(57)【要約】  本発明は、対称的なコア構造を有し、ベンゼン環中のヒドロキシル置換数が同一又は異なるベンゾフェノン化合物及びその類似体をウイルス感染及び抗腫瘍薬の予防及び治療用薬物の調製における応用を提供し、特に、エイズ、生殖器疣贅、扁平疣贅、普通疣贅、単純ヘルペス、帯状ヘルペス、膣炎、子宮頸部びらん及びアルツハイマー病、及びそれらに起因する子宮頸癌、肺癌、胃癌および結腸癌を含む。薬理学的試験では、それらが複数のウイルスおよび抗腫瘍増殖に対して非常に高い阻害活性を有することを実証した。上記用途は、ヒドロキシ置換ベンゾフェノンおよびその類似体を様々な賦形剤と共に、異なる薬剤または個人的に消毒するための衛生用品に調製することである。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ウイルス感染症および抗腫瘍の予防および治療用薬剤の製造におけるヒドロキシ置換ベンゾフェノン化合物の応用において、前記ヒドロキシ置換ベンゾフェノン化合物及びその類似体が、下記式（１）で表される化合物から選択される１種以上の化合物であり、
2018510222.tif 000008
（１）
式中、R1、R2、R3、R4、R5、R'1、R'2、R'3、R'4およびR'5は、それぞれ、独立してOHまたはHから選択され、且つ、１つのベンゼン環には少なくとも１つのOHを含むことを特徴とするヒドロキシ置換ベンゾフェノン化合物の応用。
【請求項２】
R1、R2、R3、R4、R5、R'1、R'2、R'3、R'4およびR'5において、２つ以上のOHを含むことを特徴とする請求項１に記載の応用。
【請求項３】
R1、R2、R3、R4、R5、R'1、R'2、R'3、R'4およびR'5において、３つ以上のOHを含むことを特徴とする請求項１に記載の応用。
【請求項４】
前記ヒドロキシ置換ベンゾフェノン化合物が、2,2'-ジヒドロキシベンゾフェノン、2,2'3'-トリヒドロキシベンゾフェノン、2,3,4-トリヒドロキシベンゾフェノン、2,4,2',4'-テトラヒドロキシベンゾフェノン、2,3,4,2',3',4'-ヘキサヒドロキシベンゾフェノンおよび2,3,4,2',4',5-ヘキサヒドロキシベンゾフェノンから選択される何れか１つの化合物であることを特徴とする請求項１に記載の応用。
【請求項５】
前記ヒドロキシ置換ベンゾフェノン化合物が、2,4,2',4'-テトラヒドロキシベンゾフェノン、2,3,4,2',3',4'-ヘキサヒドロキシベンゾフェノンおよび2,3,4,2',4',5-ヘキサヒドロキシベンゾフェノンから選択される何れか１つの化合物であることを特徴とする請求項１に記載の応用。
【請求項６】
前記ヒドロキシ置換ベンゾフェノン化合物が、2,3,4,2',3',4'-ヘキサヒドロキシベンゾフェノンおよび2,3,4,2',4',5-ヘキサヒドロキシベンゾフェノンから選択される何れか１つの化合物であることを特徴とする請求項１に記載の応用。
【請求項７】
有効量の前記化合物および/またはそれを活性成分として含む組成物と、注射剤または経口剤用の各種賦形剤と共に、粉末注射剤、水注射剤、輸液剤、錠剤、カプセル剤、顆粒剤または液剤を調製することを特徴とする請求項１〜６の何れかの１項に記載の応用。
【請求項８】
有効量の前記化合物および/またはそれを活性成分として含む組成物と、皮膚粘膜用製剤の各種賦形剤と共に、軟膏剤、ゲル剤、坐剤、錠剤、ローション剤、フィルム剤またはスプレー剤を調製することを特徴とする請求項１〜６の何れかの１項に記載の応用。
【請求項９】
有効量の前記化合物および/またはそれを活性成分として含む組成物と、各種賦形剤と共に、抗ウイルス及び抗腫瘍製品を調製し、前記抗ウイルス製品は、ハンドクリーナー、入浴剤、手洗い石けん、入浴スポンジ、パーソナルケアワイプ、顔拭きシート、鼻スプレー、うがい薬、膣洗浄剤、膣潤滑剤、避妊具およびそれらの組み合わせからなるパーソナルケア製品から選択されることを特徴とする請求項１〜６の何れかの１項に記載の応用。
【請求項１０】
ヒドロキシ置換ベンゾフェノン化合物が、ウイルス性疾患および腫瘍の予防および治療用薬物に使応用されることを特徴とする請求項１〜６の何れかの１項に記載の応用。
【請求項１１】
前記ウイルス感染は、ヒトおよび動物から感染したヘルペスウイルス、HIVおよびヒトパピローマウイルスであることを特徴とする請求項１〜６の何れかの１項に記載の応用。
【請求項１２】
皮膚粘膜疣贅を予防および治療する薬物を調製することを特徴とする請求項１〜６の何れかの１項に記載の用途。
【請求項１３】
ヘルペスウイルス誘発性疾患を予防および治療する薬物を調製することを特徴とする請求項１〜６の何れかの１項に記載の応用。
【請求項１４】
口唇、生殖器ヘルペスおよび帯状ヘルペスを予防および治療する薬物を調製することを特徴とする請求項１〜６の何れかの１項に記載の応用。
【請求項１５】
3,4,5,2',3',4'-ヘキサヒドロキシベンゾフェノンを含まないヘルペスウイルス誘発性老人性認知症を予防および治療する薬物を調製することを特徴とする請求項１〜６の何れかの１項に記載の応用。
【請求項１６】
ヒトパピローマウイルスのウイルス負荷量を除去または減少させ、ウイルス誘発性癌を抑制する薬物を調製することを特徴とする請求項１〜６の何れかの１項に記載の応用。 
【請求項１７】
ヒトパピローマウイルスのウイルス負荷量を除去または減少させ、ウイルス誘発性子宮頚癌を抑制する薬物を調製することを特徴とする請求項１〜６の何れかの１項に記載の応用。 
【請求項１８】
エイズを予防および治療する薬物を調製することを特徴とする請求項１〜６の何れかの１項に記載の応用。 
【請求項１９】
腫瘍を予防および治療する薬物を調製することを特徴とする請求項１〜６の何れかの１項に記載の応用。 
【請求項２０】
子宮頚癌を予防および治療する薬物を調製することを特徴とする請求項１〜６の何れかの１項に記載の用途。 
【請求項２１】
消化管腫瘍を予防および治療する薬物を調製することを特徴とする請求項１〜６の何れかの１項に記載の応用。 
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗ウイルス薬および抗腫瘍薬の調製における対称または非対称構造を有するヒドロキシ置換ベンゾフェノン化合物の応用に関し、特に、１つ以上のヒドロキシ置換ベンゾフェノン化合物またはその類似体を非常に有効なウイルス及び腫瘍抑制剤とした、抗HIV、ヘルペスウイルス及びヒトパピローマウイルス並びに抗腫瘍薬への用途及びその製剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒドロキシ置換ベンゾフェノン及びその類似体として、ベンゾフェノンの２つのベンゼン環が１つ以上のヒドロキシル基により置換された誘導体、例えば、2,2'-ジヒドロキシベンゾフェノン、2,2'3'-トリヒドロキシベンゾフェノン、2,4,2',4'-テトラヒドロキシベンゾフェノン、2,3,4-トリヒドロキシベンゾフェノン、2,2',3'-トリヒドロキシベンゾフェノン、2,3,4,2',3',4'-ヘキサヒドロキシベンゾフェノン、2,3,4,2',4',5-ヘキサヒドロキシベンゾフェノン、2,3,3',4,4',5-ヘキサヒドロキシベンゾフェノンなどが挙げられる。現在、これらのヒドロキシル置換ベンゾフェノン及びその類似体の多くは紫外線吸収剤として用いられ、個別に心血管および脳血管薬、例えば、エキシホン（3,4,5,2',3',4'-ヘキサヒドロキシベンゾフェノン）として用いられており、1988年にフランスのPharmascienceにより知能改善薬として開発され且つ市場に投入され、脳血流を増加し、脳毛細血管の透過性を低下し、学習と記憶能力を改善する機能を有する。
【０００３】
ヒト免疫不全ウイルス（HIV）、ヒトパピローマウイルス（HPV）及びヘルペスウイルス（HSV）は、ヒト細胞に組み込まれてから長期間滞在する特徴を有するが、それぞれ異なる遺伝的および代謝特性を有する。
【０００４】
HIV-1はエイズを引き起こすウイルスであり、逆転写酵素（RT）、プロテアーゼ（PR）及びインテグラーゼ（IN）の３つの酵素をコードするウイルスである。これらの３つの酵素は、HIV複製および感染に必須の基本的な酵素である。新たな作用機序を有するインテグラーゼ阻害剤は治療効果を改善し、且つ既存の抗エイズ薬と相乗的に作用して新たに効果的な併用療法を形成することができる。HIV-1インテグラーゼ（IN）は、ウイルス複製に必須の３つの基本的な酵素の１つであり、レトロウイルスDNAがインテグラーゼの触媒作用下で、宿主染色体に挿入され、ヒト染色体に組み込まれた後、ウイルスは複製され得る。インテグラーゼは、HIVが染色体に侵入することをコントロールするため、インテグラーゼ阻害剤は、HIVが正常細胞の染色体に侵入することを阻害することができる。これは、抗エイズ薬開発の分野で画期的なことである。また、HIV-1インテグラーゼは、単一の活性部位で、ウイルス及び宿主の２つの異なる立体配座を有するDNA基質と作用し、HIVがインテグラーゼ阻害剤に対する薬剤耐性が生じるようことを制限する場合がある。更に、インテグラーゼはウイルスにのみ存在し、哺乳類にはこのような酵素がないため、HIV-1インテグラーゼは、有望な抗HIV薬剤設計のための新しい標的タンパク質となる（Curr．Opin．Drug．Discov．Deve1．2001，4，402-410）。多くのHIV-1インテグラーゼ阻害剤が同定されており、その内、いくつかの化合物は選択的にHIV-1インテグラーゼを阻害し、ウイルス複製する活性を阻止する。最も影響を与える２つの阻害剤は、カテコールを含むポリヒドロキシ芳香族環化合物および最近報告されたアリールβ-ジケトン酸化合物である。しかしながら、それらの構造はヒドロキシベンゾフェノンとは完全に異なっている。
【０００５】
アルツハイマー病は最も一般的な認知症であり、近年のアルツハイマー病の多くの研究により、１型単純ヘルペスウイルス感染とアルツハイマー病に罹患している個体との関係が明らかになった。ほとんどの人は体内に単純ヘルペスウイルスを持っており、初期感染時にはウイルスは極めて活発であり、体が口腔潰瘍や口唇ヘルペスを引き起こす原因となる。ヘルペスウイルスは神経栄養ウイルスであり、感染後神経組織に侵入して長期滞在する。現在、ベータペーストプラーク（beta-pastein plaques）の蓄積がアルツハイマー病の主な原因であり、口唇ヘルペスウイルスはこのようなプラークの形成に重要な役割を果たす可能性があると考えられている。研究者らは、「in-situ重合連鎖反応」（IS-PCR）の精密遺伝子分析技術を用いて、タンパク質プラーク中の口唇ヘルペスウイルスのDNAを検出し、これは、これらのウイルスがタンパク質プラークの形成を誘導する可能性があることを示す。実験室で細胞を培養する際、口唇ヘルペスウイルスがベータペースト斑の形成に寄与する。研究者らは、「in-situポリメラーゼ連鎖反応増幅」（IS-PCR）の遺伝子解析技術を用いて、タンパク質プラーク中の唇ヘルペスウイルスのDNAを検出し、これは、このようなウイルスが、タンパク質プラークを形成する可能性があることを示す。2014年10月22日に国際誌Alzheimer＆Dementiaに掲載された２つの研究報告では、スウェーデンのUmea大学の研究者らは、単純ヘルペスウイルスの感染が、個体のアルツハイマー病に罹患するリスクを増加させる可能性があることを見出した。研究結果は、単純ヘルペスウイルス感染とアルツハイマー病との関連性を明確に分析した。一つ目の報告では研究者らは、ヘルペスウイルスの再活性化が個体のアルツハイマー病に罹患するリスクを２倍にすることができることを明らかにし、該研究では3432人の個体に対し平均11.3年の追跡研究を行った。二つ目の研究では、Umea大学の医学生物バンクから寄贈されたアルツハイマー病の360人の患者のサンプルに対し検査を行った結果、個体がヘルペスウイルスを持つことにより、アルツハイマー病に罹患するリスクが倍増することが示された。最後に、研究者らは、ヘルペスウイルス感染症の治療に抗ウイルス薬を使用すれば、抗ウイルス薬により個体のアルツハイマー病を抑制或いは治療する可能性もあり、アルツハイマー病の新しい治療法を開発することが可能であることを示した。
【０００６】
ヒトパピローマウイルス（HPV）は、多くの皮膚粘膜の炎症及び癌、例えば、生殖器疣贅、扁平疣贅、一般的な疣贅、子宮頸管炎、子宮頸部びらん、口腔癌、食道癌、胃癌、大腸癌、直腸癌、皮膚癌、肺癌および子宮頸癌と密接に関連している。生殖器疣贅、扁平疣贅、一般的な疣贅は、ヒトパピローマウイルス（HPV）によって引き起こされる良性皮膚粘膜新生物であり、最も一般的な伝染性疾患の１つである。ヒト乳頭腫ウイルス（HPV）は１００種類を超えるサブタイプを有し、その内、高リスクのサブタイプ、例えば、16型、18型、33型、52型および58型のウイルスは子宮頸部粘膜細胞DNAに組み込まれることが証明されている。既存の薬によってはそのウイルスを殺すことができず、子宮頸癌、口腔癌、食道癌、胃癌、大腸癌、直腸癌および皮膚癌を誘発することができる。研究によると、高リスクのヒトパピローマウイルスは、喫煙と同じように、肺がんの重要な誘発要因であることが証明されている。
【０００７】
HPVは、胎盤および出産プロセスを通じて、母親から子供へ垂直伝播し、次世代が生まれつきでウイルスを持っているため、予防ワクチンでも機能を発揮することができない。
【０００８】
近年の研究により、子宮頸部びらん患者の29.3％がHPV陽性を示し、正常な子宮頸部が陽性である割合はわずか11.1％であることがわかった（Fuqiang CHENら, Journal of Cancer Prevention and Treatment, 2001, 8(4), 342-344; Chengkang XU, 中山医学大学学術誌、1998, 19(3)：223-226）。報道によれば（Ahn ws et al、J Cell Biochem Suppl, 1997; 28-29：133-139）、慢性子宮頸管炎の中で高リスクHPV（ヒトパピローマウイルス）16型および18型の発現率が69％であり、高リスク型HPV16およびHPV18の発見率は、頸部びらんの程度の増加に伴って増加傾向を示し、顆粒状または乳頭状のびらんHPV16およびHPV18の発見率は、正常な子宮頸部に比べその差は顕著である。PCRによりHPV16およびHPV18の陽性率が83.33％に達することが検出され、高リスク型HPV DNAが宿主細胞の染色体に組み込まれ、腫瘍タンパク質E6およびE7を産生し、それぞれ癌抑制遺伝子 p53およびRbを制御することにより、細胞がp53およびRbの制御から脱出し、細胞周期の制御を不能にし、その結果、正常な状態の細胞が活発に増殖し、腫瘍が増殖する。例えば、HPV16型および18型が持続して存在する場合、子宮頸部の病変が進行する。子宮頸部HPV感染症は外陰感染と異なり、子宮頚管中はHPV16/18型をメインとして存在し、通常疣贅へ変化せず、潜伏感染として長期的に存在し、最初は非典型的な増殖を引き起こすが、他の要因が関与する際に癌を引き起こす。現在、生殖器疣贅および子宮頸部びらんを治療する有効な薬剤が比較的不足しており、ポドフィロトキシンｄのような薬剤は、短期間で治療できるメリットはあるが、刺激性があり、頭痛、浮腫、びらん等の副作用が大きいという問題がある。生殖器疣贅を治療するための外用剤としての組換えヒトインターフェロンα-2βゲルは、現在、一般に有効な薬剤として認められているが、これらの薬は、ヒト細胞に組み込まれたウイルスを根絶することができないので、感染が長時間持続して治癒できず、最終的に悪性腫瘍に変化してしまう。
【０００９】
悪性腫瘍は人の健康と命にとって重大な脅威である。現在、臨床応用の化学療法薬は比較的毒性が強く、固形腫瘍に対し効果が乏しく、化学療法を受ける患者の大半はこのような腫瘍細胞の転移で亡くなる。したがって、毒性が低く、腫瘍の増殖および転移を抑制することができる薬物を開発することは、腫瘍化学療法研究の重要な課題である。
【００１０】
人々は、抗HIV、HSVおよびHPVウイルス感染および抗腫瘍の新薬を開発し続けている。
【００１１】
3,4,5-トリヒドロキシ安息香酸およびそのグルコースからなる誘導体は、HIV-1インテグラーゼを阻害する効果を有するが（Kane CJ et al, Planta Med 2002 May; 68(5): 457-9）、その活性は高くない。
【００１２】
CN1234353Cには、3,4,5-トリヒドロキシ安息香酸を抗腫瘍、具体的に、抗肝癌および子宮頸癌への用途が開示されている。しかし、3,4,5-トリヒドロキシ安息香酸は、人体の環境条件では不安定であることは、既に知られていることである。
【発明の概要】
【００１３】
本発明の目的は、抗ヘルペスウイルス、抗ヒトパピローマウイルスおよび抗HIV活性を有する、抗ウイルスおよび抗腫瘍活性の高いヒドロキシ置換ベンゾフェノン化合物を見出し、HIV-1インテグラーゼ阻害活性を有し、染色体に組み込まれたウイルスの繁殖を抑制し、ウイルス感染の再発を防ぐことである。
【００１４】
本発明の別の目的は、ヒドロキシ置換ベンゾフェノンを含有する化合物の医学的応用を提供することである。
【００１５】
本発明は、HIV-1インテグラーゼとその阻害剤との相互作用による結晶構造および構造−活性関係に基づいて抗HIVを設計する。HIV-1インテグラーゼは、二量体または四量体の形で触媒作用を発揮するが（PROC. NAT1. Acad. Sci. USA, 1999, 13040-13043）、オリゴマーの正確性はまだ不明であるため、本発明では、抗ウイルス活性を有するヒドロキシ安息香酸化合物からスタートし、縮合反応によりヒドロキシル置換ベンゾフェノン化合物合成することにより、高活性の抗ウイルス薬を得る。本発明では、ヒドロキシ安息香酸をモノマーとし、ヒドロキシル基を有する又は有しないベンゼンと縮合させて、異なる構造のヒドロキシル置換ベンゾフェノン（化学式（１）に示す）を合成するとともに、各化合物に対して、HIV-1インテグラーゼ阻害活性、および抗HSV、HPV活性および多くの腫瘍細胞の増殖を抑制する活性を測定した。
【００１６】
本発明は、抗ウイルス薬またはウイルス誘発性疾患の予防薬の製造におけるヒドロキシ置換ベンゾフェノン化合物の応用に関し、前記ヒドロキシ置換ベンゾフェノン化合物は、以下の式（１）で表される化合物から選択される１種以上の化合物であり、
2018510222.tif 000002
（１）
式中、R1、R2、R3、R4、R5、R'1、R'2、R'3、R'4及びR'5は、それぞれ、独立してOHまたはHから選択され、且つ、一つのベンゼン環には少なくとも一つのOHを含む。
【００１７】
前記ウイルスは、HIV、ヘルペスウイルスまたはパピローマウイルスであり、前記誘発性疾患が、腫瘍を含むHIV、ヘルペスウイルスおよびパピローマウイルスの感染に誘発される疾患であり、前記腫瘍が、ヒトパピローマウイルスに誘発される腫瘍である。
【００１８】
前記応用において、R1、R2、R3、R4、R5、R'1、R'2、R'3、R'4およびR'5において、２つ以上のOHを含む。
【００１９】
前記応用において、R1、R2、R3、R4、R5、R'1、R'2、R'3、R'4およびR'5において、３つ以上のOHを含む。
【００２０】
前記応用において、前記ヒドロキシ置換ベンゾフェノン化合物およびその類似体が、2,2'-ジヒドロキシベンゾフェノン、2,2'3'-トリヒドロキシベンゾフェノン、2,3,4-トリヒドロキシベンゾフェノン、2,4,2'4'-テトラヒドロキシベンゾフェノン、2,3,4,2',3',4'-ヘキサヒドロキシベンゾフェノン、2,3,4,2',4',5-ヘキサヒドロキシベンゾフェノン及び3,4,5,2',3',4'-ヘキサヒドロキシベンゾフェノンから選択される何れかの１つである。
【００２１】
前記応用において、前記ヒドロキシ置換ベンゾフェノン化合物およびその類似体が、2,4,2'4'-テトラヒドロキシベンゾフェノン、2,3,4,2',3',4'-ヘキサヒドロキシベンゾフェノン、2,3,4,2',4',5-ヘキサヒドロキシベンゾフェノン及び3,4,5,2',3',4'-ヘキサヒドロキシベンゾフェノンから選択される何れかの１つである。
【００２２】
前記応用において、前記ヒドロキシ置換ベンゾフェノン化合物およびその類似体が、2,3,4,2',3',4'-ヘキサヒドロキシベンゾフェノン、2,3,4,2',4',5-ヘキサヒドロキシベンゾフェノン及び3,4,5,2',3',4'-ヘキサヒドロキシベンゾフェノンから選択される何れかの１つである。
【００２３】
前記応用において、有効量の前記化合物および/またはそれを活性成分として含む組成物と、注射剤または経口剤用の各種賦形剤と共に、粉末注射剤、水注射剤、輸液剤、錠剤、カプセル剤、顆粒剤または液剤を調製する。
【００２４】
前記応用において、有効量の前記化合物および/またはそれを活性成分として含む組成物と、皮膚粘膜用製剤の各種賦形剤と共に、軟膏剤、ゲル剤、坐剤、錠剤、ローション剤、フィルム剤またはスプレー剤を調製する。
【００２５】
前記応用において、有効量の前記化合物および/またはそれを活性成分として含む組成物と、各種賦形剤と共に、抗ウイルス及び抗腫瘍製品を調製し、前記抗ウイルス製品は、ハンドクリーナー、入浴剤、手洗い石けん、入浴スポンジ、パーソナルケアワイプ、顔拭きシート、鼻スプレー、うがい薬、膣洗浄剤、膣潤滑剤、避妊具およびそれらの組み合わせからなるパーソナルケア製品から選択される。
【００２６】
前記応用において、ヒドロキシ置換ベンゾフェノン化合物の用途として、ウイルス性疾患および腫瘍の予防および治療用薬物に応用される。
【００２７】
前記応用において、前記ウイルス感染は、ヒトおよび動物から感染したヘルペスウイルス、HIVおよびヒトパピローマウイルスである。
【００２８】
前記応用において、皮膚粘膜疣贅を予防および治療する薬物を調製する。
【００２９】
前記応用において、ヘルペスウイルス誘発性疾患を予防および治療する薬物を調製する。
【００３０】
前記応用において、口唇、生殖器ヘルペスおよび帯状ヘルペスを予防および治療する薬物を調製する。
【００３１】
前記応用において、3,4,5,2',3',4'-ヘキサヒドロキシベンゾフェノンを含まないヘルペスウイルス誘発性老人性認知症を予防および治療する薬物を調製する。
【００３２】
前記応用において、ヒトパピローマウイルスのウイルス負荷量を除去または減少させ、ウイルス誘発性癌を抑制する薬物を調製する。 
【００３３】
前記応用において、ヒトパピローマウイルスのウイルス負荷量を除去または減少させ、ウイルス誘発性子宮頚癌を抑制する薬物を調製する。 
【００３４】
前記応用において、エイズを予防および治療する薬物を調製する。 
【００３５】
前記応用において、腫瘍を予防および治療する薬物を調製する。 
【００３６】
前記応用において、子宮頚癌を予防および治療する薬物を調製する。 
【００３７】
前記応用において、消化管腫瘍を予防および治療する薬物を調製する。 
【００３８】
前記化学式（１）で表されるヒドロキシ置換ベンゾフェノンは、市販品を購入するか、または文献に報告されている合成反応によって調製することもでき、ベンゾフェノンの合成方法として、（１）塩化ベンジル法、（２）ベンゼンおよび四塩化炭素法、（３）ベンゼンおよび塩化ベンゾイル法（４）酢酸鉛法（５）ホスゲン法等がある。
【００３９】
異なる置換位置および数のヒドロキシル（-OH）を有する安息香酸を原料とし、前記原料は、p-ヒドロキシ安息香酸、O-ヒドロキシ安息香酸、2,3-ジヒドロキシ安息香酸、2,4-ジヒドロキシ安息香酸、3,4-ジヒドロキシ安息香酸、2,3,4-トリヒドロキシ安息香酸、3,4,5-トリヒドロキシ安息香酸、2,4,5-トリヒドロキシ安息香酸を含むが、これに限定されない。これらの異なる置換基を有するヒドロキシ安息香酸を適切な溶媒に溶解して、触媒および加熱の条件下で、ヒドロキシルによる置換または非置換のベンゼンとの縮合反応によって、対応するヒドロキシ置換ベンゾフェノン化合物を合成する。水浴、油浴およびマイクロ波によって加熱することができ、触媒は、メタンスルホン酸、または塩化亜鉛およびオキシ塩化リンの混合溶液であってもよい。
【００４０】
例えば、サリチル酸およびレゾルシノールを原料とし、無水塩化亜鉛を触媒とし、クロロベンゼンを溶媒とし、フリーデル-クラフツ反応により2,2',4-トリヒドロキシベンゾフェノンを調製することができる。
【００４１】
レゾルシノールの水溶液とトリクロロトルエンとの反応により2,4-ジヒドロキシベンゾフェノンを調製することができる。
【００４２】
p-ヒドロキシ安息香酸およびフェノールを原料とし、塩化亜鉛及びオキシ塩化リンを触媒とし、フリーデル-クラフツ反応により4,4'-ジヒドロキシベンゾフェノンを調製することができる。
【００４３】
ピロガロール酸およびp-ヒドロキシ安息香酸を原料とし、2,3,4,4'-テトラヒドロキシベンゾフェノンを調製することができる。
【００４４】
HIV-Iインテグラーゼ阻害試験
薬理学的データでは、これらのヒドロキシ置換ベンゾフェノン化合物が非常に高いHIV-1インテグラーゼ阻害活性を有することを示している。基質の3'末端切断および鎖転移についての半数阻害濃度IC50は、何れも88.92〜10.20μg/mlであり、その内、最も好ましい化合物の阻害活性はヒドロキシ安息香酸の単量体化合物より高い。HIV-1インテグラーゼの作用機序は、以下の2段階反応である。１）3'末端プロセシング：インテグラーゼは、プロウイルスDNAの長い末端反復領域（LTR）の特定の配列に結合して安定な複合体を形成し、次いでヌクレオシドの3'末端のエンドヌクレアーゼ処理を行い、配列・・・CAGT-3'末端のGTジヌクレオチドを特異的に切断して、窪んだ3'ヒドロキシル基を露出させる。２）ストランド移転：プロセシングされたDNA/プレインテグレーション複合体は、核膜を通過して核の中心に達し、宿主のDNAと結合し、インテグラーゼの触媒効果によりウイルスDNAの窪んだ3'-ヒドロキシル基をエステル交換によって宿主細胞の染色体に埋め込み、その結果、成熟したプロウイルスになる。したがって、インテグラーゼ阻害剤の活性は、ウイルスDNAの3'末端の切断または鎖転移を阻害する度合いで示し、半数阻害濃度IC50で表す。
【００４５】
インビトロインテグラーゼ試験では、30個の合成オリゴヌクレオチドをドナー基質として用い、20個の合成オリゴヌクレオチドを標的基質として使用する。精製したHIV-1インテグラーゼをドナー基質被覆96ウェルプレートに添加し、ELISA反応を行い、標的DNAの鎖転移産物を検出し、ビオチン標識アルカリホスファターゼ系で発色させ、マイクロプレートリーダーを用いてOD値を測定する。
【００４６】
まず、反応系にサンプルを添加し、酵素の阻害剤をスクリーニングに用いる。サンプルの使用直前に、DMSOで適切な濃度に調製し、次いで4つの希釈度で5倍に希釈する。希釈後のサンプルをドナー基質被覆96ウェルプレートに添加し、次いで、遺伝子操作された標的酵素およびビオチン標的基質を含む反応緩衝液に添加し、最適な反応条件下でインキュベートし、ビオチン標識アルカリホスファターゼで着色し、405nmにおける吸光度のOD値を測定する。
【００４７】
抗ヘルペスウイルスI型、II型（HSV-I、II）の阻害試験
ウイルス宿主としてベロ細胞（アフリカミドリザルの腎臓細胞）を使用し、ヘルペスウイルスI型およびII型によりベロ細胞の細胞変性に対するサンプルの阻害度を測定する。
【００４８】
HPVウイルスの阻害試験
上記の化合物および／または上記化合物を含む組成物は、HPV6/11及び16/18型を有効に殺傷および阻害でき、HPVウイルスの感染を予防および治療するための薬剤の調製に用いることができ、生殖器疣贅、扁平疣贅、一般的な疣贅、膣炎、子宮頸管炎及び子宮頸部びらん、子宮頸癌、食道癌およびその他HPVに起因する癌を予防及び治療することができる。本発明は、リアルタイム定量PCRによるHPVウイルス量の変化を検出することにより、活性成分および生成物の効果を測定する。このような方法は、複数の刊行物（Youling CAIら, Chinese STD / AIDS、2002,8：2,108; Yuansheng WU, Ruijiang FAN et al, Clinics, 2003, 3：2, 1）により公開されている。
【００４９】
上記化合物および／または上記化合物を含む組成物を活性成分の有効量とし、ヒトおよび動物のウイルス性疾患を治療するための薬剤を調製することができ、特に、ヒトおよび動物のヘルペスウイルス（HSV）、エイズ（HIV）、ヒトパピローマウイルス（HPV）などのウイルス性疾患の治療に用いられる。これらのウイルス性疾患は、エイズ、生殖器疣贅、扁平疣贅、一般的な疣贅、単純ヘルペス、帯状ヘルペス、膣炎、子宮頸管炎および子宮頸部びらん、子宮頸癌、胃癌、結腸癌および食道癌、およびヘルペスウイルスに起因する帯状ヘルペス、口唇ヘルペス、口腔潰瘍、生殖器ヘルペス及び老年性認知症などを含むが、これらに限らない。また、高リスクヒトパピローマウイルスの負荷量を低減することにより、ヒトパピローマウイルスに起因する子宮頸癌、胃癌、結腸癌、食道癌および肺癌等の癌リスクを低減し、癌の化学予防（Chemoprevention of Cancer）の役割を果たす。
【００５０】
腫瘍細胞の阻害試験
薬理学的データによれば、上記化合物および／または上記化合物を含む組成物の有効量を活性成分として、ヒトおよび動物の腫瘍を治療するための薬物の調製に使用され得ることを示す。これらのヒドロキシ置換ベンゾフェノン化合物は、非常に高い腫瘍阻害活性を有する。
【００５１】
上記化合物および／または上記化合物を含む組成物の有効量を活性成分は、腫瘍細胞を阻害する効果を有する。本発明において、MTT法（methyl thiazolyl tetrazolium method）により、インビトロで培養されたヒト腫瘍細胞の増殖に対するヒドロキシ置換ベンゾフェノン化合物の阻害効果を検出する。
【００５２】
チアゾール塩（MTT）比色法
該方法は、細胞生存率を検出するために使用される。生細胞のミトコンドリア内のコハク酸デヒドロゲナーゼは、外因性のMTT（チアゾール塩としても知られている臭化2,5-ジフェニルテトラゾリウム）を不溶性の青紫色の結晶に還元して細胞内に沈殿させるが、死細胞はこの機能を有さない。ジメチルスルホキシド（DMSO）イソプロピルアルコールまたは10％酸性化SDS（ドデシル硫酸ナトリウム）により粒子を溶解し、マイクロプレートリーダーを用いてA570波長でOD値を測定することにより、間接的に生細胞の数を反映する。この方法は、サイトカインの生物活性、ならびに抗腫瘍薬および腫瘍放射線感受性および細胞毒性試験の検出に用いられ、簡単で、速く、経済的で、感度が高く、正確で、再現性が良く、放射性核種を使用する必要がないという特徴を有する。この方法は、前臨床抗癌剤のスクリーニングおよび新鮮な腫瘍細胞の薬物感受性の検出に広く使用されており、その方法は次のとおりです。
【００５３】
（１）0.25％トリプシン消化により腫瘍細胞懸濁液を調製し、10％ウシ胎児血清を含むRPMI1640を用いて105/mlの細胞濃度に調整し、96ウェルプレートに各ウェル100μlずつ加え、24時間培養し、異なる投与量の薬剤を100μl/ウェルで添加し、陰性対照群、陽性対照群およびゼロ調整ウェルとして設定し、各群について4つの平行ウェルを設定する。
（２）37℃、5％ CO2インキュベーターで24〜48時間培養し、MTT溶液（5g/L）を実験の終了前に各ウェルに添加し、その方法は第九章第5節通りである。マイクロプレートリーダーを用いてA570nmのOD値を測定する。薬剤を添加していない陰性群のA570でのOD値を対照とし、以下の式に従って、細胞生存率および薬剤の細胞阻害率を計算する。
細胞生存率＝（試験群のOD値／対照群のOD値）×100％
細胞阻害率（％）＝（1-対照群のOD値／試験群のOD値）D群＝（1-
線量の対数を細胞生存率でプロットし、IC50値をプロット法により算出する。
以下、実施例により説明を行うが、保護範囲はこれらの例に限定されるものではない。
【００５４】
発明を実施するための最良の形態
本発明で採用した主な材料（含有量99％以上）及びその由来： 
3,4,5-トリヒドロキシ安息香酸および3,4,5-トリヒドロキシ安息香酸プロピルは、Long Yuan Natural Polyphenol Synthesis Plant of Nanjingから購入した。2,3-ジヒドロキシ安息香酸および3,4-ジヒドロキシ安息香酸は、Zhong Da Chemical Co., Ltd. of Taizhou Cityから購入した。2,2'-ジヒドロキシベンゾフェノン、2,2'3'-トリヒドロキシベンゾフェノン、2,4,2',4'-テトラヒドロキシベンゾフェノン、2,3,4-トリヒドロキシベンゾフェノン、2,3,4,2',3',4'-ヘキサヒドロキシベンゾフェノン、2,3,4,2',4',5-ヘキサヒドロキシベンゾフェノンおよび3,4,5,2',3',4'-ヘキサヒドロキシベンゾフェノンは、Li Cheng Chemical Co., Ltd. of Shanghaiから購入した。
【００５５】
実施例１  抗HPVマイクロエマルジョンの調製
20mlの1,2-プロピレングリコール、15mlのツイーン80および5mlのケトンを混合し、滅菌蒸留水を100mlとなるように加え、外用液剤を得た。10gの2,4,2',4'-テトラヒドロキシベンゾフェノンに50mlの外用液剤を加え、pHを5.5に調整した後、外用液剤を100mlとなるように加え、10％の本発明の抗HPVマイクロエマルジョンを得た。
【００５６】
実施例２  抗HPV2,3,4,2',4',5-ヘキサヒドロキシベンゾフェノン注射剤の調製
10gの2,3,4,2',4',5-ヘキサヒドロキシベンゾフェノン、8.5gの塩化ナトリウム、10mlの1,2-プロパンジオールおよび10mlのツイーン 80を混合し、滅菌蒸留水を加えて溶解させた後、滅菌蒸留水を100mlとなるように加え、pHを7.4に調整した後、濾過し、ポッティングし、100℃で30分間滅菌して、2,3,4,2',4',5-ヘキサヒドロキシベンゾフェノン注射剤を得た。
【００５７】
実施例３  2,3,4,2',4',5-ヘキサヒドロキシベンゾフェノン化合物発泡錠
0.25gの2,3,4,2',4',5-ヘキサヒドロキシベンゾフェノン、0.01gのポリイノシドおよび0.45gの酒石酸をそれぞれ80メッシュの篩に通過させ、無水エタノールで軟質材料を調製し、次いで、12メッシュの篩に通過させて湿粒を得た後、50℃で乾燥した。同時に、0.65gの重曹、0.02gのデキストリンに滅菌蒸留水を加えて軟質材料を調整し、12メッシュの篩に通過させ湿粒を得た後、50℃で乾燥した後、これらの顆粒を上記乾燥顆粒と混合し、造粒し、所定量の滅菌蒸留水を加えてしばらく焼いた後、0.01gのPEG6000を追加し、均一に混合し、最後に錠剤に圧縮した。
【００５８】
実施例４  HIV-Iインテグラーゼに対するサンプルの阻害試験
HIV-Iインテグラーゼに対するサンプルの阻害試験は、中国国立薬物スクリーニングセンターにより実施された。
一、試験原理：
30個の合成オリゴヌクレオチドをドナー基質として使用し、20個の合成オリゴヌクレオチドを標的基質として使用し、精製したHIV-Iインテグラーゼをドナー基質被覆96ウェルプレートに添加し、ELISA反応を行い、標的DNAの鎖移行産物を検出し、ビオチン標識アルカリホスファターゼ系で発色させ、マイクロプレートリーダーでOD値を測定した。反応系にサンプルを添加して、酵素の阻害剤をスクリーニング用に使用することができる。
【００５９】
二、試験に用いる材料および方法：
１．HIV-I IN：中国国立新薬スクリーニングセンターと中国医学アカデミーの医薬品バイオテクノロジー研究所によって抽出し、保存する。
２．サンプル処理：10個のサンプルA1~A10を使用直前にDMSOに溶解して適切な濃度に調製し、次いで、4つの希釈度で5倍に希釈する。ドナー基質および標的基質はShanghai Biochemical Synthesis製である。
３．試験方法：希釈後の試料をドナー基質被覆96ウェルプレートに添加し、次いで、遺伝子操作された標的酵素およびビオチン−標的基質を含む反応緩衝液に添加し、最適反応条件下でインキュベートし、ビオチン標識アルカリホスファターゼ系で着色し、405nmにおける吸光度のOD値を測定する。
【００６０】
三、試験結果：
【表１】
2018510222.tif 000003
【００６１】
結論：HIV-I INに対するインビトロでの薬物阻害試験のスクリーニング結果は、サンプルが2,2'-ジヒドロキシベンゾフェノン、2,2'3'-トリヒドロキシベンゾフェノン、2,4,2',4'-テトラヒドロキシベンゾフェノン、2,3,4-トリヒドロキシベンゾフェノン、2,3,4,2',3',4'-ヘキサヒドロキシベンゾフェノンおよび2,3,4,2',4',5-ヘキサヒドロキシベンゾフェノンがHIV-I INの半分を阻害する有効濃度（IC50）は、それぞれ、15.32μg/ml、10.46μg/ml、11.23μg/ml、12.11μg/ml、9.12μg/mlおよび10.51μg/mlであった。
【００６２】
実施例５  蛍光定量的PCRによるHPVウイルスの薬物スクリーニング実験
実施例１で得られたマイクロエマルジョンをサンプルとして使用し、対照用として生理食塩水を使用した。
HPVウイルス源：
様々な患者の標準的な生殖器疣贅標本を採取した後、生理食塩水で血液を除去し、無菌条件下で断片に切り、3倍体積の生理食塩水を加えて均一に混合し、ホモジネートに粉砕し、-40℃に置いた。
【００６３】
実験方法：
それぞれのサンプル薬剤のマイクロエマルジョンおよび生理食塩を計50種類取り、それぞれ50の生殖器疣贅組織ホモジネートを加え、37℃で24時間インキュベートした。Da'an Gene Diagnostic Centerから提供されたHPV6,11及び16,18型FQ-PCR診断キットの操作手順に従って試験を行った。従来のアルカリ溶解法で抽出した0.2mlのDNAを薄肉チューブに入れ、同時に一定濃度のプライマー、F-PROBE、DNTP、DNAポリメラーゼ及び緩衝液等を添加し、ABI PRISMTM 7700蛍光定量PCR増幅装置を用いて、93℃で2分間の予備変性後、93℃で45秒、55℃で120秒のサイクルを40回繰り返す。定量結果をコンピュータソフトウェアによって自動的に分析して、初期コピー数の定量結果を計算し、そのデータを表１に示す（Da'an Gene Clinical Test Centerにより完成）。
【００６４】
【表２】
2018510222.tif 000004
【００６５】
結果：試験化合物である2,2'-ジヒドロキシベンゾフェノン、2,2'3'-トリヒドロキシベンゾフェノン、2,4,2',4'-テトラヒドロキシベンゾフェノン、2,3,4-トリヒドロキシベンゾフェノン、2,3,4,2',3',4'-ヘキサヒドロキシベンゾフェノンおよび2,3,4,2',4',5-ヘキサヒドロキシベンゾフェノンを生殖器疣贅の組織ホモジネートに添加して24時間経過後、HPV 6/11およびHPV 16/18ウイルスはFQ-POVRにより検出されなかったが、3,4-ジヒドロキシ安息香酸および2,3-ジヒドロキシベンゼン群は、高濃度のHPV 6/11およびHPV 16/18ウイルス含有量を示し、ブランク群も高いHPV 6/11およびHPV 16/18ウイルス含有量を示し、これは、本発明の化合物がインビトロで迅速かつ効果的にHPVウイルスを殺す能力を有することを示す。
【００６６】
実施例６  抗ヘルペスウイルスI型、II型（HSV-I、II）の阻害試験
一、試験原理：ベロ細胞（アフリカミドリザルの腎細胞）をウイルス宿主として、ヘルペスウイルスI型およびII型に起因するベロ細胞の変性効果に対するサンプルの阻害度を測定した。
【００６７】
二、試験材料および方法
１．ウイルス株：HSV-1、VR733株、およびHSV-II、SAV株のいずれもATCCによって提供された。
２．サンプル処理：サンプルを使用直前にDMSOに溶解し適切な濃度に調整し、試験のために3倍に希釈、計8つの希釈度に調製した。
３．陽性対象薬物：アシクロビル（ACV）、Hubei Ke Yi pharmaceutical factory製。
４．測定方法：96ウェルプレートにベロ細胞を植え、24時間後にヘルペスウイルスI型10-3（TCID50感染量の50倍）とII型ヘルペスウイルス10-4（TCID50感染量の10倍）にそれぞれ感染させ、2時間吸収させた後、ウイルス溶液を廃棄した。上記の希釈度に従ってサンプルおよび陽性対照薬物を添加すると同時に、細胞対照ウェルおよびウイルス対照ウェルを設定し、細胞変性効果（CPE）を48時間観察し、Reed-Muench法によってヘルペスウイルスI型およびII型に対する試料のそれぞれの半数阻害濃度（IC50）を計算した。
【００６８】
三、測定結果
【表３】
2018510222.tif 000005
【００６９】
結果：試験化合物の添加後、上記の種々のヒドロキシ置換ベンゾフェノンがHSV-IおよびHSV-IIの両方において異なる阻害率を有することを示す。
【００７０】
四、口唇ヘルペスの治療の臨床観察：
１．材料：
20mlのグリセロール、20mlの1,2-プロピレングリコール、15mlのツイーン80および5mlのケトンを混合し、滅菌蒸留水を全量が100mlとなるように加え、外用剤溶液を得た。10gの2,3,4,2',4',5-ヘキサヒドロキシベンゾフェノンに、50mlの外用剤液を加えpH5.5に調整し、外用剤液を100mlとなるように加えて、得られた10％の本発明の抗HPVマイクロエマルジョンをAとし、市販のアシクロビル軟膏（Shanghai General Pharmaceutical Co., Ltd.製）をBとした。
２．方法及び結果：
口唇ヘルペスを患っている10人の患者をA群とB群にランダムに分けた。
A群：5人の患者にAを1日に4回塗抹し、翌日、5人全員が結痂した。
B群：5人の患者にBを1日4回で塗抹し、3日目に2人が結痂し、5日目に3人が結痂した。
A群の効果がB群より有意に優れている。
この結果は、2,3,4,2',4',5-ヘキサヒドロキシベンゾフェノンが抗ヘルペス機能を有し、ヘルペス感染の治療に使用できることを示している。
【００７１】
実施例７  化合物のインビトロ抗腫瘍試験
一、試験材料
１．腫瘍細胞株：ヒト神経膠腫細胞株（U251）、ヒト結腸癌細胞株（LOVO）、ヒト肝癌細胞株（HepG2）、ヒト肺癌細胞株（PC84045）、ヒト子宮内膜癌細胞株（JEC）、ヒト腎癌細胞株（GRC）、ヒト胃癌細胞株（MCG804）、ヒト子宮頸癌細胞株（HeLa）、ヒト肝癌細胞株（BEL-7402）、ヒト臍帯静脈内皮細胞株（ECV304）の何れも中山医科大学の動物研究室から購入し、該研究室で保存した。
２．測定機器および試薬：Sheldon社のCO2加湿インキュベーター、蘇州浄化設備工場のベンチトップ、Biored社のマイクロプレートリーダー、Sigma社のトリプシン、Gibco社のRPMI-1640培地、Corning社の96ウェル培養プレート、杭州四季清社の新生ウシ血清を用いた。
【００７２】
二、測定方法
１．細胞培養
腫瘍細胞株を通常の方法により15％の新生ウシ血清を含むRPMI-1640培地で培養し、37℃で、5％のCO2を含む加湿インキュベーターで培養、倒立顕微鏡により成長を観察した。約3〜5日おきに継代培養を行い、対数増殖期の細胞を0.25％のトリプシンで消化し、血清を含まないRPMI-1640培地で細胞懸濁液を調製した。血球計数プレートで計数し、トリパンブルー排除により細胞活性を測定し、細胞生存率>95％を正式試験に用いた[１]。
２．MTT法
液体調製：化合物をそれぞれコードで標識し、DMSOを用いて各化合物を溶解し、細菌フィルターを用いて細菌を除去し、各化合物を10-4g/ml、10-5g/ml、10-6μg/mlに調製し、4℃で保存した。
MTT法：指数増殖期の4〜5日齢の細胞を培養し、適量のトリプシン-EDTA溶液を添加して付着細胞を脱落させ、15％の新生ウシ血清を含むRPMI-1640培地10mlを添加し懸濁液を調製し、トリパンブルーで染色した後、血球計数プレート上の細胞数を計数して、生存細胞が97％以上であることを確認した。細胞懸濁液を完全培地で希釈して、各100mlの溶液に5000〜400000個の細胞を含むように調製した。96ウェルプレートを使用し、ウェル毎に200μlの細胞懸濁液をそれぞれ添加し、96ウェルプレートを37℃、5％CO2インキュベーターに24時間置く。試験化合物の3つの希釈度を用意し、各濃度について5つのウェルで平行に添加すると同時に、無血清RPMI1640を対照群として使用する。96ウェルプレートを5％のCO2および100％湿度のインキュベーターにて37℃で3日間インキュベートする。MTTを無血清RPMI 1640培地で1mg/mlの溶液に調製し、各ウェルに50μl添加し、37℃で4時間インキュベートしてMTTをホルマザンに還元した。上清を吸い取り、200μlのDMSOを加えてホルマザンを溶解し、得られた溶液をプレートシェーカーで5分間振盪して均一にする。マイクロプレートリーダーを用いて吸光度値を測定し、670nmの対照波長、570nmの波長で各ウェルの吸光度値を測定し、得られたデータをSPSS11.0統計ソフトウェアで処理し、細胞の阻害率を算出した。
阻害率％=（1-サンプル群の平均吸光度／溶媒群の平均吸光度）×100％
３．結果の判断
阻害率  >50％は、敏感であることを意味し、
30％〜50％は、中度敏感であることを意味し、
<30％は、鈍感であることを意味する。
【００７３】
三、測定結果と分析
【表４】
2018510222.tif 000006
【００７４】
2018510222.tif 000007
【００７５】
結果：試験化合物を添加した3日後に、上記の様々なヒドロキシ置換ベンゾフェノンが、種々の腫瘍細胞に対して異なる阻害率を示し、ヒト肺癌細胞株（PC84045）、ヒト子宮内膜癌細胞株（JEC）、ヒト腎癌細胞株（GRC）、ヒト子宮頸癌細胞株（HeLa）およびヒト肝細胞癌細胞株（BEL-7402）を有意に阻害することを示した。この結果は、本発明のヒドロキシ置換ベンゾフェノン化合物およびその類似体が腫瘍細胞を阻害するのに有効であることを示している。
【産業上の利用可能性】
【００７６】
本発明では、HIV、ヘルペスウイルス、乳頭腫ウイルスおよびそれらによって誘発される疾患の感染を予防および治療することができる抗ウイルス薬および抗腫瘍薬の調製にヒドロキシベンゾフェノンを用いた。 ヒドロキシ置換ベンゾフェノンおよびその類似体は、様々な賦形剤とともに、異なる薬剤または個人的に消毒するための衛生用品に調製することができる。
【手続補正書】
【提出日】平成29年11月30日(2017.11.30)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ウイルス感染症および抗腫瘍の予防および治療用薬剤の製造におけるヒドロキシ置換ベンゾフェノン化合物の応用において、前記ヒドロキシ置換ベンゾフェノン化合物及びその類似体が、下記式（１）で表される化合物から選択される１種以上の化合物であり、
2018510222.tif 000009
（１）
式中、R1、R2、R3、R4、R5、R'1、R'2、R'3、R'4およびR'5は、それぞれ、独立してOHまたはHから選択され、且つ、R1、R2、R3、R4、R5、R'1、R'2、R'3、R'4およびR'5のうち少なくとも１つがOHであることを特徴とするヒドロキシ置換ベンゾフェノン化合物の応用。
【請求項２】
R1、R2、R3、R4、R5、R'1、R'2、R'3、R'4およびR'5において、２つ以上のOHを含むことを特徴とする請求項１に記載の応用。
【請求項３】
R1、R2、R3、R4、R5、R'1、R'2、R'3、R'4およびR'5において、３つ以上のOHを含むことを特徴とする請求項１に記載の応用。
【請求項４】
前記ヒドロキシ置換ベンゾフェノン化合物が、2,2'-ジヒドロキシベンゾフェノン、2,2'3'-トリヒドロキシベンゾフェノン、2,3,4-トリヒドロキシベンゾフェノン、2,4,2',4'-テトラヒドロキシベンゾフェノン、2,3,4,2',3',4'-ヘキサヒドロキシベンゾフェノンおよび2,3,4,2',4',5-ヘキサヒドロキシベンゾフェノンから選択される何れか１つの化合物であることを特徴とする請求項１に記載の応用。
【請求項５】
前記ヒドロキシ置換ベンゾフェノン化合物が、2,4,2',4'-テトラヒドロキシベンゾフェノン、2,3,4,2',3',4'-ヘキサヒドロキシベンゾフェノンおよび2,3,4,2',4',5-ヘキサヒドロキシベンゾフェノンから選択される何れか１つの化合物であることを特徴とする請求項１に記載の応用。
【請求項６】
前記ヒドロキシ置換ベンゾフェノン化合物が、2,3,4,2',3',4'-ヘキサヒドロキシベンゾフェノンおよび2,3,4,2',4',5-ヘキサヒドロキシベンゾフェノンから選択される何れか１つの化合物であることを特徴とする請求項１に記載の応用。
【請求項７】
有効量の前記化合物および/またはそれを活性成分として含む組成物と、注射剤または経口剤用の各種賦形剤と共に、粉末注射剤、水注射剤、輸液剤、錠剤、カプセル剤、顆粒剤または液剤を調製することを特徴とする請求項１〜６の何れかの１項に記載の応用。
【請求項８】
有効量の前記化合物および/またはそれを活性成分として含む組成物と、皮膚粘膜用製剤の各種賦形剤と共に、軟膏剤、ゲル剤、坐剤、錠剤、ローション剤、フィルム剤またはスプレー剤を調製することを特徴とする請求項１〜６の何れかの１項に記載の応用。
【請求項９】
有効量の前記化合物および/またはそれを活性成分として含む組成物と、各種賦形剤と共に、抗ウイルス及び抗腫瘍製品を調製し、前記抗ウイルス製品は、ハンドクリーナー、入浴剤、手洗い石けん、入浴スポンジ、パーソナルケアワイプ、顔拭きシート、鼻スプレー、うがい薬、膣洗浄剤、膣潤滑剤、避妊具およびそれらの組み合わせからなるパーソナルケア製品から選択されることを特徴とする請求項１〜６の何れかの１項に記載の応用。
【請求項１０】
ヒドロキシ置換ベンゾフェノン化合物が、ウイルス性疾患および腫瘍の予防および治療用薬物に使応用されることを特徴とする請求項１〜６の何れかの１項に記載の応用。
【請求項１１】
前記ウイルス感染は、ヒトおよび動物から感染したヘルペスウイルス、HIVおよびヒトパピローマウイルスであることを特徴とする請求項１〜６の何れかの１項に記載の応用。
【請求項１２】
皮膚粘膜疣贅を予防および治療する薬物を調製することを特徴とする請求項１〜６の何れかの１項に記載の用途。
【請求項１３】
ヘルペスウイルス誘発性疾患を予防および治療する薬物を調製することを特徴とする請求項１〜６の何れかの１項に記載の応用。
【請求項１４】
口唇、生殖器ヘルペスおよび帯状ヘルペスを予防および治療する薬物を調製することを特徴とする請求項１〜６の何れかの１項に記載の応用。
【請求項１５】
3,4,5,2',3',4'-ヘキサヒドロキシベンゾフェノンを含まないヘルペスウイルス誘発性老人性認知症を予防および治療する薬物を調製することを特徴とする請求項１〜６の何れかの１項に記載の応用。
【請求項１６】
ヒトパピローマウイルスのウイルス負荷量を除去または減少させ、ウイルス誘発性癌を抑制する薬物を調製することを特徴とする請求項１〜６の何れかの１項に記載の応用。 
【請求項１７】
ヒトパピローマウイルスのウイルス負荷量を除去または減少させ、ウイルス誘発性子宮頚癌を抑制する薬物を調製することを特徴とする請求項１〜６の何れかの１項に記載の応用。 
【請求項１８】
エイズを予防および治療する薬物を調製することを特徴とする請求項１〜６の何れかの１項に記載の応用。 
【請求項１９】
腫瘍を予防および治療する薬物を調製することを特徴とする請求項１〜６の何れかの１項に記載の応用。 
【請求項２０】
子宮頚癌を予防および治療する薬物を調製することを特徴とする請求項１〜６の何れかの１項に記載の用途。 
【請求項２１】
消化管腫瘍を予防および治療する薬物を調製することを特徴とする請求項１〜６の何れかの１項に記載の応用。 
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１６】
本発明は、抗ウイルス薬またはウイルス誘発性疾患の予防薬の製造におけるヒドロキシ置換ベンゾフェノン化合物の応用に関し、前記ヒドロキシ置換ベンゾフェノン化合物は、以下の式（１）で表される化合物から選択される１種以上の化合物であり、
2018510222.tif 000010
（１）
式中、R1、R2、R3、R4、R5、R'1、R'2、R'3、R'4及びR'5は、それぞれ、独立してOHまたはHから選択され、且つ、R1、R2、R3、R4、R5、R'1、R'2、R'3、R'4およびR'5のうち少なくとも１つがOHである。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５３】
（１）0.25％トリプシン消化により腫瘍細胞懸濁液を調製し、10％ウシ胎児血清を含むRPMI1640を用いて105/mlの細胞濃度に調整し、96ウェルプレートに各ウェル100μlずつ加え、24時間培養し、異なる投与量の薬剤を100μl/ウェルで添加し、陰性対照群、陽性対照群およびゼロ調整ウェルとして設定し、各群について4つの平行ウェルを設定する。
（２）37℃、5％ CO2インキュベーターで24〜48時間培養し、MTT溶液（5g/L）を実験の終了前に各ウェルに添加し、マイクロプレートリーダーを用いてA570nmのOD値を測定する。薬剤を添加していない陰性群のA570でのOD値を対照とし、以下の式に従って、細胞生存率および薬剤の細胞阻害率を計算する。
細胞生存率＝（試験群のOD値／対照群のOD値）×100％
細胞阻害率（％）＝[（対照群のOD値−試験群のOD値）／（対照群のOD値−ブランク群のOD値）]×100％
線量の対数を細胞生存率でプロットし、IC50値をプロット法により算出する。
以下、実施例により説明を行うが、保護範囲はこれらの例に限定されるものではない。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６３】
実験方法：
サンプル薬剤のマイクロエマルジョンおよび生理食塩を其々50μl取り、其々50μlの生殖器疣贅組織ホモジネートを加え、37℃で24時間インキュベートした。Da'an Gene Diagnostic Centerから提供されたHPV6,11及び16,18型FQ-PCR診断キットの操作手順に従って試験を行った。従来のアルカリ溶解法で抽出した0.2mlのDNAを薄肉チューブに入れ、同時に一定濃度のプライマー、F-PROBE、DNTP、DNAポリメラーゼ及び緩衝液等を添加し、ABI PRISMTM 7700蛍光定量PCR増幅装置を用いて、93℃で2分間の予備変性後、93℃で45秒、55℃で120秒のサイクルを40回繰り返す。定量結果をコンピュータソフトウェアによって自動的に分析して、初期コピー数の定量結果を計算し、そのデータを表２に示す（Da'an Gene Clinical Test Centerにより完成）。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７３】
三、測定結果と分析
【表４】
2018510222.tif 000011
【国際調査報告】
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2018510222.tif 000013
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