【手続補正書】
【提出日】平成26年9月22日(2014.9.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
重鎖ポリペプチドおよび軽鎖ポリペプチドを含む単離したヒトモノクローナル抗体であって、
前記重鎖ポリペプチドは、配列番号2および配列番号142からなる群から選択されるアミノ酸配列に少なくとも90%同一である可変領域を含み、
前記軽鎖ポリペプチドは、配列番号19および配列番号144からなる群から選択されるアミノ酸配列に少なくとも90％同一である可変領域を含み、
EEKKGNYVVT（配列番号94）を含むペプチドに特異的に結合する、
抗体。
【請求項２】
前記重鎖ポリペプチドが、配列番号2のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の単離したヒトモノクローナル抗体。
【請求項３】
前記軽鎖ポリペプチドが、配列番号19のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の単離したヒトモノクローナル抗体。
【請求項４】
前記重鎖ポリペプチドが、配列番号2のアミノ酸配列に少なくとも95％同一である可変領域を含み、前記軽鎖ポリペプチドが、配列番号19のアミノ酸配列に少なくとも95％同一である可変領域を含む、請求項１に記載の単離したヒトモノクローナル抗体。
【請求項５】
前記重鎖ポリペプチドが、配列番号142のアミノ酸配列に少なくとも95％同一である可変領域を含み、前記軽鎖ポリペプチドが、配列番号144のアミノ酸配列に少なくとも95％同一である可変領域を含む、請求項1に記載の単離したヒトモノクローナル抗体。
【請求項６】
前記重鎖ポリペプチドが、配列番号2および配列番号142から選択され、前記軽鎖ポリペプチドが、配列番号19および144から選択される、請求項１に記載の単離したヒトモノクローナル抗体。
【請求項７】
EGFRvIII上のエピトープに特異的に結合する単離したヒトモノクローナル抗体であって、アミノ酸配列LEEKKGNYVVTDHC（配列番号56）に結合し、配列番号56の二番目のリジンが前記エピトープの一部である、抗体。
【請求項８】
EGFRvIIIに特異的に結合する単離したヒトモノクローナル抗体であって、請求項１に記載の抗体とEGFRvIIIへの結合に関して競合する、抗体。
【請求項９】
重鎖ポリペプチドおよび軽鎖ポリペプチドを含む単離したヒトモノクローナル抗体であって、
前記重鎖ポリペプチドが、配列番号138のアミノ酸配列に少なくとも90％同一である可変領域を含み、
前記軽鎖ポリペプチドが、配列番号140のアミノ酸配列に少なくとも90％同一である可変領域を含む、
抗体。
【請求項１０】
a)配列番号2のアミノ酸配列に少なくとも90％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチド、および、配列番号19のアミノ酸配列に少なくとも90％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチド；または
b)配列番号142のアミノ酸配列に少なくとも90％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチド、および、配列番号144のアミノ酸配列に少なくとも90％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチド
を含む、EGFRvIIIに結合するモノクローナル抗体。
【請求項１１】
請求項１から１０のいずれか一項に記載の単離したヒトモノクローナル抗体のアミノ酸配列中に5個以下のアミノ酸の置換、欠失または添加によって形成される変異体タンパク質である、単離したヒトモノクローナル抗体の変異体であって、前記変異体タンパク質が、配列LEEKKGNYVVTDHC（配列番号56）からなるペプチドに結合する、変異体。
【請求項１２】
配列番号56に特異的に結合する、請求項１から１１のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１３】
EGFRvIIIのエピトープに特異的に結合し、前記エピトープが配列LEEKKGNYVVTDHC（配列番号56）からなる、請求項１から１１のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１４】
配列LEEKKGNYVVTDHC（配列番号56）からなるペプチドに結合する、請求項１から１１のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１５】
配列EEKKGNYVVT（配列番号57）からなるエピトープに更に結合する、請求項１から１１のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１６】
配列LEEKKGNYVVTDHC（配列番号56）からなるエピトープの6位のグリシン残基を特異的に認識する、請求項１から１１のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１７】
EEKKGNYVVT（配列番号94）を含むペプチドに特異的に結合する、請求項１から１１のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１８】
抗体との結合に関与しているアミノ酸配列LEEKKGNYVVTDHC（配列番号56）中の残基が、EEK、KKNYV、LEK、EKNYおよびEEKGNからなる群から選択される、請求項１から１１のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１９】
野生型のEGFRペプチド（配列番号134）への非特異的な結合が、EGFRvIII（配列番号135）への特異的な結合の10％未満である、請求項１から１１のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２０】
上皮成長因子（EGF）の上皮成長因子受容体vIII（EGFRvIII）への結合を阻害する、請求項１から１１のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２１】
1.3×10-9M未満のKDを有する、請求項１から１１のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２２】
500pM未満のKDを有する、請求項１から１１のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２３】
インターナリゼーションされることができる、請求項１から１１のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２４】
前記重鎖ポリペプチドが、以下のアミノ酸配列：配列番号121、配列番号123および配列番号125の少なくとも1つを含む、請求項１、３、５、６から１０のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２５】
前記軽鎖ポリペプチドが、以下のアミノ酸配列：配列番号101、配列番号116および配列番号118の少なくとも1つを含む、請求項１、２、５、６から１０のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２６】
前記軽鎖ポリペプチドが、以下のアミノ酸配列：配列番号101、配列番号116および配列番号118の3つ全てを含む、請求項１、２、５、６から１０のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２７】
前記重鎖ポリペプチドが、以下のアミノ酸配列：配列番号121、配列番号123および配列番号125の3つ全てを含む、請求項１、３、５、６から１０のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２８】
前記重鎖ポリペプチドが、以下のアミノ酸配列：配列番号121、配列番号123および配列番号125の3つ全てを含み、前記軽鎖ポリペプチドが、以下のアミノ酸配列：配列番号101、配列番号116および配列番号118の3つ全てを含む、請求項１、５、６から１０のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２９】
前記重鎖ポリペプチドが、以下のアミノ酸配列：配列番号108、配列番号110および配列番号112の3つ全てを含む、請求項１、３、４、６から１０のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項３０】
前記軽鎖ポリペプチドが、以下のアミノ酸配列：配列番号101、配列番号103および配列番号105の3つ全てを含む、請求項１、２、４、６から１０のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項３１】
前記重鎖ポリペプチドが、以下のアミノ酸配列：配列番号108、配列番号110および配列番号112の3つ全てを含み、前記軽鎖ポリペプチドが、以下のアミノ酸配列：配列番号101、配列番号103および配列番号105の3つ全てを含む、請求項１、４、６から１０のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項３２】
前記重鎖ポリペプチドが、以下のアミノ酸配列：配列番号108、配列番号110および配列番号112の少なくとも1つを含む、請求項１、３、４、６から１０のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項３３】
前記軽鎖ポリペプチドが、以下のアミノ酸配列：配列番号101、配列番号103および配列番号105の少なくとも1つを含む、請求項１、２、４、６から１０のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項３４】
抗体に結合した標識を更に含む、請求項１から３３のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項３５】
前記標識が、3H、14C、15N、35S、90Y、99Tc、111In、125I、131I、ローダミン、ランタニド、リン、FITC、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、β-ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼおよびアルカリホスファターゼからなる群から選択される、請求項３４に記載の抗体。
【請求項３６】
前記標識が、放射標識、蛍光標識、酵素標識、化学発光標識およびビオチニル基からなる群から選択される、請求項３４に記載の抗体。
【請求項３７】
請求項１から３６のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体；および
標識
を含むキット。
【請求項３８】
前記標識が抗体に共有結合的に結合している、請求項３７に記載のキット。
【請求項３９】
前記標識が、放射標識、蛍光標識、酵素標識、化学発光標識およびビオチニル基からなる群から選択される、請求項３７に記載のキット。
【請求項４０】
前記標識が、3H、14C、15N、35S、90Y、99Tc、111In、125I、131I、ローダミン、ランタニド、リン、FITC、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、β-ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼおよびアルカリホスファターゼからなる群から選択される、請求項３７に記載のキット。
【請求項４１】
前記抗体が、EGFRへの結合を超えてEGFRvIIIへの結合に関して選択的である、請求項３７に記載のキット。
【請求項４２】
前記モノクローナル抗体に結合する二次抗体を更に含み、前記二次抗体が標記に結合している、請求項３７に記載のキット。
【請求項４３】
前記二次抗体が、抗-免疫グロブリンである、請求項４２に記載のキット。
【請求項４４】
前記標識が、モノクローナル抗体に結合している、請求項３７に記載のキット。
【請求項４５】
前記抗体が請求項１０に記載の抗体であり、ヒト抗体ではない、請求項３７に記載のキット。
【請求項４６】
前記抗体がマウスの定常領域を含む、請求項４５に記載のキット。
【請求項４７】
前記抗体がラットの定常領域を含む、請求項４５に記載のキット。
【請求項４８】
請求項１から３３のいずれか一項に記載の抗体を産生するハイブリドーマ細胞。
【請求項４９】
チャイニーズハムスター卵巣細胞である、請求項４８に記載の細胞。
【請求項５０】
請求項１から３３のいずれか一項に記載の抗体をコードする遺伝子を含む形質転換細胞。
【請求項５１】
請求項１から３３のいずれか一項に記載の少なくとも1つの抗体；および
存在する場合に、前記抗体のEGFRvIIIとの結合を示すための手段
を含む、哺乳類組織または細胞中のEGFRvIIIの検出のためのアッセイキット。
【請求項５２】
前記抗体が標識されている、請求項５１に記載のアッセイキット。
【請求項５３】
前記抗体が、非常識の第一の抗体であり、前記結合反応を示すための手段が、抗-免疫グロブリンである標識された第二の抗体である、請求項５１に記載のアッセイキット。
【請求項５４】
前記抗体が、蛍光色素、酵素、放射性核種および放射線不透過性物質からなる群から選択されるマーカーで標識されている、請求項５１に記載のアッセイキット。
【請求項５５】
請求項１から３３のいずれか一項に記載の抗体を接触させる工程；および
前記抗体に結合した標識の存在または非存在を検出する工程
を含む、EGFRvIIIを発現する細胞を検出する方法。
【請求項５６】
請求項１から３３のいずれか一項に記載の抗体を発現する細胞を提供する工程を含む、請求項１から３３のいずれか一項に記載の抗体を調製する方法。
【請求項５７】
前記抗体の提供が、前記抗体を産生するハイブリドーマ細胞を提供することによって実施される、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
前記ハイブリドーマ細胞が、前記抗体をコードする核酸配列を含む、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
配列番号19の軽鎖可変領域アミノ酸配列に少なくとも90％同一である軽鎖可変領域アミノ案配列；
配列番号2の重鎖可変領域アミノ酸配列に少なくとも90%同一である重鎖可変領域アミノ酸配列
を含む、タンパク質。
【請求項６０】
配列番号19中の軽鎖CDR1である軽鎖CDR1；
配列番号19中の軽鎖CDR2である軽鎖CDR2；および
配列番号19中の軽鎖CDR3である軽鎖CDR3；
を含む軽鎖可変領域：ならびに
配列番号2中の重鎖CDR1である重鎖CDR1；
配列番号2中の重鎖CDR2である重鎖CDR2；および
配列番号2中の重鎖CDR3である重鎖CDR3
を含む重鎖可変領域
を含む、タンパク質。
【請求項６１】
Fc鎖活性受容体に結合する、請求項59または60に記載のタンパク質。
【請求項６２】
CD3に結合する、請求項61に記載のタンパク質。
【請求項６３】
配列番号19中の軽鎖CDR1である軽鎖CDR1；
配列番号19中の軽鎖CDR2である軽鎖CDR2；
配列番号19中の軽鎖CDR3である軽鎖CDR3；
配列番号2中の重鎖CDR1である重鎖CDR1；
配列番号2中の重鎖CDR2である重鎖CDR2；および
配列番号2中の重鎖CDR3である重鎖CDR3
を含む、人工抗体。
【請求項６４】
二重特異的である、請求項63に記載の人工抗体。
【請求項６５】
単鎖を含む、請求項64に記載の人工抗体。
【請求項６６】
前記単鎖が、EGFRvIIIおよび他の分子に特異的である、請求項６５に記載の人工抗体。
【請求項６７】
前記他の分子が、CD3を含む、請求項66に記載の人工抗体。
【請求項６８】
配列番号19中の軽鎖CDR1である軽鎖CDR1；
配列番号19中の軽鎖CDR2である軽鎖CDR2；および
配列番号19中の軽鎖CDR3である軽鎖CDR3；
を含む、第一の軽鎖可変領域：
配列番号2中の重鎖CDR1である重鎖CDR1；
配列番号2中の重鎖CDR2である重鎖CDR2；および
配列番号2中の重鎖CDR3である重鎖CDR3；
を含む第一の重鎖可変領域：
CD3に結合する第二の軽鎖可変領域：ならびに
CD3に結合する第二の軽鎖可変領域
を含む、EGFRvIIIおよびCD3に結合する二重特異的抗体断片。
【請求項６９】
単鎖コンストラクトを含む、請求項68に記載の二重特異的抗体断片。
【請求項７０】
配列番号19中の軽鎖CDR1である軽鎖CDR1；
配列番号19中の軽鎖CDR2である軽鎖CDR2；
配列番号19中の軽鎖CDR3である軽鎖CDR3；
配列番号2中の重鎖CDR1である重鎖CDR1；
配列番号2中の重鎖CDR2である重鎖CDR2；および
配列番号2中の重鎖CDR3である重鎖CDR3
を含む、EGFRvIIIおよびCD3に結合する二重特異的抗体断片。
【請求項７１】
EGFRvIIIに対する特異性を付与する第一の重鎖および軽鎖の対；および
CD3に対する特異性を付与する第二の重鎖および軽鎖の対
を含む、BiTE（Bi-specific T-cell engager）タンパク質。
【請求項７２】
前記第一の重鎖および軽鎖の対が、
配列番号19中の軽鎖CDR1である軽鎖CDR1；
配列番号19中の軽鎖CDR2である軽鎖CDR2；
配列番号19中の軽鎖CDR3である軽鎖CDR3；
配列番号2中の重鎖CDR1である重鎖CDR1；
配列番号2中の重鎖CDR2である重鎖CDR2；および
配列番号2中の重鎖CDR3である重鎖CDR3
を含む、請求項71に記載のBiTEタンパク質。
【請求項７３】
配列番号19中の軽鎖CDR1である軽鎖CDR1；
配列番号19中の軽鎖CDR2である軽鎖CDR2；
配列番号19中の軽鎖CDR3である軽鎖CDR3；
配列番号2中の重鎖CDR1である重鎖CDR1；
配列番号2中の重鎖CDR2である重鎖CDR2；および
配列番号2中の重鎖CDR3である重鎖CDR3
を含む、BiTE（Bi-specific T-cell engager）タンパク質。
【請求項７４】
効果的な量のBiTE（Bi-specific T-cell engager）タンパク質を含む、配列番号56のアミノ酸配列を含むEGFRvIIIの発現と関連する細胞増殖を阻害するための組成物であって、
前記BiTEタンパク質が、
配列番号19中の軽鎖CDR1である軽鎖CDR1；
配列番号19中の軽鎖CDR2である軽鎖CDR2；
配列番号19中の軽鎖CDR3である軽鎖CDR3；
配列番号2中の重鎖CDR1である重鎖CDR1；
配列番号2中の重鎖CDR2である重鎖CDR2；および
配列番号2中の重鎖CDR3である重鎖CDR3
を含み、
前記BiTEタンパク質が、EGFRvIIIのLEEKKGNYVVTDHC（配列番号56）に結合する、組成物。
【請求項７５】
in vivoで使用されるものである、請求項74に記載の組成物。
【請求項７６】
哺乳動物に使用されるものである、請求項75に記載の組成物。
【請求項７７】
前記哺乳動物が、ヒトである、請求項76に記載の組成物。
【請求項７８】
前記哺乳類が、上皮細胞増殖を伴う癌に罹患している、請求項77に記載の組成物。
【請求項７９】
前記癌が、肺癌、大腸癌、胃癌、腎臓癌、前立腺癌、乳癌、膠芽細胞腫または卵巣癌を含む、請求項78に記載の組成物。
【請求項８０】
前記癌が、膠芽細胞腫である、請求項79に記載の組成物。