(57)【要約】【課題】ピリド［１，２−ａ］ピリミドン類似体、それらの結晶形、それらの中間体、及びそれらの製造方法【解決手段】本発明は、ピリド［１，２−ａ］ピリミドン類似体の結晶形、それらの製造方法、及びそれらの中間体を開示する。【化１】2018537497.tif 000052【選択図】なし
2018537497.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式で表され、Ｘ線回折パターンにおいて、
２θ＝７．９４７°，１０．０７３°，１４．５３１°，１９．１８７°，２１．２３７°，２４．０５５°，２５．４９７°の；
典型的には、２θ＝７．９４７°，１０．０７３°，１１．９７０°，１３．４６８°，１４．５３１°，１５．９１１°，１９．１８７°，２１．２３７°，２４．０５５°，２５．４９７°の；
より典型的には、２θ＝７．９４７°，１０．０７３°，１１．９７０°，１３．４６８°，１４．５３１°，１５．９１１°，１９．１８７°，１９．５６１°，２１．２３７°，２３．４４６°，２４．０５５°，２５．４９７°，２７．０７４°の、
回折ピークを有することを特徴とする、化合物１の結晶形ＩＸ。
【化１】
2018537497.tif 000033
【請求項２】
ＸＲＰＤパターン解析データが以下の通り表されることを特徴とする、
請求項１に記載の結晶形ＩＸ。
【表１】
2018537497.tif 000034
【請求項３】
ＸＲＰＤパターンが図２５に示されるものであることを特徴とする、
請求項１又は請求項２に記載の結晶形ＩＸ。
【請求項４】
下記式で表される化合物２。
【化２】
2018537497.tif 000035
【請求項５】
Ｘ線回折パターンにおいて、
２θ＝１０．１５４°，１２．２８５°，１４．５１１°，１６．３２８°，２４．３１１°，２６．１８８°の；
典型的には２θ＝７．２７０°，１０．１５４°，１２．２８５°，１３．２０６°，１４．５１１°，１６．３２８°，２４．３１１°，２６．１８８°，２７．７２４°の；より典型的には、２θ＝７．２７０°，１０．１５４°，１２．２８５°，１３．２０６°，１４．５１１°，１６．３２８°，１９．００８°，２０．７０２°，２１．２５９°，２４．３１１°，２６．１８８°，２７．７２４°の、
回折ピークを有し、
最も典型的には、下記ＸＲＰＤパターン解析データを有することを特徴とする、
請求項４に記載の化合物２の結晶形Ｉ。
【表２】
2018537497.tif 000036
【請求項６】
Ｘ線回折パターンにおいて、
２θ＝６．５２４°，７．７８２°，１３．８９５°，１５．４９５°，１７．４８７°，１９．３２２°の；
典型的には、２θ＝６．５２４°，７．７８２°，１１．６２８°，１３．８９５°，１５．４９５°，１７．４８７°，１９．３２２°，２０．９６２°，２３．２６９°の；より典型的には２θ＝６．５２４°，７．７８２°，１１．６２８°，１３．８９５°，１５．４９５°，１７．４８７°，１９．３２２°，２０．９６２°，２３．２６９°，２４．２５７°，２６．００９°，３１．５３３°の、
回折ピークを有し、
最も典型的には、下記ＸＲＰＤパターン解析データを有することを特徴とする、
請求項４に記載の化合物２の結晶形ＩＩ。
【表３】
2018537497.tif 000037
【請求項７】
Ｘ線回折パターンにおいて、
２θ＝６．９７９°，９．９３９°，１４．３９２°，１６．１０７°，２０．９８２°，２５．９９０°の；
典型的には２θ＝６．１８７°，６．９７９°，９．９３９°，１１．９１０°，１４．３９２°，１６．１０７°，２０．９８２°，２２．７５５°，２５．９９０°の；
より典型的には２θ＝６．１８７°，６．９７９°，９．９３９°，１１．９１０°，１３．１４８°，１４．３９２°，１６．１０７°，２０．９８２°，２２．７５５°，２３．９７５°，２５．９９０°，２９．００６°の
回折ピークを有し、
最も典型的には、下記ＸＲＰＤパターン解析データを有することを特徴とする、
請求項４に記載の化合物２の結晶形ＩＩＩ。
【表４】
2018537497.tif 000038
【請求項８】
Ｘ線回折パターンにおいて、
２θ＝６．３８８°，７．２７８°，１１．０７６°，１５．４５４°，２１．２５６°の；
典型的には２θ＝６．３８８°，７．２７８°，１１．０７６°，１２．１０２°，１５．４５４°，１６．０９１°，１８．９１２°，２１．２５６°の；
より典型的には２θ＝６．３８８°，７．２７８°，１１．０７６°，１２．１０２°，１５．１０３°，１５．４５４°，１６．０９１°，１８．９１２°，２１．２５６°，２１．８４６°の
回折ピークを有し、
最も典型的には、下記ＸＲＰＤパターン解析データを有することを特徴とする、
請求項４に記載の化合物２の結晶形ＩＶ。
【表５】
2018537497.tif 000039
【請求項９】
Ｘ線回折パターンにおいて、
２θ＝７．１１６°，１４．１３７°，１５．９１１°，２２．２２３°，２４．６１０°の；
典型的には２θ＝７．１１６°，１４．１３７°，１５．９１１°，２１．６９１°，２２．２２３°，２４．２１３°，２４．６１０°，２８．９８７の
回折ピークを有し、
最も典型的には、下記ＸＲＰＤパターン解析データを有することを特徴とする、
請求項４に記載の化合物２の結晶形Ｖ。
【表６】
2018537497.tif 000040
【請求項１０】
Ｘ線回折パターンにおいて、
２θ＝５．７７５°，１１．７７０°，１４．４１５°，１５．７５３°，２２．５１８°，２６．６２３°の；
典型的には２θ＝５．７７５°，１１．７７０°，１４．４１５°，１５．７５３°，１７．１３２°，２０．９３９°，２２．５１８°，２６．６２３°の；
より典型的には２θ＝５．７７５°，１１．７７０°，１４．４１５°，１５．７５３°，１７．１３２°，２０．９３９°，２２．５１８°，２３．７４５°，２６．６２３°，３１．２９５°の
回折ピークを有し、
最も典型的には、下記ＸＲＰＤパターン解析データを有することを特徴とする、
請求項４に記載の化合物２の結晶形ＶＩ。
【表７】
2018537497.tif 000041
【請求項１１】
下記式で表される化合物３。
【化３】
2018537497.tif 000042
【請求項１２】
Ｘ線回折パターンにおいて、
２θ＝６．３２５°，１２．６７７°，１５．８１３°，２１．３９５°，２２．５１９°，２７．１３３°の；
典型的には２θ＝６．３２５°，１２．６７７°，１３．２５１°，１５．８１３°，１８．９５４°，２１．３９５°，２２．５１９°，２５．１６１°，２７．１３３°の；より典型的に経２θ＝６．３２５°，１２．６７７°，１３．２５１°，１５．８１３°，１６．５６５°，１８．９５４°，２１．３９５°，２２．５１９°，２４．１１７°，２５．１６１°，２６．４０５°，２７．１３３°の
回折ピークを有し、
最も典型的には、下記ＸＲＰＤパターン解析データを有することを特徴とする、
請求項１１に記載の化合物３の結晶形ＶＩＩ。
【表８】
2018537497.tif 000043
【請求項１３】
下記式で表される化合物４。
【化４】
2018537497.tif 000044
【請求項１４】
Ｘ線回折パターンにおいて、
２θ＝５．８８９°，１１．００２°，１２．５１８°，１４．９０６°，１７．８２５°，２２．８１４°，２５．５５５°の；
典型的には２θ＝５．８８９°，７．１７３°，１１．００２°，１１．３９６°，１２．５１８°，１２．８９５°，１４．９０６°，１７．８２５°，２２．８１４°，２５．５５５°の；
より典型的には２θ＝５．８８９°，７．１７３°，１１．００２°，１１．３９６°，１２．５１８°，１２．８９５°，１４．９０６°，１６．１６９°，１７．８２５°，１９．８７５°，２１．５７４°，２２．８１４°，２５．５５５°，２７．２５４°の回折ピークを有し、
最も典型的には、下記ＸＲＰＤパターン解析データを有することを特徴とする、
請求項１３に記載の化合物４の結晶形ＶＩＩＩ。
【表９】
2018537497.tif 000045
【請求項１５】
請求項１乃至３、５乃至１０、１２及び１４のうち何れか一項に記載の結晶形を含む結晶組成物であって、
前記結晶形が、前記結晶組成物の質量の５０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、最も好ましくは９５％以上にて存在する、
結晶性組成物。
【請求項１６】
請求項４、１１及び１３のうち何れか一項に記載の化合物、又は、
請求項１乃至３、５乃至１０、１２及び１４のうち何れか一項に記載の結晶形、又は
請求項１５に記載の結晶組成物を含む医薬組成物であって、
前記医薬組成物は、前記化合物、又は前記結晶形、又は前記結晶組成物を治療有効量で含み、そして所望により、薬学的に許容される担体、賦形剤及び／又は媒体を含む、
医薬組成物。
【請求項１７】
ＰＩ３Ｋキナーゼ関連疾患の治療のための薬剤を製造するための、
請求項１乃至３、５乃至１０、１２及び１４のうち何れか一項に記載の結晶形、又は
下記式で表される化合物１、又は、
請求項４、１１及び１３のうち何れか一項に記載の化合物、又は、
それらの結晶組成物、又はそれらの医薬組成物の使用であって、
前記ＰＩ３Ｋキナーゼ関連疾患は好ましくは癌から、より好ましくは結腸がん又は胃がんから選択される、
使用。
【化５】
2018537497.tif 000046
【請求項１８】
治療有効量の
請求項１乃至３、５乃至１０、１２及び１４のうち何れか一項に記載の結晶形、又は
請求項４、１１及び１３のうち何れか一項に記載の化合物、又は、
それらの結晶組成物、又はそれらの医薬組成物の
投与を含む、ＰＩ３Ｋキナーゼ関連疾患を治療するための方法であって、
前記ＰＩ３Ｋキナーゼ関連疾患は好ましくは癌から、より好ましくは結腸がん又は胃がんから選択される、
治療方法。
【請求項１９】
下記式で表される化合物１の製造方法であって
【化６】
2018537497.tif 000047
下記工程：
【化７】
2018537497.tif 000048
（式中、
ＸはＣｌ又はＢｒから選択され；
塩基Ｃはピリジン、２，６−ルチジン（２，６−ジメチルピリジン）、Ｅｔ３Ｎ、４−ＤＭＡＰ、ＬｉＯＨ、Ｃｓ２ＣＯ３、又はＫ２ＣＯ３から選択され；
溶媒ｃは、ピリジン、ジクロロメタン、トルエン、アセトニトリル、アセトン、ＤＭＦ又はＴＨＦから選択され；
化合物７対化合物８のモル比は１：１〜３、好ましくは１：１．２〜１．６であり；
化合物７対塩基Ｃのモル比は１：１〜３である。）
を含む、製造方法。
【請求項２０】
さらに下記工程：
【化８】
2018537497.tif 000049
【化９】
2018537497.tif 000050
（式中、
塩基Ａは、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸セシウム、水酸化カリウム、又は水酸化ナトリウムから選択され；
溶媒ａは、ＤＭＦ、ＤＭＳＯ、又はＮＭＰから選択され；
塩基Ｂは、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、水酸化バリウム、リン酸カリウム、炭酸セシウム、フッ化カリウム、フッ化セシウム、水酸化ナトリウム、カリウムｔ−ブトキシド、ナトリウムｔ−ブトキシド、酢酸カリウム又は酢酸ナトリウムから選択され；
溶媒ｂは、１，４−ジオキサン、ＤＭＳＯ、ＴＨＦ、１，４−ジオキサン／水、又はＴＨＦ／水から選択され；
前記溶媒ｂにおける１，４−ジオキサン又はＴＨＦ対水の体積比は３〜６：１、好ましくは５：１であり、
触媒はＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２、又はＰｄ（ＰＰｈ３）４から選択され；
２−ジメチルアミノエチルクロリド又は２−ジメチルアミノエチルブロミドはその塩の形態であってよい。）
を含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
化合物１の製造のための中間体としての、
下記式で表される化合物。
【化１０】
2018537497.tif 000051
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はピリド［１，２−ａ］ピリミドン類似体の結晶形、それらの製造方法、及びそれらの中間体に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＰＩ３Ｋ経路（ＰＩ３Ｋ  ｐａｔｈｗａｙ）は、突然変異が最も一般的に起こり、細胞増殖、活性化、およびシグナル増幅につながり得る、ヒトのがん細胞の部位である。
【０００３】
ＰＩ３Ｋキナーゼ（ホスファチジルイノシトール−３−キナーゼ、ＰＩ３Ｋｓ）は、脂質キナーゼに属し、ホスファチジルイノシトールのイノシトール環の３’−ＯＨ末端をリン酸化することができる。ＰＩ３Ｋは、調節サブユニットｐ８５又はｐ１０１と触媒サブユニットｐ１１０から構成される脂質キナーゼであり、ホスファチジルイノシトール４，５−ビスホスフェート（ＰＩＰ２）のリン酸化を促進してホスファチジルイノシトール３，４，５−トリスホスフェート（ＰＩＰ３）を形成し、それにより、Ａｋｔの下流などを活性化することにより、細胞増殖、生存及び代謝などにおける重要な役割を果たす。したがって、ホスファチジルイノシトール−３−キナーゼの抑制は、ＰＩ３Ｋ経路に影響を与え、がん細胞の増殖及び活性化を抑制する。
【０００４】
腫瘍抑制遺伝子ＰＴＥＮ（第１０染色体上で欠失しているホスファターゼ・テンシン・ホモログ（ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ  ａｎｄ  ｔｅｎｓｉｏｎ  ｈｏｍｏｌｏｇ））は、ＰＩＰ３を脱リン酸化してＰＩＰ２を生成し、ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔシグナル伝達経路の負の調節を達成し、細胞増殖を抑制して、アポトーシスを促進する。ＰＩ３Ｋ遺伝子変異及び増幅の頻発並びに癌におけるＰＴＥＮ損失などが、ＰＩ３Ｋが腫瘍形成と密接に関連していることを示す。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、化合物１の製造方法を提供し、
【化１】
2018537497.tif 000003
該方法は、下記工程を含む
【化２】
2018537497.tif 000004
上記式中、
ＸはＣｌ又はＢｒから選択され、
塩基Ｃはピリジン、２，６−ルチジン（２，６−ジメチルピリジン）、Ｅｔ３Ｎ、４−ＤＭＡＰ、ＬｉＯＨ、Ｃｓ２ＣＯ３、又はＫ２ＣＯ３から選択され；
溶媒ｃは、ピリジン、ジクロロメタン、トルエン、アセトニトリル、アセトン、ＤＭＦ又はＴＨＦから選択され；
化合物７対化合物８のモル比は１：１〜３であり；
化合物７対塩基Ｃのモル比は１：１〜３である。
【０００６】
本発明のいくつかの実施態様において、化合物７対化合物８のモル比は１：１．２〜１．６である。
【０００７】
本発明のいくつかの実施態様において、前記化合物１の製造は、下記工程を含む。
【化３】
2018537497.tif 000005
式中、
塩基Ａは、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸セシウム、水酸化カリウム、又は水酸化ナトリウムから選択され；
溶媒ａは、ＤＭＦ、ＤＭＳＯ、又はＮＭＰから選択される。
【０００８】
本明細書において、２−ジメチルアミノエチルクロリド又は２−ジメチルアミノエチルブロミドは、例えば、２−ジメチルアミノエチルクロリド塩酸塩、又は２−ジメチルアミノエチルブロミド塩酸塩などの、それらの塩の形態で使用可能である。
【０００９】
本発明のいくつかの実施態様において、化合物５対２−ジメチルアミノエチルクロリド（又はその塩酸塩）又は２−ジメチルアミノエチルブロミド（又はその塩酸塩）のモル比は１：１〜２である。
【００１０】
本発明のいくつかの実施態様において、化合物５対２−ジメチルアミノエチルクロリド（又はその塩酸塩）又は２−ジメチルアミノエチルブロミド（又はその塩酸塩）のモル比は１：１．１〜１．３である。
【００１１】
本発明のいくつかの実施態様において、前記化合物１の製造は、下記工程を含む。
【化４】
2018537497.tif 000006
式中、
塩基Ｂは、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、水酸化バリウム、リン酸カリウム、炭酸セシウム、フッ化カリウム、フッ化セシウム、水酸化ナトリウム、カリウムｔ−ブトキシド、ナトリウムｔ−ブトキシド、酢酸カリウム又は酢酸ナトリウムから選択され；
溶媒ｂは、１，４−ジオキサン、ＤＭＳＯ、ＴＨＦ、１，４−ジオキサン／水、又はＴＨＦ／水から選択され；
前記溶媒ｂにおける１，４−ジオキサン又はＴＨＦ対水の体積比は３〜６：１、好ましくは５：１であり、
触媒はＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２、又はＰｄ（ＰＰｈ３）４から選択される。
【００１２】
本発明のいくつかの実施態様において、前記溶媒ｂにおける１，４−ジオキサン又はＴＨＦ対水の体積比は５：１である。
【００１３】
本発明のいくつかの実施態様において、前記化合物１の製造は、下記工程を含む。
【化５】
2018537497.tif 000007
【００１４】
上記反応スキームにおいて、化合物６を生成するための、化合物５と２−ジメチルアミノエチルクロリド塩酸塩との反応は、好ましくは塩基Ａと溶媒ａの存在下で実施され、塩基Ａは、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸セシウム、水酸化カリウム、又は水酸化ナトリウムから選択され；溶媒ａは、ＤＭＦ、ＤＭＳＯ、又はＮＭＰから選択される。本発明のいくつかの実施態様において、化合物５対２−ジメチルアミノエチルクロリド塩酸塩のモル比は１：１〜２である。本発明のいくつかの実施態様において、化合物５対２−ジメチルアミノエチルクロリド塩酸塩のモル比は１：１．１〜１．３である。
【００１５】
上記反応スキームにおいて、化合物７を生成するための、化合物６と２−メトキシ−５−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ピリジン−３−アミンとの反応は、好ましくは塩基Ｂと溶媒ｂと触媒の存在下で実施され、塩基Ｂは、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、水酸化バリウム、リン酸カリウム、炭酸セシウム、フッ化カリウム、フッ化セシウム、水酸化ナトリウム、カリウムｔ−ブトキシド、ナト
リウムｔ−ブトキシド、酢酸カリウム又は酢酸ナトリウムから選択され；溶媒ｂは、１，４−ジオキサン、ＤＭＳＯ、ＴＨＦ、１，４−ジオキサン／水、又はＴＨＦ／水から選択され、溶媒ｂにおける１，４−ジオキサン又はＴＨＦ対水の体積比は３〜６：１、好ましくは５：１であり；そして触媒はＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２、又はＰｄ（ＰＰｈ３）４から選択される。
【００１６】
上記反応スキームにおいて、化合物１を生成するための、化合物７と２−クロロ−４−フルオロベンゼンスルホニルクロリドとの反応は、好ましくは塩基Ｃと溶媒ｃの存在下で実施され、塩基Ｃは、ピリジン、２，６−ルチジン（２，６−ジメチルピリジン）、Ｅｔ３Ｎ、４−ＤＭＡＰ、ＬｉＯＨ、Ｃｓ２ＣＯ３、又はＫ２ＣＯ３から選択され；溶媒ｃは、ピリジン、ジクロロメタン、トルエン、アセトニトリル、アセトン、ＤＭＦ又はＴＨＦから選択され；そして化合物７対２−クロロ−４−フルオロベンゼンスルホニルクロリドのモル比は１：１〜３であり；化合物７対塩基Ｃのモル比は１：１〜３である。本発明のいくつかの実施態様において、化合物７対２−クロロ−４−フルオロベンゼンスルホニルクロリドのモル比は１：１．２〜１．６である。
【００１７】
本発明はまた、化合物１の製造のための中間体としての下記式で表される化合物を提供する。
【化６】
2018537497.tif 000008
【００１８】
本発明は、Ｘ線回折（ＸＲＤ）パターンにおいて、２θ＝７．９４７°，１０．０７３°，１４．５３１°，１９．１８７°，２１．２３７°，２４．０５５°，２５．４９７°の；典型的には、２θ＝７．９４７°，１０．０７３°，１１．９７０°，１３．４６８°，１４．５３１°，１５．９１１°，１９．１８７°，２１．２３７°，２４．０５５°，２５．４９７°の；より典型的には、２θ＝７．９４７°，１０．０７３°，１１．９７０°，１３．４６８°，１４．５３１°，１５．９１１°，１９．１８７°，１９．５６１°，２１．２３７°，２３．４４６°，２４．０５５°，２５．４９７°，２７．０７４°の回折ピークを有することを特徴とする、化合物１の結晶形ＩＸを提供する。
【００１９】
本発明は、図２５に示すＸＲＰＤパターンを有する、化合物１の結晶形ＩＸを提供する。
【００２０】
本発明のいくつかの実施態様において、前記化合物１の結晶形ＩＸのＸＲＰＤパターン解析データは下記表１に示される。
【表１】
2018537497.tif 000009
【００２１】
本発明のいくつかの実施態様において、前記化合物１の結晶形ＩＸのＤＳＣパターンは図２６に示される通りである。
【００２２】
本発明のいくつかの実施態様において、前記化合物１の結晶形ＩＸのＴＧＡパターンは図２７に示される通りである。
【００２３】
化合物１の結晶形ＩＸは、非溶媒和物結晶又は溶媒和物結晶の形態で存在し得る。本明細書において溶媒和物とは、有機溶媒及び／又は水と対応する化合物により形成される溶媒和物を言及する。
【００２４】
本発明は、結晶形ＩＸの結晶組成物を提供する。いくつかの実施態様において、結晶形ＩＸは、前記結晶組成物の質量の５０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、最も好ましくは９５％以上にて存在する。
【００２５】
本発明は、治療有効量の結晶形ＩＸ、又は結晶形ＩＸの結晶組成物を含む、結晶形ＩＸ
の医薬組成物を提供する。さらに医薬組成物は、薬学的に許容される担体、賦形剤及び／又は媒体を含んでいてもよいし含んでいなくてもよい。
【００２６】
本発明は下記式で表される化合物２を提供する。
【化７】
2018537497.tif 000010
【００２７】
本発明は、Ｘ線回折（ＸＲＤ）パターンにおいて、２θ＝１０．１５４°，１２．２８５°，１４．５１１°，１６．３２８°，２４．３１１°，２６．１８８°の；典型的には、２θ＝７．２７０°，１０．１５４°，１２．２８５°，１３．２０６°，１４．５１１°，１６．３２８°，２４．３１１°，２６．１８８°，２７．７２４°の；より典型的には、２θ＝７．２７０°，１０．１５４°，１２．２８５°，１３．２０６°，１４．５１１°，１６．３２８°，１９．００８°，２０．７０２°，２１．２５９°，２４．３１１°，２６．１８８°，２７．７２４の回折ピークを有することを特徴とする、化合物２の結晶形Ｉを提供する。
【００２８】
本発明は、図１に示すＸＲＰＤパターンを有する、化合物２の結晶形Ｉを提供する。
【００２９】
本発明のいくつかの実施態様において、前記化合物２の結晶形ＩのＸＲＰＤパターン解析データは下記表２に示される。
【表２】
2018537497.tif 000011
【００３０】
本発明のいくつかの実施態様において、前記化合物２の結晶形ＩのＤＳＣパターンは図２に示される通りである。
【００３１】
本発明のいくつかの実施態様において、前記化合物２の結晶形ＩのＴＧＡパターンは図３に示される通りである。
【００３２】
化合物２の結晶形Ｉは、非溶媒和物結晶又は溶媒和物結晶の形態で存在し得る。本明細書において溶媒和物とは、有機溶媒及び／又は水と対応する化合物により形成される溶媒和物を言及する。
【００３３】
本発明は、結晶形Ｉの結晶組成物を提供する。いくつかの実施態様において、結晶形Ｉは、前記結晶組成物の質量の５０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、最も好ましくは９５％以上にて存在する。
【００３４】
本発明は、治療有効量の結晶形Ｉ、又は結晶形Ｉの結晶組成物を含む、結晶形Ｉの医薬組成物を提供する。さらに医薬組成物は、薬学的に許容される担体、賦形剤及び／又は媒体を含んでいてもよいし含んでいなくてもよい。
【００３５】
本発明は、Ｘ線回折（ＸＲＤ）パターンにおいて、２θ＝６．５２４°，７．７８２°，１３．８９５°，１５．４９５°，１７．４８７°，１９．３２２°の；典型的には、２θ＝６．５２４°，７．７８２°，１１．６２８°，１３．８９５°，１５．４９５°，１７．４８７°，１９．３２２°，２０．９６２°，２３．２６９°の；より典型的に
は、２θ＝６．５２４°，７．７８２°，１１．６２８°，１３．８９５°，１５．４９５°，１７．４８７°，１９．３２２°，２０．９６２°，２３．２６９°，２４．２５７°，２６．００９°，３１．５３３°の回折ピークを有することを特徴とする、化合物２の結晶形ＩＩを提供する。
【００３６】
本発明は、図４に示すＸＲＰＤパターンを有する、化合物２の結晶形ＩＩを提供する。
【００３７】
本発明のいくつかの実施態様において、前記化合物２の結晶形ＩＩのＸＲＰＤパターン解析データは下記表３に示される。
【表３】
2018537497.tif 000012
【００３８】
本発明のいくつかの実施態様において、前記化合物２の結晶形ＩＩのＤＳＣパターンは図５に示される通りである。
【００３９】
本発明のいくつかの実施態様において、前記化合物２の結晶形ＩＩのＴＧＡパターンは図６に示される通りである。
【００４０】
化合物２の結晶形ＩＩは、非溶媒和物結晶又は溶媒和物結晶の形態で存在し得る。本明細書において溶媒和物とは、有機溶媒及び／又は水と対応する化合物により形成される溶媒和物を言及する。
【００４１】
本発明は、結晶形ＩＩの結晶組成物を提供する。いくつかの実施態様において、結晶形ＩＩは、前記結晶組成物の質量の５０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、最も好ましくは９５％以上にて存在する。
【００４２】
本発明は、治療有効量の結晶形ＩＩ、又は結晶形ＩＩの結晶組成物を含む、結晶形ＩＩの医薬組成物を提供する。さらに医薬組成物は、薬学的に許容される担体、賦形剤及び／又は媒体を含んでいてもよいし含んでいなくてもよい。
【００４３】
本発明は、Ｘ線回折（ＸＲＤ）パターンにおいて、２θ＝６．９７９°，９．９３９°，１４．３９２°，１６．１０７°，２０．９８２°，２５．９９０°の；典型的には、２θ＝６．１８７°，６．９７９°，９．９３９°，１１．９１０°，１４．３９２°，１６．１０７°，２０．９８２°，２２．７５５°，２５．９９０°の；より典型的には、２θ＝６．１８７°，６．９７９°，９．９３９°，１１．９１０°，１３．１４８°，１４．３９２°，１６．１０７°，２０．９８２°，２２．７５５°，２３．９７５°，２５．９９０°，２９．００６°の回折ピークを有することを特徴とする、化合物２の結晶形ＩＩＩを提供する。
【００４４】
本発明は、図７に示すＸＲＰＤパターンを有する、化合物２の結晶形ＩＩＩを提供する。
【００４５】
本発明のいくつかの実施態様において、前記化合物２の結晶形ＩＩＩのＸＲＰＤパターン解析データは下記表４に示される。
【表４】
2018537497.tif 000013
【００４６】
本発明のいくつかの実施態様において、前記化合物２の結晶形ＩＩＩのＤＳＣパターンは図８に示される通りである。
【００４７】
本発明のいくつかの実施態様において、前記化合物２の結晶形ＩＩＩのＴＧＡパターン
は図９に示される通りである。
【００４８】
化合物２の結晶形ＩＩＩは、非溶媒和物結晶又は溶媒和物結晶の形態で存在し得る。本明細書において溶媒和物とは、有機溶媒及び／又は水と対応する化合物により形成される溶媒和物を言及する。
【００４９】
本発明は、結晶形ＩＩＩの結晶組成物を提供する。いくつかの実施態様において、結晶形ＩＩＩは、前記結晶組成物の質量の５０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、最も好ましくは９５％以上にて存在する。
【００５０】
本発明は、治療有効量の結晶形ＩＩＩ、又は結晶形ＩＩＩの結晶組成物を含む、結晶形ＩＩＩの医薬組成物を提供する。さらに医薬組成物は、薬学的に許容される担体、賦形剤及び／又は媒体を含んでいてもよいし含んでいなくてもよい。
【００５１】
本発明は、Ｘ線回折（ＸＲＤ）パターンにおいて、２θ＝６．３８８°，７．２７８°，１１．０７６°，１５．４５４°，２１．２５６°の；典型的には、２θ＝６．３８８°，７．２７８°，１１．０７６°，１２．１０２°，１５．４５４°，１６．０９１°，１８．９１２°，２１．２５６°の；より典型的には、２θ＝６．３８８°，７．２７８°，１１．０７６°，１２．１０２°，１５．１０３°，１５．４５４°，１６．０９１°，１８．９１２°，２１．２５６°，２１．８４６°の回折ピークを有することを特徴とする、化合物２の結晶形ＩＶを提供する。
【００５２】
本発明は、図１０に示すＸＲＰＤパターンを有する、化合物２の結晶形ＩＶを提供する。
【００５３】
本発明のいくつかの実施態様において、前記化合物２の結晶形ＩＶのＸＲＰＤパターン解析データは下記表５に示される。
【表５】
2018537497.tif 000014
【００５４】
本発明のいくつかの実施態様において、前記化合物２の結晶形ＩＶのＤＳＣパターンは図１１に示される通りである。
【００５５】
本発明のいくつかの実施態様において、前記化合物２の結晶形ＩＶのＴＧＡパターンは図１２に示される通りである。
【００５６】
化合物２の結晶形ＩＶは、非溶媒和物結晶又は溶媒和物結晶の形態で存在し得る。本明細書において溶媒和物とは、有機溶媒及び／又は水と対応する化合物により形成される溶媒和物を言及する。
【００５７】
本発明は、結晶形ＩＶの結晶組成物を提供する。いくつかの実施態様において、結晶形ＩＶは、前記結晶組成物の質量の５０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、最も好ましくは９５％以上にて存在する。
【００５８】
本発明は、治療有効量の結晶形ＩＶ、又は結晶形ＩＶの結晶組成物を含む、結晶形ＩＶの医薬組成物を提供する。さらに医薬組成物は、薬学的に許容される担体、賦形剤及び／又は媒体を含んでいてもよいし含んでいなくてもよい。
【００５９】
本発明は、Ｘ線回折（ＸＲＤ）パターンにおいて、２θ＝７．１１６°，１４．１３７°，１５．９１１°，２２．２２３°，２４．６１０°の；典型的には、２θ＝７．１１
６°，１４．１３７°，１５．９１１°，２１．６９１°，２２．２２３°，２４．２１３°，２４．６１０°，２８．９８７°の回折ピークを有することを特徴とする、化合物２の結晶形Ｖを提供する。
【００６０】
本発明は、図１３に示すＸＲＰＤパターンを有する、化合物２の結晶形Ｖを提供する。
【００６１】
本発明のいくつかの実施態様において、前記化合物２の結晶形ＶのＸＲＰＤパターン解析データは下記表６に示される。
【表６】
2018537497.tif 000015
【００６２】
本発明のいくつかの実施態様において、前記化合物２の結晶形ＶのＤＳＣパターンは図１４に示される通りである。
【００６３】
本発明のいくつかの実施態様において、前記化合物２の結晶形ＶのＴＧＡパターンは図１５に示される通りである。
【００６４】
化合物２の結晶形Ｖは、非溶媒和物結晶又は溶媒和物結晶の形態で存在し得る。本明細書において溶媒和物とは、有機溶媒及び／又は水と対応する化合物により形成される溶媒和物を言及する。
【００６５】
本発明は、結晶形Ｖの結晶組成物を提供する。いくつかの実施態様において、結晶形Ｖは、前記結晶組成物の質量の５０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、最も好ましくは９５％以上にて存在する。
【００６６】
本発明は、治療有効量の結晶形Ｖ、又は結晶形Ｖの結晶組成物を含む、結晶形Ｖの医薬組成物を提供する。さらに医薬組成物は、薬学的に許容される担体、賦形剤及び／又は媒体を含んでいてもよいし含んでいなくてもよい。
【００６７】
本発明は、Ｘ線回折（ＸＲＤ）パターンにおいて、２θ＝５．７７５°，１１．７７０°，１４．４１５°，１５．７５３°，２２．５１８°，２６．６２３°の；典型的には、２θ＝５．７７５°，１１．７７０°，１４．４１５°，１５．７５３°，１７．１３２°，２０．９３９°，２２．５１８°，２６．６２３°の；より典型的には、２θ＝５．７７５°，１１．７７０°，１４．４１５°，１５．７５３°，１７．１３２°，２０．９３９°，２２．５１８°，２３．７４５°，２６．６２３°，３１．２９５°の回折ピークを有することを特徴とする、化合物２の結晶形ＶＩを提供する。
【００６８】
本発明は、図１６に示すＸＲＰＤパターンを有する、化合物２の結晶形ＶＩを提供する。
【００６９】
本発明のいくつかの実施態様において、前記化合物２の結晶形ＶＩのＸＲＰＤパターン解析データは下記表７に示される。
【表７】
2018537497.tif 000016
【００７０】
本発明のいくつかの実施態様において、前記化合物２の結晶形ＶＩのＤＳＣパターンは図１７に示される通りである。
【００７１】
本発明のいくつかの実施態様において、前記化合物２の結晶形ＶＩのＴＧＡパターンは図１８に示される通りである。
【００７２】
化合物２の結晶形ＶＩは、非溶媒和物結晶又は溶媒和物結晶の形態で存在し得る。本明細書において溶媒和物とは、有機溶媒及び／又は水と対応する化合物により形成される溶媒和物を言及する。
【００７３】
本発明は、結晶形ＶＩの結晶組成物を提供する。いくつかの実施態様において、結晶形ＶＩは、前記結晶組成物の質量の５０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９
０％以上、最も好ましくは９５％以上にて存在する。
【００７４】
本発明は、治療有効量の結晶形ＶＩ、又は結晶形ＶＩの結晶組成物を含む、結晶形ＶＩの医薬組成物を提供する。さらに医薬組成物は、薬学的に許容される担体、賦形剤及び／又は媒体を含んでいてもよいし含んでいなくてもよい。
【００７５】
本発明は下記式で表される化合物３を提供する。
【化８】
2018537497.tif 000017
【００７６】
本発明は、Ｘ線回折（ＸＲＤ）パターンにおいて、２θ＝６．３２５°，１２．６７７°，１５．８１３°，２１．３９５°，２２．５１９°，２７．１３３°の；典型的には、２θ＝６．３２５°，１２．６７７°，１３．２５１°，１５．８１３°，１８．９５４°，２１．３９５°，２２．５１９°，２５．１６１°，２７．１３３°の；より典型的には、２θ＝６．３２５°，１２．６７７°，１３．２５１°，１５．８１３°，１６．５６５°，１８．９５４°，２１．３９５°，２２．５１９°，２４．１１７°，２５．１６１°，２６．４０５°，２７．１３３°の回折ピークを有することを特徴とする、化合物３の結晶形ＶＩＩを提供する。
【００７７】
本発明は、図１９に示すＸＲＰＤパターンを有する、化合物３の結晶形ＶＩＩを提供する。
【００７８】
本発明のいくつかの実施態様において、前記化合物３の結晶形ＶＩＩのＸＲＰＤパターン解析データは下記表８に示される。
【表８】
2018537497.tif 000018
【００７９】
本発明のいくつかの実施態様において、前記化合物３の結晶形ＶＩＩのＤＳＣパターンは図２０に示される通りである。
【００８０】
本発明のいくつかの実施態様において、前記化合物３の結晶形ＶＩＩのＴＧＡパターンは図２１に示される通りである。
【００８１】
化合物３の結晶形ＶＩＩは、非溶媒和物結晶又は溶媒和物結晶の形態で存在し得る。本明細書において溶媒和物とは、有機溶媒及び／又は水と対応する化合物により形成される溶媒和物を言及する。
【００８２】
本発明は、結晶形ＶＩＩの結晶組成物を提供する。いくつかの実施態様において、結晶形ＶＩＩは、前記結晶組成物の質量の５０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、最も好ましくは９５％以上にて存在する。
【００８３】
本発明は、治療有効量の結晶形ＶＩＩ、又は結晶形ＶＩＩの結晶組成物を含む、結晶形ＶＩＩの医薬組成物を提供する。さらに医薬組成物は、薬学的に許容される担体、賦形剤及び／又は媒体を含んでいてもよいし含んでいなくてもよい。
【００８４】
本発明は下記式で表される化合物４を提供する。
【化９】
2018537497.tif 000019
【００８５】
本発明は、Ｘ線回折（ＸＲＤ）パターンにおいて、２θ＝５．８８９°，１１．００２°，１２．５１８°，１４．９０６°，１７．８２５°，２２．８１４°，２５．５５５°の；典型的には、２θ＝５．８８９°，７．１７３°，１１．００２°，１１．３９６°，１２．５１８°，１２．８９５°，１４．９０６°，１７．８２５°，２２．８１４°，２５．５５５°の；より典型的には、２θ＝５．８８９°，７．１７３°，１１．００２°，１１．３９６°，１２．５１８°，１２．８９５°，１４．９０６°，１６．１６９°，１７．８２５°，１９．８７５°，２１．５７４°，２２．８１４°，２５．５５５°，２７．２５４°の回折ピークを有することを特徴とする、化合物４の結晶形ＶＩＩＩを提供する。
【００８６】
本発明のいくつかの実施態様において、前記化合物４の結晶形ＶＩＩＩのＸＲＰＤパターン解析データは図２２に示される。
【００８７】
本発明のいくつかの実施態様において、前記化合物４の結晶形ＶＩＩＩのＸＲＰＤパターン解析データは下記表９に示される。
【表９】
2018537497.tif 000020
【００８８】
本発明のいくつかの実施態様において、前記化合物４の結晶形ＶＩＩＩのＤＳＣパターンは図２３に示される通りである。
【００８９】
本発明のいくつかの実施態様において、前記化合物４の結晶形ＶＩＩＩのＴＧＡパターンは図２４に示される通りである。
【００９０】
化合物４の結晶形ＶＩＩＩは、非溶媒和物結晶又は溶媒和物結晶の形態で存在し得る。本明細書において溶媒和物とは、有機溶媒及び／又は水と対応する化合物により形成される溶媒和物を言及する。
【００９１】
本発明は、結晶形ＶＩＩＩの結晶組成物を提供する。いくつかの実施態様において、結晶形ＶＩＩＩは、前記結晶組成物の質量の５０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、最も好ましくは９５％以上にて存在する。
【００９２】
本発明は、治療有効量の結晶形ＶＩＩＩ、又は結晶形ＶＩＩＩの結晶組成物を含む、結晶形ＶＩＩＩの医薬組成物を提供する。さらに医薬組成物は、薬学的に許容される担体、賦形剤及び／又は媒体を含んでいてもよいし含んでいなくてもよい。
【００９３】
本発明の目的は、また、ＰＩ３Ｋ受容体関連疾患の治療のための薬剤の製造における、化合物１、２、３及び４、又はそれらの医薬組成物の使用を提供することである。
【００９４】
本発明の別の目的は、ＰＩ３Ｋキナーゼ関連疾患の治療のための薬剤の製造における、結晶形Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩ、ＶＩＩＩ及びＩＸ、それらの結晶組成物、及びそれらの医薬組成物の使用を提供することである。
【００９５】
本発明のいくつかの実施態様において、ＰＩ３Ｋキナーゼ関連疾患は、結腸がん、胃がんなどの癌から選択される。
【００９６】
本発明の目的は、治療有効量の化合物１、２、３及び４、又はそれらの医薬組成物を、それらを必要とする患者に対して投与することを含む、ＰＩ３Ｋキナーゼ関連疾患を治療するための方法を提供することである。
【００９７】
本発明の別の目的は、治療有効量の本発明の結晶形Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩ、ＶＩＩＩ及びＩＸ、それらの結晶組成物、及びそれらの医薬組成物を、それらを必要とする患者に対して投与することを含む、ＰＩ３Ｋキナーゼ関連疾患を治療するための方法を提供することである。
【００９８】
本発明のいくつかの実施態様において、ＰＩ３Ｋキナーゼ関連疾患は、結腸がん、胃がんなどの癌から選択される。
【課題を解決するための手段】
【００９９】
定義及び説明
特に明記しない限り、本明細書で使用される用語及びフレーズ（語句）は、以下の意味を有することを意図している。特定のフレーズ又は用語は、特定の定義がない場合、不確実または不明瞭とみなされるべきではなく、常識に従って理解されるべきである。本明細書において商品名が現れる場合、対応する製品またはその有効成分を言及するものであることを意図している。
【０１００】
本発明の中間化合物は、下記に説明される特定の実施態様、他の化学合成方法と組み合わせて形成された実施態様、及び当業者に既知の均等物を含む、当業者に既知の種々の合成方法で製造され得る。好ましい実施態様としては、本発明の実施例が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【０１０１】
本発明の特定の実施態様における化学反応は、適切な溶媒中で遂行され、該溶媒は化学変化並びに本発明で必要とされる試薬及び材料に適していなければならない。本発明の化合物を得るために、本明細書のこれら実施態様に基づいて、当業者は、合成工程又は反応スキームを変更又は選択することがときに必要である。
【０１０２】
当該分野において任意の合成ルート計画に関して考慮すべき重要な要因は、反応性官能基（例えば本発明におけるアミノ基）のための適切な保護基の選択である。グリーン及びウッツ（有機合成における保護基、ワイリー・アンド・サンズ、１９９１）は、当技術分野の熟練した実践者にとって、この分野における権威である。本発明に引用される全ての参考文献は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０１０３】
以下の実施例により、本発明を具体的に説明するが、本発明がこれらの実施例に限定されることを意図するものではない。
【０１０４】
本発明において使用される全ての溶媒は市販されており、さらなる精製をすることなく使用される。反応は、一般に、不活性窒素ガス下で、無水溶媒中で行われる。プロトン核磁気共鳴データを、Ｂｒｕｋｅｒ  Ａｖａｎｃｅ  ＩＩＩ  ４００（４００ＭＨｚ）スペクトロメーターで記録し、ケミカルシフトを低磁場（ｌｏｗ  ｆｉｅｌｄ）にて、テトラメチルシランの（ｐｐｍ）として示す。マススペクトルをＡｇｉｌｅｎｔ  １２００  シリーズ  ｐｌｕｓ  ６１１０（＆１９５６Ａ）で測定した。ＬＳ／ＭＳ又はＳｈｉｍａｄｚｕ  ＭＳはＤＡＤを含む：ＳＰＤ−Ｍ２０Ａ（ＬＣ）及びＳｈｉｍａｄｚｕマイクロマス  ２０２０  デテクター。マススペクトロメーターは、ポジティブ又はネガティブモードで操作されるエレクトロスプレーイオン源（ＥＳＩ）を備える。
【０１０５】
Ｘ線回折スペクトルにおいて、結晶化合物から得られる回折パターンは、しばしば、特定の結晶形に特徴的であるが、バンドの相対強度（特に低角度における）は、結晶状態、粒子サイズ及び他の測定条件の変化から生じる優位な配向効果により変化し得る。それゆえ、回折ピークの相対強度は、目的とする結晶形に特徴的なものではない。結晶形が既知のものと同一であるかどうかを判断する際、注目すべきはピークの相対強度よりはむしろピークの相対的な位置である。さらに、与えられた任意の結晶形に関して、ピークの位置にわずかな誤差が存在し得、これは結晶学の分野でもよく知られている。例えば、ピークの位置は、試料の解析中の温度変化、試料の移動、又は装置のキャリブレーションにより変化し得、２θ値の測定誤差は、ときに約±０．５°、好ましくは約±０．３°、より好ましくは約±０．２°である。したがって、各結晶形の構造を決定する際、そのような誤差を考慮すべきであり、誤差を含めた２θ値もまた本発明の範囲内である。ＸＲＤパターンにおいて、ピークの位置は、通常、２θ角又は面間隔ｄで表され、これらの間に単純な変換式が存在する：ｄ＝λ／２ｓｉｎθ、式中、ｄは面間隔を表し、λは入射Ｘ線の波長を表し、θは回折角を表す。同種の化合物の同じ結晶形に関して、ＸＲＤスペクトルにおけるピークの位置は全体的に類似し、相対強度はより大きな誤差を有し得る。混合物の同定において、含有量の減少といった要因により、回折線の一部が失われ得る点も指摘されるべきである。この場合、１つのバンドであっても所定の結晶に特徴的であり得、高純度試料で観察されるように全てのバンドを頼りにする必要はない。
【０１０６】
薬物の結晶形を調製する際、薬物分子と溶媒分子が互いに接触している場合には、溶媒分子と化合物分子が共晶を形成し、外部条件及び内部要因により固体にとどまり、それにより溶媒和物を、例えば化学量論的及び非化学量論的溶媒和物を形成することは避けられないということを把握すべきである。そのような溶媒和物は、本発明の範囲内に包含される。
【０１０７】
本発明により調製される化合物２（塩酸塩）における塩化物イオンの化学量論は、イオ
ンクロマトグラフィーにより決定され得る。使用される装置は、８８３  Ｂａｓｉｃ  ＩＣ  ｐｌｕｓ  1であり；選択されるカラムは  Ｍｅｔｒｏｓｅｐ  Ａ  Ｓｕｐｐ  ５−１５０／４．０であり；流量は０．７００ｍＬ／分であり；ランタイムは１０分である。
【０１０８】
本発明は、以下の略語を採用する：ＤＣＭはジクロロメタンを意味し；ＰＥは石油エーテルを意味し；ＥＡは酢酸エチルを意味し；ＤＭＦはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを意味し；ＤＭＳＯはジメチルスルホキシドを意味し；ＴＨＦはテトラヒドロフランを意味し；ＭｅＯＨはメタノールを意味し；ＮＭＰはＮ−メチルピロリドンを意味し；Ｅｔ３Ｎはトリエチルアミンを意味し；４−ＤＭＡＰは４−ジメチルアミノピリジンを意味し；ＬｉＯＨは水酸化リチウムを意味し；Ｃｓ２ＣＯ３は炭酸セシウムを意味し；Ｋ２ＣＯ３は炭酸カリウムを意味し；ＰＰｈ３はトリフェニルホスフィンを意味し；Ｐｄ（ＰＰｈ３）４はテトラ−トリフェニルホスフィンパラジウムを意味し；Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２は１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンパラジウムクロリドを意味する。
【０１０９】
本発明におけるＸ線粉末回折装置（ＸＲＰＤ）法：
装置モデル：ブルカー  Ｄ８  アドバンス  Ｘ線回折装置
試験条件：詳細なＸＲＰＤパラメータは以下の通りである：
Ｘ線発生器（発生源）：Ｃｕ、ｋα（λ＝１．５４０５６Å）
管電圧（チューブ電圧）：４０ｋＶ、管電流（チューブ電流）：４０ｍＡ
散乱スリット：０．６０ｍｍ
検出スリット：１０．５０ｍｍ
散乱防止スリット：７．１０ｍｍ
スキャンレンジ：４−４０ｄｅｇ（°）
ステップレングス：０．０２ｄｅｇ（°）
速度：０．１Ｓ（秒）
試料プレートの回転速度：１５ｒｐｍ
【０１１０】
本発明における示差走査熱量計（ＤＳＣ）法：
装置モデル：ＴＡ  Ｑ２０００  示差走査熱量計
試験条件：試料（０．５〜１ｍｇ）を取り、試験用ＤＳＣアルミニウムパンに載せ、試験は室温〜３００℃、昇温速度１０℃／分。
【０１１１】
本発明における熱重量測定装置（ＴＧＡ）法：
装置モデル：ＴＡ  Ｑ５０００  ＩＲ  熱重量測定装置
試験条件：試料（２〜５ｍｇ）を取り、試験用ＴＧＡプラチナパンに載せ、試験は室温〜３００℃、昇温速度１０℃／分。
【発明の効果】
【０１１２】
技術的効果
本発明により提供される、化合物２、３、及び４、化合物１の結晶形ＩＸ、化合物２の結晶形Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ及びＶＩ、化合物３の結晶形ＶＩＩ、及び化合物４の結晶形ＶＩＩＩは、事実上安定であり、良好な溶解性と優れた吸湿性を有し、薬剤として将来性有望である。
【０１１３】
本発明により提供される、化合物１及びそれらの中間体の合成に関するプロセスは、原材料が安価であり入手容易であり、使用する試薬の高い毒性、激しい反応条件、分離及び精製が困難であり、工業化が容易でないといった不利点を克服する。
【図面の簡単な説明】
【０１１４】
【図１】図１は、Ｃｕ−Ｋα線を用いた化合物２の結晶形ＩのＸＲＰＤパターンである。
【図２】図２は、化合物２の結晶形ＩのＤＳＣパターンである。
【図３】図３は、化合物２の結晶形ＩのＴＧＡパターンである。
【図４】図４は、Ｃｕ−Ｋα線を用いた化合物２の結晶形ＩＩのＸＲＰＤパターンである。
【図５】図５は、化合物２の結晶形ＩＩのＤＳＣパターンである。
【図６】図６は、化合物２の結晶形ＩＩのＴＧＡパターンである。
【図７】図７は、Ｃｕ−Ｋα線を用いた化合物２の結晶形ＩＩＩのＸＲＰＤパターンである。
【図８】図８は、化合物２の結晶形ＩＩＩのＤＳＣパターンである。
【図９】図９は、化合物２の結晶形ＩＩＩのＴＧＡパターンである。
【図１０】図１０は、Ｃｕ−Ｋα線を用いた化合物２の結晶形ＩＶのＸＲＰＤパターンである。
【図１１】図１１は、化合物２の結晶形ＩＶのＤＳＣパターンである。
【図１２】図１２は、化合物２の結晶形ＩＶのＴＧＡパターンである。
【図１３】図１３は、Ｃｕ−Ｋα線を用いた化合物２の結晶形ＶのＸＲＰＤパターンである。
【図１４】図１４は、化合物２の結晶形ＶのＤＳＣパターンである。
【図１５】図１５は、化合物２の結晶形ＶのＴＧＡパターンである。
【図１６】図１６は、Ｃｕ−Ｋα線を用いた化合物２の結晶形ＶＩのＸＲＰＤパターンである。
【図１７】図１７は、化合物２の結晶形ＶＩのＤＳＣパターンである。
【図１８】図１８は、化合物２の結晶形ＶＩのＴＧＡパターンである。
【図１９】図１９は、Ｃｕ−Ｋα線を用いた化合物３の結晶形ＶＩＩのＸＲＰＤパターンである。
【図２０】図２０は、化合物３の結晶形ＶＩＩのＤＳＣパターンである。
【図２１】図２１は、化合物３の結晶形ＶＩＩのＴＧＡパターンである。
【図２２】図２２は、Ｃｕ−Ｋα線を用いた化合物４の結晶形ＶＩＩＩのＸＲＰＤパターンである。
【図２３】図２３は、化合物４の結晶形ＶＩＩＩのＤＳＣパターンである。
【図２４】図２４は、化合物４の結晶形ＶＩＩＩのＴＧＡパターンである。
【図２５】図２５は、Ｃｕ−Ｋα線を用いた化合物１の結晶形ＩＸのＸＲＰＤパターンである。
【図２６】図２６は、化合物１の結晶形ＩＸのＤＳＣパターンである。
【図２７】図２７は、化合物１の結晶形ＩＸのＴＧＡパターンである。
【発明を実施するための形態】
【０１１５】
本発明の内容をよりよく理解するために、以下の具体例を組み合わせてさらに説明するが、本発明の内容を何ら限定するものではない。
【実施例】
【０１１６】
参照例１：化合物５の製造
【化１０】
2018537497.tif 000021
【０１１７】
メチル２−（ベンジルオキシ）酢酸（２）の製造
【化１１】
2018537497.tif 000022
ジクロロメタン（９６０ｍＬ）を３．０Ｌの三ツ口丸底フラスコに加え、メタノール（１９７．６ｇ、２４７ｍＬ）及びピリジン（３０４．７８ｍＬ、３１１ｍｏｌ）を加え、そして混合物を氷浴で０℃まで冷却した。窒素ガスの保護下で、２−（ベンジルオキシ）アセチルクロリド（３００ｇ、１．５４ｍｏｌ）を丸底フラスコに滴下して加え、添加の間、温度を０−１０℃に制御した。添加後、氷浴を除去し、反応溶液を２０℃で１．５時間撹拌した。サンプリング及び検出後、ＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル＝５／１）は反応が完了したことを示した。水（１．５Ｌ）を丸底フラスコに加え、１０分間撹拌し、層を分離させて、有機層を回収した；その後有機層を１．０ｍｏｌ／Ｌの希釈塩酸（９００ｍＬ×２）で洗浄し、層を分離させて、有機層を回収した；有機層をさらに２０％炭酸ナトリウム溶液（６００ｍＬ）で洗浄し、層を分離させ、有機層を回収し、無水硫酸ナトリウム（１５０ｇ）で乾燥し、ろ過し、ろ液を減圧下で濃縮して、無色の油状生成物を得た（２８４ｇ、１．５３ｍｏｌ、収率９７％、純度９９％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）ｐｐｍ  ７．３７−７．３２（ｍ，５Ｈ），４．６３（ｓ，２Ｈ），４．１１（ｓ，２Ｈ），３．７６（ｓ，３Ｈ）；ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：２０２．８（Ｍ＋２３）．
【０１１８】
メチル２−（ベンジルオキシ）−３−（ジメチルアミノ）アクリレート（３）の製造
【化１２】
2018537497.tif 000023
メチル２−（ベンジルオキシ）酢酸（５０６ｇ、２．７２ｍｏｌ）を３Ｌ丸底フラスコに加え、ｔ−ブトキシビス（ジメチルアミノ）メタン（５６９ｇ、３．２６ｍｏｌ）を加え、反応温度を９０℃−１００℃に制御して、１４時間反応させた。サンプリング及び検出後、ＴＬＣ（ＰＥ／ＥＡ＝５／１）は反応が完了したことを示した。反応溶液を６０℃
に冷却し、オイルポンプを用いて濃縮し、黄色の油状生成物（６９９ｇ、粗生成物）を得、これを次の工程に直接使用した。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）ｐｐｍ  ７．４４−７．２（ｍ，２Ｈ），７．３７−７．２８（ｍ，３Ｈ），６．８７（ｓ，１Ｈ），４．７２（ｓ，２Ｈ），３．７３（ｓ，３Ｈ），２．９８（ｓ，６Ｈ）．
【０１１９】
３−（ベンジルオキシ）−７−ブロモ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（４）の製造
【化１３】
2018537497.tif 000024
メチル２−（ベンジルオキシ）−３−（ジメチルアミノ）アクリレート（３１８ｇ、１．３５ｍｏｌ）を５Ｌ丸底フラスコに加え、酢酸（３Ｌ）及び２−アミノ−５−ブロモピリジン（２４６ｇ、１．３５ｍｏｌ）をそれらに加えた。反応溶液を温度を１２０℃−１３０℃に制御し、撹拌しながら、１４時間反応させた。サンプリング及び検出後、ＬＣＭＳは反応がほぼ完了したことを示した。反応溶液を６０℃に冷却し、濃縮し、蒸発させて溶媒を除去し、酢酸エチル（７５０ｍＬ）を加え、１０分間撹拌し、ろ過した。得られたろ過ケーキに酢酸エチル（５００ｍＬ）を加え、１０分間撹拌し、ろ過した。さらに得られたろ過ケーキを酢酸エチル（１５０ｍＬ）でリンスし、スピンドライ（脱水）して、黄色の固体化合物を得た（３１９ｇ、純度９５％、収率６７．７９％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）ｄ＝９．１３（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），８．０５（ｓ，１Ｈ），７．５６（ｄｄ，Ｊ＝２．０，９．６Ｈｚ，１Ｈ），７．４６−７．４２（ｍ，３Ｈ），７．３７−７．３３（ｍ，３Ｈ），５．３０（ｓ，２Ｈ）；ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：３３２．６（ｉｓｏｔｏｐｅ  Ｍ＋１）．
【０１２０】
７−ブロモ−３−ヒドロキシ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（５）の製造
【化１４】
2018537497.tif 000025
トリフルオロ酢酸（１．２Ｌ）を３Ｌ丸底フラスコに加え、３−（ベンジルオキシ）−７−ブロモ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（３１３ｇ、８９７．９ｍｍｏｌ）をそれらに加え、反応溶液を温度を８０℃−９０℃に制御し、撹拌しながら、２時間反応させた。サンプリング及び検出後、ＬＣＭＳは反応がほぼ完了したことを示した。反応溶液を６０℃に冷却し、濃縮し、蒸発させて溶媒を除去し、酢酸エチル（１．２Ｌ）を加え、６０分間撹拌し、ろ過した。得られたろ過ケーキに酢酸エチル（４００ｍＬ）を加え、６０分間撹拌し、ろ過した。さらに得られたろ過ケーキを減圧下、４０℃で７０時間乾燥し、黄色の固体化合物を得た（１９１ｇ、含量９５．６％、純度１００％、収率８４．５９％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）ｄ＝９．９２（ｂｒ，１Ｈ），８．９０（ｓ，１Ｈ），８．０７（ｓ，１Ｈ），７．７３（ｄｄ，Ｊ＝２．０，９．６Ｈｚ，１Ｈ），７．５３（ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ）；ＭＳ  ｍ／ｚ：２４０．９（Ｍ＋１），２
４２．８（ｉｓｏｔｏｐｅ  Ｍ＋１）．
【０１２１】
例１：化合物１の製造
７−ブロモ−３−（２−（ジメチルアミノ）エトキシ）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（６）の製造
【化１５】
2018537497.tif 000026
７−ブロモ−３−ヒドロキシ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（３００ｇ、１．２ｍｏｌ）及びＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３Ｌ）を丸底フラスコに加え、反応装置の温度を９５℃−１００℃に調節した。炭酸カリウム（４９７．４ｇ、３．６ｍｏｌ）を反応フラスコに入れ、３０分間撹拌した。２−ジメチルアミノエチルクロリド塩酸塩を３つに分けて、以下の通り供給した：２−ジメチルアミノエチルクロリド塩酸塩（７０．６ｇ、０．４９ｍｏｌ）を反応フラスコに入れ、３０分間撹拌した；２−ジメチルアミノエチルクロリド塩酸塩（７０．６ｇ、０．４９ｍｏｌ）を反応フラスコに入れ、３０分間撹拌した；そして２−ジメチルアミノエチルクロリド塩酸塩（７０．６ｇ、０．４９ｍｏｌ）を反応フラスコに入れ、２−２．５時間撹拌した。
【０１２２】
反応完了後（ＨＰＬＣを用いてモニターした）、反応装置の温度を１５±５℃に調節した。反応溶液を水（１５Ｌ）に加え、その後ジクロロメタン（４．５Ｌ×４）で抽出した。有機層を合わせて、減圧下、３５±５℃にて、一定重量まで濃縮した。濃縮後の得られた生成物に、ｎ−ヘプタン（１．８Ｌ）を加え、１５±５℃で１５−１６時間撹拌した。ろ過後、得られたろ過ケーキを、減圧下、３５±５℃で回転蒸発（ロータリーエバポレート）し、緑色の固体生成物を得た（２８０ｇ、収率７４．０９％、純度９８．２２％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）ｄ＝２．３５（ｓ，６Ｈ），２．７８（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），４．２５（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），７．４５（ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ），７．５５（ｄｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，２Ｈｚ，１Ｈ），８．１３（ｓ，１Ｈ），９．０９（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ）；ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：３１２（ｉｓｏｔｏｐｅ  Ｍ＋１）．
【０１２３】
７−（５−アミノ−６−メトキシピリミジン−３−イル）−３−（２−（ジメチルアミノ）エトキシ）−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（７）の製造
【化１６】
2018537497.tif 000027
７−ブロモ−３−（２−（ジメチルアミノ）エトキシ）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２７５ｇ、０．８７ｍｏｌ）、２−メトキシ−５−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ピリジン−３−アミン（２４９ｇ、０．９６ｍｏｌ）、１，４−ジオキサン（２．７５Ｌ）、水（５５０ｍＬ）、及び炭酸カリウム（３６２ｇ、２．６２ｍｏｌ）を、次々に反応フラスコに加えた；３０−６０分間バブリングさせた後、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（１９．２ｇ、２６ｍｍｏｌ
）を反応フラスコに加えて、反応フラスコを窒素ガスで５回置換した；反応フラスコの温度を９５±５℃に調節し、この温度で２−２．５時間、混合物を撹拌した。反応完了後（ＨＰＬＣを用いてモニターした）、反応装置の温度を１５±５℃に調節した。反応溶液をｎ−ヘプタン（６．６Ｌ）に加え、温度を１５±５℃に調節した後、この温度で２−２．５時間、混合物を撹拌した。ろ過後、得られたろ過ケーキを、減圧下、４５±５℃でスピンドライ（脱水）した。得られた残留物にジクロロメタン／メタノール（Ｖ／Ｖ＝８／１、２．７５Ｌ）を加え、１５±５℃で３０−６０分間撹拌し、ろ過して、ろ過ケーキを得た；ろ過ケーキにジクロロメタン／メタノール（Ｖ／Ｖ＝８／１、１．３７５Ｌ）を加え、１５±５℃で３０−６０分間撹拌し、再びろ過して、別のろ過ケーキを得、これをジクロロメタン／メタノール（Ｖ／Ｖ＝８／１、１．３７５Ｌ）でリンスした。得られた２つのろ液を合わせ、減圧下、４５±５℃で濃縮した。濃縮残留物にジクロロメタン／メタノール（Ｖ／Ｖ＝２／１、４．１２５Ｌ）を加え、撹拌して溶解した。得られた溶液にチオシアヌル酸（１３．９３ｇ）及び活性炭素（２７．５ｇ）を加え、１５±５℃にて１５−１６時間撹拌し、珪藻土（１３７．５ｇ）でろ過し、得られたろ過ケーキをジクロロメタン／メタノール（Ｖ／Ｖ＝２／１、１．３７５Ｌ×２）でリンスした。ろ液を減圧下、４５±５℃で濃縮した。濃縮残留物にメタノール（１．１Ｌ）を加え、１５±５℃で２−３時間撹拌し、ろ過し、得られたろ過ケーキをメタノール（１３７．５ｍＬ）でリンスし、減圧下、４５±５℃で回転蒸発させて、黄色の固体生成物を得た（２７０ｇ、純度９７．９８％、収率８４．２４％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）ｄ＝８．９２（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ），８．２４（ｓ，１Ｈ），８．０４（ｄｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，２Ｈｚ，１Ｈ），７．８０（ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ，１Ｈ），７．６７（ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ），７．２７（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），５．２４（ｓ，２Ｈ），４．１９（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），３．９３（ｓ，３Ｈ），２．６６（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），２．２５（ｓ，６Ｈ）；ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：３５６（Ｍ＋１）．
【０１２４】
化合物１の製造
【化１７】
2018537497.tif 000028
７−（５−アミノ−６−メトキシピリミジン−３−イル）−３−（２−ジメチルアミノ）エトキシ）−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２６５ｇ、０．７２ｍｏｌ）及びピリジン（２．６５Ｌ）を反応フラスコに加えた；５±５℃に冷却した後、２−クロロ−４−フルオロベンゼンスルホニルクロリド（２５２ｇ、１．０８ｍｏｌ）のピリジン（５０４ｍＬ）溶液を滴下して反応フラスコに加えた；添加が完了した際、反応溶液を温度３０℃−３５℃に調節し、この温度で２−３時間撹拌した。反応完了後（ＨＰＬＣを用いてモニターした）、反応溶液を減圧下、４５±５℃で、化合物７の２．５−３倍の重さまで濃縮した。濃縮生成物にジクロロメタン（３．７Ｌ）を加え、２５±５℃で３０分間撹拌し、減圧下、４５±５℃で、化合物７の２．５−３倍の重さまで濃縮した。濃縮生成物にジクロロメタン（３．７Ｌ）を加え、２５±５℃で２−３時間スラリーした。ろ過後、ろ過ケーキを回収し、４５±５℃で、化合物７の１．３−１．７倍の重さまで回転蒸発させた。回転蒸発した生成物にジクロロメタン（１．８５Ｌ）を加え、２５±５℃で２
−３時間スラリーした。ろ過後、ろ過ケーキを回収し、４５±５℃で、化合物７の１．２−１．４倍の重さまで回転蒸発し、その後４５℃で３−４時間、化合物７の１．２−１．３倍の重さまで真空乾燥した。得られた粗生成物にアセトニトリル（２．１２Ｌ）を加え、５５±５℃で１５−１６時間スラリーした。スラリー後の溶液を２５±５℃に冷却し、ろ過し、得られたろ過ケーキを回収し、４５±５℃で、化合物７の１．１−１．２倍の重さまで回転蒸発させた。回転蒸発した生成物にアセトニトリル（１．９Ｌ）を加え、５５±５℃で１５−１６時間スラリーした。スラリー後の溶液を２５±５℃に冷却し、ろ過し、得られたろ過ケーキを４５±５℃で、化合物７の１．０−１．１倍の重さまで回転蒸発させた。回転蒸発した生成物にメタノール（５．３Ｌ）及び活性炭素（５３ｇ）を加え、７５±５℃で２−３時間撹拌した。ろ過を珪藻土（１３２ｇ）で実施し、得られたろ過ケーキを回収し、ジクロロメタンとメタノールの混合溶媒（Ｖ／Ｖ＝４／１、７．９５Ｌ）を加え、２５±５℃で３０−６０分間撹拌した。ろ過を再度実施し、２つの得られたろ液を合わせて、４５±５℃で化合物７の１．０１−１．０３倍の重さまで濃縮した。濃縮生成物に水（４．２４Ｌ）及びエタノール（１．０６Ｌ）を加え、２５±５℃で５−１０分間撹拌し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（１．３Ｌ）を滴下して加え、更に２−３時間撹拌した。ろ過後、ろ過ケーキを、４５±５℃で、化合物７の１．１−１．３倍の重さまで回転蒸発させた。回転蒸発した生成物にエタノール（１．５９Ｌ）を加え、７５±５℃で１５−１６時間スラリーした。スラリー後の溶液を２５±５℃に冷却し、ろ過し、ろ過ケーキを回収し、４５±５℃で、化合物７の０．８９−０．９２倍の重さまで回転蒸発させた。回転蒸発した生成物にエタノール（１．５９Ｌ）を加え、７５±５℃で１５−１６時間スラリーした。スラリー後の溶液を２５±５℃に冷却し、ろ過し、得られたろ過ケーキを回収し、４５±５℃で、化合物７の０．８７−０．９倍の重さまで回転蒸発させた。回転蒸発した生成物に水（２．３５Ｌ）を加え、４５±５℃で６１±１時間撹拌した。混合溶液を２５±５℃に冷却し、ろ過した。得られたろ過ケーキを回収し、水（２．３５Ｌ）を加え、２５±５℃で２−３時間撹拌し、ろ過した。得られたろ過ケーキを回収し、６０℃で１５−１６時間真空乾燥し、６０メッシュシーブで篩分けし、淡黄色の固体生成物を得た（１９０ｇ、純度９８．３３％、収率４７．３６％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６−ｄ）ｄ＝２．９６（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），３．７２（ｓ，３Ｈ），４．２７（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），７．３２（ｔｄ，Ｊ＝８．８，２．８Ｈｚ，１Ｈ），７．６０（ｄｄ，Ｊ＝８．４，２．４Ｈｚ，１Ｈ），７．７０（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），７．７５（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．９５−８．０５（ｍ，２Ｈ），８．１５（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ），８．２７（ｓ，１Ｈ），８．８５（ｓ，１Ｈ）；ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：５４８（Ｍ＋１）．
【０１２５】
例２：化合物１の結晶形ＩＸの製造
７−（５−アミノ−６−メトキシピリミジン−３−イル）−３−（２−（ジメチルアミノ）エトキシ）−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２．５ｇ、６．７５ｍｍｏｌ、１．０当量）をピリジン（２５ｍＬ）に溶解し、２−クロロ−４−フルオロベンゼンスルホニルクロリド（２．０１ｇ、８．７８ｍｍｏｌ、１．３当量）を、０℃にて滴下して加え、１０℃−２０℃で１６時間撹拌した。反応完了後、溶媒をスピンドライして除き、粗生成物を得た。粗生成物をカラム（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ：１０／１−４／１）で精製した。黄色の固体生成物を得た（２．４ｇ、純度９８．３１％、収率６３．７９％）。上記黄色固体（１．３ｇ、２．３７ｍｍｏｌ）を分取ＨＰＬＣ（中性）で分離した。分取ＨＰＬＣ（中性）での分離からの液体をＤＣＭ（５００ｍＬ×３）で抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウム（１００ｇ）で乾燥し、ろ過し、得られたろ液をスピンドライして、白色固体生成物である、化合物１の結晶形ＩＸを得た（９７０ｍｇ、１．７５ｍｍｏｌ、純度９９％、収率７３．９４％）。
【０１２６】
例３：化合物２の結晶形Ｉの製造
７−（５−アミノ−６−メトキシピリミジン−３−イル）−３−（２−（ジメチルアミ
ノ）エトキシ）−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２９．０ｇ、８１．６０ｍｍｏｌ、１．０当量）及びピリジン（２９０ｍＬ）を、撹拌機が備えられた１．０Ｌの三ツ口丸底フラスコＲ１に加えた。Ｒ１を氷浴に入れ、０−５℃に冷却した。２−クロロ−４−フルオロベンゼンスルホニルクロリド（２４．３０ｇ、１０６．０８ｍｍｏｌ、１．３当量）のピリジン（６０ｍＬ）溶液をＲ１に約３０分かけて滴下して加え、反応溶液を自然に２０℃まで温め、１６時間撹拌しながら反応させた。反応完了後、反応溶液を減圧下で濃縮してピリジンを除去し、８０ｇの赤色固体粗生成物を得た。上記の粗生成物６４ｇを取り、１．０Ｌ丸底フラスコＲ２に入れ、ジクロロメタン（３５０ｍＬ）をＲ２に加えた。Ｒ２を１５℃で２時間撹拌し、ろ過し、得られたろ過ケーキを回収して、乾燥し、淡赤色固体を得た（３３．４ｇ、収率７７％、純度９９．４％）。上記の固体３０ｇを取り、１Ｌの丸底フラスコＲ３に入れ、メタノール（６００ｍＬ）及び活性炭素（６ｇ、２０％）をＲ３に加えた。混合物を７０℃のオイルバスに入れ、１２時間撹拌した。混合物を珪藻土（１５ｇ）で温かいうちにろ過した。ろ液を回収し、スピンドライして黄色固体生成物を得た（２２．６ｇ、純度９７．４７％）。アセトニトリル（１５０ｍＬ）を上記固体に加えた；得られた混合物を８５℃のオイルバスにて１２時間撹拌し、２０℃に冷却し、ろ過した；得られたろ過ケーキを回収し、乾燥して、白色固体にて、表題生成物である、化合物２の結晶形Ｉを得た（２１ｇ、収率４４．３％、純度１００％）。イオンクロマトグラフィーから決定した化合物２の塩素イオン対化合物１の塩素イオンのモル比は１：１であった。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６−ｄ）ｄ＝２．９１（ｓ，６Ｈ），３．５３（ｔ，２Ｈ），３．７１（ｓ，３Ｈ），４．５２（ｔ，２Ｈ），７．３８（ｍ，１Ｈ），７．７７（ｍ，２Ｈ），７．９７（ｍ，２Ｈ），８．１６（ｍ，１Ｈ），８．４５（ｍ，２Ｈ），８．９８（ｓ，１Ｈ）．
【０１２７】
例４：化合物２の結晶形ＩＩの製造
約５０ｍｇの化合物２の結晶形Ｉを取り、０．４ｍＬのアセトンを加え、懸濁液を形成した。懸濁液試料をミキサーに設置し、一定温度（４０℃）で２日間振盪した（遮光した（光から保護した））。残留固体を遠心分離し、真空乾燥オーブンにて４０℃で一晩乾燥し、化合物２の結晶形ＩＩを得た。
【０１２８】
例５：化合物２の結晶形ＩＩＩの製造
結晶形ＩＩＩの製造手順は、溶媒であるアセトンをイソプロパノールに替えた以外は、結晶形ＩＩのものと同一であった。化合物２の結晶形ＩＩＩを得た。
【０１２９】
例６：化合物２の結晶形ＩＶの製造
結晶形ＩＶの製造手順は、溶媒であるアセトンを酢酸エチルに替えた以外は、結晶形ＩＩのものと同一であった。化合物２の結晶形ＩＶを得た。
【０１３０】
例７：化合物２の結晶形Ｖの製造
化合物２の結晶形Ｉ（２．０ｇ、３．４２ｍｍｏｌ）を５００ｍＬの一つ口フラスコＲ１に入れ、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（２／１、２００ｍＬ）を加えて撹拌しながら固体を完全に溶解させた。溶液を４０℃で減圧下に晒して溶媒を除去し、２．０ｇの黄色固体を得た；該固体１ｇを取り、５０ｍＬの一つ口フラスコに入れ、続いてエタノール（６ｍＬ）を加えた；得られた混合物をオイルバスに入れ８０℃で１２時間撹拌し、その後加熱を停止した。混合物を撹拌しながら２０℃に冷却し、ろ過し、ろ過ケーキを乾燥し、化合物２の結晶形Ｖを得た。
【０１３１】
例７：化合物２の結晶形ＶＩの製造
７−（５−アミノ−６−メトキシピリミジン−３−イル）−３−（２−ジメチルアミノ）エトキシ）−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（７０．０ｇ、２２２．９０
ｍｍｏｌ、１．０当量、純度９９．４％）及びピリジン（７００ｍＬ）を、メカニカルスターラーが備えられた２．０Ｌの三ツ口丸底フラスコＲ１に加え、Ｒ１を氷浴に入れ、０−５℃に冷却した。２−クロロ−４−フルオロベンゼンスルホニルクロリド（７０．８１ｇ、２９３．６７ｍｍｏｌ、１．５当量、純度９５％）のピリジン（１４０ｍＬ）溶液をＲ１に約３０分かけて滴下して加えた。Ｒ１を３０℃のオイルバスに入れ、２時間撹拌しながら反応させた。反応完了後、反応溶液を減圧下で濃縮して溶媒であるピリジンを除去し、赤色固体の粗生成物（２００ｇ）を得た。残留物にジクロロメタン（１．０Ｌ）を加え、２０℃で３時間撹拌した。ろ過後、ろ過ケーキを回収した。アセトニトリル（１．２Ｌ）をろ過ケーキに加えた；得られた反応溶液を８５℃で１２時間還流し、２０℃に冷却し、ろ過した；別のろ過ケーキを回収し、乾燥して固体（９２ｇ）を得た。ろ過ケーキの固体にメタノール（２Ｌ）及び活性炭素（１４ｇ）を加え、撹拌しながら３時間還流し、温かいうちに珪藻土（４０ｇ）でろ過し、５００ｍＬでリンスした。ろ液を減圧下４０℃でスピンドライし、固体（８３ｇ）を得た。得られた固体にアセトニトリル（８００ｍＬ）を加え、混合物を８５℃で一晩還流し、２０℃に冷却してろ過し、得られたろ過ケーキを乾燥して白色固体７７ｇを得た。７２ｇの白色固体を取り、メタノールに完全に溶解し、スピンドライし、化合物２の結晶形ＶＩを得た。
【０１３２】
例８：化合物３の結晶形ＶＩＩの製造
化合物１（９９７．３４ｍｇ、１．８２ｍｍｏｌ、１．００当量）を５ｍＬのガラス瓶に入れ、エタノール／水（７．５ｍＬ／２．５ｍＬ）を加え、室温（１５℃）で０．１時間撹拌したが、大量の固体は溶解しなかった。マレイン酸（２１１．２５ｍｇ、１．８２ｍｍｏｌ、１．００当量）を混合物に加え、室温（１５℃）で１８時間撹拌し、固体を完全に溶解し、黄色溶液を形成した。得られた溶液を減圧下４０℃で２ｍＬ体積になるまでスピンドライし、ＥＡ（２０ｍＬ）を加え、０．５時間撹拌し、ろ過した；形成されたろ過ケーキを減圧下４０℃ででスピンドライし、化合物３の結晶形ＶＩＩを得た。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）ｄ  ｐｐｍ  ２．９４（ｓ，６Ｈ）３．５１−３．５６（ｍ，２Ｈ）３．７１（ｓ，３Ｈ）４．３６−４．５９（ｍ，２Ｈ）６．０３（ｓ，２Ｈ）７．１８−７．４８（ｍ，１Ｈ）７．６５−７．９０（ｍ，２Ｈ）７．９２−８．０９（ｍ，２Ｈ）８．１７（ｄｄ，Ｊ＝９．２９，１．７６Ｈｚ，１Ｈ）８．３５−８．５５（ｍ，２Ｈ）８．９９（ｓ，１Ｈ）．
【０１３３】
例９：化合物４の結晶形ＶＩＩＩの製造
化合物１（９９７．３４ｍｇ、１．８２ｍｍｏｌ、１．００当量）を５ｍＬのガラス瓶に入れ、エタノール／水（７．５ｍＬ／２．５ｍＬ）を加え、室温（１５℃）で０．５時間撹拌したが、大量の固体が溶解しなかった。クエン酸（３８２．４５ｍｇ、１．８２ｍｍｏｌ、１．００当量）を混合物に加え、室温（１５℃）で１８時間撹拌し、反応ビン中に乳白色スラリーを得た。得られた混合溶液を減圧下４０℃で２ｍＬ体積になるまでスピンドライし、ＥＡ（２０ｍＬ）を加え、０．５時間撹拌し、ろ過した；形成されたろ過ケーキを減圧下４０℃でスピンドライし、化合物４の結晶形ＶＩＩＩを得た。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）ｄ  ｐｐｍ  ２．５６−２．６８（ｍ，４Ｈ）２．７６（ｓ，６Ｈ）３．３１（ｍ，２Ｈ）３．７２（ｓ，３Ｈ）４．３７−４．４０（ｍ，２Ｈ）７．３５−７．３７（ｍ，１Ｈ）７．７１−７．７８（ｍ，２Ｈ）７．９１−７．９５（ｍ，１Ｈ）７．９５−８．０９（ｍ，１Ｈ）８．１１−８．１３（ｍ，１Ｈ）８．３６−８．３７（ｍ，２Ｈ）８．９６（ｄ，Ｊ＝１．６，１Ｈ）．
【０１３４】
試験例１：異なる溶媒における化合物１の結晶形ＩＸの安定性試験
適切な量にて化合物１の結晶形ＩＸのいくつかの試料を取り、夫々に０．３−０．４ｍＬの下記表に示す単一溶媒又は混合溶媒を加え、４０℃で撹拌した。２日間撹拌後、試料を遠心分離した。試料中の固体を回収し、その結晶状態をＸＲＰＤで検出した。結果を表１０に示す。
【表１０】
2018537497.tif 000029
【０１３５】
試験例２：高温、多湿及び強光条件下の、化合物１の結晶形ＩＸの固体状態の安定性試験
約１０ｍｇの化合物１の結晶形ＩＸを量り取り、ガラスサンプル瓶の底に置き、薄層を形成させた。配置した試料に関して、６０℃条件下、及び室温／９２．５ＲＨ条件下で、瓶の上部をアルミホイルでカバーし、アルミホイルにいくつかの穴を開け、試料が環境中の空気に完全にさらされるように保証した；強光（５Ｋｌｘ）下に配置した試料に関して、スクリューキャップで瓶を密封した。結晶形ＩＸの別の試料１５ｍｇを取り、上記の方法に従い、試料の結晶形を検出するために配置した。異なる条件下で配置した試料をサンプルし、５日目及び１０日目に検出し、検出結果を０日目の当初の検出結果と比較した。試験結果を表１１に示す。
【表１１】
2018537497.tif 000030
【０１３６】
試験結果：
本発明の結晶形は優れた安定性を有し、薬剤を容易に製造することが可能である。
【０１３７】
試験例３：酵素活性のインビトロ（体外）試験
ＡＤＰ−Ｇｌｏ  アッセイ  Ｉ
化合物の希釈：
試験化合物を３倍濃度勾配で希釈し、全１０の濃度（１００００ｎＭ〜０．５ｎＭ）を
得た。
【０１３８】
試験方法：
本発明の試験化合物５０ｎＬを反応プレート（パーキンエルマー  ＃６００７２９９）に移し、３μＬの酵素／基質混合物（０．３３ｎＭ  ＰＩ３Ｋα、ミリポア  ＃１４−６０２−Ｋ／１６６．５μＭ  ＰＩＰ２）を加えた；２０分間のインキュベーション後、２μＬのＡＴＰ溶液（１００μＭ）を加え、反応を開始した；室温で２時間反応の後、５μＬのＡＤＰ−Ｇｌｏ試薬を添加してキナーゼ反応を停止させ、続いて室温で６０分間インキュベーションし、残存する未反応のＡＴＰを完全に消化させた；得られた溶液に１０μＬのキナーゼ検出試薬を加え、室温で４０分間インキュベートし、蛍光をエンヴィジョン（Ｅｎｖｉｓｉｏｎ）にて読み取った。ＰＩＰ２、ＡＴＰ、ＡＤＰ−Ｇｌｏ試薬、及びキナーゼアッセイ試薬は、全てＡＤＰ−Ｇｌｏキナーゼアッセイキット（プロメガ  ＃Ｖ１７９２）からのものである。
【０１３９】
データ解析：
ＩＣ５０を、標準４−パラメータフィッティング法（モデル２０５、ＸＬ−ｆｉｔ、ｉＤＢＳ）を用いて計算した。
【０１４０】
ｍＴＯＲキナーゼにおける本発明の試験化合物の活性を、下記試験方法で試験した。
反応バッファー：２０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ（ｐＨ７．５）、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、２ｍＭ
ＭｎＣｌ２、１ｍＭ  ＥＧＴＡ、０．０２％  Ｂｒｉｊ３５、０．０２ｍｇ／ｍＬ  ＢＳＡ、０．１ｍＭ  Ｎａ３ＶＯ４、２ｍＭ  ＤＴＴ、２％  ＤＭＳＯ。
反応酵素：昆虫細胞中で発現させた、Ｎ−末端ＧＳＴタグ（アミノ酸１３６０−２５４９、分子量＝１６３．９ｋＤａ）を有するヒト化組み換えｍＴＯＲ断片。
反応基質：バクテリア中で発現させた、Ｎ−末端Ｈｉｓタグ（分子量＝１３．６ｋＤａ）を有するヒト化組み換え完全長４ＥＢＰ１
反応条件：３μＭ  ４ＥＢＰ１  及び  １０μＭ  ＡＴＰ
反応手順：
１．反応基質及び他の反応因子を新たに調製した反応バッファーに加えた。
２．キナーゼを基質反応物に加え、穏やかに混合した。
３．１００％ＤＭＳＯに溶解した化合物を、Ａｃｏｕｓｔｉｃテクノロジー（Ｅｃｈｏ５５０；ｎａｎｏｌｉｔｅｒ  ｒａｎｇ（ナノリッターレンジ））を用いてキナーゼ反応溶液に移し入れ、室温で２０分間インキュベートした。
４．適切な濃度の３２Ｐ−ＡＴＰを反応系に添加した。
５．室温で２時間インキュベートした。
６．キナーゼ活性をＰ８１フィルター結合法で検出した。
【０１４１】
試験結果を表１２に示す。
【表１２】
2018537497.tif 000031
【０１４２】
結論：化合物１はＰＩ３Ｋ（ｐ１１０α）に対して有意な阻害効果を有するが、ｍＴＯＲにおけるその阻害効果は弱い。
【０１４３】
ＡＤＰ−Ｇｌｏ  アッセイ  ＩＩ
試験手順：
１）化合物をラブサイト（Ｌａｂｃｙｔｅ）社のＥｃｈｏを用いて希釈し、化合物５０ｎＬをアッセイプレートに移し、速度１０００ｒｐｍで１０秒間遠心分離した。
２）キナーゼ／脂質基質混合溶液及びキナーゼ反応バッファー／脂質基質混合溶液を調製した；キナーゼ／脂質基質混合溶液をアッセイプレートの３−２４カラムに１ウェルあたり３μＬずつ加えた；キナーゼ反応バッファー／脂質基質混合溶液をアッセイプレートのカラム１−２に１ウェルあたり３μＬずつ加えた；プレートを速度１０００ｒｐｍで１０秒間遠心分離した。
３）ＡＴＰ溶液を調製し、アッセイプレートに１ウェルあたり２μＬずつ加えた；プレートを速度１０００ｒｐｍで１０秒間遠心分離し、プレートシェイカーの第２ギアモードで１分間振盪及び混合し、さらに、速度１０００ｒｐｍで１０秒間遠心分離し、そして２３℃で１２０分間インキュベートした。
４）ＡＤＰ−Ｇｌｏ（登録商標）試薬を調製し、アッセイプレートに１ウェルあたり５μＬずつ加えた；プレートを速度１０００ｒｐｍで１０秒間遠心分離し、プレートシェイカーの第２ギアモードで１分間振盪及び混合し、さらに速度１０００ｒｐｍで１０秒間遠心分離し、そして２３℃で６０分間インキュベートした。
５）キナーゼ検出試薬を調製し、アッセイプレートに１ウェルあたり１０μＬずつ加えた；プレートを速度１０００ｒｐｍで１０秒間遠心分離し、プレートシェイカーの第２ギアモードで１分間振盪及び混合し、さらに速度１０００ｒｐｍで１０秒間遠心分離し、そして２３℃で３０分間インキュベートした；その後、マルチマーカー検出エンヴィジョン（Ｅｎｖｉｓｉｏｎ）で読み取った。
データ解析：
ＩＤＢＳ社のＸｌｆｉｔ５（Ｆｏｒｍｕｌａ２０５）によりＩＣ５０結果を解析した。
【０１４４】
陽性コントロール薬として化合物ＢＫＭ−１２０を用い、対応する試験及び分析を、上記に示す試験手順を適用して実施した。
【０１４５】
試験結果：
ＰＩ３Ｋα、ＰＩ３Ｋβ、ＰＩ３Ｋδ、及びＰＩ３Ｋγ活性における化合物１のＩＣ５０阻害値は、それぞれ、０．６±０．２ｎＭ、９．９±２．７ｎＭ、０．５±０．１ｎＭ、及び７．０±０．９ｎＭ（Ｎ＝２）であった。対して、ＰＩ３Ｋα、ＰＩ３Ｋβ、ＰＩ３Ｋδ、及びＰＩ３Ｋγ活性における陽性コントロール薬物ＢＫＭ１２０（ＰＩ３Ｋ阻害物質、ブパルリシブ）のＩＣ５０阻害値は、それぞれ、２４．７±４．７ｎＭ、２４１．６±５０．６ｎＭ、６８．８±２５．０ｎＭ、及び１１１．９±１５．２ｎＭであった。
【０１４６】
結論：
化合物１は、ＰＩ３Ｋの４つ全てのサブタイプに対してとても高い阻害活性を示した。
【０１４７】
試験例４：細胞活性のインビトロ（体外）試験
試験工程及び方法：
１）ＭＣＦ−７細胞を密度２．５×１０４細胞／ウェルで９６−ウェルプレートに播種した（使用した培地は、１０％ＦＢＳを含む完全培地でなければならない）。
２）次の日、各ウェルの培地を取り出した。特定濃度（予備スクリーニング）の又は濃度群（ＩＣ５０試験）の試験化合物を、血清を含まない培地に溶解し、９６ウェルプレートに添加して、２時間細胞培養した。
３）血清を含まない培地にインスリンを溶解し、培養細胞に加え、３０分間インキュベートし、最終インスリン濃度を１０ｍｇ／ｍＬとした。
４）反応の待ち時間中に、溶菌（ｌｙｓｉｓ）溶液を下記手順にて調製した：
ａ）予めエンハンサー溶液を冷蔵庫から取り出して溶解させた。
ｂ）エンハンサー溶液を５×溶菌バッファーで１０倍に希釈し、濃縮溶菌溶液を得た。
ｃ）濃縮溶菌溶液を、再蒸留水で５倍に希釈し、溶菌溶液を得た。
５）各ウェル中の培地を完全に除去し、各ウェルをＰＢＳですばやく１回リンスした。
６）新たに調製した溶菌溶液１５０μＬを各ウェルに加え、室温で１０分間振盪した。
７）全ての細胞が分離したことを確認した後、細胞残屑を含む溶菌溶液を１．５ｍＬチューブに移した。
８）チューブを数回ボルテックスし、溶菌溶液及び細胞を完全に混合し、その後混合物を４℃で１２０００ｇにて１０分間、遠心分離した。
９）必要となるＥＬＩＳＡ−ｏｎｅ  マイクロ−ウェルプレートのストリップ数を計算した。必要のないストリップをフレームから取り出し、貯蔵バックに入れ密封した。マイクロ−ウェルプレートのストリップを使用する前に、２００μＬの再蒸留水で各ウェルをリンスし、防腐剤を除去した。
１０）５０μＬの抗体混合物を各ウェルに加えた（抗体混合物溶液は、ｍｅｄｉｕｍ抗体試薬と酵素標識化抗体試薬を等量で混合したものである。抗体混合物の調製にはボルテックスを必要としない。）。
１１）２５μＬの細胞溶解物を、ＥＬＩＳＡ−ｏｎｅ  マイクロ−ウェルプレートの各ウェルに加えた。マイクロ−ウェルプレートを接着性シーリングフィルムで覆い、室温にて１時間、マイクロ−ウェルプレート振動装置でインキュベートした。
１２）各ウェルを１５０μＬの１×リンスバッファーで３回リンスした。最後のリンスの後、ウェル中のリンスバッファーを完全に除去した。必要に応じて、１×リンスバッファーを最大３０分間マイクロ−ウェルプレートに滞留させて、その間に基質混合物溶液を調製することができた。
１３）基質混合物溶液を夫々の使用の直前に調製し、１００μＬの基質混合物溶液を各ウェルに加え、マイクロ−ウェルプレートをスズ箔でシールし、マイクロ−ウェルプレート振動装置にて室温で１０分間インキュベートした。
１４）１０μＬの停止溶液を各ウェルに加え、マイクロ−ウェルプレート振動装置でわずかに（５−１０秒）混合した。
１５）対応するＥＬＩＳＡ−Ｏｎｅフィルター群を組み立て、蛍光シグナル強度を読み取るために使用した。
【０１４８】
試験結果を表１３に示す。
【表１３】
2018537497.tif 000032
【０１４９】
試験例５：インビボ（体内）有効性試験
本研究は、試験薬物が、ヒト大腸癌ＣＯ−０４−００３２動物モデル及び胃癌ＳＴ−０２−００１３動物モデルにおいて、インビボ有効性を有するかどうかを調べるために行った。試験における動物飼料、飼料成分、実験的観察、実験的指標（指数）、実験終了、並びにデータ解析は下記の通りである：
【０１５０】
動物飼料：
動物は到着後、実験の開始前に、実験環境で３−７日間飼育せねばならない。動物を、ＳＰＦグレードの動物収容施設のＩＶＣ（独立換気システム）ケージ（１ケージあたり５匹）に収容した。全てのケージ、パッディング、及び飲料水は、使用前に滅菌する必要があり、滅菌記録は附属書に示される。動物収容施設の全ての研究室職員は、手術の際に、
保護服とラテックス手袋を着用せねばならない。各ケージの情報カードは、ケージ内の動物数、性別、種族、到着日、投与計画、実験番号、グループ、及び実験の開始日を示す必要がある。ケージ、飼料、及び飲料水を、１週間に２回交換した。採餌環境及び光条件は以下の通りである：
温度：２０〜２６℃
湿度：４０〜７０％
明暗サイクル：光あり１２時間、光なし１２時間
【０１５１】
試料成分：
飼料は、実験動物の食物識別基準に適合している。汚染物質の最大含量は、制御可能な範囲内であり、製造者は定期的な検査の責任を負う。オートクレーブした飲料水を飲料水として使用した。
【０１５２】
動物群：
動物の体重を測定し、投与の前に腫瘍体積を測定した。動物は腫瘍体積に従いランダムにグループ分けした（ランダムブロックデザイン）。
【０１５３】
観察：
実験プロトコル及びそれらの任意の変形を、上海、ＷｕＸｉ  ＡｐｐＴｅｃの動物ケア及び使用委員会（ＩＡＣＵＣ）の承認を得て実施した。実験動物の使用及び福祉は、実験動物ケア評価認証協会（ＡＡＡＬＡＣ）の規則に従った。動物の健康及び死亡を毎日監視し、日常的な検査では、動物の日々の行動及びパフォーマンス、例えば、食料及び水分摂取量、体重変化（１週間に２回の体重測定）、外観、又はその他の異常な状況に対する、腫瘍の成長及び薬物の治療に対する影響を観察することが含まれる。動物の死亡及び副作用は、各グループの動物数に基づいて記録され、相関記録が付録に示される。
【０１５４】
実験的指標（指数）：
実験的指標は、腫瘍の成長が抑制されるか、遅延されるか、又は治癒されるかどうかを調べるために用いた。腫瘍径を週に２回、ノギスで測定した。腫瘍体積を下記式により算出した：Ｖ＝０．５ａ×ｂ２、式中、ａ及びｂは、それぞれ、腫瘍の長径及び短径を表す。化合物の腫瘍成長抑制（ＴＧＩ）を、Ｔ−Ｃ（日）及びＴ／Ｃ（％）で評価した。Ｔ−Ｃ（日）は、腫瘍成長遅延指数を反映し、ここでＴは投与群における所定の腫瘍体積（例えば１，０００ｍｍ３）に達するのに必要な平均日数を表し、Ｃはコントロール群で同じ腫瘍体積に達するのに必要な平均日数を表す。Ｔ／Ｃ（％）パーセンテージ値は、腫瘍成長抑制率を反映し、Ｔ及びＣは、夫々投与群及びコントロール群の特定日における腫瘍重量（腫瘍体積）を表す。
【０１５５】
腫瘍成長抑制率は、下記式により算出される：ＴＧＩ（％）＝［１−（Ｔｉ−Ｔ０）／（Ｖｉ−Ｖ０）］×１００、式中、Ｔｉは特定日の投与群の平均腫瘍体積を表し、Ｔ０は投与開始時の投与群の平均腫瘍体積を表す；Ｖｉは特定日（Ｔｉと同じ日）のビヒクルコントロール群の平均腫瘍体積を表し、Ｖ０は投与開始時のビヒクルコントロール群の平均腫瘍体積を表す。実験の最後に、腫瘍体積を測定し、Ｔ／Ｃパーセンテージを算出し、ここでＴ及びＣは、それぞれ、投与群とビヒクルコントロール群の腫瘍体積を表す。
【０１５６】
実験終結：
動物の健康状態が悪化し続けるか、あるいは、動物が２，０００ｍｍ３以上の腫瘍体積、あるいは、重篤な病気又は痛みを有した場合、動物は安楽死させねばならない。以下の症状が現れた場合、獣医師に通告され、動物を安楽死させる：
明らかにやせて、２０％超の体重減少；
食べ物や水に自由にアクセスできない；
コントロール群の平均腫瘍体積が２，０００ｍｍ３に達した場合、この場合には試験は終結させるべきである。
動物が下記の臨床兆候を示し、悪化し続ける：
・立毛
・弓背（アーチバック）
・青白い耳、鼻、目あるいは足
・慌ただしい呼吸
・発作
・持続性の下痢
・脱水症
・緩慢な動作
・発声
【０１５７】
データ解析：
３以上の群の比較に、一元配置分散分析（Ｏｎｅ−ｗａｙ  ＡＮＯＶＡ）を用いた。Ｆ値に有意差がある場合、ＡＮＯＶＡ解析後に複数の比較を行う必要がある。全てのデータをＳＰＳＳ  １７．０を用いて解析した。ｐ＜０．０５は有意差を示す。
【０１５８】
ヒト結腸癌ＣＯ−０４−００３２細胞の皮下異種移植片腫瘍モデルにおける試験薬物のインビボ薬力学研究：
試験設計：
ヒト腫瘍移植モデルの確立：
ヒト結腸癌ＣＯ−０４−００３２モデルは、もともと手術で除去された腫瘍検体（サンプル）に由来する。サンプルの取得と利用は、患者からのインフォームドコンセントを含む、国家、病院及び企業の倫理法及び規則を厳守した。モデルの確立プロセスは社内のＳＯＰを厳密に遵守した。継代世代の命名規則は以下の通りである：ヌードマウスへの腫瘍サンプルの接種後の腫瘍をＰ０世代に指定し、継続する継代をＰ１世代などと指定した；そして、再生サンプルをＦＰと指定した。この実験に使用された腫瘍組織はＦＰ４世代であった。
動物：
ＢＡＬＢ／ｃヌードマウス、メス、６−８週齢、体重１８−２０ｇ、上海Ｓｉｐｐｒ−ＢＫラボラトリーアニマル社より供給。
腫瘍接種：
体積約３０ｍｍ３のＣＯ−０４−００３２腫瘍塊を、各マウスの右背中に皮下接種した；平均腫瘍体積が約１００乃至２００ｍｍ３に到達したとき、マウスを群に分け、各群に薬物を投与した。
試験結果：
本発明の化合物１（その結晶形ＸＩを含む）の投与の１５日から３０日まで、腫瘍体積はほとんど増大しなかった；陽性コントロール薬剤ＢＫＭ１２０と比べて、本発明の化合物１（その結晶形ＸＩを含む）は、結腸癌に対してより優れた抗腫瘍活性を有する。
【０１５９】
ヒト胃癌ＳＴ−０２−００１３の皮下異種移植片腫瘍モデルにおける試験薬物のインビボ薬力学研究：
試験設計：
ヒト腫瘍移植モデルの確立：
ＳＴ−０２−００１３のＰＤＸ（患者腫瘍組織移植）モデルは、もともと手術で除去された臨床検体（サンプル）に由来し、これをヌードマウスに埋め込み、Ｐ０世代と指定した。マウスの世代から世代への連続的な移植による腫瘍に関して、Ｐ０腫瘍の移植からの次世代をＰ１世代などと指定した。ＦＰ２腫瘍は、ＦＰ３腫瘍を得るために復元された。ＦＰ３腫瘍を継代してＦＰ４腫瘍を得、これをこの研究に使用した。
動物：
ＢＡＬＢ／ｃヌードマウス、メス、６−８週齢、体重１８−２２ｇ、上海Ｌｉｎｇ  Ｃｈａｎｇ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社より供給。
腫瘍接種：
体積約３０ｍｍ３のＳＴ−０２−００１３  ＦＰ４腫瘍組織を、各マウスの右背中に皮下接種した；平均腫瘍体積が約１５０乃至２００ｍｍ３に到達したとき、マウスを群に分け、各群に薬物を投与した。
試験結果：
本発明の化合物１（その結晶形ＸＩを含む）の投与の１５日から３０日まで、腫瘍体積はほとんど増大しなかった；陽性コントロール薬剤ＢＫＭ１２０と比べて、本発明の化合物１（その結晶形ＸＩを含む）は、胃癌に対してより優れた抗腫瘍活性を有する。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０１６０】
【非特許文献１】グリーン及びウッツ（有機合成における保護基、ワイリー・アンド・サンズ、１９９１）
【図１】
2018537497.tif 000053
【図２】
2018537497.tif 000054
【図３】
2018537497.tif 000055
【図４】
2018537497.tif 000056
【図５】
2018537497.tif 000057
【図６】
2018537497.tif 000058
【図７】
2018537497.tif 000059
【図８】
2018537497.tif 000060
【図９】
2018537497.tif 000061
【図１０】
2018537497.tif 000062
【図１１】
2018537497.tif 000063
【図１２】
2018537497.tif 000064
【図１３】
2018537497.tif 000065
【図１４】
2018537497.tif 000066
【図１５】
2018537497.tif 000067
【図１６】
2018537497.tif 000068
【図１７】
2018537497.tif 000069
【図１８】
2018537497.tif 000070
【図１９】
2018537497.tif 000071
【図２０】
2018537497.tif 000072
【図２１】
2018537497.tif 000073
【図２２】
2018537497.tif 000074
【図２３】
2018537497.tif 000075
【図２４】
2018537497.tif 000076
【図２５】
2018537497.tif 000077
【図２６】
2018537497.tif 000078
【図２７】
2018537497.tif 000079
【国際調査報告】
2018537497.tif 000080
2018537497.tif 000081
2018537497.tif 000082
2018537497.tif 000083
2018537497.tif 000084
2018537497.tif 000085