(57)【要約】  本開示は、グルカゴン受容体遮断薬を用いて心不全を治療または予防するための方法に関する。種々の実施形態において、本開示は、ヒトグルカゴン受容体に特異的に結合してその機能に拮抗するアンタゴニスト性抗原結合タンパク質、例えば完全ヒト抗体、を用いて心不全（例えば、心筋梗塞後心不全）、糖尿病性心筋症性心不全）、および側脳室（ＬＶ）リモデリングを治療または予防するための方法に関する。【選択図】  図２２
2018528210.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象に、ヒトグルカゴン受容体に特異的に結合する治療有効量の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質を投与することを含む、対象における心不全を治療するための方法。
【請求項２】
（ａ）心不全を発症する危険性がある対象を特定すること、および（ｂ）対象に、ヒトグルカゴン受容体に特異的に結合する治療有効量の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質を投与すること、を含む、心不全を発症する危険性がある対象における心不全を予防する方法。
【請求項３】
対象に、ヒトグルカゴン受容体に特異的に結合する治療有効量の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質を投与することを含む、対象における心筋梗塞後心不全を治療するための方法。
【請求項４】
（ａ）心筋梗塞後心不全を発症する危険性がある対象を特定すること、および（ｂ）対象に、ヒトグルカゴン受容体に特異的に結合する治療有効量の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質を投与すること、を含む、心筋梗塞後心不全を発症する危険性がある対象における心筋梗塞後心不全を予防する方法。
【請求項５】
対象に、ヒトグルカゴン受容体に特異的に結合する治療有効量の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質を投与することを含む、対象における糖尿病性心筋症性心不全を治療するための方法。
【請求項６】
（ａ）糖尿病性心筋症を発症する危険性がある対象を特定すること、および（ｂ）対象に、ヒトグルカゴン受容体に特異的に結合する治療有効量の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質を投与すること、を含む、糖尿病性心筋症を発症する危険性がある対象における糖尿病性心筋症性心不全を予防する方法。
【請求項７】
ヒトグルカゴン受容体に特異的に結合する治療有効量の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質の投与を含む、側脳室（ＬＶ）リモデリングを治療する方法。
【請求項８】
単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質が、完全ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、抗原結合性抗体断片、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ２、Ｆａｂ’２、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、ｄＡｂ、ナノボディ、ユニボディ、ダイアボディ、またはヘミボディから選択される単離抗体を含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
単離アンタゴニスト性抗体または抗原結合性抗体断片が、少なくとも約１×１０−７Ｍ、少なくとも約１×１０−８Ｍ、少なくとも約１×１０−９Ｍ、少なくとも約１×１０−１０Ｍ、少なくとも約１×１０−１１Ｍ、少なくとも約１×１０−１２Ｍの解離定数（ＫＤ）でヒトグルカゴン受容体に特異的に結合する、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
単離アンタゴニスト性抗体が完全ヒト抗体である、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
完全ヒト抗体が、配列番号２の重鎖可変領域をコードするアミノ酸配列および配列番号３の軽鎖可変領域をコードするアミノ酸配列を含むヒト抗ＧＣＧＲ抗体を含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
完全ヒト抗体が、配列番号４の重鎖可変領域をコードするアミノ酸配列および配列番号５の軽鎖可変領域をコードするアミノ酸配列を含むヒト抗ＧＣＧＲ抗体を含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
完全ヒト抗体が、配列番号６の重鎖可変領域をコードするアミノ酸配列および配列番号７の軽鎖可変領域をコードするアミノ酸配列を含むヒト抗ＧＣＧＲ抗体を含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
完全ヒト抗体が、配列番号５１の重鎖をコードするアミノ酸配列および配列番号５２の軽鎖をコードするアミノ酸配列を含むヒト抗ＧＣＧＲ抗体を含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１５】
抗体が、配列番号８の重鎖をコードするアミノ酸配列および配列番号９の軽鎖をコードするアミノ酸配列を含むキメラ抗ＧＣＧＲ抗体を含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１６】
単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質の治療有効量が、１週間当たり、０．００１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重、０．００１〜９０ｍｇ／ｋｇ体重、０．００１〜８０ｍｇ／ｋｇ体重、０．００１〜７０ｍｇ／ｋｇ体重、０．００１〜６０ｍｇ／ｋｇ体重、０．００１〜５０ｍｇ／ｋｇ体重、０．００１〜４０ｍｇ／ｋｇ体重、０．００１〜３０ｍｇ／ｋｇ体重、０．００１〜２０ｍｇ／ｋｇ体重、０．００１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重、０．００１〜５ｍｇ／ｋｇ体重、０．００１〜４ｍｇ／ｋｇ体重、０．００１〜３ｍｇ／ｋｇ体重、０．００１〜２ｍｇ／ｋｇ体重、０．００１〜１ｍｇ／ｋｇ体重、０．０１０〜５０ｍｇ／ｋｇ体重、０．０１０〜４０ｍｇ／ｋｇ体重、０．０１０〜３０ｍｇ／ｋｇ体重、０．０１０〜２０ｍｇ／ｋｇ体重、０．０１０〜１０ｍｇ／ｋｇ体重、０．０１０〜５ｍｇ／ｋｇ体重、０．０１０〜４ｍｇ／ｋｇ体重、０．０１０〜３ｍｇ／ｋｇ体重、０．０１０〜２ｍｇ／ｋｇ体重、０．０１０〜１ｍｇ／ｋｇ体重、０．１〜５０ｍｇ／ｋｇ体重、０．１〜４０ｍｇ／ｋｇ体重、０．１〜３０ｍｇ／ｋｇ体重、０．１〜２０ｍｇ／ｋｇ体重、０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重、０．１〜５ｍｇ／ｋｇ体重、０．１〜４ｍｇ／ｋｇ体重、０．１〜３ｍｇ／ｋｇ体重、０．１〜２ｍｇ／ｋｇ体重、０．１〜１ｍｇ／ｋｇ体重、０．５〜５０ｍｇ／ｋｇ体重、０．５〜４０ｍｇ／ｋｇ体重、０．５〜３０ｍｇ／ｋｇ体重、０．５〜２０ｍｇ／ｋｇ体重、０．５〜１０ｍｇ／ｋｇ体重、０．５〜５ｍｇ／ｋｇ体重、０．５〜４ｍｇ／ｋｇ体重、０．５〜３ｍｇ／ｋｇ体重、０．５〜２ｍｇ／ｋｇ体重、０．５〜１ｍｇ／ｋｇ体重、１〜５０ｍｇ／ｋｇ体重、１〜４０ｍｇ／ｋｇ体重、１〜３０ｍｇ／ｋｇ体重、１〜２０ｍｇ／ｋｇ体重、１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重、１〜５ｍｇ／ｋｇ体重、１〜４ｍｇ／ｋｇ体重、１〜３ｍｇ／ｋｇ体重、１〜２ｍｇ／ｋｇ体重、および１ｍｇ／ｋｇ体重から選択される、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
（ａ）対象に、ヒトグルカゴン受容体に特異的に結合する治療有効量の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質を投与すること；並びに（ｂ）対象に、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、βアドレナリン遮断薬、アンジオテンシン（ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｏｎ）ＩＩ受容体遮断薬（ＡＲＢ）、利尿薬、およびジギタリスからなる群から選択される抗心不全薬を投与すること、を含む、治療を必要とする対象における心不全を治療するための方法。
【請求項１８】
単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質を薬剤的に許容できる担体と混合することで、対象への全身投与のための医薬組成物を形成する、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
全身投与が静脈内注射、筋肉内注射、皮下注射、腹腔内注射、経皮注射（ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ  ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）、動脈内注射、胸骨内注射、くも膜下腔内注射、脳室内注射、尿道内注射、頭蓋内注射、滑液包内注射または点滴から選択される、請求項１８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１５年９月４日に出願された米国仮出願第６２／２１４，４４９号、および２０１５年１１月２４日に出願された米国仮出願第６２／２５９，０６１号に基づく優先権を主張するものであり、これら各々の米国仮特許出願はその全体が参照によって本明細書に援用される。
【背景技術】
【０００２】
心不全（ＨＦ）は、推定有病率が全世界で患者数３８，０００，０００人、内６，０００，０００人が合衆国内、の世界的な問題であり、米国では毎年５５０，０００人を超える患者がＨＦと新たに診断されている。ＨＦは、６５歳以上の入院患者においては最も一般的な診断であり、先進国における疾病および死亡の最も大きな原因の１つである。
【０００３】
心不全は、心臓が十分な血液を送り出せず、全身的な要求を満たすことができないことを特徴とする臨床症状である。心臓は心拍毎に収縮と弛緩を行い、これらの期は収縮期（ｓｙｓｔｏｌｅ）（収縮期（ｃｏｎｔｒａｃｔｉｏｎ  ｐｈａｓｅ））および拡張期（ｄｉａｓｔｏｌｅ）（弛緩期（ｒｅｌａｘａｔｉｏｎ  ｐｈａｓｅ））と呼ばれる。収縮期心不全（ＳＨＦ）は低い駆出率を特徴とする。拡張期心不全（ＤＨＦ）患者は、収縮は正常である場合があるが、心臓の弛緩に障害がある場合がある。この機能障害は一般的には心室の硬直によって引き起こされる。このような機能障害は拡張機能障害と称され、肺鬱血（肺の血管内の圧力および体液の増加）を引き起こすほどの重症の場合、拡張期心不全と称される。ＤＨＦ患者は「正常な」駆出率を有し得るという点で、ＳＨＦ患者とは異なる。しかし、心室が正常に弛緩しないため、心室内の圧力が増加し、心室を満たす血液が「正常」値を超えてしまう。ある特定の種類の心筋症を有する人は、拡張機能障害も有する場合がある。
【０００４】
左室肥大（ＬＶＨ）は、左心室の負荷増大を原因とする、左心室の肥厚を指す。ＬＶＨは、心血管障害の重要なマーカーになる可能性があり、最も一般的な合併症には不整脈、心不全、虚血性心疾患、および突然死が含まれる。ＬＶＨは加齢に伴い自然に増加するが、高血圧である人または他の心臓障害を抱える人に多く見られる。ＬＶＨは通常は高血圧に応答して発達するため、現在の治療および予防は高血圧の管理を含むことが主要である。典型的な診断は、心エコー図（ＥＣＨＯ）および心電図（ＥＣＧ）の使用を伴う。
【０００５】
心筋梗塞（ＭＩ）は心不全の主要原因である。ＭＩのメカニズムは動脈硬化巣の破裂をしばしば伴い、これが冠動脈の完全閉塞を引き起こし、その結果、心筋細胞に十分な酸素が届かずに、心筋細胞の死または損傷に繋がる。真性糖尿病（１型または２型）、高血圧、異脂肪血症（高レベルの血中コレステロール、特に高レベルの低密度リポタンパク質、低レベルの高密度リポタンパク質、高レベルのトリグリセリド）、および肥満症は、全て心筋梗塞と関連付けられている（Ｊａｙ  Ｎ．Ｃｏｈｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ，３５（３），５６９−８２，２０００）。ＭＩ後の長期転帰は、主に、左心室の大きさと形に与える影響（すなわち、左心室（ＬＶ）リモデリング）によって定義することができる。３つの主要なメカニズムがＬＶリモデリングに寄与している：ｉ）初期の梗塞拡大、ｉｉ）続く、隣接する梗塞を起こしていない心筋層への梗塞拡張、およびｉｉｉ）後期の遠位ＬＶ肥大（同上）。心臓のリモデリングに伴い、心臓は大きくなるだけでなく、心臓壁がより厚くなり、心臓のポンピング能が低下する。心臓リモデリングは、ＭＩ回復後の生存期間の決定要因として一般に認められている。発症機序としてのリモデリングの重要性は完全には理解されていないが、心臓リモデリングは、原因にかかわらず、ＨＦにおける疾患増悪の重要な一面であると考えられている（同上）。左心室リモデリングというプロセスを通じて、心室の大きさ、形、および機能が、機械的要因、神経ホルモン的要因、および遺伝要因によって制御される。リモデリングは、正常な発育における生理的且つ適応的なものである場合もあるし、あるいは、ＭＩ、心筋症、高血圧症、または心臓弁膜症による病理学的なものである場合もある（Ｆｒｅｎｃｈ  ａｎｄ  Ｋｒａｍｅｒ，Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ．Ｔｏｄａｙ  Ｄｉｓ  Ｍｅｃｈ．，４（３）：１８５−１９６，２００７）。
【０００６】
心筋細胞におけるグルカゴン受容体シグナリングが、実験的心筋梗塞を有する非糖尿病マウスにおける結果を調節することが、最近報告された（Ａｌｉ，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，４：１３２−１４３，２０１５）。具体的には、外来性グルカゴンの投与が、エキソビボにおいて虚血性マウス心臓の心室圧の回復を直接的に障害し、ｐ３８  ＭＡＰＫ依存的にマウスにおける左冠動脈前下行枝結紮後の心筋梗塞による死亡率を増加させた。対照的に、成体ＧＣＧＲＣＭ−／−マウス（不活化されたＧＣＧＲを有するマウス）における心筋細胞特異的なグルカゴン作用の低減は、生存時間を有意に改善し、心筋梗塞後の肥大および梗塞サイズを減少させた（同上）。この著者らは、グルカゴン作用を操作することの心血管系に対する影響は未だ不明なところが多いと結論付けており、そのような影響のさらなる理解を得る必要性を強調している（同上）。
【０００７】
心不全および他の心血管障害の管理に利用可能な現在の薬物療法は、血圧を減少させて心臓の稼働負荷を緩和するための血管拡張薬、体液過負荷を低減するための利尿薬、身体の神経ホルモン反応の阻害剤および遮断薬（例えば、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤およびβアドレナリン遮断薬）、並びに他の薬剤を含む。このような薬物治療は、短期間は有効であるが、多くの場合、副作用のために長期間使用することができない。心臓移植等の様々な外科的処置も、重篤な難治性心不全を患う患者に提案されている。あるいは、補助人工心臓（ＶＡＤ）等の植え込み型医療機器が、心臓のポンプ作用を増加させるために胸部に植え込まれる場合がある。あるいは、大動脈内バルーンポンプ（ＩＡＢＰ）が、短期間、ただし典型的には１ヵ月未満、心機能を維持するために使用される場合がある。これらのアプローチはそれぞれ、患者にとって少なくとも部分的には有益であると証明されているが、それらの全体的な有効性を限定する欠点を有する。例えば、薬物療法は、患者の服薬遵守率の低さに寄与する、望まれない副作用および複雑な治療レジメンを含む場合が多い。且つ、薬物療法アプローチおよび外科的アプローチは共に非常に高価であり、心不全関連の医療費を増大させる。心不全治療の研究開発は継続されているが、治療の改善および代替が依然として切望されている。
【発明の概要】
【０００８】
本開示は部分的には、ヒトグルカゴン受容体に特異的に結合する単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質が、心筋梗塞後心不全の治療および予防のための、並びに糖尿病および高血糖症に伴う心不全の予防のための、改善された有効な治療法をもたらし得るという、本発明者らの独自の洞察に基づいている。本発明者は、心筋梗塞誘導性心不全患者（または他の全ての心不全患者）におけるグルカゴン受容体の遮断によりもたらされる有益な治療効果は、左室内径短縮率（ＦＳ）の増加、左室拡張（ＬＶ  ｄｉｌａｔｉｏｎ）（ＬＶＥＳＤ）の低減；左室壁厚の保存；左室最大圧および心室収縮能の増加；体重に対する心臓重量の割合（梗塞サイズ）の減少；線維化プロセスの低減；虚血状態下の心臓における不完全酸化脂肪酸代謝産物のレベル減少；並びに心筋梗塞による死亡率の減少を含み得る、左心室（ＬＶ）リモデリングの予防または減弱に関すると提唱している。
【０００９】
すなわち、一態様において、本開示は、心不全と診断された対象、または心不全に罹患するリスクがある対象に、ヒトグルカゴン受容体に特異的に結合する治療有効量の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質を投与することを含む、対象における心不全および関連状態を治療または予防するための方法を含む。様々な実施形態において、本開示は心筋梗塞後心不全を治療または予防するための方法を含む。様々な実施形態において、本開示は真性糖尿病と関連した心不全を治療または予防するための方法を含む。様々な実施形態において、本開示は糖尿病性心筋症と関連した心不全を治療または予防するための方法を含む。
【００１０】
様々な実施形態において、単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質は、完全ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、抗原結合性抗体断片、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ２、Ｆａｂ’２、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、ｄＡｂ、ナノボディ、ユニボディ、またはダイアボディから選択される抗体を含む。様々な実施形態において、抗体は完全ヒトモノクローナル抗体である。様々な実施形態において、単離された抗体または抗原結合性抗体断片は、ヒトグルカゴン受容体に対して、少なくとも約１×１０−７Ｍ、少なくとも約１×１０−８Ｍ、少なくとも約１×１０−９Ｍ、少なくとも約１×１０−１０Ｍ、少なくとも約１×１０−１１Ｍ、または少なくとも約１×１０−１２Ｍの解離定数（ＫＤ）で特異的に結合する。
【００１１】
様々な実施形態において、単離アンタゴニスト性結合タンパク質は、配列番号２の重鎖可変領域をコードするアミノ酸配列および配列番号３の軽鎖可変領域をコードするアミノ酸配列を含む完全ヒト抗体である。  様々な実施形態において、単離アンタゴニスト性タンパク質は、配列番号４の重鎖可変領域をコードするアミノ酸配列および配列番号５の軽鎖可変領域をコードするアミノ酸配列を含む完全ヒト抗体である。様々な実施形態において、単離アンタゴニスト性タンパク質は、配列番号６の重鎖可変領域をコードするアミノ酸配列および配列番号７の軽鎖可変領域をコードするアミノ酸配列を含む完全ヒト抗体である。様々な実施形態において、単離アンタゴニスト性タンパク質は、配列番号８の重鎖可変領域をコードするアミノ酸配列および配列番号９の軽鎖可変領域をコードするアミノ酸配列を含む完全ヒト抗体である。様々な実施形態において、単離アンタゴニスト性タンパク質は、配列番号１０−２８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む完全ヒト抗体である。様々な実施形態において、単離アンタゴニスト性タンパク質は、配列番号２９−４７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む完全ヒト抗体である。  様々な実施形態において、単離アンタゴニスト性タンパク質は、配列番号５１の重鎖をコードするアミノ酸配列および配列番号５２の軽鎖をコードするアミノ酸配列を含む完全ヒト抗体である。
【００１２】
すなわち、様々な実施形態において、本開示は、心不全と診断された対象、または心不全を発症する危険性がある対象に、ヒトグルカゴン受容体に特異的に結合する治療有効量の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質；および（ｂ）第二の薬剤組成物を投与することを含む、対象における心不全および関連状態を治療または予防するための方法を含む。様々な実施形態において、第二の薬剤組成物は、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、βアドレナリン遮断薬、アンジオテンシン（ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｏｎ）ＩＩ受容体遮断薬（ＡＲＢ）、利尿薬、およびジギタリスからなる群から選択される。様々な実施形態において、単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質は、配列番号５１の重鎖をコードするアミノ酸配列および配列番号５２の軽鎖をコードするアミノ酸配列を含む抗体を含む。
【００１３】
様々な実施形態において、本開示は、糖尿病と診断された対象、または糖尿病を発症する危険性がある対象に、ヒトグルカゴン受容体に特異的に結合する治療有効量の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質；および（ｂ）第二の薬剤組成物を投与することを含む、対象における糖尿病誘導性心筋症を治療または予防するための方法を含む。様々な実施形態において、第二の薬剤組成物は、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、βアドレナリン遮断薬、アンジオテンシン（ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｏｎ）ＩＩ受容体遮断薬（ＡＲＢ）、利尿薬、およびジギタリスからなる群から選択される。様々な実施形態において、単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質は、配列番号５１の重鎖をコードするアミノ酸配列および配列番号５２の軽鎖をコードするアミノ酸配列を含む抗体を含む。
【００１４】
様々な実施形態において、ヒトグルカゴン受容体と特異的に結合する単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質が、薬剤的に許容できる担体と混合されることにより、静脈内注射、筋肉内注射、皮下注射、腹腔内注射、経皮注射（ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ  ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）、動脈内注射、胸骨内注射、くも膜下腔内注射、脳室内注射、尿道内注射、頭蓋内注射、滑液包内注射を介して、または点滴を介して対象に全身投与することができる医薬組成物が形成される。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】図１は、心筋梗塞（ＭＩ）が５４匹のＣ５７ＢＬ６雄マウスで誘導された２８日間の試験全体に亘る、対照（ＣＯＮ）群（ｎ＝１８）、ＲＥＭＤ２．５９（ｍＡｂ）処置群（ｎ＝１８）、およびグルカゴン（ＧＬＣ）処置群（ｎ＝２８）の、死亡率に対するインビボ効果を示す折れ線グラフである。生存率は時間（日）に対してプロットされている。
【００１６】
【図２】図２は、心筋梗塞（ＭＩ）が５４匹のＣ５７ＢＬ６雄マウスで誘導された２８日間の試験全体に亘る、対照（ＣＯＮ）群（ｎ＝１０）、ＲＥＭＤ２．５９（ｍＡｂ）処置群（ｎ＝１１）、およびグルカゴン（ＧＬＣ）処置群（ｎ＝６）の、左室内径短縮率（ＦＳ）に対するインビボ効果を示す折れ線グラフである。％ＦＳは時間（週）に対してプロットされている。＃：Ｐ＜０．０５  Ｃｏｎ対ＧＬＣ、＊＊：Ｐ＜０．０１  ｍＡｂ対ＧＬＣ、＊＊＊：Ｐ＜０．００１  ｍＡｂ対ＣＯＮまたはＧＬＣ。
【００１７】
【図３】図３は、心筋梗塞（ＭＩ）が５４匹のＣ５７ＢＬ６雄マウスで誘導された２８日間の試験全体に亘る、対照（ＣＯＮ）群（ｎ＝１０）、ＲＥＭＤ２．５９（ｍＡｂ）処置群（ｎ＝１１）、およびグルカゴン（ＧＬＣ）処置群（ｎ＝６）の、左室収縮末期径（ＬＶＥＳＤ）に対するインビボ効果を示す折れ線グラフである。ＬＶＥＳＤ（ｍｍ）は時間（週）に対してプロットされている。＃：ｐ＜０．０５  対ＧＬＣ、＊：ｐ＜０．０５  対ＣＯＮ、＊＊：ｐ＜０．０１  対ＧＬＣ。
【００１８】
【図４】図４は、心筋梗塞（ＭＩ）が５４匹のＣ５７ＢＬ６雄マウスで誘導された２８日間の試験全体に亘る、対照（ＣＯＮ）群（ｎ＝１０）、ＲＥＭＤ２．５９（ｍＡｂ）処置群（ｎ＝１１）、およびグルカゴン（ＧＬＣ）処置群（ｎ＝６）の、左室拡張末期径（ＬＶＥＤＤ）に対するインビボ効果を示す折れ線グラフである。ＬＶＥＤＤ（ｍｍ）は時間（週）に対してプロットされている。
【００１９】
【図５】図５は、心筋梗塞（ＭＩ）が５４匹のＣ５７ＢＬ６雄マウスで誘導された２８日間の試験全体に亘る、対照（ＣＯＮ）群（ｎ＝１０）、ＲＥＭＤ２．５９（ｍＡｂ）処置群（ｎ＝１１）、およびグルカゴン（ＧＬＣ）処置群（ｎ＝６）の、虚血性左室壁厚（ＩＶＳｄ）に対するインビボ効果を示す折れ線グラフである。ＩＶＥＤＤ（ｍｍ）は時間（週）に対してプロットされている。＊＊：Ｐ＜０．０１  対ＣＯＮまたはＧＬＣ、＊＊＊：Ｐ＜０．００１  対ＣＯＮまたはＧＬＣ、＃：Ｐ＜０．０５  Ｃｏｎ  対  ＧＬＣ。
【００２０】
【図６】図６は、心筋梗塞（ＭＩ）が５４匹のＣ５７ＢＬ６雄マウスで誘導された試験における、対照（ＣＯＮ）群、ＲＥＭＤ２．５９（ｍＡｂ）処置群、およびグルカゴン（ＧＬＣ）処置群の、左室弛緩期圧（ＬＶＤＰ）に対するインビボ効果を示す棒グラフである。２８日目のＬＶＤＰ（ｍｍＨｇ）が示されている。
【００２１】
【図７】図７は、心筋梗塞（ＭＩ）が５４匹のＣ５７ＢＬ６雄マウスで誘導された試験における、対照（ＣＯＮ）群、ＲＥＭＤ２．５９（ｍＡｂ）処置群、およびグルカゴン（ＧＬＣ）処置群の、心筋収縮能（＋ｄｐ／ｄｔｍ−ｍｍＨｇ／ｓ）（左パネル）および弛緩（−ｄｐ／ｄｔｍ−ｍｍＨｇ／ｓ）（右パネル）に対するインビボ効果を示す棒グラフである。２８日目の心筋収縮能（＋ｄｐ／ｄｔｍ−ｍｍＨｇ／ｓ）（左パネル）および弛緩（−ｄｐ／ｄｔｍ−ｍｍＨｇ／ｓ）（右パネル）が示されている。
【００２２】
【図８】図８は、心筋梗塞（ＭＩ）が５４匹のＣ５７ＢＬ６雄マウスで誘導された試験の２８日目における、対照（ＣＯＮ）群、ＲＥＭＤ２．５９（ｍＡｂ）処置群、およびグルカゴン（ＧＬＣ）処置群の、心臓リモデリングに対するインビボ効果を示す、エコー読み出しおよび対応する画像である。
【００２３】
【図９】図９は、心筋梗塞（ＭＩ）が５４匹のＣ５７ＢＬ６雄マウスで誘導された試験の２８日目における、対照（ＣＯＮ）群、ＲＥＭＤ２．５９（ｍＡｂ）処置群、およびグルカゴン（ＧＬＣ）処置群の、心臓リモデリングに対するインビボ効果を示す、棒グラフである。２８日目の体重（ＢＷ）（ｇ）に対する心臓重量（ＨＷ）（ｍｇ）の比率が示されている。
【００２４】
【図１０】図１０は、心筋梗塞（ＭＩ）が５４匹のＣ５７ＢＬ６雄マウスで誘導された試験の１４日目における、対照（ＣＯＮ）群およびＲＥＭＤ２．５９（ｍＡｂ）処置群の、血糖値に対するインビボ効果を示す、棒グラフである。１４日目の血糖値（ｍｇ／ｄｌ）（４時間絶食時）が示されている。＊：Ｐ＜０．０１。
【００２５】
【図１１】図１１は、心筋梗塞（ＭＩ）が５４匹のＣ５７ＢＬ６雄マウスで誘導された試験の２８日目における、対照（ＣＯＮ）群、ＲＥＭＤ２．５９（ｍＡｂ）処置群、およびグルカゴン（ＧＬＣ）処置群の、梗塞巣内のアポトーシスに対するインビボ効果を示す、棒グラフである。マウス当たり８つの視野をカウントした。２８日目の％ＴＵＮＥＬ陽性細胞が示されている。
【００２６】
【図１２】図１２は、心筋梗塞（ＭＩ）が５４匹のＣ５７ＢＬ６雄マウスで誘導された試験の２８日目における、対照（ＣＯＮ）群、ＲＥＭＤ２．５９（ｍＡｂ）処置群、およびグルカゴン（ＧＬＣ）処置群の、非梗塞巣における線維症に対するインビボ効果を示す、種々の切片のＨ＆Ｅ組織染色である。
【００２７】
【図１３】図１３は、心筋梗塞（ＭＩ）が５４匹のＣ５７ＢＬ６雄マウスで誘導された試験の２８日目における、対照（ＣＯＮ）群、ＲＥＭＤ２．５９（ｍＡｂ）処置群、およびグルカゴン（ＧＬＣ）処置群の、非梗塞巣における線維症に対するインビボ効果を示す、棒グラフである。マウス当たり８つの視野をカウントした。２８日目の％線維性領域が示されている。
【００２８】
【図１４】図１４は、心筋梗塞（ＭＩ）が５４匹のＣ５７ＢＬ６雄マウスで誘導された試験の２８日目における、対照（ＣＯＮ）群、ＲＥＭＤ２．５９（ｍＡｂ）処置群、およびグルカゴン（ＧＬＣ）処置群の、非梗塞巣における筋肥大に対するインビボ効果を示す、種々の切片のＨ＆Ｅ組織染色である。拡大率は４０×１０である。
【００２９】
【図１５】図１５は、心筋梗塞（ＭＩ）が５４匹のＣ５７ＢＬ６雄マウスで誘導された試験の２８日目における、対照（ＣＯＮ）群、ＲＥＭＤ２．５９（ｍＡｂ）処置群、およびグルカゴン（ＧＬＣ）処置群の、非梗塞巣における筋肥大に対するインビボ効果を示す、棒グラフである。マウス当たり８つの視野をカウントした。２８日目の筋細胞断面積（ＣＳＡ）（μｍ２）が示されている。
【００３０】
【図１６】図１６は、心筋梗塞（ＭＩ）が５４匹のＣ５７ＢＬ６雄マウスで誘導された試験の２８日目における、対照（ＣＯＮ）群、ＲＥＭＤ２．５９（ｍＡｂ）処置群、およびグルカゴン（ＧＬＣ）の、梗塞サイズに対するインビボ効果を示す、棒グラフおよび対応する画像である。２８日目の左室壁の長さに対する梗塞壁の長さの割合（％）が示されている。
【００３１】
【図１７】図１７は、心筋梗塞（ＭＩ）が５４匹のＣ５７ＢＬ６雄マウスで誘導された試験の２８日目における、対照（ＣＯＮ）群、ＲＥＭＤ２．５９（ｍＡｂ）処置群、およびグルカゴン（ＧＬＣ）の、梗塞巣に対するインビボ効果を示す、棒グラフおよび対応する画像である。２８日目の心室領域の全長に対する梗塞巣の長さの割合（％）が示されている。
【００３２】
【図１８】図１８は、１８週間の試験全体に亘る、ｄｂ／ｄｂ（ＰＢＳ）群、ｄｂ／ｄｂ（ｍＡｂ）群、ｄｂ／＋（ＰＢＳ）群、およびｄｂ／＋（ｍＡｂ）群の、血糖値（ｍｇ／ｄｌ）を示す折れ線グラフである。各マウスは６時間絶食させ、反復測定ＡＮＯＶＡが統計解析に使用された。＊＊＊：ｐ＜０．０００１、ｄｂ／ｄｂ（ｍＡｂ）対ｄｂ／ｄｂ（ＰＢＳ）の比較；＃＃＃：ｐ＜０．０００１、ｄｂ／＋（ＰＢＳ）またはｄｂ／＋（ｍＡｂ）対ｄｂ／ｄｂ（ＰＢＳ）の比較。
【００３３】
【図１９】図１９は、ｍＡｂまたはＰＢＳで処置後１８週目の、ｄｂ／ｄｂ（ＰＢＳ）群、ｄｂ／ｄｂ（ｍＡｂ）群、ｄｂ／＋（ＰＢＳ）群、およびｄｂ／＋（ｍＡｂ）群の、経口ブドウ糖負荷試験（ＯＧＴＴ）の結果を示す折れ線グラフである。各マウスは胃管栄養法により２．０ｇ／ｋｇのグルコースを与えられた。２ｇ／ｋｇグルコースを経口投与した後、Ａｃｃｕ−Ｃｈｅｋ  Ｐｅｒｆｏｒｍａ  Ｓｙｓｔｅｍを用いて種々の時点（３０、６０、１２０分）で血糖値を測定した。統計解析には反復測定ＡＮＯＶＡが使用され、血清グルコース値（ｍｇ／ｄｌ）が時間（分）に対してプロットされている。＊＊＊：ｐ＜０．０００１、ｄｂ／ｄｂ（ｍＡｂ）対ｄｂ／ｄｂ（ＰＢＳ）の比較；＃＃＃：ｐ＜０．０００１、ｄｂ／＋（ＰＢＳ）またはｄｂ／＋（ｍＡｂ）対ｄｂ／ｄｂ（ＰＢＳ）の比較。
【００３４】
【図２０】図２０は、１８週間の試験全体に亘る、ｄｂ／ｄｂ（ＰＢＳ）群、ｄｂ／ｄｂ（ｍＡｂ）群、ｄｂ／＋（ＰＢＳ）群、およびｄｂ／＋（ｍＡｂ）群の、左室収縮末期径（ＬＶＥＳＤ）に対するインビボ効果を示す折れ線グラフである。統計解析には反復測定ＡＮＯＶＡが使用され、ＬＶＥＳＤ（ｍｍ）が時間（週）に対してプロットされている。＊＊＊：ｐ＜０．０００１、ｄｂ／ｄｂ（ｍＡｂ）対ｄｂ／ｄｂ（ＰＢＳ）の比較；＃＃＃：ｐ＜０．０００１、ｄｂ／＋（ＰＢＳ）またはｄｂ／＋（ｍＡｂ）対ｄｂ／ｄｂ（ＰＢＳ）の比較。
【００３５】
【図２１】図２１は、１８週間の試験全体に亘る、ｄｂ／ｄｂ（ＰＢＳ）群、ｄｂ／ｄｂ（ｍＡｂ）群、ｄｂ／＋（ＰＢＳ）群、およびｄｂ／＋（ｍＡｂ）群の、左室拡張末期径（ＬＶＥＤＤ）に対するインビボ効果を示す折れ線グラフである。ＬＶＥＤＤ（ｍｍ）は時間（週）に対してプロットされている。Ｐ値、＃＃：ｐ＜０．０１、ｄｂ／＋（ｍＡｂ）対ｄｂ／ｄｂ（ＰＢＳ）の比較；Ｎ．Ｓ：ｄｂ／ｄｂ（ＰＢＳ）群と比較して有意差無し、反復測定ＡＮＯＶＡ、ボンフェローニ／ダン法を使用。
【００３６】
【図２２】図２２は、全時点の群間比較に反復測定ＡＮＯＶＡを用いた、１８週間の試験全体に亘る、ｄｂ／ｄｂ（ＰＢＳ）群、ｄｂ／ｄｂ（ｍＡｂ）群、ｄｂ／＋（ＰＢＳ）群、およびｄｂ／＋（ｍＡｂ）群の、左室内径短縮率（ＦＳ）に対するインビボ効果を示す折れ線グラフである。＊＊＊：ｐ＜０．０００１、ｄｂ／ｄｂ（ｍＡｂ）対ｄｂ／ｄｂ（ＰＢＳ）の比較、＃＃＃：ｐ＜０．０００１、ｄｂ／＋（ＰＢＳ）またはｄｂ／＋（ｍＡＢ）対ｄｂ／ｄｂ（ＰＢＳ）の比較。
【００３７】
【図２３】図２３は、統計解析に反復測定ＡＮＯＶＡを用いた、１８週間の試験全体に亘る、ｄｂ／ｄｂ（ＰＢＳ）群、ｄｂ／ｄｂ（ｍＡｂ）群、ｄｂ／＋（ＰＢＳ）群、およびｄｂ／＋（ｍＡｂ）群の、心室中隔拡張末期（ＩＶＳＤ）に対するインビボ効果を示す折れ線グラフである。Ｐ値、＊＊＊：ｐ＜０．０００１、ｄｂ／ｄｂ（ｍＡｂ）対ｄｂ／ｄｂ（ＰＢＳ）の比較；＃＃＃：ｐ＜０．０００１、ｄｂ／＋（ＰＢＳ）またはｄｂ／＋（ｍＡｂ）対ｄｂ／ｄｂ（ＰＢＳ）の比較。
【００３８】
【図２４】図２４は、統計解析に反復測定ＡＮＯＶＡを用いた、１８週間の試験全体に亘る、ｄｂ／ｄｂ（ＰＢＳ）群、ｄｂ／ｄｂ（ｍＡｂ）群、ｄｂ／＋（ＰＢＳ）群、およびｄｂ／＋（ｍＡｂ）群の、後期（Ａ）心室充満速度に対する早期心室充満速度（Ｅ）（Ｅ／Ａ）の比率に対するインビボ効果を示す折れ線グラフである。＊＊＊：ｐ＜０．０００１、ｄｂ／ｄｂ（ｍＡｂ）対ｄｂ／ｄｂ（ＰＢＳ）の比較；＃＃＃：ｐ＜０．０００１、ｄｂ／＋（ＰＢＳ）またはｄｂ／＋（ｍＡｂ）対ｄｂ／ｄｂ（ＰＢＳ）の比較。
【００３９】
【図２５】図２５は、統計解析に反復測定ＡＮＯＶＡを用いた、１８週間の試験全体に亘る、ｄｂ／ｄｂ（ＰＢＳ）群、ｄｂ／ｄｂ（ｍＡｂ）群、ｄｂ／＋（ＰＢＳ）群、およびｄｂ／＋（ｍＡｂ）群の、心拍出量（ＣＯ、ｍｌ／分）に対するインビボ効果を示す折れ線グラフである。＊＊＊：ｐ＜０．０００１、ｄｂ／ｄｂ（ｍＡｂ）対ｄｂ／ｄｂ（ＰＢＳ）の比較；＃＃＃：ｐ＜０．０００１、ｄｂ／＋（ＰＢＳ）またはｄｂ／＋（ｍＡｂ）対ｄｂ／ｄｂ（ＰＢＳ）の比較。
【００４０】
【図２６】図２６は、統計解析に反復測定ＡＮＯＶＡを用いた、１８週間の試験全体に亘る、ｄｂ／ｄｂ（ＰＢＳ）群、ｄｂ／ｄｂ（ｍＡｂ）群、ｄｂ／＋（ＰＢＳ）群、およびｄｂ／＋（ｍＡｂ）群の、等容弛緩時間（ＩＶＲＴ、ミリ秒）に対するインビボ効果を示す折れ線グラフである。＊＊＊：ｐ＜０．０００１、ｄｂ／ｄｂ（ｍＡｂ）対ｄｂ／ｄｂ（ＰＢＳ）の比較；＃＃＃：ｐ＜０．０００１、ｄｂ／＋（ＰＢＳ）またはｄｂ／＋（ｍＡｂ）対ｄｂ／ｄｂ（ＰＢＳ）の比較。
【００４１】
【図２７】図２７は、反復測定ＡＮＯＶＡ法を用いた、１８週間の試験全体に亘る、ｄｂ／ｄｂ（ＰＢＳ）群、ｄｂ／ｄｂ（ｍＡｂ）群、ｄｂ／＋（ＰＢＳ）群、およびｄｂ／＋（ｍＡｂ）群の、心拍速度（ＨＲ、拍動／分）に対するインビボ効果を示す折れ線グラフである。Ｐ値：Ｎ．Ｓ：統計的有意差無し、ｄｂ／ｄｂ（ｍＡｂ）群対ｄｂ／ｄｂ（ＰＢＳ）群の比較；＃＃＃：ｐ＜０．０００１、ｄｂ／＋（ＰＢＳ）またはｄｂ／＋（ｍＡｂ）群対ｄｂ／ｄｂ（ＰＢＳ）群の比較；＊＊：ｄｂ／＋（ＰＢＳ）群またはｄｂ／＋（ｍＡｂ）群対ｄｂ／ｄｂ（ｍＡｂ）群の比較。
【００４２】
【図２８】図２８は、１８週目における、ｄｂ／ｄｂ（ＰＢＳ）群、ｄｂ／ｄｂ（ｍＡｂ）群、ｄｂ／＋（ＰＢＳ）群、およびｄｂ／＋（ｍＡｂ）群の、Ｍｉｋｒｏ−ｔｉｐカテーテルにより測定された左室弛緩期圧（ＬＶＤＰ、ｍｍＨｇ）に対するインビボ効果を示す、棒グラフである。＊＊＊：ｄｂ／ｄｂ（ＰＢＳ）との比較でｐ＜０．０００１；＃＃＃：ｄｂ／ｄｂ（ＰＢＳ）との比較でｐ＜０．００１。
【００４３】
【図２９】図２９は、反復測定ＡＮＯＶＡ法を用いた、１８週目における、ｄｂ／ｄｂ（ＰＢＳ）群、ｄｂ／ｄｂ（ｍＡｂ）群、ｄｂ／＋（ＰＢＳ）群、およびｄｂ／＋（ｍＡｂ）群の、＋ｄｐ／ｄｔｍ値および−ｄｐ／ｄｔｍ値（Ｍｉｋｒｏ−ｔｉｐカテーテルで測定）に対するインビボ効果を示す、棒グラフである。＊＊＊：ｐ＜０．０００１。＊＊：ｄｂ／ｄｂ（ＰＢＳ）との比較でｐ＜０．０１；＃：ｄｂ／ｄｂ（ＰＢＳ）との比較でｐ＜０．０５：、＃＃＃：ｄｂ／ｄｂ（ＰＢＳ）との比較でｐ＜０．００１。
【００４４】
【図３０】図３０は、反復測定ＡＮＯＶＡ法を用いた、１８週目における、ｄｂ／ｄｂ（ＰＢＳ）群、ｄｂ／ｄｂ（ｍＡｂ）群、ｄｂ／＋（ＰＢＳ）群、およびｄｂ／＋（ｍＡｂ）群の、血清中活性ＧＬＰ−１レベルおよび血清中ＧＨｂＡｃ１レベルに対するインビボ効果を示す、棒グラフである。Ｐ値、＊ｐ＜０．０５；＊＊＊：ｐ＜０．００１。
【００４５】
【図３１】図３１は、反復測定ＡＮＯＶＡ法を用いた、１８週目における、ｄｂ／ｄｂ（ＰＢＳ）群、ｄｂ／ｄｂ（ｍＡｂ）群、ｄｂ／＋（ＰＢＳ）群、およびｄｂ／＋（ｍＡｂ）群の、心臓重量および体重に対するインビボ効果を示す、棒グラフである。Ｐ値：＊＊：ｐ＜０．０１、Ｎ．Ｓ：有意差無し。
【００４６】
【図３２】図３２は、反復測定ＡＮＯＶＡ法を用いた、１８週目における、ｄｂ／ｄｂ（ＰＢＳ）、ｄｂ／ｄｂ（ｍＡｂ）、ｄｂ／＋（ＰＢＳ）、およびｄｂ／＋（ｍＡｂ）の、処置後の血中インスリンレベル（ｎｇ／ｍｌ）に対するインビボ効果を示す、棒グラフである。
【発明を実施するための形態】
【００４７】
本明細書において別途定義されない限り、本開示と関連して使用される科学用語および技術用語は当業者によって一般的に理解される意味を持つものとする。さらに、文脈から特に必要とされない限り、単数形の用語は複数のものを含むものとし、複数形の用語は単数のものを含むものとする。概して、本明細書に記載される細胞と組織の培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝学、およびタンパク質と核酸の化学、およびハイブリダイゼーションと関連して使用される命名法およびそれらの技術は当技術分野において一般的に使用され、且つ、よく知られているものである。概して、本開示の方法および技術は別段の指示が無い限り当技術分野においてよく知られている従来法に従って、ならびに本明細書を通して引用および議論される様々な一般的参照文献およびより特定的な参照文献に記載されているように実施される。例えば、参照により本明細書に援用されるＳａｍｂｒｏｏｋら著、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、第４版、コールド・スプリング・ハーバー研究所出版局、コールド・スプリング・ハーバー、ニューヨーク州（２０１２年）、およびＡｕｓｕｂｅｌら著、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、グリーン・パブリッシング・アソシエーツ（１９９２年）、ならびにＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ著、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、コールド・スプリング・ハーバー研究所出版局、コールド・スプリング・ハーバー、ニューヨーク州（１９９０年）を参照されたい。酵素反応および精製技術は製造業者の仕様書に従って、当技術分野において一般的に遂行されるように、または本明細書に記載されるように実施される。本明細書に記載される分析化学、有機合成化学、および医薬化学と関連して使用される命名法ならびにそれらの実験技法および実験技術は当技術分野において一般的に使用され、且つ、よく知られているものである。化学合成、化学分析、医薬調製、製剤、および送達、および患者の治療には標準的技術が使用される。
【００４８】
定義
「ペプチド」、「ポリペプチド」および「タンパク質」という用語はそれぞれペプチド結合によって相互に結合した２個以上のアミノ酸残基を含む分子を指す。これらの用語は、例えば、あるタンパク質配列の天然タンパク質と人工タンパク質、タンパク質断片およびポリペプチド類似体（改変タンパク質、変異体、および融合タンパク質等）ならびに翻訳後に改変されたか、または他の場合では共有結合または非共有結合によって改変されたタンパク質を包含する。ペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質は単量体でも多量体でもあり得る。ある特定の実施形態において、「ペプチド」、「ポリペプチド」、および「タンパク質」はペプチド結合を介して連結しているα炭素を有するアミノ酸鎖である。したがって、その鎖の一方の末端（アミノ末端）の末端アミノ酸は遊離アミノ基を有し、その鎖の他方の末端（カルボキシ末端）の末端アミノ酸は遊離カルボキシル基を有する。本明細書において使用される場合、「アミノ末端」（Ｎ末端と略される）という用語はペプチドのアミノ末端のアミノ酸上の遊離α−アミノ基、またはそのペプチド内の他のいずれかの位置にあるアミノ酸のα−アミノ基（ペプチド結合に関与しているときはイミノ基）を指す。同様に、「カルボキシ末端」という用語はペプチドのカルボキシ末端上の遊離カルボキシル基、またはそのペプチド内の他のいずれかの位置にあるアミノ酸のカルボキシル基を指す。ペプチドにはまた、アミド結合と対照的にエーテル結合によって結合したアミノ酸などのペプチド模倣物を含むがこれらに限定されないあらゆるポリアミノ酸が基本的に含まれる。
【００４９】
用語「治療用タンパク質」は、一つまたは複数の治療活性および／または生物活性を有する、タンパク質、ポリペプチド、抗体、ペプチドまたはその断片もしくはバリアントを指す。本発明に包含される治療用タンパク質としては、限定はされないが、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、抗体、および生物学的製剤が挙げられる（ペプチド、タンパク質、およびポリペプチドという用語は本明細書では同義的に使用される）。用語「治療用タンパク質」には抗体並びにその断片およびバリアントも包含されることも明確に企図される。
【００５０】
ポリヌクレオチド配列とポリペプチド配列は標準的な１文字または３文字の略記を用いて表示される。別段の指示が無い限り、ポリペプチド配列はそれらのアミノ末端を左側に有し、且つ、それらのカルボキシ末端を右側に有し、一本鎖核酸配列と二本鎖核酸配列のトップストランドはそれらの５’末端を左側に有し、且つ、それらの３’末端を右側に有する。ポリペプチドの特定の区域はアミノ酸８０〜１１９のようにアミノ酸残基番号によるか、またはＳｅｒ８０〜Ｓｅｒ１１９のようにその部位の実際の残基によって指定され得る。特定のポリペプチド配列またはポリヌクレオチド配列はどのくらいその配列が基準配列と異なっているか説明することによっても記載され得る。
【００５１】
本開示のポリペプチドにはあらゆる理由のために、例えば、（１）タンパク質分解に対する感受性を低下させるため、（２）酸化に対する感受性を低下させるため、（３）タンパク質複合体形成向けに結合親和性を変化させるため、（４）結合親和性を変化させるため、および（５）他の物理化学的特性または機能的特性を付与または改変するために多少なりとも改変されているポリペプチドが含まれる。例えば、単一アミノ酸置換または多重アミノ酸置換（例えば、保存的アミノ酸置換）が天然配列の中に（例えば、分子間接触部を形成するドメインの外側にあるポリペプチド部分の中に）起きて良い。「保存的アミノ酸置換」は機能的に類似のアミノ酸によるアミノ酸のポリペプチド中での置換を指す。次の６群は相互に保存的置換物であるアミノ酸をそれぞれ含む。
アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、およびトレオニン（Ｔ）
アスパラギン酸（Ｄ）およびグルタミン酸（Ｅ）
アスパラギン（Ｎ）およびグルタミン（Ｑ）
アルギニン（Ｒ）およびリシン（Ｋ）
イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）
フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、およびトリプトファン（Ｗ）
【００５２】
「非保存的アミノ酸置換」はこれらのクラスのうちの１つのクラスのメンバーによる別のクラスのメンバーに対する置換を指す。ある特定の実施形態によると、そのような変更を行うときにアミノ酸の疎水性親水性指標を考慮して良い。それぞれのアミノ酸にはその疎水性特性と電荷特性に基づいて疎水性親水性指標が割り当てられている。疎水性親水性指標はイソロイシン（＋４．５）、バリン（＋４．２）、ロイシン（＋３．８）、フェニルアラニン（＋２．８）、システイン／シスチン（＋２．５）、メチオニン（＋１．９）、アラニン（＋１．８）、グリシン（−０．４）、トレオニン（−０．７）、セリン（−０．８）、トリプトファン（−０．９）、チロシン（−１．３）、プロリン（−１．６）、ヒスチジン（−３．２）、グルタミン酸（−３．５）、グルタミン（−３．５）、アスパラギン酸（−３．５）、アスパラギン（−３．５）、リシン（−３．９）、およびアルギニン（−４．５）である。
【００５３】
相互作用性生物学的機能をタンパク質に付与する際の疎水性親水性アミノ酸指標の重要性が当技術分野において理解されている（例えば、Ｋｙｔｅら著、１９８２年、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．誌、第１５７巻：１０５〜１３１頁を参照されたい）。ある特定のアミノ酸を類似の疎水性親水性指標またはスコアを有する他のアミノ酸に対して置換して良く、それでもなお類似の生物活性が保持されることが知られている。疎水性親水性指標に基づいて変更を行う際に±２以内の疎水性親水性指標を有するアミノ酸の置換がある特定の実施形態に含まれる。±１以内の疎水性親水性指標を有するアミノ酸の置換がある特定の実施形態に含まれ、±０．５以内の疎水性親水性指標を有するアミノ酸の置換がある特定の実施形態に含まれる。
【００５４】
類似のアミノ酸の置換は、特にそれによって作製された生物学的に機能的なタンパク質またはペプチドを本明細書において開示されるように免疫学的実施形態に使用するつもりである場合、親水性に基づいて効果的に行われ得ることも当技術分野において理解されている。ある特定の実施形態において、タンパク質の最大局所的平均親水性はその隣接するアミノ酸の親水性によって影響され、そのタンパク質の免疫原性と抗原性、すなわちそのタンパク質の生物学的特性と相関する。
【００５５】
次の親水性値がこれらのアミノ酸残基に割り当てられている：アルギニン（＋３．０）、リシン（＋３．０）、アスパラギン酸（＋３．０±１）、グルタミン酸（＋３．０±１）、セリン（＋０．３）、アスパラギン（＋０．２）、グルタミン（＋０．２）、グリシン（０）、トレオニン（−０．４）、プロリン（−０．５±１）、アラニン（−０．５）、ヒスチジン（−０．５）、システイン（−１．０）、メチオニン（−１．３）、バリン（−１．５）、ロイシン（−１．８）、イソロイシン（−１．８）、チロシン（−２．３）、フェニルアラニン（−２．５）およびトリプトファン（−３．４）。類似の親水性値に基づいて変更を行う際に±２以内の親水性値を有するアミノ酸の置換がある特定の実施形態に含まれ、±１以内の親水性値を有するアミノ酸の置換がある特定の実施形態に含まれ、±０．５以内の親水性値を有するアミノ酸の置換がある特定の実施形態に含まれる。例となるアミノ酸置換が表１に示されている。
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【００５６】
当業者はよく知られている技術を用いて本明細書において明記されるポリペプチドの適切な変異体を決定することができる。ある特定の実施形態において、当業者は、活性にとって重要であると考えられていない領域を標的とすることによって活性を損なうことなく変更することができる分子の適切な領域を特定することができる。他の実施形態において、当業者は類似のポリペプチドの間で保存されているそれらの分子の残基および部分を特定することができる。追加の実施形態において、生物活性または構造にとって重要であり得る領域ですら、生物活性を損なうことがない、またはポリペプチド構造に悪影響を与えることがない保存的アミノ酸置換の対象とされ得る。
【００５７】
加えて、当業者は類似のポリペプチド中の残基であって、活性または構造にとって重要であるそれらの残基を特定する構造機能研究を再検討することができる。そのような比較を考慮すると、当業者はあるポリペプチド中のアミノ酸残基であって、類似のポリペプチドにおける活性または構造にとって重要なアミノ酸残基に対応するそれらアミノ酸残基の重要性を予測することができる。当業者はそのような予測された重要なアミノ酸残基に対する化学的に類似のアミノ酸置換を選択することができる。
【００５８】
当業者は三次元構造およびアミノ酸配列を類似のポリペプチド中のその構造と関連して分析することもできる。そのような情報を考慮すると、当業者はポリペプチドのアミノ酸残基の整列をその三次元構造に関して予測することができる。ある特定の実施形態において、そのポリペプチドの表面上にあると予測されるアミノ酸残基は他の分子との重要な相互作用に関与し得るので、当業者はそのような残基に対して極端な変更を行わないことを選択することができる。また、当業者はそれぞれの所望のアミノ酸残基の位置に単一のアミノ酸置換を有する検査変異体を作製することができる。次に、当業者に知られている活性アッセイ法を用いてそれらの変異体をスクリーニングすることができる。適切な変異体についての情報を集めるためにそのような変異体を使用することが可能である。例えば、特定のアミノ酸残基に対する変更が活性の棄損、活性の望ましくない低下、または不適切な活性を引き起こすことが分かった場合、そのような変更を有する変異体を回避することができる。言い換えると、当業者は、さらなる置換が単独で、または他の突然変異と組み合わせて回避されるべき位置にあるアミノ酸をそのような日常の実験から集められた情報に基づいて容易に決定することができる。
【００５９】
本明細書において使用される「ポリペプチド断片」および「短縮型ポリペプチド」という用語は、対応する完全長タンパク質と比較してアミノ末端欠失および／またはカルボキシ末端欠失を有するポリペプチドを指す。ある特定の実施形態において、断片は、例えば、少なくとも５アミノ酸長、少なくとも１０アミノ酸長、少なくとも２５アミノ酸長、少なくとも５０アミノ酸長、少なくとも１００アミノ酸長、少なくとも１５０アミノ酸長、少なくとも２００アミノ酸長、少なくとも２５０アミノ酸長、少なくとも３００アミノ酸長、少なくとも３５０アミノ酸長、少なくとも４００アミノ酸長、少なくとも４５０アミノ酸長、少なくとも５００アミノ酸長、少なくとも６００アミノ酸長、少なくとも７００アミノ酸長、少なくとも８００アミノ酸長、少なくとも９００アミノ酸長、または少なくとも１０００アミノ酸長であり得る。ある特定の実施形態において、断片は、例えば、多くとも１０００アミノ酸長、多くとも９００アミノ酸長、多くとも８００アミノ酸長、多くとも７００アミノ酸長、多くとも６００アミノ酸長、多くとも５００アミノ酸長、多くとも４５０アミノ酸長、多くとも４００アミノ酸長、多くとも３５０アミノ酸長、多くとも３００アミノ酸長、多くとも２５０アミノ酸長、多くとも２００アミノ酸長、多くとも１５０アミノ酸長、多くとも１００アミノ酸長、多くとも５０アミノ酸長、多くとも２５アミノ酸長、多くとも１０アミノ酸長、または多くとも５アミノ酸長でもあり得る。断片はその末端のうちの一方または両方のどちらかに１個以上の追加アミノ酸、例えば、異なる天然タンパク質に由来するアミノ酸の配列（例えば、Ｆｃドメインまたはロイシンジッパードメイン）または人工アミノ酸配列（例えば、人工リンカー配列）をさらに含み得る。
【００６０】
本明細書において使用される「ポリペプチド変異体」および「ポリペプチド突然変異体」という用語は、あるアミノ酸配列を備え、別のポリペプチド配列との関連で１個以上のアミノ酸残基がそのアミノ酸配列に挿入され、そのアミノ酸配列から欠失され、および／またはそのアミノ酸配列に置換されているポリペプチドを指す。ある特定の実施形態において、挿入、欠失、または置換されるアミノ酸残基の数は、例えば、少なくとも１アミノ酸長、少なくとも２アミノ酸長、少なくとも３アミノ酸長、少なくとも４アミノ酸長、少なくとも５アミノ酸長、少なくとも１０アミノ酸長、少なくとも２５アミノ酸長、少なくとも５０アミノ酸長、少なくとも７５アミノ酸長、少なくとも１００アミノ酸長、少なくとも１２５アミノ酸長、少なくとも１５０アミノ酸長、少なくとも１７５アミノ酸長、少なくとも２００アミノ酸長、少なくとも２２５アミノ酸長、少なくとも２５０アミノ酸長、少なくとも２７５アミノ酸長、少なくとも３００アミノ酸長、少なくとも３５０アミノ酸長、少なくとも４００アミノ酸長、少なくとも４５０アミノ酸長、または少なくとも５００アミノ酸長であり得る。本開示の変異体には融合タンパク質が含まれる。
【００６１】
ポリペプチドの「誘導体」は化学的に改変されているポリペプチド、例えば、別の化学部分への結合、例えばポリエチレングリコールへの結合、アルブミン（例えばヒト血清アルブミン）への結合、リン酸化、およびグリコシル化があるポリペプチドである。
【００６２】
「％配列同一性」という用語は本明細書において「％同一性」という用語と互換的に使用され、配列アラインメントプログラムを使用して整列させたときの２つ以上のペプチド配列の間のアミノ酸配列同一性のレベル、または２つ以上のヌクレオチド配列の間のヌクレオチド配列同一性のレベルを指す。例えば、本明細書において使用される場合、８０％の同一性は規定のアルゴリズムによって決定される８０％配列同一性と同じ事を意味し、所与の配列が別の長さの別の配列に対して少なくとも８０％同一であることを意味する。ある特定の実施形態において、その％同一性は、例えば、所与の配列に対する少なくとも６０％の、少なくとも６５％の、少なくとも７０％の、少なくとも７５％の、少なくとも８０％の、少なくとも８５％の、少なくとも９０％の、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の、またはそれよりも高い配列同一性から選択される。ある特定の実施形態において、その％同一性は、例えば、約６０％〜約７０％、約７０％〜約８０％、約８０％〜約８５％、約８５％〜約９０％、約９０％〜約９５％、または約９５％〜約９９％の範囲内にある。
【００６３】
「％配列相同性」という用語は本明細書において「％相同性」という用語と互換的に使用され、配列アラインメントプログラムを使用して整列させたときの２つ以上のペプチド配列の間のアミノ酸配列相同性のレベル、または２つ以上のヌクレオチド配列の間のヌクレオチド配列相同性のレベルを指す。例えば、本明細書において使用される場合、８０％の相同性は規定のアルゴリズムによって決定される８０％配列相同性と同じ事を意味し、したがって所与の配列のホモログがその所与の配列のある長さにわたって８０％を超える配列相同性を有することを意味する。ある特定の実施形態において、その％相同性は、例えば、所与の配列に対する少なくとも６０％の、少なくとも６５％の、少なくとも７０％の、少なくとも７５％の、少なくとも８０％の、少なくとも８５％の、少なくとも９０％の、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の、またはそれより高い配列相同性から選択される。ある特定の実施形態において、その％相同性は、例えば、約６０％〜約７０％、約７０％〜約８０％、約８０％〜約８５％、約８５％〜約９０％、約９０％〜約９５％、または約９５％〜約９９％の範囲内にある。
【００６４】
２つの配列間の同一性を決定するために使用され得る例となるコンピュータープログラムにはＮＣＢＩウェッブサイトにおいてインターネット上で公開されているＢＬＡＳＴプログラム、例えば、ＢＬＡＳＴＮ、ＢＬＡＳＴＸ、およびＴＢＬＡＳＴＸ、ＢＬＡＳＴＰおよびＴＢＬＡＳＴＮからなるパッケージが含まれるがこれらに限定されない。Ａｌｔｓｃｈｕｌら著、１９９０年、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．誌、第２１５巻：４０３〜１０頁（公表された初期設定、すなわちｗ＝４、ｔ＝１７のパラメーターに特に関連して）およびＡｌｔｓｃｈｕｌら著、１９９７年、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．誌、第２５巻：３３８９〜３４０２頁も参照されたい。配列検索は、所与のアミノ酸配列をＧｅｎＢａｎｋ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓおよび他の公開データベースの中のアミノ酸配列と比較して評価するときにＢＬＡＳＴＰプログラムを使用して実行されることが典型的である。ＢＬＡＳＴＸプログラムは全てのリーディングフレームで翻訳された核酸配列をＧｅｎＢａｎｋ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓおよび他の公開データベースの中のアミノ酸配列に対して検索することにとって好ましい。ＢＬＡＳＴＰとＢＬＡＳＴＸの両方は１１．０のオープンギャップペナルティ―と１．０の伸長ギャップペナルティ―という初期パラメーターを使用して実行され、且つ、ＢＬＯＳＵＭ−６２マトリックスを利用する。同文献を参照されたい。
【００６５】
パーセント配列同一性の算出に加え、ＢＬＡＳＴアルゴリズムは２つの配列間の類似性の統計分析も実施する（例えば、ＫａｒｌｉｎおよびＡｌｔｓｃｈｕｌ著、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ誌、第９０巻：５８７３〜５７８７頁（１９９３年）を参照されたい）。ＢＬＡＳＴアルゴリズムによって提供される類似性の１つの基準は最小和確率（Ｐ（Ｎ））であり、それは２つのヌクレオチド配列またはアミノ酸配列の間の整合が偶然に起こる確率の指標を提供する。例えば、基準核酸に対する検査核酸の比較における最小和確率が例えば約０．１未満、約０．０１未満、または約０．００１未満である場合にその核酸はその基準配列に対して類似していると考えらえる。
【００６６】
「単離分子」という用語は（その分子が例えばポリペプチド、ポリヌクレオチド、または抗体である場合に）その起源または誘導源によって（１）その分子の天然状態ではその分子に付随する天然結合成分と結合していない分子、（２）同じ種に由来する他の分子を実質的に含まない分子、（３）異なる種に由来する細胞によって発現される分子、または（４）自然界では生じない分子である。したがって、化学合成される分子、または自然界で起源となる細胞とは異なる細胞系で発現される分子は、その分子の天然結合成分から「単離」される。分子は、当技術分野においてよく知られている精製技術を用いて単離されることによって天然結合成分を実質的に含まないようにされても良い。分子の純度または均質性は当技術分野においてよく知られている多数の手段によってアッセイされ得る。例えば、ポリペプチド試料の純度は、当技術分野においてよく知られている技術を用いるポリアクリルアミドゲル電気泳動およびそのポリペプチドを可視化するためのそのゲルの染色を用いてアッセイされ得る。ある特定の目的のためにＨＰＬＣまたは当技術分野においてよく知られている精製のための他の手段を用いることでより高い解像度が提供され得る。
【００６７】
タンパク質またはポリペプチドは、試料の少なくとも約６０％〜７５％が単一種のポリペプチドを示すときに「実質的に純粋」であり、「実質的に均質」であり、または「実質的に精製」されている。実質的に純粋なポリペプチドまたはタンパク質はタンパク質試料の約５０％（重量／重量）、６０％（重量／重量）、７０％（重量／重量）、８０％（重量／重量）、または９０％（重量／重量）を構成することが典型的であり、約９５％を構成することがより一般的であり、例えば、それは９９％を超える。タンパク質の純度または均質性は、タンパク質試料のポリアクリルアミドゲル電気泳動とそれに続く当技術分野においてよく知られている染色液によるそのゲルの染色時の単一ポリペプチドバンドの視覚化などの当技術分野においてよく知られている多数の手段によって示され得る。ある特定の目的のためにＨＰＬＣまたは当技術分野においてよく知られている精製のための他の手段を用いることでより高い解像度が提供され得る。
【００６８】
「抗原結合性拮抗タンパク質」は、抗原に結合する部分を含み、且つ、その抗原へのその単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質の結合を促進する構造をその抗原結合部分に採らせるスキャフォルドまたはフレームワーク部分を含んでも良いタンパク質である。抗原結合性拮抗タンパク質の例には抗体、抗体断片（例えば、抗体の抗原結合部分）、抗体誘導体、および抗体類似体が挙げられる。その単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質は、例えば、移入されたＣＤＲまたはＣＤＲ派生物を有する代替的タンパク質スキャフォルドまたは人工スキャフォルドを含み得る。そのようなスキャフォルドには、例えば前記単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質の三次元構造を安定化するために導入された突然変異を含む抗体由来スキャフォルド、ならびに例えば生体適合性重合体を含む完全合成スキャフォルドが含まれるがこれらに限定されない。例えば、Ｋｏｒｎｄｏｒｆｅｒら著、２００３年、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：ＳｔｒｕｃｔｕｒｅＦｕｎｃｔｉｏｎ，ａｎｄ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ誌、第５３巻、第１号：１２１〜１２９頁（２００３年）、Ｒｏｑｕｅら著、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．誌、第２０巻：６３９〜６５４頁（２００４年）を参照されたい。加えて、ペプチド抗体模倣物（「ＰＡＭ」）ならびにスキャフォルドとしてフィブロネクション成分を利用する抗体模倣物に基づくスキャフォルドを使用することができる。
【００６９】
単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質は、例えば、天然免疫グロブリンの構造を有し得る。「免疫グロブリン」は四量体分子である。天然免疫グロブリンではそれぞれの四量体が二対の同一のポリペプチド鎖から構成され、それぞれのペアが１本の「軽」鎖（約２５ｋＤａ）と１本の「重」鎖（約５０〜７０ｋＤａ）を有する。各鎖のアミノ末端部分は、抗原認識に対して最終的な責任がある約１００アミノ酸〜１１０アミノ酸、またはそれより多くのアミノ酸からなる可変領域を含む。各鎖のカルボキシ末端部分はエフェクター機能に対して最終的な責任がある定常領域を規定する。ヒト軽鎖はカッパ軽鎖とラムダ軽鎖に分類される。重鎖はミュー、デルタ、ガンマ、アルファ、またはイプシロンとして分類され、その抗体のアイソタイプをそれぞれＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、およびＩｇＥとして規定する。軽鎖と重鎖の内部では可変領域と定常領域が約１２個以上のアミノ酸からなる「Ｊ」領域によって連結されており、重鎖はさらに約１０個多いアミノ酸からなる「Ｄ」領域も含む。Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第７章（Ｐａｕｌ，Ｗ．編、第２版、レイブン・プレス、ニューヨーク（１９８９年））を全般的に参照されたい（全ての目的のために参照によりその全体が援用される）。完全な免疫グロブリンが２つの結合部位を有するように各軽鎖／重鎖対の可変領域が抗体結合部位を形成する。
【００７０】
「抗体」は、免疫グロブリン遺伝子または免疫グロブリン遺伝子の断片によって実質的または部分的にコードされ、且つ、腫瘍抗原に対する特異性または病理状態で過剰発現された分子に対する特異性を有する１つ以上のポリペプチドを含むタンパク質を指す。広く認められている免疫グロブリン遺伝子にはカッパ、ラムダ、アルファ、ガンマ、デルタ、イプシロン、およびミューの定常領域遺伝子、ならびにこれらの遺伝子のサブタイプおよび多種多様な免疫グロブリン可変領域遺伝子が含まれる。軽鎖（ＬＣ）はカッパまたはラムダのどちらかとして分類される。重鎖（ＨＣ）はガンマ、ミュー、アルファ、デアルタ、またはイプシロンとして分類され、それらは次にそれぞれＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＥの免疫グロブリンクラスを規定する。典型的な免疫グロブリン（例えば抗体）構造単位は四量体を含む。各四量体は二対の同一のポリペプチド鎖から構成され、それぞれのペアが１本の「軽」鎖（約２５ｋＤ）と１本の「重」鎖（約５０〜７０ｋＤ）を有する。各鎖のＮ末端は抗原認識に対して最終的な責任がある約１００アミノ酸〜１１０アミノ酸、またはそれより多くのアミノ酸からなる可変領域を規定する。
【００７１】
完全長抗体では各重鎖は重鎖可変領域（本明細書においてＨＣＶＲまたはＶＨと略記される）および重鎖定常領域から構成される。重鎖定常領域はＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３の３ドメイン（および幾つかの例ではＣＨ４）から構成される。各軽鎖は軽鎖可変領域（本明細書においてＬＣＶＲまたはＶＬと略記される）および軽鎖定常領域から構成される。軽鎖定常領域はＣＬの１ドメインから構成される。ＶＨ領域とＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより保存的な領域が散在する相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性領域にさらに細かく分割され得る。ＶＨとＶＬのそれぞれがアミノ末端からカルボキシ末端に向かって次の順序、すなわちＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順序で配置されている３つのＣＤＲと４つのＦＲから構成される。フレームワーク領域とＣＤＲの範囲が規定されている。様々な軽鎖または重鎖のフレームワーク領域の配列がヒトなどの種の内部で比較的に保存されている。抗体のフレームワーク領域、すなわち構成要素である軽鎖と重鎖のフレームワーク領域複合体は三次元空間内でＣＤＲを配置および配列するように働く。免疫グロブリン分子はいずれかのタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）またはサブクラスの分子であり得る。
【００７２】
抗体は完全な免疫グロブリンとして、または多数のよく特徴づけられた断片として存在する。そのような断片には標的抗原に結合するＦａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆａｂ２、Ｆ（ａｂ）’２断片、単鎖Ｆｖタンパク質（「ｓｃＦｖ」）、およびジスルフィド安定化Ｆｖタンパク質（「ｄｓＦｖ」）が含まれる。ｓｃＦｖタンパク質は免疫グロブリンの軽鎖可変領域と免疫グロブリンの重鎖可変領域がリンカーによって結合している融合タンパク質であり、一方でｄｓＦｖではそれらの鎖の結合を安定化させるためにそれらの鎖に突然変異が形成されてジスルフィド結合が導入されている。様々な抗体断片が完全抗体の消化との関連で規定されており、当業者は化学的に、または組換えＤＮＡ法を利用することでそのような断片を新規に合成し得ることを理解する。したがって、本明細書において使用される場合、抗体という用語は、例えば、モノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、少なくとも２つの完全抗体から形成される多重特異性抗体（例えば、二特異性抗体）、ヒト抗体、ヒト化抗体、ラクダ化抗体、キメラ抗体、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、単鎖抗体、単ドメイン抗体、ドメイン抗体、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、所望の生物活性を示す抗体断片、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、イントラボディ、および上記のいずれかのエピトープ結合断片または抗原結合断片を包含する。
【００７３】
Ｆａｂ断片はＶＬドメイン、ＶＨドメイン、ＣＬドメインおよびＣＨ１ドメインを有する一価断片であり、Ｆ（ａｂ’）２断片はヒンジ領域においてジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を有する二価断片であり、Ｆｄ断片はＶＨドメインとＣＨ１ドメインを有し、Ｆｖ断片はある抗体の単腕のＶＬドメインとＶＨドメインを有し、ｄＡｂ断片はＶＨドメイン、ＶＬドメイン、またはＶＨドメインもしくはＶＬドメインの抗原結合断片を有する（米国特許第６，８４６，６３４号明細書、第６，６９６，２４５号明細書、米国特許出願公開第０５／０２０２５１２号明細書、第０４／０２０２９９５号明細書、第０４／００３８２９１号明細書、第０４／０００９５０７号明細書、第０３／００３９９５８号明細書、Ｗａｒｄら著、Ｎａｔｕｒｅ誌、第３４１巻：５４４〜５４６頁（１９８９年））。
【００７４】
単鎖抗体（ｓｃＦｖ）は、そのタンパク質鎖が自身の上に折り重なり、且つ、一価抗原結合部位を形成することを可能にするほど充分に長いリンカー（例えば、アミノ酸残基の合成配列）を介して連続的なタンパク質鎖を形成するためにＶＬ領域とＶＨ領域が連結されている抗体である（例えば、Ｂｉｒｄら著、Ｓｃｉｅｎｃｅ誌、第２４２巻：４２３〜２６頁（１９８８年）およびＨｕｓｔｏｎら著、１９８８年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ誌、第８５巻：５８７９〜８３頁（１９８８年）を参照されたい）。ディアボディは、２本のポリペプチド鎖を含み、同じ鎖の上にある２つのドメインの間で対合させるにはあまりに短いリンカーによって連結されたＶＨドメインとＶＬドメインをそれぞれのポリペプチド鎖が含み、そうして各ドメインが別のポリペプチド鎖上にある相補的なドメインと対合するようになっている二価抗体である（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒら著、１９９３年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ誌、第９０巻：６４４４〜４８頁（１９９３年）、およびＰｏｌｊａｋら著、Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ誌、第２巻：１１２１〜２３頁（１９９４年）を参照されたい）。ディアボディのそれら２本のポリペプチド鎖が同一である場合、それらの対合により生じるディアボディは２か所の同一の抗原結合部位を有することになる。２つの異なる抗原結合部位を有するディアボディを作製するために異なる配列を有するポリペプチド鎖が使用され得る。同様に、トリボディおよびテトラボディは、それぞれ３本および４本のポリペプチド鎖を含み、且つ、それぞれ同じでも異なっていても良い３か所および４か所の抗原結合部位を形成する抗体である。
【００７５】
単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質は１か所以上の結合部位を有し得る。１か所より多くの結合部位が存在する場合、それらの結合部位は相互に同一であっても異なっていても良い。例えば、天然ヒト免疫グロブリンは２か所の同一な結合部位を有していることが典型的であり、一方で「二特異性」または「二官能性」抗体は２か所の異なる結合部位を有する。
【００７６】
「ヒト抗体」という用語にはヒト免疫グロブリン配列に由来する１つ以上の可変領域と定常領域を有する全ての抗体が含まれる。１つの実施形態において、それら可変ドメインと定常ドメインの全てがヒト免疫グロブリン配列に由来する（完全ヒト抗体）。これらの抗体は様々な方法で調製されて良く、それらの方法の例が下で説明されており、それらにはヒト重鎖および／または軽鎖コード遺伝子に由来する抗体を発現するように遺伝的に改変されているマウスの目的の抗原による免疫を介した方法が含まれる。
【００７７】
「ヒト化抗体」は、そのヒト化抗体がヒト患者に投与されたときにその抗体が非ヒト種抗体と比較して免疫応答を誘導する可能性が低くなるように、および／または程度が低い免疫応答を誘導するように、その非ヒト種に由来する抗体の配列と１か所以上のアミノ酸置換、欠失、および／または付加によって異なる配列を有する。１つの実施形態において、ヒト化抗体を作製するために非ヒト種抗体の重鎖および／または軽鎖のフレームワークドメインと定常ドメインの中のある特定のアミノ酸に突然変異が形成される。別の実施形態において、ヒト抗体の定常ドメインが非ヒト種の可変ドメインに融合される。別の実施形態において、非ヒト抗体がヒト患者に投与されたときのその抗体のあり得る免疫原性を減少させるためにその非ヒト抗体の１つ以上のＣＤＲ配列中の１個以上のアミノ酸残基が変更されるが、そのヒト化抗体の抗原への結合がその非ヒト抗体の抗原への結合よりもあまり悪くならないようにそれらの変更されるアミノ酸残基はその抗体の抗原への免疫特異的結合にとって重要ではないか、またはそのアミノ酸配列へ変更が保存的変更で行われるかのどちらかである。ヒト化抗体の作製法の例を米国特許第６，０５４，２９７号明細書、第５，８８６，１５２号明細書および第５，８７７，２９３号明細書に見ることができる。
【００７８】
抗体を含む本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質は、１０−７Ｍまたはそれより低い解離定数（以下で定義されるＫｄ、または対応するＫｂ）値によって判定される高い結合親和性でヒトグルカゴン受容体などの抗原に結合する場合、その抗原に「特異的に結合」する。ヒトグルカゴン受容体に特異的に結合する単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質は他の種に由来するグルカゴン受容体にも同じ親和性、または異なる親和性で結合して良い。
【００７９】
「エピトープ」は単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質（例えば、抗体）が結合する分子のその部分である。エピトープはその分子の非連続的な部分（例えば、ポリペプチドの場合、そのポリペプチドの一次配列では連続していないが、そのポリペプチドの三次構造および四次構造の状況では抗原結合性拮抗タンパク質が結合するほど充分に相互に近傍にあるアミノ酸残基）を含み得る。
【００８０】
用語「血糖値（ｂｌｏｏｄ  ｇｌｕｃｏｓｅ  ｌｅｖｅｌ）」、または「血糖値（ｌｅｖｅｌ  ｏｆ  ｂｌｏｏｄ  ｇｌｕｃｏｓｅ）」は、血糖濃度を意味するものとする。ある実施形態では、血糖値は血漿グルコース値である。血漿グルコースは、例えばＥｔｇｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，４９（５）：６８４−６８８，２０００）に従って求めてもよいし、あるいは、Ｄ’Ｏｒａｚｉｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｌａｂ．Ｍｅｄ．，４４（１２）：１４８６−１４９０，２００６に従って全体血糖濃度の変換から算出してもよい。
【００８１】
用語「正常血糖値（ｎｏｒｍａｌ  ｇｌｕｃｏｓｅ  ｌｅｖｅｌ）」は、ヒトにおいて、空腹時血糖値では約１００ｍｇ／ｄＬ未満、食後２時間の血糖値では約１４５ｍｇ／ｄＬ未満、あるいは、ランダム血糖値検査の血糖値（ｒａｎｄｏｍ  ｇｌｕｃｏｓｅ）では１２５ｍｇ／ｄＬの、平均血漿グルコース値を指す。用語「血糖値上昇（ｅｌｅｖａｔｅｄ  ｂｌｏｏｄ  ｇｌｕｃｏｓｅ  ｌｅｖｅｌ）」または「血糖値上昇（ｅｌｅｖａｔｅｄ  ｌｅｖｅｌｓ  ｏｆ  ｂｌｏｏｄ  ｇｌｕｃｏｓｅ）」は、臨床的に不適切な基底および食後の高血糖を示す対象において見られるもの等、または、経口グルコース負荷試験（ｏＧＴＴ）で対象において見られるもの等の、血糖値上昇を意味するものとし、「血糖値上昇」は、空腹時条件下で試験された場合は約１００ｍｇ／ｄＬ超であり、１時間の時点で試験された場合は約２００ｍｇ／ｄＬ超である。
【００８２】
用語「グルカゴン阻害剤」、「グルカゴン抑制剤」および「グルカゴンアンタゴニスト」は同義的に使用される。各々はグルカゴンシグナル伝達を検出可能に阻害する分子である。阻害剤によって引き起こされる阻害は、その阻害がグルカゴンシグナル伝達阻害を決定するものとして当該技術分野において認知および理解されるアッセイを用いて検出可能である限り、完了される必要はない。
【００８３】
本明細書で使用される場合、「心不全」とは、心臓が、代謝組織の要求に対して必要とされる速度で血液を送り出さない、心機能の異常を意味する。心不全には、うっ血性心不全、心筋梗塞、頻拍性不整脈、家族性肥大型心筋症、虚血性心疾患、特発性拡張型心筋症、および心筋炎等の種々の病状が含まれる。心不全は多くの要因によって引き起こされる可能性があり、例えば、限定はされないが、虚血性、先天性、リウマチ性、ウイルス性、中毒性（ｔｏｘｉｃ）または特発性の形態がある。慢性心肥大は、うっ血性心不全および心停止の前兆となる、著しく病的な状態である。
【００８４】
「医薬組成物」は動物またはヒトにおける製薬学的用途にとって適切な組成物を指す。医薬組成物は薬理学的有効量および／または治療有効量の活性薬剤と薬学的に許容可能な担体を含む。「薬学的に許容可能な担体」は、動物またはヒトに投与されたときに有害反応、アレルギー反応、または他の不都合な反応を引き起こすことがない組成物を指す。本明細書において使用される場合、「薬学的に許容可能な担体」は標準的な医薬担体、ベヒクル、緩衝剤、およびリン酸緩衝生理食塩水溶液、５％ブドウ糖水溶液のような担体、および水中油型乳剤または油中水型乳剤のような乳剤、および様々な種類の湿潤剤、および／またはアジュバントのうちのいずれをも指す。適切な医薬担体と製剤はＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第２１版、２００５年、マック・パブリッシング社、イーストンの中に記載されている。「薬学的に許容可能な塩」は製薬学的用途のために化合物の中に製剤することができる、例えば、金属塩（ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、等）およびアンモニアまたは有機アミンの塩をはじめとする塩である。
【００８５】
用語「免疫複合体」または「融合タンパク質」は、本明細書で使用される場合、エフェクター分子に直接的または間接的に結合（または連結）された抗体またはその抗原結合性断片を含む分子を指す。エフェクター分子は、検出可能な標識、免疫毒素、サイトカイン、ケモカイン、治療薬、または化学療法薬とすることができる。抗体またはその抗原結合性断片は、ペプチドリンカーを介してエフェクター分子に結合していてもよい。免疫複合体および／または融合タンパク質は抗体または抗原結合性断片の免疫反応性を保持しており、例えば、抗体または抗原結合性断片は、結合後も結合前とほぼ同じ、またはわずかに低減された、抗原結合能を有する。本明細書で使用される場合、免疫複合体は、抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）と称される場合もある。免疫複合体および／または融合タンパク質は、元々は、抗体およびエフェクター分子等の、別々の機能性を有する２つの分子から作製されていることから、「キメラ分子」と称される場合もある。
【００８６】
本明細書で使用される場合、ヒトグルカゴン受容体と特異的に結合する単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質の「治療有効量」は、開示および特許請求された方法に従って対象に与えられた場合に以下の生物活性のうちの１つをもたらす、係るタンパク質の量を指す：心不全の治療；または心不全の一つもしくは複数の症状の低減、抑制、減弱、もしくは阻害。
【００８７】
用語「治療する（ｔｒｅａｔ）」、「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」および「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」は、有益または所望の臨床結果を得るためのアプローチを指す。さらに、本明細書における「治療」への言及は、治癒的、対症的および予防的な治療への言及を包含する。本開示の目的において、有益または所望の臨床結果には、限定はされないが、以下のうちの一つまたは複数が含まれる：約８０〜１８０ｍｇ／ｄＬ以内、もしくは約８０〜１７０ｍｇ／ｄＬ以内、もしくは約８０〜１６０ｍｇ／ｄＬ以内、もしくは約８０〜１５０ｍｇ／ｄＬ以内、もしくは約８０〜１４０ｍｇ／ｄＬ以内への血糖の改善、または、高血糖症、高グルカゴン血症（ｈｙｐｅｒｇｌｕｃａｎｅｍｉａ）、および高インスリン血症を含むがこれらに限定はされない、血糖値上昇と関連した、もしくは血糖値上昇からもたらされる、一つもしくは複数のあらゆる状態、疾患、もしくは症状における改善。
【００８８】
本明細書に記載の本発明の態様および実施形態は、態様および実施形態「からなること（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」および／または「から本質的になること（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」、を包含すると理解される。
【００８９】
本明細書および添付されている特許請求の範囲において使用される場合、単数形の「ａ」、「ｏｒ」、および「ｔｈｅ」は文脈から明確にそうではないことが示されていない限り複数の指示物を含む。本明細書に記載される本開示の態様とその変形例にはある態様と変形例から「なる」こと、および／または「基本的になる」ことが含まれることが理解される。
【００９０】
本明細書中の「約」が付いた値またはパラメーターへの言及は、その値またはパラメーター自体を対象とする変量を含む（および、その変量を説明する）。例えば、「約Ｘ」を参照する説明は「Ｘ」の説明を含む。
【００９１】
グルカゴン受容体および抗原結合性拮抗タンパク質
グルカゴンは、プロホルモンとプロニューロペプチドの細胞内成熟に関与する神経内分泌特異的プロテアーゼであるプロホルモン転換酵素２（ＰＣ２）の細胞特異的発現によって膵臓α細胞においてそのプレプロ型をプロセッシングして作られる２９アミノ酸ホルモンである（Ｆｕｒｕｔａら著、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．誌、第２７６巻：２７１９７〜２７２０２頁（２００１年））。生体内ではグルカゴンはインスリン作用に対する主要な逆調節性ホルモンである。空腹時にグルコースレベルの低下に応じてグルカゴン分泌が増加する。増加したグルカゴン分泌により、肝臓のグリコーゲン分解と糖新生の促進によるグルコース産生が刺激される（ＤｕｎｎｉｎｇおよびＧｅｒｉｃｈ著、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ誌、第２８巻：２５３〜２８３頁（２００７年））。したがって、グルカゴンは動物における正常なグルコースレベルの維持においてインスリンの効果を相殺する。
【００９２】
グルカゴンの生物学的効果には特異的な細胞表面受容体であるグルカゴン受容体への結合とその後の活性化が介在する。グルカゴン受容体（ＧＣＧＲ）はＧタンパク質共役受容体セクレチンサブファミリー（ファミリーＢ）のメンバーである。ヒトＧＣＧＲは４７７アミノ酸配列ＧＰＣＲであり、ＧＣＧＲのアミノ酸配列は種を越えてよく保存されている（Ｍａｙｏら著、Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖ．誌、第５５巻：１６７〜１９４頁、（２００３年））。グルカゴン受容体は主に肝臓で発現し、それは肝臓では肝臓でのグルコース産生を調節し、腎臓および膵島β細胞では糖新生におけるその役割を反映する。肝臓におけるグルカゴン受容体の活性化によりアデニルシクラーゼの活性およびホスホイノシトール代謝回転が刺激され、それが引き続いてホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼ（ＰＥＰＣＫ）、フルクトース−１，６−ビスホスファターゼ（ＦＢＰａｓｅ−１）、およびグルコース−６−ホスファターゼ（Ｇ−６−Ｐａｓｅ）を含む糖新生酵素の発現増加を引き起こす。加えて、グルカゴンシグナル伝達によってグリコーゲンホスホリラーゼが活性化され、グリコーゲンシンターゼが抑制される。高めの基底グルカゴンレベルと食後のグルカゴン分泌の抑制欠如がヒトにおいて糖尿病状態に寄与することが研究から示されている（Ｍｕｌｌｅｒら著、Ｎ  Ｅｎｇ  Ｊ  Ｍｅｄ誌、第２８３巻：１０９〜１１５頁（１９７０年））。したがって、ＧＣＧＲアンタゴニストを使用してグルカゴンの産生または機能を標的とすることによって血糖を制御し、低下させる方法が探索されている。
【００９３】
様々な実施形態において、本開示の抗原結合性拮抗タンパク質は、細胞上に発現される膜結合型グルカゴン受容体に結合し、グルカゴン受容体を介するグルカゴンシグナル伝達を阻害または遮断するように選択され得る。様々な実施形態において、本開示の抗原結合性拮抗タンパク質はヒトグルカゴン受容体に特異的に結合する。様々な実施形態において、ヒトグルカゴン受容体に結合する本抗原結合性拮抗タンパク質は他の種のグルカゴン受容体に結合しても良い。幾つかの種のグルカゴン受容体のポリヌクレオチド配列とポリペプチド配列が知られている（例えば、ヒト、ラット、マウスおよびカニクイザルのグルカゴン受容体のポリヌクレオチド配列とポリペプチド配列についてのその具体的な教示のために参照によりその全体が本明細書に援用される米国特許第７９４７８０９号明細書を参照されたい）。本開示の様々な実施形態において、本抗原結合性拮抗タンパク質は配列番号１に示されるアミノ酸配列を有するヒトグルカゴン受容体に特異的に結合する。
ヒト（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）グルカゴン受容体アミノ酸配列
（受託番号ＡＡＩ０４８５５）
ＭＰＰＣＱＰＱＲＰＬＬＬＬＬＬＬＬＡＣＱＰＱＶＰＳＡＱＶＭＤＦＬＦＥＫＷＫＬＹＧＤＱＣＨＨＮＬＳＬＬＰＰＰＴＥＬＶＣＮＲＴＦＤＫＹＳＣＷＰＤＴＰＡＮＴＴＡＮＩＳＣＰＷＹＬＰＷＨＨＫＶＱＨＲＦＶＦＫＲＣＧＰＤＧＱＷＶＲＧＰＲＧＱＰＷＲＤＡＳＱＣＱＭＤＧＥＥＩＥＶＱＫＥＶＡＫＭＹＳＳＦＱＶＭＹＴＶＧＹＳＬＳＬＧＡＬＬＬＡＬＡＩＬＧＧＬＳＫＬＨＣＴＲＮＡＩＨＡＮＬＦＡＳＦＶＬＫＡＳＳＶＬＶＩＤＧＬＬＲＴＲＹＳＱＫＩＧＤＤＬＳＶＳＴＷＬＳＤＧＡＶＡＧＣＲＶＡＡＶＦＭＱＹＧＩＶＡＮＹＣＷＬＬＶＥＧＬＹＬＨＮＬＬＧＬＡＴＬＰＥＲＳＦＦＳＬＹＬＧＩＧＷＧＡＰＭＬＦＶＶＰＷＡＶＶＫＣＬＦＥＮＶＱＣＷＴＳＮＤＮＭＧＦＷＷＩＬＲＦＰＶＦＬＡＩＬＩＮＦＦＩＦＶＲＩＶＱＬＬＶＡＫＬＲＡＲＱＭＨＨＴＤＹＫＦＲＬＡＫＳＴＬＴＬＩＰＬＬＧＶＨＥＶＶＦＡＦＶＴＤＥＨＡＱＧＴＬＲＳＡＫＬＦＦＤＬＦＬＳＳＦＱＧＬＬＶＡＶＬＹＣＦＬＮＫＥＶＱＳＥＬＲＲＲＷＨＲＷＲＬＧＫＶＬＷＥＥＲＮＴＳＮＨＲＡＳＳＳＰＧＨＧＰＰＳＫＥＬＱＦＧＲＧＧＧＳＱＤＳＳＡＥＴＰＬＡＧＧＬＰＲＬＡＥＳＰＦ（配列番号１）
様々な実施形態において、それら引用された参照文献に記載されるグルカゴン受容体に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の（当技術分野において知られており、且つ、本明細書に記載される方法を用いて計算される）同一性を有するグルカゴン受容体に特異的に結合する本開示の抗原結合性拮抗タンパク質も本開示に含まれる。
【００９４】
本開示のアンタゴニスト性抗原結合タンパク質は、グルカゴンとその受容体との間の相互作用を遮断して、グルカゴンのグルコース増加作用を阻害する働きをする。すなわち、本開示のアンタゴニスト性抗原結合タンパク質の使用は、正常なグルコースレベルを達成することにより、糖尿病の一つもしくは複数の症状、または糖尿病によって引き起こされる長期的合併症、例えば、限定はされないが、高血糖症、高グルカゴン血症（ｈｙｐｅｒｇｌｕｃａｎｅｍｉａ）、および高インスリン血症、を改善または防止する、有効な手段である。本開示のアンタゴニスト性抗原結合タンパク質の使用はまた、非糖尿病患者において正常なグルコースレベルを達成することで、Ｔ１Ｄ、Ｔ２Ｄ、肥満症、ＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨを含むがこれに限定はされない障害を有する対象における、高血糖症、高グルカゴン血症（ｈｙｐｅｒｇｌｕｃａｎｅｍｉａ）、および高インスリン血症のリスクを低下させる、並びに、そのような非糖尿病性障害を治療するための、有効な手段である。本開示は部分的には、ヒトグルカゴン受容体に特異的に結合する単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質が、心筋梗塞後心不全の治療および予防のための、改善された有効な治療法をもたらし得るという、本発明者らの独自の洞察に基づいている。本発明者は、心筋梗塞誘導性心不全患者（または他の全ての心不全患者）におけるグルカゴン受容体の遮断によりもたらされる有益な治療効果は、左室内径短縮率（ＦＳ）の増加、左室拡張（ＬＶ  ｄｉｌａｔｉｏｎ）（ＬＶＥＳＤ）の低減；左室壁厚の保存；左室最大圧および心室収縮能の増加；体重に対する心臓重量の割合（梗塞サイズ）の減少；線維化プロセスの低減；虚血状態下の心臓における不完全酸化脂肪酸代謝産物のレベル減少；並びに心筋梗塞による死亡率の減少を含み得る、左心室（ＬＶ）リモデリングの予防または減弱に関すると提唱している。
【００９５】
ヒトグルカゴン受容体などの抗原に結合する抗体の作製方法が当業者に知られている。例えば、標的抗原ポリペプチドに特異的に結合するモノクローナル抗体を作製するための方法は、検出可能な免疫応答を刺激するために有効である量の、その標的抗原ポリペプチドを含む免疫原性組成物をマウスに投与すること、そのマウスから抗体産生細胞（例えば、脾臓由来細胞）を入手し、それらの抗体産生細胞を骨髄腫細胞と融合して抗体産生性ハイブリドーマを得ること、およびそれらの抗体産生性ハイブリドーマを検査してその標的抗原ポリペプチドに特異的に結合するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマを特定することを含み得る。一旦ハイブリドーマが獲得されると、細胞培養物の中で、所望によりハイブリドーマ由来細胞が標的抗原ポリペプチドに特異的に結合するモノクローナル抗体を産生する培養条件下でそのハイブリドーマを増殖させることができる。そのモノクローナル抗体はその細胞培養物から精製され得る。そこで、特に望ましい抗体を特定するために多種多様な技術が抗原／抗体相互作用の試験に利用可能である。
【００９６】
例えば、ライブラリーから組換え抗体を選択する方法、または全レパートリーのヒト抗体を産生することが可能な遺伝子導入動物（例えば、マウス）の免疫に依存する方法をはじめとした、必要な特異性を有する抗体を作製または単離する他の適切な方法を使用することができる。例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら著、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（Ｕ．Ｓ．Ａ．）誌、第９０巻：２５５１〜２５５５頁、１９９３年；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら著、Ｎａｔｕｒｅ誌、第３６２巻：２５５〜２５８頁、１９９３年；Ｌｏｎｂｅｒｇら、米国特許第５５４５８０６号明細書、およびＳｕｒａｎｉら、米国特許第５５４５８０７号明細書を参照されたい。
【００９７】
種々の方法で抗体を改変することができる。それらの抗体は単鎖抗体（小型モジュール免疫薬剤、すなわちＳＭＩＰ（商標）を含む）、ＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２断片等として作製され得る。抗体はヒト化され得る、キメラ化され得る、脱免疫化され得る、または完全ヒト型であり得る。多数の刊行物が多種多様な抗体とそのような抗体の作製方法について説明している。例えば、米国特許第６，３５５，２４５号明細書、第６，１８０，３７０号明細書、第５，６９３，７６２号明細書、第６，４０７，２１３号明細書、第６，５４８，６４０号明細書、第５，５６５，３３２号明細書、第５，２２５，５３９号明細書、第６，１０３，８８９号明細書および第５，２６０，２０３号明細書を参照されたい。
【００９８】
キメラ抗体は当技術分野において知られている組換えＤＮＡ技術によって作製され得る。例えば、マウス（または他の種）モノクローナル抗体分子のＦｃ定常領域をコードしている遺伝子を制限酵素で消化してマウスＦｃをコードする領域を取り外し、そしてヒトＦｃ定常領域をコードしている遺伝子の同等の部分を置換する（Ｒｏｂｉｎｓｏｎら、国際特許出願公開ＰＣＴ／ＵＳ８６／０２２６９号明細書；Ａｋｉｒａら、欧州特許出願公開第１８４１８７号明細書；Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ，Ｍ．、欧州特許出願公開第１７１４９６号明細書；Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、欧州特許出願公開第１７３４９４号明細書；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら、国際出願公開第８６／０１５３３号パンフレット、Ｃａｂｉｌｌｙら、米国特許第４，８１６，５６７号明細書；Ｃａｂｉｌｌｙら、欧州特許出願公開第１２５０２３号明細書；Ｂｅｔｔｅｒら著、Ｓｃｉｅｎｃｅ誌、第２４０巻：１０４１〜１０４３頁、１９８８年；Ｌｉｕら著、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（Ｕ．Ｓ．Ａ．）誌、第８４巻：３４３９〜３４４３頁、１９８７年；Ｌｉｕら著、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．誌、第１３９巻：３５２１〜３５２６頁、１９８７年；Ｓｕｎら著、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（Ｕ．Ｓ．Ａ．）誌、第８４巻：２１４〜２１８頁、１９８７年；Ｎｉｓｈｉｍｕｒａら著、Ｃａｎｃ．Ｒｅｓ．誌、第４７巻：９９９〜１００５頁、１９８７年；Ｗｏｏｄら著、Ｎａｔｕｒｅ誌、第３１４巻：４４６〜４４９頁、１９８５年、およびＳｈａｗら著、Ｊ．Ｎａｔｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．誌、第８０巻：１５５３〜１５５９頁、１９８８年を参照されたい）。
【００９９】
抗体をヒト化するための方法が当技術分野において説明されている。幾つかの実施形態において、ヒト化抗体は非ヒトＣＤＲに加えてヒトではない起源から導入された１個以上のアミノ酸残基を有する。ヒト化は基本的にＷｉｎｔｅｒと共同研究者の方法に従い、超可変領域配列をヒト抗体の対応配列に対して置換することにより実施され得る（Ｊｏｎｅｓら著、Ｎａｔｕｒｅ誌、第３２１巻：５２２〜５２５頁、１９８６年；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら著、Ｎａｔｕｒｅ誌、第３３２巻：３２３〜３２７頁、１９８８年；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら著、Ｓｃｉｅｎｃｅ誌、第２３９巻：１５３４〜１５３６頁、１９８８年）。したがって、そのような「ヒト化」抗体は、完全なヒト可変領域よりもかなり小さな領域が非ヒト種に由来する対応配列によって置換されているキメラ抗体である（米国特許第４８１６５６７号明細書）。実際にはヒト化抗体は、数個の超可変領域残基と可能であれば数個のフレームワーク領域残基がげっ歯類抗体中の類似の部位の残基によって置換されているヒト抗体であることが典型的である。
【０１００】
Ｑｕｅｅｎらの米国特許第５６９３７６１号は抗体のヒト化についてのＷｉｎｔｅｒらの方法に対する改良点を開示しており、ＣＤＲが折り畳まれてマウス抗体中に見出される結合可能構造になることを立体構造的または他の化学的不適合性のために妨げるそのヒト化フレームワーク中の構造的モチーフ内の問題に結合力喪失の原因があるとする前提に基づいている。この問題に対処するため、Ｑｕｅｅｎはヒト化されるマウス抗体のフレームワーク配列に対して直鎖ペプチド配列の状態で非常に相同的なヒトフレームワーク配列を使用することを教示している。したがって、Ｑｕｅｅｎの方法は種間でフレームワーク配列を比較することに焦点を当てている。典型的には、全ての利用可能なヒト可変領域配列を特定のマウス配列と比較し、対応するフレームワーク残基間のパーセンテージ同一性を算出する。それらのフレームワーク配列をヒト化プロジェクトに提供するために最も高いパーセンテージを有するヒト可変領域を選択する。ＱｕｅｅｎはＣＤＲを結合可能構造の中に支持ために重要なマウスフレームワーク由来のある特定のアミノ酸残基をヒト化フレームワークの中に保持することが重要であることも教示している。潜在的な重要度は分子モデルから評価される。保持される候補残基は典型的には直鎖配列の状態でＣＤＲに隣接する残基、またはどのＣＤＲ残基からでも物理的にその６Å以内にある残基である。
【０１０１】
他のアプローチでは、特定のフレームワークアミノ酸残基の重要性は、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら著、１９８８年によって記載されるように低結合力ヒト化コンストラクトが一旦得られると個々の残基をマウス配列のものに戻し、抗原結合をアッセイすることによって実験的に決定される。フレームワーク配列中の重要なアミノ酸を特定するための別の例となるアプローチはＣａｒｔｅｒらの米国特許第５，８２１，３３７号及びＡｄａｉｒらの米国特許第５，８５９，２０５号によって開示されている。これらの参照文献は、フレームワーク内の特異的なＫａｂａｔ残基位置であって、ヒト化抗体中では結合力を維持するために対応するマウスのアミノ酸による置換を必要とし得る前記残基位置を開示している。
【０１０２】
抗体をヒト化する「フレームワークシャッフリング」と呼ばれる別の方法は、個々のヒト生殖系列フレームワークをまとめたものにインフレームで融合された非ヒトＣＤＲ可変領域を含むコンビナトリアルライブラリーの作製に依存する（Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａら著、Ｍｅｔｈｏｄｓ誌、第３６巻：４３頁、２００５年）。次に良好な結合を保持するヒト化抗体をコードするクローンを特定するためにそれらのライブラリーがスクリーニングされる。
【０１０３】
ヒト化抗体の作製の際に使用される軽鎖と重鎖の両方のヒト可変領域の選択が抗原性を低下させるために非常に重要である。いわゆる「ベストフィット」法によると、げっ歯類抗体の可変領域の配列が公知のヒト可変ドメイン配列からなる全ライブラリーに対してスクリーニングされる。そして、そのげっ歯類抗体の可変領域の配列に最も近いヒト配列がヒト化抗体用のヒトフレームワーク領域（フレームワーク領域）として受け入れられる（Ｓｉｍｓら著、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．誌、第１５１巻：２２９６頁、１９９３年；Ｃｈｏｔｈｉａら著、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．誌、第１９６巻：９０１頁、１９８７年）。別の方法は、特定のサブグループの軽鎖可変領域または重鎖可変領域を有する全ヒト抗体のコンセンサス配列に由来する特定のフレームワーク領域を使用する。同じフレームワークを幾つかの異なるヒト化抗体に使用することができる（Ｃａｒｔｅｒら著、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（Ｕ．Ｓ．Ａ．）誌、第８９巻：４２８５頁、１９９２年；Ｐｒｅｓｔａら著、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．誌、第１５１巻：２６２３頁、１９９３年）。
【０１０４】
ヒト可変領域の中に置換される非ヒト残基の選択は様々な因子によって影響を受け得る。これらの因子には、例えば、特定の位置にあるアミノ酸の希少性、ＣＤＲまたは抗原のどちらかとの相互作用の確率、および軽鎖可変ドメイン接触面と重鎖可変ドメイン接触面との間の接触面に参加する確率が含まれる（例えば、米国特許第５，６９３，７６１号明細書、第６，６３２，９２７号明細書、および第６，６３９，０５５号明細書を参照されたい）。これらの因子を分析するための１つの方法は非ヒト配列とヒト化配列の三次元モデルの使用を介したものである。三次元免疫グロブリンモデルは一般的に利用可能であり、当業者によく知られている。選択された候補免疫グロブリン配列のありそうな三次元立体配座構造を例示および提示するコンピュータープログラムが利用可能である。これらの提示物の調査により、候補免疫グロブリン配列の機能におけるそれらの残基のあり得る役割についての分析、例えば、候補免疫グロブリンの抗原への結合能力に影響を与える残基の分析が可能になる。標的抗原への増加した親和性などの所望の抗体特性を達成するために、このようにして非ヒト残基を選択し、ヒト可変領域残基に置換することができる。
【０１０５】
完全ヒト抗体を作製するための方法が当技術分野において説明されている。例として、抗ＧＣＧＲ抗体またはその抗原結合性抗体断片を作製するための方法は、ファージ上でヒト抗体のライブラリーを合成するステップ、ＧＣＧＲまたはその抗体結合部分を用いてライブラリーをスクリーニングするステップ、ＧＣＧＲに結合するファージを単離するステップ、およびそのファージから抗体を獲得するステップを含む。別の例として、ファージディスプレイ技術に使用される抗体ライブラリーを調製するための１つの方法は、ヒト免疫グロブリン遺伝子座を備える非ヒト動物をＧＣＧＲまたはその抗原性部分で免疫して免疫応答を生じさせるステップ、その免疫された動物から抗体産生細胞を取り出すステップ、それらの取り出された細胞から本開示の抗体の重鎖と軽鎖をコードするＲＮＡを単離するステップ、そのＲＮＡを逆転写してｃＤＮＡを作製するステップ、プライマーを使用してｃＤＮＡを増幅するステップ、およびファージディスプレイベクターにそのｃＤＮＡを挿入して抗体をファージ上に発現させるステップを含む。本開示の組換え抗ＧＣＧＲ抗体はこのようにして獲得され得る。
【０１０６】
また、例として、本開示の組換えヒト抗ＧＣＧＲ抗体は、組換えコンビナトリアル抗体ライブラリーをスクリーニングすることによっても単離され得る。そのライブラリーは、Ｂ細胞から単離されたｍＲＮＡより調製されたヒトＶＬ  ｃＤＮＡとＶＨ  ｃＤＮＡを使用して作製されたｓｃＦｖファージディスプレイライブラリーであることが好ましい。そのようなライブラリーを調製し、そしてスクリーニングするための方法が当技術分野において知られている。ファージディスプレイライブラリーを作製するためのキットが市販されている（例えば、Ｐｈａｒｍａｃｉａリコンビナント・アンティボディ・システム、カタログ番号２７−９４００−０１；およびＳｔｒａｔａｇｅｎｅ  ＳｕｒｆＺＡＰ（商標）ファージディスプレイキット、カタログ番号２４０６１２）。抗体ディスプレイライブラリーの作製およびスクリーニングにおいて使用され得る他の方法および試薬も存在する（例えば、全ての参照により本明細書に援用される米国特許第５，２２３，４０９号明細書、ＰＣＴ国際公開第９２／１８６１９号パンフレット、第９１／１７２７１号パンフレット、第９２／２０７９１号パンフレット、第９２／１５６７９号パンフレット、第９３／０１２８８号パンフレット、第９２／０１０４７号パンフレット、第９２／０９６９０号パンフレット、Ｆｕｃｈｓら著、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ誌、第９巻：１３７０〜１３７２頁（１９９１年）；Ｈａｙら著、Ｈｕｍ．Ａｎｔｉｂｏｄ．Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ誌、第３巻：８１〜８５頁、１９９２年；Ｈｕｓｅら著、Ｓｃｉｅｎｃｅ誌、第２４６巻：１２７５〜１２８１頁、１９８９；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら著、Ｎａｔｕｒｅ誌、第３４８巻：５５２〜５５４頁、１９９０年；Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓら著、ＥＭＢＯ  Ｊ．誌、１２巻：７２５〜７３４頁、１９９３年；Ｈａｗｋｉｎｓら著、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．誌、第２２６巻：８８９〜８９６頁、１９９２年；Ｃｌａｃｋｓｏｎら著、Ｎａｔｕｒｅ誌、第３５２巻：６２４〜６２８頁、１９９１年；Ｇｒａｍら著、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（Ｕ．Ｓ．Ａ．）誌、第８９巻：３５７６〜３５８０頁、１９９２年；Ｇａｒｒａｄら著、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ誌、第９巻：１３７３〜１３７７頁、１９９１年；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら著、Ｎｕｃ．Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ．誌、第１９巻：４１３３〜４１３７頁、１９９１年；およびＢａｒｂａｓら著、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（Ｕ．Ｓ．Ａ．）誌、第８８巻：７９７８〜７９８２頁、１９９１年）を参照されたい）。
【０１０７】
ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座および軽鎖遺伝子座の幾つか、または全てをゲノム内に含む非ヒト遺伝子導入動物、例えばＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（商標）動物（Ａｂｇｅｎｉｘ社／Ａｍｇｅｎ社、フリーモント、カリフォルニア州）をヒトＩｇＥ抗原で免疫することによっても作製される。ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（商標）マウスは、ヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座と軽鎖遺伝子座の大きな断片を含み、且つ、マウス抗体の産生が欠損している遺伝子改変マウス株である。例えば、Ｇｒｅｅｎら著、Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ誌、第７巻：１３〜２１頁、１９９４年および米国特許第５，９１６，７７１号明細書、第５，９３９，５９８号明細書、第５，９８５，６１５号明細書、第５，９９８，２０９号明細書、第６，０７５，１８１号明細書、第６，０９１，００１号明細書、第６，１１４，５９８号明細書、第６，１３０，３６４号明細書、第６，１６２，９６３号明細書、および第６，１５０，５８４号明細書を参照されたい。ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（商標）マウスは成体様ヒトレパートリーの完全ヒト抗体を産生し、抗原特異的ヒト抗体を生成する。幾つかの実施形態において、ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（商標）マウスは酵母人工染色体（ＹＡＣ）中のヒト重鎖遺伝子座とカッパ軽鎖遺伝子座のメガベースサイズの生殖系列構成断片の導入を介してヒト抗体Ｖ遺伝子レパートリーの約８０％を含む。他の実施形態において、ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（商標）マウスはヒトラムダ軽鎖遺伝子座のほぼ全てをさらに含む。Ｍｅｎｄｅｚら著、Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ誌、第１５巻：１４６〜１５６頁、１９９７年；ＧｒｅｅｎおよびＪａｋｏｂｏｖｉｔｓ著、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．誌、第１８８巻：４８３〜４９５頁、１９９８年；および国際公開第９８／２４８９３号パンフレットを参照されたい。
【０１０８】
様々な実施形態において、本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体またはその抗原結合断片、組換え抗体、ディアボディ、キメラ化もしくはキメラ抗体またはその抗原結合断片、ヒト化抗体またはその抗原結合断片、完全ヒト抗体またはその抗原結合断片、ＣＤＲ移植抗体またはその抗原結合断片、単鎖抗体、Ｆｖ、Ｆｄ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、またはＦ（ａｂ’）２、および合成もしくは半合成抗体である抗体またはその抗原結合性抗体断片を利用している。
【０１０９】
様々な実施形態において、本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質は、例えば、少なくとも約１×１０−７Ｍ、少なくとも約１×１０−８Ｍ、少なくとも約１×１０−９Ｍ、少なくとも約１×１０−１０Ｍ、少なくとも約１×１０−１１Ｍ、または少なくとも約１×１０−１２Ｍの解離定数（ＫＤ）で免疫チェックポイントタンパク質抗原に結合する抗体または抗原結合断片を利用している。様々な実施形態において、本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質は、例えば、少なくとも約１×１０−７Ｍから少なくとも約１×１０−８Ｍ、少なくとも約１×１０−８Ｍから少なくとも約１×１０−９Ｍ、少なくとも約１×１０−９Ｍから少なくとも約１×１０−１０Ｍ、少なくとも約１×１０−１０Ｍから少なくとも約１×１０−１１Ｍ、または少なくとも約１×１０−１１Ｍから少なくとも約１×１０−１２Ｍの範囲の解離定数（ＫＤ）で免疫チェックポイントタンパク質抗原に結合する抗体または抗原結合断片を利用している。
【０１１０】
本発明の様々な実施形態において、単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質は、例えば米国特許第７，９４７，８０９号、同第８，１５８，７５９号、同第５，７７０，４４５号、同第７，９４７，８０９号、同第７，９６８，６８６号、同第８，５４５，８４７号、および同第８，７７１，６９６号；米国特許公開第２００９／００４１７８４号、同第２００９／０２５２７２７号、同第２０１３／０３４４５３８号、および同第２０１４／０３３５０９１号、並びに国際公開第２００８／０３６３４１号（各々、様々な抗ＧＣＧＲ抗体または抗ＧＣＧＲ抗原結合性フラグメントのポリヌクレオチド配列およびポリペプチド配列のその具体的な教示について、その全体が参照によって本明細書に援用される）に記載されるポリヌクレオチド配列およびポリペプチド配列を含む、抗ＧＣＧＲ（「アンタゴニスト性」）抗体または抗ＧＣＧＲ抗原結合性フラグメントである。本発明の様々な実施形態において、単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質は、先行技術に記載の任意の抗ＧＣＧＲ抗体の、任意のバイオシミラー、バイオジェネリック、後続バイオ医薬品、または後続タンパク質版である。
【０１１１】
本開示の様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号２に示される重鎖可変領域配列を備える抗体のものと同等以上の抗原結合親和性を有する抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号２に示される重鎖可変領域配列を備える抗体と同じエピトープに結合する抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号２に示される重鎖可変領域配列を備える抗体と競合する抗ＧＣＧＲ抗体である。様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号２に示される重鎖可変領域配列の少なくとも１つ（例えば、２つ、または３つの）ＣＤＲを含む抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は配列番号２に示される重鎖可変領域配列を備える抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は配列番号２に示される重鎖可変領域配列、すなわち
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＭＷＹＤＧＳＮＫＤＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＲＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＫＤＨＹＤＩＬＴＧＹＮＹＹＹＧＬＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号２）
を含む抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。
【０１１２】
本開示の様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号３に示される軽鎖可変領域配列を備える抗体のものと同等以上の抗原結合親和性を有する抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号３に示される軽鎖可変領域配列を備える抗体と同じエピトープに結合する抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号３に示される軽鎖可変領域配列を備える抗体と競合する抗ＧＣＧＲ抗体である。様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号３に示される軽鎖可変領域配列の少なくとも１つ（例えば、２つ、または３つの）ＣＤＲを含む抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は配列番号３に示される軽鎖可変領域配列を備える抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は配列番号３に示される軽鎖可変領域配列、すなわち
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＲＮＤＬＧＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＲＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＶＱＰＥＤＦＶＴＹＹＣＬＱＨＮＳＮＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号３）
を含む抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。
【０１１３】
様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号２または３の配列と、例えば、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の観察された相同性を共有するアミノ酸配列を含む。
【０１１４】
本開示の様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号４に示される重鎖可変領域配列を備える抗体のものと同等以上の抗原結合親和性を有する抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号４に示される重鎖可変領域配列を備える抗体と同じエピトープに結合する抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号４に示される重鎖可変領域配列を備える抗体と競合する抗ＧＣＧＲ抗体である。様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号４に示される重鎖可変領域配列の少なくとも１つ（例えば、２つ、または３つの）ＣＤＲを含む抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は配列番号４に示される重鎖可変領域配列を備える抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は配列番号４に示される重鎖可変領域配列、すなわち
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＭＷＹＤＧＳＮＫＤＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＫＤＨＹＤＩＬＴＧＹＮＹＹＹＧＬＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号４）
を含む抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。
【０１１５】
本開示の様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号５に示される軽鎖可変領域配列を備える抗体のものと同等以上の抗原結合親和性を有する抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号５に示される軽鎖可変領域配列を備える抗体と同じエピトープに結合する抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号５に示される軽鎖可変領域配列を備える抗体と競合する抗ＧＣＧＲ抗体である。様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号５に示される軽鎖可変領域配列の少なくとも１つ（例えば、２つ、または３つの）ＣＤＲを含む抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は配列番号５に示される軽鎖可変領域配列を備える抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は配列番号５に示される軽鎖可変領域配列、すなわち
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＲＮＤＬＧＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＲＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＶＴＹＹＣＬＱＨＮＳＮＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号５）
を含む抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。
【０１１６】
様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号４または５の配列と、例えば、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の観察された相同性を共有するアミノ酸配列を含む。
【０１１７】
本開示の様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号６に示される重鎖可変領域配列を備える抗体のものと同等以上の抗原結合親和性を有する抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号６に示される重鎖可変領域配列を備える抗体と同じエピトープに結合する抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号６に示される重鎖可変領域配列を備える抗体と競合する抗ＧＣＧＲ抗体である。様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号６に示される重鎖可変領域配列の少なくとも１つ（例えば、２つ、または３つの）ＣＤＲを含む抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は配列番号６に示される重鎖可変領域配列を備える抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は配列番号６に示される重鎖可変領域配列、すなわち
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＭＷＹＤＧＳＮＫＤＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＲＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＫＤＨＹＤＩＬＴＧＹＮＹＹＹＧＬＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号６）
を含む抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。
【０１１８】
本開示の様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号７に示される軽鎖可変領域配列を備える抗体のものと同等以上の抗原結合親和性を有する抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号７に示される軽鎖可変領域配列を備える抗体と同じエピトープに結合する抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号７に示される軽鎖可変領域配列を備える抗体と競合する抗ＧＣＧＲ抗体である。様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号７に示される軽鎖可変領域配列の少なくとも１つ（例えば、２つ、または３つの）ＣＤＲを含む抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は配列番号７に示される軽鎖可変領域配列を備える抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は配列番号７に示される軽鎖可変領域配列、すなわち
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＲＮＤＬＧＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＲＬＩＹＡＡＳＳＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＶＱＰＥＤＦＶＴＹＹＣＬＱＨＮＳＮＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号７）
を含む抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。
【０１１９】
様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号６または７の配列と、例えば、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の観察された相同性を共有するアミノ酸配列を含む。
【０１２０】
本開示の様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号８に示される重鎖配列を備えるキメラ抗体のものと同等以上の抗原結合親和性を有する抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号８に示される重鎖配列を備える抗体と同じエピトープに結合する抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号８に示される重鎖配列を備える抗体と競合する抗ＧＣＧＲ抗体である。様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号８に示される重鎖配列の少なくとも１つ（例えば、２つ、または３つの）ＣＤＲを含む抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は配列番号８に示される重鎖配列を備える抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号８に示される重鎖配列、すなわち
ＭＥＦＧＬＳＷＶＦＬＶＡＬＬＲＧＶＱＣＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＭＷＹＤＧＳＮＫＤＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＲＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＫＤＨＹＤＩＬＴＧＹＮＹＹＹＧＬＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＫＴＴＰＰＳＶＹＰＬＡＰＧＳＡＡＱＴＮＳＭＶＴＬＧＣＬＶＫＧＹＦＰＥＰＶＴＶＴＷＮＳＧＳＬＳＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＤＬＹＴＬＳＳＳＶＴＶＰＳＳＴＷＰＳＥＴＶＴＣＮＶＡＨＰＡＳＳＴＫＶＤＫＫＩＶＰＲＤＣＧＣＫＰＣＩＣＴＶＰＥＶＳＳＶＦＩＦＰＰＫＰＫＤＶＬＴＩＴＬＴＰＫＶＴＣＶＶＶＤＩＳＫＤＤＰＥＶＱＦＳＷＦＶＤＤＶＥＶＨＴＡＱＴＱＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＳＶＳＥＬＰＩＭＨＱＤＷＬＮＧＫＥＦＫＣＲＶＮＳＡＡＦＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＲＰＫＡＰＱＶＹＴＩＰＰＰＫＥＱＭＡＫＤＫＶＳＬＴＣＭＩＴＤＦＦＰＥＤＩＴＶＥＷＱＷＮＧＱＰＡＥＮＹＫＮＴＱＰＩＭＤＴＤＧＳＹＦＶＹＳＫＬＮＶＱＫＳＮＷＥＡＧＮＴＦＴＣＳＶＬＨＥＧＬＨＮＨＨＴＥＫＳＬＳＨＳＰＧＫ（配列番号８）
を含む抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。
【０１２１】
本開示の様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号９に示される軽鎖配列を備えるキメラ抗体のものと同等以上の抗原結合親和性を有する抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号９に示される軽鎖配列を備える抗体と同じエピトープに結合する抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号９に示される軽鎖配列を備える抗体と競合する抗ＧＣＧＲ抗体である。様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号９に示される軽鎖配列の少なくとも１つ（例えば、２つ、または３つの）ＣＤＲを含む抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は配列番号９に示される軽鎖配列を備える抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は配列番号９に示される軽鎖配列、すなわち
ＭＤＭＲＶＰＡＱＬＬＧＬＬＬＬＷＦＰＧＡＲＣＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＲＮＤＬＧＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＲＬＩＹＡＡＳＳＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＶＱＰＥＤＦＶＴＹＹＣＬＱＨＮＳＮＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＡＤＡＡＰＴＶＳＩＦＰＰＳＳＥＱＬＴＳＧＧＡＳＶＶＣＦＬＮＮＦＹＰＫＤＩＮＶＫＷＫＩＤＧＳＥＲＱＮＧＶＬＮＳＷＴＤＱＤＳＫＤＳＴＹＳＭＳＳＴＬＴＬＴＫＤＥＹＥＲＨＮＳＹＴＣＥＡＴＨＫＴＳＴＳＰＩＶＫＳＦＮＲＮＥＣ（配列番号９）
を含む抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。
【０１２２】
様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号８または９の配列と、例えば、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の観察された相同性を共有するアミノ酸配列を含む。
【０１２３】
本開示の様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、および配列番号２８から選択される重鎖可変領域配列と配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、および配列番号４７から選択される軽鎖可変領域配列を備える抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号１０〜２８または配列番号２９〜４７の配列と、例えば、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の観察された相同性を共有するアミノ酸配列を含む。
2018528210.tif 000004
【０１２４】
本開示の単離抗ＧＣＧＲ抗体、本開示の抗体断片、または本開示の抗体誘導体は当技術分野において知られているあらゆる定常領域を含み得る。その軽鎖定常領域は、例えば、カッパまたはラムダタイプの軽鎖定常領域、例えばヒトカッパまたはラムダタイプの軽鎖定常領域であり得る。その重鎖定常領域は、例えば、アルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、またはミュータイプの重鎖定常領域、例えば、ヒトアルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、またはミュータイプの重鎖定常領域であり得る。様々な実施形態において、前記軽鎖定常領域または重鎖定常領域は天然定常領域の断片、誘導体、変異体、または改変タンパク質である。
【０１２５】
目的の抗体から異なるサブクラスまたはアイソタイプの抗体を誘導するための技術、すなわち、サブクラススイッチングが知られている。したがって、ＩｇＧ抗体が例えばＩｇＭ抗体に由来することも、その反対もあり得る。そのような技術により、所与の抗体（親抗体）の抗原結合特性を持つが、親抗体のものと異なる抗体アイソタイプまたはサブクラスに関連する生物学的特性も持つ新しい抗体の調製が可能になる。組換えＤＮＡ技術を用いても良い。特定の抗体ポリペプチドをコードするクローン化ＤＮＡ、例えば、所望のアイソタイプの抗体の定常ドメインをコードするＤＮＡをそのような技法に用いても良い。Ｌａｎｉｔｔｏら著、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．誌、第１７８巻：３０３〜１６頁（２００２年）も参照されたい。
【０１２６】
様々な実施形態において、本開示の単離抗原結合タンパク質は配列番号４８に示されるカッパ軽鎖定常領域またはその断片を含む。様々な実施形態において、本開示の単離抗原結合タンパク質は配列番号４９に示されるラムダ軽鎖定常領域またはその断片を含む。様々な実施形態において、本開示の単離抗原結合タンパク質は配列番号５０に示されているＩｇＧ２重鎖定常領域またはその断片を含む。
【０１２７】
様々な実施形態において、本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質は、配列番号５１と同一の、実質的に同一の、または実質的に類似の重鎖配列、および、配列番号５２と同一の、実質的に同一の、または実質的に類似の軽鎖配列を備える完全ヒト抗ＧＣＧＲ抗体である。様々な実施形態において、本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質は、配列番号５１に示される重鎖配列、および、配列番号５２に示される軽鎖配列を備える完全ヒト抗ＧＣＧＲ抗体である。
【０１２８】
本開示の様々な実施形態において、前記単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質はヘミボディである。「ヘミボディ」は、完全な重鎖、完全な軽鎖、およびその完全な重鎖のＦｃ領域と対合した２つ目の重鎖Ｆｃ領域を含む免疫学的に機能的な免疫グロブリン構築物である。その重鎖Ｆｃ領域とその第２重鎖Ｆｃ領域を連結するためにリンカーを用いることができるが、リンカーが必要なわけでもない。様々な実施形態において、前記ヘミボディは（ｉ）完全軽鎖と（ｉｉ）Ｆｃ領域（例えば、ＩｇＧ２  Ｆｃ領域）に融合した重鎖を含む一価抗原結合タンパク質である。ヘミボディを調製するための方法は、例えば、そのようなヘミボディの調製を教示する目的で本明細書における参照によりその全体が本明細書に援用される米国特許出願公開第２０１２／０１９５８７９号明細書に記載されている。
【０１２９】
医薬組成物
別の態様では本開示は１種類以上の薬学的に許容可能な担体と共に本明細書に記載される単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質を含む医薬組成物を提供する。本明細書に記載されるそれらの医薬組成物および使用方法は、下で詳細に説明されるように他の活性薬剤との併用（共投与）実施形態も包含する。
【０１３０】
概して、本開示の前記アンタゴニスト性抗原結合タンパク質は１種類以上の薬学的に許容可能な担体と合同した製剤として投与されるのに適している。「担体」という用語は、本開示の化合物以外のあらゆる成分を記述するために本明細書において使用される。担体の選択は特定の投与モード、溶解性と安定性に対する担体の効果、および剤形の性質などの因子に大いに依存することになる。本明細書において使用される場合、「薬学的に許容可能な担体」には生理学的に適合するありとあらゆる溶媒、分散媒、被覆材、抗菌剤と抗真菌剤、等張化剤、および吸収遅延化剤などが含まれる。薬学的に許容可能な担体の幾つかの例は水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、ブドウ糖、グリセロール、エタノールなど、ならびにそれらの組合せである。多くの事例において、前記組成物はその組成物の中に等張化剤、例えば糖類、マンニトール、ソルビトールなどのポリアルコール類、または塩化ナトリウムを含む。薬学的に許容可能な物質の追加例は湿潤剤、または湿潤もしくは乳化剤、保存剤、もしくは緩衝剤などの少量の補助物質であり、それらは前記抗体の有効期間または有効性を向上させる。本開示の医薬組成物およびそれらの調製方法は容易に当業者に明らかになる。そのような組成物およびそれらの調製方法は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１９版、（マック・パブリッシング社、１９９５年）内に見出すことができる。概して、前記医薬組成物は、無菌であり、実質的に等張であり、且つ、米国食品医薬品局の全てのＧＭＰ規制を全面順守したものとして製剤される。
【０１３１】
本開示の医薬組成物は典型的には非経口投与に適切である。本明細書において使用される場合、医薬組成物の「非経口投与」には患者組織の物理的裂傷形成とその組織のその裂傷を介した医薬組成物の投与を特徴とし、したがって一般的には血流、筋肉、または内臓へ直接的に投与することになるあらゆる投与経路が含まれる。したがって、非経口投与には医薬組成物の注射によるその組成物の投与、外科的切開を介したその組成物の塗布によるその組成物の投与、組織貫通性非外科的創傷を介したその組成物の塗布によるその組成物の投与などが含まれるがこれらに限定されない。具体的に、非経口投与は皮下注射または注入、腹膜内注射または注入、筋肉内注射または注入、胸骨内注射または注入、静脈内注射または注入、動脈内注射または注入、髄腔内注射または注入、脳室内注射または注入、尿道内注射または注入、頭蓋内注射または注入、滑膜内注射または注入、または腎臓透析注入技術を含むと考えられているがこれらに限定されない。
【０１３２】
本開示の医薬組成物は、標準的な針および注射器を用いて皮下または静脈内に送達され得る。さらに皮下送達については、ペン型送達デバイスが、本開示の医薬組成物の送達に容易に適用される。このようなペン型送達デバイスは、再利用可能なものと、使い捨てのものがある。再利用可能なペン型送達デバイスは通常、医薬組成物を含有する交換可能カートリッジを利用する。カートリッジ内の全ての医薬組成物が投与され、カートリッジが空になった後、その空のカートリッジは容易に、廃棄し、医薬組成物を含有する新しいカートリッジと交換することができる。ペン型送達デバイスはその後再利用することができる。使い捨てペン型送達デバイスには、交換可能カートリッジが存在しない。そうではなく、使い捨てペン型送達デバイスには、デバイス内部のリザーバーに保持された医薬組成物が予め充填されている。リザーバーから医薬組成物がなくなると、デバイス全体が廃棄される。多数の再利用可能なペン型およびオートインジェクター型の送達デバイスが、本開示の医薬組成物の皮下送達に適用されており、例えば、限定はされないが、ＡＵＴＯＰＥＮ（登録商標）（オーウェン・マンフォード社（Ｏｗｅｎ  Ｍｕｍｆｏｒｄ，Ｉｎｃ．）、ウッドストック、英国）、ＤＩＳＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）（ディストロニック・メディカル・システムズ社（Ｄｉｓｅｔｒｏｎｉｃ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）、ブルクドルフ、スイス）、およびＨＵＭＡＬＯＧ  ＭＩＸ  ７５／２５（登録商標）、ＨＵＭＡＬＯＧ（登録商標）ペン、ＨＵＭＡＬＩＮ  ７０／３０（登録商標）ペン（イーライリリー社（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ  ａｎｄ  Ｃｏ．）、インディアナポリス、インディアナ州）が挙げられる。
【０１３３】
非経口投与に適切な医薬組成物製剤は典型的には無菌水または無菌等張生理食塩水などの薬学的に許容可能な担体と混合されて有効成分を含むことが一般的である。そのような製剤はボーラス投与または連続投与に適切な形態で調製、包装、または販売されて良い。注射可能製剤は、保存剤を含むアンプルまたは複数回投与用容器などの単位剤形の状態で調製、包装、または販売されて良い。非経口投与用製剤には懸濁剤、水剤、油性ベヒクルまたは水性ベヒクル中の乳剤、ペースト剤などが含まれるがこれらに限定されない。そのような製剤は、懸濁化剤、安定化剤または分散化剤を含むがこれらに限定されない１種類以上の追加の成分をさらに含んで良い。非経口投与用製剤の１つの実施形態において、前記有効成分は、再構成された組成物の非経口投与前に適切なベヒクル（例えば無菌発熱性物質非含有水）と共に再構成されるように乾燥形状（すなわち、粉末形状または顆粒形状）で提供される。非経口製剤には塩、炭水化物および緩衝剤（好ましくは３から９までのｐＨ）などの担体を含み得る水剤も含まれるが、幾つかの用途について非経口製剤は無菌非水性溶液として、または無菌発熱性物質非含有水などの適切なベヒクルと併せて使用される乾燥体としてより適切に製剤され得る。例となる非経口投与剤形には無菌水溶液、例えばプロピレングリコール水溶液またはブドウ糖水溶液中の水剤または懸濁剤が含まれる。そのような剤形は所望により適切に緩衝化され得る。有用な他の非経口投与可能製剤には有効成分を微晶質形状またはリポソーマル調製物形状で含むものが含まれる。非経口投与用製剤は即時放出および／または調節放出されるように製剤され得る。放出調節製剤には遅延放出、持続性放出、パルス放出、制御放出、標的放出、およびプログラム放出が含まれる。
【０１３４】
例えば、１つの態様では無菌注射溶液は、必要に応じて上に列記した成分のうちの１つ、またはそれらの成分の組合せを含む適切な溶媒の中に必要な量の前記単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質を包含し、その後にそれをフィルター滅菌することで調製され得る。概して、分散剤は、基礎分散媒と上で列挙した成分の中の必要とされる他の成分を含む無菌ベヒクルの中に前記活性化合物を包含することにより調製される。無菌注射溶液の調製用の無菌粉剤の場合では、以前に無菌濾過されたその溶液から真空乾燥および凍結乾燥などの調製方法によって追加のあらゆる所望の成分と前記有効成分からなる粉末が産生される。溶液の適正な流動性は、例えば、レシチンなどの被覆材の使用によって、分散剤の場合は要求される粒径の維持によって、および界面活性剤の使用によって維持され得る。注射可能組成物の長期吸収は吸収を遅らせる薬剤、例えばモノステアリン酸塩およびゼラチンを前記組成物の中に含むことによって可能になる。様々な実施形態において、それら注射可能組成物は市販の使い捨て注射用器具を使用して投与される。
【０１３５】
本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質を鼻腔内経路で投与することができ、または吸入により、典型的には乾燥粉剤吸入器からの（単独での、混合物としての、または、例えば、適切な薬学的に許容可能な担体と混合された混合成分粒子としての）乾燥粉剤の形状での吸入により投与することができ、適切な噴射剤の使用を含む、または含まない加圧容器、ポンプ、スプレー、噴霧器（好ましくは細かい霧を作製するために電気流体力学を使用する噴霧器）、またはネブライザからのエアロゾルスプレーとして投与することができ、または点鼻薬として投与することができる。
【０１３６】
概して、その加圧容器、ポンプ、スプレー、噴霧器、またはネブライザは、本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質の溶液または懸濁液であって、例えば、前記活性薬剤の分散、溶解、またはその放出の長期化にとって適切な薬剤である噴射剤を溶媒として含む前記溶液または懸濁液を含有する
【０１３７】
乾燥粉剤製剤または懸濁剤製剤の使用前に前記医薬製品は概して吸入による送達に適切なサイズ（典型的には５マイクロン未満）にまで微粉にされる。これはスパイラルジェットミリング、流動床ジェットミリング、ナノ粒子を形成するための超臨界流体プロセッシング、高圧ホモジナイゼーション、またはスプレー乾燥などのあらゆる適切な粉砕方法によって達成され得る。
【０１３８】
吸入器または散布器の中に使用するためのカプセル、ブリスターおよびカートリッジは、本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質、適切な粉末基材、および性能調節剤からなる粉末混合物を含むように製剤され得る。
【０１３９】
メントールおよびレボメントールなどの適切な着香料、またはサッカリンもしくはサッカリンナトリウムなどの甘味料を吸入／鼻腔内投与用の本開示の製剤に添加して良い。
【０１４０】
吸入／鼻腔内投与用の製剤は即時放出および／または調節放出されるように製剤され得る。放出調節製剤には遅延放出、持続性放出、パルス放出、制御放出、標的放出、およびプログラム放出が含まれる。
【０１４１】
乾燥粉剤吸入器およびエアロゾル剤の事例では投薬単位は計量された量を送達する弁によって決定される。本開示に準拠する単位は、計量された用量または「一吹き」の本開示の抗体を投与するように用意されていることが典型的である。全体的な１日用量は単回投与で投与されることが典型的であり、より一般的には一日を通して複数に分割された用量として投与される。
【０１４２】
本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質は経口投与用に製剤されても良い。経口投与はその化合物が胃腸管に入ることになる飲み込み、および／またはその化合物が口から直接的に血流に入るバッカル投与、舌投与、または舌下投与を含み得る。経口投与に適切な製剤には、錠剤、多粒子またはナノ粒子を含む軟質カプセル剤または硬質カプセル剤、液剤、または粉剤、ロゼンジ剤（液体充填型を含む）、チューイング剤、ゲル剤、急速分散剤形、フィルム剤、膣坐剤、スプレー剤、およびバッカル／粘膜付着パッチなどの固形系、半固形系、および液体系が含まれる。
【０１４３】
経口用の医薬組成物は医薬組成物の製造についての技術分野に知られているあらゆる方法に従って調製されて良く、薬学的に洗練されており、且つ、口当たりが良い調製物を提供するためにそのような組成物は甘味剤からなる群より選択される１種類以上の薬剤を含んで良い。例えば、経口送達用錠剤を調製するために前記単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質が少なくとも１種類の医薬担体と混合され、そしてその固形製剤が胃腸管への送達用に公知の方法に従って圧縮されて錠剤に成形される。その錠剤組成物は添加物、例えばサッカリド担体またはセルロース担体、デンプンペーストまたはメチルセルロースなどの結合剤、充填剤、崩壊剤、または医薬調製物の製造に通常は使用されることが典型的である他の添加物と共に製剤されることが典型的である。経口送達用カプセル剤を調製するためにＤＨＥＡが少なくとも１種類の医薬担体と混合され、そしてその固形製剤が胃腸管への送達に適切なカプセル容器の中に入れられる。単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質を含む組成物は、参照により本明細書に援用されるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１８版、１９９０年（マック・パブリッシング社、イーストン、ペンシルバニア州１８０４２）の第８９章に概ね記載されているように調製され得る。
【０１４４】
様々な実施形態において、前記医薬組成物は、錠剤の製造にとって適切である無毒の薬学的に許容可能な担体と混合して単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質を含む経口送達用錠剤として製剤される。これらの担体は炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウムまたはリン酸ナトリウムなどの不活性希釈剤、顆粒化剤および崩壊剤、例えばトウモロコシデンプン、ゼラチンまたはアカシアガム、および滑沢剤、例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、またはタルクであり得る。それらの錠剤は被覆されていなくても良く、または胃腸路における崩壊と吸収を遅らせることによってより長い期間にわたって持続性作用を提供するために公知の技術で被覆されても良い。例えば、モノステアリン酸グリセリルもしくはジノステアリン酸グリセリル単独またはワックスとそれらなどの時間遅延物質を用いて良い。
【０１４５】
様々な実施形態において、前記医薬組成物は、前記単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質が不活性固形希釈剤、例えば炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、またはカオリンと混合している硬質ゼラチンカプセル剤として、または前記単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質が水性媒体または油性媒体、例えばラッカセイ油、ピーナッツ油、液体パラフィン、またはオリーブ油と混合している軟質ゼラチンカプセル剤として製剤される。
【０１４６】
液体製剤には懸濁剤、水剤、シロップ剤、およびエリキシル剤が含まれる。そのような製剤は（例えば、ゼラチンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロースから作製された）軟質カプセル剤または硬質カプセル剤の中で充填剤として使用されて良く、典型的には担体、例えば水、エタノール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、メチルセルロース、または適切な油と１種類以上の乳化剤および／または懸濁化剤を含む。液体製剤は例えばサシェの固形物の再構成によっても調製され得る。
【０１４７】
当技術分野において受け入れられているペプチド、タンパク質または抗体のあらゆる投与方法が本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質を投与するために適切に用いられ得る。
【０１４８】
治療法
グルカゴン受容体とのそれらの相互作用により、本アンタゴニスト性抗原結合タンパク質は、現在の治療に関連する望まれない副作用のうちの一つまたは複数を低減および／または排除しつつ、糖新生およびグリコーゲン溶解を制御することにより血糖値を低下させるのに、並びにまた、グルカゴンのその受容体との相互作用の遮断が有益である広範囲の状態および障害を治療するのに、有用である。
【０１４９】
アンタゴニスト性抗原結合タンパク質、特に本開示によるヒト抗体は、有望な治療薬となるのに、完治させる必要も、あるいは疾患の全ての症状もしくは徴候を根絶する必要もない。関連分野で認知されているように、治療薬として使用される薬剤は、所与の病状の重症度を低減すればよく、有用な治療薬と見なされるために疾患の全ての徴候を根絶する必要はない。同様に、予防的に施される処置も、有望な予防薬となるために、状態の発生防止に完全に効果的である必要はない。単に、疾患の影響を低減すれば（例えば、その症状の数もしくは重症度を低減することにより、または別の治療の有効性を増加させることにより、または別の有益な作用をもたらすことにより）、あるいは、疾患が対象において発生もしくは悪化する可能性を減少させれば、十分である。本開示の一実施形態は、特定の障害の重症度を示す指標のベースラインを超える持続的な改善を誘導するのに十分な量および時間で、ヒト抗体等の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質を対象に投与することを含む、方法を対象とする。
【０１５０】
循環器疾患／糖尿病性心筋症／心不全
循環器疾患は、心臓および／または血管に発症する種々様々な疾患、障害および状態の総称である。循環器疾患の種類としては、アンギナ、心発作（心筋梗塞）、アテローム性動脈硬化、心不全、循環器疾患、リウマチ性心疾患、心不整脈（異常な心臓の拍動）、脳血管疾患、先天性心疾患、心筋症、左室肥大、右室肥大、梗塞後心破裂、心臓の感染症、冠動脈疾患、抹消動脈疾患、腎動脈狭窄、大動脈瘤、心筋疾患、心臓弁障害、心筋炎、および心外膜炎が挙げられる。
【０１５１】
心不全は、心臓が十分な血液を送り出せず、全身的な要求を満たすことができないことを特徴とする、臨床症状である。心臓は心拍毎に収縮と弛緩を行い、これらの期は収縮期（ｓｙｓｔｏｌｅ）（収縮期（ｃｏｎｔｒａｃｔｉｏｎ  ｐｈａｓｅ））および拡張期（ｄｉａｓｔｏｌｅ）（弛緩期（ｒｅｌａｘａｔｉｏｎ  ｐｈａｓｅ））と呼ばれる。収縮期心不全（ＳＨＦ）は低い駆出率を特徴とする。拡張期心不全（ＤＨＦ）患者は、収縮は正常である場合があるが、心臓の弛緩に障害がある場合がある。この機能障害は一般的には心室の硬直によって引き起こされる。このような機能障害は拡張機能障害と称され、肺鬱血（肺の血管内の圧力および体液の増加）を引き起こすほどの重症の場合、拡張期心不全と称される。ＤＨＦ患者は「正常な」駆出率を有し得るという点で、ＳＨＦ患者とは異なる。しかし、心室が正常に弛緩しないため、心室内の圧力が増加し、心室を満たす血液が「正常」値を超えてしまう。ある特定の種類の心筋症を有する人は、拡張機能障害も有する場合がある。左室肥大は、左心室の負荷増大を原因とする、左心室の肥厚を指す。左室肥大は、心血管障害の重要なマーカーになる可能性があり、最も一般的な合併症には不整脈、心不全、虚血性心疾患、および突然死が含まれる。左室肥大（ＬＶＨ）は加齢に伴い自然に増加するが、高血圧である人または他の心臓障害を抱える人に多く見られる。ＬＶＨは通常は高血圧に応答して発達するため、現在の治療および予防は高血圧の管理を含むことが主要である。典型的な診断は、心エコー図（ＥＣＨＯ）および心電図（ＥＣＧ）の使用を伴う。
【０１５２】
一態様において、本開示は、対象にヒトグルカゴン受容体に特異的に結合する治療有効量の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質を投与することを含む、対象における心不全を治療または予防するための方法を含む。様々な実施形態において、本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質は、配列番号５１に記載の重鎖配列および配列番号５２に記載の軽鎖配列を含む完全ヒト抗ＧＣＧＲ抗体である。
【０１５３】
一態様において、本開示は、対象にヒトグルカゴン受容体に特異的に結合する治療有効量の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質を投与することを含む、治療を必要とする対象における心筋梗塞後心不全を治療または予防するための方法を含む。様々な実施形態において、本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質は、配列番号５１に記載の重鎖配列および配列番号５２に記載の軽鎖配列を含む完全ヒト抗ＧＣＧＲ抗体である。
【０１５４】
一態様において、本開示は、心不全と診断された対象または心不全に罹患するリスクがある対象に、ヒトグルカゴン受容体に特異的に結合する治療有効量の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質を投与することを含む、対象における側脳室（ＬＶ）リモデリングを治療する方法を含む。様々な実施形態において、本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質は、配列番号５１に記載の重鎖配列および配列番号５２に記載の軽鎖配列を含む完全ヒト抗ＧＣＧＲ抗体である。
【０１５５】
糖尿病性心筋症は、冠動脈疾患（ＣＡＤ）または高血圧症等の他の交絡因子には直接起因していない、心筋層の構造および機能における、糖尿病に伴う変化の説明となる。報告によれば、多くの２型糖尿病患者では、糖尿病に伴う変化がこれらの共存症の存在によって増幅され、これが、左室肥大の発達増大、虚血傷害に対する心臓の感受性増加、心不全を発症する総合的な可能性の増加を引き起こす可能性があるとされている（Ｂｏｕｄｉｎａ  ａｎｄ  Ａｂｅｌ，Ｒｅｖ  Ｅｎｄｏｃｒ  Ｍｅｔａｂ  Ｄｉｓｏｒｄ．，１１（１）：３１−３９，２０１０  Ｍａｒｃｈ）。いくつかの機構が糖尿病性心筋症の病因に結び付けられており、糖尿病性心筋症に関与する機構の解明が継続されている。心筋構造、カルシウムシグナリングおよび代謝における変化は、主に動物モデルにおいて説明された、臨床的に明確な心機能不全に先行し得る、初期異常である（同上）。ヒトにおける糖尿病性心筋症は拡張機能障害（ＤＤ）を特徴とし、ＤＤは収縮機能障害（ＳＤ）の発症に先行し得る。
【０１５６】
糖尿病性腎症は、真性糖尿病のよく見られる重篤な合併症である、神経傷害性の障害である。糖尿病性神経障害には４つの主な病型がある：末梢神経障害、自律神経障害、神経根・神経叢（ｒａｄｉｃｕｌｏｐｌｅｘｕｓ）障害、および単神経障害。個人は、１つの病型のみ、またはいくつかの病型の症状を有し得る。ほとんどの症状はゆっくりと発症するものであり、かなりの傷害が起こるまで、問題が気付かれない場合がある。高血糖への長期暴露は、デリケートな神経線維を傷害し、糖尿病性神経障害を引き起こす可能性がある。従って、厳格な血糖管理によって、糖尿病性神経障害を予防する、または、糖尿病性神経障害の進行を遅らせることが可能であり得る。
【０１５７】
様々な実施形態において、本開示は、真性糖尿病と診断された対象、または真性糖尿病を発症するリスクがある対象に、ヒトグルカゴン受容体に特異的に結合する治療有効量の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質を投与することを含む、対象における心不全および関連状態を治療または予防するための方法を含む。様々な実施形態において、単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質は、配列番号５１の重鎖をコードするアミノ酸配列および配列番号５２の軽鎖をコードするアミノ酸配列を含む抗体を含む。
【０１５８】
一態様において、本開示は、対象にヒトグルカゴン受容体に特異的に結合する治療有効量の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質を投与することを含む、治療を必要とする対象における糖尿病性心筋症を治療または予防するための方法を含む。様々な実施形態において、本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質は、配列番号５１に記載の重鎖配列および配列番号５２に記載の軽鎖配列を含む完全ヒト抗ＧＣＧＲ抗体である。
【０１５９】
ヒトグルカゴン受容体に特異的に結合する単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質、具体的には本開示の完全ヒト抗体は一定の期間にわたって定期的な間隔で例えば１回、または１回よりも多く投与されて良い。様々な実施形態において、完全ヒト抗体は一定の期間にわたって少なくとも１カ月以上につき一回、例えば１カ月につき一回、２か月につき一回、または３か月につき一回、または不確定の頻度でも投与される。慢性の病気の治療については長期治療が非常に有効であることが一般的である。しかしながら、急性の病気の治療についてはより短い期間の投与、例えば、１〜６週間までの投与で充分であり得る。概して、前記完全ヒト抗体は、患者が選択された指標または選択された複数の指標について基線よりも上の医学的に適切な程度の改善を示すまで投与される。
【０１６０】
本明細書において提供される治療計画の一例は、血糖レベルが関与する病気を治療するために適切な投与量で単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質を週に一度、または２週間に一度皮下注射することを含む。単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質の週に一度、２週間に一度、または月に一度の投与は所望の結果が達成されるまで、例えば、患者の症状が治まるまで継続されることになる。治療は必要に応じて再開されて良く、あるいは維持用量が投与されて良い。
【０１６１】
患者の血糖レベルは、あるとすれば幾らかでもそれらのレベルの変化を検出するためにヒト抗体などの単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質による治療の前、治療中、および／または治療後にモニターされて良い。幾つかの障害について、血糖上昇の発生率は疾患ステージなどの因子に従って変化し得る。グルコースレベルを測定するために公知の技術が用いられて良い。グルカゴンレベルも公知の技術、例えばＥＬＩＳＡを用いて患者の血液の中で測定されて良い。
【０１６２】
治療的に有効な用量は、ＩＣ５０を決定することによって細胞培養アッセイから最初に推定され得る。その後、用量は、細胞培養において決定されるＩＣ５０を含む循環血漿中濃度範囲を達成するために動物モデルにおいて定式化され得る。そのような情報はヒトにおける有用な用量をより精密に決定するために使用され得る。血漿中のレベルは、例えば、ＨＰＬＣまたはその治療薬に特異的な抗イディオタイプ抗体を使用する免疫アッセイによって測定され得る。患者の病気を診る個々の医師によって正確な組成物、投与経路、および投与量が選択され得る。
【０１６３】
投与計画を調節して最適な所望の応答（例えば、治療的応答または予防的応答）をもたらすことができる。例えば、単回ボーラスを投与することができ、一定の期間にわたって数回に分割された用量（複数回用量または反復用量または維持用量）を投与することができ、そして急迫した治療状況によって示されるように比例的にその用量を減少または増加することができる。投与を簡単にし、且つ、投与量を均一にするために投薬単位剤形で非経口組成物を製剤することが特に有利である。本明細書において使用される投薬単位剤形は治療を受ける哺乳類対象への統一的な投与量として適切な物理的に別々の単位を指し、各単位は必要とされる医薬担体と共に所望の治療効果をもたらすように計算された所定の量の活性化合物を含む。本開示の投薬単位剤形の仕様は主に前記抗体に独特の特性、および達成されるべき特定の治療効果または予防効果によって決定づけられる。
【０１６４】
したがって、当業者は本明細書において提供される開示に基づいて治療技術分野においてよく知られている方法に準拠して用量と投与計画が調節されることを理解することになる。すなわち、最大忍容用量を容易に確定することができ、検出可能な治療利益を患者に提供するための各薬剤を投与する時間的要求事項を決定できるように検出可能な治療利益をその患者に対して提供する有効量を決定することもできる。したがって、ある特定の用量と投与計画が本明細書において例示されるが、これらの例は本開示の実施に際して患者に提供され得る用量と投与計画を決して限定しない。
【０１６５】
投与量の値は緩和されるべき病気の種類と重症度によって変化する場合があり得、それらは単回用量または複数回用量を含み得ることが特筆されるべきである。どの特定の患者についても具体的な投与計画は、その個人の要求と前記組成物の投与を行い、またはその投与を指揮する人物の専門的な判断に応じて時間と共に調節されるべきであること、および本明細書において明記される投与量範囲はただの例示であり、本請求の構成要素の範囲または実施を制限することを意図したものではないことがさらに理解されるべきである。さらに、本開示の組成物を用いる投与計画は疾患の種類、患者の年齢、体重、性別、医療状態、病気の重症度、投与経路、および使用される特定の抗体をはじめとする様々な因子に基づいて良い。したがって、投与計画は大幅に変化する場合があり得るが、それは標準的方法を用いて日常的に決定され得る。例えば、用量は薬物動態パラメーターまたは薬力学パラメーターに基づいて調節されて良く、それらのパラメーターは毒性効果および／または検査室値などの臨床効果を含み得る。したがって、本開示は当業者によって決定される患者内用量増加を包含する。適切な投与量および投与計画の決定は関連の技術分野においてよく知られており、本明細書において開示される教示が一旦提供されるとそのような決定が包含されることが当業者によって理解されることになる。
【０１６６】
ヒト対象への投与において、本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質の月当たりの総用量は、もちろん投与様式に依存するが、０．５〜１２００ｍｇ／対象、０．５〜１１００ｍｇ／対象、０．５〜１０００ｍｇ／対象、０．５〜９００ｍｇ／対象、０．５〜８００ｍｇ／対象、０．５〜７００ｍｇ／対象、０．５〜６００ｍｇ／対象、０．５〜５００ｍｇ／対象、０．５〜４００ｍｇ／対象、０．５〜３００ｍｇ／対象、０．５〜２００ｍｇ／対象、０．５〜１００ｍｇ／対象、０．５〜５０ｍｇ／対象、１〜１２００ｍｇ／対象、１〜１１００ｍｇ／対象、１〜１０００ｍｇ／対象、１〜９００ｍｇ／対象、１〜８００ｍｇ／対象、１〜７００ｍｇ／対象、１〜６００ｍｇ／対象、１〜５００ｍｇ／対象、１〜４００ｍｇ／対象、１〜３００ｍｇ／対象、１〜２００ｍｇ／対象、１〜１００ｍｇ／対象、または１〜５０ｍｇ／対象の範囲内であり得る。例えば、月当たりの静脈内用量は、約１〜１０００ｍｇ／対象を必要とし得る。ある特定の実施形態では、本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質は、約１〜２００ｍｇ／対象、１〜１５０ｍｇ／対象または１〜１００ｍｇ／対象で投与され得る。毎月総用量は、一回量で投与することも、分割量で投与することもでき、医師の裁量で、本明細書中に与えられる典型的な範囲の外とすることができる。
【０１６７】
本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質の治療有効量または予防有効量についての例となる非限定的な毎週または二週間毎の投与範囲は、体重に対して０．００１〜１０ｍｇ／ｋｇ、０．００１〜９ｍｇ／ｋｇ、０．００１〜８ｍｇ／ｋｇ、０．００１〜７ｍｇ／ｋｇ、０．００１〜６ｍｇ／ｋｇ、０．００１〜５ｍｇ／ｋｇ、０．００１〜４ｍｇ／ｋｇ、０．００１〜３ｍｇ／ｋｇ、０．００１〜２ｍｇ／ｋｇ、０．００１〜１ｍｇ／ｋｇ、０．０１０〜１０ｍｇ／ｋｇ、０．０１０〜９ｍｇ／ｋｇ、０．０１０〜８ｍｇ／ｋｇ、０．０１０〜７ｍｇ／ｋｇ、０．０１０〜６ｍｇ／ｋｇ、０．０１０〜５ｍｇ／ｋｇ、０．０１０〜４ｍｇ／ｋｇ、０．０１０〜３ｍｇ／ｋｇ、０．０１０〜２ｍｇ／ｋｇ、０．０１０〜１ｍｇ／ｋｇ、０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ、０．１〜９ｍｇ／ｋｇ、０．１〜８ｍｇ／ｋｇ、０．１〜７ｍｇ／ｋｇ、０．１〜６ｍｇ／ｋｇ、０．１〜５ｍｇ／ｋｇ、０．１〜４ｍｇ／ｋｇ、０．１〜３ｍｇ／ｋｇ、０．１〜２ｍｇ／ｋｇ、０．１〜１ｍｇ／ｋｇ、１〜１０ｍｇ／ｋｇ、１〜９ｍｇ／ｋｇ、１〜８ｍｇ／ｋｇ、１〜７ｍｇ／ｋｇ、１〜６ｍｇ／ｋｇ、１〜５ｍｇ／ｋｇ、１〜４ｍｇ／ｋｇ、１〜３ｍｇ／ｋｇ、１〜２ｍｇ／ｋｇであり得、または体重に対して１〜１ｍｇ／ｋｇであり得る。投与量の値は緩和されるべき病気の種類と重症度によって変化する場合があり得ることが特筆されるべきである。どの特定の患者についても具体的な投与計画は、その個人の要求と前記組成物の投与を行い、またはその投与を指揮する人物の専門的な判断に応じて時間と共に調節されるべきであること、および本明細書において明記される投与量範囲はただの例示であり、本請求の構成要素の範囲または実施を制限することを意図したものではないことがさらに理解されるべきである。
【０１６８】
様々な実施形態において、投与された総用量は、例えば、約１〜１０００μｇ／ｍｌ、約１〜７５０μｇ／ｍｌ、約１〜５００μｇ／ｍｌ、約１〜２５０μｇ／ｍｌ、約１０〜１０００μｇ／ｍｌ、約１０〜７５０μｇ／ｍｌ、約１０〜５００μｇ／ｍｌ、約１０〜２５０μｇ／ｍｌ、約２０〜１０００μｇ／ｍｌ、約２０〜７５０μｇ／ｍｌ、約２０〜５００μｇ／ｍｌ、約２０〜２５０μｇ／ｍｌ、約３０〜１０００μｇ／ｍｌ、約３０〜７５０μｇ／ｍｌ、約３０〜５００μｇ／ｍｌ、約３０〜２５０μｇ／ｍｌの範囲内の血漿中抗体濃度を達成する。
【０１６９】
本開示の医薬組成物の毒性および治療指数は、例えばＬＤ５０（集団の５０％にとって致死的である用量）およびＥＤ５０（集団の５０％において治療上有効である用量）のための細胞培養物または実験動物における標準的薬学的手法によって決定され得る。有毒な用量と治療的に有効な用量との間の用量の比率が治療指数であり、それは比率ＬＤ５０／ＥＤ５０として表され得る。大きい治療指数を示す組成物が一般的に好ましい。
【０１７０】
様々な実施形態において、前記医薬組成物の単回投与または複数回投与が、患者が必要とし、且つ、患者によって認容される投与量および投与頻度に応じて行われる。あらゆる事象において、前記組成物は患者を効果的に治療するために本明細書において開示される単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質のうちの少なくとも１つを充分な量で提供するべきである。その投与量を一度投与することができるが、治療成果が達成されるまでか、または副作用のために治療の中断が許されるまでのどちらかで、その投与量を定期的に適用してよい。
【０１７１】
単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質医薬組成物の投与頻度は、治療法および治療される特定の疾患の性質に応じたものとなる。対象は、毎週または毎月等の一定間隔を置いて、所望の治療結果が達成されるまで、治療され得る。例示的な投与頻度として、限定はされないが：ブレークなしで毎週１回；毎週１回、隔週で１回；２週間に１回；３週間に１回；ブレークなしで２週間毎週１回、その後月１回；ブレークなしで３週間毎週１回、その後月１回；月１回；２ヵ月に１回；３ヵ月に１回；４ヵ月に１回；５ヵ月に１回；もしくは６ヶ月に１回、または年１回が挙げられる。
【０１７２】
併用療法
本明細書において使用される場合、「共投与」、「共投与された」および「との併用で」という用語は本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質および１つ以上の他の治療薬に関して次のこと、すなわち、治療を必要とする患者への本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質と治療薬のそのような組合せの同時投与であって、そのような成分を実質的に同時に前記患者へ放出する単一の剤形に前記成分が一緒に製剤されるときの前記同時投与；治療を必要とする患者への本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質と治療薬のそのような組合せの実質的な同時投与であって、前記患者によって実質的に同時に取り込まれるとそのような成分を実質的に同時に前記患者へ放出する別々の剤形に前記成分が相互に離間して製剤されるときの前記実質的な同時投与；治療を必要とする患者への本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質と治療薬のそのような組合せの連続投与であって、各投与の間にかなりの時間間隔をあけて前記患者によって連続的に取り込まれるとそのような成分を実質的に異なる時間で前記患者へ放出する別々の剤形に前記成分が相互に離間して製剤されるときの前記連続投与；および治療を必要とする患者への本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質と治療薬のそのような組合せの連続投与であって、各部分が同じ経路または異なる経路のどちらで投与されても良い場合にそのような成分が制御放出されると前記成分を同時および／または異なる時間で前記患者へ同時に、連続的に、および／または重複的に放出する単一の剤形に前記成分が一緒に製剤されるときの前記連続投与を意味するものとし、且つ、そのような投与を指し、且つ、そのような投与を含む。
【０１７３】
本発明の化合物と組み合わせて使用され得る好適な医薬品としては、降圧薬、および慢性心不全、アテローム性動脈硬化または関連疾患を治療するための剤が含まれる。使用が企図されるそのような剤としては、限定はされないが、以下が挙げられる：ビモクロモル、アンジオテンシン変換酵素阻害剤（例えば、カプトプリル、エナラプリル、フォシノプリル、リシノプリル、ペリンドプリル、キナプリル、およびラミプリル等）、中性エンドペプチダーゼ阻害剤（例えば、チオルファン、オマパトリラト、ＭＤＬ−１００２４０、ファシドトリル、サムパトリラット（ｓａｍｐａｔｒｉｌａｔ）、ＧＷ−６６０５１１、ミクサンプリル（ｍｉｘａｎｐｒｉｌ）、ＳＡ−７０６０、Ｅ−４０３０、ＳＬＶ−３０６、エカドトリル等）、アンジオテンシンＩＩ受容体拮抗薬（例えば、カンデサルタンシレキセチル、エプロサルタン、イルベサルタン、ロサルタン、オルメサルタンメドキソミル、テルミサルタン、バルサルタン、タソサルタン、エノールタソサルタン等）、エンドセリン変換酵素阻害剤（例えば、ＣＧＳ３５０６６、ＣＧＳ２６３０３、ＣＧＳ−３１４４７、ＳＭ−１９７１２等）、エンドセリン受容体拮抗薬（例えば、トラクリア、シタキセンタン、アンブリセンタン、Ｌ−７４９８０５、ＴＢＣ−３２１４、ＢＭＳ−１８２８７４、ＢＱ−６１０、ＴＡ−０２０１、ＳＢ−２１５３５５、ＰＤ−１８０９８８、ＢＭＳ−１９３８８４、ダルセンタン、ＴＢＣ−３７１１、ボセンタン、テゾセンタン、Ｊ−１０４１３２、ＹＭ−５９８、Ｓ−０１３９、ＳＢ−２３４５５１、ＲＰＲ−１１８０３１Ａ、ＡＴＺ−１９９３、ＲＯ−６１−１７９０、ＡＢＴ−５４６、エンラセンタン、ＢＭＳ−２０７９４０等）、利尿薬（例えば、ヒドロクロロチアジド、ベンドロフルメチアジド、トリクロルメチアジド、インダパミド、メトラゾン、フロセミド、ブメタニド（ｂｕｍｅｔａｍｉｄｅ）、トルセミド、クロルタリドン、メトラゾン、シクロペンチアジド、ヒドロフルメチアジド、トリパミド、メフルシド、ベンジルヒドロクロロチアジド、ペンフルチジド、メチクロチアジド、アゾセミド、エタクリン酸、トラセミド、ピレタニド（ｐｉｒｅｔａｍｉｄｅ）、メチクラン、カンレノ酸カリウム、スピロノラクトン、トリアムテレン、アミノフィリン、シクレタニン、ＬＬＵ−α、ＰＮＵ−８０８７３Ａ、イソソルビド、Ｄ−マンニトール、Ｄ−ソルビトール、フルクトース、グリセリン、アセタゾラミド、メタゾラミド、ＦＲ−１７９５４４、ＯＰＣ−３１２６０、リキシバプタン、コニバプタン等）、カルシウムチャネル拮抗剤（例えば、アムロジピン、ベプリジル、ジルチアゼム、フェロジピン、イスラジピン、ニカルジピン（ｎｉｃａｒｄｉｐｅｎ）、ニモジピン、ベラパミル、Ｓ−ベラパミル、アラニジピン、エホニジピン、バルニジピン、ベニジピン、マニジピン、シルニジピン、ニソルジピン、ニトレンジピン、ニフェジピン、ニルバジピン、フェロジピン、プラニジピン、レルカニジピン、イスラジピン、エルゴジピン、アゼルニジピン、ラシジピン、バタニジピン、レミルジピン、ジルチアゼム、クレンチアゼム、ファスジル、ベプリジル、ガロパミル等）、血管拡張性降圧薬（例えば、インダパミド、���ドララジン、ヒドララジン、カドララジン、ブドララジン等）、β遮断薬（例えば、アセブトロール、ビソプロロール、エスモロール、プロプラノロール（ｐｒｏｐａｎｏｌｏｌ）、アテノロール、ラベタロール、カルベジロール、メトプロロール等）、交感神経遮断薬（例えば、アモスラロール、テラゾシン、ブナゾシン、プラゾシン、ドキサゾシン、プロプラノロール、アテノロール、メトプロロール、カルベジロール、ニプラジロール、セリプロロール、ネビボロール、ベタキソロール、ピンドロール、テルタトロール、ベバントロール、チモロール、カルテオロール、ビソプロロール、ボピンドロール、ニプラジロール、ペンブトロール、アセブトロール、チリソロール、ナドロール、ウラピジル、インドラミン等）、α−２−アドレナリン受容体作動薬（例えば、クロニジン、メチルドパ、ＣＨＦ−１０３５、酢酸グアナベンズ、グアンファシン、モクソニジン、ロフェキシジン、タリペキソール等）、中枢作用性降圧薬（例えば、レセルピン等）、血小板凝集阻害剤（例えば、ワルファリン、ジクマロール、フェンプロクーモン、アセノクマロール、アニシンジオン、フェニンジオン、キシメラガトラン等）、抗血小板薬（例えば、アスピリン、クロピドグレル、チクロピジン、ジピリダモール、シロスタゾール、イコサペント酸エチル、サルポグレラート、ジラゼプ、トラピジル、ベラプロスト等）、およびニューレグリン（ＮＲＧ−１、ＮＲＧ−２、ＮＲＧ−３およびＮＲＧ−４）、並びにこれらのアイソフォーム。
【０１７４】
すなわち、様々な実施形態において、本開示は、心不全と診断された対象、または心不全に罹患する危険性がある対象に、ヒトグルカゴン受容体に特異的に結合する治療有効量の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質；および（ｂ）第二の薬剤組成物を投与することを含む、対象における心不全および関連状態を治療または予防するための方法を含む。様々な実施形態において、本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質は、配列番号５１に記載の重鎖配列および配列番号５２に記載の軽鎖配列を含む完全ヒト抗ＧＣＧＲ抗体であり、第二の薬剤組成物は以下からなる群から選択される：アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、βアドレナリン遮断薬、アンジオテンシン（ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｏｎ）ＩＩ受容体遮断薬（ＡＲＢ）、利尿薬、およびジギタリス。様々な実施形態において、本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質は、配列番号５１に記載の重鎖配列および配列番号５２に記載の軽鎖配列を含む完全ヒト抗ＧＣＧＲ抗体であり、第二の薬剤組成物は以下からなる群から選択される：アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、βアドレナリン遮断薬、アンジオテンシン（ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｏｎ）ＩＩ受容体遮断薬（ＡＲＢ）、利尿薬、およびジギタリス。様々な実施形態において、本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質は、配列番号５１に記載の重鎖配列および配列番号５２に記載の軽鎖配列を含む完全ヒト抗ＧＣＧＲ抗体であり、第二の薬剤組成物はアンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤である。様々な実施形態において、本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質は、配列番号５１に記載の重鎖配列および配列番号５２に記載の軽鎖配列を含む完全ヒト抗ＧＣＧＲ抗体であり、第二の薬剤組成物はβアドレナリン遮断薬である。様々な実施形態において、本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質は、配列番号５１に記載の重鎖配列および配列番号５２に記載の軽鎖配列を含む完全ヒト抗ＧＣＧＲ抗体であり、第二の薬剤組成物は利尿薬である。様々な実施形態において、本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質は、配列番号５１に記載の重鎖配列および配列番号５２に記載の軽鎖配列を含む完全ヒト抗ＧＣＧＲ抗体であり、第二の薬剤組成物はジギタリスである。
【０１７５】
様々な実施形態において、前記併用療法は同じ医薬組成物または別々の医薬組成物のどちらかの中にある前記単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質組成物と前記第２薬剤組成物を同時に投与することを含む。様々な実施形態において、単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質組成物と前記第２薬剤組成物は連続的に投与される、すなわち、前記単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質組成物は前記第２薬剤組成物の投与の前または後のどちらかに投与される。
【０１７６】
様々な実施形態において、前記単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質組成物と前記第２薬剤組成物の投与は同時である、すなわち、前記単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質組成物と前記第２薬剤組成物の投与期間が相互に重なり合う。
【０１７７】
様々な実施形態において、前記単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質組成物と前記第２薬剤組成物の投与は同時ではない。例えば、様々な実施形態において、前記単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質組成物の投与は前記第２薬剤組成物が投与される前に終了する。様々な実施形態において、前記第２薬剤組成物の投与は前記単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質組成物が投与される前に終了する。
【０１７８】
本発明を説明してきたが、以下の実施例は例示であり、限定するものではない。
【実施例】
【０１７９】
実施例１
本実施例において、本発明者らは、抗グルカゴン受容体モノクローナル抗体の、心筋梗塞後心不全におけるＬＶリモデリングに対する治療法としての可能性を評価した。本実施例では、配列番号８に記載の重鎖配列および配列番号９に記載の軽鎖配列を含む抗ＧＣＧＲ抗体（「ＲＥＭＤ２．５９Ｃ」）のインビボ活性を、心筋梗塞誘導Ｃ５７ＢＬ／６マウスを用いて評価する。
【０１８０】
５４匹の８〜１０週齢Ｃ５７ＢＬ６雄マウスにおいて、左冠動脈を閉塞することにより心筋梗塞（ＭＩ）を誘導した。ＭＩの後、マウスを３つの群に無作為に分けた。第１群には対照としてビヒクルＰＢＳ処置を行い（ＣＯＮ、ｎ＝１８）；第２群にはＭＩ後２時間および１４日間の時点で皮下に７．５ｍｇ／ｋｇ  ＲＥＭＤ２．５９Ｃ  ｍＡｂ処置を行い（ｍＡｂ、ｎ＝１８）；第３群には、ＭＩ後の最初の６日間、グルカゴン（１０％ゼラチン中３０ｎｇ／ｋｇ体重）処置を１日３回行った（ＧＬＣ、ｎ＝１８）。シャム動物を陰性対照として使用した。
【０１８１】
梗塞マウスの生存率を２８日間毎日調べた。生存曲線を時間に対して描いた。空腹時血糖測定はＭＩ後２週間の時点で行う。心機能をＭＩ後の回復期にモニターした。２８日間の試験の最後に、マウスを安楽死させ、組織学的研究用に心臓を摘出し、心室収縮（エコーＦＳ／ＥＦ）、心室圧および収縮能（カテーテル）；心室リモデリング、隔壁および左室壁の厚さ（エコー）、心係数（ＨＷ／ＢＷ）、筋肥大、線維症；梗塞サイズ、並びにアポトーシスを測定した。
【０１８２】
心機能を、心エコーにより３回、ＭＩ後１日目、次いでＭＩ後１４日間および２８日間の時点で測定した。１回目のエコーは梗塞マウスから梗塞無しマウスをふるい分けるために用いた。左室内径短縮率が４０％を超えるマウスは試験から排除した。実験の最後に、Ｍｉｃｒｏ−ｔｉｐ圧力トランスデューサー（カテーテル）で心室機能を測定した。組織学的研究のために、心臓を固定用１０％ホルマリンで灌流した。心尖部、中央部、および心底部から得られた心臓切片を、マッソントリクローム染色（ＭＴＳ）およびＴＵＮＥＬ染色に使用した。ＭＴＳ切片では梗塞サイズを測定し、ＴＵＮＥＬ染色後の切片ではアポトーシスを評価した。梗塞サイズおよびアポトーシスに基づいて、ＲＥＭＤ２．５９Ｃ  ｍＡｂの保護効果を評価した。心臓リモデリングの評価のために、ＭＴＳ切片で線維症および筋細胞サイズを測定した。
【０１８３】
図１に示されるように、試験終了時に、ＭＩはＣＯＮマウスにおいては５５％（１０／１８）の死亡率をもたらしたが、一方、ＲＥＭＤ２．５９Ｃ  ｍＡｂ処置は死亡率を減少させ（１１／１８すなわち６１％のマウスが生存）、グルカゴン処置は死亡率を増加させた（６／１８すなわち３３％のマウスが生存）。図２に示されるように、ｍＡｂはＣＯＮとの比較で左室内径短縮率（ＦＳ）を有意に増加させ、一方、ＧＬＣはＣＯＮとの比較でＦＳを減少させた。図３に示されるように、ｍＡｂはＣＯＮとの比較で左室収縮末期径（ＬＶＥＳＤ）を細め、一方、ＧＬＣはＣＯＮとの比較でＬＶＥＳＤを増加させた。図４に示されるように、ｍＡｂはＣＯＮとの比較で左室拡張末期径（ＬＶＥＤＤ）を細め、一方、ＧＬＣはＣＯＮとの比較でＬＶＥＤＤを増加させた。図５に示されるように、ｍＡｂはＣＯＮとの比較で左室虚血筋（ｌｅｆｔ  ｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ  ｉｓｃｈｅｍｉｃ  ｍｕｓｃｌｅ）を保存し、一方、ＧＬＣはＣＯＮとの比較で左室虚血筋をわずかに減少させた。図６に示されるように、ｍＡｂはＣＯＮとの比較で左心室収縮を増加させ、一方、ＧＬＣはＣＯＮとの比較で左心室収縮を減少させた。図７に示されるように、ｍＡｂはＣＯＮとの比較で心筋収縮能（左パネル）および弛緩（右パネル）を増加させ、一方、ＧＬＣはＣＯＮとの比較で両方を減少させた。図８に示されるように、ｍＡｂはＣＯＮとの比較で心臓リモデリングを減弱し、一方、ＧＬＣはＣＯＮとの比較で心臓重量をわずかに増加させた。図９に示されるように、ｍＡｂはＣＯＮとの比較で心臓リモデリングを減弱（ＨＷ／ＢＷを減少）し、一方、ＧＬＣはＣＯＮとの比較でＨＷ／ＢＷをわずかに増加させた。図１０に示されるように、ｍＡｂは、ＭＩ後２週間の時点で、ＣＯＮとの比較でマウス（４時間絶食）の血糖値を減少させた。図１１に示されるように、ｍＡｂは梗塞巣におけるアポトーシスを減弱した。図１２および図１３に示されるように、ｍＡｂは非梗塞巣における線維症を減弱した。図１４および図１５に示されるように、ｍＡｂは非梗塞巣における単球の肥大を減弱した。図１６に示されるように、ｍＡｂはＭＩ後数週間の時点で梗塞サイズを減少させた。図１７に示されるように、ｍＡｂはＭＩ後数週間の時点で梗塞巣を減少させた。
【０１８４】
組織学所見は、ＭＩ後心室リモデリングに対するグルカゴン受容体ｍＡｂの保護効果を強く裏付けている。グルカゴン受容体ｍＡｂによる処置は梗塞領域におけるアポトーシスを減弱し、非梗塞巣における筋肥大および線維症を減少させた。グルカゴン受容体ｍＡｂはＰＢＳ対照との比較でＭＩ後４週間の時点で梗塞巣を減少させた。抗グルカゴン受容体モノクローナル抗体は心臓リモデリングを減弱し、これによりＨＷ／ＢＷが減少し、左室収縮能（＋ｄｐ／ｄｔｍ）およびＦＳが増加し、左室壁厚が保存された。グルカゴン（リガンド）投与は心臓リモデリングを促進して心機能を悪化させたが、このことは、グルカゴンシグナル伝達がＭＩ後リモデリングに関与していることを示唆している。
【０１８５】
これらの試験の驚くべき結果は、グルカゴンシグナル伝達がＭＩ後心室リモデリングに関与していること、および、アンタゴニスト性ｍＡｂによるグルカゴン受容体の標的化が心筋梗塞後心不全の予防への有効な治療的アプローチになり得ること、を示差している。抗グルカゴン受容体抗体は、ＭＩ後の有害な心臓リモデリングおよび心不全との戦いにおいて、強力な武器になり得る。
【０１８６】
実施例２
本実施例では、本発明者らは、ｄｂ／ｄｂマウスにおける糖尿病によって誘導された心筋症に対するヒト抗ＧＣＧＲ抗体の潜在的な予防効果を評価した。本実施例では、配列番号５１に記載の重鎖配列および配列番号５２に記載の軽鎖配列を含むヒト抗ＧＣＧＲ抗体（「ＲＥＭＤ４７７」）のインビボ活性を、Ｃ５７ＢＬ／６／ｄｂ／ｄｂ雄糖尿病マウスおよびｄｂ／＋雄対照マウスを用いて評価した。
【０１８７】
この１８週間の試験では、３０匹の８〜１０週齢Ｃ５７ＢＬ６／ｄｂ／ｄｂ糖尿病雄マウス、および１８匹のｄｂ／＋雄マウスを、４つの群に無作為に分けた。第１群では、ｄｂ／＋マウス（ｎ＝９）を対照としてのビヒクルＰＢＳで処置し（以後、「ｄｂ／＋（ＰＢＳ）」）；第２群では、ｄｂ／＋マウス（ｎ＝９）をＲＥＭＤ４７７で処置し（以後、「ｄｂ／＋（ｍＡｂ）」）；第３群では、ｄｂ／ｄｂ糖尿病マウス（ｎ＝１５）を対照としてのビヒクルＰＢＳで処置し（以後、「ｄｂ／ｄｂ（ＰＢＳ）」）；第４群では、ｄｂ／ｄｂマウス（ｎ＝１５）をＲＥＭＤ４７７で処置した（以後、「ｄｂ／ｄｂ（ｍＡｂ）」）。第２群および第４群では、ＲＥＭＤ４７７を、７ｍｇ／ｋｇで皮下に週１回、その後、３ｍｇ／ｋｇで皮下に週１回を１８週目まで、合計１３回の注射となるように、投与した。第１群および第３群では、第２群および第４群の処置と同じ頻度で、０１．ｍｌ／マウスのＰＢＳを投与した。１８週間の試験の終了時に、マウスを安楽死させ、心臓を組織学的研究用に摘出する。
【０１８８】
体重、空腹時血糖、およびＯＧＴＴの測定を、処置後０、４、８、１２および１８週間の時点で行う。血中インスリンレベルおよび血中グルカゴンレベルを、処置後０、６、１２および１８週間の時点で測定した。心機能を、心エコーにより、処置後１日目、次いで処置後６、１２および１８週間の時点で測定した。１回目のエコーは梗塞マウスから梗塞無しマウスをふるい分けるために用いた。左室内径短縮率が４０％を超えるマウスは試験から排除した。心機能変化（例えば、心室収縮機能（エコー／ＦＳ／ＥＦ）および拡張機能（エコーＥ／ＡおよびＩＲＴ）、心室圧および収縮能（カテーテル）、並びに心拍出量（エコー））を、処置後０、６、１２および１８週間の時点でモニターする。左心室リモデリングを、処置後１８週間の時点でＭｉｃｒｏ−ｔｉｐ圧力トランスデューサー（カテーテル）によって測定し、例えば、左室弛緩期圧（ｍｍＨｇ）および心係数（ＨＷ／ＢＷ）を、処置後１８週間の時点でＭｉｃｒｏ−ｔｉｐカテーテルによって測定する。血清中のＧＬＰ−１およびＧＨｂＡｃ１のレベル測定を、処置後０および１８週間の時点で行う。
【０１８９】
組織学的研究のために、心臓を固定用１０％ホルマリンで灌流する。心尖部、中央部、および心底部から得られた心臓切片を、マッソントリクローム染色（ＭＴＳ）およびＴＵＮＥＬ染色に使用する。ＭＴＳ切片では梗塞サイズを測定し、ＴＵＮＥＬ染色後の切片ではアポトーシスを評価する。心臓リモデリングの評価のために、ＭＴＳ切片で線維症および筋細胞サイズを測定した。
【０１９０】
図１８に示されるように、ｍＡｂは、血糖値の急速な低下に対して、有意な効果を示し、インスリン無しで、早ければ３〜４週間で血中濃度を正常レベルにまで戻すことが可能であり、且つ、正常レベルを１４週間維持することが可能である。図１９に示されるように、ＯＧＴＴは、耐糖能が有意に向上されたことを示した。図２０に示されるように、ｍＡｂは、糖尿病ｄｂ／ｄｂマウスにおけるＰＢＳとの比較で左室拡大（ＬＶＥＳＤ）を顕著に減弱し、値を対照ｄｂ／＋マウスの値にまで回復させ、その値を１８週間維持した。図２１に示されるように、ｍＡｂは、１８週間の時点で、ＰＢＳとの比較で左室拡張末期径（ＬＶＥＤＤ）を減弱した。図２２に示されるように、ｍＡｂは、糖尿病ｄｂ／ｄｂにおけるＰＢＳとの比較で左室内径短縮率（ＦＳ）を有意に増加させ、値を対照ｄｂ／＋マウスの値にまで回復させ、その値を１８週間維持した。図２３に示されるように、ｍＡｂは、糖尿病ｄｂ／ｄｂマウスにおけるＰＢＳとの比較で心室中隔拡張末期（ＩＶＳＤ）を顕著に減弱し、値を対照ｄｂ／＋マウスの値にまで回復させ、その値を１８週間維持した。図２４に示されるように、ｍＡｂは、糖尿病ｄｂ／ｄｂマウスにおけるＰＢＳとの比較で後期心室充満速度（Ａ）に対する早期心室充満速度（Ｅ）の比率（Ｅ／Ａ）を顕著に減少させ、値を対照ｄｂ／＋マウスの値にまで回復させ、その値を１８週間維持した。図２５に示されるように、ｍＡｂは、糖尿病ｄｂ／ｄｂマウスにおけるＰＢＳとの比較で心拍出量（ＣＯ、ｍｌ／分）を顕著に増加させ、値を対照ｄｂ／＋マウスの値にまで回復させ、その値を１８週間維持した。図２６に示されるように、ｍＡｂは、糖尿病ｄｂ／ｄｂマウスにおけるＰＢＳとの比較で等容弛緩時間（ＩＶＲＴ、ミリ秒）を顕著に減少させ、値を対照ｄｂ／＋マウスの値にまで回復させ、その値を１８週間維持した。図２７に示されるように、ＰＢＳ対照との比較で、ｍＡｂにける心拍速度に統計的有意差は無かった。図２８に示されるように、ｍＡｂは、１８週目において糖尿病ｄｂ／ｄｂマウスにおけるＰＢＳとの比較で左室弛緩期圧（ＬＶＤＰ、ｍｍＨｇ、Ｍｉｋｒｏ−ｔｉｐカテーテルで測定）を顕著に増加させ、値を対照ｄｂ／＋マウスの値近くにまで回復させた。図２９に示されるように、＋ｄｐ／ｄｔｍ値および−ｄｐ／ｄｔｍ値が、１８週目においてＰＢＳとの比較でｍＡｂ処置によって顕著に改善され、ｍＡｂは値を対照ｄｂ／＋マウスの値近くにまで回復させた。図３０に示されるように、ｍＡｂを用いた処置後、ＰＢＳ処置ｄｂ／ｄｂマウスと比較して血中ＧＬＰ−１が有意に増加し、ＰＢＳ処置ｄｂ／ｄｂマウスと比較して血中ＧＨｂＡ１ｃが有意に減少した。図３１に示されるように、ｍＡｂ処置は、１８週目に、ＰＢＳと比較して、心臓重量および体重のわずかな減少をもたらした。図３２に示されるように、１８週目において、血中インスリンレベルには処置群間で有意差は無かった。
【０１９１】
組織学所見は、糖尿病によって誘導された心筋症に対する、抗グルカゴン受容体ｍＡｂの潜在的な予防効果を強く裏付けている。これらの試験の驚くべき結果は、グルカゴンシグナル伝達が糖尿病によって誘導される心筋症に関与していることを示唆しており、さらに、アンタゴニスト性ｍＡｂによるグルカゴン受容体の標的化が、糖尿病によって誘導される心筋症の予防への、有効な治療的アプローチになり得ることを示している。
【０１９２】
実施例３
本実施例では、配列番号８に記載の重鎖配列および配列番号９に記載の軽鎖配列を含む抗ＧＣＧＲ抗体（「ＲＥＭＤ２．５９Ｃ」）のインビボ活性を、ミニブタ心筋梗塞モデル（シンクレア・リサーチ社）における有効性について評価する。
【０１９３】
ミニブタ（若年成体／雌）には７日間の順化期間を与え、無作為に２つの群に分ける。第１群では、ブタを対照としてのビヒクルＰＢＳの単回投与で処置し（ＣＯＮ、ｎ＝５）、第２群では、ブタを７．５ｍｇ／ｋｇ  ＲＥＭＤ２．５９Ｃ  ｍＡｂの単回投与で処置する（ｍＡｂ、ｎ＝５）。投与に先立ち、各動物には外科手術（１０〜２０分間の左上行動脈の結紮）を行って、閉塞をつくり出し、心筋梗塞を誘導する。２０分後、この閉塞を取り除き、再灌流中に前記処置を施行する。動物は手術後はストレスを与えない環境で維持および取り扱いをする。
【０１９４】
死亡率／罹患率の観察を１日２回行う。種々の評価およびパラメーターを、ベースライン時および終了前または剖検前に得る。これらには、体重、臨床所見、臨床病理、臨床化学、血液学および凝固のパラメーター、並びにＥＣＧ／心臓評価が含まれる。試験（２８日間）終了時に、組織学的研究用に、限局的な剖検を行い、組織病理学用の限局的な心臓組織を採取する（梗塞の中央、注射領域およびそれぞれの程度の梗塞領域において２以上を評価）。心室収縮（エコーＦＳ／ＥＦ）、心室圧および収縮能（カテーテル）；心室リモデリング、隔壁および左室壁の厚さ（エコー）、心係数（ＨＷ／ＢＷ）、筋肥大、線維症；梗塞サイズ、並びにアポトーシスを測定した。
【０１９５】
心エコー図による、トロポニンレベル、心室のサイズ、心室壁厚、および駆出率がエンドポイントである。
【０１９６】
さらなる材料および方法
梗塞マウスの作製
ＭＩは、以前の記述（Ｐａｔｔｅｎ  ＲＤ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．，１９９８；２７４：Ｈ１８１２−１８２０．［ＰｕｂＭｅｄ：９６１２３９４］）の通りにマウスに誘導した。簡潔に説明すると、胸部を左開胸にて開いた。実体顕微鏡を用いて左冠動脈を目視にて特定し、７−０縫合糸を左心耳より１〜２ｍｍ下にある動脈に巻いた。心電図（ＥＣＧ）を継続的にモニターした。縫合糸による左冠動脈の結紮によって、左冠動脈の永続的な閉塞が生じた。心臓色の蒼白さおよびＳＴ部分上昇によって心筋虚血を確認した。胸部を６−０絹縫合糸で縫合した。自発呼吸が再開した後、気管内チューブを取り除いた。完全に意識が戻るまで動物を監視した。動物をケージに戻した後、標準的な固形飼料および水を与えた。
【０１９７】
心エコー
インビボにおける心機能を、経胸壁心エコー法（Ａｃｕｓｏｎ  Ｐ３００，１８  ＭＨｚ  ｔｒａｎｓｄｕｃｅｒ；Ｓｉｅｍｅｎｓ）により、意識のあるマウスにおいて以前の記述の通りに評価した。マウスの心臓を、乳頭レベルで傍胸骨短軸から２次元的にイメージングした。この画像から、左室寸法を測定した。左室内径短縮率（ＦＳ）を、左心室（ＬＶ）の拡張末期径（ＥＤＤ）および収縮末期径（ＥＳＤ）から算出した。ＭモードのＥＤＤおよびＥＳＤを３〜５回の拍動から平均した。研究および分析は処置を知らされていない研究者が行った。
【０１９８】
Ｍｉｋｒｏ−ｔｉｐカテーテルによる左室圧の測定
マウスをペントバルビタール（４０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）で麻酔した。胸部を左開胸にて開いた。梗塞心臓を露出させた。マウス用Ｍｉｋｒｏ−ｔｉｐカテーテル（ＳＰＲ１０００）を、梗塞を起こしていない心室壁を通じて左心室内に挿入した。左室圧をＰｏｗｅｒＬａｂシステム（Ａｄインスツルメント社（Ａｄｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ））によって測定した。心室収縮能を、Ｃｈａｒｔ  ７ソフトウェア（Ａｄインスツルメント社）により算出した。
【０１９９】
組織学的研究
心臓を、１０％緩衝ホルマリンで固定し、パラフィン包埋し、６μｍ切片にした。１心臓当たり１つの中縦断面（ｍｉｄｄｌｅ  ｌｏｎｇｉｔｕｄｉｎａｌ  ｓｅｃｔｉｏｎ）をマッソントリクローム染色した。左心室の非梗塞巣からの、８つの無作為に選択した視野（４００×）を、線維症および筋細胞サイズについて、顕微鏡下で調べた。各群は５〜６の心臓を含み、各群において最低４０視野を、コンピュータ化された側面法（ＮＩＨ  Ｉｍａｇｅ  Ｊ）によって解析した。線維症を評価するため、線維性である青色の面積および全心筋面積を測定した。線維性面積は心筋面積に対する線維性面積の割合として表した。横断面筋細胞において、筋細胞サイズを測定した。合計１００〜１５０細胞／心臓を解析した。梗塞心臓のサイズを評価するために、２つの方法を使用した。梗塞面積は、心臓写真の表面および裏面を用いて、合計心室面積に対する梗塞心室面積の割合として求めた。梗塞サイズは、心臓切片を用いて、心室壁全長に対する梗塞心室壁の長さの割合として測定した。観測者は心臓切片の由来を知らされていない者とした。
【０２００】
ＴＵＮＥＬアッセイ
ＴＵＮＥＬアッセイを、Ｉｎ  Ｓｉｔｕ  Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｋｉｔを用いて行った。簡潔に説明すると、心臓を１０％ホルマリン溶液で灌流固定し、パラフィン包埋し、６μｍ切片にした。１心臓当たり１つの中央（ｍｉｄｄｌｅ）縦断面をＴＵＮＥＬ染色した。プロテアーゼＫ（２０μｇ／ｍｌ）を各スライドに加えた。切片を２％過酸化水素で覆って、内在性ペルオキシダーゼを不活性化した。固定後、切片をＴｄＴ緩衝液と一緒に３７℃で３０分間インキュベートした。１×ＳＳＣで反応を止めた。洗浄後、スライドを使用準備済み（ＲＴＵ）ストレプトアビジン−ＨＲＰと一緒に３０分間インキュベートした。ＤＡＢ溶液を添加して陽性シグナルを発色させた。ＲＴＵヘマトキシリンによる対比染色後、スライドを封入剤で覆い、顕微鏡下で解析した。各群は５〜６の心臓を含んだ。１心臓当たり梗塞巣から８つの視野（４００×）を、陽性細胞および総細胞について、コンピュータ化された側面法（ＮＩＨ  Ｉｍａｇｅ  Ｊ）を用いて解析した。アポトーシスの程度は総細胞に対する陽性細胞の割合として表した。
【０２０１】
本願で開示および特許請求される物品および方法は全て、本開示に照らして、不要な実験を行うことなく、作製および実行することができる。本開示の物品および方法が好ましい実施形態の観点から記述されたが、本開示の精神および範囲から逸脱しない範囲で物品および方法に変形を適用してよいことは、当業者には明らかである。当業者に明らかな、そのような変形形態および均等物は全て、現存するものであれ後に開発されるものであれ、添付の特許請求の範囲によって定義される本開示の精神および範囲に包含されると見なされる。本明細書で言及された特許、特許出願、および刊行物は全て、本開示が属する技術分野における当業者の水準を示すものである。全ての特許、特許出願、および刊行物は、あたかも個々の刊行物が、その全体があらゆる目的で参照により援用されると明確且つ個々に示されるのとの同程度に、それらの全体があらゆる目的で参照により本明細書に援用される。本明細書に例示的に記載された開示は、本明細書に特には開示されていないいかなる要素が存在せずとも、好適に実施することができる。すなわち、例えば、本明細書におけるどの場合でも、用語「を含む」、「から本質的になる」、および「からなる」のいずれも、他の２つの用語のいずれとも置き換えることができる。使用された用語および表現は、限定ではなく説明のための用語として使用されており、そのような用語および表現の使用に際して、示されそして説明された特徴またはその一部のいかなる均等物も排除する意図も無く、ただし、特許請求された本開示の範囲内で様々な変更形態が可能であると認識される。すなわち、本開示は好ましい実施形態および任意の特徴によって具体的に開示されたが、本明細書で開示された概念の変更および変形が当業者により行われてもよいこと、並びに、そのような変更および変形が添付の特許請求の範囲によって定義される本開示の範囲内であると見なされることを理解されたい。
【０２０２】
配列表
添付されている配列表に挙げられているアミノ酸配列は米国特許法施行規則第１．８２２条において規定されるアミノ酸の標準的３文字コードを使用して示されている。
【０２０３】
配列番号１はヒトグルカゴン受容体（ＧＣＧＲ）分子のアミノ酸配列である（受託番号ＡＡＩ０４８５５）。
【０２０４】
配列番号２は完全ヒト抗ＧＣＧＲ抗体の重鎖可変領域をコードするアミノ酸配列である。配列番号３は完全ヒト抗ＧＣＧＲ抗体の軽鎖可変領域をコードするアミノ酸配列である。
【０２０５】
配列番号４は完全ヒト抗ＧＣＧＲ抗体の重鎖可変領域をコードするアミノ酸配列である。配列番号５は完全ヒト抗ＧＣＧＲ抗体の軽鎖可変領域をコードするアミノ酸配列である。
【０２０６】
配列番号６は完全ヒト抗ＧＣＧＲ抗体の重鎖可変領域をコードするアミノ酸配列である。配列番号７は完全ヒト抗ＧＣＧＲ抗体の軽鎖可変領域をコードするアミノ酸配列である。
【０２０７】
配列番号８はキメラ抗ＧＣＧＲ抗体の重鎖をコードするアミノ酸配列である。配列番号９はキメラ抗ＧＣＧＲ抗体の軽鎖をコードするアミノ酸配列である。
【０２０８】
配列番号１０〜２８は様々な完全ヒト抗ＧＣＧＲ抗体の重鎖可変領域をコードするアミノ酸配列である。
【０２０９】
配列番号２９〜４７は様々な完全ヒト抗ＧＣＧＲ抗体の軽鎖可変領域をコードするアミノ酸配列である。
【０２１０】
配列番号４８はカッパ軽鎖定常領域をコードするアミノ配列である。配列番号４９はラムダ軽鎖定常領域をコードするアミノ配列である。
【０２１１】
配列番号５０はＩｇＧ２重鎖定常領域をコードするアミノ配列である。
【０２１２】
配列番号５１はヒト抗ＧＣＧＲ抗体の重鎖をコードするアミノ酸配列である。配列番号５２はヒト抗ＧＣＧＲ抗体の軽鎖をコードするアミノ酸配列である。
[配列表]
配列番号１  −  ヒトグルカゴン受容体（ＧＣＧＲ）分子のアミノ酸配列
ＭＰＰＣＱＰＱＲＰＬＬＬＬＬＬＬＬＡＣＱＰＱＶＰＳＡＱＶＭＤＦＬＦＥＫＷＫＬＹＧＤＱＣＨＨＮＬＳＬＬＰＰＰＴＥＬＶＣＮＲＴＦＤＫＹＳＣＷＰＤＴＰＡＮＴＴＡＮＩＳＣＰＷＹＬＰＷＨＨＫＶＱＨＲＦＶＦＫＲＣＧＰＤＧＱＷＶＲＧＰＲＧＱＰＷＲＤＡＳＱＣＱＭＤＧＥＥＩＥＶＱＫＥＶＡＫＭＹＳＳＦＱＶＭＹＴＶＧＹＳＬＳＬＧＡＬＬＬＡＬＡＩＬＧＧＬＳＫＬＨＣＴＲＮＡＩＨＡＮＬＦＡＳＦＶＬＫＡＳＳＶＬＶＩＤＧＬＬＲＴＲＹＳＱＫＩＧＤＤＬＳＶＳＴＷＬＳＤＧＡＶＡＧＣＲＶＡＡＶＦＭＱＹＧＩＶＡＮＹＣＷＬＬＶＥＧＬＹＬＨＮＬＬＧＬＡＴＬＰＥＲＳＦＦＳＬＹＬＧＩＧＷＧＡＰＭＬＦＶＶＰＷＡＶＶＫＣＬＦＥＮＶＱＣＷＴＳＮＤＮＭＧＦＷＷＩＬＲＦＰＶＦＬＡＩＬＩＮＦＦＩＦＶＲＩＶＱＬＬＶＡＫＬＲＡＲＱＭＨＨＴＤＹＫＦＲＬＡＫＳＴＬＴＬＩＰＬＬＧＶＨＥＶＶＦＡＦＶＴＤＥＨＡＱＧＴＬＲＳＡＫＬＦＦＤＬＦＬＳＳＦＱＧＬＬＶＡＶＬＹＣＦＬＮＫＥＶＱＳＥＬＲＲＲＷＨＲＷＲＬＧＫＶＬＷＥＥＲＮＴＳＮＨＲＡＳＳＳＰＧＨＧＰＰＳＫＥＬＱＦＧＲＧＧＧＳＱＤＳＳＡＥＴＰＬＡＧＧＬＰＲＬＡＥＳＰＦ
配列番号２  −  ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＨＣＶＲのアミノ酸配列
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＭＷＹＤＧＳＮＫＤＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＲＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＫＤＨＹＤＩＬＴＧＹＮＹＹＹＧＬＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号３  −  ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＬＣＶＲのアミノ酸配列
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＲＮＤＬＧＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＲＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＶＱＰＥＤＦＶＴＹＹＣＬＱＨＮＳＮＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号４  −  ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＨＣＶＲのアミノ酸配列
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＭＷＹＤＧＳＮＫＤＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＫＤＨＹＤＩＬＴＧＹＮＹＹＹＧＬＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号５  −  ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＬＣＶＲのアミノ酸配列
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＲＮＤＬＧＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＲＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＶＴＹＹＣＬＱＨＮＳＮＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号６  −  ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＨＣＶＲのアミノ酸配列
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＭＷＹＤＧＳＮＫＤＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＲＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＫＤＨＹＤＩＬＴＧＹＮＹＹＹＧＬＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号７  −  ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＬＣＶＲのアミノ酸配列
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＲＮＤＬＧＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＲＬＩＹＡＡＳＳＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＶＱＰＥＤＦＶＴＹＹＣＬＱＨＮＳＮＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号８  −  ＧＣＧＲに結合するキメラ抗体の重鎖のアミノ酸配列
ＭＥＦＧＬＳＷＶＦＬＶＡＬＬＲＧＶＱＣＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＭＷＹＤＧＳＮＫＤＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＲＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＫＤＨＹＤＩＬＴＧＹＮＹＹＹＧＬＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＫＴＴＰＰＳＶＹＰＬＡＰＧＳＡＡＱＴＮＳＭＶＴＬＧＣＬＶＫＧＹＦＰＥＰＶＴＶＴＷＮＳＧＳＬＳＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＤＬＹＴＬＳＳＳＶＴＶＰＳＳＴＷＰＳＥＴＶＴＣＮＶＡＨＰＡＳＳＴＫＶＤＫＫＩＶＰＲＤＣＧＣＫＰＣＩＣＴＶＰＥＶＳＳＶＦＩＦＰＰＫＰＫＤＶＬＴＩＴＬＴＰＫＶＴＣＶＶＶＤＩＳＫＤＤＰＥＶＱＦＳＷＦＶＤＤＶＥＶＨＴＡＱＴＱＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＳＶＳＥＬＰＩＭＨＱＤＷＬＮＧＫＥＦＫＣＲＶＮＳＡＡＦＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＲＰＫＡＰＱＶＹＴＩＰＰＰＫＥＱＭＡＫＤＫＶＳＬＴＣＭＩＴＤＦＦＰＥＤＩＴＶＥＷＱＷＮＧＱＰＡＥＮＹＫＮＴＱＰＩＭＤＴＤＧＳＹＦＶＹＳＫＬＮＶＱＫＳＮＷＥＡＧＮＴＦＴＣＳＶＬＨＥＧＬＨＮＨＨＴＥＫＳＬＳＨＳＰＧＫ
配列番号９  −  ＧＣＧＲに結合するキメラ抗体の軽鎖のアミノ酸配列
ＭＤＭＲＶＰＡＱＬＬＧＬＬＬＬＷＦＰＧＡＲＣＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＲＮＤＬＧＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＲＬＩＹＡＡＳＳＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＶＱＰＥＤＦＶＴＹＹＣＬＱＨＮＳＮＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＡＤＡＡＰＴＶＳＩＦＰＰＳＳＥＱＬＴＳＧＧＡＳＶＶＣＦＬＮＮＦＹＰＫＤＩＮＶＫＷＫＩＤＧＳＥＲＱＮＧＶＬＮＳＷＴＤＱＤＳＫＤＳＴＹＳＭＳＳＴＬＴＬＴＫＤＥＹＥＲＨＮＳＹＴＣＥＡＴＨＫＴＳＴＳＰＩＶＫＳＦＮＲＮＥＣ
配列番号１０  −  ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＨＣＶＲのアミノ酸配列
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＬＳＤＧＲＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＤＹＥＩＬＴＧＹＧＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号１１  −  ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＨＣＶＲのアミノ酸配列
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＬＮＤＧＲＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＤＹＥＩＬＴＧＹＧＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号１２  −  ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＨＣＶＲのアミノ酸配列
ＱＶＱＬＱＱＳＧＰＧＬＶＫＰＳＱＴＬＳＬＴＣＡＩＳＧＤＳＶＳＳＮＧＡＡＷＮＷＩＲＱＳＰＳＲＧＬＥＷＬＧＲＴＹＹＲＳＫＷＹＹＤＹＡＧＳＶＫＳＲＩＮＩＮＰＤＴＳＫＮＱＦＳＬＱＶＮＳＶＴＰＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲＤＲＳＳＧＷＮＥＧＹＹＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号１３  −  ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＨＣＶＲのアミノ酸配列
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＤＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＬＳＳＤＧＮＮＫＹＣＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＴＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＥＶＹＹＤＩＬＴＧＹＹＤＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号１４  −  ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＨＣＶＲのアミノ酸配列
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＳＴＹＦＷＴＷＩＲＱＦＰＧＫＧＬＥＷＩＧＹＩＦＹＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＹＹＤＩＬＴＧＥＤＹＳＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号１５  −  ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＨＣＶＲのアミノ酸配列
ＱＶＱＬＱＱＳＧＰＧＬＶＫＰＳＱＩＬＳＬＴＣＡＩＳＧＤＲＶＳＳＮＧＡＡＷＮＷＩＲＱＳＰＳＲＧＬＥＷＬＧＲＴＹＹＲＳＫＷＹＹＤＹＡＧＳＶＫＳＲＩＮＩＮＰＤＴＳＫＮＱＦＳＬＱＶＮＳＶＴＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＲＳＳＧＷＮＥＧＹＹＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号１６  −  ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＨＣＶＲのアミノ酸配列
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＳＴＹＦＷＴＷＩＲＱＦＰＧＥＧＬＥＷＩＧＹＩＦＹＳＧＮＴＮＹＮＰＳＬＴＳＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＹＹＤＩＬＴＧＥＤＹＳＹＧＩＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号１７  −  ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＨＣＶＲのアミノ酸配列
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＩＦＳＳＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＳＮＤＧＳＮＫＹＹＡＤＦＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＤＹＤＩＬＴＧＮＧＶＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号１８  −  ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＨＣＶＲのアミノ酸配列
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＴＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＹＩＳＧＳＳＳＬＩＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＨＭＮＳＬＲＤＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＡＲＹＮＷＮＤＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号１９  −  ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＨＣＶＲのアミノ酸配列
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＡＦＳＳＹＧＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＧＩＷＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＶＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＬＦＤＡＦＤＩＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳ
配列番号２０  −  ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＨＣＶＲのアミノ酸配列
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＩＦＳＳＹＴＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＹＩＳＳＳＳＳＬＩＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＤＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＤＹＹＧＳＧＳＹＹＫＧＮＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号２１  −  ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＨＣＶＲのアミノ酸配列
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＴＩＩＷＳＤＧＩＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＮＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＲＧＬＹＤＩＬＴＧＹＹＤＹＹＧＩＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号２２  −  ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＨＣＶＲのアミノ酸配列
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＴＩＩＷＳＤＧＩＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＮＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＲＧＬＹＤＩＬＴＧＹＹＤＹＹＧＩＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号２３  −  ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＨＣＶＲのアミノ酸配列
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＩＴＦＲＳＹＳＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＳＳＳＳＹＩＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＲＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号２４  −  ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＨＣＶＲのアミノ酸配列
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＴＦＲＳＹＤＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＳＹＤＧＳＮＫＹＹＧＤＳＶＫＧＲＬＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＱＹＤＩＬＴＧＹＳＳＤＡＦＤＩＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳ
配列番号２５  −  ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＨＣＶＲのアミノ酸配列
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＲＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＷＹＤＧＳＨＫＹＹＥＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＤＤＴＧＶＹＹＣＡＲＶＧＹＧＳＧＷＹＥＹＹＹＨＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号２６  −  ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＨＣＶＲのアミノ酸配列
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＭＷＹＤＧＳＮＫＤＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＲＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＫＤＨＹＤＩＬＴＧＹＮＹＹＹＧＬＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号２７  −  ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＨＣＶＲのアミノ酸配列
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＭＷＹＤＧＳＮＫＤＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＲＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＫＤＨＹＤＩＬＴＧＹＮＹＹＹＧＬＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号２８  −  ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＨＣＶＲのアミノ酸配列
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＩＴＦＳＳＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＳＩＷＹＤＧＳＮＫＹＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＦＲＤＮＳＫＫＴＬＹＬＱＭＮＲＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＬＧＧＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号２９  −  ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＬＣＶＲのアミノ酸配列
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＡＷＦＱＫＫＰＧＫＡＰＫＳＬＩＹＶＶＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＮＮＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＮＨＹＰＬＴＦＧＧＧＴＲＶＥＩＫＲ
配列番号３０  −  ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＬＣＶＲのアミノ酸配列
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＡＷＦＱＱＲＰＧＫＡＰＫＳＬＩＹＶＶＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＮＬＱＰＥＤＦＡＴＹＦＣＱＱＹＮＨＹＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ
配列番号３１  −  ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＬＣＶＲのアミノ酸配列
ＤＩＱＭＴＱＦＰＳＳＬＳＡＳＩＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＤＩＳＮＦＬＮＷＦＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＤＡＳＤＬＥＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＡＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＦＣＱＱＹＤＤＬＰＬＴＦＧＧＧＴＲＶＤＩＫＲ
配列番号３２  −  ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＬＣＶＲのアミノ酸配列
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＲＮＤＬＧＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＲＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＨＮＳＮＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ
配列番号３３  −  ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＬＣＶＲのアミノ酸配列
ＱＮＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＶＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＦＧＶＳＳＲＡＴＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＳＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＹＧＮＳＰＦＴＦＧＰＧＴＫＶＤＩＫＲ
配列番号３４  −  ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＬＣＶＲのアミノ酸配列
ＤＩＱＭＴＱＦＰＳＳＬＳＡＳＩＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＤＩＳＮＦＬＮＷＦＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＤＡＳＤＬＥＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＡＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＶＡＴＹＦＣＱＱＹＤＮＬＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＤＩＫＲ
配列番号３５  −  ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＬＣＶＲのアミノ酸配列
ＥＮＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＴＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＦＧＶＳＳＲＡＴＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＳＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＹＧＮＳＰＦＴＦＧＰＧＴＫＶＤＩＫＲ
配列番号３６  −  ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＬＣＶＲのアミノ酸配列
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＤＭＹＬＡＷＦＱＱＫＰＧＫＡＰＫＳＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＫＦＳＧＳＧＦＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＮＩＦＰＦＴＦＧＰＧＴＫＶＤＶＫＲ
配列番号３７  −  ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＬＣＶＲのアミノ酸配列
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＲＮＤＬＧＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＲＬＩＹＡＡＳＳＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＨＮＳＹＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ
配列番号３８  −  ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＬＣＶＲのアミノ酸配列
ＫＩＶＭＴＱＴＰＬＡＬＰＶＩＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＶＤＳＤＤＧＤＴＹＬＤＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＶＬＩＨＲＬＳＹＲＡＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＩＹＹＣＭＨＲＩＥＦＰＦＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ
配列番号３９  −  ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＬＣＶＲのアミノ酸配列
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＲＮＤＬＧＷＹＱＱＲＰＧＫＡＰＫＲＬＩＹＡＡＳＳＬＱＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＨＮＳＹＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ
配列番号４０  −  ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＬＣＶＲのアミノ酸配列
ＧＩＶＬＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＹＮＹＬＤＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＬＧＳＮＲＡＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＥＡＬＱＴＭＣＳＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲ
配列番号４１  −  ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＬＣＶＲのアミノ酸配列
ＧＩＶＬＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＹＮＹＬＤＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＬＧＳＮＲＡＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＥＡＬＱＴＭＳＳＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲ
配列番号４２  −  ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＬＣＶＲのアミノ酸配列
ＤＩＶＭＴＱＴＰＬＦＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＴＬＬＤＳＤＤＧＮＴＹＬＤＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＲＬＩＹＴＬＳＹＲＡＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＩＹＹＣＭＱＨＩＥＦＰＳＴＦＧＱＧＴＲＬＥＩＫＲ
配列番号４３  −  ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＬＣＶＲのアミノ酸配列
ＳＹＥＬＴＱＰＰＳＶＳＶＳＰＧＱＴＡＳＩＴＣＳＧＤＫＬＧＤＫＹＡＳＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＶＬＶＩＹＱＳＴＫＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＮＳＧＮＴＡＴＬＴＩＳＧＴＱＡＭＤＥＡＤＹＹＣＱＡＷＤＳＳＴＶＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧ
配列番号４４  −  ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＬＣＶＲのアミノ酸配列
ＮＩＶＭＴＱＴＰＬＳＬＳＶＴＰＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＨＳＤＧＫＮＹＬＦＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＥＶＳＹＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＳＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＱＮＩＱＰＰＬＴＦＧＱＧＴＲＬＥＩＫＲ
配列番号４５  −  ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＬＣＶＲのアミノ酸配列
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＲＮＤＬＧＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＲＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＶＱＰＥＤＦＶＴＹＹＣＬＱＨＮＳＮＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ
配列番号４６  −  ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＬＣＶＲのアミノ酸配列
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＲＮＤＬＧＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＲＬＩＹＡＡＳＳＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＶＱＰＥＤＦＶＴＹＹＣＬＱＨＮＳＮＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ
配列番号４７  −  ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＬＣＶＲのアミノ酸配列
ＤＩＶＬＴＱＴＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＬＤＲＤＤＧＤＴＹＬＤＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＴＬＳＹＲＡＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＳＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＱＲＩＥＦＰＦＴＦＧＰＧＴＫＶＤＩＫＲ
配列番号４８  −  カッパ軽鎖定常領域のアミノ酸配列
ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号４９  −  ラムダ軽鎖定常領域のアミノ酸配列
ＧＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＳＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＴＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＳＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣＳ
配列番号５０  −  ＩｇＧ２重鎖定常領域のアミノ配列
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＮＦＧＴＱＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号５１  −  ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＨＣのアミノ酸配列
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＭＷＹＤＧＳＮＫＤＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＲＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＫＤＨＹＤＩＬＴＧＹＮＹＹＹＧＬＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＮＦＧＴＱＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号５２  −  ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＬＣのアミノ酸配列
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＲＮＤＬＧＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＲＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＶＱＰＥＤＦＶＴＹＹＣＬＱＨＮＳＮＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
【図１】
2018528210.tif 000005
【図２】
2018528210.tif 000006
【図３】
2018528210.tif 000007
【図４】
2018528210.tif 000008
【図５】
2018528210.tif 000009
【図６】
2018528210.tif 000010
【図７】
2018528210.tif 000011
【図８】
2018528210.tif 000012
【図９】
2018528210.tif 000013
【図１０】
2018528210.tif 000014
【図１１】
2018528210.tif 000015
【図１２】
2018528210.tif 000016
【図１３】
2018528210.tif 000017
【図１４】
2018528210.tif 000018
【図１５】
2018528210.tif 000019
【図１６】
2018528210.tif 000020
【図１７】
2018528210.tif 000021
【図１８】
2018528210.tif 000022
【図１９】
2018528210.tif 000023
【図２０】
2018528210.tif 000024
【図２１】
2018528210.tif 000025
【図２２】
2018528210.tif 000026
【図２３】
2018528210.tif 000027
【図２４】
2018528210.tif 000028
【図２５】
2018528210.tif 000029
【図２６】
2018528210.tif 000030
【図２７】
2018528210.tif 000031
【図２８】
2018528210.tif 000032
【図２９】
2018528210.tif 000033
【図３０】
2018528210.tif 000034
【図３１】
2018528210.tif 000035
【図３２】
2018528210.tif 000036
【配列表】
2018528210000001.app
【国際調査報告】
2018528210.tif 000037
2018528210.tif 000038
2018528210.tif 000039
2018528210.tif 000040