(57)【要約】  ブランクリポソームは、活性物質（例えば、薬物、美容活性物質、またはヘルスケア機能を有する物質など）が充填され得る、脂質および式Ｉのギンセノシドを含む膜を有する。
2018528269.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
膜を有するブランクリポソームであって、前記膜が、脂質と、式Ｉのギンセノシドとを含む、ブランクリポソーム：
【化１】
2018528269.tif 000093
式中、
Ｒ１およびＲ２のそれぞれが独立して、Ｈ、ＯＨまたはＲ５であり、ならびにＲ１およびＲ２は同時にともにＨではない；
Ｒ３は
【化２】
2018528269.tif 000094
または
【化３】
2018528269.tif 000095
である；
Ｒ４は、Ｈ、ＯＨまたはＲ５である；
Ｒ５は、Ｒ６、Ｒ７またはＲ８である；
Ｒ６は、−Ｏ−Ｇｌｃ、−Ｏ−Ｒｈａ、−Ｏ−Ｌｙｘ、−Ｏ−Ｘｙｌ、−Ｏ−Ａｒａ（ｐ）、−Ｏ−Ａｒａ（ｆ）、−Ｏ−Ｇｌｃ（２→１）Ｇｌｃ、−Ｏ−Ｇｌｃ（６→１）Ｇｌｃ、−Ｏ−Ｇｌｃ（２→１）Ｒｈａ、−Ｏ−Ｇｌｃ（２→１）Ｘｙｌ、−Ｏ−Ｇｌｃ（６→１）Ｘｙｌ、−Ｏ−Ｇｌｃ（６→１）Ｒｈａ、−Ｏ−Ｇｌｃ（２→１）Ａｒａ（ｐ）、−Ｏ−Ｇｌｃ（６→１）Ａｒａ（ｐ）、−Ｏ−Ｇｌｃ（２→１）Ａｒａ（ｆ）、−Ｏ−Ｇｌｃ（６→１）Ａｒａ（ｆ）、−Ｏ−Ｇｌｃ（２→１）Ｇｌｃ（２→１）Ｇｌｃ、−Ｏ−Ｇｌｃ（２→１）Ｇｌｃ（２→１）Ｘｙｌ、−Ｏ−Ｇｌｃ（６→１）Ｇｌｃ（６→１）Ｘｙｌ、−Ｏ−Ｇｌｃ（２→１）Ｇｌｃ（４→１）Ｘｙｌ、−Ｏ−Ｇｌｃ（２→１）Ｌｙｘ、−Ｏ−Ｇｌｃ（６→１）Ｌｙｘ、−Ｏ−Ｇｌｃ（２→１）Ｇｌｃ（２→１）Ｒｈａ、−Ｏ−Ｇｌｃ（２→１）Ｇｌｃ（２→１）Ｌｙｘ、−Ｏ−Ｇｌｃ（２→１）Ｇｌｃ（２→１）Ａｒａ（ｆ）、−Ｏ−Ｇｌｃ（２→１）Ｇｌｃ（２→１）Ａｒａ（ｐ）、−Ｏ−Ｇｌｃ（２→１）Ｇｌｃ（６→１）Ｇｌｃ、−Ｏ−Ｇｌｃ（２→１）Ｇｌｃ（６→１）Ｒｈａ、−Ｏ−Ｇｌｃ（２→１）Ｇｌｃ（６→１）Ｘｙｌ、−Ｏ−Ｇｌｃ（２→１）Ｇｌｃ（６→１）Ｌｙｘ、−Ｏ−Ｇｌｃ（２→１）Ｇｌｃ（６→１）Ａｒａ（ｆ）、−Ｏ−Ｇｌｃ（２→１）Ｇｌｃ（６→１）Ａｒａ（ｐ）、−Ｏ−Ｇｌｃ（６→１）Ｇｌｃ（２→１）Ｇｌｃ、−Ｏ−Ｇｌｃ（６→１）Ｇｌｃ（２→１）Ｒｈａ、−Ｏ−Ｇｌｃ（６→１）Ｇｌｃ（２→１）Ｘｙｌ、−Ｏ−Ｇｌｃ（６→１）Ｇｌｃ（２→１）Ｌｙｘ、−Ｏ−Ｇｌｃ（６→１）Ｇｌｃ（２→１）Ａｒａ（ｆ）、−Ｏ−Ｇｌｃ（６→１）Ｇｌｃ（２→１）Ａｒａ（ｐ）、−Ｏ−Ｇｌｃ（６→１）Ｇｌｃ（６→１）Ｇｌｃ、−Ｏ−Ｇｌｃ（６→１）Ｇｌｃ（６→１）Ｒｈａ、−Ｏ−Ｇｌｃ（６→１）Ｇｌｃ（６→１）Ｌｙｘ、−Ｏ−Ｇｌｃ（６→１）Ｇｌｃ（６→１）Ａｒａ（ｆ）または−Ｏ−Ｇｌｃ（６→１）Ｇｌｃ（６→１）Ａｒａ（ｐ）からなる群から選択される；
Ｒ７は、Ｒ６における１つまたは複数のＯＨ基をＲ８により置換することによって形成された基であり、前記１つまたは２つ以上のＲ８基のそれぞれが独立して、互いに同じまたは異なり得る；
Ｒ８は、
Ｉ）−ｍＰＥＧ、−Ｚ−ｍＰＥＧ、−ｍＰＥＯ、−Ｚ−ＰＥＯ、−ｍＰＶＰ、−Ｚ−ＰＶＰ、−ｍＥＰＥＧまたは−Ｚ−ＥＰＥＧ（式中、ｍは、Ｈ、アルキルまたはアシルであり、Ｚは、−ＣＯ（ＣＨ２）ａＣＯ−、−ＮＨ（ＣＨ２）ａＣＯ−、−ＮＨ（ＣＨ２）ｂＸ−または−ＣＯ−Ａｒ−ＣＨ２−であり、Ｘは、Ｏ、ＳまたはＮＨであり、ａは、１、２、３、４、５、６、７または８であり、ｂは、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０である）である；または
ＩＩ）Ｃ４〜２２脂肪族アシル、ホスファート基、コハク酸エステル基、ｎ−ブチル酸エステル基、スルホナート基、リンゴ酸エステル基または硫酸ナトリウム塩である；または
ＩＩＩ）Ｂｏｃ−グリシン、Ｂｏｃ−アラニン、Ｂｏｃ−アルギニン、Ｂｏｃ−リシン、Ｂｏｃ−セリン、アセチルフェニルアラニン、アセチル−プロリン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、トレオニン、トリプトファン、チロシンまたはバリンに含まれるカルボキシルを脱水素化することによって形成された基である；または
ＩＶ）−Ｏ−ＰＥＯ、−Ｏ−ＰＶＰ、−Ｏ−ＰＥＧ、−Ｏ−ＭＰＥＧ、−Ｏ−ＥＰＥＧ、−Ｏ−Ｇｌｃ（２→１）Ｇｌｃ（６→１）Ｍａｌまたは−Ｏ−Ｇｌｃ（２→１）Ｇｌｃ（６→１）Ａｃである；
Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２およびＲ１３のそれぞれが独立して、Ｃ１〜３アルキルである；
ｄおよびｅのそれぞれが独立して、１、２または３である；ならびに
前記式Ｉのギンセノシドは必要に応じて、その１つまたは複数のＯＨ基を１つまたは複数のＲ８基により置換することによって修飾することができ、および前記Ｒ８置換基（２つ以上のとき）のそれぞれは独立して互いに同じまたは異なり得る。
【請求項２】
前記ギンセノシドが、ギンセノシドＲｇ５、ギンセノシドＲｇ６、ギンセノシドＲｋ１、ギンセノシドＲｋ２、ギンセノシドＲｋ３、ギンセノシドＲｋ４、ギンセノシドＲｈ３、ギンセノシドＲｈ４、ギンセノシドＦ４、ギンセノシドＲｓ４、ギンセノシドＲｓ５、ギンセノシドＲｓ６、ギンセノシドＲｓ７、ノトギンセノシドＴ５、ダムリン（ｄａｍｕｌｉｎ）ＡまたはダムリンＢを含む、請求項１に記載のブランクリポソーム。
【請求項３】
前記膜における前記脂質がリン脂質を含み、前記リン脂質の前記ギンセノシドに対する質量比率が、０．５：１から１００：１までの範囲、０．５：１から２０：１までの範囲、または０．５：１から２：１までの範囲である、請求項１または２に記載のブランクリポソーム。
【請求項４】
前記膜における前記脂質がリン脂質を含み、前記膜がさらにコレステロールを含み、前記膜における前記リン脂質の、式Ｉの前記ギンセノシドに対する質量比率が、１：０．０１から１：３までの範囲、１：０．０５から１：０．９までの範囲、または１：０．１から１：０．９までの範囲であり、および、式Ｉの前記ギンセノシドの、前記コレステロールに対する質量比率が、０．１：１から１００：１までの範囲、０．５：１から１０：１までの範囲、または１．５：１から６：１までの範囲である、請求項１〜３の少なくとも一項に記載のブランクリポソーム。
【請求項５】
前記膜における前記式Ｉのギンセノシドの質量百分率が、０．０１％〜８０％、１０％〜８０％、１０％〜４０％、または２０％〜４０％の範囲であり、前記膜における前記リン脂質の質量百分率が、５％〜９９．９％、１０％〜７０％、３０％〜７０％、または３０％〜６０％の範囲にあり、および、前記膜における前記コレステロールの質量百分率が５０％未満である、または０．５％〜５０％、５％〜４０％、もしくは５％〜３０％の範囲である、請求項３または４に記載のブランクリポソーム。
【請求項６】
酸化防止剤、凍結保護剤、またはダイズ油および／もしくはオレイン酸ナトリウムをさらに含み、かつ、前記膜内に封入し、前記酸化防止剤のブランクリポソーム中の質量百分率が、２５％以下、０．００１％〜１５％の範囲、０．０１％〜１０％の範囲、または０．０１％〜５％の範囲であり、前記凍結保護剤のブランクリポソーム中の質量百分率が、８０％以下であり、または、０．５％〜６０％、５％〜６０％、もしくは３０％〜６０％の範囲であり、および、前記ダイズ油および／またはオレイン酸ナトリウムのブランクリポソーム中の質量百分率が、１％〜９０％、１５％〜８０％、２０％〜７０％、２０％〜３０％、または６０％〜７０％の範囲である、請求項３〜５の少なくとも一項に記載のブランクリポソーム。
【請求項７】
前記リン脂質が、天然のリン脂質、半合成のリン脂質、または全合成のリン脂質を含み、前記天然のリン脂質が、天然のレシチン、ダイズレシチン、卵レシチン、またはセファリンを含み、前記半合成のリン脂質または前記全合成のリン脂質が、ホスファチジルコリンのリン脂質、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルエタノールアミンのリン脂質、ホスファチジルグリセロール、ジセチルホスファート、ＰＥＧ修飾のリン脂質、コレステロールスクシナートまたは１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンを含み、ホスファチジルコリンの前記リン脂質が、水素化ダイズレシチン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコリン、ジミリストイルホスファチジルコリン、ジラウロイルホスファチジルコリン、ジオレオイルホスファチジルコリン、ホスファチジルコリン、単一パルミトイルホスファチジルコリンまたはグリセロールホスファチジルコリンを含み、ホスファチジルエタノールアミンの前記リン脂質が、１−パルミトイル−２−オレオイルホスファチジルエタノールアミン、ジラウロイルホスファチジルエタノールアミン、ジエルコイルホスファチジルエタノールアミン、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミンまたはジミリストイルホスファチジルエタノールアミンを含み、前記ＰＥＧ修飾のリン脂質が、ホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ、Ｃ８セラミド−ＰＥＧ、Ｃ１６セラミド−ＰＥＧ、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ−スクシニル、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ−カルボキシル、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ−マレイミド、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ−プロピオンアミドビス−メルカプトピリジン、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ−シアヌル酸塩化物、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ−アミノ、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ−ビオチン、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ−ホラート、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ−ホラート、ジラウロイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ−活性エステル、ホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ−活性エステル、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ−活性エステル、ジラウロイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ−活性エステル、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ−マレイミド、ホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ−マレイミド、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ−マレイミド、ジラウロイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ−マレイミド、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ−ビオチン、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ−フルオレセイン、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ−ヒドロキシル、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ−アミノ、ホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ−アミノ、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ−アミノ、ジラウロイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ−アミノ、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ−カルボキシル、ホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ−カルボキシル、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ−カルボキシル、ジラウロイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ−カルボキシル、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ−チオール、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ−シラン、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ−アジド、コレステロール−ＰＥＧ、メトキシル−ＰＥＧ−コレステロール、コレステロール−ＰＥＧ−活性エステル、コレステロール−ＰＥＧ−マレイミド、コレステロール−ＰＥＧ−ビオチン、コレステロール−ＰＥＧ−フルオレセイン、コレステロール−ＰＥＧ−カルボキシル、コレステロール−ＰＥＧ−アミノまたはコレステロール−ＰＥＧ−チオールを含み、前記酸化防止剤が、メタ重亜硫酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、没食子酸プロピル、アスコルビン酸、α−トコフェロール、α−ヒドロキシ酸、フラボノイド、フェニルプロパノイドフェノール系化合物、ビタミンＥ、ビタミンＣ、フマル酸、システイン、メチオニン、ブチルヒドロキシアニソール、ブチルヒドロキシトルエン、チオジプロピオン酸、亜硫酸塩、ヒドロ亜硫酸塩、ジチオアミノ安息香酸化合物、クエン酸、リンゴ酸、ソルビトール、グリセロール、プロピレングリコール、ヒドロキノン、ヒドロキシクマリン、エタノールアミン、リン酸または亜リン酸を含み、前記凍結保護剤が、糖質、ポリオール、アミノ酸または緩衝剤試薬を含み、前記糖質が、単糖、二糖または多糖を含み、前記単糖が、グルコース、マンニトール、キシリトールまたはソルビトールを含み、前記二糖が、スクロース、ラクトース、マルトースまたはガラクトースを含み、前記多糖がトレハロースを含み、前記ポリオールがプロパンジオールまたはグリセロールを含み、前記アミノ酸が、トレオニン、グリシン、グルタミン酸、アルギニンおよびヒスチジンからなる群から選択されるα−アミノ酸を含み、前記緩衝剤試薬が、ｐＨが３〜１０の範囲または５〜７の範囲である緩衝液を含み、前記緩衝液が、エタノール−酢酸緩衝液、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン緩衝液、バルビタール緩衝液、ギ酸ナトリウム緩衝液、フタル酸塩緩衝液、クエン酸塩緩衝液、クエン酸−リン酸水素二ナトリウム緩衝液、アンモニア−塩化アンモニウム緩衝液、ホウ砂−塩化カルシウム緩衝液、酢酸塩緩衝液、酢酸−リチウム塩緩衝液、酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液、酢酸−酢酸アンモニウム緩衝液、リン酸−トリエチルアミン緩衝液またはリン酸塩緩衝液を含む、請求項３〜６の少なくとも一項に記載のブランクリポソーム。
【請求項８】
界面活性剤、感熱性賦形剤、ｐＨ感受性材料またはイオン添加剤をさらに含み、かつ、前記膜内に封入し、前記界面活性剤がポリエチレングリコールおよび／またはポリソルベートを含み、前記ポリエチレングリコールが２００〜８０００の数平均分子量を有し、前記ポリソルベートが、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウラート、ポリオキシエチレンソルビタンモノパルミタート、ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート、ポリオキシエチレンソルビタントリオレアート、ＰＥＧ−ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ−ポリ乳酸、ポリリシン−ポリ（乳酸−グリコール酸共重合体）、ポリエーテルイミド−ポリ乳酸、ＰＥＧ−ポリカプロラクトン、ＰＥＧ−ポリ（乳酸−グリコール酸共重合体）、ポロキサマー１８８、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン脂肪酸エーテルまたはポリオキシエチレンメチルヒマシ油エーテルを含み、前記感熱性賦形剤が、ポリマー、薬物または界面活性剤を含み、かつ、熱感受性を前記リポソームにもたらし、前記ポリマーが、ポリイソプレンアクリルアミド、ポリイソプレンアクリル酸、ポリホスファート、またはポリリン脂質−アミドコポリマーを含み、前記薬物が、ガジュツウコン油、エレメンまたはニガキモドキ（ｂｒｕｃｅａ  ｊａｖａｎｉｃａ）油を含み、前記イオン添加剤がカチオン性添加剤またはアニオン添加剤を含み、前記カチオン性添加剤がオクタデシルアミンを含み、前記アニオン添加剤がホスファチジン酸またはホスファチジルセリンを含む、請求項１〜７の少なくとも一項に記載のブランクリポソーム。
【請求項９】
請求項１〜８の少なくとも一項に記載のブランクリポソームを調製するためのプロセスであって、第１の方法または第２の方法を含み、前記第１の方法または前記第１の方法によって調製された前記ブランクリポソームは凍結保護剤を含まず、および、前記第２の方法または前記第２の方法によって調製された前記ブランクリポソームは凍結保護剤を含み、
前記第１の方法が、下記の工程：
（１）脂質および式Ｉのギンセノシドと、必要な場合にはコレステロール、疎水性の酸化防止剤、ダイズ油および／もしくはオレイン酸ナトリウム、疎水性の界面活性剤、疎水性の感熱性賦形剤、疎水性のｐＨ感受性材料ならびに／または疎水性のイオン添加剤とを有機溶媒中において混合して、透明な溶液を得る工程；ならびに
（２）工程（１）で得られる前記透明な溶液の前記有機溶媒を除き、薄膜を形成させ、前記薄膜を、親水性の酸化防止剤、親水性の界面活性剤、親水性の感熱性賦形剤、親水性のｐＨ感受性材料および／または親水性のイオン添加剤を含有してもよい水と混合して、水性混合物を得て、前記混合物を、超音波の、高圧均質化のまたはメンブランを押し通す操作の後でろ過して、ブランクリポソームを含有する水溶液を得て、乾燥して、前記ブランクリポソームを得る工程
を含み、
前記第２の方法が、下記の工程：
（１）脂質および式Ｉのギンセノシドと、必要な場合にはコレステロール、疎水性の酸化防止剤、ダイズ油および／もしくはオレイン酸ナトリウム、疎水性の界面活性剤、疎水性の感熱性賦形剤、疎水性のｐＨ感受性材料ならびに／または疎水性のイオン添加剤とを有機溶媒中において混合して、透明な溶液を得る工程；ならびに
（２）工程（１）で得られる前記透明な溶液の前記有機溶媒を除き、薄膜を形成させ、前記薄膜を、凍結保護剤と、必要な場合には親水性の酸化防止剤、親水性の界面活性剤、親水性の感熱性賦形剤、親水性のｐＨ感受性材料および／または親水性のイオン添加剤とを含有する水溶液と混合して、混合物を得て、前記混合物を、超音波の、高圧均質化のまたはメンブランを押し通す操作の後でろ過して、ブランクリポソームを含有する水溶液を得て、乾燥して、前記ブランクリポソームを得る工程
を含み、
前記脂質、前記式Ｉのギンセノシド、前記コレステロール、前記酸化防止剤、前記ダイズ油および／またはオレイン酸ナトリウム、前記凍結保護剤、前記界面活性剤、前記感熱性賦形剤、前記ｐＨ感受性材料、ならびに前記イオン添加剤は、請求項１〜８において定義される通りであり、ならびに、前記有機溶媒は、ニトリル溶媒、Ｃ１〜４アルコール溶媒、ケトン溶媒、アルカン溶媒、エーテル溶媒、ハロゲン化炭化水素溶媒、スルホキシド溶媒またはアルデヒド溶媒を含む、プロセス。
【請求項１０】
前記有機溶媒が、Ｃ１〜４アルコール溶媒、ニトリル溶媒、エーテル溶媒またはハロゲン化炭化水素溶媒を含み、前記ニトリル溶媒がアセトニトリルを含み、前記Ｃ１〜４アルコール溶媒が、メタノール、エタノール、イソプロパノールまたはｎ−ブタノールを含み、前記エーテル溶媒がテトラヒドロフランまたはジエチルエーテルを含み、前記ハロゲン化炭化水素溶媒がクロロホルムまたはジクロロメタンを含み、前記ケトン溶媒がアセトンまたはブタノンを含み、前記アルカン溶媒が石油エーテルを含み、前記第１または第２の方法の工程（１）における前記有機溶媒の体積の、前記有機溶媒に溶解された成分の総質量に対する比率が、５ｍＬ／ｇ〜２０ｍＬ／ｇであり、前記第１または第２の方法の工程（１）が、０℃〜８０℃、１０℃〜８０℃、または１０℃〜６５℃の温度で行われ、前記第１または第２の方法の工程（２）において、工程（１）で得られる前記透明な溶液の前記有機溶媒の除去が、ロータリーエバポレーターまたは膜エバポレーターを用いて２５℃〜８０℃の温度で行われ、
前記第１の方法または第２の方法の工程（２）において、前記ろ過が微多孔膜ろ過であり、前記微多孔膜の細孔サイズが好ましくは０．２２ミクロンであり、および
前記第２の方法の工程（２）において、前記凍結保護剤水溶液が５％〜１０％の質量百分率の前記凍結保護剤を有し、
前記第１の方法または第２の方法の工程（２）において、凍結乾燥機が乾燥のために使用される、請求項９に記載のプロセス。
【請求項１１】
活性物質を充填するおよび膜内に封入するリポソームを調製することにおける、請求項１〜８の少なくとも一項に記載のブランクリポソームの使用であって、前記活性物質が、薬物、美容活性物質、またはヘルスケア機能を有する物質を含む、使用。
【請求項１２】
請求項１〜８の少なくとも一項に記載のブランクリポソームと、前記リポソーム膜内に充填されたおよび封入された活性物質とを含む充填型リポソームであって、前記活性物質が、薬物、美容活性物質、またはヘルスケア機能を有する物質を含み、および、前記リポソームが請求項１〜８の少なくとも一項に記載のブランクリポソームである、充填型リポソーム。
【請求項１３】
前記薬物が、抗腫瘍薬、抗真菌薬、抗ウイルス薬、抗生物質、非ステロイド性抗炎症薬、カルシウムイオンアンタゴニスト、免疫抑制剤、麻酔剤、心臓血管薬もしくは血管拡張薬、胃腸薬、抗うつ薬、生物学的作用因子、ポリヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド（リボヌクレオチドおよびデオキシリボヌクレオチドを含む）を含み、前記抗腫瘍薬が、パクリタキセル、ドセタキセル、カバジタキセル、イリノテカン塩酸塩、ヒドロキシカンプトテシン、アミノカンプトテシン、７−エチル−１０−ヒドロキシカンプトテシン、トポテカン塩酸塩、ルルトテカン（ｌｕｒｔｏｔｅｃａｎ）、トポテカン、ベロテカン（ｂｅｌｏｔｅｃａｎ）、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ネダプラチン、ロバプラチン（ｌｏｂａｐｌａｔｉｎ）、サトラプラチン、ミリプラチン、アミル白金（ａｍｙｌ  ｐｌａｔｉｎｕｍ）、アロプラチン（ａｒｏｐｌａｔｉｎ）、カルムスチン、クロラムブシル、メルファラン、ハリングトニン、ホモハリングトニン、トリプトリド（ｔｒｉｐｔｏｌｉｄｅ）、タクロリムス、ダウノルビシン、ピンヤンマイシン（ｐｉｎｇｙａｎｇｍｙｃｉｎ）、塩酸ドキソルビシン、イダルビシン、フルオロウラシル、シタラビン、メトトレキサート、エトポシドリン酸塩、デスオキシ−ポドフィロトキシン、フペルジン（ｈｕｐｅｒｚｉｎｅ）−Ａ、ビノレルビン酒石酸塩、ビンクリスチン硫酸塩、ビンブラスチン硫酸塩、ビノレルビン、ビンデシン硫酸塩、テモゾロミド、テガフール、シクロホスファミド、イホスファミド、ダカルバジン、エポチロンＡ、エポチロンＢ、エポチロンＣ、エポチロンＤ、エポチロンＥ、エポチロンＦ、ボルテゾミブ、ゲムシタビン塩酸塩、フルダラビンリン酸塩、カペシタビン、デシタビン、ペメトレキセド二ナトリウム、ソラフェニブ、組換えヒトインターフェロンａ２ｂ、シトシンアラビノシド、ａｌｌ−ｔｒａｎｓ−レチノイン酸、インターロイキン−２、エトポシド、チミジル酸シンターゼ阻害剤、ミトキサントロン、ミノキシジル、アジスロマイシン、エピルビシン塩酸塩、塩酸ドキソルビシン（アドリアマイシン）、アムルビシン塩酸塩、５−アミノレブリン酸、ゲフィチニブ、イマチニブ、エルロチニブ、スニチニブ、ダサチニブ、ラパチニブ、アキシチニブ、アパチニブ、ニロチニブ、ボスチニブ、バンデタニブ、テラチニブ（ｔｅｌａｔｉｎｉｂ）、ネラチニブ、カルネチニブ、サラカチニブ（ｓａｒａｃａｔｉｎｉｂ）、オクテニジン（ｏｃｔｅｎｉｄｉｎｅ）、ソラフェニブ、イコチニブ（ｉｃｏｔｉｎｉｂ）、ムブリチニブ（ｍｕｂｒｉｔｉｎｉｂ）、レスタウルチニブ、タンズチニブ（ｔａｎｄｕｔｉｎｉｂ）、ドビチニブ（ｄｏｖｉｔｉｎｉｂ）、３’，５’−ジパルミトイルシクロシチジンまたはクルクメノール（ｃｕｒｃｕｍｅｎｏｌ）を含み、前記抗真菌薬が、アムホテリシンＢ、ゲンタマイシン、インドメタシン、ペニシリンＧ、エコナゾール硝酸塩、フルシトシン、フルコナゾール、イトラコナゾール、ボリコナゾール、ポサコナゾール、ラブコナゾール、カスポファンギン、ミカファンギン、アニデュラファンギン、セフピラミドナトリウム、セフォタキシムナトリウム、セフトリアキソン、セフォペラゾン、セフジトレ���ピボキシル、セフォキシチンナトリウム、セファレキシン、セフロキシムナトリウム、セフィキシム、セフポドキシム、セフメノキシム、セフォジジム、セフスロジン、セファゾナム（ｃｅｆａｚｏｎａｍ）、セフチゾキシム、セフェタメトピボキシル、セフテラムピボキシル、セフチブテン、セフジニル、セファマンドール、セフォチアム、セフォラニド、セフォニシド、セフタジジム、セフラジン、セフプロジル、セファゾリンナトリウム、セファドロキシル、セファロチン、セファチアミジン（ｃｅｆａｔｈｉａｍｉｄｉｎｅ）、セファロリジン、セファセトリル、セフタゾール、セファピリン、セフピロム、セフクリジン（ｃｅｆｃｌｉｄｉｎ）、セフェピム、フシジン酸ナトリウム、フロルフェニコールまたはチゲサイクリンを含み、前記抗ウイルス薬が、リバビリン、アシクロビル、シタラビン、イドクスウリジン、アシクロビルラウラート、アシクロビルパルミタート、ヨードデオキシウリジン、シクロシチジン、ジパルミトイルシクロシチジン、リン酸ホルマート、リン酸アセタート、シメチジン、ジピリダモール、リファンピン、イソニアジド、プラジクワンテル、ドキシサイクリン、サキナビル、インジナビル、リトナビル、ネルフィナビル、アンプレナビル、チプラナビル、ＢＭＳ２３２６３２、ラミブジン、ジドブジン、ジダノシン、ザルシタビン、スタブジン、アバカビル、アデホビルジピボアイル（ａｄｅｆｏｖｉｒｄｉｐｉｖｏａｉｌ）、テノホビ（ｔｅｎｏｆｏｖｉ）、フルオロラミブジン、ネビラピン、デラビルジン、エファビレンス（ｅｆａｖｉｒｅｎｓ）、インターロイキン−２、チルミコシンまたはジクラズリルを含み、前記抗生物質が、ペニシリン、ペニシリンＶ、アモキシシリン、アンピシリン、オキサシリン、クロキサシリン、プロカインペニシリン、ベンザチンペニシリン、ピペラシリン、メズロシリン、チカルシリン、アズロシリン、メズロシリン、カルベニシリン、スルベニシリン、フルブシリン（ｆｕｒｂｕｃｉｌｌｉｎ）、ナフシリン、ジクロキサシリン、ピバンピシリン、アパルシリン（ａｐａｌｃｉｌｌｉｎ）、アスポキシシリン、ピブメシリナム、メチシリン、レナンピシリン（ｌｅｎａｍｐｉｃｉｌｌｉｎ）、ホミダシリン（ｆｏｍｉｄａｃｉｌｌｉｎ）、フルクロキサシリン、カナマイシン、ナタマイシン（ｎａｔａｍｙｃｉｎ）、マイトマイシン、アミカシン、チロシン、ベルテポルフィン、セフピラミドナトリウム、ネチルマイシン硫酸塩、アジスロマイシン、オフロキサシン、シプロフロキサシン、エノキサシン、ロメフロキサシン、ペフロキサシン、ルフロキサシン、スパルフロキサシン、フレロキサシン、モキシフロキサシン、グレパフロキサシン、トロバフロキサシン、ノルフロキサシン、ゲミフロキサシン、ガチフロキサシン、トスフロキサシン、パズフロキサシン、スパルフロキサシン、クラリスロマイシン、クリンダマイシン、ポリミキシン、トブラマイシン、バンコマイシン、アジスロマイシン、ドキシサイクリン、テトラサイクリン、オキシテトラサイクリン、ミノサイクリン、オーレオマイシン、グアメサイクリン（ｇｕａｍｅｃｙｃｌｉｎｅ）、デメクロサイクリン、メタサイクリン、エチマイシン（ｅｔｉｍｉｃｉｎ）、ネチル���イシン、シソマイシン、アミカシン、アルベカシン、ジベカシン、アズトレオナム、メロペネム、イミペネム、チエナマイシン、パニペネム、エルタペネム、ネオマイシン、パロモマイシンまたはスペクチノマイシンを含み、前記カルシウムイオンアンタゴニストが、ニモジピン、ニフェジピン、ニカルジピン、ニトレンジピン、ベラパミル、アムロジピン、ジルチアゼム、フルナリジン、プレンブラミン（ｐｒｅｎｖｌａｍｉｎｅ）、ガロパミルまたはチアパミルを含み、前記非ステロイド性抗炎症薬が、インドメタシン、アスピリン、パラセタモール、ナプロキセン、ジクロフェナク、イブプロフェン、ニメスリド、ロフェコキシブまたはセレコキシブを含み、前記免疫抑制剤が、シクロスポリン（ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎ）、アルプロスタジル、シクロスポリン（ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ）、タクロリムス、ラパマイシン、ミコフェノール酸モフェチルまたはミゾリビンを含み、前記麻酔薬が、ハロタン、セボフルラン、イソフルラン、エンフルラン、プロポフォール、フェンタニル、ウレタン、リドカイン、プロカイン、テトラカイン、ブピバカイン、ペルトバルビタラムナトリクム（ｐｅｌｌｔｏｂａｒｂｉｔａｌｕｍ  ｎａｔｒｉｃｕｍ）、抱水クロラール、ケタミン、モルヒネまたはクロラロースを含み、前記心臓血管薬または血管拡張薬が、ダビガトランエテキシラート、アログリプチン、多糖類ナトリウム、ギンコライド、イチョウフラボノイド、イチョウエキス、アサロン、オルメサルタンメドキソミ、レパグリニド、リポ酸、ブレビスカピン（ｂｒｅｖｉｓｃａｐｉｎｅ）、ウラピジル、ナイアシン、カプトプリル、ロサルタン、プエラリン、タンシノン（ｔａｎｓｈｉｎｏｎｅ）ＩＩＡ、サルポグレラート塩酸塩、フルバスタチン、プラバスタチン、シンバスタチン、ロバスタチン、シンバスタチン、メバスタチン、セリバスタチン、ロスバスタチン、アトルバスタチンカルシウムまたはロスバスタチンカルシウムを含み、前記胃腸薬が、オメプラゾール、ランソプラゾール、イラプラゾール（ｉｌａｐｒａｚｏｌｅ）、パントプラゾール、ラベプラゾール、テラゾシン、エソメプラゾール、テナトプラゾール、レミノプラゾール、テナトプラゾール、ジスプラゾール（ｄｉｓｕｐｒａｚｏｌｅ）またはラフチジン（ｌａｆｕｔｉｄｉｎｅ）を含み、前記抗うつ薬が、アゴメラチン、フルオキセチン、パロキセチン、デュロキセチン、セルトラリン、フルボキサミン、シタロプラム、エスシタロプラム、ベンラファキシン、ミルタザピン、イミプラミン、アミトリプチリン、クロミプラミン、ドキセピン、レメロン、ベンラファキシム（ｖｅｎｌａｆａｘｉｍｅ）、フェネルジン、イソカルボキサジドまたはトラニルシプロミンを含み、
前記ポリヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチドが、遺伝機能を有し、および、Ａ、Ｔ、Ｃ、ＧまたはＵなどの塩基性基からなるフラグメントを含み、
前記生物学的作用因子が、従来のモノ抗体薬物、インスリン、ガンマグロブリン、抗毒素血清、インターフェロン、インターロイキン、腫瘍壊死因子、皮膚の活性因子、上皮増殖因子、インフルエンザワクチン、Ａ型肝炎ワクチン、ガンワクチン、組換えヒト酸性線維芽細胞増殖因子または血管内皮増殖因子２モノクローナル抗体を含み、
前記美容活性物質が、ウルソル酸、スーパーオキシドジスムターゼ、生物学的タンパク質Ｔ４Ｎ５、ビタミンＤ２、ニコチン酸メチル、精製ヘビ油、ヒアルロン酸、精油またはセラミドを含み、
ヘルスケア機能を有する前記物質が、グリチルリチン、グリチルリチン酸、グリチルリチン酸二ナトリウム、グリチルリチン酸メチル、グリチルリチン酸二アンモニウム、ビタミンＥ、レスベラトロール、補酵素Ｑ１０、シリマリン、アントシアニン、プロアントシアニジン、ルテイン、葉酸、フォリン酸、クルクミン、エモジン、茶ポリフェノール、没食子酸エピガロカテキン、カテキン、ブルーベリー抽出物、グルタチオンまたはオキシマトリンを含む、
請求項１１に記載の使用または請求項１２に記載の充填型リポソーム。
【請求項１４】
前記充填型リポソームが、注入、凍結乾燥注入、経口投与または局所投与のために好適である形態である、請求項１１に記載の使用または請求項１２に記載の充填型リポソーム。
【請求項１５】
前記薬物が、パクリタキセル、ドセタキセルまたはイリノテカン塩酸塩を含み、前記リポソームがリン脂質および式Ｉのギンセノシドを含み、前記ギンセノシドがギンセノシドＲｇ５を含み、および、前記リン脂質の前記ギンセノシドＲｇ５に対する質量比率が、０．５：１から１００：１までの範囲、０．５：１から２０：１までの範囲、または０．５：１から４：１までの範囲である、請求項１２〜１４の少なくとも一項に記載の充填型リポソーム。
【請求項１６】
前記リポソームがコレステロールをさらに含み、前記リン脂質のギンセノシドＲｇ５に対する質量比率が、１：０．０１から１：３までの範囲、１：０．０５から１：０．９までの範囲、または１：０．１から１：０．９までの範囲であり、および、ギンセノシドＲｇ５の前記コレステロールに対する質量比率が、０．１：１から１００：１までの範囲、０．５：１から５０：１までの範囲、または０．５：１から１０：１までの範囲である、請求項１５に記載の充填型リポソーム。
【請求項１７】
前記ブランクリポソームにおけるギンセノシドＲｇ５の質量百分率が、０．０１％〜８０％、１０％〜８０％、１０％〜４０％、または２０％〜４０％の範囲であり、前記ブランクリポソームにおける前記リン脂質の質量百分率が、５％〜９９．９％、１０％〜７０％、３０％〜７０％、または３０％〜６０％の範囲であり、および、前記ブランクリポソームにおける前記コレステロールの質量百分率が、０％〜５０％、０．５％〜５０％、５％〜４０％、または５％〜３０％の範囲である、請求項１５または１６に記載の充填型リポソーム。
【請求項１８】
酸化防止剤、凍結保護剤、またはダイズ油および／もしくはオレイン酸ナトリウムをさらに含みならびに前記リポソーム膜内に封入し、前記酸化防止剤（存在するとき）の前記ブランクリポソームにおける質量百分率が２５％以下であり、または、０．００１％〜１５％、０．０１％〜１０％、もしくは０．０１％〜５％の範囲であり、前記凍結保護剤（存在するとき）の前記ブランクリポソームにおける質量百分率が８０％以下であり、または、０．５％〜６０％、５％〜６０％、もしくは３０％〜６０％の範囲であり、ならびに前記ダイズ油および／またはオレイン酸ナトリウム（存在するとき）の前記ブランクリポソームにおける質量百分率が、１％〜９０％、１５％〜８０％、２０％〜７０％、２０％〜３０％、または６０％〜７０％の範囲である、請求項１５〜１７の少なくとも一項に記載の充填型リポソーム。
【請求項１９】
前記リン脂質が、ダイズレシチン、卵レシチンまたはジミリストイルホスファチジルコリンを含み、前記酸化防止剤が、アスコルビン酸、ビタミンＥ、ビタミンＣまたはトレオニンを含み、前記凍結保護剤が、グルコース、マンニトール、キシリトール、スクロース、ラクトース、トレハロースまたはプロパンジオールを含む、請求項１８に記載の充填型リポソーム。
【請求項２０】
請求項１２〜１９の少なくとも一項に記載の充填型リポソームを調製するためのプロセスであって、前記リポソームが凍結保護剤を含むときには、前記充填型リポソームを調製するための前記プロセスは、方法Ａ、方法Ｂ、方法Ｃおよび方法Ｄのいずれかを含み、前記リポソームが凍結保護剤を含有せずまたは含まない（ｎｏｔ  ｃｏｎｔａｉｎ  ｏｒ  ｉｎｃｌｕｄｅ）ときには、前記充填型リポソームを調製するための前記プロセスは、方法Ａ１、方法Ｂ１、方法Ｃ１および方法Ｄ１のいずれか１つを含み、
方法Ａが、
（１）前記脂質、前記式Ｉのギンセノシド、および前記活性物質と、必要な場合にはコレステロール、疎水性の酸化防止剤、ダイズ油および／もしくはオレイン酸ナトリウム、疎水性の界面活性剤、疎水性の感熱性賦形剤、疎水性のｐＨ感受性材料ならびに／または疎水性のイオン添加剤とを有機溶媒中において混合して、透明な溶液を得る工程；ならびに
（２）工程（１）で得られる前記透明な溶液の前記有機溶媒を除き、薄膜を形成させ、前記薄膜を、凍結保護剤と、必要な場合には親水性の酸化防止剤、親水性の界面活性剤、親水性の感熱性賦形剤、親水性のｐＨ感受性材料および／または親水性のイオン添加剤とを含有する水溶液と混合して、混合物を得て、前記混合物を、超音波の、前記混合物の高圧均質化の、または前記混合物のメンブランを押し通す操作の後でろ過して、前記活性物質が充填された前記リポソームを含有する水溶液を得て、乾燥して、前記充填型リポソームを得る工程
を含み、
方法Ｂが、
（１）前記脂質および前記式Ｉのギンセノシドと、必要な場合にはコレステロール、疎水性の酸化防止剤、ダイズ油および／もしくはオレイン酸ナトリウム、疎水性の界面活性剤、疎水性の感熱性賦形剤、疎水性のｐＨ感受性材料ならびに／または疎水性のイオン添加剤とを有機溶媒中において混合して、透明な溶液を得る工程；ならびに
（２）工程（１）で得られる前記透明な溶液の前記有機溶媒を除き、薄膜を形成させ、前記薄膜を、活性物質ならびに凍結保護剤、必要な場合には親水性の酸化防止剤、親水性の界面活性剤、親水性の感熱性賦形剤、親水性のｐＨ感受性材料および／または親水性のイオン添加剤を含有する水溶液と混合して、混合物を得て、超音波の、前記混合物の高圧均質化の、または前記混合物のメンブランを押し通す操作の後で充填型リポソームの溶液を得て、透析およびろ過して、前記活性物質が充填された前記リポソームを含有する水溶液を得て、乾燥して、前記充填型リポソームを得る工程
を含み、
方法Ｃが、
（１）前記脂質および前記式Ｉのギンセノシドと、必要な場合にはコレステロール、疎水性の酸化防止剤、ダイズ油および／もしくはオレイン酸ナトリウム、疎水性の界面活性剤、疎水性の感熱性賦形剤、疎水性のｐＨ感受性材料ならびに／または疎水性のイオン添加剤とを有機溶媒中において混合して、透明な溶液を得る工程；ならびに
（２）工程（１）で得られる前記透明な溶液の前記有機溶媒を除き、薄膜を形成させ、前記薄膜を、硫酸アンモニウムおよび凍結保護剤と、必要な場合には親水性の酸化防止剤、親水性の界面活性剤、親水性の感熱性賦形剤、親水性のｐＨ感受性材料および／または親水性のイオン添加剤とを含有する水溶液と混合して、混合物を得て、超音波の、前記混合物の高圧均質化の、または前記混合物のメンブランを押し通す操作の後でブランクリポソームの溶液を得て、透析し、その後、活性物質と混合し、ろ過して、前記活性物質が充填されたリポソームを含有する水溶液を得て、乾燥して、前記充填型リポソームを得る工程
を含み、
方法Ｄが、
（１）前記脂質および前記式Ｉのギンセノシドと、必要な場合にはコレステロール、疎水性の酸化防止剤、ダイズ油および／もしくはオレイン酸ナトリウム、疎水性の界面活性剤、疎水性の感熱性賦形剤、疎水性のｐＨ感受性材料ならびに／または疎水性のイオン添加剤とを有機溶媒中において混合して、透明な溶液を得る工程；ならびに
（２）工程（１）で得られる前記透明な溶液の前記有機溶媒を除き、薄膜を形成させ、前記薄膜を、クエン酸ならびに凍結保護剤、必要な場合には親水性の酸化防止剤、親水性の界面活性剤、親水性の感熱性賦形剤、親水性のｐＨ感受性材料および／または親水性のイオン添加剤を含有する水溶液と混合して、混合物を得て、超音波の、前記混合物の高圧均質化の、または前記混合物のメンブランを押し通す操作の後でブランクリポソームの溶液を得て、前記溶液を、活性物質およびリン酸水素二ナトリウムの水溶液と混合し、ろ過して、前記活性物質が充填されたリポソームを含有する水溶液を得て、乾燥して、前記充填型リポソームを得る工程
を含み、
方法Ａ１が、
（１）前記脂質、前記式Ｉのギンセノシド、および活性物質と、必要な場合にはコレステロール、疎水性の酸化防止剤、ダイズ油および／もしくはオレイン酸ナトリウム、疎水性の界面活性剤、疎水性の感熱性賦形剤、疎水性のｐＨ感受性材料ならびに／または疎水性のイオン添加剤とを有機溶媒中において混合して、透明な溶液を得る工程；ならびに
（２）工程（１）で得られる前記透明な溶液の前記有機溶媒を除き、薄膜を形成させ、前記薄膜を水と混合して、水性混合物を得て、必要な場合には、前記水性混合物に、親水性の酸化防止剤、親水性の界面活性剤、親水性の感熱性賦形剤、親水性のｐＨ感受性材料および／または親水性のイオン添加剤を加え、前記混合物を、超音波の、前記混合物の高圧均質化の、または前記混合物のメンブランを押し通す操作の後でろ過して、前記活性物質が充填されたリポソームを含有する水溶液を得て、乾燥して、前記充填型リポソームを得る工程
を含み、
方法Ｂ１が、
（１）前記脂質および前記式Ｉのギンセノシドと、必要な場合にはコレステロール、疎水性の酸化防止剤、ダイズ油および／もしくはオレイン酸ナトリウム、疎水性の界面活性剤、疎水性の感熱性賦形剤、疎水性のｐＨ感受性材料ならびに／または疎水性のイオン添加剤とを有機溶媒中において混合して、透明な溶液を得る工程；ならびに
（２）工程（１）で得られる前記透明な溶液の前記有機溶媒を除き、薄膜を形成させ、前記薄膜を、活性物質ならびに必要な場合には親水性の酸化防止剤、親水性の界面活性剤、親水性の感熱性賦形剤、親水性のｐＨ感受性材料および／または親水性のイオン添加剤を含有する水溶液と混合して、超音波の、高圧均質化のまたはメンブランを押し通す操作の後で活性物質が充填されたリポソームを含有する水溶液を得て、透析およびろ過して、前記活性物質が充填された前記リポソームを含有する水溶液を得て、乾燥して、前記充填型リポソームを得る工程
を含み、
方法Ｃ１が、
（１）前記脂質および前記式Ｉのギンセノシドと、必要な場合にはコレステロール、疎水性の酸化防止剤、ダイズ油および／もしくはオレイン酸ナトリウム、疎水性の界面活性剤、疎水性の感熱性賦形剤、疎水性のｐＨ感受性材料ならびに／または疎水性のイオン添加剤とを有機溶媒中において混合して、透明な溶液を得る工程；ならびに
（２）工程（１）で得られる前記透明な溶液の前記有機溶媒を除き、薄膜を形成させ、前記薄膜を、硫酸アンモニウムならびに必要な場合には親水性の酸化防止剤、親水性の界面活性剤、親水性の感熱性賦形剤、親水性のｐＨ感受性材料および／または親水性のイオン添加剤を含有する水溶液と混合して、超音波の、高圧均質化のまたはメンブランを押し通す操作の後でブランクリポソームの溶液を得て、透析し、その後、前記溶液を活性物質と混合し、ろ過して、前記活性物質が充填されたリポソームを含有する水溶液を得て、乾燥して、前記充填型リポソームを得る工程
を含み、
方法Ｄ１が、
（１）前記脂質および前記式Ｉのギンセノシドと、必要な場合にはコレステロール、疎水性の酸化防止剤、ダイズ油および／もしくはオレイン酸ナトリウム、疎水性の界面活性剤、疎水性の感熱性賦形剤、疎水性のｐＨ感受性材料ならびに／または疎水性のイオン添加剤とを有機溶媒中において混合して、透明な溶液を得る工程；ならびに
（２）工程（１）で得られる前記透明な溶液の前記有機溶媒を除き、薄膜を形成させ、前記薄膜を、クエン酸ならびに必要な場合には親水性の酸化防止剤、親水性の界面活性剤、親水性の感熱性賦形剤、親水性のｐＨ感受性材料および／または親水性のイオン添加剤を含有する水溶液と混合して、超音波の、高圧均質化のまたはメンブランを押し通す操作の後でブランクリポソームの溶液を得て、その後、前記ブランクリポソーム溶液を、活性物質およびリン酸水素二ナトリウムの水溶液と混合し、ろ過して、前記活性物質が充填されたリポソームを含有する水溶液を得て、乾燥して、前記充填型リポソームを得る工程
を含み、
前記方法Ａ、前記方法Ｂ、前記方法Ｃ、前記方法Ｄ、前記方法Ａ１、前記方法Ｂ１、前記方法Ｃ１または前記方法Ｄ１において、それぞれの条件またはパラメーターは、請求項１０または１１において規定される通りであり、前記活性物質の、式Ｉの前記ギンセノシドに対する質量比率が、１：０．１〜１：１０、または１：２〜１：６であり、前記脂質、前記式Ｉのギンセノシド、前記コレステロール、前記酸化防止剤、前記ダイズ油および／またはオレイン酸ナトリウム、前記凍結保護剤、前記界面活性剤、前記感熱性賦形剤、前記ｐＨ感受性材料、前記イオン添加剤、ならびに前記活性物質はそれぞれ、請求項１〜１９において上記で定義される通りである、プロセス。
【請求項２１】
方法Ｂ、方法Ｃ、方法Ｂ１または方法Ｃ１において、前記透析操作が、ブランクリポソーム溶液または充填型リポソーム溶液をグルコースの水溶液または純水に入れて混合溶液を得て、その後、前記混合溶液を５時間〜２０時間にわたって、または約１２時間にわたって透析することを含み、または、方法Ｂ、方法Ｃ、方法Ｂ１または方法Ｃ１において、前記透析操作が、超音波の、高圧均質化のまたはメンブランを押し通す操作の前に行われ、または、方法Ｃまたは方法Ｃ１において、硫酸アンモニウムおよび前記凍結保護剤の前記水溶液、または、硫酸アンモニウムの前記水溶液における前記硫酸アンモニウムの質量分率が１％〜１５％の範囲または６．６％の範囲であり、方法Ｃまたは方法Ｃ１において、前記溶液を３０℃〜８０℃で５分間〜１時間にわたって保つために、ろ過前に保温する操作を含み、方法Ｄまたは方法Ｄ１において、その水溶液におけるクエン酸の質量濃度が１％〜１５％の範囲であり、または約５．７６％であり、その水溶液におけるリン酸水素二ナトリウムの質量濃度が５％〜２０％の範囲であり、または約７．１％であり、方法Ｄまたは方法Ｄ１において、ろ過前に保温する操作を含み、保温する前記操作が好ましくは３０℃〜８０℃で５分間〜１時間にわたって保つことを含み、方法Ａ、方法Ｂ、方法Ｃ、方法Ｄ、方法Ａ１、方法Ｂ１、方法Ｃ１または方法Ｄ１において、前記活性物質が、前記活性物質の脂質溶解性または水溶性に基づいてその水溶液または有機溶液の形態で使用され、および前記水溶液または前記有機溶液における前記活性物質の質量体積百分率が１％〜２０％の範囲である、請求項２０に記載のプロセス。
【請求項２２】
方法１、方法２、方法３、方法４、方法５または方法６を含む、充填型リポソームを調製するためのプロセスであって、
方法１が、ダイズレシチン、ギンセノシドＲｇ５およびパクリタキセルをアセトニトリルに加え、撹拌して、透明な溶液を形成すること（この際、前記ダイズレシチン、ギンセノシドＲｇ５およびパクリタキセルの質量比率が１０：６：３であり、前記アセトニトリルの体積の前記ギンセノシドＲｇ５の質量に対する比率が１００ｍＬ／３ｇである）、前記有機溶媒を５０℃〜６０℃での恒温水浴において除いて、薄膜を形成すること、ならびに、精製水を加えること（前記精製水の体積の前記ギンセノシドＲｇ５の質量に対する比率が１００ｍＬ／３ｇである）、超音波の操作を、前記リポソームの粒径が０．１〜０．３ミクロンの間になるまで行うこと、０．２２ミクロンの微多孔膜でろ過し、それにより、ギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームを含有する水溶液を得て、ギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームを含有する前記水溶液を凍結乾燥し、保護ガスを導入し、密封して、前記ギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームを得ることを含み、
方法２が、卵レシチン、ギンセノシドＲｇ５、パクリタキセルおよびトレオニンをメタノールに加え、撹拌して、透明な溶液を形成すること（この際、前記卵レシチン、ギンセノシドＲｇ５、パクリタキセル、コレステロールおよびトレオニンの質量比率が１３：１２：４：５：５であり、前記メタノールの体積の前記ギンセノシドＲｇ５の質量に対する比率が１００ｍＬ／３ｇである）、前記有機溶媒を６０℃〜７０℃での恒温水浴において除いて、薄膜を形成させること、ならびに、５％グルコース水溶液を加えること（前記グルコース水溶液の体積の前記ギンセノシドＲｇ５の質量に対する比率が１００ｍＬ／３ｇである）、超音波の操作を、前記リポソームの粒径が０．１〜０．３ミクロンの間になるまで行うこと、０．２２ミクロンの微多孔膜でろ過し、それにより、ギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームを含有する水溶液を得て、ギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームを含有する前記水溶液を凍結乾燥し、保護ガスを導入し、密封して、前記ギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームを得ることを含み、
方法３が、卵レシチン、ギンセノシドＲｇ５、パクリタキセル、ダイズ油およびビタミンＣをクロロホルムに加え、撹拌して、透明な溶液を形成すること（この際、前記卵レシチン、ギンセノシドＲｇ５、パクリタキセル、ダイズ油およびビタミンＣの質量比率が８：６：１．５：４：０．５であり、前記クロロホルムの体積の前記ギンセノシドＲｇ５の質量に対する比率が１００ｍＬ／３ｇである）、前記有機溶媒を３０℃〜６０℃で除いて、薄膜を形成させること、ならびに、１０％トレハロース水溶液を加えること（前記トレハロース水溶液の体積の前記ギンセノシドＲｇ５の質量に対する比率が１００ｍＬ／３ｇである）、高圧ホモジナイザーによる均質化の操作を、前記リポソームの粒径が０．１〜０．３ミクロンの間になるまで行うこと、０．２２ミクロンの微多孔膜でろ過し、それにより、ギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームを含有する水溶液を得て、ギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームを含有する前記水溶液を凍結乾燥し、保護ガスを導入し、密封して、前記ギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームを得ることを含み、
方法４が、卵レシチン、ギンセノシドＲｇ５、パクリタキセル、ダイズ油、コレステロールおよびビタミンＥをクロロホルムに加え、撹拌して、透明な溶液を形成すること（この際、前記卵レシチン、ギンセノシドＲｇ５、パクリタキセル、ダイズ油、コレステロールおよびビタミンＥの質量比率が１４：１２：４：８：０．５：０．１であり、前記クロロホルムの体積の前記ギンセノシドＲｇ５の質量に対する比率が１００ｍＬ／３ｇである）、前記有機溶媒を３０℃〜６０℃で除いて、薄膜を形成させること、ならびに、５％サッカロース水溶液を加えること（前記サッカロース水溶液の体積の前記ギンセノシドＲｇ５の質量に対する比率が１００ｍＬ／３ｇである）、高圧ホモジナイザーによる均質化を、前記リポソームの粒径が０．１〜０．３ミクロンの間になるまで行うこと、０．２２ミクロンの微多孔膜でろ過し、それにより、ギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームを含有する水溶液を得て、その後、ギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームを含有する前記水溶液を凍結乾燥し、その後、保護ガスを導入し、密封して、前記ギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームを得ることを含み、
方法５が、卵レシチン、ギンセノシドＲｇ５、ドセタキセル、ダイズ油、ビタミンＣをクロロホルムに加え、撹拌して、透明な溶液を形成すること（この際、前記卵レシチン、ギンセノシドＲｇ５、ドセタキセル、ダイズ油およびビタミンＣの質量比率が８：６：３：４：５であり、前記クロロホルムの体積の前記ギンセノシドＲｇ５の質量に対する比率が１００ｍＬ／３ｇである）、前記有機溶媒を３０℃〜６０℃で除いて、薄膜を形成させること、ならびに、１０％トレハロース水溶液を加えること（前記トレハロース水溶液の体積の前記ギンセノシドＲｇ５の質量に対する比率が１００ｍＬ／３ｇである）、超音波の操作を、前記リポソームの粒径が０．１〜０．３ミクロンの間になるまで行うこと、０．２２ミクロンの微多孔膜でろ過し、それにより、ギンセノシドＲｇ５ドセタキセルリポソームを含有する水溶液を得て、ギンセノシドＲｇ５ドセタキセルリポソームを含有する前記水溶液を凍結乾燥し、保護ガスを導入し、密封して、前記ギンセノシドＲｇ５ドセタキセルリポソームを得ることを含み、
方法６が、卵レシチン、ギンセノシドＲｇ５、イリノテカン塩酸塩およびダイズ油をクロロホルムに加え、撹拌して、透明な溶液を形成すること（この際、前記卵レシチン、ギンセノシドＲｇ５、イリノテカン塩酸塩およびダイズ油の質量比率が８：６：２：４：５であり、前記クロロホルムの体積の前記ギンセノシドＲｇ５の質量に対する比率が１００ｍＬ／３ｇである）、前記有機溶媒を３０℃〜６０℃で除いて、薄膜を形成させること、ならびに、１０％トレハロース水溶液を加えること（前記トレハロース水溶液の体積の前記ギンセノシドＲｇ５の質量に対する比率が１００ｍＬ／３ｇである）、超音波の操作を、前記リポソームの粒径が０．１〜０．３ミクロンの間になるまで行うこと、０．２２ミクロンの微多孔膜でろ過して、ギンセノシドＲｇ５ドセタキセルリポソームを含有する水溶液を得て、ギンセノシドＲｇ５ドセタキセルリポソームを含有するために前記水溶液を凍結乾燥し、保護ガスを導入し、密封して、ギンセノシドＲｇ５ドセタキセルリポソームを得ることを含む、プロセス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は中国特許出願第２０１５１０５０９４０４．８号（２０１５年８月１９日出願）に対する優先権を主張する（その内容はその全体が参照によって本明細書中に組み込まれる）。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
リポソームは、少なくとも１つの脂質二重層を有する球状の小胞である。リポソームは、標的化された薬物キャリアとして使用されてきており、標的化薬物送達システムの新しい配合物に属する。リポソームは、薬物の粉末または溶液を、直径がミクロンレベルまたはナノメートルレベルである粒子の中に取り込むことができ、この粒子は生体膜構造の二重層の微小胞と類似しており、良好な生体適合性を有する。一方で、リポソームが標的化薬物送達システムと呼ばれる理由は、表面非修飾のリポソームがヒト身体内に入った後において、表面非修飾のリポソームは通常の場合、網状内皮系による食作用を受けやすく、それにより、身体自身の免疫機能を活性化し、かつ、取り込まれている薬物のヒト身体における分布を変化させ、これにより、当該薬物が主に肝臓、脾臓ならびに他の組織および器官に蓄積することをもたらすからである。高まった腫瘍浸透性・停留効果（ＥＰＲ効果）のために、粒径がナノメートルレベルであるリポソームを腫瘍部位に効果的に蓄積することができ、この特性をリポソームの受動的標的と呼ぶことができる。一方、リポソームの表面は共有結合様式または非共有結合様式で特異的なリガンドによって修飾することができる。そのようなリガンドには、抗体、ポリペプチド、アプタマー、グリコシルおよび低分子などが含まれる。このようなリポソームは、手始めの標的と呼ばれるリガンドと受容体との間の相互作用を介して、特定の標的化された細胞によって効率的に吸収され、しばしば「生物学的ミサイル」にたとえられる。リポソームの標的化薬物送達能は薬物の治療指数を増大させることができ、薬物の投薬量および毒性を低下させることができる。
【０００３】
リポソームの構造は、界面活性剤によって組み立てられるミセルとは異なる。後者は単分子層から構成され、一方、リポソームは、親油性薬物または水溶性薬物を取り込むことができる二重層から構成される。リポソームの主成分は脂質（例えば、リン脂質）およびコレステロールである。リン脂質は両親媒性物質であり、リン酸基およびアミノ含有塩基性基（ともに親水性である）と、２つの比較的長い疎水性炭化水素鎖とを含有する。コレステロールは両親媒性物質であり、疎水性基と親水性基との両方を有しており、しかし、その疎水性がその親水性よりも強い。リン脂質がリポソームを形成するときには、２つの疎水性鎖が内部方向を向き、親水性基が膜の内側表面および外側表面の両方に存在する。このようなリン脂質二重層により、水溶液を含有する閉じた区画が構成される。区画内の水溶液はリン脂質二重層によって取り囲まれており、それとは無関係に、リン脂質二重層が小胞を形成し、水性媒体によって隔てられる。コレステロールがリポソーム膜の安定性を増大させており、他の賦形剤が特別な機能的効果を有する。
【０００４】
従来型リポソームの主成分が、リポソームの膜を形成するリン脂質およびコレステロールである。Ｃｉｓｃｏ  Ｎａｎｊｉｎｇによって供給されるパクリタキセルリポソーム（これは「Ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ  Ｌｉｐｏｓｏｍｅ」として販売されており、本明細書中では単に「パクリタキセル」としてもまた示される）の主成分（タキソール薬物を除く）には、レシチン（第１の主成分）、コレステロール（第２の主成分）、トレオニン（酸化防止剤または緩衝剤試薬として一般に使用されるアミノ酸）およびグルコース（凍結乾燥賦形剤または凍結保護剤として一般に使用される糖質）が含まれる。他の賦形剤もまた、このリポソームの中に加えることができる。例えば、感熱性賦形剤を、感熱性リポソームを調製するために加えることができ、ｐＨ感受性賦形剤を、ｐＨ感受性リポソームを調製するために加えることができ、カチオンもしくはアニオンを、カチオン性リポソームもしくはアニオン性リポソームを調製するために加えることができ、または、界面活性剤などを加えることができる。異なる目的に応じて、異なる賦形剤が加えられる。一般には、凍結乾燥前のリポソームはリン脂質（一般には５０％〜９５％の割合）およびコレステロール（約５％〜５０％）を主成分として有しており、しかし、凍結乾燥過程の期間中に、ある特定量の賦形剤が特定の条件に従って加えられるであろう。リポソームの種々の用途に依存して、添加された賦形剤の割合は大きく異なる。いくつかは、賦形剤を凍結乾燥の期間中に加える必要がなく、その一方で、いくつかは、５０％の賦形剤を凍結乾燥の期間中に加えることが必要となることさえある。加えて、市場には現在、多くの修飾されたリン脂質が存在する（例えば、ＰＥＧまたはアミノ酸によって修飾されたリン脂質（これは非常に少量の賦形剤を含有する）など）。したがって、相互の参照は、用途が異なるリポソーム、および、タイプが異なるリポソームの間では、具体的な成分およびそれぞれの成分の量が大きく異なっているために大きな意味を有していない（なお、上述の百分率は、リポソームの原材料の総質量に対する各成分の百分率を示す）。
【０００５】
様々な異なるタイプの薬物の物理的性質および化学的性質（例えば、構造、溶解性および安定性など）における違いのために、調製のための様々な対応する技術的要件が存在する。同時に、技術、膜材料、パイロットスケール化および他の側面を改善し続けることが必要である。リポソームの品質を評価するために、８つの主要な指標があり、これらには、リポソーム（分散液を含む）の形態および粒径、封入効率、薬物負荷、バーストおよび浸透性、インビトロでの放出、リン脂質の酸化度、有機溶媒の残留、ならびに、インビボおよびインビトロでの機能的評価が含まれる。しかし、全体として、現在のリポソームは、例えば、標的特異的能力をさらに改善する必要がある、封入効率が低い、安定性が不良である、また、調製プロセスが複雑であるなどの短所を依然として有する。
【０００６】
したがって、高い効率、安全性、安定性、高まった標的化能、良好な均一性、安定かつ信頼できる品質、および簡便な調製プロセスを有するリポソームを研究することが常に、リポソームの重要な点であり、かつ重要な方向である。
【０００７】
ギンセノシドは、親水性末端におけるグリコシルと、親油性末端における長い末端鎖とによる特殊な両親媒性特性を有する物質である。ギンセノシドは広範囲の薬学的用途を有しており、例えば、ギンセノシドＦ４およびギンセノシドＲｇ６が、リンパ腫を治療するために使用され、ギンセノシドＲｇ３が、月経困難症および白斑を治療するために使用され、ギンセノシドＲｈ１は、デキサメタゾンを使用することによって誘発されるステロイド抵抗性を改善し、かつ、デキサメタゾンの抗炎症効果を増大させるために使用することができ、また、ギンセノシドＲｂ１は高血圧の予防および治療のために使用することができる（中国特許出願第２０１３１０１６５９２６号、同第２０１３１０１６５９０７号、同第２０１２１０５０１６５２号、同第２０１３１００１１４００号および同第２０１２１０４８６９５９号を参照のこと）。中国特許出願第２０１２１０１５１５９７．０号には、ギンセノシドＲｇ３のリポソームおよびその調製方法が開示される。ギンセノシドＲｇ３のリポソームが、薬物のギンセノシドＲｇ３をリポソームに封入することによって得られ、このことにより、ギンセノシドＲｇ３の吸収および生物学的利用能が著しく増大し、かつ、腫瘍組織に対するその標的化能が高まり、したがって、薬物効力が改善される。
【０００８】
先行技術においては、ギンセノシドが、リポソーム膜材料として、また、その一方では標的化材料および薬物として、ブランクリポソームを調製するために、また、薬物および他の成分を封入するために使用され得ることに関しての報告は何ら見当たらない。
【発明の概要】
【０００９】
発明の概要
現在のリポソーム技術の欠点（例えば、低い封入効率、不良な安定性、複雑な調製プロセス、および、さらに改善される必要がある標的化能など）を克服するために、本発明はとりわけ、ギンセノシドを膜材料として有するブランクリポソーム、その調製方法、その使用、ならびに、活性物質および本発明のブランクリポソームを含有する充填型リポソームを提供する。本発明のブランクリポソームは、高い効率、安全性、安定性、高まった標的化能、良好な均一性、安定かつ信頼できる品質、および好都合な調製プロセスという利点を有する。本発明のリポソームは、薬物、美容活性物質、またはヘルスケア機能を有する物質を封入して、活性物質が充填されたリポソームを形成するために使用することができる。本発明のブランクリポソームが、そのような活性物質（例えば、抗腫瘍薬物など）を封入するために使用されるとき、そのようにして調製された充填型リポソームは、腫瘍細胞に対する予想外にはるかにより良好な標的化作用、抗多剤耐性効果、相乗作用効果、減弱化効果および薬物相乗作用を示した。具体的には、通常のリポソームと比較したとき、本発明のこのリポソームは、とりわけ、薬物を充填するための候補物としての、また、薬物キャリアとしてのはるかにより優れた指標、すなわち、標的化能、抗多剤耐性、相乗作用および減弱化および薬物相乗作用などを有している。
【００１０】
いくつかの形態において、本発明は、膜を有するブランクリポソームであって、前記膜が、脂質と、式Ｉのギンセノシドとを含む、ブランクリポソームを提供する：
【００１１】
【化１】
2018528269.tif 000003
【００１２】
式Ｉにおいて、
Ｒ１およびＲ２のそれぞれが独立して、Ｈ、ＯＨまたはＲ５であり、ならびに、Ｒ１およびＲ２は同時にともにＨではない；
Ｒ３は
【００１３】
【化２】
2018528269.tif 000004
【００１４】
または
【００１５】
【化３】
2018528269.tif 000005
【００１６】
である；
Ｒ４は、Ｈ、ＯＨまたはＲ５である；
Ｒ５は、Ｒ６、Ｒ７またはＲ８である；
Ｒ６は、−Ｏ−Ｇｌｃ、−Ｏ−Ｒｈａ、−Ｏ−Ｌｙｘ、−Ｏ−Ｘｙｌ、−Ｏ−Ａｒａ（ｐ）、−Ｏ−Ａｒａ（ｆ）、−Ｏ−Ｇｌｃ（２→１）Ｇｌｃ、−Ｏ−Ｇｌｃ（６→１）Ｇｌｃ、−Ｏ−Ｇｌｃ（２→１）Ｒｈａ、−Ｏ−Ｇｌｃ（２→１）Ｘｙｌ、−Ｏ−Ｇｌｃ（６→１）Ｘｙｌ、−Ｏ−Ｇｌｃ（６→１）Ｒｈａ、−Ｏ−Ｇｌｃ（２→１）Ａｒａ（ｐ）、−Ｏ−Ｇｌｃ（６→１）Ａｒａ（ｐ）、−Ｏ−Ｇｌｃ（２→１）Ａｒａ（ｆ）、−Ｏ−Ｇｌｃ（６→１）Ａｒａ（ｆ）、−Ｏ−Ｇｌｃ（２→１）Ｇｌｃ（２→１）Ｇｌｃ、−Ｏ−Ｇｌｃ（２→１）Ｇｌｃ（２→１）Ｘｙｌ、−Ｏ−Ｇｌｃ（６→１）Ｇｌｃ（６→１）Ｘｙｌ、−Ｏ−Ｇｌｃ（２→１）Ｇｌｃ（４→１）Ｘｙｌ、−Ｏ−Ｇｌｃ（２→１）Ｌｙｘ、−Ｏ−Ｇｌｃ（６→１）Ｌｙｘ、−Ｏ−Ｇｌｃ（２→１）Ｇｌｃ（２→１）Ｒｈａ、−Ｏ−Ｇｌｃ（２→１）Ｇｌｃ（２→１）Ｌｙｘ、−Ｏ−Ｇｌｃ（２→１）Ｇｌｃ（２→１）Ａｒａ（ｆ）、−Ｏ−Ｇｌｃ（２→１）Ｇｌｃ（２→１）Ａｒａ（ｐ）、−Ｏ−Ｇｌｃ（２→１）Ｇｌｃ（６→１）Ｇｌｃ、−Ｏ−Ｇｌｃ（２→１）Ｇｌｃ（６→１）Ｒｈａ、−Ｏ−Ｇｌｃ（２→１）Ｇｌｃ（６→１）Ｘｙｌ、−Ｏ−Ｇｌｃ（２→１）Ｇｌｃ（６→１）Ｌｙｘ、−Ｏ−Ｇｌｃ（２→１）Ｇｌｃ（６→１）Ａｒａ（ｆ）、−Ｏ−Ｇｌｃ（２→１）Ｇｌｃ（６→１）Ａｒａ（ｐ）、−Ｏ−Ｇｌｃ（６→１）Ｇｌｃ（２→１）Ｇｌｃ、−Ｏ−Ｇｌｃ（６→１）Ｇｌｃ（２→１）Ｒｈａ、−Ｏ−Ｇｌｃ（６→１）Ｇｌｃ（２→１）Ｘｙｌ、−Ｏ−Ｇｌｃ（６→１）Ｇｌｃ（２→１）Ｌｙｘ、−Ｏ−Ｇｌｃ（６→１）Ｇｌｃ（２→１）Ａｒａ（ｆ）、−Ｏ−Ｇｌｃ（６→１）Ｇｌｃ（２→１）Ａｒａ（ｐ）、−Ｏ−Ｇｌｃ（６→１）Ｇｌｃ（６→１）Ｇｌｃ、−Ｏ−Ｇｌｃ（６→１）Ｇｌｃ（６→１）Ｒｈａ、−Ｏ−Ｇｌｃ（６→１）Ｇｌｃ（６→１）Ｌｙｘ、−Ｏ−Ｇｌｃ（６→１）Ｇｌｃ（６→１）Ａｒａ（ｆ）または−Ｏ−Ｇｌｃ（６→１）Ｇｌｃ（６→１）Ａｒａ（ｐ）からなる群から選択される；
Ｒ７は、Ｒ６における１つまたは２つ以上のＯＨ基をＲ８により置換することによって形成された基であり、前記１つまたは２つ以上のＲ８基のそれぞれが独立して、互いに同じまたは異なり得る；
Ｒ８は、
Ｉ）−ｍＰＥＧ、−Ｚ−ｍＰＥＧ、−ｍＰＥＯ、−Ｚ−ＰＥＯ、−ｍＰＶＰ、−Ｚ−ＰＶＰ、−ｍＥＰＥＧまたは−Ｚ−ＥＰＥＧ（式中、ｍは、Ｈ、アルキルまたはアシルであり、Ｚは、−ＣＯ（ＣＨ２）ａＣＯ−、−ＮＨ（ＣＨ２）ａＣＯ−、−ＮＨ（ＣＨ２）ｂＸ−または−ＣＯ−Ａｒ−ＣＨ２−であり、Ｘは、Ｏ、ＳまたはＮＨであり、ａは、１、２、３、４、５、６、７または８であり、ｂは、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０である）である；または
ＩＩ）Ｃ４〜２２脂肪族アシル、ホスファート基、コハク酸エステル基、ｎ−ブチル酸エステル基、スルホナート基、リンゴ酸エステル基または硫酸ナトリウム塩である；または
ＩＩＩ）Ｂｏｃ−グリシン、Ｂｏｃ−アラニン、Ｂｏｃ−アルギニン、Ｂｏｃ−リシン、Ｂｏｃ−セリン、アセチルフェニルアラニン、アセチル−プロリン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、トレオニン、トリプトファン、チロシンまたはバリンに含まれるカルボキシルを脱水素化することによって形成された基である；または
ＩＶ）−Ｏ−ＰＥＯ、−Ｏ−ＰＶＰ、−Ｏ−ＰＥＧ、−Ｏ−ＭＰＥＧ、−Ｏ−ＥＰＥＧ、−Ｏ−Ｇｌｃ（２→１）Ｇｌｃ（６→１）Ｍａｌまたは−Ｏ−Ｇｌｃ（２→１）Ｇｌｃ（６→１）Ａｃである；
Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２およびＲ１３のそれぞれが独立して、Ｃ１〜３アルキルである；
ｄおよびｅのそれぞれが独立して、１、２または３である；ならびに
前記式Ｉのギンセノシドは必要に応じて、それにおける１つまたは複数のＯＨ基を１つまたは複数のＲ８基により置換することによって修飾することができ、および前記Ｒ８置換基（２つ以上のとき）のそれぞれは独立して互いに同じまたは異なり得る。
【００１７】
本明細書中で使用される場合、−Ｏ−Ｇｌｃ（２→１）Ｇｌｃなどの基において、数字は炭素位置を示し、矢印→は結合関係を示す；Ｇｌｃはグルコピラノシルを示す；Ｘｙｌはキシロピラノシルを示す；Ｒｈａはラムノピラノシルを示す；Ａｒａ（ｐ）はアラビノピラノシルを示す；Ａｒａ（ｆ）はアラビノフラノシルを示す；Ｌｙｘはリキソシルである；Ａｒはアリールを示す；Ｍａｌはマロニルを示す；Ａｃはアセチルを示す；ＰＥＧはポリエチレングリコールを示す；ＰＥＯはポリオキシエチレンまたはポリエチレンオキシドを示す；ＭＰＥＧはモノメトキシ末端ポリエチレングリコールを示す；ＥＰＥＧはエポキシ末端ポリエチレングリコールを示す；ＰＶＰはポビドンを示す。
【００１８】
−Ｏ−Ｇｌｃ−基において、Ｇｌｃの構造は、
【００１９】
【化４】
2018528269.tif 000006
【００２０】
である。−Ｏ−Ａｒａ（ｐ）基において、Ａｒａ（ｐ）の構造は、
【００２１】
【化５】
2018528269.tif 000007
【００２２】
である。−Ｏ−Ｌｙｘ基において、Ｌｙｘの構造は、
【００２３】
【化６】
2018528269.tif 000008
【００２４】
である。−Ｏ−Ａｒａ（ｆ）基において、Ａｒａ（ｆ）の構造は、
【００２５】
【化７】
2018528269.tif 000009
【００２６】
である。−Ｏ−Ｒｈａ基において、Ｒｈａの構造は、
【００２７】
【化８】
2018528269.tif 000010
【００２８】
である。−Ｏ−Ｘｙｌ基において、Ｘｙｌの構造は、
【００２９】
【化９】
2018528269.tif 000011
【００３０】
である。Ｍａｌの構造は、
【００３１】
【化１０】
2018528269.tif 000012
【００３２】
である。
【００３３】
いくつかの実施形態において、ＰＥＧ、ＰＥＯ、ＰＶＰまたはＥＰＥＧの分子量は独立して、２００〜２０，０００の範囲である。
【００３４】
いくつかの実施形態において、上記脂肪族アシル基は、天然の飽和脂肪族酸または不飽和脂肪族酸のアシル、および、人工的に合成された飽和脂肪族酸または不飽和脂肪族酸のアシルであることが可能であり、好ましくはステアリルまたはパルミチルであることが可能である。
【００３５】
Ｒ３は好ましくは、
【００３６】
【化１１】
2018528269.tif 000013
【００３７】
または
【００３８】
【化１２】
2018528269.tif 000014
【００３９】
である。
【００４０】
上記ブランクリポソームにおいて、式Ｉのギンセノシドは、ギンセノシドＲｇ５、ギンセノシドＲｇ６、ギンセノシドＲｋ１、ギンセノシドＲｋ２、ギンセノシドＲｋ３、ギンセノシドＲｋ４、ギンセノシドＲｈ３、ギンセノシドＲｈ４、ギンセノシドＦ４、ギンセノシドＲｓ４、ギンセノシドＲｓ５、ギンセノシドＲｓ６、ギンセノシドＲｓ７、ノトギンセノシドＴ５、ダムリン（ｄａｍｕｌｉｎ）ＡまたはダムリンＢでありうる。
【００４１】
上述のように、本発明のブランクリポソームに含有される式Ｉのギンセノシドは、当該ギンセノシドにおける１つ以上のヒドロキシル（ＯＨ）基をＲ８により置換することによって修飾されることが可能であり、かつ、Ｒ８基のそれぞれ（２つ以上のとき）が、相互に同じまたは異なることが可能であり、かつ、Ｒ８は上記で定義される通りである。
【００４２】
本発明のブランクリポソームにおいて、ギンセノシド（上記のように修飾されたものを含む）のＨＰＬＣ純度は好ましくは９０％以上であり、より好ましくは９５％を超える（ただし、百分率は質量百分率である）。
【００４３】
好ましくは、上記ブランクリポソームにおいて、式Ｉのギンセノシドはまた、ミセルの形態であることが可能である。ギンセノシドのナノミセルは、当該ギンセノシドがミセルの形態であることを示し、具体的には、中国特許出願第２０１３１０１５５６３９．２号（２０１３年４月２８日出願）およびＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＣＮ２０１３／０８８５５８（２０１３年１２月４日出願）を参照する（これらは本明細書により、それらの全体が参照によって本明細書中に組み込まれる）。
【００４４】
好ましくは、本発明のブランクリポソームにおいて、膜における脂質はリン脂質を含み、かつ、前記リン脂質の、式Ｉの上記ギンセノシドに対する質量比率が通常の場合には０．５：１から１００：１までの範囲であり、好ましくは０．５：１から２０：１までの範囲であり、より好ましくは０．５：１から４：１までの範囲である（例えば、０．５：１から２：１までの範囲など）。
【００４５】
好ましくは、本発明のブランクリポソームにおいて、膜中の脂質はリン脂質を含み、膜はさらにコレステロールを含む。前記リン脂質の、式Ｉの上記ギンセノシドに対する質量比率が好ましくは１：０．０１から１：３までの範囲であり（例えば、１：０．０３から１：１までの範囲など）、より好ましくは１：０．０５から１：０．９までの範囲であり（例えば、１：０．３から１：０．７５までの範囲など）、最も好ましくは１：０．１から１：０．９までの範囲である（例えば、１：０．１から１：０．５までの範囲など）。式Ｉの上記ギンセノシドの、前記コレステロールに対する質量比率が好ましくは０．１：１から１００：１までの範囲であり、好ましくは０．５：１から５０：１までの範囲であり、より好ましくは０．５：１から１０：１までの範囲である（例えば、１．５：１から６：１または５：１までの範囲など）。
【００４６】
本発明のブランクリポソームにおいて、膜における式Ｉのギンセノシドの質量百分率が好ましくは０．０１％〜８０％の範囲であり、膜におけるリン脂質の質量百分率が好ましくは５％〜９９．９％の範囲であり、膜におけるコレステロールの質量百分率が好ましくは５０％未満である：上述の百分率（％）は、膜の総質量に対する各成分の質量の百分率を示す。
【００４７】
膜における式Ｉのギンセノシドの質量百分率は好ましくは１０％〜８０％の範囲であり、より好ましくは１０％〜４０％の範囲であり、最も好ましくは２０％〜４０％の範囲である（例えば、２５％〜４０％の範囲など、好ましくは２５％〜３５％の範囲）。膜におけるリン脂質の質量百分率は好ましくは１０％〜７０％の範囲であり、より好ましくは３０％〜７０％の範囲であり、最も好ましくは３０％〜６０％の範囲である。膜におけるコレステロールの質量百分率は好ましくは０．５％〜５０％の範囲であり、より好ましくは５％〜４０％の範囲であり、最も好ましくは５％〜３０％の範囲である（例えば、１０％〜２０％の範囲など）。
【００４８】
本発明の好ましい実施形態において、上記ブランクリポソームはさらに酸化防止剤を含み、かつ、膜内に封入することができる。ブランクリポソームにおける酸化防止剤の質量百分率が通常の場合には２５％以下であり、好ましくは０．００１％〜１５％の範囲であり、より好ましくは０．０１％〜１０％の範囲であり、最も好ましくは０．０１％〜５％の範囲である（例えば、０．１％〜１％の範囲など）：百分率（％）は、ブランクリポソームの総質量に対する酸化防止剤の質量の百分率を示す。
【００４９】
本発明の好ましい実施形態において、上記ブランクリポソームはさらに凍結保護剤を含み、かつ、膜内に封入することができる。ブランクリポソームにおける凍結保護剤の質量百分率が通常の場合には８０％以下であり、好ましくは０．５％〜６０％の範囲であり、より好ましくは５％〜６０％の範囲であり、最も好ましくは３０％〜６０％の範囲である：百分率（％）は、ブランクリポソームの総質量に対する凍結保護剤の質量の百分率を示す。
【００５０】
本発明の好ましい実施形態において、上記ブランクリポソームはさらにダイズ油および／またはオレイン酸ナトリウムを含み、かつ、膜内に封入することができる。ブランクリポソームにおける「ダイズ油および／またはオレイン酸ナトリウム」の質量百分率が通常の場合には１％〜９０％の範囲であり、好ましくは１５％〜８０％の範囲であり、より好ましくは２０％〜７０％の範囲であり（例えば、２５％または６２．５％の範囲など）、最も好ましくは２０％〜３０％、または６０％〜７０％の範囲である：百分率は、ブランクリポソームの総質量に対する「ダイズ油および／またはオレイン酸ナトリウム」の質量の百分率を示す。ブランクリポソームにおける「ダイズ油および／またはオレイン酸ナトリウム」の、リン脂質に対する質量比率が好ましくは１：０．１から１：１０までの範囲であり、より好ましくは１：０．５から１：５までの範囲であり、最も好ましくは１：０．５から１：４までの範囲である（例えば、１：１から１：２までの範囲など）。
【００５１】
本発明の好ましい実施形態において、上記ブランクリポソームは下記の成分を含む：リン脂質および式Ｉのギンセノシド、あるいは、式Ｉのギンセノシド、リン脂質および酸化防止剤、あるいは、式Ｉのギンセノシド、リン脂質および凍結保護剤、あるいは、式Ｉのギンセノシド、「ダイズ油および／またはオレイン酸ナトリウム」ならびにリン脂質、あるいは、式Ｉのギンセノシド、「ダイズ油および／またはオレイン酸ナトリウム」、リン脂質ならびに酸化防止剤、あるいは、式Ｉのギンセノシド、「ダイズ油および／またはオレイン酸ナトリウム」、リン脂質ならびに凍結保護剤、あるいは、式Ｉのギンセノシド、「ダイズ油および／またはオレイン酸ナトリウム」、リン脂質、酸化防止剤ならびに凍結保護剤、あるいは、式Ｉのギンセノシド、リン脂質およびコレステロール、あるいは、式Ｉのギンセノシド、リン脂質、コレステロールおよび酸化防止剤、あるいは、式Ｉのギンセノシド、リン脂質、コレステロールおよび凍結保護剤、あるいは、式Ｉのギンセノシド、「ダイズ油および／またはオレイン酸ナトリウム」、リン脂質ならびにコレステロール、あるいは、式Ｉのギンセノシド、「ダイズ油および／またはオレイン酸ナトリウム」、リン脂質、コレステロールならびに酸化防止剤、あるいは、式Ｉのギンセノシド、「ダイズ油および／またはオレイン酸ナトリウム」、リン脂質、コレステロールならびに凍結保護剤、あるいは、式Ｉのギンセノシド、「ダイズ油および／またはオレイン酸ナトリウム」、リン脂質、コレステロール、酸化防止剤ならびに凍結保護剤。
【００５２】
本発明の好ましい実施形態において、上記ブランクリポソームは上述の成分からなる。
【００５３】
本発明の好ましい実施形態において、上記ブランクリポソームは下記の成分を含む：式Ｉのギンセノシド、リン脂質、コレステロール、ダイズ油および／またはオレイン酸ナトリウム、酸化防止剤ならびに凍結保護剤。ブランクリポソームにおけるダイズ油および／またはオレイン酸ナトリウムの、コレステロールに対する質量比率が好ましくは１：０．１から１：１０までの範囲であり、より好ましくは１：０．５から１：５までの範囲であり、最も好ましくは１：０．５から１：１までの範囲である。膜におけるコレステロールの質量百分率が好ましくは１％〜２０％の範囲であり、より好ましくは１０％〜２０％の範囲であり、ブランクリポソームにおけるダイズ油および／またはオレイン酸ナトリウムの質量百分率が好ましくは１％〜９０％の範囲であり、より好ましくは１５％〜８０％の範囲であり、最も好ましくは２０％〜７０％の範囲である（例えば、２５％または６２．５％、２０％〜３０％、または６０％〜７０％の範囲など）。
【００５４】
本発明の好ましい実施形態において、上記ブランクリポソームは、リン脂質と、式Ｉのギンセノシドとからなる。
【００５５】
本発明の好ましい実施形態において、上記ブランクリポソームは、式Ｉのギンセノシドと、リン脂質と、コレステロールとからなる。
【００５６】
本発明の好ましい実施形態において、上記ブランクリポソームは、式Ｉのギンセノシドと、リン脂質と、コレステロールと、酸化防止剤と、凍結保護剤とからなる。
【００５７】
本発明の好ましい実施形態において、上記ブランクリポソームは、式Ｉのギンセノシドと、リン脂質と、コレステロールと、ダイズ油および／またはオレイン酸ナトリウムと、酸化防止剤と、凍結保護剤とからなる。
【００５８】
リン脂質は、この分野における従来のリン脂質であることが可能であり、好ましくは、天然のリン脂質、半合成のリン脂質または全合成のリン脂質を含む。
【００５９】
天然のリン脂質は典型的には、ダイズ、卵黄、動物の脳または臓器に由来し、好ましくは、天然のレシチン、ダイズレシチン、卵レシチンまたはセファリンを含む。
【００６０】
半合成のリン脂質または全合成のリン脂質は、この分野における従来の半合成のリン脂質または全合成のリン脂質であることが可能であり、好ましくは、ホスファチジルコリンのリン脂質、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）、ホスファチジルエタノールアミンのリン脂質、ホスファチジルグリセロール（ＤＳＰＧ）、ジセチルホスファート（ＤＣＰ）、ＰＥＧ修飾のリン脂質、コレステロールスクシナート（ＣＨＳ）または１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１６：０〜１８：１のＰＣ、ただし、１６：０〜１８：１はＰＣの炭素鎖を示す）を含む。半合成または全合成のリン脂質（例えば、ジパルミトイルホスファチジルコリンおよびジステアロイルホスファチジルコリンなど）の感熱性のために、半合成または全合成のリン脂質は熱感性賦形剤として同時に使用することができる。
【００６１】
ホスファチジルコリンのリン脂質は、この分野における従来のホスファチジルコリンのリン脂質であることが可能であり、好ましくは、水素化ダイズレシチン（ＨＳＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、ジラウロイルホスファチジルコリン（ＤＬＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、ホスファチジルコリン（ＳＰＣ）、モノパルミトイルホスファチジルコリン（ＭＰＰＣ）またはグリセロールホスファチジルコリン（ＧＰＣ）を含む。
【００６２】
ホスファチジルエタノールアミンのリン脂質は、この分野における従来のホスファチジルコリンのリン脂質であることが可能であり、好ましくは、１−パルミトイル−２−オレオイル−ホスファチジルエタノールアミン（ＰＯＰＥ）、ジラウロイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＬＰＥ）、ジエルコイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＥＰＥ）、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）またはジミリストイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＭＰＥ）を含む。
【００６３】
ＰＥＧ修飾のリン脂質は、この分野における従来のＰＥＧ修飾のリン脂質であることが可能であり、好ましくは、ホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ（ＤＭＰＥ−ＰＥＧ）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ（ＤＰＰＥ−ＰＥＧ）、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ（ＤＳＰＥ−ＰＥＧ）、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ（ＤＯＰＥ−ＰＥＧ）、Ｃ８セラミド−ＰＥＧ（Ｃ８セラミド−ＰＥＧ）、Ｃ１６セラミド−ＰＥＧ（Ｃ１６セラミド−ＰＥＧ）、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ−スクシニル（ＤＳＰＥ−ＰＥＧスクシニル）、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ−カルボキシル（ＤＳＰＥ−ＰＥＧカルボン酸）、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ−マレイミド（ＤＳＰＥ−ＰＥＧマレイミド）、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ−プロピオンアミドビス−メルカプトピリジン（ＤＳＰＥ−ＰＥＧ  ＰＤＰ）、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ−シアヌル酸塩化物（ＤＳＰＥ−ＰＥＧシアヌル）、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ−アミノ（ＤＳＰＥ−ＰＥＧアミン）、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ−ビオチン（ＤＳＰＥ−ＰＥＧビオチン）、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ−ホラート（ＤＳＰＥ−ＰＥＧホラート）、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ−ホラート（ＤＳＰＥ−ＰＥＧホラート）、ジラウロイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ（ＤＬＰＥ−ＰＥＧ）、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ−活性エステル（ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＮＨＳ）、ホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ−活性エステル（ＤＭＰＥ−ＰＥＧ−ＮＨＳ）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ−活性エステル（ＤＰＰＥ−ＰＥＧ−ＮＨＳ）、ジラウロイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ−活性エステル（ＤＬＰＥ−ＰＥＧ−ＮＨＳ）、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ−マレイミド（ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−マレイミド）、ホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ−マレイミド（ＤＭＰＥ−ＰＥＧ−マレイミド）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ−マレイミド（ＤＰＰＥ−ＰＥＧ−マレイミド）、ジラウロイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ−マレイミド（ＤＬＰＥ−ＰＥＧ−マレイミド）、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ−ビオチン（ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ビオチン）、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ−フルオレセイン（ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣ）、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ−ヒドロキシル（ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＯＨ）、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ−アミノ（ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＮＨ２）、ホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ−アミノ（ＤＭＰＥ−ＰＥＧ−ＮＨ２）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ−アミノ（ＤＰＰＥ−ＰＥＧ−ＮＨ２）、ジラウロイルホ���ファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ−アミノ（ＤＬＰＥ−ＰＥＧ−ＮＨ２）、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ−カルボキシル（ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＣＯＯＨ）、ホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ−カルボキシル（ＤＭＰＥ−ＰＥＧ−ＣＯＯＨ）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ−カルボキシル（ＤＰＰＥ−ＰＥＧ−ＣＯＯＨ）、ジラウロイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ−カルボキシル（ＤＬＰＥ−ＰＥＧ−ＣＯＯＨ）、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ−チオール（ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＳＨ）、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ−シラン（ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−シラン）、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ−アジド（ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−Ｎ３）、コレステロール−ＰＥＧ（コレステロールＰＥＧ）、メトキシル−ＰＥＧ−コレステロール（ｍＰＥＧ−ＣＬＳ）、コレステロール−ＰＥＧ−活性エステル（コレステロールＰＥＧ  ＮＨＳエステル）、コレステロール−ＰＥＧ−マレイミド（ＣＬＳ−ＰＥＧ−Ｍａｌ）、コレステロール−ＰＥＧ−ビオチン（コレステロールＰＥＧビオチン）、コレステロール−ＰＥＧ−フルオレセイン（コレステロールＰＥＧフルオレセイン）、コレステロール−ＰＥＧ−カルボキシル（コレステロールＰＥＧ  ＣＯＯＨ）、コレステロール−ＰＥＧ−アミノ（コレステロールＰＥＧ  ＮＨ２）またはコレステロール−ＰＥＧ−チオール（コレステロールＰＥＧ  ＳＨ）を含む。上記ＰＥＧの相対分子量は好ましくは３００〜５００００の範囲であり、より好ましくは５００〜１００００の範囲であり、例えば、約３００、３５０、５００、５５０、１０００、２０００、３４００、５０００、１００００、２００００、３００００、４００００または５００００である。
【００６４】
上記ＤＭＰＥ−ＰＥＧの数平均分子量は好ましくは、３５０、５５０、７５０、１０００、２０００、３０００または５０００である。上記ＤＰＰＥ−ＰＥＧの数平均分子量は好ましくは、３５０、５５０、７５０、１０００、２０００、３０００または５０００である。上記ＤＳＰＥ−ＰＥＧの数平均分子量は好ましくは、３５０、５５０、７５０、１０００、２０００、３０００、５０００、１００００、２００００、３００００または４００００である。上記ＤＯＰＥ−ＰＥＧの数平均分子量は好ましくは、３５０、５５０、７５０、１０００、２０００、３０００または５０００である。上記Ｃ８セラミド−ＰＥＧの数平均分子量は好ましくは、７５０、２０００または５０００である。上記ＤＬＰＥ−ＰＥＧの数平均分子量は好ましくは、２０００または５０００である。上記ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＮＨＳの数平均分子量は好ましくは、１０００、２０００、５０００、１００００、２００００、３００００または４００００である。上記ＤＭＰＥ−ＰＥＧ−ＮＨＳの数平均分子量は好ましくは、３４００または５０００である。上記ＤＰＰＥ−ＰＥＧ−ＮＨＳの数平均分子量は好ましくは、３４００または５０００である。上記ＤＬＰＥ−ＰＥＧ−ＮＨＳの数平均分子量は好ましくは、３４００または５０００である。上記ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−マレイミドの数平均分子量は好ましくは、１０００、２０００、３４００、５０００または１００００である。上記ＤＭＰＥ−ＰＥＧ−マレイミドの数平均分子量は好ましくは、１０００、２０００、３４００、５０００または１００００である。上記ＤＰＰＥ−ＰＥＧ−マレイミドの数平均分子量は好ましくは、１０００、２０００、３４００、５０００または１００００である。上記ＤＬＰＥ−ＰＥＧ−マレイミドの数平均分子量は好ましくは、１０００、２０００、３４００、５０００または１００００である。上記ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ビオチンの数平均分子量は好ましくは、１０００、２０００、３４００、５０００または１００００である。上記ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣの数平均分子量は好ましくは、１０００、２０００、３４００、５０００または１００００である。上記ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＯＨの数平均分子量は好ましくは、２０００、３４００または５０００である。上記ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＮＨ２の数平均分子量は好ましくは、２０００、３４００または５０００である。上記ＤＭＰＥ−ＰＥＧ−ＮＨ２の数平均分子量は好ましくは、２０００、３４００または５０００である。上記ＤＰＰＥ−ＰＥＧ−ＮＨ２の数平均分子量は好ましくは、２０００、３４００または５０００である。上記ＤＬＰＥ−ＰＥＧ−ＮＨ２の数平均分子量は好ましくは、２０００、３４００または５０００である。上記ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＣＯＯＨの数平均分子量は好ましくは、２０００、３４００または５０００である。上記ＤＭＰＥ−ＰＥＧ−ＣＯＯＨの数平均分子量は好ましくは、２０００、３４００または５０００である。上記ＤＰＰＥ−ＰＥＧ−ＣＯＯＨの数平均分子量は好ましくは、２０００、３４００または５０００である。上記ＤＬＰＥ−ＰＥＧ−ＣＯＯＨの数平均分子量は好ましくは、２０００、３４００または５０００である。上記ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＳＨの数平均分子量は好ましくは５０００である。上記ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−シランの数平均分子量は好ましくは３４００である。上記ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−Ｎ３の数平均分子量は好ましくは、２０００、３４００または５０００である。上記ｍＰＥＧ−ＣＬＳの数平均分子量は好ましくは、１０００、２０００、５０００、１００００または２００００である。上記コレステロールＰＥＧ  ＮＨＳエステルの数平均分子量は好ましくは、１０００、２０００、３４００、５０００または１００００である。上記ＣＬＳ−ＰＥＧ−Ｍａｌの数平均分子量は好ましくは、２０００、３４００、５０００または１００００である。上記ＣＬＳ−ＰＥＧ−ビオチンの数平均分子量は好ましくは、２０００、３４００または５０００である。上記ＣＬＳ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣの数平均分子量は好ましくは、２０００、３４００または５０００である。上記コレステロールＰＥＧ  ＣＯＯＨの数平均分子量は好ましくは３４００である。上記コレステロールＰＥＧアミンの数平均分子量は好ましくは３４００である。上記コレステロールＰＥＧチオール／スルフヒドリルの数平均分子量は好ましくは３４００である。
【００６５】
酸化防止剤は、この分野における従来の酸化防止剤であることが可能であり、好ましくは、メタ重亜硫酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、没食子酸プロピル、アスコルビン酸、α−トコフェロール、α−ヒドロキシル酸、フラボノイド、フェニルプロパノイドフェノール系化合物、ビタミンＥ、ビタミンＣ、フマル酸、システイン、メチオニン、ブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、チオジプロピオン酸、亜硫酸塩（例えば、亜硫酸ナトリウムなど）、ヒドロ亜硫酸塩（例えば、ヒドロ亜硫酸ナトリウムなど）、ジチオアミノ安息香酸化合物、クエン酸、リンゴ酸、ソルビトール、グリセロール、プロピレングリコール、ヒドロキノン、ヒドロキシクマリン、エタノールアミン、リン酸または亜リン酸を含む。
【００６６】
凍結保護剤は、この分野における従来の凍結保護剤であることが可能であり、一般には、糖質、ポリオール、アミノ酸または緩衝剤試薬を含み、この場合、糖質は好ましくは、単糖、二糖または多糖を含む。単糖は好ましくは、グルコース、マンニトール、キシリトールまたはソルビトールを含む。二糖は好ましくは、スクロース、ラクトース、ガラクトースまたはマルトースを含む。多糖は好ましくはトレハロースを含む。ポリオールは好ましくは、マンニトール、ソルビトールまたはグリセロールを含む。アミノ酸は好ましくは、トレオニン、グリシン、グルタミン酸、アルギニンおよびヒスチジンからなる群から選択されるα−アミノ酸を含む。緩衝剤試薬は一般には、緩衝液を示す。緩衝液は、この分野における従来の緩衝液であることが可能であり、ｐＨ値が好ましくは３〜１０の範囲にあり、より好ましくは５〜７の範囲にある。緩衝液は好ましくは、エタノール−酢酸緩衝液、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン緩衝液、バルビタール緩衝液、ギ酸ナトリウム緩衝液、フタル酸塩緩衝液、クエン酸塩緩衝液、クエン酸−リン酸水素二ナトリウム緩衝液、アンモニア−塩化アンモニウム緩衝液、ホウ砂−塩化カルシウム緩衝液、酢酸塩緩衝液、酢酸−リチウム塩緩衝液、酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液、酢酸−酢酸アンモニウム緩衝液、リン酸−トリエチルアミン緩衝液またはリン酸塩緩衝液を含む。
【００６７】
好ましくは、上記ブランクリポソームは他の賦形剤をさらに含み、かつ、膜内に封入することができる。賦形剤は、酸化防止剤および凍結保護剤を除く、この分野においてリポソームを調製するために使用される従来の賦形剤であることが可能であり、例えば、賦形剤は、界面活性剤、感熱性賦形剤、ｐＨ感受性材料またはイオン添加剤を含む。
【００６８】
上記界面活性剤は好ましくは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリソルベート、Ｔｗｅｅｎ界面活性剤またはｂｒｉｊ界面活性剤を含む。この場合、ポリエチレングリコールの数平均分子量は好ましくは、２００〜８０００の範囲である（例えば、約３００、３５０、５００、５５０、１０００、２０００、３４００または５０００）。ポリソルベートは好ましくは、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウラート、ポリオキシエチレンソルビタンモノパルミタート、ポリオキシエチレンソルビタンモノステアラート、ポリオキシエチレンソルビタントリオレアート、ＰＥＧ−ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ−ポリ乳酸、ポリリシン−ポリ（乳酸−グリコール酸共重合体）、ポリエーテルイミド−ポリ乳酸、ＰＥＧ−ポリカプロラクトン、ＰＥＧ−ポリ（乳酸−グリコール酸共重合体）、ポロキサマー１８８、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン脂肪酸エーテルまたはポリオキシエチレンメチルヒマシ油エーテルを含む。
【００６９】
上記感熱性賦形剤は一般には、感熱性をリポソームにもたらすことができるポリマー、薬物または界面活性剤を含む。前記ポリマーは好ましくは、ポリプレンアクリルアミド、ポリプレンアクリル酸、ポリホスファートまたはポリリン脂質−アミドコポリマーを含む。前記薬物は好ましくは、ガジュツウコン油、エレメンまたはニガキモドキ（ｂｒｕｃｅａ  ｊａｖａｎｉｃａ）油を含む。前記界面活性剤は好ましくは、Ｔｗｅｅｎ界面活性剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ−８０など）および／またはｂｒｉｊ界面活性剤である。
【００７０】
上記イオン添加剤は好ましくは、カチオン性添加剤（例えば、オクタデシルアミンなど）および／またはアニオン添加剤（例えば、ホスファチジン酸および／またはホスファチジルセリンなど）を含む。
【００７１】
上記賦形剤の質量百分率は、この技術分野における通常のリポソームに含有されるそのような種類の賦形剤の質量百分率に従って選択することができる。例えば、上記ブランクリポソームが界面活性剤を含むとき、当該ブランクリポソームにおける界面活性剤の質量百分率は好ましくは、０％〜５０％の範囲である（ただし、０％は除く）。上記ブランクリポソームがイオン添加剤を含むとき、当該ブランクリポソームにおけるイオン添加剤の質量百分率は好ましくは、０％〜１０％の範囲である（ただし、０％は除く）。
【００７２】
上記ブランクリポソームは、リポソームを調製する従来の様々な方法によって調製することができる。一般には、注入法、逆蒸発法、凍結融解法、二重乳化法、イニシアチブ封入法、前駆体リポソーム調製法、薄膜分散法、凍結乾燥法、硫酸アンモニウム勾配法またはｐＨ勾配法を採用することができ、同様にまた、上記２つの方法のどのような組合せであっても採用することができる。本発明では好ましくは、下記のような第１の方法または第２の方法が採用され、ただし、第１の方法、または第１の方法によって調製されるブランクリポソームは凍結保護剤を含まず、第２の方法、または第２の方法によって調製されるブランクリポソームは凍結保護剤を含む。
【００７３】
第１の方法は下記の工程を含む：
（１）脂質および式Ｉのギンセノシドと、必要な場合にはコレステロール、疎水性の酸化防止剤、ダイズ油および／もしくはオレイン酸ナトリウム、疎水性の界面活性剤、疎水性の感熱性賦形剤、疎水性のｐＨ感受性材料ならびに／または疎水性のイオン添加剤とを有機溶媒中において混合して、透明な溶液を得る工程；ならびに
（２）工程（１）で得られる透明な溶液の有機溶媒を除き、薄膜を形成させ、前記薄膜を、親水性の酸化防止剤、親水性の界面活性剤、親水性の感熱性賦形剤、親水性のｐＨ感受性材料および／または親水性のイオン添加剤を含有してもよい水と混合して、水性混合物を得て、前記混合物を、超音波の、高圧均質化のまたはメンブランを押し通す操作の後でろ過して、ブランクリポソームを含有する水溶液を得て、乾燥して、前記ブランクリポソームを得る工程。
【００７４】
第２の方法は下記の工程を含む：
（１）脂質および式Ｉのギンセノシドと、必要な場合にはコレステロール、疎水性の酸化防止剤、ダイズ油および／もしくはオレイン酸ナトリウム、疎水性の界面活性剤、疎水性の感熱性賦形剤、疎水性のｐＨ感受性材料ならびに／または疎水性のイオン添加剤とを有機溶媒中において混合して、透明な溶液を得る工程；ならびに
（２）工程（１）で得られる透明な溶液の有機溶媒を除き、薄膜を形成させ、前記薄膜を、凍結保護剤と、必要な場合には親水性の酸化防止剤、親水性の界面活性剤、親水性の感熱性賦形剤、親水性のｐＨ感受性材料および／または親水性のイオン添加剤とを含有する水溶液と混合して、混合物を得て、前記混合物を、超音波の、高圧均質化のまたはメンブランを押し通す操作の後でろ過して、ブランクリポソームを含有する水溶液を得て、乾燥して、前記ブランクリポソームを得る工程。
【００７５】
第１の方法または第２の方法において、脂質、式Ｉのギンセノシド、コレステロール、酸化防止剤、ダイズ油および／またはオレイン酸ナトリウム、凍結保護剤、界面活性剤、感熱性賦形剤、ｐＨ感受性材料、ならびにイオン添加剤は、上記で定義される通りである。
【００７６】
第１または第２の方法の工程（１）において、有機溶媒は、この技術分野におけるリポソームの調製において使用される従来の有機溶媒であることが可能であり、そのような有機溶媒は好ましくは、ニトリル溶媒、Ｃ１〜４アルコール溶媒、ケトン溶媒、アルカン溶媒、エーテル溶媒、ハロゲン化炭化水素溶媒、スルホキシド溶媒またはアルデヒド溶媒を含み、より好ましくは、Ｃ１〜４アルコール溶媒、ニトリル溶媒、エーテル溶媒またはハロゲン化炭化水素溶媒を含む。前記ニトリル溶媒は好ましくは、アセトニトリルを含む。前記Ｃ１〜４アルコール溶媒は好ましくは、メタノール、エタノール、イソプロパノールまたはｎ−ブタノールを含む。前記エーテル溶媒は好ましくは、テトラヒドロフランまたはジエチルエーテルを含む。前記ハロゲン化炭化水素溶媒は好ましくは、クロロホルムまたはジクロロメタンを含む。前記ケトン溶媒は好ましくは、アセトンまたはブタノンを含む。前記アルカン溶媒は好ましくは、石油エーテルを含む。有機溶媒の量は、この技術分野におけるリポソームの調製において使用される従来の量であることが可能であり、特に限定されないが、その一般的な必要量により、透明な溶液を、上記有機溶媒およびすべての上記成分を混合した後で得ることができる。好ましくは、第１または第２の方法の工程（１）における有機溶媒の体積の、当該有機溶媒に溶解されるすべての成分の総質量に対する比率が、５ｍＬ／ｇ〜２０ｍＬ／ｇである。
【００７７】
第１または第２の方法の工程（１）は一般には０℃〜８０℃の温度で行われ、好ましくは１０℃〜８０℃の温度で行われ、より好ましくは１０℃〜６５℃の温度で行われる。この分野における常識に基づいて、場合により、８０℃に達するために、加熱することが要求される。あるいは、第１または第２の方法によって調製されるブランクリポソームが感熱性材料（例えば、タンパク質材料など）を含むときには、第１または第２の方法の工程（１）は一般には、ｅ０℃の温度で行われる。
【００７８】
第１または第２の方法の工程（２）において、工程（１）で得られる透明な溶液の有機溶媒を除く操作は、通常ロータリーエバポレーターまたは膜エバポレーターを用いて行われる、この分野における従来の操作であることが可能である。有機溶媒が除かれる温度は、除去すべき有機溶媒に応じて選択することができ、一般には２５℃〜８０℃である。
【００７９】
第１または第２の方法の工程（２）において、超音波の、高圧均質化のまたはメンブランを押し通す操作は、この分野における従来の操作であることが可能である。超音波の、高圧均質化のまたはメンブランを押し通す操作の後において、リポソームの粒径が一般には、０．０５ミクロン〜０．３ミクロンの範囲である。
【００８０】
第１または第２の方法の工程（２）において、ろ過する操作は、この分野におけるリポソームの調製での従来の操作であることが可能であり、この場合、その目的は、細菌、固体粒子、および、特に大きいリポソームなどを除くことである（活性物質が充填されたリポソームを調製する方法においては、封入されなかった遊離薬物もまた除くことができる）。本発明において、ろ過は好ましくは、微孔性メンブランろ過である。微孔性メンブランの細孔サイズは好ましくは０．２２ミクロンである。
【００８１】
第２の方法の工程（２）において、凍結保護剤水溶液は、凍結保護剤および水を混合することによって形成される水溶液を示す。凍結保護剤水溶液は好ましくは、凍結保護剤の５％〜１０％の水溶液であり、百分率は、凍結保護剤の水溶液の総質量に対する凍結保護剤の質量の百分率を示す。凍結保護剤水溶液の量は、ブランクリポソームの形成に対する影響が認められない限り、特に限定されず、好ましくは、工程（１）で使用される有機溶媒の量と同じである。
【００８２】
本発明の好ましい実施形態において、第２の方法では、凍結保護剤が緩衝剤試薬であるとき、工程（２）における薄膜形成操作の後で、凍結保護剤が直接に混合される。
【００８３】
第１または第２の方法の工程（２）において、乾燥する操作は、この分野における従来の操作であることが可能であり、好ましくは、凍結乾燥機を一般には利用する凍結乾燥である。凍結乾燥によって必要とされる温度および時間は、この分野における従来の温度および時間であり、特に限定されない。
【００８４】
第１または第２の方法において、容易な貯蔵のために、工程（２）で得られるブランクリポソームを含有する水溶液はバイアルに分注され、乾燥され、保護ガス（アルゴンまたは窒素）で空気が追い出され、密封される。
【００８５】
上記ブランクリポソームは、活性物質が充填され、膜内に封入されたリポソームを調製するために使用することができ、この場合、活性物質は、薬物、美容活性物質、またはヘルスケア機能を有する物質を含む。したがって、本発明はまた、ブランクリポソームと、リポソーム膜内に充填されたおよび封入された活性物質とを含む充填型リポソームであって、前記活性物質が、薬物、美容活性物質、またはヘルスケア機能を有する物質を含む、充填型リポソームを提供する。
【００８６】
充填型リポソームにおいて、活性物質の、式Ｉのギンセノシドに対する質量比率が、１：０．１から１：１０までであり、より好ましくは１：２から１：６までである（例えば、１：３、または１：４など）。
【００８７】
上記薬物は、この技術分野における従来の薬物であることが可能であり、好ましくは、抗腫瘍薬、抗真菌薬、抗ウイルス薬、抗生物質、非ステロイド性抗炎症薬、カルシウムイオンアンタゴニスト、免疫抑制剤、麻酔剤、心臓血管薬および血管拡張薬、胃腸薬、抗うつ薬、生物学的作用因子、ポリヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド（リボヌクレオチドおよびデオキシリボヌクレオチドを含む）を含む。
【００８８】
上記抗腫瘍薬は、この技術分野における従来の抗腫瘍薬であることが可能であり、好ましくは、パクリタキセル、ドセタキセル、カバジタキセル、イリノテカン塩酸塩、ヒドロキシカンプトテシン、アミノカンプトテシン、７−エチル−１０−ヒドロキシカンプトテシン、トポテカン塩酸塩、ルルトテカン（ｌｕｒｔｏｔｅｃａｎ）、トポテカン、ベロテカン（ｂｅｌｏｔｅｃａｎ）、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ネダプラチン、ロバプラチン（ｌｏｂａｐｌａｔｉｎ）、サトラプラチン、ミリプラチン、アミル白金（ａｍｙｌ  ｐｌａｔｉｎｕｍ）、アロプラチン（ａｒｏｐｌａｔｉｎ）（Ｌ−ＮＤＤＰ）、カルムスチン、クロラムブシル、メルファラン、ハリングトニン、ホモハリングトニン、トリプトリド（ｔｒｉｐｔｏｌｉｄｅ）、タクロリムス、ダウノルビシン、ピンヤンマイシン（ｐｉｎｇｙａｎｇｍｙｃｉｎ）、ドキソルビシン塩酸塩、イダルビシン、フルオロウラシル、シタラビン、メトトレキサート、エトポシドリン酸塩、デスオキシ−ポドフィロトキシン、フペルジン（ｈｕｐｅｒｚｉｎｅ）−Ａ、ビノレルビン酒石酸塩、ビンクリスチン硫酸塩、ビンブラスチン硫酸塩、ビノレルビン、ビンデシン硫酸塩、テモゾロミド、テガフール、シクロホスファミド、イホスファミド、ダカルバジン、エポチロンＡ、エポチロンＢ、エポチロンＣ、エポチロンＤ、エポチロンＥ、エポチロンＦ、ボルテゾミブ、ゲムシタビン塩酸塩、フルダラビンリン酸塩、カペシタビン、デシタビン、ペメトレキセド二ナトリウム、ソラフェニブ、組換えヒトインターフェロンａ２ｂ、シトシンアラビノシド、ａｌｌ−ｔｒａｎｓ−レチノイン酸、インターロイキン−２、エトポシド、チミジル酸シンターゼ阻害剤、ミトキサントロン、ミノキシジル、アジスロマイシン、エピルビシン塩酸塩、ドキソルビシン塩酸塩（アドリアマイシン）、アムルビシン塩酸塩、５−アミノレブリン酸（５−ＡＬＡ）、ゲフィチニブ、イマチニブ、エルロチニブ、スニチニブ、ダサチニブ、ラパチニブ、アキシチニブ、アパチニブ、ニロチニブ、ボスチニブ、バンデタニブ、テラチニブ（ｔｅｌａｔｉｎｉｂ）、ネラチニブ、カルネチニブ、サラカチニブ（ｓａｒａｃａｔｉｎｉｂ）、オクテニジン（ｏｃｔｅｎｉｄｉｎｅ）、ソラフェニブ、イコチニブ（ｉｃｏｔｉｎｉｂ）、ムブリチニブ（ｍｕｂｒｉｔｉｎｉｂ）、レスタウルチニブ、タンズチニブ（ｔａｎｄｕｔｉｎｉｂ）、ドビチニブ（ｄｏｖｉｔｉｎｉｂ）、３’，５’−ジパルミトイルシクロシチジンまたはクルクメノール（ｃｕｒｃｕｍｅｎｏｌ）を含む。
【００８９】
上記抗真菌薬は好ましくは、アムホテリシンＢ、ゲンタマイシン、インドメタシン、ペニシリンＧ、エコナゾール硝酸塩、フルシトシン、フルコナゾール、イトラコナゾール、ボリコナゾール、ポサコナゾール、ラブコナゾール、カスポファンギン、ミカファンギン、アニデュラファンギン、セフピラミドナトリウム、セフォタキシムナトリウム、セフトリアキソン、セフォペラゾン、セフジトレンピボキシル、セフォキシチンナトリウム、セファレキシン、セフロキシムナトリウム、セフィキシム、セフポドキシム、セフメノキシム、セフォジジム、セフスロジン、セファゾナム（ｃｅｆａｚｏｎａｍ）、セフチゾキシム、セフェタメトピボキシル、セフテラムピボキシル、セフチブテン、セフジニル、セファマンドール、セフォチアム、セフォラニド、セフォニシド、セフタジジム、セフラジン、セフプロジル、セファゾリンナトリウム、セファドロキシル、セファロチン、セファチアミジン（ｃｅｆａｔｈｉａｍｉｄｉｎｅ）、セファロリジン、セファセトリル、セフタゾール、セファピリン、セフピロム、セフクリジン（ｃｅｆｃｌｉｄｉｎ）、セフェピム、フシジン酸ナトリウム、フロルフェニコールまたはチゲサイクリンを含む。
【００９０】
上記抗ウイルス薬は好ましくは、リバビリン、アシクロビル、シタラビン、イドクスウリジン、アシクロビルラウラート、アシクロビルパルミタート、ヨードデオキシウリジン、シクロシチジン、ジパルミトイルシクロシチジン、リン酸ホルマート、リン酸アセタート、シメチジン、ジピリダモール、リファンピン、イソニアジド、プラジクワンテル、ドキシサイクリン、サキナビル、インジナビル、リトナビル、ネルフィナビル、アンプレナビル、チプラナビル、ＢＭＳ２３２６３２、ラミブジン、ジドブジン、ジダノシン（ｄｄｉ）、ザルシタビン（ｄｄｃ）、スタブジン（ｄ４ｔ）、アバカビル、アデホビルジピボアイル（ａｄｅｆｏｖｉｒｄｉｐｉｖｏａｉｌ）（ｐｍｅａ）、テノホビル（ｐｍｐａ）、フルオロラミブジン（ｆｔｃ）、ネビラピン、デラビルジン、エファビレンス（ｅｆａｖｉｒｅｎｓ）、インターロイキン−２（ｉｌ−２）、チルミコシンまたはジクラズリルを含む。
【００９１】
上記抗生物質は好ましくは、ペニシリン、ペニシリンＶ、アモキシシリン、アンピシリン、オキサシリン、クロキサシリン、プロカインペニシリン、ベンザチンペニシリン、ピペラシリン、メズロシリン、チカルシリン、アズロシリン、メズロシリン、カルベニシリン、スルベニシリン、フルブシリン（ｆｕｒｂｕｃｉｌｌｉｎ）、ナフシリン、ジクロキサシリン、ピバンピシリン、アパルシリン（ａｐａｌｃｉｌｌｉｎ）、アスポキシシリン、ピブメシリナム、メチシリン、レナンピシリン（ｌｅｎａｍｐｉｃｉｌｌｉｎ）、ホミダシリン（ｆｏｍｉｄａｃｉｌｌｉｎ）、フルクロキサシリン、カナマイシン、ナタマイシン（ｎａｔａｍｙｃｉｎ）、マイトマイシン、アミカシン、チロシン、ベルテポルフィン、セフピラミドナトリウム、ネチルマイシン硫酸塩、アジスロマイシン、オフロキサシン、シプロフロキサシン、エノキサシン、ロメフロキサシン、ペフロキサシン、ルフロキサシン、スパルフロキサシン、フレロキサシン、モキシフロキサシン、グレパフロキサシン、トロバフロキサシン、ノルフロキサシン、ゲミフロキサシン、ガチフロキサシン、トスフロキサシン、パズフロキサシン、スパルフロキサシン、クラリスロマイシン、クリンダマイシン、ポリミキシン、トブラマイシン、バンコマイシン、アジスロマイシン、ドキシサイクリン、テトラサイクリン、オキシテトラサイクリン、ミノサイクリン、オーレオマイシン、グアメサイクリン（ｇｕａｍｅｃｙｃｌｉｎｅ）、デメクロサイクリン、メタサイクリン、エチマイシン（ｅｔｉｍｉｃｉｎ）、ネチルマイシン、シソマイシン、アミカシン、アルベカシン、ジベカシン、アズトレオナム、メロペネム、イミペネム、チエナマイシン、パニペネム、エルタペネム、ネオマイシン、パロモマイシンまたはスペクチノマイシンを含む。
【００９２】
上記カルシウムイオンアンタゴニストは好ましくは、ニモジピン、ニフェジピン、ニカルジピン、ニトレンジピン、ベラパミル、アムロジピン、ジルチアゼム、フルナリジン、プレンブラミン（ｐｒｅｎｖｌａｍｉｎｅ）、ガロパミルまたはチアパミルを含む。
【００９３】
上記非ステロイド性抗炎症薬は好ましくは、インドメタシン、アスピリン、パラセタモール、ナプロキセン、ジクロフェナク、イブプロフェン、ニメスリド、ロフェコキシブまたはセレコキシブを含む。
【００９４】
上記免疫抑制剤は好ましくは、シクロスポリン（ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎ）、アルプロスタジル（これは前立腺Ｅ−１としてもまた知られている）、シクロスポリン（ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ）、タクロリムス、ラパマイシン、ミコフェノール酸モフェチルまたはミゾリビンを含む。
【００９５】
上記麻酔剤は好ましくは、ハロタン、セボフルラン、イソフルラン、エンフルラン、プロポフォール、フェンタニル、ウレタン、リドカイン、プロカイン、テトラカイン、ブピバカイン、ペルトバルビタラムナトリクム（ｐｅｌｌｔｏｂａｒｂｉｔａｌｕｍ  ｎａｔｒｉｃｕｍ）、抱水クロラール、ケタミン、クロラロースまたはモルヒネを含む。
【００９６】
上記心臓血管薬および血管拡張薬は好ましくは、ダビガトランエテキシラート、アログリプチン、多糖類ナトリウム、ギンコライド、イチョウフラボノイド、イチョウエキス、アサロン、オルメサルタンメドキソミ、レパグリニド、リポ酸、ブレビスカピン（ｂｒｅｖｉｓｃａｐｉｎｅ）、ウラピジル、ナイアシン、カプトプリル、ロサルタン、プエラリン、タンシノン（ｔａｎｓｈｉｎｏｎｅ）ＩＩＡ、サルポグレラート塩酸塩、フルバスタチン、プラバスタチン、シンバスタチン、ロバスタチン、シンバスタチン、メバスタチン、セリバスタチン、ロスバスタチン、アトルバスタチンカルシウムまたはロスバスタチンカルシウムを含む。
【００９７】
上記胃腸薬は好ましくは、オメプラゾール、ランソプラゾール、イラプラゾール（ｉｌａｐｒａｚｏｌｅ）、パントプラゾール、ラベプラゾール、テラゾシン、エソメプラゾール、テナトプラゾール、レミノプラゾール、テナトプラゾール、ジスプラゾール（ｄｉｓｕｐｒａｚｏｌｅ）またはラフチジン（ｌａｆｕｔｉｄｉｎｅ）を含む。
【００９８】
上記抗うつ薬は好ましくは、アゴメラチン、フルオキセチン、パロキセチン、デュロキセチン、セルトラリン、フルボキサミン、シタロプラム、エスシタロプラム、ベンラファキシン、ミルタザピン、イミプラミン、アミトリプチリン、クロミプラミン、ドキセピン、レメロン、ベンラファキシム（ｖｅｎｌａｆａｘｉｍｅ）、フェネルジン、イソカルボキサジドまたはトラニルシプロミンを含む。
【００９９】
上記ポリヌクレオチドおよびオリゴヌクレオチドは好ましくは、遺伝機能を有し、および、塩基性基（例えば、Ａ、Ｔ、Ｃ、ＧまたはＵなど）からなるフラグメント（例えば、ＳｉＲＮＡ、アンチセンス核酸のＲＮＡｉ配列、またはミクログリアＮＬＲＰ３遺伝子）を含む。
【０１００】
上記生物学的作用因子は好ましくは、この分野における従来のモノ抗体薬物、インスリン、ガンマグロブリン、抗毒素血清、インターフェロン、インターロイキン、腫瘍壊死因子、皮膚の活性因子、上皮増殖因子、インフルエンザワクチン、Ａ型肝炎ワクチン、ガンワクチン、組換えヒト酸性線維芽細胞増殖因子または血管内皮増殖因子２モノクローナル抗体（ＶＥＧＦＲ−２モノクローナル抗体）を含む。
【０１０１】
上記美容活性物質は一般には、皮膚に栄養を与える機能、皮膚の状態を改善する機能、および、皮膚疾患を予防する機能を有する活性物質を示し、好ましくは、ウルソル酸、スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）、生物学的タンパク質Ｔ４Ｎ５、ビタミンＤ２、ニコチン酸メチル、精製ヘビ油、ヒアルロン酸、精油またはセラミドを含む。
【０１０２】
ヘルスケア機能を有する上記物質は、この分野における従来のヘルスケア機能を有する物質であることが可能であり、好ましくは、グリチルリチン、グリチルリチン酸、グリチルリチン酸二ナトリウム、グリチルリチン酸メチル、グリチルリチン酸二アンモニウム、ビタミンＥ、レスベラトロール、補酵素Ｑ１０、シリマリン、アントシアニン、プロアントシアニジン、ルテイン、葉酸、フォリン酸、クルクミン、エモジン、茶ポリフェノール、没食子酸エピガロカテキン（ＥＧＣＧ）、カテキン、ブルーベリー抽出物、グルタチオンまたはオキシマトリンを含む。
【０１０３】
本発明の好ましい実施形態において、充填型リポソームでは、薬物は、パクリタキセル、ドセタキセルまたはイリノテカン塩酸塩を含み、リポソームはリン脂質および式Ｉのギンセノシドを含み、前記ギンセノシドはギンセノシドＲｇ５を含み、リン脂質のギンセノシドＲｇ５に対する質量比率が０．５：１から１００：１までの範囲であり、好ましくは０．５：１から２０：１までの範囲であり、より好ましくは０．５：１から４：１までの範囲である（例えば、０．５：１から２：１までの範囲など）。
【０１０４】
本発明の別の好ましい実施形態において、リポソームはコレステロールをさらに含み、リン脂質のギンセノシドＲｇ５に対する質量比率が１：０．０１から１：３までの範囲であり（例えば、１：０．０３から１：１までの範囲など）、より好ましくは１：０．０５から１：０．９までの範囲であり（例えば、１：０．３から１：０．７５までの範囲など）、最も好ましくは１：０．１から１：０．９までの範囲であり（例えば、１：０．１から１：０．５までの範囲など）、ギンセノシドＲｇ５のコレステロールに対する質量比率が０．１：１から１００：１までの範囲であり、好ましくは０．５：１から５０：１までの範囲であり、より好ましくは０．５：１から１０：１までの範囲である（例えば、１．５：１から６：１、または５：１までの範囲など）。
【０１０５】
本発明の別の好ましい実施形態において、膜におけるギンセノシドＲｇ５の質量百分率が０．０１％〜８０％の範囲であり、好ましくは１０％〜８０％の範囲であり、より好ましくは１０％〜４０％の範囲であり、最も好ましくは２０％〜４０％の範囲であり、膜におけるリン脂質の質量百分率が５％〜９９．９％の範囲であり、好ましくは１０％〜７０％の範囲であり、より好ましくは３０％〜７０％の範囲であり、最も好ましくは３０％〜６０％の範囲であり、膜におけるコレステロールの質量百分率が０％〜５０％の範囲であり、好ましくは０．５％〜５０％の範囲であり、より好ましくは５％〜４０％の範囲であり、最も好ましくは５％〜３０％の範囲である（例えば、１０％〜２０％の範囲など）。
【０１０６】
本発明の別の好ましい実施形態において、リポソームは、酸化防止剤をさらに含み、およびリポソーム膜内に封入することができ、ブランクリポソームにおける酸化防止剤の質量百分率が２５％以下であり、好ましくは０．００１％〜１５％の範囲であり、より好ましくは０．０１％〜１０％の範囲であり、最も好ましくは０．０１％〜５％の範囲である。
【０１０７】
本発明の別の好ましい実施形態において、リポソームは、凍結保護剤をさらに含み、およびリポソーム膜内に封入することができ、ブランクリポソームにおける凍結保護剤の質量百分率が８０％以下であり、好ましくは０．５％〜６０％の範囲であり、より好ましくは５％〜６０％の範囲であり、最も好ましくは３０％〜６０％の範囲である。
【０１０８】
本発明の別の好ましい実施形態において、リポソームは、ダイズ油および／またはオレイン酸ナトリウムをさらに含み、およびリポソーム膜内に封入することができ、ブランクリポソームにおけるダイズ油および／またはオレイン酸ナトリウムの質量百分率が通常の場合には１％〜９０％の範囲であり、好ましくは１５％〜８０％の範囲であり、より好ましくは２０％〜７０％の範囲であり（例えば、２５％または６２．５％の範囲など）、最も好ましくは２０％〜３０％の範囲または６０％〜７０％の範囲であり、百分率は、ブランクリポソームの総質量に対する「ダイズ油および／またはオレイン酸ナトリウム」の質量を示す。ブランクリポソームにおける「ダイズ油および／またはオレイン酸ナトリウム」の、リン脂質に対する質量比率が好ましくは１：０．１から１：１０までの範囲であり、より好ましくは１：０．５から１：５までの範囲であり、最も好ましくは１：０．５から１：４までの範囲である（例えば、１：１から１：２までの範囲など）。
【０１０９】
本発明の別の好ましい実施形態において、リポソームは、他の賦形剤をさらに含み、およびリポソーム膜内に封入することができる。他の賦形剤および他の賦形剤の量は、ブランクリポソームにおける場合と同じである。
【０１１０】
本発明の好ましい実施形態において、リポソームは、ダイズ油および／またはオレイン酸ナトリウム、ギンセノシドＲｇ５、ならびにリン脂質を含み、あるいは、ダイズ油および／またはオレイン酸ナトリウム、ギンセノシドＲｇ５、リン脂質、ならびに凍結保護剤を含み、あるいは、ダイズ油および／またはオレイン酸ナトリウム、ギンセノシドＲｇ５、リン脂質、凍結保護剤、ならびに酸化防止剤を含む。
【０１１１】
本発明の別の好ましい実施形態において、上記リポソームは上述の成分からなる。
【０１１２】
本発明の別の好ましい実施形態において、リポソームにおいて、リン脂質は好ましくは、ダイズレシチン、卵レシチンまたはジミリストイルホスファチジルコリンを含み、酸化防止剤は好ましくは、アスコルビン酸、ビタミンＥ、ビタミンＣまたはトレオニンを含み、凍結保護剤は好ましくは、グルコース、マンニトール、キシリトール、スクロース、ラクトース、トレハロースまたはプロパンジオールを含む。
【０１１３】
本発明はまた、上記の充填型リポソームを調製するためのプロセスを提供する。リポソームが凍結保護剤を含むとき、充填型リポソームを調製するためのプロセスは、方法Ａ、方法Ｂ、方法Ｃおよび方法Ｄのいずれかを含み、リポソームが凍結保護剤を含有せず、または、含まない（ｎｏｔ  ｃｏｎｔａｉｎ  ｏｒ  ｉｎｃｌｕｄｅ）ときには、充填型リポソームを調製するためのプロセスは、方法Ａ１、方法Ｂ１、方法Ｃ１および方法Ｄ１のいずれか１つを含む：
方法Ａは下記の工程を含む：
（１）脂質、式Ｉのギンセノシド、および活性物質と、必要な場合にはコレステロール、疎水性の酸化防止剤、ダイズ油および／もしくはオレイン酸ナトリウム、疎水性の界面活性剤、疎水性の感熱性賦形剤、疎水性のｐＨ感受性材料ならびに／または疎水性のイオン添加剤とを有機溶媒中において混合して、透明な溶液を得る工程；ならびに
（２）工程（１）で得られる透明な溶液の有機溶媒を除き、薄膜を形成させ、前記薄膜を、凍結保護剤と、必要な場合には親水性の酸化防止剤、親水性の界面活性剤、親水性の感熱性賦形剤、親水性のｐＨ感受性材料および／または親水性のイオン添加剤とを含有する水溶液と混合して、混合物を得て、前記混合物を、超音波の、前記混合物の高圧均質化の、または前記混合物のメンブランを押し通す操作の後でろ過して、前記活性物質が充填されたリポソームを含有する水溶液を得て、乾燥して、前記充填型リポソームを得る工程。
【０１１４】
方法Ｂは下記の工程を含む：
（１）脂質および式Ｉのギンセノシドと、必要な場合にはコレステロール、疎水性の酸化防止剤、ダイズ油および／もしくはオレイン酸ナトリウム、疎水性の界面活性剤、疎水性の感熱性賦形剤、疎水性のｐＨ感受性材料ならびに／または疎水性のイオン添加剤とを有機溶媒中において混合して、透明な溶液を得る工程；ならびに
（２）工程（１）で得られる透明な溶液の有機溶媒を除き、薄膜を形成させ、前記薄膜を、活性物質ならびに凍結保護剤、必要な場合には親水性の酸化防止剤、親水性の界面活性剤、親水性の感熱性賦形剤、親水性のｐＨ感受性材料および／または親水性のイオン添加剤を含有する水溶液と混合して、混合物を得て、超音波の、前記混合物の高圧均質化の、または前記混合物のメンブランを押し通す操作の後で充填型リポソームの溶液を得て、透析およびろ過して、前記活性物質が充填されたリポソームを含有する水溶液を得て、乾燥して、前記充填型リポソームを得る工程。
【０１１５】
方法Ｃは下記の工程を含む：
（１）脂質および式Ｉのギンセノシドと、必要な場合にはコレステロール、疎水性の酸化防止剤、ダイズ油および／もしくはオレイン酸ナトリウム、疎水性の界面活性剤、疎水性の感熱性賦形剤、疎水性のｐＨ感受性材料ならびに／または疎水性のイオン添加剤とを有機溶媒中において混合して、透明な溶液を得る工程；ならびに
（２）工程（１）で得られる透明な溶液の有機溶媒を除き、薄膜を形成させ、前記薄膜を、硫酸アンモニウムおよび凍結保護剤と、必要な場合には親水性の酸化防止剤、親水性の界面活性剤、親水性の感熱性賦形剤、親水性のｐＨ感受性材料および／または親水性のイオン添加剤とを含有する水溶液と混合して、混合物を得て、超音波の、前記混合物の高圧均質化の、または前記混合物のメンブランを押し通す操作の後でブランクリポソームの溶液を得て、透析し、その後、活性物質と混合し、ろ過して、前記活性物質が充填されたリポソームを含有する水溶液を得て、乾燥して、前記充填型リポソームを得る工程。
【０１１６】
方法Ｄは下記の工程を含む：
（１）脂質および式Ｉのギンセノシドと、必要な場合にはコレステロール、疎水性の酸化防止剤、ダイズ油および／もしくはオレイン酸ナトリウム、疎水性の界面活性剤、疎水性の感熱性賦形剤、疎水性のｐＨ感受性材料ならびに／または疎水性のイオン添加剤とを有機溶媒中において混合して、透明な溶液を得る工程；ならびに
（２）工程（１）で得られる透明な溶液の有機溶媒を除き、薄膜を形成させ、前記薄膜を、クエン酸ならびに凍結保護剤、必要な場合には親水性の酸化防止剤、親水性の界面活性剤、親水性の感熱性賦形剤、親水性のｐＨ感受性材料および／または親水性のイオン添加剤を含有する水溶液と混合して、混合物を得て、超音波の、前記混合物の高圧均質化の、または前記混合物のメンブランを押し通す操作の後でブランクリポソームの溶液を得て、前記溶液を、活性物質およびリン酸水素二ナトリウムの水溶液と混合し、ろ過して、前記活性物質が充填されたリポソームを含有する水溶液を得て、乾燥して、前記充填型リポソームを得る工程。
【０１１７】
方法Ａ１は下記の工程を含む：
（１）脂質、式Ｉのギンセノシド、および活性物質と、必要な場合にはコレステロール、疎水性の酸化防止剤、ダイズ油および／もしくはオレイン酸ナトリウム、疎水性の界面活性剤、疎水性の感熱性賦形剤、疎水性のｐＨ感受性材料ならびに／または疎水性のイオン添加剤とを有機溶媒中において混合して、透明な溶液を得る工程；ならびに
（２）工程（１）で得られる透明な溶液の有機溶媒を除き、薄膜を形成させ、前記薄膜を水と混合して、水性混合物を得て、必要な場合には、前記水性混合物に、親水性の酸化防止剤、親水性の界面活性剤、親水性の感熱性賦形剤、親水性のｐＨ感受性材料および／または親水性のイオン添加剤を加え、前記混合物を、超音波の、前記混合物の高圧均質化の、または前記混合物のメンブランを押し通す操作の後でろ過して、前記活性物質が充填されたリポソームを含有する水溶液を得て、乾燥して、前記充填型リポソームを得る工程。
【０１１８】
方法Ｂ１は下記の工程を含む：
（１）脂質と、式Ｉのギンセノシドと、必要な場合にはコレステロール、疎水性の酸化防止剤、ダイズ油および／またはオレイン酸ナトリウム、疎水性の界面活性剤、疎水性の感熱性賦形剤、疎水性のｐＨ感受性材料および／または疎水性のイオン添加剤とを有機溶媒中において混合して、透明な溶液を得る工程；ならびに
（２）工程（１）で得られる透明な溶液の有機溶媒を除き、薄膜を形成させ、前記薄膜を、活性物質と、必要な場合には親水性の酸化防止剤、親水性の界面活性剤、親水性の感熱性賦形剤、親水性のｐＨ感受性材料および／または親水性のイオン添加剤とを含有する水溶液と混合して、活性物質が充填されたリポソームを含有する水溶液を、超音波、高圧均質化またはメンブラン通過の操作の後で得て、透析し、ろ過して、前記活性物質が充填されたリポソームを含有する水溶液を得て、乾燥して、前記充填型リポソームを得る工程。
【０１１９】
方法Ｃ１は下記の工程を含む：
（１）脂質と、式Ｉのギンセノシドと、必要な場合にはコレステロール、疎水性の酸化防止剤、ダイズ油および／またはオレイン酸ナトリウム、疎水性の界面活性剤、疎水性の感熱性賦形剤、疎水性のｐＨ感受性材料および／または疎水性のイオン添加剤とを有機溶媒中において混合して、透明な溶液を得る工程；ならびに
（２）工程（１）で得られる透明な溶液の有機溶媒を除き、薄膜を形成させ、前記薄膜を、硫酸アンモニウムと、必要な場合には親水性の酸化防止剤、親水性の界面活性剤、親水性の感熱性賦形剤、親水性のｐＨ感受性材料および／または親水性のイオン添加剤とを含有する水溶液と混合して、ブランクリポソームの溶液を、超音波、高圧均質化またはメンブラン通過の操作の後で得て、透析し、その後、前記溶液を活性物質と混合し、ろ過して、前記活性物質が充填されたリポソームを含有する水溶液を得て、乾燥して、前記充填型リポソームを得る工程。
【０１２０】
方法Ｄ１は下記の工程を含む：
（１）脂質と、式Ｉのギンセノシドと、必要な場合にはコレステロール、疎水性の酸化防止剤、疎水性の界面活性剤、疎水性の感熱性賦形剤、疎水性のｐＨ感受性材料および／または疎水性のイオン添加剤とを有機溶媒中において混合して、透明な溶液を得る工程；ならびに
（２）工程（１）で得られる透明な溶液の有機溶媒を除き、薄膜を形成させ、前記薄膜を、クエン酸と、必要な場合には親水性の酸化防止剤、ダイズ油および／またはオレイン酸ナトリウム、親水性の界面活性剤、親水性の感熱性賦形剤、親水性のｐＨ感受性材料および／または親水性のイオン添加剤とを含有する水溶液と混合して、ブランクリポソームの溶液を、超音波、高圧均質化またはメンブラン通過の操作の後で得て、その後、前記ブランクリポソーム溶液を、活性物質と、リン酸水素二ナトリウムの水溶液と混合し、ろ過して、前記活性物質が充填されたリポソームを含有する水溶液を得て、乾燥して、前記充填型リポソームを得る工程。
【０１２１】
方法Ａ、方法Ｂ、方法Ｃ、方法Ｄ、方法Ａ１、方法Ｂ１、方法Ｃ１または方法Ｄ１において、それぞれの条件またはパラメーターは、ブランクリポソームを調製するための第１または第２の方法において定義される通りである。式Ｉのギンセノシドに対する活性物質の質量比（活性物質：式Ｉのギンセノシド）は、好ましくは１：０．１から１：１０まで、または１：２から１：６までである。脂質、式Ｉのギンセノシド、コレステロール、酸化防止剤、ダイズ油および／またはオレイン酸ナトリウム、凍結保護剤、界面活性剤、感熱性賦形剤、ｐＨ感受性材料、イオン添加剤、ならびに活性物質はそれぞれが、上記で定義される通りである。
【０１２２】
方法Ａ、方法Ｂ、方法Ｃまたは方法Ｄの工程（２）において、乾燥の前、活性物質が充填されたリポソームを含有する水溶液が得られた後に、凍結保護剤を加えることができる。
【０１２３】
方法Ｂ、方法Ｃ、方法Ｂ１または方法Ｃ１において、透析の操作は、この分野においてリポソームを調製するためのプロセスにおける従来の操作を行うことができ、好ましくは、ブランクリポソームの溶液または充填型リポソームの溶液をグルコースの水溶液（例えば、０．１５ｍｏｌ／Ｌ）または純水に加えて、混合溶液を得ることを含む。透析に要する時間は、この分野においてリポソームを調製するためのプロセスにおける従来のものとすることができ、好ましくは５時間から２０時間までであり、より好ましくは１２時間である。方法Ｂ、方法Ｃ、方法Ｂ１または方法Ｃ１において、超音波、高圧均質化またはメンブラン通過の操作の前に、透析の操作が実施されうる。
【０１２４】
方法Ｃまたは方法Ｃ１において、硫酸アンモニウムと凍結保護剤との水溶液、または硫酸アンモニウムの水溶液中における硫酸アンモニウムの質量分率は、特に限定されず、この分野において硫酸アンモニウム勾配法を用いてリポソームを調製するために使用される、従来の質量分率でありうる。硫酸アンモニウムと凍結保護剤との水溶液、または硫酸アンモニウムの水溶液中における硫酸アンモニウムの質量分率は、好ましくは１％から１５％までの範囲であり、より好ましくは６．６％であり、百分率は、上記水溶液の総質量に対する硫酸アンモニウムの質量を示す。
【０１２５】
方法Ｃまたは方法Ｃ１において、好ましくは、ろ過の前に保温する操作を含む。この保温する操作は、好ましくは、３０℃から８０℃まで（例えば、３７℃など）で、５分間から１時間まで（例えば、３０分間など）保温することを含む。
【０１２６】
方法Ｄまたは方法Ｄ１において、クエン酸の水溶液の濃度および量は、特に限定されず、この分野においてｐＨ勾配法を用いてリポソームを調製するために使用される従来の濃度および量でありうる。本発明において、その水溶液中におけるクエン酸の質量濃度は、好ましくは１％から１５％までの範囲であり、より好ましくは５．７６％であり、百分率は、クエン酸の水溶液の総質量に対するクエン酸の質量を示す。リン酸水素二ナトリウムの水溶液の濃度および量は、特に限定されず、この分野においてｐＨ勾配法を用いてリポソームを調製するための従来の濃度および量でありうる。本発明において、その水溶液中におけるリン酸水素二ナトリウムの質量濃度は、好ましくは５％から２０％までの範囲であり、より好ましくは７．１％である。リン酸水素二ナトリウムの水溶液の量は、一般的には、活性物質が充填されたリポソームを含有する水溶液のｐＨを６．５と７．５との間（例えば、７．３など）で保つことができる。所望のｐＨにすばやく到達するために、ろ過の前に純水が加えられ、活性物質が充填されたリポソームの水溶液のｐＨは、６．５と７．５との間（例えば、７．３など）に調節される。
【０１２７】
方法Ｄまたは方法Ｄ１において、好ましくは、ろ過の前に保温する操作を含む。この保温する操作は、好ましくは３０℃から８０℃まで（６０℃など）で、５分間から１時間まで（例えば、３０分間など）保温することを含む。
【０１２８】
上記のそれぞれの方法において、活性物質の脂質溶解性または水溶性に従って、活性物質はまた、活性物質の水溶液または活性物質の有機溶液の形態で好ましく使用されてもよい。活性物質の水溶液または活性物質の有機溶液の質量濃度は、特に限定されることは要せず、好ましくは、前記水溶液または前記有機溶液の質量体積百分率は１％から２０％までの範囲であり、百分率は、活性物質の水溶液または活性物質の有機溶液の総体積（ｍＬ）に対する活性物質の質量（ｇ）を示す。活性物質の有機溶液に含有される有機溶媒は、活性物質をよく溶解することができる、この分野における従来の有機溶媒でありうる。本発明において、有機溶媒は好ましくはスルホキシド溶媒であり、例えば、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）などである。
【０１２９】
方法１、方法２、方法３、方法４、方法５または方法６を含む、充填型リポソームを製造するためのプロセス、ただし、
方法１は、ダイズレシチン、ギンセノシドＲｇ５およびパクリタキセルをアセトニトリルに加え、撹拌して、透明な溶液を形成すること（この場合、ダイズレシチン、ギンセノシドＲｇ５およびパクリタキセルの質量比率が１０：６：３であり、前記ギンセノシドＲｇ５の質量に対する前記アセトニトリルの体積の比が１００ｍＬ／３ｇである）、５０℃から６０℃までの恒温水浴において有機溶媒を除いて、薄膜を形成すること、精製水を加えること（前記ギンセノシドＲｇ５の質量に対する前記精製水の体積の比が１００ｍＬ／３ｇである）、リポソームの粒径が０．１ミクロンと０．３ミクロンとの間になるまで超音波の操作を行うこと、０．２２ミクロンの微多孔膜でろ過し、それにより、ギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームを含有する水溶液を得て、ギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームを含有する前記水溶液を凍結乾燥し、保護ガスを導入し、密封して、ギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームを得ることを含む；
方法２は、卵レシチン、ギンセノシドＲｇ５、パクリタキセルおよびトレオニンをメタノールに加え、撹拌して、透明な溶液を形成すること（この場合、卵レシチン、ギンセノシドＲｇ５、パクリタキセル、コレステロールおよびトレオニンの質量比率が１３：１２：４：５：５であり、前記ギンセノシドＲｇ５の質量に対する前記メタノールの体積の比が１００ｍＬ／３ｇである）、６０℃から７０℃までの恒温水浴において有機溶媒を除いて、薄膜を形成すること、５％グルコース水溶液を加えること（前記ギンセノシドＲｇ５の質量に対する前記グルコース水溶液の体積の比が１００ｍＬ／３ｇである）、リポソームの粒径が０．１ミクロンと０．３ミクロンとの間になるまで超音波の操作を行うこと、０．２２ミクロンの微多孔膜でろ過し、それにより、ギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームを含有する水溶液を得て、ギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームを含有する前記水溶液を凍結乾燥し、保護ガスを導入し、密封して、ギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームを得ることを含む；
方法３は、卵レシチン、ギンセノシドＲｇ５、パクリタキセル、ダイズ油およびビタミンＣをクロロホルムに加え、撹拌して、透明な溶液を形成すること（この場合、卵レシチン、ギンセノシドＲｇ５、パクリタキセル、ダイズ油およびビタミンＣの質量比率が８：６：１．５：４：０．５であり、前記ギンセノシドＲｇ５の質量に対する前記クロロホルムの体積の比が１００ｍＬ／３ｇである）、３０℃から６０℃までで有機溶媒を除いて、薄膜を形成すること、１０％トレハロース水溶液を加えること（前記ギンセノシドＲｇ５の質量に対する前記トレハロース水溶液の体積の比が１００ｍＬ／３ｇである）、リポソームの粒径が０．１ミクロンと０．３ミクロンとの間になるまで、高圧ホモジナイザーによる均質化の操作を行うこと、０．２２ミクロンの微多孔膜でろ過し、それにより、ギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームを含有する水溶液を得て、ギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームを含有する前記水溶液を凍結乾燥し、保護ガスを導入し、密封して、ギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームを得ることを含む；
方法４は、卵レシチン、ギンセノシドＲｇ５、パクリタキセル、ダイズ油、コレステロールおよびビタミンＥをクロロホルムに加え、撹拌して、透明な溶液を形成すること（この場合、卵レシチン、ギンセノシドＲｇ５、パクリタキセル、ダイズ油、コレステロールおよびビタミンＥの質量比率が１４：１２：４：８：０．５：０．１であり、前記ギンセノシドＲｇ５の質量に対する前記クロロホルムの体積の比が１００ｍＬ／３ｇである）、３０℃から６０℃までで有機溶媒を除いて、薄膜を形成すること、５％サッカロース水溶液を加えること（前記ギンセノシドＲｇ５の質量に対する前記サッカロース水溶液の体積の比率が１００ｍＬ／３ｇである）、リポソームの粒径が０．１ミクロンと０．３ミクロンとの間になるまで、高圧ホモジナイザーによる均質化を行うこと、０．２２ミクロンの微多孔膜でろ過し、それにより、ギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームを含有する水溶液を得て、その後、ギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームを含有する前記水溶液を凍結乾燥し、その後、保護ガスを導入し、密封して、ギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームを得ることを含む；
方法５は、卵レシチン、ギンセノシドＲｇ５、ドセタキセル、ダイズ油、ビタミンＣをクロロホルムに加え、撹拌して、透明な溶液を形成すること（この場合、卵レシチン、ギンセノシドＲｇ５、ドセタキセル、ダイズ油およびビタミンＣの質量比率が８：６：３：４：５であり、前記ギンセノシドＲｇ５の質量に対する前記クロロホルムの体積の比が１００ｍＬ／３ｇである）、３０℃から６０℃までで有機溶媒を除いて、薄膜を形成すること、１０％トレハロース水溶液を加えること（前記ギンセノシドＲｇ５の質量に対する前記トレハロース水溶液の体積の比が１００ｍＬ／３ｇである）、リポソームの粒径が０．１ミクロンと０．３ミクロンとの間になるまで超音波の操作を行うこと、０．２２ミクロンの微多孔膜でろ過し、それにより、ギンセノシドＲｇ５ドセタキセルリポソームを含有する水溶液を得て、ギンセノシドＲｇ５ドセタキセルリポソームを含有する前記水溶液を凍結乾燥し、保護ガスを導入し、密封して、ギンセノシドＲｇ５ドセタキセルリポソームを得ることを含む；
方法６は、卵レシチン、ギンセノシドＲｇ５、イリノテカン塩酸塩およびダイズ油をクロロホルムに加え、撹拌して、透明な溶液を形成すること（この場合、卵レシチン、ギンセノシドＲｇ５、イリノテカン塩酸塩およびダイズ油の質量比率が８：６：２：４：５であり、前記ギンセノシドＲｇ５の質量に対する前記クロロホルムの体積の比が１００ｍＬ／３ｇである）、３０℃から６０℃までで有機溶媒を除いて、薄膜を形成すること、１０％トレハロース水溶液を加えること（前記ギンセノシドＲｇ５の質量に対する前記トレハロース水溶液の体積の比が１００ｍＬ／３ｇである）、リポソームの粒径が０．１ミクロンと０．３ミクロンとの間になるまで超音波の操作を行うこと、０．２２ミクロンの微多孔膜でろ過して、ギンセノシドＲｇ５ドセタキセルリポソームを含有する水溶液を得て、ギンセノシドＲｇ５ドセタキセルリポソームを含有するために前記水溶液を凍結乾燥し、保護ガスを導入し、密封して、ギンセノシドＲｇ５ドセタキセルリポソームを得ることを含む。
【０１３０】
充填型リポソームを調製するための上記プロセスにおいて、活性物質の質量比率は、この分野における従来の質量比率であ、好ましくは、式Ｉのギンセノシドに対する活性物質の質量比（活性物質：式Ｉのギンセノシド）は１：０．１から１：１０までであり、より好ましくは１：２から１：６までである（例えば、１：３、または１：４など）。
【０１３１】
上記ブランクリポソームまたは上記充填型リポソームの粒径は、この分野における従来の粒径であることが可能であり、好ましくは３０ｎｍから２０００ｎｍまでの範囲であり、より好ましくは３０ｎｍから３００ｎｍまでの範囲であり、最も好ましくは５０ｎｍから３００ｎｍまでの範囲である。上記充填型リポソームの封入効率は好ましくは８０％以上であり、より好ましくは９０％以上であり、最も好ましくは９５％以上である。
【０１３２】
上記充填型リポソームの活性物質が、薬物、またはヘルスケア機能を有する物質であるとき、上記充填型リポソームの投与は、この分野における従来の投与でありえて、好ましくは、疾患の処置および／または医療ヘルスケアのために使用される注入投与、経口投与または皮膚浸透である。したがって、上記充填型リポソームは、一般的には、注入、凍結乾燥注入、経口投与または局所投与のために好適である形態で調製される。注入投与は、好ましくは、静脈内注射、筋肉内注射、腹腔内注射、皮内注射または皮下注射が含まれる。一般的に、上記充填型リポソームは、生理食塩水、リン酸塩緩衝液または５％グルコース水溶液に加えられ、注射のための注射液が調製される。
【０１３３】
上記充填型リポソームにおいて、活性物質が抗腫瘍薬であるとき、上記充填型リポソームは、一般的に、腫瘍細胞に対する標的化効果、抗多剤耐性効果、相乗効果および減衰効果、ならびに薬物の相乗作用を有する。
【０１３４】
下記の表には、予防発明のために特に好適である例示的なギンセノシドの構造が示される：
【０１３５】
【表１−１】
2018528269.tif 000015
【０１３６】
【表１−２】
2018528269.tif 000016
【０１３７】
【表１−３】
2018528269.tif 000017
【０１３８】
【表１−４】
2018528269.tif 000018
【０１３９】
本発明において、言及された最適化条件は、必要な場合にはこの分野における常識に基づいて組み合わせて、好ましい実施形態を得ることができる。
【０１４０】
本発明において、室温は１０℃から３０℃までを示す。
【０１４１】
本発明において、凍結保護剤の水溶液または活性物質の水溶液の密度は１ｇ／ｍＬ（すなわち、水の密度）であり、したがって、凍結保護剤の水溶液または活性物質の水溶液の総質量は、ｍ＝ρ＊Ｖによって計算される。
【０１４２】
本発明において、活性物質の有機溶液の密度は有機溶媒の種類に依存する。例えば、有機溶媒がＤＭＳＯであるとき、活性物質の有機溶液の密度は１．１ｇ／ｍＬである。
【０１４３】
本発明において、試薬および原料は市販されている。
【０１４４】
本発明の有益な効果は下記の通りである：
本発明のブランクリポソームは、高い効率、良好な安全性、良好な安定性、高まった標的化能、良好な均一性、安定かつ信頼できる品質、および簡便な調製プロセスという利点を有する。活性物質が抗腫瘍薬であるとき、充填型リポソームは一般的に、腫瘍細胞に対する標的化効果、抗多剤耐性効果、相乗効果および減衰効果、ならびに薬物の相乗作用を有する。
【図面の簡単な説明】
【０１４５】
【図１】実施形態１によって調製されるギンセノシドＲｇ５ブランクリポソームの粒径分布図である。
【図２】実施形態２によって調製されるギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームの粒径分布図である。
【図３】実施形態３によって調製されるギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームの粒径分布図である。
【図４】実施形態４によって調製されるギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームの粒径分布図である。
【図５】実施形態５によって調製されるギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームの粒径分布図である。
【図６】実施形態６によって調製されるギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームの粒径分布図である。
【図７】実施形態７によって調製されるギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームの粒径分布図である。
【図８】実施形態８によって調製されるギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームの粒径分布図である。
【図９】実施形態９によって調製されるギンセノシドＲｇ５ドセタキセルリポソームの粒径分布図である。
【図１０】実施形態１０によって調製されるギンセノシドＲｇ５イリノテカン塩酸リポソームの粒径分布図である。
【図１１】実施形態１１によって調製されるギンセノシドＲｇ５ヒドロキシカンプトテシンリポソームの粒径分布図である。
【図１２】実施形態１２によって調製されるギンセノシドＲｇ５塩酸ドキソルビシンリポソームの粒径分布図である。
【図１３】実施形態１３によって調製されるギンセノシドＲｇ５アムホテリシンＢリポソームの粒径分布図である。
【図１４】実施形態１４によって調製されるギンセノシドＲｇ５塩酸ドキソルビシンリポソームの粒径分布図である。
【図１５】実施形態１５によって調製されるギンセノシドＲｇ５ビンクリスチン硫酸塩リポソームの粒径分布図である。
【図１６】実施形態１６によって調製されるギンセノシドＲｇ５オキサリプラチンリポソームの粒径分布図である。
【図１７】実施形態１７によって調製されるギンセノシドＲｇ５シスプラチンリポソームの粒径分布図である。
【図１８】実施形態１８によって調製されるギンセノシドＲｇ５フルオロウラシルリポソームの粒径分布図である。
【図１９】実施形態１９によって調製されるギンセノシドＲｇ５従来型ＳｉＲＮＡリポソームの粒径分布図である。
【図２０】実施形態２１によって調製されるギンセノシドＲｇ５塩酸ドキソルビシンリポソームの粒径分布図である。
【図２１】実施形態２２によって調製されるギンセノシドＲｇ５アムホテリシンＢリポソームの粒径分布図である。
【図２２】実施形態２３によって調製されるギンセノシドＲｇ５エピルビシン塩酸塩リポソームの粒径分布図である。
【図２３】実施形態２４によって調製されるギンセノシドＲｇ５ビンクリスチン硫酸塩リポソームの粒径分布図である。
【図２４】実施形態２５によって調製されるギンセノシドＲｇ５オキサリプラチンリポソームの粒径分布図である。
【図２５】実施形態２６によって調製されるギンセノシドＲｇ５シスプラチンリポソームの粒径分布図である。
【図２６】実施形態２７によって調製されるギンセノシドＲｇ５フルオロウラシルリポソームの粒径分布図である。
【図２７】実施形態２８によって調製されるギンセノシドＲｇ５従来型ＳｉＲＮＡリポソームの粒径分布図である。
【図２８】ヒト肺ガン細胞系（Ａ５４９）に対するタキソール、ブランクＲｇ５、およびタキソール＋Ｒｇ５の細胞生存率グラフである。
【図２９】パクリタキセル耐性ヒト肺ガン細胞系（Ａ５４９／Ｔ）に対するタキソール、ブランクＲｇ５、およびタキソール＋Ｒｇ５の細胞生存率グラフである。
【図３０】腫瘍細胞取り込みの蛍光倒立顕微鏡観察図であり、図３０−Ａ、図３０−Ｂ、図３０−Ｃはそれぞれ、パクリタキセル耐性ヒト肺ガン細胞系（Ａ５４９／Ｔ）に対するＮｉｌ、Ｎｉｌ−ｌｉｐ、Ｒｇ５−Ｎｉｌ−ｌｉｐの蛍光倒立顕微鏡観察図である。
【図３１】ライブ撮像装置によって記録されるＩＲ７８３蛍光のインビボ分布図であり、図３１−Ａ、図３１−Ｂおよび図３１−Ｃはそれぞれ、ライブ撮像装置によって記録される２時間目、６時間目および１０時間目でのコントロール群のＩＲ７８３蛍光のインビボ分布図であり、図３１−Ｄ、図３１−Ｅおよび図３１−Ｆはそれぞれ、ライブ撮像装置によって記録される２時間目、６時間目および１０時間目での実験群のＩＲ７８３蛍光のインビボ分布図であり、図３１−Ｇは蛍光物差しであり、この場合、蛍光強度に従って、色が順に、赤色、黄色、緑色および青色であり、赤色が最も強い蛍光を示し、青色が弱い蛍光を示す。
【図３２】コントロール群マウスおよび実験群マウスの単離された内臓の蛍光図であり、図３２−Ａおよび図３２−Ｂはそれぞれ、コントロール群マウスおよび実験群マウスの単離された内臓の蛍光図であり、図３２−Ｃは蛍光物差しであり、この場合、蛍光強度に従って、色が、赤色、黄色、緑色および青色であり、赤色が最も強い蛍光を示し、青色が弱い蛍光を示す。
【図３３】ヒト肺ガン細胞系（Ａ５４９）に対するコントロール群、タキソール＋Ｒｇ５群、およびアブラキサン（Ａｂｒａｘａｎｅ）群の抗腫瘍グラフである。
【図３４】パクリタキセル耐性ヒト肺ガン細胞系（Ａ５４９／Ｔ）に対するコントロール群、タキソール＋Ｒｇ５群、およびアブラキサン群の抗腫瘍グラフである。
【図３５】ヘマトキシリン−エオシンによって染色された後の正常マウス、コントロール群マウス、およびタキソール＋Ｒｇ５群マウスの肺組織、肝臓組織および腫瘍組織のパラフィン切片の顕微鏡観察図であり、図３５−Ａ、図３５−Ｄおよび図３５−Ｇはそれぞれ、ヘマトキシリン−エオシンによって染色された後の正常マウスの肺組織、肝臓組織および腫瘍組織のパラフィン切片の顕微鏡観察図であり、図３５−Ｂ、図３５−Ｅおよび図３５−Ｈはそれぞれ、ヘマトキシリン−エオシンによって染色された後のコントロール群の腫瘍保有マウスの肺組織、肝臓組織および腫瘍組織のパラフィン切片の顕微鏡観察図であり、図３５−Ｃ、図３５−Ｆおよび図３５−Ｉはそれぞれ、ヘマトキシリン−エオシンによって染色された後の実験群マウスの肺組織、肝臓組織および腫瘍組織のパラフィン切片の顕微鏡観察図である。
【図３６】ヒト乳ガン細胞系（ＭＣＦ−７）に対するタキソール、ブランクＲｇ５、およびタキソール＋Ｒｇ５の細胞生存率グラフである。
【図３７】タパクリタキセル耐性ヒト乳ガン細胞系（ＭＣＦ−７／Ｔ）に対するタキソール、ブランクＲｇ５、およびタキソール＋Ｒｇ５の細胞生存率グラフである。
【図３８】ヒト乳ガン細胞系（ＭＣＦ−７）に対するコントロール群、タキソール＋Ｒｇ５群、およびアブラキサン群の抗腫瘍グラフである。
【図３９】パクリタキセル耐性ヒト乳ガン細胞系（ＭＣＦ−７／Ｔ）に対するコントロール群、タキソール＋Ｒｇ５群、およびアブラキサン群の抗腫瘍グラフである。
【図４０】ヒト卵巣ガン細胞系（Ａ２７８０）に対するタキソール、ブランクＲｇ５、タキソール＋Ｒｇ５、およびアブラキサンの細胞生存率グラフである。
【図４１】パクリタキセル耐性ヒト卵巣ガン細胞系（Ａ２７８０／Ｔ）に対するタキソール、ブランクＲｇ５、タキソール＋Ｒｇ５、およびアブラキサンの細胞生存率グラフである。
【図４２】ヒト前立腺ガン細胞系（ＰＣ−３）に対するタキソール、ブランクＲｇ５、タキソール＋Ｒｇ５、およびアブラキサンの細胞生存率グラフである。
【図４３】パクリタキセル耐性ヒト前立腺ガン細胞系（ＰＣ−３／Ｔ）に対するタキソール、ブランクＲｇ５、タキソール＋Ｒｇ５、およびアブラキサンの細胞生存率グラフである。
【図４４】ヒト膵臓ガン細胞系（ＢｘＰＣ−３）に対するタキソール、ブランクＲｇ５、およびタキソール＋Ｒｇ５の細胞生存率グラフである。
【図４５】タパクリタキセル耐性ヒト膵臓ガン細胞系（ＢｘＰＣ−３／Ｔ）に対するタキソール、ブランクＲｇ５、およびタキソール＋Ｒｇ５の細胞生存率グラフである。
【図４６】ヒト乳ガン細胞系（ＭＣＦ−７）に対するＤｏｃ、ブランクＲｇ５、およびＤｏｃ＋Ｒｇ５の細胞生存率グラフである。
【図４７】タパクリタキセル耐性ヒト乳ガン細胞系（ＭＣＦ−７／Ｔ）に対するＤｏｃ、ブランクＲｇ５、およびＤｏｃ＋Ｒｇ５の細胞生存率グラフである。
【図４８】ヒト乳ガン細胞系（ＭＣＦ−７）に対するコントロール群、Ｄｏｃ＋Ｒｇ５群、およびアブラキサン群の抗腫瘍グラフである。
【図４９】パクリタキセル耐性ヒト乳ガン細胞系（ＭＣＦ−７／Ｔ）に対するコントロール群、Ｄｏｃ＋Ｒｇ５群、およびアブラキサン群の抗腫瘍グラフである。
【図５０】ヒト前立腺ガン細胞系（ＰＣ−３）に対するＣａｂ、ブランクＲｇ５、およびＣａｂ＋Ｒｇ５の細胞生存率グラフである。
【図５１】パクリタキセル耐性ヒト前立腺ガン細胞系（ＰＣ−３／Ｔ）に対するＣａｂ、ブランクＲｇ５、およびＣａｂ＋Ｒｇ５の細胞生存率グラフである。
【図５２】フルオロウラシル耐性ヒト肝臓ガン細胞系（Ｂｅｌ／ＦＵ）に対するＦＵ＋Ｒｇ５、ブランクＲｇ５およびＦＵの細胞生存率グラフである。
【図５３】フルオロウラシル耐性ヒト肝臓ガン細胞系（Ｂｅｌ／ＦＵ）に対するブランクＲｇ５、ＦＵ、およびＦＵ＋Ｒｇ５の抗腫瘍グラフである。
【図５４】シスプラチン耐性ヒト胃ガン細胞系（ＳＧＣ−７９０１／ＤＤＰ）に対するブランクＲｇ５、ＤＤＰ、およびＤＤＰ＋Ｒｇ５の細胞生存率グラフである。
【図５５】シスプラチン耐性ヒト胃ガン細胞系（ＳＧＣ−７９０１／ＤＤＰ）に対するブランクＲｇ５、ＤＤＰ、およびＤＤＰ＋Ｒｇ５の抗腫瘍グラフである。
【図５６】ビンクリスチン耐性ヒト結腸ガン細胞系（ＨＣＴ−８／Ｖ）に対するブランクＲｇ５、Ｖ、およびＶ＋Ｒｇ５の細胞生存率グラフである。
【図５７】ビンクリスチン耐性ヒト結腸ガン細胞系（ＨＣＴ−８／Ｖ）に対するブランクＲｇ５、Ｖ、およびＶ＋Ｒｇ５の抗腫瘍グラフである。
【図５８】ヒト胃ガン細胞系（ＳＧＣ−７９０１）に対するブランクＲｇ５、タキソール、およびＲｇ５＋タキソールの細胞生存率グラフである。
【図５９】パクリタキセル耐性ヒト胃ガン細胞系（ＳＧＣ−７９０１／Ｔ）に対するブランクＲｇ５、タキソール、およびＲｇ５＋タキソールの細胞生存率グラフである。
【図６０】ヒト胃ガン細胞系（ＳＧＣ−７９０１）に対するコントロール群、アブラキサン群、およびＲｇ５＋タキソール群の抗腫瘍グラフである。
【図６１】パクリタキセル耐性ヒト胃ガン細胞系（ＳＧＣ−７９０１／Ｔ）に対するコントロール群、アブラキサン群、およびＲｇ５＋タキソール群の抗腫瘍グラフである。
【発明を実施するための形態】
【０１４６】
本発明が下記の実施形態によってさらに説明されるが、本発明は下記の実施形態によって限定されない。下記の実施形態において、具体的な条件を与えることを伴わない実験方法は、従来の様式および条件または商品仕様に従って実施される。
【０１４７】
１．実験薬物：ギンセノシドＲｇ５、ギンセノシドＲｈ２、ギンセノシドＲｇ３、ギンセノシドＲｋ１、パクリタキセル、ドセタキセル、カバジタキセル、シスプラチン、オキサリプラチン、イリノテカン塩酸塩、ヒドロキシカンプトテシン、塩酸ドキソルビシン、アムホテリシンＢ、エピルビシン塩酸塩、ビンクリスチン硫酸塩、フルオロウラシルは、この分野では市販されており、例えば、これらは、Ｓｈａｎｇｈａｉ  Ｇｉｎｐｏｓｏｍｅ  Ｐｈａｒｍａ  Ｔｅｃｈ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．によって供給される。
【０１４８】
従来型ＳｉＲＮＡはＲｉｂｏＢｉｏによって供給される。
【０１４９】
従来のブランクリポソームを調製するためのプロセス：１ｇのダイズレシチン、０．６ｇのコレステロール、０．１ｇのダイズ油を２０ｍＬのクロロホルムに加え、室温で撹拌して、透明な溶液を形成した。４０℃から５０℃まででの恒温水浴における回転蒸発によって有機溶媒を除いて、薄膜を形成し、２０ｍＬの５％グルコース水溶液（百分率はグルコース水溶液の総質量に対するグルコースの質量を示す）を加えた。リポソームの粒径が０．１ミクロンと０．３ミクロンとの間になるまで超音波の操作を行い、０．２２ミクロンの微多孔膜でろ過して、従来のブランクリポソームを含有する水溶液を得て、その後、バイアルに分注した：各バイアルが１８０ｍｇのリポソームを含有した。前記水溶液を凍結乾燥機に入れて、７２時間にわたって凍結乾燥し、その後、保護ガス（アルゴンまたは窒素）を導入し、密封して、前記従来のブランクリポソームを得た。
【０１５０】
２．下記の実施形態および応用実施形態において使用される機器は、Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  ｏｆ  Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙによって自己所有されており、これらの機器の型式および供給元情報は下記の通りである：
高速液体クロマトグラフィー（Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００）
電子天秤（ＴＢ−２１５、Ｄｅｎｖｅｒ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ、米国）
超音波洗浄機（ＳＢ３２００ＤＴ、Ｎｉｎｇｂｏ  ｎｅｗ  ＭａｃＢｏｏｋ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）
Ｔｅｒｍｏｖａｐサンプル濃縮器（ＨＧＣ−１２Ａ、Ｔｉａｎｊｉｎ  Ｈｅｎｇａｏ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）
ロータリーエバポレーター（ＲＥ−２０００Ａ、Ｓｈａｎｇｈａｉ  Ｙａｒｏｎｇ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ  Ｆａｃｔｏｒｙ）
超純水製造システム（ＵＬＵＰ−ＩＶ−１０Ｔ、Ｓｉｃｈｕａｎ  Ｕ  ＆  Ｐ  Ｕｌｔｒａ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）
温度自動調節振動器（ＳＨＡ−Ｃ、Ｃｈａｎｇｚｈｏｕ  Ａｏｈｕａ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）
超音波細胞破砕器（ＪＹ９２−ＩＩ、Ｎｉｎｇｂｏ  ｎｅｗ  ＭａｃＢｏｏｋ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）
高圧ホモジナイザー（Ｂ１５、ＡＶＥＳＴＩＮ、カナダ）
レーザー粒径分析装置（Ｎａｎｏ  ＺＳ、Ｍａｌｖｅｒｎ  ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｌｔｄ．、英国）
小型押出し機（Ｍｉｎｉ−ｅｘｔｒｕｄｅｒ、Ａｖａｎｔｉ  Ｐｏｌａｒ  Ｌｉｐｉｄｓ  Ｉｎｃ）
光電子顕微鏡（ＸＤＳ−１Ｂ、Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ  Ｏｐｔｉｃａｌ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）
クリーンベンチ（ＳＷ−ＣＪ−１ＦＤ、Ｓｕｚｈｏｕ  Ａｅｔｎａ  ａｉｒ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）
細胞インキュベーター（ＣＣＬ−１７０Ｂ−８、ＥＳＣＯ、シンガポール）
蛍光倒立顕微鏡（ＩＸ−７３、オリンパス、日本）
インビボ小動物画像化システム（ＦＸ  ＰＲＯ、Ｂｒｕｋｅｒ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、米国）
３．実験細胞系：
Ａ５４９ヒト肺ガン細胞系（Ｎａｎｊｉｎｇ  ＫｅｙＧＥＮ  Ｂｉｏ）
Ａ５４９／Ｔパクリタキセル耐性ヒト肺ガン細胞系（Ｎａｎｊｉｎｇ  ＫｅｙＧＥＮ  Ｂｉｏ）
ＭＣＦ−７ヒト乳ガン細胞系（南京ＫｅｙＧＥＮ  Ｂｉｏ）
Ａ２７８０ヒト卵巣ガン細胞系（Ｎａｎｊｉｎｇ  ＫｅｙＧＥＮ  Ｂｉｏ）
Ａ２７８０／Ｔパクリタキセル耐性ヒト卵巣ガン細胞系（Ｎａｎｊｉｎｇ  ＫｅｙＧＥＮ  Ｂｉｏ）
ＰＣ−３ヒト前立腺ガン細胞系（Ｎａｎｊｉｎｇ  ＫｅｙＧＥＮ  Ｂｉｏ）
ＢｘＰＣ−３ヒト膵臓ガン細胞系（Ｎａｎｊｉｎｇ  ＫｅｙＧＥＮ  Ｂｉｏ）
Ｂｅｌ／ＦＵフルオロウラシル耐性ヒト肝臓ガン細胞系（Ｎａｎｊｉｎｇ  ＫｅｙＧＥＮ  Ｂｉｏ）
ＳＧＣ−７９０１ヒト胃ガン細胞系（Ｎａｎｊｉｎｇ  ＫｅｙＧＥＮ  Ｂｉｏ）
ＳＧＣ−７９０１／ＤＤＰシスプラチン耐性ヒト胃ガン細胞系（Ｎａｎｊｉｎｇ  ＫｅｙＧＥＮ  Ｂｉｏ）
ＨＣＴ−８／Ｖビンクリスチン耐性ヒト結腸ガン細胞系（Ｎａｎｊｉｎｇ  ＫｅｙＧＥＮ  Ｂｉｏ）
ＳＧＣ−７９０１／Ｔパクリタキセル耐性ヒト胃ガン細胞系を確立するためのプロセス：
低濃度量増加連続誘導法を適用して、元となるＳＧＣ−７９０１細胞からの誘導を、薬物耐性ヒト胃ガン細胞系ＳＧＣ−７９０１／パクリタキセルを確立するために行った。新しい回収ＳＧＣ−７９０１細胞を、従来の条件のもとで２世代または３世代にわたって培養して、細胞を安定に成長させた。培養培地を、消化期間を通して細胞を継代培養した翌日に取り替えたとき、元となるＳＧＣ−７９０１に、ＩＣ５０の１／１０の初期濃度で、パクリタキセルを加えた。培養培地を、薬剤が加えられた翌日に取り替え、従来の継代培養が行われている間、パクリタキセルの濃度を維持した。パクリタキセルの各濃度のもとで細胞が安定に成長することができた後で、薬物の濃度を増大させた。２．５ｍｇ／Ｌのパクリタキセルを含有する培養培地において、細胞が安定に成長することができるまで培養し続けた。この期間が１２ヶ月続いた。
【０１５１】
ＭＣＦ−７／Ｔパクリタキセル耐性ヒト乳ガン細胞系を確立するためのプロセス：
低濃度量増加連続誘導法を適用して、元となるＭＣＦ−７細胞からの誘導を、薬物耐性ヒト乳ガン細胞系ＭＣＦ−７／パクリタキセルを確立するために行った。新しい回収ＭＣＦ−７細胞を、従来の条件のもとで２世代または３世代にわたって培養して、細胞を安定に成長させた。培養培地を、消化期間を通して細胞を継代培養した翌日に取り替えたとき、元となるＭＣＦ−７に、ＩＣ５０の１／１０の初期濃度で、パクリタキセルを加えた。培養培地を、薬剤が加えられた翌日に取り替え、従来の継代培養が行われている間、パクリタキセルの濃度を維持した。パクリタキセルの各濃度のもとで細胞が安定に成長することができた後で、薬物の濃度を増大させた。２．５ｍｇ／Ｌのパクリタキセルを含有する培養培地において、細胞が安定に成長することができるまで培養し続けた。この期間が１２ヶ月続いた。
【０１５２】
ＰＣ−３／Ｔパクリタキセル耐性ヒト前立腺ガン細胞系を確立するためのプロセス：
低濃度量増加連続誘導法を適用して、元となるＰＣ−３細胞からの誘導を、薬物耐性ヒト前立腺ガン細胞系ＰＣ−３／パクリタキセルを確立するために行った。新しい回収ＰＣ−３細胞を、従来の条件のもとで２世代または３世代にわたって培養して細胞を安定に成長させた。培養培地を、消化期間を通して細胞を継代培養した翌日に取り替えたとき、元となるＰＣ−３に、ＩＣ５０の１／１０の初期濃度で、パクリタキセルを加えた。培養培地を、薬剤が加えられた翌日に取り替え、従来の継代培養が行われている間、パクリタキセルの濃度を維持した。パクリタキセルの各濃度のもとで細胞が安定に成長することができた後で、薬物の濃度を増大させた。０．５ｍｇ／Ｌのパクリタキセルを含有する培養培地において、細胞が安定に成長することができるまで培養し続けた。この期間が１０ヶ月間続いた。
【０１５３】
ＢｘＰＣ−３／Ｔパクリタキセル耐性ヒト膵臓ガン細胞系を確立するためのプロセス：
低濃度量増加連続誘導法を適用して、元となるＢｘＰＣ−３細胞からの誘導を、薬物耐性ヒト膵臓ガン細胞系ＢｘＰＣ−３／パクリタキセルを確立するために行った。新しい回収ＢｘＰＣ−３細胞を、従来の条件のもとで２世代または３世代にわたって培養して細胞を安定に成長させた。培養培地を、消化期間を通して細胞を継代培養した翌日に取り替えたとき、元となるＢｘＰＣ−３に、ＩＣ５０の１／１０の初期濃度で、パクリタキセルを加えた。培養培地を、薬剤が加えられた翌日に取り替え、従来の継代培養が行われている間、パクリタキセルの濃度を維持した。パクリタキセルの各濃度のもとで細胞が安定に成長することができた後で、薬物の濃度を増大させた。３ｍｇ／Ｌのパクリタキセルを含有する培養培地において、細胞が安定に成長することができるまで培養し続けた。この期間が１２ヶ月続いた。
【０１５４】
４．実験動物：Ｋｕｎｍｉｎｇマウス（または指定の正常マウス）（Ｔｈｉｒｄ  Ｍｉｌｉｔａｒｙ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙの動物センターから購入）、
ＢＡＬＢ／Ｃ−ｎｕ／ｎｕマウス（または指定のヌードマウス）（Ｓｈａｎｇｈａｉ  Ｓｌａｃｋ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入）
５．細胞培養法：関連する細胞系を、５％のＣＯ２を含有する３７℃のインキュベーターに入れ、（１０％のウシ胎児血清、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン、１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシンを含有する）ＤＭＥＭまたはＲＰＭＩ１６４０の完全培養培地によって培養し、０．２５％トリプシン−ＥＤＴＡを使用して、週に２〜３回、消化し、継代培養した。
【０１５５】
６．投与：陰性コントロール群、陽性コントロール群（例えば、ギンセノシド−ブランクリポソームコントロール群、パクリタキセルコントロール群、従来型リポソーム−パクリタキセルコントロール群、またはアルブミン−パクリタキセルコントロール群）、および薬物負荷ギンセノシドリポソーム群が、それぞれの実験のために設定される。少なくとも６点の濃度の勾配が設定される（２分の１の希釈、または５倍希釈、それぞれの濃度について３つのウエル）。
【０１５６】
７．腫瘍細胞の阻害濃度ＩＣ５０のアッセイ：対数増殖期の腫瘍細胞をトリプシンにより消化し、それにより、ある特定の濃度の細胞液を得て、その後、５０００細胞／ウエルの密度（それぞれのウエルについて１００μｌ）により９６ウエルプレートに播種した。異なる濃度のサンプルを含有する新鮮な培養培地と、対応する溶媒コントロールとを、それぞれのウエルについて１００μｌ加えた（ＤＭＳＯの最終濃度：０．５％未満）。それぞれのサンプルでは１０点の用量の群を設定し、それぞれの群では３つの並列ウエルを設定し、上清を３７℃でのインキュベーターにおける７２時間の培養の後で除いた。１００μｌのＰＢＳおよび１０μｌのＣＣＫ−８をそれぞれのウエルに加え、マイクロ振動器によって振とうして均一にし、３時間にわたって培養し続けた。光学密度（ＯＤ）を、６３０ｎｍの参照波長および４５０ｎｍの検出波長においてマイクロプレートリーダーによって求める。溶媒により処理される腫瘍細胞をコントロール群とし、ＩＣ５０をメジアン効果の式に従って計算した。
【０１５７】
８．インビトロ細胞実験のアッセイ：対数増殖期の腫瘍細胞を集め、（１０％のウシ胎児血清、１００Ｕ／ｍｌのペニシリン、１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシンを含有する）ＤＭＥＭ完全培養培地に再懸濁し、最終濃度が４×１０４細胞／ｍｌであった。９６ウエル細胞培養プレートにおいて、２００μｌの上記細胞懸濁物をそれぞれのウエルに加え（８×１０３細胞／ウエル）、５％のＣＯ２で満たされる３７℃での細胞インキュベーターにおいて４８時間培養した。ＤＭＥＭ完全培養培地を、異なる濃度を有する２００μＬの抗腫瘍薬によりそれぞれ置き換えた。薬物の最終濃度を、少なくとも６つの群に設定した。ＤＭＥＭ完全培養培地を陰性コントロール群とした。それぞれの濃度が４つのウエルで設定され、実験を３回繰り返した。細胞を５％のＣＯ２で満たされる３７℃での細胞インキュベーターにおいて７２時間培養した後、２０μｌの、５ｍｇ／ｍＬのＭＴＴ溶液をそれぞれのウエルに加えた。細胞インキュベーターにおいてさらに４時間培養した後、上清を捨てた。１５０μｌのＤＭＳＯをそれぞれのウエルに加え、１０分間振とうした。ＯＤを連続スペクトル多機能マイクロプレートリーダー（Ｔｅｃａｎ  ｉｎｆｉｎｉｔｅ  Ｍ２００  ＴＥＣＡＮ、スイス）によって４９０ｎｍで求めた。細胞生存率を下記の式によって算出した：（細胞生存率（％）＝ＯＤ薬物／ＯＤコントロール×１００％）。
【０１５８】
細胞生存率（％）＝ＯＤ４９０（サンプル）／ＯＤ４９０（コントロール）×１００％；
式中、ＯＤ４９０（サンプル）は実験群のＯＤであり、ＯＤ４９０（コントロール）はブランクコントロール群のＯＤである。
【０１５９】
９．インビボ薬理学的有効性実験のアッセイ：１×１０７細胞／ｍＬ〜１０×１０７細胞／ｍＬの対数増殖期の腫瘍細胞を１８ｇ〜２０ｇのヌードマウスの右側の脇の下に１ｍＬのシリンジによってゆっくり皮下注入した。それぞれのヌードマウスに１００μｌを注入した。腫瘍の成長を、腫瘍の体積が約１００ｍｍ３になるまで観察した。動物を無作為に群に分け、投与を行った。２日毎に、マウスを重量測定し、腫瘍の体積を測定した。ノギスにより腫瘍の最大直径および最小直径を測定した。ヌードマウスを屠殺し、腫瘍の体積を測定した。統計学分析のために相対腫瘍体積（ＲＴＶ）、相対腫瘍増殖比（Ｔ／Ｃ）および腫瘍抑制率を計算した。
【０１６０】
腫瘍体積の計算式：Ｖ＝ａｂｈ／２、式中、ａは腫瘍の直径であり、ｂは腫瘍の横方向直径であり、ｈは腫瘍の高さである。
【０１６１】
相対腫瘍体積の計算式：ＲＴＶ＝Ｖｔ／Ｖ０、式中、Ｖｔは、ある特定の時間における腫瘍の体積であり、Ｖ０は投与時の腫瘍の体積である。
【０１６２】
相対腫瘍増殖比の計算式：Ｔ／Ｃ（％）＝ＴＲＴＶ／ＣＲＴＶ×１００％、式中、ＴＲＴＶは処置群のＲＴＶであり、ＣＲＴＶは溶媒コントロール群のＲＴＶである。
【０１６３】
腫瘍抑制率の計算式：腫瘍抑制率＝（溶媒コントロール群の腫瘍重量−薬物投与群の腫瘍重量）／溶媒コントロール群の腫瘍重量×１００％。
【０１６４】
治療効果の評価基準：Ｔ／Ｃ（％）＞６０は、効果がないことを示している；Ｔ／Ｃ（％）≦６０、かつ、溶媒コントロール群と比較して、Ｐ＜０．０５（腫瘍体積が統計学により処理されたとき）は、効果があることを示している。
【０１６５】
下記の実施形態において、操作のための温度および圧力は、別途指定される場合を除き、一般には室温および常圧を示し、ただし、室温は１０℃〜３０℃を示し、常圧は標準大気圧を示す。
【０１６６】
実施形態１  ギンセノシドＲｇ５ブランクリポソームの調製
１ｇのダイズレシチン、０．６ｇのギンセノシドＲｇ５および０．１ｇのダイズ油を２０ｍＬのクロロホルムに加え、室温で撹拌して、透明な溶液を形成した。４０℃から５０℃までの恒温水浴において回転蒸発によって有機溶媒を除いて、薄膜を形成し、２０ｍＬの５％グルコース水溶液（百分率はグルコース水溶液の総質量に対するグルコースの質量を示す）を加えた。リポソームの粒径が０．１ミクロンと０．３ミクロンとの間になるまで超音波の操作を行った。０．２２ミクロンの微多孔膜を使用してろ過し、それにより、ギンセノシドＲｇ５ブランクリポソームを含有する水溶液を得た。その後、前記水溶液をバイアルに分注し、それぞれのバイアルが１８０ｍｇのリポソームを含有した。前記水溶液を凍結乾燥機に入れて、７２時間にわたって凍結乾燥し、その後、保護ガス（アルゴンまたは窒素）を導入し、密封して、ギンセノシドＲｇ５ブランクリポソームを得た。試験によって、リポソームの平均粒径が５７．４３ｎｍであった（表１および図１を参照のこと）。
【０１６７】
【表２】
2018528269.tif 000019
【０１６８】
実施形態２  ギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームの調製
１ｇのダイズレシチン、０．６ｇのギンセノシドＲｇ５および０．３ｇのパクリタキセルをアセトニトリル２０ｍＬに加え、室温で撹拌して、透明な溶液を形成した。５０℃から６０℃までの恒温水浴において回転蒸発によって有機溶媒を除いて、薄膜を形成し、２０ｍＬの精製水を加えた。リポソームの粒径が０．１ミクロンと０．３ミクロンとの間になるまで超音波の操作を行った。０．２２ミクロンの微多孔膜を使用してろ過し、それにより、ギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームを含有する水溶液を得た。その後、前記水溶液をバイアルに分注し、それぞれのバイアルが３０ｍｇのパクリタキセルを含有した。前記水溶液を凍結乾燥機に入れて、７２時間にわたって凍結乾燥し、その後、保護ガス（アルゴンまたは窒素）を導入し、密封して、ギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームを得た。試験によって、リポソームの平均粒径が１１３．６ｎｍであった（表２および図２を参照のこと）。封入効率が９０％超であった。
【０１６９】
【表３】
2018528269.tif 000020
【０１７０】
実施形態３  ギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームの調製
０．７５ｇの卵レシチン、０．６ｇのギンセノシドＲｇ５、０．２ｇのパクリタキセル、０．２５ｇのコレステロールおよび０．２５ｇのトレオニンを２０ｍＬのメタノールに加え、室温で撹拌して、透明な溶液を形成した。６０℃から７０℃までの恒温水浴において回転蒸発によって有機溶媒を除いて、薄膜を形成し、２０ｍＬの５％グルコース水溶液（百分率はグルコース水溶液の総質量に対するグルコースの質量を示す）を加えた。リポソームの粒径が０．１ミクロンと０．３ミクロンとの間になるまで超音波の操作を行った。０．２２ミクロンの微多孔膜を使用してろ過し、それにより、ギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームを含有する水溶液を得た。その後、前記水溶液をバイアルに分注し、それぞれのバイアルが３０ｍｇのパクリタキセルを含有した。前記水溶液を凍結乾燥機に入れて、７２時間にわたって凍結乾燥し、その後、保護ガス（アルゴンまたは窒素）を導入し、密封して、ギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームを得た。試験によって、リポソームの平均粒径が１３２．６ｎｍであった（表３および図３を参照のこと）。封入効率が９０％超であった。
【０１７１】
【表４】
2018528269.tif 000021
【０１７２】
実施形態４  ギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームの調製
８ｇのダイズレシチン、６ｇのギンセノシドＲｇ５、１ｇのパクリタキセル、４ｇのダイズ油および２．５ｇのビタミンＣを２００ｍＬのエタノールに加え、室温で撹拌して、透明な溶液を形成した。６０℃から７０℃までで薄膜エバポレーターによって有機溶媒を除いて、薄膜を形成し、２００ｍＬの１０％トレハロース水溶液（百分率はトレハロース水溶液の総質量に対するトレハロースの質量を示す）を加えた。リポソームの粒径が０．１ミクロンと０．３ミクロンとの間になるまで、高圧ホモジナイザーによる均質化の操作を行った。０．２２ミクロンの微多孔膜を使用してろ過し、それにより、ギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームを含有する水溶液を得た。その後、前記水溶液をバイアルに分注し、それぞれのバイアルが３０ｍｇのパクリタキセルを含有した。前記水溶液を凍結乾燥機に入れて、７２時間にわたって凍結乾燥し、その後、保護ガス（アルゴンまたは窒素）を導入し、密封して、ギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームを得た。試験によって、リポソームの平均粒径が１１６．４ｎｍであった（表４および図４を参照のこと）。封入効率が９０％超であった。
【０１７３】
【表５】
2018528269.tif 000022
【０１７４】
実施形態５  ギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームの調製
７ｇのダイズレシチン、６ｇのギンセノシドＲｇ５、２ｇのパクリタキセル、４ｇのダイズ油、２．５ｇのコレステロールおよび０．５ｇのビタミンＥを２００ｍＬのジエチルエーテルに加え、室温で撹拌して、透明な溶液を形成した。３０℃から４０℃までで薄膜エバポレーターによって有機溶媒を除いて、薄膜を形成し、２００ｍＬの５％サッカロース水溶液（百分率はサッカロース水溶液の総質量に対するサッカロースの質量を示す）を加えた。リポソームの粒径が０．１ミクロンと０．３ミクロンとの間になるまで、高圧ホモジナイザーによる均質化の操作を行った。０．２２ミクロンの微多孔膜を使用してろ過し、それにより、ギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームを含有する水溶液を得た。その後、前記水溶液をバイアルに分注し、それぞれのバイアルが３０ｍｇのパクリタキセルを含有した。前記水溶液を凍結乾燥機に入れて、７２時間にわたって凍結乾燥し、その後、保護ガス（アルゴンまたは窒素）を導入し、密封して、ギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームを得た。試験によって、リポソームの平均粒径が１０９．８ｎｍであった（表５および図５を参照のこと）。封入効率が９０％超であった。
【０１７５】
【表６】
2018528269.tif 000023
【０１７６】
実施形態６  ギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームの調製
８ｇのＨＳＰＣ、６ｇのギンセノシドＲｇ５、２ｇのパクリタキセル、４ｇのダイズ油および０．５ｇのビタミンＥを２００ｍＬのクロロホルムに加え、室温で撹拌して、透明な溶液を形成した。３５℃〜４５℃で薄膜エバポレーターによって有機溶媒を除いて、薄膜を形成し、２００ｍＬの５％マンニトール水溶液（百分率はマンニトール水溶液の総質量に対するマンニトールの質量を示す）を加えた。リポソームの粒径が０．１ミクロンと０．３ミクロンとの間になるまで、高圧ホモジナイザーによる均質化の操作を行った。０．２２ミクロンの微多孔膜を使用してろ過し、それにより、ギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームを含有する水溶液を得た。その後、前記水溶液をバイアルに分注し、それぞれのバイアルが３０ｍｇのパクリタキセルを含有した。前記水溶液を凍結乾燥機に入れて、７２時間にわたって凍結乾燥し、その後、保護ガス（アルゴンまたは窒素）を導入し、密封して、ギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームを得た。試験によって、リポソームの平均粒径が１８６．７ｎｍであった（表６および図６を参照のこと）。封入効率が９０％超であった。
【０１７７】
【表７】
2018528269.tif 000024
【０１７８】
実施形態７  ギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームの調製
８ｇのＤＭＰＣ、６ｇのギンセノシドＲｇ５、１ｇのパクリタキセル、４ｇのダイズ油および０．１ｇのアスコルビン酸を２００ｍＬのエタノールに加え、５５℃から６５℃までで撹拌して、透明な溶液を形成した。６０℃から７０℃までで薄膜エバポレーターによって有機溶媒を除いて、薄膜を形成し、２００ｍＬの５％キシリトール水溶液（百分率はキシリトール水溶液の総質量に対するキシリトールの質量を示す）を加えた。リポソームの粒径が０．１ミクロンと０．３ミクロンとの間になるまで、高圧ホモジナイザーによる均質化の操作を行った。０．２２ミクロンの微多孔膜を使用してろ過し、それにより、ギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームを含有する水溶液を得た。その後、前記水溶液をバイアルに分注し、それぞれのバイアルが３０ｍｇのパクリタキセルを含有した。前記水溶液を凍結乾燥機に入れて、７２時間にわたって凍結乾燥し、その後、保護ガス（アルゴンまたは窒素）を導入し、密封して、ギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームを得た。試験によって、リポソームの平均粒径が１４６．７ｎｍであった（表７および図７を参照のこと）。封入効率が９０％超であった。
【０１７９】
【表８】
2018528269.tif 000025
【０１８０】
実施形態８  ギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームの調製
８ｇのＤＳＰＥ−ＰＥＧ（２０００）、６ｇのギンセノシドＲｇ５、２ｇのパクリタキセル、４ｇのオレイン酸ナトリウムおよび０．１ｇのプロピレングリコールを２００ｍＬのクロロホルムに加え、１０℃〜２０℃で撹拌して、透明な溶液を形成した。４０℃から５０℃までで薄膜エバポレーターによって有機溶媒を除いて、薄膜を形成し、２００ｍＬの５％ラクトース水溶液（百分率はラクトース水溶液の総質量に対するラクトースの質量を示す）を加えた。リポソームの粒径が０．１ミクロンと０．３ミクロンとの間になるまで、高圧ホモジナイザーによる均質化の操作を行った。０．２２ミクロンの微多孔膜を使用してろ過し、それにより、ギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームを含有する水溶液を得た。その後、前記水溶液をバイアルに分注し、それぞれのバイアルが３０ｍｇのパクリタキセルを含有した。前記水溶液を凍結乾燥機に入れて、７２時間にわたって凍結乾燥し、その後、保護ガス（アルゴンまたは窒素）を導入し、密封して、ギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームを得た。試験によって、リポソームの平均粒径が２１７．２ｎｍであった（表８および図８を参照のこと）。封入効率が９０％超であった。
【０１８１】
【表９】
2018528269.tif 000026
【０１８２】
実施形態９  ギンセノシドＲｇ５ドセタキセルリポソームの調製
０．８ｇのダイズレシチン、０．６ｇのギンセノシドＲｇ５、０．２ｇのドセタキセル、０．４ｇのダイズ油および０．５ｇのビタミンＣを２０ｍＬのエタノールに加え、室温で撹拌して、透明な溶液を形成した。有機溶媒を６０℃〜７０℃でロータリーエバポレーターによって除いて、薄膜を形成し、２０ｍＬの１０％トレハロース水溶液を加えた。超音波の操作を、リポソームの粒径が０．１〜０．３ミクロンの間になるまで行った。０．２２ミクロンの微多孔膜を使用してろ過し、それにより、ギンセノシドＲｇ５ドセタキセルリポソームを含有する水溶液を得た。次に、前記水溶液をバイアルに分注し、それぞれのバイアルが２０ｍｇのドセタキセルを含有した。前記水溶液を凍結乾燥機に入れて、７２時間にわたって凍結乾燥した後、保護ガス（アルゴンまたは窒素）を導入し、密封して、ギンセノシドＲｇ５ドセタキセルリポソームを得た。試験によって、リポソームの平均粒径が１５８ｎｍであった（表９および図９を参照のこと）。封入効率が９０％超であった。
【０１８３】
【表１０】
2018528269.tif 000027
【０１８４】
実施形態１０  ギンセノシドＲｇ５イリノテカン塩酸リポソームの調製
０．８ｇのダイズレシチン、０．６ｇのギンセノシドＲｇ５、０．２ｇのイリノテカン塩酸、０．４ｇのダイズ油および０．５ｇのビタミンＣを２０ｍＬのエタノールに加え、室温で撹拌して、透明な溶液を形成した。有機溶媒を６０℃〜７０℃でロータリーエバポレーターによって除いて、薄膜を形成し、２０ｍＬの１０％トレハロース水溶液（百分率はトレハロース水溶液の総質量に対するトレハロースの質量を示す）を加えた。超音波の操作を、リポソームの粒径が０．１〜０．３ミクロンの間になるまで行った。０．２２ミクロンの微多孔膜を使用してろ過し、それにより、ギンセノシドＲｇ５イリノテカン塩酸リポソームを含有する水溶液を得た。次に、前記水溶液をバイアルに分注し、それぞれのバイアルが１００ｍｇのイリノテカン塩酸を含有した。前記水溶液を凍結乾燥機に入れて、７２時間にわたって凍結乾燥した後、保護ガス（アルゴンまたは窒素）を導入し、密封して、ギンセノシドＲｇ５イリノテカン塩酸リポソームを得た。試験によって、リポソームの平均粒径が１２１．６ｎｍであった（表１０および図１０を参照のこと）。
【０１８５】
【表１１】
2018528269.tif 000028
【０１８６】
実施形態１１  ギンセノシドＲｇ５  ＨＣＰＴリポソームの調製
０．８ｇのダイズレシチン、０．６ｇのギンセノシドＲｇ５、０．２ｇのＨＣＰＴ、０．４ｇのダイズ油および０．５ｇのビタミンＣを２０ｍＬのエタノールに加え、室温で撹拌して、透明な溶液を形成した。有機溶媒を６０℃〜７０℃でロータリーエバポレーターによって除いて、薄膜を形成し、２０ｍＬの１０％トレハロース水溶液（百分率はトレハロース水溶液の総質量に対するトレハロースの質量を示す）を加えた。超音波の操作を、リポソームの粒径が０．１〜０．３ミクロンの間になるまで行った。０．２２ミクロンの微多孔膜を使用してろ過し、それにより、ギンセノシドＲｇ５  ＨＣＰＴリポソームを含有する水溶液を得た。次に、前記水溶液をバイアルに分注し、それぞれのバイアルが１０ｍｇのＨＣＰＴを含有した。前記水溶液を凍結乾燥機に入れて、７２時間にわたって凍結乾燥した後、保護ガス（アルゴンまたは窒素）を導入し、密封して、ギンセノシドＲｇ５  ＨＣＰＴリポソームを得た。試験によって、リポソームの平均粒径が１７７．９ｎｍであった（表１１および図１１を参照のこと）。
【０１８７】
【表１２】
2018528269.tif 000029
【０１８８】
実施形態１２  ギンセノシドＲｇ５塩酸ドキソルビシンリポソームの調製
０．８ｇのダイズレシチン、０．６ｇのギンセノシドＲｇ５、０．２ｇの塩酸ドキソルビシン、０．４ｇのダイズ油および０．５ｇのビタミンＣを２０ｍＬのエタノールに加え、室温で撹拌して、透明な溶液を形成した。有機溶媒を６０℃〜７０℃でロータリーエバポレーターによって除いて、薄膜を形成し、２０ｍＬの１０％トレハロース水溶液（百分率はトレハロース水溶液の総質量に対するトレハロースの質量を示す）を加えた。超音波の操作を、リポソームの粒径が０．１〜０．３ミクロンの間になるまで行った。０．２２ミクロンの微多孔膜を使用してろ過し、それにより、ギンセノシドＲｇ５塩酸ドキソルビシンリポソームを含有する水溶液を得た。次に、前記水溶液をバイアルに分注し、それぞれのバイアルが１０ｍｇの塩酸ドキソルビシンを含有した。前記水溶液を凍結乾燥機に入れて、７２時間にわたって凍結乾燥した後、保護ガス（アルゴンまたは窒素）を導入し、密封して、ギンセノシドＲｇ５塩酸ドキソルビシンリポソームを得た。試験によって、リポソームの平均粒径が１４４．５ｎｍであった（表１２および図１２を参照のこと）。
【０１８９】
【表１３】
2018528269.tif 000030
【０１９０】
実施形態１３  ギンセノシドＲｇ５アムホテリシンＢリポソームの調製
０．８ｇのダイズレシチン、０．６ｇのギンセノシドＲｇ５、０．２ｇのアムホテリシンＢ、０．４ｇのダイズ油および０．５ｇのビタミンＣを２０ｍＬのエタノールに加え、室温で撹拌して、透明な溶液を形成した。有機溶媒を６０℃〜７０℃でロータリーエバポレーターによって除いて、薄膜を形成し、２０ｍＬの１０％トレハロース水溶液（百分率はトレハロース水溶液の総質量に対するトレハロースの質量を示す）を加えた。超音波の操作を、リポソームの粒径が０．１〜０．３ミクロンの間になるまで行った。０．２２ミクロンの微多孔膜を使用してろ過し、それにより、ギンセノシドＲｇ５アムホテリシンＢリポソームを含有する水溶液を得た。次に、前記水溶液をバイアルに分注し、それぞれのバイアルが１０ｍｇのアムホテリシンＢを含有した。前記水溶液を凍結乾燥機に入れて、７２時間にわたって凍結乾燥した後、保護ガス（アルゴンまたは窒素）を導入し、密封して、ギンセノシドＲｇ５アムホテリシンＢリポソームを得た。試験によって、リポソームの平均粒径が１１９．２ｎｍであった（表１３および図１３を参照のこと）。
【０１９１】
【表１４】
2018528269.tif 000031
【０１９２】
実施形態１４  ギンセノシドＲｇ５塩酸ドキソルビシンリポソームの調製
０．８ｇのダイズレシチン、０．６ｇのギンセノシドＲｇ５、０．２ｇの塩酸ドキソルビシン、０．４ｇのダイズ油および０．５ｇのビタミンＣを２０ｍＬのエタノールに加え、室温で撹拌して、透明な溶液を形成した。有機溶媒を６０℃〜７０℃で回転蒸発によって除いて、薄膜を形成し、２０ｍＬの１０％トレハロース水溶液（百分率はトレハロース水溶液の総質量に対するトレハロースの質量を示す）を加えた。超音波の操作を、リポソームの粒径が０．１〜０．３ミクロンの間になるまで行った。０．２２ミクロンの微多孔膜を使用してろ過し、それにより、ギンセノシドＲｇ５塩酸ドキソルビシンリポソームを含有する水溶液を得た。その後、前記水溶液をバイアルに分注し、それぞれのバイアルが１０ｍｇの塩酸ドキソルビシンを含有した。前記水溶液を凍結乾燥機に入れて、７２時間にわたって凍結乾燥し、その後、保護ガス（アルゴンまたは窒素）を導入し、密封して、ギンセノシドＲｇ５塩酸ドキソルビシンリポソームを得た。試験によって、リポソームの平均粒径が１５８．２ｎｍであった（表１４および図１４を参照のこと）。
【０１９３】
【表１５】
2018528269.tif 000032
【０１９４】
実施形態１５  ギンセノシドＲｇ５硫酸ビンクリスチンリポソームの調製
０．８ｇのダイズレシチン、０．６ｇのギンセノシドＲｇ５、０．２ｇの硫酸ビンクリスチン、０．４ｇのダイズ油および０．５ｇのビタミンＣを２０ｍＬのエタノールに加え、室温で撹拌して、透明な溶液を形成した。有機溶媒を６０℃〜７０℃でロータリーエバポレーターによって除いて、薄膜を形成し、２０ｍＬの１０％トレハロース水溶液（百分率はトレハロース水溶液の総質量に対するトレハロースの質量を示す）を加えた。超音波の操作を、リポソームの粒径が０．１〜０．３ミクロンの間になるまで行った。０．２２ミクロンの微多孔膜を使用してろ過し、それにより、ギンセノシドＲｇ５硫酸ビンクリスチンリポソームを含有する水溶液を得た。次に、前記水溶液をバイアルに分注し、それぞれのバイアルが１ｍｇの硫酸ビンクリスチンを含有した。前記水溶液を凍結乾燥機に入れて、７２時間にわたって凍結乾燥した後、保護ガス（アルゴンまたは窒素）を導入し、密封して、ギンセノシドＲｇ５硫酸ビンクリスチンリポソームを得た。試験によって、リポソームの平均粒径が１７７．９ｎｍであった（表１５および図１５を参照のこと）。
【０１９５】
【表１６】
2018528269.tif 000033
【０１９６】
実施形態１６  ギンセノシドＲｇ５オキサリプラチンリポソームの調製
０．８ｇのダイズレシチン、０．６ｇのギンセノシドＲｇ５、０．２ｇのオキサリプラチン、０．４ｇのダイズ油および０．５ｇのビタミンＣを２０ｍＬのエタノールに加えし、室温で撹拌して、透明な溶液を形成した。有機溶媒を６０℃〜７０℃でロータリーエバポレーターによって除いて、薄膜を形成し、２０ｍＬの１０％トレハロース水溶液（百分率はトレハロース水溶液の総質量に対するトレハロースの質量を示す）を加えた。超音波の操作を、リポソームの粒径が０．１〜０．３ミクロンの間になるまで行った。０．２２ミクロンの微多孔膜を使用してろ過し、それにより、ギンセノシドＲｇ５オキサリプラチンリポソームを含有する水溶液を得た。次に、前記水溶液をバイアルに分注し、それぞれのバイアルが５０ｍｇのオキサリプラチンを含有した。前記水溶液を凍結乾燥機に入れて、７２時間にわたって凍結乾燥した後、保護ガス（アルゴンまたは窒素）を導入し、密封して、ギンセノシドＲｇ５オキサリプラチンリポソームを得た。試験によって、リポソームの平均粒径が１２２．７ｎｍであった（表１６および図１６を参照のこと）。
【０１９７】
【表１７】
2018528269.tif 000034
【０１９８】
実施形態１７  ギンセノシドＲｇ５シスプラチンリポソームの調製
０．８ｇのダイズレシチン、０．６ｇのギンセノシドＲｇ５、０．２ｇのシスプラチン、０．４ｇのダイズ油および０．５ｇのビタミンＣを２０ｍＬのエタノールに加えし、室温で撹拌して、透明な溶液を形成した。有機溶媒を６０℃〜７０℃でロータリーエバポレーターによって除いて、薄膜を形成し、２０ｍＬの１０％トレハロース水溶液（百分率はトレハロース水溶液の総質量に対するトレハロースの質量を示す）を加えた。超音波の操作を、リポソームの粒径が０．１〜０．３ミクロンの間になるまで行った。０．２２ミクロンの微多孔膜を使用してろ過し、それにより、ギンセノシドＲｇ５シスプラチンリポソームを含有する水溶液を得た。次に、前記水溶液をバイアルに分注し、それぞれのバイアルが３０ｍｇのシスプラチンを含有した。前記水溶液を凍結乾燥機に入れて、７２時間にわたって凍結乾燥した後、保護ガス（アルゴンまたは窒素）を導入し、密封して、ギンセノシドＲｇ５シスプラチンリポソームを得た。試験によって、リポソームの平均粒径が１２４．３ｎｍであった（表１７および図１７を参照のこと）。
【０１９９】
【表１８】
2018528269.tif 000035
【０２００】
実施形態１８  ギンセノシドＲｇ５フルオロウラシルリポソームの調製
０．８ｇのダイズレシチン、０．６ｇのギンセノシドＲｇ５、０．２ｇのフルオロウラシル、０．４ｇのダイズ油および０．５ｇのビタミンＣを２０ｍＬのエタノールに加え、室温で撹拌して、透明な溶液を形成した。有機溶媒を６０℃〜７０℃でロータリーエバポレーターによって除いて、薄膜を形成し、２０ｍＬの１０％トレハロース水溶液（百分率はトレハロース水溶液の総質量に対するトレハロースの質量を示す）を加えた。超音波の操作を、リポソームの粒径が０．１〜０．３ミクロンの間になるまで行った。０．２２ミクロンの微多孔膜を使用して、ろ過し、それにより、ギンセノシドＲｇ５フルオロウラシルリポソームを含有する水溶液を得た。次に、前記水溶液をバイアルに分注し、それぞれのバイアルが２５０ｍｇのフルオロウラシルを含有した。前記水溶液を凍結乾燥機に入れて、７２時間にわたって凍結乾燥した後、保護ガス（アルゴンまたは窒素）を導入し、密封して、ギンセノシドＲｇ５フルオロウラシルリポソームを得た。試験によって、リポソームの平均粒径が１４０．３ｎｍであった（表１８および図１８を参照のこと）。
【０２０１】
【表１９】
2018528269.tif 000036
【０２０２】
実施形態１９  ギンセノシドＲｇ５従来型ＳｉＲＮＡリポソームの調製
０．８ｇのダイズレシチン、０．６ｇのギンセノシドＲｇ５、０．２ｇの従来型ＳｉＲＮＡ、０．４ｇのダイズ油および０．５ｇのビタミンＣを２０ｍＬのエタノールに加え、室温で撹拌して、透明な溶液を形成した。有機溶媒を６０℃〜７０℃でロータリーエバポレーターによって除いて、薄膜を形成し、２０ｍＬの１０％トレハロース水溶液（百分率はトレハロース水溶液の総質量に対するトレハロースの質量を示す）を加えた。超音波の操作を、リポソームの粒径が０．１〜０．３ミクロンの間になるまで行った。０．２２ミクロンの微多孔膜を使用してろ過し、それにより、ギンセノシドＲｇ５従来型ＳｉＲＮＡリポソームを含有する水溶液を得た。次に、前記水溶液をバイアルに分注し、それぞれのバイアルが２０ｍｇの従来型ＳｉＲＮＡを含有した。前記水溶液を凍結乾燥機に入れて、７２時間にわたって凍結乾燥した後、保護ガス（アルゴンまたは窒素）を導入し、密封して、ギンセノシドＲｇ５従来型ＳｉＲＮＡリポソームを得た。試験によって、リポソームの平均粒径が８４．５８ｎｍであった（表１９および図１９を参照のこと）。
【０２０３】
【表２０】
2018528269.tif 000037
【０２０４】
実施形態２０  ギンセノシドＲｇ５カバジタキセルリポソーム
０．８ｇのダイズレシチン、０．６ｇのギンセノシドＲｇ５、０．２ｇのカバジタキセル、０．４ｇのダイズ油および０．５ｇのビタミンＣを２０ｍＬのエタノールに加え、室温で撹拌して、透明な溶液を形成した。有機溶媒を６０℃〜７０℃でロータリーエバポレーターによって除いて、薄膜を形成し、２０ｍＬの１０％トレハロース水溶液（百分率はトレハロース水溶液の総質量に対するトレハロースの質量を示す）を加えた。超音波の操作を、リポソームの粒径が０．１〜０．３ミクロンの間になるまで行った。０．２２ミクロンの微多孔膜を使用してろ過し、それにより、ギンセノシドＲｇ５カバジタキセルリポソームを含有する水溶液を得た。次に、前記水溶液をバイアルに分注し、それぞれのバイアルが２５０ｍｇのカバジタキセルを含有した。前記水溶液を凍結乾燥機に入れて、７２時間にわたって凍結乾燥した後、保護ガス（アルゴンまたは窒素）を導入し、密封して、ギンセノシドＲｇ５カバジタキセルリポソームを得た。
【０２０５】
実施形態２１  ギンセノシドＲｇ５塩酸ドキソルビシンリポソームの調製
０．８ｇのダイズレシチン、０．６ｇのギンセノシドＲｇ５および０．５ｇのビタミンＣを２０ｍＬのエタノールに加え、室温で撹拌して、透明な溶液を形成した。有機溶媒を３５℃〜４０℃でロータリーエバポレーターによって除いて、薄膜を形成し、２０ｍＬの６．６％硫酸アンモニウム水溶液（百分率は硫酸アンモニウム水溶液の総質量に対する硫酸アンモニウムの質量を示す）を加えた。超音波の操作を、ブランクリポソームの粒径が０．１〜０．３ミクロンの間になるまで行い、それにより、ブランクリポソームの溶液を得た。前記ブランクリポソームの溶液を０．１５Ｍ（０．１５ｍｏｌ／Ｌ）のグルコース溶液において１２時間にわたって透析した後、対応する質量のトレハロースを、ブランクリポソームの溶液におけるトレハロースの質量分率が１０％に達するように、透析後のブランクリポソームの溶液の体積に応じて加えた：百分率はブランクリポソームの溶液の総質量に対するトレハロースの質量を示す。２０％の質量分率の塩酸ドキソルビシン水溶液１ｍＬ（０．２ｇの塩酸ドキソルビシン）を加え、３７℃で水浴において３０分間保った。０．２２ミクロンの微多孔膜を使用してろ過し、それにより、ギンセノシドＲｇ５塩酸ドキソルビシンリポソームを含有する水溶液を得た。次に、前記水溶液をバイアルに分注し、それぞれのバイアルが１０ｍｇの塩酸ドキソルビシンを含有した。前記水溶液を凍結乾燥機に入れて、７２時間にわたって凍結乾燥した後、保護ガス（アルゴンまたは窒素）を導入し、密封して、ギンセノシドＲｇ５塩酸ドキソルビシンリポソームを得た。試験によって、リポソームの平均粒径が１８０．８ｎｍであった（表２０および図２０を参照のこと）。
【０２０６】
【表２１】
2018528269.tif 000038
【０２０７】
実施形態２２  ギンセノシドＲｇ５アムホテリシンＢリポソームの調製
０．８ｇのダイズレシチン、０．６ｇのギンセノシドＲｇ５および０．５ｇのビタミンＣを２０ｍＬのエタノールに加え、室温で撹拌して、透明な溶液を形成した。有機溶媒を３５℃〜４０℃でロータリーエバポレーターによって除いて、薄膜を形成し、２０％の質量分率のアンホテリシンＢのＤＭＳＯ溶液１ｍＬ（アムホテリシンＢの質量が０．２２ｇであった）と、１０％の質量分率のトレハロース水溶液２０ｍＬ（２ｇのトレハロース）とを加えた。超音波の操作を、リポソームの粒径が０．１〜０．３ミクロンの間になるまで行い、それにより、活性物質が充填される(loaded with)リポソームの溶液を得た。この活性物質が充填されたリポソームの溶液を透析バッグの中に注ぎ、体積が前記溶液の体積の１００倍である純水において室温で１２時間にわたって透析した。０．２２ミクロンの微多孔膜を使用してろ過し、それにより、ギンセノシドＲｇ５アムホテリシンＢリポソームを含有する水溶液を得た。次に、前記水溶液をバイアルに分注し、それぞれのバイアルが１０ｍｇのアムホテリシンＢを含有した。前記水溶液を凍結乾燥機に入れて、７２時間にわたって凍結乾燥した後、保護ガス（アルゴンまたは窒素）を導入し、密封して、ギンセノシドＲｇ５アムホテリシンＢリポソームを得た。試験によって、リポソームの平均粒径が２１６．４ｎｍであった（表２１および図２１を参照のこと）。
【０２０８】
【表２２】
2018528269.tif 000039
【０２０９】
実施形態２３  ギンセノシドＲｇ５エピルビシンリポソームの調製
０．８ｇのダイズレシチン、０．６ｇのギンセノシドＲｇ５および０．５ｇのビタミンＣを２０ｍＬのエタノールに加え、室温で撹拌して、透明な溶液を形成した。有機溶媒を３５℃〜４０℃でロータリーエバポレーターによって除いて、薄膜を形成し、２０ｍＬの、６．６％の質量分率の硫酸アンモニウム水溶液を加えた。超音波の操作を、ブランクリポソームの粒径が０．１〜０．３ミクロンの間になるまで行い、それにより、ブランクリポソームの溶液を得た。このブランクリポソームの溶液を０．１５Ｍのグルコース溶液において１２時間にわたって透析した後、対応する質量のトレハロースを、ブランクリポソームの溶液におけるトレハロースの質量分率が１０％に達するように、透析後のブランクリポソームの溶液の体積に応じて加えた：百分率はブランクリポソームの溶液の総質量に対するトレハロースの質量を示す。２０％の質量分率のエピルビシン水溶液１ｍＬ（０．２ｇのエピルビシン）を加え、３７℃で水浴において３０分間保った。０．２２ミクロンの微多孔膜を使用してろ過し、それにより、ギンセノシドＲｇ５エピルビシンリポソームを含有する水溶液を得た。次に、前記水溶液をバイアルに分注し、それぞれのバイアルが１０ｍｇのエピルビシンを含有した。前記水溶液を凍結乾燥機に入れて、７２時間にわたって凍結乾燥した後、保護ガス（アルゴンまたは窒素）を導入し、密封して、ギンセノシドＲｇ５エピルビシンリポソームを得た。試験によって、リポソームの平均粒径が１８７．６ｎｍであった（表２２および図２２を参照のこと）。
【０２１０】
【表２３】
2018528269.tif 000040
【０２１１】
実施形態２３  ギンセノシドＲｇ５硫酸ビンクリスチンリポソームの調製
０．８ｇのダイズレシチン、０．６ｇのギンセノシドＲｇ５および０．５ｇのビタミンＣを２０ｍＬのエタノールに加え、室温で撹拌して、透明な溶液を形成した。有機溶媒を６０℃〜７０℃でロータリーエバポレーターによって除いて、薄膜を形成し、１０％の質量分率のトレハロースおよび５．７６％の質量分率のクエン酸の混合水溶液２０ｍＬを加えた。超音波の操作を、ブランクリポソームの粒径が０．１〜０．３ミクロンの間になるまで行い、それにより、ブランクリポソームの溶液を得た。２０％の質量分率の硫酸ビンクリスチン水溶液１ｍＬ（０．２ｇの硫酸ビンクリスチン）と、７．１％の質量分率のリン酸水素二ナトリウム水溶液６ｍＬとを加え、純水を加えて、外水層のｐＨが７．３０に達するように調節し、６０℃で水浴において３０分間保った。０．２２ミクロンの微多孔膜を使用してろ過し、それにより、ギンセノシドＲｇ５硫酸ビンクリスチンリポソームを含有する水溶液を得た。次に、前記水溶液をバイアルに分注し、それぞれのバイアルが１ｍｇの硫酸ビンクリスチンを含有した。前記水溶液を凍結乾燥機に入れて、７２時間にわたって凍結乾燥した後、保護ガス（アルゴンまたは窒素）を導入し、密封して、ギンセノシドＲｇ５硫酸ビンクリスチンリポソームを得た。試験によって、リポソームの平均粒径が１８８．３ｎｍであった（表２３および図２３を参照のこと）。
【０２１２】
【表２４】
2018528269.tif 000041
【０２１３】
実施形態２５  ギンセノシドＲｇ５オキサリプラチンリポソームの調製
０．８ｇのダイズレシチン、０．６ｇのギンセノシドＲｇ５、０．４ｇのダイズ油および０．５ｇのビタミンＣを２０ｍＬのエタノールに加え、室温で撹拌して、透明な溶液を形成した。有機溶媒を６０℃〜７０℃でロータリーエバポレーターによって除いて、薄膜を形成し、１％の質量分率のオキサリプラチンおよび１０％の質量分率のトレハロースの混合水溶液２０ｍＬ（０．２ｇのオキサリプラチン、２ｇのトレハロース）を加えた。超音波の操作を、リポソームの粒径が０．１〜０．３ミクロンの間になるまで行った。０．２２ミクロンの微多孔膜を使用してろ過し、それにより、ギンセノシドＲｇ５オキサリプラチンリポソームを含有する水溶液を得た。次に、前記水溶液をバイアルに分注し、それぞれのバイアルが５０ｍｇのオキサリプラチンを含有した。前記水溶液を凍結乾燥機に入れて、７２時間にわたって凍結乾燥した後、保護ガス（アルゴンまたは窒素）を導入し、密封して、ギンセノシドＲｇ５オキサリプラチンリポソームを得た。試験によって、リポソームの平均粒径が１８０．８ｎｍであった（表２４および図２４を参照のこと）。
【０２１４】
【表２５】
2018528269.tif 000042
【０２１５】
実施形態２６  ギンセノシドＲｇ５シスプラチンリポソームの調製
０．８ｇのダイズレシチン、０．６ｇのギンセノシドＲｇ５、０．４ｇのダイズ油および０．５ｇのビタミンＣを２０ｍＬのエタノールに加え、室温で撹拌して、透明な溶液を形成した。有機溶媒を６０℃〜７０℃のロータリーエバポレーターによって除いて、薄膜を形成し、１％の質量分率のシスプラチンおよび１０％の質量分率のトレハロースの混合水溶液２０ｍＬ（０．２ｇのシスプラチン、２ｇのトレハロース）を加えた。超音波の操作を、リポソームの粒径が０．１〜０．３ミクロンの間になるまで行った。０．２２ミクロンの微多孔膜を使用してろ過し、それにより、ギンセノシドＲｇ５シスプラチンリポソームを含有する水溶液を得た。次に、前記水溶液をバイアルに分注し、それぞれのバイアルが３０ｍｇのシスプラチンを含有した。前記水溶液を凍結乾燥機に入れて、７２時間にわたって凍結乾燥し、その後、保護ガス（アルゴンまたは窒素）を導入し、密封して、ギンセノシドＲｇ５シスプラチンリポソームを得た。試験によって、リポソームの平均粒径が１４３．６ｎｍであった（表２５および図２５を参照のこと）。
【０２１６】
【表２６】
2018528269.tif 000043
【０２１７】
実施形態２７  ギンセノシドＲｇ５フルオロウラシルリポソームの調製
０．８ｇのダイズレシチン、０．６ｇのギンセノシドＲｇ５、０．４ｇのダイズ油および０．５ｇのビタミンＣを２０ｍＬのエタノールに加え、室温で撹拌して、透明な溶液を形成した。有機溶媒を６０℃〜７０℃でロータリーエバポレーターによって除いて、薄膜を形成し、１％の質量分率のフルオロウラシルおよび１０％の質量分率のトレハロースの混合水溶液２０ｍＬ（０．２ｇのフルオロウラシル、２ｇのトレハロース）を加えた。超音波の操作を、リポソームの粒径が０．１〜０．３ミクロンの間になるまで行った。０．２２ミクロンの微多孔膜を使用して、ろ過し、それにより、ギンセノシドＲｇ５フルオロウラシルリポソームを含有する水溶液を得た。次に、前記水溶液をバイアルに分注し、それぞれのバイアルが２５０ｍｇのフルオロウラシルを含有した。前記水溶液を凍結乾燥機に入れて、７２時間にわたって凍結乾燥した後、保護ガス（アルゴンまたは窒素）を導入し、密封して、ギンセノシドＲｇ５フルオロウラシルリポソームを得た。試験によって、リポソームの平均粒径が１４５．６ｎｍであった（表２６および図２６を参照のこと）。
【０２１８】
【表２７】
2018528269.tif 000044
【０２１９】
実施形態２８  ギンセノシドＲｇ５従来型ＳｉＲＮＡリポソームの調製
０．５ｇのＤＯＴＡＰ、０．３ｇのダイズレシチン、０．６ｇのギンセノシドＲｇ５、０．４ｇのダイズ油および０．５ｇのビタミンＣを２０ｍＬのエタノールに加え、室温で撹拌して、透明な溶液を形成した。有機溶媒を６０℃〜７０℃のロータリーエバポレーターによって除いて、薄膜を形成し、１％の質量分率の従来型ＳｉＲＮＡおよび１０％の質量分率のトレハロースの混合水溶液２０ｍＬ（０．２ｇのＳｉＲＮＡ、２ｇのトレハロース）を加えた。超音波の操作を、リポソームの粒径が０．１〜０．３ミクロンの間になるまで行った。０．２２ミクロンの微多孔膜を使用してろ過し、それにより、ギンセノシドＲｇ５従来型ＳｉＲＮＡリポソームを含有する水溶液を得た。次に、前記水溶液をバイアルに分注し、それぞれのバイアルが２０ｍｇの従来型ＳｉＲＮＡを含有した。前記水溶液を凍結乾燥機に入れて、７２時間にわたって凍結乾燥した後、保護ガス（アルゴンまたは窒素）を導入し、密封して、ギンセノシドＲｇ５従来型ＳｉＲＮＡリポソームを得た。試験によって、リポソームの平均粒径が２１５．０ｎｍであった（表２７および図２７を参照のこと）。
【０２２０】
【表２８】
2018528269.tif 000045
【０２２１】
実施形態２９  ギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームの調製
８ｇの卵レシチン、６ｇのギンセノシドＲｇ５、１．５ｇのパクリタキセル、４ｇのダイズ油および０．５ｇのビタミンＣを２００ｍＬのクロロホルムに加え、室温で撹拌して、透明な溶液を形成した。有機溶媒を３５℃〜４５℃で薄膜エバポレーターによって除いて、薄膜を形成し、２００ｍＬの１０％トレハロース水溶液（百分率はトレハロース水溶液の総質量に対するトレハロースの質量を示す）を加えた。高圧ホモジナイザーによる均質化の操作を、リポソームの粒径が０．１〜０．３ミクロンの間になるまで行った。０．２２ミクロンの微多孔膜を使用してろ過し、それにより、ギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームを含有する水溶液を得た。次に、前記水溶液をバイアルに分注し、それぞれのバイアルが３０ｍｇのパクリタキセルを含有した。前記水溶液を凍結乾燥機に入れて、７２時間にわたって凍結乾燥した後、保護ガス（アルゴンまたは窒素）を導入し、密封して、ギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームを得た。
【０２２２】
実施形態３０  ギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームの調製
１４ｇの卵レシチン、１２ｇのギンセノシドＲｇ５、４ｇのパクリタキセル、８ｇのダイズ油、０．５ｇのコレステロールおよび０．５ｇのビタミンＥを４００ｍＬのクロロホルムに加え、室温で撹拌して、透明な溶液を形成した。有機溶媒を３５℃〜４５℃でロータリーエバポレーターによって除いて、薄膜を形成し、４００ｍＬの５％サッカロース水溶液（百分率はサッカロース水溶液の総質量に対するサッカロースの質量を示す）を加えた。高圧ホモジナイザーによる均質化の操作を、リポソームの粒径が０．１〜０．３ミクロンの間になるまで行った。０．２２ミクロンの微多孔膜を使用してろ過し、それにより、ギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームを含有する水溶液を得た。次に、前記水溶液をバイアルに分注し、それぞれのバイアルが３０ｍｇのパクリタキセルを含有した。前記水溶液を凍結乾燥機に入れて、７２時間にわたって凍結乾燥し、その後、保護ガス（アルゴンまたは窒素）を導入し、密封して、ギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームを得た。
【０２２３】
実施形態３１  ギンセノシドＲｇ５ドセタキセルリポソームの調製
８ｇの卵レシチン、６ｇのギンセノシドＲｇ５、３ｇのドセタキセル、４ｇのダイズ油および０．５ｇのビタミンＣを２００ｍＬのクロロホルムに加え、室温で撹拌して、透明な溶液を形成した。有機溶媒を３５℃〜４５℃で膜エバポレーターによって除いて、薄膜を形成し、２００ｍＬの１０％トレハロース水溶液（百分率はトレハロース水溶液の総質量に対するトレハロースの質量を示す）を加えた。超音波の操作を、リポソームの粒径が０．１〜０．３ミクロンの間になるまで行った。０．２２ミクロンの微多孔膜を使用してろ過し、それにより、ギンセノシドＲｇ５ドセタキセルリポソームを含有する水溶液を得た。次に、前記水溶液をバイアルに分注し、それぞれのバイアルが２０ｍｇのドセタキセルを含有した。前記水溶液を凍結乾燥機に入れて、７２時間にわたって凍結乾燥した後、保護ガス（アルゴンまたは窒素）を導入し、密封して、ギンセノシドＲｇ５ドセタキセルリポソームを得た。
【０２２４】
実施形態３２  ギンセノシドＲｇ５イリノテカン塩酸リポソームの調製
８ｇの卵レシチン、６ｇのギンセノシドＲｇ５、２ｇのイリノテカン塩酸および４ｇのダイズ油を２００ｍＬのクロロホルムに加え、室温で撹拌して、透明な溶液を形成した。有機溶媒を３５℃〜４５℃でロータリーエバポレーターによって除いて、薄膜を形成し、２００ｍＬの１０％トレハロース水溶液（百分率はトレハロース水溶液の総質量に対するトレハロースの質量を示す）を加えた。超音波の操作を、リポソームの粒径が０．１〜０．３ミクロンの間になるまで行った。０．２２ミクロンの微多孔膜を使用してろ過し、それにより、ギンセノシドＲｇ５イリノテカン塩酸リポソームを含有する水溶液を得た。その後、前記水溶液をバイアルに分注し、それぞれのバイアルが１００ｍｇのイリノテカン塩酸を含有した。前記水溶液を凍結乾燥機に入れて、７２時間にわたって凍結乾燥した後、保護ガス（アルゴンまたは窒素）を導入し、密封して、ギンセノシドＲｇ５イリノテカン塩酸リポソームを得た。
【０２２５】
応用実施形態
下記の応用実施形態において、Ｃ（μＭ）は濃度を意味し、ただし、タキソール＋Ｒｇ５の濃度は、ギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームにおけるパクリタキセルおよびギンセノシドＲｇ５の濃度を示し、例えば、５＋３０は、ギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームにおいて、パクリタキセルの濃度が５μＭであり、ギンセノシドＲｇ５の濃度が３０μＭであることを意味する。時間（ｄ）は時間（日）を意味する。
【０２２６】
下記の応用実施形態において、特記しない限り、ギンセノシドＲｇ５ブランクリポソームは、実施形態１に従って調製されるギンセノシドＲｇ５ブランクリポソーム（これはＲｇ５ブランクと略記される）を示す；特記しない限り、ギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームは、実施形態４に従って調製されるギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームを示す（これは、タキソール＋Ｒｇ５と略記される）；従来のパクリタキセル注射剤（タキソール）は市販されている（これはタキソールと略記される）。
【０２２７】
応用実施形態１：ヒト肺ガン細胞系（Ａ５４９）／パクリタキセル耐性ヒト肺ガン細胞系（Ａ５４９／Ｔ）に対するギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームについてのインビトロ細胞実験およびインビボ動物実験
１．インビトロ細胞実験
インビトロ細胞実験のアッセイに従って、ヒト肺ガン細胞系（Ａ５４９）またはパクリタキセル耐性ヒト肺ガン細胞系（Ａ５４９／Ｔ）の細胞生存率を、それぞれ、従来のパクリタキセル注射剤（タキソール）、ギンセノシドＲｇ５ブランクリポソーム（ブランクＲｇ５）およびギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソーム（タキソール＋Ｒｇ５）に関して求めた。１０点の異なる薬物濃度を表２８および表２９に示されるように設定した。具体的な実験データが、表２８、表２９、ならびに図２８、図２９に示される。図２８は、ヒト肺ガン細胞系（Ａ５４９）に対するタキソール、ブランクＲｇ５、およびタキソール＋Ｒｇ５の細胞生存率のグラフである；図２９は、パクリタキセル耐性ヒト肺ガン細胞系系（Ａ５４９／Ｔ）に対するタキソール、ブランクＲｇ５、およびタキソール＋Ｒｇ５の細胞生存率のグラフである。
【０２２８】
【表２９】
2018528269.tif 000046
【０２２９】
表２８および図２８から、ギンセノシドＲｇ５ブランクリポソームの活性がヒト肺ガン細胞系（Ａ５４９）に対して比較的弱く、タキソール＋Ｒｇ５の活性が従来のパクリタキセル注射剤と比較してわずかに改善されたことが示される。
【０２３０】
【表３０】
2018528269.tif 000047
【０２３１】
表２９および図２９から、低い用量ではとりわけ、より低い細胞生存率を示した従来のパクリタキセル注射剤と比較して、ギンセノシドＲｇ５ブランクリポソームがパクリタキセル耐性ヒト肺ガン細胞系（Ａ５４９／Ｔ）に対してより良好な活性を有し、タキソール＋Ｒｇ５がパクリタキセル耐性ヒト肺ガン細胞系（Ａ５４９／Ｔ）に対して活性が向上したことが示される。
【０２３２】
２．ＩＣ５０のアッセイに従って、ヒト肺ガン細胞系（Ａ５４９）およびパクリタキセル耐性ヒト肺ガン細胞系（Ａ５４９／Ｔ）に対するブランクＲｇ５、タキソール、およびタキソール＋Ｒｇ５のＩＣ５０をそれぞれ調べた。実験データが表３０に示される。
【０２３３】
【表３１】
2018528269.tif 000048
【０２３４】
表３０から、タキソール＋Ｒｇ５の活性がヒト肺ガン細胞系（Ａ５４９）に対して、従来のタキソール注射剤の活性の１．１倍〜１．２倍向上し、タキソール＋Ｒｇ５の活性がタキソール耐性ヒト肺ガン細胞系（Ａ５４９／Ｔ）に対して、従来のパクリタキセル注射剤の活性の６倍〜８倍向上することが示された。
【０２３５】
３．インビトロ細胞取り込み実験
ＤＡＰＩは、細胞膜に浸入し、細胞の核内の二本鎖ＤＮＡと結合して、標識機能を有し、ＤＡＰＩ自体の２０倍の蛍光を生じさせ得るであろう蛍光色素の一種である。ＥＢと比較して、二本鎖ＤＮＡを染色する感度が数倍強化される。青色蛍光を有する細胞を顕微鏡により観察でき、高い細胞標識化効率が蛍光顕微鏡によって認められる（ほぼ１００％）。ＤＡＰＩは、特定の場合において、正常な細胞の核染色および二本鎖ＤＮＡの染色のためにしばしば使用される。細胞を、熱ショック処理後、ＤＡＰＩにより３分間染色すると、細胞の核の形態学的変化を蛍光顕微鏡により観察できるであろう。ＤＡＰＩによる染色の後、青色蛍光を有する細胞の核が蛍光顕微鏡により観察され得るであろう。特定の条件のもとでは、ＤＩＰＡによって染色された細胞をナイルレッド(Nile red)培養培地に入れると、細胞がナイルレッドを吸収することができる。赤色蛍光と青色蛍光とを重ね合わせた後で、青紫色の蛍光が生じ得るであろう。ナイルレッドの取り込み量を青紫色蛍光の強度に従って求め得るであろう。
【０２３６】
パクリタキセル耐性ヒト肺ガン細胞系（Ａ５４９／Ｔ）を２４ウエルプレートに播種し、一晩培養した。Ｎｉｌ（遊離のナイルレッド）、Ｎｉｌ−ＬｉｐおよびＲｇ５−Ｎｉｌ−Ｌｉｐを使用して、等量のＮｉｌ（１０μｇ・ｍＬ−１）を無血清培地とともに含有する培養培地を調製し、遮光しながらそれぞれのウエルに加えた。それぞれの群を８つのウエルとした。培養培地を、細胞を遮光しながら２時間培養した後で捨て、その後、ＰＢＳによって３回洗浄した。それぞれの群における最初の４つのウエルを、３７℃で３０分間、４％パラホルムアルデヒドにより固定処理し、その後、ＰＢＳにより３回洗浄し、ＤＡＰＩ（４，６−ジアミジノ−２−フェニルインドール）により染色し、ＰＢＳ（リン酸緩衝液）により３回洗浄し、蛍光倒立顕微鏡を用いて観察した（図３０を参照のこと）。図３０−Ａ、図３０−Ｂ、図３０−Ｃは、それぞれ、Ｎｉｌ、Ｎｉｌ−ｌｉｐ、Ｒｇ５−Ｎｉｌ−ｌｉｐの蛍光倒立顕微鏡観察図であった。Ｎｉｌ＝遊離のナイルレッド；Ｎｉｌ−ｌｉｐ＝ナイルレッドリポソーム（すなわち、従来のブランクリポソームによって封入されるナイルレッド）；Ｒｇ５−Ｎｉｌ−ｌｉｐ＝ナイルレッドＲｇ５リポソーム（すなわち、ギンセノシドＲｇ５ブランクリポソームによって封入されるナイルレッド、詳しくは実施形態４を参照のこと、ただし、この場合、パクリタキセルの代わりにナイルレッドを使用した）。
【０２３７】
図３０−Ａは青色蛍光を示し、図３０−Ｂはわずかに赤紫色の蛍光を示し、図３０−Ｃはほぼ赤紫色の蛍光を示す。パクリタキセル耐性ヒト肺ガン細胞系（Ａ５４９／Ｔ）によるギンセノシドＲｇ５リポソームの取り込みが有意に増大したことを認めることができる。
【０２３８】
４．インビボ小動物画像化システム
出血性壊死を伴わない左前肢に１００ｍｍ３の均一サイズの腫瘍を有するＢＡＬＢ／Ｃ−ｎｕ／ｎｕマウスの尾に、１０％の近赤外蛍光プローブ（ＩＲ７８３）を含有するギンセノシドＲｇ５リポソーム（以降、実験群と略記され、近赤外蛍光プローブ（ＩＲ７８３）をギンセノシドＲｇ５ブランクリポソームに封入することによって得られたものである（詳しくは実施形態４を参照のこと、ただし、この場合、パクリタキセルの代わりに近赤外蛍光プローブ（ＩＲ７８３）を使用した））、および、近赤外蛍光プローブ（ＩＲ７８３）を含有する従来のブランクリポソーム（以降、コントロール群と略記され、近赤外蛍光プローブ（ＩＲ７８３）を従来のブランクリポソームに封入することによって得られたものである（そのプロセスは、近赤外蛍光プローブ（ＩＲ７８３）を充填するリポソームを調製するための当該分野において公知のプロセスであった））を、それぞれ、静脈内注射した。ＩＲ７８３蛍光のインビボ分布を、２時間目、６時間目および１０時間目にライブ撮像装置(live imager)によって記録した（図３１および図３２を参照のこと）。図３１−Ａ、図３１−Ｂおよび図３１−Ｃは、それぞれ、２時間目、６時間目および１０時間目にライブ撮像装置によって記録されるコントロール群のＩＲ７８３蛍光のインビボ分布の図であった。図３１−Ｇは蛍光物差しであり、この場合、蛍光強度に従って、色が順に、赤色、黄色、緑色および青色であり、赤色が最も強い蛍光を示し、青色が弱い蛍光を示す。図３１−Ｄ、図３１−Ｅおよび図３１−Ｆは、それぞれ、２時間目、６時間目および１０時間目にライブ撮像装置によって記録される実験群のＩＲ７８３蛍光のインビボ分布の図であった。図３１から、コントロール群におけるマウスの左前肢は蛍光を全く有さず、その一方で、実験群におけるマウスの左前肢は強い蛍光を有したことを認めることができ、このことは、ギンセノシドＲｇ５ブランクリポソームが腫瘍細胞に対する非常に強い標的化能を有することを示した。
【０２３９】
図３２は、コントロール群マウスおよび実験群マウスの単離された内臓の蛍光図であった。インビボ画像化実験の後、主要な内臓および腫瘍をコントロール群および実験群のマウスから取り出して、インビトロでのさらなる蛍光検出を行った。図３２−Ａおよび図３２−Ｂは、それぞれ、コントロール群マウスおよび実験群マウスの単離された内臓の蛍光図であった。図３２−Ｃは蛍光物差しであり、この場合、蛍光強度に従って、色が順に、赤色、黄色、緑色および青色であり、赤色が最も強い蛍光を示し、青色が弱い蛍光を示す。図３２−Ｂにおける腫瘍の蛍光は強く、このことは、ギンセノシドＲｇ５ブランクリポソームが腫瘍細胞に対する強い標的化能を有することを示唆した。
【０２４０】
図３１および図３２から、Ａ５４９肺ガンに対するギンセノシドＲｇ５ブランクリポソームの標的化能が促進したことが示された。
【０２４１】
５．インビボ薬理学的有効性実験
インビボ薬理学的有効性実験のアッセイに従って、皮下に腫瘍を有する２７匹のヌードマウスを無作為に下記の３つの群に分けた（それぞれの群において９匹）：コントロール群（コントロール群、０．９％ＮａＣｌ）、タキソール＋Ｒｇ５群（ギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソーム）およびアブラキサン群（アルブミン−タキソール群、これはＡｂｒと略される）。対応する製剤を、尾静脈を介して注射した（２５ｍｇ・ｋｇ−１の用量）。それぞれの群におけるマウスの体重の変化を２日毎に記録し、腫瘍の最大直径および最小直径をノギスにより測定した。腫瘍体積が下記の式によって計算される：Ｖ＝（ｄｍａｘ×ｄｍｉｎ２）／２、式中、ｄｍｉｎおよびｄｍａｘは、それぞれ、腫瘍の最小直径および最大直径（ｍｍ）である；相対腫瘍体積（ＲＴＶ）が測定結果に従って計算され、前記計算式が、ＲＴＶ＝Ｖｔ／Ｖ０である。式において、Ｖ０は、マウスに投与が開始されたときに測定された腫瘍体積であり、Ｖｔは、２日毎に測定された腫瘍体積であった。
【０２４２】
５．１  ヒト肺ガン細胞系（Ａ５４９）に対するコントロール群、タキソール＋Ｒｇ５群、およびアブラキサン群の抗腫瘍効果（薬理学的有効性）を比較する。詳細な実験データを表３１および図３３に示した。図３３は、ヒト肺ガン細胞系（Ａ５４９）に対するコントロール群、タキソール＋Ｒｇ５群、およびアブラキサン群の抗腫瘍グラフであった。
【０２４３】
【表３２】
2018528269.tif 000049
【０２４４】
表３１および図３３から、同じ期間の後において、コントロール群における腫瘍の体積が最大であり、その一方で、タキソール＋Ｒｇ５群では最小であることが示された。時間遅延とともに、コントロール群における腫瘍の体積が１２．２７４に達し、その一方で、タキソール＋Ｒｇ５群は２．７７に達しただけであり、アブラキサン群は２１日目において４．１９８であった。このことは、タキソール＋Ｒｇ５の薬理学的有効性が、ヒト肺ガンＡ５４９腫瘍保有マウスについてはアブラキサンよりもわずかに強いことを示唆した。
【０２４５】
５．２．パクリタキセル耐性ヒト肺ガン細胞系（Ａ５４９／Ｔ）に対するコントロール群、タキソール＋Ｒｇ５群、およびアブラキサン群の抗腫瘍効果（薬理学的有効性）を比較する。詳細な実験データを表３２および図３４に示した。図３４は、パクリタキセル耐性ヒト肺ガン細胞系（Ａ５４９／Ｔ）に対するコントロール群、タキソール＋Ｒｇ５群、およびアブラキサン群の抗腫瘍グラフであった。
【０２４６】
【表３３】
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【０２４７】
表３２および図３４から、同じ期間の後において、コントロール群における腫瘍の体積が最大であり、その一方で、タキソール＋Ｒｇ５群では最小であることが示された。時間遅延とともに、コントロール群における腫瘍の体積が２０．９７５に達し、その一方で、タキソール＋Ｒｇ５群は４．８２５に達しただけであり、アブラキサン群は２１日目において１１．５０４であった。このことは、パクリタキセル耐性ヒト肺ガンＡ５４９／Ｔ腫瘍保有マウスに対するタキソール＋Ｒｇ５の薬理学的有効性が、アブラキサンと比較して有意に改善されることを示唆した。
【０２４８】
６．ギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームの抗腫瘍転移実験（Ａ５４９／Ｔ）
インビボ薬理実験でのコントロール群およびタキソール＋Ｒｇ５群におけるパクリタキセル耐性ヒト肺ガン細胞系（Ａ５４９／Ｔ）保有マウスおよび正常マウスを屠殺した後、対応する内臓組織または腫瘍組織をパラフィン切片のために採取し、ヘマトキシリン−エオシンによって染色し、光学顕微鏡で観察した（図３５を参照のこと）。図３５−Ａ、図３５−Ｄおよび図３５−Ｇは、それぞれ、ヘマトキシリン−エオシンによって染色された後の正常マウスの肺組織、肝臓組織および腫瘍組織のパラフィン切片の顕微鏡観察図であった。図３５−Ｂ、図３５−Ｅおよび図３５−Ｈは、それぞれ、ヘマトキシリン−エオシンによって染色された後のコントロール群における腫瘍保有マウスの肺組織、肝臓組織および腫瘍組織のパラフィン切片の顕微鏡観察図であった。図３５−Ｃ、図３５−Ｆおよび図３５−Ｉは、それぞれ、ヘマトキシリン−エオシンによって染色された後における（ギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームによる処置の後の）実験群におけるマウスのパラフィン切片の肺組織、肝臓組織および腫瘍組織の顕微鏡観察図であった。
【０２４９】
図３５−Ａ、図３５−Ｂおよび図３５−Ｃから、実験群におけるマウスの肺組織のパラフィン切片をヘマトキシリン−エオシンによって染色した後において、色分布が正常マウスの色分布と同じであることが示されたこから、、腫瘍転移が実験群マウスにはないことが示唆された。しかしながら、コントロール群におけるマウスのパラフィン切片をヘマトキシリン−エオシンによって染色した後では、色分布が均一ではなかったことから、腫瘍転移がコントロール群マウスにはあることが示唆された。
【０２５０】
図３５から、タキソール＋Ｒｇ５がＡ５４９／Ｔの肺腫瘍転移に対してより良好な阻害効果を有することをが示された。
【０２５１】
応用実施形態２：
インビトロ細胞実験のアッセイに従って、ヒト乳ガン細胞系（ＭＣＦ−７）およびパクリタキセル耐性ヒト乳ガン細胞系（ＭＣＦ−７／Ｔ）に対するタキソール、ブランクＲｇ５、およびタキソール＋Ｒｇ５の効果を、インビトロ細胞実験およびインビボ動物実験において調べた。
【０２５２】
１．インビトロ薬理学的有効性実験アッセイ
インビトロ細胞実験のアッセイに従って、９点の異なる濃度を表３３および表３２に示されるように設定した。比生存率のデータおよびグラフを表３３〜図３４および図３６〜図３７に示した。図３６は、それぞれ、ヒト乳ガン細胞系（ＭＣＦ−７）に対するタキソール、ブランクＲｇ５、およびタキソール＋Ｒｇ５の細胞生存率グラフであった。図３７は、それぞれ、パクリタキセル耐性ヒト乳ガン細胞系（ＭＣＦ−７／Ｔ）に対するタキソール、ブランクＲｇ５、およびタキソール＋Ｒｇ５の細胞生存率グラフであった。
【０２５３】
【表３４】
2018528269.tif 000051
【０２５４】
表３３および図３６から、ギンセノシドＲｇ５ブランクリポソームの活性がＭＣＦ−７に対して比較的弱く、腫瘍細胞は高い生存率を有し、その一方で、タキソール＋Ｒｇ５の活性がインビトロではＭＣＦ−７生細胞に対して、従来のパクリタキセル注射剤よりもわずかに強く、腫瘍細胞は低い生存率を有することが示された。
【０２５５】
【表３５】
2018528269.tif 000052
【０２５６】
表３４および図３７から、とりわけ低用量で、ギンセノシドＲｇ５ブランクリポソームがタキソール耐性ヒト乳ガン細胞系（ＭＣＦ−７／Ｔ）に対してより良好な活性を有し、タキソール＋Ｒｇ５がパクリタキセル耐性ヒト乳ガン細胞（ＭＣＦ−７／Ｔ）に対して従来のパクリタキセル注射剤よりも強い活性を有し、その細胞生存率がより低いことが示された。
【０２５７】
２．ＩＣ５０のアッセイに従って、ヒト乳ガン細胞系（ＭＣＦ−７）およびパクリタキセル耐性ヒト乳ガン細胞系（ＭＣＦ−７／Ｔ）に対するブランクＲｇ５、タキソール、およびタキソール＋Ｒｇ５のＩＣ５０を調べた。実験データを表３５に示した。
【０２５８】
【表３６】
2018528269.tif 000053
【０２５９】
表３５から、タキソール＋Ｒｇ５の活性がヒト乳ガン細胞系（ＭＣＦ−７）に対して従来のタキソール注射剤の活性の１．１倍〜１．２倍高まり、タキソール＋Ｒｇ５の活性がパクリタキセル耐性ヒト乳ガン細胞系（ＭＣＦ−７／Ｔ）に対して従来のパクリタキセル注射剤の活性の２倍〜３倍高まることが示された。
【０２６０】
３．インビボ薬理学的有効性実験
２７匹の皮下腫瘍保有マウスを無作為に下記の３つの群に分けた（それぞれの群において９匹）：コントロール群（コントロール群、０．９％ＮａＣｌ）、タキソール＋Ｒｇ５群（ギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソーム）およびアブラキサン群（アルブミン−タキソール群、これはＡｂｒと略される）。対応する製剤を、尾静脈を介して注射した（２５ｍｇ・ｋｇ−１の用量）。それぞれの群におけるマウスの体重の変化を２日毎に記録し、腫瘍の最大直径および最小直径をノギスにより測定した。腫瘍体積が下記の式によって計算される：Ｖ＝（ｄｍａｘ×ｄｍｉｎ２）／２、式中、ｄｍｉｎおよびｄｍａｘは、それぞれ、腫瘍の最小直径および最大直径（ｍｍ）である；相対腫瘍体積（ＲＴＶ）が測定結果に従って計算され、計算式が、ＲＴＶ＝Ｖｔ／Ｖ０であり、式中、Ｖ０は、マウスに投与が開始されたときに測定された腫瘍体積であり、Ｖｔは、２日毎に測定された腫瘍体積であった。
【０２６１】
３．１  ヒト乳ガン細胞系（ＭＣＦ−７）に対するコントロール群、タキソール＋Ｒｇ５群、およびアブラキサン群の抗腫瘍効果（薬理学的有効性）を比較する。詳細な実験データを表３６および図３８に示した。図３８は、ヒト乳ガン細胞系（ＭＣＦ−７）に対するコントロール群、タキソール＋Ｒｇ５群、およびアブラキサン群の抗腫瘍グラフを示した。
【０２６２】
【表３７】
2018528269.tif 000054
【０２６３】
表３６および図３８から、同じ期間の後において、コントロール群における腫瘍の体積が最大であり、その一方で、タキソール＋Ｒｇ５群では最小であることが示された。時間遅延とともに、コントロール群における腫瘍の体積が８．２１４に達し、その一方で、タキソール＋Ｒｇ５群は２．６４に達しただけであり、アブラキサン群は２１日目において３．５１であった。このことは、タキソール＋Ｒｇ５の薬理学的有効性が、ヒト乳ガンＭＣＦ−７腫瘍保有マウスについてはアブラキサンよりもわずかに強いことを示唆した。
【０２６４】
３．２  パクリタキセル耐性ヒト乳ガン細胞系（ＭＣＦ−７／Ｔ）に対するコントロール群、タキソール＋Ｒｇ５群、およびアブラキサン群の抗腫瘍効果（薬理学的有効性）を比較する。詳細な実験データを表３７および図３９に示した。図３９は、パクリタキセル耐性ヒト乳ガン細胞系（ＭＣＦ−７／Ｔ）に対するコントロール群、タキソール＋Ｒｇ５群、およびアブラキサン群の抗腫瘍グラフであった。
【０２６５】
【表３８】
2018528269.tif 000055
【０２６６】
表３７および図３９から、同じ期間の後において、コントロール群における腫瘍の体積が最大であり、その一方で、タキソール＋Ｒｇ５群では最小であることが示された。時間遅延とともに、コントロール群における腫瘍の体積が２２．１５７に達し、その一方で、タキソール＋Ｒｇ５群は４．３２に達しただけであり、アブラキサン群は１４日目において８．７８であった。このことは、パクリタキセル耐性ヒト乳ガンＭＣＦ−７／Ｔ腫瘍保有マウスに対するタキソール＋Ｒｇ５の薬理学的有効性が、アブラキサンと比較して有意に改善されることを示唆した。
【０２６７】
応用実施形態３：ヒト卵巣ガン細胞系（Ａ２７８０）／パクリタキセル耐性ヒト卵巣ガン細胞系（Ａ２７８０／Ｔ）に対するギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームについてのインビトロ細胞実験
１．インビトロ薬理学的有効性実験アッセイ
インビトロ細胞実験のアッセイに従って、ヒト卵巣ガン細胞系（Ａ２７８０）／パクリタキセル耐性ヒト卵巣ガン細胞系（Ａ２７８０／Ｔ）に対するタキソール、ブランクＲｇ５、タキソール＋Ｒｇ５、およびアブラキサンの生存率をそれぞれ調べた。１０点の異なる薬物濃度を表３０および表３１に示されるように設定した。詳細な生存率データおよびグラフを、表３８および表３９、図４０および図４１に示した。図４０は、それぞれ、ヒト卵巣ガン細胞系（Ａ２７８０）に対するタキソール、ブランクＲｇ５、タキソール＋Ｒｇ５、およびアブラキサンの細胞生存率グラフであった。図４１は、それぞれ、パクリタキセル耐性ヒト卵巣ガン細胞系（Ａ２７８０／Ｔ）に対するタキソール、ブランクＲｇ５、タキソール＋Ｒｇ５、およびアブラキサンの細胞生存率グラフであった。
【０２６８】
【表３９】
2018528269.tif 000056
【０２６９】
表３８および図４０から、ギンセノシドＲｇ５ブランクリポソームの活性がヒト卵巣ガン細胞系（Ａ２７８０）に対して比較的弱く、タキソール＋Ｒｇ５の活性がインビトロではヒト卵巣ガン細胞系（Ａ２７８０）に対して従来のパクリタキセル注射剤およびアブラキサンよりもわずかに強いことが示された。
【０２７０】
【表４０】
2018528269.tif 000057
【０２７１】
表３９および図４１から、ギンセノシドＲｇ５ブランクリポソームがパクリタキセル耐性ヒト卵巣ガン細胞系（Ａ２７８０／Ｔ）に対してより良好な活性を有し、タキソール＋Ｒｇ５の活性がパクリタキセル耐性ヒト卵巣ガン細胞系（Ａ２７８０／Ｔ）に対して従来のパクリタキセル注射剤およびアブラキサンの活性よりも強いことが示された。
【０２７２】
２．ＩＣ５０のアッセイに従って、ヒト卵巣ガン細胞系（Ａ２７８０）およびパクリタキセル耐性ヒト卵巣ガン細胞系（Ａ２７８０／Ｔ）に対するブランクＲｇ５、タキソール、タキソール＋Ｒｇ５、およびアブラキサンのＩＣ５０を調べた。実験データを表４０に示した。
【０２７３】
【表４１】
2018528269.tif 000058
【０２７４】
表４０から、タキソール＋Ｒｇ５の活性がヒト卵巣ガン細胞系（Ａ２７８０）に対してパクリタキセルおよびアブラキサン注射剤の活性の１．１倍〜１．５倍高まり、タキソール＋Ｒｇ５の活性がパクリタキセル耐性ヒト卵巣ガン細胞系（Ａ２７８０／Ｔ）に対してパクリタキセルおよびアブラキサン注射剤の活性の３倍〜５倍高まることが示された。
【０２７５】
応用実施形態４  ヒト前立腺ガン細胞系（ＰＣ−３）／パクリタキセル耐性ヒト前立腺ガン細胞系（ＰＣ−３／Ｔ）に対するギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームについてのインビトロ細胞実験
１．インビトロ薬理学的有効性実験アッセイ
インビトロ細胞実験のアッセイに従って、ヒト前立腺ガン細胞系（ＰＣ−３）／パクリタキセル耐性ヒト前立腺ガン細胞系（ＰＣ−３／Ｔ）に対するタキソール、ブランクＲｇ５、タキソール＋Ｒｇ５、およびアブラキサンの生存率をそれぞれ調べた。１０点の異なる薬物濃度を表４１および表４２に示されるように設定した。詳細な生存率データおよびグラフを、表４１、表４２、ならびに図４２、図４３に示した。図４２は、それぞれ、ヒト前立腺ガン細胞系（ＰＣ−３）に対するタキソール、ブランクＲｇ５、タキソール＋Ｒｇ５、およびアブラキサンの細胞生存率グラフであった。図４３は、それぞれ、パクリタキセル耐性ヒト前立腺ガン細胞系（ＰＣ−３／Ｔ）に対するタキソール、ブランクＲｇ５、タキソール＋Ｒｇ５、およびアブラキサンの細胞生存率グラフであった。
【０２７６】
【表４２】
2018528269.tif 000059
【０２７７】
表４１および図４２から、ギンセノシドＲｇ５ブランクリポソームの活性が低用量ではヒト前立腺ガン細胞系（ＰＣ−３）に対して比較的弱いが、高用量ではより強いことが示された。タキソール＋Ｒｇ５の活性は、ヒト前立腺ガン細胞系（ＰＣ−３）に対しては従来のパクリタキセル注射剤およびアブラキサン注射剤の活性との有意差がなかった。
【０２７８】
【表４３】
2018528269.tif 000060
【０２７９】
表４２および図４３から、ギンセノシドＲｇ５ブランクリポソームの活性が高用量ではタキソール耐性ヒト前立腺ガン細胞系（ＰＣ−３／Ｔ）に対して比較的強いことが示された。タキソール＋Ｒｇ５の活性は、パクリタキセル耐性ヒト前立腺ガン細胞系（ＰＣ−３／Ｔ）に対して、従来のパクリタキセル注射剤およびアブラキサン注射剤の活性と比較して明白な利点を有した。
【０２８０】
２．ＩＣ５０のアッセイに従って、ヒト前立腺ガン細胞系（ＰＣ−３）およびパクリタキセル耐性ヒト前立腺ガン細胞系（ＰＣ−３／Ｔ）に対するブランクＲｇ５、タキソール、タキソール＋Ｒｇ５、およびアブラキサンのＩＣ５０をそれぞれ調べた。実験データを表４３に示した。
【０２８１】
【表４４】
2018528269.tif 000061
【０２８２】
表４３から、タキソール＋Ｒｇ５の活性がヒト前立腺ガン細胞系（ＰＣ−３）に対してパクリタキセル注射剤およびアブラキサン注射剤の活性の１．０倍〜１．５倍高まり、タキソール＋Ｒｇ５の活性がパクリタキセル耐性ヒト前立腺ガン細胞系（ＰＣ−３／Ｔ）に対してはパクリタキセル注射剤およびアブラキサン注射剤の活性の２０倍〜３０倍高まることが示された。
【０２８３】
応用実施形態５  ヒト上皮内膵臓ガン細胞系（ＢｘＰＣ−３）／パクリタキセル耐性膵臓ガン細胞系（ＢｘＰＣ−３／Ｔ）に対するギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームについてのインビトロ細胞実験
１．インビトロ薬理学的有効性実験アッセイ
インビトロ細胞実験のアッセイに従って、ヒト膵臓ガン細胞系（ＢｘＰＣ−３）／パクリタキセル耐性ヒト膵臓ガン細胞系（ＢｘＰＣ−３／Ｔ）に対するタキソール、ブランクＲｇ５、およびタキソール＋Ｒｇ５の生存率をそれぞれ調べた。９点の異なる薬物濃度を表４４および表４５に示されるように設定した。詳細な生存率データおよびグラフを、表４４および表４５、図４４および図４５に示した。図４４は、ヒト膵臓ガン細胞系（ＢｘＰＣ−３）に対するタキソール、ブランクＲｇ５、およびタキソール＋Ｒｇ５の細胞生存率グラフであった。図４５は、パクリタキセル耐性ヒト膵臓ガン細胞系（ＢｘＰＣ−３／Ｔ）に対するタキソール、ブランクＲｇ５、およびタキソール＋Ｒｇ５の細胞生存率グラフであった。
【０２８４】
【表４５】
2018528269.tif 000062
【０２８５】
表４４および図４４から、ギンセノシドＲｇ５ブランクリポソームの活性がヒト膵臓ガン細胞系（ＢｘＰＣ−３）に対して比較的強いことが示された。タキソール＋Ｒｇ５の活性は、ヒト膵臓ガン細胞系（ＢｘＰＣ−３）に対して従来のパクリタキセル注射剤の活性よりも強かった。
【０２８６】
【表４６】
2018528269.tif 000063
【０２８７】
表４５および図４５から、ギンセノシドＲｇ５の活性がパクリタキセル耐性ヒト膵臓ガン細胞系（ＢｘＰＣ−３／Ｔ）に対して比較的強いことが示された。ギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームの活性は、パクリタキセル耐性ヒト膵臓ガン細胞系（ＢｘＰＣ−３／Ｔ）に対して従来のタキソール注射剤の活性よりも強かった。
【０２８８】
２．ＩＣ５０のアッセイに従って、ヒト膵臓ガン細胞系（ＢｘＰＣ−３）およびパクリタキセル耐性ヒト膵臓ガン細胞系（ＢｘＰＣ−３／Ｔ）に対するブランクＲｇ５、タキソール、およびタキソール＋Ｒｇ５のＩＣ５０をそれぞれ調べた。実験データを表４６に示した。
【０２８９】
【表４７】
2018528269.tif 000064
【０２９０】
表４６から、タキソール＋Ｒｇ５の活性がヒト膵臓ガン細胞系（ＢｘＰＣ−３）に対して従来のパクリタキセルの活性の１．１倍〜１．５倍高まり、タキソール＋Ｒｇ５の活性がパクリタキセル耐性ヒト膵臓ガン細胞系（ＢｘＰＣ−３／Ｔ）に対してパクリタキセル注射剤の活性の２倍〜３倍高まることが示された。
【０２９１】
応用実施形態６
乳ガン細胞系（ＭＣＦ−７）／パクリタキセル耐性ヒト乳ガン細胞系（ＭＣＦ−７／Ｔ）に対するギンセノシドＲｇ５ドセタキセルリポソームについてのインビトロ細胞実験およびインビボ動物実験
１．インビトロ薬理学的有効性実験アッセイ
インビトロ細胞実験のアッセイに従って、ヒト乳ガン細胞系（ＭＣＦ−７）／パクリタキセル耐性ヒト乳ガン細胞系（ＭＣＦ−７／Ｔ）に対する従来のドセタキセル注射剤（Ｄｏｃ）、ギンセノシドＲｇ５ブランクリポソーム（ブランクＲｇ５）、ギンセノシドＲｇ５ドセタキセルリポソーム（Ｄｏｃ＋Ｒｇ５、実施形態９に従って調製されたもの）の生存率を調べた。９点の異なる薬物濃度を表４７および表４８に示されるように設定した。詳細な細胞生存率データおよびグラフを、表４７および表４８、図４６および図４７に示した。図４６は、ヒト乳ガン細胞系（ＭＣＦ−７）に対するＤｏｃ、ブランクＲｇ５、およびＤｏｃ＋Ｒｇ５の細胞生存率グラフであった；図４７は、パクリタキセル耐性ヒト乳ガン細胞系（ＭＣＦ−７／Ｔ）に対するＤｏｃ、ブランクＲｇ５、およびＤｏｃ＋Ｒｇ５の細胞生存率グラフであった。
【０２９２】
【表４８】
2018528269.tif 000065
【０２９３】
表４７および図４６から、ギンセノシドＲｇ５ブランクリポソームの活性が乳ガン細胞系（ＭＣＦ−７）に対して比較的弱く、Ｄｏｃ＋Ｒｇ５の活性が乳ガン細胞系（ＭＣＦ−７）に対して従来のＤｏｃ注射剤の活性よりもわずかに強いことが示された。
【０２９４】
【表４９】
2018528269.tif 000066
【０２９５】
表４８および図４７から、ギンセノシドＲｇ５ブランクリポソームの活性がパクリタキセル耐性ヒト乳ガン細胞系（ＭＣＦ−７／Ｔ）に対して比較的強く、Ｄｏｃ＋Ｒｇ５の活性がパクリタキセル耐性ヒト乳ガン細胞系（ＭＣＦ−７／Ｔ）に対して従来のＤｏｃ注射剤の活性よりも強いことが示された。
【０２９６】
２．ＩＣ５０のアッセイに従って、ヒト乳ガン細胞系（ＭＣＦ−７）およびパクリタキセル耐性ヒト乳ガン細胞系（ＭＣＦ−７／Ｔ）に対するＤｏｃ、ブランクＲｇ５、およびＤｏｃ＋Ｒｇ５のＩＣ５０を調べた。実験データを表４９に示した。
【０２９７】
【表５０】
2018528269.tif 000067
【０２９８】
表４９から、Ｄｏｃ＋Ｒｇ５の活性がヒト乳ガン細胞系（ＭＣＦ−７）に対して従来のドセタキセルの活性の１．２倍〜１．５倍高まり、Ｄｏｃ＋Ｒｇ５の活性がパクリタキセル耐性乳ガン細胞系（ＭＣＦ−７／Ｔ）に対してドセタキセルの活性の１．５倍〜２倍高まることが示された。
【０２９９】
３．インビボ薬理学的有効性実験
２７匹の皮下腫瘍保有マウスを無作為に下記の３つの群に分けた（それぞれの群において９匹）：コントロール群（コントロール群、０．９％ＮａＣｌ）、Ｄｏｃ＋Ｒｇ５群、およびアブラキサン群。対応する製剤を、尾静脈を介して注射した（２５ｍｇ・ｋｇ−１の用量）。それぞれの群におけるマウスの体重の変化を２日毎に記録し、腫瘍の最大直径および最小直径をノギスにより測定した。腫瘍体積が下記の式によって計算される：Ｖ＝（ｄｍａｘ×ｄｍｉｎ２）／２、式中、ｄｍｉｎおよびｄｍａｘは、それぞれ、腫瘍の最小直径および最大直径（ｍｍ）である；相対腫瘍体積（ＲＴＶ）が測定結果に従って計算され、計算式が、ＲＴＶ＝Ｖｔ／Ｖ０であり、式中、Ｖ０は、マウスに投与が開始されたときに測定された体積であり、Ｖｔは、２日毎に測定された腫瘍体積であった。
【０３００】
３．１  ヒト乳ガン細胞系（ＭＣＦ−７）に対するコントロール群、Ｄｏｃ＋Ｒｇ５群、およびアブラキサン群の抗腫瘍効果（薬理学的有効性）を比較する。詳細な実験データを表５０および図４８に示した。図４８は、ヒト乳ガン細胞系（ＭＣＦ−７）に対するコントロール群、Ｄｏｃ＋Ｒｇ５群、およびアブラキサン群の抗腫瘍グラフである。
【０３０１】
【表５１】
2018528269.tif 000068
【０３０２】
表５０および図４８から、Ｄｏｃ＋Ｒｇ５の薬理学的有効性が、ヒト乳ガン細胞系（ＭＣＦ−７）の腫瘍保有マウスを処置することにおいてアブラキサン注射剤の薬理学的有効性よりもわずかに強いことが示された。
【０３０３】
３．２  タキソール耐性ヒト乳ガン細胞系（ＭＣＦ−７／Ｔ）に対するコントロール群、Ｄｏｃ＋Ｒｇ５群、およびアブラキサン群の抗腫瘍効果（薬理学的有効性）を比較する。詳細な実験データを表５１および図４９に示した。図４９は、パクリタキセル耐性ヒト乳ガン細胞系（ＭＣＦ−７／Ｔ）に対するコントロール群、Ｄｏｃ＋Ｒｇ５群、およびアブラキサン群の抗腫瘍グラフであった。
【０３０４】
【表５２】
2018528269.tif 000069
【０３０５】
表５１および図４９から、Ｄｏｃ＋Ｒｇ５の薬理学的有効性が、パクリタキセル耐性ヒト乳ガン細胞系（ＭＣＦ−７／Ｔ）の腫瘍保有マウスを処置することにおいてアブラキサン注射剤と比較して明白な利点を有することが示された。
【０３０６】
応用実施形態７
ヒト前立腺ガン細胞系（ＰＣ−３）／パクリタキセル耐性ヒト前立腺ガン細胞系（ＰＣ−３／Ｔ）に対するギンセノシドＲｇ５カバジタキセルリポソームについてのインビトロ細胞実験
１．インビトロ薬理学的有効性実験アッセイ
インビトロ細胞実験のアッセイに従って、ヒト前立腺ガン細胞系（ＰＣ−３）／パクリタキセル耐性ヒト前立腺ガン細胞系（ＰＣ−３／Ｔ）に対する従来のカバジタキセル注射剤（Ｃａｂ）、ギンセノシドＲｇ５ブランクリポソーム（ブランクＲｇ５）およびギンセノシドＲｇ５カバジタキセルリポソーム（Ｃａｂ＋Ｒｇ５、実施形態２０に従って調製されたもの）の生存率をそれぞれ調べた。１０点の異なる薬物濃度を表４４および表４５に示されるように設定した。詳細な生存率データおよびグラフを、表５２、表５３、ならびに図５０、図５１に示した。図５０は、ヒト前立腺ガン細胞系（ＰＣ−３）に対するＣａｂ、ブランクＲｇ５、およびＣａｂ＋Ｒｇ５の細胞生存率グラフであった。図５１は、パクリタキセル耐性ヒト前立腺ガン細胞系（ＰＣ−３／Ｔ）に対するＣａｂ、ブランクＲｇ５、およびＣａｂ＋Ｒｇ５の細胞生存率グラフであった。
【０３０７】
【表５３】
2018528269.tif 000070
【０３０８】
表５２および図５０から、ギンセノシドＲｇ５ブランクリポソームの活性がヒト前立腺ガン細胞系（ＰＣ−３）に対して低用量では比較的弱いが、高用量では強いことが示された。Ｃａｂ＋Ｒｇ５の活性は、ヒト前立腺ガン細胞系（ＰＣ−３）に対して、従来のカバジタキセル注射剤の活性よりもわずかに強かった。
【０３０９】
【表５４】
2018528269.tif 000071
【０３１０】
表５３および図５１から、ギンセノシドＲｇ５ブランクリポソームの活性がパクリタキセル耐性ヒト前立腺ガン細胞系（ＰＣ−３／Ｔ）に対して低用量では比較的弱いが、高用量では強いことが示された。Ｃａｂ＋Ｒｇ５の活性は、パクリタキセル耐性ヒト前立腺ガン細胞系（ＰＣ−３／Ｔ）に対して従来のカバジタキセル注射剤の活性よりもわずかに強かった。
【０３１１】
２．ＩＣ５０のアッセイに従って、ヒト前立腺ガン細胞系（ＰＣ−３）およびパクリタキセル耐性ヒト前立腺ガン細胞系（ＰＣ−３／Ｔ）に対するＣａｂ、ブランクＲｇ５、およびタキソール＋Ｒｇ５のＩＣ５０をそれぞれ調べた。実験データを表５４に示した。
【０３１２】
【表５５】
2018528269.tif 000072
【０３１３】
表５４から、Ｃａｂ＋Ｒｇ５の活性がヒト前立腺ガン細胞系（ＰＣ−３）に対して従来のカバジタキセル注射剤の活性の１．１倍〜１．５倍高まり、Ｃａｂ＋Ｒｇ５の活性がパクリタキセル耐性ヒト前立腺ガン細胞系（ＰＣ−３／Ｔ）に対して従来のカバジタキセル注射剤の活性の１０倍〜２０倍高まることが示された。
【０３１４】
応用実施形態８
フルオロウラシル耐性ヒト肝臓ガン細胞系（Ｂｅｌ／ＦＵ）に対するギンセノシドＲｇ５フルオロウラシルリポソームについてのインビトロ細胞実験およびインビボ動物実験
１．インビトロ薬理学的有効性実験アッセイ
インビトロ細胞実験のアッセイに従って、フルオロウラシル耐性ヒト肝臓ガン細胞系（Ｂｅｌ／ＦＵ）に対するギンセノシドＲｇ５ブランクリポソーム（ブランクＲｇ５）、従来のフルオロウラシルリポソーム（ＦＵ）およびギンセノシドＲｇ５フルオロウラシルリポソーム（ＦＵ＋Ｒｇ５、実施形態１８に従って調製されたもの）の細胞生存率および細胞阻害率を調べた。１０点の異なる薬物濃度を表５５に示されるように設定し、詳細な細胞生存率データおよび細胞阻害データを表５５および図５２に示した。図５２は、フルオロウラシル耐性ヒト肝臓ガン細胞系（Ｂｅｌ／ＦＵ）に対するＦＵ＋Ｒｇ５、ブランクＲｇ５およびＦＵの細胞生存率グラフであった。
【０３１５】
【表５６】
2018528269.tif 000073
【０３１６】
２．ＩＣ５０のアッセイに従って、フルオロウラシル耐性ヒト肝臓ガン細胞系（Ｂｅｌ／ＦＵ）に対するＦＵ＋Ｒｇ５、ブランクＲｇ５およびＦＵのＩＣ５０をそれぞれ調べた。実験データを表５６に示した。
【０３１７】
【表５７】
2018528269.tif 000074
【０３１８】
表５５、表５６および図５２から、ギンセノシドＲｇ５ブランクリポソームの活性がフルオロウラシル耐性ヒト肝臓ガン細胞系（Ｂｅｌ／ＦＵ）に対して比較的弱く、ＦＵ＋Ｒｇ５の活性がフルオロウラシル耐性ヒト肝臓ガン細胞系（Ｂｅｌ／ＦＵ）に対して従来のフルオロウラシルリポソームの活性と比較して明白に利点を有することが示された。ＦＵ＋Ｒｇ５の活性がフルオロウラシル耐性ヒト肝臓ガン細胞系（Ｂｅｌ／ＦＵ）に対して従来のフルオロウラシルリポソームの活性の３倍高まった。
【０３１９】
３．インビボ薬理学的有効性実験：ヌードマウスに皮下移植された腫瘍の直径をノギスにより測定した。腫瘍が約１００ｍｍ３の平均体積にまで成長したとき、動物を無作為に群に分けた。従来のフルオロウラシルリポソーム（ＦＵ）の単回使用群についての用量が５ｍｇ／ｋｇであり、マウスに、３週間にわたって週に１回、静脈内注射した。ギンセノシドＲｇ５ブランクリポソーム（ブランクＲｇ５）の単回使用群についての用量が１５０ｍｇ／ｋｇであり、マウスに、３週間にわたって週に１回、静脈内注射した。ギンセノシドＲｇ５フルオロウラシルリポソーム（ＦＵ＋Ｒｇ５）群の用量が５＋１５０ｍｇ／ｋｇであり、これもまた、３週間にわたって週に１回、静脈内注射した。溶媒コントロール群には等量の生理食塩水を注射した。この実験の期間中、移植した腫瘍の直径を２日毎に測定した。腫瘍体積（ＴＶ）を計算するための式が、ＴＶ＝１／２×ａ×ｂ２であり、式中、「ａ」および「ｂ」は長さおよび幅をそれぞれ表す。相対腫瘍体積（ＲＴＶ）が測定結果に従って計算され、計算式が、ＲＴＶ＝Ｖｔ／Ｖ０であり、式中、Ｖ０は、マウスを群に分けたとき（すなわちｄ０）に測定された腫瘍体積であり、Ｖｔは、毎回測定される腫瘍体積である。
【０３２０】
フルオロウラシル耐性ヒト肝臓ガン細胞系（Ｂｅｌ／ＦＵ）に対するブランクＲｇ５、ＦＵ、およびＦＵ＋Ｒｇ５の抗腫瘍効果（薬理学的有効性）を比較する。詳細な実験データを表５７および図５３に示した。図５３は、フルオロウラシル耐性ヒト肝臓ガン細胞系（Ｂｅｌ／ＦＵ）に対するブランクＲｇ５、ＦＵ、およびＦＵ＋Ｒｇ５の抗腫瘍グラフであった。
【０３２１】
【表５８】
2018528269.tif 000075
【０３２２】
表５７および図５３から、ＦＵ＋Ｒｇ５の薬理学的有効性が、フルオロウラシル耐性ヒト肝臓ガン細胞系（Ｂｅｌ／ＦＵ）の腫瘍保有マウスを処置することにおいて従来のフルオロウラシルの薬理学的有効性と比較して明白な利点を有することが示された。
【０３２３】
応用実施形態９
シスプラチン抵抗性ヒト胃ガン細胞系（ＳＧＣ−７９０１／ＤＤＰ）に対するギンセノシドＲｇ５シスプラチンリポソームについてのインビトロ細胞実験およびインビボ動物実験
１．インビトロ薬理学的有効性実験アッセイ
インビトロ細胞実験のアッセイに従って、シスプラチン耐性ヒト胃ガン細胞系（ＳＧＣ−７９０１／ＤＤＰ）に対するギンセノシドＲｇ５ブランクリポソーム（ブランクＲｇ５）、従来のシスプラチンリポソーム（ＤＤＰ）およびギンセノシドＲｇ５シスプラチンリポソーム（ＤＤＰ＋Ｒｇ５、実施形態１７に従って調製されたもの）の細胞生存率および細胞阻害率を調べた。１１点の異なる薬物濃度を表５８に示されるように設定し、
詳細な細胞生存率データおよび細胞阻害率データを表５８および図５４に示した。図５４は、シスプラチン耐性ヒト胃ガン細胞系（ＳＧＣ−７９０１／ＤＤＰ）に対するブランクＲｇ５、ＤＤＰ、およびＤＤＰ＋Ｒｇ５の細胞生存率グラフであった。
【０３２４】
【表５９】
2018528269.tif 000076
【０３２５】
２．ＩＣ５０のアッセイに従って、シスプラチン耐性ヒト胃ガン細胞系（ＳＧＣ−７９０１／ＤＤＰ）に対するブランクＲｇ５、ＤＤＰ、およびＤＤＰ＋Ｒｇ５のＩＣ５０を調べた。実験データを表５９に示した。
【０３２６】
【表６０】
2018528269.tif 000077
【０３２７】
表５８、表５９および図５４から、ギンセノシドＲｇ５の薬理学活性がシスプラチン耐性ヒト胃ガン細胞系（ＳＧＣ−７９０１／ＤＤＰ）に対して比較的弱く、ＤＤＰ＋Ｒｇ５の活性がシスプラチン耐性ヒト胃ガン細胞系（ＳＧＣ−７９０１／ＤＤＰ）に対して従来のシスプラチンリポソームの活性と比較して明白な利点を有することが示された。ＤＤＰ＋Ｒｇ５の活性がシスプラチン耐性ヒト胃ガン細胞系（ＳＧＣ−７９０１／ＤＤＰ）に対して従来のシスプラチンリポソームの活性の５倍高まった。
【０３２８】
３．インビボ薬理学的有効性実験：ヌードマウスにおいて皮下移植された腫瘍の直径をノギスにより測定した。腫瘍が約１００ｍｍ３の平均体積にまで成長したとき、動物を無作為に群に分けた。従来のシスプラチンリポソーム（ＤＤＰ）の単回使用群についての用量が６ｍｇ／ｋｇであり、マウスに、３週間にわたって週に１回、静脈内注射した。ギンセノシドＲｇ５ブランクリポソーム（ブランクＲｇ５）の単回使用群についての用量が１５０ｍｇ／ｋｇであり、マウスに、３週間にわたって週に１回、静脈内注射した。ギンセノシドＲｇ５シスプラチンリポソーム（ＤＤＰ＋Ｒｇ５）群の用量が６＋１５０ｍｇ／ｋｇであり、これもまた、マウスに、３週間にわたって週に１回、静脈内注射した。溶媒コントロール群には等量の生理食塩水を注射した。この実験の期間中を通して、腫瘍の直径を２日毎に測定した。腫瘍体積（ＴＶ）を計算するための式が、ＴＶ＝１／２×ａ×ｂ２であり、式中、「ａ」および「ｂ」は長さおよび幅をそれぞれ表す。相対腫瘍体積（ＲＴＶ）が測定結果に従って計算され、計算式が、ＲＴＶ＝Ｖｔ／Ｖ０であり、式中、Ｖ０は、マウスを群に分けたときに測定された腫瘍体積であり、Ｖｔは、毎回測定された腫瘍体積であった。
【０３２９】
シスプラチン耐性ヒト胃ガン細胞系（ＳＧＣ−７９０１／ＤＤＰ）に対するブランクＲｇ５、ＤＤＰ、およびＤＤＰ＋Ｒｇ５の抗腫瘍効果（薬理学的有効性）を比較する。詳細な実験データを表６０および図５５に示した。図５５は、シスプラチン耐性ヒト胃ガン細胞系（ＳＧＣ−７９０１／ＤＤＰ）に対するブランクＲｇ５、ＤＤＰ、およびＤＤＰ＋Ｒｇ５の抗腫瘍グラフであった。
【０３３０】
【表６１】
2018528269.tif 000078
【０３３１】
表６０および図５５から、ＤＤＰ＋Ｒｇ５の薬理学的有効性が、シスプラチン耐性ヒト胃ガン細胞系（ＳＧＣ−７９０１／ＤＤＰ）の腫瘍保有マウスを処置することにおいて従来のシスプラチンの薬理学的有効性と比較して明白な利点を有することが示された。
【０３３２】
応用実施形態１０
ビンクリスチン耐性ヒト結腸ガン細胞系（ＨＣＴ−８／Ｖ）に対するギンセノシドＲｇ５硫酸ビンクリスチンリポソームについてのインビトロ細胞実験およびインビボ動物実験
１．インビトロ薬理学的有効性実験アッセイ
インビトロ細胞実験のアッセイに従って、ビンクリスチン耐性ヒト結腸ガン細胞系（ＨＣＴ−８／Ｖ）に対するギンセノシドＲｇ５ブランクリポソーム（ブランクＲｇ５）、従来のビンクリスチンリポソーム（Ｖ）およびギンセノシドＲｇ５硫酸ビンクリスチンリポソーム（Ｖ＋Ｒｇ５、実施形態１５に従って調製されたもの）の細胞生存率および細胞阻害率を調べた。１１点の異なる薬物濃度を表６１に示されるように設定し、詳細な細胞生存率データおよび細胞阻害率データを表６１および図５６に示した。図５６は、ビンクリスチン耐性ヒト結腸ガン細胞系（ＨＣＴ−８／Ｖ）に対するブランクＲｇ５、Ｖ、およびＶ＋Ｒｇ５の細胞生存率グラフであった。
【０３３３】
【表６２】
2018528269.tif 000079
【０３３４】
２．ＩＣ５０のアッセイに従って、ビンクリスチン耐性ヒト結腸ガン細胞系（ＨＣＴ−８／Ｖ）に対するブランクＲｇ５、Ｖ、およびＶ＋Ｒｇ５のＩＣ５０値を調べた。実験データを表６２に示した。
【０３３５】
【表６３】
2018528269.tif 000080
【０３３６】
表６１、表６２および図５６から、ギンセノシドＲｇ５ブランクリポソームの活性がビンクリスチン耐性ヒト結腸ガン細胞系（ＨＣＴ−８／Ｖ）に対して比較的弱く、Ｖ＋Ｒｇ５の活性がビンクリスチン耐性ヒト結腸ガン細胞系（ＨＣＴ−８／Ｖ）に対して従来のビンクリスチンの活性と比較して明白な利点を有することが示された。Ｖ＋Ｒｇ５の活性がビンクリスチン耐性ヒト結腸ガン細胞系（ＨＣＴ−８／Ｖ）に対して従来のビンクリスチンリポソームの活性の２倍高まった。
【０３３７】
３．インビボ薬理学的有効性実験
ヌードマウスにおける皮下移植された腫瘍の直径をノギスにより測定した。腫瘍が約１００ｍｍ３の平均体積にまで成長したとき、動物を無作為に群に分けた。従来のビンクリスチンリポソーム（Ｖ）の単回使用群の用量が０．５ｍｇ／ｋｇであり、マウスに、３週間にわたって週に１回、静脈内注射した。ギンセノシドＲｇ５ブランクリポソーム（ブランクＲｇ５）の単回使用群の用量が１５０ｍｇ／ｋｇであり、マウスに、３週間にわたって週に１回、静脈内注射した。ギンセノシドＲｇ５ビンクリスチンリポソーム（Ｖ＋Ｒｇ５）の用量が０．５＋１５０ｍｇ／ｋｇであり、これもまた、マウスに、３週間にわたって週に１回、静脈内注射した。溶媒コントロール群には等量の生理食塩水を注射した。この実験の期間中を通して、腫瘍の直径を２日毎に測定した。腫瘍体積（ＴＶ）を計算するための式が、ＴＶ＝１／２×ａ×ｂ２であり、式中、「ａ」および「ｂ」は長さおよび幅をそれぞれ表す。相対腫瘍体積（ＲＴＶ）が測定結果に従って計算され、計算式が、ＲＴＶ＝Ｖｔ／Ｖ０であり、式中、Ｖ０は、マウスを群に分けたとき（すなわちｄ０）に測定された腫瘍体積であり、Ｖｔは、毎回測定される腫瘍体積である。
【０３３８】
ビンクリスチン耐性ヒト結腸ガン細胞系（ＨＣＴ−８／Ｖ）に対するブランクＲｇ５、Ｖ、およびＶ＋Ｒｇ５の抗腫瘍効果（薬理学的有効性）を比較する。詳細な実験データを表６３および図５７に示した。図５７は、ビンクリスチン耐性ヒト結腸ガン細胞系（ＨＣＴ−８／Ｖ）に対するブランクＲｇ５、Ｖ、およびＶ＋Ｒｇ５の抗腫瘍グラフであった。
【０３３９】
【表６４】
2018528269.tif 000081
【０３４０】
表６３および図５７から、Ｖ＋Ｒｇ５の薬理学的有効性が、ビンクリスチン耐性ヒト結腸ガン細胞系（ＨＣＴ−８／Ｖ）の腫瘍保有マウスを処置することにおいて従来のビンクリスチンリポソームの薬理学的有効性と比較して明白な利点を有することが示された。
【０３４１】
応用実施形態１１
胃ガン細胞系（ＳＧＣ−７９０１）／パクリタキセル耐性ヒト胃ガン細胞系（ＳＧＣ−７９０１／Ｔ）に対するギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームについてのインビトロ細胞実験およびインビボ動物実験（経口投与）
１．インビトロ薬理学的有効性実験
インビトロ細胞実験のアッセイに従って、ヒト胃ガン（ＳＧＣ−７９０１）細胞系およびパクリタキセル耐性ヒト胃ガン細胞系（ＳＧＣ−７９０１／Ｔ）に対するギンセノシドＲｇ５ブランクリポソーム（ブランクＲｇ５）、従来のパクリタキセル注射剤（タキソール）およびギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソーム（タキソール＋Ｒｇ５）の細胞生存率をそれぞれ調べた。１０点の異なる薬物濃度を表６４および６６に示されるように設定し、詳細な細胞生存率データおよびグラフを、表６４および表６６、図５８および図５９に示した。
【０３４２】
【表６５】
2018528269.tif 000082
【０３４３】
２．ＩＣ５０のアッセイに従って、ヒト胃ガン細胞系（ＳＧＣ−７９０１）に対するブランクＲｇ５、タキソール、およびＲｇ５＋タキソールのＩＣ５０を調べた。実験データを表６５に示した。
【０３４４】
【表６６】
2018528269.tif 000083
【０３４５】
表６４、表６５および図５８から、ギンセノシドＲｇ５ブランクリポソームの活性がヒト胃ガン細胞系（ＳＧＣ−７９０１）に対して比較的弱く、Ｒｇ５＋タキソールの活性がヒト胃ガン細胞系（ＳＧＣ−７９０１）に対して従来のパクリタキセル注射剤の活性よりも強いことが示された。
【０３４６】
【表６７】
2018528269.tif 000084
【０３４７】
３．ＩＣ５０のアッセイに従って、パクリタキセル耐性ヒト胃ガン細胞系（ＳＧＣ−７９０１／Ｔ）に対するブランクＲｇ５、タキソール、およびＲｇ５＋タキソールのＩＣ５０を調べた。実験データを表６７に示した。
【０３４８】
【表６８】
2018528269.tif 000085
【０３４９】
表６６、表６７および図５９から、ギンセノシドＲｇ５ブランクリポソームの活性がパクリタキセル耐性ヒト胃ガン細胞系（ＳＧＣ−７９０１／Ｔ）に対して比較的弱く、Ｒｇ５＋タキソールの活性がパクリタキセル耐性ヒト胃ガン細胞系（ＳＧＣ−７９０１／Ｔ）に対して従来のパクリタキセル注射剤の活性と比較して明白な利点を有することが示された。
【０３５０】
４．インビボ実験
２７匹の皮下腫瘍保有マウスを無作為に下記の３つの群に分けた（それぞれの群において９匹）：コントロール群（コントロール群、０．９％ＮａＣｌ）、タキソール＋Ｒｇ５群、およびアブラキサン群。対応する製剤を経口投与した（５０ｍｇ・ｋｇ−１の用量）。マウスの体重の変化を２日毎に記録し、腫瘍の最大直径および最小直径をノギスにより測定した。腫瘍体積を以下の式によって計算した：Ｖ＝（ｄｍａｘ×ｄｍｉｎ２）／２、式中、ｄｍｉｎおよびｄｍａｘは、それぞれ、腫瘍の最小直径および最大直径（ｍｍ）であった；相対腫瘍体積（ＲＴＶ）が測定結果に従って計算され、計算式が、ＲＴＶ＝Ｖｔ／Ｖ０であり、式中、Ｖ０は、マウスに投与が開始されたときに測定された腫瘍体積であり、Ｖｔは、２日毎に測定された腫瘍体積であった。
【０３５１】
ヒト胃ガン細胞系（ＳＧＣ−７９０１）およびパクリタキセル耐性ヒト胃ガン細胞系（ＳＧＣ−７９０１／Ｔ）に対するアブラキサンおよびタキソール＋Ｒｇ５の抗腫瘍効果（薬理学的有効性）を比較する。詳細な実験データを、表６８ならびに表６９、図６０および図６１に示した。図６０および図６１は、ヒト胃ガン細胞系（ＳＧＣ−７９０１）およびパクリタキセル耐性ヒト胃ガン細胞系（ＳＧＣ−７９０１／Ｔ）に対するコントロール群、アブラキサン群、およびタキソール＋Ｒｇ５群の抗腫瘍グラフであった。
【０３５２】
【表６９】
2018528269.tif 000086
【０３５３】
表６８および図６０から、タキソール＋Ｒｇ５の薬理学的有効性が、ヒト胃ガン細胞系（ＳＧＣ−７９０１）の腫瘍保有マウスを処置することにおいて従来のパクリタキセル注射剤の薬理学的有効性と比較して明白な利点を有することが示された。
【０３５４】
【表７０】
2018528269.tif 000087
【０３５５】
表６９および図６１から、タキソール＋Ｒｇ５の薬理学的有効性が、パクリタキセル耐性ヒト胃ガン細胞系（ＳＧＣ−７９０１／Ｔ）の腫瘍保有マウスを処置することにおいて従来のパクリタキセル注射剤の薬理学的有効性と比較して明白な利点を有することが示された。
【０３５６】
効果実施形態
１．ギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソーム
３０ｍｇの卵レシチン、ギンセノシドＲｇ５、３ｍｇのパクリタキセルおよび１５ｍｇのダイズ油を２ｍＬのアセトニトリルに加え、室温で撹拌して、透明な溶液を形成した。有機溶媒を４０℃〜５０℃での恒温水浴において回転蒸発によって除いて、薄膜を形成し、２０ｍＬの５％グルコース水溶液（百分率はグルコース水溶液の総質量に対するグルコースの質量を示す）を加えた。超音波の操作を、リポソームの粒径が０．１〜０．３ミクロンの間になるまで行った。０．２２ミクロンの微多孔膜を使用してろ過し、それにより、ギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームを含有する水溶液を得た。次に、前記水溶液をバイアルに分注した。調製されたギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームのギンセノシドＲｇ５の用量、外観、パクリタキセルの封入効率、平均粒径および安定性のデータを下記の表に示す。
【０３５７】
【表７１】
2018528269.tif 000088
【０３５８】
２．ギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソーム
３０ｍｇの卵レシチン、ギンセノシドＲｇ５、３ｍｇのパクリタキセル、１５ｍｇのダイズ油および７．５ｍｇのコレステロールを２ｍＬのアセトニトリルに加え、室温で撹拌して、透明な溶液を形成した。有機溶媒を４０℃〜５０℃での恒温水浴において回転蒸発によって除いて、薄膜を形成し、２０ｍＬの５％グルコース水溶液（百分率はグルコース水溶液の総質量に対するグルコースの質量を示す）を加えた。超音波の操作を、リポソームの粒径が０．１〜０．３ミクロンの間になるまで行った。０．２２ミクロンの微多孔膜を使用してろ過し、それにより、ギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームを含有する水溶液を得た。次に、前記水溶液をバイアルに分注した。調製されたギンセノシドＲｇ５パクリタキセルリポソームのギンセノシドＲｇ５の用量、外観、パクリタキセルの封入効率、平均粒径および安定性のデータを下記の表に示す。
【０３５９】
【表７２】
2018528269.tif 000089
【０３６０】
３．ギンセノシドＲｇ３ブランクリポソームまたはギンセノシドＲｈ２ブランクリポソーム
中国特許出願第２０１２１０１５１５９７．０号に開示されるリポソームの原料はコレステロールを含有しなければならない、すなわち、ギンセノシドＲｇ３：コレステロール＝１：２．５、ギンセノシドＲｇ３：リン脂質＝１：１０〜１：２０。しかしながら、ギンセノシドＲｇ３の質量が卵レシチンの質量に対して１０％であると、封入効率が８０％未満であったが、このことは医療基準を満たすことができない。
【０３６１】
下記の調製方法におけるギンセノシドＲｇ３およびギンセノシドＲｈ２はＲ立体配置であった。
【０３６２】
３．１．調製方法：
３０ｍｇの卵レシチン、ギンセノシドＲｇ３またはギンセノシドＲｈ２、および１５ｍｇのダイズ油を２ｍＬのクロロホルムに加え、室温で撹拌して、透明な溶液を形成した。有機溶媒を４０℃〜５０℃での恒温水浴において回転蒸発によって除いて、薄膜を形成し、２ｍＬの５％グルコース水溶液（百分率はグルコース水溶液の総質量に対するグルコースの質量を示す）を加えた。超音波の操作を、リポソームの粒径が０．１〜０．３ミクロンの間になるまで行った。０．２２ミクロンの微多孔膜を使用してろ過し、それにより、ギンセノシドＲｇ３ブランクリポソームを含有する水溶液またはギンセノシドＲｈ２ブランクリポソームを含有する水溶液を得た。次に、前記水溶液をバイアルに分注した。調製されたギンセノシドＲｇ３ブランクリポソームまたはギンセノシドＲｈ２ブランクリポソームのギンセノシドＲｇ３またはギンセノシドＲｈ２の用量、外観、平均粒径および安定性のデータを下記の表に示す。
【０３６３】
【表７３】
2018528269.tif 000090
【０３６４】
３．２．調製方法
３０ｍｇの卵レシチン、ギンセノシドＲｇ３またはギンセノシドＲｈ２、１５ｍｇのダイズ油および７．５ｍｇのコレステロールを２ｍＬのクロロホルムに加え、室温で撹拌して、透明な溶液を形成した。有機溶媒を４０℃〜５０℃での恒温水浴において回転蒸発によって除いて、薄膜を形成し、２ｍＬの５％グルコース水溶液（百分率はグルコース水溶液の総質量に対するグルコースの質量を示す）を加えた。超音波の操作を、リポソームの粒径が０．１〜０．３ミクロンの間になるまで行った。０．２２ミクロンの微多孔膜を使用してろ過し、それにより、ギンセノシドＲｇ３ブランクリポソームを含有する水溶液またはギンセノシドＲｈ２ブランクリポソームを含有する水溶液を得た。次に、前記水溶液をバイアルに分注した。調製されたギンセノシドＲｇ３ブランクリポソームまたはギンセノシドＲｈ２ブランクリポソームのギンセノシドＲｇ３またはギンセノシドＲｈ２の用量、外観、平均粒径および安定性のデータを下記の表に示す。
【０３６５】
【表７４】
2018528269.tif 000091
【０３６６】
４．ギンセノシドＲｇ３パクリタキセルリポソームまたはギンセノシドＲｈ２パクリタキセルリポソーム
調製方法：
３０ｍｇの卵レシチン、ギンセノシドＲｇ３またはギンセノシドＲｈ２、３ｍｇのパクリタキセル、１５ｍｇのダイズ油および７．５ｍｇのコレステロールを２ｍＬのクロロホルムに加え、室温で撹拌して、透明な溶液を形成した。有機溶媒を４０℃〜５０℃での恒温水浴において回転蒸発によって除いて、薄膜を形成し、２ｍＬの５％グルコース水溶液（百分率はグルコース水溶液の総質量に対するグルコースの質量を示す）を加えた。超音波の操作を、リポソームの粒径が０．１〜０．３ミクロンの間になるまで行った。０．２２ミクロンの微多孔膜を用いてろ過し、それにより、ギンセノシドＲｇ３パクリタキセルリポソームを含有する水溶液またはギンセノシドＲｈ２パクリタキセルリポソームを含有する水溶液を得た。次に、前記水溶液をバイアルに分注した。調製されたギンセノシドＲｇ３パクリタキセルリポソームまたはギンセノシドＲｈ２パクリタキセルリポソームのギンセノシドＲｇ３またはギンセノシドＲｈ２の用量、外観、パクリタキセルの封入効率、平均粒径および安定性のデータを下記の表に示す。
【０３６７】
【表７５】
2018528269.tif 000092
【０３６８】
本発明の具体的な様々な実施形態が上記に記載されるが、当業者は、これらは単に例示にすぎず、本発明の原則および精神から逸脱しないという条件で、様々な変更または改変がこれらの実施形態に対してなされ得ることを理解しなければならない。したがって、本発明の保護の範囲は添付の請求項によって規定される。
【図１】
2018528269.tif 000096
【図２】
2018528269.tif 000097
【図３】
2018528269.tif 000098
【図４】
2018528269.tif 000099
【図５】
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【図６】
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【図７】
2018528269.tif 000102
【図８】
2018528269.tif 000103
【図９】
2018528269.tif 000104
【図１０】
2018528269.tif 000105
【図１１】
2018528269.tif 000106
【図１２】
2018528269.tif 000107
【図１３】
2018528269.tif 000108
【図１４】
2018528269.tif 000109
【図１５】
2018528269.tif 000110
【図１６】
2018528269.tif 000111
【図１７】
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【図１８】
2018528269.tif 000113
【図１９】
2018528269.tif 000114
【図２０】
2018528269.tif 000115
【図２１】
2018528269.tif 000116
【図２２】
2018528269.tif 000117
【図２３】
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【図２４】
2018528269.tif 000119
【図２５】
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【図２６】
2018528269.tif 000121
【図２７】
2018528269.tif 000122
【図２８】
2018528269.tif 000123
【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
2018528269.tif 000130
【図３６】
2018528269.tif 000131
【図３７】
2018528269.tif 000132
【図３８】
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【図３９】
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【図４０】
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【図４１】
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【図４２】
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【図４３】
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【図４４】
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【図４５】
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【図４６】
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【図４７】
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【図４８】
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【図４９】
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【図５０】
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【図５１】
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【図５２】
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【図５３】
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【図５４】
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【図５５】
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【図５６】
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【図５７】
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【図５８】
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【図５９】
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【図６０】
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【図６１】
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【国際調査報告】
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