(57)【要約】  本発明は、フコステロール、ホンダワラ、ホンダワラ粉砕物、ホンダワラ抽出物、ヒジキ、ヒジキ粉砕物またはヒジキ抽出物を含む筋肉疾患の予防または治療用または筋機能改善用組成物に関する。本発明によるフコステロール、ホンダワラ、ホンダワラ粉砕物、ホンダワラ抽出物、ヒジキ、ヒジキ粉砕物またはヒジキ抽出物は、筋タンパク質の合成に関与する主な遺伝子ｐ−ｍＴＯＲのタンパク質発現の増加、筋タンパク質の分解に関与するＭｕＲＦ−１とａｔｒｏｇｉｎ−１のｍＲＮＡの発現の抑制、筋肉分化に関与するＭｙｏＤとミオゲニンのｍＲＮＡの発現を増加させることにより、筋機能を顕著に増強する効果がある。また、本発明の組成物は、天然物であるので、副作用なしに安全に使用され得、医薬品、食品、化粧品または家畜飼料または飼料添加剤に使用され得る。
2018524398.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記化学式１で表されるフコステロール（ｆｕｃｏｓｔｅｒｏｌ）化合物またはこれを含むホンダワラ（Ｓａｒｇａｓｓｕｍ  ｆｕｌｖｅｌｌｕｍ）抽出物またはヒジキ（Ｓａｒｇａｓｓｕｍ  ｆｕｓｉｆｏｒｍｅ）抽出物を有効成分として含む筋肉疾患の予防または治療用薬学的組成物：
【化１】
2018524398.tif 000025
【請求項２】
前記化学式１で表されるフコステロールは、ホンダワラ抽出物またはヒジキ抽出物から分離されることを特徴とする、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項３】
ホンダワラ、その粉砕物またはその抽出物を有効成分として含む筋肉疾患の予防または治療用薬学的組成物。
【請求項４】
ヒジキ、その粉砕物またはその抽出物を有効成分として含む筋肉疾患の予防または治療用薬学的組成物。
【請求項５】
前記抽出物は、水、炭素数１〜６の有機溶媒、亜臨界流体および超臨界流体よりなる群から選ばれるいずれか一つ以上の溶媒でホンダワラまたはヒジキを抽出して収得することを特徴とする、請求項１〜４のいずれかに記載の薬学的組成物。
【請求項６】
前記炭素数１〜６の有機溶媒は、炭素数１〜６のアルコール、アセトン、エーテル、ベンゼン、クロロホルム、エチルアセテート、メチレンクロリド、ヘキサン、シクロヘキサンおよび石油エーテルよりなる群から選ばれるいずれか一つ以上の溶媒であることを特徴とする、請求項５に記載の薬学的組成物。
【請求項７】
前記抽出物は、１００ＭＰａ〜１０００ＭＰａの超高圧の条件下にホンダワラまたはヒジキを抽出して収得することを特徴とする、請求項１〜４のいずれかに記載の薬学的組成物。
【請求項８】
前記筋肉疾患は、 緊張減退症（ａｔｏｎｙ）、筋萎縮症（ｍｕｓｃｕｌａｒ  ａｔｒｏｐｈｙ）、筋ジストロフィー（ｍｕｓｃｕｌａｒ  ｄｙｓｔｒｏｐｈｙ）、筋肉退化、筋無力症、悪液質（ｃａｃｈｅｘｉａ）および筋肉減少症（ｓａｒｃｏｐｅｎｉａ）よりなる群から選ばれるいずれか一つ以上であることを特徴とする、請求項１〜４のいずれかに記載の薬学的組成物。
【請求項９】
下記化学式１で表されるフコステロール化合物またはこれを含むホンダワラ抽出物またはヒジキ抽出物を有効成分として含む筋肉疾患の予防または改善用健康機能食品組成物：
【化２】
2018524398.tif 000026
【請求項１０】
前記化学式１で表されるフコステロールは、ホンダワラ抽出物またはヒジキ抽出物から分離されることを特徴とする、請求項９に記載の健康機能食品組成物。
【請求項１１】
ホンダワラ、その粉砕物またはその抽出物を有効成分として含む筋肉疾患の予防または改善用健康機能食品組成物。
【請求項１２】
ヒジキ、その粉砕物またはその抽出物を有効成分として含む筋肉疾患の予防または改善用健康機能食品組成物。
【請求項１３】
前記抽出物は、水、炭素数１〜６の有機溶媒、亜臨界流体および超臨界流体よりなる群から選ばれるいずれか一つ以上の溶媒でホンダワラまたはヒジキを抽出して収得することを特徴とする、請求項９〜１２のいずれかに記載の健康機能食品組成物。
【請求項１４】
前記炭素数１〜６の有機溶媒は、炭素数１〜６のアルコール、アセトン、エーテル、ベンゼン、クロロホルム、エチルアセテート、メチレンクロリド、ヘキサン、シクロヘキサンおよび石油エーテルよりなる群から選ばれるいずれか一つ以上であることを特徴とする、請求項１３に記載の健康機能食品組成物。
【請求項１５】
前記抽出物は、１００ＭＰａ〜１０００ＭＰａの超高圧の条件下にホンダワラまたはヒジキを抽出して収得することを特徴とする、請求項９〜１２のいずれかに記載の健康機能食品組成物。
【請求項１６】
前記筋肉疾患は、緊張減退症、筋萎縮症、筋ジストロフィー、筋肉退化、筋無力症、悪液質および筋肉減少症よりなる群から選ばれるいずれか一つ以上であることを特徴とする、請求項９〜１２のいずれかに記載の健康機能食品組成物。
【請求項１７】
下記化学式１で表されるフコステロール化合物またはこれを含むホンダワラ抽出物またはヒジキ抽出物を有効成分として含む筋機能改善用化粧料組成物：
【化３】
2018524398.tif 000027
【請求項１８】
前記化学式１で表されるフコステロールは、ホンダワラ抽出物またはヒジキ抽出物から分離されることを特徴とする、請求項１７に記載の化粧料組成物。
【請求項１９】
ホンダワラ、その粉砕物またはその抽出物を有効成分として含む筋機能改善用化粧料組成物。
【請求項２０】
ヒジキ、その粉砕物またはその抽出物を有効成分として含む筋機能改善用化粧料組成物。
【請求項２１】
前記抽出物は、水、炭素数１〜６の有機溶媒、亜臨界流体および超臨界流体よりなる群から選ばれるいずれか一つ以上の溶媒でホンダワラまたはヒジキを抽出して収得することを特徴とする、請求項１７〜２０のいずれかに記載の化粧料組成物。
【請求項２２】
前記炭素数１〜６の有機溶媒は、炭素数１〜６のアルコール、アセトン、エーテル、ベンゼン、クロロホルム、エチルアセテート、メチレンクロリド、ヘキサン、シクロヘキサンおよび石油エーテルよりなる群から選ばれるいずれか一つ以上の溶媒であることを特徴とする、請求項２１に記載の化粧料組成物。
【請求項２３】
前記抽出物は、１００ＭＰａ〜１０００ＭＰａの超高圧の条件下でホンダワラまたはヒジキを抽出して収得したことを特徴とする、請求項１７〜２０のいずれかに記載の化粧料組成物。
【請求項２４】
下記化学式１で表されるフコステロール化合物またはこれを含むホンダワラ抽出物またはヒジキ抽出物を有効成分として含む筋肉疾患の予防または改善用飼料添加剤：
【化４】
2018524398.tif 000028
【請求項２５】
前記化学式１で表されるフコステロールはホンダワラ抽出物またはヒジキ抽出物から分離されることを特徴とする、請求項２４に記載の飼料添加剤。
【請求項２６】
ホンダワラ、その粉砕物またはその抽出物を有効成分として含む筋肉疾患の予防または改善用飼料添加剤。
【請求項２７】
ヒジキ、その粉砕物またはその抽出物を有効成分として含む筋肉疾患の予防または改善用飼料添加剤。
【請求項２８】
前記抽出物は、水、炭素数１〜６の有機溶媒、亜臨界流体および超臨界流体よりなる群から選ばれるいずれか一つ以上の溶媒でホンダワラまたはヒジキを抽出して収得することを特徴とする、請求項２４〜２７のいずれかに記載の飼料添加剤。
【請求項２９】
前記炭素数１〜６の有機溶媒は、炭素数１〜６のアルコール、アセトン、エーテル、ベンゼン、クロロホルム、エチルアセテート、メチレンクロリド、ヘキサン、シクロヘキサンおよび石油エーテルよりなる群から選ばれるいずれか一つ以上であることを特徴とする、請求項２８に記載の飼料添加剤。
【請求項３０】
前記抽出物は、１００ＭＰａ〜１０００ＭＰａの超高圧の条件下でホンダワラまたはヒジキを抽出して収得したことを特徴とする、請求項２４〜２７のいずれかに記載の飼料添加剤。
【請求項３１】
前記筋肉疾患は、緊張減退症、筋萎縮症、筋ジストロフィー、筋肉退化、筋無力症、悪液質および筋肉減少症よりなる群から選ばれるいずれか一つ以上であることを特徴とする、請求項２４〜２７のいずれかに記載の飼料添加剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０１５年５月２６日付けで出願された韓国特許出願第１０−２０１５−００７２７４０号および２０１６年５月２６日付けで出願された韓国特許出願第１０−２０１６−００６４９１７号を優先権として主張し、前記明細書の全体は、本出願の参考文献である。
【０００２】
本発明は、筋肉疾患の予防、改善または治療用または筋機能改善用組成物に関し、より詳細には、フコステロール（ｆｕｃｏｓｔｅｒｏｌ）、ホンダワラ（Ｓａｒｇａｓｓｕｍ
ｆｕｌｖｅｌｌｕｍ）、ホンダワラ粉砕物、ホンダワラ抽出物、ヒジキ（Ｓａｒｇａｓｓｕｍ  ｆｕｓｉｆｏｒｍｅ）、ヒジキ粉砕物またはヒジキ抽出物を含む筋肉疾患の予防、改善または治療用または筋機能改善用組成物に関する。
【背景技術】
【０００３】
筋萎縮とは、筋肉量の漸進的減少に伴って発生するものであって、筋肉の弱化および退行を称する（Ｃｅｌｌ  １１９（７）：９０７−９１０、２００４）。筋萎縮は、非活動、酸化的ストレス、慢性炎症により促進され、筋肉機能と運動能力を弱化させる（Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ、２６（５）：５２４−５３４、２００７）。筋肉機能を決定づける最も重要な要素は筋肉量であり、これは、タンパク質の合成と分解の均衡により維持される。筋萎縮症は、タンパク質の分解が合成より大きく起こるときに発生する（Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．３７（１０）：１９８５−１９９６、２００５）。
【０００４】
筋肉のサイズは、筋肉内で起こる同化作用や異化作用を誘導する細胞内シグナル伝達経路により調節され、筋肉タンパク質の分解より合成を誘導するシグナル伝逹反応が多く起こる場合、筋肉タンパク質の合成が増加するが、これは、筋肉タンパク質の増加による筋肉サイズの増加（ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｙ、筋肥大）や筋線維数の増加（ｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａ）として現われる（Ｔｈｅ  Ｋｏｒｅａ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｓｐｏｒｔｓ
Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２０（３）：１５５１−１５６１、２０１１）。
【０００５】
筋タンパク質の合成に関与する因子は、筋細胞内でｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ−３ｋｉｎａｓｅ（ＰＩ３Ｋ）／Ａｋｔ経路の刺激を基点としてダウンストリームタンパク質をリン酸化させることにより、タンパク質の合成を誘導する。ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔシグナル伝逹による哺乳類ラパマイシン標的タンパク質（ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｔａｒｇｅｔ  ｏｆ  ｒａｐａｍｙｃｉｎ、 ｍＴＯＲ ）の活性は、細胞内で多様な成長シグナルを統合する中心成長シグナル伝逹因子と認められている。ｍＴＯＲは、ｍＲＮＡ翻訳を開始する二つの因子、４Ｅ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ（４Ｅ−ＢＰ１ ）と ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｅｄ  ７０−ｋＤａ  ｒｉｂｏｓｏｍａｌ  Ｓ６  ｋｉｎａｓｅ（ｐ７０Ｓ６Ｋ）を活性化させることにより、筋タンパク質の合成を誘導して筋肉量の増加に寄与する（Ｔｈｅ  Ｋｏｒｅａ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｓｐｏｒｔｓ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２０（３）：１５５１−１５６１、２０１１；Ｔｈｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、４３（９）：１２６７−１２７６，２０１１）。反対に、転写因子（ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒ）のｆｏｒｋｈｅａｄ  ｂｏｘ（ＦｏｘＯ）が細胞質から核内に移動すると、蛋白質の分解に関与するＥ３ユビキチンリガーゼ因子ａｔｒｏｇｉｎ−１とＭｕＲＦ−１の発現を増加させる（Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｍｏｄｅｌｓ  ａｎｄ  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ、６：２５−３９、２０１３）。これらの発現量が増加すると、筋肉内の蛋白質分解が促進されて筋肉量が減少する。したがって、ｍＴＯＲの活性促進とａｔｒｏｇｉｎ−１とＭｕＲＦ−１の発現抑制は、筋肉蛋白質の量を増加させて筋肉量を増加さ
せる。
【０００６】
筋肉細胞の分化と筋肉の形成は、多様な筋肉調節因子により調節される。そのうち、ＭｙｏＤは、筋肉特異遺伝子の発現を開始させ、筋衛星細胞が筋芽細胞に分化することを誘導する。 ＭｙｏＤの活性によるミオゲニン発現の誘導は、筋芽細胞の結合に最も重要な要素であって、筋管細胞の形成に関与する。このような過程を通じて形成された筋線維は、束を成して最終的に筋肉を形成する（Ｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、７０：４１１７−４１３０、２０１３）。
【０００７】
ホンダワラは、ホンダワラ属（Ｓａｒｇａｓｓｕｍ）に属する海藻類である。今までホンダワラの活性としては、抗菌（Ｋｏｒｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｆｏｏｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、４２（２）：１５５−１５９、２０１０）、抗炎症（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、１１６（１）：１８７−１９０、２００８）、抗酸（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｆｏｏｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ、１２（２）：６５−７３、２００７）、抗癌（Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ、３２（１２）：１００４−１００９、１９８４）、抗光老化（Ｅｖｉｄｅｎｃｅ−ｂａｓｅｄ  Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ  ａｎｄ  Ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、２０１３：７４７８４６、２０１３）、抗糖尿（Ｎａｔｕｒａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、１８（２）：１３０−１３６、２０１２）などの活性が報告されている。
【０００８】
ヒジキは、ホンダワラ属に属する海藻類である。今までヒジキに対する活性としては、抗酸と抗炎症（Ｔｒｏｐｉｃａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１４（３）：４６３−４６８、２０１５）、抗糖尿（Ｆｏｏｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、２３（３）：２０３７−２０４４、２０１４）、抗ウイルス（Ｎａｔｕｒａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ、４８（３）：１７３−１７９、１９９４）、抗癌（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｆｏｏｄ、１２（４）：７８２−７８７、２００９）、抗骨粗鬆症（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｆｏｏｄ、１５（４）：３８４−３９０、２０１２）などの活性が報告されている。
【０００９】
フコステロールは、ホンダワラとヒジキを含む海藻類に多く含有されている物質であって、韓国、中国、日本国などアジア地域の海岸に生息する海藻類で多く発見されている。今までフコステロールの活性は、抗癌（Ｐｈａｒｍａｃｏｇｎｏｓｙ  Ｍａｇａｚｉｎｅ、８（２９）：６０−６４、２０１２）、抗糖尿（Ａｒｃｈｉｖｅｓ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２７（１１）：１１２０−１１２２、２００４）、抗酸化（Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ａｎｄ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、１７（５）：１９６３−１９７３、２００９）、血中脂質成分の改善（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ、３６９（２）：３６３−３６８、２００８）、コレステロール代謝の改善（Ｎｅｗ  Ｐｈｙｔｏｌｏｇｉｓｔ、１８３（２）：２９１−３００、２００９）、抗菌（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ａｎａｌｙｓｉｓ、５１（２）：４５０−４５５５、２０１０）、抗かび（Ｎａｔｕｒａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２４（１５）：１４８１−１４８７、２０１０）、抗老化（Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌｏｇｙ、８９（４）：９１１−９１８、２０１３）などが報告されている。
【００１０】
しかし、本発明以前には、フコステロール、ホンダワラまたはヒジキの筋肉疾患の予防、改善または治療または筋機能の改善については知られていなかった。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
よって、本発明者らは、優れた筋機能調節活性を有し、安全に適用され得る天然物質を探索した結果、フコステロール、ホンダワラ、ホンダワラ粉砕物、ホンダワラ抽出物、ヒジキ、ヒジキ粉砕物またはヒジキ抽出物が、筋肉疾患の予防、改善または治療または筋機能改善活性があることを確認して、本発明を完成した。
【００１２】
したがって、本発明の目的は、下記化学式１で表されるフコステロール化合物またはこれを含むホンダワラ抽出物またはヒジキ抽出物を有効成分として含有する筋肉疾患の予防または治療用薬学的組成物を提供するものである：
【００１３】
【化１】
2018524398.tif 000003
【００１４】
本発明の他の目的は、ホンダワラ、その粉砕物またはその抽出物を有効成分として含む筋肉疾患の予防または治療用薬学的組成物を提供することにある。
【００１５】
本発明のさらに他の目的は、ヒジキ、その粉砕物またはその抽出物を有効成分として含む筋肉疾患の予防または治療用または薬学的組成物を提供することにある。
【００１６】
本発明の他の目的は、下記化学式１で表されるフコステロール化合物またはこれを含むホンダワラ抽出物またはヒジキ抽出物を有効成分として含む筋肉疾患の予防または改善用健康機能食品組成物を提供することにある：
【００１７】
【化２】
2018524398.tif 000004
【００１８】
本発明のさらに他の目的は、ホンダワラ、その粉砕物またはその抽出物を有効成分として含む筋肉疾患の予防または改善用健康機能食品組成物を提供することにある。
【００１９】
本発明の他の目的は、ヒジキ、その粉砕物またはその抽出物を有効成分として含む筋肉疾患の予防または改善用健康機能食品組成物を提供することにある。
【００２０】
本発明のさらに他の目的は、下記化学式１で表されるフコステロール化合物またはこれを含むホンダワラ抽出物またはヒジキ抽出物を有効成分として含む筋機能改善用化粧料組成物を提供することにある：
【００２１】
【化３】
2018524398.tif 000005
【００２２】
本発明の他の目的は、ホンダワラ、その粉砕物またはその抽出物を有効成分として含む筋機能改善用化粧料組成物を提供することにある。
【００２３】
本発明のさらに他の目的は、ヒジキ、その粉砕物またはその抽出物を有効成分として含む筋機能改善用化粧料組成物を提供することにある。
【００２４】
本発明の他の目的は、下記化学式１で表されるフコステロール化合物またはこれを含むホンダワラ抽出物またはヒジキ抽出物を有効成分として含む筋肉疾患の予防または改善用飼料添加剤を提供することにある：
【００２５】
【化４】
2018524398.tif 000006
【００２６】
本発明のさらに他の目的は、ホンダワラ、その粉砕物またはその抽出物を有効成分として含む筋肉疾患の予防または改善用飼料添加剤を提供することにある。
【００２７】
本発明の他の目的は、ヒジキ、その粉砕物またはその抽出物を有効成分として含む筋肉疾患の予防または改善用飼料添加剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００２８】
前記課題を解決するための手段として、本発明は、下記化学式１で表されるフコステロール化合物またはこれを含むホンダワラ抽出物またはヒジキ抽出物を有効成分として含む筋肉疾患の予防または治療用薬学的組成物を提供する：
【００２９】
【化５】
2018524398.tif 000007
【００３０】
また、本発明は、ホンダワラ、ホンダワラ粉砕物、ホンダワラ抽出物、ヒジキ、ヒジキ粉砕物またはヒジキ抽出物を有効成分として含む筋肉疾患の予防または治療用薬学的組成物を提供する。
【００３１】
また、本発明は、下記化学式１で表されるフコステロール化合物またはこれを含むホンダワラ抽出物またはヒジキ抽出物を有効成分として含む筋肉疾患の予防または改善用健康機能食品組成物を提供する：
【００３２】
【化６】
2018524398.tif 000008
【００３３】
また、本発明は、ホンダワラ、ホンダワラ粉砕物、ホンダワラ抽出物、ヒジキ、ヒジキ粉砕物またはヒジキ抽出物を有効成分として含む筋肉疾患の予防または改善用健康機能食品組成物を提供する。
【００３４】
また、本発明は、下記化学式１で表されるフコステロール化合物またはこれを含むホンダワラ抽出物またはヒジキ抽出物を有効成分として含む筋機能改善用化粧料組成物を提供する：
【００３５】
【化７】
2018524398.tif 000009
【００３６】
また、本発明は、ホンダワラ、ホンダワラ粉砕物、ホンダワラ抽出物、ヒジキ、ヒジキ粉砕物またはヒジキ抽出物を有効成分として含む筋機能改善用化粧料組成物を提供する。
【００３７】
また、本発明は、下記化学式１で表されるフコステロール化合物またはこれを含むホンダワラ抽出物またはヒジキ抽出物を有効成分として含む筋肉疾患の予防または改善用飼料添加剤を提供する：
【００３８】
【化８】
2018524398.tif 000010
【００３９】
また、本発明は、ホンダワラ抽出物またはヒジキ抽出物を有効成分として含む筋肉疾患の予防または改善用飼料添加剤を提供する。
【００４０】
本発明の好ましい一実施例によると、前記化学式１で表されるフコステロールは、ホンダワラ抽出物またはヒジキ抽出物から分離され得る。
【００４１】
本発明の好ましい一実施例によると、前記抽出物は、水、炭素数１〜６の有機溶媒、亜臨界流体および超臨界流体よりなる群から選ばれるいずれか一つ以上の溶媒でホンダワラまたはヒジキを抽出して収得し得る。
【００４２】
本発明の好ましい他の一実施例によると、前記炭素数１〜６の有機溶媒は、炭素数１〜６のアルコール、アセトン、エーテル、ベンゼン、クロロホルム、エチルアセテート、メチレンクロリド、ヘキサン、シクロヘキサンおよび石油エーテルよりなる群から選ばれるいずれか一つ以上であってもよい。
【００４３】
本発明の好ましいさらに他の一実施例によると、前記抽出物は、１００ＭＰａ〜１０００ＭＰａの超高圧の条件下にホンダワラまたはヒジキを抽出して収得し得る。
【００４４】
本発明の好ましい他の一実施例によると、前記筋肉疾患は、緊張減退症（ａｔｏｎｙ）、筋萎縮症（ｍｕｓｃｕｌａｒ  ａｔｒｏｐｈｙ）、筋ジストロフィー（ｍｕｓｃｕｌａｒ  ｄｙｓｔｒｏｐｈｙ）、筋肉退化、筋無力症、悪液質（ｃａｃｈｅｘｉａ）および筋肉減少症（ｓａｒｃｏｐｅｎｉａ）よりなる群から選ばれるいずれか一つ以上であってもよい。
【発明の効果】
【００４５】
本発明によるフコステロール、ホンダワラ、ホンダワラ粉砕物、ホンダワラ抽出物、ヒジキ、ヒジキ粉砕物またはヒジキ抽出物は、筋タンパク質の合成に関与するｐ−ｍＴＯＲのタンパク質発現の増加、筋タンパク質の分解に関与するＭｕＲＦ−１とａｔｒｏｇｉｎ−１のｍＲＮＡの発現抑制、筋肉分化に関与するＭｙｏＤとミオゲニンのｍＲＮＡの発現を増加させることにより、筋肉量を増大させるのに優れた効果がある。また、本発明の組成物は天然物であるので、副作用なしに安全に使用され得、医薬品、食品、化粧品または家畜飼料または飼料添加剤などに使用され得る。
【図面の簡単な説明】
【００４６】
【図１】図１は、Ｌ６筋肉細胞で、ホンダワラのエタノール抽出物、ヒジキのエタノール抽出物またはフコステロールの処理によるｐ−ｍＴＯＲのタンパク質の発現を測定した結果を示す。
【図２】図２は、Ｌ６筋肉細胞で、フコステロール処理によるｐ−４ＥＢＰ１とｐ−ｐ７０Ｓ６Ｋのタンパク質発現を測定した結果を示す。
【図３】図３は、Ｌ６筋肉細胞で、フコステロールの処理によるＭｙｏＤとミオゲニンのｍＲＮＡの発現を測定した結果を示す。
【図４】図４は、Ｌ６筋肉細胞で、ホンダワラのヘキサン抽出物、エチルアセテート抽出物、エタノール抽出物、熱水抽出物の処理によるＭｙｏＤとミオゲニンのｍＲＮＡの発現を測定した結果を示す。
【図５】図５は、Ｌ６筋肉細胞で、ヒジキのヘキサン抽出物、エチルアセテート抽出物、エタノール抽出物、熱水抽出物の処理によるＭｙｏＤとミオゲニンのｍＲＮＡの発現を測定した結果を示す。
【図６】図６は、Ｌ６筋肉細胞で、フコステロールの処理によるａｔｒｏｇｉｎ−１とＭｕＲＦ−１のｍＲＮＡの発現を測定した結果を示す。
【図７】図７は、Ｌ６筋肉細胞で、ホンダワラのヘキサン抽出物、エチルアセテート抽出物、エタノール抽出物、熱水抽出物の処理によるａｔｒｏｇｉｎ−１とＭｕＲＦ−１のｍＲＮＡの発現を測定した結果を示す。
【図８】図８は、Ｌ６筋肉細胞で、ヒジキのヘキサン抽出物、エチルアセテート抽出物、エタノール抽出物、熱水抽出物の処理によるａｔｒｏｇｉｎ−１とＭｕＲＦ−１のｍＲＮＡの発現を測定した結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００４７】
以下、本発明の構成を具体的に説明する。
【００４８】
本発明は、下記化学式１で表されるフコステロール、ホンダワラ抽出物またはヒジキ抽出物の筋肉疾患の予防、改善または治療用または筋機能改善用途；下記化学式１で表されるフコステロール、ホンダワラ、ホンダワラ粉砕物、ホンダワラ抽出物、ヒジキ、ヒジキ粉砕物またはヒジキ抽出物を含む筋肉疾患の予防、改善または治療用または筋機能改善用組成物；または下記化学式１で表されるフコステロール、ホンダワラ抽出物またはヒジキ抽出物を、ヒトを含む哺乳動物に適用することを含む筋肉疾患の予防、改善または治療または筋機能改善方法を提供する：
【００４９】
【化９】
2018524398.tif 000011
【００５０】
本明細書で「ホンダワラ（Ｓａｒｇａｓｓｕｍ  ｆｕｌｖｅｌｌｕｍｓ）」は、ビョウタケ科（Ｈｅｌｏｔｉａｃｅａｅ）のホンダワラ属（Ｓａｒｇａｓｓｕｍ  ｓｐｐ．）に属する海藻類である。
【００５１】
本明細書で「ヒジキ」（Ｓａｒｇａｓｓｕｍ  ｆｕｓｉｆｏｒｍｅ）  は、ビョウタケ科のホンダワラ属に属する海藻類である。
【００５２】
本明細書で「ホンダワラ粉砕物」または「ヒジキ粉砕物」は、乾燥させたホンダワラまたはヒジキを、本発明の属する技術分野における通常の知識を有する者が容易に実施できる方法により、ヒトを含む哺乳動物が容易に摂取できると共に、摂取後に腸で有効成分が乾燥粉砕物から簡単に遊離して、結果的に哺乳動物の体内に容易に吸収され得る形態で準備して使用され得る。このための乾燥粉砕物粒子の形状やサイズは限定されないが、粒子の表面が極大化するほど前記に記載した有効成分の遊離が容易であるので、できるだけ細かい粉末の形態で製造することが好ましい。本発明の一実施例では、乾燥させたホンダワラまたはヒジキをミキサーで粉砕して粉砕物を製造した。
【００５３】
本明細書で「ホンダワラ抽出物」は、ホンダワラを好適な溶媒を用いて抽出して収得したものであって、抽出液、抽出液の希釈液または濃縮液、抽出液を乾燥して得られる乾燥物、またはこれらの粗精製物または精製物の形態を全部含む。ホンダワラ抽出物の製造方法は、ホンダワラから水、炭素数１〜６の有機溶媒および亜臨界または超臨界流体よりなる群から選ばれた一つ以上の溶媒で抽出して収得し得るが、これに限らない。
【００５４】
本明細書で「ヒジキ抽出物」は、ヒジキを好適な溶媒を用いて抽出して収得したものであって、抽出液、抽出液の希釈液または濃縮液、抽出液を乾燥して得られる乾燥物、またはこれらの粗精製物または精製物の形態を全部含む。ヒジキ抽出物の製造方法は、ヒジキから水、炭素数１〜６の有機溶媒および亜臨界または超臨界流体よりなる群から選ばれた一つ以上の溶媒で抽出して収得し得るが、これに限らない。
【００５５】
本発明のホンダワラ抽出物またはヒジキ抽出物は、加熱抽出、冷浸抽出、超音波抽出法、濾過法および還流抽出法など当業界における通常の抽出方法を用いて製造され得、ホンダワラとヒジキは、商業的に販売されるものを購入して使用したり、自然で採取または栽培されたものが使用できる。
【００５６】
本発明によるホンダワラまたはヒジキ抽出物は、天然物から抽出物を製造する当業界に公知となった通常の方法により、すなわち通常の温度、圧力の条件下に通常の溶媒を用いて分離し得る。
【００５７】
本明細書で使用される用語「分画物」は、多様な構成成分を含む混合物から特定の成分
または特定のグループを分離する分画方法により得られた結果を意味する。本発明では、前記のように製造されたホンダワラまたはヒジキ抽出物から特定の成分または特定のグループを分離する分画方法により得られた結果物を意味する。
【００５８】
本発明によるホンダワラまたはヒジキ分画物を得るために、当業界に公知となった通常の分画溶媒、例えば、水、エタノール、メタノールのような炭素数１〜４の無水または含水低級アルコールなどの極性溶媒およびヘキサン、ブタノール、エチルアセテート、クロロホルム、ジクロロメタンなどの非極性溶媒、またはこれらの混合溶媒が使用できるが、これらに限られない。
【００５９】
本発明のホンダワラまたはヒジキ分画物は、精製過程をさらに適用して得たものも含まれ得る。例えば、本発明によるホンダワラまたはヒジキ抽出物を一定の分子量カット−オフ値を有する限外濾過膜を通過させて得た分画物、多様なクロマトグラフィー（サイズ、電荷、疎水性または親和性による分離のために製作されたもの）による分離などで追加として実施された多様な精製方法を通じて得られた分画物も、本発明のホンダワラまたはヒジキ分画物に含まれる。
【００６０】
本明細書において、「筋」は、筋、筋肉、腱を包括的に指称し、「筋機能」は、筋肉の収縮により力を発揮する能力を意味し、筋肉が抵抗に耐えるために最大限に収縮力を発揮できる能力である筋力と、筋肉が与えられた重量にどれほど長時間またはどれほど何回収縮と弛緩を繰り返すことができるかどうかを示す能力である筋持久力と、短時間内に強い力を発揮する能力である瞬発力を含む。このような筋機能は、肝が担当し、筋肉量に比例する。用語「筋機能の改善」は、筋機能をさらに良好に向上させることを言う。
【００６１】
本発明の筋肉疾患の予防、改善または治療用または筋機能改善用組成物は、ホンダワラ、ホンダワラ粉砕物、ホンダワラ抽出物またはヒジキ、ヒジキ粉砕物またはヒジキ抽出物を単独で含有したり、ホンダワラ、ホンダワラ粉砕物またはホンダワラ抽出物とヒジキ、ヒジキ粉砕物またはヒジキ抽出物を１〜１００の比率で混ぜて含有したり、または類似した機能を示す有効成分を１種以上含有し得る。追加としての成分を含む場合、本発明の組成物の筋機能の改善効果がさらに増進され得る。前記成分の追加時には、複合使用による皮膚の安全性、剤形化の容易性、有効成分の安定性を考慮し得る。
【００６２】
本発明は、ホンダワラ、ホンダワラ粉砕物、ホンダワラ抽出物、ヒジキ、ヒジキ粉砕物またはヒジキ抽出物を有効成分として含む筋肉疾患の予防または治療用薬学的組成物；筋肉疾患の予防または改善用健康機能食品組成物；筋機能改善用化粧料組成物；および筋肉疾患の予防または改善用飼料添加剤を提供する。
【００６３】
また、本発明は、化学式１で表される化合物も、これを含有するホンダワラ抽出物またはヒジキ抽出物を有効成分として含有する筋肉疾患の予防または治療用薬学的組成物；筋肉疾患の予防または改善用健康機能食品組成物；筋機能改善用化粧料組成物；および筋肉疾患の予防または改善用飼料添加剤を提供する：
【００６４】
【化１０】
2018524398.tif 000012
【００６５】
前記化学式１の化合物は、別名フコステロールという。
【００６６】
前記化学式１の化合物は、海藻類および植物抽出物またはこれらの分画物から分離または合成して利用したり、市販の化合物を利用し得る。
【００６７】
一具体例で、前記化学式１で表されるフコステロールは、ホンダワラ抽出物またはヒジキ抽出物から分離されたものであってもよい。
【００６８】
一具体例で、ホンダワラ抽出物は、エタノール抽出物、熱水抽出物、ヘキサン抽出物、エチルアセテート抽出物、超高圧抽出物、超臨界流体抽出物または亜臨界流体抽出物であってもよいが、これらに限らない。
【００６９】
一具体例で、ホンダワラ抽出物は、水、炭素数１〜６の有機溶媒、亜臨界流体および超臨界流体よりなる群から選ばれる一つ以上の溶媒でホンダワラを抽出して収得し得る。例えば、ホンダワラを１００ＭＰａ以上、好ましくは１００ＭＰａ〜１０００ＭＰａの超高圧の条件下に抽出して収得してもよい。必要な場合には、当業界に公知となった方法により濾過および濃縮段階をさらに含んで製造し得る。
【００７０】
一具体例で、炭素数１〜６の有機溶媒は、炭素数１〜６のアルコール、アセトン、エーテル、ベンゼン、クロロホルム、エチルアセテート、メチレンクロリド、ヘキサン、シクロヘキサンおよび石油エーテルよりなる群から選ばれる一つ以上であってもよい。
【００７１】
また、本発明のホンダワラ抽出物は、乾燥させたホンダワラを食品加工に適した精製水、エタノールおよび亜臨界水または超臨界二酸化炭素を利用して抽出、精製して得られるか、超高圧抽出装置を利用して抽出、精製して得られるか、または、ホンダワラを直接圧着して得たオイルから分離精製して得られる。例えば、１００ＭＰａ以上、好ましくは１
００ＭＰａ〜１０００ＭＰａの超高圧の条件下でホンダワラを抽出して抽出物を収得し得る。
【００７２】
一具体例で、ヒジキ抽出物は、エタノール抽出物、熱水抽出物、ヘキサン抽出物、エチルアセテート抽出物、超高圧抽出物、超臨界流体抽出物または亜臨界流体抽出物であってもよいが、これらに限らない。
【００７３】
一具体例で、ヒジキ抽出物は、水、炭素数１〜６の有機溶媒、亜臨界流体および超臨界流体よりなる群から選ばれる一つ以上の溶媒でヒジキを抽出して収得し得る。例えば、ヒジキを１００ＭＰａ以上、好ましくは１００ＭＰａ〜１０００ＭＰａの超高圧の条件下に抽出して収得してもよい。必要な場合にはも当業界に公知となった方法により濾過および濃縮段階をさらに含んで製造し得る。
【００７４】
一具体例で、炭素数１〜６の有機溶媒は、炭素数１〜６のアルコール、アセトン、エーテル、ベンゼン、クロロホルム、エチルアセテート、メチレンクロリド、ヘキサン、シクロヘキサンおよび石油エーテルよりなる群から選ばれる一つ以上であってもよい。
【００７５】
また、本発明のヒジキ抽出物は、乾燥させたヒジキを食品加工に適した精製水、エタノールおよび亜臨界水または超臨界二酸化炭素を利用して抽出、精製して得られるか、超高圧抽出装置を利用して抽出、精製して得られるか、またはヒジキを直接圧着して得たオイルから分離精製して得られる。例えば、１００ＭＰａ以上、好ましくは１００ＭＰａ〜１０００ＭＰａの超高圧の条件下にヒジキを抽出して抽出物を収得し得る。
【００７６】
本発明の具体的な実施例において、本発明者は、乾燥させたホンダワラまたはヒジキ粉砕物をメタノール、エタノール、エチルアセテートおよびヘキサンを溶媒としてそれぞれ常温で反復抽出したり、熱水抽出、超高圧抽出、超臨界流体抽出、亜臨界流体抽出して抽出物を製造した。
【００７７】
製造されたホンダワラのエタノール抽出物、ヒジキのエタノール抽出物およびフコステロールをそれぞれＬ６筋肉細胞に処理して筋肉細胞内で示す活性を確認した結果、筋タンパク質の合成に関与するｐ−ｍＴＯＲのタンパク質の発現を増加させることを確認し（図１）、フコステロール処理によりＬ６筋肉細胞でｍＲＮＡ翻訳過程に関与するｐ−４ＥＢＰ１とｐ−ｐ７０Ｓ６Ｋのタンパク質の発現が増加することを確認した（図２）。また、フコステロール、ホンダワラまたはヒジキのヘキサン抽出物、エチルアセテート抽出物、エタノール抽出物および熱水抽出物は、それぞれＬ６筋肉細胞で筋肉分化に関与するＭｙｏＤとミオゲニンのｍＲＮＡの発現を増加させ（図３〜図５）、筋タンパク質の分解に関与するＭｕＲＦ−１とａｔｒｏｇｉｎ−１のｍＲＮＡの発現を抑制させることを確認した（図６〜図８）。
【００７８】
さらに、ホンダワラまたはヒジキの高圧抽出物をＬ６筋肉細胞に処理して筋肉生成活性を確認した結果、表１に示されるように、ホンダワラ超高圧抽出物、ホンダワラ超臨界流体抽出物、ホンダワラ亜臨界流体抽出物、ヒジキ超高圧抽出物、ヒジキ超臨界流体抽出物およびヒジキ亜臨界流体抽出物は、それぞれ筋機能の改善に関与する主な遺伝子であるｐ−ｍＴＯＲのタンパク質の発現量を増加させることを確認し（表１）、ＴＮＦ−αで筋萎縮を誘導したラット動物モデルにおいて本発明のホンダワラ乾燥粉末、ホンダワラのエタノール抽出物、ヒジキ乾燥粉末、ヒジキのエタノール抽出物またはフコステロールの投与による筋肉重さの変化量を測定した結果、それぞれの処理群が全部対照群に比べて有意的に筋肉量が増加することを確認した（表２）。
【００７９】
前記のような結果を通じて、本発明のホンダワラ、ホンダワラ粉砕物、ホンダワラ抽出
物、ヒジキ、ヒジキ粉砕物、ヒジキ抽出物、または前記抽出物から分離されたフコステロールは、筋肉量を増大させるのに顕著に優れた効果を示すので、筋肉疾患の予防または治療用薬学的組成物；筋肉疾患の予防または改善用健康機能食品組成物；筋肉疾患の予防または改善用飼料添加剤；筋機能改善用化粧料組成物；および飼料添加剤またはこれを含む飼料添加剤の有効成分として有用に使用できる。
【００８０】
本発明の筋肉疾患の予防または治療用組成物が薬学的組成物である場合、筋肉消耗または退化による筋肉疾患の予防または治療に使用され得る。筋肉消耗および退化は、遺伝的要因、後天的要因、老化などを原因として発生し、筋肉消耗は、筋肉量の漸進的損失、筋肉、特に骨格筋または随意筋および心臓筋肉の弱化および退行を特徴とする。これと関連した疾患の例としては、緊張減退症、筋萎縮症、筋ジストロフィー、筋肉退化、筋無力症、悪液質および筋肉減少症などが挙げられるが、これらに限定されるものではない。本発明の組成物は、筋肉量の増大効果があり、筋肉の種類は限定されない。
【００８１】
本発明の薬学的組成物は、フコステロール、ホンダワラ、ホンダワラ粉砕物、ホンダワラ抽出物、ヒジキ、ヒジキ粉砕物またはヒジキ抽出物の薬剤学的に許容可能な塩を含むことができる。本明細書において用語「薬剤学的に許容可能な」とは、生理学的に許容され、ヒトに投与される時に、通常、アレルギー反応またはこれと類似した反応を起こさないことを言い、前記塩としては、薬剤学的に許容可能な遊離酸により形成された酸付加塩が好ましい。
【００８２】
前記フコステロール、ホンダワラ、ホンダワラ粉砕物、ホンダワラ抽出物、ヒジキ、ヒジキ粉砕物またはヒジキ抽出物の薬剤学的に許容可能な塩は、有機酸または無機酸を利用して形成された酸付加塩であってもよく、前記有機酸は、例えば、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、乳酸、ブチル酸、イソブチル酸、トリフルオロ酢酸、リンゴ酸、マレイン酸、マロン酸、フマル酸、コハク酸、コハク酸モノアミド、グルタミン酸、タルタル酸、シュウ酸、クエン酸、グリコール酸、グルクロン酸、アスコルビン酸、安息香酸、フタル酸、サリチル酸、アントラニル酸、ジクロロ酢酸、アミノオキシ酢酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸またはメタンスルホン酸を含む。無機酸は、例えば塩酸、臭素酸、硫酸、リン酸、硝酸、炭酸またはホウ酸を含む。酸付加塩は、好ましくは、塩酸塩または酢酸塩の形態であってもよく、より好ましくは、塩酸塩の形態であってもよい。
【００８３】
前記言及された酸付加塩は、ａ）フコステロール、ホンダワラ、ホンダワラ粉砕物、ホンダワラ抽出物、ヒジキ、ヒジキ粉砕物またはヒジキ抽出物および酸を直接混合したり、ｂ）これらのうち一つを溶媒または含水溶媒中に溶解させ、混合させたり、またはｃ）フコステロール、ホンダワラ、ホンダワラ粉砕物、ホンダワラ抽出物、ヒジキ、ヒジキ粉砕物またはヒジキ抽出物を溶媒または水和溶媒中の酸に位置させ、これらを混合する一般的な塩の製造方法で製造される。
【００８４】
前記とは別に、さらなる塩が可能な形態は、ガバ塩、ガバペンチン塩、プレガバリン塩、ニコチン酸塩、アジペート塩、ヘミマロン酸塩、システイン塩、アセチルシステイン塩、メチオニン塩、アルギニン塩、リシン塩、オルニチン塩またはアスパルト酸塩などがある。
【００８５】
また、本発明の筋肉疾患の予防または治療用薬学組成物は、薬学的に許容可能な担体をさらに含むことができる。
【００８６】
薬学的に許容される担体としては、例えば、経口投与用担体または非経口投与用担体をさらに含むことができる。経口投与用担体は、ラクトース、澱粉、セルロース誘導体、マグネシウムステアレート、ステアリン酸などを含むことができる。また、非経口投与用担
体は、水、好適なオイル、食塩水、水性グルコースおよびグリコールなどを含むことができる。また、安定化剤および保存剤をさらに含むことができる。好適な安定化剤としては、亜硫酸水素ナトリウム、亜硫酸ナトリウムまたはアスコルビン酸のような抗酸化剤がある。好適な保存剤としては、塩化ベンザルコニウム、メチル−またはプロピル−パラベンおよびクロロブタノールがある。その他の薬学的に許容される担体としては、次の文献に記載されているものを参照できる（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ    Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、１９ｔｈ  ｅｄ．、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ、１９９５）。
【００８７】
本発明の薬学組成物は、ヒトを始めとした哺乳動物にいかなる方法でも投与し得る。例えば、経口または非経口で投与し得、非経口的な投与方法としては、これらに限定されるものではないが、静脈内、筋肉内、動脈内、骨髄内、硬膜内、心臓内、経皮、皮下、腹腔内、鼻腔内、腸管、局所、舌下または直腸内投与であってもよい。
【００８８】
本発明の薬学組成物は、前述したような投与経路に応じて経口投与用または非経口投与用製剤で剤形化し得る。剤形化する場合には、一つ以上の緩衝剤（例えば、食塩水またはＰＢＳ）、抗酸化剤、静菌剤、キレート化剤（例えば、ＥＤＴＡまたはグルタチオン）、充填剤、増量剤、結合剤、アジュバント（例えば、アルミニウムヒドロキキド）、懸濁剤、濃厚剤、湿潤剤、崩解剤、界面活性剤、希釈剤または賦形剤を使用して調剤され得る。
【００８９】
経口投与のための製剤には、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、液剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリー剤、懸濁液またはカプセル剤などが含まれ、このような固形製剤は、本発明の薬学組成物に少なくとも一つ以上の賦形剤、例えば、澱粉（とうもろこし澱粉、小麦澱粉、米澱粉、じゃがいも澱粉などを含む）、カルシウムカーボネート、スクロース、ラクトース、デキストロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、マルチトール、セルロース、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロースおよびヒドロキシプロピルメチル−セルロースまたはゼラチンなどを混ぜて調剤され得る。例えば、活性成分を固体賦形剤と配合した後、これを粉砕し、好適な補助剤を添加した後、顆粒混合物で加工することにより、錠剤または糖衣錠を収得し得る。
【００９０】
単純な賦形剤の他に、マグネシウムステアレート、タルクのような潤滑剤も使用される。経口のための液状製剤としては、懸濁剤、内用液剤、乳剤またはシロップ剤などが該当するが、頻繁に使用される単純希釈剤である水またはリキッドパラフィンの他に、様々な賦形剤、例えば湿潤剤、甘味剤、芳香剤または保存剤などが含まれ得る。
【００９１】
また、場合に応じて、架橋結合ポリビニルピロリドン、寒天、アルギン酸またはナトリウムアルギネートなどを崩解剤として添加し得、抗凝集剤、潤滑剤、湿潤剤、香料、乳化剤および防腐剤などをさらに含むことができる。
【００９２】
非経口的に投与する場合、本発明の薬学組成物は、好適な非経口用担体と共に、注射剤、経皮投与剤および鼻腔吸入剤の形態で当業界に公知となった方法により剤形化され得る。前記注射剤の場合には、必ず滅菌されなければならならず、バクテリアおよび真菌のような微生物の汚染から保護されなければならない。注射剤の場合、好適な担体の例としては、これに限定されないが、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコールおよび液体ポリエチレングリコールなど）、これらの混合物および／または植物油を含む溶媒または分散媒質であってもよい。より好ましくは、好適な担体としては、ハンクス溶液、リンガー液、トリエタノールアミンが含有されたＰＢＳ（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｂｕｆｆｅｒｅｄ  ｓａｌｉｎｅ）または注射用滅菌水、１０％エタノール、４０％プロピレングリコールおよび５％デキストロースのような等張溶液などが使用できる。前記注射剤を微生物の汚染から保護するためには、パラベン、クロロブタノール、
フェノール、ソルビン酸、チメロサールなどのような多様な抗菌剤および抗真菌剤をさらに含むことができる。また、前記注射剤は、大部分の場合、糖またはナトリウムクロリドのような等張化剤をさらに含むことができる。
【００９３】
経皮投与剤の場合、軟膏剤、クリーム剤、ローション剤、ゲル剤、外用液剤、パスタ剤、リニメント剤、エアロゾル剤などの形態が含まれる。前記で「経皮投与」は、薬学組成物を局所的に皮膚に投与し、薬学組成物に含有された有効な量の活性成分が皮膚内に伝達されることを意味する。
【００９４】
吸入投与剤の場合、本発明によって使用される化合物は、好適な推進剤、例えば、ジクロロフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素または他の好適な気体を使用して、加圧パックまたは煙霧機からエアロゾルスプレーの形態で便利に伝達できる。加圧エアロゾールの場合、投薬の単位は、計量された量を伝達する弁を提供して決定できる。例えば、吸込器または吹込器に使用されるゼラチンカプセルおよびカートリッジは、化合物、およびラクトースまたは澱粉のような好適な粉末基剤の粉末混合物を含有するように剤形化できる。非経口投与用剤形は、すべての製薬化学に一般的に公知となった処方書である文献（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、１５ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ、１９７５．Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ  １８０４２、Ｃｈａｐｔｅｒ  ８７：Ｂｌａｕｇ、Ｓｅｙｍｏｕｒ）に記載されている。
【００９５】
本発明の筋肉疾患の予防または治療用薬学的組成物はフコステロール、ホンダワラ、ホンダワラ粉砕物、ホンダワラ抽出物、ヒジキ、ヒジキ粉砕物またはヒジキ抽出物を有効量として含む時、好ましい筋肉疾患の予防または治療効果を提供できる。本明細書において、「有効量」というのは、陰性対照群に比べてそれ以上の反応を示す量を言い、好ましくは、筋機能を向上させるのに十分な量を言う。本発明の薬学組成物にフコステロール、ホンダワラ、ホンダワラ粉砕物、ホンダワラ抽出物、ヒジキ、ヒジキ粉砕物またはヒジキ抽出物が０．０１〜９９．９９％含まれ得、残量は、薬学的に許容可能な担体が占めることができる。本発明の薬学組成物に含まれるフコステロール、ホンダワラ、ホンダワラ粉砕物、ホンダワラ抽出物、ヒジキ、ヒジキ粉砕物またはヒジキ抽出物の有効量は、組成物が製品化される形態などに応じて変わる。
【００９６】
本発明の薬学組成物の総有効量は、単一投与量（ｓｉｎｇｌｅ  ｄｏｓｅ）で患者に投与され得、多重投与量（ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｄｏｓｅ）で長期間投与される分割治療方法（ｆｒａｃｔｉｏｎａｔｅｄ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｐｒｏｔｏｃｏｌ）により投与され得る。本発明の薬学組成物は、疾患の程度に応じて有効成分の含量を異にすることができる。非経口投与時は、前記フコステロール、ホンダワラ、ホンダワラ粉砕物、ホンダワラ抽出物、ヒジキ、ヒジキ粉砕物またはヒジキ抽出物を基準として一日に体重１ｋｇ当たり好ましくは０．０１〜５０ｍｇ、より好ましくは０．１〜３０ｍｇの量で投与されるように、また、経口投与時には、フコステロール、ホンダワラ、ホンダワラ粉砕物、ホンダワラ抽出物、ヒジキ、ヒジキ粉砕物またはヒジキ抽出物を基準として一日に体重１ｋｇ当たり好ましくは０．０１〜１００ｍｇ、より好ましくは０．０１〜１０ｍｇの量で投与されるように１回〜数回に分けて投与できる。しかし、前記フコステロール、ホンダワラ、ホンダワラ粉砕物、ホンダワラ抽出物、ヒジキ、ヒジキ粉砕物またはヒジキ抽出物の容量は、投与経路および治療回数だけでなく、患者の年齢、体重、健康状態、性別、疾患の重症度、食餌および排泄率など多様な要因を考慮して決定されるので、このような点を考慮するとき、当業界における通常の知識を有する者であれば、前記フコステロール、ホンダワラ、ホンダワラ粉砕物、ホンダワラ抽出物、ヒジキ、ヒジキ粉砕物またはヒジキ抽出物を筋肉疾患の予防または治療のための特定の用途に応じた適切な有効投与量を決定できる。本発明による薬学組成物は、本発明の効果を示す限り、その剤形、投与経路および投与方
法が特に限定されるものではない。
【００９７】
本発明の筋肉疾患の予防または治療用薬学組成物は、単独でまたは手術、放射線治療、ホルモン治療、化学治療または生物学的反応調節剤を使用する方法と併用して使用できる。
【００９８】
また、本発明の筋肉疾患の予防または治療用薬学組成物は、フコステロール、ホンダワラ、ホンダワラ粉砕物、ホンダワラ抽出物、ヒジキ、ヒジキ粉砕物またはヒジキ抽出物を有効成分として含む外用剤の剤形で提供できる。
【００９９】
本発明の筋肉疾患の予防または治療用薬学組成物を皮膚外用剤として使用する場合、さらに、脂肪物質、有機溶媒、溶解剤、濃縮剤およびゲル化剤、軟化剤、抗酸化剤、懸濁化剤、安定化剤、発泡剤、芳香剤、界面活性剤、水、イオン型乳化剤、非イオン型乳化剤、充填剤、金属イオン封鎖剤、キレート化剤、保存剤、ビタミン、遮断剤、湿潤化剤、必須オイル、染料、顔料、親水性活性剤、親油性活性剤または脂質小嚢など皮膚外用剤に通常使用される任意の他の成分のような皮膚科学分野において通常使用される補助剤を含有できる。また、前記成分は、皮膚科学分野において一般的に使用される量で導入され得る。
【０１００】
本発明の筋肉疾患の予防または治療用組成物が皮膚外用剤として提供される場合、これらに限定されるものではないが、軟膏、パッチ、ゲル、クリームまたは噴霧剤などの剤形であり得る。
【０１０１】
また、本発明の筋肉疾患の予防または筋機能改善用組成物は、食品組成物であってもよい。本発明の筋肉疾患の予防または筋機能改善用が食品組成物である場合、筋肉消耗または退化による筋肉疾患の予防または改善に使用され得る。筋肉消耗および退化は、遺伝的要因、後天的要因、老化などを原因として発生し、筋肉消耗は、筋肉量の漸進的損失、筋肉、特に骨格筋または随意筋および心臓筋肉の弱化および退行を特徴とする。これと関連した疾患の例としては、緊張減退症、筋萎縮症、筋ジストロフィー、筋肉退化、筋無力症、悪液質および筋肉減少症などが挙げられる。本発明の組成物は、筋肉量の増大効果があり、筋肉の種類は限定されない。
【０１０２】
本発明の食品組成物は、機能性食品、栄養補助剤、健康食品、食品添加剤および飼料などのすべての形態を含み、ヒトまたは家畜を始めとする動物を取食対象とする。前記類型の食品組成物は、当業界に公知となった通常の方法により多様な形態で製造し得る。
【０１０３】
前記類型の食品組成物は、当業界に公知にされた通常の方法により多様な形態で製造し得る。一般食品としては、これらに限定されないが、飲料（アルコール性飲料を含む）、果実およびその加工食品（例えば、果物缶詰め、瓶詰め、ジャム、マーマレードなど）、魚類、肉類およびその加工食品（例えば、ハム、ソーセージ、コンビーフなど）、パン類および麺類（例えば、うどん、そば、ラーメン、スパゲティ、マカロニなど）、果汁、各種ドリンク、クッキー、飴、乳製品（例えば、バター、チーズなど）、食用植物油脂、マーガリン、植物性タンパク質、レトルト食品、冷凍食品、各種調味料（例えば、みそ、醤油、ソースなど）などにホンダワラ、ホンダワラ粉砕物、ホンダワラ抽出物、ヒジキ、ヒジキ粉砕物またはヒジキ抽出物を添加して製造し得る。また、栄養補助剤としては、これに限定されないが、カプセル、錠剤、丸剤などにフコステロール、ホンダワラ、ホンダワラ粉砕物、ホンダワラ抽出物、ヒジキ、ヒジキ粉砕物またはヒジキ抽出物を添加して製造し得る。また、健康機能食品としては、これらに限定されないが、例えば、前記ホンダワラ抽出物またはヒジキ抽出物自体をお茶、ジュースおよびドリンクの形態で製造して飲用（健康飲料）できるように、液状化、顆粒化、カプセル化および粉末化して製造し得る。また、前記ホンダワラ、ホンダワラ粉砕物、ホンダワラ抽出物、ヒジキ、ヒジキ粉砕物ま
たはヒジキ抽出物を食品添加剤の形態で使用するためには、粉末または濃縮液の形態で製造して使用できる。また、ホンダワラ、ホンダワラ粉砕物、ホンダワラ抽出物、ヒジキ、ヒジキ粉砕物またはヒジキ抽出物と筋肉疾患の予防または筋機能の改善効果があると知られている周知の活性成分と共に混合して組成物の形態で製造し得る。
【０１０４】
本発明の筋肉疾患の予防または筋機能改善用組成物が健康飲料組成物として用いられる場合、前記健康飲料組成物は、通常の飲料のように、さまざまな香味剤または天然炭水化物などをさらなる成分として含有できる。前述した天然炭水化物は、ブドウ糖、果糖のようなモノサッカライド；マルトース、スクロースのようなジサッカライド；デキストリン、シクロデキストリンのようなポリサッカライド；キシリトール、ソルビトール、エリスリトールなどの糖アルコールであってもよい。甘味剤は、タウマチン、ステビア抽出物のような天然甘味剤；サッカリン、アスパルタムのような合成甘味剤などが使用できる。前記天然炭水化物の比率は、本発明の組成物１００ｍＬ当たり一般的に約０．０１〜０．０４ｇ、好ましくは約０．０２〜０．０３ｇである。
【０１０５】
フコステロール、ホンダワラ、ホンダワラ粉砕物、ホンダワラ抽出物、ヒジキ、ヒジキ粉砕物またはヒジキ抽出物は、筋肉疾患の予防または改善用食品組成物の有効成分として含有され得るが、その量は、筋肉疾患の予防または筋機能改善用作用を達成するのに有効な量であって、特に限定されるものではないが、全体組成物の総重量に対して０．０１〜１００重量％であることが好ましい。本発明の食品組成物は、フコステロール、ホンダワラ、ホンダワラ粉砕物、ホンダワラ抽出物、ヒジキ、ヒジキ粉砕物または、ヒジキ抽出物と共に筋肉疾患の予防または筋機能改善用組成物に効果があると知られている他の活性成分と共に混合して製造し得る。
【０１０６】
前記以外に、本発明の健康食品は、さまざまな栄養剤、ビタミン、電解質、風味剤、着色剤、ペクチン酸、ペクチン酸の塩、アルギン酸、アルギン酸の塩、有機酸、保護コロイド、増粘剤、ｐＨ調節剤、安定化剤、防腐剤、グリセリン、アルコールまたは炭酸化剤などを含むことができる。その他、本発明の健康食品は、天然フルーツジュース、フルーツジュース飲料、または野菜飲料の製造のための果肉を含有できる。このような成分は、独立的にまたは混合して使用できる。このような添加剤の比率は、さほど重要ではないが、本発明の組成物１００重量部当たり０．０１〜０．１重量部の範囲で選択されることが一般的である。
【０１０７】
また、本発明の筋機能改善用組成物は、化粧料組成物であってもよい。本発明の化粧料組成物は、フコステロール、ホンダワラ、ホンダワラ粉砕物、ホンダワラ抽出物、ヒジキ、ヒジキ粉砕物またはヒジキ抽出物を有効成分として含有し、皮膚学的に許容可能な賦形剤と共に基礎化粧品組成物（化粧水、クリーム、エッセンス、クレンジングフォームおよびクレンジングウォーターのような洗顔剤、パック、ボディーオイル）、カラー化粧品組成物（ファウンデーション、リップスティック、マスカラ、メイクアップベース）、頭髪製品組成物（シャンプー、リンス、ヘアコンディショナー、ヘアジェル）および石鹸などの形態で製造され得る。
【０１０８】
前記賦形剤としては、これに限らないが、例えば、皮膚軟化剤、皮膚浸透増強剤、着色剤、芳香剤、乳化剤、濃化剤および溶媒を含むことができる。また、香料、色素、殺菌剤、酸化防止剤、防腐剤および保湿剤などをさらに含むことができ、物性の改善を目的として増粘剤、無機塩類、合成高分子物質などを含むことができる。例えば、本発明の化粧料組成物で洗顔剤および石鹸を製造する場合には、通常の洗顔剤および石鹸ベースに前記フコステロール、ホンダワラ、ホンダワラ粉砕物、ホンダワラ抽出物、ヒジキ、ヒジキ粉砕物またはヒジキ抽出物を添加して容易に製造し得る。クリームを製造する場合には、一般的な水中油型（Ｏ／Ｗ）のクリームベースにフコステロール、ホンダワラ、ホンダワラ粉
砕物、ホンダワラ抽出物、ヒジキ、ヒジキ粉砕物、ヒジキ抽出物またはその塩を添加して製造し得る。これに香料、キレート剤、色素、酸化防止剤、防腐剤などと、物性の改善を目的とするタンパク質、ミネラル、ビタミンなど合成または天然素材をさらに添加し得る。
【０１０９】
本発明の化粧料組成物に含有されるフコステロール、ホンダワラ、ホンダワラ粉砕物、ホンダワラ抽出物、ヒジキ、ヒジキ粉砕物またはヒジキ抽出物の含量は、これに限らないが、全体組成物の総重量に対して０．００１〜１０重量％であることが好ましく、０．０１〜５重量％であることがより一層好ましい。前記含量が０．００１重量％未満であると、目的とする筋機能改善効果が期待できず、１０重量％を超過すると、安全性または剤形状の製造に困難があり得る。
【０１１０】
本発明の組成物は、筋肉疾患の予防または改善を目的として飼料添加剤またはこれを含む飼料組成物に添加し得る。
【０１１１】
本発明において、用語「飼料添加物」とは、栄養素の補充および体重減少の予防、飼料内繊維素の消化利用性の増進、乳質改善、繁殖障害の予防、受胎率の向上、夏季における高温ストレスの予防など、様々な効果を目的として飼料に添加する物質をいう。本発明の飼料添加剤は、飼料管理法上の補助飼料に該当し、炭酸水素ナトリウム、ベントナイト、酸化マグネシウム、複合鉱物質などの鉱物質製剤、亜鉛、銅、コバルト、セレンなどの微量鉱物質であるミネラル製剤、ケロチン、ビタミンＥ、ビタミンＡ、Ｄ、Ｅ、ニコチン酸、ビタミンＢ複合体などのビタミン剤、メチオニン、リジンなどの保護アミノ酸剤、脂肪酸カルシウム塩などの保護脂肪酸剤、生菌製剤（乳酸菌製剤）、酵母培養物、カビ発酵物などの生菌、酵母剤などをさらに含むことができる。
【０１１２】
本発明で用語“飼料”は、動物が食べ、摂取し、消化させるための、またはこれに適当な任意の天然または人工規定食、一片食などまたは前記一片食の成分であって、本発明による筋肉疾患の予防または改善用組成物を有効成分として含む飼料は、当業界における公知となった様々な形態の飼料に製造可能であり、好ましくは、濃厚飼料、粗飼料および／または特殊飼料が含まれ得るが、これに限らない。
【０１１３】
濃厚飼料としては、小麦、オート麦、トウモロコシなどの穀類を含む種実類と、穀物を精製して得る副産物であって、米糠、ふすま、大麦糠などを含む糠類と、豆、アブラナ、ゴマ、亜麻仁、ココヤシなどを採油して得る副産物である油粕類と、サツマイモ、ジャガイモなどから澱粉を取り出した残りである澱粉残渣の主成分たる残存の澱粉質類などの残渣類と、魚粉、魚かす、魚類から得た新鮮な液状物を濃縮させたものであるフィッシュソリュブル、肉粉、血粉、羽毛粉、脱脂粉乳、乳からチーズ、脱脂乳からカゼインを製造するときの残液であるホエイ（ｗｈｅｙ）を乾燥させた乾燥ホエイなどの動物性飼料、酵母、クロレラ、海藻類などがあるが、これらに限らない。
【０１１４】
粗飼料としては、野草、牧草、青刈りなどの生草飼料、飼料用カブ、飼料用ビート、カブの一種であるルタバガなどの根菜類、生草、青刈作物、穀実などをサイロに入れて乳酸発酵させた貯蔵飼料であるサイレージ（ｓｉｌａｇｅ）、野草、牧草を刈り取って乾燥させた乾草、種畜用作物のわら、マメ科植物の葉などがあるが、これらに限らない。特殊飼料としては、カキ殻、岩塩などのミネラル飼料、尿素またはその誘導体であるジウレイドイソブタンなどの尿素飼料、天然飼料の原料のみを配合した時に不足しがちな成分を補充したり、飼料の貯蔵性を高めるために配合飼料に微量で添加する物質である飼料添加物、
食餌補助剤などがあるが、これらに限らない。
【０１１５】
本発明による前記筋肉疾患の予防または改善用飼料添加剤は、当業界に公知となった多
様な飼料の製造方法により適切な有効濃度の範囲でフコステロール、ホンダワラ、ホンダワラ粉砕物、ホンダワラ抽出物、ヒジキ、ヒジキ粉砕物またはヒジキ抽出物を添加して製造可能である。
【０１１６】
本発明による飼料添加剤は、筋肉疾患の予防または改善を目的とする個体であれば、制限なしに適用可能である。例えば、猿、犬、猫、ウサギ、モルモット、ラット、マウス、牛、羊、豚、ヤギなどのような非ヒト動物、鳥類および魚類などいずれの個体にも適用可能である。
【実施例】
【０１１７】
以下、本発明を実施例を通じてより詳細に説明する。
【０１１８】
但し、下記実施例は、本発明を例示するものに過ぎず、本発明の内容が下記実施例に限定されるものではない。
【０１１９】
【化１１】
2018524398.tif 000013
【０１２０】
参照例１：フコステロールの物質情報
名称：Ｆｕｃｏｓｔｅｒｏｌ；（２４Ｅ）−２４−Ｎ−Ｐｒｏｐｙｌｉｄｅｎｅｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ；２４−Ｉｓｏｅｔｈｙｌｉｄｅｎｅｃｈｏｌｅｓｔ−５−ｅｎ−３ｂｅｔａ−ｏｌ、ｄｅｌｔａ（５）−ａｖｅｎａｓｔｅｒｏｌ；２８−Ｉｓｏｆｕｃｏｓｔｅｒｏｌ；Ｓｔｉｇｍａｓｔａ−５、２４−ｄｉｅｎ−３ｂｅｔａ−ｏｌ；Ｓｔｉｇｍａｓｔａ−５、２４（２８）−ｄｉｅｎ−３−ｏｌ、（３ｂｅｔａ、２４Ｅ）−；（３ｂｅｔａ、２４Ｚ）−ｓｔｉｇｍａｓｔａ−５、２４（２８）−ｄｉｅｎ−３−ｏｌ；（３ｂｅｔａ、２４Ｅ）−ｓｔｉｇｍａｓｔａ−５、２４（２８）−ｄｉｅｎ−３−ｏｌ；（２４Ｅ）−ｓｔｉｇｍａｓｔａ−５、２４（２８）−ｄｉｅｎ−３−ｏｌ
ＣＡＳ  Ｎｏ．：１７６０５−６７−３
【０１２１】
［実施例１］
ホンダワラ抽出物の製造
＜１−１＞ホンダワラのメタノール抽出物の製造
乾燥させたホンダワラをミキサーで粉砕した後、粉砕したホンダワラ試料１００ｇを１００％メタノール１Ｌに入れ、２４時間常温で３回繰り返して抽出した。抽出した試料は、ワットマンＮｏ．２濾過紙で減圧濾過し、濾過した抽出液を真空回転濃縮器で濃縮して溶媒成分を除去した後、ホンダワラのメタノール抽出物を得た。
【０１２２】
＜１−２＞ホンダワラのエタノール抽出物の製造
乾燥させたホンダワラをミキサーで粉砕した後、粉砕したホンダワラ試料１００ｇを１００％エタノール１Ｌに入れ、２４時間常温で３回繰り返して抽出した。抽出した試料は、ワットマンＮｏ．２濾過紙で減圧濾過し、濾過した抽出液を真空回転濃縮器で濃縮して溶媒成分を除去した後、ホンダワラのエタノール抽出物を得た。
【０１２３】
＜１−３＞ホンダワラのエチルアセテート抽出物の製造
乾燥させたホンダワラをミキサーで粉砕した後、粉砕したホンダワラ試料１００ｇを１００％エチルアセテート１Ｌに入れ、２４時間常温で３回繰り返して抽出した。抽出した試料は、ワットマンＮｏ．２濾過紙で減圧濾過し、濾過した抽出液を真空回転濃縮器で濃縮して溶媒成分を除去した後、ホンダワラのエチルアセテート抽出物を得た。
【０１２４】
＜１−４＞ホンダワラのヘキサン抽出物の製造
乾燥させたホンダワラをミキサーで粉砕した後、粉砕したホンダワラ試料１００ｇを１００％ヘキサン１Ｌに入れ、２４時間常温で３回繰り返して抽出した。抽出した試料は、ワットマンＮｏ．２濾過紙で減圧濾過し、濾過した抽出液を真空回転濃縮器で濃縮して溶媒成分を除去した後、ホンダワラのヘキサン抽出物を得た。
【０１２５】
＜１−５＞ホンダワラの熱水抽出物の製造
乾燥させたホンダワラをミキサーで粉砕した後、粉砕したホンダワラ試料１００ｇを水１Ｌに入れて８０℃で２時間撹拌しながら抽出した。抽出した試料は、ワットマンＮｏ．２濾過紙で減圧濾過し、濾過した抽出液を真空回転濃縮器で濃縮して溶媒成分を除去した後、ホンダワラの熱水抽出物を得た。
【０１２６】
＜１−６＞ホンダワラの超高圧抽出物の製造
乾燥させたホンダワラをミキサーで粉砕した後、粉砕したホンダワラ１ｇと１８％エタノール７６ｍＬをポリエチレンパックに入れてシールした後、超高圧抽出装置（Ｆｒｅｓｃａｌ  ＭＦＰ−７０００；三菱重工業社）を利用して抽出した。超高圧抽出の条件は、抽出圧力が３２０ＭＰａ、抽出時間が５ｍｉｎであった。抽出した試料は、ワットマンＮｏ．２濾過紙で濾過し、濾過した抽出液を真空回転濃縮器で濃縮して溶媒成分を除去することにより、ホンダワラの超高圧抽出物を得た。
【０１２７】
＜１−７＞ホンダワラの超臨界流体抽出物の製造
乾燥させたホンダワラをミキサーで粉砕した後、粉砕したホンダワラ試料１ｇを試料カートリッジに充填し、超臨界流体抽出装置（ＳＦＸ  ３５６０、Ｉｓｃｏ  Ｉｎｃ．、Ｌｉｎｃｏｌｎ、ＮＥ、ＵＳＡ）を利用して抽出した。超臨界流体抽出の条件は、抽出圧力が４０ＭＰａ、抽出温度が５０℃、超臨界二酸化炭素の流速が６０ｍＬ／ｍｉｎ、抽出時間が６０ｍｉｎであった。超臨界流体の抽出が完了すると、抽出装置の圧力を下げて、超臨界流体状態を解除して、ホンダワラの超臨界流体抽出物を得た。
【０１２８】
＜１−８＞ホンダワラの亜臨界流体抽出物の製造
乾燥させたホンダワラをミキサーで粉砕した後、粉砕したホンダワラ試料１ｇを蒸留水１０ｍＬに入れ、亜臨界流体抽出装置（ＤＩＯＮＥＸ  Ａｃｃｅｌｅｒａｔｅｄ  Ｓｏｌｖｅｎｔ  Ｅｘｔｒａｃｔｏｒ  １００、ＤＩＯＮＥＸ  ｃｏ．、ＵＳＡ）を利用して抽出した。亜臨界流体抽出の条件は、抽出圧力が２．５ＭＰａ、抽出温度が１５０℃、抽出時間が１５分の条件下に亜臨界抽出を行った。抽出した試料は、ワットマンＮｏ．２濾過紙で濾過し、濾過した抽出液を−４０で凍結乾燥して、ホンダワラの亜臨界流体抽出物を得た。
【０１２９】
［実施例２］
ヒジキ抽出物の製造
＜２−１＞ヒジキのメタノール抽出物の製造
乾燥させたヒジキをミキサーで粉砕した後、粉砕したヒジキ試料１００ｇを１００％メタノール１Ｌに入れ、２４時間常温で３回繰り返して抽出した。抽出した試料は、ワットマンＮｏ．２濾過紙で減圧濾過し、濾過した抽出液を真空回転濃縮器で濃縮して溶媒成分
を除去した後、ヒジキのメタノール抽出物を得た。
【０１３０】
＜２−２＞ヒジキのエタノール抽出物の製造
乾燥させたヒジキをミキサーで粉砕した後、粉砕したヒジキ試料１００ｇを１００％エタノール１Ｌに入れ、２４時間常温で３回繰り返して抽出した。抽出した試料は、ワットマンＮｏ．２濾過紙で減圧濾過し、濾過した抽出液を真空回転濃縮器で濃縮して溶媒成分を除去した後、ヒジキのエタノール抽出物を得た。
【０１３１】
＜２−３＞ヒジキのエチルアセテート抽出物の製造
乾燥させたヒジキをミキサーで粉砕した後、粉砕したヒジキ試料１００ｇを１００％エチルアセテート１Ｌに入れ、２４時間常温で３回繰り返して抽出した。抽出した試料は、ワットマンＮｏ．２濾過紙で減圧濾過し、濾過した抽出液を真空回転濃縮器で濃縮して溶媒成分を除去した後、ヒジキのエチルアセテート抽出物を得た。
【０１３２】
＜２−４＞ヒジキのヘキサン抽出物の製造
乾燥させたヒジキをミキサーで粉砕した後、粉砕したヒジキ試料１００ｇを１００％ヘキサン１Ｌに入れ、２４時間常温で３回繰り返して抽出した。抽出した試料は、ワットマンＮｏ．２濾過紙で減圧濾過し、濾過した抽出液を真空回転濃縮器で濃縮して溶媒成分を除去した後、ヒジキのヘキサン抽出物を得た。
【０１３３】
＜２−５＞ヒジキの熱水抽出物の製造
乾燥させたヒジキをミキサーで粉砕した後、粉砕したヒジキ試料１００ｇを水１Ｌに入れて８０℃で２時間撹拌しながら抽出した。抽出した試料は、ワットマンＮｏ．２濾過紙で減圧濾過し、濾過した抽出液を真空回転濃縮器で濃縮して溶媒成分を除去した後、ヒジキの熱水抽出物を得た。
【０１３４】
＜２−６＞ヒジキの超高圧抽出物の製造
乾燥させたヒジキをミキサーで粉砕した後、粉砕したヒジキ試料１ｇと１８％エタノール７６ｍＬをポリエチレンパックに入れてシールした後、超高圧抽出装置（Ｆｒｅｓｃａｌ  ＭＦＰ−７０００；三菱重工業社）を利用して抽出した。超高圧抽出の条件は、抽出圧力が３２０ＭＰａ、抽出時間が５ｍｉｎであった。抽出した試料は、ワットマンＮｏ．２濾過紙で濾過し、濾過した抽出液を真空回転濃縮器で濃縮して溶媒成分を除去することにより、ヒジキの超高圧抽出物を得た。
【０１３５】
＜２−７＞ヒジキの超臨界流体抽出物の製造
乾燥させたヒジキをミキサーで粉砕した後、粉砕したヒジキ試料１ｇを試料カートリッジに充填して超臨界流体抽出装置（ＳＦＸ  ３５６０、Ｉｓｃｏ  Ｉｎｃ．、Ｌｉｎｃｏｌｎ、ＮＥ、ＵＳＡ）を利用して抽出した。超臨界流体抽出の条件は、抽出圧力が４０ＭＰａ、抽出温度が５０℃、超臨界二酸化炭素の流速が６０ｍＬ／ｍｉｎ、抽出時間が６０ｍｉｎであった。超臨界流体の抽出が完了すると、抽出装置の圧力を下げて、超臨界流体状態を解除して、ヒジキの超臨界流体抽出物を得た。
【０１３６】
＜２−８＞ヒジキの亜臨界流体抽出物の製造
乾燥させたヒジキをミキサーで粉砕した後、粉砕したヒジキ試料１ｇを蒸留水１０ｍＬに入れて亜臨界流体抽出装置（ＤＩＯＮＥＸ  Ａｃｃｅｌｅｒａｔｅｄ  Ｓｏｌｖｅｎｔ
Ｅｘｔｒａｃｔｏｒ  １００、ＤＩＯＮＥＸ  ｃｏ．、ＵＳＡ）を利用して抽出した。亜臨界流体抽出の条件は、抽出圧力が２．５ＭＰａ、抽出温度が１５０、抽出時間が１５分の条件下に亜臨界抽出を行った。抽出した試料は、ワットマンＮｏ．２濾過紙で濾過し、濾過した抽出液を−４０℃で凍結乾燥して、ヒジキの亜臨界流体抽出物を得た。
【０１３７】
［実施例３］
フコステロールの分離
乾燥ホンダワラまたはヒジキ５００ｇをミキサーで粉砕した後、５Ｌヘキサンに入れて４８時間常温で冷浸して抽出した。抽出した試料は、ワットマンＮｏ．２濾過紙で濾過し、濾過した抽出液を真空回転濃縮器で濃縮して溶媒成分を除去した後、約１５．０ｇのヘキサン抽出物を得た。ヘキサン可用抽出物１５ｇをシリカゲルオープンカラム（７０−２３０ｍｅｓｈ、Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏ．、Ｗｈｉｔｅｈｏｕｓｅ  Ｓｔａｔｉｏｎ、ＮＪ、ＵＳＡ）に積載し、核酸およびエチルアセテートの混合した溶媒システムを利用して分取した。前記分取の順序に応じて濃度勾配で４０個の下部分画物に分けた後、そのうちの１０番と３０番の間の分画物から下記化学式１の化合物であるフコステロールを分離（２１０ｍｇ）した。
【０１３８】
【化１２】
2018524398.tif 000014
【０１３９】
［実施例４］
フコステロール、ホンダワラ抽出物またはヒジキ抽出物による筋肉生成活性
筋肉細胞であるＬ６筋芽細胞（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１４５８、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ、ＵＳＡ）を１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ；Ｈｙｃｌｏｎｅ、Ｌｏｇａｎ、ＵＴ、ＵＳＡ）が含有されたダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ；Ｈｙｃｌｏｎｅ）と共に６−ウェルプレートに２Ｘ１０５ｃｅｌｌ／ｍｌになるように入れた。細胞密度が約８０〜８５％になった時、ウェルにある培地を除去し、２％ウマ血清（ＨＳ；Ｈｙｃｌｏｎｅ）が含有されたＤＭＥＭ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）に前記実施例１−２で製造したホンダワラのエタノール抽出物（２０μｇ／ｍＬ）、実施例２−２で製造したヒジキのエタノール抽出物（２０μｇ／ｍＬ）と前記実施例３で分離および精製したフコステロール（１０μＭ）を溶かした後、細胞に処理して筋管細胞の分化を誘導した。この際、試料の代わりに０．０１％ＤＭＳＯを処理した群を対照群とした。この過程を２日間を１サイクルとして６日間進めて分化させた後、プロテアーゼインヒビターカクテルが含まれたＮＰ−４０緩衝溶液（ＥＬＰＩＳ−Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｄａｅｊｅｏｎ、Ｋｏｒｅａ）で溶解させた。緩衝溶液に溶解された細胞を１．５ｍＬのチューブに移して１３，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離して上澄み液のみを取った。上澄み液をブラッドフォード（Ｂｒａｄｆｏｒｄ、Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｉｎｃ．、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、ＣＡ、ＵＳＡ）法を利用して定量した。定量したタンパク質を５分間沸かした後、１０％ＳＤＳ−ＰＡＧＥで電気泳動して分離し、分離されたタンパク質をニトロセルロース膜に伝達した。ｐ−ｍＴＯＲ  １次抗体（Ｃｅｌｌ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｂｅｖｅｒｌｙ、ＭＡ、ＵＳＡ）を２．５％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）に１：１０００の比率で希釈して、ニトロセルロース膜に伝達されたタンパク質と２０時間常温で反応させた。１次抗体を反応させた後、Ｔｗｅｅｎ−２０を含むトリス緩衝食塩水（ＴＢＳＴ）を利用してニトロセルロース膜を１０分間３回洗浄した。洗浄後、１次抗体を認知するホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）が接合された抗ウサギ２次抗体（Ｂｅｔｈｙｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｉｎｃ．、Ｍｏｎｔｇｏｍｅｒｙ、ＴＡ、ＵＳＡ）を２．５％ＢＳ
Ａに１：５０００になるように希釈して、ニトロセルロース膜と２時間常温で反応させ、ＴＢＳＴを利用して１０分ずつ３回にわたって洗浄した。タンパク質バンドは、ＥＣＬウェスタンブロッティング検出試薬（Ａｍｅｒｓｈａｍ、Ｔｏｋｙｏ、Ｊａｐａｎ）を使用して発色し、Ｇ；ＢＯＸ  ＥＦイメージングシステム（Ｓｙｎｇｅｎｅ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＵＫ）を利用して発色されたタンパク質バンドを確認した。その結果を図１に示した。
【０１４０】
その結果、図１に示されるように、ホンダワラのエタノール抽出物、ヒジキのエタノール抽出物、フコステロールの処理によりＬ６筋肉細胞でｐ−ｍＴＯＲの発現量が増加したことが確認できた。これは、本発明のホンダワラのエタノール抽出物、ヒジキのエタノール抽出物、フコステロールが筋肉細胞内で筋肉生成を増加させる能力に優れていることを意味する。
【０１４１】
［実施例５］
Ｌ６筋肉細胞でフコステロールのｍＲＮＡ翻訳促進活性
前記実施例３で分離および精製したフコステロールをそれぞれ１と１０μＭの濃度で前記実施例４と同じ方法で実験を進めた。ｐ−ｍＴＯＲ  １次抗体の代わりにｍＲＮＡ翻訳過程に関与するｐ−ｐ７０Ｓ６Ｋおよびｐ−４ＥＢＰ１  １次抗体（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ、ＣＡ、ＵＳＡ）を処理して、タンパク質バンドを確認した。
【０１４２】
その結果、図２に示されるように、フコステロールを処理することにより、Ｌ６筋肉細胞でｍＲＮＡ翻訳過程に関与するｐ−ｐ７０Ｓ６Ｋおよびｐ−４ＥＢＰ１のタンパク質発現量が増加したことが確認できる。これは、本発明のフコステロールが筋肉細胞内で筋肉生成のためのｍＲＮＡ翻訳過程を促進させることを意味する。
【０１４３】
［実施例６］
フコステロールによる筋肉分化活性
筋肉細胞であるＬ６筋芽細胞（ＡＴＣＣ）を１０％ＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）が含有されたＤＭＥＭ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）と共に６−ウェルプレートに２×１０５ｃｅｌｌ／ｍｌになるように入れた。細胞密度が約８０〜８５％になった時、ウェルにある培地を除去して２％ＨＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）が含有されたＤＭＥＭ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）に前記実施例３で分離および精製したフコステロールをそれぞれ１と１０μＭの濃度で溶かした後、細胞に処理して、筋管細胞の分化を誘導した。この際、試料の代わりに０．０１％ＤＭＳＯを処理した群を対照群とした。この過程を２日間を１サイクルとして６日間進めて分化させた後、ＴＲＩｚｏｌ試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ、ＵＳＡ）を使用してトータルＲＮＡを分離した。分離したトータルＲＮＡは、ナノドロップ（ＮａｎｏＤｒｏｐ  １０００；Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｉｎｃ．、ＭＡ、ＵＳＡ）を利用して定量した。定量した１６μＬのＲＮＡをＲｅｖｅｒｓｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ  Ｐｒｅｍｉｘ（ＥＬＰＩＳ−Ｂｉｏｔｅｃｈ）とＰＣＲ機器（Ｇｅｎｅ  Ａｍｐ  ＰＣＲ  Ｓｙｓｔｅｍ  ２７００、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、ＭＡ、ＵＳＡ）を利用して４２℃で５５分、７０℃で１５分の条件でｃＤＮＡで合成した。１６μＬの生成されたｃＤＮＡのうち４μＬのｃＤＮＡ、下記の特定のプライマー（Ｂｉｏｎｅｅｒ、Ｄａｅｊｅｏｎ、Ｋｏｒｅａ）、およびＰＣＲプレミックス（ＥＬＰＩＳ−Ｂｉｏｔｅｃｈ）で９５℃で３０秒、６０℃で１分、７２℃で１分を３０回繰り返してＰＣＲを行った。
【０１４４】
ＭｙｏＤ
Ｆｏｒｗａｒｄ  ｐｒｉｍｅｒ：５’−ＴＴＴＣＧＡＣＴＣＡＣＣＡＧＡＣＣＴＧＣ−３’（配列番号１）
Ｒｅｖｅｒｓｅ  ｐｒｉｍｅｒ：５’−ＣＡＧＡＧＣＣＴＧＣＡＧＡＣＣＴＴＣＡＡ−３’（配列番号２）
ミオゲニン
Ｆｏｒｗａｒｄ  ｐｒｉｍｅｒ：５’−ＴＴＴＣＧＣＡＣＣＴＧＡＴＧＧＡＣＣＴＧ−３’（配列番号３）
Ｒｅｖｅｒｓｅ  ｐｒｉｍｅｒ：５’−ＣＴＴＴＣＴＴＧＡＧＣＣＴＧＣＧＣＴＴＣ−３’（配列番号４）
β−Ａｃｔｉｎ：
Ｆｏｒｗａｒｄ  ｐｒｉｍｅｒ：５’−ＡＧＣＣＡＴＧＴＡＣＧＴＡＧＣＣＡＴＣＣ−３’（配列番号５）
Ｒｅｖｅｒｓｅ  ｐｒｉｍｅｒ：５’−ＣＴＣＴＣＡＧＣＴＧＴＧＧＴＧＣＴＧＡＡ−３’（配列番号６）
【０１４５】
ＰＣＲの結果、増幅されたｃＤＮＡを１．５％アガロースゲルで電気泳動して分離し、Ｇ；ＢＯＸ  ＥＦイメージングシステム（Ｓｙｎｇｅｎｅ）を利用してｃＤＮＡバンドを確認した。その結果を図３に示した。
【０１４６】
その結果、図３に示されるように、フコステロールを処理することにより、Ｌ６筋肉細胞でＭｙｏＤおよびミオゲニンのｍＲＮＡの発現が増加することが分かった。これは、本発明のフコステロールが筋肉細胞内で筋肉分化を促進する能力に優れていることを意味する。
【０１４７】
［実施例７］
ホンダワラ抽出物による筋肉分化活性
前記実施例６と同じ方法で筋肉細胞であるＬ６筋芽細胞（ＡＴＣＣ）を培養した後、２％ＨＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）が含有されたＤＭＥＭ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）に前記実施例１−２〜１−５で製造したホンダワラのエタノール抽出物、エチルアセテート抽出物、ヘキサン抽出物および熱水抽出物を１０μｇ／ｍＬの濃度で溶かした後、細胞に処理して、筋管細胞の分化を誘導した。この際、試料の代わりに０．０１％ＤＭＳＯを処理した群を対照群とした。この過程を２日間を１サイクルとして６日間進めて分化させた後、実施例６と同じ方法でＲＴ−ＰＣＲを行った。
【０１４８】
その結果、図４に示されるように、ホンダワラ抽出物を処理することにより、Ｌ６筋肉細胞でＭｙｏＤおよびミオゲニンのｍＲＮＡの発現が増加するということが分かった。これは、本発明のホンダワラ抽出物が筋肉細胞内で筋肉分化を促進する能力に優れていることを意味する。
【０１４９】
［実施例８］
ヒジキ抽出物による筋肉分化活性
前記実施例６と同じ方法で筋肉細胞であるＬ６筋芽細胞（ＡＴＣＣ）を培養した後、２％ＨＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）が含有されたＤＭＥＭ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）に前記実施例２−２〜２−５で製造したヒジキのエタノール抽出物、エチルアセテート抽出物、ヘキサン抽出物および熱水抽出物を１０μｇ／ｍＬの濃度で溶かした後、細胞に処理して、筋管細胞の分化を誘導した。この際、試料の代わりに０．０１％ＤＭＳＯを処理した群を対照群とした。この過程を２日間を１サイクルとして６日間進めて分化させた後、実施例６と同じ方法でＲＴ−ＰＣＲを行った。
【０１５０】
その結果、図５に示されるように、ヒジキ抽出物を処理することにより、Ｌ６筋肉細胞でＭｙｏＤおよびミオゲニンのｍＲＮＡの発現が増加するということが分かった。これは、本発明のヒジキ抽出物が筋肉細胞内で筋肉分化を促進する能力に優れていることを意味
する。
【０１５１】
［実施例９］
フコステロールの筋タンパク質の分解抑制活性
筋肉細胞であるＬ６筋芽細胞（ＡＴＣＣ）を１０％ＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）が含有されたＤＭＥＭ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）と共に６−ウェルプレートに２×１０５ｃｅｌｌ／ｍｌになるように入れた。細胞密度が約８０〜８５％になった時、ウェルにある培地を除去し、２％ＨＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）が含有されたＤＭＥＭ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）を細胞に処理して、筋管細胞の分化を誘導した。２日に一回ずつ新しい培地に交換して、合計６日間分化を進めた。分化後、５０ｎｇ／ｍＬの腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α；ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ、Ｒｏｃｋｙ  Ｈｉｌｌｓ、ＮＪ、ＵＳＡ）が含有されたＤＭＥＭ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）に前記実施例３で分離および精製したフコステロールをそれぞれ１と１０μＭの濃度で溶かした後、細胞に処理した。６時間後、ＴＲＩｚｏｌ試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用してトータルＲＮＡを分離した。分離したトータルＲＮＡは、ナノドロップ（ＮａｎｏＤｒｏｐ  １０００；Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｉｎｃ．）を利用して定量した。定量した１６μＬのＲＮＡをＲｅｖｅｒｓｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ  Ｐｒｅｍｉｘ（ＥＬＰＩＳ−Ｂｉｏｔｅｃｈ）とＰＣＲ機器（Ｇｅｎｅ  Ａｍｐ
ＰＣＲ  Ｓｙｓｔｅｍ  ２７００；Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を利用して４２℃で５５分、７０℃で１５分の条件でｃＤＮＡで合成した。１６μＬの生成されたｃＤＮＡのうち４μＬのｃＤＮＡ、下記の特定プライマー（Ｂｉｏｎｅｅｒ）、およびＰＣＲプレミックス（ＥＬＰＩＳ−Ｂｉｏｔｅｃｈ）で９５℃で３０秒、６０℃で１分、７２℃で１分を３０回繰り返してＰＣＲを行った。
【０１５２】
Ａｔｒｏｇｉｎ−１
Ｆｏｒｗａｒｄ  ｐｒｉｍｅｒ：５’−ＣＣＣＴＧＡＧＴＧＧＣＡＴＣＧＣＣＣＡＡ−３’（配列番号７）
Ｒｅｖｅｒｓｅ  ｐｒｉｍｅｒ：５’−ＡＧＧＴＣＣＣＧＣＣＣＡＴＣＧＣＴＣＡ−３’（配列番号８）
ＭｕＲＦ−１
Ｆｏｒｗａｒｄ  ｐｒｉｍｅｒ：５’−ＧＡＡＡＴＧＣＴＡＴＧＣＡＧＡＡＣＣＴＧ−３’（配列番号９）
Ｒｅｖｅｒｓｅ  ｐｒｉｍｅｒ：５’−ＡＴＴＣＣＴＧＣＴＴＧＴＡＧＡＴＧＴＣＧ−３’（配列番号１０）
β−Ａｃｔｉｎ：
Ｆｏｒｗａｒｄ  ｐｒｉｍｅｒ：５’−ＡＧＣＣＡＴＧＴＡＣＧＴＡＧＣＣＡＴＣＣ−３’（配列番号５）
Ｒｅｖｅｒｓｅ  ｐｒｉｍｅｒ：５’−ＣＴＣＴＣＡＧＣＴＧＴＧＧＴＧＣＴＧＡＡ−３’（配列番号６）
【０１５３】
ＰＣＲの結果、増幅したｃＤＮＡを１．５％アガロースゲルで電気泳動して分離し、Ｇ；ＢＯＸ  ＥＦイメージングシステム（Ｓｙｎｇｅｎｅ）を利用してｃＤＮＡバンドを確認した。その結果を図６に示した。
【０１５４】
その結果、図６に示されるように、フコステロールを処理することにより、Ｌ６筋肉細胞でａｔｒｏｇｉｎ−１およびＭｕＲＦ−１のｍＲＮＡの発現が減少することが分かった。これは、本発明のフコステロールが筋肉細胞内で筋タンパク質の分解を抑制する能力に優れていることを意味する。
【０１５５】
［実施例１０］
ホンダワラ抽出物の筋タンパク質の分解抑制活性
前記実施例９と同じ方法で筋肉細胞を２％ＨＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）が含有されたＤＭＥＭ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）を処理して筋管細胞の分化後、５０ｎｇ／ｍＬのＴＮＦ−α（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ）が含有されたＤＭＥＭ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）に実施例１−２〜１−５で製造したホンダワラのエタノール抽出物、エチルアセテート抽出物、ヘキサン抽出物および熱水抽出物を１０μｇ／ｍＬの濃度で溶かした後、実施例９と同じ方法でＲＴ−ＰＣＲを行った。
【０１５６】
その結果、図７に示されるように、ホンダワラ抽出物を処理することにより、Ｌ６筋肉細胞でａｔｒｏｇｉｎ−１およびＭｕＲＦ−１のｍＲＮＡの発現が減少することが分かった。これは、本発明のホンダワラ抽出物が筋肉細胞内で筋タンパク質の分解を抑制する能力に優れていることを意味する。
【０１５７】
［実施例１１］
ヒジキ抽出物の筋タンパク質の分解抑制活性
前記実施例９と同じ方法で筋肉細胞を２％ＨＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）が含有されたＤＭＥＭ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）を処理して筋管細胞の分化後、５０ｎｇ／ｍＬのＴＮＦ−α（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ）が含有されたＤＭＥＭ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）に前記実施例２−２〜２−５で製造したヒジキのエタノール抽出物、エチルアセテート抽出物、ヘキサン抽出物および熱水抽出物を１０μｇ／ｍＬの濃度で溶かした後、実施例９と同じ方法でＲＴ−ＰＣＲを行った。
【０１５８】
その結果、図８に示されるように、ヒジキのエタノール抽出物、エチルアセテート抽出物、ヘキサン抽出物および熱水抽出物を処理することにより、Ｌ６筋肉細胞でａｔｒｏｇｉｎ−１およびＭｕＲＦ−１のｍＲＮＡの発現が減少することが分かった。これは、本発明のヒジキ抽出物が筋肉細胞内で筋タンパク質の分解を抑制する能力に優れていることを意味する。
【０１５９】
［実施例１２］
ホンダワラとヒジキの高圧抽出物による筋肉生成活性
前記実施例１−６で製造したホンダワラの超高圧抽出物、実施例１−７で製造したホンダワラ超臨界流体抽出物、実施例１−８で製造したホンダワラの亜臨界流体抽出物、実施例２−６で製造したヒジキの超高圧抽出物、実施例２−７で製造したヒジキの超臨界流体抽出物、実施例２−８で製造したヒジキの亜臨界流体抽出物を２０ｐｐｍの濃度で前記実施例４と同じ方法で筋肉細胞に処理した。ＥＣＬウェスタンブロッティング検出試薬（Ａｍｅｒｓｈａｍ、Ｔｏｋｙｏ、Ｊａｐａｎ）を使用してｐ−ｍＴＯＲタンパク質バンドを発色し、Ｇ；ＢＯＸ  ＥＦイメージングシステム（Ｓｙｎｇｅｎｅ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＵＫ）を利用して発色されたタンパク質バンドの密度（ｄｅｎｓｉｔｙ）を測定した。この際に、対照群タンパク質バンドの密度を１００％として、試料を処理した実験群の相対的なタンパク質バンドの密度を百分率（％）で示した。その結果を下記表１に示した。
【０１６０】
【表１】
2018524398.tif 000015
【０１６１】
前記表１に示されるように、ホンダワラとヒジキの超高圧抽出物、超臨界流体抽出物、亜臨界流体抽出物は、筋機能の改善に関与する主な遺伝子ｐ−ｍＴＯＲのタンパク質発現量を増加させることが分かった。
【０１６２】
［実施例１３］
動物モデルで筋肉量の増加効果の確認
５週齢のウィスターラット（Ｄａｅｈａｎ  Ｂｉｏｌｉｎｋ、Ｋｏｒｅａ）を１週間適応させ、ＴＮＦ−α１００ｎｇ／ｇを２週間供給して、筋萎縮を誘導させた後、体重をベースにして無作為に群を配置して、それぞれ８匹ずつ総６群に分けて実験に利用した。実験群としては、ホンダワラの乾燥粉末５００ｍｇ／ｋｇ体重、実施例１−２で製造したホンダワラのエタノール抽出物５００ｍｇ／ｋｇ体重、ヒジキ乾燥粉末５００ｍｇ／ｋｇ体重、実施例２−２で製造したヒジキのエタノール抽出物５００ｍｇ／ｋｇ体重、実施例３で製造したフコステロール３００ｍｇ／ｋｇ体重の濃度で０．２５％カルボキシメチルセルロースに懸濁して、１日１回ずつ８週間一定の時間に投与した。この際、対照群としては、実験群が摂取する同じ量の０．２５％カルボキシメチルセルロースにＴＮＦ−αを投与した群を使用した。
【０１６３】
８週間試料を投与した後、右側のふくらはぎの下方の筋肉を切除して、微量てんびん（Ｍｅｔｔｌｅｒ  ＰＥ１６０、ＵＳＡ）で重さを測定した。その結果、表２に示されるように、ホンダワラの乾燥粉末、ホンダワラのエタノール抽出物、ヒジキの乾燥粉末、ヒジキのエタノール抽出物、フコステロールをそれぞれ投与した群における筋肉の重さが対照群と比較してそれぞれ有意的（ｐ＜０．０１）に１４．９４％、２４．８２％、１６．１４％、２２．６５％、２５．７８％増加した。このような結果は、本発明のホンダワラ、ホンダワラ粉砕物、ホンダワラ抽出物、ヒジキ、ヒジキ粉砕物、ヒジキ抽出物または前記抽出物から分離されたフコステロールが筋肉量の増大に効率的に作用することを意味する。
【０１６４】
【表２】
2018524398.tif 000016
【０１６５】
以下、本発明によるフコステロール、ホンダワラ、ホンダワラ粉砕物、ホンダワラ抽出物、ヒジキ、ヒジキ粉砕物またはヒジキ抽出物を有効成分として含有する食品類および医薬品の製造例を説明するが、本発明は、これを限定しようとするものではなく、単に具体的に説明しようとするものである。前記筋肉疾患の予防または治療または筋機能の改善効果に優れたフコステロールまたは、前記実施例１および２のホンダワラ抽出物またはヒジキ抽出物を有し、下記のような組成成分および組成比に応じて製造例１〜４の医薬品、食品、化粧品および飼料添加剤組成物を通常の方法により製造した。
【０１６６】
［製造例１］医薬品
＜１−１＞散剤
本発明のフコステロール、ホンダワラ粉砕物、ホンダワラ抽出物、ヒジキ粉砕物またはヒジキ抽出物５０ｍｇ、結晶セルロース２ｇを混合した後、通常の散剤の製造方法により気密布に充填して散剤を製造した。
【０１６７】
＜１−２＞ 錠剤
本発明のフコステロール、ホンダワラ粉砕物、ホンダワラ抽出物、ヒジキ粉砕物またはヒジキ抽出物５０ｍｇ、結晶セルロース４００ｍｇ、ステアリン酸マグネシウム５ｍｇを混合した後、通常の錠剤の製造方法により打錠して錠剤を製造した。
【０１６８】
＜１−３＞カプセル剤
本発明のフコステロール、ホンダワラ粉砕物、ホンダワラ抽出物、ヒジキ粉砕物またはヒジキ抽出物３０ｍｇ、乳清タンパク質１００ｍｇ、結晶セルロース４００ｍｇ、ステアリン酸マグネシウム６ｍｇを混合した後、通常のカプセル剤の製造方法によりゼラチン  カプセルに充填してカプセル剤を製造した。
【０１６９】
＜１−４＞注射剤
通常の注射剤の製造方法により活性成分を注射用蒸留水に溶解し、ｐＨを約７．５に調節した後、前記実施例３のフコステロール１００ｍｇ、注射用蒸留水、ｐＨ調節剤を混合して２ｍＬ容量のアンプルに充填し、滅菌させて注射剤を製造した。
【０１７０】
［製造例２］食品
＜２−１＞健康食品の製造
本発明のフコステロール、ホンダワラ粉砕物、ホンダワラ抽出物、ヒジキ粉砕物またはヒジキ抽出物１０００ｍｇ、ビタミンＡアセテート７０ｕｇ、ビタミンＥ  １．０ｍｇ、ビタミンＢ１  ０．１３ｍｇ、ビタミンＢ２  ０．１５ｍｇ、ビタミンＢ６  ０．５ｍｇ、ビタミンＢ１２  ０．２ｕｇ、ビタミンＣ  １０ｍｇ、ビオチン１０ｕｇ、ニコチン酸
アミド１．７ｍｇ、葉酸５０ｕｇ、パントテン酸カルシウム０．５ｍｇ、硫酸第１鉄１．７５ｍｇ、酸化亜鉛０．８２ｍｇ、炭酸マグネシウム２５．３ｍｇ、第１リン酸カリウム１５ｍｇ、第２リン酸カルシウム５５ｍｇ、クエン酸カリウム９０ｍｇ、炭酸カルシウム１００ｍｇ、塩化マグネシウム２４．８ｍｇを混合して製造し得、その配合比を任意に変形して実施してもよく、通常の健康食品の製造方法により前記の成分を混合した後、顆粒を製造し、通常の方法により健康食品組成物の製造に使用できる。
【０１７１】
＜２−２＞健康飲料の製造
本発明のフコステロール、ホンダワラ粉砕物、ホンダワラ抽出物、ヒジキ粉砕物またはヒジキ抽出物１０００ｍｇ、クエン酸１０００ｍｇ、オリゴ糖１００ｇ、梅濃縮液２ｇ、タウリン１ｇに合計９００ｍｌになるように精製水を添加し、通常の健康飲料の製造方法により前記の成分を混合した後、約１時間８５℃で撹拌加熱した後、製造された溶液を濾過して滅菌した２Ｌの容器に取得して、密封滅菌した後、冷蔵保管することで、健康飲料組成物の製造に使用できる。
【０１７２】
＜２−３＞チューインガム
ガムベース２０重量％、砂糖７６．９重量％、香料１重量％および水２重量％と本発明のフコステロール、ホンダワラ粉砕物、ホンダワラ抽出物、ヒジキ粉砕物またはヒジキ抽出物０．１重量％を配合して、通常の方法でチューインガムを製造した。
【０１７３】
＜２−４＞キャンディ
砂糖６０重量％、水飴３９．８重量％および香料０．１重量％と本発明のフコステロール、ホンダワラ粉砕物、ホンダワラ抽出物、ヒジキ粉砕物またはヒジキ抽出物０．１重量％を配合して、通常の方法でキャンディを製造した。
【０１７４】
＜２−５＞ビスケット
薄力粉１等級２５．５９重量％、中力粉１等級２２．２２重量％、精白糖４．８０重量％、食塩０．７３重量％、ブドウ糖０．７８重量％、パームショートニング１１．７８重量％、アンモニウム１．５４重量％、重曹０．１７重量％、重亜硫酸ナトリウム０．１６重量％、米粉１．４５重量％、ビタミンＢ０．０００１重量％、ミルク香０．０４重量％、水２０．６９９８重量％、全脂粉乳１．１６重量％、代用粉乳０．２９重量％、第１リン酸カルシウム０．０３重量％、散布塩０．２９重量％および噴霧乳７．２７重量％と、本発明のフコステロール、ホンダワラ粉砕物、ホンダワラ抽出物、ヒジキ粉砕物またはヒジキ抽出物０．８３０１重量％を配合して、通常の方法でビスケットを製造した。
【０１７５】
［製造例３］化粧品
＜３−１＞栄養化粧水（乳液）
本発明のフコステロール、ホンダワラ粉砕物、ホンダワラ抽出物、ヒジキ粉砕物またはヒジキ抽出物を下記表３の栄養化粧水の剤形比率に基づいて通常の方法により栄養化粧水を製造した。
【０１７６】
【表３】
2018524398.tif 000017
【０１７７】
＜３−２＞柔軟化粧水（スキンローション）
本発明のフコステロール、ホンダワラ粉砕物、ホンダワラ抽出物、ヒジキ粉砕物またはヒジキ抽出物を下記表４の柔軟化粧水の剤形比率に基づいて通常の方法により柔軟化粧水を製造した。
【０１７８】
【表４】
2018524398.tif 000018
【０１７９】
＜３−３＞栄養クリーム
本発明のフコステロール、ホンダワラ粉砕物、ホンダワラ抽出物、ヒジキ粉砕物またはヒジキ抽出物を下記表５の栄養クリームの剤形比率に基づいて通常の方法により栄養クリームを製造した。
【０１８０】
【表５】
2018524398.tif 000019
【０１８１】
＜３−４＞マッサージクリーム
本発明のフコステロール、ホンダワラ粉砕物、ホンダワラ抽出物、ヒジキ粉砕物またはヒジキ抽出物を下記表６のマッサージクリームの剤形比率に基づいて通常の方法によりマッサージクリームを製造した。
【０１８２】
【表６】
2018524398.tif 000020
【０１８３】
＜３−５＞パック
本発明のフコステロール、ホンダワラ粉砕物、ホンダワラ抽出物、ヒジキ粉砕物またはヒジキ抽出物を下記表７のパックの剤形比率に基づいて通常の方法によりパックを製造した。
【０１８４】
【表７】
2018524398.tif 000021
【０１８５】
＜３−６＞ジェル
本発明のフコステロール、ホンダワラ粉砕物、ホンダワラ抽出物、ヒジキ粉砕物または
ヒジキ抽出物を下記表８のジェルの剤形比率に基づいて通常の方法によりジェルを製造した。
【０１８６】
【表８】
2018524398.tif 000022
【０１８７】
［製造例４］飼料
＜４−１＞飼料添加剤の製造
本発明のフコステロール、ホンダワラ粉砕物、ホンダワラ抽出物、ヒジキ粉砕物またはヒジキ抽出物を下記表９の配合成分を混合して、通常の方法により飼料添加剤を製造した。
【０１８８】
【表９】
2018524398.tif 000023
【０１８９】
＜４−２＞飼料の製造
本発明のフコステロール、ホンダワラ粉砕物、ホンダワラ抽出物、ヒジキ粉砕物またはヒジキ抽出物を下記表１０の配合成分を混合して、通常の方法により飼料を製造した。
【０１９０】
【表１０】
2018524398.tif 000024
【０１９１】
以上説明したように、本発明は、フコステロール、ホンダワラ、ホンダワラ粉砕物、ホンダワラ抽出物、ヒジキ、ヒジキ粉砕物またはヒジキ抽出物を含有する筋肉疾患の予防または治療用または筋機能改善用組成物を提供する。より詳細には、本発明のフコステロール、ホンダワラ、ホンダワラ粉砕物、ホンダワラ抽出物、ヒジキ、ヒジキ粉砕物またはヒジキ抽出物は、筋タンパク質の合成に関与する主な遺伝子ｐ−ｍＴＯＲのタンパク質発現の増加、筋タンパク質の分解に関与するＭｕＲＦ−１とａｔｒｏｇｉｎ−１のｍＲＮＡの発現の抑制、筋肉分化に関与するＭｙｏＤとミオゲニンのｍＲＮＡの発現を増加させて、筋肉疾患の予防、改善または治療または筋機能の改善に優れた効果を示す。また、本発明の組成物は、天然物であるので、副作用なしに安全に使用され得、筋肉疾患の予防、改善または治療または筋機能の改善に顕著に優れた効果を示す組成物を提供できるので、産業上の利用可能性が高い。
【図１】
2018524398.tif 000029
【図２】
2018524398.tif 000030
【図３】
2018524398.tif 000031
【図４】
2018524398.tif 000032
【図５】
2018524398.tif 000033
【図６】
2018524398.tif 000034
【図７】
2018524398.tif 000035
【図８】
2018524398.tif 000036
【配列表】
2018524398000001.app
【国際調査報告】
2018524398.tif 000037
2018524398.tif 000038
2018524398.tif 000039
2018524398.tif 000040
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