(57)【要約】  本記載は、ETBR関連癌を治療するための組成物及び方法を提供する。ある態様において、本記載は、任意でETARアンタゴニスト、抗PD1抗体、bRAF阻害剤、ナイアシンアミド、またはそれらの組み合わせを含む、ETBRアンタゴニスト、カスパーゼ-8阻害剤、またはそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つの制御型全身放出のための送達システムを提供する。記載される組成物は、たとえば乳癌、悪性黒色腫、扁平上皮細胞癌、グリア芽腫などをはじめとする特定の癌の治療に有用である。さらに、本記載は、脳にまで拡散した癌の治療に有用な、任意でETARアンタゴニスト、抗PD1抗体、bRAF阻害剤、ナイアシンアミド、またはそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つを含む、ETBRアンタゴニスト、カスパーゼ-8阻害剤、またはそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つの、中枢神経系への制御型放出のための送達システムを提供する。
2018528980.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
エンドセリンB受容体（ETBR）アンタゴニスト、カスパーゼ-8阻害剤、またはそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つの有効量と、
エンドセリンA受容体（ETAR）アンタゴニスト、抗PD1抗体、bRAF阻害剤、ナイアシンアミド、またはそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つの相乗的有効量と、
薬学的に許容可能な担体と、を含有する、治療用組成物。
【請求項２】
前記抗PD-1抗体が、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ピジリズマブ、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つの剤である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記bRAF阻害剤が、ダブラフェニブ、ソラフェニブ、ベムラフェニブ、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つの剤である、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
前記ETBRアンタゴニストが、BQ788、BQ-017、A192621、それらの重水素化アナログもしくはフッ素化アナログ、またはそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５】
前記ETARアンタゴニストが、BQ123である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６】
前記ETBRアンタゴニスト、前記ETARアンタゴニスト、前記抗PD1抗体、前記bRAF阻害剤、前記ナイアシンアミド、および前記カスパーゼ-8阻害剤のうちの少なくとも１つの用量が、約0.1μg〜約5000μgであり、ならびに／または前記ETBRアンタゴニスト、前記ETARアンタゴニスト、前記抗PD1抗体、前記bRAF阻害剤、前記ナイアシンアミド、および前記カスパーゼ-8阻害剤のうちの少なくとも１つの濃度が、組成物１mL当たり、約0.01μg/mL〜約1000mg/mLである、請求項１〜５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７】
LyoCell（登録商標）、大豆油、ジメチルスルホキシド（DMSO）、Intravail（登録商標）、Protek（登録商標）、およびAegis HydrogelTMからなる群から選択される少なくとも１つの賦形剤をさらに含有する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項８】
前記薬学的に許容可能な担体は、固体脂質ナノ粒子、リポソーム、および生体適合性ポリマーからなる群から選択される、請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項９】
活性成分の均一分散物を含有する、制御放出型の皮下投与製剤または筋肉内投与製剤であって、
ETBRアンタゴニスト、カスパーゼ-8阻害剤、またはそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つと、
生体適合性送達システム中の、ETARアンタゴニスト、抗PD1抗体、bRAF阻害剤、ナイアシンアミド、またはそれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つの相乗的量の追加の剤と、を含有し、
投与後、前記ETBRアンタゴニストと追加の剤が前記製剤から全身循環へとゆっくりと、および同時に放出される、製剤。
【請求項１０】
前記抗PD-1抗体が、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ピジリズマブ、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つの剤であり；
前記bRAF阻害剤が、ダブラフェニブ、ソラフェニブ、ベムラフェニブ、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つの剤であり；
前記ETBRアンタゴニストが、BQ788、BQ-017、A192621、それらの重水素化アナログもしくはフッ素化アナログ、またはそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つであり；
前記ETARアンタゴニストが、BQ123であり；および
前記カスパーゼ-8阻害剤が、Ac-AAVALLPAVLLAALAPIETD-CHOの配列を有するペプチドである、請求項９に記載の制御放出型皮下投与製剤または筋肉内投与製剤。
【請求項１１】
前記送達システムが、
ポリ（ラクチド）、ポリ（グリコリド）、ポリ（ラクチド-コ-グリコリド）、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリ（乳酸-コ-グリコール酸）、ポリカプロラクトン、ポリカーボネート、ポリエステルアミド、ポリ無水物、ポリ（アミノ酸）、ポリオルトエステル、ポリシアノアクリル酸、ポリ（p-ジオキサノン）、ポリ（シュウ酸アルキレン）、生分解性ポリウレタン、それらの混合物およびコポリマーからなる群から選択される生体適合性ポリマーと、
ジパルミトイルPE（DPPE）などのホスファチジルエタノールアミン（PE）、およびたとえば卵PC（EPC）またはSPCなどの部分不飽和ホスファチジルコリン（PC）、たとえばHSPCなどの完全不飽和PC、PG、ホスファチジルセリン（PS）およびホスファチジルイノシトール（PI）、部分不飽和PG、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（DPPG）、コレステロール、DSPE-PEG2000からなる群から選択されるリポソーム調製物と、
DMSO溶液と、
LyoCell（登録商標）と、
トリグリセリド（Compritol 888 ATOおよびDynasan 112）、カルナバワックス、ミツロウ、セチルアルコール、乳化ワックス、コレステロール、酪酸コレステロール、およびポリ（エチレン）グリコール（PEG）誘導体からなる群から選択される固体脂質ナノ粒子調製物と、
それらの組み合わせと、からなる群から選択される、請求項９または１０に記載の制御放出型製剤。
【請求項１２】
前記ETBRアンタゴニスト、前記ETARアンタゴニスト、前記抗PD1抗体、前記bRAF阻害剤、前記ナイアシンアミド、または前記カスパーゼ-8阻害剤のうちの少なくとも１つの用量が、約0.1μg〜約5000μgである、請求項９〜１１のいずれか１項に記載の制御放出型製剤。
【請求項１３】
前記ETBRアンタゴニスト、前記ETARアンタゴニスト、前記抗PD1抗体、前記bRAF阻害剤、前記ナイアシンアミド、および前記カスパーゼ-8阻害剤のうちの少なくとも１つの濃度が、組成物1mL当たり、約0.01μg/mL〜約1000mg/mLである、請求項９〜１２のいずれか１項に記載の制御放出型製剤。
【請求項１４】
Intravail（登録商標）、Protek（登録商標）、およびAegis HydrogelTMからなる群から選択される賦形剤をさらに含有する、請求項９〜１３のいずれか１項に記載の制御放出型製剤。
【請求項１５】
その必要のある患者に前記組成物または前記製剤を投与することを含む、患者の癌を治療するための方法における使用のための請求項１〜８のいずれか１項に記載の組成物、または請求項９〜１４のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１６】
エンドセリン受容体アンタゴニスト、または免疫系療法に対する癌細胞の感受性を決定する方法であって、前記方法が、
a)患者由来の癌組織サンプルを提供する工程と、
b)ET-1に特異的に結合する抗体、および／またはET-3に特異的に結合する抗体の存在下で前記組織サンプルをインキュベートする工程と、
c)ET-1および／またはET-3に結合した抗体量を検出する工程であって、ET-1および／またはET-3が癌で活発に発現されている場合に、前記癌が、エンドセリン受容体アンタゴニスト療法に対し感受性である、工程とを含む、方法。
【請求項１７】
c)の検出の工程の後、前記方法が、d)エンドセリン受容体アンタゴニストまたはETBRシグナル伝達阻害剤の有効量を投与する工程をさらに含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記エンドセリン受容体アンタゴニストが、BQ788、BQ-017、BQ788の重水素化アナログもしくはフッ素化アナログ、BQ-017の重水素化アナログもしくはフッ素化アナログ、および／またはBQ123である、請求項１６または１７に記載の方法。
【請求項１９】
ETBR関連転移性脳腫瘍の治療方法における使用のための、請求項１〜８のいずれか１項に記載の組成物、または請求項９〜１４のいずれか１項に記載の製剤であって、前記方法が、その必要のある対象に、前記組成物または前記製剤の有効量を投与することを含み、前記組成物は、ETBR関連転移性脳腫瘍の症状の治療または改善に有効である、組成物または製剤。
【請求項２０】
免疫系療法に対する癌細胞の感受性を決定する方法であって、前記方法が、
a)癌を有する患者由来の癌細胞からの組織サンプルを提供する工程と、
b)ET-1に結合する抗体、および／またはET-3に結合する抗体の存在下で前記組織サンプルをインキュベートする工程と、
c)ET-1および／またはET-3に結合した抗体量を検出する工程であって、ET-1および／またはET-3が腫瘍で活発に発現している場合に、前記癌が、免疫系療法に対し反応性ではないことが示唆される、工程とを含む、方法。
【請求項２１】
c)の検出の工程の後、前記方法が、d)免疫系療法の有効量を投与する工程をさらに含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記免疫系療法が、免疫チェックポイント阻害剤、癌ワクチン、およびキメラ抗原受容体T細胞（CAR-T）療法からなる群から選択される、請求項２０または２１の方法。
【請求項２３】
前記カスパーゼ-8阻害剤が、Ac-AAVALLPAVLLAALAPIETD-CHOの配列を有するペプチドである、請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願／特許の相互参照 
本出願は、2015年8月3日に出願された「COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING CANCERS ASSOCIATED WITH ETBR ACTIVATION」という表題の米国仮特許出願第62/200,181号明細書に対する優先権を主張するものであり、当該出願の全内容は、その全体ですべての目的に対し参照により本明細書に援用される。
参照による援用
【０００２】
米国特許法施行細則第1.52条(e)（5）項に従い、以下の名称の電子ファイルに配列情報が含有される：1514985_101WO2_Sequence_Listing_ST25.txt；サイズ649B；作成日：2016年8月2日：Patent-In 3.5、およびChecker 4.4.0を使用。当該電子ファイルは、その全体で参照により本明細書に援用される。
【０００３】
本記載は、癌治療のための制御送達治療システム、癌の治療方法、および診断スクリーニング方法に関する。特に、たとえば悪性黒色腫、扁平上皮細胞癌、グリア芽腫、および他種の癌などの癌のための組成物、および癌治療剤を投与する方法が本明細書に記載される。
【背景技術】
【０００４】
2015年には新たに160万人超が、癌と診断されると推定される。１  特に、米国癌協会（American Cancer Society）は、2015年には新たに252,310人が黒色腫と診断されると推定している。２  黒色腫は現在、米国において9,940人が死亡しており、世界では65,000人が死亡している。1
【０００５】
悪性黒色腫は、メラニン細胞の癌性増殖であり、メラニン細胞は、表皮の色素産生細胞である。現在の統計で、2015年に、40人の白色人種のアメリカ人のうち1人がその生涯のうちに黒色腫を発症すると示唆されている。１  また、米国において、新たに73,870人が進行性浸潤性黒色腫と診断されると推定されている。進行性浸潤性黒色腫の5年生存率は現在、たった16.6％である。３  さらに、そのうちの転移性疾患を有する症例では、40％超が2年以内に脳転移を起こすとされており、その場合の平均生存期間はわずか3〜4か月である。７、８
【０００６】
悪性黒色腫に対する一次治療法は、外科的切除および放射線療法であるが、1年以内に50％の再発率であり、放射線治療後の認知障害の可能性もある。９  厚さ0.76mmを超える悪性黒色腫は、転移リスクが有意に高い。しかしながら、現行の黒色腫治療は、進行性疾患に対してのみ、承認されている。たとえば、米国および欧州においておよそ170万人が黒色腫に罹患し生活しているが、わずか20％、すなわちおおよそ340,000人が、目下の治療候補である。２  多くの患者が、分子標的治療剤または新規の免疫療法のいずれにも反応しない。５、６  現在承認されている薬剤に対する薬剤耐性の発現も普遍的である。４
【０００７】
エンドセリンB受容体（ETBR：Endothelin B receptor）経路は、黒色腫の転移拡散に大きな役割を果たしており、そのため、治療標的としての可能性がある。たとえば、RAFおよびMEKキナーゼは現在の黒色腫の薬剤標的であり、ETBRにより活性化される。１０  エンドセリンB受容体は、7回膜貫通型のGタンパク質共役受容体（GPCR：G-protein coupled receptor）である。正常なメラニン細胞では低レベルで発現されているが、黒色腫の発症及び進行の間は大きくアップレギュレートされている。１０  エンドセリン‐1（ET-1)とエンドセリン-3（ET-3)は、ETBRを活性化するリガンドである。ETBRのET-1活性化は、黒色腫細胞を増殖、転移させ、およびそれら独自の血液供給を形成させる。１７、２４
【０００８】
扁平上皮細胞癌（SCC：Squamous cell carcinoma）は、皮膚、舌、および食道に影響を及ぼし得る。扁平上皮細胞癌もまた、ETBR発現と関連づけられている。例えば、扁平上皮細胞腫瘍における高レベルのETBR発現は、予後不良の指標である。ETBRとETARのアンタゴニストの両方が、前臨床試験において、SCCの治療に有効性を示している。そのため、ETBRもまた、SCCに対する治療標的の可能性がある。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】American Cancer Society. Cancer Facts & Figures 2015. Atlanta: American Cancer Society; 2015.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
黒色腫とSCCを含む癌の治療法開発の発展にもかかわらず、効果的な治療に対する重大なアンメットニーズが未だ存在する。しかしながら、ETBRを標的とする市販の黒色腫薬剤は現在のところ存在しない。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本記載は、癌治療のためのETBRアンタゴニストを含有する治療用組成物または製剤に関する。特に、本明細書において記載されるように、製剤は、たとえば黒色腫、転移性黒色腫、扁平上皮細胞癌、グリア芽腫、またはそれらの組み合わせなどのETBR関連癌の治療に有用である。本明細書に記載されるように、本明細書で製剤化されたETBRアンタゴニストは、ETBR関連癌の治療に驚くべき効果があった。
【００１２】
したがって、１つの態様において、本記載は、ETBRアンタゴニストの有効量と、薬学的に許容可能な担体を含有する治療用組成物または製剤を提供する。ある実施形態において、治療用組成物または製剤は、ETBRアンタゴニスト、カスパーゼ-8阻害剤、またはそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つの有効量、およびETARアンタゴニスト、抗PD-1抗体、ｂRAF阻害剤、ナイアシンアミド、またはそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つの相乗的有効量、および薬学的に許容可能な担体を含有する。
【００１３】
したがって、別の態様において、本記載は、生体適合性送達システムにおいて、ETBRアンタゴニスト、またはカスパーゼ-8阻害剤、またはそれらの組み合わせの有効量、およびETARアンタゴニスト、抗PD-1抗体、ｂRAF阻害剤、ナイアシンアミド、またはそれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つの追加剤の相乗的量、および薬学的に許容可能な担体を含有する治療用組成物または製剤を提供する。
【００１４】
本明細書に記載される実施形態または態様のいずれかにおいて、抗PD-1抗体は、ニボルマブ（Nivolumab）、ペムブロリズマブ（pembrolizumab）、ピジリズマブ（pidilizumab）、または当分野の当業者に公知の、もしくは当分野の当業者に公知となる任意の他の抗PD-1抗体からなる群から選択される少なくとも１つの剤である。
【００１５】
本明細書に記載される実施形態または態様のいずれかにおいて、bRAF阻害剤は、ダブラフェニブ（Dabrafenib）、ソラフェニブ（Sorafenib）、ベムラフェニブ（Vemurafenib）、または当分野の当業者に公知の、もしくは当分野の当業者に公知となる任意の他のbRAF阻害剤からなる群から選択される少なくとも１つの剤である。
【００１６】
本明細書に記載される実施形態または態様のいずれかにおいて、ETBRアンタゴニストは、BQ788、BQ-017、A192621、それらの重水素化アナログもしくはフッ素化アナログ、またはそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つである。
【００１７】
本明細書に記載される態様または実施形態のいずれかにおいて、ETARアンタゴニストは、BQ123である。
【００１８】
本明細書に記載される実施形態または態様のいずれかにおいて、カスパーゼ-8阻害剤は、Ac-AAVALLPAVLLAALAPIETD-CHOの配列を有するペプチドである。
【００１９】
本明細書に記載される実施形態または態様のいずれかにおいて、ETBRアンタゴニストの用量は、約0.1μg〜約5000μg(たとえば、約100μg〜約4000μg)であり、および／またはETBRアンタゴニストの濃度は、組成物1mL当たり約0.01μg/mL〜約1000mg/mL(たとえば、約0.1mg/mL〜約5mg/mL)である。
【００２０】
本明細書に記載される実施形態または態様のいずれかにおいて、ETARアンタゴニストの用量は、約0.1μg〜約5000μg(たとえば、約100μg〜約4000μg)であり、および／またはETARアンタゴニストの濃度は、組成物1mL当たり約0.01μg/mL〜約1000mg/mL(たとえば、約0.1mg/mL〜約5mg/mL)である。
【００２１】
本明細書に記載される実施形態または態様のいずれかにおいて、抗PD1抗体の用量は、約0.1μg〜約5000μg(たとえば、約100μg〜約4000μg)であり、および／または抗PD1抗体の濃度は、組成物1mL当たり約0.01μg/mL〜約1000mg/mL(たとえば、約0.1mg/mL〜約5mg/mL)である。
【００２２】
本明細書に記載される実施形態または態様のいずれかにおいて、bRAF阻害剤の用量は、約0.1μg〜約5000μg(たとえば、約100μg〜約4000μg)であり、および／またはbRAF阻害剤の濃度は、組成物1mL当たり約0.01μg/mL〜約1000mg/mL(たとえば、約0.1mg/mL〜約5mg/mL)である。
【００２３】
本明細書に記載される実施形態または態様のいずれかにおいて、ナイアシンアミドの用量は、約0.1μg〜約5000μg(たとえば、約100μg〜約4000μg)であり、および／またはナイアシンアミドの濃度は、組成物1mL当たり約0.01μg/mL〜約1000mg/mL(たとえば、約0.1mg/mL〜約5mg/mL)である。
【００２４】
本明細書に記載される実施形態または態様のいずれかにおいて、カスパーゼ-8阻害剤の用量は、約0.1μg〜約5000μg(たとえば、約100μg〜約4000μgまたは約1μg〜約4000μg)であり、および／またはカスパーゼ-8阻害剤の濃度は、組成物1mL当たり約0.01μg/mL〜約1000mg/mL(たとえば、約0.1mg/mL〜約5mg/mL)である。
【００２５】
本明細書に記載される実施形態または態様のいずれかにおいて、組成物はさらに、LyoCell（登録商標）、大豆油、ジメチルスルホキシド（DMSO）、Intravail（登録商標）、Protek（登録商標）、およびAegis HydrogelTMからなる群から選択される少なくとも１つの賦形剤を含有する。たとえば、DMSOは、約5％〜約100％DMSO溶液である。
【００２６】
本明細書に記載される態様または実施形態のいずれかにおいて、薬学的に許容可能な担体は、固体脂質ナノ粒子、リポソーム、および生体適合性ポリマーからなる群から選択される。たとえば、治療用組成物または製剤は、ETBRアンタゴニストまたはカスパーゼ-8阻害剤またはそれらの組み合わせ、およびETARアンタゴニスト、抗PD1抗体、bRAF阻害剤、ナイアシンアミドもしくはそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つを含有する内部容積を有する、リポソームまたはナノ粒子またはそれらの組み合わせを含有してもよい。ある実施形態において、製剤は、中性脂質、塩基性（正味の正電荷を有する）脂質、酸性（正味の負電荷を有する）脂質、コレステロール、またはそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つを含有するリポソームを含む。ある追加的実施形態において、リポソームはさらにポリマー成分を含有する。ある実施形態において、リポソームの内部容積は少なくとも部分的に水性であり、ならびにETBRアンタゴニスト、カスパーゼ-8阻害剤、またはそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つ、およびETARアンタゴニスト、抗PD-1抗体、ｂRAF阻害剤、ナイアシンアミド、またはそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つを含有する。
【００２７】
本明細書に記載される態様または実施形態のいずれかにおいて、リポソームは、ETBRアンタゴニストおよび／もしくはカスパーゼ-8阻害剤、ならびに／またはETARアンタゴニスト、抗PD1抗体、bRAF阻害剤、ナイアシンアミド、もしくはそれらの組み合わせの内の少なくとも１つの、制御放出を達成させるよう構成される。ある実施形態において、リポソームは、ETBRアンタゴニストの急速放出を達成させるよう構成される。本明細書に記載される態様または実施形態のいずれかにおいて、リポソームは、ETBRアンタゴニストおよび／もしくはカスパーゼ-8阻害剤、ならびに／またはETARアンタゴニスト、抗PD1抗体、bRAF阻害剤、ナイアシンアミド、もしくはそれらの組み合わせの内の少なくとも１つの持続放出を達成させるよう構成され、または製剤化される。本明細書に記載される態様または実施形態のいずれかにおいて、リポソームは、ETBRアンタゴニスト、カスパーゼ-8阻害剤またはそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つ、およびETARアンタゴニスト、抗PD1抗体、bRAF阻害剤、ナイアシンアミド、またはそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つの急速放出と持続放出の両方を生じさせるよう構成される。
【００２８】
本明細書に記載される実施形態または態様のいずれかにおいて、本記載は、生体適合性ポリマー、およびETBRアンタゴニストの有効量を含むヒドロゲルを含有する治療用組成物または製剤を提供する。
【００２９】
本明細書に記載される態様または実施形態のいずれかにおいて、治療用組成物または製剤は、RAFキナーゼアンタゴニスト、MEKアンタゴニスト、またはそれらの組み合わせの有効量のうちの少なくとも１つを含有する。
【００３０】
本明細書に記載される態様または実施形態のいずれかにおいて、治療用組成物または製剤は、少なくとも１つの追加的抗癌剤または化学療法剤の有効量を含有する。
【００３１】
さらなる態様において、制御放出用の皮下または筋肉内の投与製剤が提供される。製剤は、以下を含む活性成分の均一分散物を含有する：ETBRアンタゴニストまたはカスパーゼ-8阻害剤またはそれらの組み合わせ；および生体適合性送達システム中のETARアンタゴニスト、抗PD1抗体、bRAF阻害剤、ナイアシンアミド、またはそれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つの追加的剤の相乗的量であって、投与後、ETBRアンタゴニストと追加的剤は、製剤から全身循環へとゆっくりと、および同時に放出される。
【００３２】
本明細書に記載される態様または実施形態のいずれかにおいて、以下の内の少なくとも１つ：（１）抗PD1抗体は、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ピジリズマブ、または当分野の当業者に公知の、もしくは当分野の当業者に公知となる任意の他の抗PD1抗体からなる群から選択される少なくとも１つの剤である；（２）bRAF阻害剤は、ダブラフェニブ、ソラフェニブ、ベムラフェニブ、または当分野の当業者に公知の、もしくは当分野の当業者に公知となる任意の他のbRAF阻害剤からなる群から選択される少なくとも１つの剤である；（３）ETBRアンタゴニストは、BQ788、BQ-017、A192621、それらの重水素化アナログもしくはフッ素化アナログ、またはそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つである；（４）ETARアンタゴニストは、BQ123である；または（５）カスパーゼ-8阻害剤は、配列Ac-AAVALLPAVLLAALAPIETD-CHOを有するペプチドである。
【００３３】
本明細書に記載される態様または実施形態のいずれかにおいて、送達システムは、以下からなる群から選択される：（１）生体適合性ポリマー、（２）リポソーム調製物、（３）DMSO溶液、（４）LyoCell（登録商標）、および（５）固体脂質ナノ粒子調製物。
【００３４】
本明細書に記載される態様または実施形態のいずれかにおいて、生体適合性ポリマーは、ポリ（ラクチド）、ポリ（グリコリド）、ポリ（ラクチド-コ-グリコリド）、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリ（乳酸-コ-グリコール酸）、ポリカプロラクトン、ポリカーボネート、ポリエステルアミド、ポリ無水物、ポリ（アミノ酸）、ポリオルトエステル、ポリシアノアクリル酸、ポリ（p-ジオキサノン）、ポリ（シュウ酸アルキレン）、生分解性ポリウレタン、それらの混合物およびコポリマーからなる群から選択される。
【００３５】
本明細書に記載される態様または実施形態のいずれかにおいて、リポソーム調製物は、例えばジパルミトイルPE（DPPE）などのホスファチジルエタノールアミン（PE）、およびたとえば卵PC（EPC）またはSPCなどの部分不飽和ホスファチジルコリン（PC）、たとえばHSPCなどの完全不飽和PC、PG、ホスファチジルセリン（PS）、およびホスファチジルイノシトール（PI）、部分不飽和PG、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（DPPG）、コレステロール、DSPE-PEG2000からなる群から選択される。
【００３６】
本明細書に記載される態様または実施形態のいずれかにおいて、固体脂質ナノ粒子調製物は、トリグリセリド（Compritol 888 ATOおよびDynasan 112）、カルナバワックス、ミツロウ、セチルアルコール、乳化ワックス、コレステロール、酪酸コレステロール、およびポリ（エチレン）グリコール（PEG）誘導体からなる群から選択される。
【００３７】
本明細書に記載される態様または実施形態のいずれかにおいて、DMSO溶液は、約5％〜約100％のDMSOである。
【００３８】
さらに別の態様において、本記載は、例えば、ヒトなどの動物などの対象または患者において疾患、障害、またはその症状を治療または改善するための方法を提供するものであり、当該方法は、本明細書に記載される治療用組成物または製剤の有効量、例えば、治療有効量を、その必要のある対象に投与することを含み、ここで当該組成物は、当該対象の疾患または障害またはその症状の治療または改善に有効である。ある実施形態において、疾患または障害は、ETBR関連癌である。さらに追加的実施形態において、ETBR関連癌は、乳癌、黒色腫、扁平上皮細胞癌、またはそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つである。
【００３９】
本明細書に記載される態様または実施形態のいずれかにおいて、ETBRアンタゴニスト、ETARアンタゴニスト、抗PD1抗体、bRAF阻害剤、ナイアシンアミド、およびカスパーゼ-8阻害剤のうちの少なくとも１つの用量は、当該ETBRアンタゴニスト、ETARアンタゴニスト、抗PD1抗体、bRAF阻害剤、ナイアシンアミド、およびカスパーゼ-8阻害剤のうちの少なくとも１つの濃度が、組成物１mL当たり、約0.1〜約5.0mg/mLで、約100μg〜約4000μgである。
【００４０】
本明細書に記載される態様または実施形態のいずれかにおいて、ETBRアンタゴニスト、ETARアンタゴニスト、抗PD1抗体、bRAF阻害剤、ナイアシンアミド、およびカスパーゼ-8阻害剤のうちの少なくとも１つの用量は、当該ETBRアンタゴニスト、ETARアンタゴニスト、抗PD1抗体、bRAF阻害剤、ナイアシンアミド、およびカスパーゼ-8阻害剤のうちの少なくとも１つの濃度が、組成物１mL当たり、約0.01μg/mL〜約1000mg/mLで、約0.1μg〜約5000μgである。
【００４１】
本明細書に記載される態様または実施形態のいずれかにおいて、ETBRアンタゴニスト、ETARアンタゴニスト、抗PD1抗体、bRAF阻害剤、ナイアシンアミド、およびカスパーゼ-8阻害剤のうちの少なくとも１つの用量は、約0.1μg〜約5000μgである。
【００４２】
本明細書に記載される態様または実施形態のいずれかにおいて、ETBRアンタゴニスト、ETARアンタゴニスト、抗PD1抗体、bRAF阻害剤、ナイアシンアミド、およびカスパーゼ-8阻害剤のうちの少なくとも１つの濃度は、組成物1mL当たり、約0.01μg/mL〜約1000mg/mLである。
【００４３】
本明細書に記載される実施形態または態様のいずれかにおいて、製剤はさらに、Intravail（登録商標）、Protek（登録商標）、およびAegis HydrogelTMからなる群から選択される賦形剤を含有する。
【００４４】
さらなる態様において、患者の癌の治療方法が提供される。当該方法は、その必要のある患者に対し、本開示組成物または製剤を投与することを含む。
【００４５】
本明細書に記載される態様または実施形態のいずれかにおいて、組成物または製剤は、鼻内または静脈内または頭蓋内に送達される。
【００４６】
ある態様において、エンドセリン受容体アンタゴニストに対する癌細胞の感受性を決定する方法が提供される。当該方法は、以下を含む：エンドセリン受容体アンタゴニストに対する癌細胞の感受性を決定する方法であって、当該方法は、a)患者からの癌組織サンプルを提供すること；b)当該組織サンプルを、ET-1に特異的に結合する抗体の存在下、および／またはET-3に特異的に結合する抗体の存在下でインキュベートすること；およびc)ET-1および／またはET-3に結合した抗体量を検出することであって、ET-1および／またはET-3が癌中で活発に発現されている場合、当該癌は、エンドセリン受容体アンタゴニスト療法に対し感受性であること、を含む。
【００４７】
本明細書に記載される態様または実施形態のいずれかにおいて、c)の検出の後、当該方法は、d)たとえば癌がエンドセリン受容体アンタゴニスト療法に対し感受性である場合、またはETBRシグナル伝達の阻害剤に対し感受性である場合などに、エンドセリン受容体アンタゴニストまたはETBRシグナル伝達阻害剤（たとえば、カスパーゼ-8阻害剤）の有効量を投与することをさらに含む。
【００４８】
本明細書に記載される態様または実施形態のいずれかにおいて、ET-1および／またはET-3に結合した抗体の量を検出することは、検出可能な標識が結合した二次抗体を用いて行われる。
【００４９】
本明細書に記載される態様または実施形態のいずれかにおいて、エンドセリン受容体アンタゴニストは、選択的ETBRアンタゴニスト、および／または選択的ETARアンタゴニストであり、たとえばBQ788および／またはBQ123である。本明細書に記載される態様または実施形態のいずれかにおいて、エンドセリン受容体アゴニストは、BQ788、BQ-017、BQ788の重水素化アナログもしくはフッ素化アナログ、BQ-017の重水素化アナログもしくはフッ素化アナログ、および／またはBQ123である。
【００５０】
別の態様において、本記載は、a)対象から生物サンプルを取得する工程；b)ET-1の核酸またはポリペプチドを検出することができる剤（たとえば、核酸系プローブまたは抗体またはそれらの断片）および／またはET-3の核酸またはポリペプチドを検出することができる剤（たとえば核酸系プローブまたは抗体またはそれらの断片）と、サンプルを接触させる工程；c)サンプル中のET-1および／またはET-3に対する剤の結合を検出する工程；およびd)ET-1に結合した剤の量および／またはET-3に結合した剤の量と、対照を比較する工程であって、この場合においてET-1および／またはET-3の増大は、ETBR関連癌を有する対象の指標であり、それによって、ETBR関連癌を有するとして対象を診断する工程、を含む、個体におけるETBR関連癌の診断方法を提供する。
【００５１】
追加的態様において、本記載は、a)対象から生物サンプルを取得する工程；b)ET-1の核酸またはポリペプチドを検出することができる剤（たとえば、核酸系プローブまたは抗体またはそれらの断片）および／またはET-3の核酸またはポリペプチドを検出することができる剤（たとえば核酸系プローブまたは抗体またはそれらの断片）と、サンプルを接触させる工程；c)サンプル中のET-1および／またはET-3に対する剤の結合を検出する工程；d)対象からのET-1に結合した剤の量と、対照を比較する工程であって、この場合においてET-1および／またはET-3の増大は、ETBR関連癌を有する対象の指標であり、それによって、ETBR関連癌を有するとして対象を診断する工程；およびe)本明細書に記載される治療用組成物を投与する工程、を含む、ETBR関連癌を有する対象に対し、適切な治療的処置を選択する方法を提供する。ある実施形態において、当該方法は、工程a)〜d)を反復する工程を含み、それによって、対象が処置に対し反応しているか否かを決定する工程を含む。
【００５２】
追加的態様において、本記載は、a)ETBR関連癌を有すると診断された対象を提供する工程；b)癌治療のために治療剤を投与する工程；c)治療的処置後に当該患者からサンプルを取得する工程；d)ET-1の核酸またはポリペプチドを検出することができる剤、および／またはET-3の核酸またはポリペプチドを検出することができる剤と、サンプルを接触させる工程；e)サンプル中のET-1および／またはET-3に対する剤の結合を検出する工程；およびf)対象からのET-1および／またはET-3に結合した剤の量と、対照を比較する工程であって、それにより治療的処置応答を評価する工程であって、この場合においてET-1および／またはET-3のレベルの上昇は、治療的応答がほとんどないか、ないことの指標であり、ならびにET-1および／またはET-3のレベルの低下は、正の治療的応答の指標である工程、を含む、ETBR関連癌を有する対象における治療的処置応答をモニタリングする方法を提供する。
【００５３】
本明細書に記載される態様または実施形態のいずれかにおいて、診断方法は、治療剤を投与する追加的工程を含む。ある実施形態において、同量の治療剤が投与される。追加的実施形態において、より多い用量が投与される。さらに追加的実施形態において、当該方法は、治療的処置および／または治療計画の変更工程を含む。ある実施形態において、同量の治療剤が投与される。追加的実施形態において、より多い用量が投与される。さらに追加的実施形態において、当該方法は、治療的処置および／または治療計画の変更工程を含む。ある実施形態において、ETBR関連癌は、乳癌、黒色腫、扁平上皮細胞癌、グリア芽腫、またはそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つである。
【００５４】
さらなる態様において、ETBR関連転移性脳腫瘍の治療方法が提供される。当該方法は、その必要のある対象に、本開示の組成物または製剤の有効量を投与することを含み、この場合において当該組成物または製剤は、ETBR関連転移性脳腫瘍の症状の治療または改善に有効である。
【００５５】
本明細書に記載される態様または実施形態のいずれかにおいて、ETBR関連転移性脳腫瘍は、転移性黒色腫関連脳腫瘍、転移性扁平上皮細胞癌関連脳腫瘍、グリア芽腫、またはそれらの組み合わせである。
【００５６】
ある態様において、免疫系療法に対する癌細胞の感受性を決定する方法が提供される。当該方法は、以下を含む：a)癌を有する患者からの癌細胞由来の組織サンプルを提供する工程；b)当該組織サンプルを、ET-1に結合する抗体の存在下、および／またはET-3に結合する抗体の存在下でインキュベートする工程；およびc)ET-1および／またはET-3に結合した抗体量を検出する工程であって、ET-1および／またはET-3が腫瘍中で活発に発現されている場合、それにより当該癌は、免疫系療法に対し非反応性であることを示唆する工程。
【００５７】
本明細書に記載される態様または実施形態のいずれかにおいて、ET-1および／またはET-3に結合した抗体量の検出は、検出可能な標識が結合した少なくとも１つの二次抗体を用いて行われる。
【００５８】
本明細書に記載される態様または実施形態のいずれかにおいて、c)の検出工程の後、当該方法はさらに、d)たとえば癌が免疫系療法に反応性である場合などに、免疫系療法の有効量を投与する工程を含む。
【００５９】
本明細書に記載される態様または実施形態のいずれかにおいて、免疫系療法は、免疫チェックポイント阻害剤、癌ワクチン、およびキメラ抗原受容体T細胞（CAR-T：Chimeric Antigen Receptor T-Cell）療法からなる群から選択される。
【００６０】
本明細書に記載される態様または実施形態のいずれかにおいて、免疫チェックポイント阻害剤は、抗PD-1抗体である。
【００６１】
前述の一般的使用分野は例示のためだけに提示されており、本開示および添付されている「特許請求の範囲」の範囲を限定することを意図してはいない。本発明の組成物、方法、および工程に関連する追加の課題および利点は、本特許請求の範囲、明細書、および実施例を参照して当業者によって理解される。例えば、全てが本明細書によって明示的に企図されている本発明の様々な態様および実施形態を様々に組み合わせて利用してよい。これらの追加の利点、課題、および実施形態が本発明の範囲内に含まれることは明らかである。本発明の背景を明らかにするために、特に、実施に関する追加の詳細を提供するために本明細書において使用される刊行物および他の材料は参照により援用される。
【００６２】
添付図面は本明細書に援用され、その一部分を形成しており、本発明の幾つかの実施形態を例示し、本発明の原理を本明細書と共に説明することに役立つ。本図面は本発明の実施形態を例示することだけを目的としており、本発明を限定するものと解釈されてはならない。本発明の他の課題、特徴および利点は、本発明の例示的実施形態を示す添付図面と併せて下記の「発明を実施するための形態」から明らかになる。
【図面の簡単な説明】
【００６３】
【図１】図１。エンドセリンB受容体（ETBR）の細胞シグナル伝達経路。ETBRは、7回膜貫通型Gタンパク質共役受容体（GPCR）である。エンドセリン-1（ET-1）は、ETBRのリガンドである。ET-1が受容体に結合すると、PTK、RAF、MEK、MAPK／ERKをはじめとする多くの下流キナーゼの活性化が発生する。
【図２】図２。bRAF阻害剤に対する薬剤耐性は、ETBRのアップレギュレーションが原因である。ETBRのアップレギュレーションにより、黒色腫細胞は、MAPK／ERK活性化に対する阻害の回避が可能となる。ETBRアンタゴニストのたとえばBQ788、A192621は、ET-1結合を阻害する。
【図３】図３。ET-1は、進行性黒色腫により発現される。ET-1は、ETBRを活性化するリガンドであり、黒色腫細胞を増殖、転移させ、およびそれら独自の血液供給を形成させる。組織切片は、ET-1特異的標識で染色されたヒト浸潤性黒色腫標本に由来する。写真は、黒色腫がET-1陽性であることを示す。浸潤性および転移性の黒色腫は、ET-1を産生する。
【図４】図４Ａおよび４Ｂ。BQ788は、黒色腫の増殖と転移を阻害する。BQ788(IC50 1.2nM、Ki=17.8nM)は、ETBR関連黒色腫細胞増殖の強力な阻害剤である。BQ788は、黒色腫細胞においてアポトーシスを誘導する。
【図５−１】図５Ａ、５Ｂ、および５Ｃ。ETBRアンタゴニストは、マウスにおいて、黒色腫脳転移を阻害する。マウス黒色腫モデルを使用して、60mg/kg/日の投与量で、A192621(IC50 4.5nM、Ki=8.8nM)が投与された。A192621は、(A)生存率を上昇させ；(B-C）脳黒色腫転移を縮小させる。本実験において、レンチウイルスベクターを使用して、黒色腫細胞株でETBRを過剰発現させた。次にこれを使用して、マウスに異種移植片を移植した。
【図５−２】図５Ｄおよび５Ｅ。A192621は、(D-E)CNS黒色腫を縮小させる。
【図６】図６。ETBRアンタゴニストのBQ788は、マウスにおける脳黒色腫異種移植片の処置において、bRAF阻害剤のダブラフェニブ（Dabrafenib）と相乗効果を発揮する。ヌードマウスに、ルシフェラーゼでタグ化したSKMEL28ヒト黒色腫細胞を頭蓋内接種した。腫瘍は1週間増殖させ、その後、腫瘍の平均発光に基づいてマウスを無作為に群に分けた（n=8）。マウスは、ダブラフェニブ 100mg/Kg 経口投与（PO）を毎日、またはダブラフェニブ+BQ788 10ngの鼻内投与を週に3回（TIW）で処置した。BQ788+ダブラフェニブの組み合わせで処置したマウスが、ダブラフェニブ単独で処置したマウスよりも、脳黒色腫異種移植片の増殖抑制が大きかった。
【図７】図７。BQ788は、in vivoにおいてダブラフェニブと相乗効果を発揮する。A375ヒト黒色腫細胞を、Nu/Jヌードマウスの後部側腹に皮下移植し、150mm3〜200mm3にまで増殖させ、その後、無作為化して処置を開始した。マウスは以下の処置を受けた：（１）ビヒクル（n=8）、（２）ダブラフェニブ100 mg/Kg 経口投与（PO）を毎日(n=5)、および（３）ダブラフェニブ+BQ788 600ng 腹腔内投与（IP） を週に3回（TIW）(n=5)。ダブラフェニブ単独は、腫瘍増殖を遅延させた。BQ788とダブラフェニブの併用により、11日目までに基準を下回る腫瘍縮小が生じた（p<0.05)。
【図８】図８。BQ788は、同系マウス黒色腫モデルにおいて、抗PD1抗体と相乗効果を発揮する。C57Bl/6マウスの後部側腹内に、B16F10マウス黒色腫細胞を接種した。腫瘍が触診可能になった時点で、マウスを4群（n=5）に無作為化し、以下のように処置した：（１）ビヒクル、（２）BQ788、（３）抗PD1、または（４）抗PD1+BQ788。グラフ中のデータは、被験物質を3回投与した後の腫瘍増殖を反映しており、BQ788と抗PD1の間の相乗効果を示している。
【図９】図９。ETARアンタゴニストとナイアシンアミドは、BQ788による体重減少を軽減する。6週齢の無胸腺ヌードマウスに、42日の期間にわたり、指定される漸増用量で、ETBRアンタゴニストのBQ788の20％DMSO溶液を鼻内投与した。1つの群には、追加でETARアンタゴニストのマシテンタン（Macitentan）を5mg/kgの投与量で毎日経口投与した。これらマウスの飲水は、0.3mg/mLの濃度のビタミンBナイアシンアミドが補給された。BQ788単独で処置された動物は発育不良となり、試験終了までに、基準体重と比較し、5％の平均体重減少があった。ETARアンタゴニストのマシテンタンと、ナイアシンアミド補給を共投与することで、この体重減少が軽減された。かかる処置をされた動物は、試験期間を通じて体重を維持することができた。ETARアンタゴニストおよびナイアシンアミドと、ETBRアンタゴニストの共投与により、治療目的で投与された場合のETBRアンタゴニストの有害事象が軽減された。
【図１０】図１０Ａ、１０Ｂ、および１０Ｃ。色素細胞性母斑のエンドセリン-1（ET-1)免疫組織化学染色 （A）ET-1ペプチドとET-3ペプチドの濃度は1pg〜250ngの範囲にあり、膜上に固定され、抗ET-1モノクローナル抗体を使用してハイブリダイズされた。（B）代表的な複合性先天性色素性母斑（C）代表的な重度の細胞異型を伴う異形成母斑 両検体において、病変部近傍環境中の散在性細胞は、ET-1陽性である（矢印）。これら検体中のメラニン細胞は、ET-1陰性である。ヘマトキシリンおよびエオジン（H&E）染色された切片を左のパネルに示す。検体のET-1免疫組織染色を右のパネルに示す。ET-1は赤色に染まる。
【図１１】図１１Ａおよび１１Ｂ。上皮内黒色腫検体のエンドセリン-1（ET-1)免疫組織化学染色 （A）皮膚内浸潤物中のET-1陽性細胞が陰性である代表的な上皮内黒色腫検体［ヘマトキシリンおよびエオジン（H&E）染色：左のパネル、ET-1免疫組織化学（IHC）染色：右のパネル］ （B）真皮内浸潤中に多くのET-1陽性細胞（矢印で示される）を有する代表的な上皮内黒色腫検体。H&E染色：左のパネル、ET-1  IHC：真ん中としたのパネル（高倍率）。
【図１２】図１２Ａ、１２Ｂ、１２Cおよび１２Ｄ。浸潤性黒色腫のエンドセリン-1（ET-1)免疫組織化学染色 （Ａ、Ｂ）浸潤性黒色腫の２つの別の検体は、低倍率（左、中央のパネル）と高倍率（右のパネル）で示されている。左のパネルはそれぞれのヘマトキシリンおよびエオジン（Ｈ＆Ｅ）染色である。真ん中と右のパネルは、免疫組織化学（ＩＨＣ）染色である。真皮内浸潤物中に多くのET-1陽性細胞（短く青い矢印）が示され、ならびにET-1陽性の黒色腫細胞も示されている（長く黒い矢印）。（C）H&E（左のパネル）とET-1（右のパネル）で染色された、高倍率の第三の検体。（D）浸潤性黒色腫細胞の微小環境中ET-1陽性細胞は、マクロファージマーカーのCD68を発現している。抗ET-1抗体（茶色）と抗CD68抗体（赤）の両方で染色された代表的なスライドを示す。短く青い矢印は、CD68のみが陽性であった細胞を示す。長く黒い矢印は、ET-1とCD68の両方が陽性の細胞を示す。
【図１３】図１３Ａおよび１３Ｂ。浸潤性黒色腫のエンドセリン-1（ET-1)およびHMB45の免疫組織化学染色 （A）ET-1（茶色）とHMB45（赤色）で二重染色され、アズールブルー（左のパネル）で対比染色された浸潤性黒色腫検体。短く青い矢印は、HMB45陽性の細胞を示す。長く黒い矢印は、HMB45ならびにET-1が陽性の細胞を示す。（B）アズールブルー対比染色単独。
【図１４】図１４A、１４B、１４C、１４Dおよび１４E。転移性黒色腫と青色母斑におけるET-1発現 （A）転移性黒色腫検体をET-1で染色した。（B）同じ検体を黒色腫マーカーのHMB45で染色した。（C）青色母斑はヘマトキシリンおよびエオジンで染色した。（D、E）同じ検体をET-1（赤色素原）で染色した。短く青い矢印は、ET-1陽性マクロファージを指している。長く黒い矢印は、青色母斑中のET-1陰性メラニン細胞を指している。
【発明を実施するための形態】
【００６４】
以下は、当業者による本発明の実施を支援するために提供される発明を実施するための形態である。当業者は、本開示の主旨または範囲から逸脱することなく本明細書に記載される実施形態に改変および変更を行うことができる。本明細書において言及される全ての刊行物、特許出願、特許、図面、および他の参照文献は、それらの全体が参照により明示的に援用される。
【００６５】
本明細書において、癌治療に有用な剤に関する驚くべき発見に関する組成物及び方法が記載される。特に、本明細書において記載されるように、製剤は、たとえば黒色腫、転移性黒色腫、扁平上皮細胞癌、グリア芽腫、またはそれらの組み合わせなどのETBR関連癌の治療に有用である。本明細書に記載されるように、本明細書で製剤化されたETBRアンタゴニストは、ETBR関連癌の治療に驚くべき効果があった。
【００６６】
本記載は、ETBRアンタゴニスト、カスパーゼ-8阻害剤またはそれらの組み合わせの内の少なくとも１つと、ETARアンタゴニスト、抗PD1抗体、bRAF阻害剤、ナイアシンアミド、又はそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つの（単回剤型、またはほぼ同時に投与される別々の剤型での）共投与のための組成物及び方法を提供する。
【００６７】
また、ETBRアンタゴニスト、カスパーゼ-8阻害剤、またはそれらの組み合わせの内の少なくとも１つの有効量と、ETARアンタゴニストの有効量（例えば、相乗的有効量）を併用して含有する組成物は、相乗効果的に作用し、ETBRアンタゴニストの有益な効果を増強させつつ、有害事象または副作用を最小化するという驚くべき発見があった。また、ナイアシンアミドの有効量（たとえば、相乗的有効量）に、ETBRアンタゴニストによるたとえば体重減少などの有害事象または副作用を相乗的に最小化する効果があったことは驚くべきことであった。本明細書に記載される製剤は、たとえば黒色腫、SCC、グリア芽腫、またはそれらすべてなどの、患者の癌治療に有用である。
【００６８】
さらに、ETBRアンタゴニスト、カスパーゼ-8阻害剤、またはそれらの組み合わせの内の少なくとも１つの有効量と、抗PD1抗体の有効量（例えば、相乗的有効量）を併用して含有する組成物は、相乗的に作用し、ETBRアンタゴニストの有益な効果を増強させつつ、有害事象または副作用を最小化するという驚くべき発見があった。本明細書に記載される製剤は、たとえば黒色腫、SCC、グリア芽腫、またはそれらすべてなどの、患者の癌治療に有用である。
【００６９】
さらに、ETBRアンタゴニスト、カスパーゼ-8阻害剤、またはそれらの組み合わせの内の少なくとも１つの有効量と、bRAF阻害剤の有効量（例えば、相乗的有効量）を併用して含有する組成物は、相乗的に作用し、ETBRアンタゴニストの有益な効果を増強させるという驚くべき発見があった。本明細書に記載される製剤は、たとえば黒色腫、SCC、グリア芽腫、またはそれらすべてなどの、患者の癌治療に有用である。
【００７０】
さらに、ETBRアンタゴニストの有効量と、カスパーゼ-8阻害剤の有効量（例えば、相乗的有効量）を併用して含有する組成物は、相乗的に作用し、ETBRアンタゴニストの有益な効果を増強させるという驚くべき発見があった。本明細書に記載される製剤は、たとえば黒色腫、SCC、グリア芽腫、またはそれらすべてなどの、患者の癌治療に有用である。
【００７１】
本明細書に記載される好ましい組成物および／または製剤は、当該組成物および／または製剤が以下のうちの少なくとも１つを達成するという相乗効果を示す：構成要素成分単独の投与により得られる追加的治療効果よりも高い治療効果（すなわち、より有効的）、高用量の構成要素成分単独の投与により得られる効果よりも高い治療効果、構成要素単独の投与により観察されるものと比較して有害事象または副作用が低下した同等の治療効果または高い治療効果（すなわち、治療濃度域の改善）、または少ない投与量の構成要素成分もしくはそれらの組み合わせのうちの１つまたは両方で同等の治療効果または高い治療効果。
【００７２】
別段の定義が無い限り、本明細書において使用される全ての技術用語と科学用語は、この発明が属する分野の当業者が共通して理解する意味と同じ意味を有する。本明細書において使用される用語は特定の実施形態を説明するためだけのものであり、本発明を限定するようには意図されていない。
【００７３】
ある範囲の値が提供される場合、別途文脈から明確に指示されない限り、その範囲の上限と下限の間にあるその下限の単位の小数第一位までの各中間値（例えば、ある数の炭素原子を含有する基の場合では、その場合にその範囲内にある各炭素原子数が提供される）、およびその表示範囲の中にある他のあらゆる表示値または中間値が本発明に含まれることが理解される。いずれかの具体的に除外される限界が表示範囲に存在するが、これらのより小さな範囲の上限と下限がそれぞれそれらのより小さな範囲内に含まれてよく、それらも本発明に包含される。その表示範囲がそれらの限界のうちの一方または両方を含む場合、それらの含まれている限界のうちのどちらかを、または両方を除外する範囲も本開示に含まれる。
【００７４】
本発明を説明するために次の用語を使用する。本明細書において用語が具体的に定義されていない場合、本発明の説明にその用語を使用する文脈の中でその用語に当てはまる、当業者によって理解される意味がその用語に与えられる。
【００７５】
本明細書および添付されている特許請求の範囲において使用される冠詞「ａ」および「ａｎ」は、文脈から別途明確に指示されない限り、その冠詞の文法上の目的語の１つ、または１つより多く（すなわち、少なくとも１つ）を指すために本明細書において使用される。例として、「要素」は１つの要素、または１つより多くの要素を意味する。
【００７６】
本明細書および特許請求の範囲において使用される「および／または」という語句は、そのようにして結合された要素の「どちらか、または両方」を意味する、すなわち、ある場合は接続的に存在し、他の場合では離接的に存在する要素を意味すると理解されるべきである。「および／または」を用いて記載された複数の要素も同様に、すなわち、そのようにして結合された要素のうちの「１つ以上」を意味する解釈されるべきである。「および／または」節によって具体的に特定された要素以外の他の要素も、具体的に特定されたそれらの要素に関係するにしても、無関係であるにしても、所望により存在してもよい。したがって、非限定的な例として、「含む（comprising）」のような非制限言語と併用されるとき、「Ａおよび／またはＢ」への参照は、１つの実施形態ではＡのみ（所望によりＢ以外の要素を含んでもよい）、別の実施形態ではＢのみ（所望により以外の要素を含んでもよいＡ）、さらに別の実施形態、ではＡとＢの両方（所望により他の要素を含んでもよい）、等を意味することができる。
【００７７】
本明細書および特許請求の範囲において使用される場合、「または」は上で定義された「および／または」と同じ意味を有すると理解されるべきである。例えば、リスト中の項目を分断する場合、「または」または「および／または」は非制限的であると、すなわち、多数の要素または列挙された要素のうちの少なくとも１つばかりか、そのうちの１つ以上、および所望により、リストに挙げられていない追加の項目を含むと解釈される。逆の意味を明確に示す「ただ１つ（only one of）」または「正に１つ（exactly one of）」、または、特許請求の範囲において使用される場合、「から成る（consisting of）」といった用語だけが、多数の要素または列挙された要素のうちの正に１つの要素を含むことを意味する。概して、本明細書において使用される「または」という用語は「どちらか（either）」、「１つ（one of）」、「ただ１つ（only one of）」、または「正に１つ（exactly one of）」といった排他的な用語が前に来たときにだけ排他的選択肢（すなわち、「一方または他方であるが、両方ではない」）を表すと解釈される。
【００７８】
本明細書ならびに特許請求の範囲において、「含む（comprising）」、「含む（including）」、「担持する（carrying）」、「有する（having）」、「含有する（containing）」、「伴う（involving）」、「保持する（holding）」、「から構成される（composed of）」等といった全ての移行句は非制限的であると、すなわち、「を含むが限定されない」を意味すると理解されるべきである。「から成る（consisting of）」および「から基本的に成る（consisting essentially of）」という移行句だけが米国特許庁特許審査手順マニュアル第２１１１．０３節に記載されているようにそれぞれ制限的または半制限的移行句である。
【００７９】
本明細書および特許請求の範囲において使用される場合、「少なくとも１つ」という語句は１つ以上の要素を参照するときに要素リストの中の要素のうちのいずれか１つ以上から選択される少なくとも１つの要素を意味すると理解されるべきであるが、それはその要素リスト内に具体的に挙げられた少なくとも１つのそれぞれ個々の要素を必ず含むということではなく、その要素リスト内の要素のあらゆる組合せを除外しない。「少なくとも１つ」という語句が指すその要素リスト内で具体的に特定された要素以外の要素も、具体的に特定された要素に関係するにしても、無関係であるにしても、所望により存在し得ることもこの定義により許される。したがって、非限定的な例として、「ＡおよびＢのうちの少なくとも１つ」（または、同様に「ＡまたはＢのうちの少なくとも１つ」、または、同様に「Ａおよび／またはＢのうちの少なくとも１つ」）は、１つの実施形態ではＢが存在せずに（所望によりＢ以外の要素を含んでもよい）所望により１つより多くのＡを含む少なくとも１つのＡ、別の実施形態ではＡが存在せずに（所望によりＡ以外の要素を含んでもよい）所望により１つより多くのＢを含む少なくとも１つのＢ、さらに別の実施形態では所望により１つより多くのＡを含む少なくとも１つのＡ、および少なくとも１つ、所望により１つより多くのＢを含む少なくとも１つのＢ（所望により他の要素を含んでもよい）、等を意味することができる。
【００８０】
１つより多くの工程または作業を含む本明細書に記載されるある特定の方法では、文脈から別途指示されない限り、その方法の工程または作業の順序は必ずしもその方法の工程または作業が挙げられている順番に限定されないことも理解されるべきである。
【００８１】
「共投与」および「共投与する」または「併用治療」という用語は、複数の治療薬が同時点である程度、好ましくは有効量で患者内に存在する限り、同時投与（同時点での２つ以上の治療薬の投与）と時間差投与（１つ以上の治療薬の投与であって、追加の治療薬または治療薬剤の投与の時点とは異なる時点での投与）の両方を指す。ある特定の好ましい態様において、本明細書に記載される本化合物のうちの１つ以上が少なくとも１つの追加の生体活性剤、特に抗癌剤を含む生体活性剤と併せて共投与される。特に好ましい態様において、化合物の共投与によって抗癌活性をはじめとする相乗的活性および／または相乗的治療が生じる。
【００８２】
本明細書において使用される場合、「化合物」という用語は、別途指示されない限り、本明細書において開示されるあらゆる特定の化学化合物を指し、互変異性体、位置異性体、幾何異性体、ならびに該当する場合は光学異性体（エナンチオマー）および他の立体異性体（ジアステレオマー）をはじめとする立体異性体を含み、同様に文脈の中で該当する場合はその薬学的に許容可能な塩および誘導体（プロドラッグ形態を含む）を含む。文脈内で使用されるとき、化合物という用語は一般的に単一の化合物を指すが、開示された化合物の立体異性体、位置異性体、および／または光学異性体（ラセミ混合物を含む）ならびに特定のエナンチオマーまたはエナンチオマー富化混合物などの他の化合物を含んでもよい。その用語は、活性部位への化合物の投与および送達を容易にするように改変されたプロドラッグ形態の化合物も文脈の中で指す。本化合物の説明の中で何よりもそれに関連する多数の置換基および変数が説明されることが特筆される。当業者は、本明細書に記載される分子が以下に一般的に記載されるように安定な化合物であることを理解する。結合が示されるとき、二重結合と一重結合の両方が示された化合物の文脈の中に表される。
【００８３】
「患者」または「対象」という用語は、本発明による組成物を用いる予防的治療を含む治療が提供される動物、好ましくはヒトまたは家畜化動物を説明するために本明細書を通して使用される。ヒト患者などの特定の動物に特異的である感染症、病状、または疾患状態の治療について、患者という用語はその特定の動物を指し、その動物にはイヌもしくはネコ、またはウマ、ウシ、ヒツジ等の農場動物のような家畜化動物が含まれる。概して本発明では患者という用語は別段の表示が無いか、またはその用語の使用文脈から暗に示されない限りヒト患者を指す。
【００８４】
「有効な」という用語は、化合物、組成物、または構成成分の量であって、その使用目的の文脈の中で使用されるときに意図した結果を達成するその量を説明するために使用される。「有効な」という用語は、他の全ての有効量または有効濃度といった用語を包含し、それらの用語は本出願において別段で記載または使用されている。
【００８５】
エンドセリンB受容体（ETBR）経路（図１）は、黒色腫の転移拡散に大きな役割を果たしており、そのため、治療介入の標的となる。エンドセリンB受容体は、7回膜貫通型Gタンパク質共役受容体（GPCR）である。正常なメラニン細胞では非常に低いレベルで発現されているが、黒色腫の発生と進行の間はアップレギュレートされている。１０  RAFとMEKキナーゼは現在の黒色腫の薬剤標的であり、ETBRにより活性化される。１０
【００８６】
エンドセリン-1（ET-1)（およびエンドセリン-3、示さず）は、ETBRを活性化するリガンドである（図２）。ETBRのET-1活性化は、黒色腫細胞を増殖、転移させ、それら独自の血液供給を形成させる。１７  本発明者らの研究により、色素沈着型浸潤性黒色腫と転移性黒色腫はET-1を産生することが示されている（図３）。
組成物
【００８７】
本明細書に記載される製剤は、患者のETBR関連癌の治療に有用である。ある実施形態において、癌は、乳癌、黒色腫、SCC、グリア芽腫、またはそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つである。
【００８８】
１つの態様において、本記載は、ETBRアンタゴニストの有効量と、薬学的に許容可能な担体を含有する治療用組成物または製剤を提供する。
【００８９】
ある実施形態において、治療用組成物または製剤は、ETBRアンタゴニスト、カスパーゼ-8阻害剤、またはそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つの有効量、および追加的抗癌剤のうちの少なくとも１つの有効量（たとえば、相乗的有効量）、および薬学的に許容可能な担体を含有する。ある追加的実施形態において、追加的抗癌剤は、ETARアンタゴニスト、抗PD1抗体、bRAF阻害剤、ナイアシンアミド、またはそれらの組み合わせからなる群から選択される。
【００９０】
ある実施形態において、治療用組成物または製剤は、ETBRアンタゴニスト、カスパーゼ-8阻害剤、ETARアンタゴニスト、抗PD-1抗体、ｂRAF阻害剤、ナイアシンアミド、またはそれらの組み合わせのうちの少なくとも２つの有効量（たとえば、相乗的有効量）を含有する。
【００９１】
ある実施形態において、ETBRアンタゴニストは、BQ788、BQ-017、A192621、ならびに重水素化アナログおよびフッ素化アナログを含む、それらのアナログ、誘導体、多形体、プロドラッグ、および塩を含むそれらの組み合わせからなる群から選択される。たとえば、ETBRアンタゴニストは、BQ788の重水素化アナログもしくはフッ素化アナログであってもよく、またはBQ-017の重水素化アナログもしくはフッ素化アナログであってもよい。
【００９２】
BQ788 ((2R)-2-[[(2R)-2-アミノ-3-(1-メトキシカルボニルインドール-3-イル)プロパノイル]-[(2S)-2-[[(2R,6S)-2,6-ジメチルピぺリジン-1-カルボニル]アミノ]-4,4-ジメチルペンタノイル]アミノ]ヘキサン酸塩または[N-シス-2,6-ジメチルピペリジノカルボニル-L-ガンマ-メチルロイシル-D-1-メトキシカルボニルトリプトファニル-D-ノルロイシン]、以下の構造)は、前臨床試験において悪性黒色腫の治療で有効性を示したETBRアンタゴニストである(Okada, M; Nishikibe, M (Winter 2002). "BQ-788, a selective endothelin ET(B) receptor antagonist." Cardiovascular drug reviews 20 (1): 53-66。本文献は参照により本明細書に援用される)。BQ788は、たとえばMolPort社(MolPort-019-939-166)から市販されている。
【化１】
2018528980.tif 000003
【００９３】
A192621 ((2R,3R,4S)-4-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-1-[2-(2,6-ジエチルアニリノ)-2-オキソエチル]-2-(4-プロポキシフェニル)ピロリジン-3-カルボン酸または(2R-(2アルファ,3ベータ,4アルファ)-4-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-1-(2-(2,6-ジエチルフェニル)アミノ)-2-オキソエチル)-2-(4-プロポキシフェニル)-3-ピロリジンカルボン酸)は、強力なETBRアンタゴニストである。A192621は、たとえばABI Chem社(AC1NSJS8)から市販されている。
【化２】
2018528980.tif 000004
【００９４】
しかしETBRの生理的役割は、過剰なレベルのエンドセリン-1（ET-1）を循環中から除去することである。BQ788の投与により、ET-1の排泄が阻害され、血清ET-1レベルが上昇する。血清ET-1レベルの上昇は、高血圧、肺高血圧、および腎臓血管収縮をはじめとする、エンドセリンA受容体（ETAR）の活性化を原因とした様々な有害事象と関連づけられている。そのため、ETAR活性化による不要な作用を最小化するために、ある態様において、本記載は、ETARアンタゴニストとともに、ETBRアンタゴニストを（単回剤型またはおよそ同時に投与される別々の剤型で）共投与するための治療用組成物および方法を提供する。
【００９５】
ある実施形態において、ETARアンタゴニストはBQ123である。BQ123 (2-[(3R,6R,9S,12R,15S)-6-(1H-インドール-3-イルメチル)-9-(2-メチルプロピル)-2,5,8,11,14-ペンタオキソ-12-プロパン-2-イル-1,4,7,10,13-ペンタアザビシクロ[13.3.0]オクタデカン-3-イル]酢酸またはシクロ(D-Trp-D-Asp-Pro-D-Val-Leu))は選択的ETARアンタゴニストである。(Ishikawa et al., (1992). "Cyclic pentapeptide endothelin antagonists with high ETA selectivity. Potency- and solubility-enhancing modifications.” Journal of Medicinal Chemistry 35 (11): 1239-42、本文献は参照により本明細書に援用される）。BQ123は、たとえばABI Chem社(AC1L9EDH)から市販されている。
【化３】
2018528980.tif 000005
【００９６】
また、ETBRアンタゴニストの有効量と、ETARアンタゴニストの有効量を併用して含有する組成物は、相乗的に作用し、ETBRアンタゴニストの有益な効果を増強させつつ、有害事象または副作用を最小化するという驚くべき発見があった。そこで、別の態様において、本記載は、ETBRアンタゴニストの有効量と、ETARアンタゴニストの有効量を併用して含有し、および薬学的に許容可能な担体を含有する治療用組成物または製剤を提供する。ある実施形態において、ETARの有効量は、相乗的有効量である。ある実施形態において、ETBRアンタゴニストは、BQ788、A192621、ならびにそれらのアナログ、誘導体、多形体、プロドラッグ、および塩を含むそれらの組み合わせからなる群から選択される。
【００９７】
ある実施形態において、ETARアンタゴニストは、そのアナログ、誘導体、多形体、プロドラッグ、および塩を含むBQ123である。
【００９８】
カスパーゼ-8は、ETBRの下流エフェクターである。カスパーゼ-8阻害剤は、ETBR活性化の結果として誘発される浸潤および転移を促進する分子事象を阻害する。したがって、カスパーゼ-8阻害剤は、カスパーゼ-8アンタゴニストとして、またはETBRシグナル伝達のアンタゴニスト／阻害剤として分類されることもできる。本明細書に記載される態様または実施形態のいずれかにおいて、カスパーゼ-8阻害剤は、Ac-AAVALLPAVLLAALAPIETD-CHOの配列を有するペプチドであり、それらはEMD Millipore社(Billerica, MA 01821, USA)から市販されている。
【００９９】
本明細書に記載される態様または実施形態のいずれかにおいて、治療用組成物または製剤は、少なくとも１つの追加的抗癌剤を含有する。本明細書に記載される態様または実施形態のいずれにおいて、追加的抗癌剤は、別のETBRアンタゴニストである。
【０１００】
ある実施形態において、治療用組成物または製剤は、ETBRアンタゴニストまたはカスパーゼ-8阻害剤またはそれらの組み合わせの有効量、および追加的ETBRアンタゴニスト、ETARアンタゴニストまたはそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つの有効量、および薬学的に許容可能な担体を含有する。ある実施形態において、組成物は、追加的ETBRアンタゴニスト、ETARアンタゴニスト、またはそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つの相乗的有効量を含有する。特定の実施形態において、治療用組成物または製剤はさらに、追加的ETBRアンタゴニスト、ETARアンタゴニスト、bRAF阻害剤、ナイアシンアミド、またはそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つの有効量（たとえば、相乗的有効量）を含有する。
【０１０１】
さらなる態様において、本記載は、ETBRアンタゴニスト、カスパーゼ-8阻害剤、またはそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つの有効量と、抗PD1抗体の有効量を併用して含有し、および薬学的に許容可能な担体を含有する治療用組成物または製剤を提供する。ある実施形態において、抗PD1抗体の有効量は、相乗的有効量である。特定の実施形態において、治療用組成物または製剤はさらに、追加的ETBRアンタゴニスト、ETARアンタゴニスト、bRAF阻害剤、ナイアシンアミド、またはそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つの有効量（たとえば、相乗的有効量）を含有する。
【０１０２】
本明細書に記載される実施形態または態様のいずれかにおいて、抗PD-1抗体は、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ピジリズマブ、または当分野の当業者に公知の、もしくは当分野の当業者に公知となる任意の他の抗PD-1抗体からなる群から選択される少なくとも１つの剤である。
【０１０３】
さらに別の態様において、本記載は、ETBRアンタゴニスト、カスパーゼ-8阻害剤、またはそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つの有効量と、bRAF阻害剤の有効量を併用して含有し、および薬学的に許容可能な担体を含有する治療用組成物または製剤を提供する。ある実施形態において、bRAF阻害剤の有効量は、相乗的有効量である。特定の実施形態において、治療用組成物または製剤はさらに、追加的ETBRアンタゴニスト、ETARアンタゴニスト、抗PD1抗体、またはそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つの有効量を含有する。
【０１０４】
本明細書に記載される実施形態または態様のいずれかにおいて、bRAF阻害剤は、ダブラフェニブ、ソラフェニブ、ベムラフェニブ、または当分野の当業者に公知の、もしくは当分野の当業者に公知となる任意の他のbRAF阻害剤からなる群から選択される少なくとも１つの剤である。
【０１０５】
本明細書に記載される態様または実施形態のいずれかにおいて、治療用組成物または製剤は、少なくとも１つの追加的抗癌剤の有効量または相乗的有効量を含有する。
【０１０６】
ある実施形態において、追加的抗癌剤は、RAFキナーゼアンタゴニスト、MEKアンタゴニスト、またはそれらの組み合わせである。
【０１０７】
ある実施形態において、追加的抗癌剤は、イピリムマブ（ipilimumab）、ベムラフェニブ（vemurafenib）、ダカバジン（dacabazine）、ニボルマブ（nivolumab）、ペムブロリズマブ（pembrolizumab）、ナイアシンアミド（niacinamide）、インターロイキン-2、DEDN6526、タリモゲン  ラヘルパレプヴェック（Talimogene laherparepvec）、腫瘍浸潤性リンパ球、血管新生阻害剤、アドリアマイシン（adriamycin）、カンプトテシン（camptothecin）、カルボプラチン（carboplatin）、シスプラチン（cisplatin）、ダウノルビシン（daunorubicin）、ドキソルビシン（doxorubicin）、アルファ、ベータ、またはガンマインターフェロン、イリノテカン（irinotecan）、ドセタキセル（docetaxel）、パクリタキセル（paclitaxel）、トポテカン（topotecan）、アトラセンタン（atrasentan）、テゾセンタン（tezosentan）、ボセンタン（bosentan）、シタクスセンタン（sitaxsentan）、エンラセンンタン（enrasentan）、Ro468443、TBC10950、TBC10894、A192621、A308165、SB209670、SB17242、A182086、(s)-Lu302872、J-104132、TAK-044、サラフォトキシン（Sarafotoxin） 56c、IRL2500、RES7011、アセラシンス（Aselacins）A、B、およびC、Ro470203、Ro462005、スルファメトキサゾール（sulfamethoxazole）、コキンミシン（cochinmicin）I、II、およびIII、L749329、L571281、L754142、J104132、CGS27830、PD142893、PD143296、PD145065、PD156252、PD159020、PD160672、PD160874、TM-ET-1、IRL3630、Ro485695、L75037、LU224332、PD142893、LU302872、PD145065、Ro610612、SB217242、ならびにそれらの組み合わせからなる群から選択される。
【０１０８】
ある実施形態において、血管新生阻害剤は、サリドマイド、マリマスタット（marimastat）、COL-3、BMS275291、スクアラミン（squalamine）、2-ME、SU6668、ネオバスタット（neovastat）、Medi522、EMD121974、CAI、セレコキシブ（celecoxib）、インターロイキン-12、IM862、TNP470、アバスチン（avastin）、グリバック（gleevac）、ハーセプチン（herceptin）、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される。
【０１０９】
本明細書に記載される態様または実施形態のいずれかにおいて、治療用組成物または製剤は、有効量または相乗的有効量のナイアシンアミドを含有する。ナイアシンアミドは、ETBRアンタゴニストの腎臓血管収縮の副作用を軽減または減弱することができる。特定の実施形態において、治療用組成物または製剤は、有効量のETBRアンタゴニスト（またはカスパーゼ-8阻害剤、もしくはETBRアンタゴニストとカスパーゼ-8阻害剤）、有効量または相乗的有効量のETBRアンタゴニスト、有効量または相乗的有効量のナイアシンアミド、および薬学的に許容可能な担体を含有する。ナイアシンアミドは、ETBRアンタゴニストの腎臓血管収縮の副作用を軽減または減弱することができる。
【０１１０】
本明細書に記載される態様または実施形態のいずれかにおいて、ETBRアンタゴニスト、ETARアンタゴニスト、抗PD1抗体、bRAF阻害剤、ナイアシンアミド、およびカスパーゼ-8阻害剤のうちの少なくとも１つの用量は、約0.1μg〜約5000μgである。本明細書に記載される態様または実施形態のいずれかにおいて、ETBRアンタゴニスト、ETARアンタゴニスト、抗PD1抗体、bRAF阻害剤、ナイアシンアミド、およびカスパーゼ-8阻害剤のうちの少なくとも１つの濃度は、組成物1mL当たり、約0.01μg/mL〜約1000mg/mLである。
【０１１１】
本明細書に記載される実施形態または態様のいずれかにおいて、ETBRアンタゴニストの用量は、約100μg〜約4000μg、および／またはETBRアンタゴニストの濃度は組成物１mL当たり約0.1〜約5.0mg/mLである。
【０１１２】
本明細書に記載される実施形態または態様のいずれかにおいて、ETARアンタゴニストの用量は、約100μg〜約4000μg、および／またはETARアンタゴニストの濃度は組成物１mL当たり約0.1〜約5.0mg/mLである。
【０１１３】
本明細書に記載される実施形態または態様のいずれかにおいて、抗PD1抗体の用量は、約100μg〜約4000μg、および／または抗PD1抗体の濃度は組成物１mL当たり約0.1〜約5.0mg/mLである。
【０１１４】
本明細書に記載される実施形態または態様のいずれかにおいて、bRAF阻害剤の用量は、約100μg〜約4000μg、および／またはbRAF阻害剤の濃度は組成物１mL当たり約0.1〜約5.0mg/mLである。
【０１１５】
本明細書に記載される実施形態または態様のいずれかにおいて、ナイアシンアミドの用量は、約100μg〜約4000μg、および／またはナイアシンアミドの濃度は組成物１mL当たり約0.1〜約5.0mg/mLである。
【０１１６】
本明細書に記載される実施形態または態様のいずれかにおいて、カスパーゼ-8阻害剤の用量は、約1.0μg〜約4000μg、および／またはカスパーゼ-8阻害剤の濃度は組成物１mL当たり約0.1〜約5.0mg/mLである。
【０１１７】
たとえば、ETBRアンタゴニスト、ETARアンタゴニスト抗PD1抗体、bRAF阻害剤ナイアシンアミド、およびカスパーゼ-8阻害剤の濃度は、独立して、組成物1mL当たり、約0.01μg/mL〜約1000mg/mL、約0.01μg/mL〜約750mg/mL、約0.01μg/mL〜約500mg/mL、約0.01μg/mL〜約300mg/mL、約0.01μg/mL〜約150mg/mL、約0.01μg/mL〜約100mg/mL、約0.01μg/mL〜約50mg/mL、約0.01μg/mL〜約25mg/mL、約0.01μg/mL〜約10mg/mL、約0.01μg/mL〜約1.0mg/mL、約0.01μg/mL〜約0.1μg/mL、約0.1μg/mL〜約750mg/mL、約0.1μg/mL〜約500mg/mL、約0.1μg/mL〜約300mg/mL、約0.1μg/mL〜約150mg/mL、約0.1μg/mL〜約100mg/mL、約0.1μg/mL〜約50mg/mL、約0.1μg/mL〜約25mg/mL、約0.1μg/mL〜約10mg/mL、約0.1μg/mL〜約1.0mg/mL、約1.0μg/mL〜約750mg/mL、約1.0μg/mL〜約500mg/mL、約1.0μg/mL〜約300mg/mL、約1.0μg/mL〜約150mg/mL、約1.0μg/mL〜約100mg/mL、約1.0μg/mL〜約50mg/mL、約1.0μg/mL〜約25mg/mL、約1.0μg/mL〜約10mg/mL、約10μg/mL〜約750mg/mL、約10μg/mL〜約500mg/mL、約10μg/mL〜約300mg/mL、約10μg/mL〜約150mg/mL、約10μg/mL〜約100mg/mL、約10μg/mL〜約50mg/mL、約10μg/mL〜約25mg/mL、約25μg/mL〜約750mg/mL、約25μg/mL〜約500mg/mL、約25μg/mL〜約300mg/mL、約25μg/mL〜約150mg/mL、約25μg/mL〜約100mg/mL、約25μg/mL〜約50mg/mL、約50μg/mL〜約750mg/mL、約50μg/mL〜約500mg/mL、約50μg/mL〜約300mg/mL、約50μg/mL〜約150mg/mL、約50μg/mL〜約100mg/mL、約100μg/mL〜約750mg/mL、約100μg/mL〜約500mg/mL、約100μg/mL〜約300mg/mL、約100μg/mL〜約150mg/mL、約150μg/mL〜約750mg/mL、約150μg/mL〜約500mg/mL、約150μg/mL〜約300mg/mL、約300μg/mL〜約750mg/mL、約300μg/mL〜約500mg/mL、または約500μg/mL〜約750mg/mLであってもよい。
【０１１８】
たとえば、ETBRアンタゴニスト、ETARアンタゴニストカスパーゼ-8阻害剤、bRAF阻害剤、ナイアシンアミド、および抗PD1抗体の用量は、独立して、約0.1μg〜約5000μg、約0.1μg〜約4500μg、約0.1μg〜約4000μg、約0.1μg〜約3500μg、約0.1μg〜約3000μg、約0.1μg〜約2500μg、約0.1μg〜約2000μg、約0.1μg〜約1500μg、約0.1μg〜約1000μg、約0.1μg〜約500μg、約1.0μg〜約5000μg、約1.0μg〜約4500μg、約1.0μg〜約4000μg、約1.0μg〜約3500μg、約1.0μg〜約3000μg、約1.0μg〜約2500μg、約1.0μg〜約2000μg、約1.0μg〜約1500μg、約1.0μg〜約1000μg、約1.0μg〜約500μg、約100μg〜約5000μg、約100μg〜約4500μg、約100μg〜約4000μg、約100μg〜約3500μg、約100μg〜約3000μg、約100μg〜約2500μg、約100μg〜約2000μg、約100μg〜約1500μg、約100μg〜約1000μg、約100μg〜約500μg、約250μg〜約5000μg、約250μg〜約4500μg、約250μg〜約4000μg、約250μg〜約3500μg、約250μg〜約3000μg、約250μg〜約2500μg、約250μg〜約2000μg、約250μg〜約1500μg、約250μg〜約1000μg、約250μg〜約500μg、約500μg〜約5000μg、約500μg〜約4500μg、約500μg〜約4000μg、約500μg〜約3500μg、約500μg〜約3000μg、約500μg〜約2500μg、約500μg〜約2000μg、約500μg〜約1500μg、約500μg〜約1000μg、約750μg〜約5000μg、約750μg〜約4500μg、約750μg〜約4000μg、約750μg〜約3500μg、約750μg〜約3000μg、約750μg〜約2500μg、約750μg〜約2000μg、約75μg〜約1500μg、約750μg〜約1000μg、約1500μg〜約5000μg、約1500μg〜約4500μg、約1500μg〜約4000μg、約1500μg〜約3500μg、約1500μg〜約3000μg、約1500μg〜約2500μg、約1500μg〜約2000μg、約2000μg〜約5000μg、約2000μg〜約4500μg、約2000μg〜約4000μg、約2000μg〜約3500μg、約2000μg〜約3000μg、約2000μg〜約2500μg、約2500μg〜約5000μg、約2500μg〜約4500μg、約2500μg〜約4000μg、約2500μg〜約3500μg、約2500μg〜約3000μg、約3000μg〜約5000μg、約3000μg〜約4500μg、約3500μg〜約4000μg、約3500μg〜約5000μg、約3500μg〜約4500μg、約3500μg〜約4000μg、約4000μg〜約5000μg、約4000μg〜約4500μg、または約4500μg〜約5000μgであってもよい。
【０１１９】
本明細書に記載される実施形態または態様のいずれかにおいて、抗PD1抗体の用量は、約0.1mg/kg〜約9.0mg/kgである。たとえば、抗PD1抗体の用量は、約0.1mg/kg〜約9.0mg/kg、約0.1mg/kg〜約8.0mg/kg、約0.1mg/kg〜約7.0mg/kg、約0.1mg/kg〜約6.0mg/kg、約0.1mg/kg〜約5.0mg/kg、約0.1mg/kg〜約4.0mg/kg、約0.1mg/kg〜約3.0mg/kg、約0.1mg/kg〜約2.0mg/kg、約0.1mg/kg〜約1.0mg/kg、約1.0mg/kg〜約9.0mg/kg、約1.0mg/kg〜約8.0mg/kg、約1.0mg/kg〜約7.0mg/kg、約1.0mg/kg〜約6.0mg/kg、約1.0mg/kg〜約5.0mg/kg、約1.0mg/kg〜約4.0mg/kg、約1.0mg/kg〜約3.0mg/kg、約1.0mg/kg〜約2.0mg/kg、約2.0mg/kg〜約9.0mg/kg、約2.0mg/kg〜約8.0mg/kg、約2.0mg/kg〜約7.0mg/kg、約2.0mg/kg〜約6.0mg/kg、約2.0mg/kg〜約5.0mg/kg、約2.0mg/kg〜約4.0mg/kg、約2.0mg/kg〜約3.0mg/kg、約3.0mg/kg〜約9.0mg/kg、約3.0mg/kg〜約8.0mg/kg、約3.0mg/kg〜約7.0mg/kg、約3.0mg/kg〜約6.0mg/kg、約3.0mg/kg〜約5.0mg/kg、約3.0mg/kg〜約4.0mg/kg、約4.0mg/kg〜約9.0mg/kg、約4.0mg/kg〜約8.0mg/kg、約4.0mg/kg〜約7.0mg/kg、約4.0mg/kg〜約6.0mg/kg、約4.0mg/kg〜約5.0mg/kg、約5.0mg/kg〜約9.0mg/kg、約5.0mg/kg〜約8.0mg/kg、約5.0mg/kg〜約7.0mg/kg、約5.0mg/kg〜約6.0mg/kg、約6.0mg/kg〜約9.0mg/kg、約6.0mg/kg〜約8.0mg/kg、約6.0mg/kg〜約7.0mg/kg、約7.0mg/kg〜約9.0mg/kg、約7.0mg/kg〜約8.0mg/kg、または約8.0mg/kg〜約9.0mg/kgである。
【０１２０】
本明細書に記載される実施形態または態様のいずれかにおいて、bRAF阻害剤の用量は、約1mg〜約1500mgである。たとえば、bRAF阻害剤の用量は、約1mg〜約1500mg、約1mg〜約1250mg、約1mg〜約1000mg、約1mg〜約750mg、約1mg〜約500mg、約1mg〜約250mg、約250mg〜約1500mg、約250mg〜約1250mg、約250mg〜約1000mg、約250mg〜約750mg、約250mg〜約500mg、約500mg〜約1500mg、約500mg〜約1250mg、約500mg〜約1000mg、約500mg〜約750mg、約750mg〜約1500mg、約750mg〜約1250mg、約750mg〜約1000mg、約1000mg〜約1500mg、約1000mg〜約1250mg、または約1250mg〜約1500mgである。
【０１２１】
本明細書に記載される実施形態または態様のいずれかにおいて、ナイアシンアミドの用量は、約1mg〜約3000mgである。たとえば、ナイアシンアミドの用量は、約1mg〜約3000mg、約1mg〜約2750mg、約1mg〜約2500mg、約1mg〜約2250mg、約1mg〜約2000mg、約1mg〜約1750mg、約1mg〜約1500mg、約1mg〜約1250mg、約1mg〜約1000mg、約1mg〜約750mg、約1mg〜約500mg、約1mg〜約250mg、約250mg〜約3000mg、約250mg〜約2750mg、約250mg〜約2500mg、約250mg〜約2250mg、約250mg〜約2000mg、約250mg〜約1750mg、約250mg〜約1500mg、約250mg〜約1250mg、約250mg〜約1000mg、約250mg〜約750mg、約250mg〜約500mg、約500mg〜約3000mg、約500mg〜約2750mg、約500mg〜約2500mg、約500mg〜約2250mg、約500mg〜約2000mg、約500mg〜約1750mg、約500mg〜約1500mg、約500mg〜約1250mg、約500mg〜約1000mg、約500mg〜約750mg、約750mg〜約3000mg、約750mg〜約2750mg、約750mg〜約2500mg、約750mg〜約2250mg、約750mg〜約2000mg、約750mg〜約1750mg、約750mg〜約1500mg、約750mg〜約1250mg、約750mg〜約1000mg、約1000mg〜約3000mg、約1000mg〜約2750mg、約1000mg〜約2500mg、約1000mg〜約2250mg、約1000mg〜約2000mg、約1000mg〜約1750mg、約1000mg〜約1500mg、約100mg〜約1250mg、約1250mg〜約3000mg、約1250mg〜約2750mg、約1250mg〜約2500mg、約1250mg〜約2250mg、約1250mg〜約2000mg、約1250mg〜約1750mg、約1250mg〜約1500mg、約1500mg〜約3000mg、約1500mg〜約2750mg、約1500mg〜約2500mg、約1500mg〜約2250mg、約1500mg〜約2000mg、約1500mg〜約1750mg、約1750mg〜約3000mg、約1750mg〜約2750mg、約1750mg〜約2500mg、約1750mg〜約2250mg、約1750mg〜約2000mg、約2000mg〜約3000mg、約2000mg〜約2750mg、約2000mg〜約2500mg、約2000mg〜約2250mg、約2250mg〜約3000mg、約2250mg〜約2750mg、約2250mg〜約2500mg、約2500mg〜約3000mg、約2500mg〜約2750mg、または約2750mg〜約3000mgである。
【０１２２】
本記載に基づき、提供される例示的な用量範囲は、上記に検討されるように、日常的な技法を使用して共投与された場合に観察される相乗効果を最大化するために、または最適化するために組み合わされてもよい。
【０１２３】
本明細書に記載される医薬組成物は、薬学的に許容可能な担体、添加物、または賦形剤と併用した活性成分の組み合わせを含み、および本開示のさらなる態様を表している。特定の実施形態において、賦形剤は、Intravail（登録商標）、Protek（登録商標）、およびAegis HydrogelTMからなる群から選択される。別の実施形態において、組成物または製剤は、LyoCell（登録商標）、大豆油、ジメチルスルホキシド（DMSO）、Intravail（登録商標）、Protek（登録商標）、およびAegis HydrogelTMからなる群から選択される少なくとも１つの賦形剤を含有する。たとえば、DMSOは、約5%〜約100%DMSO、約25%〜約100%DMSO、約50%〜約100%DMSO、約75%〜約100%DMSO、約5%〜約75%DMSO、約25%〜約75%DMSO、約50%〜約75%DMSO、約5%〜約50%DMSO、約25%〜約50%DMSO、または約5%〜約25%DMSOを含有するDMSO溶液である。
【０１２４】
本開示には、該当する場合は本明細書に記載される化合物の薬学的に許容可能な塩、特に、酸付加塩または塩基付加塩を含む組成物が含まれる。この態様によると有用である前述の塩基化合物の薬理学的に許容可能な酸付加塩を調製するために使用される酸は、無毒の酸付加塩、すなわち、多くの中でも、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硝酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、酸性リン酸塩、酢酸塩、乳酸塩、クエン酸塩、酸性クエン酸塩、酒石酸塩、重酒石酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、糖酸塩、安息香酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩およびパモ酸塩［すなわち、１，１’−メチレン−ビス−（２−ヒドロキシ−３ナフトエート）塩］などの薬理的に許容可能なアニオンを含む塩を形成する酸である。
【０１２５】
薬学的に許容可能な塩基付加塩も薬学的に許容可能な塩形態の本開示による化合物または誘導体を作製するために用いられ得る。もともと酸性である本化合物の薬学的に許容可能な塩基塩を調製するための試薬として使用され得る化学塩基は、そのような化合物と無毒の塩基塩を形成する塩基である。そのような無毒の塩基塩には、とくにたとえばアルカリ金属カチオン（例えば、カリウムおよびナトリウム）およびアルカリ土類金属カチオン（例えば、カルシウム、亜鉛、およびマグネシウム）などの薬学的に許容可能なカチオン、たとえばＮ−メチルグルカミン−（メグルミン）などのアンモニウムまたは水溶性アミン付加塩、および低級アルカノールアンモニウム、ならびに薬学的に許容可能な有機アミンの他の塩基塩に由来するものが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１２６】
本明細書に記載される化合物は、本開示に従うと、経口経路、非経口経路、または局所経路によって単回用量または分割用量で投与されてよい。その活性化合物の投与は連続的投与（静脈持続注入）から１日に数回の（例えば１日に４回の）経口投与まで変化してよく、それには数ある投与経路の中でも経口投与、局所投与、非経口投与、筋肉内投与、静脈内投与、皮下投与、経皮投与（透過性増強剤が含まれ得る）、バッカル投与、舌下投与、および坐剤投与が含まれ得る。経口投与経路からの本化合物の生物学的利用率を向上させるために腸溶性コーティング経口錠剤を使用してもよい。最も有効な剤型は、選択した特定の剤（複数含む）の薬物動態ならびに患者の疾患の重症度に依存する。鼻内投与、気管内投与、または肺内投与のためのスプレー剤、ミスト剤、またはエアロゾル剤としての本開示の化合物の投与を用いてもよい。したがって、本開示は所望により薬学的に許容可能な担体、添加物、または賦形剤と組み合わせて本明細書に記載される化合物の有効量を含む医薬組成物にも関する。本開示の化合物は、即時放出、中間型放出、または持続性放出もしくは制御放出の形態で投与されてもよい。持続または制御放出剤形は経口投与されることが好ましいが、坐剤および経皮または他の局所剤形でも投与される。化合物の放出を注射部位において制御する、または持続させるためにリポソーム剤形での筋肉内注射を用いてもよい。
【０１２７】
本明細書に記載される組成物は１つ以上の薬学的に許容可能な担体を使用して従来的に製剤されてよく、制御放出製剤として投与されてもよい。これらの医薬組成物に使用され得る薬学的に許容可能な担体としては、ジメチルスルホキシド（DMSO）、担体としての大豆油、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、たとえばヒト血清アルブミンなどの血清タンパク質、たとえばリン酸塩などの緩衝性物質、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物性脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、たとえば硫酸プロラミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩などの塩または電解質、コロイド状シリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロース系物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン−ポリオキシプロピレン−ブロックポリマー、ポリエチレングリコール、および羊毛脂が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１２８】
本明細書に記載される組成物は経口投与により、非経口投与により、吸入スプレーによる投与により、局所投与により、直腸投与により、鼻噴投与により、バッカル投与により、膣内投与により、または埋め込み式リザーバーを介して投与され得る。本明細書において使用される「非経口」という用語には皮下、静脈内、筋肉内、関節内、関節滑液嚢内、胸骨内、髄腔内、肝臓内、傷害内、および頭蓋内の注射または点滴技術が含まれる。本組成物は経口投与、腹腔内投与、または静脈内投与により投与されることが好ましい。
【０１２９】
本明細書に記載される組成物の無菌注射剤形は水性懸濁液でも油性懸濁液でもよい。これらの懸濁液は、適切な分散剤または湿潤剤および懸濁剤を使用して当技術分野において知られている技術に従って製剤され得る。その無菌注射調製物は無毒で非経口的に許容可能な希釈剤または溶媒の中の、例えば１，３−ブタンジオール中の溶液としての無菌注射溶液または懸濁液であってもよい。許容可能なベヒクルおよび溶媒の中でも水、リンゲル液および等張塩化ナトリウム溶液が使用可能である。さらに、無菌不揮発性油が溶媒または懸濁媒体として従来的に使用される。この目的のため、合成モノまたはジ−グリセリドを含むあらゆるブランドの不揮発性油を使用してもよい。オレイン酸およびそのグリセリド誘導体などの脂肪酸は、注射物質の調製に有用であり、オリーブ油、ひまし油または大豆油などの天然の薬学的に許容可能な油、特にそれらのポリオキシエチル化型がある。これらの油性溶液または懸濁液はスイス薬局方または類似のアルコールなどの長鎖アルコール希釈剤または分散剤を含有してもよい。
【０１３０】
本明細書に記載される医薬組成物は、限定されないが、カプセル剤、錠剤、水性懸濁剤、または水剤を含むあらゆる経口的に許容可能な剤形で経口投与され得る。経口使用向けの錠剤の場合、一般的に使用される担体にはラクトースおよびコーンスターチが含まれる。ステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤も一般的に添加される。カプセル剤形での経口投与ために有用な希釈剤にはラクトースおよび乾燥コーンスターチが含まれる。水性懸濁剤が経口使用に要求される場合、その活性成分は乳化剤および懸濁剤と混合される。希望に応じてある特定の甘味剤、芳香剤、または着色剤を添加してもよい。
【０１３１】
あるいは、本明細書に記載される医薬組成物は直腸内投与向けの坐剤の形態で投与され得る。これらは、室温では固体であるが、直腸温度では液体であり、したがって、直腸内で融解してその薬品を放出する適切な非刺激性賦形剤とその薬剤を混合することにより調製され得る。そのような材料にはココアバター、ミツロウ、およびポリエチレングリコールが含まれる。
【０１３２】
本明細書に記載される医薬組成物は局所投与されてもよい。適切な局所製剤はこれらの領域または器官の各々に向けて容易に調製される。下部腸管への局所適用は直腸坐剤製剤（上を参照）または適切な直腸投与製剤で達成され得る。局所的に許容可能な経皮パッチを使用してもよい。
【０１３３】
局所適用のために本医薬組成物は、１つ以上の担体中に懸濁または溶解された活性成分を含有する適切な軟膏に製剤され得る。本発明の化合物の局所投与用担体としては、鉱物油、流動ワセリン、DMSO、白色ワセリン、プロピレングリコール、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン化合物、乳化ワックス、および水が挙げられるが、これらに限定されない。本発明のある特定の好ましい態様において、本化合物は、患者内のステントに閉塞が起こる可能性を阻害する、または減少させるために患者に外科的に移植される予定のステント上に被覆されてよい。
【０１３４】
あるいは、本医薬組成物は、１つ以上の薬学的に許容可能な担体中に懸濁または溶解された活性成分を含有する適切なローションまたはクリームに製剤され得る。適切な担体には鉱物油、ソルビタンモノステアレート、ポリソルベート６０、セチルエステルワックス、セテアリルアルコール、２−オクチルドデカノール、ベンジルアルコール、および水が含まれるが、これらに限定されない。
【０１３５】
眼科使用に関して本医薬組成物は、塩化ベンジルアルコニウムなどの保存料を含むか、または含まない等張性のｐＨ調節済み無菌生理食塩水中の微粒子懸濁剤として、または好ましくは等張性のｐＨ調節済み無菌生理食塩水中の水剤として製剤され得る。あるいは、眼科使用のため、本医薬組成物はワセリンなどの軟膏状に製剤され得る。
【０１３６】
本明細書に記載される医薬組成物は鼻エアロゾルまたは吸入によって投与されてもよい。かかる組成物は、医薬製剤に関連する本明細書に解説される技術に従い調製され、それらはベンジルアルコールまたは他の適切な保存料、生体利用効率を向上させるための吸収促進剤、フルオロカーボン、および／または他の従来の可溶化剤もしくは分散剤を使用して生理食塩中の溶液として調製され得る。ある実施形態において、本記載は、ETBRアンタゴニストまたはカスパーゼ-8阻害剤またはそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つの有効量（たとえば相乗的有効量）、および／またはETARアンタゴニスト、抗PD1抗体、bRAF阻害剤、ナイアシンアミド、もしくはそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つの有効量（たとえば相乗的有効量）を含むリポソームを含有する製剤を提供するものであり、当該リポソーム製剤は、鼻内送達用または舌下送達用に構成され、または調節される。さらなる実施形態において、リポソームはさらに上記に記載される追加的抗癌剤を含有する。
【０１３７】
単一の剤形を作製するために担体材料と混合され得る本明細書に記載される医薬組成物中の化合物の量は治療を受ける宿主および疾患、特定の投与モードに応じて変化する。好ましくはそれらの組成物は、約0.05ミリグラム〜約750ミリグラムまたはそれ以上、より好ましくは約1ミリグラム〜約600ミリグラムの間、およびさらにより好ましくは約10ミリグラム〜約500ミリグラムの活性成分を単独で、または本発明に従う少なくとも１つの他の化合物と組み合わされて含有するよう製剤化されなければならない。
【０１３８】
どの特定の患者向けの特定の投与量および治療計画も、使用される特定の化合物の活性、年齢、体重、一般健康状態、性別、食事、投与時間、排泄率、薬品の組合せ、および治療担当医の判断、および治療を受けている特定の疾患または病気の重症度を含む様々な因子に左右されることも理解する必要がある。
【０１３９】
本明細書に記載される方法による化合物を使用する治療を必要とする患者または対象は、所望により薬学的に許容可能な担体または希釈剤中の本発明による化合物の薬学的に許容可能な塩、溶媒和化合物、または多形体を含むその化合物の有効量を単独で、または本明細書において別途特定される他の公知の赤血球生成刺激剤と組み合わせてその患者（対象）に投与することにより治療され得る。
【０１４０】
これらの化合物は、液体剤形、クリーム剤形、ゲル剤形、または固体剤形で、またはエアロゾル剤形によりあらゆる適切な経路で、例えば、経口投与により、非経口投与により、静脈内投与により、皮内投与により、皮下投与により、または経皮投与を含む局所投与により投与され得る。
【０１４１】
本活性化合物は、治療を受ける患者に重篤な毒性効果を引き起こさずに所望の適応症の治療有効量をその患者に送達するために充分な量で薬学的に許容可能な担体または希釈剤に含まれる。本明細書において言及された病状の全てのための本活性化合物の好ましい用量は約10ng/kg〜300mg/kg、好ましくは一日当たり0.1〜100mg/kg、より一般的には一日に受容者／患者の体重１キログラム当たり0.5〜約25mgの範囲にある。典型的な局所投与量は適切な担体中に0.01〜5%（重量／重量）までの範囲になる。
【０１４２】
本化合物は、限定されないが、単位剤形当たり1mg未満、1mg〜3000mg、好ましくは5〜500mgの活性成分を含有する単位剤形を含む、任意の適切な単位剤形で簡便に投与される。約25〜250mgの経口投与量が多くの場合に利用しやすい。
【０１４３】
本活性成分は、活性化合物のピーク血漿濃度が約0.00001〜30mM、好ましくは約0.1〜30μＭを達成するように投与されることが好ましい。これは、例えば、所望により生理食塩水または水性媒体中の本活性成分の溶液または製剤の静脈内注射によるか、またはその活性成分のボーラスとして投与されて達成され得る。経口投与は活性薬剤の血漿濃度を有効にするためにも適切である。
【０１４４】
薬品組成物中の活性化合物の濃度は、その薬品の吸収、分布、不活化、および排出速度、ならびに当分野の当業者に公知の他の因子に依存する 投与量の値も緩和される症状の重症度によって変化することに留意されたい。あらゆる特定の対象にとって、個々の要求と本組成物を投与する、またはその投与を監督する専門家による判断によって経時的に特定の投与計画を調節する必要があること、および本明細書において示される濃度範囲は例示だけを目的としており、本請求の組成物の範囲または実施を限定することを意図していないことがさらに理解される必要がある。本活性成分は一度に投与されてもよく、または多数のより小さい用量に分割して様々な投与間隔で投与されてもよい。
【０１４５】
経口組成物は概ね不活性希釈剤または食用担体を含むことになる。それらはゼラチンカプセルに封入されても錠剤に圧縮されてもよい。経口治療投与の目的のため、本活性化合物またはそのプロドラッグ誘導体を賦形剤と混合し、錠剤、トローチ剤、またはカプセル剤の形態で使用することができる。薬学的に適合可能な結合剤および／またはアジュバント材を本組成物の一部として含めることができる。
【０１４６】
その錠剤、丸剤、カプセル剤、トローチ剤等は次の成分、または類似の性質を持つ化合物のうちのいずれかを含有することができる：ミクロクリスタリンセルロース、トラガカントガム、またはゼラチンなどの結合剤；デンプンまたはラクトースなどの賦形剤；アルギン酸、プリモゲル、またはコーンスターチなどの分散剤；ステアリン酸マグネシウムまたはステローテなどの滑沢剤；コロイド状二酸化ケイ素などの滑剤；ショ糖またはサッカリンなどの甘味剤；またはペパーミント、サリチル酸メチル、またはオレンジ香料などの芳香剤。投薬単位剤形がカプセルであるとき、それは上記の種類の物質に加えて脂肪油などの液体担体を含有することができる。さらに、投薬単位剤形はその投薬単位の物理的形態を改変する様々な他の材料、例えば、糖衣、シェラック、または腸溶剤を含有することができる。
【０１４７】
本活性化合物または薬学的に許容可能なその塩はエリキシル剤、懸濁剤、シロップ剤、ウェハー剤、チューインガム剤などの成分として投与され得る。シロップ剤は本活性化合物に加えて甘味剤としてのショ糖およびある特定の保存料、色素、および着色剤と芳香剤を含有してよい。
【０１４８】
非経口適用、皮内適用、皮下適用、または局所適用のために使用される水剤または懸濁剤は、以下の構成要素を含んでもよい：たとえば注射用水、生理食塩水溶液、不揮発性油（たとえば大豆油）、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、または他の合成溶媒などの無菌希釈剤；たとえばベンジルアルコールまたはメチルパラベンなどの抗細菌剤；たとえばアスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウムなどの抗酸化剤；たとえばエチレンジアミンテトラ酢酸などのキレート剤；たとえば酢酸塩、クエン酸塩、またはリン酸塩などの緩衝剤、およびたとえば塩化ナトリウムまたはブドウ糖などの等張性調節剤。非経口調製物はガラス製またはプラスチック製のアンプル、使い捨て注射器、または複数投与用バイアルに封入され得る。
【０１４９】
静脈内投与される場合、好ましい担体は生理食塩水またはリン酸緩衝生理食塩水（PBS）である。
【０１５０】
ある実施形態において、リポソームは、治療用組成物または製剤の制御放出が効果を発揮するように構成される。ある実施形態において、リポソームは、治療用組成物または製剤の急速放出が効果を発揮するように構成される。他の実施形態において、リポソームは、治療用組成物または製剤の持続放出が効果を発揮するように構成され、または製剤化される。さらに追加的実施形態において、リポソームは、治療用組成物または製剤の急速放出と持続放出の両方が発生するように構成される。
【０１５１】
ある実施形態において、リポソームは、ETBRアンタゴニストまたはカスパーゼ-8阻害剤またはそれらの組み合わせの制御放出が効果を発揮するように構成される。ある実施形態において、リポソームは、ETBRアンタゴニストまたはカスパーゼ-8阻害剤またはそれらの組み合わせの急速放出が効果を発揮するように構成される。他の実施形態において、リポソームは、ETBRアンタゴニストまたはカスパーゼ-8阻害剤またはそれらの組み合わせの持続放出が効果を発揮するように構成され、または製剤化される。さらに追加的実施形態において、リポソームは、ETBRアンタゴニストまたはカスパーゼ-8阻害剤またはそれらの組み合わせの急速放出と持続放出の両方が発生するように構成される。
【０１５２】
追加的実施形態において、本記載は、ETBRアンタゴニスト（たとえば、BQ788、BQ-017、A192621、それらの重水素化アナログもしくはフッ素化アナログ、またはそれらの組み合わせ）、およびETARアンタゴニスト（たとえばBQ123）の均一分散物を生体適合性送達システム中に含有する、制御放出型の皮下または筋肉内の投与製剤を提供するものであり、それにより投与後、ETBRアンタゴニストとETARアンタゴニストは、製剤から全身循環へゆっくりと、および同時に放出される。
【０１５３】
ある実施形態において、制御放出送達システムの組成物は、生体適合性ポリマーを含有する。ある実施形態において、活性化合物は、身体からの急速な排出から化合物を防御する、移植物、ヒドロゲル、温度感受性ヒドロゲル、およびマイクロカプセル化送達システムを含むたとえば制御放出性製剤などの担体とともに調製される。たとえばエチレンビニル酢酸塩、アクリル酸塩、ポリカルボン酸、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸などの生分解性で生体適合性のポリマーを使用してもよい。
【０１５４】
ある実施形態において、本明細書に記載される治療用組成物は、ポリ（ラクチド）、ポリ（グリコリド）、ポリ（ラクチド-コ-グリコリド）、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリ（乳酸-コ-グリコール酸）、ポリカプロラクトン、ポリカーボネート、ポリエステルアミド、ポリ無水物、ポリ（アミノ酸）、ポリオルトエステル、ポリシアノアクリル酸塩、ポリ（p-ジオキサノン）、ポリ（シュウ酸アルキレン）、生分解性ポリウレタン、それらの混合物およびコポリマーからなる群から選択される生体適合性ポリマーを備える制御放出送達システム内で製剤化される。
【０１５５】
リポソーム懸濁系も薬学的に許容可能な担体であり得る。これらは当分野の当業者に公知の方法、例えば、米国特許第4,522,811号明細書（その全体が参照により本明細書に援用される）に記載される方法に従い、調製され得る。例えば、リポソーム製剤は、適切な脂質（ステアロイルホスファチジルエタノールアミン、ステアロイルホスファチジルコリン、アラカドイルホスファチジルコリン、およびコレステロールなど）を無機溶媒に溶解し、次にその無機溶媒を蒸発させ、容器の表面に乾燥した脂質の薄膜を残すことにより調製され得る。次に本活性化合物の水性溶液をその容器に導入する。次にその容器を手でぐるぐる回してその容器の側面から脂質材料を解放し、脂質凝集物を分散し、それによりリポソーム懸濁系を形成する。
【０１５６】
本明細書に記載される態様または実施形態のいずれかにおいて、治療用組成物または製剤は、ETBRアンタゴニストまたはカスパーゼ-8阻害剤またはそれらの組み合わせを含有し、およびETARアンタゴニスト、抗PD1抗体、bRAF阻害剤、ナイアシンアミドまたはそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つの有効量を含有する内部容積を有する、リポソームを含有する。ある実施形態において、リポソームは、中性脂質、塩基性（正味の正電荷を有する）脂質、酸性（正味の負電荷を有する）脂質、コレステロール、またはそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つを含有する。ある追加的実施形態において、リポソームはさらにポリマー成分を含有する。ある実施形態において、リポソームの内部容積は、少なくとも部分的に水性であり、およびETBRアンタゴニストを含有する。
【０１５７】
ある実施形態において、本記載は、ジパルミトイルPE（DPPE）などのホスファチジルエタノールアミン（PE）、およびたとえば卵PC（EPC）またはSPCなどの部分不飽和ホスファチジルコリン（PC）、たとえばHSPCなどの完全不飽和PC、PG、ホスファチジルセリン（PS）、およびホスファチジルイノシトール（PI）からなる群から選択されるリポソーム送達システム内で本明細書に記載される治療用組成物を提供する。１つの好ましいリン脂質は、部分不飽和PG、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（DPPG）、コレステロール、DSPE-PEG2000である。ある実施形態において、リポソーム送達システムは、急速放出、持続放出、急速および持続放出、遅延放出、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される制御放出システムである。ある実施形態において、送達システムは、LyoCell（登録商標）である。
【０１５８】
さらに追加的実施形態において、本明細書に記載される治療用組成物は、トリグリセリド（Compritol 888 ATOおよびDynasan 112）、カルナバワックス、ミツロウ、セチルアルコール、乳化ワックス、コレステロール、酪酸コレステロール、およびポリ（エチレン）グリコール（PEG）誘導体、ならびにそれらの組み合わせからなる群から選択される固体脂質ナノ粒子調製物中に製剤化される。
【０１５９】
さらなる実施形態において、本記載は、ETBRアンタゴニスト、カスパーゼ-8阻害剤、またはそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つの有効量と、ETARアンタゴニスト、抗PD-1抗体、ｂRAF阻害剤、ナイアシンアミド、またはそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つの有効量を併用して含有し、および薬学的に許容可能な担体を含有する治療用組成物および製剤を提供する。ある実施形態において、ETARアンタゴニスト、抗PD1抗体、bRAF阻害剤、ナイアシンアミド、および／またはそれらの組み合わせの有効量は、相乗的有効量である。特定の実施形態において、治療用組成物または製剤はさらに、上記に記載される追加的抗癌剤のうちの少なくとも１つの有効量を含有する。
【０１６０】
本明細書に記載される実施形態または態様のいずれかにおいて、抗PD-1抗体は、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ピジリズマブ、または当分野の当業者に公知の、もしくは当分野の当業者に公知となる任意の他の抗PD-1抗体からなる群から選択される少なくとも１つの剤である。
【０１６１】
さらに別の態様において、本記載は、ETBRアンタゴニスト、カスパーゼ-8阻害剤、またはそれらの組み合わせの有効量と、bRAF阻害剤の有効量を併用して含有し、および薬学的に許容可能な担体を含有する治療用組成物または製剤を提供する。ある実施形態において、bRAF阻害剤の有効量は、相乗的有効量である。特定の実施形態において、治療用組成物または製剤はさらに、追加的ETBRアンタゴニスト、ETARアンタゴニスト、抗PD-1抗体、またはそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つの有効量を含有する。
【０１６２】
本明細書に記載される実施形態または態様のいずれかにおいて、bRAF阻害剤は、ダブラフェニブ、ソラフェニブ、ベムラフェニブ、または当分野の当業者に公知の、もしくは当分野の当業者に公知となる任意の他のnRAF阻害剤からなる群から選択される少なくとも１つの剤である。
【０１６３】
さらなる態様において、制御放出用の皮下または筋肉内の投与製剤が提供される。製剤は、以下を含む活性成分の均一分散物を含有する：ETBRアンタゴニストまたはカスパーゼ-8阻害剤またはそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つ；および生体適合性送達システム中のETARアンタゴニスト、抗PD1抗体、bRAF阻害剤、ナイアシンアミド、またはそれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つの追加的剤の相乗的量であって、投与後、ETBRアンタゴニストと追加的剤は、製剤から全身循環へとゆっくりと、および同時に放出される。
【０１６４】
本明細書に記載される態様または実施形態のいずれかにおいて、以下の内の少なくとも１つ：（１）抗PD1抗体は、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ピジリズマブ、または当分野の当業者に公知の、もしくは当分野の当業者に公知となる任意の他の抗PD1抗体からなる群から選択される少なくとも１つの剤である；（２）bRAF阻害剤は、ダブラフェニブ、ソラフェニブ、ベムラフェニブ、または当分野の当業者に公知の、もしくは当分野の当業者に公知となる任意の他のbRAF阻害剤からなる群から選択される少なくとも１つの剤である；（３）ETBRアンタゴニストは、BQ788、BQ-017、A192621、それらの重水素化アナログもしくはフッ素化アナログ、またはそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つである；（４）ETARアンタゴニストは、BQ123である；または（５）カスパーゼ-8阻害剤は、配列Ac-AAVALLPAVLLAALAPIETD-CHOを有するペプチドである。
【０１６５】
本明細書に記載される態様または実施形態のいずれかにおいて、送達システムは、以下からなる群から選択される：（１）生体適合性ポリマー、（２）リポソーム調製物、（３）DMSO溶液、（４）LyoCell（登録商標）、および（５）固体脂質ナノ粒子調製物。
【０１６６】
本明細書に記載される態様または実施形態のいずれかにおいて、生体適合性ポリマーは、ポリ（ラクチド）、ポリ（グリコリド）、ポリ（ラクチド-コ-グリコリド）、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリ（乳酸-コ-グリコール酸）、ポリカプロラクトン、ポリカーボネート、ポリエステルアミド、ポリ無水物、ポリ（アミノ酸）、ポリオルトエステル、ポリシアノアクリル酸、ポリ（p-ジオキサノン）、ポリ（シュウ酸アルキレン）、生分解性ポリウレタン、それらの混合物およびコポリマーからなる群から選択される。
【０１６７】
本明細書に記載される態様または実施形態のいずれかにおいて、リポソーム調製物は、例えばジパルミトイルPE（DPPE）などのホスファチジルエタノールアミン（PE）、およびたとえば卵PC（EPC）またはSPCなどの部分不飽和ホスファチジルコリン（PC）、たとえばHSPCなどの完全不飽和PC、PG、ホスファチジルセリン（PS）、およびホスファチジルイノシトール（PI）、部分不飽和PG、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（DPPG）、コレステロール、DSPE-PEG2000からなる群から選択される。
【０１６８】
本明細書に記載される態様または実施形態のいずれかにおいて、固体脂質ナノ粒子調製物は、トリグリセリド（Compritol 888 ATOおよびDynasan 112）、カルナバワックス、ミツロウ、セチルアルコール、乳化ワックス、コレステロール、酪酸コレステロール、およびポリ（エチレン）グリコール（PEG）誘導体からなる群から選択される。
治療方法
【０１６９】
たとえばET-1およびET-3などのエンドセリンによるETBRの活性化は、様々な分子事象を発生させ、それにより黒色腫の浸潤と転移が促進される。黒色腫の多くがETBRを発現している一方で、これらのサブセットはETBRアクチベーターのET-1および／またはET-3も発現している。それゆえこのサブセットはおそらく生存能力、浸潤性および転移性に関し、ETBRの活性化に依存している。したがって、このサブセットの患者はおそらく、ETBR阻害に対し応答性である。さらにこのサブセットの患者は、免疫系の療法に反応する可能性が最も低い。そのため、本開示は、ETBR阻害剤（たとえば、BQ788、BQ-017、A192621、それらの重水素化アナログもしくはフッ素化アナログ、またはそれらの組み合わせ）および／またはカスパーゼ-8阻害剤および／またはETAR阻害剤（たとえばBQ123）の投与に関するコンパニオン診断としての、ET-1および／またはET-3の発現のスクリーニング検査の使用に関する。
【０１７０】
したがって、さらに別の態様において、本記載は、例えば、ヒトなどの動物などの対象または患者において疾患、障害、またはその症状を治療または改善するための方法を提供するものであり、当該方法は、本明細書に記載される治療用組成物または製剤の有効量、例えば、治療有効量または相乗的有効量を、その必要のある対象に投与することを含み、ここで当該組成物は、当該対象の疾患または障害またはその症状の治療または改善に有効である。ある実施形態において、疾患または障害は、ETBR関連癌、または免疫系療法に非反応性の癌である。さらに追加的実施形態において、ETBR関連癌は、乳癌、黒色腫、扁平上皮細胞癌、グリア芽腫、またはそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つである。本明細書に記載される態様または実施形態のいずれかにおいて、免疫系療法は、免疫チェックポイント阻害剤（たとえば抗PD-1抗体）、癌ワクチン、およびキメラ抗原受容体T細胞（CAR-T）療法からなる群から選択される。
【０１７１】
ある実施形態において、本記載は、患者において黒色腫の浸潤および転移を阻害する方法を提供するものであり、当該方法は、本明細書に記載される治療用組成物または製剤の有効量、たとえば治療有効量または相乗的有効量をその必要のある対象に投与することを含み、この場合において当該組成物は、黒色腫の浸潤と転移の阻害に有効である。
【０１７２】
ある実施形態において、本記載は、黒色腫細胞に死（アポトーシス）を誘導する方法を提供するものであり、当該方法は、本明細書に記載される治療用組成物または製剤の有効量、たとえば治療有効量または相乗的有効量をその必要のある対象に投与することを含み、この場合において当該組成物は、黒色腫細胞に死を誘導することに関して有効である。
【０１７３】
ある実施形態において、本記載は、患者において黒色腫への血液供給を阻害する方法を提供するものであり、当該方法は、本明細書に記載される治療用組成物または製剤の有効量、たとえば治療有効量または相乗的有効量をその必要のある対象に投与することを含み、この場合において当該組成物は、黒色腫への血液供給の阻害に有効である。
【０１７４】
ある実施形態において、本記載は、ETBR関連転移性脳腫瘍を含むETBR関連癌の治療方法を提供するものであり、当該方法は、本明細書に記載されるリポソーム製剤を含む、本明細書に記載される治療用組成物または製剤の有効量（たとえば治療有効量または相乗的有効量）をその必要のある対象に鼻内投与することを含み、この場合において当該組成物または製剤は、ETBR関連転移性脳腫瘍の治療に有効である。ある実施形態において、ETBR関連転移性脳腫瘍は、転移性黒色腫脳腫瘍、転移性扁平上皮細胞癌、転移性乳癌、グリア芽腫、またはそれらの組み合わせである。
【０１７５】
ある実施形態において、本記載は、患者において黒色腫脳転移を治療する方法を提供するものであり、当該方法は、本明細書に記載される治療用組成物または製剤の有効量、たとえば治療有効量または相乗的有効量をその必要のある対象に投与することを含み、この場合において当該組成物は、黒色腫脳転移の治療に有効である。
【０１７６】
「治療する」、「治療すること」、および「治療」等の用語は、本明細書において使用される場合、本化合物が結合するタンパク質を介して調節されるあらゆる疾患状態または病状の治療を含む、本化合物を投与する場合があるその利益を患者に与えるあらゆる活動を指す。癌を含む疾患の状態または症状は、本開示に従う化合物を使用して治療され得、および本明細書において上記に解説されている。
【０１７７】
別の実施形態において、本開示は、タンパク質を介して調節される疾患の状態または症状に関し、その必要のあるヒト患者を治療する方法を目的としており、ここで当該患者の治療効果は、当該タンパク質の分解によって生じるものであり、当該方法は、本開示に従う組成物または製剤の有効量を、任意で別の生体活性剤と併用して、その必要のある患者に投与することを含む。その疾患状態または病状は、たとえばウイルス、細菌、真菌、原生動物もしくは他の微生物などの微生物因子または他の外来性因子によって引き起こされる疾患であってもよく、または疾患の状態および／もしくは病状をもたらすタンパク質の過剰発現ならびに／または発現不足によって引き起こされ得る疾患状態であってもよい。
【０１７８】
「疾患状態または病状」という用語は、タンパク質の異常調節（すなわち、患者において発現されるタンパク質の量が増加している）が起きており、且つ、患者での１つ以上のタンパク質の分解により必要とする患者に有益な治療または症状からの解放を与えることができるあらゆる疾患状態または病状を説明するために使用される。ある特定の例ではその疾患状態または病状は治癒可能である。
【０１７９】
「生体活性剤」という用語は、本開示に従う化合物以外の剤を記載するために使用され、生物活性を有する剤として本発明化合物と併用して使用され、本発明化合物の使用目的である意図された治療、抑制、および／または防止／予防の達成を支援する。本明細書において、使用に好ましい生体活性剤としては、本発明化合物の使用目的または投与目的である薬理学的活性と類似のものを有する剤が挙げられ、例えば、抗癌剤などが挙げられる。
【０１８０】
「追加の抗癌剤」という用語は癌治療のために本発明による化合物と組み合わせられる場合がある抗癌剤を説明するために使用される。これらの薬剤としては、例えば、エベロリムス、ナイアシンアミド、トラベクテジン、アブラキサン、ＴＬＫ２８６、ＡＶ−２９９、ＤＮ−１０１、パゾパニブ、ＧＳＫ６９０６９３、ＲＴＡ７４４、ＯＮ  ０９１０．Ｎａ、ＡＺＤ６２４４（ＡＲＲＹ−１４２８８６）、ＡＭＮ−１０７、ＴＫＩ−２５８、ＧＳＫ４６１３６４、ＡＺＤ１１５２、エンザスタウリン、バンデタニブ、ＡＲＱ−１９７、ＭＫ−０４５７、ＭＬＮ８０５４、ＰＨＡ−７３９３５８、Ｒ−７６３、ＡＴ−９２６３、ＦＬＴ−３阻害剤、ＶＥＧＦＲ阻害剤、ＥＧＦＲ  ＴＫ阻害剤、オーロラキナーゼ阻害剤、ＰＩＫ−１修飾因子、Ｂｃｌ−２阻害剤、ＨＤＡＣ阻害剤、ｃ−ＭＥＴ阻害剤、ＰＡＲＰ阻害剤、Ｃｄｋ阻害剤、ＥＧＦＲ  ＴＫ阻害剤、ＩＧＦＲ−ＴＫ阻害剤、抗ＨＧＦ抗体、ＰＩ３キナーゼ阻害剤、ＡＫＴ阻害剤、ｍＴＯＲＣ１／２阻害剤、ＪＡＫ／ＳＴＡＴ阻害剤、チェックポイント−１または２阻害剤、フォーカル・アドヒージョンキナーゼ阻害剤、Ｍａｐキナーゼキナーゼ（ｍｅｋ）阻害剤、ＶＥＧＦ  ｔｒａｐ抗体、ペメトレキセド、エルロチニブ、ダサチニブ、ニロチニブ、デカタニブ、パニツムマブ、アムルビシン、オレゴボマブ、Ｌｅｐ−ｅｔｕ、ノラトレキシド、ａｚｄ２１７１、バタブリン、オファツムマブ、ザノリムマブ、エドテカリン、テトランドリン、ルビテカン、テスミリフェン、オブリメルセン、チシリムマブ、イピリムマブ、ゴシポール、Ｂｉｏ１１１、１３１−Ｉ−ＴＭ−６０１、ＡＬＴ−１１０、ＢＩＯ１４０、ＣＣ８４９０、シレンギチド、ジャイマテカン、ＩＬ１３−ＰＥ３８ＱＱＲ、ＩＮＯ１００１、ＩＰｄＲ１ＫＲＸ−０４０２、ルカントン、ＬＹ３１７６１５、ノイラジアブ、ビテスパン、Ｒｔａ７４４、Ｓｄｘ１０２、タランパネル、アトラセンタン、Ｘｒ３１１、ロミデプシン、ＡＤＳ−１００３８０、スニチニブ、５−フルオロウラシル、ボリノスタット、エトポシド、ゲムシタビン、ドキソルビシン、リポソームドキソルビシン、５’−デオキシ−５−フルオロウリジン、ビンクリスチン、テモゾロミド、ＺＫ−３０４７０９、セリシクリブ；ＰＤ０３２５９０１、ＡＺＤ−６２４４、カペシタビン、Ｌ−グルタミン酸、Ｎ−［４−［２−（２−アミノ−４，７−ジヒドロ−４−オキソ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−イル）エチル］ベンゾイル］２ナトリウム塩７水和物、カンプトテシン、ＰＥＧ標識イリノテカン、タモキシフェン、クエン酸トレミフェン、アナストラゾール、エキセメスタン、レトロゾール、ＤＥＳ（ジエチルスチルベストロール）、エストラジオール、エストロゲン、結合型エストロゲン、ベバシズマブ、ＩＭＣ−１Ｃ１１、ＣＨＩＲ−２５８）；３−［５−（メチルスルホニルピペラジンメチル）−インドリル］−キノロン、バタラニブ、ＡＧ−０１３７３６、ＡＶＥ−０００５、ゴセレリン酢酸、ロイプロリド酢酸、パモ酸トリプトレリン、メドロキシプロゲステロン酢酸、カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン、メゲストロール酢酸、ラロキシフェン、ビカルタミド、フルタミド、ニルタミド、メゲストロール���酸、ＣＰ−７２４７１４；ＴＡＫ−１６５、ＨＫＩ−２７２、エルロチニブ、ラパタニブ、カネルチニブ、ＡＢＸ−ＥＧＦ抗体、エルビタックス、ＥＫＢ−５６９、ＰＫＩ−１６６、ＧＷ−５７２０１６、ロナファルニブ、ＢＭＳ−２１４６６２、ティピファルニブ；アミホスチン、ＮＶＰ−ＬＡＱ８２４、ヒドロキサミン酸サブエロイルアナリド、バルプロ酸、トリコスタチンＡ、ＦＫ−２２８、ＳＵ１１２４８、ソラフェニブ、ＫＲＮ９５１、アミノグルテチミド、アムサクリン、アナグレリド、Ｌ−アスパラギナーゼ、カルメット・ゲラン桿菌（ＢＣＧ）ワクチン、アドリアマイシン、ブレオマイシン、ブセレリン、ブスルファン、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブチル、シスプラチン、クラドリビン、クロドロネート、シプロテロン、シタラビン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ジエチルスチルベストロール、エピルビシン、フルダラビン、フルドロコルチゾン、フルオキシメステロン、フルタミド、グリベック、ゲムシタビン、ヒドロキシウレア、イダルビシン、イホスファミド、イマチニブ、ロイプロリド、レバミゾール、ロムスチン、メクロレタミン、メルファラン、６−メルカプトプリン、メスナ、メトトレキサート、マイトマイシン、ミトタン、ミトキサントロン、ニルタミド、オクトレオチド、オキサリプラチン、パミドロネート、ペントスタチン、プリカマイシン、ポルフィマー、プロカルバジン、ラルチトレキセド、リツキシマブ、ストレプトゾシン、テニポシド、テストステロン、サリドマイド、チオグアニン、チオテパ、トレチノイン、ビンデシン、１３−ｃｉｓ−レチノイン酸、フェニルアラニンマスタード、ウラシルマスタード、エストラムスチン、アルトレタミン、フロクスウリジン、５−デオキシウリジン、シトシンアラビノシド、６−メルカプトプリン、デオキシコホルマイシン、カルシトリオール、バルルビシン、ミトラマイシン、ビンブラスチン、ビノレルビン、トポテカン、ラゾキシン、マリマスタット、ＣＯＬ−３、ネオバスタット、ＢＭＳ−２７５２９１、スクワラミン、エンドスタチン、ＳＵ５４１６、ＳＵ６６６８、ＥＭＤ１２１９７４、インターロイキン−１２、ＩＭ８６２、アンギオスタチン、ビタキシン、ドロロキシフェン、イドキシフェン、スピロノラクトン、フィナステリド、シミチジン、トラスツズマブ、デニロイキンジフチトクス、ゲフィチニブ、ボルテジミブ、パクリタキセル、非クレモフォール含有パクリタキセル、ドセタキセル、エピチロンＢ、ＢＭＳ−２４７５５０、ＢＭＳ−３１０７０５、ドロロキシフェン、４−ヒドロキシタモキシフェン、ピペンドキシフェン、ＥＲＡ−９２３、アルゾキシフェン、フルベストラント、アコルビフェン、ラソフォキシフェン、イドキシフェン、ＴＳＥ−４２４、ＨＭＲ−３３３９、ＺＫ１８６６１９、トポテカン、ＰＴＫ７８７／ＺＫ２２２５８４、ＶＸ−７４５、ＰＤ１８４３５２、ラパマイシン、４０−Ｏ−（２−ヒドロキシエチル）−ラパマイシン、テムシロリムス、ＡＰ−２３５７３、ＲＡＤ００１、ＡＢＴ−５７８、ＢＣ−２１０、ＬＹ２９４００２、ＬＹ２９２２２３、ＬＹ２９２６９６、ＬＹ２９３６８４、ＬＹ２９３６４６、ウォルトマンニン、ＺＭ３３６３���２、Ｌ−７７９，４５０、ＰＥＧ−フィルグラスチム、ダルベポエチン、エリスロポエチン、顆粒球コロニー刺激因子、ゾレンドロネート、プレドニゾン、セツキシマブ、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、ヒストレリン、ペグ化インターフェロンα−２ａ、インターフェロンα−２ａ、ペグ化インターフェロンα−２ｂ、インターフェロンα−２ｂ、アザシチジン、ＰＥＧ−Ｌ−アスパラギナーゼ、レナリドミド、ゲムツズマブ、ヒドロコルチゾン、インターロイキン−１１、デクスラゾキサン、アレムツズマブ、全トランス型レチノイン酸、ケトコナゾール、インターロイキン−２、メゲストロール、免疫グロブリン、ナイトロジェンマスタード、メチルプレドニソロン、イブリツモマブチウキセタン、アンドロゲン類、デシタビン、ヘキサメチルメラミン、ベキサロテン、トシツモマブ、三酸化ヒ素、コルチゾン、エチドロン酸、ミトタン、サイクロスポリン、リポソームダウノルビシン、エドウィナ−アスパラギナーゼ、ストロンチウム８９、カソピタント、ネツピタント、ＮＫ−１受容体アンタゴニスト、パロノセトロン、アプレピタント、ジフェンヒドラミン、ヒドロキシジン、メトクロプラミド、ロラゼパム、アルプラゾラム、ハロペリドール、ドロペリドール、ドロナビノール、デキサメタゾン、メチルプレドニソロン、プロクロルペラジン、グラニセトロン、オンダンセトロン、ドラセトロン、トロピセトロン、ＰＥＧフィルグラスチム、エリスロポエチン、エポエチンα、ダルベポエチンα、およびそれらの混合物が挙げられる。
【０１８１】
「薬学的に許容可能な塩」という用語は、該当する場合は、本明細書に記載される化合物のうちの１つ以上の塩形態であって、それらの化合物の溶解および生物学的利用率を向上するために患者の胃腸管の胃酸中でその化合物の溶解性を高めるように提供されるものを説明するために本明細書を通して使用される。薬学的に許容可能な塩には薬学的に許容可能な無機または有機の塩基および酸に由来する塩が該当する場合に含まれる。適切な塩には、製薬分野においてよく知られている多数の酸および塩基の中でもカリウムおよびナトリウムなどのアルカリ金属に由来する塩、カルシウム、マグネシウムおよびアンモニウム塩などのアルカリ土類金属に由来する塩が含まれる。ナトリウム塩およびカリウム塩は本発明によるホスフェートの中和塩として特に好ましい。
【０１８２】
「薬学的に許容可能な誘導体」という用語は、患者に投与されると本化合物または本化合物の活性代謝物を直接的または間接的に提供するあらゆる薬学的に許容可能なプロドラッグ形態（エステル、アミド、他のプロドラッググループなど）を説明するために本明細書を通して使用される。
【０１８３】
「治療有効量」という用語は、かかる治療の必要のある哺乳類に投与された場合に本明細書に定義される治療効果を発揮するために充分な量を指す。治療有効量は、治療される対象および疾患状態、苦痛の重症度、および投与様式に応じて変化し、当分野の当業者により日常的に決定することができる。
【０１８４】
本発明の治療用組成物は、約1％〜約95％の活性成分を含有し、単回投与剤型は好ましくは約20％〜約90％の活性成分を含有し、単回投与ではない投与剤型は、好ましくは約5％〜約20％の活性成分を含有する。単位剤型はたとえばコーティングされた錠剤、錠剤、アンプル、バイアル、座薬またはカプセルなどである。他の投与剤型はたとえば軟膏、クリーム、ペースト、泡状物質、チンキ剤、リップスティック、ドロップ、スプレー、分散剤などである。例は、約0.05g〜約1.0gの活性成分を含有するカプセルである。
【０１８５】
本活性化合物は、治療を受ける患者に重篤な毒性効果を引き起こさずに所望の適応症の治療有効量をその患者に送達するために充分な量で薬学的に許容可能な担体または希釈剤に含まれる。本明細書において言及された病状の全てのための本活性化合物の好ましい用量は約10ng/kg〜300mg/kg、好ましくは一日当たり0.1〜100mg/kg、より一般的には一日に受容者／患者の体重１キログラム当たり0.5〜約25mgの範囲にある。典型的な局所投与量は適切な担体中に0.01〜5%（重量／重量）までの範囲になる。本化合物は、限定されないが、単位剤形当たり1mg未満、1mg〜3000mg、好ましくは5〜500mgの活性成分を含有するものを含む任意の適切な単位剤形で簡便に投与される。約25〜250ｍｇの経口投与量が多くの場合に利用しやすい。本活性成分は、約0.00001〜30mM、好ましくは約0.1〜30μMの活性化合物のピーク血漿濃度を達成するように投与されることが好ましい。
診断方法
【０１８６】
診断方法は、疾患の存在の有無に関する指標を提供する。本明細書において使用される場合、「診断する」などは、疾患、障害もしくは症状の兆候または症候などの少なくとも１つの指標の存在に基づいて、疾患、障害もしくは症状を有する対象を特定するための観察、検査、または状況に基づいて、対象の症状を臨床的に評価すること、または他の評価を行うことを指す。ある態様において、本開示方法を使用した診断は、疾患、障害または症状の複数の指標に関し、本明細書に提供される方法と併せて対象を観察することを含む。
【０１８７】
本明細書において使用される場合、「サンプル」とは、その環境から単離された、たとえばタンパク質、検体、核酸などの対象の診断標的を含有することが推測される、または含有することが知られている生物物質（たとえば動物からの血液もしくは組織、細胞、または組織培養からの馴化培地）を指す。またサンプルは、組織または体液（たとえば血清または血漿など）の部分精製画分であってもよい。基準サンプルまたは対照サンプルは、対象もしくは同一対象由来の液体または組織を含む、疾患または症状を有していないドナー由来のサンプルであってもよい。基準サンプルまたは対照サンプルは、未治療ドナー由来であってもよく、または活性剤で処置されていない（たとえば無処置またはビヒクルのみ投与された）細胞培養物由来であってもよい。基準サンプルまたは対照サンプルは、細胞または対象が、検証される剤または治療介入と接触する前の時点で、またはプロスペクティブ試験の開始時に採取されてもよい。
【０１８８】
別の態様において、本記載は、a)対象から生物サンプルを取得する工程；b)ET-1の核酸またはポリペプチドを検出することができる剤（たとえば、核酸系プローブまたは抗体またはそれらの断片）および／またはET-3の核酸またはポリペプチドを検出することができる剤（たとえば核酸系プローブまたは抗体またはそれらの断片）と、サンプルを接触させる工程；c)サンプル中のET-1および／またはET-3に対する剤の結合を検出する工程；およびd)ET-1に結合した剤の量および／またはET-3に結合した剤の量と、対照を比較する工程であって、この場合においてET-1および／またはET-3の増大は、ETBR関連癌を有する対象の指標であり、それによって、ETBR関連癌を有するとして対象を診断する工程、を含む、個体中のETBR関連癌を診断する方法を提供する。本明細書に記載される態様または実施形態のいずれかにおいて、当該方法はさらに、e)本明細書に記載される治療用組成物／製剤を投与する工程を含んでもよい。
【０１８９】
追加的態様において、本記載は、a)対象から生物サンプルを取得する工程；b)ET-1の核酸またはポリペプチドを検出することができる剤（たとえば、核酸系プローブまたは抗体またはそれらの断片）および／またはET-3の核酸またはポリペプチドを検出することができる剤（たとえば核酸系プローブまたは抗体またはそれらの断片）と、サンプルを接触させる工程；c)サンプル中のET-1および／またはET-3に対する剤の結合を検出する工程；d)対象からのET-1および／またはET-3に結合した剤の量と、対照を比較する工程であって、この場合においてET-1および／またはET-3の増大は、ETBR関連癌を有する対象の指標であり、それによって、ETBR関連癌を有するとして対象を診断する工程；およびe)本明細書に記載される治療用組成物を投与する工程、を含む、ETBR関連癌を有する対象に対し、適切な治療的処置を選択する方法を提供する。ある実施形態において、当該方法は、工程a)〜d)を反復する工程を含み、それによって、対象が処置に対し反応しているか否かを決定する工程を含む。
【０１９０】
追加的態様において、本記載は、a)ETBR関連癌を有すると診断された対象を提供する工程；b)癌治療のために治療剤を投与する工程；c)治療的処置後に当該患者からサンプルを取得する工程；d)ET-1の核酸またはポリペプチドを検出することができる剤、および／またはET-3の核酸またはポリペプチドを検出することができる剤と、サンプルを接触させる工程；e)サンプル中のET-1および／またはET-3に対する剤の結合を検出する工程；およびf)対象からのET-1および／またはET-3に結合した剤の量と、対照を比較する工程であって、それにより治療的処置応答を評価する工程であって、この場合においてET-1および／またはET-3のレベルの上昇は、治療的応答がほとんどないか、ないことの指標であり、ならびにET-1および／またはET-3のレベルの低下は、正の治療的応答の指標である工程、を含む、ETBR関連癌を有する対象における治療的処置応答をモニタリングする方法を提供する。
【０１９１】
ある実施形態において、診断方法は、治療剤を投与する追加的工程を含む。ある実施形態において、同量の治療剤が投与される。追加的実施形態において、より多い用量が投与される。さらに追加的実施形態において、当該方法は、治療的処置および／または治療計画の変更工程を含む。ある実施形態において、同量の治療剤が投与される。追加的実施形態において、より多い用量が投与される。さらに追加的実施形態において、当該方法は、治療的処置および／または治療計画の変更工程を含む。ある実施形態において、ETBR関連癌は、乳癌、黒色腫、扁平上皮細胞癌、グリア芽腫、またはそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つである。
【０１９２】
ある態様において、本記載は、エンドセリン受容体アンタゴニストに対する癌細胞の感受性を決定する方法を提供する。当該方法は、以下を含む：a)患者からの癌組織サンプルを提供する工程；b)当該組織サンプルを、ET-1に特異的に結合する抗体の存在下、および／またはET-3に特異的に結合する抗体の存在下でインキュベートする工程；およびc)ET-1および／またはET-3に結合した抗体量を検出する工程であって、ET-1および／またはET-3が癌中で活発に発現されている場合、当該癌は、エンドセリン受容体アンタゴニスト療法に対し感受性であること。
【０１９３】
ET-1および／またはET-3に結合した抗体量の検出は、検出可能な標識が結合した少なくとも１つの二次抗体を用いて行われてもよい。すなわち、検出可能な標識に結合した二次抗体は、ET-1に結合した抗体、ET-3に結合した抗体、またはET-1に結合する抗体とET-3に結合する抗体の両方に結合する。さらに、c)検出する工程の後に、さらなる工程のd)エンドセリン受容体アンタゴニスト、またはETBRシグナル伝達阻害剤（たとえばカスパーゼ-8阻害剤）の有効量を投与する工程を含んでもよい。たとえば本明細書に記載される治療用組成物／製剤を投与する工程。
【０１９４】
別の態様において、本記載は、エンドセリン受容体アンタゴニストに対する癌細胞の感受性を決定する方法を提供するものであり、当該方法は以下を含む：癌を有する患者由来の癌細胞に由来する組織サンプルを提供する工程、当該サンプルをホルマリンに固定し、パラフィン包埋し、ミクロトームを使用して切片を切り、および免疫組織化学法に適したガラススライドに切片を移す工程；ET-1の存在を検出する抗体および／またはET-3の存在を検出する抗体（たとえば抗ET-1抗体および抗ET-3抗体）、ET-1および／またはET-3に結合する抗体（複数含む）に結合し、および結合した抗体複合体の可視化が可能な分子に結合されている、少なくとも１つの二次抗体（たとえば抗ET-1抗体に指向する二次抗体と、抗ET-3抗体に指向する追加の二次抗体）の存在下でスライドをインキュベートし、それにより腫瘍中でET-1および／またはET-3が活発に発現されていることを決定し、それにより、エンドセリン受容体へのET-1とET-3の結合を阻害することで、治療効果が発揮されることを示唆する工程。
【０１９５】
さらなる態様におて、免疫系療法に対する癌細胞の感受性を決定する方法が提供され、当該方法は以下を含む：a)癌を有する患者からの癌細胞由来の組織サンプルを提供する工程；b)当該組織サンプルを、ET-1に結合する抗体の存在下、および／またはET-3に結合する抗体の存在下でインキュベートする工程；およびc)ET-1および／またはET-3に結合した抗体量を検出する工程であって、ET-1および／またはET-3が腫瘍中で活発に発現されている場合、それにより当該癌は、免疫系療法に対し反応性ではないことを示唆する工程。ET-1および／またはET-3に結合した抗体の量は、検出可能な標識が結合した少なくとも１つの二次抗体を用いて行われてもよい。すなわち、検出可能な標識に結合した二次抗体は、ET-1に結合した抗体、ET-3に結合した抗体、またはET-1に結合する抗体とET-3に結合する抗体の両方に結合する。さらに、c)検出工程の後のさらなる工程は、d)免疫系療法の有効量を投与する工程を含んでもよい。
【０１９６】
免疫系療法は、免疫チェックポイント阻害剤（たとえば抗PD-1抗体）、癌ワクチン、およびキメラ抗原受容体T細胞（CAR-T）療法からなる群から選択されてもよい。
【０１９７】
ある態様において、免疫系療法に対する癌細胞の感受性を決定する方法が提供される。当該方法は以下を含む：a)癌を有する患者からの癌細胞由来の組織サンプルを提供する工程；b)当該サンプルをホルマリン中に固定する工程；c)パラフィン包埋する工程；d)ミクロトームを用いて切片を切り、免疫組織化学法に適したガラススライドに切片を移す工程；e)ET-1の存在を検出する抗体および／またはET-3の存在を検出する抗体、ET-1および／またはET-3に結合する抗体に結合し、結合抗体複合体の可視化が可能な分子に結合されている少なくとも１つの追加の二次抗体の存在下でスライドをインキュベートし、それによりET-1および／またはET-3が腫瘍中で活発に発現されていることを決定し、それにより癌が、免疫系療法に対し反応性ではないことを示唆する工程。
【０１９８】
上述の態様において、たとえばET-1核酸またはタンパク質などの診断標的への核酸または抗体の結合の検出は、当分野に公知の任意の方法により分析されてもよい。複数の実施形態において、検出は、たとえばX線標識もしくは蛍光標識、または酵素反応などのレポーター系を使用した検出を含む。酵素反応は、たとえばルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ、またはベータ-ガラクトシダーゼなどの酵素により触媒されることができる。ある実施形態において、当該方法は、たとえば抗原-抗体複合体を固形基質に結合させることにより、抗体-抗原複合体をサンプルから単離する工程を含む。ある実施形態において、抗体-抗原複合体は溶液中で形成される。複数の実施形態において、アッセイは、免疫アッセイである。免疫アッセイとしては、限定されないが、たとえばルシフェラーゼ免疫沈降系（LIPS：luciferase immunoprecipitation systems）、BIAcore解析、蛍光活性化セルソーター（FACS：fluorescent-activated cell sorter）解析、免疫蛍光法、免疫細胞化学、ウェスタンブロット、放射免疫アッセイ、酵素結合免疫吸着アッセイ（ELISA：enzyme-linked immunosorbent assay）、「サンドイッチ」免疫アッセイ、免疫沈降アッセイ、沈降反応、ゲル拡散沈降素反応、免疫拡散アッセイ、凝集アッセイ、補体結合アッセイ、免疫放射定量アッセイ、蛍光免疫アッセイ、およびプロテインA免疫アッセイなどの技術を使用した競合アッセイ系または非競合アッセイ系が挙げられる。参照により本明細書に援用されるAusubel et al, eds, 1994, Current Protocols in Molecular Biology, Vol. 1, John Wiley & Sons, Inc., New Yorkを参照のこと。
【０１９９】
免疫蛍光アッセイ、ウェスタンブロット、およびELISAをはじめとする様々な免疫アッセイを使用してタンパク質が検出されている。(Bacon, et al., 2003. J Infect Dis 187:1187-99; Embers, et al., 2007. Clin Vaccine Immunol 14:931-6.; Liang, et al., 1999. J Immunol 163:5566-73; and Liang, et al., 1999. J Clin Microbiol 37:3990-6)。
【０２００】
ある実施形態において、レポーターは、容易に検出することができるポリペプチド、好ましくは直接的または間接的のいずれかで容易に定量的に検出することができるポリペプチドである。レポーターポリペプチドは、多くの場合、酵素活性、ルシフェラーゼ活性、アルカリホスファターゼ活性、ベータ-ガラクトシダーゼ活性、アセチルトランスフェラーゼ活性などを有しており、この場合において、基質との反応の酵素による触媒は、たとえば特定の波長の光で検出することができる光、放射活性などの産物の産生を生じさせ、それによりサンプル中のレポーターペプチドの量が、対照サンプルとの比較により相対量または絶対量のいずれかとして決定され得る。
キット
【０２０１】
別の態様において、本記載は、容器、および本明細書に記載される方法のいずれかを実行するための試薬、または本明細書に記載される治療用組成物、ならびにその使用説明書を備えるキットを提供する。ある実施形態において、キットは、エンドセリン受容体アンタゴニストを用いた治療の候補者である患者を検出するための容器および試薬を備え、この場合において、当該キットは、ET-1に特異的な抗体および／またはET-3に特異的な抗体、ET-1／ET-3抗体に結合することができ、結合抗体複合体の検出が可能な分子に結合されている二次抗体、および適切な検出系を備える。
【実施例】
【０２０２】
BQ788は、黒色腫の増殖と転移を阻害する（図４Aおよび４B）。BQ788は、ETBR関連黒色腫細胞の増殖の強力な阻害剤である(IC50は1.2nM、Ki=17.8nM)。BQ788は、黒色腫細胞においてアポトーシスを誘導する。マウスに、1x106個のSKMEL28ヒト黒色腫細胞を移植した。触診可能となるまで10日間、腫瘍を確立させ、その後、DMSO中に溶解させた120ng（約60ug/kg）のBQ788を、1週当たり3回を6週間、IP注射した。その後マウスを安楽死させ、肺を回収し、腫瘍の重量を測定した。腫瘍重量の75％の低下が観察された。対照マウス（図４A）から回収された肺検体は、多くの転移が認められた一方で、BQ788で処置されたマウスから回収された検体は、＞95％の肺転移の消失が認められた（図４B）。
【０２０３】
A192621は、マウスにおいて黒色腫の脳転移を阻害する（図５A、５B、５C、５Dおよび５E）。A192621は、4.5nMのIC50、およびKi=8.8nMを示している。マウス黒色腫モデルを使用して、60mg/kg/日の投与量で、A192621が投与された。(A)A192621は、生存率を上昇させ；および(B-C-D-E）は、脳の黒色腫転移を縮小させる。本実験において、レンチウイルスベクターを使用して、黒色腫細胞株でETBRを過剰発現させた。次にこれを使用して、マウスに異種移植片を移植した。本実験において、レンチウイルスベクターを使用して、黒色腫細胞株でETBRを過剰発現させた。次にこれを使用して、マウスに異種移植片を移植した。
【０２０４】
SC投与経路と組み合わせた、BQ788とA192621の低副作用プロファイルは、進行期および早期の黒色腫患者の両方の治療を実現可能とする。
【０２０５】
ETBRアンタゴニストのBQ788は、マウスにおける脳の黒色腫異種移植片の処置において、bRAF阻害剤と相乗効果を発揮する（図６）。ヌードマウスに、ルシフェラーゼでタグ化した1x105個のSKMEL28ヒト黒色腫細胞を頭蓋内接種した。腫瘍は1週間増殖させ、その後、腫瘍の平均発光に基づいてマウスを無作為に群に分けた（n=8）。マウスは、ダブラフェニブ 100mg/Kg POを毎日、またはダブラフェニブ+BQ788 10ngの鼻内を週に3回（TIW）で処置した。対照マウスはビヒクルで処置した。腫瘍の発光は、43日間にわたり測定された。BQ788+ダブラフェニブの組み合わせで処置したマウスが、ダブラフェニブ単独で処置したマウスよりも、脳黒色腫異種移植片の増殖抑制が大きかった。
【０２０６】
BQ788は、in vivoでbRAF阻害剤と相乗効果を発揮する（図７）。A375ヒト黒色腫細胞（3x106個）を、Nu/Jヌードマウスの後部側腹に皮下移植し、150mm3〜200mm3にまで増殖させ、その後、無作為化して処置を開始した。処置群は以下であった：（１）ビヒクル（n=8）、ダブラフェニブ100mg/Kg 経口投与（PO）を毎日(n=5)、（２）ダブラフェニブ+BQ788 600ng 腹腔内投与（IP） を週に3回(n=5)。ダブラフェニブ単独でも腫瘍増殖を遅延させたが、BQ788の追加によって、11日までに基準を下回る腫瘍の縮小が生じた（p<0.05）。
【０２０７】
BQ788は、同系マウス黒色腫モデルにおいて、抗PD1抗体と相乗効果を発揮する（図８）。C57Bl/6マウスの後部側腹内に、2x105個のB16F10マウス黒色腫細胞を接種した。腫瘍が触診可能になった時点で、マウスを4群（n=5）に無作為化し、以下のように処置した：(1)ビヒクル(10ul DMSO 腹腔内投与  週に3回、100ug アイソタイプ対照抗体  腹腔内投与  週に3回）、(2) BQ788(600ng BQ788 腹腔内投与  週に3回、100ug アイソタイプ対照抗体  腹腔内投与  週に3回）、(3) 抗PD1(10uL DMSO 腹腔内投与  週に3回、100ug  マウス抗PD1  腹腔内投与  週に3回）または(4) 抗PD1 + ENB001(600ng BQ788 腹腔内投与  週に3回、100ug マウス抗PD1 腹腔内投与  週に3回）。グラフ中のデータは、被験物質を3回投与した後の腫瘍増殖を反映しており、BQ788と抗PD1の間の相乗効果を示している。
【０２０８】
ETARアンタゴニストとナイアシンアミドは、BQ788による体重減少を軽減する（図９）。6週齢の無胸腺ヌードマウス（一群当たりn=3）に、42日の期間にわたり、指定される漸増用量で、ETBRアンタゴニストのBQ788の20％DMSO溶液を鼻内投与した。1つの群には、追加でETARアンタゴニストのマシテンタン（Macitentan）を5mg/kgの投与量で毎日経口投与した。これらマウスの飲水は、0.3mg/mLの濃度のビタミンBナイアシンアミドが補給された。BQ788単独で処置された動物は発育不良となり、試験終了までに、基準体重と比較し、5％の平均体重減少があった。ETARアンタゴニストのマシテンタンと、ナイアシンアミド補給を共投与することで、この体重減少が軽減された。かかる処置をされた動物は、試験期間を通じて体重を維持することができた。ETARアンタゴニストおよびナイアシンアミドと、ETBRアンタゴニストの共投与により、治療目的で投与された場合のETBRアンタゴニストの有害事象が軽減された。
腫瘍微小環境中のエンドセリン-1は、メラノーマ浸潤と相関する。
【０２０９】
組織検体。ホルマリン固定され、パラフィン包埋された、メラニン細胞性母斑、上皮内黒色腫、浸潤性黒色腫、および青色母斑の匿名化ヒト組織を、Dermatopathology Section, New York University School of Medicineのアーカイブから取得した。検体は、表1に解説される。検体は、2年までアーカイブ保管される。本試験に関するすべてのプロトコールは、施設内倫理委員会の承認を得た。
【０２１０】
免疫組織化学法。免疫組織化学（IHC）解析は、4-μmの厚さの、ホルマリン固定、パラフィン包埋された組織切片に対し、以下の抗体を用いて行われた：マウス抗ヒトET-1、クローンTR.ET.48.5 (Affinity Bioreagents社、Golden, Colorado, USA)；マウス抗ヒトCD68、クローンKP1(Dako社、Carpinteria, California, USA)；およびマウス抗ヒト黒色腫、クローンHMB45(Ventana Medical Systems社、Tucson, Arizona, USA)。IHC染色条件は、正常な皮膚、黒色腫、リンパ節、および胸腺からなる3mmの組織マクロアレイを使用して決定された。抗原回復の必要条件が最初に決定され、その後、抗体が連続希釈され、最適希釈／濃度が決定された。二重標識IHC染色、およびアズールB対比染色のために、本発明者らは、ET-1抗原回復条件に対しCD68およびHMB45染色を最適化し、その後、ET-1-茶色と、HMB45／CD68赤色の連続標識プロトコールを使用した。簡潔に述べると、切片をキシレン中で脱パラフィンし（3回交換）、勾配アルコールを介して再水和し（100％エタノールを3回交換、95％エタノールを3回交換）、蒸留水でリンスした。加熱誘導性エピトープ回復は、90％パワーの1200Wの電子レンジ中、10mmol/lのクエン酸緩衝液（pH6.0）において行われた。ET-1とCD68は、それぞれ10分と5分、回復された。切片を30分間冷却させ、その後、蒸留水でリンスした。抗体のインキュベーションと検出は、別段の特定がない限り、Ventana緩衝液と検出システムを使用し、NEXesプラットフォーム(Ventana Medical Systems社 Tucson, Arizona, USA)上で行われた。CD68とメラノソームの両方が、そのまま適用され（希釈前）、40℃で30分間、インキュベートされた。ET-1は、ダルベッコPBS (Life Technologies社 Grand Island, New York, USA)中で１：８００に希釈され、室温で一晩インキュベートされた。3種すべての抗体が、iViewビオチニル化ヤギ抗マウス抗体を使用して検出され、次いで、ストレプトアビジン-
アルカリホスファターゼ結合が適用された。この複合体は、Naphthol-AS-MXホスファターゼおよびFast Red複合体を用いて可視化された。スライドを蒸留水中で洗浄し、ヘマトキシリンを用いて対比染色し、脱水し、パーマネントメディアを用いて標本化した。陽性（組織マクロアレイ）対照および陰性（PBS置換抗体）対照が、切片に含められた。染色は、正常皮膚検体を使用して最適化され、対照検体中にバックグラウンド染色が生じない抗体希釈が決定された。ET-1／CD68とET-1／メラノソームの二重標識は、NEXesプラットフォーム上で順に行われ、ペルオキシダーゼ/3,3ジアミノベンジデン酵素検出を最初に用いて、次にアルカリホスファターゼ／Fast Red検出が用いられた。簡潔に述べると、上述されるようにET-1とCD68に対して抗原回復が行われた。内因性ペルオキシダーゼ活性は、過酸化水素で阻害された。ET-1は、上述のように希釈され、一晩インキュベートされた。ET-1は、iViewビオチニル化ヤギ抗マウス抗体を用いて検出され、次いでストレプトアビジン-西洋ワサビペルオキシダーゼ結合物が適用された。ET-1染色陽性とみなされた検体に対しては、ET-1陽性のマクロファージまたは黒色腫細胞の明白な病巣があるはずであった。ET-1染色のカットオフは、所与の群における少なくとも5％の細胞の存在であり、以下のように陽性細胞の割合が検討された：+１、33％未満であるが、5％より大きい；+2、33％より大きいが、65％未満である；+3、66％よりも大きい：および+3＝強い、+2＝中程度、+1＝弱い、0＝無染色。3，3ジアミノベンジデンを用いて複合体が可視化され、硫酸銅で増強された。次いで、スライドをしっかりと洗浄し、上述のようにアルカリホスファターゼ／Fast Redを用いてCD68またはメラノソームを標識した。アズールbを用いた対比染色は、改変することなくKamino and Tam14の方法に従って行われた。
表１．組織および特徴
【表１】
2018528980.tif 000006
【０２１１】
統計解析。  x2検定を使用して、分類別比較における統計的有意差に関する仮説を検証した。サンプルサイズがx2検定には小さすぎる場合には、フィッシャーの直接確率検定を使用した。関連性の統計的有意差は、両側p値を使用して報告され、0.05未満のp値を有意差の基準とした。オッズ比（ORs）が、関連性の強度の基準として使用され、95％信頼区間（CIs）で表されている。SPSS  バージョン22（SPSS Inc., Chicago, Illinois, USA）を統計計算に使用した。
【０２１２】
抗ET-1抗体は、ET-3アイソフォームに対し、ごく弱い交差反応性を示す。転移性黒色腫細胞において低レベルのET-1が発現している一方で、ETアイソフォームのET-315の発現は高いレベルであったことが従前の研究で報告されている。ET-1とET-3は近い関係性にあるため、本発明者らは、固定されたET-1およびET-3のドットブロット解析によりET-1抗体の特異性を示した（図１０）。抗ET-1抗体と、250ngのET-3に関し、ごく弱い交差反応シグナルのみが見いだされた。250ngは非生理的な非常に高値のタンパク質であり、低値のタンパク質では交差反応は見られなかった。したがって、ET-1抗体は、ET-1に対し高度に特異的である。
【０２１３】
メラニン細胞および腫瘍微小環境におけるエンドセリン‐1発現は、黒色腫の進行程度に伴い上昇する。ET-1が色素沈着病変の微小環境において発現されているか否かを決定するために、本発明者らはメラニン細胞性母斑、および上皮内黒色腫病変のIHCスクリーニングを行った。ホルマリン固定、パラフィン包埋されたアーカイブのヒト組織検体を、本試験で解析した（表１）。赤色素原を使用したアルカリホスファターゼ染色を使用して、メラニン（茶色）とET-1陽性シグナル（赤色）を識別した。メラニン細胞性母斑の26％において、病変部近傍の真皮内浸潤中にET-1陽性細胞が検出された。しかしながら検証したほとんどの検体で、ET-1陽性メラニン細胞は稀であるか、存在しなかった（図１０Bおよび１０C）。上皮内黒色腫病変は、表在性の非浸潤性黒色腫である。これら病変のうち、44％が病変部近傍の真皮内浸潤中にET-1陽性細胞を示し、22％がET-1陽性黒色腫細胞を示した（図１１）。
【０２１４】
メラニン細胞性母斑および上皮内黒色腫検体とは際立って対照的に、浸潤性黒色腫の大部分は、腫瘍微小環境中に多くのET-1発現陽性細胞を含有していた（図１２A〜C）。さらに、ET-1強陽性の黒色腫細胞の巣が観察された。解析された23個の浸潤性黒色腫のうち、全体で74％が、腫瘍微小環境中の多数のET-1陽性細胞と相関していた。しかしながら、中程度〜高度に色素沈着した浸潤性黒色腫の100％が、ET-1陽性腫瘍微小環境と相関しており、低色素沈着黒色腫の33％とは対照的であった。したがって、ET-1発現と黒色腫浸潤、ならびに黒色腫の色素産生の間の相関が示された。色素沈着病変の真皮微小環境中のET-1陽性細胞の組織学的特徴から、それらがマクロファージ起源である可能性が示唆される。ゆえに、本発明者らは、標準的なマクロファージマーカーであるCD68に対する抗体を使用して、検体のIHC解析を行った。浸潤性黒色腫と関連した真皮内浸潤は、抗ET-1（茶色素原）と抗CD68（赤色素原、図１２D）を用いて二重染色した。図１２の短く青い矢印は、CD68のみを発現する細胞を指している。これらの細胞は、明るい赤／ピンクの色である。図１２の黒く長い矢印は、ET-1とCD68の両方を発現している細胞を指している。これらの細胞は、一重染色された細胞よりも暗い茶−赤の色相を有している。その理由は、それぞれET-1とCD68の発現を表す、茶色と赤色の染色の両方が存在するためである。これらの結果から、腫瘍微小環境中におけるET-1陽性細胞は、マクロファージ起源の細胞であることが示される。
【０２１５】
浸潤性黒色腫における、黒色腫マーカーのHMB45とET-1の共局在。図１３は、類上皮の形態をした大きなET-1陽性細胞の巣を伴う、浸潤性黒色腫検体を表す。これらET-1陽性細胞が実際に黒色腫細胞であることを確認するために、検体をET-1と、黒色腫マーカーのHMB45の両方で染色し、次いでアズールブルーで対比染色した。アズールブルーは、メラニン顆粒を緑-青に染め、解釈を容易にする。図１３Aに示されるように、黒色腫細胞クラスター内の散在細胞は、ET-1（茶色素原）ならびにHMB45（赤色素原）に対し陽性である。アズールブルーのみで染色した同じ検体は、メラニン由来の茶色素を示していない（図１３B）。ゆえにET-1発現細胞は、黒色腫細胞起源である。
【０２１６】
転移性黒色腫と青色母斑におけるET-1発現。黒色腫の転移体（図１４、代表的画像）を、ET-1発現（赤色素原、図１４A）と、黒色腫腫瘍マーカーのHMB45（赤色素原、図１４B）で染色した。高度に色素沈着した転移性黒色腫のうち、62％が、黒色腫中にET-1発現を示し、低色素沈着性転移性黒色腫の28％とは対照的であった。このことから再び、ET-1発現と色素産生の間の有意な相関が示される。ET-1を発現する細胞を有する転移性黒色腫検体の全割合は43％であり、対して浸潤性黒色腫は52％であった。この所見に対し考えられる理由は、検証された転移性検体の大部分が、低色素沈着性であったことである（57％）。しかしながら、低色素沈着性黒色腫の発生率はおよそ5％以下であり、ゆえに、これら病変は本発明者らの試験において偏って現れている。低色素沈着性黒色腫におけるET-1発現は低いため、転移性黒色腫の真のET-1発現の全発生率は、本発明者らの試験で観察された43％よりもずっと高い可能性がある。
【０２１７】
本発明者らはまた、ET-1発現に関し青色母斑を解析した。青色母斑は、真皮深部に局在するメラニン細胞性母斑の特殊な亜群であり、表皮への胎児期移動が中断されたメラニン細胞の増殖の現れと考えられている。18個の青色母斑のうち16個（89％）が、真皮浸潤に多くのET-1陽性細胞を含有していた（図１４C〜E）。これら病変内のET-1陽性細胞は、マクロファージとメラノファージと合致した組織病理学的特徴を示しており、CD68発現が陽性であった（データは示さず）。メラニン細胞性母斑で観察されたように、青色母斑内のメラニン細胞中にET-1発現は稀であるか全く検出されなかった。
【０２１８】
ET-1発現は、浸潤、色素沈着、および黒色腫の進行と有意に相関する。統計的仮説検定のために、ET-1の陽性度、浸潤性、および色素沈着を各生検検体に対し決定し、各々２つのカテゴリーを有するカテゴリー変数として定義した。ET-1陽性検体は、ET-1を発現する細胞が5％よりも多いと定義され、陰性検体は5％以下と定義された。非浸潤性病変は、メラニン細胞性母斑と上皮内黒色腫を含み、浸潤性病変は、浸潤性黒色腫を含み、一部の解析で実行可能であれば、転移性黒色腫を含めた。色素沈着のカテゴリーは、低色素沈着性と色素沈着性（中度〜高度の色素沈着を含む）であった。本発明者らは最初に、非浸潤性検体と比較して、浸潤性検体で観察される病変近傍浸潤中のET-1の発現が、統計的に有意であるかどうかを決定した。28個の非浸潤性病変（母斑と上皮内黒色腫病変を合わせた）のうち9個（32.1％）が、ET-1陽性の病変近傍浸潤を示した。検証された23個の浸潤性黒色腫のうち17個（73.9％）が、ET-1陽性病変近傍浸潤を示した。陽性検査の割合は、非浸潤性群に対し、浸潤性群で有意に高かった[P<0.01、OR=6.0(95% CI 1.8, 20.3)]。転移性黒色腫はこの解析から除外された。その理由は多くの場合で大きな質量にあり、生検では腫瘍組織のみが取得され、末梢組織が除外されたためである。青色母斑はこの解析から除外された。その理由は、それらが異なる生物起源であったからである。次に、浸潤性検体と非浸潤性検体を比較し、メラニン細胞と黒色腫細胞におけるET-1発現の違いを解析した。28個の非浸潤性検体のうち2個（7.1％）が、メラニン細胞中にET-1発現を示した。対照的に、91個の浸潤性検体中（浸潤性黒色腫と転移性黒色腫を合わせた）、41個（45.1％）が、黒色腫細胞においてET-1発現を示した。陽性検査の割合は、非浸潤性群に対し、浸潤性群で有意に高かった[P<0.01、OR=10.7(95% CI 2.4, 48)]。したがって、ET-1発現と浸潤の間の相関は、統計的に有意な相関である。
【０２１９】
次に色素沈着とET-1発現の間の相関を検証した。母斑および上皮内黒色腫病変は、これら解析から除外された。その理由は、これらの群には低色素沈着性亜群が存在しなかったためである。中程度〜高度な色素沈着の14個の浸潤性黒色腫のうち14個（100％）が、病変近傍浸潤中にET-1発現を示し、一方で9個の低色素性黒色腫のうち3個（33％）が、ET-1陽性の黒色腫細胞を示した。色素沈着性群における陽性検査の割合は、低色素沈着性群よりも有意に高かった（P<0.01、ORは無限大であった。その理由は、強度または中程度に色素沈着したET-1陰性病変はゼロであったためである）。黒色腫細胞のET-1発現の観点から、14個の中程度〜高度に色素沈着した浸潤性黒色腫のうち11個（79％）が、ET-1陽性の黒色腫細胞を示した。9個の低色素沈着性浸潤性黒色腫のうち1個（11％）が、黒色腫細胞中のET-1発現を示した。陽性検査の割合は、低色素沈着群に対し、色素沈着群で有意に高かった[P<0.01、ORは29(95% CI 2.6, 336)]。29個の中程度〜高度に色素沈着した転移性黒色腫のうち18個（62％）が、黒色腫細胞中のET-1発現を示し、一方で39個の低色素沈着性転移性黒色腫のうち11個（28％）が、黒色腫細胞にET-1発現を示した。色素沈着群の陽性検査の割合は、低色素沈着群に対し、有意に高かった[P<0.01、ORは4.2(95% CI 1.5, 11.6)]。全体として、本発明者らは、浸潤性黒色腫と転移性黒色腫の両方において、ET-1発現と色素沈着の間に統計的に有意な相関があると結論づけた。
【０２２０】
次に、本発明者らは、黒色腫進行の間の、微小環境中のET-1発現の増加が統計的に有意であるかどうかを解析した。転移性黒色腫は、上述の理由によりこの解析から除外した。正常母斑、上皮内黒色腫病変、および浸潤性黒色腫のうち、それぞれ26％、44％および74％が、病変近傍浸潤においてET-1発現を示した。したがって陽性ET-1検査での浸潤細胞の割合は、より進行した疾患状態で高く、これは統計的に有意であった（P<0.01）。
【０２２１】
考察。本明細書に提示されるデータから、ヒトにおける、腫瘍微小環境中のET-1と、黒色腫進行を関連づける最初のin vivo証明が提供される。メラニン細胞および黒色腫細胞のET-1刺激が、黒色腫の浸潤と転移を促進することが知られている分子事象を惹起させることがよく報告されているが、今日までに作成されたすべてのデータは、in vitro実験から、またはマウスにおける実験に由来していた１６、１７、１８、１９、２０。in vivoにおけるメラニン細胞の微小環境は、その表現型に大きな影響を与える可能性があり、in vitroで観察される表現型から大きく変化させる。腫瘍微小環境中のET-1発現と黒色腫の進行の間に強い相関が本明細書において示された。おそらくin vivoにおいて、黒色腫細胞は当初、マクロファージに由来するET-1でパラクライン的に刺激され、それによって、ET-1刺激が黒色腫細胞に対して発揮する浸潤促進性の反応が惹起されるのであろう。これらの反応には、E-カドヘリンのダウンレギュレーション２１、黒色腫細胞の付着分子であるCXCL1とCXCL8のアップレギュレーション２１、マトリクスメタロプロテアーゼの活性化、SNAI1遺伝子の活性化２１、およびアポトーシス阻害２１が含まれる。本発明者らの発見は、浸潤性および転移性の黒色腫細胞が高割合でET-1を発現していること、そしてそれゆえに、パラクライン的よりもむしろオートクライン的にET-1により刺激されている可能性があることをさらに示している。従前の研究でもまた、浸潤性黒色腫によるエンドセリン発現が示されていたが、その研究では黒色腫細胞におけるET-3の発現に焦点を当てており、腫瘍微小環境中のET-1発現は調査していなかった１５。本発明者らは、腫瘍微小環境中のマクロファージによるET-1発現は、黒色腫細胞と母斑細胞の両方により開始される、異常なサイトカインネットワークを経て発生すると仮説を立てた。黒色腫細胞は、腫瘍壊死因子α（TNFα）を分泌しており、TNFαはマクロファージにおいてET-1分泌を誘導することが知られている２２、２３。母斑細胞もまたTNFαを分泌するが、黒色腫細胞で観察されるものよりも低レベルである２２。これら異なるレベルのTNFα発現が、メラニン細胞性母斑と関連した浸潤と比較し、浸潤性黒色腫と関連した真皮内浸潤で観察されるET-1発現がより強固であることの説明となるであろう。本発明者らはさらに、真皮内微小環境におけるET-1発現が、上皮内から浸潤ステージへの黒色腫進行において重要な役割を果たす可能性があると仮説を立てた。ET-1は、黒色腫細胞とメラニン細胞にとって、走化性および遊走促進性の因子である１８、２５。上皮内黒色腫病変が内在する真皮中のマクロファージによるET-1の発現は、下層真皮への表皮黒色腫細胞の遊走を惹起させる可能性がある。真皮浸潤によるET-1発現は、局所の黒色腫浸潤に対しては充分であり得るが、遠い部位への転移には不十分である可能性がある。本発明者らは、黒色腫細胞による内因性ET-1発現の獲得が、真皮からの脱出、および遠い部位への転移を可能とさせると仮説を立てている。この仮説は、転移性黒色腫を有する患者における血漿ET-1レベルの有意な上昇を示す研究を一致している２６。そのため、卵巣癌、前立腺癌、および大腸癌をはじめとする他の様々な癌と同じように、ET-1は、黒色腫においてオートクライン的増殖���子として役割を果たしている可能性がある２７、２８。
【０２２２】
またこのデータから、ET-1が、青色母斑の形成に病因的役割を果たしていることが示される。ET-1はメラニン細胞に対し走化性効果を発揮するため、ET-1分泌マクロファージの局所濃度が、真皮中にメラニン細胞を隔離することに役立ち、それによって、青色母斑の発現がもたらされる可能性がある。ET-1はメラニン生成の強力な刺激因子でもあるため、これが、青色母斑ならびに多くの浸潤性黒色腫および転移性黒色腫における顕著な色素沈着の説明となりえる２９。青色母斑の浸潤マクロファージおよびメラノファージによる堅固なET-1発現は、真皮微小環境中のみでのET-1発現が、メラニン細胞において、浸潤性の表現型の誘導には充分であるが、悪性の表現型の誘導には不十分であり得ることが示唆される。しかしながら、これら病変には夥しい数のET-1陽性マクロファージがあることを理由として、本発明者らは、ET-1が、青色母斑の形成に重要な役割を果たしていること、およびこれら病変の真皮局在の維持にも役立っていると推測している。
【０２２３】
青色母斑のメラニン細胞がbRAFをその構造的活性型で発現していることは稀であるが、メラニン細胞性母斑のメラニン細胞の80％が、構造的に活性なbRAFキナーゼを発現していることは興味深い３０、３１。本発明者らの実験で示されたように、メラニン細胞性母斑の微小環境は、稀にしかET-1発現を示さない。これらの結果を踏まえると、構造的活性型bRAFを発現していない正常なメラニン細胞がET-1に暴露されると、青色母斑でみられるように、悪性の形質転換を伴わずに真皮局在が引き起こされうる事が示唆される。しかしながら、構造的活性型bRAFおよび／またはp16黒色腫感受性遺伝子の変異体を発現しているメラニン細胞が、微小環境中でさらにET-1に暴露されると、浸潤性の悪性表現型へと進行する可能性がある。ET-1またはET-3のいずれかの内因性発現も獲得したそれら浸潤性黒色腫細胞は、その後、転移性の表現型を示すのであろう。黒色腫細胞で観察されるETB受容体のアップレギュレーションは、bRAFの表現型にかかわらず、ほぼ確実に黒色腫進行の必要条件である３２、３３。bRAF阻害剤を用いた治療に反応して黒色腫細胞で観察される急速な薬剤耐性の発現は、ETB受容体のアップレギュレーションの結果として発生する２１。
【０２２４】
このデータは、真皮微小環境中のET-1発現が、黒色腫の浸潤と強く相関していることを示している。しかしながら、関連浸潤がET-1陽性であったメラニン細胞性母斑と上皮内黒色腫の病変は稀であった。真皮微小環境中のET-1発現の発生率は、黒色腫進行の程度とともに上昇する。そのため、真皮ET-1の存在は、母斑および上皮内黒色腫がより進んだ病変へと進行する可能性が高いことを示すマーカーである可能性がある。この可能性と一致して、局所浸潤性黒色腫におけるET-1陽性黒色腫細胞の存在は、転移へと進行する機会が高いことを示している。全体として、これら新たな知見は、黒色腫の浸潤と転移の治療または予防に対する新たな標的としてのエンドセリン経路を示唆するものである。
【０２２５】
成獣マウスは、約10g〜約32gの範囲の体重である（たとえば、約15g〜約27g）。
【０２２６】
投薬計画。本記載に基づき、本記載全体で含有される、本提示の例示的な用量範囲は、上記に検討されるように、日常的な技法を使用して共投与された場合に観察される相乗効果を最大化するために、または最適化するために組み合わされてもよい。
【０２２７】
治療計画には、約100μg〜約4000μgの各含有される活性成分（すなわち、ETBRアンタゴニスト、ETARアンタゴニスト、抗PD1抗体、bRAF阻害剤、ナイアシンアミド、またはカスパーゼ-8阻害剤の内の少なくとも１つ）を有する投与製剤または組成物を含む。投与は、持続放出型投与であってもよく、それにより、約50μg〜約3000μgの各活性成分が最初に飛び出し、その間に約50μg〜約3000μgの各活性成分が2時間にわたり持続的に放出される。
【０２２８】
たとえば、本開示の製剤または組成物の各活性成分は、約100μg〜約4000μg、約100μg〜約3750μg、約100μg〜約3500μg、約100μg〜約3250μg、約100μg〜約3000μg、約100μg〜約2750μg、約100μg〜約2500μg、約100μg〜約2250μg、約100μg〜約2000μg、約100μg〜約1750μg、約100μg〜約1500μg、約100μg〜約1250μg、約100μg〜約1000μg、約100μg〜約750μg、約100μg〜約500μg、約250μg〜約4000μg、約250μg〜約3750μg、約250μg〜約3500μg、約250μg〜約3250μg、約250μg〜約3000μg、約250μg〜約2750μg、約250μg〜約2500μg、約250μg〜約2250μg、約250μg〜約2000μg、約250μg〜約1750μg、約250μg〜約1500μg、約250μg〜約1250μg、約250μg〜約1000μg、約250μg〜約750μg、約250μg〜約500μg、約500μg〜約4000μg、約500μg〜約3750μg、約500μg〜約3500μg、約500μg〜約3250μg、約500μg〜約3000μg、約500μg〜約2750μg、約500μg〜約2500μg、約500μg〜約2250μg、約500μg〜約2000μg、約500μg〜約1750μg、約500μg〜約1500μg、約500μg〜約1250μg、約500μg〜約1000μg、約500μg〜約750μg、約750μg〜約4000μg、約750μg〜約3750μg、約750μg〜約3500μg、約750μg〜約3250μg、約750μg〜約3000μg、約750μg〜約2750μg、約750μg〜約2500μg、約750μg〜約2250μg、約750μg〜約2000μg、約750μg〜約1750μg、約750μg〜約1500μg、約750μg〜約1250μg、約750μg〜約1000μg、約1000μg〜約4000μg、約1000μg〜約3750μg、約1000μg〜約3500μg、約1000μg〜約3250μg、約1000μg〜約3000μg、約1000μg〜約2750μg、約1000μg〜約2500μg、約1000μg〜約2250μg、約1000μg〜約2000μg、約1000μg〜約1750μg、約1000μg〜約1500μg、約1000μg〜約1250μg、約1250μg〜約4000μg、約1250μg〜約3750μg、約1250μg〜約3500μg、約1250μg〜約3250μg、約1250μg〜約3000μg、約1250μg〜約2750μg、約1250μg〜約2500μg、約1250μg〜約2250μg、約1250μg〜約2000μg、約1250μg〜約1750μg、約1250μg〜約1500μg、約1500μg〜約4000μg、約1500μg〜約3750μg、約1500μg〜約3500μg、約1500μg〜約3250μg、約1500μg〜約3000μg、約1500μg〜約2750μg、約1500μg〜約2500μg、約1500μg〜約2250μg、約1500μg〜約2000μg、約1500μg〜約1750μg、約1750μg〜約4000μg、約1750μg〜約3750μg、約1750μg〜約3500μg、約1750μg〜約3250μg、約1750μg〜約3000μg、約1750μg〜約2750μg、約1750μg〜約2500μg、約1750μg〜約2250μg、約1750μg〜約2000μg、約2000μg〜約4000μg、約2000μg〜約3750μg、約2000μg〜約3500μg、約2000μg〜約3250μg、約2000μg〜約3000μg、約2000μg〜約2750μg、約2000μg〜約2500μg、約2000μg〜約2250μg、約2250μg〜約4000μg、約2250μg〜約3750μg、約2250μg〜約3500μg、約2250μg〜約3250μg、約2250μg〜約3000μg、約2250μg〜約2750μg、約2250μg〜約2500μg、約2500μg〜約4000μg、約2500μg〜約3750μg、約2500μg〜約3500μg、約2500μg〜約3250μg、約2500μg〜約3000μg、約2500μg〜約2750μg、約2750μg〜約4000μg、約2750μg〜約3750μg、約2750μg〜約3500μg、約2750μg〜約3250μg、約2750μg〜約3000μg、約3000μg〜約4000μg、約3000μg〜約3750μg、約3000μg〜約3500μg、約3000μg〜約3250μg、約3250μg〜約4000μg、約3250μg〜約3750μg、約3250μg〜約3500μg、約3500μg〜約4000μg、約3500μg〜約3750μg、または約3750μg〜約4000μgで、いずれか投与製剤（たとえば、最初の放出投与、持続性放出投与など）中に存在していてもよい。
【０２２９】
本開示の製剤／組成物の各活性成分は、約0.1mg/mL〜約5.0mg/mLの投与製剤または組成物（たとえば、製剤／組成物に対し、約0.1mg/mL〜約4.5mg/mL、約0.1mg/mL〜約4.0mg/mL、約0.1mg/mL〜約3.5mg/mL、約0.1mg/mL〜約3.0mg/mL、約0.1mg/mL〜約2.5mg/mL、約0.1mg/mL〜約2.0mg/mL、約0.1mg/mL〜約1.5mg/mL、約0.1mg/mL〜約1.0mg/mL、約0.1mg/mL〜約0.5mg/mL、約0.5mg/mL〜約4.5mg/mL、約0.5mg/mL〜約4.0mg/mL、約0.5mg/mL〜約3.5mg/mL、約0.5mg/mL〜約3.0mg/mL、約0.5mg/mL〜約2.5mg/mL、約0.5mg/mL〜約2.0mg/mL、約0.5mg/mL〜約1.5mg/mL、約0.5mg/mL〜約1.0mg/mL、約1.0mg/mL〜約4.5mg/mL、約1.0mg/mL〜約4.0mg/mL、約1.0mg/mL〜約3.5mg/mL、約1.0mg/mL〜約3.0mg/mL、約1.0mg/mL〜約2.5mg/mL、約1.0mg/mL〜約2.0mg/mL、約1.0mg/mL〜約1.5mg/mL、約1.5mg/mL〜約4.5mg/mL、約1.5mg/mL〜約4.0mg/mL、約1.5mg/mL〜約3.5mg/mL、約1.5mg/mL〜約3.0mg/mL、約1.5mg/mL〜約2.5mg/mL、約1.5mg/mL〜約2.0mg/mL、約2.0mg/mL〜約4.5mg/mL、約2.0mg/mL〜約4.0mg/mL、約2.0mg/mL〜約3.5mg/mL、約2.0mg/mL〜約3.0mg/mL、約2.0mg/mL〜約2.5mg/mL、約2.5mg/mL〜約4.5mg/mL、約2.5mg/mL〜約4.0mg/mL、約2.5mg/mL〜約3.5mg/mL、約2.5mg/mL〜約3.0mg/mL、約3.0mg/mL〜約4.5mg/mL、約3.0mg/mL〜約4.0mg/mL、約3.0mg/mL〜約3.5mg/mL、約3.5mg/mL〜約4.5mg/mL、約3.5mg/mL〜約4.0mg/mL、または約3.5mg/mL〜約4.5mg/mL）で存在していてもよい。
【０２３０】
本開示の投与製剤または組成物は、経口投与、舌下投与、非経口投与、鼻内投与、静脈内投与、皮内投与、皮下投与、または局所投与されてもよい。
【０２３１】
本開示の例示的な製剤。本明細書に記載される態様または実施形態のいずれかは、上述のように単一成分油層製剤／組成物であってもよく、その場合において各活性成分は、上述の用量または濃度のいずれかであってもよい。単一成分油層は、たとえば大豆油などの固定油であってもよい。たとえば製剤または組成物は、単一成分油1mL中、各活性成分を約0.1mg〜約5.0mg含有してもよい（すなわち、単一成分油中、各活性成分は約0.5mg/mL、約1mg/mL、または約1.5mg/mL）。単一成分油層製剤／組成物は、各活性成分（たとえば、約1mg〜約50mgの各活性成分（複数含む））を約10mLの単一成分油溶液に加えることにより調製されてもよい。
【０２３２】
本明細書に記載される態様または実施形態のいずれかは、上述のようにDMSO製剤／組成物であってもよく、その場合において活性成分（複数含む）は、上述の用量または濃度のいずれかであってもよい。製剤／組成物は、約5%〜約100%のDMSO溶液（たとえば、約10%〜約100%、約20%〜約100%、約30%〜約100%、約40%〜約100%、約50%〜約100%、約60%〜約100%、約70%〜約100%、約80%〜約100%、約90%〜約100%、約30%〜約95%、約45%〜約95%、約75%〜約95%、約30%〜約90%、約45%〜約90%、約75%〜約90%、約30%〜約85%、約45%〜約85%、または約75%〜約85%）を含有してもよい。たとえば製剤または組成物は、1mLのDMSO中、各活性成分を約0.1mg〜約5.0mg含有してもよい（すなわち、DMSO中、各活性成分は約0.5mg/mL、約1mg/mL、または約1.5mg/mL）。DMSO油層製剤／組成物は、各活性成分（たとえば、約1mg〜約50mgの各活性成分（複数含む））を約10mLのDMSO溶液に加えることにより調製されてもよい。
【０２３３】
本明細書に記載される態様または実施形態のいずれかは、上述のようにLyoCell（登録商標）製剤／組成物であってもよく、その場合において各活性成分は、上述の用量または濃度のいずれかであってもよい。たとえば製剤または組成物は、1mLのLyoCell（登録商標）中、各活性成分を約0.1mg〜約5.0mg含有してもよい（すなわち、LyoCell（登録商標）中、各活性成分は約0.5mg/mL、約1mg/mL、または約1.5mg/mL）。LyoCell（登録商標）製剤／組成物は、約1mg〜約50mgの活性成分（複数含む）を約10mLのLyoCell（登録商標）溶液に加えることにより調製されてもよい。LyoCell（登録商標）は、米国特許第7,713,440号に従い調製することができ、またはParticle Sciences（登録商標） (Bethlehem, PA 18017-8920)から市販されている。
【０２３４】
本明細書に記載される態様または実施形態のいずれかは、上述のようにナノ粒子を含んでもよく、その場合において各活性成分は、上述の用量または濃度のいずれかであってもよい。たとえば、製剤または組成物は、約1mLのナノ粒子懸濁液（たとえば、固体脂質ナノ粒子懸濁液）中、活性成分（複数含む）を約0.1mg〜約5.0mg含有してもよい。したがって、ナノ粒子製剤は、ナノ粒子懸濁液中、各活性成分は約0.5mg/mL、約1.0mg/mL、または約1.5mg/mL含有する。ナノ粒子製剤／組成物は、約1mg〜約50mgの各活性成分を、240mgの脂質層に加え、9.75mLの水層中で乳化させることにより調製されてもよく、それによって、約10mLの総バッチ中に固体脂質ナノ粒子懸濁液が形成される（約2.5％固体）。ナノ粒子製剤／組成物は、約2%〜約8%のカルナバ(たとえば、5.0%)、約0.5%〜約3.5%の大豆油(たとえば、約2.0%)、約85.0%〜約97.0%の水溶液(たとえば、約92.0%、約0.5%〜約1.5%のポリソルベート(たとえば、約1.0%)、および約0.1mg/mL〜約5.0mg/mL(たとえば、約0.1mg/mL〜約5.0mg/mL）の活性成分（複数含む）を含有してもよい。
特定の実施形態
【０２３５】
ある態様において、治療用組成物が提供される。含有物：ETBRアンタゴニスト、カスパーゼ-8阻害剤、またはそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つの有効量；ETARアンタゴニスト、抗PD1抗体、bRAF阻害剤、ナイアシンアミド、またはそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つの相乗的有効量；および薬学的に許容可能な担体。
【０２３６】
本明細書に記載される実施形態または態様のいずれかにおいて、以下の内の少なくとも１つ：（１）抗PD1抗体は、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ピジリズマブ、または当分野の当業者に公知の、もしくは当分野の当業者に公知となる任意の他の抗PD1抗体からなる群から選択される少なくとも１つの剤である；（２）bRAF阻害剤は、ダブラフェニブ、ソラフェニブ、ベムラフェニブ、または当分野の当業者に公知の、もしくは当分野の当業者に公知となる任意の他のbRAF阻害剤からなる群から選択される少なくとも１つの剤である；（３）ETBRアンタゴニストは、BQ788、BQ-017、A192621、それらの重水素化アナログもしくはフッ素化アナログ、またはそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つである；（４）ETARアンタゴニストは、BQ123である；または（５）カスパーゼ-8阻害剤は、配列Ac-AAVALLPAVLLAALAPIETD-CHOを有するペプチドである。
【０２３７】
本明細書に記載される実施形態または態様のいずれかにおいて、（１）抗PD1抗体は、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ピジリズマブ、または当分野の当業者に公知の、もしくは当分野の当業者に公知となる任意の他の抗PD1抗体からなる群から選択される少なくとも１つの剤である；または（２）bRAF阻害剤は、ダブラフェニブ、ソラフェニブ、ベムラフェニブ、または当分野の当業者に公知の、もしくは当分野の当業者に公知となる任意の他のbRAF阻害剤からなる群から選択される少なくとも１つの剤である；または（３）ETBRアンタゴニストは、BQ788、BQ-017、A192621、それらの重水素化アナログもしくはフッ素化アナログ、またはそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つである；または（４）ETARアンタゴニストは、BQ123である；または（５）カスパーゼ-8阻害剤は、配列Ac-AAVALLPAVLLAALAPIETD-CHOを有するペプチドである。
【０２３８】
本明細書に記載される実施形態または態様のいずれかにおいて、（１）抗PD1抗体は、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ピジリズマブ、または当分野の当業者に公知の、もしくは当分野の当業者に公知となる任意の他の抗PD1抗体からなる群から選択される少なくとも１つの剤である；および／または（２）bRAF阻害剤は、ダブラフェニブ、ソラフェニブ、ベムラフェニブ、または当分野の当業者に公知の、もしくは当分野の当業者に公知となる任意の他のbRAF阻害剤からなる群から選択される少なくとも１つの剤である；および／または（３）ETBRアンタゴニストは、BQ788、BQ-017、A192621、それらの重水素化アナログもしくはフッ素化アナログ、またはそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つである；および／または（４）ETARアンタゴニストは、BQ123である；および／または（５）カスパーゼ-8阻害剤は、配列Ac-AAVALLPAVLLAALAPIETD-CHOを有するペプチドである。
【０２３９】
本明細書に記載される実施形態または態様のいずれかにおいて、抗PD-1抗体は、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ピジリズマブ、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つの剤である。
【０２４０】
本明細書に記載される実施形態または態様のいずれかにおいて、bRAF阻害剤は、ダブラフェニブ、ソラフェニブ、ベムラフェニブ、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つの剤である。
【０２４１】
本明細書に記載される実施形態または態様のいずれかにおいて、ETBRアンタゴニストは、BQ788、BQ-017、A192621、それらの重水素化アナログもしくはフッ素化アナログ、またはそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つである。
【０２４２】
本明細書に記載される実施形態または態様のいずれかにおいて、ETARアンタゴニストは、BQ123である。
【０２４３】
本明細書に記載される実施形態または態様のいずれかにおいて、カスパーゼ-8阻害剤は、Ac-AAVALLPAVLLAALAPIETD-CHOの配列を有するペプチドである。
【０２４４】
本明細書に記載される実施形態または態様のいずれかにおいて、ETBRアンタゴニスト、ETARアンタゴニスト、抗PD1抗体、bRAF阻害剤、ナイアシンアミド、およびカスパーゼ-8阻害剤のうちの少なくとも１つの用量は、約100μg〜約4000μgであり、ならびに／または当該ETBRアンタゴニスト、ETARアンタゴニスト、抗PD1抗体、bRAF阻害剤、ナイアシンアミド、およびカスパーゼ-8阻害剤のうちの少なくとも１つの濃度は、組成物１mL当たり、約0.1〜約5.0mg/mLである。
【０２４５】
本明細書に記載される実施形態または態様のいずれかにおいて、ETBRアンタゴニスト、ETARアンタゴニスト、抗PD1抗体、bRAF阻害剤、ナイアシンアミド、およびカスパーゼ-8阻害剤のうちの少なくとも１つの用量は、約0.1μg〜約5000μgである。
【０２４６】
本明細書に記載される実施形態または態様のいずれかにおいて、ETBRアンタゴニスト、ETARアンタゴニスト、抗PD1抗体、bRAF阻害剤、ナイアシンアミド、およびカスパーゼ-8阻害剤のうちの少なくとも１つの濃度は、組成物1mL当たり、約0.01μg/mL〜約1000mg/mLである。
【０２４７】
本明細書に記載される実施形態または態様のいずれかにおいて、組成物はさらに、LyoCell（登録商標）、大豆油、ジメチルスルホキシド（DMSO）、Intravail（登録商標）、Protek（登録商標）、およびAegis HydrogelTMからなる群から選択される少なくとも１つの賦形剤を含有する。
【０２４８】
本明細書に記載される実施形態または態様のいずれかにおいて、DMSO溶液は、約5％〜約100％のDMSO溶液である。
【０２４９】
本明細書に記載される実施形態または態様のいずれかにおいて、薬学的に許容可能な担体は、固体脂質ナノ粒子、リポソーム、および生体適合性ポリマーからなる群から選択される。
【０２５０】
別の態様において、制御放出用の皮下または筋肉内の投与製剤が提供される。製剤は、以下を含む活性成分の均一分散物を含有する：ETBRアンタゴニストまたはカスパーゼ-8阻害剤またはそれらの組み合わせ；および生体適合性送達システム中のETARアンタゴニスト、抗PD1抗体、bRAF阻害剤、ナイアシンアミド、またはそれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つの追加的剤の相乗的量であって、投与後、ETBRアンタゴニストと追加的剤は、製剤から全身循環へとゆっくりと、および同時に放出される。
【０２５１】
本明細書に記載される実施形態または態様のいずれかにおいて、以下の内の少なくとも１つ：（１）抗PD1抗体は、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ピジリズマブ、または当分野の当業者に公知の、もしくは当分野の当業者に公知となる任意の他の抗PD1抗体からなる群から選択される少なくとも１つの剤である；（２）bRAF阻害剤は、ダブラフェニブ、ソラフェニブ、ベムラフェニブ、または当分野の当業者に公知の、もしくは当分野の当業者に公知となる任意の他のbRAF阻害剤からなる群から選択される少なくとも１つの剤である；（３）ETBRアンタゴニストは、BQ788、BQ-017、A192621、それらの重水素化アナログもしくはフッ素化アナログ、またはそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つである；（４）ETARアンタゴニストは、BQ123である；または（５）カスパーゼ-8阻害剤は、配列Ac-AAVALLPAVLLAALAPIETD-CHOを有するペプチドである。
【０２５２】
本明細書に記載される実施形態または態様のいずれかにおいて、以下の内の少なくとも１つ：（１）抗PD1抗体は、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ピジリズマブ、または当分野の当業者に公知の、もしくは当分野の当業者に公知となる任意の他の抗PD1抗体からなる群から選択される少なくとも１つの剤である；または（２）bRAF阻害剤は、ダブラフェニブ、ソラフェニブ、ベムラフェニブ、または当分野の当業者に公知の、もしくは当分野の当業者に公知となる任意の他のbRAF阻害剤からなる群から選択される少なくとも１つの剤である；または（３）ETBRアンタゴニストは、BQ788、BQ-017、A192621、それらの重水素化アナログもしくはフッ素化アナログ、またはそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つである；または（４）ETARアンタゴニストは、BQ123である；または（５）カスパーゼ-8阻害剤は、配列Ac-AAVALLPAVLLAALAPIETD-CHOを有するペプチドである。
【０２５３】
本明細書に記載される実施形態または態様のいずれかにおいて、（１）抗PD1抗体は、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ピジリズマブ、または当分野の当業者に公知の、もしくは当分野の当業者に公知となる任意の他の抗PD1抗体からなる群から選択される少なくとも１つの剤である；または（２）bRAF阻害剤は、ダブラフェニブ、ソラフェニブ、ベムラフェニブ、または当分野の当業者に公知の、もしくは当分野の当業者に公知となる任意の他のbRAF阻害剤からなる群から選択される少なくとも１つの剤である；または（３）ETBRアンタゴニストは、BQ788、BQ-017、A192621、それらの重水素化アナログもしくはフッ素化アナログ、またはそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つである；または（４）ETARアンタゴニストは、BQ123である；または（５）カスパーゼ-8阻害剤は、配列Ac-AAVALLPAVLLAALAPIETD-CHOを有するペプチドである。
【０２５４】
本明細書に記載される実施形態または態様のいずれかにおいて、（１）抗PD1抗体は、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ピジリズマブ、または当分野の当業者に公知の、もしくは当分野の当業者に公知となる任意の他の抗PD1抗体からなる群から選択される少なくとも１つの剤である；および／または（２）bRAF阻害剤は、ダブラフェニブ、ソラフェニブ、ベムラフェニブ、または当分野の当業者に公知の、もしくは当分野の当業者に公知となる任意の他のbRAF阻害剤からなる群から選択される少なくとも１つの剤である；および／または（３）ETBRアンタゴニストは、BQ788、BQ-017、A192621、それらの重水素化アナログもしくはフッ素化アナログ、またはそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つである；および／または（４）ETARアンタゴニストは、BQ123である；および／または（５）カスパーゼ-8阻害剤は、配列Ac-AAVALLPAVLLAALAPIETD-CHOを有するペプチドである。
【０２５５】
本明細書に記載される実施形態または態様のいずれかにおいて、抗PD-1抗体は、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ピジリズマブ、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つの剤である。
【０２５６】
本明細書に記載される実施形態または態様のいずれかにおいて、bRAF阻害剤は、ダブラフェニブ、ソラフェニブ、ベムラフェニブ、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つの剤である。
【０２５７】
本明細書に記載される実施形態または態様のいずれかにおいて、ETBRアンタゴニストは、BQ788、A192621、またはそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つである。
【０２５８】
本明細書に記載される態様または実施形態のいずれかにおいて、ETARアンタゴニストは、BQ123である。
【０２５９】
本明細書に記載される実施形態または態様のいずれかにおいて、カスパーゼ-8阻害剤は、Ac-AAVALLPAVLLAALAPIETD-CHOの配列を有するペプチドである。
【０２６０】
本明細書に記載される実施形態または態様のいずれかにおいて、送達システムは、以下からなる群から選択される：（１）生体適合性ポリマーは、ポリ（ラクチド）、ポリ（グリコリド）、ポリ（ラクチド-コ-グリコリド）、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリ（乳酸-コ-グリコール酸）、ポリカプロラクトン、ポリカーボネート、ポリエステルアミド、ポリ無水物、ポリ（アミノ酸）、ポリオルトエステル、ポリシアノアクリル酸、ポリ（p-ジオキサノン）、ポリ（シュウ酸アルキレン）、生分解性ポリウレタン、それらの混合物およびコポリマーからなる群から選択される；（２）リポソーム調製物は、ジパルミトイルPE（DPPE）などのホスファチジルエタノールアミン（PE）、およびたとえば卵PC（EPC）またはSPCなどの部分不飽和ホスファチジルコリン（PC）、たとえばHSPCなどの完全不飽和PC、PG、ホスファチジルセリン（PS）、およびホスファチジルイノシトール（PI）、部分不飽和PG、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（DPPG）、コレステロール、DSPE-PEG2000からなる群から選択される；（３）DMSO溶液；（４）LyoCell（登録商標）；および（５）トリグリセリド（Compritol 888 ATOおよびDynasan 112）、カルナバワックス、ミツロウ、セチルアルコール、乳化ワックス、コレステロール、酪酸コレステロール、およびポリ（エチレン）グリコール（PEG）誘導体からなる群から選択される固体脂質ナノ粒子調製物。
【０２６１】
本明細書に記載される実施形態または態様のいずれかにおいて、送達システムは、以下からなる群から選択される：（１）生体適合性ポリマー、（２）リポソーム調製物、（３）DMSO溶液、（４）LyoCell（登録商標）、および（５）固体脂質ナノ粒子調製物。
【０２６２】
本明細書に記載される実施形態または態様のいずれかにおいて、生体適合性ポリマーは、ポリ（ラクチド）、ポリ（グリコリド）、ポリ（ラクチド-コ-グリコリド）、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリ（乳酸-コ-グリコール酸）、ポリカプロラクトン、ポリカーボネート、ポリエステルアミド、ポリ無水物、ポリ（アミノ酸）、ポリオルトエステル、ポリシアノアクリル酸、ポリ（p-ジオキサノン）、ポリ（シュウ酸アルキレン）、生分解性ポリウレタン、それらの混合物およびコポリマーからなる群から選択される。
【０２６３】
本明細書に記載される実施形態または態様のいずれかにおいて、リポソーム調製物は、例えばジパルミトイルPE（DPPE）などのホスファチジルエタノールアミン（PE）、およびたとえば卵PC（EPC）またはSPCなどの部分不飽和ホスファチジルコリン（PC）、たとえばHSPCなどの完全不飽和PC、PG、ホスファチジルセリン（PS）、およびホスファチジルイノシトール（PI）、部分不飽和PG、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（DPPG）、コレステロール、DSPE-PEG2000からなる群から選択される。
【０２６４】
本明細書に記載される実施形態または態様のいずれかにおいて、固体脂質ナノ粒子調製物は、トリグリセリド（Compritol 888 ATOおよびDynasan 112）、カルナバワックス、ミツロウ、セチルアルコール、乳化ワックス、コレステロール、酪酸コレステロール、およびポリ（エチレン）グリコール（PEG）誘導体からなる群から選択される。
【０２６５】
本明細書に記載される実施形態または態様のいずれかにおいて、DMSO溶液は、約5％〜約100％のDMSOである。
【０２６６】
本明細書に記載される態様または実施形態のいずれかにおいて、ETBRアンタゴニスト、ETARアンタゴニスト、抗PD1抗体、bRAF阻害剤、ナイアシンアミド、およびカスパーゼ-8阻害剤のうちの少なくとも１つの用量は、約0.1μg〜約5000μgであり、および／またはETBRアンタゴニスト、ETARアンタゴニスト、抗PD1抗体、bRAF阻害剤、ナイアシンアミド、およびカスパーゼ-8阻害剤のうちの少なくとも１つの濃度は、組成物１mL当たり、約0.01μg/mL〜約1000mg/mLである。
【０２６７】
本明細書に記載される実施形態または態様のいずれかにおいて、ETBRアンタゴニスト、ETARアンタゴニスト、抗PD1抗体、bRAF阻害剤、ナイアシンアミド、およびカスパーゼ-8阻害剤のうちの少なくとも１つの用量は、約0.1μg〜約5000μgである。
【０２６８】
本明細書に記載される実施形態または態様のいずれかにおいて、ETBRアンタゴニスト、ETARアンタゴニスト、抗PD1抗体、bRAF阻害剤、ナイアシンアミド、およびカスパーゼ-8阻害剤のうちの少なくとも１つの濃度は、組成物1mL当たり、約0.01μg/mL〜約1000mg/mLである。
【０２６９】
本明細書に記載される態様または実施形態のいずれかにおいて、ETBRアンタゴニスト、ETARアンタゴニスト、抗PD1抗体、bRAF阻害剤、ナイアシンアミド、またはカスパーゼ-8阻害剤のうちの少なくとも１つの用量は、約100μg〜約4000μgであり、および／またはETBRアンタゴニスト、ETARアンタゴニスト、抗PD1抗体、bRAF阻害剤、ナイアシンアミド、およびカスパーゼ-8阻害剤のうちの少なくとも１つの濃度は、組成物１mL当たり、約0.01μg/mL〜約1000mg/mLである。
【０２７０】
本明細書に記載される態様または実施形態のいずれかにおいて、ETBRアンタゴニスト、ETARアンタゴニスト、抗PD1抗体、bRAF阻害剤、ナイアシンアミド、またはカスパーゼ-8阻害剤のうちの少なくとも１つの用量は、約100μg〜約4000μgである。
【０２７１】
本明細書に記載される実施形態または態様のいずれかにおいて、ETBRアンタゴニスト、ETARアンタゴニスト、抗PD1抗体、bRAF阻害剤、ナイアシンアミド、およびカスパーゼ-8阻害剤のうちの少なくとも１つの濃度は、組成物1mL当たり、約0.01μg/mL〜約1000mg/mLである。
【０２７２】
本明細書に記載される実施形態または態様のいずれかにおいて、製剤はさらに、Intravail（登録商標）、Protek（登録商標）、およびAegis HydrogelTMからなる群から選択される賦形剤を含有する。
【０２７３】
さらなる態様において、患者の癌の治療方法が提供される。当該方法は、その必要のある患者に対し、本開示組成物を投与することを含む。
【０２７４】
本明細書に記載される実施形態または態様のいずれかにおいて、組成物または製剤は、鼻内または静脈内または頭蓋内に送達される。
【０２７５】
さらなる態様において、患者の癌を治療する方法は、その必要のある患者に本開示の製剤を投与することを含む。
【０２７６】
別の態様において、癌の治療方法において使用するための本開示組成物または本開示製剤が提供される。当該使用は、その必要のある患者に対し、組成物または製剤を投与することを含む。
【０２７７】
本明細書に記載される実施形態または態様のいずれかにおいて、組成物または製剤は、鼻内または静脈内または頭蓋内に送達される。
【０２７８】
さらに別の態様において、エンドセリン受容体アンタゴニストに対する癌細胞の感受性を決定する方法が提供される。当該方法は、以下を含む：a)患者からの癌組織サンプルを提供する工程；b)当該組織サンプルを、ET-1に特異的に結合する抗体の存在下、および／またはET-3に特異的に結合する抗体の存在下でインキュベートする工程；およびc)ET-1および／またはET-3に結合した抗体量を検出する工程であって、ET-1および／またはET-3が癌中で活発に発現されている場合、当該癌は、エンドセリン受容体アンタゴニスト療法に対し感受性であること。
【０２７９】
本明細書に記載される実施形態または態様のいずれかにおいて、ET-1および／またはET-3に結合した抗体の量を検出することは、検出可能な標識が結合した二次抗体を用いて行われる。
【０２８０】
本明細書に記載される態様または実施形態のいずれかにおいて、c)の検出の後、当該方法は、d)エンドセリン受容体アンタゴニストまたはETBRシグナル伝達阻害剤（たとえば、カスパーゼ-8阻害剤）のうちの少なくとも１つの有効量を投与することをさらに含む。
【０２８１】
本明細書に記載される態様または実施形態のいずれかにおいて、エンドセリン受容体アンタゴニストは、選択的ETBRアンタゴニスト、および／または選択的ETARアンタゴニストである。
【０２８２】
本明細書に記載される態様または実施形態のいずれかにおいて、エンドセリン受容体アンタゴニストは、BQ788、BQ-017、BQ788の重水素化アナログもしくはフッ素化アナログ、BQ-017の重水素化アナログもしくはフッ素化アナログ、および／またはBQ123である。
【０２８３】
さらなる態様において、エンドセリン受容体アンタゴニストに対する癌細胞の感受性を決定する方法が提供される。当該方法は以下を含む：a)癌を有する患者からの癌細胞由来の組織サンプルを提供する工程；b)当該サンプルをホルマリン中に固定する工程；c)パラフィン包埋する工程；d)ミクロトームを用いて切片を切り、免疫組織化学法に適したガラススライドに切片を移す工程；e)ET-1の存在を検出する抗体および／またはET-3の存在を検出する抗体、ET-1および／またはET-3に結合する抗体に結合し、結合抗体複合体の可視化が可能な分子に結合されている少なくとも１つの追加の二次抗体の存在下でスライドをインキュベートし、それによりET-1および／またはET-3が腫瘍中で活発に発現されていることを決定し、それによりエンドセリン受容体へのET-1および／またはET-3の結合を阻害することで治療効果が発揮されることが示唆される工程。
【０２８４】
本明細書に記載される態様または実施形態のいずれかにおいて、エンドセリン受容体アンタゴニストは、選択的ETBRアンタゴニスト、および／または選択的ETARアンタゴニストである。
【０２８５】
本明細書に記載される態様または実施形態のいずれかにおいて、エンドセリン受容体アンタゴニストは、BQ788、BQ-017、BQ788の重水素化アナログもしくはフッ素化アナログ、BQ-017の重水素化アナログもしくはフッ素化アナログ、および／またはBQ123である。
【０２８６】
ある態様において、ETBR関連転移性脳腫瘍の治療方法が提供される。当該方法は、その必要のある対象に、請求項１の組成物の有効量を投与することを含み、当該組成物は、ETBR関連転移性脳腫瘍の症状の治療または改善に有効である。
【０２８７】
別の態様において、ETBR関連転移性脳腫瘍の治療方法において使用するための本開示組成物または本開示製剤が提供される。当該使用は、その必要のある対象に、本組成物または本製剤の有効量を投与することを含み、当該組成物は、ETBR関連転移性脳腫瘍の症状の治療または改善に有効である。
【０２８８】
本明細書に記載される態様または実施形態のいずれかにおいて、ETBR関連転移性脳腫瘍は、転移性黒色腫関連脳腫瘍、転移性扁平上皮細胞癌関連脳腫瘍、グリア芽腫、またはそれらの組み合わせである。
【０２８９】
本明細書に記載される態様または実施形態のいずれかにおいて、組成物または製剤は、鼻内または舌下に送達される。
【０２９０】
追加的態様において、ETBR関連転移性脳腫瘍の治療方法が提供される。当該方法は、その必要のある対象に、本開示製剤の有効量を投与することを含み、この場合において当該製剤は、ETBR関連転移性脳腫瘍の症状の治療または改善に有効である。
【０２９１】
追加的態様において、免疫系療法に対する癌細胞の感受性を決定する方法が提供される。当該方法は、以下を含む：a)癌を有する患者からの癌細胞由来の組織サンプルを提供する工程；b)当該組織サンプルを、ET-1に結合する抗体の存在下、および／またはET-3に結合する抗体の存在下でインキュベートする工程；およびc)ET-1および／またはET-3に結合した抗体量を検出する工程であって、ET-1および／またはET-3が腫瘍中で活発に発現されている場合、それにより当該癌は、免疫系療法に対し非反応性であることを示唆する工程。
【０２９２】
本明細書に記載される実施形態または態様のいずれかにおいて、ET-1および／またはET-3に結合した抗体量の検出は、検出可能な標識が結合した少なくとも１つの二次抗体を用いて行われる。
【０２９３】
本明細書に記載される態様または実施形態のいずれかにおいて、c)の検出の後、当該方法はさらに、d)エンドセリン受容体アンタゴニストの有効量を投与する工程をさらに含む。
【０２９４】
本明細書に記載される態様または実施形態のいずれかにおいて、免疫系療法は、免疫チェックポイント阻害剤、癌ワクチン、およびキメラ抗原受容体T細胞（CAR-T）療法からなる群から選択される。
【０２９５】
本明細書に記載される実施形態または態様のいずれかにおいて、免疫チェックポイント阻害剤は、抗PD-1抗体である。
【０２９６】
さらなる態様において、免疫系療法に対する癌細胞の感受性を決定する方法が提供される。当該方法は以下を含む：a)癌を有する患者からの癌細胞由来の組織サンプルを提供する工程；b)当該サンプルをホルマリン中に固定する工程；c)パラフィン包埋する工程；d)ミクロトームを用いて切片を切り、免疫組織化学法に適したガラススライドに切片を移す工程；e)ET-1の存在を検出する抗体および／またはET-3の存在を検出する抗体、ET-1および／またはET-3に結合する抗体に結合し、結合抗体複合体の可視化が可能な分子に結合されている少なくとも１つの追加の二次抗体の存在下でスライドをインキュベートし、それによりET-1および／またはET-3が腫瘍中で活発に発現されていることを決定し、それにより癌が、免疫系療法に対し反応性ではないことを示唆する工程。
【０２９７】
本明細書に記載される態様または実施形態のいずれかにおいて、免疫系療法は、免疫チェックポイント阻害剤、癌ワクチン、およびキメラ抗原受容体T細胞（CAR-T）療法からなる群から選択される。
【０２９８】
本明細書に記載される実施形態または態様のいずれかにおいて、免疫チェックポイント阻害剤は、抗PD-1抗体である。
【０２９９】
本願を通して引用された全ての参考文献、特許、係属中の特許出願、および公開特許の内容は参照により明示的に本明細書に援用される。
【０３００】
当業者は本明細書に記載される本発明の特定の実施形態との多数の等価物を単なる日常的な実験を用いて理解し、または確認することができる。そのような等価物は以下の特許請求の範囲に包含されるものとする。本明細書に記載される詳細な例および実施形態は例示を目的とした例として提供されているだけであり、決して本発明を限定していると考えられてはならないことが理解される。それらの視点からの様々な改変または変更が当業者に提案され、それらは本願の主旨と範囲内に含まれ、そして添付されている特許請求の範囲の範囲内にあると考えられる。例えば、成分の相対的な量を所望の効果の最適化のために変更してよく、追加の成分を加えてよく、且つ／または記載の成分のうちの１つ以上について類似の成分で置換してよい。本発明の系、方法、および過程に付随する追加の有利な特徴および機能性は添付されている特許請求の範囲から明らかになる。また、当業者は本明細書に記載される本発明の特定の実施形態との多数の等価物を単なる日常的な実験を用いて理解し、または確認することができる。そのような等価物は以下の特許請求の範囲に包含されるものとする。
【０３０１】
参考文献
以下の参考文献は、すべての目的に対しその全体で参照により本明細書に援用される。
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【図１】
2018528980.tif 000007
【図２】
2018528980.tif 000008
【図３】
2018528980.tif 000009
【図４Ａ】
2018528980.tif 000010
【図４Ｂ】
2018528980.tif 000011
【図５−１】
2018528980.tif 000012
【図５−２】
2018528980.tif 000013
【図６】
2018528980.tif 000014
【図７】
2018528980.tif 000015
【図８】
2018528980.tif 000016
【図９】
2018528980.tif 000017
【図１０Ａ】
2018528980.tif 000018
【図１０Ｂ】
2018528980.tif 000019
【図１０Ｃ】
2018528980.tif 000020
【図１１Ａ】
2018528980.tif 000021
【図１１Ｂ】
2018528980.tif 000022
【図１２Ａ】
2018528980.tif 000023
【図１２Ｂ】
2018528980.tif 000024
【図１２Ｃ】
2018528980.tif 000025
【図１２Ｄ】
2018528980.tif 000026
【図１３Ａ】
2018528980.tif 000027
【図１３Ｂ】
2018528980.tif 000028
【図１４Ａ】
2018528980.tif 000029
【図１４Ｂ】
2018528980.tif 000030
【図１４Ｃ】
2018528980.tif 000031
【図１４Ｄ】
2018528980.tif 000032
【図１４Ｅ】
2018528980.tif 000033
【配列表】
2018528980000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成30年3月30日(2018.3.30)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
(a)エンドセリンB受容体（ETBR）アンタゴニスト、カスパーゼ-8阻害剤、またはそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つおよび薬学的に許容可能な担体と、
(b)エンドセリンA受容体（ETAR）アンタゴニスト、抗PD1抗体、bRAF阻害剤、ナイアシンアミド、またはそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つおよび薬学的に許容可能な担体と、を含有する、治療用共投与組成物であって、(a)及び(b)の各々が、別々の剤型である、組成物。
【請求項２】
前記抗PD-1抗体が、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ピジリズマブ、またはそれらの組み合わせの少なくとも１つである、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記bRAF阻害剤が、ダブラフェニブ、ソラフェニブ、ベムラフェニブ、またはそれらの組み合わせの少なくとも１つである、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
前記ETBRアンタゴニストが、BQ788、BQ-017、A192621、それらの重水素化アナログもしくはフッ素化アナログ、またはそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５】
前記ETARアンタゴニストが、BQ123である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６】
前記ETBRアンタゴニスト、前記ETARアンタゴニスト、前記抗PD1抗体、前記bRAF阻害剤、前記ナイアシンアミド、および前記カスパーゼ-8阻害剤のうちの少なくとも１つの用量が、約0.1μg〜約5000μgであり、ならびに／または前記ETBRアンタゴニスト、前記ETARアンタゴニスト、前記抗PD1抗体、前記bRAF阻害剤、前記ナイアシンアミド、および前記カスパーゼ-8阻害剤のうちの少なくとも１つの濃度が、組成物１mL当たり、約0.01μg/mL〜約1000mg/mLである、請求項１〜５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７】
LyoCell（登録商標）、大豆油、ジメチルスルホキシド（DMSO）、Intravail（登録商標）、Protek（登録商標）、またはAegis HydrogelTMである少なくとも１つの賦形剤をさらに含有する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項８】
前記薬学的に許容可能な担体は、固体脂質ナノ粒子、リポソーム、または生体適合性ポリマーである、請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項９】
活性成分の均一分散物を含有する、制御放出型の皮下共投与製剤または筋肉内共投与製剤であって、
(a)ETBRアンタゴニスト、カスパーゼ-8阻害剤、またはそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つと、
(b)生体適合性送達システム中の、ETARアンタゴニスト、抗PD1抗体、bRAF阻害剤、ナイアシンアミド、またはそれらの組み合わせの少なくとも１つとを含有し、
共投与後、(a)及び(b)の活性成分が前記製剤から全身循環へとゆっくりと、および同時に放出される、製剤。
【請求項１０】
前記抗PD-1抗体が、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ピジリズマブ、およびそれらの組み合わせの少なくとも１つであり；
前記bRAF阻害剤が、ダブラフェニブ、ソラフェニブ、ベムラフェニブ、およびそれらの組み合わせの少なくとも１つであり；
前記ETBRアンタゴニストが、BQ788、BQ-017、A192621、それらの重水素化アナログもしくはフッ素化アナログ、またはそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つであり；
前記ETARアンタゴニストが、BQ123であり；および
前記カスパーゼ-8阻害剤が、Ac-AAVALLPAVLLAALAPIETD-CHOの配列を有するペプチドである、請求項９に記載の制御放出型皮下共投与製剤または筋肉内共投与製剤。
【請求項１１】
前記送達システムが、
ポリ（ラクチド）、ポリ（グリコリド）、ポリ（ラクチド-コ-グリコリド）、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリ（乳酸-コ-グリコール酸）、ポリカプロラクトン、ポリカーボネート、ポリエステルアミド、ポリ無水物、ポリ（アミノ酸）、ポリオルトエステル、ポリシアノアクリル酸、ポリ（p-ジオキサノン）、ポリ（シュウ酸アルキレン）、生分解性ポリウレタン、それらの混合物およびコポリマーの少なくとも一つを含む生体適合性ポリマー、
ジパルミトイルPE（DPPE）などのホスファチジルエタノールアミン（PE）、およびたとえば卵PC（EPC）またはSPCなどの部分不飽和ホスファチジルコリン（PC）、たとえばHSPCなどの完全不飽和PC、PG、ホスファチジルセリン（PS）およびホスファチジルイノシトール（PI）、部分不飽和PG、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（DPPG）、コレステロール、DSPE-PEG2000の少なくとも一つを含むリポソーム調製物、
DMSO溶液、
LyoCell（登録商標）、もしくは
トリグリセリド（Compritol 888 ATOおよびDynasan 112）、カルナバワックス、ミツロウ、セチルアルコール、乳化ワックス、コレステロール、酪酸コレステロール、およびポリ（エチレン）グリコール（PEG）誘導体の少なくとも一つを含む固体脂質ナノ粒子調製物、または
それらの組み合わせである、請求項９または１０に記載の制御放出型製剤。
【請求項１２】
前記ETBRアンタゴニスト、前記ETARアンタゴニスト、前記抗PD1抗体、前記bRAF阻害剤、前記ナイアシンアミド、または前記カスパーゼ-8阻害剤のうちの少なくとも１つの用量が、約0.1μg〜約5000μgである、請求項９〜１１のいずれか１項に記載の制御放出型製剤。
【請求項１３】
前記ETBRアンタゴニスト、前記ETARアンタゴニスト、前記抗PD1抗体、前記bRAF阻害剤、前記ナイアシンアミド、および前記カスパーゼ-8阻害剤のうちの少なくとも１つの濃度が、組成物1mL当たり、約0.01μg/mL〜約1000mg/mLである、請求項９〜１２のいずれか１項に記載の制御放出型製剤。
【請求項１４】
Intravail（登録商標）、Protek（登録商標）、およびAegis HydrogelTMからなる群から選択される賦形剤をさらに含有する、請求項９〜１３のいずれか１項に記載の制御放出型製剤。
【請求項１５】
その必要のある患者に前記組成物または前記製剤を投与することを含む、患者の癌を治療するための方法における使用のための請求項１〜８のいずれか１項に記載の組成物、または請求項９〜１４のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１６】
ETBR関連転移性脳腫瘍の治療方法における使用のための、請求項１〜８のいずれか１項に記載の組成物、または請求項９〜１４のいずれか１項に記載の製剤であって、前記方法が、その必要のある対象に、前記組成物または前記製剤の有効量を投与することを含み、前記組成物は、ETBR関連転移性脳腫瘍の症状の治療または改善に有効である、組成物または製剤。
【請求項１７】
前記カスパーゼ-8阻害剤が、Ac-AAVALLPAVLLAALAPIETD-CHOの配列を有するペプチドである、請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１８】
BQ788、BQ-017、もしくはA192621の少なくとも一つの重水素化アナログもしくはフッ素化アナログ、またはそれらの組合せであるETBRアンタゴニストと、薬学的に許容可能な担体とを含む治療用組成物。
【請求項１９】
薬学的に許容可能な担体中に、BQ788、BQ-017、A192621、それらの重水素化アナログもしくはフッ素化アナログの少なくとも一つ、またはそれらの組合せであるETBRアンタゴニストのナノ粒子調製物を含む治療用組成物であって、前記ナノ粒子調製物の投与後、ETBRアンタゴニストが全身循環へゆっくりと放出される、治療用組成物。
【請求項２０】
エンドセリンA受容体（ETAR）アンタゴニスト、抗PD1抗体、bRAF阻害剤、ナイアシンアミド、またはそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つおよび薬学的に許容可能な担体の別個の剤型と共投与される、請求項１８または１９に記載の治療用組成物。
【国際調査報告】
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