(57)【要約】      （修正有）【課題】試料中に存在するアナライトを検出するためのデバイスであって、特に体液中に存在するアナライトに対して免疫アッセイを実施するのに特に有用であるデバイスを提供する。【解決手段】移動性リガンドおよび移動性抗体を含んでおり、移動性抗体がアナライトおよび／または移動性リガンドと特異結合する、流動領域と、流動領域の下流に配置されており、移動性リガンドと結合する固定化されたトラッピング受容体を含んでいるブロッキング領域と、ブロッキング領域の下流に配置されており、移動性抗体と結合する固定化された検出受容体を含んでいる検出領域とを有する。【選択図】図４
0003158764.tif 000002
【実用新案登録請求の範囲】
【請求項１】
液体試料中におけるアナライトの有無を検出するための試験デバイスであって、
移動性リガンドおよび移動性抗体を含んでおり、移動性抗体がアナライトおよび／または移動性リガンドと特異結合する、流動領域と、
流動領域の下流に配置されており、移動性リガンドと結合する固定化されたトラッピング受容体を含んでいるブロッキング領域と、
ブロッキング領域の下流に配置されており、移動性抗体と結合する固定化された検出受容体を含んでいる検出領域と
を有する、試験デバイス。
【請求項２】
移動性抗体が、移動性リガンドが試料に接触される前に試料に接触されるようになされる、請求項１に記載のデバイス。
【請求項３】
試料が移動性リガンドに接触する前に移動性抗体に接触するように、移動性リガンドが移動性抗体から空間的に分離されるようになされている、請求項１に記載のデバイス。
【請求項４】
流動領域、ブロッキング領域および検出領域を横切る前記液体試料の流れを補助するようなラテラルフローストリップの方式を採用するように構成される、請求項１に記載のデバイス。
【請求項５】
移動性リガンドおよび移動性抗体がある間隙だけ分離されるようになされる、請求項１に記載のデバイス
【請求項６】
移動性リガンドがアナライトとは異なる結合対の一要素を含み、固定化されたトラッピング受容体が結合対の他方の要素を含む、請求項１に記載のデバイス。
【請求項７】
結合対が、ビオチンおよびアビジン、ビオチンおよびステレプトアビジン、ならびに、ローダミンおよび抗ローダミンのグループから選択される、請求項６に記載のデバイス。
【請求項８】
結合対がビオチンおよびストレプトアビジンから構成される、請求項６に記載のデバイス。
【請求項９】
移動性リガンドおよび移動性抗体がある垂直距離または水平距離だけ互いから分離されるようになされる、請求項１に記載のデバイス。
【請求項１０】
移動性リガンドおよび移動性抗体がある水平距離だけ互いから分離されるようになされる、請求項１に記載のデバイス。
【請求項１１】
移動性抗体が乾燥状態で存在して第１の吸水性ストリップ内に収容され、移動性リガンドが乾燥状態で存在して第２の吸水性ストリップ内に収容されており、第１のストリップが第２のストリップから物理的に分離されている、請求項１に記載のデバイス。
【請求項１２】
ブロッキング領域および検出領域が第２の吸水性ストリップ上に配置され、移動性リガンドの下流に配置される、請求項１１に記載のデバイス。
【請求項１３】
移動性抗体と移動性リガンドとが第１の結合親和力を有し、アナライトと移動性抗体とが第２の結合親和力を有しており、第１の結合親和力が第２の親和定数より大きい、請求項１に記載のデバイス。
【請求項１４】
移動性抗体が着色粒子をさらに有する、請求項１に記載のデバイス。
【請求項１５】
試料が移動性抗体に接触する接触時間が、試料が移動性リガンドに接触する接触時間より長くなるように、移動性リガンドおよび移動性抗体が流動領域上に構成されている、請求項１に記載のデバイス。
【請求項１６】
移動性抗体が検出可能な標識を有する、請求項１に記載のデバイス。
【考案の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
アナライトを検出するためのデバイスおよび方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
試料中のアナライトを検出するための免疫アッセイは多様な分野で広く使用されている。免疫アッセイは、病気の診断、予後および／または治療を助けるために、様々な試料中（唾液、血液、尿、血清および汗など）のアナライトを検出するのに使用することができる。例えば、免疫アッセイは、妊娠初期の徴候、腫瘍の存在、感染症、および薬物乱用を監視するために日常的に実施される。免疫アッセイは、抗原／抗体、ハプテン／抗体およびビオチン／抗ビオチンなど免疫分子間に含まれる特異結合部位を利用して行われる。ほとんどの免疫アッセイは、ラテラルフロー試験ストリップ、ガラスもしくはプラスチックの多孔質ディスク、または免疫クロマトグラフィデバイス（ｉｍｍｕｎｅ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ  ｄｅｖｉｃｅ）上など、固相上で実施される。
【０００３】
免疫アッセイには２つの一般的な方式がある。すなわち、サンドイッチアッセイおよび競合アッセイである。競合免疫アッセイでは、アナライトが抗体と結合するために、標識されたアナライトと競合する。この方式は、試料中のハプテンなどの小さなアナライトを検出するのに一般に使用されている。使用される標識は、検出領域または結果読取領域内で着色バンドとしてその存在を示す標識であってよい。競合原理を用いた試薬およびデバイスがＵＳ４，２３５，６０１、ＵＳ４，４４２，２０４、ＵＳ５，２２９，０７３に詳細に記載されている。競合原理を用いたデバイスでは、検出領域の色が変化しない場合、または検出領域もしくは結果読取領域内に着色バンドが現れない場合、このことは陽性結果を示し、それにより、アナライトが試料中に存在する可能性があることが示される。逆に、検出領域もしくは結果読取領域内にすでに色が存在する場合、または着色バンドが現れた場合、これは陰性結果と解釈されてよく、それにより、アナライトが試料中に存在していな可能性が示される。
【０００４】
陽性結果が直接に示される別のデバイスが、例えば、ＵＳ５，０２８，５３５、ＵＳ５，０８９，３９１、ＵＳ５，６２７，５２６、ＵＳ５，１４３，８５２、ＵＳ５，４８０，７９２およびＵＳ５，９８５，５７９に記載されている。このようなデバイスが例えばハプテンの検出に使用されるとき、アナライトが存在する場合またはその濃度が予想されるしきい値より高い場合は試験領域内に色が現れて陽性結果を示す。逆に、陰性結果は、アナライトが存在していないまたはアナライト濃度が予想されるしきい値より低い可能性があることを示している。上述したデバイスおよび方法は一度に複数のアナライトを検出することができるが、それでも、現在使用可能であるデバイスには多くの欠点がある。例えば、試料と、アナライトと結合するための複数の抗体とを、反応させるために、ニトロセルロース（ＮＣ）膜に加える前に約１０分から１５分の間、試料ウェル内に入れる必要がある。また、ＮＣ膜は個々の結果を読み取る前にくり返し洗浄される必要がある。したがって、これらのデバイスは手間がかかる上、操作が不便であり、複数のステップの反応を必要とする。
【０００５】
ＵＳ５，４５１，５０４では、３つの特異的な領域と、流動領域（ｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ  ｚｏｎｅ）と、トラップ領域と、検出領域とを有する試験ストリップが開示されている。流動領域内の着色標識（ｃｏｌｏｒ  ｌａｂｅｌ）に結合されている抗体がアナライトと結合して錯体（着色標識−抗体−アナライトの錯体）を形成することができる。この錯体は、液体により、リガンドが固定化されているトラップ領域まで移動され得る。この固定化されたリガンドは、すでにアナライトとともに錯体を形成している抗体に結合することができない。この錯体は安定しており、固定化されたリガンドの影響を受けることはない。リガンドは自由に遊動していて、それまでにアナライトに結合されていない抗体とは結合することができるだけである。その後、アナライト−抗体の錯体は固定化された検出受容体によって捕捉されて直接的に陽性結果を示すことができる。しかし、この特許明細書に記載されているデバイスでは、抗体とアナライトとの間の親和性が抗体とリガンドとの間の親和性より高いことが必要となる。実際、本考案に適用するために、このように制限された特徴を用いて抗体を選択することは非常に困難である。
【０００６】
ＵＳ６，６９９，７２２では、試料適用領域と、流動領域と、第１の捕捉領域と、第２の捕捉領域とからなる試験ストリップが開示されている。このデバイスでは、これらの領域は液体流れの経路に沿って配置されており、液体は各領域を順番に通って流れる。第１の捕捉領域は第１の捕捉抗体が塗布されており、第２の捕捉領域は第２の捕捉抗体が塗布されている。標識されたアナライト類似体の分子量は試料中のアナライトの分子量より大きい。アナライトが試料中に存在している場合、標識されたアナライト類似体およびアナライトは流動液体の経路に従って移動するが、アナライトはアナライト類似体より速く移動する。その結果、アナライトは標識されたアナライト類似体より早く第１の捕捉領域に到達する。アナライトは、標識されたアナライト類似体が捕捉領域に到達する前に第１の捕捉抗体によって捕捉されて固着される。標識されたアナライト類似体は継続して流れて第１の捕捉領域を通過し、第２の捕捉抗体が塗布されている第２の捕捉領域に接触する。このとき、第２の捕捉領域の色が、標識されたアナライト類似体との結合に反応して変化して陽性結果を示す。実際には、このような試験ストリップは不便であり、また、このような試験ストリップからの結果は正確ではない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】米国特許第４，２３５，６０１号明細書
【特許文献２】米国特許第４，４４２，２０４号明細書
【特許文献３】米国特許第５，２２９，０７３号明細書
【特許文献４】米国特許第５，０２８，５３５号明細書
【特許文献５】米国特許第５，０８９，３９１号明細書
【特許文献６】米国特許第５，６２７，５２６号明細書
【特許文献７】米国特許第５，１４３，８５２号明細書
【特許文献８】米国特許第５，４８０，７９２号明細書
【特許文献９】米国特許第５，９８５，５７９号明細書
【特許文献１０】米国特許第５，４５１，５０４号明細書
【特許文献１１】米国特許第６，６９９，７２２号明細書
【考案の概要】
【考案が解決しようとする課題】
【０００８】
本考案は、液体試料中におけるアナライトの有無を検出するための試験デバイスを提供するものである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
この試験デバイスは、通常、移動性リガンドおよび移動性抗体を含んでおり、移動性抗体がアナライトおよび／または移動性リガンドと特異結合する、流動領域と、流動領域の下流に配置されており、移動性リガンドと結合する固定化されたトラッピング受容体（ｔｒａｐｐｉｎｇ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ）を含んでいるブロッキング領域と、ブロッキング領域の下流に配置されており、移動性抗体と結合する固定化された検出受容体を含んでいる検出領域とを有する。一実施形態では、移動性抗体は、移動性リガンドが試料に接触される前に試料に接触されるようになされる。別の実施形態では、試料は移動性リガンドに接触する前に移動性抗体に接触するように移動性リガンドは移動性抗体から空間的に分離されるようになされている。所望される場合、実用新案登録請求されるデバイスは、流動領域、ブロッキング領域および検出領域を横切る上記液体試料の流れを補助するようなラテラルフローストリップの方式を採用するように構成されてよい。いくつかの実施形態では、移動性リガンドおよび移動性抗体はある間隙だけ分離されるようになされる。いくつかの実施形態では、移動性リガンドおよび移動性抗体はある垂直距離または水平距離だけ互いから分離されるようになされる。別の実施形態では、移動性リガンドはアナライトとは異なる結合対の一要素を含み、固定化されたトラッピング受容体がこの結合対の他方の要素を含む。この結合対は、ビオチンおよびアビジン、ビオチンおよびストレプトアビジン、ならびに、ローダミンおよび抗ローダミンのグループから選択されてよい。別の実施形態では、移動性抗体は乾燥状態で存在して第１の吸水性ストリップ内に収容され、移動性リガンドは乾燥状態で存在して第２の吸水性ストリップ内に収容される。ここでは、第１のストリップは第２のストリップから物理的に分離されている。別の実施形態では、ブロッキング領域および検出領域は第２の吸水性ストリップ上に配置され、移動性リガンドの下流に配置される。
【００１０】
いくつかの実施形態では、移動性抗体と移動性リガンドとが第１の結合親和力を有し、アナライトと移動性抗体とが第２の結合親和力を有しており、第１の結合親和力は第２の親和定数より大きい。移動性抗体は着色粒子をさらに有していてよい。別のいくつかの実施形態では、試料が移動性抗体に接触する接触時間が、試料が移動性リガンドに接触する接触時間より長くなるように移動性リガンドおよび移動性抗体は流動領域上に構成されている。所望される場合、移動性抗体は検出可能な標識を有する。
【００１１】
本考案はまた、対象のデバイスを使用する方法を提供する。一実施形態では、本考案は、アナライトの有無の検出を実施するための対象の試験デバイス（本明細書で説明される試験デバイスのうちの任意の１つ）に液体試料を接触させることによって液体試料中における上記アナライトの有無を検出するための方法を提供する。一実施形態では、対象の方法は、第１の混合物を生成するために試験デバイス上の移動性抗体に液体試料を接触させ、次いで、第２の混合物を生成するために第１の混合物を移動性リガンドに接触させることによって進行し、さらに第２の混合物がブロッキング領域に接触する。
【００１２】
本明細書で言及するすべての刊行物、特許および特許出願は、それぞれの個々の刊行物、特許および特許出願が参照より組み込まれることが明確かつ個別に示されているかのうように、参照により本明細書に組み込まれる。
【００１３】
本考案の新規な特徴は添付の実用新案登録請求の範囲で詳しく説明されている。本考案の原理が利用されている例示の実施形態を説明する以下の詳細な説明および添付図面を参照することにより、本考案の特徴および利点はより良く理解されるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】本デバイスの試験ストリップの図である。
【図２Ａ】ある垂直距離だけ分離された２つのストリップを含む、本デバイスの試験ストリップの図である。
【図２Ｂ】ある垂直距離だけ分離された２つのストリップを含む、本デバイスの試験ストリップの図である。
【図３Ａ】ある水平距離だけ分離された２つの部分を有する試験ストリップの代替実施形態の図である。
【図３Ｂ】ある水平距離だけ分離された２つの部分を有する試験ストリップの代替実施形態の図である。
【図４】試験ストリップ用のハウジングを有するデバイスの図である。
【図５Ａ】アナライトの検出時にデバイスによって表示される結果の図である。
【図５Ｂ】アナライトの検出時にデバイスによって表示される結果の図である。
【図５Ｃ】アナライトの検出時にデバイスによって表示される結果の図である。
【図５Ｄ】アナライトの検出時にデバイスによって表示される結果の図である。
【図５Ｅ】アナライトの検出時にデバイスによって表示される結果の図である。
【図５Ｆ】アナライトの検出時にデバイスによって表示される結果の図である。
【考案を実施するための形態】
【００１５】
説明するデバイスおよび方法は、陽性結果または陰性結果を直接的に示すことによってアナライトの有無を検出するようになされて構成される。通常、試験デバイスは、例えば図１に示されているような、流動領域Ｋ、ブロッキング領域Ｄおよび検出領域Ｆを有する試験ストリップである。流動領域は、移動性リガンドと、標的アナライトまたは移動性リガンドのいずれか一方と特異結合するための移動性抗体とを含んでいる。移動性リガンドを捕捉するためのトラッピング受容体がブロッキング領域Ｄ内に存在する。通常、トラッピング受容体はリガンドを捕捉することができるが、任意のアナライト結合抗体を直接に捕捉することはできない。デバイスの検出領域は、例えば抗体が溶液に溶解された後で移動性抗体と結合することができる固定化された検出受容体をさらに含んでいる。いくつかの実施形態では、試験ストリップは、流体試料が試験ストリップを流れるのを補助するための吸水性材料を含んでいる。吸水性材料とは、流体を安定的に吸収して毛管作用によりその流体を通過させることができる材料を意味する。いくつかの実施形態では、吸水性材料は、その長手方向に沿って流体の運動および移動を補助する材料であってよい。別の実施形態では、吸水性材料は、このデバイスを通過する流体の運動を毛管作用によって引き起こすための材料である。試験ストリップは、上に抗体およびリガンドが配置されている１種類の吸水性材料を有していてよい。別法として、試験ストリップは、流体試料と共に相互的に作用することができる複数の種類の吸水性材料で構成されていてよい。吸水性材料としては、限定しないが、ニトロセルロース、ろ紙、ガラス繊維、ポリエステルが含まれる。また、この吸水性の固相は、いくつかの実施形態では、このデバイス上で試験を行うのに適した別の試薬をさらに含む。単に例としては、この固相は、ｐＨ値を調整するための緩衝溶液をさらに含んでいてよい。
【００１６】
この試験デバイスの試験ストリップは、試料を受け入れるための試料適用領域Ａをさらに有する。試料適用領域Ａは、ブロッキング領域Ｄ、試料が試験ストリップを通過した後に試料を吸収するための吸収性領域Ｈ、および、試験制御領域Ｇの上流に配置される。試験制御領域は、試料が検出領域を通り過ぎるのに十分な時間があるかどうかまたは試験を完了するのに十分な時間が経過したかどうかを判定するためのある量の試薬を含んでいる。この試験デバイスが使用されるときは、標的アナライトまたはある量のリガンドのどちらか一方と特異結合するある量の抗体が流動領域のアナライト結合領域上に含まれている。抗体は乾燥状態であってよい。流動領域は、流動領域の調整領域に配置されるある量のリガンドをさらに含んでいる。リガンドはアナライト結合抗体の下流に配置される。
【００１７】
抗体およびリガンドは試料によって溶解され得る。抗体およびリガンドは、試料が対応する領域を通過するときに、溶解された状態で、試料を含んでいる試験デバイスの領域を通るように移動する。いくつかの実施形態では、この試験デバイスにおいて、試料はまず、流動領域の抗体結合領域内に配置された抗体に接触する。抗体は試料中で溶解されて試料中のアナライトに接触する。試料は、抗体結合領域内の抗体とある時間だけ接触した状態を保つ。この時間は、抗体に結合されたアナライトすなわちアナライト−抗体の錯体から構成される第１の液体混合物を生成するのに十分な時間である。いくつかの実施形態では、アナライト結合抗体のすべてが試料中で溶解される。いくつかの実施形態では、アナライト結合抗体の少なくとも一部が試料中で溶解される。その後、第１の液体混合物は、アナライト結合領域の次に配置された調整領域まで通過する。そこで、第１の液体混合物は調整領域に配置されたリガンドと接触するようになる。このとき、リガンドは第１の液体混合物によって溶解され、第２の液体混合物が生成される。いくつかの実施形態では、試料は標的アナライトを含んでいない。このような実施形態では、第１の混合物に担持された、移動性にされた抗体は、第２の液体混合物中で溶解されている可動リガンドに結合され得、それにより抗体−リガンドの錯体が生成される。その後、この抗体−リガンドの錯体は、ブロッキング領域に配置されたある量のトラッピング受容体によって捕捉され得る。このトラッピング受容体は、ブロッキング領域に配置されたリガンドであり、移動されたリガンドと直接に結合するための特異結合部位を有する。トラッピング受容体は流動領域の下流に配置されたブロッキング領域上に固定化されている。抗体−リガンドの錯体はトラッピング受容体に結合されることから、移動性にされた抗体は一般にはブロッキング領域を通過しない。通常、第２の液体混合物中で溶解されており未結合であるいかなるリガンドも、その後、同様にブロッキング領域上のトラッピング受容体に結合される。
【００１８】
アナライトすなわちある量のアナライトが試料中に存在する場合、アナライトの少なくとも一部がアナライト結合領域上の移動性抗体に結合され得る。アナライトが存在する場合、アナライトは、通常、抗体−アナライトの錯体である第１の錯体を形成しており、その結果第１の液体混合物が生成される。いくつかの実施形態では、アナライト結合抗体の一部のみが標的アナライトに結合される。このような実施形態では、第１の液体混合物中に溶解されているがアナライトと未結合のままである抗体が、その後、調整領域に配置されたリガンドに結合され得る。第１の液体混合物が抗体結合領域の下流に配置されたリガンドに接触すると、第２の混合物が生成される。第２の混合物は、通常、第１の液体混合物によって溶解された、第１の抗体−アナライトの錯体およびリガンドを含む。
【００１９】
いくつかの実施形態では、抗体−アナライトの錯体のすべてが、溶解されたリガンドから放置された状態を維持する。いくつかの実施形態では、溶解されたリガンドの一部が、第１の錯体の抗体上の結合部位と結合するためにアナライトと競合する。この場合、第１の液体混合物は、アナライト−抗体の錯体および抗体−リガンドの錯体の両方を含むことができる。その後、第２の混合物はブロッキング領域に接触する。ブロッキング領域は、通常、ある量の固定化されたトラッピング受容体を含んでいる。トラッピング受容体は、抗体の一部がアナライトと未結合である場合はリガンド−抗体の錯体と、また、リガンドの一部のみが、移動性にされた抗体に結合されている場合は未結合のリガンドのいずれか一方と結合することができる。トラッピング受容体は、通常、抗体−アナライトの錯体を捕捉しない。
【００２０】
その後、試料は、ブロッキング領域の下流に配置された検出領域まで通過する。アナライト−抗体の錯体は、いくつかの実施形態では、第２の液体混合物が検出領域に到達したときに、試験デバイスの検出領域上に固定化されたある量の検出分子によって捕捉される。検出領域は、アナライト結合抗体と特異結合するためのある量の固定化された受容体を有する。この受容体は通常は抗体である。いくつかの実施形態では、アナライト結合抗体は検出可能な標識と共役される。検出可能な標識の量の決定は、試験試料中のアナライトの量に関連する。通常、検出可能な標識は着色粒子である。このように、アナライトの量は、検出領域上で捕捉された着色粒子を裸眼で検出することによって直接的に判定されてよい。
【００２１】
第２の液体混合物が検出領域に接触すると、通常、抗体上の特異結合部位が試料中で溶解されて露出される。かなり短い時間での反応を可能にするために、抗体の露出された結合部位は、通常、アナライトによって認識可能である。第２の液体混合物は、試料中で溶解されたリガンドを含む。いくつかの実施形態では、試料中で溶解されたリガンドは、アナライトとすでに共役体形成している抗体に対してアナライトと競合する。別法として、リガンドは未結合の任意のアナライト結合抗体と直接的に結合してもよい。これは、リガンドが第１の混合物中で溶解されるときにリガンドの結合部位も露出されるためである。また、別のいくつかの実施形態では、リガンドは、アナライト結合抗体に無関係である特異的な分子結合対の一方の要素に直接的または間接的に接続、連結または共役される。このような実施形態では、リガンドの結合部位の一部が結合対の一方の要素によって覆われる。この構成により、抗体−アナライトの錯体における抗体上の結合部位に対してのリガンドとアナライトとの間の競合が減少する。いくつかの実施形態では、リガンドは、ビオチンを含む共役の一部分を有する。リガンドはまたビオチン／アビジンの共役を形成しており、ここでは、アビジンが、第２の混合物がブロッキング領域を通過するときに第２の錯体（抗体−リガンド−ビオチン）を捕捉するためにブロッキング領域上に固定化されている。別の実施形態では、リガンドは、たんぱく質と共役された一対の特異結合分子の一方のパートナーを含む共役の一部分である。
【００２２】
小分子用の、特に薬物乱用の検出のための現代のアッセイでは、通常の医学的治療を受けている患者から薬物乱用者を区別するために、最も低い濃度すなわちカットオフ値を変更しなければならない。例えば、アナライトの存在を調べるために患者の血液が分析される場合、患者の血液は標準的なカットオフ値より高い濃度のアナライトを含んでいる可能性がある。試料中の標的アナライトの濃度が標準的なカットオフ値より高くても、必ずしもこの患者が薬物使用者であるということにはならない。患者は、単に治療の一環としてそのアナライトを摂取したということで高い濃度のアナライトを有している場合もある。このような状況では、アナライトの濃度をこのデバイスで検出できず、一般の人におけるアナライトの標準的なレベルと比較することができない。可能性のある薬物使用者を特定する際、カットオフ値がより高いデバイスを使用することでより正確となる。いくつかの実施形態では、デバイスは、流動領域に配置されたアナライト結合抗体を含んでおり、この抗体は、リガンドと結合するための結合親和力Ｋ２より低い、標的アナライトと結合するための結合親和力Ｋ１を有する。Ｋ１がＫ２より低い場合、第２の液体混合物内で、移動性抗体上に配置された結合部位に対して移動性リガンドと競合するためには、高濃度のアナライトが必要となる。それにより、たとえアナライトの濃度が患者の体液（ｂｏｄｙ  ｆｌｕｉｄ）中の標準的なレベルより高い場合でも、偽陽性結果ではなく適切な陰性結果が検出領域上に得られる。結合親和力Ｋ１がＫ２以下である抗体が通常使用される。
【００２３】
アナライトと特異結合するための抗体、および、リガンドは、両方とも、液体試料に接触される前は乾燥相であってよい。別法として、抗体は試料に接触される前は液相であってもよい。抗体およびリガンドは、通常、試験デバイスの単一のストリップ上に乾燥相で収容される。液体試料が流動領域を通るように移動するとき、抗体およびリガンドは、液体試料中で溶解され、液体試料によって担持され得る。
【００２４】
アナライトと特異結合することができる移動性抗体は、検出可能な標識と共役され得る。この標識は、限定しないが、酵素、非水溶性粒子、コロイド金粒子、ラテックス粒子、またはこれらの任意の組み合わせから選択されてよい。いくつかの実施形態では、この標識は水溶性物質または蛍光物質である。この標識は、抗体を標識するのに適した任意の標識であってよい。
【００２５】
この試験デバイスは、直接的に陽性結果または陰性結果を表示することによって試料中の標的アナライトの有無を示すために、免疫アッセイで採用される競合原理を用いてアナライトを検出するのに使用され得る。具体的には、対象のデバイスは、免疫アッセイで発生する光信号を検出する電子式読取装置を有していてよい。
【００２６】
１．デバイス
図１は試験デバイスの一実施形態を示している。この試験デバイスは、示されるように、試料受取領域（ｓａｍｐｌｅ  ｒｅｃｅｐｔｉｏｎ  ｚｏｎｅ）Ａと、通常はある量の抗体および着色標識を含んでいるアナライト結合領域Ｂと、ビオチンと共役されている共役の一部分としてある量のリガンドを含んでいる調整領域Ｃと、ニトロセルロース膜Ｅとを有する試験ストリップ１００を有する。ニトロセルロース膜は、ある量の固定化されたアビジンを含んでいるブロッキング領域Ｄと、検出領域Ｆと、結果制御領域Ｇとをさらに有する。通常、流動領域Ｋから制御領域Ｇまで通過する液体を吸収するための吸収領域Ｈが存在する。流動領域Ｋは、アナライト結合領域Ｂおよび調整領域Ｃの両方を取り囲んでいる。アナライト結合領域および調整領域上のアナライトおよびリガンドは、それぞれ、試料によって溶解されて試験ストリップに沿って運ばれ得る。
【００２７】
試料受取領域Ａは通常、流動領域の下流に配置される。試料受取領域Ａはまた、アナライトと抗体との間の反応条件を向上させるまたは調整することができる化学試薬で処理され得る。使用される化学試薬としては、限定しないが、従来技術で知られている、反応しやすいｐＨ値、イオン濃度、試料中の一部の干渉物質の除去、または、他の任意適当な化学試薬、あるいはこれらの任意の組み合わせが含まれる。吸収性領域Ｈは、通常、液体の流れを促進しさらには強めるために検出領域の下流に配置される。吸収性領域に適した材料としては、限定しないが、ろ紙または他の任意の吸収性材料が含まれる。
【００２８】
流動領域Ｋは、標的アナライトまたはある量のリガンドのいずれか一方と結合するためのある量の抗体を含んでいる。抗体は乾燥状態で流動領域内に収容される。流動領域は、アナライト結合抗体の下流の流動領域上にある量のリガンドをさらに含んでいる。抗体およびリガンドは、試料が対応する領域を通過するときに試料によって移動されて試料中で溶解され得る。ある量のリガンドが、アナライト結合領域Ｂの下流に配置された調整領域Ｃ上に収容されていてよい。加えて、アナライトと特に結合するある量の抗体が、アナライト結合領域Ｂ上に乾燥状態で収容されていてよい。液体試料は通常ストリップ１００に付加される。その後、試料はアナライト結合領域Ｂ上に配置される、アナライト結合抗体にある時間だけ接触する。次いで、試料は、試料がアナライト結合領域Ｂに接触した時間より短い時間だけ調整領域Ｃ上のリガンドに接触する。アナライトおよびアナライト結合抗体は抗体結合領域内で第１の混合物を形成し、この混合物は、アナライト結合抗体の下流に配置されたリガンドに接触する前にある時間だけ抗体結合領域内に維持されてよい。第１の混合物が、アナライト結合抗体に通常接触する時間は、第２の混合物が移動性リガンドに接触する時間より長い。いくつかの実施形態では、第１の混合物が、アナライト結合抗体に接触する時間は約１秒から約６０秒の間である。いくつかの実施形態では、この時間は約１０秒から約３０秒の間である。いくつかの実施形態では、この時間は６０秒を超える。
【００２９】
試験ストリップは、通常、アナライト結合領域Ｂと調整領域Ｃとをさらに有しており、間隙１０２がアナライト結合領域Ｂと調整領域Ｃとの間を分離している。間隙１０２は通常、吸水性材料を含んでいる。本明細書に記載するデバイスのいくつかの実施形態では、２つ以上の間隙が存在する。間隙が試験ストリップ上の調整領域とブロッキング領域との間に配置されてよい。このような実施形態では、第２の間隙は第１の間隙より短い。したがって、液体試料が、アナライト結合抗体と反応するためにアナライト結合領域に接触する時間は、試料がリガンドに接触する時間より長くなる。時間の長さの違いにより、液体試料中でのアナライト結合抗体とアナライトとの間の結合は、第２の液体混合物中でのリガンドと、アナライト抗体との間の結合と比較してより完全となる。
【００３０】
本考案で説明するデバイスの別の態様では、図２Ａに示すように抗体とリガンドとの間にある垂直距離が存在する。このような実施形態では、アナライト結合領域２０１は吸水性ストリップ２０の第１の部片上に配置され、調整領域２０３は第２の吸水性ストリップ２１上に配置される。これら２つのストリップ２０、２１の間には間隙２０２が存在する。第１のストリップ２０は、通常、第２のストリップ２１の上方に配置されて第２のストリップ２１から物理的に分離される。第１のストリップは、第１および第２のストリップが物理的に分離されている限りにおいて、第２のストリップに対して任意適当な位置に配置されてよい。試料は、第１のストリップ２０上に配置された試料適用領域２００のところでデバイスに付加される。試料は、第１のストリップ２０に接触して、アナライト結合領域２０１内のアナライト結合抗体を液相へと溶解させ、それにより第１のアナライト−抗体の混合物が生成される。この混合物はアナライト結合領域内にある時間だけ維持されてよい。その後、第１のストリップ２０は、図２Ｂに示すように、第２のストリップ２１に隣接するように配置されて第２のストリップ２１と流体連通するようになる。第１のストリップ２０が第２のストリップ２１に接触したときに、試料が、アナライト結合領域２０１から調整領域２０３を介して、第１のストリップ２０から第２のストリップ２１へと流れる。第１のストリップ２０と第２のストリップ２１とが接触した後、アナライト−抗体の混合物が、第２のストリップ２１上に配置された調整領域２０３に接触する。抗体−アナライトの混合物はさらに調整領域２０３上に収容されているリガンドを溶解させ、それにより第２の混合物が生成される。第２の混合物は、通常、第１の混合物が生成される時間より短い時間で生成される。
【００３１】
ブロッキング領域２０４は、通常、検出デバイス内の調整領域２０３の下流に配置される。調整領域内の第２の液体混合物は、その後、試験ストリップの長手方向に沿ってブロッキング領域まで流れる。代替実施形態では、第１のストリップは、それ以前に第２のストリップに流体連通されている。このような実施形態では、液体混合物は、液体試料の重力により自然に落下して調整領域２０１内に到達する。
【００３２】
いくつかの実施形態では、ある量のトラッピング受容体がブロッキング領域上に固定化されている。固定化されたトラッピング受容体は、リガンドと結合するが第２の液体混合物中の、どのアナライト結合抗体とも直接的には結合しない特異的部位を有する。トラッピング受容体は、抗体、抗体フラグメント、移動性リガンドとは無関係である一部の特異的な分子対の一方のパートナー、または、他の任意適当なトラッピング受容体から選択されてよい。一対の特異的な分子の一方のパートナーがブロッキング領域上に固定化されている場合、この特異的な分子対の他方のパートナーがリガンドと共役され、調整領域上に収容され得る。特異的な分子対は、ビオチンおよびアビジン、ビオチンおよびストレプトアビジン、抗体および抗原（標的アナライトと結合するための抗体およびアナライト自体は除く）、ローダミンおよび抗ローダミン、マウスＩｇＧおよび抗マウスＩｇＧ、または、他の任意適当な分子対から選択されてよい。詳細には、流動領域で移動性リガンドにビオチンが付加または標識または結合された場合、ブロッキング領域は、リガンドと共役された共役の一部分としての、ビオチンと特異結合するためのある量のアビジンによってリガンドを固定化する。
【００３３】
別の実施形態では、移動性リガンド（抗原−リガンド）はたんぱく質と共役される。一般に、１つのたんぱく質分子は、単分子の抗原リガンドがアナライト用の複数の受容体に結合され得るように、複数の小さな抗原と共役され得る。抗原リガンドはビオチンにも連結され得る。陰性状態では、抗原リガンドはアナライト抗体と反応して錯体を形成（アナライト−抗体−ビオチンの錯体）する。錯体が、液体が流れる固相まで動いて、ストレプトアビジン−ＩｇＧの錯体に結合される場合、ストレプトアビジン−ＩｇＧの１つの単分子錯体は４つの分子状ビオチンに結合され得る。この多点での共役は、アナライトおよび抗体がこの固相を通過するのを防止してしまう。抗体またはアナライトをできるだけ少なく防止する機能があると、それに応じて偽陽性の可能性は低下する。また、試験の質を上げるために、別の試薬がブロッキング領域上またはその上流に配置されていてもよい。また、ブロッキング領域は、いくつかの実施形態では、限定しないが、ろ紙、セルロース膜、ナイロン膜、または他の任意適当な材料が含まれる固体材料上に配置される。いくつかの実施形態では、ブロッキング領域はセルロース膜上に配置される。
【００３４】
アナライト結合領域３０１と調整領域３０３との間に水平方向の間隙が存在するデバイスが図３Ａに示されている。アナライト結合領域３０１は第１のストリップ３０上に配置され、調整領域３０３は第２のストリップ３１上に収容される。第１のストリップ３０は、第２のストリップ３１から、水平軸に沿って、これらの２つのストリップの間にある間隙３０２の分だけ分離されている。試料は試料適用領域のところで第１のストリップ３０に付加される。試料は第１のストリップ３０上のアナライト結合領域３０１に接触する。次いで、アナライト結合領域３０１内に配置された抗体が試料中で溶解されて第１の試料混合物が生成される。第１の試料混合物は、ある時間だけアナライト結合領域内に維持され得る。その後、第１のストリップ３０は、図３Ｂに示すように、第２のストリップ３１に隣接するように配置されてよい。アナライト結合領域３０１が調整領域３０３と流体連通するように配置されると、試料がアナライト結合領域３０１から調整領域へと流れて、そこで第２の液体混合物が生成される。アナライト結合領域３０１と調整領域３０３との間の間隙は、限定しないが特定の感度を含めた種々の要求基準、および、現行のデバイスを用いて１つの標的アナライトを試験するときの特異性に関する要求基準（ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ  ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔ）に適合するように設計され得る。いくつかの実施形態では、間隙３０２の幅は約１から１００ミリメートルの間である。いくつかの実施形態では、この間隙の幅は少なくとも１ミリメートル、２ミリメートル、３ミリメートル、４ミリメートル、５ミリメートル、６ミリメートル、７ミリメートル、８ミリメートル、９ミリメートルまたは１０ミリメートルである。いくつかの実施形態では、この間隙は１００ミリメートルを超える。
【００３５】
いくつかの実施形態では、試験デバイスは、図４に描かれた、試験ストリップ１００を入れるためのハウジング４００を有する。ハウジング４００は、試料がストリップ１００に導入されるときに通過する試料ウェル４１を有する。図４に示されるように、ハウジング４００は、試料適用領域Ａに位置合わせされた試料ウェル４１と、検出領域Ｆおよび制御領域Ｇに位置合わせされた窓４２とを有する。検出領域Ｆ上に示される結果は、透明の目視窓４２を介して読み取ることができる。ブロッキング領域Ｄおよび流動領域Ｋ（図１に示したものと同様）は、通常、ハウジングの不透明壁によって隠される。いくつかの実施形態では、ブロッキング領域および流動領域は、壁が透明であるデバイスを用いることによって目視可能となる。
【００３６】
２．方法
本明細書ではまた、この試験デバイスを使用する方法が提供される。この試験デバイスを使用する一方法は、直接的な陽性結果または陰性結果によって液体試料中の標的アナライトの有無を検出するステップを含む。この方法は、第１の液体混合物を生成するために、標的アナライトまたはある量のリガンドと特異結合するためのある量のアナライト結合抗体に試料を接触させるステップを含む。標的アナライトが存在する場合、この第１の混合物は抗体−アナライトの錯体を含む。第１の液体混合物は、アナライトの量が抗体の量より少ない場合はある量の抗体を、または、アナライトの量が抗体の量より多い場合はある量のアナライトをさらに含む。第１の混合物は、通常、第２の液体混合物を生成するために、ある量のリガンドに接触する前に第１の時間だけ温置または維持される。第２の液体混合物中のリガンドは、実質的に液相の状態で、抗体−アナライトの錯体の抗体に結合するためにアナライトと競合する。第２の液体混合物は、通常、第１の時間より短い第２の時間だけ温置または維持される。この第２の時間において、第２の液体混合物は、未結合のリガンドまたはリガンド−抗体の錯体を含んでおり、リガンドを第２の液体混合物から抽出するためのある量のトラッピング受容体を含んだブロッキング領域を有する固相に接触する。アナライト結合抗体は、この第２の液体混合物中では直接的には結合されない。この試験結果は抗体−アナライトの錯体の量と相互関係がある。
【００３７】
別の実施形態では、この方法は、アナライト結合領域と、アナライト結合領域から分離されておりその下流にある調整領域と、ブロッキング領域と、検出領域とを有する固相に液体試料を付加するステップを含む。ある量のアナライト結合抗体が乾燥状態でアナライト結合領域上に収容されている。ある量のリガンドが乾燥状態で調整領域上に収容されている。アナライト結合抗体およびリガンドは液相中で溶解され、液体試料によって担持され得る。ブロッキング領域は、リガンドと結合するがどのアナライト結合抗体とも直接的に結合しないある量の固定化されたトラッピング受容体を含んでいる。
【００３８】
本明細書ではまた、アナライトの有無を検出するための方法が提供される。試料中におけるアナライトの有無を検出するための一方法は、第１の混合物を生成するために、ある量の標的アナライトまたはある量のリガンドのどちらか一方と特異結合するためのある量の抗体に試料を接触させるステップと、第２の混合物を生成するために第１の混合物をある量のリガンドに接触させるステップと、ブロッキング領域を有する固相に第２の混合物を接触させるステップにおいて、ブロッキング領域が、リガンドと特異結合するが第１の混合物の抗体とは直接的には結合しないある量の固定化されたトラッピング受容体を含んでいる、ステップと、第２の混合物中の抗体の量を測定するステップにおいて、検出される抗体の量が液体試料中のアナライトの量に対応する、ステップとを含む。いくつかの実施形態では、この固相はラテラルフローストリップを有する。いくつかの実施形態では、リガンド、および、アナライトと結合するための抗体の両方が、ラテラルフローストリップ上で乾燥されており、ブロッキング領域の上流に配置されている。この方法ではさらに、アナライトと無関係であるリガンドを含んでいる分子共役を生成することが可能であり、それによりトラッピング受容体が第２の混合物中に生成される。この分子共役は、ビオチンおよびアビジン、ビオチンおよびストレプトアビジン、または、ローダミンおよび抗ローダミンから選択されてよい。また、この分子共役は検出可能な標識をさらに含んでいる。検出可能な標識は、コロイド金、ラテックス粒子または発色団からなる群から選択されてよい。いくつかの実施形態では、移動性抗体と移動性リガンドとの間の親和定数は、アナライトと移動性抗体との間に存在する親和定数より大きい。いくつかの実施形態では、試料がアナライト結合抗体と接触する時間の長さは、第１の液体混合物がリガンドに接触する時間の長さより大きい。
【００３９】
３．実施例
本考案の単に実施例であることのみを意図しており本考案を限定することを意図しない以下の実施例によって本考案をさらに説明する。
【００４０】
実施例１：尿中のコカインの検出
コロイド金と共役されたコカイン抗体を含む共役の準備
対称形である適切な粒子（直径が２０ｎｍ−４０ｎｍ）を含む３Ｌの金コロイド溶液を清潔なガラス容器内に用意した。最初に、この金コロイド溶液をかき混ぜた。次に、ｐＨ＝７．０であるリン酸塩緩衝溶液を金コロイド溶液に加えて、コロイド金溶液のｐＨが約６．８となるように調整した。次いで、２５ｍｇのＣＯＣ単クローン抗体をこの混合物に加えた。この溶液を連続して約１時間かき混ぜた。溶液をかき混ぜた後、反応を阻止するために３５ｍｌの１０％ＢＳＡを加えた。その後再び、溶液をさらなる時間かき混ぜた。続けて、このブロッキング溶液を１１０００ｒｐｍで約３５分間だけ遠心分離機にかけた。次いで上清を除去した。その後、堆積物を０．００３ｍｏｌ／Ｌの０．０２％ＢＳＡ／リン酸塩溶液（洗浄緩衝液）に溶解し、その溶液を再び遠心分離機にかけた。上清を再びデカントして、堆積物を収集した。こうすることにより、以後、金コロイド溶液の濃度を必要に応じて調節することができる。こうして、５４０ｎｍ未満の波長における溶液のＯＤ値を測定した。
【００４１】
コカインおよびビオチンを含む共役（ＣＯＣ−ＢＳＡ−ビオチン）の準備
ＢＳＡ−コカインの共役２．５ｍｇ／ｍｌ（Ｉｍｍｕｎｅｔｉｃ  Ｉｎｃ．より購入）を１０００ｍｌのＮａＨＣＯ３緩衝溶液（ｐＨ＝８．０）中で４時間透析して溶液（１）を生成した。蒸留水で１０ｍＭの濃度までビオチンを希釈した後、４７μｌのビオチン溶液と溶液（１）とを混ぜ合わせて室温で１時間攪拌することにより溶液（２）を生成した。溶液（２）を１０００ｍｌのリン酸塩緩衝溶液（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｂｕｆｆｅｒｅｄ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）（ｐＨ＝７．４）中で１２時間透析して溶液（３）を生成した。次いで、分光測光器内の６５５ｎｍ未満の波長のコカイン−ＢＳＡ−ビオチンの濃度を希釈して溶液（４）とし、濃度が０．５ｍｇ／ｍｌの最終溶液を生成した。
【００４２】
試験ストリップの準備
図１に示した試験ストリップを用意した。
【００４３】
試料適用パッドの準備
ガラス繊維から作られた試料適用パッドＭを使用した。まず、このガラス繊維を緩衝溶液（ｂｕｆｆｅｒｅｄ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）（Ｂｏｒａｘ０．０５Ｍ、ｐＨ９．３、表面活性試薬：２％Ｓ−１７：（ＲＨＯＤＡＳＵＲＦ（Ｒ）ＯＮ−８７０））で処理して、オーブンを用いて３７℃で乾燥させた。
【００４４】
標識パッドＢの準備
次いで、ポリエステル膜を緩衝溶液（ｂｕｆｆｅｒｅｄ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）（ＰＶＡ  ５ｇ／Ｌ、Ｎａ２ＨＰＯ４、７．１ｇ／Ｌ、Ｓ−１４（Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ−１００）０．１％、ＢＳＡ  ５ｇ／Ｌ、ＮａＮ３  ０．２ｇ／Ｌ）で処理した。この膜をオーブンを用いて３７℃で乾燥させた。この膜を、抗ＣＯＣで標識されており、濃度が１０ＯＤ未満でありかつ１ｕｌ／ｃｍという条件のコロイド金粒子および自動スプレー用マイクロプロセッサ（ａｕｔｏｍａｔｉｃ  ｓｐｒａｙ  ｍｉｃｒｏｐｒｏｃｅｓｓｏｒ）で処理して標識パッド１を生成した。次いで、標識パッド１をオーブンを用いて３７℃で乾燥させた。
【００４５】
標識パッドＣの準備
このポリエステル膜を緩衝溶液（ｂｕｆｆｅｒｅｄ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）（ＰＶＡ  ５ｇ／Ｌ、Ｎａ２ＨＰＯ４、７．１ｇ／Ｌ、Ｓ−１４（Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ−１００）０．１％、ＢＳＡ  ５ｇ／Ｌ、ＮａＮ３  ０．２ｇ／Ｌ）で処理し、オーブンを用いて３７℃で乾燥させた。次に、この膜を基準値２．５ｕｌ／ｃｍ未満の０．５ｍｇ／ｍｌのビオチン−ＢＳＡ−ＣＯＣ溶液４および自動スプレー用マイクロプロセッサで処理して標識パッド２を生成した。次いで、標識パッド２をオーブンを用いて３７℃で乾燥させた。
【００４６】
ニトロセルロース膜の準備
ニトロセルロース（ＮＣ）膜Ｅのブロッキング領域Ｄを、濃度が０．６ｍｇ／ｍｌであり２．５ｕｌ／ｃｍという条件のストレプトアビジン−ＩｇＧ（Ｙｉｎｇｋｅｌｏｎｇ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｏ．  Ｌｔｄ．（杭州））および３バンドの自動スプレー用マイクロスプレー膜プロセッサ（３  ｂａｎｄｓ  ａｕｔｏｍａｔｉｃ  ｓｐｒａｙ  ｍｉｃｒｏｓｐｒａｙ−ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｐｒｏｃｅｓｓｏｒ）で処理した。検出領域Ｆを、濃度が０．６ｍｇ／ｍｌであり１．０ｕｌ／ｃｍという基準条件のヤギ抗マウス抗体ＩｇＧ（Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ  Ｉｎｃ．より購入）および１バンドの自動スプレー用マイクロスプレー膜プロセッサ（１  ｂａｎｄｓ  ａｕｔｏｍａｔｉｃ  ｓｐｒａｙ  ｍｉｃｒｏｓｐｒａｙ−ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｐｒｏｃｅｓｓｏｒ）で処理した。次いで、このＮＣ膜Ｅをオーブンを用いて３７℃で乾燥させた。
【００４７】
試料パッド、標識パッドおよびＮＣ膜を備える試験ストリップの構築
用意した部品をおよそ０．４×１０ｃｍの試験ストリップに切断した。試料適用領域Ａ、標識パッド１Ｂ、標識パッド２Ｃ、ＮＣ膜Ｅおよび吸収性ろ紙Ｈを、連続するように組み合わせた。標識パッド１Ｂおよび標識パッド２Ｃが、試料適用領域Ａ、標識パッド１Ｂ、標識パッド２ＣおよびＮＣ膜Ｅから距離１０２だけ隔離された状態を維持するようにした。これらのすべての部品を吸水性材料の上に付着させた。
【００４８】
コカイン検出溶液の希釈
コカインを陰性尿で希釈して、検出溶液の濃度を０ｎｇ／ｍｌ、１５０ｎｇ／ｍｌ、５０ｎｇ／ｍｌ、１００ｎｇ／ｍｌ、１５０ｎｇ／ｍｌ、４５０ｎｇ／ｍｌおよび９００ｎｇ／ｍｌ未満とする。
【００４９】
検出結果を表１にまとめた。
【表１】
0003158764.tif 000003
【００５０】
コカイン試験ストリップでの結果を図５Ａに示した。この試験により、尿試料中の複数のコカイン濃度における検出領域Ｊでの結果が示される。試料のコカイン濃度は、左から右に０ｎｇ／ｍｌ、１５０ｎｇ／ｍｌ、４５０ｎｇ／ｍｌおよび９００ｎｇ／ｍｌである。Ｉ：吸収領域、Ｊ：検出領域、Ｋ：ブロッキング領域、Ｌ：標識領域、Ｍ：試料受取領域。
【００５１】
結果の分析
この検出結果は、本考案が提供する方法およびデバイスにより、検出感度を最大５０ｎｇ／ｍｌ程度まで向上させることができることを示している。偽陰性は見られなかった。
【００５２】
実施例２：尿中のフェンシクリジン（ＰＣＰ）の検出
実施例１で説明した試験ストリップを用意した。採用した実験計画は実施例１と同じであるが、いくつかの部分が異なる：（１）ＣＯＣをＰＣＰに置き換えた、（２）試料適用パッドＡを処理するための緩衝溶液（ｂｕｆｆｅｒｅｄ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）をＴＲＩＳ緩衝溶液（ＴＲＩＳ  ｂｕｆｆｅｒｅｄ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）とし、具体的処方では、０．１ＭのＴＲＩＳ塩（ｐＨ＝８．０）と、１％Ｓ−７（ＲＨＯＤＡＳＵＲＦ（Ｒ）ＯＮ−８７０）、１％Ｓ−９（ＲＨＯＤＡＳＵＲＦ（Ｒ）ＯＮ−８７０）および１％ＢＳＡを含む表面活性試薬とが含まれる、（３）標識パッドＣを処理するためのビオチン−ＢＳＡ−ＰＣＰの濃度を１ｍｇ／ｍｌ、処理基準値を２．５ｕｌ／ｃｍとし、標識パッドＣをオーブンを用いて３７℃で乾燥させた、（４）ＮＣ膜Ｅを用意するときに、検出領域Ｆの下流にあり吸収性パッドＨに近接する検出結果処理領域Ｇにヤギ抗ウサギＩｇＧが塗布される。この塗布手法は、実施例１の検出領域Ｆの場合と同じである。
【００５３】
ＰＣＰ溶液の希釈
ＰＣＰを陰性尿で希釈して、検出溶液の濃度を０ｎｇ／ｍｌ、１２．５ｎｇ／ｍｌ、３７．５ｎｇ／ｍｌ未満とする。
【００５４】
標識パッド１を、ラビットＩｇＧと、濃度が０．６ｍｇ／ｍｌ未満であるコロイド金粒子と、自動スプレー用マイクロプロセッサとで処理した。次いで、標識パッド１をオーブンを用いて３７℃で乾燥させた。他の試薬の濃度および手法は実施例１の場合と同じである。
【００５５】
検出結果
図５Ｂは、ＰＣＰが尿試料中に存在しない場合に、検出領域５内にバンドが現れないことにより陰性結果（左から右に、第１の結果および第２の結果）が直接的に示されている様子を説明している。ＰＣＰが存在する場合は検出領域内にバンドが現れ、このバンドの色は濃度が上がるにつれて暗くなっている。
【００５６】
実施例３：尿中のメチルアンフェタミン（ＭＥＴ）の検出
使用した試験ストリップの処置は実施例１で説明した処置と同じである。採用した実験計画は、ＰＣＰがメチルアンフェタミン（ＭＥＴ）に置き換えられ、このＭＥＴ希釈液が、ＭＥＴを陰性尿で希釈することによって得られ、それにより濃度が０ｎｇ／ｍｌ、１５０ｎｇ／ｍｌ、４５０ｎｇ／ｍｌおよび９００ｎｇ／ｍｌの検出溶液が得られることを除いて、実施例２で説明した実験計画に類似する。
【００５７】
検出結果
図５Ｃは、ＭＥＴが尿試料中に存在しない場合に、検出領域１５内にバンドが現れないことにより陰性結果（左から右に、第１の結果および第２の結果）が直接的に示されている様子を説明している。ＭＥＴが存在する場合は検出領域内にバンドが現れ、このバンドの色は濃度が上がるにつれて暗くなっている。
【００５８】
実施例４：尿中のモルヒネの検出
使用した試験ストリップの処置は実施例１で説明した処置と同じである。採用した実験計画は、ＰＣＰがモルヒネに置き換えられることを除いて実施例２で説明した実験計画に類似する。モルヒネ希釈溶液はＭＯＰを陰性尿で希釈することによって生成され、それにより、濃度が０ｎｇ／ｍｌ、１０５ｎｇ／ｍｌ、４５０ｎｇ／ｍｌおよび９００ｎｇ／ｍｌの検出溶液が得られる。
【００５９】
検出結果
図５Ｄは、ＭＯＰが尿試料中に存在しない場合に、検出領域２５内にバンドが現れないことにより陰性結果（左から右に、第１の結果および第２の結果）が直接的に示されている様子を説明している。ＭＯＰが存在する場合は検出領域内にバンドが現れ、このバンドの色は濃度が上がるにつれて暗くなっている。
【００６０】
実施例５：尿中のアンフェタミン（ＡＭＰ）の検出
使用した試験ストリップの処置は実施例１で説明した処理と同じである。採用した実験計画は、ＰＣＰがアンフェタミン（ＡＭＰ）に置き換えられることを除いて実施例２で説明した実験計画に類似する。このＡＭＰ希釈液はＡＭＰを陰性尿で希釈することによって生成され、それにより、濃度が０ｎｇ／ｍｌ、１５０ｎｇ／ｍｌ、１５００ｎｇ／ｍｌおよび３０００ｎｇ／ｍｌの検出溶液が得られる。
【００６１】
検出結果
図５Ｅは、ＡＭＰが尿試料中に存在しない場合に、検出領域３５内にバンドが現れないことにより陰性結果（左から右に、第１の結果および第２の結果）が直接的に示されている様子を説明している。ＡＭＰが存在する場合は検出領域内にバンドが現れ、このバンドの色は濃度が上がるにつれて暗くなっている。
【００６２】
実施例６：尿中のテトラヒドロカナビノール（ＴＨＣ）の検出
使用した試験ストリップの処置は実施例１で説明した処置と同じである。採用した実験計画は、ＰＣＰがテトラヒドロカナビノール（ＴＨＣ）に置き換えられることを除いて実施例２で説明した実験計画に類似する。このＴＨＣ希釈液はＴＨＣを陰性尿で希釈することによって生成され、それにより、濃度が０ｎｇ／ｍｌ、１７．５ｎｇ／ｍｌ、７５ｎｇ／ｍｌ、および１５０ｎｇ／ｍｌの検出溶液が得られる。
【００６３】
検出結果
図５Ｆは、ＴＨＣが尿試料中に存在しない場合に、検出領域４５内にバンドが現れないことにより陰性結果（左から右に、第１の結果および第２の結果）が直接的に示されている様子を説明している。ＴＨＣが存在する場合は検出領域内にバンドが現れ、このバンドの色は濃度が上がるにつれて暗くなっている。
【００６４】
本明細書では本考案の好適な実施形態を示して説明してきたが、これらの実施形態が単に例として提示されていることは当業者には明白である。当業者には多数の変形形態、変更および置き換えが本考案から逸脱することなく直ちに思いつくであろう。本明細書で説明した本考案の実施形態に対する種々の代替形態が本考案を実施するのに採用され得ることを理解されたい。添付の実用新案登録請求の範囲が本考案の範囲を定義すること、ならびに、これらの実用新案登録請求の範囲内にある方法および構造とそれらの均等物とがそれによって保護され得ることが意図される。
【図１】
0003158764.tif 000004
【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
0003158764.tif 000011
【図５Ｃ】
0003158764.tif 000012
【図５Ｄ】
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【図５Ｅ】
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【図５Ｆ】
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