(57)【要約】  本発明は、少なくとも第２世代の抗凝血薬に対して実質的な抵抗性を示す齧歯類を防除するための、少なくとも１種類のヒドロキシクマリンと少なくとも１種類のビタミンＤ類似体を含んでいる薬剤の使用に関する。本発明は、さらに、本発明による上記薬剤を使用して抵抗性齧歯類を防除する方法にも関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１種類の第２世代抗凝血薬に対する実質的な抵抗性が存在している齧歯類を防除するための薬剤の使用であって、該薬剤が少なくとも１種類のヒドロキシクマリン及び少なくとも１種類のビタミンＤ類似体を含んでいることを特徴とする、前記使用。
【請求項２】
前記第２世代抗凝血薬がブロマジオロン及びジフェナクムの群から選択されることを特徴とする、請求項１に記載の薬剤の使用。
【請求項３】
少なくとも１種類の第１世代抗凝血薬に対する実質的な抵抗性もさらに存在していることを特徴とする、請求項１又は２に記載の齧歯類を防除するための薬剤の使用。
【請求項４】
前記第１世代抗凝血薬が、ワルファリン、クマテトラリル、ダイファシノン及びクロロファシノンの群から選択されることを特徴とする、請求項３に記載の薬剤の使用。
【請求項５】
ブロマジオロンに対する抵抗性が存在しており且つ該実質的な抵抗性がブロマジオロンに対する少なくとも７の抵抗性因子によって特徴付けられることを特徴とする、請求項１〜４のいずれかに記載の薬剤の使用。
【請求項６】
ジフェナクムに対する実質的な抵抗性が存在しており且つ該実質的な抵抗性がジフェナクムに対する少なくとも２の抵抗性因子によって特徴付けられることを特徴とする、請求項１〜５のいずれかに記載の薬剤の使用。
【請求項７】
前記齧歯類がネズミ類であることを特徴とする、請求項１〜６のいずれかに記載の薬剤の使用。
【請求項８】
前記ネズミ類がドブネズミ類であることを特徴とする、請求項７に記載の薬剤の使用。
【請求項９】
前記ドブネズミ類がビタミンＫエポキシドレダクターゼ複合体１サブユニット１（ＶＫＯＲＣ１）において遺伝子配列変化を有していることを特徴とする、請求項８に記載の薬剤の使用。
【請求項１０】
前記ドブネズミ類が、系統Ｌ１２０Ｑ  Ｂｅｒｋｓｈｉｒｅ、系統Ｌ１２０Ｑ  Ｈａｍｐｓｈｉｒｅ、系統Ｌ１２８Ｑ、系統Ｙ１３９Ｃ、系統Ｙ１３９Ｆのドブネズミ類であることを特徴とする、請求項９に記載の薬剤の使用。
【請求項１１】
少なくともブロマジオロンに対する実質的な抵抗性が存在しており且つ該実質的な抵抗性が、ブロマジオロンに対して、
＊  系統Ｙ１３９Ｃの場合には、少なくとも１５の抵抗性因子によって；
＊  系統Ｙ１３９Ｆの場合には、少なくとも７の抵抗性因子によって；及び、
＊  系統Ｌ１２０Ｑ  Ｈａｍｐｓｈｉｒｅの場合には、少なくとも１０の抵抗性因子によって；
特徴付けられることを特徴とする、請求項１０に記載の薬剤の使用。
【請求項１２】
前記少なくとも１種類のヒドロキシクマリンがクマテトラリルであることを特徴とする、請求項１〜１１のいずれかに記載の薬剤の使用。
【請求項１３】
前記少なくとも１種類のビタミンＤ類似体がエルゴカルシフェロール及びコレカルシフェロールの群から選択されることを特徴とする、請求項１〜１２のいずれかに記載の薬剤の使用。
【請求項１４】
前記薬剤を、使用した前記少なくとも１種類のヒドロキシクマリンの前記齧歯類の体内における残留値を低減させるために使用することを特徴とする、請求項１〜１３のいずれかに記載の薬剤の使用。
【請求項１５】
少なくとも第２世代抗凝血薬に対する実質的な抵抗性が存在している齧歯類を防除する方法であって、少なくとも１種類のヒドロキシクマリンと少なくとも１種類のビタミンＤ類似体を含んでいる薬剤を使用することを特徴とする、前記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、少なくとも第２世代抗凝血薬に対して実質的な抵抗性が存在している齧歯類を防除するための、少なくとも１種類のヒドロキシクマリンと少なくとも１種類のビタミンＤ類似体を含んでいる薬剤の使用に関する。さらに、本発明は、本発明による上記薬剤を使用して抵抗性齧歯類を防除する方法にも関する。
【背景技術】
【０００２】
抗凝血薬、特に、ヒドロキシクマリン類は、齧歯類を防除するための毒餌又は別の薬剤の中の殺鼠性活性成分として、１９５０年代以来使用されている。それらの活性成分（例えば、ワルファリン）は、酸化型ビタミンＫをその活性型であるビタミンＫヒドロキノンに変換させる酵素であるビタミンＫエポキシドレダクターゼの活性を阻害する。ビタミンＫの活性型が欠乏すると、血液凝固におけるＸ因子を包含する多くの種類のタンパク質のカルボキシル化が不充分となる。かくして、血液凝固カスケードにおける１つの段階であるプロトロンビンからトロンビンへの変換が中断され、それによって、適切な用量のクマリンを摂取した後の動物を衰弱させることができ、場合により、死に至らせることができる。
【０００３】
ドブネズミ（Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）、クマネズミ（Ｒａｔｔｕｓ  ｒａｔｔｕｓ）及びハツカネズミ（Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ）などの有害な齧歯類を防除するための抗凝血薬は、１９５０年代から使用されている。急性毒物と比較して、これらの活性成分は、遅効性であるという有利な点を有している。このことは、毒餌に対して用心深くなることが無いことを意味する。さらに、例えば家畜などに偶発的な中毒が起こった場合、ビタミンＫ１と一緒に有効な解毒剤を使用することができる。
【０００４】
最初の抗凝血性殺鼠剤であるワルファリンが市場に導入されてから僅か数年後には、この活性成分に対して耐性を示すネズミに対する報告がなされた（例えば、Ｂｏｙｌｅ  １９６０，  Ｎａｔｕｒｅ  １８８：５１７；  Ｌｕｎｄ  １９６４，  Ｂｕｌｌ  ＷＨＯ  ４７：６１１−６１８）。抵抗性に関する報告が増加するにつれて、１９７０年代から１９８０年代において、これまでより極めて高い急性毒性を有する第２世代の抗凝血性活性成分が開発された。しかしながら、これらの活性成分の一部に関しても、増大した耐性又は抵抗性が発達し得るし、交差抵抗性も生じ得る。一般に、ある種の活性成分に対する抵抗性は、それよりも活性が弱い全ての活性成分に対する抵抗性も含んでいる。従って、ある系統が１種類の第２世代の活性成分に対して抵抗性を示す場合、その系統は、第１世代の全ての活性成分に対しても抵抗性を示し、さらに、場合により、効果が弱い第２世代の物質に対しても抵抗性を示す。極めて強力な第２世代の活性成分の特に不利な点は、生体内（特に、肝臓内）に長期間残留することに関連した高い毒性である。従って、これらの薬剤は、極めて制限された方法においてのみ使用される。それらは、残留性があり且つ生体毒性を示すと評価されており、従って、原則として認可されることはあり得ないにもかかわらず、代替え手段が無いという理由で、さしあたり、特定の条件下において、当局によって今でも認可されている。
【０００５】
ネズミ類及びハツカネズミ類における抵抗性の主な原因は、ビタミンＫエポキシドレダクターゼ複合体サブユニット１（ＶＫＯＲＣ１）に関する遺伝子内の配列変化である。当該遺伝子内の点突然変異（一塩基多型、ＳＮＰ）は、ＶＫＯＲＣ１の特定のアミノ酸の置換をもたらす。ドブネズミ類の抵抗性系統の場合、いずれの場合にも、１つのアミノ酸のみが置換される。ＶＫＯＲＣ１における特定の配列変化によって、当該酵素の特性が変化し、その変化が、抗凝血性活性成分による標的酵素のブロッキングを妨げる。その結果は、抗凝血性活性成分に対する強化された耐性である。この強化された耐性は、ヒトにおいても生じる可能性があり、関連する薬物の治療的な使用を妨げ得る。ネズミ類及びハツカネズミ類の場合、関連する抗凝血性防除剤を正しく使用しているのにもかかわらず充分な防除結果が得られないほど、そのような耐性は極めて顕著であり得る。さらに、毒餌が当該齧歯類によって良好に受け入れられた場合、実質的な抵抗性が存在していると考えられる（Ｇｒｅａｖｅｓ，  １９９４，  Ｂｕｃｋｌｅ  Ａ．Ｐ．  ａｎｄ  Ｓｍｉｔｈ  Ｒ．Ｈ．  ｅｄｓ．  “Ｒｏｄｅｎｔ  Ｐｅｓｔｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  Ｃｏｎｔｒｏｌ”，  ＣＡＢＩ，  Ｗａｌｌｉｎｇｆｏｒｄ，  Ｏｘｏｎ，  ＵＫ，  ｐａｇｅｓ  １９７−２１７）。
【０００６】
ＶＫＯＲＣ１遺伝子内における配列変化は、そのような変化が起こる部分に応じて、種々の効果を有している。特に、当該遺伝子のアミノ酸の位置１２０〜１４０の間の領域における配列変化は、いずれの場合にも、ネズミ類及びハツカネズミ類における特定のレベルの抵抗性をもたらす。例えば、ドイツにおいて広範囲に及んでいるＶＫＯＲＣ１の１３９位におけるシステインのアミノ酸チロシンへの置換（Ｔｙｒ１３９Ｃｙｓ、Ｙ１３９Ｃ）は、ドブネズミ類及びハツカネズミ類を、ワルファリン、クマテトラリル、ブロマジオロンに対して実質的に完全に非感受性とし、及び、ネズミ類の場合には、ジフェナクムに対しても実質的に完全に非感受性とする。ＶＫＯＲＣ１のこの変異形を有している個体は、高薬量のワルファリン及び別の活性成分の存在下においてさえ、血液凝固を維持することができる。
【０００７】
特に、ドブネズミの場合には、さまざまなＳＮＰによって特徴付けられる系統について、それらが、時に、極めて異なる感受性又は抵抗性を示すことに関して、充分に研究されている。例えば、系統Ｙ１３９Ｓ（ウェールズから既知）の場合、該系統は、ワルファリンに対しては、多少、より耐性であることが知られているが、第２世代の抗凝血薬であるブロマジオロンに対しては実質的な抵抗性は存在しない（Ｂｕｃｋｌｅ  ｅｔ  ａｌ．  ２００７，  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｐｅｓｔ  Ｍｇｔ．  ５３（４），  ２９１−２９７）。抵抗性は、おそらく最も広範囲にはびこっている抵抗性系統である系統Ｙ１３９Ｃにおいて、実質的に、さらに顕著である（デンマーク、ドイツ、オランダ、イギリス、フランス、ベルギー）。実験室及び野外における実験において、該系統が第１世代の全ての活性成分に対して抵抗性を示し、さらに、第２世代の活性成分であるブロマジオロン及びジフェナクムに対しても抵抗性を示すことが示された（特に、以下のものを参照されたい：  Ｂｕｃｋｌｅ  ｅｔ  ａｌ．  ２０１２，  Ｐｅｓｔ．  Ｍａｎａｇ．  Ｓｃｉ．  ６９：２３３−２３９；  Ｅｎｄｅｐｏｌｓ  ｅｔ  ａｌ．  ２００７，  Ｐｅｓｔ  Ｍａｎａｇ．  Ｓｃｉ．  ６８：３４８−３５４）。
【０００８】
殺鼠剤として使用することが可能な活性成分のさらなる群は、ビタミンＤの２種類の形態、エルゴカルシフェロール及びコレカルシフェロール（ビタミンＤ２及びＤ３）である。これらの活性成分は、残留物を形成する可能性を殆ど示さず、従って、ネズミ類又はハツカネズミ類を餌としている捕食者に対してリスクを示さない。該ビタミンの過剰摂取は、高カルシウム血症をもたらす。従って、コレカルシフェロールは、殺鼠剤として使用される。しかしながら、上記抗凝血薬と比較して、該カルシフェロール類は、使用される濃度で、特にネズミ類において、毒餌に対して用心深くさせる（即ち、当該毒餌が避けられる）ので、又は、ネズミ類に対して当該毒餌の誘引性を低減させるので、これまで、市場で受け入れられることができていない（Ｐｒｅｓｃｏｔｔ  ｅｔ  ａｌ．  １９９２，  Ｐｒｏｃ．  １５ｔｈ  Ｖｅｒｔｅｂｒａｔｅ  Ｐｅｓｔ  Ｃｏｎｆ．，  Ｕｎｉｖ．  Ｃａｌｉｆ．，  Ｄａｖｉｓ，  ２１８−２２３）。ネズミ類は、０．０７５％のコレカルシフェロールを含んでいる毒餌を食べてからまさに１日後には、毒餌に対して用心深くなる。即ち、それらのネズミ類は、もはや当該毒餌を食べることはなく、別の食料源のみを食べる。
【０００９】
しかしながら、カルシフェロール類は、ネズミの特定の系統において特定の抗凝血性殺鼠剤の作用を増強することができるということ、即ち、相乗的に作用し得るということも知られている。この効果は、ウェールズ系統Ｙ１３９Ｓのワルファリン抵抗性ネズミにおいて実証されている（Ｋｅｒｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．  ２００２，  Ｃｏｍｐ．  Ｃｌｉｎ．  Ｐａｔｈ．  １１，  ５９−６４）。非抵抗性動物、即ち、抗凝血性殺鼠剤に対して正常な感受性を示す動物の場合、当該２種類の活性成分のせいぜい相加効果を実証することは可能である（Ｇｒｅａｖｅｓ  ｅｔ  ａｌ．  １９７４，  Ｊ．  Ｈｙｇ．  Ｃａｍｂ．  ７３，  ３４１−３５２）。
【００１０】
今日まで、この増強効果は第１世代抗凝血薬（特に、ワルファリン）に対して抵抗性を示す系統においてのみ生じ、第２世代活性成分（例えば、ブロマジオロン）に対しても抵抗性を示すさらに強力な抵抗性系統においては生じないと推定されてきた。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Ｂｏｙｌｅ  １９６０，  Ｎａｔｕｒｅ  １８８：５１７
【非特許文献２】Ｌｕｎｄ  １９６４，  Ｂｕｌｌ  ＷＨＯ  ４７：６１１−６１８
【非特許文献３】Ｇｒｅａｖｅｓ，  １９９４，  Ｂｕｃｋｌｅ  Ａ．Ｐ．  ａｎｄ  Ｓｍｉｔｈ  Ｒ．Ｈ．  ｅｄｓ．  “Ｒｏｄｅｎｔ  Ｐｅｓｔｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  Ｃｏｎｔｒｏｌ”，  ＣＡＢＩ，  Ｗａｌｌｉｎｇｆｏｒｄ，  Ｏｘｏｎ，  ＵＫ，  ｐａｇｅｓ  １９７−２１７
【非特許文献４】Ｂｕｃｋｌｅ  ｅｔ  ａｌ．  ２００７，  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｐｅｓｔ  Ｍｇｔ．  ５３（４），  ２９１−２９７
【非特許文献５】Ｂｕｃｋｌｅ  ｅｔ  ａｌ．  ２０１２，  Ｐｅｓｔ．  Ｍａｎａｇ．  Ｓｃｉ．  ６９：２３３−２３９
【非特許文献６】Ｅｎｄｅｐｏｌｓ  ｅｔ  ａｌ．  ２００７，  Ｐｅｓｔ  Ｍａｎａｇ．  Ｓｃｉ．  ６８：３４８−３５４
【非特許文献７】Ｐｒｅｓｃｏｔｔ  ｅｔ  ａｌ．  １９９２，  Ｐｒｏｃ．  １５ｔｈ  Ｖｅｒｔｅｂｒａｔｅ  Ｐｅｓｔ  Ｃｏｎｆ．，  Ｕｎｉｖ．  Ｃａｌｉｆ．，  Ｄａｖｉｓ，  ２１８−２２３
【非特許文献８】Ｋｅｒｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．  ２００２，  Ｃｏｍｐ．  Ｃｌｉｎ．  Ｐａｔｈ．  １１，  ５９−６４
【非特許文献９】Ｇｒｅａｖｅｓ  ｅｔ  ａｌ．  １９７４，  Ｊ．  Ｈｙｇ．  Ｃａｍｂ．  ７３，  ３４１−３５２
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
従って、本発明の目的は、第２世代抗凝血薬に対して実質的な抵抗性を示す齧歯類に対して使用することが可能な薬剤を提供することである。さらなる目的は、急性毒性物質又は極めて強力で残留物を形成する第２世代の抗凝血薬に頼る必要は無いが、それにもかかわらず、抗凝血薬抵抗性齧歯類に対しても有効な薬剤を見いだすことである。さらにまた、本発明のさらなる目的は、捕食者の二次的な中毒を防止するために、当該齧歯類の体内における抗凝血薬の残留値をできる限り小さくすることである。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
上記目的は、少なくとも１種類のヒドロキシクマリンと少なくとも１種類のビタミンＤ類似体を含んでいる、少なくとも１種類の第２世代抗凝血薬に対して抵抗性を示す齧歯類を防除するための薬剤を使用することによって、達成される。好ましくは、本発明による上記薬剤は、さらに少なくとも１種類の第１世代抗凝血薬に対しても抵抗性を示す齧歯類を防除するために使用される。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
本発明に関連して、抗凝血薬は、インダンジオン誘導体又はヒドロキシクマリン類の群から選択される物質（第１世代及び第２世代）である。該物質は、齧歯類を防除するために世界中で使用されている（ｃｆ．  例えば、ＤＥ  ２５０６７６９；  ＪＰ  ４８０２３９４２；  ＣＨ  ４８１５８０；  「Ｐａｐｏｓｃｉ（１９７４）：Ｂｅｉｈｅｆｔｅ  Ｚ．  Ａｎｇｅｗ．  Ｚｏｏｌ．  ｐ．  １５５」、及び、ＤＥ  ２５０６７６９）。第１世代抗凝血性物質の例としては、以下のものを挙げることができる：４−ヒドロキシクマリン誘導体（１−フェニル−２−アセチル）−３−エチル−４−ヒドロキシクマリン（「ワルファリン」）、３−（α−アセトニル−４−クロロベンジル）−４−ヒドロキシクマリン（「クマクロル」）、３−（１’，２’，３’，４’−テトラヒドロ−１’−ナフチル）−４−ヒドロキシクマリン（「クマテトラリル」）、並びに、インダンジオン誘導体、例えば、１，１−ジフェニル−２−アセチルインダン−１，３−ジオン（「ダイファシノン」）及び（１’−ｐ−クロロフェニル−１’−フェニル）−２−アセチルインダン−１，３−ジオン（「クロロダイファシノン」）。第２世代としては、以下のものを挙げることができる：３−［３−（４’−ヒドロキシ−３’−クマリニル）−３−フェニル−１−（４’−ブロモ−４’−ビフェニル）プロパン−１−オール（「ブロマジオロン」）、３−（３’−パラジフェニリル−１’，２’，３’，４’−テトラヒドロ−１’−ナフチル）−４−ヒドロキシクマリン（「ジフェナクム」）、３−［３−４’−ブロモビフェニル−４−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１−ナフチル］−４−ヒドロキシクマリン（「ブロジファクム」）、４−ヒドロキシ−３−［１，２，３，４−テトラヒドロ−３−［４−（４−トリフルオロメチルベンジルオキシ）フェニル］−１−ナフチル］クマリン（「フロクマフェン」）、並びに、ヒドロキシ−４−ベンゾチオピラノン類、例えば、「ジフェチアロン」。
【００１５】
本発明の１実施形態は、ブロマジオロン、ジフェナクム、フロクマフェン、ブロジファクム及びジフェチアロンの群（好ましくは、該群は、ジフェチアロンを含まない）から選択される少なくとも１種類の第２世代抗凝血薬に対して実質的な抵抗性を示す齧歯類を防除するための本発明による上記薬剤の使用に基づいている。本発明のさらに好ましい実施形態は、ブロマジオロン及びジフェナクムの群から選択される少なくとも１種類の第２世代抗凝血薬（好ましくは、少なくともブロマジオロン）に対して実質的な抵抗性を示す齧歯類を防除するための本発明による上記薬剤の使用に基づいている。さらに一層好ましくは、本発明による上記薬剤は、さらに、ワルファリン、クマテトラリル、ダイファシノン及びクロロファシノンの群（好ましくは、該群は、ダイファシノン及びクロロファシノンを含まない）から選択される第１世代抗凝血薬に対して実質的な抵抗性を示す齧歯類を防除するためにも使用される。好ましくは、ワルファリン、クマテトラリル及びブロマジオロンに対して同時に実質的な抵抗性が存在している。さらに一層好ましくは、付加的に、ジフェナクムに対しても実質的なさらなる抵抗性が存在している。
【００１６】
本発明に関連して、用語「抵抗性（ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ（ｓ））」は、「実質的な抵抗性」を意味し、これは、当該殺鼠剤が、適切に使用され且つその毒餌が当該齧歯類によって良好に受け入れられた場合においてさえ、もはや充分な生物学的効力を達成することができないことを特徴とする（以下のもの参照されたい：Ｇｒｅａｖｅｓ  −  １９９４，  Ｂｕｃｋｌｅ  Ａ．Ｐ．  ａｎｄ  Ｓｍｉｔｈ  Ｒ．Ｈ．  ｅｄｓ．  “Ｒｏｄｅｎｔ  Ｐｅｓｔｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  Ｃｏｎｔｒｏｌ”，  ＣＡＢＩ，  Ｗａｌｌｉｎｇｆｏｒｄ，  Ｏｘｏｎ，  ＵＫ，  ｐａｇｅｓ  １９７−２１７）。当業者は、この定義に従って、実質的な抵抗性が存在しているのか又はいないのかについて、明瞭ではっきりとした評価をすることができる。一般に、「抵抗性」の程度は、抵抗性因子を特定することによって記載することができる。抵抗性因子（ＲＦ）は、通常、致死量（ＬＤ５０）又は有効量（ＥＤ５０）に基づいて計算される。ＬＤ５０は、被験動物の５０％を死に至らしめることが期待される、統計的に求められる薬量である。ＥＤ５０は、当該動物の５０％において特定の応答を引き起こす、統計的に求められる活性成分の薬量である；本発明によれば、これは、血液凝固における臨界値である。ＬＤ５０及びＥＤ５０は、それぞれ、各系統に対して実験的に求められる。ＲＦは、当該抵抗性系統及び対照標準と見なされる感受性系統のＬＤ５０又はＥＤ５０から形成される指数である。１９８０年代まで、ＲＦは、ＬＤ５０に基づいて求められた。この方法は、後に、血液凝固試験（ＢＣＲ抵抗性試験）によって置き換えられた。その血液凝固試験（ＢＣＲ抵抗性試験）を用いて、ＥＤ５０をより正確に決定することができる（Ｐｒｅｓｃｏｔｔ  ｅｔ  ａｌ．  ２００７：  Ａ  ｓｔａｎｄａｒｄｉｓｅｄ  ＢＣＲ−ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｔｅｓｔ  ｆｏｒ  ａｌｌ  ａｎｔｉｃｏａｇｕｌａｎｔ  ｒｏｄｅｎｔｉｃｉｄｅｓ．  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｐｅｓｔ  Ｍｇｔ．  ５３（４），  ２６５−２７２）。従って、本発明によれば、ＲＦは、当該抵抗性系統及び対照標準と見なされる感受性系統のＥＤ５０から形成される指数によって計算するのが好ましい。本発明によれば、ＥＤ５０は、好ましくは、上記参照文献に従って、ＢＣＲ抵抗性試験を用いて決定する。
【００１７】
本発明の好ましい実施形態は、齧歯類（好ましくは、ネズミ類、さらに一層好ましくは、ドブネズミ類）を防除するための、本発明による上記薬剤の使用に基づいており、ここで、ブロマジオロンに対する実質的な抵抗性が存在しており、その実質的な抵抗性は、ブロマジオロンに対して、少なくとも７、好ましくは少なくとも１０、さらに一層好ましくは少なくとも１２及び最も好ましくは少なくとも１５の抵抗性因子（これは、好ましくは、ＢＣＲ抵抗性試験によって求める；「Ｐｒｅｓｃｏｔｔ  ｅｔ  ａｌ．  ２００７」を参照されたい）によって特徴付けられる。
【００１８】
本発明のさらなる好ましい実施形態は、齧歯類（好ましくは、ネズミ類、さらに一層好ましくは、ドブネズミ類）を防除するための、本発明による上記薬剤の使用に基づいており、ここで、ジフェナクムに対する実質的な抵抗性が存在しており、その実質的な抵抗性は、ジフェナクムに対して、少なくとも２、好ましくは少なくとも２．９、さらに一層好ましくは少なくとも４．８及び最も好ましくは少なくとも１２の抵抗性因子（これは、好ましくは、ＢＣＲ抵抗性試験によって求める）によって特徴付けられる。
【００１９】
さらに強力な抵抗性を示す系統は、特に、ブロマジオロン抵抗性によって特徴付けられる。下記表１には、特定の抵抗性ドブネズミ系統におけるブロマジオロンに対するＲＦが記載されている：
表１：  ドブネズミ（Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）の既知抵抗性系統におけるブロマジオロンに関する抵抗性因子。Ｙ１３９Ｓに関するＲＦは、ＬＤ５０に基づいて求めた（ＢＣＲ抵抗性試験データは、Ｙ１３９Ｓに関しては、まだ入手できない）。その他の系統のＲＦは、ＢＣＲ抵抗性試験を用いて求めた（出典：Ｙ１３９Ｓ：Ｂｕｃｋｌｅ  ｅｔ  ａｌ．  ２００７，  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｐｅｓｔ  Ｍｇｔ．  ５３（４），  ２９１−２９７）；  他の系統：表２、第８頁、ＲＲＡＣ  Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  ｏｎ  Ａｎｔｉｃｏａｇｕｌａｎｔ  Ｒｏｄｅｎｔｉｃｉｄｅ  Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ；  ｗｗｗ．ｒｒａｃ．ｉｎｆｏ）：
【表１】
2018510847.tif 000002
【００２０】
本発明の好ましいさらなる変形態様は、ドブネズミ類を防除するための、本発明による上記薬剤の使用に関し、ここで、少なくともブロマジオロンに対する実質的な抵抗性が存在しており、その実質的な抵抗性は、ブロマジオロンに対して、
＊  系統Ｙ１３９Ｃの場合には、少なくとも１５、好ましくは少なくとも１７、及び、さらに一層好ましくは少なくとも２０の抵抗性因子によって特徴付けられ；
＊  系統Ｙ１３９Ｆの場合には、少なくとも７、好ましくは少なくとも９、及び、さらに一層好ましくは少なくとも１２の抵抗性因子によって特徴付けられ；
＊  系統Ｌ１２０Ｑ  Ｈａｍｐｓｈｉｒｅの場合には、少なくとも１０、好ましくは少なくとも１４、及び、さらに一層好ましくは少なくとも１７の抵抗性因子によって特徴付けられる。
【００２１】
本発明の好ましいさらなる変形態様は、ドブネズミ類を防除するための、本発明による上記薬剤の使用に関し、ここで、少なくともジフェナクムに対する実質的な抵抗性が存在しており、その実質的な抵抗性は、ジフェナクムに対して、
＊  系統Ｙ１３９Ｃの場合には、少なくとも１．６、好ましくは少なくとも２、及び、さらに一層好ましくは少なくとも２．９の抵抗性因子によって特徴付けられ；
＊  系統Ｌ１２０Ｑ  Ｈａｍｐｓｈｉｒｅの場合には、少なくとも４．８、好ましくは少なくとも１２、及び、さらに一層好ましくは少なくとも１５の抵抗性因子によって特徴付けられる。
【００２２】
経験及びさまざまな抗凝血薬を用いた野外実験から、ＲＦが３〜６の範囲を超えている場合には１種類の抗凝血薬だけで１００％防除することはもはや不可能であるということを推論することが可能である。当該系統及び使用する抗凝血薬に応じて、ＲＦが１．５〜３の範囲から困難は既に生じ得る。
【００２３】
本発明による薬剤は、ハタネズミ属（Ｍｉｃｒｏｔｕｓ）の代表的なものであるミズハタネズミ属（Ａｒｖｉｃｏｌａ）、クマネズミ属（Ｒａｔｔｕｓ）及びハツカネズミ属（Ｍｕｓ）を包含する全ての有害な抵抗性齧歯類系統を防除するのに適している。ヒトが定住している領域において特に注目すべきは、ハツカネズミ（Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ／ｄｏｍｅｓｔｉｃｕｓ）、ドブネズミ（Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）、及び、さらに、クマネズミ（Ｒ．ｒａｔｔｕｓ）である。好ましくは、本発明による上記薬剤は、ドブネズミ（Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）又はクマネズミ（Ｒ．ｒａｔｔｕｓ）などの抵抗性ネズミ類に対して使用する。特に好ましくは、該上記薬剤は、ドブネズミ（Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）の防除において使用する。施用は、空閑地において実施可能であり、及び、建造物（これは、動物舎、貯蔵空間及び製造空間を包含する）の中でも実施可能であり、及び、下水道の中でも実施可能である。
【００２４】
下記表２は、全ての既知抵抗性ドブネズミ系統の感受性に関する現在の知識を要約している。該データは、イギリス及びドイツにおける抵抗性ワーキンググループによる全ての利用可能なデータの解析に基づいている（特に、以下のものを参照されたい：  ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｂｐｃａ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｓｓｅｔｓ／ＲＲＡＧ＿Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ＿Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ．ｐｄｆ，  Ｅｓｔｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  ２０１４，  Ｂｕｎｄｅｓｇｅｓｕｎｄｈｅｉｔｓｂｌａｔｔ．  ＤＯＩ  １０．１００７／ｓ００１０３−０１３−１９３０−ｚ）。系統Ｙ１３９Ｓ（ウェールズ）のみは、第２世代抗凝血薬に対して実質的な抵抗性を示さない；その他の系統は、これらの活性成分に対して、時には異なる程度まで、実質的な抵抗性を示す。このことは、これらの系統が系統Ｙ１３９Ｓよりも強い抵抗性を示すことを意味している。
【００２５】
表２：  ＶＫＯＲＣ１多形性によって特徴付けられるドブネズミ（Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）の抵抗性系統、並びに、第１世代抗凝血薬（ワルファリン、クロロファシノン、クマテトラリル）及び第２世代抗凝血薬（ブロマジオロン、ジフェナクム、ブロジファクム、フロクマフェン、ジフェチアロン）に対するそれらの実質的な抵抗性。評価は、経験から得られた値及び野外実験に基づいている。
【表２】
2018510847.tif 000003
【００２６】
系統Ｙ１３９Ｃは、重要な役割を果たす。第１に、それは、Ｌ１２０Ｑ  Ｂｅｒｋｓｈｉｒｅに加えて、最も強力な抵抗性系統である。第２に、それは、最も広範囲にはびこっている系統である  −  このことによって、Ｙ１３９ＣはＬ１２０Ｑから区別される（表３）。従って、この系統に対する薬剤の効力を実証することは、抵抗性ネズミ類に対する効力の一般的な実証であると考えられる；  系統Ｌ１２０Ｑ  Ｂｅｒｋｓｈｉｒｅのみは、匹敵する程度の抵抗性を示し得るであろう。
【表３】
2018510847.tif 000004
【００２７】
ＶＫＯＲＣ１多形Ｙ１３９Ｃによって特徴付けられる抵抗性ネズミ系統「Ｗｅｓｔｐｈａｌｉａ」は、第２世代抗凝血薬であるブロマジオロン及びジフェナクムに対して抵抗性を示し、並びに、第１世代活性成分に対しても抵抗性を示す。これらの活性成分のうちの１種類を認可された濃度で含んでいる毒餌は、この系統の動物に対して有効ではない。例えば、ブロマジオロン及びクマテトラリルを用いた実験室飼育試験において、死亡事例は観察されなかった。
【００２８】
本発明のさらなる実施形態は、少なくとも第２世代抗凝血薬に対して（及び、好ましくは、同時に、少なくとも第１世代抗凝血薬に対しても）抵抗性を示すドブネズミ類を防除するための本発明による上記薬剤の使用に関し、ここで、該ドブネズミ類は、ビタミンＫエポキシドレダクターゼ複合体１サブユニット１（ＶＫＯＲＣ１）において遺伝子配列変化を有している。好ましくは、該ドブネズミ類は、ＶＫＯＲＣ１タンパク質の位置１２０〜１４０のアミノ酸をコードするＶＫＯＲＣ１遺伝子領域の範囲内に配列変化を有している。さらに一層好ましくは、本発明による上記薬剤は、系統Ｌ１２０Ｑ  Ｂｅｒｋｓｈｉｒｅ、系統Ｌ１２０Ｑ  Ｈａｍｐｓｈｉｒｅ、系統Ｌ１２８Ｑ、系統Ｙ１３９Ｃ、系統Ｙ１３９Ｆの抵抗性ドブネズミ類を防除するために使用する。さらに一層好ましくは、系統Ｙ１３９Ｃを防除するために使用する。
【００２９】
本発明のさらなる実施形態においては、本発明に従って使用される薬剤は、少なくとも１種類のヒドロキシクマリンとして、ワルファリン、クマクロル、クマテトラリル、ブロマジオロン、ジフェナクム、ブロジファクム及びフロクマフェンの群から選択されるヒドロキシクマリンを含んでいる。好ましくは、１種類のみのヒドロキシクマリンを使用する。再度好ましくは、少なくとも（及び、好ましくは、単独のヒドロキシクマリンとして）クマテトラリルを本発明に従って使用する。
【００３０】
本発明に関連して、ビタミンＤ類似体は、エルゴカルシフェロール及びコレカルシフェロールである。それらは、３β−ヒドロキシ−Δ５，７−１７β−置換ステロイドの誘導体である。カルシフェロール類は、照射することによってエルゴステロールから形成される。さらに、別の類似体及びビタミンＤの代謝産物（例えば、ヒドロキシコレカルシフェロール、ジヒドロキシコレカルシフェロール、ヒドロキシエルゴカルシフェロール、ジヒドロキシエルゴカルシフェロール）も適している。本発明の好ましい実施形態においては、本発明に従って使用される薬剤は、少なくとも１種類のビタミンＤ類似体として、エルゴカルシフェロール及び／又はコレカルシフェロールを含んでいる。さらに一層好ましくは、本発明に従って使用される薬剤は、ビタミンＤ類似体として、コレカルシフェロールのみを含んでいる。
【００３１】
本発明によれば、驚くべきことに、少量のコレカルシフェロールを加えた場合、クマテトラリル毒餌が上記抵抗性ネズミ類に対して特に有効であるということが分かった。慣習的な濃度のクマテトラリルにコレカルシフェロールを５０ｍｇ／ｋｇの濃度で添加することは、抵抗性ネズミ類における高い死亡率をもたらすのに充分である。１００ｍｇ／ｋｇのコレカルシフェロールの濃度は、１００％に至るまでの死亡率を達成することを可能にするのに充分である（実施例を参照されたい）。予想通り、クマテトラリル単独では、死に至らせることはない。１００ｍｇ／ｋｇのコレカルシフェロール単独でも死に至らせることはないので、当該効果は、もっぱら、クマテトラリルの増強された効果に起因し得る。コレカルシフェロールの増強効果についてこれまで公表された実例は、弱い抵抗性しか示さないウェールズ系統Ｙ１３９Ｓ（これは、第１世代の活性成分であるワルファリン及びクマテトラリルに対して僅かに抵抗性を示すのみであり、そして、第２世代抗凝血薬に対しては実質的な抵抗性を示さない）にのみ関している（以下のものも参照されたい：Ｔａｂｌｅ  ２、ｐ．１６，  ＲＲＡＣ  Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  ｏｎ  Ａｎｔｉｃｏａｇｕｌａｎｔ  Ｒｏｄｅｎｔｉｃｉｄｅ  Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ；ｗｗｗ．ｒｒａｃ．ｉｎｆｏ）。
【００３２】
さらなる実施形態は、本発明による上記薬剤の使用に関し、ここで、該少なくとも１種類のヒドロキシクマリンは、５ｍｇ／ｋｇ〜１０００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは、２０〜８００ｍｇ／ｋｇ（第１世代のヒドロキシクマリン類：ワルファリン、クマクロル、クマテトラリル）の濃度で、又は、１０〜１００ｍｇ／ｋｇ（第２世代のヒドロキシクマリン類：ブロマジオロン、ジフェナクム、ブロジファクム、及び、フロクマフェン）の濃度で使用し、及び、特に好ましくは、２０〜７５０ｍｇ／ｋｇ（第１世代のヒドロキシクマリン類に基づく）の濃度で、又は、１０〜５０ｍｇ／ｋｇ（第２世代のヒドロキシクマリン類に基づく）の濃度で使用し、及び、極めて特に好ましくは、２５０〜８００ｍｇ／ｋｇ（第１世代のヒドロキシクマリン類に基づく）の濃度で、又は、２０〜５０ｍｇ／ｋｇ（第２世代のヒドロキシクマリン類に基づく）の濃度で使用する。複数種類のヒドロキシクマリンを使用する場合、ヒドロキシクマリン類の総濃度は、同様に、上記範囲の中に位置している。
【００３３】
さらなる実施形態は、本発明による上記薬剤の使用に関し、ここで、該少なくとも１種類の少なくとも１種類のビタミンＤ類似体は、１０〜１０００ｍｇ／ｋｇの濃度で、好ましくは、２０〜２００ｍｇ／ｋｇの濃度で、特に好ましくは、２５〜１００ｍｇ／ｋｇの濃度で、極めて特に好ましくは、５０〜１００ｍｇ／ｋｇの濃度で使用する。複数種類のビタミンＤ類似体を使用する場合、ビタミンＤ類似体の総濃度は、同様に、上記範囲の中に位置している。
【００３４】
第１世代抗凝血薬を含んでいる毒餌に少量のコレカルシフェロールを添加することの実際的な条件下における効果の証拠を提供するために、標準的な野外実験を実施した。１００ｍｇ／ｋｇのコレカルシフェロールを用いた上首尾の実験に加えて、より低濃度であるちょうど５０ｍｇ／ｋｇのコレカルシフェロールをクマテトラリルと組み合わせて用いる実験も実施した。この低減された量のコレカルシフェロールでさえ、充分に有効であるということが分かった（実施例２を参照されたい）。ここで、約５０％の系統Ｙ１３９Ｃの抵抗性（即ち、ブロマジオロン抵抗性）ネズミ類を含んでいる大群は、実質的に完全に抹殺された。
【００３５】
ネズミ系統Ｙ１３９Ｃは、第２世代の２種類の抗凝血性殺鼠剤に対して実質的な抵抗性を示す。バークシャー（イギリス）においてのみ見いだされる系統Ｌ１２０Ｑの１変異体を別にすれば、そのような高いレベルの抵抗性を示す系統は存在しない。少量のコレカルシフェロールによる増強効果は、これまで、明らかに耐性のレベルが低く且つ第２世代の活性成分に対しては実質的な抵抗性を示さない系統Ｙ１３９Ｓにおいてのみ実証されてきた。この系統においては、抗凝血薬の血液凝固阻害作用に対する増強効果を実証することが可能であった（Ｋｅｒｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．  ２００２，  Ｃｏｍｐ．  Ｃｌｉｎ．  Ｐａｔｈ．  １１，  ５９−６４）。しかしながら、この効果は、実質的にさらに強い抵抗性のネズミ類においては、期待される充分な効果を示す程には、充分に強力ではなかった。
【００３６】
第１世代の抗凝血性殺鼠剤にそれ自体は効果を有さない少量のコレカルシフェロールを加えることにより、強い抵抗性のネズミ系統に対して作用し且つ抗凝血性活性成分の有利な点（遅効性の作用、解毒剤）を有しているが第２世代抗凝血薬を使用することを不要とする防除剤を製造することが可能である。かくして、これらの残留性活性成分を使用することに伴う環境リスクは、明瞭に低減される。
【００３７】
本発明は、さらに、少なくとも第２世代抗凝血薬に対して実質的な抵抗性を示す齧歯類を防除する方法も提供し、ここで、該方法は、少なくとも１種類のヒドロキシクマリンと少なくとも１種類のビタミンＤ類似体を含んでいる薬剤を使用することを特徴とする。上記使用の場合と同様に、全ての制限的な特質は、齧歯類を防除するための上記方法にも適用される。
【００３８】
本発明に従って使用される薬剤は、全てのタイプの殺鼠性毒餌の形態に製剤される。これらは、従来技術から充分に知られている。推奨され得るものは、ロールドオート、コムギ、トウモロコシなどの穀類を基にしたものである。これらは、１種類以上の穀物成分で構成される流し込み可能な毒餌、植物性脂肪及び小麦粉を基にした顆粒若しくはペレット、ワックスブロック、ソフト混合物若しくはペースト状混合物などの押出し加工された毒餌、又は、油性製剤若しくは水性製剤を基にしたゲルであり得る。特に推奨され得るものは、穀類又は小麦粉と植物性脂肪からなるペースト状の毒餌である。例えば、１０ｇ〜２００ｇのポーションパックに入れられたペースト状毒餌が極めて適している。
【００３９】
さらなる投与形態は、液体飲料又はゼラチン化飲料、並びに、さらに、粉末及び泡状物などの、所謂、接触剤である。これらの薬剤は、毒餌ではなく、当該齧歯類の毛皮に付着して毛繕い（ｃｌｅａｎｉｎｇ）をしている間に経口によってのみ摂取されるように、施用される。
【００４０】
次いで、ネズミ類を用いたさらなる実験（実施例３を参照されたい）において、驚くべきことに、さらに、ヒドロキシクマリンと低濃度（好ましくは、５０〜１００ｍｇ／ｋｇの濃度、及び、さらに一層好ましくは、７５〜１００ｍｇ／ｋｇの濃度）のコレカルシフェロールを含んでいる毒餌を摂食する第３日の間に、既に、摂食活動の完全な停止（「摂食停止効果（ｓｔｏｐ−ｆｅｅｄｉｎｇ  ｅｆｆｅｃｔ）」）が起こるということも分かった。このことは、特に、ヒドロキシクマリンと脂肪に溶解させたコレカルシフェロールが均一に分布しているものを含んでいる毒餌（好ましくは、ペースト状毒餌又はワックスブロック）を投与したときに観察することができる。コレカルシフェロールが脂肪に溶解していて均一に分布している毒餌の中の当該コレカルシフェロールの利用可能性が極めて優れているということは明らかである。当該物質は、急速に且つ実質的に完全に、消化管の中で摂取される。そのような実験において、特に驚いたのは、「摂食停止（ｓｔｏｐ−ｆｅｅｄｉｎｇ）」効果にもかかわらず、当該ネズミの少なくとも９０％が致死量の抗凝血薬を既に摂取していて、内出血で死亡したという事実であった。予想に反して、「摂食停止効果（ｓｔｏｐ−ｆｅｅｄｉｎｇ  ｅｆｆｅｃｔ）」に起因する摂食期間の短縮は、死亡率の大きな低下をもたらすことはなかった。
【００４１】
第１世代抗凝血薬（クマテトラリル；実施例３を参照されたい）を用いた実験においては、概して、毒餌の量の（例えば、該抗凝血薬を含んでいるがコレカルシフェロールは含んでいない同じ処方の毒餌）の約５０％〜６０％のみが摂取された。毒餌又は活性成分の摂取におけるこの低減の場合、当業者は、肝臓内で検出される抗凝血性活性成分の残留物は同じ割合で低下するということを期待したであろう。しかしながら、全く驚くべきことに、当該残留物が、コレカルシフェロールと組み合わされた当該抗凝血薬を与えられた実験グループにおいては、摂食量の割合から推測され得るよりも実質的にさらに低減されるということが分かった。
【００４２】
従って、本発明のさらなる実施形態においては、本発明による上記薬剤は、付加的に、特に、当該齧歯類の体内において（及び、特に、当該齧歯類の肝臓内において）、使用したヒドロキシクマリン類の残留値を低減させるためにも使用される。本発明による上記薬剤のそのような施用を用いることで、当該抗凝血薬の使用に伴う環境リスクは、大幅に低減される。これは、例えば、殺鼠性毒餌を摂食した齧歯類を食する捕食者（例えば、猛禽類、フクロウ類、又は、イタチ類）の二次中毒のリスクを包含する。本発明は、さらに、本発明による上記方法を提供し、ここで、該方法は、好ましくは、齧歯類の体内において、使用したヒドロキシクマリン類の残留値を低減させるためにも使用される。
【００４３】
［実施例］
実施例
実施例１：
抵抗性系統Ｙ１３９Ｃのドブネズミを用いた摂食実験；毒餌は、クマテトラリル（３７５ｍｇ／ｋｇ）及びコレカルシフェロール（１００ｍｇ／ｋｇ）を含んでいる
系統Ｙ１３９Ｃの６匹のドブネズミ（雄２匹、及び、雌４匹）に、以下に記載されているように、４日間にわたって、毒餌を与えた。その後、摂食量及び死亡率を求めた。１つのグループ（６匹のネズミ、グループ１）には、クマテトラリル（３７５ｍｇ／ｋｇ）とコレカルシフェロール（１００ｍｇ／ｋｇ）からなる毒餌を与えた。残りのグループ（グループ２）には、クマテトラリル単独（３７５ｍｇ／ｋｇ）を与えた。グループ２の１匹の動物を除いて、全ての動物は当該毒餌を摂食した。摂食は、最初の２４時間の期間が最も盛んであった。第３日及び第４日では、摂食はごく僅かであった。グループ１では、６匹全てのネズミは、実験開始の５〜７日後に死亡した。２匹の雄は、それぞれ、約４７ｍｇ／ｋｇのクマテトラリル及び１２．５ｍｇ／ｋｇのコレカルシフェロール（体重基準）を摂取した。当該雌は、５０〜７９ｍｇ／ｋｇのクマテトラリル及び１３〜２１ｍｇ／ｋｇのコレカルシフェロール（いずれの場合にも、体重基準）を摂取した。グループ２では、当該動物は９４ｍｇ／ｋｇのクマテトラリル（体重を基準とした平均値）を摂取したが、死亡事例は観察されなかった。クマテトラリルとコレカルシフェロールの組合せは、致死的であった。このことは、この組合せが系統Ｙ１３９Ｃの抵抗性ドブネズミに対して有効であることを示している。
【００４４】
実施例２：
ミュンスター地方抵抗性領域（ヴェストファーリア、ドイツ）における農場での野外実験
ブロマジオロン抵抗性系統Ｙ１３９Ｃが分布している主な領域は、ミュンスター地方（ドイツ）である。この抵抗性系統のネズミは、多くの畜産場において見いだすことができる。それらは、クマテトラリル並びに第２世代抗凝血薬のブロマジオロン及びジフェナクムに対して抵抗性を示す（Ｂｕｃｋｌｅ  ｅｔ  ａｌ．  ２０１２，  Ｐｅｓｔ  Ｍａｎａｇ  Ｓｃｉ  ６９：２３３−２３９；  Ｅｎｄｅｐｏｌｓ  ｅｔ  ａｌ．  ２００７，  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｐｅｓｔ  Ｍｇｔ．  ５３（４），  ２８５−２９０；  Ｅｎｄｅｐｏｌｓ  ｅｔ  ａｌ．  ２０１２，  Ｐｅｓｔ  Ｍａｎａｇ．  Ｓｃｉ．  ６８：３４８−３５４）。野外実験は、クマテトラリル（３７５ｍｇ／ｋｇ）とコレカルシフェロール（５０ｍｇ／ｋｇ）を含んでいる毒餌を使用して、上記のような農場で実施した。当該農場における抵抗性の頻度及び程度は、殺鼠性毒餌を用いて防除する前に確認した。この目的のために、ネズミを捕獲し、クマテトラリルを用いる血液凝固試験において試験した。結果：当該農場のネズミの約４６％が、６０〜８０の抵抗性因子で、クマテトラリルに対して抵抗性を示した。その後、当該毒餌を標準的な方法で３５日間施用した。防除結果は、７．３ｋｇの該毒餌を摂食した後で、９４％であった。一般に、このレベルの結果は、極めて優れた結果であると判断され、そして、効力を実証していると判断される。それは、周囲の土地からのネズミの移入がある実際的な条件下で防除結果を計算しなければならないからである。製品の公的認可に関しては、９０％の防除結果は、効力を実証しているものと判断される。従って、この野外実験の結果は、マテトラリルとコレカルシフェロールを含んでいる毒餌のブロマジオロン抵抗性系統Ｙ１３９Ｃに対する充分な効力を実証しているものと判断される。
【００４５】
実施例３：  摂食停止効果及び残留物低減の実験的証拠
方法：
野生系統のドブネズミ（Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）を用いた実験室実験において、コレカルシフェロールを添加したことを除いて同一の組成を有する２種類の毒餌の摂食量を比較した。両方の毒餌は、いずれも、脂肪に基づくペースト状毒餌であり、毒餌Ａは抗凝血薬クマテトラリル（３７５ｍｇ／ｋｇ）を含んでおり、毒餌Ｂはクマテトラリル（３７５ｍｇ／ｋｇ）及びコレカルシフェロール（１００ｍｇ／ｋｇ）を含んでいた。両方の毒餌は、それぞれが６匹の雄成体ネズミ及び雌成体ネズミを含んでいるグループに、１０日間、随意に与えられた。個体の１日当たりの摂食量を測定し、体重に関して計算した。この実験中に死亡した全てのネズミにおいて、肝臓の中のクマテトラリル残留物、及び、身体の残りの部分におけるクマテトラリル残留物を測定した。
【００４６】
結果：
グループＡ（クマテトラリルのみ）では、当該毒餌の摂食量は２２２．１ｇ／ｋｇであった。グループＢ（クマテトラリル及びコレカルシフェロール）では、１２６．５ｇ／ｋｇ（即ち、グループＡにおいて摂食された量の僅かに５７％）が摂食された。この差異は、グループＢにおける「摂食停止効果」に起因すると考えることが可能であり、この「摂食停止効果」によって、第３日における摂食が停止した（表４）。死亡率は、グループＡでは１１／１２であり、グループＢでは１２／１２であった。当該動物の肝臓の中のクマテトラリルの残存量は、摂食データに基づいて期待されたものと大きく異なっていた：グループＢでは、該残存量は、グループＡにおける値の僅かに３１％であった。
【００４７】
表４：  それぞれが１２匹のネズミを含んでいるグループにおける毒餌摂食量（ｇ／ｋｋｇ体重／日）、及び、肝臓内におけるクマテトラリルの残存量（平均値）。グループＡ：クマテトラリル（３７５ｍｇ／ｋｇ）；  グループＢ：クマテトラリル（３７５ｍｇ／ｋｇ）＋コレカルシフェロール（１００ｍｇ／ｋｇ）。
【表４】
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【国際調査報告】
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