し、次いで、特異性についてＥＬＩＳＡ及びＦＡＣＳにより再度試験する。
【０３０５】
本明細書中言及される全ての文献、特許、及び特許出願は、それぞれ個々の文献、特許、または特許出願が、具体的かつ個別に本明細書中参照により援用されると示されたのと同程度まで、その全体が、本明細書に参照により援用される。また、本出願中の任意の参照についての引用及び特定は、その参照が本発明の先行技術として利用可能であることの承認であると見なしてはならない。セクションの見出しが使用される限りにおいて、それらは、必然的に限定として見なしてはならない。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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