(57)【要約】  プロリン、セリン、及びスレオニンを用い、腸管粘膜の治癒を促進する方法及び組成物が、提供される。治療上有効な量のプロリン、セリン、及びスレオニンが、これらの投与を必要とする個体、例えば、損傷した腸管粘膜を有する個体等の、ヒト又は他の哺乳動物に投与される。方法及び組成物は、粘膜治癒を促進し、腸管バリア機能を回復させ、腸上皮細胞を修復し、結腸上皮の保護を促進し、かつ／又は腸管粘膜及び結腸粘膜における杯細胞の補充を促進することができる。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
投与を必要とする個体に、治療上有効な量のプロリン、セリン、及びスレオニンの組み合わせを含む組成物を投与するステップを含む、腸管粘膜の治癒を促進する方法。
【請求項２】
前記組成物が、前記プロリン約０．０７〜約０．３ｇ／ｋｇ体重／日を提供する量で投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記組成物が、前記セリン約０．０７〜約０．３５ｇ／ｋｇ体重／日を提供する量で投与される、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
前記組成物が、前記スレオニン約０．０４〜約０．２０ｇ／ｋｇ体重／日を提供する量で投与される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記プロリン、前記セリン、又は前記スレオニンのうちの少なくとも１種の少なくとも一部が遊離アミノ酸である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記個体が損傷した腸管粘膜を有する、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
治療上有効な量のプロリン、セリン、及びスレオニンを含む組成物を、これを必要とする個体に投与するステップを含む、腸管バリア機能を回復させる方法。
【請求項８】
前記組成物が、（ｉ）前記プロリン約０．０７〜約０．３ｇ／ｋｇ体重／日、（ｉｉ）前記セリン約０．０７〜約０．３５ｇ／前記個体の体重１ｋｇ／日、（ｉｉｉ）前記スレオニン約０．０４〜約０．２０ｇ／ｋｇ体重／日、及び（ｉｖ）これらの組み合わせからなる群から選択される用量を提供する量で投与される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記個体が障害のある腸管バリア機能を有する、請求項７又は８に記載の方法。
【請求項１０】
投与を必要とする個体に、治療上有効な量のプロリン、セリン、及びスレオニンの組み合わせを含む組成物を投与するステップを含む、腸上皮細胞を修復する方法。
【請求項１１】
前記組成物が、（ｉ）プロリン約０．０７〜約０．３ｇ／ｋｇ体重／日、（ｉｉ）セリン約０．０７〜約０．３５ｇ／前記個体の体重１ｋｇ／日、（ｉｉｉ）スレオニン約０．０４〜約０．２０ｇ／ｋｇ体重／日、及び（ｉｖ）これらの組み合わせからなる群から選択される用量を提供する量で投与される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記個体が損傷した腸上皮細胞を有する、請求項１０又は１１に記載の方法。
【請求項１３】
投与を必要とする個体に、治療上有効な量のプロリン、セリン、及びスレオニンの組み合わせを含む組成物を投与するステップを含む、結腸上皮の保護を促進する方法。
【請求項１４】
前記組成物が、（ｉ）前記プロリン約０．０７〜約０．３ｇ／ｋｇ体重／日、（ｉｉ）前記セリン約０．０７〜約０．３５ｇ／前記個体の体重１ｋｇ／日、（ｉｉｉ）前記スレオニン約０．０４〜約０．２０ｇ／ｋｇ体重／日、及び（ｉｖ）これらの組み合わせからなる群から選択される用量を提供する量で投与される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記個体が損傷した結腸上皮を有する、請求項１３又は１４に記載の方法。
【請求項１６】
投与を必要とする個体に、治療上有効な量のプロリン、セリン、及びスレオニンの組み合わせを含む組成物を投与するステップを含む、杯細胞の増殖及び／又は産生を促進する方法。
【請求項１７】
前記組成物が、（ｉ）前記プロリン約０．０７〜約０．３ｇ／ｋｇ体重／日、（ｉｉ）前記セリン約０．０７〜約０．３５ｇ／前記個体の体重１ｋｇ／日、（ｉｉｉ）前記スレオニン約０．０４〜約０．２０ｇ／ｋｇ体重／日、及び（ｉｖ）これらの組み合わせからなる群から選択される用量を提供する量で投与される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記個体の杯細胞が激減している、請求項１６又は１７に記載の方法。
【請求項１９】
投与を必要とする個体に、治療上有効な量のプロリン、セリン、及びスレオニンの組み合わせを含む組成物を投与するステップを含む、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）を治療するための方法。
【請求項２０】
前記組成物が、（ｉ）前記プロリン約０．０７〜約０．３ｇ／ｋｇ体重／日、（ｉｉ）前記セリン約０．０７〜約０．３５ｇ／前記個体の体重１ｋｇ／日、（ｉｉｉ）前記スレオニン約０．０４〜約０．２０ｇ／ｋｇ体重／日、及び（ｉｖ）これらの組み合わせからなる群から選択される用量を提供する量で投与される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
投与を必要とする個体に、治療上有効な量のプロリン、セリン、及びスレオニンの組み合わせを含む組成物を投与するステップを含む、ＩＢＤ患者における再発を予防する、又は、遅延させるための方法。
【請求項２２】
前記組成物が、（ｉ）前記プロリン約０．０７〜約０．３ｇ／ｋｇ体重／日、（ｉｉ）前記セリン約０．０７〜約０．３５ｇ／前記個体の体重１ｋｇ／日、（ｉｉｉ）前記スレオニン約０．０４〜約０．２０ｇ／ｋｇ体重／日、及び（ｉｖ）これらの組み合わせからなる群から選択される用量を提供する量で投与される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
腸管粘膜治癒を促進するために治療上有効なプロリン、セリン、及びスレオニンの量を食材に加え、医療食品を形成するステップを含む、腸管粘膜の治癒を促進するための組成物を作製する方法。
【請求項２４】
前記医療食品が、栄養学的に完全な製品、飲料、栄養補助食品、食事代替物、食品添加物、食品製品への補給物、溶解用の粉末、経腸栄養製品、乳児用配合物、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される形態である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
腸管粘膜の治癒を促進するための組成物であって、前記組成物が、タンパク質、プロリン、セリン、及びスレオニンを含み、前記プロリン、前記セリン、及び前記スレオニンのそれぞれが、（ｉ）前記タンパク質の一部、（ｉｉ）遊離型アミノ酸、及び（ｉｉｉ）これらの混合物からなる群から個々に選択される形態を有し、前記組成物が、（ｉ）前記プロリン約０．０６ｇ／前記タンパク質１ｇ、（ｉｉ）前記セリン約０．０７ｇ／前記タンパク質１ｇ、（ｉｉｉ）前記スレオニン０．０４／前記タンパク質１ｇ、及び（ｉｖ）これらの組み合わせからなる群から選択される量を含む、組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
［０００１］本開示は概して、健康及び栄養に関する。より具体的には、本開示は、プロリン、セリン、及びスレオニンを用いた腸管粘膜治癒を促進する方法及び組成物に関する。
【０００２】
［０００２］粘膜は、胃腸管の最も内側の層であり、胃腸管を通過する管腔を取り巻いている。胃腸管粘膜は、最も内側の層、すなわち上皮と、上皮を取り巻く平滑筋の薄層、すなわち粘膜筋板と、上皮と粘膜筋板との間の結合組織の層、すなわち粘膜固有層と、によって形成されている。
【０００３】
［０００３］潰瘍性大腸炎及びクローン病を含む炎症性腸疾患（ＩＢＤ）は、粘膜の炎症だけでなく、腸管バリア機能の重篤な損傷をも特徴とする。最近の臨床試験は、「粘膜治癒」を、ＩＢＤ患者における長期寛解、及びＣＤ患者における外科療法のリスクの低減のための最も重要な予後因子として特筆している。
【０００４】
［０００４］臨床的な粘膜治癒は、内視鏡レベル及び顕微鏡レベルの両方で、上皮層の完全な修復と定義されてきた。目下、上皮内層及びバリアの修復が、効果的なＩＢＤ治療の達成に重要であることが認識されているが、ＩＢＤ患者において粘膜治癒を促進するための有効な治療の解決策がない。更にこの点に関し、粘膜治癒は炎症性腸疾患患者において再発のリスクを低減するが、この過程における食品栄養補充の役割については十分に精査されていない。
【発明の概要】
【０００５】
［０００５］本開示は、プロリン、セリン、及びスレオニンを、これらの投与を必要とする個体、例えば、炎症性腸疾患を有する個体に投与するステップを含む、腸管粘膜治癒を促進するための方法を提供する。本発明者らは、特定のアミノ酸、すなわちプロリン、セリン、及びスレオニンによる、ラットモデルにおける食餌の補給により、驚くべきことに、腸上皮細胞が修復され、結腸上皮の保護が促進されることを見出した。これらは、粘膜治癒を促進するための重要なステップである。具体的には、これらの驚くべき有益な効果は、健康なラットの理論的なスレオニン必要量の約４倍の用量のスレオニンと、健康なラットの基礎摂取量の約３倍の用量のセリンと、健康なラットについて規定された基礎摂取量の約４倍の用量のプロリンと、の投与によってもたらされた。
【０００６】
［０００６］したがって、一般的な一実施形態において、腸管粘膜の治癒を促進する方法が提供される。この方法は、治療上有効な量のプロリン、セリン、及びスレオニンの組み合わせを含む組成物を、これを必要とする個体に投与するステップを含む。
【０００７】
［０００７］一実施形態において、組成物は、プロリン約０．０７〜約０．３ｇ／ｋｇ体重／日の用量を組成物が提供する量で、投与される。
【０００８】
［０００８］一実施形態において、組成物は、セリン約０．０７〜約０．３５ｇ／個体の体重１ｋｇ／日の用量を組成物が提供する量で、投与される。
【０００９】
［０００９］一実施形態において、組成物は、スレオニン約０．０４〜約０．２０ｇ／ｋｇ体重／日の用量を組成物が提供する量で、投与される。
【００１０】
［００１０］一実施形態において、プロリン、セリン、又はスレオニンのうちの少なくとも１種の少なくとも一部は遊離アミノ酸である。
【００１１】
［００１１］一実施形態において、個体は損傷した腸管粘膜を有する。
【００１２】
［００１２］他の一実施形態において、腸管バリア機能を回復させる方法が提供される。この方法は、治療上有効な量のプロリン、セリン、及びスレオニンを含む組成物を、これを必要とする個体に投与するステップを含む。一実施形態において、組成物は、（ｉ）プロリン約０．０７〜約０．３ｇ／ｋｇ体重／日、（ｉｉ）セリン約０．０７〜約０．３５ｇ／個体の体重１ｋｇ／日、（ｉｉｉ）スレオニン約０．０４〜約０．２０ｇ／ｋｇ体重／日、及び（ｉｖ）これらの組み合わせからなる群から選択される用量を、組成物が提供する量で、投与される。一実施形態において、個体は、障害のある腸管バリア機能を有する。
【００１３】
［００１３］他の一実施形態において、腸上皮細胞を修復する方法が提供される。この方法は、治療上有効な量のプロリン、セリン、及びスレオニンの組み合わせを含む組成物を、これを必要とする個体に投与するステップを含む。一実施形態において、組成物は、（ｉ）プロリン約０．０７〜約０．３ｇ／ｋｇ体重／日、（ｉｉ）セリン約０．０７〜約０．３５ｇ／個体の体重１ｋｇ／日、（ｉｉｉ）スレオニン約０．０４〜約０．２０ｇ／ｋｇ体重／日、及び（ｉｖ）これらの組み合わせからなる群から選択される用量を、組成物が提供する量で、投与される。一実施形態において、個体は損傷した腸上皮細胞を有する。
【００１４】
［００１４］他の一実施形態において、結腸上皮の保護を促進する方法が提供される。この方法は、治療上有効な量のプロリン、セリン、及びスレオニンの組み合わせを含む組成物を、これを必要とする個体に投与するステップを含む。一実施形態において、組成物は、（ｉ）プロリン約０．０７〜約０．３ｇ／ｋｇ体重／日、（ｉｉ）セリン約０．０７〜約０．３５ｇ／個体の体重１ｋｇ／日、（ｉｉｉ）スレオニン約０．０４〜約０．２０ｇ／ｋｇ体重／日、及び（ｉｖ）これらの組み合わせからなる群から選択される用量を、組成物が提供する量で、投与される。一実施形態において、個体は損傷した結腸上皮を有する。
【００１５】
［００１５］他の一実施形態において、杯細胞の増殖及び／又は産生を促進する方法が提供される。この方法は、治療上有効な量のプロリン、セリン、及びスレオニンの組み合わせを含む組成物を、これを必要とする個体に投与するステップを含む。一実施形態において、組成物は、（ｉ）プロリン約０．０７〜約０．３ｇ／ｋｇ体重／日、（ｉｉ）セリン約０．０７〜約０．３５ｇ／個体の体重１ｋｇ／日、（ｉｉｉ）スレオニン約０．０４〜約０．２０ｇ／ｋｇ体重／日、及び（ｉｖ）これらの組み合わせからなる群から選択される用量を、組成物が提供する量で、投与される。一実施形態において、個体では杯細胞が激減している。
【００１６】
［００１６］更に他の一実施形態において、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）を治療するための方法が提供される。この方法は、治療上有効な量のプロリン、セリン、及びスレオニンの組み合わせを含む組成物を、これを必要とする個体に投与するステップを含む。一実施形態において、組成物は、（ｉ）プロリン約０．０７〜約０．３ｇ／ｋｇ体重／日、（ｉｉ）セリン約０．０７〜約０．３５ｇ／個体の体重１ｋｇ／日、（ｉｉｉ）スレオニン約０．０４〜約０．２０ｇ／ｋｇ体重／日、及び（ｉｖ）これらの組み合わせからなる群から選択される用量を、組成物が提供する量で、投与される。ＩＢＤは、クローン病又は潰瘍性大腸炎であり得る。
【００１７】
［００１７］更に他の一実施形態において、ＩＢＤ患者における再発を防止する、又は、遅延させるための方法が提供される。この方法は、治療上有効な量のプロリン、セリン、及びスレオニンの組み合わせを含む組成物を、これを必要とする個体に投与するステップを含む。一実施形態において、組成物は、（ｉ）プロリン約０．０７〜約０．３ｇ／ｋｇ体重／日、（ｉｉ）セリン約０．０７〜約０．３５ｇ／個体の体重１ｋｇ／日、（ｉｉｉ）スレオニン約０．０４〜約０．２０ｇ／ｋｇ体重／日、及び（ｉｖ）これらの組み合わせからなる群から選択される用量を、組成物が提供する量で、投与される。ＩＢＤは、クローン病又は潰瘍性大腸炎であり得る。
【００１８】
［００１８］他の一実施形態において、腸管粘膜の治癒を促進するための組成物を作製する方法が提供される。この方法は、腸管粘膜治癒を促進するために治療上有効なプロリン、セリン、及びスレオニンの量を食材に加え、医療食品を形成するステップを含む。一実施形態において、医療食品は、発酵乳、ヨーグルト、フレッシュチーズ、レンネット乳、菓子バー、朝食のシリアルフレーク、朝食のシリアルバー、飲料、乳粉末、ダイズを素材とする製品、非乳発酵製品、又は臨床栄養のための栄養補助食品からなる群から選択される。一実施形態において、組成物は、粉末、特に液体による再構成用の粉末の形態であってもよい。一実施形態において、組成物は、液体、例えば、すぐに飲める液体の経口栄養補助食品の形態であってもよい。
【００１９】
［００１９］一実施形態において、プロリン、セリン、及びスレオニンのそれぞれは、（ｉ）タンパク質の一部、（ｉｉ）遊離型のアミノ酸、及び（ｉｉｉ）これらの組み合わせからなる群から個々に選択される形態を有する。
【００２０】
［００２０］一実施形態においては、個体は、乳児、小児、思春期の若者、成人、及び高齢者からなる群から選択される。好ましい一実施形態において、個体は、成人及び高齢者からなる群から選択される。
【００２１】
［００２１］本開示の利点は、腸管粘膜治癒を促進する方法を提供すること、及びこのような方法において有用な組成物を提供することである。
【００２２】
［００２２］本開示の他の利点は、プロリン、セリン、及びスレオニンを組み込んだ治療用栄養組成物又は薬剤の経口投与により、腸管粘膜治癒を促進することである。
【００２３】
［００２３］本開示の更に他の利点は、許容できる副作用を伴い又は副作用なしに、腸管粘膜治癒を促進する天然化合物を使用して、炎症を低減又は予防することである。
【００２４】
［００２４］本開示の他の利点は、腸管バリア機能を修復し、腸上皮細胞を修復し、結腸上皮の保護を促進し、かつ／又は杯細胞の増殖及び／若しくは産生を促進することである。
【００２５】
［００２５］更なる特徴及び利点を、本明細書に記載する。これらは、下記の「発明を実施するための形態」及び図面から明らかとなろう。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】本明細書に開示の実施例による実験結果（結腸上皮の１μｍ当たりの杯細胞の数）のグラフ図である。結腸上皮の１μｍ当たりの杯細胞の数。データは平均±ＳＥＭである。ＣＴＲＬ：対照；ＤＳＳ：デキストラン硫酸ナトリウム；ＡＬＡ：アラニン；３ＡＡ：スレオニン、セリン、及びプロリンの配合物；μｍ：マイクロメートル。差は、ノンパラメトリッククラスカル・ウォリス分散分析（ｎｏｎ−ｐａｒａｍｅｔｒｉｃ  Ｋｒｕｓｋａｌ−Ｗａｌｌｉｓ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｖａｒｉａｎｃｅ）、次いでダンの検定（Ｄｕｎｎ’ｓ  ｔｅｓｔ）を用いて評価した。ｐ＜０．０５の値を、統計学的に有意であるとみなした。＊ＣＴＲＬ−ＡＬＡとの比較、†ＤＳＳ−ＡＬＡとの比較。
【図２】本明細書に開示の実施例による実験結果（腸脂肪酸結合タンパク質ｉＦＡＢＰの血漿中濃度）のグラフ図である。９日及び２８日目のｉＦＡＢＰの血漿中濃度。データは平均±ＳＥＭである。ＣＴＲＬ：対照；ＤＳＳ：デキストラン硫酸ナトリウム；ＡＬＡ：アラニン；３ＡＡ：スレオニン、セリン、及びプロリンの配合物。差は、ノンパラメトリッククラスカル・ウォリス分散分析（ｎｏｎ−ｐａｒａｍｅｔｒｉｃ  Ｋｒｕｓｋａｌ−Ｗａｌｌｉｓ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｖａｒｉａｎｃｅ）、次いでダンの検定（Ｄｕｎｎ’ｓ  ｔｅｓｔ）を用いて評価した。ｐ＜０．０５の値を、統計学的に有意であるとみなした。＊ＣＴＲＬ−ＡＬＡとの比較、†ＤＳＳ−ＡＬＡとの比較。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
［００２８］本開示及び添付の「特許請求の範囲」で使用する場合、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、文脈上他に明確に記載のない限り、複数の指示対象を含む。したがって、例えば、「アミノ酸（ａｎ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ）」又は「アミノ酸（ｔｈｅ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ）」という言及は、２種以上のアミノ酸を包含する。「Ｘ及び／又はＹ」の文脈で使用する用語「及び／又は」は、「Ｘ、」又は「Ｙ、」又は「Ｘ及びＹ」と解釈すべきである。本明細書において使用する場合、用語「例（ｅｘａｍｐｌｅ）」は、特に用語の掲載が後続する場合、単に例示的かつ説明のためのものであり、排他的又は包括的なものと判断すべきではない。
【００２８】
［００２９］本明細書で使用する場合、「約」は、ある数値範囲の数字、例えば、参照する数字の−１０％〜＋１０％の範囲、好ましくは参照する数字の−５％〜＋５％以内、より好ましくは参照する数字の−１％〜＋１％以内、最も好ましくは参照する数字の−０．１％〜＋０．１％以内の数字を指すものと理解される。更に、本明細書における全ての数値範囲は、その範囲内の全ての整数（ｉｎｔｅｇｅｒｓ，  ｗｈｏｌｅ）又は分数を含むものと理解されるべきである。更に、これらの数値範囲は、この範囲内の任意の数字又は数字の部分集合を対象とする請求項を支持するために与えられていると解釈すべきである。例えば、１〜１０という開示は、１〜８、３〜７、１〜９、３．６〜４．６、３．５〜９．９等の範囲を支持するものと解釈すべきである。
【００２９】
［００３０］本明細書に記載する全ての百分率は、別途記載のない限り、組成物の総重量の重量によるものである。ｐＨについての参照がなされるとき、値は標準的な装置により２５℃で測定されるｐＨに相当する。
【００３０】
［００３１］用語「状態」及び「障害」は、任意の疾患、状態、症状、又は徴候を意味する。本明細書で使用する場合、「有効な量」とは、欠乏を予防する、個体の状態若しくは障害を治療する、又は、より一般的に、症状を軽減する、状態若しくは疾患の進行を管理する、あるいは、栄養学的、生理学的、若しくは医学的効果を個体に対して提供する量である。
【００３１】
［００３２］用語「治療」及び「治療する」は、状態又は障害の改善をもたらす任意の効果、例えば状態又は障害を和らげること、軽減すること、調節すること、又は、解消させることを包含する。状態若しくは障害を「治療する」又は状態若しくは障害「の治療」の非限定的な例としては、（１）状態若しくは障害を抑制すること、すなわち状態若しくは障害又はその臨床症状の発症を阻止すること、及び（２）状態若しくは障害を緩和すること、すなわち状態若しくは障害又はその臨床症状の一時的若しくは永続する退縮を引き起こすことが挙げられる。用語「治療する」及び「治療」は、（標的とする病態若しくは障害の発症を予防する、かつ／又は、遅延させる）予防的治療（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ  ｏｒ  ｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）と、治癒的、治療的又は疾患改変治療と、の両方を含む。これらは、診断された病態又は障害の症状を治療する、減速させる、軽減する、かつ／又は、進行を停止する治療手段と、疾患に冒されるリスクがある、又は、疾患に冒されたことが疑われる患者、並びに、病気である、又は、疾患若しくは医学的状態に罹患していると診断された患者の治療と、を含む。これらの用語は、完全に回復するまで対象が治療されることを必ずしも意味するものではない。治療は患者に関連する、又は、医師に関連するものとすることができる。
【００３２】
［００３３］用語「予防」又は「予防する」は、状態若しくは障害にさらされ得る、又は、罹患しやすい場合があるが、まだその状態若しくは障害の症状に見舞われていない、又は、その症状を呈していない個体において、言及される状態又は障害の臨床症状を発症させないことを意味する。「予防」は、状態若しくは障害のリスク及び／又は重症度の低減を含む。
【００３３】
［００３４］「動物」としては、これらに限定されるものではないが、哺乳動物が挙げられ、哺乳動物としては、これらに限定されるものではないが、齧歯類、水生哺乳動物、イヌ及びネコ等の飼育動物、ヒツジ、ブタ、ウシ、及びウマ等の家畜、並びにヒトが挙げられる。「動物」、「哺乳動物」、又はこれらの複数形が用いられる場合、これらの用語は、その一節の文脈によって示される、又は、示されることを意図した効果が可能な、任意の動物にも当てはまる。本明細書で使用する場合、用語「患者」及び「個体」は、本明細書において定義されるとおりの治療を受ける、又は、治療を受けることが意図される動物、特に哺乳動物、及び更には特にヒトを含むものと理解される。用語「個体」及び「患者」は、本明細書においてヒトを指して使用されることが多いが、本開示はそのようには限定されない。したがって、用語「個体」及び「患者」は、治療により効果を得ることのできる任意の動物、哺乳動物、又はヒトを指す。
【００３４】
［００３５］ある動物が「高齢（ｅｌｄｅｒｌｙ）」とみなされるのは、その原産国における平均予想寿命の最初の３分の２を超えた場合を指し、好ましくは、その原産国における平均予想寿命の最初の４分の３を超えた場合、より好ましくは、その原産国における平均予想寿命の最初の５分の４を超えた場合を指す。「高齢のヒト」とは、暦年齢で６５歳以上の人を意味する。
【００３５】
［００３６］本明細書で使用する場合、「長期投与」は６週間以上の連続投与（例えば、少なくとも週に２回、好ましくは毎日）である。「短期投与」は６週間未満の連続投与（例えば、少なくとも週に２回、好ましくは毎日）である。
【００３６】
［００３７］用語「食品」、「食品製品」、及び「食品組成物」は、ヒトによる摂取を意図し、ヒトに少なくとも１種の栄養素を提供する製品又は組成物を意味する。本明細書に開示される組成物は、本明細書に具体的に開示されていない任意の要素を欠く場合がある。したがって、用語「を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」を使用する実施形態の開示は、特定された構成成分「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」及び「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」実施形態の開示を含む。同様に、本明細書に開示される方法は、本明細書に具体的に開示されていない任意のステップを欠く場合がある。したがって、用語「を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」を使用する実施形態の開示は、特定されているステップ「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」及び「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」実施形態の開示を含む。本明細書で開示される任意の実施形態は、本明細書で開示される任意の他の実施形態と組み合わせることができる。
【００３７】
［００３８］本開示の一態様において、腸管粘膜の治癒を促進する方法が提供される。この方法は、治療上有効な量のプロリン、セリン、及びスレオニンを含む組成物を、損傷した腸管粘膜を有する個体等の、これらの投与を必要とする個体に投与するステップを含む。一実施形態において、治癒は、内視鏡レベル及び顕微鏡レベルの両方で、上皮層の完全な修復である。
【００３８】
［００３９］本開示の他の一態様において、腸管バリア機能を回復させる方法が提供される。この方法は、治療上有効な量のプロリン、セリン、及びスレオニンを、障害のある腸管バリア機能を有する個体等の、これらの投与を必要とする個体に投与するステップを含む。
【００３９】
［００４０］本開示の更に別の一態様において、腸上皮細胞を修復する方法が提供される。この方法は、治療上有効な量のプロリン、セリン、及びスレオニンを、損傷した腸上皮細胞を有する個体等の、これらの投与を必要とする個体に投与するステップを含む。
【００４０】
［００４１］本開示の更なる一態様において、結腸上皮の保護を促進する方法が提供される。この方法は、治療上有効な量のプロリン、セリン、及びスレオニンを、損傷した結腸上皮を有する個体等の、これらの投与を必要とする個体に投与するステップを含む。
【００４１】
［００４２］本開示の更なる一態様において、腸管粘膜及び結腸粘膜における杯細胞の補充を促進する方法が提供される。この方法は、治療上有効な量のプロリン、セリン、及びスレオニンを、杯細胞が減少した個体等の、これらの投与を必要とする個体に投与するステップを含む。
【００４２】
［００４３］これらの実施形態のいずれかにおいて、個体は、炎症性腸疾患を有する患者とすることができる。
【００４３】
［００４４］一実施形態において、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）を治療するための方法が提供される。この方法は、治療上有効な量のプロリン、セリン、及びスレオニンの組み合わせを含む組成物を、これを必要とする個体に投与するステップを含む。他の一実施形態において、ＩＢＤ患者における再発を防止する、又は、遅延させるための方法が提供される。この方法は、治療上有効な量のプロリン、セリン、及びスレオニンの組み合わせを含む組成物を、これを必要とする個体に投与するステップを含む。ＩＢＤは、クローン病又は潰瘍性大腸炎であり得る。
【００４４】
［００４５］組成物は、ヒト、又はコンパニオンアニマル、ペット、若しくは家畜等の動物に投与してもよい。一実施形態において、組成物は、プロリン約０．０７〜約０．３ｇ／ｋｇ体重／日、セリン約０．０７〜約０．３５ｇ／ｋｇ体重／日、スレオニン約０．０４〜約０．２０ｇ／ｋｇ体重／日の用量のうちの１種以上を提供する量で、投与される。一実施形態において、組成物は、プロリン約０．０６ｇ／タンパク質１ｇ、セリン約０．０７ｇ／タンパク質１ｇ、及びスレオニン０．０４／タンパク質１ｇの量のうちの１種以上を含む。
【００４５】
［００４６］組成物は、いかなる年齢層に対しても有益な効果がある。好ましくは、組成物は、乳児、若年者、成人、又は高齢者を対象とする。組成物は、個体に、短期間又は長期間投与することができる。組成物は、経口、局所、経腸、及び非経口からなる群から選択される経路によって投与することができる。好ましくは、組成物は、経腸投与、例えば経口投与される。例えば、組成物は粉末、液体濃縮物、又はレディ・トゥ・ドリンク飲料の形態を有することができる。
【００４６】
［００４７］一実施形態において、組成物は、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパルテート、シトルリン、システイン、グルタメート、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、ヒドロキシプロリン、ヒドロキシセリン、ヒドロキシチロシン、ヒドロキシリジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、タウリン、トリプトファン、チロシン、バリン、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、追加のアミノ酸を含有する。一実施形態において、組成物は追加的にアミノ酸前駆体を含有してもよい。一実施形態において、組成物は、システイン前駆体のシスタチオニン、Ｎ−アセチルシステイン、及び／又はＤＡＣＥから選択されるアミノ酸前駆体を含有する。他の一実施形態において、これらの追加のアミノ酸の１種以上は、組成物中に不在である。例えば、プロリン、セリン、及びスレオニンのみが、このような実施形態における組成物中のアミノ酸であり得る。
【００４７】
［００４８］組成物中のプロリン、セリン、及びスレオニンのそれぞれは、遊離型（すなわちモノマー）であってもよく、又はジペプチド、トリペプチド、若しくはポリペプチド（例えば、本明細書で使用する場合、２０個以上のアミノ酸を有するポリペプチドを意味する、タンパク質）の一部であってもよい。タンパク質が、プロリン、セリン、又はスレオニンのうちの１種以上を提供するために使用される場合、タンパク質は、無処理のタンパク質、タンパク質加水分解物、タンパク質部分加水分解物、又は無処理のタンパク質とタンパク質加水分解物との混合物とすることができる。
【００４８】
［００４９］組成物は、食品製品、食品製品への補給物、動物食品製品、又は医薬組成物であってもよい。例えば、製品は、栄養組成物、ニュートラシューティカルズ、飲料、食品添加物、又は薬剤であってもよい。食品添加物又は薬剤は、例えば、錠剤、カプセル剤、トローチ、又は液体の形態であってもよい。食品添加物又は薬剤は、好ましくは、持続放出性配合物として提供され、長時間にわたり、セリンの一定の供給を可能とする。
【００４９】
［００５０］組成物は、医療食品であってもよい。医療食品製品は、疾患又は医学的状態の食事管理（例えば、疾患又は望ましくない医学的状態の予防又は治療）を目的として特別に配合される。医療食品製品は、臨床栄養を提供することができ、例えば、医学的状態を有する患者、又はその他の特殊な栄養的必要性を有する人の特別な栄養的必要性を満たす。医療食品製品は、完全な食事、食事の一部、食品添加物、又は溶解用の粉末の形態とすることができる。
【００５０】
［００５１］一実施形態において、栄養組成物は、錠剤、カプセル剤、液体、チュアブル、ソフトゲル、サッシェ、粉末、シロップ剤、液体懸濁剤、乳濁液、溶液、又はこれらの組み合わせからなる群から選択される形態である。一実施形態において、栄養組成物は、経口栄養補助食品である。あるいは、栄養組成物は、経管栄養であってもよい。
【００５１】
［００５２］組成物は、完全栄養又は不完全栄養を提供することができる。完全栄養は、これが投与される動物にとって唯一の栄養源となるのに十分な、種類及びレベルの主要栄養素（タンパク質、脂肪、及び炭水化物）及び微量栄養素を提供する。患者は、その栄養必要量の１００％を、このような完全栄養組成物から摂取できる。不完全栄養は、その組成物が、投与される動物にとって唯一の栄養源となるのに十分なレベルの主要栄養素（タンパク質、脂肪、及び炭水化物）又は微量栄養素は、提供しない。部分又は不完全栄養組成物は、好ましくは、栄養補助食品として使用される。
【００５２】
［００５３］組成物は、好ましくは、乳粉末を素材とする製品、インスタント飲料、レディ・トゥ・ドリンク配合物、栄養粉末、栄養液、乳製品、特にヨーグルト又はアイスクリーム、穀類製品、飲料、水、コーヒー、カプチーノ、麦芽飲料、チョコレート味の飲料、調理用製品、スープ、錠剤、及びシロップ剤からなる群から選択される。乳は動物源又は植物源から入手可能な任意の乳とすることができ、好ましくは、牛乳、人乳、羊乳、山羊乳、馬乳、ラクダ乳、米乳、又は豆乳である。追加的に、又は、代替的に、乳由来のタンパク質分画又は初乳を使用してもよい。
【００５３】
［００５４］組成物は、保護親水コロイド（ガム、タンパク質、加工デンプン等）、結合剤、フィルム形成剤、封入剤／材料、皮膜／殻材料、マトリックス化合物、コーティング、乳化剤、界面活性剤、可溶化剤（油、脂肪、ワックス、レシチン等）、吸着剤、担体、充填剤、共化合物、分散剤、湿潤剤、加工助剤（溶媒）、流動剤、味覚マスキング剤、増量剤、ゼリー化剤、ゲル形成剤、抗酸化物質、及び抗菌剤を含んでもよい。組成物はまた、従来の医薬品添加物及び補助剤、賦形剤及び希釈剤を含有してもよく、これらに限定されるものではないが、水、任意の由来のゼラチン、植物ガム、リグニンスルホネート、タルク、糖、デンプン、アラビアゴム、植物油、ポリアルキレングリコール、着香料、防腐剤、安定剤、乳化剤、緩衝液、滑沢剤、着色剤、湿潤剤、充填剤等が挙げられる。更に、組成物は、経口又は経腸投与に好適な有機又は無機担体材料、並びに政府機関の推奨に従う、ビタミン、ミネラル微量元素及びその他の微量栄養素を含有してもよい。
【００５４】
［００５５］組成物は、タンパク質源、炭水化物源、及び／又は脂質源を含んでもよい。任意の好適なタンパク質、例えば動物性タンパク質（乳タンパク質、肉タンパク質、及び卵タンパク質等）、植物性タンパク質（ダイズタンパク質、コムギタンパク質、コメタンパク質、及びエンドウマメタンパク質等）、遊離アミノ酸の混合物、又はこれらの組み合わせを使用してもよい。カゼイン及びホエイ等の乳タンパク質、並びにダイズタンパク質が、特に好ましい。
【００５５】
［００５６］組成物が脂肪源を含む場合、脂肪源は、好ましくは組成物のエネルギーの５％〜５０％、好ましくは１０％〜４０％、より好ましくは、エネルギーの２０％〜３０％を提供する。ダイズ油、パーム油、ヤシ油、ベニバナ油、ヒマワリ油、トウモロコシ油、キャノーラ油、及びレシチン等の植物性脂肪が、特に好適である。所望であれば、乳脂肪等の動物性脂肪を含んでもよい。
【００５６】
［００５７］炭水化物源は、組成物のエネルギーの２０％〜８０％、好ましくは、組成物のエネルギーの３０％〜７０％を提供することができる。任意の好適な炭水化物、例えば、スクロース、ラクトース、グルコース、フルクトース、固形コーンシロップ、マルトデキストリン、及びこれらの混合物を使用してもよい。所望であれば、食物繊維もまた加えてもよい。食物繊維は任意の好適な由来のものとすることができ、例えば、ダイズ、エンドウマメ、エンバク、ペクチン、グアーガム、アラビアゴム、フラクトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、シアリル−ラクトース、及び動物の乳由来のオリゴ糖が挙げられる。
【００５７】
［００５８］好適なビタミン及びミネラルを、組成物中に含んでもよい。特定のビタミン及びミネラルの存在及び量は、投与が意図される対象に応じて異なる。
【００５８】
［００５９］一実施形態において、組成物は、１種以上のヌクレオチド、シンバイオティックス、魚油、ω３脂肪酸の非海産供給源、リン脂質、植物性栄養素、及び／又は抗酸化物質を更に含む。本明細書において使用する場合、シンバイオティクスは、腸の微生物叢を相乗的に改善する、プレバイオティクスとプロバイオティクスとの組み合わせである。好適な魚油の非限定的な例としては、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）及びエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）を提供する魚油が挙げられる。好適な植物栄養素の非限定的な例としては、ケルセチン、クルクミン、及びリモニンが挙げられる。抗酸化物質は、他の分子の酸化を遅延させる、又は、防止することができる分子である。好適な抗酸化物質の非限定的な例としては、ビタミンＡ、カロテノイド、ビタミンＣ、ビタミンＥ、セレン、フラボノイド、ラクトウルフベリー（Ｌａｃｔｏｗｏｌｆｂｅｒｒｙ）、ゴジ（Ｇｏｊｉ）（ウルフベリー（ｗｏｌｆｂｅｒｒｙ））、ポリフェノール、リコペン、ルテイン、リグナン、コエンザイムＱ１０（ＣｏＱ１０）、ヘスペリジン、及びグルタチオンが挙げられる。リン脂質の非限定的な例としては、ホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、及びホスファチジルエタノールアミンが挙げられる。
【００５９】
［００６０］本開示の他の一態様において、腸管粘膜の治癒を促進するための組成物を作製する方法が提供される。この方法は、腸管粘膜治癒を促進するために治療上有効なプロリン、セリン、及びスレオニンの量を食材に加え、医療食品を形成するステップを含む。例えば、医療食品は、発酵乳、ヨーグルト、フレッシュチーズ、レンネット乳、菓子バー、朝食のシリアルフレーク、朝食のシリアルバー、飲料、乳粉末、ダイズを素材とする製品、非乳発酵製品、又は臨床栄養のための栄養補助食品とすることができる。
【００６０】
［００６１］実施例
［００６２］下記の非限定的な実施例は、本開示による腸管粘膜治癒促進の例示である。
【００６１】
［００６３］実施例１
［００６４］実験手順は、実験動物の管理及び使用に関する欧州ガイドライン（Ｄｉｒｅｃｔｉｖｅ  ２０１０／６３／ＵＥ）に従って実施した。Ｊａｎｖｉｅｒ（フランス）より入手したスプラーグドーリーラットの雄３０匹、到着当日の月齢が６〜８箇月、かつ体重約５００／７００ｇを、本試験に使用した。ラットは、個々にケージに収容した。試験中、ラットは食餌及び飲料水、又は硫酸デキストランナトリウム（ＤＳＳ，ＭＷ  ３６−４４  ｋＤａ，ＩＣＮ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ）溶液を、無制限に自由に取れた。ラットに、５％ＤＳＳを０日目から８日目まで（急性大腸炎）、更に２％ＤＳＳを９日目から２８日目まで（慢性大腸炎）施すことにより、大腸炎を誘発した。ＤＳＳをオートクレーブで処理した水に溶解し、ラットに無制限に与えた。対照群のラットには、ＤＳＳを含まない水を０日目から２８日目まで与えた。
【００６２】
［００６５］３群のラットに、下記の処置及び食餌を施した。
［００６６］ＣＴＲＬ群（ＣＴＲＬ−ＡＬＡ、ｎ＝１０）には、以下（ｇ／ｋｇ）からなる乾燥半合成粉末の対照食を摂取した：炭水化物６４６（小麦デンプン）、タンパク質１２０（全てのアミノ酸必要量を満たすようにバランスの取れたニシンの肉によって供給した）、脂質６４（落花生油４５、ヒマワリ油１０、菜種油９）、カンテン３０、ミネラルミックス７０（ＵＡＲ  ２０５ｂ：ＣａＨＰＯ４，３０．１；ＫＣｌ，７；ＮａＣｌ，７；ＭｇＯ，０．７３５；ＭｇＳＯ４，３．５；Ｆｅ２Ｏ３，０．２１；ＦｅＳＯ４７Ｈ２Ｏ，０．３５）及びビタミンミックス１０［ＵＡＲ  ２００］。対照食は、アラニンの補充（４０ｇ／ｋｇ乾燥物）により、その他の食餌と等窒素であった。対照食のスレオニン、セリン、及びプロリンの濃度は、それぞれ５．７、５、及び５ｇ／ｋｇ（乾燥物）であった。
【００６３】
［００６７］ＤＳＳ対照群（ＤＳＳ−ＡＬＡ、ｎ＝１０）には、アラニンを補充した（４０ｇ／ｋｇ乾燥物）対照食を与えた。
【００６４】
［００６８］ＤＳＳ群（ＤＳＳ−３ＡＡ、ｎ＝１０）には、３ＡＡ、すなわちスレオニン（１５ｇ／ｋｇ乾燥物）、セリン（１０ｇ／ｋｇ乾燥物）、及びプロリン（１５ｇ／ｋｇ乾燥物）の配合物を補充した対照食を摂取した。
【００６５】
［００６９］８日間の順応期間中、各群のラットには、それぞれの食餌を給餌した。０日目から、ラットは、前述のとおり、飲料水中のＤＳＳを摂取した、又は、摂取しなかった。９日目及び２８日目に採血し、直ちに乾燥した管に移して遠心分離し、更に分析するまで血漿を−２０℃で凍結した。腸脂肪酸結合タンパク質（ｉＦＡＢＰ）の血漿中濃度を、市販のＥＬＩＳＡキットを使用して評価した。
【００６６】
［００７０］試験の終了時（２８日目）に、ラットをケタミン及びキシラジンの組み合わせを使用して麻酔し、頚椎脱臼により安楽死させた。ラットが安楽死すると直ちに、腹部正中切開を行い、結腸接合部から肛門縁より、結腸を採取した。結腸をすすぎ、近位結腸、中位結腸、遠位結腸の全てから結腸の小片を採取し、冷蔵した４％ホルマリン中に浸けた。試料を脱水し、次いで、横断切片を得るため、ワックスに包埋した。規定の長さの結腸粘膜上の杯細胞の数を評価するため、結腸のスライドを抗ＮＵＣ２抗体で免疫標識した。
【００６７】
［００７１］結腸上皮１μｍ当たりの杯細胞の数を、図１に示す。結腸上皮１μｍ当たりの杯細胞の数は、アラニンの補充による等窒素の食餌を給餌したＣＴＲＬ群（ｐ＜０．０１）及びＤＳＳ群と比較すると、ＤＳＳ−３ＡＡ群で有意に高かった。杯細胞のこの増加は、粘膜治癒を促進するための最初のステップとして、結腸上皮の保護を促進するために必要とされる。
【００６８】
［００７２］この点に関し、粘膜免疫系の防護の第一線は、杯細胞から分泌され、細菌が散在する、主としてムチンからなる粘液バイオフィルムに覆われた、上皮細胞の層である。上皮細胞の種類の中での杯細胞の比率は、近位腸管から結腸に存在する微生物の数が増加するのと同様に、十二指腸（４％）から遠位結腸（１６％）へと、体の後端に向かって増加する。したがって、杯細胞は、例えば微生物叢等の管腔内容物によって引き起こされる恒常的な侵襲から、腸管粘膜及び結腸粘膜を確実に保護するために、重要な役割を担っている。この第一線と共に、杯細胞及びムチン等の分泌された生成物もまた、アポトーシスを抑制すること、及び細胞移動を刺激することが示されており、表面の上皮層の完全性の維持、並びに粘膜の修復及び治癒の促進における生物活性的な役割が示唆されている。杯細胞はまた、上皮の回復及び創傷治癒に関与することが示されている、ＴＦＦ３等の、トレフォイルファクターを併せて分泌する。
【００６９】
［００７３］ｉＦＡＢＰの血漿中濃度を、図２に示す。９日目に、ｉＦＡＢＰの血漿中濃度は、ＣＴＲＬ−ＡＬＡ群と比較すると、ＤＳＳ−ＡＬＡ群において増加傾向にあった（有意差なし）。ＤＳＳ−ＡＬＡ群と比較すると、血漿中ｉＦＡＢＰ濃度は、３ＡＡの配合が補充されたＤＳＳ群において、未処置の対照群と同様の濃度まで有意に低下した。同様に、２８日目に、ｉＦＡＢＰの血漿中濃度は、ＤＳＳ−３ＡＡ群において、ＤＳＳ−ＡＬＡ群においてよりも有意に低かった。３ＡＡの補充を摂取したＤＳＳ群における血漿中ｉＦＡＢＰ濃度のこの低下は、粘膜治癒をもたらすために必要な過程である、腸上皮細胞の修復を示すものである。
【００７０】
［００７４］この点に関し、脂肪酸結合タンパク質（ＦＡＢＰ）は、脂肪酸の取り込み及び消費に関与する組織に高濃度で見られる、低分子量（１４〜１５ｋＤａ）細胞質ゾルタンパク質の一種である。ｉＦＡＢＰは、多数の腸疾患における破壊の初期部位である、絨毛の上部に存在する細胞において高度に発現している。ｉＦＡＢＰは、主として、小腸及び大腸の成熟腸細胞に限定されており、少量が、健康な個体の血流中を循環する。ｉＦＡＢＰは、早期腸管細胞死に対する有用な血漿／尿マーカーであり、急性腸管虚血及び炎症の発症後、濃度が急速に上昇する。循環ｉＦＡＢＰの濃度は、実験的研究における腸管虚血−再灌流後の上皮の組織学的状態と相関していることが報告されている。潰瘍性大腸炎を有する患者における血清中ｉＦＡＢＰ濃度の上昇はまた、腸管の炎症の存在を反映することも示唆された。
【００７１】
［００７５］したがって、血漿中ｉＦＡＢＰの評価は、これらのタンパク質が腸において特異的に発現され、細胞の損傷に際し、直ちに循環中へと放出されるため、腸細胞の損傷を評価するための、最も有望な内因性腸管細胞タンパク質マーカーとして認識されている。
【００７２】
［００７６］本明細書に記載された、現在好ましい実施形態に対する様々な変更及び改変が、当業者には明らかとなることを理解されたい。このような変更及び改変は、本主題の趣旨及び範囲から逸脱することなく、かつ意図された利点を損なうことなく行うことができる。したがって、このような変更及び改変は、添付の「特許請求の範囲」に包含されることを意図するものである。
【図１】
2018504404.tif 000002
【図２】
2018504404.tif 000003
【国際調査報告】
2018504404.tif 000004
2018504404.tif 000005
2018504404.tif 000006