(57)【要約】ＧＤＦ１１プロドメイン複合体に特異的に結合する結合タンパク質が開示されている。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１プロドメイン複合体に特異的に結合する抗体が開示されている。このような結合タンパク質を使用して、ＧＤＦ１１の異常レベルまたは活性に起因する疾患を処置または予防することができる。本開示は、ＧＤＦ１１結合タンパク質（例えば、プロドメイン複合体結合タンパク質）に関係する。本開示の結合タンパク質として、ＧＤＦ１１（例えば、ヒトプロ潜在型ＧＤＦ１１複合体）に結合することができる、抗体、抗原結合部分および他の抗原結合タンパク質が挙げられるがこれらに限定されない。
2018527903.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトプロＧＤＦ１１、マウスプロＧＤＦ１１、ヒト潜在型ＧＤＦ１１およびマウス潜在型ＧＤＦ１１に特異的に結合するが、ヒトプロＧＤＦ１１  ＡＲＭ８、ヒトプロＧＤＦ８、ヒトプロドメインＧＤＦ１１  ＡＲＭ８または成熟ＧＤＦ１１に特異的に結合しない抗体。
【請求項２】
前記ヒトプロＧＤＦ１１および前記ヒト潜在型ＧＤＦ１１が、配列番号８２に記載のアミノ酸配列を有する、請求項１に記載の抗体。
【請求項３】
前記マウスプロＧＤＦ１１および前記マウス潜在型ＧＤＦ１１が、配列番号９７に記載のアミノ酸配列を有する、請求項１または２に記載の抗体。
【請求項４】
前記プロＧＤＦ１１  ＡＲＭ８が、配列番号１２２に記載のアミノ酸配列を有する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項５】
前記ヒトプロＧＤＦ８が、配列番号８３に記載のアミノ酸配列を有する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項６】
前記ヒトプロドメインＧＤＦ１１  ＡＲＭ８が、配列番号１２４に記載のアミノ酸配列を有する、請求項１〜５のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項７】
前記成熟ＧＤＦ１１が、配列番号９０に記載のアミノ酸配列を有する、請求項１〜６のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項８】
配列番号６６、７２、３０、３６または４２に記載のＣＤＲ−Ｈ３アミノ酸配列を含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項９】
配列番号６９、７５、３３、３９または４５に記載のＣＤＲ−Ｌ３アミノ酸配列を含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１０】
配列番号６４、７０、２８、３４または４０に記載のＣＤＲ−Ｈ１アミノ酸配列を含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１１】
配列番号６７、７３、３１、３７または４３に記載のＣＤＲ−Ｌ１アミノ酸配列を含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１２】
配列番号６５、７１、２９、３５または４１に記載のＣＤＲ−Ｈ２アミノ酸配列を含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１３】
配列番号６８、７４、３２、３８または４４に記載のＣＤＲ−Ｌ２アミノ酸配列を含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１４】
配列番号１０、１２または１４に記載の可変重鎖アミノ酸配列を含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１５】
配列番号１１、１３または１５に記載の可変重鎖アミノ酸配列を含む、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１６】
ヒトプロＧＤＦ１１、マウスプロＧＤＦ１１、ヒト潜在型ＧＤＦ１１、マウス潜在型ＧＤＦ１１、ヒトプロＧＤＦ８およびヒトプロドメインＧＤＦ１１  ＡＲＭ８に特異的に結合するが、ヒトプロＧＤＦ１１  ＡＲＭ８または成熟ＧＤＦ１１に特異的に結合しない抗体。
【請求項１７】
前記ヒトプロＧＤＦ１１および前記ヒト潜在型ＧＤＦ１１が、配列番号８２に記載のアミノ酸配列を有する、請求項１６に記載の抗体。
【請求項１８】
前記マウスプロＧＤＦ１１および前記マウス潜在型ＧＤＦ１１が、配列番号９７に記載のアミノ酸配列を有する、請求項１６または１７に記載の抗体。
【請求項１９】
前記プロＧＤＦ１１  ＡＲＭ８が、配列番号１２２に記載のアミノ酸配列を有する、請求項１６〜１８のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２０】
前記ヒトプロＧＤＦ８が、配列番号８３に記載のアミノ酸配列を有する、請求項１６〜１９のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２１】
前記ヒトプロドメインＧＤＦ１１  ＡＲＭ８が、配列番号１２４に記載のアミノ酸配列を有する、請求項１６〜２０のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２２】
前記成熟ＧＤＦ１１が、配列番号９０に記載のアミノ酸配列を有する、請求項１６〜２１のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２３】
配列番号６６、７２または２４に記載のＣＤＲ−Ｈ３アミノ酸配列を含む、請求項１６〜２２のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２４】
配列番号６９、７５または２７に記載のＣＤＲ−Ｌ３アミノ酸配列を含む、請求項１６〜２３のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２５】
配列番号６４、７０または２２に記載のＣＤＲ−Ｈ１アミノ酸配列を含む、請求項１６〜２４のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２６】
配列番号６７、７３または２５に記載のＣＤＲ−Ｌ１アミノ酸配列を含む、請求項１６〜２５のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２７】
配列番号６５、７１または２３に記載のＣＤＲ−Ｈ２アミノ酸配列を含む、請求項１６〜２６のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２８】
配列番号６８、７４または２６に記載のＣＤＲ−Ｌ２アミノ酸配列を含む、請求項１６〜２７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２９】
配列番号８に記載の可変重鎖アミノ酸配列を含む、請求項１６〜２８のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項３０】
配列番号９に記載の可変重鎖アミノ酸配列を含む、請求項１６〜２９のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項３１】
ヒトプロＧＤＦ１１、マウスプロＧＤＦ１１、ヒト潜在型ＧＤＦ１１、マウス潜在型ＧＤＦ１１、ヒトプロＧＤＦ８、ヒトプロドメインＧＤＦ１１  ＡＲＭ８、ヒトプロＧＤＦ１１  ＡＲＭ８および成熟ＧＤＦ１１に特異的に結合する抗体。
【請求項３２】
前記ヒトプロＧＤＦ１１および前記ヒト潜在型ＧＤＦ１１が、配列番号８２に記載のアミノ酸配列を有する、請求項３１に記載の抗体。
【請求項３３】
前記マウスプロＧＤＦ１１および前記マウス潜在型ＧＤＦ１１が、配列番号９７に記載のアミノ酸配列を有する、請求項３１または３２に記載の抗体。
【請求項３４】
前記プロＧＤＦ１１  ＡＲＭ８が、配列番号１２２に記載のアミノ酸配列を有する、請求項３１〜３３のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項３５】
前記ヒトプロＧＤＦ８が、配列番号８３に記載のアミノ酸配列を有する、請求項３１〜３４のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項３６】
前記ヒトプロドメインＧＤＦ１１  ＡＲＭ８が、配列番号１２４に記載のアミノ酸配列を有する、請求項３１〜３５のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項３７】
前記成熟ＧＤＦ１１が、配列番号９０に記載のアミノ酸配列を有する、請求項３１〜３６のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項３８】
配列番号６６、７８または４８に記載のＣＤＲ−Ｈ３アミノ酸配列を含む、請求項３１〜３７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項３９】
配列番号６９、８１または５１に記載のＣＤＲ−Ｌ３アミノ酸配列を含む、請求項３１〜３８のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項４０】
配列番号６４、７６または４６に記載のＣＤＲ−Ｈ１アミノ酸配列を含む、請求項３１〜３９のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項４１】
配列番号６７、７９または４９に記載のＣＤＲ−Ｌ１アミノ酸配列を含む、請求項３１〜４０のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項４２】
配列番号６５、７７または４７に記載のＣＤＲ−Ｈ２アミノ酸配列を含む、請求項３１〜４１のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項４３】
配列番号６８、８０または５０に記載のＣＤＲ−Ｌ２アミノ酸配列を含む、請求項３１〜４２のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項４４】
配列番号１６に記載の可変重鎖アミノ酸配列を含む、請求項３１〜４３のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項４５】
配列番号１７に記載の可変重鎖アミノ酸配列を含む、請求項３１〜４４のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項４６】
ヒトプロＧＤＦ１１、マウスプロＧＤＦ１１、ヒト潜在型ＧＤＦ１１、マウス潜在型ＧＤＦ１１、ヒトプロＧＤＦ８、ヒトプロドメインＧＤＦ１１  ＡＲＭ８およびヒトプロＧＤＦ１１  ＡＲＭ８に特異的に結合するが、成熟ＧＤＦ１１に特異的に結合しない抗体。
【請求項４７】
前記ヒトプロＧＤＦ１１および前記ヒト潜在型ＧＤＦ１１が、配列番号８２に記載のアミノ酸配列を有する、請求項４６に記載の抗体。
【請求項４８】
前記マウスプロＧＤＦ１１および前記マウス潜在型ＧＤＦ１１が、配列番号９７に記載のアミノ酸配列を有する、請求項４６または４７に記載の抗体。
【請求項４９】
前記プロＧＤＦ１１  ＡＲＭ８が、配列番号１２２に記載のアミノ酸配列を有する、請求項４６〜４８のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項５０】
前記ヒトプロＧＤＦ８が、配列番号８３に記載のアミノ酸配列を有する、請求項４６〜４９のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項５１】
前記ヒトプロドメインＧＤＦ１１  ＡＲＭ８が、配列番号１２４に記載のアミノ酸配列を有する、請求項４６〜５０のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項５２】
前記成熟ＧＤＦ１１が、配列番号９０に記載のアミノ酸配列を有する、請求項４６〜５１のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項５３】
配列番号６６、７８または６０に記載のＣＤＲ−Ｈ３アミノ酸配列を含む、請求項４６〜５２のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項５４】
配列番号６９、８１または６３に記載のＣＤＲ−Ｌ３アミノ酸配列を含む、請求項４６〜５３のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項５５】
配列番号６４、７６または５８に記載のＣＤＲ−Ｈ１アミノ酸配列を含む、請求項４６〜５４のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項５６】
配列番号６７、７９または６１に記載のＣＤＲ−Ｌ１アミノ酸配列を含む、請求項４６〜５５のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項５７】
配列番号６５、７７または５９に記載のＣＤＲ−Ｈ２アミノ酸配列を含む、請求項４６〜５６のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項５８】
配列番号６８、８０または６２に記載のＣＤＲ−Ｌ２アミノ酸配列を含む、請求項４６〜５７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項５９】
配列番号２０に記載の可変重鎖アミノ酸配列を含む、請求項４６〜５８のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項６０】
配列番号２１に記載の可変重鎖アミノ酸配列を含む、請求項４６〜５９のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項６１】
ヒトプロＧＤＦ１１、マウスプロＧＤＦ１１、ヒト潜在型ＧＤＦ１１、マウス潜在型ＧＤＦ１１および成熟ＧＤＦ１１に特異的に結合するが、ヒトプロＧＤＦ１１  ＡＲＭ８、ヒトプロＧＤＦ８またはヒトプロドメインＧＤＦ１１  ＡＲＭ８に特異的に結合しない抗体。
【請求項６２】
前記ヒトプロＧＤＦ１１および前記ヒト潜在型ＧＤＦ１１が、配列番号８２に記載のアミノ酸配列を有する、請求項６１に記載の抗体。
【請求項６３】
前記マウスプロＧＤＦ１１および前記マウス潜在型ＧＤＦ１１が、配列番号９７に記載のアミノ酸配列を有する、請求項６１または６２に記載の抗体。
【請求項６４】
前記プロＧＤＦ１１  ＡＲＭ８が、配列番号１２２に記載のアミノ酸配列を有する、請求項６１〜６３のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項６５】
前記ヒトプロＧＤＦ８が、配列番号８３に記載のアミノ酸配列を有する、請求項６１〜６４のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項６６】
前記ヒトプロドメインＧＤＦ１１  ＡＲＭ８が、配列番号１２４に記載のアミノ酸配列を有する、請求項６１〜６５のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項６７】
前記成熟ＧＤＦ１１が、配列番号９０に記載のアミノ酸配列を有する、請求項６１〜６６のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項６８】
配列番号６６または５４に記載のＣＤＲ−Ｈ３アミノ酸配列を含む、請求項６１〜６７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項６９】
配列番号６９または５７に記載のＣＤＲ−Ｌ３アミノ酸配列を含む、請求項６１〜６８のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項７０】
配列番号６４または５２に記載のＣＤＲ−Ｈ１アミノ酸配列を含む、請求項６１〜６９のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項７１】
配列番号６７または５５に記載のＣＤＲ−Ｌ１アミノ酸配列を含む、請求項６１〜７０のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項７２】
配列番号６５または５３に記載のＣＤＲ−Ｈ２アミノ酸配列を含む、請求項６１〜７１のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項７３】
配列番号６８または５６に記載のＣＤＲ−Ｌ２アミノ酸配列を含む、請求項６１〜７２のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項７４】
配列番号１８に記載の可変重鎖アミノ酸配列を含む、請求項６１〜７３のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項７５】
配列番号１９に記載の可変重鎖アミノ酸配列を含む、請求項６１〜７４のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項７６】
抗原結合ドメインを含む抗体であって、前記抗原結合ドメインが、６個のＣＤＲ：ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、ＣＤＲ−Ｈ３、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３を含み、前記ＣＤＲ配列のうち少なくとも１種が、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８および配列番号６９からなる群から選択される、抗体。
【請求項７７】
前記ＣＤＲ配列のうち少なくとも１種が、
Ｘ１ＹＸ３Ｘ４Ｘ５（配列番号６４）であるＣＤＲＨ１配列
（式中、Ｘ１は、Ｄ、ＧまたはＳであり、
Ｘ３は、Ａ、Ｙ、ＧまたはＳであり、
Ｘ４は、Ｍ、ＩまたはＷであり、
Ｘ５は、Ｈ、Ｓ、Ｙ、ＧまたはＮである）、
Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０ＹＸ１２Ｘ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６Ｘ１７（配列番号６５）であるＣＤＲＨ２配列
（式中、Ｘ１は、Ｇ、Ｗ、Ｖ、Ｙである、または存在せず、
Ｘ２は、ＩまたはＥであり、
Ｘ３は、Ｓ、Ｎ、ＲまたはＩであり、
Ｘ４は、Ｗ、Ｐ、Ｙ、ＡまたはＳであり、
Ｘ５は、Ｎ、Ｄ、Ｙ、ＨまたはＳであり、
Ｘ６は、Ｓ、ＧまたはＮであり、
Ｘ７は、ＧまたはＳであり、
Ｘ８は、Ｓ、Ｇ、Ｎ、ＤまたはＴであり、
Ｘ９は、Ｉ、ＴまたはＥであり、
Ｘ１０は、Ｇ、ＮまたはＹであり、
Ｘ１２は、ＡまたはＮであり、
Ｘ１３は、Ｄ、ＱまたはＰであり、
Ｘ１４は、ＳまたはＫであり、
Ｘ１５は、Ｖ、ＦまたはＬであり、
Ｘ１６は、ＫまたはＱであり、
Ｘ１７は、Ｇ、ＤまたはＳである）、
Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０Ｘ１１Ｘ１２Ｘ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６Ｘ１７Ｘ１８（配列番号６６）であるＣＤＲＨ３配列
（式中、Ｘ１は、Ｇである、または存在せず、
Ｘ２は、Ｇである、または存在せず、
Ｘ３は、Ｓ、Ｄである、または存在せず、
Ｘ４は、Ｉ、Ｇである、または存在せず、
Ｘ５は、Ａ、Ｄ、Ｔ、Ｎ、Ｉである、または存在せず、
Ｘ６は、Ｖ、Ｆ、Ｐ、Ｙである、または存在せず、
Ｘ７は、Ａ、Ｗ、Ｐ、Ｄ、Ｙである、または存在せず、
Ｘ８は、Ｇ、Ｓ、Ｌ、Ｉ、Ｖ、Ｄである、または存在せず、
Ｘ９は、Ｔ、Ｇ、Ｗ、Ｌ、Ｓである、または存在せず、
Ｘ１０は、Ｌ、Ｙ、Ｆ、Ｔ、Ｓである、または存在せず、
Ｘ１１は、Ｅ、Ｖ、Ｐ、ＧまたはＳであり、
Ｘ１２は、Ｖ、Ｄ、Ｑ、Ｅ、ＹまたはＷであり、
Ｘ１３は、Ｔ、Ｙ、ＱまたはＥであり、
Ｘ１４は、Ｇ、Ｙ、Ｎ、ＡまたはＤであり、
Ｘ１５は、Ｄ、Ｇ、Ｗ、Ａ、Ｐ、ＹまたはＬであり、
Ｘ１６は、Ｌ、ＭまたはＦであり、
Ｘ１７は、ＤまたはＧであり、
Ｘ１８は、Ｙ、Ｖ、ＰまたはＩである）、
Ｘ１Ｘ２ＳＱＸ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９ＹＬＸ１２（配列番号６７）であるＣＤＲＬ１配列、
（式中、Ｘ１は、ＲまたはＱであり、
Ｘ２は、ＡまたはＴであり、
Ｘ５は、Ｆ、Ｄ、Ｓ、ＲまたはＨであり、
Ｘ６は、Ｌ、ＩまたはＶであり、
Ｘ７は、Ｓ、Ｉである、または存在せず、
Ｘ８は、Ｓである、または存在せず、
Ｘ９は、Ｔ、Ｎである、または存在せず、
Ｘ１２は、ＡまたはＮである）、
Ｘ１ＡＳＸ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７（配列番号６８）であるＣＤＲＬ２配列
（式中、Ｘ１は、Ｓ、Ｄ、Ｇ、ＫまたはＡであり、
Ｘ４は、Ｎ、ＳまたはＴであり、
Ｘ５は、ＲまたはＬであり、
Ｘ６は、Ａ、ＥまたはＱであり、
Ｘ７は、ＴまたはＳである）および
Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６ＰＸ８Ｘ９（配列番号６９）であるＣＤＲＬ３配列
（式中、Ｘ１は、ＭまたはＱであり、
Ｘ２は、Ｑ、ＫまたはＨであり、
Ｘ３は、Ａ、ＹまたはＳであり、
Ｘ４は、Ｔ、Ｓ、Ｇ、ＹまたはＱであり、
Ｘ５は、Ｈ、Ｔ、Ｓである、または存在せず、
Ｘ６は、Ｗ、Ａ、Ｔ、Ｙである、または存在せず、
Ｘ８は、Ｙ、Ｌ、Ｉ、Ｐである、または存在せず、
Ｘ９は、Ｔである、または存在しない）
からなる群から選択される、請求項７６に記載の抗体。
【請求項７８】
前記ＣＤＲ配列のうち少なくとも１種が、
Ｘ１ＹＸ３Ｘ４Ｘ５（配列番号７０）であるＣＤＲＨ１配列
（式中、Ｘ１は、Ｄ、ＧまたはＳであり、
Ｘ３は、Ａ、ＹまたはＧであり、
Ｘ４は、ＭまたはＩであり、
Ｘ５は、ＨまたはＳである）、
Ｘ１ＩＸ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０ＹＡＸ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６Ｇ（配列番号７１）であるＣＤＲＨ２配列
（式中、Ｘ１は、Ｇ、ＷまたはＶであり、
Ｘ３は、ＳまたはＮであり、
Ｘ４は、Ｗ、Ｐ、ＹまたはＡであり、
Ｘ５は、Ｎ、ＤまたはＹであり、
Ｘ６は、Ｓ、ＧまたはＮであり、
Ｘ７は、ＧまたはＳであり、
Ｘ８は、Ｓ、ＧまたはＮであり、
Ｘ９は、Ｉ、ＴまたはＥであり、
Ｘ１０は、Ｇ、ＮまたはＹであり、
Ｘ１３は、ＤまたはＱであり、
Ｘ１４は、ＳまたはＫであり、
Ｘ１５は、Ｖ、ＦまたはＬであり、
Ｘ１６は、ＫまたはＱである）、
Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０Ｘ１１Ｘ１２Ｘ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６ＤＸ１８（配列番号７２）であるＣＤＲＨ３配列
（式中、Ｘ１は、Ｇである、または存在せず、
Ｘ２は、Ｇである、または存在せず、
Ｘ３は、Ｓである、または存在せず、
Ｘ４は、Ｉである、または存在せず、
Ｘ５は、Ａ、Ｄ、Ｔである、または存在せず、
Ｘ６は、Ｖ、Ｆ、Ｐである、または存在せず、
Ｘ７は、Ａ、Ｗ、Ｐである、または存在せず、
Ｘ８は、Ｇ、Ｓ、Ｌである、または存在せず、
Ｘ９は、Ｔ、Ｇ、Ｗである、または存在せず、
Ｘ１０は、Ｌ、Ｙ、Ｆである、または存在せず、
Ｘ１１は、Ｅ、Ｖ、ＰまたはＧであり、
Ｘ１２は、Ｖ、Ｄ、ＱまたはＥであり、
Ｘ１３は、ＴまたはＹであり、
Ｘ１４は、Ｇ、ＹまたはＮであり、
Ｘ１５は、Ｄ、Ｇ、ＷまたはＡであり、
Ｘ１６は、Ｌ、ＭまたはＦであり、
Ｘ１８は、Ｙ、Ｖ、ＰまたはＩである）、
Ｘ１ＡＳＱＸ５Ｘ６Ｘ７ＳＸ９ＹＬＸ１２（配列番号７３）であるＣＤＲＬ１配列
（式中、Ｘ１は、ＲまたはＱであり、
Ｘ５は、Ｆ、ＤまたはＳであり、
Ｘ６は、Ｌ、ＩまたはＶであり、
Ｘ７は、Ｓである、または存在せず、
Ｘ９は、ＴまたはＮであり、
Ｘ１２は、ＡまたはＮである）、
Ｘ１ＡＳＮ４Ｘ５Ｘ６Ｔ（配列番号７４）であるＣＤＲＬ２配列
（式中、Ｘ１は、ＳまたはＤであり、
Ｘ５は、ＲまたはＬであり、
Ｘ６は、ＡまたはＥである）、
Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６ＰＸ８Ｔ（配列番号７５）であるＣＤＲＬ３配列
（式中、Ｘ１は、ＭまたはＱであり、
Ｘ２は、ＱまたはＫであり、
Ｘ３は、Ａ、ＹまたはＳであり、
Ｘ４は、Ｔ、Ｓ、ＧまたはＹであり、
Ｘ５は、Ｈ、ＴまたはＳであり、
Ｘ６は、Ｗ、ＡまたはＴであり、
Ｘ８は、Ｙ、ＬまたはＩである）
からなる群から選択される、請求項７６または７７に記載の抗体。
【請求項７９】
前記ＣＤＲ配列のうち少なくとも１種が、
Ｘ１ＹＸ３Ｘ４Ｘ５（配列番号７６）であるＣＤＲＨ１配列
（式中、Ｘ１は、ＧまたはＳであり、
Ｘ３は、ＹまたはＳであり、
Ｘ４は、ＩまたはＭであり、
Ｘ５は、ＹまたはＮである）、
Ｘ１ＩＸ３Ｘ４Ｘ５ＳＸ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０ＹＡＸ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６Ｘ１７（配列番号７７）であるＣＤＲＨ２配列
（式中、Ｘ１は、ＷまたはＹであり、
Ｘ３は、ＲまたはＳであり、
Ｘ４は、ＰまたはＳであり、
Ｘ５は、ＮまたはＳであり、
Ｘ７は、ＧまたはＳであり、
Ｘ８は、ＤまたはＴであり、
Ｘ９は、ＴまたはＩであり、
Ｘ１０は、ＮまたはＹであり、
Ｘ１３は、ＱまたはＤであり、
Ｘ１４は、ＫまたはＳであり、
Ｘ１５は、ＦまたはＶであり、
Ｘ１６は、ＱまたはＫであり、
Ｘ１７は、ＤまたはＧである）、
Ｘ１Ｘ２Ｘ３ＹＸ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８ＧＹＸ１１Ｘ１２Ｘ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｙ（配列番号７８）であるＣＤＲＨ３配列
（式中、Ｘ１は、Ｄである、または存在せず、
Ｘ２は、Ｇである、または存在せず、
Ｘ３は、ＮまたはＩであり、
Ｘ５は、ＤまたはＹであり、
Ｘ６は、ＩまたはＤであり、
Ｘ７は、ＬまたはＳであり、
Ｘ８は、ＴまたはＳであり、
Ｘ１１は、ＱまたはＹであり、
Ｘ１２は、ＡまたはＤであり、
Ｘ１３は、ＰまたはＬであり、
Ｘ１４は、ＬまたはＦであり、
Ｘ１５は、ＧまたはＤである）、
ＲＡＳＱＸ５Ｘ６Ｘ７ＳＸ９ＹＬＸ１２（配列番号７９）であるＣＤＲＬ１配列
（式中、Ｘ５は、ＲまたはＳであり、
Ｘ６は、ＶまたはＩであり、
Ｘ７は、ＩまたはＳであり、
Ｘ９は、Ｎである、または存在せず、
Ｘ１２は、ＡまたはＮである）、
Ｘ１ＡＳＳＸ５Ｘ６Ｘ７（配列番号８０）であるＣＤＲＬ２配列
（式中、Ｘ１は、ＧまたはＡであり、
Ｘ５は、ＲまたはＬであり、
Ｘ６は、ＡまたはＱであり、
Ｘ７は、ＴまたはＳである）、
ＱＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６ＰＸ８Ｘ９（配列番号８１）であるＣＤＲＬ３配列
（式中、Ｘ２は、ＨまたはＱであり、
Ｘ３は、ＹまたはＳであり、
Ｘ４は、ＧまたはＹであり、
Ｘ５は、Ｓである、または存在せず、
Ｘ６は、Ｔである、または存在せず、
Ｘ８は、Ｐである、または存在せず、
Ｘ９は、Ｔである、または存在しない）
からなる群から選択される、請求項７６〜７８のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項８０】
Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０Ｘ１１Ｘ１２Ｘ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６Ｘ１７Ｘ１８（配列番号６６）
（式中、Ｘ１は、Ｇである、もしくは存在せず、
Ｘ２は、Ｇである、もしくは存在せず、
Ｘ３は、Ｓ、Ｄである、もしくは存在せず、
Ｘ４は、Ｉ、Ｇである、もしくは存在せず、
Ｘ５は、Ａ、Ｄ、Ｔ、Ｎ、Ｉである、もしくは存在せず、
Ｘ６は、Ｖ、Ｆ、Ｐ、Ｙである、もしくは存在せず、
Ｘ７は、Ａ、Ｗ、Ｐ、Ｄ、Ｙである、もしくは存在せず、
Ｘ８は、Ｇ、Ｓ、Ｌ、Ｉ、Ｖ、Ｄである、もしくは存在せず、
Ｘ９は、Ｔ、Ｇ、Ｗ、Ｌ、Ｓである、もしくは存在せず、
Ｘ１０は、Ｌ、Ｙ、Ｆ、Ｔ、Ｓである、もしくは存在せず、
Ｘ１１は、Ｅ、Ｖ、Ｐ、ＧもしくはＳであり、
Ｘ１２は、Ｖ、Ｄ、Ｑ、Ｅ、ＹもしくはＷであり、
Ｘ１３は、Ｔ、Ｙ、ＱもしくはＥであり、
Ｘ１４は、Ｇ、Ｙ、Ｎ、ＡもしくはＤであり、
Ｘ１５は、Ｄ、Ｇ、Ｗ、Ａ、Ｐ、ＹもしくはＬであり、
Ｘ１６は、Ｌ、ＭもしくはＦであり、
Ｘ１７は、ＤもしくはＧであり、
Ｘ１８は、Ｙ、Ｖ、ＰもしくはＩである）または
Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０Ｘ１１Ｘ１２Ｘ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６ＤＸ１８（配列番号７２）
（式中、Ｘ１は、Ｇである、もしくは存在せず、
Ｘ２は、Ｇである、もしくは存在せず、
Ｘ３は、Ｓである、もしくは存在せず、
Ｘ４は、Ｉである、もしくは存在せず、
Ｘ５は、Ａ、Ｄ、Ｔである、もしくは存在せず、
Ｘ６は、Ｖ、Ｆ、Ｐである、もしくは存在せず、
Ｘ７は、Ａ、Ｗ、Ｐである、もしくは存在せず、
Ｘ８は、Ｇ、Ｓ、Ｌである、もしくは存在せず、
Ｘ９は、Ｔ、Ｇ、Ｗである、もしくは存在せず、
Ｘ１０は、Ｌ、Ｙ、Ｆである、もしくは存在せず、
Ｘ１１は、Ｅ、Ｖ、ＰもしくはＧであり、
Ｘ１２は、Ｖ、Ｄ、ＱもしくはＥであり、
Ｘ１３は、ＴもしくはＹであり、
Ｘ１４は、Ｇ、ＹもしくはＮであり、
Ｘ１５は、Ｄ、Ｇ、ＷもしくはＡであり、
Ｘ１６は、Ｌ、ＭもしくはＦであり、
Ｘ１８は、Ｙ、Ｖ、ＰもしくはＩである）または
Ｘ１Ｘ２Ｘ３ＹＸ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８ＧＹＸ１１Ｘ１２Ｘ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｙ（配列番号７８）
（式中、Ｘ１は、Ｄである、もしくは存在せず、
Ｘ２は、Ｇである、もしくは存在せず、
Ｘ３は、ＮもしくはＩであり、
Ｘ５は、ＤもしくはＹであり、
Ｘ６は、ＩもしくはＤであり、
Ｘ７は、ＬもしくはＳであり、
Ｘ８は、ＴもしくはＳであり、
Ｘ１１は、ＱもしくはＹであり、
Ｘ１２は、ＡもしくはＤであり、
Ｘ１３は、ＰもしくはＬであり、
Ｘ１４は、ＬもしくはＦであり、
Ｘ１５は、ＧもしくはＤである）
のＣＤＲＨ３配列を含む、請求項７６〜７９のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項８１】
Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６ＰＸ８Ｘ９（配列番号６９）
（式中、Ｘ１は、ＭもしくはＱであり、
Ｘ２は、Ｑ、ＫもしくはＨであり、
Ｘ３は、Ａ、ＹもしくはＳであり、
Ｘ４は、Ｔ、Ｓ、Ｇ、ＹもしくはＱであり、
Ｘ５は、Ｈ、Ｔ、Ｓである、もしくは存在せず、
Ｘ６は、Ｗ、Ａ、Ｔ、Ｙである、もしくは存在せず、
Ｘ８は、Ｙ、Ｌ、Ｉ、Ｐである、もしくは存在せず、
Ｘ９は、Ｔである、もしくは存在しない）または
Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６ＰＸ８Ｔ（配列番号７５）
（式中、Ｘ１は、ＭもしくはＱであり、
Ｘ２は、ＱもしくはＫであり、
Ｘ３は、Ａ、ＹもしくはＳであり、
Ｘ４は、Ｔ、Ｓ、ＧもしくはＹであり、
Ｘ５は、Ｈ、ＴもしくはＳであり、
Ｘ６は、Ｗ、ＡもしくはＴであり、
Ｘ８は、Ｙ、ＬもしくはＩである）または
ＱＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６ＰＸ８Ｘ９（配列番号８１）
（式中、Ｘ２は、ＨもしくはＱであり、
Ｘ３は、ＹもしくはＳであり、
Ｘ４は、ＧもしくはＹであり、
Ｘ５は、Ｓである、もしくは存在せず、
Ｘ６は、Ｔである、もしくは存在せず、
Ｘ８は、Ｐである、もしくは存在せず、
Ｘ９は、Ｔである、もしくは存在しない）
のＣＤＲＬ３配列を含む、請求項７６〜８０のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項８２】
抗原結合ドメインを含む抗体であって、前記抗原結合ドメインが、６個のＣＤＲ：ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、ＣＤＲ−Ｈ３、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３を含み、
ＣＤＲ−Ｈ１が、
配列番号２２；
配列番号２８；
配列番号３４；
配列番号４０；
配列番号４６；
配列番号５２；および
配列番号５８からなる群から選択され、
ＣＤＲ−Ｈ２が、
配列番号２３；
配列番号２９；
配列番号３５；
配列番号４１；
配列番号４７；
配列番号５３；および
配列番号５９からなる群から選択され、
ＣＤＲ−Ｈ３が、
配列番号２４；
配列番号３０；
配列番号３６；
配列番号４２；
配列番号４８；
配列番号５４；および
配列番号６０からなる群から選択され、
ＣＤＲ−Ｌ１が、
配列番号２５；
配列番号３１；
配列番号３７；
配列番号４３；
配列番号４９；
配列番号５５；および
配列番号６１からなる群から選択され、
ＣＤＲ−Ｌ２が、
配列番号２６；
配列番号３２；
配列番号３８；
配列番号４４；
配列番号５０；
配列番号５６；および
配列番号６２からなる群から選択され、
ＣＤＲ−Ｌ３が、
配列番号２７；
配列番号３３；
配列番号３９；
配列番号４５；
配列番号５１；
配列番号５７；および
配列番号６３からなる群から選択される、抗体。
【請求項８３】
前記６個のＣＤＲのうち３個が、
ＶＨ  ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−１  ＣＤＲセット
ＣＤＲ−Ｈ１：配列番号２２
ＣＤＲ−Ｈ２：配列番号２３
ＣＤＲ−Ｈ３：配列番号２４
ＶＬ  ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−１  ＣＤＲセット
ＣＤＲ−Ｌ１：配列番号２５
ＣＤＲ−Ｌ２：配列番号２６
ＣＤＲ−Ｌ３：配列番号２７
ＶＨ  ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−２  ＣＤＲセット
ＣＤＲ−Ｈ１：配列番号２８
ＣＤＲ−Ｈ２：配列番号２９
ＣＤＲ−Ｈ３：配列番号３０
ＶＬ  ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−２  ＣＤＲセット
ＣＤＲ−Ｌ１：配列番号３１
ＣＤＲ−Ｌ２：配列番号３２
ＣＤＲ−Ｌ３：配列番号３３
ＶＨ  ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−３  ＣＤＲセット
ＣＤＲ−Ｈ１：配列番号３４
ＣＤＲ−Ｈ２：配列番号３５
ＣＤＲ−Ｈ３：配列番号３６
ＶＬ  ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−３  ＣＤＲセット
ＣＤＲ−Ｌ１：配列番号３７
ＣＤＲ−Ｌ２：配列番号３８
ＣＤＲ−Ｌ３：配列番号３９
ＶＨ  ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−４  ＣＤＲセット
ＣＤＲ−Ｈ１：配列番号４０
ＣＤＲ−Ｈ２：配列番号４１
ＣＤＲ−Ｈ３：配列番号４２
ＶＬ  ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−４  ＣＤＲセット
ＣＤＲ−Ｌ１：配列番号４３
ＣＤＲ−Ｌ２：配列番号４４
ＣＤＲ−Ｌ３：配列番号４５
ＶＨ  ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−５  ＣＤＲセット
ＣＤＲ−Ｈ１：配列番号４６
ＣＤＲ−Ｈ２：配列番号４７
ＣＤＲ−Ｈ３：配列番号４８
ＶＬ  ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−５  ＣＤＲセット
ＣＤＲ−Ｌ１：配列番号４９
ＣＤＲ−Ｌ２：配列番号５０
ＣＤＲ−Ｌ３：配列番号５１
ＶＨ  ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−６  ＣＤＲセット
ＣＤＲ−Ｈ１：配列番号５２
ＣＤＲ−Ｈ２：配列番号５３
ＣＤＲ−Ｈ３：配列番号５４
ＶＬ  ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−６  ＣＤＲセット
ＣＤＲ−Ｌ１：配列番号５５
ＣＤＲ−Ｌ２：配列番号５６
ＣＤＲ−Ｌ３：配列番号５７
ＶＨ  ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−７  ＣＤＲセット
ＣＤＲ−Ｈ１：配列番号５８
ＣＤＲ−Ｈ２：配列番号５９
ＣＤＲ−Ｈ３：配列番号６０
および
ＶＬ  ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−７  ＣＤＲセット
ＣＤＲ−Ｌ１：配列番号６１
ＣＤＲ−Ｌ２：配列番号６２
ＣＤＲ−Ｌ３：配列番号６３
からなる可変ドメインＣＤＲセットの群から選択される、請求項７６〜８２のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項８４】
少なくとも２個の可変ドメインＣＤＲセットを含む、請求項８３に記載の抗体。
【請求項８５】
前記少なくとも２個の可変ドメインＣＤＲセットが、
ＶＨ  ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−１  ＣＤＲセットおよびＶＬ  ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−１  ＣＤＲセット、
ＶＨ  ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−２  ＣＤＲセットおよびＶＬ  ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−２  ＣＤＲセット、
ＶＨ  ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−３  ＣＤＲセットおよびＶＬ  ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−３  ＣＤＲセット、
ＶＨ  ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−４  ＣＤＲセットおよびＶＬ  ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−４  ＣＤＲセット、
ＶＨ  ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−５  ＣＤＲセットおよびＶＬ  ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−５  ＣＤＲセット、
ＶＨ  ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−６  ＣＤＲセットおよびＶＬ  ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−６  ＣＤＲセット、
および
ＶＨ  ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−７  ＣＤＲセットおよびＶＬ  ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−７  ＣＤＲセット
からなる群から選択される、請求項８４に記載の抗体。
【請求項８６】
ヒトアクセプターフレームワークをさらに含む、請求項７６〜８５のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項８７】
単離された抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号８〜２１からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１個の可変ドメインを含む、請求項７６〜８６のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項８８】
少なくとも１個の重鎖可変ドメインおよび少なくとも１個の軽鎖可変ドメインを含み、前記重鎖可変ドメインが、配列番号８、１０、１２、１４、１６、１８および２０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有し、前記軽鎖可変ドメインが、配列番号９、１１、１３、１５、１７、１９および２１からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項７６〜８７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項８９】
２個の可変ドメインを含み、前記２個の可変ドメインが、
配列番号８および９、
配列番号１０および１１、
配列番号１２および１３、
配列番号１４および１５、
配列番号１６および１７、
配列番号１８および１９、および
配列番号２０および２１
からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項７６〜８８のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項９０】
ヒトＩｇＭ定常ドメイン；ヒトＩｇＧ１定常ドメイン；ヒトＩｇＧ２定常ドメイン；ヒトＩｇＧ３定常ドメイン；ヒトＩｇＧ４定常ドメイン；ヒトＩｇＥ定常ドメインおよびヒトＩｇＡ定常ドメインからなる群から選択される重鎖免疫グロブリン定常ドメインをさらに含む、請求項１〜８９のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項９１】
前記重鎖免疫グロブリン定常ドメインが、ヒトＩｇＧ１定常ドメインである、請求項９０に記載の抗体。
【請求項９２】
軽鎖免疫グロブリン定常ドメインをさらに含み、前記軽鎖免疫グロブリン定常ドメインが、ヒトＩｇカッパ定常ドメインである、請求項１〜９１のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項９３】
軽鎖免疫グロブリン定常ドメインをさらに含み、前記軽鎖免疫グロブリン定常ドメインが、ヒトＩｇラムダ定常ドメインである、請求項１〜９１のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項９４】
免疫グロブリン分子、ｓｃＦｖ、モノクローナル抗体、ヒト抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、単一ドメイン抗体、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ジスルフィド連結されたＦｖ、単一ドメイン抗体、ダイアボディ、多特異性抗体、二特異性抗体および二重特異性抗体からなる群から選択される、請求項１〜９３のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項９５】
ヒト抗体である、請求項１〜９４のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項９６】
ＧＤＦ１１の生物機能またはレベルをモジュレートすることができる、請求項１〜９５のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項９７】
ＧＤＦ１１を中和することができる、請求項１〜９６のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項９８】
前記ＧＤＦ１１が、ヒトＧＤＦ１１である、請求項９６または９７に記載の抗体。
【請求項９９】
赤血球生成を増強することができる、請求項１〜９８のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１００】
ヒトＧＤＦ１１プロドメイン複合体に対し、多くても約１０−７Ｍ；多くても約１０−８Ｍ；多くても約１０−９Ｍ；多くても約１０−１０Ｍ；多くても約１０−１１Ｍ；多くても約１０−１２Ｍ；および多くても１０−１３Ｍからなる群から選択される解離定数（ＫＤ）を有する、請求項１〜９９のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１０１】
ヒトＧＤＦ１１プロドメイン複合体に対し、少なくとも約１０２Ｍ−１ｓ−１；少なくとも約１０３Ｍ−１ｓ−１；少なくとも約１０４Ｍ−１ｓ−１；少なくとも約１０５Ｍ−１ｓ−１；および少なくとも約１０６Ｍ−１ｓ−１からなる群から選択されるオンレートを有する、請求項１〜９９のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１０２】
ヒトＧＤＦ１１プロドメイン複合体に対し、多くても約１０−３ｓ−１；多くても約１０−４ｓ−１；多くても約１０−５ｓ−１；および多くても約１０−６ｓ−１からなる群から選択されるオフレートを有する、請求項１〜９９のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１０３】
単離された、請求項１〜１０２のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１０４】
ヒトＧＤＦ１１プロドメイン複合体に特異的に結合する、請求項１〜１０３のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１０５】
請求項１〜１０４のいずれか一項に記載の抗体を含み、リンカーポリペプチドまたは免疫グロブリン定常ドメインをさらに含む抗体構築物。
【請求項１０６】
免疫グロブリン分子、
モノクローナル抗体、
キメラ抗体、
ＣＤＲグラフト抗体、
ヒト化抗体、
Ｆａｂ、
Ｆａｂ’、
Ｆ（ａｂ’）２、
Ｆｖ、
ジスルフィド連結されたＦｖ、
ｓｃＦｖ、
単一ドメイン抗体、
ダイアボディ、
多特異性抗体、
二重特異性抗体、および
二特異性抗体
からなる群から選択される、請求項１０５に記載の抗体構築物。
【請求項１０７】
ヒトＩｇＭ定常ドメイン、
ヒトＩｇＧ１定常ドメイン、
ヒトＩｇＧ２定常ドメイン、
ヒトＩｇＧ３定常ドメイン、
ヒトＩｇＧ４定常ドメイン、
ヒトＩｇＥ定常ドメイン、
ヒトＩｇＡ定常ドメイン、および
Ｆｃ新生児受容体、Ｆｃガンマ受容体またはＣ１ｑに対する結合強度を変更する１個または複数の突然変異を有するＩｇＧ定常ドメインバリアント
からなる群から選択される重鎖免疫グロブリン定常ドメインを含む、請求項１０６に記載の抗体構築物。
【請求項１０８】
請求項１０５〜１０７のいずれか一項に記載の抗体構築物を含む抗体コンジュゲートであって、前記抗体構築物が、治療剤または細胞傷害剤にコンジュゲートされている、抗体コンジュゲート。
【請求項１０９】
前記治療剤または細胞傷害剤が、代謝拮抗薬、アルキル化剤、抗生物質、増殖因子、サイトカイン、抗血管新生剤、有糸分裂阻害剤、アントラサイクリン、毒素およびアポトーシス剤からなる群から選択される、請求項１０８に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項１１０】
請求項１〜１０４のいずれか一項に記載の抗体、請求項１０５〜１０７のいずれか一項に記載の抗体構築物、または請求項１０８もしくは１０９に記載の抗体コンジュゲートと、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
【請求項１１１】
プロＧＤＦ１１への前記抗体または前記抗体構築物の結合が、プロタンパク質変換酵素による前記プロＧＤＦ１１のタンパク質分解性切断を阻害する、請求項１〜１０４のいずれか一項に記載の抗体、または請求項Ａ３０〜Ａ３５のいずれか一項に記載の抗体構築物。
【請求項１１２】
ヒトＧＤＦ１１活性を低下させるための方法であって、ヒトＧＤＦ１１活性が低下されるように、ヒトＧＤＦ１１プロドメイン複合体を、請求項１〜１０４のいずれか一項に記載の抗体、請求項１０５〜１０７のいずれか一項に記載の抗体構築物、請求項１０８もしくは１０９に記載の抗体コンジュゲート、または請求項１１０に記載の医薬組成物と接触させるステップを含む方法。
【請求項１１３】
ＧＤＦ１１活性が有害となる障害を患うヒト対象におけるヒトＧＤＦ１１活性を低下させるための方法であって、前記ヒト対象におけるヒトＧＤＦ１１活性が低下されるように、前記ヒト対象に、請求項１〜１０４のいずれか一項に記載の抗体、請求項１０５〜１０７のいずれか一項に記載の抗体構築物、請求項１０８もしくは１０９に記載の抗体コンジュゲート、または請求項１１０に記載の医薬組成物を投与するステップを含む方法。
【請求項１１４】
前記障害が、貧血および赤芽球過形成からなる群から選択される、請求項１１３に記載の方法。
【請求項１１５】
生物システムにおける増殖因子活性をモジュレートする方法であって、前記生物システムを、請求項１〜１０４のいずれか一項に記載の抗体、請求項１０５〜１０７のいずれか一項に記載の抗体構築物、請求項１０８もしくは１０９に記載の抗体コンジュゲート、または請求項１１０に記載の医薬組成物と接触させるステップを含む方法。
【請求項１１６】
前記増殖因子活性が、ＧＤＦ１１活性を含む、請求項１１５に記載の方法。
【請求項１１７】
前記抗体が、安定化抗体であり、前記生物システムを前記安定化抗体と接触させるステップが、前記生物システムにおける総ＧＤＦ１１成熟増殖因子の少なくとも５％の放出の阻害をもたらす、請求項１１５または１１６に記載の方法。
【請求項１１８】
プロＧＤＦ１１への前記抗体もしくはその抗原結合部分、前記抗体構築物または前記抗体コンジュゲートの結合が、プロタンパク質変換酵素による前記プロＧＤＦ１１のタンパク質分解性切断を阻害する、請求項１１５〜１１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１９】
前記抗体が、プロタンパク質変換酵素による前記プロＧＤＦ１１のタンパク質分解性切断を阻害する、請求項１１５〜１１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２０】
対象におけるＴＧＦ−β関連徴候を処置する方法であって、前記対象を、請求項１〜１０４のいずれか一項に記載の抗体、請求項１０５〜１０７のいずれか一項に記載の抗体構築物、請求項１０８もしくは１０９に記載の抗体コンジュゲート、または請求項１１０に記載の医薬組成物と接触させるステップを含む方法。
【請求項１２１】
前記ＴＧＦ−β関連徴候が、心肥大、心臓萎縮、粥状動脈硬化および再狭窄からなる群から選択される心血管徴候を含む、請求項１２０に記載の方法。
【請求項１２２】
前記ＴＧＦ−β関連徴候が、ＧＤＦ１１関連徴候を含む、請求項１２０に記載の方法。
【請求項１２３】
前記ＧＤＦ１１関連徴候が、赤芽球過形成貧血および／またはβ−サラセミアを含む、請求項１２２に記載の方法。
【請求項１２４】
請求項１〜１０４のいずれか一項に記載の抗体、請求項１０５〜１０７のいずれか一項に記載の抗体構築物、または請求項１０８もしくは１０９に記載の抗体コンジュゲートをコードする核酸。
【請求項１２５】
請求項１２４に記載の核酸を含むベクター。
【請求項１２６】
請求項１２４に記載の核酸を含む細胞。
【請求項１２７】
請求項１〜１０４のいずれか一項に記載の抗体、請求項１０５〜１０７のいずれか一項に記載の抗体構築物、請求項１０８もしくは１０９に記載の抗体コンジュゲート、または請求項１１０に記載の医薬組成物と、その使用説明書とを含むキット。
【請求項１２８】
エピトープへの結合に関して、請求項１〜１０４のいずれか一項に記載の抗体、請求項１０５〜１０７のいずれか一項に記載の抗体構築物、または請求項１０８もしくは１０９に記載の抗体コンジュゲートと競合する抗体。
【請求項１２９】
請求項１〜１０４のいずれか一項に記載の抗体、請求項１０５〜１０７のいずれか一項に記載の抗体構築物、または請求項１０８もしくは１０９に記載の抗体コンジュゲートと同じエピトープに結合する抗体。
【請求項１３０】
ヒトプロＧＤＦ１１のエピトープまたはヒト潜在型ＧＤＦ１１のエピトープへの結合に関して、請求項１〜１０４のいずれか一項に記載の抗体、請求項１０５〜１０５のいずれか一項に記載の抗体構築物、または請求項１０８もしくは１０９に記載の抗体コンジュゲートと競合する抗体。
【請求項１３１】
請求項１〜１０４のいずれか一項に記載の抗体、請求項１０５〜１０７のいずれか一項に記載の抗体構築物、または請求項１０８もしくは１０９に記載の抗体コンジュゲートと同じエピトープにおいて、ヒトプロＧＤＦ１１またはヒト潜在型ＧＤＦ１１のエピトープに特異的に結合する、請求項１３０に記載の抗体。
【請求項１３２】
１０−６Ｍ未満の前記抗体と前記エピトープとの間の平衡解離定数（Ｋｄ）で、前記エピトープへの結合に関して競合する、請求項１２８〜１３１のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１３３】
前記Ｋｄが、１０−１１Ｍ〜１０−６Ｍの範囲内である、請求項１３２に記載の抗体。
【請求項１３４】
請求項１〜１０４のいずれか一項に記載の抗体、請求項１０５〜１０７のいずれか一項に記載の抗体構築物、または請求項１０８もしくは１０９に記載の抗体コンジュゲートと、担体とを含む組成物。
【請求項１３５】
（ｉ）治療有効量の請求項１〜１０４のいずれか一項に記載の抗体、請求項１０５〜１０７のいずれか一項に記載の抗体構築物、または請求項１０８もしくは１０９に記載の抗体コンジュゲートと、（ｉｉ）薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物である、請求項１３４に記載の組成物。
【請求項１３６】
治療有効量の請求項１〜７５のいずれか一項に記載の抗体、または請求項７６〜１０２のいずれか一項に記載の単離された抗体もしくはその抗原結合性断片、または請求項１０３〜１０５のいずれか一項に記載の抗体構築物、または請求項１０６もしくは１０７に記載の抗体コンジュゲートを含む、赤芽球過形成、貧血、筋消耗、うっ血性心不全に伴う脱力、糖尿病および／またはβ−サラセミアの処置における使用のための、請求項１３４または１３５に記載の組成物。
【請求項１３７】
前記担体が、薬学的に許容される担体である、請求項１３４〜１３６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３８】
前記抗体および担体が、凍結乾燥形態である、請求項１３４〜１３７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３９】
前記抗体および担体が、溶液中に存在する、請求項１３４〜１３７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１４０】
前記抗体および担体が、凍結されている、請求項１３４〜１３７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１４１】
前記抗体および担体が、−６５℃未満のまたはこれに等しい温度で凍結されている、請求項１４０に記載の組成物。
【請求項１４２】
前記抗体が、スイープ抗体である、請求項１〜１０４のいずれか一項に記載の抗体、請求項１０５〜１０７のいずれか一項に記載の抗体構築物、または請求項１０８もしくは１０９に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項１４３】
前記抗体が、リサイクル抗体である、請求項１〜１０４のいずれか一項に記載の抗体、請求項１０５〜１０７のいずれか一項に記載の抗体構築物、または請求項１０８もしくは１０９に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項１４４】
前記抗体が、Ｆｃ部分を含む、請求項１〜１０４のいずれか一項に記載の抗体、請求項１０５〜１０７のいずれか一項に記載の抗体構築物、または請求項１０８もしくは１０９に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項１４５】
新生児Ｆｃ受容体ＦｃＲｎに結合する、請求項１４２〜１４４のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１４６】
前記Ｆｃ部分が、前記新生児Ｆｃ受容体ＦｃＲｎに結合する、請求項１４４に記載の抗体。
【請求項１４７】
６．０を超えるｐＨでＦｃＲｎに結合する、請求項１４５または１４６に記載の抗体。
【請求項１４８】
７．０〜７．５の範囲内のｐＨでＦｃＲｎに結合する、請求項１４７に記載の抗体。
【請求項１４９】
前記ＦｃＲＮへの前記抗体の結合のＫｄが、１０−３Ｍ〜１０−８Ｍの範囲内である、請求項１４５〜１４８のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１５０】
前記ＦｃＲＮへの前記抗体の結合のＫｄが、１０−４Ｍ〜１０−８Ｍの範囲内である、請求項１４５〜１４８のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１５１】
前記ＦｃＲＮへの前記抗体の結合のＫｄが、１０−５Ｍ〜１０−８Ｍの範囲内である、請求項１４５〜１４８のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１５２】
前記ＦｃＲＮへの前記抗体の結合のＫｄが、１０−６Ｍ〜１０−８Ｍの範囲内である、請求項１４５〜１４８のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１５３】
ＧＤＦ１１プロドメイン複合体に特異的に結合し、前記ＧＤＦ１１プロドメイン複合体からの成熟ＧＤＦ１１の放出を阻害する抗体。
【請求項１５４】
ＧＤＦ１１プロドメイン複合体に特異的に結合し、プロタンパク質変換酵素またはトロイドプロテアーゼによるプロＧＤＦ１１または潜在型ＧＤＦ１１のタンパク質分解性切断を阻害する抗体。
【請求項１５５】
前記プロＧＤＦ１１または潜在型ＧＤＦ１１におけるトロイドプロテアーゼ切断部位のタンパク質分解性切断を阻害する、請求項１５４のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１５６】
前記トロイドプロテアーゼが、ＢＭＰ−１、哺乳動物トロイドタンパク質（ｍＴＬＤ）、哺乳動物トロイド様１（ｍＴＬＬ１）および哺乳動物トロイド様２（ｍＴＬＬ２）からなる群から選択される、請求項１５４または１５５に記載の抗体。
【請求項１５７】
プロＧＤＦ１１または潜在型ＧＤＦ１１のトロイドプロテアーゼ切断部位の１０アミノ酸残基内に結合する、請求項１５４〜１５６のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１５８】
前記トロイドプロテアーゼ切断部位が、プロＧＤＦ１１または潜在型ＧＤＦ１１のアミノ酸配列ＧＤを含む、請求項１５１に記載の抗体。
【請求項１５９】
前記プロＧＤＦ１１または潜在型ＧＤＦ１１が、配列番号８２、８６、９７または９８に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１５４〜１５８のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１６０】
アミノ酸配列ＫＡＰＰＬＱＱＩＬＤＬＨＤＦＱＧＤＡＬＱＰＥＤＦＬＥＥＤＥＹＨＡ（配列番号１４９）に結合する、請求項１５４〜１５９のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１６１】
前記プロＧＤＦ１１または潜在型ＧＤＦ１１におけるプロタンパク質変換酵素切断部位のタンパク質分解性切断を阻害する、請求項１５４のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１６２】
前記プロタンパク質変換酵素が、フューリンおよびＰＣＳＫ５からなる群から選択される、請求項１６１に記載の抗体。
【請求項１６３】
プロＧＤＦ１１または潜在型ＧＤＦ１１のプロタンパク質変換酵素（converrase）切断部位の１０アミノ酸残基内に結合する、請求項１６１または１６２に記載の抗体。
【請求項１６４】
前記プロタンパク質変換酵素切断部位が、プロＧＤＦ１１または潜在型ＧＤＦ１１のアミノ酸配列ＲＳＳＲ（配列番号１５１）、ＲＥＬＲ（配列番号１６１）、ＲＳＲＲ（配列番号１５２）を含む、請求項１６３に記載の抗体。
【請求項１６５】
前記プロＧＤＦ１１または潜在型ＧＤＦ１１が、配列番号８２、８６、９７または９８に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１６１〜１６４のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１６６】
アミノ酸配列ＧＬＨＰＦＭＥＬＲＶＬＥＮＴＫＲＳＲＲＮＬＧＬＤＣＤＥＨＳＳＥＳＲＣ（配列番号１５３）、ＰＥＰＤＧＣＰＶＣＶＷＲＱＨＳＲＥＬＲＬＥＳＩＫＳＱＩＬＳＫＬＲＬＫ（配列番号１５４）、またはＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＧＶＧＧＥＲＳＳＲＰＡＰＳＶＡＰＥＰＤＧＣＰＶＣ（配列番号１５４）に結合する、請求項１６１〜１６５のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１６７】
前記プロＧＤＦ１１のタンパク質分解性切断を阻害する、請求項１５３〜１６６のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１６８】
前記潜在型ＧＤＦ１１のタンパク質分解性切断を阻害する、請求項１５３〜１６７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１６９】
生物システムにおける前記ＧＤＦ１１プロドメイン複合体からの成熟ＧＤＦ１１の放出を少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも４０％または少なくとも６０％阻害する、請求項１５３〜１６８のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１７０】
生物システムにおけるプロタンパク質変換酵素またはトロイドプロテアーゼによるプロＧＤＦ１１または潜在型ＧＤＦ１１のタンパク質分解性切断を少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも４０％または少なくとも６０％阻害する、請求項１５３〜１６９のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１７１】
前記生物システムが、細胞または対象である、請求項１６９または１７０に記載の抗体。
【請求項１７２】
安定化抗体である、請求項１５３〜１７１のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１７３】
請求項１〜１１４、１２８〜１３３、１４２〜１５２のいずれか一項に記載の抗体、または請求項１３４〜１４１に記載の組成物の抗体である、請求項１５３〜１７２のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１７４】
対象における増殖因子活性をモジュレートする方法であって、ＧＤＦ１１タンパク質分解活性化の阻害剤を前記対象に送達するステップを含む方法。
【請求項１７５】
ＧＤＦ１１タンパク質分解活性化の前記阻害剤が、結合タンパク質、化合物または小分子である、請求項１７４に記載の方法。
【請求項１７６】
ＧＤＦ１１タンパク質分解活性化の前記阻害剤が、プロタンパク質変換酵素またはフューリンプロテアーゼの阻害剤である、請求項１７４または１７５に記載の方法。
【請求項１７７】
前記プロタンパク質変換酵素が、フューリンまたはＰＣＳＫ５である、請求項１７６に記載の方法。
【請求項１７８】
前記トロイドプロテアーゼが、ＢＭＰ−１、哺乳動物トロイドタンパク質（ｍＴＬＤ）、哺乳動物トロイド様１（ｍＴＬＬ１）および哺乳動物トロイド様２（ｍＴＬＬ２）からなる群から選択される、請求項１７６に記載の方法。
【請求項１７９】
前記対象に、請求項１〜１１４、１２８〜１３３、１４２〜１７２のいずれか一項に記載の抗体、または請求項１３４〜１４１に記載の組成物の抗体を投与するステップをさらに含む、請求項１７４〜１７８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８０】
ヒトプロＧＤＦ１１に特異的に結合する抗体。
【請求項１８１】
前記プロＧＤＦ１１が、配列番号８２に記載のアミノ酸（animo  acid）配列を含む、請求項１８０に記載の抗体。
【請求項１８２】
ヒトプロＧＤＦ８に特異的に結合しない、請求項１８０または１８１に記載の抗体。
【請求項１８３】
ヒト潜在型ＧＤＦ８に特異的に結合しない、請求項１８０〜１８２のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１８４】
前記ヒトプロＧＤＦ８または前記ヒト潜在型ＧＤＦ８が、配列番号８３に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１８２または１８３に記載の抗体。
【請求項１８５】
マウスプロＧＤＦ８に特異的に結合しない、請求項１８０〜１８４のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１８６】
マウス潜在型ＧＤＦ８に特異的に結合しない、請求項１８０〜１８５のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１８７】
前記プロＧＤＦ８または前記潜在型ＧＤＦ８が、配列番号９３に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１８５または１８６に記載の抗体。
【請求項１８８】
ヒトプロアクチビンＡに特異的に結合しない、請求項１８０〜１８７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１８９】
ヒト潜在型アクチビンＡに特異的に結合しない、請求項１８０〜１８８のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１９０】
前記ヒトプロアクチビンＡまたは前記潜在型アクチビンＡが、配列番号８４に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１８８または１８９に記載の抗体。
【請求項１９１】
成熟ＧＤＦ１１に特異的に結合しない、請求項１８０〜１９０のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１９２】
前記成熟ＧＤＦ１１が、配列番号９０に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１９１に記載の抗体。
【請求項１９３】
成熟ＧＤＦ８に特異的に結合しない、請求項１８０〜１９２のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１９４】
前記成熟ＧＤＦ８が、配列番号８９に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１９３に記載の抗体。
【請求項１９５】
成熟アクチビンＡに特異的に結合しない、請求項１８０〜１９４のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１９６】
前記成熟アクチビンＡが、配列番号１２０に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１９５に記載の抗体。
【請求項１９７】
ヒト潜在型ＧＤＦ１１に特異的に結合する、請求項１８０〜１９６のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１９８】
前記ヒト潜在型ＧＤＦ１１が、配列番号８２に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１９７に記載の抗体。
【請求項１９９】
マウスプロＧＤＦ１１に特異的に結合する、請求項１８０〜１９８のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２００】
前記マウスプロＧＤＦ１１が、配列番号９７に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１９９に記載の抗体。
【請求項２０１】
マウス潜在型ＧＤＦ１１に特異的に結合する、請求項１８０〜２００のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２０２】
前記マウス潜在型ＧＤＦ１１が、配列番号９７に記載のアミノ酸配列を含む、請求項２０１に記載の抗体。
【請求項２０３】
請求項１〜１１４、１２８〜１３３、１４２〜１５２のいずれか一項に記載の抗体、または請求項１３４〜１４１に記載の組成物の抗体である、請求項１８０〜２０２のいずれか一項に記載の抗体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本出願は、２０１５年７月２２日に出願された「ＣＯＭＰＯＳＩＴＩＯＮＳ  ＡＮＤ  ＭＥＴＨＯＤＳ  ＦＯＲ  ＧＲＯＷＴＨ  ＦＡＣＴＯＲ  ＭＯＤＵＬＡＴＩＯＮ」との名称の米国仮特許出願第６２／１９５，５０４号；および２０１６年１月５日に出願された「ＧＤＦ１１  ＢＩＮＤＩＮＧ  ＰＲＯＴＥＩＮＳ  ＡＮＤ  ＵＳＥＳ  ＴＨＥＲＥＯＦ」との名称の米国仮特許出願第６２／２７５，０６８号の３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１１９（ｅ）の下での優先権を主張する。これらの出願のそれぞれは、全ての目的のために、その全体が本明細書において参考として援用される。
【０００２】
開示の分野
本開示は、ＧＤＦ１１結合タンパク質およびその使用に関し、特に、様々な疾患の予防および／または処置に関する。
【背景技術】
【０００３】
ＧＤＦ１１（増殖分化因子１１）は、ＴＧＦ−ベータスーパーファミリーのメンバーである。このタンパク質ファミリーは、多塩基タンパク質分解プロセシング部位によって一般に特徴付けられ、この部位は、プロドメイン含有前駆体から切断されて、７個の保存されたシステイン残基を含有する成熟タンパク質を産生する。
【０００４】
ＧＤＦ１１は、胚および成体組織の両方における細胞成長および分化の調節において重要な役割を果たすことが示された（ＭｃＰｈｅｒｒｏｎら、１９９９年）。Ｄｕｓｓｉｏｔらは、ＧＤＦ１１が、後期赤血球生成の負の調節因子であることを示した。Ｄｕｓｓｉｏｔら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ．２０巻：３９８〜４０９頁（２０１４年）。ＧＤＦ１１投与が、貧血および赤芽球過形成をもたらす一方で、ＡｃｔｒＩＩＡ−Ｆｃまたは修飾されたＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃの投与が、赤血球生成を促進することも報告された。いくつかの研究が、ＧＤＦ１１が、骨格筋および他の組織に有害な効果を有し得ることを示唆した。例えば、Ｓｉｎｈａら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３４４巻（６１８４号）：６４９〜５２頁（２０１４年）；Ｋａｔｓｉｍｐａｒｄｉら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３４４巻（６１８４号）：６３０〜３４頁（２０１４年）；Ｅｇｅｒｍａｎら、Ｃｅｌｌ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ２２巻：１〜１１頁（２０１５年）；およびＬｏｆｆｒｅｄｏら、Ｃｅｌｌ  １５３巻（４号）：８２８〜８３９頁（２０１３年）を参照されたい。より最近では、心血管疾患を有する高齢者における循環ＧＤＦ１１のレベル増加が、糖尿病およびフレイルティ（ｆｒａｉｌｔｙ）の有病率（ｐｒｅｖｅｌａｎｃｅ）増加ならびに術後合併症および再入院のリスク増加に関連付けられた。Ｓｃｈａｆｅｒ  Ｍ．ら「Ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＧＤＦ１１  ａｎｄ  Ｍｙｏｓｔａｔｉｎ  ｉｎ  Ｈｕｍａｎ  Ａｇｉｎｇ  ａｎｄ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  Ｄｉｓｅａｓｅ」、Ｃｅｌｌ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ（２０１６年）２３巻、１２０７〜１２１６頁を参照されたい。
全長ＧＤＦ１１タンパク質は、Ｎ末端プロドメインと、それに続くＣ末端増殖因子ドメインを有する、不活性状態（プロＧＤＦ１１）として発現する（図１）。プロＧＤＦ１１は先ず、プロドメインのＣ末端の二塩基部位における、プロタンパク質変換酵素（ＰＣＳＫ５等）によるタンパク質分解性切断により、潜在型ＧＤＦ１１に変換される。プロドメインと増殖因子ドメインとの間の切断後に、この２個のドメインは、非共有結合による会合を維持しており、成熟増殖因子は、細胞表面受容体に結合してシグナル伝達事象を惹起することができない。完全ＧＤＦ１１成熟は、プロテアーゼのトロイドファミリーがプロドメインをタンパク質分解して、成熟ＧＤＦ１１増殖因子を遊離させることよって達成される（図２）。ＧＤＦ１１のプロドメイン、例えば、ＡＲＭ領域またはストレートジャケット（ｓｔｒａｉｇｈｔ  ｊａｃｋｅｔ）領域に結合することができる結合タンパク質は、ＧＤＦ１１前駆体のタンパク質分解性切断を妨げる（ＧＤＦ１１をその前駆（ｐｒｏ）状態または潜在型状態に維持する）、またはプロドメインを増殖因子ドメインにロックし、これにより、成熟ＧＤＦ１１機能性を中和することができる。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｄｕｓｓｉｏｔら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ．２０巻：３９８〜４０９頁（２０１４年）
【非特許文献２】Ｓｉｎｈａら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３４４巻（６１８４号）：６４９〜５２頁（２０１４年）
【非特許文献３】Ｋａｔｓｉｍｐａｒｄｉら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３４４巻（６１８４号）：６３０〜３４頁（２０１４年）
【非特許文献４】Ｅｇｅｒｍａｎら、Ｃｅｌｌ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ２２巻：１〜１１頁（２０１５年）
【非特許文献５】Ｌｏｆｆｒｅｄｏら、Ｃｅｌｌ  １５３巻（４号）：８２８〜８３９頁（２０１３年）
【非特許文献６】Ｓｃｈａｆｅｒ  Ｍ．ら「Ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＧＤＦ１１  ａｎｄ  Ｍｙｏｓｔａｔｉｎ  ｉｎ  Ｈｕｍａｎ  Ａｇｉｎｇ  ａｎｄ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  Ｄｉｓｅａｓｅ」、Ｃｅｌｌ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ（２０１６年）２３巻、１２０７〜１２１６頁
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本開示は、ＧＤＦ１１結合タンパク質（例えば、プロドメイン複合体結合タンパク質）に関係する。本開示の結合タンパク質として、ＧＤＦ１１（例えば、ヒトプロ潜在型ＧＤＦ１１複合体）に結合することができる、抗体、抗原結合部分および他の抗原結合タンパク質が挙げられるがこれらに限定されない。さらに、本開示は、ＧＤＦ１１の異常レベルおよび／または活性に起因する障害を処置するために、ＧＤＦ１１結合タンパク質（例えば、プロドメイン複合体結合タンパク質）を作製および使用する方法を提供する。
【０００７】
一実施形態では、本開示は、ＧＤＦ１１プロドメイン複合体に結合することができる結合タンパク質に関係する。別の実施形態では、結合タンパク質は、ヒトＧＤＦ１１プロドメイン複合体に結合する。別の実施形態では、結合タンパク質は、ＧＤＦ１１の生物機能をモジュレートすることができる。別の実施形態では、結合タンパク質は、プロドメインからの成熟ＧＤＦ１１の放出を阻害することができる。別の実施形態では、結合タンパク質は、プロタンパク質変換酵素またはトロイドプロテアーゼによるＧＤＦ１１プロドメイン複合体のタンパク質分解性切断を阻害することができる。したがって、一部の実施形態では、本開示は、タンパク質分解によるＧＤＦ１１活性化の阻害剤（例えば、結合タンパク質および小分子等の他の分子）に関する。本開示の一態様では、結合タンパク質は、ＧＤＦ１１プロドメイン複合体に結合し、その標的へのＧＤＦ１１の結合を阻害することができる。
【０００８】
本開示の一実施形態は、単離された抗体またはその抗原結合性断片であって、ヒトＧＤＦ１１プロドメイン複合体に結合し、細胞におけるその結合パートナーへの前記ＧＤＦ１１の結合を阻害する抗体またはその抗原結合性断片を提供する。別の実施形態では、５０ｎＭプロＧＤＦ１１の濃度において、開示されている抗体のＥＣ５０は、１０−６Ｍ〜１０−１０Ｍ、例えば、１０−６Ｍ、１０−７Ｍ、１０−８Ｍ、１０−９Ｍまたは１０−１０Ｍである。
【０００９】
一実施形態では、結合タンパク質は、単離された抗体である。別の実施形態では、本開示は、単離された抗体またはその抗原結合性断片であって、ヒトＧＤＦ１１プロドメイン複合体に結合し、ＧＤＦ１１のレベルおよび／または活性をモジュレートする抗体またはその抗原結合性断片を提供する。一態様では、抗体またはその抗原結合性断片は、治療有効量で対象に投与された後に、ＧＤＦ１１の活性を５０％、６０％、７０％、８０％、９０％または１００％阻害する。別の態様では、抗体またはその抗原結合性断片は、治療有効量で対象に投与された後に、ＧＤＦ１１のレベルを５０％、６０％、７０％、８０％、９０％または１００％低下させる。
【００１０】
一実施形態では、本開示の結合タンパク質は、表面バイオレイヤー干渉法によって測定された場合、少なくとも約１０２Ｍ−１ｓ−１、少なくとも約１０３Ｍ−１ｓ−１、少なくとも約１０４Ｍ−１ｓ−１、少なくとも約１０５Ｍ−１ｓ−１、少なくとも約１０６Ｍ−１ｓ−１、少なくとも約１０７Ｍ−１ｓ−１または少なくとも約１０８Ｍ−１ｓ−１の、ＧＤＦ１１プロドメイン複合体に対するオンレート（on  rate）定数（ｋｏｎ）を有する。
【００１１】
別の実施形態では、本開示の結合タンパク質は、表面バイオレイヤー干渉法によって測定された場合、多くても約１０−３ｓ−１、多くても約１０−４ｓ−１、多くても約１０−５ｓ−１、多くても約１０−６ｓ−１、多くても約１０−７ｓ−１または多くても約１０−７ｓ−１の、ＧＤＦ１１プロドメイン複合体に対するオフレート（off  rate）定数（ｋｏｆｆ）を有する。
【００１２】
別の実施形態では、本開示の結合タンパク質は、表面バイオレイヤー干渉法によって測定された場合、多くても約１０−７Ｍ；多くても約１０−８Ｍ；多くても約１０−９Ｍ；多くても約１０−１０Ｍ；多くても約１０−１１Ｍ；多くても約１０−１２Ｍ；または多くても１０−１３Ｍの、ＧＤＦ１１プロドメイン複合体に対する解離定数（ＫＤ）を有する。
【００１３】
別の実施形態では、結合タンパク質は、ＧＤＦ１１プロドメイン複合体のプロドメイン、例えば、ＡＲＭ領域またはストレートジャケット領域に結合することができる結合ドメインを含む。
【００１４】
別の実施形態では、結合タンパク質は、本明細書における結合タンパク質を競合的に阻害することができる結合ドメインを含む。より詳細には、結合タンパク質を競合的に阻害することができる結合タンパク質は、ＧＤＦ１１プロドメイン複合体のＡＲＭ（例えば、Ｂｉｎ  １またはＢｉｎ  ３）またはストレートジャケット（例えば、Ｂｉｎ  ２）に結合することができる（図３Ａ）。
【００１５】
別の実施形態では、本明細書に開示されている結合タンパク質は、ヒトＦｃ領域をさらに含む。別の実施形態では、結合タンパク質は、ＧＤＦ１１プロドメイン複合体に結合することができるヒト抗体またはその抗原結合部分である。
【００１６】
別の実施形態では、本明細書に開示されている結合タンパク質は、ヒトアクセプターフレームワークをさらに含む。別の実施形態では、結合タンパク質は、ＧＤＦ１１プロドメイン複合体に結合することができるＣＤＲグラフト抗体またはその抗原結合部分である。別の実施形態では、ＣＤＲグラフト抗体またはその抗原結合部分は、本明細書に開示されている１個または複数のＣＤＲを含む。別の実施形態では、ＣＤＲグラフト抗体またはその抗原結合部分は、ヒトアクセプターフレームワークを含む。
【００１７】
別の実施形態では、開示されている結合タンパク質は、ＧＤＦ１１プロドメイン複合体に結合することができるヒト化抗体またはその抗原結合部分である。別の実施形態では、ヒト化抗体またはその抗原結合部分は、ヒトアクセプターフレームワークのヒト抗体可変ドメインに取り込まれた、上に開示されている１個または複数のＣＤＲを含む。別の実施形態では、ヒト抗体可変ドメインは、コンセンサスヒト可変ドメインである。
【００１８】
別の実施形態では、ヒトアクセプターフレームワークは、鍵となる残基に、少なくとも１個のフレームワーク領域アミノ酸置換を含み、この鍵となる残基は、ＣＤＲに隣接する残基；グリコシル化部位残基；稀な残基；ヒトＧＤＦ１１プロドメイン複合体と相互作用することができる残基；ＣＤＲと相互作用することができる残基；正準残基；重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間の接触残基；Ｖｅｒｎｉｅｒゾーン内の残基；およびＣｈｏｔｈｉａ定義される可変重鎖ＣＤＲ１とＫａｂａｔ定義される第１の重鎖フレームワークとの間で重複する領域における残基からなる群から選択される。
【００１９】
ある実施形態では、結合タンパク質は、ＧＤＦ１１プロドメイン複合体に結合することができるヒト化抗体またはその抗原結合部分である。別の実施形態では、ヒト化抗体またはその抗原結合部分は、本明細書に開示されている１個または複数のＣＤＲを含む。別の実施形態では、ヒト化抗体またはその抗原結合部分は、本明細書に開示されている３個またはそれよりも多くのＣＤＲを含む。別の実施形態では、ヒト化抗体またはその抗原結合部分は、本明細書に開示されている６個のＣＤＲを含む。
【００２０】
一部の態様では、本開示は、ＧＤＦ１１プロドメイン複合体に特異的に結合する抗体を提供する。本開示は、一部の態様では、ヒトプロＧＤＦ１１、マウスプロＧＤＦ１１、ヒト潜在型ＧＤＦ１１およびマウス潜在型ＧＤＦ１１に特異的に結合するが、ヒトプロＧＤＦ１１  ＡＲＭ８、ヒトプロＧＤＦ８、ヒトプロドメインＧＤＦ１１  ＡＭＲ８または成熟ＧＤＦ１１に特異的に結合しない抗体を含む。
【００２１】
一部の実施形態では、ヒトプロＧＤＦ１１およびヒト潜在型ＧＤＦ１１は、配列番号８２に記載のアミノ酸配列を有する。別の実施形態では、マウスプロＧＤＦ１１およびマウス潜在型ＧＤＦ１１は、配列番号９７に記載のアミノ酸配列を有する。他の実施形態では、プロＧＤＦ１１  ＡＲＭ８は、配列番号１２２に記載のアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、ヒトプロＧＤＦ８は、配列番号８３に記載のアミノ酸配列を有する。他の実施形態では、ヒトプロドメインＧＤＦ１１  ＡＲＭ８は、配列番号１２４に記載のアミノ酸配列を有する。別の実施形態では、成熟ＧＤＦ１１は、配列番号９０に記載のアミノ酸配列を有する。
【００２２】
一部の実施形態では、抗体は、配列番号６６、７２、３０、３６または４２に記載のＣＤＲ−Ｈ３アミノ酸配列を含む。他の実施形態では、抗体は、配列番号６９、７５、３３、３９または４５に記載のＣＤＲ−Ｌ３アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号６４、７０、２８、３４または４０に記載のＣＤＲ−Ｈ１アミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号６７、７３、３１、３７または４３に記載のＣＤＲ−Ｌ１アミノ酸配列を含む。他の実施形態では、抗体は、配列番号６５、７１、２９、３５または４１に記載のＣＤＲ−Ｈ２アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号６８、７４、３２、３８または４４に記載のＣＤＲ−Ｌ２アミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号１０、１２または１４に記載の可変重鎖アミノ酸配列を含む。他の実施形態では、抗体は、配列番号１１、１３または１５に記載の可変重鎖アミノ酸配列を含む。
【００２３】
本開示の別の態様は、ヒトプロＧＤＦ１１、マウスプロＧＤＦ１１、ヒト潜在型ＧＤＦ１１、マウス潜在型ＧＤＦ１１、ヒトプロＧＤＦ８およびヒトプロドメインＧＤＦ１１  ＡＭＲ８に特異的に結合するが、ヒトプロＧＤＦ１１  ＡＲＭ８または成熟ＧＤＦ１１に特異的に結合しない抗体を含む。
【００２４】
一部の実施形態では、ヒトプロＧＤＦ１１およびヒト潜在型ＧＤＦ１１は、配列番号８２に記載のアミノ酸配列を有する。他の実施形態では、マウスプロＧＤＦ１１およびマウス潜在型ＧＤＦ１１は、配列番号９７に記載のアミノ酸配列を有する。別の実施形態では、プロＧＤＦ１１  ＡＲＭ８は、配列番号１２２に記載のアミノ酸配列を有する。他の実施形態では、ヒトプロＧＤＦ８は、配列番号８３に記載のアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、ヒトプロドメインＧＤＦ１１  ＡＲＭ８は、配列番号１２４に記載のアミノ酸配列を有する。別の実施形態では、成熟ＧＤＦ１１は、配列番号９０に記載のアミノ酸配列を有する。  
【００２５】
一部の実施形態では、抗体は、配列番号６６、７２または２４に記載のＣＤＲ−Ｈ３アミノ酸配列を含む。他の実施形態では、抗体は、配列番号６９、７５または２７に記載のＣＤＲ−Ｌ３アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号６４、７０または２２に記載のＣＤＲ−Ｈ１アミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号６７、７３または２５に記載のＣＤＲ−Ｌ１アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号６５、７１または２３に記載のＣＤＲ−Ｈ２アミノ酸配列を含む。他の実施形態では、抗体は、配列番号６８、７４または２６に記載のＣＤＲ−Ｌ２アミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号８に記載の可変重鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号９に記載の可変重鎖アミノ酸配列を含む。
【００２６】
別の態様では、本開示は、ヒトプロＧＤＦ１１、マウスプロＧＤＦ１１、ヒト潜在型ＧＤＦ１１、マウス潜在型ＧＤＦ１１、ヒトプロＧＤＦ８、ヒトプロドメインＧＤＦ１１  ＡＭＲ８、ヒトプロＧＤＦ１１  ＡＲＭ８および成熟ＧＤＦ１１に特異的に結合する抗体を含む。
【００２７】
一部の実施形態では、ヒトプロＧＤＦ１１およびヒト潜在型ＧＤＦ１１は、配列番号８２に記載のアミノ酸配列を有する。別の実施形態では、マウスプロＧＤＦ１１およびマウス潜在型ＧＤＦ１１は、配列番号９７に記載のアミノ酸配列を有する。さらなる実施形態では、プロＧＤＦ１１  ＡＲＭ８は、配列番号１２２に記載のアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ヒトプロＧＤＦ８は、配列番号８３に記載のアミノ酸配列を有する。別の実施形態では、ヒトプロドメインＧＤＦ１１  ＡＲＭ８は、配列番号１２４に記載のアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、成熟ＧＤＦ１１は、配列番号９０に記載のアミノ酸配列を有する。
【００２８】
一部の実施形態では、抗体は、配列番号６６、７８または４８に記載のＣＤＲ−Ｈ３アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号６９、８１または５１に記載のＣＤＲ−Ｌ３アミノ酸配列を含む。一実施形態では、抗体は、配列番号６４、７６または４６に記載のＣＤＲ−Ｈ１アミノ酸配列を含む。他の実施形態では、抗体は、配列番号６７、７９または４９に記載のＣＤＲ−Ｌ１アミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号６５、７７または４７に記載のＣＤＲ−Ｈ２アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号６８、８０または５０に記載のＣＤＲ−Ｌ２アミノ酸配列を含む。一実施形態では、抗体は、配列番号１６に記載の可変重鎖アミノ酸配列を含む。他の実施形態では、抗体は、配列番号１７に記載の可変重鎖アミノ酸配列を含む。
【００２９】
本開示は、別の態様では、ヒトプロＧＤＦ１１、マウスプロＧＤＦ１１、ヒト潜在型ＧＤＦ１１、マウス潜在型ＧＤＦ１１、ヒトプロＧＤＦ８、ヒトプロドメインＧＤＦ１１  ＡＭＲ８およびヒトプロＧＤＦ１１  ＡＲＭ８に特異的に結合するが、成熟ＧＤＦ１１に特異的に結合しない抗体を含む。
【００３０】
一部の実施形態では、ヒトプロＧＤＦ１１およびヒト潜在型ＧＤＦ１１は、配列番号８２に記載のアミノ酸配列を有する。他の実施形態では、マウスプロＧＤＦ１１およびマウス潜在型ＧＤＦ１１は、配列番号９７に記載のアミノ酸配列を有する。別の実施形態では、プロＧＤＦ１１  ＡＲＭ８は、配列番号１２２に記載のアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ヒトプロＧＤＦ８は、配列番号８３に記載のアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、ヒトプロドメインＧＤＦ１１  ＡＲＭ８は、配列番号１２４に記載のアミノ酸配列を有する。他の実施形態では、成熟ＧＤＦ１１は、配列番号９０に記載のアミノ酸配列を有する。
【００３１】
一部の実施形態では、抗体は、配列番号６６、７８または６０に記載のＣＤＲ−Ｈ３アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号６９、８１または６３に記載のＣＤＲ−Ｌ３アミノ酸配列を含む。一実施形態では、抗体は、配列番号６４、７６または５８に記載のＣＤＲ−Ｈ１アミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号６７、７９または６１に記載のＣＤＲ−Ｌ１アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号６５、７７または５９に記載のＣＤＲ−Ｈ２アミノ酸配列を含む。一実施形態では、抗体は、配列番号６８、８０または６２に記載のＣＤＲ−Ｌ２アミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号２０に記載の可変重鎖アミノ酸配列を含む。他の実施形態では、抗体は、配列番号２１に記載の可変重鎖アミノ酸配列を含む。
【００３２】
本開示は、別の態様では、ヒトプロＧＤＦ１１、マウスプロＧＤＦ１１、ヒト潜在型ＧＤＦ１１、マウス潜在型ＧＤＦ１１および成熟ＧＤＦ１１に特異的に結合するが、ヒトプロＧＤＦ１１  ＡＲＭ８、ヒトプロＧＤＦ８またはヒトプロドメインＧＤＦ１１  ＡＭＲ８に特異的に結合しない抗体を含む。
【００３３】
一部の実施形態では、ヒトプロＧＤＦ１１およびヒト潜在型ＧＤＦ１１は、配列番号８２に記載のアミノ酸配列を有する。別の実施形態では、マウスプロＧＤＦ１１およびマウス潜在型ＧＤＦ１１は、配列番号９７に記載のアミノ酸配列を有する。別の実施形態では、プロＧＤＦ１１  ＡＲＭ８は、配列番号１２２に記載のアミノ酸配列を有する。さらなる実施形態では、ヒトプロＧＤＦ８は、配列番号８３に記載のアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、ヒトプロドメインＧＤＦ１１  ＡＲＭ８は、配列番号１２４に記載のアミノ酸配列を有する。他の実施形態では、成熟ＧＤＦ１１は、配列番号９０に記載のアミノ酸配列を有する。
【００３４】
一部の実施形態では、抗体は、配列番号６６または５４に記載のＣＤＲ−Ｈ３アミノ酸配列を含む。他の実施形態では、抗体は、配列番号６９または５７に記載のＣＤＲ−Ｌ３アミノ酸配列を含む。さらなる実施形態では、抗体は、配列番号６４または５２に記載のＣＤＲ−Ｈ１アミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号６７または５５に記載のＣＤＲ−Ｌ１アミノ酸配列を含む。他の実施形態では、抗体は、配列番号６５または５３に記載のＣＤＲ−Ｈ２アミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号６８または５６に記載のＣＤＲ−Ｌ２アミノ酸配列を含む。他の実施形態では、抗体は、配列番号１８に記載の可変重鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号１９に記載の可変重鎖アミノ酸配列を含む。
【００３５】
本開示は、別の態様では、抗原結合ドメインを含む抗体であって、前記抗原結合ドメインが、６個のＣＤＲ：ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、ＣＤＲ−Ｈ３、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３を含み、ＣＤＲ配列のうち少なくとも１種が、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８および配列番号６９からなる群から選択される、抗体を提供する。
【００３６】
一部の実施形態では、ＣＤＲ配列のうち少なくとも１種は、
Ｘ１ＹＸ３Ｘ４Ｘ５（配列番号６４）であるＣＤＲＨ１配列
（式中、Ｘ１は、Ｄ、ＧまたはＳであり、
Ｘ３は、Ａ、Ｙ、ＧまたはＳであり、
Ｘ４は、Ｍ、ＩまたはＷであり、
Ｘ５は、Ｈ、Ｓ、Ｙ、ＧまたはＮである）、
Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０ＹＸ１２Ｘ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６Ｘ１７（配列番号６５）であるＣＤＲＨ２配列
（式中、Ｘ１は、Ｇ、Ｗ、Ｖ、Ｙである、または存在せず、
Ｘ２は、ＩまたはＥであり、
Ｘ３は、Ｓ、Ｎ、ＲまたはＩであり、
Ｘ４は、Ｗ、Ｐ、Ｙ、ＡまたはＳであり、
Ｘ５は、Ｎ、Ｄ、Ｙ、ＨまたはＳであり、
Ｘ６は、Ｓ、ＧまたはＮであり、
Ｘ７は、ＧまたはＳであり、
Ｘ８は、Ｓ、Ｇ、Ｎ、ＤまたはＴであり、
Ｘ９は、Ｉ、ＴまたはＥであり、
Ｘ１０は、Ｇ、ＮまたはＹであり、
Ｘ１２は、ＡまたはＮであり、
Ｘ１３は、Ｄ、ＱまたはＰであり、
Ｘ１４は、ＳまたはＫであり、
Ｘ１５は、Ｖ、ＦまたはＬであり、
Ｘ１６は、ＫまたはＱであり、
Ｘ１７は、Ｇ、ＤまたはＳである）、
Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０Ｘ１１Ｘ１２Ｘ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６Ｘ１７Ｘ１８（配列番号６６）であるＣＤＲＨ３配列
（式中、Ｘ１は、Ｇである、または存在せず、
Ｘ２は、Ｇである、または存在せず、
Ｘ３は、Ｓ、Ｄである、または存在せず、
Ｘ４は、Ｉ、Ｇである、または存在せず、
Ｘ５は、Ａ、Ｄ、Ｔ、Ｎ、Ｉである、または存在せず、
Ｘ６は、Ｖ、Ｆ、Ｐ、Ｙである、または存在せず、
Ｘ７は、Ａ、Ｗ、Ｐ、Ｄ、Ｙである、または存在せず、
Ｘ８は、Ｇ、Ｓ、Ｌ、Ｉ、Ｖ、Ｄである、または存在せず、
Ｘ９は、Ｔ、Ｇ、Ｗ、Ｌ、Ｓである、または存在せず、
Ｘ１０は、Ｌ、Ｙ、Ｆ、Ｔ、Ｓである、または存在せず、
Ｘ１１は、Ｅ、Ｖ、Ｐ、ＧまたはＳであり、
Ｘ１２は、Ｖ、Ｄ、Ｑ、Ｅ、ＹまたはＷであり、
Ｘ１３は、Ｔ、Ｙ、ＱまたはＥであり、
Ｘ１４は、Ｇ、Ｙ、Ｎ、ＡまたはＤであり、
Ｘ１５は、Ｄ、Ｇ、Ｗ、Ａ、Ｐ、ＹまたはＬであり、
Ｘ１６は、Ｌ、ＭまたはＦであり、
Ｘ１７は、ＤまたはＧであり、
Ｘ１８は、Ｙ、Ｖ、ＰまたはＩである）、
Ｘ１Ｘ２ＳＱＸ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９ＹＬＸ１２（配列番号６７）であるＣＤＲＬ１配列
（式中、Ｘ１は、ＲまたはＱであり、
Ｘ２は、ＡまたはＴであり、
Ｘ５は、Ｆ、Ｄ、Ｓ、ＲまたはＨであり、
Ｘ６は、Ｌ、ＩまたはＶであり、
Ｘ７は、Ｓ、Ｉである、または存在せず、
Ｘ８は、Ｓである、または存在せず、
Ｘ９は、Ｔ、Ｎである、または存在せず、
Ｘ１２は、ＡまたはＮである）、
Ｘ１ＡＳＸ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７（配列番号６８）であるＣＤＲＬ２配列
（式中、Ｘ１は、Ｓ、Ｄ、Ｇ、ＫまたはＡであり、
Ｘ４は、Ｎ、ＳまたはＴであり、
Ｘ５は、ＲまたはＬであり、
Ｘ６は、Ａ、ＥまたはＱであり、
Ｘ７は、ＴまたはＳである）および
Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６ＰＸ８Ｘ９（配列番号６９）であるＣＤＲＬ３配列
（式中、Ｘ１は、ＭまたはＱであり、
Ｘ２は、Ｑ、ＫまたはＨであり、
Ｘ３は、Ａ、ＹまたはＳであり、
Ｘ４は、Ｔ、Ｓ、Ｇ、ＹまたはＱであり、
Ｘ５は、Ｈ、Ｔ、Ｓである、または存在せず、
Ｘ６は、Ｗ、Ａ、Ｔ、Ｙである、または存在せず、
Ｘ８は、Ｙ、Ｌ、Ｉ、Ｐである、または存在せず、
Ｘ９は、Ｔである、または存在しない）
からなる群から選択される。
【００３７】
別の実施形態では、ＣＤＲ配列のうち少なくとも１種は、
Ｘ１ＹＸ３Ｘ４Ｘ５（配列番号７０）であるＣＤＲＨ１配列
（式中、Ｘ１は、Ｄ、ＧまたはＳであり、
Ｘ３は、Ａ、ＹまたはＧであり、
Ｘ４は、ＭまたはＩであり、
Ｘ５は、ＨまたはＳである）、
Ｘ１ＩＸ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０ＹＡＸ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６Ｇ（配列番号７１）であるＣＤＲＨ２配列
（式中、Ｘ１は、Ｇ、ＷまたはＶであり、
Ｘ３は、ＳまたはＮであり、
Ｘ４は、Ｗ、Ｐ、ＹまたはＡであり、
Ｘ５は、Ｎ、ＤまたはＹであり、
Ｘ６は、Ｓ、ＧまたはＮであり、
Ｘ７は、ＧまたはＳであり、
Ｘ８は、Ｓ、ＧまたはＮであり、
Ｘ９は、Ｉ、ＴまたはＥであり、
Ｘ１０は、Ｇ、ＮまたはＹであり、
Ｘ１３は、ＤまたはＱであり、
Ｘ１４は、ＳまたはＫであり、
Ｘ１５は、Ｖ、ＦまたはＬであり、
Ｘ１６は、ＫまたはＱである）、
Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０Ｘ１１Ｘ１２Ｘ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６ＤＸ１８（配列番号７２）であるＣＤＲＨ３配列
（式中、Ｘ１は、Ｇである、または存在せず、
Ｘ２は、Ｇである、または存在せず、
Ｘ３は、Ｓである、または存在せず、
Ｘ４は、Ｉである、または存在せず、
Ｘ５は、Ａ、Ｄ、Ｔである、または存在せず、
Ｘ６は、Ｖ、Ｆ、Ｐである、または存在せず、
Ｘ７は、Ａ、Ｗ、Ｐである、または存在せず、
Ｘ８は、Ｇ、Ｓ、Ｌである、または存在せず、
Ｘ９は、Ｔ、Ｇ、Ｗである、または存在せず、
Ｘ１０は、Ｌ、Ｙ、Ｆである、または存在せず、
Ｘ１１は、Ｅ、Ｖ、ＰまたはＧであり、
Ｘ１２は、Ｖ、Ｄ、ＱまたはＥであり、
Ｘ１３は、ＴまたはＹであり、
Ｘ１４は、Ｇ、ＹまたはＮであり、
Ｘ１５は、Ｄ、Ｇ、ＷまたはＡであり、
Ｘ１６は、Ｌ、ＭまたはＦであり、
Ｘ１８は、Ｙ、Ｖ、ＰまたはＩである）、
Ｘ１ＡＳＱＸ５Ｘ６Ｘ７ＳＸ９ＹＬＸ１２（配列番号７３）であるＣＤＲＬ１配列
（式中、Ｘ１は、ＲまたはＱであり、
Ｘ５は、Ｆ、ＤまたはＳであり、
Ｘ６は、Ｌ、ＩまたはＶであり、
Ｘ７は、Ｓである、または存在せず、
Ｘ９は、ＴまたはＮであり、
Ｘ１２は、ＡまたはＮである）、
Ｘ１ＡＳＮ４Ｘ５Ｘ６Ｔ（配列番号７４）であるＣＤＲＬ２配列
（式中、Ｘ１は、ＳまたはＤであり、
Ｘ５は、ＲまたはＬであり、
Ｘ６は、ＡまたはＥである）、
Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６ＰＸ８Ｔ（配列番号７５）であるＣＤＲＬ３配列
（式中、Ｘ１は、ＭまたはＱであり、
Ｘ２は、ＱまたはＫであり、
Ｘ３は、Ａ、ＹまたはＳであり、
Ｘ４は、Ｔ、Ｓ、ＧまたはＹであり、
Ｘ５は、Ｈ、ＴまたはＳであり、
Ｘ６は、Ｗ、ＡまたはＴであり、
Ｘ８は、Ｙ、ＬまたはＩである）
からなる群から選択される。
【００３８】
他の実施形態では、ＣＤＲ配列のうち少なくとも１種は、
Ｘ１ＹＸ３Ｘ４Ｘ５（配列番号７６）であるＣＤＲＨ１配列
（式中、Ｘ１は、ＧまたはＳであり、
Ｘ３は、ＹまたはＳであり、
Ｘ４は、ＩまたはＭであり、
Ｘ５は、ＹまたはＮである）、
Ｘ１ＩＸ３Ｘ４Ｘ５ＳＸ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０ＹＡＸ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６Ｘ１７（配列番号７７）であるＣＤＲＨ２配列
（式中、Ｘ１は、ＷまたはＹであり、
Ｘ３は、ＲまたはＳであり、
Ｘ４は、ＰまたはＳであり、
Ｘ５は、ＮまたはＳであり、
Ｘ７は、ＧまたはＳであり、
Ｘ８は、ＤまたはＴであり、
Ｘ９は、ＴまたはＩであり、
Ｘ１０は、ＮまたはＹであり、
Ｘ１３は、ＱまたはＤであり、
Ｘ１４は、ＫまたはＳであり、
Ｘ１５は、ＦまたはＶであり、
Ｘ１６は、ＱまたはＫであり、
Ｘ１７は、ＤまたはＧである）、
Ｘ１Ｘ２Ｘ３ＹＸ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８ＧＹＸ１１Ｘ１２Ｘ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｙ（配列番号７８）であるＣＤＲＨ３配列
（式中、Ｘ１は、Ｄである、または存在せず、
Ｘ２は、Ｇである、または存在せず、
Ｘ３は、ＮまたはＩであり、
Ｘ５は、ＤまたはＹであり、
Ｘ６は、ＩまたはＤであり、
Ｘ７は、ＬまたはＳであり、
Ｘ８は、ＴまたはＳであり、
Ｘ１１は、ＱまたはＹであり、
Ｘ１２は、ＡまたはＤであり、
Ｘ１３は、ＰまたはＬであり、
Ｘ１４は、ＬまたはＦであり、
Ｘ１５は、ＧまたはＤである）、
ＲＡＳＱＸ５Ｘ６Ｘ７ＳＸ９ＹＬＸ１２（配列番号７９）であるＣＤＲＬ１配列
（式中、Ｘ５は、ＲまたはＳであり、
Ｘ６は、ＶまたはＩであり、
Ｘ７は、ＩまたはＳであり、
Ｘ９は、Ｎである、または存在せず、
Ｘ１２は、ＡまたはＮである）、
Ｘ１ＡＳＳＸ５Ｘ６Ｘ７（配列番号８０）であるＣＤＲＬ２配列
（式中、Ｘ１は、ＧまたはＡであり、
Ｘ５は、ＲまたはＬであり、
Ｘ６は、ＡまたはＱであり、
Ｘ７は、ＴまたはＳである）、
ＱＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６ＰＸ８Ｘ９（配列番号８１）であるＣＤＲＬ３配列
（式中、Ｘ２は、ＨまたはＱであり、
Ｘ３は、ＹまたはＳであり、
Ｘ４は、ＧまたはＹであり、
Ｘ５は、Ｓである、または存在せず、
Ｘ６は、Ｔである、または存在せず、
Ｘ８は、Ｐである、または存在せず、
Ｘ９は、Ｔである、または存在しない）
からなる群から選択される。
一部の実施形態では、本明細書に提供されている抗体は、
Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０Ｘ１１Ｘ１２Ｘ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６Ｘ１７Ｘ１８（配列番号６６）
（式中、Ｘ１は、Ｇである、もしくは存在せず、
Ｘ２は、Ｇである、もしくは存在せず、
Ｘ３は、Ｓ、Ｄである、もしくは存在せず、
Ｘ４は、Ｉ、Ｇである、もしくは存在せず、
Ｘ５は、Ａ、Ｄ、Ｔ、Ｎ、Ｉである、もしくは存在せず、
Ｘ６は、Ｖ、Ｆ、Ｐ、Ｙである、もしくは存在せず、
Ｘ７は、Ａ、Ｗ、Ｐ、Ｄ、Ｙである、もしくは存在せず、
Ｘ８は、Ｇ、Ｓ、Ｌ、Ｉ、Ｖ、Ｄである、もしくは存在せず、
Ｘ９は、Ｔ、Ｇ、Ｗ、Ｌ、Ｓである、もしくは存在せず、
Ｘ１０は、Ｌ、Ｙ、Ｆ、Ｔ、Ｓである、もしくは存在せず、
Ｘ１１は、Ｅ、Ｖ、Ｐ、ＧもしくはＳであり、
Ｘ１２は、Ｖ、Ｄ、Ｑ、Ｅ、ＹもしくはＷであり、
Ｘ１３は、Ｔ、Ｙ、ＱもしくはＥであり、
Ｘ１４は、Ｇ、Ｙ、Ｎ、ＡもしくはＤであり、
Ｘ１５は、Ｄ、Ｇ、Ｗ、Ａ、Ｐ、ＹもしくはＬであり、
Ｘ１６は、Ｌ、ＭもしくはＦであり、
Ｘ１７は、ＤもしくはＧであり、
Ｘ１８は、Ｙ、Ｖ、ＰもしくはＩである）または
Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０Ｘ１１Ｘ１２Ｘ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６ＤＸ１８（配列番号７２）
（式中、Ｘ１は、Ｇである、もしくは存在せず、
Ｘ２は、Ｇである、もしくは存在せず、
Ｘ３は、Ｓである、もしくは存在せず、
Ｘ４は、Ｉである、もしくは存在せず、
Ｘ５は、Ａ、Ｄ、Ｔである、もしくは存在せず、
Ｘ６は、Ｖ、Ｆ、Ｐである、もしくは存在せず、
Ｘ７は、Ａ、Ｗ、Ｐである、もしくは存在せず、
Ｘ８は、Ｇ、Ｓ、Ｌである、もしくは存在せず、
Ｘ９は、Ｔ、Ｇ、Ｗである、もしくは存在せず、
Ｘ１０は、Ｌ、Ｙ、Ｆである、もしくは存在せず、
Ｘ１１は、Ｅ、Ｖ、ＰもしくはＧであり、
Ｘ１２は、Ｖ、Ｄ、ＱもしくはＥであり、
Ｘ１３は、ＴもしくはＹであり、
Ｘ１４は、Ｇ、ＹもしくはＮであり、
Ｘ１５は、Ｄ、Ｇ、ＷもしくはＡであり、
Ｘ１６は、Ｌ、ＭもしくはＦであり、
Ｘ１８は、Ｙ、Ｖ、ＰもしくはＩである）または
Ｘ１Ｘ２Ｘ３ＹＸ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８ＧＹＸ１１Ｘ１２Ｘ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｙ（配列番号７８）
（式中、Ｘ１は、Ｄである、もしくは存在せず、
Ｘ２は、Ｇである、もしくは存在せず、
Ｘ３は、ＮもしくはＩであり、
Ｘ５は、ＤもしくはＹであり、
Ｘ６は、ＩもしくはＤであり、
Ｘ７は、ＬもしくはＳであり、
Ｘ８は、ＴもしくはＳであり、
Ｘ１１は、ＱもしくはＹであり、
Ｘ１２は、ＡもしくはＤであり、
Ｘ１３は、ＰもしくはＬであり、
Ｘ１４は、ＬもしくはＦであり、
Ｘ１５は、ＧもしくはＤである）
のＣＤＲＨ３配列を含む。
別の実施形態では、本明細書に提供されている抗体は、
Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６ＰＸ８Ｘ９（配列番号６９）
（式中、Ｘ１は、ＭもしくはＱであり、
Ｘ２は、Ｑ、ＫもしくはＨであり、
Ｘ３は、Ａ、ＹもしくはＳであり、
Ｘ４は、Ｔ、Ｓ、Ｇ、ＹもしくはＱであり、
Ｘ５は、Ｈ、Ｔ、Ｓである、もしくは存在せず、
Ｘ６は、Ｗ、Ａ、Ｔ、Ｙである、もしくは存在せず、
Ｘ８は、Ｙ、Ｌ、Ｉ、Ｐである、もしくは存在せず、
Ｘ９は、Ｔである、もしくは存在しない）または
Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６ＰＸ８Ｔ（配列番号７５）
（式中、Ｘ１は、ＭもしくはＱであり、
Ｘ２は、ＱもしくはＫであり、
Ｘ３は、Ａ、ＹもしくはＳであり、
Ｘ４は、Ｔ、Ｓ、ＧもしくはＹであり、
Ｘ５は、Ｈ、ＴもしくはＳであり、
Ｘ６は、Ｗ、ＡもしくはＴであり、
Ｘ８は、Ｙ、ＬもしくはＩである）または
ＱＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６ＰＸ８Ｘ９（配列番号８１）
（式中、Ｘ２は、ＨもしくはＱであり、
Ｘ３は、ＹもしくはＳであり、
Ｘ４は、ＧもしくはＹであり、
Ｘ５は、Ｓである、もしくは存在せず、
Ｘ６は、Ｔである、もしくは存在せず、
Ｘ８は、Ｐである、もしくは存在せず、
Ｘ９は、Ｔである、もしくは存在しない）
のＣＤＲＬ３配列を含む。
【００３９】
本開示は、一部の態様では、抗原結合ドメインを含む抗体であって、前記抗原結合ドメインが、６個のＣＤＲ：ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、ＣＤＲ−Ｈ３、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３を含み、
ＣＤＲ−Ｈ１が、
配列番号２２；
配列番号２８；
配列番号３４；
配列番号４０；
配列番号４６；
配列番号５２；および
配列番号５８からなる群から選択され、
ＣＤＲ−Ｈ２が、
配列番号２３；
配列番号２９；
配列番号３５；
配列番号４１；
配列番号４７；
配列番号５３；および
配列番号５９からなる群から選択され、
ＣＤＲ−Ｈ３が、
配列番号２４；
配列番号３０；
配列番号３６；
配列番号４２；
配列番号４８；
配列番号５４；および
配列番号６０からなる群から選択され、
ＣＤＲ−Ｌ１が、
配列番号２５；
配列番号３１；
配列番号３７；
配列番号４３；
配列番号４９；
配列番号５５；および
配列番号６１からなる群から選択され、
ＣＤＲ−Ｌ２が、
配列番号２６；
配列番号３２；
配列番号３８；
配列番号４４；
配列番号５０；
配列番号５６；および
配列番号６２からなる群から選択され、
ＣＤＲ−Ｌ３が、
配列番号２７；
配列番号３３；
配列番号３９；
配列番号４５；
配列番号５１；
配列番号５７；および
配列番号６３からなる群から選択される、
抗体を含む。
【００４０】
一部の実施形態では、６個のＣＤＲのうち３個は、
ＶＨ  ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−１  ＣＤＲセット
ＣＤＲ−Ｈ１：配列番号２２
ＣＤＲ−Ｈ２：配列番号２３
ＣＤＲ−Ｈ３：配列番号２４
ＶＬ  ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−１  ＣＤＲセット
ＣＤＲ−Ｌ１：配列番号２５
ＣＤＲ−Ｌ２：配列番号２６
ＣＤＲ−Ｌ３：配列番号２７
ＶＨ  ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−２  ＣＤＲセット
ＣＤＲ−Ｈ１：配列番号２８
ＣＤＲ−Ｈ２：配列番号２９
ＣＤＲ−Ｈ３：配列番号３０
ＶＬ  ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−２  ＣＤＲセット
ＣＤＲ−Ｌ１：配列番号３１
ＣＤＲ−Ｌ２：配列番号３２
ＣＤＲ−Ｌ３：配列番号３３
ＶＨ  ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−３  ＣＤＲセット
ＣＤＲ−Ｈ１：配列番号３４
ＣＤＲ−Ｈ２：配列番号３５
ＣＤＲ−Ｈ３：配列番号３６
ＶＬ  ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−３  ＣＤＲセット
ＣＤＲ−Ｌ１：配列番号３７
ＣＤＲ−Ｌ２：配列番号３８
ＣＤＲ−Ｌ３：配列番号３９
ＶＨ  ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−４  ＣＤＲセット
ＣＤＲ−Ｈ１：配列番号４０
ＣＤＲ−Ｈ２：配列番号４１
ＣＤＲ−Ｈ３：配列番号４２
ＶＬ  ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−４  ＣＤＲセット
ＣＤＲ−Ｌ１：配列番号４３
ＣＤＲ−Ｌ２：配列番号４４
ＣＤＲ−Ｌ３：配列番号４５
ＶＨ  ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−５  ＣＤＲセット
ＣＤＲ−Ｈ１：配列番号４６
ＣＤＲ−Ｈ２：配列番号４７
ＣＤＲ−Ｈ３：配列番号４８
ＶＬ  ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−５  ＣＤＲセット
ＣＤＲ−Ｌ１：配列番号４９
ＣＤＲ−Ｌ２：配列番号５０
ＣＤＲ−Ｌ３：配列番号５１
ＶＨ  ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−６  ＣＤＲセット
ＣＤＲ−Ｈ１：配列番号５２
ＣＤＲ−Ｈ２：配列番号５３
ＣＤＲ−Ｈ３：配列番号５４
ＶＬ  ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−６  ＣＤＲセット
ＣＤＲ−Ｌ１：配列番号５５
ＣＤＲ−Ｌ２：配列番号５６
ＣＤＲ−Ｌ３：配列番号５７
ＶＨ  ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−７  ＣＤＲセット
ＣＤＲ−Ｈ１：配列番号５８
ＣＤＲ−Ｈ２：配列番号５９
ＣＤＲ−Ｈ３：配列番号６０
および
ＶＬ  ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−７  ＣＤＲセット
ＣＤＲ−Ｌ１：配列番号６１
ＣＤＲ−Ｌ２：配列番号６２
ＣＤＲ−Ｌ３：配列番号６３
からなる可変ドメインＣＤＲセットの群から選択される。
【００４１】
一部の実施形態では、抗体は、少なくとも２個の可変ドメインＣＤＲセットを含む。他の実施形態では、抗体は、
ＶＨ  ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−１  ＣＤＲセットおよびＶＬ  ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−１  ＣＤＲセット、
ＶＨ  ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−２  ＣＤＲセットおよびＶＬ  ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−２  ＣＤＲセット、
ＶＨ  ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−３  ＣＤＲセットおよびＶＬ  ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−３  ＣＤＲセット、
ＶＨ  ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−４  ＣＤＲセットおよびＶＬ  ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−４  ＣＤＲセット、
ＶＨ  ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−５  ＣＤＲセットおよびＶＬ  ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−５  ＣＤＲセット、
ＶＨ  ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−６  ＣＤＲセットおよびＶＬ  ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−６  ＣＤＲセット、
および
ＶＨ  ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−７  ＣＤＲセットおよびＶＬ  ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−７  ＣＤＲセット
からなる群から選択される少なくとも２個の可変ドメインＣＤＲセットを含む。
【００４２】
一部の実施形態では、抗体は、ヒトアクセプターフレームワークをさらに含む。
【００４３】
他の実施形態では、単離された抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号８〜２１からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１個の可変ドメインを含む。他の実施形態では、抗体は、少なくとも１個の重鎖可変ドメインおよび少なくとも１個の軽鎖可変ドメインを含み、前記重鎖可変ドメインは、配列番号８、１０、１２、１４、１６、１８および２０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有し、前記軽鎖可変ドメインは、配列番号９、１１、１３、１５、１７、１９および２１からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。別の実施形態では、抗体は、２個の可変ドメインを含み、前記２個の可変ドメインは、
配列番号８および９、
配列番号１０および１１、
配列番号１２および１３、
配列番号１４および１５、
配列番号１６および１７、
配列番号１８および１９、および
配列番号２０および２１
からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。
【００４４】
一部の実施形態では、本明細書に提供されている抗体は、ヒトＩｇＭ定常ドメイン；ヒトＩｇＧ１定常ドメイン；ヒトＩｇＧ２定常ドメイン；ヒトＩｇＧ３定常ドメイン；ヒトＩｇＧ４定常ドメイン；ヒトＩｇＥ定常ドメインおよびヒトＩｇＡ定常ドメインからなる群から選択される重鎖免疫グロブリン定常ドメインをさらに含む。他の実施形態では、前記重鎖免疫グロブリン定常ドメインは、ヒトＩｇＧ１定常ドメインである。他の実施形態では、抗体は、軽鎖免疫グロブリン定常ドメインをさらに含み、前記軽鎖免疫グロブリン定常ドメインは、ヒトＩｇカッパ定常ドメインである。別の実施形態では、抗体は、軽鎖免疫グロブリン定常ドメインをさらに含み、前記軽鎖免疫グロブリン定常ドメインは、ヒトＩｇラムダ定常ドメインである。
【００４５】
他の実施形態では、抗体は、免疫グロブリン分子、ｓｃＦｖ、モノクローナル抗体、ヒト抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、単一ドメイン抗体、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ジスルフィド連結されたＦｖ、単一ドメイン抗体、ダイアボディ（diabody）、多特異性抗体、二特異性抗体および二重特異性抗体からなる群から選択される。他の実施形態では、抗体は、ヒト抗体である。
【００４６】
別の実施形態では、抗体は、ＧＤＦ１１の生物機能またはレベルをモジュレートすることができる。一部の実施形態では、抗体は、ＧＤＦ１１を中和することができる。別の実施形態では、前記ＧＤＦ１１は、ヒトＧＤＦ１１である。一実施形態では、前記抗体は、赤血球生成を増強することができる。別の実施形態では、前記抗体は、ヒトＧＤＦ１１プロドメイン複合体に対し、多くても約１０−７Ｍ；多くても約１０−８Ｍ；多くても約１０−９Ｍ；多くても約１０−１０Ｍ；多くても約１０−１１Ｍ；多くても約１０−１２Ｍ；および多くても１０−１３Ｍからなる群から選択される解離定数（ＫＤ）を有する。さらなる実施形態では、前記抗体は、ヒトＧＤＦ１１プロドメイン複合体に対し、少なくとも約１０２Ｍ−１ｓ−１；少なくとも約１０３Ｍ−１ｓ−１；少なくとも約１０４Ｍ−１ｓ−１；少なくとも約１０５Ｍ−１ｓ−１；および少なくとも約１０６Ｍ−１ｓ−１からなる群から選択されるオンレートを有する。
【００４７】
一部の実施形態では、前記抗体は、ヒトＧＤＦ１１プロドメイン複合体に対し、多くても約１０−３ｓ−１；多くても約１０−４ｓ−１；多くても約１０−５ｓ−１；および多くても約１０−６ｓ−１からなる群から選択されるオフレートを有する。別の実施形態では、抗体は、単離される。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＧＤＦ１１プロドメイン複合体に特異的に結合する。
【００４８】
本開示は、別の態様では、本明細書に提供されている抗体を含み、リンカーポリペプチドまたは免疫グロブリン定常ドメインをさらに含む、抗体構築物を含む。
【００４９】
一部の実施形態では、抗体構築物は、免疫グロブリン分子、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ＣＤＲグラフト抗体、ヒト化抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ジスルフィド連結されたＦｖ、ｓｃＦｖ、単一ドメイン抗体、ダイアボディ、多特異性抗体、二重特異性抗体および二特異性抗体からなる群から選択される。
【００５０】
別の実施形態では、前記抗体構築物は、ヒトＩｇＭ定常ドメイン、ヒトＩｇＧ１定常ドメイン、ヒトＩｇＧ２定常ドメイン、ヒトＩｇＧ３定常ドメイン、ヒトＩｇＧ４定常ドメイン、ヒトＩｇＥ定常ドメイン、ヒトＩｇＡ定常ドメイン、およびＦｃ新生児受容体、Ｆｃガンマ受容体またはＣ１ｑに対する結合強度を変更する１個または複数の突然変異を有するＩｇＧ定常ドメインバリアントからなる群から選択される重鎖免疫グロブリン定常ドメインを含む。
【００５１】
本開示は、一部の態様では、本明細書に提供されている抗体構築物を含む抗体コンジュゲートを含み、前記抗体構築物は、治療剤または細胞傷害剤にコンジュゲートされている。一実施形態では、前記治療剤または細胞傷害剤は、代謝拮抗薬、アルキル化剤、抗生物質、増殖因子、サイトカイン、抗血管新生剤、有糸分裂阻害剤、アントラサイクリン、毒素およびアポトーシス剤からなる群から選択される。
【００５２】
本開示は、一部の態様では、本明細書に提供されている結合タンパク質（抗体、抗体構築物または抗体構築物）と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物を含む。一実施形態では、プロＧＤＦ１１への抗体または抗体構築物の結合は、プロタンパク質変換酵素によるプロＧＤＦ１１のタンパク質分解性切断を阻害する。
【００５３】
本開示は、別の態様では、ヒトＧＤＦ１１活性を低下させるための方法であって、ヒトＧＤＦ１１活性が低下されるように、ヒトＧＤＦ１１プロドメイン複合体を本明細書に提供されている結合タンパク質（抗体、抗体構築物または抗体コンジュゲート）と接触させるステップを含む方法を提供する。
【００５４】
本開示の別の態様は、ＧＤＦ１１活性が有害となる障害を患うヒト対象におけるヒトＧＤＦ１１活性を低下させるための方法であって、ヒト対象におけるヒトＧＤＦ１１活性が低下されるように、ヒト対象に本明細書に提供されている結合タンパク質（抗体、抗体構築物または抗体コンジュゲート）を投与するステップを含む方法を提供する。一実施形態では、前記障害は、貧血および赤芽球過形成からなる群から選択される。
【００５５】
本開示の追加的な態様は、生物システムにおける増殖因子活性をモジュレートする方法であって、前記生物システムを本明細書に提供されている結合タンパク質（抗体、抗体構築物または抗体コンジュゲート）と接触させるステップを含む方法を提供する。
【００５６】
一部の実施形態では、前記増殖因子活性は、ＧＤＦ１１活性を含む。別の実施形態では、抗体は、安定化抗体であり、前記生物システムを前記安定化抗体と接触させるステップは、前記生物システムにおける総ＧＤＦ１１成熟増殖因子の少なくとも５％の放出の阻害をもたらす。他の実施形態では、プロＧＤＦ１１への抗体もしくはその抗原結合部分、抗体構築物または抗体コンジュゲートの結合は、プロタンパク質変換酵素によるプロＧＤＦ１１のタンパク質分解性切断を阻害する。さらなる実施形態では、抗体は、プロタンパク質変換酵素によるプロＧＤＦ１１のタンパク質分解性切断を阻害する。
【００５７】
一態様では、本開示は、対象におけるＴＧＦ−β関連徴候を処置する方法であって、前記対象を本明細書に提供されている結合タンパク質（抗体、抗体構築物または抗体コンジュゲート）と接触させるステップを含む方法を提供する。
【００５８】
一実施形態では、前記ＴＧＦ−β関連徴候は、心肥大、心臓萎縮、粥状動脈硬化および再狭窄からなる群から選択される心血管徴候を含む。別の実施形態では、前記ＴＧＦ−β関連徴候は、ＧＤＦ１１関連徴候を含む。さらなる実施形態では、前記ＧＤＦ１１関連徴候は、赤芽球過形成貧血および／またはβ−サラセミアを含む。
【００５９】
本開示の別の態様は、本明細書に提供されている結合タンパク質（抗体、抗体構築物または抗体コンジュゲート）をコードする核酸を含む。
【００６０】
本開示のさらなる態様は、本明細書に提供されている核酸を含むベクターを含む。
【００６１】
本開示の追加的な態様は、本明細書に提供されている核酸を含む細胞を含む。
【００６２】
本開示の別の態様は、本明細書に提供されている結合タンパク質（抗体、抗体構築物または抗体コンジュゲート）と、その使用説明書とを含むキットを提供する。
【００６３】
本開示の一態様は、エピトープへの結合に関して、本明細書に提供されている結合タンパク質（抗体、抗体構築物または抗体コンジュゲート）と競合する抗体を含む。
【００６４】
本開示の別の態様は、本明細書に提供されている結合タンパク質（抗体、抗体構築物または抗体コンジュゲート）と同じエピトープに結合する抗体を提供する。
【００６５】
本開示のさらなる態様は、ヒトプロＧＤＦ１１のエピトープまたはヒト潜在型ＧＤＦ１１のエピトープへの結合に関して、本明細書に提供されている結合タンパク質（抗体、抗体構築物または抗体コンジュゲート）と競合する抗体を含む。
【００６６】
一部の実施形態では、抗体は、本明細書に提供されている結合タンパク質（抗体、抗体構築物または抗体コンジュゲート）と同じエピトープにおけるヒトプロＧＤＦ１１またはヒト潜在型ＧＤＦ１１のエピトープに特異的に結合する。
【００６７】
別の実施形態では、抗体は、１０−６Ｍ未満の抗体とエピトープとの間の平衡解離定数（Ｋｄ）で、エピトープへの結合に関して競合する。一実施形態では、Ｋｄは、１０−１１Ｍ〜１０−６Ｍの範囲内である。
【００６８】
本開示の別の態様は、本明細書に提供されている結合タンパク質（抗体、抗体構築物または抗体コンジュゲート）と、担体とを含む組成物を含む。
【００６９】
一部の実施形態では、組成物は、治療有効量の本明細書に提供されている結合タンパク質（抗体、抗体構築物または抗体コンジュゲート）と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物である。本開示の別の実施形態は、治療有効量の本明細書に提供されている結合タンパク質（抗体、単離された抗体もしくは抗原結合性断片、抗体構築物または抗体コンジュゲート）を含む、赤芽球過形成貧血および／またはβ−サラセミアの予防における使用のための本明細書に提供されている組成物を含む。
【００７０】
一部の実施形態では、担体は、薬学的に許容される担体である。
【００７１】
別の実施形態では、抗体および担体は、凍結乾燥形態となる。一実施形態では、抗体および担体は、溶液中に存在する。一部の実施形態では、抗体および担体は、凍結されている。別の実施形態では、抗体および担体は、−６５℃未満のまたはこれに等しい温度で凍結されている。
【００７２】
一部の実施形態では、抗体は、スイープ（sweeping）抗体である。他の実施形態では、抗体は、リサイクル（recycling）抗体である。別の実施形態では、抗体は、Ｆｃ部分を含む。他の実施形態では、抗体は、新生児Ｆｃ受容体ＦｃＲｎに結合する。別の実施形態では、Ｆｃ部分は、新生児Ｆｃ受容体ＦｃＲｎに結合する。
【００７３】
一部の実施形態では、抗体は、６．０を超えるｐＨでＦｃＲｎに結合する。他の実施形態では、抗体は、７．０〜７．５の範囲内のｐＨでＦｃＲｎに結合する。
【００７４】
一実施形態では、ＦｃＲＮへの抗体の結合のＫｄは、１０−３Ｍ〜１０−８Ｍの範囲内である。別の実施形態では、ＦｃＲＮへの抗体の結合のＫｄは、１０−４Ｍ〜１０−８Ｍの範囲内である。一部の実施形態では、ＦｃＲＮへの抗体の結合のＫｄは、１０−５Ｍ〜１０−８Ｍの範囲内である。他の実施形態では、ＦｃＲＮへの抗体の結合のＫｄは、１０−６Ｍ〜１０−８Ｍの範囲内である。
【００７５】
本開示は、別の態様では、ＧＤＦ１１プロドメイン複合体に特異的に結合し、ＧＤＦ１１プロドメイン複合体からの成熟ＧＤＦ１１の放出を阻害する抗体を含む。
【００７６】
本開示の追加的な態様は、ＧＤＦ１１プロドメイン複合体に特異的に結合し、プロタンパク質変換酵素またはトロイドプロテアーゼによるプロＧＤＦ１１または潜在型ＧＤＦ１１のタンパク質分解性切断を阻害する抗体を提供する。
【００７７】
一部の実施形態では、抗体は、プロＧＤＦ１１または潜在型ＧＤＦ１１におけるトロイドプロテアーゼ切断部位のタンパク質分解性切断を阻害する。別の実施形態では、トロイドプロテアーゼは、ＢＭＰ−１、哺乳動物トロイドタンパク質（ｍＴＬＤ）、哺乳動物トロイド様１（ｍＴＬＬ１）および哺乳動物トロイド様２（ｍＴＬＬ２）からなる群から選択される。他の実施形態では、抗体は、プロＧＤＦ１１または潜在型ＧＤＦ１１のトロイドプロテアーゼ切断部位の１０アミノ酸残基内に結合する。一部の実施形態では、トロイドプロテアーゼ切断部位は、プロＧＤＦ１１または潜在型ＧＤＦ１１のアミノ酸配列ＧＤを含む。他の実施形態では、プロＧＤＦ１１または潜在型ＧＤＦ１１は、配列番号８２、８６、９７または９８に記載のアミノ酸配列を含む。別の実施形態では、抗体は、アミノ酸配列ＫＡＰＰＬＱＱＩＬＤＬＨＤＦＱＧＤＡＬＱＰＥＤＦＬＥＥＤＥＹＨＡ（配列番号１４９）に結合する。
【００７８】
一実施形態では、抗体は、プロＧＤＦ１１または潜在型ＧＤＦ１１におけるプロタンパク質変換酵素切断部位のタンパク質分解性切断を阻害する。別の実施形態では、プロタンパク質変換酵素は、フューリンおよびＰＣＳＫ５からなる群から選択される。さらなる実施形態では、抗体は、プロＧＤＦ１１または潜在型ＧＤＦ１１のプロタンパク質変換酵素（converrase）切断部位の１０アミノ酸残基内に結合する。別の実施形態では、プロタンパク質変換酵素切断部位は、プロＧＤＦ１１または潜在型ＧＤＦ１１のアミノ酸配列ＲＳＲＲ（配列番号１５１）、ＲＥＬＲ（配列番号１６１）、ＲＳＳＲ（配列番号１５２）を含む。
【００７９】
他の実施形態では、プロＧＤＦ１１または潜在型ＧＤＦ１１は、配列番号８２、８６、９７または９８に記載のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗体は、アミノ酸配列ＧＬＨＰＦＭＥＬＲＶＬＥＮＴＫＲＳＲＲＮＬＧＬＤＣＤＥＨＳＳＥＳＲＣ（配列番号１５３）、ＰＥＰＤＧＣＰＶＣＶＷＲＱＨＳＲＥＬＲＬＥＳＩＫＳＱＩＬＳＫＬＲＬＫ（配列番号１５４）、またはＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＧＶＧＧＥＲＳＳＲＰＡＰＳＶＡＰＥＰＤＧＣＰＶＣ（配列番号１５５）に結合する。
【００８０】
一部の実施形態では、抗体は、プロＧＤＦ１１のタンパク質分解性切断を阻害する。他の実施形態では、抗体は、潜在型ＧＤＦ１１のタンパク質分解性切断を阻害する。別の実施形態では、抗体は、生物システムにおけるＧＤＦ１１プロドメイン複合体からの成熟ＧＤＦ１１の放出を少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも４０％または少なくとも６０％阻害する。一実施形態では、抗体は、生物システムにおけるプロタンパク質変換酵素またはトロイドプロテアーゼによるプロＧＤＦ１１または潜在型ＧＤＦ１１のタンパク質分解性切断を少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも４０％または少なくとも６０％阻害する。
【００８１】
一部の実施形態では、生物システムは、細胞または対象である。
【００８２】
他の実施形態では、抗体は、安定化抗体である。
【００８３】
別の実施形態では、本明細書に開示されている結合タンパク質、抗体構築物または抗体コンジュゲートのいずれかは、結晶として存在する。別の実施形態では、結晶は、担体不含医薬品放出制御結晶である。別の実施形態では、結晶化された結合タンパク質、結晶化された抗体構築物または結晶化された抗体コンジュゲートは、ｉｎ  ｖｉｖｏで、その可溶性対応物よりも優れた半減期を有する。別の実施形態では、結晶化された結合タンパク質、結晶化された抗体構築物または結晶化された抗体コンジュゲートは、結晶化後に生物活性を保持する。
【００８４】
一実施形態では、宿主細胞は、本明細書に提供されているベクターのいずれかにより形質転換される。別の実施形態では、宿主細胞は、原核細胞である。別の実施形態では、宿主細胞は、Ｅ．ｃｏｌｉである。別の実施形態では、宿主細胞は、真核細胞である。別の実施形態では、真核細胞は、原生生物細胞、動物細胞、植物細胞および真菌細胞からなる群から選択される。別の実施形態では、宿主細胞は、ＨＥＫ２９３、ＣＨＯおよびＣＯＳが挙げられるがこれらに限定されない哺乳動物細胞；またはＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ等の真菌細胞；またはＳｆ９等の昆虫細胞である。
【００８５】
別の実施形態では、ＧＤＦ１１プロドメイン複合体に結合する結合タンパク質を産生する方法が提供される。本方法は、ＧＤＦ１１プロドメイン複合体に結合する結合タンパク質の産生に十分な条件下で、培養培地において宿主細胞（例えば、本明細書に提供されている宿主細胞のいずれか）を培養するステップを含むことができる。別の実施形態は、上に開示されている方法に従って産生された結合タンパク質を提供する。
【００８６】
別の実施形態では、結合タンパク質の放出のための組成物が開示され、この組成物は、製剤を含み、次いでこの製剤は、上に開示されている結晶化された結合タンパク質、結晶化された抗体構築物または結晶化された抗体コンジュゲートおよび成分；ならびに少なくとも１種のポリマー担体を含む。別の実施形態では、ポリマー担体は、ポリ（アクリル酸）、ポリ（シアノアクリレート）、ポリ（アミノ酸）、ポリ（無水物）、ポリ（デプシペプチド）、ポリ（エステル）、ポリ（乳酸）、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）またはＰＬＧＡ、ポリ（ｂ−ヒドロキシ酪酸塩（butryate））、ポリ（カプロラクトン）、ポリ（ジオキサノン（dioxanone））；ポリ（エチレングリコール）、ポリ（（ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド、ポリ［（オルガノ）ホスファゼン］、ポリ（オルトエステル）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、無水マレイン酸−アルキルビニルエーテルコポリマー、プルロニックポリオール、アルブミン、アルギン酸塩、セルロースおよびセルロース誘導体、コラーゲン、フィブリン、ゼラチン、ヒアルロン酸、オリゴ糖、グリコサミノグリカン（glycaminoglycan）、硫酸化多糖、これらのブレンドおよびコポリマーからなる群のうち１種または複数から選択されるポリマーである。別の実施形態では、成分は、アルブミン、スクロース、トレハロース、ラクチトール、ゼラチン、ヒドロキシプロピル−．ベータ．−シクロデキストリン、メトキシポリエチレングリコールおよびポリエチレングリコールからなる群から選択される。
【００８７】
別の実施形態では、哺乳動物に有効量の本明細書に開示されている組成物を投与するステップを含む、哺乳動物を処置するための方法が開示される。
【００８８】
本開示は、本明細書に開示されている結合タンパク質、抗体構築物または抗体コンジュゲートと、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物も提供する。さらなる実施形態では、医薬組成物は、ＧＤＦ１１活性が有害となる障害を処置するための少なくとも１種の追加的な治療剤を含む。別の実施形態では、追加的な薬剤は、治療剤、造影剤、細胞傷害剤、血管新生阻害剤（抗ＶＥＧＦ抗体またはＶＥＧＦ−トラップが挙げられるがこれらに限定されない）；キナーゼ阻害剤（ＫＤＲおよびＴＩＥ−２阻害剤が挙げられるがこれらに限定されない）；同時刺激分子遮断薬（抗Ｂ７．１、抗Ｂ７．２、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ、抗ＣＤ２０が挙げられるがこれらに限定されない）；接着分子遮断薬（抗ＬＦＡ−１  Ａｂ、抗Ｅ／ＬセレクチンＡｂ、小分子阻害剤が挙げられるがこれらに限定されない）；抗サイトカイン抗体またはその機能的断片（抗ＩＬ−１８、抗ＴＮＦ、抗ＩＬ−６／サイトカイン受容体抗体が挙げられるがこれらに限定されない）；メトトレキセート；シクロスポリン；ラパマイシン；ＦＫ５０６；検出可能標識またはレポーター；ＴＮＦアンタゴニスト；抗リウマチ薬；筋弛緩薬、麻薬、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛薬、麻酔薬、鎮静薬、局所麻酔薬、神経筋遮断薬、抗菌薬、乾癬治療薬（antipsoriatic）、副腎皮質ステロイド（corticosteriod）、タンパク質同化ステロイド、エリスロポエチン、免疫化、免疫グロブリン、免疫抑制薬、成長ホルモン、ホルモン補充薬、放射性医薬品、抗うつ薬、抗精神病薬、刺激薬、喘息薬物療法、ベータアゴニスト、吸入ステロイド、エピネフリンまたはアナログ、サイトカインおよびサイトカインアンタゴニストからなる群から選択される。
【００８９】
別の態様では、本開示は、ヒトＧＤＦ１１活性を阻害するための方法であって、ヒトＧＤＦ１１活性が阻害されるように、ヒトＧＤＦ１１プロドメイン複合体を本明細書に開示されている結合タンパク質と接触させるステップを含む方法を提供する。別の態様では、本開示は、ＧＤＦ１１活性が有害となる障害を患うヒト対象におけるヒトＧＤＦ１１活性を阻害するための方法であって、ヒト対象におけるヒトＧＤＦ１１活性が阻害され、処置が達成されるように、ヒト対象に本明細書に開示されている結合タンパク質を投与するステップを含む方法を提供する。
【００９０】
別の態様では、本開示は、対象におけるＧＤＦ１１関連障害を処置（例えば、治癒、抑制、軽快、発病遅延もしくは予防、または再発もしくは再燃予防）または予防する方法を提供する。本方法は、対象に、ＧＤＦ１１プロドメイン複合体結合剤、例えば、本明細書に記載されている抗ＧＤＦ１１プロドメイン複合体抗体またはその断片を、ＧＤＦ１１関連障害の処置または予防に十分な量で投与するステップを含む。ＧＤＦ１１プロドメイン複合体結合タンパク質、例えば、抗ＧＤＦ１１プロドメイン複合体抗体またはその断片は、単独で、または本明細書に記載されている他の治療モダリティと組み合わせて対象に投与することができる。
【００９１】
一実施形態では、対象は、哺乳動物、例えば、１種または複数のＧＤＦ１１関連障害を患うヒトであり、このような障害として、例えば、本明細書に記載されている通り、呼吸器障害（例えば、喘息（例えば、アレルギー性および非アレルギー性喘息）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、ならびに気道炎症、好酸球増加、線維症および過剰な粘液産生が関与する他の状態；アトピー性障害（例えば、アトピー性皮膚炎およびアレルギー性鼻炎）；皮膚、胃腸管系臓器（例えば、潰瘍性大腸炎および／またはクローン病等の炎症性腸疾患（ＩＢＤ））および肝臓（例えば、肝硬変、線維症）の炎症性および／または自己免疫性状態；強皮症；腫瘍またはがん、例えば、ホジキンリンパ腫が挙げられる。したがって、本開示は、本明細書に記載されている処置のためのＧＤＦ１１プロドメイン複合体結合剤（本明細書に記載されている抗ＧＤＦ１１プロドメイン複合体抗体またはその断片等）の使用、および本明細書に記載されている処置のための医薬を調製するためのＧＤＦ１１結合プロドメイン複合体剤（本明細書に記載されている抗ＧＤＦ１１プロドメイン複合体抗体またはその断片等）の使用を含む。ＧＤＦ１１関連障害の例として、本明細書に記載されている貧血、赤芽球過形成、ベータサラセミアが挙げられるがこれらに限定されない。
【００９２】
他の実施形態では、本開示は、貧血または赤芽球過形成に関連する１種または複数の症状を処置（例えば、低下、軽快）または予防する方法を提供する。本方法は、対象に、ＧＤＦ１１プロドメイン複合体結合タンパク質、例えば、ＧＤＦ１１プロドメイン複合体抗体またはその断片を、１種または複数の症状の処置（例えば、低下、軽快）または予防に十分な量で投与するステップを含む。ＧＤＦ１１プロドメイン複合体抗体は、治療的もしくは予防的にまたはその両方で投与することができる。ＧＤＦ１１プロドメイン複合体結合タンパク質、例えば、抗ＧＤＦ１１プロドメイン複合体抗体またはその断片は、単独で、または本明細書に記載されている他の治療モダリティと組み合わせて対象に投与することができる。別の態様では、対象は、哺乳動物、例えば、本明細書に記載されているＧＤＦ１１関連障害を患うヒトである。
【００９３】
別の態様では、本願は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで試料（例えば、血清、血漿、組織および生検等、生体試料）におけるＧＤＦ１１プロドメイン複合体の存在を検出するための方法を提供する。対象方法を使用して、障害を診断することができる。本方法は、（ｉ）試料または対照試料を本明細書に記載されている抗ＧＤＦ１１プロドメイン複合体抗体またはその断片と接触させるステップと、（ｉｉ）抗ＧＤＦ１１プロドメイン複合体抗体またはその断片と試料または対照試料との間の複合体の形成を検出するステップであって、対照試料と比べて試料における複合体形成の統計的に有意な変化が、試料におけるＧＤＦ１１プロドメイン複合体の存在を示すステップとを含む。
【００９４】
別の態様では、本願は、ｉｎ  ｖｉｖｏでＧＤＦ１１プロドメイン複合体の存在を検出するための方法（例えば、対象におけるｉｎ  ｖｉｖｏイメージング）を提供する。対象方法を使用して、障害、例えば、ＧＤＦ１１関連障害を診断することができる。本方法は、（ｉ）ＧＤＦ１１プロドメイン複合体への抗体または断片の結合を可能にする条件下で、本明細書に記載されている抗ＧＤＦ１１プロドメイン複合体抗体またはその断片を対象または対照対象に投与するステップと、（ｉｉ）抗体または断片とＧＤＦ１１プロドメイン複合体との間の複合体の形成を検出するステップであって、対照対象と比べて対象における複合体形成の統計的に有意な変化が、ＧＤＦ１１プロドメイン複合体の存在を示すステップとを含む。
【００９５】
別の実施形態では、本開示は、本明細書に開示されている少なくとも１種のＧＤＦ１１プロドメイン複合体結合タンパク質に対する少なくとも１種のＧＤＦ１１プロドメイン複合体抗イディオタイプ抗体を提供する。抗イディオタイプ抗体は、本開示の結合タンパク質に取り込むことができる、重鎖もしくは軽鎖またはそのリガンド結合部分の少なくとも１個の相補性（complementarily）決定領域（ＣＤＲ）、重鎖または軽鎖可変領域、重鎖または軽鎖定常領域、フレームワーク領域、あるいは；これらのいずれかの部分等が挙げられるがこれらに限定されない、免疫グロブリン分子の少なくとも部分を含む、いずれかのタンパク質またはペプチド含有分子を含む。
【図面の簡単な説明】
【００９６】
【図１】図１Ａ〜１Ｂは、ＧＤＦ１１ドメイン構造およびプロＧＤＦ１１アセンブリを示す図である。図１Ａは、ＧＤＦ１１のドメイン構造の模式図である。ＧＤＦ１１は、阻害性プロドメインと、それに続くジスルフィド連結された二量体として存在するＣ末端増殖因子ドメインを有するプロタンパク質として分泌される。図１Ｂは、プロドメイン（紫）が、潜在型ラッソと称されるループに連結されたアルファヘリックスからなる「ストレートジャケット」アセンブリで増殖因子（シアン）を包み込んでいる不活性コンホメーションにアセンブリされている前駆体タンパク質を示している。この図は、潜在型ＴＧＦｂ１の構造からの改作である（Shiら、２０１１年）。
【００９７】
【図２】図２は、ＧＤＦ１１の活性化が２個の異なるタンパク質分解事象を必要とすることを例示する模式図である。生合成前駆体タンパク質、プロＧＤＦ１１は、２個の別々のプロテアーゼによってプロセシングされる。この模式図に示す第１のステップは、フューリンまたはＰＣＳＫ５などのプロタンパク質変換酵素ファミリーのメンバーによって実施される。この切断は、プロドメインを成熟増殖因子から分離し、ＧＤＦ１１の潜在型形態を産生する。プロテアーゼのトロイドファミリーによる第２の切断事象は、プロドメイン内を切断する。両切断事象は、ＧＤＦ１１の放出ならびに続くＧＤＦ１１増殖因子のＩ型およびＩＩ型シグナル伝達受容体との会合のために必要である。
【００９８】
【図３】図３Ａ〜３Ｂは、ＧＤＦ１１活性化遮断抗体がプロＧＤＦ１１のプロドメインに結合する３個の別々のエピトープ群を含むことを示す図である。図３Ａは、３個のエピトープ群を同定したＦｏｒｔｅＢｉｏ  Ｏｃｔｅｔ  ＢＬＩで実施された交差遮断実験からの結果を示している。ペアワイズ結合事象は、実験に添加された第１の抗体がＹ軸に、第２の抗体がＸ軸に示されている四角内の色調によって示されている。これらの交差遮断実験において検出された結合の程度は、「非結合」、「一部結合」および「無妨害結合」として示されている。図３Ｂは、キメラＧＤＦ１１／ミオスタチンタンパク質を利用した交差遮断結果とエピトープマッピング研究との組合せを示している。Ｂｉｎ  １および３の抗体は、図において紫で影を付けた領域を含むプロドメインの「ＡＲＭ」領域に結合する。Ｂｉｎ  ２の抗体は、緑で影を付けたプロドメインの「ストレートジャケット」部分に結合する。
【００９９】
【図４】図４Ａ〜４Ｂは、ＧＤＦ１１活性化の遮断剤を示すグラフである。プロタンパク質変換酵素およびトロイドプロテアーゼファミリーの両方からの酵素との終夜のタンパク質分解反応後、成熟増殖因子の放出がＧＤＦ１１活性化を阻害する様々な濃度の抗体の存在下で、２９３Ｔ細胞におけるＣＡＧＡに基づくレポーターアッセイを使用して測定された（図４Ａ）。算出されたＥＣ５０値は括弧内に示されている。図４Ｂは、ＧＤＦ１１阻害性Ａｂ、ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−５が、ヒトプロＧＤＦ８の活性化を遮断しないことを示している。このアッセイではヒトプロＧＤＦ８濃度は４００ｎＭであった。
【０１００】
【図５】図５は、ＣＡＧＡプロモーター依存性ルシフェラーゼ活性がプロタンパク質変換酵素、トロイドプロテイナーゼまたはプロタンパク質変換酵素とトロイドプロテイナーゼとの組合せでの処置後のＧＤＦ−１１またはプロＧＤＦ−１１の存在であることを示すグラフである。
【０１０１】
【図６】図６は、ルシフェラーゼに基づく増殖因子活性アッセイの結果を示すグラフである。
【０１０２】
【図７】図７は、還元および非還元条件下でのプロテイナーゼ処置プロＧＤＦ−１１の分離を示す染色ゲルを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【０１０３】
本開示は、ヒトＧＤＦ１１プロドメイン複合体結合タンパク質に関係し、より具体的には、ＧＤＦ１１プロドメイン複合体に結合する抗ＧＤＦ１１プロドメイン複合体抗体またはその抗原結合部分に関係する。本開示の様々な態様は、抗体および抗体断片ならびにそれらの医薬組成物、ならびにこのような抗体および断片を作製するための核酸、組換え発現ベクターおよび宿主細胞に関する。本開示の抗体を使用して、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏのいずれかにおいて、ヒトＧＤＦ１１プロドメイン複合体を検出する、あるいはヒトＧＤＦ１１活性および／またはレベルをモジュレートする方法も開示されている。
【０１０４】
本明細書において他に規定がなければ、本開示に関連して使用されている科学および技術用語は、当業者によって一般的に理解される意味を有するものとする。用語の意味および範囲は明確であるが、何らかの潜在的な曖昧さがある場合は、本明細書に提供されている定義が、いかなる辞書または外部の定義よりも優先される。さらに、文脈がそれ以外を要求しない限り、単数形の用語は、複数を含むものとし、複数形の用語は、単数を含むものとする。本開示において、特段の定めがなければ、「または」の使用は、「および／または」を意味する。さらに、用語「含む（including）」、ならびに「含み（includes）」および「含まれた（included）」等の他の形態の使用は、限定的ではない。また、「エレメント」または「構成成分」等の用語は、特に他に記されていない限り、１個のユニットを含むエレメントおよび構成成分、ならびに１個を超えるサブユニットを含むエレメントおよび構成成分の両方を包含する。
【０１０５】
一般に、本明細書に記載されている細胞および組織培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝学ならびにタンパク質および核酸化学ならびにハイブリダイゼーションに関連して使用されている命名法およびそれらの技法は、本技術分野で周知かつ一般的に使用されているものである。本開示の方法および技法は一般に、他に断りがなければ、本技術分野で周知の従来方法に従って、本開示を通して引用および記述されている様々な一般的なおよびより専門的な参考文献に記載されている通りに実行される。酵素反応および精製技法は、製造業者の明細に従って、本技術分野で一般的に達成される通りに、または本明細書に記載されている通りに実行される。本明細書に記載されている分析化学、合成有機化学ならびに薬用および医薬品化学に関連して使用されている命名法ならびにそれらの研究室手順および技法は、本技術分野で周知かつ一般的に使用されているものである。化学合成、化学分析、医薬品調製、製剤および送達、ならびに患者の処置のために、標準技法が使用される。
【０１０６】
本開示をより容易に理解することができるように、選択された用語を下で定義する。
【０１０７】
用語「ポリペプチド」は、本明細書において、アミノ酸のいずれかのポリマー鎖を指す。用語「ペプチド」および「タンパク質」は、用語、ポリペプチドと互換的に使用されており、同様に、アミノ酸のポリマー鎖を指す。用語「ポリペプチド」は、ネイティブまたは人工のタンパク質、タンパク質断片およびタンパク質配列のポリペプチドアナログを包含する。ポリペプチドは、モノマーであってもポリマーであってもよい。
【０１０８】
用語「単離されたタンパク質」または「単離されたポリペプチド」は、その派生起源もしくは供給源のおかげで、そのネイティブ状態ではこれを伴う、天然において会合した構成成分と会合していないタンパク質もしくはポリペプチド（例えば、抗体）である；同じ種由来の他のタンパク質を実質的に含まない；異なる種由来の細胞によって発現される；または天然にはない。よって、化学合成された、またはそれが天然に起源をもつ細胞とは異なる細胞系において合成されたポリペプチドは、その天然において会合した構成成分から「単離される」であろう。タンパク質は、本技術分野で周知のタンパク質精製技法を使用した単離によって、天然において会合した構成成分を実質的に含まない状態にすることもできる。一部の実施形態では、用語「単離された」は、「分離された」と同義であるが、分離は、人の手によって行われたという推論を伴う。一実施形態では、単離された物質または実体は、これが以前に会合していた（天然であれ実験状況であれ）構成成分の少なくとも一部から分離されたものである。単離された物質は、これが会合していた物質を参照して、変動するレベルの純度を有することができる。単離された物質および／または実体は、これが最初に会合していた他の構成成分の少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％またはそれよりも多くから分離することができる。一部の実施形態では、単離された作用因子は、約８０％を超えて、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約９９％を超えて純粋である。本明細書において、物質は、他の構成成分を実質的に含まない場合、「純粋」である。
【０１０９】
用語「実質的に単離された」は、化合物が、これが形成または検出された環境から実質的に分離されていることを意味する。部分的分離は、例えば、本開示の化合物が濃縮された組成物を含むことができる。実質的分離は、重量で少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％または少なくとも約９９％の本開示の化合物またはその塩を含有する組成物を含むことができる。化合物およびその塩を単離するための方法は、本技術分野でルーチンである。一部の実施形態では、物質または実体の単離は、化学的会合および／または結合の破壊を含む。一部の実施形態では、単離は、単離された物質または実体が以前に組み合わされていた構成成分からの分離のみを含み、このような破壊を含まない。
【０１１０】
用語「ヒトＧＤＦ１１プロドメイン複合体」は、本明細書において、プロＧＤＦ１１およびＧＤＦ１１の潜在型複合体（増殖因子ドメインと複合体形成したプロドメイン）を指す。一部の実施形態では、プロおよび潜在型ＧＤＦ１１のアミノ酸配列は、配列番号８２を含む。
【０１１１】
タンパク質の「生物活性」または「活性」は、本明細書において、タンパク質のあらゆる固有の生物学的特性を指す。
【０１１２】
用語「特異的な結合」または「特異的に結合」は、本明細書において、抗体、タンパク質またはペプチドと第２の化学種との相互作用を参照している場合、相互作用が、化学種における特定の構造（例えば、抗原決定基またはエピトープ）の存在に依存することを意味する；例えば、抗体は、タンパク質全体ではなく、特異的なタンパク質構造を認識し、これに結合する。抗体が、エピトープ「Ａ」に特異的である場合、標識された「Ａ」および抗体を含有する反応物におけるエピトープＡ（または遊離した、標識されていないＡ）を含有する分子の存在は、抗体に結合した標識されたＡの量を低下させるであろう。
【０１１３】
用語「抗体」は、本明細書において、２本が重（Ｈ）鎖で２本が軽（Ｌ）鎖の４本のポリペプチド鎖で構成された、いずれかの免疫グロブリン（Ｉｇ）分子、またはＩｇ分子の本質的なエピトープ結合特色を保持する抗原結合部分を含む、そのいずれかの機能的断片、突然変異体、バリアントもしくは派生を広く指す。このような突然変異体、バリアントまたは誘導体抗体フォーマットは、本技術分野で公知である。その非限定的な実施形態について後述する。
【０１１４】
一部の実施形態では、本開示の化合物および／または組成物は、抗体またはその断片を含むことができる。他の実施形態では、用語「抗体」は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多特異性抗体（例えば、少なくとも２個のインタクト抗体から形成された二特異性抗体）、および所望の生物活性を示す限りにおいて、ダイアボディ等の抗体断片が挙げられるがこれらに限定されない、様々な実施形態を最も広い意味で指し、これらを特に包含する。抗体は、主にアミノ酸に基づく分子であるが、１個または複数の修飾（糖部分、蛍光部分、化学的タグ等の付加が挙げられるがこれらに限定されない）を含むこともできる。
【０１１５】
全長抗体において、各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書において、ＨＣＶＲまたはＶＨと省略される）および重鎖定常領域で構成されている。重鎖定常領域は、３個のドメインのＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３で構成されている。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書において、ＬＣＶＲまたはＶＬと省略される）および軽鎖定常領域で構成されている。軽鎖定常領域は、１個のドメインのＣＬで構成されている。ＶＨおよびＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と命名されるより保存された領域が散りばめられた、相補性決定領域（ＣＤＲ）と命名される高頻度可変性の領域へとさらに細分することができる。各ＶＨおよびＶＬは、３個のＣＤＲおよび４個のＦＲで構成されており、これらは、アミノ末端からカルボキシ末端へと、次の順序で配置されている：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。免疫グロブリン分子は、いずれの型（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）またはサブクラスのものであってもよい。
【０１１６】
用語、抗体の「抗原結合部分」（または単純に「抗体部分」）は、本明細書において、抗原（例えば、ｈＧＤＦ１１）に特異的に結合する能力を保持する抗体の１個または複数の断片を指す。抗体の抗原結合機能が、全長抗体の断片によって実行され得ることが示された。このような抗体の実施形態は、二特異性、二重特異性または多特異性フォーマットとなることもできる；これらは、２種またはそれよりも多くの異なる抗原に特異的に結合する。多特異性、二重特異性および二特異性抗体構築物は、本技術分野で周知であり、Kontermann（編）Bispecific  Antibodies、Springer、NY（２０１１年）およびSpiessら、Mol.  Immunol.６７巻（２号）：９６〜１０６頁（２０１５年）に記載および特徴付けされている。
【０１１７】
用語、抗体の「抗原結合部分」の内に包含される結合断片の例として、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる一価断片である、Ｆａｂ断片；（ｉｉ）ヒンジ領域におけるジスルフィド架橋によって連結された２個のＦａｂ断片を含む二価断片である、Ｆ（ａｂ’）２断片；（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；（ｉｖ）抗体単腕のＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片；（ｖ）単一の可変ドメインを含むｄＡｂ断片（参照により本明細書に組み込むWardら（１９８９年）Nature  ３４１巻：５４４〜５４６頁、Winterら、ＰＣＴ公開ＷＯ９０／０５１４４（Ａ１））；ならびに（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。さらに、Ｆｖ断片の２個のドメインであるＶＬおよびＶＨは、別々の遺伝子によってコードされているが、これらは、組換え方法を使用して、ＶＬおよびＶＨ領域が対形成して一価分子を形成した単一のタンパク質鎖として作製することができる、合成リンカーによって接続することができる（単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として公知；例えば、Birdら（１９８８年）Science  ２４２巻：４２３〜４２６頁；およびHustonら（１９８８年）Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA  ８５巻：５８７９〜５８８３頁を参照）。このような単鎖抗体も、用語、抗体の「抗原結合部分」の内に包含されることが意図される。ダイアボディ等、単鎖抗体の他の形態も包含される。ダイアボディは、二価、二特異性抗体であり、それによると、ＶＨおよびＶＬドメインは、単一のポリペプチド鎖において発現されるが、同じ鎖におけるこの２個のドメインの間で対形成させるには短すぎるリンカーを使用することにより、これらのドメインを、別の鎖の相補的ドメインと対形成させ、２個の抗原結合部位を作製する（例えば、Holliger,  P.ら、（１９９３年）Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA  ９０巻：６４４４〜６４４８頁；Poljak,  R.  J.ら（１９９４年）Structure  ２巻：１１２１〜１１２３頁を参照）。このような抗体結合部分は、本技術分野で公知である（KontermannおよびDubel編、Antibody  Engineering（２００１年）Springer-Verlag.  New  York.７９０頁（ＩＳＢＮ３−５４０−４１３５４−５）。
【０１１８】
用語「抗体構築物」は、本明細書において、リンカーポリペプチドまたは免疫グロブリン定常ドメインに連結された、１個または複数の本開示の抗原結合部分を含むポリペプチドを指す。リンカーポリペプチドは、ペプチド結合によって接続された２個またはそれよりも多くのアミノ酸残基を含み、１個または複数の抗原結合部分の連結に使用される。このようなリンカーポリペプチドは、本技術分野で周知である（例えば、Holliger,  P.ら（１９９３年）Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA  ９０巻：６４４４〜６４４８頁；Poljak,  R.  J.ら（１９９４年）Structure  ２巻：１１２１〜１１２３頁を参照）。免疫グロブリン定常ドメインは、重鎖または軽鎖定常ドメインを指す。ヒトＩｇＧ重鎖および軽鎖定常ドメインアミノ酸配列ならびにこれらの機能的変種は、本技術分野で公知である。
【０１１９】
さらに、抗体またはその抗原結合部分は、抗体または抗体部分と１個または複数の他のタンパク質またはペプチドとの共有結合または非共有結合による会合によって形成された、より大型の免疫接着（immunoadhesion）分子の一部であり得る。このような免疫接着分子の例として、四量体ｓｃＦｖ分子を作製するためのストレプトアビジンコア領域の使用（Kipriyanov,  S.  M.ら（１９９５年）Human  Antibodies  and  Hybridomas  ６巻：９３〜１０１頁）、ならびに二価およびビオチン化ｓｃＦｖ分子を作製するためのシステイン残基、マーカーペプチドおよびＣ末端ポリヒスチジンタグの使用（Kipriyanov,  S.  M.ら（１９９４年）Mol.  Immunol.３１巻：１０４７〜１０５８頁）が挙げられる。ＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２断片等、抗体部分は、抗体全体のそれぞれパパインまたはペプシン消化等、従来技法を使用して、抗体全体から調製することができる。さらに、抗体、抗体部分および免疫接着分子は、本明細書に記載されている標準組換えＤＮＡ技法を使用して得ることができる。
【０１２０】
「単離された抗体」は、本明細書において、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体を指すことが意図される（例えば、ｈＧＤＦ１１プロドメイン複合体に特異的に結合する単離された抗体は、ｈＧＤＦ１１プロドメイン複合体以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない）。しかし、ｈＧＤＦ１１プロドメイン複合体に特異的に結合する単離された抗体は、他の種由来のＧＤＦ１１プロドメイン複合体分子等、他の抗原に対し交差反応性を有する場合がある。さらに、単離された抗体は、他の細胞材料および／または化学物質を実質的に含まないことがある。
【０１２１】
用語「ヒト抗体」は、本明細書において、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変および定常領域を有する抗体を含むことが意図される。本開示のヒト抗体は、例えば、ＣＤＲ、特にＣＤＲ３に、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基（例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのランダムもしくは部位特異的突然変異誘発によってまたはｉｎ  ｖｉｖｏでの体細胞突然変異によって導入された突然変異）を含むことができる。しかし、用語「ヒト抗体」は、本明細書において、マウス等、別の哺乳動物種の生殖系列に由来するＣＤＲ配列が、ヒトフレームワーク配列にグラフトされた抗体を含むことは意図されない。
【０１２２】
用語「組換えヒト抗体」は、本明細書において、宿主細胞にトランスフェクトされた組換え発現ベクターを使用して発現された抗体（本開示においてより詳細に記載）、組換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離された抗体（Hoogenboom  H.  R.（１９９７年）TIB  Tech.１５巻：６２〜７０頁；Azzazy  H.およびHighsmith  W.  E.（２００２年）Clin.  Biochem.３５巻：４２５〜４４５頁；Gavilondo  J.  V.およびLarrick  J.  W.（２００２年）BioTechniques  ２９巻：１２８〜１４５頁；Hoogenboom  H.およびChames  P.（２０００年）Immunology  Today  ２１巻：３７１〜３７８頁）、ヒト免疫グロブリン遺伝子に関してトランスジェニックである動物（例えば、マウス）から単離された抗体（例えば、Taylor,  L.  D.ら（１９９２年）Nucl.  Acids  Res.２０巻：６２８７〜６２９５頁；Kellermann  S-A.およびGreen  L.  L.（２００２年）Current  Opinion  in  Biotechnology  １３巻：５９３〜５９７頁；Little  M.ら（２０００年）Immunology  Today  ２１巻：３６４〜３７０頁を参照）、または他のＤＮＡ配列へのヒト免疫グロブリン遺伝子配列のスプライシングが関与する他のいずれかの手段によって調製、発現、作製もしくは単離された抗体等、組換え手段によって調製、発現、作製または単離されたあらゆるヒト抗体を含むことが意図される。このような組換えヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変および定常領域を有する。しかし、ある特定の実施形態では、このような組換えヒト抗体は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ突然変異誘発（または、ヒトＩｇ配列に関してトランスジェニックである動物が使用される場合は、ｉｎ  ｖｉｖｏ体細胞突然変異誘発）に付され、よって、組換え抗体のＶＨおよびＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列ＶＨおよびＶＬ配列に由来し、これに関係するが、ｉｎ  ｖｉｖｏにおけるヒト抗体生殖系列レパートリー内に天然に存在していなくてよい配列である。本開示の一実施形態は、Jermutusら、ＰＣＴ公開番号ＷＯ２００５／００７６９９（Ａ２）に開示されているもの等のヒトＩｇファージライブラリーの使用等が挙げられるがこれらに限定されない、本技術分野で周知の技法を使用して生成することができる、ヒトＧＤＦ１１プロドメイン複合体に結合することができる完全ヒト抗体を提供する。
【０１２３】
用語「キメラ抗体」は、ヒト定常領域に連結されたマウス重鎖および軽鎖可変領域を有する抗体等、ある一種に由来する重鎖および軽鎖可変領域配列、ならびに別の一種に由来する定常領域配列を含む抗体を指す。
【０１２４】
用語「ＣＤＲグラフト抗体」は、マウスＣＤＲのうち１個または複数（例えば、ＣＤＲ３）がヒトＣＤＲ配列に置き換えられている、マウス重鎖および軽鎖可変領域を有する抗体等、ある一種に由来する重鎖および軽鎖可変領域配列を含むが、この配列中、ＶＨおよび／またはＶＬのＣＤＲ領域のうち１個または複数の配列が、別の一種のＣＤＲ配列に置き換えられている抗体を指す。
【０１２５】
用語「ヒト化抗体」は、非ヒト種（例えば、マウス）に由来する重鎖および軽鎖可変領域配列を含むが、この配列中、ＶＨおよび／またはＶＬ配列の少なくとも部分が、より「ヒト様」となる、すなわち、ヒト生殖系列可変配列により類似するように変更されている抗体を指す。ヒト化抗体の一型は、ヒトＣＤＲ配列を非ヒトＶＨおよびＶＬ配列に導入して、対応する非ヒトＣＤＲ配列を置き換えたＣＤＲグラフト抗体である。一実施形態では、ヒト化抗ヒトＧＤＦ１１プロドメイン複合体抗体および抗原結合部分が提供される。このような抗体は、Kasaianら、ＰＣＴ公開番号ＷＯ２００５／１２３１２６（Ａ２）に開示されているもの等、伝統的ハイブリドーマ技術を使用してマウス抗ｈＧＤＦ１１プロドメイン複合体モノクローナル抗体を得て、続いてｉｎ  ｖｉｔｒｏ遺伝子操作を使用してヒト化することによって生成された。
【０１２６】
用語「Ｋａｂａｔナンバリング」、「Ｋａｂａｔ定義」および「Ｋａｂａｔ標識」は、本明細書で互換的に使用されている。本技術分野で認識されているこれらの用語は、抗体またはその抗原結合部分の重鎖および軽鎖可変領域における他のアミノ酸残基よりも可変的な（すなわち、高頻度可変的な）アミノ酸残基をナンバリングするシステムを指す（Kabatら（１９７１年）Ann.  NY  Acad,  Sci.１９０巻：３８２〜３９１頁およびKabat,  E.  A.ら（１９９１年）Sequences  of  Proteins  of  Immunological  Interest、第５版、U.S.  Department  of  Health  and  Human  Services、ＮＩＨ公開番号９１−３２４２）。重鎖可変領域に関して、高頻度可変領域は、ＣＤＲ１はアミノ酸位置３１〜３５、ＣＤＲ２はアミノ酸位置５０〜６５、ＣＤＲ３はアミノ酸位置９５〜１０２に及ぶ。軽鎖可変領域に関して、高頻度可変領域は、ＣＤＲ１はアミノ酸位置２４〜３４、ＣＤＲ２はアミノ酸位置５０〜５６、ＣＤＲ３はアミノ酸位置８９〜９７に及ぶ。
【０１２７】
本明細書において、用語「アクセプター」および「アクセプター抗体」は、フレームワーク領域の１種または複数のアミノ酸配列の少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または１００％をもたらすまたはコードする抗体または核酸配列を指す。一部の実施形態では、用語「アクセプター」は、定常領域（複数可）をもたらすまたはコードする抗体アミノ酸または核酸配列を指す。さらに別の実施形態では、用語「アクセプター」は、フレームワーク領域および定常領域（複数可）の１種または複数をもたらすまたはコードする抗体アミノ酸または核酸配列を指す。特異的な実施形態では、用語「アクセプター」は、フレームワーク領域の１種または複数のアミノ酸配列の少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または１００％をもたらすまたはコードするヒト抗体アミノ酸または核酸配列を指す。本実施形態に従って、アクセプターは、ヒト抗体の１種または複数の特異的な位置において出現しない、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５または少なくとも１０個のアミノ酸残基を含有することができる。アクセプターフレームワーク領域および／またはアクセプター定常領域（複数可）は、例えば、生殖系列抗体遺伝子、成熟抗体遺伝子、機能的抗体（例えば、本技術分野で周知の抗体、開発中の抗体または市販の抗体）に由来し得るまたはこれから得ることができる。
【０１２８】
本明細書において、用語「ＣＤＲ」は、抗体可変配列内の相補性決定領域を指す。重鎖および軽鎖の可変領域のそれぞれに３個のＣＤＲが存在し、これらは、可変領域のそれぞれに対しＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と命名される。用語「ＣＤＲセット」は、本明細書において、抗原に結合することができる単一の可変領域にある３個のＣＤＲの群を指す。これらのＣＤＲの正確な境界は、異なるシステムに従って異なって定義されてきた。Ｋａｂａｔ（Kabatら、Sequences  of  Proteins  of  Immunological  Interest（National  Institutes  of  Health、Bethesda、Md.（１９８７年）および（１９９１年））によって記載されているシステムは、抗体のいずれかの可変領域に適用可能な明確な残基ナンバリングシステムを提供するのみならず、３個のＣＤＲを定義する的確な残基境界も提供する。これらのＣＤＲは、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲと称することができる。Chothiaとその共同研究者ら（ChothiaおよびLesk、J.  Mol.  Biol.１９６巻：９０１〜９１７頁（１９８７年）およびChothiaら、Nature  ３４２巻：８７７〜８８３頁（１９８９年））は、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ内のある特定の小部分（sub-portion）が、アミノ酸配列のレベルで高い多様性を有するにもかかわらず、ほぼ同一のペプチド骨格立体構造の形をとることを見出した。これらの小部分は、Ｌ１、Ｌ２およびＬ３またはＨ１、Ｈ２およびＨ３と命名され、この場合の「Ｌ」および「Ｈ」は、それぞれ軽鎖および重鎖領域を指名する。これらの領域は、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲと称することができ、これは、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲと重複する境界を有する。Ｋａｂａｔ  ＣＤＲと重複するＣＤＲを定義する他の境界は、Padlan（FASEB  J.９巻：１３３〜１３９頁（１９９５年））およびMacCallum（J  Mol  Biol  ２６２巻（５号）：７３２〜４５頁（１９９６年））によって記載されている。さらに他のＣＤＲ境界定義は、上述のシステムの１種に厳密に従わない場合があるにもかかわらず、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲと重複するであろうが、そのような定義は、特定の残基または残基群またはさらにＣＤＲ全体が、抗原結合に有意な影響を与えないという予測または実験による知見を踏まえて短縮または延長され得る。本明細書で使用されている方法は、これらのシステムのいずれかに従って定義されたＣＤＲを利用することができるが、好まれる実施形態は、ＫａｂａｔまたはＣｈｏｔｈｉａ定義されたＣＤＲを使用する。
【０１２９】
本明細書において、用語「正準」残基は、Chothiaら（J.  Mol.  Biol.１９６巻：９０１〜９０７頁（１９８７年）；Chothiaら、J.  Mol.  Biol.２２７巻：７９９頁（１９９２年）、両者共に参照により本明細書に組み込む）によって定義される特定の正準ＣＤＲ構造を定義するＣＤＲまたはフレームワークにおける残基を指す。Chothiaらによると、多くの抗体のＣＤＲの重大な意味を持つ部分は、アミノ酸配列のレベルでの高い多様性にもかかわらず、ほぼ同一のペプチド骨格立体構造（confirmation）を有する。各正準構造は、ループを形成するアミノ酸残基の近接セグメントに対し、主に１セットのペプチド骨格ねじれ角を指定する。
【０１３０】
本明細書において、用語「ドナー」および「ドナー抗体」は、１個または複数のＣＤＲを提供する抗体を指す。ある実施形態では、ドナー抗体は、フレームワーク領域が得られたまたは由来する抗体とは異なる種に由来する抗体である。ヒト化抗体の文脈において、用語「ドナー抗体」は、１個または複数のＣＤＲを提供する非ヒト抗体を指す。
【０１３１】
本明細書において、用語「フレームワーク」または「フレームワーク配列」は、可変領域マイナスＣＤＲの残っている配列を指す。ＣＤＲ配列の正確な定義は、異なるシステムによって決定することができるため、フレームワーク配列の意味は、これに対応して異なる解釈に沿う。６個のＣＤＲ（軽鎖のＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３、ならびに重鎖のＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３）も、軽鎖および重鎖におけるフレームワーク領域を各鎖における４個の小領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）に分け、この場合、ＣＤＲ１はＦＲ１とＦＲ２との間に、ＣＤＲ２はＦＲ２とＦＲ３との間に、ＣＤＲ３はＦＲ３とＦＲ４との間に位置する。ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３またはＦＲ４として特定の小領域を指定することなく、その他によって参照されるフレームワーク領域は、単一の天然起源の免疫グロブリン鎖の可変領域内の組み合わせたＦＲｓを表す。本明細書において、ＦＲは、４個の小領域の１個を表し、ＦＲｓは、フレームワーク領域を構成する４個の小領域のうち２個またはそれよりも多いことを表す。
【０１３２】
ヒト重鎖および軽鎖アクセプター配列は、本技術分野で公知である。一実施形態では、本技術分野で公知のアクセプター配列は、本明細書に開示されている抗体において使用することができる。
【０１３３】
本明細書において、用語「生殖系列抗体遺伝子」または「遺伝子断片」は、特定の免疫グロブリンの発現のための遺伝的再編成および突然変異をもたらす成熟プロセスを受けていない非リンパ系細胞によってコードされる免疫グロブリン配列を指す（例えば、Shapiroら、Crit.  Rev.  Immunol.２２巻（３号）：１８３〜２００頁（２００２年）；Marchalonisら、Adv  Exp  Med.  Biol.４８４巻：１３〜３０頁（２００１年）を参照）。本開示の様々な実施形態によって提供される利点の１つは、生殖系列抗体遺伝子が、成熟抗体遺伝子よりも、その種における個体に特徴的な本質的アミノ酸配列構造を保存する可能性が高く、したがって、この種において治療法として使用されたときに、外来性供給源由来として認識される可能性が低いという認識から生じる。
【０１３４】
本明細書において、用語「鍵となる」残基は、抗体、特にヒト化抗体の結合特異性および／または親和性に影響がより大きい、可変領域内のある特定の残基を指す。鍵となる残基として、次のうち１種または複数が挙げられるがこれらに限定されない：ＣＤＲに隣接する残基、潜在的グリコシル化部位（Ｎ−またはＯ−グリコシル化部位のいずれかであり得る）、稀な残基、抗原と相互作用することができる残基、ＣＤＲと相互作用することができる残基、正準残基、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間の接触残基、Ｖｅｒｎｉｅｒゾーン内の残基、および可変重鎖ＣＤＲ１のＣｈｏｔｈｉａ定義と第１の重鎖フレームワークのＫａｂａｔ定義との間で重複する領域における残基。
【０１３５】
本明細書において、用語「ヒト化抗体」は、目的の抗原に免疫特異的に（immunospecifically）結合し、実質的にヒト抗体のアミノ酸配列を有するフレームワーク（ＦＲ）領域および実質的に非ヒト抗体のアミノ酸配列を有する相補性（complementary）決定領域（ＣＤＲ）を含む、抗体またはそのバリアント、誘導体、アナログもしくは断片である。本明細書において、ＣＤＲの文脈における用語「実質的に」は、非ヒト抗体ＣＤＲのアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有するＣＤＲを指す。ヒト化抗体は、少なくとも１、典型的には２個の可変ドメイン（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ＦａｂＣ、Ｆｖ）の実質的に全てを含み、この可変ドメインでは、ＣＤＲ領域の全てまたは実質的に全てが、非ヒト免疫グロブリンのものに対応し（すなわち、ドナー抗体）、フレームワーク領域の全てまたは実質的に全てが、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである。一実施形態では、ヒト化抗体は、典型的にはヒト免疫グロブリンのものである、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも部分も含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、軽鎖と共に、重鎖の少なくとも可変ドメインの両方を含有する。抗体は、重鎖のＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３およびＣＨ４領域を含むこともできる。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、ヒト化軽鎖のみを含有する。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、ヒト化重鎖のみを含有する。別の実施形態では、ヒト化抗体は、軽鎖のヒト化可変ドメインおよび／またはヒト化重鎖のみを含有する。
【０１３６】
ヒト化抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＥを含む免疫グロブリンのいずれかのクラス、ならびにＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４を限定することなく含むいずれかのアイソタイプから選択することができる。ヒト化抗体は、１を超えるクラスまたはアイソタイプに由来する配列を含むことができ、本技術分野で周知の技法を使用して、特定の定常ドメインを選択して、所望のエフェクター機能を最適化することができる。
【０１３７】
一実施形態では、ヒト化抗体のフレームワークおよびＣＤＲ領域は、親配列に的確に対応している必要はなく、例えば、ドナー抗体ＣＤＲまたはコンセンサスフレームワークは、該部位におけるＣＤＲまたはフレームワーク残基が、ドナー抗体またはコンセンサスフレームワークのいずれかに対応しないような、少なくとも１個のアミノ酸残基の置換、挿入および／または欠失によって突然変異誘発されていてよい。しかし、別の実施形態では、このような突然変異は、大規模ではないであろう。通常、ヒト化抗体残基の少なくとも８０％、８５％、９０％および／または９５％は、親ＦＲおよびＣＤＲ配列のものに対応するであろう。本明細書において、用語「コンセンサスフレームワーク」は、コンセンサス免疫グロブリン配列におけるフレームワーク領域を指す。本明細書において、用語「コンセンサス免疫グロブリン配列」は、関連する免疫グロブリン配列のファミリーにおいて最も高頻度で出現するアミノ酸（またはヌクレオチド）から形成された配列を指す（例えば、Winnaker、From  Genes  to  Clones（Verlagsgesellschaft、Weinheim、Germany  １９８７年を参照）。免疫グロブリンのファミリーにおいて、コンセンサス配列における各位置は、このファミリーにおける該位置に最も高頻度で出現するアミノ酸によって占有される。別の実施形態では、２種のアミノ酸が、等しく高頻度で出現する場合、どちらかがコンセンサス配列に含まれ得る。
【０１３８】
本明細書において、「Ｖｅｒｎｉｅｒ」ゾーンは、FooteおよびWinter（１９９２年、J.  Mol.  Biol.２２４巻：４８７〜４９９頁、参照により本明細書に組み込む）によって記載されている通り、ＣＤＲ構造を調整し、抗原に対する適合性を微調整することができるフレームワーク残基のサブセットを指す。Ｖｅｒｎｉｅｒゾーン残基は、ＣＤＲの根底にある層を形成し、ＣＤＲの構造および抗体の親和性に影響を与え得る。
【０１３９】
用語「多価結合タンパク質」は、２個またはそれよりも多くの抗原結合部位を含む結合タンパク質を表示するように本明細書で使用されている。別の実施形態では、多価結合タンパク質は、３個またはそれよりも多くの抗原結合部位を有するように操作されていてよく、一般に、天然起源の抗体ではない。
【０１４０】
用語「多特異性結合タンパク質」は、２種またはそれよりも多くの関係するまたは無関係の標的に結合することができる結合タンパク質を指す。先に参照した通り、このような抗体構築物は、本技術分野で周知であり、Kontermann（編）Bispecific  Antibodies、Springer、NY（２０１１年）およびSpiessら、Mol.  Immunol.６７巻（２号）：９６〜１０６頁（２０１５年）に記載および特徴付けられている通りのものである。このような二特異性抗体構築物として、ミニボディ（Minibody）、ナノボディ、ダイアボディ、Ｂｉｔｅ、デュオボディ（Duobody）、Ｔａｎｄｅｍａｂ、ノブ・ホール（Knobs-into-holes）Ｉｇ、ＤＡＦ、ＣＴ−Ｉｇ、ＤｕｔａｍＡｂ、ＤＶＤ−Ｉｇ、ＣｏＤＶＤ−Ｉｇ、ＣｏＤＶ−Ｉｇ、ＦＩＴ−Ｉｇ、ＣｒｏｓｓｍＡｂ、ＣｒｏｓｓｆＡｂ、ＳＥＥＤｂｏｄｙ、ＴｒｉｏｍＡｂ、ＬＵＺ−Ｙ、ザイボディ（Zybody）として一般的に公知のものが挙げられるがこれらに限定されない。多特異性結合タンパク質は、本明細書において、２個またはそれよりも多くの抗原結合部位を含む結合タンパク質であり、四価または多価結合タンパク質である。このようなＤＶＤは、単一特異性であり得る、すなわち、１種の抗原に結合することができる、または多特異性であり得る、すなわち、２種またはそれよりも多くの抗原に結合することができる。一部の実施形態では、多特異性抗体は、２個またはそれよりも多くの可変領域が、異なるエピトープに結合する抗体を指す。エピトープは、同じまたは異なる標的に存在し得る。ある特定の実施形態では、多特異性抗体は、同じまたは異なる抗原における２種の異なるエピトープを認識する二特異性抗体である。一部の実施形態では、二特異性抗体は、２種の異なる抗原に結合することができる。このような抗体は典型的に、少なくとも２種の異なる抗体に由来する抗原結合領域を含む。例えば、二特異性モノクローナル抗体（ＢｓＭＡｂ、ＢｓＡｂ）は、２種の異なるモノクローナル抗体の断片で構成された人工タンパク質であり、これにより、ＢｓＡｂが、２種の異なる種類の抗原に結合することを可能にする。一部の実施形態では、結合タンパク質は、多特異性抗体、二重特異性抗体および二特異性抗体であり得る。このような抗体構築物は、本技術分野で周知であり、Kontermann（編）Bispecific  Antibodies、Springer、NY（２０１１年）およびSpiessら、Mol.  Immunol.６７巻（２号）：９６〜１０６頁（２０１５年）に記載および特徴付けられている通りのものである。このような二特異性抗体構築物は、ＧＤＦ１１プロドメイン複合体および第２の標的に結合することができる１個または複数の結合ドメインを含む。一実施形態では、第２の標的は、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ５、ＧＤＦ６、ＧＤＦ７、ＧＤＦ８、ＧＤＦ９、ＧＤＦ１０、ＢＭＰ１０、ＢＭＰ９（ＧＤＦ２）、ｎｏｄａｌ、ＢＭＰ２、ＢＭＰ４、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６、ＢＭＰ８Ａ、ＢＭＰ８Ｂ、ＢＭＰ１５、ＢＭＰ３、ＴＧＦベータ１、ＴＧＦベータ２、ＴＧＦベータ３、インヒビンベータＡ、インヒビンベータＢ、インヒビンベータＣ、インヒビンベータＥ、レフティー１、レフティー２、ＧＤＦ１５、抗ミュラー管（Antimullerian）ホルモン、インヒビンアルファからなる群から選択される。別の実施形態では、第２の標的は、ＣＳＦ１、（ＭＣＳＦ）、ＣＳＦ２（ＧＭ−ＣＳＦ）、ＣＳＦ３（ＧＣＳＦ）、ＦＧＦ２、ＩＦＮ．アルファ．１、ＩＦＮ．ベータ．１、ＩＦＮ．ガンマ．、ヒスタミンおよびヒスタミン受容体、ＩＬ−１．アルファ．、ＩＬ−１．ベータ．、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２．アルファ．、ＩＬ−１２．ベータ．、ＩＬ−１４、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−１９、ＫＩＴＬＧ、ＰＤＧＦＢ、ＩＬ−２Ｒ．アルファ．、ＩＬ−４Ｒ、ＩＬ−５Ｒ．アルファ．、ＩＬ−８Ｒ．アルファ．、ＩＬ−８Ｒ．ベータ．、ＩＬ−１２Ｒ．ベータ．１、ＩＬ−１２Ｒ．ベータ．２、ＧＤＦ１１Ｒ．アルファ．１、ＧＤＦ１１Ｒ．アルファ．２、ＩＬ−１８Ｒ１、ＴＳＬＰ、ＣＣＬ１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２４、ＣＸ３ＣＬ１、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＸＣＬ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＸ３ＣＲ１、ＧＰＲ２、ＸＣＲ１、ＦＯＳ、ＧＡＴＡ３、ＪＡＫ１、ＪＡＫ３、ＳＴＡＴ６、ＴＢＸ２１、ＴＧＦＢ１、ＴＮＦＳＦ６、ＹＹ１、ＣＹＳＬＴＲ１、ＦＣＥＲ１Ａ、ＦＣＥＲ２、ＬＴＢ４Ｒ、ＴＢ４Ｒ２、ＬＴＢＲおよびキチナーゼからなる群から選択される。別の実施形態では、多特異性結合タンパク質は、ＧＤＦ１１およびＩＬ−１．ベータ．、ＧＤＦ１１およびＩＬ−９；ＧＤＦ１１およびＬ−４；ＧＤＦ１１およびＩＬ−５；ＧＤＦ１１およびＩＬ−２５；ＧＤＦ１１およびＴＡＲＣ；ＧＤＦ１１およびＭＤＣ；ＧＤＦ１１およびＭＩＦ；ＧＤＦ１１およびＴＧＦ−．ベータ．；ＧＤＦ１１およびＬＨＲアゴニスト；ＧＤＦ１１およびＣＬ２５；ＧＤＦ１１およびＳＰＲＲ２ａ；ＧＤＦ１１およびＳＰＲＲ２ｂ；またはＧＤＦ１１およびＡＤＡＭ８を認識することができる。別の実施形態では、多特異性結合タンパク質は、ＧＤＦ１１およびＴＮＦ−アルファに結合することができる。
【０１４１】
本明細書において、用語「中和する」は、結合タンパク質が、標的タンパク質に特異的に結合する際の、標的タンパク質の生物活性の中和を指す。一実施形態では、中和結合タンパク質は、ｈＧＤＦ１１プロドメイン複合体へのその結合が、ｈＧＤＦ１１の生物活性の阻害をもたらす中和抗体である。別の実施形態では、中和結合タンパク質は、ｈＧＤＦ１１プロドメイン複合体に結合し、ＧＤＦ１１の生物活性を少なくとも約２０％、４０％、６０％、８０％、８５％またはそれよりも多く低下させる。中和結合タンパク質によるｈＧＤＦ１１プロドメイン複合体の生物活性の阻害は、本技術分野で周知のｈＧＤＦ１１の生物活性の１種または複数の指標を測定することにより評価することができる。
【０１４２】
用語「活性」は、抗原に対する抗体の結合特異性／親和性等の活性を含む。
【０１４３】
用語「エピトープ」は、免疫グロブリンまたはＴ細胞受容体に特異的に結合することができる、いずれかのポリペプチド決定基を含む。ある特定の実施形態では、エピトープ決定基は、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリルまたはスルホニル等、分子の化学活性表面集団を含み、ある特定の実施形態では、特異的な三次元構造特徴および／または特異的な電荷特徴を有することができる。エピトープは、抗体によって結合される抗原の領域である。ある特定の実施形態では、抗体は、タンパク質および／または高分子の複合混合物中のその標的抗原を優先的に認識する場合、抗原に特異的に結合すると言われる。
【０１４４】
用語「表面バイオレイヤー干渉法」は、本明細書において、例えば、Ｆｏｒｔｅ  Ｂｉｏ  Ｏｃｔｅｔシステムを使用した、バイオセンサーマトリックス内のタンパク質濃度の変更の検出によるリアルタイム生体分子特異的相互作用の分析を可能にする光学現象を指す。
【０１４５】
用語「表面プラズモン共鳴法」は、本明細書において、例えば、ＢＩＡｃｏｒｅシステム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ  ＡＢ、Ｕｐｐｓａｌａ、ＳｗｅｄｅｎおよびＰｉｓｃａｔａｗａｙ、Ｎ．Ｊ．）を使用した、バイオセンサーマトリックス内のタンパク質濃度の変更の検出によるリアルタイム生体分子特異的相互作用の分析を可能にする光学現象を指す。さらなる記載については、Jonsson,  U.ら（１９９３年）Ann.  Biol.  Clin.５１巻：１９〜２６頁；Jonsson,  U.ら（１９９１年）Biotechniques  １１巻：６２０〜６２７頁；Johnsson,  B.ら（１９９５年）J.  Mol.  Recognit.８巻：１２５〜１３１頁；およびJohnnson,  B.ら（１９９１年）Anal.  Biochem.１９８巻：２６８〜２７７頁を参照されたい。
【０１４６】
用語「ｋｏｎ」は、本明細書において、本技術分野で公知の通り、抗原へと抗体が会合して抗体／抗原複合体を形成するオンレート定数を指すことが意図される。
【０１４７】
用語「ｋｏｆｆ」は、本明細書において、本技術分野で公知の通り、抗体／抗原複合体から抗体が解離するオフレート定数を指すことが意図される。
【０１４８】
用語「ＫＤ」は、本明細書において、本技術分野で公知の通り、特定の抗体−抗原相互作用の解離定数を指すことが意図される。
【０１４９】
用語「標識された結合タンパク質」は、本明細書において、結合タンパク質の同定をもたらす標識が取り込まれたタンパク質を指す。一実施形態では、標識は、検出可能マーカーである、例えば、放射標識されたアミノ酸の取込み、またはマークされたアビジン（例えば、蛍光マーカーまたは光学的もしくは比色的方法によって検出され得る酵素活性を含有するストレプトアビジン）によって検出され得るビオチニル部分のポリペプチドへの取付けである。ポリペプチドのための標識の例として、次のものが挙げられるがこれらに限定されない：放射性同位元素または放射性核種（例えば、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏおよび１５３Ｓｍ）；蛍光標識（例えば、ＦＩＴＣ、ローダミン、ランタニド蛍光体）、酵素標識（例えば、西洋わさびペルオキシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ）；化学発光マーカー；ビオチニル基；二次レポーターによって認識される既定のポリペプチドエピトープ（例えば、ロイシンジッパーペア配列、二次抗体の結合部位、金属結合ドメイン、エピトープタグ）；およびガドリニウムキレート等の磁性薬剤。
【０１５０】
用語「抗体コンジュゲート」は、治療剤または細胞傷害剤等、第２の化学部分に化学的に連結された抗体等、結合タンパク質を指す。用語「薬剤」は、化合物、化合物の混合物、生体高分子、または生体材料から作製された抽出物を表示するように本明細書で使用されている。別の実施形態では、治療剤または細胞傷害剤として、百日咳毒素、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、エチジウムブロマイド、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テニポシド（tenoposide）、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラセン（anthracin）ジオン、ミトキサントロン、ミスラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロールおよびピューロマイシン、ならびにこれらのアナログまたはホモログが挙げられるがこれらに限定されない。
【０１５１】
用語「結晶」および「結晶化された」は、本明細書において、結晶の形態で存在する抗体またはその抗原結合部分を指す。結晶は、アモルファス固体状態または液晶状態等の他の形態とは別個の、物質の固体状態の一形態である。結晶は、原子、イオン、分子（例えば、抗体等のタンパク質）または分子アセンブリ（例えば、抗原／抗体複合体）の規則的な反復した三次元アレイで構成されている。このような三次元アレイは、本分野で十分に理解されている特異的な数学的関係性に従って配置される。結晶中で反復される基本単位または構成要素は、非対称単位と呼ばれる。明確に規定されたある結晶学的対称性に適合する配置における非対称単位の反復は、結晶の「単位格子」をもたらす。全三次元における規則的並進による単位格子の反復は、結晶をもたらす。Giege,  R.およびDucruix,  A.  Barrett、Crystallization  of  Nucleic  Acids  and  Proteins,  a  Practical  Approach、第２版、２０１〜１６頁、Oxford  University  Press、New  York、N.Y.（１９９９年）を参照されたい。
【０１５２】
本明細書で参照されている用語「ポリヌクレオチド」は、リボヌクレオチドもしくはデオキシヌクレオチド、またはいずれかの種類のヌクレオチドの修飾型のいずれかである、２個またはそれよりも多くのヌクレオチドのポリマー型を意味する。この用語は、ＤＮＡの一本および二本鎖型を含む。
【０１５３】
用語「単離されたポリヌクレオチド」は、本明細書において、その起源のおかげで、「単離されたポリヌクレオチド」が天然で存在するポリヌクレオチドの全体もしくは部分と会合していない；これが天然では連結されていないポリヌクレオチドに作動可能に連結した；またはより大型の配列の一部として天然では出現しない、ポリヌクレオチド（例えば、ゲノム、ｃＤＮＡもしくは合成起源のまたはこれらのいくつかの組合せ）を意味するものとする。
【０１５４】
用語「ベクター」は、本明細書において、自身に連結された別の核酸を輸送することができる核酸分子を指すことが意図される。ベクターの一種は、「プラスミド」であり、これは、追加的なＤＮＡセグメントをその中にライゲーションすることができる環状二本鎖ＤＮＡループを指す。ベクターの別の一種は、ウイルスベクターであり、このベクターでは、追加的なＤＮＡセグメントをウイルスゲノム中にライゲーションすることができる。ある特定のベクターは、それが導入された宿主細胞において自律的に複製することができる（例えば、細菌複製起点を有する細菌ベクターおよびエピソーム哺乳動物ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞への導入後に宿主細胞のゲノムに組み込むことができ、これにより、宿主ゲノムと共に複製される。さらに、ある特定のベクターは、それが操作的に連結された遺伝子の発現を導くことができる。このようなベクターは、本明細書において、「組換え発現ベクター」（または単純に「発現ベクター」）と称される。一般に、組換えＤＮＡ技法において有用な発現ベクターは、プラスミドの形態であることが多い。プラスミドは、ベクターの最も一般的に使用されている形態であるため、本明細書では、「プラスミド」および「ベクター」は、互換的に使用することができる。しかし、本開示は、均等な機能を果たすウイルスベクター（例えば、複製欠損レトロウイルス、アデノウイルスおよびアデノ随伴ウイルス）等、発現ベクターのその他の形態を含むことが意図される。
【０１５５】
用語「作動可能に連結された」は、記載されている構成成分が、それらに意図された様式で機能することが可能な関係性にある並置を指す。コード配列に「作動可能に連結された」制御配列は、制御配列と適合性の条件下で、コード配列の発現が達成されるような仕方でライゲーションされている。「作動可能に連結された」配列は、目的の遺伝子に近接した発現制御配列と、目的の遺伝子を制御するためにトランスでまたは少し離れて作用する発現制御配列の両方を含む。用語「発現制御配列」は、本明細書において、それがライゲーションされたコード配列の発現およびプロセシングをもたらすのに必要なポリヌクレオチド配列を指す。発現制御配列は、適切な転写開始、終結、プロモーターおよびエンハンサー配列；スプライシングおよびポリアデニル化シグナル等、効率的ＲＮＡプロセシングシグナル；細胞質ｍＲＮＡを安定化する配列；翻訳効率を増強する配列（すなわち、コザックコンセンサス配列）；タンパク質安定性を増強する配列；ならびに所望であれば、タンパク質分泌を増強する配列を含む。このような制御配列の性質は、宿主生物に応じて異なる；原核生物において、このような制御配列は一般に、プロモーター、リボソーム結合部位および転写終結配列を含む；真核生物においては、一般に、このような制御配列は、プロモーターおよび転写終結配列を含む。用語「制御配列」は、その存在が発現およびプロセシングに必須である構成成分を含むことが意図され、その存在が有利である追加的な構成成分、例えば、リーダー配列および融合パートナー配列を含むこともできる。発現カセット、ベクター、組換え宿主細胞、ならびに単一のオープンリーディングフレームからの組換えポリタンパク質および前タンパク質の組換え発現およびタンパク質分解プロセシングのための方法（例えば、参照により本明細書に組み込むＷＯ２００７／０１４１６２）を含む、本技術分野で公知の発現ベクターおよび宿主細胞を使用して、本開示のタンパク質構築物を発現させ、精製することができる。
【０１５６】
本明細書で定義されている「形質転換」は、外因的ＤＮＡを宿主細胞に進入させるいずれかのプロセスを指す。形質転換は、本技術分野で周知の様々な方法を使用して、天然または人工条件下で起き得る。形質転換は、原核または真核宿主細胞への外来性核酸配列の挿入のためのいずれか公知の方法に頼ることができる。方法は、形質転換されている宿主細胞に基づき選択され、そのようなものとして、ウイルス感染、エレクトロポレーション、リポフェクションおよび微粒子銃を挙げることができるがこれらに限定されない。このような「形質転換された」細胞は、挿入されたＤＮＡが、自律的に複製するプラスミドまたは宿主染色体の一部のいずれかとして複製することができる、安定に形質転換された細胞を含む。これは、挿入されたＤＮＡまたはＲＮＡを限られた期間一過的に発現する細胞も含む。
【０１５７】
用語「組換え宿主細胞」（または単純に「宿主細胞」）は、本明細書において、外因的ＤＮＡが導入された細胞を指すことが意図される。このような用語が、特定の対象細胞のみならず、このような細胞の後代も指すことが意図されることを理解されたい。突然変異または環境の影響のいずれかにより後継世代においてある一定の修飾が起き得るため、このような後代は、実際には、親細胞と同一でないこともあるが、依然として、本明細書における用語「宿主細胞」の範囲内に含まれる。別の実施形態では、宿主細胞は、生物界のいずれかから選択される原核および真核細胞を含む。別の実施形態では、真核細胞は、原生生物、真菌、植物および動物細胞を含む。別の実施形態では、宿主細胞として、原核細胞株Ｅ．ｃｏｌｉ；哺乳動物細胞株ＣＨＯ、ＨＥＫ２９３およびＣＯＳ；昆虫細胞株Ｓｆ９；ならびに真菌細胞Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅが挙げられるがこれらに限定されない。
【０１５８】
組換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成および組織培養および形質転換（例えば、エレクトロポレーション、リポフェクション）のために、標準技法を使用することができる。酵素反応および精製技法は、製造業者の明細に従って、または本技術分野で一般的に達成される通りに、または本明細書に記載されている通りに行うことができる。前述の技法および手順は、一般に、本技術分野で周知の従来方法に従って、本明細書を通して引用および記述されている様々な一般的なおよびより専門的な参考文献に記載されている通りに行うことができる。例えば、いずれかの目的のために参照により本明細書に組み込む、Sambrookら、Molecular  Cloning:  A  Laboratory  Manual（第２版、Cold  Spring  Harbor  Laboratory  Press、Cold  Spring  Harbor、N.Y.（１９８９年））を参照されたい。
【０１５９】
本技術分野で公知の通りかつ本明細書において、「トランスジェニック生物」は、導入遺伝子を含有する細胞を有する生物であって、生物（またはこの生物の祖先）に導入された導入遺伝子が、この生物において天然では発現されないポリペプチドを発現する生物を指す。「導入遺伝子」は、トランスジェニック生物が生じる細胞のゲノムに安定にかつ作動可能に組み込まれたＤＮＡ構築物であり、トランスジェニック生物の１種または複数の細胞型または組織において、コードされた遺伝子産物の発現を導く。
【０１６０】
用語「調節する」および「モジュレートする」は、互換的に使用されており、本明細書において、目的の分子の活性（例えば、ｈＧＤＦ１１の生物活性）の変化または変更を指す。モジュレーションは、目的の分子のある特定の活性または機能の振幅の増加または減少であり得る。分子の例示的な活性および機能として、結合特徴、酵素活性、細胞受容体活性化およびシグナルトランスダクションが挙げられるがこれらに限定されない。
【０１６１】
それに対応して、用語「モジュレーター」は、本明細書において、目的の分子の活性または機能（例えば、ｈＧＤＦ１１の生物活性）を変化または変更することができる化合物である。例えば、モジュレーターは、モジュレーターの非存在下で観察される活性または機能の振幅と比較して、分子のある特定の活性または機能の振幅の増加または減少を引き起こすことができる。ある特定の実施形態では、モジュレーターは、分子の少なくとも１種の活性または機能の振幅を減少させる阻害剤である。例示的な阻害剤として、タンパク質、ペプチド、抗体、ペプチボディ、炭水化物または有機小分子が挙げられるがこれらに限定されない。ペプチボディは、例えば、ＷＯ０１／８３５２５に記載されている。
【０１６２】
用語「アゴニスト」は、本明細書において、目的の分子に接触されると、アゴニストの非存在下で観察される活性または機能の振幅と比較して、分子のある特定の活性または機能の振幅の増加を引き起こすモジュレーターを指す。ＧＤＦ１１のアゴニストとして、ＧＤＦ１１またはプロＧＤＦ１１に結合するタンパク質（例えば、Ａｂ）、核酸、炭水化物または他のいずれかの分子を挙げることができるがこれらに限定されない。
【０１６３】
用語「アンタゴニスト」または「阻害剤」は、本明細書において、目的の分子に接触されると、アンタゴニストの非存在下で観察される活性または機能の振幅と比較して、分子のある特定の活性または機能の振幅の減少を引き起こすモジュレーターを指す。特定の目的のアンタゴニストは、ＧＤＦ１１の生物学的または免疫学的活性を遮断またはモジュレートするアンタゴニストを含む。ｈＧＤＦ１１プロドメイン複合体のアンタゴニストおよび阻害剤として、潜在型ＧＤＦ１１またはプロＧＤＦ１１に結合するタンパク質（例えば、Ａｂ）、核酸、炭水化物または他のいずれかの分子を挙げることができるがこれらに限定されない。
【０１６４】
本明細書において、用語「有効量」は、障害またはその１種もしくは複数の症状の重症度および／または持続時間の低下または軽快、障害の前進の予防、障害の退縮の誘発、障害に伴う１種または複数の症状の再発、発症、発病または進行の予防、障害の検出、あるいは別の治療法（例えば、予防または治療剤）の予防または治療効果（複数可）の増強または改善に十分な治療法の量を指す。
【０１６５】
用語「試料」は、本明細書において、その最も広い意味で使用されている。「生体試料」は、本明細書において、生き物または以前に生き物であったものに由来するいずれかの含量の物質が挙げられるがこれらに限定されない。このような生き物として、ヒト、マウス、ラット、サル、イヌ、ウサギおよび他の動物が挙げられるがこれらに限定されない。このような物質として、血液、血清、尿、滑液、細胞、臓器、組織、骨髄、リンパ節および脾臓が挙げられるがこれらに限定されない。
タンパク質のＴＧＦβファミリー
【０１６６】
本開示の態様は、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質を提供する。ヒトにはＴＧＦ−ベータファミリーの３３種の異なるメンバーが存在する。メンバーは、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）、インヒビン、アクチビン、増殖分化因子（ＧＤＦ）、ミオスタチン、ｎｏｄａｌ、抗ミュラー管ホルモンおよびレフティータンパク質を限定することなく含む。ＴＧＦ−βファミリーメンバー、関連するシグナル伝達分子とこれらの関係性の総説については、その内容全体を参照により本明細書に組み込む、Massague.、２０００年、Nature  Reviews  Molecular  Cell  Biology.１巻：１６９〜７８頁に見出すことができる。一部の実施形態では、成熟増殖因子は、そのプロドメインと共に単一のポリペプチド鎖として合成される。一部の実施形態では、このようなポリペプチド鎖は、成熟増殖因子からのプロドメインの分離のための切断部位を含むことができる。一部の実施形態では、このような切断部位は、プロタンパク質変換酵素によって認識および切断されるフューリン切断部位である。
【０１６７】
一般に、ＴＧＦ−βファミリーメンバー増殖因子ドメインの間での相同性は、相対的に高い。興味深いことに、プロドメイン相同性は、はるかにより低い。このような相同性の欠如は、ファミリーメンバーの間で異なる増殖因子調節において重要な因子であり得る。場合によっては、プロドメインは、増殖因子ドメインの適正なフォールディングおよび／または二量体形成をガイドすることができる。プロドメインは、場合によっては、潜在型からの増殖因子放出を引き起こす他のシグナルを受け取るまで、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）および／または細胞マトリックスにおける特異的な場所へと増殖因子を導く（分泌後に）上で重要な機能を有することが、ごく最近になって認識された。潜在型からの放出は、高度に局在化された環境において起き得、それによって、増殖因子は、短い距離（例えば、約１個の細胞の直径〜約数個の細胞の直径、約２個の細胞の直径〜約１００個の細胞直径および／または約１０個の細胞の直径〜約１０，０００個の細胞の直径）にわたって作用することができ、ひとたび循環に達したら排除される。一部の増殖因子−プロドメイン複合体は、ホモ二量体として分泌される。一部の実施形態では、プロドメイン増殖因子複合体は、ヘテロ二量体として分泌され得る。
【０１６８】
本明細書において、用語「ＴＧＦ−β関連タンパク質」は、ＴＧＦ−βアイソフォーム、ＴＧＦ−βファミリーメンバーまたはＴＧＦ−βファミリーメンバー関連タンパク質を指す。ＴＧＦ−βファミリーメンバーとして、表１〜６に収載されているもののいずれかを挙げることができるがこれらに限定されない。そのようなものとして、ＴＧＦ−βタンパク質、ＢＭＰ、ミオスタチン、ＧＤＦおよびインヒビンが挙げられるがこれらに限定されない。本発明の態様は、増殖因子シグナル伝達に関する細胞活性を特徴付けおよび／またはモジュレートするためのツールおよび／または方法を提供する。他の実施形態では、本発明のツールは、１種または複数のＴＧＦ−β関連タンパク質の１種または複数の構成成分を含む抗原を含むことができる。一部のツールは、本発明の抗原に対する抗体を含むことができる。追加的な実施形態では、本発明のツールは、ＴＧＦ−β関連タンパク質の検出および／または特徴付け、ＴＧＦ−β関連タンパク質に対する抗体の検出および／または特徴付け、および／または細胞活性および／またはＴＧＦ−β関連タンパク質に関するその細胞シグナル伝達の検出および／または特徴付けのためのアッセイを含むことができる。
【０１６９】
増殖因子活性および／またはレベルのモジュレーションのための化合物が本明細書に記載されている。このような増殖因子は、いくつかの細胞および発生上の活性に関与するＴＧＦ−βファミリーメンバータンパク質である増殖分化因子（ＧＤＦ）タンパク質を含む。本発明の一部は、ＧＤＦ調節性抗体、ならびにこのような抗体を生成、最適化および使用するための方法を提供する。さらに別の抗体は、特異的複合体形成の部位のみで出現する増殖因子活性モジュレーションを可能にする、様々な増殖因子複合体の間を区別することができるＧＤＦ調節性抗体を含む。
【０１７０】
一部の実施形態では、本発明は、ＧＤＦ−１１調節性抗体を提供する。このような抗体は、ＧＤＦ−１１  ＧＰＣ、ＧＤＦ−１１プロドメイン、増殖因子、またはＧＤＦ−１１増殖因子を含む複合体に結合し、ＧＤＦ−１１増殖因子活性を活性化または阻害することができる。場合によっては、これらの抗体は、ＧＤＦ−１１に特異的であり、ＧＤＦ−８増殖因子活性における影響が低下しているまたは全くない。
【０１７１】
多くのＴＧＦ−βファミリーメンバータンパク質は、プロドメインと併せて合成される。一部のプロドメインは、切断後に増殖因子との会合を維持することができる。このような会合は、細胞シグナル伝達のための増殖因子の利用能をモジュレートする潜在型増殖因子−プロドメイン複合体（ＧＰＣ）を形成することができる。増殖因子は、１種または複数の細胞外タンパク質との会合により、ＧＰＣ中の潜在型から放出され得る。場合によっては、増殖因子放出は、細胞外タンパク質相互作用によりＧＰＣに加えられる力に頼ることがある。このような力は、ＧＰＣのＣ末端および／またはＮ末端領域から引き、会合した増殖因子の放出をもたらすことができる。
【０１７２】
一部のＴＧＦ−βファミリーメンバーにおいて、ＧＰＣのプロドメイン部分は、増殖因子保持および保持された増殖因子とその受容体との相互作用遮断の原因となる。そこに結合した増殖因子が、シグナル伝達活性を促進することができないこのようなＧＰＣは、本明細書において、「潜在型複合体」とも称される。増殖因子シグナル伝達活性を遮断するように機能するＧＰＣのプロドメイン部分は、潜在関連ペプチド（ＬＡＰ）と称される。ＴＧＦ−β１、２および３は、ＬＡＰを含むことが公知である。ＧＤＦプロドメインも、増殖因子活性を遮断するように機能する。一部のプロドメインは、ＬＡＰ様ドメインを含むことができる。本明細書において、用語「ＬＡＰ様ドメイン」は、ＧＰＣのプロドメイン部分、および／またはＬＡＰと構造的に類似したもしくは類似の様式で合成されたが、増殖因子／受容体相互作用を防止するように機能しない場合がある、遊離プロドメインを指す。
【０１７３】
一部の実施形態では、増殖因子二量体は、プロドメインモジュールと会合して、ＧＰＣを形成することができる。一部の実施形態では、ＧＰＣは、増殖因子シグナル伝達、分泌、潜在型および／または潜在型ＧＰＣからの放出の異なる態様に必要なタンパク質モジュールを含む。本明細書において、用語「タンパク質モジュール」は、タンパク質のいずれかの構成成分、領域および／または特色を指す。タンパク質モジュールは、１個または複数のアミノ酸を含む長さが変動し得る。タンパク質モジュールは、約２アミノ酸残基の長さ〜約５０アミノ酸残基の長さ、約５アミノ酸残基の長さ〜約７５アミノ酸残基の長さ、約１０アミノ酸残基の長さ〜約１００アミノ酸残基の長さ、約２５アミノ酸残基の長さ〜約１５０アミノ酸残基の長さ、約１２５アミノ酸残基の長さ〜約２５０アミノ酸残基の長さ、約１７５アミノ酸残基の長さ〜約４００アミノ酸残基の長さ、約２００アミノ酸残基の長さ〜約５００アミノ酸残基の長さ、および／または少なくとも５００アミノ酸残基の長さであり得る。
【０１７４】
一部の実施形態では、タンパク質モジュールは、公知の機能的特色を有する１種または複数の領域（例えば、タンパク質結合ドメイン、核酸結合ドメイン、疎水性ポケット等）を含む。タンパク質モジュールは、増殖因子シグナル伝達、分泌、潜在型および／または潜在型立体構造からの放出の異なる態様に必要な機能的タンパク質ドメインを含むことができる。
【０１７５】
一部の実施形態では、プロドメインは、ＧＰＣにおける増殖因子と会合することができる。一部のプロドメインは、１個または複数の細胞受容体との増殖因子会合を立体的に防止することができる。プロドメインは、アーム領域および／またはストレートジャケット領域を含むことができる。一部のプロドメインは、本明細書において「ボウタイ（bowtie）領域」と称されるＣ末端領域を含むことができる。一部のプロドメイン二量体において、各単量体のボウタイ領域は、会合および／または相互作用することができる。このような会合は、ＴＧＦ−βアイソフォームＬＡＰの単量体間に見出される通り、ジスルフィド結合形成を含むことができる。
【０１７６】
一部の実施形態では、アーム領域は、トリガー（trigger）ループ領域を含むことができる。トリガーループは、インテグリンと会合する領域を含むことができる。このような領域は、ＲＧＤ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ）を含むアミノ酸配列を含むことができる。ＲＧＤ配列を含む領域は、本明細書において、ＲＧＤ配列領域と称される。一部の実施形態では、プロドメインは、潜在型ループ（本明細書において、潜在型ラッソ（lasso）とも称される）を含む。一部の潜在型ループは、ＧＰＣ内に存在するプロドメインと増殖因子との間の会合を維持することができる。プロドメインは、ファスナー（fastener）領域を含むこともできる。このようなファスナー領域は、増殖因子保持を促進するプロドメイン立体構造を維持することにより、ＧＰＣ内に存在するプロドメインと増殖因子との間の会合を促進することができる。
【０１７７】
場合によっては、ＧＰＣは、結合した増殖因子の解離および増殖因子活性を促進するために酵素による切断を要求することがある。このような酵素による切断事象は、本明細書において、「活性化切断」事象と称される。ＧＰＣの活性化切断は、一部の事例では、ＢＭＰ−１／トロイド様プロテイナーゼ（Ｂ／ＴＰ）ファミリーのメンバーによって実行され得る（その内容全体を参照により本明細書に組み込む、Muirら、２０１１年、J  Biol  Chem.２８６巻（４９号）：４１９０５〜１１頁）。このようなメタロプロテイナーゼ（metaloproteinase）として、ＢＭＰ−１、哺乳動物トロイドタンパク質（ｍＴＬＤ）、哺乳動物トロイド様１（ｍＴＬＬ１）および哺乳動物トロイド様２（ｍＴＬＬ２）を挙げることができるがこれらに限定されない。このようなメタロプロテイナーゼによる活性化切断に付すことができる例示的なＧＰＣとして、ＧＤＦ−８およびＧＤＦ−１１を挙げることができるがこれらに限定されない。場合によっては、ＧＤＦ−８は、ｍＴＬＬ２によって切断され得る。場合によっては、活性化切断は、細胞内で起き得る。場合によっては、活性化切断は、細胞外で起き得る。
【０１７８】
ＧＰＣからの増殖因子放出は、プロタンパク質変換酵素による切断と、続く活性化切断［例えば、ＢＭＰ−１／トロイド様プロテイナーゼ（Ｂ／ＴＰ）ファミリーの１種または複数のメンバーによる］を要求することがある。一例では、ＧＤＦ−８およびＧＤＦ−１１  ＧＰＣは、フューリン切断によって潜在型複合体へと変換され得、これは、増殖因子放出のためにＢＭＰ／トロイドプロテアーゼによる切断をさらに要求する。
【０１７９】
一部の実施形態では、本発明は、Ｂ／ＴＰファミリーの１種または複数のメンバーを阻害するポリペプチド阻害剤（例えば、抗体）を提供する。このような阻害剤は、１種または複数の潜在型複合体（例えば、ＧＤＦ−８潜在型複合体および／またはＧＤＦ−１１潜在型複合体）におけるＢＭＰ／トロイド切断部位が挙げられるがこれらに限定されない、ＢＭＰ−１／トロイド切断部位の切断を遮断することができる。
【０１８０】
場合によっては、活性化切断は、結合した増殖因子の解離をもたらさないことがあるが、その代わりに、ＧＰＣの活性立体構造を促進することがある。本明細書において、ＧＰＣを参照する場合、用語「活性立体構造」は、増殖因子が、受容体相互作用に関与することを可能にするＧＰＣタンパク質立体構造（confirmation）を指す。このようなシナリオは、プロＢＭＰ−７およびプロＢＭＰ−９により予測された（これらそれぞれの内容全体を参照により本明細書に組み込む、Sengle,  G.ら、２００８年、JMB.３８１巻：１０２５〜３９頁およびMiら、２０１５年、PNAS.１１２巻（１２号）：３７１０〜５頁）。一部の実施形態では、本発明は、活性立体構造を特異的に標的として、増殖因子活性をモジュレートする抗体を提供する。
【０１８１】
ＧＤＦ−１１  ＧＰＣの活性立体構造は、本明細書において、「プライミングされた」複合体と称され、フューリン切断部位およびＢＭＰ／トロイド切断部位におけるＧＰＣの連続的切断によって産生することができる。潜在型ＧＰＣとは異なり、プライミングされた複合体（複合体全体または複合体の部分のいずれか）は、受容体に結合し、受容体シグナル伝達をもたらすことができる。場合によっては、プロドメインは、受容体結合および／またはシグナル伝達活性後に、増殖因子から解離され得る。場合によっては、プロドメインは、受容体結合および／またはシグナル伝達活性後に、増殖因子との会合を維持することができる。場合によっては、プロドメインは、受容体結合および／またはシグナル伝達活性の際に、増殖因子から部分的に解離されるようになることができる。
【０１８２】
場合によっては、プライミングされた複合体は、１種または複数の受容体に、１種または複数の他の受容体よりも優先的に結合することができる。場合によっては、プライミングされた複合体の相互作用に起因する受容体活性は、過剰なプロドメインまたはその断片によってクエンチまたは競合され得る。
【０１８３】
一部の実施形態では、本発明は、潜在型複合体からのプライミングされた複合体の形成を遮断するポリペプチド阻害剤（例えば、阻害抗体）を提供する。場合によっては、このような阻害剤は、潜在型ＧＰＣ（例えば、潜在型ＧＤＦ−１１）におけるＢＭＰ／トロイド切断部位に結合する。一部の実施形態では、このような阻害剤は、ＢＭＰ／トロイド切断部位の切断を防止する。
【０１８４】
ストレートジャケット領域は、アルファ１ヘリックス領域を含むことができる。一部の実施形態では、アルファ１ヘリックス領域は、増殖因子単量体間に位置することができる。一部のアルファ１ヘリックス領域は、プロドメインのＮ末端領域を含む。アルファ１ヘリックス領域は、細胞外会合のためのＮ末端領域を含むこともできる。このような細胞外会合は、細胞外マトリックスタンパク質および／または細胞外マトリックスに会合したタンパク質を含むことができる。一部の細胞外会合は、ＬＴＢＰ（例えば、ＬＴＢＰ１、ＬＴＢＰ２、ＬＴＢＰ３および／またはＬＴＢＰ４）、フィブリリン（例えば、フィブリリン−１、フィブリリン−２、フィブリリン−３および／またはフィブリリン−４）、パールカン、デコリンおよび／またはＧＡＳＰを挙げることができるがこれらに限定されないタンパク質との会合を含むことができる。Ｎ末端細胞外会合は、システイン残基間のジスルフィド結合を含むことができる。場合によっては、細胞外マトリックスタンパク質および／または細胞外（extraceullar）マトリックスと会合したタンパク質は、Ｎ末端領域以外のプロドメインの１個または複数の領域との結合または相互作用を含むことができる。
【０１８５】
一部の実施形態では、増殖因子ドメインは、１個または複数の増殖因子単量体を含む。一部の増殖因子ドメインは、増殖因子二量体を含む。このような増殖因子ドメインは、増殖因子ホモ二量体またはヘテロ二量体（異なるＴＧＦ−β関連タンパク質由来の増殖因子単量体を含む）を含むことができる。一部の増殖因子ドメインは、フィンガー領域を含むことができる。このようなフィンガー領域は、β−プリーツシートを含むことができる。フィンガー領域は、プロドメインと会合することができる。一部のフィンガー領域は、増殖因子ドメインとプロドメインとの間の会合を維持することができる。
【０１８６】
一部の実施形態では、本発明の組換えタンパク質は、増殖分化因子（ＧＤＦ）タンパク質由来のタンパク質モジュールを含むことができる。このようなＧＤＦタンパク質モジュールは、表２または４に収載されているタンパク質モジュールおよび／またはアミノ酸配列を含むことができる。一部の実施形態では、本発明のタンパク質モジュールは、表２または４における配列に類似したアミノ酸配列を含むことができるが、収載されている配列に追加的なまたはより少ないアミノ酸を含むことができる。このようなアミノ酸配列のいくつかは、Ｎ末端および／またはＣ末端側の端に、さらに約１個多いもしくは少ないアミノ酸、さらに約２個多いもしくは少ないアミノ酸、さらに約３個多いもしくは少ないアミノ酸、さらに約４個多いもしくは少ないアミノ酸、さらに約５個多いもしくは少ないアミノ酸、さらに約６個多いもしくは少ないアミノ酸、さらに約７個多いもしくは少ないアミノ酸、さらに約８個多いもしくは少ないアミノ酸、さらに約９個多いもしくは少ないアミノ酸、さらに約１０個多いもしくは少ないアミノ酸、またはさらに１０個超多いもしくは少ないアミノ酸を含むことができる。
【０１８７】
一部の実施形態では、本発明の組換えタンパク質は、アクチビンサブユニット由来のタンパク質モジュールを含むことができる。このようなタンパク質モジュールは、表４に収載されている、アクチビンサブユニットインヒビンベータＡのタンパク質モジュールおよび／またはアミノ酸配列を含むことができる。一部の実施形態では、本発明のタンパク質モジュールは、表４における配列に類似したアミノ酸配列を含むことができるが、収載されている配列に追加的なまたはより少ないアミノ酸を含むことができる。このようなアミノ酸配列のいくつかは、Ｎ末端および／またはＣ末端側の端に、さらに約１個多いもしくは少ないアミノ酸、さらに約２個多いもしくは少ないアミノ酸、さらに約３個多いもしくは少ないアミノ酸、さらに約４個多いもしくは少ないアミノ酸、さらに約５個多いもしくは少ないアミノ酸、さらに約６個多いもしくは少ないアミノ酸、さらに約７個多いもしくは少ないアミノ酸、さらに約８個多いもしくは少ないアミノ酸、さらに約９個多いもしくは少ないアミノ酸、さらに約１０個多いもしくは少ないアミノ酸、またはさらに１０個超多いもしくは少ないアミノ酸を含むことができる。
ヒトＧＤＦ１１プロドメイン複合体に結合する結合タンパク質
【０１８８】
本開示の一態様は、単離された抗体である、抗体またはその部分を提供する。本開示の一態様は、高い親和性、遅いオフレートおよび高い中和能力で、ＧＤＦ１１プロドメイン複合体に結合する、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合部分を提供する。本開示の別の態様は、ｈＧＤＦ１１プロドメイン複合体に特異的に結合する抗体を提供する。本開示の別の態様は、ＧＤＦ１１プロドメイン複合体に結合する完全ヒト抗体を提供する。本開示の別の態様は、ＧＤＦ１１プロドメイン複合体に結合するマウス抗体を提供する。本開示の別の態様は、ＧＤＦ１１プロドメイン複合体に結合するキメラ抗体を提供する。本開示の別の態様は、ＧＤＦ１１プロドメイン複合体に結合するヒト化抗体またはその抗原結合部分を提供する。一実施形態では、抗体またはその部分は、ｈＧＤＦ１１プロドメイン複合体に特異的に結合する。別の実施形態では、本開示の抗体は、中和ヒト抗ＧＤＦ１１抗体である。より詳細には、本開示の抗体は、中和ヒト抗ｈＧＤＦ１１抗体である。
Ａ．抗ＧＤＦ１１抗体を作製する方法
【０１８９】
本開示の抗体は、本技術分野で公知のいくつかの技法のいずれかにより作製することができる。
組換え抗体ライブラリーを使用した抗ＧＤＦ１１プロドメイン複合体モノクローナル抗体
【０１９０】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ方法を使用して、本開示の抗体を作製することができ、それによると、抗体ライブラリーをスクリーニングして、ＧＤＦ１１に対する所望の結合特異性を有する抗体を同定する。組換え抗体ライブラリーのこのようなスクリーニングのための方法は、本技術分野で周知であり、例えば、これらそれぞれの内容を参照により本明細書に組み込む、Ladnerら、米国特許第５，２２３，４０９号；Kangら、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／１８６１９；Dowerら、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９１／１７２７１；Winterら、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／２０７９１；Marklandら、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／１５６７９；Breitlingら、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９３／０１２８８；McCaffertyら、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／０１０４７；Garrardら、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／０９６９０；Fuchsら（１９９１年）Bio/Technology  ９巻：１３７０〜１３７２頁；Hayら（１９９２年）Hum  Antibod  Hybridomas  ３巻：８１〜８５頁；Huseら（１９８９年）Science  ２４６巻：１２７５〜１２８１頁；McCaffertyら、Nature（１９９０年）３４８巻：５５２〜５５４頁；Griffithsら（１９９３年）EMBO  J.１２巻：７２５〜７３４頁；Hawkinsら（１９９２年）J  Mol  Biol  ２２６巻：８８９〜８９６頁；Clacksonら（１９９１年）Nature  ３５２巻：６２４〜６２８頁；Gramら（１９９２年）PNAS  ８９巻：３５７６〜３５８０頁；Garradら（１９９１年）Bio/Technology  ９巻：１３７３〜１３７７頁；Hoogenboomら（１９９１年）Nuc  Acid  Res  １９巻：４１３３〜４１３７頁；およびBarbasら（１９９１年）PNAS  ８８巻：７９７８〜７９８２頁、米国特許出願公開第２００３０１８６３７４号およびＰＣＴ公開番号ＷＯ９７／２９１３１に記載されている方法を含む。
【０１９１】
下に記載する次表（表１〜６）は、本開示に従って使用することができる、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質と、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質、非ヒトＴＧＦβファミリーメンバータンパク質およびキメラタンパク質のタンパク質モジュールの（例えば、本明細書に提供されているタンパク質モジュールの）アミノ酸配列を含む。本明細書に提供されているアミノ酸配列が、限定を目的としておらず、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質の追加的な配列も、本開示の範囲内であることが認められよう。本開示および本技術分野の知識を考慮すれば、追加的なＴＧＦβファミリーメンバータンパク質とそのドメインの配列は、当業者に明らかとなるはずである。
【表１】
2018527903.tif 000003
表１における推定プロタンパク質変換酵素切断部位に下線を引き、太字で示す。
【表２】
2018527903.tif 000004
【表３−１】
2018527903.tif 000005
【表３−２】
2018527903.tif 000006
【表４−１】
2018527903.tif 000007
【表４−２】
2018527903.tif 000008
【表５−１】
2018527903.tif 000009
【表５−２】
2018527903.tif 000010
【表５−３】
2018527903.tif 000011
【表５−４】
2018527903.tif 000012
【表５−５】
2018527903.tif 000013
【表６】
2018527903.tif 000014
【０１９２】
ヒトプロＧＤＦ１１に結合するように設計された抗体を、ヒトプロＧＤＦ１１（配列番号８２）；ヒト潜在型ＧＤＦ１１（配列番号８２）；マウスプロＧＤＦ１１（配列番号９７）；マウス潜在型ＧＤＦ１１（配列番号９７）；ヒトプロミオスタチン（配列番号８３）；マウスプロミオスタチン（配列番号９３）；ヒト潜在型ミオスタチン（配列番号８３）；マウス潜在型ミオスタチン（配列番号９３）；ヒトＧＤＦ１１  ＡＲＭ８プロドメイン（配列番号１２４）；ヒトプロＧＤＦ１１  ＡＲＭ８（配列番号１２２）；ヒト成熟ＧＤＦ１１（配列番号９０）への結合に関して検査した。
【０１９３】
組換え抗体ライブラリーは、ＧＤＦ１１もしくはＧＤＦ１１プロドメイン複合体、またはＧＤＦ１１もしくはＧＤＦ１１プロドメイン複合体の部分により免疫化された対象に由来することができる。あるいは、組換え抗体ライブラリーは、ヒトＧＤＦ１１プロドメイン複合体により免疫化されていないヒト対象由来のヒト抗体ライブラリー等、無感作（naive）対象、すなわち、ＧＤＦ１１プロドメイン複合体により免疫化されていない対象に由来することができる。本開示の抗体は、ヒトＧＤＦ１１プロドメイン複合体を含むペプチドにより組換え抗体ライブラリーをスクリーニングすることにより選択され、これにより、ＧＤＦ１１プロドメイン複合体を認識する抗体を選択する。このようなスクリーニングおよび選択を行うための方法は、先の段落の参考文献に記載されているもの等、本技術分野で周知である。特定のｋｏｆｆ速度定数でヒトＧＤＦ１１プロドメイン複合体から解離する抗体等、ｈＧＤＦ１１プロドメイン複合体に対する特定の結合親和性を有する本開示の抗体を選択するために、本技術分野で公知の表面バイオレイヤー干渉方法を使用して、所望のｋｏｆｆ速度定数を有する抗体を選択することができる。特定のＩＣ５０を有する抗体等、ｈＧＤＦ１１プロドメイン複合体に対する特定の中和活性を有する本開示の抗体を選択するために、ｈＧＤＦ１１プロドメイン複合体活性の阻害を評価するための本技術分野で公知の標準方法を使用することができる。
【０１９４】
一態様では、本開示は、ヒトＧＤＦ１１プロドメイン複合体に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分に関係する。別の実施形態では、抗体は、中和抗体である。様々な実施形態では、抗体は、組換え抗体またはモノクローナル抗体である。
【０１９５】
例えば、本開示の結合タンパク質（例えば、抗体またはその抗原結合部分）は、本技術分野で公知の様々なファージディスプレイ方法を使用して生成することができる。ファージディスプレイ方法において、機能的抗体ドメインは、これをコードするポリヌクレオチド配列を保有するファージ粒子の表面にディスプレイされる。特に、このようなファージを利用して、レパートリーまたはコンビナトリアル抗体ライブラリー（例えば、ヒトまたはマウス）から発現された抗原結合ドメインをディスプレイすることができる。目的の抗原に結合する抗原結合ドメインを発現するファージは、抗原により、例えば、標識された抗原または固体表面もしくはビーズに結合もしくは捕捉された抗原を使用して選択または同定することができる。これらの方法において使用されるファージは典型的に、ファージ遺伝子ＩＩＩまたは遺伝子ＶＩＩＩタンパク質のいずれかへと組換えにより融合されたＦａｂ、Ｆｖまたはジスルフィド安定化されたＦｖ抗体ドメインを有するファージから発現されるｆｄおよびＭ１３結合ドメインを含む、繊維状ファージである。本開示の抗体の作製に使用することができるファージディスプレイ方法の例として、これらそれぞれの全体を参照により本明細書に組み込む、Brinkmanら、J.  Immunol.  Methods  １８２巻：４１〜５０頁（１９９５年）；Amesら、J.  Immunol.  Methods  １８４巻：１７７〜１８６頁（１９９５年）；Kettleboroughら、Eur.  J.  Immunol.２４巻：９５２〜９５８頁（１９９４年）；Persicら、Gene  １８７巻、９〜１８頁（１９９７年）；Burtonら、Advances  in  Immunology  ５７巻：１９１〜２８０頁（１９９４年）；ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＧＢ９１／０１１３４；ＰＣＴ公開ＷＯ９０／０２８０９；ＷＯ９１／１０７３７；ＷＯ９２／０１０４７；ＷＯ９２／１８６１９；ＷＯ９３／１１２３６；ＷＯ９５／１５９８２；ＷＯ９５／２０４０１；ならびに米国特許第５，６９８，４２６号；同第５，２２３，４０９号；同第５，４０３，４８４号；同第５，５８０，７１７号；同第５，４２７，９０８号；同第５，７５０，７５３号；同第５，８２１，０４７号；同第５，５７１，６９８号；同第５，４２７，９０８号；同第５，５１６，６３７号；同第５，７８０，２２５号；同第５，６５８，７２７号；同第５，７３３，７４３号および同第５，９６９，１０８号に開示されている方法が挙げられる。
【０１９６】
上述の参考文献に記載されている通り、ファージ選択の後に、ファージから抗体コード領域を単離し、ヒト抗体を含む抗体全体または他のいずれかの所望の抗原結合性断片の生成に使用し、例えば、詳細に後述する、哺乳動物細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母および細菌を含むいずれか所望の宿主において発現させることができる。例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ９２／２２３２４；Mullinaxら、BioTechniques  １２巻（６号）：８６４〜８６９頁（１９９２年）；およびSawaiら、AJRI  ３４巻：２６〜３４頁（１９９５年）；およびBetterら、Science  ２４０巻：１０４１〜１０４３頁（１９８８年）（前記参考文献は、それらの全体を参照により本明細書に組み込む）に開示されている方法等、本技術分野で公知の方法を使用して、Ｆａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）２断片を組換えにより産生するための技法を用いることもできる。単鎖Ｆｖおよび抗体の産生に使用することができる技法の例として、米国特許第４，９４６，７７８号および同第５，２５８，４９８号；Hustonら、Methods  in  Enzymology  ２０３巻：４６〜８８頁（１９９１年）；Shuら、PNAS  ９０巻：７９９５〜７９９９頁（１９９３年）；ならびにSkerraら、Science  ２４０巻：１０３８〜１０４０頁（１９８８年）に記載されている技法が挙げられる。
【０１９７】
ファージディスプレイによる組換え抗体ライブラリーのスクリーニングの代替として、大規模コンビナトリアルライブラリーのスクリーニングのための本技術分野で公知の他の方法論を、本開示の二重特異性抗体の同定に適用することができる。代替発現系の１種は、SzostakおよびRobertsによるＰＣＴ公開番号ＷＯ９８／３１７００ならびにRoberts,  R.  W.およびSzostak,  J.  W.（１９９７年）Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA  ９４巻：１２２９７〜１２３０２頁に記載されている通り、組換え抗体ライブラリーがＲＮＡ−タンパク質融合体として発現される発現系である。この系において、その３’端にペプチジルアクセプター抗生物質であるピューロマイシンを保有する合成ｍＲＮＡのｉｎ  ｖｉｔｒｏ翻訳によって、ｍＲＮＡと、これがコードするペプチドまたはタンパク質との間で共有結合融合体が作製される。よって、二重特異性抗原への抗体またはその部分の結合等、コードされるペプチドまたはタンパク質、例えば、抗体またはその部分の特性に基づき、ｍＲＮＡの複合混合物（例えば、コンビナトリアルライブラリー）から特異的ｍＲＮＡを濃縮することができる。このようなライブラリーのスクリーニングから回収された抗体またはその部分をコードする核酸配列は、上述の組換え手段によって発現させることができ（例えば、哺乳動物宿主細胞において）、さらに、本来選択された配列（複数可）に突然変異が導入されたｍＲＮＡ−ペプチド融合体の追加的なラウンドのスクリーニング、または上述の組換え抗体のｉｎ  ｖｉｔｒｏでの親和性成熟のための他の方法のいずれかによるさらなる親和性成熟に付すことができる。
【０１９８】
別のアプローチにおいて、本開示の抗体は、本技術分野で公知の酵母ディスプレイ方法を使用して生成することもできる。酵母ディスプレイ方法において、遺伝学的方法が使用して、抗体ドメインを酵母細胞壁に繋留し、これを酵母表面にディスプレイする。特に、このような酵母を利用して、レパートリーまたはコンビナトリアル抗体ライブラリー（例えば、ヒトまたはマウス）から発現された抗原結合ドメインをディスプレイすることができる。本開示の抗体の作製に使用することができる酵母ディスプレイ方法の例として、参照により本明細書に組み込むWittrupら、米国特許第６，６９９，６５８号に開示されている方法が挙げられる。
Ｂ．組換えＧＤＦ１１プロドメイン複合体結合タンパク質の産生
【０１９９】
本開示の結合タンパク質（例えば、抗体またはその抗原結合部分）は、本技術分野で公知のいくつかの技法のいずれかによって産生することができる。例えば、宿主細胞からの発現を挙げることができ、この場合、宿主細胞には標準技法によって重鎖および軽鎖をコードする発現ベクター（複数可）がトランスフェクトされている。用語「トランスフェクション」の様々な形態は、原核または真核宿主細胞への外因的ＤＮＡの導入に一般的に使用される多種多様な技法、例えば、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈殿、ＤＥＡＥ−デキストラントランスフェクションその他を包含するように意図される。一実施形態では、原核または真核宿主細胞のいずれかにおいて本開示の結合タンパク質を発現させることが可能である。別の実施形態では、結合タンパク質の発現は、真核細胞におけるものである。別の実施形態では、結合タンパク質の発現は、哺乳動物宿主細胞におけるものであり、その理由として、このような真核細胞（および特に哺乳動物細胞）は、原核細胞よりも、適正にフォールディングされ免疫学的に活性を有する結合タンパク質をアセンブルおよび分泌する可能性が高いことが挙げられる。
【０２００】
組換え結合タンパク質を発現させるための共通の哺乳動物宿主細胞は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）（例えば、R.  J.  KaufmanおよびP.  A.  Sharp（１９８２年）Mol.  Biol.１５９巻：６０１〜６２１頁に記載されているＤＨＦＲ選択可能マーカーと共に使用される、UrlaubおよびChasin（１９８０年）Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA  ７７巻：４２１６〜４２２０頁に記載されているｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞を含む）、ＮＳＯミエローマ細胞、ＣＯＳ細胞およびＨＥＫ２９３細胞、およびＳＰ２細胞を含む。抗体遺伝子をコードする組換え発現ベクターが、哺乳動物宿主細胞に導入されると、宿主細胞における抗体の発現を可能にするのに十分な期間宿主細胞を培養することにより、結合タンパク質が産生される。別の実施形態では、結合タンパク質は、宿主細胞が育成されている培養培地へと分泌される。結合タンパク質は、標準タンパク質精製方法を使用して、培養培地から回収することができる。
【０２０１】
宿主細胞を使用して、Ｆａｂ断片またはｓｃＦｖ分子等、機能的抗体断片を産生することもできる。上述の手順における変種が、本開示の範囲内であることが理解されるであろう。例えば、本開示の抗体の軽鎖および／または重鎖のいずれかの機能的断片をコードするＤＮＡを宿主細胞にトランスフェクトすることが望ましいことがある。組換えＤＮＡ技術を使用して、目的の抗原への結合に必要ない軽鎖および重鎖のいずれか一方または両方をコードするＤＮＡの一部または全体を除去することもできる。このようなトランケートされたＤＮＡ分子から発現される分子も、本開示の抗体によって包含される。加えて、標準化学架橋方法によって第２の抗体へと本開示の抗体を架橋することにより、一方の重鎖および一方の軽鎖が本開示の抗体であり、他方の重鎖および軽鎖が目的の抗原以外の抗原に特異的である、二機能性抗体を産生することができる。
【０２０２】
ある実施形態では、リン酸カルシウム媒介性トランスフェクションにより、抗体重鎖および抗体軽鎖の両方をコードする組換え発現ベクターをｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞に導入することができる。組換え発現ベクター内では、抗体重鎖および軽鎖遺伝子はそれぞれ、ＣＭＶエンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモーター調節エレメントに操作的に連結されて、遺伝子の高レベルの転写を駆動する。組換え発現ベクターは、メトトレキセート選択／増幅を使用して、ベクターをトランスフェクトされたＣＨＯ細胞の選択を可能にするＤＨＦＲ遺伝子も保有する。選択された形質転換体宿主細胞を培養して、抗体重鎖および軽鎖の発現を可能にし、培養培地からインタクト抗体を回収する。標準分子生物学技法が使用して、組換え発現ベクターを調製し、宿主細胞にトランスフェクトし、形質転換体を選択し、宿主細胞を培養し、培養培地から抗体を回収する。別の実施形態では、本開示は、本開示の組換え抗体が合成されるまで、適した培養培地において本開示の宿主細胞を培養することにより、本開示の組換え抗体を合成する方法を提供する。本方法は、培養培地から組換え抗体を単離するステップをさらに含むことができる。
抗ＧＤＦ１１プロドメイン複合体結合タンパク質：
【０２０３】
一部の実施形態では、本明細書に提供されている結合タンパク質（例えば、抗体またはその抗原結合部分）のいずれかは、ＧＤＦ１１活性を阻害することができる。ＧＤＦ１１に結合する例示的な結合タンパク質および結合タンパク質の断片を下に提示する。
表７は、ＳｃＦｖライブラリーのスクリーニング由来の抗体クローンの省略された配列表である。
【表７−１】
2018527903.tif 000015
【表７−２】
2018527903.tif 000016
【表８−１】
2018527903.tif 000017
【表８−２】
2018527903.tif 000018
各クローンのＣＤＲ配列を表３〜９に収載する：
【表９】
2018527903.tif 000019
【表１０】
2018527903.tif 000020
【表１１】
2018527903.tif 000021
【表１２】
2018527903.tif 000022
【表１３】
2018527903.tif 000023
【表１４】
2018527903.tif 000024
【表１５】
2018527903.tif 000025
一部の実施形態では、配列番号２２、２８、３４、４０、４６、５２および５８のＣＤＲＨ１配列が、代替的に、それぞれ配列番号１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７および１６８のＣＤＲＨ１配列であり得ることが認められよう。
各ＣＤＲ領域のコンセンサス配列は、表１６〜２１に同定されている。表１６〜２１において、コンセンサス配列に存在しないアミノ酸残基は、下線「＿」で示されている。
【表１６】
2018527903.tif 000026
ＣＤＲＨ１コンセンサス配列Ｘ１ＹＸ３Ｘ４Ｘ５（配列番号６４）
（式中、Ｘ１は、Ｄ、ＧまたはＳであり、
Ｘ３は、Ａ、Ｙ、ＧまたはＳであり、
Ｘ４は、Ｍ、ＩまたはＷであり、
Ｘ５は、Ｈ、Ｓ、Ｙ、ＧまたはＮである）
アミノ酸配列Ｘ１ＹＸ３Ｘ４Ｘ５（配列番号７０）を有する、ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−１、ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−２、ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−３およびＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−４を含むＢｉｎ１のＣＤＲＨ１コンセンサス配列
（式中、Ｘ１は、Ｄ、ＧまたはＳであり、
Ｘ３は、Ａ、ＹまたはＧであり、
Ｘ４は、ＭまたはＩであり、
Ｘ５は、ＨまたはＳである）
アミノ酸配列Ｘ１ＹＸ３Ｘ４Ｘ５（配列番号７６）を有する、ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−５およびＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−７を含むＢｉｎ２のＣＤＲＨ１コンセンサス配列
（式中、Ｘ１は、ＧまたはＳであり、
Ｘ３は、ＹまたはＳであり、
Ｘ４は、ＩまたはＭであり、
Ｘ５は、ＹまたはＮである）
【表１７】
2018527903.tif 000027
ＣＤＲＨ２コンセンサス配列Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０ＹＸ１２Ｘ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６Ｘ１７（配列番号６５）
（式中、Ｘ１は、Ｇ、Ｗ、Ｖ、Ｙである、または存在せず、
Ｘ２は、ＩまたはＥであり、
Ｘ３は、Ｓ、Ｎ、ＲまたはＩであり、
Ｘ４は、Ｗ、Ｐ、Ｙ、ＡまたはＳであり、
Ｘ５は、Ｎ、Ｄ、Ｙ、ＨまたはＳであり、
Ｘ６は、Ｓ、ＧまたはＮであり、
Ｘ７は、ＧまたはＳであり、
Ｘ８は、Ｓ、Ｇ、Ｎ、ＤまたはＴであり、
Ｘ９は、Ｉ、ＴまたはＥであり、
Ｘ１０は、Ｇ、ＮまたはＹであり、
Ｘ１２は、ＡまたはＮであり、
Ｘ１３は、Ｄ、ＱまたはＰであり、
Ｘ１４は、ＳまたはＫであり、
Ｘ１５は、Ｖ、ＦまたはＬであり、
Ｘ１６は、ＫまたはＱであり、
Ｘ１７は、Ｇ、ＤまたはＳである）
アミノ酸配列Ｘ１ＩＸ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０ＹＡＸ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６Ｇ（配列番号７１）を有する、ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−１、ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−２、ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−３およびＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−４を含むＢｉｎ１のＣＤＲＨ２コンセンサス配列
（式中、Ｘ１は、Ｇ、ＷまたはＶであり、
Ｘ３は、ＳまたはＮであり、
Ｘ４は、Ｗ、Ｐ、ＹまたはＡであり、
Ｘ５は、Ｎ、ＤまたはＹであり、
Ｘ６は、Ｓ、ＧまたはＮであり、
Ｘ７は、ＧまたはＳであり、
Ｘ８は、Ｓ、ＧまたはＮであり、
Ｘ９は、Ｉ、ＴまたはＥであり、
Ｘ１０は、Ｇ、ＮまたはＹであり、
Ｘ１３は、ＤまたはＱであり、
Ｘ１４は、ＳまたはＫであり、
Ｘ１５は、Ｖ、ＦまたはＬであり、
Ｘ１６は、ＫまたはＱである）
アミノ酸配列Ｘ１ＩＸ３Ｘ４Ｘ５ＳＸ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０ＹＡＸ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６Ｘ１７（配列番号７７）を有する、ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−５およびＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−７を含むＢｉｎ２のＣＤＲＨ２コンセンサス配列
（式中、Ｘ１は、ＷまたはＹであり、
Ｘ３は、ＲまたはＳであり、
Ｘ４は、ＰまたはＳであり、
Ｘ５は、ＮまたはＳであり、
Ｘ７は、ＧまたはＳであり、
Ｘ８は、ＤまたはＴであり、
Ｘ９は、ＴまたはＩであり、
Ｘ１０は、ＮまたはＹであり、
Ｘ１３は、ＱまたはＤであり、
Ｘ１４は、ＫまたはＳであり、
Ｘ１５は、ＦまたはＶであり、
Ｘ１６は、ＱまたはＫであり、
Ｘ１７は、ＤまたはＧである）
【表１８】
2018527903.tif 000028
ＣＤＲＨ３コンセンサス配列Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０Ｘ１１Ｘ１２Ｘ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６Ｘ１７Ｘ１８（配列番号６６）
（式中、Ｘ１は、Ｇである、または存在せず、
Ｘ２は、Ｇである、または存在せず、
Ｘ３は、Ｓ、Ｄである、または存在せず、
Ｘ４は、Ｉ、Ｇである、または存在せず、
Ｘ５は、Ａ、Ｄ、Ｔ、Ｎ、Ｉである、または存在せず、
Ｘ６は、Ｖ、Ｆ、Ｐ、Ｙである、または存在せず、
Ｘ７は、Ａ、Ｗ、Ｐ、Ｄ、Ｙである、または存在せず、
Ｘ８は、Ｇ、Ｓ、Ｌ、Ｉ、Ｖ、Ｄである、または存在せず、
Ｘ９は、Ｔ、Ｇ、Ｗ、Ｌ、Ｓである、または存在せず、
Ｘ１０は、Ｌ、Ｙ、Ｆ、Ｔ、Ｓである、または存在せず、
Ｘ１１は、Ｅ、Ｖ、Ｐ、ＧまたはＳであり、
Ｘ１２は、Ｖ、Ｄ、Ｑ、Ｅ、ＹまたはＷであり、
Ｘ１３は、Ｔ、Ｙ、ＱまたはＥであり、
Ｘ１４は、Ｇ、Ｙ、Ｎ、ＡまたはＤであり、
Ｘ１５は、Ｄ、Ｇ、Ｗ、Ａ、Ｐ、ＹまたはＬであり、
Ｘ１６は、Ｌ、ＭまたはＦであり、
Ｘ１７は、ＤまたはＧであり、
Ｘ１８は、Ｙ、Ｖ、ＰまたはＩである）
アミノ酸配列Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０Ｘ１１Ｘ１２Ｘ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６ＤＸ１８（配列番号７２）を有する、ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−１、ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−２、ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−３およびＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−４を含むＢｉｎ１のＣＤＲＨ３コンセンサス配列
（式中、Ｘ１は、Ｇである、または存在せず、
Ｘ２は、Ｇである、または存在せず、
Ｘ３は、Ｓである、または存在せず、
Ｘ４は、Ｉである、または存在せず、
Ｘ５は、Ａ、Ｄ、Ｔである、または存在せず、
Ｘ６は、Ｖ、Ｆ、Ｐである、または存在せず、
Ｘ７は、Ａ、Ｗ、Ｐである、または存在せず、
Ｘ８は、Ｇ、Ｓ、Ｌである、または存在せず、
Ｘ９は、Ｔ、Ｇ、Ｗである、または存在せず、
Ｘ１０は、Ｌ、Ｙ、Ｆである、または存在せず、
Ｘ１１は、Ｅ、Ｖ、ＰまたはＧであり、
Ｘ１２は、Ｖ、Ｄ、ＱまたはＥであり、
Ｘ１３は、ＴまたはＹであり、
Ｘ１４は、Ｇ、ＹまたはＮであり、
Ｘ１５は、Ｄ、Ｇ、ＷまたはＡであり、
Ｘ１６は、Ｌ、ＭまたはＦであり、
Ｘ１８は、Ｙ、Ｖ、ＰまたはＩである）
アミノ酸配列Ｘ１Ｘ２Ｘ３ＹＸ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８ＧＹＸ１１Ｘ１２Ｘ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｙ（配列番号７８）を有する、ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−５およびＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−７を含むＢｉｎ２のＣＤＲＨ３コンセンサス配列
（式中、Ｘ１は、Ｄである、または存在せず、
Ｘ２は、Ｇである、または存在せず、
Ｘ３は、ＮまたはＩであり、
Ｘ５は、ＤまたはＹであり、
Ｘ６は、ＩまたはＤであり、
Ｘ７は、ＬまたはＳであり、
Ｘ８は、ＴまたはＳであり、
Ｘ１１は、ＱまたはＹであり、
Ｘ１２は、ＡまたはＤであり、
Ｘ１３は、ＰまたはＬであり、
Ｘ１４は、ＬまたはＦであり、
Ｘ１５は、ＧまたはＤである）
【表１９】
2018527903.tif 000029
ＣＤＲＬ１コンセンサス配列Ｘ１ＡＳＱＸ５Ｘ６Ｘ７ＳＸ９ＹＬＸ１２（配列番号６７）
（式中、Ｘ１は、ＲまたはＱであり、
Ｘ５は、Ｆ、Ｄ、Ｓ、ＲまたはＨであり、
Ｘ６は、Ｌ、ＩまたはＶであり、
Ｘ７は、Ｓ、Ｉである、または存在せず、
Ｘ８は、Ｓである、または存在せず、
Ｘ９は、Ｔ、Ｎである、または存在せず、
Ｘ１２は、ＡまたはＮである）
アミノ酸配列Ｘ１ＡＳＱＸ５Ｘ６Ｘ７ＳＸ９ＹＬＸ１２（配列番号７３）を有する、ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−１、ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−２、ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−３およびＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−４を含むＢｉｎ１のＣＤＲＬ１コンセンサス配列
（式中、Ｘ１は、ＲまたはＱであり、
Ｘ５は、Ｆ、ＤまたはＳであり、
Ｘ６は、Ｌ、ＩまたはＶであり、
Ｘ７は、Ｓである、または存在せず、
Ｘ９は、ＴまたはＮであり、
Ｘ１２は、ＡまたはＮである）
アミノ酸配列ＲＡＳＱＸ５Ｘ６Ｘ７ＳＸ９ＹＬＸ１２（配列番号７９）を有する、ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−５およびＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−７を含むＢｉｎ２のＣＤＲＬ１コンセンサス配列
（式中、Ｘ５は、ＲまたはＳであり、
Ｘ６は、ＶまたはＩであり、
Ｘ７は、ＩまたはＳであり、
Ｘ９は、Ｎである、または存在せず、
Ｘ１２は、ＡまたはＮである）
【表２０】
2018527903.tif 000030
ＣＤＲＬ２コンセンサス配列Ｘ１ＡＳＸ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７（配列番号６８）
（式中、Ｘ１は、Ｓ、Ｄ、Ｇ、ＫまたはＡであり、
Ｘ４は、Ｎ、ＳまたはＴであり、
Ｘ５は、ＲまたはＬであり、
Ｘ６は、Ａ、ＥまたはＱであり、
Ｘ７は、ＴまたはＳである）
アミノ酸配列Ｘ１ＡＳＮ４Ｘ５Ｘ６Ｔ（配列番号７４）を有する、ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−１、ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−２、ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−３およびＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−４を含むＢｉｎ１のＣＤＲＬ２コンセンサス配列
（式中、Ｘ１は、ＳまたはＤであり、
Ｘ５は、ＲまたはＬであり、
Ｘ６は、ＡまたはＥである）
アミノ酸配列Ｘ１ＡＳＳＸ５Ｘ６Ｘ７（配列番号８０）を有する、ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−５およびＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−７を含むＢｉｎ２のＣＤＲＬ２コンセンサス配列
（式中、Ｘ１は、ＧまたはＡであり、
Ｘ５は、ＲまたはＬであり、
Ｘ６は、ＡまたはＱであり、
Ｘ７は、ＴまたはＳである）
【表２１】
2018527903.tif 000031
ＣＤＲＬ３コンセンサス配列Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６ＰＸ８Ｘ９（配列番号６９）
（式中、Ｘ１は、ＭまたはＱであり、
Ｘ２は、Ｑ、ＫまたはＨであり、
Ｘ３は、Ａ、ＹまたはＳであり、
Ｘ４は、Ｔ、Ｓ、Ｇ、ＹまたはＱであり、
Ｘ５は、Ｈ、Ｔ、Ｓである、または存在せず、
Ｘ６は、Ｗ、Ａ、Ｔ、Ｙである、または存在せず、
Ｘ８は、Ｙ、Ｌ、Ｉ、Ｐである、または存在せず、
Ｘ９は、Ｔである、または存在しない）
アミノ酸配列Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６ＰＸ８Ｔ（配列番号７５）を有する、ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−１、ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−２、ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−３およびＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−４を含むＢｉｎ１のＣＤＲＬ３コンセンサス配列
（式中、Ｘ１は、ＭまたはＱであり、
Ｘ２は、ＱまたはＫであり、
Ｘ３は、Ａ、ＹまたはＳであり、
Ｘ４は、Ｔ、Ｓ、ＧまたはＹであり、
Ｘ５は、Ｈ、ＴまたはＳであり、
Ｘ６は、Ｗ、ＡまたはＴであり、
Ｘ８は、Ｙ、ＬまたはＩである）
アミノ酸配列ＱＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６ＰＸ８Ｘ９（配列番号８１）を有する、ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−５およびＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−７を含むＢｉｎ２のＣＤＲＬ３コンセンサス配列
（式中、Ｘ２は、ＨまたはＱであり、
Ｘ３は、ＹまたはＳであり、
Ｘ４は、ＧまたはＹであり、
Ｘ５は、Ｓである、または存在せず、
Ｘ６は、Ｔである、または存在せず、
Ｘ８は、Ｐである、または存在せず、
Ｘ９は、Ｔである、または存在しない）
【０２０４】
前述の単離された抗ＧＤＦ１１プロドメイン複合体抗体ＣＤＲ配列は、本開示に従って単離された、表３〜１５に収載されているＣＤＲ配列を含むポリペプチドを含む、ＧＤＦ１１プロドメイン複合体結合タンパク質の新規ファミリーおよびモチーフを確立する。
ＧＤＦ１１調節性結合タンパク質
【０２０５】
本明細書に提示されている一部の結合タンパク質（例えば、抗体またはその抗原結合部分）は、ＧＤＦ１１調節性抗体である。このような抗体は、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ１１断片またはＧＤＦ１１を含む１種もしくは複数のタンパク質複合体に結合することができる。場合によっては、このような抗体は、ＧＤＦ１１増殖因子放出および／または活性に関する放出抗体または安定化抗体であり得る。本開示のＧＤＦ１１モジュレート抗体は、表７に収載されているｓｃＦｖ配列またはその断片のいずれかを含むことができる、またはこれを使用して開発され得る。収載されているｓｃＦｖ配列は、配列ＡＳＡＰＴＬＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＡＡＡ（配列番号１５０）を含むリンカーを介してＶＬドメインに接続されたＶＨドメインを含む。本開示の一部の組換えＧＤＦモジュレート抗体は、表７に収載されているｓｃＦｖのいずれか、または収載されているｓｃＦｖ配列のいずれかに対し少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．５％もしくは少なくとも約９９．９％配列同一性を有するそのバリアントに存在する少なくとも１個の可変ドメインペア（ＶＨおよびＶＬ）を含むように設計することができる。組換えＧＤＦ１１調節性抗体は、場合によっては、提示されているｓｃＦｖに存在するＶＨおよびＶＬドメインの代替的な組合せを含むことができる。さらに別の組換えＧＤＦ１１調節性抗体は、場合によっては、提示されているＶＨおよび／またはＶＬドメインを含むことができるが、ＣＤＲの異なる組合せによるものとなる。本開示の一部の組換えＧＤＦモジュレート抗体は、表７に収載されているｓｃＦｖ配列（配列番号１〜７）のいずれかに対し、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．５％または少なくとも約９９．９％配列同一性を含むｓｃＦｖ配列を含むことができる、またはこれを使用して開発され得る。場合によっては、表７に提示されているｓｃＦｖ配列の１種または複数を使用して構築されたＧＤＦ１１調節性抗体は、表１〜６に収載されている組換えタンパク質のうち１種または複数と相互作用することができる。
【０２０６】
本開示の組換えＧＤＦ１１モジュレート抗体は、表８に収載されているＶＨ配列（配列番号８、１０、１２、１４、１６、１８および２０）のいずれかを含むことができる、またはこれを使用して開発され得る。本開示の一部の組換えＧＤＦモジュレート抗体は、表８に収載されているＶＨ配列のいずれかに対し、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．５％または少なくとも約９９．９％配列同一性を含むＶＨ配列を含むことができる、またはこれを使用して開発され得る。組換えＧＤＦ１１モジュレート抗体は、場合によっては、提示されているＶＨドメインを含むことができるが、ＣＤＲ（例えば、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２またはＣＤＲ−Ｈ３）の異なる組合せによるものとなる。場合によっては、このような抗体は、表１〜６に収載されている組換えタンパク質のうち１種または複数と相互作用することができる。
【０２０７】
本開示の組換えＧＤＦ１１モジュレート抗体は、表１０〜１２に収載されているＣＤＲ−Ｈ配列（ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２および／またはＣＤＲ−Ｈ３）のいずれかまたは本明細書に提供されているＣＤＲ−Ｈコンセンサス配列のいずれかを含むことができる、またはこれを使用して開発され得る。本開示の一部の組換えＧＤＦ１１モジュレート抗体は、表１０〜１２に収載されているＣＤＲ−Ｈ配列のいずれかまたは本明細書に提供されているＣＤＲ−Ｈコンセンサス配列のいずれかに対し、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．５％または少なくとも約９９．９％配列同一性を含むＣＤＲ−Ｈ配列を含むことができる、またはこれを使用して開発され得る。組換えＧＤＦ１１モジュレート抗体は、場合によっては、提示されているＣＤＲ−Ｈドメインを含むことができるが、収載されている他のクローン由来のＣＤＲの異なる組合せによるものとなる。場合によっては、このような抗体は、表１〜６に収載されている組換えタンパク質のうち１種または複数と相互作用することができる。
【０２０８】
本開示の組換えＧＤＦ１１モジュレート抗体は、表８に収載されているＶＬ配列（配列番号９、１１、１３、１５、１７、１９および２１）のいずれかを含むことができる、またはこれを使用して開発され得る。本開示の一部の組換えＧＤＦ１１モジュレート抗体は、表８に収載されているＶＬ配列のいずれかに対し、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．５％または少なくとも約９９．９％配列同一性を含むＶＬ配列を含むことができる、またはこれを使用して開発され得る。組換えＧＤＦ１１モジュレート抗体は、場合によっては、提示されているＶＬドメインを含むことができるが、ＣＤＲ（例えば、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２またはＣＤＲ−Ｌ３）の異なる組合せによるものとなる。場合によっては、このような抗体は、表１〜６に収載されている組換えタンパク質のうち１種または複数と相互作用することができる。
【０２０９】
本開示の組換えＧＤＦ１１モジュレート抗体は、表１３〜１５に収載されているＣＤＲ−Ｌ配列（ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２および／またはＣＤＲ−Ｌ３）のいずれかまたは本明細書に提供されているＣＤＲ−Ｌコンセンサス配列のいずれかを含むことができる、またはこれを使用して開発され得る。本開示の一部の組換えＧＤＦ１１モジュレート抗体は、表１３〜１５に収載されているＣＤＲ−Ｌ配列のいずれかまたは本明細書に提供されているＣＤＲ−Ｌコンセンサス配列のいずれかに対し、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．５％または少なくとも約９９．９％配列同一性を含むＣＤＲ−Ｌ配列を含むことができる、またはこれを使用して開発され得る。組換えＧＤＦ１１モジュレート抗体は、場合によっては、提示されているＣＤＲ−Ｌドメインを含むことができるが、収載されている他のクローン由来のＣＤＲの異なる組合せによるものとなる。場合によっては、このような抗体は、表１〜６に収載されている組換えタンパク質のうち１種または複数と相互作用することができる。
【０２１０】
ＧＤＦ８およびＧＤＦ１１は、相当な相同性を共有する。プロドメインは、４８％相同性しか共有しないが、ＧＤＦ８およびＧＤＦ１１増殖因子ドメインは、９０％相同性を共有する（プロドメインおよび増殖因子をまとめると、６０％相同性となる）。高い程度の配列類似性を考慮すると、ＧＤＦ１１および８が、ＩＩ型受容体（ＡＣＴＲＩＩＡ／Ｂ）と会合したＩ型受容体（ＡＬＫ４／５）からなる同じ受容体に結合し、これを介してシグナル伝達することは驚くにはあたらない。成熟増殖因子における高い程度の保存により、成熟ＧＤＦ１１と８との間を識別することができる試薬およびモノクローナル抗体を同定することは困難な課題となった。結果的に、現在の臨床治験において、ＧＤＦ１１に特異的な治療法は存在しない。
【０２１１】
一部の実施形態では、本開示は、ＧＤＦ１１調節性抗体、ならびにこのような抗体を開発および同定する方法を提供する。場合によっては、ＧＤＦ調節性抗体は、ＧＤＦ１１のプロドメインを特異的に認識するが、ＧＤＦ８プロドメインと交差反応しない。このような抗体を機能的に評価して、ＧＤＦ１１成熟増殖因子の放出を遮断または活性化するか決定することができ、動物モデルにおいてさらに特徴付けして、疾患関連モデルにおける特異的増殖因子レベルをモジュレートする効果を評定することができる。
【０２１２】
ＴＧＦ−βスーパーファミリーの他のメンバーと同様に、ＧＤＦ１１および８は両者共に、不活性前駆体ポリペプチド（プロＧＤＦ８およびプロＧＤＦ１１と命名）として最初に発現される。ＧＤＦ１１および８に関して、成熟増殖因子の活性化および放出は、個別のプロテアーゼ切断事象によって達成される。プロＧＤＦ８およびプロＧＤＦ１１の第１の切断ステップは、プロドメインと成熟増殖因子との間の保存されたＲＸＸＲ部位においてカットするプロタンパク質変換酵素によって行われる。この切断は、プロドメインによって成熟増殖因子がその受容体への結合から遮蔽されている、潜在型複合体を産生する。成熟した活性ＧＤＦ１１増殖因子の活性化および放出は、ＢＭＰ／トロイドファミリー由来の追加的なプロテアーゼによる切断後に達成される。
【０２１３】
骨格筋量の負の調節因子としての十分に解明された役割を有するミオスタチンとは対照的に、ＧＤＦ１１の生理的役割についてはほとんど知られていない。近年、いくつかのグループが、ＧＤＦ１１に関する胸を躍らせる新たな生物学的見地を明らかにした。循環する因子の効果を検討するために、並体癒合外科手技を使用して、老齢および若齢マウスの血液系が接続された（Loffredoら、２０１３年、Cell.１５３巻：８２８〜３９頁）。血液循環を共有して４週間後に、老齢マウスは、加齢性心肥大の反転を劇的に改善した。追加的な研究は、ＧＤＦ１１が、この若返り効果の原因となる因子であることを示唆した。その後、追跡研究は、ＧＤＦ１１レベルが、年齢と共に減少し、全身性レベルが復旧されると、加齢プロセスによる骨格筋における機能障害が反転され得ることを示した（Sinha,  M.ら、２０１４年、Science  Express.  10.1126/science.1251152、２〜６頁）。神経原性ニッチの脈管構造における追加的な改善が、ＧＤＦ１１の添加によって改善され、ＧＤＦ１１レベルの増加が、神経変性および神経血管性疾患の処置において有益であり得ることを示唆する（Katsimpardi,  L.ら、２０１４年、Science  Express.  10.1126/science.1251141）。これらの研究のいくつかが矛盾したことに留意されたい（Brun,  C.E.ら、２０１５年、Cell  Metabolism.２２巻（１号）：５４〜６頁およびEgerman,  M.A.ら、２０１５年、Cell  Metabolism.２２巻（１号）：１６４〜７４頁を参照）。
【０２１４】
他のグループは近年、ＧＤＦ１１が、後期赤血球生成の新規の負の調節因子であることの確証的なデータを発表した（これらそれぞれの内容全体を参照により本明細書に組み込む、Carrancio,  S.ら、２０１４年、Br  J  Haematol.１６５巻（６号）：８７０〜８２頁およびSuragani,  R.N.V.S.ら、２０１４年、Blood.１２３巻（２５号）：３８６４〜７２頁）。これらの研究は、がんおよびβ−サラセミアに関連する貧血等、貧血の処置のための診療所における、２種のＴＧＦ−βスーパーファミリーリガンドトラップである、ＡＣＥ−０１１（ＡＣＴＲＩＩａ−Ｆｃ融合タンパク質）およびＡＣＥ−５３６（ＡＣＴＲＩＩｂ−Ｆｃ融合タンパク質）の検査を導いた。ＧＤＦ１１は、後期赤血球生成の阻害の原因となる増殖因子として意味づけられたが、これらの融合タンパク質のどちらも、ＴＧＦ−βスーパーファミリーの複数の他のメンバーに結合するため、ＧＤＦ１１に特異的ではなかった。
【０２１５】
ＧＤＦ１１を加齢の反転に関係づける新たなデータは、ＧＤＦ８およびＧＤＦ１１の文献において以前に確立された事柄と矛盾する。さらに、ＧＤＦ１１を赤血球生成に関係づける研究は依然として、ごく初期の段階にある。現在の実験アプローチのいずれも、ＧＤＦ１１をＧＤＦ８から識別せず、ＧＤＦ１１が、受容体結合および下流シグナル伝達のレベルでＧＤＦ８とどのように区別されるかについての疑問は未解決のままである。異なる形態の循環ＧＤＦ１１前駆体、潜在型および成熟形態の間を識別することができる分子ツールは存在しないため、身体におけるＧＤＦ１１の相対的な循環および組織結合レベルが如何なるものであるかは不明である。
【０２１６】
一部の実施形態では、本開示のＧＤＦ１１調節性抗体は、ＧＤＦ１１プロドメイン、したがって、ＧＤＦ１１の活性化機構を標的とすることができる。このような抗体は、現在利用できる方法では得ることができない特異性および安全性を達成することができる。場合によっては、ＧＤＦ１１調節性抗体は、ｉｎ  ｖｉｖｏでＧＤＦ１１の役割を調べるための特異的なツールとして有用となることもでき、重要なことに、ＧＤＦ１１放出の遮断または活性化のいずれかを行うことができ、臨床治験において評定され得る、治療用抗体の開発を可能にする。
抗ＧＤＦ１１プロドメイン複合体キメラ抗体
【０２１７】
キメラ抗体は、抗体の異なる部分が、異なる起源または動物種に由来する分子である。キメラ抗体を産生するための方法は、当技術分野で公知である。例えば、それらの全体を参照により本明細書に組み込む、Morrison、Science  ２２９巻：１２０２頁（１９８５年）；Oiら、BioTechniques  ４巻：２１４頁（１９８６年）；Gilliesら（１９８９年）J.  Immunol.  Methods  １２５巻：１９１〜２０２頁；米国特許第５，８０７，７１５号；同第４，８１６，５６７号；および同第４，８１６，３９７号を参照されたい。加えて、適切な生物活性のマウス抗体分子由来の遺伝子と共に、適切な抗原特異性のヒト抗体分子由来の遺伝子をスプライシングすることによる、「キメラ抗体」の産生のために開発された技法（それらの全体を参照により本明細書に組み込むMorrisonら、１９８４年、Proc.  Natl.  Acad.  Sci.８１巻：８５１〜８５５頁；Neubergerら、１９８４年、Nature  ３１２巻：６０４〜６０８頁；Takedaら、１９８５年、Nature  ３１４巻：４５２〜４５４頁）を使用することができる。
【０２１８】
一実施形態では、本開示のキメラ抗体は、ヒトＩｇＧ１定常領域と共に、本明細書に記載されている抗ＧＤＦ１１プロドメイン複合体結合タンパク質のＣＤＲを挿入することにより産生される。別の実施形態では、本開示のキメラ抗体は、配列番号８、１０、１２、１４、１６、１８および２０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、ならびに配列番号９、１１、１３、１５、１７、１９および２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含むことができる。
抗ＧＤＦ１１プロドメイン複合体ヒト化抗体
【０２１９】
ヒト化抗体は、非ヒト種由来の１個または複数の相補性決定領域（ＣＤＲ）と、ヒト免疫グロブリン分子由来のフレームワーク領域とを有する、所望の抗原に結合する非ヒト種抗体由来の抗体分子である。公知のヒトＩｇ配列は、例えば、それぞれ全体的に参照により本明細書に組み込む、www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez-/query.fcgi；www.atcc.org/phage/hdb.html；www.sciquest.com/；www.abcam.com/；www.antibodyresource.com/onlinecomp.html；www.public.iastate.edu/.about.pedro/research_tools.html；www.mgen.uni-heidelberg.de/SD/IT/IT.html；www.whfreeman.com/immunology/CH-05/kuby05.htm；www.library.thinkquest.org/12429/Immune/Antibody.html；www.hhmi.org/grants/lectures/1996/vlab/；www.path.cam.ac.uk/.about.mrc7/m-ikeimages.html；www.antibodyresource.com/；mcb.harvard.edu/BioLinks/Immunology.html.www.immunologylink.com/；pathbox.wustl.edu/.about.hcenter/index.-html；www.biotech.ufl.edu/.about.hcl/；www.pebio.com/pa/340913/340913.html-；www.nal.usda.gov/awic/pubs/antibody/；www.m.ehime-u.acjp/.about.yasuhito-/Elisa.html；www.biodesign.con/table.asp；www.icnet.uk/axp/facs/davies/links.html；www.biotech.ufl.edu/.about.fccl/protocol.html；www.isac-net.org/sites_geo.html；aximtl.imt.uni-marburg.de/.about.rek/AEP-Start.html；baserv.uci.kun.nl/.aboutjraats/linksl.html；www.recab.uni-hd.de/immuno.bme.nwu.edu/；www.mrc-cpe.cam.ac.uk/imt-doc/public/INTRO.html；www.ibt.unam.mx/vir/V_mice.html；imgt.cnusc.fr:8104/；www.biochem.uct.ac.uk/.about.martin/abs/index.html；antibody.bath.ac.uk/；abgen.cvm.tamu.edu/lab/wwwabgen.html；www.unizh.ch/.about.honegger/AHOseminar/Slide01.html；www.cryst.bbk.ac.uk/.about.ubcg07s/；www.nimr.mrc.ac.uk/CC/ccaewg/ccaewg.htm；www.path.cam.ac.uk/.about.mrc7/humanisation/TAHHP.html；www.ibt.unam.mx/vir/structure/stat_aim.html；www.biosci.missouri.edu/smithgp/index.html；www.cryst.bioc.cam.ac.uk/.abo-ut.fmolina/Web-pages/Pept/spottech.html；www.jerini.de/fr  roducts.htm；www.patents.ibm.com/ibm.html、Kabatら、Sequences  of  Proteins  of  Immunological  Interest、U.S.  Dept.  Health（１９８３年）に開示されている。このような移入された配列を使用して、免疫原性を低下させる、または結合、親和性、オンレート、オフレート、アビディティー、特異性、半減期もしくは当技術分野で公知の他のいずれかの適した特徴を低下、増強もしくは修飾することができる。
【０２２０】
ヒトフレームワーク領域におけるフレームワーク残基を、ＣＤＲドナー抗体由来の対応する残基により置換して、抗原結合を変更または改善することができる。これらのフレームワーク置換は、当技術分野で周知の方法、例えば、抗原結合に重要なフレームワーク残基を同定するための、ＣＤＲおよびフレームワーク残基の相互作用のモデリング、ならびに特定の位置における珍しいフレームワーク残基を同定するための配列比較によって同定される（例えば、それらの全体を参照により本明細書に組み込む、Queenら、米国特許第５，５８５，０８９号；Riechmannら、Nature  ３３２巻：３２３頁（１９８８年）を参照）。三次元免疫グロブリンモデルは、一般的に利用することができ、当業者にとってなじみ深い。選択された候補免疫グロブリン配列の可能性の高い三次元立体構造を図解およびディスプレイする、コンピュータープログラムを利用することができる。これらのディスプレイの点検は、候補免疫グロブリン配列の機能発揮における残基の可能な役割の分析、すなわち、その抗原に結合する候補免疫グロブリンの能力に影響する残基の分析を可能にする。このようにして、標的抗原（複数可）に対する親和性増加等、所望の抗体特徴が達成されるように、ＦＲ残基を、コンセンサスおよび移入配列から選択および組み合わせることができる。一般に、ＣＤＲ残基は、抗原結合への影響に直接的にかつ最も実質的に関与する。抗体は、当技術分野で公知の種々の技法を使用してヒト化することができ、そのような技術として、そこで引用されている参考文献を含めて、それぞれ全体的に参照により本明細書に組み込む、Jonesら、Nature  ３２１巻：５２２頁（１９８６年）；Verhoeyenら、Science  ２３９巻：１５３４頁（１９８８年））、Simsら、J.  Immunol.１５１巻：２２９６頁（１９９３年）；ChothiaおよびLesk、J.  Mol.  Biol.１９６巻：９０１頁（１９８７年）、Carterら、Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  U.S.A.８９巻：４２８５頁（１９９２年）；Prestaら、J.  Immunol.１５１巻：２６２３頁（１９９３年）、Padlan、Molecular  Immunology  ２８巻（４／５号）：４８９〜４９８頁（１９９１年）；Studnickaら、Protein  Engineering  ７巻（６号）：８０５〜８１４頁（１９９４年）、Roguska.ら、PNAS  ９１巻：９６９〜９７３頁（１９９４年）；ＰＣＴ公開ＷＯ９１／０９９６７、ＰＣＴ／：ＵＳ９８／１６２８０、ＵＳ９６／１８９７８、ＵＳ９１／０９６３０、ＵＳ９１／０５９３９、ＵＳ９４／０１２３４、ＧＢ８９／０１３３４、ＧＢ９１／０１１３４、ＧＢ９２／０１７５５；ＷＯ９０／１４４４３、ＷＯ９０／１４４２４、ＷＯ９０／１４４３０、ＥＰ２２９２４６、ＥＰ５９２，１０６；ＥＰ５１９，５９６、ＥＰ２３９，４００、米国特許第５，５６５，３３２号、同第５，７２３，３２３号、同第５，９７６，８６２号、同第５，８２４，５１４号、同第５，８１７，４８３号、同第５，８１４，４７６号、同第５，７６３，１９２号、同第５，７２３，３２３号、同第５，７６６８８６号、同第５，７１４，３５２号、同第６，２０４，０２３号、同第６，１８０，３７０号、同第５，６９３，７６２号、同第５，５３０，１０１号、同第５，５８５，０８９号、同第５，２２５，５３９号；同第４，８１６，５６７号に記載されている技術等が挙��られるがこれらに限定されない。
特定の結合プロファイルを有する抗体
【０２２１】
本開示の一部の態様は、特定の結合プロファイルを有する抗体に関する。一部の実施形態では、抗体は、公知および／または所望の結合プロファイル（選択された結合プロファイル）を有するという事実に基づき、使用（例えば、ＧＤＦ１１活性化の阻害）のために選択される。本明細書において、用語「結合プロファイル」は、抗体が１種または複数の抗原に特異的に結合する程度を示す１種または複数のパラメーター（例えば、記号、含量、測定値等）のセットを指す。一部の実施形態では、標的抗原に対する抗体の結合を示すパラメーターは、ＩＣ５０またはＥＣ５０値である。しかし、一部の実施形態では、標的抗原に対する抗体の結合を示すパラメーターは、平衡解離定数（Ｋｄ）である。一部の実施形態では、結合を示すパラメーターは、平衡会合定数（Ｋａ）である。一部の実施形態では、結合を示す他の適したパラメーターを使用することができる。一部の実施形態では、本開示は、１種または複数の抗原であって、その少なくとも１種がＧＤＦ１１関連タンパク質（例えば、プロＧＤＦ１１または潜在型ＧＤＦ１１）である抗原に抗体が特異的に結合する程度を示す１種または複数のパラメーターのセットを含む、選択されたＧＤＦ１１関連結合プロファイルを有する抗体に関する。
【０２２２】
一部の実施形態では、結合プロファイルは、抗体が、１種または複数の抗原への結合（例えば、特異的結合）の閾値レベルを示すか否かを示す１種または複数のパラメーターを含む。一部の実施形態では、結合の閾値レベルは、結合の対照または参照レベル（例えば、バックグラウンドまたは非特異的結合）を上回る（または下回る、これはパラメーター次第である）結合のレベルである。一部の実施形態では、結合の閾値レベルは、適切なイムノアッセイによって測定された場合に、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７またはそれよりも多くの標準偏差だけ、結合の対照または参照レベル（例えば、バックグラウンドまたは非特異的結合）を超える（またはそれに満たない、これはアッセイおよび／またはパラメーター次第である）結合のレベルである。一部の実施形態では、結合の閾値レベルは、適切なイムノアッセイによって測定された場合に、１〜１０標準偏差、２〜１０標準偏差または４〜６標準偏差だけ結合の対照または参照レベル（例えば、バックグラウンドまたは非特異的結合）を超える（またはそれに満たない、これはアッセイおよび／またはパラメーター次第である）範囲内の結合のレベルである。
【０２２３】
一部の実施形態では、結合の閾値レベルは、適切なイムノアッセイにより決定される。一部の実施形態では、適切なイムノアッセイは、標的抗原に対する抗体の結合親和性を評価する。一部の実施形態では、適切なイムノアッセイは、酵素結合免疫吸着（immune-sorbent）アッセイである。一部の実施形態では、適切なイムノアッセイは、抗体と抗原との間の結合を示す動態測定値（例えば、オンレート、オフレート）を決定するアッセイである。一部の実施形態では、適切なイムノアッセイは、抗体と抗原との間の結合を示す１種または複数の動態パラメーターを決定するＯｃｔｅｔアッセイ等のアッセイである。一部の実施形態では、適切なイムノアッセイは、細胞活性、例えば、増殖因子シグナル伝達（ＳＭＡＤシグナル伝達等）、細胞成長、細胞生存、遺伝子発現、レポーター発現、タンパク質産生、タンパク質分泌等に基づき抗体と抗原との間の特異的結合を示す、１種または複数のパラメーターを決定する細胞に基づくアッセイである。一部の実施形態では、適切なイムノアッセイは、細胞、組織または他の生理的活性に基づき、抗体と抗原との間の特異的結合を示す１種または複数のパラメーターを決定するｉｎ  ｖｉｖｏアッセイである。
【０２２４】
一部の実施形態では、結合プロファイルは、抗体が、１種もしくは複数のＴＧＦβファミリーメンバータンパク質（例えば、ＧＤＦ１１）もしくはその型、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質の１種もしくは複数の部分もしくはドメイン、および／またはＴＧＦβファミリーメンバータンパク質の１種もしくは複数のキメラに特異的に結合する程度を示す、１種または複数のパラメーターのセットを含む。一部の実施形態では、結合プロファイルは、抗体が、１種または複数の異なる抗原に特異的に結合するまたは特異的に結合しない程度を示す、１種または複数のパラメーターのセットを含む。一部の実施形態では、結合プロファイルは、抗体が、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０種またはそれよりも多くの異なる抗原に特異的に結合するまたは特異的に結合しない程度に関する。一部の実施形態では、結合プロファイルは、抗体が、４、５、６、７または８種の異なる抗原に特異的に結合するまたは特異的に結合しない程度に関する。
【０２２５】
一部の実施形態では、特定の結合プロファイルは、抗体が、１種または複数のＴＧＦβファミリーメンバータンパク質またはその型に特異的に結合する程度を示す、１種または複数のパラメーターのセットを含む。一部の実施形態では、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質は、ＡＭＨ、ＡＲＴＮ、ＢＭＰ１０、ＢＭＰ１５、ＢＭＰ２、ＢＭＰ３、ＢＭＰ４、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、ＢＭＰ８Ａ、ＢＭＰ８Ｂ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ１０、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ１５、ＧＤＦ２、ＧＤＦ３、ＧＤＦ３Ａ、ＧＤＦ５、ＧＤＦ６、ＧＤＦ７、ＧＤＦ８、ＧＤＦ９、ＧＤＮＦ、ＩＮＨＡ、ＩＮＨＢＡ、ＩＮＨＢＢ、ＩＮＨＢＣ、ＩＮＨＢＥ、レフティー１、レフティー２、ＮＯＤＡＬ、ＮＲＴＮ、ＰＳＰＮ、ＴＧＦβ１、ＴＧＦβ２およびＴＧＦβ３タンパク質からなる群から選択される。一部の実施形態では、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質またはその型は、脊椎動物生物に由来する。一部の実施形態では、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質またはその型は、ヒト、サル、マウスまたはラットに由来する。一部の実施形態では、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質またはその型は、ヒトまたはマウスに由来する。一部の実施形態では、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質またはその型は、ヒトに由来する。ヒトおよび非ヒトＴＧＦβファミリーメンバータンパク質の配列の例を、本明細書に提供されている表１および３に示す。一部の実施形態では、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質またはその型は、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質（例えば、ＧＤＦ１１）のいずれかの天然起源のアイソフォームまたはバリアントを含むことができる。一部の実施形態では、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質は、配列番号８２〜８４および９３〜９８のいずれか一配列に記載のアミノ酸配列のいずれかに対し少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質は、配列番号８２〜８４および９３〜９８のいずれか一配列に記載のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質は、配列番号８２〜８４および９３〜９８のいずれか一配列に記載のアミノ酸配列からなる。
【０２２６】
一部の実施形態では、特定の結合プロファイルは、抗体が、１種または複数のＴＧＦβファミリーメンバータンパク質の部分またはドメインに特異的に結合するまたは特異的に結合しない程度を示す、１種または複数のパラメーターを含むこともできる。一部の実施形態では、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質の部分またはドメインは、プロドメイン、ストレートジャケット領域、増殖因子ドメイン、ファスナー領域、フューリン切断部位領域、ｂｍｐ／トロイド切断部位、アーム領域、フィンガー領域１、フィンガー領域２、潜在型ループ、アルファ１ヘリックス領域および／またはボウタイ領域である。ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質の例示的な部分またはドメインを、本明細書に提供されている表２および４に示す。一部の実施形態では、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質の部分またはドメインは、ＧＤＦタンパク質の部分またはドメインである。一部の実施形態では、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質の部分またはドメインは、ＧＤＦ８および／またはＧＤＦ１１の部分またはドメインである。一部の実施形態では、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質の部分またはドメインは、インヒビンベータＡの部分またはドメインである。しかし、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質の部分またはドメインが、本明細書に提供されているいかなるＴＧＦβファミリーメンバータンパク質に由来してもよいことが認められよう。一部の実施形態では、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質の部分またはドメインは、配列番号８５〜９２および９９〜１１０のいずれか一配列に記載のアミノ酸配列のいずれかに対し少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質の部分またはドメインは、配列番号８５〜９２および９９〜１１０のいずれか一配列に記載のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質の部分またはドメインは、配列番号８５〜９２および９９〜１１０のいずれか一配列に記載のアミノ酸配列からなる。
【０２２７】
一部の実施形態では、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質の型は、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質の複合体を指す。例えば、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質の型は、例えば、プロＧＤＦ８、プロＧＤＦ１１、潜在型ＧＤＦ８、潜在型ＧＤＦ１１、プライミングされたＧＤＦ８またはプライミングされたＧＤＦ１１等、二量体ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質のプロ型、潜在型、プライミングされた型または成熟型を含むことができる。一部の実施形態では、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質は、二量体複合体を形成する。一部の実施形態では、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質は、ホモ二量体複合体を形成する。一部の実施形態では、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質は、ヘテロ二量体複合体を形成する。ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質の二量体型は、全長であるＴＧＦβファミリーメンバータンパク質、または切断された（例えば、プロタンパク質変換酵素および／またはトロイドプロテアーゼによって）ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質を含むことができる。一部の実施形態では、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質の型は、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質のプロ型である（例えば、プロＧＤＦ１１）。一部の実施形態では、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質の型は、全長ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質を含む。例えば、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質のプロ型は、プロタンパク質変換酵素切断部位（例えば、ＰＣＳＫ５等、プロタンパク質変換酵素によって）またはトロイドプロテアーゼ切断部位（例えば、ＢＭＰ−１等、トロイドプロテアーゼによって）において切断されていないプロＧＤＦ８およびプロＧＤＦ１１を限定することなく含む。一部の実施形態では、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質の型は、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質の潜在型である（例えば、潜在型ＧＤＦ８または潜在型ＧＤＦ１１）。一部の実施形態では、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質の型は、切断された（例えば、プロタンパク質変換酵素によって）ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質を含む。例えば、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質の潜在型は、プロタンパク質変換酵素切断部位（例えば、フューリンまたはＰＣＳＫ５等、プロタンパク質変換酵素により）において切断されているが、トロイドプロテアーゼ切断部位においては切断されていない潜在型ＧＤＦ８および潜在型ＧＤＦ１１を限定することなく含む。一部の実施形態では、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質の型は、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質のプライミングされた型である（例えば、プライミングされたＧＤＦ８またはプライミングされたＧＤＦ１１）。一部の実施形態では、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質の型は、切断された（例えば、プロタンパク質変換酵素および／またはトロイドプロテアーゼによって）ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質を含む。例えば、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質のプライミングされた型は、プロタンパク質変換酵素切断部位（例えば、フューリン等、プロタンパク質変換酵素によって）およびトロイドプロテアーゼ切断部位（例えば、ＢＭＰ−１等、トロイドプロテアーゼによって���において切断されたプライミングされたＧＤＦ８およびプライミングされたＧＤＦ１１を限定することなく含む。一部の実施形態では、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質の型は、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質の成熟型である（例えば、成熟ＧＤＦ８または成熟ＧＤＦ１１）。一部の実施形態では、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質の型は、切断されており（例えば、プロタンパク質変換酵素および／またはトロイドプロテアーゼによって）、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質のプロドメインの１種または複数の部分と複合体形成していない、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質を含む。例えば、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質の成熟型は、プロタンパク質変換酵素切断部位（例えば、フューリンまたはＰＣＳＫ５等、プロタンパク質変換酵素によって）、トロイドプロテアーゼ切断部位（例えば、ＢＭＰ−１等、トロイドプロテアーゼによって）において切断されており、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質のプロドメインと複合体形成していない、成熟ＧＤＦ８および成熟ＧＤＦ１１を限定することなく含む。
【０２２８】
一部のプロドメインは、プロタンパク質変換酵素によって切断されてよいことが認められる。本明細書において、用語「プロタンパク質変換酵素」は、翻訳されたタンパク質からプロドメインを切断して、タンパク質成熟を容易にする酵素を指す。本開示の一部のプロタンパク質変換酵素は、スブチリシン様プロタンパク質変換酵素（ＳＰＣ）ファミリーメンバー酵素を含む。ＳＰＣファミリーは、フューリン／ＰＡＣＥ、ＰＣ１／３、ＰＣ２、ＰＣ４、ＰＣ５／６、ＰＡＣＥ４およびＰＣ７が挙げられるがこれらに限定されない、カルシウム依存性セリンエンドプロテアーゼを含む（その内容全体を参照により本明細書に組み込む、Fullerら、２００９年、Invest  Ophthalmol  Vis  Sci.５０巻（１２号）：５７５９〜６８頁）。ＧＤＦ１１は、場合によっては、ＰＣ５／６によって切断されてよい。場合によっては、プロタンパク質変換酵素は、表１に示される部位以外の追加的な部位においてプロタンパク質を切断することができる。一部の実施形態では、プロタンパク質は、第１の切断部位（この第１の部位は、Ｎ末端に最も近い部位である）において切断されてよい。他の実施形態では、プロタンパク質は、第１の切断部位以外の切断部位において切断されてよい。場合によっては、プロタンパク質変換酵素切断は、細胞内で起き得る。場合によっては、プロタンパク質変換酵素切断は、細胞外で起き得る。
【０２２９】
一部の実施形態では、特定の結合プロファイルは、抗体が、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質のキメラに特異的に結合するまたは特異的に結合しない程度を示す１種または複数のパラメーターのセットを含む。一部の実施形態では、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質のキメラを使用して、本明細書に提供されている抗体のいずれかが、特異的に結合するまたは特異的に結合しない特定のエピトープに関する情報を提供することができる。一部の実施形態では、キメラＴＧＦβファミリーメンバータンパク質は、異なるＴＧＦβファミリーメンバータンパク質の少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５個の部分またはドメインを含む。例えば、キメラＴＧＦβファミリーメンバータンパク質は、ある１種のＴＧＦβファミリーメンバータンパク質のプロドメイン、ストレートジャケット領域、増殖因子ドメイン、ファスナー領域、フューリン切断部位領域、ｂｍｐ／トロイド切断部位、アーム領域、フィンガー領域１、フィンガー領域２、潜在型ループ、アルファ１ヘリックス領域および／またはボウタイ領域、ならびに１種または複数の異なるＴＧＦβファミリーメンバータンパク質由来の少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５個のプロドメイン、ストレートジャケット領域、増殖因子ドメイン、ファスナー領域、フューリン切断部位領域、ｂｍｐ／トロイド切断部位、アーム領域、フィンガー領域１、フィンガー領域２、潜在型ループ、アルファ１ヘリックス領域および／またはボウタイ領域を含むことができる。ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質の例示的なキメラを、本明細書に提供されている表５および６に示す。一部の実施形態では、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質のキメラは、配列番号１１１〜１３８のいずれか一配列に記載のアミノ酸配列のいずれかに対し少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質のキメラは、配列番号１１１〜１３８のいずれか一配列に記載のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質のキメラは、配列番号１１１〜１３８のいずれか一配列に記載のアミノ酸配列からなる。
【０２３０】
一部の実施形態では、特定の結合プロファイルは、抗体が、ヒトプロＧＤＦ１１、マウスプロＧＤＦ１１、ヒト潜在型ＧＤＦ１１、マウス潜在型ＧＤＦ１１、ヒトプロＧＤＦ１１  ＡＲＭ８、ヒトプロＧＤＦ８、ヒトプロドメインＧＤＦ１１  ＡＲＭ８および／またはヒト成熟ＧＤＦ１１のうち１種または複数に特異的に結合するまたは特異的に結合しない程度を示す、１種または複数のパラメーターのセットを含む。しかし、ある特定の実施形態では、１種または複数のマウス抗原への結合の程度を示すパラメーターは、結合プロファイルから除去することができる。例えば、一部の実施形態では、特定の結合プロファイルは、抗体が、ヒトプロＧＤＦ１１、ヒト潜在型ＧＤＦ１１、ヒトプロＧＤＦ１１  ＡＲＭ８、ヒトプロＧＤＦ８、ヒトプロドメインＧＤＦ１１  ＡＲＭ８および／またはヒト成熟ＧＤＦ１１のうち１種または複数に特異的に結合するまたは特異的に結合しない程度を示す、１種または複数のパラメーターのセットを含む。一部の実施形態では、特定の結合プロファイルは、抗体が、ヒトプロＧＤＦ１１、マウスプロＧＤＦ１１、ヒト潜在型ＧＤＦ１１、マウス潜在型ＧＤＦ１１、ヒトプロＧＤＦ１１  ＡＲＭ８、ヒトプロＧＤＦ８、ヒトプロドメインＧＤＦ１１  ＡＲＭ８および／またはヒト成熟ＧＤＦ１１に対し少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一であるアミノ酸配列を含むタンパク質のうち１種または複数に特異的に結合するまたは特異的に結合しない程度に関する。一部の実施形態では、ヒトプロＧＤＦ１１は、配列番号８２に記載のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、マウスプロＧＤＦ１１は、配列番号９７に記載のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、マウス潜在型ＧＤＦ１１は、配列番号８２に記載のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ヒトＧＤＦ８プロドメインは、配列番号９７に記載のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ヒトプロＧＤＦ１１  ＡＲＭ８は、配列番号１２２に記載のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ヒトプロＧＤＦ８は、配列番号８３に記載のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ヒトプロドメインＧＤＦ１１  ＡＲＭ８は、配列番号１２４に記載のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ヒト成熟ＧＤＦ１１は、配列番号９０に記載のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供されている抗体は、表２２に記載の結合プロファイルを有する。
【０２３１】
一部の実施形態では、結合プロファイルは、抗体が抗原に結合する程度を示す、１種または複数の記号（例えば、＋、−、＋／−）を含むことができる。例えば、一部の実施形態では、閾値レベルを越えた検出可能なレベルでの抗原への抗体の結合（例えば、参照レベルを５標準偏差だけ超えるレベル）は、「＋」によって示すことができる。一部の実施形態では、「−」は、抗体が、特定のアッセイにおいて閾値を越えた検出可能なレベルで抗原に結合しない（例えば、参照レベル、例えば、アッセイバックグラウンドレベルを２、３、４または５標準偏差未満しか超えないレベル）ことを示す。一部の実施形態では、「＋／−」は、抗体が、特定のアッセイによって決定される、抗原結合の閾値にあるまたはその付近にある（例えば、参照レベルの２〜５、３〜５または４〜５標準偏差以内である）ことを示す。
【０２３２】
一部の実施形態では、標的抗原に「特異的に結合」する抗体は、これが非標的抗原に結合する場合よりも大きい親和性、アビディティーで、より容易におよび／またはより長い持続時間で、標的抗原に結合する。一部の実施形態では、本明細書に提供されている抗体は、例えば、これが、１種もしくは複数のＴＧＦβファミリーメンバータンパク質もしくはその型、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質の１種もしくは複数の部分またはドメイン、および／またはＴＧＦβファミリーメンバータンパク質の１種もしくは複数のキメラに特異的に結合するか特異的に結合しないかに基づく、特定の結合プロファイルを有する。一部の実施形態では、抗原への結合が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ結合アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡ）を使用して、バックグラウンドレベル（例えば、対照抗原の）を上回って検出される場合、抗体は、この抗原に特異的に結合する。一部の実施形態では、抗原への結合が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ結合アッセイを使用して、バックグラウンドレベル（例えば、対照抗原の）を少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９または少なくとも１０標準偏差上回って検出される場合、抗体は、この抗原に特異的に結合する。一部の実施形態では、抗原への結合が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ結合アッセイを使用して、バックグラウンドレベル（例えば、対照抗原の）を少なくとも１、少なくとも５標準偏差上回って検出される場合、抗体は、この抗原に特異的に結合する。一部の実施形態では、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ結合アッセイは、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）である。一部の実施形態では、ＥＬＩＳＡは、本明細書に提供されている実施例２に記載されている通りに実行される。しかし、抗原に対するタンパク質の結合親和性を決定するための追加的な方法も、本開示の範囲内であることが認められよう。
【０２３３】
一部の実施形態では、別の抗原（例えば、潜在型ＧＤＦ１１）と比較して、より高い親和性で抗原（例えば、プロＧＤＦ１１）に結合する場合、抗体は、この抗原に特異的に結合する。一部の実施形態では、別の抗原よりも少なくとも２倍、５倍、１０倍、５０倍、１００倍、２００倍、５００倍または１，０００倍高い親和性によって抗原に結合する場合、抗体は、この抗原に特異的に結合する。
【０２３４】
一部の実施形態では、別の抗原（例えば、潜在型ＧＤＦ１１）と比較して、より高い親和性で抗原（例えば、プロＧＤＦ１１）に結合する場合、抗体は、この抗原に特異的に結合する。一部の実施形態では、１０−３Ｍ、１０−４Ｍ、１０−５Ｍ、１０−６Ｍ、１０−７Ｍ、１０−８Ｍ未満の解離定数（Ｋｄ）で抗原に結合する場合、抗体は、この抗原に特異的に結合する。
【０２３５】
本発明の一部の態様は、ヒトプロＧＤＦ１１に特異的に結合する抗体を提供する。一部の実施形態では、ヒトプロＧＤＦ１１は、（配列番号８２）に記載のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ヒトプロＧＤＦ１１に特異的に結合する抗体は、次のうち１、２、３、４、５、６、７、８または９種のいずれかの組合せに特異的に結合しない：ヒトプロＧＤＦ８、ヒト潜在型ＧＤＦ８、マウスプロＧＤＦ８、マウス潜在型ＧＤＦ８、ヒトプロアクチビンＡ、ヒト潜在型アクチビンＡ、成熟ＧＤＦ１１、成熟ＧＤＦ８または成熟アクチビンＡ。一部の実施形態では、ヒトプロＧＤＦ８は、（配列番号８３）に記載のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ヒト潜在型ＧＤＦ８は、（配列番号８３）に記載のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、マウスプロＧＤＦ８は、（配列番号９３）に記載のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、マウス潜在型ＧＤＦ８は、（配列番号９３）に記載のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ヒトプロアクチビンＡは、（配列番号８４）に記載のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ヒト潜在型アクチビンＡは、（配列番号８４）に記載のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、成熟ＧＤＦ１１は、（配列番号９０）に記載のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、成熟ＧＤＦ８は、（配列番号８９）に記載のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、成熟アクチビンＡは、（配列番号１２０）に記載のアミノ酸配列を含む。
【０２３６】
一部の実施形態では、ヒトプロＧＤＦ１１に特異的に結合する抗体のいずれかは、次のうち１、２または３種のいずれかの組合せに特異的に結合することもできる：ヒト潜在型ＧＤＦ１１、マウスプロＧＤＦ１１、マウス潜在型ＧＤＦ１１。一部の実施形態では、ヒト潜在型ＧＤＦ１１は、（配列番号８２）に記載のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、マウスプロＧＤＦ１１は、（配列番号９７）に記載のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、マウス潜在型ＧＤＦ１１は、（配列番号９７）に記載のアミノ酸配列を含む。
スイープ抗体
【０２３７】
一部の実施形態では、結合タンパク質は、抗原に結合するが、血漿から抗原を有効に排除することができない。よって、一部の実施形態では、血漿中の抗原の濃度は、抗原のクリアランスを低下させることにより増加され得る。しかし、一部の実施形態では、本明細書に提供されている結合タンパク質（例えば、スイープ抗体または抗原結合部分）は、ｐＨに感受性がある、抗原に対する親和性を有する。このようなｐＨ感受性結合タンパク質は、中性ｐＨで血漿中の抗原に結合し、酸性エンドソームにおいて抗原から解離することができ、これにより、結合タンパク質媒介性抗原蓄積を低下させる、および／または血漿からの抗原クリアランスを促進する。本開示の態様は、スイープ抗体に関する。本明細書において、「スイープ抗体」は、ｐＨ感受性抗原結合、および中性または生理的ｐＨにおける細胞表面新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合の少なくとも閾値レベルの両方を有する抗体を指す。一部の実施形態では、スイープ抗体は、中性ｐＨで新生児Ｆｃ受容体ＦｃＲｎに結合する。例えば、スイープ抗体は、７．０〜７．６に及ぶｐＨでＦｃＲｎに結合することができる。一部の実施形態では、スイープ抗体は、抗原結合部位において抗原に結合し、抗体のＦｃ部分を介して細胞ＦｃＲｎに結合することができる。一部の実施形態では、続いて、スイープ抗体は、内部移行され、酸性エンドソーム中に抗原を放出することができ、抗原は分解され得る。一部の実施形態では、続いて、もう抗原に結合していないスイープ抗体は、細胞によって血清に戻るように放出され得る（例えば、エキソサイトーシスによって）。
【０２３８】
一部の実施形態では、血管内皮（例えば、対象の）におけるＦｃＲｎは、スイープ抗体の半減期を延長する。一部の実施形態では、血管内皮細胞は、スイープ抗体を内部移行させ、この抗体は、一部の実施形態では、ＧＤＦ１１（例えば、プロＧＤＦ１１、潜在型ＧＤＦ１１またはプライミングされたＧＤＦ１１）等の抗原に結合している。一部の実施形態では、スイープ抗体は、血流中に戻されリサイクルされる。一部の実施形態では、スイープ抗体は、その従来の対応物と比較して増加した半減期（例えば、対象の血清中の）を有する。一部の実施形態では、スイープ抗体の従来の対応物は、スイープ抗体が派生した（例えば、ｐＨ７でより大きい親和性でＦｃＲｎに結合するように従来の抗体のＦｃ部分を操作する前の）抗体を指す。一部の実施形態では、スイープ抗体は、その従来の対応物と比較して少なくとも１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３５％、５０％、７５％、１００％、１５０％、２００％または２５０％長い、対象の血清中の半減期を有する。
【０２３９】
一部の実施形態では、スイープ抗体のＦｃ部分は、ＦｃＲｎに結合する。一部の実施形態では、スイープ抗体のＦｃ部分は、７．４のｐＨにおいて、１０−３Ｍ〜１０−８Ｍに及ぶＫｄでＦｃＲｎに結合する。一部の実施形態では、スイープ抗体は、７．４のｐＨにおいて、１０−３Ｍ〜１０−７Ｍ、１０−３Ｍ〜１０−６Ｍ、１０−３Ｍ〜１０−５Ｍ、１０−３Ｍ〜１０−４Ｍ、１０−４Ｍ〜１０−８Ｍ、１０−４Ｍ〜１０−７Ｍ、１０−４Ｍ〜１０−６Ｍ、１０−４Ｍ〜１０−５Ｍ、１０−５Ｍ〜１０−８Ｍ、１０−５Ｍ〜１０−７Ｍ、１０−５Ｍ〜１０−６Ｍ、１０−６Ｍ〜１０−８Ｍ、１０−６Ｍ〜１０−７Ｍまたは１０−７Ｍ〜１０−８Ｍに及ぶＫｄでＦｃＲｎに結合する。一部の実施形態では、ＦｃＲｎは、スイープ抗体のＣＨ２−ＣＨ３ヒンジ領域に結合する。一部の実施形態では、ＦｃＲｎは、プロテインＡまたはプロテインＧと同じ領域に結合する。一部の実施形態では、ＦｃＲｎは、ＦｃγＲとは異なる結合部位に結合する。一部の実施形態では、スイープ抗体Ｆｃ領域のアミノ酸残基ＡＡは、ＦｃＲｎへの結合に要求される。一部の実施形態では、スイープ抗体Ｆｃ領域のアミノ酸残基ＡＡは、ＦｃＲｎへの結合に影響を与える。
【０２４０】
一部の実施形態では、本明細書に提供されている抗体のいずれかは、より大きい親和性でＦｃＲｎに結合するように操作される。一部の実施形態では、本明細書に提供されている抗体のいずれかは、ｐＨ７．４においてより大きい親和性でＦｃＲｎに結合するように操作される。一部の実施形態では、ＦｃＲｎに対するスイープ抗体の親和性は、その従来の対応物と比較して、その薬物動態（ＰＫ）特性を延長するように増加される。例えば、一部の実施形態では、スイープ抗体は、より低い用量におけるその有効性のため、より少ない有害反応を誘発する。一部の実施形態では、スイープ抗体は、より低頻度で投与される。一部の実施形態では、ある特定の組織型へのスイープ抗体のトランスサイトーシスが増加される。一部の実施形態では、スイープ抗体は、経胎盤性送達の効率を増強する。一部の実施形態では、スイープ抗体は、産生がより安価である。
【０２４１】
一部の実施形態では、本明細書に提供されている抗体のいずれかは、より低い親和性でＦｃＲｎに結合するように操作される。一部の実施形態では、本明細書に提供されている抗体のいずれかは、ｐＨ７．４においてより低い親和性でＦｃＲｎに結合するように操作される。一部の実施形態では、ＦｃＲｎに対するスイープ抗体の親和性は、その従来の対応物と比較して、その薬物動態（ＰＫ）特性を短縮するように減少される。例えば、一部の実施形態では、スイープ抗体は、イメージングおよび／または放射免疫療法のために、より急速に排除される。一部の実施形態では、スイープ抗体は、自己免疫性疾患の処置として、内在性病原性抗体のクリアランスを促進する。一部の実施形態では、スイープ抗体は、材料胎児特異的抗体の経胎盤性輸送に起因し得る、有害妊娠成績のリスクを低下させる。
【０２４２】
一部の実施形態では、スイープ抗体は、中性または生理的ｐＨ（例えば、ｐＨ７．４）と比較して、低ｐＨにおいて抗原に対する減少した親和性を有する。一部の実施形態では、スイープ抗体は、生理的ｐＨ（例えば、ｐＨ７．４）と比較して、酸性ｐＨ（例えば、５．５〜６．５に及ぶｐＨ）において抗原に対する減少した親和性を有する。本明細書に提供されている抗体のいずれかを、ｐＨ変化に応じて抗原から解離するように操作することができる（例えば、ｐＨ感受性抗体）ことが認められよう。一部の実施形態では、本明細書に提供されているスイープ抗体は、ｐＨに依存して、抗原に結合するように操作される。一部の実施形態では、本明細書に提供されているスイープ抗体は、ｐＨに依存して、ＦｃＲｎに結合するように操作される。一部の実施形態では、本明細書に提供されているスイープ抗体は、エンドサイトーシスによって内部移行される。一部の実施形態では、本明細書に提供されているスイープ抗体は、ＦｃＲｎ結合によって内部移行される。一部の実施形態では、エンドサイトーシスされたスイープ抗体は、エンドソームにおいて抗原を放出する。一部の実施形態では、スイープ抗体は、リサイクルされて細胞表面に戻る。一部の実施形態では、スイープ抗体は、細胞に取り付けられたままとなる。一部の実施形態では、エンドサイトーシスされたスイープ抗体は、リサイクルされて血漿に戻る。本明細書に提供されている抗体のいずれかのＦｃ部分は、異なるＦｃＲｎ結合活性を有するように操作することができることが認められよう。一部の実施形態では、ＦｃＲｎ結合活性は、スイープ抗体による抗原のクリアランス時間に影響を与える。一部の実施形態では、スイープ抗体は、長時間作用性または速効性スイープ抗体であり得る。
【０２４３】
一部の実施形態では、従来の治療用抗体をスイープ抗体に変換すると、効果的な用量を低下させる。一部の実施形態では、従来の治療用抗体をスイープ抗体に変換すると、効果的な用量を少なくとも１％、２％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９９％低下させる。一部の実施形態では、従来の治療用抗体をスイープ抗体に変換すると、効果的な用量を少なくとも３分の２、２分の１、３分の１、４分の１、５分の１、６分の１、８分の１、１０分の１、１５分の１、２０分の１、５０分の１または１００分の１に低下させる。
【０２４４】
一部の実施形態では、治療法のためのスイープ抗体の適切な用量の選択は、経験的に行うことができる。一部の実施形態では、高用量のスイープ抗体は、ＦｃＲｎを飽和させ、内部移行されることなく血清中の抗原を安定化する抗体をもたらすことができる。一部の実施形態では、低用量のスイープ抗体は、治療上有効でなくてもよい。一部の実施形態では、スイープ抗体は、１日１回、１週間に１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、６週間に１回、８週間に１回、１０週間に１回、１２週間に１回、１６週間に１回、２０週間に１回または２４週間に１回投与される。
【０２４５】
一部の実施形態では、本明細書に提供されている抗体のいずれかは、スイープ抗体となるように修飾または操作され得る。一部の実施形態では、本明細書に提供されている抗体のいずれかは、いずれか適した方法を使用して、スイープ抗体に変換され得る。例えば、スイープ抗体を作製するための適した方法は、これにより、これらそれぞれの内容を参照により本明細書に組み込む、Igawaら（２０１３年）「Engineered  Monoclonal  Antibody  with  Novel  Antigen-Sweeping  Activity  In  Vivo」PLoS  ONE  ８巻（５号）：ｅ６３２３６頁；およびIgawaら「pH-dependent  antigen-binding  antibodies  as  a  novel  therapeutic  modality」Biochimica  et  Biophysica  Acta  １８４４巻（２０１４年）１９４３〜１９５０頁に以前に記載された。
【０２４６】
しかし、本明細書に提供されているスイープ抗体を作製するための方法が、限定を目的としないことが認められよう。よって、スイープ抗体を作製するための追加的な方法は、本開示の範囲内である。
競合および交差競合する結合タンパク質
【０２４７】
本開示の態様は、本明細書に提供されている結合タンパク質のいずれかと競合または交差競合する結合タンパク質（例えば、抗体またはその抗原結合部分）に関する。結合タンパク質に関する用語「競合する」は、本明細書において、第２の結合タンパク質の非存在下での第１の結合タンパク質の結合と比較して、第１の結合タンパク質とそのエピトープの結合の結果が、第２の結合タンパク質の存在下で検出可能に減少されるように、第１の結合タンパク質が、第２の結合タンパク質の結合に十分に類似した様式で、タンパク質（例えば、潜在型ＧＤＦ１１）のエピトープに結合することを意味する。第２の結合タンパク質のそのエピトープへの結合が同様に、第１の抗体の存在下で検出可能に減少される選択肢が妥当である場合もあるが、そうである必要はない。すなわち、第２の結合タンパク質は、第１の抗体のそれぞれのエピトープへの結合を阻害しないが、第１の結合タンパク質は、第２の結合タンパク質のそのエピトープへの結合を阻害することができる。しかし、各結合タンパク質が、他の抗体のそのエピトープまたはリガンドとの結合を検出可能に阻害する場合、同じ、より大きいまたはより小さい程度であれ、抗体は、それぞれのエピトープ（複数可）の結合に関して互いに「交差競合」すると考えられる。競合および交差競合する結合タンパク質の両方は、本開示の範囲内である。このような競合または交差競合が起きる機構（例えば、立体障害、立体構造変化または共通のエピトープもしくはその部分への結合）に関係なく、当業者は、このような競合および／または交差競合する結合タンパク質が包含され、本明細書に提供されている方法および／または組成物に有用であり得ることを認めるであろう。
【０２４８】
一部の実施形態では、本開示の態様は、本明細書に提供されている抗体のいずれかと競合または交差競合する抗体に関する。一部の実施形態では、抗体は、本明細書に提供されている抗体のいずれかと同じエピトープにまたはその付近に結合する。一部の実施形態では、抗体は、エピトープの１５個またはそれよりも少ないアミノ酸残基内に結合する場合、エピトープの付近に結合する。一部の実施形態では、本明細書に提供されている抗体のいずれかは、本明細書に提供されている抗体のいずれかによって結合されるエピトープの１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５個のアミノ酸残基内に結合する。例えば、一部の実施形態では、本明細書に提供されている抗体のいずれかは、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質（例えば、プロＧＤＦ１１または潜在型ＧＤＦ１１）のトロイド切断部位にもしくはその付近にまたはトロイドドッキング部位にもしくはその付近に結合する。一部の実施形態では、抗体は、トロイド切断部位またはトロイドドッキング部位の１５個またはそれよりも少ないアミノ酸残基内に結合する場合、トロイド切断部位の付近にまたはトロイドドッキング部位の付近に結合する。一部の実施形態では、本明細書に提供されている抗体のいずれかは、トロイド切断部位またはトロイドドッキング部位の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５個のアミノ酸残基内に結合する。例えば、トロイド切断部位は、ＧＤＦ１１（配列番号８２）のアミノ酸残基９７〜９８に対応するアミノ酸残基ＧＤを含む。一部の実施形態では、抗体は、ＧＤＦ１１のトロイド切断部位にまたはその付近に結合する。例えば、抗体は、配列番号１４９に記載のアミノ酸配列に結合することができる。ＫＡＰＰＬＱＱＩＬＤＬＨＤＦＱＧＤＡＬＱＰＥＤＦＬＥＥＤＥＹＨＡ（配列番号１４９）。一部の実施形態では、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質（例えば、ＧＤＦ１１）のトロイド切断部位におけるもしくはその付近におけるまたはトロイドドッキング部位におけるもしくはその付近における抗体の結合は、例えば、トロイドプロテアーゼ（例えば、ＢＭＰ−１）によるＴＧＦβファミリーメンバータンパク質の切断を阻害する。
【０２４９】
他の実施形態では、本明細書に提供されている抗体のいずれかは、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質（例えば、プロＧＤＦ１１または潜在型ＧＤＦ１１）のプロタンパク質変換酵素切断部位にもしくはその付近にまたはプロタンパク質変換酵素ドッキング部位にもしくはその付近に結合する。一部の実施形態では、抗体は、プロタンパク質変換酵素切断部位またはプロタンパク質変換酵素ドッキング部位の１５個またはそれよりも少ないアミノ酸残基内に結合する場合、プロタンパク質変換酵素切断部位の付近にまたはプロタンパク質変換酵素ドッキング部位の付近に結合する。一部の実施形態では、本明細書に提供されている抗体のいずれかは、プロタンパク質変換酵素切断部位またはプロタンパク質変換酵素ドッキング部位の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５個のアミノ酸残基内に結合する。一部の実施形態では、抗体は、ＧＤＦ１１のプロタンパク質変換酵素切断部位にまたはその付近に結合する。例えば、ＧＤＦ１１プロタンパク質変換酵素切断部位は、ＧＤＦ１１（配列番号８２）のアミノ酸残基２３〜２６に対応するＲＳＳＲ（配列番号１５１）；ＧＤＦ１１（配列番号８２）のアミノ酸残基４８〜５１に対応するＲＥＬＲ（配列番号１６１）；またはＧＤＦ１１（配列番号８２）のアミノ酸残基２７１〜２７４に対応するＲＳＲＲ（配列番号１５２）を含むことができる。別の例として、抗体は、アミノ酸配列ＧＬＨＰＦＭＥＬＲＶＬＥＮＴＫＲＳＲＲＮＬＧＬＤＣＤＥＨＳＳＥＳＲＣ（配列番号１５３）；ＰＥＰＤＧＣＰＶＣＶＷＲＱＨＳＲＥＬＲＬＥＳＩＫＳＱＩＬＳＫＬＲＬＫ（配列番号１５４）；またはＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＧＶＧＧＥＲＳＳＲＰＡＰＳＶＡＰＥＰＤＧＣＰＶＣ（配列番号１５５）に結合することができる。一部の実施形態では、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質のプロタンパク質変換酵素切断部位におけるもしくはその付近におけるまたはプロタンパク質変換酵素ドッキング部位におけるもしくはその付近における抗体の結合は、例えば、プロタンパク質変換酵素（例えば、ＰＣＳＫ５）によるＴＧＦβファミリーメンバータンパク質の切断を阻害する。
【０２５０】
他の実施形態では、本明細書に提供されている抗体のいずれかは、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質（例えば、プロＧＤＦ１１または潜在型ＧＤＦ１１）のストレートジャケット領域にもしくはその付近にまたはＡＲＭ領域にもしくはその付近に結合する。一部の実施形態では、抗体は、ストレートジャケット領域またはＡＲＭ領域の１５個またはそれよりも少ないアミノ酸残基内に結合する場合、ストレートジャケット領域の付近にまたはＡＲＭ領域部位の付近に結合する。一部の実施形態では、本明細書に提供されている抗体のいずれかは、プロタンパク質変換酵素切断部位またはプロタンパク質変換酵素ドッキング部位の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５個のアミノ酸残基内に結合する。一部の実施形態では、抗体は、ＧＤＦ１１のストレートジャケット領域にまたはその付近に結合する。例えば、抗体は、配列番号８８に記載のアミノ酸配列を含むＧＤＦ１１のストレートジャケット領域にまたはその付近に結合することができる。別の例として、抗体は、配列番号９２に記載のアミノ酸配列を含むＧＤＦ１１のＡＲＭ領域にまたはその付近に結合することができる。一部の実施形態では、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質のストレートジャケット領域におけるもしくはその付近におけるまたはＡＲＭ領域におけるもしくはその付近における抗体の結合は、例えば、成熟増殖因子（例えば、成熟ＧＤＦ１１）の放出を阻害することにより、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質の活性化を阻害する。
【０２５１】
別の実施形態では、抗体は、１０−６Ｍ未満の抗体とタンパク質との間の平衡解離定数Ｋｄで、本明細書に提供されている抗原（例えば、１種もしくは複数のＴＧＦβファミリーメンバータンパク質もしくはその型、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質の１種もしくは複数の部分もしくはドメイン、および／またはＴＧＦβファミリーメンバータンパク質の１種もしくは複数のキメラ）のいずれかへの結合に関して競合または交差競合する。他の実施形態では、抗体は、１０−１１Ｍ〜１０−６Ｍの範囲内のＫｄで、本明細書に提供されている抗原のいずれかへの結合に関して競合または交差競合する。
【０２５２】
本明細書に提供されている抗体のいずれかは、いずれか適した方法を使用して特徴付けることができる。例えば、一方法は、抗原が結合するエピトープを同定すること、すなわち「エピトープマッピング」である。タンパク質におけるエピトープの場所をマッピングおよび特徴付けするための多くの適した方法が存在し、そのようなものとして、例えば、HarlowおよびLane、Using  Antibodies,  a  Laboratory  Manual、Cold  Spring  Harbor  Laboratory  Press、Cold  Spring  Harbor、N.Y.、１９９９年の第１１章に記載されている通り、抗体−抗原複合体の結晶構造の解明、競合アッセイ、遺伝子断片発現アッセイ、および合成ペプチドに基づくアッセイが挙げられる。追加的な例では、エピトープマッピングを使用して、抗体が結合する配列を決定することができる。エピトープは、直鎖エピトープであり得る、すなわち、単一ストレッチのアミノ酸に含有され得る、または必ずしも単一ストレッチ（一次構造の直鎖配列）に含有されていなくてもよい、アミノ酸の三次元相互作用によって形成される立体構造エピトープであり得る。変動する長さ（例えば、少なくとも４〜６アミノ酸長）のペプチドを単離または合成し（例えば、組換えにより）、抗体による結合アッセイに使用することができる。別の例では、抗体が結合するエピトープは、標的抗原配列に由来する重複するペプチドを使用し、抗体による結合を決定することにより、系統的スクリーニングにおいて決定することができる。遺伝子断片発現アッセイによると、標的抗原をコードするオープンリーディングフレームは、ランダムにまたは特異的遺伝的構築のいずれかにより断片化され、検査しようとする抗体と抗原の発現された断片との反応性が決定される。遺伝子断片は、例えば、ＰＣＲによって産生され、続いて放射性アミノ酸の存在下、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでタンパク質に転写・翻訳されてよい。次に、放射標識された抗原断片への抗体の結合が、免疫沈降およびゲル電気泳動によって決定される。ある特定のエピトープは、ファージ粒子の表面にディスプレイされたランダムペプチド配列の大型のライブラリー（ファージライブラリー）を使用することにより同定することもできる。あるいは、重複するペプチド断片の定義されたライブラリーを、結合アッセイにおいて被験抗体への結合に関して検査することができる。追加的な例では、抗原結合ドメインの突然変異誘発、ドメインスワッピング（swapping）実験およびアラニンスキャニング突然変異誘発を行って、エピトープ結合に要求される、十分なおよび／または必要な残基を同定することができる。例えば、ドメインスワッピング実験は、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質の様々な断片が、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質の別のメンバー等、関連するが抗原性として別個のタンパク質由来の配列により置き換えられている（スワッピングされている）、標的抗原の突然変異体を使用して行うことができる。抗原の結合プロファイルを評価することにより、抗体結合に対する特定の抗原断片の重要性を評価することができる。
【０２５３】
あるいは、同じ抗原に結合することが公知の他の抗体を使用して、競合アッセイを行って、抗体が、斯かる他の抗体と同じエピトープに結合するか決定することができる。このような競合アッセイは、当業者には明らかとなるであろう。
【０２５４】
適した方法、例えば、本明細書に記載されているエピトープマッピング方法のいずれかを適用して、本明細書に（hererin）提供されている抗体のいずれが、本明細書に記載されている１種または複数のＴＧＦβファミリーメンバータンパク質の特異的な残基／セグメントの１種または複数に結合するか決定することができる。さらに、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質におけるこのような定義されている残基のうち１種または複数と抗体との相互作用は、ルーチン技術によって決定することができる。例えば、結晶構造を決定し、それに従って、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質における残基と、抗体における１種または複数の残基との間の距離を決定することができる。このような距離に基づき、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質における特異的な残基が、抗体における１種または複数の残基と相互作用するかについて決定することができる。さらに、競合アッセイおよび標的突然変異誘発アッセイ等、適した方法を適用して、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質への候補抗体の優先的結合を、別のＴＧＦβファミリーメンバータンパク質と比較して決定することができる。
結合タンパク質の変種
【０２５５】
本開示の態様は、本明細書に提供されているポリペプチド（例えば、抗ＧＤＦ１１抗体）のいずれかの変種を提供する。本開示の化合物および／または組成物は、ポリペプチド全体、複数のポリペプチドまたはポリペプチドの断片として存在し得、これらは独立して、１種もしくは複数の核酸、複数の核酸、核酸の断片、または上述のいずれかのバリアントによってコードされてよい。一部の実施形態では、ポリペプチドは、遺伝子産物、天然起源のポリペプチド、合成ポリペプチド、前述のホモログ、オルソログ、パラログ、断片および他の均等物、バリアントおよびアナログを含む。ポリペプチドは、単一の分子であっても、二量体、三量体または四量体等の多分子複合体であってもよい。これは、単鎖または多重鎖ポリペプチドを含むこともでき、会合または連結されていてよい。ポリペプチドという用語は、１個または複数のアミノ酸残基が、対応する天然起源のアミノ酸の人工化学アナログである、アミノ酸ポリマーに適用することもできる。
【０２５６】
本明細書において、用語「ポリペプチドバリアント」は、そのアミノ酸配列が、ネイティブまたは参照配列とは異なる分子を指す。アミノ酸配列バリアントは、ネイティブまたは参照配列と比較して、アミノ酸配列内のある特定の位置に置換、欠失および／または挿入を保有することができる。バリアントは、ネイティブまたは参照配列に対し、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．５％または少なくとも約９９．９％同一性（相同性）を保有することができる。
【０２５７】
一部の実施形態では、「バリアントミミック」が提供される。本明細書において、用語「バリアントミミック」は、活性化された配列を模倣するであろう、１個または複数のアミノ酸を含有するバリアントを指す。例えば、グルタミン酸は、ホスホ−スレオニンおよび／またはホスホ−セリンのミミックとして機能するであろう。あるいは、バリアントミミックは、非活性化をまたはミミックを含有する不活性化産物をもたらすことができ、例えば、フェニルアラニンは、チロシンの不活性化置換として作用することができる；またはアラニンは、セリンの不活性化置換として作用することができる。本開示の化合物および／または組成物のアミノ酸配列は、天然起源のアミノ酸を含むことができ、そのようなものは、タンパク質、ペプチド、ポリペプチドまたはその断片であると考慮され得る。あるいは、本化合物および／または組成物は、天然および非天然起源のアミノ酸の両方を含むことができる。
【０２５８】
本明細書において、用語「アミノ酸配列バリアント」は、ネイティブまたは出発配列と比較して、そのアミノ酸配列にある程度の差がある分子を指す。アミノ酸配列バリアントは、アミノ酸配列内のある特定の位置に置換、欠失および／または挿入を保有することができる。本明細書において、用語「ネイティブ」または「出発」は、配列を参照する場合、比較の対象となり得る元の分子を参照する相対的な用語である。ネイティブまたは出発配列は、野生型配列と混同されるべきではない。ネイティブ配列または分子は、野生型（天然に見出される該配列）を表すことができるが、野生型配列と同一である必要はない。
【０２５９】
通常、バリアントは、ネイティブ配列に対し少なくとも約７０％相同性を保有するであろう、好ましくは、ネイティブ配列に対し少なくとも約８０％、より好ましくは少なくとも約９０％相同となるであろう。
【０２６０】
本明細書において、アミノ酸配列に適用する用語「相同性」は、配列を整列し、必要であればギャップを導入して、最大パーセント相同性を達成した後に、第２の配列のアミノ酸配列における残基と同一である、候補アミノ酸配列における残基のパーセンテージとして定義される。整列のための方法およびコンピュータープログラムは、当技術分野で周知である。相同性は、パーセント同一性の計算に依存するが、計算に導入されたギャップおよびペナルティのため、値が異なる場合があることが理解される。
【０２６１】
本明細書において、アミノ酸配列に適用する用語「ホモログ」は、第２の種の第２の配列に対し実質的同一性を有する他の種の対応する配列を意味する。
【０２６２】
本明細書において、用語「アナログ」は、親ポリペプチドの特性を依然として維持する、アミノ酸残基の１個または複数のアミノ酸変更、例えば、置換、付加または欠失によって異なるポリペプチドバリアントを含むことを目的とする。
【０２６３】
本明細書において、用語「誘導体」は、用語「バリアント」と同義に使用されており、参照分子または出発分子と比べて、いずれかの仕方で修飾または変化させられた分子を指す。
【０２６４】
本開示は、バリアントおよび誘導体を含む、アミノ酸ベースの数種類の化合物および／または組成物を企図する。そのようなものとして、置換、挿入、欠失および共有結合バリアントおよび誘導体が挙げられる。したがって、置換、挿入、付加、欠失および／または共有結合修飾を含む化合物および／または組成物が、本開示の範囲内に含まれる。例えば、１個または複数のリシン等、配列タグまたはアミノ酸を、本開示のペプチド配列に付加することができる（例えば、Ｎ末端またはＣ末端側の端に）。配列タグは、ペプチド精製または局在化に使用することができる。リシンを使用して、ペプチド溶解性を増加させることができる、またはビオチン化を可能にすることができる。場合によっては、ビオチン化（例えば、細菌リガーゼによる）の標的であるアミノ酸配列が含まれていてよい。そのような配列は、その内容全体を参照により本明細書に組み込む、米国特許第５，７２３，５８４号に収載されている配列のいずれかを含むことができる。例えば、アミノ酸配列ＧＬＮＤＩＦＥＡＱＫＩＥＷＨＥ（配列番号１５６）を使用することができ、この場合、ビオチンは、細菌リガーゼにより、包埋されたリシン残基に接続される。加えて、ＧＬＮＤＩＦＥＡＱＫＩＥＷＨＥ（配列番号１５６）に特異的な抗体を使用して、この配列を発現するタンパク質を標的とすることができる。場合によっては、これらの配列は、Ｎおよび／またはＣ末端分泌シグナル配列［例えば、アミノ酸配列ＭＤＭＲＶＰＡＱＬＬＧＬＬＬＬＷＦＳＧＶＬＧ（配列番号１５７）を有するヒトＩｇカッパ鎖］、ｆｌａｇタグ配列［例えば、ＤＹＫＤＤＤＤＫ（配列番号１５８）］、１種または複数の３Ｃプロテアーゼ切断部位［例えば、ＬＥＶＬＦＱＧＰ（配列番号１５９）］、１種または複数のビオチン化部位、および／またはＨｉｓタグ配列［例えば、ＨＨＨＨＨＨ（配列番号１６０）］と併せて発現される。
【０２６５】
ペプチドまたはタンパク質のアミノ酸配列のカルボキシおよびアミノ末端領域に位置するアミノ酸残基は、任意選択で欠失させて、トランケートされた配列をもたらすことができる。あるいは、ある特定のアミノ酸（例えば、Ｃ末端またはＮ末端残基）は、例えば、可溶性であるより大型の配列の一部としての配列の発現等、配列の使用に応じて欠失されてよい、または固体支持体に連結されてよい。
【０２６６】
「置換バリアント」は、タンパク質を参照する場合、ネイティブまたは出発配列における少なくとも１個のアミノ酸残基が除去され、同じ位置におけるその場所に異なるアミノ酸が挿入されたバリアントである。置換は、単一であり得、その場合、分子中の１個のアミノ酸のみが置換されており、または複数であり得、その場合、同分子中の２個またはそれよりも多くのアミノ酸が置換されている。
【０２６７】
本明細書において、用語「保存的アミノ酸置換」は、類似のサイズ、電荷または極性を有する異なるアミノ酸を有する配列において正常に存在するアミノ酸の置換を指す。保存的置換の例として、イソロイシン、バリンおよびロイシン等、非極性（疎水性）残基の、別の非極性残基に代えた置換が挙げられる。同様に、保存的置換の例として、アルギニンとリシンとの間、グルタミンとアスパラギンとの間およびグリシンとセリンとの間等、ある極性（親水性）残基の別の極性（親水性）残基に代えた置換が挙げられる。その上、リシン、アルギニンもしくはヒスチジン等、塩基性残基の別の塩基性残基に代えた置換、またはアスパラギン酸もしくはグルタミン酸等、ある酸性残基の別の酸性残基に代えた置換は、保存的置換の追加的な例である。非保存的置換の例として、イソロイシン、バリン、ロイシン、アラニン、メチオニン等、非極性（疎水性）アミノ酸残基の、システイン、グルタミン、グルタミン酸もしくはリシン等、極性（親水性）残基に代えた、および／または極性残基の非極性残基に代えた置換が挙げられる。
【０２６８】
本明細書において、用語「挿入バリアント」は、タンパク質を参照する場合、１個または複数のアミノ酸が、ネイティブまたは出発配列における特定の位置におけるアミノ酸に直に隣接して挿入されたバリアントである。本明細書において、用語「直に隣接」は、出発または参照アミノ酸のアルファ−カルボキシまたはアルファ−アミノ官能基のいずれかに接続された隣接アミノ酸を指す。
【０２６９】
本明細書において、用語「欠失バリアント」は、タンパク質を参照する場合、ネイティブまたは出発アミノ酸配列における１個または複数のアミノ酸が除去されたバリアントである。通常、欠失バリアントは、分子の特定の領域における１個または複数のアミノ酸が欠失されているであろう。
【０２７０】
本明細書において、本明細書で参照される用語「誘導体」は、有機タンパク質性または非タンパク質性誘導体化剤による１個または複数の修飾、および翻訳後修飾を含むネイティブまたは出発タンパク質のバリアントを含む。共有結合修飾は、伝統的には、タンパク質の標的化されたアミノ酸残基を、選択された側鎖もしくは末端残基と反応することができる有機誘導体化剤と反応させることにより、または選択された組換え宿主細胞において機能する翻訳後修飾の機構を利用することにより導入される。その結果得られる共有結合誘導体は、イムノアッセイのために、または組換え糖タンパク質の免疫親和性精製のための抗タンパク質抗体の調製のために、生物活性に重要な残基を同定することを目的とするプログラムにおいて有用である。このような修飾は、当業者の技能範囲内であり、過度の実験法を行うことなく実行される。
【０２７１】
ある特定の翻訳後修飾は、発現されたポリペプチドに組換え宿主細胞が作用した結果である。グルタミニルおよびアスパラギニル残基は、高頻度で翻訳後に脱アミドされて対応するグルタミルおよびアスパルチル残基となる。あるいは、これらの残基は、弱酸性条件下で脱アミドされる。これらの残基のいずれかの型が、本開示に従って使用されるタンパク質に存在してもよい。
【０２７２】
他の翻訳後修飾は、プロリンおよびリシンのヒドロキシル化、セリルまたはスレオニル残基のヒドロキシル基のリン酸化、リシン、アルギニンおよびヒスチジン側鎖のアルファ−アミノ基のメチル化を含む（T.  E.  Creighton、Proteins:  Structure  and  Molecular  Properties、W.H.  Freeman  &  Co.、San  Francisco、７９〜８６頁（１９８３年））。
【０２７３】
共有結合誘導体は、本開示のタンパク質が非タンパク質性ポリマーに共有結合した融合分子を特に含む。非タンパク質性ポリマーは通常、親水性合成ポリマー、すなわち、さもなければ天然には見出されないポリマーである。しかし、自然から単離されるポリマーのように、天然に存在し、組換えまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏ方法によって産生されるポリマーが有用である。親水性ポリビニルポリマーは、本開示の範囲内に収まり、例えば、ポリビニルアルコールおよびポリビニルピロリドンが挙げられる。ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール等、ポリビニルアルキレンエーテルが特に有用である。タンパク質は、米国特許第４，６４０，８３５号；同第４，４９６，６８９号；同第４，３０１，１４４号；同第４，６７０，４１７号；同第４，７９１，１９２号または同第４，１７９，３３７号に記載されている様式で、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコールまたはポリオキシアルキレン等、様々な非タンパク質性ポリマーに連結されてよい。
【０２７４】
本明細書において、用語「特色」は、タンパク質を参照する場合、分子の別個のアミノ酸配列に基づく構成成分として定義される。本開示のタンパク質の特色は、表面顕在化、局所立体構造的形状、フォールド、ループ、ハーフループ、ドメイン、ハーフドメイン、部位、末端またはこれらのいずれかの組合せを含む。
【０２７５】
本明細書において、用語「表面顕在化」は、タンパク質を参照する場合、最外側表面に現れるタンパク質のポリペプチドに基づく構成成分を指す。
【０２７６】
本明細書において、用語「局所立体構造的形状」は、タンパク質を参照する場合、タンパク質の定義できる空間内に位置する、タンパク質のポリペプチドに基づく構造的顕在化を指す。
【０２７７】
本明細書において、用語「フォールド」は、タンパク質を参照する場合、エネルギー最小化による、その結果得られるアミノ酸配列立体構造を指す。フォールドは、フォールディングプロセスの二次または三次レベルで起き得る。二次レベルフォールドの例として、ベータシートおよびアルファヘリックスが挙げられる。三次フォールドの例として、エネルギー性の力の凝集または分離により形成されたドメインおよび領域が挙げられる。このようにして形成された領域は、疎水性および親水性ポケットその他を含む。
【０２７８】
本明細書において、タンパク質立体構造に関する用語「ターン」は、ペプチドまたはポリペプチドの骨格の方向を変更する屈曲を指し、これには１、２、３個またはそれよりも多くのアミノ酸残基が関与し得る。
【０２７９】
本明細書において、用語「ループ」は、タンパク質を参照する場合、ペプチドまたはポリペプチドの骨格の方向を反転させる、ペプチドまたはポリペプチドの構造的特色を指し、４個またはそれよりも多くのアミノ酸残基を含む。Ｏｌｉｖａらは、少なくとも５クラスのタンパク質ループを同定した（Oliva,  B.ら、An  automated  classification  of  the  structure  of  protein  loops.、J  Mol  Biol.１９９７年、２６６巻（４号）：８１４〜３０頁）。
【０２８０】
本明細書において、用語「ハーフループ」は、タンパク質を参照する場合、これが由来するループとして存するアミノ酸の数の少なくとも半分を有する同定されたループの部分を指す。ループが、必ずしも偶数のアミノ酸残基を含有するとは限らないことが理解される。したがって、ループが、奇数のアミノ酸を含有するまたはこれを含むと同定された場合、この奇数のループのハーフループは、ループの整数部分または次の整数部分（ループ／２＋／−０．５アミノ酸のアミノ酸の数）を含むであろう。例えば、７アミノ酸ループとして同定されたループは、３アミノ酸または４アミノ酸（７／２＝３．５＋／−０．５は、３または４）のハーフループを産生することができる。
【０２８１】
本明細書において、用語「ドメイン」は、タンパク質を参照する場合、１種または複数の同定可能な構造的または機能的特徴または特性（例えば、結合能力、タンパク質−タンパク質相互作用のための部位として役立つ）を有するポリペプチドのモチーフを指す。
【０２８２】
本明細書において、用語「ハーフドメイン」は、タンパク質を参照する場合、これが由来するドメインとして存するアミノ酸の数の少なくとも半分を有する同定されたドメインの部分を指す。ドメインが、必ずしも偶数のアミノ酸残基を含有するとは限らないことが理解される。したがって、ドメインが、奇数のアミノ酸を含有するまたはこれを含むと同定される場合、この奇数のドメインのハーフドメインは、ドメインの整数部分または次の整数部分（ドメイン／２＋／−０．５アミノ酸のアミノ酸の数）を含むであろう。例えば、７アミノ酸ドメインとして同定されたドメインは、３アミノ酸または４アミノ酸（７／２＝３．５＋／−０．５は、３または４）のハーフドメインを産生することができる。サブドメインが、ドメインまたはハーフドメイン内で同定されてよく、このようなサブドメインが、これが由来したドメインまたはハーフドメインにおいて同定された構造的または機能的特性の全てに満たないものを保有することも理解される。本明細書におけるドメイン型のいずれかを含むアミノ酸は、ポリペプチドの骨格に沿って近接している必要がない（すなわち、非隣接アミノ酸が、構造的にフォールディングして、ドメイン、ハーフドメインまたはサブドメインを産生することができる）ことも理解される。
【０２８３】
本明細書において、アミノ酸に基づく実施形態に関係する用語「部位」は、「アミノ酸残基」および「アミノ酸側鎖」と同義に使用されている。部位は、本開示のポリペプチドに基づく分子内で修飾、操作、変更、誘導体化または変動され得るペプチドまたはポリペプチド内の位置を表す。
【０２８４】
本明細書において、用語「末端（複数）」または「末端（単数）」は、タンパク質を参照する場合、ペプチドまたはポリペプチドの先端を指す。このような先端は、ペプチドまたはポリペプチドの最初または最終の部位のみに限定されるものではなく、末端領域における追加的なアミノ酸を含むことができる。本開示のポリペプチドに基づく分子は、Ｎ末端（遊離アミノ基（ＮＨ２）を有するアミノ酸によって終結）およびＣ末端（遊離カルボキシル基（ＣＯＯＨ）を有するアミノ酸によって終結）の両方を有するものとして特徴付けることができる。本開示のタンパク質は、場合によっては、ジスルフィド結合または非共有結合力によって一体にまとめられた複数のポリペプチド鎖で構成されている（マルチマー、オリゴマー）。このような種類のタンパク質は、複数のＮおよびＣ末端を有するであろう。あるいは、ポリペプチドの末端は、場合によっては、有機コンジュゲート等、非ポリペプチドに基づく部分で始まるまたは終わるように修飾されてよい。
【０２８５】
特色のいずれかが、本開示の分子の構成成分として同定または定義されたら、移動、スワッピング、反転化、欠失、ランダム化または重複によって、これらの特色のいくつかの操作および／または修飾のいずれかを行うことができる。さらに、特色の操作が、本開示の分子に対する修飾と同じ成果をもたらし得ることが理解される。例えば、ドメインの欠失が関与した操作は、全長未満の分子をコードするように核酸を修飾したのと全く同じように、分子の長さの変更をもたらすであろう。
【０２８６】
修飾および操作は、部位特異的突然変異誘発等、当技術分野で公知の方法によって達成することができる。次に、その結果得られる修飾された分子は、本明細書に記載されているアッセイまたは当技術分野で公知の他のいずれか適したスクリーニングアッセイ等、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏアッセイを使用して、活性に関して検査することができる。
【０２８７】
一部の実施形態では、本開示の化合物および／または組成物は、同位体である１個または複数の原子を含むことができる。本明細書において、用語「同位体」は、１個または複数の追加的な中性子を有する化学元素を指す。一部の実施形態では、本開示の化合物は、重水素化されていてよい。本明細書において、用語「重水素化」は、物質中の１個または複数の水素原子を重水素同位体に置き換えるプロセスを指す。重水素同位体は、水素の同位体である。水素の核は、１個の陽子を含有するが、重水素核は、陽子および中性子の両方を含有する。安定性等、１種または複数の物理的特性を変化させるため、あるいは化合物および／または組成物が、診断および／または実験適用において使用されることを可能にするために、本開示の化合物および／または組成物を重水素化することができる。
【０２８８】
一部の態様では、本開示は、本明細書に記載されている配列のいずれかと相同な、重鎖可変および／または軽鎖可変アミノ酸配列を有する抗体（例えば、抗ＧＤＦ１１抗体）を提供する。一部の実施形態では、抗体は、配列番号８、１０、１２、１４、１６、１８および２０のいずれかの重鎖可変配列、または配列番号９、１１、１３、１５、１７、１９もしくは２１のいずれか一配列の軽鎖可変配列に対し、少なくとも７５％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％）同一である、重鎖可変配列または軽鎖可変配列を含む。一部の実施形態では、相同重鎖可変および／または軽鎖可変アミノ酸配列は、本明細書に提供されているＣＤＲ配列のいずれかの内で変動しない。例えば、一部の実施形態では、配列変動の程度（例えば、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％）は、本明細書に提供されているＣＤＲ配列のいずれかを除外した、重鎖可変および／または軽鎖可変配列内で出現し得る。
結合タンパク質および結合タンパク質産生細胞株の産生
【０２８９】
一実施形態では、本開示の抗ＧＤＦ１１プロドメイン複合体結合タンパク質は、例えば、当技術分野で公知のいくつかのｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏアッセイのいずれか１種によって評価される通り、ＧＤＦ１１活性を低下させるまたは中和する高い能力を示すことができる。
【０２９０】
一実施形態では、単離された抗体またはその抗原結合部分は、ヒトＧＤＦ１１プロドメイン複合体に結合し、抗体またはその抗原結合部分は、表面バイオレイヤー干渉法によって決定される場合、約０．１ｓ−１もしくはそれに満たないｋｏｆｆ速度定数で、ヒトＧＤＦ１１プロドメイン複合体から解離する、または約１×１０−６Ｍもしくはそれに満たないＩＣ５０でヒトＧＤＦ１１活性を阻害する。あるいは、抗体またはその抗原結合部分は、表面バイオレイヤー干渉法によって決定される場合、約１×１０−２ｓ−１もしくはそれに満たないｋｏｆｆ速度定数で、ヒトＧＤＦ１１プロドメイン複合体から解離することができる、または約１×１０−７Ｍもしくはそれに満たないＩＣ５０でヒトＧＤＦ１１活性を阻害することができる。あるいは、抗体またはその抗原結合部分は、表面バイオレイヤー干渉法によって決定される場合、約１×１０−３ｓ−１もしくはそれに満たないｋｏｆｆ速度定数で、ヒトＧＤＦ１１プロドメイン複合体から解離することができる、または約１×１０−８Ｍもしくはそれに満たないＩＣ５０でヒトＧＤＦ１１活性を阻害することができる。あるいは、抗体またはその抗原結合部分は、表面バイオレイヤー干渉法によって決定される場合、約１×１０−４ｓ−１もしくはそれに満たないｋｏｆｆ速度定数で、ヒトＧＤＦ１１プロドメイン複合体から解離することができる、または約１×１０−８Ｍもしくはそれに満たないＩＣ５０でヒトＧＤＦ１１活性を阻害することができる。あるいは、抗体またはその抗原結合部分は、表面バイオレイヤー干渉法によって決定される場合、約１×１０−５ｓ−１もしくはそれに満たないｋｏｆｆ速度定数で、ヒトＧＤＦ１１プロドメイン複合体から解離することができる、または約１×１０−９Ｍもしくはそれに満たないＩＣ５０でヒトＧＤＦ１１活性を阻害することができる。
【０２９１】
ある特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭまたはＩｇＤ定常領域等、重鎖定常領域を含む。別の実施形態では、重鎖定常領域は、ＩｇＧ１重鎖定常領域またはＩｇＧ４重鎖定常領域である。さらに、抗体は、カッパ軽鎖定常領域またはラムダ軽鎖定常領域のいずれかである軽鎖定常領域を含むことができる。別の実施形態では、抗体は、カッパ軽鎖定常領域を含む。あるいは、抗体部分は、例えば、Ｆａｂ断片または単鎖Ｆｖ断片であり得る。
【０２９２】
抗体エフェクター機能を変更するためのＦｃ部分におけるアミノ酸残基の置き換えは、当技術分野で公知である（Winterら、米国特許第５，６４８，２６０号；同第５，６２４，８２１号）。抗体のＦｃ部分は、いくつかの重要なエフェクター機能、例えば、サイトカイン誘導、ＡＤＣＣ、ファゴサイトーシス、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）ならびに抗体および抗原−抗体複合体の半減期／クリアランス速度を媒介する。場合によっては、これらのエフェクター機能は、治療用抗体に望ましいが、他の場合では、治療目的に応じて不要、さらには有害となる可能性がある。ある特定のヒトＩｇＧアイソタイプ、特にＩｇＧ１およびＩｇＧ３は、それぞれＦｃ．ガンマ．Ｒｓおよび補体Ｃ１ｑへの結合によりＡＤＣＣおよびＣＤＣを媒介する。新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）は、抗体の循環半減期を決定する、重大な意味を持つ構成成分である。さらに別の実施形態では、抗体のエフェクター機能が変更されるように、少なくとも１個のアミノ酸残基が、抗体の定常領域、例えば、抗体のＦｃ領域において置き換えられる。
【０２９３】
一実施形態は、本開示の抗体または抗体部分が、別の機能分子（例えば、別のペプチドまたはタンパク質）に誘導体化または連結されている、標識された結合タンパク質を提供する。例えば、本開示の抗体または抗体部分を（化学的カップリング、遺伝的融合、非共有結合的会合または他の仕方によって）、別の抗体（例えば、二特異性抗体またはダイアボディ）、検出可能薬剤、細胞傷害剤、医薬剤、および／または抗体もしくは抗体部分と別の分子（ストレプトアビジンコア領域またはポリヒスチジンタグ等）との会合を媒介することができるタンパク質もしくはペプチド等、１種または複数の他の分子実体に機能的に連結することにより、本開示の標識された結合タンパク質を派生させることができる。
【０２９４】
本開示の抗体または抗体部分を誘導体化することができる有用な検出可能薬剤は、蛍光化合物を含む。例示的な蛍光検出可能薬剤は、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、５−ジメチルアミン−１−ナフタレンスルホニルクロライド、フィコエリトリンその他を含む。抗体は、アルカリホスファターゼ、西洋わさびペルオキシダーゼ、グルコースオキシダーゼその他等、検出可能酵素により誘導体化することもできる。抗体は、検出可能酵素により誘導体化される場合、この酵素が検出可能な反応産物の産生に使用する、追加的な試薬を添加することにより検出される。例えば、検出可能な薬剤の西洋わさびペルオキシダーゼが存在する場合、過酸化水素およびジアミノベンジジンの添加は、検出可能な発色された反応産物をもたらす。抗体は、ビオチンにより誘導体化され、アビジンまたはストレプトアビジン結合の間接的測定により検出することもできる。
【０２９５】
本開示の別の実施形態は、結晶化された結合タンパク質を提供する。別の実施形態では、本開示は、本明細書に開示されている抗ＧＤＦ１１プロドメイン複合体抗体全体およびその断片の結晶、ならびにこのような結晶を含む製剤および組成物に関する。別の実施形態では、結晶化された結合タンパク質は、結合タンパク質の可溶性対応物よりも優れたｉｎ  ｖｉｖｏでの半減期を有する。別の実施形態では、結合タンパク質は、結晶化後に生物活性を保持する。
【０２９６】
本開示の結晶化された結合タンパク質は、当技術分野で公知の方法に従って、また、参照により本明細書に組み込むＷＯ０２０７２６３６に開示されている通りに産生することができる。
【０２９７】
本開示の別の実施形態は、抗体またはその抗原結合部分が１個または複数の炭水化物残基を含む、グリコシル化された結合タンパク質を提供する。新生ｉｎ  ｖｉｖｏタンパク質産生は、翻訳後修飾として公知のさらなるプロセシングを受けることができる。特に、糖（グリコシル）残基は、酵素により付加することができ、これは、グリコシル化として公知のプロセスである。共有結合により連結されたオリゴ糖側鎖を有する、その結果得られるタンパク質は、グリコシル化されたタンパク質または糖タンパク質として公知である。抗体は、Ｆｃドメインと共に可変ドメインに１個または複数の炭水化物残基を有する糖タンパク質である。Ｆｃドメインにおける炭水化物残基は、Ｆｃドメインのエフェクター機能に重要な効果を有し、抗体の抗原結合または半減期に最小の効果がある（R.  Jefferis、Biotechnol.  Prog.２１巻（２００５年）１１〜１６頁）。対照的に、可変ドメインのグリコシル化は、抗体の抗原結合活性に効果を有することができる。可変ドメインにおけるグリコシル化は、抗体結合親和性にマイナスの効果を有することができ、これは、立体障害によるものである可能性がある（Co,  M.  S.ら、Mol.  Immunol.（１９９３年）３０巻：１３６１〜１３６７頁）、または抗原に対する親和性増加をもたらす（Wallick,  S.  C.ら、Exp.  Med.（１９８８年）１６８巻：１０９９〜１１０９頁；Wright,  A.ら、EMBO  J.（１９９１年）１０巻：２７１７〜２７２３頁）。
【０２９８】
本開示の一態様は、結合タンパク質のＯまたはＮ結合型グリコシル化部位が突然変異された、グリコシル化部位突然変異体の生成を対象にする。当業者は、標準周知技術を使用して、このような突然変異体を生成することができる。生物活性を保持するが、増加または減少した結合活性を有するグリコシル化部位突然変異体は、本開示の別の目的である。
【０２９９】
別の実施形態では、本開示の抗体または抗原結合部分のグリコシル化は修飾される。例えば、脱グリコシル化された抗体を作製することができる（すなわち、この抗体は、グリコシル化を欠く）。グリコシル化を変更させて、例えば、抗原に対する抗体の親和性を増加させることができる。このような炭水化物修飾は、例えば、抗体配列内のグリコシル化の１個または複数の部位を変更することにより達成することができる。例えば、１個または複数の可変領域グリコシル化部位の排除をもたらす１個または複数のアミノ酸置換を作製し、これにより、該部位におけるグリコシル化を排除することができる。このような脱グリコシル化は、抗原に対する抗体の親和性を増加させることができる。このようなアプローチは、これらそれぞれの内容全体を参照により本明細書に組み込む、ＰＣＴ公開ＷＯ２００３０１６４６６Ａ２ならびに米国特許第５，７１４，３５０号および同第６，３５０，８６１号にさらに詳細に記載されている。
【０３００】
その上またはそれに代えて、低下した量のフコシル残基を有する低フコシル化抗体または増加したバイセクティングＧｌｃＮＡｃ構造を有する抗体等、変更された種類のグリコシル化を有する本開示の修飾された抗体を作製することができる。このような変更されたグリコシル化パターンは、抗体のＡＤＣＣ能力を増加させることが実証された。このような炭水化物修飾は、例えば、グリコシル化の仕組みが変更された宿主細胞において抗体を発現させることにより達成することができる。グリコシル化の仕組みが変更された細胞は、当技術分野に記載されており、本開示の組換え抗体を発現し、これにより、グリコシル化が変更された抗体を産生するための宿主細胞として使用することができる。例えば、これらそれぞれの内容全体を参照により本明細書に組み込む、Shields,  R.  L.ら（２００２年）J.  Biol.  Chem.２７７巻：２６７３３〜２６７４０頁；Umanaら（１９９９年）Nat.  Biotech.１７巻：１７６〜１頁および欧州特許番号：ＥＰ１，１７６，１９５；ＰＣＴ公開ＷＯ０３／０３５８３５；ＷＯ９９／５４３４２  ８０を参照されたい。
【０３０１】
タンパク質グリコシル化は、目的のタンパク質のアミノ酸配列と共に、タンパク質が発現される宿主細胞に依存する。異なる生物は、異なるグリコシル化酵素（例えば、グリコシルトランスフェラーゼおよびグリコシダーゼ）を産生することができ、異なる基質（ヌクレオチド糖）を利用することができる。このような因子のため、タンパク質グリコシル化パターンおよびグリコシル残基の組成は、特定のタンパク質が発現される宿主系に応じて異なる場合がある。本開示において有用なグリコシル残基として、グルコース、ガラクトース、マンノース、フコース、ｎ−アセチルグルコサミンおよびシアル酸を挙げることができるがこれらに限定されない。別の実施形態では、グリコシル化された結合タンパク質は、グリコシル化パターンがヒトとなるようにグリコシル残基を含む。
【０３０２】
当業者には、異なるタンパク質グリコシル化が、異なるタンパク質特徴をもたらし得ることが公知である。例えば、酵母等、微生物宿主において産生され、酵母の内在性経路を利用してグリコシル化された治療用タンパク質の有効性は、ＣＨＯ細胞株等、哺乳動物細胞において発現された同じタンパク質の有効性と比較して低下され得る。このような糖タンパク質は、ヒトにおいて免疫原性となる可能性もあり、投与後にｉｎ  ｖｉｖｏで低下した半減期を示す。ヒトおよび他の動物における特異的な受容体は、特異的なグリコシル残基を認識し、血流からのタンパク質の急速なクリアランスを促進することができる。他の有害効果は、タンパク質フォールディング、溶解性、プロテアーゼに対する感受性、移送、輸送、区画化、分泌、他のタンパク質もしくは因子による認識、抗原性、またはアレルゲン性の変化を含むことができる。したがって、医師は、特異的な組成およびパターンのグリコシル化、例えば、ヒト細胞または意図される対象動物の種特異的細胞において産生されたものと同一のまたは少なくとも類似したグリコシル化組成およびパターンを有する治療用タンパク質を好む場合がある。
【０３０３】
宿主細胞のものとは異なるグリコシル化タンパク質の発現は、異種グリコシル化酵素を発現するように宿主細胞を遺伝的に修飾することにより達成することができる。当技術分野で公知の技法を使用して、医師は、ヒトタンパク質グリコシル化を示す抗体またはその抗原結合部分を生成することができる。例えば、酵母系統は、この酵母系統において産生されたグリコシル化タンパク質（糖タンパク質）が、動物細胞、特にヒト細胞のものと同一のタンパク質グリコシル化を示すように、非天然起源のグリコシル化酵素を発現するように遺伝的に修飾されている（米国特許出願公開第２００４００１８５９０号および同第２００２０１３７１３４号ならびにＰＣＴ公開ＷＯ２００５１００５８４（Ａ２））。
【０３０４】
結合タンパク質に加えて、本開示は、本開示のこのような結合タンパク質に特異的な抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体も対象にする。抗Ｉｄ抗体は、別の抗体の抗原結合領域に一般に関連する特有の決定基を認識する抗体である。抗Ｉｄは、結合タンパク質またはそのＣＤＲ含有領域で動物を免疫化することにより調製することができる。免疫化された動物は、免疫化抗体のイディオタイプ決定基を認識し、これに応答し、抗Ｉｄ抗体を産生するであろう。抗Ｉｄ抗体を「免疫原」として使用して、さらに別の動物において免疫応答を誘導し、いわゆる抗抗Ｉｄ抗体を産生することもできる。
【０３０５】
さらに、当業者であれば、ライブラリーのメンバー宿主細胞が、バリアントグリコシル化パターンを有する目的のタンパク質を産生するように、様々なグリコシル化酵素を発現するように遺伝的に操作された宿主細胞のライブラリーを使用して、目的のタンパク質を発現することができることが認められるであろう。次いで、医師は、特定の新規グリコシル化パターンを有する目的のタンパク質を選択および単離することができる。別の実施形態では、特に選択された新規グリコシル化パターンを有するタンパク質は、改善または変更された生物学的特性を示す。
抗ＧＤＦ１１プロドメイン複合体結合タンパク質の使用
【０３０６】
ヒトＧＤＦ１１に結合するその能力を考慮すると、本開示の抗ヒトＧＤＦ１１プロドメイン複合体抗体またはその部分を使用して、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、ウェスタンブロット、免疫親和性質量分析、免疫沈降、免疫蛍光、ＭＳＤまたは組織免疫組織化学的検査等、従来のイムノアッセイを使用して、ヒトＧＤＦ１１プロドメイン複合体を検出することができる（例えば、血清または血漿等、生体試料における）。本開示は、生体試料におけるヒトＧＤＦ１１プロドメイン複合体を検出するための方法であって、生体試料を本開示の抗体または抗体部分と接触させるステップと、ヒトＧＤＦ１１プロドメイン複合体に結合した抗体（または抗体部分）または結合していない抗体（または抗体部分）のいずれかを検出し、これにより、生体試料におけるヒトＧＤＦ１１プロドメイン複合体を検出するステップを含む方法を提供する。抗体を、検出可能な物質により直接的にまたは間接的に標識して、結合したまたは結合していない抗体の検出を容易にする。適した検出可能な物質は、様々な酵素、補欠分子族、蛍光材料、発光材料および放射性材料を含む。適した酵素の例として、西洋わさびペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、．ベータ．−ガラクトシダーゼまたはアセチルコリンエステラーゼが挙げられ；適した補欠分子族複合体の例として、ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンが挙げられ；適した蛍光材料の例として、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミン（dichlorotriazinylamine）フルオレセイン、塩化ダンシルまたはフィコエリトリンが挙げられ；発光材料の例として、ルミノールが挙げられる。
【０３０７】
結合タンパク質標識の代替として、ヒトＧＤＦ１１プロドメイン複合体は、検出可能な物質で標識されたｒｈＧＤＦ１１プロドメイン複合体標準および標識されていない抗ヒトＧＤＦ１１プロドメイン複合体抗体を利用した競合イムノアッセイにより、生体液においてアッセイすることができる。このアッセイにおいて、生体試料、標識されたｒｈＧＤＦ１１プロドメイン複合体標準および抗ヒトＧＤＦ１１プロドメイン複合体抗体は、組み合わされ、標識されていない抗体に結合した標識されたｒｈＧＤＦ１１プロドメイン複合体標準の量が決定される。生体試料におけるヒトＧＤＦ１１プロドメイン複合体の量は、抗ＧＤＦ１１プロドメイン複合体抗体に結合した標識されたｒｈＧＤＦ１１プロドメイン複合体標準の量に反比例する。同様に、ヒトＧＤＦ１１プロドメイン複合体は、検出可能な物質で標識されたｒｈＧＤＦ１１プロドメイン複合体標準および標識されていない抗ヒトＧＤＦ１１プロドメイン複合体抗体を利用した競合イムノアッセイにより、生体液においてアッセイすることもできる。
【０３０８】
一実施形態では、本開示の抗体および抗体部分は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏの両方でヒトＧＤＦ１１活性を中和することができる。したがって、このような本開示の抗体および抗体部分を使用して、例えば、ｈＧＤＦ１１プロドメイン複合体を含有する細胞培養物において、ヒト対象において、または本開示の抗体が交差反応するＧＤＦ１１プロドメイン複合体を有する他の哺乳動物対象において、ｈＧＤＦ１１活性を阻害することができる。別の実施形態では、本開示は、ｈＧＤＦ１１活性を阻害するための方法であって、ｈＧＤＦ１１活性が阻害されるように、ｈＧＤＦ１１プロドメイン複合体を本開示の抗体または抗体部分と接触させるステップを含む方法を提供する。例えば、ｈＧＤＦ１１プロドメイン複合体を含有するまたはこれを含有すると疑われる細胞培養物において、本開示の抗体または抗体部分を培養培地に添加して、培養物におけるｈＧＤＦ１１活性を阻害することができる。
【０３０９】
別の実施形態では、本開示は、対象における、有利には、ＧＤＦ１１活性が有害となる疾患または障害を患う対象におけるｈＧＤＦ１１活性を低下させるための方法を提供する。本開示は、このような疾患または障害を患う対象におけるＧＤＦ１１活性を低下させるための方法であって、対象におけるＧＤＦ１１活性が低下されるように、本開示の結合タンパク質、抗体または抗体部分を対象に投与するステップを含む方法を提供する。別の実施形態では、ＧＤＦ１１は、ヒトＧＤＦ１１であり、対象は、ヒト対象である。あるいは、対象は、本開示の抗体が結合することができるＧＤＦ１１プロドメイン複合体を発現する哺乳動物であり得る。別の実施形態では、対象は、ＧＤＦ１１が導入された（例えば、ＧＤＦ１１の投与により、またはＧＤＦ１１導入遺伝子の発現により）哺乳動物であり得る。本開示の抗体は、治療目的でヒト対象に投与することができる。さらに、本開示の抗体は、獣医学目的で、またはヒト疾患の動物モデルとして、抗体が結合することができるＧＤＦ１１プロドメイン複合体を発現する非ヒト哺乳動物に投与することができる。後者に関して、そのような動物モデルは、本開示の抗体の治療有効性の評定に有用であり得る（例えば、投薬量および投与の時間経過の検査）。
【０３１０】
本明細書において、用語「ＧＤＦ１１活性が有害となる障害」は、当該障害を患う対象におけるＧＤＦ１１の存在が、障害の病態生理学の原因もしくは障害の悪化に寄与する因子のいずれかであると示されてきた、またはそうであると疑われる疾患および他の障害を含むことが意図される。したがって、ＧＤＦ１１活性が有害となる障害は、ＧＤＦ１１活性の低下が、障害の症状および／または進行を軽減すると予想される障害である。このような障害は、例えば、抗ＧＤＦ１１抗体を使用して検出することができる、例えば、障害を患う対象の生体液におけるＧＤＦ１１の濃度の増加（例えば、対象の血清、血漿、滑液等におけるＧＤＦ１１の濃度の増加）によって証明することができる。本開示の抗体により処置することができる障害の非限定例として、本開示の抗体の医薬組成物に関係する後述するセクションに記されている障害が挙げられる。
【０３１１】
別の実施形態では、本開示の結合タンパク質は、ＧＤＦ１１プロドメイン複合体と別のタンパク質、例えば、ＴＧＦ−ベータまたはＴＧＦ−ベータスーパーファミリーの他のメンバーが挙げられるがこれらに限定されない、標的ペアに結合することができる多特異性結合タンパク質に取り込まれてよい。
ＧＤＦ１１タンパク質分解性切断の阻害
【０３１２】
本開示の一部の態様は、ＧＤＦ１１タンパク質分解活性化の阻害剤を使用して、増殖因子活性（例えば、ＧＤＦ１１増殖因子活性）をモジュレートする方法を提供する。一部の実施形態では、本方法は、対象（例えば、ヒトまたはマウス）に、ＧＤＦ１１タンパク質分解活性化の阻害剤を送達するステップを含む。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１タンパク質分解活性化の阻害剤は、結合タンパク質、化合物または小分子である。本明細書において、「小分子」は、低分子量有機化合物を指す。一部の実施形態では、小分子は、９００ダルトンまたはそれに満たない分子量を有する。一部の実施形態では、小分子は、８５０ダルトンもしくはそれに満たない、８００ダルトンもしくはそれに満たない、７５０ダルトンもしくはそれに満たない、７００ダルトンもしくはそれに満たない、６５０ダルトンもしくはそれに満たない、６００ダルトンもしくはそれに満たない、５５０ダルトンもしくはそれに満たない、５００ダルトンもしくはそれに満たない、４５０ダルトンもしくはそれに満たない、４００ダルトンもしくはそれに満たない、３５０ダルトンもしくはそれに満たない、３００ダルトンもしくはそれに満たない、２５０ダルトンもしくはそれに満たない、２００ダルトンもしくはそれに満たない、１５０ダルトンもしくはそれに満たない、１００ダルトンもしくはそれに満たない、５０ダルトンもしくはそれに満たないまたは２０ダルトンもしくはそれに満たない分子量を有する。典型的に、小分子を細胞浸透に使用して、１種または複数の生物機能に影響を与えることができる。
【０３１３】
一部の実施形態では、ＧＤＦ１１タンパク質分解活性化の阻害剤は、プロタンパク質変換酵素またはフューリンプロテアーゼの阻害剤である。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１タンパク質分解活性化の阻害剤は、プロタンパク質変換酵素の阻害剤である。一部の実施形態では、阻害剤は、フューリン／ＰＡＣＥ、ＰＣ１／３、ＰＣ２、ＰＣ４、ＰＣ５／６（すなわち、ＰＣＳＫ５）、ＰＡＣＥ４またはＰＣ７の阻害剤である。一部の実施形態では、阻害剤は、ＰＣＳＫ５の阻害剤である。プロタンパク質変換酵素の阻害剤は、当技術分野で公知であり、当業者には明らかであろう。例えば、プロタンパク質変換酵素阻害剤は、クロロメチルケトン、グアニジニル化（guanidinylated）２，５−ジデオキシストレプタミン（dideoxystreptamine）誘導体、（１，１’−（４，６−ビス（４−グアニジノフェノキシ）シクロヘキサン−１，３−ジイル）ジグアニジン）、（１，３−ビス（２，４−ジグアニジノフェノキシ）ベンゼン）および（１，１’−（４−（（２，４−ジグアニジノ−５−（４−グアニジノフェノキシ）シクロヘキシル）オキシ）−１，３−フェニレン）ジグアニジン）を限定することなく含むことができる。本開示の範囲内である追加的なプロタンパク質変換酵素阻害剤は、それぞれの全内容を参照により本明細書に組み込む、Coppola  J.M.ら「A  Small-Molecule  Furin  Inhibitor  Inhibits  Cancer  Cell  Motility  and  Invasiveness」Neoplasia  ２００８年、１０巻、４号、３６３〜３７０頁；Becker  G.L.ら「Highly  potent  inhibitors  of  the  proprotein  convertase  furin  as  potential  drugs  for  the  treatment  of  infectious  diseases」JBC、２０１２年、Ｍ１１１．３３２６４３；およびKowalska  D.ら「Synthetic  Small-Molecule  Prohormone  Convertase  2  Inhibitors」Molecular  Pharmacology、２００９年、７５巻、３号、６１７〜６２５頁に記載されている阻害剤を含む。
【０３１４】
一部の実施形態では、ＧＤＦ１１タンパク質分解活性化の阻害剤は、トロイドプロテアーゼの阻害剤である。一部の実施形態では、阻害剤は、ＢＭＰ−１、哺乳動物トロイドタンパク質（ｍＴＬＤ）、哺乳動物トロイド様１（ｍＴＬＬ１）または哺乳動物トロイド様２（ｍＴＬＬ２）の阻害剤である。一部の実施形態では、阻害剤は、ＢＭＰ−１またはｍＴＬＬ２の阻害剤である。ＢＭＰ−１およびｍＴＬＬ２等、トロイドプロテアーゼの阻害剤は、当業者に明らかであり、本開示の範囲内である。ＧＤＦ１１タンパク質分解活性化の阻害剤のいずれかを送達する方法は、本明細書に提供されている抗体のいずれかを送達するステップをさらに含むことができることが認められよう。
医薬組成物
【０３１５】
本開示は、本開示の結合性タンパク質、抗体またはその抗原結合性部分および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物も提供する。一部の実施形態では、「医薬組成物」は、１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤と一緒に製剤化された本開示の化合物および／または組成物を指す。本開示の抗体を含む医薬組成物は、限定されずに、障害を診断、検出もしくはモニタリングすること、障害もしくはその１つまたは複数の症状を予防、処置、管理もしくは軽快すること、および／または研究において使用するためのものである。具体的な実施形態では、組成物は、本開示の１つまたは複数の抗体を含む。別の実施形態では、医薬組成物は、ＧＤＦ１１活性が有害である障害を処置するための、本開示の１つまたは複数の抗体、および本開示の抗体以外の１つまたは複数の予防的または治療的な薬剤を含む。一実施形態では、この予防的または治療的な薬剤は、障害またはその１つまたは複数の症状の予防、処置、管理または軽快のために有益であることが公知であるか、またはそれらに使用されてきたかもしくは現在使用されている。これらの実施形態により、組成物は、担体、希釈剤または賦形剤をさらに含むことができる。
【０３１６】
本開示の抗体および抗体部分は、対象への投与に適する医薬組成物に組み込むことができる。一般的に、医薬組成物は、本開示の抗体または抗体部分および薬学的に許容される担体を含む。本明細書で用いるように、「薬学的に許容される担体」には、任意の全ての溶媒、分散媒体、コーティング、抗細菌および抗真菌剤、等張性および吸収遅延剤、ならびに生理的に適合する類似物が含まれる。薬学的に許容される担体の例には、水、食塩水、リン酸緩衝食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールなどのうちの１つまたは複数、ならびにその組合せが含まれる。多くの場合には、等張剤、例えば糖、多価アルコール、例えばマンニトール、ソルビトールまたは塩化ナトリウムを組成物中に含めることが好ましいであろう。薬学的に許容される担体は、抗体または抗体部分の有効期間または効果を強化する少量の補助物質、例えば湿潤もしくは乳化剤、保存剤または緩衝剤をさらに含むことができる。
【０３１７】
本開示の１つまたは複数の抗体、または、本開示の１つまたは複数の抗体と、障害もしくはその１つまたは複数の症状を予防、管理、処置もしくは軽快するのに有益な予防剤もしくは治療剤との組合せを投与するために、様々な送達系が公知であり、使用することができる、例えば、リポソーム、微粒子、マイクロカプセルへの封入、抗体または抗体断片を発現することが可能な組換え細胞、受容体媒介エンドサイトーシス（例えば、WuおよびWu、J.  Biol.  Chem.  ２６２巻：４４２９〜４４３２頁（１９８７年）を参照）、レトロウイルスまたは他のベクターの一部としての核酸の構築等。本開示の予防的または治療的な薬剤を投与する方法には、限定されずに、非経口投与（例えば、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内および皮下）、硬膜外投与、腫瘍内投与および粘膜投与（例えば、鼻腔内および経口の経路）が含まれる。さらに、吸入器またはネブライザーの使用、およびエアゾール化剤による製剤化により、肺投与を用いることもできる。例えば、米国特許第６，０１９，９６８号、第５，９８５，３２０号、第５，９８５，３０９号、第５，９３４，２７２号、第５，８７４，０６４号、第５，８５５，９１３号、第５，２９０，５４０号および第４，８８０，０７８号；ならびにＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／１９２４４、ＷＯ９７／３２５７２、ＷＯ９７／４４０１３、ＷＯ９８／３１３４６およびＷＯ９９／６６９０３を参照する、その各々は参照により本明細書に完全に組み込まれる。一実施形態では、本開示の抗体、併用療法または本開示の組成物は、Ａｌｋｅｒｍｅｓ  ＡＩＲ．ＲＴＭ．肺薬物送達技術（Ａｌｋｅｒｍｅｓ，Ｉｎｃ．、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、Ｍａｓｓ．）を使用して投与される。具体的な実施形態では、本開示の予防的または治療的な薬剤は、筋肉内、静脈内、腫瘍内、経口的、鼻腔内、肺または皮下に投与される。予防的または治療的な薬剤は、任意の便利な経路によって、例えば注入またはボーラス注射によって、上皮または皮膚粘膜内膜（例えば、口の粘膜、直腸および腸管粘膜等）を通した吸収によって投与することができ、また、他の生物学的活性薬剤と一緒に投与することができる。投与は全身性または局所的であってよい。
【０３１８】
具体的な実施形態では、本開示の予防的または治療的な薬剤を処置の必要な領域に局所的に投与することが望ましいことがある。これは、例えば、限定することなく、局所注入によって、注射によって、またはインプラントによって達成することができ、前記インプラントは、シアラスチック（sialastic）な膜、ポリマー、繊維マトリックスまたはコラーゲンマトリックスなどの膜およびマトリックスを含む多孔性または非多孔性の材料のものである。一実施形態では、障害またはその症状を予防、処置、管理および／または軽快するために、本開示アンタゴニストの１つまたは複数の抗体の有効量は、対象に対して患部に局所的に投与される。別の実施形態では、障害またはその１つまたは複数の症状を予防、処置、管理および／または軽快するために、本開示の１つまたは複数の抗体の有効量は、対象の本開示の抗体以外の１つまたは複数の療法（例えば、１つまたは複数の予防的または治療的な薬剤）の有効量と組み合わせて患部に局所的に投与される。
【０３１９】
別の実施形態では、本開示の予防的または治療的な薬剤は、制御放出または持続的放出系で送達することができる。一実施形態では、制御されたまたは持続する放出を達成するために、ポンプを使用することができる（Langer、上記、Sefton、１９８７年、CRC  Crit.  Ref.  Biomed.  Eng.１４巻：２０頁；Buchwaldら、１９８０年、Surgery  ８８巻：５０７頁；Saudekら、１９８９年、N.  Engl.  J.  Med.３２１巻：５７４頁を参照する）。別の実施形態では、本開示の療法の制御されたまたは持続する放出を達成するために、ポリマー材料を使用することができる（例えば、Medical  Applications  of  Controlled  Release、LangerおよびWise（編）、CRC  Pres.、Boca  Raton、Fla.（１９７４年）；Controlled  Drug  Bioavailability,  Drug  Product  Design  and  Performance、SmolenおよびBall（編）、Wiley、New  York（１９８４年）；RangerおよびPeppas、１９８３年、J.,  Macromol.  Sci.  Rev.  Macromol.  Chem.２３巻：６１頁を参照；Levyら、１９８５年、Science  ２２８巻：１９０頁、Duringら、１９８９年、Ann.  Neurol.２５巻：３５１頁；Howardら、１９８９年、J.  Neurosurg.７１巻：１０５頁も参照）；米国特許第５，６７９，３７７号；第５，９１６，５９７号；第５，９１２，０１５号；第５，９８９，４６３号；第５，１２８，３２６号；ＰＣＴ公開番号ＷＯ９９／１５１５４；およびＰＣＴ公開番号ＷＯ９９／２０２５３。持続的放出製剤で使用されるポリマーの例には、限定されずに、ポリ（２−ヒドロキシメタクリル酸エチル）、ポリ（メタクリル酸メチル）、ポリ（アクリル酸）、エチレン−酢酸ビニル共重合体、ポリ（メタクリル酸）、ポリグリコリド（ＰＬＧ）、ポリアンヒドリド、ポリ（Ｎ−ビニルピロリドン）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリアクリルアミド、ポリ（エチレングリコール）、ポリラクチド（ＰＬＡ）、ラクチド−グリコリド共重合体（ＰＬＧＡ）およびポリオルトエステルが含まれる。一実施形態では、持続的放出製剤で使用されるポリマーは、不活性で、浸出性不純物を含有せず、保存上安定し、無菌で、生分解性である。さらに別の実施形態では、制御されたまたは持続的放出系は、予防または治療の標的に近接して置くことができ、したがって、わずかな全身用量だけを必要とする（例えば、Goodson、出典Medical  Applications  of  Controlled  Release、上記、２巻、１１５〜１３８頁（１９８４年）を参照）。
【０３２０】
制御放出系は、Langer（１９９０年、Science２４９巻：１５２７〜１５３３頁）によるレビューで考察されている。本開示の１つまたは複数の治療剤を含む持続的放出製剤を生成するために、当業者に公知である任意の技術を使用することができる。例えば、米国特許第４，５２６，９３８号、ＰＣＴ公開ＷＯ９１／０５５４８、ＰＣＴ公開ＷＯ９６／２０６９８、Ningら、１９９６年、「Intratumoral  Radioimmunotheraphy  of  a  Human  Colon  Cancer  Xenograft  Using  a  Sustained-Release  Gel」、Radiotherapy  &Oncology  ３９巻：１７９〜１８９頁、Songら、１９９５年、「Antibody  Mediated  Lung  Targeting  of  Long-Circulating  Emulsions」、PDA  Journal  of  Pharmaceutical  Science  &Technology  ５０巻：３７２〜３９７頁、Cleekら、１９９７年、「Biodegradable  Polymeric  Carriers  for  a  bFGF  Antibody  for  Cardiovascular  Application」、Pro.  Int'l.  Symp.  Control.  Rel.  Bioact.  Mater.２４巻：８５３〜８５４頁、およびLamら、１９９７年、「Microencapsulation  of  Recombinant  Humanized  Monoclonal  Antibody  for  Local  Delivery」、「Proc.  Int'l.  Symp.  Control  Rel.  Bioact.  Mater.２４巻：７５９〜７６０頁を参照、各々は参照により本明細書に完全に組み込まれる。
【０３２１】
具体的な実施形態では、本開示の組成物が予防的または治療的な薬剤をコードする核酸である場合、核酸はそのコードされた予防的もしくは治療的な薬剤の発現を促進するために、例えばレトロウイルスのベクターの使用によってそれが細胞内になるように、適当な核酸発現ベクターの一部としてそれを構築してそれを投与することによって（米国特許第４，９８０，２８６号を参照）、または、直接の注射によって、または微粒子銃の使用によって（例えば、遺伝子銃；微粒子銃、Ｄｕｐｏｎｔ）、または、脂質もしくは細胞表面受容体もしくはトランスフェクション剤をコーティングすることによって、または、核に入ることが公知であるホメオボックス様ペプチドに連結させてそれを投与することによって（例えば、Joliotら、１９９１年、Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA  ８８巻：１８６４〜１８６８年を参照）ｉｎ  ｖｉｖｏで投与することができる。あるいは、核酸は、発現のために相同組換えによって細胞内に導入し、宿主細胞ＤＮＡの中に組み込むことができる。
【０３２２】
本開示の医薬組成物は、その予定の投与経路に適合するように製剤化される。投与経路の例には、限定されずに、非経口、例えば、静脈内、皮内、皮下、経口、鼻腔内（例えば、吸入）、経皮（例えば、局所）、経粘膜および直腸投与が含まれる。具体的な実施形態では、組成物は、ヒトへの静脈内、皮下、筋肉内、経口、鼻腔内または局所の投与のために適合させた医薬組成物として、ルーチンの手順に従って製剤化される。一般的に、静脈内投与のための組成物は、無菌の等張性水性緩衝液中の溶液である。必要な場合、組成物は、可溶化剤および局所麻酔薬、例えばリグノカインを、注射部位の疼痛を軽減するために含むこともできる。
【０３２３】
本開示の組成物を局所的に投与する予定ならば、組成物は、軟膏、クリーム、経皮パッチ、ローション、ゲル、シャンプー、噴霧剤、エアゾール、溶液、乳剤または当業者に周知の他の形態の形で製剤化することができる。例えば、Remington's  Pharmaceutical  Sciences  and  Introduction  to  Pharmaceutical  Dosage  Forms、第１９版、Mack  Pub.  Co.、Easton、Pa.（１９９５年）を参照。噴霧不可能な局所剤形の場合、局所適用に適合し、水より大きい動的粘度を有する担体または１つまたは複数の賦形剤を含む、粘性から半固体の、または固体の形態が一般的に用いられる。適する製剤には、限定されずに、溶液、懸濁液、乳剤、クリーム、軟膏、散剤、塗り薬、膏薬などが含まれ、それらは、所望により滅菌されるかまたは、例えば浸透圧などの様々な特性に影響を及ぼすための補助剤（例えば、保存剤、安定剤、湿潤剤、緩衝液または塩）と混合される。他の適する局所剤形には、固体または液体の不活性担体と組み合わされた有効成分が、加圧された揮発性物質（例えば、フレオンなどの気体の噴射剤）との混合物として、またはスクイーズボトルの中にパックされる噴霧可能なエアゾール調製物が含まれる。所望により、医薬組成物および剤形に保湿剤または湿潤剤を加えることもできる。そのようなさらなる成分の例は、当技術分野で周知である。
【０３２４】
本開示の方法が組成物の鼻腔内投与を含む場合は、組成物はエアゾールの形態、噴霧剤、ミストまたはドロップ剤の形態で製剤化されてもよい。特に、本開示による使用のための予防的または治療的な薬剤は、適する噴射剤（例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素または他の適する気体）を使用して、加圧パックまたはネブライザーからのエアゾール噴出の形態で都合よく送達することができる。加圧式エアゾールの場合、用量単位は、計量した量を送達するためのバルブを備えることによって決めることができる。化合物とラクトースまたはデンプンなどの適する粉末基剤との粉末混合物を含有する、吸入器または吹入器で使用するための（例えばゼラチンで構成された）カプセルおよびカートリッジを製剤化することができる。
【０３２５】
本開示の方法が経口投与を含む場合は、組成物は、錠剤、カプセル、カシェ剤、ゲルキャップ、溶液、懸濁液などの形態で経口用に製剤化することができる。錠剤またはカプセルは、薬学的に許容される賦形剤、例えば、結合剤（例えば、アルファ化されたメイズデンプン、ポリビニルピロリドンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロース）；充填剤（例えば、ラクトース、微結晶性セルロースまたはリン酸水素カルシウム）；滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルクまたはシリカ）；崩壊剤（例えば、ジャガイモデンプンまたはグリコール酸デンプンナトリウム）；または湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）により従来の手段によって調製することができる。錠剤は、当技術分野で周知の方法によってコーティングすることができる。経口投与のための液体調製物は、限定されずに、溶液、シロップもしくは懸濁液の形態をとることができ、または、それらは、使用時に水もしくは他の適するビヒクルによる構成のための乾燥生成物として提示することができる。そのような液体調製物は、薬学的に許容される添加剤、例えば懸濁剤（例えば、ソルビトールシロップ、セルロース誘導体または水素化された食用脂）；乳化剤（例えば、レシチンまたはアラビアゴム）；非水性ビヒクル（例えば、アーモンドオイル、油性エステル、エチルアルコールまたは分画植物油）；および保存剤（例えば、メチルまたはプロピル−ｐ−ヒドロキシベンゾエートまたはソルビン酸）により従来の手段によって調製することができる。調製物は、緩衝塩、香料、着色剤および甘味剤を適宜含有することもできる。経口投与のための調製物は、予防的または治療的な薬剤（複数可）の徐放性、制御放出または持続的放出のために好適に製剤化することができる。
【０３２６】
本開示の方法は、例えば吸入器またはネブライザーの使用による、エアゾール化剤で製剤化された組成物の肺投与を含むことができる。例えば、米国特許第６，０１９，９６８号、第５，９８５，３２０号、第５，９８５，３０９号、第５，９３４，２７２号、第５，８７４，０６４号、第５，８５５，９１３号、第５，２９０，５４０号および第４，８８０，０７８号；ならびにＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／１９２４４、ＷＯ９７／３２５７２、ＷＯ９７／４４０１３、ＷＯ９８／３１３４６およびＷＯ９９／６６９０３を参照、各々は参照により本明細書に完全に組み込まれる。具体的な実施形態では、本開示の抗体、併用療法および／または本開示の組成物は、Ａｌｋｅｒｍｅｓ  ＡＩＲ．ＲＴＭ．肺薬物送達技術（Ａｌｋｅｒｍｅｓ，Ｉｎｃ．、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、Ｍａｓｓ．）を使用して投与される。
【０３２７】
本開示の方法は、注射（例えば、ボーラス注射または連続注入）による非経口投与のために製剤化された組成物の投与を含むことができる。注射用製剤は、保存料を加えた単位剤形（例えば、アンプルまたは多回投与容器）で提示してもよい。組成物は油性または水性ビヒクル中の懸濁液、溶液または乳剤などの形態をとることができ、懸濁剤、安定化剤および／または分散剤などの製剤用薬剤を含有することができる。あるいは、有効成分は、使用時に適するビヒクル（例えば、無菌の発熱物質フリーの水）による構成のために、粉末の形態であってもよい。
【０３２８】
本開示の方法は、デポー調製物として製剤化された組成物の投与をさらに含むことができる。そのような長時間作用性製剤は、移植（例えば、皮下または筋肉内）または筋肉内注射によって投与することができる。したがって、例えば、組成物は、適するポリマーもしくは疎水性の材料で（例えば、許容される油の中のエマルジョンとして）またはイオン交換樹脂で、またはやや溶けにくい誘導体（例えば、やや溶けにくい塩）として製剤化することができる。
【０３２９】
本開示の方法は、中性または塩の形態として製剤化される組成物の投与を包含する。薬学的に許容される塩には、塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸酸等に由来するものなどのアニオンで形成されるもの、およびナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、水酸化第二鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、２−エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカイン等に由来するものなどのカチオンで形成されるものが含まれる。
【０３３０】
一般的に、組成物の成分は、別々にまたは単位剤形中に混合されて、例えば、密封容器、例えば活性薬剤の量を示すアンプルまたはサシェの中の乾燥した凍結乾燥粉末または無水濃縮物として供給される。投与様式が注入である場合、組成物は、無菌の医薬グレードの水または食塩水を含有する注入ボトルで分注することができる。投与様式が注射による場合、成分を投与前に混合することができるように、無菌の注射用水または食塩水のアンプルが提供されてもよい。
【０３３１】
特に、本開示は、本開示の予防的もしくは治療的な薬剤または医薬組成物の１つまたは複数が、薬剤の量を示すアンプルまたはサシェなどの密封容器にパックされることも提供する。一実施形態では、本開示の予防的もしくは治療的な薬剤または医薬組成物の１つまたは複数は、密封容器中の乾燥した滅菌の凍結乾燥粉末または無水濃縮物として供給され、対象への投与のために適当な濃度に（例えば、水または食塩水で）復元することができる。別の実施形態では、本開示の予防的もしくは治療的な薬剤または医薬組成物の１つまたは複数は、密封容器中の乾燥した滅菌の凍結乾燥粉末として、少なくとも５ｍｇ、少なくとも１０ｍｇ、少なくとも１５ｍｇ、少なくとも２５ｍｇ、少なくとも３５ｍｇ、少なくとも４５ｍｇ、少なくとも５０ｍｇ、少なくとも７５ｍｇまたは少なくとも１００ｍｇの単位用量で供給される。本開示の凍結乾燥された予防的もしくは治療的な薬剤または医薬組成物は、その元の容器中に２℃から８℃の間で保存するべきであり、本開示の予防的もしくは治療的な薬剤または医薬組成物は、復元されてから１週以内、５日以内、７２時間以内、４８時間以内、２４時間以内、１２時間以内、６時間以内、５時間以内、３時間以内または１時間以内に投与するべきである。代わりの実施形態では、本開示の予防的もしくは治療的な薬剤または医薬組成物の１つまたは複数は、薬剤の量および濃度を示す密封容器に液状で供給される。別の実施形態では、投与される組成物の液剤は、密封容器中に少なくとも０．２５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも０．５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１ｍｇ／ｍｌ、少なくとも２．５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも８ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも５０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも７５ｍｇ／ｍｌまたは少なくとも１００ｍｇ／ｍｌで供給される。液剤は、その元の容器中に２℃から８℃の間で保存するべきである。
【０３３２】
本開示の抗体および抗体部分は、非経口投与に適する医薬組成物に組み込むことができる。別の実施形態では、抗体または抗体部分は、０．１〜２５０ｍｇ／ｍｌの抗体を含有する注射溶液として調製される。注射溶液は、フリントもしくはアンバーバイアル、アンプルまたは予充填シリンジ中の、液体または凍結乾燥剤形で構成されてもよい。緩衝液は、Ｌ−ヒスチジン（１〜５０ｍＭ）、最適には５〜１０ｍＭ、ｐＨ５．０〜７．０（最適にはｐＨ６．０）であってよい。他の適する緩衝液には、限定されずに、コハク酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、リン酸ナトリウムまたはリン酸カリウムが含まれる。溶液の毒性を修正するために、塩化ナトリウムを０〜３００ｍＭ（液体剤形の場合、最適には１５０ｍＭ）の濃度で使用することができる。凍結乾燥剤形のために、主に０〜１０％のスクロース（最適には０．５〜１．０％）の凍結保護物質が含まれ得る。他の適する凍結保護物質には、トレハロースおよびラクトースが含まれる。凍結乾燥剤形のために、主に１〜１０％のマンニトール（最適には２４％）の増量剤が含まれ得る。液体および凍結乾燥剤形で、主に１〜５０ｍＭのＬ−メチオニン（最適には５〜１０ｍＭ）の安定剤が使用されてよい。グリシン、アルギニンを含む他の適する増量剤が、０〜０．０５％ポリソルベート８０（最適には０．００５〜０．０１％）として含まれ得る。さらなる界面活性剤には、限定されずに、ポリソルベート２０およびＢＲＩＪ界面活性剤が含まれる。非経口投与のための注射溶液として調製される本開示の抗体および抗体部分を含む医薬組成物は、アジュバントとして有益な薬剤、例えば治療的タンパク質（例えば、抗体）の吸収または分散を増加させるために使用されるものをさらに含むことができる。特に有益なアジュバントは、Ｈｙｌｅｎｅｘ．ＲＴＭ．（組換えヒトヒアルロニダーゼ）などのヒアルロニダーゼである。注射溶液へのヒアルロニダーゼの添加は、非経口投与、特に皮下投与の後のヒト生物学的利用能を向上させる。それは、より大きな注射部位量（すなわち、１ｍｌ超）を、より少ない疼痛および不快、ならびに注射部位反応の最小発生率で可能にする。（参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２００４０７８１４０号、米国特許出願公開第２００６１０４９６８号を参照する）。
【０３３３】
この開示の組成物は、様々な形態であってよい。これらには、例えば、液体、半固体、固体の剤形、例えば液体溶液（例えば、注射可能および注入可能な溶液）、分散液または懸濁液、錠剤、丸剤、散剤、リポソームおよび坐薬が含まれる。好ましい形態は、予定の投与様式および治療的適用に依存する。別の実施形態では、一般的な組成物は、注射可能または注入可能な溶液の形態、例えば、他の抗体によるヒトの受動免疫のために使用されるものと類似の組成物である。別の実施形態では、投与様式は非経口（例えば、静脈内、皮下、腹腔内、筋肉内）である。別の実施形態では、抗体は、静脈内の注入または注射によって投与される。別の実施形態では、抗体は、筋肉内または皮下の注射によって投与される。
【０３３４】
治療組成物は、製造および保存の条件下で一般的に無菌および安定でなければならない。組成物は、溶液、マイクロエマルジョン、分散液、リポソーム、または高い薬物濃度に適する他の注文構造に製剤化することができる。無菌の注射溶液は、必要に応じて上に列挙された成分の１つまたは組合せと一緒に、適当な溶媒に必要な量で活性化合物（例えば、抗体または抗体部分）を組み込み、続いて濾過滅菌を行うことによって調製することができる。一般に、分散液は、塩基性の分散媒体および上に列挙されるものから必要とされる他の成分を含有する無菌のビヒクルに活性化合物を組み込むことによって調製される。別の実施形態では、無菌の注射溶液の調製のための無菌凍結乾燥粉末の場合は、調製法は、前もって濾過滅菌したその溶液から有効成分と任意の追加の所望の成分の粉末を与える、減圧乾燥および噴霧乾燥である。例えばレシチンなどのコーティング材の使用によって、分散液の場合は必要とされる粒径の維持によって、および界面活性剤の使用によって、溶液の適切な流動性を維持することができる。吸収を遅らせる薬剤、例えばモノステアリン酸塩およびゼラチンを組成物中に含めることによって、注射可能な組成物の長期吸収をもたらすことができる。
【０３３５】
本開示の抗体および抗体部分は、当技術分野で公知の様々な方法によって投与することができるが、多くの治療的適用のために、投与の好ましい経路／様式は皮下注射、静脈内注射または注入である。当業者が理解するであろうように、投与の経路および／または様式は、所望の結果によって異なる。ある特定の実施形態では、活性化合物は、インプラント、経皮パッチおよびマイクロカプセル送達系を含む制御放出製剤など、急速な放出から化合物を保護する担体で調製することができる。生分解性、生体適合性のポリマー、例えばエチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステルおよびポリ乳酸などを使用することができる。そのような製剤の調製のための多くの方法は、特許を受けているか、または当業者に周知である。例えば、Sustained  and  Controlled  Release  Drug  Delivery  Systems、J.  R.  Robinson編、Marcel  Dekker,  Inc.、New  York、１９７８年を参照。
【０３３６】
ある特定の実施形態では、本開示の抗体または抗体部分は、例えば不活性の希釈剤または同化性食用の担体と一緒に経口投与することができる。化合物（および所望により他の成分）は、ハードまたはソフトシェルゼラチンカプセルに封入すること、錠剤に圧縮すること、または対象の食事に直接的に組み込むこともできる。経口による治療的投与のために、化合物は、賦形剤と一緒に組み込み、摂取可能な錠剤、口内錠剤、トローチ剤、カプセル剤、エリキシル剤、懸濁剤、シロップ剤、ウエハーなどの形態で使用することができる。非経口投与以外によって本開示の化合物を投与するために、化合物をその不活性化を阻止する材料でコーティングするか、または化合物をそれと一緒に同時投与することが必要ことがある。
【０３３７】
補助活性化合物を、組成物に組み込むこともできる。ある特定の実施形態では、本開示の抗体または抗体部分は、ＧＤＦ１１活性が有害である障害の処置に有益である１つまたは複数のさらなる治療剤と共製剤化および／または同時投与される。例えば、本開示の抗ｈＧＤＦ１１抗体または抗体部分は、他の標的に結合する１つまたは複数のさらなる抗体（例えば、他のサイトカインに結合する、または細胞表面分子に結合する抗体）と共製剤化および／または同時投与することができる。さらに、本開示の１つまたは複数の抗体は、上述の治療剤のうちの２つまたはそれよりも多くと併用することができる。そのような併用療法は、投与される治療剤のより低い投薬量を有利に利用することができ、このように、様々な単独療法に関連した可能な毒性または合併症を回避する。
【０３３８】
ある特定の実施形態では、ＧＤＦ１１プロドメイン複合体またはその断片に対する抗体は、当技術分野で公知の半減期延長ビヒクルに連結される。そのようなビヒクルには、限定されずに、Ｆｃドメイン、ポリエチレングリコールおよびデキストランが含まれる。そのようなビヒクルは、例えば、米国特許出願第０９／４２８，０８２号および公開ＰＣＴ出願番号ＷＯ９９／２５０４４に記載され、それはいかなる目的においてもここに参照により組み込まれる。
【０３３９】
具体的な実施形態では、本開示の抗体をコードするヌクレオチド配列を含む核酸配列または本開示の別の予防的もしくは治療的な薬剤は、障害または１つまたは複数のその症状を遺伝子療法により処置、予防、管理または軽快するために投与される。遺伝子療法は、対象への発現されるまたは発現可能な核酸の投与によって実施される療法を指す。本開示のこの実施形態では、核酸は、予防的または治療的な効果を媒介する、本開示のそれらのコードされる抗体または予防的もしくは治療的な薬剤を生成する。
【０３４０】
当技術分野で利用可能な遺伝子療法のための方法のいずれも、本開示によって使用することができる。遺伝子療法の方法の一般的なレビューについては、Goldspielら、１９９３年、Clinical  Pharmacy  １２巻：４８８〜５０５頁；WuおよびWu、１９９１年、Biotherapy  ３巻：８７〜９５頁；Tolstoshev、１９９３年、Ann.  Rev.  Pharmacol.  Toxicol.３２巻：５７３〜５９６頁；Mulligan、Science２６０巻：９２６〜９３２頁（１９９３年）；およびMorganおよびAnderson、１９９３年、Ann.  Rev.  Biochem.６２巻：１９１〜２１７頁；１９９３年５月、TIBTECH  １１巻（５号）：１５５〜２１５頁を参照。使用することができる組換えＤＮＡ技術の分野で一般的に公知の方法は、Ausubelら（編）、Current  Protocols  in  Molecular  Biology、John  Wiley  &Sons、NY（１９９３年）；およびKriegler、Gene  Transfer  and  Expression、A  Laboratory  Manual、Stockton  Press、NY（１９９０年）に記載されている。遺伝子療法の様々な方法の詳細な記載は、参照により本明細書に組み込まれるＵＳ２００５００４２６６４Ａ１に開示される。
【０３４１】
別の態様では、本出願は、対象におけるＧＤＦ１１関連障害を処置（例えば、治癒、抑制、軽快、発病遅延もしくは予防、または再発もしくは再燃予防）または予防する方法を特徴として有する。本方法は、対象に、本明細書に記載されているＧＤＦ１１プロドメイン複合体結合剤（特に、アンタゴニスト）、例えば、抗ＧＤＦ１１プロドメイン複合体抗体またはその断片を、ＧＤＦ１１関連障害を処置または予防するのに十分な量で投与することを含む。ＧＤＦ１１アンタゴニスト、例えば抗ＧＤＦ１１プロドメイン複合体抗体またはその断片は、単独で、または本明細書に記載されている他の治療モダリティと併用して対象に投与することができる。
【０３４２】
一実施形態では、対象は、例えば呼吸障害（例えば喘息（例えば、アレルギー性および非アレルギー性喘息））、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）ならびに気道炎症、好酸球増加、線維症および過剰な粘液産生が関与する他の状態；アトピー性障害（例えば、アトピー性皮膚炎およびアレルギー性鼻炎）；皮膚、胃腸管系臓器（例えば、潰瘍性大腸炎および／またはクローン病等の炎症性腸疾患（ＩＢＤ））および肝臓（例えば、肝硬変、線維症）の炎症性および／または自己免疫性状態；強皮症；腫瘍またはがん、例えば、本明細書に記載されているホジキンリンパ腫を含む１つまたは複数のＧＤＦ１１関連障害を患う哺乳動物、例えばヒトである。したがって、本開示は、本明細書に記載されている処置のためのＧＤＦ１１プロドメイン複合体結合剤（例えば、本明細書に記載されている抗ＧＤＦ１１プロドメイン複合体抗体またはその断片）の使用、および、本明細書に記載されている処置のための医薬を調製するための、ＧＤＦ１１プロドメイン複合体結合剤（例えば、本明細書に記載されている抗ＧＤＦ１１プロドメイン複合体抗体またはその断片）の使用を含む。
【０３４３】
一実施形態では、ＧＤＦ１１関連障害の例には、限定されずに、貧血または赤血球過形成が含まれる。別の実施形態では、ＧＤＦ１１関連障害の例には、限定されずに、以下のうちの１つまたは複数から選択される障害が含まれる：
【０３４４】
本明細書に記載されている、呼吸障害、例えば喘息（例えば、アレルギー性および非アレルギー性喘息（例えば、例えば若齢児童における、例えばＲＳウイルス（ＲＳＶ）による感染による喘息））、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、ならびに、気道炎症、好酸球増加、線維症および過剰な粘液産生が関与する他の状態、例えば嚢胞性線維症および肺線維症；例えばＧＤＦ１１に対する感受性の増加から生じるアトピー性障害（例えば、アトピー性皮膚炎、じんま疹、湿疹、アレルギー性鼻炎およびアレルギー性胃腸炎）；皮膚（例えば、アトピー性皮膚炎）、胃腸管系臓器（例えば、潰瘍性大腸炎および／またはクローン病等の炎症性腸疾患（ＩＢＤ））、肝臓（例えば、肝硬変、肝細胞癌）の炎症性および／または自己免疫性状態、ならびに強皮症；腫瘍またはがん（例えば、軟組織または固形腫瘍）、例えば白血病、神経膠芽腫およびリンパ腫、例えばホジキンリンパ腫；ウイルス感染症（例えば、ＨＴＬＶ−１から生じる）；他の臓器の線維症、例えば、肝臓の線維症（例えば、Ｂ型および／またはＣ型肝炎ウイルスによって引き起こされる線維症）；ならびに、保護的１型免疫応答（例えば、ワクチン接種の間の）の発現の抑制。
【０３４５】
他の実施形態では、本出願は、呼吸障害、例えば喘息（例えば、アレルギー性および非アレルギー性喘息）；アレルギー；慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）；気道炎症、好酸球増加、線維症および過剰な粘液産生が関与する状態、例えば嚢胞性線維症および肺線維症に関連した１つまたは複数の症状を処置（例えば、軽減、軽快）または予防する方法を提供する。例えば、喘息の症状には、限定されずに、喘鳴、息切れ、気管支収縮、気道反応亢進、減少した肺気量、線維症、気道炎症および粘液産生が含まれる。本方法は、対象に、ＧＤＦ１１プロドメイン複合体アンタゴニスト、例えば、ＧＤＦ１１プロドメイン複合体抗体またはその断片を、１つまたは複数の症状の処置（例えば、軽減、軽快）または予防に十分な量で投与することを含む。ＧＤＦ１１プロドメイン複合体抗体は、治療的または予防的に、またはその両方で投与することができる。ＧＤＦ１１プロドメイン複合体アンタゴニスト、例えば抗ＧＤＦ１１プロドメイン複合体抗体またはその断片は、単独で、または本明細書に記載されている他の治療モダリティと併用して対象に投与することができる。別の実施形態では、対象は、本明細書に記載されているＧＤＦ１１関連障害を患う哺乳動物、例えばヒトである。
【０３４６】
別の態様では、本開示の結合性タンパク質は、ミオパシーに関連した疾患または障害を処置するのに有益である。本明細書で使用するように、用語「ミオパシー」は、筋線維が適切に機能せず、筋肉の脱力を一般的にもたらす筋疾患を指す。ミオパシーは、性質が神経筋または筋骨格である筋疾患を含む。一部の実施形態では、ミオパシーは遺伝性ミオパシーである。遺伝性ミオパシーには、限定されずに、ジストロフィー、ミオトニー、先天性ミオパシー（例えば、ネマリンミオパシー、多重／ミニコアミオパシーおよび中心核ミオパシー）、ミトコンドリアのミオパシー、家族性周期的ミオパシー、炎症性ミオパシーおよび代謝ミオパシー（例えば、糖原病および脂質貯蔵障害）が含まれる。一部の実施形態では、ミオパシーは後天性ミオパシーである。後天性ミオパシーには、限定されずに、外部物質誘導ミオパシー（例えば、薬物性ミオパシーおよびグルココルチコイドミオパシー、アルコール性ミオパシーおよび他の毒性薬剤によるミオパシー）、筋肉炎（例えば、皮膚筋炎、多発筋炎（polymositis）および封入体筋肉炎）、骨化性筋炎、横紋筋融解およびミオグロビン尿症、および非活動萎縮が含まれる。一部の実施形態では、ミオパシーは非活動萎縮であり、それは骨折（例えば股関節部骨折）または神経損傷（例えば、脊髄損傷（ＳＣＩ））によって引き起こされ得る。一部の実施形態では、ミオパシーは、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、脊髄筋萎縮（ＳＭＡ）、腎不全による悪液質症候群、ＡＩＤＳ、心臓の状態および／またはがんなどの疾患または障害に関連している。一部の実施形態では、ミオパシーは加齢に関連する。
【０３４７】
本開示の態様は、ミオパシーを有する対象の処置方法を含み、本方法は、本明細書に記載されている結合性タンパク質の有効量を対象に投与することを含む。一部の実施形態では、ミオパシーは原発性ミオパシーである。別の実施形態では、原発性ミオパシーは、非活動萎縮を含む。他の実施形態では、非活動萎縮は、股関節部骨折、選択的関節置換、救命救急ミオパシー、脊髄損傷または脳卒中と関連する。一部の実施形態では、ミオパシーは、筋肉喪失が疾患病状に続発する二次性のミオパシーである。他の実施形態では、二次性のミオパシーは、脱神経、遺伝的筋力低下または悪液質を含む。別の実施形態では、二次性のミオパシーは、筋萎縮性側索硬化症または脊髄筋萎縮に伴う脱神経である。一部の実施形態では、二次性のミオパシーは、筋ジストロフィーに伴う遺伝的筋力低下である。他の実施形態では、二次性のミオパシーは、腎不全、ＡＩＤＳ、心臓の状態、がんまたは加齢に伴う悪液質である。
【０３４８】
本開示の別の態様は、加齢に関連した疾患または状態を有する対象の処置方法を含む。加齢に関連した例示的な疾患および状態には、限定されずに、サルコペニア（加齢性筋肉喪失）、虚弱およびアンドロゲン欠乏症が含まれる。
【０３４９】
本開示の別の態様は、非活動萎縮／外傷に関連した疾患または状態を有する対象の処置方法を含む。非活動萎縮／外傷に関連した例示的な疾患および状態には、限定されずに、集中治療室（ＩＣＵ）で費やした時間に関連した筋力低下、腰部／関節置換、股関節部骨折、脳卒中、床上安静、ＳＣＩ、回旋腱板損傷、膝関節置換、骨折および火傷が含まれる。
【０３５０】
本開示の別の態様は、神経変性疾患または状態を有する対象の処置方法を含む。例示的な神経変性疾患または状態には、限定されずに、脊髄筋萎縮および筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）が含まれる。
【０３５１】
本開示の別の態様は、悪液質に関連した疾患または状態を有する対象の処置方法を含む。悪液質に関連した例示的な疾患および状態には、限定されずに、がん、慢性心不全、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）および慢性腎臓疾患（ＣＫＤ）が含まれる。
【０３５２】
本開示の別の態様は、稀な疾患に関連した疾患または状態を有する対象の処置方法を含む。例示的な稀な疾患および状態には、限定されずに、骨形成不全、散発性の封入体筋肉炎および急性のリンパ芽球性白血病が含まれる。
【０３５３】
本開示の別の態様は、代謝障害および／または体組成に関連した疾患または状態を有する対象の処置方法を含む。一部の実施形態では、疾患または状態は、肥満（例えば、重度の肥満）、プラダー−ウィリー、ＩＩ型糖尿病または食欲不振である。しかし、代謝障害および／または体組成に関連したさらなる疾患または状態は当業者にとって明らかなはずであり、この開示の範囲内である。
【０３５４】
本開示の別の態様は、先天性ミオパシーに関連した疾患または状態を有する対象の処置方法を含む。例示的な先天性ミオパシーには、限定されずに、Ｘ連鎖筋細管ミオパシー、常染色体優性中心核ミオパシー、常染色体劣性中心核ミオパシー、ネマリンミオパシーおよび先天性線維型不均衡ミオパシーが含まれる。
【０３５５】
本開示の別の態様は、筋ジストロフィーに関連した疾患または状態を有する対象の処置方法を含む。例示的な筋ジストロフィーには、限定されずに、デュシェンヌ、ベッカー、顔面肩甲上腕型（ＦＳＨ）および肢帯筋ジストロフィーが含まれる。本開示の別の態様は、泌尿婦人科関連の疾患もしくは状態、声門の障害（狭窄症）、外眼性ミオパシー、心皮トンネル、ギラン−バレーまたは骨肉腫を有する対象の処置方法を含む。
【０３５６】
別の態様では、本開示の結合性タンパク質は、地中海貧血症、ベータ地中海貧血症、貧血、鉄欠乏性貧血、プランマー−ヴィンソン症候群、悪性貧血、巨赤芽球性貧血、タンパク欠乏貧血、壊血病、有棘赤血球増加、アルファ地中海貧血症、無形成性貧血、先天性異常造血性貧血、溶血性貧血ファンコーニ貧血、遺伝性球状赤血球症（sperocytosis）、遺伝性楕円赤血球症、遺伝性熱変形赤血球症（pyropoilikocytosis）寒冷赤血球凝集素病、溶血性尿毒症症候群、高貧血、無効赤血球生成（erythropesis）、大赤血球性（cacrocytic）貧血、骨髄癆性貧血、神経有棘赤血球増加、舞踏病、有棘赤血球増加、ピルビン酸キナーゼ欠乏、鎌状赤血球症、トリオースリン酸（thriosephophosphate）イソメラーゼ欠乏、関節炎、変形性関節炎、若年性慢性関節炎、敗血性関節炎、ライム関節炎、乾癬性関節炎、反応性関節炎、脊椎関節症、全身性エリテマトーデス、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、インスリン依存型糖尿病、甲状腺炎、喘息、アレルギー性疾患、乾癬、皮膚炎強皮症、移植片対宿主病、臓器移植拒絶反応、臓器移植に関連した急性または慢性的免疫疾患、サルコイドーシス、アテローム硬化症、播種性血管内凝固、川崎病、グレーブス病、ネフローゼ症候群、慢性疲労症候群、ヴェーゲナー肉芽腫症、ヘノッホ−シェーンライン紫斑病、腎臓の顕微鏡的血管炎、慢性活動性肝炎、ブドウ膜炎、敗血症性ショック、毒性ショック症候群、敗血症症候群、悪液質、感染性疾患、寄生虫疾患、後天性免疫不全症候群、急性の横断脊髄炎、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、アルツハイマー病、脳卒中、原発性胆汁性肝硬変、溶血性貧血、悪性腫瘍、心不全、心筋梗塞、アジソン病、散発性の多腺性欠乏症Ｉ型および多腺性欠乏症ＩＩ型、シュミット症候群、成人（急性）呼吸窮迫症候群、脱毛症、円形脱毛（alopecia  greata）、血清陰性関節症、関節症、ライター病、乾癬性関節症、潰瘍性大腸炎関節症、腸症滑膜炎、クラミジア、エルシニアおよびサルモネラ菌関連の関節症、脊椎関節症、アテローム疾患／動脈硬化、アトピー性アレルギー、自己免疫性水疱性疾患、尋常天疱瘡、落葉状天疱瘡、類天疱瘡、線状ＩｇＡ疾患、自己免疫性溶血性貧血、クームス陽性溶血性貧血、後天性悪性貧血、若年性悪性貧血、筋肉痛脳炎／ロイヤルフリー病、慢性的粘膜皮膚カンジダ症、巨細胞性動脈炎、原発性硬化性肝炎、原因不明自己免疫性肝炎、後天性免疫不全疾患症候群、後天性免疫不全関連疾患、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、分類不能免疫不全症（分類不能低ガンマグロブリン血症）、拡張型心筋症、雌不妊症、卵巣不全、未熟卵巣不全、線維性肺疾患、原因不明線維化性肺胞炎、炎症後間質性肺疾患、間質性肺臓炎、結合組織疾患関連間質性肺疾患、混合性結合組織疾患関連肺疾患、全身性硬化関連間質性肺疾患、慢性関節リウマチ関連間質性肺疾患、全身性エリテマトーデス関連肺疾患、皮膚筋炎／多発筋炎関連肺疾患、シェーグレン病関連肺疾患、強直性脊椎炎関連肺疾患、脈管炎散在性肺疾患、ヘモジデリン沈着関連肺疾患、薬物性間質性肺疾患、線維症、放射線維症、閉塞性細気管支炎、慢性的好酸球性肺炎、リンパ球浸潤性肺疾患、感染後間質性肺疾患、痛風関節炎、自己免疫性肝炎、１型自己免疫肝炎（古典的自己免疫性または狼瘡様肝炎）、２型自己免疫肝炎（抗ＬＫＭ抗体肝炎）、自己免疫媒介低血糖、黒色表皮腫を有するＢ型インスリン抵抗性、副甲状腺機能低下症、臓器移植に関連した急性免疫疾患、臓器移植に関連した慢性免疫疾患、骨関節症、原発性硬化性胆管炎、１型乾癬、２型乾癬、特発性白血球減少、自己免疫性好中球減少、腎臓疾患ＮＯＳ、糸球体腎炎、腎臓の顕微鏡的血管炎、ライム病、円板状エリテマトーデス、雄不妊症特発性またはＮＯＳ、精子自己免疫、多発性硬化症（全てのサブタイプ）、交感性眼炎、結合組織疾患に続発する肺高血圧、グッドパスチャー症候群、結節性多発動脈炎の肺発現症状、急性リウマチ熱、リウマチ様脊椎炎、スチル病、全身性硬化症、シェーグレン症候群、高安病／動脈炎、自己免疫性血小板減少、特発性の血小板減少、自己免疫性甲状腺疾患、甲状腺機能亢進症、甲状腺腫の自己免疫性甲状腺機能低下症（橋本病）、萎縮性自己免疫性甲状腺機能低下症、原発性粘液水腫、水晶体原性ブドウ膜炎、原発性血管炎、白斑急性肝疾患、慢性肝疾患、アルコール肝硬変、アルコール性肝臓損傷、胆汁うっ滞（choleosatatis）、特有の肝疾患、薬物性肝炎、非アルコール性脂肪肝炎、アレルギーおよび喘息、Ｂ群連鎖球菌（ＧＢＳ）感染症、精神障害（例えば、うつ病および統合失調症）、Ｔｈ２型およびＴｈ１型媒介疾患、急性および慢性疼痛（疼痛の異なる形態）、ならびに、がん、例えば肺、乳房、胃、膀胱、結腸、膵臓、卵巣、前立腺および直腸のがんおよび造血系悪性腫瘍（白血病およびリンパ腫）、ベータリポタンパク質血症（abetalipoprotemia）、肢端チアノーゼ、急性および慢性の寄生性または感染性のプロセス、急性白血病、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性または慢性の細菌感染症、急性膵臓炎、急性腎不全、腺癌、空中異所性拍動、ＡＩＤＳ認知症複合群、アルコール性肝炎、アレルギー性結膜炎、アレルギー性接触性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、同種異系移植片拒絶反応、アルファ−１−抗トリプシン欠乏症、筋萎縮性側索硬化症、貧血、狭心症、前角細胞変性、抗ｃｄ３療法、抗リン脂質症候群、抗受容体過敏性反応、大動脈および末梢動脈瘤（aordic  and  peripheral  aneuryisms）、大動脈切開、動脈高血圧、動脈硬化、動静脈フィステル、運動失調、心房細動（持続性または発作性の）、心房性粗動、房室ブロック、Ｂ細胞リンパ腫、骨移植拒絶反応、骨髄移植（ＢＭＴ）拒絶反応、脚ブロック、バーキットリンパ腫、火傷、心臓不整脈、心臓気絶症候群、心臓腫瘍、心筋症、心肺バイパス炎症応答、軟骨移植拒絶、小脳皮質変性、小脳障害、無秩序なまたは多病巣性の心房性頻拍、化学療法関連障害、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性アルコール中毒、慢性炎症性病状、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性サリチル酸中毒、結腸直腸癌、うっ血性心不全、結膜炎、接触性皮膚炎、肺性心、冠状動脈疾患、クロイツフェルトヤコブ病、培養陰性敗血症、嚢胞性線維症、サイトカイン療法関連障害、ボクサー認知症、脱髄疾患、デング出血熱、皮膚炎、皮膚疾患、糖尿病、真性糖尿病、糖尿病性動脈硬化症、散在性レーヴィ小体疾患、拡張型うっ血型心筋症、基底核の障害、中年のダウン症候群、ＣＮＳドーパミン受容���を遮断する薬物によって誘導される薬物性運動障害、薬物感受性、湿疹、脳脊髄炎、心内膜炎、内分泌障害、喉頭蓋炎、エプスタインバーウイルス感染症、肢端紅痛症、錐体外路および小脳障害、家族性血球貪食リンパ組織球増多症、胎児の胸腺インプラント拒絶反応、フリートライヒの運動失調、機能的末梢動脈障害、真菌敗血症、ガス壊疸、胃潰瘍、糸球体腎炎、任意の臓器または組織の移植拒絶反応、グラム陰性敗血症、グラム陽性敗血症、細胞内生物体による肉芽腫、毛様細胞白血病、ハレルフォルデン−スパッツ病、橋本の甲状腺炎、花粉症、心臓移植拒絶反応、ヘモクロマトーシス、血液透析、溶血性尿毒症症候群／血栓溶解剤血小板減少性紫斑病、出血、肝炎（Ａ）、ヒス束不整脈、ＨＩＶ感染症／ＨＩＶ神経障害、ホジキン病、多動障害、過敏性反応、過敏性肺炎、高血圧、運動低下障害、視床下部−脳下垂体−副腎系評価、特発性アジソン病、特発性肺線維症、抗体媒介細胞毒性、無力、乳児脊髄筋萎縮、大動脈の炎症、Ａ型インフルエンザ、電離放射線曝露、虹彩毛様体炎／ブドウ膜炎／眼神経炎、虚血−再かん流損傷、虚血性脳卒中、若年性関節リウマチ、若年性脊髄筋萎縮、カポジ肉腫、腎臓移植拒絶反応、レジオネラ、リーシュマニア症、ハンセン病、皮質脊髄系の病変、脂肪浮腫、肝移植拒絶反応、リンパ水腫（lymphederma）、マラリア、悪性リンパ腫、悪性組織球症、悪性メラノーマ、髄膜炎、髄膜炎菌血、代謝／特発性、片頭痛、ミトコンドリアの多重系障害、混合性結合組織疾患、モノクローナル高ガンマグロブリン血症、多発性骨髄腫、多重系変性（メンセルデジェリーヌ−トーマスシ−ドレーガーおよびマチャド−ジョセフ）、重症筋無力症、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ、マイコバクテリウム結核、骨髄異形成（myelodyplastic）症候群、心筋梗塞、心筋虚血性障害、上咽頭癌、新生児慢性肺疾患、腎炎、ネフローゼ、神経変性疾患、神経原性Ｉ筋萎縮、好中球減少性発熱、非ホジキンリンパ腫、腹大動脈およびその支脈の閉塞、閉塞性（occulsive）動脈障害、ｏｋｔ３療法、精巣炎／精巣上体炎、精巣炎／精管切除反転処置、臓器肥大、骨粗しょう症、膵臓移植拒絶、膵臓癌、悪性腫瘍の腫瘍随伴症候群／カルシウム過剰血、副甲状腺移植拒絶、骨盤炎症性疾患、超季節性鼻炎、心膜疾患、末梢アテローム硬化性疾患、末梢血管障害、腹膜炎、悪性貧血、ニューモシスチスカリニ肺炎、肺炎、ＰＯＥＭＳ症候群（多発性ニューロパシー、臓器肥大、内分泌障害、モノクローナル高ガンマグロブリン血症および皮膚変化症候群）、かん流後症候群、ポンプ後症候群、心筋梗塞後開心術症候群、子癇前症、進行性の核上麻痺、原発性肺高血圧、放射線療法、レイノーの現象および疾患、レイノー病、レフスム病、規則的な狭ＱＲＳ心頻拍、腎血管性高血圧、再かん流損傷、収縮性心筋症、肉腫、強皮症、老年性舞踏病、レーヴィ小体型の老人性痴呆、血清陰性の関節症、ショック、鎌状赤血球貧血、皮膚同種異系移植片拒絶反応、皮膚変化症候群、小腸移植拒絶、固形腫瘍、特異的不整脈、脊髄性運動失調、脊髄小脳変性、連鎖球菌性筋肉炎、小脳の構造的病変、亜急性硬化性全脳炎、失神、心血管系の梅毒、全身性アナフィラキシー（anaphalaxis）、全身性炎症性応答症候群、全身性発症若年性関節リウマチ、Ｔ細胞またはＦＡＢ  ＡＬＬ、毛細管拡張症、バージャー病、血小板減少、毒性、移植、外傷／出血、ＩＩＩ型過敏反応、ＩＶ型過敏性、不安定狭心症、尿毒症、尿路性敗血症、じんま疹、弁膜性心疾患、拡張蛇行静脈、血管炎、静脈疾患、静脈血栓、心室細動、ウイルスおよび真菌感染症、重大な脳炎／無菌髄膜炎、生命に関連する食血細胞症候群、ヴェルニッケ−コルサコフ症候群、ウィルソン病、任意の臓器または組織の異種移植拒絶反応、急性冠動脈症候群、急性特発性多発性神経炎、急性炎症性脱髄性多発神経根筋障害、急性虚血、成人のスチル病、円形脱毛、アナフィラキシー、抗リン脂質抗体症候群、無形成性貧血、動脈硬化、アトピー性湿疹、アトピー性皮膚炎、自己免疫性皮膚炎、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染に伴う自己免疫性障害、自己免疫性腸疾患、自己免疫性聴力障害、自己免疫性リンパ組織増殖性症候群（ＡＬＰＳ）、自己免疫性心筋炎、自己免疫性未熟卵巣不全、眼瞼炎、気管支拡張症、水疱性類天疱瘡、心血管疾患、破滅的な抗リン脂質症候群、セリアック病、頸部脊椎症、慢性虚血、瘢痕性類天疱瘡、多発性硬化症の危険がある臨床的に独立した症候群（ＣＩＳ）、結膜炎、小児期発症精神障害、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、涙嚢炎、皮膚筋炎、糖尿病網膜症、真性糖尿病、椎間板ヘルニア、椎間板脱出症、薬物性免疫性溶血性貧血、心内膜炎、子宮内膜症、眼内炎、上強膜炎、多形紅斑、重症多形紅斑、妊娠期類天疱瘡、ギランバレー症候群（ＧＢＳ）、花粉症、ヒューズ症候群、特発性パーキンソン病、特発性間質性肺炎、ＩｇＥ媒介アレルギー、免疫性溶血性貧血、封入体筋肉炎、感染性眼炎症性疾患、炎症性脱髄疾患、炎症性心疾患、炎症性腎臓疾患、ＩＰＦ／ＵＩＰ、虹彩炎、角膜炎、乾性角結膜炎（keratojuntivitis）、クスマウル病またはクスマウル−マイヤー病、ランドリー麻痺、ランゲルハンス細胞組織球症、網状皮斑、黄斑変性症、顕微鏡的多発血管炎、べヒデレフ病、運動ニューロン障害、粘膜類天疱瘡、多臓器不全、重症筋無力症、骨髄異形成症候群、心筋炎、神経根障害、神経障害、非Ａ非Ｂ型肝炎、視神経炎、骨溶解、少関節型ＪＲＡ、末梢動脈閉塞性疾患（ＰＡＯＤ）、末梢血管疾患（ＰＶＤ）、末梢動脈疾患（ＰＡＤ）、静脈炎、結節性多発動脈炎（または、結節性動脈
周囲炎）、多発性軟骨炎、リウマチ性多筋痛、白毛、多関節型ＪＲＡ、多内分泌欠乏症候群、多発筋炎、リウマチ性多筋痛（ＰＭＲ）、ポンプ後症候群、原発性パーキンソン症候群、前立腺炎、赤芽球癆、原発性副腎機能不全、再発性視神経脊髄炎、再狭窄、リウマチ性心疾患、ＳＡＰＨＯ（滑膜炎、にきび、膿疱症、骨化過剰および骨炎）、強皮症、二次性アミロイド症、ショック肺、強膜炎、座骨神経痛、二次性副腎機能不全、シリコーン関連結合組織疾患、スネッドン−ウィルキンソン皮膚症、強直性脊椎炎、スティーブンズ−ジョンソン症候群（ＳＪＳ）、全身性炎症性応答症候群、側頭動脈炎、トキソプラスマ性網膜炎、毒性表皮性表皮壊死症、横断脊髄炎、ＴＲＡＰＳ（腫瘍壊死因子受容体、１型アレルギー反応、ＩＩ型糖尿病、じんま疹、通常の間質性肺炎（ＵＩＰ）、血管炎、春季結膜炎、ウイルス性網膜炎、フォークト−小柳−原田症候群（ＶＫＨ症候群）、湿性黄斑変性症および創傷治癒からなる群から選択される障害を処置するために有益である。
【０３５７】
別の態様では、本開示の結合性タンパク質は、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、副腎皮質癌、肛門がん、虫垂がん、小脳星状細胞腫、脳星状細胞腫、基底細胞癌、胆管がん、肝臓外、膀胱がん、骨がん、骨肉腫／悪性線維性組織球腫脳幹神経膠腫、脳腫瘍、脳幹神経膠腫、脳星状細胞腫（Cerebral  strocytoma）／悪性神経膠腫、上衣細胞腫、髄芽細胞腫、テント上未分化神経外胚葉性腫瘍、視覚路および視床下部神経膠腫、乳がん、気管支腺腫／カルチノイド、カルチノイド腫瘍、カルチノイド腫瘍、未知原発の胃腸癌、中枢神経系リンパ腫、原発性小脳星状細胞腫、子宮頸がん、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病慢性骨髄増殖性疾患、結腸がん、結腸直腸がん、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、子宮体がん、上衣細胞腫、食道がん、ユーイングファミリーの腫瘍、頭蓋外胚細胞腫瘍、性腺外胚細胞腫瘍、肝臓外胆管がん、目がん、眼内メラノーマ網膜芽細胞腫、胆嚢がん、胃部（胃）がん、胃腸カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、頭蓋外胚細胞腫瘍、性腺外胚細胞腫瘍、卵巣の胚細胞腫瘍、妊娠期栄養膜腫瘍、神経膠腫、脳幹神経膠腫、脳星状細胞腫神経膠腫、小児期視覚路および視床下部神経膠腫、毛様細胞白血病、頭頸部がん、肝細胞性（肝臓）がん、ホジキンリンパ腫、下咽頭がん、眼内メラノーマ、島細胞癌（内分泌膵臓）、カポジ肉腫、腎臓（腎臓細胞）がん、喉頭がん、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、毛様細胞白血病、唇および口腔がん、肝がん、非小細胞肺がん、小細胞肺がん、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、バーキットリンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、ワルデンストレームマクログロブリン血症、骨の悪性線維性組織球腫／骨肉腫、髄芽細胞腫、メラノーマ、眼内（目）メラノーマ、メルケル細胞癌、悪性中皮腫、不顕性の原発による転移性扁平上皮頸部がん、口がん、多発性内分泌腺新生物症候群、多発性骨髄腫／形質細胞新生物、菌状息肉腫、骨髄異形成症候群、脊髄形成異常／骨髄増殖性の疾患、骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、多発性骨髄腫、骨髄増殖性疾患、鼻腔および副鼻腔がん、鼻咽頭がん、神経芽細胞腫、口のがん、口腔がん、唇および口咽頭がん、骨の骨肉腫／悪性線維性組織球腫、卵巣がん、卵巣上皮がん、卵巣胚細胞腫瘍、卵巣の低悪性度腫瘍、膵臓がん、島細胞膵臓がん、副鼻腔および鼻腔がん、副甲状腺がん、陰茎がん、咽頭がん、褐色細胞腫、松果体芽細胞腫およびテント上未分化神経外胚葉性腫瘍、下垂体腫瘍、形質細胞新生物／多発性骨髄腫、胸膜肺の芽細胞腫、前立腺がん、直腸がん、腎臓細胞（腎臓）がん、腎臓骨盤および尿管、移行細胞がん、網膜芽細胞腫、唾液腺がん、肉腫、ユーイングファミリーの腫瘍、カポジ肉腫、軟部組織肉腫、子宮肉腫、セザリー症候群、皮膚がん（非メラノーマ）、皮膚がん（メラノーマ）、メルケル細胞皮膚癌、小腸がん、扁平上皮癌、不顕性原発による転移性扁平上皮頸部がん、胃（胃部）がん、テント上未分化神経外胚葉性腫瘍、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、精巣がん、咽喉がん、胸腺腫、胸腺腫および胸腺癌、甲状腺がん、腎盤および尿管の移行細胞がん、妊娠期栄養膜腫瘍、尿管および腎���、移行細胞がん、尿道がん、子宮がん、子宮内膜子宮肉腫、膣がん、視覚路および視床下部神経膠腫、外陰部がん、ワルデンストレームマクログロブリン血症およびウィルムス腫瘍からなる群から選択される障害の処置に有益である。
【０３５８】
別の態様では、本開示は、ヒトＧＤＦ１１が有害である障害を患う患者を処置する方法であって、上で開示した結合性タンパク質のいずれか１つを、本明細書で考察した第２の薬剤の投与の前に、それと同時に、またはその後に投与するステップを含む方法を提供する。一実施形態では、１つまたは複数のＧＤＦ１１アンタゴニスト（例えば、抗ＧＤＦ１１プロドメイン複合体抗体またはその断片）と同時投与および／または共製剤化することができるさらなる治療剤には、限定されずに以下のうちの１つまたは複数が含まれる：吸入ステロイド；経口ステロイド；ベータ−アゴニスト、例えば、短時間作用性または長時間作用性のベータ−アゴニスト；ロイコトリエンまたはロイコトリエン受容体のアンタゴニスト；ＡＤＶＡＩＲなどの配合薬；ＩｇＥ阻害剤、例えば、抗ＩｇＥ抗体（例えば、ＸＯＬＡＩＲ）；ホスホジエステラーゼ阻害剤（例えば、ＰＤＥ４阻害剤）；キサンチン；抗コリン薬；クロモリンなどの肥満細胞安定化剤；ＩＬ−４阻害剤；ＩＬ−５阻害剤；エオタキシン／ＣＣＲ３阻害剤；Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３およびＨ４を含むヒスタミンまたはその受容体のアンタゴニスト、ならびにプロスタグランジンＤまたはその受容体のアンタゴニスト（ＤＰ１およびＣＲＴＨ２）。そのような組合せは、喘息および他の呼吸障害を処置するのに使用することができる。１つまたは複数の抗ＧＤＦ１１抗体またはその断片と同時投与および／または共製剤化することができる治療剤のさらなる例には、なかでも、以下のうちの１つまたは複数が含まれる：ＴＮＦアンタゴニスト（例えば、ＴＮＦ受容体、例えばｐ５５またはｐ７５ヒトＴＮＦ受容体またはその誘導体、例えば７５ｋＤ  ＴＮＦＲ−ＩｇＧ（７５ｋＤ  ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質、ＥＮＢＲＥＬ）の可溶性断片）；ＴＮＦ酵素アンタゴニスト、例えば、ＴＮＦ変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤；ムスカリン受容体アンタゴニスト；ＴＧＦ−ベータアンタゴニスト；インターフェロンガンマ；ピルフェニドン；化学療法剤、例えば、メトトレキセート、レフルノミドまたはシロリムス（ラパマイシン）またはその類似体、例えば、ＣＣＩ−７７９；ＣＯＸ２およびｃＰＬＡ２阻害剤；ＮＳＡＩＤ；免疫調節物質；ｐ３８阻害剤、ＴＰＬ−２、ＭＫ−２およびＮＦκＢ阻害剤。さらなる第２の薬剤は、ブデノシド、上皮増殖因子、副腎皮質ステロイド、シクロスポリン、スルファサラジン、アミノサリチル酸塩、６−メルカプトプリン、アザチオプリン、メトロニダゾール、リポオキシゲナーゼ阻害剤、メサラミン、オルサラジン、バルサラジド、抗酸化剤、トロンボキサン阻害剤；ＩＬ−１受容体アンタゴニスト、抗ＩＬ−１．ベータ．モノクローナル抗体、抗ＩＬ−６モノクローナル抗体、増殖因子、エラスターゼ阻害剤、ピリジニル−イミダゾール化合物、ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦおよびＰＤＧＦの抗体またはアゴニスト、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ９０またはそれらのリガンドの抗体、メトトレキセート、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸モフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ、イブプロフェン、副腎皮質ステロイド、プレドニゾロン、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデノシン（adensosine）アゴニスト、抗血栓薬、補体阻害剤、アドレナリン作動薬、ＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８、ＭＡＰキナーゼ阻害剤、ＩＬ−１．ベータ、変換酵素阻害剤、ＴＮＦ変換酵素阻害剤、Ｔ細胞シグナル伝達阻害剤、メタロプロテイナーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンジオテンシン変換酵素阻害剤、可溶性サイトカイン受容体、可溶性ｐ５５ＴＮＦ受容体、可溶性ｐ７５ＴＮＦ受容体、ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−１ＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ、抗炎症サイトカイン、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１およびＴＧＦ−ベータからなる群から選択される。
【０３５９】
本開示の抗体またはその抗原結合性部分は、そのような疾患の処置のために、単独または併用で使用することができる。本開示の抗体またはその抗原結合性部分は、単独で、またはさらなる薬剤、例えば治療剤と併用して使用することができることを理解すべきであり、前記さらなる薬剤はその使用目的のために当業者によって選択される。例えば、さらなる薬剤は、本開示の抗体によって処置される疾患または状態の処置に有益であると当業者に認知されている治療剤であってよい。さらなる薬剤は、治療組成物に有益な属性を付与する薬剤、例えば組成物の粘度に影響する薬剤であってもよい。
【０３６０】
この開示に含まれる組合せは、それらの使用目的のために有益な組合せであることをさらに理解すべきである。下に示す薬剤は、例示が目的であり、限定するものでない。この開示の一部である組合せは、本開示の抗体および下のリストから選択される少なくとも１つのさらなる薬剤であってよい。その組合せが、形成される組成物がその予定の機能を遂行することができるようなものであるならば、組合せは、１を超えるさらなる薬剤、例えば２つまたは３つのさらなる薬剤を含むこともできる。
【０３６１】
併用療法は、本明細書でさらに記載されているように、１つまたは複数のさらなる治療剤、例えば１つまたは複数のサイトカインおよび増殖因子阻害剤、免疫抑制薬、抗炎症剤（例えば、全身性抗炎症剤）、抗線維症剤、代謝阻害剤、酵素阻害剤および／または細胞傷害性もしくは細胞増殖抑制剤と共製剤化および／または同時投与される、１つまたは複数のＧＤＦ１１プロドメイン複合体アンタゴニスト、例えば抗ＧＤＦ１１プロドメイン複合体抗体またはその断片を含むことができる。
【０３６２】
本開示の医薬組成物は、本開示の抗体または抗体部分の「治療的有効量」または「予防的有効量」を含むことができる。「治療的有効量」は、必要な投薬量および期間で、所望の治療結果を達成するのに有効な量を指す。抗体または抗体部分の治療的有効量は当業者が決定することができ、個体の疾患状態、年齢、性別および体重ならびに個体において所望の応答を導き出す抗体または抗体部分の能力などの因子によって異なることができる。さらに、治療的有効量は、抗体または抗体部分のいかなる毒性または有害作用よりも治療的に有益な作用が上回るものである。「予防的有効量」は、必要な投薬量および期間で、所望の予防結果を達成するのに有効な量を指す。一般的に、予防的用量は疾患の前かまたは初期の段階で対象において使用されるので、予防的有効量は治療的有効量より少なくなる。
【０３６３】
投薬レジメンは、最適な所望の応答（例えば、治療または予防応答）を提供するように調整することができる。例えば、単一のボーラスを投与することができるか、いくつかの分割用量を経時的に投与することができるか、または治療状況の緊急性によって指示される通り、用量をそれ相応に低減もしくは増加することができる。投与の容易さおよび投薬量の均一性のために、投薬単位剤形で非経口組成物を製剤化することが特に有利である。本明細書で使用される投薬単位剤形は、処置される哺乳動物対象のための単一投薬量として適している物理的に別個の単位を指し、各単位は、必要とされる薬用担体と共同して所望の治療効果を生むように計算された活性化合物の所定量を含有する。本開示の投薬単位剤形のための仕様は、（ａ）活性化合物の特異な特徴および達成すべき特定の治療または予防効果、ならびに（ｂ）個体の感受性の処置のためにそのような活性化合物を調合することの当技術分野で固有の限界によって決定づけられ、それに直接的に依存する。
【０３６４】
本開示の抗体または抗体部分の治療的または予防的に有効な量の例示的で非限定的な範囲は、０．１〜２０ｍｇ／ｋｇ、１〜１０ｍｇ／ｋｇである。投薬量の値は、軽減する状態のタイプおよび重症度によって異なることもある点に注意されたい。任意の特定の対象のために、個々の必要性および組成物の投与を管理または監督する者の専門的判断に従って具体的な投薬レジメンを経時的に調整するべきであること、ならびに、本明細書で示される投薬量範囲は単に例示であって、特許請求される組成物の範囲または実施を限定するものでないことをさらに理解されたい。
【０３６５】
別の実施形態では、本明細書に開示される医薬組成物は、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、関節内、気管支内、腹腔内、包内、軟骨内、空洞内、腔内、小脳内、側脳室内、結腸内、子宮頸内、胃内、肝内、心筋内、骨内、骨盤内、心膜内、腹腔内、胸膜腔内、前立腺内、肺内、直腸内、腎臓内、網膜内、脊椎内、関節滑液嚢内、胸内、子宮内、膀胱内、ボーラス、膣、直腸、口内、舌下、鼻腔内および経皮から選択される少なくとも１つの様式によって対象に投与される。
抗体生成における組換えおよびキメラタンパク質の使用
【０３６６】
一部の実施形態では、本明細書に記載されている組換えおよび／またはキメラタンパク質は、抗体を生成するための抗原（本明細書で、抗原性タンパク質と呼ばれる）として使用することができる。そのような抗原性タンパク質は、類似の野生型タンパク質では抗体生成のためによりアクセス可能でないことがあるエピトープを含むことができる。本開示の抗原性タンパク質に対する一部の抗体は、１つまたは複数のＧＰＣからの１つまたは複数の増殖因子の放出をモジュレートすることができる。一部のそのような抗体は、抗体を安定化すること［２つの薬剤の間の解離（例えばＧＰＣからの増殖因子放出、１つまたは複数のタンパク質相互作用からのＧＰＣ放出）を低減または阻止すること］、および／または放出すること［２つの薬剤の間の解離（例えばＧＰＣからの増殖因子放出、１つまたは複数のタンパク質相互作用からのＧＰＣ放出）を強化すること］ができる。本開示の抗原性タンパク質は、ＴＧＦ−β関連タンパク質ならびにその構成成分および／またはタンパク質モジュールを含むことができる。一部の場合には、本開示の抗原性タンパク質は、関連する増殖因子なしのプロドメイン、フューリン切断欠損突然変異体、細胞外タンパク質会合が欠損した突然変異体、および／またはその組合せを含むことができる。
【０３６７】
一部の実施形態では、抗原性タンパク質は、ＴＧＦ−β関連タンパク質および／またはそのモジュールを含むことができる。そのような抗原性タンパク質は、増殖因子がプロドメイン領域と会合するかまたはそれとの立体解析学的近接性を含む領域からのエピトープを含むことができる。そのようなエピトープに対する本開示の抗体は、増殖因子とプロドメインの間の重複領域に結合することができる。そのような抗体は、ＧＰＣからの増殖因子の解離を立体解析学的に阻害することができる。
【０３６８】
一部の実施形態では、抗原性タンパク質は、特定のＧＰＣからのプロドメインだけまたは増殖因子だけを含む。そのような抗原性タンパク質の上に存在するエピトープは、インタクトなＧＰＣでは保護されている、または曝露されていないことがある。本開示の一部の抗体は、そのようなエピトープに対するものであり得る。そのような抗体は抗体を放出し、ＧＰＣからの増殖因子の解離を促進することができる。さらなる抗体はプロドメイン結合に関して遊離の増殖因子と競合することができ、それによってＧＰＣからの増殖因子の解離を促進する。
【０３６９】
一部の実施形態では、抗原性タンパク質はプロタンパク質変換酵素（例えばフューリン）切断部位突然変異を含み得る。そのような突然変異は、それらのプロドメインからの増殖因子の酵素切断を阻止することができる。本開示の一部の抗体は、そのような突然変異タンパク質の上に存在するエピトープに対するものであり得る。そのような抗体は、プロドメインと増殖因子の間の会合を安定化することができる。一部の実施形態では、フューリン切断部位突然変異体は、本明細書に記載されているＤ２Ｇ突然変異体を含む。
【０３７０】
一部の実施形態では、プロドメインを含む抗原性タンパク質は、細胞外タンパク質とのプロドメイン会合の減少につながるＮ末端突然変異を含むことがあり、したがって、さもなければそれらの会合によって保護されるＮ末端領域でエピトープを提示することがある。本開示の一部の抗体は、そのようなエピトープに対するものであり得る。
【０３７１】
一部の実施形態では、本開示の抗原性タンパク質は、ＧＤＦからの１つまたは複数のタンパク質モジュール（例えばＧＤＦ１１および／またはＧＤＦ８）を含むことがある。一部の実施形態では、本開示の抗体は、ＧＤＦ１１タンパク質モジュールを含む抗原性タンパク質に対するものであり得る。一部の実施形態では、そのような抗体は、１つまたは複数のニッチでＧＤＦ１１のレベルおよび／または活性をモジュレートすることができる。一部の実施形態では、本開示の抗体は、ＧＰＣからのＧＤＦ１１増殖因子の放出を阻止することができる。一部の実施形態では、本開示の抗体は、筋肉組織の修復および／または強化に使用することができる。
【０３７２】
一部の実施形態では、本明細書に記載されている組換えタンパク質（キメラタンパク質を限定することなく含む）は、抗体開発の重要な標的である可能性のあるエピトープを同定およびマッピングする研究で使用することができる。そのような研究は、抗体結合後の増殖因子の放出またはＧＰＣの安定化を促進することができるエピトープを同定するために使用することができる。
【０３７３】
一部の場合には、本開示の組換えタンパク質は、抗体、抗体断片、および１つまたは複数の抗体または抗体断片を含む融合タンパク質を限定することなく含む、組換え結合性タンパク質を含むことができる。そのような組換え結合性タンパク質は、本明細書に記載されている１つまたは複数の組換え抗原を使用して開発された１つまたは複数の抗体からの１つまたは複数の領域を含むことができる。
放出抗体
【０３７４】
本開示の一部の態様は、放出抗体を提供する。本明細書において、用語「放出抗体」は、増殖因子が隔離されているＧＰＣ、細胞、ニッチ、天然の蓄積部位または任意の他の部位に対する抗体の導入の後に、不活性のおよび／またはプロドメイン会合増殖因子と比較した活性および／または遊離の増殖因子の比を増加させる抗体を指す。この関係において、放出抗体は、アゴニストとして特徴付けることができる。本明細書において、用語「天然の蓄積部位」は、増加したレベルの生体分子またはイオンが保存される細胞、組織または臓器の中の位置を指す。例えば、細胞外マトリックスは、１つまたは複数の増殖因子のための天然の蓄積部位の働きをすることができる。
【０３７５】
増殖因子放出のために必要な接触は、増殖因子の放出のための、ＧＰＣもしくはその構成成分、または細胞構造、例えば細胞外および／もしくは細胞性マトリックスタンパク質ならびに／または細胞外および／もしくは細胞性マトリックスに会合したタンパク質［例えば、フィブリリン（例えばフィブリリン−１、フィブリリン−２、フィブリリン−３および／またはフィブリリン−４）、ペルレカン、デコリン、エラスチン、コラーゲンおよび／またはＧＡＳＰ］との抗体の直接的または間接的な接触と規定することができる。本開示の抗体を放出抗体として特徴付けるために、増殖因子の少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれよりも多くの放出が十分である。抗体投与の後の増殖因子の放出は局所であってよく、持続的期間にわたって起こることができ、放出のピークまたは急騰を含むことができるものと理解される。本開示の抗体は、数分、数時間、数日またはより長期にわたって１つまたは複数の増殖因子を放出する働きをすることができる。
【０３７６】
放出プロファイルは、ｉｎ  ｖｉｖｏで接触してから約４時間から約７日以内に、またはｉｎ  ｖｉｔｒｏでより短い期間で初期のピークまたはバーストを有することができる。例えば、初期のピークまたはバーストは、約４時間から約５時間、または約４時間から約６時間、または約４時間から約７時間、または約４時間から約８時間、または約４時間から約９時間、または約４時間から約１０時間、または約４時間から約１１時間、または約４時間から約１２時間、または約４時間から約２４時間、または約４時間から約３６時間、または約４時間から約４８時間、または約１日から約７日、または約１日から約２日、または約１日から約３日、または約１日から約４日、または約４日から約５日、または約４日から約６日、または約４日から約７日で起こることができる。本開示の化合物および／または組成物は、存在する増殖因子の５〜１００％の放出を刺激することができる。例えば、増殖因子放出のパーセントは、約５％から約１０％、または約５％から約１５％、または約５％から約２０％、または約５％から約２５％、または約１０％から約３０％、または約１０％から約４０％、または約１０％から約５０％、または約１０％から約６０％、または約２０％から約７０％、または約２０％から約８０％、または約４０％から約９０％、または約４０％から約１００％であってよい。
【０３７７】
一部の実施形態では、本開示の放出抗体は、それらの半数最大有効濃度（ＥＣ５０）によって特徴付けることができる。一部の場合には、この値は、可能な活性の最大量の半分と等しい増殖因子活性の増加を生成するのに必要な抗体濃度を表すことができる。そのようなＥＣ５０値は、約０．００１ｎＭから約０．０１ｎＭ、約０．００５ｎＭから約０．０５ｎＭ、約０．０１ｎＭから約１ｎＭ、約０．０５ｎＭから約５ｎＭ、約０．１ｎＭから約１０ｎＭ、約０．５ｎＭから約２５ｎＭ、約１ｎＭから約５０ｎＭ、約５ｎＭから約７５ｎＭ、約１０ｎＭから約１００ｎＭ、約２５ｎＭから約２５０ｎＭ、約２００ｎＭから約１０００ｎＭまたは１０００ｎＭ超えであってよい。
【０３７８】
本明細書に記載されている方法によって生成される放出抗体は、表１に掲載されるプロタンパク質のいずれかを含むＧＰＣから増殖因子を放出するように生成することができる。一部の場合には、放出抗体は、ＧＤＦおよび／またはＧＤＦからの１つまたは複数のモジュールを含むＧＰＣに対するものである。本開示の一部の放出抗体は、ＧＰＣまたは他のタンパク質複合体からＧＤＦ１１を放出する。
安定化結合性タンパク質
【０３７９】
本開示の一部の態様は、安定化結合性タンパク質（例えば、抗体またはその抗原結合性部分）を提供する。例えば、本明細書において、用語「安定化抗体」は、増殖因子が隔離されている１つまたは複数のＧＰＣ、細胞、ニッチ、天然の蓄積部位および／または任意の他の部位に対する抗体の導入の後に、不活性のおよび／またはプロドメイン会合増殖因子と比較した活性および／または遊離の増殖因子の比を減少させる抗体を指す。この関係において、抗体は、アンタゴニストとして特徴付けることができる。本明細書において、「アンタゴニスト」は、別のものの生理的作用を妨害または阻害するものである。アンタゴニスト作用は、下流のシグナル伝達の刺激または活性化をもたらすことさえでき、したがって拮抗されるものと別個である別の経路に関してアゴニスト的に作用することができる。経路は相互関係を有するので、一非限定例では、ＴＧＦ−βアンタゴニストはＢＭＰアゴニストの働きをすることができ、逆もまた同じである。細胞性事象との関係で、本明細書において、用語「下流」は、本開示の化合物および／または組成物による作用、結合または標的化の後に起こる任意のシグナル伝達または細胞性事象を指す。
【０３８０】
阻害または安定化のために必要な接触は、抗体とＧＰＣもしくはその構成成分、または細胞構造、例えば細胞外および／もしくは細胞性マトリックスタンパク質ならびに／または細胞外および／もしくは細胞性マトリックスに会合したタンパク質［例えば、フィブリリン（例えばフィブリリン−１、フィブリリン−２、フィブリリン−３および／またはフィブリリン−４）、ペルレカン、デコリン、エラスチン、コラーゲンおよび／またはＧＡＳＰ］との直接的または間接的な接触であってよく、それにより増殖因子の放出が阻害される。一部の場合には、本開示の抗体を阻害性または安定化と特徴付けるために、増殖因子の少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれよりも多くの放出の阻害が十分ことがある。阻害抗体は、ＧＰＣを安定化し、それらをヘテロ二量体としてトラップすることができる。
【０３８１】
一部の場合には、本開示の阻害抗体は、ＧＤＦ１１阻害抗体である。そのような抗体は、ＧＰＣまたは他のタンパク質複合体からのＧＤＦ１１増殖因子の放出を遮断することができる。一部の場合には、さもなければ、ＧＤＦ１１阻害抗体はＧＤＦ１１増殖因子活性を低減または排除する。
【０３８２】
本開示の１つまたは複数の抗体との接触の後の増殖因子の放出の阻害は局所であってよく、持続的期間にわたって起こることができ、ピーク、トラフまたは急騰を含むことができるものと理解される。ＧＰＣを安定化する機能を果たすこともできる阻害抗体は、それらの放出動態によって規定することができる。増殖因子の放出および対応する放出動態は、局所の場合でさえ、直接的に測定することができるか、または下流のシグナル伝達事象によって推測することができる。一部の実施形態では、タンパク質もしくは核酸の濃度または表現型応答における変化は、本開示の化合物および／または組成物の効果の指標となることができる。
【０３８３】
本開示の抗体は、数分、数時間または数日にわたって増殖因子の放出を阻害する働きをすることができる。阻害および／または安定化プロファイルは、ｉｎ  ｖｉｖｏでの導入から約４時間から約７日以内に、またはｉｎ  ｖｉｔｒｏでより短い期間で初期のトラフを有することができる。例えば、阻害または安定化の初期のトラフは、約４時間から約５時間、または約４時間から約６時間、または約４時間から約７時間、または約４時間から約８時間、または約４時間から約９時間、または約４時間から約１０時間、または約４時間から約１１時間、または約４時間から約１２時間、または約４時間から約２４時間、または約４時間から約３６時間、または約４時間から約４８時間、または約１日から約７日、または約１日から約２日、または約１日から約３日、または約１日から約４日、または約４日から約５日、または約４日から約６日、または約４日から約７日で起こることができる。本開示の化合物および／または組成物の導入は、存在する増殖因子の５％から１００％の阻害および／または安定化に導くことができる。例えば、増殖因子の阻害または安定化のパーセントは、約５％から約１０％、約５％から約１５％、約５％から約２０％、約５％から約２５％、約１０％から約３０％、約１０％から約４０％、約１０％から約５０％、約１０％から約６０％、約２０％から約７０％、約２０％から約８０％、約４０％から約９０％、または約４０％から約１００％であってよい。
【０３８４】
一部の実施形態では、本開示の安定化抗体は、それらの半数最大阻止濃度（ＩＣ５０）によって特徴付けることができる。一部の場合には、この値は、抗体の最高濃度で観察される最大阻害の半分と等しい増殖因子活性の低下を生成するのに必要な抗体濃度を表すことができる。そのようなＩＣ５０値は、約０．００１ｎＭから約０．０１ｎＭ、約０．００５ｎＭから約０．０５ｎＭ、約０．０１ｎＭから約１ｎＭ、約０．０５ｎＭから約５ｎＭ、約０．１ｎＭから約１０ｎＭ、約０．５ｎＭから約２５ｎＭ、約１ｎＭから約５０ｎＭ、約５ｎＭから約７５ｎＭ、約１０ｎＭから約１００ｎＭ、約２５ｎＭから約２５０ｎＭ、約２００ｎＭから約１０００ｎＭまたは１０００ｎＭ超えであってよい。
【０３８５】
本明細書に記載されている方法によって生成される安定化抗体は、表１に掲載されるプロタンパク質のいずれかを含むＧＰＣからの増殖因子の放出を遮断するように生成することができる。そのような抗体は、ＧＰＣプロテアーゼ切断部位と物理的に相互作用することができ、および／またはそのような切断部位を標的とすることができるタンパク質分解酵素の相互作用を遮断することができる。一部の場合には、安定化抗体は、ＧＤＦおよび／またはＧＤＦからの１つまたは複数のモジュールを含むＧＰＣに対するものである。
【０３８６】
ＧＤＦ１１を含むＧＰＣに対する抗体を安定化することで、そのような複合体のメタロプロテイナーゼ切断を遮断することができる。そのような薬剤は、そのようなＧＰＣとそのようなＧＰＣを標的とするメタロプロテイナーゼの間の相互作用を物理的に阻止するような方法で、ＧＤＦ１１を含むＧＰＣに結合することができる。メタロプロテイナーゼ自体を実際に標的とする薬剤は、以前に記載されている（その内容は参照により本明細書に完全に組み込まれる、米国特許第７，５７２，５９９号を参照）。
結合性タンパク質選択
【０３８７】
所望の結合性タンパク質（例えば、抗体またはその抗原結合性部分）は、所望の抗原および／またはエピトープに会合する所望の結合性タンパク質の能力に基づいて２つまたはそれよりも多くの候補のより大きなプールから選択することができる。そのような抗原および／またはエピトープには、限定されずに、組換えタンパク質、キメラタンパク質、ＧＰＣ、プロドメイン、増殖因子、タンパク質モジュール、フィブリリン、ＧＡＳＰ、ＴＧＦ−β関連タンパク質および／またはその突然変異体および／またはバリアントおよび／または複合体および／または組合せを限定することなく含む、本明細書に記載されているもののいずれかが含まれ得る。一部の実施形態では、所望の抗体の選択は、抗体結合アッセイ、例えば表面プラズモン共鳴をベースとしたアッセイ、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）または蛍光フローサイトメトリーをベースとしたアッセイを使用して実行することができる。そのようなアッセイは、所望の抗体に結合する所望の抗原を利用することができ、次に、結合を検出する１つまたは複数の検出方法を使用することができる。
【０３８８】
一部の実施形態では、本開示の抗体は、複数の種からの所望の抗原および／またはエピトープに会合するそれらの能力に基づいて、２つまたはそれよりも多くの候補抗体のより大きなプールから選択することができる（本明細書で、「正の選択」と呼ばれる）。
【０３８９】
一部の実施形態では、そのような種は、脊椎動物の種を含むことができる。一部の実施形態では、そのような種は、哺乳動物の種を含むことができる。一部の実施形態では、そのような種は、限定することなく、マウス、ラット、ウサギ、ヤギ、ヒツジ、ブタ、ウマ、ウシおよび／またはヒトを含むことができる。
【０３９０】
一部の実施形態では、２つまたはそれよりも多くの候補抗体のより大きなプールから抗体を取り除くために、負の選択が使用される。本明細書において、用語「負の選択」は、１つまたは複数の所望されない抗原および／またはエピトープに結合するそれらの能力に基づく、群からの１つまたは複数の因子の排除を指す。一部の実施形態では、所望されない抗原および／またはエピトープには、限定されずに、組換えタンパク質、キメラタンパク質、ＧＰＣ、プロドメイン、増殖因子、タンパク質モジュール、フィブリリン、ＧＡＳＰ、ＴＧＦ−β関連タンパク質および／またはその突然変異体および／またはバリアントおよび／または組合せおよび／または複合体を限定することなく含む、本明細書に記載されているもののいずれかが含まれ得る。
【０３９１】
一部の実施形態では、本開示の抗体は、所与のニッチにおいて増殖因子のシグナル伝達および／またはレベル（例えば、ＧＤＦ増殖因子のシグナル伝達および／またはレベル）を低下させるプロドメイン（例えば、ＧＰＣのプロドメイン部分）に対するものであり得る。一部の実施形態では、プロドメインに対する本開示の抗体は、所与のニッチで増殖因子のシグナル伝達および／またはレベルを増加させることができる。一部の実施形態では、本開示の抗体は、１つまたは複数の細胞外タンパク質、例えばフィブリリン、ペルレカン（perlican）、デコリンおよび／またはＧＡＳＰと複合体を形成したときだけ、プロドメインおよび／またはＧＰＣに対するものであり得る。
【０３９２】
一部の実施形態では、本開示の抗体は、増殖因子のレベルおよび／または活性をモジュレートするそれらの能力に基づいて、２つまたはそれよりも多くの候補抗体のより大きなプールから選択することができる。一部の場合には、増殖因子活性アッセイは、増殖因子活性をモジュレートする候補抗体の能力を試験するために使用することができる。増殖因子活性アッセイは、本明細書の下に記載されている細胞に基づくアッセイを含むことができる。増殖因子活性に及ぼす候補抗体の影響を判定するために使用することができるさらなるアッセイには、限定されずに、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ウェスタンブロッティング、リポーターアッセイ（例えば、ルシフェラーゼをベースとしたリポーターアッセイまたは他の酵素をベースとしたリポーターアッセイ）、ＰＣＲ分析、ＲＴ−ＰＣＲ分析、および／または、その内容は参照により本明細書に完全に組み込まれる国際特許出願番号ＷＯ２０１４０７４５３２に記載されている方法のいずれかを含む、当技術分野で公知の他の方法が含まれる。
【０３９３】
一部の実施形態では、本明細書に開示される１つまたは複数の組換えタンパク質または抗体は、抗体を試験、開発および／または選択するアッセイで使用することができる。アッセイされる１つまたは複数の抗体の放出および／または安定化する能力を試験するために、組換えＧＰＣを発現させることができる。一部の実施形態では、組換えタンパク質は、アッセイの陽性または陰性の対照構成成分として発現させることができる。一部の実施形態では、増殖因子の放出および／または活性をモジュレートするために複数の組換えタンパク質を一度に発現させることができ、そのような組換えタンパク質はそのようなモジュレーションにおいて相乗的または拮抗的に作用することができる。
組換え結合性タンパク質
【０３９４】
本開示の組換え結合性タンパク質（例えば、抗体またはその抗原結合性部分）は、その内容は参照により本明細書に完全に組み込まれる国際特許出願番号ＷＯ２０１４０７４５３２に開示される方法のいずれかにより生成することができる。一部の実施形態では、組換え抗体は、本明細書に記載されている方法によって産生されるハイブリドーマ細胞由来の抗体から得られる可変ドメインを使用して産生することができる。抗体の重鎖および軽鎖可変領域ｃＤＮＡ配列は、標準の生化学的技術を使用して判定することができる。全ＲＮＡを抗体生産ハイブリドーマ細胞から抽出し、逆転写酵素（ＲＴ）ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によってｃＤＮＡに変換することができる。ＰＣＲ増幅を生じるｃＤＮＡの上で実行して、可変領域遺伝子を増幅することができる。そのような増幅は、重鎖および軽鎖の配列の増幅に特異的なプライマーの使用を含むことができる。他の実施形態では、組換え抗体は、他の供与源から得られる可変ドメインを使用して産生することができる。これは、抗原パニングで使用されるｓｃＦｖライブラリーなどの、１つまたは複数の抗体断片ライブラリーから選択される可変ドメインの使用を含む。結果として生じるＰＣＲ産物は、配列分析のためにプラスミドに次にサブクローニングすることができる。配列決定されると、抗体コード配列を発現ベクターに入れることができる。ヒト化のために、ヒト重鎖および軽鎖定常ドメインのコード配列を、相同的ネズミ配列の代わりに使用することができる。結果として生じる構築物は、大規模翻訳のために哺乳動物の細胞に次にトランスフェクトすることができる。
【０３９５】
一実施形態では、本開示は、上に開示される結合性タンパク質のいずれか１つおよびリンカーポリペプチドまたは免疫グロブリンを含む抗体構築物を提供する。別の実施形態では、抗体構築物は、免疫グロブリン分子、モノクローナル抗体、完全ヒト抗体、キメラ抗体、ＣＤＲグラフト抗体、ヒト化抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ジスルフィド連結されたＦｖ、ｓｃＦｖ、単一ドメイン抗体、ダイアボディ、多特異性抗体、二重特異性抗体および二特異性抗体からなる群から選択される。別の実施形態では、抗体構築物は、ヒトＩｇＭ定常ドメイン、ヒトＩｇＧ１定常ドメイン、ヒトＩｇＧ２定常ドメイン、ヒトＩｇＧ３定常ドメイン、ヒトＩｇＧ４定常ドメイン、ヒトＩｇＥ定常ドメインおよびヒトＩｇＡ定常ドメインからなる群から選択される重鎖免疫グロブリン定常ドメインを含む。別の実施形態では、本開示は、本明細書に開示される抗体構築物および薬剤を含む抗体コンジュゲートを提供し、薬剤は、免疫接着分子、イメージング剤、治療剤および細胞傷害剤からなる群から選択される。別の実施形態では、イメージング剤は、放射性標識、酵素、蛍光性標識、発光性標識、生物発光標識、磁気標識およびビオチンからなる群から選択される。別の実施形態では、イメージング剤は、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏおよび１５３Ｓｍからなる群から選択される放射性標識である。別の実施形態では、治療剤または細胞傷害剤は、代謝拮抗薬、アルキル化剤、抗生物質、増殖因子、サイトカイン、抗血管新生剤、有糸分裂阻害剤、アントラサイクリン、毒素およびアポトーシス剤からなる群から選択される。
【０３９６】
別の実施形態では、抗体構築物はグリコシル化される。別の実施形態では、グリコシル化は、ヒトグリコシル化パターンである。
細胞傷害性結合性タンパク質の開発
【０３９７】
一部の実施形態では、本開示の結合性タンパク質（例えば、抗体またはその抗原結合性部分）は、抗体依存性細胞媒介細胞傷害性（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）および／または抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）を誘導することが可能である。ＡＤＣＣは、免疫細胞攻撃の結果として細胞が溶解する免疫機構である。そのような免疫細胞は、ＣＤ５６＋細胞、ＣＤ３ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単球および好中球を含むことができる（Strohl,  W.R.  Therapeutic  Antibody  Engineering、Woodhead  Publishing、Philadelphia  PA.２０１２年、第８章、１８６頁、その内容は参照により本明細書に完全に組み込まれる）。
【０３９８】
一部の場合には、本開示の結合性タンパク質（例えば、抗体またはその抗原結合性部分）は、抗原との結合の後にＡＤＣＣまたはＡＤＣＰが所望されるかどうかによって、所与のアイソタイプを含むように工学的に操作することができる。そのような結合性タンパク質は、例えば、Alderson,  K.L.ら、J  Biomed  Biotechnol.２０１１年、２０１１巻：３７９１２３頁によって開示される方法のいずれかによって工学的に操作することができる。マウス抗体の場合、異なるアイソタイプの抗体が、ＡＤＣＣの促進でより有効である。ＩｇＧ２ａは、例えば、ＩｇＧ２ｂよりＡＤＣＣの誘導でより有効である。マウスＩｇＧ２ｂ抗体を含む本開示の一部の抗体は、ＩｇＧ２ａ抗体を含むように再設計することができる。そのような再設計された抗体は、細胞関連抗原への結合の後にＡＤＣＣの誘導でより有効である可能性がある。
【０３９９】
一部の実施形態では、本開示の方法によって生成される抗体の可変領域をコードする遺伝子は、ヒトＦｃ領域をコードする哺乳動物の発現ベクターにクローニングすることができる。そのようなＦｃ領域は、ヒトＩｇＧ１κからのＦｃ領域を含むことができる。ＩｇＧ１κのＦｃ領域は、Ｆｃ受容体結合および抗体依存性細胞媒介細胞傷害性ＡＤＣＣを強化することが公知であるアミノ酸突然変異を含むことができる。
【０４００】
一部の場合には、抗体は、ＡＤＣＣを低減するように工学的に操作することができる。一部の場合には、循環中のより長い半減期を可能にする免疫媒介クリアランスの不在または限界のために、ＡＤＣＣを活性化しない、または低減したレベルのＡＤＣＣと関連する抗体は、本開示の抗体実施形態のために望ましいことがある。
抗体断片ディスプレイライブラリースクリーニング技術
【０４０１】
一部の実施形態では、本開示の抗体は、ハイスループット発見方法を使用して産生および／または最適化することができる。そのような方法は、その内容は参照により本明細書に完全に組み込まれる、国際特許出願番号ＷＯ２０１４０７４５３２に開示されるディスプレイ技術（例えば、ディスプレイライブラリースクリーニング技術）のいずれかを含むことができる。一部の実施形態では、ディスプレイ技術（例えば、ファージディスプレイ技術）を使用して標的抗原をスクリーニングすることによって、合成抗体を設計、選択または最適化することができる。ファージディスプレイライブラリーは、数１００万から数１０億のファージ粒子を含むことができ、各々はそれらのウイルスコートの上で特異な抗体断片を発現する。そのようなライブラリーは、目的の１つまたは複数の抗原への多様なレベルの親和性を有する潜在的に数百の抗体断片を選択するために使用することができる多種多様な資源を提供することができる（McCaffertyら、１９９０年、Nature、３４８巻：５５２〜４頁；Edwards,  B.M.ら、２００３年、JMB.３３４巻：１０３〜１８頁；Schofield,  D.ら、２００７年、Genome  Biol.８巻、Ｒ２５４およびPershad,  K.ら、２０１０年、Protein  Engineering  Design  and  Selection、２３巻：２７９〜８８頁；各々の内容は参照により本明細書に完全に組み込まれる）。しばしば、そのようなライブラリー中に存在する抗体断片は、フレキシブルリンカー（例えば、Ｓｅｒ／Ｇｌｙ富化リンカー）によって連結されるＶＨおよびＶＬ抗体ドメインの融合タンパク質を含む、ｓｃＦｖ抗体断片を含む。一部の場合には、ｓｃＦｖは、相補性決定領域（ＣＤＲ）の可変ループをコードするユニーク配列を除いて、同じ配列を含有することができる。一部の場合には、ｓｃＦｖは、ウイルスコートタンパク質（例えば、ウイルスのｐＩＩＩコートタンパク質のＮ末端）に連結される融合タンパク質として発現される。ＶＬ鎖は、ウイルスコートへの複合体組込みの前に周辺質でのＶＨ鎖とのアセンブリのために別々に発現されることがある。
【０４０２】
本開示によるファージ選択は、その内容は参照により本明細書に完全に組み込まれる、Schofield,  D.ら、２００７年、Genome  Biol.８巻、Ｒ２５４およびPershad,  K.ら、２０１０年、Protein  Engineering  Design  and  Selection、２３巻：２７９〜８８頁に記載されている抗体ディスプレイライブラリーの使用を含むことができる。このライブラリーは１０１０個超のクローンを含み、７，５００個を超える異なる抗体クローンを産生する３００個超の抗原に対する抗体の良好な生成を通して検証された。さらに、このライブラリーを使用した抗体産生は、各々の内容は参照により本明細書に完全に組み込まれる、Falk,  R.ら、２０１２年、Methods.５８巻：６９〜７８頁および／またはMelidoniら、２０１３年、PNAS１１０巻（４４号）：１７８０２〜７頁に記載されている通りに実行することができる。
【０４０３】
選択のために、標的抗原は、正の結合パートナーの沈殿のために、ファージディスプレイライブラリー粒子とｉｎ  ｖｉｔｒｏでインキュベートすることができる。このプロセスは、本明細書において「ファージ濃縮」と呼ばれる。一部の場合には、ファージ濃縮は、固相ファージ濃縮を含む。そのような濃縮により、標的抗原は（例えば受動吸着によって）基質に結合し、ファージ粒子を含む１つまたは複数の溶液と接触する。そのような標的抗原への親和性を有するファージ粒子は、溶液から沈殿する。一部の場合には、ファージ濃縮は、ファージ溶液と組み合わされた溶液中に標的抗原が存在する、液相ファージ濃縮を含む。そのような方法により、標的抗原は、溶液からの回収および結合したファージの回収を促進するために、検出可能な標識（例えば、ビオチン標識）を含むことができる。他の実施形態では、液相ファージ濃縮は、ビーズ（例えば、ストレプトアビジンビーズ）に結合した抗原の使用を含むことができる。一部の場合には、そのようなビーズは、沈殿を促進する磁気ビーズであってよい。
【０４０４】
一部の実施形態では、ファージ濃縮は、標的抗原が固体表面に固定化される固相濃縮を含むことができる。そのような方法により、ファージ溶液は、固定化された抗原による濃縮のために固体表面に接触するために使用することができる。固体表面は、抗原を保持することが可能な任意の表面を含むことができ、限定することなくシャーレ、プレート、フラスコおよびチューブを含むことができる。一部の場合には、イムノチューブを使用することができ、そのようなチューブの内部表面は抗原でコーティングすることができる。イムノチューブによるファージ濃縮は、ファージ溶液をチューブ内に通して結合した抗原を濃縮することによって実行することができる。
【０４０５】
選択の後、次のラウンドの濃縮のために増幅されたアウトプットライブラリーを産生するために、結合したファージを使用して、ヘルパーファージに共感染させられるＥ．ｃｏｌｉ培養に感染させることができる。このプロセスを繰り返し、ますますより狭くなるクローンセットを産生することができる。一部の実施形態では、選択されるファージの多様性を向上させるために、濃縮のラウンド数は制限される。
【０４０６】
沈殿したライブラリーメンバーは、所望のｓｃＦｖをコードするｃＤＮＡを得るために、結合したファージから配列決定することができる。そのような配列は組換え抗体の産生のために抗体配列に直接的に組み込むことができ、または、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ親和性成熟を通してさらなる最適化のために突然変異させて利用することができる。
【０４０７】
選択されたｓｃＦｖからの１つまたは複数の可変ドメインを含むＩｇＧ抗体を、さらなる試験および／または製品開発のために合成することができる。そのような抗体は、ＩｇＧ産生に適している発現ベクターの中にｓｃＦｖ  ｃＤＮＡの１つまたは複数のセグメントを挿入することによって産生することができる。発現ベクターは、哺乳動物細胞でのＩｇＧ発現に適する哺乳動物の発現ベクターを含むことができる。産生される抗体が哺乳動物のタンパク質に特徴的な改変（例えば、グリコシル化）を含むことを確実にし、および／または細菌発現系からのタンパク質調製物に存在する可能性のあるエンドトキシンおよび／または他の混在物質を抗体調製物が欠くことを確実にするために、哺乳動物のＩｇＧ発現を実行することができる。
【０４０８】
一部の実施形態では、本開示によって生成されるｓｃＦｖは、抗体Ｆｃドメインを含むｓｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質として発現させることができる。そのようなｓｃＦｖは、ｓｃＦｖの結合および親和性のさらなるスクリーニングおよび分析のために有益である可能性がある。
【０４０９】
一部の場合には、ファージディスプレイスクリーニングを、抗体の広く多様なパネルを生成するために使用することができる。そのような多様性は、抗体配列の多様性および／または標的としたエピトープの多様性によって測定することができる。
【０４１０】
抗体を仕分ける交差遮断実験を使用して、親和性結合推定値を求めることができる。一部の場合には、親和性分析装置を使用することができる。そのような装置には、限定されずに、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）（ＦｏｒｔｅＢｉｏ、Ｍｅｎｌｏ  Ｐａｒｋ、ＣＡ）を限定することなく含む、表面プラズモン共鳴機器が含まれ得る。
【０４１１】
一部の場合には、同じ抗原の上に存在する異なるエピトープに結合する抗体の群を同定するために、エピトープビニングを実行することができる。そのようなビニングは、交差遮断実験および／または親和性分析機器を使用した親和性分析から得られるデータからの情報に基づくことができる。
親和性成熟技術
【０４１２】
本開示の親和性成熟技術は、その内容は参照により本明細書に完全に組み込まれる、国際特許出願番号ＷＯ２０１４０７４５３２に開示される技術のいずれかを含むことができる。標的抗原に結合することが可能な抗体断片を同定した後（例えば、上記のファージディスプレイライブラリーの使用を通して）、親和性成熟のプロセスを通して高親和性突然変異体をこれらから導くことができる。標的抗原に最も高い親和性を有するＣＤＲをコードする配列を同定するために、親和性成熟技術が使用される。そのような技術を使用して、選ばれたＣＤＲ配列（例えば、本明細書に記載されているプロセスによって単離または産生されたもの）を、全体としてまたは特定の残基においてランダムに突然変異させて、数１００万から数１０億のバリアントを作製することができる。そのようなバリアントは、標的抗原に結合するそれらの能力に関する、反復される複数ラウンドの親和性スクリーニング（例えば、ディスプレイライブラリースクリーニング）に付すことができる。標的抗原に最も高い親和性を有する抗体断片配列を同定するために、そのような反復される複数ラウンドの選択、突然変異および発現を実行することができる。そのような配列は、組換え抗体の産生のために抗体配列に直接的に組み込むことができる。
抗体特徴付け
【０４１３】
本開示の結合性タンパク質（例えば、抗体またはその抗原結合性部分）は、異なる構造的および／または機能的属性によって特徴付けるかまたはグループ分けすることができる。一部の場合には、本開示の抗体は、１つまたは複数のエピトープへの親和性によって特徴付けることができる。一部の場合には、抗体親和性は、会合（Ｋａ）または解離（Ｋｄ）定数を使用して判定または記載することができる。平衡定数とも呼ばれるＫｄ（本開示の抗体を指すとき）は、所与の系においてエピトープ会合抗体の濃度で割ったエピトープ解離抗体の濃度の比を表す。より小さい値は、より高い親和性を示す。一部の場合には、抗体エピトープ結合のためのＫｄ値は、ＥＬＩＳＡ分析によって判定される。一部の場合には、抗体エピトープ結合のためのＫｄ値は、表面プラズモン共鳴分析（例えば、ＯＣＴＥＴ（登録商標）装置、ＦｏｒｔｅＢｉｏ、Ｍｅｎｌｏ  Ｐａｒｋ、ＣＡを使用する）によって判定される。
【０４１４】
抗体を含む本開示の化合物および／または組成物は、食作用、飲作用、または、細胞外マトリックスおよび／もしくは細胞性マトリックスでのアセンブリの阻害による除去を通して、１つまたは複数のＧＰＣの局所濃度を低下させる働きをすることができる。本開示の化合物および／または組成物の導入は、所与の領域に存在する増殖因子の５％から１００％の除去に導くことができる。例えば、増殖因子の除去のパーセントは、約５％から約１０％、約５％から約１５％、約５％から約２０％、約５％から約２５％、約１０％から約３０％、約１０％から約４０％、約１０％から約５０％、約１０％から約６０％、約２０％から約７０％、約２０％から約８０％、約４０％から約９０％、または約４０％から約１００％であってよい。
【０４１５】
１つまたは複数の増殖因子の放出、阻害または除去の測定は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで標準と比較して、または正常な生理条件下の増殖因子の天然の放出もしくは活性と比較して行うことができる。測定は、抗体の存在下または不在下と比較して行うこともできる。増殖因子のレベル、放出、阻害または除去を測定するそのような方法には、組織および／または流体（例えば、血清または血液）における標準の測定、例えば、ウェスタンブロット、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、活性アッセイ、リポーターアッセイ、ルシフェラーゼアッセイ、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）アレイ、遺伝子アレイ、リアルタイム逆転写酵素（ＲＴ）ＰＣＲなどが含まれる。
【０４１６】
本開示の抗体は、増殖因子シグナル伝達を強化または阻害するために、ＧＰＣまたはそれらの関連構造の上でまたはそれに沿って、任意数のエピトープに結合するかまたはそれと相互作用することができる。そのようなエピトープは、ＧＰＣ機能を改変、強化または阻害するための、あらゆる可能な部位を含むことができる。一部の実施形態では、そのようなエピトープには、限定されずに、増殖因子、調節エレメント、ＧＰＣ、ＧＰＣ調節性因子、細胞または受容体を受ける増殖因子、ファスナー領域、フューリン切断部位、腕領域、フィンガー領域、フィブリリン結合性ドメイン、潜在型ラッソ、アルファ１領域、ＲＧＤ配列、ボウタイ領域、細胞外マトリックスおよび／または細胞性マトリックス構成成分の上または中のエピトープ、ならびに／または上述のいずれかの領域もしくは部分を組み合わせることによって形成されるエピトープが含まれる。
【０４１７】
本開示の化合物および／または組成物は、１つまたは複数のエピトープおよび／または抗体認識領域への結合（可逆的または不可逆的）を通してそれらの効果を発揮する。理論に束縛されることを望まないが、抗体のためのそのような結合部位は、タンパク質、タンパク質ドメインまたは領域によって最もしばしば形成される。結合部位には、しかし、生体分子、例えば糖、脂質、核酸分子、または任意の他の形態の結合性エピトープを含めることができる。
【０４１８】
一部の実施形態では、例えば、酵素切断部位を遮断することによって、または構造を安定化することによって、本開示のアンタゴニスト抗体はＧＤＦプロドメインに結合して、増殖因子の放出を安定化および阻止することができる。そのような抗体は、過剰なＧＤＦ活性からもたらされるＧＤＦ関連徴候の処置で有益なはずである。
【０４１９】
代わりに、またはさらに、本開示の抗体は、ＧＰＣの内部移行を誘導するであろうリガンド模倣体として機能することができる。そのような抗体は、非伝統的ペイロード担体として作用することができ、結合またはコンジュゲートした薬物ペイロードを特異的ＧＰＣおよび／またはＧＰＣ関連部位に送達および／または輸送する働きをする。
【０４２０】
本開示の抗体によって導き出される変化は、細胞において新形態変化をもたらすことができる。本明細書において、用語「新形態変化」は、新しいかまたは異なる変化または変更を指す。例えば、抗体によって標的とされる特定のＧＰＣに一般的に会合していない１つまたは複数の増殖因子の放出または安定化を導き出す抗体は、新形態の抗体であるはずであり、放出は新形態変化であるはずである。
【０４２１】
一部の実施形態では、本開示の化合物および／または組成物は、タンパク質分解事象を変更および／または制御する働きをすることができる。一部の実施形態では、そのようなタンパク質分解事象は細胞内であってもまたは細胞外であってもよい。一部の実施形態では、そのようなタンパク質分解事象は、フューリン切断および／または他のタンパク質分解性プロセシング事象の変更を含むことができる。一部の実施形態では、そのようなタンパク質分解事象は、増殖因子シグナル伝達分子のタンパク質分解性プロセシングまたは増殖因子シグナル伝達分子によって開始される下流カスケードを含むことができる。
【０４２２】
一部の実施形態では、本開示の化合物および／または組成物は、増殖因子（リガンド）またはそれらの受容体の二量体化または多量体化を誘導または阻害することができる。一部の実施形態では、そのような作用は、単量体、二量体もしくは多量体の形態の安定化を通すもの、または二量体もしくは多量体複合体の破壊を通すものであってよい。
【０４２３】
一部の実施形態では、本開示の化合物および／または組成物は、受容体群またはＧＰＣまたは他のシグナル伝達分子対を含む単量体単位のホモおよび／またはヘテロ二量体に作用することができる。
【０４２４】
本開示の抗体は、標的抗原への結合の前に細胞に内在化されてよい。内在化の後、そのような抗体は、１つまたは複数のシグナル伝達事象を増減する働き、１つまたは複数のＧＰＣを放出もしくは安定化する働き、増殖因子放出を遮断もしくは促進する働き、および／または１つまたは複数の細胞ニッチを変更する働きをすることができる。
【０４２５】
一部の実施形態では、本開示の化合物および／または組成物は、１つまたは複数のＧＰＣにおける１つまたは複数の増殖因子の滞留時間を変更すること、ならびに／または細胞外マトリックスおよび／もしくは細胞性マトリックスにおける１つまたは複数のＧＰＣの滞留時間を変更することもできる。そのような変更は、不可逆的局在化および／または一過性の局在化をもたらすことができる。
【０４２６】
本開示の抗体は、当業者に公知の任意の方法を使用して設計、製造および／または選択することができる。一部の実施形態では、本開示の抗体および／または抗体産生細胞は、その内容は参照により本明細書に完全に組み込まれる国際特許出願番号ＷＯ２０１４０７４５３２に掲載される方法のいずれかにより産生される。
ノックアウトマウスにおける結合性タンパク質生成
【０４２７】
一部の実施形態では、本開示の結合性タンパク質（例えば、抗体またはその抗原結合性部分）は、１つまたは複数の所望の抗原をコードする遺伝子を欠くノックアウトマウスで生成することができる。そのようなマウスはそのような抗原に寛容でなく、したがって、その抗原のヒトおよびマウスの形態と交差反応できるそれらに対する抗体を生成することが可能ことがある。モノクローナル抗体の産生のために、宿主マウスを標的ペプチドで免疫化して、そのペプチドに特異的に結合するリンパ球を誘発する。リンパ球を収集し、不死化細胞株と融合する。結果として生じるハイブリドーマ細胞を、選択薬剤を含む適する培養培地で培養して、融合細胞だけの増殖を支える。
【０４２８】
一部の実施形態では、１つまたは複数の増殖因子遺伝子のノックアウトは致死性であることができ、および／または生育不能な胎児もしくは新生子を産生することができる。一部の実施形態では、新生児動物は、せいぜい数週（例えば、１、２、３、４または５週）の間生存することができるだけである。そのような実施形態では、免疫化は、出産直後の新生児動物で実行することができる。Oidaら（Oida,  T.ら、TGF-β  induces  surface  LAP  expression  on  Murine  CD4  T  cells  independent  of  FoxP3  induction、PLOS  One、２０１０年、５巻（１１号）：ｅ１５５２３頁）は、生存期間を長くする（これらのマウスで一般的に出産後３〜４週）ガレクチン−１注射の使用を通して、新生児ＴＧＦ−βノックアウトマウスの免疫化を実証する。出産から８日後に開始されて１日おきに１０日間、マウスのＴＧＦ−βを発現する細胞でマウスを免疫化し、出産から２２日後に脾細胞を採取した。採取された脾細胞を骨髄腫細胞と融合し、結果として生じたハイブリドーマ細胞のうち、多くは抗ＬＡＰ抗体を首尾よく産生することが見出された。本開示の一部の実施形態では、抗体を生成するために、これらの方法を使用することができる。一部の実施形態では、そのような方法は、ヒト抗原の使用を含むことができる。
【０４２９】
本開示の方法は、Oidaらによって記載されている免疫化方法の１つまたは複数のステップを、１つまたは複数のさらなるおよび／または改変されたステップと組み合わせて含むこともできる。改変されたステップには、限定されずに、融合のための代わりの細胞型の使用、融合を実施するときの様々な数の脾細胞をプールすること、注射レジメンを変更すること、脾細胞採取日を変更すること、免疫原を変更すること、および／または免疫原用量を変更することが含まれ得る。さらなるステップには、免疫化マウスからの他の組織（例えば、リンパ節）の採取を含めることができる。
調節性結合性タンパク質
【０４３０】
一部の実施形態では、本開示の抗体は、活性化または阻害抗体を含むことができる。本明細書において、用語「阻害抗体」は、増殖因子の活性を低減する抗体を指す。阻害抗体には、そのような抗体に会合したときに、増殖因子の活性を低減する任意のエピトープを標的とする抗体が含まれる。そのようなエピトープは、抗体によって結合したときに増殖因子の活性の低下に導く、プロドメイン、増殖因子または他のエピトープの上に存在し得る。本開示の阻害抗体には、限定されずに、ＧＤＦ−１１阻害抗体などのＧＤＦ阻害抗体が含まれ得る。対照的に、本明細書において、用語「活性化抗体」は、増殖因子の活性を促進する抗体を指す。活性化抗体には、増殖因子の活性を促進する任意のエピトープを標的とする抗体が含まれる。そのようなエピトープは、抗体によって結合したときに増殖因子の活性に導く、プロドメイン、増殖因子または他のエピトープの上に存在し得る。本開示の活性化抗体は、ＧＤＦ−１１活性化抗体を含むことができる。
【０４３１】
一部の実施形態では、本開示の阻害抗体は、抗プライミングされた複合体抗体（ａｎｔｉ−ｐｒｉｍｅｄ  ｃｏｍｐｌｅｘ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）を含むことができる。そのような抗体はＧＤＦ−１１によりプライミングされた複合体を標的とすることができ、結果として生じる増殖因子の活性を遮断することができる。一部の場合には、抗プライミングされた複合体抗体は、受容体結合の後の結合したプロドメインの解離を阻止することができる。一部の場合には、抗プライミングされた複合体抗体は、プライミングされた複合体が受容体に結合することを阻止することができる。一部の場合には、抗プライミングされた複合体抗体は、プライミングされたされた複合体が１つまたは複数の他の因子に会合することを阻止することができ、増殖因子の活性のモジュレーションに導くことができる。
【０４３２】
本開示の実施形態は、増殖因子のシグナル伝達を改変するために、溶液、細胞培養の中の、および／または対象で活性化および／または阻害抗体を使用する方法を含む。
抗プロドメイン抗体
【０４３３】
一部の実施形態では、本開示の化合物および／または組成物は、増殖因子のプロドメインを標的とする１つまたは複数の抗体を含むことができる。そのような抗体は、結合する特定のプロドメインによって、および／またはそのような抗体によって標的とされる特定のエピトープによって、増殖因子シグナル伝達を低減または上昇させることができる。本開示の抗プロドメイン抗体は、ＧＰＣからの遊離増殖因子の解離を促進することができる。そのような解離はＧＰＣへの抗体結合の後に誘導することができ、または、プロドメインとの遊離増殖因子の再会合を阻止することによって解離を促進することができる。一部の場合には、抗ＧＤＦプロドメイン抗体が提供される。抗ＧＤＦプロドメイン抗体は、ＧＤＦ活性化抗体を含むことができる。そのような抗体は、一部の場合には潜在型ＧＰＣからＧＤＦ遊離増殖因子を放出することによって、および／またはプロドメインとの遊離増殖因子の再会合を阻止することによって、ＧＤＦ活性（例えばＧＤＦ−１１活性）を増加させることができる。一部の場合には、ｐｒｏＧＤＦが細胞外タンパク質（例えば、フィブリリンまたはＧＡＳＰタンパク質）に会合しているとき、抗ＧＤＦプロドメイン抗体は、ＧＤＦ活性をより好都合に増加させることができる。
コンジュゲートおよび組合せ
【０４３４】
本発明の化合物および／または組成物を、１つまたは複数の同種または異種の分子と複合体化、コンジュゲートまたは組み合わせることができることが、本発明によって企図される。本明細書において、用語「同種分子」は、出発分子と比較して構造または機能のうちの少なくとも１つが類似している分子を指し、「異種分子」は、出発分子と比較して構造または機能のうちの少なくとも１つが異なるものである。したがって、構造的ホモログは、実質的に構造的に類似することができる分子である。一部の実施形態では、そのようなホモログは同一であってよい。機能的ホモログは、実質的に機能的に類似することができる分子である。一部の実施形態では、そのようなホモログは同一であってよい。
【０４３５】
本発明の化合物および／または組成物は、コンジュゲートを含むことができる。本発明のそのようなコンジュゲートは、天然に存在する物質またはリガンド、例えば、タンパク質（例えば、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）またはグロブリン）；炭水化物（例えば、デキストラン、プルラン、キチン、キトサン、イヌリン、シクロデキストリンまたはヒアルロン酸）；または脂質を含むことができる。コンジュゲートは、組換えまたは合成分子、例えば、合成ポリマー、例えば合成ポリアミノ酸、オリゴヌクレオチド（例えばアプタマー）であってもよい。ポリアミノ酸の例には、ポリリシン（ＰＬＬ）、ポリＬ−アスパラギン酸、ポリＬ−グルタミン酸、スチレン−無水マレイン酸コポリマー、Ｌ−ラクチド−グリコリドコポリマー、ジビニルエーテル−無水マレイン酸コポリマー、Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミドコポリマー（ＨＭＰＡ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリウレタン、ポリ（２−エチルアクリル酸）、Ｎ−イソプロピルアクリルアミドポリマーまたはポリホスファジンを含めることができる。ポリアミンの例には、以下のものが含まれる：ポリエチレンイミン、ポリリシン（ＰＬＬ）、スペルミン、スペルミジン、ポリアミン、偽ペプチド−ポリアミン、ペプチド様ポリアミン、デンドリマーポリアミン、アルギニン、アミジン、プロタミン、カチオン性脂質、カチオン性ポルフィリン、ポリアミンの四級塩またはアルファ螺旋ペプチド。
【０４３６】
一部の実施形態では、コンジュゲートは標的化基を含むこともできる。本明細書において、用語「標的化基」は、所望の領域、組織、細胞および／またはタンパク質への薬剤の局在化を促進する薬剤に付着する官能性の基または部分を指す。そのような標的化基には、限定されずに、細胞または組織標的化薬剤または基（例えば、レクチン、糖タンパク質、脂質、タンパク質、腎臓細胞などの特定の細胞型または他の細胞型に結合する抗体）が含まれ得る。一部の実施形態では、標的化基は、チロトロピン、メラノトロピン、レクチン、糖タンパク質、界面活性剤プロテインＡ、ムチン炭水化物、多価ラクトース、多価ガラクトース、Ｎ−アセチルガラクトサミン、Ｎ−アセチル−グルコサミン、多価マンノース、多価フコース、グリコシル化ポリアミノ酸、多価ガラクトース、トランスフェリン、ビスホスホネート、ポリグルタミン酸、ポリアスパラギン酸、脂質、コレステロール、ステロイド、胆汁酸、葉酸、ビタミンＢ１２、ビオチン、ＲＧＤペプチド、ＲＧＤペプチド模倣体またはアプタマーを含むことができる。
【０４３７】
一部の実施形態では、標的化基は、タンパク質、例えば糖タンパク質、またはペプチド、例えば共リガンドに特異的親和性を有する分子、または抗体、例えば特定の細胞型、例えばがん細胞、内皮細胞もしくは骨細胞に結合する抗体であってよい。標的化基は、ホルモンおよび／またはホルモン受容体を含むこともできる。
【０４３８】
一部の実施形態では、標的化基は、特異的受容体を標的とすることが可能な任意のリガンドであってよい。例には、限定されずに、葉酸、ＧａｌＮＡｃ、ガラクトース、マンノース、マンノース−６−リン酸塩、アプタマー、インテグリン受容体リガンド、ケモカイン受容体リガンド、トランスフェリン、ビオチン、セロトニン受容体リガンド、ＰＳＭＡ、エンドセリン、ＧＣＰＩＩ、ソマトスタチン、ＬＤＬおよびＨＤＬリガンドが含まれる。一部の実施形態では、標的化基はアプタマーである。そのようなアプタマーは未改変であってよいか、または、本明細書に開示される改変の任意の組合せを含むことができる。
【０４３９】
なお他の実施形態では、本発明の化合物および／または組成物は、細胞貫通性ポリペプチドに共有結合でコンジュゲートすることができる。一部の実施形態では、細胞貫通性ペプチドは、シグナル配列を含むこともできる。一部の実施形態では、本発明のコンジュゲートは、増加した安定性、増加した細胞トランスフェクションおよび／または変更された体内分布（例えば、特異的組織または細胞型に標的化）を有するように設計することができる。
【０４４０】
一部の実施形態では、コンジュゲート部分は、それらがクリアランスのために標的への検出可能な標識の付着を可能にするように、本発明の化合物および／または組成物に加えることができる。そのような検出可能な標識には、限定されずに、ビオチン標識、ユビキチン、蛍光分子、ヒトインフルエンザ血球凝集素（ＨＡ）、ｃ−ｍｙｃ、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、フラグ、グルタチオンＳトランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、Ｖ５（シミアンウイルス５エピトープのパラミキソウイルス）、ビオチン、アビジン、ストレプトアビジン、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）およびジゴキシゲニンが含まれる。
【０４４１】
一部の実施形態では、本発明の化合物は、抗体ＦｃドメインとコンジュゲートしてＦｃ融合タンパク質を作製することができる。本明細書に記載されている化合物のいずれかとのＦｃ融合タンパク質の形成は、その各々の内容は参照により本明細書に完全に組み込まれる、米国特許第５，１１６，９６４号、第５，５４１，０８７号および第８，６３７，６３７号に記載されているものを含む、当技術分野で公知の任意の方法によって実行することができる。本発明のＦｃ融合タンパク質は、Ｆｃヒンジ領域のシステイン残基を通してＩｇＧ  Ｆｃのヒンジ領域に連結される本発明の化合物を含むことができる。結果として生じるＦｃ融合タンパク質は、ＣＨ１ドメインも軽鎖もないが、抗体様構造を含むことができる。一部の場合には、Ｆｃ融合タンパク質は、天然の抗体と同等の薬物動態学的プロファイルを含むことができる。一部の場合には、本発明のＦｃ融合タンパク質は、延長された循環半減期および／または変更された生物活性を含むことができる。
【０４４２】
一部の実施形態では、本発明の化合物および／または組成物は、疾患および／または状態の処置においてお互いと、または他の分子と組み合わせることができる。
核酸
【０４４３】
一部の実施形態では、本発明の化合物および／または組成物は、核酸分子によってコードされてもよい。そのような核酸分子には、限定されずに、ＤＮＡ分子、ＲＮＡ分子、ポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、ｍＲＮＡ分子、ベクター、プラスミドなどが含まれる。一部の実施形態では、本発明は、本発明の化合物および／または組成物をコードする核酸分子を発現するようにプログラムまたは生成される細胞を含むことができる。一部の場合には、本発明の核酸は、コドン最適化核酸を含む。コドン最適化核酸を生成する方法は当技術分野で公知であり、その各々の内容は参照により本明細書に完全に組み込まれる、米国特許第５，７８６，４６４号および第６，１１４，１４８号に記載されているものを限定することなく含むことができる。
【０４４４】
別の実施形態では、本開示は、本明細書で提供される結合性タンパク質、抗体構築物または抗体コンジュゲートのうちのいずれか１つをコードする単離された核酸に関係する。さらなる実施形態は本明細書で提供される単離された核酸を含むベクターを提供し、ここで、前記ベクターはｐｃＤＮＡ；ｐＴＴ（Durocherら、Nucleic  Acids  Research  ２００２年、３０巻、２号）；ｐＴＴ３（さらなる複数のクローニング部位を有するｐＴＴ；ｐＥＦＢＯＳ（Mizushima,  S.およびNagata,  S.、（１９９０年）Nucleic  acids  Research  １８巻、１７号）；ｐＢＶ；ｐＪＶ；およびｐＢＪからなる群から選択される。
使用方法
【０４４５】
本発明の方法は、１つまたは複数の生物システムで増殖因子の活性を改変する方法を含む。そのような方法は、１つまたは複数の生物システムを本発明の化合物および／または組成物と接触させることを含むことができる。一部の場合には、これらの方法は、生物システム（例えば、細胞ニッチまたは対象）において遊離増殖因子のレベルを改変することを含む。そのような方法による化合物および／または組成物には、限定されずに、本明細書に記載されている組換えタンパク質、タンパク質複合体および／または抗体を限定することなく含む生体分子が含まれ得る。
【０４４６】
一部の実施形態では、本発明の方法は、増殖因子の活性を開始または増加させるために使用することができ、本明細書において「活性化方法」と命名される。一部のそのような方法は、ＧＰＣからの増殖因子の放出および／または潜在型ＧＰＣへの増殖因子の再会合の阻害を含むことができる。一部の場合には、活性化方法は、抗体、組換えタンパク質および／またはタンパク質複合体の使用を含むことができる。一部の活性化方法により、１つまたは複数の活性化抗体が提供される。そのような方法では、１つまたは複数の増殖因子を放出すること、またはＧＰＣに引き戻されることを阻止することができる。１つの非限定例では、増殖因子とＧＰＣの間の解離を強化し、および／またはＧＰＣの再形成を阻止する抗プロドメイン抗体を提供することができる。
【０４４７】
本発明の実施形態は、増殖因子の活性を改変するために抗プロドメイン抗体を使用する方法を含む。一部の場合には、そのような方法は、抗ＧＤＦプロドメイン抗体のＧＤＦ活性化抗体としての使用を含むことができる。
【０４４８】
一部の実施形態では、本発明の方法は、増殖因子の活性を低減または排除するために使用することができ、本明細書において「阻害方法」と命名される。一部のそのような方法は、ＧＰＣでの増殖因子の保持および／または潜在型ＧＰＣへの増殖因子の再会合の促進を含むことができる。一部の場合には、阻害方法は、抗体、組換えタンパク質および／またはタンパク質複合体の使用を含むことができる。一部の阻害方法により、１つまたは複数の阻害抗体が提供される。一部の場合には、阻害方法は、増殖因子との会合が可能な阻害組換えタンパク質または阻害タンパク質複合体の使用を含み、ここで、会合は増殖因子の活性を阻止する。
標的化複合体
【０４４９】
一部の実施形態では、本発明の方法は、１つまたは複数の標的化複合体の使用を含むことができる。本明細書において、用語「標的化複合体」はタンパク質複合体を指し、ここで、少なくとも１つのタンパク質構成成分は標的化剤としての働きをする。本明細書において、用語「標的化剤」は、薬剤と複合体を形成したカーゴまたは他の構成成分を標的部位に対する薬剤を指す。
【０４５０】
一部の場合には、標的化複合体は、１つまたは複数の細胞外マトリックスタンパク質および／または細胞外マトリックスと会合したタンパク質を含むことができる。そのようなタンパク質は、標的化複合体で標的化剤として機能することができる。そのような実施形態により、標的化複合体の細胞外マトリックス構成成分は、細胞外マトリックスおよび／または細胞性マトリックスを含む標的部位へと複合体を導くことができる。標的化複合体の細胞外マトリックス構成成分には、限定することなく、ＬＴＢＰ（例えば、ＬＴＢＰ１、ＬＴＢＰ２、ＬＴＢＰ３および／またはＬＴＢＰ４）、フィブリリン（例えばフィブリリン−１、フィブリリン−２、フィブリリン−３および／またはフィブリリン−４）、ペルレカン、デコリン、エラスチン、コラーゲン、ＧＡＳＰおよび／またはＧＡＲＰ（例えば、ＧＡＲＰおよび／またはＬＲＲＣ３３）を含めることができる。
【０４５１】
一部の実施形態では、異なる組織を囲んでいる細胞外マトリックスの領域に標的化複合体を導く標的化剤として、ＬＴＢＰアイソフォームを使用することができる。ＬＴＢＰ１は、例えば、心臓、肺、腎臓、胎盤、脾臓および胃において主に発現されることが示されている。このように、標的化複合体は、標的化剤としてのＬＴＢＰ１の組込みによってそれらの臓器へと導くことができる。同様に、ＬＴＢＰ２は肺、骨格筋、肝臓および胎盤に見出されるが、ＬＴＢＰ３およびＬＴＢＰ４の両方は、骨格筋、心臓、卵巣および小腸で発現されることが公知である（Ceco,  E.２０１３年、FEBS  J.２８０巻（１７号）：４１９８〜２０９頁、その内容は参照により本明細書に完全に組み込まれる）。これらの差別的発現領域は、ＬＴＢＰ２、３または４のアイソフォームを標的化剤として使用できる標的化複合体のための標的部位であってよい。
【０４５２】
本発明の一部の標的化複合体は、プロドメインなどの１つまたは複数のプロドメイン構成成分を含むことができる。一部の場合には、そのような標的化複合体の部分は、遊離増殖因子のレベルおよび／または活性を低減するために遊離増殖因子に結合するように機能することができる。一部の場合には、ＧＤＦプロドメインが標的化複合体に含まれ得る。
治療薬
【０４５３】
一部の実施形態では、本発明の組成物および方法は、多種多様の疾患、障害および／または状態を処置するために使用することができる。一部の場合には、そのような疾患、障害および／または状態は、ＴＧＦ−β関連徴候であってよい。本明細書において、用語「ＴＧＦ−β関連徴候」は、ＴＧＦ−βファミリーメンバータンパク質の発現、活性および／もしくは代謝に関連した任意の疾患、障害および／もしくは状態、または１つもしくは複数のＴＧＦ−βファミリーメンバータンパク質の活性および／もしくはレベルのモジュレーションから恩恵を受けることができる任意の疾患、障害および／もしくは状態を指す。ＴＧＦ−β関連徴候には、限定されずに、線維症、加齢の貧血、がん（結腸、腎臓、乳房、悪性メラノーマおよび神経膠芽腫を限定することなく含む）、化学療法に続く急速な造血の促進、骨の治癒、内皮増殖症候群、喘息およびアレルギー、胃腸障害、大動脈瘤、オーファン適応症（マルファン症候群およびカムラチ−エンゲルマン病など）、肥満、糖尿病、関節炎、多発性硬化症、筋ジストロフィー、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、パーキンソン病、骨粗しょう症、変形性関節炎、骨減少症、メタボリックシンドローム、栄養障害、臓器萎縮、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）および食欲不振が含まれ得る。さらなる適応症には、その各々の内容は参照により本明細書に完全に組み込まれる、米国特許出願公開第２０１３／０１２２００７号、米国特許第８，４１５，４５９号または国際公開番号ＷＯ２０１１／１５１４３２に開示されるもののいずれかが含まれ得る。
【０４５４】
処置の効能または疾患の軽快は、例えば疾患進行、疾患寛解、症状重症度、疼痛の低減、生活の質、処置効果を維持するのに必要とされる医薬の用量、予防のために処置または標的化される所与の疾患に適当な疾患マーカーまたは任意の他の測定可能なパラメーターのレベルを測定することによって、調査することができる。そのようなパラメーターのいずれか１つまたはパラメーターの任意の組合せを測定することによって、処置または予防の効能をモニタリングすることは、十分に当業者の能力の範囲内である。本発明の組成物の投与に関連して、例えばがん「に対して有効な」は、臨床的に適当な方法での投与が、患者の少なくとも統計的に有意な割合にとって有益な効果、例えば症状の改善、治癒、疾患負担の低減、腫瘍質量もしくは細胞数の低減、生命の延長、生活の質の改善、または特定のタイプのがんの処置に精通した医師によって正であると一般的に認められる他の効果をもたらすことを示す。
【０４５５】
疾患状態の１つまたは複数のパラメーターにおいて統計的に有意な改善があるとき、または、さもなければそれらが予想される場合に症状の悪化もしくは発生がないことによって、処置または予防効果が明白である。例として、疾患の測定可能なパラメーターにおける少なくとも１０％の良好な変化、好ましくは少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％またはそれよりも多くのものは、有効な処置を表すことができる。当技術分野で公知であるように、本発明の所与の組成物または製剤の効能は、所与の疾患の実験動物モデルを使用して判断することもできる。実験動物モデルを使用するとき、処置の効能は統計的に有意な変化が観察されるときに明白に示される。
貧血、血小板減少および好中球減少のための治療薬
【０４５６】
化学療法の間、癌細胞の増殖および広がりを予防するために、細胞分裂は一時的に停止される。不運な副作用は、骨髄細胞の活発な細胞分裂に依存する、赤血球、血小板および白血球の喪失である。一部の実施形態では、本発明の化合物および／または組成物は、貧血（赤血球の喪失）、血小板減少（血小板数の減少）および／または好中球減少（好中球数の減少）を患う患者を処置するように設計することができる。
がんのための治療薬
【０４５７】
本発明の化合物および／または組成物で、様々ながんを処置することができる。本明細書において、用語「がん」は、周囲の組織に侵入して、新しい体部位に転移する傾向がある未分化細胞の増殖によって特徴付けられる様々な悪性新生物のいずれかを指し、さらに、そのような悪性腫瘍性増殖によって特徴付けられる病的状態も指す。がんは、腫瘍または血液学的な悪性腫瘍であってよく、限定されずに、全てのタイプのリンパ腫／白血病、癌腫および肉腫、例えば、肛門、膀胱、胆管、骨、脳、乳房、頸部、結腸／直腸、子宮内膜、食道、目、胆嚢、頭頸部、肝臓、腎臓、喉頭、肺、縦隔（胸部）、口、卵巣、膵臓、ペニス、前立腺、皮膚、小腸、胃、脊髄、尾骨、精巣、甲状腺および子宮において見出されるがんまたは腫瘍が含まれる。
【０４５８】
がんでは、ＴＧＦ−βは、増殖促進性または増殖阻害性であってもよい。一例として、膵臓がんでは、ＳＭＡＤ４野生型腫瘍はＴＧＦ−βに応答して阻害された増殖に直面することがあるが、疾患進行に伴い、構成的に活性化されたＩＩ型受容体が一般的に存在する。さらに、ＳＭＡＤ４−ヌル膵臓がんがある。一部の実施形態では、本発明の化合物および／または組成物は、がんの１つまたは複数の形態において特異的に機能するＴＧＦ−βシグナル伝達経路の構成成分を選択的に標的とするように設計される。白血病、または白色血球、すなわち白血球の異常な増殖によって特徴付けられる血液または骨髄のがんは、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性骨髄性白血病（Ａｃｕｔｅ  Ｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓ  ｌｅｕｋｉｍｉａ）または急性骨髄性白血病（Ａｃｕｔｅ  Ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋｉｍｉａ）（ＡＭＬ）（第１０および第１１染色体［ｔ（１０、１１）］、第８および第２１染色体［ｔ（８；２１）］、第１５および第１７染色体［ｔ（１５；１７）］の間の転位ならびに第１６染色体における反転［ｉｎｖ（１６）］によるＡＭＬ；ＡＭＬに形質転換する事前の骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）または骨髄増殖性疾患があった患者を含む多系統異形成によるＡＭＬ；ＡＭＬおよび骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、治療関連、であって、このカテゴリーは、事前の化学療法および／または放射線があり、ＡＭＬまたはＭＤＳをその後発生する患者を含む；ｄ）他に分類されないＡＭＬ、上記のカテゴリーに該当しないＡＭＬのサブタイプを含む；ならびにｅ）白血病細胞を骨髄性ともリンパ系細胞とも分類できないとき、または両タイプの細胞が存在する場合に起こる、あいまいな系統の急性白血病）；および慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）を含む４つの主要な分類に分けることができる。
【０４５９】
癌腫のタイプには、限定されずに、パピローマ／癌腫、絨毛癌、内皮洞腫瘍、テラトーマ、アデノーマ／腺癌、メラノーマ、線維腫、脂肪腫、平滑筋腫、横紋筋腫、中皮腫、血管腫、骨腫、軟骨腫、神経膠腫、リンパ腫／白血病、扁平上皮癌、小細胞癌、大細胞未分化癌、基底細胞癌および副鼻腔未分化癌が含まれる。
【０４６０】
肉腫のタイプには、限定されずに、軟部組織肉腫、例えば蜂窩性軟部肉腫、血管肉腫、皮膚線維肉腫、デスモイド腫瘍、癒着性小円形細胞腫瘍、骨外性軟骨肉腫、骨外性骨肉腫、線維肉腫、血管周囲細胞腫、血管肉腫、カポジ肉腫、平滑筋肉腫、脂肪肉腫、リンパ管肉腫、リンパ肉腫、悪性線維性組織球腫、神経線維肉腫、横紋筋肉腫、滑膜肉腫およびアスキン腫瘍、ユーイング肉腫（未分化神経外胚葉性腫瘍）、悪性血管内皮腫、悪性神経線維腫、骨肉腫および軟骨肉腫が含まれる。
【０４６１】
一部の実施形態では、本発明の組成物および方法は、結腸がん、腎臓がん、乳がん、悪性メラノーマおよび神経膠芽腫を限定することなく含むことができる、１つまたは複数のタイプのがんまたはがん関連状態の処置のために使用することができる（Schlingensiepenら、２００８年；Ouhtitら、２０１３年）。
【０４６２】
本発明は、１つまたは複数の形態のがんの処置のための、本発明の化合物および／または組成物を、他の医薬品および／または他の治療方法、例えば公知の医薬品および／または公知の治療方法、例えばこれらの障害の処置のために現在用いられているものと併用することにさらに関する。例えば、本発明の化合物および／または組成物は、１つまたは複数のさらなる抗がん療法、例えば生物学的製剤、化学療法および放射線療法と併用して投与することもできる。したがって、処置には、例えば、イマチニブ（Ｇｌｅｅｖａｃ）、全トランスレチノイン酸、モノクローナル抗体処置（ゲムツズマブ、オゾガマイシン）、化学療法（例えば、クロラムブシル、プレドニゾン、プレドニゾロン、ビンクリスチン、シタラビン、クロファラビン、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、デシタビン、ＭＤＲ１の阻害剤）、リツキシマブ、インターフェロン−α、アントラサイクリン薬（ダウノルビシンまたはイダルビシンなど）、Ｌ−アスパラギナーゼ、ドキソルビシン、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ブレオマイシン、フルダラビン、エトポシド、ペントスタチンまたはクラドリビン）、骨髄移植、幹細胞移植、放射線療法、抗代謝産物薬（メトトレキセートおよび６−メルカプトプリン）またはその任意の組合せを含めることができる。
【０４６３】
放射線療法（Ｒａｄｉａｔｉｏｎ  ｔｈｅｒａｐｙ）（放射線療法（Ｒａｄｉo  ｔｈｅｒａｐｙ）、Ｘ線療法または照射とも呼ばれる）は、がん細胞を死滅させ、腫瘍を縮小するための電離放射線の使用である。放射線療法は、外部ビーム放射線療法（ＥＢＲＴ）を通して外部に、または近接照射療法を通して内部に投与することができる。放射線療法の効果は、処置される領域に局在化、限定される。放射線療法は、脳、乳房、頸部、喉頭、肺、膵臓、前立腺、皮膚、胃、子宮のがんまたは軟部組織肉腫を含むほとんど全てのタイプの固形腫瘍を処置するために使用することができる。放射線は、白血病およびリンパ腫を処置するためにも使用される。
【０４６４】
化学療法は、がん細胞を破壊することができる薬物によるがんの処置である。現在の用法では、用語「化学療法」は、標的療法と対照的に、急速に分裂する細胞に一般に影響する細胞傷害薬を通常指す。化学療法薬は、様々な可能な方法で細胞分裂を、例えばＤＮＡの複製または新たに形成された染色体の分離を妨害する。化学療法のほとんどの形態は全ての急速に分裂する細胞を標的とする。多くのがん細胞はＤＮＡ損傷を修復することができないが正常な細胞は一般的にそうすることができることから、多少の程度の特異性がもたらされることがあるが、化学療法のこれらの形態はがん細胞に特異的でない。
【０４６５】
ほとんどの化学療法レジメンは、組合せで与えられる。例示的な化学療法剤には、限定されずに、５−ＦＵエンハンサー、９−ＡＣ、ＡＧ２０３７、ＡＧ３３４０、アグリカナーゼ阻害剤、アミノグルテチミド、アムサクリン（ｍ−ＡＭＳＡ）、アスパラギナーゼ、アザシチジン、バチマスタット（ＢＢ９４）、ＢＡＹ１２−９５６６、ＢＣＨ−４５５６、ビス−ナフタルイミド、ブスルファン、カペシタビン、カルボプラチン、カルムスチン（Carmustaine）＋ポリフェプロサン、ｃｄｋ４／ｃｄｋ２阻害剤、クロラムブシル、ＣＩ−９９４、シスプラチン、クラドリビン、ＣＳ−６８２、シタラビンＨＣｌ、Ｄ２１６３、ダクチノマイシン、ダウノルビシンＨＣｌ、ＤｅｐｏＣｙｔ、デキシフォサミド、ドセタキセル、ドラスタチン（Dolastain）、ドキシフルリジン、ドキソルビシン、ＤＸ８９５１ｆ、Ｅ７０７０、ＥＧＦＲ、エピルビシン、エリスロポイエチン、リン酸エストラムスチンナトリウム、エトポシド（ＶＰ１６−２１３）、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、ＦＫ３１７、フラボピリドール、フロクスウリジン、フルダラビン、フルオロウラシル（５−ＦＵ）、フルタミド、フラギリン、ゲムシタビン、ヘキサメチルメラミン（ＨＭＭ）、ヒドロキシ尿素（ヒドロキシカルバミド）、イホスファミド、インターフェロンアルファ−２ａ、インターフェロンアルファ−２ｂ、インターロイキン−２、イリノテカン、ＩＳＩ６４１、クレスチン、レモナールＤＰ２２０２、酢酸ロイプロリド（ＬＨＲＨ放出因子類似体）、レバミゾール、ＬｉＧＬＡ（リチウム−ガンマリノレネート）、ロジンシード、ロメテキソール、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、マリミスタット、メクロルエタミンＨＣｌ（ナイトロジェンマスタード）、酢酸メゲストロール、メグルミン（Meglamine）ＧＬＡ、メルカプトプリン、メスナ、ミトグアゾン（メチル−ＧＡＧ；メチルグリオキサールビス−グアニルヒドラゾン；ＭＧＢＧ）、ミトタン（ｏ．ｐ’−ＤＤＤ）、ミトキサントロン、ミトキサントロンＨＣｌ、ＭＭＩ２７０、ＭＭＰ、ＭＴＡ／ＬＹ２３１５１４、オクトレオチド、ＯＤＮ６９８、ＯＫ−４３２、経口白金、経口タキソイド、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ．ＲＴＭ．）、ＰＡＲＰ阻害剤、ＰＤ１８３８０５、ペントスタチン（２’デオキシコホルマイシン）、ＰＫＣ４１２、プリカマイシン、プロカルバジンＨＣｌ、ＰＳＣ８３３、ラリトレキセド、ＲＡＳファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、ＲＡＳがん遺伝子阻害剤、セムスチン（メチルＣＣＮＵ）、ストレプトゾシン、スラミン、クエン酸タモキシフェン、タキサン類似体、テモゾロマイド、テニポシド（ＶＭ−２６）、チオグアニン、チオテパ、トポテカン、チロシンキナーゼ、ＵＦＴ（テガフール／ウラシル）、バルルビシン、硫酸ビンブラスチン、硫酸ビンデシン、ＶＸ−７１０、ＶＸ−８５３、ＹＭ  １１６、ＺＤ  ０１０１、ＺＤ  ０４７３／Ａｎｏｒｍｅｄ、ＺＤ  １８３９、ＺＤ  ９３３１が含まれる。
【０４６６】
生物学的療法は、がんと闘うために、または一部のがん処置によって引き起こされ得る副作用を少なくするために、体の免疫系を直接的または間接的に使用する。一部の実施形態では、本発明の化合物および／または組成物は、例えば１つまたは複数の腫瘍に対してそれらが免疫系作用を刺激することができるという点で、生物学的療法であると考えることができる。しかし、このアプローチは、他のそのような生物学的アプローチ、例えば、免疫応答改変療法、例えば、インターフェロン、インターロイキン、コロニー刺激因子、他のモノクローナル抗体、ワクチン、遺伝子療法の投与と考えることもでき、非特異的な免疫調節剤も本発明の化合物および／または組成物と組み合わせる抗がん療法と想定される。
【０４６７】
小分子標的療法薬は、一般的にがん細胞内の突然変異した、過剰発現される、またはさもなければ重大なタンパク質の上の酵素ドメインの阻害剤、例えばチロシンキナーゼ阻害剤イマチニブ（Ｇｌｅｅｖｅｃ／Ｇｌｉｖｅｃ）およびゲフィチニブ（Ｉｒｅｓｓａ）である。本発明の化合物および／または組成物と一緒に使用することができるモノクローナル抗体療法の例には、限定されずに、乳がんにおいて使用される抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ）、および様々なＢ細胞悪性腫瘍において使用される抗ＣＤ２０抗体リツキシマブが含まれる。一部のがんの増殖は、ある特定のホルモンを提供または遮断することによって阻害することができる。ホルモン感受性腫瘍の一般的な例には、ある特定のタイプの乳房および前立腺のがんが含まれる。エストロゲンまたはテストステロンを除去または遮断することは、しばしば重要な追加処置である。ある特定のがんでは、ホルモンアゴニスト、例えばプロゲストゲンの投与が治療的に有益であることがある。
【０４６８】
がん免疫療法は、腫瘍と闘うように患者自身の免疫系を誘導するように設計された多様なセットの治療戦略を指し、限定されずに、表在性の膀胱がんのための膀胱内ＢＣＧ免疫療法、例えば悪性のメラノーマおよび腎細胞癌のための特異的免疫応答を生成するワクチン、および前立腺由来細胞に対して特異的免疫応答を誘導するために患者からの樹状細胞に前立腺酸性フォスファターゼペプチドをロードする、前立腺がんのためのシプリューセルＴの使用が含まれる。
血管新生および内皮増殖性の状態のための治療薬
【０４６９】
本発明の化合物および／または組成物は、血管新生および内皮増殖性の症候群、疾患または障害を処置するために使用することができる。用語「血管新生」は、本明細書において、新しい血管の形成および／または再編成を指す。血管新生疾患は、体内での血管新生の制御の喪失を含む。そのような場合、血管の増殖、形成または再編成は、過度に活発であるか（無制御の細胞増殖が血液供給の増加を必要とする腫瘍増殖およびがんの期間を含む）、または健康な組織を維持するのに不十分であることがある。そのような状態には、限定されずに、血管腫、血管肉腫、毛細管拡張症、リンパ管腫、先天性血管異常、腫瘍血管新生および手術後の血管構造が含まれ得る。がん、黄斑変性症、糖尿病性失明、慢性関節リウマチ、乾癬ならびに多くの他の状態において、過剰な血管新生が注目される。過剰な血管新生は、過剰な血管新生増殖因子の発現によってしばしば促進される。本発明の化合物および／または組成物は、過剰な血管新生に関与する増殖因子を遮断する働きをすることができる。あるいは、血管新生が阻害される状態において血管新生を強化するために増殖因子シグナル伝達を促進するために、本発明の化合物および／または組成物を利用することができる。そのような状態には、限定されずに、冠状動脈疾患、脳卒中、糖尿病および慢性的創傷が含まれる。
心血管徴候のための治療薬
【０４７０】
一部の実施形態では、心臓肥大を限定することなく含む１つまたは複数の心血管徴候を処置するために、本発明の化合物および／または組成物を使用することができる。心臓肥大は、一般的に心臓の細胞の細胞量の増加のために、心臓の拡大を含む（Aurigemma  ２００６年、N  Engl  J  Med.３５５巻（３号）：３０８〜１０頁）。加齢性心肥大は、ＧＤＦ−１１の低減した循環レベルに一部起因することができる。Loffredoら（Loffredoら、２０１３年、Cell.１５３巻：８２８〜３９頁）による研究は、若齢と老齢マウスの間の循環系の融合が、心臓肥大に関して保護効果を有することを見出した。この研究は、マウスにおいて年齢と共に減少する循環因子としてＧＤＦ−１１を同定し、その投与が心臓肥大を低減することもできることを示すことができた。本発明の一部の化合物および／または組成物は、心臓萎縮を処置および／または予防するために使用することができる。そのような化合物および／または組成物は、一部の場合には潜在型ＧＰＣからのＧＤＦ−１１増殖因子の解離を強化することを通して循環するＧＤＦ−１１のレベルを上昇させる、ＧＤＦ−１１アゴニストを含むことができる。
【０４７１】
一部の実施形態では、心血管の疾患、障害および／または状態の処置で使用するための本発明の化合物および／または組成物を開発および試験するために、動物モデルを使用することができる。一部の場合には、アテローム硬化症および／または再狭窄の処置において化合物を試験するために、血管損傷モデルを使用することができる。そのようなモデルには、バルーン損傷モデルが含まれ得る。一部の場合には、これらは、その内容は参照により本明細書に完全に組み込まれる、Smithら、１９９９年、Circ  Res.８４巻（１０号）：１２１２〜２２頁に記載されている通りに実行することができる。
筋肉の障害および／または損傷に関連した治療薬
【０４７２】
一部の実施形態では、１つまたは複数の筋肉の障害および／または損傷を処置するために、本発明の化合物および／または組成物を使用することができる。一部の場合には、そのような化合物および／または組成物には、限定されずに、ＧＤＦ−１１活性をモジュレートする抗体が含まれ得る。筋肉は全体重の約４０〜５０％を占め、これは体の最大臓器となっている。筋障害には、悪液質（例えば、筋消耗）を含めることができる。筋肉消耗は、様々な疾患および異化作用障害（例えば、ＨＩＶ／ＡＩＤＳ、がん、がん悪液質、腎不全、うっ血性心不全、筋ジストロフィー、非活動萎縮、慢性閉塞性肺疾患、運動ニューロン疾患、外傷、神経変性疾患、感染症、慢性関節リウマチ、不動化、糖尿病等）に伴うことができる。そのような障害では、ＧＤＦシグナル伝達活性は、筋肉異化作用に寄与することができる（Hanら、２０１３年、Int  J  Biochem  Cell  Biol.４５巻（１０号）：２３３３〜４７頁；Lee.、２０１０年、Immunol  Endocr  Metab  Agents  Med  Chem.１０巻：１８３〜９４頁、各々は参照により本明細書に完全に組み込まれる）。他の筋肉障害は、サルコペニアを含むことができる。サルコペニアは、加齢と関連する筋肉および機能の進行性の喪失である。高齢者では、サルコペニアは、虚弱、脱力、疲労および可動性の喪失を引き起こすことができる（Morely、２０１２年、Family  Practice、２９巻：ｉ４４〜ｉ４８頁）。老齢人口の増加とともに、サルコペニアは次第により深刻な公衆衛生上の懸念になっている。Hamrickら（Hamrickら、２０１０年、６９巻（３号）：５７９〜８３頁）による研究は、側方コンパートメントの筋肉損傷を含む腓骨切断（osteotomoy）のマウスモデルにおいて、ＧＤＦ阻害が筋肉を修復し得ることを実証した。ＧＤＦプロペプチドの投与は、筋肉質量をほぼ２０％増加させるだけでなく、骨折治癒を向上させるのに十分だった。ＧＤＦ−１１活性をモジュレートすることによって筋肉の疾患、障害および／または損傷を処置するために、本発明の一部の化合物および／または組成物を使用することができる。一部の場合には、本発明の化合物は、ＧＤＦ−１１シグナル伝達活性を阻止または低減する、ＧＤＦ−１１シグナル伝達アンタゴニストであってよい。
【０４７３】
封入体筋肉炎（ＩＢＭ）は、人生の中期から後期に一般的に起こる、進行性の筋肉喪失によって特徴付けられる疾患である。この疾患は、筋線維のＴ細胞浸潤を引き起こして筋線維破壊をもたらす、筋肉中の自己抗原への自己免疫性応答のために起こると考えられる（Greenberg  ２０１２年、Curr  Opin  Neurol.２５巻（５号）：６３０〜９頁）。ビマグルマブ（ＢＹＭ３３８；Ｎｏｖａｒｔｉｓ、Ｂａｓｅｌ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）、ＧＤＦおよび／またはアクチビンシグナル伝達を阻止し、それによって筋肉生成および強化を刺激する、ＩＩ型アクチビン受容体を標的とする抗体を含む、治療化合物が調査中である［Efficacy  and  Safety  of  Bimagrumab/BYM338  at  52  Weeks  on  Physical  Function,  Muscle  Strength,  Mobility  in  sIBM  Patientsという表題の臨床治験番号ＮＣＴ０１９２５２０９（ＲＥＳＩＬＩＥＮＴ）を参照する］。本発明の一部の化合物および／または組成物は、ＩＢＭを有する対象の処置で使用することができる。一部の場合には、そのような化合物および／または組成物は、ＧＤＦ−１１活性を（例えば、ＧＤＦ−１１  ＧＰＣの安定化を通して）遮断することができる。ＩＢＭに加えて、ＢＹＭ３３８は慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）の処置のために調査されている。一部の場合には、ＩＢＭ処置のために利用される本発明の化合物および／または組成物は、ＣＯＰＤの処置でも使用することができる。一部の場合には、本発明の化合物および／または組成物は、ＢＹＭ３３８と組み合わせておよび／または協同で投与することができる。
糖尿病のための治療薬
【０４７４】
骨格筋は、燃料のためにグルコースを使用し、保存する。これのために、骨格筋は、循環グルコースレベルの重要な調節因子である。筋肉によるグルコースの取り込みは、収縮によって、またはインスリン刺激によって刺激することができる（McPherronら、２０１３年、Adipocyte.２巻（２号）：９２〜８頁、参照により本明細書に完全に組み込まれる）。Guoら（Guoら、２０１２年、Diabetes６１巻（１０号）：２４１４〜２３頁）による近年の研究は、ＧＤＦ受容体欠損マウスをＡ−ＺＩＰ／Ｆ１マウス（リポジストロフィーマウス系統、糖尿病モデルとして使用される）と交配したとき、ハイブリッド子孫が低減したレベルの血糖およびインスリンに対する感受性の改善を示すことを見出した。これらのマウスでは、過食（過剰な摂食）も低減された。別の例として、ＧＤＦ受容体シグナル伝達は、ＩＩ型糖尿病で起こる膵臓β細胞の脱分化と結びつけられている。その全内容は参照により本明細書に組み込まれる、Blum  B.ら、「Reversal  of  β  cell  de-differentiation  by  a  small  molecule  inhibitor  of  the  TGFβ  pathway」eLife（２０１４年）３巻：ｅ０２８０９、１〜１７頁を参照する。Ａｌｋ５受容体の阻害剤は、重度のＩＩ型糖尿病のモデルにおいて成熟β細胞を回復することが示された。さらに、ＧＤＦ１１欠損動物は膵臓の発達に欠陥を有し、外分泌形成不全を提示し、ＮＧＮ３＋内分泌前駆体細胞の増加、分化した内分泌細胞への影響は２つの研究の間で一貫していなかった。Dichmann  D.S.ら、「Analysis  of  Pancreatic  Endocrine  Development  in  GDF11-Deficient  Mice」Developmental  Dynamics（２００６年）２３５巻：３０１６〜３０２５頁；および、Harmon  E.B.ら、「GDF11  modulates  NGN3+  islet  progenitor  cell  number  and  promotes  β-cell  differentiation  in  pancreas  development」Development（２００４年）１３１巻、６１６３〜６１７４頁を参照；各々の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。一部の実施形態では、本発明の化合物および／または組成物は、糖尿病および／または過食を処置するために使用することができる。一部のそのような処置は、血糖を低減し、および／またはインスリン感受性を改善するために使用することができる。一部の場合には、そのような処置はＧＤＦ−１１シグナル伝達アンタゴニスト、例えば、そのプロドメインからのＧＤＦ−１１の解離を阻止する１つまたは複数の抗体を含むことができる。
ＧＤＦ−１１関連徴候のための治療薬
【０４７５】
一部の実施形態では、ＧＤＦ−１１関連徴候を含むＴＧＦ−β関連徴候を処置するために、本発明の化合物を使用することができる。本明細書において、ＧＤＦ−１１関連徴候は、ＧＤＦ−１１活性に関連した疾患、障害および／または状態である。ＧＤＦ−１１発現は全身性であり、その活性は複数のプロセスに関与すると考えられる（Leeら、２０１３年、PNAS.１１０巻（３９号）：Ｅ３７１３〜２２頁、その内容は参照により本明細書に完全に組み込まれる）。それは、網膜、腎臓、膵臓および嗅覚系を限定することなく含む複数の組織の発達に関与すると考えられている。それは、血液中の循環因子であるとも考えられている。近年の研究は、ＧＤＦ−１１が骨格筋を回復させ、脳循環を改善し、神経形成を促進することができることを示す（Sinha,  M.ら、２０１４年、Science  Express.  10.1126/science.1251152、２〜６頁およびKatsimpardi,  L.ら、２０１４年、Science  Express.  10.1126/science.1251141、各々の内容は参照により本明細書に完全に組み込まれる）。一部の場合には、本発明の抗体は、潜在型複合体からのＧＤＦ−１１増殖因子の放出を促進することによって、骨格筋回復を促進し、脳循環を改善し、神経形成を促進することができる。
【０４７６】
その役割は若干論争の的であるが、ＧＤＦ−１１は赤血球生成の調節に関与すると考えられ、正負の調節は科学文献において記載されている。CarrancioらおよびSuraganiら（Carrancio,  S.ら、２０１４年、Br  J  Haematol.１６５巻（６号）：８７０〜８２頁およびSuragani,  R.N.V.S.ら、２０１４年、Blood.１２３巻（２５号）：３８６４〜７２頁、各々の内容は参照により本明細書に完全に組み込まれる）は、アクチビン受容体ＩＩＡ細胞外ドメインを含むＧＤＦ−１１リガンドトラップ（ＳＯＴＡＴＥＲＣＥＰＴ（登録商標））が赤血球生成を強化することを実証する。ＧＤＦ−１１に結合することが示され、アクチビンへの親和性を低減するように改変された類似の薬剤、ＡＣＥ−５３６も、赤血球生成を刺激することが示された（Suragani,  R.N.V.S.ら、２０１４年、Nature  Medicine.２０巻（４号）：４０８〜１７頁、その内容は参照により本明細書に完全に組み込まれる）。さらなる研究は、ＳＯＴＡＴＥＲＣＥＰＴ（登録商標）を受けた患者においてヘモグロビンレベルの短期上昇を実証する（El-Shahawy,  M.ら、２０１４年、Poster  #81、National  Kidney  Foundation  (NKF)  2014  Spring  Clinical  Meeting）。一部の場合には、本発明のＧＤＦ−１１阻害抗体は、赤血球生成を刺激して、貧血および／またはβ−地中海貧血症を処置するために、これらの研究に記載されている方法によって使用することができる。
獣医学的適用
【０４７７】
一部の実施形態では、本発明の組成物および方法は、非ヒト脊椎動物の医療および処置を含む獣医学的医療の領域で有用性を見出すと考えられる。本明細書に記載されているように、用語「脊椎動物」には、魚類、両生類、鳥類、爬虫類および哺乳動物（アルパカ、バンテン、バイソン、ラクダ、ネコ、ウシ、シカ、イヌ、ロバ、ガヤール、ヤギ、モルモット、ウマ、ラマ、マウス、サル、ラバ、ブタ、ウサギ、ラット、トナカイ、ヒツジ、水牛、ヤクおよびヒトを限定することなく含む）を限定することなく含む、全ての脊椎動物が含まれる。本明細書において、用語「非ヒト脊椎動物」は、ヒト（すなわち、Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）を除く、任意の脊椎動物を指す。例示的な非ヒト脊椎動物には、伴侶動物および畜産動物などの野生のおよび家畜化された種が含まれる。畜産動物には、食物、労働ならびに繊維および化学物質などの誘導製品などの材料を産生するために農業場面で飼育される家畜動物が含まれる。一般的に、畜産動物には、潜在的農業的重要性を有する全ての哺乳動物、鳥類および魚類が含まれる。特に、四つ足の屠殺動物には、去勢ウシ、若雌ウシ、雌ウシ、子ウシ、雄ウシ、ウシ、ブタおよびヒツジが含まれる。
バイオプロセシング
【０４７８】
一部の実施形態では、本発明は、そのような細胞を、標的遺伝子の発現をモジュレートすることまたは増殖因子シグナル伝達分子のレベルを変更することが可能な本発明の化合物および／または組成物と接触させることによって、宿主細胞において１つまたは複数の生物学的生成物を生成する方法を提供し、ここで、そのようなモジュレーションまたは変更は生物学的生成物の生成を強化する。本発明により、バイオプロセシング方法は、本発明の１つまたは複数の化合物および／または組成物を使用して改善することができる。それらは、１つまたは複数の化合物および／または組成物を補う、置き換えるまたは加えることによって改善することもできる。
医薬組成物
【０４７９】
一部の実施形態では、本明細書に記載されている医薬組成物は、生物学的利用能、治療ウィンドウおよび／または分布量のうちの１つまたは複数によって特徴付けることができる。
生物学的利用能
【０４８０】
一部の実施形態では、医薬組成物は、本発明の化合物および／または組成物のＧＰＣとの複合体を含む。そのような実施形態では、複合体は、複合体からの増殖因子の安定した解離が所望の期間にわたって起こることができる所望の治療部位に植え込むことができる。一部の実施形態では、移植複合体は、スポンジおよび／または骨様マトリックスと会合した形で実行することができる。そのような移植は、限定することなく、歯科用インプラント部位および／または骨修復部位を含むことができる。
【０４８１】
一部の実施形態では、本発明の化合物および／または組成物は、フューリン欠損細胞で作製される。そのような細胞で産生されるＧＰＣは、ＧＰＣプロセシングの間のｉｎ  ｖｉｖｏフューリン切断が律速性であるという事実のために放出が遅くなる領域において、処置のために有益である可能性がある。一部の実施形態では、ＧＰＣにおける１つまたは複数のトロイドおよび／またはフューリン部位は突然変異し、内因性トロイドおよび／またはフューリンプロテアーゼの作用を減速する。そのような実施形態では、増殖因子放出は、遅くなることがある（例えば、移植部位において）。
【０４８２】
本明細書に記載されている送達／製剤化剤またはビヒクルで組成物に製剤化されるとき、本発明の抗体は、本明細書に記載されている送達剤を欠く組成物と比較して増大した生物学的利用能を示すことができる。本明細書において、用語「生物学的利用能」は、対象に投与される特定の薬剤の所与の量の全身の利用度を指す。生物学的利用能は、哺乳動物への化合物の投与の後に、未変形化合物の曲線下面積（ＡＵＣ）または最大血清中もしくは血漿中濃度（Ｃｍａｘ）を測定することによって評価することができる。ＡＵＣは、横軸（Ｘ軸）に沿った時間に対して縦軸（Ｙ軸）に沿って化合物の血清中または血漿中濃度をプロットした曲線の下の面積の判定である。一般に、特定の化合物のためのＡＵＣは、当業者に公知であり、その内容は参照により本明細書に完全に組み込まれる、G.  S.  Banker、Modern  Pharmaceutics,  Drugs  and  the  Pharmaceutical  Sciences、７２版、Marcel  Dekker,  New  York,  Inc.、１９９６年、に記載されている方法を使用して計算することができる。
【０４８３】
Ｃｍａｘ値は、対象への化合物の投与の後に対象の血清または血漿で達成される、化合物の最高濃度である。特定の化合物のＣｍａｘ値は、当業者に公知である方法を使用して測定することができる。本明細書において、フレーズ「生物学的利用能を増加させる」または「薬物動態を改善する」は、対象における本発明の化合物および／または組成物の全身の利用可能性（ＡＵＣ、ＣｍａｘまたはＣｍｉｎによって測定される）を増加させることができる作用を指す。一部の実施形態では、そのような作用は、本明細書に記載されている１つまたは複数の送達剤との同時投与を含むことができる。一部の実施形態では、化合物および／または組成物の生物学的利用能は、少なくとも約２％、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％または約１００％増加することができる。
治療ウィンドウ
【０４８４】
本発明の化合物および／または組成物は、本明細書に記載されている１つまたは複数の送達剤で製剤化されるとき、本明細書に記載されている１つまたは複数の送達剤なしで投与される化合物および／または組成物の治療ウィンドウと比較して、化合物および／または組成物投与の治療ウィンドウの増加を示すことができる。本明細書において、用語「治療ウィンドウ」は、治療効果を導き出す確率の高い、血漿中濃度の範囲または作用部位における治療活性物質のレベルの範囲を指す。一部の実施形態では、化合物および／または組成物の治療ウィンドウは、本明細書に記載されている１つまたは複数の送達剤と同時投与されるとき、少なくとも約２％、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％または約１００％増加することができる。
分布量
【０４８５】
本明細書に記載されている１つまたは複数の送達剤で製剤化されるとき、本発明の化合物および／または組成物は、本明細書に記載されている１つまたは複数の送達剤を欠く製剤と比較して改善された、例えば低減されたまたは目標の分布量（Ｖｄｉｓｔ）を示すことができる。Ｖｄｉｓｔは、体内の薬剤量を血液または血漿中の同じ薬剤の濃度に関連付ける。本明細書において、用語「分布量」は、血液または血漿におけるのと同じ濃度で体内において全薬剤量を含有するために必要とされる液量を指す：Ｖｄｉｓｔは、体内の薬剤量／血液または血漿中の薬剤濃度に等しい。例えば、所与の薬剤の１０ｍｇ用量および１０ｍｇ／Ｌの血漿中濃度の場合、分布量は１リットルになるであろう。分布量は、薬剤が脈管外組織に存在する程度を反映する。大きな分布量は、血漿タンパク質と比較して組織構成成分に結合する薬剤の傾向を反映する。臨床場面では、定常状態濃度を達成する負荷用量を決定するために、Ｖｄｉｓｔを使用することができる。一部の実施形態では、本発明の化合物および／または組成物の分布量は、本明細書に記載されている１つまたは複数の送達剤と同時投与されるとき、少なくとも約２％、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％減少することができる。
製剤、投与、送達および投薬
【０４８６】
一部の実施形態では、本発明の化合物および／または組成物は、医薬組成物である。一部の実施形態では、医薬組成物は、１つまたは複数の追加の活性物質、例えば治療的および／または予防的に活性である物質を任意選択で含むことができる。医薬用薬剤の製剤化および／または製造における一般考慮事項は、例えば、Remington:  The  Science  and  Practice  of  Pharmacy第２１版、Lippincott  Williams  &  Wilkins、２００５年（参照により本明細書に組み込まれる）に見出すことができる。
【０４８７】
一部の実施形態では、組成物は、ヒト、ヒトの患者または対象に投与することができる。本開示の目的のために、フレーズ「有効成分」は、本明細書に記載されている通りに送達される本発明の化合物および／または組成物を一般に指す。
【０４８８】
本明細書で提供される医薬組成物の記載は、主に、ヒトへの投与に適する医薬組成物を対象とするが、当業者は、そのような組成物は、他の対象、例えばヒト以外の動物、例えば非ヒト哺乳動物への投与に一般に適することを理解するであろう。様々な動物への投与のためにそれらの組成物が適するようにするための、ヒトへの投与に適する医薬組成物の改変は十分理解されており、通常のスキルを有する獣医薬理学者は、要るとしても単に通常の実験だけでそのような改変を設計および／または実施することができる。医薬組成物の投与が企図される対象には、限定されずに、ヒトおよび／もしくは他の霊長類；商業的に重要な哺乳動物、例えばウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ、ネコ、イヌ、マウスおよび／もしくはラットを含む哺乳動物；ならびに／または商業的に重要な鳥類、例えば家禽、ニワトリ、カモ、ガチョウおよび／もしくは七面鳥を含む鳥類が含まれる。
【０４８９】
一部の実施形態では、本明細書に記載されている医薬組成物の製剤は、薬学分野で公知であるかまたは今後開発される任意の方法によって調製することができる。一般に、そのような調製方法は、有効成分を賦形剤および／または１つまたは複数の他の副成分と会合させ、次に、必要に応じておよび／または望ましい場合、所望の単回または多回投与単位に生成物を分割、成形および／またはパッケージングする工程を含む。
【０４９０】
一部の実施形態では、本発明の医薬組成物は、バルクで、単一の単位用量としておよび／または複数の単一の単位用量として調製、パッケージおよび／または販売することができる。本明細書において、用語「単位用量」は、有効成分の所定量を含む医薬組成物の個別の量を指す。有効成分の量は、対象に投与されるであろう有効成分の投薬量および／またはそのような投薬量の都合のよい分割部分、例えばそのような投薬量の１／２または１／３に一般に等しい。
【０４９１】
一部の実施形態では、本発明の医薬組成物中の有効成分、薬学的に許容される賦形剤および／または任意の追加の成分の相対量は、処置される対象の個性、サイズおよび／または状態によって、ならびにさらに組成物が投与される経路によって異なることができる。例として、組成物は、約０．１％から１００％の間、例えば約０．５％から約５０％、約１％から約３０％、約５％から約８０％または少なくとも８０％（ｗ／ｗ）の有効成分を含むことができる。一部の実施形態では、有効成分は、調節エレメントおよび／またはＧＰＣに対する抗体である。
製剤
【０４９２】
本発明の化合物および／または組成物は、以下の目的のために、１つまたは複数の賦形剤を使用して製剤化することができる：（１）安定性を増加させるため；（２）細胞透過性を増加させるため；（３）持続するもしくは遅延型の放出（例えば、そのような製剤からの化合物および／または増殖因子の）を可能にするため；および／または（４）体内分布を変更するため（例えば、化合物を特異的組織または細胞型に向かわせる）。あらゆる溶媒、分散媒体、希釈剤、液体ビヒクル、分散補助剤、懸濁補助剤、界面活性剤、等張剤、増粘剤、乳化剤および保存剤などの伝統的な賦形剤に加えて、本発明の製剤は、限定することなく、リポソーム、脂質ナノ粒子、ポリマー、リポプレックス、コア−シェルナノ粒子、ペプチド、タンパク質、本発明の化合物および／または組成物をトランスフェクトされた細胞（例えば、対象への移植のために）ならびにその組合せを含むことができる。
賦形剤
【０４９３】
医薬組成物を製剤化するための様々な賦形剤および組成物を調製する技術は、当技術分野で公知である（参照により本明細書に組み込まれる、Remington:  The  Science  and  Practice  of  Pharmacy、第２１版、A.  R.  Gennaro、Lippincott、Williams  &  Wilkins、Baltimore、MD、２００６年、を参照）。
【０４９４】
一部の実施形態では、任意の従来の賦形剤媒体が、例えば任意の望ましくない生物学的作用を起こすかさもなければ医薬組成物の任意の他の構成成分（複数可）と有害な相互作用を起こすことによって、物質および／またはその誘導体と相容れない場合以外は、従来の賦形剤媒体の使用は本開示の範囲内にあると考えられる。
【０４９５】
本明細書に記載されている医薬組成物の製剤は、薬学分野において公知であるかまたは今後開発される任意の方法によって調製することができる。一般に、そのような調製方法は、有効成分を賦形剤および／または他の副成分と関連付ける工程を含む。
【０４９６】
本開示による医薬組成物は、バルクで、単一の単位用量としておよび／または複数の単一の単位用量として調製、パッケージおよび／または販売することができる。
【０４９７】
本開示の医薬組成物中の有効成分、薬学的に許容される賦形剤および／または追加の成分の相対量は、処置されている対象の個性、サイズおよび／もしくは状態によって、ならびにさらに医薬組成物を投与できる経路によって異なることができる。
【０４９８】
一部の実施形態では、薬学的に許容される賦形剤は、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％純粋である。一部の実施形態では、賦形剤は、ヒトで使用するためにおよび／または獣医学的使用のために承認される。一部の実施形態では、賦形剤は米国食品医薬品局に承認される。一部の実施形態では、賦形剤は医薬グレードである。一部の実施形態では、賦形剤は、米国薬局方（ＵＳＰ）、欧州薬局方（ＥＰ）、英国薬局方および／または国際薬局方の規格を満たす。
【０４９９】
一部の実施形態では、本発明の薬学的に許容される賦形剤には、限定されずに、不活性の希釈剤、分散および／もしくは顆粒化剤、界面活性剤および／または乳化剤、崩壊剤、結合剤、保存剤、緩衝剤、潤滑剤および／または油が含まれ得る。そのような賦形剤は、医薬組成物に任意選択で含まれ得る。
【０５００】
例示的な希釈剤には、限定されずに、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、リン酸カルシウム、リン酸二カルシウム、硫酸カルシウム、リン酸水素カルシウム、リン酸ナトリウム、ラクトース、スクロース、セルロース、微結晶性セルロース、カオリン、マンニトール、ソルビトール、イノシトール、塩化ナトリウム、乾燥デンプン、コーンスターチ、粉糖等、および／またはその組合せが含まれる。
【０５０１】
例示的な顆粒化および／または分散剤には、限定されずに、ジャガイモデンプン、コーンスターチ、タピオカデンプン、グリコール酸デンプンナトリウム、クレイ、アルギン酸、グアーガム、柑橘類のパルプ、寒天、ベントナイト、セルロースおよび木材産物、天然スポンジ、カチオン交換樹脂、炭酸カルシウム、ケイ酸塩、炭酸ナトリウム、架橋ポリ（ビニルピロリドン）（クロスポピドン）、デンプングリコール酸ナトリウム（グリコール酸デンプンナトリウム）、カルボキシメチルセルロース、架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム（クロスカルメロース）、メチルセルロース、アルファ化デンプン（デンプン１５００）、微結晶性デンプン、水不溶性デンプン、繊維素グリコール酸カルシウム、珪酸アルミニウムマグネシウム（ＶＥＥＧＵＭ（登録商標））、ラウリル硫酸ナトリウム、四級アンモニウム化合物等、および／またはその組合せが含まれる。
【０５０２】
例示的な界面活性剤および／または乳化剤には、限定されずに、天然の乳化剤（例えば、アラビアゴム、寒天、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、トラガカントゴム、コンドレックス（chondrux）、コレステロール、キサンタン、ペクチン、ゼラチン、卵黄、カゼイン、ラノリン、コレステロール、ワックスおよびレシチン）、コロイド状クレイ（例えば、ベントナイト［ケイ酸アルミニウム］およびＶＥＥＧＵＭ（登録商標）［珪酸アルミニウムマグネシウム］）、長鎖アミノ酸誘導体、高分子量アルコール（例えば、ステアリルアルコール、セチルアルコール、オレイルアルコール、モノステアリン酸トリアセチン、ジステアリン酸エチレングリコール、モノステアリン酸グリセリルおよびモノステアリン酸プロピレングリコール、ポリビニルアルコール）、カルボマー（例えば、カルボキシポリメチレン、ポリアクリル酸、アクリル酸ポリマーおよびカルボキシビニルポリマー）、カラゲナン、セルロースの誘導体（例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、粉末セルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース）、ソルビタン脂肪酸エステル（例えば、モノラウリン酸ポリオキシエチレンソルビタン［ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０］、ポリオキシエチレンソルビタン［ＴＷＥＥＮｎ（登録商標）６０］、モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン［ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０］、モノパルミチン酸ソルビタン［ＳＰＡＮ（登録商標）４０］、モノステアリン酸ソルビタン［Ｓｐａｎ（登録商標）６０］、トリステアリン酸ソルビタン［Ｓｐａｎ（登録商標）６５］、モノオレイン酸グリセリル、モノオレイン酸ソルビタン［ＳＰＡＮ（登録商標）８０］）、ポリオキシエチレンエステル（例えば、モノステアリン酸ポリオキシエチレン［ＭＹＲＪ（登録商標）４５］、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリエトキシル化ヒマシ油、ステアリン酸ポリオキシメチレンおよびＳＯＬＵＴＯＬ（登録商標））、ショ糖脂肪酸エステル、ポリエチレングリコール脂肪酸エステル（例えば、ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ（登録商標））、ポリオキシエチレンエーテル（例えば、ポリオキシエチレンラウリルエーテル［ＢＲＩＪ（登録商標）３０］）、ポリ（ビニルピロリドン）、モノラウリン酸ジエチレングリコール、オレイン酸トリエタノールアミン、オレイン酸ナトリウム、オレイン酸カリウム、オレイン酸エチル、オレイン酸、ラウリン酸エチル、ラウリル硫酸ナトリウム、ＰＬＵＯＲＩＮＣ（登録商標）Ｆ６８、ＰＯＬＯＸＡＭＥＲ（登録商標）１８８、臭化セトリモニウム、塩化セチルピリジニウム、塩化ベンザルコニウム、ドキュセートナトリウム等および／またはその組合せが含まれる。
【０５０３】
例示的な結合剤には、限定されずに、デンプン（例えば、コーンスターチおよびデンプンのり）；ゼラチン；糖（例えば、スクロース、グルコース、デキストロース、デキストリン、糖蜜、ラクトース、ラクチトール、マンニトール）；天然および合成のガム（例えば、アラビアゴム、アルギン酸ナトリウム、アイルランドコケの抽出物、ｐａｎｗａｒガム、ガティガム、ｉｓａｐｏｌ殻の粘質物、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、微結晶性セルロース、酢酸セルロース、ポリ（ビニル−ピロリドン）、珪酸アルミニウムマグネシウム（Ｖｅｅｇｕｍ（登録商標））およびカラマツアラボガラクタン）；アルギン酸塩；ポリエチレンオキシド；ポリエチレングリコール；無機カルシウム塩；ケイ酸；ポリメタクリレート；ワックス；水；アルコール等；およびその組合せが含まれる。
【０５０４】
例示的な保存剤には、限定されずに、抗酸化剤、キレート化剤、抗微生物性保存剤、抗真菌保存剤、アルコール保存剤、酸性保存剤および／または他の保存剤が含まれ得る。例示的な抗酸化剤には、限定されずに、アルファトコフェロール、アスコルビン酸、パルミチン酸アスコルビル（acorbyl）、ブチルヒドロキシアニソール、ブチルヒドロキシトルエン、モノチオグリセロール、メタ重亜硫酸カリウム、プロピオン酸、没食子酸プロピル、アスコルビン酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウムおよび／または亜硫酸ナトリウムが含まれる。例示的なキレート化剤には、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、クエン酸一水和物、エデト酸二ナトリウム、エデト酸二カリウム、エデト酸、フマル酸、リンゴ酸、リン酸、エデト酸ナトリウム、酒石酸および／またはエデト酸三ナトリウムが含まれる。例示的な抗微生物性保存剤には、限定されずに、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、ベンジルアルコール、ブロノポール、セトリミド、塩化セチルピリジニウム、クロルヘキシジン、クロロブタノール、クロロクレソール、クロロキシレノール、クレゾール、エチルアルコール、グリセリン、ヘキセチジン、イミド尿素、フェノール、フェノキシエタノール、フェニルエチルアルコール、硝酸フェニル水銀、プロピレングリコールおよび／またはチメロサールが含まれる。例示的な抗真菌保存剤には、限定されずに、ブチルパラベン、メチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベン、安息香酸、ヒドロキシ安息香酸、安息香酸カリウム、ソルビン酸カリウム、安息香酸ナトリウム、プロピオン酸ナトリウムおよび／またはソルビン酸が含まれる。例示的なアルコール保存剤には、限定されずに、エタノール、ポリエチレングリコール、フェノール、フェノール化合物、ビスフェノール、クロロブタノール、ヒドロキシベンゾエートおよび／またはフェニルエチルアルコールが含まれる。例示的な酸性保存剤には、限定されずに、ビタミンＡ、ビタミンＣ、ビタミンＥ、ベータカロテン、クエン酸、酢酸、デヒドロ酢酸、アスコルビン酸、ソルビン酸および／またはフィチン酸が含まれる。他の保存剤には、限定されずに、トコフェロール、酢酸トコフェロール、デテロキシムメシレート、セトリミド、ブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、エチレンジアミン、ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＬＳ）、ラウリルエーテル硫酸ナトリウム（ＳＬＥＳ）、亜硫酸水素ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸カリウム、メタ重亜硫酸カリウム、ＧＬＹＤＡＮＴ  ＰＬＵＳ（登録商標）、ＰＨＥＮＯＮＩＰ（登録商標）、メチルパラベン、ＧＥＲＭＡＬＬ（登録商標）１１５、ＧＥＲＭＡＢＥＮ（登録商標）ＩＩ、ＮＥＯＬＯＮＥ（商標）、ＫＡＴＨＯＮ（商標）および／またはＥＵＸＹＬ（登録商標）が含まれる。
【０５０５】
例示的な緩衝剤には、限定されずに、クエン酸緩衝液、酢酸塩緩衝液、リン酸緩衝液、塩化アンモニウム、炭酸カルシウム、塩化カルシウム、クエン酸カルシウム、グルビオン酸カルシウム、グルセプト酸カルシウム、グルコン酸カルシウム、ｄ−グルコン酸、グリセロリン酸カルシウム、乳酸カルシウム、プロパン酸、レブリン酸カルシウム、ペンタン酸、二塩基性リン酸カルシウム、リン酸、三塩基性リン酸カルシウム、リン酸水酸化カルシウム、酢酸カリウム、塩化カリウム、グルコン酸カリウム、カリウム混合物、二塩基性リン酸カリウム、リン酸二水素カリウム、リン酸カリウム混合物、酢酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、第二リン酸ナトリウム、第一リン酸ナトリウム、リン酸ナトリウム混合物、トロメタミン、水酸化マグネシウム、水酸化アルミニウム、アルギン酸、無発熱物質水、等張性食塩水、リンガー液、エチルアルコール等、および／またはその組合せが含まれる。
【０５０６】
例示的な潤滑剤には、限定されずに、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸、シリカ、タルク、モルト、ベヘン酸グリセリル、水素化植物油、ポリエチレングリコール、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ロイシン、ラウリル硫酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウム等、およびその組合せが含まれる。
【０５０７】
例示的な油には、限定されずに、アーモンド、アプリコットの実、アボカド、ババスーヤシ、ベルガモット、ブラックカラント種子、ルリヂサ、ケード、カモミール、キャノーラ、キャラウェー、ブラジルロウヤシ、ヒマ、シナモン、カカオ脂、ココナッツ、タラ肝臓、コーヒー、コーン、綿実、エミュー、ユーカリノキ、オオマツヨイグサ、魚類、亜麻仁、ゲラニオール、ヒョウタン、ブドウ種子、ヘーゼルナッツ、ヒソップ、ミリスチン酸イソプロピル、ジョジョバ、クークーエーナッツ、ラバンディン、ラベンダー、レモン、ｌｉｔｓｅａ  ｃｕｂｅｂａ、マカデミアナッツ、ゼニアオイ、マンゴー種子、メドウフォーム種子、ミンク、ナツメグ、オリーブ、オレンジ、オレンジラフィー、ヤシ、ヤシの実、桃仁、ピーナッツ、ケシの実、カボチャ種子、ナタネ、米糠、ローズマリー、ベニバナ、ビャクダン、サザンカ（sasquana）、セイバリー、シーバックソーン、ゴマ、シアバター、シリコーン、ダイズ、ヒマワリ、チャノキ、アザミ、ツバキ、ベチベルソウ、クルミおよびコムギの胚芽油が含まれる。例示的な油には、限定されずに、ステアリン酸ブチル、カプリル酸トリグリセリド、カプリン酸トリグリセリド、シクロメチコン、セバシン酸ジエチル、ジメチコン３６０、ミリスチン酸イソプロピル、鉱油、オクチルドデカノール、オレイルアルコール、シリコーン油および／またはその組合せが含まれる。
【０５０８】
配合者の判断に従って、カカオ脂および坐薬ワックス、着色剤、コーティング剤、甘味料、香料および／または芳香剤などの賦形剤が、組成物中に存在してよい。
製剤ビヒクル：リポソーム、リポプレックスおよび脂質ナノ粒子
【０５０９】
本発明の化合物および／または組成物は、１つまたは複数のリポソーム、リポプレックスおよび／または脂質ナノ粒子を使用して製剤化することができる。一部の実施形態では、医薬組成物は、リポソームを含む。リポソームは、脂質二重層で主に構成されてよく、栄養素および医薬製剤の投与のための送達ビヒクルとして使用することができる、人工的に調製された小胞である。リポソームは、限定されずに、直径数百ナノメートルであってよく、狭い水性のコンパートメントによって分けられた一連の同心性二重層を含有することができる多層小胞（ＭＬＶ）、直径５０ｎｍ未満であってよい小単細胞小胞（ＳＵＶ）、および直径５０〜５００ｎｍであってよい大単層小胞（ＬＵＶ）などのように異なるサイズであってよい。不健康な組織へのリポソームの付着を改善するかまたは、限定することなくエンドサイトーシスなどの事象を活性化するために、リポソーム構成成分は、限定することなく、オプソニンまたはリガンドを含むことができる。リポソームは、低いかまたは高いｐＨを含むことができる。一部の実施形態では、医薬製剤の送達を改善するために、リポソームｐＨを変化させることができる。
【０５１０】
一部の実施形態では、リポソームの形成は、物理化学的特徴、例えば、限定されずに、取り込まれる医薬製剤、リポソームの成分、脂質小胞を分散させる媒体の性質、取り込まれる物質の有効濃度、取り込まれる物質の潜在的毒性、小胞の適用および／または送達の間に関与するさらなるプロセス、最適化サイズ、多分散、予定の適用のための小胞の有効期間、バッチ間の再現性、ならびに安全で効率的なリポソーム生成物の大規模生産の可能性に依存することがある。
【０５１１】
一部の実施形態では、それらが受動的にまたは能動的に異なる細胞型にｉｎ  ｖｉｖｏで導かれるように、製剤を組み立てるかまたは組成物を変更することができる。
【０５１２】
一部の実施形態では、製剤は、限定されずに、葉酸、トランスフェリン、Ｎ−アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）および抗体標的化手法によって例示されるように、製剤表面での異なるリガンドの発現を通して選択的に標的化することができる。
【０５１３】
一部の実施形態では、本発明の医薬組成物は、機能の効力を改善するために、リポソーム、リポプレックスおよび／または脂質ナノ粒子で製剤化することができる。そのような製剤は、医薬組成物による細胞トランスフェクションを増加させることができる。一部の実施形態では、医薬組成物の安定性を増加させるために、リポソーム、リポプレックスまたは脂質ナノ粒子を使用することができる。
【０５１４】
一部の実施形態では、リポソームは、１つまたは複数の抗体を含む医薬組成物のために特異的に製剤化される。そのようなリポソームは、当技術分野で公知の技術、例えばEppsteinら（Eppstein,  D.A.ら、Biological  activity  of  liposome-encapsulated  murine  interferon  gamma  is  mediated  by  a  cell  membrane  receptor.  Proc  Natl  Acad  Sci  USA.１９８５年６月；８２巻（１１号）：３６８８〜９２頁）；Hwangら（Hwang,  K.J.ら、Hepatic  uptake  and  degradation  of  unilamellar  sphingomyelin/cholesterol  liposomes:  a  kinetic  study.  Proc  Natl  Acad  Sci  USA.１９８０年７月；７７巻（７号）：４０３０〜４頁）；米国特許第４，４８５，０４５号および米国特許第４，５４４，５４５号によって記載されているものによって調製することができる。持続的循環時間を有するリポソームの生成は、米国特許第５，０１３，５５６号に記載されてもいる。
【０５１５】
一部の実施形態では、抗体を含んでいる本発明のリポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロールならびにポリエチレングリコール誘導体化ホスファチジルエタノールアミンなどの脂質を利用する逆相蒸発を使用して生成することができる。所望の直径のリポソームを押し出すために、規定の孔径を有するフィルターが使用される。別の実施形態では、本発明の化合物および／または組成物は、Martinら（Martin,  F.J.ら、Irreversible  coupling  of  immunoglobulin  fragments  to  preformed  vesicles.  An  improved  method  for  liposome  targeting.  J  Biol  Chem.１９８２年１月１０日；２５７巻（１号）：２８６〜８頁）によって記載されているようなジスルフィド相互変換反応によってリポソームの外部表面にコンジュゲートすることができる。
製剤ビヒクル：ポリマーおよびナノ粒子
【０５１６】
本発明の化合物および／または組成物は、天然および／または合成のポリマーを使用して製剤化することができる。送達のために使用することができるポリマーの非限定的例には、ＤＭＲＩ／ＤＯＰＥ、ポロキサマー、キトサン、シクロデキストリンおよび乳酸−グリコール酸コポリマー（ＰＬＧＡ）ポリマーが限定されずに含まれる。一部の実施形態では、ポリマーは生分解性であってよい。
【０５１７】
一部の実施形態では、ポリマー製剤は、化合物および／または組成物の持続的および／または遅延型放出を可能にすることができる（例えば、筋肉内および／または皮下注射の後）。本発明の化合物および／または組成物の変更された放出プロファイルは、例えば、長期間にわたる化合物放出をもたらすことができる。ポリマー製剤は、本発明の化合物および／または組成物の安定性を増加させるために使用することもできる。
【０５１８】
一部の実施形態では、ポリマー製剤は、限定されずに、葉酸、トランスフェリンおよびＮ−アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）によって例示されるように、異なるリガンドの発現を通して選択的に標的化することができる（Benoit,  D.S.ら、Synthesis  of  folate-functionalized  RAFT  polymers  for  targeted  siRNA  delivery.  Biomacromolecules.２０１１年１２巻：２７０８〜１４頁；Rozema,  D.B.ら、Dynamic  polyconjugates  for  targeted  in  vivo  delivery  of  siRNA  to  hepatocytes.  Proc  Natl  Acad  Sci  USA.２００７年１０４巻：１２９８２〜１２８８７頁；Davis,  M.E.ら、The  first  targeted  delivery  of  siRNA  in  humans  via  a  self-assembling,  cyclodextrin  polymer-based  nanoparticle:  from  concept  to  clinic.  Mol  Pharm.２００９年６巻：６５９〜６６８頁；Davis,  M.E.ら、Evidence  of  RNAi  in  humans  from  systemically  administered  siRNA  via  targeted  nanoparticles.  Nature.２０１０年、４６４巻：１０６７〜７０頁；各々の内容は参照により本明細書に完全に組み込まれる）。
【０５１９】
本発明の化合物および／または組成物は、ポリマー、脂質および／または他の生分解性薬剤、例えば、限定されずに、リン酸カルシウムの組合せを使用して、ナノ粒子として製剤化することができる。一部の実施形態では、送達が強化されるようにナノ粒子構造の微調整を可能にするために、構成成分をコア−シェル、ハイブリッドおよび／またはレイヤー−バイ−レイヤー構造で組み合わせることができる。本発明の抗体のために、ポリ（２−（メタクリロイルオキシ）エチルホスホリルコリン）−ブロック−（２−（ジイソプロピルアミノ）メタクリル酸エチル）、（ＰＭＰＣ−ＰＤＰＡ）、生理的ｐＨで自己組織化してポリマーソムとしても公知のナノメートルサイズの小胞を形成するｐＨ感受性のジブロックコポリマー、に基づく系を使用することができる。これらのポリマーソムは、生細胞の中に比較的高い抗体ペイロードを首尾よく送達することが示された。（Massignani,  M.ら、Cellular  delivery  of  antibodies:  effective  targeted  subcellular  imaging  and  new  therapeutic  tool.  Nature  Proceedings.２０１０年、１〜１７頁）。
【０５２０】
一部の実施形態では、本発明の化合物および／または組成物の送達のためにナノ粒子を形成するために、ＰＥＧ−電荷変換型ポリマー（Pitella,  F.ら、Enhanced  endosomal  escape  of  siRNA-incorporating  hybrid  nanoparticles  from  calcium  phosphate  and  PEG-block  charge-conversional  polymer  for  efficient  gene  knockdown  with  negligible  cytotoxicity.  Biomaterials.２０１１年３２巻：３１０６〜１４頁）を使用することができる。一部の実施形態では、ＰＥＧ−電荷変換型ポリマーは、酸性ｐＨでポリカチオンに切断し、こうしてエンドソーム回避を強化することによって、ＰＥＧ−ポリアニオンブロックコポリマーを向上させることができる。
【０５２１】
一部の実施形態では、ポリマーナノ粒子の複合体生成、送達および／または内在化は、コアおよびシェルナノ粒子構成成分の化学組成を変更することによって、正確に制御することができる（Siegwart,  D.J.ら、Combinatorial  synthesis  of  chemically  diverse  core-shell  nanoparticles  for  intracellular  delivery.  Proc  Natl  Acad  Sci  USA.２０１１年１０８巻：１２９９６〜３００１頁）。
【０５２２】
一部の実施形態では、本発明の化合物および／または組成物を送達するために、エチレン−酢酸ビニルコポリマーのマトリックスが使用される。そのようなマトリックスは、他によって記載されている（Sherwood,  J.K.ら、Controlled  antibody  delivery  systems.  Nature  Biotechnology.１９９２年。１０巻：１４４６〜９頁）。
結合性タンパク質製剤
【０５２３】
本発明の結合性タンパク質（例えば、抗体またはその抗原結合性部分）は、静脈内投与または脈管外投与のために製剤化することができる（Daughertyら、Formulation  and  delivery  issues  for  monoclonal  antibody  therapeutics.  Adv  Drug  Deliv  Rev.２００６年８月７日；５８巻（５〜６号）：６８６〜７０６頁および米国特許出願公開番号ＵＳ２０１１／０１３５５７０、各々の内容は参照により本明細書に完全に組み込まれる）。脈管外投与経路には、限定されずに、皮下投与、腹腔内投与、脳内投与、眼内投与、病巣内投与、局所投与および筋肉内投与が含まれ得る。
【０５２４】
一部の実施形態では、結合性タンパク質構造は、治療薬としての効果を改善するために改変することができる。改善には、限定されずに、改善された熱力学的安定性、低減されたＦｃ受容体結合特性および／または改善されたフォールディング効率が含まれ得る。改変には、限定されずに、アミノ酸置換、グリコシル化、パルミトイル化および／またはタンパク質コンジュゲーションが含まれ得る。
【０５２５】
一部の実施形態では、本発明の結合性タンパク質（例えば、抗体またはその抗原結合性部分）は、抗体酸化を低減するために抗酸化剤と一緒に製剤化することができる。本発明の抗体は、タンパク質凝集を低減する添加剤と一緒に製剤化することもできる。そのような添加剤には、限定されずに、アルブミン、アミノ酸、糖、尿素、塩化グアニジニウム、多価アルコール、ポリマー（ポリエチレングリコールおよびデキストランなど）、界面活性剤（ポリソルベート２０およびポリソルベート８０を限定することなく含む）または他の抗体でさえ含まれ得る。
【０５２６】
一部の実施形態では、本発明の結合性タンパク質（例えば、抗体またはその抗原結合性部分）は、結合性タンパク質の構造および機能に及ぼす水の影響を低減するように製剤化することができる。そのような製剤における抗体調製物は、凍結乾燥されてもよい。凍結乾燥に付される製剤は、抗体構造を保護および／または安定化するために、炭水化物またはポリオール化合物を含むことができる。そのような化合物には、限定されずに、スクロース、トレハロースおよびマンニトールが含まれ得る。
【０５２７】
一部の実施形態では、本発明の結合性タンパク質（例えば、抗体またはその抗原結合性部分）は、ポリマーで製剤化することができる。一部の実施形態では、ポリマー製剤は、疎水性ポリマーを含むことができる。そのようなポリマーは、水中油中固体封入方法を通してラクチド−グリコリドコポリマーで製剤化されるマイクロスフェアであってよい。一部の実施形態では、エチレン酢酸ビニルコポリマーを含むマイクロスフェアは、抗体送達のためにおよび／または送達部位での抗体放出経過時間を延長するために使用することもできる。一部の実施形態では、ポリマーは、水性ゲルであってもよい。そのようなゲルは、例えば、カルボキシメチルセルロースを含むことができる。一部の実施形態では、水性ゲルは、ヒアルロン酸ヒドロゲルを含むこともできる。一部の実施形態では、抗体は、中枢神経系の組織を非限定的に含む組織における持続的送達を可能にするヒドラゾン連結を通して、そのようなゲルに共有結合させることができる。
製剤ビヒクル：ペプチドおよびタンパク質
【０５２８】
本発明の化合物および／または組成物は、ペプチドおよび／またはタンパク質で製剤化することができる。一部の実施形態では、細胞内送達を可能にするペプチド、例えば、限定されずに、細胞貫通性ペプチドおよび／またはタンパク質／ペプチドを、医薬製剤を送達するために使用することができる。本発明の医薬製剤で使用することができる細胞貫通性ペプチドの非限定例には、細胞内空間への送達を促進するポリカチオンに付着した細胞貫通性ペプチド配列、例えば、ＨＩＶ由来のＴＡＴペプチド、ペネトラチン、トランスポータンス、またはｈＣＴ由来の細胞貫通性ペプチドが含まれる（例えば、各々の内容は参照により本明細書に完全に組み込まれる、Caron,  N.J.ら、Intracellular  delivery  of  a  Tat-eGFP  fusion  protein  into  muscle  cells.  Mol  Ther.２００１年、３巻（３号）：３１０〜８頁；Langel,  U.、Cell-Penetrating  Peptides:  Processes  and  Applications、CRC  Press、Boca  Raton  FL、２００２年；El-Andaloussi,  S.ら、Cell-penetrating  peptides:  mechanisms  and  applications.  Curr  Pharm  Des.２００３年、１１巻（２８号）：３５９７〜６１１頁；およびDeshayes,  S.ら、Cell-penetrating  peptides:  tools  for  intracellular  delivery  of  therapeutics.  Cell  Mol  Life  Sci.２００５年、６２巻（１６号）：１８３９〜４９頁、を参照）。本発明の化合物および／または組成物は、細胞内空間への組成物の送達を強化する細胞貫通性薬剤、例えばリポソームを含むように製剤化することもできる。本発明の化合物および／または組成物は、細胞内送達を可能にするために、ペプチドおよび／またはタンパク質、例えば、限定されずに、Ａｉｌｅｒｏｎ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ）およびＰｅｒｍｅｏｎ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ）からのペプチドおよび／またはタンパク質と複合体を形成することができる（Cronican,  J.J.ら、Potent  delivery  of  functional  proteins  into  mammalian  cells  in  vitro  and  in  vivo  using  a  supercharged  protein.  ACS  Chem  Biol.２０１０年、５巻：７４７〜５２頁；McNaughton,  B.R.ら、Mammalian  cell  penetration,  siRNA  transfection,  and  DNA  transfection  by  supercharged  proteins.  Proc  Natl  Acad  Sci,  USA.２００９年、１０６巻：６１１１〜６頁；Verdine,  G.L.ら、Stapled  peptides  for  intracellular  drug  targets.  Methods  Enzymol.２０１２年、５０３巻：３〜３３頁；各々の内容は参照により本明細書に完全に組み込まれる）。
【０５２９】
一部の実施形態では、細胞貫通性ポリペプチドは、第１および第２のドメインを含むことができる。第１のドメインは、過給ポリペプチドを含むことができる。第２のドメインは、タンパク質結合パートナーを含むことができる。本明細書において、タンパク質結合パートナーには、限定されずに、抗体およびその機能的断片、骨格タンパク質および／またはペプチドが含まれ得る。細胞貫通性ポリペプチドは、タンパク質結合パートナーのための細胞内結合パートナーをさらに含むことができる。一部の実施形態では、細胞貫通性ポリペプチドは、本発明の化合物および／または組成物を導入することができる細胞から分泌させることができる。
【０５３０】
細胞トランスフェクションを増加させるために、および／または化合物／組成物体内分布を（例えば、特異的組織または細胞型を標的とすることによって）改変するために、ペプチドおよび／またはタンパク質を含む本発明の組成物を使用することができる。
製剤ビヒクル：細胞
【０５３１】
細胞トランスフェクション（例えば、細胞担体における）を確実にするために、または体内分布を（例えば、細胞担体を特異的組織または細胞型に導くことによって）改変するために、本発明の化合物および／または組成物の細胞に基づく製剤を使用することができる。
細胞移入方法
【０５３２】
ウイルスおよび非ウイルス媒介技術を含め、細胞への核酸またはタンパク質の導入のための様々な方法が当技術分野で公知であり、適する。一般的な非ウイルス媒介技術の例には、限定されずに、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム媒介移入、ヌクレオフェクション、ソノポレーション、熱ショック、マグネトフェクション、リポソーム媒介移入、マイクロインジェクション、マイクロ発射体媒介移入（ナノ粒子）、カチオン性ポリマー媒介移入（ＤＥＡＥ−デキストラン、ポリエチレンイミン、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）など）または細胞融合が含まれる。
【０５３３】
ソノポレーションまたは細胞超音波処理の技術は、細胞原形質膜の透過性を改変するための音（例えば、超音波周波数）の使用である。ソノポレーション方法は当業者に公知であり、核酸をｉｎ  ｖｉｖｏで送達するために使用される（Yoon,  C.S.ら、Ultrasound-mediated  gene  delivery.  Expert  Opin  Drug  Deliv.２０１０年７巻：３２１〜３０頁；Postema,  M.ら、Ultrasound-directed  drug  delivery.  Curr  Pharm  Biotechnol.２００７年８巻：３５５〜６１頁；Newman,  C.M.ら、Gene  therapy  progress  and  prospects:  ultrasound  for  gene  transfer.  Gene  Ther.２００７年、１４巻（６号）：４６５〜７５頁；各々の内容は参照により本明細書に完全に組み込まれる）。ソノポレーション方法は当技術分野で公知であり、例えば、米国特許出願公開ＵＳ２０１０／０１９６９８３ではそれらと細菌の関係が、および、例えば米国特許出願公開ＵＳ２０１０／０００９４２４ではそれと他の細胞型の関係が教示されてもおり、各々の内容は参照により本明細書に完全に組み込まれる。
【０５３４】
エレクトロポレーション技術も当技術分野で周知であり、核酸をｉｎ  ｖｉｖｏでおよび臨床的に送達するために使用される（Andre,  F.M.ら、Nucleic  acids  electrotransfer  in  vivo:  mechanisms  and  practical  aspects.  Curr  Gene  Ther.２０１０年１０巻：２６７〜８０頁；Chiarella,  P.ら、Application  of  electroporation  in  DNA  vaccination  protocols.  Curr  Gene  Ther.２０１０年、１０巻：２８１〜６頁；Hojman,  P.、Basic  principles  and  clinical  advancements  of  muscle  electrotransfer.  Curr  Gene  Ther.２０１０年１０巻：１２８〜３８頁；各々の内容は参照により本明細書に完全に組み込まれる）。一部の実施形態では、本発明の化合物および／または組成物は、エレクトロポレーションによって送達されてもよい。
投与および送達
【０５３５】
本発明の化合物および／または組成物は、当技術分野で公知の標準の方法または経路のいずれかによって投与することができる。そのような方法は、治療的に有効な転帰をもたらす任意の経路を含むことができる。これらには、限定されずに、腸内、胃腸内、硬膜外、経口、経皮、硬膜外（硬膜上）、大脳内（大脳中に）、脳室内（脳室中に）、皮膚表面（皮膚の上への適用）、皮内（皮膚自体の中へ）、皮下（皮膚の下へ）、経鼻投与（鼻を通して）、静脈内（静脈中へ）、動脈内（動脈中へ）、筋肉内（筋肉中へ）、心臓内（心臓内へ）、骨内注入（骨髄中へ）、髄腔内（脊柱管へ）、腹腔内（腹膜への注入または注射）、膀胱内注入、硝子体内（目を通して）、空洞内注射（ペニス基部の中へ）、膣内投与、子宮内、羊膜外投与、経皮（全身分布のためのインタクトな皮膚を通した拡散）、経粘膜（粘膜を通した拡散）、ガス注入（鼻で吸う）、舌下、口唇下、浣腸、点眼剤（結膜の上へ）、または点耳液が含まれる。具体的な実施形態では、本発明の化合物および／または組成物は、それらが脳血液関門、血管障壁または他の上皮障壁を通過することを可能にする方法で投与することができる。製剤化および投与の方法には、その各々の内容は参照により本明細書に完全に組み込まれる、米国特許出願公開第２０１３／０１２２００７号、米国特許第８，４１５，４５９号または国際公開番号ＷＯ２０１１／１５１４３２に開示されるもののいずれも含まれ得る。本発明の化合物および／または組成物の投与の非限定経路は、下に記載されている。
非経口および注射可能な投与
【０５３６】
一部の実施形態では、本発明の化合物および／または組成物は、非経口投与することができる。経口および非経口投与のための液体剤形には、限定されずに、薬学的に許容される乳剤、マイクロエマルジョン、溶液、懸濁液、シロップ剤および／またはエリキシル剤が含まれる。有効成分に加えて、液体剤形は、当技術分野で一般的に使用される不活性の希釈剤、例えば、水または他の溶媒、可溶化剤および乳化剤、例えばエチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油（特に、綿実、落花生、トウモロコシ、胚芽、オリーブ、ヒマおよびゴマの油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコールおよびソルビタンの脂肪酸エステル、およびそれらの混合物を含むことができる。不活性希釈剤の他に、経口組成物は、湿潤剤、乳化剤および懸濁剤などのアジュバント、甘味料、香料ならびに／または芳香剤を含むことができる。非経口投与のためのある特定の実施形態では、組成物は、可溶化剤、例えばＣＲＥＭＯＰＨＯＲ（登録商標）、アルコール、油、加工油、グリコール、ポリソルベート、シクロデキストリン、ポリマーおよび／またはその組合せと混合される。他の実施形態では、ヒドロキシプロピルセルロースなどの界面活性剤が含まれる。
【０５３７】
注射可能な調製物、例えば無菌の水性または油性の懸濁液は、適する分散剤、湿潤剤および／または懸濁剤を使用して公知の技術によって製剤化することができる。無菌の注射可能な調製物は、例えば１，３−ブタンジオール中の溶液のように、無毒の非経口的に許容される希釈剤および／または溶媒中の無菌の注射可能な溶液、懸濁液および／または乳剤であってよい。用いることができる許容されるビヒクルおよび溶媒には、水、リンガー液、Ｕ．Ｓ．Ｐ．、および等張性の塩化ナトリウム溶液がある。無菌の不揮発性油が、溶媒または懸濁媒として従来用いられている。この目的のために、合成のモノ−またはジグリセリドを含む、任意の刺激の少ない不揮発性油を用いることができる。注射剤の調製で、オレイン酸などの脂肪酸を使用することができる。
【０５３８】
注射用製剤は、例えば、細菌保持フィルターによる濾過によって、および／または使用直前に無菌水または他の無菌注射用媒体に溶解または分散させることができる無菌固体組成物の形態で滅菌剤を混和することによって、滅菌することができる。
【０５３９】
有効成分の効果を長くするために、皮下または筋肉内注射からの有効成分の吸収を減速することがしばしば望ましい。これは、水溶性の劣る結晶性または非晶質の材料の液体懸濁液の使用によって達成することができる。有効成分の吸収速度は溶解速度に依存し、溶解速度は結晶のサイズおよび結晶形に次に依存することができる。あるいは、非経口的に投与される薬物剤形の遅延される吸収は、薬物を油ビヒクルに溶解または懸濁することによって達成することができる。注射用デポー剤形は、生分解性ポリマー、例えばポリラクチド−ポリグリコリドの中で薬物のマイクロカプセルマトリックスを形成することによって作製される。薬物対ポリマーの比および採用される特定のポリマーの性質によって、薬物放出速度を制御することができる。他の生分解性ポリマーの例には、ポリ（オルソエステル）およびポリ（無水物）が含まれる。デポー注射用製剤は、体組織に適合するリポソームまたはマイクロエマルジョンに薬物を取り込むことによって調製される。
直腸および膣投与
【０５４０】
一部の実施形態では、本発明の化合物および／または組成物は、直腸および／または膣に投与することができる。直腸または膣投与のための組成物は一般的に坐薬であり、それは、組成物を、周囲温度で固体であるが体温では液体であり、したがって直腸または膣腔内で融解して有効成分を放出する、適する非刺激性の賦形剤、例えばカカオ脂、ポリエチレングリコールまたは坐薬ワックスと混合することによって調製することができる。
経口投与
【０５４１】
一部の実施形態では、本発明の化合物および／または組成物は、経口投与することができる。経口投与のための固体剤形には、カプセル剤、錠剤、丸剤、散剤および顆粒剤が含まれる。そのような固体剤形では、有効成分は少なくとも１つの不活性の薬学的に許容される賦形剤、例えば、クエン酸ナトリウムもしくはリン酸二カルシウムならびに／または充填剤もしくは増量剤（例えば、デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトールおよびケイ酸）、結合剤（例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリジノン、スクロースおよびアラビアゴム）、保湿剤（例えば、グリセロール）、崩壊剤（例えば、寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモまたはタピオカデンプン、アルギン酸、ある特定のケイ酸塩、および炭酸ナトリウム）、溶解遅延剤（例えば、パラフィン）、吸収促進剤（例えば、四級アンモニウム化合物）、湿潤剤（例えば、セチルアルコールおよびモノステアリン酸グリセロール）、吸収材（例えば、カオリンおよびベントナイト粘土）、および滑沢剤（例えば、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム）、およびそれらの混合物と混合される。カプセル剤、錠剤および丸剤の場合、剤形は緩衝剤を含むことができる。
局所または経皮投与
【０５４２】
本明細書に記載されているように、本発明の化合物および／または組成物は、局所投与のために製剤化することができる。皮膚は容易にアクセス可能であるので、送達の理想的な標的部位になることができる。皮膚に本発明の化合物および／または組成物を送達するために、３つの経路が一般的に考えられる：（ｉ）局所適用（例えば、局所／領域性の処置および／または美容的適用のため）；（ｉｉ）皮内注射（例えば、局所／領域性の処置および／または美容的適用のため）；および（ｉｉｉ）全身性送達（例えば、皮膚および真皮外の領域の両方に影響する皮膚科疾患の処置のため）。本発明の化合物および／または組成物は、当技術分野で公知のいくつかの異なるアプローチによって皮膚に送達することができる。
【０５４３】
一部の実施形態では、本発明は、本発明の方法を便利におよび／または効果的に実行するための、様々な被覆帯（例えば、創傷被覆帯）または包帯（例えば、絆創膏）を提供する。一般的に、被覆帯または包帯は、ユーザーが複数の処置を実施することを可能にするために、本明細書に記載されている本発明の化合物および／または組成物の十分な量を含むことができる。
【０５４４】
局所および／または経皮投与のための剤形には、軟膏、ペースト、クリーム、ローション、ゲル、散剤、溶液、噴霧剤、吸入剤および／またはパッチを含めることができる。一般的に、有効成分は薬学的に許容される賦形剤および／または任意の必要とされる保存剤および／または緩衝剤と無菌条件下で混合される。さらに、本発明は経皮パッチの使用を企図し、それは体への本発明の化合物および／または組成物の制御送達を提供するという追加の利点をしばしば有する。そのような剤形は、例えば、適切な媒体で化合物および／または組成物を溶解および／または分散させることによって調製することができる。あるいは、またはさらに、速度制御膜を提供することによって、および／または化合物および／または組成物をポリマーマトリックスおよび／またはゲルに分散させることによって速度を制御することができる。
【０５４５】
局所投与のために適する製剤には、限定されずに、液体および／もしくは半液体調製物、例えば塗り薬、ローション、水中油および／もしくは油中水乳剤、例えばクリーム、軟膏および／もしくはペースト、および／または溶液および／または懸濁液が含まれる。
【０５４６】
局所投与可能な製剤は、例えば、約１％から約１０％（ｗ／ｗ）の有効成分を含むことができるが、有効成分の濃度は溶媒中の有効成分の溶解限度と同じくらい高くてもよい。局所投与のための製剤は、本明細書に記載されているさらなる成分のうちの１つまたは複数をさらに含むことができる。
デポー投与
【０５４７】
本明細書に記載されているように、一部の実施形態では、本発明の化合物および／または組成物は、長期放出のためにデポー剤に製剤化される。一般的に、特異的臓器または組織（「標的組織」）が投与の標的とされる。
【０５４８】
本発明の一部の態様では、本発明の化合物および／または組成物は、標的組織の中にまたは近位に空間的に保持される。標的組織（１つまたは複数の標的細胞を含む）を、それらが標的組織に実質的に保持されるような、すなわち、組成物の少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９、９９．９、９９．９９または９９．９９％を超えて標的組織の中に保持されるような条件下で化合物および／または組成物と接触させることによって、化合物および／または組成物を哺乳動物対象の標的組織に提供する方法が提供される。有利には、１つまたは複数の標的細胞に入る化合物および／または組成物の量を測定することによって、保持は判定される。例えば、投与の一定時間後に、対象に投与される化合物および／または組成物の少なくとも１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、９９．９９％が、または９９．９９％を超えて細胞内に存在する。例えば、哺乳動物対象への筋肉内注射は、本発明の化合物および／または組成物ならびに１つまたは複数のトランスフェクション試薬を含む水性組成物を使用して実施することができ、保持は、筋細胞に存在する化合物および／または組成物の量を測定することによって判定される。
【０５４９】
本発明のある特定の態様は、標的組織（１つまたは複数の標的細胞を含む）を、それらがそのような標的組織に実質的に保持されるような条件下で化合物および／または組成物と接触させることによって、本発明の化合物および／または組成物を哺乳動物対象の標的組織に提供する方法に関する。化合物および／または組成物は、少なくとも１つの標的細胞において目的の効果が生まれるように、十分な有効成分を含む。一部の実施形態では、化合物および／または組成物は１つまたは複数の細胞貫通剤を一般的に含むが、薬学的に許容される担体の有無にかかわらず、「裸の」製剤（例えば、細胞貫通剤や他の薬剤のない）も企図される。
【０５５０】
一部の実施形態では、組織中の細胞に存在する増殖因子の量は、望ましくは増加する。好ましくは、増殖因子におけるこの増加は、標的組織の中の細胞に空間的に制限される。したがって、哺乳動物対象の組織における目的の増殖因子の量を増加させる方法が提供される。一部の実施形態では、提供される単位量が、所定量の標的組織の中に含有される細胞のかなりの百分率において目的の増殖因子の所望のレベルを生成すると判定されることによって特徴付けられる、化合物および／または組成物を含む製剤が提供される。
【０５５１】
一部の実施形態では、製剤は複数の異なる化合物および／または組成物を含み、ここで、１つまたは１つより多くは目的の生体分子を標的とする。任意選択で、製剤は、化合物および／または組成物の細胞内送達を支援するために、細胞貫通剤を含むこともできる。そのような実施形態では、所定量の標的組織の中に含有される細胞のかなりの百分率において目的の生体分子を標的とするのに（一般的に、隣接したまたは遠位の組織における目的の生体分子を標的とせずに）必要とされる化合物および／または組成物の用量が決定される。決定された用量は、対象の組織に次に直接的に導入される。一部の実施形態では、本発明は、化合物および／または組成物が１回を超える投与で、または分割用量投与によって送達されることを可能にする。
肺投与
【０５５２】
一部の実施形態では、本発明の化合物および／または組成物は、肺投与に適する製剤で調製、パッケージおよび／または販売することができる。一部の実施形態では、そのような投与は、口腔経由である。一部の実施形態では、製剤は、有効成分を含む乾燥粒子を含むことができる。そのような実施形態では、乾燥粒子は、約０．５ｎｍから約７ｎｍ、または約１ｎｍから約６ｎｍの範囲内の直径を有することができる。一部の実施形態では、製剤は、そのような粉末を分散させるように噴射剤の流れを向けることができる乾燥粉末レザバーを含むデバイスを使用する投与のために、乾燥粉末の形態であってよい。一部の実施形態では、自己噴射溶媒／粉末排出容器を使用することができる。そのような実施形態では、有効成分は密封容器中の低沸点噴射剤に溶解および／または懸濁させることができる。そのような粉末は、粒子の少なくとも９８重量％が０．５ｎｍを超える直径を有し、数で粒子の少なくとも９５％が７ｎｍ未満の直径を有する粒子を含むことができる。あるいは、粒子の少なくとも９５重量％が１ｎｍを超える直径を有し、数で粒子の少なくとも９０％が６ｎｍ未満の直径を有する。乾燥粉末組成物は、糖などの固体微粉末希釈剤を含むことができ、単位剤形で都合良く提供される。
【０５５３】
低沸点噴射剤は、大気圧で６５°Ｆ未満の沸点を有する液体噴射剤を一般的に含む。一般的に、噴射剤は組成物の５０％から９９．９％（ｗ／ｗ）を構成することができ、有効成分は組成物の０．１％から２０％（ｗ／ｗ）を構成することができる。噴射剤は、液体非イオン性および／もしくは固体アニオン性界面活性剤ならびに／または固体希釈剤（有効成分を含む粒子と同じ次数の粒径を有することができる）などのさらなる成分をさらに含むことができる。
【０５５４】
肺送達のために製剤化される医薬組成物は、溶液および／または懸濁液の液滴の形態で有効成分を提供することができる。そのような製剤は、有効成分を含む任意選択で無菌の水性および／または希釈されたアルコール溶液および／または懸濁液として調製、パッケージおよび／または販売することができ、任意の噴霧療法および／または霧化デバイスを使用して都合良く投与することができる。そのような製剤は、香料、例えばサッカリンナトリウム、揮発性油、緩衝剤、界面活性剤および／または保存剤、例えばメチルヒドロキシベンゾエートを限定することなく含む、１つまたは複数のさらなる成分をさらに含むことができる。この投与経路により提供される液滴は、約０．１ｎｍから約２００ｎｍの範囲内の平均直径を有することができる。
鼻腔内、経鼻および口内投与
【０５５５】
一部の実施形態では、本発明の化合物および／または組成物は、経鼻および／または鼻腔内投与することができる。一部の実施形態では、肺送達のために有益であると本明細書に記載されている製剤は、鼻腔内送達のためにも有益であろう。一部の実施形態では、鼻腔内投与のための製剤は、有効成分を含み、約０．２μｍから５００μｍの平均粒子を有する粗粉末を含む。そのような製剤は嗅ぐ方法で、すなわち、鼻の近くに保持される粉末容器からの鼻通路を通しての急速な吸入によって投与される。
【０５５６】
経鼻投与のために適する製剤は、例えば、およそわずか０．１％（ｗ／ｗ）から１００％（ｗ／ｗ）もの有効成分を含むことができ、本明細書に記載されているさらなる成分のうちの１つまたは複数を含むことができる。医薬組成物は、口内投与のために適する製剤で調製、パッケージおよび／または販売することができる。そのような製剤は、例えば、従来の方法を使用して作製される錠剤および／またはロゼンジの形態であってよく、例えば、０．１％から２０％（ｗ／ｗ）の有効成分を含むことができ、残りは、口内溶解性および／または分解性の組成物、ならびに任意選択で本明細書に記載されているさらなる成分のうちの１つまたは複数を含む。あるいは、口内投与のために適する製剤は、有効成分を含んでいる粉末ならびに／またはエアゾール化および／もしくは霧化された溶液および／もしくは懸濁液を含むことができる。そのような粉末化、エアゾール化および／またはエアゾール化された製剤は、分散されるとき、約０．１ｎｍから約２００ｎｍの範囲内の平均粒径および／または液滴サイズを含むことができ、本明細書に記載されている任意のさらなる成分のうちの１つまたは複数をさらに含むことができる。
眼または耳への投与
【０５５７】
一部の実施形態では、本発明の化合物および／または組成物は、眼および／または耳投与に適する製剤で調製、パッケージおよび／または販売することができる。そのような製剤は、例えば、例えば水性および／または油性液体賦形剤中の有効成分の０．１／１．０％（ｗ／ｗ）溶液および／または懸濁液を含む、点眼液および／または点耳液の形態であってよい。そのようなドロップ剤は、緩衝剤、塩および／または本明細書に記載されている任意のさらなる成分のうちの他の１つまたは複数をさらに含むことができる。有益である他の眼科投与可能な製剤には、微結晶性形態および／またはリポソーム調製物に有効成分を含むものが含まれる。網膜下挿入を、投与の形態として使用することもできる。
ペイロード投与：検出可能な薬剤および治療剤
【０５５８】
一部の実施形態では、本発明の化合物および／または組成物は、生物標的への物質（「ペイロード」）の送達、例えば、標的の検出のための検出可能な物質の送達または治療薬および／もしくは診断薬の送達が所望されるいくつかの異なるシナリオにおいて使用することができる。検出方法には、限定されずに、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏ両方の画像化方法、例えば、免疫組織化学、生物発光画像化（ＢＬＩ）、磁気共鳴画像化（ＭＲＩ）、陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）、電子顕微鏡法、Ｘ線ＣＴ、ラマン画像化、光学式干渉断層撮影、吸収画像化、熱画像化、蛍光反射画像化、蛍光顕微鏡検査法、蛍光分子断層撮影画像化、核磁気共鳴画像化、Ｘ線画像化、超音波画像化、光音響画像化、ラボアッセイ、またはタグ付け／染色／画像化が必要とされる任意の状況におけるものが含まれ得る。
【０５５９】
一部の実施形態では、化合物および／または組成物は、任意の有益な配向でリンカーおよびペイロードを含むように設計することができる。例えば、１つの末端をペイロードに、他の末端を化合物および／または組成物に付着させるために、２つの末端を有するリンカーを使用することができる。本発明の化合物および／または組成物は、１つを超えるペイロードを含むことができる。一部の実施形態では、化合物および／または組成物は、１つまたは複数の切断可能なリンカーを含むことができる。一部の実施形態では、ペイロードはリンカーを通して化合物および／または組成物に付着させることができ、ｉｎ  ｖｉｖｏ、例えば細胞内での追跡のために蛍光標識することができる。
【０５６０】
一部の実施形態では、本発明の化合物および／または組成物は、細胞への可逆的薬物送達において使用することができる。
【０５６１】
本発明の化合物および／または組成物は、特異的オルガネラへのペイロード、例えば、検出可能なまたは治療的な薬剤の細胞内標的化において使用することができる。さらに、本発明の化合物および／または組成物は、例えば、生きている動物の細胞または組織に治療剤を送達するために使用することができる。例えば、本明細書に記載されている化合物および／または組成物は、がん細胞を死滅させる化学療法剤を送達するために使用することができる。化合物および／または組成物は、膜透過を促進し、治療剤が細胞内に移動して細胞内標的に到達することを可能にする、１つまたは複数のリンカーを通して治療剤に付着させることができる。
【０５６２】
一部の実施形態では、ペイロードは細胞毒素、放射性イオン、化学療法薬または他の治療剤などの治療剤であってよい。細胞毒素および／または細胞傷害剤には、細胞を害することができる任意の薬剤が含まれ得る。例には、限定されずに、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、エチジウムブロマイド、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テニポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラセンジオン、ミトキサントロン、ミスラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、ピューロマイシン、マイタンシノイド、例えばマイタンシノール（本明細書に完全に組み込まれる米国特許第５，２０８，０２０号を参照）、レイチェルマイシン（ＣＣ−１０６５、米国特許第５，４７５，０９２号、第５，５８５，４９９号および第５，８４６，５４５号を参照、各々の内容は参照により本明細書に完全に組み込まれる）、およびその類似体またはホモログが含まれる。放射性イオンには、限定されずに、ヨウ素（例えば、１２５ヨウ素または１３１ヨウ素）、８９ストロンチウム、リン、パラジウム、セシウム、イリジウム、リン酸塩、コバルト、９０イットリウム、１５３サマリウムおよびプラセオジムが含まれる。他の治療剤には、限定されずに、代謝拮抗薬（例えば、メトトレキセート、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、シタラビン、５−フルオロウラシルデカルバジン）、アルキル化剤（例えば、メクロルエタミン、チオテパクロラムブシル、レイチェルマイシン（ＣＣ−１０６５）、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロホスファミド、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、およびシス−ジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチン）、アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン（旧ダウノマイシン）およびドキソルビシン）、抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（旧アクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミスラマイシンおよびアントラマイシン（ＡＭＣ））、ならびに有糸分裂阻害剤（例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、タキソールおよびマイタンシノイド）が含まれる。
【０５６３】
一部の実施形態では、ペイロードは、検出可能な薬剤、例えば、様々な有機小分子、無機化合物、ナノ粒子、酵素もしくは酵素基質、蛍光性材料、発光性材料（例えば、ルミノール）、生物発光材料（例えば、ルシフェラーゼ、ルシフェリンおよびアエクオリン）、化学発光性材料、放射性物質（例えば、１８Ｆ、６７Ｇａ、８１ｍＫｒ、８２Ｒｂ、１１１Ｉｎ、１２３Ｉ、１３３Ｘｅ、２０１Ｔｌ、１２５Ｉ、３５Ｓ、１４Ｃ、３Ｈまたは９９ｍＴｃ（例えば、過テクネチウム酸塩（テクネチウム酸塩（ＶＩＩ）、ＴｃＯ４−）として）、および造影剤（例えば、金（例えば、金のナノ粒子）、ガドリニウム（例えば、キレート化Ｇｄ）、酸化鉄（例えば、超常磁性酸化鉄（ＳＰＩＯ）、単結晶酸化鉄ナノ粒子（ＭＩＯＮ）および極小超常磁性酸化鉄（ＵＳＰＩＯ））、マンガンキレート（例えば、Ｍｎ−ＤＰＤＰ）、硫酸バリウム、ヨウ素化造影剤（イオヘキソール）、マイクロバブルまたはパーフルオロカーボン）であってよい。そのような光学的に検出可能な標識には、限定されずに、例えば、４−アセトアミド−４’−イソチオシアナトスチルベン−２，２’二スルホン酸；アクリジンおよび誘導体（例えば、アクリジンおよびアクリジンイソチオシアネート）；５−（２’−アミノエチル）アミノナフタレン−１−スルホン酸（ＥＤＡＮＳ）；４−アミノ−Ｎ−［３−ビニルスルホニル）フェニル］ナフタルイミド−３，５ジスルホネート；Ｎ−（４−アニリノ−１−ナフチル）マレイミド；アントラニルアミド；ＢＯＤＩＰＹ；ブリリアントイエロー；クマリンおよび誘導体（例えば、クマリン、７−アミノ−４−メチルクマリン（ＡＭＣ、クマリン１２０）、および７−アミノ−４−トリフルオロメチルクマリン（クマリン１５１））；シアニン色素；シアノシン；４’，６−ジアミニジノ−２−フェニルインドール（ＤＡＰＩ）；５’５’’−ジブロモピロガロール−スルホナフタレイン（ブロモピロガロールレッド）；７−ジエチルアミノ−３−（４’−イソチオシアナトフェニル）−４−メチルクマリン；ジエチレントリアミンペンタアセテート；４，４’−ジイソチオシアナトジヒドロ−スチルベン−２，２’ジスルホン酸；４，４’−ジイソチオシアナトスチルベン−２，２’−ジスルホン酸；５−［ジメチルアミノ］−ナフタレン−１−スルホニルクロリド（ＤＮＳ、ダンシルクロリド）；４−ジメチルアミノフェニルアゾフェニル−４’−イソチオシアネート（ＤＡＢＩＴＣ）；エオシンおよび誘導体（例えば、エオシンおよびエオシンイソチオシアネート）；エリトロシンおよび誘導体（例えば、エリトロシンＢおよびエリトロシンイソチオシアネート）；エチジウム；フルオレセインおよび誘導体（例えば、５−カルボキシフルオレセイン（ＦＡＭ）、５−（４，６−ジクロロトリアジン−２−イル）アミノフルオレセイン（ＤＴＡＦ）、２’，７’−ジメトキシ−４’５’−ジクロロ−６−カルボキシフルオレセイン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、Ｘ−ローダミン−５−（および−６）−イソチオシアネート（ＱＦＩＴＣまたはＸＲＩＴＣ）およびフルオレサミン）；２−［２−［３−［［１，３−ジヒドロ−１，１−ジメチル−３−（３−スルホプロピル）−２Ｈ−ベンズ［ｅ］インドール−２−イリデン］エチリデン］−２−［４−（エトキシカルボニル）−１−ピペラジニル］−１−シクロペンテン−１−イル］エテニル］−１，１−ジメチル−３−（３−スルホルプロピル）−１Ｈ−ベンズ［ｅ］インドリウムヒドロキシド、内塩、ｎ，ｎ−ジエチルエタンアミン（１：１）による化合物（ＩＲ１４４）；５−クロロ−２−［２−［３−［（５−クロロ−３−エチル−２（３Ｈ）−ベンゾチアゾール−イリデン）エチリデン］−２−（ジフェニルアミノ）−１−シクロペンテン−１−イル］エテニル］−３−エチルベンゾチアゾリウム過塩素酸塩（ＩＲ１４０）；マラカイトグリーンイソチオシアネート；４−メチルウンベリフェロンオルトクレゾールフタレイン；ニトロチロシン；パラローザニリン；フェノールレッド；Ｂ−フィコエリトリン；ｏ−フタルジアルデヒド；ピレンおよび誘導体（例えば、ピレン、酪酸ピレンおよびスクシンイミジル１−ピレン）；酪酸量子ドット；リアクティブレッド４（ＣＩＢＡＣＲＯＮ（商標）ブリリアントレッド３Ｂ−Ａ）；ローダミンおよび誘導体（例えば、６−カルボキシ−Ｘ−ローダミン（ＲＯＸ）、６−カルボキシローダミン（Ｒ６Ｇ）、リサミンローダミンＢ塩化スルホニルローダルニン（rhodarnine）（Ｒｈｏｄ）、ローダミンＢ、ローダミン１２３、ローダミンＸイソチオシアネート、スルホローダミンＢ、スルホローダミン１０１、スルホローダミン１０１の塩化スルホニル誘導体（テキサスレッド）、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’テトラメチル−６−カルボキシローダミン（ＴＡＭＲＡ）テトラメチルローダミンおよびテトラメチルローダミンイソチオシアネート（ＴＲＩＴＣ））；リボフラビン；ロゾール酸；テルビウムキレート誘導体；シアニン−３（Ｃｙ３）；シアニン−５（Ｃｙ５）；シアニン−５．５（Ｃｙ５．５）、シアニン−７（Ｃｙ７）；ＩＲＤ７００；ＩＲＤ８００；Ａｌｅｘａ６４７；Ｌａ  Ｊｏｌｔａ  Ｂｌｕｅ；フタロシアニン；およびナフタロシアニンが含まれる。
【０５６４】
一部の実施形態では、検出可能な薬剤は、活性化の後に検出可能になる検出可能でない前駆体であってよい（例えば、蛍光発生テトラジン−蛍光体構築物（例えば、テトラジン−ＢＯＤＩＰＹ  ＦＬ、テトラジン−オレゴングリーン４８８またはテトラジン−ＢＯＤＩＰＹ  ＴＭＲ−Ｘ）、または酵素活性化可能な蛍光発生剤（例えば、ＰＲＯＳＥＮＳＥ（登録商標）（ＶｉｓＥｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ）））。酵素標識組成物を使用することができるｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイには、限定されずに、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、免疫沈降アッセイ、免疫蛍光法、酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）およびウェスタンブロット分析が含まれる。
組合せ
【０５６５】
一部の実施形態では、本発明の化合物および／または組成物は、１つまたは複数の他の治療、予防、診断または画像化の薬剤と組み合わせて使用することができる。「と組み合わせて」は、薬剤を同時に投与しなければならない、および／または送達のために一緒に製剤化しなければならないことを意味するものでないが、これらの送達方法は本開示の範囲内である。本発明の化合物および／または組成物は、１つまたは複数の他の所望の治療または医療処置と同時に、その前または後に投与することができる。一般に、各薬剤は、その薬剤のために決定された用量でおよび／または時間スケジュールで投与される。一部の実施形態では、本開示は、医薬、予防、診断または画像化の組成物の、それらの生物学的利用能を改善する、それらの代謝を低減および／もしくは改変する、それらの排出を抑制する、ならびに／または体内でのそれらの分布を改変することができる薬剤と組み合わせた送達を包含する。
【０５６６】
一部の場合には、本発明の化合物および／または組成物は、当技術分野で公知である１つまたは複数の治療剤と組み合わせることができる。そのような薬剤には、ＢＹＭ３３８（Ｎｏｖａｒｔｉｓ、Ｂａｓｅｌ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を含めることができ、ここで、投与は、Efficacy  and  Safety  of  Bimagrumab/BYM338  at  52  Weeks  on  Physical  Function,  Muscle  Strength,  Mobility  in  sIBM  Patientsという表題の臨床治験番号ＮＣＴ０１９２５２０９（ＲＥＳＩＬＩＥＮＴ）に開示される方法のいずれかを含むことができる。本発明の化合物および／または組成物と組み合わせて使用することができる他の薬剤には、その各々の内容は参照により本明細書に完全に組み込まれる、米国特許出願公開第２０１３／０１２２００７号、米国特許第８，４１５，４５９号または国際公開番号ＷＯ２０１１／１５１４３２に開示されるもののいずれも含まれ得る。
投薬および剤形
【０５６７】
本開示は、薬物送達科学における可能な進歩を考慮した任意の適当な経路による、治療、医薬、診断または画像化のいずれかのための本発明の化合物および／または組成物の送達を包含する。送達は裸であっても、または製剤化されてもよい。
裸の送達
【０５６８】
本発明の化合物および／または組成物は、裸の形態で細胞、組織、臓器および／または生物体に送達することができる。本明細書において、用語「裸の」は、トランスフェクションまたは透過性を促進する薬剤または改変なしに送達される化合物および／または組成物を指す。裸の化合物および／または組成物は、当技術分野で公知であり本明細書に記載されている投与経路を使用して、細胞、組織、臓器および／または生物体に送達することができる。一部の実施形態では、裸の送達は、食塩水またはＰＢＳなどの単純な緩衝液での製剤を含むことができる。
製剤化送達
【０５６９】
一部の実施形態では、本発明の化合物および／または組成物は、本明細書に記載されている方法を使用して製剤化することができる。製剤は、改変されてもよいおよび／または未改変であってもよい化合物および／または組成物を含むことができる。製剤は、限定することなく、細胞貫通剤、薬学的に許容される担体、送達剤、生物崩壊性もしくは生体適合性のポリマー、溶媒および／または持続的放出送達デポー剤をさらに含むことができる。本発明の製剤は、当技術分野で公知であり本明細書に記載されている投与経路を使用して細胞に送達することができる。
【０５７０】
組成物は、直接的な浸漬もしくは濡らすこと、カテーテルによる方法、ゲル、散剤、軟膏、クリーム、ゲル、ローションおよび／またはドロップ剤による方法、組成物をコーティングもしくは含浸させたファブリックもしくは生分解性材料などの基質を使用する方法を限定することなく含む、当技術分野のいくつかの方法のいずれかによる、臓器または組織への直接送達のために製剤化することもできる。
投薬
【０５７１】
本発明は、それを必要とする対象に１つまたは複数の化合物および／または組成物を投与することを含む方法を提供する。本発明の化合物および／または組成物またはその予防的組成物は、疾患、障害および／または状態の予防、処置、診断または画像化に有効な任意の量および任意の投与経路を使用して対象に投与することができる。必要とされる正確な量は、種、年齢および／または一般的な対象状態、疾患の重症度、特定の組成物、投与様式、活性の様式などによって、対象によって異なる。本発明による組成物は、投与の容易さおよび投薬量の均一性のために投薬単位剤形で一般的に製剤化される。しかし、本発明の組成物の全日使用量は、主治医によって健全な医学判断の範囲内で決定されると理解されるであろう。任意の特定の患者のための具体的な治療的に有効な、予防的に有効な、または適当な画像化用量レベルは、処置される障害および障害の重症度；用いられる具体的な化合物の活性；用いられる具体的な組成物；患者の年齢、体重、一般健康状態、性別および食事；用いられる具体的な化合物の投与の時間、投与経路および排泄速度；処置の持続時間；用いられる具体的な化合物と組み合わせてまたは同時に使用される薬物；ならびに医学分野で周知の類似の因子を含む様々な因子に依存する。
【０５７２】
ある特定の実施形態では、本発明による組成物は、所望の治療、診断、予防または画像化の効果を得るために、１日につき対象の体重の、約０．０００１ｍｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇから約５０ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇから約４０ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇから約３０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇから約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇから約１０ｍｇ／ｋｇ、または約１ｍｇ／ｋｇから約２５ｍｇ／ｋｇを１日に１回または複数回送達するのに十分な投薬量レベルで投与することができる。所望の投薬量は、１日につき３回、１日につき２回、１日に１回、１日おき、３日ごと、毎週、２週ごと、３週ごとまたは４週ごとに送達することができる。ある特定の実施形態では、所望の投薬量は、複数回の投与（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４回またはそれよりも多い投与）を使用して送達することができる。
【０５７３】
本発明により、本発明の化合物および／または組成物は、分割用量レジメンで投与することができる。本明細書において、「分割用量」は、単一の単位用量または全日用量の２つまたはそれよりも多い用量、例えば、単一の単位用量の２回またはそれよりも多い投与への分割である。本明細書において、「単一の単位用量」は、１用量で／１回で／単一経路／単一の接触点、すなわち単一の投与事象で投与される任意の治療薬の用量である。本明細書において、「全日用量」は、２４時間内に与えられるまたは処方される量である。一部の実施形態では、本発明の化合物および／または組成物は、単一の単位用量として投与することができる。一部の実施形態では、本発明の化合物および／または組成物は、分割用量で対象に投与することができる。一部の実施形態では、本発明の化合物および／または組成物は、緩衝液だけで、または本明細書に記載されている製剤で製剤化することができる。本明細書に記載されている医薬組成物は、局所、鼻腔内、気管内または注射用（例えば、静脈内、眼内、硝子体内、筋肉内、心臓内、腹腔内、皮下）などの、本明細書に記載されている剤形に製剤化することができる。医薬用薬剤の製剤化および／または製造における一般考慮事項は、例えば、Remington:  The  Science  and  Practice  of  Pharmacy第２１版、Lippincott  Williams  &  Wilkins、２００５年（参照により本明細書に組み込まれる）に見出すことができる。
コーティングまたはシェル
【０５７４】
錠剤、糖衣剤、カプセル剤、丸剤および顆粒剤の固体剤形は、腸溶コーティングおよび医薬製剤技術分野で周知の他のコーティングなどのコーティングおよびシェルで調製することができる。それらは乳白剤を任意選択で含むことができ、それらが有効成分（複数可）を、任意選択で遅延型の様式で腸管のある特定の部分だけに、またはそこに優先的に放出する組成物のものであってよい。使用することができる包埋組成物の例には、ポリマー物質およびワックスが含まれる。類似のタイプの固体組成物は、ラクトースおよび／またはミルク糖のような賦形剤ならびに高分子量ポリエチレングリコールなどを使用したソフトおよびハードに充填したゼラチンカプセルで、充填剤として用いることができる。
アッセイ
【０５７５】
一部の実施形態では、本明細書に開示される組換えタンパク質（キメラタンパク質を限定することなく含む）および／またはそのようなタンパク質に対する抗体は、本明細書に記載されているアッセイを使用して開発することができる。一部の実施形態では、本明細書に開示される組換えタンパク質（キメラタンパク質を限定することなく含む）および／またはそのようなタンパク質に対する抗体は、本発明の他の組換えタンパク質および／または抗体を開発するためのアッセイで使用することができる。
結合アッセイ
【０５７６】
一部の実施形態では、本発明は、結合アッセイを提供する。本明細書において、用語「結合アッセイ」は、２つまたはそれよりも多い因子が関連する能力を調査するために使用されるアッセイを指す。そのようなアッセイは、所望の抗体に結合する所望の抗原の能力を調査することができ、次に、結合を検出する１つまたは複数の検出方法を使用することができる。本発明の結合アッセイには、限定されずに、表面プラズモン共鳴をベースとしたアッセイ、ＥＬＩＳＡおよび蛍光フローサイトメトリーをベースとしたアッセイが含まれ得る。本発明の結合アッセイは、任意のＴＧＦ−βファミリーメンバータンパク質、任意のキメラタンパク質、任意の補因子およびその任意のモジュール、組合せまたは断片を限定することなく含む、本明細書に記載されている１つまたは複数の組換えタンパク質の使用を含むことができる。
細胞に基づくアッセイ
【０５７７】
一部の実施形態では、本発明は、細胞に基づくアッセイを提供する。本明細書において、用語「細胞に基づくアッセイ」は、生きている細胞または細胞培養の使用を含む少なくとも１つの態様を含むアッセイを指す。一部の実施形態では、これらは、本明細書において「増殖因子放出アッセイ」と呼ぶＧＰＣからの増殖因子放出のモジュレーションを調査するのに有益である可能性がある。一部の実施形態では、細胞に基づくアッセイは、本明細書において「増殖因子活性アッセイ」と呼ぶ増殖因子活性のモジュレーションを調査するのに有益である可能性がある。本発明の細胞に基づくアッセイは、発現細胞および／または応答性細胞を含むことができる。本明細書で言及される発現細胞は、特定のアッセイで分析される１つまたは複数の因子を発現する細胞である。そのような発現は天然であってよいか、または外来遺伝子のトランスフェクションおよび／もしくは形質導入の結果であってもよい。一部の実施形態では、発現細胞による１つまたは複数の因子の発現は、１つまたは複数の外因性因子の付加によって強化または抑制することができる。一部の実施形態では、発現細胞は、細胞株（例えば、ＨＥＫ２９３細胞、ＨｅｐＧ２細胞、ＣＨＯ細胞、ＴＭＬＣ細胞、２９３Ｔ／１７細胞、Ｈｓ６８細胞、ＣＣＤ１１１２ｓｋ細胞、ＨＦＦ−１細胞、ケロイド線維芽細胞またはＳｗ−４８０細胞）を含むことができる。一部の実施形態では、発現細胞を含む細胞株は、本発明の１つまたは複数の組換えタンパク質を発現することができる（例えば、天然に、および／またはトランスフェクション、安定したトランスフェクションおよび／もしくは形質導入を通して）。
【０５７８】
一部の実施形態では、増殖因子の放出／活性アッセイは、ＧＰＣを発現する発現細胞を含むことができる。そのような実施形態では、そのようなＧＰＣからの増殖因子放出に及ぼすそれらの影響を判定するために、さらなる因子を発現細胞で同時発現させることおよび／またはそれと組み合わせることができる。一部の実施形態では、インテグリン（αｖβ６インテグリン、αｖβ８インテグリンおよび／またはα９β１インテグリンを限定することなく含む）が同時発現され、および／またはさもなければＧＰＣ発現発現細胞に導入される。一部の実施形態では、そのようなさらなるインテグリン発現は、増殖因子放出を促進することができる。一部の実施形態では、細胞外タンパク質（例えば、フィブリリンおよび／またはＧＡＳＰ）および／またはそのバリアントが同時発現され、および／またはさもなければ発現細胞に導入される。
【０５７９】
一部の実施形態では、特定のアッセイの焦点によって、発現細胞で１つまたは複数の遺伝子をノックアウト、ノックダウンおよび／またはさもなければモジュレートすることができる。一部の実施形態では、１つまたは複数の遺伝子産物を、ＲＮＡおよび／またはタンパク質レベルでモジュレートすることができる。一部の実施形態では、発現細胞へのｓｉＲＮＡ分子の導入を通して、遺伝子産物を低減することができる。一部の実施形態では、細胞外タンパク質（例えば、フィブリリンおよび／またはＧＡＳＰ）遺伝子からの遺伝子産物を、本発明の発現細胞から低減および／または排除することができる。
【０５８０】
増殖因子の放出／活性アッセイを限定することなく含む本発明の細胞に基づくアッセイは、応答性細胞を含むことができる。本明細書において、用語「応答性細胞」は、アッセイに導入される１つまたは複数の因子への応答を経る細胞を指す。一部の実施形態では、そのような応答は、遺伝子発現の変化を含むことができ、ここで、そのような細胞は、１つまたは複数の導入される因子との接触により１つまたは複数の遺伝子の転写をモジュレートする。一部の実施形態では、応答性細胞は、表現型、行動および／または生存度における変化を経ることができる。
【０５８１】
一部の実施形態では、応答性細胞は、１つまたは複数のリポーター遺伝子を含む。本明細書において、用語「リポーター遺伝子」は、プロモーターおよび１つまたは複数の検出可能な遺伝子産物をコードするタンパク質コード領域を一般的に含む合成遺伝子を指す。リポーター遺伝子は、特定のアッセイによって分析される１つまたは複数の因子に応答してそれらの発現をモジュレートすることができるような方法で一般的に設計される。これは、リポーター遺伝子のプロモーターを操作することによって実行することができる。本明細書において、用語プロモーターは、その遺伝子の転写を開始する遺伝子部分を指す。プロモーターは、所与の遺伝子のアンチセンス鎖の３’末端にヌクレオチドを一般的に含み、遺伝子発現の間に転写されない。遺伝子のタンパク質コード部分の転写を開始するために、プロモーターは１つまたは複数の転写因子ならびにＲＮＡポリメラーゼ酵素との相互作用を通して一般的に機能する。１つまたは複数の転写因子および／またはポリメラーゼ酵素と物理的に相互作用するプロモーターのセグメントは、本明細書において応答エレメントと呼ばれる。一部の実施形態では、リポーター遺伝子は、所与のアッセイで分析される１つまたは複数の因子（増殖因子を限定することなく含む）に応答性であることが公知のプロモーターおよび／または応答エレメントを含むように設計される。応答性細胞遺伝子の発現の変化は、遺伝子発現データを生むための当技術分野で利用可能な任意の方法によって測定することができる。そのような遺伝子発現データは、ルシフェラーゼ活性データ［しばしば相対光単位（ＲＬＵ）で測定される］の形態で得ることができる。
【０５８２】
一部の場合には、応答性細胞は、アッセイに導入される１つまたは複数の因子に応答して、生存度における変化を経る。そのような応答性細胞は、本明細書に記載されている増殖アッセイにおいて使用することができる。応答性細胞生存度における変化は、細胞計数および／または応答性細胞生存度データを与える当業者に公知の他の方法によって検出することができる。
【０５８３】
リポーター遺伝子のタンパク質コード領域は、１つまたは複数の検出可能なタンパク質を一般的にコードする。検出可能なタンパク質は、当技術分野で公知の１つまたは複数の方法を通して検出が可能な、任意のタンパク質を指す。そのような検出方法には、限定されずに、ウェスタンブロッティング、ＥＬＩＳＡ、検出可能なタンパク質の酵素活性（例えば、カタラーゼ活性、β−ガラクトシダーゼ活性および／またはルシフェラーゼ活性）のためのアッセイ、免疫細胞化学的検出、表面プラズモン共鳴検出および／または蛍光性検出可能タンパク質の検出が含まれ得る。リポーター遺伝子をアッセイで使用するとき、検出可能なタンパク質の発現は、リポーター遺伝子に存在するプロモーターを活性化する調査中の因子の能力と相関する。増殖因子の放出／活性アッセイを含む実施形態では、リポーター遺伝子プロモーターは、増殖因子シグナル伝達に一般的に応答する。そのような実施形態では、産生される検出可能なタンパク質のレベルは、増殖因子のシグナル伝達レベルと相関し、所与の増殖因子の放出および／または活性を示す。
【０５８４】
一部の実施形態では、リポーター遺伝子は、ルシフェラーゼ酵素をコードする。ルシフェラーゼ酵素と基質分子の間の化学反応は、発光反応である。そのような発光反応のために、ルシフェラーゼ酵素レベルは、基質分子の添加および放射される光の以降の光検出を通して数量化することができる。一部の実施形態では、本発明のリポーター遺伝子はホタルルシフェラーゼをコードし、その配列はＰｈｏｔｉｎｕｓ  ｐｙｒａｌｉｓからクローニングされた。一部の実施形態では、本発明の応答性細胞は、増殖因子に応答性であるプロモーターとルシフェラーゼを発現するリポーター遺伝子を含む。そのような実施形態では、ルシフェラーゼ活性は増殖因子活性レベルと相関することができ、増殖因子の活性および／またはＧＰＣからの放出の判定を可能にする。
【０５８５】
一部の実施形態では、複製を可能にするため、および／または細胞への導入を促進するために、リポーター遺伝子は細菌性プラスミドに挿入される。一部の実施形態では、そのようなプラスミドは検出可能な遺伝子産物をコードする配列を含むように設計され、目的の１つまたは複数の因子に応答性であろうプロモーター配列を挿入するように操作することができる。これらのプラスミドは、本明細書においてリポータープラスミドと呼ばれる。本発明の一部の実施形態では、目的の１つまたは複数の因子に応答性であろうプロモーターは、リポータープラスミドに対して、そのようなリポータープラスミドの中で機能的リポーター遺伝子を形成するために検出可能な遺伝子産物をコードする配列の上流に挿入することができる。少なくとも１つの機能的リポーター遺伝子を含むリポータープラスミドは、本明細書においてリポーター構築物と呼ばれる。一部の実施形態では、本発明のリポーター構築物は、ｐＧＬ２リポータープラスミド（Ｐｒｏｍｅｇａ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ、ＬＬＣ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）、ｐＧＬ３リポータープラスミド（Ｐｒｏｍｅｇａ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ、ＬＬＣ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）、ｐＧＬ４リポータープラスミド（Ｐｒｏｍｅｇａ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ、ＬＬＣ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）またはそのバリアントを含むことができる。そのようなリポーター構築物は、プロモーターの活性化に応答してホタルルシフェラーゼを発現する。
【０５８６】
一部の実施形態では、リポーター構築物は発現細胞に直接的に導入することができ、または、１つまたは複数の応答性細胞に導入することができる。１つまたは複数のリポーター遺伝子を含む本発明の応答性細胞は、本明細書においてリポーター細胞と呼ばれる。一部の実施形態では、リポーター細胞にリポーター構築物を一時的にトランスフェクトすることができ、または、そのような構築物の安定した発現を含めることができる（例えば、各ラウンドの細胞分裂の間、リポーター構築物はゲノムＤＮＡとともに首尾よく複製される）。リポーター構築物を安定して含む細胞株は、本明細書においてリポーター細胞株と呼ばれる。一部の実施形態では、リポーター細胞は哺乳動物である。一部の実施形態では、リポーター細胞は、マウス細胞、ウサギ細胞、ラット細胞、サル細胞、ハムスター細胞およびヒト細胞を含むことができる。一部の実施形態では、リポーター遺伝子の一過性のおよび／または安定した発現に有益な細胞株には、限定されずに、ＨＥＫ２９３細胞、ＨｅｐＧ２細胞、ＨｅＬａ細胞、Ｓｗ−４８０細胞、ＴＭＬＣ細胞［Abeら（Abe,  M.ら、An  assay  for  transforming  growth  factor-β  using  cells  transfected  with  a  plasminogen  activator  inhibitor-1  promoter-luciferase  construct.  Analytical  Biochemistry.１９９４年、２１６巻：２７６〜８４頁）に開示される］、２９３Ｔ／１７細胞、Ｈｓ６８細胞、ＣＣＤ１１１２ｓｋ細胞、ＨＦＦ−１細胞、ケロイド線維芽細胞、Ａ２０４細胞、Ｌ１７ＲＩＢ細胞［Cashら（Cash,  J.Nら、The  structure  of  myostatin:follistatin  288:  insights  into  receptor  utilization  and  heparin  binding.  The  EMBO  Journal.２００９年、２８巻：２６６２〜７６頁）に開示される］、Ｃ２Ｃ１２細胞、ＨｅｐＧ２細胞およびＥＬ４Ｔリンパ腫細胞が含まれ得る。
【０５８７】
１つまたは複数のリポーター細胞および／またはリポーター細胞株が利用される実施形態では、そのような細胞は、共培養系の一部として発現細胞と培養することができる。一部の実施形態では、リポーター細胞／リポーター細胞株は、発現細胞と別々に培養することができる。そのような実施形態では、発現される因子（増殖因子を限定することなく含む）を調査するために、発現細胞からの溶解物および／または培地を、リポーター細胞／リポーター細胞株の培養物と組み合わせることができる。
【０５８８】
一部の実施形態では、本発明の細胞に基づくアッセイは、発現細胞だけを含み、応答性細胞を含まなくてもよい。そのような実施形態では、ＧＰＣおよび／または増殖因子を非限定的に含む発現されるタンパク質は、細胞ベースでない１つまたは複数の方法によって検出することができる。そのような方法には、限定されずに、ウェスタンブロッティング、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、免疫細胞化学、表面プラズモン共鳴およびタンパク質検出のための当技術分野で公知の他の方法が含まれ得る。一部の実施形態では、発現細胞培養物および／または培養培地におけるＧＤＦ放出は、ＥＬＩＳＡによって検出することができる。一部の実施形態では、ＧＤＦ−８／ミオスタチンｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ  ＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ）を使用することができる。検出のために使用することができる抗ＧＤＦ−８／ミオスタチン抗体の例には、ＡＦ１５３９、ＭＡＢ７８８およびＡＦ７８８（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ）が含まれる。
増殖／分化アッセイ
【０５８９】
一部の実施形態では、本発明の細胞に基づくアッセイは、増殖アッセイを含むことができる。本明細書において、用語「増殖アッセイ」は、細胞増殖に及ぼす１つまたは複数の薬剤の影響を判定するアッセイを指す。
【０５９０】
一部の実施形態では、活性化および／または阻害抗体による増殖因子活性モジュレーションを調査するために、細胞分化アッセイを使用することができる。細胞分化アッセイは、骨格筋分化アッセイを含むことができる。そのようなアッセイは、ＧＤＦ−１１活性化および／または阻害抗体を試験するために使用することができる。一部の場合には、分化段階の間に変化するタンパク質の発現レベルの変化を見ることによって、骨格筋分化アッセイは筋芽細胞分化を調査する。そのようなタンパク質には、限定されずに、ミオゲニン、ミオシン重鎖およびクレアチンキナーゼが含まれ得る。一部の場合には、ＧＤＦ−１１阻害抗体は、筋芽細胞分化に及ぼすそれらの影響を調べることによって試験することができる。
動物モデル
【０５９１】
一部の実施形態では、本発明の化合物および／または組成物は、筋肉の成長および発達の哺乳動物モデルを含む動物モデルで試験することができる。これらのモデルには、限定されずに、握力のマウスモデルが含まれ得る。そのようなモデルは、マウスを力測定レバーから引っ張ったときに生成される力（グラム）を判定することによって試験することを含むことができる。さらなるモデルには、限定されずに、他の筋力および持久力試験、例えば持久力のためのモーリス水迷路試験および運動障害のためのワイヤハング試験が含まれ得る。他のマウスモデルには、限定されずに、全筋肉の重量およびサイズにおける変化を判定するアッセイが含まれ得る。
【０５９２】
別の実施形態では、本発明の化合物および／または組成物は、筋肉の変化を観察する、筋肉の成長および発達のモデルを含むマウス以外の動物モデルで試験することができる。そのような変化には、限定されずに、筋肉の重量およびサイズ、筋線維の長さおよび直径、筋束あたりの線維数、筋線維あたりのシナプス接点数および線維強度における変化が含まれ得る。
【０５９３】
一部の実施形態では、本発明の化合物および／または組成物で処置された動物からの組織は、免疫組織化学的分析によって分析することができる。そのような分析には、処置に応答した変化を示すための、筋肉、筋線維および筋肉接合部の免疫染色が含まれ得る。本発明の化合物および／または組成物のモニタリングを可能にするために、完全血球算定を研究の前後に実行することができる。
キットおよびデバイス
【０５９４】
本発明の化合物および／または組成物のいずれも、キットに含まれ得る。非限定例では、抗原分子を含む化合物および／または組成物を生成するための試薬が、１つまたは複数のキットに含まれる。一部の実施形態では、キットは、本発明の化合物および組成物を作製および／または合成するための試薬および／または説明書をさらに含むことができる。一部の実施形態では、キットは、１つまたは複数の緩衝剤を含むこともできる。一部の実施形態では、本発明のキットは、タンパク質または核酸のアレイまたはライブラリーを作製するための構成成分を含むことができ、したがって、例えば固体支持体を含むことができる。
【０５９５】
一部の実施形態では、キット構成成分は、水性媒体に、または凍結乾燥形態でパッケージすることができる。キットの容器手段は、少なくとも１つのバイアル、試験管、フラスコ、ボトル、シリンジまたは他の容器手段を一般的に含み、その中に構成成分を置くこと、好ましくは好適に小分けすることができる。１つを超えるキット構成成分がある場合（標識試薬およびラベルを一緒にパッケージすることができる）、キットは、さらなる構成成分を別々に置くことができる第２、第３または他のさらなる容器を一般的に含有することもできる。一部の実施形態では、キットは、無菌の薬学的に許容される緩衝液および／または他の希釈剤を含有するための第２の容器手段を含むこともできる。一部の実施形態では、構成成分の様々な組合せが１つまたは複数のバイアルに含まれ得る。本発明のキットは、本発明の化合物および／または組成物を含有するための手段、例えば、市販のために密封されたタンパク質、核酸および任意の他の試薬容器を一般的に含むこともできる。そのような容器は、所望のバイアルを保持する注入またはブロー成形プラスチック容器を含むことができる。
【０５９６】
一部の実施形態では、キット構成成分は、１つおよび／または複数の液体溶液で提供される。一部の実施形態では、液体溶液は水溶液であり、無菌の水溶液が特に好ましい。一部の実施形態では、キット構成成分は、乾燥粉末（複数可）として提供することができる。試薬および／または構成成分が乾燥粉末として提供されるとき、そのような粉末は適量の溶媒の添加によって復元することができる。一部の実施形態では、溶媒を別の容器手段で提供することもできることが想定される。一部の実施形態では、標識色素は、乾燥粉末として提供される。一部の実施形態では、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１２０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００マイクログラム、または少なくとももしくは多くてもそれらの量の乾燥色素が本発明のキットで提供されることが企図される。そのような実施形態では、色素はＤＭＳＯなどの任意の適する溶媒に次に再懸濁させることができる。
【０５９７】
一部の実施形態では、キットは、キット構成成分を用いるための説明書、ならびにキットに含まれない任意の他の試薬の使用を含むことができる。説明書は、実装することができる変異形を含むことができる。
【０５９８】
一部の実施形態では、本発明の化合物および／または組成物は、デバイスと組み合わせること、それにコーティングすることまたはその中に包埋することができる。デバイスには、限定されずに、歯科用インプラント、ステント、骨の代用物、人工関節、弁、ペースメーカーおよび／または他の移植可能な治療デバイスが含まれ得る。
【０５９９】
本明細書に記載されている開示の方法の他の適する修正および調節が明らかであり、それらは、本開示または本明細書に開示される実施形態の範囲を逸脱せずに適する同等物を使用してなされてもよいことは、当業者にとって容易に明らかになる。これで本開示を詳細に記載したが、例示のためにだけ含まれ、本開示を限定するものではない以下の実施例への参照によって、本開示はより明確に理解されるであろう。
【実施例】
【０６００】
（実施例１）
プロＧＤＦ−１１の切断依存性活性化
組換えプロＧＤＦ１１の精製
ＧＤＦ１１の前駆体形態を産生するために、プロＧＤＦ１１およびＰＣＳＫ５を過剰発現する安定細胞株を確立した。タンパク質構築物をＦＬＰ−ＩＮ（商標）Ｔ−ＲＥＸ（商標）２９３細胞（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）に安定に組み込み、タンパク質を製造業者の説明書に従って発現させた。濾過した上清を回収し、目的のタンパク質をＮｉ−ＮＴＡクロマトグラフィー（Ｑｉａｇｅｎ）によって精製した。タンパク質をサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によってさらに精製した。
【０６０１】
プロＧＤＦ１１を細胞培養上清から直接精製した。潜在型ＧＤＦ１１を、ＰＣＳＫ５（プロタンパク質変換酵素）を過剰発現する安定細胞をＧＤＦ１１発現安定細胞に加え、細胞上清から潜在型ＧＤＦ１１を精製することによって産生した（上記を参照されたい）。切断された物質は、使用した条件下でタンパク質分解反応がほとんど完了するまで進行し、９５％超が潜在型であった。
【０６０２】
部分的にプロ変換酵素切断プロＧＤＦ−１１を非還元および還元条件下でＳＤＳ  ＰＡＧＥゲルにかけた（図１を参照されたい）。非還元条件下でタンパク質バンドは、プロＧＤＦ−１１二量体（約１００ｋＤ）、プロＧＤＦ−１１単量体（約６０ｋＤ）、ＧＤＦ−１１プロドメイン（約３８ｋＤ）およびＧＤＦ−１１増殖因子二量体（約２０ｋＤ）からなった。還元条件下では増殖因子二量体は単量体（約１２ｋＤ）に還元された。
【０６０３】
プロＧＤＦ−１１の試料をプロタンパク質変換酵素（フューリン／ＰＡＣＥ３またはＰＣＳＫ５のいずれか）、トロイドプロテイナーゼ（ＢＭＰ−１またはｍＴＬＬ２のいずれか）、両方のプロテアーゼの組合せと共にまたはプロテアーゼを含まずにインキュベートした。試料は３７℃で、１６時間インキュベートした。処置した試料を、ＣＡＧＡルシフェラーゼ応答プラスミドを保有している２９３ＴまたはＨｅｐＧ２細胞にそれらを加え、６時間インキュベートすることによって分析した。増殖因子活性を細胞可溶化物中のＣＡＧＡ依存性ルシフェラーゼ活性を測定することによって評価した。図２に示すとおり、組み合わせたプロテアーゼ可溶化物（トロイドプロテイナーゼおよびプロタンパク質変換酵素）での処置から生じたＧＤＦ−１１活性は、組換えＧＤＦ−１１（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ）での処置とほとんど同程度であった。さらなるアッセイの結果は、両細胞株における種々のプロテアーゼでの処置後のプロＧＤＦ−１１からの増殖因子放出を実証している図３に示す。驚くべきことにｍＴＬＬ−２およびＰＣＳＫ５での処置は、他のプロテアーゼ処置条件と比較して最も高いレベルの活性を生じた。
（実施例２）
抗ヒトＧＤＦ１１プロドメイン複合体モノクローナル抗体の生成
【０６０４】
プロＧＤＦ１１（配列番号８２）を選択のための一次抗原として使用するナイーブファージディスプレイライブラリーの選択を介してモノクローナル抗体を同定した。
【０６０５】
ファージ選択および初回スクリーニングをＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら（McCaffertyら、１９９０年）によって記載されたものと同様のフォーマットで従来のｓｃＦｖを提示しているライブラリーを使用して実施した。選択の各ラウンドは、プレクリアリング（非特異的ファージ抗体の除去のため）、抗原とのインキュベーション、洗浄、溶出および増幅からなった。選択は、固相（イムノチューブ上にコートしたビオチン化抗原）および溶液相（ビオチン化抗原、ストレプトアビジンコートビーズを使用する捕捉）の両方のパニング戦略を使用し、複数ラウンドによって実施した。抗原は、製造業者の指示書に従って２１３２９  ＥＺ−Ｌｉｎｋ  ＮＨＳ−ＰＥＧ４−Ｂｉｏｔｉｎ（Ｐｉｅｒｃｅ）でビオチン化した。加えたビオチンの量は、製造業者の指示書に従ってＰｉｅｒｃｅ（商標）Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  Ｂｉｏｔｉｎ  Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ  Ｋｉｔによって評価して二量体化抗原複合体１個あたりビオチン分子１個に達するように決定した。
【０６０６】
合計２，３０４個体のｓｃＦｖクローンをプロＧＤＦ１１への結合についてスクリーニングした。目的のｓｃＦｖクローンについてのＤＮＡを配列決定し、８２個の特有のクローンを同定した。陽性結合ｓｃＦｖクローンを、プロ／潜在型ＧＤＦ１１への特異性を確認するためにプロミオスタチン（配列番号８３）および無関係なタンパク質のパネル（例えばＨｉｓ−ＰｒｏＴＧＦβおよびＨｉｓ−ＩＣＡＭ１）への結合についてカウンタースクリーニングした。５０個の特有のｓｃＦｖクローンのパネルから３１個を追加的特徴付けのために全長ＩｇＧ（ＩｇＧ１アイソタイプ）に変換した。
【０６０７】
候補クローンをヒトＩｇＧ１フォーマットに変換した。全長ＩｇＧ抗体をミオスタチンおよびＧＤＦ１１のヒトおよびマウスのプロおよび潜在型形態への結合についてＥＬＩＳＡによって、さらに特徴付けた。抗体をミオスタチンプロドメイン（配列番号８５）、プロＴＧＦβ１（ヒトおよびマウス）、ミオスタチンの成熟増殖因子（配列番号８９）、ＧＤＦ１１成熟増殖因子（配列番号９０）ならびにプロアクチビンＡ（配列番号８４）への結合についてもスクリーニングした。ミオスタチンおよびＧＤＦ１１のプロドメインの部分をスワッピングしたキメラ構築物を設計し、産生した。例えばプロＧＤＦ１１  ａｒｍ８（配列番号１１２）はＧＤＦ８  ａｒｍドメインを有するＧＤＦ１１を指し、プロドメインＧＤＦ１１  ａｒｍ８（配列番号１１４）はＧＤＦ８  ａｒｍドメインを有するＧＤＦ１１プロドメインを指す。これらのキメラタンパク質をスクリーニング抗体との相互作用についてＥＬＩＳＡによってアッセイし、ＧＤＦ１１プロドメイン複合体のＡＲＭまたはストレートジャケット部分への抗体の結合の評価を可能にした。表２２を参照されたい。抗体は、ＧＤＦ８、アクチビンまたはＴＧＦβタンパク質との相互作用を伴わない、プロおよび潜在型ヒトおよびマウスＧＤＦ１１とのそれらの交差反応性に基づいて選択した。アクチビンＡは、インヒビンベータＡサブユニットのホモ二量体である。例えばインヒビンベータＡは、様々なアクチビンタンパク質を産生するように他のタンパク質とヘテロ二量体化することができる。
【表２２】
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【０６０８】
ＥＬＩＳＡスクリーニングに加えて全長ＩｇＧ１クローンをｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＣＡＧＡルシフェラーゼレポーターアッセイを使用することによってスクリーニングした。ＧＤＦ１１活性化アッセイの工程は次のとおりである：５０ｎＭプロＧＤＦ１１を検査する抗体とプレインキュベートした。ＰＣＳＫ５を過剰発現する細胞由来の馴化培地および組換えＢＭＰ１（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ）を混合物に加え、プロＧＤＦ１１の切断および活性ＧＤＦ１１の放出を生じるように終夜、３０Ｃでインキュベートした。ＧＤＦ１１の活性化は、ＳＭＡＤ応答性ＣＡＧＡ配列を含むプロモーターを有する安定に組み込まれたｐＧＬ４プラスミド（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）を含有する２９３Ｔ細胞とタンパク質分解反応由来の物質とをインキュベートするＣＡＧＡルシフェラーゼレポーターアッセイ系で測定した。細胞を３７°で、６時間インキュベートした後、ＢＲＩＧＨＴ−ＧＬＯ（商標）試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）を製造業者の説明書に従って使用しルシフェラーゼ発現を検出した。結果をＧＤＦ１１活性化の阻害パーセントを算出するために、放出された成熟ＧＤＦ１１増殖因子の割合を算出するために対照反応と比較した。
ＥＬＩＳＡ分析
【０６０９】
酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）分析を、抗体結合を評価するために実行する。９６ウエルＥＬＩＳＡアッセイプレートをニュートラアビジン、より中性のｐＨを有するストレプトアビジンの脱グリコシル化バージョンでコートする。標的タンパク質をヒスチジン（Ｈｉｓ）タグあり、またはなしで発現させ、ビオチン化に供する。ビオチン化標的タンパク質をニュートラアビジンコートＥＬＩＳＡアッセイプレートで２時間、室温でインキュベートし、未結合タンパク質を洗浄緩衝液（２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、０．０５％ＴＷＥＥＮ（登録商標）−２０または２０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ  ｐＨ７．５、５００ｍＭ  ＮａＣｌ、０．０５％ＴＷＥＥＮ（登録商標）−２０のいずれか）での３回洗浄によって除去する。検査する一次抗体を各ウエルに加え、室温で、１時間またはそれより長くインキュベートする。次いで未結合抗体を洗浄緩衝液で３回洗浄することによって除去する。検査する一次抗体に結合でき、検出可能な標識とコンジュゲートされた二次抗体を次いで各ウエル中、３０分間、室温でインキュベートする。未結合二次抗体を洗浄緩衝液で３回洗浄することによって除去する。最後に結合二次抗体を検出される二次抗体上に存在する検出可能な標識に応じて、酵素反応、蛍光検出および／またはルミネセンス検出によって検出する。
２９３Ｔ  ＣＡＧＡルシフェラーゼアッセイを使用するＣＡＧＡ分析
【０６１０】
ＣＡＧＡルシフェラーゼアッセイをＧＤＦ−１１活性のモジュレーションについて抗体を検査するために実行する。１００μｌの０．０１％ポリ−Ｌ−リシン溶液を９６ウエルプレートの各ウエルに加える。プレートを１０分間、室温でインキュベートした後、水で洗浄する。対照プロモーターまたはＳＭＡＤ１／２応答性ＣＡＧＡ配列を含むプロモーターの制御下にｐＧＬ４（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）の一過的または安定発現を含む２９３Ｔ細胞を、次いでポリ−Ｌ−リシンコートウエルに播種するために使用する（完全増殖培地中、細胞４ｘ１０４個／ウエル）。翌日、細胞を、０．１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含む細胞培養培地１５０μｌ／ウエルで洗浄した後、検査抗体あり、またはなしでプロＧＤＦ−１１複合体で処置する。細胞を、３７°で、６時間インキュベートした後、ＢＲＩＧＨＴ−ＧＬＯ（商標）試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）を製造業者の説明書に従って使用しルシフェラーゼ発現を検出する。
（実施例３）
抗ヒトＧＤＦ１１プロドメイン複合体モノクローナル抗体の特徴付け
【０６１１】
７個の結合タンパク質は、活性アッセイにおいてヒトおよびマウスの両方のプロＧＤＦ１１に対して５０％超の阻害を達成し、エピトープ多様性および用量応答活性アッセイ実験におけるＥＣ５０についてさらに特徴付けた（表２３および図４）。表２３にヒトおよびマウスの両方のＧＤＦ１１についてのプロＧＤＦ１１活性化の最大阻害パーセントを報告する。ヒトおよびマウスの潜在型／プロＧＤＦ１１に対する結合親和性も表面バイオレイヤー干渉法を利用して選択されたクローンについて測定し、親和性をｐＭで報告した。
【表２３】
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【０６１２】
エピトープマッピングを抗ＧＤＦ１１プロドメイン複合体結合タンパク質の結合部位を決定するために実施した。これらの結合タンパク質の結合エピトープを図３および表２２に示す。エピトープビニングを、ビオチン化プロＧＤＦ１１がストレプトアビジンコートバイオセンサーチップに固定されたＦｏｒｔｅＢｉｏ  ＢＬＩ装置を使用する表面バイオレイヤー干渉法によって実行し、抗体の交差遮断をセンサー応答によって評価し、その結果を図３に示す。交差遮断実験では抗体結合を２個の別々の抗体を利用するペアワイズ様式で評価する。最初に、飽和結合をプロＧＤＦ１１複合体上のすべてのエピトープが第１の抗体によって占められるように第１の抗体について達成した。次いで第２のステップで第２の抗体を、飽和プロＧＤＦ１１−抗体１複合体に結合させる。第２の抗体が結合事象を示すセンサー応答を示す場合、２個の抗体は異なるエピトープを認識している。結合事象が観察されない場合、第１の抗体の存在がプロＧＤＦ１１に結合する第２の抗体の能力を遮断していることが推測され、２個の抗体は同じエピトープを認識している。次いで、抗体の添加順が相対的親和性および／または立体的干渉の可能性についての情報を提供できることから、２個の抗体の添加の順を交代して同じ対で実験を反復する。これらのエピトープビニング実験は、ＥＬＩＳＡ結合実験のデータ（上記実施例２を参照されたい）と共に、本発明者らの機能的に活性なリード抗体の３個の異なるエピトープ群または「Ｂｉｎ」への分別およびＧＤＦ１１プロドメイン複合体上のそれらの結合部位のマッピングを可能にする。
【０６１３】
抗体候補の結合親和性をＦｏｒｔｅＢｉｏ  Ｏｃｔｅｔ  ＱＫｅ  ｄｉｐおよび、バイオレイヤー干渉法を利用するリードラベルフリーアッセイ系を使用して決定した。ヒトプロおよび潜在型ＧＤＦ８ならびにヒトアクチビンＡを各実験のストレプトアビジンコートバイオセンサーに固定し、結合相互作用を測定するために抗体を溶液中に高濃度（５０μｇ／ｍＬ）で加えた。データを表２３に示す。
【０６１４】
図４は、プロＧＤＦ１１活性化アッセイ（上に記載）を利用した一部の開示の抗体によるＧＤＦ１１プロドメイン複合体の用量依存的阻害を示している。５０ｎＭプロＧＤＦ１１の濃度でのクローンＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−５、ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−２、ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−１およびＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−４についてのＥＣ５０は、それぞれ３０．１３ｎＭ、２７．５ｎＭ、８７．１ｎＭおよび２６．７ｎＭである。対照としてＧＤＦ１１阻害抗体ＧＤＦ１１  Ｉｎｈ−５を検査し、ヒトプロＧＤＦ８の活性化を遮断しないことを見出した（図４Ｂ）。このアッセイではヒトプロＧＤＦ８濃度は４００ｎＭであった。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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