(57)【要約】ＩＬ−２に基づく治療法および間葉系幹細胞に基づく治療法に有用なコンパニオン方法およびキットが本明細書に記載されている。現在まで、ＩＬ−２療法の投与に伴う潜在的有害事象、および移植されたＭＳＣに対する環境の潜在的有害効果を決定する仕方はほとんど知られていない。そこで、ＩＬ−２で処置されている患者の処置、およびＭＳＣに基づく治療法を受けている患者のための処置を改善するためのコンパニオン方法およびキットの必要がある。本発明はこれらの課題を解決する手段を提供する。
2018518692.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＩＬ−２に基づく治療法を受けるのに適格な個体が、前記ＩＬ−２に基づく治療法に伴う有害事象を経験し得るか決定する方法であって、
（ａ）前記個体由来の試料における、バイオマーカーのパネルから選択される少なくとも２種のバイオマーカーの発現レベルを測定するステップであって、（１）前記個体が、少なくとも１用量のＩＬ−２に基づく治療法を受けたことがある、または（２）前記試料が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＩＬ−２と組み合わされるのいずれかであり、前記バイオマーカーのパネルが、ＴＩＥ−１、ＴＩＥ−２、ＴＩＭＰ−４、ＦＧＦ１、ＬＩＦ、ＴＧＦＢＲ２、ＣＳＦ１、ＴＧＦα、ＴＧＦβ１、ＩＬ１７Ｄ、ＳＤＦ２、ＴＧＦＢＲＡＰ１、ＦＧＦ１１、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＦＧＦ１４、ＩＬ１β、ＩＬ−１１、ＩＬ−３２、ＩＬ−６、ＩＬ１ＲＮ、ＩＬ−２０ＲＢ、ＩＬ−２１Ｒ、ＰＬＡＵ、ＧＮＢ２Ｌ１、ＰＬＥＫＨＡ６、ＣＴＳＢ、ＦＥＲＭＴ１、ＣＲＭＰ１、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＡおよびＰＬＥＫＨＡ１を含むステップと、
（ｂ）前記バイオマーカーのレベルを参照レベルと比較するステップであって、前記参照レベルを上回る前記レベルの増加が、前記個体が前記ＩＬ−２に基づく治療法に伴う有害事象を経験し得ることを示し、前記参照レベルと比較した前記レベルの減少または変化なしが、前記個体が前記ＩＬ−２に基づく治療法に伴う有害事象を経験しない場合があることを示すステップと
を含む方法。
【請求項２】
前記個体が、少なくとも１用量のＩＬ−２に基づく治療法を受けたことがある、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記個体が、がんの処置のために前記ＩＬ−２に基づく治療法を受けたことがある、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記試料が、前記ＩＬ−２に基づく治療法を受けてから２４、４８または７２時間後に前記個体から得られた、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
前記試料が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＩＬ−２と組み合わされる、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記試料が、ＩＬ−２と約２４時間組み合わされる、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記発現レベルが、前記試料からのＩＬ−２の除去から２４、４８または７２時間後に測定される、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
前記バイオマーカーのパネル由来の少なくとも３種のバイオマーカーの発現レベルを測定するステップを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記バイオマーカーのパネル由来の少なくとも４種のバイオマーカーの発現レベルを測定するステップを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記バイオマーカーのパネル由来の少なくとも５種のバイオマーカーの発現レベルを測定するステップを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
ＴＩＥ−１、ＴＩＥ−２、ＴＩＭＰ−４、ＶＥＧＦＡ、ＰＬＥＫＨＡ１、ＶＥＧＦＢ、ＣＲＭＰ１、ＦＥＲＭＴ１、ＣＴＳＢ、ＰＬＥＫＨＡ６、ＧＮＢ２Ｌ１およびＴＧＦβ１の発現レベルを測定するステップを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
ＳＩＶＡ１のレベルを測定するステップをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記バイオマーカーのタンパク質レベルを測定するステップを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記測定ステップが、ＥＬＩＳＡアッセイ、抗体プロテオミクスアレイ、免疫組織化学的検査または質量分析により為される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記バイオマーカーのＲＮＡレベルを測定するステップを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記測定ステップが、Ｑ−ＰＣＲアッセイまたはＲＮＡ−ｓｅｑにより為される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記個体から試料を得るステップをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
前記試料が、血液、血漿または血清試料である、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
ステップ（ｂ）において、前記個体が、前記ＩＬ−２に基づく治療法に伴う有害事象を経験しない場合があることが決定された場合、有効量の前記ＩＬ−２に基づく治療法を前記個体に投与するステップをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
ステップ（ｂ）において、前記個体が、前記ＩＬ−２に基づく治療法に伴う有害事象を経験し得ることが決定された場合、前記個体に若返り治療法を投与するステップをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２１】
ＩＬ−２に基づく治療法によりがんに関して個体を処置する方法であって、
（ａ）前記個体由来の試料における、バイオマーカーのパネルから選択される少なくとも２種のバイオマーカーの発現レベルを測定するステップであって、（１）前記個体が、少なくとも１用量のＩＬ−２に基づく治療法を受けたことがある、または（２）前記試料が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＩＬ−２と組み合わされるのいずれかであり、前記バイオマーカーのパネルが、ＴＩＥ−１、ＴＩＥ−２、ＴＩＭＰ−４、ＦＧＦ１、ＬＩＦ、ＴＧＦＢＲ２、ＣＳＦ１、ＴＧＦα、ＴＧＦβ１、ＩＬ１７Ｄ、ＳＤＦ２、ＴＧＦＢＲＡＰ１、ＦＧＦ１１、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＦＧＦ１４、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ−１１、ＩＬ−３２、ＩＬ−６、ＩＬ１ＲＮ、ＩＬ−２０ＲＢ、ＩＬ−２１Ｒ、ＰＬＡＵ、ＧＮＢ２Ｌ１、ＰＬＥＫＨＡ６、ＣＴＳＢ、ＦＥＲＭＴ１、ＣＲＭＰ１、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＡおよびＰＬＥＫＨＡ１を含むステップと、
（ｂ）前記バイオマーカーのレベルを参照レベルと比較するステップであって、前記レベルの変化なしまたは前記参照レベルを下回る減少が、前記個体が、前記ＩＬ−２に基づく治療法に伴う有害事象を経験しない場合があることを示すステップと、
（ｃ）ステップ（ｂ）において、前記個体が、前記ＩＬ−２に基づく治療法に伴う有害事象を経験しない場合があることが決定された場合、有効量の前記ＩＬ−２に基づく治療法を前記個体に投与するステップと
を含む方法。
【請求項２２】
前記個体が、少なくとも１用量のＩＬ−２に基づく治療法を受けたことがある、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記個体が、がんの処置のために前記ＩＬ−２に基づく治療法を受けたことがある、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記試料が、前記ＩＬ−２に基づく治療法を受けてから２４、４８または７２時間後に前記個体から得られた、請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
前記試料が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＩＬ−２と組み合わされる、請求項２１に記載の方法。
【請求項２６】
前記試料が、ＩＬ−２と約２４時間組み合わされる、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記発現レベルが、前記試料からのＩＬ−２の除去から２４、４８または７２時間後に測定される、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
前記バイオマーカーのパネル由来の少なくとも３種のバイオマーカーの発現レベルを測定するステップを含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２９】
前記バイオマーカーのパネル由来の少なくとも４種のバイオマーカーの発現レベルを測定するステップを含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項３０】
前記バイオマーカーのパネル由来の少なくとも５種のバイオマーカーの発現レベルを測定するステップを含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項３１】
ＴＩＥ−１、ＴＩＥ−２、ＴＩＭＰ−４、ＶＥＧＦＡ、ＰＬＥＫＨＡ１、ＶＥＧＦＢ、ＣＲＭＰ１、ＦＥＲＭＴ１、ＣＴＳＢ、ＰＬＥＫＨＡ６、ＧＮＢ２Ｌ１およびＴＧＦβ１の発現レベルを測定するステップを含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項３２】
ＳＩＶＡ１のレベルを測定するステップをさらに含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項３３】
前記バイオマーカーのタンパク質レベルを測定するステップを含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項３４】
前記測定ステップが、ＥＬＩＳＡアッセイ、抗体プロテオミクスアレイ、免疫組織化学的検査または質量分析により為される、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記バイオマーカーのＲＮＡレベルを測定するステップを含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項３６】
前記測定ステップが、Ｑ−ＰＣＲアッセイまたはＲＮＡ−ｓｅｑにより為される、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記個体から試料を得るステップをさらに含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項３８】
前記試料が、血液、血漿または血清試料を含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項３９】
ＩＬ−２に基づく治療法によりがんに関して個体を処置する方法であって、少なくとも２種のバイオマーカーの発現レベルが、前記個体由来の試料において、参照レベルと比較して減少するか、または変化を示さない場合、有効量の前記ＩＬ−２に基づく治療法を前記個体に投与するステップであって、（１）前記個体が、少なくとも１用量のＩＬ−２に基づく治療法を受けたことがある、または（２）前記試料が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＩＬ−２と組み合わされるのいずれかであり、前記バイオマーカーのパネルが、ＴＩＥ−１、ＴＩＥ−２、ＴＩＭＰ−４、ＦＧＦ１、ＬＩＦ、ＴＧＦＢＲ２、ＣＳＦ１、ＴＧＦα、ＴＧＦβ１、ＩＬ１７Ｄ、ＳＤＦ２、ＴＧＦＢＲＡＰ１、ＦＧＦ１１、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＦＧＦ１４、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ−１１、ＩＬ−３２、ＩＬ−６、ＩＬ１ＲＮ、ＩＬ−２０ＲＢ、ＩＬ−２１Ｒ、ＰＬＡＵ、ＧＮＢ２Ｌ１、ＰＬＥＫＨＡ６、ＣＴＳＢ、ＦＥＲＭＴ１、ＣＲＭＰ１、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＡおよびＰＬＥＫＨＡ１を含むステップを含む方法。
【請求項４０】
前記個体が、少なくとも１用量のＩＬ−２に基づく治療法を受けたことがある、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記個体が、がんの処置のために前記ＩＬ−２に基づく治療法を受けたことがある、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記試料が、前記ＩＬ−２に基づく治療法を受けてから２４、４８または７２時間後に前記個体から得られた、請求項３９に記載の方法。
【請求項４３】
前記試料が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＩＬ−２と組み合わされる、請求項３９に記載の方法。
【請求項４４】
前記試料が、ＩＬ−２と約２４時間組み合わされる、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記発現レベルが、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける前記試料からのＩＬ−２の除去から２４、４８または７２時間後に測定される、請求項４３に記載の方法。
【請求項４６】
前記バイオマーカーのパネル由来の少なくとも３種のバイオマーカーの発現レベルを測定するステップを含む、請求項３９に記載の方法。
【請求項４７】
前記バイオマーカーのパネル由来の少なくとも４種のバイオマーカーの発現レベルを測定するステップを含む、請求項３９に記載の方法。
【請求項４８】
前記バイオマーカーのパネル由来の少なくとも５種のバイオマーカーの発現レベルを測定するステップを含む、請求項３９に記載の方法。
【請求項４９】
ＴＩＥ−１、ＴＩＥ−２、ＴＩＭＰ−４、ＶＥＧＦＡ、ＰＬＥＫＨＡ１、ＶＥＧＦＢ、ＣＲＭＰ１、ＦＥＲＭＴ１、ＣＴＳＢ、ＰＬＥＫＨＡ６、ＧＮＢ２Ｌ１およびＴＧＦβ１の発現レベルを測定するステップを含む、請求項３９に記載の方法。
【請求項５０】
ＳＩＶＡ１のレベルを測定するステップをさらに含む、請求項３９に記載の方法。
【請求項５１】
前記バイオマーカーのタンパク質レベルを測定するステップを含む、請求項３９に記載の方法。
【請求項５２】
前記測定ステップが、ＥＬＩＳＡアッセイ、抗体プロテオミクスアレイ、免疫組織化学的検査または質量分析により為される、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
前記バイオマーカーのＲＮＡレベルを測定するステップを含む、請求項３９に記載の方法。
【請求項５４】
前記測定ステップが、Ｑ−ＰＣＲアッセイまたはＲＮＡ−ｓｅｑにより為される、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記試料が、血液、血漿または血清試料を含む、請求項３９に記載の方法。
【請求項５６】
間葉系幹細胞（ＭＳＣ）の集団が、ＭＳＣに基づく治療法のための個体への投与に適するか決定する方法であって、
（ａ）前記ＭＳＣの集団と共にＩＬ−２をインキュベートするステップと、
（ｂ）前記ＭＳＣにおける、バイオマーカーのパネルから選択される少なくとも２種のバイオマーカーの発現レベルを測定するステップであって、前記バイオマーカーのパネルが、ＴＩＥ−１、ＴＩＥ−２、ＴＩＭＰ−４、ＦＧＦ１、ＬＩＦ、ＴＧＦＢＲ２、ＣＳＦ１、ＴＧＦα、ＴＧＦβ１、ＩＬ１７Ｄ、ＳＤＦ２、ＴＧＦＢＲＡＰ１、ＦＧＦ１１、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＦＧＦ１４、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ−１１、ＩＬ−３２、ＩＬ−６、ＩＬ１ＲＮ、ＩＬ−２０ＲＢ、ＩＬ−２１Ｒ、ＰＬＡＵ、ＧＮＢ２Ｌ１、ＰＬＥＫＨＡ６、ＣＴＳＢ、ＦＥＲＭＴ１、ＣＲＭＰ１、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＡおよびＰＬＥＫＨＡ１を含むステップと、
（ｃ）前記バイオマーカーのレベルを参照レベルと比較するステップであって、前記参照レベルを上回る前記レベルの増加が、前記ＭＳＣが、個体への投与に適さないことを示し、前記レベルの変化なしまたは前記参照レベルを下回る減少が、前記ＭＳＣが、個体への投与に適することを示すステップと
を含む方法。
【請求項５７】
前記バイオマーカーのパネル由来の少なくとも３種のバイオマーカーの発現レベルを測定するステップを含む、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
前記バイオマーカーのパネル由来の少なくとも４種のバイオマーカーの発現レベルを測定するステップを含む、請求項５６に記載の方法。
【請求項５９】
前記バイオマーカーのパネル由来の少なくとも５種のバイオマーカーの発現レベルを測定するステップを含む、請求項５６に記載の方法。
【請求項６０】
ＴＩＥ−１、ＴＩＥ−２、ＴＩＭＰ−４、ＶＥＧＦＡ、ＰＬＥＫＨＡ１、ＶＥＧＦＢ、ＣＲＭＰ１、ＦＥＲＭＴ１、ＣＴＳＢ、ＰＬＥＫＨＡ６、ＧＮＢ２Ｌ１およびＴＧＦβ１の発現レベルを測定するステップを含む、請求項５６に記載の方法。
【請求項６１】
ＳＩＶＡ１のレベルを測定するステップをさらに含む、請求項５６に記載の方法。
【請求項６２】
前記バイオマーカーのタンパク質レベルを測定するステップを含む、請求項５６に記載の方法。
【請求項６３】
前記測定ステップが、ＥＬＩＳＡアッセイ、抗体プロテオミクスアレイ、免疫組織化学的検査または質量分析により為される、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
前記バイオマーカーのＲＮＡレベルを測定するステップを含む、請求項５６に記載の方法。
【請求項６５】
前記測定ステップが、Ｑ−ＰＣＲアッセイまたはＲＮＡ−ｓｅｑにより為される、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
前記細胞が、前記ＩＬ−２と共に約２４時間インキュベートされる、請求項５６に記載の方法。
【請求項６７】
前記測定ステップが、前記ＩＬ−２の除去から２４、４８または７２時間後に行われる、請求項５６に記載の方法。
【請求項６８】
前記細胞の集団を前記個体に投与するステップをさらに含む、請求項５６に記載の方法。
【請求項６９】
前記細胞を若返らせるステップをさらに含む、請求項５６に記載の方法。
【請求項７０】
移植に対するＭＳＣの集団の適合性を評価するための、またはＩＬ−２に基づく治療法を投与するべきか決定するためのキットであって、試料におけるバイオマーカーのパネルから選択される少なくとも２種のバイオマーカーの発現レベルを測定するための試薬を含み、前記バイオマーカーのパネルが、ＴＩＥ−１、ＴＩＥ−２、ＴＩＭＰ−４、ＦＧＦ１、ＬＩＦ、ＴＧＦＢＲ２、ＣＳＦ１、ＴＧＦα、ＴＧＦβ１、ＩＬ１７Ｄ、ＳＤＦ２、ＴＧＦＢＲＡＰ１、ＦＧＦ１１、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＦＧＦ１４、ＩＬ１β、ＩＬ−１１、ＩＬ−３２、ＩＬ−６、ＩＬ１ＲＮ、ＩＬ−２０ＲＢ、ＩＬ−２１Ｒ、ＰＬＡＵ、ＧＮＢ２Ｌ１、ＰＬＥＫＨＡ６、ＣＴＳＢ、ＦＥＲＭＴ１、ＣＲＭＰ１、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＡおよびＰＬＥＫＨＡ１を含むキット。
【請求項７１】
前記試料における少なくとも３種のバイオマーカーの発現レベルを測定するための試薬を含む、請求項７０に記載のキット。
【請求項７２】
前記試料における少なくとも４種のバイオマーカーの発現レベルを測定するための試薬を含む、請求項７０に記載のキット。
【請求項７３】
前記試料における少なくとも５種のバイオマーカーの発現レベルを測定するための試薬を含む、請求項７０に記載のキット。
【請求項７４】
ＴＩＥ−１、ＴＩＥ−２、ＴＩＭＰ−４、ＶＥＧＦＡ、ＰＬＥＫＨＡ１、ＶＥＧＦＢ、ＣＲＭＰ１、ＦＥＲＭＴ１、ＣＴＳＢ、ＰＬＥＫＨＡ６、ＧＮＢ２Ｌ１およびＴＧＦβ１を測定するための試薬を含む、請求項７０に記載のキット。
【請求項７５】
ＩＬ−２をさらに含む、請求項７０に記載のキット。
【請求項７６】
移植に対するＭＳＣの集団の適合性を評価するための、請求項７０に記載のキット。
【請求項７７】
ＩＬ−２に基づく治療法を投与するべきか決定するための、請求項７０に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願への相互参照）
本出願は、２０１５年６月３日に出願された米国仮出願番号第６２／１７０，６０４号、２０１５年６月３日に出願された米国仮出願番号第６２／１７０，６１９号、および２０１５年６月１２日に出願された米国仮出願番号第６２／１７５，２０３号に基づく優先権を主張しており、これら仮出願の各々は、それらの全体が参考として本明細書中に援用される。
【背景技術】
【０００２】
（背景技術）
インターロイキン２（ＩＬ−２）は、免疫系におけるサイトカインシグナル伝達分子の一種であり、治療法として使用される。ＩＬ−２は、組換えＤＮＡ技術を使用して製造され、アルデスロイキン（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）の商標）と呼ばれるタンパク質治療薬として販売されている。ＩＬ−２は、がん（転移性メラノーマおよび腎細胞癌）およびＨＩＶの処置のために数か国で承認されている。
【０００３】
ＩＬ−２は、高用量レジメンによるがん処置のための化学療法剤として承認されたが、低用量形態で投与することもできる。高用量レジメンは、耐容性を示す限りにおいて、最大１５用量まで、８時間毎に薬物を静脈内投与することを伴う。高用量ＩＬ−２療法は、約１５％〜２０％の奏効率しか生じない；さらに、これは、基本的に全ての臓器系を侵す著しい毒性を伴う。これらの副作用の重症度のため、患者は、薬物を受けている間、入院し、集中治療室の支援を必要とする場合もある；重症例では、ＩＬ−２処置は中断される。
ヒト間葉系幹細胞（ＭＳＣ）は現在、種々の状態を処置するための移植のための幹細胞の主要供給源の１つである（Kucerova、Cancer  Res  ２００７年７月１日、６７巻；６３０４頁）。ｉｎ  ｖｉｖｏでの炎症誘発性または他の面で快適でない環境の存在下におけるこのような移植された幹細胞は、望まれない有害事象を生じ得る。ＭＳＣの有益な特性が、その局所的環境によって影響される程度については、ほとんど知られていない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Kucerova、Cancer  Res  ２００７年７月１日、６７巻；６３０４頁
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
まとめると、現在まで、ＩＬ−２療法の投与に伴う潜在的有害事象、および移植されたＭＳＣに対する環境の潜在的有害効果を決定する仕方はほとんど知られていない。そこで、ＩＬ−２で処置されている患者の処置、およびＭＳＣに基づく治療法を受けている患者のための処置を改善するためのコンパニオン方法およびキットの必要がある。これらの目的のための方法およびキットが、本明細書に記載されている。
【０００６】
（発明の要旨）
ＩＬ−２に基づく治療法を受けるのに適格な個体またはＩＬ−２に基づく治療法を既に受けている個体が、このＩＬ−２に基づく治療法に伴う有害事象を経験する可能性があるか決定するためのコンパニオン方法およびキットが、本明細書に記載されている。個体が、がん等、根底にある疾患の根絶よりもむしろ、腫瘍発生または転移のリスク増加等、有害事象を経験し得ることが決定された場合、処置決断は、さらなるＩＬ−２に基づく治療法を全く行わないものとすることができる。同様に、個体が、ＩＬ−２に基づく治療法に伴う有害事象を経験しない可能性が高いことが決定された場合、ＩＬ−２に基づく治療法の投与を開始するか、または続けるように決断を為すことができる。
【０００７】
ＭＳＣに基づく治療法を受けるのに適格な個体が、この治療法に伴う有害事象を経験する可能性があるか決定するためのコンパニオン方法およびキットも、本明細書に記載されている。
【０００８】
よって、本発明の一態様では、ＩＬ−２に基づく治療法を受けるのに適格な個体が、ＩＬ−２に基づく治療法に伴う有害事象を経験し得るか決定するための方法であって、（ａ）個体由来の試料における、バイオマーカーのパネルから選択される少なくとも２種のバイオマーカーの発現レベルを測定するステップであって、（１）個体が、少なくとも１用量のＩＬ−２に基づく治療法を受けたことがある、または（２）試料が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＩＬ−２と組み合わされるのいずれかであり、バイオマーカーのパネルが、ＴＩＥ−１、ＴＩＥ−２、ＴＩＭＰ−４、ＦＧＦ１、ＬＩＦ、ＴＧＦＢＲ２、ＣＳＦ１、ＴＧＦα、ＴＧＦβ１、ＩＬ１７Ｄ、ＳＤＦ２、ＴＧＦＢＲＡＰ１、ＦＧＦ１１、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＦＧＦ１４、ＩＬ１β、ＩＬ−１１、ＩＬ−３２、ＩＬ−６、ＩＬ１ＲＮ、ＩＬ−２０ＲＢ、ＩＬ−２１Ｒ、ＰＬＡＵ、ＧＮＢ２Ｌ１、ＰＬＥＫＨＡ６、ＣＴＳＢ、ＦＥＲＭＴ１、ＣＲＭＰ１、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＡおよびＰＬＥＫＨＡ１を含むステップと、（ｂ）バイオマーカーのレベルを参照レベルと比較するステップであって、参照レベルを上回るレベルの増加が、個体が、ＩＬ−２に基づく治療法に伴う有害事象を経験し得ることを示し、参照レベルと比較したレベルの減少または変化なしが、個体が、ＩＬ−２に基づく治療法に伴う有害事象を経験しない場合があることを示すステップとを含む方法が、本明細書に提供される。本発明の一変形形態では、個体は、少なくとも１用量のＩＬ−２に基づく治療法を受けたことがあり（例えば、投与されたことがあり）；一部の変形形態では、個体は、がんの処置のためにＩＬ−２に基づく治療法を受けたことがある。一部の変形形態では、試料は、ＩＬ−２に基づく治療法を受けてから２４、４８または７２時間後に個体から得られた。別の変形形態では、個体由来の試料は、さらなる分析のためにｉｎ  ｖｉｔｒｏでＩＬ−２と組み合わされ；一部の変形形態では、試料は、約２４時間の期間組み合わされてよく、その後、バイオマーカーが、ＩＬ−２の除去から２４、４８または７２時間後に測定される。本明細書に企図される通り、試料は、いずれかの生体試料であり得；一変形形態では、試料は、血液、血漿または血清試料である。特定の変形形態では、本方法は、バイオマーカーのパネル由来の少なくとも３種のバイオマーカー、バイオマーカーのパネル由来の少なくとも４種のバイオマーカー、またはバイオマーカーのパネル由来の少なくとも５種のバイオマーカーの発現レベルを測定するステップを含む。一部の変形形態では、本方法は、ＴＩＥ−１、ＴＩＥ−２、ＴＩＭＰ−４、ＶＥＧＦＡ、ＰＬＥＫＨＡ１、ＶＥＧＦＢ、ＣＲＭＰ１、ＦＥＲＭＴ１、ＣＴＳＢ、ＰＬＥＫＨＡ６、ＧＮＢ２Ｌ１およびＴＧＦβ１の発現レベルを測定するステップを含む。一部の変形形態では、本方法は、追加的なバイオマーカーを測定するステップをさらに含むことができる。特定の一変形形態では、本方法は、ＳＩＶＡ１の発現レベルを測定するステップと、このバイオマーカーの発現減少を照会するステップとをさらに含む。本明細書に企図される通り、ＲＮＡまたはタンパク質のいずれかの発現レベルを測定することができる。したがって、一変形形態では、本方法は、例えば、ＥＬＩＳＡアッセイ、抗体プロテオミクスアレイ、免疫組織化学的検査または質量分析により、バイオマーカーのタンパク質レベルを測定するステップを含む。別の変形形態では、本方法は、例えば、Ｑ−ＰＣＲアッセイまたはＲＮＡ−ｓｅｑにより、バイオマーカーのＲＮＡレベルを測定するステップを含む。一部の変形形態では、本方法は、本方法の一部として、個体から試料を得るステップを含む。発現の結果の決定の際に、本方法は、ステップ（ｂ）において、個体が、ＩＬ−２に基づく治療法に伴う有害事象を経験しない場合があることが決定された場合、有効量のＩＬ−２に基づく治療法を個体に投与するステップを含むことができる。本方法は、ステップ（ｂ）において、個体が、ＩＬ−２に基づく治療法に伴う有害事象を経験し得ることが決定された場合、若返り治療法を個体に投与するステップをさらにまた含むことができる。
【０００９】
別の態様では、本発明は、ＩＬ−２に基づく治療法によりがんに関して個体を処置する方法を提供する。一変形形態では、ＩＬ−２に基づく治療法によりがんに関して個体を処置する方法は、（ａ）個体由来の試料における、バイオマーカーのパネルから選択される少なくとも２種のバイオマーカーの発現レベルを測定するステップであって、（１）個体が、少なくとも１用量のＩＬ−２に基づく治療法を受けたことがある、または（２）試料が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＩＬ−２と組み合わされるのいずれかであり、バイオマーカーのパネルが、ＴＩＥ−１、ＴＩＥ−２、ＴＩＭＰ−４、ＦＧＦ１、ＬＩＦ、ＴＧＦＢＲ２、ＣＳＦ１、ＴＧＦα、ＴＧＦβ１、ＩＬ１７Ｄ、ＳＤＦ２、ＴＧＦＢＲＡＰ１、ＦＧＦ１１、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＦＧＦ１４、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ−１１、ＩＬ−３２、ＩＬ−６、ＩＬ１ＲＮ、ＩＬ−２０ＲＢ、ＩＬ−２１Ｒ、ＰＬＡＵ、ＧＮＢ２Ｌ１、ＰＬＥＫＨＡ６、ＣＴＳＢ、ＦＥＲＭＴ１、ＣＲＭＰ１、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＡおよびＰＬＥＫＨＡ１を含むステップと、（ｂ）バイオマーカーのレベルを参照レベルと比較するステップであって、レベルの変化なしまたは参照レベルを下回る減少が、個体が、ＩＬ−２に基づく治療法に伴う有害事象を経験しない場合があることを示すステップと、（ｃ）ステップ（ｂ）において、個体が、ＩＬ−２に基づく治療法に伴う有害事象を経験しない場合があることが決定された場合、有効量のＩＬ−２に基づく治療法を個体に投与するステップとを含む。別の変形形態では、ＩＬ−２に基づく治療法によりがんに関して個体を処置する方法は、少なくとも２種のバイオマーカーの発現レベルが、個体由来の試料において、参照レベルと比較して減少するか、または変化を示さない場合、有効量のＩＬ−２に基づく治療法を個体に投与するステップであって、（１）個体が、少なくとも１用量のＩＬ−２に基づく治療法を受けたことがある、または（２）試料が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＩＬ−２と組み合わされるのいずれかであり、バイオマーカーのパネルが、ＴＩＥ−１、ＴＩＥ−２、ＴＩＭＰ−４、ＦＧＦ１、ＬＩＦ、ＴＧＦＢＲ２、ＣＳＦ１、ＴＧＦα、ＴＧＦβ１、ＩＬ１７Ｄ、ＳＤＦ２、ＴＧＦＢＲＡＰ１、ＦＧＦ１１、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＦＧＦ１４、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ−１１、ＩＬ−３２、ＩＬ−６、ＩＬ１ＲＮ、ＩＬ−２０ＲＢ、ＩＬ−２１Ｒ、ＰＬＡＵ、ＧＮＢ２Ｌ１、ＰＬＥＫＨＡ６、ＣＴＳＢ、ＦＥＲＭＴ１、ＣＲＭＰ１、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＡおよびＰＬＥＫＨＡ１を含むステップを含む。本発明の一変形形態では、個体は、少なくとも１用量のＩＬ−２に基づく治療法を受けたことがある（例えば、投与されたことがある）。一部の変形形態では、試料は、ＩＬ−２に基づく治療法を受けてから２４、４８または７２時間後に個体から得られた。別の変形形態では、個体由来の試料は、さらなる分析のためにｉｎ  ｖｉｔｒｏでＩＬ−２と組み合わされ；一部の変形形態では、試料は、約２４時間の期間組み合わされてよく、その後、バイオマーカーが、ＩＬ−２の除去から２４、４８または７２時間後に測定される。本明細書に企図される通り、試料は、いずれかの生体試料であり得；一変形形態では、試料は、血液、血漿または血清試料であ���。特定の変形形態では、本方法は、バイオマーカーのパネル由来の少なくとも３種のバイオマーカー、バイオマーカーのパネル由来の少なくとも４種のバイオマーカー、またはバイオマーカーのパネル由来の少なくとも５種のバイオマーカーの発現レベルを測定するステップを含む。一部の変形形態では、本方法は、ＴＩＥ−１、ＴＩＥ−２、ＴＩＭＰ−４、ＶＥＧＦＡ、ＰＬＥＫＨＡ１、ＶＥＧＦＢ、ＣＲＭＰ１、ＦＥＲＭＴ１、ＣＴＳＢ、ＰＬＥＫＨＡ６、ＧＮＢ２Ｌ１およびＴＧＦβ１の発現レベルを測定するステップを含む。一部の変形形態では、本方法は、追加的なバイオマーカーを測定するステップをさらに含むことができる。特定の一変形形態では、本方法は、ＳＩＶＡ１の発現レベルを測定するステップと、このバイオマーカーの発現減少を照会するステップとをさらに含む。本明細書に企図される通り、ＲＮＡまたはタンパク質のいずれかの発現レベルを測定することができる。したがって、一変形形態では、本方法は、例えば、ＥＬＩＳＡアッセイ、抗体プロテオミクスアレイ、免疫組織化学的検査または質量分析により、バイオマーカーのタンパク質レベルを測定するステップを含む。別の変形形態では、本方法は、例えば、Ｑ−ＰＣＲアッセイまたはＲＮＡ−ｓｅｑにより、バイオマーカーのＲＮＡレベルを測定するステップを含む。一部の変形形態では、本方法は、本方法の一部として、個体から試料を得るステップを含む。本方法は、個体が、ＩＬ−２に基づく治療法に伴う有害事象を経験し得ることが決定された場合、若返り治療法を個体に投与するステップをさらにまた含むことができる。
【００１０】
別の態様では、本発明は、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）の集団が、ＭＳＣに基づく治療法のための個体への投与に適するか決定する方法であって、（ａ）ＭＳＣの集団と共にＩＬ−２をインキュベートするステップと、（ｂ）ＭＳＣにおける、バイオマーカーのパネルから選択される少なくとも２種のバイオマーカーの発現レベルを測定するステップであって、バイオマーカーのパネルが、ＴＩＥ−１、ＴＩＥ−２、ＴＩＭＰ−４、ＦＧＦ１、ＬＩＦ、ＴＧＦＢＲ２、ＣＳＦ１、ＴＧＦα、ＴＧＦβ１、ＩＬ１７Ｄ、ＳＤＦ２、ＴＧＦＢＲＡＰ１、ＦＧＦ１１、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＦＧＦ１４、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ−１１、ＩＬ−３２、ＩＬ−６、ＩＬ１ＲＮ、ＩＬ−２０ＲＢ、ＩＬ−２１Ｒ、ＰＬＡＵ、ＧＮＢ２Ｌ１、ＰＬＥＫＨＡ６、ＣＴＳＢ、ＦＥＲＭＴ１、ＣＲＭＰ１、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＡおよびＰＬＥＫＨＡ１を含むステップと、（ｃ）バイオマーカーのレベルを参照レベルと比較するステップであって、参照レベルを上回るレベルの増加が、ＭＳＣが、個体への投与に適さないことを示し、レベルの変化なしまたは参照レベルを下回る減少が、ＭＳＣが、個体への投与に適することを示すステップとを含む方法を提供する。一部の変形形態では、本方法は、バイオマーカーのパネル由来の少なくとも３種のバイオマーカーの発現レベルを測定するステップ、バイオマーカーのパネル由来の少なくとも４種のバイオマーカーの発現レベルを測定するステップ、またはバイオマーカーのパネル由来の少なくとも５種のバイオマーカーの発現レベルを測定するステップを含む。一部の変形形態では、本方法は、ＴＩＥ−１、ＴＩＥ−２、ＴＩＭＰ−４、ＶＥＧＦＡ、ＰＬＥＫＨＡ１、ＶＥＧＦＢ、ＣＲＭＰ１、ＦＥＲＭＴ１、ＣＴＳＢ、ＰＬＥＫＨＡ６、ＧＮＢ２Ｌ１およびＴＧＦβ１の発現レベルを測定するステップを含む。一部の変形形態では、本方法は、追加的なバイオマーカーを測定するステップをさらに含むことができる。特定の一変形形態では、本方法は、ＳＩＶＡ１の発現レベルを測定するステップと、このバイオマーカーの発現減少を照会するステップとをさらに含む。本明細書に企図される通り、ＲＮＡまたはタンパク質のいずれかの発現レベルを測定することができる。したがって、一変形形態では、本方法は、例えば、ＥＬＩＳＡアッセイ、抗体プロテオミクスアレイ、免疫組織化学的検査または質量分析により、バイオマーカーのタンパク質レベルを測定するステップを含む。別の変形形態では、本方法は、例えば、Ｑ−ＰＣＲアッセイまたはＲＮＡ−ｓｅｑにより、バイオマーカーのＲＮＡレベルを測定するステップを含む。一部の変形形態では、インキュベーション期間は、約２４時間である。一部の変形形態では、測定ステップは、ＩＬ−２とのインキュベーション期間の２４、４８または７２時間後に行われる。一部の変形形態では、本方法は、細胞の集団を個体に投与するステップをさらに含む。本方法は、個体への細胞の投与に先立ち、細胞を若返らせるステップをさらに含むことができる。
【００１１】
本発明の別の態様では、移植に対するＭＳＣの集団の適合性を評価するため、またはＩＬ−２に基づく治療法を投与するべきか決定するためのキットであって、試料における、バイオマーカーのパネルから選択される少なくとも２種のバイオマーカーの発現レベルを測定するための試薬を含み、バイオマーカーのパネルが、ＴＩＥ−１、ＴＩＥ−２、ＴＩＭＰ−４、ＦＧＦ１、ＬＩＦ、ＴＧＦＢＲ２、ＣＳＦ１、ＴＧＦα、ＴＧＦβ１、ＩＬ１７Ｄ、ＳＤＦ２、ＴＧＦＢＲＡＰ１、ＦＧＦ１１、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＦＧＦ１４、ＩＬ１β、ＩＬ−１１、ＩＬ−３２、ＩＬ−６、ＩＬ１ＲＮ、ＩＬ−２０ＲＢ、ＩＬ−２１Ｒ、ＰＬＡＵ、ＧＮＢ２Ｌ１、ＰＬＥＫＨＡ６、ＣＴＳＢ、ＦＥＲＭＴ１、ＣＲＭＰ１、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＡおよびＰＬＥＫＨＡ１を含むキットが、本明細書に提供される。一部の変形形態では、本キットは、試料における少なくとも３種のバイオマーカーの発現レベルを測定するため、試料における少なくとも４種のバイオマーカーの発現レベルを測定するため、または試料における少なくとも５種のバイオマーカーの発現レベルを測定するための試薬を含む。一部の変形形態では、本キットは、ＴＩＥ−１、ＴＩＥ−２、ＴＩＭＰ−４、ＶＥＧＦＡ、ＰＬＥＫＨＡ１、ＶＥＧＦＢ、ＣＲＭＰ１、ＦＥＲＭＴ１、ＣＴＳＢ、ＰＬＥＫＨＡ６、ＧＮＢ２Ｌ１およびＴＧＦβ１を測定するための試薬を含む。一部の変形形態では、本キットは、ＩＬ−２を含む。
【００１２】
本明細書に記載されている様々な変形形態の特性のうちの１つ、一部または全てを組み合わせて、本発明の他の変形形態を形成することができることを理解されたい。本発明のこれらおよび他の態様は、当業者に明らかになる。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１Ａ】図１Ａは、それらが炎症性環境を感知しそれに応答すること、およびサイトカインによる処置を可能にする、血管の上のＭＳＣのｉｎ  ｖｉｖｏ配置を図示する概略図である。
【００１４】
【図１Ｂ】図１Ｂは、ＩＬ−２に基づく治療法を開始または継続するべきか決定するために、個体または幹細胞を試験する１つの例示的な方法を図示するチャートである。
【００１５】
【図２】図２Ａは、ＩＬ−２に基づく治療法を投与するべきか決定するための例示的なアッセイの概略図である。図２Ｂは、図２Ａに示すアッセイを使用した例示的スクリーニング結果を図示する。図２Ｂでは、結果は陽性であって、いくつかのマーカーの発現が増加し、潜在的有害事象がＩＬ−２の投与と関連し得ることを示す。
【００１６】
【図３】図３Ａ〜３Ｄは、複製老化（ＳＥＮ）がヒト脂肪由来間葉系幹細胞（ｈＡＤＳＣ、本明細書で互換的にｈＡＤＳＣとも呼ばれる）の遊走特性をどのように害するかを図示する。図３Ａは、ｈＡＤＳＣの成長曲線を示し、培養日数に対する累積集団倍加で表される。図３Ｂは、老化関連のβ−ガラクトシダーゼの検出を示す。図３Ｃは、ＳＲ（左）およびＳＥＮ（右）のｈＡＤＳＣのｅｘ  ｖｉｖｏ遊走アッセイを示す。図３Ｄは、ＳＲ−ｈＡＤＳＣ（左）およびＳＥＮ−ｈＡＤＳＣ（右）の遊走を示す。
【００１７】
【図４】図４Ａ〜４Ｃは、ＩＬ−２受容体アイソフォームの遺伝子発現およびＩＬ−２で誘導されるＳＲ−ｈＡＤＳＣおよびＳＥＮ−ｈＡＤＳＣでの膜とのそれらの会合を図示する。図４Ａは、ＩＬ−２受容体組成物の概略図を示す。図４Ｂは、ＩＬ−２の存在下または非存在下で、定量的ＰＣＲ（Ｑ−ＰＣＲ）ＳＲおよびＳＥＮ−ｈＡＤＳＣによって評価されたＩＬ−２受容体α、βおよびγを示す。図４Ｃは、ＩＬ−２ＲａおよびＩＬ−２Ｒβの細胞膜に会合しているタンパク質レベルを示す。
【００１８】
【図５】図５は、ＩＬ−２によるＳＲおよびＳＥＮ−ｈＡＤＳＣの刺激の効果を図示する。ＳＴＡＴ５Ａ、ＳＴＡＴ５ＢおよびＶＥＧＦＡのｍＲＮＡ発現は、定量的ＲＴ−ＰＣＲによって評価した。
【００１９】
【図６】図６Ａ〜６Ｄは、ＩＬ−２処置の際のＳＲとＳＥＮ細胞の間の遺伝子発現レベルの比較を示す。
【００２０】
【図７】図７Ａ〜７Ｄは、機能的にコヒーレントなセットの遺伝子間の、ＩＬ−２処置の際のＳＲおよびＳＥＮ細胞の遺伝子発現レベルを図示する。
【００２１】
【図８】図８Ａ〜８Ｄは、ＩＬ−２処置に供したＳＲおよびＳＥＮ−ｈＡＤＳＣのＲＮＡ−ｓｅｑプロファイリングの分析を図示する。図８Ａは、ＲＮＡ−ｓｅｑ分析設計の概略図を提供する。図８Ｂは、ＡＣＴＢ正規化の前の各条件の遺伝子特異的ＲＮＡ−ｓｅｑ読み取りカウントデータの分布を示す。図８Ｃは、正規化のために使用されたＡＣＴＢの条件特異的ＲＮＡ−ｓｅｑ読み取りカウントデータを示す。図８Ｄは、ＡＣＴＢ正規化の後の各条件の遺伝子特異的ＲＮＡ−ｓｅｑ読み取りカウントデータの分布を示す。
【００２２】
【図９】図９は、ＲＮＡ−ｓｅｑ実験の品質管理のために使用されたＥｘｔｅｒｎａｌ  ＲＮＡ  Ｃｏｎｔｒｏｌｓ  Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ（ＥＲＣＣ、外部ＲＮＡ対照の一般的なセット）用量応答を示す。
【００２３】
【図１０Ａ−１】図１０Ａ〜１０Ｂは、ＳＥＮおよびＳＲ  ｈＡＭＣＳでＩＬ−２処置後に差次的に発現された遺伝子の表を表す。図１０Ａは、ＳＲおよびＳＥＮ−ｈＡＤＳＣでＩＬ−２処置の際に上方調節された遺伝子が濃縮された生物学的経路を示す。図１０Ｂは、ＳＲおよびＳＥＮ−ｈＡＤＳＣでＩＬ−２処置の際に下方調節された遺伝子が濃縮された生物学的経路を示す。
【図１０Ａ−２】図１０Ａ〜１０Ｂは、ＳＥＮおよびＳＲ  ｈＡＭＣＳでＩＬ−２処置後に差次的に発現された遺伝子の表を表す。図１０Ａは、ＳＲおよびＳＥＮ−ｈＡＤＳＣでＩＬ−２処置の際に上方調節された遺伝子が濃縮された生物学的経路を示す。図１０Ｂは、ＳＲおよびＳＥＮ−ｈＡＤＳＣでＩＬ−２処置の際に下方調節された遺伝子が濃縮された生物学的経路を示す。
【図１０Ｂ−１】図１０Ａ〜１０Ｂは、ＳＥＮおよびＳＲ  ｈＡＭＣＳでＩＬ−２処置後に差次的に発現された遺伝子の表を表す。図１０Ａは、ＳＲおよびＳＥＮ−ｈＡＤＳＣでＩＬ−２処置の際に上方調節された遺伝子が濃縮された生物学的経路を示す。図１０Ｂは、ＳＲおよびＳＥＮ−ｈＡＤＳＣでＩＬ−２処置の際に下方調節された遺伝子が濃縮された生物学的経路を示す。
【図１０Ｂ−２】図１０Ａ〜１０Ｂは、ＳＥＮおよびＳＲ  ｈＡＭＣＳでＩＬ−２処置後に差次的に発現された遺伝子の表を表す。図１０Ａは、ＳＲおよびＳＥＮ−ｈＡＤＳＣでＩＬ−２処置の際に上方調節された遺伝子が濃縮された生物学的経路を示す。図１０Ｂは、ＳＲおよびＳＥＮ−ｈＡＤＳＣでＩＬ−２処置の際に下方調節された遺伝子が濃縮された生物学的経路を示す。
【図１０Ｂ−３】図１０Ａ〜１０Ｂは、ＳＥＮおよびＳＲ  ｈＡＭＣＳでＩＬ−２処置後に差次的に発現された遺伝子の表を表す。図１０Ａは、ＳＲおよびＳＥＮ−ｈＡＤＳＣでＩＬ−２処置の際に上方調節された遺伝子が濃縮された生物学的経路を示す。図１０Ｂは、ＳＲおよびＳＥＮ−ｈＡＤＳＣでＩＬ−２処置の際に下方調節された遺伝子が濃縮された生物学的経路を示す。
【００２４】
【図１１】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図１２】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図１３】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図１４】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図１５】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図１６】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図１７】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図１８】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図１９】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図２０】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図２１】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図２２】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図２３】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図２４】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図２５】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図２６】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図２７】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図２８】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図２９】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図３０】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図３１】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図３２】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図３３】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図３４】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図３５】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図３６】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図３７】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図３８】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図３９】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図４０】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図４１】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図４２】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図４３】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図４４】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図４５】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図４６】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図４７】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図４８】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図４９】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図５０】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図５１】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図５２】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図５３】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図５４】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図５５】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図５６】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図５７】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図５８】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図５９】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図６０】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図６１】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図６２】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図６３】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図６４】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図６５】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図６６】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図６７】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図６８】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図６９】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図７０】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図７１】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図７２】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図７３】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図７４】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図７５】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図７６】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図７７】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図７８】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図７９】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図８０】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図８１】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図８２】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図８３】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図８４】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図８５】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図８６】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図８７】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図８８】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図８９】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【図９０】図１１〜９０は、培地単独（ＩＬ−２刺激がない）でのインキュベーションの後またはＩＬ−２による刺激の後に、ＳＲ−ｈＡＤＳＣまたはＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの命名されたタンパク質（因子）の分泌の増加を図示する。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
（発明の詳細な説明）
Ｉ．方法
１．序文
ＩＬ−２に基づく治療法および間葉系幹細胞に基づく治療法に有用なコンパニオン方法およびキットが、本明細書に提供される。
【００２６】
特に、本発明の一変形形態では、がんまたはＨＩＶ等の状態の処置のためにＩＬ−２に基づく治療法を受けるのに適格な個体が、このＩＬ−２に基づく治療法に伴う有害事象を経験し得るか決定するための方法が、本明細書に提供される。本方法は、ＩＬ−２への曝露の際に個体由来の試料におけるある特定のバイオマーカーの発現レベルの増加を測定するステップを伴い、このようなバイオマーカーは、試料におけるＭＳＣの細胞老化を示す。このようなバイオマーカーの発現は、仮にＩＬ−２に基づく治療法が投与されるまたは続けられるとしたら、個体が、有害事象（腫瘍発生または転移等）を経験し得ることを示すであろう。処置決断は、本方法の実施および本明細書に記載されているキットの使用に基づき為すことができる。
【００２７】
本発明の別の変形形態では、ＭＳＣに基づく治療法のための個体への投与（例えば、移植）に対するＭＳＣの集団の適合性を決定するための方法が、本明細書に提供される。本方法は、ＩＬ−２への曝露の際のＭＳＣにおけるある特定のバイオマーカーの発現レベルの変化を測定するステップを伴い、このようなバイオマーカーは、ＭＳＣの細胞老化に関連する。バイオマーカーの増加が観察される場合、これは、細胞が個体に投与された場合に、個体が、転移性形質転換および浸潤性成長等、移植に伴う有害事象を経験し得ることを示すであろう。逆に、バイオマーカーの発現レベルの変化なしまたは減少が観察される場合、これは、投与に対する細胞の集団の適合性を示すことができる。ＭＳＣ移植に関する処置決断は、本方法の実施および本明細書に記載されているキットの使用に基づき為すことができる。
【００２８】
これらについては、本明細書でさらに詳細に考察されている。
２．ＳＥＮ−ＭＳＣおよびＳＲ−ＭＳＣ
【００２９】
ＩＬ−２へのＭＳＣを含む試料の曝露の際のバイオマーカーの発現レベルを測定するための方法であって、バイオマーカーが、細胞老化を示す方法が、本明細書に提供される。本明細書において使用される場合、ＳＥＮ  ＭＳＣは、複製的に老化した細胞である。複製老化は、成長停止、アポトーシス抵抗性、高レベルの代謝活性、形態学的および細胞サイズ変化、腫瘍サプレッサーＰ１６、Ｐ２１、Ｐ５３および／またはＲＢの高レベルの発現、老化関連ベータガラクトシダーゼ（ＳＡ−β−ｇａｌ）の活性増加、ならびにＤＮＡを合成および修復する能力の喪失によって特徴付けられる。ＭＳＣの複製加齢は、その生物学的特性に影響を与え得る。
【００３０】
ＳＲ−ＭＳＣは、他方では、生産的であることに関連し：品質を示すコードまたは非コードＲＮＡのセットを発現し；自己再生し；老化しておらず；次第に老化しておらず；継代回数が６回またはそれ未満であり；高い成長能を示し；目的のタンパク質を産生し；長期組織再生を可能にし；疾患の長期補正を誘導し；不死化の見込みを示さないまたはそのごく僅かな見込みを示し；腫瘍形成能を示さないまたは低い腫瘍形成能を示し；プロウイルス組込みをほとんど含有しないまたは全く含有しない。例示的な変形形態では、生産的幹細胞は、自己再生する。一部の変形形態では、生産的幹細胞は、生産的であることに関連する特色のうち少なくとも２、３、４、５種またはそれ超を示す。
３．目的のバイオマーカーの検出
【００３１】
本明細書に記載されているコンパニオン方法は、細胞老化に関連するバイオマーカーのパネル由来の少なくとも２種のバイオマーカーの発現レベルの測定に依拠し、例えば、このパネルは、抗アポトーシス、血管新生、腫瘍原性であり、浸潤性成長、転移、細胞運動性、遊走その他の原因となる血管発生をもたらすバイオマーカーを含むことができる。一般に、本方法は、ＩＬ−２療法の使用またはＭＳＣの移植が、有害事象をもたらす可能性があるかに関する決定を下すためのマーカーの測定を提供する。本明細書において使用される場合、ＩＬ−２療法またはＭＳＣ移植に続く有害事象として、腫瘍発生の増加、抗アポトーシス活性、血管新生、血管発生、浸潤性成長、転移、細胞運動性および遊走が挙げられるがこれらに限定されない。
【００３２】
本明細書に提供されている通り、ＩＬ−２に応答して上方調節される、細胞老化に関連するバイオマーカーは、表１〜４、表５Ｂおよび図７Ａ〜７Ｄに収載されているバイオマーカーを含むことができる。
【００３３】
一部の変形形態では、本方法は、バイオマーカーのＲＮＡレベルを測定するステップを含む。このような方法は、当業者には公知であり、Ｑ−ＰＣＲ、アレイに基づく技術、ＲＮＡ−ｓｅｑ、トランスクリプトーム分析、単一細胞トランスクリプトーム分析およびｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションの使用を含むがこれらに限定されない。
【００３４】
一部の変形形態では、本方法は、バイオマーカーのタンパク質レベルを測定するステップを含む。このような方法は、当業者には公知であり、ＥＬＩＳＡアッセイ、プロテオミクスアレイ、免疫組織化学的検査、ウエスタンブロット、質量分析（ＭＳ）、抗体アレイまたはケミルミネッセンスアッセイの使用を含むがこれらに限定されない。
【００３５】
一部の変形形態では、本方法は、バイオマーカーのＲＮＡおよびタンパク質レベルの両方を測定するステップを含む。
【００３６】
バイオマーカーは、測定され、参照レベルと比較される。本明細書に企図される通り、参照レベルは、ＩＬ−２処置前の同じ個体由来の試料を含むことができる；ＩＬ−２を全く受けたことがない健康な個体由来の試料を含むことができる；またはＩＬ−２処置を受けたことがない個体の不均一な群を表す試料の収集物を含むことができる。
【００３７】
特定の変形形態では、バイオマーカーの参照レベルよりも、少なくとも１．１、少なくとも１．２、少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも５０、少なくとも７５またはさらには少なくとも１００倍高い発現を呈する場合、バイオマーカーのＲＮＡ発現レベルが増加することが決定される。倍数は一般に、未加工の倍数値、ＧＦＯＬＤ値、または当業者に公知のアルゴリズムを使用して計算された倍数値を指すことができる。
【００３８】
遺伝子発現におけるＲＮＡ依存性の差は、ＲＮＡ−ｓｅｑによる遺伝子発現測定の不確実性を考慮に入れた倍の変化を推定するための、ＧＦＯＬＤ計算方法（Fengら、Bioinformatics.２０１２年）を使用して測定することができる。これらの変形形態では、ＧＦＯＬＤの使用は、遺伝子発現の相対的な差を考慮に入れ、異なる発現レベルを有するか、または異なる長さの遺伝子の比較を容易にする。
【００３９】
特定の変形形態では、バイオマーカーの参照レベルよりも、少なくとも１．１、少なくとも１．２、少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも５０、少なくとも７５またはさらには少なくとも１００倍高い発現を呈する場合、バイオマーカーのタンパク質発現レベルが増加することが決定される。
４．目的のバイオマーカーの同一性
【００４０】
本明細書で参照される通り、「バイオマーカー」とは、目的の任意の生物学的分子（またはその断片）、例えば、細胞の細胞質、表面に存在するか、または分泌されたバイオマーカーを意味する。そのようなバイオマーカーとして、ポリペプチド、タンパク質、炭水化物、脂質、糖タンパク質、リボヌクレオタンパク質、リポタンパク質、糖脂質およびそれらの断片を含む生体分子が挙げられるがこれらに限定されない。バイオマーカーが、タンパク質を含む場合、タンパク質は、分泌タンパク質、細胞内タンパク質または膜タンパク質であり得る。バイオマーカータンパク質として、ペプチド、ポリペプチド、糖タンパク質、リポタンパク質、サイトカイン、増殖因子、抗体および他の免疫原性分子が挙げられるがこれらに限定されない。バイオマーカーは、また、膜貫通タンパク質であり得る、または例えば膜貫通タンパク質もしくは膜脂質に結合していてよい。
【００４１】
本明細書に提供されている通り、ＩＬ−２に応答して上方調節される、細胞老化に関連するバイオマーカーは、表１〜４、表５Ｂおよび図７Ａ〜７Ｄに収載されているバイオマーカーである。
【００４２】
一部の変形形態では、本方法は、ＩＬ−２に基づく治療法に伴う潜在的有害事象の決定のために、および／または移植に対するＭＳＣの集団の適合性の決定のために、バイオマーカーのパネル由来の少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９またはさらには少なくとも２０種のバイオマーカーの発現レベルを測定するステップを含む。
【００４３】
一部の変形形態では、表１〜４に提示されるバイオマーカーのいずれかから選択される少なくとも２種のバイオマーカーの発現レベルが測定される。一部の変形形態では、図７Ａ〜７Ｄに提示される少なくとも２種のバイオマーカーの発現レベルが測定される。一部の変形形態では、表５Ｂに提示される少なくとも２種のバイオマーカーの発現レベルが測定される。
【００４４】
一変形形態では、少なくとも２種のバイオマーカーの発現レベルが測定され、第１のバイオマーカーは、ＴＩＥ−１であり、第２のバイオマーカーは、ＴＩＥ−２、ＴＩＭＰ−４、ＦＧＦ１、ＬＩＦ、ＴＧＦＢＲ２、ＣＳＦ１、ＴＧＦα、ＴＧＦβ１、ＩＬ１７Ｄ、ＳＤＦ２、ＴＧＦＢＲＡＰ１、ＦＧＦ１１、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＦＧＦ１４、ＩＬ１β、ＩＬ−１１、ＩＬ−３２、ＩＬ−６、ＩＬ１ＲＮ、ＩＬ−２０ＲＢ、ＩＬ−２１Ｒ、ＰＬＡＵ、ＧＮＢ２Ｌ１、ＰＬＥＫＨＡ６、ＣＴＳＢ、ＦＥＲＭＴ１、ＣＲＭＰ１、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＡおよびＰＬＥＫＨＡ１からなる群から選択される。
【００４５】
一変形形態では、少なくとも２種のバイオマーカーの発現レベルが測定され、第１のバイオマーカーは、ＴＩＥ−２であり、第２のバイオマーカーは、ＴＩＥ−１、ＴＩＭＰ−４、ＦＧＦ１、ＬＩＦ、ＴＧＦＢＲ２、ＣＳＦ１、ＴＧＦα、ＴＧＦβ１、ＩＬ１７Ｄ、ＳＤＦ２、ＴＧＦＢＲＡＰ１、ＦＧＦ１１、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＦＧＦ１４、ＩＬ１β、ＩＬ−１１、ＩＬ−３２、ＩＬ−６、ＩＬ１ＲＮ、ＩＬ−２０ＲＢ、ＩＬ−２１Ｒ、ＰＬＡＵ、ＧＮＢ２Ｌ１、ＰＬＥＫＨＡ６、ＣＴＳＢ、ＦＥＲＭＴ１、ＣＲＭＰ１、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＡおよびＰＬＥＫＨＡ１からなる群から選択される。一変形形態では、少なくとも２種のバイオマーカーの発現レベルが測定され、第１のバイオマーカーは、ＴＩＥ−１であり、第２のバイオマーカーは、ＴＩＥ−１、ＴＩＥ−２、ＴＩＭＰ−４、ＦＧＦ１、ＬＩＦ、ＴＧＦＢＲ２、ＣＳＦ１、ＴＧＦα、ＴＧＦβ１、ＩＬ１７Ｄ、ＳＤＦ２、ＴＧＦＢＲＡＰ１、ＦＧＦ１１、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＦＧＦ１４、ＩＬ１β、ＩＬ−１１、ＩＬ−３２、ＩＬ−６、ＩＬ１ＲＮ、ＩＬ−２０ＲＢ、ＩＬ−２１Ｒ、ＰＬＡＵ、ＧＮＢ２Ｌ１、ＰＬＥＫＨＡ６、ＣＴＳＢ、ＦＥＲＭＴ１、ＣＲＭＰ１、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＡおよびＰＬＥＫＨＡ１からなる群から選択される。
【００４６】
一変形形態では、少なくとも２種のバイオマーカーの発現レベルが測定され、第１のバイオマーカーは、ＴＩＭＰ−４であり、第２のバイオマーカーは、ＴＩＥ−１、ＴＩＥ−２、ＦＧＦ１、ＬＩＦ、ＴＧＦＢＲ２、ＣＳＦ１、ＴＧＦα、ＴＧＦβ１、ＩＬ１７Ｄ、ＳＤＦ２、ＴＧＦＢＲＡＰ１、ＦＧＦ１１、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＦＧＦ１４、ＩＬ１β、ＩＬ−１１、ＩＬ−３２、ＩＬ−６、ＩＬ１ＲＮ、ＩＬ−２０ＲＢ、ＩＬ−２１Ｒ、ＰＬＡＵ、ＧＮＢ２Ｌ１、ＰＬＥＫＨＡ６、ＣＴＳＢ、ＦＥＲＭＴ１、ＣＲＭＰ１、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＡおよびＰＬＥＫＨＡ１からなる群から選択される。
【００４７】
一変形形態では、少なくとも２種のバイオマーカーの発現レベルが測定され、第１のバイオマーカーは、ＦＧＦ１であり、第２のバイオマーカーは、ＴＩＥ−１、ＴＩＥ−２、ＴＩＭＰ−４、ＬＩＦ、ＴＧＦＢＲ２、ＣＳＦ１、ＴＧＦα、ＴＧＦβ１、ＩＬ１７Ｄ、ＳＤＦ２、ＴＧＦＢＲＡＰ１、ＦＧＦ１１、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＦＧＦ１４、ＩＬ１β、ＩＬ−１１、ＩＬ−３２、ＩＬ−６、ＩＬ１ＲＮ、ＩＬ−２０ＲＢ、ＩＬ−２１Ｒ、ＰＬＡＵ、ＧＮＢ２Ｌ１、ＰＬＥＫＨＡ６、ＣＴＳＢ、ＦＥＲＭＴ１、ＣＲＭＰ１、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＡおよびＰＬＥＫＨＡ１からなる群から選択される。
【００４８】
一変形形態では、少なくとも２種のバイオマーカーの発現レベルが測定され、第１のバイオマーカーは、ＬＩＦであり、第２のバイオマーカーは、ＴＩＥ−１、ＴＩＥ−２、ＴＩＭＰ−４、ＦＧＦ１、ＴＧＦＢＲ２、ＣＳＦ１、ＴＧＦα、ＴＧＦβ１、ＩＬ１７Ｄ、ＳＤＦ２、ＴＧＦＢＲＡＰ１、ＦＧＦ１１、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＦＧＦ１４、ＩＬ１β、ＩＬ−１１、ＩＬ−３２、ＩＬ−６、ＩＬ１ＲＮ、ＩＬ−２０ＲＢ、ＩＬ−２１Ｒ、ＰＬＡＵ、ＧＮＢ２Ｌ１、ＰＬＥＫＨＡ６、ＣＴＳＢ、ＦＥＲＭＴ１、ＣＲＭＰ１、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＡおよびＰＬＥＫＨＡ１からなる群から選択される。
【００４９】
一変形形態では、少なくとも２種のバイオマーカーの発現レベルが測定され、第１のバイオマーカーは、ＴＧＦＢＲ２であり、第２のバイオマーカーは、ＴＩＥ−１、ＴＩＥ−２、ＴＩＭＰ−４、ＦＧＦ１、ＬＩＦ、ＣＳＦ１、ＴＧＦα、ＴＧＦβ１、ＩＬ１７Ｄ、ＳＤＦ２、ＴＧＦＢＲＡＰ１、ＦＧＦ１１、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＦＧＦ１４、ＩＬ１β、ＩＬ−１１、ＩＬ−３２、ＩＬ−６、ＩＬ１ＲＮ、ＩＬ−２０ＲＢ、ＩＬ−２１Ｒ、ＰＬＡＵ、ＧＮＢ２Ｌ１、ＰＬＥＫＨＡ６、ＣＴＳＢ、ＦＥＲＭＴ１、ＣＲＭＰ１、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＡおよびＰＬＥＫＨＡ１からなる群から選択される。
【００５０】
一変形形態では、少なくとも２種のバイオマーカーの発現レベルが測定され、第１のバイオマーカーは、ＣＳＦ１であり、第２のバイオマーカーは、ＴＩＥ−１、ＴＩＥ−２、ＴＩＭＰ−４、ＦＧＦ１、ＬＩＦ、ＴＧＦＢＲ２、ＴＧＦα、ＴＧＦβ１、ＩＬ１７Ｄ、ＳＤＦ２、ＴＧＦＢＲＡＰ１、ＦＧＦ１１、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＦＧＦ１４、ＩＬ１β、ＩＬ−１１、ＩＬ−３２、ＩＬ−６、ＩＬ１ＲＮ、ＩＬ−２０ＲＢ、ＩＬ−２１Ｒ、ＰＬＡＵ、ＧＮＢ２Ｌ１、ＰＬＥＫＨＡ６、ＣＴＳＢ、ＦＥＲＭＴ１、ＣＲＭＰ１、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＡおよびＰＬＥＫＨＡ１からなる群から選択される。
【００５１】
一変形形態では、少なくとも２種のバイオマーカーの発現レベルが測定され、第１のバイオマーカーは、ＴＧＦαであり、第２のバイオマーカーは、ＴＩＥ−１、ＴＩＥ−２、ＴＩＭＰ−４、ＦＧＦ１、ＬＩＦ、ＴＧＦＢＲ２、ＣＳＦ１、ＴＧＦβ１、ＩＬ１７Ｄ、ＳＤＦ２、ＴＧＦＢＲＡＰ１、ＦＧＦ１１、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＦＧＦ１４、ＩＬ１β、ＩＬ−１１、ＩＬ−３２、ＩＬ−６、ＩＬ１ＲＮ、ＩＬ−２０ＲＢ、ＩＬ−２１Ｒ、ＰＬＡＵ、ＧＮＢ２Ｌ１、ＰＬＥＫＨＡ６、ＣＴＳＢ、ＦＥＲＭＴ１、ＣＲＭＰ１、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＡおよびＰＬＥＫＨＡ１からなる群から選択される。
【００５２】
一変形形態では、少なくとも２種のバイオマーカーの発現レベルが測定され、第１のバイオマーカーは、ＴＧＦβ１であり、第２のバイオマーカーは、ＴＩＥ−２、ＴＩＭＰ−４、ＦＧＦ１、ＬＩＦ、ＴＧＦＢＲ２、ＣＳＦ１、ＴＧＦα、ＩＬ１７Ｄ、ＳＤＦ２、ＴＧＦＢＲＡＰ１、ＦＧＦ１１、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＦＧＦ１４、ＩＬ１β、ＩＬ−１１、ＩＬ−３２、ＩＬ−６、ＩＬ１ＲＮ、ＩＬ−２０ＲＢ、ＩＬ−２１Ｒ、ＰＬＡＵ、ＧＮＢ２Ｌ１、ＰＬＥＫＨＡ６、ＣＴＳＢ、ＦＥＲＭＴ１、ＣＲＭＰ１、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＡおよびＰＬＥＫＨＡ１からなる群から選択される。
【００５３】
一変形形態では、少なくとも２種のバイオマーカーの発現レベルが測定され、第１のバイオマーカーは、ＩＬ１７Ｄであり、第２のバイオマーカーは、ＴＩＥ−１、ＴＩＭＰ−４、ＦＧＦ１、ＬＩＦ、ＴＧＦＢＲ２、ＣＳＦ１、ＴＧＦα、ＴＧＦβ１、ＳＤＦ２、ＴＧＦＢＲＡＰ１、ＦＧＦ１１、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＦＧＦ１４、ＩＬ１β、ＩＬ−１１、ＩＬ−３２、ＩＬ−６、ＩＬ１ＲＮ、ＩＬ−２０ＲＢ、ＩＬ−２１Ｒ、ＰＬＡＵ、ＧＮＢ２Ｌ１、ＰＬＥＫＨＡ６、ＣＴＳＢ、ＦＥＲＭＴ１、ＣＲＭＰ１、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＡおよびＰＬＥＫＨＡ１からなる群から選択される。
【００５４】
一変形形態では、少なくとも２種のバイオマーカーの発現レベルが測定され、第１のバイオマーカーは、ＳＤＦ２であり、第２のバイオマーカーは、ＴＩＥ−１、ＴＩＥ−２、ＴＩＭＰ−４、ＦＧＦ１、ＬＩＦ、ＴＧＦＢＲ２、ＣＳＦ１、ＴＧＦα、ＴＧＦβ１、ＩＬ１７Ｄ、ＴＧＦＢＲＡＰ１、ＦＧＦ１１、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＦＧＦ１４、ＩＬ１β、ＩＬ−１１、ＩＬ−３２、ＩＬ−６、ＩＬ１ＲＮ、ＩＬ−２０ＲＢ、ＩＬ−２１Ｒ、ＰＬＡＵ、ＧＮＢ２Ｌ１、ＰＬＥＫＨＡ６、ＣＴＳＢ、ＦＥＲＭＴ１、ＣＲＭＰ１、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＡおよびＰＬＥＫＨＡ１からなる群から選択される。
【００５５】
一変形形態では、少なくとも２種のバイオマーカーの発現レベルが測定され、第１のバイオマーカーは、ＴＧＦＢＲＡＰ１であり、第２のバイオマーカーは、ＴＩＥ−１、ＴＩＥ−２、ＦＧＦ１、ＬＩＦ、ＴＧＦＢＲ２、ＣＳＦ１、ＴＧＦα、ＴＧＦβ１、ＩＬ１７Ｄ、ＳＤＦ２、ＦＧＦ１１、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＦＧＦ１４、ＩＬ１β、ＩＬ−１１、ＩＬ−３２、ＩＬ−６、ＩＬ１ＲＮ、ＩＬ−２０ＲＢ、ＩＬ−２１Ｒ、ＰＬＡＵ、ＧＮＢ２Ｌ１、ＰＬＥＫＨＡ６、ＣＴＳＢ、ＦＥＲＭＴ１、ＣＲＭＰ１、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＡおよびＰＬＥＫＨＡ１からなる群から選択される。
【００５６】
一変形形態では、少なくとも２種のバイオマーカーの発現レベルが測定され、第１のバイオマーカーは、ＦＧＦ１１であり、第２のバイオマーカーは、ＴＩＥ−１、ＴＩＥ−２、ＴＩＭＰ−４、ＬＩＦ、ＴＧＦＢＲ２、ＣＳＦ１、ＴＧＦα、ＴＧＦβ１、ＩＬ１７Ｄ、ＳＤＦ２、ＴＧＦＢＲＡＰ１、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＦＧＦ１４、ＩＬ１β、ＩＬ−１１、ＩＬ−３２、ＩＬ−６、ＩＬ１ＲＮ、ＩＬ−２０ＲＢ、ＩＬ−２１Ｒ、ＰＬＡＵ、ＧＮＢ２Ｌ１、ＰＬＥＫＨＡ６、ＣＴＳＢ、ＦＥＲＭＴ１、ＣＲＭＰ１、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＡおよびＰＬＥＫＨＡ１からなる群から選択される。
【００５７】
一変形形態では、少なくとも２種のバイオマーカーの発現レベルが測定され、第１のバイオマーカーは、ＴＮＦＳＦ１３Ｂであり、第２のバイオマーカーは、ＴＩＥ−１、ＴＩＥ−２、ＴＩＭＰ−４、ＦＧＦ１、ＴＧＦＢＲ２、ＣＳＦ１、ＴＧＦα、ＴＧＦβ１、ＩＬ１７Ｄ、ＳＤＦ２、ＴＧＦＢＲＡＰ１、ＦＧＦ１１、ＦＧＦ１４、ＩＬ１β、ＩＬ−１１、ＩＬ−３２、ＩＬ−６、ＩＬ１ＲＮ、ＩＬ−２０ＲＢ、ＩＬ−２１Ｒ、ＰＬＡＵ、ＧＮＢ２Ｌ１、ＰＬＥＫＨＡ６、ＣＴＳＢ、ＦＥＲＭＴ１、ＣＲＭＰ１、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＡおよびＰＬＥＫＨＡ１からなる群から選択される。
【００５８】
一変形形態では、少なくとも２種のバイオマーカーの発現レベルが測定され、第１のバイオマーカーは、ＦＧＦ１４であり、第２のバイオマーカーは、ＴＩＥ−１、ＴＩＥ−２、ＴＩＭＰ−４、ＦＧＦ１、ＬＩＦ、ＣＳＦ１、ＴＧＦα、ＴＧＦβ１、ＩＬ１７Ｄ、ＳＤＦ２、ＴＧＦＢＲＡＰ１、ＦＧＦ１１、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＩＬ１β、ＩＬ−１１、ＩＬ−３２、ＩＬ−６、ＩＬ１ＲＮ、ＩＬ−２０ＲＢ、ＩＬ−２１Ｒ、ＰＬＡＵ、ＧＮＢ２Ｌ１、ＰＬＥＫＨＡ６、ＣＴＳＢ、ＦＥＲＭＴ１、ＣＲＭＰ１、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＡおよびＰＬＥＫＨＡ１からなる群から選択される。
【００５９】
一変形形態では、少なくとも２種のバイオマーカーの発現レベルが測定され、第１のバイオマーカーは、ＩＬ１βであり、第２のバイオマーカーは、ＴＩＥ−１、ＴＩＥ−２、ＴＩＭＰ−４、ＦＧＦ１、ＬＩＦ、ＴＧＦＢＲ２、ＴＧＦα、ＴＧＦβ１、ＩＬ１７Ｄ、ＳＤＦ２、ＴＧＦＢＲＡＰ１、ＦＧＦ１１、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＦＧＦ１４、ＩＬ−１１、ＩＬ−３２、ＩＬ−６、ＩＬ１ＲＮ、ＩＬ−２０ＲＢ、ＩＬ−２１Ｒ、ＰＬＡＵ、ＧＮＢ２Ｌ１、ＰＬＥＫＨＡ６、ＣＴＳＢ、ＦＥＲＭＴ１、ＣＲＭＰ１、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＡおよびＰＬＥＫＨＡ１からなる群から選択される。
【００６０】
一変形形態では、少なくとも２種のバイオマーカーの発現レベルが測定され、第１のバイオマーカーは、ＩＬ−１１であり、第２のバイオマーカーは、ＴＩＥ−１、ＴＩＥ−２、ＴＩＭＰ−４、ＦＧＦ１、ＬＩＦ、ＴＧＦＢＲ２、ＣＳＦ１、ＴＧＦβ１、ＩＬ１７Ｄ、ＳＤＦ２、ＴＧＦＢＲＡＰ１、ＦＧＦ１１、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＦＧＦ１４、ＩＬ１β、ＩＬ−３２、ＩＬ−６、ＩＬ１ＲＮ、ＩＬ−２０ＲＢ、ＩＬ−２１Ｒ、ＰＬＡＵ、ＧＮＢ２Ｌ１、ＰＬＥＫＨＡ６、ＣＴＳＢ、ＦＥＲＭＴ１、ＣＲＭＰ１、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＡおよびＰＬＥＫＨＡ１からなる群から選択される。
【００６１】
一変形形態では、少なくとも２種のバイオマーカーの発現レベルが測定され、第１のバイオマーカーは、ＩＬ−３２であり、第２のバイオマーカーは、ＴＩＥ−２、ＴＩＭＰ−４、ＦＧＦ１、ＬＩＦ、ＴＧＦＢＲ２、ＣＳＦ１、ＴＧＦα、ＩＬ１７Ｄ、ＳＤＦ２、ＴＧＦＢＲＡＰ１、ＦＧＦ１１、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＦＧＦ１４、ＩＬ１β、ＩＬ−１１、ＩＬ−６、ＩＬ１ＲＮ、ＩＬ−２０ＲＢ、ＩＬ−２１Ｒ、ＰＬＡＵ、ＧＮＢ２Ｌ１、ＰＬＥＫＨＡ６、ＣＴＳＢ、ＦＥＲＭＴ１、ＣＲＭＰ１、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＡおよびＰＬＥＫＨＡ１からなる群から選択される。
【００６２】
一変形形態では、少なくとも２種のバイオマーカーの発現レベルが測定され、第１のバイオマーカーは、ＩＬ−６であり、第２のバイオマーカーは、ＴＩＥ−１、ＴＩＭＰ−４、ＦＧＦ１、ＬＩＦ、ＴＧＦＢＲ２、ＣＳＦ１、ＴＧＦα、ＴＧＦβ１、ＳＤＦ２、ＴＧＦＢＲＡＰ１、ＦＧＦ１１、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＦＧＦ１４、ＩＬ１β、ＩＬ−１１、ＩＬ−３２、ＩＬ１ＲＮ、ＩＬ−２０ＲＢ、ＩＬ−２１Ｒ、ＰＬＡＵ、ＧＮＢ２Ｌ１、ＰＬＥＫＨＡ６、ＣＴＳＢ、ＦＥＲＭＴ１、ＣＲＭＰ１、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＡおよびＰＬＥＫＨＡ１からなる群から選択される。
【００６３】
一変形形態では、少なくとも２種のバイオマーカーの発現レベルが測定され、第１のバイオマーカーは、ＩＬ１ＲＮであり、第２のバイオマーカーは、ＴＩＥ−１、ＴＩＥ−２、ＴＩＭＰ−４、ＦＧＦ１、ＬＩＦ、ＴＧＦＢＲ２、ＣＳＦ１、ＴＧＦα、ＴＧＦβ１、ＩＬ１７Ｄ、ＴＧＦＢＲＡＰ１、ＦＧＦ１１、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＦＧＦ１４、ＩＬ１β、ＩＬ−１１、ＩＬ−３２、ＩＬ−６、ＩＬ−２０ＲＢ、ＩＬ−２１Ｒ、ＰＬＡＵ、ＧＮＢ２Ｌ１、ＰＬＥＫＨＡ６、ＣＴＳＢ、ＦＥＲＭＴ１、ＣＲＭＰ１、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＡおよびＰＬＥＫＨＡ１からなる群から選択される。
【００６４】
一変形形態では、少なくとも２種のバイオマーカーの発現レベルが測定され、第１のバイオマーカーは、ＩＬ−２０ＲＢであり、第２のバイオマーカーは、ＴＩＥ−１、ＴＩＥ−２、ＦＧＦ１、ＬＩＦ、ＴＧＦＢＲ２、ＣＳＦ１、ＴＧＦα、ＴＧＦβ１、ＩＬ１７Ｄ、ＳＤＦ２、ＦＧＦ１１、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＦＧＦ１４、ＩＬ１β、ＩＬ−１１、ＩＬ−３２、ＩＬ−６、ＩＬ１ＲＮ、ＩＬ−２１Ｒ、ＰＬＡＵ、ＧＮＢ２Ｌ１、ＰＬＥＫＨＡ６、ＣＴＳＢ、ＦＥＲＭＴ１、ＣＲＭＰ１、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＡおよびＰＬＥＫＨＡ１からなる群から選択される。
【００６５】
一変形形態では、少なくとも２種のバイオマーカーの発現レベルが測定され、第１のバイオマーカーは、ＩＬ−２１Ｒであり、第２のバイオマーカーは、ＴＩＥ−１、ＴＩＥ−２、ＴＩＭＰ−４、ＬＩＦ、ＴＧＦＢＲ２、ＣＳＦ１、ＴＧＦα、ＴＧＦβ１、ＩＬ１７Ｄ、ＳＤＦ２、ＴＧＦＢＲＡＰ１、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＦＧＦ１４、ＩＬ１β、ＩＬ−１１、ＩＬ−３２、ＩＬ−６、ＩＬ１ＲＮ、ＩＬ−２０ＲＢ、ＰＬＡＵ、ＧＮＢ２Ｌ１、ＰＬＥＫＨＡ６、ＣＴＳＢ、ＦＥＲＭＴ１、ＣＲＭＰ１、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＡおよびＰＬＥＫＨＡ１からなる群から選択される。
【００６６】
一変形形態では、少なくとも２種のバイオマーカーの発現レベルが測定され、第１のバイオマーカーは、ＰＬＡＵであり、第２のバイオマーカーは、ＴＩＥ−１、ＴＩＥ−２、ＴＩＭＰ−４、ＦＧＦ１、ＴＧＦＢＲ２、ＣＳＦ１、ＴＧＦα、ＴＧＦβ１、ＩＬ１７Ｄ、ＳＤＦ２、ＴＧＦＢＲＡＰ１、ＦＧＦ１１、ＦＧＦ１４、ＩＬ１β、ＩＬ−１１、ＩＬ−３２、ＩＬ−６、ＩＬ１ＲＮ、ＩＬ−２０ＲＢ、ＩＬ−２１Ｒ、ＧＮＢ２Ｌ１、ＰＬＥＫＨＡ６、ＣＴＳＢ、ＦＥＲＭＴ１、ＣＲＭＰ１、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＡおよびＰＬＥＫＨＡ１からなる群から選択される。
【００６７】
一変形形態では、少なくとも２種のバイオマーカーの発現レベルが測定され、第１のバイオマーカーは、ＧＮＢ２Ｌ１であり、第２のバイオマーカーは、ＴＩＥ−１、ＴＩＥ−２、ＴＩＭＰ−４、ＦＧＦ１、ＬＩＦ、ＣＳＦ１、ＴＧＦα、ＴＧＦβ１、ＩＬ１７Ｄ、ＳＤＦ２、ＴＧＦＢＲＡＰ１、ＦＧＦ１１、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＩＬ１β、ＩＬ−１１、ＩＬ−３２、ＩＬ−６、ＩＬ１ＲＮ、ＩＬ−２０ＲＢ、ＩＬ−２１Ｒ、ＰＬＡＵ、ＰＬＥＫＨＡ６、ＣＴＳＢ、ＦＥＲＭＴ１、ＣＲＭＰ１、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＡおよびＰＬＥＫＨＡ１からなる群から選択される。
【００６８】
一変形形態では、少なくとも２種のバイオマーカーの発現レベルが測定され、第１のバイオマーカーは、ＰＬＥＫＨＡ６であり、第２のバイオマーカーは、ＴＩＥ−１、ＴＩＥ−２、ＴＩＭＰ−４、ＦＧＦ１、ＬＩＦ、ＴＧＦＢＲ２、ＴＧＦα、ＴＧＦβ１、ＩＬ１７Ｄ、ＳＤＦ２、ＴＧＦＢＲＡＰ１、ＦＧＦ１１、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＦＧＦ１４、ＩＬ−１１、ＩＬ−３２、ＩＬ−６、ＩＬ１ＲＮ、ＩＬ−２０ＲＢ、ＩＬ−２１Ｒ、ＰＬＡＵ、ＧＮＢ２Ｌ１、ＣＴＳＢ、ＦＥＲＭＴ１、ＣＲＭＰ１、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＡおよびＰＬＥＫＨＡ１からなる群から選択される。
【００６９】
一変形形態では、少なくとも２種のバイオマーカーの発現レベルが測定され、第１のバイオマーカーは、ＣＴＳＢであり、第２のバイオマーカーは、ＴＩＥ−１、ＴＩＭＰ−４、ＦＧＦ１、ＬＩＦ、ＴＧＦＢＲ２、ＣＳＦ１、ＴＧＦα、ＴＧＦβ１、ＳＤＦ２、ＴＧＦＢＲＡＰ１、ＦＧＦ１１、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＦＧＦ１４、ＩＬ１β、ＩＬ−１１、ＩＬ−３２、ＩＬ１ＲＮ、ＩＬ−２０ＲＢ、ＩＬ−２１Ｒ、ＰＬＡＵ、ＧＮＢ２Ｌ１、ＰＬＥＫＨＡ６、ＦＥＲＭＴ１、ＣＲＭＰ１、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＡおよびＰＬＥＫＨＡ１からなる群から選択される。
【００７０】
一変形形態では、少なくとも２種のバイオマーカーの発現レベルが測定され、第１のバイオマーカーは、ＦＥＲＭＴ１であり、第２のバイオマーカーは、ＴＩＥ−１、ＴＩＥ−２、ＴＩＭＰ−４、ＦＧＦ１、ＬＩＦ、ＴＧＦＢＲ２、ＣＳＦ１、ＴＧＦα、ＴＧＦβ１、ＩＬ１７Ｄ、ＴＧＦＢＲＡＰ１、ＦＧＦ１１、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＦＧＦ１４、ＩＬ１β、ＩＬ−１１、ＩＬ−３２、ＩＬ−６、ＩＬ−２０ＲＢ、ＩＬ−２１Ｒ、ＰＬＡＵ、ＧＮＢ２Ｌ１、ＰＬＥＫＨＡ６、ＣＴＳＢ、ＣＲＭＰ１、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＡおよびＰＬＥＫＨＡ１からなる群から選択される。
【００７１】
一変形形態では、少なくとも２種のバイオマーカーの発現レベルが測定され、第１のバイオマーカーは、ＣＲＭＰ１であり、第２のバイオマーカーは、ＴＩＥ−１、ＴＩＥ−２、ＦＧＦ１、ＬＩＦ、ＴＧＦＢＲ２、ＣＳＦ１、ＴＧＦα、ＴＧＦβ１、ＩＬ１７Ｄ、ＳＤＦ２、ＦＧＦ１１、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＦＧＦ１４、ＩＬ１β、ＩＬ−１１、ＩＬ−３２、ＩＬ−６、ＩＬ１ＲＮ、ＩＬ−２１Ｒ、ＰＬＡＵ、ＧＮＢ２Ｌ１、ＰＬＥＫＨＡ６、ＣＴＳＢ、ＦＥＲＭＴ１、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＡおよびＰＬＥＫＨＡ１からなる群から選択される。
【００７２】
一変形形態では、少なくとも２種のバイオマーカーの発現レベルが測定され、第１のバイオマーカーは、ＶＥＧＦＢであり、第２のバイオマーカーは、ＴＩＥ−１、ＴＩＥ−２、ＴＩＭＰ−４、ＬＩＦ、ＴＧＦＢＲ２、ＣＳＦ１、ＴＧＦα、ＴＧＦβ１、ＩＬ１７Ｄ、ＳＤＦ２、ＴＧＦＢＲＡＰ１、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＦＧＦ１４、ＩＬ１β、ＩＬ−１１、ＩＬ−３２、ＩＬ−６、ＩＬ１ＲＮ、ＩＬ−２０ＲＢ、ＰＬＡＵ、ＧＮＢ２Ｌ１、ＰＬＥＫＨＡ６、ＣＴＳＢ、ＦＥＲＭＴ１、ＣＲＭＰ１、ＶＥＧＦＡおよびＰＬＥＫＨＡ１からなる群から選択される。
【００７３】
一変形形態では、少なくとも２種のバイオマーカーの発現レベルが測定され、第１のバイオマーカーは、ＶＥＧＦＡであり、第２のバイオマーカーは、ＴＩＥ−１、ＴＩＥ−２、ＴＩＭＰ−４、ＦＧＦ１、ＴＧＦＢＲ２、ＣＳＦ１、ＴＧＦα、ＴＧＦβ１、ＩＬ１７Ｄ、ＳＤＦ２、ＴＧＦＢＲＡＰ１、ＦＧＦ１１、ＦＧＦ１４、ＩＬ１β、ＩＬ−１１、ＩＬ−３２、ＩＬ−６、ＩＬ１ＲＮ、ＩＬ−２０ＲＢ、ＩＬ−２１Ｒ、ＧＮＢ２Ｌ１、ＰＬＥＫＨＡ６、ＣＴＳＢ、ＦＥＲＭＴ１、ＣＲＭＰ１、ＶＥＧＦＢ  ａｎｄ  ＰＬＥＫＨＡ１からなる群から選択される。
【００７４】
一変形形態では、少なくとも２種のバイオマーカーの発現レベルが測定され、第１のバイオマーカーは、ＰＬＥＫＨＡ１であり、第２のバイオマーカーは、ＴＩＥ−１、ＴＩＥ−２、ＴＩＭＰ−４、ＦＧＦ１、ＬＩＦ、ＣＳＦ１、ＴＧＦα、ＴＧＦβ１、ＩＬ１７Ｄ、ＳＤＦ２、ＴＧＦＢＲＡＰ１、ＦＧＦ１１、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＩＬ１β、ＩＬ−１１、ＩＬ−３２、ＩＬ−６、ＩＬ１ＲＮ、ＩＬ−２０ＲＢ、ＩＬ−２１Ｒ、ＰＬＡＵ、ＰＬＥＫＨＡ６、ＣＴＳＢ、ＦＥＲＭＴ１、ＣＲＭＰ１、ＶＥＧＦＢおよびＶＥＧＦＡからなる群から選択される。
【００７５】
本明細書に提供される他の変形形態では、測定される少なくとも２種のバイオマーカーのうち、少なくとも１種のバイオマーカーが、ＴＩＥ−１、ＴＩＥ−２、ＴＩＭＰ−４、ＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＢ、ＦＢＬＮ５、ＦＢＬＮ７、ＰＧＦ、ＡＮＧＰＴ１、ＡＮＧＰＴ２、ＡＮＧＰＴＬ２、ＡＮＧＰＴＬ６、ＴＮＦＳＦ１２、ＰＲＫＣＡ、ＰＩＫ３ＣＡおよびＥＳＭ１等、血管発生および血管新生に関するリモデリングに関与する因子を含む、血管発生をもたらす因子である。
【００７６】
本明細書に提供される一部の変形形態では、測定される少なくとも２種のバイオマーカーのうち、少なくとも１種のバイオマーカーが、ＣＤ９９，ＣＥＲＣＡＭ，ＨＩＶＥＰ１，ＰＴＧＥＲ１，ＩＬ−３２，ＩＴＦＧ１，ＩＴＧＡＶ、ＨＩＶＥＰ２、ＣＳＦ１Ｒ、ＴＮＦＳＦ１３、ＩＲＡＫ３、ＭＹＬ９、ＮＯＳ３、ＩＬ１２Ａ、ＴＮＦＲＳＦ２１、ＩＲＡＫ１、ＩＬ３３、ＬＲＲＣ８Ａ、ＣＬＥＣ１１Ａ、ＣＣＬ２８、ＥＳＭ１、ＣＭＩＰ、ＴＮＦＲＳＦ２５、ＣＨＳＴ３、ＣＤ７２、ＣＤ３２０、ＣＤ８３、ＩＬ６、ＣＤ６８、ＣＤ９９、ＩＬ−１６、またはＩＬＦ３等、抗炎症または免疫調節因子である。本方法は、ＫＩＦ  １４、ＣＣＬ２、ＩＬＦ２、ＩＬ７Ｒ、ＰＥＡＲ  ｌまたはＩＬ  １６発現レベルが減少するか決定するステップをさらに含むことができる。
【００７７】
本明細書に提供される一部の変形形態では、測定される少なくとも２種のバイオマーカーのうち、少なくとも１種のバイオマーカーが、トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦα、ＴＧＦβ１またはＴＧＦβ２）、トランスフォーミング増殖因子ベータ受容体ＴＧＦＢＲ２またはトランスフォーミング増殖因子ベータ受容体関連タンパク質ＴＧＦＢＲＡＰ１である。
【００７８】
本明細書に提供される一部の変形形態では、測定される少なくとも２種のバイオマーカーのうち、少なくとも１種のバイオマーカーが、ＴＩＥ−１、ＴＩＥ−２、ＴＩＭＰ−４、ＣＧＮＬｌ、ＣＧＲＥＦｌ、ＣＲＭＰｌ、ＦＧＤ６、ＴＮＫ２、ＰＴＧＳ１、ＴＮＦＡＩＰ８、ＣＴＳＢ、ＣＴＳＯ、ＦＡＰ、ＦＥＲＭＴｌ、ＰＬＥＫＨＡ１、ＰＬＥＫＨＡ６、ＲＯＣＫ１、またはＲＯＣＫ２等、細胞運動性、遊走および浸潤性成長促進因子である。
【００７９】
本明細書に提供される一部の変形形態では、測定される少なくとも２種のバイオマーカーのうち、少なくとも１種のバイオマーカーが、抗アポトーシス因子、例えば、ＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＢ、ＰＬＥＫＨＡ１、ＰＬＥＫＨＡ６、ＣＲＭＰｌ、ＦＥＲＭＹ１、ＣＴＳＢ、ＴＧＦＢ１またはＧＮＢ２Ｌ１である。
【００８０】
本明細書に提供される一部の変形形態では、ＣＨＤ２４、ＣＹＲ６１、ＩＬＫ、ＮＥＤＤ９、ＭＹＬ９、ＰＰＡＰ２Ｂ、ＲＥＬＮ、ＩＣＡＭ２、ＩＣＡＭ３およびＴＬＮ２の発現レベルの減少が、その上モニターされるが、その理由は、これらが、細胞接着を促進する因子であるからである。
【００８１】
一部の変形形態では、ＳＩＶＡ１の発現レベルの減少が、その上測定される。
【００８２】
本明細書に提供される一部の変形形態では、測定される少なくとも２種のバイオマーカーのうち、少なくとも１種のバイオマーカーが、インターロイキン、例えば、ＩＬ１ｂ、ＩＬ３、ＩＬ５、ＩＬ６、ＩＬ９、ＩＬ１０、ＩＬ１２ｂ、ＩＬ１８結合タンパク質−α、ＩＬ９、ＩＬ−１１、ＩＬ１２ａ、ＩＬ１２ｂ、ＩＬ−４またはＩＬ−１６である。
【００８３】
本明細書に提供される一部の変形形態では、測定される少なくとも２種のバイオマーカーのうち、少なくとも１種のバイオマーカーが、インターロイキン受容体、例えば、ＩＬ１Ｒα、ＩＬ１Ｒ４、ＩＬ１０Ｒβ、ＩＬ１８Ｒβ、ＩＬ１Ｒ２、ＩＬ−２１Ｒ、ＩＬ−２Ｒβ、ＩＬ−２Ｒγ、ＩＬ５Ｒα、ＩＬ１Ｒ１、ＩＬ１Ｒ２またはＩＬ１Ｒ４である。
【００８４】
本明細書に提供される一部の変形形態では、測定される少なくとも２種のバイオマーカーのうち、少なくとも１種のバイオマーカーが、ケモカイン、例えば、ＣＣＬ８、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２６、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ２３、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２７、ＣＸＣＬ１０、ＣＣＬ２３、ＣＸＣＬ１６、またはＣＣＬ２７である。
【００８５】
本明細書に提供される一部の変形形態では、測定される少なくとも２種のバイオマーカーのうち、少なくとも１種のバイオマーカーが、増殖因子、ホルモンまたは増殖因子受容体、例えば、ＦＧＦ６、ＩＧＦ１、ＩＧＦ２、ＬＡＰ、ＮＴ３、ＰＤＧＦＡＡ、ＰＤＧＦＡＢ、ＳＣＦ、ＴＧＦ２、ＴＧＦα、ＴＧＦβ１、ＴＧＦｂ３、ＴＮＦβ、ＰＤＧＦＲα、ＰＤＧＦＲβ、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＤ、ＶＥＧＦＲ、ＦＧＦ４、ＦＧＦ９、ＨＧＦ  ｌｉｋｅ、ＩＧＦＢＰ  ６、ＰＤＧＦＢβ、ＩＦＮγ，ＳＤＦ１α、ＤＲ６、Ｅｎｄｏｇｌｉｎ  、ＥｒｂＢ３、Ｆａｓ  ＬＧ、ＧＤＮＦ、ＧＩＴＲ  ＬＧ、ＬＥＰＲ、ＳＣＦＲ、Ｓｉｇｌｅｃ  ５、ＴＩＥ−１＆２、ＢＤＮＦ、ＢＭＰ４、ＦＧＦ７、ＩＧＦＢＰ２、ＤＲ６、ＡＮＧ、  ＣＮＴＦ、ＥＧＦ、Ｅｏｔａｘｉｎ  １、ＮＧＦＲ、Ａｃｒｐ３０、ＡｇＲＰ、ＡＮＧＰＴ２、ＬＥＰ、ＮＴ４、ＨＧＦ、ＰＲＬ、ＳＣＦＲ、Ｆａｓ  ＬＧ、ＩＧＦＢＰ  １、またはＩＧＦＢＰ  ２である。
【００８６】
一変形形態では、少なくとも２種のバイオマーカーは、ＴＩＥ−１、ＴＩＥ−２、ＴＩＭＰ−４、ＦＧＦ１、ＬＩＦ、ＴＧＦＢＲ２、ＣＳＦ１、ＴＧＦα、ＴＧＦβ１、ＩＬ１７Ｄ、ＳＤＦ２、ＴＧＦＢＲＡＰ１、ＦＧＦ１１、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＦＧＦ１４、ＩＬ１β、ＩＬ−１１、ＩＬ−３２、ＩＬ−６、ＩＬ１ＲＮ、ＩＬ−２０ＲＢ、ＩＬ−２１Ｒ、ＰＬＡＵ、ＧＮＢ２Ｌ１、ＰＬＥＫＨＡ６、ＣＴＳＢ、ＦＥＲＭＴ１、ＣＲＭＰ１、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＡおよびＰＬＥＫＨＡ１を含むバイオマーカーのパネルから選択される。
【００８７】
一変形形態では、本方法は、ＴＩＥ−１、ＴＩＥ−２、ＴＩＭＰ−４、ＦＧＦ１、ＬＩＦ、ＴＧＦＢＲ２、ＣＳＦ１、ＴＧＦα、ＴＧＦβ１、ＩＬ１７Ｄ、ＳＤＦ２、ＴＧＦＢＲＡＰ１、ＦＧＦ１１、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＦＧＦ１４、ＩＬ１β、ＩＬ−１１、ＩＬ−３２、ＩＬ−６、ＩＬ１ＲＮ、ＩＬ−２０ＲＢ、ＩＬ−２１Ｒ、ＰＬＡＵ、ＧＮＢ２Ｌ１、ＰＬＥＫＨＡ６、ＣＴＳＢ、ＦＥＲＭＴ１、ＣＲＭＰ１、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＡおよびＰＬＥＫＨＡ１から選択される少なくとも２、少なくとも（least）３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９またはさらには少なくとも２０種のバイオマーカーの発現レベルを測定するステップを含む。
【００８８】
一変形形態では、ＴＩＥ−１、ＴＩＥ−２、ＴＩＭＰ−４、ＦＧＦ１、ＬＩＦ、ＴＧＦＢＲ２、ＣＳＦ１、ＴＧＦα、ＴＧＦβ１、ＩＬ１７Ｄ、ＳＤＦ２、ＴＧＦＢＲＡＰ１、ＦＧＦ１１、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＦＧＦ１４、ＩＬ１β、ＩＬ−１１、ＩＬ−３２、ＩＬ−６、ＩＬ１ＲＮ、ＩＬ−２０ＲＢ、ＩＬ−２１Ｒ、ＰＬＡＵ、ＧＮＢ２Ｌ１、ＰＬＥＫＨＡ６、ＣＴＳＢ、ＦＥＲＭＴ１、ＣＲＭＰ１、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＡおよびＰＬＥＫＨＡ１のレベルが測定される。
【００８９】
一変形形態では、本方法は、ＶＥＧＦＡ、ＰＬＥＫＨＡ１、ＶＥＧＦＢ、ＣＲＭＰ１、ＦＥＲＭＴ１、ＣＴＳＢ、ＰＬＥＫＨＡ６、ＧＮＢ２Ｌ１およびＴＧＦβ１から選択される少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７またはさらには少なくとも８種のバイオマーカーの発現レベルを測定するステップを含む。
【００９０】
一変形形態では、本方法は、ＶＥＧＦＡ、ＰＬＥＫＨＡ１、ＶＥＧＦＢ、ＣＲＭＰ１、ＦＥＲＭＴ１、ＣＴＳＢ、ＰＬＥＫＨＡ６、ＧＮＢ２Ｌ１およびＴＧＦβ１の発現レベルを測定するステップを含む。
【００９１】
一部の変形形態では、本方法は、ＳＩＶＡ１のレベルを測定するステップをさらに含む。ＳＩＶＡ１は、ＩＬ−２に曝露されるとＳＥＮ−ＭＳＣにおいて減少することが観察されるいくつかのバイオマーカーのうちの１種である。
【００９２】
一部の変形形態では、ＴＩＥ−１、ＴＩＥ−２、ＴＩＭＰ−４、ＦＧＦ１、ＬＩＦ、ＴＧＦＢＲ２、ＣＳＦ１、ＴＧＦα、ＴＧＦβ１、ＩＬ１７Ｄ、ＳＤＦ２、ＴＧＦＢＲＡＰ１、ＦＧＦ１１、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＦＧＦ１４、ＩＬ１β、ＩＬ−１１、ＩＬ−３２、ＩＬ−６、ＩＬ１ＲＮ、ＩＬ−２０ＲＢ、ＩＬ−２１Ｒ、ＰＬＡＵ、ＧＮＢ２Ｌ１、ＰＬＥＫＨＡ６、ＣＴＳＢ、ＦＥＲＭＴ１、ＣＲＭＰ１、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＡおよびＰＬＥＫＨＡ１を含むバイオマーカーのパネルから選択される少なくとも２種のバイオマーカーの発現が測定され、ＳＩＶＡ１の発現レベルが測定される。少なくとも２種のバイオマーカーの発現レベルが、参照レベルと比べて増加し、ＳＩＶＡ１の発現レベルが、参照レベルと比べて減少することが決定された場合、（１）個体が、ＩＬ−２に基づく治療法に伴う有害事象を経験する見込みが増加したこと；または（２）ＭＳＣの集団が、移植における使用に適さないことのいずれかが決定される。
【００９３】
一部の変形形態では、ＴＩＥ−１、ＴＩＥ−２、ＴＩＭＰ−４、ＦＧＦ１、ＬＩＦ、ＴＧＦＢＲ２、ＣＳＦ１、ＴＧＦα、ＴＧＦβ１、ＩＬ１７Ｄ、ＳＤＦ２、ＴＧＦＢＲＡＰ１、ＦＧＦ１１、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＦＧＦ１４、ＩＬ１β、ＩＬ−１１、ＩＬ−３２、ＩＬ−６、ＩＬ１ＲＮ、ＩＬ−２０ＲＢ、ＩＬ−２１Ｒ、ＰＬＡＵ、ＧＮＢ２Ｌ１、ＰＬＥＫＨＡ６、ＣＴＳＢ、ＦＥＲＭＴ１、ＣＲＭＰ１、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＡおよびＰＬＥＫＨＡ１を含むバイオマーカーのパネルから選択される少なくとも２種のバイオマーカーの発現が測定され、ＳＩＶＡ１の発現レベルが測定される。少なくとも２種のバイオマーカーの発現レベルが、参照レベルと比べて減少するか、または変化を示さず、ＳＩＶＡ１の発現レベルが、参照レベルと比べて増加することが決定された場合、（１）個体が、ＩＬ−２に基づく治療法に伴う有害事象を経験する見込みが増加したこと；または（２）ＭＳＣの集団が、移植における使用に適さないことのいずれかが決定される。
【００９４】
一部の変形形態では、ＶＥＧＦＡ、ＰＬＥＫＨＡ１、ＶＥＧＦＢ、ＣＲＭＰ１、ＦＥＲＭＴ１、ＣＴＳＢ、ＰＬＥＫＨＡ６、ＧＮＢ２Ｌ１およびＴＧＦβ１を含むバイオマーカーのパネルから選択される少なくとも２種のバイオマーカーの発現が測定され、ＳＩＶＡ１の発現レベルが測定される。少なくとも２種のバイオマーカーの発現レベルが、参照レベルと比べて増加し、ＳＩＶＡ１の発現レベルが、参照レベルと比べて減少することが決定された場合、（１）個体が、ＩＬ−２に基づく治療法に伴う有害事象を経験する見込みが増加したこと；または（２）ＭＳＣの集団が、移植における使用に適さないことのいずれかが決定される。
【００９５】
一部の変形形態では、ＴＩＥ−１、ＴＩＥ−２、ＴＩＭＰ−４、ＶＥＧＦＡ、ＰＬＥＫＨＡ１、ＶＥＧＦＢ、ＣＲＭＰ１、ＦＥＲＭＴ１、ＣＴＳＢ、ＰＬＥＫＨＡ６、ＧＮＢ２Ｌ１およびＴＧＦβ１を含むバイオマーカーのパネルから選択される少なくとも２種のバイオマーカーの発現が測定され、ＳＩＶＡ１の発現レベルが測定される。少なくとも２種のバイオマーカーの発現レベルが、参照レベルと比べて減少するか、または変化を示さず、ＳＩＶＡ１の発現レベルが、参照レベルと比べて増加することが決定された場合、（１）個体が、ＩＬ−２に基づく治療法に伴う有害事象を経験する見込みが増加したこと；または（２）ＭＳＣの集団が、移植における使用に適さないことのいずれかが決定される。
【００９６】
本発明の特定の変形形態では、ＴＧＦβ１バイオマーカーのＲＮＡ発現レベルは、参照レベル（ＩＬ−２で処置されていない試料）と比較して、ＩＬ−２処置の際の試料において約少なくとも０．２５倍減少する。倍数は、未加工の倍数またはＧＦＯＬＤ値であり得る。
【００９７】
本発明の特定の変形形態では、ＳＩＶＡ１バイオマーカーのＲＮＡ発現レベルは、参照レベル（ＩＬ−２で処置されていない試料）と比較して、ＩＬ−２処置の際の試料において約少なくとも０．２倍減少する。倍数は、未加工の倍数またはＧＦＯＬＤ値であり得る。
【００９８】
本発明の特定の変形形態では、ＣＲＭＰ１バイオマーカーのＲＮＡ発現レベルは、参照レベル（ＩＬ−２で処置されていない試料）と比較して、ＩＬ−２処置の際の試料において約少なくとも０．２２倍増加する。倍数は、未加工の倍数またはＧＦＯＬＤ値であり得る。
【００９９】
本発明の特定の変形形態では、ＶＥＧＦＢバイオマーカーのＲＮＡ発現レベルは、参照レベル（ＩＬ−２で処置されていない試料）と比較して、ＩＬ−２処置の際の試料において約少なくとも０．１９倍増加する。倍数は、未加工の倍数またはＧＦＯＬＤ値であり得る。
【０１００】
本発明の特定の変形形態では、ＶＥＧＦＡバイオマーカーのＲＮＡ発現レベルは、参照レベル（ＩＬ−２で処置されていない試料）と比較して、ＩＬ−２処置の際の試料において約少なくとも１．５倍または約１．７８倍増加する。倍数は、未加工の倍数またはＧＦＯＬＤ値であり得る。
【０１０１】
本発明の特定の変形形態では、ＰＬＥＫＨＡ１バイオマーカーのＲＮＡ発現レベルは、参照レベル（ＩＬ−２で処置されていない試料）と比較して、ＩＬ−２処置の際の試料において約少なくとも０．４６倍増加する。倍数は、未加工の倍数またはＧＦＯＬＤ値であり得る。
【０１０２】
本発明の特定の変形形態では、ＣＴＳＢバイオマーカーのＲＮＡ発現レベルは、参照レベル（ＩＬ−２で処置されていない試料）と比較して、ＩＬ−２処置の際の試料において約少なくとも．２５倍増加する。倍数は、未加工の倍数またはＧＦＯＬＤ値であり得る。
【０１０３】
本発明の特定の変形形態では、ＩＬ−２処置の際に、ＴＧＦβ１のＲＮＡ発現レベルは、約−０．２５ＧＦＯＬＤ減少し、ＳＩＶＡ１は、約−０．２ＧＦＯＬＤ減少し、同じ条件下で、ＣＲＭＰ１のレベルは、約０．２２ＧＦＯＬＤ増加し、ＶＥＧＦＢは、約０．１９ＧＦＯＬＤ増加し、ＶＥＧＦＡは、約１．７８ＧＦＯＬＤ増加し、ＰＬＥＫＨＡ１は、約０．４５９ＧＦＯＬＤ増加し、ＣＴＳＢは、約０．２５ＧＦＯＬＤ増加する。
【０１０４】
本発明の特定の変形形態では、ＴＩＥ−１バイオマーカーのタンパク質発現レベルは、参照レベル（ＩＬ−２で処置されていない試料）と比較して、ＩＬ−２処置の際の試料において約少なくとも２倍、少なくとも３倍または約３．７３倍増加する。
【０１０５】
本発明の特定の変形形態では、ＴＩＥ−２バイオマーカーのタンパク質発現レベルは、参照レベル（ＩＬ−２で処置されていない試料）と比較して、ＩＬ−２処置の際の試料において約少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍または約５．２４倍増加する。
【０１０６】
本発明の特定の変形形態では、ＴＩＭＰ−４バイオマーカーのタンパク質発現レベルは、参照レベル（ＩＬ−２で処置されていない試料）と比較して、ＩＬ−２処置の際の試料において約少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍または約４．３１倍増加する。
【０１０７】
本発明の特定の変形形態では、ＩＬ−１１バイオマーカーのタンパク質発現レベルは、参照レベル（ＩＬ−２で処置されていない試料）と比較して、ＩＬ−２処置の際の試料において約少なくとも１．１倍、少なくとも１．２倍、少なくとも１．３倍、少なくとも１．４倍または約１．４２倍増加する。
【０１０８】
本発明の特定の変形形態では、ＩＬ１βバイオマーカーのタンパク質発現レベルは、参照レベル（ＩＬ−２で処置されていない試料）と比較して、ＩＬ−２処置際の試料において約少なくとも１．１倍または約１．１４倍増加する。
【０１０９】
本発明の特定の変形形態では、ＴＧＦαバイオマーカーのタンパク質発現レベルは、参照レベル（ＩＬ−２で処置されていない試料）と比較して、ＩＬ−２処置の際の試料において約少なくとも１．５倍、少なくとも２倍または約２．４倍増加する。
【０１１０】
本発明の特定の変形形態では、ＴＧＦβ１バイオマーカーのタンパク質発現レベルは、参照レベル（ＩＬ−２で処置されていない試料）と比較して、ＩＬ−２処置の際の試料において約少なくとも１．１倍、少なくとも１．２倍、少なくとも１．３倍、少なくとも１．４倍または約１．４４倍増加する。
【０１１１】
本発明の特定の変形形態では、試料において、参照レベルと比較して、ＴＩＥ−１バイオマーカーのタンパク質発現レベルは、約３．７３倍増加し、ＴＩＥ−２のタンパク質発現レベルは、約５．２４倍増し、ＴＩＭＰ−４のタンパク質発現レベルは、約４．３１倍増し、ＩＬ−１１のタンパク質発現レベルは、約１．４２倍増し、ＩＬ１βのタンパク質発現レベルは、約１．１４倍増し、ＴＧＦαのタンパク質発現レベルは、約２．４倍増し、ＴＧＦβ１は、約１．４４倍増する。
５．ＩＬ−２治療法のためのコンパニオン方法
【０１１２】
本明細書に企図される通り、ＩＬ−２の投与は、ＭＳＣの分泌特性に影響を与え、ＩＬ−２処置は、ある特定の個体における潜在的な有害成果をもたらし得る。ある特定のバイオマーカー（上述の通り）の産生の特徴付けに基づき、ＩＬ−２に基づく治療法を受けるのに適格な個体が、ＩＬ−２に基づく治療法に伴う有害事象を経験し得るか決定するために使用することができる診断キット、アッセイおよび方法が、本明細書に記載されている。ＩＬ−２により患者を処置する方法も、本明細書に記載されている。
【０１１３】
本明細書において使用される場合、ＩＬ−２に基づく治療法に伴う潜在的有害事象は、細胞老化に関連し、血管新生、腫瘍発生、血管発生、浸潤性成長、転移、細胞運動性、遊走その他等の事象を含む。本発明は、個体が、ＩＬ−２に基づく治療法に伴う有害事象を経験し得る、経験するであろう、または経験する可能性が高いかに関する決定を可能にする。一変形形態では、本発明は、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはさらには約１００％の、有害事象を経験する見込み増加の決定を可能にする。
【０１１４】
一変形形態では、個体由来の試料において本方法が行われる前に、個体は、少なくとも１用量のＩＬ−２に基づく治療法を受けたことがある。この変形形態では、ＩＬ−２に基づく治療法を受けるのに適格な個体が、ＩＬ−２に基づく治療法に伴う有害事象を経験し得るか決定するための方法は、個体由来の試料における、本明細書に記載されているＭＳＣ老化を示すバイオマーカーのパネルから選択される少なくとも２種のバイオマーカーの発現レベルを測定するステップであって（バイオマーカーのパネルは、抗アポトーシス、血管新生、腫瘍原性であり、浸潤性成長、転移、細胞運動性、遊走その他の原因となる血管発生をもたらす）、個体が、少なくとも１用量のＩＬ−２に基づく治療法を受けたことがあるステップと、バイオマーカーのレベルを参照レベルと比較するステップであって、参照レベルを上回るレベルの増加が、個体が、ＩＬ−２に基づく治療法に伴う有害事象を経験し得ることを示し、参照レベルと比較したレベルの減少または変化なしが、個体が、ＩＬ−２に基づく治療法に伴う有害事象を経験しない場合があることを示すステップとを含む。
【０１１５】
別の変形形態では、個体から試料が得られ、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＩＬ−２に曝露される（これと共にインキュベートされる、これと組み合わされる等）。この変形形態では、ＩＬ−２に基づく治療法を受けるのに適格な個体が、ＩＬ−２に基づく治療法に伴う有害事象を経験し得るか決定するための方法は、個体由来の試料における、ＭＳＣ老化を示すバイオマーカーのパネルから選択される少なくとも２種のバイオマーカーの発現レベルを測定するステップであって、個体が、少なくとも１用量のＩＬ−２に基づく治療法を受けたことがあるステップと、バイオマーカーのレベルを参照レベルと比較するステップであって、参照レベルを上回るレベルの増加が、個体が、ＩＬ−２に基づく治療法に伴う有害事象を経験し得ることを示し、参照レベルと比較したレベルの減少または変化なしが、個体が、ＩＬ−２に基づく治療法に伴う有害事象を経験しない場合があることを示すステップとを含む。
【０１１６】
別の変形形態では、本方法は、ＩＬ−２に基づく治療法によりがんに関して個体を処置することを対象とし、本方法は、少なくとも２種のバイオマーカーの発現レベルが、個体由来の試料において、参照レベルと比較して増加する場合、有効量のＩＬ−２に基づく治療法を個体に投与するステップであって、（１）個体が、少なくとも１用量のＩＬ−２に基づく治療法を受けたことがある、または（２）試料が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＩＬ−２と組み合わされる、のいずれかであり、バイオマーカーのパネルが、細胞老化についてのバイオマーカーを含むステップを含む。
【０１１７】
バイオマーカーは、上昇したレベルで存在する場合、ＳＥＮ  ＭＳＣの存在を示し、ＩＬ−２によるさらなる処置が、個体における腫瘍発生、浸潤または転移の促進等の有害効果をもたらし得る見込みを示す。これに基づき、個体が、ＩＬ−２に基づく治療法を受けるべきではないことを決定することができる。その代わりに、これらの方法の実施の際に、特定のセットのバイオマーカーの発現に基づき、ＩＬ−２に基づく治療法の使用が、有害効果をもたらさない可能性が高い（例えば、腫瘍発生、浸潤または転移を促進しない可能性が高い）ことが決定される場合、ＩＬ−２に基づく治療法の投与が容認できることを決定することができ、任意選択で、ＩＬ−２に基づく治療法が投与されるであろう。
【０１１８】
本明細書において使用される場合、「ＩＬ−２に基づく治療法」は、ＩＬ−２単独または別の薬剤と組み合わせたＩＬ−２の投与を伴う治療法である。ＩＬ−２の投与は、単独での、または他のモチーフに融合したＩＬ−２の活性部分の投与を企図する。ＩＬ−２に基づく治療法は、静脈内（ＩＶ）、筋肉内（ＩＭ）もしくは経皮もしくは皮下（ＳＣ）注射を含む、いずれかの形態の注射によって；経口もしくは経鼻経路によって；または外用投与（クリーム、液滴等）によって投与することができる。本発明の特定の変形形態では、ＩＬ−２は、徐放製剤、または徐放デバイスを使用して投与される製剤として使用される。そのようなデバイスは、本技術分野で周知であり、例えば、経皮パッチ、および種々の用量にて連続的な定常状態様式で経時的な薬物送達をもたらし徐放効果を達成することができる、小型の植え込み型ポンプを含む。舌下または点眼製剤も企図され得る。
【０１１９】
本明細書に提供されている通り、発現分析に使用される試料は、組織、生検、血液、血漿、血清、尿、唾液、ＣＳＦ、糞便、リンパ液、精液および汗が挙げられるがこれらに限定されない、いずれかの試料であり得る。特定の変形形態では、試料は、血液、血漿または血清試料であり；例示的な変形形態では、試料は、血液である。いかなる理論にも制約されないが、ＭＳＣは、血管周囲区画に置かれるため、ＩＬ−２投与に応答してＭＳＣによって産生される因子は、全身性／循環性であり得、血液試料において容易に測定可能であり得る。
【０１２０】
本明細書に提供される変形形態では、試料の発現レベルは、個体へのＩＬ−２に基づく治療法の投与に続くいずれかの時点で、またはＩＬ−２のｉｎ  ｖｉｔｒｏ混合（単独での、または他のモチーフに融合したＩＬ−２の活性部分と試料との混合）に続くいずれかの時点で、例えば、その１５分、３０分、１時間、２、３、４、６、１２、１５、２４、３６、４８、７２またはさらには９６時間後に測定することができる。
【０１２１】
一部の変形形態では、個体は、測定に先立ち複数用量のＩＬ−２に基づく治療法を投与される。一部の変形形態では、個体は、測定に先立ち単一用量のＩＬ−２に基づく治療法を投与される。典型的には、ＩＬ−２の用量は、特異的ＩＬ−２産物の選択に依存する。およそ０．００１〜０．１ｍｇ／ｋｇ患者体重を投与することができ；一部の変形形態では、約０．００５、０．０１、０．０５ｍｇ／ｋｇを投与することができる。一部の変形形態では、６００，０００ＩＵ／ｋｇが投与される（ＩＵは、リンパ球増殖バイオアッセイによって決定することができ、ヒトＩＬ−２のための世界保健機関（World  Health  Organization）第１国際標準（1st  International  Standard）によって確立された国際単位（ＩＵ）で表現される）。一部の変形形態では、ＩＬ−２用量は、０．０１ＭＩＵ／日〜３．０ＭＩＵ／日／患者（ＭＩＵは、百万国際単位）に及ぶ。ＩＬ−２に基づく治療法は、１日当たり１または複数回から１週間当たり１または複数回投与することができ；これは、１日おきに１回を含む。当業者であれば、ある特定の因子が、対象を有効に処置するために要求される投薬量およびタイミングに影響を与え得ることを認めるであろうが、そのような因子として、疾患または障害の重症度、以前の処置、対象の総体的な健康および／または年齢、ならびに存在する他の疾患が挙げられるがこれらに限定されない。さらに、治療有効量のＩＬ−２による対象の処置は、単一の処置を含むことができる、または一連の処置を含むことができる。一変形形態では、組成物は、５日間８時間毎に投与され、続いて２〜１４日間、例えば、９日間の休息期間、続いて８時間毎の追加的な５日間の投与が為される。
【０１２２】
がん処置のためのＩＬ−２に基づく治療法の広汎な使用を考慮すると、本明細書に提供されるＩＬ−２処置のためのコンパニオン方法は、がんのためのコンパニオン方法として特に適することがある。しかし、記載されている方法は、がん治療法のために限定されず、ＩＬ−２が承認された処置または候補処置であるいずれかの疾患に適用可能である。一部の変形形態では、しかし、個体は、がんの処置のためにＩＬ−２に基づく治療法を受けたことがある。一部の変形形態では、がんは、腎細胞癌、メラノーマ、乳がん、膵がん、卵巣がん、結腸がん、肺がん、非小細胞肺がん、上皮内癌（ＩＳＣ）、扁平上皮癌（ＳＣＣ）、甲状腺がん、子宮頸部がん、子宮がん、前立腺がん、精巣がん、脳がん、膀胱がん、胃がん、肝細胞腫、メラノーマ、神経膠腫、網膜芽細胞腫、中皮腫、骨髄腫、リンパ腫および白血病の中から選択される。一部の例では、がんは、後期がん、転移性がんまたは再燃したがんである。他の変形形態では、ＩＬ−２処置は、望ましくない免疫応答に伴うまたはこれに起因するいずれかの状態、例えば、ＨＣＶ関連血管炎、ぶどう膜炎、筋炎、Ｉ型糖尿病、全身性ループスエリテマトーデス（lupus  erythematous）、全身性血管炎、乾癬、アレルギー、喘息、クローン病、多発性硬化症、関節リウマチ、粥状動脈硬化、自己免疫性甲状腺疾患、神経変性疾患、アルツハイマー病、移植片対宿主病、自然流産および同種移植片拒絶を限定することなく含む、炎症性、免疫関連または自己免疫性疾患のためのものである。
【０１２３】
個体が、ＩＬ−２に基づく治療法を受けるのに適すると決定される場合、処置は、参照試料と比べた、試料における検出されたバイオマーカーの決定されたレベルに基づき変更させることができる。本方法を使用して、参照試料と比べた試料におけるバイオマーカーの決定されたレベルに基づき、処置レジメンを改変する（例えば、投薬量または投薬スケジュールをエスカレートさせる）ことができる。
【０１２４】
特定の変形形態では、個体が、ＩＬ−２に基づく治療法に起因する有害効果を経験しない可能性が高い（例えば、経験しない場合がある）ことが決定され、次いでＩＬ−２に基づく治療法を投与された場合、個体はその後、再度検査して、有害効果についてモニターすることができる。よって、この変形形態では、個体は、処置前および処置が開始されてからの両方において、潜在的有害効果の見込みについて検査される。投与の用量およびスケジュールは、それに従って調整することができる。例えば、ＩＬ−２処置のための低投薬量レジメンを臨床で実行することができる。本発明に記載されているコンパニオン方法に加えて、ＩＬ−２処置効果、例えば、ｉｎ  ｖｉｖｏでのＴ細胞の分化に対するＩＬ−２に基づく治療法の効果を、追加的な測定によってモニターすることができる。
【０１２５】
図１Ｂは、ＭＳＣの複製老化状態を照会することにより、ＩＬ−２により患者を処置する例示的な方法を図解する。この例では、患者は、１または複数用量のＩＬ−２により処置され（１０１）、既定の期間内に（例えば、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間等の開始時間と、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、２４時間、３０時間、３６時間、４２時間、４８時間、７２時間または９６時間等の停止時間との間に）、患者から試料を採取する（１０３）。試料は、本明細書に提供されるいずれか適切な体液または組織（例えば、血液、血漿、血清、尿等）であり得る。次いで、この試料を試験して、バイオマーカーのパネルの存在／非存在および／またはレベルを検出することができる（１０５）。
６．細胞に基づく治療法における使用に先立つＭＳＣの品質管理
【０１２６】
ＭＳＣは、種々の徴候のために投与（移植）される。本発明の重要な態様は、投与に先立つ、いずれのＭＳＣが投与に適するかに関する決定である。特に、提供される方法は、炎症誘発性または他の面で良い結果を生じない可能性があるｉｎ  ｖｉｖｏ環境における移植されたＭＳＣに関連する抗アポトーシス、血管新生および腫瘍原性活性の見込みを回避または低下させるために、検査の際に、投与に適したＭＳＣの集団の選択を可能にする。
【０１２７】
よって、別の態様では、試料中の幹細胞の品質および潜在力を評価するための方法が、本明細書に提供される。そのような方法およびキットは、個体において使用される前の、ＭＳＣの集団の安全性および品質を確実にするための援助に有用である。
【０１２８】
一変形形態では、ＭＳＣの集団が、幹細胞に基づく治療法のための個体への投与に適するか決定する方法は、（ａ）ＭＳＣの集団をＩＬ−２と共にインキュベートするステップ（単独での、または他のモチーフに融合したＩＬ−２の活性部分と共にインキュベートするステップ）と、（ｂ）細胞における、細胞老化に関連するバイオマーカーのパネルの発現レベルを測定するステップであって、バイオマーカーのパネルが、抗アポトーシス、血管新生、腫瘍原性であり、浸潤性成長、転移、細胞運動性、遊走その他の原因となる血管発生をもたらすステップと、（ｃ）バイオマーカーのレベルを参照レベルと比較するステップであって、参照レベルを上回るレベルの増加が、幹細胞が、個体への投与に最適ではなく、投与されれば有害効果をもたらし得ることを示すステップとを含む。しかし、レベルの変化なしまたは参照レベルを下回る減少は、幹細胞が、個体への投与に適することを示すことができる。一般に、適したとは、細胞が、腫瘍原性、転移促進、抗アポトーシスその他等、有害事象をほとんどまたは全く引き起こさないであろうと伝えることを意図する。
【０１２９】
一部の変形形態では、細胞の集団は、自家使用に意図される。他の変形形態では、細胞の集団は、同種異系間使用に意図される。一部の変形形態では、細胞の集団は、均質な起源の、例えば、単一個体に由来する細胞を含む。一部の変形形態では、細胞の集団は、例えば、種々の供給源由来の細胞で構成された、不均一な起源の細胞を含む。
【０１３０】
本明細書に提供される変形形態では、試料の発現レベルは、ＩＬ−２のインキュベーションに続くいずれかの時点で、例えば、ＩＬ−２とのインキュベーションの１５分、３０分、１時間、２、３、４、６、１２、１５、２４、３６、４８、７２またはさらには９６時間後に測定することができる。
ＩＩ．キットおよび製造品
【０１３１】
本願は、試料におけるバイオマーカーのレベルを測定するためのキットも提供する。
【０１３２】
一変形形態では、本発明のキットは、移植に対するＭＳＣの集団の適合性を評価するためのものである。
【０１３３】
別の変形形態では、本発明のキットは、ＩＬ−２に基づく治療法を、それを必要とする個体に投与するべきか決定するためのものである。
【０１３４】
一変形形態では、キットは、試料における少なくとも２種のバイオマーカーのＲＮＡ発現レベルを測定するための試薬を含む。例えば、本キットは、本明細書に記載されているバイオマーカーのいずれかから選択される少なくとも２種のバイオマーカーに特異的なプローブまたはプライマー、例えば、Ｑ−ＰＣＲプライマーを含むことができる。
【０１３５】
特定の変形形態では、本キットは、ＴＩＥ−１、ＴＩＥ−２、ＴＩＭＰ−４、ＦＧＦ１、ＦＧＦ１１、ＦＧＦ１４、ＬＩＦ、ＴＧＦＢＲ２、ＣＳＦ１、ＴＧＦα、ＴＧＦβ１、ＩＬ１７Ｄ、ＳＤＦ２、ＴＧＦＢＲＡＰ１、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ−１１、ＩＬ−３２、ＩＬ−６、ＩＬ１ＲＮ、ＩＬ−２０ＲＢ、ＩＬ−２１Ｒ、ＰＬＡＵ、ＧＮＢ２Ｌ１、ＰＬＥＫＨＡ６、ＰＬＥＫＨＡ１、ＣＴＳＢ、ＦＥＲＭＴ１、ＣＲＭＰ１、ＶＥＧＦＢおよびＳＩＶＡ１およびＶＥＧＦＡから選択されるバイオマーカーの測定に特異的な少なくとも２種の試薬を含む。一部の変形形態では、プライマーは、標識、例えば、蛍光標識を含む。一部の変形形態では、本キットは、試料におけるバイオマーカーのＲＮＡ発現レベルを測定するための、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９またはさらには少なくとも２０種の試薬、例えば、プローブまたはプライマーを含む。
【０１３６】
他の変形形態では、キットは、試料における少なくとも２種のバイオマーカーのタンパク質発現レベルを測定するための試薬を含む。例えば、本キットは、ＴＩＥ−１、ＴＩＥ−２、ＴＩＭＰ−４、ＦＧＦ１，ＦＧＦ１１、ＦＧＦ１４，ＬＩＦ，ＴＧＦＢＲ２、ＣＳＦ１、ＴＧＦα、ＴＧＦβ１，ＩＬ１７Ｄ、ＳＤＦ２、ＴＧＦＢＲＡＰ１，ＴＮＦＳＦ１３Ｂ，ＩＬ１Ｂ，ＩＬ−１１，ＩＬ−３２、ＩＬ−６、ＩＬ１ＲＮ、ＩＬ−２０ＲＢ、ＩＬ−２１Ｒ、ＰＬＡＵ，ＧＮＢ２Ｌ１，ＰＬＥＫＨＡ６、ＰＬＥＫＨＡ１，ＣＴＳＢ，ＦＥＲＭＴ１，ＣＲＭＰ１，ＶＥＧＦＢおよびＳＩＶＡ１およびＶＥＧＦＡから選択される少なくとも２種のバイオマーカーに特異的な抗体を含むことができる。一部の変形形態では、抗体は、標識、例えば、蛍光標識を含む。一部の変形形態では、本キットは、試料におけるバイオマーカーのタンパク質発現レベルを測定するための、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９またはさらには少なくとも２０種の試薬、例えば、抗体を含むアレイまたはＥＬＩＳＡプレートを含む。
【０１３７】
一部の変形形態では、本キットは、ＩＬ−２組成物（試料と、全長ＩＬ−２、または単独でのもしくは他のモチーフに融合したＩＬ−２の部分を含む組成物）をさらに含む。このＩＬ−２組成物は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの試料の検査に、または個体への投与（admiration）に使用して、本発明の方法を実施することができる。
【０１３８】
一部の変形形態では、本キットは、アッセイにおける使用のための参照標準（参照レベルが同じ条件下で生じることを決定するために、並行して検査するべき試料）をさらに含む。一部の変形形態では、本キットは、それに対してアッセイ結果をチェックすることができる参照を提供する、参照レベル、例えば、健康な個体またはＩＬ−２で処置されていない個体の集団由来の参照レベルとして役立つ値の書面のリストをさらに含む。
【０１３９】
本明細書に企図される一部の変形形態では、本キットは、並行してまたは連続的に使用することができる、特定のバイオマーカーの発現レベルの測定のための複数のアッセイを提供する。例えば、キットは、３枚のアッセイプレートと、Ｑ−ＰＣＲプライマーまたは抗体を含むことができ、１枚は、増殖因子バイオマーカーの検出を対象にし、１枚は、抗アポトーシスバイオマーカーの検出を対象にし、１枚は、細胞運動性および遊走に関与する因子の検出を対象にする。別の変形形態では、本キットは、３種の異なる時点における被験試料のアッセイに有用な３枚のアッセイプレートを含むことができる。本キットが、バイオマーカーの連続的または並行検出の目的で、４、５枚またはそれを超えるこのようなプレートを含むことができることが理解される。
【０１４０】
本願は、本明細書に記載されているキットのうちいずれか１種を含む製造品も提供する。
【０１４１】
本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲およびその均等物によってのみ限定されることから、本明細書に用いられている用語法が、単に特定の変形形態を説明する目的で使用されており、限定を意図しないことを理解されたい。次の実施例は、説明を目的とする。これらは、本発明のある特定の態様および変形形態を示すことを意図するが、いかなる様式においても本発明を限定することを意図しない。
【実施例】
【０１４２】
（実施例１）
材料および方法
この実施例は、本発明の例示的な方法を提供し、実施例２〜１０で後に使用される材料および方法を提供する。
ＭＳＣの単離、培養および特徴付け
【０１４３】
この研究で使用されたＭＳＣは、ＵＣＳＤ医療センター、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、でルーチンの脂肪吸引手技を受けた３２歳および４９歳の健康な成人女性ドナーから得られたヒト脂肪組織から単離した。ＭＳＣ単離プロトコールは現地の倫理委員会の承認を得、前述の通りに実行した。単離した脂肪由来幹細胞株は、ＤＭＥＭ／Ｆ１２培地（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で成長させた。Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｆｏｒ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙによって設定されたＭＳＣ最小定義基準により、フローサイトメトリー分析は、ｈＡＤＳＣがＣＤ２９、ＣＤ７３、ＣＤ９０およびＣＤ１０５を発現するが、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１４、ＣＤ１９、ＣＤ３４、ＣＤ４５、ＣＤ８０、ＣＤ８６（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｓｅ、ＵＳＡからの抗体）を発現しないことを示した。形態学的分析は、細胞が線維芽細胞様形態を示し、プラスチック粘着性であり、市販の分化培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＵＳＡ）を使用したｉｎ  ｖｉｔｒｏ条件下で脂肪生成、軟骨形成および骨形成分化が可能なことを示した。累積集団倍加（ＰＤ）は、培養での成長日数の関数としての複数の継代にわたるＰＤ＝ｌｏｇ（Ｎ／ＮＯ）×３．３３として計算し、ここで、ＮＯはフラスコに平板培養した細胞の数であり、Ｎはこの継代で回収された細胞の数である。全ての実験で、ｈＡＤＳＣのＰＤ４またはＰＤ６のＳＲ集団ならびにＳＥＮ集団のＰＤ４１および４５が使用された。組換えＩＬ−２（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ、ＵＳＡ）による処置は、（Deenick  EK、Gett  AV、Hodgkin  PD（２００３年）J  Immunol１７０巻：４９６３〜４９７２頁）に記載されるように実行した。２０Ｕ／ｍｌのＩＬ−２を、３７℃で２４時間培養培地に加えた。
老化関連のＳＡ−βガラクトシダーゼアッセイ
【０１４４】
ｐＨ依存性の老化関連（３−ガラクトシダーゼ活性（ＳＡ−（βＧａｌ）の発現をモニタリングするアッセイを、製造業者のキット（ＢｉｏＶｉｓｉｏｎ）に記載されるように、およびWang  J、Geesman  GJ、Hostikka  SL、Atallah  M、Blackwell  Bら（２０１１年）Inhibition  of  activated  pericentromeric  SINE/ALU  repeat  transcription  in  senescent  human  adult  stem  cells  reinstates  self-renewal.  Cell  cycle１０巻：３０１６〜３０３０頁で以前に公開されている通りに実行した。培養されたｈＡＤＳＣをＰＢＳで室温で１５分間洗浄し、ＰＢＳで２回洗浄し、３７℃で一晩Ｘ−Ｇａｌ含有補助剤で染色した。細胞をＰＢＳで２回洗浄し、顕微鏡（Ｎｉｋｏｎｓ、ＴＥ３００、ＤＸＭ１２００デジタルカメラ、Ｊａｐａｎ）を使用して画像を捕捉した。
遊走および浸潤アッセイ
【０１４５】
トランスウェルフィルターはＣｏｒｎｉｎｇ  Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ（Ａｃｔｏｎ、ＭＡ、ＵＳＡ）からのものであり、使用した全てのサイトカインはＰｅｐｒｏｔｅｃｈ  Ｉｎｃ．（Ｒｏｃｋｙ  Ｈｉｌｌ、ＮＪ、ＵＳＡ）から得た。遊走アッセイは、８ｍｍ厚のトランスウェルチャンバーを使用して、Perez  LM、Bernal  A、San  Martin  N、Galvez  BG（２０１３年）、Arch  Physiol  Biochem１１９巻：１９５〜２０１頁に記載されるように実行した。トランスウェル遊走アッセイのために、１．０×１０４個の細胞を８０ｕｌの無血清アルファ−ＭＥＭに懸濁し、８ｍｍ孔径フィルターを含有する２４ウェルトランスウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、Ｃｏｓｔａｒ、ＵＳＡ）の上部チャンバーに播種した。下部チャンバーに、６００ｕｌのＤＭＥＭまたはサイトカイン：ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＴＮＦ−α、ＨＭＧβ１を含有する培地を加えた。使用濃度は：５０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−８およびＨＭＧβ１；（Perezら、２０１３年、Arch  Physiol  Biochem１１９巻：１９５〜２０１頁）に記載されているように３０ｎｇ／ｍｌのＴＮＦ−αであった。ｈＡＤＳＣを３７℃で１６時間インキュベートした。上部チャンバーに保持された細胞はスワブによって除去し、フィルターを通して遊走したものは室温で２０分間４％パラホルムアルデヒドで固定し、５％トルイジンブルーで一晩染色した。細胞は、下側で数えた；明視野顕微鏡（Ｎｉｋｏｎｓ、ＴＥ３００、ＤＸＭ１２００デジタルカメラ、Ｊａｐａｎ）を使用して、５つの異なるランダムに選択された１０×視野で。これらの実験は、ＳＲまたはＳＥＮ集団のいずれかの３２歳および４１歳の２名のドナーのｈＡＤＳＣで行い、各ドナーは３回を超えて試料採取した。
酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）
【０１４６】
ｈＡＤＳＣ（ＳＲまたはＳＥＮ）を１０ｃｍ２のシャーレあたり１０５個の細胞密度で平板培養し、ＩＬ−２の２０Ｕ／ｍＬで２４時間処置し、未処置対照は、Deenick  EK、Gett  AV、Hodgkin  PD（２００３年）Stochastic  model  of  T  cell  proliferation:  a  calculus  revealing  IL-2  regulation  of  precursor  frequencies、cell  cycle  timeおよびsurvival.  J  Immunol１７０巻：４９６３〜４９７２頁に既述の通りである。次に、ＭｅｍＰＥＲ  Ｐｌｕｓ＃８９８４２（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を製造業者のプロトコールに従って使用して、細胞膜に会合しているタンパク分画を調製した。ヒトＩＬ−２ＲアルファおよびヒトＩＬ−２ＲベータＥＬＩＳＡキット＃ＥＬＨ−ＩＬ−２Ｒａおよび＃ＥＬＨ−ＩＬ−２Ｒｂ（ＲａｙＢｉｏｔｅｃｈ，Ｉｎｃ）をそれぞれ使用して、ＩＬ−２受容体アルファおよびベータの濃度の測定を得た。標準（組換えＩＬ−２受容体アルファおよびベータ）ならびに実験試料の光学密度はＳＰＥＣＴＲＡ  Ｍａｘ  Ｐｌｕｓ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）によって４５０ｎｍで測定し、濃度は製造業者のプロトコールに記載されるように計算した。
リアルタイム定量的ポリメラーゼ連鎖反応
【０１４７】
ＲＮｅａｓｙミニキット（Ｑｉａｇｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して、ｈＡＤＳＣから全ＲＮＡを単離した。ＲｅｖｅｒｔＡｉｄ  Ｆｉｒｓｔ  Ｓｔｒａｎｄ  ｃＤＮＡ合成キット（Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ、ＵＳＡ）を使用して、ｃＤＮＡを次に合成した。リアルタイム定量的ポリメラーゼ連鎖反応（Ｑ−ＰＣＲ）は、ＴａｑＭａｎ装置を使用して実行した。発現レベルは２−ΔΔＣｔとして計算し、ここで、相対発現はベータ−アクチン遺伝子発現への正規化によって決定した。全てのアッセイを３反復で実行し、ｃＤＮＡのない陰性対照試料を使用した。Ｑ−ＰＣＲのためのプライマーは、以下の通りだった：
【０１４８】
【化１】
2018518692.tif 000003
【０１４９】
【化２】
2018518692.tif 000004
【０１５０】
【化３】
2018518692.tif 000005
【０１５１】
【化４】
2018518692.tif 000006
【０１５２】
【化５】
2018518692.tif 000007
【０１５３】
【化６】
2018518692.tif 000008
転写分析
【０１５４】
Deenick  EK、Gett  AV、Hodgkin  PD（２００３年）Stochastic  model  of  T  cell  proliferation:  a  calculus  revealing  IL-2  regulation  of  precursor  frequencies、cell  cycle  timeおよびsurvival.  J  Immunol１７０巻：４９６３〜４９７２頁に既述の通りに、ＩＬ−２処置および未処置（対照群）のＳＲおよびＳＥＮ−ｈＡＤＳＣで転写分析を実行した。４つの異なる条件：それぞれＩＬ−２刺激の有る無しのＳＲまたはＳＥＮ細胞の分析のために、図３Ａに示す２つの遺伝子型を使用した。各実験条件のためにＤＭＥＭ  Ｆ１２培地に同じ量（１０６個）の細胞を播種し、Deernickら２００３年に既述の通り、２０Ｕ／ｍｌの組換えＩＬ−２（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ、ＵＳＡ）を２４時間培地に直接的に加えることによってＩＬ−２処置を実行した。製造業者の説明書に従ってＴＲＩｚｏｌ試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＵＳＡ）を使用して、全ＲＮＡを試料から単離した。２名の異なる患者からの試料を関連する条件のために一緒に合わせ、ＲＮＡ  ＨＳアッセイキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｌｉｆｅ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ＵＳＡ）を使用してＲＮＡ濃度をＱｕｂｉｔ２．０蛍光計で測定した。
【０１５５】
製造業者の説明書に従って、Ｉｏｎ  Ｐｒｏｔｏｎ（商標）システム（Ｌｉｆｅ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ＵＳＡ）の上で配列決定のためのライブラリーを構築するために、各試料の全ＲＮＡの１００ｎｇを使用した。ｒＲＮＡ消去およびＲＮＡ−ｓｅｑライブラリー構築の前に、品質管理分析のためにＥＲＣＣ  ＲＮＡ  Ｓｐｉｋｅ−Ｉｎ対照ミックス（Ａｍｂｉｏｎ、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を全ＲＮＡに加えた。ＥＲＣＣ  ＲＮＡ  Ｓｐｉｋｅ−Ｉｎ対照ミックスは、天然の真核生物ｍＲＮＡを模倣する長さ２５０〜２０００ｎｔの９２個の転写物を含有する。製造業者によって提供されるプロトコールに従って、全ＲＮＡの１００ｎｇをｓｐｉｋｅ−ｉｎの１：１０００の希釈で２ｕｌのＭｉｘｌに加えた。その後、Ｌｏｗ  Ｉｎｐｕｔ  Ｒｉｂｏｍｉｎｕｓ真核生物システムｖ２（Ａｍｂｉｏｎ、Ｌｉｆｅ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ＵＳＡ）でｒＲＮＡ消去を実行した。ｃＤＮＡライブラリーをＩｏｎ  ｔｏｔａｌ  ＲＮＡ−ｓｅｑキットｖ２（Ａｍｂｉｏｎ、Ｌｉｆｅ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ＵＳＡ）で構築し、Ｉｏｎ  Ｘｐｒｅｓｓ  ＲＮＡ−ｓｅｑバーコード（Ａｍｂｉｏｎ、Ｌｉｆｅ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）でバーコード化した。ライブラリーのサイズ分布および数量化は、バイオアナライザー２１００（Ａｇｉｌｅｎｔ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ＵＳＡ）で実行した。ライブラリーの配列決定はＰ１チップを有するＩｏｎ  Ｐｒｏｔｏｎ（商標）システムで実行し、各ライブラリーは３回配列決定をした。
ＲＮＡ−ｓｅｑデータ分析
【０１５６】
個々のＩｏｎ  Ｐｒｏｔｏｎ（商標）システムの配列決定実行からのＲＮＡ−ｓｅｑ読み取りデータを、４つの条件の各々のために合わせた。配列読み取りデータは、Ｔｏｒｒｅｎｔ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ａｌｉｇｎｍｅｎｔプログラム（ＴＭＡＰ、Ｌｉｆｅ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して、参照ヒトゲノムアセンブリーｈｇｌ９（ＧＲＣｈ３７）にマッピングした。４つの条件特異的な合わせたＲＮＡ−ｓｅｑ実行の品質は、製造業者のウェブサイトから得たＥＲＣＣ  ｓｐｉｋｅ−ｉｎ  ＲＮＡ配列の予想されたカウントを、同じ配列にマッピングされるＲＮＡ−ｓｅｑタグの観察されたカウントに対して比較することによって評価した。初期の遺伝子発現レベルは、個々のＮＣＢＩ  ＲｅｆＳｅｑ遺伝子モデル（ｃ）のためのエクソンマッピング読み取りデータの合計としてとり、低発現遺伝子（１００万あたりの読み取りカウントデータが＜１）は以降の分析から除去した。各ライブラリーについて、個々の遺伝子発現レベルを、ベータ−アクチン（ＡＣＴＢ）発現レベル（ｃＡＣＴＢ）および各遺伝子の全エクソン長ｌを使用して正規化した。ライブラリーｊのために、ベータ−アクチン（beta-acting）正規化因子ｓｊを、
【数１】
2018518692.tif 000009
として計算し、ライブラリーｊの遺伝子ｉの最終正規化発現値を、
【数２】
2018518692.tif 000010
として計算した。
【０１５７】
ライブラリーの対の間の差次的遺伝子発現分析を、プログラムＧＦＯＬＤ  ｖ１．１．３、Feng  J、Meyer  CA、Wang  Q、Liu  JS、Shirley  Liu  Xら、（２０１２年）GFOLD:  a  generalized  fold  change  for  ranking  differentially  expressed  genes  from  RNA-seq  data.  Bioinformatics２８巻：２７８２〜２７８８頁を使用して実行した。複製データセットの非存在下で差次的に発現された遺伝子の特徴付けにおいて実証されたその優れた性能に基づいて、ＧＦＯＬＤを選択した。ＧＦＯＬＤ分析は、条件間の差次的遺伝子発現の程度を測定するスコアを与える；差次的に発現された遺伝子をここで規定するために、推奨された±０．０１のＧＦＯＬＤスコアカットオフを使用した。ライブラリーの対の間の差次的に発現された遺伝子に関する、機能の濃縮についての分析（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ  ａｎａｌｙｓｉｓ）は、プログラムＧＳＥＡ  ｖ２．１．０を使用して実行した。具体的には、ＳＲ、ＳＥＮまたは両方でのＩＬ−２処置の後に上方調節または下方調節される複数の遺伝子を含有する個々の経路は、このように識別した。ノードが経路に対応し、端が経路間で共有される遺伝子の存在に対応するネットワークを使用して、差次的に調節された遺伝子（ＳＲおよび／またはＳＥＮで上方調節されたＩＬ−２＋とＳＲおよび／またはＳＥＮで下方調節されたＩＬ−２＋）の特異的セットのための個々の経路を関連付けた。
【０１５８】
図９は、ＲＮＡ−ｓｅｑ実験の品質管理のために使用されたＥｘｔｅｒｎａｌ  ＲＮＡ  Ｃｏｎｔｒｏｌｓ  Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ（ＥＲＣＣ、外部ＲＮＡ対照の一般的なセット）用量応答を示す。４つの条件特異的ＲＮＡ−ｓｅｑプールの各々について、ＥＲＣＣ  ｓｐｉｋｅ−ｉｎ  ＲＮＡ配列の予想されたカウントを、同じ配列にマッピングされるＲＮＡ−ｓｅｑタグの観察されたカウントに対して回帰させた。回帰およびピアソン相関ｒ値の形状によって示されるように、観察されたカウント対予想されたカウントは非常に相関しており、高品質ＲＮＡ−ｓｅｑ結果と一致していた。
（実施例２）
ＭＳＣ老化表現型の特徴付け
【０１５９】
この実施例で、ＩＬ−２シグナル伝達に応答したヒト脂肪由来ＭＳＣ（ｈＡＤＳＣ）の転写活性に及ぼす複製老化の影響を評価するために実行された試験を記載する。
【０１６０】
ＩＬ−２は、３つのＩＬ−２Ｒサブユニット：ＩＬ−２Ｒα（ＣＤ２５）、ＩＬ−２Ｒβ（ＣＤ１２２）およびＩＬ−２Ｒｇ（ＣＤ１３２）の様々な組合せによって形成される細胞表面受容体の３つのクラスにより、特異的受容体を通してシグナル伝達する。実験結果は、ｈＡＤＳＣが全３つの受容体を転写により発現するが、ｈＡＤＳＣでのＩＬ−２Ｒα（ＩＬ−２Ｒａ）のタンパク質発現はＩＬ−２Ｒβで見られるより低いことを示す。これらの観察は、ＩＬ−２ＲβおよびＩＬ−２ＲγアイソフォームからなるＩＬ−２受容体組成物が、ｈＡＤＳＣによる支配的な形態のＩＬ−２サイトカインの認識を媒介することができることを示す。ｈＡＤＳＣの複製加齢により受容体組成物はわずかに変化するだけであり、ＩＬ−２へのｈＡＤＳＣの応答性はそれらの老化により変化しないことを示す。
【０１６１】
ｈＡＤＳＣを単離し、上記のように培養した。ｅｘ  ｖｉｖｏ複製老化は、減少した増殖、ＤＮＡ傷害および形態学的変化の蓄積につながった：ｈＡＤＳＣは不規則で平らな形状を伴って大いにより大きくなり、核は、位相差顕微鏡法において多くの封入体および埋積の顆粒状細胞質外観を伴ってより限局性になった。２名の異なる患者から得られたｈＡＤＳＣの成長曲線を、図３Ａに示す。線形成長速度、ＳＲ、または細胞株がそれらの増殖を停止するとき、ＳＥＮ、のいずれかのｈＡＤＳＣについての老化関連のＳＡ−βガラクトシダーゼ活性についての一般的な染色を、図３Ｂに示す。
（実施例３）
ＳＥＮ−ＭＳＣは、遊走のより高い傾向を示す
【０１６２】
この実施例は、複製老化がｈＡＤＳＣの遊走能力に影響することを示す。下の材料および方法のセクションに記載される通り、トランスウェルシステムを使用しサイトカインおよび増殖因子のセットを使用して、遊走アッセイを実行した。複製老化を経た脂肪由来ＭＳＣが、遊走のより高い傾向を示すことが観察された。ＳＥＮ  ｈＡＤＳＣが、それらのＳＲ対応物より有意に高い基底遊走能力を示すことが観察された（図３Ｃ）。図３Ｃは、自己再生（ＳＲ、左）および老化（ＳＥＮ、右）のｈＡＤＳＣのｅｘ  ｖｉｖｏ遊走アッセイを示す。黒線は中央値を示し、ひげは値の範囲を示す。図示したように、統計的差はｐ値（ｐ）によるＴ検定によって評価した。
【０１６３】
さらに、異なるサイトカイン化学誘引物質へのＳＥＮ−ｈＡＤＳＣの応答を測定した。ｈＡＤＳＣは、初期の継代と比較して後期の継代で遊走する能力が増加することが観察され（図３Ｄ）、複製老化が、試験した化学誘引物質に応答してｈＡＤＳＣの遊走特性を増加させることを示す。ＩＬ−２はＳＥＮ−ＭＳＣに対して最も強力な化学走性刺激剤であったが、ＴＮＦ−αはこれらの実験で試験した化学誘引物質の間でより強力でなかった（図３Ｄ）。図３Ｄは、自己再生ＳＲ（左）および老化ＳＥＮ（右）ｈＡＤＳＣの遊走を示す。ｈＡＤＳＣは、異なるサイトカイン（５０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＨＭＧＢｌ；３０ｎｇ／ｍｌのＴＮＦ）の存在下で遊走するように誘導された。グラフは、１０件の独立実験（ｎ＝１０）の平均を表す。実験測定に関するＰ値（ｐ）は、グラフの下に列挙する。
【０１６４】
これらのデータは、複製老化がｈＡＤＳＣの遊走特性を改変し、炎症性環境へのＭＳＣの応答に影響して、それらの免疫調節出力に影響することができることを示した。
（実施例４）
複製老化の際のヒト脂肪由来ＭＳＣにおけるＩｌ−２刺激への差次的応答
【０１６５】
Ｑ−ＰＣＲによるＩＬ−２受容体アイソフォーム発現の評価は、ｅｘ  ｖｉｖｏ複製老化の際のＩＬ−２ＲγおよびＩＬ−２Ｒβと比較してＩＬ−２Ｒαアイソフォームの発現の有意な変化を実証した（図４Ｂ）。図４Ｂは、非刺激（ＩＬ−２−）ＳＲ細胞（第１のバー）およびＳＥＮ細胞（第３のバー）における、ならびに２０ｕｇ／ｍｌの組換えＩＬ−２（ＩＬ−２＋）による刺激の際（ＳＲ細胞、第２のバー；ＳＥＮ細胞、第４のバー）の、定量的ＰＣＲ（Ｑ−ＰＣＲ）によって評価したＩＬ−２受容体α、βおよびγを示す。データは、変化倍率（ΔΔＣＴ）として示す。３件の独立実験からの平均±ＳＤを示す。注目すべきことに、ＳＲおよびＳＥＮ−ｈＡＤＳＣの両方で、ＩＬ−２処置の後にＩＬ−２ＲβおよびＩＬ−２Ｒａ転写物の蓄積の増加が記録されたが、老化細胞を類似の処置に供したときにＩＬ−２Ｒａ発現は抑止された（図４Ｂ）。
【０１６６】
しかし、細胞膜に会合しているＩＬ−２Ｒα受容体のタンパク質レベル発現は反対のパターンを示すことをデータは示した（図４Ｃ）。図４Ｃは、ＩＬ−２ＲαおよびＩＬ−２Ｒβの細胞膜に会合しているレベルを示す。レベルは、非刺激（ＩＬ−２−）ＳＥＮ（第３のバー）およびＳＲ（第１のバー）ｈＡＤＳＣ、ならびに２０ｕｇ／ｍｌの組換えＩＬ−２（ＩＬ−２＋）による刺激の後のＳＥＮ（第４のバー）およびＳＲ（第２のバー）において、ＥＬＩＳＡによって数量化した。データは、ミリリットルあたりのピクトグラムで表す。結果は、３件の独立実験の平均である（平均±ＳＤ）。統計的有意性はｔ検定によって推定し、＊＊＊はｐ＜０．００１、＊＊はｐ＜０．０１、＊はｐ＜０．０５であった。
【０１６７】
ＩＬ−２受容体アイソフォームの転写状態は２つの異なる細胞状態（ＳＲおよびＳＥＮ）の間で異なるが、ＥＬＩＳＡアッセイによって測定したときにそれはＩＬ−２曝露（誘導）に依存しないようである（上の材料および方法で記載されている）。図４Ｃに示すように、データは、ＩＬ−２α受容体鎖をコードするタンパク質が、ＩＬ−２Ｒβアイソフォームほど豊富でないことも実証した（１２０ｐｇ／ｍｌのＩＬ−２Ｒαを、ｅｘ  ｖｉｖｏ複製老化の際の３５０ｐｇ／ｍｌのＩＬ−２Ｒβと、ｌ５０ｐｇ／ｍｌのＩＬ−２Ｒαおよび４４０ｐｇ／ｍｌのＩＬ−２Ｒβと比較する）。これらのデータは、ＩＬ−２刺激へのｈＡＤＳＣ応答が、ＩＬ−２Ｒβ（ＣＤ１２２）および一般的なＩＬ−２Ｒγ（ＣＤ１３２）で構成される中間体親和性受容体ダイマーを通して起こることを示す。
【０１６８】
ＩＬ−２は、ＳＴＡＴ５ＡおよびＳＴＡＴ５Ｂを活性化するためにＪＡＫ１およびＪＡＫ３を通してシグナル伝達し、さらにＲａｓ−ＭＡＰキナーゼおよびホスホイノシトール３−キナーゼ依存性シグナル伝達経路を使用する。ＩＬ−２の下流標的ＳＴＡＴ５の発現は、図５、７Ａおよび７Ｂならびに図１０Ａおよび１０Ｂの表に示す。ｈＡＤＳＣでは、ＳＴＡＴ５Ａ遺伝子転写とＳＴＡＴ５Ｂ遺伝子転写の両方は、ＩＬ−２／ＳＴＡＴ５シグナル伝達軸をたどる。
【０１６９】
図５は、ＩＬ−２によるＳＲおよびＳＥＮ−ｈＡＤＳＣの刺激の効果を図示する。ＩＬ−２は、ＩＬ−２シグナル伝達ＳＴＡＴ５遺伝子のメディエーターのｍＲＮＡを上方調節する。ＳＴＡＴ５ＡおよびＳＴＡＴ５ＢのｍＲＮＡ発現は、非刺激（ＩＬ−２−）ＳＲ（第１のバー）およびＳＥＮ細胞（第３のバー）において、ならびに２０ｕｇ／ｍｌの組換えＩＬ−２（ＩＬ−２＋）による刺激の際（ＳＲ＋ＩＬ−２、第２のバー；ＳＥＮ＋ＩＬ−２、第３のバー）に、定量的ＲＴ−ＰＣＲによって評価した。データは、変化倍率（ΔΔＣＴ）として示す。３件の独立実験からの平均±ＳＤを示す。Ｑ−ＰＣＲプライマーの位置を、図式で表す。統計的有意性はｔ検定によって推定し、＊＊＊はｐ＜０．００１、＊＊はｐ＜０．０１であった。
【０１７０】
ＩＬ−２およびその下流標的ＳＴＡＴ５がｅｘ  ｖｉｖｏでそれらの複製老化の際にｈＡＤＳＣで転写転帰にどのように影響するかについて、次に調査した。
【０１７１】
ＩＬ−２への曝露は、複製老化の際にヒトＭＣＳで遺伝子発現の改変をもたらした。ＩＬ−２／ＳＴＡＴ５軸への転写応答がｅｘ  ｖｉｖｏでｈＡＤＳＣの複製加齢の際にどのように変化するかについて対処するために、実施例１に記載し、図８Ａに示した通りにＩｏｎ  Ｐｒｏｔｏｎ（商標）システムを使用してＲＮＡ−ｓｅｑトランスクリプトーム分析を実行した。４つの条件（ライブラリー）にわたるｈＡＤＳＣでの遺伝子発現レベルを比較した：正常なｅｘ  ｖｉｖｏ培養の際の自己再生（ＳＲ  ＩＬ−２−）、２４時間の組換えＩＬ−２刺激の際の自己再生（ＳＲ  ＩＬ−２＋）、正常なｅｘ  ｖｉｖｏ培養の際の複製老化（ＳＥＮ  ＩＬ−２−）および２４時間の組換えＩＬ−２刺激の際の複製老化（ＳＥＮ  ＩＬ−２＋）。各状態を表す４つの条件のための全読み取りカウントデータの分布を、図８Ｂに示す。
【０１７２】
条件間で遺伝子発現レベルを正規化するために、ベータ−アクチン発現レベルを使用した（実施例１に記載されるように）。ＩＬ−２処置の後に全体の遺伝子発現レベルが変化することができるという事実を認めるために、このアプローチがとられた。ベータ−アクチン正規化遺伝子発現分布は、ＳＲ状態とＳＥＮ状態の両方でのＩＬ−２処置の後の遺伝子発現の全体的上方調節を明らかにする（図８Ｄ）。しかし、４つの条件の間の個々の遺伝子発現レベルの比較は、ＩＬ−２処置がＳＲ−ｈＡＤＳＣと比較してＳＥＮ−により有意に影響することを示す（図６Ａ）。図６Ａは、条件特異的遺伝子発現プロファイルの比較に基づく条件間のペアワイズの距離を示す階層的クラスタリングを示す。個々の遺伝子発現レベルを比較したとき、ＳＲ  ＩＬ−２−およびＳＲ  ＩＬ−２＋条件は緊密な集団になり、ＳＥＮ  ＩＬ−２−条件が後に続く。ＳＥＮ  ＩＬ−２＋条件は、個々の遺伝子発現レベルの実質的に発散したパターンを示す、４つの条件の間の外れ値である。これは、老化の後のｈＡＤＳＣでのＩＬ−２処置への生物学的応答が、ＩＬ−２に応答した広域の転写脱調節を通してＭＳＣ機能を有意に妨害することができることを示す。
【０１７３】
ＳＲ状態とＳＥＮ状態の両方でＩＬ−２処置に応答して差次的に発現され、上方および下方調節される個々の遺伝子を識別するために、発現レベルを条件間でさらに比較した（図６Ｂ）。図６Ｂは、ＩＬ−２処置の際に上方調節および下方調節される遺伝子の数を示すベン図である。ＳＲとＳＥＮ−ｈＡＤＳＣの両方において、ＩＬ−２処置の際に下方調節される遺伝子（２，２９６個）と比較していくつかのより多くの遺伝子（８，８６６個）が上方調節される。両方の状態で下方調節される遺伝子（４％）と比較して、ＳＲとＳＥＮ−ｈＡＤＳＣの両方で上方調節される遺伝子の割合（３５％）は実質的により高い。ＩＬ−２処置の際のＳＥＮ−ｈＡＤＳＣで下方調節される遺伝子（１，７３９個）で最も大きな非対称が見られる；そのような遺伝子は、ＳＲ  ＩＬ−２＋条件で見られるよりずっと多い（６４９個）。ＳＥＮ  ＩＬ−２＋条件の全体的発散がＩＬ−２処置の際に下方調節される遺伝子に大きく起因することをこの差は示し、これは、ＩＬ−２処置の際のＳＲとＳＥＮの両方にわたる全体的上方調節を考慮すると予想外の結果である（図６Ｂおよび図８Ｄ）。
【０１７４】
図６Ｃ〜６Ｄは、ＩＬ−２処置の後に上方調節（図６Ｃ）および下方調節（図６Ｄ）される遺伝子の発現レベルを示すヒートマップを示す。正規化された遺伝子発現レベルは、グレイスケールでヒートマップとして示す。群は、ＳＲだけで、ＳＥＮだけで、または両条件で上方または下方調節される遺伝子に対応する。
【０１７５】
まとめると、これらのデータは、活発に増殖するＳＲ細胞で存在するのと同じ程度に、ＩＬ−２処置に応答して協調調節変化を生成する能力をＳＥＮ−ｈＡＤＳＣが失ったことを示す。ＳＥＮ  ＩＬ−２−と比較してＳＲ  ＩＬ−２＋で見られる上方調節された遺伝子の数がより多いことは、この解釈と整合する。
【０１７６】
ＩＬ処置の際に濃縮される経路が、本明細書で提供される。図１０Ａは、ＳＲおよびＳＥＮ−ｈＡＤＳＣでＩＬ−２処置の際に上方調節される遺伝子が濃縮された生物学的経路を示す表（図１０Ａ）を示す。図１０Ａで、濃縮された経路を、経路に属する個々のＩＬ−２＋上方調節された遺伝子および経路濃縮有意レベルと一緒に示す。ＳＲで上方調節される遺伝子メンバーの経路は左の欄に示し、ＳＥＮで上方調節される遺伝子メンバーの経路は右の欄に示す。ＳＲとＳＥＮの両方で上方調節される遺伝子メンバーの経路を上の列に、続いてＳＥＮだけで上方調節される遺伝子メンバーの経路を、および最後にＳＲだけで上方調節される遺伝子メンバーの経路を示す。ＳＲで上方調節される経路（左の欄）およびＳＥＮで上方調節される経路（右の欄）を関連付けるネットワークを示す。ネットワークノードは経路を表し、ノードのサイズはその経路で上方調節された遺伝子の数に対応する。経路が上方調節された遺伝子を共有する場合には経路ノードは端で接続し、端重量は経路間で共有される上方調節された遺伝子の数に対応する。
【０１７７】
図１０Ｂは、ＳＲおよびＳＥＮ  ｈＡＤＳＣでＩＬ−２処置の際に下方調節された遺伝子が濃縮された生物学的経路を図示する表（図１０Ｂ）である。濃縮された経路を、経路に属する個々のＩＬ−２＋下方調節された遺伝子および経路濃縮有意レベルと一緒に示す。ＳＲで下方調節される遺伝子メンバーの経路は左の欄に示し、ＳＥＮで下方調節される遺伝子メンバーの経路は右の欄に示す。ＳＲとＳＥＮの両方で下方調節される遺伝子メンバーの経路を上の列に、続いてＳＥＮだけで下方調節される遺伝子メンバーの経路を、および最際にＳＲだけで下方調節される遺伝子メンバーの経路を示す。ＳＥＮで下方調節される経路（左の欄）を関連付けるネットワークを示す。ネットワークノードは経路を表し、ノードのサイズはその経路でのＳＥＮ下方調節された遺伝子の数に対応する。経路がＳＥＮ下方調節された遺伝子を共有する場合には経路ノードは端で接続し、端重量は経路間で共有される下方調節された遺伝子の数に対応する。
（実施例５）
Ｉｌ−２刺激後のｈＡＤＳＣの栄養特性は、ｅｘ  ｖｉｖｏ複製加齢に感受性である
【０１７８】
図７Ａ〜７Ｄは、機能的にコヒーレントなセットの遺伝子の間の、ＩＬ−２処置の際のＳＲおよびＳＥＮ細胞の遺伝子発現レベルを図示する。（図７Ａで）栄養因子、（図７Ｂで）抗炎症性および免疫調節性、（図７Ｃに示すように）抗アポトーシス性および転移促進性、ならびに（図７Ｄに示すように）遊走および血管新生促進性であると特徴付けられる遺伝子のセットについて、発現レベルを示す。正規化された遺伝子発現レベルは、グレイスケールでヒートマップとして示す。
【０１７９】
ＩＬ−２曝露後のＭＳＣの栄養特性は、ｅｘ  ｖｉｖｏ複製加齢に感受性である（例えば、図７Ａ、表１）。広い範囲の生体活性分子の分泌が、ＭＳＣがそれらの治療効果を達成する主な機構であると考えられている。ＭＳＣは、多くのタイプの免疫細胞の間で、複雑なフィードバック機構を有する多数の増殖因子および抗炎症タンパク質を分泌する。
【０１８０】
表１は、ＳＥＮおよびＳＲ細胞でのＩＬ−２処置の際の栄養因子の差次的発現を示す。ＳＲ  ＧＦｏｌｄ値は、ＩＬ−２で処置されていないＳＲ細胞と比較して、ＩＬ−２で処置したＳＲ細胞での差異倍率を表す；ＳＥＮ  ＧＦｏｌｄ値は、ＩＬ−２で処置されていないＳＥＮ細胞と比較して、ＩＬ−２で処置したＳＥＮ細胞での差異倍率を表す。
【表１】
2018518692.tif 000011
【０１８１】
ＩＬ−２による刺激の際のｈＡＤＳＣでの増殖因子の発現が、ｅｘ  ｖｉｖｏで複製老化の際に有意な変化に供されることを、データは示した。活発に増殖する（ＳＲ）ｈＡＤＳＣのＩＬ−２への曝露は間質細胞由来因子２（ＳＤＦ２）およびＳＤＦＬ２ならびにプロスタグランジンＥシンテターゼ２（ＰＴＧＥＳ２）などの分裂誘起タンパク質の発現増加をもたらしたが、ＳＲとＳＥＮ  ｈＡＤＳＣの両方は、全身環境で分泌されるときは線維芽細胞、上皮および内皮細胞の分裂を増加させることが公知である、トランスフォーミング増殖因子アルファおよびベータ（ＴＧＦα、ＴＧＦβ１およびＴＧＦβ２）、トランスフォーミング増殖因子ベータ受容体ＴＧＦＢＲ２およびトランスフォーミング増殖因子ベータ受容体関連タンパク質ＴＧＦＢＲＡＰｌ、ならびにトランスフォーミング増殖因子ベータ誘導（ＴＧＦＢＩ）の有意な増加を特徴とする（図７Ａおよび表５Ａ〜５Ｄ）。
【０１８２】
さらに、ＳＲとＳＥＮ  ＩＬ−２刺激ｈＡＤＳＣの両方は、コロニー刺激因子１（ＣＳＦ−１）、ＬＩＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１７Ｄ、ＩＬ−１βおよび腫瘍壊死因子（リガンド）スーパーファミリーＴＮＦＳＦ１３Ｂ、Ｂ細胞およびＴ細胞機能を刺激するサイトカインコード遺伝子の上方調節が特徴であった（図７Ａ、７Ｂおよび図１０Ａ〜１０Ｂ）。
【０１８３】
パラクリンＩＬ−１７Ｄが内皮細胞でＩＬ−６、ＩＬ−８およびＧＭ  ＣＳＦ遺伝子の発現を誘導すること、ならびに、ＩＬ−１βが線維芽細胞増殖因子活性（ＴＧＦα、ＴＧＦβ１およびＴＧＦβ２遺伝子はＩＬ−２曝露ｈＡＤＳＣで顕著に上方調節される）をオートクリンおよびパラクリン様式で刺激すること、加えてこれらの細胞からＩＬ−２の放出を誘導することによる胸腺細胞およびＢ細胞の増殖および成熟を刺激することを考慮すると、ＳＲとＳＥＮ−ｈＡＤＳＣの両方の転写状態が、複雑な調節フィードバックループを通したＩＬ−２曝露の後のこれらの細胞の強化された免疫調節特性を指し示すことができることを、データは示す。
【０１８４】
ＩＬ−２に曝露させたＳＲとＳＥＮ−ｈＡＤＳＣの両方は、トランスフォーミング増殖因子アルファおよびベータ（ＴＧＦα、ＴＧＦβ１およびＴＧＦβ２）、トランスフォーミング増殖因子ベータ受容体ＴＧＦＢＲ２およびトランスフォーミング増殖因子ベータ受容体関連タンパク質ＴＧＦＢＲＡＰｌ、ならびにトランスフォーミング増殖因子ベータ誘導（ＴＧＦＢＩ）遺伝子の発現の有意な増加が特徴である（図７Ａ）。
【０１８５】
本明細書で、ＴＧＦβバイオマーカーが提供される。ＴＧＦβは、ＣＤ＋４  Ｔ細胞の分化を促進し、免疫サーベイランスを阻害し、それによって免疫抑制を課すことによって、免疫系の調節において重要であると考えられている。しかし、ＩＬ−２への曝露の後の脂肪由来ヒトＭＳＣでのＴＧＦβ発現のより高いレベルは、発癌を促進し得る。さらに、ＳＲ細胞で観察されなかったｈＡＤＳＣの老化の際の増殖因子のＩＬ−２依存的発現における差も注目された。これは、ＦＧＦ２、ＦＧＦ５、ＦＧＦ７などの他のメンバーの下方調節を伴う、線維芽細胞増殖因子ファミリーメンバー（ＦＧＦ１、ＦＧＦ１１、ＦＧＦ１４）のサブセットの上方調節を含む（図７Ａ、表１および表５Ａ〜５Ｄ）。
【０１８６】
ＩＬ−２に曝露させたＳＥＮ−ｈＡＤＳＣは、ＥＧＦ  ｍＲＮＡの上方調節を特徴とするが、その受容体ＥＧＦＲへのｍＲＮＡの下方調節も、血清応答因子ＳＲＦおよびＷＮＴシグナル伝達ＳＦＲＰ１の分泌されるモジュレーターの発現の低下とともにその特徴とする。興味深いことに、創傷治癒を促進する間葉系起源の細胞のための強力な分裂促進因子ＰＤＧＦＡとその受容体ＰＤＧＦＲＡの発現の両方は、ＩＬ−２の曝露に供したＳＲ細胞と比較してＳＥＮ−ｈＡＤＳＣで有意に抑制される（図７Ａ、図１０Ａ、表１および表５Ａ〜５Ｄ）。
【０１８７】
これらの細胞免疫調節特性をｅｘ  ｖｉｖｏで、および最終的にｉｎ  ｖｉｖｏで妨害し得るｈＡＤＳＣでのＩＬ−２媒介転写応答の性質における老化関連の差を、これらのデータは示す。
【０１８８】
ＩＬ−２処置、他の薬物と組み合わせたＩＬ−２およびＩＬ−２に曝露させたヒトＭＳＣのための抗炎症性および免疫調節性マーカーのパネルを示す（表２）。
【０１８９】
本発明は、どの経路がＩＬ−２処置に応答して調節されるか決定することも企図する。ＩＬ−２刺激に対する協調細胞性応答の生物学的な現実を捕捉するために、統合した遺伝子セット濃縮および経路ネットワークアプローチを使用して、ＩＬ−２処置のＳＲおよびＳＥＮ  ｈＡＤＳＣで上方または下方調節されると指定された遺伝子を分析した。これを行うために、上方または下方調節された遺伝子について統計学的に濃縮された経路を同定し、それらが共通する差次的に発現された遺伝子に基づいて次に選択した（図１０Ａ〜１０Ｂ）。各経路で差次的に発現された遺伝子の数および異なる経路が差次的に発現された遺伝子のセットを共有する程度に基づいて、経路ネットワーク表示に重み付けした。このアプローチは、多数の機能的に関係のある経路ならびに機能的に関連するネットワーク下部構造を有する高度に接続されたネットワーク構造の同定を可能にした。
【０１９０】
ｈＡＤＳＣの老化の際、生存、遊走および増殖などの重要な細胞性機能を調節する、増殖を促進する（細胞周期経路、ｑ値＝１．５４ｅ−５）、Ｇ２チェックポイントを課す（Ｇ２経路、ｑ値＝５．９４ｅ−４）遺伝子経路、ｐ５３経路（ｑ値＝１．１８ｅ−２）、主シグナル伝達ＭＡＰＫ経路（ＭＡＰＫ、ｑ値＝２．４２ｅ−４）およびその主サブグループＥＲＫ経路（ＥＲＫ、ｑ値＝２．６２ｅ−２）に対して、ＩＬ−２は刺激性がより低い。
【０１９１】
データは、発癌性状況でのＭＳＣの機能性に関する情報も提供する。ＩＬ−２に曝露させたＳＲとＳＥＮ  ｈＡＤＳＣの両方は、トランスフォーミング増殖因子アルファおよびベータ（ＴＧＦα、ＴＧＦβ１およびＴＧＦβ２）、トランスフォーミング増殖因子ベータ受容体ＴＧＦＢＲ２およびトランスフォーミング増殖因子ベータ受容体関連タンパク質ＴＧＦＢＲＡＰｌ、ならびにトランスフォーミング増殖因子ベータ誘導（ＴＧＦＢＩ）遺伝子の発現の有意な増加を特徴とする（図７Ａ）。
【０１９２】
ＩＬ−２処置ＳＥＮ  ｈＡＤＳＣは、ＭＳＣに生存有利性を提供することが証明されている、炎症（ＩＬ−６経路、ｑ値＝５．５５ｅ−３）およびＥＧＦシグナル伝達（ｑ値＝２．３３ｅ−４）と関連する経路のために、顕著な上方調節された遺伝子が濃縮されることを示す。ＩＬ−２に曝露させたＳＥＮ  ｈＡＤＳＣは、ＩＬ−１Ｒ・ＩＬ−６およびＩＬ−１２の発現の増加も特徴とする（図７Ｂ）。
【０１９３】
血管新生ＶＥＧＦ経路（ｑ値＝５．２４ｅ−３）（図１０Ａ、右側および図７Ｄ）との観察された関係およびＳＥＮ−ｈＡＤＳＣの遊走能力の強化（図３Ａ、３Ｂ）は、ＩＬ−２に曝露させたＳＥＮ−ＭＳＣが、腫瘍形成環境および転移を支持するのに必要な特性を獲得し得ることを示すことができる。さらに、複製老化の後のｈＡＤＳＣでの一酸化窒素合成酵素経路（ｉＮＯＳ）ＮＯＳｌ経路（ｑ値＝８．３２ｅ−２）に含まれる遺伝子の上方調節は、老化を経るＭＳＣが、免疫抑制を通して転移促進特性を獲得することができることを再び支持する。
【０１９４】
増殖およびＤＮＡ修復の支持にとって重要な経路は、老化の際のｈＡＤＣＳで下方調節される：図ｌ０Ｂに示す細胞周期経路（ｑ値＝２．５２ｅ−５）、ＭＣＭ経路（ｑ値＝１．６２ｅ−８）、ＲＢ経路（ｑ値＝６．９７ｅ−５）、ＡＴＭ経路（ｑ値＝３．２８ｅ−２）、ｐ５３経路（ｑ値＝１．８６ｅ−２）。全体として、データは、自己再生よりも老化において、ＩＬ−２誘発下方調節を受ける多くの生物学的経路があること、および、これらの生物学的経路は相互に関係し（図１０Ｂ）、ｈＡＤＳＣの複製加齢の際のＩＬ−２応答の生理的障害をさらに関連付けることを示し、したがって、そのような障害が、ｉｎ  ｖｉｖｏでおよび臨床適用の際に脂肪由来幹細胞逸脱機能に不可欠であり得ることを示す。
【０１９５】
データは、免疫調節および抗炎症事象の評価のため、ならびに臨床適用のために自家もしくは同種異系ＭＳＣ利用に優先順位をつけるために情報に基づく決定を下すために重大である分子マーカー標的のリストを提供し、ならびに／または臨床状況でＩＬ−２剤および／もしくはＩＬ−２と細胞療法によるがん処置をモニタリングするコンパニオン診断法として使用される（表２）。
【０１９６】
表２は、ＳＥＮおよびＳＲ細胞でのＩＬ−２処置後の抗炎症性および免疫調節因子の差次的発現を示す。ＳＲ  ＧＦｏｌｄ値は、ＩＬ−２で処置されていないＳＲ細胞と比較して、ＩＬ−２で処置したＳＲ細胞での差異倍率を表す；ＳＥＮ  ＧＦｏｌｄ値は、ＩＬ−２で処置されていないＳＥＮ細胞と比較して、ＩＬ−２で処置したＳＥＮ細胞での差異倍率を表す。
【表２−１】
2018518692.tif 000012
【表２−２】
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（実施例６）
ＩＬ−２に曝露させたヒトＭＳＣの抗炎症および免疫調節特性
【０１９７】
次に、複製加齢に課されるとき、ＩＬ−２炎症誘発性環境への曝露が、ｈＡＤＳＣの免疫調節特性（例えば、ＩＬ−２に曝露させたヒトＭＳＣの抗炎症および免疫調節特性）を提供すると指定された遺伝子の発現にどのように影響するかを調査した。免疫調節のための能力が、ｅｘ  ｖｉｖｏでの継代の間にヒト脂肪由来ＭＣＳの複製加齢によって影響を受けることを、データは実証した（図７Ｂおよび表２）。
【０１９８】
ＳＲ−ｈＡＤＳＣでのＩＬ−２曝露は、Ｔ細胞調節に起因する異なるセットの遺伝子を活性化する。自己再生するｈＡＤＳＣのＩＬ−２曝露は、図７Ｂ、表２および表５Ａ〜５Ｄに示した遺伝子、例えばＴＮＦＲＳＦ２１（Ｔ細胞分化に関与する）、ＩＬ１２Ａ（Ｔ細胞活性化因子）、ＩＬＦ２（Ｔ細胞活性化の間のＩＬ−２遺伝子の転写の強力な調節因子）、ＩＬ３３（ヘルパーＴ２型関連のサイトカインのパラクリン誘導因子）の上方調節、およびＣＣＬ２８（ＣＤ＋４、ＣＤ＋８Ｔ細胞の走化因子）、ＣＤ３２０（プラズマ細胞の増殖を増強するオートクリンおよびパラクリン機能を有する受容体分子）の下方調節をもたらす。
【０１９９】
それに反して、ＩＬ−２に曝露させたＳＥＮ−ｈＡＤＳＣは、ＣＤ３２０、Ｔ細胞機能のモジュレーションに関与し得るいくつかのインテグリン（ＩＴＧ１１、ＩＴＧＡ  Ｖ、ＩＴＦＧ１）、ならびに、重要な調節分子をコードする遺伝子、例えば：Ｔ細胞接着受容体（ＣＤ９９）、ナイーブＴ細胞の維持に帰される因子（ＣＨＳＴ３）、Ｔ細胞活性化因子（ＨＩＶＥＰ１およびＨＩＶＥＰ２）、Ｔ細胞シグナル伝達経路に関与する遺伝子（ＣＭＩＰ）、およびＣＤ＋細胞増殖の阻害に関与するオートクリン／パラクリン因子、ＰＴＧＥＲｌの有意な転写上方調節によって特徴付けられた（図７Ｂ、表２および表５Ａ〜５Ｄ）。
【０２００】
データは、ＩＬ−２に曝露させたＳＲ−ｈＡＤＳＣが、Ｂ細胞増殖および分化（ＣＤ７２）ならびにマクロファージホーニング（ＣＤ６８）で役割を果たす表面受容体をコードする遺伝子の転写活性の下方調節を誘発することも実証した。これらの遺伝子の両方とも、類似の処置の後に老化細胞で有意に転写的に上方調節される（図７Ｂ、表２、表５Ａ〜５Ｄ）。さらに、ＩＬ−２処置ＳＥＮ−ｈＡＤＳＣは、いくつかの非粘着性の骨髄性前駆細胞を調節する、プロ−Ｂからプレ−Ｂへの移行のために必要とされる遺伝子、ＬＲＲＣ８ＡおよびＰＥＡＲｌ遺伝子、の転写下方調節によって、同様に処置されるＳＲ細胞から区別される。対照的に、リンパ球の活性化およびホメオスタシス（ＣＤ８３およびＴＮＦＲＳＦ２５）ならびに白血球遊出（ＣＥＲＣＡＭ）に関与する遺伝子、ならびに内皮細胞−白血球相互作用の役割を担う遺伝子（ＥＳＭ１）、ならびに対照単球／マクロファージ媒介免疫学的プロセスにとって重要な遺伝子（ＴＮＦＳＦ１３）は、ＳＥＮ−ｈＡＤＳＣで上方調節される（図７Ｂ、表２および表５Ａ〜５Ｄ）。
【０２０１】
ＩＬ−２曝露は、化学走性のために重大ないくつかのサイトカインおよび因子の差次的発現をもたらす（図７Ｂおよび表２に示す）。
【０２０２】
ＳＲ−ｈＡＤＳＣは、ＩＬ−３３、ＩＬ−１２Ａ、ＩＬ１０ＲＢ、ＩＬ１ＲＡＰ、ＩＬ７Ｒ、ＩＬＦ２およびＮＯＳ３遺伝子の上方調節を特徴とするが、ＩＬ−１６およびＣＳＦ１Ｒ遺伝子はこれらの細胞で下方調節される。
【０２０３】
ＩＬ−２により類似の条件下で処置されたＳＥＮ−ｈＡＤＳＣでは、サイトカインＩＬ−３２、ＩＬ−６、ＩＬ１ＲＮ、ＩＬ−２０ＲＢ、ＩＬ−２１Ｒをコードする遺伝子、ならびに炎症誘導因子ＴＮＦＳＦ１３およびＴＮＦＳＦ１２、ならびに細胞外マトリックスリモデラーＰＬＡＵをコードする遺伝子は、上方調節される。
【０２０４】
同時に、ＭＹＬ９、ＫＩＦ１４、ＩＲＡＣ３などの細胞質分裂のために必須のいくつかの因子、ならびに単球および好塩基球（ＣＣＬ２）を誘引する走化因子をコードする遺伝子および造血前駆体細胞の増殖および分化を調節するＣＬＥＣ１１Ａ遺伝子は、下方調節される（図７Ｂ）。
【０２０５】
類似の下方調節は、いくつかのインターロイキン受容体コード遺伝子ＩＬ７Ｒ、ＩＬ１Ｒ１、ＩＬ１５ＲＡ、およびインターロイキンエンハンサー結合性因子ＩＬＦ２およびＩＬＦ３でも見出される。
【０２０６】
これらの観察は、ＳＥＮ−ｈＡＤＳＣ（ＩＬ−３２、ＩＬ−６、ＰＬＡＵ遺伝子の上方調節；ＣＣＬ２、ＣＬＥＣ１１Ａ、ＩＬＦ３、ＩＲＡＫ３、ＫＩＦ１４、ＭＹＬ９遺伝子の下方調節）およびＳＲ−ｈＡＤＳＣ（ＩＬ１２Ａ、ＩＬ７Ｒ、ＩＲＡＫ１、ＮＯＳ３遺伝子の上方調節；ＩＬ−１６、ＣＳＦ１Ｒ遺伝子の下方調節）でのサイトカインのＩＬ−２依存性差次的転写性発現とともに、ｈＡＤＳＣの免疫調節特性が老化によって強いられる変化に感受性であることを示す。
【０２０７】
血管新生ＶＥＧＦ経路（ｑ値＝５．２４ｅ−３）（図１０Ａ、右側および図７Ｄ）との観察された関係、およびＳＥＮ−ｈＡＤＳＣの遊走能力の強化（図４Ａ、Ｂ）は、ＩＬ−２に曝露させたＳＥＮ−ＭＳＣが、腫瘍形成環境および転移を支持するのに必要な特性を獲得し得ることを示す。さらに、複製老化の後のｈＡＤＳＣでの一酸化窒素合成酵素経路（ｉＮＯＳ）ＮＯＳｌ経路（ｑ値＝８．３２ｅ−２）に含まれる遺伝子の上方調節は、老化を経るＭＳＣが、免疫抑制を通して転移促進特性を獲得することができることも示す。
（実施例７）
複製老化の際のＩＬ−２刺激ｈＡＤＳＣの抗アポトーシスおよび転移促進特性
【０２０８】
これらの実験は、複製老化の際のＩＬ−２曝露ＭＳＣの抗アポトーシスおよび転移促進特性を調べるためにも使用された。
【０２０９】
ＩＬ−２処置、他の薬物と組み合わせたＩＬ−２、またはＭＳＣと組み合わせたＩＬ−２のための抗アポトーシスおよび転移促進マーカーのパネルを表３に示す。データは、抗アポトーシスおよび転移促進事象の評価のため、ならびに臨床適用のために自家もしくは同種異系ＭＳＣ利用に優先順位をつけるために情報に基づく決定を下すために重要である分子マーカー標的のリストを提供し、ならびに／または臨床状況でＩＬ−２剤および／もしくはＩＬ−２と細胞療法によるがん処置をモニタリングするコンパニオン診断法として使用される（表３）。
【０２１０】
表３は、ＳＥＮおよびＳＲ細胞でのＩＬ−２処置の際の抗アポトーシスおよび転移因子の差次的発現を示す。ＳＲ  ＧＦｏｌｄ値は、ＩＬ−２で処置されていないＳＲ細胞と比較して、ＩＬ−２で処置したＳＲ細胞での差異倍率を表す；ＳＥＮ  ＧＦｏｌｄ値は、ＩＬ−２で処置されていないＳＥＮ細胞と比較して、ＩＬ−２で処置したＳＥＮ細胞での差異倍率を表す。
【表３】
2018518692.tif 000014
【０２１１】
例えば、ＭＳＣは、虚血後の心臓筋芽細胞ならびに傷害を受けたニューロンおよび肺線維芽細胞でのアポトーシスの反転を支援することが証明された。スタンニオカルシン１（ＳＴＣ１）が、ＵＶおよび酸度によって傷害を受けた線維芽細胞で強力なアポトーシス反転が可能な必須の因子として識別された。
【０２１２】
ＩＬ−２曝露がＳＴＣ１遺伝子とＳＴＣ２遺伝子の両方を転写的に上方調節することをデータは示し、そのような活性化は、少なくともｅｘ  ｖｉｖｏで、ｈＡＤＳＣの複製加齢に依存性でない（表５Ａ〜５Ｄ）。さらに、ＶＥＧＦおよびＴＧＦＢ１などのパラクリンエフェクターが、内皮細胞でのアポトーシスの反転と結びつけられた。これらの因子の両方をコードする遺伝子の発現は、ＩＬ−２処置後のＳＲおよびＳＥＮ−ｈＡＤＳＣで上方調節される（図７Ｃ、図５、表３および表５Ａ〜５Ｄ）。
【０２１３】
図５の第３のグラフは、ｈＡＤＳＣの複製老化の際にＩＬ−２がＶＥＧＦＡ遺伝子の転写を上方調節することを示す。ＶＥＦＧＡ遺伝子発現は、非刺激（ＩＬ−２−）老化（暗色）および自己再生（明色）ｈＡＤＳＣで、ならびに２０ｕｇ／ｍｌの組換えＩＬ−２による刺激の後に（ＩＬ−２＋）、定量的Ｑ−ＰＣＲによって評価した。３件の独立実験からの変化倍率ΔΔＣＴ平均±ＳＤとして示されるデータを示す。ｑ−ＰＣＲプライマーの位置は、図式で表される。統計的有意性はｔ検定によって推定し、＊＊＊はｐ＜０．００１、＊＊はｐ＜０．０１であった。
【０２１４】
しかし、図７Ｃに示すＱ−ＰＣＲ分析によってさらに検証される通り、ＶＥＧＦＡの転写活性は、活発に増殖する細胞より老化で著しく高い。注目すべきことに、アポトーシス促進因子をコードするＳＩＶＡ１遺伝子およびＴリンパ球アポトーシスの強力な誘導因子は、増殖するｈＡＤＳＣと比較してＩＬ−２処置後の老化細胞で有意に下方調節される（図７Ｃ、表３および表５Ａ〜５Ｄ）。ＳＩＶＡ１は、厳密にアポトーシス促進性の因子でなく、腫瘍転移の強力なサプレッサーでもない。重要なことに、浸潤性成長および転移の役割を担ういくつかの因子は、同様に処置されたＳＲ細胞と比較してＩＬ−２に曝露させたＳＥＮ−ｈＡＤＳＣで有意に上方調節される（図７Ｃおよび表３）。これには、ＲＡＣＫＩ、ＰＬＥＫＨＡ１、ＰＬＥＫＨＡ６、ＣＴＳＢ、ＣＲＭＰ１、ＦＥＲＭＴｌ遺伝子が含まれる。これらのデータは、ＩＬ−２によるｈＡＤＳＣの前処置／曝露が、これらの細胞一般の抗アポトーシス特性を強化することができること、およびそのような強化が少なくとも培養において複製老化によってもたらされることを示した。
【０２１５】
ＩＬ−２処置ＳＥＮ−ｈＡＤＳＣでは、ＭＳＣに生存有利性を提供することが証明されている、炎症（ＩＬ−６経路、ｑ値＝５．５５ｅ−３）およびＥＧＦシグナル伝達（ｑ値＝２．３３ｅ−４）と関連する経路のために、顕著な上方調節された遺伝子が濃縮されることが実証された。ＩＬ−２に曝露させたＳＥＮ−ｈＡＤＳＣは、ＩＬ−１β、ＩＬ−６およびＩＬ−１２（図７Ｂ）、リンパ球からのＩＬ−１７を刺激することが公知のサイトカインの発現の増加も特徴とする。
【０２１６】
データは、リンパ球がＩＬ−１７産生の唯一の供給源であること、および炎症誘発性環境に供されるとき、特にそれらの老化の際のＭＳＣがＩＬ−１７の高い転写活性を示すことも示した（図７Ａ）。ＭＣＳ由来のＣＳＦ−１と共にＭＣＳ由来のＩＬ−１７は、がん進行および転移の促進ならびに乾癬を含むいくつかの炎症性疾患におけるこれらの因子の重大な役割を示す研究と類似した、全身性好中球拡張およびマクロファージ浸潤を誘導することができる。
（実施例８）
転写プロファイリングは、複製老化の際にＩＬ−２刺激ｈＡＤＳＣで強化された遊走および血管新生を調節する遺伝子標的を示す
【０２１７】
加齢に際しＩＬ−２処置で強化された遊走および血管新生を示すマーカーのパネルを示す（表４）。
【０２１８】
遊走および血管新生促進事象の評価のために重大である分子マーカー標的のリストは、臨床適用のために自家もしくは同種異系ＭＳＣ利用に優先順位をつけるために情報に基づく決定を下すことを助けることができ、ならびに／または臨床状況でＩＬ−２剤および／もしくはＩＬ−２と細胞療法によるがん処置をモニタリングするコンパニオン診断法として使用される（表４）。転写プロファイリングは、複製老化の際にＩＬ−２刺激ＡＤＳ  Ｃで強化された遊走および血管新生を調節する遺伝子標的を示す。転写応答のさらなる分析は、ＳＥＮ  ｈＡＤＳＣのＩＬ−２刺激が血管新生に関係する血管発生およびリモデリングに関与する遺伝子の発現を強化することを示す。ＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＢ、ＦＢＬＮＳ、ＦＢＬＮ７、ＰＧＦ、ＡＮＧＰＴ１、ＡＮＧＰＴ２、ＡＮＧＰＴＬ２、ＡＮＧＰＴＬ６、ＴＮＦＳＦ１２、ＰＲＫＣＡ、ＰＩＫ３ＣＡ、ＨＲＡＳ遺伝子、ならびに内皮細胞−白血球接着の強力なモジュレーターをコードする遺伝子ＥＳＭ１の有意な上方調節が観察された（図７Ｄ、図１０Ａ〜１０Ｂ、表４および表５Ａ〜５Ｄ）。
【０２１９】
表４は、ＳＥＮおよびＳＲ細胞でのＩＬ−２処置後の遊走および血管新生因子の差次的発現を示す。ＳＲ  ＧＦｏｌｄ値は、ＩＬ−２で処置されていないＳＲ細胞と比較して、ＩＬ−２で処置したＳＲ細胞での差異倍率を表す；ＳＥＮ  ＧＦｏｌｄ値は、ＩＬ−２で処置されていないＳＥＮ細胞と比較して、ＩＬ−２で処置したＳＥＮ細胞での差異倍率を表す。
【表４−１】
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【表４−２】
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【０２２０】
以前に報告されたように、ＭＣＳによって放出される血管内皮増殖因子ＶＥＧＦは、内皮系統細胞の動員および血管新生の開始を可能にする。ＳＥＮ−ｈＡＤＳＣでのＶＥＧＦＡ遺伝子発現の上方調節は定量的ＲＴ−ＰＣＲ分析によって検出することができること、ならびに、ＩＬ−２曝露がＳＲおよびＳＥＮ−ｈＡＤＳＣでＶＥＧＦＡ遺伝子転写の統計的に有意な増加をもたらすことがさらに実証される（図７Ｄおよび表４）。
【０２２１】
ＩＬ−２に応答して、細胞運動性、遊走および浸潤性成長の役割を担う一群の遺伝子が、複製老化を経たｈＡＤＳＣだけで有意に上方調節される：ＣＧＮＬ１、ＣＧＲＥＦ１、ＣＲＭＰ１、ＦＧＤ６、ＴＮＫ２、ＰＴＧＳ１、ＴＮＦＡＩＰ８、ＣＴＳＢ、ＣＴＳＯ、ＦＡＰ、ＦＥＲＭＴ１、ＰＬＥＫＨＡ１、ＰＬＥＫＨＡ６、ＲＯＣＫ１、ＲＯＣＫ２。細胞接着を促進する遺伝子のセット、例えばＣＨＤ２４、ＣＹＲ６１、ＩＬＫ、ＮＥＤＤ９、ＭＹＬ９、ＰＰＡＰ２Ｂ、ＲＥＬＮおよびＴＬＮ２が下方調節された（図７Ｄ、表４および表５Ａ〜５Ｄ）。これらのデータは、図３Ｂに示すＳＥＮ  ｈＡＤＳＣの強化された遊走能力の実験証拠をさらに支持する。
（実施例９）
プロテオーム抗体アレイデータ
【０２２２】
表６は、全てのプロテオームアレイデータの未加工の値を提供する。
【０２２３】
１０％ＰＲＰ含有ＳｔｅｍＰｒｏ  ＭＳＣ  ＳＦＭ  Ｘｅｎｏ不含培地中の３８歳の患者からのＭＳＣを基質の上に平板培養した。実施例１に記載されている通りに決定されたＳＲまたはＳＥＮ  ｈＡＤＳＣを、１０％ＰＲＰ含有ＳｔｅｍＰｒｏ  ＭＳＣ  ＳＦＭ  Ｘｅｎｏ不含培地の７００μｌ／ｃｍ２に２５００個の細胞／ｃｍ２の密度で平板培養した。ＳＥＮおよびＳＲ  ｈＡＤＳＣをＩＬ−２で２４時間刺激したか、またはＩＬ−２により刺激せず（ＩＬ−２−）、その後、培地を１０％ＰＲＰ含有ＳｔｅｍＰｒｏ  ＭＳＣ  ＳＦＭ  Ｘｅｎｏ不含培地に交換した。細胞を３７℃および５％ＣＯ２に２４、４８および７２時間保った後、培地を収集し、分析した。等量の培地を、ＲａｙＢｉｏ  Ｃシリーズヒトサイトカイン抗体アレイＡＡＨ−ＣＹＴ−２０００（ＲａｙＢｉｏｔｅｃｈ，Ｉｎｃ）で分析した。Ｃシリーズヒトサイトカイン抗体アレイＡＡＨ−ＣＹＴ−２０００は、ケミルミネッセンスアッセイ原理に基づき、目的の１７４個のタンパク質に対する抗体を含有する。ＬＩ−ＣＯＲ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓデンシトメトリーソフトウェア（Ｌｉ−ＣＯＲ）を使用して、膜からデータを抽出した。曝露の差およびアレイ間の変動について調製するために、所与のタンパク質シグナルの平均強度／平均強度陰性対照の間の比をとることによって、未加工のデータを正規化した。データは図１１〜９０に提示され、表６はＩＬ−２曝露の際に分泌されるタンパク質因子を示す。これらのタンパク質には図７Ａ〜７Ｄの表に示す因子が限定されずに含まれ、分泌プロファイルは転写データを要約する。
【０２２４】
図１１〜１７は、１０％ＰＲＰ（多血小板血漿）を含有する培地単独とのインキュベーション（ＩＬ−２刺激なし）２４時間後の、ＳＲ−ｈＡＤＳＣからの下で命名したタンパク質（因子）の分泌の増加を示す。分泌レベルは、ｈＡＤＳＣ支持に使用される、１０％ＰＲＰ含有培地における基底レベルで存在する対応するタンパク質の量と比べて示される。図１１は、インターロイキン５（ＩＬ５）およびインターロイキン６（ＩＬ６）の分泌の増加を示す。図１２は、インターロイキン１受容体４（ＩＬ１Ｒ４）の分泌の増加を示す。図１３は、ニューロトロフィン３（ＮＴ３）、血小板由来増殖因子Ａアルファ（ＰＤＧＦ  ＡＡ）、血小板由来増殖因子Ａベータ（ＰＤＧＦ  ＡＢ）および血小板前駆細胞塩基性タンパク質（ＰＰＢＰ）の分泌の増加を示す。図１４は、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド１８（ＣＣＬ１８）、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド２５（ＣＣＬ２５）、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド２７（ＣＣＬ２７）およびＣＸＣケモカインリガンド１１（ＣＸＣＬ１１）の分泌の増加を示す。図１５は、細胞間接着分子１（ＩＣＡＭ−１）およびメタロプロテイナーゼ阻害剤２（ＴＩＭＰ−２）の分泌の増加を示す。図１６は、メタロプロテイナーゼ阻害剤１（ＴＩＭＰ−１）の分泌の増加を示す。図１７は、血管上皮（ＶＥ）カドヘリン（カルシウム依存性細胞接着タンパク質）の分泌の増加を示す。
【０２２５】
図１８〜１９は、１０％ＰＲＰ単独とのインキュベーション（ＩＬ−２刺激なし）２４時間後の、ＳＲ−ｈＡＤＳＣからの、図の下に記すタンパク質（因子）の分泌の増加を示す。これらのタンパク質は、ＰＲＰに存在しないことが判明した。図１８は、インターロイキン４（ＩＬ４）の分泌の増加を示す。図１９は、インスリン様増殖因子結合タンパク質−１（ＩＧＦＢＰ１）の分泌の増加を示す。
【０２２６】
図２０〜３１は、１０％ＰＲＰ単独とのインキュベーション（ＩＬ−２刺激なし）４８時間後の、ＳＲ−ｈＡＤＳＣからの下で命名したタンパク質（因子）の増加を示す。分泌レベルは、ｈＡＤＳＣ支持に使用される、１０％ＰＲＰ含有培地における基底レベルで存在する対応するタンパク質の量と比べて示される。図２０は、インターロイキン９（ＩＬ９）およびインターロイキン１８結合タンパク質アルファ（ＩＬ１８ＢＰａ）の分泌の増加を示す。図２１は、インターロイキン１受容体ＩＩ型（ＩＬ１Ｒ２）、インターロイキン２受容体ベータ（ＩＬ−２Ｒｂ）、インターロイキン２受容体ガンマ（ＩＬ−２Ｒｇ）、インターロイキン５受容体アルファ（ＩＬ５Ｒａ）、インターロイキン１０受容体ベータ（ＩＬ１０Ｒｂ）、インターロイキン１８受容体アクセサリータンパク質（ＩＬ１８Ｒｂ）およびインターロイキン２１受容体（ＩＬ−２１Ｒ）の分泌の増加を示す。図２２は、インスリン様増殖因子２（ＩＧＦ２）、トランスフォーミング増殖因子アルファ（ＴＧＦα）、トランスフォーミング増殖因子ベータ１／潜在関連ペプチド（ＬＡＰ）（ＴＧＦβ１）およびトランスフォーミング増殖因子ベータ２（ＴＧＦｂ２）の分泌の増加を示す。図２３は、受容体チロシンタンパク質キナーゼＥｒｂＢ−３（ＥｒｂＢ３）、Ｆａｓリガンド（Ｆａｓ  ＬＧ）、白血病阻害因子（ＬＩＦ）、プロラクチン（ＰＲＬ）因子、血小板由来増殖因子受容体アルファ（ＰＤＧＦＲα）、血小板由来増殖因子受容体ベータ（ＰＤＧＦＲβ）、幹細胞因子ｋｉｔ受容体（ＳＣＦＲ）およびシアル酸結合Ｉｇ様レクチン５（シグレック５）の分泌の増加を示す。図２４は、ＣＸＣケモカインリガンド１６（ＣＸＣＬ１６）の分泌の増加を示す。図２５は、活性化白血球細胞接着分子（ＡＬＣＡＭ）、Ｅセレクチン（免疫接着における細胞表面糖タンパク質）、細胞間接着分子２（ＩＣＡＭ２）、Ｌセレクチン（白血球接着分子）および血小板内皮細胞接着分子（ＰＥＣＡＭ１）の分泌の増加を示す。図２６は、アクチビンＡ（ＩＮＨＢＡ）、インスリン様増殖因子２（ＩＧＦ−２）およびレプチン受容体（ＬＥＰＲ）の分泌の増加を示す。図２７は、骨形成タンパク質５（ＢＭＰ５）、骨形成タンパク質７（ＢＭＰ７）、マクロファージコロニー刺激因子１受容体（ＭＣＳＦＲ）、マトリックスメタロプロテイナーゼ１（ＭＭＰ１）、マトリックスメタロプロテイナーゼ３（ＭＭＰ３）、マトリックスメタロプロテイナーゼ９（ＭＭＰ９）およびマトリックスメタロプロテイナーゼ１３（ＭＭＰ１３）の分泌の増加を示す。図２８は、単球分化抗原（ＣＤ１４）、細胞分化抗原（ＣＤ８０）、カルジオトロフィン−１（ＣＴ−１）および白血病阻害因子（ＬＩＦ）の分泌の増加を示す。図２９は、エンドグリン（ＥＮＧ）の分泌の増加を示す。図３０は、免疫グロブリン様およびＥＧＦ様ドメインを有するチロシンキナーゼ１（ＴＩＥ−１）、ならびに免疫グロブリン様およびＥＧＦ様ドメインを有するチロシンキナーゼ２（ＴＩＥ−２）の分泌の増加を示す。図３１は、アクチビンＡ（インヒビンベータＡ、ＩＮＨＢＡ）、レプチン受容体（レプチンＲ）およびトランスフォーミング増殖因子ベータ１（ＴＧＦβ１）の分泌の増加を示す。
【０２２７】
図３２は、１０％ＰＲＰ単独とのインキュベーション（ＩＬ−２刺激なし）４８時間後の、ＳＲ−ＭＳＣからの神経増殖因子受容体（ＮＧＦＲ）の分泌の増加を示す。ＮＧＦＲは、ＰＲＰに存在しないことが見出された。
【０２２８】
図３３〜３９は、１０％ＰＲＰ単独とのインキュベーション（ＩＬ−２刺激なし）７２時間後の、ＳＲ−ｈＡＤＳＣからの下で命名したタンパク質（因子）の分泌の増加を示す。分泌レベルは、ｈＡＤＳＣ支持に使用される、１０％ＰＲＰ含有培地における基底レベルで存在する対応するタンパク質の量と比べて示される。図３３は、インターロイキン１ベータ（ＩＬ１β）、インターロイキン３（ＩＬ３）、インターロイキン−１３受容体サブユニットアルファ−２（ＩＬ１３Ｒα２）およびインターロイキン１受容体アルファ（ＩＬ１Ｒα）の分泌の増加を示す。図３４は、プロベータセルリン（ＢＴＣ）、コロニー刺激因子（ＣＳＦ１）、線維芽細胞増殖因子６（ＦＧＦ６）、グリア細胞株由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）、インスリン様増殖因子１（ＩＧＦ−１）、レプチンおよび血小板由来増殖因子Ｂベータ（ＰＤＧＦ  ＢＢ）の分泌の増加を示す。図３５は、幹細胞因子／ｃ−ｋｉｔリガンド（ＳＣＦ）、間質細胞由来因子−１アルファ（ＳＤＦ１ａ）、間質細胞由来因子−１ベータ（ＳＤＦ１ｂ）、トランスフォーミング増殖因子ベータ１（ＴＧＦβ１）、トランスフォーミング増殖因子ベータ３（ＴＧＦｂ３）および腫瘍壊死因子スーパーファミリーメンバー１４（ＴＮＦＳＦ１４）の分泌の増加を示す。図３６は、インスリン様増殖因子１（ＩＧＦ１）の分泌の増加を示す。図３７は、トランスフォーミング増殖因子ベータ１（ＴＧＦβ１）および血小板由来増殖因子Ｂベータ（ＰＤＧＦ  ＢＢ）の分泌の増加を示す。図３８は、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド２（ＣＣＬ２）、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド５（ＣＣＬ５）、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド７（ＣＣＬ７）、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド８（ＣＣＬ８）およびケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド１１（ＣＣＬ１１）の分泌の増加を示す。図３９は、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド１３（ＣＣＬ１３）、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド２２（ＣＣＬ２２）、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド２３（ＣＣＬ２３）、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド２４（ＣＣＬ２４）およびＣＸＣケモカインリガンド１０（ＣＸＣＬ１０）の分泌の増加を示す。
【０２２９】
図４０〜４２は、１０％ＰＲＰ単独とのインキュベーション（ＩＬ−２刺激なし）７２時間後の、ＳＲ−ｈＡＤＳＣからの下で命名したタンパク質（因子）の分泌の増加を示す。これらの因子は、ＰＲＰに存在しないことが判明した。図４０は、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、骨形成タンパク質４（ＢＭＰ４）、骨形成タンパク質６（ＢＭＰ６）、毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、線維芽細胞増殖因子７（ＦＧＦ７）およびインスリン様増殖因子結合タンパク質−４（ＩＧＦＢＰ４）の分泌の増加を示す。図４１は、ケモカイン（Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフ）リガンド１３（ＢＬＣ）、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド２３（ＣＣＬ２３）、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド２８（ＣＣＬ２８）、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド１１（エオタキシン１）、ケモカイン（Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフ）リガンド６（ＧＣＰ−２）、ＦＬＴ３ＬＧ（Ｆｍｓ関連チロシンキナーゼ３リガンド）およびフラクタルカイン（ＣＸ３ＣＬ１）の分泌の増加を示す。図４２は、アンジオテンシン（ＡＮＧ）およびコロニー刺激因子２（ＣＳＦ２）の分泌の増加を示す。
【０２３０】
図４３は、ＩＬ−２による刺激２４時間後の、ＳＲ−ｈＡＤＳＣからのケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド２７（ＣＣＬ２７）およびＴＮＦＲＳＦ１Ｂ（腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー、メンバー１Ｂ）の分泌の増加を示す。ｈＡＤＳＣ支持のために使用される、１０％ＰＲＰ含有培地に基底レベルで存在する対応タンパク質の量と比較して、分泌レベルを示す。
【０２３１】
図４４〜５３は、ＩＬ−２による刺激４８時間後のＳＲ−ｈＡＤＳＣからの下で命名したタンパク質（因子）の増加を示す。分泌レベルは、ｈＡＤＳＣ支持に使用される、１０％ＰＲＰ含有培地における基底レベルで存在する対応するタンパク質の量と比べて示される。図４４は、インターロイキン９（ＩＬ９）、インターロイキン１１（ＩＬ−１１）、インターロイキン１２アルファ（ＩＬ１２ａ）、インターロイキン１２ベータ（ＩＬ１２ｂ）およびインターロイキン１８結合タンパク質アルファ（ＩＬ１８ＢＰａ）の分泌の増加を示す。図４５は、インターロイキン１受容体Ｉ型（ＩＬ１Ｒ１）、インターロイキン１受容体ＩＩ型（ＩＬ１Ｒ２）、インターロイキン１受容体ＩＶ型（ＩＬ１Ｒ４）、インターロイキン２受容体ベータ（ＩＬ−２Ｒｂ）、インターロイキン２受容体ガンマ（ＩＬ−２Ｒｇ）、インターロイキン５受容体アルファ（ＩＬ５Ｒａ）、インターロイキン１０受容体ベータ（ＩＬ１０Ｒｂ）、インターロイキン１８受容体ベータ（ＩＬ１８Ｒｂ）およびインターロイキン２１受容体（ＩＬ−２１Ｒ）の分泌の増加を示す。図４６は、線維芽細胞増殖因子４（ＦＧＦ４）、ＦＧＦ９、ＭＳＰアルファ／ＨＧＦ様因子（ＨＧＦ様）、インスリン様増殖因子１（ＩＧＦ１）、ＩＧＦ２、インスリン様増殖因子結合タンパク質−６（ＩＧＦＢＰ６）、ＬＡＰ（ＴＧＦベータファミリー）および血小板由来増殖因子Ａアルファ（ＰＤＧＦＡＡ）の分泌の増加を示す。図４７は、血小板由来増殖因子Ａベータ（ＰＤＧＦＡＢ）、血小板由来増殖因子Ｂベータ（ＰＤＧＦＢＢ）、間質細胞由来因子−１アルファ（ＳＤＦ１ａ）、シアル酸結合Ｉｇ様レクチン５（シグレック５）、トランスフォーミング増殖因子アルファ（ＴＧＦα）、トランスフォーミング増殖因子ベータ２（ＴＧＦｂ２）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）および血管内皮増殖因子Ｄ（ＶＥＧＦＤ）の分泌の増加を示す。図４７は、ＤＲ６、Ｄｔｋ、ＥＧＦＲ、エンドグリン、ＥｒｂＢ３、Ｆａｓ、Ｆａｓ  ＬＧおよびＩＧＦ１  ｓｒの分泌の増加も示す。図４８は、レプチン（ＬＥＰ）、レプチン受容体（ＬＥＰＲ）、マクロファージコロニー刺激因子１受容体（ＭＣＳＦＲ）、ニューロトロフィン４（ＮＴ４）、オステオプロテジェリン（ＯＰＧ）、血小板由来増殖因子受容体アルファ（ＰＤＧＦＲａ）、血小板由来増殖因子受容体ベータ（ＰＤＧＦＲｂ）およびプロラクチン（ＰＲＬ）の分泌の増加を示す。図４９は、幹細胞因子受容体（ＳＣＦＲ）、アンジオポエチン１受容体（ＴＩＥ−１）、アンジオポエチン１受容体（ＴＩＥ−２）、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー１０Ｃ（ＴＮＦＳＦ１０Ｃ）、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー１０Ｄ（ＴＮＦＳＦ１０Ｄ）、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー１４（ＴＮＦＳＦ１４）、ウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子受容体（ｕＰＡＲ）および血管内皮増殖因子受容体−２（ＶＥＧＦＲ２）の分泌の増加を示す。図５０は、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド２（ＣＣＬ２）、ＣＣＬ３、ＣＣＬ５、ＣＣＬ８、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２５、ＣＸＣケモカインリガンド５（ＣＸＣＬ５）、ＣＸＣＬ１１およびＣＸＣＬ１６の分泌の増加を示す。図５１は、活性化白血球細胞接着分子（ＡＬＣＡＭ）、骨形成タンパク質５（ＢＭＰ５）、ＢＭＰ７、Ｅセレクチン（内皮細胞接着分子）、細胞間接着分子２（ＩＣＡＭ２）、ＩＣＡＭ３、Ｌセレクチン（白血球接着分子）およびマトリックスメタロプロテイナーゼ１（ＭＭＰ１）の分泌の増加を示す。図５２は、マトリックスメタロプロテイナーゼ１３（ＭＭＰ１３）、ＭＭＰ３、ＭＭＰ９、血小板内皮細胞接着分子（ＰＥＣＡＭ１）、メタロプロテイナーゼ阻害剤ＴＩＭＰ１、ＴＩＭＰ２、ＴＩＭＰ４および血管上皮（ＶＥ）カドヘリン（カルシウム依存性細胞接着タンパク質）の分泌の増加を示す。図５３は、単球分化抗原（ＣＤ１４）、細胞分化抗原（ＣＤ８０）、カルジオトロフィン−１（ＣＴ−１）、白血病阻害因子（ＬＩＦ）、マクロファージ遊走阻害因子（ＭＩＦ）、トロンボポエチン（ＴＨＰＯ）およびリンホタクチン（ＸＣＬ１）の分泌の増加を示す。
【０２３２】
図５４は、ＩＬ−２による刺激２４または４８時間後の、ＳＲ−ｈＡＤＳＣからの神経増殖因子受容体（ＮＧＦＲ）の分泌の増加を示す。図５４は、ＩＬ８およびＴＮＦＲＳＦ１Ａの分泌の増加も示す。図５４のこれらの因子は、ＰＲＰに存在しないことが見出された。
【０２３３】
図５５〜５７は、ＩＬ−２による刺激７２時間後の、ＳＲ−ｈＡＤＳＣからの下で命名したタンパク質（因子）の分泌の増加を示す。分泌レベルは、ｈＡＤＳＣ支持に使用される、１０％ＰＲＰ含有培地における基底レベルで存在する対応するタンパク質の量と比べて示される。図５５は、インターロイキン１受容体アルファ（ＩＬ１Ｒａ）、インターロイキン６（ＩＬ６）およびインターロイキン−１３受容体サブユニットアルファ−２（ＩＬ１３Ｒａ２）の分泌の増加を示す。図５６は、線維芽細胞増殖因子６（ＦＧＦ６）、血小板前駆細胞塩基性タンパク質（ＰＰＢＰ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）および血管内皮増殖因子受容体−３（ＶＥＧＦＲ３）の分泌の増加を示す。図５７は、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド２２（ＣＣＬ２２）、ＣＣＬ２３、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２６およびＣＸＣケモカインリガンド１０（ＣＸＣＬ１０）の分泌の増加を示す。
【０２３４】
図５８は、ＩＬ−２による刺激７２時間後の、ＳＲ−ｈＡＤＳＣからの、アンジオテンシン（ＡＮＧ）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、骨形成タンパク質４（ＢＭＰ４）、コロニー刺激因子２（ＣＳＦ２）、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、線維芽細胞増殖因子７（ＦＧＦ−７）、インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）、インスリン様増殖因子結合性タンパク質−１（ＩＧＦＢＰ１）およびＩＧＦＢＰ２の分泌の増加を示す。これらの因子は、ＰＲＰに存在しないことが見出された。
【０２３５】
図５９は、１０％ＰＲＰ単独とのインキュベーション（ＩＬ−２刺激なし）２４時間後の、ＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの、線維芽細胞増殖因子６（ＦＧＦ６）、ＣＸＣケモカインリガンド１６（ＣＸＣＬ１６）および間質細胞由来因子−１アルファ（ＳＤＦ１ａ）の分泌の増加を示す。ｈＡＤＳＣ支持のために使用される、１０％ＰＲＰ含有培地に基底レベルで存在する対応タンパク質の量と比較して、分泌レベルを示す。
【０２３６】
図６０は、１０％ＰＲＰ単独とのインキュベーション（ＩＬ−２刺激なし）２４時間後の、ＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、Ｂリンパ球ケモカイン（ＣＸＣＬ１３；ＢＬＣ）、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド１（ＣＣＬ１）、Ｆｌｔ−３  ＬＧ（Ｆｍｓ関連チロシンキナーゼ３リガンド）、フラクタルカイン（Ｔ細胞ケモカインＣＸ３ＣＬ１）、顆粒球走化性タンパク質２（ＧＣＰ−２）／ＣＸＣＬ６、インターロイキン１アルファ（ＩＬ１ａ）、インターロイキン４（ＩＬ４）、ＩＬ１５およびインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）の分泌の増加を示す。これらの因子は、ＰＲＰに存在しないことが見出された。
【０２３７】
図６１〜７０は、１０％ＰＲＰ単独とのインキュベーション（ＩＬ−２刺激なし）４８時間後の、ＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの下で命名したタンパク質（因子）の分泌の増加を示す。分泌レベルは、ｈＡＤＳＣ支持に使用される、１０％ＰＲＰ含有培地における基底レベルで存在する対応するタンパク質の量と比べて示される。図６１は、インターロイキン２ベータ（ＩＬ−２ｂ）、ＩＬ３、ＩＬ５およびＩＬ６の分泌の増加を示す。図６２は、インターロイキン１受容体ＩＩ型（ＩＬ１Ｒ２）、インターロイキン２受容体ガンマ（ＩＬ−２Ｒｇ）、インターロイキン５受容体アルファ（ＩＬ５Ｒａ）、インターロイキン１０受容体ベータ（ＩＬ１０Ｒｂ）、インターロイキン１８受容体結合タンパク質アルファ（ＩＬ１８ＢＰａ）、インターロイキン１８受容体ベータ（ＩＬ１８Ｒｂ）およびインターロイキン２１受容体（ＩＬ−２１Ｒ）の分泌の増加を示す。図６３は、インスリン様増殖因子１（ＩＧＦ１）、ＩＧＦ２、ＬＡＰ（ＴＧＦベータファミリー）、レプチン（ＬＥＰ）、レプチン受容体（ＬＥＰＲ）、血小板由来増殖因子Ａアルファ（ＰＤＧＦＡＡ）、血小板由来増殖因子Ａベータ（ＰＤＧＦＡＢ）および血小板由来増殖因子Ｂベータ（ＰＤＧＦＢＢ）の分泌の増加を示す。図６４は、血小板由来増殖因子受容体アルファ（ＰＤＧＦＲａ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、幹細胞因子受容体（ＳＣＦＲ）、トランスフォーミング増殖因子ベータ１（ＴＧＦ  ｂ１）、トランスフォーミング増殖因子ベータ２（ＴＧＦｂ２）、トランスフォーミング増殖因子アルファ（ＴＧＦα）、血管内皮増殖因子受容体−２（ＶＥＧＦＲ２）およびＶＥＧＦＲ３の分泌の増加を示す。図６５は、細胞死受容体６（ＤＲ６；ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー２１）、グリア細胞株由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）、ニューロトロフィン３（ＮＴ３）、免疫グロブリン様およびＥＧＦ様ドメインを有するチロシンキナーゼ１（ＴＩＥ−１）、ＴＩＥ−２およびＴＮＦスーパーファミリーメンバー１４（ＴＮＦＳＦ１４）の分泌の増加を示す。図６６は、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド２（ＣＣＬ２）、ＣＣＬ５、ＣＣＬ８、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１８およびＣＣＬ２３の分泌の増加を示す。図６７は、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド２４（ＣＣＬ２４）、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２６、ＣＣＬ２７、ＣＸＣケモカインリガンド１０（ＣＸＣＬ１０）およびＣＸＣＬ１１の分泌の増加を示す。図６８は、活性化白血球細胞接着分子（ＡＬＣＡＭ）、骨形成タンパク質５（ＢＭＰ５）、ＢＭＰ７、Ｅセレクチン（内皮細胞接着分子）、細胞間接着分子１（ＩＣＡＭ１）、ＩＣＡＭ２、Ｌセレクチン（白血球接着分子）およびマトリックスメタロプロテイナーゼ１（ＭＭＰ１）の分泌の増加を示す。図６９は、マトリックスメタロプロテイナーゼ３（ＭＭＰ３）、ＭＭＰ９、ＭＭＰ１３、血小板内皮細胞接着分子（ＰＥＣＡＭ１）、メタロプロテイナーゼ阻害剤ＴＩＭＰ１、ＴＩＭＰ２およびＴＩＭＰ４の分泌の増加を示す。図７０は、単球分化抗原（ＣＤ１４）、単球分化抗原（ＣＤ８０）、カルジオトロフィン−１（ＣＴ−１）および白血病阻害因子（ＬＩＦ）の分泌の増加を示す。
【０２３８】
図７１〜７２は、１０％ＰＲＰ単独とのインキュベーション（ＩＬ−２刺激なし）４８時間後の、ＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの下で命名したタンパク質（因子）の分泌の増加を示す。これらの因子は、ＰＲＰに存在しないことが判明した。図７１は、骨形成タンパク質４（ＢＭＰ４）、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド１１（ＣＣＬ１１）、ＣＣＬ２３、毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、線維芽細胞増殖因子７（ＦＧＦ７）、インスリン様増殖因子結合タンパク質−１（ＩＧＦＢＰ１）、ＩＧＦＢＰ２、ＩＧＦＢＰ４および神経増殖因子受容体（ＮＧＦＲ）の分泌の増加を示す。図７２は、インターロイキン７（ＩＬ７）、ＩＬ１０、ＩＬ１３およびＩＬ−１６の分泌の増加を示す。
【０２３９】
図７３は、１０％ＰＲＰ単独とのインキュベーション（ＩＬ−２刺激なし）７２時間後の、ＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの、プロベータセルリン（ＢＴＣ）、インターロイキン−１３受容体サブユニットアルファ−２（ＩＬ１３Ｒａ２）および間質細胞由来因子−１ベータ（ＳＤＦ１ｂ）の分泌の増加を示す。ｈＡＤＳＣ支持のために使用される、１０％ＰＲＰ含有培地に基底レベルで存在する対応タンパク質の量と比較して、分泌レベルを示す。
【０２４０】
図７４は、１０％ＰＲＰ単独とのインキュベーション（ＩＬ−２刺激なし）７２時間後の、ＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、インターロイキン８（ＩＬ８）およびＴＮＦＲＳＦ１Ａ（腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー、メンバー１Ａ）の分泌の増加を示す。これらの因子は、ＰＲＰに存在しないことが見出された。
【０２４１】
図７５は、ＩＬ−２による刺激２４時間後の、ＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド２３（ＣＣＬ２３）、毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、ＣＣＬ１１（エオタキシン１）、ＩＬ４および神経増殖因子受容体（ＮＧＦＲ）の分泌の増加を示す。これらの因子は、ＰＲＰに存在しないことが見出された。
【０２４２】
図７５は、ＩＬ−２刺激２４時間後の、ＣＸＣＬ１６、ＨＣＣ４、ｓｇｐ１３０およびＴＮＦＲＳＦ１Ｂの分泌の増加も示す。分泌レベルは、１０％ＰＲＰ含有培地における基底レベルで存在する対応するタンパク質の量と比べて示される。
【０２４３】
図７６〜８６は、ＩＬ−２による刺激４８時間後の、ＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの、図の下に記すタンパク質（因子）の分泌の増加を示す。分泌レベルは、ｈＡＤＳＣ支持に使用される、１０％ＰＲＰ含有培地における基底レベルで存在する対応するタンパク質の量と比べて示される。図７６は、インターロイキン１ベータ（ＩＬ１β）、ＩＬ３、ＩＬ５、ＩＬ６、ＩＬ９、ＩＬ１０、ＩＬ１２ｂおよびインターロイキン１８結合タンパク質アルファ（ＩＬ１８ＢＰα）の分泌の増加を示す。図７７は、インターロイキン１受容体アルファ（ＩＬ１Ｒａ）、ＩＬ１Ｒ４、ＩＬ１０Ｒｂ、ＩＬ１８Ｒｂ、ＩＬ１Ｒ２、ＩＬ−２１Ｒ、ＩＬ−２Ｒβ、ＩＬ−２ＲγおよびＩＬ５Ｒａの分泌の増加を示す。図７８は、線維芽細胞増殖因子６（ＦＧＦ６）、インスリン様増殖因子ＩＧＦ１およびＩＧＦ２、ＬＡＰ（ＴＧＦベータファミリー）、ニューロトロフィン３（ＮＴ３）、血小板由来増殖因子Ａアルファ（ＰＤＧＦＡＡ）、血小板由来増殖因子Ａベータ（ＰＤＧＦＡＢ）ならびに血小板由来増殖因子受容体アルファ（ＰＤＧＦＲａ）の分泌の増加を示す。図７９は、幹細胞因子（ＳＣＦ）、トランスフォーミング増殖因子２（ＴＧＦ２）、ＴＧＦα、ＴＧＦβ１、ＴＧＦｂ３、腫瘍壊死因子ベータ（ＴＮＦｂ）、血管内皮増殖因子受容体−２（ＶＥＧＦ  Ｒ２）およびＶＥＧＦ  Ｒ３の分泌の増加を示す。図８０は、ＤＲ６（ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー２１）、エンドグリン（ＥＮＧ）、受容体チロシンタンパク質キナーゼｅｒｂＢ−３（ＥｒｂＢ３）、Ｆａｓリガンド（Ｆａｓ  ＬＧ）、グリア細胞株由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）、ＧＩＴＲリガンド（ＧＩＴＲ  ＬＧ）およびレプチン受容体（ＬＥＰＲ）の分泌の増加を示す。図８１は、プロラクチン（ＰＲＬ）、幹細胞因子受容体（ＳＣＦＲ）、シアル酸結合Ｉｇ様レクチン５（シグレック５）、アンジオポエチン１受容体（ＴＩＥ−１）およびアンジオポエチン１受容体（ＴＩＥ−２）の分泌の増加を示す。図８２は、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド８（ＣＣＬ８）、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１８およびＣＣＬ２０の分泌の増加を示す。図８３は、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド２２（ＣＣＬ２２）、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２６、ＣＸＣケモカインリガンド９（ＣＸＣＬ９）およびＣＸＣＬ１１の分泌の増加を示す。図８４は、アクチビンＡ（ＩＮＨＢＡ）、骨形成タンパク質５（ＢＭＰ５）、Ｅセレクチン（内皮細胞接着分子）、細胞間接着分子１（ＩＣＡＭ１）、ＩＣＡＭ２、Ｌセレクチン（白血球接着分子）およびマクロファージコロニー刺激因子（ＭＣＳＦ）の分泌の増加を示す。図８５は、マトリックスメタロプロテイナーゼ１（ＭＭＰ１）、ＭＭＰ１３、ＭＭＰ３、ＭＭＰ９、血小板内皮細胞接着分子（ＰＥＣＡＭ１）およびメタロプロテイナーゼ阻害剤４（ＴＩＭＰ−４）の分泌の増加を示す。図８６は、単球分化抗原（ＣＤ１４）、リンホタクチン（ＸＣＬ１）、カルジオトロフィン−１（ＣＴ−１）、白血病阻害因子（ＬＩＦ）、マクロファージ遊走阻害因子（ＭＩＦ）および血小板前駆細胞塩基性タンパク質（ＰＰＢＰ）の分泌の増加を示す。
【０２４４】
図８７は、ＩＬ−２による刺激４８時間後の、ＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、骨形成タンパク質４（ＢＭＰ４）、線維芽細胞増殖因子７（ＦＧＦ７）、インスリン様増殖因子結合性タンパク質−２（ＩＧＦＢＰ２）、ＩＬ−２、ＩＬ−１６およびインターフェロンガンマ（ＩＮＦガンマ）の分泌の増加を示す。これらの因子は、ＰＲＰに存在しないことが見出された。
【０２４５】
図８８〜８９は、ＩＬ−２による刺激７２時間後の、ＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの下で命名したタンパク質（因子）の分泌の増加を示す。分泌レベルは、ｈＡＤＳＣ支持に使用される、１０％ＰＲＰ含有培地における基底レベルで存在する対応するタンパク質の量と比べて示される。図８８は、アディポネクチン（Ａｃｒｐ３０）、アグーチ関連タンパク質（ＡｇＲＰ）、ＡＮＧＰＴ２（アンジオポエチン２）、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）、プロベータセルリン（ＢＴＣ）、インターロイキン−１３受容体サブユニットアルファ−２（ＩＬ１３Ｒａ２）、レプチン（ＬＥＰ）、ニューロトロフィン４（ＮＴ４）および間質細胞由来因子−１アルファ（ＳＤＦ１ａ）の分泌の増加を示す。図８９は、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド２（ＣＣＬ２）、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ２３、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２７、ＣＸＣケモカインリガンド１０（ＣＸＣＬ１０）、間質細胞由来因子−１ベータ（ＳＤＦ１ｂ）、メタロプロテイナーゼ阻害剤１（ＴＩＭＰ１）、ＴＩＭＰ２および腫瘍壊死因子スーパーファミリーメンバー１４（ＴＮＦＳＦ１４）の分泌の増加を示す。
【０２４６】
図９０は、ＩＬ−２による刺激７２時間後の、ＳＥＮ−ｈＡＤＳＣからの、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）およびＩＬ１３の分泌の増加を示す。これらの因子は、ＰＲＰに存在しないことが見出された。
【表５Ａ−１】
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【表５Ａ−２】
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【表５Ａ−３】
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【表５Ａ−４】
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【表５Ａ−５】
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【表５Ａ−６】
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【表５Ａ−７】
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【表５Ａ−８】
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【表５Ａ−９】
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【表５Ａ−１０】
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【表５Ａ−１１】
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【表５Ａ−１３】
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【表５Ａ−１４】
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【表５Ａ−１５】
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【表５Ａ−３４】
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【表５Ａ−４４】
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【表５Ａ−５４】
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【表５Ａ−８０】
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【表５Ａ−８１】
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【表５Ｂ−１】
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【表５Ｂ−２】
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【表５Ｂ−３】
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【表５Ｂ−４】
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【表５Ｂ−５】
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【表５Ｂ−６】
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【表５Ｂ−７】
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【表５Ｂ−８】
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【表５Ｂ−９】
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【表５Ｂ−１０】
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【表５Ｂ−１１】
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【表５Ｂ−２０】
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【表５Ｂ−２１】
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【表５Ｂ−２４】
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【表５Ｂ−３０】
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【表５Ｂ−３１】
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【表５Ｂ−３２】
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【表５Ｂ−３３】
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【表５Ｂ−３４】
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【表５Ｂ−３５】
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【表５Ｂ−３６】
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【表５Ｂ−３７】
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【表５Ｂ−３８】
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【表５Ｂ−４０】
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【表５Ｂ−４２】
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【表５Ｂ−４３】
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【表５Ｂ−４４】
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【表５Ｂ−５１】
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【表５Ｂ−５２】
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【表５Ｂ−５３】
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【表５Ｂ−５４】
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【表５Ｂ−５５】
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【表５Ｂ−５６】
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【表５Ｂ−５７】
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【表５Ｂ−５８】
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【表５Ｂ−５９】
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【表５Ｂ−６０】
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【表５Ｂ−６１】
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【表５Ｂ−６２】
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【表５Ｂ−６３】
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【表５Ｂ−６４】
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【表５Ｂ−６５】
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【表５Ｂ−６６】
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【表５Ｂ−６７】
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【表５Ｂ−６８】
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【表５Ｂ−６９】
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【表５Ｂ−７０】
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【表５Ｂ−７１】
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【表５Ｂ−７２】
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【表５Ｃ−１】
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【表５Ｃ−２】
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【表５Ｃ−３】
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【表５Ｃ−４】
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【表５Ｃ−５】
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【表５Ｃ−６】
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【表５Ｃ−７】
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【表５Ｃ−８】
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【表５Ｃ−９】
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【表５Ｃ−１０】
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【表５Ｃ−１１】
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【表５Ｃ−１２】
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【表５Ｃ−１３】
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【表５Ｃ−１４】
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【表５Ｃ−１５】
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【表５Ｄ−１】
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【表５Ｄ−２】
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【表５Ｄ−３】
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【表５Ｄ−４】
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【表５Ｄ−５】
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【表５Ｄ−６】
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【表５Ｄ−７】
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【表５Ｄ−８】
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【表５Ｄ−９】
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【表５Ｄ−１０】
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【表５Ｄ−１１】
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【表５Ｄ−１２】
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【表５Ｄ−１３】
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【表５Ｄ−１４】
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【表５Ｄ−１５】
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【表５Ｄ−１６】
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【表５Ｄ−１７】
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【表５Ｄ−１８】
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【表５Ｄ−１９】
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【表５Ｄ−２０】
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【表５Ｄ−２１】
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【表５Ｄ−２２】
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【表５Ｄ−２３】
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【表５Ｄ−２４】
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【表５Ｄ−２５】
2018518692.tif 000209
【表５Ｄ−２６】
2018518692.tif 000210
【表５Ｄ−２７】
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【表５Ｄ−２８】
2018518692.tif 000212
【表５Ｄ−２９】
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【表５Ｄ−３０】
2018518692.tif 000214
【表５Ｄ−３１】
2018518692.tif 000215
【表５Ｄ−３２】
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【表５Ｄ−３３】
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【表５Ｄ−３４】
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【表５Ｄ−３５】
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【表５Ｄ−３６】
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【表５Ｄ−３７】
2018518692.tif 000221
【表５Ｄ−３８】
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【表５Ｄ−３９】
2018518692.tif 000223
【表５Ｄ−４０】
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【表５Ｄ−４１】
2018518692.tif 000225
【表５Ｄ−４２】
2018518692.tif 000226
【表６−１】
2018518692.tif 000227
【表６−２】
2018518692.tif 000228
【表６−３】
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【表６−４】
2018518692.tif 000230
【表６−５】
2018518692.tif 000231
【表６−６】
2018518692.tif 000232
【表６−７】
2018518692.tif 000233
【表６−８】
2018518692.tif 000234
【０２４７】
前述のことから、本発明の具体的な変形形態が例示のために本明細書に記載されているが、本発明の精神および範囲からそれることなく様々な改変を加えることができることが理解される。したがって、本発明は、添付の特許請求の範囲による場合を除いて限定されない。
【図１Ａ】
2018518692.tif 000235
【図１Ｂ】
2018518692.tif 000236
【図２Ａ−２Ｂ】
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【図３】
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【図４】
2018518692.tif 000239
【図５】
2018518692.tif 000240
【図６】
2018518692.tif 000241
【図６ＡＢ】
2018518692.tif 000242
【図６ＣＤ】
2018518692.tif 000243
【図７】
2018518692.tif 000244
【図７ＡＢＣ】
2018518692.tif 000245
【図７Ｄ】
2018518692.tif 000246
【図８】
2018518692.tif 000247
【図８Ａ】
2018518692.tif 000248
【図８ＢＣＤ】
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【図９】
2018518692.tif 000250
【図１０Ａ−１】
2018518692.tif 000251
【図１０Ａ−２】
2018518692.tif 000252
【図１０Ｂ−１】
2018518692.tif 000253
【図１０Ｂ−２】
2018518692.tif 000254
【図１０Ｂ−３】
2018518692.tif 000255
【図１１】
2018518692.tif 000256
【図１２】
2018518692.tif 000257
【図１３】
2018518692.tif 000258
【図１４】
2018518692.tif 000259
【図１５】
2018518692.tif 000260
【図１６】
2018518692.tif 000261
【図１７】
2018518692.tif 000262
【図１８】
2018518692.tif 000263
【図１９】
2018518692.tif 000264
【図２０】
2018518692.tif 000265
【図２１】
2018518692.tif 000266
【図２２】
2018518692.tif 000267
【図２３】
2018518692.tif 000268
【図２４】
2018518692.tif 000269
【図２５】
2018518692.tif 000270
【図２６】
2018518692.tif 000271
【図２７】
2018518692.tif 000272
【図２８】
2018518692.tif 000273
【図２９】
2018518692.tif 000274
【図３０】
2018518692.tif 000275
【図３１】
2018518692.tif 000276
【図３２】
2018518692.tif 000277
【図３３】
2018518692.tif 000278
【図３４】
2018518692.tif 000279
【図３５】
2018518692.tif 000280
【図３６】
2018518692.tif 000281
【図３７】
2018518692.tif 000282
【図３８】
2018518692.tif 000283
【図３９】
2018518692.tif 000284
【図４０】
2018518692.tif 000285
【図４１】
2018518692.tif 000286
【図４２】
2018518692.tif 000287
【図４３】
2018518692.tif 000288
【図４４】
2018518692.tif 000289
【図４５】
2018518692.tif 000290
【図４６】
2018518692.tif 000291
【図４７】
2018518692.tif 000292
【図４８】
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【図４９】
2018518692.tif 000294
【図５０】
2018518692.tif 000295
【図５１】
2018518692.tif 000296
【図５２】
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【図５３】
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【図５４】
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【図５５】
2018518692.tif 000300
【図５６】
2018518692.tif 000301
【図５７】
2018518692.tif 000302
【図５８】
2018518692.tif 000303
【図５９】
2018518692.tif 000304
【図６０】
2018518692.tif 000305
【図６１】
2018518692.tif 000306
【図６２】
2018518692.tif 000307
【図６３】
2018518692.tif 000308
【図６４】
2018518692.tif 000309
【図６５】
2018518692.tif 000310
【図６６】
2018518692.tif 000311
【図６７】
2018518692.tif 000312
【図６８】
2018518692.tif 000313
【図６９】
2018518692.tif 000314
【図７０】
2018518692.tif 000315
【図７１】
2018518692.tif 000316
【図７２】
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【図７３】
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【図７４】
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【図７５】
2018518692.tif 000320
【図７６】
2018518692.tif 000321
【図７７】
2018518692.tif 000322
【図７８】
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【図７９】
2018518692.tif 000324
【図８０】
2018518692.tif 000325
【図８１】
2018518692.tif 000326
【図８２】
2018518692.tif 000327
【図８３】
2018518692.tif 000328
【図８４】
2018518692.tif 000329
【図８５】
2018518692.tif 000330
【図８６】
2018518692.tif 000331
【図８７】
2018518692.tif 000332
【図８８】
2018518692.tif 000333
【図８９】
2018518692.tif 000334
【図９０】
2018518692.tif 000335
【配列表】
2018518692000001.app
【国際調査報告】
2018518692.tif 000336
2018518692.tif 000337
2018518692.tif 000338
2018518692.tif 000339