【手続補正書】
【提出日】平成26年8月29日(2014.8.29)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２１】
別の好ましいヒトグリコシル化α−Gal A調製物は、好ましくは少なくとも20％、より好ましくは少なくとも50％、最も好ましくは少なくとも70％の２〜４個のシアル酸残基を有するコンプレックスグリカンを含む多様なα−Gal Aグリコフォームを含む。別の好ましい実施態様においては、多様なグリコフォームを含むヒトグリコシル化α−Gal A調製物は、オリゴ糖電荷を有しており、その値をＺ数で表すと、100以上、好ましくは150以上、より好ましくは170以上である。また別の好ましい実施態様においては、多様なグリコフォームを含むヒトグリコシル化α−Gal A調製物は、平均して少なくとも16〜50％、好ましくは25〜50％、より好ましくは少なくとも30％のグリコフォームがホスホリル化されている。さらに別の実施態様においては、多様なグリコフォームを有する該調製物は、総グリカンの50〜75％、好ましくは、少なくとも60％がシアリル化されている。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２８】
α−Gal A調製物のシアリル化状態が改良されることにより、外来性α−Gal Aの循環半減期が長くなる。さらに、α−Gal Aのシアリル化状態が改良されることにより、肝細胞のα−Gal Aの取り込みと比較して、肝内皮細胞、肝洞細胞（liver sinusoidal cells）、肺細胞、腎細胞、神経細胞、内皮細胞または心細胞などのような肝細胞以外における取り込みが増加する。好ましくは、シアル酸含量が高められたヒトグリコシル化α−Gal A調製物は、少なくとも20％の２〜４個のシアル酸残基を有するコンプレックスグリカンを含む多様なグリコフォームを含む。別の好ましいヒトグリコシル化α−Gal A調製物は、総グリカンの50〜75％、好ましくは少なくとも60％がシアル化されている多様なグリコフォームを含む。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８５】
後者の例としては、腎臓においてグルタミルトランスペプチダーゼのコンプレックスグリカン上にいわゆるバイセクティングGlcNAｃ（bisectingGlcNAc）（コアのβ−マンノース残基にβ１，４結合しているGlcNAｃ）が形成することが挙げられ、肝臓ではこのようなことは起こらない。γ−グルタミルトランスペプチダーゼ上のバイセクトビアンテナ構造は次のように表される。
【化２】
2013241466.tif 000001
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８６】
哺乳類においては、酵素としての作用を有するGlcNAｃトランスフェラーゼIII（GnT-III）が脳および腎臓のある種の細胞内、ならびに肝細胞癌の患者の肝臓のある種の細胞内に見出されている。GnT-IIIは、β１，４結合内のN−アセチルグルコサミンがN−結合糖鎖のトリマンノシルコアのβ−マンノースに付加する反応を触媒し、バイセクティングGlcNAｃ残基を形成する。GnT-IIIに対するマウス、ラットおよびヒトの遺伝子がクローニングされている。イハラ（Ihara）ら、J. Biochem.(Tokyo) 113: 692-698(1993)。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８８】
α−GalAの一部は腎臓によって取り込まれ、貯蔵糖脂質を著しく減少させる。これは、腎臓がバイセクティングGlcNAｃ残基を有するN−グリカンを合成することができるためであり、腎上皮細胞は、このエピトープを有する糖タンパク質を非常に特異的に認識することができる。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８９】
GnT-IIIの活性レベルが上昇すると、GnT-II、IV、VおよびGalβ１，４−トランスフェラーゼによるさらなる分岐が基質レベルで阻害されることによって、トリマンノシルコア上の分岐状態の不均衡が生じる。最近、組換えGnT-IIIを過剰発現させることにより、糖タンパク質上にバイセクトオリゴ糖を産生することができるチャイニーズハムスター卵巣（CHO）細胞系が確立された。スバーラティ（Sburlati）ら、Biotechnol. Progr., 14: 189-192(1998)。モデルとしてインターフェロンβ（INF-β）を選び、GnT-IIIが発現することにより、グリコシル化される分泌異種タンパク質の治療作用を評価した。バイセクトオリゴ糖を有するINF-βは、GnT-IIIを操作したCHO細胞によって産生されたが、未操作の親細胞系では産生しなかった。
【手続補正７】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
α−ガラクトシダーゼＡ（α−Ｇａｌ Ａ）調製物を含む医薬組成物であって、対象の体重１ｋｇあたり０．１〜０．３ｍｇの１週間または２週間当たりの用量で、α−Ｇａｌ Ａ欠乏症の治療に使用するためのものであり、前記α−Ｇａｌ Ａ調製物の全グリカンの少なくとも５０％がコンプレックスグリカンである、医薬組成物。
【請求項２】
前記α−Ｇａｌ Ａ欠乏症がファブリー病である、請求項１記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記ファブリー病がファブリー病の異型変種である、請求項２記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記対象が心臓血管異常を患っている、請求項２または３記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記心臓血管異常が左心室肥大（ＬＶＨ）である、請求項４記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記用量が、対象の体重１ｋｇあたり約０．２ｍｇのα−Ｇａｌ Ａ調製物である、請求項１−５いずれか１項記載の医薬組成物。
【請求項７】
筋肉内、経口、直腸、皮下、動脈内、腹腔内、脳内、鼻内、鞘内、経粘膜、経皮または吸入投与用に製剤化されている、請求項１−６いずれか１項記載の医薬組成物。
【請求項８】
皮下投与用に製剤化されている、請求項１−７いずれか１項記載の医薬組成物。
【請求項９】
ポンプ送達、カプセル封入細胞送達、リポソーム送達、針を用いた注射、針なし注射、ネブライザー、エアロゾライザー、エレクトロポレーションおよび経皮パッチより成る群から選択される送達系での投与用に製剤化されている、請求項１−７いずれか１項記載の使用。
【請求項１０】
前記対象がファブリー病の症候を示す、請求項１−９いずれか１項記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記対象が古典型ファブリー病の症候を示す、請求項１、２および４−１０いずれか１項記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記対象がファブリー病の異型変種の症候を示す、請求項１−１０いずれか１項記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記対象が心臓障害の症候を示す、請求項１−１２いずれか１項記載の医薬組成物。
【請求項１４】
前記対象が腎臓障害の症候を示す、請求項１−１３いずれか１項記載の医薬組成物。
【請求項１５】
前記対象が、角膜ジストロフィー、角化血管腫、痛みを伴う神経障害、脳血管疾患、心筋症、左心室肥大、運動性呼吸困難、対称性心室中隔肥大、心筋梗塞、心筋症および心筋浸潤より成る群から選択される少なくとも１つの症候を示す、請求項１−１４いずれか１項記載の医薬組成物。
【請求項１６】
α−ガラクトシダーゼＡ（α−Ｇａｌ Ａ）欠乏症の治療のための薬剤の製造におけるα−Ｇａｌ Ａ調製物の使用であって、該薬剤が、対象の体重１ｋｇあたり０．１ｍｇ〜０．３ｍｇのα−Ｇａｌ Ａ調製物の用量を１週間または２週間ごとに投与するためのものであり、前記α−Ｇａｌ Ａ調製物の全グリカンの少なくとも６７％がコンプレックスグリカンである、使用。
【請求項１７】
前記α−Ｇａｌ Ａ欠乏症がファブリー病である、請求項１６記載の使用。
【請求項１８】
前記α−Ｇａｌ Ａ欠乏症がファブリー病の異型変種である、請求項１６または１７記載の使用。
【請求項１９】
前記対象が心臓血管異常を患っている、請求項１７または１８記載の使用。
【請求項２０】
前記心臓血管異常が左心室肥大（ＬＶＨ）である、請求項１９記載の使用。
【請求項２１】
前記用量が、対象の体重１ｋｇあたり約０．２ｍｇのα−Ｇａｌ Ａ調製物である、請求項１６−２０いずれか１項記載の使用。
【請求項２２】
前記用量の薬剤が、筋肉内、経口、直腸、皮下、動脈内、腹腔内、脳内、鼻内、鞘内、経粘膜、経皮または吸入投与用に製剤化される、請求項１６−２１いずれか１項記載の使用。
【請求項２３】
前記用量の薬剤が皮下投与用に製剤化される、請求項１６−２２いずれか１項記載の使用。
【請求項２４】
前記用量の薬剤が、ポンプ送達、カプセル封入細胞送達、リポソーム送達、針を用いた注射、針なし注射、ネブライザー、エアロゾライザー、エレクトロポレーションおよび経皮パッチより成る群から選択される送達系での投与用に製剤化される、請求項１６−２２いずれか１項記載の使用。
【請求項２５】
前記対象がファブリー病の症候を示す、請求項１６−２４いずれか１項記載の使用。
【請求項２６】
前記対象が古典型ファブリー病の症候を示す、請求項１６、１７および１９−２５いずれか１項記載の使用。
【請求項２７】
前記対象がファブリー病の異型変種の症候を示す、請求項１６−２５いずれか１項記載の使用。
【請求項２８】
前記対象が心臓障害の症候を示す、請求項１６−２７いずれか１項記載の使用。
【請求項２９】
前記対象が腎臓障害の症候を示す、請求項１６−２８いずれか１項記載の使用。
【請求項３０】
前記対象が、角膜ジストロフィー、角化血管腫、痛みを伴う神経障害、脳血管疾患、心筋症、左心室肥大、運動性呼吸困難、対称性心室中隔肥大、心筋梗塞、心筋症および心筋浸潤より成る群から選択される少なくとも１つの症候を示す、請求項１６−２９いずれか１項記載の使用。
【請求項３１】
グリコシル化α−Ｇａｌ Ａ調製物を作成する方法であって、
（ａ）シアリルトランスフェラーゼをコードするポリヌクレオチドをα−Ｇａｌ Ａ産生細胞に導入するか、または相同組換えにより内在性シアリルトランスフェラーゼの発現を制御する制御配列を導入し、ここで、前記α−Ｇａｌ Ａ産生細胞はヒト細胞である、
（ｂ）α−Ｇａｌ Ａおよびシアリルトランスフェラーゼの発現をもたらす条件下において、前記α−Ｇａｌ Ａ産生細胞を培養し、さらに、
（ｃ）前記α−Ｇａｌ Ａを単離する、工程を含み、該α−Ｇａｌ Ａ調製物は、様々なα−Ｇａｌ Ａグリコフォームを含むことを特徴とする方法。
【請求項３２】
（ｄ）前記工程（ｃ）の調製物をさらに分画または精製することにより、α−Ｇａｌ Ａグリコフォームを選択する工程をさらに含む、請求項３１記載の方法。
【請求項３３】
ａ）前記α−Ｇａｌ Ａ調製物のオリゴ糖の少なくとも３５％が電荷を帯びているか、
ｂ）前記α−Ｇａｌ Ａ調製物が複数のグリコフォームを含み、該グリコフォームは２〜４個のシアル酸残基を有する少なくとも２０％のコンプレックスグリカンを含むか、
ｃ）Ｚ数によって測定した前記α−Ｇａｌ Ａ調製物のオリゴ糖電荷が１５０以上であるか、
ｄ）前記α−Ｇａｌ Ａ調製物が複数のグリコフォームを含み、該グリコフォームは、平均して少なくとも２５〜５０％がホスホリル化されているか、または
ｅ）前記α−Ｇａｌ Ａ調製物が、バイセクティングＧｌｃＮＡｃ残基を有するＮ−グリカンを含むことを特徴とする、請求項３１または３２記載の方法。
【請求項３４】
請求項３１−３３いずれか１項記載の方法によって作成したグリコシル化α−Ｇａｌ Ａ調製物。
【請求項３５】
ＳＤＳ−ＰＡＧＥまたは逆相ＨＰＬＣにより測定して、少なくとも９９．５％の均質性まで精製されたものであり、多様なα−Ｇａｌ Ａグリコフォームを含み、少なくとも３．０×１０６ユニット／ｍｇタンパク質の比活性を有し、かつレクチンを実質的に含まない、請求項３４記載のグリコシル化α−Ｇａｌ Ａ調製物。
【請求項３６】
請求項３４または３５記載のグリコシル化α−Ｇａｌ Ａ調製物を含む組成物。
【請求項３７】
対象の体重１ｋｇあたり０．０５ｍｇ〜５．０ｍｇのα−Ｇａｌ Ａ調製物の用量を１週間または２週間ごとに投与するための薬剤の製造における、請求項３４または３５記載のα−Ｇａｌ Ａ調製物の使用。
【請求項３８】
前記薬剤が、対象の体重１ｋｇあたり０．１ｍｇ〜０．３ｍｇのα−Ｇａｌ Ａ調製物の用量を１週間または２週間ごとに投与するためのものである、請求項３７記載の使用。
【請求項３９】
前記薬剤が、対象の体重１ｋｇあたり約０．２ｍｇのα−Ｇａｌ Ａ調製物の用量を１週間または２週間ごとに投与するためのものである、請求項３８記載の使用。
【請求項４０】
前記用量の薬剤が、筋肉内、経口、直腸、皮下、動脈内、腹膜内、脳内、鼻内、髄膜内、経粘膜、経皮投与用、または吸入用に製剤化される、請求項３７−３９いずれか１項記載の使用。
【請求項４１】
前記用量の薬剤が、ポンプ送達、カプセル封入細胞送達、リポソーム送達、針を用いた注射、針なし注射、ネブライザー、エアロゾライザー、エレクトロポレーションおよび経皮パッチよりなる群から選択される送達系用に製剤化される、請求項４０記載の使用。
【請求項４２】
ファブリー病を治療するための薬剤の製造における請求項３４または３５記載のα−Ｇａｌ Ａ調製物の使用であって、該薬剤は、対象の体重１ｋｇあたり０．０５ｍｇ〜５．０ｍｇのα−Ｇａｌ Ａ調製物の用量を１週間または２週間ごとに投与するためのものである、使用。
【請求項４３】
前記薬剤が皮下投与用に製剤化される、請求項４２記載の使用。
【請求項４４】
ファブリー病の異型変種を治療するための薬剤の製造における、請求項３４または３５記載のα−Ｇａｌ Ａ調製物の使用であって、該薬剤は、対象の体重１ｋｇあたり０．０５ｍｇ〜５．０ｍｇのα−Ｇａｌ Ａ調製物の用量を１週間または２週間ごとに投与するためのものである、使用。
【請求項４５】
前記対象が心臓血管異常を患っている、請求項４２−４４いずれか１項記載の使用。
【請求項４６】
前記心臓血管異常が左心室肥大（ＬＶＨ）である、請求項４５記載の使用。
【請求項４７】
ファブリー病の治療に使用するための組成物であって、請求項３４または３５記載のα−Ｇａｌ Ａ調製物を含み、対象の体重１ｋｇあたり０．０５ｍｇ〜５．０ｍｇのα−Ｇａｌ Ａ調製物の用量を１週間または２週間ごとに投与するためのものである、組成物。
【請求項４８】
ファブリー病の異型変種を治療するための組成物であって、請求項３４または３５記載のα−Ｇａｌ Ａ調製物を含み、対象の体重１ｋｇあたり０．０５ｍｇ〜５．０ｍｇのα−Ｇａｌ Ａ調製物の用量を１週間または２週間ごとに投与するためのものである、組成物。
【請求項４９】
対象の体重１ｋｇあたり０．１ｍｇ〜０．３ｍｇのα−Ｇａｌ Ａ調製物の用量を１週間または２週間ごとに投与するためのものである、請求項４７または４８記載の組成物。
【請求項５０】
対象の体重１ｋｇあたり約０．２ｍｇのα−Ｇａｌ Ａ調製物の用量を１週間または２週間ごとに投与するためのものである、請求項４９記載の組成物。
【請求項５１】
筋肉内、経口、直腸、皮下、動脈内、腹膜内、脳内、鼻内、髄膜内、経粘膜、経皮投与用、または吸入用に製剤化されている、請求項４７−５０いずれか１項記載の組成物。
【請求項５２】
ポンプ送達、カプセル封入細胞送達、リポソーム送達、針を用いた注射、針なし注射、ネブライザー、エアロゾライザー、エレクトロポレーションおよび経皮パッチよりなる群から選択される送達系用に製剤化されている、請求項５１記載の組成物。
【請求項５３】
皮下投与用に製剤化されている、請求項４７記載の組成物。
【請求項５４】
前記対象が心臓血管異常を患っている、請求項４７または４８記載の組成物。
【請求項５５】
前記心臓血管異常が左心室肥大（ＬＶＨ）である、請求項５４記載の組成物。