(57)【要約】本発明は、ヒト新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に対する高い結合親和性を有する抗体を特徴とする。これらの抗ＦｃＲｎ抗体は、例えば、対象における自己抗体のクリアランスを促進するために、または対象における抗原提示を抑制するために、または対象における免疫応答を阻止する、例えば免疫応答の免疫複合体に基づく活性化を阻止するために、および対象における免疫疾患（例えば自己免疫疾患）を治療するために有用である。2018504907.tif 000084
2018504907.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトＦｃＲｎに結合する単離された抗体であって、以下を含む、単離された抗体：
（１）ＣＤＲ  Ｌ１、ＣＤＲ  Ｌ２、およびＣＤＲ  Ｌ３を含む軽鎖可変領域、ならびに
（２）ＣＤＲ  Ｈ１、ＣＤＲ  Ｈ２、およびＣＤＲ  Ｈ３を含む重鎖可変領域
（ここでは、
前記ＣＤＲ  Ｌ１は、ＴＧＴＧＳＤＶＧＳＹＮＬＶＳ（配列番号１）の配列と比較して２つ以下のアミノ酸置換を有する配列を有し、
前記ＣＤＲ  Ｌ２は、ＧＤＳＥＲＰＳ（配列番号２）の配列と比較して１つ以下のアミノ酸置換を有する配列を有し、
前記ＣＤＲ  Ｌ３は、ＳＳＹＡＧＳＧＩＹＶ（配列番号３）の配列と比較して１つ以下のアミノ酸置換を有する配列を有し、
前記ＣＤＲ  Ｈ１は、ＴＹＡＭＧ（配列番号４）、ＤＹＡＭＧ（配列番号５）、またはＮＹＡＭＧ（配列番号６）の配列と比較して１つ以下のアミノ酸置換を有する配列を有し、
前記ＣＤＲ  Ｈ２は、ＳＩＧＳＳＧＡＱＴＲＹＡＤＳ（配列番号７）、ＳＩＧＡＳＧＳＱＴＲＹＡＤＳ（配列番号８）、ＳＩＧＡＳＧＡＱＴＲＹＡＤＳ（配列番号９）、またはＳＩＧＡＳＧＧＱＴＲＹＡＤＳ（配列番号１０）の配列と比較して２つ以下のアミノ酸置換を有する配列を有し、
前記ＣＤＲ  Ｈ３は、ＬＡＩＧＤＳＹ（配列番号１１）の配列と比較して１つ以下のアミノ酸置換を有する配列を有する）。
【請求項２】
前記抗体が、抗体Ｎ０２６のＫＤ以下のＫＤでヒトＦｃＲｎと結合する、請求項１に記載の単離された抗体。
【請求項３】
前記ＣＤＲ  Ｌ１が、配列ＴＧＴＧＳＤＶＧＳＹＮＬＶＳ（配列番号１）を有し、
前記ＣＤＲ  Ｌ２が、配列ＧＤＳＥＲＰＳ（配列番号２）を有し、
前記ＣＤＲ  Ｌ３が、配列ＳＳＹＡＧＳＧＩＹＶ（配列番号３）を有し、
前記ＣＤＲ  Ｈ１が、配列ＴＹＡＭＧ（配列番号４）を有し、
前記ＣＤＲ  Ｈ２が、配列ＳＩＧＳＳＧＡＱＴＲＹＡＤＳ（配列番号７）を有し、
前記ＣＤＲ  Ｈ３が、配列ＬＡＩＧＤＳＹ（配列番号１１）を有する、
請求項１に記載の単離された抗体。
【請求項４】
前記ＣＤＲ  Ｌ１が、配列ＴＧＴＧＳＤＶＧＳＹＮＬＶＳ（配列番号１）を有し
前記ＣＤＲ  Ｌ２が、配列ＧＤＳＥＲＰＳ（配列番号２）を有し、
前記ＣＤＲ  Ｌ３が、配列ＳＳＹＡＧＳＧＩＹＶ（配列番号３）を有し、
前記ＣＤＲ  Ｈ１が、配列ＤＹＡＭＧ（配列番号５）を有し、
前記ＣＤＲ  Ｈ２が、配列ＳＩＧＡＳＧＳＱＴＲＹＡＤＳ（配列番号８）を有し、
前記ＣＤＲ  Ｈ３が、配列ＬＡＩＧＤＳＹ（配列番号１１）を有する、
請求項１に記載の単離された抗体。
【請求項５】
前記ＣＤＲ  Ｌ１が、配列ＴＧＴＧＳＤＶＧＳＹＮＬＶＳ（配列番号１）を有し、
前記ＣＤＲ  Ｌ２が、配列ＧＤＳＥＲＰＳ（配列番号２）を有し、
前記ＣＤＲ  Ｌ３が、配列ＳＳＹＡＧＳＧＩＹＶ（配列番号３）を有し、
前記ＣＤＲ  Ｈ１が、配列ＮＹＡＭＧ（配列番号６）を有し、
前記ＣＤＲ  Ｈ２が、配列ＳＩＧＡＳＧＡＱＴＲＹＡＤＳ（配列番号９）を有し、
前記ＣＤＲ  Ｈ３が、配列ＬＡＩＧＤＳＹ（配列番号１１）を有する、
請求項１に記載の単離された抗体。
【請求項６】
前記ＣＤＲ  Ｌ１が、配列ＴＧＴＧＳＤＶＧＳＹＮＬＶＳ（配列番号１）を有し、
前記ＣＤＲ  Ｌ２が、配列ＧＤＳＥＲＰＳ（配列番号２）を有し、
前記ＣＤＲ  Ｌ３が、配列ＳＳＹＡＧＳＧＩＹＶ（配列番号３）を有し、
前記ＣＤＲ  Ｈ１が、配列ＴＹＡＭＧ（配列番号４）を有し、
前記ＣＤＲ  Ｈ２が、配列ＳＩＧＡＳＧＧＱＴＲＹＡＤＳ（配列番号１０）を有し、
前記ＣＤＲ  Ｈ３が、配列ＬＡＩＧＤＳＹ（配列番号１１）を有する、
請求項１に記載の単離された抗体。
【請求項７】
前記ＣＤＲ  Ｌ１が、配列ＴＧＴＧＳＤＶＧＳＹＮＬＶＳ（配列番号１）を有し、
前記ＣＤＲ  Ｌ２が、配列ＧＤＳＥＲＰＳ（配列番号２）を有し、
前記ＣＤＲ  Ｌ３が、配列ＳＳＹＡＧＳＧＩＹＶ（配列番号３）を有し、
前記ＣＤＲ  Ｈ１が、配列ＴＹＡＭＧ（配列番号４）を有し、
前記ＣＤＲ  Ｈ２が、配列ＳＩＧＡＳＧＳＱＴＲＹＡＤＳ（配列番号８）を有し、
前記ＣＤＲ  Ｈ３が、配列ＬＡＩＧＤＳＹ（配列番号１１）を有する、
請求項１に記載の単離された抗体。
【請求項８】
ヒトＦｃＲｎに結合する単離された抗体であって、以下を含む、単離された抗体：
（１）ＣＤＲ  Ｌ１、ＣＤＲ  Ｌ２、およびＣＤＲ  Ｌ３を含む軽鎖可変領域、ならびに
（２）ＣＤＲ  Ｈ１、ＣＤＲ  Ｈ２、およびＣＤＲ  Ｈ３を含む重鎖可変領域
（ここでは、
前記ＣＤＲ  Ｌ１は、配列Ｘ１ＧＴＧＳＤＶＧＳＹＮＸ２ＶＳ（配列番号１２）を有し、
前記ＣＤＲ  Ｌ２は、配列ＧＤＸ３Ｘ４ＲＰＳ（配列番号１３）を有し、
前記ＣＤＲ  Ｌ３は、配列Ｘ５ＳＹＸ６ＧＳＧＩＹＶ（配列番号１４）を有し、
前記ＣＤＲ  Ｈ１は、配列Ｚ１ＹＡＭＧ（配列番号１５）を有し、
前記ＣＤＲ  Ｈ２は、配列ＳＩＧＺ２ＳＧＺ３ＱＴＺ４ＹＡＤＳ（配列番号１６）を有し、
前記ＣＤＲ  Ｈ３は、配列ＬＡＺ５Ｚ６ＤＳＹ（配列番号１７）を有し、
ここでは、
Ｘ１は、極性または疎水性アミノ酸であり、
Ｘ２は、疎水性アミノ酸であり、
Ｘ３は、極性アミノ酸であり、
Ｘ４は、極性または酸性アミノ酸であり、
Ｘ５は、極性または疎水性アミノ酸であり、
Ｘ６は、疎水性アミノ酸であり、
Ｚ１は、極性または酸性アミノ酸であり、
Ｚ２は、極性または疎水性アミノ酸であり、
Ｚ３は、Ｇ、Ｓ、またはＡであり、
Ｚ４は、塩基性アミノ酸であり、
Ｚ５は、疎水性または塩基性アミノ酸であり、
Ｚ６は、Ｇ、Ｓ、Ｄ、Ｑ、またはＨであり、かつ、
前記抗体は、２００、１５０、１００、５０、または４０ｐＭ未満のＫＤで、ヒトＦｃＲｎと結合する）。
【請求項９】
前記ＣＤＲ  Ｌ１が、配列Ｘ１ＧＴＧＳＤＶＧＳＹＮＸ２ＶＳ（配列番号１２）を有し、
前記ＣＤＲ  Ｌ２が、配列ＧＤＸ３Ｘ４ＲＰＳ（配列番号１３）を有し、
前記ＣＤＲ  Ｌ３が、配列Ｘ５ＳＹＸ６ＧＳＧＩＹＶ（配列番号１４）を有し、
前記ＣＤＲ  Ｈ１が、配列Ｚ１ＹＡＭＧ（配列番号１５）を有し、
前記ＣＤＲ  Ｈ２が、配列ＳＩＧＺ２ＳＧＺ３ＱＴＺ４ＹＡＤＳ（配列番号１６）を有し、
前記ＣＤＲ  Ｈ３が、配列ＬＡＺ５Ｚ６ＤＳＹ（配列番号１７）を有し、
ここでは、
Ｘ１が、Ｔ、Ａ、Ｓ、またはＩであり、
Ｘ２が、ＬまたはＩであり、
Ｘ３が、Ｓ、Ｎ、またはＴであり、
Ｘ４が、Ｑ、Ｅ、またはＮであり、
Ｘ５が、Ｃ、Ｓ、Ｉ、またはＹであり、
Ｘ６が、ＡまたはＶであり、
Ｚ１が、Ｅ、Ｔ、Ｄ、またはＮであり、
Ｚ２が、ＳまたはＡであり、
Ｚ３が、Ｇ、Ｓ、またはＡであり、
Ｚ４が、ＫまたはＲであり、
Ｚ５が、Ｉ、Ｌ、またはＨであり、
Ｚ６が、Ｇ、Ｓ、Ｄ、Ｑ、またはＨである、
請求項８に記載の単離された抗体。
【請求項１０】
前記ＣＤＲ  Ｌ１が、ＴＧＴＧＳＤＶＧＳＹＮＬＶＳ（配列番号１）の配列と比較して２つ以下のアミノ酸置換を有する配列を有し、
前記ＣＤＲ  Ｌ２が、ＧＤＳＥＲＰＳ（配列番号２）の配列と比較して１つ以下のアミノ酸置換を有する配列を有し、
前記ＣＤＲ  Ｌ３が、ＳＳＹＡＧＳＧＩＹＶ（配列番号３）の配列と比較して１つ以下のアミノ酸置換を有する配列を有し、
前記ＣＤＲ  Ｈ１が、ＴＹＡＭＧ（配列番号４）、ＤＹＡＭＧ（配列番号５）、またはＮＹＡＭＧ（配列番号６）の配列と比較して１つ以下のアミノ酸置換を有する配列を有し、
前記ＣＤＲ  Ｈ２が、ＳＩＧＳＳＧＡＱＴＲＹＡＤＳ（配列番号７）、ＳＩＧＡＳＧＳＱＴＲＹＡＤＳ（配列番号８）、ＳＩＧＡＳＧＡＱＴＲＹＡＤＳ（配列番号９）、またはＳＩＧＡＳＧＧＱＴＲＹＡＤＳ（配列番号１０）の配列と比較して２つ以下のアミノ酸置換を有する配列を有し、
前記ＣＤＲ  Ｈ３が、ＬＡＩＧＤＳＹ（配列番号１１）の配列と比較して１つ以下のアミノ酸置換を有する配列を有する、
請求項８または９に記載の単離された抗体。
【請求項１１】
配列ＴＧＴＧＳＤＶＧＳＹＮＬＶＳ（配列番号１）を有するＣＤＲ  Ｌ１、配列ＧＤＳＥＲＰＳ（配列番号２）を有するＣＤＲ  Ｌ２、および配列ＳＳＹＡＧＳＧＩＹＶ（配列番号３）を有するＣＤＲ  Ｌ３を含む軽鎖可変領域、ならびにＣＤＲ  Ｈ１、ＣＤＲ  Ｈ２、およびＣＤＲ  Ｈ３を含む重鎖可変領域を含む、単離された抗体
（ここでは、
前記ＣＤＲ  Ｈ１は、配列Ｚ１ＹＡＭＧ（配列番号１５）を有し、
前記ＣＤＲ  Ｈ２は、配列ＳＩＧＺ２ＳＧＺ３ＱＴＲＹＡＤＳ（配列番号１８）を有し、
前記ＣＤＲ  Ｈ３は、配列ＬＡＩＧＤＳＹ（配列番号１１）を有し、
ここでは、
Ｚ１は、Ｔ、Ｄ、またはＮであり、
Ｚ２は、ＳまたはＡであり、
Ｚ３は、Ｇ、Ｓ、またはＡである）。
【請求項１２】
前記軽鎖可変領域が、
2018504907.tif 000058
の配列との少なくとも９０％の同一性を有する配列を有する、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１３】
前記重鎖可変領域が、
2018504907.tif 000059
の配列との少なくとも９０％の同一性を有する配列を有する、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１４】
前記重鎖可変領域が、
2018504907.tif 000060
の配列との少なくとも９０％の同一性を有する配列を有する、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１５】
前記重鎖可変領域が、
2018504907.tif 000061
の配列との少なくとも９０％の同一性を有する配列を有する、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１６】
前記重鎖可変領域が、
2018504907.tif 000062
の配列との少なくとも９０％の同一性を有する配列を有する、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１７】
前記重鎖可変領域が、
2018504907.tif 000063
の配列との少なくとも９０％の同一性を有する配列を有する、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１８】
軽鎖可変領域が、
2018504907.tif 000064
の配列との少なくとも９０％の同一性を有する配列を有し；
重鎖可変領域が、
2018504907.tif 000065
の配列との少なくとも９０％の同一性を有する配列を有する、前記軽鎖可変領域および前記重鎖可変領域を含む単離された抗体。
【請求項１９】
軽鎖可変領域が、
2018504907.tif 000066
の配列との少なくとも９０％の同一性を有する配列を有し；
重鎖可変領域が、
2018504907.tif 000067
の配列との少なくとも９０％の同一性を有する配列を有する、前記軽鎖可変領域および前記重鎖可変領域を含む単離された抗体。
【請求項２０】
軽鎖可変領域が、
2018504907.tif 000068
の配列との少なくとも９０％の同一性を有する配列を有し；
重鎖可変領域が、
2018504907.tif 000069
の配列との少なくとも９０％の同一性を有する配列を有する、前記軽鎖可変領域および前記重鎖可変領域を含む単離された抗体。
【請求項２１】
軽鎖可変領域が、
2018504907.tif 000070
の配列との少なくとも９０％の同一性を有する配列を有し；
重鎖可変領域が、
2018504907.tif 000071
の配列との少なくとも９０％の同一性を有する配列を有する、前記軽鎖可変領域および前記重鎖可変領域を含む単離された抗体。
【請求項２２】
軽鎖可変領域が、
2018504907.tif 000072
の配列との少なくとも９０％の同一性を有する配列を有し；
重鎖可変領域が、
2018504907.tif 000073
の配列との少なくとも９０％の同一性を有する配列を有する、前記軽鎖可変領域および前記重鎖可変領域を含む単離された抗体。
【請求項２３】
前記重鎖可変領域が、配列番号２０〜２４のいずれか１つの配列との少なくとも９５％、９７％、９９％、または１００％の同一性を有する配列を有する、請求項１３〜２２のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項２４】
前記軽鎖可変領域が、配列番号１９の配列との少なくとも９５％、９７％、９９％、または１００％の同一性を有する配列を有する、請求項１２〜２３のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項２５】
前記抗体が、配列番号２０〜２４のいずれか１つの配列に対する、アミノ酸置換Ｎ２９７Ａをさらに含む、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項２６】
前記抗体が、配列番号２０〜２４のいずれか１つの配列に対する、アミノ酸置換Ｄ３５５ＥおよびＬ３５７Ｍをさらに含む、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項２７】
前記抗体が、次のアミノ酸置換：配列番号２０〜２４のいずれか１つの配列に対するＡ２３Ｖ、Ｓ３０Ｒ、Ｌ８０Ｖ、Ａ８４Ｔ、Ｅ８５Ｄ、Ａ９３Ｖ、ならびに配列番号１９の配列に対するＱ３８Ｈ、Ｖ５８Ｉ、およびＧ９９Ｄのうちいずれか１つまたは複数をさらに含む、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項２８】
前記抗体が、配列番号２０〜２４のいずれか１つの配列と比較して、残基４４６にＣ末端リジンを含有しない、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項２９】
軽鎖可変領域が、
2018504907.tif 000074
の配列を有し；
重鎖可変領域が、
2018504907.tif 000075
の配列を有する、前記軽鎖可変領域および前記重鎖可変領域を含む単離された抗体。
【請求項３０】
軽鎖可変領域が、
2018504907.tif 000076
の配列を有し；
重鎖可変領域が、
2018504907.tif 000077
の配列を有する、前記軽鎖可変領域および前記重鎖可変領域を含む単離された抗体。
【請求項３１】
軽鎖可変領域が、
2018504907.tif 000078
の配列を有し；
重鎖可変領域が、
2018504907.tif 000079
の配列を有する、前記軽鎖可変領域および前記重鎖可変領域を含む単離された抗体。
【請求項３２】
軽鎖可変領域が、
2018504907.tif 000080
の配列を有し；
重鎖可変領域が、
2018504907.tif 000081
の配列を有する、前記軽鎖可変領域および前記重鎖可変領域を含む単離された抗体。
【請求項３３】
軽鎖可変領域が、
2018504907.tif 000082
の配列を有し；
重鎖可変領域が、
2018504907.tif 000083
の配列を有する、前記軽鎖可変領域および前記重鎖可変領域を含む単離された抗体。
【請求項３４】
前記抗体が、モノクローナル抗体である、請求項１〜３３のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項３５】
前記抗体が、ＩｇＧ１である、請求項１〜３４のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項３６】
前記抗体が、λ軽鎖を含む、請求項１〜３５のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項３７】
前記抗体が、シアル酸付加された抗体である、請求項１〜３６のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項３８】
請求項１〜３７のいずれか一項に記載の単離された抗体をコードする核酸分子。
【請求項３９】
請求項３８に記載の核酸分子を含むベクター。
【請求項４０】
請求項１〜３７のいずれか一項に記載の単離された抗体を発現する宿主細胞であって、前記宿主細胞が、請求項３８に記載の核酸分子または請求項３９に記載のベクターを含み、前記核酸分子またはベクターが前記宿主細胞中で発現される、前記宿主細胞。
【請求項４１】
前記宿主細胞が、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である、請求項４０に記載の宿主細胞。
【請求項４２】
請求項１〜３７のいずれか一項に記載の単離された抗体を調製する方法であって、以下を含む、前記方法：
ａ）請求項３８の核酸分子または請求項３９のベクターを含む宿主細胞を提供すること、および
ｂ）前記抗体の形成を可能にする条件下で、前記宿主細胞中で前記核酸分子またはベクターを発現させること。
【請求項４３】
約１〜１００、１〜５０、１〜２５、２〜５０、５〜５０、または２〜２０ｍｇ／ｍｌの濃度で前記抗体を回収する工程をさらに含む、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記宿主細胞が、ＣＨＯ細胞である、請求項４２または４３に記載の方法。
【請求項４５】
請求項１〜３７のいずれか一項に記載の単離された抗体と、１種または複数種の薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む、薬学的組成物。
【請求項４６】
前記抗体が、治療有効量である、請求項４５に記載の薬学的組成物。
【請求項４７】
対象におけるＩｇＧ異化を亢進させる方法であって、請求項１〜３７のいずれか一項に記載の単離された抗体または請求項４５または４６に記載の薬学的組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項４８】
対象における自己抗体を減少させる方法であって、請求項１〜３７のいずれか一項に記載の単離された抗体または請求項４５または４６に記載の薬学的組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項４９】
対象における免疫応答の免疫複合体に基づく活性化を低下させる方法であって、請求項１〜３７のいずれか一項に記載の単離された抗体または請求項４５または４６に記載の薬学的組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項５０】
前記免疫応答が、前記対象における急性または慢性の免疫応答である、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記急性の免疫応答が、尋常性天疱瘡、ループス腎炎、重症筋無力症、ギラン・バレー症候群、抗体媒介性拒絶反応、劇症型抗リン脂質抗体症候群、免疫複合体性血管炎、糸球体炎、チャネル病、視神経脊髄炎、自己免疫性難聴、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、自己免疫性溶血性貧血（ＡＩＨＡ）、免疫性好中球減少症、拡張型心筋症、および血清病からなる群より選択される医学的状態によって活性化される、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記対象が、慢性炎症性脱髄性多発神経炎（ＣＩＤＰ）、全身性ループス、反応性関節障害、原発性胆汁性肝硬変、潰瘍性大腸炎、および抗好中球細胞質抗体（ＡＮＣＡ）関連血管炎を有する、請求項５０に記載の方法。
【請求項５３】
前記対象が、自己免疫疾患を有する、請求項５０に記載の方法。
【請求項５４】
前記対象が、円形脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質抗体症候群、アジソン病、溶血性貧血、自己免疫性肝炎、肝炎、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、心筋症、セリアックスプルー−皮膚炎、慢性疲労免疫不全症候群、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、チャーグ・ストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡、限局型全身性強皮症（クレスト症候群）、寒冷凝集素症、クローン病、皮膚筋炎、円板状ループス、本態性混合型クリオグロブリン血症、線維筋痛症、線維筋炎、グレーブス病、橋本甲状腺炎、甲状腺機能低下症、炎症性腸疾患、自己免疫性リンパ増殖症候群、特発性肺線維症、ＩｇＡ腎症、インスリン依存性糖尿病、若年性関節炎、扁平苔癬、ループス、メニエール病、混合性結合組織病、多発性硬化症、悪性貧血、結節性多発動脈炎、多発性軟骨炎、多腺性症候群、リウマチ性多発筋痛症、多発性筋炎、原発性無ガンマグロブリン血症、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、レイノー現象、ライター症候群、リウマチ熱、関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症候群、全身硬直症候群、高安動脈炎、側頭動脈炎、潰瘍性大腸炎、ぶどう膜炎、白斑、およびウェゲナー肉芽腫症からなる群より選択される状態を有する、請求項５０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
発明の背景
治療用タンパク質、例えば治療用抗体は、急速に、免疫疾患を有する患者にとって、臨床的に重要な薬物クラスとなっている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００２】
本発明は、ヒト新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に対する新規の抗体を特徴とする。これらの抗ＦｃＲｎ抗体は、例えば、対象における自己抗体のクリアランスを促進するために、または対象における抗原提示を抑制するために、または対象における免疫応答を阻止する、例えば免疫応答の免疫複合体に基づく活性化を阻止するために、または対象における免疫疾患（例えば自己免疫疾患）を治療するために有用である。
【０００３】
一局面では、本発明は、ヒトＦｃＲｎに結合する単離された抗体を特徴とする。この単離された抗体は、以下を含有する：（１）ＣＤＲ  Ｌ１、ＣＤＲ  Ｌ２、およびＣＤＲ  Ｌ３を含む軽鎖可変領域、ならびに（２）ＣＤＲ  Ｈ１、ＣＤＲ  Ｈ２、およびＣＤＲ  Ｈ３を含む重鎖可変領域。ここでは、ＣＤＲ  Ｌ１は、ＴＧＴＧＳＤＶＧＳＹＮＬＶＳ（配列番号１）の配列と比較して２つ以下のアミノ酸置換を有する配列を有し、ＣＤＲ  Ｌ２は、ＧＤＳＥＲＰＳ（配列番号２）の配列と比較して１つ以下のアミノ酸置換を有する配列を有し、ＣＤＲ  Ｌ３は、ＳＳＹＡＧＳＧＩＹＶ（配列番号３）の配列と比較して１つ以下のアミノ酸置換を有する配列を有し、ＣＤＲ  Ｈ１は、ＴＹＡＭＧ（配列番号４）、ＤＹＡＭＧ（配列番号５）、またはＮＹＡＭＧ（配列番号６）の配列と比較して１つ以下のアミノ酸置換を有する配列を有し、ＣＤＲ  Ｈ２は、ＳＩＧＳＳＧＡＱＴＲＹＡＤＳ（配列番号７）、ＳＩＧＡＳＧＳＱＴＲＹＡＤＳ（配列番号８）、ＳＩＧＡＳＧＡＱＴＲＹＡＤＳ（配列番号９）、またはＳＩＧＡＳＧＧＱＴＲＹＡＤＳ（配列番号１０）の配列と比較して２つ以下のアミノ酸置換を有する配列を有し、ＣＤＲ  Ｈ３は、ＬＡＩＧＤＳＹ（配列番号１１）の配列と比較して１つ以下のアミノ酸置換を有する配列を有する。
【０００４】
いくつかの態様では、該抗体は、２００、１５０、１００、５０、または４０ｐＭ未満のＫＤで、ヒトＦｃＲｎと結合する。
【０００５】
いくつかの態様では、該抗体は、Ｎ０２２、Ｎ０２３、Ｎ０２４、Ｎ０２６、またはＮ０２７の軽鎖可変領域および重鎖可変領域を有し、かつ比較される抗体と同じＦｃ領域をさらに有する抗体のＫＤ以下であるＫＤで、ヒトＦｃＲｎと結合する。
【０００６】
別の局面では、本発明は、以下を含有する単離された抗体を特徴とする：（１）ＣＤＲ  Ｌ１、ＣＤＲ  Ｌ２、およびＣＤＲ  Ｌ３を含む軽鎖可変領域、ならびに（２）ＣＤＲ  Ｈ１、ＣＤＲ  Ｈ２、およびＣＤＲ  Ｈ３を含む重鎖可変領域。ここでは、ＣＤＲ  Ｌ１は、Ｘ１ＧＴＧＳＤＶＧＳＹＮＸ２ＶＳ（配列番号１２）の配列を有し、ＣＤＲ  Ｌ２は、ＧＤＸ３Ｘ４ＲＰＳ（配列番号１３）の配列を有し、ＣＤＲ  Ｌ３は、Ｘ５ＳＹＸ６ＧＳＧＩＹＶ（配列番号１４）の配列を有し、ＣＤＲ  Ｈ１は、Ｚ１ＹＡＭＧ（配列番号１５）の配列を有し、ＣＤＲ  Ｈ２は、ＳＩＧＺ２ＳＧＺ３ＱＴＺ４ＹＡＤＳ（配列番号１６）の配列を有し、ＣＤＲ  Ｈ３は、ＬＡＺ５Ｚ６ＤＳＹ（配列番号１７）の配列を有し、ここでは、Ｘ１は、極性または疎水性アミノ酸であり、Ｘ２は、疎水性アミノ酸であり、Ｘ３は、極性アミノ酸であり、Ｘ４は、極性または酸性アミノ酸であり、Ｘ５は、極性または疎水性アミノ酸であり、Ｘ６は、疎水性アミノ酸であり、Ｚ１は、極性または酸性アミノ酸であり、Ｚ２は、極性または疎水性アミノ酸であり、Ｚ３は、Ｇ、Ｓ、またはＡであり、Ｚ４は、塩基性アミノ酸であり、Ｚ５は、疎水性または塩基性アミノ酸であり、Ｚ６は、Ｇ、Ｓ、Ｄ、Ｑ、またはＨであり、かつ、ここでは、該抗体は、Ｎ０２６の軽鎖可変領域および重鎖可変領域を有し、かつ比較される抗体と同じＦｃ領域をさらに有する抗体のＫＤ以下であるＫＤで、ヒトＦｃＲｎと結合する。いくつかの態様では、Ｘ１は、Ｔ、Ａ、Ｓ、またはＩである。他の態様では、Ｘ２は、ＬまたはＩである。いくつかの態様では、Ｘ３は、Ｓ、Ｎ、またはＴである。さらに他の態様では、Ｘ４は、Ｑ、Ｅ、またはＮであり、Ｘ５は、Ｃ、Ｓ、Ｉ、またはＹである。いくつかの態様では、Ｘ６は、ＡまたはＶであり、Ｚ１は、Ｅ、Ｔ、Ｄ、またはＮである。さらなる態様では、Ｚ２は、ＳまたはＡである。いくつかの態様では、Ｚ４は、ＫまたはＲである。さらに他の態様では、Ｚ５は、Ｉ、Ｌ、またはＨである。
【０００７】
別の局面では、本発明は、ＴＧＴＧＳＤＶＧＳＹＮＬＶＳ（配列番号１）の配列を有するＣＤＲ  Ｌ１、ＧＤＳＥＲＰＳ（配列番号２）の配列を有するＣＤＲ  Ｌ２、およびＳＳＹＡＧＳＧＩＹＶ（配列番号３）の配列を有するＣＤＲ  Ｌ３を含む軽鎖可変領域、およびＺ１ＹＡＭＧ（配列番号１５）の配列を有するＣＤＲ  Ｈ１、ＳＩＧＺ２ＳＧＺ３ＱＴＲＹＡＤＳ（配列番号１８）の配列を有するＣＤＲ  Ｈ２、およびＬＡＩＧＤＳＹ（配列番号１１）の配列を有するＣＤＲ  Ｈ３（ここでは、Ｚ１は、Ｔ、Ｄ、またはＮであり、Ｚ２は、ＳまたはＡであり、Ｚ３は、Ｇ、Ｓ、またはＡである）を含む重鎖可変領域を含有する、単離された抗体を特徴とする。
【０００８】
いくつかの態様では、単離された抗体は、ＴＧＴＧＳＤＶＧＳＹＮＬＶＳ（配列番号１）の配列を有するＣＤＲ  Ｌ１、ＧＤＳＥＲＰＳ（配列番号２）の配列を有するＣＤＲ  Ｌ２、ＳＳＹＡＧＳＧＩＹＶ（配列番号３）の配列を有するＣＤＲ  Ｌ３、ＴＹＡＭＧ（配列番号４）の配列を有するＣＤＲ  Ｈ１、ＳＩＧＳＳＧＡＱＴＲＹＡＤＳ（配列番号７）の配列を有するＣＤＲ  Ｈ２、およびＬＡＩＧＤＳＹ（配列番号１１）の配列を有するＣＤＲ  Ｈ３を含有する。
【０００９】
いくつかの態様では、単離された抗体は、ＴＧＴＧＳＤＶＧＳＹＮＬＶＳ（配列番号１）の配列を有するＣＤＲ  Ｌ１、ＧＤＳＥＲＰＳ（配列番号２）の配列を有するＣＤＲ  Ｌ２、ＳＳＹＡＧＳＧＩＹＶ（配列番号３）の配列を有するＣＤＲ  Ｌ３、ＤＹＡＭＧ（配列番号５）の配列を有するＣＤＲ  Ｈ１、ＳＩＧＡＳＧＳＱＴＲＹＡＤＳ（配列番号８）の配列を有するＣＤＲ  Ｈ２、およびＬＡＩＧＤＳＹ（配列番号１１）の配列を有するＣＤＲ  Ｈ３を含有する。
【００１０】
いくつかの態様では、単離された抗体は、ＴＧＴＧＳＤＶＧＳＹＮＬＶＳ（配列番号１）の配列を有するＣＤＲ  Ｌ１、ＧＤＳＥＲＰＳ（配列番号２）の配列を有するＣＤＲ  Ｌ２、ＳＳＹＡＧＳＧＩＹＶ（配列番号３）の配列を有するＣＤＲ  Ｌ３、ＮＹＡＭＧ（配列番号６）の配列を有するＣＤＲ  Ｈ１、ＳＩＧＡＳＧＡＱＴＲＹＡＤＳ（配列番号９）の配列を有するＣＤＲ  Ｈ２、およびＬＡＩＧＤＳＹ（配列番号１１）の配列を有するＣＤＲ  Ｈ３を含有する。
【００１１】
他の態様では、単離された抗体は、ＴＧＴＧＳＤＶＧＳＹＮＬＶＳ（配列番号１）の配列を有するＣＤＲ  Ｌ１、ＧＤＳＥＲＰＳ（配列番号２）の配列を有するＣＤＲ  Ｌ２、ＳＳＹＡＧＳＧＩＹＶ（配列番号３）の配列を有するＣＤＲ  Ｌ３、ＴＹＡＭＧ（配列番号４）の配列を有するＣＤＲ  Ｈ１、ＳＩＧＡＳＧＧＱＴＲＹＡＤＳ（配列番号１０）の配列を有するＣＤＲ  Ｈ２、およびＬＡＩＧＤＳＹ（配列番号１１）の配列を有するＣＤＲ  Ｈ３を含有する。
【００１２】
さらに他の態様では、単離された抗体は、ＴＧＴＧＳＤＶＧＳＹＮＬＶＳ（配列番号１）の配列を有するＣＤＲ  Ｌ１、ＧＤＳＥＲＰＳ（配列番号２）の配列を有するＣＤＲ  Ｌ２、ＳＳＹＡＧＳＧＩＹＶ（配列番号３）の配列を有するＣＤＲ  Ｌ３、ＴＹＡＭＧ（配列番号４）の配列を有するＣＤＲ  Ｈ１、ＳＩＧＡＳＧＳＱＴＲＹＡＤＳ（配列番号８）の配列を有するＣＤＲ  Ｈ２、およびＬＡＩＧＤＳＹ（配列番号１１）の配列を有するＣＤＲ  Ｈ３を含有する。
【００１３】
いくつかの態様では、本発明の単離された抗体の軽鎖可変領域は、
2018504907.tif 000003
の配列との少なくとも９０％の同一性を有する配列を有する。
【００１４】
いくつかの態様では、本発明の単離された抗体の重鎖可変領域は、
2018504907.tif 000004
の配列との少なくとも９０％の同一性を有する配列を有する。
【００１５】
他の態様では、本発明の単離された抗体の重鎖可変領域は、
2018504907.tif 000005
の配列との少なくとも９０％の同一性を有する配列を有する。
【００１６】
他の態様では、本発明の単離された抗体の重鎖可変領域は、
2018504907.tif 000006
の配列との少なくとも９０％の同一性を有する配列を有する。
【００１７】
いくつかの態様では、本発明の単離された抗体の重鎖可変領域は、
2018504907.tif 000007
の配列との少なくとも９０％の同一性を有する配列を有する。
【００１８】
他の態様では、本発明の単離された抗体の重鎖可変領域は、
2018504907.tif 000008
の配列との少なくとも９０％の同一性を有する配列を有する。
【００１９】
別の局面では、本発明は、軽鎖可変領域および重鎖可変領域を含有する単離された抗体を特徴とし、ここでは、軽鎖可変領域は、
2018504907.tif 000009
の配列との少なくとも９０％の同一性を有する配列を有し；重鎖可変領域は、
2018504907.tif 000010
の配列との少なくとも９０％の同一性を有する配列を有する。
【００２０】
別の局面では、本発明は、軽鎖可変領域および重鎖可変領域を含有する単離された抗体を特徴とし、ここでは、軽鎖可変領域は、
2018504907.tif 000011
の配列との少なくとも９０％の同一性を有する配列を有し；重鎖可変領域は、
2018504907.tif 000012
の配列との少なくとも９０％の同一性を有する配列を有する。
【００２１】
別の局面では、本発明は、軽鎖可変領域および重鎖可変領域を含有する単離された抗体を特徴とし、ここでは、軽鎖可変領域は、
2018504907.tif 000013
の配列との少なくとも９０％の同一性を有する配列を有し；重鎖可変領域は、
2018504907.tif 000014
の配列との少なくとも９０％の同一性を有する配列を有する。
【００２２】
別の局面では、本発明は、軽鎖可変領域および重鎖可変領域を含有する単離された抗体を特徴とし、ここでは、軽鎖可変領域は、
2018504907.tif 000015
の配列との少なくとも９０％の同一性を有する配列を有し；重鎖可変領域は、
2018504907.tif 000016
の配列との少なくとも９０％の同一性を有する配列を有する。
【００２３】
別の局面では、本発明は、軽鎖可変領域および重鎖可変領域を含有する単離された抗体を特徴とし、ここでは、軽鎖可変領域は、
2018504907.tif 000017
の配列との少なくとも９０％の同一性を有する配列を有し；重鎖可変領域は、
2018504907.tif 000018
の配列との少なくとも９０％の同一性を有する配列を有する。
【００２４】
いくつかの態様では、本発明の単離された抗体の重鎖可変領域は、配列番号２０〜２４のいずれか１つの配列との少なくとも９５％、９７％、９９％、または１００％の同一性を有する配列を有する。他の態様では、本発明の単離された抗体の軽鎖可変領域は、配列番号１９の配列との少なくとも９５％、９７％、９９％、または１００％の同一性を有する配列を有する。
【００２５】
いくつかの態様では、本発明の単離された抗体は、配列番号２０〜２４のいずれか１つの配列に対する、アミノ酸置換Ｎ２９７Ａをさらに含む。
【００２６】
他の態様では、単離された抗体は、配列番号２０〜２４のいずれか１つの配列に対する、アミノ酸置換Ｄ３５５ＥおよびＬ３５７Ｍをさらに含む。
【００２７】
他の態様では、本発明の単離された抗体は、次のアミノ酸置換のいずれか１つまたは複数をさらに含む：配列番号２０〜２４のいずれか１つの配列に対するＡ２３Ｖ、Ｓ３０Ｒ、Ｌ８０Ｖ、Ａ８４Ｔ、Ｅ８５Ｄ、Ａ９３Ｖ、ならびに配列番号１９の配列に対するＱ３８Ｈ、Ｖ５８Ｉ、およびＧ９９Ｄ。
【００２８】
さらに他の態様では、本発明の単離された抗体は、配列番号２０〜２４のいずれか１つの配列と比較して、残基４４６にＣ末端リジンを含有しない。
【００２９】
いくつかの態様では、上の局面のいずれかの抗体は、Ｎ０２２、Ｎ０２３、Ｎ０２４、Ｎ０２６、またはＮ０２７の軽鎖可変領域および重鎖可変領域を有し、かつ比較される抗体と同じＦｃ領域を有する抗体のＫＤ以下であるＫＤで、ヒトＦｃＲｎと結合する。例えば、ある特定のＫＤアッセイでは、抗体のＫＤは、２００、１５０、１００、５０、または４０ｐＭ未満である。
【００３０】
本明細書において記載したあらゆる単離された抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）およびフレームワーク領域（ＦＲ）に割り当てられるアミノ酸位置は、ＫａｂａｔのＥＵインデックスに従って定義される（Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ．（１９９１））。
【００３１】
別の局面では、本発明は、軽鎖可変領域および重鎖可変領域を含有する単離された抗体を特徴とし、ここでは、軽鎖可変領域は、
2018504907.tif 000019
の配列を有し；重鎖可変領域は、
2018504907.tif 000020
の配列を有する。
【００３２】
別の局面では、本発明は、軽鎖可変領域および重鎖可変領域を含有する単離された抗体を特徴とし、ここでは、軽鎖可変領域は、
2018504907.tif 000021
の配列を有し；重鎖可変領域は、
2018504907.tif 000022
の配列を有する。
【００３３】
別の局面では、本発明は、軽鎖可変領域および重鎖可変領域を含有する単離された抗体を特徴とし、ここでは、軽鎖可変領域は、
2018504907.tif 000023
の配列を有し；重鎖可変領域は、
2018504907.tif 000024
の配列を有する。
【００３４】
別の局面では、本発明は、軽鎖可変領域および重鎖可変領域を含有する単離された抗体を特徴とし、ここでは、軽鎖可変領域は、
2018504907.tif 000025
の配列を有し；重鎖可変領域は、
2018504907.tif 000026
の配列を有する。
【００３５】
さらに別の局面では、本発明は、軽鎖可変領域および重鎖可変領域を含有する単離された抗体を特徴とし、ここでは、軽鎖可変領域は、
2018504907.tif 000027
の配列を有し；重鎖可変領域は、
2018504907.tif 000028
の配列を有する。
【００３６】
上の局面のいずれかのいくつかの態様では、本発明の単離された抗体は、モノクローナル抗体である。いくつかの態様では、単離された抗体は、ＩｇＧ１である。いくつかの態様では、単離された抗体は、λ軽鎖を含む。いくつかの態様では、単離された抗体は、κ軽鎖を含む。いくつかの態様では、単離された抗体のＦｃ領域上のグリコシル化部位は、シアル酸付加（例えば、二シアル酸付加）されている。
【００３７】
上の局面のいずれかのいくつかの態様では、本発明の単離された抗体は、ヒト化または完全ヒト型抗体である。
【００３８】
いくつかの態様では、単離された抗体は、１〜１００、５〜１５０、５〜１００、５〜７５、５〜５０、１０〜５０、または１０〜４０ｐＭのＫＤで、ヒトＦｃＲｎに結合する。
【００３９】
いくつかの態様では、本発明の単離された抗体は、げっ歯類、例えば、マウスまたはラットＦｃＲｎと結合する。いくつかの態様では、本発明の単離された抗体は、２００、１５０、１００、５０、または４０ｐＭ未満のＫＤで、げっ歯類、例えば、マウスまたはラットＦｃＲｎと結合する。
【００４０】
別の局面では、本発明は、本明細書において記載したいずれかの単離された抗体をコードする核酸分子を特徴とする。
【００４１】
さらなる別の局面では、本発明は、本明細書において記載したいずれかの抗体をコードする核酸分子を含有するベクターを特徴とする。
【００４２】
別の局面では、本発明は、本明細書において記載したいずれかの単離された抗体を発現する宿主細胞を特徴とする。該宿主細胞は、本明細書において記載したいずれかの単離された抗体をコードする核酸分子、または本明細書において記載したいずれかの単離された抗体をコードする核酸分子を含有するベクターを含み、ここでは、該核酸分子またはベクターは、宿主細胞によって発現される。
【００４３】
いくつかの態様では、宿主細胞は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である。いくつかの態様では、宿主細胞は、Ｓｐ２細胞またはＮＳ０細胞である。
【００４４】
別の局面では、本発明は、本明細書において記載したいずれかの単離された抗体を調製する方法を特徴とする。この方法は、以下を含む：ａ）本明細書において記載したいずれかの単離された抗体をコードする核酸分子、または本明細書において記載したいずれかの単離された抗体をコードする核酸分子を含有するベクターを含む宿主細胞を提供すること、およびｂ）抗体の形成を可能にする条件下で、宿主細胞中で該核酸分子またはベクターを発現させること。
【００４５】
いくつかの態様では、該方法は、例えば約１〜１００、１〜５０、１〜２５、２〜５０、５〜５０、または２〜２０ｍｇ／ｍｌの濃度で、宿主細胞から抗体を回収する工程を含む。
【００４６】
他の態様では、該方法で使用される宿主細胞は、ＣＨＯ細胞である。
【００４７】
別の局面では、本発明は、本明細書において記載したいずれかの単離された抗体と、１種または複数種の薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む、薬学的組成物を特徴とする。
【００４８】
いくつかの態様では、該薬学的組成物は、治療有効投与量の抗体を含む。
【００４９】
別の局面では、本発明は、対象におけるＩｇＧ異化を亢進させる方法を特徴とする。別の局面では、本発明は、対象における自己抗体を減少させる方法を特徴とする。さらに別の局面では、本発明は、対象における免疫応答の免疫複合体に基づく活性化を治療するまたは低下させる方法を特徴とする。この方法は、本明細書において記載したいずれかの単離された抗体、または本明細書において記載したいずれかの単離された抗体を含む薬学的組成物を対象に投与することを含む。
【００５０】
いくつかの態様では、対象における免疫応答は、急性または慢性の免疫応答である。
【００５１】
いくつかの態様では、対象は、尋常性天疱瘡、ループス腎炎、重症筋無力症、ギラン・バレー症候群、抗体媒介性拒絶反応、劇症型抗リン脂質抗体症候群、免疫複合体性血管炎、糸球体炎、チャネル病、視神経脊髄炎、自己免疫性難聴、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、自己免疫性溶血性貧血（ＡＩＨＡ）、免疫性好中球減少症、拡張型心筋症、および血清病からなる群より選択される医学的状態を有する、または、急性の免疫応答が、該医学的状態によって活性化される。
【００５２】
いくつかの態様では、対象は、慢性炎症性脱髄性多発神経炎（ＣＩＤＰ）、全身性ループス、急性治療の適応となる慢性形態の障害、反応性関節障害、原発性胆汁性肝硬変、潰瘍性大腸炎、および抗好中球細胞質抗体（ＡＮＣＡ）関連血管炎からなる群より選択される医学的状態を有する、または、慢性の免疫応答が、該医学的状態によって活性化される。
【００５３】
いくつかの態様では、対象は、自己免疫疾患を有する、または、免疫応答が、自己免疫疾患によって活性化される。具体的には、自己免疫疾患は、円形脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質抗体症候群、アジソン病、溶血性貧血、自己免疫性肝炎、肝炎、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、心筋症、セリアックスプルー−皮膚炎、慢性疲労免疫不全症候群、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、チャーグ・ストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡、限局型全身性強皮症（クレスト症候群）、寒冷凝集素症、クローン病、皮膚筋炎、円板状ループス、本態性混合型クリオグロブリン血症、線維筋痛症、線維筋炎、グレーブス病、橋本甲状腺炎、甲状腺機能低下症、炎症性腸疾患、自己免疫性リンパ増殖症候群、特発性肺線維症、ＩｇＡ腎症、インスリン依存性糖尿病、若年性関節炎、扁平苔癬、ループス、メニエール病、混合性結合組織病、多発性硬化症、悪性貧血、結節性多発動脈炎、多発性軟骨炎、多腺性症候群（ｐｏｌｙｇｌａｎｄｕｌａｒ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、リウマチ性多発筋痛症、多発性筋炎、原発性無ガンマグロブリン血症、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、レイノー現象、ライター症候群、リウマチ熱、関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症候群、全身硬直症候群、高安動脈炎、側頭動脈炎、潰瘍性大腸炎、ぶどう膜炎、白斑、およびウェゲナー肉芽腫症からなる群より選択される。
【００５４】
定義
本明細書における用語「抗体」は、最も広範な意味で使用され、限定はされないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、および抗体断片（これらがＦｃＲｎ抗原結合活性を示す限り）を含めた、様々な抗体構造を包含する。
【００５５】
「抗体断片」は、インタクト抗体の一部分、好ましくはインタクト抗体の抗原結合領域または可変領域を含む。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ａｎｄ  Ｆｖ断片、ダイアボディ、線状抗体、単鎖抗体分子、および多重特異性抗体が挙げられる。
【００５６】
本明細書において使用される場合、用語「単離された抗体」は、それを製造する宿主細胞環境の構成成分から分離および／または回収されている抗体を指す。それを製造する宿主細胞環境の夾雑成分は、抗体の研究、診断的または治療的使用を妨害するであろう材料である。夾雑成分は、酵素、ホルモン、および他のタンパク質性または非タンパク質性の溶質を含む可能性がある。いくつかの態様では、抗体は、（１）例えばＬｏｗｒｙ方法によって決定された抗体の９５重量％超、いくつかの態様では９９重量％超まで；（２）例えばスピニングカップ配列決定装置の使用による、Ｎ末端または内部アミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るのに十分な程度まで、または（３）例えばクーマシーブルーまたは銀染色を使用する還元または非還元条件下でのＳＤＳ−ＰＡＧＥによる均一性まで精製される。単離された抗体には、組換え細胞内のインサイチューの抗体が含まれる。しかし、通常、単離された抗体は、少なくとも１つの精製工程によって調製されることとなる。単離された抗体の薬学的調製物は、一般的に、ＦＤＡ「Ｇｕｉｄａｎｃｅ  ｆｏｒ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ」文書によって推奨される通りに実施されるＥＬＩＳＡに基づくＨＣＰ分析によって決定される場合に２５０ｐｐｍ未満（例えば、２００ｐｐｍ、１５０ｐｐｍ、１００ｐｐｍ未満）の宿主細胞タンパク質（ＨＣＰ）を有する。
【００５７】
本明細書において使用される場合、用語「モノクローナル抗体」は、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を指す。すなわち、集団中の個々の抗体は、微量で存在する可能性がある天然に存在する変異の可能性を除いて、同じ一次配列を有する。モノクローナル抗体は、単一の抗原部位（すなわち、ヒトＦｃＲｎ上のエピトープ）に対して、非常に特異的かつこれに方向付けられる。一般的に様々な抗体を含むポリクローナル抗体調製物が、様々なエピトープに方向付けられるのとは対照的に、各モノクローナル抗体は、上の単一のエピトープに方向付けられる。修飾語句「モノクローナル」は、抗体の実質的に同種の集団から得られるものとしての抗体の特性を示し、いずれかの特定の方法による抗体の産生を必要とすると解釈されるべきではない。
【００５８】
本明細書において使用される場合、用語「可変領域」および「可変ドメイン」は、相補性決定領域（ＣＤＲ、例えば、ＣＤＲ  Ｌ１、ＣＤＲ  Ｌ２、ＣＤＲ  Ｌ３、ＣＤＲ  Ｈ１、ＣＤＲ  Ｈ２、およびＣＤＲ  Ｈ３）およびフレームワーク領域（ＦＲ）のアミノ酸配列を含む、抗体の軽鎖および重鎖の一部分を指す。本発明において使用される方法によれば、ＣＤＲおよびＦＲに割り当てられるアミノ酸位置は、Ｋａｂａｔに従って定義される（Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ．（１９９１））。この番号付けシステムを使用すると、実際の線状アミノ酸配列は、可変領域のＣＤＲ（本明細書において後で定義する）またはＦＲ（本明細書において後で定義する）の短縮またはこれらへの挿入に相当する、より少ないまたは追加的なアミノ酸を含有する可能性がある。例えば、重鎖可変領域は、ＣＤＲ  Ｈ２の残基５２の後の単一の挿入残基（すなわち、Ｋａｂａｔによる残基５２ａ）、および重鎖ＦＲの残基８２の後の残基（すなわち、Ｋａｂａｔによる残基８２ａ、８２ｂ、８２ｃ、など）を含むことができる。残基のＫａｂａｔ番号付けは、抗体の配列の相同の領域での「標準の」Ｋａｂａｔ番号付け配列とのアライメントによって、所与の抗体について決定することができる。
【００５９】
本明細書において使用される場合、用語「相補性決定領域」および「ＣＤＲ」は、配列内の高頻度可変性である、かつ／または構造的に定義されたループを形成する、抗体可変ドメインの領域を指す。ＣＤＲはまた、高頻度可変領域としても公知である。軽鎖可変領域および重鎖可変領域はそれぞれ、３つのＣＤＲを有する。軽鎖可変領域は、ＣＤＲ  Ｌ１、ＣＤＲ  Ｌ２、およびＣＤＲ  Ｌ３を含有する。重鎖可変領域は、ＣＤＲ  Ｈ１、ＣＤＲ  Ｈ２、およびＣＤＲ  Ｈ３を含有する。各ＣＤＲは、Ｋａｂａｔによって定義される通りの、相補性決定領域由来のアミノ酸残基（すなわち軽鎖可変領域内のほぼ残基２４〜３４（ＣＤＲ  Ｌ１）、５０〜５６（ＣＤＲ  Ｌ２）、および８９〜９７（ＣＤＲ  Ｌ３）、および重鎖可変領域内のほぼ残基３１〜３５（ＣＤＲ  Ｈ１）、５０〜６５（ＣＤＲ  Ｈ２）、および９５−１０２（ＣＤＲＨ３）を含むことができる。
【００６０】
本明細書において使用される場合、用語「ＦｃＲｎ」は、ＩｇＧ抗体、例えばＩｇＧ１抗体のＦｃ領域に結合する新生児Ｆｃ受容体を指す。例示的なＦｃＲｎは、ＵｎｉＰｒｏｔ  ＩＤ  Ｎｏ．Ｐ５５８９９を有するヒトＦｃＲｎである。ヒトＦｃＲｎは、恒常的に内部移行されたＩｇＧと結合し、ＩｇＧの再利用のために細胞表面に戻すことによって、ＩｇＧの半減期を維持するのを担うと考えられている。
【００６１】
本明細書において使用される場合、用語「親和性」および「結合親和性」は、２つの分子間の結合相互作用の強度を指す。一般に、結合親和性は、ある分子の単一の結合部位とその結合パートナー、例えば単離された抗体とその標的（例えば、本発明の単離された抗ＦｃＲｎ抗体とヒトＦｃＲｎ）との間の非共有結合性相互作用の合計の強度を指す。他に指示のない限り、結合親和性は、結合対のメンバー間の１：１相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。２つの分子間の結合親和性は、通常、解離定数（ＫＤ）または親和定数（ＫＡ）によって記載される。互いに結合親和性が低い２つの分子は、一般に、ゆっくりと結合し、容易に解離しがちであり、大きいＫＤを示す。互いに結合親和性が高い２つの分子は、一般に、直ちに結合し、より長く結合が保たれる傾向にあり、小さいＫＤを示す。抗体のヒトＦｃＲｎに対するＫＤを決定するための、ある方法は、実施例２に記載する（「ＳＰＲ方法」）。この方法を使用すると、Ｎ０２２、Ｎ０２３、Ｎ０２４、Ｎ０２６、およびＮ０２７のＫＤは、それぞれ、３１、３１．４、３５．５、３６．５、および１９．３ｐＭであった。
【００６２】
本明細書において使用される場合、用語「ＦｃＲｎへのＩｇＧ結合を阻害する」は、本発明の抗ＦｃＲｎ抗体がＩｇＧ（例えばＩｇＧ１）のヒトＦｃＲｎへの結合を阻止または阻害する能力を指す。いくつかの態様では、本発明の抗ＦｃＲｎ抗体は、ＦｃＲｎと、例えば、ＩｇＧが結合するヒトＦｃＲｎ上の部位に結合する。したがって、本発明の抗ＦｃＲｎ抗体は、ＩｇＧ（例えば、対象の自己抗体）のＦｃＲｎへの結合を阻害することが可能である。いくつかの態様では、分子（例えば、本発明の抗ＦｃＲｎ抗体）は、ＩｇＧへの結合を実質的にまたは完全に阻害する。いくつかの態様では、ＩｇＧの結合は、１０％、２０％、３０％、５０％、７０％、８０％、９０％、９５％、さらには１００％低下される。
【００６３】
本明細書において使用される場合、用語「疎水性アミノ酸」は、比較的に低い水溶性を有するアミノ酸を指す。疎水性アミノ酸としては、限定はされないが、ロイシン、イソロイシン、アラニン、フェニルアラニン、バリン、およびプロリンが挙げられる。本発明における特に好ましい疎水性アミノ酸は、アラニン、ロイシン、イソロイシン、およびバリンである。
【００６４】
本明細書において使用される場合、用語「極性アミノ酸」は、その側鎖内に、異なる電気陰性度を有する原子によって誘発される化学的極性を有するアミノ酸を指す。極性アミノ酸の極性は、アミノ酸の側鎖内の原子間の電気陰性度、および側鎖の構造の非対称性に依存する。極性アミノ酸としては、限定はされないが、セリン、トレオニン、システイン、メチオニン、チロシン、トリプトファン、アスパラギン、およびグルタミンが挙げられる。本発明における特に好ましい極性アミノ酸は、セリン、トレオニン、アスパラギン、グルタミン、システイン、およびチロシンである。
【００６５】
本明細書において使用される場合、用語「酸性アミノ酸」は、その側鎖が３．５から４．５のｐＫａを有するカルボン酸基を含有するアミノ酸を指す。酸性アミノ酸としては、限定はされないが、アスパラギン酸およびグルタミン酸が挙げられる。
【００６６】
本明細書において使用される場合、用語「塩基性アミノ酸」は、その側鎖が９．５から１３のｐＫａを有するアミノ基を含有するアミノ酸を指す。塩基性アミノ酸としては、限定はされないが、ヒスチジン、リジン、およびアルギニンが挙げられる。
【００６７】
本明細書において使用される場合、用語「同一性（パーセント（％））」は、最大の同一性（％）を得るために、必要であれば、配列を整列し、ギャップを導入した後の（すなわち、ギャップは、最適なアライメントのために、候補配列と基準配列の片方または両方に導入することができ、また、非相同配列は、比較目的については無視することができる）、基準配列（例えば野生型抗ＦｃＲｎ抗体）のアミノ酸（または核酸）残基と同一である候補配列（例えば本発明の抗ＦｃＲｎ抗体）のアミノ酸（または核酸）残基の割合を指す。同一性（％）を決定する目的のアライメントは、当技術分野内の様々な方式で、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＡＬＩＧＮ、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して実現することができる。当分野の技術者は、比較される配列の完全長にわたって最大アライメントを実現するのに必要とされるあらゆるアルゴリズムを含めた、アライメントを測定するための適切なパラメータを決定することができる。いくつかの態様では、所与の基準配列との、所与の基準配列との、または所与の基準配列に対する、所与の候補配列のアミノ酸（または核酸）配列同一性（％）（あるいは、これは、所与の基準配列との、所与の基準配列との、または所与の基準配列に対する、一定のアミノ酸（または核酸）配列同一性（％）を有するまたは含む、所与の候補配列と表現することができる）は、次の通りに算出される：
１００×（Ａ／Ｂの割合）
式中、Ａは、候補配列と基準配列とのアライメントにおいて同一として記録されるアミノ酸（または核酸）残基の数であり、Ｂは、基準配列内のアミノ酸（または核酸）残基の総数である。候補配列の長さが基準配列の長さと等しくないいくつかの態様では、候補配列の、基準配列とのアミノ酸（または核酸）配列同一性は、基準配列のとの候補配列アミノ酸（または核酸）配列同一性（％）と等しくはないであろう。
【００６８】
特定の態様では、候補配列との比較のために整列させた基準配列は、候補配列が、候補配列、または近接するアミノ酸（または核酸）残基の選択された部分の完全長にわたって５０％から１００％の同一性を示すことを示すことができる。比較目的で整列させた候補配列の長さは、基準配列の長さの少なくとも３０％、例えば、少なくとも４０％、例えば、少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％である。候補配列内のある位置が、基準配列内の対応する位置と同じアミノ残基によって占有されている場合、その分子は、その位置で同一である。
【００６９】
本明細書において使用される場合、用語「宿主細胞」は、必須の細胞成分、例えば、その対応する核酸からタンパク質を発現させるのに必要な細胞小器官を含む媒体を指す。核酸は、一般的に、当技術分野において公知の従来の技術（例えば、形質転換、遺伝子導入、電気穿孔、リン酸カルシウム沈殿、直接マイクロインジェクションなど）によって宿主細胞に導入することができる核酸ベクター内に包含させる。宿主細胞は、原核細胞、例えば細菌細胞、または真核細胞、例えば哺乳類細胞（例えばＣＨＯ細胞）であり得る。本明細書において記載した通り、本発明の抗ＦｃＲｎ抗体をコードする１つまたは複数のポリペプチドを発現させるために、宿主細胞を使用する。
【００７０】
本明細書において使用される場合、用語「ベクター」は、それに連結されている別の核酸分子を輸送することが可能な核酸分子を指す。ベクターの１つの型は、「プラスミド」であり、これは、それに追加のＤＮＡセグメントを連結することができる環状二本鎖ＤＮＡループを指す。別の型のベクターは、ファージベクターである。別の型のベクターは、ウイルスベクターであり、ここでは、追加のＤＮＡセグメントを、ウイルスゲノムに連結することができる。ある種のベクターは、それが導入される宿主細胞中での自律複製が可能である（例えば、細菌の複製起点を有する細菌ベクター、および哺乳類エピソーマルベクター）。宿主細胞への導入時に、他のベクター（例えば、哺乳類非エピソーマルベクター）も、宿主細胞のゲノムに組み込むことができ、それによって、宿主ゲノムに連動して複製される。さらに、ある種のベクターは、それに機能的に連結された遺伝子の発現を誘導することが可能である。こうしたベクターは、「組換え発現ベクター」（または簡単に「組換えベクター」）と呼ばれる。一般に、組換えＤＮＡ技術における有用な発現ベクターは、しばしば、プラスミドの形態である。
【００７１】
本明細書において使用される場合、用語「対象」は、哺乳類、例えば、好ましくはヒトを指す。哺乳類には、限定はされないが、ヒトならびに飼育動物および家畜、例えばサル（例えばカニクイザル）、マウス、イヌ、ネコ、ウマ、およびウシなどが含まれる。
【００７２】
本明細書において使用される場合、用語「薬学的組成物」は、活性成分と、活性成分を投与方法に適するようにするための１種または複数種の賦形剤および希釈剤を含有する医学または薬学的製剤を指す。本発明の薬学的組成物は、抗ＦｃＲｎ抗体と適合性のある薬学的に許容される構成成分を含む。薬学的組成物は、静脈内もしくは皮下投与については水性形態、または経口投与については錠剤もしくはカプセル形態であり得る。
【００７３】
本明細書において使用される場合、用語「薬学的に許容される担体」は、薬学的組成物中の賦形剤または希釈剤を指す。薬学的に許容される担体は、製剤の他の成分と適合性がなければならず、かつ、レシピエントにとって有害であってはならない。本発明では、薬学的に許容される担体は、Ｆｃ構築物に適切な薬学的安定性を提供しなければならない。担体の性質は、投与方式によって異なる。例えば、静脈内投与については、水溶液担体が一般に使用され；経口投与については、固体担体が好ましい。
【００７４】
本明細書において使用される場合、用語「治療有効量」は、対象または患者における所望の生物学的効果を誘発するのに、または本明細書において記載した状態または障害を有する患者を治療するのに有効な量、例えば薬学的用量を指す。「治療有効量」を、単独でまたは他の治療薬と組み合わせて摂取される、ある用量でまたは任意の投薬量もしくは経路で摂取される、所望の治療効果を与える量と解釈できることも、本明細書において理解されよう。
【図面の簡単な説明】
【００７５】
【図１】抗体Ｎ０２２〜Ｎ０２４、Ｎ０２６、およびＮ０２７の、ヒトまたはカニクイザルＦｃＲｎへのｐＨ６．０でのＩｇＧ競合的結合を示す、２つのグラフおよび表を含む。
【図２】マウスにおけるＩｇＧ異化に対する抗体Ｎ０２３、Ｎ０２４、Ｎ０２６、およびＮ０２７の効果を示すグラフを含む。
【図３】マウスにおけるＩｇＧレベルおよび標的占有に対する抗体Ｎ０２７の用量依存的効果を示すグラフを含む。
【図４】様々な用量の抗体Ｎ０２７の投与後のカニクイザルにおけるＩｇＧ異化および標的占有の選択的誘発を示すグラフを含む。
【図５】マウスにおけるＮ０２７の体内分布を示すグラフを含む。
【図６】マウスコラーゲン抗体誘導関節炎モデルにおけるＮ０２７の有効性を示す、実験タイムラインおよびグラフを含む。
【図７】マウス慢性特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）モデルにおけるＮ０２７の有効性を示す、実験タイムラインおよび２つのグラフを含む。
【発明を実施するための形態】
【００７６】
発明の詳細な説明
本発明は、ヒト新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に高親和性で結合する単離された抗体を特徴とする。本発明は、抗ＦｃＲｎ抗体、ならびに抗ＦｃＲｎ抗体を調製するための方法および組成物、ならびにＦｃＲｎ活性を阻止する、免疫応答の免疫複合体に基づく活性化を低下させる、および免疫疾患を治療するための方法を特徴とする。
【００７７】
Ｉ．抗ＦｃＲｎ抗体
一般に、本発明は、ヒトＦｃＲｎに高親和性で結合する単離された抗体を特徴とする。本発明の抗ＦｃＲｎ抗体は、ヒトＦｃＲｎに結合することができ、かつＦｃＲｎへのＩｇＧ（例えばＩｇＧ自己抗体）結合を阻害することができる抗体を指す。いくつかの態様では、抗体は、モノクローナル抗体である。他の態様では、抗体は、ポリクローナル抗体である。いくつかの態様では、抗体は、キメラ抗体、親和性成熟された抗体、ヒト化抗体、およびヒト抗体からなる群より選択される。ある種の態様では、抗体は、抗体断片、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖである。
【００７８】
いくつかの態様では、抗体は、キメラ抗体である。例えば、抗体は、異種の非ヒト、ヒト、またはヒト化配列（例えば、フレームワークおよび／または定常ドメイン配列）にグラフトされた、非ヒトドナー由来の抗原結合配列を含有する。一態様では、非ヒトドナーは、マウスである。別の態様では、抗原結合配列は、合成である、例えば、変異誘発（例えば、ファージディスプレイスクリーニングなど）によって得られる。さらなる態様では、キメラ抗体は、非ヒト（例えばマウス）可変領域とヒト定常領域を有する。ある例では、マウス軽鎖可変領域は、ヒトκ軽鎖に融合される。別の例では、マウス重鎖可変領域は、ヒトＩｇＧ１定常領域に融合される。
【００７９】
一局面では、本発明は、ヒトＦｃＲｎに結合することが可能な単離された抗体を特徴とする。この単離された抗体は、以下を含有する：（１）ＣＤＲ  Ｌ１、ＣＤＲ  Ｌ２、およびＣＤＲ  Ｌ３を含む軽鎖可変領域、ならびに（２）ＣＤＲ  Ｈ１、ＣＤＲ  Ｈ２、およびＣＤＲ  Ｈ３を含む重鎖可変領域。ここでは、ＣＤＲ  Ｌ１は、ＴＧＴＧＳＤＶＧＳＹＮＬＶＳ（配列番号１）の配列との少なくとも９２％の同一性を有する配列を有し、ＣＤＲ  Ｌ２は、ＧＤＳＥＲＰＳ（配列番号２）の配列との少なくとも８５％の同一性を有する配列を有し、ＣＤＲ  Ｌ３は、ＳＳＹＡＧＳＧＩＹＶ（配列番号３）の配列との少なくとも９０％の同一性を有する配列を有し、ＣＤＲ  Ｈ１は、ＴＹＡＭＧ（配列番号４）、ＤＹＡＭＧ（配列番号５）、またはＮＹＡＭＧ（配列番号６）の配列との少なくとも８０％の同一性を有する配列を有し、ＣＤＲ  Ｈ２は、ＳＩＧＳＳＧＡＱＴＲＹＡＤＳ（配列番号７）、ＳＩＧＡＳＧＳＱＴＲＹＡＤＳ（配列番号８）、ＳＩＧＡＳＧＡＱＴＲＹＡＤＳ（配列番号９）、またはＳＩＧＡＳＧＧＱＴＲＹＡＤＳ（配列番号１０）の配列との少なくとも９２％の同一性を有する配列を有し、ＣＤＲ  Ｈ３は、ＬＡＩＧＤＳＹ（配列番号１１）の配列との少なくとも８５％の同一性を有する配列を有する。いくつかの態様では、抗体は、２００、１５０、１００、５０、または４０ｐＭ未満のＫＤで、ヒトＦｃＲｎと結合する。いくつかの態様では、抗体は、Ｎ０２２、Ｎ０２３、Ｎ０２４、Ｎ０２６、またはＮ０２７の軽鎖可変領域および重鎖可変領域を有し、かつ比較される抗体と同じＦｃ領域を有する抗体のＫＤ以下であるＫＤで、ヒトＦｃＲｎと結合する。
【００８０】
いくつかの態様では、本発明の単離された抗体は、Ｘ１ＧＴＧＳＤＶＧＳＹＮＸ２ＶＳ（配列番号１２）の配列を有するＣＤＲ  Ｌ１、ＧＤＸ３Ｘ４ＲＰＳ（配列番号１３）の配列を有するＣＤＲ  Ｌ２、Ｘ５ＳＹＸ６ＧＳＧＩＹＶ（配列番号１４）の配列を有するＣＤＲ  Ｌ３、Ｚ１ＹＡＭＧ（配列番号１５）の配列を有するＣＤＲ  Ｈ１、ＳＩＧＺ２ＳＧＺ３ＱＴＺ４ＹＡＤＳ（配列番号１６）の配列を有するＣＤＲ  Ｈ２、およびＬＡＺ５Ｚ６ＤＳＹ（配列番号１７）の配列を有するＣＤＲ  Ｈ３を有し、ここでは、Ｘ１は、極性または疎水性アミノ酸（例えば、好ましくはＴ、Ａ、Ｓ、またはＩ）であり、Ｘ２は、疎水性アミノ酸（例えば、好ましくはＬまたはＩ）であり、Ｘ３は、極性アミノ酸（例えば、好ましくはＳ、Ｎ、またはＴ）であり、Ｘ４は、極性または酸性アミノ酸（例えば、好ましくはＱ、Ｅ、またはＮ）であり、Ｘ５は、極性または疎水性アミノ酸（例えば、好ましくはＣ、Ｓ、Ｉ、またはＹ）であり、Ｘ６は、疎水性アミノ酸（例えば、好ましくはＡまたはＶ）であり、Ｚ１は、極性または酸性アミノ酸（例えば、好ましくはＥ、Ｔ、Ｄ、またはＮ）であり、Ｚ２は、極性または疎水性アミノ酸（例えば、好ましくはＳまたはＡ）であり、Ｚ３は、Ｇ、Ｓ、またはＡであり、Ｚ４は、塩基性アミノ酸（例えば、好ましくはＫまたはＲ）であり、Ｚ５は、疎水性または塩基性アミノ酸（例えば、好ましくはＩ、Ｌ、またはＨ）であり、Ｚ６は、Ｇ、Ｓ、Ｄ、Ｑ、またはＨであり、かつ、ここでは、該抗体は、２００、１５０、１００、５０、または４０ｐＭ未満のＫＤで、ヒトＦｃＲｎと結合する。
【００８１】
他の態様では、本発明の単離された抗体は、ＴＧＴＧＳＤＶＧＳＹＮＬＶＳ（配列番号１）の配列を有するＣＤＲ  Ｌ１、ＧＤＳＥＲＰＳ（配列番号２）の配列を有するＣＤＲ  Ｌ２、ＳＳＹＡＧＳＧＩＹＶ（配列番号３）の配列を有するＣＤＲ  Ｌ３、Ｚ１ＹＡＭＧ（配列番号１５）の配列を有するＣＤＲ  Ｈ１、ＳＩＧＺ２ＳＧＺ３ＱＴＲＹＡＤＳ（配列番号１８）の配列を有するＣＤＲ  Ｈ２、およびＬＡＩＧＤＳＹ（配列番号１１）の配列を有するＣＤＲ  Ｈ３を有し、ここでは、Ｚ１は、Ｔ、Ｄ、またはＮであり、Ｚ２は、ＳまたはＡであり、Ｚ３は、Ｇ、Ｓ、またはＡである。
【００８２】
表１は、本発明のいくつかの例示的な抗ＦｃＲｎ抗体の、軽鎖および重鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を示す。
【００８３】
【表１】
2018504907.tif 000029
【００８４】
表２は、本発明のこれらの例示的な抗ＦｃＲｎ抗体の、軽鎖および重鎖可変領域のＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯを示す。
【００８５】
【表２】
2018504907.tif 000030
【００８６】
いくつかの態様では、本発明の単離された抗体の軽鎖可変領域は、
2018504907.tif 000031
の配列との少なくとも９０％の同一性を有する配列を有する。
【００８７】
いくつかの態様では、本発明の単離された抗体の重鎖可変領域は、
2018504907.tif 000032
の配列との少なくとも９０％の同一性を有する配列を有する。
【００８８】
いくつかの態様では、本発明の単離された抗体の重鎖可変領域は、
2018504907.tif 000033
の配列との少なくとも９０％の同一性を有する配列を有する。
【００８９】
いくつかの態様では、本発明の単離された抗体の重鎖可変領域は、
2018504907.tif 000034
の配列との少なくとも９０％の同一性を有する配列を有する。
【００９０】
他の態様では、本発明の単離された抗体の重鎖可変領域は、
2018504907.tif 000035
の配列との少なくとも９０％の同一性を有する配列を有する。
【００９１】
さらに他の態様では、本発明の単離された抗体の重鎖可変領域は、
2018504907.tif 000036
の配列との少なくとも９０％の同一性を有する配列を有する。
【００９２】
本発明は、軽鎖可変領域および重鎖可変領域を含む単離された抗体を特徴とし、ここでは、軽鎖可変領域は、
2018504907.tif 000037
の配列との少なくとも９０％の同一性を有する配列を有し；重鎖可変領域は、
2018504907.tif 000038
の配列との少なくとも９０％の同一性を有する配列を有する。
【００９３】
本発明は、軽鎖可変領域および重鎖可変領域を含む単離された抗体を特徴とし、ここでは、軽鎖可変領域は、
2018504907.tif 000039
の配列との少なくとも９０％の同一性を有する配列を有し；重鎖可変領域は、
2018504907.tif 000040
の配列との少なくとも９０％の同一性を有する配列を有する。
【００９４】
本発明は、軽鎖可変領域および重鎖可変領域を含む単離された抗体を特徴とし、ここでは、軽鎖可変領域は、
2018504907.tif 000041
の配列との少なくとも９０％の同一性を有する配列を有し；重鎖可変領域は、
2018504907.tif 000042
の配列との少なくとも９０％の同一性を有する配列を有する。
【００９５】
本発明は、軽鎖可変領域および重鎖可変領域を含む単離された抗体を特徴とし、ここでは、軽鎖可変領域は、
2018504907.tif 000043
の配列との少なくとも９０％の同一性を有する配列を有し；重鎖可変領域は、
2018504907.tif 000044
の配列との少なくとも９０％の同一性を有する配列を有する。
【００９６】
本発明は、軽鎖可変領域および重鎖可変領域を含む単離された抗体を特徴とし、ここでは、軽鎖可変領域は、
2018504907.tif 000045
の配列との少なくとも９０％の同一性を有する配列を有し；重鎖可変領域は、
2018504907.tif 000046
の配列との少なくとも９０％の同一性を有する配列を有する。
【００９７】
さらに、本明細書において記載した抗ＦｃＲｎ抗体のいずれかにおいては、抗体の重鎖可変領域は、配列番号２０〜２４のいずれか１つの配列との少なくとも９５％、９７％、９９％、または１００％の同一性を有する配列を有する。本明細書において記載した抗ＦｃＲｎ抗体のいずれかにおいては、軽鎖可変領域は、配列番号１９の配列との少なくとも９５％、９７％、９９％、または１００％の同一性を有する配列を有する。
【００９８】
本発明の抗体は、ＣＤＲの外側（すなわちフレームワーク領域（ＦＲ）内）に、アミノ酸の置換、付加、および／または欠失をさらに含有することができる。いくつかの態様では、本発明の抗体は、次のアミノ酸置換のいずれか１つまたは複数をさらに含むことができる：配列番号２０〜２４のいずれか１つの配列に対するＡ２３Ｖ、Ｓ３０Ｒ、Ｌ８０Ｖ、Ａ８４Ｔ、Ｅ８５Ｄ、Ａ９３Ｖ、ならびに配列番号１９の配列に対するＱ３８Ｈ、Ｖ５８Ｉ、およびＧ９９Ｄ。
【００９９】
いくつかの態様では、本発明の抗体は、例えばエフェクター機能の低下、例えば補体依存性細胞溶解（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞介在性細胞溶解（ＡＤＣＣ）、および／または抗体依存性細胞介在性食作用（ＡＤＣＰ）の低下、および／またはＢ細胞殺滅の低下をもたらす、その抗体の定常領域（例えばＦｃ領域）内のアミノ酸の置換、付加、および／または欠失を含むことができる。この定常領域は、抗体のその標的への結合に直接的には関与しないが、抗体の抗体依存性細胞毒性への関与などの種々のエフェクター機能は示す。いくつかの態様では、本発明の抗体は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞上のヒト補体因子Ｃ１ｑおよび／またはヒトＦｃ受容体への結合の低下（すなわち、結合の非存在）を特徴とする。他の態様では、本発明の抗体は、ヒトＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、および／または  ＦｃγＲＩＩＩＡへの結合の低下（すなわち、結合の非存在）を特徴とする。ＣＤＣ、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、および／またはＢ細胞殺滅などの抗体依存性のエフェクター機能を変えるまたは低下させるために、本発明の抗体は、ＩｇＧクラスのものであり得、１つまたは複数のアミノ酸置換Ｅ２３３、Ｌ２３４、Ｇ２３６、Ｄ２６５、Ｄ２７０、Ｎ２９７、Ｅ３１８、Ｋ３２０、Ｋ３２２、Ａ３２７、Ａ３３０、Ｐ３３１、および／またはＰ３２９（ＫａｂａｔのＥＵインデックス（Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ．（１９９１））に従う番号付け）を含有することができる。いくつかの態様では、該抗体は、変異Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５ＡまたはＤ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａを含有する。好ましくは、本発明の抗ＦｃＲｎ抗体は、配列番号２０〜２４のいずれか１つの配列に対するアミノ酸置換Ｎ２９７Ａを含有し、その結果、本発明の抗体は、非グリコシル化形態に変化する。得られるエフェクターのない（ｅｆｆｅｃｔｏｒｌｅｓｓ）抗体は、補体またはＦｃ受容体への非常にわずかな結合（すなわち、補体Ｃ１ｑ結合）を示し、低いＣＤＣの可能性を示唆する。
【０１００】
他の態様では、本発明の抗体は、その抗体の安定性を向上させる、特定のアミノ酸変化を有するものを含むことができる。
【０１０１】
さらに、他の態様では、免疫原性の可能性を最小限にするために、いくつかの本発明の抗体、例えば、Ｎ０２４、Ｎ０２６、およびＮ０２７は、アミノ酸Ｄ３５５およびＬ３５７（配列番号２０〜２４のいずれか１つの配列に対する）をそれぞれグルタミン酸およびメチオニンに置換することによって、Ｇ１ｍ１７．１からＧ１ｍ１７へのアロタイプ変化を受けることができる。
【０１０２】
他の態様では、本発明の抗体、例えば、Ｎ０２２〜Ｎ０２４、Ｎ０２６、およびＮ０２７は、配列番号２０〜２４のいずれか１つの配列と比較して、残基４４６にＣ末端リジンを含有しない。
【０１０３】
本発明は、軽鎖可変領域および重鎖可変領域を含有する単離された抗体を特徴とし、ここでは、軽鎖可変領域は、
2018504907.tif 000047
の配列を有し；重鎖可変領域は、
2018504907.tif 000048
の配列を有する。
【０１０４】
本発明は、軽鎖可変領域および重鎖可変領域を含有する単離された抗体を特徴とし、ここでは、軽鎖可変領域は、
2018504907.tif 000049
の配列を有し；重鎖可変領域は、
2018504907.tif 000050
の配列を有する。
【０１０５】
本発明は、軽鎖可変領域および重鎖可変領域を含有する単離された抗体を特徴とし、ここでは、軽鎖可変領域は、
2018504907.tif 000051
の配列を有し；重鎖可変領域は、
2018504907.tif 000052
の配列を有する。
【０１０６】
本発明は、軽鎖可変領域および重鎖可変領域を含有する単離された抗体を特徴とし、ここでは、軽鎖可変領域は、
2018504907.tif 000053
の配列を有し；重鎖可変領域は、
2018504907.tif 000054
の配列を有する。
【０１０７】
本発明は、軽鎖可変領域および重鎖可変領域を含有する単離された抗体を特徴とし、ここでは、軽鎖可変領域は、
2018504907.tif 000055
の配列を有し；重鎖可変領域は、
2018504907.tif 000056
の配列を有する。
【０１０８】
さらに他の態様では、本発明の抗体は、シアル酸付加された抗体である。
【０１０９】
本明細書において記載した抗ＦｃＲｎ抗体のいずれかにおいては、いくつかの態様では、抗体は、２００、１５０、１００、５０、または４０ｐＭ未満のＫＤで、マウスまたはラットＦｃＲｎと結合する。
【０１１０】
本明細書において記載した抗ＦｃＲｎ抗体のいずれかにおいては、いくつかの態様では、抗体は、１〜１００、５〜１５０、５〜１００、５〜７５、５〜５０、１０〜５０、または１０〜４０ｐＭの親和性で、ヒトＦｃＲｎに結合する。
【０１１１】
本発明の抗ＦｃＲｎ抗体は、免疫グロブリン抗体アイソタイプＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、またはＩｇＤのものであり得る。好ましくは、抗ＦｃＲｎ抗体は、免疫グロブリン抗体アイソタイプＩｇＧのものである。抗ＦｃＲｎ抗体はまた、あらゆる免疫グロブリン抗体アイソタイプサブクラスのものであり得る。例えば、抗ＦｃＲｎ抗体は、ＩｇＧ  サブクラスＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４のものであり得る。好ましくは、抗ＦｃＲｎ抗体は、サブクラスＩｇＧ１のものである。特に、本発明の抗ＦｃＲｎ抗体は、ＩｇＧ  Ｇ１ｍ１７またはＧ１ｍ１７．１アロタイプ重鎖を含有する。いくつかの態様では、抗ＦｃＲｎ抗体の軽鎖は、κ軽鎖、λ軽鎖、またはκ−λキメラ軽鎖であり得る。好ましい態様では、本発明の抗ＦｃＲｎ抗体は、完全長のλ軽鎖を含有する。
【０１１２】
いくつかの態様では、本発明の抗体は、モノクローナルである。本発明の抗体はまた、ポリクローナル、キメラ、ヒト化、または完全ヒト型抗体であり得る。いくつかの態様では、本発明の抗体は、親和性成熟させることができる。他の態様では、本発明の抗体は、抗体断片であり得る。
【０１１３】
理論には拘泥されないが、本発明の抗ＦｃＲｎ抗体は、ヒトＦｃＲｎへのＩｇＧの結合と競合し、これを阻害すると考えられている。本発明の抗体の水素−重水素交換によるエピトープマッピングは、本発明の抗体が、Ｆｃ−ＦｃＲｎ相互作用界面に位置するおよび／または該界面に隣接するＦｃＲｎ上のエピトープに結合することを示し、これは、本発明の抗体が、方向性（ｄｉｒｅｃｔｉｏｎ）阻害によって、ＦｃＲｎへのＩｇＧ結合を阻止することを示唆している。さらに、エピトープマッピングされた結合部位は、ＦｃＲｎのアルブミン結合部位から離れている。したがって、血清アルブミン結合は、阻害されないはずであり、血清アルブミン濃度は、低下しないはずである。実際、実験的証拠によれば、マウスアルブミン濃度が、抗ＦｃＲｎ抗体投与後に一定のままであることが示され、アルブミン再利用がＦｃＲｎへの抗体結合によって妨害されないことが示唆される。
【０１１４】
ＩＩ．シアル酸付加された抗ＦｃＲｎ抗体
いくつかの態様では、本発明の抗ＦｃＲｎ抗体のＦｃ領域のグリコシル化部位は、モル基準で少なくとも２５％、５０％、７５％、またはそれ以上シアル酸付加されている。本発明の抗体は、順序付けられた様式で基質にシアル酸付加するシアリルトランスフェラーゼ（ＳＴ６  Ｇａｌ−Ｉ）でシアル酸付加させることができる。具体的には、ある種の条件下で、ＳＴ６シアリルトランスフェラーゼは、抗ＦｃＲｎ抗体のＦｃ領域上のグリカンのα１，３アーム上へのシアル酸の付加を、それに続いてα１，６アーム上への第２のシアル酸の付加を、それに続いてα１，３アームからのシアル酸の除去を触媒する。
【０１１５】
単離された本発明の抗ＦｃＲｎ抗体は、製造する宿主細胞（例えば、哺乳類細胞、例えば、ＳＴ６シアリルトランスフェラーゼを同時導入したまたはこれを過剰発現している哺乳類細胞）中での産生中にシアル酸付加することができる。他の態様では、単離された本発明の抗ＦｃＲｎ抗体は、製造する宿主細胞からの精製後に、例えば酵素によって、または化学的結合によって、インビトロでシアル酸付加することができる。シアル酸付加された抗ＦｃＲｎ抗体を産生する方法は、ＰＣＴ公報ＷＯ２０１４／１７９６０１に記載されている。
【０１１６】
ＩＩＩ．ＦｃＲｎ阻害
ＦｃＲｎは、ＩｇＧ−および血清アルブミン−結合性の、細胞内の小胞輸送（ｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ）タンパク質として機能するＩ型膜貫通タンパク質である。ＦｃＲｎは、内皮細胞、管腔上皮細胞、肝細胞、有足細胞、顆粒球、単球、マクロファージ、樹状細胞、およびＮＫ細胞において発現されるが、ＢまたはＴ細胞上には発現されない。ＦｃＲｎは、恒常的に内部移行されたＩｇＧと結合し、細胞表面に戻すことによって、ＩｇＧの半減期を維持する。ＦｃＲｎによるＦｃと血清アルブミンの両方の結合が、初期エンドソームにおいてｐＨ６．０で生じ、ＦｃＲｎの小胞へのソーティングがそれに続き、ＦｃＲｎが結合したＩｇＧまたはアルブミンが細胞表面に戻され、ここで、ＦｃＲｎは、ｐＨ７．４で、ＩｇＧまたはアルブミンを急速に放出する。この輸送サイクルは、ＩｇＧおよびアルブミンの半減期を、両方を循環に再利用すること、また、分解のためのリソソームへの輸送を防止することによって維持する。ＦｃＲｎはまた、上皮細胞中の内部移行されたＩｇＧ  Ｆｃを捕捉し、これを、反対側の頂端膜または側底膜に双方向的に輸送する。この作用は、ＩｇＧが消化管などの器官の内腔に輸送されるのを、または、内腔から間質層内の脈管またはリンパ組織へのＩｇＧまたはＩｇＧ−抗原複合体の輸送を可能にする。
【０１１７】
ＦｃＲｎのＩｇＧ恒常性への寄与を研究するために、マウスを、ＦｃＲｎの軽鎖および重鎖の一部が「ノックアウト」されて、その結果これらのタンパク質が発現されなくなるように操作した（Ｊｕｎｇｈａｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９３：５５１２，１９９６）。これらのマウスでは、ＩｇＧの血清半減期および濃度は、劇的に低下し、これは、ＩｇＧ恒常性のＦｃＲｎ依存性の機構を示唆していた。上で論じたものなどのげっ歯類モデルにおける研究は、ＦｃＲｎの封鎖が、病原性自己抗体のを含めたＩｇＧ異化を増大させ、それによって、疾患（例えば自己免疫疾患）発生を阻害することができることを示唆している。ＦｃＲｎはまた、免疫複合体の抗原分解およびＭＨＣ付加区画への輸送を通して抗原提示に寄与することができる。
【０１１８】
本発明は、ヒトＦｃＲｎに高親和性で結合する単離された抗ＦｃＲｎ抗体を提供する。本発明の抗ＦｃＲｎ抗体は、ＦｃＲｎへの他の抗ＦｃＲｎ抗体（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＧ自己抗体）の結合と競合し、効率的に阻害し、それによって、異化を増大させる、および他の抗ＦｃＲｎ抗体（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＧ自己抗体）の半減期を縮小させる。本発明の抗ＦｃＲｎ抗体は、自己免疫疾患における自己抗体によって引き起こされる免疫応答などの、対象における免疫応答の、免疫複合体に基づく活性化を治療するまたは低下させる方法において使用することができる。
【０１１９】
ＩＶ．ベクター、宿主細胞、および抗体産生
本発明の抗ＦｃＲｎ抗体は、宿主細胞から産生することができる。宿主細胞は、必須の細胞成分、例えば、その対応する核酸から本明細書において記載したポリペプチドおよび構築物を発現させるのに必要な細胞小器官を含む媒体を指す。核酸は、当技術分野において公知の従来の技術（例えば、形質転換、遺伝子導入、電気穿孔、リン酸カルシウム沈殿、直接マイクロインジェクション、感染など）によって宿主細胞に導入することができる核酸ベクター内に包含させることができる。核酸ベクターの選択は、使用されることとなる宿主細胞に、ある程度依存する。一般に、好ましい宿主細胞は、原核生物（例えば細菌）または真核生物（例えば哺乳類）起源のものである。
【０１２０】
核酸ベクター構築および宿主細胞
本発明の抗ＦｃＲｎ抗体のアミノ酸配列をコードする核酸配列は、当技術分野において公知の様々な方法によって調製することができる。これらの方法には、限定はされないが、オリゴヌクレオチド介在性の（または部位特異的）変異誘発およびＰＣＲ変異誘発が含まれる。本発明の抗ＦｃＲｎ抗体をコードする核酸分子は、標準の技術、例えば遺伝子合成を使用して得ることができる。あるいは、野生型抗ＦｃＲｎ抗体をコードする核酸分子を、当技術分野における標準の技術、例えばＱｕｉｋＣｈａｎｇｅ（商標）変異誘発を使用して、特定のアミノ酸置換を含有するように変異させることができる。核酸分子は、ヌクレオチド合成装置またはＰＣＲ技術を使用して合成することができる。
【０１２１】
本発明の抗ＦｃＲｎ抗体をコードする核酸配列を、原核生物または真核生物宿主細胞中で核酸分子を複製および発現させることが可能なベクターに挿入することができる。多くのベクターが、当技術分野において利用可能であり、本発明の目的のために使用することができる。それぞれのベクターは、特定の宿主細胞との適合性のために調節および最適化することができる種々の構成成分を含有することができる。例えば、ベクター構成成分としては、限定はされないが、複製起点、選択マーカー遺伝子、プロモーター、リボソーム結合部位、シグナル配列、対象となるタンパク質をコードする核酸配列、および転写終結配列が含まれ得る。
【０１２２】
いくつかの態様では、本発明のための宿主細胞として、哺乳類細胞が使用される。哺乳類細胞型の例としては、限定はされないが、ヒト胎児腎臓（ＨＥＫ）（例えば、ＨＥＫ２９３、ＨＥＫ  ２９３Ｆ）、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）、ＨｅＬａ、ＣＯＳ、ＰＣ３、Ｖｅｒｏ、ＭＣ３Ｔ３、ＮＳ０、Ｓｐ２／０、ＶＥＲＹ、ＢＨＫ、ＭＤＣＫ、Ｗ１３８、ＢＴ４８３、Ｈｓ５７８Ｔ、ＨＴＢ２、ＢＴ２０、Ｔ４７Ｄ、ＮＳ０（いかなる免疫グロブリン鎖も内因的に産生しないマウス骨髄腫細胞株）、ＣＲＬ７Ｏ３Ｏ、およびＨｓＳ７８Ｂｓｔ細胞が挙げられる。他の態様では、本発明のための宿主細胞として、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞が使用される。Ｅ．ｃｏｌｉ系統の例としては、限定はされないが、Ｅ．ｃｏｌｉ  ２９４（ＡＴＣＣ（登録商標）３１，４４６）、Ｅ．ｃｏｌｉ  λ  １７７６（ＡＴＣＣ（登録商標）３１，５３７、Ｅ．ｃｏｌｉ  ＢＬ２１（ＤＥ３）（ＡＴＣＣ（登録商標）ＢＡＡ−１０２５）、およびＥ．ｃｏｌｉ  ＲＶ３０８（ＡＴＣＣ（登録商標）３１，６０８）が挙げられる。様々な宿主細胞が、タンパク質産物の翻訳後プロセシングおよび修飾のための、特有のおよび特定の機構を有する。発現された抗ＦｃＲｎ抗体の正確な修飾およびプロセシングを確実にするために、適切な細胞株または宿主システムを選択することができる。上に記載した発現ベクターを、当技術分野にける従来の技術、例えば、形質転換、遺伝子導入、電気穿孔、リン酸カルシウム沈殿、および直接マイクロインジェクションを使用して、適切な宿主細胞に導入することができる。いったん、ベクターが、タンパク質産生のための宿主細胞に導入されたら、宿主細胞を、プロモーターを誘導する、形質転換体を選択する、または所望の配列をコードする遺伝子を増幅するために、必要に応じて改変された従来の栄養培地中で培養する。治療用タンパク質の発現のための方法は、当技術分野において公知であり、例えば、Ｐａｕｌｉｎａ  Ｂａｌｂａｓ，Ａｒｇｅｌｉａ  Ｌｏｒｅｎｃｅ（ｅｄｓ．）Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ：Ｒｅｖｉｅｗｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ），Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ；２ｎｄ  ｅｄ．２００４（Ｊｕｌｙ  ２０，２００４）、およびＶｌａｄｉｍｉｒ  Ｖｏｙｎｏｖ  ａｎｄ  Ｊｕｓｔｉｎ  Ａ．Ｃａｒａｖｅｌｌａ（ｅｄｓ．）Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ；２ｎｄ  ｅｄ．２０１２（Ｊｕｎｅ  ２８，２０１２）を参照されたい。
【０１２３】
タンパク質の産生、回収、および精製
本発明の抗ＦｃＲｎ抗体を産生するために使用される宿主細胞は、当技術分野において公知の、かつ選択された宿主細胞を培養するのに適した培地中で成長させることができる。哺乳類宿主細胞のための好適な培地の例としては、最小必須培地（Ｍｉｎｉｍａｌ  Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  Ｍｅｄｉｕｍ）（ＭＥＭ）、ダルベッコ改変イーグル培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ’ｓ  Ｍｅｄｉｕｍ）（ＤＭＥＭ）、Ｅｘｐｉ２９３（商標）発現培地（Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｍｅｄｉｕｍ）、ウシ胎児血清を添加したＤＭＥＭ、およびＲＰＭＩ−１６４０が挙げられる。細菌宿主細胞のための好適な培地の例としては、選択剤、例えばアンピシリンなどの必須の添加剤を加えたＬｕｒｉａブロス（ＬＢ）が挙げられる。宿主細胞は、好適な温度、例えば約２０℃から約３９℃、例えば、２５℃から約３７℃、好ましくは３７℃で、かつ、５から１０％（好ましくは８％）などのＣＯ２濃度で培養される。培地のｐＨは、一般に、主に宿主生物に依存して、約６．８から７．４、例えば７．０である。本発明の発現ベクター内に、誘導性プロモーターが使用されるならば、プロモーターの活性化に適した条件下でタンパク質発現が誘導される。
【０１２４】
タンパク質回収は、一般的に、一般に浸透圧ショック、超音波処理、または溶解などの手段によって、宿主細胞を破壊することを含む。いったん細胞が破壊されれば、遠心分離または濾過によって細胞残屑を除去することができる。タンパク質は、さらに精製することができる。本発明の抗ＦｃＲｎ抗体は、タンパク質精製の、当技術分野において公知の任意の方法によって、例えば、プロテインＡ親和性、他のクロマトグラフィー（例えば、イオン交換、アフィニティ、およびサイズ排除カラムクロマトグラフィー）、遠心分離、溶解度の違い（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｓｏｌｕｂｉｌｉｔｙ）によって、または、タンパク質の精製のための任意の他の標準の技術によって精製することができる。（Ｐｒｏｃｅｓｓ  Ｓｃａｌｅ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｕｗｅ  Ｇｏｔｔｓｃｈａｌｋ（ｅｄ．）Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，２００９を参照のこと）。場合によっては、精製を容易にするために、抗ＦｃＲｎ抗体を、ペプチドなどのマーカー配列に結合させることができる。マーカーアミノ酸配列の例は、ヘキサ−ヒスチジンペプチド（Ｈｉｓ−ｔａｇ）であり、これは、ニッケル官能基化アガロースアフィニティカラムに、マイクロモル濃度の親和性で結合する。精製に有用な他のペプチドタグとしては、限定はされないが、インフルエンザヘマグルチニンタンパク質に由来するエピトープに相当するヘマグルチニン「ＨＡ」タグが挙げられる。
【０１２５】
あるいは、本発明の抗ＦｃＲｎ抗体は、本発明の抗ＦｃＲｎ抗体をコードする核酸分子を含有するベクター（例えば、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、ポックスウイルスベクター（例えば、改変ワクシニアアンカラ（Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｖａｃｃｉｎｉａ  Ａｎｋａｒａ）（ＭＶＡ））などのワクシニアウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、およびアルファウイルスベクター）を投与することによって、例えば、治療の場面で、対象（例えばヒト）の細胞によって産生することができる。ベクターは、いったん対象の細胞に（例えば、形質転換、遺伝子導入、電気穿孔、リン酸カルシウム沈殿、直接マイクロインジェクション、感染などによって）入り込むと、抗ＦｃＲｎ抗体の発現を促進することとなり、該抗体は、その後、細胞から分泌される。疾患または障害の治療が、所望の結果であるならば、さらなる操作は必要とされない可能性がある。タンパク質の収集が所望されるならば、血液を対象から収集し、タンパク質を、当技術分野において公知の方法によって、血液から精製することができる。
【０１２６】
Ｖ．薬学的組成物および調製物
本発明は、本明細書において記載した１種または複数種の抗ＦｃＲｎ抗体を含む薬学的組成物を特徴とする。いくつかの態様では、本発明の薬学的組成物は、治療用タンパク質としての１種または複数種の本発明の抗体、例えば、Ｎ０２２〜Ｎ０２４、Ｎ０２６、およびＮ０２７を含有する。他の態様では、１種または複数種の本発明の抗体、例えば、Ｎ０２２〜Ｎ０２４、Ｎ０２６、およびＮ０２７を含有する本発明の薬学的組成物を、治療において、他の作用物質（例えば、治療用の生物製剤および／または小分子）または組成物と組み合わせて使用することができる。該薬学的組成物は、治療有効量の抗体に加えて、１種または複数種の薬学的に許容される担体または賦形剤を含有することができ、これを、当分野の技術者に公知の方法によって製剤化することができる。
【０１２７】
該薬学的組成物中の許容される担体および賦形剤は、用いられる投薬量および濃度で、レシピエントに対して非毒性である。許容される担体および賦形剤には、緩衝液、酸化防止剤、保存剤、ポリマー、アミノ酸、および炭水化物が含まれ得る。本発明の薬学的組成物は、注射製剤の形態で非経口的に投与することができる。注射（すなわち静脈内注射）のための薬学的組成物は、ビヒクルとしての滅菌溶液または任意の薬学的に許容される液体を使用して製剤化することができる。薬学的に許容されるビヒクルとしては、限定はされないが、滅菌水、生理食塩水、および細胞培養培地（例えば、ダルベッコ改変イーグル培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ  Ｍｅｄｉｕｍ）（ＤＭＥＭ）、α−改変イーグル培地（α−Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅｓ  Ｍｅｄｉｕｍ）（α−ＭＥＭ）、Ｆ−１２培地）が挙げられる。製剤方法は、当技術分野において公知であり、例えば、Ｂａｎｇａ（ｅｄ．）Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ，Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ  ａｎｄ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（２ｎｄ  ｅｄ．）Ｔａｙｌｏｒ  ＆  Ｆｒａｎｃｉｓ  Ｇｒｏｕｐ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ（２００６）を参照のこと。
【０１２８】
該薬学的組成物は、必要に応じて、単位剤形で形成させることができる。薬学的調製物に含められる活性成分、例えば、１種または複数種の本発明の抗ＦｃＲｎ抗体（例えば、Ｎ０２２〜Ｎ０２４、Ｎ０２６、およびＮ０２７、好ましくはＮ０２７および／またはＮ０２４）の量は、指定された範囲内の好適な用量（例えば、０．０１〜５００ｍｇ／ｋｇ（体重）の範囲内の用量）が提供されるようになるものである。
【０１２９】
ＶＩ．経路、投薬量、および投与
治療用タンパク質として１種または複数種の抗ＦｃＲｎ抗体（例えば、Ｎ０２２〜Ｎ０２４、Ｎ０２６、およびＮ０２７、好ましくはＮ０２７および／またはＮ０２４）を含有する本発明の薬学的組成物は、静脈内投与、非経口投与、皮下投与、筋肉内投与、動脈内投与、くも膜下腔内投与、または腹腔内投与のために製剤化することができる。特に、静脈内投与が好ましい。該薬学的組成物はまた、経口、経鼻、スプレー、エアロゾル、直腸内、または膣内投与のために製剤化する、またはこれらを介して投与することもできる。注射製剤については、様々な有効な薬剤担体が、当技術分野において公知である。
【０１３０】
本発明の薬学的組成物の投薬量は、投与経路、治療されることとなる疾患、および対象の身体的特性、例えば、年齢、体重、全身健康状態を含めた因子に依存する。一般的に、単一用量内に含有される本発明の抗ＦｃＲｎ抗体（例えば、Ｎ０２２〜Ｎ０２４、Ｎ０２６、およびＮ０２７のいずれか、好ましくはＮ０２７またはＮ０２４）の量は、有意な毒性を誘発せずに、疾患を効率的に予防する、遅らせる、または治療する量であり得る。本発明の薬学的組成物は、０．０１〜５００ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．０１、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、１、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、または５００ｍｇ／ｋｇ）まで、より具体的な態様では約１〜約１００ｍｇ／ｋｇまで、より具体的な態様では約１〜約５０ｍｇ／ｋｇの範囲の、本発明の抗ＦｃＲｎ抗体を含むことができる。この投薬量は、疾患の程度および対象の様々なパラメータなどの従来の因子に従って、医師によって適合させることができる。
【０１３１】
該薬学的組成物は、投薬製剤と適合性のある方式で、かつ症状の改善または救済をもたらすのに治療的に有効である量で投与される。該薬学的組成物は、様々な剤形、例えば、静脈内剤形、皮下剤形、および経口剤形（例えば、摂取可能溶液、薬物放出カプセル剤）で投与される。一般に、治療用タンパク質は、１〜１００ｍｇ／ｋｇ、例えば、１〜５０ｍｇ／ｋｇで投与される。抗ＦｃＲｎ抗体（例えば、Ｎ０２２〜Ｎ０２４、Ｎ０２６、およびＮ０２７のいずれか１つ、好ましくはＮ０２７またはＮ０２４）を含有する本発明の薬学的組成物は、例えば、毎日、毎週、毎月、半年ごと、毎年、または医学的に必要な場合に、１または複数回（例えば、１〜１０回、またはそれ以上）、それを必要とする対象に投与することができる。投薬は、単回または複数回投薬レジメンで提供することができる。投与間のタイミングは、医学的状態が改善するにつれて減らすこともできるし、患者の健康が減退するにつれて増やすこともできる。
【０１３２】
ＶＩＩ．適応症
本発明の抗ＦｃＲｎ抗体によるヒトＦｃＲｎの遮断は、ＩｇＧ自己抗体によって主導される疾患において、治療上有用であり得る。ＦｃＲｎ遮断が、血清アルブミン、小さな循環代謝産物、またはリポタンパク質を攪乱せずに、全ＩｇＧ異化、および多くの種の自己抗体の除去を誘導する能力は、自己抗体除去戦略の有用性および接近性を拡大するための方法を、自己抗体主導型の自己免疫疾患病態を有する患者に提供する。本発明は理論に拘泥されないが、本発明の抗ＦｃＲｎ抗体の主要な作用機序は、循環中の病原性自己抗体の異化を増大させ、かつ、罹患組織における自己抗体および免疫複合体沈着を低下させることができる。
【０１３３】
１つまたは複数の抗ＦｃＲｎ抗体（例えば、Ｎ０２２〜Ｎ０２４、Ｎ０２６、およびＮ０２７、好ましくはＮ０２７および／またはＮ０２４）を含有する、本発明の薬学的組成物および方法は、対象における病原性抗体、例えばＩｇＧおよびＩｇＧ自己抗体の異化およびクリアランスを促進するために、および対象における免疫応答を低下させる、例えば免疫応答の免疫複合体に基づく活性化を阻止するために、および、対象における免疫学的状態または免疫疾患を治療するために有用である。特に、本発明の薬学的組成物および方法は、急性または慢性の免疫応答の免疫複合体に基づく活性化を低下させるまたは治療するために有用である。急性の免疫応答は、尋常性天疱瘡、ループス腎炎、重症筋無力症、ギラン・バレー症候群、抗体媒介性拒絶反応、劇症型抗リン脂質抗体症候群、免疫複合体性血管炎、糸球体炎、チャネル病、視神経脊髄炎、自己免疫性難聴、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、自己免疫性溶血性貧血（ＡＩＨＡ）、免疫性好中球減少症、拡張型心筋症、および血清病からなる群より選択される医学的状態によって活性化される可能性がある。慢性の免疫応答は、慢性炎症性脱髄性多発神経炎（ＣＩＤＰ）、全身性ループス、急性治療の適応となる慢性形態の障害、反応性関節障害、原発性胆汁性肝硬変、潰瘍性大腸炎、および抗好中球細胞質抗体（ＡＮＣＡ）関連血管炎からなる群より選択される医学的状態によって活性化される可能性がある。
【０１３４】
いくつかの態様では、本発明の薬学的組成物および方法は、自己免疫疾患によって活性化される免疫応答を低下させるまたは治療するために有用である。自己免疫疾患は、円形脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質抗体症候群、アジソン病、溶血性貧血、自己免疫性肝炎、肝炎、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、心筋症、セリアックスプルー−皮膚炎、慢性疲労免疫不全症候群、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、チャーグ・ストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡限局型全身性強皮症（クレスト症候群）、寒冷凝集素症、クローン病、皮膚筋炎、円板状ループス、本態性混合型クリオグロブリン血症、線維筋痛症、線維筋炎、グレーブス病、橋本甲状腺炎、甲状腺機能低下症、炎症性腸疾患、自己免疫性リンパ増殖症候群、特発性肺線維症、ＩｇＡ腎症、インスリン依存性糖尿病、若年性関節炎、扁平苔癬、ループス、メニエール病、混合性結合組織病、多発性硬化症、悪性貧血、結節性多発動脈炎、多発性軟骨炎、多腺性症候群、リウマチ性多発筋痛症、多発性筋炎、原発性無ガンマグロブリン血症、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、レイノー現象、ライター症候群、リウマチ熱、関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症候群、全身硬直症候群、高安動脈炎、側頭動脈炎、潰瘍性大腸炎、ぶどう膜炎、白斑、およびウェゲナー肉芽腫症からなる群より選択することができる。
【０１３５】
特に、本発明の薬学的組成物および方法は、全身性ループスエリテマトーデス、抗リン脂質抗体症候群、尋常性天疱瘡／水疱性類天疱瘡、抗好中球細胞質抗体（ＡＮＣＡ）関連血管炎、重症筋無力症、または視神経脊髄炎によって活性化される免疫応答を低下させるまたは治療するために有用である。
【実施例】
【０１３６】
実施例１−抗体産生
ＩｇＧ重鎖および軽鎖の核酸分子を、オステオネクチン分泌シグナルを使用して、ベクターｐＣＤＮＡ  ３．３にクローン化した。ＨＥＫ  ２９３Ｆ細胞を、Ｅｘｐｉ２９３培地中で、８％  ＣＯ２で、３７℃で成長させた。細胞を、１リットルあたり１ｍｇの全ＤＮＡで、３×１０６／ｍｌの密度で遺伝子導入させた。第２および３日に、製造業者の指示書に従って、エンハンサーを添加し、細胞を、細胞生存率が５０％から６０％未満に低下する前まで、第５または第６日まで培養した。次いで、細胞を、遠心分離によって分離し、使用した培地を滅菌濾過して、抗体精製まで４℃で保管した。抗体を、２カラム手順：ＰＯＲＯＳプロテインＡクロマトグラフィー、それに続くＰＯＲＯＳ  ＨＳ−５０陽イオン交換クロマトグラフィーによって精製した。前者は、発現された抗体から宿主細胞タンパク質のほとんどを分離したのに対し、後者は、重鎖二量体、軽鎖二量体、および半抗体、ならびにより高い分子量の種を除去した。ＨＳ−５０陽イオン交換カラムからの分画を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル分析に基づいてプールし、完全長抗体の純度を最大にした。収集した分画を、ｐＨ７．２のＰＢＳで平衡化したＳｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ５０バッファー交換カラムに流した。ピーク分画をプールし、３０ｋＤａスピンコンセントレータを使用して１０ｍｇ／ｍｌ超に濃縮し、２ｍｇおよび５ｍｇの一定分量で、−３０℃で凍結させた。最終のタンパク質試料を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって、純度について確認した。
【０１３７】
実施例２−結合親和性
親和性成熟を通して、本発明者らは、マイクロモル以下の範囲内のＫＤでのヒトＦｃＲｎへの結合親和性を有する、１００を超える抗ＦｃＲｎ抗体を特定した。さらなる特徴付けのために、５種の抗体（Ｎ０２２〜Ｎ０２４、Ｎ０２６、およびＮ０２７）を選択した。表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して、これらの５種の抗体のそれぞれについて、オン−およびオフ−レート（それぞれｋａおよびｋｄ）を決定した。簡単に言うと、Ｂｉｏ−Ｒａｄ  ＧＬＣセンサーチップを、ＰｒｏｔｅＯｎ  ＸＰＲ  ３６に挿入し、エア初期化（ａｉｒ  ｉｎｉｔｉａｌｉｚｅ）した。初期化後、ランニングバッファーを、必要に応じて、新たに調製したバッファー、ＨＢＳＰ＋（０．０１Ｍ  ＨＥＰＥＳ、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、０．０５％  Ｐ２０、ｐＨ７．４）またはリン酸ナトリウム緩衝液（０．０２Ｍ  リン酸ナトリウム、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、０．０５％  Ｐ２０、ｐＨ６．０）のいずれかに切り替え、これを、残りの分析のために、また、すべての希釈のために使用した。チップは、３０μｌ／分の６０秒間の０．５％  ＳＤＳ、５０ｍＭ  ＮａＯＨ、および１０ｍＭ  ＨＣｌのそれぞれの１回の注入を使用して、あらかじめ調整した。ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ（ＢＲ１００８３９）からのマウス抗ヒトＦｃ  ｍＡｂを、１０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ５．０）で１０μｇ／ｍｌに希釈し、およそ５，７００応答単位（ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｕｎｉｔ）（ＲＵ）を、標準のアミンカップリング化学を使用して、ＧＬＣセンサーチップ上に水平方向に固定化した。試験されることとなる抗ｈＦｃＲｎ  ｍＡｂを、表面上に垂直方向に捕捉させ、固定化の目標は、相互作用スポットあたり、およそ２００応答単位（ＲＵ）であった。ｒｈＦｃＲｎを、１．２５μｇ／ｍｌから開始する５点の３倍希釈系列で希釈し、１つのレーンは、二重の参照のために、緩衝液のみとして残しておいた。分析物を、１００μｌ／分で２４０秒間、水平方向に、センサー表面全体に流し、３，６００秒の解離時間を伴った。１００μｌ／分で３０秒間、水平方向と垂直方向の両方で３Ｍ  ＭｇＣｌ２を注入することによって、再生を実現した。これらの手順を、すべてのリガンドについて繰り返した。
【０１３８】
ＰｒｏｔｅＯｎ  Ｍａｎａｇｅｒソフトウェアを使用して、データ分析を実施した。各相互作用段階は、Ａｕｔｏ  Ｐｒｏｃｅｓｓツールを使用して、ＹおよびＸ方向について調節し、それに続いてスポット間（ｉｎｔｅｒｓｐｏｔ）チャネル参照を行って非特異的な相互作用を除去し、ブランクレーンの二重参照を行って分析ドリフトを除去した。データを、ラングミュア１：１動力学モデルを使用して、グループ分けされたＲｍａｘと適合させた。ＰｒｏｔｅＯｎ  Ｍａｎａｇｅｒから単回実行で得られたｋａ、ｋｄ、およびＫＤ値を平均し、Ｎが３以上であった時は、そのＣＶ（％）を、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ｅｘｃｅｌで算出した。
【０１３９】
表３は、５種の本発明の抗ＦｃＲｎ抗体、Ｎ０２２、Ｎ０２２、Ｎ０２４、Ｎ０２６、およびＮ０２７がすべて、ｐＨ７．４で、ヒトＦｃＲｎに高親和性で結合することを示す。本発明の抗ＦｃＲｎ抗体の平衡解離定数ＫＤは、ｐＨ７．４でのヒトＦｃＲｎへの結合について、１９．４ｐＭ（Ｎ０２７）から３６．５ｐＭ（Ｎ０２６）の範囲であった。表３はまた、５種の抗ＦｃＲｎ抗体の急速なオンレート（ｏｎ−ｒａｔｅ）および緩徐なオフレート（ｏｆｆ−ｒａｔｅ）も示す。ｐＨ７．４では、オンレートは、ヒトＦｃＲｎへの結合について、０．９３〜１．４２×１０６１／Ｍｓの範囲内であった。オフレートは、２．３１〜４．４４×１０６１／ｓの範囲内であった。
【０１４０】
【表３】
2018504907.tif 000057
【０１４１】
実施例３−ＩｇＧ競合
本発明の抗ＦｃＲｎ抗体が、ヒトまたはカニクイザルＦｃＲｎへの結合についてＩｇＧと競合する能力を、細胞表面のグリコホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）結合ＦｃＲｎを異所的に発現しているヒト胎児腎臓（ＨＥＫ）２９３細胞上で評価した。ヒトとカニクイザルのＦｃＲｎアルファアミノ酸配列は、９７．５％の配列同一性を示す。ヒトとカニクイザルのＦｃＲｎアルファの間では、３５５個のうち９個のアミノ酸残基が異なるが、いずれも、エピトープマッピングされた結合領域内にはない。細胞に結合したＩｇＧのレベルを、６６ｎＭの蛍光プローブ標識された非特異的ＩｇＧを使用して決定した。ＩｇＧの細胞表面ＦｃＲｎへの結合は、ＩｇＧのＦｃ部分がＦｃＲｎと相互作用することを可能にするｐＨ６．０で行われた。図１に示した通り、細胞に結合したＩｇＧの量は、抗ＦｃＲｎ抗体（Ｎ０２２〜Ｎ０２４、Ｎ０２６、またはＮ０２７）の濃度が増大するにつれて、有意に低下した。ＩｇＧの結合は、５種の例示的な本発明の抗ＦｃＲｎ抗体のそれぞれによって、濃度および飽和度依存的方式で阻害され、これは、抗ＦｃＲｎ抗体、Ｎ０２２〜Ｎ０２４、Ｎ０２６、およびＮ０２７が、ｐＨ６．０で、ＩｇＧのＦｃＲｎへの結合と効率的に競合し、これを阻害する能力を示していた。抗体のＥＣ５０値は、２から６ｎＭの範囲であった。
【０１４２】
実施例４−マウスにおける抗ＦｃＲｎ抗体のＩｇＧ異化に対する効果
本発明の抗ＦｃＲｎ抗体のＩｇＧ異化に対するインビボでの効果を測定するために、マウスＦｃＲｎを欠くが、内在性のマウスおよびヒトＦｃＲｎと類似の組織分布でヒトＦｃＲｎを発現する、ヒトＦｃＲｎトランスジェニックマウス系統ＦｃＲｎ−／−ｈＦｃＲｎ（３２）Ｔｇマウスを使用した。第０日に５００ｍｇ／ｋｇヒトＩｇＧを注射したＦｃＲｎ−／−ｈＦｃＲｎ（３２）Ｔｇマウスに、単一用量の抗ＦｃＲｎ抗体を、第１および４日に、１０ｍｇ／ｋｇで投与した。図２に示した通り、抗ＦｃＲｎ抗体で治療したマウスにおいて経時的に測定された、より低いレベルのＩｇＧによってわかるように、ＩｇＧの異化は、抗ＦｃＲｎ抗体の投与によって増大した。Ｎ０２４（ＫＤ＝３５．５ｐＭ）、Ｎ０２６（ＫＤ＝３６．５ｐＭ）、およびＮ０２７（ＫＤ＝１９．４ｐＭ）の活性は、１０ｍｇ／ｋｇで類似であるようである。
【０１４３】
実施例５−抗ＦｃＲｎ抗体のインビトロおよびインビボでの機能特性
インビトロ
本発明の抗体の細胞結合親和性を、細胞表面のグリコホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）が結合するヒトまたはカニクイザルＦｃＲｎを異所的に発現しているヒト胎児腎臓（ＨＥＫ）２９３細胞上で測定した。ＦｃＲｎは、エンドソーム膜の腔側に、または原形質膜への輸送時には細胞表面に方向付けられるＩｇＧおよびアルブミン結合ドメインを有するＩ型膜貫通タンパク質である。抗ＦｃＲｎ抗体の、ＨＥＫ２９３細胞上の細胞表面の膜結合型ＦｃＲｎへのｐＨ７．４での結合は、生理学的に関連する環境での、またｐＨでの結合と類似しており、ここでは、該抗体のＦａｂドメインのみがＦｃＲｎと相互作用し、Ｆｃドメインは相互作用しない。ＦｃＲｎ細胞外ドメインは、Ｃ末端が改変されるＧＰＩ結合を通して、細胞表面上に高密度で提示される。本発明の抗ＦｃＲｎ抗体を、蛍光プローブで標識した。この抗体を、３０分間氷上で結合させた。次いで、細胞を４℃で洗浄し、結合した抗体を、フルオロフォア標識された二次抗体、例えば、ヤギ抗ヒトＩｇＧ  Ｆ（ａｂ）２を使用して検出した。ヒトＦｃＲｎへの結合は、濃度依存的であり、本発明の抗体は、４から７ｎＭの範囲のＥＣ５０値を示した。
【０１４４】
本発明の抗体の細胞結合親和性を、内因的に発現されるヒトＦｃＲｎに対しても測定した。単球は、最も高いレベルのＦｃＲｎを発現し、マウスおよびヒト血液において、ＦｃＲｎ発現について最も高い陽性率を示す。単球細胞株ＴＨＰ−１を使用して、ｐＨ７．４での、抗ＦｃＲｎ抗体の内因性ヒトＦｃＲｎへの結合を評価した。内因性ＦｃＲｎは、主としてＴＨＰ−１細胞中の細胞内エンドソーム小胞中にあるので、細胞を、最初に、中性洗剤で透過性にし、固定し、その後、ウシ血清の存在下で、抗ＦｃＲｎ抗体と共に、４℃で３０分間インキュベーションを行い、非特異的なＦｃ受容体結合を阻止した。このアッセイによって、内因性ヒトＦｃＲｎへの結合に優れた抗体を識別することができた。抗ＦｃＲｎ抗体のＴＨＰ−１細胞への結合は、濃度依存的であった。本発明のすべての抗体、例えば、Ｎ０２２〜Ｎ０２４、Ｎ０２６、およびＮ０２７は、ＩｇＧ１よりも優れた結合親和性を示した。抗体Ｎ０２７は、３．０ｎＭのＥＣ５０値で、最も高い結合親和性を示した。
【０１４５】
本発明の抗ＦｃＲｎ抗体が、ヒトまたはカニクイザルＦｃＲｎへの結合についてＩｇＧと競合する能力を、細胞表面のＧＰＩ結合ＦｃＲｎを異所的に発現しているヒト胎児腎臓（ＨＥＫ）２９３細胞上で評価した。細胞に結合したＩｇＧのレベルを、蛍光プローブ標識された非特異的ＩｇＧを使用して決定した。ＩｇＧの細胞表面ＦｃＲｎへの結合は、ＩｇＧのＦｃ部分がＦｃＲｎと相互作用することを可能にするｐＨ６．０で行われた。実施例３および図１に示した通り、細胞に結合したＩｇＧの量は、抗ＦｃＲｎ抗体の濃度が増大するにつれて、有意に低下した。ＩｇＧの結合は、５種の例示的な本発明の抗ＦｃＲｎ抗体、例えば、Ｎ０２２〜Ｎ０２４、Ｎ０２６、およびＮ０２７のそれぞれによって、濃度および飽和度依存的方式で阻害され、これは、抗ＦｃＲｎ抗体が、ｐＨ６．０で、ＩｇＧのＦｃＲｎへの結合と効率的に競合し、これを阻害する能力を示していた。抗体のＥＣ５０値は、２から６ｎＭの範囲であった。
【０１４６】
本発明の抗体の水素−重水素交換によるエピトープマッピングは、本発明の抗体が、Ｆｃ−ＦｃＲｎ相互作用界面に位置するおよび／または該界面に隣接するヒトＦｃＲｎ上のエピトープに結合することを示し、これは、本発明の抗体が、方向性（ｄｉｒｅｃｔｉｏｎ）阻害によって、ＦｃＲｎへのＩｇＧ結合を阻止することを示唆している。さらに、エピトープマッピングされた結合部位は、ＦｃＲｎのアルブミン結合部位から離れており、したがって、血清アルブミン結合は、阻害されないはずであり、血清アルブミン濃度は、低下しないはずである。酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）を使用して、本発明の抗体が、ＦｃＲｎへの血清アルブミン結合を阻害しないことを確認した。ヒトＦｃＲｎの可溶性のＨｉｓタグ付けされた細胞外ドメインを、プレート表面に結合させ、ｐＨ６．０で、漸増濃度の抗ＦｃＲｎ抗体と共に予備インキュベートした。西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）を結合させたヒト血清アルブミンを、可溶性のＨｉｓタグ付けされたＦｃＲｎに結合させた。いずれの抗体も、ＦｃＲｎへのアルブミン結合を阻害しなかった。さらに、インビボでの実験的証拠によれば、マウスアルブミン濃度が、抗ＦｃＲｎ抗体投与後に一定のままであることも示され、アルブミン再利用がＦｃＲｎへの抗体結合によって妨害されないことが示唆される。
【０１４７】
インビボ
本発明の抗ＦｃＲｎ抗体のＩｇＧ異化に対するインビボでの効果を試験するために、マウスＦｃＲｎを欠くが、内在性のマウスおよびヒトＦｃＲｎと類似の組織分布でヒトＦｃＲｎを発現する、ヒトＦｃＲｎトランスジェニックマウス系統ＦｃＲｎ−／−ｈＦｃＲｎ（３２）Ｔｇマウスを使用した。第０日にヒトＩｇＧを注射したＦｃＲｎ−／−ｈＦｃＲｎ（３２）Ｔｇマウスに、単一用量の抗ＦｃＲｎ抗体を、第１および４日に、１０ｍｇ／ｋｇで投与した。実施例３および図２に示した通り、抗ＦｃＲｎ抗体で治療したマウスにおいて経時的に測定された、より低いレベルのＩｇＧによってわかるように、ＩｇＧの異化は、抗ＦｃＲｎ抗体の投与によって増大した。Ｎ０２４（ＫＤ＝３５．５ｐＭ）、Ｎ０２６（ＫＤ＝３６．５ｐＭ）、およびＮ０２７（ＫＤ＝１９．４ｐＭ）の活性は、１０ｍｇ／ｋｇで類似であるようである。
【０１４８】
実施例６−マウスにおけるＩｇＧレベルおよび標的占有に対する抗ＦｃＲｎ抗体の効果
Ｔｇ３２ヒトＦｃＲｎ（ｈＦＣＧＲＴ）トランスジェニック、マウスＦｃＲｎ（ｍＦＣＧＲＴ）ノックアウトマウスに、５００ｍｇ／ｋｇ  ＩＶＩｇ（トレーサー）の投与の２４時間後に、Ｎ０２７を静脈内（ｉ．ｖ．）投与した。循環するヒトＩｇＧを、毎日、ＥＬＩＳＡによって検出した。標的占有は、溶解させた全血由来の単球において、細胞の、細胞表面の免疫表現型診断マーカーとのインキュベーション、それに続く固定および透過処理後の蛍光標識細胞分取（ＦＡＣＳ）によって、毎日測定した。Ｄｙ６５０標識したＮ０２７で染色することによって、非占有ＦｃＲｎを測定した（ｎ＝４（雄）／群）。図３に示した通り、ＩｇＧレベル、および非占有ＦｃＲｎの割合は、Ｎ０２７の投与によって用量依存的に低下した。
【０１４９】
実施例７−カニクイザルにおけるＩｇＧ異化および標的占有の選択的誘発
カニクイザルにおいて、Ｎ０２７を、ｔ＝０でｉ．ｖ．投与した。循環する内在性ＩｇＧおよびアルブミンを、ＥＬＩＳＡによって検出した。標的占有は、溶解させた全血由来の単球において、細胞の、細胞表面の免疫表現型診断マーカーとのインキュベーション、それに続く固定および透過処理後のＦＡＣＳによって測定した。Ｄｙ６５０標識したＮ０２７で染色することによって、非占有ＦｃＲｎを測定した（ｎ＝３（雄）／群）。図４に示した通り、ＩｇＧレベル、および非占有ＦｃＲｎの割合は、Ｎ０２７の投与によって用量依存的に低下したのに対し、血漿アルブミン濃度は、変化しないままであった。
【０１５０】
実施例８−マウスにおけるＮ０２７の体内分布
フルオロフォア（ＶＴ６８０）で標識した、Ｎ０２７またはアイソタイプヒトＩｇＧ１対照抗体を、Ｔｇ３２ヒトＦｃＲｎトランスジェニック、マウスＦｃＲｎノックアウトマウスに、３０ｍｇ／ｋｇでｉ．ｖ．投与した。標識された抗体のレベルを、定量的エクスビボ光学イメージングによって、個々の器官において測定した。図５は、マウスにおける様々な器官におけるＮ０２７の体内分布を示す。
【０１５１】
実施例９−マウスコラーゲン抗体誘導関節炎におけるＮ０２７の有効性
コラーゲン抗体誘導関節炎を、Ｔｇ３２ヒトＦｃＲｎトランスジェニック、マウスＦｃＲｎノックアウトマウスにおいて、第１日のＡｒｔｈｒｉｔｏＭａｂ（商標）カクテル（ＭＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）の腹腔内（ｉ．ｐ．）注射によって誘発し、炎症性疾患活性を、第４日に１００μｇ  ＬＰＳ（ｉ．ｐ．）を用いて誘発した。Ｎ０２７を、疾患誘発およびランダム化後の第６日に、５ｍｇ／ｋｇ（矢印）で、治療的にｉ．ｖ．投与した。１ｇ／ｋｇのＩＶＩＧ（陽性対照群）またはビヒクル−ＰＢＳ（陰性対照）を、ランダム化後の第６日に投与した（ｎ＝５／群）。図６に示した通り、Ｎ０２７は、治療的に投与された場合、ヒトトランスジェニックＦｃＲｎマウスにおいて、コラーゲン抗体誘導関節炎を強力に阻害する。
【０１５２】
実施例１０−マウス慢性特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）におけるＮ０２７の有効性
血小板減少症を、Ｔｇ３２ヒトＦｃＲｎ（ｈＦＣＧＲＴ）トランスジェニック、マウスＦｃＲｎ（ｍＦＣＧＲＴ）ノックアウトマウスにおいて、抗血小板抗体（抗ＣＤ４１、ＭＷＲｅｇ３０）の皮下の（ｓ．ｃ．）ミニ浸透圧ポンプ持続注入によって誘発した。循環する血小板レベルは、ポンプ埋め込み後、７２時間（３日目）までに３００×１０９／Ｌ以下に低下した。Ｎ０２７は、ポンプ埋め込み後、７２時間（３日目）および１２０時間（５日目）に、治療的にｉ．ｖ．投与した（Ａ、ｎ＝４／群；Ｂ、ｎ＝７／群）。図７は、血小板減少症を有するマウスにおける血小板レベルに対するＮ０２７の効果を示す。
【０１５３】
他の態様
本発明を、特定の態様と関連付けて記載してきたが、さらなる改変が可能であり、本出願は、一般に、本発明の原理に従う、また、本発明が属する技術分野における公知のまたは習慣的な慣行に入る本開示からのこうした逸脱を含む、本発明のあらゆる変形、使用、または適合を包含することが意図され、また、先に説明した本質的特徴に応用することができることが理解されよう。
【０１５４】
すべての刊行物、特許、および特許出願の全体を、まるで、それぞれ個々の刊行物、特許、および特許出願の全体が参照によって組み込まれることが具体的にかつ個々に示されるかのような程度と同じ程度まで、参照によって本明細書に組み込む。
【０１５５】
他の態様は、次の特許請求の範囲内にある。
【図１】
2018504907.tif 000085
【図２−１】
2018504907.tif 000086
【図２−２】
2018504907.tif 000087
【図３】
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【図４−１】
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【図４−２】
2018504907.tif 000090
【図４−３】
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【図５】
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【図６】
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【図７−１】
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【図７−２】
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【国際調査報告】
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