(57)【要約】【課    題】  安全で、日常的に摂取あるいは皮膚への塗布により、末梢での感覚の鈍化を改善する効果を示す感覚改善剤を提供することを課題とする。また、本発明は、経口摂取や皮膚への塗布により末梢での感覚の鈍化を改善する効果を示す感覚改善用飲食品又は飼料、化粧品を提供することを課題とする。【解決手段】  乳由来タンパク質及び／または乳由来タンパク質分解物を有効成分として使用した感覚改善剤を提供する。乳由来タンパク質及び／または乳由来タンパク質分解物を経口摂取、あるいは皮膚に直接塗布することにより、感覚、特に末梢での感覚の鈍化を改善でき、感覚改善用飲食品又は飼料、化粧品とすることができる。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
乳由来タンパク質及び／または乳由来タンパク質分解物を有効成分とする感覚改善剤。
【請求項２】
前記乳由来タンパク質が、ラクトパーオキシダーゼ、ラクトフェリン、シスタチン、アンジオジェニンから選択されるいずれか１種以上であることを特徴とする請求項１記載の感覚改善剤。
【請求項３】
前記乳由来タンパク質分解物が、乳由来タンパク質を、タンパク質分解酵素によって分解して得られたものであることを特徴とする請求項１乃至２記載の感覚改善剤。
【請求項４】
前記タンパク質分解酵素がペプシン、トリプシン、キモトリプシン、パンクレアチンよりなる群から選択されるいずれか１種以上であることを特徴とする請求項３記載の感覚改善剤。
【請求項５】
請求項１及至４のいずれかに記載の成分を配合した感覚改善用飲食品又は飼料、化粧品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、以下の乳由来タンパク質及び／または乳由来タンパク質の分解物を有効成分とする、末梢神経の鈍化を改善する効果を有する感覚改善剤、及びこの感覚改善剤を配合した感覚改善用飲食品又は飼料、化粧品に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、高齢化にともない、骨粗しょう症や認知症等、加齢による疾患の増加が社会的問題となっている。そのため、このような加齢にともなう疾患を予防または改善するために、様々な医薬品が開発されている。しかしながら、医薬品は常に副作用を考慮に入れる必要があることから、近年では、食生活の見直しや、特定の食品成分の摂取によって、加齢にともなう疾患を予防または改善しようとする試みがなされている。例えば、骨粗しょう症に対しては、牛乳に含まれる塩基性タンパク質の摂取により、当該疾患を予防または改善することが知られている。また、牛乳中に比較的多く含まれるリン脂質であるスフィンゴミエリンを有効成分とするアルツハイマー型記憶障害を予防あるいは改善する記憶障害予防治療剤が知られている。
【０００３】
加齢に伴う症状の一つとして、末梢での感覚の鈍化が挙げられるが、この末梢での感覚の鈍化は、加齢だけでなく、糖尿病等の疾患によっても生じる。末梢での感覚の鈍化は、例えば、熱いものに触れたときに、正しく熱いと感じることができず、火傷等の危険性が高まることや、痛覚の鈍化により怪我の発見が遅れるといった問題を生じさせる。近年、こういった危険性を回避するため、加齢や疾患による末梢での感覚の鈍化を改善させる研究が進められている。例えば、外因性のセラミドや内因性のセラミドの生合成を増加させる効果のある酵素であるスフィンゴミエリナーゼやホスファチジルコリン特異的ホスホリパーゼCは、株化繊維芽細胞である３Ｔ３細胞を介した、つまり、３Ｔ３細胞から分泌された神経栄養因子による、神経モデル細胞であるP-12細胞の形態的な分化を促進することが報告されている（非特許文献１）。神経モデル細胞の形態的な分化の促進は、末梢での感覚鈍化の改善効果を示唆するものである。しかし、上述のセラミドや酵素は食品成分ではないことから、その使用に際しては安全性を検討する必要がある。このような状況の下、より安全で、日常的な摂取あるいは皮膚への塗布によって、末梢での感覚の鈍化を改善する効果のある剤が求められている。
【０００４】
乳に含まれる成分はさまざまな生理活性を持つことが知られているが、末梢での感覚の鈍化に対しては、乳由来のスフィンゴミエリンやリン脂質にこれを改善する効果があることが知られている（特許文献１および特許文献２）。しかしながら、乳由来のタンパク質について末梢での感覚の鈍化に対する効果は知られていない。乳由来のタンパク質としては、例えば、ラクトパーオキシダーゼ、ラクトフェリン、シスタチン、アンジオジェニンが挙げられる。
【０００５】
ラクトパーオキシダーゼは、乳中に存在し、ヘム鉄を含む糖タンパク質であるが、その詳細な構造はいまだ明らかにされていない。ラクトパーオキシダーゼの利用については、生体内で過酸化脂質の生成抑制効果があることを見いだし、視力低下、運動能力低下、免疫機能低下等を防ぐ老化防止剤や、肝機能改善剤としての利用、また、低う触作用があることから低う触栄養組成物としての利用が知られている。しかし、ラクトパーオキシダーゼ及びそのタンパク質分解酵素で分解して得られる酵素分解物が末梢神経の鈍化を改善する作用を持ち、感覚改善剤として有用であることについては知られていない。
【０００６】
ラクトフェリン及びその分解物については、細胞への病原菌付着防止作用があること、抗ウイルス作用があること等が知られている。また、上皮細胞成長因子と混合することにより、上皮細胞成長因子単独の皮膚細胞賦活化作用を高めることが報告されている。また、一般的に、ラクトフェリンには、痛みに伴うストレスや精神的なストレスを軽減する作用があることが知られている。しかし、ラクトフェリン及びそのタンパク質分解酵素で分解して得られる酵素分解物が末梢神経の鈍化を改善する作用を持ち、感覚改善剤として有用であることについては知られていない。
【０００７】
シスタチンは、システインプロテアーゼインヒビターとして、活性中心にＳＨ基を持つシステインプロテアーゼのタンパク質分解活性を阻害する物質であり、動物組織、細胞、血液及び尿中に見出されている。また、シスタチンの有用な作用として、ウイルスの増殖阻害作用が確認されている。しかし、シスタチン及びそのタンパク質分解酵素で分解して得られる酵素分解物が末梢神経の鈍化を改善する作用を持ち、感覚改善剤として有用であることについては知られていない。
【０００８】
アンジオジェニンは血管形成因子の一つである。ヒトのアンジオジェニンは分子量１４，４００のタンパク質であることが知られており、血液や乳中に存在している。ウシアンジオジェニンについては、牛乳中のアンジオジェニンを単離して、アミノ酸配列の決定が既に報告されている。また、アンジオジェニンの牛乳からの製造については、牛乳を陽イオン交換クロマトグラフィーに吸着後、弱有機酸のアルカリ金属塩水溶液で溶出し、この溶出液を再度陽イオン交換クロマトグラフィーとゲル濾過クロマトグラフィーにより回収する方法が開示されている。さらに、アンジオジェニンがメラノーマ細胞であるＢ−１６細胞のメラニン産生を特異的に抑制することを見出したことから、美白剤として利用できることも報告されている。しかし、アンジオジェニン及びそのタンパク質分解酵素で分解して得られる酵素分解物が末梢神経の鈍化を改善する作用を持ち、感覚改善剤として有用であることについては知られていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】特開２００９-１２６７８７号公報
【特許文献２】特開２００９-１２６７８８号公報
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】コスメトロジー研究報告(2002)第10号
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明は、安全で、日常的に摂取あるいは皮膚への塗布により、末梢での感覚の鈍化を改善する効果を示す感覚改善剤を提供することを課題とする。また、本発明は、経口摂取や皮膚への塗布により末梢での感覚の鈍化を改善する効果を示す感覚改善用飲食品又は飼料、化粧品を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者らは、これらの問題点を鑑み、安全で、感覚の鈍化に対して優れた改善効果を示す成分について鋭意探索を進めたところ、乳由来タンパク質及び／または乳由来タンパク質分解物のいずれかを経口摂取、あるいは皮膚に直接塗布することにより、感覚、特に末梢での感覚の鈍化を改善できることを見出した。そこで、これらを有効成分として使用することによって感覚改善剤を完成させるに至った。また、この感覚改善剤を飲食品や飼料等に配合して感覚改善用飲食品又は飼料、化粧品とすることができることを見出し、本発明を完成するに至った。なお、本明細書においては乳中に含まれるという特徴をもって、ラクトパーオキシダーゼ、ラクトフェリン、シスタチン、アンジオジェニンを「乳由来タンパク質」として記載するが、本発明の感覚改善剤に用いるこれらのタンパク質は必ずしも乳由来でなくてもよく、人工的に合成されたものや、血液等から精製されたものであってもよい。
【００１３】
すなわち本発明は、
（１）乳由来タンパク質及び／または乳由来タンパク質分解物を有効成分とする感覚改善剤。
（２）前記乳由来タンパク質が、ラクトパーオキシダーゼ、ラクトフェリン、シスタチン、アンジオジェニンから選択されるいずれか１種以上であることを特徴とする（１）記載の感覚改善剤。
（３）前記乳由来タンパク質分解物が、乳由来タンパク質を、タンパク質分解酵素によって分解して得られたものであることを特徴とする（１）乃至（２）記載の感覚改善剤。
（４）前記タンパク質分解酵素がペプシン、トリプシン、キモトリプシン、パンクレアチンよりなる群から選択されるいずれか１種以上であることを特徴とする（３）記載の感覚改善剤。
（５）（１）及至（４）のいずれかに記載の成分を配合した感覚改善用飲食品又は飼料、化粧品。
【発明の効果】
【００１４】
本発明の感覚改善剤では、末梢での感覚の鈍化を改善する効果を得ることが出来る。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
本発明の特徴は、乳由来タンパク質及び／または乳由来タンパク質分解物を有効成分とすることにある。乳由来タンパク質としては、ラクトパーオキシダーゼ、ラクトフェリン、シスタチン、アンジオジェニンが挙げられ、ヒト、ウシ、水牛、ヤギ、ヒツジ等の哺乳類の乳から得られるものや遺伝子工学的手法により生産されたものが使用可能である。また、乳由来タンパク質分解物は、これらの乳由来タンパク質にタンパク質分解酵素を作用させて得ることができるものである。
【００１６】
ラクトパーオキシダーゼは哺乳動物の乳から調製する。給源としては、ヒト、ウシ、水牛、ヤギ、ヒツジ等の乳があげられる。ラクトパーオキシダーゼは、公知の物質であって、市販されているものであるが、それを製造するには、公知の方法、例えばスルホン化担体を用いてラクトパーオキシダーゼを精製する方法（特開平３−１０９４００号公報） を工業的に利用することができる。また、本発明では、遺伝子工学的手法により生産されたラクトパーオキシダーゼも使用し得る。ラクトパーオキシダーゼ分解物は、上記のラクトパーオキシダーゼをトリプシン、パンクレアチン、キモトリプシン、ペプシン、パパイン、カリクレイン、カテプシン、サーモライシン、Ｖ８プロテアーゼ等のタンパク質分解酵素で分子量が１０，０００以下となるように限定分解したペプチド混合物である。分子量下限は５００以上が好ましい。
【００１７】
ラクトフェリンは哺乳動物の乳から調製する。給源としては、ヒト、ウシ、水牛、ヤギ、ヒツジ等の乳があげられる。ラクトフェリンは、公知の物質であって、市販されているものであるが、それを製造するには、公知の方法、例えばスルホン化担体を用いてラクトフェリンを精製する方法（特開平３−１０９４００号公報） を工業的に利用することができる。また、本発明では、遺伝子工学的手法により生産されたラクトフェリンも使用し得る。ラクトフェリン分解物は、上記のラクトフェリンをトリプシン、パンクレアチン、キモトリプシン、ペプシン、パパイン、カリクレイン、カテプシン、サーモライシン、Ｖ８プロテアーゼ等のタンパク質分解酵素で分子量が１０，０００以下となるように限定分解したペプチド混合物である。分子量の下限は５００以上が好ましい。
【００１８】
シスタチンは、ヒト、ウシ、水牛、ヤギ、ヒツジ等の乳由来のものを含めどのような由来のものであっても使用可能である。例えば、ヒト及びウシ由来のシスタチンはすでにその遺伝子配列が明らかになっており、遺伝子組換えによる生産が可能であるが、本発明では、遺伝子工学的手法により生産されたシスタチンも使用可能である。また、シスタチンはウシ初乳中に比較的大量に含有されており、乳から回収したものであっても良い。さらにシスタチンは細胞培養の培養液から回収することも可能であり、このような細胞由来のものであっても使用可能である。例えば、乳由来のシスタチンについては、公知の方法（特開２０００−２８１５８７号公報等）に従って製造することが可能であり、生乳や粉乳、脱脂乳、還元乳等から加熱処理、加塩処理、エタノール処理、イオン交換クロマトグラフィーやゲル濾過クロマトグラフィー等の各種クロマト処理、限外濾過処理等を行うことにより、シスタチンを得ることができる。シスタチン分解物は、シスタチンをトリプシン、パンクレアチン、キモトリプシン、ペプシン、パパイン、カリクレイン、カテプシン、サーモライシン、Ｖ８プロテアーゼ等のタンパク質分解酵素で分子量が８，０００以下となるように限定分解したペプチド混合物を使用することが可能である。但し、分子量の下限は５００以上であることが好ましい。
【００１９】
アンジオジェニンの給源としては、ヒト、ウシ、水牛、ヤギ、ヒツジ等の分娩後１〜７日以内、特に好ましくは分娩後１〜５日以内の初乳のアンジオジェニン含量が高いため適しているが、通常の泌乳期の乳であっても本発明の原料として使用可能である。それを製造するには、公知の方法、例えば、陽イオン交換クロマトグラフィーとゲル濾過クロマトグラフィーを組み合わせてアンジオジェニンを精製する方法（特開平２−２９６０００号公報等)を工業的に利用することができる。アンジオジェニン分解物は、上記のアンジオジェニンをトリプシン、パンクレアチン、キモトリプシン、ペプシン、パパイン、カリクレイン、カテプシン、サーモライシン、Ｖ８プロテアーゼ等のタンパク質分解酵素で分子量が１０， ０００以下となるように限定分解したペプチド混合物である。分子量の下限は５００以上が好ましい。
【００２０】
本発明の感覚改善剤は、上記の乳由来タンパク質、特にラクトパーオキシダーゼやラクトフェリン、シスタチン、アンジオジェニン、あるいは乳由来タンパク質にタンパク質分解酵素を作用させて得ることができる分解物をそのまま感覚改善剤として用いることも可能であるが、この他に糖類や脂質、タンパク質、ビタミン類、ミネラル類、フレーバー等、他の医薬品、飲食品や飼料に通常使用する原材料等と混合することや、さらに常法に従い粉末剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、ドリンク剤などに製剤化することも可能である。また、塗布剤としては、乳液、クリーム、ローション、パックなど通常の塗布形態で用いることができる。これらの塗布剤は常法により製造し、本発明の有効成分である乳由来タンパク質及び／または乳由来タンパク質分解物をその製造過程で適宜配合すればよく、化粧品としての使用も可能である。また、乳由来タンパク質及び／または乳由来タンパク質分解物に加えて、他の感覚改善効果を示す成分、例えばセラミドやスフィンゴミエリナーゼ、スフィンゴミエリン等を共に使用することも可能である。本発明の感覚改善剤の有効量としては、後述するマウスでの試験において、体重１ｋｇあたり乳由来タンパク質及び／または乳由来タンパク質分解物を１０ｍｇ以上、好ましくは２０ｍｇ以上経口摂取させることにより、末梢での感覚が改善することから、通常、成人一人一日あたり、乳由来タンパク質及び／または乳由来タンパク質分解物を１０ｍｇ以上、好ましくは２０ｍｇ以上摂取することにより感覚、特に、末梢での感覚の鈍化の改善が期待できるので、この必要量を確保できるようにすればよい。また、皮膚へ塗布する場合、皮膚塗布剤の総量を基準として、０.００１〜４０重量％、より好ましくは０.１〜１０重量％である。
【００２１】
本発明の感覚改善用飲食品としては、通常の飲食品、例えばヨーグルト、乳飲料、ウエ
ハース、デザート等に乳由来タンパク質及び／または乳由来タンパク質分解物を配合すればよい。これらの感覚改善用飲食品については、成人一人一日あたり、乳由来タンパク質及び／または乳由来タンパク質分解物を１０ｍｇ以上摂取させるために、飲食品の形態にもよるが飲食品１００ｇあたり乳由来タンパク質及び／または乳由来タンパク質分解物を０．５〜２０００ｍｇ配合することが好ましい。また、本発明の感覚改善用飼料は、通常の飼料、例えば家畜用飼料やペットフード等に乳由来タンパク質及び／または乳由来タンパク質分解物を配合すればよい。例えば、これらの飼料について、乳由来タンパク質及び／または乳由来タンパク質分解物を配合する場合、乳由来タンパク質及び／または乳由来タンパク質分解物を１０ｍｇ以上摂取させるために、飼料１００ｇあたり乳由来タンパク質及び／または乳由来タンパク質分解物を０．５〜２０００ｍｇ配合することが好ましい。
【００２２】
本発明では、乳由来タンパク質及び／または乳由来タンパク質分解物を配合する方法に特に制限はないが、例えば、溶液中で添加、配合するには、乳由来タンパク質及び／または乳由来タンパク質分解物を脱イオン水に懸濁あるいは溶解し、撹拌混合した後、医薬品、飲食品や飼料の形態に調製して使用する。撹拌混合の条件としては、乳由来タンパク質及び／または乳由来タンパク質分解物が均一に混合されればよく、ウルトラディスパーサーやＴＫホモミクサー等を使用して撹拌混合することも可能である。また、当該組成物の溶液は、医薬品、飲食品や飼料に使用しやすいように、必要に応じて、ＲＯ膜等での濃縮や、凍結乾燥して使用することができる。本発明では、医薬品、飲食品や飼料の製造に通常使用される殺菌処理が可能であり、粉末状であっては乾熱殺菌も可能である。従って、本発明の乳由来タンパク質及び／または乳由来タンパク質分解物を含有する液状、ゲル状、粉末状、顆粒状等様々な形態の医薬品、飲食品や飼料を製造することができる。
【００２３】
以下に、実施例及び試験例を示し、本発明についてより詳細に説明するが、これらは単
に例示するのみであり、本発明はこれらによって何ら限定されるものではない。
【実施例１】
【００２４】
陽イオン交換樹脂であるスルホン化キトパール（富士紡績社製）４００ｇを充填したカラム（直径５ｃｍ×高さ３０ｃｍ）を脱イオン水で十分に洗浄した後、このカラムに未殺菌脱脂乳４０L（ｐＨ６．７）を流速２５ｍｌ／ｍｉｎで通液した。通液後、カラムを脱イオン水で十分洗浄し、２．０Ｍ塩化ナトリウムを含む０．０２Ｍ炭酸緩衝液（ｐＨ７．０） で溶出した。そしてラクトパーオキシダーゼを含有する溶出画分をＳ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＦＦカラム（ＧＥヘルスケア社製）に吸着させ、脱イオン水で十分洗浄し、１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０） で平衡化した後、０〜２．０Ｍ塩化ナトリウムのリニアグラジエントで吸着した画分を溶出し、ラクトパーオキシダーゼを含む画分を回収した。そしてその画分をＨｉＬｏａｄ １６／６０ Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ７５ ｐｇ（ＧＥヘルスケア社製） を用いたゲル濾過クロマトグラフィーで処理し、ラクトパーオキシダーゼ３．０ｇを得た。なお、このようにして得られたラクトパーオキシダーゼの純度は９４％であり、そのまま感覚改善剤（実施例品１）として使用可能である。
【実施例２】
【００２５】
実施例１で得られたラクトパーオキシダーゼ１ｇを水２００ｍｌに溶解し、最終濃度が０．０１重量％ となるようタンパク質分解酵素であるパンクレアチン（シグマ社製） を加え、３７℃で５時間酵素処理した。そして、９０℃で５分間加熱処理して酵素を失活させた後、凍結乾燥してラクトパーオキシダーゼ分解物０．８ｇを得た。なお、このようにして得られたラクトパーオキシダーゼ分解物の分子量は、１０，０００以下であり、そのまま感覚改善剤（実施例品２）として使用可能である。
【実施例３】
【００２６】
実施例１で得られたラクトパーオキシダーゼ１ｇを水２００ｍｌに溶解し、最終濃度が０．０１重量％となるようタンパク質分解酵素であるトリプシン（シグマ社製）を加え、３７ ℃ で５時間酵素処理した。そして、９０℃で５分間加熱処理して酵素を失活させた後、凍結乾燥してラクトパーオキシダーゼ分解物０．９ｇを得た。なお、このようにして得られたラクトパーオキシダーゼ分解物の分子量は、１０，０００以下であり、そのまま感覚改善剤（実施例品３）として使用可能である。
【実施例４】
【００２７】
陽イオン交換樹脂であるスルホン化キトパール（富士紡績社製）４００ｇを充填したカラム（直径５ｃｍ×高さ３０ｃｍ）を脱イオン水で十分に洗浄した後、このカラムに未殺菌脱脂乳４０L（ｐＨ６．７）を流速２５ｍｌ／ｍｉｎで通液した。通液後、カラムを脱イオン水で十分洗浄し、２．０Ｍ 塩化ナトリウムを含む０．０２Ｍ 炭酸緩衝液（ｐＨ７．０）で溶出した。そしてラクトフェリンを含有する溶出画分をＳ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  ＦＦカラム（ＧＥヘルスケア社製） に吸着させ、脱イオン水で十分洗浄し、１０ｍＭ リン酸緩衝液（ｐＨ７．０）で平衡化した後、０〜２．０Ｍ塩化ナトリウムのリニアグラジエントで吸着した画分を溶出し、ラクトフェリンを含む画分を回収した。そしてその画分をＨｉＬｏａｄ  １６／６０  Ｓｕｐｅｒｄｅｘ  ７５  ｐｇ（ＧＥヘルスケア社製） を用いたゲル濾過クロマトグラフィーで処理し、ラクトフェリン８．０ｇ を得た。なお、このようにして得られたラクトフェリンの純度は９６％であり、そのまま感覚改善剤（実施例品４）として使用可能である。
【実施例５】
【００２８】
実施例４で得られたラクトフェリン１ｇを水２００ｍｌに溶解し、最終濃度が０．０１重量％となるようタンパク質分解酵素であるパンクレアチン（シグマ社製） を加え、３７℃で５時間酵素処理した。そして、９０℃で５分間加熱処理して酵素を失活させた後、凍結乾燥してラクトフェリン分解物０．８ｇを得た。なお、このようにして得られたラクトフェリン分解物の分子量は、１０，０００以下であり、そのまま感覚改善剤（実施例品５）として使用可能である。
【実施例６】
【００２９】
実施例４で得られたラクトフェリン１ｇを水２００ｍｌに懸濁し、最終濃度が０．０１重量％となるようタンパク質分解酵素であるトリプシン（シグマ社製）を加え、３７℃で５時間酵素処理した。そして、９０℃で５分間加熱処理して酵素を失活させた後、凍結乾燥してラクトフェリン分解物０．９ｇを得た。なお、このようにして得られたラクトフェリン分解物の分子量は、１０，０００以下であり、そのまま感覚改善剤（実施例品６）として使用可能である。
【実施例７】
【００３０】
Ｓセファロース３,０００ｇ を充填したカラムを脱イオン水で充分洗浄し、脱脂乳１０,０００Ｌを通液し、脱イオン水で充分洗浄した後、０．１〜１．０Ｍの塩化ナトリウムの直線濃度勾配で溶出した。得られた画分を９０℃で１０分間加熱処理し、遠心分離することにより沈澱を除去した。そして、牛乳由来塩基性シスタチンを含む溶出画分を再度ＭｏｎｏＳイオン交換クロマトグラフィーで分画した。さらに、この画分をＦＰＬＣシステムによりＭｏｎｏＱイオン交換クロマトグラフィー、Ｓｕｐｅｒｏｓｅ１２ゲル濾過クロマトグラフィーを行い、さらにＨＰＬＣシステムにてヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー及びＣ４逆相クロマトグラフィーで順次処理し、シスタチン５８ｍｇ（画分Ａ）を得た。なお、このようにして得られたシスタチンは、そのまま感覚改善剤（実施例品７）として使用可能である。
【実施例８】
【００３１】
５％乳清タンパク質溶液１０，０００Ｌを９０℃で１０分間加熱処理し、遠心分離することにより沈澱を除去した。さらに、カルボキシメチル化パパインをトレシルトヨパール（Ｔｒｅｓｙｌ−Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ、東ソー社製） に結合させた担体をカラムに充填後、０．５Ｍ塩化ナトリウム溶液で平衡化し、先の乳清タンパク質溶液を通液した。通液後、０．５Ｍ塩化ナトリウム溶液と０．１％ Ｔｗｅｅｎ２０を含む０．５Ｍ塩化ナトリウム溶液で順次カラムを洗浄した。次いで、２０ｍＭ 酢酸−０．５Ｍ塩化ナトリウム溶液でシステインプロテアーゼを溶出させた。溶出画分を直ちに１Ｍ水酸化ナトリウム溶液で中和し、ＭｏｎｏＳ陰イオン交換クロマトグラフィー、さらにＨＰＬＣシステムにてヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー及びＣ４逆相クロマトグラフィーで順次処理して分画し、牛乳由来塩基性シスタチン４８ｍｇ（画分Ｂ）を得た。なお、このようにして得られたシスタチンは、そのまま感覚改善剤（実施例品８）として使用可能である。
【実施例９】
【００３２】
実施例７で得られた画分Ａ２５ｍｇを、水１００ｍｌに懸濁し、最終濃度が１％となるようにパンクレアチンを加えて、３７℃で５時間酵素処理した。そして、９０℃で５分間加熱処理して酵素を失活させた後、凍結乾燥して、シスタチン分解物２３ｍｇ（画分Ｃ）を得た。また、実施例８で得られた画分Ｂ２５ｍｇを、同様に処理し、シスタチン分解物 ２４ｍｇ（画分Ｄ）を得た。なお、このようにして得られたシスタチン分解物の分子量は、８，０００以下であり、そのまま感覚改善剤（実施例品９）として使用可能である。
【実施例１０】
【００３３】
陽イオン交換樹脂であるスルホン化キトパール（富士紡績社製）４００ｇを充填したカラム（直径５ｃｍ×高さ３０ｃｍ）を脱イオン水で十分に洗浄した後、このカラムに未殺菌脱脂乳４０L（ｐＨ６．７）を流速２５ｍｌ／ｍｉｎで通液した。通液後、カラムを脱イオン水で十分洗浄し、２．０Ｍ 塩化ナトリウムを含む０．０２Ｍ 炭酸緩衝液（ｐＨ７．０）で溶出した。そしてアンジオジェニンを含有する溶出画分をＳ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  ＦＦカラム（ＧＥヘルスケア社製）に吸着させ、脱イオン水で十分洗浄し、１０ｍＭ  リン酸緩衝液（ｐＨ７．０）で平衡化した後、０〜２．０Ｍ 塩化ナトリウムのリニアグラジエントで吸着した画分を溶出し、アンジオジェニンを含む画分を回収した。そしてその画分をＨｉＬｏａｄ １６／６０ Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ７５  ｐｇ（ＧＥヘルスケア社製） を用いたゲル濾過クロマトグラフィーで処理し、アンジオジェニンを多く含む画分１．８ｇを得た。なお、このようにして得られたアンジオジェニンを多く含む画分中のアンジオジェニン含量は１０％であり、そのまま感覚改善剤（実施例品１０）として使用可能である。
【実施例１１】
【００３４】
陽イオン交換樹脂であるスルホン化キトパール（富士紡績社製）３，０００ｇを充填したカラムを脱イオン水で十分に洗浄した後、このカラムに未殺菌脱脂乳１００L（ｐＨ６．７）を通液した。次に、このカラムを脱イオン水で十分洗浄した後、０．１〜２．０Ｍ  塩化ナトリウムの直線濃度勾配で溶出した。そして、アンジオジェニンを含有する溶出画分をＳ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ陽イオン交換クロマトグラフィー（GEヘルスケア社製）で分画し、得られたアンジオジェニン含有画分を９０℃で１０分間加熱処理し、遠心分離することにより沈澱を除去した。さらに、このアンジオジェニン含有画分をＭｏｎｏＳ陽イオン交換クロマトグラフィー、Ｓｕｐｅｒｏｓｅ １２ゲル濾過クロマトグラフィー、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー及びＣ４逆相クロマトグラフィーで順次処理し、アンジオジェニン５５ｍｇを得た。なお、このようにして得られたアンジオジェニンの純度は９９％であり、そのまま感覚改善剤（実施例品１１）として使用可能である。
【実施例１２】
【００３５】
実施例１１ で得られたアンジオジェニン５ｍｇを水１０ｍｌに溶解し、最終濃度０．０１重量％となるようパンクレアチン（シグマ社製）を加え、３７℃で５時間酵素処理した。そして、９０℃で５分間加熱処理して酵素を失活させた後、凍結乾燥してアンジオジェニン分解物４．０ｍｇを得た。このようにして得られたアンジオジェニン分解物の分子量は１０，０００以下であり、そのまま感覚改善剤（実施例品１２）として使用可能である。
【実施例１３】
【００３６】
実施例１１で得られたアンジオジェニン５ｍｇを水１０ｍｌに溶解し、最終濃度０．０１重量％となるようトリプシン（シグマ社製） を加え、３７℃で５時間酵素処理した。そして、９０℃で５分間加熱処理して酵素を失活させた後、凍結乾燥してアンジオジェニン分解物４．２ｍｇを得た。このようにして得られたアンジオジェニン分解物の分子量は１０，０００以下であり、そのまま感覚改善剤（実施例品１３）として使用可能である。
【００３７】
[試験例１]
(細胞分化促進活性の確認)
皮膚に存在することが知られている繊維芽細胞の細胞株である３Ｔ３細胞を、実施例品１および実施例品３、実施例品４、実施例品５、実施例品７、実施例品９の画分Ｃ、実施例品１１、実施例品１３を０．０３〜１％の濃度で添加した状態で、２日間培養した。また、対照として、３Ｔ３細胞を、実施例品を添加しないで２日間培養した（対照）。それら培養上清を用いて神経のモデル細胞であるＰＣ−１２細胞を培養し、３Ｔ３細胞から神経栄養因子が分泌された場合のＰＣ−１２細胞の形態的な分化を観察した。
【００３８】
その結果、実施例品を添加した場合の培養上清は、すべてＰＣ−１２細胞を強く分化させた。また、この実験を数回繰り返し、分化の割合を光学顕微鏡下で観察した結果、実施例品を添加した場合は、９５％以上の細胞に分化が認められた。一方、対照の培養上清は、ＰＣ−１２細胞を分化させず、数回の繰り返し実験における光学顕微鏡下の観察において、まったく分化は認められなかった。このことから、乳由来タンパク質及び／または乳由来タンパク質分解物が、３Ｔ３細胞からの神経栄養因子の分泌を促し、神経のモデル細胞であるＰＣ−１２細胞の分化を促進することがわかった。
【００３９】
［試験例２］
(動物実験による感覚改善効果の確認)
Ｗｏｏｌｆｅ，ＭａｃＤｏｎａｌｄらが開発した熱刺激に対する行動学的研究法であるホットプレート試験にて熱刺激による感覚改善効果を評価した。２４週齢のヘアレスマウス(Ｈｏｓ：ＨＲ−１)を６匹ずつ１３群に分けた。実施例品２および実施例品６、実施例品８、実施例品９の画分Ｄ、実施例品１０、実施例品１２をマウス体重１ｋgあたりそれぞれ１０ｍｇ、２０ｍｇになるよう１日１回ゾンデで経口投与する、あるは、いずれの実施例品も含まない溶媒のみを１日１回ゾンデで経口投与（対照；０ｍｇ）して４週間飼育した。投与終了時に５４℃のホットプレートにマウスを置き、マウスがホットプレートから足を離す、立ち上がる、ジャンプするなどの逃避行動までの時間を測定した。熱刺激の最大強度を３０秒に設定し、このときの値は３０秒とした。その結果を表１に示す。
【００４０】
【表１】
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【００４１】
表１に示したように、実施例品２および実施例品６、実施例品８、実施例品９の画分Ｄ、実施例品１０、実施例品１２を１０ｍｇ摂取することにより、逃避行動陽性反応時間が短縮する傾向が認められ、２０ｍｇでは明らかに短縮した。このことから、実施例品２および実施例品６、実施例品８、実施例品９の画分Ｄ、実施例品１０、実施例品１２を摂取することにより感覚、特に、末梢での感覚の鈍化を予防・改善できることがわかった。
【００４２】
［試験例３］
（経口摂取による感覚改善効果の確認）
手の感覚の鈍化を感じている健康な高齢者（平均年齢７５±３歳）を１０名ずつ、９群に分けた。それぞれを、いずれの実施例品も摂取しない群（Ａ群）、実施例品１を１０ｍｇ摂取する群（Ｂ群）、２０ｍｇ摂取する群（Ｃ群）、実施例品４を１０ｍｇ摂取する群（Ｄ群）、２０ｍｇ摂取する群（Ｅ群）、実施例品７を１０ｍｇ摂取する群（Ｆ群）、２０ｍｇ摂取する群（Ｇ群）、実施例品１１を１０ｍｇ摂取する群（Ｈ群）、２０ｍｇ摂取する群（Ｉ群）とし、６週間摂取してもらった。摂取前と６週間の摂取終了後に表在知覚計アルゲジオメーター(インタークロス社製)を用い、上腕内側の痛覚を基準として手掌と足底土踏まずの痛覚を使用方法に基づき正常、低下I〜IIIの計４段階で測定した。その結果を表２、表３に示す。また、６週間の摂取終了後に、それぞれの高齢者に、手の感覚の改善についてアンケート調査を実施した。その結果を表４、表５に示す。
（測定方法）
５種類の太さの違うピンと５つの支点位置で痛覚を評価した。まず、最も細い１pinを上腕内側に転がし、正常な痛覚の度合いを被験者に確認した。次に、手掌と足底に１pinにてホルダを持つ支点の位置を順に変えて転がし、最初に感じた痛覚と同程度の痛みを感じる支点の位置を探した。
（評価方法）
アルゲジオメーターは上腕内側で１pin(支点５０ｇ)を転がした場合と、手掌での２pin(５０ｇ)で同じ痛みを生じる用に設計されており、使用方法に基づき、以下のように評価した。また、痛みの評価に点数をつけ、平均値を算出した。
２pin(５０ｇ)で同じ痛みであれば、正常(０点)
１pin(５０ｇ)で同じ痛みであれば、低下I(１点)
１pin(６０ｇ)で同じ痛みであれば、低下II(２点)
１pin(７０ｇ)で同じ痛みであれば、低下III(３点)
【００４３】
【表２】
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【００４４】
【表３】
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【００４５】
【表４】
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【００４６】
【表５】
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【００４７】
表２乃至表５に示したように、実施例品１や実施例品４、実施例品７、実施例品１１を１０ｍｇ摂取することにより、手、足底の感覚が改善する傾向が認められ、２０ｍｇでは明らかに改善した。通常、成人一人一日あたり、乳由来タンパク質及び／または乳由来タンパク質分解物を１０ｍｇ以上、好ましくは２０ｍｇ以上摂取することにより感覚、特に、末梢での感覚の鈍化の改善が期待できる。
【実施例１４】
【００４８】
（感覚改善用化粧品（クリーム）の調製）
実施例３で得られたラクトパーオキシダーゼ分解物（実施例品３）を使用し、表６に記載される割合で原料を混合し、感覚改善用化粧品（クリーム）を製造した。
【００４９】
【表６】
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【００５０】
[試験例４]
（皮膚への塗布による感覚改善効果試験）
手の感覚の鈍化を感じている健康な高齢者（平均年齢７５±３歳）を１５名ずつ、Ａ群、Ｂ群の２群に分けた。Ａ群では実施例品１４と同様の方法で製造した、感覚改善剤を含まない化粧品（クリーム）を、Ｂ群では、実施例品１４の感覚改善用化粧品（クリーム）を１日１回手と足の全体へ塗布した。塗布期間は６週間とし、塗布前と６週間の塗布終了後に表在知覚計アルゲジオメーター(インタークロス(株)社製)を用い、上腕内側の痛覚を基準として手掌と足底土踏まずの痛覚を使用方法に基づき正常、低下I〜IIIの計４段階で測定した。その結果を表７、表８に示す。また、６週間の塗布終了後に、被験者それぞれに、手の感覚の改善についてアンケート調査を実施した。その結果を表９、表１０に示す。なお、測定方法については試験例３と同様に行った。
【００５１】
【表７】
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【００５２】
【表８】
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【００５３】
【表９】
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【００５４】
【表１０】
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【００５５】
表７乃至表１０に示したように、実施例品１４の感覚改善用化粧品（クリーム）を塗布することにより、手、足底の感覚が改善する傾向が認められた。このことから、本発明の感覚改善剤を含有するクリームを塗布することで、感覚、特に、末梢での感覚の鈍化の改善が期待できることがわかった。
【実施例１５】
【００５６】
（感覚改善用液状栄養組成物の調製）
実施例品５のラクトフェリン分解物５ｇを４９９５ｇの脱イオン水に溶解し、ＴＫホモミクサー（ＴＫ ＲＯＢＯ ＭＩＣＳ；特殊機化工業社製）にて、６０００ｒｐｍで３０分間撹拌混合してラクトフェリン分解物１００ｍｇ／１００ｇのラクトフェリン分解物溶液を得た。このラクトフェリン分解物溶液５．０ｋｇに、カゼイン４．０ｋｇ、大豆タンパク質５．０ｋｇ、魚油１．０ｋｇ、シソ油３．０ｋｇ、デキストリン１８．０ｋｇ、ミネラル混合物６．０ｋｇ、ビタミン混合物１．９５ｋｇ、乳化剤２．０ｋｇ、安定剤４．０ｋｇ、香料０．０５ｋｇを配合し、２００ｍｌのレトルトパウチに充填し、レトルト殺菌機（第１種圧力容器、ＴＹＰＥ：ＲＣＳ−４ＣＲＴＧＮ、日阪製作所社製）で１２１℃、２０分間殺菌して、本発明の感覚改善用液状栄養組成物５０ｋｇを製造した。このようにして得られた感覚改善用液状栄養組成物には、すべて沈殿等は認められず、風味に異常は感じられなかった。なお、この感覚改善用液状栄養組成物には、１００ｇあたり、ラクトフェリン分解物が１０ｍｇ含まれていた。
【実施例１６】
【００５７】
（感覚改善用ゲル状食品の調製）
実施例品８のシスタチン２ｇを７０８ｇの脱イオン水に溶解し、ウルトラディスパーサー（ＵＬＴＲＡ−ＴＵＲＲＡＸ Ｔ−２５；ＩＫＡジャパン社製）にて、９５００ｒｐｍで３０分間撹拌混合した。この溶液に、ソルビトール４０ｇ、酸味料２ｇ、香料２ｇ、ペクチン５ｇ、乳清タンパク質濃縮物５ｇ、乳酸カルシウム１ｇ、脱イオン水２３５ｇを添加して、撹拌混合した後、２００ｍｌのチアパックに充填し、８５℃、２０分間殺菌後、密栓し、本発明の感覚改善用ゲル状食品５袋（２００ｇ入り）を調製した。このようにして得られた感覚改善用ゲル状食品には、すべて沈殿等は認められず、風味に異常は感じられなかった。なお、この感覚改善用ゲル状食品には、１００ｇあたり、シスタチンが２００ｍｇ含まれていた。
【実施例１７】
【００５８】
（感覚改善用飲料の調製）
酸味料２ｇを７０６ｇの脱イオン水に溶解した後、実施例品１１のアンジオジェニン４ｇを溶解し、ウルトラディスパーサー（ＵＬＴＲＡ−ＴＵＲＲＡＸ Ｔ−２５；ＩＫＡジャパン社製）にて、９５００ｒｐｍで３０分間撹拌混合した。マルチトール１００ｇ、還元水飴２０ｇ、香料２ｇ、脱イオン水１６６ｇを添加した後、１００ｍｌのガラス瓶に充填し、９５℃、１５秒間殺菌後、密栓し、感覚改善用飲料１０本（１００ｍｌ入り）を調製した。このようにして得られた感覚改善用飲料には、すべて沈殿は認められず、風味に異常は感じられなかった。なお、この感覚改善用飲料には、１００ｇあたり、アンジオジェニンが４００ｍｇ含まれていた。
【実施例１８】
【００５９】
（感覚改善用飼料の調製）
実施例品２のラクトパーオキシダーゼ分解物２ｋｇを９８ｋｇの脱イオン水に溶解し、ＴＫホモミクサー（ＭＡＲＫII  １６０型；特殊機化工業社製）にて、３６００ｒｐｍで４０分間撹拌混合してラクトパーオキシダーゼ分解物を２ｇ／１００ｇ含有するラクトパーオキシダーゼ分解物溶液を得た。このラクトパーオキシダーゼ分解物溶液１０ｋｇに大豆粕１２ｋｇ、脱脂粉乳１４ｋｇ、大豆油４ｋｇ、コーン油２ｋｇ、パーム油２３．２ｋｇ、トウモロコシ澱粉１４ｋｇ、小麦粉９ｋｇ、ふすま２ｋｇ、ビタミン混合物５ｋｇ、セルロース２．８ｋｇ、ミネラル混合物２ｋｇを配合し、１２０℃、４分間殺菌して、本発明の感覚改善用イヌ飼育飼料１００ｋｇを製造した。なお、この感覚改善用イヌ飼育飼料には、１００ｇあたり、ラクトパーオキシダーゼ分解物が２００ｍｇ含まれていた。
【実施例１９】
【００６０】
（感覚改善剤（錠剤）の調製）
表１１に示す配合で原料を混合後、常法にしたがって１ｇに成型、打錠して本発明の感覚改善剤を製造した。なお、この感覚改善剤１ｇ中には、ラクトパーオキシダーゼが１００ｍｇ含まれていた。
【００６１】
【表１１】
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【実施例２０】
【００６２】
（感覚改善用化粧品（ローション）の調製）
表１２に記載される割合で原料を混合し、感覚改善用化粧品（ローション）を製造した。
【００６３】
【表１２】
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