(57)【要約】場合によりそれに結合しているカーゴ部分を含む細胞透過性ペプチドを本明細書において提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１の配列：
ＸＡ−ＸＢ−ＸＣ−ＸＤ−ＸＥ−ＸＦ−ＸＧ−ＸＨ（配列番号１）
（式中、
ＸＡは、存在しないか、又はLys若しくはPhe-Ileであり；
ＸＢは、Met、ノルロイシン、Lys、又はAspであり；
ＸＣ、ＸＤ、ＸＥ、ＸＦ、及びＸＧは、互いに独立して、疎水性アミノ酸、Asp、又はLysであり；そして、
ＸＨは、存在しないか、又はMet、Asp、若しくはLeu-Leu-Ileである）
を含むペプチドであって、場合により、前記配列番号１の配列上のある位置に結合してペプチド−カーゴコンジュゲートを形成するカーゴ部分を含むペプチド。
【請求項２】
前記疎水性アミノ酸が、Leu、Ile、Phe、Trp、Val、Met、Cys、Tyr、及びAlaからなる群から選択される、請求項１記載のペプチド。
【請求項３】
前記カーゴ部分が、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、低分子物質、薬物、モノヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド、アンチセンス分子、二本鎖及び一本鎖のＤＮＡ、ＲＮＡ、人工又は部分的に人工の核酸、低分子量分子、糖、プラスミド、抗生物質、細胞毒性剤、抗ウイルス剤、又はタグ若しくはマーカーの分子である、請求項１記載のペプチド。
【請求項４】
ＸＡが、存在せず；
ＸＢが、Met又はノルロイシンであり；
ＸＣ、ＸＤ、及びＸＥが、独立して、疎水性アミノ酸であり；
ＸＦ及びＸＧが、独立して、疎水性アミノ酸であり；
ＸＨが、存在しないか又はMetであり；
そして、ＸＨ、又はＸＨが存在しない場合、ＸＧが、場合により、前記カーゴ部分に結合する、請求項１記載のペプチド。
【請求項５】
ＸＡが、存在せず；
ＸＢが、Met又はノルロイシンであり；
ＸＣ、ＸＤ、及びＸＥが、独立して、Ile又はLeuであり；
ＸＦ及びＸＧが、Ileであり；
ＸＨが、存在せず；
そして、ＸＧが、場合により、前記カーゴ部分に結合する、請求項１記載のペプチド。
【請求項６】
ＸＡが、存在しないか、又はLys若しくはPhe-Ileであり；
ＸＢが、ノルロイシン、Lys、又はAspであり；
ＸＣ、ＸＤ、及びＸＥが、独立して、疎水性アミノ酸であり；
ＸＦ及びＸＧが、独立して、疎水性アミノ酸であり；
ＸＨが、存在しないか、又はMet、Asp、若しくはLeu-Leu-Ileであり；
ＸＡ又はＸＢと、ＸＦ、ＸＧ、又はＸＨとが、場合により結合してラクタム結合を形成し；
そして、ＸＨ、又はＸＨが存在しない場合、ＸＧが、場合により、前記カーゴ部分に結合する、請求項１記載のペプチド。
【請求項７】
ＸＡが、存在しないか、又はLys若しくはPhe-Ileであり；
ＸＢが、ノルロイシン、Lys、又はAspであり；
ＸＣ、ＸＤ、及びＸＥが、独立して、Ile又はLeuであり；
ＸＦ及びＸＧが、独立して、Ile、Asp、又はLysであり；
ＸＨが、存在しないか、又はMet、Asp、若しくはLeu-Leu-Ileであり；
ＸＡ又はＸＢと、ＸＦ、ＸＧ、又はＸＨとが、場合により結合してラクタム結合を形成し；
そして、ＸＨ、又はＸＨが存在しない場合、ＸＧが、場合により、前記カーゴ部分に結合する、請求項１記載のペプチド。
【請求項８】
配列番号１の配列：
ＸＡ−ＸＢ−ＸＣ−ＸＤ−ＸＥ−ＸＦ−ＸＧ−ＸＨ（配列番号１）
（式中、
ＸＡは、存在しないか、又はLys若しくはPhe-Ileであり；
ＸＢは、Met、ノルロイシン、Lys、又はAspであり；
ＸＣ、ＸＤ、ＸＥ、ＸＦ、及びＸＧは、互いに独立して、疎水性アミノ酸、Asp、又はLysであり；そして、
ＸＨは、存在しないか、又はMet、Asp、若しくはLeu-Leu-Ileである）
を含むペプチドと；
前記配列番号１の配列上のある位置に結合しているカーゴ部分と
を含むペプチド−カーゴコンジュゲート。
【請求項９】
処置的に有効な量の請求項１記載のペプチド−カーゴコンジュゲートを含む医薬組成物。
【請求項１０】
癌性、感染性、神経学的、炎症性、免疫学的、眼性、又は代謝性の疾患又は障害を処置する方法であって、それを必要としている患者に処置的に有効な量の請求項１記載のペプチド−カーゴコンジュゲートを投与する工程を含む方法。
【請求項１１】
医薬として使用するための、配列番号１の配列：ＸＡ−ＸＢ−ＸＣ−ＸＤ−ＸＥ−ＸＦ−ＸＧ−ＸＨ（配列番号１）（式中、ＸＡは、存在しないか、又はLys若しくはPhe-Ileであり；ＸＢは、Met、ノルロイシン、Lys、又はAspであり；ＸＣ、ＸＤ、ＸＥ、ＸＦ、及びＸＧは、互いに独立して、疎水性アミノ酸、Asp、又はLysであり；そして、ＸＨは、存在しないか、又はMet、Asp、若しくはLeu-Leu-Ileである）を含むペプチドと、前記配列番号１の配列上のある位置に結合しているカーゴ部分とを含むペプチド−カーゴコンジュゲート。
【請求項１２】
癌性、感染性、神経学的、炎症性、免疫学的、眼性、又は代謝性の疾患又は障害の処置において医薬として使用するための、配列番号１の配列：ＸＡ−ＸＢ−ＸＣ−ＸＤ−ＸＥ−ＸＦ−ＸＧ−ＸＨ（配列番号１）（式中、ＸＡは、存在しないか、又はLys若しくはPhe-Ileであり；ＸＢは、Met、ノルロイシン、Lys、又はAspであり；ＸＣ、ＸＤ、ＸＥ、ＸＦ、及びＸＧは、互いに独立して、疎水性アミノ酸、Asp、又はLysであり；そして、ＸＨは、存在しないか、又はMet、Asp、若しくはLeu-Leu-Ileである）を含むペプチドと、前記配列番号１の配列上のある位置に結合しているカーゴ部分とを含むペプチド−カーゴコンジュゲート。
【請求項１３】
本明細書に記載される発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
配列表
本出願は、ASCIIフォーマットで電子的に提出された配列表を含み、そして、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。前記ASCIIのコピー（２０１５年１１月２日作成）は、113123-89625_SL.txtと名付けられ、そして、サイズは５，６２２バイトである。
【０００２】
技術分野
本発明は、細胞を透過することができ、そして、場合によりカーゴ分子を細胞に運ぶことができるペプチドに関する。以下に引用又は依拠したすべての文書は、参照により明示的に本明細書に組み入れられる。
【０００３】
発明の背景
多数の魅力的な創薬ターゲットは、細胞内タンパク質−タンパク質相互作用（PPI）である。しかし、PPIは、従来の分子によって容易には調節することができないが、それは、前記分子が小さ過ぎ、そして、典型的には細胞膜を通過することができないペプチド等のより大きな化合物に接近しにくいためである。
【０００４】
細胞透過性ペプチド（CPP）は、大部分のペプチドとは異なり細胞膜を通過することができる、典型的には５〜３０アミノ酸の多様なペプチドのクラスである。最初のCPPであるペネトラチンの発見（Derossi et al, Biol. Chem., 269, 10444-10450, 1994）から、CPPは様々な用途に用いられてきた。CPPは、インビトロ又はインビボの両方において、核酸（Lehto et al. Exp. Op. Drug Delivery, 9, 823-836, 2012）、低分子、タンパク質、及び他のペプチドのためのベクターとして作用することができる（Copolovici et al, ACS Nano, 8, 1972-1994, 2014）。CPPを用いて機能性ペプチドを細胞内部に運ぶことができるだけではなく、機能性モチーフを組み込むこともできる。
【０００５】
最初、細胞取り込みは、原形質膜の直接浸透によって生じると考えられていた（Prochiantz, Curr. Opin. Cell Biol, 12, 400-406, 2000）が、現在は、エンドサイトーシスが細胞取り込みに大きく寄与していることが知られている（Fotin-Mleczek et al, Curr. Pharm. Design, 11, 3613-3628, 2005）。これら最近の結果を前提として、CPPとしてのペプチドの特徴は、特異的細胞移入機構を示唆するものではなく、むしろ、共有結合的に又は非共有結合的にコンジュゲートしているカーゴ分子の細胞取り込みを強化するペプチドの能力に起因する。
【０００６】
それを必要としている患者又は被験体にペプチド又はペプチド−カーゴコンジュゲートを投与するための新規CPPが当技術分野において必要とされている。
【０００７】
発明の概要
本発明は、配列番号１の配列：
ＸＡ−ＸＢ−ＸＣ−ＸＤ−ＸＥ−ＸＦ−ＸＧ−ＸＨ（配列番号１）
（式中、
ＸＡは、存在しないか、又はLys若しくはPhe-Ileであり；
ＸＢは、Met、ノルロイシン、Lys、又はAspであり；
ＸＣ、ＸＤ、ＸＥ、ＸＦ、及びＸＧは、互いに独立して、疎水性アミノ酸、Asp、又はLysであり；そして、
ＸＨは、存在しないか、又はMet、Asp、若しくはLeu-Leu-Ileである）
を含むペプチドであって、場合により、配列番号１の配列上のある位置に結合してペプチド−カーゴコンジュゲートを形成するカーゴ部分を含むペプチドに関する。
【０００８】
本発明は、更に、処置的に有効な量のペプチド−カーゴコンジュゲートを含む医薬組成物に関する。
【０００９】
本発明は、更に、癌、又はウイルス学的、中枢神経系、炎症、免疫、若しくは代謝性の疾患若しくは病態を処置する方法であって、それを必要としている患者に処置的に有効な量のペプチド−カーゴコンジュゲートを投与する工程を含む方法に関する。
【００１０】
また、本発明は、ペプチドをコードしている単離ヌクレオチド、及び前記単離ヌクレオチドを含むベクターに関する。
【００１１】
発明を実施するための形態
本発明の図面及び明細書は、明確性を目的として典型的なペプチド合成においてみられる多くの他の要素を削除すると同時に、本発明の明確な理解のために、簡略化して関連する要素を説明していると理解すべきである。当業者は、他の要素及び／又は工程が本発明の実施において望ましい及び／又は必要であることを認識している。しかし、このような要素及び工程は、当技術分野において周知であり、そして、本発明のより深い理解を促進するものではないので、このような要素及び工程についての議論は本明細書に提供しない。本明細書における開示は、当業者に公知のこのような要素及び方法に対するすべてのこのような変形例及び変更例を目的とする。更に、本明細書において特定及び説明する実施態様は、例示のみを目的とするものであり、そして、本発明の記載において排他的であることも限定されることも意味しない。
【００１２】
本明細書において言及するすべてのペプチド配列は、慣例に従って記載され、したがって、Ｎ末端のアミノ酸が左側に、そして、Ｃ末端のアミノ酸が右側に記載される。２つのアミノ酸残基間の短い線は、ペプチド結合を示す。アミノ酸が異性体を有する場合、特に明示的に指定しない限り、表されるのは該アミノ酸のＬ型である。
【００１３】
本発明の説明の便宜上、様々なアミノ酸残基の従来の及び非従来的な略記を用いる。これら略記は、当業者によく知られているが、明確にするために以下に列挙する：
Asp＝Ｄ＝アスパラギン酸；Ala＝Ａ＝アラニン；Arg＝Ｒ＝アルギニン；Asn＝Ｎ＝アスパラギン；Gly＝Ｇ＝グリシン；Glu＝Ｅ＝グルタミン酸；Gln＝Ｑ＝グルタミン；His＝Ｈ＝ヒスチジン；Ile＝Ｉ＝イソロイシン；Leu＝Ｌ＝ロイシン；Lys＝Ｋ＝リジン；Met＝Ｍ＝メチオニン；Phe＝Ｆ＝フェニルアラニン；Pro＝Ｐ＝プロリン；Ser＝Ｓ＝セリン；Thr＝Ｔ＝スレオニン；Trp＝Ｗ＝トリプトファン；Tyr＝Ｙ＝チロシン；及びVal＝Ｖ＝バリン；Nle＝ノルロイシン；Fluo＝カルボキシフルオレセイン；Ado＝９−（Fmoc−アミノ）−３，６−ジオキサ−オクタン酸。
【００１４】
アミノ酸は、Ｌ型であってもＤ型であってもよい。Ｄ−アミノ酸を小文字で示し、Ｌ−アミノ酸を大文字で示す。
【００１５】
また、便宜上、そして、当業者に容易に分かるようにするために、以下の略記又は記号を用いて、本明細書で使用する部分、試薬等を表す：
Et2Oは、ジエチルエーテルであり；hr(s)は、時間であり；TISは、トリイソプロピルシランであり；ACNは、アセトニトリルであり、Fmocは、９−フルオレニルメチルオキシカルボニルであり；DMFは、ジメチルホルムアミドであり；DIPEAは、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンであり；TFAは、トリフルオロ酢酸であり；HOBTは、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾールであり；BOPは、ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ−トリス−（ジメチルアミノ）ホスホニウム−ヘキサフルオロホスファートであり；HBTUは、２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム−ヘキサフルオロホスファートであり；(ES)+-LCMSは、エレクトロスプレー液体クロマトグラフィー−質量分析であり；DIEAは、ジイソプロピルエチルアミンであり；MeOHは、メタノールであり；そして、DCMは、塩化メチレンである。
本発明において有用な疎水性アミノ酸は、Leu、Ile、Phe、Trp、Val、Met、Cys、Tyr、及びAlaを含む。
【００１６】
したがって、本発明の１つの実施態様では、配列番号１の配列：
ＸＡ−ＸＢ−ＸＣ−ＸＤ−ＸＥ−ＸＦ−ＸＧ−ＸＨ（配列番号１）
（式中、
ＸＡは、存在しないか、又はLys若しくはPhe-Ileであり；
ＸＢは、Met、ノルロイシン、Lys、又はAspであり；
ＸＣ、ＸＤ、ＸＥ、ＸＦ、及びＸＧは、互いに独立して、疎水性アミノ酸、Asp、又はLysであり；そして、
ＸＨは、存在しないか、又はMet、Asp、若しくはLeu-Leu-Ileである）
を含むペプチドであって、場合により、配列番号１の配列上のある位置に結合してペプチド−カーゴコンジュゲートを形成するカーゴ部分を含むペプチドが提供される。
【００１７】
本発明の別の実施態様では、配列番号１の配列を含むペプチドであって、前記疎水性アミノ酸が、Leu、Ile、Phe、Trp、Val、Met、Cys、Tyr、及びAlaからなる群から選択されるペプチドが提供される。
【００１８】
本発明の別の実施態様では、配列番号１の配列を含むペプチドであって、前記カーゴ部分が、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、低分子物質、薬物、モノヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド、アンチセンス分子、二本鎖及び一本鎖のＤＮＡ、ＲＮＡ、人工又は部分的に人工の核酸、低分子量分子、糖、プラスミド、抗生物質、細胞毒性剤、抗ウイルス剤、又はタグ若しくはマーカーの分子であるペプチドが提供される。
【００１９】
本発明の別の実施態様では、配列番号１の配列を含むペプチドであって、ラクタム、チオエーテル、又はジスルフィド結合を更に含むペプチドが提供される。
【００２０】
本発明の別の実施態様では、配列番号１の配列を含むペプチドであって、前記カーゴ部分がＸＨに結合するか、又はＸＨが存在しない場合、ＸＧに結合するペプチドが提供される。
【００２１】
本発明の別の実施態様では、配列番号１の配列を含むペプチドであって、前記カーゴ部分がＸＡに結合するか、又はＸＡが存在しない場合、ＸＢに結合するペプチドが提供される。
【００２２】
本発明の別の実施態様では、配列番号１の配列を含むペプチドであって、ＸＡが存在しないペプチドが提供される。
【００２３】
本発明の別の実施態様では、配列番号１の配列を含むペプチドであって、ＸＡがLys又はPhe-Ileであるペプチドが提供される。
【００２４】
本発明の別の実施態様では、配列番号１の配列を含むペプチドであって、ＸＢがMet又はノルロイシンであるペプチドが提供される。
【００２５】
本発明の別の実施態様では、配列番号１の配列を含むペプチドであって、ＸＢがLys又はAspであるペプチドが提供される。
【００２６】
本発明の別の実施態様では、配列番号１の配列を含むペプチドであって、ＸＣ、ＸＤ、及びＸＥが、独立して、Ile又はLeuであるペプチドが提供される。
【００２７】
本発明の別の実施態様では、配列番号１の配列を含むペプチドであって、ＸＦ及びＸＧが、独立して、Ile又はLeuであるペプチドが提供される。
【００２８】
本発明の別の実施態様では、配列番号１の配列を含むペプチドであって、ＸＨが存在しないペプチドが提供される。
【００２９】
本発明の別の実施態様では、配列番号１の配列を含むペプチドであって、ＸＨがMet、Asp、又はLeu-Leu-Ileであるペプチドが提供される。
【００３０】
本発明の別の実施態様では、配列番号１の配列を含むペプチドであって、ＸＨがMet又はLeu-Leu-Ileであるペプチドが提供される。
【００３１】
本発明の別の実施態様では、配列番号１の配列を含むペプチドであって、ＸＨがAspであるペプチドが提供される。
【００３２】
本発明の別の実施態様では、配列番号１の配列を含むペプチドであって、ＸＡ及びＸＨが結合してラクタム結合を形成するペプチドが提供される。
【００３３】
本発明の別の実施態様では、配列番号１の配列を含むペプチドであって、ＸＢ及びＸＧが結合してラクタム結合を形成するペプチドが提供される。
【００３４】
本発明の別の実施態様では、配列番号１の配列を含むペプチドであって、ＸＢ及びＸＦが結合してラクタム結合を形成するペプチドが提供される。
【００３５】
本発明の別の実施態様では、配列番号１の配列を含むペプチドであって、前記カーゴ部分がＸＨに結合しているペプチドが提供される。
【００３６】
本発明の別の実施態様では、配列番号１の配列を含むペプチドであって、ＸＨが存在せず、そして、前記カーゴ部分がＸＧに結合しているペプチドが提供される。
【００３７】
本発明の別の実施態様では、配列番号１の配列を含むペプチドであって、
ＸＡが、存在せず；
ＸＢが、Met又はノルロイシンであり；
ＸＣ、ＸＤ、及びＸＥが、独立して、疎水性アミノ酸であり；
ＸＦ及びＸＧが、独立して、疎水性アミノ酸であり；
ＸＨが、存在しないか又はMetであり；
そして、ＸＨ、又はＸＨが存在しない場合、ＸＧが、場合により、前記カーゴ部分に結合するペプチドが提供される。
【００３８】
本発明の別の実施態様では、配列番号１の配列を含むペプチドであって、
ＸＡが、存在せず；
ＸＢが、Met又はノルロイシンであり；
ＸＣ、ＸＤ、及びＸＥが、独立して、Ile又はLeuであり；
ＸＦ及びＸＧが、独立して、疎水性アミノ酸であり；
ＸＨが、存在しないか又はMetであり；
そして、ＸＨ、又はＸＨが存在しない場合、ＸＧが、場合により、前記カーゴ部分に結合するペプチドが提供される。
【００３９】
本発明の別の実施態様では、配列番号１の配列を含むペプチドであって、
ＸＡが、存在せず；
ＸＢが、Met又はノルロイシンであり；
ＸＣ、ＸＤ、及びＸＥが、独立して、Ile又はLeuであり；
ＸＦ及びＸＧが、Ileであり；
ＸＨが、存在しないか又はMetであり；
そして、ＸＨ、又はＸＨが存在しない場合、ＸＧが、場合により、前記カーゴ部分に結合するペプチドが提供される。
【００４０】
本発明の別の実施態様では、配列番号１の配列を含むペプチドであって、
ＸＡが、存在せず；
ＸＢが、Met又はノルロイシンであり；
ＸＣ、ＸＤ、及びＸＥが、独立して、Ile又はLeuであり；
ＸＦ及びＸＧが、Ileであり；
ＸＨが、存在せず；
そして、ＸＧが、場合により、前記カーゴ部分に結合するペプチドが提供される。
【００４１】
本発明の別の実施態様では、配列番号１の配列を含むペプチドであって、
ＸＡが、存在しないか、又はLys若しくはPhe-Ileであり；
ＸＢが、ノルロイシン、Lys、又はAspであり；
ＸＣ、ＸＤ、及びＸＥが、独立して、疎水性アミノ酸であり；
ＸＦ及びＸＧが、独立して、疎水性アミノ酸であり；
ＸＨが、存在しないか、又はMet、Asp、若しくはLeu-Leu-Ileであり；
ＸＡ又はＸＢとＸＦ、ＸＧ、又はＸＨとが、場合により結合してラクタム結合を形成し；
そして、ＸＨ、又はＸＨが存在しない場合、ＸＧが、場合により、前記カーゴ部分に結合するペプチドが提供される。
【００４２】
本発明の別の実施態様では、配列番号１の配列を含むペプチドであって、
ＸＡが、存在しないか、又はLys若しくはPhe-Ileであり；
ＸＢが、ノルロイシン、Lys、又はAspであり；
ＸＣ、ＸＤ、及びＸＥが、独立して、Ile、Leu、又はValであり；
ＸＦ及びＸＧが、独立して、Ile、Leu、若しくはValから選択される疎水性アミノ酸、又はAsp若しくはLysであり；
ＸＨが、存在しないか、又はMet、Asp、若しくはLeu-Leu-Ileであり；
ＸＡ又はＸＢのうちの１つとＸＦ、ＸＧ、又はＸＨのうちの１つとが、場合により結合してラクタム結合を形成し；
そして、ＸＨ、又はＸＨが存在しない場合、ＸＧが、場合により、前記カーゴ部分に結合するペプチドが提供される。
【００４３】
本発明の別の実施態様では、配列番号１の配列を含むペプチドであって、
ＸＡが、存在しないか、又はLys若しくはPhe-Ileであり；
ＸＢが、ノルロイシン、Lys、又はAspであり；
ＸＣ、ＸＤ、及びＸＥが、独立して、Ile、Leu、又はValであり；
ＸＦ及びＸＧが、独立して、Ile、Leu、若しくはVal、又はAsp若しくはLysであり；
ＸＨが、存在しないか、又はMet、Asp、若しくはLeu-Leu-Ileであり；
ＸＡ又はＸＢとＸＦ、ＸＧ、又はＸＨとが、場合により結合してラクタム結合を形成し；
そして、ＸＨ、又はＸＨが存在しない場合、ＸＧが、場合により、前記カーゴ部分に結合するペプチドが提供される。
【００４４】
本発明の別の実施態様では、配列番号１の配列を含むペプチドであって、
ＸＡが、存在しないか、又はLys若しくはPhe-Ileであり；
ＸＢが、ノルロイシン、Lys、又はAspであり；
ＸＣ、ＸＤ、及びＸＥが、独立して、Ile又はLeuであり；
ＸＦ及びＸＧが、独立して、Ile、Leu、若しくはVal、又はAsp若しくはLysであり；
ＸＨが、存在しないか、又はMet、Asp、若しくはLeu-Leu-Ileであり；
ＸＡ又はＸＢとＸＦ、ＸＧ、又はＸＨとが、場合により結合してラクタム結合を形成し；
そして、ＸＨ、又はＸＨが存在しない場合、ＸＧが、場合により、前記カーゴ部分に結合するペプチドが提供される。
【００４５】
本発明の別の実施態様では、配列番号１の配列を含むペプチドであって、
ＸＡが、存在しないか、又はLys若しくはPhe-Ileであり；
ＸＢが、ノルロイシン、Lys、又はAspであり；
ＸＣ、ＸＤ、及びＸＥが、独立して、Ile又はLeuであり；
ＸＦ及びＸＧが、独立して、Ile、Asp、又はLysであり；
ＸＨが、存在しないか、又はMet、Asp、若しくはLeu-Leu-Ileであり；
ＸＡ又はＸＢとＸＦ、ＸＧ、又はＸＨとが、場合により結合してラクタム結合を形成し；
そして、ＸＨ、又はＸＨが存在しない場合、ＸＧが、場合により、前記カーゴ部分に結合するペプチドが提供される。
【００４６】
本発明の別の実施態様では、配列番号１の配列を含むペプチドであって、
ＸＡが、存在しないか、又はLys若しくはPhe-Ileであり；
ＸＢが、ノルロイシン、Lys、又はAspであり；
ＸＣ、ＸＤ、及びＸＥが独立してIle又はLeuであり；
ＸＦ及びＸＧが、独立して、Ile、Asp、又はLysであり；
ＸＨが、存在しないか、又はMet、Asp、若しくはLeu-Leu-Ileであり；
ＸＡ又はＸＢとＸＦ、ＸＧ、又はＸＨとが、場合により結合してラクタム結合を形成し；
そして、ＸＨ、又はＸＨが存在しない場合、ＸＧが、場合により、前記カーゴ部分に結合するペプチドが提供される。
【００４７】
本発明の更なる実施態様では、
配列番号１の配列：
ＸＡ−ＸＢ−ＸＣ−ＸＤ−ＸＥ−ＸＦ−ＸＧ−ＸＨ（配列番号１）
（式中、
ＸＡは、存在しないか、又はLys若しくはPhe-Ileであり；
ＸＢは、Met、ノルロイシン、Lys、又はAspであり；
ＸＣ、ＸＤ、ＸＥ、ＸＦ、及びＸＧは、互いに独立して、疎水性アミノ酸、Asp、又はLysであり；そして、
ＸＨは、存在しないか、又はMet、Asp、若しくはLeu-Leu-Ileである）
を含むペプチドと；
前記配列番号１の配列上のある位置に結合しているカーゴ部分と
を含むペプチド−カーゴコンジュゲートが提供される。
【００４８】
本発明の更に別の実施態様では、配列番号１の配列を含むペプチドとカーゴ部分とを含むペプチド−カーゴコンジュゲートであって、前記カーゴ部分が、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、低分子物質、薬物、モノヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド、アンチセンス分子、二本鎖及び一本鎖のＤＮＡ、ＲＮＡ、人工又は部分的に人工の核酸、低分子量分子、糖、プラスミド、抗生物質、細胞毒性剤、抗ウイルス剤、又はタグ若しくはマーカーの分子であるコンジュゲートが提供される。
【００４９】
本発明の別の実施態様では、処置的に有効な量の上記実施態様に係るペプチド−カーゴコンジュゲートを含む医薬組成物が提供される。
【００５０】
本発明の別の実施態様では、癌性、感染性、神経学的、炎症性、免疫学的、眼性、又は代謝性の疾患又は障害を処置する方法であって、それを必要としている患者に処置的に有効な量の上記本発明の実施態様に係るペプチド−カーゴコンジュゲートを投与する工程を含む方法が提供される。
【００５１】
発明の特定の実施態様の一般的合成
一般的に、本発明のペプチドは、アミノ酸間にペプチド結合を形成するための任意の公知の従来の手順によって容易に合成することができる。
【００５２】
本発明のペプチドを合成するためのこのような従来の手順は、例えば、任意の固相ペプチド合成法を含む。このような方法では、ペプチドの合成は、固相法の一般的原理に従って、成長しているペプチド鎖に所望のアミノ酸残基を１つずつ逐次組み込むことによって実施することができる。このような方法は、例えば、Merrifield, R. B., J. Amer. Chem. Soc. 85, 2149-2154 (1963)；Barany et al, The Peptides, Analysis, Synthesis and Biology, Vol. 2, Gross, E.、及びMeienhofer, J., Eds. Academic Press 1-284 (1980)に開示されており、これらは、参照により本明細書に組み入れられる。
【００５３】
一般的に、本発明のペプチドは、アミノ酸間にペプチド結合を形成するための任意の公知の従来の手順によって容易に合成することができる。このような従来の手順は、例えば、そのカルボキシル基及び保護されている他の反応性基を有するアミノ酸又はその断片の遊離アルファアミノ基と、そのアミノ基又は保護されている他の反応性基を有する別のアミノ酸又はその断片の遊離一級カルボキシル基との間の縮合を可能にする任意の液相手順を含む。
【００５４】
ペプチドの合成中、アミノ酸における特定の反応性基、例えば、アルファ−アミノ基、ヒドロキシル基、及び／又は反応性側鎖基は、これらとの化学反応を防ぐために保護されていることが望ましい場合がある。これは、例えば、反応性基と後で除去し得る保護基とを反応させることによって達成することができる。例えば、アミノ酸又はその断片のアルファアミノ基は、それとの化学反応を防ぐために保護されてよく、一方、前記アミノ酸又はその断片のカルボキシル基は、別のアミノ酸又はその断片と反応してペプチド結合を形成する。この後に、その部位において、例えば、別のアミノ酸又はその断片のカルボキシル基との後続反応を生じさせることができるようにアルファアミノ保護基を選択的に除去し得る。
【００５５】
アルファアミノ基は、例えば、芳香族ウレタン型保護基、例えば、アリルオキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニル（Ｚ）、及び置換ベンジルオキシカルボニル、例えば、ｐ−クロロベンジルオキシカルボニル、ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニル、ｐ−ブロモベンジルオキシカルボニル、ｐ−ビフェニル−イソプロピルオキシカルボニル、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル（Fmoc）、及びｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル（Moz）；ならびに脂肪族ウレタン型保護基、例えば、ｔ−ブチルオキシカルボニル（Boc）、ジイソプロピルメチルオキシカルボニル、イソプロピルオキシカルボニル、及びアリルオキシカルボニルから選択される好適な保護基によって保護され得る。実施態様では、アルファアミノ保護のためにFmocを用いる。
【００５６】
アミノ酸のヒドロキシル基（OH）は、例えば、ベンジル（Bzl）、２，６−ジクロロベンジル（2,6 diCl-Bzl）、及びtert−ブチル（t-Bu）から選択される好適な保護基によって保護され得る。チロシン、セリン、又はスレオニンのヒドロキシル基を保護することを意図する実施態様では、例えば、t-Buを用いてよい。
【００５７】
イプシロン−アミノ酸基は、例えば、２−クロロ−ベンジルオキシカルボニル（2-Cl-Z）、２−ブロモ−ベンジルオキシカルボニル（2-Br-Z）、アリルカルボニル、及びｔ−ブチルオキシカルボニル（Boc）から選択される好適な保護基によって保護され得る。リジンのイプシロン−アミノ基を保護することを意図する実施態様では、例えば、Bocを用いてよい。
【００５８】
ベータ−及びガンマ−アミド基は、例えば、４−メチルトリチル（Mtt）、２，４，６−トリメトキシベンジル（Tmob）、４，４’−ジメトキシジチル（Dod）、ビス−（４−メトキシフェニル）−メチル、及びトリチル（Trt）から選択される好適な保護基によって保護され得る。アスパラギン又はグルタミンのアミド基を保護することを意図する実施態様では、例えば、Trtを用いてよい。
【００５９】
インドール基は、例えば、ホルミル（For）、メシチル−２−スルホニル（Mts）、及びｔ−ブチルオキシカルボニル（Boc）から選択される好適な保護基によって保護され得る。トリプトファンのインドール基を保護することを意図する実施態様では、例えば、Bocを用いてよい。
【００６０】
イミダゾール基は、例えば、ベンジル（Bzl）、ｔ−ブチルオキシカルボニル（Boc）、及びトリチル（Trt）から選択される好適な保護基によって保護され得る。ヒスチジンのイミダゾール基を保護することを意図する実施態様では、例えば、Trtを用いてよい。
【００６１】
固相合成は、保護されているアルファ−アミノ酸を好適なレジンにカップリングすることによってペプチドのＣ末端から開始してよい。このような出発材料は、エステル結合によってアルファ−アミノ保護アミノ酸をｐ−ベンジルオキシベンジルアルコール（Wang）レジンに結合させることによって、又はFmocリンカー、例えば、Rinkリンカーとベンズヒドリルアミン（BHA）レジンとの間のアミノ結合によって調製することができる。ヒドロキシメチルレジンの調製は、当技術分野において周知である。Fmoc−リンカー−BHAレジン支持体は、市販されており、そして、一般的に、合成されている所望のペプチドがＣ末端において非置換アミドを有するときに用いられる。
【００６２】
実施態様では、ペプチド合成は、マイクロ波で補助される。マイクロ波補助ペプチド合成は、固相ペプチド合成を加速させるための魅力的な方法である。これは、マイクロ波ペプチド合成機、例えば、Liberty peptide synthesizer（CEM Corporation, Matthews, NC）を用いて実施してよい。マイクロ波補助ペプチド合成によって、設定した時間設定した温度で反応を制御する方法を作成することが可能になる。合成機は、設定点で温度を維持するために反応にもたらされる電力の量を自動的に制御する。
【００６３】
典型的には、アミノ酸又は模倣剤のFmoc保護形態を用いてFmocリンカー−BHAレジン上にアミノ酸又は模倣剤をカップリングさせ、ここでは、２〜５当量のアミノ酸及び好適なカップリング試薬を用いる。カップリング後、レジンを洗浄し、そして、真空下で乾燥させてよい。レジンへのアミノ酸の負荷は、Fmoc−アミノ酸レジンのアリコートのアミノ酸分析によって決定してもよく、又はUV分析によるFmoc基の決定によって決定してもよい。レジンを塩化メチレン中無水酢酸及びジイソプロピルエチルアミンと反応させることによって任意の未反応アミノ基をキャッピングしてもよい。
【００６４】
レジンは、アミノ酸を逐次付加するために数回の反復サイクルを通じて持ち越される。アルファアミノFmoc保護基は、塩基性条件下で除去される。DMF中ピペリジン、ピペラジン、又はモルホリン（２０〜４０％v/v）をこの目的のために用いてよい。実施態様では、DMF中２０％ ピペリジンを利用する。
【００６５】
アルファアミノ保護基の除去後、次の保護されたアミノ酸を所望の順序で段階的にカップリングさせて、中間保護ペプチド−レジンを得る。ペプチドの固相合成におけるアミノ酸のカップリングのために用いられる活性化試薬は、当技術分野において周知である。例えば、このような合成に適切な試薬は、ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ−トリ−（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスファート（BOP）、ブロモ−トリス−ピロリジノ−ホスホニウムヘキサフルオロホスファート（PyBroP）２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート（HBTU）、及びジイソプロピルカルボジイミド（DIC）である。実施態様では、試薬は、HBTU又はDICである。他の活性化剤は、Barany及びMerrifieldによって記載されている（The Peptides, Vol. 2, J. Meienhofer, ed., Academic Press, 1979, pp 1-284）。合成サイクルを最適化するために、１ヒドロキシベンゾトリアゾール（HOBT）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（HOSu）、及び３，４−ジヒドロ−３−ヒドロキシ−４−オキソ−１，２，３−ベンゾトリアジン（HOOBT）等の様々な試薬をカップリング混合物に添加してよい。実施態様では、HOBTを添加する。
【００６６】
ペプチドの合成後、ブロック基を除去してよく、そして、任意の公知の方法によってレジンからペプチドを切断する。例えば、ペプチド−レジンをエタンジチオール、ジメチルスルフィド、アニソール、及びトリフルオロ過酢酸で処理して、ブロック基を除去してよい。
【００６７】
粗ペプチドの精製は、当技術分野において公知の任意の方法によって実施してよい。例えば、精製は、逆相C18カラムにおいて高性能液体クロマトグラフィー（HPLC）によってShimadzu LC-8A systemで実施することができる。
【００６８】
本発明のペプチドの有用性及びコンジュゲーション
特定の実施態様では、様々な処置及び他の用途のために細胞の内部（例えば、細胞質又は核）に送達するために、本発明のペプチドを１つ以上のカーゴ部分に「コンジュゲート」（本明細書では互換的に「連結」又は「結合」させるとも称する）する。このようなカーゴ部分の例は、全体が参照により本明細書に組み入れられる米国特許出願公開第２００８／０２３４１８３号に開示されているカーゴを含むが、これらに限定されない。例えば、カーゴ部分は、任意の薬理学的に相互作用する物質、例えば、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、低分子物質、薬物、モノヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド、アンチセンス分子、二本鎖及び一本鎖のＤＮＡ、ＲＮＡ、及び／又は任意の人工若しくは部分的に人工の核酸、例えば、ＰＮＡ、低分子量分子、糖、プラスミド、抗生物質、細胞毒性剤、又は抗ウイルス剤、あるいはこれらの組合せであってよい。更に、カーゴの輸送は、例えば、タグ及びマーカーを送達するためならびに膜の電位及び／又は特性を変化させるための研究ツールとして有用であり得、該カーゴは、例えば、マーカー分子、例えば、ビオチンであってよい。
【００６９】
カーゴ部分は、当技術分野において公知の方法によってペプチドにコンジュゲートさせてペプチド−カードコンジュゲートを形成することができる。例えば、カーゴは、ペプチド合成の任意の段階でペプチドにコンジュゲートさせてよい。１つの実施態様では、ペプチドが完全に合成された後にカーゴ部分をコンジュゲートさせてよい。別の実施態様では、部分的に合成されたペプチドにカーゴ部分を添加してよい。
【００７０】
本発明のペプチド及び／又はペプチド−カーゴコンジュゲートは、疾患の処置において使用するために提供される。疾患を処置するための医薬の製造におけるペプチド及び／又はペプチド−カーゴコンジュゲートの使用も提供される。疾患状態の処置を必要としている患者又は被験体を処置する方法であって、医師又は獣医師によって決定される処置的に有効な量のペプチド及び／又はペプチド−カーゴコンジュゲートを必要としている患者又は被験体に投与する工程を含む方法も提供される。１つの実施態様では、ペプチド−カーゴコンジュゲートのカーゴ成分は、疾患を治療、予防、又は寛解することができる活性剤（例えば、薬剤）を含む。
【００７１】
コンジュゲートしたカーゴを細胞の内部に送達するためのCPPの使用、ならびに低分子、核酸、蛍光部分、タンパク質、ペプチド、及び／又は他のカーゴ等のカーゴをコンジュゲート又は結合させる方法は、当技術分野において周知である。例えば、米国特許出願公開第２００８／０２３４１８３号；Rhee et al, 201. C105Y, a Novel Cell Penetrating Peptide Enhances Gene Transfer of Sec-R Targeted Molecular Conjugates, Molecular Therapy (2005) 11, S79-S79；Johnson et al, Cell-penetrating Peptide for Enhanced Delivery of Nucleic Acids and Drugs to Ocular Tissues Including Retina and Cornea, Molecular Therapy (2007) 16 (1), 107-114；El-Andaloussi et al, A Novel Cell-penetrating Peptide, M918, for Efficient Delivery of Proteins and Peptide Nucleic Acids, Molecular Therapy (2007) 15 (10), 1820-1826；及びCrombez et al, A New Potent Secondary Amphipathic Cell-Penetrating Peptide for siRNA Delivery Into Mammalian Cells, Molecular Therapy (2008) 17 (1), 95-103；Sasaki, Y. et al, Cell-penetrating peptide-conjugated ＸIAP-inhibitory cyclic hexapeptides enter into Jurkat cells and inhibit cell proliferation FEBS Journal (2008) 275 (23), 6011-6021；Kolluri, S.K. et al, A Short Nur77-Derived Peptide Converts Bcl-2 from a Protector to a Killer, Cancer Cell (2008) 14 (4), 285-298；Avbelj, M., The Role of Intermediary Domain of MyD88 in Cell Activation and Therapeutic Inhibition of TLRs J.Immunology (2011), l;187(5):2394-404を参照。
【００７２】
更に、前述の例は、カルボキシフルオレセインへのコンジュゲーション、及び以下の細胞アッセイ例に要約するその後の細胞透過を証明する。
【００７３】
実施例
本開示は、以下の実施例によって更に説明されるが、これは、この開示の範囲又は趣旨を本明細書に記載する特定の手順に限定すると解釈すべきではない。実施例は、特定の実施態様を説明するために提供され、そして、本開示の範囲を限定することを意図するものではないことを理解すべきである。本開示の趣旨及び／又は添付の特許請求の範囲の範囲から逸脱することなく、当業者に示唆することができる様々な他の実施態様、その変形例及び等価物を行い得ることを更に理解すべきである。
【００７４】
以下の具体例におけるペプチドを固体状態合成によって調製した。Steward and Young, Solid Phase Peptide Synthesis, Freemantle, San Francisco, Calif. (1968)を参照。好ましい方法は、Merrifieldプロセスである。Merrifield, Recent Progress in Hormone Res., 23:451 (1967)。更に、ペプチドのＮ末端に緑色蛍光色素としてFITCをタグ付けすることによって、以下の具体例におけるペプチドを合成した。
【００７５】
実施例１
Fluo-Met-Ile-Ile-Leu-Ile-Ile-Gly-Ser-Thr-Ser-Arg-Asp-His-Met-Val-Leu-His-Glu-Tyr-Val-Asn-Ala-Ala-Gly-Ile-Thr-NH2（配列番号２）の合成
DMF、DCM、DIEA、及びMeOH等のすべての化学物質及び試薬は、更に精製することなく用いた。Fmoc-Rink Amide MBHAレジン（０．２３ｇ、０．１mmol）をDMF中で膨潤させ、次いで、２０％ Pip/DMFを添加して、逐次５分間及び２５分間脱保護を実施した。次いで、該レジンをDMF/DCMによって洗浄し、そして、液体を廃棄した。自動化CS336合成機を用いて、Met-1までペプチド合成を完了した。少量切断は、正しい質量を示した。カップリング試薬としてDIC/HOBtを用いてカルボキシフルオレセインを該レジンに結合させた。次いで、該レジンをDMF/MeOHで洗浄し、液体を廃棄し、そして、真空乾燥後、切断の準備が整った。乾燥ペプチジルレジン（０．５ｇ）を計量し、そして、反応容器に移した。適切なスカベンジャーを含有するTFA溶液を添加した。４時間反応させた後、加圧下で濾過し、そして、TFAで２回洗浄することによって該レジンを除去した。濾液を合わせた。ロータリーエバポレートによって濾液の体積を減らし、そして、冷エーテルを残渣に添加して粗ペプチドを沈殿させた。沈殿したペプチドをわずかに減圧下にてフリット漏斗で濾過し、そして、更に、冷エーテルで更に３回洗浄した。次いで、該粗ペプチドをオフホワイトの粉末（約１９０mg）として空気乾燥させた。該ペプチドを水中０．１％ TFA及びACN（勾配：６０分間で５０〜７０％ ACN、流速：２８mL/分）に溶解させ、そして、予測MWを含有する画分（ペプチド純度＞９５％）を回収した。所望の画分を１Ｌ 凍結乾燥ジャー内で合わせ、そして、液体窒素で急速冷凍させた。次いで、該ジャーをVirTis凍結乾燥機に取り付け、真空下（＜５００mTorr）で一晩乾燥させて、TFA塩を含む最終ペプチドを与えた。このペプチドを、TFA緩衝系、１．５％／分勾配を用いて分析HPLC（Agilent 1200）によって確認して、純度≧９９％ QCを与えた。(ES)+-LCMS m/e 実測M.W.３２１２．８４（予測３２１２．６６）。
【００７６】
実施例２
Fluo-シクロ(Lys-Ile-Ile-Ile-Ile-Asp)-Gly-Ser-Thr-Ser-Arg-Asp-His-Nle-Val-Leu-His-Glu-Tyr-Val-Asn-Ala-Ala-Gly-Ile-Thr-Ado-NH2（配列番号３）の合成
実施例１に記載の方法に従って、この実施例におけるペプチドを調製した。(ES)+-LCMS m/e 実測M.W.３３２０．６４（予測３３２０．７０）。
【００７７】
実施例３
Fluo-シクロ(Lys-Nle-Ile-Ile-Leu-Ile-Ile-Asp)-Gly-Ser-Thr-Ser-Arg-Asp-His-Nle-Val-Leu-His-Glu-Tyr-Val-Asn-Ala-Ala-Gly-Ile-Thr-Ado-NH2（配列番号４）の合成
実施例１に記載の方法に従って、この実施例におけるペプチドを調製した。(ES)+-LCMS m/e 実測M.W.３５４６．１６（予測３５４７．０２）。
【００７８】
実施例４
Fluo-Nle-Ile-Ile-Leu-Ile-Ile-Gly-Ser-Thr-Ser-Arg-Asp-His-Nle-Val-Leu-His-Glu-Tyr-Val-Asn-Ala-Ala-Gly-Ile-Thr-Ado-NH2（配列番号５）の合成
実施例１に記載の方法に従って、この実施例におけるペプチドを調製した。(ES)+-LCMS m/e 実測M.W.３３２０．５６（予測３３２１．７６）。
【００７９】
実施例５
Fluo-(D-Met)-Ile-(D-Ile)-Leu-Ile-Ile-Gly-Ser-Thr-Ser-Arg-Asp-His-Nle-Val-Leu-His-Glu-Tyr-Val-Asn-Ala-Ala-Gly-Ile-Thr-Ado-NH2（配列番号６）の合成
実施例１に記載の方法に従って、この実施例におけるペプチドを調製した。(ES)+-LCMS m/e 実測M.W.３３３９．３２（予測３３３９．８０）。
【００８０】
実施例６
Fluo-Met-Ile-Ile-Leu-Ile-Ile-Met-Gly-Val-Ala-Asp-Leu-Ile-Lys-Lys-Phe-Glu-Ser-Ile-Ser-Lys-Glu-Glu-NH2（配列番号７）の合成
実施例１に記載の方法に従って、この実施例におけるペプチドを調製した。(ES)+-LCMS m/e 実測M.W.２９７８．０２（予測２９７８．５２）。
【００８１】
実施例７
Fluo-Phe-Ile-cyclo(Asp-Ile-Ile-Ile-Lys)-Ile-Leu-Leu-Ile-Gly-Ser-Thr-Ser-Arg-Asp-His-Nle-Val-Leu-His-Glu-Tyr-Val-Asn-Ala-Ala-Gly-Ile-Thr-Ado-NH2（配列番号８）の合成
実施例１に記載の方法に従って、この実施例におけるペプチドを調製した。(ES)+-LCMS m/e 実測M.W.３９２０．７６（予測３９２０．５１）。
【００８２】
実施例８
細胞アッセイ
本発明のペプチドをHeLa及びHEK293Tの細胞株において細胞透過について試験した。
【００８３】
材料：HeLa（DSMZ）及びHEK293Tの細胞を成長培地で維持し、次いで、２〜３日間毎に継代した。HeLa細胞用の成長培地は、RPMI 1640、１０％ ウシ胎仔血清、MEM−非必須アミノ酸、ピルビン酸ナトリウム、及びＬ−グルタミン（GIBCO）であった。HEK293T用の成長培地DMEMには、１０％ ウシ胎仔血清、MEM−非必須アミノ酸、ピルビン酸ナトリウム、及びグルタミン（すべてGIBCO）を添加した。
【００８４】
方法及び手順：ibidi標準底を備えるμ−スライド８ウェルチャンバー付カバースリップ（IBIDI）に細胞をプレーティングし、そして、一晩培養した。ペプチド原液をMillQで調製し、そして、細胞取り込み試験のために細胞成長培地で希釈した。細胞を、ウシ胎仔血清を含まない培養培地で十分に洗浄し、ウシ胎仔血清の非存在下にて２μM CPP濃度でインキュベートし、そして、３７℃で２時間にわたって取り込み効率及び局在に関して共焦点顕微鏡によって分析した。最後に、トリパンブルー（最終濃度０．４％）を投与して、細胞表面の蛍光をクエンチし、続いて、エンドポイントイメージング工程を行った。プレートを４８８nmで励起させて撮像し、そして、HCX PL APO 175 63× N.A. 1.2浸水レンズ及び温度制御された顕微鏡ステージを備えるTCS SP5共焦点顕微鏡（Leica 174 Microsystems, Mannheim, Germany）を用いて５００〜５５０nm（フルオレセイン）にわたって蛍光を検出した。
【００８５】
HeLa及びHEK293Tの細胞における実施例１〜７のペプチドの結果を表１に示す：
【表１】
2018504381.tif 000002
上記表に示すとおり、HeLa細胞の透過は、実施例１のペプチドで高く、そして、蛍光は、エンドソーム及びサイトゾルに局在していた。実施例７のペプチドの透過は高く、そして、エンドソームに局在しており、続いて、実施例４のペプチドである。一方、実施例２、３、５、及び６のペプチドで処理した細胞では低い細胞内シグナルが測定された。HEK293T細胞は、実施例７のペプチドについて顕著なサイトゾル、及び部分的にエンドソームにおける蛍光を示した。
【００８６】
特定の実施態様の変形例を作製することができ、そして、該変形例も添付の特許請求の範囲の範囲内であるので、本発明は、上記本発明の特定の実施態様に限定されるものではないことを理解されたい。
【配列表】
2018504381000001.app
【国際調査報告】
2018504381.tif 000003
2018504381.tif 000004
2018504381.tif 000005
2018504381.tif 000006