(57)【要約】本発明は、改善された安定性または親和性の抗ＨＥＲ２抗体を含む、抗ＨＥＲ２抗体、及びその使用方法を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＨＥＲ２結合ドメインを含む単離された抗ＨＥＲ２抗体であって、前記ＨＥＲ２結合ドメインが、
ｉ．（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、または
ｉｉ．（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、または
ｉｉｉ．（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、または
ｉｖ．（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、または
ｖ．（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、または
ｖｉ．（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、または
ｖｉｉ．（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３。
ｖｉｉｉ．（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、または
ｉｘ．（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＨＥＲ２結合ドメインを含む、前記単離された抗ＨＥＲ２抗体。
【請求項２】
配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、を含む、単離された抗ＨＥＲ２抗体。
【請求項３】
前記配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、配列番号５のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、を含む、単離された抗ＨＥＲ２抗体。
【請求項４】
ｉ．配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）及び配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、または
ｉｉ．配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）及び配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、または
ｉｉｉ．配列番号１０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）及び配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、または
ｉｖ．配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）及び配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、または
ｖ．配列番号１４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）及び配列番号１５のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、または
ｖｉ．配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）及び配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、または
ｖｉｉ．配列番号１８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）及び配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、または
ｖｉｉｉ．配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）及び配列番号２１のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、または
ｉｘ．配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）及び配列番号２３のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む、ＨＥＲ２結合ドメインを含む、先行請求項のいずれか１項に記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【請求項５】
前記抗ＨＥＲ２抗体が、抗ＣＤ３結合ドメインをさらに含む、先行請求項のいずれか１項に記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【請求項６】
前記抗ＣＤ３結合ドメインが、
ｉ．（ａ）配列番号８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、または
ｉｉ．（ａ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、または
ｉｉｉ．配列番号７７のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号７８のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、または
ｉｖ．（ａ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号７５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、または
ｖ．配列番号７９のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号８１のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、請求項５に記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【請求項７】
前記抗ＨＥＲ２抗体が、モノクローナル、ヒト、ヒト化、またはキメラ抗体である、先行請求項のいずれか１項に記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【請求項８】
前記抗ＨＥＲ２抗体がＩｇＧ抗体である、先行請求項のいずれか１項に記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【請求項９】
前記抗ＨＥＲ２抗体が多重特異性抗体である、先行請求項のいずれか１項に記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【請求項１０】
前記抗ＨＥＲ２抗体が完全長抗体である、先行請求項のいずれか１項に記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【請求項１１】
前記抗ＨＥＲ２抗体が、非グリコシル化部位突然変異を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【請求項１２】
前記非グリコシル化部位突然変異が、置換突然変異である、先行請求項のいずれか１項に記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【請求項１３】
前記抗ＨＥＲ２抗体が、低減したエフェクター機能を有する、先行請求項のいずれか１項に記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【請求項１４】
前記抗ＨＥＲ２抗体が、ＥＵ番号付けによるアミノ酸残基Ｎ２９７、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｄ２６５、及び／またはＰ３２９Ｇに置換突然変異を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【請求項１５】
前記置換突然変異が、ＥＵ番号付けによるＮ２９７Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｄ２６５Ａ、及びＰ３２９Ｇからなる群から選択される、請求項１４に記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【請求項１６】
前記抗ＨＥＲ２抗体が、ＥＵ番号付けによるアミノ酸残基２９７にＮ２９７Ｇ置換突然変異を含む、請求項１５に記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【請求項１７】
前記抗ＨＥＲ２抗体が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、及び／または（Ｆａｂ’）２断片などの抗体断片である、請求項１〜９のいずれか１項に記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【請求項１８】
請求項１〜１７のいずれか１項に記載の抗ＨＥＲ２抗体をコードする、核酸。
【請求項１９】
請求項１８に記載の単離された核酸を含む、ベクター。
【請求項２０】
請求項１９に記載のベクターを含む、宿主細胞。
【請求項２１】
請求項１〜１７のいずれか１項に記載の抗ＨＥＲ２抗体の産生方法であって、培養培地中で請求項２０に記載の宿主細胞を培養することを含む、前記方法。
【請求項２２】
請求項１〜１７のいずれか１項に記載の抗ＨＥＲ２抗体を含む、薬学的組成物。
【請求項２３】
薬剤として使用するための請求項１〜１７のいずれか１項に記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【請求項２４】
細胞増殖性障害の治療またはその進行の遅延を必要とする対象において、それに使用するための請求項１〜１７のいずれか１項に記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【請求項２５】
細胞増殖性障害を有する対象において、免疫機能の増強に使用するための請求項５〜１７のいずれか１項に記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【請求項２６】
前記細胞増殖性障害が癌である、請求項２４または２５に記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【請求項２７】
前記癌が、ＨＥＲ２を発現する、請求項２６に記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【請求項２８】
前記癌が、ＨＥＲ２陽性癌である、請求項２６に記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【請求項２９】
前記癌が、乳癌または胃癌である、請求項２６〜２８のいずれか１項に記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【請求項３０】
細胞増殖性障害を治療する、またはその進行を遅延させるための薬剤の製造における、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の抗ＨＥＲ２抗体の使用。
【請求項３１】
前記細胞増殖性障害が癌である、請求項２４または２５に記載の抗ＨＥＲ２抗体の使用。
【請求項３２】
前記癌が、ＨＥＲ２を発現する、請求項３１に記載の使用。
【請求項３３】
前記癌が、ＨＥＲ２陽性癌である、請求項３１に記載の使用。
【請求項３４】
前記癌が、乳癌または胃癌である、請求項３１〜３３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項３５】
細胞増殖性障害の治療またはその進行の遅延を必要とする対象における、治療方法または遅延方法であって、前記対象に請求項１〜１７のいずれか１項に記載の抗ＨＥＲ２抗体を投与することを含む、前記方法。
【請求項３６】
細胞増殖性障害を有する対象における免疫機能の増強方法であって、前記対象に有効量の請求項５〜１７のいずれか１項に記載の抗ＨＥＲ２抗体を投与することを含む、前記方法。
【請求項３７】
前記細胞増殖性障害が癌である、請求項３５または３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記癌が、ＨＥＲ２を発現する、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記癌が、ＨＥＲ２陽性癌である、請求項３７に記載の方法。
【請求項４０】
前記癌が、乳癌または胃癌である、請求項３７〜３９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４１】
前記対象にＰＤ−１軸結合アンタゴニスト（抗ＰＤＬ１抗体等）を投与することをさらに含む、請求項３５〜４０のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１５年６月１７日に出願された米国特許出願第６２／１８１，１０６号の優先権を主張し、その開示は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。２０１６年６月１６日に作成された該ＡＳＣＩＩの複写は、Ｐ３２９１７ＷＯ＿ＰＣＴＳｅｑｕｅｎｃｅＬｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔという名称であり、７１，９４２バイトの大きさである。
【０００３】
本発明は、抗ＨＥＲ２抗体及びそれらを使用する方法に関する。
【背景技術】
【０００４】
受容体チロシンキナーゼのＥｒｂＢファミリーのメンバーは、細胞成長、分化、及び生存の重要な媒介因子である。受容体ファミリーには、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲまたはＥｒｂＢ１）、ＨＥＲ２（ＥｒｂＢ２またはｐ１８５．ｓｕｐ．ｎｅｕ）、ＨＥＲ３（ＥｒｂＢ３）、及びＨＥＲ４（ＥｒｂＢ４またはｔｙｒｏ２）を含む４つの異なるメンバーが含まれる。
【０００５】
ラットｐ１８５ｎｅｕｎｅｕ及びヒトＥｒｂＢ２タンパク質産物に対して指向される抗体が記載されている。例えば、Ｄｒｅｂｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ，４１：６９５−７０６（１９８５）、Ｍｙｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍ．１９８：２７７−２９０（１９９１）、及びＷＯ９４／２２４７８、Ｔａｇｌｉａｂｕｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ４７：９３３−９３７（１９９１）、ＭｃＫｅｎｚｉｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ４：５４３−５４８（１９８９）、Ｍａｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５１：５３６１−５３６９（１９９１）、Ｂａｃｕｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ３：３５０−３６２（１９９０）、Ｓｔａｎｃｏｖｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）８８：８６９１−８６９５（１９９１）、Ｂａｃｕｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ５２：２５８０−２５８９（１９９２）、Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ５３：４０１−４０８（１９９３）、ＷＯ９４／００１３６、Ｋａｓｐｒｚｙｋ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ５２：２７７１−２７７６（１９９２）、Ｈａｎｃｏｃｋ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５１：４５７５−４５８０（１９９１）、Ｓｈａｗｖｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５４：１３６７−１３７３（１９９４）、Ａｒｔｅａｇａ  ｅｔ  ａｌ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．５４：３７５８−３７６５（１９９４）、Ｈａｒｗｅｒｔｈ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７：１５１６０−１５１６７（１９９２）、米国特許第５，７８３，１８６号、及びＫｌａｐｐｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ１４：２０９９−２１０９（１９９７）、Ｌｅｗｉｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ５６：１４５７−１４６５（１９９６）、ならびにＳｃｈａｅｆｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ１５：１３８５−１３９４（１９９７）を参照されたい。
【０００６】
マウスモノクローナル抗ＨＥＲ２抗体４Ｄ５は、ＨＥＲ２を過剰発現する乳癌細胞系の成長を阻害する（Ｌｅｗｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．［１９９３］）。この観察に基づいて、抗体４Ｄ５がヒト化された（Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８９：４２８５−４２８９［１９９２］）。ヒト化（４Ｄ５）モノクローナル抗体（ｈｕ４Ｄ５）は、薬物Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）（トラスツズマブ、ｒｈｕＭＡｂ  ＨＥＲ２、米国特許第５，８２１，３３７号）として商業的に知られており、これは、１９９８後半にＦＤＡの販売承認を得た。しかしながら、ＨＥＲ２標的抗原を発現する癌を標的とする、改善された癌治療薬が依然として必要とされている。
【発明の概要】
【０００７】
本発明は、ヒト化抗ＨＥＲ２抗体ｈｕ４Ｄ５の変異型に関する。いくつかの実施形態では、変異型は、ｈｕ４Ｄ５と比較して、改善された安定性を有する。いくつかの実施形態では、変異型は、ｈｕ４Ｄ５と比較して、Ｈｅｒ２抗原に対して増加した親和性を有する。
【０００８】
本発明の一態様は、配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）とを含む、単離された抗ＨＥＲ２抗体を提供する。本発明の一態様は、配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、配列番号５のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）とを含む、単離された抗ＨＥＲ２抗体を提供する。本発明の一態様は、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含み、配列番号５のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む、単離された抗ＨＥＲ２抗体を提供する。本発明の一態様は、配列番号１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含み、配列番号５のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む、単離された抗ＨＥＲ２抗体を提供する。
【０００９】
本発明の一態様は、（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＨＥＲ２結合ドメインを含む、単離された抗ＨＥＲ２抗体を提供する。本発明の一態様は、ＨＥＲ２結合ドメイン：（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、単離された抗ＨＥＲ２抗体を提供する。本発明の一態様は、（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＨＥＲ２結合ドメインを含む、単離された抗ＨＥＲ２抗体を提供する。
【００１０】
本発明の一態様は、（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＨＥＲ２結合ドメインを含む、単離された抗ＨＥＲ２抗体を提供する。本発明の一態様は、（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＨＥＲ２結合ドメインを含む、単離された抗ＨＥＲ２抗体を提供する。本発明の一態様は、（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＨＥＲ２結合ドメインを含む、単離された抗ＨＥＲ２抗体を提供する。本発明の一態様は、（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＨＥＲ２結合ドメインを含む、単離された抗ＨＥＲ２抗体を提供する。
【００１１】
本発明の一態様は、（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＨＥＲ２結合ドメインを含む、単離された抗ＨＥＲ２抗体を提供する。本発明の一態様は、（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＨＥＲ２結合ドメインを含む、単離された抗ＨＥＲ２抗体を提供する。
【００１２】
本発明の一態様は、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）とを含む、ＨＥＲ２結合ドメインを含む、単離された抗ＨＥＲ２抗体を提供する。本発明の一態様は、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）とを含む、ＨＥＲ２結合ドメインを含む、単離された抗ＨＥＲ２抗体を提供する。本発明の一態様は、配列番号１０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）とを含む、ＨＥＲ２結合ドメインを含む、単離された抗ＨＥＲ２抗体を提供する。本発明の一態様は、配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）とを含む、ＨＥＲ２結合ドメインを含む、単離された抗ＨＥＲ２抗体を提供する。本発明の一態様は、配列番号１４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、配列番号１５のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）とを含む、ＨＥＲ２結合ドメインを含む、単離された抗ＨＥＲ２抗体を提供する。本発明の一態様は、配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）とを含む、ＨＥＲ２結合ドメインを含む、単離された抗ＨＥＲ２抗体を提供する。本発明の一態様は、配列番号１８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）とを含む、ＨＥＲ２結合ドメインを含む、単離された抗ＨＥＲ２抗体を提供する。本発明の一態様は、配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、配列番号２１のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）とを含む、ＨＥＲ２結合ドメインを含む、単離された抗ＨＥＲ２抗体を提供する。本発明の一態様は、配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、配列番号２３のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）とを含む、ＨＥＲ２結合ドメインを含む、単離された抗ＨＥＲ２抗体を提供する。
【００１３】
本発明の一態様は、前述の態様のいずれかに記載の単離された抗ＨＥＲ２抗体を提供し、この抗ＨＥＲ２抗体は、抗ＣＤ３結合ドメインをさらに含む。一実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメインは、（ａ）配列番号８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメインは、（ａ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメインは、配列番号７７のアミノ酸配列を含むＶＨドメインと、配列番号７８のアミノ酸配列を含むＶＬドメインとを含む。一実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメインは、（ａ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号７５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメインは、配列番号７９のアミノ酸配列を含むＶＨドメインと、配列番号８１のアミノ酸配列を含むＶＬドメインとを含む。
【００１４】
上記態様のある特定の実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、モノクローナル、ヒト、ヒト化、またはキメラ抗体である。上記態様のある特定の実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、ＩｇＧ抗体である。上記態様のある特定の実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、多重特異性抗体である。上記態様のある特定の実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、完全長抗体である。上記態様のある特定の実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、非グリコシル化部位突然変異を含む。上記態様のある特定の実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、置換突然変異である非グリコシル化部位変異を含む。上記態様のある特定の実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、低減されたエフェクター機能を有する。上記態様のある特定の実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、ＥＵ番号付けによるアミノ酸残基Ｎ２９７、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｄ２６５、及び／またはＰ３２９Ｇに置換突然変異を含む。いくつかでは、置換突然変異は、ＥＵ番号付けによるＮ２９７Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｄ２６５Ａ、及びＰ３２９Ｇからなる群から選択される。上記態様のある特定の実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、ＥＵ番号付けによるアミノ酸残基２９７にＮ２９７Ｇ置換突然変異を含む。
【００１５】
上記態様のある特定の実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、及び／または（Ｆａｂ’）２断片などの抗体断片である。
【００１６】
本発明の一態様は、上記態様のいずれかに記載の抗ＨＥＲ２抗体をコードする、単離された核酸を提供する。本発明の一態様は、単離された核酸を含む、ベクターを提供する。本発明の一態様は、ベクターを含む宿主細胞を提供する。
【００１７】
本発明の一態様は、抗ＨＥＲ２抗体の産生方法を提供し、本方法は、培養培地中で宿主細胞を培養することを含む。
【００１８】
本発明の一態様は、上記態様のいずれかに記載の抗ＨＥＲ２抗体を含む薬学的組成物を提供する。本発明の一態様は、薬剤として使用するための、上記態様のいずれかに記載の抗ＨＥＲ２抗体を提供する。本薬剤は、細胞増殖性障害の治療またはその進行の遅延を必要とする対象において、その使用を見出す。本発明の一態様は、癌などの細胞増殖性障害を有する対象において免疫機能の増強に使用するための、上記態様のいずれかに記載の抗ＨＥＲ２抗体を提供する。ある特定の実施形態では、癌は、ＨＥＲ２を発現する癌である。一実施形態では、癌はＨＥＲ２陽性癌である。いくつかの実施形態では、癌は、乳癌または胃癌である。
【００１９】
本発明の一態様は、癌などの細胞増殖性障害の治療またはその進行の遅延のための薬剤の製造における、上記態様のいずれかに記載の抗ＨＥＲ２抗体の使用を提供する。ある特定の実施形態では、癌は、ＨＥＲ２を発現する癌である。一実施形態では、癌はＨＥＲ２陽性癌である。いくつかの実施形態では、癌は、乳癌または胃癌である。
【００２０】
本発明の一態様は、細胞増殖性障害の治療またはその進行の遅延を必要とする対象における、治療方法または遅延方法を提供し、本方法は、上記態様のいずれかに記載の抗ＨＥＲ２抗体を対象に投与することを含む。
【００２１】
本発明の一態様は、細胞増殖性障害を有する対象における免疫機能の増強方法を提供し、本方法は、有効量の上記態様のいずれかに記載の抗ＨＥＲ２抗体を対象に投与することを含む。ある特定の実施形態では、細胞増殖性障害は、癌である。ある特定の実施形態では、癌は、ＨＥＲ２を発現する癌である。一実施形態では、癌はＨＥＲ２陽性癌である。いくつかの実施形態では、癌は、乳癌または胃癌である。ある特定の実施形態では、本方法は、対象にＰＤ−１軸結合アンタゴニスト（抗ＰＤＬ１抗体等）を投与することをさらに含む。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】ｈｕ４Ｄ５（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））、置換アミノ酸位置（Ｘ１〜Ｘ６）が影付きのｈｕ４Ｄ５、及び変異型４Ｄ５ｖ３（表示の順にそれぞれ配列番号１、３、１０、２、４、及び１１）のアミノ酸配列アライメントを示す。
【図２】表面プラズモン共鳴によって決定された、抗ＨＥＲ２変異型のＦａｂバージョンの一価の結合親和性を要約する表である。
【図３】表面プラズモン共鳴によって決定された、選択抗ＨＥＲ２抗体の結合親和性を要約する表である。
【図４】表面プラズモン共鳴によって決定された、選択抗ＨＥＲ２抗体／ＣＤ３二重特異性抗体の結合親和性を要約する表である。
【図５Ａ】精製したヒトＣＤ８＋細胞及びＨＥＲ２発現標的細胞系を使用して抗ＨＥＲ２／ＣＤ３  ＴＤＢの機能的活性を評価するために行われた細胞死滅アッセイを示す。
【図５Ｂ】精製したヒトＣＤ８＋細胞及びＨＥＲ２発現標的細胞系を使用して抗ＨＥＲ２／ＣＤ３  ＴＤＢの機能的活性を評価するために行われた細胞死滅アッセイを示す。
【図５Ｃ】精製したヒトＣＤ８＋細胞及びＨＥＲ２発現標的細胞系を使用して抗ＨＥＲ２／ＣＤ３  ＴＤＢの機能的活性を評価するために行われた細胞死滅アッセイを示す。
【図６Ａ】Ｔ細胞活性を誘導する抗ＨＥＲ２／ＣＤ３  ＴＤＢの能力を示す。
【図６Ｂ】Ｔ細胞活性を誘導する抗ＨＥＲ２／ＣＤ３  ＴＤＢの能力を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
Ｉ．定義
本明細書で使用される「約」という用語は、当業者であれば容易に理解するそれぞれの値の通常の誤差範囲を指す。本明細書における「約」値またはパラメータへの言及は、その値またはパラメータ自体を対象とする実施形態を含む（かつ説明する）。
【００２４】
本明細書の目的のための「アクセプターヒトフレームワーク」は、以下に定義される、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークに由来する、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）フレームワークまたは重鎖可変ドメイン（ＶＨ）フレームワークのアミノ酸配列を含むフレームワークである。ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワーク「に由来する」アクセプターヒトフレームワークは、その同じアミノ酸配列を含んでもよく、またはそれは、アミノ酸配列変化を含有し得る。いくつかの実施形態では、アミノ酸変化の数は、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、または２以下である。いくつかの実施形態では、ＶＬアクセプターヒトフレームワークの配列は、ＶＬヒト免疫グロブリンフレームワーク配列またはヒトコンセンサスフレームワーク配列と同一である。
【００２５】
「親和性」とは、分子（例えば、抗体）の単一結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有結合相互作用の合計の強度を指す。別途示されない限り、本明細書で使用されるとき、「結合親和性」とは、結合対のメンバー（例えば、抗体及び抗原）間の１：１の相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。分子ＸのそのパートナーＹに対する親和性は、一般に、解離定数（Ｋｄ）で表され得る。親和性は、本明細書に記載される方法を含む当該技術分野で既知の一般的な方法によって測定され得る。結合親和性を測定するための具体的な例証的説明及び例示的な実施形態が、以下に記載される。
【００２６】
「親和性成熟」抗体は、変化を有しない親抗体と比較して、１つ以上の超可変領域（ＨＶＲ）において１つ以上の変化を有し、かかる変化によって抗原に対する抗体の親和性を改善する、抗体を指す。
【００２７】
「抗ＣＤ３抗体」及び「ＣＤ３に結合する抗体」という用語は、抗体がＣＤ３の標的化において診断剤及び／または治療剤として有用であるように、十分な親和性でＣＤ３と結合することができる抗体を指す。一実施形態では、無関係の非ＣＤ３タンパク質への抗ＣＤ３抗体の結合の程度は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定した場合に、この抗体のＣＤ３への結合の約１０％未満である。ある特定の実施形態では、ＣＤ３に結合する抗体は、１μＭ以下、１００ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、１ｎＭ以下、０．１ｎＭ以下、０．０１ｎＭ以下、または０．００１ｎＭ以下（例えば、１０−８Ｍ以下、例えば、１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。ある特定の実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、異なる種に由来するＣＤ３間で保存されるＣＤ３のエピトープに結合する。
【００２８】
「抗体」という用語は、本明細書で最も広義に使用され、それらが所望の抗原結合活性を示す限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び抗体断片を含むが、これらに限定されない、種々の抗体構造を包含する。
【００２９】
「抗体断片」は、無傷抗体が結合する抗原と結合する、無傷抗体の一部を含む無傷抗体以外の分子を指す。抗体断片の例には、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ′、Ｆａｂ′−ＳＨ、Ｆ（ａｂ′）２；ダイアボディ；線状抗体；単鎖抗体分子（例えばｓｃＦｖ）；及び抗体断片から形成される多重特異性抗体が含まれるが、これらに限定されない。
【００３０】
「結合ドメイン」とは、標的エピトープ、抗原、リガンド、または受容体に特異的に結合する化合物または分子の一部を意味する。結合ドメインは、抗体（例えば、モノクローナル、ポリクローナル、組み換え、ヒト化、及びキメラ抗体）、抗体断片またはその部分（例えば、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’２、ｓｃＦｖ抗体、ＳＭＩＰ、ドメイン抗体、ダイアボディ、ミニボディ、ｓｃＦｖ−Ｆｃ、アフィボディ、ナノボディ、ならびに抗体のＶＨ及び／またはＶＬドメイン）、受容体、リガンド、アプタマー、及び特定された結合パートナーを有する他の分子を含むが、これらに限定されない。
【００３１】
「化学療法剤」は、癌の治療に有用な化学化合物である。化学療法剤の例としては、チオテパ及びシクロスホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標））などのアルキル化剤；ブスルファン、インプロスルファン、及びピポスルファンなどのアルキルスルホネート；ベンゾドパ（ｂｅｎｚｏｄｏｐａ）、カルボコン、メツレドパ（ｍｅｔｕｒｅｄｏｐａ）、及びウレドパ（ｕｒｅｄｏｐａ）などのアジリジン；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンチオホスホルアミド、及びトリメチロメラミンを含むエチレンイミン及びメチルアメラミン；アセトゲニン（特にブラタシン及びブラタシノン）；デルタ−９−テトラヒドロカンナビノール（ドロナビノール、ＭＡＲＩＮＯＬ（登録商標））；ベータ−ラパコン；ラパコール；コルヒチン；ベツリン酸；カンプトテシン（合成類似体トポテカン（ＨＹＣＡＭＴＩＮ（登録商標））、ＣＰＴ−１１（イリノテカン、ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（登録商標））、アセチルカンプトテシン、スコポレクチン（ｓｃｏｐｏｌｅｃｔｉｎ）、及び９−アミノカンプトテシンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ−１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシン、及びビゼレシン合成類似体を含む）；ポドフィロトキシン；ポドフィリン酸；テニポシド；クリプトフィシン（とりわけクリプトフィシン１及びクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成類似体、ＫＷ−２１８９及びＣＢ１−ＴＭ１を含む）；エリュテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチイン；スポンジスタチン；クロラムブシル、クロルナファジン（ｃｈｌｏｒｎａｐｈａｚｉｎｅ）、クロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベムビシン（ｎｏｖｅｍｂｉｃｈｉｎ）、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタードなどの窒素マスタード；カルムスチン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、及びラニムヌスチン（ｒａｎｉｍｎｕｓｔｉｎｅ）などのニトロソ尿素；エンジイン抗生物質（例えば、カリケアミシン、特にカリケアミシンガンマ１Ｉ及びカリケアミシンオメガ１Ｉ（例えば、Ｎｉｃｏｌａｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ  Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．，３３：１８３−１８６（１９９４）を参照されたい）などの抗生物質；ＣＤＰ３２３、経口アルファ−４インテグリン（ｏｒａｌ  ａｌｐｈａ−４ｉｎｔｅｇｒｉｎ）阻害剤；ダイネマイシン（ｄｙｎｅｍｉｃｉｎ）Ａを含むダイネマイシン；エスペラミシン；ならびにネオカルジノスタチン発色団及び関連色素タンパク質エンジイン（ｅｎｅｄｉｙｎｅ）抗生物質発色団）、アクラシノマイシン（ａｃｌａｃｉｎｏｍｙｓｉｎ）、アクチノマイシン、オウトラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン（ｃａｒａｂｉｃｉｎ）、カミノマイシン（ｃａｍｉｎｏｍｙｃｉｎ）、カルジノフィリン（ｃａｒｚｉｎｏｐｈｉｌｉｎ）、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン（ｄｅｔｏｒｕｂｉｃｉｎ）、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン���ドキソルビシン（ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（登録商標）、モルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシン、ドキソルビシンＨＣｌリポソーム注射剤（ＤＯＸＩＬ（登録商標））、リポソームドキソルビシンＴＬＣ  Ｄ−９９（ＭＹＯＣＥＴ（登録商標））、ペグ化リポソームドキソルビシン（ＣＡＥＬＹＸ（登録商標））、及びデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン（ｅｓｏｒｕｂｉｃｉｎ）、イダルビシン、マルセロマイシン（ｍａｒｃｅｌｌｏｍｙｃｉｎ）、マイトマイシン、例えば、マイトマイシンＣ、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポルフィロマイシン、ピューロマイシン、ケラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン（ｒｏｄｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；代謝拮抗薬、例えば、メトトレキサート、ゲムシタビン（ＧＥＭＺＡＲ（登録商標））、テガフール（ＵＦＴＯＲＡＬ（登録商標））、カペシタビン（ＸＥＬＯＤＡ（登録商標））、エポチロン、及び５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）；コンブレタスタチン；葉酸類似体、例えば、デノプテリン（ｄｅｎｏｐｔｅｒｉｎ）、メトトレキサート、プテロプテリン（ｐｔｅｒｏｐｔｅｒｉｎ）、トリメトレキサート；プリン類似体、例えば、フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン（ｔｈｉａｍｉｐｒｉｎｅ）、チオグアニン；ピリミジン類似体、例えば、アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン（ｄｉｄｅｏｘｙｕｒｉｄｉｎｅ）、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン；男性ホルモン剤、例えば、カルステロン（ｃａｌｕｓｔｅｒｏｎｅ）、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン；抗副腎剤、例えばアミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン；葉酸補充薬、例えば、フロリン酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド（ａｌｄｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ  ｇｌｙｃｏｓｉｄｅ）；アミノレブリン酸（ａｍｉｎｏｌｅｖｕｌｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル（ｂｅｓｔｒａｂｕｃｉｌ）；ビサントレン（ｂｉｓａｎｔｒｅｎｅ）；エダトラキセート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）；デフォファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）；デメコルチン；ジアジコン（ｄｉａｚｉｑｕｏｎｅ）；エルフォルミチン（ｅｌｆｏｒｍｉｔｈｉｎｅ）；酢酸エリプチニウム；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダイニン（ｌｏｎｉｄａｉｎｉｎｅ）；メイタンシノイド（ｍａｙｔａｎｓｉｎｏｉｄ）、例えば、メイタンシン及びアンサミトシン（ａｎｓａｍｉｔｏｃｉｎ）；ミトグアゾン（ｍｉｔｏｇｕａｚｏｎｅ）；ミトキサントロン；モピダモール（ｍｏｐｉｄａｍｏｌ）；ニトラエリン（ｎｉｔｒａｅｒｉｎｅ）；ペントスタチン；フェナメット（ｐｈｅｎａｍｅｔ）；ピラルビシン；ロソキサントロン（ｌｏｓｏｘａｎｔｒｏｎｅ）；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登��商標）多糖類複合体（ＪＨＳ  Ｎａｔｕｒａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，Ｏｒｅｇ．）；ラゾキサン；リゾキシン（ｒｈｉｚｏｘｉｎ）；シゾフラン（ｓｉｚｏｆｕｒａｎ）；スピロゲルマニウム（ｓｐｉｒｏｇｅｒｍａｎｉｕｍ）；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２’−トリクロロトリエチルアミン；トリコテシン（特に、Ｔ−２トキシン、ベラクリンＡ（ｖｅｒｒａｃｕｒｉｎ  Ａ）、ロリジンＡ（ｒｏｒｉｄｉｎ  Ａ）、及びアングイジン（ａｎｇｕｉｄｉｎｅ））；ウレタン；ビンデシン（ＥＬＤＩＳＩＮＥ（登録商標）、ＦＩＬＤＥＳＩＮ（登録商標））；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）；アラビノシド（ａｒａｂｉｎｏｓｉｄｅ）（「Ａｒａ−Ｃ」）；チオテパ；タキソイド、例えば、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．）、パクリタキセルのアルブミン操作されたナノ粒子製剤（ＡＢＲＡＸＡＮＥ（商標））、及びドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）、Ｒｈｏｍｅ−Ｐｏｕｌｅｎｅ  Ｒｏｒｅｒ，Ａｎｔｏｎｙ，Ｆｒａｎｃｅ）；クロランブシル；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；白金製剤、例えば、シスプラチン、オキサリプラチン（例えば、ＥＬＯＸＡＴＩＮ（登録商標））、及びカルボプラチン；ビンブラスチン（ＶＥＬＢＡＮ（登録商標））、ビンクリスチン（ＯＮＣＯＶＩＮ（登録商標））、ビンデシン（ＥＬＤＩＳＩＮＥ（登録商標）、ＦＩＬＤＥＳＩＮ（登録商標））、及びビノレルビン（ｖｉｎｏｒｅｌｂｉｎｅ）（ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標））を含む、ビンカ（これは、チューブリン重合が微小管形成することを阻止する）；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ロイコボリン；ノバントロン；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；イバンドロン酸（ｉｂａｎｄｒｏｎａｔｅ）；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ  ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；ベキサロテン（ＴＡＲＧＲＥＴＩＮ（登録商標））を含む、レチノイン酸（ｒｅｔｉｎｏｉｃ  ａｃｉｄ）などのレチノイド；ビスホスホネート、例えば、クロドロン酸（ｃｌｏｄｒｏｎａｔｅ）（例えば、ＢＯＮＥＦＯＳ（登録商標）またはＯＳＴＡＣ（登録商標））、エチドロン酸（ｅｔｉｄｒｏｎａｔｅ）（ＤＩＤＲＯＣＡＬ（登録商標））、ＮＥ−５８０９５、ゾレドロン酸（ｚｏｌｅｄｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）／ゾレドロネート（ｚｏｌｅｄｒｏｎａｔｅ）（ＺＯＭＥＴＡ（登録商標））、アレンドロン酸（ａｌｅｎｄｒｏｎａｔｅ）（ＦＯＳＡＭＡＸ（登録商標））、パミドロン酸（ｐａｍｉｄｒｏｎａｔｅ）（ＡＲＥＤＩＡ（登録商標））、チルドロン酸（ｔｉｌｕｄｒｏｎａｔｅ）（ＳＫＥＬＩＤ（登録商標））、またはリセドロン酸（ｒｉｓｅｄｒｏｎａｔｅ）（ＡＣＴＯＮＥＬ（登録商標））；トロキサシタビン（１，３−ジオキソランヌクレオシドシトシン類似体）；アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に、異常な細胞増殖に関与するシグナル伝達経路における遺伝子の発現を阻害するもの、例えば、ＰＫＣ−アルファ、Ｒａｆ、Ｈ−Ｒａｓ、及び上皮細胞成長因子受容体（ＥＧＦ−Ｒ）（例えば、エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ（商標）））；及び細胞増殖を低減するＶＥＧＦ−Ａ；ＴＨＥＲＡＴＯＰＥ（登録商標）ワクチンなどのワクチン、ならびに遺伝子療法ワクチン、例えば、ＡＬＬＯＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、ＬＥＵＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、及びＶＡＸＩＤ（登録商標）ワクチン；トポイソメラーゼ１阻害剤（例えば、ＬＵＲＴＯＴＥＣＡＮ（登録商標））；ｒｍＲＨ（例えば、ＡＢＡＲＥＬＩＸ（登録商標））；ＢＡＹ４３９００６（ソラフェニブ（ｓｏｒａｆｅｎｉｂ）；Ｂａｙｅｒ）；ＳＵ−１１２４８（スニチニブ（ｓｕｎｉｔｉｎｉｂ）、ＳＵＴＥＮＴ（登録商標）、Ｐｆｉｚｅｒ）；ペリフォシン（ｐｅｒｉｆｏｓｉｎｅ）、ＣＯＸ−２阻害剤（例えば、セレコキシブまたはエトリコキシブ）、プロテアソーム阻害剤（例えば、ＰＳ３４１）；ボルテゾミブ（ＶＥＬＣＡＤＥ（登録商標））；ＣＣＩ−７７９；ティピファニブ（Ｒ１１５７７）；オラフェニブ（ｏｒａｆｅｎｉｂ）、ＡＢＴ５１０；Ｂｃｌ−２阻害剤、例えば、オブリメルセンナトリウム（ＧＥＮＡＳＥＮＳＥ（登録商標））；ピクサントロン；ＥＧＦＲ阻害剤；チロシンキナーゼ阻害剤；セリン−スレオニンキナーゼ阻害剤、例えば、ラパマイシン（シロリムス、ＲＡＰＡＭＵＮＥ（登録商標））；ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、例えば、ロナファーニブ（ｌｏｎａｆａｒｎｉｂ）（ＳＣＨ  ６６３６、ＳＡＲＡＳＡＲ（商標））；及び上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸、または誘導体；ならびに上記のうちの２つ以上の組み合わせ、例えば、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、及びプレドニゾロンの併用療法の略称であるＣＨＯＰ；ならびに５−ＦＵ及びロイコボリンと組み合わせたオキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮ（商標））を用いた治療レジメンの略称であるＦＯＬＦＯＸ、及び上記のうちのいずれかの薬学的に許容される塩、酸、または誘導体、ならびに上記のうちの２つ以上の組み合わせが挙げられる。
【００３２】
本明細書で定義される化学治療剤は、癌の成長を促進し得るホルモンの作用を調節、低減、遮断、または阻害するように作用する「抗ホルモン剤」または「内分泌治療薬」を含む。それらは、それ自体がホルモンであってもよく、例えば、タモキシフェン（ＮＯＬＶＡＤＥＸ（登録商標）タモキシフェンを含む）、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストーン、及びＦＡＲＥＳＴＯＮ．ｃｎｄｏｔ．トレミフェンを含む抗エストロゲン及び選択的エストロゲン受容体調節薬（ＳＥＲＭ）；副腎におけるエストロゲン産生を調節する、酵素アロマターゼを阻害するアロマターゼ阻害剤、例えば、４（５）−イミダゾール、アミノグルテチミド、ＭＥＧＡＳＥ（登録商標）酢酸メゲストロール、ＡＲＯＭＡＳＩＮ（登録商標）エキセメスタン、ホルメスタニー（ｆｏｒｍｅｓｔａｎｉｅ）、ファドロゾール、ＲＩＶＩＳＯＲ（登録商標）ボロゾール、ＦＥＭＡＲＡ（登録商標）レトロゾール、及びＡＲＩＭＩＤＥＸ（登録商標）アナストロゾールなど；ならびに抗アンドロゲン、例えば、フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリド、及びゴセレリン；ならびにトロキサシタビン（１，３−ジオキソランヌクレオシドシトシン類似体）；アンチセンスオリゴヌクレオチド、具体的には、異常な細胞増殖に関与するシグナル伝達経路における遺伝子の発現を阻害するもの、例えば、ＰＫＣ−アルファ、Ｒａｆ、及びＨ−Ｒａｓなど；リボザイム、例えば、ＶＥＧＦ発現阻害剤（例えば、ＡＮＧＩＯＺＹＭＥ（登録商標）リボザイム）及びＨＥＲ２発現阻害剤；ワクチン、例えば、遺伝子療法ワクチン、例えば、ＡＬＬＯＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、ＬＥＵＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、及びＶＡＸＩＤ（登録商標）ワクチン；ＰＲＯＬＥＵＫＩＮ（登録商標）ｒＩＬ−２；ＬＵＲＴＯＴＥＣＡＮ（登録商標）トポイソメラーゼ１阻害剤；ＡＢＡＲＥＬＩＸ（登録商標）ｒｍＲＨ；ビノレルビン及びエスペラミシン（米国特許第４，６７５，１８７号を参照のこと）、ならびに上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸、または誘導体、及び上記のうちの２つ以上の組み合わせを含むが、これらに限定されない。
【００３３】
「キメラ」抗体という用語は、重鎖及び／または軽鎖の一部分が特定の源または種に由来する一方で、重鎖及び／または軽鎖の残りの部分が異なる源または種に由来する抗体を指す。
【００３４】
「表面抗原分類３」または「ＣＤ３」という用語は、本明細書で使用されるとき、別途指示されない限り、霊長類（例えばヒト）及び齧歯類（例えば、マウス及びラット）等の哺乳動物を含む、任意の脊椎動物源由来の任意の天然ＣＤ３を指し、例えば、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３α、及びＣＤ３β鎖を含む。この用語は、「完全長」のプロセシングされていないＣＤ３（例えば、プロセシングされていない、もしくは修飾されていないＣＤ３εまたはＣＤ３γ）、ならびに細胞内のプロセシングから得られるＣＤ３の任意の形態を包含する。この用語は、例えば、スプライス変異型または対立遺伝子変異型を含む、ＣＤ３の自然発生変異型も包含する。ＣＤ３は、例えば、２０７のアミノ酸長であるヒトＣＤ３εタンパク質（ＮＣＢＩ参照配列番号ＮＰ＿０００７２４）、及び１８２のアミノ酸長であるヒトＣＤ３γタンパク質（ＮＣＢＩ参照配列番号ＮＰ＿００００６４）を含む。
【００３５】
抗体の「クラス」は、その重鎖によって保有される定常ドメインまたは定常領域の型を指す。抗体の５つの主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭが存在し、これらのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２にさらに分類され得る。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれ、α、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。
【００３６】
本明細書に記載の本発明の態様及び実施形態が、態様及び実施形態「を含む」、「からなる」、及び「から本質的になる」を含むことが理解される。
【００３７】
本明細書で使用される「細胞傷害性薬剤」という用語は、細胞機能を阻害するもしくは阻止する、かつ／または細胞死もしくは破壊を引き起こす、物質を指す。細胞傷害性薬剤には、放射性同位体（例えば、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、およびＬｕの放射性同位体）；化学療法剤もしくは化学療法薬（例えば、メトトレキサート、アドリアマイシン、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド）、ドキソルビシン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、ダウノルビシン、または他のインターカレート剤）；成長阻害剤；核酸分解酵素等の酵素及びそれらの断片；抗生物質；細菌、真菌、植物、または動物起源の小分子毒素または酵素活性毒素（それらの断片及び／または変異形を含む）等の毒素；ならびに下に記載される種々の抗腫瘍または抗癌薬剤が含まれるが、これらに限定されない。
【００３８】
「障害」とは、哺乳動物を問題の障害に罹患しやすくする病理学的状態を含む慢性及び急性障害または疾患を含むが、これらに限定されない、治療から恩恵を受けることになる任意の状態である。
【００３９】
「細胞増殖性障害」及び「増殖性障害」という用語は、ある程度の異常な細胞増殖に関連する障害を指す。一実施形態では、細胞増殖性障害は、癌である。一実施形態では、細胞増殖性障害は、腫瘍である。
【００４０】
用語「癌」及び「癌性」は、典型的に無秩序な細胞成長を特徴とする哺乳動物の生理的状態を指すか、または記述する。癌の例としては、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、及び白血病またはリンパ性悪性腫瘍が挙げられるが、これらに限定されない。かかる癌のより具体的な例としては、扁平上皮癌（例えば、上皮扁平上皮癌）、肺癌、例えば、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌及び肺扁平上皮癌、腹膜癌、肝細胞癌、胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ  ｃａｎｃｅｒ）または胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ  ｃａｎｃｅｒ）、例えば、胃腸癌及び胃腸間質癌、膵臓癌、膠芽細胞腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、尿路癌、肝癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌または子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌または腎癌、前立腺癌、外陰部癌、甲状腺癌、肝癌、肛門癌、陰茎癌、黒色腫、表在拡大型黒色腫、悪性黒子型黒色腫、末端性黒子性黒色腫、結節型黒色腫、多発性骨髄腫及びＢ細胞リンパ腫（低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ、中悪性度／濾胞性ＮＨＬ、中悪性度びまん性ＮＨＬ、高悪性度免疫芽細胞性ＮＨＬ、高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ、高悪性度小型非開裂細胞性ＮＨＬ、巨大病変ＮＨＬ、マントル細胞リンパ腫、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、及びワルデンストレームマクログロブリン血症等）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、ヘアリー細胞白血病、慢性骨髄芽球性白血病、及び移植後リンパ増殖性障害（ＰＴＬＤ）、ならびに母斑症に関連する異常な血管増殖、浮腫（脳腫瘍に関連するもの等）、メーグス症候群、脳癌、ならびに頭頸部癌、及び関連転移が挙げられるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態では、本発明の抗体での治療に適する癌としては、乳癌、結腸直腸癌、直腸癌、非小細胞肺癌、膠芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、腎細胞癌、前立腺癌、肝臓癌、膵臓癌、軟組織肉腫、カポジ肉腫、カルチノイド癌、頭頸部癌、卵巣癌、中皮腫、及び多発性骨髄腫が挙げられる。いくつかの実施形態では、癌は、小細胞肺癌、膠芽細胞腫、神経芽細胞腫、黒色腫、乳癌、胃癌、結腸直腸癌（ＣＲＣ）、及び肝細胞癌から選択される。またいくつかの実施形態では、癌は、非小細胞肺癌、結腸直腸癌、膠芽細胞腫、及び乳癌（これらの癌の転移型を含む）から選択される。他の実施形態では、癌は、ホジキンリンパ腫を除外するが、胚中心Ｂ細胞様（ＧＣＢ）ＤＬＢＣＬ、活性化Ｂ細胞様（ＡＢＣ）ＤＬＢＣＬ、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）、小リンパ球性白血病（ＳＬＬ）、リンパ形質細胞性リンパ腫（ＬＬ）、ワルデンストレームマクログロブリン血症（ＷＭ）、中枢神経系リンパ腫（ＣＮＳＬ）、バーキットリンパ腫（ＢＬ）、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、脾臓周辺帯リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、脾臓リンパ腫／白血病、分類不能脾臓びまん性赤脾髄小型Ｂ細胞リンパ腫、ヘアリー細胞白血病変異型、ワルデンストレームマクログロブリン血症、鎖病、α鎖病、γ鎖病、μ鎖病、形質細胞性骨髄腫、骨の孤立性形質細胞腫、骨以外の形質細胞腫、粘膜関連リンパ組織の節外性辺縁��リンパ腫（ＭＡＬＴリンパ腫）、節性辺縁帯リンパ腫、小児節性辺縁帯リンパ腫、小児濾胞性リンパ腫、原発性皮膚濾胞中心リンパ腫、Ｔ細胞／組織球豊富型大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、ＣＮＳの原発性ＤＬＢＣＬ、原発性皮膚ＤＬＢＣＬ下肢型、加齢性ＥＢＶ陽性ＤＬＢＣＬ、慢性炎症に関連するＤＬＢＣＬ、リンパ腫様肉芽腫症、原発性縦隔（胸腺）大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（Ｐｒｉｍａｒｙ  ｍｅｄｉａｓｔｉｎａｌ（ｔｈｙｍｉｃ）ｌａｒｇｅ  Ｂ−ｃｅｌｌ  ｌｙｍｐｈｏｍａ）、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、ＡＬＫ陽性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、形質芽球性リンパ腫、ＨＨＶ８関連多中心性キャッスルマン病において生じる大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性体液性リンパ腫：びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫とバーキットリンパ腫との間の中間の特徴を有する分類不能Ｂ細胞リンパ腫、及びびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫と古典的ホジキンリンパ腫との間の特徴を有する分類不能Ｂ細胞リンパ腫を含む成熟Ｂ細胞癌のクラスから選択される。
【００４１】
「腫瘍」は、本明細書で使用されるとき、悪性か良性かにかかわらず、全ての腫瘍性細胞の成長及び増殖、ならびに全ての前癌性及び癌性の細胞及び組織を指す。「癌」、「癌性」、「細胞増殖性障害」、「増殖性障害」、及び「腫瘍」という用語は、本明細書で言及される場合、相互排他的ではない。
【００４２】
本明細書で使用されるとき、「腫瘍抗原」という用語は、腫瘍細胞上に提示されるそれらの抗原として理解され得る。これらの抗原は、分子の膜貫通及び細胞質部分と組み合わされることが多い細胞外部分と共に細胞表面上に提示され得る。これらの抗原は、時折、腫瘍細胞によってのみ提示され得、正常な細胞によっては決して提示されない。腫瘍抗原は、腫瘍細胞上にのみ発現され得るか、または正常な細胞と比較して腫瘍特異的突然変異を表し得る。この場合、それらは腫瘍特異的抗原と呼ばれる。腫瘍細胞及び正常な細胞によって提示される腫瘍抗原がより一般的であり、それらは腫瘍関連抗原と呼ばれる。これらの腫瘍関連抗原は、正常な細胞と比較して過剰発現され得るか、または正常な細胞と比較して腫瘍組織の構造があまりコンパクトではないため、腫瘍細胞における抗体結合にアクセスしやすい。一態様では、腫瘍抗原は、下の表１に記載されるものから選択される。
【００４３】
「エフェクター機能」とは、抗体のアイソタイプにより異なる抗体のＦｃ領域に起因する生物学的活性を指す。抗体エフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞傷害作用（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、食作用、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方調節、ならびにＢ細胞活性化が挙げられる。
【００４４】
化合物、例えば、本発明の抗ＨＥＲ２抗体またはその組成物（例えば、薬学的組成物）の「有効量」は、特定の障害（例えば、細胞増殖性障害、例えば、癌）の測定可能な改善または予防など、所望の治療的または予防的結果を達成するのに必要な少なくとも最小量である。本明細書における有効量は、患者の疾患状態、年齢、性別、及び体重、ならびに個体における所望の応答を誘発する抗体の能力などの要因に応じて異なり得る。有効量は、治療上有益な作用が治療の任意の毒性作用または有害作用を上回るものでもある。予防的使用の場合、有益なまたは所望の結果には、疾患の生化学的、組織学的、及び／または挙動的症状、その合併症、ならびに疾患の発症中に現れる中間病理学的表現型を含む、疾患のリスクの排除もしくは低減、疾患の重症度の軽減、または疾患の発生の遅延などの結果が含まれる。治療的使用の場合、有益なまたは所望の結果には、疾患に起因する１つ以上の症状の減少、疾患に罹患している者の生活の質の向上、疾患の治療に必要な他の薬剤の用量の減少、別の薬剤の効果の増強（例えば、標的による）、疾患の進行の遅延、及び／または生存期間の延長などの臨床結果が含まれる。癌または腫瘍の場合、有効量の薬物は、癌細胞の数を低減させ、腫瘍サイズを低減させ、癌細胞の末梢器官への浸潤を阻害し（すなわち、ある程度遅らせるか、または望ましくは停止させ）、腫瘍転移を阻害し（すなわち、ある程度遅らせるか、または望ましくは停止させ）、腫瘍成長をある程度阻害し、かつ／または障害に関連する症状のうちの１つ以上をある程度軽減する効果を有し得る。有効量は、１回以上の投与で投与され得る。本発明の目的に関しては、薬物、化合物、または薬学的組成物の有効量は、予防的または治療的治療を直接または間接的に達成するのに十分な量である。臨床分野において理解されるように、薬物、化合物、または薬学的組成物の有効量は、別の薬物、化合物、または薬学的組成物と併せて達成されても、されなくてもよい。したがって、「有効量」は、１つ以上の療法剤を投与するという点で考慮され得、単剤は、１つ以上の他の薬剤と併せて、望ましい結果が達成され得るか、または達成される場合、有効量で与えられると見なされ得る。
【００４５】
本明細書における「Ｆｃ領域」という用語は、定常領域の少なくとも一部分を含有する免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するように使用される。この用語は、天然配列Ｆｃ領域及び変異型Ｆｃ領域を含む。一実施形態では、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、Ｃｙｓ２２６から、またはＰｒｏ２３０から、重鎖のカルボキシル末端に及ぶ。しかしながら、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）は、存在する場合もあれば、しない場合もある。本明細書で別途指示がない限り、Ｆｃ領域または定常領域中のアミノ酸残基の番号付けは、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９９１に記載されている、ＥＵインデックスとも称されるＥＵ番号付け方式に従う。
【００４６】
「フレームワーク」または「ＦＲ」は、超可変領域（ＨＶＲ）残基以外の可変ドメイン残基を指す。可変ドメインのＦＲは一般に、４つのＦＲドメイン：ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４からなる。したがって、ＨＶＲ及びＦＲ配列は一般に、ＶＨ（またはＶＬ）において次の配列：ＦＲ１−Ｈ１（Ｌ１）−ＦＲ２−Ｈ２（Ｌ２）−ＦＲ３−Ｈ３（Ｌ３）−ＦＲ４で出現する。
【００４７】
「完全長抗体」、「無傷抗体」、及び「全抗体」という用語は、天然の抗体構造に実質的に類似な構造を有するか、または本明細書に定義されるＦｃ領域を含む重鎖を有する、抗体を指して、本明細書で互換的に使用される。
【００４８】
「成長阻害剤」は、本明細書で使用されるとき、インビトロまたはインビボのいずれかで細胞の成長を阻害する化合物または組成物を指す。一実施形態では、成長阻害剤は、抗体が結合する抗原を発現する細胞の増殖を予防または低減する成長阻害抗体である。別の実施形態では、成長阻害剤は、Ｓ期の細胞の割合を著しく低減させるものであり得る。成長阻害剤の例としては、細胞周期進行（Ｓ期以外の場所で）を遮断する薬剤、例えば、Ｇ１停止及びＭ期停止を誘導する薬剤が挙げられる。従来のＭ期遮断薬には、ビンカ（ビンクリスチン及びビンブラスチン）、タキサン、及び、例えば、ドキソルビシン、エピルビシン、ダウノルビシン、エトポシド、及びブレオマイシンなどのトポイソメラーゼＩＩ阻害剤が含まれる。Ｇ１で停止させるこれらの薬剤はまた、Ｓ期での停止、例えば、タモキシフェン、プレドニゾン、ダカルバジン、メクロレタミン、シスプラチン、メトトレキサート、５−フルオロウラシル、及びａｒａ−ＣなどのＤＮＡアルキル化剤にも及ぶ。さらなる情報は、Ｍｅｎｄｅｌｓｏｈｎ  ａｎｄ  Ｉｓｒａｅｌ，ｅｄｓ．，Ｔｈｅ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ，Ｃｈａｐｔｅｒ１、表題「Ｃｅｌｌ  ｃｙｃｌｅ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ，ｏｎｃｏｇｅｎｅｓ，ａｎｄ  ａｎｔｉｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ  ｄｒｕｇｓ」（Ｍｕｒａｋａｍｉらによる）（Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，１９９５）の例えば１３頁に見出すことができる。タキサン（パクリタキセル及びドセタキセル）は、いずれもイチイ由来の抗癌薬である。ヨーロッパイチイ由来のドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）、Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ  Ｒｏｒｅｒ）は、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）の半合成類似体である。パクリタキセル及びドセタキセルは、チューブリン二量体由来の微小管の構築を促進し、脱重合を阻止することによって微小管を安定させ、細胞内での有糸分裂を阻害する。
【００４９】
「ＨＥＲ２陽性」癌という用語は、正常レベルよりも高いＨＥＲ２を有する癌細胞を含む。ＨＥＲ２陽性癌の例としては、ＨＥＲ２陽性乳癌及びＨＥＲ２陽性胃癌が挙げられる。任意に、ＨＥＲ２陽性癌は、２＋もしくは３＋の免疫組織化学（ＩＨＣ）スコア、及び／または２．０以上のｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）増幅率を有する。
【００５０】
「宿主細胞」、「宿主細胞系」、及び「宿主細胞培養」という用語は、互換的に使用され、外因性核酸が中に導入された細胞を指し、かかる細胞の子孫を含む。宿主細胞には、「形質転換体」及び「形質転換細胞」が含まれ、これらは、初代形質転換細胞及び継代の数にかかわらずそれに由来する子孫を含む。子孫は、親細胞と核酸含有量の点で完全に同一ではないが、突然変異を含み得る。元来形質転換された細胞についてスクリーニングまたは選択されたものと同じ機能または生物学的活性を有する変異子孫が、本明細書に含まれる。
【００５１】
「ヒト抗体」は、ヒトもしくはヒト細胞によって産生された、またはヒト抗体レパートリーを利用する非ヒト源に由来する、抗体のアミノ酸配列、または他のヒト抗体コード配列に対応する、アミノ酸配列を保有するものである。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を明確に除外する。ヒト抗体は、ファージディスプレイライブラリを含む当技術分野で既知の種々の技法を使用して産生され得る。Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１（１９９１）、Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１（１９９１）。Ｃｏｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，ｐ．７７（１９８５）、Ｂｏｅｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７（１）：８６−９５（１９９１）に記載される方法も、ヒトモノクローナル抗体の調製に利用可能である。ｖａｎ  Ｄｉｊｋ  ａｎｄ  ｖａｎ  ｄｅ  Ｗｉｎｋｅｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，５：３６８−７４（２００１）も参照されたい。ヒト抗体は、抗原攻撃に応答してかかる抗体を産生するように修飾されているが、その内因性遺伝子座が無効化されているトランスジェニック動物、例えば、免疫化異種マウスに抗原を投与することにより調製され得る（例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術に関して、米国特許第６，０７５，１８１号及び同第６，１５０，５８４号を参照されたい）。また、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術により生成されるヒト抗体に関して、例えば、Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ１０３：３５５７−３５６２（２００６）も参照されたい。
【００５２】
「ヒトコンセンサスフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨフレームワーク配列の選択において最も一般的に生じるアミノ酸残基を表すフレームワークである。一般に、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列の下位集団からである。一般に、配列の下位集団は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ９１−３２４２，Ｂｅｔｈｅｓｄａ  ＭＤ（１９９１），ｖｏｌｓ．１−３にあるような下位集団である。一実施形態では、ＶＬについて、下位集団は、上記のＫａｂａｔらにあるような下位集団カッパＩである。一実施形態では、ＶＨについて、下位集団は、上記のＫａｂａｔらにあるような下位集団ＩＩＩである。
【００５３】
「ヒト化」抗体は、非ヒトＨＶＲ由来のアミノ酸残基及びヒトＦＲ由来のアミノ酸残基を含む、キメラ抗体を指す。ある特定の実施形態では、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、そのＨＶＲ（例えば、ＣＤＲ）の全てまたは実質的に全てが非ヒト抗体のものに対応し、ＦＲの全てまたは実質的に全てがヒト抗体のものに対応する。ヒト化抗体は、任意に、ヒト抗体に由来する抗体定常領域の少なくとも一部分を含んでもよい。抗体、例えば非ヒト抗体の、「ヒト化型」は、ヒト化を受けた抗体を指す。
【００５４】
「超可変領域」または「ＨＶＲ」という用語は、本明細書で使用されるとき、配列中で超可変（「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」）であり、かつ／または構造的に定義されたループ（「超可変ループ」）を形成し、かつ／または抗原接触残基（「抗原接触体」）を含有する、抗体可変ドメインの領域の各々を指す。一般に、抗体は、３つがＶＨ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）にあり、３つがＶＬ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）にある、６つのＨＶＲを含む。本明細書の例示的なＨＶＲは、
（ａ）アミノ酸残基２６〜３２（Ｌ１）、５０〜５２（Ｌ２）、９１〜９６（Ｌ３）、２６〜３２（Ｈ１）、５３〜５５（Ｈ２）、及び９６〜１０１（Ｈ３）で発生する超可変ループ（Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７））、
（ｂ）アミノ酸残基２４〜３４（Ｌ１）、５０〜５６（Ｌ２）、８９〜９７（Ｌ３）、３１〜３５ｂ（Ｈ１）、５０〜６５（Ｈ２）、及び９５〜１０２（Ｈ３）で発生するＣＤＲ（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１））、
（ｃ）アミノ酸残基２７ｃ〜３６（Ｌ１）、４６〜５５（Ｌ２）、８９〜９６（Ｌ３）、３０〜３５ｂ（Ｈ１）、４７〜５８（Ｈ２）、及び９３〜１０１（Ｈ３）で発生する抗原接触体（ＭａｃＣａｌｌｕｍ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２−７４５（１９９６））、ならびに
（ｄ）ＨＶＲアミノ酸残基４６〜５６（Ｌ２）、４７〜５６（Ｌ２）、４８〜５６（Ｌ２）、４９〜５６（Ｌ２）、２６〜３５（Ｈ１）、２６〜３５ｂ（Ｈ１）、４９〜６５（Ｈ２）、９３〜１０２（Ｈ３）、及び９４〜１０２（Ｈ３）を含む、（ａ）、（ｂ）、及び／または（ｃ）の組み合わせを含む。
【００５５】
別途指示されない限り、可変ドメインにおけるＨＶＲ残基及び他の残基（例えば、ＦＲ残基）は、本明細書において上記のＫａｂａｔらに従って番号付けされる。
【００５６】
「免疫コンジュゲート」は、細胞傷害性薬剤を含むがこれに限定されない１つ以上の異種性分子（複数可）にコンジュゲートされる抗体である。
【００５７】
「対象」または「個体」は、哺乳動物である。哺乳動物には、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、及びウマ）、霊長類（例えば、ヒト、及びサル等の非ヒト霊長類）、ウサギ、及び齧歯類（例えば、マウス及びラット）が含まれるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態では、対象または個体は、ヒトである。
【００５８】
「単離された」抗体は、その自然環境の構成成分から分離されているものである。いくつかの実施形態では、抗体は、例えば、電気泳動法（例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、等電点電気泳動（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動）、またはクロマトグラフ法（例えば、イオン交換または逆相ＨＰＬＣ）によって決定される場合、９５％または９９％を超える純度まで精製される。抗体純度の評価のための方法の概説については、例えば、Ｆｌａｔｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｂ８４８：７９−８７（２００７）を参照されたい。
【００５９】
「単離された」核酸とは、その天然環境の構成成分から分離されている核酸分子を指す。単離された核酸は、通常は核酸分子を含有する細胞内に含有される核酸分子を含むが、その核酸分子が染色体外に、またはその天然染色体位置とは異なる染色体位置に存在する。
【００６０】
「抗ＨＥＲ２抗体をコードする単離された核酸」は、抗体の重鎖及び軽鎖（またはそれらの断片）をコードする１つ以上の核酸分子を指し、それには単一のベクターまたは別個のベクターにおけるかかる核酸分子（複数可）が含まれ、かかる核酸分子（複数可）は、宿主細胞内の１つ以上の場所に存在する。
【００６１】
本明細書で使用される「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に同種の抗体の集団から得られる抗体を指す。すなわち、その集団を構成する個々の抗体は、同一であり、かつ／または同じエピトープと結合するが、例えば、自然発生突然変異を含有する、またはモノクローナル抗体調製物の産生中に発生する、想定される変異型抗体を除いて、かかる変異型は一般に少量で存在する。異なる決定基（エピトープ）に対して指向される異なる抗体を典型的に含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対して指向される。したがって、「モノクローナル」という修飾語は、実質的に同種の抗体の集団から得られるものとして抗体の特徴を示しており、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするものとして解釈されるものではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法、組み換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、及びヒト免疫グロブリン遺伝子座の全てまたは一部を含有するトランスジェニック動物を利用する方法を含むが、これらに限定されない、多様な技法によって作製されてもよく、モノクローナル抗体を作製するためのかかる方法及び他の例示的な方法が、本明細書に記載されている。
【００６２】
「裸の抗体」は、異種性部分（例えば、細胞傷害性部分）または放射標識に複合されていない抗体を指す。裸の抗体は、薬学的製剤中に存在してもよい。
【００６３】
「天然抗体」は、様々な構造を有する、自然発生免疫グロブリン分子を指す。例えば、天然ＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合されている２つの同一の軽鎖及び２つの同一の重鎖から構成される、約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。Ｎ末端からＣ末端まで、各重鎖は、可変重ドメイン（ｖａｒｉａｂｌｅ  ｈｅａｖｙ  ｄｏｍａｉｎ）または重鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＨ）と、その後に３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）とを有する。同様に、Ｎ末端からＣ末端まで、各軽鎖は、可変軽ドメイン（ｖａｒｉａｂｌｅ  ｌｉｇｈｔ  ｄｏｍａｉｎ）または軽鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＬ）と、その後に定常軽（ＣＬ）ドメインとを有する。抗体の軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）及びラムダ（λ）と呼ばれる２つの型うちの１つに割り当てられ得る。
【００６４】
「添付文書」という用語は、かかる治療製品の適応症、使用法、投薬量、投与、併用療法、禁忌症についての情報、及び／またはその使用に関する警告を含有する、治療剤製品のパッケージに通例含まれる指示書を指すように使用される。
【００６５】
「ＰＤ−１軸結合アンタゴニスト」という用語は、ＰＤ−１シグナル伝達軸上のシグナル伝達に起因するＴ細胞機能障害を除去するようにＰＤ−１軸結合パートナーとその結合パートナーのうちのいずれか１つ以上との相互作用を阻害し、結果として、Ｔ細胞機能（例えば、増殖、サイトカイン産生、標的細胞死滅）を復元または増強する分子を指す。本明細書で使用されるとき、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストには、ＰＤ−１結合アンタゴニスト、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニスト、及びＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストが含まれる。
【００６６】
「ＰＤ−１結合アンタゴニスト」という用語は、ＰＤ−１とその結合パートナーのうちの１つ以上、例えば、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２との相互作用に起因するシグナル伝達を減少させる、遮断する、阻害する、抑止する、または妨害する分子を指す。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＰＤ−１のその結合パートナーのうちの１つ以上への結合を阻害する分子である。具体的な実施形態では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＰＤ−１の、ＰＤ−Ｌ１及び／またはＰＤ−Ｌ２への結合を阻害する。例えば、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、抗ＰＤ−１抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチド、ならびにＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１及び／またはＰＤ−Ｌ２との相互作用に起因するシグナル伝達を減少させる、遮断する、阻害する、抑止する、または妨害する他の分子を含む。一実施形態では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、機能障害Ｔ細胞の機能障害性をより低くする（例えば、抗原認識へのエフェクター応答を増強する）ように、ＰＤ−１を介して媒介されたシグナル伝達など、Ｔリンパ球で発現された細胞表面タンパク質によってまたはそれを介して媒介される負の共刺激シグナルを低減する。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、抗ＰＤ−１抗体である。具体的な実施形態では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＭＤＸ−１１０６（ニボルマブ）である。別の具体的な実施形態では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＭＫ−３４７５（ペンブロリズマブ）である。別の具体的な実施形態では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＣＴ−０１１（ピディリズマブ）である。別の具体的な実施形態では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＡＭＰ−２２４である。別の具体的な実施形態では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＭＥＤ１−０６８０である。別の具体的な実施形態では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＰＤＲ００１である。別の具体的な実施形態では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＲＥＧＮ２８１０である。別の具体的な実施形態では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＢＧＢ−１０８である。
【００６７】
「ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニスト」という用語は、ＰＤ−Ｌ１とその結合パートナーのうちのいずれか１つ以上、例えば、ＰＤ−１、Ｂ７−１との相互作用に起因するシグナル伝達を減少させる、遮断する、阻害する、抑止する、または妨害する分子を指す。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ１の、その結合パートナーへの結合を阻害する分子である。具体的な実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ１の、ＰＤ−１及び／またはＢ７−１への結合を阻害する。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチド、及びＰＤ−Ｌ１とその結合パートナーのうちの１つ以上、例えば、ＰＤ−１、Ｂ７−１との相互作用に起因するシグナル伝達を減少させる、遮断する、阻害する、抑止する、または妨害する他の分子を含む。一実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、機能障害Ｔ細胞の機能障害性をより低くする（例えば、抗原認識へのエフェクター応答を増強する）ように、ＰＤ−Ｌ１を介して媒介されたシグナル伝達など、Ｔリンパ球で発現された細胞表面タンパク質によってまたはそれを介して媒介される負の共刺激シグナルを低減する。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。さらに別の具体的な実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＭＰＤＬ３２８０Ａ（アテゾリズマブ）である。具体的な実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０である。別の具体的な実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＭＤＸ−１１０５である。別の具体的な実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＭＳＢ００１５７１８Ｃである。さらに別の具体的な実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＭＥＤＩ４７３６である。
【００６８】
「ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニスト」という用語は、ＰＤ−Ｌ２とその結合パートナーのうちのいずれか１つ以上、例えば、ＰＤ−１との相互作用に起因するシグナル伝達を減少させる、遮断する、阻害する、抑止する、または妨害する分子を指す。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ２のその結合パートナーのうちの１つ以上への結合を阻害する分子である。具体的な実施形態では、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ２のＰＤ−１への結合を阻害する。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ２アンタゴニストは、抗ＰＤ−Ｌ２抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチド、及びＰＤ−Ｌ２とその結合パートナーのうちのいずれか１つ以上、例えば、ＰＤ−１との相互作用に起因するシグナル伝達を減少させる、遮断する、阻害する、抑止する、または妨害する他の分子を含む。一実施形態では、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、機能障害Ｔ細胞の機能障害性をより低くする（例えば、抗原認識へのエフェクター応答を増強する）ように、ＰＤ−Ｌ２を介して媒介されたシグナル伝達など、Ｔリンパ球で発現された細胞表面タンパク質によってまたはそれを介して媒介される負の共刺激シグナルを低減する。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、イムノアドヘシンである。
【００６９】
本明細書で使用される「タンパク質」という用語は、別途指示されない限り、霊長類（例えば、ヒト）及び齧歯類（例えば、マウス及びラット）等の哺乳動物を含む任意の脊椎動物源由来の任意の天然タンパク質を指す。この用語は、「完全長」のプロセシングされていないタンパク質、ならびに細胞内のプロセシングから生じるタンパク質の任意の形態を包含する。この用語は、タンパク質の自然発生変異型、例えば、スプライス変異型または対立遺伝子変異型も包含する。本発明によるタンパク質は、例えば、表１に列挙される任意のタンパク質を含む。
【００７０】
参照ポリペプチド配列に関して「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、配列同一性最大パーセントを達成するために配列を整列させ、かつ必要に応じてギャップを導入した後の、配列同一性の一部としていずれの保存的置換も考慮しない、参照ポリペプチド配列におけるアミノ酸残基と同一の候補配列におけるアミノ酸残基の割合と定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定するためのアライメントは、当該技術分野の技術範囲内の種々の方法で、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ等の公的に入手可能なコンピュータソフトウェア、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアを使用して達成され得る。当業者であれば、比較される配列の全長にわたる最大アライメントを達成するのに必要な任意のアルゴリズムを含む、配列の整列に適切なパラメータを決定することができる。しかしながら、本明細書における目的のために、アミノ酸配列同一性％値は、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ−２を使用して生成される。ＡＬＩＧＮ−２配列比較コンピュータプログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．によってオーサリングされ、ソースコードは、ユーザ文書と共に米国著作権局（Ｕ．Ｓ．Ｃｏｐｙｒｉｇｈｔ  Ｏｆｆｉｃｅ）、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  Ｄ．Ｃ．，２０５５９に提出されており、米国著作権登録番号ＴＸＵ５１００８７の下に登録されている。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．，Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａから公的に入手可能であるか、またはソースコードからコンパイルされ得る。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、デジタルＵＮＩＸ  Ｖ４．０Ｄを含むＵＮＩＸオペレーティングシステムでの使用のためにコンパイルされるべきである。全ての配列比較パラメータは、ＡＬＩＧＮ−２プログラムによって設定されており、変動しない。
【００７１】
ＡＬＩＧＮ−２がアミノ酸配列比較に用いられる状況下で、所与のアミノ酸配列Ｂへの、それとの、またはそれに対する所与のアミノ酸配列Ａのアミノ酸配列同一性％（代替的に、所与のアミノ酸配列Ｂへの、それとの、またはそれに対するある特定のアミノ酸配列同一性％を有するか、または含む所与のアミノ酸配列Ａと表現され得る）は、以下のように計算される。
１００×画分Ｘ／Ｙ
式中、Ｘは、配列アライメントプログラムＡＬＩＧＮ−２によって、そのプログラムのＡ及びＢのアライメントにおいて完全な一致としてスコア化されたアミノ酸残基の数であり、Ｙは、Ｂ中のアミノ酸残基の総数である。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さと等しくない場合、Ｂに対するＡのアミノ酸配列同一性％は、Ａに対するＢのアミノ酸配列同一性％と等しくはならないことが理解されるだろう。別途具体的に記されない限り、本明細書で使用される全てのアミノ酸配列同一性％値は、直前の段落に記載されるようにＡＬＩＧＮ−２コンピュータプログラムを使用して得られる。
【００７２】
「薬学的製剤」という用語は、調製物の中に含有される活性成分の生物学的活性が有効になるような形態であり、かつ製剤が投与される対象にとって許容できないほど有毒である追加の構成成分を何ら含有しない調製物を指す。
【００７３】
「薬学的に許容される担体」とは、対象にとって無毒である、活性成分以外の薬学的製剤中の成分を指す。薬学的に許容される担体には、緩衝剤、賦形剤、安定剤、または防腐剤が含まれるが、これらに限定されない。
【００７４】
本明細書で使用されるとき、「治療」（及び「治療する」または「治療すること」等のその文法上の変形）とは、治療されている個体の自然経過を変更することを目的とした臨床介入を指し、予防のために、または臨床病理過程中のいずれかに実施され得る。治療の望ましい作用には、疾患の発生または再発の予防、症状の緩和、疾患の任意の直接的または間接的病理学的帰結の縮小、転移の予防、疾患進行速度の減少、病状の回復または寛解、及び緩解または予後の改善を含むが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、本発明の抗体を使用して、疾患の発症を遅延させるか、または疾患の進行を遅らせる。
【００７５】
本明細書で使用されるとき、障害または疾患の「進行を遅延させること」とは、疾患または障害（例えば、細胞増殖性障害、例えば、癌）の発症を延期する、妨げる、遅らせる、遅滞させる、安定化させる、及び／または延滞させることを意味する。この遅延は、治療されている病歴及び／または個体に応じて異なる期間であり得る。当業者に明らかであるように、十分なまたは著しい遅延は、個体が疾患を発症しないという点で、予防を事実上包含し得る。例えば、転移の発症などの末期癌を遅延させることができる。
【００７６】
「低減する」または「阻害する」とは、例えば、２０％以上の、５０％以上の、または７５％、８５％、９０％、９５％、もしくはそれ以上の全体的な減少を生じる能力を意味する。ある特定の実施形態では、減少する、または阻害するとは、抗体Ｆｃ領域によって媒介される抗体のエフェクター機能を指すことができ、かかるエフェクター機能は、具体的に補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、及び抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）を含む。
【００７７】
「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は、抗体の抗原への結合に関与する抗体の重鎖または軽鎖のドメインを指す。天然抗体の重鎖及び軽鎖（それぞれ、ＶＨ及びＶＬ）の可変ドメインは、一般に、各ドメインが４つの保存フレームワーク領域（ＦＲ）及び３つの超可変領域（ＨＶＲ）を含む類似の構造を有する。（例えば、Ｋｉｎｄｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｋｕｂｙ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６ｔｈｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏ．，ｐａｇｅ９１（２００７）を参照されたい。）単一のＶＨドメインまたはＶＬドメインは、抗原結合特異性を付与するのに十分であり得る。さらに、特定の抗原に結合する抗体は、抗原と結合する抗体のＶＨドメインまたはＶＬドメインを使用して単離されて、それぞれ、相補的ＶＬドメインまたはＶＨドメインのライブラリをスクリーニングすることができる。例えば、Ｐｏｒｔｏｌａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：８８０−８８７（１９９３）、Ｃｌａｒｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３５２：６２４−６２８（１９９１）を参照されたい。
【００７８】
本明細書で使用される「ベクター」という用語は、それが結合している別の核酸を増殖させることができる核酸分子を指す。この用語は、自己複製核酸構造としてのベクター、及び中に導入される宿主細胞のゲノム内に組み込まれたベクターを含む。ある特定のベクターは、それらが作動可能に結合される核酸の発現を指向することができる。かかるベクターは、本明細書で「発現ベクター」と称される。
【００７９】
本明細書で使用されるとき、「投与する」とは、ある投薬量の化合物（例えば、本発明の抗ＨＥＲ２抗体もしくは本発明の抗ＨＥＲ２抗体をコードする核酸）または組成物（例えば、薬学的組成物、例えば、本発明の抗ＨＥＲ２抗体を含む薬学的組成物）を対象に与える方法を意味する。本明細書に記載される方法に用いられる組成物は、例えば、筋肉内、静脈内、皮内、経皮、動脈内、腹腔内、病巣内、頭蓋内、関節内、前立腺内（ｉｎｔｒａｐｒｏｓｔａｔｉｃａｌｌｙ）、胸膜内、気管内、鼻腔内、硝子体内、膣内、直腸内、局所、腫瘍内、腹膜内、皮下、結膜下、小胞内、経粘膜、心膜内、臍帯内、眼球内、経口、局所、局在、吸入により、注射により、注入により、持続注入により、標的細胞に直接的に流す局在灌流により、カテーテルにより、洗浄により、クリームで、または脂質組成物で投与することができる。投与方法は、種々の要因（例えば、投与される化合物または組成物、及び治療される状態、疾患、または障害の重症度）に応じて異なり得る。
【００８０】
ＩＩ．組成物及び方法
本発明は、ヒト化抗ＨＥＲ２抗体ｈｕ４Ｄ５の変異型に関する。ある特定の実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、ＨＥＲ２結合ドメイン及びＣＤ３結合ドメインを含む二重特異性抗体である。かかる二重特異性抗体は、Ｔ細胞依存性二重特異性（ＴＤＢ）抗体（本明細書でＨＥＲ２  ＴＤＢとも称される）と称される。
【００８１】
本発明の抗ＨＥＲ２抗体は、例えば、ＨＥＲ２を発現する癌及びＨＥＲ２陽性癌を含む、癌の診断または治療に有用である。いくつかの実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、ｈｕ４Ｄ５と比較して、改善された安定性を有する。いくつかの事例では、改善された安定性は、ｈｕ４Ｄ５のＨＶＲ領域に存在する特定の残基の脱アミド化または異性化の減少に関する。Ｎ３０、Ｔ３１、Ｎ５４、Ｇ５５、Ｄ９８、及び／またはＧ９９の位置のアミノ酸の置換により生成されたある特定の抗ＨＥＲ２抗体は、脱アミド化または異性化の低減に関連した、増加した安定性を呈した。これらの抗ＨＥＲ２抗体のいくつかは、意外にも、ＨＥＲ２標的に関して増加した親和性も呈した。
【００８２】
Ａ．Ｈｕ４Ｄ５変異型
一態様では、本発明は、配列番号１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）とを含む抗ＨＥＲ２抗体を提供し、この軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインは、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに従って番号付けされた、Ｎ３０（ＶＬ）及びＴ３１（ＶＬ）（両方とも配列番号１）、ならびにＮ５４（ＶＨ）、Ｇ５５（ＶＨ）、Ｄ９８（ＶＨ）、及びＧ９９（ＶＨ）（全て配列番号２）からなる群から選択される１つ以上の位置にアミノ酸置換を含む。
【００８３】
一態様では、本発明は、配列番号１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む抗ＨＥＲ２抗体を提供し、この軽鎖可変ドメインは、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに従って番号付けされたＮ３０（ＶＬ）及びＴ３１（ＶＬ）からなる群から選択される１つまたは両方の位置にアミノ酸置換を含む。
【００８４】
一実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、この軽鎖可変ドメインは、Ｎ３０（ＶＬ）Ｓ、Ｎ３０（ＶＬ）Ｄ、Ｎ３０（ＶＬ）Ｅ、Ｎ３０（ＶＬ）Ｔ、Ｎ３０（ＶＬ）Ｑ、Ｎ３０（ＶＬ）Ｎ、Ｎ３０（ＶＬ）Ｈ、Ｎ３０（ＶＬ）Ｋ、Ｎ３０（ＶＬ）Ｒ、Ｔ３１（ＶＬ）Ｄ、Ｔ３１（ＶＬ）Ｖ、及びＴ３１（ＶＬ）Ｓからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸置換を含む。
【００８５】
一実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、この軽鎖可変ドメインは、Ｎ３０（ＶＬ）にアミノ酸置換を含む。一実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、この軽鎖可変ドメインは、アミノ酸置換Ｎ３０（ＶＬ）Ｓを含む。一実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、この軽鎖可変ドメインは、アミノ酸置換Ｎ３０（ＶＬ）Ｄを含む。一実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、この軽鎖可変ドメインは、アミノ酸置換Ｎ３０（ＶＬ）Ｅを含む。一実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、この軽鎖可変ドメインは、アミノ酸置換Ｎ３０（ＶＬ）Ｔを含む。一実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、この軽鎖可変ドメインは、アミノ酸置換Ｎ３０（ＶＬ）Ｑを含む。
【００８６】
一実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、この軽鎖可変ドメインは、Ｎ３１（ＶＬ）にアミノ酸置換を含む。一実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、この軽鎖可変ドメインは、アミノ酸置換Ｔ３１（ＶＬ）Ｄを含む。
【００８７】
一態様では、本発明は、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む抗ＨＥＲ２抗体を提供し、この重鎖可変ドメインは、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに従って番号付けされたＮ５４（ＶＨ）及びＧ５５（ＶＨ）からなる群から選択される位置のうちの１つまたは両方にアミノ酸置換を含む。
【００８８】
一実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含み、この重鎖可変ドメインは、Ｎ５４（ＶＨ）Ｅ、Ｎ５４（ＶＨ）Ａ、Ｎ５４（ＶＨ）Ｓ、Ｎ５４（ＶＨ）Ｑ、Ｎ５４（ＶＨ）Ｈ、Ｎ５４（ＶＨ）Ｄ、Ｎ５４（ＶＨ）Ｋ、Ｎ５４（ＶＨ）Ｒ、及びＧ５５（ＶＨ）Ａからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸置換を含む。
【００８９】
一実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含み、この重鎖可変ドメインは、Ｎ５４（ＶＨ）にアミノ酸置換を含む。一実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含み、この重鎖可変ドメインは、アミノ酸置換Ｎ５４（ＶＨ）Ｅを含む。一実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含み、この重鎖可変ドメインは、アミノ酸置換Ｎ５４（ＶＨ）Ａを含む。一実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含み、この重鎖可変ドメインは、アミノ酸置換Ｎ５４（ＶＨ）Ｓを含む。
【００９０】
一実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含み、この重鎖可変ドメインは、Ｇ５５（ＶＨ）にアミノ酸置換を含む。一実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含み、この重鎖可変ドメインは、アミノ酸置換Ｇ５５（ＶＨ）Ａを含む。
【００９１】
一態様では、本発明は、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む抗ＨＥＲ２抗体に関し、この重鎖可変ドメインは、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに従って番号付けされたＤ９８（ＶＨ）及びＧ９９（ＶＨ）からなる群から選択される位置のうちの１つまたは両方にアミノ酸置換を含む。
【００９２】
一実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含み、この重鎖可変ドメインは、Ｄ９８（ＶＨ）Ｔ、Ｄ９８ＶＨ）Ｅ、Ｄ９８（ＶＨ）Ｎ、Ｄ９８（ＶＨ）Ｓ、Ｇ９９（ＶＨ）Ｓ、Ｇ９９（ＶＨ）Ａ、及びＧ９９（ＶＨ）Ｔからなる群から選択されるアミノ酸置換を含む。
【００９３】
一実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含み、この重鎖可変ドメインは、Ｄ９８（ＶＨ）にアミノ酸置換を含む。一実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含み、この重鎖可変ドメインは、アミノ酸置換Ｄ９８（ＶＨ）Ｔを含む。一実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含み、この重鎖可変ドメインは、アミノ酸置換Ｄ９８（ＶＨ）Ｅを含む。一実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含み、この重鎖可変ドメインは、アミノ酸置換Ｄ９８（ＶＨ）Ｓを含む。
【００９４】
一実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含み、この重鎖可変ドメインは、Ｇ９９（ＶＨ）にアミノ酸置換を含む。一実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含み、この重鎖可変ドメインは、アミノ酸置換Ｇ９９（ＶＨ）Ｓを含む。一実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含み、この重鎖可変ドメインは、アミノ酸置換Ｇ９９（ＶＨ）Ｔを含む。
【００９５】
一態様では、本発明は、配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）とを含む抗ＨＥＲ２抗体に関する。
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＸ１Ｘ２ＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＴＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号３）
配列中、Ｘ１は、Ｎ、Ｄ、Ｓ、Ｔ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、またはＱであり、Ｘ２は、Ｔ、Ｖ、Ｓ、またはＤである。
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＸ３Ｘ４ＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＸ５Ｘ６ＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号４）
配列中、Ｘ３は、Ｎ、Ｅ、Ａ、Ｑ、Ｈ、Ｄ、Ｋ、Ｒ、またはＳであり、Ｘ４は、ＧまたはＡであり、Ｘ５は、Ｄ、Ｅ、Ｓ、Ｎ、またはＴであり、Ｘ６は、Ｇ、Ｓ、Ａ、またはＴである。
【００９６】
一態様では、本発明は、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含み、配列番号５のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む、抗ＨＥＲ２抗体に関する。
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＮＸ７ＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号５）
配列中、Ｘ７はＧ以外のアミノ酸である。一実施形態では、Ｘ７はＡである。
【００９７】
一態様では、本発明は、配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、配列番号５のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）とを含む抗ＨＥＲ２抗体に関する。
【００９８】
一態様では、本発明は、配列番号１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、配列番号５のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）とを含む抗ＨＥＲ２抗体に関する。
【００９９】
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含むＨＥＲ２結合ドメインを含む、抗ＨＥＲ２抗体を提供する。
【０１００】
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ  ＨＶＲ配列を含むＨＥＲ２結合ドメインを含む、抗ＨＥＲ２抗体を提供する。さらなる実施形態では、ＨＥＲ２結合ドメインは、（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０１０１】
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ  ＨＶＲ配列を含むＨＥＲ２結合ドメインを含む、抗ＨＥＲ２抗体を提供する。さらなる実施形態では、ＨＥＲ２結合ドメインは、（ａ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１０２】
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＨＥＲ２結合ドメインを含む、抗ＨＥＲ２抗体を提供する。
【０１０３】
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含むＨＥＲ２結合ドメインを含む、抗ＨＥＲ２抗体を提供する。
【０１０４】
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ  ＨＶＲ配列を含むＨＥＲ２結合ドメインを含む、抗ＨＥＲ２抗体を提供する。さらなる実施形態では、ＨＥＲ２結合ドメインは、（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０１０５】
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、（ｃ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ  ＨＶＲ配列を含むＨＥＲ２結合ドメインを含む、抗ＨＥＲ２抗体を提供する。さらなる実施形態では、ＨＥＲ２結合ドメインは、（ａ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１０６】
一態様では、本発明は、ＨＥＲ２結合ドメイン：（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、抗ＨＥＲ２抗体を提供する。
【０１０７】
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５８アミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含むＨＥＲ２結合ドメインを含む、抗ＨＥＲ２抗体を提供する。
【０１０８】
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ  ＨＶＲ配列を含むＨＥＲ２結合ドメインを含む、抗ＨＥＲ２抗体を提供する。さらなる実施形態では、ＨＥＲ２結合ドメインは、配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。さらなる実施形態では、ＨＥＲ２結合ドメインは、（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０１０９】
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＨＥＲ２結合ドメインを含む、抗ＨＥＲ２抗体を提供する。
【０１１０】
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含むＨＥＲ２結合ドメインを含む、抗ＨＥＲ２抗体を提供する。
【０１１１】
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ  ＨＶＲ配列を含むＨＥＲ２結合ドメインを含む、抗ＨＥＲ２抗体を提供する。さらなる実施形態では、ＨＥＲ２結合ドメインは、（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０１１２】
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＨＥＲ２結合ドメインを含む、抗ＨＥＲ２抗体を提供する。
【０１１３】
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含むＨＥＲ２結合ドメインを含む、抗ＨＥＲ２抗体を提供する。
【０１１４】
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ  ＨＶＲ配列を含むＨＥＲ２結合ドメインを含む、抗ＨＥＲ２抗体を提供する。さらなる実施形態では、ＨＥＲ２結合ドメインは、（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０１１５】
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、（ｃ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ  ＨＶＲ配列を含むＨＥＲ２結合ドメインを含む、抗ＨＥＲ２抗体を提供する。さらなる実施形態では、ＨＥＲ２結合ドメインは、（ａ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１１６】
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＨＥＲ２結合ドメインを含む、抗ＨＥＲ２抗体を提供する。
【０１１７】
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含むＨＥＲ２結合ドメインを含む、抗ＨＥＲ２抗体を提供する。
【０１１８】
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ  ＨＶＲ配列を含むＨＥＲ２結合ドメインを含む、抗ＨＥＲ２抗体を提供する。さらなる実施形態では、ＨＥＲ２結合ドメインは、（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０１１９】
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＨＥＲ２結合ドメインを含む、抗ＨＥＲ２抗体を提供する。
【０１２０】
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含むＨＥＲ２結合ドメインを含む、抗ＨＥＲ２抗体を提供する。
【０１２１】
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ  ＨＶＲ配列を含むＨＥＲ２結合ドメインを含む、抗ＨＥＲ２抗体を提供する。さらなる実施形態では、ＨＥＲ２結合ドメインは、（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０１２２】
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＨＥＲ２結合ドメインを含む、抗ＨＥＲ２抗体を提供する。
【０１２３】
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含むＨＥＲ２結合ドメインを含む、抗ＨＥＲ２抗体を提供する。
【０１２４】
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ  ＨＶＲ配列を含むＨＥＲ２結合ドメインを含む、抗ＨＥＲ２抗体を提供する。さらなる実施形態では、ＨＥＲ２結合ドメインは、（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０１２５】
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＨＥＲ２結合ドメインを含む、抗ＨＥＲ２抗体を提供する。
【０１２６】
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含むＨＥＲ２結合ドメインを含む、抗ＨＥＲ２抗体を提供する。
【０１２７】
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ  ＨＶＲ配列を含むＨＥＲ２結合ドメインを含む、抗ＨＥＲ２抗体を提供する。さらなる実施形態では、ＨＥＲ２結合ドメインは、（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０１２８】
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＨＥＲ２結合ドメインを含む、抗ＨＥＲ２抗体を提供する。
【０１２９】
上記実施形態のいずれかにおいて、ＨＥＲ２結合ドメインを含む抗ＨＥＲ２抗体はヒト化されている。一実施形態では、ＨＥＲ２結合ドメインを含む抗ＨＥＲ２抗体は、上記実施形態のいずれかにあるように、ＨＶＲを含み、ヒトアクセプターフレームワーク、例えば、ヒト免役グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。ある特定の実施形態では、ヒトアクセプターフレームワークは、ヒトＶＬカッパＩコンセンサス（ＶＬＫＩ）フレームワーク及び／またはＶＨフレームワークＶＨ１である。
【０１３０】
一態様では、本発明は、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）とを含む抗ＨＥＲ２抗体に関する。
【０１３１】
一態様では、本発明は、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）とを含む抗ＨＥＲ２抗体に関する。
【０１３２】
一態様では、本発明は、配列番号１０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）とを含む抗ＨＥＲ２抗体に関する。
【０１３３】
一態様では、本発明は、配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）とを含む抗ＨＥＲ２抗体に関する。
【０１３４】
一態様では、本発明は、配列番号１４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、配列番号１５のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）とを含む抗ＨＥＲ２抗体に関する。
【０１３５】
一態様では、本発明は、配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）とを含む抗ＨＥＲ２抗体に関する。
【０１３６】
一態様では、本発明は、配列番号１８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）とを含む抗ＨＥＲ２抗体に関する。
【０１３７】
一態様では、本発明は、配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、配列番号２１のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）とを含む抗ＨＥＲ２抗体に関する。
【０１３８】
一態様では、本発明は、配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、配列番号２３のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）とを含む抗ＨＥＲ２抗体に関する。
【０１３９】
別の態様では、ＨＥＲ２結合ドメインを含む抗ＨＥＲ２抗体が提供され、この抗体は、上述の実施形態のいずれかにあるようなＶＨ、及び上述の実施形態のいずれかにあるようなＶＬを含み、これらの配列の翻訳後修飾を含む。
【０１４０】
本発明のさらなる態様では、上記実施形態のいずれかによるＨＥＲ２結合ドメインを含む抗ＨＥＲ２抗体は、ヒト抗体を含むモノクローナル抗体である。一実施形態では、ＨＥＲ２結合ドメインを含む抗ＨＥＲ２抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、またはＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施形態では、本抗体は、実質的に完全長の抗体、例えば、本明細書に定義されるＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２ａ抗体、または他の抗体クラスもしくはアイソタイプである。
【０１４１】
図１、３、及び４に示されるｈｕ４Ｄ５と比較してアミノ酸置換を有するＨＶＲを含む軽鎖可変ドメインを含むＨＥＲ２結合ドメインを含む、抗ＨＥＲ２抗体が本明細書において提供される。
【０１４２】
ＨＥＲ２  ＴＤＢ
上記態様のいずれか１つにおいて、本明細書に提供される抗ＨＥＲ２抗体は、Ｔ細胞依存性二重特異性（ＴＤＢ）抗体であり、結合特異性のうちの一方はＨＥＲ２に対してであり、もう一方はＣＤ３（例えば、ＣＤ３εまたはＣＤ３γ）に対してである。
【０１４３】
いくつかの実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体のＣＤ３結合ドメインは、ヒトＣＤ３ポリペプチドまたはカニクイザル（ｃｙｎｏ）ＣＤ３ポリペプチドに結合する。いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ３ポリペプチドまたはｃｙｎｏＣＤ３ポリペプチドは、それぞれ、ヒトＣＤ３εポリペプチドまたはｃｙｎｏＣＤ３εポリペプチドである。いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ３ポリペプチドまたはｃｙｎｏＣＤ３ポリペプチドは、それぞれ、ヒトＣＤ３γポリペプチドまたはｃｙｎｏＣＤ３γポリペプチドである。ある特定の実施形態では、ヒトＣＤ３εのアミノ酸１〜２６または１〜２７からなるＣＤ３（例えば、ヒトＣＤ３ε）の断片内のエピトープに結合するＣＤ３結合ドメインを含む、抗ＨＥＲ２抗体が提供される。いくつかの実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、二重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、二重特異性ＩｇＧ抗体である。
【０１４４】
いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、２５０ｎＭ以下のＫｄでヒトＣＤ３εポリペプチドと結合する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、１００ｎＭ以下のＫｄでヒトＣＤ３εポリペプチドと結合する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、１５ｎＭ以下のＫｄでヒトＣＤ３εポリペプチドと結合する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、１０ｎＭ以下のＫｄでヒトＣＤ３εポリペプチドと結合する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、５ｎＭ以下のＫｄでヒトＣＤ３εポリペプチドと結合する。いくつかの実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体のＣＤ３結合アームは、５０ｎＭ未満及び１ｎＭ超の親和性でヒトＣＤ３と結合する。いくつかの実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体のＣＤ３結合アームは、１ｎＭ未満及び０．１ｎＭ超の親和性でヒトＣＤ３と結合する。いくつかの実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体のＣＤ３結合アームは、０．１ｎＭ未満及び０．０１ｎＭ超の親和性でヒトＣＤ３と結合する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合アームの親和性は、Ｂｉａｃｏｒｅにより決定される。いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ３は、ｈＣＤ３εγである。いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ３は、ｈＣＤ３ε１〜２７Ｆｃである。
【０１４５】
いくつかの実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体のＣＤ３結合ドメインは、３．５オングストローム、３．２５オングストローム、３．００オングストローム、２．７５オングストローム以下の距離でヒトＣＤ３εのアミノ酸と結合または接触する。ある特定の実施形態では、３．５オングストローム、３．２５オングストローム、３．００オングストローム、２．７５オングストローム以下の距離でヒトＣＤ３εの１つ、２つ、３つ、４つ、または５つのアミノ酸からなるエピトープに結合するＣＤ３結合ドメインが提供される。一実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体のＣＤ３結合ドメインは、３．５オングストローム以下の距離でヒトＣＤ３εのアミノ酸と独特に接触する。ある特定の実施形態では、３．５オングストローム以下の距離でヒトＣＤ３εの１つ、２つ、３つ、４つ、または５つのアミノ酸からなるエピトープに結合するＣＤ３結合ドメインが提供される。例えば、ある特定の実施形態では、Ｇｌｎ１、Ａｓｐ２、Ａｓｎ４、Ｇｌｕ６、及びＭｅｔ７から選択されるヒトＣＤ３εのアミノ酸からなるエピトープに結合するＣＤ３結合ドメインが提供される。特定の一実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、具体的にＧｌｕ６を含むエピトープに結合する。ある特定の他の実施形態では、ヒトＣＤ３εアミノ酸Ｇｌｕ５を含むエピトープに結合しないＣＤ３結合ドメインが提供される。ある特定の他の実施形態では、ヒトＣＤ３εアミノ酸Ｇｌｙ３及びＧｌｕ５を含むエピトープに結合しないＣＤ３結合ドメインが提供される。
【０１４６】
ＣＤ３エピトープは、エピトープのペプチド断片に結合するＣＤ３結合ドメインによって決定され得る。代替的に、ＣＤ３エピトープは、アラニンスキャニング変異誘発により決定され得る。一実施形態では、ＣＤ３結合ドメインの突然変異したＣＤ３への結合における２０％、３０％、５０％、８０％以上の低減は、アラニンスキャニング変異誘発アッセイにおいて突然変異されたＣＤ３の残基がそのＣＤ３結合ドメインのエピトープ残基であることを示す。代替的に、ＣＤ３エピトープは、質量分析によって決定され得る。いくつかの実施形態では、エピトープは、結晶解析（例えば、結晶解析法）によって決定される。
【０１４７】
いくつかの実施形態では、結晶解析により決定されるＣＤ３エピトープは、ＣＤ３のアミノ酸Ｑ１〜Ｍ７を使用して決定される。いくつかの実施形態では、結晶解析により決定されるＣＤ３エピトープは、ＣＤ３のアミノ酸ＱＤＧＮＥＥＭＧＧＩＴＱＴＰＹＫ（配列番号８９）を使用して決定される。
【０１４８】
いくつかの実施形態では、結晶解析により決定されるＣＤ３エピトープは、１０ｍｇ／ｍｌで０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、２５ｍＭトリス、ｐＨ７．５に溶解した抗ＣＤ３抗体Ｆａｂを、２倍のモル過剰（１ｍｇ）のＣＤ３εペプチドと混合し、シッティングドロップ蒸気拡散形式で沈殿物の疎行列を最初にスクリーニングすることにより行うことができる。最適化した結晶は、７０％ｖ／ｖメチル−ペンタンジオール及び０．１Ｍ  ＨＥＰＥＳ緩衝剤、ｐＨ７．５を含有するリザーバ溶液との１：１混合物から成長させることができる。リザーバは、凍結保護剤として使用されてもよい。結晶は、液体窒素への急激な浸漬により、極低温度に移されてもよい。
【０１４９】
結晶の回折データは、ＭＡＲ３００  ＣＣＤ検出器を使用して、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｐｈｏｔｏｎ  Ｓｏｕｒｃｅビームライン２２ＩＤで収集することができる。記録した回折を統合し、プログラムＨＫＬ２０００を使用してスケーリングすることができる。
【０１５０】
構造は、プログラムＰｈａｓｅｒを使用して分子置換（ＭＲ）方法によって一致させて（ｐｈａｓｅｄ）もよい。例えば、ＭＲサーチモデルは、ＨＧＦＡ／Ｆａｂ複合体（ＰＤＢコード：２Ｒ０Ｌ）の結晶構造に由来するＦａｂサブユニットである。ＣＤ３εペプチドは、Ｆｏ−Ｆｃマップに基づいて構造に組み込まれる。構造は、その後、最大尤度標的関数、異方性の個別Ｂ因子精密化方法、及びＴＬＳ精密化方法を使用して、収束を達成するために、プログラムＲＥＦＭＡＣ５及びＰＨＥＮＩＸで精密化することができる。
【０１５１】
一実施形態では、抗ＨＥＲ２  ＴＤＢのＣＤ３結合ドメインは、超可変領域（ＨＶＲ）である（ａ）配列番号８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１５２】
一実施形態では、抗ＨＥＲ２  ＴＤＢのＣＤ３結合ドメインは、（ａ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１５３】
一実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、配列番号７７もしくはその配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、配列番号７８もしくはその配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインとを含む。一実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、配列番号７７のアミノ酸配列を含むＶＨドメインと、配列番号７８のアミノ酸配列を含むＶＬドメインとを含む。特定の事例では、ＣＤ３結合ドメインは、４０Ｇ５ｃ、またはその誘導体もしくはクローン類縁体であり得る。
【０１５４】
一実施形態では、抗ＨＥＲ２  ＴＤＢのＣＤ３結合ドメインは、超可変領域（ＨＶＲ）である（ａ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号７５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１５５】
一実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、配列番号７９もしくはその配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、配列番号８０もしくはその配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインとを含む。一実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、配列番号７９のアミノ酸配列を含むＶＨドメインと、配列番号８０のアミノ酸配列を含むＶＬドメインとを含む。特定の事例では、ＣＤ３結合ドメインは、３８Ｅ４ｖ１、またはその誘導体またはクローン類縁体であり得る。
【０１５６】
一実施形態では、抗ＨＥＲ２  ＴＤＢのＣＤ３結合ドメインは、超可変領域（ＨＶＲ）である（ａ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号７５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１５７】
一実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、配列番号７９もしくはその配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、配列番号８１もしくはその配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインとを含む。一実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、配列番号７９のアミノ酸配列を含むＶＨドメインと、配列番号８１のアミノ酸配列を含むＶＬドメインとを含む。特定の事例では、ＣＤ３結合ドメインは、３８Ｅ４ｖ１１、またはその誘導体もしくはクローン類縁体であり得る。
【０１５８】
一態様では、抗ＨＥＲ２  ＴＤＢは、（ｉ）（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、及び（ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含むＨＥＲ２結合ドメインであって、この軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインが、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに従って番号付けされた、Ｎ３０（ＶＬ）及びＴ３１（ＶＬ）（両方とも配列番号１）、ならびにＮ５４（ＶＨ）、Ｇ５５（ＶＨ）、Ｄ９８（ＶＨ）、及びＧ９９（ＶＨ）（全て配列番号２）からなる群から選択される１つ以上の位置にアミノ酸置換を含む、ＨＥＲ２結合ドメインと、（ｉｉ）（ｃ）配列番号７７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）及び（ｄ）配列番号７８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む、ＣＤ３結合ドメインとを含む。
【０１５９】
一態様では、抗ＨＥＲ２  ＴＤＢは、（ｉ）（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）及び（ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含むＨＥＲ２結合ドメインであって、この軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインが、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに従って番号付けされた、Ｎ３０（ＶＬ）及びＴ３１（ＶＬ）（両方とも配列番号１）、ならびにＮ５４（ＶＨ）、Ｇ５５（ＶＨ）、Ｄ９８（ＶＨ）、及びＧ９９（ＶＨ）（全て配列番号２）からなる群から選択される１つ以上の位置にアミノ酸置換を含む、ＨＥＲ２結合ドメインと、（ｉｉ）（ｃ）配列番号７９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）及び（ｄ）配列番号８０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む、ＣＤ３結合ドメインとを含む。
【０１６０】
一実施形態では、抗ＨＥＲ２  ＴＤＢは、（ｉ）（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）及び（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む、ＨＥＲ２結合ドメインと、（ｉｉ）（ｃ）配列番号７７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）及び（ｄ）配列番号７８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む、ＣＤ３結合ドメインとを含む。
【０１６１】
一実施形態では、抗ＨＥＲ２  ＴＤＢは、（ｉ）（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）及び（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む、ＨＥＲ２結合ドメインと、（ｉｉ）（ｃ）配列番号７９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）及び（ｄ）配列番号８０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む、ＣＤ３結合ドメインとを含む。
【０１６２】
一実施形態では、抗ＨＥＲ２  ＴＤＢは、（ｉ）（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）及び（ｂ）配列番号５のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む、ＨＥＲ２結合ドメインと、（ｉｉ）（ｃ）配列番号７７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）及び（ｄ）配列番号７８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む、ＣＤ３結合ドメインとを含む。
【０１６３】
一実施形態では、抗ＨＥＲ２  ＴＤＢは、（ｉ）（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）及び（ｂ）配列番号５のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む、ＨＥＲ２結合ドメインと、（ｉｉ）（ｃ）配列番号７９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）及び（ｄ）配列番号８０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む、ＣＤ３結合ドメインとを含む。
【０１６４】
一実施形態では、抗ＨＥＲ２  ＴＤＢは、（ｉ）（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＨＥＲ２結合ドメインと、（ｉｉ）（ａ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＣＤ３結合ドメインとを含む。いくつかの実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、配列番号７の配列を含む重鎖可変領域と、配列番号６の配列を含む軽鎖可変領域とを含む、ＨＥＲ２結合ドメインを含む。
【０１６５】
一実施形態では、抗ＨＥＲ２  ＴＤＢは、（ｉ）（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＨＥＲ２結合ドメインと、（ｉｉ）（ａ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＣＤ３結合ドメインとを含む。いくつかの実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、配列番号９の配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８の配列を含む軽鎖可変領域とを含む、ＨＥＲ２結合ドメインを含む。
【０１６６】
一実施形態では、抗ＨＥＲ２  ＴＤＢは、（ｉ）（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＨＥＲ２結合ドメインと、（ｉｉ）（ａ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＣＤ３結合ドメインとを含む。いくつかの実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、配列番号１１の配列を含む重鎖可変領域と、配列番号１０の配列を含む軽鎖可変領域とを含む、ＨＥＲ２結合ドメインを含む。
【０１６７】
一実施形態では、抗ＨＥＲ２  ＴＤＢは、（ｉ）（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＨＥＲ２結合ドメインと、（ｉｉ）（ａ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＣＤ３結合ドメインとを含む。いくつかの実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、配列番号１３の配列を含む重鎖可変領域と、配列番号１２の配列を含む軽鎖可変領域とを含む、ＨＥＲ２結合ドメインを含む。
【０１６８】
一実施形態では、抗ＨＥＲ２  ＴＤＢは、（ｉ）（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＨＥＲ２結合ドメインと、（ｉｉ）（ａ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＣＤ３結合ドメインとを含む。
【０１６９】
一実施形態では、抗ＨＥＲ２  ＴＤＢは、（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、ならびに（ｉｉ）（ａ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＣＤ３結合ドメインを含む。
【０１７０】
一実施形態では、抗ＨＥＲ２  ＴＤＢは、（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、ならびに（ｉｉ）（ａ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＣＤ３結合ドメインを含む。
【０１７１】
一実施形態では、抗ＨＥＲ２  ＴＤＢは、（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、ならびに（ｉｉ）（ａ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＣＤ３結合ドメインを含む。
【０１７２】
一実施形態では、抗ＨＥＲ２  ＴＤＢは、（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、ならびに（ｉｉ）（ａ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＣＤ３結合ドメインを含む。
【０１７３】
さらなる態様では、上記実施形態のいずれかによる抗ＨＥＲ２抗体は、下の１〜７節に記載される特長のいずれかを、単独でまたは組み合わせで組み込み得る。
【０１７４】
１．抗体親和性
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、１μＭ以下、１００ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、１ｎＭ以下、０．１ｎＭ以下、０．０１ｎＭ以下、または０．００１ｎＭ以下（例えば、１０−８Ｍ以下、例えば、１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。
【０１７５】
一実施形態では、Ｋｄは、放射標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）によって測定される。一実施形態では、ＲＩＡは、Ｆａｂバージョンの目的の抗体及びその抗原を用いて実施される。例えば、抗原に対するＦａｂの溶液結合親和性は、非標識抗原の一連の滴定の存在下で、Ｆａｂを最小濃度の（１２５Ｉ）標識抗原と平衡化し、次いで抗Ｆａｂ抗体でコーティングされたプレートと結合した抗原を捕捉することによって、測定される（例えば、Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５−８８１（１９９９）を参照されたい）。アッセイの条件を確立するために、ＭＩＣＲＯＴＩＴＥＲ（登録商標）マルチウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を、５０ｍＭの炭酸ナトリウム（ｐＨ９．６）中５μｇ／ｍｌの捕捉抗Ｆａｂ抗体（Ｃａｐｐｅｌ  Ｌａｂｓ）で一晩コーティングし、その後、ＰＢＳ中２％（ｗ／ｖ）ウシ血清アルブミンで２〜５時間にわたって室温（約２３℃）で遮断する。非吸着性のプレート（Ｎｕｎｃ番号２６９６２０）中で、１００ｐＭまたは２６ｐＭ［１２５Ｉ］−抗原を、目的のＦａｂの段階希釈液と混合する（例えば、Ｐｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５７：４５９３−４５９９（１９９７）における抗ＶＥＧＦ抗体Ｆａｂ−１２の評価と一貫する）。その後、目的のＦａｂを一晩インキュベートするが、インキュベーションをより長い期間（例えば、約６５時間）続けて、平衡に達することを確実にすることができる。その後、室温でのインキュベーション（例えば、１時間）のために混合物を捕捉プレートに移す。その後、溶液を除去し、プレートをＰＢＳ中０．１％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（登録商標））で８回洗浄する。プレートが乾燥したら、１５０μｌ／ウェルのシンチラント（ｓｃｉｎｔｉｌｌａｎｔ）（ＭＩＣＲＯＳＣＩＮＴ−２０（商標）；Ｐａｃｋａｒｄ）を添加し、プレートをＴＯＰＣＯＵＮＴ（商標）ガンマ計数器（Ｐａｃｋａｒｄ）上で１０分間、計数する。最大結合の２０％以下をもたらす各Ｆａｂの濃度を競合結合アッセイでの使用に選択する。
【０１７６】
別の実施形態によると、Ｋｄは、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）表面プラズモン共鳴アッセイを使用して測定される。例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−２０００またはＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を使用するアッセイは、約１０の応答単位（ＲＵ）で固定化抗原ＣＭ５チップを用いて２５℃で実施される。一実施形態では、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサチップ（ＣＭ５、ＢＩＡＣＯＲＥ，Ｉｎｃ．）は、供給者の指示書に従って、Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）を用いて活性化される。抗原を１０ｍＭの酢酸ナトリウム（ｐＨ４．８）で５μｇ／ｍｌ（約０．２μＭ）になるまで希釈した後に、５μｌ／分の流量で注入して、およそ１０応答単位（ＲＵ）のカップリングしたタンパク質を得る。抗原の注入後、１Ｍのエタノールアミンを注入して、未反応基を遮断する。反応速度測定のために、Ｆａｂの２倍連続希釈液（０．７８ｎＭ〜５００ｎＭ）を、２５℃の０．０５％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（商標））界面活性剤（ＰＢＳＴ）を有するＰＢＳ中におよそ２５μｌ／分の流量で注入する。会合速度（ｋｏｎ）及び解離速度（ｋｏｆｆ）は、単純な１対１のラングミュア結合モデル（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  Ｓｏｆｔｗａｒｅバージョン３．２）を使用して、会合センサグラムと解離センサグラムとを同時に当てはめることによって計算される。平衡解離定数（Ｋｄ）を、比率ｋｏｎ／ｋｏｆｆとして計算する。例えば、Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｌ．２９３：８６５−８８１（１９９９）を参照されたい。上記表面プラズモン共鳴アッセイによるｏｎ速度が１０６Ｍ−１ｓ−１を超える場合、ｏｎ速度は、ストップトフローを備えた分光光度計（Ａｖｉｖ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）、または撹拌キュベットを備えた８０００シリーズＳＬＭ−ＡＭＩＮＣＯ（商標）分光光度計（ＴｈｅｒｍｏＳｐｅｃｔｒｏｎｉｃ）等の分光計で測定される場合に、増加する抗原濃度の存在下で、２５℃で、ＰＢＳ中２０ｎＭの抗−抗原抗体（Ｆａｂ型）（ｐＨ７．２）の蛍光発光強度（励起＝２９５ｎｍ、発光＝３４０ｎｍ、１６ｎｍ帯域通過）の増加または減少を測定する蛍光消光技法を使用して決定することができる。
【０１７７】
２．抗体断片
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、抗体断片である。抗体断片には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、及びｓｃＦｖ断片、ならびに以下に記載される他の断片が含まれるが、これらに限定されない。ある特定の抗体断片の概説については、Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）を参照されたい。ｓｃＦｖ断片の概説については、例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ  ａｎｄ  Ｍｏｏｒｅ  ｅｄｓ．，（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ），ｐｐ．２６９−３１５（１９９４）を参照されたく、また、ＷＯ９３／１６１８５号、ならびに米国特許第５，５７１，８９４号及び同第５，５８７，４５８号も参照されたい。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、増加したインビボ半減期を有するＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片の考察については、米国特許第５，８６９，０４６号を参照されたい。
【０１７８】
ダイアボディは、二価または二重特異性であり得る２つの抗原結合部位を有する抗体断片である。例えば、ＥＰ４０４，０９７、ＷＯ１９９３／０１１６１、Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）、及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：６４４４−６４４８（１９９３）を参照されたい。トリアボディ及びテトラボディもまた、Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）に記載されている。
【０１７９】
単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全てもしくは一部、または軽鎖可変ドメインの全てもしくは一部を含む、抗体断片である。ある特定の実施形態では、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ、例えば、米国特許第６，２４８，５１６Ｂ１号を参照されたい）。
【０１８０】
抗体断片は、本明細書に記載される無傷抗体のタンパク質消化ならびに組み換え宿主細胞（例えばＥ．ｃｏｌｉまたはファージ）による産生を含むが、これらに限定されない種々の技法によって作製することができる。
【０１８１】
３．キメラ抗体及びヒト化抗体
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、キメラ抗体である。ある特定のキメラ抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号、及びＭｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１−６８５５（１９８４））に記載されている。一例において、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、または非ヒト霊長類、例えば、サル由来の可変領域）及びヒト定常領域を含む。さらなる例では、キメラ抗体は、クラスまたはサブクラスが親抗体のクラスまたはサブクラスから変更された「クラススイッチ」抗体である。キメラ抗体は、その抗原結合断片を含む。
【０１８２】
ある特定の実施形態では、キメラ抗体は、ヒト化抗体である。典型的には、非ヒト抗体は、ヒトに対する免疫原性を低減する一方で、親非ヒト抗体の特異性及び親和性は保持するようにヒト化される。一般に、ヒト化抗体は、１つ以上の可変ドメインを含み、そのＨＶＲ、例えば、ＣＤＲ（またはそれらの部分）は、非ヒト抗体に由来し、ＦＲ（またはそれらの部分）は、ヒト抗体配列に由来する。ヒト化抗体は、任意に、ヒト定常領域の少なくとも一部も含む。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体におけるいくつかのＦＲ残基は、例えば、抗体特異性または親和性を復元または改善するように、非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基が由来する抗体）由来の対応する残基で置換される。
【０１８３】
ヒト化抗体及びそれらの作製方法は、例えば、Ａｌｍａｇｒｏ  ａｎｄ  Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）で概説されており、例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３３２：３２３−３２９（１９８８）、Ｑｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ′ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８６：１００２９−１００３３（１９８９）、米国特許第５，８２１，３３７号、同第７，５２７，７９１号、同第６，９８２，３２１号、及び同第７，０８７，４０９号、Ｋａｓｈｍｉｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ３６：２５−３４（２００５）（特異性決定領域（ＳＤＲ）移植について説明する）、Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４８９−４９８（１９９１）（「リサーフェイシング（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）」を記載する）、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ３６：４３−６０（２００５）（「ＦＲシャフリング」を記載する）、ならびにＯｓｂｏｕｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ３６：６１−６８（２００５）及びＫｌｉｍｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，８３：２５２−２６０（２０００）（ＦＲシャフリングへの「誘導選択（ｇｕｉｄｅｄ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ）」アプローチについて説明する）にさらに記載されている。
【０１８４】
ヒト化に使用され得るヒトフレームワーク領域には、「ベストフィット」法を使用して選択されるフレームワーク領域（例えば、Ｓｉｍｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）を参照されたい）、軽鎖または重鎖可変領域の特定の下位集団のヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域（例えば、Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５（１９９２）、及びＰｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３（１９９３）を参照されたい）、ヒト成熟（体細胞突然変異した）フレームワーク領域またはヒト生殖系列フレームワーク領域（例えば、Ａｌｍａｇｒｏ  ａｎｄ  Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）を参照されたい）、ならびにＦＲライブラリのスクリーニングに由来するフレームワーク領域（例えば、Ｂａｃａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８−１０６８４（１９９７）及びＲｏｓｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２２６１１−２２６１８（１９９６）を参照されたい）が含まれるが、これらに限定されない。
【０１８５】
４．ヒト抗体
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当該技術分野で既知の種々の技法を使用して産生され得る。ヒト抗体は、一般に、ｖａｎ  Ｄｉｊｋ  ａｎｄ  ｖａｎ  ｄｅ  Ｗｉｎｋｅｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８−７４（２００１）及びＬｏｎｂｅｒｇ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：４５０−４５９（２００８）に記載されている。
【０１８６】
ヒト抗体は、抗原攻撃に応答してヒト可変領域を有する無傷ヒト抗体または無傷抗体を産生するように修飾されたトランスジェニック動物に免疫原を投与することによって調製することができる。かかる動物は、典型的には、内因性免疫グロブリン遺伝子座を置き換えるか、または染色体外に存在するか、もしくは動物の染色体に無作為に組み込まれるヒト免疫グロブリン遺伝子座の全てまたは一部を含有する。かかるトランスジェニックマウスにおいて、内因性免疫グロブリン遺伝子座は、一般に、不活性化されている。トランスジェニック動物からヒト抗体を得るための方法の概説については、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３：１１１７−１１２５（２００５）を参照されたい。例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術について記載している米国特許第６，０７５，１８１号及び同第６，１５０，５８４号、ＨＵＭＡＢ（登録商標）技術について記載している米国特許第５，７７０，４２９号、Ｋ−Ｍ  ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術について記載している米国特許第７，０４１，８７０号、ならびに米国特許出願公開第２００７／００６１９００号（ＶＥＬＯＣＩＭＯＵＳＥ（登録商標）技術について記載）も参照されたい。かかる動物によって生成された無傷抗体由来のヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせることによってさらに修飾され得る。
【０１８７】
ヒト抗体は、ハイブリドーマに基づく方法によって作製することもできる。ヒトモノクローナル抗体を産生するためのヒト骨髄腫及びマウス−ヒトヘテロ骨髄腫細胞系が記載されている。（例えば、Ｋｏｚｂｏｒ  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）、Ｂｒｏｄｅｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１−６３（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８７）、及びＢｏｅｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：８６（１９９１）を参照されたい。）ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術によって生成されるヒト抗体も、Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０３：３５５７−３５６２（２００６）に記載されている。追加の方法には、例えば、米国特許第７，１８９，８２６号（ハイブリドーマ細胞系由来のモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の産生を記載する）、及びＮｉ，Ｘｉａｎｄａｉ  Ｍｉａｎｙｉｘｕｅ，２６（４）：２６５−２６８（２００６）（ヒト−ヒトハイブリドーマを記載する）に記載されるものを含む。ヒトハイブリドーマ技術（トリオーマ技術）についても、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ  ａｎｄ  Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，２０（３）：９２７−９３７（２００５）及びＶｏｌｌｍｅｒｓ  ａｎｄ  Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｆｉｎｄｉｎｇｓ  ｉｎ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２７（３）：１８５−９１（２００５）に記載されている。
【０１８８】
ヒト抗体は、ヒト由来のファージディスプレイライブラリから選択されるＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することによって生成することもできる。その後、かかる可変ドメイン配列は、所望のヒト定常ドメインと組み合わせられ得る。抗体ライブラリからヒト抗体を選択するための技法が以下に記載されている。
【０１８９】
５．ライブラリ由来抗体
本発明の抗体は、所望の活性（複数可）を有する抗体についてコンビナトリアルライブラリをスクリーニングすることによって単離され得る。例えば、ファージディスプレイライブラリを生成し、所望の結合特性を保有する抗体についてかかるライブラリをスクリーニングするための多様な方法が、当該技術分野で既知である。かかる方法は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ１７８：１−３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００１）に概説され、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３４８：５５２−５５４、Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３５２：６２４−６２８（１９９１）、Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９２）、Ｍａｒｋｓ  ａｎｄ  Ｂｒａｄｂｕｒｙ，ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ２４８：１６１−１７５（Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３）、Ｓｉｄｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９−３１０（２００４）、Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３−１０９３（２００４）、Ｆｅｌｌｏｕｓｅ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ１０１（３４）：１２４６７−１２４７２（２００４）、及びＬｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ２８４（１−２）：１１９−１３２（２００４）にさらに記載されている。
【０１９０】
ある特定のファージディスプレイ法では、ＶＨ及びＶＬ遺伝子のレパートリーは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって別個にクローニングされ、ファージライブラリ中で無作為に組み換えられ、それは次いで、Ｗｉｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，１２：４３３−４５５（１９９４）に記載されるように、抗原結合ファージについてスクリーニングすることができる。ファージは、典型的には、抗体断片を一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片またはＦａｂ断片のいずれかとしてディスプレイする。免疫化源由来のライブラリは、ハイブリドーマの構築を必要とすることなく、免疫原に高親和性な抗体を提供する。代替的に、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ，１２：７２５−７３４（１９９３）によって記載されるように、ナイーブレパートリーは、クローニングされ（例えば、ヒトから）、いかなる免疫化も伴わずに、幅広い非自己抗原また自己抗原に対する抗体の単一の源を提供することができる。最後に、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１−３８８（１９９２）に記載されるように、ナイーブライブラリは、幹細胞から再配列されていないＶ遺伝子セグメントをクローニングし、無作為配列を含有するＰＣＲプライマーを使用して、高度可変ＣＤＲ３領域をコードし、かつインビトロで再配列を達成することによって、合成的に作製することもできる。ヒト抗体ファージライブラリについて記載している特許公開には、例えば、米国特許第５，７５０，３７３号、ならびに米国特許公開第２００５／００７９５７４号、同第２００５／０１１９４５５号、同第２００５／０２６６０００号、同第２００７／０１１７１２６号、同第２００７／０１６０５９８号、同第２００７／０２３７７６４号、同第２００７／０２９２９３６号、及び同第２００９／０００２３６０号が含まれる。
【０１９１】
ヒト抗体ライブラリから単離された抗体または抗体断片は、本明細書においてヒト抗体またはヒト抗体断片と見なされる。
【０１９２】
６．多重特異性抗体
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗ＨＥＲ２抗体は、多重特異性抗体、例えば、二重特異性抗体である。多重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる部位に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体である。ある特定の実施形態では、結合特異性のうちの一方は、ＨＥＲ２に対するものであり、他方は、任意の他の抗原に対するものである。ある特定の実施形態では、二重特異性抗体は、ＨＥＲ２の２つの異なるエピトープに結合し得る。二重特異性抗体をまた使用して、細胞傷害性薬剤を、ＨＥＲ２を発現する細胞に限局させてもよい。二重特異性抗体は、完全長抗体または抗体断片として調製され得る。ある特定の実施形態では、多重特異性抗体は、上述のＴＤＢである。
【０１９３】
多重特異性抗体を作製するための技法は、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖対の組み換え同時発現（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｃｕｅｌｌｏ，Ｎａｔｕｒｅ３０５：５３７（１９８３））、ＷＯ９３／０８８２９、及びＴｒａｕｎｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．１０：３６５５（１９９１）を参照されたい）、ならびに「ノブ・イン・ホール（ｋｎｏｂ−ｉｎ−ｈｏｌｅ）」操作（例えば、米国特許第５，７３１，１６８号を参照されたい）が挙げられるが、これらに限定されない。多重特異性抗体の「ノブ・イン・ホール」操作は、ノブを含有する第１のアーム、及び第１のアームのノブが結合され得るホールを含有する第２のアームを生成するように利用され得る。本発明の多重特異性抗体のノブは、一実施形態では、抗ＣＤ３アームであり得る。代替的に、本発明の多重特異性抗体のノブは、一実施形態では、抗ＨＥＲ２アーム等の抗標的／抗原アームであり得る。本発明の多重特異性抗体のホールは、一実施形態では、抗ＣＤ３アームであり得る。代替的に、本発明の多重特異性抗体のホールは、一実施形態では、抗ＨＥＲ２アーム等の抗標的／抗原アームであり得る。多重特異性抗体は、免疫グロブリンクロスオーバー（Ｆａｂドメイン交換またはＣｒｏｓｓＭａｂ形式としても知られる）技術を使用して操作されてもよい（例えば、ＷＯ２００９／０８０２５３、Ｓｃｈａｅｆｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０８：１１１８７−１１１９２（２０１１）を参照されたい）。多重特異性抗体は、抗体Ｆｃ−ヘテロ二量体分子を作製するための静電気ステアリング（ｅｌｅｃｔｒｏｓｔａｔｉｃ  ｓｔｅｅｒｉｎｇ）作用の操作（ＷＯ２００９／０８９００４Ａ１）、２つ以上の抗体または断片の架橋（例えば、米国特許第４，６７６，９８０号、及びＢｒｅｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１（１９８５）を参照されたい）、二重特異性抗体を産生するためのロイシンジッパーの使用（例えば、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８（５）：１５４７−１５５３（１９９２）を参照されたい）、二重特異性抗体断片を作製するための「ダイアボディ」技術の使用（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４−６４４８（１９９３）を参照されたい）、及び一本鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体の使用（例えば、Ｇｒｕｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：５３６８（１９９４）を参照されたい）、ならびに例えば、Ｔｕｔｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）に記載される三重特異性（ｔｒｉｓｐｅｃｉｆｉｃ）抗体の調製によって作製することもできる。多重特異性抗体は、ビスＦａｂ形式を使用して生成され得る（例えば、ＷＯ２０１１０６９１０４を参照されたい）。
【０１９４】
「オクトパス（Ｏｃｔｏｐｕｓ）抗体」を含む、３つ以上の機能抗原結合部位を有する操作された抗体も、本明細書に含まれる（例えば、ＵＳ２００６／００２５５７６Ａ１を参照されたい）。
【０１９５】
抗体またはその抗体断片は、ＣＤ３、ならびに別の異なる抗原（例えば、第２の生物学的分子）に結合する抗原結合部位を含む「二重作用ＦＡｂ」または「ＤＡＦ」も含み得る（例えば、ＵＳ２００８／００６９８２０を参照されたい）。
【０１９６】
７．抗体変異型
ある特定の実施形態では、本発明の抗ＨＥＲ２抗体のアミノ酸配列変異型が企図される。例えば、抗体の結合親和性及び／または他の生物学的特性を改善することが望ましい場合がある。抗体のアミノ酸配列変異型は、抗体をコードするヌクレオチド配列中に適切な修飾を導入することによって、またはペプチド合成によって調製することができる。かかる修飾には、例えば、抗体のアミノ酸配列内の残基からの欠失、及び／またはそこへの挿入、及び／またはその置換が挙げられる。欠失、挿入、及び置換を任意に組み合わせて最終構築物を得ることができるが、但し、その最終構築物が、所望の特性、例えば、抗原結合性を保有することを条件とする。
【０１９７】
ａ．置換、挿入、及び欠失変異型
ある特定の実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換を有する抗体変異型が提供される。置換型変異誘発の目的の部位には、ＨＶＲ及びＦＲが含まれる。保存的置換は、表２において、「好ましい置換」の見出しの下に示される。より実質的な変化は、表２において、「例示的な置換」の見出しの下に提供され、またアミノ酸側鎖クラスを参照して以下にさらに記載される。アミノ酸置換は、目的の抗体中に導入され得、その産物は、所望の活性、例えば、保持／改善された抗原結合、減少した免疫原性、または改善されたＡＤＣＣもしくはＣＤＣについてスクリーニングされ得る。
表２．例示的、かつ好ましいアミノ酸置換
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アミノ酸は、一般的な側鎖特性に従って群分けされ得る。
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ、
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、
（５）鎖配向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのあるメンバーと別のクラスとの交換を伴う。
【０１９８】
ある種類の置換型変異型は、親抗体（例えば、ヒト化抗体またはヒト抗体）の１つ以上の超可変領域残基を置換することを伴う。一般に、さらなる試験ために選択される結果として生じる変異型（複数可）は、親抗体と比較したある特定の生物学的特性（例えば、親和性の増加、免疫原性の低減）の修正（例えば、改善）を有し、かつ／または実質的に保持された親抗体のある特定の生物学的特性を有する。例示的な置換型変異型は、例えば、本明細書に記載される技法等のファージディスプレイに基づく親和性成熟技法を使用して簡便に生成され得る親和性成熟抗体である。簡潔には、１つ以上のＨＶＲ残基が突然変異され、変異型抗体がファージ上にディスプレイされ、特定の生物学的活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングされる。
【０１９９】
改変（例えば、置換）がＨＶＲに行われて、例えば、抗体親和性を改善することができる。かかる改変は、ＨＶＲ「ホットスポット」、すなわち、体細胞成熟プロセス中に高頻度で突然変異を経るコドンによってコードされる残基（例えば、Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０７：１７９−１９６（２００８）を参照されたい）、及び／または抗原と接触する残基において行われてもよく、結果として生じる変異型ＶＨまたはＶＬは、結合親和性について試験される。二次ライブラリを構築し、そこから再選択することによる親和性成熟は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ１７８：１−３７に記載されている（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，（２００１）。）親和性成熟のいくつかの実施形態では、多様性が、多様な方法（例えば、エラー−プローンＰＣＲ、鎖シャフリング、またはオリゴヌクレオチド指向性変異誘発）のうちのいずれかによって、成熟させるために選択された可変遺伝子に導入される。その後、二次ライブラリが作製される。その後、このライブラリがスクリーニングされて、所望の親和性を有する任意の抗体変異型を特定する。多様性を導入する別の方法は、数個のＨＶＲ残基（例えば、一度に４〜６個の残基）が無作為化されるＨＶＲ指向性アプローチを伴う。抗原結合に関与するＨＶＲ残基は、例えば、アラニンスキャニング変異誘発またはモデリングを使用して、具体的に特定され得る。特にＣＤＲ−Ｈ３及びＣＤＲ−Ｌ３が標的とされることが多い。
【０２００】
ある特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、かかる改変が抗原に結合する抗体の能力を実質的に低下させない限り、１つ以上のＨＶＲ内で生じ得る。例えば、結合親和性を実質的に低減しない保存的改変（例えば、本明細書に提供される保存的置換）がＨＶＲで行われ得る。かかる改変は、例えば、ＨＶＲ内の抗原接触残基の外側であってもよい。上述の変異型ＶＨ配列及びＶＬ配列のある特定の実施形態では、各ＨＶＲは、改変されないか、または１つより多く、２つより多く、もしくは３つより多くのアミノ酸置換を含有しないかのいずれかである。
【０２０１】
変異誘発のために標的とされ得る抗体の残基または領域の特定に有用な方法は、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ａｎｄ  Ｗｅｌｌｓ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１−１０８５によって説明される「アラニンスキャニング変異誘発」と呼ばれる。この方法では、残基または標的残基群（例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、及びｇｌｕ等の荷電残基）が特定され、中性または負荷電アミノ酸（例えば、アラニンまたはポリアラニン）によって置き換えられて、抗体と抗原との相互作用に影響が及ぼされたかを決定する。さらなる置換が最初の置換に対する機能感受性を示すアミノ酸位置に導入され得る。代替的に、または加えて、抗体と抗原との間の接触点を特定するための抗原−抗体複合体の結晶構造。かかる接触残基及び隣接する残基が置換の候補として標的とされ得るか、または排除され得る。変異型がスクリーニングされて、それらが所望の特性を有するかを決定することができる。
【０２０２】
アミノ酸配列挿入としては、長さが１残基から１００以上の残基の範囲を含有するポリペプチドの範囲であるアミノ末端及び／またはカルボキシル末端の融合、ならびに単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入が挙げられる。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入変異型には、酵素（例えば、ＡＤＥＰＴのための）またはポリペプチドへの抗体のＮ末端もしくはＣ末端の融合が挙げられ、これは抗体の血清半減期を増加させる。
【０２０３】
ｂ．グリコシル化変異型
ある特定の実施形態では、本発明の抗ＨＥＲ２抗体を改変して、抗体がグリコシル化する程度を増加または減少させることができる。本発明の抗ＨＥＲ２抗体へのグリコシル化部位の付加または欠失は、１つ以上のグリコシル化部位を作り出すかまたは除去するように、アミノ酸配列を改変することによって簡便に達成することができる。
【０２０４】
この抗体がＦｃ領域を含む場合、それに結合した炭水化物が改変され得る。哺乳類細胞によって産生される天然抗体は、典型的には、一般にＮ結合によってＦｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７に結合される分岐状の二分岐オリゴ糖を含む。例えば、Ｗｒｉｇｈｔ  ｅｔ  ａｌ．ＴＩＢＴＥＣＨ１５：２６−３２（１９９７）を参照されたい。オリゴ糖としては、種々の炭水化物、例えば、マンノース、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、及びシアル酸、ならびに二分岐オリゴ糖構造の「幹」のＧｌｃＮＡｃに結合したフコースが挙げられ得る。いくつかの実施形態では、ある特定の特性が改善された抗体変異型を作製するために、本発明の抗体におけるオリゴ糖の修飾が行われ得る。
【０２０５】
一実施形態では、Ｆｃ領域に（直接的または間接的に）結合されたフコースを欠く炭水化物構造を有する抗ＨＥＲ２抗体変異型が提供される。例えば、かかる抗体中のフコースの量は、１％〜８０％、１％〜６５％、５％〜６５％、または２０％〜４０％であり得る。フコースの量は、例えば、ＷＯ２００８／０７７５４６に記載されるＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析によって測定される、Ａｓｎ２９７に結合した全ての糖構造（例えば、複合体、ハイブリッド、及び高マンノース構造）の合計に対するＡｓｎ２９７での糖鎖内のフコースの平均量を計算することによって決定される。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域内の約２９７位（Ｆｃ領域残基のＥＵ番号付け）に位置するアスパラギン残基を指すが、Ａｓｎ２９７はまた、抗体における小規模な配列変異に起因して、２９７位から約±３アミノ酸、上流または下流、すなわち、２９４〜３００位の間に位置してもよい。かかるフコシル化変異型は、改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。例えば、米国特許公開第２００３／０１５７１０８号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）、同第２００４／００９３６２１号（Ｋｙｏｗａ  Ｈａｋｋｏ  Ｋｏｇｙｏ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ）を参照されたい。「脱フコシル化」または「フコース欠損」抗体変異型に関する刊行物の例には、ＵＳ２００３／０１５７１０８、ＷＯ２０００／６１７３９、ＷＯ２００１／２９２４６、ＵＳ２００３／０１１５６１４、ＵＳ２００２／０１６４３２８、ＵＳ２００４／００９３６２１、ＵＳ２００４／０１３２１４０、ＵＳ２００４／０１１０７０４、ＵＳ２００４／０１１０２８２、ＵＳ２００４／０１０９８６５、ＷＯ２００３／０８５１１９、ＷＯ２００３／０８４５７０、ＷＯ２００５／０３５５８６、ＷＯ２００５／０３５７７８、ＷＯ２００５／０５３７４２、ＷＯ２００２／０３１１４０、Ｏｋａｚａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３６：１２３９−１２４９（２００４）、Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）が挙げられる。脱フコシル化抗体を産生することができる細胞系の例には、タンパク質フコシル化が欠損したＬｅｃ１３ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａ  ｅｔ  ａｌ．Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９：５３３−５４５（１９８６）、米国特許出願第２００３／０１５７１０８Ａ１号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ）、及びＷＯ２００４／０５６３１２Ａ１（Ａｄａｍｓら）、特に実施例１１）、及びアルファ−１，６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞等のノックアウト細胞系（例えば、Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）、Ｋａｎｄａ，Ｙ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，９４（４）：６８０−６８８（２００６）、及びＷＯ２００３／０８５１０７を参照されたい）が挙げられる。
【０２０６】
例えば、抗体のＦｃ領域に結合した二分岐オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃによって二分されている、二分されたオリゴ糖を有する抗ＨＥＲ２抗体変異型がさらに提供される。かかる抗体変異型は、低減されたフコシル化及び／または改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。かかる抗体変異型の例は、例えば、ＷＯ２００３／０１１８７８（Ｊｅａｎ−Ｍａｉｒｅｔ  ｅｔ  ａｌ．）、米国特許第６，６０２，６８４号（Ｕｍａｎａ  ｅｔ  ａｌ．）、及び２００５／０１２３５４６（Ｕｍａｎａ  ｅｔ  ａｌ．）に記載されている。Ｆｃ領域に結合したオリゴ糖内に少なくとも１つのガラクトース残基を有する抗体変異型も提供される。かかる抗体変異型は、改善されたＣＤＣ機能を有し得る。かかる抗体変異型は、例えば、ＷＯ１９９７／３００８７（Ｐａｔｅｌ  ｅｔ  ａｌ．）、ＷＯ１９９８／５８９６４（Ｒａｊｕ、Ｓ．）、及びＷＯ１９９９／２２７６４（Ｒａｊｕ、Ｓ．）に記載されている。
【０２０７】
ｃ．Ｆｃ領域変異型
ある特定の実施形態では、１つ以上のアミノ酸修飾が、本発明の抗ＨＥＲ２抗体のＦｃ領域内に導入され得、それによりＦｃ領域変異型が生成され得る（例えば、ＵＳ２０１２／０２５１５３１を参照されたい）。Ｆｃ領域変異型は、１つ以上のアミノ酸位置にアミノ酸修飾（例えば、置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４  Ｆｃ領域）を含み得る。
【０２０８】
ある特定の実施形態では、本発明は、全てではなくいくつかのエフェクター機能を保有し、それにより、インビボでの抗体の半減期が重要であるが、さらにある特定のエフェクター機能（補体及びＡＤＣＣ等）が不必要であるか、または有害である用途に対して望ましい候補となる、抗ＨＥＲ２抗体変異型を企図する。インビトロ及び／またはインビボ細胞傷害性アッセイを行って、ＣＤＣ及び／またはＡＤＣＣ活性の低減／枯渇を確認することができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイを行って、抗体がＦｃγＲ結合を欠く（故にＡＤＣＣ活性を欠く可能性が高い）が、ＦｃＲｎ結合能力を保持していることを確実にすることができる。ＡＤＣＣを媒介するための初代細胞であるＮＫ細胞が、Ｆｃ（ＲＩＩＩのみを発現する一方で、単球は、Ｆｃ（ＲＩ、Ｆｃ（ＲＩＩ、及びＦｃ（ＲＩＩＩを発現する。造血細胞でのＦｃＲ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７−４９２（１９９１）の頁４６４の表３に要約されている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのインビトロアッセイの非限定的な例は、米国特許第５，５００，３６２号（例えば、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ．ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ′ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８３：７０５９−７０６３（１９８６）を参照されたい）、及びＨｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ′ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８２：１４９９−１５０２（１９８５）、５，８２１，３３７（Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６６：１３５１−１３６１（１９８７）を参照されたい）に記載される。代替的に、非放射性アッセイ方法が用いられ得る（例えば、フローサイトメトリーのためのＡＣＴＩ（商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ，ＣＡ、及びＣｙｔｏＴｏｘ９６（登録商標）非放射性細胞毒性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を参照されたい。かかるアッセイに有用なエフェクター細胞としては、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。代替的に、または加えて、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、インビボで、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ′ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９５：６５２−６５６（１９９８）に開示の動物モデルで評価され得る。Ｃ１ｑ結合アッセイを実行して、抗体がＣ１ｑに結合することができず、それ故にＣＤＣ活性を欠くことを確認することもできる。例えば、ＷＯ２００６／０２９８７９及びＷＯ２００５／１００４０２におけるＣ１ｑ及びＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照されたい。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを行ってもよい（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ２０２：１６３（１９９６）、Ｃｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ．１０１：１０４５−１０５２（２００３）、及びＣｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ａｎｄ  Ｍ．Ｊ．Ｇｌｅｎｎｉｅ  Ｂｌｏｏｄ．１０３：２７３８−２７４３（２００４）を参照されたい）。ＦｃＲｎ結合及びインビボクリアランス／半減期の決定も、当該技術分野で既知の方法を使用して行うことができる（例えば、Ｐｅｔｋｏｖａ，Ｓ．Ｂ．ｅｔ  ａｌ．Ｉｎｔ′ｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８（１２）：１７５９−１７６９（２００６）を参照されたい）。
【０２０９】
低減したエフェクター機能を有する抗体としては、Ｆｃ領域残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７、及び３２９のうちの１つ以上の置換を有する抗体が挙げられる（米国特許第６，７３７，０５６号及び同第８，２１９，１４９号）。かかるＦｃ突然変異型は、アラニンへの残基２６５及び２９７の置換を有するいわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ突然変異型を含む、アミノ酸位置２６５、２６９、２７０、２９７、及び３２７のうちの２つ以上に置換を有するＦｃ突然変異型を含む（米国特許第７，３３２，５８１号及び同第８，２１９，１４９号）。
【０２１０】
ある特定の実施形態では、抗体の野生型ヒトＦｃ領域の位置３２９におけるプロリンが、グリシンもしくはアルギニン、または、Ｆｃのプロリン３２９とＦｃｇＲＩＩＩのトリプトファン残基Ｔｒｐ８７及びＴｒｐ１１０との間に形成される、Ｆｃ／Ｆｃガンマ受容体界面内のプロリンサンドイッチを破壊するのに十分に大きなアミノ酸残基で置換される（Ｓｏｎｄｅｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．：Ｎａｔｕｒｅ４０６，２６７−２７３（２０  Ｊｕｌ．２０００））。ある特定の実施形態では、抗体は、少なくとも１つのさらなるアミノ酸置換を含む。一実施形態では、さらなるアミノ酸置換は、Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｄ、またはＰ３３１Ｓであり、さらに別の実施形態では、少なくとも１つのさらなるアミノ酸置換は、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域のＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ、またはヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域のＳ２２８Ｐ及びＬ２３５Ｅであり（例えば、ＵＳ２０１２／０２５１５３１を参照されたい）、さらに別の実施形態では、少なくとも１つのさらなるアミノ酸置換は、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域のＬ２３４Ａ及びＬ２３５ＡならびにＰ３２９Ｇである。
【０２１１】
ＦｃＲへの結合が改善または縮小されたある特定の抗体変異型が記載される。（例えば、米国特許第６，７３７，０５６号、ＷＯ２００４／０５６３１２、及びＳｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．９（２）：６５９１−６６０４（２００１）を参照されたい。）
【０２１２】
ある特定の実施形態では、抗体変異型は、ＡＤＣＣを改善する１つ以上のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の位置２９８、３３３、及び／または３３４（残基のＥＵ番号付け）に置換を有するＦｃ領域を含む。
【０２１３】
いくつかの実施形態では、例えば、米国特許第６，１９４，５５１号、ＷＯ９９／５１６４２、及びＩｄｕｓｏｇｉｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：４１７８−４１８４（２０００）に記載されるように、改変は、改変された（すなわち、改善された、または縮小された）Ｃ１ｑ結合及び／または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）をもたらすＦｃ領域において行われる。
【０２１４】
母体ＩｇＧの胎児への移入に関与する、半減期が増加しかつ新生児型Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合が改善された抗体（Ｇｕｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７（１９７６）及びＫｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９（１９９４））については、ＵＳ２００５／００１４９３４Ａ１（Ｈｉｎｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．）に記載される。それらの抗体は、Ｆｃ領域のＦｃＲｎへの結合を改善する１つ以上の置換を有するＦｃ領域をそこに含む。かかるＦｃ変異型は、Ｆｃ領域残基：２３８、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４、または４３４のうちの１つ以上に置換、例えば、Ｆｃ領域残基４３４の置換を有するものを含む（米国特許第７，３７１，８２６号）。
【０２１５】
Ｆｃ領域変異型の他の例に関して、Ｄｕｎｃａｎ  ＆  Ｗｉｎｔｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ３２２：７３８−４０（１９８８）、米国特許第５，６４８，２６０号、米国特許第５，６２４，８２１号、及びＷＯ９４／２９３５１も参照されたい。
【０２１６】
いくつかの態様では、抗ＨＥＲ２抗体は、Ｎ２９７Ｇ突然変異を含むＦｃ領域を含む。
【０２１７】
いくつかの実施形態では、Ｎ２９７Ｇ突然変異を含む抗ＨＥＲ２抗体は、１つ以上の重鎖定常ドメインを含み、この１つ以上の重鎖定常ドメインは、第１のＣＨ１（ＣＨ１１）ドメイン、第１のＣＨ２（ＣＨ２１）ドメイン、第１のＣＨ３（ＣＨ３１）ドメイン、第２のＣＨ１（ＣＨ１２）ドメイン、第２のＣＨ２（ＣＨ２２）ドメイン、及び第２のＣＨ３（ＣＨ３２）ドメインから選択される。いくつかの事例では、１つ以上の重鎖定常ドメインのうちの少なくとも１つは、別の重鎖定常ドメインと対になる。いくつかの事例では、ＣＨ３１及びＣＨ３２ドメインは各々、突起または空隙を含み、ＣＨ３１ドメイン内のこの突起または空隙は、それぞれ、ＣＨ３２ドメイン内の空隙または突起中に位置付けることができる。いくつかの事例では、ＣＨ３１及びＣＨ３２ドメインは、該突起と空隙との間の境界面において接触する。いくつかの事例では、ＣＨ２１及びＣＨ２２ドメインは各々、突起または空隙を含み、ＣＨ２１ドメイン内のこの突起または空隙は、それぞれ、ＣＨ２２ドメイン内の空隙または突起中に位置付けることができる。他の事例では、ＣＨ２１及びＣＨ２２ドメインは、該突起と空隙との間の境界面において接触する。いくつかの事例では、抗ＨＥＲ２抗体は、ＩｇＧ１抗体である。
【０２１８】
ｄ．システイン操作された抗体変異型
ある特定の実施形態では、抗体の１つ以上の残基がシステイン残基で置換されている、システイン操作された抗体、例えば、「チオマブ（ｔｈｉｏＭＡｂ）」を作製することが望ましい場合がある。特定の実施形態では、置換された残基は、抗体の利用しやすい部位で生じる。それらの残基をシステインで置換することによって、反応性のチオール基はそれによって、抗体の利用しやすい部位に位置付けられ、それを使用して、抗体を、薬物部分またはリンカー−薬物部分等の他の部分にコンジュゲートして、本明細書にさらに記載される、免疫コンジュゲートを作製してもよい。ある特定の実施形態では、次の残基のうちの任意の１つ以上が、システインで置換され得る：軽鎖のＶ２０５（Ｋａｂａｔ番号付け）、重鎖のＡ１１８（ＥＵ番号付け）、及び重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵ番号付け）。システイン操作された抗体は、例えば、米国特許第７，５２１，５４１号に記載されるように生成され得る。
【０２１９】
ｅ．抗体誘導体
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される本発明の抗ＨＥＲ２抗体は、当該技術分野で既知であり、かつ容易に入手可能な、追加の非タンパク質性部分を含有するようにさらに修飾されてもよい。抗体の誘導体化に好適な部分には、水溶性ポリマーが含まれるが、これに限定されない。水溶性ポリマーの非限定的な例には、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマーまたはランダムコポリマーのいずれか）、及びデキストランまたはポリ（ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロプロピレン（ｐｒｏｐｒｏｐｙｌｅｎｅ）グリコールホモポリマー、プロリプロピレン（ｐｒｏｌｙｐｒｏｐｙｌｅｎｅ）オキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、ならびにそれらの混合物が含まれるが、これらに限定されない。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中でのその安定性のため、製造時に有利であり得る。ポリマーは、任意の分子量のものであり得、分岐状または非分岐状であり得る。抗体に結合したポリマーの数は異なり得、１つより多くのポリマーが結合される場合、それらは、同じ分子または異なる分子であり得る。一般に、誘導体化に使用されるポリマーの数及び／または種類は、改善される抗体の特定の特性または機能、抗体の誘導体が規定の条件下で療法で使用されるか等を含むが、これらに限定されない検討事項に基づいて決定され得る。
【０２２０】
別の実施形態では、放射線への曝露によって選択的に加熱され得る、抗体及び非タンパク質性部分のコンジュゲートが提供される。一実施形態では、非タンパク質性部分は、カーボンナノチューブである（Ｋａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ１０２：１１６００−１１６０５（２００５））。放射線は、任意の波長のものであってもよく、通常の細胞を傷つけないが、非タンパク質性部分を、抗体−非タンパク質性部分に近位の細胞を死滅させる温度まで加熱する波長を含むが、これらに限定されない。
【０２２１】
Ｂ．組み換え法及び組成物
本発明の抗ＨＥＲ２抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号に記載される、組み換え方法及び組成物を使用して産生され得る。一実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＥＲ２抗体をコードする単離された核酸が提供される。かかる核酸は、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び／または抗体のＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖及び／または重鎖）をコードし得る。さらなる実施形態では、かかる核酸を含む１つ以上のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。さらなる実施形態では、かかる核酸を含む宿主細胞が提供される。１つのかかる実施形態では、宿主細胞は、（１）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、または（２）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第１のベクター、及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第２のベクターを含む（例えば、それらで形質転換されている）。一実施形態では、宿主細胞は、真核生物のもの、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞またはリンパ系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。一実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体を作製する方法が提供され、本方法は、上記抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を、抗体の発現に好適な条件下で培養することと、任意に、抗体を宿主細胞（または宿主細胞培養培地）から回収することとを含む。
【０２２２】
抗ＨＥＲ２抗体の組み換え産生のために、例えば、上述のものなどの、抗体をコードする核酸が単離され、宿主細胞内でのさらなるクローニング及び／または発現のために、１つ以上のベクター中に挿入される。かかる核酸は、従来の手順を使用して（例えば、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合可能であるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）、容易に単離され、配列決定され得る。
【０２２３】
抗体をコードするベクターのクローニングまたは発現に好適な宿主細胞は、本明細書に記載される原核生物細胞または真核生物細胞を含む。例えば、抗体は、特にグリコシル化及びＦｃエフェクター機能が必要とされない場合に、細菌において産生され得る。細菌における抗体断片及びポリペプチドの発現については、例えば、米国特許第５，６４８，２３７号、同第５，７８９，１９９号、及び同第５，８４０，５２３号を参照されたい。（また、Ｅ．ｃｏｌｉにおける抗体断片の発現について説明するＣｈａｒｌｔｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３），ｐｐ．２４５−２５４も参照されたい）。発現後、抗体は、可溶性画分中で細菌細胞ペーストから単離されてもよく、さらに精製されてもよい。
【０２２４】
原核生物に加えて、糸状菌または酵母等の真核微生物は、抗体をコードするベクターに好適なクローニングまたは発現宿主であり、グリコシル化経路が「ヒト化」されており、部分的または完全なヒトグリコシル化パターンを有する抗体の産生をもたらす、真菌及び酵母株を含む。Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２：１４０９−１４１４（２００４）、及びＬｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４：２１０−２１５（２００６）を参照されたい。
【０２２５】
グリコシル化抗体の発現に好適な宿主細胞は、多細胞生物（無脊椎動物及び脊椎動物）にも由来する。無脊椎動物細胞の例としては、植物及び昆虫細胞が挙げられる。昆虫細胞と併せて、特にＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞のトランスフェクションのために使用され得る、多数のバキュロウイルス株が特定されている。
【０２２６】
植物細胞培養物も宿主として利用することができる。例えば、米国特許第５，９５９，１７７号、同第６，０４０，４９８号、同第６，４２０，５４８号、同第７，１２５，９７８号、及び同第６，４１７，４２９号（トランスジェニック植物において抗体を産生するためのＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ（商標）技術について説明している）を参照されたい。
【０２２７】
脊椎動物細胞も宿主として使用することができる。例えば、懸濁液中で成長するように適合される哺乳類細胞系が、有用であり得る。有用な哺乳類宿主細胞系の他の例は、ＳＶ４０（ＣＯＳ−７）によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１系、ヒト胚性腎臓系（例えば、Ｇｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ  Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７）に記載される２９３または２９３細胞）、ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）、マウスセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３−２５１（１９８０）に記載されるＴＭ４細胞）、サル腎臓細胞（ＣＶ１）、アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６）、ヒト子宮頚部癌細胞（ＨＥＬＡ）、イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ、バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ  ３Ａ）、ヒト肺細胞（Ｗ１３８）、ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ  Ｇ２）、マウス乳房腫瘍（ＭＭＴ  ０６０５６２）、例えば、Ｍａｔｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ  Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４−６８（１９８２）に記載されるＴＲＩ細胞、ＭＲＣ５細胞、及びＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳類宿主細胞系には、ＤＨＦＲ−ＣＨＯ細胞（Ｕｒｌａｕｂ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ７７：４２１６（１９８０））を含む、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ならびにＹ０、ＮＳ０、及びＳｐ２／０等の骨髄腫細胞系が挙げられる。抗体産生に好適なある特定の哺乳類宿主細胞系の概説については、例えば、Ｙａｚａｋｉ  ａｎｄ  Ｗｕ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ），ｐｐ．２５５−２６８（２００３）を参照されたい。
【０２２８】
Ｃ．アッセイ
本明細書に提供される本発明の抗ＨＥＲ２抗体は、それらの物理的／化学的特性及び／または生物学的活性について、当該技術分野で既知の種々のアッセイによって、特定されるか、スクリーニングされるか、または特徴付けられてもよい。
【０２２９】
１．結合アッセイ及び他のアッセイ
一態様では、本発明の抗ＨＥＲ２抗体は、例えば、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロットなどの既知の方法によって、その抗原結合活性に関して試験される。
【０２３０】
別の態様では、競合アッセイを用いて、ＨＥＲ２への結合について本発明の抗ＨＥＲ２抗体と競合する抗体が特定され得る。
【０２３１】
例示的な競合アッセイでは、固定化されたＨＥＲ２が、ＨＥＲ２に結合する第１の標識抗体と、ＨＥＲ２への結合について第１の抗体と競合するその能力について試験されている第２の未標識抗体とを含む溶液中で、インキュベートされる。第２の抗体は、ハイブリドーマ上清中に存在してもよい。対照として、固定化されたＨＥＲ２が、第１の標識抗体を含むが、第２の未標識抗体を含まない溶液中でインキュベートされる。ＨＥＲ２に第１の抗体が結合することを許容する条件下でのインキュベーション後、過剰な非結合抗体が除去され、固定化されたＨＥＲ２に関連する標識の量が測定される。固定化されたＨＥＲ２に関連する標識の量が、対照試料と比較して試験試料中で実質的に低減される場合、それは、第２の抗体がＨＥＲ２への結合について第１の抗体と競合していることを示す。Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  ｃｈ．１４（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ）を参照されたい。
【０２３２】
２．活性アッセイ
一態様では、生物学的活性を有するその抗ＨＥＲ２抗体を特定するためのアッセイが提供される。生物学的活性には、例えば、ＨＥＲ２またはそのペプチド断片に、インビボ、インビトロ、またはエキソビボのいずれかで結合することが含まれ得る。本発明の多重特異性（例えば、二重特異性）抗ＨＥＲ２抗体（例えば、１つの抗ＣＤ３アーム及びＨＥＲ２を認識する１つのアームを有するＴＤＢ抗体）の場合、生物学的活性は、例えば、エフェクター細胞の活性化（例えば、Ｔ細胞（例えば、ＣＤ８＋及び／またはＣＤ４＋Ｔ細胞）の活性化）、エフェクター細胞集団の拡張（すなわち、Ｔ細胞数の増加）、標的細胞集団の低減（すなわち、それらの細胞表面上に第２の生物学的分子を発現する細胞集団の減少）及び／または標的細胞死滅も含み得る。インビボ及び／またはインビトロでかかる生物学的活性を有する抗体が提供される。ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、以下の本明細書の実施例に詳細に記載されるように、かかる生物学的活性について試験される。
【０２３３】
Ｄ．免疫コンジュゲート
本発明はまた、化学療法剤または化学療法薬、成長阻害剤、毒素（例えば、タンパク質毒素、細菌、真菌、植物、もしくは動物起源の酵素活性毒素、またはそれらの断片）、または放射性同位体等の１つ以上の細胞傷害性薬剤とコンジュゲートされた本明細書における抗ＨＥＲ２抗体を含む、免疫コンジュゲートを提供する。
【０２３４】
一実施形態では、免疫コンジュゲートは、抗体が１つ以上の薬物にコンジュゲートされた抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）であり、この薬物としては、マイタンシノイド（米国特許第５，２０８，０２０号、同第５，４１６，０６４号、及び欧州特許第ＥＰ０４２５２３５Ｂ１号を参照されたい）；モノメチルオーリスタチン薬物部分ＤＥ及びＤＦ等のオーリスタチン（ＭＭＡＥ及びＭＭＡＦ）（米国特許第５，６３５，４８３号及び同第５，７８０，５８８号及び同第７，４９８，２９８号を参照されたい）；ドラスタチン；カリケアマイシンまたはその誘導体（米国特許第５，７１２，３７４号、同第５，７１４，５８６号、同第５，７３９，１１６号、同第５，７６７，２８５号、同第５，７７０，７０１号、同第５，７７０，７１０号、同第５，７７３，００１号、及び同第５，８７７，２９６号、Ｈｉｎｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５３：３３３６−３３４２（１９９３）、ならびにＬｏｄｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５８：２９２５−２９２８（１９９８）を参照されたい）；ダウノマイシンまたはドキソルビシン等のアントラサイクリン（Ｋｒａｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１３：４７７−５２３（２００６）、Ｊｅｆｆｒｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ１６：３５８−３６２（２００６）、Ｔｏｒｇｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．１６：７１７−７２１（２００５）、Ｎａｇｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９７：８２９−８３４（２０００）、Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．＆Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ１２：１５２９−１５３２（２００２）、Ｋｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４５：４３３６−４３４３（２００２）、及び米国特許第６，６３０，５７９号を参照されたい）、メトトレキサート；ビンデシン；ドセタキセル、パクリタキセル、ラロタキセル；テセタキセル、及びオルタタキセル等のタキサン；トリコテシン；ならびにＣＣ１０６５を含むが、これらに限定されない、１つ以上の薬物にコンジュゲートされる。
【０２３５】
別の実施形態では、免疫コンジュゲートは、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、外毒素Ａ鎖（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、アルファ−サルシン、Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ  ｆｏｒｄｉｉタンパク質、ジアンシンタンパク質、Ｐｈｙｔｏｌａｃａ  ａｍｅｒｉｃａｎａタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、及びＰＡＰ−Ｓ）、ｍｏｍｏｒｄｉｃａ  ｃｈａｒａｎｔｉａ阻害剤、クルシン、クロチン、ｓａｐａｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、及びトリコテセンを含むがこれらに限定されない酵素活性毒素またはその断片にコンジュゲートされた、本明細書に記載される抗ＨＥＲ２抗体を含む。
【０２３６】
別の実施形態では、免疫コンジュゲートは、放射性原子にコンジュゲートされ、放射性コンジュゲートを形成する、本明細書に記載される抗ＨＥＲ２抗体を含む。多様な放射性同位体が、放射性コンジュゲートの産生に利用可能である。例には、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、及びＬｕの放射性同位体が挙げられる。放射性コンジュゲートを検出のために使用する場合、それは、シンチグラフィー研究のための放射性原子、例えば、ｔｃ９９ｍもしくはＩ１２３、または核磁気共鳴（ＮＭＲ）画像法（磁気共鳴画像法、ｍｒｉとしても知られる）のためのスピン標識、例えば、再びヨウ素−１２３、ヨウ素−１３１、インジウム−１１１、フッ素−１９、炭素−１３、窒素−１５、酸素−１７、ガドリニウム、マンガン、もしくは鉄を含み得る。
【０２３７】
抗体及び細胞傷害性薬剤のコンジュゲートは、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（例えば、アジプイミド酸ジメチルＨＣｌ）、活性エステル（例えば、スベリン酸ジスクシンイミジル）、アルデヒド（例えば、グルタルアルデヒド）、ビス−アジド化合物（例えば、ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン）、ビス−ジアゾニウム誘導体（例えば、ビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）−エチレンジアミン）、ジイソシアネート（例えば、トルエン２，６−ジイソシアネート）、及びビス−活性フッ素化合物（例えば、１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン）などの多様な二官能性タンパク質結合剤を使用して作製され得る。例えば、リシン免疫毒素は、Ｖｉｔｅｔｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ２３８：１０９８（１９８７）に記載されるように調製することができる。炭素−１４で標識された１−イソチオシアナトベンジル−３−メチルジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＭＸ−ＤＴＰＡ）は、放射性ヌクレオチドの抗体へのコンジュゲートのための例示的なキレート剤である。ＷＯ９４／１１０２６を参照されたい。リンカーは、細胞内において細胞傷害性薬物の放出を容易にする「切断可能リンカー」であってもよい。例えば、酸不安定性リンカー、ペプチダーゼ感受性リンカー、感光性リンカー、ジメチルリンカー、またはジスルフィド含有リンカー（Ｃｈａｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５２：１２７−１３１（１９９２）、米国特許第５，２０８，０２０号）が使用され得る。
【０２３８】
本明細書の免疫コンジュゲートまたはＡＤＣは、ＢＭＰＳ、ＥＭＣＳ、ＧＭＢＳ、ＨＢＶＳ、ＬＣ−ＳＭＣＣ、ＭＢＳ、ＭＰＢＨ、ＳＢＡＰ、ＳＩＡ、ＳＩＡＢ、ＳＭＣＣ、ＳＭＰＢ、ＳＭＰＨ、スルホ−ＥＭＣＳ、スルホ−ＧＭＢＳ、スルホ−ＫＭＵＳ、スルホ−ＭＢＳ、スルホ−ＳＩＡＢ、スルホ−ＳＭＣＣ、及びスルホ−ＳＭＰＢ、ならびに市販されている（例えば、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ．，Ｕ．Ｓ．Ａから）ＳＶＳＢ（サクシニミジル−（４−ビニルスルホン）安息香酸塩）を含むが、これらに限定されない架橋剤試薬を用いて調製されるかかるコンジュゲートを明白に企図するが、これに限定されない。
【０２３９】
Ｅ．診断及び検出のための方法及び組成物
ある特定の実施形態では、本発明の抗ＨＥＲ２抗体のいずれも、生物学的試料中のＨＥＲ２の存在の検出に有用である。本明細書で使用される「検出すること」という用語は、定量または定性検出を包含する。ある特定の実施形態では、生物学的試料は、細胞または組織を含む。
【０２４０】
一実施形態では、診断または検出方法において使用するための抗ＨＥＲ２抗体が提供される。さらなる態様では、生物学的試料中のＨＥＲ２の存在を検出する方法が提供される。ある特定の実施形態では、本方法は、生物学的試料と、本明細書に記載される抗ＨＥＲ２抗体とを、ＨＥＲ２に抗ＨＥＲ２抗体が結合することを許容する条件下で接触させることと、複合体が、抗ＨＥＲ２抗体とＨＥＲ２との間で形成されるかどうかを検出することと、を含む。かかる方法は、インビトロ方法またはインビボ方法であり得る。
【０２４１】
ある特定の実施形態では、標識された抗ＨＥＲ２抗体が提供される。標識としては、直接検出される標識または部分（蛍光標識、発色団標識、電子密度の高い標識、化学発光標識、及び放射性標識等）、ならびに間接的に、例えば、酵素反応または分子相互作用により検出される酵素またはリガンド等の部分が挙げられるが、これらに限定されない。例示的な標識には、放射性同位体３２Ｐ、１４Ｃ、１２５Ｉ、３Ｈ、及び１３１Ｉ、希土類キレートまたはフルオレセイン及びその誘導体等のフルオロフォア、ローダミン及びその誘導体、ダンシル、ウンベリフェロン、ルセリフェラーゼ（ｌｕｃｅｒｉｆｅｒａｓｅｓ）、例えば、ホタルルシフェラーゼ及び細菌ルシフェラーゼ（米国特許第４，７３７，４５６号）、ルシフェリン、２，３−ジヒドロフタラジンジオン、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、リゾチーム、糖質オキシダーゼ、例えば、グルコースオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、及びグルコース−６−リン酸塩デヒドロゲナーゼ、過酸化水素を用いて色素前駆体を酸化させる酵素、例えばＨＲＰ、ラクトペルオキシダーゼ、またはマイクロペルオキシダーゼとカップリングされた、ウリカーゼおよびキサンチンオキシダーゼ等の複素環式オキシダーゼ、ビオチン／アビジン、スピン標識、バクテリオファージ標識、安定した遊離ラジカル等が含まれるが、これらに限定されない。
【０２４２】
Ｆ．薬学的製剤
本発明の抗ＨＥＲ２抗体の薬学的製剤は、所望の程度の純度を有するかかる抗体を、１つ以上の任意の薬学的に許容される担体（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０））と混合することによって、凍結乾燥製剤または水溶液の形態で調製される。薬学的に許容される担体は一般に、用いられる投薬量及び濃度でレシピエントに対して非毒性であり、リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸等の緩衝剤；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化物質；防腐剤（塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム、塩化ヘキサメトニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、フェノール、ブチル、もしくはベンジルアルコール、メチルもしくはプロピルパラベン等のアルキルパラベン、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、３−ペンタノール、及びｍ−クレゾール等）；低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリン等のタンパク質；ポリビニルピロリドン等の親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、もしくはリジン等のアミノ酸；単糖類、二糖類、及びグルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡ等のキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロース、もしくはソルビトール等の糖類；ナトリウム等の塩形成対イオン；金属複合体（例えば、Ｚｎ−タンパク質複合体）、ならびに／またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の非イオン性界面活性剤を含むが、これらに限定されない。本明細書における例示的な薬学的に許容される担体は、可溶性の中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）、例えば、ｒＨｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）、Ｂａｘｔｅｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．）等のヒト可溶性ＰＨ−２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質等の介在性薬物分散剤をさらに含む。ｒＨｕＰＨ２０を含むある特定の例示的なｓＨＡＳＥＧＰ及び使用方法は、米国特許公開第２００５／０２６０１８６号及び同第２００６／０１０４９６８号に記載されている。一態様では、ｓＨＡＳＥＧＰは、コンドロイチナーゼ等の１つ以上のさらなるグリコサミノグリカナーゼと組み合わせられる。
【０２４３】
例示的な凍結乾燥抗体製剤は、米国特許第６，２６７，９５８号に記載されている。水性抗体製剤は、米国特許第６，１７１，５８６号及びＷＯ２００６／０４４９０８に記載されるものを含み、後者の製剤は、ヒスチジン−アセテート緩衝剤を含む。
【０２４４】
本明細書の製剤はまた、治療されている特定の適応症の必要に応じて、１つより多くの活性成分、好ましくは相互に悪影響を及ぼさない相補的活性を有する成分を含有してもよい。例えば、追加の治療剤（例えば、先の本明細書に列記されるものなど、化学療法剤、細胞傷害性薬剤、成長阻害剤、及び／または抗ホルモン剤）をさらに提供することが望ましい場合がある。かかる活性成分は、好適には、意図される目的に有効な量で、組み合わせで存在する。
【０２４５】
活性成分は、例えば、コアセルベーション技法または界面重合によって調製されたマイクロカプセル、例えば、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチン−マイクロカプセル及びポリ−（メチルメタクリレート）マイクロカプセル中に、コロイド薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子、及びナノカプセル）中に、またはマクロエマルジョン中に封入され得る。かかる技法は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０）に開示されている。
【０２４６】
徐放性調製物を調製してもよい。徐放性調製物の好適な例には、抗体を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが含まれ、これらのマトリックスは、成形物品、例えば、フィルム、またはマイクロカプセルの形態である。
【０２４７】
インビボ投与に使用される製剤は、一般に、滅菌のものである。滅菌性は、例えば、滅菌濾過膜を介する濾過によって容易に達成され得る。
【０２４８】
Ｇ．治療方法及び組成物
本発明の抗ＨＥＲ２抗体のいずれか（抗ＨＥＲ２  ＴＤＢを含む）が、治療方法に使用され得る。
【０２４９】
一態様では、薬剤として使用するための抗ＨＥＲ２抗体が提供される。さらなる態様では、細胞増殖性障害（例えば、ＨＥＲ陽性癌等の癌）の治療またはその進行の遅延において使用するための抗ＨＥＲ２抗体が提供される。ある特定の実施形態では、治療方法において使用するための抗ＨＥＲ２抗体が提供される。ある特定の実施形態では、本発明は、細胞増殖性障害を有する個体を治療する方法において使用するための抗ＨＥＲ２抗体を提供し、この方法は、有効量の抗ＨＥＲ２抗体を個体に投与することを含む。一実施形態では、本方法は、例えば、以下に記載されるような、有効量の少なくとも１つの追加の治療剤を個体に投与することをさらに含む。さらなる実施形態では、本発明は、細胞増殖性障害を有する個体において免疫機能の増強に使用するための抗ＨＥＲ２抗体（抗ＨＥＲ２  ＴＤＢ等）を提供する。ある特定の実施形態では、本発明は、エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、例えば、ＣＤ８＋及び／またはＣＤ４＋Ｔ細胞）を活性化する、エフェクター細胞集団を拡張する（増加させる）、標的細胞（例えば、本発明の二重特異性ＴＤＢ抗体など、本発明の抗ＨＥＲ２抗体により認識される第２の生物学的分子を発現する細胞）集団を低減する、及び／または標的細胞（例えば、標的腫瘍細胞）を死滅させるために有効量の抗ＨＥＲ２抗体を個体に投与することを含む、細胞増殖性障害を有する個体の免疫機能を増強する方法において使用するための抗ＨＥＲ２抗体を提供する。上記実施形態のいずれかによる「個体」は、ヒトであり得る。
【０２５０】
さらなる態様では、本発明は、薬剤の製造または調製における抗ＨＥＲ２抗体の使用を提供する。一実施形態では、本薬剤は、細胞増殖性障害（例えば、癌）の治療ためのものである。さらなる実施形態では、本薬剤は、細胞増殖性障害を有する個体に有効量の薬剤を投与することを含む、細胞増殖性障害を治療する方法において使用するためのものである。かかる一実施形態では、本方法は、例えば、以下に記載されるような、有効量の少なくとも１つの追加の治療剤を個体に投与することをさらに含む。さらなる実施形態では、本薬剤は、個体中の、エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、例えば、ＣＤ８＋及び／またはＣＤ４＋Ｔ細胞）を活性化する、エフェクター細胞集団を拡張する（増加させる）、標的細胞（例えば、本発明の二重特異性ＴＤＢ抗体など、本発明の抗ＨＥＲ２抗体により認識される第２の生物学的分子を発現する細胞）集団を低減する、及び／または標的細胞（例えば、標的腫瘍細胞）を死滅させるためのものである。さらなる実施形態では、本薬剤は、エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、例えば、ＣＤ８＋及び／またはＣＤ４＋Ｔ細胞）を活性化する、エフェクター細胞集団を拡張する（増加させる）、標的細胞（例えば、本発明の二重特異性ＴＤＢ抗体など、本発明の抗ＨＥＲ２抗体により認識される第２の生物学的分子を発現する細胞）集団を低減する、及び／または標的細胞（例えば、標的腫瘍細胞）を死滅させるために有効量の薬剤を個体に投与することを含む、細胞増殖性障害を有する個体の免疫機能を増強する方法において使用するためのものである。上記実施形態のいずれかによる「個体」は、ヒトであり得る。
【０２５１】
さらなる態様では、本発明は、細胞増殖性障害（例えば、癌）を治療するための方法を提供する。一実施形態では、本方法は、かかる細胞増殖性障害を有する個体に、有効量の抗ＨＥＲ２抗体を投与することを含む。かかる一実施形態では、本方法は、例えば、以下に記載されるような、有効量の少なくとも１つの追加の治療剤を個体に投与することをさらに含む。上記実施形態のいずれかによる「個体」は、ヒトであり得る。
【０２５２】
さらなる態様では、本発明は、細胞増殖性障害を有する個体において、細胞増殖性障害を有する個体の免疫機能を増強するための方法を提供する。一実施形態では、本方法は、エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、例えば、ＣＤ８＋及び／またはＣＤ４＋Ｔ細胞）を活性化する、エフェクター細胞集団を拡張する（増加させる）、標的細胞（例えば、本発明の二重特異性ＴＤＢ抗体など、本発明の抗ＨＥＲ２抗体により認識される第２の生物学的分子を発現する細胞）集団を低減する、及び／または標的細胞（例えば、標的腫瘍細胞）を死滅させるために有効量の抗ＨＥＲ２抗体を個体に投与することを含む。一実施形態では、「個体」は、ヒトである。
【０２５３】
さらなる態様では、本発明は、ＨＥＲ２陽性癌を含む、ＨＥＲ２を発現する癌の治療方法を提供する。一実施形態では、本方法は、かかる癌を有する個体に、有効量の本発明の抗ＨＥＲ２抗体を投与することを含む。一実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、単一特異性の二価の抗体である。別の実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、抗ＨＥＲ２標的アーム及び抗ＣＤ３標的アームを有する二重特異性ＴＤＢ抗体である。好ましい実施形態では、ＨＥＲ２−ＴＤＢは、患者に有効用量で投与した場合、許容可能な毒性プロファイルを保有する。一実施形態では、許容可能な毒性プロファイルを有するＨＥＲ２−ＴＤＢのＣＤ３アームは、低親和性ＣＤ３アームである。一実施形態では、許容可能な毒性プロファイルを有するＨＥＲ２−ＴＤＢのＣＤ３アームは、４０Ｇ５ｃである。
【０２５４】
本発明の抗体は、療法において、単独で、または他の薬剤と組み合わせのいずれかで使用され得る。例えば、本発明の抗体は、少なくとも１つの追加の治療剤と共投与されてもよい。ある特定の実施形態では、追加の治療剤は、化学治療剤、成長阻害剤、細胞傷害性薬剤、放射線療法で使用される薬剤、抗血管新生剤、アポトーシス剤、抗チューブリン剤、または上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）アンタゴニスト（例えば、チロシンキナーゼ阻害剤）、ＨＥＲ１／ＥＧＦＲ阻害剤（例えば、エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ（商標））、血小板由来成長因子阻害剤（例えば、Ｇｌｅｅｖｅｃ（商標）（メシル酸イマチニブ））、ＣＯＸ−２阻害剤（例えば、セレコキシブ）、インターフェロン、サイトカイン、次の標的、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、ＰＤＧＦＲ−ベータ、ＢｌｙＳ、ＡＰＲＩＬ、ＢＣＭＡ  ＶＥＧＦ、もしくはＶＥＧＦ受容体（複数可）のうちの１つ以上に結合する抗体等の本発明の抗ＨＥＲ２抗体以外の抗体、ＴＲＡＩＬ／Ａｐｏ２、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、または別の生物活性もしくは有機化学剤等の他の薬剤である。
【０２５５】
いくつかの実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストまたは追加の治療剤と組み合わせて対象に投与される。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、抗ＨＥＲ２抗体の投与前または投与後に投与される。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、抗ＨＥＲ２抗体と同時投与される。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストは、ＰＤ−１結合アンタゴニスト、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニスト、及びＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストからなる群から選択される。
【０２５６】
いくつかの実施形態では、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストは、ＰＤ−１結合アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、抗ＰＤ−１抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチド、またはＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１及び／またはＰＤ−Ｌ２との相互作用に起因するシグナル伝達を減少させる、遮断する、阻害する、抑止する、または妨害する他の分子である。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、抗ＰＤ−１抗体である。具体的な実施形態では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＭＤＸ−１１０６（ニボルマブ）である。別の具体的な実施形態では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＭＫ−３４７５（ペンブロリズマブ）である。別の具体的な実施形態では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＣＴ−０１１（ピディリズマブ）である。別の具体的な実施形態では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＡＭＰ−２２４である。別の具体的な実施形態では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＭＥＤ１−０６８０である。別の具体的な実施形態では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＰＤＲ００１である。別の具体的な実施形態では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＲＥＧＮ２８１０である。別の具体的な実施形態では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＢＧＢ−１０８である。
【０２５７】
他の実施形態では、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチド、またはＰＤ−Ｌ１とその結合パートナーのうちの１つ以上、例えば、ＰＤ−１、Ｂ７−１との相互作用に起因するシグナル伝達を減少させる、遮断する、阻害する、抑止する、または妨害する他の分子である。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。さらに別の具体的な実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＭＰＤＬ３２８０Ａ（アテゾリズマブ）である。具体的な実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０である。別の具体的な実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＭＤＸ−１１０５である。別の具体的な実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＭＳＢ００１５７１８Ｃである。さらに別の具体的な実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＭＥＤＩ４７３６である。
【０２５８】
他の実施形態では、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、抗ＰＤ−Ｌ２抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチド、またはＰＤ−Ｌ２とその結合パートナーのうちの１つ以上、例えば、ＰＤ−１との相互作用に起因するシグナル伝達を減少させる、遮断する、阻害する、抑止する、または妨害する他の分子である。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、抗ＰＤ−Ｌ２抗体である。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、イムノアドヘシンである。
【０２５９】
好ましい実施形態では、ＨＥＲ２陽性癌は、ＨＥＲ２陽性乳癌またはＨＥＲ２陽性胃癌である。一実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、ＨＥＲ経路を標的とする１つ以上の追加の治療剤と共投与される。一実施形態では、ＨＥＲ経路を標的とする治療剤は、ＥＧＦＲ阻害剤、ＨＥＲ２阻害剤、ＨＥＲ３阻害剤、及び／またはＨＥＲ４阻害剤から選択される。一実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））、Ｔ−ＤＭ１（Ｋａｄｃｙｌａ（登録商標））、及びペルツズマブ（Ｐｅｒｊｅｔａ（登録商標））から選択される１つ以上の追加の治療剤と共投与される。一実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、トラスツズマブと共投与される。一実施形態では、ＨＥＲ２  ＴＤＢは、Ｔ−ＤＭ１と共投与される。一実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、ペルツズマブと共投与される。一実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、トラスツズマブ及びペルツズマブと共投与される。一実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、Ｔ−ＤＭ１及びペルツズマブと共投与される。
【０２６０】
いくつかの実施形態では、本発明は、追加の治療剤がグルココルチコイドである方法を提供する。一実施形態では、グルココルチコイドは、デキサメタゾンである。
【０２６１】
かかる併用療法には、組み合わせ投与（２つ以上の治療剤が同じまたは別個の製剤中に含まれる）及び別個の投与が含まれ、別個の投与の場合、本発明の抗体の投与は、追加の治療剤（複数可）の投与の前、それと同時、及び／またはその後に行うことができる。一実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体の投与及び追加の治療剤の投与は、互いの約１ヶ月以内、または約１週間、２週間、もしくは３週間以内、または約１、２、３、４、５、もしくは６日以内に生じる。本発明の抗ＨＥＲ２抗体は、放射線療法と組み合わせて使用することもできる。
【０２６２】
本発明の抗体（及び／または任意の追加の治療剤）は、非経口投与、肺内投与、及び鼻腔内投与、ならびに局所治療で所望される場合、病変内投与を含む、任意の好適な手段によって投与することができる。非経口注入には、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、または皮下投与が含まれる。いくつかの実施形態では、抗体は、皮下投与により投与される。いくつかの実施形態では、皮下注射により投与された抗ＨＥＲ２抗体は、患者において、静脈内注射により投与された同じ抗ＨＥＲ２抗体よりも低い毒性応答を呈する。投薬は、投与が短時間であるか長期であるかに部分的に応じて、任意の好適な経路、例えば、静脈内または皮下注射などの注射によるものであってもよい。単回投与または種々の時点にわたる複数回投与、ボーラス投与、及びパルス注入を含むが、これらに限定されない、種々の投薬スケジュールが本明細書で企図される。
【０２６３】
本発明の抗体は、良好な医療行為と一致する様式で、製剤化され、投薬され、投与されるだろう。これに関連して考慮する要因には、治療されている特定の障害、治療されている特定の哺乳動物、個々の患者の臨床状態、障害の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与のスケジューリング、及び医師に既知である他の要因を含む。抗体は必然的にではなく任意に、問題の障害を予防または治療するために現在使用される１つ以上の薬剤と共に製剤化される。かかる他の薬剤の有効量は、製剤中に存在する抗体の量、障害または治療の種類、及び上で考察される他の要因に左右される。これらは一般に、本明細書に記載されるものと同じ投薬量及び投与経路で、または本明細書に記載される投薬量の約１〜９９％で、または適切であると経験的／臨床的に決定される任意の投薬量及び任意の経路で使用される。
【０２６４】
疾患の予防または治療に関して、本発明の抗体の適切な投薬量は（単独で、または１つ以上の他の追加の治療剤と組み合わせて使用される場合）、治療される疾患の種類、抗体の種類、疾患の重症度及び経過、抗体が予防目的または治療目的で投与されるかどうか、以前の療法、患者の病歴、及び抗体への応答、ならびに主治医の裁量に左右される。抗体は好適に、１回で、または一連の治療にわたって患者に投与される。
【０２６５】
一般的な提案として、ヒトに投与される治療有効量の抗ＨＥＲ２抗体は、１回以上の投与によるかにかかわらず、約０．０１〜約１００ｍｇ／患者の体重ｋｇの範囲であろう。いくつかの実施形態では、使用される抗体は、例えば、約０．０１〜約４５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約４０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約３５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約２５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約２０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約１５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約５ｍｇ／ｋｇ、または約０．０１〜約１ｍｇ／ｋｇであり、毎日投与される。一実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＥＲ２抗体は、２１日周期の１日目に、約１００ｍｇ、約２００ｍｇ、約３００ｍｇ、約４００ｍｇ、約５００ｍｇ、約６００ｍｇ、約７００ｍｇ、約８００ｍｇ、約９００ｍｇ、約１０００ｍｇ、約１１００ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１３００ｍｇ、または約１４００ｍｇの用量でヒトに投与される。用量は、注入物等の、単回用量で、または複数回用量（例えば、２回用量または３回用量）で投与されてもよい。病態に応じて数日間以上にわたる反復投与では、治療は一般に、疾患症状の所望の抑制が生じるまで持続されるだろう。抗体の１つの例示的な投薬量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの範囲だろう。したがって、約０．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇの１つ以上の用量（またはそれらの任意の組み合わせ）が、患者に投与され得る。かかる用量は、断続的に、例えば、毎週、または３週間毎に投与されてもよい（例えば、患者が、約２回〜約２０回、または例えば、約６回用量の抗ＨＥＲ２抗体を受容するようにする）。より高い初回負荷量、続いて１回以上のより低い用量が、投与されてもよい。この療法の進行は、従来の技法及びアッセイによって容易に監視される。
【０２６６】
いくつかの実施形態では、本方法は、追加の療法をさらに含み得る。追加の療法は、放射線療法、手術、化学療法、遺伝子療法、ＤＮＡ療法、ウイルス療法、ＲＮＡ療法、免疫療法、骨髄移植、ナノ療法、モノクローナル抗体療法、または前述のものの組み合わせであってもよい。追加の療法は、アジュバント療法またはネオアジュバント療法の形態であり得る。いくつかの実施形態では、追加の療法は、小分子酵素阻害剤または抗転移薬の投与である。いくつかの実施形態では、追加の療法は、副作用制限剤（例えば、治療の副作用の発生及び／または重症度を軽減するよう意図された薬剤、例えば、制嘔吐剤など）の投与である。いくつかの実施形態では、追加の療法は、放射線療法である。いくつかの実施形態では、追加の療法は、手術である。いくつかの実施形態では、追加の療法は、放射線療法と手術との組み合わせである。いくつかの実施形態では、追加の療法は、ガンマ照射である。いくつかの実施形態では、追加の療法は、上述の治療剤のうちの１つ以上の別個の投与であってもよい。
【０２６７】
Ｈ．製品
本発明の別の態様では、上述の障害の治療、予防、及び／または診断に有用な材料を含有する製品が提供される。製品は、容器と、容器上のまたは容器に関連するラベルまたは添付文書と、を含む。好適な容器には、例えば、ボトル、バイアル瓶、シリンジ、ＩＶ溶液バッグ等が挙げられる。容器は、ガラスまたはプラスチックなどの多様な材料から形成され得る。容器は、組成物を単独で、または病態の治療、予防、及び／または診断に有効である別の組成物と組み合わせて保持し、滅菌アクセスポートを有してもよい（例えば、容器は、静脈注射溶液バッグまたは皮下注射針によって貫通可能な栓を有するバイアル瓶であり得る）。組成物中の少なくとも１つの活性薬剤は、本発明の抗体である。ラベルまたは添付文書は、組成物が、選定した病態を治療するために使用されることを示す。さらに、製品は、（ａ）本発明の抗体を含む組成物をその中に収容した第１の容器、及び（ｂ）さらなる細胞傷害性薬剤、さもなければ治療剤を含む組成物をその中に収容した第２の容器を含み得る。本発明のこの実施形態の製品は、組成物を使用して特定の病態を治療することができることを示す添付文書をさらに含み得る。代替的に、または加えて、製品は、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝食塩水、リンガー溶液、及びデキストロース溶液等の薬学的に許容される緩衝液を含む第２（または第３）の容器をさらに含み得る。それは、他の緩衝剤、希釈剤、フィルター、針、及びシリンジを含む、商業的観点及びユーザの観点から望ましい他の材料をさらに含んでもよい。
ＩＩＩ．
【実施例】
【０２６８】
以下は、本発明の方法及び組成物の実施例である。上に提供される一般的説明を考慮すると、種々の他の実施形態が実施され得ることが理解される。
【０２６９】
実施例１．抗ＨＥＲ２抗体の生成及び特徴付け
ｈｕ４Ｄ５の軽鎖可変領域に２つ、及び重鎖可変領域に４つの、ｈｕ４Ｄ５の６つのアミノ酸残基を変異誘発のために選択した。
ＬＣ−Ａｓｎ３０＝位置Ｘ１
ＬＣ−Ｔｈｒ３０＝位置Ｘ２
ＨＣ−Ａｓｎ５４＝位置Ｘ３
ＨＣ−Ｇｌｙ５５＝位置Ｘ４
ＨＣ−Ａｓｐ９８＝位置Ｘ５
ＨＣ−Ｇｌｙ９９＝位置Ｘ６
残基は、図１の配列アライメントに示される。
【０２７０】
残基Ｘ１〜Ｘ６は異なり、突然変異は、Ｋｕｎｋｅｌ部位指向性変異誘発により導入された。Ｋｕｎｋｅｌ  ＴＡ．（１９８５）．’’Ｒａｐｉｄ  ａｎｄ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ  ｓｉｔｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ  ｗｉｔｈｏｕｔ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ．’’（ＰＤＦ）．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｕ  Ｓ  Ａ．８２（２）：４８８−９２。
【０２７１】
軽鎖ＣＤＲ  Ｌ１配列「Ｎ３０、Ｔ３１」は、次の変異：ＱＴ、ＴＴ、ＳＴ、ＥＴ、ＤＴ、及びＮＤを含むように突然変異された。
【０２７２】
重鎖ＣＤＲ  Ｈ２「Ｎ５４、Ｇ５５」は、ＡＧ、ＥＧ、ＳＧ、ＮＡに突然変異された。
【０２７３】
重鎖ＣＤＲ  Ｈ３「Ｄ９８、Ｇ９９」は、ＥＧ、ＴＧ、ＳＧ、ＤＳ、及びＤＴに突然変異された。
【０２７４】
示される残基番号付けは、Ｋａｂａｔに従う。（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．，Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１））
【０２７５】
点突然変異の組み合わせは、野生型ｈｕ４Ｄ５配列を有する、精製された一本鎖重鎖及び軽鎖ＤＮＡ上に導入された。選択された突然変異の組み合わせは、ＨＥＫ２９３細胞においてＦａｂとして発現され、タンパク質Ｇ親和性クロマトグラフィーにより精製された。野生型４Ｄ５Ｆａｂを含む２３Ｆａｂ構築物のそれぞれは、単離され、組み換えヒトＨｅｒ２ＥＣＤ（ヒトＨｅｒ２／ＥｒｂＢ２タンパク質、カタログ番号１０００４−ＨＣＣＨ，Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｃ．）への結合についてスクリーニングされた。
【０２７６】
一価の結合親和性は、Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００機器を使用する表面プラズモン共鳴によって決定された。凍結乾燥された組み換えＨＥＲ２タンパク質は、酢酸緩衝液（ｐＨ５．０）中中２μｇ／ｍｌに希釈された。タンパク質は、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅからのアミンカップリングキット及び製造業者のプロトコル（ＢＲ−１０００−５０）を使用してシリーズＳ  ＣＭ５センサーチップ上に３つの異なる密度で固定化された。
【０２７７】
精製された抗ＨＥＲ２  Ｆａｂを、１．５６ｎＭ〜５０ｎＭの濃度系列で０．５％Ｐ２０、ＨＢＳ−ＥＰ泳動緩衝液中に希釈し、ブランク参照としてフローセル１を使用して全てのフローセルにわたって３０μｌ／分の流量で注入した。各試料を３分間会合及び解離させ、各サイクル後に５０ｍＭ  ＨＣＬを６０秒間注入することにより、各サイクル後の再生を達成した。
【０２７８】
１：１ラングミュア結合モデルを使用して、ｋａ及びｋｄを同時に当てはめることによって反応速度相互作用を特徴付けした。図２。
【０２７９】
実施例２．抗ＨＥＲ２抗体の生成及び特徴付け
野生型ｈｕＭＡｂ４Ｄ５重鎖及び軽鎖の可変ドメインのアミノ酸配列を、ＷＴ  ｈｕＩｇＧ  Ｆｃ、または突然変異を有すＦｃ領域を含有するプラスミドのいずれかを含有するプラスミドにサブクローニングして、ノブまたはホール変異型構築物を作製した（Ｔｒｉｌｌ，  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  １９９５：５５３−５６０）。残基番号は、Ｋａｂａｔに従う（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，５ｔｈ  Ｅｄ．，Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１））。単一特異性の二価の抗体を生成するために、ＷＴ−Ｆｃ重鎖または軽鎖ＤＮＡを含有する別個のプラスミドを哺乳類ＣＨＯ細胞にトランスフェクトすることにより、２つの抗原結合ドメインを有する無償完全長ＩｇＧ１を産生した。モノクローナル抗体を発現させ、標準的な方法により精製した。（Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．ＭＡｂｓ．２０１０Ｓｅｐ−Ｏｃｔ；２（５）：４８０−４９９）。ｋｕｎｋｅｌ変異誘発により指示された位置に突然変異を導入して、４Ｄ５ｖ３の二価の抗体を上記のように産生した。４Ｄ５ｖ３抗体のアミノ酸配列は図１に示される。
2018524312.tif 000003
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＮＡＹＴＲＹＡＤＳＶ  ＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＴＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
ＶＨ：配列番号１１
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧ  ＳＲＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＴＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
ＶＬ：配列番号１０
【０２８０】
位置Ｎ３０、Ｇ５５、及びＤ９８でのアミノ酸の置換は、抗体の脱アミド化または異性化のため、野生型４Ｄ５と比較して、増加した安定性を有する４Ｄ５ｖ３をもたらした。
【０２８１】
抗ＨＥＲ２変異型の親和性
ＨＥＲ２標的に対する抗ＨＥＲ２  ４Ｄ５ｖ３の二価の抗体の結合親和性は、上述の条件を使用して、Ｂｉａｃｏｒｅ分析により決定された。図３は、Ｂｉａｃｏｒｅ分析の結果を示す。４Ｄ５ｖ３は、野生型４Ｄ５の結合親和性よりも約１０倍大きい結合親和性を呈した。したがって、増加した安定性を有することに加えて、４Ｄ５ｖ３も、意外にも、ＨＥＲ２標的に関して増加した親和性を呈した。
【０２８２】
実施例３．抗ＨＥＲ２／ＣＤ３二重特異性抗体の生成及び特徴付け
「Ｔ細胞依存性二重特異性」（ＴＤＢ）抗体とも称される、ある特定の抗ＨＥＲ抗体の有用性が、Ｔ細胞標的治療抗体の分野において、それらの有用性に関して試験された。ＴＤＢ抗体は、Ｔ細胞上の細胞表面抗原（例えば、ＣＤ３）及び腫瘍細胞上の細胞表面抗原を同時に結合することができ、それにより結合Ｔ細胞が腫瘍細胞の破壊に寄与することを可能にする。
【０２８３】
ＣＤ３（４０Ｇ５Ｃ）に指向された１つのアーム及び細胞表面抗原ＨＥＲ２に指向された１つのアームを有する抗ＨＥＲ２  ＴＤＢ抗体、ＨＥＲ２  ＴＤＢは、ヒトＩｇＧ１としてノブ・イントゥ・ホール（ｋｎｏｂ−ｉｎｔｏ−ｈｏｌｅ）形式で完全長抗体として産生された（Ａｔｗｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７０：  ２６−３５，１９９７）。半抗体がタンパク質Ａ−親和性クロマトグラフィーによって精製されたＥ．ｃｏｌｉまたはチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞内のいずれかで発現され、以前に記載されているように（Ｓｐｉｅｓｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１３）、適切な半抗体対がインビトロでアニーリングされた。ＣＨＯ細胞内でＴＤＢ抗体産生を行った場合、ＴＤＢ抗体が、エフェクターのない（ｅｆｆｅｃｔｏｒ−ｌｅｓｓ）変異型であり、抗体依存性の細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を始めることが不可能であるように、抗体は、例えば、残基Ｎ２９７（例えば、Ｎ２９７Ｇ）に非グリコシル化突然変異を含んだ。アニーリング後、ＨＥＲ２  ＴＤＢ抗体を、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）によって精製し、分析用ゲル濾過、質量分析、及びポリアクリルアミドゲル電気泳動によって特徴付けた。これらの方法により、抗ＣＤ３アームとして４０Ｇ５Ｃを有する種々のＨＥＲ２  ＴＤＢが生成された。
【０２８４】
ＨＥＲ２に対する抗ＨＥＲ２  ＴＤＢの親和性
抗ＨＥＲ２／ＣＤ３二重特異性抗体の親和性は、上述の条件を使用して、Ｂｉａｃｏｒｅ分析によりそれらのＨＥＲ２標的に対するそれらの親和性に関して試験された。図４は、Ｂｉａｃｏｒｅ分析の結果を示す。ＴＤＢは、ＨＥＲ２抗原に対するある範囲の結合親和性を示した。４Ｄ５ｖ３、４Ｄ５ｖ２１、及び４Ｄ５ｖ２２の抗体は、野生型４Ｄ５  ＴＤＢの結合親和性よりも約１０倍大きい結合親和性を呈した。
【０２８５】
ＨＥＲ２  ＴＤＢのインビトロ試験
ヒトＰＢＭＣの単離及びＣＤ８＋細胞の精製
リンパ球分離培地Ｌｙｍｐｈｏｐｒｅｐ（ＳｔｅｍＣｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，番号０７８１１）を使用して、ヒトＰＢＭＣを健康なボランディアの血液から分離した。ＣＤ８＋単離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ，番号１３０−０９４−１５６）を使用して、負の選択により、ＣＤ８＋細胞をＰＢＭＣから抽出した。
【０２８６】
インビトロ細胞死滅アッセイ
１日目に、黒色の透明底の９６ウェル皿（Ｃｏｒｎｉｎｇ，番号３９０４）において、１ウェル当たり１０ｋ細胞の密度でＳＫ−ＢＲ−３細胞を平板培養した。２日目に、５：１のＥ：Ｔ比で精製したＣＤ８＋細胞を添加した。２日目に、１０００、１００、１０、１、０．１、０．００１、０．０００１、０．００００１ｎｇ／ｍＬで、細胞をＨＥＲ２  ＴＤＢ変異型で処理するか、または処理しなかった。４日目に、ＣＤ８＋細胞をプレートから取り出し、ウェルをＰＢＳで２ｘ洗浄した。製造業者の指示（Ｐｒｏｍｅｇａ，番号Ｇ７５７２）に従いＣｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ  Ｇｌｏアッセイを行い、プレートを読み取った。
【０２８７】
Ｔ細胞活性化の分析
標的細胞及び精製したＣＤ８＋Ｔ細胞を、種々のＨＥＲ２  ＴＤＢの存在下または不在下で混合した。Ｔ細胞活性化は、フローサイトメトリーによって分析された。インキュベーションが終わった後、細胞を、ＣＤ８−ＦＩＴＣ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，番号５５５６３４）及びＣＤ６９−ＰＥ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，番号５５５５３１）ならびにＣＤ２５−ＡＰＣ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，番号５５５４３４）で染色した。
【０２８８】
結果
精製したヒトＣＤ８＋細胞及びＨＥＲ２発現標的細胞系を使用して４Ｄ５−４０Ｇ５変異型の機能的活性を評価するために、細胞死滅アッセイを行った。変異型２０〜２４は、ＷＴ４Ｄ５−４０Ｇ５及び４Ｄ５ｖ３−４０Ｇ５変異型の両方と類似する死滅活性を呈した。変異型のうち、４Ｄ５ｖ２３が最も弱かった。死滅アッセイは３つの別個のドナーで繰り返された。結果は各事例において類似した。図５Ａ〜５Ｃ。
【０２８９】
変異型は、Ｔ細胞活性を誘導するそれらの能力に関しても試験された。試験した変異型の全てが２人の患者からから単離された細胞を使用したアッセイにおいて細胞活性を示した。Ｔ細胞活性の結果は、ＣＤ８＋細胞における活性化が最も弱く、インビトロ死滅が最も弱かった４Ｄ５ｖ２３の死滅アッセイとの一致を示した。死滅及びＴ細胞活性化の両方において、４Ｄ５ｖ３、４Ｄ５ｖ２０、及び４Ｄ５ｖ２４は、エフェクターにおいて最も大きい活性及び標的に対してより高い効力を示す。図６
【０２９０】
他の実施形態
前述の発明が明確な理解のために例証及び例によって多少詳しく説明されているが、これらの説明及び例は、本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。本明細書で引用される全ての特許及び科学文献の開示は、参照によりそれらの全体が明示的に組み込まれる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
2018524312.tif 000006
【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
2018524312.tif 000009
【図５Ｃ】
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【図６Ａ】
2018524312.tif 000011
【図６Ｂ】
2018524312.tif 000012
【配列表】
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【国際調査報告】
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