【手続補正書】
【提出日】平成26年9月11日(2014.9.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
複数の微生物培養シートを固定するための合成樹脂からなる微生物培養シート固定用台紙であって、
前記微生物培養シートを脱着可能に固定でき、各微生物培養シートの固定位置を示す仕切りが形成され、かつ明度の低い色で枠が形成されることを特徴とする、微生物培養シート固定用台紙。
【請求項２】
微生物培養シートに菌液を接種し、培養してコロニーを発現させ、当該コロニーを発現させた微生物培養シートの複数枚を請求項１記載の微生物培養シート固定用台紙に固定し、
前記微生物培養シートを固定した台紙の画像データを形成し、
前記画像データに含まれる前記微生物培養シートの画像データを使用して微生物培養シート毎のコロニー数をカウントすることを特徴とする、微生物検査方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】発明の名称
【補正方法】変更
【補正の内容】
【発明の名称】微生物培養シート固定用台紙および微生物検査方法
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００１】
本発明は、複数の微生物培養シートを固定するための微生物培養シート固定用台紙、および前記台紙に微生物培養シートを固定し、撮像により複数の微生物培養シートの画像データを形成し、画像データに基づいてコロニー数をカウントする微生物検査方法に関する。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００８】
特許文献１や特許文献２に記載される微生物培養シートはシート状物であるため薄く、寒天培地などと相違してコンパクトで、収納容積や培養容積をコンパクトにできる利点がある。しかしながら、微生物培養シートは乾燥培養層を使用するため、菌液が培地上に徐々に広がって培地に浸み込むため、培養環境を確保して微生物を培養し、正確にコロニーを評価するには、接種後の菌液を所定範囲に菌液が広がるように円形の押圧部を有するスプレッダーで押圧したり、または接種後の菌液が培地にしみこむまでの１〜３分程度の間、カバーシートを被覆した後、水平に放置する必要がある。細菌学的成分規格に適合するか否かの評価が求められる検体数は極めて多く、より効率的な操作が可能な微生物培養シートの開発が望まれる。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００９
【補正方法】削除
【補正の内容】
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１２
【補正方法】削除
【補正の内容】
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】削除
【補正の内容】
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１４
【補正方法】削除
【補正の内容】
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１５】
加えて、前記台紙付き微生物培養シートを使用する微生物検査方法を提供する事を目的とする。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１６】
本発明者らは、微生物培養シートについて詳細に検討した結果、台紙に複数の微生物培養シートを固定し、画像処理によるコロニー数の自動カウントを行う際、複数の微生物培養シートについて一度に画像を形成すれば、微生物培養シートを一枚ずつ画像形成する場合と相違して短時間で画像を形成しうることを見出し、本発明を完成させた。
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１７】
すなわち、本発明は、複数の微生物培養シートを固定するための合成樹脂からなる微生物培養シート固定用台紙であって、
前記微生物培養シートを脱着可能に固定でき、各微生物培養シートの固定位置を示す仕切りが形成され、かつ明度の低い色で枠が形成されることを特徴とする、微生物培養シート固定用台紙を提供するものである。
【手続補正１２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１８
【補正方法】削除
【補正の内容】
【手続補正１３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１９
【補正方法】削除
【補正の内容】
【手続補正１４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２０
【補正方法】削除
【補正の内容】
【手続補正１５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２１
【補正方法】削除
【補正の内容】
【手続補正１６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２２
【補正方法】削除
【補正の内容】
【手続補正１７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２３
【補正方法】削除
【補正の内容】
【手続補正１８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２４】
加えて本発明は、微生物培養シートに菌液を接種し、培養してコロニーを発現させ、当該コロニーを発現させた微生物培養シートの複数枚を前記微生物培養シート固定用台紙に固定し、
前記微生物培養シートを固定した台紙の画像データを形成し、
前記画像データに含まれる前記微生物培養シートの画像データを使用して微生物培養シート毎のコロニー数をカウントすることを特徴とする、微生物検査方法を提供するものである。
【手続補正１９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２６
【補正方法】削除
【補正の内容】
【手続補正２０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２７
【補正方法】削除
【補正の内容】
【手続補正２１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２８】
本発明の台紙付き微生物培養シートによれば、複数の微生物培養シートが固定されているため、複数の微生物培養シートについて一度に画像データを形成することができ、画像データ形成が容易であり、効率的にコロニー数の自動カウントを行うことができる。
【手続補正２２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２９
【補正方法】削除
【補正の内容】
【手続補正２３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３１】
本発明の第一は、複数の微生物培養シートを固定するための合成樹脂からなる微生物培養シート固定用台紙であって、
前記微生物培養シートを脱着可能に固定でき、各微生物培養シートの固定位置を示す仕切りが形成され、かつ明度の低い色で枠が形成されることを特徴とする、微生物培養シート固定用台紙である。前記台紙には、微生物培養シートの角部を挿入して固定するための切り欠き部、または微生物培養シートを固定するための粘着剤層が形成されていてもよく、色補正用のカラーチャートまたはグレースケール、および／または位置認識マーカーが表示されていてもよい。
【手続補正２４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３２
【補正方法】削除
【補正の内容】
【手続補正２５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３３
【補正方法】削除
【補正の内容】
【手続補正２６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３４
【補正方法】削除
【補正の内容】
【手続補正２７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３５】
また、本発明の第二は、微生物培養シートに菌液を接種し、培養してコロニーを発現させ、当該コロニーを発現させた微生物培養シートの複数枚を前記微生物培養シート固定用台紙に固定し、
前記微生物培養シートを固定した台紙の画像データを形成し、
前記画像データに含まれる前記微生物培養シートの画像データを使用して微生物培養シート毎のコロニー数をカウントすることを特徴とする、微生物検査方法である。前記画像データに含まれる位置認識マーカーを用いて画像データの位置補正を行い、ついで、カラーチャートおよびグレースケールを用いて色補正を行い、培地に含まれるコロニーに対応する画素をカウントしてもよい。
以下、本発明を詳細に説明する。
【手続補正２８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４３】
（２）台紙付き微生物培養シート
台紙付き微生物培養シート（１００）とは、上記微生物培養シート固定用台紙（Ａ）に複数の微生物培養シート（Ｂ）が固定されたものである。図３に、図１に示す微生物培養シート固定用台紙（Ａ）に８枚の微生物培養シート（Ｂ）を固定した態様を示す。
【手続補正２９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５８】
（４）台紙付き微生物培養シートの製造方法
台紙付き微生物培養シートは、前記した台紙（Ａ）に微生物培養シート（Ｂ）を固定したものである。台紙の材質によって適宜選択できるが、台紙（Ａ）に印刷その他によって前記仕切り線（Ｌ）や、カラーチャートやグレースケールチャートなどの色見本配列表、位置認識マーカー、シリアルナンバーなどを形成する。また、台紙（Ａ）に、図１に示すように微生物培養シート（Ｂ）を固定するための貫通孔からなる切り欠き部（ｂ）を形成する場合には、所定形状の抜き打ち型などで貫通孔を形成すればよい。微生物培養シート（Ｂ）を固定するためのフォトコーナーを添付してもよい。
【手続補正３０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６２】
（５）  連設微生物培養シート
連設微生物培養シートとは、基材シートと前記基材シートの一方の面に形成された複数の乾燥培養層と、前記複数の乾燥培養層をそれぞれ被覆するカバーシートとからなる。前記した台紙付き微生物培養シート（１００）と同様に、複数の微生物培養シートが連設することで水平の維持が容易で、菌液を接種した後の培養装置への搬入を短時間で行え、コロニー形成後の画像形成も容易である。
【手続補正３１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６３】
連設微生物培養シート（１００’）の好適な態様を図８（ａ）の平面図および図８（ｂ）のＸ−Ｘ線断面図に示す。図８は、基材シート（１０’）の上に複数の乾燥培養層（２０’）が形成され、かつ前記乾燥培養層（２０’）を被覆する複数のカバーシート（３０’）が固定された態様を示す。基材シート（１０’）とカバーシート（３０’）とが重複する部分を微生物培養シート（Ｂ’）とすれば、複数の微生物培養シート（Ｂ’）が同じ基材シート（１０’）に形成されて連なるため、「連設微生物培養シート」と称する。本発明の連設微生物培養シート（１００’）は、一枚の基材シート（１０’）を使用して複数の微生物培養シート（Ｂ’）が形成される場合であってもよく、各微生物培養シート（Ｂ’）ごとに容易に分離できるように、基材シート（１０’）にミシン目などが形成されていてもよい。
【手続補正３２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６４】
連設微生物培養シート（１００’）で使用する基材シート（１０’）としては、例えば、台紙付き微生物培養シート（１００）の台紙（Ａ）と同様に、微生物培養シート（Ｂ’）のカバーシート（３０’）よりも大きく、好ましくは微生物培養シート（Ａ’）が２以上連設されるもの、より好ましくは６〜１０、とくに好ましくは６〜８が連設されるものである。基材シート（１０’）のサイズとしては、微生物培養シート固定用台紙（Ａ）と同様に、Ａ４判やＢ４判などのものを好適に使用することができる。コロニー形成後に、スキャナなどで画像データを形成するのが容易だからである。
【手続補正３３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６５】
連設微生物培養シート（１００’）では、基材シート（１０’）に、前記した微生物培養シート固定用台紙（Ａ）と同様の色見本配列表（７０）やシリアルナンバー（８０）を表示してもよい。複数の微生物培養シート（Ａ’）にコロニーを形成した場合、複数の微生物培養シート（Ｂ’）の画像データの形成を一度に行い、かつコロニー数の自動カウントを簡便に行うことができる。
【手続補正３４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６６】
上記連設微生物培養シート（１００’）は、基材シート（１０’）に複数の乾燥培養層（２０’）を形成し、各乾燥培養層（２０’）を被覆するようにカバーシート（３０’）を固定することで調製することができる。本発明の連設微生物培養シート（１００’）によれば、台紙（Ａ）への固定化手段を形成することなく複数の乾燥培養層（２０’）が固定されるため、より軽量化かつ薄型化することができる。
（６）  収納トレイ
台紙付き微生物培養シート（１００）や連設微生物培養シート（１００’）は、菌液を接種した後に培養装置に搬入し、培養することができる。この際、台紙付き微生物培養シート（１００）や連設微生物培養シート（１００’）を所定のトレイに収納してトレイごと培養装置に搬入すれば、搬入操作を容易に行うことができると共に多量の台紙付き微生物培養シートや連設微生物培養シートを培養装置に搬入できるため、培養操作を効率的に行うことができる。このような収納トレイの斜視図を図９に示す。図９に示す収納トレイ（２００）は、複数の棚からなる棚段部（１２０）の上部に蓋部（１３０）を被覆したものである。
【手続補正３５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７０】
前記収納トレイは、棚および蓋部をそれぞれ、例えば、ポリエチレン、ポリプロピレンなどのポリオレフィン系樹脂、ポリエチレンテレフタレートなどのポリエステル系樹脂、その他、ポリアミド系樹脂などを使用し、射出成形などで製造することができる。
【手続補正３６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７７】
（８）微生物検査方法
本発明の台紙付き微生物培養シート(１００)や連設微生物培養シート(１００’)は、前記微生物培養シート（Ｂ’，Ｂ）に菌液を接種し、培養してコロニーを発現させ、このコロニーを含む台紙付き微生物培養シートや連設微生物培養シートの画像データを形成し、前記画像データに含まれる前記コロニーが発現した複数の培養層の画像データを使用して個別に各培養層のコロニー数をカウントする事ができる。その際、各培養層に含まれるコロニーに対応する画素をコロニーと判断し、画像解析によりコロニー数を自動カウントすることができる。
本発明では、台紙（Ａ）に複数の微生物培養シート（Ｂ）を固定して菌液の接種、培養、撮像による画像データを取得できるため、１の撮像操作により複数の微生物培養シート（Ｂ）の画像データを取得できる点に特徴がある。画像データから、コロニー数をカウントする方法は公知であり、乾燥培養層（２０）に対応する画像データからそれぞれの微生物培養シート（Ｂ）のコロニー数をカウントすることができる。
台紙（Ａ）に、カラーチャートやグレースケール、位置認識マーカーなどを表示することができる。台紙（Ａ）にこのような表示が含まれると、撮像した画像データにもこれらの表示が含まれる。よって前記位置認識マーカーを用いて画像データの位置補正を行い、ついで、カラーチャートおよびグレースケールを用いて色補正を行い、その後にコロニー数をカウントすることができる。なお、このような画像解析によるコロニー数カウントは、位置補正プログラムや色補正プログラム、コロニー数カウント用のプログラムが構築された処理装置に画像データを入力して行うことができる。以下、位置補正や色補正を行う場合の態様を説明する。なお、台紙付き微生物培養シート（１００）を使用する場合で説明するが連設微生物培養シート（１００’）でも同様である。