(57)【要約】本明細書に記載する実施形態は、希少細胞または対象の体内に低頻度で存在する細胞、例えば、抗原特異的細胞または疾患特異的細胞を識別および収集するためのデバイスを提供する。より具体的には、デバイスは免疫細胞の捕捉に有用であり、デバイスは、生理学的に適合性の多孔性ポリマー足場、複数の抗原、および免疫細胞動員剤を含有し、複数の抗原および免疫細胞動員剤がデバイス内に免疫細胞を誘引し、そして捕捉する。そのようなデバイスを含有する医薬組成物、キットおよびパッケージも提供する。さらなる実施形態は、デバイス、組成物およびキット／パッケージを製造する方法に関する。さらなる実施形態は、自己免疫疾患またはがんなどの疾患の診断または治療においてデバイス、組成物および／またはキットを使用する方法に関する。
2018510887.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
免疫細胞捕捉デバイスであって、
生理学的に適合性の多孔性ポリマー足場、および
複数の精製抗原
を含み、前記複数の抗原が、前記デバイス内の前記複数の抗原に特異的な複数の免疫細胞を誘引し、捕捉する、免疫細胞捕捉デバイス。
【請求項２】
前記抗原が、前記ポリマー足場上に吸収されている、請求項１に記載のデバイス。
【請求項３】
前記抗原が、前記ポリマー足場によって封入されている、請求項１に記載のデバイス。
【請求項４】
前記複数の抗原が、前記複数の免疫細胞上の受容体に結合する、請求項１に記載のデバイス。
【請求項５】
免疫細胞を殺滅または排除する作用物質を含有しない、請求項１に記載のデバイス。
【請求項６】
免疫細胞動員剤をさらに含む、請求項１に記載のデバイス。
【請求項７】
前記免疫細胞動員剤が、Ｔ細胞動員剤、樹状細胞動員剤およびマクロファージ動員剤からなる群から選択される作用物質、またはそれらの組合せを含む、請求項６に記載のデバイス。
【請求項８】
前記免疫細胞動員剤が、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞動員剤、ＣＤ３＋Ｔ細胞動員剤、ＣＤ４＋Ｔ細胞動員剤、ＣＤ８＋Ｔ細胞動員剤、ＣＤ８＋Ｔ細胞動員剤、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）動員剤からなる群から選択される作用物質、またはそれらの組合せを含む、請求項６に記載のデバイス。
【請求項９】
前記免疫細胞動員剤が、増殖因子、サイトカイン、インターロイキン、接着シグナル伝達分子、インテグリンシグナル伝達分子、インターフェロン、リンホカイン、もしくはケモカイン、もしくはそれらの断片、またはそれらの組合せである、請求項６に記載のデバイス。
【請求項１０】
前記インターロイキンが、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２およびＩＬ−１７からなる群から選択される、請求項９に記載のデバイス。
【請求項１１】
前記デバイスへの前記免疫細胞の侵入を増進する作用物質をさらに含む、請求項１に記載のデバイス。
【請求項１２】
前記複数の抗原が、がん抗原である、請求項１に記載のデバイス。
【請求項１３】
前記がん抗原が、ＭＡＧＥ−１、ＭＡＧＥ−２、ＭＡＧＥ−３、ＣＥＡ、チロシナーゼ、ミッドカイン、ＢＡＧＥ、ＣＡＳＰ−８、β−カテニン、β−カテニン、γ−カテニン、ＣＡ−１２５、ＣＤＫ−１、ＣＤＫ４、ＥＳＯ−１、ｇｐ７５、ｇｐ１００、ＭＡＲＴ−１、ＭＵＣ−１、ＭＵＭ−１、ｐ５３、ＰＡＰ、ＰＳＡ、ＰＳＭＡ、ｒａｓ、ｔｒｐ−１、ＨＥＲ−２、ＴＲＰ−１、ＴＲＰ−２、ＩＬ１３Ｒアルファ、ＩＬ１３Ｒアルファ２、ＡＩＭ−２、ＡＩＭ−３、ＮＹ−ＥＳＯ−１、Ｃ９ｏｒｆ１１２、ＳＡＲＴ１、ＳＡＲＴ２、ＳＡＲＴ３、ＢＲＡＰ、ＲＴＮ４、ＧＬＥＡ２、ＴＮＫＳ２、ＫＩＡＡ０３７６、ＩＮＧ４、ＨＳＰＨ１、Ｃ１３ｏｒｆ２４、ＲＢＰＳＵＨ、Ｃ６ｏｒｆ１５３、ＮＫＴＲ、ＮＳＥＰ１、Ｕ２ＡＦ１Ｌ、ＣＹＮＬ２、ＴＰＲ、ＳＯＸ２、ＧＯＬＧＡ、ＢＭＩ１、ＣＯＸ−２、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＺＨ２、ＬＩＣＡＭ、Ｌｉｖｉｎ、Ｌｉｖｉｎβ、ＭＲＰ−３、Ｎｅｓｔｉｎ、ＯＬＩＧ２、ＡＲＴ１、ＡＲＴ４、Ｂ−サイクリン、Ｇｌｉ１、Ｃａｖ−１、カテプシンＢ、ＣＤ７４、Ｅ−カドヘリン、ＥｐｈＡ２／Ｅｃｋ、Ｆｒａ−１／Ｆｏｓｌ  １、ＧＡＧＥ−１、ガングリオシド／ＧＤ２、ＧｎＴ−Ｖ、β１，６−Ｎ、Ｋｉ６７、Ｋｕ７０／８０、ＰＲＯＸ１、ＰＳＣＡ、ＳＯＸ１０、ＳＯＸ１１、サバイビン、ＵＰＡＲ、ＷＴ−１、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰＩＶ）、アデノシンデアミナーゼ結合タンパク質（ＡＤ  Ａｂｐ）、シクロフィリンｂ、結腸直腸関連抗原（ＣＲＣ）−Ｃ０１７−１Ａ／ＧＡ７３３、Ｔ細胞受容体／ＣＤ３−ゼータ鎖、腫瘍抗原のＧＡＧＥファミリー、ＲＡＧＥ、ＬＡＧＥ−Ｉ、ＮＡＧ、ＧｎＴ−Ｖ、ＲＣＡＳｌ、α−フェトプロテイン、ｐｌ２０ｃｔｎ、Ｐｍｅｌ１１７、ＰＲＡＭＥ、脳グリコーゲンホスホリラーゼ、ＳＳＸ−Ｉ、ＳＳＸ−２（ＨＯＭ−ＭＥＬ−４０）、ＳＳＸ−Ｉ、ＳＳＸ−４、ＳＳＸ−５、ＳＣＰ−Ｉ、ＣＴ−７、ｃｄｃ２７、大腸腺腫症タンパク質（ＡＰＣ）、フォドリン、ＰｌＡ、コネキシン３７、Ｉｇ−イディオタイプ、ｐｌ５、ＧＭ２、ＧＤ２ガングリオシド、腫瘍抗原のＳｍａｄファミリー、ｌｍｐ−１、ＥＢＶコード化核抗原（ＥＢＮＡ）−Ｉ、ＵＬ１６結合タンパク質様転写物１（Ｍｕｌｔ１）、ＲＡＥ−１タンパク質、Ｈ６０、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、およびｃ−ｅｒｂＢ−２、またはこれらの免疫原性ペプチド、ならびにそれらの組合せからなる群から選択される、請求項１２に記載のデバイス。
【請求項１４】
前記複数の抗原が、非自己抗原である、請求項１に記載のデバイス。
【請求項１５】
前記非自己抗原が、ウイルス、細菌、原生動物、寄生虫および真菌からなる群から選択される病原体に由来する病原性抗原である、請求項１４に記載のデバイス。
【請求項１６】
前記病原体が、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｏｖｉｓ、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、ヒト免疫不全ウイルス、ポックスウイルス、天然痘ウイルス、エボラウイルス、マールブルグウイルス、デング熱ウイルス、インフルエンザウイルス、パラインフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、麻疹ウイルス、水痘・帯状疱疹ウイルス、単純ヘルペスウイルス、サイトメガロウイルス、エプスタイン・バーウイルス、ＪＣウイルス、ラブドウイルス、ロタウイルス、ライノウイルス、アデノウイルス、パピローマウイルス、パルボウイルス、ピコルナウイルス、ポリオウイルス、流行性耳下腺炎の原因となるウイルス、狂犬病の原因となるウイルス、レオウイルス、風疹ウイルス、トガウイルス、オルソミクソウイルス、レトロウイルス、ヘパドナウイルス、コクサッキーウイルス、ウマ脳炎ウイルス、日本脳炎ウイルス、黄熱病ウイルス、リフトバレー熱ウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、Ｄ型肝炎ウイルス、Ｅ型肝炎ウイルス、ＳＡＲＳ  ＣｏＶ、ＭＥＲＳ  ＣｏＶ、エンテロウイルス、Ｂｏｒｒｅｌｉａ属種、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｈｒａｃｉｓ、Ｂｏｒｒｅｌｉａ  ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ、Ｃａｍｐｈｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ属種、Ｃｈｌａｍｙｄｉａｌ  ｐｓｉｔｔａｃｉ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａｌ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ属種、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ、Ｃｏｘｉｅｌｌａ属種、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ属種、Ｅｒｌｉｃｈｉａ属種、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ  ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ属種、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｐａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属種、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ属種、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ、Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒｏｓｉｓ  ｉｎｔｅｒｒｏｇａｎｓ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ属種、Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属種、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｅｐｒａｅ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ属種、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ属種、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、Ｐｎｅｕｍｏｃｏｃｃｕｓ属種、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属種、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ属種、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｅｎｔｅｒｉｃａ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ属種、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ  ｒｉｃｋｅｔｓｉｉ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ  ｔｙｐｈｉ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ属種、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ属種、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ属種、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｃｕｓ  ｐｎｕｅｍｏｎｉａ��、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｒｏｇｅｎｅｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｍｕｔａｎｓ、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ属種、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐａｌｌｉｄｕｍ、Ｖｉｂｒｉｏ属種、Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｅｓｔｉｓ、メチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属種、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、ｆｕｎｉｇａｔｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｌａｖｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｃａｌｖａｔｕｓ、Ｃａｎｄｉｄａ属種、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ属種、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ  ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ、Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ属種、Ｎｏｃａｒｄｉａ  ａｓｔｅｒｏｉｄｅｓ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ、Ｓｔａｃｈｙｂｏｔｒｙｓ  ｃｈａｒｔａｒｕｍ、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ、Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ  ｖａｇｉｎａｌｉｓ、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ属種、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｂｒｕｃｅｉ、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ  ｍａｎｓｏｎｉ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ属種、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ属種、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ属種、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ属種、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ属種、Ｂａｂｅｓｉａ属種、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ属種、Ｌｅｓｈｍａｎｉａ属種、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ属種、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ  ｊｉｒｏｖｅｃｉｉ、Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ属種、Ｇｉａｒｄｉａ属種、Ｓｃｈｉｓｏｓｔｏｍａ属種、Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ属種、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ属種、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ属種、Ｎａｅｇｌｅｒｉａ属種、Ａｃａｎｔｈａｍｏｅｂａ属種、Ｂａｌａｍｕｔｈｉａ属種、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ属種、Ｇｉａｒｄｉａ属種、Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ属種、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ属種、およびＴｒｙｐａｎｏｓｏｍａ属種からなる群から選択される、請求項１５に記載のデバイス。
【請求項１７】
前記抗原が、自己抗原である、請求項１に記載のデバイス。
【請求項１８】
前記抗原が、自己免疫応答の対象である細胞の可溶化物に由来する、請求項１７に記載のデバイス。
【請求項１９】
前記抗原が、膵ベータ細胞抗原、神経細胞抗原、骨もしくは関節関連自己免疫疾患関連抗原、または胃腸疾患関連抗原である、請求項１７に記載のデバイス。
【請求項２０】
前記膵ベータ細胞抗原が、Ｉ型糖尿病に関連する抗原であり、前記神経細胞抗原が、多発性硬化症に関連する抗原であり、前記骨または関節関連抗原が、関節リウマチに関連する抗原であり、前記胃腸疾患関連抗原が、炎症性腸疾患またはクローン病に関連する抗原である、請求項１９に記載のデバイス。
【請求項２１】
ＲＧＤペプチド、ＣｐＧオリゴヌクレオチドもしくは顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）サイトカイン、もしくはそれらの断片、またはそれらの組合せをさらに含む、請求項１に記載のデバイス。
【請求項２２】
ＲＧＤペプチドも、ＣｐＧオリゴヌクレオチドも、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）サイトカインも、それらの断片も、それらの組合せも含有しない、請求項１に記載のデバイス。
【請求項２３】
他の免疫細胞と比較してＴ細胞を優先的に誘引し、ＣＣＬ１、ＣＣＬ２（ＭＣＰ−１）、ＣＣＬ−３、ＣＣＬ−４、ＣＣＬ−５（ＲＡＮＴＥＳ）、ＣＣＬ−１７、ＣＣＬ−２２、ＣＸＣＬ１２およびＸＣＬ１からなる群から選択されるケモカイン、もしくはそれらの断片、またはそれらの組合せをさらに含む、請求項１に記載のデバイス。
【請求項２４】
前記ケモカインが、
（ａ）ＣＣＬ１（ヒトホモログについての受託番号：ＮＭ＿００２９８１．２；ＧＩ：５２３４９８６９６およびマウスホモログについての受託番号：ＮＭ  ０１１３２９；ＧＩ：２５７１５３４０４）、
（ｂ）ＣＣＬ２（ＭＰＣ−１）（ヒトホモログについての受託番号：ＮＭ＿００２９８２．３；ＧＩ：５６１１９１６９およびマウスホモログについての受託番号：ＮＭ＿０１１３３３．３；ＧＩ：１４１８０３１６２）、
（ｃ）ＣＣＬ３（ヒトホモログについての受託番号：ＮＭ＿００２９８３．２；ＧＩ：１２１５８２４６５およびマウスホモログについての受託番号：ＮＭ  ０１１３３７．２；ＧＩ：１２６４３２５５２）、
（ｄ）ＣＣＬ４（ヒトホモログについての受託番号：ＮＭ  ００２９８４．３；ＧＩ：７４８５８５１８９  ＮＭ  ０１３６５２．２およびマウスホモログについての受託番号：ＮＭ＿０１３６５２．２；ＧＩ：１２６３６６０３１）、
（ｅ）ＣＣＬ５（ＲＡＮＴＥＳ）（ヒトホモログについての受託番号：ＮＭ＿００２９８５．２；ＧＩ：２２５３８８１３およびマウスホモログについての受託番号：ＮＭ＿０１３６５３．３；ＧＩ：１６４６９８４２７）、
（ｆ）ＣＣＬ１７（ヒトホモログについての受託番号：ＮＭ＿００２９８７．２；ＧＩ：２２５３８８０１およびＮＭ＿０１１３３２．３；およびマウスホモログについての受託番号：ＮＭ＿０１１３３２．３；ＧＩ：２２５７３５５７８）、
（ｇ）ＣＣＬ１９（ヒトホモログについての受託番号：ＮＭ＿００６２７４．２；ＧＩ：２２１６５４２４およびマウスホモログについての受託番号：ＮＭ  ０１１８８８．２；ＧＩ：１０５１８３４５）、
（ｈ）ＣＣＬ２２（ヒトホモログについての受託番号：ＮＭ＿００２９９０．４；ＧＩ：３００３６０５７５およびマウスホモログについての受託番号：ＮＭ＿００９１３７．２；ＧＩ：１５４２４０６９５）、
（ｉ）ＣＸＣＬ１２（ヒトホモログについての受託番号：ＮＭ＿１９９１６８．３；ＧＩ：２９１０４５２９８およびマウスホモログについての受託番号：ＮＭ＿００１２７７９９０．１；ＧＩ：４８９４０６３８９）、および
（ｊ）ＸＣＬ１（ヒトホモログについての受託番号：ＮＭ＿００２９９５．２；ＧＩ：３１２４３４０２６およびマウスホモログについての受託番号：ＮＭ  ００８５１０．１；ＧＩ：６６７８７１１）
からなる群から選択されるケモカインである、請求項２３に記載のデバイス。
【請求項２５】
他の免疫細胞と比較して樹状細胞（ＤＣ）またはマクロファージを優先的に誘引し、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ５、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１７およびＣＣＬ２２からなる群から選択されるケモカイン、もしくはそれらの断片、またはそれらの組合せをさらに含む、請求項１に記載のデバイス。
【請求項２６】
前記ケモカインが、
（ａ）ＣＣＬ２（ヒトホモログについての受託番号：ＮＭ  ００２９８２．３；ＧＩ：５６１１９１６９およびマウスホモログについての受託番号：ＮＭ  ０１１３３３．３；ＧＩ：１４１８０３１６２）、
（ｂ）ＣＣＬ３（ヒトホモログについての受託番号：ＮＭ＿００２９８３．２；ＧＩ：１２１５８２４６５およびマウスホモログについての受託番号：ＮＭ＿０１１３３７．２；ＧＩ：１２６４３２５５２）、
（ｃ）ＣＣＬ５（バリアント１）（ヒトホモログについての受託番号：ＮＭ  ００２９８５．２；ＧＩ：２２５３８８１３およびマウスホモログについての受託番号：ＮＭ＿０１３６５３．３；ＧＩ：１６４６９８４２７）、
（ｄ）ＣＣＬ７（ヒトホモログについての受託番号：ＮＭ＿００６２７３．３；ＧＩ：４２８６７３５４０およびマウスホモログについての受託番号：ＮＭ＿０１３６５４．３；ＧＩ：２２６９５８６６４）、
（ｅ）ＣＣＬ８（ヒトホモログについての受託番号：ＮＭ＿００５６２３．２；ＧＩ：２２５３８８１５およびマウスホモログについての受託番号：ＮＭ  ０２１４４３．３；ＧＩ：２５５７０８４６８）、
（ｆ）ＣＣＬ１３（ヒトホモログについての受託番号：ＮＭ＿００５４０８．２；ＧＩ：２２５３８７９９およびマウスホモログについての受託番号：ＮＭ＿０１１３３３．３；ＧＩ：１４１８０３１６２）、
（ｇ）ＣＣＬ１７（ヒトホモログについての受託番号：ＮＭ＿００２９８７．２；ＧＩ：２２５３８８０１およびマウスホモログについての受託番号：ＮＭ  ０１１３３２．３；ＧＩ：２２５７３５５７８）、および
（ｈ）ＣＣＬ２２（ヒトホモログについての受託番号：ＮＭ＿００２９９０．４；ＧＩ：３００３６０５７５およびマウスホモログについての受託番号：ＮＭ＿００９１３７．２；ＧＩ：１５４２４０６９５）
からなる群から選択されるケモカインである、請求項２５に記載のデバイス。
【請求項２７】
他の免疫細胞と比較してＴ細胞と樹状細胞（ＤＣ）の両方を優先的に誘引し、ＣＣＬ１７およびＣＣＬ２２からなる群から選択されるケモカイン、もしくはそれらの断片、またはそれらの組合せをさらに含む、請求項１に記載のデバイス。
【請求項２８】
前記ケモカインが、
（ａ）ＣＣＬ１７（ヒトホモログについての受託番号：ＮＭ＿００２９８７．２；ＧＩ：２２５３８８０１およびマウスホモログについての受託番号：ＮＭ  ０１１３３２．３；ＧＩ：２２５７３５５７８）、および
（ｂ）ＣＣＬ２２（ヒトホモログについての受託番号：ＮＭ＿００２９９０．４；ＧＩ：３００３６０５７５およびマウスホモログについての受託番号：ＮＭ＿００９１３７．２；ＧＩ：１５４２４０６９５）
からなる群から選択されるケモカインである、請求項２７に記載のデバイス。
【請求項２９】
ＬＦＡ−１、ＭＡｄＣＡＭ−１、ＶＣＡＭ−１、ＣＤ２８およびＣＴＬＡ−４、もしくはそれらの断片、またはそれらの組合せからなる群から選択される、Ｔ細胞の複数の接着受容体をさらに含む、請求項１に記載のデバイス。
【請求項３０】
前記接着受容体が、
（ａ）ＬＦＡ（ヒトホモログについての受託番号：ＮＭ  ０００２１１．４；ＧＩ：７３５３６７７７４およびマウスホモログについての受託番号：Ｍ６０７７８．１；ＧＩ：１９８７８５）、
（ｂ）ＭＡｄＣＡＭ−１（ヒトホモログについての受託番号：ＮＭ  １３０７６０．２  ＧＩ：１０９６３３０２１およびマウスホモログについての受託番号：Ｄ５０４３４．２；ＧＩ：６０３９１３１１）、
（ｃ）ＶＣＡＭ−１（ヒトホモログについての受託番号：ＮＭ  ００１０７８．３；ＧＩ：３１５４３４２６９およびマウスホモログについての受託番号：Ｘ６７７８３．１；ＧＩ：２９８１１６）、
（ｄ）ＣＤ２８（ヒトホモログについての受託番号：ＮＭ  ００６１３９．３；ＧＩ：３４０５４５５０６およびマウスホモログについての受託番号：ＢＣ０６４０５８．１；ＧＩ：３９８５０２０１）、および
（ｅ）ＣＴＬＡ−４（ヒトホモログについての受託番号：ＮＭ  ００５２１４．４；ＧＩ：３３９２７６０４８およびマウスホモログについての受託番号：Ｕ９０２７０．１；ＧＩ：４０９９８３６）
からなる群から選択される、請求項２９に記載のデバイス。
【請求項３１】
約１０μｇ〜約２．０ｍｇの前記抗原を含む、請求項１に記載のデバイス。
【請求項３２】
前記足場の乾燥重量１グラム当り約０．１μｇ〜約４００μｇの前記抗原を含む、請求項１に記載のデバイス。
【請求項３３】
約４０％〜約９０％の多孔度を有する、請求項１に記載のデバイス。
【請求項３４】
前記多孔性ポリマー足場が、約１０μＭ〜約５００μＭの直径を有する細孔を含む、請求項１に記載のデバイス。
【請求項３５】
前記多孔性ポリマー足場が、ポリ乳酸（ＰＬＡ）、ポリグリコール酸（ＰＧＡ）、ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）、アルギネートもしくはその誘導体、ゼラチン、コラーゲン、フィブリン、ヒアルロン酸（ＨＡ）、アガロース、多糖類、ポリアミノ酸、ポリペプチド、ポリエステル、ポリ無水物、ポリホスファジン、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリアルキレンオキシド（ＰＡＯ）、ポリアリルアミン（ＰＡＭ）、ポリアクリレート、改変スチレンポリマー、プルロニックポリオール、ポロキサマー（polyoxamer）、ポリウロン酸、およびポリビニルピロリドンもしくはそのコポリマー、またはそのグラフトポリマーからなる群から選択される化合物を含む、請求項１に記載のデバイス。
【請求項３６】
請求項１に記載のデバイスと薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
【請求項３７】
静脈内投与、皮下投与、腹腔内投与、または筋肉内投与用に製剤化される、請求項３６に記載の医薬組成物。
【請求項３８】
マイクロニードルパッチとして皮下投与用に製剤化される、請求項３７に記載の医薬組成物。
【請求項３９】
それを必要とする対象の疾患を処置する方法であって、
前記複数の抗原が前記疾患に特異的である請求項１に記載のデバイスを、対象に投与するステップ、
前記デバイス内に捕捉された複数の免疫細胞を収集するステップであって、前記複数の免疫細胞が前記複数の抗原に特異的であるステップ、および
前記複数の免疫細胞を前記対象に投与することによって前記対象の前記疾患を処置するステップを含む方法。
【請求項４０】
前記対象からの前記デバイスを外植するステップをさらに含む、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記複数の免疫細胞を増殖することによって、前記疾患に特異的である免疫細胞の増殖された集団を生じさせるステップ、および
免疫細胞の前記増殖された集団を前記対象に投与するステップ
をさらに含む、請求項３９に記載の方法。
【請求項４２】
前記疾患が、がんであり、前記デバイスが、前記がんに特異的である抗原を含む、請求項３９に記載の方法。
【請求項４３】
前記がんが、頭頸部がん、乳がん、膵臓がん、前立腺がん、腎がん、食道がん、骨がん、精巣がん、子宮頸がん、胃腸がん、膠芽腫、白血病、リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、肺の前新生物性病変、結腸がん、黒色腫および膀胱がんからなる群から選択される、請求項３９に記載の方法。
【請求項４４】
前記疾患が、自己免疫疾患であり、前記デバイスが、前記自己免疫疾患に特異的である抗原を含む、請求項３９に記載の方法。
【請求項４５】
前記自己免疫疾患が、Ｉ型糖尿病、多発性硬化症、関節リウマチ、炎症性腸疾患およびクローン病からなる群から選択される、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記疾患が、病原体によって引き起こされ、前記デバイスが、前記病原体に特異的である抗原を含む、請求項３９に記載の方法。
【請求項４７】
前記病原体が、ウイルス、細菌、原生動物、寄生虫および真菌からなる群から選択される、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
前記対象がヒトである、請求項３９に記載の方法。
【請求項４９】
前記デバイスが前記対象に皮下投与される、請求項３９に記載の方法。
【請求項５０】
前記デバイスが、前記対象に静脈内投与される、請求項３９に記載の方法。
【請求項５１】
前記デバイスが前記対象に投与された約１日〜約６０日後に前記複数の免疫細胞が収集される、請求項３９に記載の方法。
【請求項５２】
抗原に特異的な免疫細胞を得る方法であって、
請求項１に記載のデバイスを対象に投与するステップ、および
前記デバイス内に捕捉された免疫細胞を回収することによって、前記抗原に特異的な免疫細胞を得るステップ
を含む方法。
【請求項５３】
前記対象からの前記デバイスを外植するステップをさらに含む、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
前記対象がヒトである、請求項５２に記載の方法。
【請求項５５】
前記デバイスが前記対象に皮下投与される、請求項５２に記載の方法。
【請求項５６】
前記デバイスが、前記対象に静脈内投与される、請求項５２に記載の方法。
【請求項５７】
前記デバイスが前記対象に投与された約１日〜約６０日後に前記複数の免疫細胞が収集される、請求項５２に記載の方法。
【請求項５８】
対象が自己免疫疾患を有するかどうかを決定する方法であって、
前記複数の抗原が前記自己免疫疾患に特異的である請求項１に記載のデバイスを、対象に投与するステップ、
前記デバイス内に捕捉された免疫細胞を収集するステップであって、前記免疫細胞が前記自己免疫疾患に特異的であるステップ、および
前記デバイス内に捕捉された前記自己免疫疾患に特異的な免疫細胞の数を決定することによって、対象が自己免疫疾患を有するかどうかを決定するステップ
を含む方法。
【請求項５９】
前記対象からの前記デバイスを外植するステップをさらに含む、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
前記対象がヒトである、請求項５８に記載の方法。
【請求項６１】
前記デバイスが前記対象に皮下投与される、請求項５８に記載の方法。
【請求項６２】
前記デバイスが、前記対象に静脈内投与される、請求項５８に記載の方法。
【請求項６３】
前記デバイスが前記対象に投与された約１日〜約６０日後に前記複数の免疫細胞が収集される、請求項５８に記載の方法。
【請求項６４】
請求項１に記載のデバイスを製造する方法であって、
複数の精製抗原を生理学的に適合性のポリマーとともにインキュベートしてポリマー−抗原混合物を生じさせるステップ、
前記ポリマー−抗原混合物を凍結し、凍結乾燥させ、ポロゲンと混合するステップ、
前記混合物を圧縮成形してディスクを生成するステップ、
前記ディスクを高圧ＣＯ２環境に付し、圧力を急速に低下させて、前記ポリマーを膨張させ、かつ融合させて、連通型足場構造にするステップ、および
前記構造を水に浸漬することによって前記足場構造から前記ポロゲンを浸出させて多孔性物品を生じさせることによって、前記デバイスを製造するステップ
を含む方法。
【請求項６５】
前記ポリマーが、ラクチドとグリコリドのコポリマー（ＰＬＧ）またはアルギネートである、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
前記ポロゲンが、ＮａＣｌまたはスクロースである、請求項６４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願）
本出願は、２０１５年４月１０日に出願された米国仮出願番号第６２／１４６，２０５号に基づく優先権を主張しており、この仮出願の全体の内容は、参考として本明細書中に援用される。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
免疫系の細胞は、自己免疫疾患および新生物疾患の状況下での異種抗原と自己抗原の区別に中心的役割を果す。胸腺（中枢性）寛容のプロセスは、これらの二つの疾患状態間の恒常性のバランスを付与する基礎を免疫細胞に与える。一端では、高親和性自己抗原特異的Ｔ細胞が系から排除され、その結果、自己免疫が妨げられる。他端では、自己抗原を全く認識できない細胞がまた、排除され、これにより腫瘍細胞が確実に抑制される。この複雑なプロセスの結果、中等度の親和性で自己抗原を認識するＴ細胞のみが残され、増殖することを許されることになる。末梢寛容のこの発生は、潜在的に自己反応性のリンパ球を抑制することの中心である。なぜなら、非炎症性条件下で組織抗原に曝露される再循環リンパ球は、通常、寛容なアネルギー状態であるからである。しかし、感染および組織損傷によって惹起されるものなどの危険な刺激の存在下では、寛容性と自己免疫のバランスが壊されることがある。逆に、自己反応性細胞が免疫レパートリーから枯渇されると、免疫系は、レベルまたはパターンが変化した自己抗原を発現する腫瘍を認識することができないことがある。
【０００３】
多くの自己免疫疾患は自己反応性Ｔ細胞応答によって媒介されることが今では認知されている。例えば、１型糖尿病に関して、自己反応性Ｔ細胞は、膵ベータ細胞の破壊に関係づけられている。同様に、多発性硬化症の病態生理は、多くの場合、神経細胞の自己反応性Ｔ細胞媒介標的化およびアポトーシスを特徴とする。しかし、自己免疫疾患の適切な診断および識別は困難を伴う。なぜなら、それらは、多くの検査室検査（通常、完全血球計算、包括的代謝パネル、急性相反応物質、免疫学的研究、血清学、フローサイトメトリー、サイトカイン分析、およびＨＬＡタイピングを含む）を行う必要があることが多いからである。これらの検査は、厄介であり、実施するための費用が高い。
【０００４】
細胞レベルで、免疫細胞核型分析に基づく自己免疫障害の診断は、組織破壊部位からの機能性Ｔ細胞にアクセスできないため同様に問題が多い。多くの疾患において、自己反応性細胞は、特異的免疫細胞の検出が技術的に困難であるような低い頻度（１：１００，０００細胞）で存在する。加えて、多くの場合、自己反応性細胞集団は、必ずしも疾患特異的でない。疾患特異的Ｔ細胞が単離された場合でさえ、それらの機能的能力に影響を与えずにそれらを凍結したり培養したりすることができないので、診断または治療用途でのそれらの使用は限定されている。
【０００５】
同様に、がんに関して、既存の治療戦略は、宿主から抽出される抗原特異的Ｔ細胞の養子移入を一般に含む。そのような場合、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を腫瘍生検材料または末梢血から抽出し、抗原特異性またはホーミング能力を加えるように操作し、ｅｘ  ｖｉｖｏで増殖させ、患者に注射して腫瘍細胞を標的にする。しかし、血液中のまたは罹病部位におけるこれらの細胞の量は、低頻度で理想的機能性を欠くものであることが多い。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
したがって、自己免疫障害およびがんを診断するために、ならびに自己免疫障害、がんおよび感染性疾患などのヒト疾患の治療のために分析することができる免疫細胞の単離を可能にする組成物および方法の未だ対処されていない需要がある。下で詳細に説明する本発明の実施形態は、これらの需要に対処するものである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
（発明の要旨）
本発明は、希少細胞または体内に低頻度で存在する細胞を識別および収集する問題の解決策を提供する。本明細書に記載する特定の実施形態は、そのような細胞の収集に有用である収集デバイス、細胞捕捉デバイスに関する。デバイスは、複数の抗原および任意選択で動員剤を含有するか、またはそれらでコーティングされている足場組成物を含み、それによってこのデバイスは免疫細胞などの標的細胞を誘引すること、そのような標的細胞に接着すること、およびそのような標的細胞を捕捉または隔離することができる。デバイスは、そのデバイス内に存在する抗原、動員剤または他の分子との直接的または間接的相互作用を含む様々な方法によって、これらの機能を果す。デバイスが使用される用途に依存して、デバイスは、それ自体の足場の物理的または化学的特性によって標的細胞の捕捉および生存を制御する。例えば、足場組成物は鑑別透過性であり、したがって足場のある特定の物理的領域内でしか細胞を通過させない。足場組成物の透過性は、例えば、より大きいまたはより小さい細孔経、密度、ポリマー架橋、剛性、靱性、延性または粘弾性のために材料を選択または設計することによって制御される。足場組成物は、物理的チャネルまたは通路を含有することができ、そこを通って標的細胞は、デバイスと相互作用し、そして／またはデバイスの特定の区画もしくは領域内に移動する。区画化を助長するために、足場組成物は、任意選択で、各々が異なる透過性を有する区画または層に組織化され、その結果、細胞が選別または濾過されて、細胞のある特定の亜集団のみにアクセスすることが可能になる。デバイス内の標的細胞集団の隔離はまた、足場組成物の分解、脱水もしくは再水和、酸素付加、化学的変化もしくはｐＨ変化、または進行中の自己アセンブリによって制御することもできる。標的細胞、例えば免疫細胞は、それらの捕捉後、デバイス内に存在する刺激分子、サイトカインおよび他の補因子を利用してそのデバイス内で成長または増殖されうる。一部の実施形態では、デバイスに別様に侵入した非標的細胞は、ネガティブ選択剤を使用して拒否または除去されうる。
【０００８】
本発明のデバイス内に捕捉される細胞は、主として免疫細胞である。ある特定の実施形態では、本発明はＴ細胞トラップに関する。他の実施形態では、本発明は、Ｂ細胞トラップに関する。さらに他の実施形態では、本発明は、トラップの組合せ、例えば、Ｔ細胞トラップとＢ細胞トラップの組合せに関する。本明細書に記載するトラップを、抗原提示細胞（ＡＰＣ）、例えば、自己反応性ＡＰＣなどを捕捉するように構成することもできる。捕捉されうる自己反応性ＡＰＣの例としては、例えば、樹状細胞（ＤＣ）、マクロファージ、またはこれらの組合せが挙げられる。他の実施形態では、複数のトラップ、例えば、リンパ球とＡＰＣの両方の捕捉用に構成されているトラップを利用することができる。例えば、抗原特異的細胞または疾患特異的細胞、例えば、Ｔ細胞、樹状細胞（ＤＣ）またはマクロファージを、分析、再プログラミングまたは枯渇のために、別々にまたは一緒に捕捉することができる。捕捉された免疫細胞、例えば、リンパ球およびＡＰＣは、疾患診断または免疫治療のための標的を識別および特徴付けるために、任意選択で、回収され、分析される。捕捉された細胞は、治療に使用されることになる組成物または製剤を開発するために再プログラムまたは増殖されることもある。
【０００９】
したがって、一態様では、本発明は、免疫細胞捕捉デバイスであって、生理学的に適合性の多孔性ポリマー足場および複数の精製抗原を含み、これらの複数の抗原が、デバイス内に複数の抗原に特異的な複数の免疫細胞を誘引し、かつ捕捉する、免疫細胞捕捉デバイスを提供する。抗原は、ポリマー足場上に吸収されていることもあり、またはポリマー足場によって封入されていることもある。
【００１０】
別の態様では、本発明は、免疫細胞捕捉デバイスであって、生理学的に適合性の多孔性ポリマー足場および複数の精製抗原を含み、これらの複数の抗原が、デバイス内に、複数の抗原に特異的な複数の免疫細胞を、複数の免疫細胞と結合することによって、誘引し、かつ捕捉する、免疫細胞捕捉デバイスを提供する。
【００１１】
別の態様では、本発明は、免疫細胞捕捉デバイスであって、免疫細胞捕捉デバイスが生理学的に適合性の多孔性ポリマー足場および複数の精製抗原を含み、これらの複数の抗原が、デバイス内に複数の抗原に特異的な複数の免疫細胞を誘引し、かつ捕捉し、免疫細胞捕捉デバイスが、免疫細胞を殺滅または排除する作用物質を含有しない、免疫細胞捕捉デバイスを提供する。
【００１２】
さらに別の態様では、本発明は、免疫細胞捕捉デバイスであって、生理学的に適合性の多孔性ポリマー足場および複数の精製抗原を含み、これらの複数の抗原が、デバイス内に複数の抗原に特異的な複数の免疫細胞を誘引し、かつ捕捉し、免疫細胞捕捉デバイスが、免疫細胞動員剤をさらに含む、免疫細胞捕捉デバイスを提供する。免疫細胞動員剤は、例えば、Ｔ細胞動員剤、樹状細胞動員剤、もしくはマクロファージ動員剤、またはこれらの組合せでありうる。詳細には、免疫細胞動員剤は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞動員剤、ＣＤ３＋Ｔ細胞動員剤、ＣＤ４＋Ｔ細胞動員剤、ＣＤ８＋Ｔ細胞動員剤、ＣＤ８＋Ｔ細胞動員剤、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）動員剤、またはこれらの組合せでありうる。関連態様では、免疫細胞動員剤は、増殖因子、サイトカイン、インターロイキン、接着シグナル伝達分子、インテグリンシグナル伝達分子、インターフェロン、リンホカイン、もしくはケモカイン、またはそれらの断片、またはそれらの組合せでありうる。詳細には、免疫細胞動員剤は、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１０  ＩＬ−１２およびＩＬ−１７からなる群から選択されるインターロイキンでありうる。
【００１３】
別の態様では、本発明は、免疫細胞捕捉デバイスであって、生理学的に適合性の多孔性ポリマー足場および複数の精製抗原を含み、これらの複数の抗原が、デバイス内に複数の抗原に特異的な複数の免疫細胞を誘引し、かつ捕捉し、免疫細胞捕捉デバイスが、デバイスへの免疫細胞の侵入を増進する作用物質を含む、免疫細胞捕捉デバイスを提供する。
【００１４】
別の態様では、本発明は、免疫細胞捕捉デバイスであって、生理学的に適合性の多孔性ポリマー足場および複数の精製がん抗原を含み、これらの複数のがん抗原が、デバイス内に複数のがん抗原に特異的な複数の免疫細胞を誘引し、かつ捕捉する、免疫細胞捕捉デバイスを提供する。この態様によると、がん抗原は、ＭＡＧＥ−１、ＭＡＧＥ−２、ＭＡＧＥ−３、ＣＥＡ、チロシナーゼ、ミッドカイン（midkin）、ＢＡＧＥ、ＣＡＳＰ−８、β−カテニン、β−カテニン、γ−カテニン、ＣＡ−１２５、ＣＤＫ−１、ＣＤＫ４、ＥＳＯ−１、ｇｐ７５、ｇｐ１００、ＭＡＲＴ−１、ＭＵＣ−１、ＭＵＭ−１、ｐ５３、ＰＡＰ、ＰＳＡ、ＰＳＭＡ、ｒａｓ、ｔｒｐ−１、ＨＥＲ−２、ＴＲＰ−１、ＴＲＰ−２、ＩＬ１３Ｒアルファ、ＩＬ１３Ｒアルファ２、ＡＩＭ−２、ＡＩＭ−３、ＮＹ−ＥＳＯ−１、Ｃ９ｏｒｆ  １１２、ＳＡＲＴ１、ＳＡＲＴ２、ＳＡＲＴ３、ＢＲＡＰ、ＲＴＮ４、ＧＬＥＡ２、ＴＮＫＳ２、ＫＩＡＡ０３７６、ＩＮＧ４、ＨＳＰＨ１、Ｃ１３ｏｒｆ２４、ＲＢＰＳＵＨ、Ｃ６ｏｒｆ１５３、ＮＫＴＲ、ＮＳＥＰ１、Ｕ２ＡＦ１Ｌ、ＣＹＮＬ２、ＴＰＲ、ＳＯＸ２、ＧＯＬＧＡ、ＢＭＩ１、ＣＯＸ−２、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＺＨ２、ＬＩＣＡＭ、Ｌｉｖｉｎ、Ｌｉｖｉｎβ、ＭＲＰ−３、Ｎｅｓｔｉｎ、ＯＬＩＧ２、ＡＲＴ１、ＡＲＴ４、Ｂ−サイクリン、Ｇｌｉ１、Ｃａｖ−１、カテプシンＢ、ＣＤ７４、Ｅ−カドヘリン、ＥｐｈＡ２／Ｅｃｋ、Ｆｒａ−１／Ｆｏｓｌ  １、ＧＡＧＥ−１、ガングリオシド／ＧＤ２、ＧｎＴ−Ｖ、β１，６−Ｎ、Ｋｉ６７、Ｋｕ７０／８０、ＰＲＯＸ１、ＰＳＣＡ、ＳＯＸ１０、ＳＯＸ１１、サバイビン、ＵＰＡＲ、ＷＴ−１、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰＩＶ）、アデノシンデアミナーゼ結合タンパク質（ＡＤ  Ａｂｐ）、シクロフィリンｂ、結腸直腸関連抗原（ＣＲＣ）−Ｃ０１７−１Ａ／ＧＡ７３３、Ｔ細胞受容体／ＣＤ３−ゼータ鎖、腫瘍抗原のＧＡＧＥファミリー、ＲＡＧＥ、ＬＡＧＥ−Ｉ、ＮＡＧ、ＧｎＴ−Ｖ、ＲＣＡＳｌ、α−フェトプロテイン、ｐｌ２０ｃｔｎ、Ｐｍｅｌ１１７、ＰＲＡＭＥ、脳グリコーゲンホスホリラーゼ、ＳＳＸ−Ｉ、ＳＳＸ−２（ＨＯＭ−ＭＥＬ−４０）、ＳＳＸ−Ｉ、ＳＳＸ−４、ＳＳＸ−５、ＳＣＰ−Ｉ、ＣＴ−７、ｃｄｃ２７、大腸腺腫症タンパク質（ＡＰＣ）、フォドリン、ＰｌＡ、コネキシン３７、Ｉｇ−イディオタイプ、ｐｌ５、ＧＭ２、ＧＤ２ガングリオシド、腫瘍抗原のＳｍａｄファミリー、ｌｍｐ−１、ＥＢＶコード化核抗原（ＥＢＮＡ）−Ｉ、ＵＬ１６結合タンパク質様転写物１（Ｍｕｌｔ１）、ＲＡＥ−１タンパク質、Ｈ６０、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、およびｃ−ｅｒｂＢ−２、またはこれらの免疫原性ペプチド、ならびにそれらの組合せからなる群から選択することができる。
【００１５】
別の態様では、本発明は、免疫細胞捕捉デバイスであって、生理学的に適合性の多孔性ポリマー足場および複数の精製非自己抗原を含み、これらの複数の非自己抗原が、デバイス内に複数の非自己抗原に特異的な複数の免疫細胞を誘引し、かつ捕捉する、免疫細胞捕捉デバイスを提供する。この態様によると、非自己抗原は、ウイルス、細菌、原生動物、寄生虫および真菌からなる群から選択される病原体に由来する病原性抗原でありうる。さらにこの態様によると、病原体は、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｏｖｉｓ、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、ヒト免疫不全ウイルス、ポックスウイルス、天然痘ウイルス、エボラウイルス、マールブルグウイルス、デング熱ウイルス、インフルエンザウイルス、パラインフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、麻疹ウイルス、水痘・帯状疱疹ウイルス、単純ヘルペスウイルス、サイトメガロウイルス、エプスタイン・バーウイルス、ＪＣウイルス、ラブドウイルス、ロタウイルス、ライノウイルス、アデノウイルス、パピローマウイルス、パルボウイルス、ピコルナウイルス、ポリオウイルス、流行性耳下腺炎の原因となるウイルス、狂犬病の原因となるウイルス、レオウイルス、風疹ウイルス、トガウイルス、オルソミクソウイルス、レトロウイルス、ヘパドナウイルス、コクサッキーウイルス、ウマ脳炎ウイルス、日本脳炎ウイルス、黄熱病ウイルス、リフトバレー熱ウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、Ｄ型肝炎ウイルス、Ｅ型肝炎ウイルス、ＳＡＲＳ  ＣｏＶ、ＭＥＲＳ  ＣｏＶ、エンテロウイルス、Ｂｏｒｒｅｌｉａ属種、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｈｒａｃｉｓ、Ｂｏｒｒｅｌｉａ  ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ、Ｃａｍｐｈｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ属種、Ｃｈｌａｍｙｄｉａｌ  ｐｓｉｔｔａｃｉ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａｌ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ属種、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ、Ｃｏｘｉｅｌｌａ属種、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ属種、Ｅｒｌｉｃｈｉａ属種、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ  ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ属種、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｐａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属種、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ属種、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ、Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒｏｓｉｓ  ｉｎｔｅｒｒｏｇａｎｓ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ属種、Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属種、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｅｐｒａｅ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ属種、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ属種、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、Ｐｎｅｕｍｏｃｏｃｃｕｓ属種、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属種、Ｐｓｅｕ���ｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ属種、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｅｎｔｅｒｉｃａ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ属種、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ  ｒｉｃｋｅｔｓｉｉ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ  ｔｙｐｈｉ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ属種、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ属種、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ属種、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｃｕｓ  ｐｎｕｅｍｏｎｉａｅ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｒｏｇｅｎｅｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｍｕｔａｎｓ、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ属種、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐａｌｌｉｄｕｍ、Ｖｉｂｒｉｏ属種、Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｅｓｔｉｓ、メチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属種、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、ｆｕｎｉｇａｔｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｌａｖｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｃａｌｖａｔｕｓ、Ｃａｎｄｉｄａ属種、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ属種、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ  ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ、Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ属種（speceis）、Ｎｏｃａｒｄｉａ  ａｓｔｅｒｏｉｄｅｓ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ、Ｓｔａｃｈｙｂｏｔｒｙｓ  ｃｈａｒｔａｒｕｍ、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ、Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ  ｖａｇｉｎａｌｉｓ、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ属種、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｂｒｕｃｅｉ、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ  ｍａｎｓｏｎｉ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ属種、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ属種、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ属種、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ属種、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ属種、Ｂａｂｅｓｉａ属種、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ属種、Ｌｅｓｈｍａｎｉａ属種、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ属種、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ  ｊｉｒｏｖｅｃｉｉ、Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ属種、Ｇｉａｒｄｉａ属種、Ｓｃｈｉｓｏｓｔｏｍａ属種、Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ属種、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ属種、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ属種、Ｎａｅｇｌｅｒｉａ属種、Ａｃａｎｔｈａｍｏｅｂａ属種、Ｂａｌａｍｕｔｈｉａ属種、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ属種、Ｇｉａｒｄｉａ属種、Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ属種、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ属種、およびＴｒｙｐａｎｏｓｏｍａ属種からなる群から選択することができる。
【００１６】
別の態様では、本発明は、免疫細胞捕捉デバイスであって、生理学的に適合性の多孔性ポリマー足場および複数の精製自己抗原を含み、これらの複数の自己抗原が、デバイス内に複数の自己抗原に特異的な複数の免疫細胞を誘引し、かつ捕捉する、免疫細胞捕捉デバイスを提供する。この態様によると、自己抗原は、自己免疫応答の対象である細胞の可溶化物に由来しうる。さらにこの態様によると、抗原は、膵ベータ細胞抗原、神経細胞抗原、骨もしくは関節関連自己免疫疾患関連抗原、または胃腸疾患関連抗原でありうる。なお、さらに、この態様によると、抗原は、Ｉ型糖尿病に関連する抗原、多発性硬化症に関連する抗原、関節リウマチに関連する抗原、炎症性腸疾患に関連する抗原、またはクローン病に関連する抗原でありうる。
【００１７】
別の態様では、本発明は、免疫細胞捕捉デバイスであって、生理学的に適合性の多孔性ポリマー足場、複数の精製抗原、および別の作用物質を含み、別の作用物質が、ＲＧＤペプチド、ＣｐＧオリゴヌクレオチドもしくは顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）サイトカイン、またはそれらの断片、またはそれらの組合せであり、複数の抗原が、デバイス内に複数の抗原に特異的な複数の免疫細胞を誘引し、かつ捕捉する、免疫細胞捕捉デバイスを提供する。代替態様では、本発明は、生理学的に適合性の多孔性ポリマー足場および複数の精製抗原を含むが、ＲＧＤペプチドも、ＣｐＧオリゴヌクレオチドも、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）サイトカインも、それらの断片も、それらの組合せも含有しないデバイスを提供する。
【００１８】
別の態様では、本発明は、他の免疫細胞と比較してＴ細胞を優先的に誘引する、免疫細胞捕捉デバイスを提供する。この態様によると、デバイスは、生理学的に適合性の多孔性ポリマー足場および複数の精製抗原を含み、これらの複数の抗原は、デバイス内に複数の抗原に特異的な複数の免疫細胞を誘引し、かつ捕捉し、デバイスは、ＣＣＬ１、ＣＣＬ２（ＭＣＰ−１）、ＣＣＬ−３、ＣＣＬ−４、ＣＣＬ−５（ＲＡＮＴＥＳ）、ＣＣＬ−１７、ＣＣＬ−２２、ＣＸＣＬ１２およびＸＣＬ１からなる群から選択されるケモカイン、もしくはそれらの断片、またはそれらの組合せをさらに含む。なお、さらに、この態様によると、ケモカインは、
（ａ）ＣＣＬ１（ヒトホモログについての受託番号：ＮＭ＿００２９８１．２；ＧＩ：５２３４９８６９６およびマウスホモログについての受託番号：ＮＭ  ０１１３２９；ＧＩ：２５７１５３４０４）、
（ｂ）ＣＣＬ２（ＭＣＰ−１）（ヒトホモログについての受託番号：ＮＭ＿００２９８２．３；ＧＩ：５６１１９１６９およびマウスホモログについての受託番号：ＮＭ＿０１１３３３．３；ＧＩ：１４１８０３１６２）、
（ｃ）ＣＣＬ３（ヒトホモログについての受託番号：ＮＭ＿００２９８３．２；ＧＩ：１２１５８２４６５およびマウスホモログについての受託番号：ＮＭ  ０１１３３７．２；ＧＩ：１２６４３２５５２）、
（ｄ）ＣＣＬ４（ヒトホモログについての受託番号：ＮＭ  ００２９８４．３；ＧＩ：７４８５８５１８９  ＮＭ  ０１３６５２．２およびマウスホモログについての受託番号：ＮＭ＿０１３６５２．２；ＧＩ：１２６３６６０３１）、
（ｅ）ＣＣＬ５（ＲＡＮＴＥＳ）（ヒトホモログについての受託番号：ＮＭ＿００２９８５．２；ＧＩ：２２５３８８１３およびマウスホモログについての受託番号：ＮＭ＿０１３６５３．３；ＧＩ：１６４６９８４２７）、
（ｆ）ＣＣＬ１７（ヒトホモログについての受託番号：ＮＭ＿００２９８７．２；ＧＩ：２２５３８８０１およびＮＭ＿０１１３３２．３；およびマウスホモログについての受託番号：ＮＭ＿０１１３３２．３；ＧＩ：２２５７３５５７８）、
（ｇ）ＣＣＬ１９（ヒトホモログについての受託番号：ＮＭ＿００６２７４．２；ＧＩ：２２１６５４２４およびマウスホモログについての受託番号：ＮＭ  ０１１８８８．２；ＧＩ：１０５１８３４５）、
（ｈ）ＣＣＬ２２（ヒトホモログについての受託番号：ＮＭ＿００２９９０．４；ＧＩ：３００３６０５７５およびマウスホモログについての受託番号：ＮＭ＿００９１３７．２；ＧＩ：１５４２４０６９５）、
（ｉ）ＣＸＣＬ１２（ヒトホモログについての受託番号：ＮＭ＿１９９１６８．３；ＧＩ：２９１０４５２９８およびマウスホモログについての受託番号：ＮＭ＿００１２７７９９０．１；ＧＩ：４８９４０６３８９）、および
（ｊ）ＸＣＬ１（ヒトホモログについての受託番号：ＮＭ＿００２９９５．２；ＧＩ：３１２４３４０２６およびマウスホモログについての受託番号：ＮＭ  ００８５１０．１；ＧＩ：６６７８７１１）
からなる群から選択することができる。
【００１９】
別の態様では、本発明は、他の免疫細胞と比較して樹状細胞（ＤＣ）を優先的に誘引する、免疫細胞捕捉デバイスを提供する。この態様によると、デバイスは、生理学的に適合性の多孔性ポリマー足場および複数の精製抗原を含み、これらの複数の抗原は、デバイス内に複数の抗原に特異的な複数の免疫細胞を誘引し、かつ捕捉し、デバイスは、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ５、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１７、およびＣＣＬ２２からなる群から選択されるケモカイン、もしくはそれらの断片、またはそれらの組合せをさらに含む。なお、さらに、この態様によると、ケモカインは、：
（ａ）ＣＣＬ２（ヒトホモログについての受託番号：ＮＭ  ００２９８２．３；ＧＩ：５６１１９１６９およびマウスホモログについての受託番号：ＮＭ  ０１１３３３．３；ＧＩ：１４１８０３１６２）、
（ｂ）ＣＣＬ３（ヒトホモログについての受託番号：ＮＭ＿００２９８３．２；ＧＩ：１２１５８２４６５およびマウスホモログについての受託番号：ＮＭ＿０１１３３７．２；ＧＩ：１２６４３２５５２）、
（ｃ）ＣＣＬ５（バリアント１）（ヒトホモログについての受託番号：ＮＭ  ００２９８５．２；ＧＩ：２２５３８８１３およびマウスホモログについての受託番号：ＮＭ＿０１３６５３．３；ＧＩ：１６４６９８４２７）、
（ｄ）ＣＣＬ７（ヒトホモログについての受託番号：ＮＭ＿００６２７３．３；ＧＩ：４２８６７３５４０およびマウスホモログについての受託番号：ＮＭ＿０１３６５４．３；ＧＩ：２２６９５８６６４）、
（ｅ）ＣＣＬ８（ヒトホモログについての受託番号：ＮＭ＿００５６２３．２；ＧＩ：２２５３８８１５およびマウスホモログについての受託番号：ＮＭ  ０２１４４３．３；ＧＩ：２５５７０８４６８）、
（ｆ）ＣＣＬ１３（ヒトホモログについての受託番号：ＮＭ＿００５４０８．２；ＧＩ：２２５３８７９９およびマウスホモログについての受託番号：ＮＭ＿０１１３３３．３；ＧＩ：１４１８０３１６２）、
（ｇ）ＣＣＬ１７（ヒトホモログについての受託番号：ＮＭ＿００２９８７．２；ＧＩ：２２５３８８０１およびマウスホモログについての受託番号：ＮＭ  ０１１３３２．３；ＧＩ：２２５７３５５７８）、および
（ｈ）ＣＣＬ２２（ヒトホモログについての受託番号：ＮＭ＿００２９９０．４；ＧＩ：３００３６０５７５およびマウスホモログについての受託番号：ＮＭ＿００９１３７．２；ＧＩ：１５４２４０６９５）
からなる群から選択することができる。
【００２０】
別の態様では、本発明は、他の免疫細胞と比較してＴ細胞と樹状細胞（ＤＣ）の両方を優先的に誘引する、免疫細胞捕捉デバイスを提供する。この態様によると、デバイスは、生理学的に適合性の多孔性ポリマー足場および複数の精製抗原を含み、これらの複数の抗原は、デバイス内に複数の抗原に特異的な複数の免疫細胞を誘引し、かつ捕捉し、デバイスは、ＣＣＬ１７およびＣＣＬ２２からなる群から選択されるケモカイン、もしくはそれらの断片、またはそれらの組合せをさらに含む。なお、さらに、この態様によると、ケモカインは、
（ａ）ＣＣＬ１７（ヒトホモログについての受託番号：ＮＭ＿００２９８７．２；ＧＩ：２２５３８８０１およびマウスホモログについての受託番号：ＮＭ  ０１１３３２．３；ＧＩ：２２５７３５５７８）、および
（ｂ）ＣＣＬ２２（ヒトホモログについての受託番号：ＮＭ＿００２９９０．４；ＧＩ：３００３６０５７５およびマウスホモログについての受託番号：ＮＭ＿００９１３７．２；ＧＩ：１５４２４０６９５）
からなる群から選択することができる。
【００２１】
さらに別の態様では、本発明は、免疫細胞捕捉デバイスであって、生理学的に適合性の多孔性ポリマー足場、複数の精製抗原、および複数の接着受容体を含み、これらの複数の抗原が、デバイス内に複数の抗原に特異的な複数の免疫細胞を誘引し、かつ捕捉する、免疫細胞捕捉デバイスを提供する。この態様によると、接着受容体は、ＬＦＡ−１、ＭＡｄＣＡＭ−１、ＶＣＡＭ−１、ＣＤ２８およびＣＴＬＡ−４、もしくはそれらの断片、またはそれらの組合せからなる群から選択される、Ｔ細胞の接着受容体でありうる。なお、さらに、この態様によると、接着受容体は、
（ａ）ＬＦＡ（ヒトホモログについての受託番号：ＮＭ  ０００２１１．４；ＧＩ：７３５３６７７７４およびマウスホモログについての受託番号：Ｍ６０７７８．１；ＧＩ：１９８７８５）、
（ｂ）ＭＡｄＣＡＭ−１（ヒトホモログについての受託番号：ＮＭ  １３０７６０．２  ＧＩ：１０９６３３０２１およびマウスホモログについての受託番号：Ｄ５０４３４．２；ＧＩ：６０３９１３１１）、
（ｃ）ＶＣＡＭ−１（ヒトホモログについての受託番号：ＮＭ  ００１０７８．３；ＧＩ：３１５４３４２６９およびマウスホモログについての受託番号：Ｘ６７７８３．１；ＧＩ：２９８１１６）、
（ｄ）ＣＤ２８（ヒトホモログについての受託番号：ＮＭ  ００６１３９．３；ＧＩ：３４０５４５５０６およびマウスホモログについての受託番号：ＢＣ０６４０５８．１；ＧＩ：３９８５０２０１）、および
（ｅ）ＣＴＬＡ−４（ヒトホモログについての受託番号：ＮＭ  ００５２１４．４；ＧＩ：３３９２７６０４８およびマウスホモログについての受託番号：Ｕ９０２７０．１；ＧＩ：４０９９８３６）
からなる群から選択することができる。
【００２２】
別の態様では、本発明は、免疫細胞捕捉デバイスであって、生理学的に適合性の多孔性ポリマー足場および複数の精製抗原を含み、これらの複数の抗原が、デバイス内に複数の抗原に特異的な複数の免疫細胞を誘引し、かつ捕捉し、免疫細胞捕捉デバイスが、約１０μｇ〜約２．０ｍｇの抗原を含む、免疫細胞捕捉デバイスを提供する。
【００２３】
別の態様では、本発明は、免疫細胞捕捉デバイスであって、生理学的に適合性の多孔性ポリマー足場および複数の精製抗原を含み、これらの複数の抗原が、デバイス内に複数の抗原に特異的な複数の免疫細胞を誘引し、かつ捕捉し、免疫細胞捕捉デバイスが、足場の乾燥重量１グラム当り約０．１μｇ〜約４００μｇの抗原を含む、免疫細胞捕捉デバイスを提供する。
【００２４】
別の態様では、本発明は、免疫細胞捕捉デバイスであって、生理学的に適合性の多孔性ポリマー足場および複数の精製抗原を含み、これらの複数の抗原が、デバイス内に複数の抗原に特異的な複数の免疫細胞を誘引し、かつ捕捉し、免疫細胞捕捉デバイスが、約４０％〜約９０％の多孔度を有する、免疫細胞捕捉デバイスを提供する。
【００２５】
別の態様では、本発明は、免疫細胞捕捉デバイスであって、約１０μＭ〜約５００μＭの直径を有する生理学的に適合性の多孔性ポリマー足場および複数の精製抗原を含み、これらの複数の抗原が、デバイス内に複数の抗原に特異的な複数の免疫細胞を誘引し、かつ捕捉する、免疫細胞捕捉デバイスを提供する。
【００２６】
別の態様では、本発明は、免疫細胞捕捉デバイスであって、ポリ乳酸（ＰＬＡ）、ポリグリコール酸（ＰＧＡ）、ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）、アルギネートもしくはその誘導体、ゼラチン、コラーゲン、フィブリン、ヒアルロン酸（ＨＡ）、アガロース、多糖類、ポリアミノ酸、ポリペプチド、ポリエステル、ポリ無水物、ポリホスファジン、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリアルキレンオキシド（ＰＡＯ）、ポリアリルアミン（ＰＡＭ）、ポリアクリレート、改変スチレンポリマー、プルロニックポリオール、ポロキサマー（polyoxamer）、ポリウロン酸、およびポリビニルピロリドンもしくはそのコポリマー、またはそのグラフトポリマーからなる群から選択される化合物を有する生理学的に適合性の多孔性ポリマー足場および複数の精製抗原を含み、これらの複数の抗原が、デバイス内に複数の抗原に特異的な複数の免疫細胞を誘引し、かつ捕捉する、免疫細胞捕捉デバイスを提供する。
【００２７】
さらに別の態様では、本発明は、免疫細胞捕捉デバイスと薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物であって、デバイスが、生理学的に適合性の多孔性ポリマー足場および複数の精製抗原を含み、これらの複数の抗原が、デバイス内に複数の抗原に特異的な複数の免疫細胞を誘引し、かつ捕捉する、医薬組成物を提供する。この態様によると、医薬組成物を静脈内投与、皮下投与、腹腔内投与または筋肉内投与用に製剤化することができる。なお、さらに、この態様によると、医薬組成物をマイクロニードルパッチとして皮下投与用に製剤化することができる。
【００２８】
別の態様では、本発明は、それを必要とする対象の疾患を処置する方法を提供し、この方法は、免疫細胞捕捉デバイスを対象に投与するステップであって、デバイスが、生理学的に適合性の多孔性ポリマー足場と、疾患に特異的である複数の精製抗原とを含み、これらの複数の抗原が、デバイス内に複数の抗原に特異的な複数の免疫細胞を誘引し、かつ捕捉するステップ、デバイス内に捕捉された複数の免疫細胞を収集するステップ、および複数の免疫細胞を対象に投与することによって対象の疾患を処置するステップを含む。この態様によると、対象からのデバイスを外植することによって免疫細胞を収集することができる。なお、さらに、この態様によると、この治療方法は、複数の免疫細胞を増殖させることによって、疾患に特異的である免疫細胞の増殖された集団を生じさせるステップ、および免疫細胞の増殖された集団を対象に投与するステップを含みうる。この態様に従って処置されることになる対象は、好ましくはヒト対象である。なお、さらに、この態様による方法は、デバイスを対象に皮下または静脈内投与するステップを含みうる。治療的態様の一実施形態のもとで、複数の免疫細胞は、デバイスが対象に投与された約１日〜約６０日後に収集される。
【００２９】
関連態様では、本発明は、それを必要とする対象のがんを処置する方法を提供し、この方法は、免疫細胞捕捉デバイスを対象に投与するステップであって、デバイスが、生理学的に適合性の多孔性ポリマー足場およびがんに特異的である複数の精製抗原を含み、これらの複数のがん抗原が、がん抗原に特異的な複数の免疫細胞を誘引し、捕捉するステップ、デバイス内に捕捉された複数の免疫細胞を収集するステップ、および複数の免疫細胞を対象に投与することによって対象のがんを処置するステップを含む。この態様によると、この方法は、頭頸部がん、乳がん、膵臓がん、前立腺がん、腎がん、食道がん、骨がん、精巣がん、子宮頸がん、胃腸がん、膠芽腫、白血病、リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、肺の前新生物性病変、結腸がん、黒色腫および膀胱がんからなる群から選択されるがんを処置するために使用することができる。この態様に従って処置されることになる対象は、好ましくはヒト対象である。
【００３０】
さらに別の関連態様では、本発明は、それを必要とする対象の自己免疫疾患を処置する方法を提供し、この方法は、免疫細胞捕捉デバイスを対象に投与するステップであって、デバイスが、生理学的に適合性の多孔性ポリマー足場および自己免疫疾患に特異的である複数の精製抗原を含み、自己免疫疾患に特異的な複数の抗原が、抗原に特異的な複数の免疫細胞を誘引し、かつ捕捉するステップ、デバイス内に捕捉された複数の免疫細胞を収集するステップ、および複数の免疫細胞を対象に投与することによって対象の自己免疫疾患を処置するステップを含む。この態様によると、方法は、Ｉ型糖尿病、多発性硬化症、関節リウマチ、炎症性腸疾患およびクローン病からなる群から選択される自己免疫疾患を処置するために使用することができる。なおこの態様に従って、捕捉される免疫細胞は、制御性Ｔ細胞またはサプレッサーＴ細胞を含みうる。この態様に従って処置されることになる対象は、好ましくはヒト対象である。
【００３１】
さらに別の関連態様では、本発明は、それを必要とする対象の病原性疾患を処置する方法を提供し、この方法は、免疫細胞捕捉デバイスを対象に投与するステップであって、デバイスが、生理学的に適合性の多孔性ポリマー足場および病原性疾患に特異的である複数の精製抗原を含み、これらの複数の抗原が、病原性疾患に特異的な抗原に特異的な複数の免疫細胞を誘引し、かつ捕捉するステップ、デバイス内に捕捉された複数の免疫細胞を収集するステップ、および複数の免疫細胞を対象に投与することによって対象の病原性疾患を処置するステップを含む。この態様によると、病原体は、ウイルス、細菌、原生動物、寄生虫および真菌からなる群から選択される。この態様に従って処置されることになる対象は、好ましくはヒト対象である。
【００３２】
別の態様では、本発明は、抗原に特異的である免疫細胞を得るための方法を提供する。この方法は、生理学的に適合性の多孔性ポリマー足場と複数の精製抗原とを含む免疫細胞捕捉デバイスを対象に投与するステップであって、複数の抗原が、デバイス内の複数の抗原に特異的な複数の免疫細胞を誘引し、かつ捕捉するステップ、およびデバイス内に捕捉された免疫細胞を回収することによって、抗原に特異的な免疫細胞を得るステップを含む。デバイスを対象から外植して免疫細胞を収集してもよい。この態様に従って免疫細胞を得ることになる対象は、好ましくはヒト対象である。この態様によると、デバイスを対象に皮下または静脈内投与することができる。なおこの態様によると、デバイスを対象に投与した約１日〜約６０日後に複数の免疫細胞を収集することができる。
【００３３】
別の態様では、本発明は、対象が自己免疫疾患を有するかどうかを決定する方法を提供する。この方法は、免疫細胞捕捉デバイスを対象に投与するステップであって、デバイスが、生理学的に適合性の多孔性ポリマー足場および自己免疫疾患に特異的である複数の精製抗原を含み、複数の抗原が、デバイス内に複数の抗原に特異的な複数の免疫細胞を誘引し、かつ捕捉するステップ、デバイス内に捕捉された免疫細胞を収集するステップであって、免疫細胞が自己免疫疾患に特異的であるステップ、およびデバイス内に捕捉された自己免疫疾患に特異的な免疫細胞の数を決定することによって、対象が自己免疫疾患を有するかどうかを決定するステップを含む。デバイスを対象から外植して免疫細胞を収集してもよい。この態様に従って免疫細胞を得ることになる対象は、好ましくはヒト対象である。この態様によると、デバイスを対象に皮下または静脈内投与することができる。なおこの態様によると、デバイスを対象に投与した約１日〜約６０日後に複数の免疫細胞を収集することができる。
【００３４】
さらに別の態様では、本発明は、生理学的に適合性の多孔性ポリマー足場と複数の精製抗原とを含む免疫細胞捕捉デバイスを製造する方法であって、複数の抗原が、デバイス内の複数の抗原に特異的な複数の免疫細胞を誘引し、かつ捕捉する方法を提供する。この方法は、複数の精製抗原を生理学的に適合性のポリマーとともにインキュベートしてポリマー−抗原混合物を生じさせるステップ、ポリマー−抗原混合物を凍結し、凍結乾燥させ、かつポロゲンと混合するステップ、混合物を圧縮成形してディスクを生成するステップ；ディスクを高圧ＣＯ２環境に付し、圧力を急速に低下させて、ポリマーを膨張させ、かつ融合させて、連通型足場構造にするステップ、およびこの構造を水に浸漬することによって足場構造からポロゲンを浸出させて多孔性物品を生じさせることによって、デバイスを製造するステップを含む。この態様によると、ポリマーは、ラクチドとグリコリドのコポリマー（ＰＬＧ）またはアルギネートを含みうる。なお、さらに、この態様によると、ポロゲンは、ＮａＣｌまたはスクロースである。
【００３５】
本発明の他の特徴および利点は、本発明の好ましい実施形態についての以下の説明から、および特許請求の範囲から明らかになる。引用する参考文献は、参照により本明細書に組み込まれている。
【００３６】
本明細書に記載する実施形態の様々な特徴および利点は、添付の図面に照らして考えるとよりよく分かるので、十分に理解することができる。
【図面の簡単な説明】
【００３７】
【図１】図１Ａは、ＰＬＧベースのＴ細胞トラップの表面マイクロコンピュータ断層撮影画像および断面ＳＥＭ像を示す写真である。図１Ｂは、ＯＶＡ−Ｔ細胞トラップからのモデル抗原としてのオボアルブミン（ＯＶＡ）タンパク質の累積放出を示す折れ線グラフである。図１Ｃは、マウスの背部の皮下に１４日間埋め込んだトラップの部位におけるＭＩＰ−１ａおよびＲＡＮＴＥＳの局所サイトカイン濃度を示す棒グラフである。ＢおよびＣにおける値は、平均および標準偏差（ｎ＝５）を表す。図１Ａ〜Ｃは、モデルＴ細胞トラップの特徴付けを示す。
【図２】図２Ａは、対照（対照）およびオボアルブミン（ＯＶＡ：抗原）担持トラップから単離された細胞の一連の蛍光標識細胞選別（ＦＡＣＳ）プロットである。細胞を抗ＣＤ８およびＯＶＡクラスＩテトラマーで染色した。ゲートは、ＯＶＡ特異的、ＣＤ８（＋）Ｔ細胞を表し、数は、ポジティブ細胞の百分率を提供する。トラップをＯＴ−１マウスに１４日間埋め込んだ。図２Ｂは、トラップ（ＯＶＡトラップ）および対照（対照）に蓄積するＣＤ８（＋）ＯＶＡテトラマー（＋）Ｔ細胞の動態を示す折れ線グラフである。足場をＯＴ−１マウスに７、１４および２８週間埋め込んだ。図２Ｃは、一連のＦＡＣＳプロットである。０日目（ＤＯ）にＣＦＡ−ＯＶＡを接種したマウスに、ＯＶＡを含有するトラップ（ＯＶＡトラップ）および黒色腫細胞可溶化物（黒色腫トラップ）を７日目（Ｄ７）に埋め込み、その後、２１日目（Ｄ２１）にそれらのトラップをアッセイした。ＣＤ３（＋）Ｔ細胞を単離し、ＯＶＡおよび黒色腫トラップから選別し、抗ＣＤ８、Ｔｒｐ２テトラマーおよびＯＶＡテトラマーで染色した。ＦＡＣＳプロットのゲートは、ＯＶＡまたはＴｒｐ２テトラマー染色がポジティブのＣＤ８（＋）Ｔ細胞を表し、数は、示されているＣＤ８  Ｔ細胞の百分率を表す。図２Ｄは、ＯＶＡトラップおよび黒色腫トラップから単離したＯＶＡ特異的およびＴｒｐ２特異的Ｔ細胞の数を示す棒グラフである。ＢおよびＤにおける値は、平均および標準偏差（ｎ＝５）を表す。＊＊Ｐ＜０：０１。図２Ａ〜Ｄは、トラップが抗原指向性ホーミングによるＴ細胞の判別に有用であることを実証する。
【図３】図３Ａは、膵ベータ細胞可溶化物抗原を担持したトラップからのタンパク質の累積放出を示す折れ線グラフである。図３Ｂは、Ｔ細胞トラップが埋め込まれている間のＮＯＤマウスの膵島内へのＴ細胞浸潤度を示す概略図である。ＮＯＤマウスが９、１２および１５週齢になったらトラップを埋め込み、２週間後にアッセイした。図３Ｃは、１１、１４および１７週齢ＮＯＤマウスから単離した、対照から回収したＣＤ３（＋）Ｔ細胞のレベル（青色塗りつぶし）および３細胞トラップから回収したＣＤ３（＋）Ｔ細胞のレベル（白抜き赤線）を表示する、一連のＦＡＣＳヒストグラムである。図３Ｄは、１１、１４および１７週齢のＮＯＤマウスから外植した、対照（対照）および細胞担持トラップ（トラップ）から単離したＣＤ３（＋）細胞の総数を示す、折れ線グラフである。図３Ｅは、ＣＤ３（＋）ＣＤ４（＋）およびＣＤ３（＋）ＣＤ８（＋）Ｔ細胞であるトラップおよび対照から単離した全細胞の百分率を示す棒グラフである。Ａ、ＤおよびＥにおける値は、平均および標準偏差（ｎ＝５）を表す。＊＊Ｐ＜０：０１。これらの図は、非肥満糖尿病マウスにおける糖尿病進行中のＴ細胞捕捉を実証する。
【図４】図４Ａは、抗原担持トラップおよび対照から回収したＴ細胞を用いて培養したベータ細胞標的のＩＬ−２  ＥＬＩＳＰＯＴアッセイ結果の写真である。１１、１４および１７週齢のＮＯＤマウスへの埋め込みの１４日後にＴ細胞を回収した。各ウェルは、単一のマウスから回収したＴ細胞からの反応を表す。図４Ｂは、トラップから抽出したＴ細胞によって生成されたＩＬ−２ポジティブスポットの数（１６００個のＴ細胞に正規化した）と脾臓からのものとの比較を示す折れ線グラフである。抗原担持トラップ（トラップ）、対照足場（対照）、トラップを埋め込んだマウスの脾臓（脾臓−トラップ）、または対照足場を埋め込んだマウスの脾臓（脾臓−対照）からのＴ細胞とともに培養したベータ細胞が入っているウェルにおけるスポットを現像し、定量した。ＭＨＣクラスＩ  Ｈ２（Ｋｄ）（３細胞Ｉ（Ｄ））またはＭＨＣクラスＩＩ  Ｉ−Ａ（ｇ７）（３細胞Ｇ７）のどちらかを過剰発現するようにベータ細胞標的を改変した。Ｔ細胞（Ｔ細胞のみ）およびベータ細胞（３細胞）を単独で対照としてアッセイした。Ｂにおける値は、平均および標準偏差を表す。これらの図は、トラップがベータ細胞特異的Ｔ細胞の濃縮に有効であることを実証する。
【図５】図５Ａは、ブランク（対照）およびオボアルブミン（抗原）担持トラップへのＣＤ３（＋）Ｔ細胞侵入を示すヒストグラムである。ブランク（対照）およびオボアルブミン（抗原）担持トラップに侵入するＣＤ８（＋）ＯＶＡテトラマー（＋）Ｔ細胞を示すドットプロット。ゲートおよび数は、トラップから単離したＯＶＡ（＋）細胞傷害性Ｔ細胞のパーセントを表す。図５Ｂは、ブランク（対照）およびオボアルブミン担持（トラップ）アルギネートクリオゲル中に捕捉されたＣＤ３（＋）Ｔ細胞の数を示す棒グラフである。図５Ｃは、ブランク（対照）および抗原担持（トラップ）アルギネートクリオゲル中に捕捉されたＣＤ８（＋）ＯＶＡ（＋）Ｔ細胞の数を示す棒グラフである。ＢおよびＣにおける値は、平均および標準偏差（ｎ＝４）を表す。＊Ｐ＜０．０５。図５Ａ〜Ｃに示されているデータは、抗原ルアーを含有するアルギネートクリオゲルトラップへのＴ細胞捕捉および保持成功を実証する。抗原のみを有するトラップで十分であり、アジュバントとしてのＧＭ−ＣＳＦおよびＣｐＧの抗原への追加はＴ細胞侵入を増進する。
【図６】図６Ａ〜Ｄは、ｉｎ  ｖｉｖｏでのがん特異的Ｔ細胞の動員を示す。図６Ａは、（ＯＴ−１マウスに１４日間埋め込んだ）対照（対照）およびオボアルブミン（ＯＶＡ；抗原）担持トラップから単離した細胞のＦＡＣＳプロットを示す。細胞を抗ＣＤ８およびＯＶＡクラスＩテトラマーで染色した。ゲートは、ＯＶＡ特異的、ＣＤ８（＋）Ｔ細胞を表し、数は、ポジティブ細胞の百分率を提供する。図６Ｂは、トラップ（ＯＶＡトラップ）および対照（対照）に蓄積するＣＤ８（＋）ＯＶＡテトラマー（＋）Ｔ細胞の動態を示す。足場をＯＴ−１マウスに７、１４および２８週間埋め込んだ。図６Ｃは、ＣＤ３（＋）Ｔ細胞のＦＡＣＳ分析を示す。０日目（Ｄ０）にＣＦＡ−ＯＶＡをマウスに接種し、ＯＶＡを含有するトラップ（ＯＶＡトラップ）および黒色腫細胞可溶化物を含有するトラップ（黒色腫トラップ）を７日目（Ｄ７）に埋め込んだ。その後、２１日目（Ｄ２１）にそれらのトラップをアッセイした。ＣＤ３（＋）Ｔ細胞を単離し、ＯＶＡおよび黒色腫トラップから選別し、抗ＣＤ８、Ｔｒｐ２テトラマーおよびＯＶＡテトラマーで染色した。ＦＡＣＳプロットのゲートは、ＯＶＡまたはＴｒｐ２テトラマー染色がポジティブのＣＤ８（＋）Ｔ細胞を表し、数は、示されているようなＣＤ８  Ｔ細胞の百分率を表す。図６Ｄは、ＯＶＡトラップおよび黒色腫トラップから単離したＯＶＡ特異的およびＴｒｐ２特異的Ｔ細胞の数を示す。ＢおよびＤにおける値は、平均および標準偏差（ｎ＝５）を表す。＊＊Ｐ＜０：０１。
【図７】図７は、トラップからの細胞の移入後の糖尿病発生率の動態を示す。１５週齢ＮＯＤマウスにブランクＰＬＧ足場（対照）またはベータ細胞可溶化物を含有する足場（トラップ）のどちらかを埋め込んだ。１７週の時点で、対照およびトラップ足場から抽出した２×１０６の細胞とともに未処置ＮＯＤマウスからの脾細胞（脾臓）をＮＯＤ−ＳＣＩＤマウスに静脈内注射した。マウスの血漿グルコースレベルを週１回モニターし、２５０ｍｇ／ｄＬより高いグルコースレベルを連続２週間記録したらマウスを糖尿病と見なした（ｎ＝８または９）。
【発明を実施するための形態】
【００３８】
（発明の詳細な説明）
本発明は、希少細胞または体内に低頻度で存在する細胞を識別および収集する問題の解決策を提供する。本明細書に記載する特定の実施形態は、そのような細胞の収集に有用である収集デバイス、例えば細胞トラップに関する。デバイスは、複数の抗原および任意選択で動員剤を取り込むか、またはそれらでコーティングされている足場組成物を含み、それによってこのデバイスは標的細胞を誘引すること、標的細胞に接着すること、および標的細胞を捕捉または隔離することができる。デバイスは、そのデバイス内に存在する抗原、動員剤または他の分子との直接的または間接的相互作用を含む様々な方法によって、これらの機能を果す。デバイスが使用される用途に依存して、デバイスは、それ自体の足場の物理的または化学的特性によって標的細胞の捕捉および生存を制御する。例えば、足場組成物は鑑別透過性であり、したがって足場のある特定の物理的領域内でしか細胞を通過させない。足場組成物の透過性は、例えば、より大きいまたはより小さい細孔経、密度、ポリマー架橋、剛性、靱性、延性または粘弾性のために材料を選択または設計することによって制御される。足場組成物は、物理的チャネルまたは通路を含有することができ、そこを通って標的細胞は、デバイスと相互作用するか、そして／またはデバイスの特定の区画もしくは領域内に移動する。区画化を助長するために、足場組成物は、任意選択で、各々が異なる透過性を有する区画または層に組織化され、その結果、細胞が選別または濾過されて、細胞のある特定の亜集団のみにアクセスすることが可能になる。デバイス内の標的細胞集団の隔離はまた、足場組成物の分解、脱水もしくは再水和、酸素付加、化学もしくはｐＨ変化、または進行中の自己組織化によって制御することができる。標的細胞は、それらの捕捉後、デバイス内に存在する刺激分子、サイトカインおよび他の補因子を利用してそのデバイス内で増殖または増殖されうる。他の事例では、デバイスに別様に侵入した非標的細胞は、ネガティブ選択剤を使用して拒絶または拒否されうる。
【００３９】
本発明のデバイス内に捕捉される細胞は、主として免疫細胞である。ある特定の実施形態では、本発明はＴ細胞トラップに関する。他の実施形態では、本発明は、Ｂ細胞トラップに関する。さらに他の実施形態では、本発明は、トラップの組合せ、例えば、Ｔ細胞トラップとＢ細胞トラップの組合せに関する。本明細書に記載するトラップを、抗原提示細胞（ＡＰＣ）、例えば、自己反応性ＡＰＣなどを捕捉するように構成することもできる。捕捉されうる自己反応性ＡＰＣの例としては、例えば、樹状細胞（ＤＣ）、マクロファージ、またはこれらの組合せが挙げられる。他の実施形態では、複数のトラップ、例えば、リンパ球とＡＰＣの両方の捕捉用に構成されているトラップを利用することができる。例えば、抗原特異的細胞または疾患特異的細胞、例えば、Ｔ細胞、樹状細胞（ＤＣ）またはマクロファージを、分析、再プログラミングまたは枯渇のために、別々にまたは一緒に捕捉することができる。捕捉された免疫細胞、例えば、リンパ球およびＡＰＣは、疾患診断または免疫治療のための標的を識別および特徴付けるために、任意選択で、回収され、分析される。捕捉された細胞は、治療に使用されることになる組成物または製剤を開発するために再プログラムまたは増殖されることもある。
【００４０】
本発明をさらに下記のサブセクションでより詳細に説明する。
Ｉ．免疫細胞を動員および捕捉するためのデバイス
【００４１】
一態様では、本発明は、細胞捕捉デバイスを提供する。デバイスは、生理学的に適合性の多孔性ポリマー足場、複数の抗原および任意選択で、免疫細胞を誘引する１つまたは複数の動員剤を含有する。
【００４２】
一実施形態では、デバイスは、生理学的に適合性のおよび任意選択で生分解性のポリマーで構成されている足場を含有する。デバイスに利用可能であるポリマーの例は、当技術分野において公知である。例えば、米国特許出願公開第２０１１／００２０２１６号を参照されたく、この特許文献の全内容は参照により本明細書に組み込まれている。そのようなポリマーの代表例としては、ポリ（ラクチド）、ポリ（グリコリド）、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリ無水物、ポリオルトエステル、ポリエーテルエステル、ポリカプロラクトン、ポリエステルアミド、ポリカーボネート、ポリシアノアクリレート、ポリウレタン、ポリアクリレート、およびこれらのブレンドまたはコポリマーが挙げられるが、それらに限定されない。生分解性足場は、生分解性材料、例えば、コラーゲン、アルギネート、多糖類、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ（グリコリド）（ＰＧＡ）、ポリ（Ｌ−ラクチド）（ＰＬＡ）、またはポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）、または絹を含みうる。一実施形態では、足場または足場デバイスは、完全または部分生分解性である生体適合性ポリマーマトリックスを含みうる。ヒドロゲルは、好適なポリマーマトリックス材料の一例である。ヒドロゲルを形成することができる材料の例としては、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ＰＬＧＡポリマー、アルギネートおよびアルギネート誘導体、ゼラチン、コラーゲン、アガロース、天然および合成多糖類、ポリアミノ酸、例えばポリペプチド、特にポリ（リシン）、ポリエステル、例えばポリヒドロキシブチレートおよびポリ−ε−カプロラクトン、ポリ無水物、ポリホスファジン、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（アルキレンオキシド）、特にポリ（エチレンオキシド）、ポリ（アリルアミン）（ＰＡＭ）、ポリ（アクリレート）、改変スチレンポリマー、例えばポリ（４−アミノメチルスチレン）、プルロニックポリオール、ポロキサマー（polyoxamer）、ポリ（ウロン酸）、ポリ（ビニルピロリドン）、ならびに上記のもののコポリマー（グラフトコポリマーを含む）が挙げられる。別の実施形態では、足場は、様々な合成ポリマーおよび天然起源のポリマー、例えば、これらに限定されるものではないが、コラーゲン、フィブリン、ヒアルロン酸、アガロース、およびラミニンリッチゲル、から作製することができる。生分解性構造の場合、その組成物は、物理的もしくは化学的作用、例えば、水和、熱もしくはイオン交換のレベルによって、または細胞の作用、例えば、近隣もしくは在住細胞による酵素、ペプチドもしくは他の成分の同化作用によって分解される。稠度は、軟質／柔軟（例えばゲル）からガラス状、ゴム状、脆性、靭性、弾性、剛性まで様々である。構造は、細孔を含有し、ナノ多孔性、ミクロ多孔性もしくはマクロ多孔性であり、細孔のパターンは、任意選択で、均質であるか、不均質であるか、整列しているか、反復しているか、またはランダムである。
【００４３】
一実施形態では、ポリマーは、ヒドロゲル形成剤、例えば、グリコリドおよび／またはアルギネートである。アルギネートは、分子量、分解速度および足場形成方法を調節することによって特定の用途用に配合することができる、汎用多糖類系ポリマーである。カップリング反応を使用して、細胞接着配列ＲＧＤなどの生体活性エピトープをポリマー骨格に共有結合させることができる。グリコリド／アルギネートポリマーは、様々な足場タイプにすることができる。注射可能ヒドロゲルは、カルシウムイオンなどの架橋剤の添加によって低ＭＷアルギネート溶液から形成することができ、その一方でマクロ多孔性足場は、高ＭＷアルギネートディスクの凍結乾燥によって形成される。足場の配合の違いが足場分解動態を左右する。アルギネート足場からのモルフォゲンまたは他の生体活性物質の放出速度は、足場の配合によって、空間的および時間的に管理された様式でモルフォゲンをもたらすように調節される。この放出調節は、全身性副作用および複数回の注射の必要をなくすばかりでなく、インプラント部位の宿主細胞および足場に播種された移植細胞を活性化する微小環境を作り出すために使用することもできる。
【００４４】
足場組成物を作製する方法は、当技術分野において公知である。例えば、Martinsenら（Biotech.&  Bioeng.、３３巻（１９８９年）７９〜８９頁）、Matthewら（Biomaterials、１６巻（１９９５年）２６５〜２７４頁）、Atalaら（J Urology、１５２巻（１９９４年）６４１〜６４３頁）、およびSmidsrod（TIBTECH ８巻（１９９０年）７１〜７８頁）を参照されたく、前記参考文献の開示は、それら全体が参照によって本明細書に組み込まれている。
【００４５】
例示的デバイスは、比較的低分子量のグリコリドまたはアルギネート、好ましくは、溶解後、例えばアルギネートまたは多糖類が１０００〜８０，０００ダルトンの分子量に低減されるヒトによるクリアランスの腎域値であるサイズの、グリコリドまたはアルギネートを利用する。好ましくは、分子量は、１０００〜６０，０００ダルトン、特に好ましくは１０００〜５０，０００ダルトンである。高グルロネート含有量のアルギネート材料の使用も有用である。グルロネート単位は、マンヌロネート単位とは対照的に、ポリマーをゲル化するための二価カチオンによるイオン架橋用の部位を提供するからである。例えば、参照により本明細書に組み込まれている米国特許第６，６４２，３６３号には、アルギネートなどの多糖類を含有するポリマーを製造および使用する方法が開示されている。
【００４６】
本発明の足場は多孔性であることができ、したがって、足場は、抗原提示を持続することができ、免疫細胞を誘引し、かつ捕捉することができる。一実施形態では、デバイスは、細孔が１０ｎｍ〜５００μｍの直径を有する多孔性足場を含有する。これらの実施形態では、本発明は、細孔が約１０ｎｍ未満（例えば、約０．５ｎｍ、約１ｎｍ、約３ｎｍ、約５ｎｍ、約７ｎｍ、約９ｎｍ、およびそれ超）の直径を有する、ナノ多孔性足場を含むデバイスを利用する。別の実施形態では、足場はミクロ多孔性であり、細孔は約１００ｎｍ〜２０μｍの範囲（例えば、約２００ｎｍ、約５００ｎｍ、約７００ｎｍ、約１μｍ、約２μｍ、約５μｍ、約７μｍ、約１０μｍ、約１２μｍ、約１５μｍ、約１７μｍ、約２０μｍまたはそれ超）の直径を有する。別の実施形態では、足場はマクロ多孔性であり、細孔の直径は、約２０μｍ〜５００μｍ（例えば、３０μｍ、５０μｍ、７０μｍ、１００μｍ、２００μｍ、３００μｍ、４００μｍ、またはそれ超）である。特に、細孔の直径は、約１００μｍより大きく、好ましくは約４００μｍより大きい。例示実施形態では、足場はマクロ多孔性であり、直径約２００〜５００μｍの細孔が整列している。
【００４７】
所望の細孔経および細孔整列を有するポリマーマトリックスを製造する方法は、当技術分野において、例えば、米国特許出願公開第２０１１／００２０２１６号および米国特許第６，５１１，６５０号において説明されており、前記特許文献中の関係のある開示は参照により本明細書に組み込まれている。
ＩＩ．抗原
【００４８】
本発明のデバイスは、１つまたは複数の抗原を含み、抗原は、天然に存在する化合物、合成によって生産された化合物、または組換え化合物、例えば、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、核酸、小分子、ハプテン、炭水化物または他の作用物質であってもよく、これらの断片またはそれらの組合せを含む。より具体的には、抗原は、ペプチドもしくはタンパク質またはこれらの免疫学的に活性な断片である。一実施形態において、本明細書に記載する抗原は、精製されている。精製化合物は、目的の化合物を重量（乾燥重量）で少なくとも６０％含有する。詳細には、抗原は、少なくとも純度７５％、好ましくは少なくとも純度９０％、および最も好ましくは少なくとも純度９９％である。純度は、任意の適切な標準法によって、例えば、カラムクロマトグラフィー、ポリアクリルアミドゲル電気泳動、またはＨＰＬＣ分析によって測定される。
【００４９】
抗原は、自己抗原であってもよく、または非自己抗原であってもよい。
【００５０】
非自己抗原の代表例には、例えば、ウイルス、細菌、原生動物、寄生虫および真菌からなる群から選択される病原体に由来する抗原が含まれる。これらの実施形態では、非自己抗原は、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｏｖｉｓ、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、ヒト免疫不全ウイルス、ポックスウイルス、天然痘ウイルス、エボラウイルス、マールブルグウイルス、デング熱ウイルス、インフルエンザウイルス、パラインフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、風疹ウイルス、水痘・帯状疱疹ウイルス、単純ヘルペスウイルス、サイトメガロウイルス、エプスタイン・バーウイルス、ＪＣウイルス、ラブドウイルス、ロタウイルス、ライノウイルス、アデノウイルス、パピローマウイルス、パルボウイルス、ピコルナウイルス、ポリオウイルス、流行性耳下腺炎の原因となるウイルス、狂犬病の原因となるウイルス、レオウイルス、風疹ウイルス、トガウイルス、オルソミクソウイルス、レトロウイルス、ヘパドナウイルス、コクサッキーウイルス、ウマ脳炎ウイルス、日本脳炎ウイルス、黄熱病ウイルス、リフトバレー熱ウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、Ｄ型肝炎ウイルス、Ｅ型肝炎ウイルス、ＳＡＲＳ  ＣｏＶ、ＭＥＲＳ  ＣｏＶ、エンテロウイルス、Ｂｏｒｒｅｌｉａ属種、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｈｒａｃｉｓ、Ｂｏｒｒｅｌｉａ  ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ、Ｃａｍｐｈｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ属種、Ｃｈｌａｍｙｄｉａｌ  ｐｓｉｔｔａｃｉ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａｌ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ属種、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ、Ｃｏｘｉｅｌｌａ属種、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ属種、Ｅｒｌｉｃｈｉａ属種、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ  ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ属種、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｐａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属種、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ属種、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ、Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒｏｓｉｓ  ｉｎｔｅｒｒｏｇａｎｓ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ属種、Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属種、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｅｐｒａｅ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ属種、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ属種、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、Ｐｎｅｕｍｏｃｏｃｃｕｓ属種、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属種、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ属種、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｅｎｔｅｒｉｃａ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ属種、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ  ｒｉｃｋｅｔｓｉｉ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ  ｔｙｐｈｉ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ属種、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ属種、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ属種、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｃｕｓ  ｐｎｕｅｍｏｎｉａｅ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｒｏｇｅｎｅｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｍｕｔａｎｓ、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ属種、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐａｌｌｉｄｕｍ、Ｖｉｂｒｉｏ属種、Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｅｓｔｉｓ、メチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属種、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、ｆｕｎｉｇａｔｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｌａｖｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｃａｌｖａｔｕｓ、Ｃａｎｄｉｄａ属種、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ属種、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ  ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ、Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ属種、Ｎｏｃａｒｄｉａ  ａｓｔｅｒｏｉｄｅｓ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ、Ｓｔａｃｈｙｂｏｔｒｙｓ  ｃｈａｒｔａｒｕｍ、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ、Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ  ｖａｇｉｎａｌｉｓ、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ属種、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｂｒｕｃｅｉ、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ  ｍａｎｓｏｎｉ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ属種、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ属種、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ属種、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ属種、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ属種、Ｂａｂｅｓｉａ属種、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ属種、Ｌｅｓｈｍａｎｉａ属種、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ属種、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ  ｊｉｒｏｖｅｃｉｉ、Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ属種、Ｇｉａｒｄｉａ属種、Ｓｃｈｉｓｏｓｔｏｍａ属種、Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ属種、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ属種、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ属種、Ｎａｅｇｌｅｒｉａ属種、Ａｃａｎｔｈａｍｏｅｂａ属種、Ｂａｌａｍｕｔｈｉａ属種、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ属種、Ｇｉａｒｄｉａ属種、Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ属種、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ属種、およびＴｒｙｐａｎｏｓｏｍａ属種に由来しうる。
【００５１】
あるいは、デバイスは、任意選択で、疾患または障害に関連づけられるか、または関連している、複数の自己抗原を含有する。好ましくは、自己抗原は、特に、ヒト疾患または障害に関連している。一実施形態では、自己抗原は関節リウマチ、狼瘡、セリアック病、炎症性腸疾患またはクローン病、シェーグレン症候群、リウマチ性多発筋痛、多発性硬化症、強直性脊椎炎、１型糖尿病、円形脱毛症、血管炎、側頭動脈炎などからなる群から選択される自己免疫障害に関連している。１型糖尿病、多発性硬化症、クローン病および関節リウマチなどに関連している、特定のタイプの抗原は、それらの断片を含めて、文献において特徴付けられている。例えば、関節リウマチ関連抗原は、４７ｋＤａタンパク質（ＲＡ−Ａ４７）である。例えば、Hattoriら、J  Bone  Miner  Metab.、１８巻（６号）：３２８〜３４頁（２０００年）を参照されたい。クローン病の場合、抗原は、細菌フラジェリンでありうる。Lodesら、J  Clin  Invest.１１３巻（９号）１２９６〜３０６頁（２００４年）を参照されたい。同様に、主要ミエリンタンパク質、例えば、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）およびプロテオリピドタンパク質（ＰＬＰ）は、多発性硬化症（ＭＳ）の過程に重要である可能性が高い。deRosboら、J  Clin  Invest.９２巻（６号）：２６０２〜２６０頁（１９９３年）を参照されたい。１型糖尿病に関しては、複数の自己抗原、例えば、プレプロインスリン（ＰＰＩ）、膵島特異的グルコース−６−ホスファターゼ（ＩＧＲＰ）、グルタミン酸デカルボキシラーゼ（ＧＡＤ６５）、インスリノーマ抗原−２（ＩＡ−２）、クロモグラニンＡおよび熱ショックタンパク質６０が関与しうる。Roepら、Cold  Spring  Harb  Perspect  Med、２巻（４号）、２０１２年（PMID:  22474615）を参照されたい。
【００５２】
別の実施形態では、自己抗原は、がんと関連している。がん抗原の代表的なタイプとしては、例えば、ＭＡＧＥ−１、ＭＡＧＥ−２、ＭＡＧＥ−３、ＣＥＡ、チロシナーゼ、ミッドカイン、ＢＡＧＥ、ＣＡＳＰ−８、β−カテニン、β−カテニン、γ−カテニン、ＣＡ−１２５、ＣＤＫ−１、ＣＤＫ４、ＥＳＯ−１、ｇｐ７５、ｇｐ１００、ＭＡＲＴ−１、ＭＵＣ−１、ＭＵＭ−１、ｐ５３、ＰＡＰ、ＰＳＡ、ＰＳＭＡ、ｒａｓ、ｔｒｐ−１、ＨＥＲ−２、ＴＲＰ−１、ＴＲＰ−２、ＩＬ１３Ｒアルファ、ＩＬ１３Ｒアルファ２、ＡＩＭ−２、ＡＩＭ−３、ＮＹ−ＥＳＯ−１、Ｃ９ｏｒｆ１１２、ＳＡＲＴ１、ＳＡＲＴ２、ＳＡＲＴ３、ＢＲＡＰ、ＲＴＮ４、ＧＬＥＡ２、ＴＮＫＳ２、ＫＩＡＡ０３７６、ＩＮＧ４、ＨＳＰＨ１、Ｃ１３ｏｒｆ２４、ＲＢＰＳＵＨ、Ｃ６ｏｒｆ１５３、ＮＫＴＲ、ＮＳＥＰ１、Ｕ２ＡＦ１Ｌ、ＣＹＮＬ２、ＴＰＲ、ＳＯＸ２、ＧＯＬＧＡ、ＢＭＩ１、ＣＯＸ−２、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＺＨ２、ＬＩＣＡＭ、Ｌｉｖｉｎ、Ｌｉｖｉｎβ、ＭＲＰ−３、Ｎｅｓｔｉｎ、ＯＬＩＧ２、ＡＲＴ１、ＡＲＴ４、Ｂ−サイクリン、Ｇｌｉ１、Ｃａｖ−１、カテプシンＢ、ＣＤ７４、Ｅ−カドヘリン、ＥｐｈＡ２／Ｅｃｋ、Ｆｒａ−１／Ｆｏｓｌ  １、ＧＡＧＥ−１、ガングリオシド／ＧＤ２、ＧｎＴ−Ｖ、β１，６−Ｎ、Ｋｉ６７、Ｋｕ７０／８０、ＰＲＯＸ１、ＰＳＣＡ、ＳＯＸ１０、ＳＯＸ１１、サバイビン、ＵＰＡＲ、ＷＴ−１、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰＩＶ）、アデノシンデアミナーゼ結合タンパク質（ＡＤ  Ａｂｐ）、シクロフィリンｂ、結腸直腸関連抗原（ＣＲＣ）−Ｃ０１７−１Ａ／ＧＡ７３３、Ｔ細胞受容体／ＣＤ３−ゼータ鎖、腫瘍抗原のＧＡＧＥファミリー、ＲＡＧＥ、ＬＡＧＥ−Ｉ、ＮＡＧ、ＧｎＴ−Ｖ、ＲＣＡＳｌ、α−フェトプロテイン、ｐｌ２０ｃｔｎ、Ｐｍｅｌ１１７、ＰＲＡＭＥ、脳グリコーゲンホスホリラーゼ、ＳＳＸ−Ｉ、ＳＳＸ−２（ＨＯＭ−ＭＥＬ−４０）、ＳＳＸ−Ｉ、ＳＳＸ−４、ＳＳＸ−５、ＳＣＰ−Ｉ、ＣＴ−７、ｃｄｃ２７、大腸腺腫症タンパク質（ＡＰＣ）、フォドリン、ＰｌＡ、コネキシン３７、Ｉｇ−イディオタイプ、ｐｌ５、ＧＭ２、ＧＤ２ガングリオシド、腫瘍抗原のＳｍａｄファミリー、ｌｍｐ−１、ＥＢＶコード化核抗原（ＥＢＮＡ）−Ｉ、ＵＬ１６結合タンパク質様転写物１（Ｍｕｌｔ１）、ＲＡＥ−１タンパク質、Ｈ６０、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、およびｃ−ｅｒｂＢ−２、またはこれらの免疫原性ペプチド、ならびにそれらの組合せが挙げられる。
ＩＩＩ．足場組成物と抗原の組合せ
【００５３】
共有結合性および非共有結合性相互作用を含む任意の公知方法を使用して、抗原を足場組成物と組み合わせることができる。非共有結合性相互作用のタイプとしては、例えば、静電相互作用、ファンデルワールス相互作用、π効果、疎水性相互作用などが挙げられる。抗原を共有結合性相互作用によって足場組成物に付着または繋留することもできる。足場／表面に抗原を結合させる方法、例えば、表面吸収、物理的固定化、例えば、相変化を使用して足場材料内に物質を捕捉する物理的固定化は、当技術分野において公知である。１つの特異的実施形態では、タンパク質を含有する抗原組成物を、それが水性相または液相中にあるうちに足場組成物と混合し、環境条件（例えば、ｐＨ、温度、イオン濃度）を変化させると、その液体がゲル化または凝固することによって抗原を捕捉する。あるいは、アルキル化剤またはアシル化剤による共有結合的カップリングを使用して、規定された高次構造にある足場上での抗原の安定した長期提示をもたらすことができる。ペプチド／タンパク質をポリマーと共有結合によりカップリングさせるための例示的な試薬および方法は、当技術分野において公知である。例えば、米国特許第６，００１，３９５号を参照されたく、本発明に関係する前記特許文献の内容は参照により本明細書に組み込まれている。他の実施形態では、抗原を足場に封入する。抗原を好適な足場、例えばＰＬＧＡマイクロスフェアに封入する方法は、当技術分野において公知である。例えば、米国特許第６，９１３，７６７号およびＷＯ／１９９５／０１１０１０を参照されたく、本発明に関係する前記特許文献の内容は参照により本明細書に組み込まれている。
【００５４】
直接的結合または間接的結合によって免疫細胞と相互作用するように抗原を製剤化することができる。直接的結合のタイプには、例えば、抗原と同種受容体、例えばＢ細胞受容体またはＴ細胞受容体との会合またはカップリングが含まれる。間接的結合は、１つまたは複数の二次的作用物質または細胞型の介在によって起こりうる。例えば、抗原は、先ずＢ細胞または抗原提示細胞（ＡＰＣ）と結合し、処理（例えば、分解）され、そして細胞表面の主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）上に提示されることがあり、標的細胞集団、例えばＴ細胞がそれと結合する。あるいは、抗原は他の介在細胞を動員することがあり、そのような細胞が様々なサイトカイン、増殖因子、ケモカインなどを分泌し、するとそれらが標的免疫細胞集団をデバイスに誘引する。メカニズムが何であれ、述べた成分は、協調して機能して、免疫細胞を本発明のデバイスに動員し、かつ隔離する。
【００５５】
抗原は、細胞可溶化物、分画された細胞可溶化物、回収したての細胞、生体液（血液、血清、腹水を含む）、組織抽出物などに由来することがある。一実施形態では、抗原は、所望の免疫細胞、例えばＢ細胞またはＴ細胞、が結合する標的細胞の可溶化物に由来する。これらの実施形態では、細胞可溶化物中の抗原を先ず分画し、その後、細胞トラップに担持する。可溶化物は、自己免疫疾患特異的細胞、例えば、Ｉ型糖尿病に関連する膵臓ベータ細胞、多発性硬化症に関連する神経細胞、関節リウマチに関連する骨／関節抗原、炎症性腸疾患またはクローン病に関連する抗原に由来することがある。あるいは、可溶化物は、がん細胞、例えば、腫瘍試料もしくは組織培養物から得られる個々の細胞に由来することもあり、または生検材料もしくは組織学的調製物から得られるバルクの腫瘍細胞に由来することもある。
ＩＶ．動員剤
【００５６】
本発明のデバイスは、１つまたは複数の動員剤も含有することができる。動員剤は、Ｔ細胞動員剤、Ｂ細胞動員剤、樹状細胞動員剤およびマクロファージ動員剤からなる群から選択される作用物質、またはこれらの組合せでありうる。
【００５７】
一実施形態では、デバイスは、Ｔ細胞動員剤を含有する。Ｔ細胞動員剤の非限定的な例としては、ＣＣＬ１、ＣＣＬ２（ＭＣＰ−１）、ＣＣＬ−３、ＣＣＬ−４、ＣＣＬ−５（ＲＡＮＴＥＳ）、ＣＣＬ−１７、ＣＣＬ−２２、ＣＸＣＬ１２およびＸＣＬ１、またはそれらの断片、それらのバリアント、もしくはそれらの組合せが挙げられるが、それらに限定されない。上述のＴ細胞動員剤の様々なホモログは、それらの機能的断片、またはそれらのバリアントを含めて、当技術分野において公知である。ホモログの代表例としては、ハエ、マウス、ラット、ブタ、ウシ、サル、ヒトなどからの関連タンパク質が挙げられる。ホモログは、好ましくは、表１に示すＮＣＢＩ受託番号を有する上述の動員剤のヒトまたはマウスホモログを含む。
【表１−１】
2018510887.tif 000003
【表１−２】
2018510887.tif 000004
【００５８】
デバイスは、上述の動員剤、例えば、表１に収載した少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、少なくとも７つ、少なくとも８つ、少なくとも９つまたはそれより多数の動員剤のあらゆる組合せを含有することもできる。関連実施形態では、デバイスは、表１に収載したすべての動員剤を含有する。
【００５９】
他の実施形態では、本発明は、樹状細胞もしくはマクロファージまたはこれらの組合せを動員するためのデバイスを提供する。樹状細胞／マクロファージ動員剤の非限定的な例としては、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ５、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１７およびＣＣＬ２２、またはそれらの機能的断片、それらのバリアント、もしくはそれらの組合せが挙げられるが、それらに限定されない。樹状細胞／マクロファージ動員剤のホモログの代表例としては、ハエ、マウス、ラット、ブタ、ウシ、サル、ヒトなどからの関連タンパク質が挙げられる。ホモログは、好ましくは、表２に示すＮＣＢＩ受託番号を有する上述の動員剤のヒトまたはマウスホモログを含む。
【表２−１】
2018510887.tif 000005
【表２−２】
2018510887.tif 000006
【００６０】
ＤＣ／マクロファージ動員のための上述のデバイスは、上述の動員剤、例えば、表２に収載した少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、少なくとも７つ、またはそれより多数の動員剤のあらゆる組合せを含有することができる。関連実施形態では、デバイスは、表２に収載したすべての動員剤を含有する。
【００６１】
関連実施形態では、本発明は、Ｂ細胞を動員するためのデバイスを提供する。Ｂ細胞動員剤の非限定的な例としては、ＳＤＦ−１、ＢＬＣ、ＢＣＬ−２およびＢＣＡ−１またはそれらの機能的断片、それらのバリアント、もしくはそれらの組合せが挙げられるが、それらに限定されない。Ｂ細胞動員剤のホモログの代表例としては、ハエ、マウス、ラット、ブタ、ウシ、サル、ヒトなどにおける上述のタンパク質のホモログが挙げられる。ホモログは、好ましくは、表３に示すＮＣＢＩ受託番号を有する上述の動員剤のヒトまたはマウスホモログを含む。
【表３−１】
2018510887.tif 000007
【表３−２】
2018510887.tif 000008
【００６２】
Ｂ細胞を動員するための上述のデバイスは、上述の動員剤、例えば、表３に収載した少なくとも２つ、少なくとも３つ、もしくは４つすべての動員剤、それらのバリアント、またはそれらの断片のあらゆる組合せを含有することができる。好ましくは、デバイスは、表３に収載したすべての動員剤、またはそれらの断片を含有する。
【００６３】
さらなる実施形態は、複数の免疫細胞、例えば、Ｔ細胞とＤＣ／マクロファージの組合せ、Ｔ細胞とＢ細胞の組合せ、Ｂ細胞とＤＣ／マクロファージの組合せなどを動員することができる作用物質を含有するデバイスに関する。したがって、一実施形態では、本発明は、Ｔ細胞と樹状細胞／マクロファージの両方を動員するデバイスであって、表１からの少なくとも１つの作用物質および表２からの少なくとも１つの作用物質から選択される動員剤を含むデバイスを提供する。関連実施形態では、本発明は、Ｂ細胞と樹状細胞／マクロファージの両方を動員するデバイスであって、表２からの少なくとも１つの作用物質および表３からの少なくとも１つの作用物質から選択される動員剤を含むデバイスを提供する。さらに別の実施形態では、本発明は、Ｔ細胞とＢ細胞の両方を動員するデバイスであって、表１からの少なくとも１つの作用物質および表３からの少なくとも１つの作用物質から選択される動員剤を含むデバイスを提供する。
【００６４】
免疫細胞の組合せを動員することができるデバイスでは、上述の表からの動員剤の様々な組合せおよび部分的組合せを利用することができる。例えば、Ｔ細胞とＤＣ／マクロファージの両方を動員するように計画されたデバイスは、表１からの少なくとも１つの作用物質と表２からの２つの作用物質、表１からの２つの作用物質と表２からの１つの作用物質、表１および２からの２つの作用物質などを含有することがある。同様に、Ｂ細胞とＤＣ／マクロファージの両方を動員するように計画されたデバイスは、表２からの少なくとも１つの作用物質と表３からの２つの作用物質、表２からの２つの作用物質と表３からの１つの作用物質、表２および３からの２つの作用物質などを含有することがあり、Ｔ細胞とＢ細胞の両方を動員するように計画されたデバイスは、表１からの少なくとも１つの作用物質と表３からの２つの作用物質、表１からの２つの作用物質と表３からの１つの作用質、表１および３からの２つの作用物質などを含有することがある。したがって、１つの代表的な実施形態では、デバイスは、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ２２、そのバリアントもしくはそれらの断片、またはそれらの組合せを含み、Ｔ細胞と樹状細胞／マクロファージの組合せの動員に適合している。動員剤のホモログ（その断片またはバリアントを含む）の代表例としては、ハエ、マウス、ラット、ブタ、ウシ、サル、ヒトなどからの関連タンパク質が挙げられる。ホモログは、好ましくは、表２に示すＮＣＢＩ受託番号を有する上述の動員剤のヒトまたはマウスホモログを含む。
【００６５】
デバイス／トラップを、他の造血細胞、例えば血小板、赤血球などと比較して、ある特定のタイプの免疫細胞の組合せ、例えばリンパ球とＡＰＣの組合せ、の優先的に動員に適合させることもできる。そのようなデバイスは、表１、２および３に収載した動員剤のあらゆる組合せを含有することができる。
【００６６】
本発明のデバイスは、単一の細胞型または単一の細胞亜型の優先的動員、例えば、Ｔ細胞の優先的動員、特に、Ｔｒｅｇ細胞またはＮＫ細胞のサブセットの優先的動員に適合している。優先的動員は、デバイス内（または動員剤を持っていない対照トラップ内）の他の型の免疫細胞と比較してデバイス内の特定の型の免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＤＣ／マクロファージ）の１つまたは複数の少なくとも１０％増、少なくとも２０％増、少なくとも３０％増、少なくとも５０％増、少なくとも７５％増、少なくとも１００％増、少なくとも２倍増、少なくとも５倍増、少なくとも８倍増、少なくとも１０倍増、またはそれ超増加する蓄積を特徴とする。免疫細胞の組合せ、例えばＴ細胞とＤＣ／マクロファージの組合せ、の動員に適合しているデバイスでは、動員される細胞の全百分率が、デバイス内（または対照トラップ内）の他の型の免疫細胞より、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも５０％、少なくとも７５％、少なくとも１００％、少なくとも２倍（すなわち２００％）、少なくとも５倍、少なくとも８倍、少なくとも１０倍、またはそれ超大きい優先的動員を特徴とする。特に、優先的動員は、他の免疫細胞と比較して目的の細胞の数の１〜１０倍増加を特徴とする。
Ｖ．さらなる作用物質
【００６７】
本発明の実施形態は、複数のさらなる作用物質を含む、免疫細胞を捕捉するためのデバイスをさらに提供する。そのような実施形態では、さらなる作用物質は、増殖因子、サイトカイン、ケモカイン、インターロイキン、接着シグナル伝達分子、インテグリンシグナル伝達分子、もしくはそれらの断片、またはそれらの組合せを含みうる。
【００６８】
増殖因子／サイトカインの代表例としては、アドレノメデュリン（ＡＭ）、アンジオポエチン（Ａｎｇ）、自己分泌型細胞運動刺激因子、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、ウシ胎仔ソマトロピン（foetal  Bovine  Somatotrophin）（ＦＢＳ）、グリア細胞株由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、増殖分化因子−９（ＧＤＦ９）、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、肝癌由来増殖因子（ＨＤＧＦ）、インスリン様増殖因子（ＩＧＦ）、ケラチノサイト増殖因子（ＫＧＦ）、遊走刺激因子（ＭＳＦ）、ミオスタチン（ＧＤＦ−８）、神経成長因子（ＮＧＦ）、ニューロトロフィン、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、Ｔ細胞増殖因子（ＴＣＧＦ）、トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ−αもしくはＴＧＦ−β）、腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、Ｗｎｔ、胎盤増殖因子（ＰＧＦ）、もしくはそれらの機能的断片、またはそれらの組合せが挙げられるが、それらに限定されない。
【００６９】
インターロイキンの代表的なタイプとしては、ＩＬ−１（Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞およびマクロファージを活性化する）、ＩＬ−２（Ｂ細胞およびＮＫ細胞を活性化する）、ＩＬ−３（非リンパ系細胞を刺激する）、ＩＬ−４（活性化Ｂ細胞、休止Ｔ細胞およびマスト細胞の増殖因子）、ＩＬ−５（活性化Ｂ細胞の分化用）、ＩＬ−６（形質細胞およびＴ細胞の増殖因子）、ＩＬ−７（Ｂ細胞／前駆Ｔ細胞およびＮＫ細胞の増殖因子）、ＩＬ−１０（マクロファージ、Ｂ細胞、マスト細胞、Ｔｈ１／Ｔｈ２細胞を活性化する）、ＩＬ−１２（Ｔ細胞およびＮＫ細胞を活性化する）、ＩＬ−１７（Ｔｈ細胞を活性化する）が挙げられるが、これらに限定されない。標的細胞の活性を調節する能力を特徴とするインターロイキンの機能的断片も利用することができる。インターロイキン分子の代表的なタイプを、それらのヒトおよび／またはマウスホモログのＮＣＢＩ受託番号を含めて、表４に提供する。
【表４】
2018510887.tif 000009
【００７０】
任意選択で、デバイスは、シグナル伝達剤としての機能を果すこともできる接着分子を含有することができる。接着シグナル伝達分子の代表例としては、フィブロネクチン、ラミニン、コラーゲン、トロンボスポンジン１、ビトロネクチン、エラスチン、テネイシン、アグリカン、アグリン、骨シアロタンパク質、軟骨基質タンパク質、フィブリノーゲン（fibronogen）、フィブリン、フィビュリン、ムチン、エンタクチン、オステオポンチン、プラスミノーゲン、レストリクチン（restrictin）、セルグリシン、ＳＰＡＲＣ／オステオネクチン、バーシカン、フォン・ヴィルブランド因子、多糖ヘパリン硫酸、コネキシン、コラーゲン、ＲＧＤ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ）およびＹＩＧＳＲ（Ｔｒｙ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ）ペプチドおよび環状ペプチド、グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）、ヒアルロン酸（ＨＡ）、コンドロイチン−６−硫酸（condroitin-6-sulfate）、インテグリンリガンド、セレクチン、カドヘリン、および免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーが挙げられるが、これらに限定されない。他の例としては、中性細胞接着分子（ＮＣＡＭ）、細胞内接着分子（ＩＣＡＭ）、血管接着分子（ＶＣＡＭ−１）、血小板・内皮細胞接着分子（ＰＥＣＡＭ−１）、Ｌ１、およびＣＨＬ１が挙げられる。本発明のデバイスへの標的細胞の結合を調節する能力を特徴とする接着分子の機能的断片も利用することができる。特に、接着分子は、アミノ酸配列アルギニン−グリシン−アスパラギン酸（ＲＧＤ）を含有するペプチドまたは環状ペプチドを含み、ＲＧＤは、細胞付着リガンドとして公知であり、様々な天然細胞外マトリックス分子において見いだされる。そのような修飾を有するポリマーマトリックスは、本発明の足場に細胞接着特性を与え、細胞増殖および分化を支持するばかりでなく、哺乳動物細胞系の長期生存を維持する。ポリマーマトリックスとカップリングされうる接着分子は、当業者に一般に公知であり、そして本実施例において説明する合成方法を使用して得られる。例えば、Hiranoら、Advanced  Materials、１７〜２５頁（２００４年）；Hermansonら、Bioconjugate  Techniques、１５２〜１８５頁（１９９６年）；MassiaおよびHubbell、J.  Cell  Biol.１１４巻：１０８９〜１１００頁（１９９１年）；Mooneyら、J.  Cell  Phys.１５１巻：４９７〜５０５頁（１９９２年）；およびHansenら、Mol.Biol.Cell  ５巻：９６７〜９７５頁（１９９４年）を参照されたく、前記参考文献の開示は、参照により本明細書に組み込まれている。
【００７１】
標的細胞型に依存して、標的細胞に特異的である接着シグナル伝達分子を利用することは、好ましいことでありうる。したがって、一実施形態では、デバイスは、Ｔ細胞の動員に有用である接着受容体を含有する。他の実施形態では、デバイスは、樹状細胞／マクロファージの動員に有用である接着受容体を含有する。さらに、別の実施形態では、デバイスは、Ｂ細胞の動員に有用である接着受容体を含有する。
【００７２】
これらの実施形態では、デバイスは、Ｔ細胞特異的接着分子、例えば、ＬＦＡ−１、ＭＡｄＣＡＭ−１、ＶＣＡＭ−１、ＣＤ２８およびＣＴＬＡ−４またはそのバリアント、それらの断片、もしくはそれらの組合せからなる群から選択される受容体を含有することができる。そのようなＴ細胞特異的接着分子のヒトおよびマウスホモログの代表例を表５に提供する。
【表５】
2018510887.tif 000010
【００７３】
同様に、ＤＣ／マクロファージまたはＢ細胞を動員するためのデバイスを、ＤＣ／マクロファージまたはＢ細胞に特異的な接着分子を含有するように構成することができる。Ｂ細胞特異的接着分子の代表例としては、例えば、Ｎ−ＣＡＭ（タイプ２）、ラミニンまたはフィブロネクチンなどが挙げられる。マクロファージまたは樹状細胞に特異的である接着分子の代表例としては、例えば、ＩＣＡＭ−１またはＶＣＡＭ−１が挙げられる。必要に応じて、上述の表１〜５からの動員剤および接着分子のサブセットを含有するようにデバイスを特異的に構成することができる。例えば、Ｔ細胞と樹状細胞の両方を動員するためのデバイスを、（ケモカインのリストからの）ＣＣＬ１７とＣＣＬ２２と（接着分子のリストからの）ＶＣＡＭ−１の組合せを含有するように構成することができる。同様に、Ｔリンパ球とＢリンパ球の両方を動員するためのデバイスを、１つまたは複数のインターロイキンおよび／またはサイトカインが任意選択で組み込まれている様々な動員剤および接着分子を選択的に組み込むことによって構成することができる。
ＶＩ．免疫細胞の特異的亜型を動員するためのデバイス
【００７４】
本発明のデバイスは、細胞において発現される細胞表面マーカーと特異的に結合する作用物質を使用することによって細胞の１つまたは複数の亜集団の優先的動員用に構成することもできる。例えば、Ｔ細胞に関して、デバイスをヘルパーＴ細胞（ＴＨ細胞；ＣＤ４＋を鑑別的に発現する）、細胞傷害性Ｔ細胞（Ｔｃ細胞；ＣＤ８＋を鑑別的に発現する）、メモリーＴ細胞（Ｔｍ細胞；ＣＤ４５たＲＯを鑑別的に発現する）、サプレッサーＴ細胞（Ｔｓ細胞）、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ；ＦＯＸＰ３＋Ｔｒｅｇ細胞およびＦＯＸＰ３−Ｔｒｅｇとしてさらに特徴づけられる）、ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫ細胞；ＣＤ１ｄ＋を鑑別的に発現する）、粘膜関連インバリアント（ＭＡＩＴ；ＭＲ１を鑑別的に発現する）、ガンマデルタＴ細胞、（γδＴ細胞；１本のγ鎖および１本のδ鎖を含有するＴＣＲを含む）の優先的動員に適合させることができる。細胞表面マーカーと結合するそのような作用物質としては、例えば、ハプテン、ペプチド、リガンド、抗体などを挙げることができる。単離物を１つまたは複数の細胞亜型に関して濃縮する他の慣用の技法を、任意選択で、ｉｎ  ｓｉｔｕまたはｅｘ  ｓｉｔｕで使用してもよい。
【００７５】
同様に、Ｂ細胞に関して、デバイスを、その中で発現される細胞表面マーカーと選択的に結合する作用物質を使用して特異的Ｂ細胞亜型の優先的動員用に構成することができる。優先的に捕捉されうるＢ細胞亜型の代表例としては、形質芽細胞、形質細胞（ＣＤ２７＋／ＣＤ１３８＋／ＣＤ３１９＋を鑑別的に発現する）、メモリーＢ細胞（Airoldiら、Clin  Cancer  Research、２００４年１０巻；１４４頁に開示されているマーカーの組合せを鑑別的に発現する）、濾胞（ＦＯ）Ｂ細胞（高レベルのＣＤ２３を発現するがＣＤ１またはＣＤ５についてネガティブである）、辺縁帯（ＭＺ）Ｂ細胞（ＣＤ２１、ＣＤ１、ＣＤ９についてポジティブ、しかしＣＤ２３、ＣＤ５およびＣＤ１１ｂについてネガティブ）、Ｂ−１細胞（マーカープロファイル、例えば、ＣＤ２０＋ＣＤ２７＋ＣＤ４３＋ＣＤ７０−を有する）、Ｂ−２細胞（ＦＯ  Ｂ細胞およびＭＺ  Ｂ細胞に類似）、制御性Ｂ（Ｂｒｅｇ）細胞（例えば、マーカープロファイルＣＤ２４＋／ＣＤ３８＋を有する）などが挙げられる。
【００７６】
デバイスを、抗原提示細胞の様々な亜型を優先的に動員するように適合させることもできる。例えば、樹状細胞に関して、デバイスを、形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）と比較して骨髄樹状細胞（ｍＤＣ、発生頻度が高いｍＤＣ−１および発生頻度が低いｍＤＣ−２を含む）の動員に適合させることができ、またはその逆もしかりである。マクロファージに関して、デバイスは、Ｍ２（すなわち、活性化マクロファージ）と比較してＭ１（すなわち、「キラー」マクロファージ）の優先的動員に適合させることができ、またはその逆もしかりである。これら２つの違いは、当技術分野において認知されている。例えば、Ｍ１亜型は、高レベルのＩＬ−１２および低レベルのＩＬ−１０を分泌し、逆のことがＭ２亜型について言える。腫瘍関連マクロファージは、主としてＭ２表現型のものであり、腫瘍増殖を能動的に促進するようである。
【００７７】
デバイスを疾患に特異的である免疫細胞の動員に適合させることもできる。例えば、特定のタイプの自己免疫疾患に特異的である複数のＴ細胞を動員することができる。したがって、一実施形態では、自己免疫障害の診断に有用であるデバイスを、障害に関係づけられる免疫細胞に特異的である動員剤を含有するように構成することができる。そのような動員剤は、例えば、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、サプレッサーＴ細胞（Ｔｓ）またはこれらの組合せに特異的でありうる。関連実施形態では、がんの診断に有用であるデバイスを、がん特異的Ｔ細胞型、例えば、細胞傷害性Ｔ細胞（Ｔｃ）、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ）またはこれらの組合せを優先的に動員するための動員剤を含有するように構成することができる。
【００７８】
ある特定の実施形態では、デバイスは、疾患特異的細胞のパニングに有用である。そのようなデバイスは、例えば、疾患進行を直接促進する細胞を含みうる。多くの自己免疫疾患に関して、疾患は、特異的細胞集団、例えば、Ｔ１Ｄの場合には膵臓のベータ細胞および多発性硬化症の場合には神経細胞の標的化殺滅によって媒介および促進されうる。他の自己免疫疾患の場合、疾患は、特異的エピトープ、例えば、関節リウマチに関してはリウマトイド因子（ＲＦ）およびシトルリン化ペプチド（ＡＣＰＡ）ならびにクローン病に関しては腸内細菌叢に存在する抗原などの標的化攻撃によって誘発されうる。細胞の標的化破壊は、一般に、特定の免疫細胞型または亜型に関わる。したがって、細胞標的の性質および特性に基づいて、それらに特異的である免疫細胞を、本発明のデバイスを使用して優先的に捕捉することができる。
【００７９】
上述の実施形態では、疾患特異的免疫細胞、例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、マクロファージなどが結合する抗原をデバイスに備えさせる。これらの自己免疫細胞を捕捉することができ、任意選択で、非自己免疫表現型に再プログラムすることができる。Ｔ細胞を多能性に再プログラムする方法は、当技術分野において公知である。Nishimuraら、Stem  Cell  １２巻、１１４〜１２６頁（２０１３年）；Themeliら、Nature  Biotechnology  ３１巻、９２８〜９３３頁（２０１３年）を参照されたい。ある特定の事例では、特に、がん特異的Ｔ細胞に関して、再プログラム細胞を、がんを標的とするように若返らせることができる。あるいは、自己免疫疾患に特異的であるＴ細胞に関して、捕捉細胞を排除（身体から除去）または殺滅することができる。
ＶＩＩ．デバイスを製造する／使用する方法
【００８０】
本発明のデバイスは、抗原提示を持続するように設計された多孔性デバイスである。デバイスの代表例を図１Ａおよび１Ｂに示す。図面に示されているように、細孔によってＴ細胞侵入および増殖のためのスペースが確保される。多孔性足場を作製する方法は、当技術分野において説明されている。例えば、米国特許出願公開第２０１１／００２０２１６号、同第２０１３／０２０２７０７号、同第２０１１／００２０２１６号、および米国特許第８，０６７，２３７号を参照されたく、前記特許文献の開示は参照により本明細書に組み込まれている。例えば、（実施例において詳細に説明するような）ガス発泡プロセス（gas  forming  process）を使用してラクチドとグリコリドのコポリマー（ＰＬＧ）でＰＬＧ細胞トラップを生じさせるようにトラップを作製してもよい。抗原をＰＬＧポリマーに、ポリマーの組成物とその抗原をインキュベートすることによって、物理的に吸着させる。あるいは、標準的な二重エマルジョンを使用して、抗原を封入するＰＬＧマイクロスフェアを製造してもよい。次いで、ＰＬＧ−抗原スフェアを凍結させ、そして凍結乾燥させ、そしてポロゲンまたは細孔形成剤と混合し、そして圧縮成形する。得られたディスクを高圧ＣＯ２環境の中で放置して平衡させ、そして圧力を急激に低下させることでポリマー粒子を膨張させ、そして融合させて、連通型足場構造にする。ポロゲンを水への浸漬によって足場から浸出させて、多孔度約９０％である、抗原を含んだ細胞トラップを得る。多孔度は、慣用の方法によって、例えば、ポロゲンの濃度を変えることによって、および／または他のバイオポリマーを足場剤として使用することによって、変更することができる。得られるデバイス多孔度は、４０％〜９９％、好ましくは５０％〜９０％、特に好ましくは６０％〜８０％またはそれ超である。
デバイス埋め込み／取り出し
【００８１】
デバイスは、当技術分野において公知の任意の手段、例えば、静脈内投与、埋め込み、例えば、皮下埋め込み、またはマイクロニードルパッチとしての埋め込み、腹腔内投与、または筋肉内注射によって埋め込むことができる。目的の細胞が多孔性マトリックス中に移動するのに十分である埋め込み期間は、２時間〜数ヶ月、例えば、０．５日、１日、２日、５日、７日、１４日、２５日、３０日、３５日、３８日、４５日、５０日、６０日またはそれ超の日数でありうる。埋め込み期間は、少なくとも１日でもよく、その時間中、体組織への滞留後にデバイスから１×１０９〜１×１０１０個の細胞が蓄積し、そして／または抽出される。
【００８２】
複数のデバイスを対象に埋め込んでもよい。一実施形態では、少なくとも１、少なくとも３、少なくとも１０、少なくとも３０、少なくとも５０、少なくとも１００、少なくとも３００、少なくとも５００、少なくとも１０００、またはそれより多くのデバイスを対象に埋め込む。デバイスの適用は、均質である（例えば、各デバイスが同じ抗原を含有する）こともあり、または変動的である（例えば、複数のデバイスが異なる抗原を含有する）こともある。
【００８３】
デバイスを細胞の単離、特徴付け、分析および／または増殖／再プログラミングのために身体から取り出す必要はない。一実施形態では、インプラントの部位からデバイスを物理的に取り出すことなく細胞を取り出す。一実施形態では、デバイスの周辺にある細胞、例えば、デバイスの半径約１μｍ、約２μｍ、約５μｍ、約１０μｍ、約２０μｍ、約６０μｍ、約１００μｍ、約３００μｍ、約０．５ｍｍ、約１．０ｍｍ、約３．０ｍｍ、５．０ｍｍ、約１０ｍｍ、５０ｍｍなど以内に位置する細胞を取り出すことができ、任意選択で増殖または再プログラムすることができる。細胞を細胞選別技術（ＦＡＣＳもしくはＭＡＣＳ）によって、または分割技術によって、例えばＦＩＣＯＬＬ勾配を使用して精製して、より均質な細胞集団を得ることもできる。別の実施形態では、デバイス上に付着しているか、またはデバイス内に位置する細胞を、デバイスを取り出すことなく、取り出すことができ、任意選択で増殖または再プログラムすることができる。埋め込まれたデバイスから細胞を取り出す方法は、当技術分野において公知である。そのような方法は、例えば、化学的または酵素的処理を含みうる。例えば、低投薬量での異なる種類の界面活性剤の組合せ、例えば、非イオン性界面活性剤（Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００）と陰イオン性界面活性剤（ドデシル硫酸ナトリウム）の組合せは、膜を破壊することができ、インプラントから細胞を取り出すのに役立つことができる。あるいは、結合組織酵素、例えば、コラゲナーゼ、トリプシン、ディスパーゼを使用して、細胞を分離することができる。トラップを繊細な機械的破壊（例えば、乳鉢（mortor）および乳棒（pistal）、または組織のホモジナイズ）に付して、在住細胞の取り出しを増進することもできる。インプラントと生細胞の後の再定着への干渉を回避するために、組織マトリックス内の一切の残留界面活性剤または酵素を排除するためのさらなるステップを行うことができるだろう。同様のアプローチが、参照により組み込まれている米国特許出願公開第２００８／０１３１９６６号に記載されている。
【００８４】
別の実施形態では、デバイスをインプラントの部位から取り出す。当技術分野において公知の任意の方法によってデバイスを取り出すことができる。取り出しに役立つように、デバイスは、そのデバイスを損傷することなくそのデバイスの機械的取り出しを可能にする短いワイヤまたは小さいリップを有することもある。細胞を回収するためにデバイスを部分的に取り出してもよく、または完全に取り出してもよい。
【００８５】
デバイスの取り出し後、捕捉細胞を当技術分野において公知の任意の方法によって、例えば、多孔性マトリックスへの細胞付着を消化することによって回収することができる。これは、例えば、トリプシン含有緩衝液を、デバイスを通して流すことによって果すことができる。その後、捕捉細胞を当技術分野において公知の任意の方法によってデバイスから追い出すことができる。好ましい実施形態では、デバイスは、例えばデバイスを通る陽圧の印加によって裂くことができる膜によって覆われた排出口を有し、それによってデバイスからの捕捉細胞の排出が可能になる。あるいは、細胞が捕捉されている多孔性マトリックスをデバイスから追い出すことができ、その後、当技術分野において公知の任意の方法によって多孔性膜から捕捉細胞を分離することができる。好ましい実施形態では、デバイスは、例えばデバイスを通る陽圧の印加によって裂くことができる膜によって覆われた排出口を有し、それによって細胞が捕捉されている多孔性マトリックスのデバイスからの排出が可能になる。
【００８６】
捕捉細胞をデバイスから回収すると、目的の捕捉細胞を他の捕捉細胞から分離することができる。これは、当技術分野において公知の任意の手段、例えば、捕捉細胞と、他の捕捉細胞上に存在するが目的の捕捉細胞上には存在しない表面マーカーに対する結合パートナーを有するマイクロビーズとを併せることによって、行うことができる。他の捕捉細胞が結合しているマイクロビーズを除去すると、目的の捕捉細胞のみが残る。別の実施形態では、捕捉細胞と、目的の捕捉細胞上に存在するが他の捕捉細胞上には存在しない表面マーカーに対する結合パートナーを有するマイクロビーズとを併せることによって、目的の捕捉細胞を他の捕捉細胞から分離することができる。目的の捕捉細胞はマイクロビーズと結合するので目的の捕捉細胞を取り出すことができる。例えば、Ｔ細胞表面受容体またはマーカーと特異的に結合するが、Ｂ細胞とも、樹状細胞とも、マクロファージとも特異的に結合しない結合パートナーを使用することによって、Ｔ細胞を取り出してもよい。
【００８７】
あるいは、他の侵入細胞と結合することができるが、目的の細胞と結合することができない結合パートナーであって、マイクロビーズと（共有結合により、または非共有結合により）結合させることができる結合パートナーを使用してもよい。例えば、そのような結合パートナーとしては、アプタマー、または好ましくは、結合部位がそのような侵入細胞の表面に存在するが目的の細胞の表面には存在しない細胞表面マーカーに好ましくは特異的である抗体もしくは抗体断片を挙げることができる。あるいは、目的の細胞に特異的である結合パートナーを使用する逆のアプローチを使用してもよい。例えば、目的の捕捉細胞がマクロファージである場合、好ましいマイクロビーズは、マクロファージ特異的細胞表面受容体に特異的な抗体を有する。当業者は、目的の任意の特定の細胞についての結合パートナーまたはその組合せを処方し得る。
【００８８】
アプタマーは、タンパク質または小分子などの特定の標的分子と結合する、一本鎖オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチドアナログである。したがって、アプタマーは、抗体のオリゴヌクレオチドアナログである。ＲＮＡと一本鎖ＤＮＡ、またはＤＮＡアナログ、の両方のアプタマーが公知である。事実上いかなる特定の標的とも結合するアプタマーを、ＳＥＬＥＸ（指数関数的濃縮によるリガンドの系統的進化（Systematic  Evolution  of  Ligands  by  EXponential  enrichment））と呼ばれる半反復プロセスを使用することによって選択することができる。
【００８９】
抗体または抗体断片は、ポリクローナル、モノクローナル、または組換え体でもよく、任意の動物、例えば、齧歯動物もしくはヒト、または動物の混合、例えばヒト化マウスのものでもよい。
【００９０】
任意のタイプのマイクロビーズを使用して、他の捕捉細胞を結合することができる。例えば、マイクロビーズは、目的の捕捉細胞をペレット化しない遠心条件下でペレット化される重い粒子でありうる。あるいは、マイクロビーズは、目的の捕捉細胞をペレット化する遠心条件下でペレット化されない浮遊性粒子でありうる。好ましい実施形態では、マイクロビーズは、磁性ビーズである。
【００９１】
単離された細胞をさらなる分析に付してもよい。そのようなさらなる分析は、細胞の定量、またはｍＲＮＡもしくはタンパク質発現の分析を含みうる。例えば、目的の捕捉細胞を定量して、所与の量の組織中の目的の捕捉細胞の数の近似値を求めて、目的の捕捉細胞の数と他の捕捉細胞の量を比較することができる。目的の捕捉細胞は、当技術分野において公知の任意の方法によって、例えば、顕微鏡観察によって定量することができる。
【００９２】
好ましくは、細胞数測定技術、例えば蛍光標識細胞選別（ＦＡＣＳ）を使用して、捕捉細胞を分析のために分離および／または選別する。これを、上に記載した複数の抗体または他の結合分子、および他の二次的作用物質を使用して果すことができる。当技術分野において公知の方法を使用して捕捉細胞の表現型を決定してもよい。Autissierら、J  Immunol  Methods.３６０巻（１〜２号）：１１９〜１２８頁（２０１０年）を参照されたい。例えば、Ｔ細胞は、ＣＤ４またはＣＤ８などの細胞表面マーカーを特徴とし、この細胞表面マーカーによって識別される。樹状細胞は、ＣＤ１１ｃの発現を特徴とし、この発現によって識別される。マクロファージは、ＣＤ１１ｃおよび／またはＣＤ６８の発現を特徴とし、この発現によって識別される。例示的なマーカー（ポジティブ識別するためおよびまた他の細胞を排除するため両方のもの）としては、ＣＤ１１ｃ（ＤＣを選択するためのもの）、Ｇｒ−１（マクロファージを選択するためのもの）、ＣＤ２０４（マクロファージを選択するためのもの）、ＣＤ１６（単球を選択するため、および非単球細胞、すなわち、単球表現型も細胞表面マーカー表現型も有さない細胞をネガティブ選択する（例えば除外する）ためのもの）、ＣＤ４５（造血細胞、例えば免疫細胞を選択するためのもの）、ＣＤ４９ｂ［ナチュラルキラー（ＮＫ細胞）はもちろん、このマーカーを発現するＴ細胞のサブセットも選択するためのもの］、ＣＤ３（Ｔ細胞を選択するためのもの）、ＣＤ４（Ｔ細胞）、ＣＤ８（Ｔ細胞）、ＣＤ１９およびＢ２２０が挙げられる。
【００９３】
一部の好ましい実施形態では、目的の捕捉細胞におけるｍＲＮＡまたはタンパク質発現を決定する。例えば、捕捉細胞のＴ細胞およびＢ細胞受容体をシークエンシングして、自己免疫に対する疾患および薬物標的の抗原特異性を識別することができる。関連実施形態では、その後、目的の捕捉細胞のｍＲＮＡまたはタンパク質発現を、他の対象からの他の細胞型または同一細胞における同じ遺伝子（単数もしくは複数）の発現と比較することができる。１つより多くの遺伝子のｍＲＮＡまたはタンパク質発現の分析が所望される場合、マイクロアレイ技術を利用することができる。この十分に確証されている技術は、多くの遺伝子のｍＲＮＡまたはタンパク質発現パターンを同時に分析することができ、その結果、例えば、目的の捕捉細胞の全ゲノムと他の細胞の全ゲノムとの比較が可能になる。デバイスから回収される生体材料の量が分析に不十分である場合には、遺伝子発現の決定前に目的の捕捉細胞からのｍＲＮＡを増殖することができる。そのような増殖は、当技術分野において公知の任意の方法によって、例えば、逆転写およびｃＤＮＡ増幅によって行うことができる。
抗原特異的細胞
【００９４】
一部の実施形態では、診断または治療上の使用に好適である組成物を製剤化するために抗原特異的捕捉細胞またはそれらの亜集団（例えば、抗原特異的Ｔ細胞またはＢ細胞）を操作する。操作の例としては、例えば、活性化、分裂、分化、成長、増殖、再プログラミング、アネルギー、静止、老化、アポトーシスまたは殺滅が挙げられる。細胞を操作するためにデバイスから物理的に取り出す必要はない。したがって、一実施形態では、細胞をｉｎ  ｓｉｔｕで（例えば、インプラント部位でまたは近傍で）操作する。他の実施形態では、細胞をｅｘ  ｓｉｔｕで（例えば、インプラントとは異なる部位で）操作する。
【００９５】
一部の実施形態では、複数の抗原を任意選択で抗原提示細胞（またはそのようなＡＰＣを誘引する抗原）とともに含有するデバイスを提供することによって、抗原特異的細胞、例えばＴ細胞をｉｎ  ｓｉｔｕで操作する（例えば、活性化し、そして／または増殖させる）。他の実施形態では、細胞培養で、任意選択で抗原提示細胞と一緒に抗原（例えば、自己免疫抗原）とインキュベートすることによって、抗原特異的細胞を操作する。活性化されると、細胞は、多くの遺伝子産物の転写および発現に至る複雑な細胞シグナル伝達カスケードを経る。所望の抗原特異性を有する細胞を識別および単離するために、活性化細胞に特異的な遺伝子産物をさらに分析してもよい。
（ａ）Ｔ細胞
【００９６】
本明細書に記載する実施形態は、抗原特異的Ｔ細胞をｅｘ  ｓｉｔｕで操作する方法に関する。本明細書に記載するこの技法をｉｎ  ｓｉｔｕでのプロセス実施用に変更することができることを特筆しておく。Ｔ細胞を含む試料を特定の抗原とともにインキュベートし、これに起因して、目的の抗原に特異的なＴ細胞の活性化が生ずる。Ｔ細胞含有試料を抗原とともに約１日〜約７日間インキュベートしてもよい。その後、上で説明したように活性化されたＴ細胞の遺伝子産物を発現するＴ細胞を選択することによって、抗原特異的Ｔ細胞を単離する。目的の抗原は、自己抗原、もしくは非自己抗原、またはそれらの断片である可能性がある。目的の抗原は、目的の２つまたはそれより多くの個々の抗原の組合せであることもある。
【００９７】
活性化Ｔ細胞を識別またはネガティブ選択するための遺伝子産物は、細胞表面マーカーもしくはサイトカイン、またはそれらの組合せであることがある。活性化Ｔ細胞を識別するための細胞表面マーカーとしては、ＣＤ６９、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２８およびＣＤ１３４が挙げられるが、これらに限定されない。ＣＤ６９は、ＢおよびＴリンパ球、ＮＫ細胞ならびに顆粒球上で見いだされる早期活性化マーカーである。ＣＤ２５は、ＩＬ−２受容体であり、活性化Ｔ細胞およびＢ細胞のマーカーである。ＣＤ４は、ＴＣＲ共受容体であり、胸腺細胞（thymocte）、ＴＨ１型およびＴＨ２型Ｔ細胞、単球ならびにマクロファージのマーカーである。ＣＤ８もＴＣＲ共受容体であり、細胞傷害性Ｔ細胞のマーカーである。ＣＤ１３４は、活性化ＣＤ４＋Ｔ細胞でしか発現されない。
【００９８】
活性化Ｔ細胞をネガティブ選択するための細胞表面マーカーとしては、ＣＤ３６、ＣＤ４０、およびＣＤ４４が挙げられるが、これらに限定されない。ＣＤ２８は、Ｔ細胞受容体経路とは無関係の刺激性Ｔ細胞活性化経路として作用し、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋細胞上で発現される。ＣＤ３６は、膜糖タンパク質であり、血小板、単球および内皮細胞のマーカーである。ＣＤ４０は、Ｂ細胞、マクロファージおよび樹状細胞のマーカーである。ＣＤ４４は、マクロファージおよび他の貪食細胞のマーカーである。Ｔ細胞のサブセットは、ヘルパーＴ細胞または細胞傷害性Ｔ細胞（例えば、ＣＤ８に対してＣＤ４）の細胞表面遺伝子産物の発現についてのポジティブ選択、ネガティブ選択、またはこれらの組合せを使用することによって単離することができる。本発明の活性化Ｔ細胞を識別するためのサイトカインには、ＴＨ１型Ｔ細胞（細胞媒介応答）およびＴＨ２型Ｔ細胞（抗体応答）によって産生されるサイトカインが含まれるが、これらに限定されない。活性化ＴＨ１型Ｔ細胞を識別するためのサイトカインとしては、ＩＬ−２、ガンマインターフェロン（γＩＦＮ）および組織壊死因子アルファ（ＴＮＦα）が挙げられるが、これらに限定されない。活性化ＴＨ２型Ｔ細胞を識別するためのサイトカインとしては、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１０およびＩＬ−１３が挙げられるが、これらに限定されない。Ｔ細胞のサブセットは、ヘルパーＴ細胞または細胞傷害性Ｔ細胞（例えば、ＩＬ４に対してγＩＦＮ）のサイトカイン遺伝子産物の発現についてのポジティブ選択、ネガティブ選択、またはこれらの組合せを使用することによって単離することもできる。
【００９９】
目的の抗原に特異的な活性化ＴＨ１型Ｔ細胞は、ＣＤ６９、ＣＤ４、ＣＤ２５、ＩＬ−２、ＩＦＮγ、ＴＮＦαまたはこれらの組合せを発現する細胞を識別することによって単離することができる。目的の抗原に特異的な活性化ＴＨ１型Ｔ細胞は、ＩＦＮγまたはＴＮＦαと一緒にＣＤ６９およびＣＤ４を発現する細胞を識別することによって単離することもできる。目的の抗原に特異的な活性化ＴＨ２型Ｔ細胞は、ＣＤ６９、ＣＤ４、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３またはこれらの組合せを発現する細胞を識別することによって単離することができる。目的の抗原に特異的な活性化ＴＨ１型Ｔ細胞とＴＨ２型Ｔ細胞の組合せは、ＣＤ６９、ＣＤ４、ＣＤ２５、ＩＬ−２、ＩＦＮγ、ＴＮＦαまたはこれらの組合せを発現する細胞、およびＣＤ６９、ＣＤ４、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３またはこれらの組合せを発現する細胞を識別することによって単離することができる。
【０１００】
本発明の活性化Ｔ細胞のポジティブまたはネガティブ選択に使用される遺伝子産物は、蛍光標識細胞選別（ＦＡＣＳ）、磁気細胞選別、パニングおよびクロマトグラフィーを含むがこれらに限定されない、抗体を利用する当業者に公知の免疫選択技術によって識別することができる。活性化Ｔ細胞上の２つまたはそれより多くのマーカーの免疫選択は、各ステップによって１つまたは複数のマーカーがポジティブ選択またはネガティブ選択される１または複数のステップで行うことができる。ＦＡＣＳを使用して１ステップで２つまたはそれより多くのマーカーの免疫選択を行う場合、２つまたはそれより多くの異なる抗体を異なるフルオロフォアで標識することができる。あるいは、上で説明したように、マイクロビーズを使用して細胞を選別することができる。
【０１０１】
細胞表面発現遺伝子産物については、抗体をその遺伝子産物と直接結合させることができ、細胞選択に使用することができる。低濃度で発現される細胞表面遺伝子産物については、磁気蛍光リポソームを細胞選択に使用することができる。低い発現レベルでの従来の蛍光標識抗体は、細胞表面発現遺伝子産物の存在を検出するために十分な感受性がないことがある。目的の特異性を有する抗体にフルオロフォア含有リポソームをコンジュゲートすることによって細胞表面マーカーの検出を可能にすることができる。
【０１０２】
サイトカインなどの細胞内遺伝子産物については、細胞を透過処理した後、抗体を使用することができる。あるいは、透過処理による細胞の殺滅を回避するために、細胞内遺伝子産物を、それが最終的に細胞から分泌される場合、それが細胞膜を通って分泌されるときに細胞表面の「捕獲」抗体を使用して検出することができる。捕獲抗体は、（ｉ）目的の分泌遺伝子産物および（ｉｉ）細胞表面タンパク質という２つの異なる抗原に特異的である、二重抗体でありうる。細胞表面タンパク質は、特にＴ細胞または一般にリンパ球上に存在する、任意の表面マーカー（例えば、ＣＤ４５）でありうる。捕獲抗体は、先ず細胞表面タンパク質と結合し、次いで、目的の細胞内遺伝子産物が膜を通って分泌されるとその遺伝子産物と結合することによって、細胞表面に遺伝子産物を保持することができる。その後、捕捉遺伝子産物に特異的な標識抗体を使用して捕捉遺伝子産物と結合することができ、それによって活性化Ｔ細胞の選択が可能になる。ある特定の形態のサイトカインが低濃度で細胞表面において発現されることも判明した。例えば、γＩＦＮは、低濃度で細胞表面において細胞内γＩＦＮ発現のものと同様の動態で提示される（Assenmacherら、Eur  J.  Immunol、１９９６年、２６巻：２６３〜２６７頁）。細胞表面で発現されるサイトカインの形態については、従来の蛍光標識抗体またはフルオロフォア含有リポソームを目的のサイトカインの検出に使用することができる。当業者は、活性化Ｔ細胞に特異的な細胞外および細胞内遺伝子産物を検出および選択する他の技法を認識し得る。
【０１０３】
本発明によって単離されるＴ細胞は、全血から少なくとも４０％〜９０％濃縮されうる。Ｔ細胞は、全血から少なくとも９５％濃縮されることもある。Ｔ細胞は、全血から少なくとも９８％濃縮されることもある。Ｔ細胞は、全血から少なくとも９９．５％濃縮されることもある。同様の方法をＢ細胞のｉｎ  ｓｉｔｕまたはｅｘ  ｓｉｔｕ操作で使用することができる。
（ｂ）Ｂ細胞
【０１０４】
抗原特異的Ｂ細胞は、上述の方法をほんの少し変えたものを使用して得ることができる。例えば、ＤＹＮＡＢＥＡＤ−Ｍ−４５０を使用して疾患特異的抗原とカップリングさせることができ、次いでそれを、本発明のデバイスで捕捉された細胞を含有する組成物とともにインキュベートする。任意選択で、捕捉細胞をスクリーニングプロセスに付して、例えば、Ｂ細胞に特異的である細胞表面マーカーと結合する作用物質を使用して、試料を濃縮することができる。次いで、Ｂ細胞を抗原とカップリングしたＤＹＮＡＢＥＡＤＳとともにインキュベートし、約７〜１０日間培養してロゼット細胞を生じさせる。分泌された抗体を、例えば、疾患特異的抗原と結合するそれらの能力に基づいて分析することによって、ロゼット細胞を任意選択で分類する。ポジティブと識別されるクローンを、慣用の技法を使用してハイブリドーマを産生するように形質転換することができる。
【０１０５】
本明細書に記載する実施形態は、目的の抗原に特異的である単離された細胞にさらに関し、これらの細胞は、上で説明した方法によって単離される。単離された細胞は、モノクローナル細胞であることもあり、またはポリクローナル抗原特異的免疫細胞、例えば抗原特異的Ｔ細胞であることもある。
【０１０６】
本発明の実施形態は、本発明のデバイス内に捕捉された免疫細胞の数を決定することによって抗原特異的免疫細胞の相対頻度を決定する方法にさらに関する。好ましくは、抗原特異的免疫細胞は、Ｔ細胞またはＢ細胞である。特に好ましくは、抗原特異的免疫細胞は、Ｔ細胞である。
疾患／障害の診断
【０１０７】
本明細書に記載する実施形態は、対象の疾患または障害を検出または診断する方法にさらに関する。一実施形態では、疾患は、がんである。別の実施形態では、疾患は、自己免疫障害である。第３の実施形態では、疾患は、病原性疾患である。
【０１０８】
これらの実施形態では、疾患を有する対象を、デバイス内の抗原が疾患に特異的である本発明のデバイスを対象に先ず投与することによって診断することができる。その後、デバイスを、ある期間、例えば、０．５日、１日、２日、５日、７日、１４日、２５日、３０日、３５日、３８日、４５日、５０日、６０日またはそれより長い期間、対象体内に留まらせ、上述の技法の１つまたは複数を使用してデバイスに収容された細胞を分析する。例えば、自己免疫疾患に関して、分析される細胞は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、抗原提示細胞、またはこれらの組合せを含みうる。がん診断に関して、分析される細胞は、Ｔ細胞またはＢ細胞を含みうる（my  include）。病原性疾患に関して、分析される細胞は、抗原提示細胞を含みうる。
【０１０９】
分析ステップは、任意の慣用の方法を使用して行うことができる。したがって、一実施形態では、分析ステップは、自己免疫疾患に特異的である免疫細胞の数を決定することを含みうる。任意の慣用の技法を使用して、例えば、抗原をコーティングした表面に細胞試料を担持し、特異的に結合していない細胞を洗い流し、検出剤（例えば、抗原特異的細胞上に位置する細胞表面エピトープと結合する抗体）を使用して抗原特異的細胞（結合細胞を放出することによって遊離形態であるか、または結合形態である）の数を定量して、免疫細胞の抗原結合特異性を決定することができる。別の実施形態では、分析ステップは、抗原特異的免疫細胞の物理的または生物学的特性の決定を含みうる。物理的特性の例としては、例えば、サイズ、形状、反射率、形態、密度が挙げられる。生物学的特性の例としては、例えば、特定の細胞表面マーカーの発現、サイトカインの分泌、特定の抗原または作用物質に対する反応性、遺伝子発現パターンが挙げられる。
【０１１０】
分析ステップを、分析ステップの結果を目的のパラメータと相関させる相関ステップと結びつけることができる。パラメータの代表的なタイプとしては、存在（または疾患の非存在）、疾患のタイプ（例えば、攻撃型対非攻撃型自己免疫障害（aggressive  vs.  non-aggressive  autoimmune  disorder）；ドラッガブル対ノンドラッガブル疾患（druggable  vs.  non-druggable  disease）、例えば、抗生物質感受性対抗生物質耐性細菌感染症、免疫療法抵抗性対免疫療法感受性のがん）、病期、疾患の（経時的な）進行／退行などが挙げられる。一実施形態では、パラメータは、（二値項で表わすことができる）疾患の存在または非存在に関する。別の実施形態では、パラメータは、（名義尺度、例えば、ステージＩ〜ＩＶ（ステージＩＶが最高である）で表わすことができる）疾患の病期分類に関する。さらに別の実施形態では、パラメータは、疾患発生のオッズまたは尤度、例えば、最小２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、２倍、３倍、５倍、１０倍、２０倍またはそれ超に関する。
【０１１１】
上述の診断方法では、パラメータをベースライン値と比較することがある。ベースライン値は、例えば健常対象集団で、予め定められている値でありうる。例えば、目的の抗原が関節リウマチ（ＲＡ）抗原である場合、健常対象のＲＡ特異的抗体（またはＴ細胞）のベースラインレベルを相関ステップで使用することができる。あるいは、好適な対照、例えば、足場のみを含有するデバイス（すわち、抗原、動員剤もしくは両方についてネガティブ）または無作為もしくは非疾患特異的抗原を含有するデバイスを使用して、ベースライン値を実験的に識別することができる。当業者は、慣用の技法を使用して、様々な対象群間の相関関係を示し、そして／または推論結果を導くことができる。
【０１１２】
例えば、一実施形態では、疾患特異的抗原（例えば、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｏｖｉｓに由来するＭＢＰ７０）を含有するデバイスを、病原体に曝露された疑いがある対象群、および健常（または無作為）対象群に、所与の期間（例えば、２週間）埋め込む。別途、各群の少数の対象に（無作為または非ＭＢＰ抗原を含有する）対照デバイスを与える。デバイスを外植し、実験群（例えば、ＭＢＰ７０＋デバイスが埋め込まれた疑わしい群）および対照群における抗原特異的Ｔ細胞の数を測定し、比較する。疑わしい群から回収したデバイスにおいて対照群から回収したものより（例えば、統計的有意性の点で）多い抗原特異的Ｔ細胞が検出された場合、陽性診断を下す。加えて、その診断に依存して、疑わしい群を治療剤で処置することができる。処置される対象における抗原特異的Ｔ細胞の数を経時的に比較することができ、健常対象に存在するものと比較することもできる。これらの結果に基づいて、研究者は、治療の有効性に関して推論することができるだろうし、疾患の治療による進行／退行を経時的にモニターすることもできるだろう。同様のプロトコルをがん患者および自己免疫疾患に罹患している対象の診断、モニタリングおよび管理に使用することができる。
【０１１３】
対象は、動物、好ましくは哺乳類または鳥類である。特に好ましくは、対象は、ヒト、イヌ、ネコ、ブタ、ウシ、水牛およびウマからなる群から選択される。最も好ましくは、対象はヒトである。
【０１１４】
いずれの免疫細胞を疾患または障害の診断に使用してもよい。好ましくは、リンパ球、例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞もしくはＡＰＣ、例えばマクロファージ、またはこれらの組合せを用いて診断を行う。診断にＴ細胞を使用することは特に好ましい。
【０１１５】
上述の方法を使用していずれの疾患または障害を検出してもよい。特に好ましくは、疾患は、関節リウマチ、狼瘡、セリアック病、炎症性腸疾患またはクローン病、シェーグレン症候群、リウマチ性多発筋痛、多発性硬化症、強直性脊椎炎、１型糖尿病、円形脱毛症、血管炎、側頭動脈炎などからなる群から選択される自己免疫疾患である。他の実施形態では、疾患は、頭頸部がん、乳がん、膵臓がん、前立腺がん、腎がん、食道がん、骨がん、精巣がん、子宮頸がん、胃腸がん、膠芽腫、白血病、リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、肺の前新生物性病変、結腸がん、黒色腫および膀胱がんからなる群から選択されるがんである。
【０１１６】
さらに別の実施形態では、疾患は、細菌性疾患、ウイルス性疾患および真菌性疾患からなる群から選択される病原性疾患またはこれらの組合せである。
【０１１７】
したがって、本発明の実施形態は、自己免疫疾患、がん疾患または病原性疾患に特異的である抗原を含有する本発明のデバイスを投与すること、およびそのデバイス内に収容された免疫細胞を分析することによる、対象の自己免疫疾患、がんまたは病原性疾患の検出または診断に関する。免疫細胞を回収するために任意選択でデバイスを外植してもよい。検出／分析ステップをｉｎ  ｓｉｔｕで実施することが可能であることもある。
【０１１８】
関連実施形態は、対象の疾患の進行をモニターする方法に関する。この方法は、疾患に特異的である抗原を含有する本発明のデバイスを対象に投与するステップ、およびそのデバイス内に収容された免疫細胞を分析するステップを含む。デバイス内に捕捉された免疫細胞の数／型は、疾患の進行に関して重要な手がかりを提供することができる。あるいは、対象が治療的介入を受けた場合、類似の方法を使用して疾患の治療および／または疾患管理をモニターすることができる。
【０１１９】
上述の方法を使用して、自己免疫障害、がん、病原性疾患などの進行／治療をモニターすることができる。好ましくは、診断方法で使用される免疫細胞は、Ｔ細胞またはＢ細胞である。
【０１２０】
自己免疫障害に関して、疾患の進行は、自己反応性Ｔ細胞の数および／または型を分析することによってモニターすることができる。分析の結果に依存して、症状の重症度を最小にするように介入および／治療方法を計画することができる。他の場合、食事、栄養および／または他の生活習慣変更に関する提言を対象に行うことを含む予防的方法を行うことができる。
疾患の治療のための新規組成物およびワクチンの生産
【０１２１】
本明細書に記載する実施形態は、疾患を処置するための新規組成物を考案および生産する方法にさらに関する。この方法は、疾患特異的抗原を含有する本発明のデバイスを対象に投与するステップであって、続いてこれが疾患に特異的である免疫細胞を捕捉するステップ、任意選択で、デバイス内に捕捉された免疫細胞を単離、濃縮および増殖するステップ、およびその後、免疫細胞を対象に投与して戻すステップを含む。あるいは、そのような免疫細胞に由来する産物を対象に投与することができる。免疫細胞に由来する産物の例としては、核酸（そのような核酸を含有するベクターおよび細胞を含む）、ペプチド、タンパク質、抗体、サイトカインなどが挙げられる。
【０１２２】
好ましくは、疾患は、自己免疫疾患である。この実施形態のもとで、上述の方法によって単離された（および任意選択で、本明細書に記載するように培養で増殖された）自己反応性Ｔ細胞をｉｎ  ｓｉｔｕまたはｅｘ  ｓｉｔｕで不活性化することができる。Ｔ細胞を不活性化する方法は、当技術分野において公知である。例としては、化学的不活性化または照射が挙げられるが、これらに限定されない。自己反応性Ｔ細胞を、不活性化前または後のどちらかに、凍結保存を含むがこれに限定されない当業者に公知の多数の技法を使用して保存することができる。下で説明するように、自己免疫患者の自己反応性Ｔ細胞を枯渇させるためにワクチンとしてこの組成物を使用することができる。
【０１２３】
一実施形態では、ワクチンは、Ｖβ−Ｄβ−Ｊβ遺伝子使用の均質な（「モノクローナル」）または不均質な（「ポリクローナル」）パターンを含む自己反応性Ｔ細胞を含みうる。臨床研究は、自家モノクローナルＴ細胞の接種を受けた自己免疫患者が自己反応性Ｔ細胞に対する免疫の漸減を示しうることを示す。場合によっては、再出現する自己反応性Ｔ細胞は、異なるクローン集団が起源であることがあり、これは、Ｔ細胞が、進行中の疾患過程に関連する、クローンシフトまたはエピトープ拡大を被ることがあることを示唆している。クローンシフトまたはエピトープ拡大は、自己反応性Ｔ細胞によって媒介される自己免疫疾患では問題でありうる。複数の自己免疫性Ｔ細胞集団を枯渇することができるポリクローナル自己反応性Ｔ細胞を含むワクチンは、クローンシフトまたはエピトープ拡大に伴う問題を回避することができる。
【０１２４】
本明細書に記載する実施形態は、上述の方法によって生産される組成物およびワクチンにさらに関する。組成物は、当技術分野において周知の方法を使用して生産することができる医薬組成物でありうる。当業者は、疾患または障害の処置において前臨床および臨床治療として使用される医薬組成物を、認知されている診断および処置原理を利用して生産することができる。
疾患の治療
【０１２５】
本明細書に記載する実施形態は、対象の疾患または障害を処置する方法にさらに関する。一実施形態では、疾患は、がんである。別の実施形態では、疾患は、自己免疫障害である。第３の実施形態では、疾患は、病原性疾患である。
【０１２６】
これらの実施形態では、疾患を有する対象を、デバイス内の抗原が疾患に特異的である本発明のデバイスを対象に先ず投与することによって処置することができる。その後、デバイスを、ある期間、例えば、０．５日、１日、２日、５日、７日、１４日、２５日、３０日、３５日、３８日、４５日、５０日、６０日またはそれより長い期間、対象体内に留まらせ、上述の技法の１つまたは複数を使用してデバイスに収容された細胞を操作する。例えば、自己免疫疾患に関して、操作される細胞は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、抗原提示細胞、またはこれらの組合せを含みうる。がん処置に関して、操作される細胞は、Ｔ細胞またはＢ細胞を含みうる。病原性疾患に関して、操作される細胞は、抗原提示細胞を含みうる。操作の例としては、例えば、活性化、分裂、分化、成長、増殖、再プログラミング、アネルギー、静止、老化、アポトーシス、殺滅などが挙げられる。細胞を操作するためにデバイスから物理的に取り出す必要はない。したがって、一実施形態では、細胞をｉｎ  ｓｉｔｕで（例えば、インプラント部位でまたは近傍で）操作する。他の実施形態では、細胞をｅｘ  ｓｉｔｕで（例えば、インプラント部位とは異なる部位で）操作する。
【０１２７】
したがって、本発明の実施形態は、対象のがんを処置する方法を提供する。この方法は、複数の抗原ががんに特異的である本発明のデバイスを対象に投与するステップ、デバイス内に捕捉された複数の免疫細胞を収集するステップであって、複数の免疫細胞が複数の抗原に特異的であるステップ、および複数の免疫細胞またはそれらに由来する産物を対象に投与することによってがんを処置するステップを含む。
【０１２８】
がん抗原の代表例としては、ＭＡＧＥ−１、ＭＡＧＥ−２、ＭＡＧＥ−３、ＣＥＡ、チロシナーゼ、ミッドカイン、ＢＡＧＥ、ＣＡＳＰ−８、β−カテニン、β−カテニン、γ−カテニン、ＣＡ−１２５、ＣＤＫ−１、ＣＤＫ４、ＥＳＯ−１、ｇｐ７５、ｇｐ１００、ＭＡＲＴ−１、ＭＵＣ−１、ＭＵＭ−１、ｐ５３、ＰＡＰ、ＰＳＡ、ＰＳＭＡ、ｒａｓ、ｔｒｐ−１、ＨＥＲ−２、ＴＲＰ−１、ＴＲＰ−２、ＩＬ１３Ｒアルファ、ＩＬ１３Ｒアルファ２、ＡＩＭ−２、ＡＩＭ−３、ＮＹ−ＥＳＯ−１、Ｃ９ｏｒｆ１１２、ＳＡＲＴ１、ＳＡＲＴ２、ＳＡＲＴ３、ＢＲＡＰ、ＲＴＮ４、ＧＬＥＡ２、ＴＮＫＳ２、ＫＩＡＡ０３７６、ＩＮＧ４、ＨＳＰＨ１、Ｃ１３ｏｒｆ２４、ＲＢＰＳＵＨ、Ｃ６ｏｒｆ１５３、ＮＫＴＲ、ＮＳＥＰ１、Ｕ２ＡＦ１Ｌ、ＣＹＮＬ２、ＴＰＲ、ＳＯＸ２、ＧＯＬＧＡ、ＢＭＩ１、ＣＯＸ−２、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＺＨ２、ＬＩＣＡＭ、Ｌｉｖｉｎ、Ｌｉｖｉｎβ、ＭＲＰ−３、Ｎｅｓｔｉｎ、ＯＬＩＧ２、ＡＲＴ１、ＡＲＴ４、Ｂ−サイクリン、Ｇｌｉ１、Ｃａｖ−１、カテプシンＢ、ＣＤ７４、Ｅ−カドヘリン、ＥｐｈＡ２／Ｅｃｋ、Ｆｒａ−１／Ｆｏｓｌ  １、ＧＡＧＥ−１、ガングリオシド／ＧＤ２、ＧｎＴ−Ｖ、β１，６−Ｎ、Ｋｉ６７、Ｋｕ７０／８０、ＰＲＯＸ１、ＰＳＣＡ、ＳＯＸ１０、ＳＯＸ１１、サバイビン、ＵＰＡＲ、ＷＴ−１、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰＩＶ）、アデノシンデアミナーゼ結合タンパク質（ＡＤ  Ａｂｐ）、シクロフィリンｂ、結腸直腸関連抗原（ＣＲＣ）−Ｃ０１７−１Ａ／ＧＡ７３３、Ｔ細胞受容体／ＣＤ３−ゼータ鎖、腫瘍抗原のＧＡＧＥファミリー、ＲＡＧＥ、ＬＡＧＥ−Ｉ、ＮＡＧ、ＧｎＴ−Ｖ、ＲＣＡＳｌ、α−フェトプロテイン、ｐｌ２０ｃｔｎ、Ｐｍｅｌ１１７、ＰＲＡＭＥ、脳グリコーゲンホスホリラーゼ、ＳＳＸ−Ｉ、ＳＳＸ−２（ＨＯＭ−ＭＥＬ−４０）、ＳＳＸ−Ｉ、ＳＳＸ−４、ＳＳＸ−５、ＳＣＰ−Ｉ、ＣＴ−７、ｃｄｃ２７、大腸腺腫症タンパク質（ＡＰＣ）、フォドリン、ＰｌＡ、コネキシン３７、Ｉｇ−イディオタイプ、ｐｌ５、ＧＭ２、ＧＤ２ガングリオシド、腫瘍抗原のＳｍａｄファミリー、ｌｍｐ−１、ＥＢＶコード化核抗原（ＥＢＮＡ）−Ｉ、ＵＬ１６結合タンパク質様転写物１（Ｍｕｌｔ１）、ＲＡＥ−１タンパク質、Ｈ６０、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、およびｃ−ｅｒｂＢ−２、またはこれらの免疫原性ペプチド、ならびにそれらの組合せが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１２９】
好ましくは、免疫細胞は、上述の抗原の１つまたは複数と特異性をもって結合するＴ細胞またはＢ細胞である。本発明のがん治療方法の実施に有用である細胞産物には、例えば、全細胞を含めて、Ｂ細胞のハイブリドーマ、安定したＴ細胞系、Ｂ細胞またはそれらのハイブリドーマに由来する抗体、がん抗原と結合する受容体（抗原を提示するＭＨＣ分子と結合する受容体）（それらの断片を含む）、受容体またはそれらの抗原結合ドメインをコードする核酸、抗体をコードする核酸が含まれる。
【０１３０】
本発明の実施形態は、対象の病原性疾患を処置する方法を提供する。この方法は、複数の抗原が病原性疾患に特異的である本発明のデバイスを対象に投与するステップ、デバイス内に捕捉された複数の免疫細胞を収集するステップであって、複数の免疫細胞が複数の抗原に特異的であるステップ、および複数の免疫細胞またはそれらに由来する産物を対象に投与することによって病原性疾患を処置するステップを含む。場合によっては、免疫細胞またはそれらに由来する組成物を予防的に、例えば、対象の疾患症状の発症前に投与してもよい。
【０１３１】
上述の実施形態に従って処置することができる病原性疾患は、細菌性疾患、ウイルス性疾患、真菌性疾患、またはこれらの組合せを含む。
【０１３２】
本発明の病原性疾患の処置に有用である細胞産物には、例えば、全細胞を含めて、Ｂ細胞のハイブリドーマ、安定したＴ細胞系、Ｂ細胞またはそれらのハイブリドーマに由来する抗体、病原性抗原と結合する受容体（および／または病原性抗原を提示するＭＨＣ分子と結合する受容体）、そのような抗体または受容体の断片、受容体、抗体またはそれらの抗原結合ドメインをコードする核酸が含まれる。
【０１３３】
本発明の実施形態は、対象の自己免疫疾患を処置する方法を提供する。この方法は、複数の抗原が自己免疫疾患に特異的である本発明のデバイスを対象に投与するステップ、デバイス内に捕捉された複数の免疫細胞を収集するステップであって、複数の免疫細胞が複数の抗原に特異的であるステップ、および複数の免疫細胞またはそれらの制御因子を対象に投与することによって自己免疫疾患を処置するステップを含む。
【０１３４】
自己免疫疾患に関して、活性免疫細胞ではなく（これらは自己反応性であるので）、むしろ静止、老化または不活性化免疫細胞を投与するほうが好ましいこともある。好ましくは、免疫細胞は、Ｔ細胞である。あるいは、免疫細胞の制御因子を投与してもよい。そのような制御因子としては、例えば、サプレッサーＴ細胞または制御性Ｔ細胞を挙げることができる。
【０１３５】
したがって、一部の実施形態では、本発明は、デバイス内の複数の抗原が自己免疫疾患に特異的である本発明のデバイスを、それを必要とする対象に投与するステップ、デバイス内に捕捉された複数の制御性またはサプレッサーＴ細胞を収集するステップであって、複数の制御性またはサプレッサーＴ細胞が抗原に特異的であるステップ、および複数の制御性Ｔ細胞もしくはサプレッサーＴ細胞またはそれらに由来する産物を対象に投与することによって自己免疫疾患を処置するステップによって、自己免疫疾患を処置する方法を提供する。
【０１３６】
自己免疫疾患の治療の実施に有用である細胞産物には、例えば、自己反応性細胞と結合する抗体および受容体、サプレッサーまたは制御性Ｔ細胞内に位置する制御タンパク質が、そのような分子をコードする核酸配列を含めて、含まれる。
【０１３７】
上で説明した治療実施形態では、約５×１０２細胞／ｍｌ〜約１×１０９細胞／ｍｌを含む全細胞濃度で細胞を製剤化することができる。Ｔ細胞の好ましい用量は、約２×１０６細胞〜約９×１０７細胞の範囲である。
【０１３８】
本発明の実施形態は、上述の組成物の１つまたは複数を投与することによる疾患の治療にさらに関する。組成物は、それらの所与の目的を果す任意の手段によって投与される医薬組成物でありうる。例えば、投与は、非経口、皮下、静脈内、動脈内、皮内、筋肉内、腹腔内、経皮、経粘膜、脳内、髄腔内または脳室内経路によってもよい。あるいは、または同時に、投与は、経口経路によってもよい。医薬組成物をボーラス注入によってまたは長期にわたる漸次灌流によって非経口投与してもよい。
【０１３９】
投与される投薬量は、レシピエントの年齢、性別、健康状態および体重、もしあれば併用処置の種類、処置の頻度、ならびに所望される効果の性質に依存しうる。医薬組成物の投与の用量範囲は、例えば、自己反応性Ｔ細胞が枯渇され、そして／または自己免疫疾患が有意に予防、抑制もしくは処置される、所望の効果を生じさせるのに十分な大きさでありうる。用量は、望ましくない交差反応、全身性免疫抑制、アナフィラキシー反応などのような有害副作用を引き起こすほど大きくてはならない。
疾患に関連する免疫細胞のレパートリーの決定
【０１４０】
本明細書において開示する実施形態は、疾患に罹患している対象における１つもしくは複数の免疫細胞受容体、またはその部分、をコードする核酸のレパートリーを決定する方法にさらに関する。方法は、本発明のデバイスによって捕捉された細胞から得られる１つまたは複数の免疫細胞受容体をコードする核酸を増幅させるステップを含む。好ましくは、免疫細胞は、Ｔ細胞またはＢ細胞であり、免疫細胞受容体は、それぞれ、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）およびＢ細胞受容体（ＢＣＲ）である。全細胞可溶化物から標的核酸構築物を標的化および増幅する方法は、当技術分野において公知である。参照によって組み込まれているMaryanskiら、Immunity、４巻、４７〜５５頁、１９９６年を参照されたい。
【０１４１】
これらの実施形態では、対象は、Ｉ型糖尿病、多発性硬化症、関節リウマチ（ＲＡ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）もしくはクローン病（ＣＤ）、またはおよび他の胃腸自己免疫状態に罹患している。デバイスから収集された細胞集団を、上述の疾患に関連する様々な抗原でさらに選択することができ、抗原プライミングによって選択された免疫細胞のレパートリーを、それらにおいて発現される細胞表面受容体の配列に基づいて特徴付けることができる。１つの代表的方法では、免疫細胞はＴ細胞であり、疾患抗原、例えばＴ１Ｄに関連する抗原、との結合に関与するＴ細胞受容体の配列に基づいて免疫細胞を特徴付ける。
病原体および／またはそれらの様々な株の分析のための細胞の捕捉
【０１４２】
免疫系は、身体からの病原体の検出および除去に様々なプレーヤーを使用する。例えば、病原体は、マクロファージによって取り込まれることがあり、マクロファージはそれらを消化し、処理して、それらを細胞表面の主要組織適合複合体（ＭＨＣ）分子上に提示し、その結果、リンパ球はそれらを認識することができる。したがって、本発明の実施形態は、病原体に特異的である免疫細胞の分析による病原体の検出および分析を提供する。病原体は、細菌、ウイルス、真菌、またはこれらの組合せでありうる。
【０１４３】
それ故、上述の実施形態に従って、本発明は、目的の病原体に特異的である免疫細胞、例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、マクロファージまたは樹状細胞を動員するトラップを提供する。特に、免疫細胞は、病原体抗原と結合するＴ細胞またはＢ細胞である。あるいは、免疫細胞は、抗原提示細胞、例えば、樹状細胞またはマクロファージである。これらの実施形態では、病原体に特異的である複数の抗原を含有するデバイスを、ある期間（例えば、１週間〜３週間）にわたって対象に投与し、そのデバイス内に収容される免疫細胞を病原性抗原への特異性および／または結合について分析する。細胞を、抗原に含有される特定のエピトープに対するそれらの反応性に基づいて、さらに亜集団に分けてもよい。任意選択で、細胞を病原性疾患の治療用の免疫組成物に製剤化してもよい。好ましくは、免疫組成物は、樹状細胞組成物である。
【０１４４】
病原体および病原性抗原の代表リストを、それらのＮＣＢＩ／ＧＩ受託番号を含めて、表６に提供する。
【０１４５】
関連実施形態では、本発明は、新たな細菌抗原に特異的である免疫細胞を捕捉するためのデバイスを提供する。例えば、ＭＰＢ７０およびＭＰＢ８３は、マイコバクテリアに関して十分に研究されており、一般に十分に理解されている。しかし、それらは、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓではそれほど豊富に発現されない（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｏｖｉｓでのほうが高度に発現される）ため、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓの病原性におけるそれらの関与はあまり解明されていない。本発明のデバイスを実装して、免疫細胞および／またはそれらの産物によって特異的に標的とされうる関連株中の新たな／肝要な病原性抗原を識別することができる。例えば、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｏｖｉｓに由来するＭＰＢ７０およびＭＰＢ８３タンパク質を含有するデバイスを対象に埋め込んで免疫細胞集団を単離することができ、その免疫細胞集団をＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓとの交差反応性について試験することができる。交差反応性に関与する受容体および分子を決定するために、交差反応する免疫細胞を分類することができる。このようにして、新規標的およびそれらと結合する治療剤を識別することができる。
【表６】
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ＶＩＩＩ．キット
【０１４６】
ある特定の実施形態では、本発明は、１つのまたは別個の区画に本発明のデバイスを含むキットを提供する。キットは、さらなる成分、例えば、ゲル化剤、皮膚軟化薬、界面活性剤、保湿剤、粘度増加剤、乳化剤を、１つまたは複数の区画にさらに含むことがある。キットは、診断または治療用途用のデバイスを処方するための説明書を任意選択で含むことがある。キットは、様々な障害および／または疾患の治療または診断の際に構成要素を個々にまたは一緒に使用するための説明書も含むことがある。
【０１４７】
関連実施形態では、本発明は、目的の捕捉細胞を選択、培養、増殖、維持および／または移植するための試薬と一緒に本発明のデバイスを含むキットを提供する。Ｔ細胞、Ｂ細胞および抗原提示細胞用の細胞選択キット、培養キット、増殖キット、移植キットの代表例は、当技術分野において公知である。例えば、目的の標的細胞がＢ細胞である場合、ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ、ＭＡＣＳビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用してそのような細胞を最初に選別し、ＲＯＳＥＴＴＥＳＥＰ培地（Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で維持し、ＣＥＬＬＥＸＶＩＶＯヒトＢ細胞増殖キット（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）で増殖させることができる。ＦＩＣＯＬＬ（登録商標）勾配を含むがこれに限定されない当業者に公知の遠心分離技術を使用することによって、試料中の細胞を濃縮することができる。試料中の細胞を、それらの遺伝子産物の発現のために、ポジティブ選択、ネガティブ選択、またはこれらの組合せを使用することによって濃縮することもできる。
【０１４８】
以下の実施例によって本発明をさらに例証するが、以下の実施例を限定とみなすべきではない。本出願を通して言及するすべての参考文献、特許および公開特許出願の全内容はもちろん図および配列表も、本明細書中での参照により本明細書に組み込まれている。
【実施例】
【０１４９】
（実施例１）
デバイス作製および特徴付け
上述の方法に従って、デバイス用のポリマー足場を、抗原提示を維持するように設計した。要するに、デバイス作製は、次のように行った：ラクチドとグリコリドのコポリマー（ＰＬＧ）（Ａｌｋｅｒｍｅｓ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ）をガス発泡プロセスにおいて使用して、ＰＬＧ足場を形成した。抗原をＰＬＧポリマー上に物理的に吸着させるために、ガス発泡微粒子浸出を使用して、トラップとして使用するための足場を作製した。図１Ａは、ＰＬＧで製造したモデルデバイスの断面走査電子顕微鏡（ＳＥＭ）像の顕微鏡写真を示す（右側の写真は、細孔の拡大図を示す）。あるいは、アルギネートなどの他のポリマーをデバイスの構造要素として使用してもよい。細孔によってＴ細胞侵入および増殖のためのスペースが確保される。図１Ｂは、ＯＶＡ−Ｔ細胞トラップが、オボアルブミン（ＯＶＡ）タンパク質（モデル抗原）を放出することができることを示す。
【０１５０】
さらに、デバイスを１４日間にわたってマウスの背部に皮下的に埋め込んだ。図１Ｃは、埋め込み部位でのＭＩＰ−１ａおよびＲＡＮＴＥＳの局所サイトカイン濃度を示す棒グラフである。ＢおよびＣにおける値は、平均および標準偏差（ｎ＝５）を表す。対象と比較して、各サイトカインの局所サイトカイン濃度がトラップ埋め込み部位で有意に高かったことが分かる。通常、抗原特異的Ｔ細胞には、対応する抗原を提示する炎症組織に入り、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）抗原認識に基づいて増殖する能力がある。抗原を提示するＴ細胞トラップを皮下投与すると、それらは局所ＭＩＰ−１ａおよびＲＡＮＴＥＳ産生を促進し、これは炎症および自己免疫病変部位と似ている。トラップは、抗原（または抗原の混合物）を含有し、抗原は、Ｔ細胞上の特異的ＴＣＲと会合して粘着性になりデバイス内に残存する。この抗原相互作用はまたデバイス内でＴ細胞を増殖させ、その結果、その局所領域のこれらの細胞が濃縮される。
（実施例２）
デバイスの埋め込み
【０１５１】
モデル抗原、オボアルブミン（ＯＶＡ）を担持したトラップ、および対照トラップを、ＯＶＡ特異的Ｔ細胞プールが既に存在するＯＴ−１マウスに埋め込んだ。１４日後、足場を外植し、細胞を回収し、ＣＤ８およびＯＶＡテトラマーについて染色した。ＯＶＡを含有するトラップは、ＯＶＡ特異的Ｔ細胞が濃縮され（図２Ａ）、対照と比較しておよそ５〜８倍多いＴ細胞を有した（図２Ｂ）。ＯＶＡ抗原または黒色腫抗原どちらかの、固有の抗原ミックスを含有する２つの異なるトラップをマウスに埋め込んだとき、Ｔ細胞は、同種抗原が担持されたトラップ内に優先的に蓄積した（図２Ｃ）。ＯＶＡ特異的Ｔ細胞は、ＯＶＡトラップ内に有意に蓄積したが、Ｔｒｐ２（黒色腫抗原）特異的Ｔ細胞は、黒色腫トラップ内に有意に蓄積した（図２Ｃおよび図２Ｄ）。ＯＶＡおよび黒色腫特異的細胞は、対応する抗原を含有しないトラップ内には本質的に無かった（図２Ｃおよび図２Ｄ）。
（実施例３）
糖尿病進行中のＴ細胞の捕捉
【０１５２】
抗原特異的捕捉を当技術分野において認知されている１型糖尿病マウスモデルで実証した。ＰＬＧ足場にベータ細胞可溶化物を担持することによって糖尿病Ｔ細胞トラップを作製した（図３Ａ）。次いで、これらのトラップを９、１２および１５週齢の非肥満糖尿病（ＮＯＤ）マウスに２週間にわたって埋め込み、そのときＴ細胞侵入についてアッセイした（図３Ｂ）。ＮＯＤマウスでは、図３Ｂに示されているように膵島炎または膵島のＴ細胞侵入が歳に伴って予想通りに増加する。詳細には、トラップは、対照と比較してＴ細胞を有意に蓄積することが判明し、侵入は、膵臓の膵島炎と相関した（図３Ｂおよび図３Ｄ）。トラップ内のＴ細胞の総数が糖尿病の進行に伴って増加するばかりでなく、Ｔ細胞集団も濃縮された。対照と比較してトラップ内のＴ細胞の数に３〜５倍の差があった。
（実施例４）
捕捉Ｔ細胞の特徴付け
【０１５３】
１１、１４および１７週齢のＮＯＤマウスへの埋め込みの１４日後にＴ細胞を回収した。回収したＴ細胞とともに膵ベータ細胞標的を培養した。ＥＬＩＳＰＯＴアッセイを使用してＩＬ−２分泌を測定した。結果を図４Ａに示す。ＥＬＩＳＰＯＴによって立証されたとおり、トラップから単離したＴ細胞の有意なサブセット（Ｔ細胞の１２％）はｉｎ  ｖｉｔｒｏでベータ細胞標的に応答性であることが判明した（図４Ａ）。対照的に、対照トラップは、膵ベータ細胞に応答性であるＴ細胞を全く持っていなかった。トラップは、対照トラップおよびマウスの脾臓と比較して高められたレベルのベータ細胞特異的Ｔ細胞を含有した。これは、血液中のＴ細胞レベルと比較して多いＴ細胞数および高められた特異性をトラップから得ることができたことを示す。トラップ内のＴ細胞を分析し、血中レベルのマーカーとしての脾臓内のＴ細胞と比較した。トラップ内で識別された糖尿病特異的細胞は、血中濃度と比較しておおよそ４０００％濃縮されていた（図４Ｂ）。
（実施例５）
がん特異的Ｔ細胞の捕捉および回収
【０１５４】
多孔性足場に疾患の抗原および他の分子パターンを担持した。トラップの１セットは、ＯＶＡ抗原の固有の混合物を含有し、他のセットは、黒色腫抗原の固有の混合物を含有した。抗原に特異的であるＴ細胞は、同種抗原が担持されたトラップ内に優先的に蓄積することが判明した（図５Ｃ）。より具体的には、ＯＶＡ特異的Ｔ細胞は、ＯＶＡトラップ内に有意に蓄積したが、Ｔｒｐ２（黒色腫抗原）特異的Ｔ細胞は、黒色腫トラップ内に有意に蓄積した（図５Ｄ）。逆に、ＯＶＡおよび黒色腫特異的細胞は、対応する抗原を含有しないトラップには無かった（図５Ｃおよび図５Ｄ）。これらの結果は、足場に供給する抗原に基づいて抗原特異的Ｔ細胞を捕捉し、回収することができることを示す。
（実施例６）
宿主への機能性Ｔ細胞の移入
【０１５５】
Ｔ細胞トラップおよびブランク足場を１５週齢ＮＯＤマウスに１４日間皮下的に埋め込んだ。その後、細胞をこれらの足場から単離し、２×１０６細胞を後眼窩注射によってＮＯＤ  ＳＣＩＤマウスに移入した。１７週齢ＮＯＤマウスからの脾細胞も陽性対照としてＮＯＤ−ＳＣＩＤレシピエントに注射した。細胞移入後、血糖を測定することによってマウスを糖尿病の発症についてモニターした。
【０１５６】
ＮＯＤ由来脾細胞を受けたＮＯＤ−ＳＣＩＤマウスは、細胞注射後１５週間の時点で糖尿病を発症し始め、２０週目までに８８％が糖尿病になった（図６）。マウスの２０％が９週目までに糖尿病になり、２０週間の時点でマウスの１００％が糖尿病であったので、捕捉細胞は、より速い動態で糖尿病を誘導した。対照足場から抽出された細胞は、ＳＣＩＤマウスにおいて糖尿病を誘導することが全くできなかった。これらのデータは、宿主に移入することができる機能性のＴ細胞をトラップが特異的に動員できることを示す。
【０１５７】
総合すれば、実施例５および６は、疾患の抗原および分子パターンが担持されている本発明の多孔性足場を使用してＴ細胞をｉｎ  ｓｉｔｕで産生および／または回収することができることを実証する。これらの結果は、抗原特異性Ｔ細胞が、ホーミングして疾患の主要部位で増殖するしくみに似た形で、ｉｎ  ｖｉｖｏで誘引され、そして回収することができるこれらのトラップで生成されることを示す。これらの細胞をｉｎ  ｖｉｖｏで生成し、そしてまたトラップからの増殖因子／サイトカインの送達によってさらに増殖幅させることができる。驚くべきことに、かつ予期せぬことに、捕捉された疾患特異的Ｔ細胞の機能性は、宿主への養子移入後に維持されることが判明した。
（実施例７）
臨床または分析用の細胞の捕捉
【０１５８】
上述の製造プロセスを使用してＴ細胞トラップ、Ｂ細胞トラップおよび／または樹状細胞トラップを構築する。例えば、Ｔ細胞トラップは、表１に示したような種々のケモカイン／サイトカインを利用することができる。同じく、樹状細胞／マクロファージのための例示的なトラップは、表２に示したサイトカイン／ケモカインを利用することができる。同様に、Ｂ細胞トラップは、表３に示した様々なサイトカイン／ケモカインを含むことができる。各タイプのトラップに、さらなる作用物質、例えば、インターロイキン、増殖因子、封鎖剤、接着受容体、または他の化合物／分子などを任意選択で利用することができる。表４は、Ｔ細胞、Ｂ細胞またはＤＣ／マクロファージトラップに任意選択で利用することができるインターロイキンのリストを提供する。表５は、Ｔ細胞接着受容体のリストを提供する。
【０１５９】
抗原の担持は、Ｔ細胞をＤＣと区別するために有効なホーミング剤である。したがって、これらの免疫細胞を分析して、病因を解明し、抗原などの治療標的を識別する。疾患を引き起こすＴ細胞は、自己免疫の病変にしか集中しないので、今のところアクセスしにくい。本明細書に記載するトラップ技術は、これらの細胞を収集する手段を提供する。
【０１６０】
上で説明したように少なくとも１日、最大で１４日またはそれ超までの間、デバイスを対象に埋め込む。細胞はデバイス内で増殖することができ、免疫細胞が担持されたデバイスを大体１〜２８日、またはそれより長く、例えば、３０日、６０日、３カ月、６カ月、９カ月、１２カ月、１８カ月、２４カ月、３６カ月、４８カ月またはそれ超、外植することができる。デバイスを定期的にモニターすることができる。
均等物
【０１６１】
当業者は、慣用の実験以上を使用することなく、本明細書に記載する特定の実施形態および方法の多くの均等物を認識するか、またはそのような均等物を確認することができる。そのような均等物は、後続の特許請求の範囲に記載の範囲によって包含されることが意図される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【国際調査報告】
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