(57)【要約】家禽から調製されるブロス組成物は、個体のプロバイオティック微生物叢を増強させることによってプレバイオティクスとして働くことが示される。選択された家禽原材料からこれらのブロス組成物を調製する方法、およびブロス組成物を使用する方法が開示される。一局面において、個体中の１つまたは複数のプロバイオティック細菌を増強させるための方法が提供され、この方法は、上記個体に、上記１つまたは複数のプロバイオティック細菌を増強させるのに有効な量で組成物を投与するステップを含み、ここで上記組成物が家禽から調製される。
2018504928.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
個体中の１つまたは複数のプロバイオティック細菌を増強させるための方法であって、前記個体に、前記１つまたは複数のプロバイオティック細菌を増強させるのに有効な量で組成物を投与するステップを含み、前記組成物が家禽から調製される、方法。
【請求項２】
前記組成物が、家禽からの可溶性コラーゲン繊維を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記組成物が、全固体の重量で少なくとも４０％のタンパク質を含む、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４】
前記組成物が、全固体の重量で１０％未満の炭水化物を含む、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記組成物が、少なくとも１４日間にわたり毎日、前記有効な量で前記個体に投与される、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記プロバイオティクスを増強させるのに有効な量が、前記個体に投与された場合、前記個体の消化器系内の前記１つまたは複数のプロバイオティック細菌の生菌数を増加させる前記組成物の量である、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記組成物が、前記個体の消化器系内の微生物多様性を増大させる、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記１つまたは複数のプロバイオティック細菌の数を増大させることを必要とする個体を特定するステップをさらに含む、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記組成物を前記個体に前記有効な量で少なくとも１４日間にわたり毎日投与した後、前記個体の消化器系内の前記１つまたは複数のプロバイオティック細菌の生菌数を測定するステップをさらに含む、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記１つまたは複数のプロバイオティック細菌が乳酸産生細菌を含む、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記組成物が、前記組成物を受けていない比較可能な個体と比較して、前記個体の消化器系内の前記１つまたは複数のプロバイオティック細菌の生菌数を増大させ、前記１つまたは複数のプロバイオティック細菌が、Ｐａｒａｓｕｔｔｅｒｅｌｌａ、Ｍｏｒｇａｎｅｌｌａ、Ｏｓｃｉｌｌｏｓｐｉｒａ、Ｆａｅｃａｌｉｂａｃｔｅｒｉｕｍおよびそれらの組合せからなる群より選択される少なくとも１つのメンバーを含む、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記個体が、前記組成物の投与の前にプロバイオティック補充物を定期的に摂取し、ここで前記投与が、前記個体がプロバイオティック補充物を定期的に摂取する必要性を排除する、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記組成物が、前記個体の腸の上部セクションおよび／または中間部セクションの１つまたは複数のプロバイオティック細菌の生菌数を増大させ、前記少なくとも１つのプロバイオティック細菌が、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｃｏｐｒｏｃｏｃｃｕｓ、Ｏｓｃｉｌｌｉｂａｃｔｅｒ、Ｏｄｏｒｉｂａｃｔｅｒ、Ｇａｓｔｒａｎａｅｒｏｐｈｉｌａｌｅｓ、Ｆａｅｃａｌｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ａｌｌａｂａｃｕｌｕｍおよびそれらの組合せからなる群より選択される少なくとも１つのメンバーを含む、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記１つまたは複数のプロバイオティック細菌が、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ細菌を含む、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記１つまたは複数のプロバイオティック細菌が、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｈａｍｎｏｓｕｓを含む、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記組成物が、１つまたは複数のプロバイオティック細菌との混合物として前記個体に投与される、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記組成物が、アミノ酸のグリシン、プロリンおよびヒドロキシプロリンを含み、グリシンが前記組成物の全アミノ酸の少なくとも１２％（ｗ／ｗ）を構成し、プロリンが少なくとも８％（ｗ／ｗ）を構成し、ヒドロキシプロリンが少なくとも７％（ｗ／ｗ）を構成する、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記組成物が、検出可能な量のグルテンを含有しない、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記組成物が、
（ａ）水の中でニワトリの小片を、７０℃〜１５０℃の間の温度で約８分間〜約２４時間調理するステップであって、前記ニワトリの小片がニワトリ全体またはニワトリの部分から調製される、ステップと、
（ｂ）ステップ（ａ）から不溶性物質（ｉｎｓｏｌｕｂｌｅ）を除去して液体形態の前記組成物を得るステップと
を含むプロセスによって、家禽の部分から調製される、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
プロバイオティック細菌を培養する方法であって、培地上で前記プロバイオティック細菌を成長させるステップを含み、前記培地が家禽から調製されたプレバイオティック組成物を含み、前記プレバイオティック組成物が家禽から調製された可溶性コラーゲン繊維を含む、方法。
【請求項２１】
前記プレバイオティック組成物が、
（ａ）水の中でニワトリの小片を、７０℃〜１５０℃の間の温度で約８分間〜約２４時間調理するステップであって、前記ニワトリの小片がニワトリ全体またはニワトリの部分から調製される、ステップと、
（ｂ）ステップ（ａ）から不溶性物質を除去して液体形態の前記組成物を得るステップと
を含むプロセスによって、家禽の部分から調製される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
プロバイオティック細菌を必要とする個体に投与するための組成物であって、可溶性コラーゲン繊維およびプロバイオティック細菌を含む、組成物。
【請求項２３】
（ａ）水の中でニワトリの小片を、７０℃〜１５０℃の間の温度で約８分間〜約２４時間調理するステップであって、前記ニワトリの小片がニワトリ全体またはニワトリの部分から調製される、ステップと、
（ｂ）ステップ（ａ）から不溶性物質を除去して液体形態の前記組成物を得るステップと
を含むプロセスによって、家禽の部分から調製される、請求項２２に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
この出願は、２０１５年１月２６日に出願された米国特許出願第６２／１０８，００８号（この全体の内容は、この出願に参考として援用される）への優先権を主張する。
【０００２】
１．発明の分野
本開示は、栄養補充物および食事補充物の分野ならびに微生物学の一般分野に関する。
【背景技術】
【０００３】
２．関連技術の説明
微生物が、哺乳動物の消化管でコロニー形成することは公知である。一部の微生物は、宿主のためにある特定の利益を有する。これらの有益な微生物は、「プロバイオティック微生物」または「プロバイオティクス」としても公知である。有益な細菌（または「良い」細菌）は、「プロバイオティック細菌」とも称される。一部のプロバイオティック微生物は、宿主の腸管内に天然に存在し得る。他は、食事補充物によって宿主中に導入され得る。
【０００４】
「プレバイオティック」という用語は、一般に、プロバイオティック微生物（例えば細菌または真菌）の成長（したがって、生菌数（ｌｉｖｅ  ｃｏｕｎｔ）またはＣＦＵ）または活性を誘発する物質を指す。しかし、全部ではないが、大部分のプレバイオティクスは、炭水化物ベースであり、種々の植物供給源からのグルテンを含有する可能性がある。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本開示は、個体のマイクロバイオームを増強させるプレバイオティクスとして使用され得る家禽から調製された組成物を提供することによって、当該技術分野を進歩させる。より具体的には、一実施形態では、本開示のプレバイオティック組成物は、グルテンを含まない。
【０００６】
一実施形態では、組成物は、ニワトリ、シチメンチョウまたは他の鳥類などの家禽から調製することができる。別の実施形態では、本開示の組成物は、他の動物供給源からの部分を使用して調製することができる。別の実施形態では、本開示の組成物は、ブロス、ストック（ｓｔｏｃｋ）、抽出物または粉末の形態であってよい。
【０００７】
別の実施形態では、個体に、家禽の部分から調製された有効量の組成物を投与することによって、個体における１つまたは複数のプロバイオティック細菌を増強させるための方法を開示する。一態様では、有効量は、個体の少なくとも１つのプロバイオティック細菌を増強させるのに有効な量である。別の態様では、プロバイオティック細菌を増強させることは、健康を増進させる、または個体の消化管（または腸管）内のプロバイオティック細菌の生菌数（すなわち、コロニー形成単位またはＣＦＵ）を増大させることを意味する。個体における細菌のＣＦＵは、直接的または間接的に測定することができる。直接測定は、これらに限定されないが、個体からの糞便試料中の細菌のＣＦＵを測定することを含み得る。一態様では、メタゲノム配列カウントの方法を、試料中の細菌のＣＦＵを測定するために使用することができる。
【０００８】
別の実施形態では、投与すべき有効量は、組成物を個体に投与した後、個体の腸管内の少なくとも１つのプロバイオティック細菌の生菌数を２〜２００倍、５〜２００倍、１０〜２００倍、２０〜２００倍または約２００倍増大させるブロス組成物の量であってよい。別の態様では、有効量は、個体の腸管マイクロバイオーム中の少なくとも１つのプロバイオティック細菌の割合（またはパーセンテージ）を増大させる（すなわち、少なくとも１つの有益なプロバイオティック細菌の数を選択的に増大させる）ブロス組成物の量であってよい。別の態様では、有効量は、個体における腸管マイクロバイオームの多様性を増大させるブロス組成物の量であってよい。
【０００９】
一実施形態では、本開示のブロス組成物を、１日間、２、３、４、５、６、７日間もしくは１４日間またはそれ超の日数にわたり毎日、有効量で個体に連続的に投与することができる。別の実施形態では、組成物を、例えば４、６、８、１０、１２、１４日間またはそれ超の日数の期間にわたって１日おきに個体に非連続的に投与することができる。
【００１０】
一実施形態では、本開示の方法にしたがって調製される組成物は、より高い濃度のある特定の有益成分を有することができる。一態様では、組成物は、可溶性コラーゲン繊維を含有することができる。本開示のために、「可溶性コラーゲン繊維」という用語は、ブロス製造プロセスに供した後、ブロス中で可溶性であるコラーゲンタンパク質のフラグメントを指すために使用される。一態様では、フラグメントは、コラーゲンタンパク質の全長または部分長を表すことができる。別の態様では、フラグメントは、コラーゲン由来の小さいペプチドまたは単一のアミノ酸を含有することができる。別の態様では、可溶性コラーゲン繊維の少なくとも２０％、３０％、４０％または少なくとも５０％は、２０またはそれ超のアミノ酸長のフラグメントまたはペプチドを含有する。別の態様では、可溶性コラーゲン繊維は、個体中のプロバイオティック細菌の増強または促進におけるプレバイオティクスとして働き得る。別の態様では、可溶性コラーゲン繊維は、主に家禽の軟骨由来である。別の態様では、可溶性コラーゲン繊維は、最終ブロス組成物の少なくとも２０％（ｗ／ｗ固体ベースで）を構成する。別の態様では、可溶性コラーゲン繊維は、最終ブロス組成物の少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％もしくは少なくとも９０％（ｗ／ｗ固体ベースで）または１００％もの高さを構成することができる。別の態様では、可溶性コラーゲン繊維は、Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩ型コラーゲン由来であることができる。
【００１１】
別の実施形態では、ある特定の有益な化合物は、現在市場で入手できる他のブロス製品と比べて、本開示の組成物中でより高い程度まで富化され得る。
【００１２】
別の実施形態では、ニワトリブロスには通常は付随しないある特定の利益を達成するように、１つまたは複数の構成要素をブロス中に補うことができる。そうした補充物の例は、これらに限定されないが、生姜、コーヒー抽出物、ニンジン、緑茶、他の植物、例えばヤナギ樹皮またはボスウェリア、クルクミン／ウコン、オメガ３脂肪酸、魚油、オキアミ油、藻類油、フランスカイガンショウ樹皮抽出物であるピクノジェノール、ブドウ種子抽出物、亜麻仁抽出物、リボヌクレアーゼ、アンギオジェニン、ラクトフェリン、リボヌクレアーゼ富化ラクトフェリン、Ｓ−アデノシルメチオニン、コラーゲン、コラーゲンタンパク質（例えばＩ、ＩＩまたはＩＩＩ型コラーゲン）またはコラーゲンペプチド、ゼラチン、アボカド／ダイズ不けん化物（ＡＳＵ）、ホップの球果の抽出物、卵殻膜、乳由来のポリペプチド、例えばカゼインまたは乳清、ＭＳＭ（メチルスルホニルメタン）、ユッカ（Ｙｕｃｃａ）、デビルズクロー（Ｄｅｖｉｌｓ  ｃｌａｗ）、ブロメライン、グルタミン酸、ココア、イラクサ、ビタミンＥ、ビタミンＤ３、クルミ抽出物等を含むことができる。一態様では、本開示のブロスは、相当な量のコラーゲン、コラーゲンタンパク質および／またはコラーゲンペプチドを含有することができる。別の態様では、相当量のコラーゲン、コラーゲンタンパク質および／またはコラーゲンペプチドは、本開示のブロス中に天然に存在していてよい。別の態様では、相当量のコラーゲン、コラーゲンタンパク質および／またはコラーゲンペプチドを、補充物として本開示のブロス中に添加することができる。
【００１３】
別の実施形態では、本開示の方法によれば、ブロス組成物を個体に投与する前に、プロバイオティック細菌の数を増大させることを必要とする個体を最初に特定する。本開示のブロス組成物を必要とするそうした個体には、これらに限定されないが、そのＧＩ系中に不均衡なマイクロバイオームを有する個体、および乳酸産生細菌などのある特定の望ましいプロバイオティック細菌の数（ＣＦＵ）の増大を必要とする個体が含まれ得る。そうした望ましい細菌の例には、これらに限定されないが、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｐａｒａｓｕｔｔｅｒｅｌｌａ、Ｍｏｒｇａｎｅｌｌａ、Ｏｓｃｉｌｌｏｓｐｉｒａ、Ｃｏｐｒｏｃｏｃｃｕｓ、Ｏｓｃｉｌｌｉｂａｃｔｅｒ、Ｏｄｏｒｉｂａｃｔｅｒ、Ｇａｓｔｒａｎａｅｒｏｐｈｉｌａｌｅｓ、ＡｌｌａｂａｃｕｌｕｍまたはＦａｅｃａｌｉｂａｃｔｅｒｉｕｍが含まれ得る。別の実施形態では、望ましいプロバイオティック細菌の一例はＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｈａｍｎｏｓｕｓであってよい。別の実施形態では、ブロス組成物は、栄養素としてのタンパク質（およびアミノ酸）だけでなく、個体の腸管マイクロバイオーム中のプロバイオティック細菌の数およびパーセンテージを増大させるのを助けるコラーゲン繊維の形態のタンパク質（およびアミノ酸）も提供する。したがって、本開示の一態様では、本開示のブロス組成物の投与は、そうでない場合、プロバイオティック補充物を定期的に摂取しなければならないことになる個体へのプロバイオティクスの連続的な補充の必要性を排除することができる。「定期的に」という用語は、少なくとも月に１回、週に１回または少なくとも日に１回を意味する。
【００１４】
本開示の目的のために、「増強させる」という用語は、微生物の成長（したがって、生菌数またはＣＦＵ）または活性を増大させることを意味する。一実施形態では、本開示の組成物は、個体中に生来存在する１つまたは複数のプロバイオティック細菌を増強させることができる。「生来の」という用語は、微生物が、個体の腸管内に天然に存在することを意味する。別の実施形態では、本開示の組成物は、個体中に生来のものではない１つまたは複数のプロバイオティック細菌を増強させることができる。生来または非生来のプロバイオティック細菌の両方を、個体へ補うことができる。
【００１５】
一態様では、本開示の組成物を、経口給餌によって個体に投与することができる。別の態様では、本開示の組成物を、１つまたは複数のプロバイオティック細菌と併せて投与することができる。別の態様では、本開示の組成物を１つまたは複数のプロバイオティック細菌と混合し、混合物として個体に投与することができる。
【００１６】
別の態様では、プレバイオティック組成物を本明細書で開示されるプロセスにしたがって調製し、次いで、食事補充物として摂取されるように、液体または固体（例えば粉末）形態に調製することができる。
【００１７】
一実施形態では、本開示の組成物によって増強される１つまたは複数のプロバイオティック細菌は少なくとも乳酸産生細菌を含むことができる。別の実施形態では、乳酸産生細菌は、例として、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ細菌を含むことができる。別の実施形態では、乳酸産生細菌は、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｈａｍｎｏｓｕｓを含むことができる。
【００１８】
家庭内で調理する場合、ニワトリまたはシチメンチョウブロスを、開放容器中、または加圧容器中、高温下で長時間調理することにより作製することができる。対照的に、本開示は、独特の組成物を有するブロス製品およびその調製方法を提供する。原材料、調理用原材料を選択し調製する方法、および得られたブロスを分離し精製する方法も本明細書で開示する。
【００１９】
一実施形態では、種々の有益な化合物の抽出を最大化するために、家禽または他の動物供給源からの原材料を非常に細かく砕くことができる。一態様では、原材料を、約２ｃｍ未満、１ｃｍ、５ｍｍ、４ｍｍ、３ｍｍ、２ｍｍまたは２ｍｍ未満のサイズまで小さくすることができる。調理する前での、小さなサイズの粒子への家禽の部分の機械的処理は、ある特定の化合物の抽出を最大化する助けとなり得る。別の実施形態では、家禽の部分は、調理の前に、非常に小さなサイズの粒子へ機械的に処理されているので、処理された家禽の部分からブロスを得るために、より穏やかな調理条件（例えば６０〜１００℃の温度）およびより短い調理時間（約８分間〜３００分間）を使用することができる。そうしたより穏やかでより短い調理は、従来の処理および調理法が使用される場合、そうでなければ不活性化されることになるある特定の化合物の不活性化を防止する助けとなり得る。そうした化合物の保存は、本開示のブロスを、ここで開示される方法によって調製されていない他のブロス製品に対して試験した場合に観察される、優れた利益を説明することができる。
【００２０】
別の実施形態では、骨や軟骨を有する家禽の部分を、機械的に分離し、細かく砕いて、５ｍｍ（ミリメートル）、４ｍｍ、３ｍｍ、２ｍｍまたは１ｍｍ未満のサイズの微細な小片にすることができる。一態様では、骨から残留する肉を除去するためのステップはとらない。これらの細かい小片を、約７０℃、１００℃、１１０℃、１２０℃、または１５０℃もの高さで、少なくとも８分間、１５分間、３０分間、１時間、２時間、３時間もしくは６時間またはそれ超の時間調理して、ある特定のブロスの画分および／または化合物の抽出を最大化することができる。
【００２１】
別の実施形態では、本開示の方法によって調製されたブロスは、ＳＤＳ−ＰＡＧＥで分析した場合、他の市販のブロス製品から得られたものと異なるタンパク質プロファイルを示す。一態様では、本開示の組成物中の全タンパク質の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、７０％または９０％は、１０ｋＤ（キロダルトン）〜７０ｋＤの間の分子量を有する。別の態様では、本開示の組成物中のタンパク質の少なくとも９５％は、１００ｋＤ未満の分子量を有する。別の態様では、方法を、ブロス中のタンパク質の分子量を１０ｋＤ、５ｋＤ未満に、さらには３ＫＤより低くさらに低下させて、被験体による同化を増強させるために使用することができる。例として、タンパク質を消化する１つまたは複数の酵素を使用して、ブロスのタンパク質の分子量を低下させることができる。
【００２２】
別の実施形態では、本開示の組成物は、全固体の重量で少なくとも４０％のタンパク質を含有することができる。例として、本開示の組成物は、組成物中の全固体の重量で５０％、６０％、７０％もしくは８０％またはそれ超のタンパク質を含有することができる。別の実施形態では、本開示の組成物は、組成物中の全固体の重量で１０％未満の炭水化物を含有することができる。例として、本開示の組成物は、組成物中の全固体の重量で８％、５％、２％もしくは１％またはそれ未満の炭水化物を含有することができる。別の実施形態では、本開示の組成物は、動物供給源（例えば家禽）から調製され、植物供給源からのいかなるタンパク質も含有しない。別の実施形態では、本開示のプレバイオティック組成物は、検出可能な量のグルテンを含有しない。別の実施形態では、本開示のプレバイオティック組成物は、グルテンに対して感受性が高いまたはアレルギーがある個体において有害反応を引き起こす相当量のグルテンを含有しない。
【００２３】
別の実施形態では、本開示の組成物は、アミノ酸のプロリンおよびヒスチジンを含有することができ、プロリンとヒスチジンとの比は重量で少なくとも４：１である。一態様では、プロリンは、組成物中に、固体ベースで少なくとも８％（ｗ／ｗ）、１０％またはそれ超存在する。別の態様では、プロリンとヒスチジンとの比は重量で少なくとも６：１である。
【００２４】
別の実施形態では、本開示の組成物はアミノ酸のグリシンおよびヒスチジンを含有することができ、グリシンとヒスチジンとの比は重量で少なくとも６：１である。一態様では、グリシンは、本開示の組成物の全アミノ酸中に、固体ベースで少なくとも１２％、１４％またはそれ超（ｗ／ｗ）存在する。別の態様では、グリシンとヒスチジンとの比は重量で少なくとも１０：１である。
【００２５】
別の実施形態では、本開示の組成物は、アミノ酸のヒドロキシプロリンおよびヒスチジンを含有することができ、ヒドロキシプロリンとヒスチジンとの比は重量で少なくとも４：１である。一態様では、ヒドロキシプロリンは、組成物の全アミノ酸中に固体ベースで少なくとも７％、８％またはそれ超（ｗ／ｗ）存在する。別の態様では、ヒドロキシプロリンとヒスチジンとの比は重量で少なくとも６：１である。
【００２６】
別の実施形態では、本開示の組成物は、プロリン、グリシン、ヒドロキシプロリンおよびヒスチジンを含有することができる。一態様では、グリシンとヒスチジンとの比は重量で少なくとも６：１である。別の態様では、グリシンは、組成物中に固体ベースで少なくとも１２％（ｗ／ｗ）存在する。別の態様では、プロリンとヒスチジンとの比は重量で少なくとも４：１である。別の態様では、ヒドロキシプロリンとヒスチジンとの比は重量で少なくとも６：１である。
【００２７】
別の実施形態では、本開示の組成物は、プロリンおよび他のアミノ酸を含有することができ、プロリンの量は、組成物中の全アミノ酸の重量で少なくとも８％、１０％またはそれ超である。別の実施形態では、本開示の組成物は、グリシンおよび他のアミノ酸を含有することができ、グリシンの量は、組成物中の全アミノ酸の少なくとも２０重量％である。別の実施形態では、本開示の組成物は、ヒドロキシプロリンおよび他のアミノ酸を含有することができ、ヒドロキシプロリンの量は、組成物中の全アミノ酸の少なくとも８重量％である。
【００２８】
別の実施形態では、本開示の組成物は、１つまたは複数の分枝鎖アミノ酸（ｂｒａｎｃｈｅｄ  ｃｈａｉｎ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ）（ＢＣＡＡ）（例えばバリン、ロイシンおよびイソロイシン）を含有することができ、組成物中のＢＣＡＡは、他のブロス製品中のＢＣＡＡのレベルより高いレベルで存在する。一態様では、バリン、ロイシンおよびイソロイシンを含む全ＢＣＡＡの量は、組成物中の全アミノ酸の少なくとも５％、６％または７重量％である。
【００２９】
別の実施形態では、本開示にしたがって調製されるブロス製品は、９９９：１〜１：９９９の間または２００：１〜１０：１の間の湿潤タンパク質比（ｍｏｉｓｔｕｒｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｒａｔｉｏ）（ＭＰＲ）を有することができる。例として、２００：１のＭＰＲは、製品が、２００部の水と１部の肉（タンパク質）とを含有することを意味する。別の実施形態では、本開示にしたがって調製されるブロス製品は、１５０：１〜４０：１の間または１３５：１〜６７：１の間の湿潤タンパク質比（ＭＰＲ）を有することができる。
【００３０】
コンドロイチン硫酸（ＣＳ）は、軟骨中に豊富にあり、関節の健康に有益であることが報告されている。ブロスが調製される原材料およびプロセスの選択は、本開示の組成物中での比較的高いレベルのコンドロイチン硫酸に寄与し得る。本開示の一実施形態では、ブロス組成物は、酵素消化およびＬＣ−ＵＶ検出アッセイを使用して測定して、組成物中の全乾燥固体の重量で少なくとも６％、７％、８％または１０％のコンドロイチン硫酸を含有することができる。例えば、参照により本開示に組み込まれる、Ｊｉら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ＡＯＡＣ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、９０巻、３号、６５９〜６９頁（２００７年）を参照されたい。
【００３１】
一態様では、組成物は、すぐに消費できる液体形態であってもよく、ストックなどの濃縮液体の形態であってもよい。別の態様では、組成物は、粉末またはペーストなどの固体形態であってよい。
【００３２】
一実施形態では、組成物は、ポリフェノールの濃度がＦｏｌｉｎ−Ｃｉｏｃａｌｔｅｕアッセイに基づいて少なくとも４，０００μｇ／ｍｌ  ＧＡＥ（没食子酸当量）である、１つまたは複数のポリフェノールを含有することができる。
【００３３】
別の実施形態では、組成物は、アミノ酸のグリシン、プロリンおよびヒドロキシプロリンを含むことができ、グリシンは、組成物の全アミノ酸の少なくとも１２％（ｗ／ｗ）を構成し、プロリンは少なくとも８％（ｗ／ｗ）を構成し、ヒドロキシプロリンは少なくとも７％（ｗ／ｗ）を構成する。
【００３４】
プロバイオティック細菌は一般に培養培地で成長させた後、それらを収穫し、食事補充物として使用する。一実施形態では、本開示のプレバイオティック組成物を、プロバイオティック細菌を培養するために使用することができる。プロバイオティック細菌は、とりわけ、家禽から調製された本開示のプレバイオティック組成物を含有する培地で成長させることができる。一態様では、本開示のプレバイオティック組成物は、家禽から調製された可溶性コラーゲン繊維を含有する。
【００３５】
本明細書で開示されるブロス組成物は、本明細書で説明するような独特の組成によって特徴付けることができる。ブロス組成物は、それらが調製される方法によっても特徴付けることができる。さらに、本開示の組成物は、それらが被験体に提供し得る利益においても独特である。被験体を、一方の群が有効量の本開示のブロス製品を毎日摂取（または消費）し、他方の群が水または他のブロス製品を摂取する、２つの群に分けることができる。次いで、種々の指標を測定し、２つの群の間で比較することができる。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】図１は、糞便試料からのＵＰＧＭＡ（算術平均での非加重結合法）系統樹を示す図である。
【００３７】
【図２】図２は、盲腸試料からのＵＰＧＭＡ系統樹を示す図である。
【００３８】
【図３】図３は、食事へのＡＡＣ１の添加によって影響を受けた種を代表するＤＮＡバンドの選択について生成したＤＧＧＥ（変性濃度勾配ゲル電気泳動）プロファイルを示す図である。番号が付けられたバンドは、目的の潜在的領域を表している。レーンは以下の通りである：（１）盲腸−水；（２）盲腸−ＡＡＣ１；（３）盲腸−市販製品；（４）盲腸−ホームメイド；（５）糞便−水；（６）糞便−ＡＡＣ１；（７）糞便−市販製品。
【００３９】
【図４】図４は、異なるニワトリブロス製品が、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ：Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ比を有意に変化させないことを示す図である。
【００４０】
【図５】図５は、ＡＡＣ１が、下部ＧＩ管でＰｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａを選択することを示す図である。
【００４１】
【図６】図６は、ＡＡＣ１が、下部ＧＩ管でＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓを選択または維持することを示す図である。
【００４２】
【図７】図７は、ＡＡＣ１が、盲腸内でＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓを選択または維持することを示す図である。
【００４３】
【図８】図８は、ＡＡＣ１が、腸管内の微生物叢の多様性を増大させることを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００４４】
ニワトリスープおよびニワトリブロスは何世紀にもわたってヒトの消費のために利用可能であった。研究は、ニワトリスープまたはブロスの種々の利益を示している。従来の家庭内の方法によれば、ニワトリスープまたはブロスは、水を入れたポットの中でニワトリ全体かまたはニワトリの大きな部分を長時間煮沸することによって調製される。この家庭内の方法によって調製されるスープまたはブロスは、化合物の一部が調理の間または処理の間に失われており、他の化合物がニワトリの部分から抽出されていない可能性があるので、スープまたはブロスの健康促進効果が最大化されていない恐れがある。
【００４５】
一実施形態では、本開示は、プレバイオティクスとしてニワトリブロスを使用する方法を提供する。プレバイオティクスは、プレバイオティクスが生きた生物ではなく、プロバイオティクスを支援するまたは増強させることができる構成要素であるという点で、プロバイオティクス（すなわち、いわゆる「良い細菌」）とは異なっている。プレバイオティクスは一般に、上部消化器系を迂回し、摂取後損なわれず腸に達する。プレバイオティクスは上部ＧＩセクションにおいて細菌に影響を及ぼし得、その結果、上部ＧＩセクションのこれらの細菌が栄養素を発酵させ始め、次いでこれが腸管の下部セクションの「良い細菌」を選択的に支援する代謝産物を提供するようにすることも可能である。それらが腸に達したら、プレバイオティクスは、正常な腸管内細菌叢による発酵において重要な役割を果たすことができる。発酵プロセスは、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓなどの「良い細菌」の増殖を刺激し促進することができる。
【００４６】
本明細書で使用される、「プロバイオティクス（ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ）」という用語は、個体の利益になる補充物として個体が取り得る多くの微生物を指すことができる。「プロバイオティクス」という用語は、宿主の体内で天然に生存し宿主に利益を提供する、多くの異なる微生物を指すこともできる。そうした望ましい細菌の例は、これらに限定されないが、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｐａｒａｓｕｔｔｅｒｅｌｌａ、Ｍｏｒｇａｎｅｌｌａ、Ｏｓｃｉｌｌｏｓｐｉｒａ、Ｃｏｐｒｏｃｏｃｃｕｓ、Ｏｓｃｉｌｌｉｂａｃｔｅｒ、Ｏｄｏｒｉｂａｃｔｅｒ、Ｇａｓｔｒａｎａｅｒｏｐｈｉｌａｌｅｓ、ＡｌｌａｂａｃｕｌｕｍまたはＦａｅｃａｌｉｂａｃｔｅｒｉｕｍを含むことができる。例えば、多くのＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ細菌は、ヒトに有益であることが示されている。Ｆａｅｃａｌｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ細菌は、抗炎症性であることも示されている。「Ｆａｅｃａｌｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｐｒａｕｓｎｉｔｚｉｉ  ｉｓ  ａｎ  ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｃｏｍｍｅｎｓａｌ  ｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ  ｂｙ  ｇｕｔ  ｍｉｃｒｏｂｉｏｔａ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｃｒｏｈｎ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｐａｔｉｅｎｔｓ」、Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ．  １０５巻（４３号）：１６７３１〜６頁（２００８年）を参照されたい。
【００４７】
本開示の方法は、有益な化合物の抽出を最大化させながら、それに付随して、過酷な処理条件に起因した活性の損失を最小化するために、調理の前にニワトリの部分を処理することによって、ならびに処理温度および調理時間を制御することによって、ある特定の成分の保存を助けることができる。
【００４８】
家禽から特に選択された原材料を本開示の方法にしたがって処理して、高いタンパク質含量を有するブロスを得ることができる。ある特定のアミノ酸は、ホームメイドのブロスまたは他の市販製品と比較して、比較的高い濃度で存在する。一態様では、本明細書で説明される種々の動物試験で示されるように、本開示のブロス組成物は、宿主のプロバイオティクスの健康を増強させるのに有効であることを示すことができる。別の態様では、本開示のブロス組成物は、宿主中のプロバイオティクスの生菌数を増大させることができる。別の態様では、本開示のブロス組成物は、ある特定の微生物を選択的に増強させることができるが、他は増強させることはできない。別の態様では、本開示のブロス組成物は、宿主の腸管内の微生物の多様性を増大させることができる。
【００４９】
「ブロス」および「スープ」という用語は、少なくとも１つの溶質を含有する液体組成物を指し、すぐ供給できる形態、濃縮物、液体または固体の形態のストックを指すのに使用することもできる。
【００５０】
本開示の家禽ブロスは、相当量の異なるアミノ酸を含有することができる。そうしたアミノ酸は、ブロス中に、タンパク質の形態で、または遊離アミノ酸として存在し得る。全アミノ酸は、タンパク質の形態で存在するアミノ酸と、遊離アミノ酸として存在するものとの両方を含む。本開示の目的のために、ブロス組成物中の異なるアミノ酸の比は、全アミノ酸間の比を指す。
【００５１】
本明細書で使用されるような「乾燥固体」または「固体」という用語は、すべての自由液体（ｆｒｅｅ  ｌｉｑｕｉｄ）が液体組成物から除去された後に残留する液体組成物の成分を指す。水性ブロスの場合、自由液体は水である。
【００５２】
「投与する」という用語は、経口摂取によるなどの、個体への材料の送達を意味する。
【００５３】
「検出不能」という用語は、現在利用可能な分析機器で測定できないような少量で存在する可能性がある化学物質または構成要素を意味する。
【００５４】
「被験体」または「個体」という用語は、ヒトを含む哺乳動物を指すのに使用される。
【００５５】
「実質的に」という用語は、少なくとも１０〜２０％を意味する。
【実施例】
【００５６】
以下の実施例は、実施形態を例示するためだけに提供するものであり、限定しようとするものではない。原材料、試薬、化学物質および他の材料は、例示的な成分または試薬として提示されるものであり、本開示の範囲内で上記考察を考慮して、様々な改変を行うことができる。本開示において別段の指定のない限り、実施例において説明されるようなシステムおよびアッセイで使用される成分、試薬、プロトコールおよび他の方法は、例示の目的のためだけのものである。
【００５７】
（実施例１  シチメンチョウの部分からのブロスの調製）
この実施例では、シチメンチョウの部分を、ブロスを調製するために使用し、ブロスの全体的な品質および潜在的利益を決定した。簡単に述べると、生のシチメンチョウを機械的に分離し、抽出を最大化させるために、部分を２ｍｍ未満のサイズに細かく砕いた。シチメンチョウからの小さなサイズの部分を、スチーム中１９５°Ｆで、約１５分間またはそれ未満で穏やかに調理した。次いで、ブロスを、デカンテーションにより不溶性画分から分離した。ブロス中の放出された脂肪も、遠心分離機によりブロスから除去した。ブロスを市販の蒸発器中で濃縮し、冷却し、販売用に包装した。
【００５８】
（実施例２  ニワトリの部分からのブロスの調製）
この試験では、ニワトリの骨および軟骨を含有する刻んだニワトリの部分を、水の中で、２５０°Ｆ超の温度で、６時間超調理して、ある特定のブロス画分および／または化合物の抽出を最大化させた。このプロセスで得られたブロスを、内部標準のために「ＡＡＣ１」と指定した。より具体的には、主要な筋肉を除去した後に残るＵＳＤＡ検査済みの刻んだ生のニワトリの骨を、大きな市販のステンレス鋼製調理タンク中、水の中で調理した。調理した後、液体ブロス部分を、デカンテーションによりニワトリ固形物から分離した。ブロスを市販の蒸発器中で濃縮し、次いで、噴霧乾燥し、標識した容器に詰めた。
【００５９】
（実施例３  異なるブロスのタンパク質およびアミノ酸プロファイルの比較）
タンパク質は、例えば、酵素として機能すること、細胞間の情報伝達を容易にすること、および細胞に構造的支持を提供することを含む、生体系において豊富な機能を行うアミノ酸の１つまたは複数の鎖で構成される大きな分子である。ヒトならびに他の動物は、それらが、そうしたアミノ酸を合成するのに必要な酵素を欠いているので、必須アミノ酸を、それらの食事の一部として消費されたタンパク質から得る。本試験の目的は、ホームメイドの製品と比較して、ニワトリブロスＡＡＣ１中のタンパク質の濃度およびサイズ範囲を決定することであった。
【００６０】
本開示にしたがって調製された１つの試料（ＡＡＣ１）と、家庭内の調理法（ホームメイド）にしたがって調製された別の試料を比較した。ＡＡＣ１についての固体パーセント（ｗ／ｖ）は８固体％であり、ホームメイドについてのパーセンテージ（ｗ／ｖ）は１．７固体％であった。
【００６１】
Ｂｒａｄｆｏｒｄ法によってタンパク質の量を決定する前に、各試料を蒸留水に希釈して最終１ｗ／ｖ％の溶液にした。標準曲線を、ウシ血清アルブミン（０〜３．５μｇ／μＬ）を使用して作製した。すべての試料を３連で分析した。全タンパク質の量は、プレードリーダーを使用して、５９５ｎｍの波長で決定した。結果を表１に示す。
【表１】
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【００６２】
ＡＡＣ１（８％）およびホームメイド（１．７％）試料における固体パーセントの差を修正するために、ＡＡＣ１およびホームメイドについての１％溶液に基づいてタンパク質値に、それらのそれぞれの出発固体％を乗じた。ＡＡＣ１およびホームメイドについての全タンパク質の最終補正量を表２に示す。
【表２】
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【００６３】
各試料のタンパク質プロファイルを決定するために、等容積のＡＡＣ１およびホームメイド試料（１５．６μｌ）を、それぞれ、Ｌａｅｍｍｌｉのサンプルバッファーおよび還元剤と混合し、９５℃で５分間加熱し、４〜１２％のビストリスゲル上で分離した。タンパク質の相対サイズ範囲を、市販のタンパク質標準品（４．５ｋＤａ〜３００ｋＤａの範囲）との比較によって決定した。１５０Ｖの一定電圧をゲルに３０分間印加し、各試料中のタンパク質を分離させた。ＳｉｍｐｌｙＢｌｕｅ（商標）ＳａｆｅＳｔａｉｎを使用して、タンパク質をゲル中で可視化させた。
【００６４】
結果を図１に示す。レーン１はホームメイドブロスについて、レーン２はＡＡＣ１ブロスについてのタンパク質プロファイルを示しており、レーン３は分子量標準品である。タンパク質プロファイルに基づいて、ＡＡＣ１は、ホームメイド製品より約３倍多いタンパク質で構成される。ホームメイド製品中のタンパク質は、大きいタンパク質（最大で約３００〜５００ｋＤ）と小さいタンパク質（約５〜１５ｋＤ）との両方を含有する、より広い範囲の分子量分布を示している。対照的に、ＡＡＣ１中のタンパク質の大部分（すなわち、５０％超）は７０ｋＤａ〜１５ｋＤａの間の分子量を有している。
【００６５】
個々のアミノ酸含量も分析した。以下の表３は、家庭内の方法ならびに他の市販製品を使用して調製したものと比較した、本開示の方法にしたがって調製されたブロス組成物の個々のアミノ酸含量を示している。
【表３】
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【００６６】
（実施例４  異なるブロス中のコンドロイチン硫酸（ＣＳ）のレベルの比較）
コンドロイチン硫酸（ＣＳ）は、軟骨中に見られる重要な構造化合物であり、関節の健康に関与している。ＣＳは、ｉＮＯＳ、ＰＧＥ２、ＣＯＸ−２（Ｇｗｅｎｄｏｌｙｎ、Ｓｐｉｎｅ  ２０１１年）およびＮＦｋＢ（Ｖａｌｌｉｅｒｅｓ、Ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｃａｒｔｉｌａｇｅ、２０１０年）などの多くの炎症性メディエータのレベルを低下させることが示されている。この試験の目的は、種々のニワトリブロス試料中のＣＳの量を決定することであった。ニワトリブロスを、酵素消化およびＬＣ−ＵＶ検出法（Ｊｉ、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ＡＯＡＣ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、２００７年）を使用して全ＣＳについて分析した。結果を、標準試料と比較した曲線上の面積とし、定量限界を１ｇ乾燥材料あたり８ｍｇコンドロイチン硫酸として計算した（表４）。試験したすべてのニワトリブロスの中で、ＡＡＣ１は、最も大きな量のＣＳ（８．７９７ｗ／ｗ％）を有していた。
【表４】
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【００６７】
（実施例５  異なるニワトリブロス中のポリフェノール濃度の比較）
異なるニワトリブロス中のポリフェノール濃度を、修正Ｆｏｌｉｎ−Ｃｉｏｃａｌｔｅａｕ法（Ｓｌｉｎｋａｒｄ、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｖｉｔｉｃｕｌｔｕｒｅ、１９７７年）を使用して決定した。ポリフェノールは、抗酸化および抗炎症特性を有することが知られている化合物の部類である。ＡＡＣ１と家庭内のブロスとはどちらもポリフェノールを含有していたが、ＡＡＣ１は４８２８．８μｇ／ｍＬ  ＧＡＥのポリフェノールを含有しており、これは、同じ種類のニワトリの部分から作製されたホームメイドブロス（６８７．７μｇ／ｍＬ  ＧＡＥ）より、約７倍多いＧＡＥのポリフェノールである。
【００６８】
（実施例６  下部ＧＩにおけるマイクロバイオームに対するブロス給餌の効果）
種々のブロス組成物を齧歯動物に給餌し、糞便試料を０日目（基礎）と１４日目に収集した。変性濃度勾配ゲル電気泳動（ＤＧＧＥ）を使用して、微生物プロファイルの変化を分析した。試験したブロス組成物には：本開示のブロスＡＡＣ１、水（陰性対照として）、ホームメイド風ブロスおよび市販のブロス製品が含まれる。動物に異なるブロス組成物を給餌した後、０日目と１４日目に、マイクロバイオームのＤＧＧＥプロファイルを比較した。
【００６９】
基礎試料のすべてが、比較的高度の類似性を示した。最大で、ＡＡＣ１の群と水の群との基礎試料の間に９％の差があった。すべての基礎試料の間の平均差は６．１％であった。種々のニワトリブロスの導入ならびに２週間の期間によって、試料間に追加的な変動がもたらされた。最大で、ＡＡＣ１と市販のブロス製品は１５％異なっていた。対照的に、ホームメイドブロスは、水および市販のブロスと９％異なった。すべての試料の間の平均差は１２％であった。
【００７０】
試料のすべてが、基礎０日目と１４日目との時間点の間で組成が変化した。例えば、水対照の０日目（基礎）と１４日目との間の差は７％であった。この７％の変化は、２週間にわたる比較的安定した腸管マイクロバイオームを実証しており、これは優れた対照としての役目を果たす。基礎から１４日目までの時間点のすべての試料の間の平均分散は１３．５％であった。
【００７１】
異なるプロファイルを、ＤＧＧＥにおける染色類似性（すなわち、ＤＮＡバンドの存在／非存在）に基づいてグループ化し、分類した。ＡＡＣ１ニワトリブロスを受けた動物は、水または他の２つのブロスを受けた動物と比較した場合、それらの腸管マイクロバイオームにおける明らかなシフトを経験している。階層的クラスタリングによって、ＡＡＣ１給餌動物において観察される相違がこの投与に独特であることが明らかにされているように、この結果は、図１において最も明確に実証されている。１４日目にＡＡＣ１を給餌された動物は、基礎の群または他の１４日目の群のいずれともクラスター形成していない。これは、ＡＡＣ１ブロスが、齧歯動物腸管マイクロバイオームにおける独特のシフトを引き起こすことを表している。図１の低部のスケールは、クラスター間の類似性パーセントを表している。
【００７２】
（実施例７  盲腸におけるマイクロバイオームに対するブロス給餌の効果）
各給餌群についての盲腸試料も１４日目に収集し、上記と同じプロトコールにしたがって分析した。糞便中に見られた多くの微生物が盲腸内にも見られるが、盲腸の内容物は、腸管マイクロバイオーム、および臓器の異なる機能／状態に起因する動物内で起こる任意の付随する変化についてのさらなる検証（ｌｏｏｋ  ｉｎｔｏ）を提供する。盲腸分析の欠点は、収集のために動物を犠牲にしなければならず、したがって、基礎試料を取れなかったという点である。盲腸材料によるＤＧＧＥ分析は、水、ホームメイドおよび市販のブロス給餌動物の間の高度の類似性（３つのすべての試料間で平均４．６％の差）を明らかにしている。興味深いことに、ＡＡＣ１群は水、ホームメイドおよび市販のブロス群から１４％超異なっていた。
【００７３】
異なるプロファイルを、ＤＧＧＥにおける染色類似性（すなわち、バンドの存在／非存在）に基づいてグループ化し、分類した。図２の低部のスケールは、クラスター間の類似性パーセントを表している。
【００７４】
盲腸材料の分析による結果は、糞便試料のものに酷似している。盲腸微生物叢の組成に関しては基本的情報が入手できないが、１４日間のＡＡＣ１ブロスの摂取は独特の盲腸組成をもたらした（図２）。
【００７５】
糞便材料と盲腸材料との間のシフトを比較する目的で、図３のゲルを作製した。このゲルを、すべての盲腸試料および選択した糞便試料の間で直接比較させた。この結果から、それぞれ独特の細菌種に対応する１１の目的の領域を選択した。バンドからのＤＮＡの直接配列決定は、ＡＡＣ１摂取の結果として変化したいくつかの種の特定を可能にした（表５）。腸管内細菌叢の著しい多様性に起因して、それらがこれまで全く特徴付けされていなかったので、種のいくつかは特定することができなかった。
【表５】
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【００７６】
特に目的の配列は、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｈａｍｎｏｓｕｓと特定されたバンド３である。この種は、ＡＡＣ１ブロスを受けた動物の盲腸内容物においてのみ見られた。Ｌ．ｒｈａｍｎｏｓｕｓは一般的な市販のプロバイオティクスであるが、腸管内細菌叢の生来の常在菌でもある。いくつかの試験から、多くの利益が、Ｌ．ｒｈａｍｎｏｓｕｓのある特定の菌株の摂取と関係していることが示されている。例えば、研究により、マウスによるＬ．ｒｈａｍｎｏｓｕｓの摂取はより低いレベルの不安およびストレスホルモンをもたらし得ることが示されている。
【００７７】
（実施例８  糞便試料中のプロバイオティック細菌を特定するための次世代配列決定法の使用）
健康なヒト成人において、特定されている糞便微生物叢の８０％は、３つの支配的な門：Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ、ＦｉｒｍｉｃｕｔｅｓおよびＡｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒｉａに分類することができる。ＦｉｒｍｉｃｕｔｅｓとＢａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓとの比は、腸管内細菌叢組成およびバランスの良好な指標と見なされている。Ｌｅｙら（２００６年）を参照されたい。ＦｉｒｍｉｃｕｔｅｓとＢａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓとの比を、異なるブロス製品を給餌された齧歯動物の群について測定した。図４に示すように、ＦｉｒｍｉｃｕｔｅｓとＢａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓとの比は、異なる群の間で有意に変化しなかった。
【００７８】
糞便微生物叢のプロファイルは、下部ＧＩ管における微生物叢の良好な指標としての役割を果たす。図５は、異なるブロス組成物を給餌された動物の下部ＧＩ管中のＰｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａの相対量を示した。ＡＡＣ１は、動物の下部ＧＩ管内のＰｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａを選択した。異なるブロス組成物を給餌された動物の下部ＧＩ管中のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓの相対量も測定した。図６に示すように、ＡＡＣ１は、動物の下部ＧＩ管でＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓを選択した（または特異的に維持した）。さらに、１つの属、Ｆａｅｃａｌｉｂａｃｔｅｒｉｕｍが、ＡＡＣ１を１４日間給餌された群においてのみ見られたが、他の群または基礎測定においては見られなかった。３つの属、Ｐａｒａｓｕｔｔｅｒｅｌｌａ、ＭｏｒｇａｎｅｌｌａおよびＯｓｃｉｌｌｏｓｐｉｒａは、基礎レベルと比較して、ＡＡＣ１で１４日後、有意に高いレベルで存在した。
【００７９】
（実施例９  盲腸試料におけるプロバイオティック細菌を特定するための次世代配列決定法の使用）
異なるブロス製品を給餌された齧歯動物の群における盲腸微生物叢のプロファイルを測定した。図７に示すように、ＡＡＣ１は、動物の盲腸内で、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓを選択した（または特異的に維持した）。さらに、４つの属、Ｏｄｏｒｉｂａｃｔｅｒ、Ｇａｓｔｒａｎａｅｒｏｐｈｉｌａｌｅｓ、ＦａｅｃａｌｉｂａｃｔｅｒｉｕｍおよびＡｌｌａｂａｃｕｌｕｍは、ＡＡＣ１を１４日間給餌された群においてのみ見られたが、他の群または基礎測定においては見られなかった。３つの属、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、ＣｏｐｒｏｃｏｃｃｕｓおよびＯｓｃｉｌｌｉｂａｃｔｅｒは、基礎レベルと比較して、ＡＡＣ１で１４日後、有意に高いレベルで存在した。１つの属、Ｉｎｔｅｓｔｉｍｏｎａｓは、基礎レベルと比較して、ＡＡＣ１で１４日後、有意に低いレベルで存在した。
【００８０】
（実施例１０  本開示の組成物は腸管内での生物多様性を増強させる）
ＮＧＳデータ分析での別の重要な検討事項は生物多様性である。より多様性のある腸管内細菌叢が有益であるということは、文献において一般に同意されていることである。ＮＧＳ分析において最も一般的に使用される生物多様性の測定法のうちの２つは、ＣｈａｏおよびＳｈａｎｎｏｎ−Ｗｅｉｎｅｒ指数である。各指数は、微生物叢がいかに多様であるかということを表す値をもたらす。図８は、ホームメイド、別の市販製品を給餌された群および水対照群における多様性と比較して、１４日後での多様性の程度が、ＡＡＣ１を給餌された動物においてはるかに高いことを実証している。
【００８１】
本明細書で説明したすべての動物試験は、政府の規則および規制に従った承認されているプロトコールを使用して実施した。その範囲を逸脱することなく、上記方法およびシステムに変更を加えることができる。したがって、上記説明に含まれる、または添付の図面に示される事柄は、例示としてのものであり、限定する意味ではないものと解釈すべきであることに留意すべきである。以下の特許請求の範囲は、本明細書で説明する全体的および特定の特徴、ならびに言語的にそこに含まれるといえる本発明の方法およびシステムの範囲の記述を包含するものである。
【００８２】
上記の実施形態のそれぞれを、特定のそれぞれの方向性を有する種々の成分で例示してきたが、本開示に記載されているシステムおよび方法は、様々な位置および相互の方向で配置されているが、それでも本開示の趣旨および範囲内に留まっている種々の成分を有する様々な特定の構成を取り入れることができることを理解すべきである。さらに、適切な均等物を、種々の成分の代わりにまたはそれに加えて使用することができ、そうした置換または追加の成分の機能および使用は、当業者によく知られているものと思われ、したがって、本開示の範囲内に包含されるものと見なされる。したがって、本発明の実施例は、例示としてのものであり、限定的なものではないものと見なされるべきであり、本開示は、本明細書で提示された詳細に限定されるべきではないが、添付の特許請求の範囲内で修正することができる。
【００８３】
特許、特許出願、学術論文および他の出版物を含む、本開示で引用したすべての文献を、参照により本出願に組み込む。
文献
本明細書で引用するか、以下に挙げたすべての文献は、本明細書で完全に再現したのと同等に本開示に組み込まれる。
【化１】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【国際調査報告】
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