(57)【要約】本願は、阻害剤ホスホイノシチド３−キナーゼ−デルタ（ＰＩ３Ｋδ）として有用である（Ｒ）−４−（３−（（Ｓ）−１−（４−アミノ−３−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）エチル）−５−クロロ−２−エトキシ−６−フルオロフェニル）ピロリジン−２−オンを調製するためのプロセス、ならびにそれに関連する塩形態及び中間体を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（Ｒ）−４−（３−（（Ｓ）−１−（４−アミノ−３−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）エチル）−５−クロロ−２−エトキシ−６−フルオロフェニル）ピロリジン−２−オン塩酸塩である塩。
【請求項２】
（Ｒ）−４−（３−（（Ｓ）−１−（４−アミノ−３−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）エチル）−５−クロロ−２−エトキシ−６−フルオロフェニル）ピロリジン−２−オン対塩酸の化学量論比が１：１である、請求項１に記載の塩。
【請求項３】
結晶である、請求項１または２に記載の塩。
【請求項４】
実質的に単離されている、請求項１〜３のいずれか一項に記載の塩。
【請求項５】
約２０７℃で吸熱ピークを有するＤＳＣサーモグラムを特徴とする、請求項１〜４のいずれか一項に記載の塩。
【請求項６】
図１に実質的に示されるＤＳＣサーモグラムを有する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の塩。
【請求項７】
図２に実質的に示されるＴＧＡサーモグラムを有する、請求項１〜６のいずれか一項に記載の塩。
【請求項８】
２θで、約１１．３°、約１６．４°、約２１．０°、約２３．０°、約２８．１°、約３１．２°、及び約３２．８°から選択される少なくとも１つのＸＲＰＤピークを有する、請求項１〜７のいずれか一項に記載の塩。
【請求項９】
２θで、約１１．３°、約１６．４°、約２１．０°、約２３．０°、約２８．１°、約３１．２°、及び約３２．８°から選択される少なくとも２つのＸＲＰＤピークを有する、請求項１〜７のいずれか一項に記載の塩。
【請求項１０】
２θで、約１１．３°、約１６．４°、約２１．０°、約２３．０°、約２８．１°、約３１．２°、及び約３２．８°から選択される少なくとも３つのＸＲＰＤピークを有する、請求項１〜７のいずれか一項に記載の塩。
【請求項１１】
２θで、約１１．３°、約１６．４°、約２１．０°、約２３．０°、約２８．１°、約３１．２°、及び約３２．８°から選択される少なくとも４つのＸＲＰＤピークを有する、請求項１〜７のいずれか一項に記載の塩。
【請求項１２】
２θで、約１１．３°、約１６．４°、約２１．０°、約２３．０°、約２８．１°、約３１．２°、及び約３２．８°から選択される少なくとも５つのＸＲＰＤピークを有する、請求項１〜７のいずれか一項に記載の塩。
【請求項１３】
図３に実質的に示されるＸＲＰＤプロファイルを有する、請求項１〜７のいずれか一項に記載の塩。
【請求項１４】
請求項１〜１３のいずれか一項に記載の塩と、薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物。
【請求項１５】
ＰＩ３Ｋキナーゼの活性を阻害する方法であって、前記キナーゼを、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の塩と接触させることを含む、前記方法。
【請求項１６】
前記ＰＩ３ＫがＰＩ３Ｋδである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記塩が、ＰＩ３Ｋα、ＰＩ３ＫβまたはＰＩ３Ｋγの１以上よりもＰＩ３Ｋδに選択的な阻害剤である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
患者における疾患を処置する方法であって、前記疾患が、ＰＩ３Ｋキナーゼの異常発現または活性に関連しており、前記患者に、治療有効量の請求項１〜１３のいずれか一項に記載の塩を投与することを含む、前記方法。
【請求項１９】
前記疾患が、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、自己免疫性溶血性貧血、血管炎、全身性エリテマトーデス、ループス腎炎、天疱瘡、自己免疫性溶血性貧血（ＡＩＨＡ）、膜性腎症、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、有毛細胞白血病、マントル細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、小リンパ球性リンパ腫、濾胞性リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、節外辺縁帯リンパ腫、ホジキンリンパ腫、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、前リンパ球性白血病、急性リンパ芽球性白血病、骨髄線維症、粘膜関連リンパ組織（ＭＡＬＴ）リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、縦隔（胸腺）大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、リンパ腫様肉芽腫症、脾性辺縁帯リンパ腫、原発性滲出液リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、形質細胞白血病、髄外性形質細胞腫、くすぶり型骨髄腫（無症状型骨髄腫として知られている）、意義不明の単クローン性免疫グロブリン血症（ＭＧＵＳ）及びＢ細胞リンパ腫から選択される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
再発性ＩＴＰ及び難治性ＩＴＰから選択される特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）を処置する方法である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
ベーチェット病、コーガン症候群、巨細胞性動脈炎、リウマチ性多発筋痛（ＰＭＲ）、高安動脈炎、バージャー病（閉塞性血栓血管炎）、中枢神経系血管炎、川崎病、結節性多発動脈炎、チャーグ・ストラウス症候群、混合型クリオグロブリン血症血管炎（本態性またはＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）誘発性）、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病（ＨＳＰ）、過敏性血管炎、顕微鏡的多発性血管炎、ウェゲナー肉芽腫症、及び抗好中球細胞質抗体関連（ＡＮＣＡ）全身性血管炎（ＡＡＳＶ）から選択される血管炎を処置する方法である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
再発性ＮＨＬ、難治性ＮＨＬ、及び再発濾胞性ＮＨＬから選択される非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を処置する方法である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２３】
Ｂ細胞リンパ腫を処置する方法であって、前記Ｂ細胞リンパ腫が、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２４】
Ｂ細胞リンパ腫を処置する方法であって、前記Ｂ細胞リンパ腫が、活性化Ｂ細胞型（ＡＢＣ）びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、または胚中心Ｂ細胞（ＧＣＢ）びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２５】
前記疾患が、骨関節炎、再狭窄、アテローム性動脈硬化症、骨障害、関節炎、糖尿病性網膜症、乾癬、前立腺肥大症、炎症、血管形成、膵炎、腎疾患、炎症性腸疾患、重症筋無力症、多発性硬化症、またはシェーグレン症候群である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２６】
前記疾患が、関節リウマチ、アレルギー、喘息、糸球体腎炎、ループス、または前記のいずれかに関係する炎症である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２７】
ループスが、全身性エリテマトーデスまたはループス腎炎である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記疾患が、乳がん、前立腺がん、結腸がん、子宮内膜がん、脳がん、膀胱がん、皮膚がん、子宮のがん、卵巣のがん、肺がん、膵臓がん、腎臓がん、胃がん、または血液がんである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２９】
前記血液がんが、急性骨髄芽球性白血病または慢性骨髄性白血病である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記疾患が、急性肺損傷（ＡＬＩ）または成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）である、請求項１８に記載の方法。
【請求項３１】
請求項１〜１３のいずれか一項に記載の塩を調製するプロセスであって、式Ｉの化合物：
【化１】
2018510144.tif 000080
を塩酸と反応させて、前記塩を形成することを含む、前記プロセス。
【請求項３２】
前記塩酸が１Ｍ塩酸水である、請求項３１に記載のプロセス。
【請求項３３】
１当量の前記式Ｉの化合物を基準にして約３．３〜約３．７当量の塩酸が使用される、請求項３１または３２に記載のプロセス。
【請求項３４】
前記反応が、約４５℃〜約５５℃の温度で行われる、請求項３１〜３３のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項３５】
塩酸を式Ｉの化合物に室温で添加してスラリーを形成することと；
前記スラリーを約４５℃〜約５５℃の温度に加熱して溶液を形成することと；
前記溶液を約０℃〜約５℃の温度に冷却して前記塩を結晶化することと
を含む、請求項３１〜３３のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項３６】
式ＸＶＩの化合物：
【化２】
2018510144.tif 000081
を酢酸ホルムアミジンと反応させて式Ｉの化合物を形成すること：
【化３】
2018510144.tif 000082
を含むプロセス。
【請求項３７】
前記式ＸＶＩの化合物と酢酸ホルムアミジンとの前記反応が、１，２−エタンジオールを含む溶媒成分中で行われる、請求項３６に記載のプロセス。
【請求項３８】
前記式ＸＶＩの化合物と酢酸ホルムアミジンとの前記反応が、約１００℃〜約１０５℃の温度で実施される、請求項３６または３７に記載のプロセス。
【請求項３９】
１当量の前記式ＸＶＩの化合物を基準にして約８〜約１０当量の酢酸ホルムアミジンが使用される、請求項３６〜３８のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項４０】
前記式ＸＶＩの化合物を、式ＸＶの化合物：
【化４】
2018510144.tif 000083
を第３級アミンの存在下で（１−エトキシエチリデン）マロノニトリルと反応させることを含むプロセスによって調製することをさらに含む、請求項３６〜３９のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項４１】
前記第３級アミンが、Ｎ−メチルピロリジノンである、請求項４０に記載のプロセス。
【請求項４２】
前記式ＸＶの化合物と（１−エトキシエチリデン）マロノニトリルとの前記反応が、約室温で実施される、請求項４０または４１に記載のプロセス。
【請求項４３】
前記式ＸＶの化合物を、式ＸＩＶ−ａの化合物：
【化５】
2018510144.tif 000084
を第３級アミンの存在下でヒドラジンと反応させることを含むプロセスによって調製することをさらに含み、Ｐ１が、Ｃ１〜６アルキルスルホニルである、請求項４０〜４２のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項４４】
前記第３級アミンが、Ｎ−メチルピロリジノンである、請求項４３に記載のプロセス。
【請求項４５】
前記式ＸＩＶ−ａの化合物とヒドラジンとの前記反応が、約３５℃〜約６０℃の温度で実施される、請求項４３または４４に記載のプロセス。
【請求項４６】
前記式ＸＩＶ−ａの化合物とヒドラジンとの前記反応が、ジクロロメタンを含む溶媒成分中で行われる、請求項４３〜４５のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項４７】
Ｐ１が、メタンスルホニル基である、請求項４３〜４６のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項４８】
前記式ＸＩＶの化合物を、式ＸＩＩＩの化合物：
【化６】
2018510144.tif 000085
を第３級アミンの存在下でＣ１〜６アルキルスルホニルハライドと反応させることを含むプロセスによって調製することをさらに含む、請求項４３〜４７のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項４９】
前記Ｃ１〜６アルキルスルホニルハライドが、塩化メタンスルホニルである、請求項４８に記載のプロセス。
【請求項５０】
前記第３級アミンが、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンである、請求項４８または４９に記載のプロセス。
【請求項５１】
１当量の前記式ＸＩＩＩの化合物を基準にして約１．１〜約１．５当量のアルキルスルホニルハライドが使用される、請求項４８〜５０のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項５２】
前記式ＸＩＩＩの化合物とＣ１〜６アルキルスルホニルハライドとの前記反応が、約−１０℃〜約５℃の温度で実施される、請求項４８〜５１のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項５３】
前記式ＸＩＩＩの化合物とＣ１〜６アルキルスルホニルハライドとの前記反応が、ジクロロメタンを含む溶媒成分中で実施される、請求項４８〜５２のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項５４】
（ｉ）前記式ＸＩＩＩの化合物をＣ１〜６アルキルスルホニルハライドと反応させるステップ；（ｉｉ）前記式ＸＩＶ−ａの化合物を第３級アミンの存在下でヒドラジンと反応させて式ＸＶの化合物を形成するステップ；及び（ｉｉｉ）前記式ＸＶの化合物を酢酸ホルムアミジンと反応させて式ＸＶＩの化合物を形成するステップが、前記式ＸＩＶ−ａの化合物または前記式ＸＶの化合物を単離することなく同じポットにおいて行われる、請求項３６〜５３のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項５５】
前記式ＸＶＩの化合物を、式ＸＶ−ａの塩：
【化７】
2018510144.tif 000086
を第３級アミンの存在下で（１−エトキシエチリデン）マロノニトリルと反応させることを含むプロセスによって調製することをさらに含み、ＴｓＯＨがｐ−トルエンスルホン酸である、請求項３６〜３９のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項５６】
前記第３級アミンが、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンである、請求項５５に記載のプロセス。
【請求項５７】
式ＸＶ−ａの塩と（１−エトキシエチリデン）マロノニトリルとの前記反応が、約室温で実施される、請求項５５または５６に記載のプロセス。
【請求項５８】
１当量の前記式ＸＶ−ａの塩を基準にして約１．３〜約１．６当量の（１−エトキシエチリデン）マロノニトリルが使用される、請求項５５〜５７のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項５９】
前記式ＸＶ−ａの塩と（１−エトキシエチリデン）マロノニトリルとの前記反応が、エタノールを含む溶媒成分中で行われる、請求項５５〜５８のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項６０】
前記式ＸＶ−ａの塩を、式ＸＸＩの化合物：
【化８】
2018510144.tif 000087
をｐ−トルエンスルホン酸と反応させることを含むプロセスによって調製することをさらに含み、Ｂｏｃがｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルである、請求項５５〜５９のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項６１】
前記ｐ−トルエンスルホン酸が、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物である、請求項６０に記載のプロセス。
【請求項６２】
１当量の前記式ＸＸＩの化合物を基準にして約１．３〜約１．６当量のｐ−トルエンスルホン酸が使用される、請求項６０または６１に記載のプロセス。
【請求項６３】
前記式ＸＸＩの化合物とｐ−トルエンスルホン酸との前記反応が、約４５℃〜約６５℃の温度で実施される、請求項６０〜６２のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項６４】
前記式ＸＸＩの化合物とｐ−トルエンスルホン酸との前記反応が、エタノールを含む溶媒成分中で行われる、請求項６０〜６３のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項６５】
（ｉ）前記式ＸＸＩの化合物をｐ−トルエンスルホン酸と反応させて式ＸＶ−ａの塩を形成するステップ；及び（ｉｉ）前記式ＸＶ−ａの塩を（１−エトキシエチリデン）マロノニトリルと反応させるステップが、前記式ＸＶ−ａの塩を単離することなく同じポットにおいて行われる、請求項６０〜６４のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項６６】
前記式ＸＸＩの化合物を、式ＸＸの化合物：
【化９】
2018510144.tif 000088
を独立して選択される１種以上の水素化触媒の存在下で水素ガスと反応させることを含むプロセスによって調製することをさらに含み、Ｂｏｃがｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルである、請求項６０〜６５のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項６７】
前記式ＸＸの化合物と水素ガスとの前記反応が、独立して選択される２種の水素化触媒の存在下で実施される、請求項６６に記載のプロセス。
【請求項６８】
一方の水素化触媒が、テトラフルオロホウ酸ビス（１，５−シクロオクタジエン）ロジウム（Ｉ）であり、他方が、（Ｒ）−（−）−１−｛（Ｓ）−２−［ビス（４−トリフルオロメチルフェニル）ホスフィン］フェロセニル｝エチル−ジ−ｔ−ブチルホスフィンである、請求項６７に記載のプロセス。
【請求項６９】
１当量の前記式ＸＸの化合物を基準にして約１３．５〜約１４．５当量のテトラフルオロホウ酸ビス（１，５−シクロオクタジエン）ロジウム（Ｉ）が使用される、請求項６８に記載のプロセス。
【請求項７０】
１当量の前記式ＸＸの化合物を基準にして約１２〜約１３当量の（Ｒ）−（−）−１−｛（Ｓ）−２−［ビス（４−トリフルオロメチルフェニル）ホスフィン］フェロセニル｝エチル−ジ−ｔ−ブチルホスフィンが使用される、請求項６８または６９に記載のプロセス。
【請求項７１】
前記式ＸＸの化合物と水素ガスとの前記反応が、約室温で実施される、請求項６６〜７０のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項７２】
前記式ＸＸの化合物と水素ガスとの前記反応が、メタノールを含む溶媒成分中で行われる、請求項６６〜７１のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項７３】
前記式ＸＸの化合物を、式ＸＩＸの化合物：
【化１０】
2018510144.tif 000089
をカルバジン酸ｔ−ブチルと反応させることを含むプロセスによって調製することをさらに含む、請求項６６〜７２のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項７４】
前記式ＸＩＸの化合物とカルバジン酸ｔ−ブチルとの前記反応が、約６０℃〜約７０℃の温度で実施される、請求項７３に記載のプロセス。
【請求項７５】
前記式ＸＩＸの化合物とカルバジン酸ｔ−ブチルとの前記反応が、メタノールを含む溶媒成分中で行われる、請求項７３または７４に記載のプロセス。
【請求項７６】
前記式ＸＩＸの化合物を、式ＸＩＩＩ−ａの化合物：
【化１１】
2018510144.tif 000090
を酸化剤の存在下で酸化することを含むプロセスによって調製することをさらに含む、請求項７３〜７５のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項７７】
前記酸化剤がデス−マーチンペルヨージナンである、請求項７６に記載のプロセス。
【請求項７８】
１当量の前記式ＸＩＩＩ−ａの化合物を基準にして約１．２〜約１．７当量の前記酸化剤が使用される、請求項７６または７７に記載のプロセス。
【請求項７９】
前記式ＸＩＩＩ−ａの化合物の前記酸化が、約室温で実施される、請求項７６〜７８のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項８０】
前記式ＸＩＩＩ−ａの化合物の前記酸化が、ジクロロメタンを含む溶媒成分中で行われる、請求項７６〜７９のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項８１】
式ＸＩＶの化合物：
【化１２】
2018510144.tif 000091
またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項８２】
式ＸＶの化合物：
【化１３】
2018510144.tif 000092
またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項８３】
式ＸＶＩの化合物：
【化１４】
2018510144.tif 000093
またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項８４】
式ＸＩＸの化合物：
【化１５】
2018510144.tif 000094
またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項８５】
式ＸＸの化合物：
【化１６】
2018510144.tif 000095
またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項８６】
式ＸＸＩの化合物：
【化１７】
2018510144.tif 000096
またはその薬学的に許容可能な塩。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この出願は、全体が参照により本明細書に組み込まれる、２０１５年２月２７日に提出された米国特許出願第６２／１２１，６９７号の利益を主張する。
【０００２】
本願は、ホスホイノシチド３−キナーゼ−デルタ（ＰＩ３Ｋδ）の阻害剤として有用である（Ｒ）−４−（３−（（Ｓ）−１−（４−アミノ−３−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）エチル）−５−クロロ−２−エトキシ−６−フルオロフェニル）ピロリジン−２−オンを調製するためのプロセス、ならびにそれに関連する塩形態及び中間体を提供する。
【背景技術】
【０００３】
ホスホイノシチド３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）は、イノシトール環のＤ３位でホスホイノシチドをリン酸化する脂質シグナル伝達キナーゼの大きなファミリーに属する（Ｃａｎｔｌｅｙ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００２，２９６（５５７３）：１６５５−７）。ＰＩ３Ｋは、構造、調節及び基質特異性にしたがって３つのクラス（クラスＩ、ＩＩ、及びＩＩＩ）に分けられる。ＰＩ３Ｋα、ＰＩ３Ｋβ、ＰＩ３Ｋγ、及びＰＩ３Ｋδを含むクラスＩのＰＩ３Ｋは、ホスファチジルイノシト−４，５−ビスホスファート（ＰＩＰ２）のリン酸化を触媒してホスファチジルイノシト−３，４，５−トリスホスファート（ＰＩＰ３）を生じさせる二重特異性脂質及びプロテインキナーゼのファミリーである。ＰＩＰ３は、成長、生存、接着及び移動を含めた多数の細胞プロセスを制御するセカンドメッセンジャーとして機能する。４つのクラスＩ  ＰＩ３Ｋアイソフォームは、全て、触媒サブユニット（ｐ１１０）と、その発現、活性化及び細胞内局在性を制御する緊密に会合した調節サブユニットとで構成されたヘテロダイマーとして存在する。ＰＩ３Ｋα、ＰＩ３Ｋβ及びＰＩ３Ｋδは、ｐ８５として公知の調節サブユニットと会合しており、チロシンキナーゼ依存性メカニズムを通して成長因子及びサイトカインによって活性化されるが（Ｊｉｍｅｎｅｚ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．，２００２，２７７（４４）：４１５５６−６２）、一方で、ＰＩ３Ｋγは、調節サブユニット（ｐ１０１及びｐ８４）と会合しており、その活性化は、Ｇ−タンパク質共役受容体の活性化によって駆動される（Ｂｒｏｃｋ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，２００３，１６０（１）：８９−９９）。ＰＩ３Ｋα及びＰＩ３Ｋβは、遍在的に発現される。対照的に、ＰＩ３Ｋγ及びＰＩ３Ｋδは、大部分が白血球において発現される（Ｖａｎｈａｅｓｅｂｒｏｅｃｋ，ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｓｃｉ．，２００５，３０（４）：１９４−２０４）。
【０００４】
ＰＩ３Ｋアイソフォームの差次的な組織分布は、それらの明白に異なる生物学的機能の要因となる。ＰＩ３ＫαまたはＰＩ３Ｋβのいずれかの遺伝子除去は、胚致死を結果として生じさせ、このことは、ＰＩ３Ｋα及びＰＩ３Ｋβが、少なくとも発達の際に、必須かつ非重複的な機能を有することを示している（Ｖａｎｈａｅｓｅｂｒｏｅｃｋ，ｅｔ  ａｌ．，２００５）。対照的に、ＰＩ３Ｋγ及びＰＩ３Ｋδが欠失したマウスは、生存可能で繁殖力があり、正常な寿命を有するが、改変された免疫系を示す。ＰＩ３Ｋγの欠損は、炎症の部位へのマクロファージ及び好中球の動員障害、ならびにＴ細胞活性化障害をもたらす（Ｓａｓａｋｉ，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０００，２８７（５４５５）：１０４０−６）。ＰＩ３Ｋδ−変異マウスは、Ｂ細胞の発達の障害及び抗原刺激後の抗体反応の低下をもたらすＢ細胞シグナル伝達において特異的欠陥を有する（Ｃｌａｙｔｏｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．２００２，１９６（６）：７５３−６３；Ｊｏｕ，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．２００２，２２（２４）：８５８０−９１；Ｏｋｋｅｎｈａｕｇ，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００２，２９７（５５８３）：１０３１−４）。
【０００５】
ＰＩ３Ｋγ及びＰＩ３Ｋδ−変異マウスの表現型は、これらの酵素が、炎症及び他の免疫に基づく疾患において役割を担う場合があることを示唆しており、このことは、前臨床モデルにおいて裏付けられている。ＰＩ３Ｋγ−変異マウスは、関節リウマチ（ＲＡ）及び喘息のマウスモデルにおいて疾患から大いに保護される（Ｃａｍｐｓ，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｍｅｄ．２００５，１１（９）：９３６−４３；Ｔｈｏｍａｓ，ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００５，３５（４）：１２８３−９１）。また、ＰＩ３Ｋγの選択的阻害剤による野生型マウスの処置は、全身性のループス腎炎（ＳＬＥ）のＭＲＬ−ｌｐｒモデルにおいて糸球体腎炎を低減して生存を延長すること、ならびに、ＲＡのモデルにおいて関節の炎症及び損傷を抑制することが示された（Ｂａｒｂｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｍｅｄ．２００５，１１（９）：９３３−５；Ｃａｍｐｓ，ｅｔ  ａｌ．，２００５）。同様に、ＰＩ３Ｋδの選択的阻害剤で処置されたＰＩ３Ｋδ−変異マウス及び野生型マウスの両方が、喘息のマウスモデルにおいてアレルギー性の気道炎症及び過敏性を軽減し（Ａｌｉ，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．２００４，４３１（７０１１）：１００７−１１；Ｌｅｅ，ｅｔ  ａｌ．，ＦＡＳＥＢ  Ｊ．２００６，２０（３）：４５５−６５）、ＲＡのモデルにおいて疾患を軽減すること（Ｒａｎｄｉｓ，ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２００８，３８（５）：１２１５−２４）が示されている。
【０００６】
Ｂ細胞増殖は、炎症性自己免疫疾患の発症において主要な役割を担うことが示されている（Ｐｕｒｉ，Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２０１２），３（２５６），１−１６；Ｗａｌｓｈ，Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ（２００７）７２，６７６−６８２）。例えば、Ｂ細胞は、炎症性自己免疫疾患の重要な構成要素であるＴ細胞自己反応性をサポートする。Ｂ細胞は、一旦活性化及び成熟されると、炎症の部位に移動して、炎症細胞を動員させまたは形質芽球に分化し得る。このように、Ｂ細胞の活性は、Ｂ細胞刺激性サイトカイン、Ｂ細胞表面受容体を標的化することによって、またはＢ細胞枯渇を介して影響され得る。リツキシマブ−Ｂ細胞表面受容体ＣＤ２０を対象としたＩｇＧ１κマウス／ヒトキメラ化モノクローナル抗体−は、ＣＤ２０＋Ｂ細胞を枯渇させることが示されている。リツキシマブの使用は、特発性血小板減少性紫斑病、自己免疫性溶血性貧血または血管炎を処置するのに効果があることが示されている。例えば、リツキシマブによる処置は、末梢Ｂ細胞枯渇が実証されている抗好中球細胞質抗体関連（ＡＮＣＡ）全身性血管炎（ＡＡＳＶ）に罹患している患者における疾患の緩和を結果として生じさせた（Ｗａｌｓｈ，２００７；Ｌｏｖｒｉｃ，Ｎｅｐｈｒｏｌ  Ｄｉａｌ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ（２００９）２４：１７９−１８５）。同様に、他の処置に耐性があるまたは耐えられない重篤な血管炎形態を示す患者を含めた、リツキシマブによる処置後の混合型クリオグロブリン血症血管炎を有する患者の３分の１〜３分の２において、完全寛解が報告された（Ｃａｃｏｕｂ，Ａｎｎ  Ｒｈｅｕｍ  Ｄｉｓ  ２００８；６７：２８３−２８７）。同様に、リツキシマブは、特発性血小板減少性紫斑病（または免疫性血小板減少性紫斑病）（Ｇａｒｖｅｙ，Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ，（２００８）１４１，１４９−１６９；Ｇｏｄｅａｕ，Ｂｌｏｏｄ（２００８），１１２（４），９９９−１００４；Ｍｅｄｅｏ，Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ，（２００８）８１，１６５−１６９）及び自己免疫性溶血性貧血（Ｇａｒｖｅｙ，Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ，（２００８）１４１，１４９−１６９）を有する患者の処置において効果があることが示されている。
【０００７】
ＰＩ３Ｋδシグナル伝達は、Ｂ細胞の生存、移動及び活性化に関係している（Ｐｕｒｉ，Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２０１２，３（２５６），１−１６，１〜５頁；及びＣｌａｙｔｏｎ，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ，２００２，１９６（６）：７５３−６３）。例えば、ＰＩ３Ｋδは、Ｂ細胞受容体によって駆動される抗原依存性Ｂ細胞活性化を必要とする。Ｂ細胞の接着、生存、活性化及び増殖を遮断することによって、ＰＩ３Ｋδ阻害が、Ｂ細胞がＴ細胞を活性化する能力を付与することで、活性化を防止し、かつ、自己抗体及び炎症性サイトカインの分泌を低減することができる。そのため、Ｂ細胞の活性化を阻害する能力により、ＰＩ３Ｋδ阻害剤が、リツキシマブによるＢ細胞枯渇などの同様の方法によって処置可能であるＢ細胞媒介疾患を処置することが期待された。実際、ＰＩ３Ｋδ阻害剤は、関節炎などの、リツキシマブによって処置可能でもある種々の自己免疫疾患の有用なマウスモデルであることが示されている（Ｐｕｒｉ（２０１２））。さらに、自己免疫に関連する生来のＢ細胞は、ＭＺ及びＢ−１細胞がｐ１１０δ遺伝子を欠失するマウスにおいてほとんど存在しないため、ＰＩ３Ｋδ活性に感受性である（Ｐｕｒｉ（２０１２）。ＰＩ３Ｋδ阻害剤は、自己免疫疾患に関わるＭＺ及びＢ−１細胞の輸送及び活性化を低減することができる。
【０００８】
免疫疾患におけるこれらの潜在的な役割に加えて、４つのクラスＩ  ＰＩ３Ｋアイソフォームは、全て、がんにおいて役割を担う場合がある。ｐ１１０αをコードする遺伝子は、乳、前立腺、結腸及び子宮内膜がんを含めた一般的ながんにおいて頻繁に突然変異する（Ｓａｍｕｅｌｓ，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００４，３０４（５６７０）：５５４；Ｓａｍｕｅｌｓ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｏｎｃｏｌ．２００６，１８（１）：７７−８２）。これらの突然変異の８０％が、酵素のヘリックスまたはキナーゼドメインにおける３つのアミノ酸置換のうち１つによって表され、キナーゼ活性の有意な上方調節をもたらし、細胞培養及び動物モデルにおいて発がん性形質転換を結果として生じさせる（Ｋａｎｇ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．２００５，１０２（３）：８０２−７；Ｂａｄｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．２００６，１０３（５）：１４７５−９）。かかる突然変異は、他のＰＩ３Ｋアイソフォームにおいて同定されていないが、悪性腫瘍の発達及び進行に寄与し得るという証拠がある。ＰＩ３Ｋδの一貫した過剰発現は、急性骨髄芽球性白血病において観察され（Ｓｕｊｏｂｅｒｔ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，２００５，１０６（３）：１０６３−６）、ＰＩ３Ｋδの阻害剤は、白血病細胞の成長を防止し得る（Ｂｉｌｌｏｔｔｅｔ，ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ．２００６，２５（５０）：６６４８−５９）。ＰＩ３Ｋγの高度発現は、慢性骨髄性白血病において見られる（Ｈｉｃｋｅｙ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２００６，２８１（５）：２４４１−５０）。ＰＩ３Ｋβ，ＰＩ３Ｋγ及びＰＩ３Ｋδの発現の改変はまた、脳、結腸及び膀胱のがんにおいても観察されている（Ｂｅｎｉｓｔａｎｔ，ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，２０００，１９（４４）：５０８３−９０；Ｍｉｚｏｇｕｃｈｉ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒａｉｎ  Ｐａｔｈｏｌ．２００４，１４（４）：３７２−７；Ｋｎｏｂｂｅ，ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ  Ａｐｐｌ  Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．２００５，３１（５）：４８６−９０）。さらに、これらのアイソフォームは、全て、細胞培養において発がん性であることが示されている（Ｋａｎｇ，ｅｔ  ａｌ．，２００６）。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
これらの理由から、炎症性障害、自己免疫疾患及びがんに使用され得る新規のＰＩ３Ｋ阻害剤を開発する必要性がある。この発明は、この必要性などを対象とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本願は、ＰＩ３Ｋδの阻害剤として有用である、式Ｉの化合物
【化１】
2018510144.tif 000002
またはその薬学的に許容可能な塩を調製するプロセスを提供する。
【００１１】
本願は、式Ｉの化合物の塩酸塩をさらに提供する。
【００１２】
本願はまた、本明細書に記載されている塩酸塩と、薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物も提供する。
【００１３】
本願は、ＰＩ３Ｋキナーゼの活性を阻害する方法であって、キナーゼを式Ｉの化合物の塩酸塩と接触させることを含む、上記方法をさらに提供する。
【００１４】
本願はまた、患者における疾患を処置する方法であって、上記疾患が、ＰＩ３Ｋキナーゼの異常発現または活性に関連しており、上記患者に、治療有効量の式Ｉの化合物の塩酸塩を投与することを含む、上記方法も提供する。
【００１５】
本願は、本明細書に記載されている方法のいずれかにおいて使用される式Ｉの化合物の塩酸塩を加えて提供する。
【００１６】
本願は、本明細書に記載されている方法のいずれかにおいて使用される薬剤の製造のための式Ｉの化合物の塩酸塩の使用をさらに提供する。
【００１７】
本願はまた、式Ｉの化合物の塩酸塩を調製するプロセスであって、式Ｉの化合物：
【化２】
2018510144.tif 000003
を塩酸と反応させて、上記塩を形成することを含む、上記プロセスも提供する。
【００１８】
本願は、式Ｉの化合物を調製するプロセスであって、式ＸＶＩの化合物：
【化３】
2018510144.tif 000004
を酢酸ホルムアミジンと反応させて、上記式Ｉの化合物：
【化４】
2018510144.tif 000005
を形成することを含む、上記プロセスを加えて提供する。
【００１９】
本願は、式ＸＩＶの化合物：
【化５】
2018510144.tif 000006
またはその薬学的に許容可能な塩をさらに提供する。
【００２０】
本願はまた、式ＸＶの化合物：
【化６】
2018510144.tif 000007
またはその薬学的に許容可能な塩も提供する。
【００２１】
本願は、式ＸＶＩの化合物：
【化７】
2018510144.tif 000008
またはその薬学的に許容可能な塩を加えて提供する。
【００２２】
本願は、式ＸＩＸの化合物：
【化８】
2018510144.tif 000009
またはその薬学的に許容可能な塩をさらに提供する。
【００２３】
本願はまた、式ＸＸの化合物：
【化９】
2018510144.tif 000010
またはその薬学的に許容可能な塩も提供する。
【００２４】
本願は、式ＸＸＩの化合物：
【化１０】
2018510144.tif 000011
またはその薬学的に許容可能な塩を加えて提供する。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】図１は、実施例３の塩に代表的なＤＳＣサーモグラムを示す。
【図２】図２は、実施例３の塩に代表的なＴＧＡデータを示す。
【図３】図３は、実施例３の塩に代表的なＸＲＰＤパターンを示す。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
化合物及び塩
本願は、ＰＩ３Ｋδの阻害剤として有用である、式Ｉの化合物：
【化１１】
2018510144.tif 000012
またはその薬学的に許容可能な塩を調製するプロセスであって、Ｅｔがエチルである、上記プロセスを提供する。
【００２７】
本願は、式Ｉの化合物の塩をさらに提供する。
【００２８】
したがって、いくつかの実施形態において、本願は、４−（３−（１−（４−アミノ−３−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）エチル）−５−クロロ−２−エトキシ−６−フルオロフェニル）ピロリジン−２−オン塩酸塩を提供する。いくつかの実施形態において、本願は、（Ｒ）−４−（３−（（Ｓ）−１−（４−アミノ−３−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）エチル）−５−クロロ−２−エトキシ−６−フルオロフェニル）ピロリジン−２−オン塩酸塩を提供する。いくつかの実施形態において、塩は、（Ｒ）−４−（３−（（Ｓ）−１−（４−アミノ−３−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）エチル）−５−クロロ−２−エトキシ−６−フルオロフェニル）ピロリジン−２−オン対塩酸の化学量論比が１：１である。
【００２９】
同じ物質の異なる形態は、例えば、吸湿性、溶解性、安定性などに関する異なるバルク特性を有する。高融点を有する形態は、多くの場合、固体形態を含有する薬物製剤の寿命を延長するのに有利である良好な熱力学的安定性を有する。より低融点を有する形態は、多くの場合、熱力学的にあまり安定でないが、増大した水溶性を有して、薬物バイオアベイラビリティの増大につながるという点において有利である。弱吸湿性である形態は、熱及び湿気に対する安定性に関して望ましく、長期保存の際の劣化に耐性である。
【００３０】
いくつかの実施形態において、本明細書において提供される式Ｉの化合物の塩酸塩は、結晶である。本明細書において使用されているとき、「結晶」または「結晶形態」は、結晶物質のある特定の格子構成を称することが意図される。同じ物質の異なる結晶形態は、結晶形態の各々に特徴的である異なる物性に起因する異なる結晶格子（例えば、単位セル）を典型的には有する。いくつかの場合において、異なる格子構成は、異なる水または溶媒含有率を有する。
【００３１】
異なる塩形態は、固体状態の特性決定方法によって、例えば、Ｘ線粉末回折（ＸＲＰＤ）によって同定され得る。他の特性決定方法、例えば、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）、熱重量分析（ＴＧＡ）、動的水蒸気吸着（ＤＶＳ）などは、形態の同定をさらに助け、また、安定性及び溶媒／水含有率の決定をさらに助ける。
【００３２】
反射（ピーク）のＸＲＰＤパターンは、典型的には、特定の結晶形態の明確な特徴であるとされる。ＸＲＰＤピークの相対強度は、とりわけ、サンプル調製技術、結晶サイズ分布、使用される種々のフィルタ、サンプル取り付け手順、及び用いられる具体的な機器に応じて広範に変動し得ることが周知である。いくつかの場合において、機器の種類または設定に応じて、新しいピークが観察される場合があり、または既存のピークが現れる場合がある。本明細書において使用されているとき、用語「ピーク」は、最大ピーク高さ／強度の少なくとも約４％の相対高さ／強度を有する反射を称する。また、機器の変更及び他の因子が２θ値に影響し得る。このように、ピーク指定、例えば、本明細書において報告されているものは、±約０．２°（２θ）変動する可能性があり、用語「実質的」及び「約」は、本明細書におけるＸＲＰＤの文脈において使用されているとき、上記の変動を包含することが意図される。
【００３３】
いくつかの実施形態において、式Ｉの化合物の塩酸塩は、２θで、約１１．３°、約１６．４°、約２１．０°、約２３．０°、約２８．１°、約３１．２°、及び約３２．８°から選択される少なくとも１つのＸＲＰＤピークを有する。いくつかの実施形態において、式Ｉの化合物の塩酸塩は、２θで、約１１．３°、約１６．４°、約２１．０°、約２３．０°、約２８．１°、約３１．２°、及び約３２．８°から選択される少なくとも２つのＸＲＰＤピークを有する。いくつかの実施形態において、式Ｉの化合物の塩酸塩は、２θで、約１１．３°、約１６．４°、約２１．０°、約２３．０°、約２８．１°、約３１．２°、及び約３２．８°から選択される少なくとも３つのＸＲＰＤピークを有する。いくつかの実施形態において、式Ｉの化合物の塩酸塩は、２θで、約１１．３°、約１６．４°、約２１．０°、約２３．０°、約２８．１°、約３１．２°、及び約３２．８°から選択される少なくとも４つのＸＲＰＤピークを有する。いくつかの実施形態において、式Ｉの化合物の塩酸塩は、２θで、約１１．３°、約１６．４°、約２１．０°、約２３．０°、約２８．１°、約３１．２°、及び約３２．８°から選択される少なくとも５つのＸＲＰＤピークを有する。いくつかの実施形態において、式Ｉの化合物の塩酸塩は、図３に示されるＸＲＰＤプロファイルを実質的に有する。
【００３４】
同じように、ＤＳＣ、ＴＧＡまたは他の熱的実験に関連する温度の読み取りは、機器、具体的な設定、サンプル調製などに応じて約±３℃変動し得る。したがって、結晶形態は、図のいずれかに「実質的に」示されるＤＳＣサーモグラムを有すると本明細書において報告されており、または、用語「約」は、かかる変動を受容すると理解される。いくつかの実施形態において、式Ｉの化合物の塩酸塩は、約２０７℃に吸熱ピークを有するＤＳＣサーモグラムを有する。いくつかの実施形態において、式Ｉの化合物の塩酸塩は、図１に実質的に示されるＤＳＣサーモグラムを有する。いくつかの実施形態において、式Ｉの化合物の塩酸塩は、図２に実質的に示されるＴＧＡサーモグラムを有する。
【００３５】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載されている塩及び化合物（例えば、式Ｉの化合物または式Ｉの化合物の塩酸塩）は、実質的に単離されている。「実質的に単離されている」は、塩または化合物が、形成または検出される環境から少なくとも部分的または実質的に分離されていることを意味している。部分的な分離は、例えば、本明細書に記載されている塩が富化された組成物を含むことができる。実質的な分離は、少なくとも約５０重量％、少なくとも約６０重量％、少なくとも約７０重量％、少なくとも約８０重量％、少なくとも約９０重量％、少なくとも約９５重量％、少なくとも約９７重量％、もしくは少なくとも約９９重量％の本明細書に記載されている塩を含有する組成物、またはその塩を含むことができる。化合物及びこれらの塩を単離するための方法は、当該分野において常套的である。
【００３６】
中間体
本願は、式Ｉの化合物の調製に有用である中間体をさらに提供する。
【００３７】
したがって、いくつかの実施形態において、本願は、式ＸＩＶの化合物：
【化１２】
2018510144.tif 000013
またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【００３８】
本願は、式ＸＶの化合物：
【化１３】
2018510144.tif 000014
またはその薬学的に許容可能な塩をさらに提供する。
【００３９】
本願は、式ＸＶＩの化合物：
【化１４】
2018510144.tif 000015
またはその薬学的に許容可能な塩をさらに提供する。
【００４０】
本願は、式ＸＩＸの化合物：
【化１５】
2018510144.tif 000016
またはその薬学的に許容可能な塩をさらに提供する。
【００４１】
本願は、式ＸＸの化合物：
【化１６】
2018510144.tif 000017
またはその薬学的に許容可能な塩をさらに提供する。
【００４２】
本願は、式ＸＸＩの化合物：
【化１７】
2018510144.tif 000018
またはその薬学的に許容可能な塩をさらに提供する。
【００４３】
プロセス
本願は、式Ｉの塩：
【化１８】
2018510144.tif 000019
を調製するプロセスをさらに提供する。
【００４４】
いくつかの実施形態において、上記プロセスは、式Ｉの化合物：
【化１９】
2018510144.tif 000020
を塩酸と反応させて、上記塩を形成することを含む。
【００４５】
いくつかの実施形態において、上記塩酸は、１Ｍ塩酸水溶液である。
【００４６】
いくつかの実施形態において、１当量の式Ｉの化合物を基準にして約３．３〜約３．７当量の塩酸が使用される。
【００４７】
いくつかの実施形態において、上記反応は、約４５℃〜約５５℃の温度で実施される。
【００４８】
いくつかの実施形態において、上記プロセスは：
塩酸を式Ｉの化合物に室温で添加してスラリーを形成することと；
上記スラリーを約４５℃〜約５５℃の温度に加熱して溶液を形成することと；
溶液を約０℃〜約５℃の温度に冷却して上記塩を結晶化することと
を含む。
【００４９】
いくつかの実施形態において、上記プロセスは、式ＸＶＩの化合物：
【化２０】
2018510144.tif 000021
を酢酸ホルムアミジンと反応させて式Ｉの化合物：
【化２１】
2018510144.tif 000022
を形成することを含む。
【００５０】
いくつかの実施形態において、式ＸＶＩの化合物と酢酸ホルムアミジンとの上記反応は、１，２−エタンジオールを含む溶媒成分中で行われる。
【００５１】
いくつかの実施形態において、式ＸＶＩの化合物と酢酸ホルムアミジンとの上記反応は、約１００℃〜約１０５℃の温度で実施される。
【００５２】
いくつかの実施形態において、１当量の式ＸＶＩの化合物を基準にして約８〜約１０当量の酢酸ホルムアミジンが使用される。
【００５３】
いくつかの実施形態において、上記プロセスは、式ＸＶＩの化合物を、式ＸＶの化合物：
【化２２】
2018510144.tif 000023
を第３級アミンの存在下で（１−エトキシエチリデン）マロノニトリルと反応させることを含むプロセスによって調製することをさらに含む。
【００５４】
いくつかの実施形態において、上記第３級アミンは、Ｎ−メチルピロリジノンである。
【００５５】
いくつかの実施形態において、式ＸＶの化合物と（１−エトキシエチリデン）マロノニトリルとの上記反応は、約室温で実施される。
【００５６】
いくつかの実施形態において、上記プロセスは、式ＸＶの化合物を、式ＸＩＶ−ａの化合物：
【化２３】
2018510144.tif 000024
を第３級アミンの存在下でヒドラジンと反応させることを含むプロセスによって調製することをさらに含み、Ｐ１が、Ｃ１〜６アルキルスルホニルである。
【００５７】
いくつかの実施形態において、上記第３級アミンは、Ｎ−メチルピロリジノンである。
【００５８】
いくつかの実施形態において、式ＸＩＶ−ａの化合物とヒドラジンとの上記反応は、約３５℃〜約６０℃の温度で実施される。
【００５９】
いくつかの実施形態において、式ＸＩＶ−ａの化合物とヒドラジンとの上記反応は、ジクロロメタンを含む溶媒成分中で行われる。
【００６０】
いくつかの実施形態において、Ｐ１は、メタンスルホニル基である。
【００６１】
いくつかの実施形態において、上記プロセスは、式ＸＩＶの化合物を、式ＸＩＩＩの化合物：
【化２４】
2018510144.tif 000025
を第３級アミンの存在下でＣ１〜６アルキルスルホニルハライドと反応させることを含むプロセスによって調製することをさらに含む。
【００６２】
いくつかの実施形態において、上記Ｃ１〜６アルキルスルホニルハライドは、塩化メタンスルホニルである。
【００６３】
いくつかの実施形態において、上記第３級アミンは、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンである。
【００６４】
いくつかの実施形態において、１当量の式ＸＩＩＩの化合物を基準にして約１．１〜約１．５当量のアルキルスルホニルハライドが使用される。
【００６５】
いくつかの実施形態において、式ＸＩＩＩの上記化合物とＣ１〜６アルキルスルホニルハライドとの上記反応は、約−１０℃〜約５℃の温度で実施される。
【００６６】
いくつかの実施形態において、式ＸＩＩＩの上記化合物とＣ１〜６アルキルスルホニルハライドとの上記反応は、ジクロロメタンを含む溶媒成分中で実施される。
【００６７】
いくつかの実施形態において、（ｉ）上記式ＸＩＩＩの化合物をＣ１〜６アルキルスルホニルハライドと反応させるステップ；（ｉｉ）上記式ＸＩＶ−ａの化合物を第３級アミンの存在下でヒドラジンと反応させて式ＸＶの化合物を形成するステップ；及び（ｉｉｉ）上記式ＸＶの化合物を酢酸ホルムアミジンと反応させて式ＸＶＩの化合物を形成するステップは、式ＸＩＶ−ａの化合物または式ＸＶの化合物を単離することなく同じポットにおいて行われる。
【００６８】
いくつかの実施形態において、上記プロセスは、式ＸＶＩの化合物を、式ＸＶ−ａの塩：
【化２５】
2018510144.tif 000026
を第３級アミンの存在下で（１−エトキシエチリデン）マロノニトリルと反応させることを含むプロセスによって調製することをさらに含み、ＴｓＯＨがｐ−トルエンスルホン酸である。
【００６９】
いくつかの実施形態において、上記第３級アミンは、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンである。
【００７０】
いくつかの実施形態において、式ＸＶ−ａの塩と（１−エトキシエチリデン）マロノニトリルとの上記反応は、約室温で実施される。
【００７１】
いくつかの実施形態において、１当量の式ＸＶ−ａの塩を基準にして約１．３〜約１．６当量の（１−エトキシエチリデン）マロノニトリルが使用される。
【００７２】
いくつかの実施形態において、式ＸＶ−ａの塩と（１−エトキシエチリデン）マロノニトリルとの上記反応は、エタノールを含む溶媒成分中で行われる。
【００７３】
いくつかの実施形態において、上記プロセスは、式ＸＶ−ａの塩を、式ＸＸＩの化合物：
【化２６】
2018510144.tif 000027
をｐ−トルエンスルホン酸と反応させることを含むプロセスによって調製することをさらに含み、Ｂｏｃがｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルである。
【００７４】
いくつかの実施形態において、上記ｐ−トルエンスルホン酸は、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物である。
【００７５】
いくつかの実施形態において、１当量の式ＸＸＩの化合物を基準にして約１．３〜約１．６当量のｐ−トルエンスルホン酸が使用される。
【００７６】
いくつかの実施形態において、上記式ＸＸＩの化合物とｐ−トルエンスルホン酸との上記反応は、約４５℃〜約６５℃の温度で実施される。
【００７７】
いくつかの実施形態において、上記式ＸＸＩの化合物とｐ−トルエンスルホン酸との上記反応は、エタノールを含む溶媒成分中で行われる。
【００７８】
いくつかの実施形態において、（ｉ）上記式ＸＸＩの化合物をｐ−トルエンスルホン酸と反応させて式ＸＶ−ａの塩を形成するステップ；及び（ｉｉ）上記式ＸＶ−ａの塩を（１−エトキシエチリデン）マロノニトリルと反応させるステップは、式ＸＶ−ａの塩を単離することなく同じポットにおいて行われる。
【００７９】
いくつかの実施形態において、上記プロセスは、式ＸＸＩの化合物を、式ＸＸの化合物：
【化２７】
2018510144.tif 000028
を独立して選択される１種以上の水素化触媒の存在下で水素ガスと反応させることを含むプロセスによって調製することをさらに含み、Ｂｏｃがｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルである。
【００８０】
いくつかの実施形態において、式ＸＸの化合物と水素ガスとの上記反応は、独立して選択される２種の水素化触媒の存在下で実施される。
【００８１】
いくつかの実施形態において、一方の水素化触媒が、テトラフルオロホウ酸ビス（１，５−シクロオクタジエン）ロジウム（Ｉ）であり、他方が、（Ｒ）−（−）−１−｛（Ｓ）−２−［ビス（４−トリフルオロメチルフェニル）ホスフィン］フェロセニル｝エチル−ジ−ｔ−ブチルホスフィンである。
【００８２】
いくつかの実施形態において、１当量の式ＸＸの化合物を基準にして約１３．５〜約１４．５当量のテトラフルオロホウ酸ビス（１，５−シクロオクタジエン）ロジウム（Ｉ）が使用される。
【００８３】
いくつかの実施形態において、１当量の式ＸＸの化合物を基準にして約１２〜約１３当量の（Ｒ）−（−）−１−｛（Ｓ）−２−［ビス（４−トリフルオロメチルフェニル）ホスフィン］フェロセニル｝エチル−ジ−ｔ−ブチルホスフィンが使用される。
【００８４】
いくつかの実施形態において、式ＸＸの化合物と水素ガスとの上記反応は、約室温で実施される。
【００８５】
いくつかの実施形態において、式ＸＸの化合物と水素ガスとの上記反応は、メタノールを含む溶媒成分中で行われる。
【００８６】
いくつかの実施形態において、上記プロセスは、式ＸＸの化合物を、式ＸＩＸの化合物：
【化２８】
2018510144.tif 000029
をカルバジン酸ｔ−ブチルと反応させることを含むプロセスによって調製することをさらに含む。
【００８７】
いくつかの実施形態において、式ＸＩＸの化合物とカルバジン酸ｔ−ブチルとの上記反応は、約６０℃〜約７０℃の温度で実施される。
【００８８】
いくつかの実施形態において、式ＸＩＸの化合物とカルバジン酸ｔ−ブチルとの上記反応は、メタノールを含む溶媒成分中で行われる。
【００８９】
いくつかの実施形態において、上記プロセスは、式ＸＩＸの化合物を、式ＸＩＩＩ−ａの化合物：
【化２９】
2018510144.tif 000030
を酸化剤の存在下で酸化することを含むプロセスによって調製することをさらに含む。
【００９０】
いくつかの実施形態において、上記酸化剤は、デス−マーチンペルヨージナンである。
【００９１】
いくつかの実施形態において、１当量の式ＸＩＩＩ−ａの化合物を基準にして約１．２〜約１．７当量の上記酸化剤が使用される。
【００９２】
いくつかの実施形態において、式ＸＩＩＩ−ａの化合物の上記酸化は、約室温で実施される。
【００９３】
いくつかの実施形態において、式ＸＩＩＩ−ａの化合物の上記酸化は、ジクロロメタンを含む溶媒成分中で行われる。
【００９４】
いくつかの実施形態において、上記式ＸＩＩＩの化合物は、式ＸＩＩの化合物：
【化３０】
2018510144.tif 000031
を溶媒成分の存在下で加熱することを含むプロセスによって調製される。
【００９５】
いくつかの実施形態において、上記加熱は、約９５℃〜約１０５℃の温度で実施される。
【００９６】
いくつかの実施形態において、上記溶媒成分は、１，４−ジオキサンを含む。
【００９７】
いくつかの実施形態において、上記溶媒成分は、トルエンを含む。
【００９８】
いくつかの実施形態において、上記溶媒成分は、１，４−ジオキサン及びトルエンを含む。
【００９９】
いくつかの実施形態において、上記式ＸＩＩの化合物は、式ＸＩの化合物：
【化３１】
2018510144.tif 000032
を強塩基の存在下で反応させることを含むプロセスによって調製される。
【０１００】
いくつかの実施形態において、上記強塩基は、水酸化ナトリウムである。
【０１０１】
いくつかの実施形態において、上記強塩基は、１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液である。
【０１０２】
いくつかの実施形態において、上記反応は、約室温で実施される。
【０１０３】
いくつかの実施形態において、上記式ＸＩの化合物は、式Ｘの化合物：
【化３２】
2018510144.tif 000033
をラネーニッケルの存在下で水素ガスと反応させることを含むプロセスによって調製される。
【０１０４】
いくつかの実施形態において、上記反応は、約５０℃〜約７０℃の温度で実施される。
【０１０５】
いくつかの実施形態において、上記式Ｘの化合物は、式ＩＸの化合物：
【化３３】
2018510144.tif 000034
を三フッ化ホウ素エーテラート、（３ａＳ）−１−メチル−３，３−ジフェニルテトラヒドロ−３Ｈ−ピロロ［１，２−ｃ］［１，３，２］オキサザボロール（（Ｓ）−ＭｅＣＢＳ）触媒及びボラン錯体の存在下で反応させるプロセスによって調製される。
【０１０６】
いくつかの実施形態において、１当量の式ＩＸの化合物を基準にして約０．０３〜約０．０７当量の三フッ化ホウ素エーテラートが使用される。
【０１０７】
いくつかの実施形態において、１当量の式ＩＸの化合物を基準にして約０．０５〜約０．１５当量の（３ａＳ）−１−メチル−３，３−ジフェニルテトラヒドロ−３Ｈ−ピロロ［１，２−ｃ］［１，３，２］オキサザボロール（（Ｓ）−ＭｅＣＢＳ）触媒が使用される。
【０１０８】
いくつかの実施形態において、上記ボラン錯体は、ＴＨＦ中１．０Ｍのボラン−ＴＨＦ錯体である。
【０１０９】
いくつかの実施形態において、１当量の式ＩＸの化合物を基準にして約０．９〜約１．１当量のボラン錯体が使用される。
【０１１０】
いくつかの実施形態において、上記反応は、約室温で実施される。
【０１１１】
いくつかの実施形態において、上記式ＩＸの化合物は、式ＶＩＩＩの化合物：
【化３４】
2018510144.tif 000035
を溶媒成分の存在下でヨウ素と反応させることを含むプロセスによって調製される。
【０１１２】
いくつかの実施形態において、上記溶媒成分は、アセトンを含む。
【０１１３】
いくつかの実施形態において、１当量の式ＶＩＩＩの化合物を基準にして約０．７５〜約１．２５当量のヨウ素が使用される。
【０１１４】
いくつかの実施形態において、上記式ＶＩＩＩの化合物は、式ＶＩＩの化合物：
【化３５】
2018510144.tif 000036
を触媒の存在下でマロン酸ジメチルと反応させることを含むプロセスによって調製される。
【０１１５】
いくつかの実施形態において、上記触媒は、（１Ｓ，２Ｓ）−Ｎ，Ｎ’−ジベンジルシクロヘキサン−１，２−ジアミン−ジブロモニッケル（Ｅｖａｎｓの触媒）である。
【０１１６】
いくつかの実施形態において、１当量の式ＶＩＩの化合物を基準にして約１．１〜約１．３当量のマロン酸ジメチルが使用される。
【０１１７】
いくつかの実施形態において、１当量の式ＶＩＩの化合物を基準にして約０．０２〜約０．０３当量の遷移金属触媒が使用される。
【０１１８】
いくつかの実施形態において、上記式ＶＩＩの化合物は、式ＶＩの化合物：
【化３６】
2018510144.tif 000037
を有機酸の存在下でニトロメタンと反応させて第１混合物を形成することを含むプロセスによって調製される。
【０１１９】
いくつかの実施形態において、上記有機酸は氷酢酸である。
【０１２０】
いくつかの実施形態において、１当量の式ＶＩの化合物を基準にして約９．５〜約１０．５当量のニトロメタンが使用される。
【０１２１】
いくつかの実施形態において、上記反応は、アミン塩基を上記第１混合物に添加して第２混合物を形成することをさらに含む。
【０１２２】
いくつかの実施形態において、上記アミン塩基は、ベンジルアミンである。
【０１２３】
いくつかの実施形態において、１当量の式ＶＩの化合物を基準にして約０．２〜約０．３当量のアミンが使用される。
【０１２４】
いくつかの実施形態において、上記第２混合物は、約５５℃〜約６５℃で加熱される。
【０１２５】
いくつかの実施形態において、上記式ＶＩの化合物は、式Ｖの化合物：
【化３７】
2018510144.tif 000038
を（Ｃ１〜４アルキル）マグネシウムハライド錯体と反応させて第１混合物を形成することを含むプロセスによって調製される。
【０１２６】
いくつかの実施形態において、上記（Ｃ１〜４アルキル）マグネシウムハライド錯体は、１．３Ｍ塩化イソプロピルマグネシウム塩化リチウム錯体である。
【０１２７】
いくつかの実施形態において、１当量の式Ｖの化合物を基準にして約１．１〜約１．３当量の上記（Ｃ１〜４アルキル）マグネシウムハライド錯体が使用される。
【０１２８】
いくつかの実施形態において、上記反応は、Ｎ−ホルミルモルホリンを上記第１混合物に添加して第２混合物を形成することをさらに含む。
【０１２９】
いくつかの実施形態において、１当量の式Ｖの化合物を基準にして約１．８〜約２．２当量のＮ−ホルミルモルホリンが使用される。
【０１３０】
いくつかの実施形態において、上記反応は、約−５℃〜約１０℃の温度で実施される。
【０１３１】
いくつかの実施形態において、上記式Ｖの化合物は、米国特許出願公開第２０１３−００５９８３５Ａｌ号に記載されている手順にしたがって調製される。
【０１３２】
いくつかの実施形態において、上記式ＶＩの化合物は、式Ｖ−ａの化合物：
【化３８】
2018510144.tif 000039
をリチウムジイソプロピルアミドの存在下でＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドと反応させることを含むプロセスによって調製される。
【０１３３】
いくつかの実施形態において、上記リチウムジイソプロピルアミドは、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミンをｎ−ブチルリチウムの存在下で反応させることによって調製される。
【０１３４】
いくつかの実施形態において、上記リチウムジイソプロピルアミドは、約−７５℃〜約５℃の温度で調製される。
【０１３５】
いくつかの実施形態において：
（ｉｉ）上記式Ｖ−ａの化合物は、リチウムジイソプロピルアミドと反応して第１混合物を形成し；
（ｉｉ）Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドは、上記第１混合物に添加されて第２混合物を形成する。
【０１３６】
いくつかの実施形態において、１当量の式Ｖ−ａの化合物を基準にして約１．２〜約１．３当量のアミン塩基が使用される。
【０１３７】
いくつかの実施形態において、１当量の式Ｖ−ａの化合物を基準にして約１．４〜約１．６当量のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドが使用される。
【０１３８】
いくつかの実施形態において、上記式Ｖ−ａの化合物は、式ＩＶ−ａの化合物：
【化３９】
2018510144.tif 000040
をｐ−トルエンスルホン酸の存在下で１，２−エタンジオールと反応させることを含むプロセスによって調製される。
【０１３９】
いくつかの実施形態において、上記ｐ−トルエンスルホン酸は、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物である。
【０１４０】
いくつかの実施形態において、１当量の式ＩＶ−ａの化合物を基準にして約２．２〜約２．７当量の１，２−エタンジオールが使用される。
【０１４１】
いくつかの実施形態において、１当量の式ＩＶ−ａの化合物を基準にして約０．０５〜約０．１当量のｐ−トルエンスルホン酸が使用される。
【０１４２】
いくつかの実施形態において、上記反応は、およそ還流で実施される。
【０１４３】
いくつかの実施形態において、上記式ＩＶ−ａの化合物は、式ＩＩの化合物：
【化４０】
2018510144.tif 000041
をアルカリ金属カーボネート塩基の存在下でＣＨ２ＣＨ２−Ｘ１と反応させることを含むプロセスによって調製され：
Ｘ１がハライドである。
【０１４４】
いくつかの実施形態において、Ｘ１はヨージドである。
【０１４５】
いくつかの実施形態において、上記アルカリ金属カーボネート塩基は、炭酸カリウムである。
【０１４６】
いくつかの実施形態において、１当量の式ＩＩの化合物を基準にして約１．１〜約１．３当量のＣＨ２ＣＨ２−Ｘ１が使用される。
【０１４７】
いくつかの実施形態において、１当量の式ＩＩの化合物を基準にして約１．８〜約２．２当量のアルカリ金属カーボネート塩基が使用される。
【０１４８】
いくつかの実施形態において、上記反応は、約５５℃〜約６５℃の温度で実施される。
【０１４９】
いくつかの実施形態において、上記式ＩＩの化合物は、米国特許出願公開第２０１３−００５９８３５Ａｌ号に記載されている手順にしたがって調製される。
【０１５０】
明確のために別個の実施形態の文脈に記載されている本発明のある一定の特徴は、（これらの実施形態は、あたかも、複数の従属形式で書かれているかのように、組み合わされることが意図されるが）単一の実施形態で組み合わせて提供されてもよいことが認識される。逆に、簡潔のために単一の実施形態の文脈において記載されている本発明の種々の特徴は、別個にまたはいずれの好適なサブ組み合わせで提供されてもよい。
【０１５１】
本明細書に記載されている塩及び化合物は、非対称であることができる（例えば、１以上の立体中心を有する）。立体化学が示されていないときには、構造または名称によって別途示されていない限り、全ての立体異性体、例えば、エナンチオマー及びジアステレオマーが意図される。非対称置換炭素原子を含有する本願の塩及び化合物は、光学活性またはラセミ体で分離され得る。光学不活性な出発物質から光学活性形態をどのように調製するかについての方法は、当該分野において公知であり、例えば、ラセミ混合物の分割による、または立体選択的合成によるものである。オレフィン、Ｃ＝Ｎ二重結合などの多くの幾何学的異性体もまた、本明細書に記載されている塩及び化合物に存在する可能性があり、全てのかかる安定な異性体が本願において企図される。本願の塩及び化合物のシス及びトランス幾何学的異性体が記載されており、異性体の混合物として、または別個の異性体形態として単離されてよい。
【０１５２】
塩及び化合物のラセミ混合物の分割は、当該分野において公知の多数の方法のいずれかによって実施され得る。例となる方法として、光学活性な塩形成性有機酸であるキラル分割酸を使用した分画再結晶が挙げられる。分画再結晶方法に好適な分割剤は、例えば、光学活性酸、例えば、酒石酸、ジアセチル酒石酸、ジベンゾイル酒石酸、マンデリン酸、リンゴ酸、乳酸または種々の光学活性カンファースルホン酸、例えば、β−カンファースルホン酸のＤ及びＬ形態である。分画結晶化方法に好適な他の分割剤として、α−メチルベンジルアミン（例えば、Ｓ及びＲ形態またはジアステレオマー的に純粋な形態）、２−フェニルグリシノール、ノルエフェドリン、エフェドリン、Ｎ−メチルエフェドリン、シクロヘキシルエチルアミン、１，２−ジアミノシクロヘキサンなどの立体異性的に純粋な形態が挙げられる。
【０１５３】
ラセミ混合物の分割はまた、光学活性分割剤（例えば、ジニトロベンゾイルフェニルグリシン）が充填されたカラムにおいて溶離によっても実施され得る。好適な溶離溶媒組成は、当業者によって決定され得る。
【０１５４】
本発明の塩及び化合物はまた、中間体または最終塩もしくは化合物において生じる原子の全ての同位体を含むこともできる。同位体として、同じ原子番号であるが異なる質量数を有する原子を含む。例えば、水素の同位体として、三重水素及び重水素が挙げられる。
【０１５５】
いくつかの実施形態において、塩及び化合物は、他の物質、例えば、水及び溶媒（例えば水和物及び溶媒和物）と一緒に見出され得、または単離され得る。
【０１５６】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載されている化合物、またはその塩（例えば、式Ｉの化合物の塩酸塩）は、実質的に単離されている。「実質的に単離されている」は、化合物が、形成または検出された環境から少なくとも部分的または実質的に分離されていることを意味する。部分的な分離は、本発明の化合物が富化された組成物を例えば含むことができる。実質的な分離は、少なくとも約５０重量％、少なくとも約６０重量％、少なくとも約７０重量％、少なくとも約８０重量％、少なくとも約９０重量％、少なくとも約９５重量％、少なくとも約９７重量％、または少なくとも約９９重量％の本発明の化合物またはその塩を含有する組成物を含むことができる。化合物及びこれらの塩を単離するための方法は、当該分野において常套的である。
【０１５７】
句「薬学的に許容可能な」は、妥当なリスクベネフィット比に見合っている、適切な医学的判断の範囲内で過度の毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症を伴わずにヒト及び動物の組織と接触して使用するのに好適である化合物、材料、組成物、及び／または投薬形態を称するのに本明細書において用いられる。
【０１５８】
本明細書において提供される化合物は、その塩を含めて、認識されるように、公知の有機合成技術を使用して調製され得、多数の可能な合成経路のいずれかによって合成され得る。本明細書に記載されているプロセスは、当該分野において公知のいずれかの好適なによってモニタリングされ得る。例えば、生成物の形成は、分光学的手段、例えば、核磁気共鳴分光学（例えば、１Ｈまたは１３Ｃ）、赤外線分光学、もしくは分光測光法（例えば、ＵＶ−可視）によって；またはクロマトグラフィ、例えば、高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）もしくは薄層クロマトグラフィ（ＴＬＣ）または他の関連技術によってモニタリングされ得る。
【０１５９】
本明細書において使用されているとき、用語「反応させる」は、当該分野において公知であるように使用され、分子レベルでの相互作用により化学的または物理的変換を達成させるような方法で化学試薬を共に合わせることを一般に称する。いくつかの実施形態において、反応には２つの試薬が関与しており、第１試薬に対して１以上の当量の第２試薬が使用される。本明細書に記載されているプロセスの反応ステップは、同定される生成物を調製するのに好適な時間及び条件で行われ得る。
【０１６０】
本明細書に記載されているプロセスの反応は、有機合成の分野の当業者によって容易に選択され得る好適な溶媒中で実施され得る。好適な溶媒は、反応が実施される温度、例えば、溶媒の凍結温度から溶媒の沸騰温度までの範囲であり得る温度において、出発物質（反応体）、中間体、または生成物と実質的に非反応性であり得る。所与の反応が、１種の溶媒または１種を超える溶媒の混合物において実施され得る。具体的な反応ステップに応じて、具体的な反応ステップに好適な溶媒が選択され得る。
【０１６１】
好適な溶媒として、ハロゲン化溶媒、例えば、四塩化炭素、ブロモジクロロメタン、ジブロモクロロメタン、ブロモホルム、クロロホルム、ブロモクロロメタン、ジブロモメタン、塩化ブチル、ジクロロメタン、テトラクロロエチレン、トリクロロエチレン、１，１，１−トリクロロエタン、１，１，２−トリクロロエタン、１，１−ジクロロエタン、２−クロロプロパン、１，２−ジクロロエタン、１，２−ジブロモエタン、ヘキサフルオロベンゼン、１，２，４−トリクロロベンゼン、１，２−ジクロロベンゼン、クロロベンゼン、フルオロベンゼン、これらの混合物などを挙げることができる。
【０１６２】
好適なエーテル溶媒として：ジメトキシメタン、テトラヒドロフラン、１，３−ジオキサン、１，４−ジオキサン、フラン、ジエチルエーテル、エチレングリコールジメチルエーテル、エチレングリコールジエチルエーテル、ジエチレングリコールジメチルエーテル、ジエチレングリコールジエチルエーテル、トリエチレングリコールジメチルエーテル、アニソール、ｔ−ブチルメチルエーテル、これらの混合物などが挙げられる。
【０１６３】
好適なプロトン性溶媒として、例として、限定することなく、水、メタノール、エタノール、２−ニトロエタノール、２−フルオロエタノール、２，２，２−トリフルオロエタノール、エチレングリコール、１−プロパノール、２−プロパノール、２−メトキシエタノール、１−ブタノール、２−ブタノール、ｉ−ブチルアルコール、ｔ−ブチルアルコール、２−エトキシエタノール、ジエチレングリコール、１−、２−、もしくは３−ペンタノール、ネオ−ペンチルアルコール、ｔ−ペンチルアルコール、ジエチレングリコールモノメチルエーテル、ジエチレングリコールモノエチルエーテル、シクロヘキサノール、ベンジルアルコール、フェノール、またはグリセロールを挙げることができる。
【０１６４】
好適な非プロトン性溶媒として、例として、限定することなく、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、１，３−ジメチル−３，４，５，６−テトラヒドロ−２（１Ｈ）−ピリミジノン（ＤＭＰＵ）、１，３−ジメチル−２−イミダゾリジノン（ＤＭＩ）、Ｎメチルピロリジノン（ＮＭＰ）、ホルムアミド、Ｎ−メチルアセトアミド、Ｎ−メチルホルムアミド、アセトニトリル、ジメチルスルホキシド、プロピオニトリル、ギ酸エチル、酢酸メチル、ヘキサクロロアセトン、アセトン、エチルメチルケトン、酢酸エチル、スルホラン、Ｎ，Ｎ−ジメチルプロピオンアミド、テトラメチルウレア、ニトロメタン、ニトロベンゼン、またはヘキサメチルホスホルアミドを挙げることができる。
【０１６５】
好適な炭化水素溶媒として、ベンゼン、シクロヘキサン、ペンタン、ヘキサン、トルエン、シクロヘプタン、メチルシクロヘキサン、ヘプタン、エチルベンゼン、ｍ−、ｏ−、もしくはｐ−キシレン、オクタン、インダン、ノナン、またはナフタレンが挙げられる。
【０１６６】
本明細書に記載されているプロセスの反応は、当業者によって容易に決定され得る適切な温度で実施され得る。反応温度は、例えば、存在する場合、試薬及び溶媒の融点及び沸点；反応の熱力学（例えば、激しい発熱反応は、低温で実施される必要がある場合がある）；ならびに反応の速度論（例えば、高い活性化エネルギー障壁は、高温を必要とする場合がある）に依る。
【０１６７】
発現「周囲温度」及び「室温」または「室温（ｒｔ）」は、本明細書において使用されているとき、当該分野において理解されており、例えば、反応が実施される室内のおおよその温度である反応温度である温度、例えば、約２０℃〜約３０℃の温度を一般に称する。
【０１６８】
本明細書に記載されているプロセスの反応は、空気中または不活性雰囲気下で実施され得る。典型的には、空気と実質的に反応性である試薬または生成物を含む反応は、当業者に周知である空気感受性の合成技術を使用して実施され得る。
【０１６９】
使用の方法
本発明の塩及び化合物は、例えば、ホスホイノシチド３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）を含めた種々のキナーゼの１以上の活性を調節することができる。用語「調節する」は、ＰＩ３Ｋファミリーの１以上のメンバーの活性を増加または減少させる能力を称することが意図される。したがって、本発明の塩及び化合物は、ＰＩ３Ｋを、本明細書に記載されている塩、化合物または組成物のいずれか１以上と接触させることによって、ＰＩ３Ｋを調節する方法において使用され得る。いくつかの実施形態において、本願の塩及び化合物は、１以上のＰＩ３Ｋの阻害剤として作用し得る。さらなる実施形態において、本発明の塩及び化合物は、調節量の本発明の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を投与することによって、受容体の調節を必要とする個体においてＰＩ３Ｋの活性を調節するのに使用され得る。いくつかの実施形態において、調節は、阻害である。
【０１７０】
がん細胞の成長及び生存が、複数のシグナル伝達経路によって影響されることを前提として、本願は、薬物抵抗性のキナーゼ突然変異体によって特徴付けられる疾患状態を処置するのに有用である。また、活性を調節するキナーゼにおいて異なる優先傾向を示す異なるキナーゼ阻害剤が併用されてよい。このアプローチは、複数のシグナル伝達経路を標的化することによって疾患状態を処置するのに高効率であることを証明し、細胞における薬物抵抗性の生じやすさを低減し、疾患の処置の毒性を低減し得る。
【０１７１】
本発明の塩及び化合物が結合及び／または調節（例えば、阻害）するキナーゼとして、ＰＩ３Ｋファミリーのあらゆるメンバーが挙げられる。いくつかの実施形態において、ＰＩ３Ｋは、ＰＩ３Ｋα、ＰＩ３Ｋβ、ＰＩ３ＫδまたはＰＩ３Ｋγである。いくつかの実施形態において、ＰＩ３Ｋは、ＰＩ３ＫδまたはＰＩ３Ｋγである。いくつかの実施形態において、ＰＩ３Ｋは、ＰＩ３Ｋδである。いくつかの実施形態において、ＰＩ３Ｋは、ＰＩ３Ｋγである。いくつかの実施形態において、ＰＩ３Ｋは、突然変異を含む。突然変異は、１つのアミノ酸の別のものへの置き換え、または１以上のアミノ酸の欠失であり得る。かかる実施形態において、突然変異は、ＰＩ３Ｋのキナーゼドメインに存在し得る。
【０１７２】
いくつかの実施形態において、本発明の１を超える塩または化合物は、１のキナーゼ（例えば、ＰＩ３ＫδまたはＰＩ３Ｋγ）の活性を阻害するのに使用される。
【０１７３】
いくつかの実施形態において、本発明の１を超える塩または化合物は、１を超えるキナーゼ、例えば、少なくとも２つのキナーゼ（例えば、ＰＩ３Ｋδ及びＰＩ３Ｋγ）を阻害するのに使用される。
【０１７４】
いくつかの実施形態において、塩または化合物の１以上が、１のキナーゼ（例えば、ＰＩ３ＫδまたはＰＩ３Ｋγ）の活性を阻害するのに別のキナーゼ阻害剤と併用される。
【０１７５】
いくつかの実施形態において、塩または化合物の１以上が、１を超えるキナーゼ（例えば、ＰＩ３ＫδまたはＰＩ３Ｋγ）、例えば、少なくとも２つのキナーゼの活性を阻害するのに別のキナーゼ阻害剤と併用される。
【０１７６】
本発明の塩及び化合物は、選択的であり得る。「選択的」は、化合物が、少なくとも１の他のキナーゼと比較して、それぞれ、より大きな親和性または有効性を有するキナーゼに結合またはこれを阻害することを意味する。いくつかの実施形態において、本発明の塩及び化合物は、ＰＩ３Ｋα及び／またはＰＩ３ＫβよりもＰＩ３ＫδまたはＰＩ３Ｋγの選択的阻害剤である。いくつかの実施形態において、本発明の塩及び化合物は、（例えば、ＰＩ３Ｋα、ＰＩ３Ｋβ及びＰＩ３Ｋγよりも）ＰＩ３Ｋδの選択的阻害剤である。いくつかの実施形態において、本発明の塩及び化合物は、（例えば、ＰＩ３Ｋα、ＰＩ３Ｋβ及びＰＩ３Ｋγよりも）ＰＩ３Ｋδの選択的阻害剤である。いくつかの実施形態において、選択性は、少なくとも約２倍、５倍、１０倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約１００倍、少なくとも約２００倍、少なくとも約５００倍または少なくとも約１０００倍であり得る。選択性は、当該分野において常套的である方法によって測定され得る。いくつかの実施形態において、選択性は、各酵素のＫｍＡＴＰ濃度で試験され得る。いくつかの実施形態において、本発明の塩及び化合物の選択性は、特定のＰＩ３Ｋキナーゼ活性と関連する細胞アッセイによって決定され得る。
【０１７７】
本願の別の態様は、個体（例えば、患者）におけるキナーゼ（例えばＰＩ３Ｋ）関連疾患または障害を、処置を必要とする個体に治療有効量または用量の本願の１以上の塩もしくは化合物またはその医薬組成物を投与することによって処置する方法に関する。ＰＩ３Ｋ関連疾患として、過剰発現及び／または異常活性レベルを含めたＰＩ３Ｋの発現または活性に直接または間接的に関係するいずれの疾患、障害または状態も挙げることができる。いくつかの実施形態において、疾患は、Ａｋｔ（プロテインキナーゼＢ）、ラパマイシン（ｍＴＯＲ）の哺乳類標的、またはホスホイノシチド依存性キナーゼ１（ＰＤＫ１）に関係し得る。いくつかの実施形態において、ｍＴＯＲ関係疾患は、炎症、アテローム性動脈硬化症、乾癬、再狭窄、前立腺肥大症、骨障害、膵炎、血管形成、糖尿病性網膜症、アテローム性動脈硬化症、関節炎、免疫障害、腎疾患、またはがんであり得る。ＰＩ３Ｋ関連疾患として、ＰＩ３Ｋ活性を調節することによって予防、寛解、または治癒され得るいずれの疾患、障害または状態も挙げることができる。いくつかの実施形態において、疾患は、ＰＩ３Ｋの異常活性を特徴とする。いくつかの実施形態において、疾患は、突然変異体ＰＩ３Ｋを特徴とする。かかる実施形態において、突然変異は、ＰＩ３Ｋのキナーゼドメインに存在し得る。
【０１７８】
ＰＩ３Ｋ関連疾患の例として、例えば、関節リウマチ、アレルギー、喘息、糸球体腎炎、ループス、または上記のいずれかに関係する炎症を含めた系に関与する免疫に基づく疾患が挙げられる。
【０１７９】
ＰＩ３Ｋ関連疾患のさらなる例として、がん、例えば、乳、前立腺、結腸、子宮内膜、脳、膀胱、皮膚、子宮、卵巣、肺、膵臓、腎臓、胃、または血液がんが挙げられる。
【０１８０】
ＰＩ３Ｋ関連疾患のさらなる例として、肺疾患、例えば、急性肺損傷（ＡＬＩ）及び成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）が挙げられる。
【０１８１】
ＰＩ３Ｋ関連疾患のさらなる例として、骨関節炎、再狭窄、アテローム性動脈硬化症、骨障害、関節炎、糖尿病性網膜症、乾癬、前立腺肥大症、炎症、血管形成、膵炎、腎疾患、炎症性腸疾患、重症筋無力症、多発性硬化症、またはシェーグレン症候群などが挙げられる。
【０１８２】
ＰＩ３Ｋ関連疾患のさらなる例として、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、自己免疫性溶血性貧血（ＡＩＨＡ）、血管炎、全身性エリテマトーデス、ループス腎炎、天疱瘡、膜性腎症、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、有毛細胞白血病、マントル細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、小リンパ球性リンパ腫、濾胞性リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、節外辺縁帯リンパ腫、活性化Ｂ細胞型（ＡＢＣ）びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫または胚中心Ｂ細胞（ＧＣＢ）びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫が挙げられる。
【０１８３】
いくつかの実施形態において、疾患は、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、自己免疫性溶血性貧血、血管炎、全身性エリテマトーデス、ループス腎炎、天疱瘡、自己免疫性溶血性貧血（ＡＩＨＡ）、膜性腎症、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、有毛細胞白血病、マントル細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、小リンパ球性リンパ腫、濾胞性リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、節外辺縁帯リンパ腫、ホジキンリンパ腫、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、前リンパ球性白血病、急性リンパ芽球性白血病、骨髄線維症、粘膜関連リンパ組織（ＭＡＬＴ）リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、縦隔（胸腺）大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、リンパ腫様肉芽腫症、脾性辺縁帯リンパ腫、原発性滲出液リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、形質細胞白血病、髄外性形質細胞腫、くすぶり型骨髄腫（無症状型骨髄腫として知られている）、意義不明の単クローン性免疫グロブリン血症（ＭＧＵＳ）及びＢ細胞リンパ腫から選択される。
【０１８４】
いくつかの実施形態において、上記方法は、再発性ＩＴＰ及び難治性ＩＴＰから選択される特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）を処置する方法である。
【０１８５】
いくつかの実施形態において、上記方法は、ベーチェット病、コーガン症候群、巨細胞性動脈炎、リウマチ性多発筋痛（ＰＭＲ）、高安動脈炎、バージャー病（閉塞性血栓血管炎）、中枢神経系血管炎、川崎病、結節性多発動脈炎、チャーグ・ストラウス症候群、混合型クリオグロブリン血症血管炎（本態性またはＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）誘発性）、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病（ＨＳＰ）、過敏性血管炎、顕微鏡的多発性血管炎、ウェゲナー肉芽腫症、及び抗好中球細胞質抗体関連（ＡＮＣＡ）全身性血管炎（ＡＡＳＶ）から選択される血管炎を処置する方法である。
【０１８６】
いくつかの実施形態において、上記方法は、再発性ＮＨＬ、難治性ＮＨＬ、及び再発濾胞性ＮＨＬから選択される非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を処置する方法である。
【０１８７】
いくつかの実施形態において、上記方法は、Ｂ細胞リンパ腫を処置する方法であって、上記Ｂ細胞リンパ腫が、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）である。
【０１８８】
いくつかの実施形態において、上記方法は、Ｂ細胞リンパ腫を処置する方法であって、上記Ｂ細胞リンパ腫が、活性化Ｂ細胞型（ＡＢＣ）びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、または胚中心Ｂ細胞（ＧＣＢ）びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫である。
【０１８９】
いくつかの実施形態において、上記疾患は、骨関節炎、再狭窄、アテローム性動脈硬化症、骨障害、関節炎、糖尿病性網膜症、乾癬、前立腺肥大症、炎症、血管形成、膵炎、腎疾患、炎症性腸疾患、重症筋無力症、多発性硬化症、またはシェーグレン症候群である。
【０１９０】
いくつかの実施形態において、上記疾患は、関節リウマチ、アレルギー、喘息、糸球体腎炎、ループス、または上記のいずれかに関係する炎症である。
【０１９１】
いくつかの実施形態において、上記ループスは、全身性エリテマトーデスまたはループス腎炎である。
【０１９２】
いくつかの実施形態において、上記疾患は、乳がん、前立腺がん、結腸がん、子宮内膜がん、脳がん、膀胱がん、皮膚がん、子宮のがん、卵巣のがん、肺がん、膵臓がん、腎臓がん、胃がん、または血液がんである。
【０１９３】
いくつかの実施形態において、上記血液がんは、急性骨髄芽球性白血病または慢性骨髄性白血病である。
【０１９４】
いくつかの実施形態において、上記血液がんは、緩慢性／侵攻性Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、及びホジキンリンパ腫（ＨＬ）を含めたＢ細胞起源のリンパ性悪性腫瘍である。
【０１９５】
いくつかの実施形態において、上記疾患は、急性肺損傷（ＡＬＩ）または成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）である。
【０１９６】
本明細書において使用されているとき、用語「接触させる」は、インビトロ系またはインビボ系において示された部位を共に合わせることを称する。例えば、ＰＩ３Ｋを本発明の化合物と「接触させる」ことは、個体または患者、例えば、ヒトに、ＰＩ３Ｋを有する本願の化合物を投与すること、ならびに、例えば、本発明の化合物を、ＰＩ３Ｋを含有する細胞または精製調製物を含有するサンプルに導入することを含む。
【０１９７】
本明細書において使用されているとき、互換的に使用される用語「個体」または「患者」は、哺乳動物を含めたあらゆる動物、好ましくはマウス、ラット、他の齧歯動物、ウサギ、イヌ、ネコ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ウマ、または霊長類、最も好ましくはヒトを称する。
【０１９８】
本明細書において使用されているとき、句「治療有効量」は、研究者、獣医、医師、または他の臨床医によって、組織、系、動物、個体またはヒトにおいて求められる生物学的または薬効的応答を生じさせる活性な化合物または医薬品の量を称する。いくつかの実施形態において、患者または個体に投与される化合物またはその薬学的に許容可能な塩の用量は、約１ｍｇ〜約２ｇ、約１ｍｇ〜約１０００ｍｇ、約１ｍｇ〜約５００ｍｇ、約１ｍｇ〜約１００ｍｇ、約１ｍｇ〜５０ｍｇ、または約５０ｍｇ〜約５００ｍｇである。
【０１９９】
本明細書において使用されているとき、用語「処置する」または「処置」は、（１）疾患を予防する；例えば、疾患、状態または障害に罹りやすい場合があるが疾患の病状または症状を未だ経ていないまたは示していない個体において疾患、状態または障害を予防する；（２）疾患を阻害する；例えば、疾患の病状または症状、状態または障害を経ているまたは示している個体において疾患、状態または障害を阻害する（すなわち、病状及び／または症状のさらなる発症を停止させる）；及び（３）疾患を寛解する；例えば、疾患の病状または症状、状態または障害を経ているまたは示している個体において疾患、状態または障害を寛解する（すなわち、病状及び／または症状を回復させる）、例えば、疾患の重篤度を減少させる；のうち１以上を称する。
【０２００】
併用療法
１以上の付加的な医薬品、例えば、化学療法薬、抗炎症剤、ステロイド、免疫抑制剤など、ならびにＢｃｒ−Ａｂｌ、Ｆｌｔ−３、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＪＡＫ（例えば、ＪＡＫ１もしくはＪＡＫ２）、ｃ−ＭＥＴ、ＶＥＧＦＲ、ＰＤＧＦＲ、ｃＫｉｔ、ＩＧＦ−１Ｒ、ＲＡＦ、ＦＡＫ、Ａｋｔ  ｍＴＯＲ、ＰＩＭ、及びＡＫＴ（例えば、ＡＫＴ１、ＡＫＴ２、もしくはＡＫＴ３）キナーゼ阻害剤、例えば、ＷＯ２００６／０５６３９９に記載されているものなど、または他の剤、例えば、治療抗体は、ＰＩ３Ｋ関連疾患、障害または状態の処置のために、本願の塩または化合物と併用され得る。１以上の付加的な医薬品は、患者に同時にまたは逐次的に投与され得る。
【０２０１】
いくつかの実施形態において、付加的な医薬品は、ＪＡＫ１及び／またはＪＡＫ２阻害剤である。いくつかの実施形態において、本願は、患者において本明細書に記載されている疾患（例えば、Ｂ細胞悪性腫瘍、例えば、びまん性Ｂ細胞リンパ腫）を処置する方法であって、患者に、本明細書に記載されている化合物またはその薬学的に許容可能な塩、ならびにＪＡＫ１及び／またはＪＡＫ２阻害剤を投与することを含む、上記方法を提供する。Ｂ細胞悪性腫瘍として、本明細書及び２０１４年８月８日に提出された米国特許出願第６１／９７６，８１５号に記載されているものを挙げることができる。
【０２０２】
いくつかの実施形態において、ＪＡＫ１及び／またはＪＡＫ２の阻害剤は、表１の化合物またはその薬学的に許容可能な塩である。表１における化合物は、選択的ＪＡＫ１阻害剤である（ＪＡＫ２、ＪＡＫ３及びＴＹＫ２よりも選択的）。１ｍＭのＡＴＰにおいてアッセイＡの方法によって得られたＩＣ５０を表１に示す。
【表１−１】
2018510144.tif 000042
【表１−２】
2018510144.tif 000043
【表１−３】
2018510144.tif 000044
【表１−４】
2018510144.tif 000045
【表１−５】
2018510144.tif 000046
【表１−６】
2018510144.tif 000047
【表１−７】
2018510144.tif 000048
【表１−８】
2018510144.tif 000049
＋は、＜１０ｎＭを意味する
＋＋は、≦１００ｎＭを意味する
＋＋＋は、≦３００ｎＭを意味する
ａエナンチオマー１のデータ
ｂエナンチオマー２のデータ
【０２０３】
いくつかの実施形態において、ＪＡＫ１及び／またはＪＡＫ２の阻害剤は、｛１−｛１−［３−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）イソニコチノイル］ピペリジン−４−イル｝−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−３−イル｝アセトニトリル、またはその薬学的に許容可能な塩である。
【０２０４】
いくつかの実施形態において、ＪＡＫ１及び／またはＪＡＫ２の阻害剤は、｛１−｛１−［３−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）イソニコチノイル］ピペリジン−４−イル｝−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−３−イル｝アセトニトリルアジピン酸塩である。
【０２０５】
いくつかの実施形態において、ＪＡＫ１及び／またはＪＡＫ２の阻害剤は、４−｛３−（シアノメチル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−１−イル｝−２，５−ジフルオロ−Ｎ−［（１Ｓ）−２，２，２−トリフルオロ−１−メチルエチル］ベンズアミド、またはその薬学的に許容可能な塩である。
【０２０６】
いくつかの実施形態において、ＪＡＫ１及び／またはＪＡＫ２の阻害剤は、（Ｒ）−３−［１−（６−クロロピリジン−２−イル）ピロリジン−３−イル］−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］プロパンニトリル、（Ｒ）−３−（１−［１，３］オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−２−イルピロリジン−３−イル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］プロパンニトリル、（Ｒ）−４−［（４−｛３−シアノ−２−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］プロピル｝ピペラジン−１−イル）カルボニル］−３−フルオロベンゾニトリル、（Ｒ）−４−［（４−｛３−シアノ−２−［３−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピロール−１−イル］プロピル｝ピペラジン−１−イル）カルボニル］−３−フルオロベンゾニトリル、または（Ｒ）−４−（４−｛３−［（ジメチルアミノ）メチル］−５−フルオロフェノキシ｝ピペリジン−１−イル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ブタンニトリル、（Ｓ）−３−［１−（６−クロロピリジン−２−イル）ピロリジン−３−イル］−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］プロパンニトリル、（Ｓ）−３−（１−［１，３］オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−２−イルピロリジン−３−イル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］プロパンニトリル、（Ｓ）−４−［（４−｛３−シアノ−２−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］プロピル｝ピペラジン−１−イル）カルボニル］−３−フルオロベンゾニトリル、（Ｓ）−４−［（４−｛３−シアノ−２−［３−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピロール−１−イル］プロピル｝ピペラジン−１−イル）カルボニル］−３−フルオロベンゾニトリル、（Ｓ）−４−（４−｛３−［（ジメチルアミノ）メチル］−５−フルオロフェノキシ｝ピペリジン−１−イル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ブタンニトリル；及び上記のいずれかの薬学的に許容可能な塩から選択される。
【０２０７】
いくつかの実施形態において、ＪＡＫ１及び／またはＪＡＫ２の阻害剤は、それぞれ、全体が参照により本明細書に組み込まれる、２０１０年５月２１日に提出された米国特許出願公開第２０１０／０２９８３３４号、２０１０年８月３１日に提出された米国特許出願公開第２０１１／００５９９５１号、２０１１年３月９日に提出された米国特許出願公開第２０１１／０２２４１９０号、２０１１年１１月１８日に提出された米国特許出願公開第２０１２／０１４９６８１号、２０１１年１１月１８日に提出された米国特許出願公開第２０１２／０１４９６８２号、２０１２年６月１９日に提出された米国特許出願公開第２０１３／００１８０３４号、２０１２年８月１７日に提出された米国特許出願公開第２０１３／００４５９６３号、及び２０１３年５月１７日に提出された米国特許出願公開第２０１４／０００５１６６号の化合物から選択される。
【０２０８】
併用療法で使用される例となる抗体として、限定されないが、トラスツズマブ（例えば、抗−ＨＥＲ２）、ラニビズマブ（例えば、抗−ＶＥＧＦ−Ａ）、ベバシズマブ（アバスチン（商標）、例えば、抗−ＶＥＧＦ）、パニツムマブ（例えば、抗−ＥＧＦＲ）、セツキシマブ（例えば、抗−ＥＧＦＲ）、リツキシマブ（リツキサン（商標）、抗−ＣＤ２０）及びｃ−ＭＥＴを対象とする抗体が挙げられる。
【０２０９】
以下の剤の１以上が本願の塩または化合物と併用されてよく、非限定的リストとして提示される：細胞増殖抑制剤、シスプラチン、ドキソルビシン、タキソテール、タキソール、エトポシド、イリノテカン、カンプトスター（ｃａｍｐｔｏｓｔａｒ）、トポテカン、パクリタキセル、ドセタキセル、エポチロン、タモキシフェン、５−フルオロウラシル、メトクストレキサート（ｍｅｔｈｏｘｔｒｅｘａｔｅ）、テモゾロミド、シクロホスファミド、ＳＣＨ６６３３６、Ｒ１１５７７７、Ｌ７７８，１２３、ＢＭＳ２１４６６２、イレッサ、タルセバ、ＥＧＦＲに対する抗体、グリーベック（商標）、イントロン、ａｒａ−Ｃ、アドリアマイシン、シトキサン、ゲムシタビン、ウラシルマスタード、クロルメチン、イホスファミド、メルファラン、クロラムブシル、ピポブロマン、トリエチレンメラミン、トリエチレンチオホスホラミン、ブスルファン、カルムスチン、ロムスチン、ストレプトゾシン、ダカルバジン、フロクスウリジン、シタラビン、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、フルダラビンリン酸エステル、オキサリプラチン、ロイコビリン（ｌｅｕｃｏｖｉｒｉｎ）、エロキサチン（商標）、ペントスタチン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ブレオマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、ミトラマイシン、デオキシコホルマイシン、マイトマイシン−Ｃ、Ｌ−アスパラギナーゼ、テニポシド１７．α．−エチニルエストラジオール、ジエチルスチルベストロール、テストステロン、プレドニゾン、フルオキシメステロン、ドロモスタノロンプロピオネート、テストラクトン、メゲストロールアセテート、メチルプレドニゾロン、メチルテストステロン、プレドニソロン、トリアムシノロン、クロロトリアニセン、ヒドロキシプロゲステロン、アミノグルテチミド、エストラムスチン、メドロキシプロゲステロンアセテート、ロイプロリド、フルタミド、トレミフェン、ゴセレリン、シスプラチン、カルボプラチン、ヒドロキシウレア、アムサクリン、プロカルバジン、ミトタン、ミトキサントロン、レバミソール、ナベルベン（Ｎａｖｅｌｂｅｎｅ）、アナストラゾール（Ａｎａｓｔｒａｚｏｌｅ）、レトラゾール（Ｌｅｔｒａｚｏｌｅ）、カペシタビン、レロキサフィン（Ｒｅｌｏｘａｆｉｎｅ）、ドロロキサフィン（Ｄｒｏｌｏｘａｆｉｎｅ）、ヘキサメチルメラミン、アバスチン、ハーセプチン、ベクザー、ベルケイド、ゼバリン、トリセノックス、ゼローダ、ビノレルビン、ポルフィマー、エルビタックス、リポソーマル、チオテパ、アルトレタミン、メルファラン、トラスツズマブ、レロゾール（Ｌｅｒｏｚｏｌｅ）、フルベストラント、エキセメスタン、フルベストラント、イホスフォミド（Ｉｆｏｓｆｏｍｉｄｅ）、リツキシマブ、Ｃ２２５、キャンパス、クロファラビン、クラドリビン、アフィジコロン（ａｐｈｉｄｉｃｏｌｏｎ）、リツキサン、スニチニブ、ダサチニブ、テザシタビン、Ｓｍｌ１、フルダラビン、ペントスタチン、トリアピン、ジドックス、トリミドックス、アミドックス、３−ＡＰ、ＭＤＬ−１０１，７３１、ベンダムスチン（トレアンダ）、オファツムマブ、及びＧＳ−１１０１（ＣＡＬ−１０���としても公知である）。
【０２１０】
例となる化学療法薬として、プロテオソーム阻害剤（例えば、ボルテゾミブ）、サリドマイド、レブリミド、及びＤＮＡ損傷剤、例えば、メルファラン、ドキソルビシン、シクロホスファミド、ビンクリスチン、エトポシド、カルムスチンなどが挙げられる。
【０２１１】
例となるステロイドとして、副腎皮質ステロイド、例えば、デキサメタゾンまたはプレドニゾンが挙げられる。
【０２１２】
例となるＢｃｒ−Ａｂｌ阻害剤として、米国特許第５，５２１，１８４号、ＷＯ０４／００５２８１、及び米国特許出願６０／５７８，４９１号に記載されている属及び種の化合物及びその薬学的に許容可能な塩が挙げられる。
【０２１３】
例となる好適なＦｌｔ−３阻害剤として、ＷＯ０３／０３７３４７、ＷＯ０３／０９９７７１、及びＷＯ０４／０４６１２０に開示されている化合物及びその薬学的に許容可能な塩が挙げられる。
【０２１４】
例となる好適なＲＡＦ阻害剤として、ＷＯ００／０９４９５及びＷＯ０５／０２８４４４に開示されている化合物及びその薬学的に許容可能な塩が挙げられる。
【０２１５】
例となる好適なＦＡＫ阻害剤として、ＷＯ０４／０８０９８０、ＷＯ０４／０５６７８６、ＷＯ０３／０２４９６７、ＷＯ０１／０６４６５５、ＷＯ００／０５３５９５、及びＷＯ０１／０１４４０２に開示されている化合物及びその薬学的に許容可能な塩が挙げられる。
【０２１６】
例となる好適なｍＴＯＲ阻害剤として、ＷＯ２０１１／０２５８８９に開示されている化合物及びその薬学的に許容可能な塩が挙げられる。
【０２１７】
いくつかの実施形態において、本発明の塩及び化合物は、イマチニブを含めた１以上の他のキナーゼ阻害剤と併用されて、特に、イマチニブまたは他のキナーゼ阻害剤に耐性のある患者を処置することができる。
【０２１８】
いくつかの実施形態において、本発明の塩及び化合物は、がん、例えば、多発性骨髄腫の処置における化学療法薬と併用され得、その毒性作用の憎悪なしに、化学療法薬単独に対する応答と比較して処置応答を改善し得る。多発性骨髄腫の処置に使用される付加的な医薬品の例として、例えば、限定されることなく、メルファラン、メルファラン＋プレドニゾン［ＭＰ］、ドキソルビシン、デキサメタゾン、及びベルケイド（ボルテゾミブ）を挙げることができる。多発性骨髄腫の処置に使用されるさらなる付加的な剤として、Ｂｃｒ−Ａｂｌ、Ｆｌｔ−３、ＲＡＦ及びＦＡＫキナーゼ阻害剤が挙げられる。相加または相乗効果は、本願のＰＩ３Ｋ阻害剤を、付加的な剤と合わせることの望ましい結果である。さらに、デキサメタゾンなどの剤に対する多発性骨髄腫細胞の耐性は、本願のＰＩ３Ｋ阻害剤による処置において可逆的であり得る。該剤は、単一または連続的な投薬形態で本発明化合物と併用され得、または、該剤は、別個の投薬形態として同時もしくは逐次的に投与され得る。
【０２１９】
いくつかの実施形態において、副腎皮質ステロイド、例えば、デキサメタゾンは、デキサメタゾンが連続的とは対照的に間欠的に投与される場合、本発明の化合物と組み合わせて患者に投与される。
【０２２０】
いくつかのさらなる実施形態において、本発明の塩及び化合物と他の治療剤との組み合わせは、骨髄移植または幹細胞移植の前、間、及び／または後に患者に投与され得る。
【０２２１】
医薬製剤及び投薬形態
本発明の化合物及び塩は、医薬品として用いられるとき、医薬組成物の形態で投与され得る。これらの組成物は、医薬分野で周知の方法で調製され得、局在的または全身的処置が望ましいか否か、及び処置される領域に応じて、種々の経路によって投与され得る。投与は、局所的（経皮、上皮、眼、ならびに、鼻腔内、膣内及び直腸送達を含めた粘膜を含む）、肺（例えば、噴霧器によるものを含めた散剤もしくはエアロゾルの吸入もしくは吹送による；気管内もしくは鼻腔内）、または経口もしくは非経口であってよい。非経口投与として、静脈内、動脈内、皮下、腹腔内筋肉内または注射もしくは点滴；または頭蓋内、例えば、くも膜下もしくは脳室内投与が挙げられる。非経口投与は、単回ボーラス投与の形態であり得、または、例えば、連続注入ポンプによるものであってよい。局所投与用の医薬組成物及び製剤として、経皮パッチ、軟膏、ローション、クリーム、ジェル、点滴剤、坐薬、スプレー、液体及び散剤が挙げられ得る。従来の医薬担体、水性の散剤または油性基剤、増粘剤などが必要であるまたは望ましい場合がある。
【０２２２】
この発明はまた、有効成分として本発明の化合物または塩（例えば、化合物式Ｉの塩酸塩）を１以上の薬学的に許容可能な担体（賦形剤）と組み合わせて含有する医薬組成物も含む。いくつかの実施形態において、組成物は、局所投与に好適である。本発明の組成物の作製において、有効成分は、典型的には、賦形剤と混合され、賦形剤によって希釈されまたはこのような担体内に、例えば、カプセル、サチェ、紙もしくは他の容器の形態で封入される。賦形剤は、希釈剤として機能するとき、有効成分のためのビヒクル、担体または媒体として作用し得る固体、半固体、または液体材料であり得る。このように、組成物は、例えば、最大で１０重量％の活性化合物を含有する、錠剤、ピル、散剤、ロゼンジ、サチェ、カシェ、エリキシル、懸濁液、乳剤、液剤、シロップ、エアロゾル（固体としてもしくは液体媒体において）、軟膏の形態、軟及び硬ゼラチンカプセル、坐薬、無菌注入溶液、及び無菌のパッケージ化された散剤の形態であり得る。
【０２２３】
製剤の調製において、活性化合物または塩は、他の成分と合わせる前に、適切な粒径を付与するように粉砕され得る。活性化合物または塩が実質的に不溶性であるとき、２００メッシュ未満の粒径に粉砕され得る。活性化合物または塩が実質的に水溶性であるとき、粒径は、製剤において実質的に均一な分布、例えば約４０メッシュを付与する粉砕によって調整され得る。
【０２２４】
本発明の化合物及び塩は、公知の粉砕手順、例えば、湿潤粉砕を使用して粉砕されて、錠剤の形成及び他の製剤のタイプに適切な粒径を得てよい。本発明の塩及び化合物の微細に分割された（ナノ粒子状）調製物は、当業者に公知のプロセスによって調製され得る、例えば、国際出願第ＷＯ２００２／０００１９６号を参照されたい。
【０２２５】
好適な賦形剤のいくつかの例として、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アカシアガム、リン酸カルシウム、アルギン酸塩、トラガカント、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微結晶性セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、水、シロップ、及びメチルセルロースが挙げられる。製剤として：潤滑剤、例えば、タルク、ステアリン酸マグネシウム、及び鉱物油；湿潤剤；乳化及び懸濁剤；保存剤、例えば、メチル−及びプロピルヒドロキシ−ベンゾエート；甘味剤；ならびに香味剤を付加的に挙げることができる。本発明の組成物は、当業者に公知の手順を用いることによって、患者に投与した後、有効成分の迅速な、持続性の、または遅延性の放出を付与するように製剤化され得る。
【０２２６】
組成物は、約５〜約１０００ｍｇ（１ｇ）、より通常では約１００〜約５００ｍｇの有効成分を含有する単一投与形態で製剤化され得る。用語「単一投与形態」は、好適な医薬賦形剤に関連して、所望の治療効果を生じるように算出された所定量の活性材料を含有する、ヒト対象及び他の哺乳動物のための単一の投薬として好適な物理的に別々の単位を称する。
【０２２７】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、約５〜約５０ｍｇの有効成分を含有する。当業者は、これにより、約５〜約１０、約１０〜約１５、約１５〜約２０、約２０〜約２５、約２５〜約３０、約３０〜約３５、約３５〜約４０、約４０〜約４５または約４５〜約５０ｍｇの有効成分を含有する組成物が具現化されることを認識する。
【０２２８】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、約２．５、約５、約７．５、約１０、約１２．５、約１５、約１７．５、約２０、約２２．５または約２５ｍｇの有効成分を含有する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、約５ｍｇの有効成分を含有する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、約１０ｍｇの有効成分を含有する。
【０２２９】
同様の投薬量の本明細書に記載されている化合物及び塩が、本発明の方法及び使用において使用されてよい。
【０２３０】
活性化合物または塩は、広い投薬量範囲にわたって有効であり得、薬学的に有効な量で一般に投与される。しかし、実際に投与される化合物または塩の量は、処置される状態、選択された投与経路、投与される実際の化合物または塩、個体患者の年齢、体重及び応答、患者の症状の重篤度などを含めた、関係する状況にしたがって、医師によって通常決定されることが理解される。
【０２３１】
固体組成物、例えば、錠剤を調製するために、主な有効成分が医薬賦形剤と混合されて、本願の化合物または塩の均一な混合物を含有する固体の予備処方組成物を形成する。これらの予備処方組成物を均一と称するとき、有効成分は、組成物が、等価に有効な単一投与形態、例えば、錠剤、ピル及びカプセルに容易にさらに分割され得るように、典型的には、組成物全体にわたって均等に分散されている。この固体の予備処方物は、次いで、例えば、約０．１〜約１０００ｍｇの本願の有効成分を含有する上記のタイプの単一投与形態にさらに分割される。
【０２３２】
本願の錠剤またはピルは、持続性作用の利益を与える投薬形態を付与するようにコーティングまたは他の場合には配合され得る。例えば、錠剤またはピルは、内部投薬及び外部投薬構成要素を含むことができ、後者は、前者の上のエンベロープの形態である。２つの構成要素は、胃内での崩壊に耐え、内部構成要素が無傷で十二指腸内に通されるまたはその放出が遅延されることを可能にする役割を果たす、腸溶層によって離され得る。種々の材料が、かかる腸溶層またはコーティングに使用され得、かかる材料は、いくつかのポリマー酸ならびにポリマー酸と、例えば、シェラック、セチルアルコール、及び酢酸セルロースとの混合物を含んでいる。
【０２３３】
本願の化合物、塩、及び組成物が経口投与のためにまたは注射によって組み込まれ得る液体形態として、水溶液、好適に風味付けされたシロップ、水性または油性懸濁液、及び食用油、例えば、綿実油、ゴマ油、ココナッツ油またはピーナッツ油によって風味付けされた乳剤、ならびにエリキシル及び同様の医薬ビヒクルが挙げられる。
【０２３４】
吸入または吹送用の組成物として、薬学的に許容可能な水性もしくは有機溶媒、またはこれらの混合物中の溶液及び懸濁液、ならびに散剤が挙げられる。液体または固体組成物は、上記のような好適な薬学的に許容可能な賦形剤を含有していてよい。いくつかの実施形態において、組成物は、局所または全身効果のための経口または鼻呼吸経路によって投与される。組成物は、不活性ガスの使用によって噴霧化され得る。噴霧化された溶液は、噴霧デバイスから直接吸い込まれてよく、噴霧デバイスは、フェイスマスク、テント、または間欠的陽圧呼吸機に取り付けられ得る。溶液、懸濁液、または散剤組成物は、製剤を適切な方式で送達するデバイスから経口でまたは経鼻的に投与され得る。
【０２３５】
局所製剤は、１以上の従来の担体を含有することができる。いくつかの実施形態において、軟膏は、水と、例えば、液体パラフィン、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、プロピレングリコール、白色ワセリンなどから選択される１以上の疎水性担体とを含有することができる。クリームの担体組成物は、グリセロールと１以上の他の成分、例えばモノステアリン酸グリセリン、ＰＥＧ−モノステアリン酸グリセリン及びセチルステアリルアルコールとを組み合わせた、水ベースであり得る。ジェルは、イソプロピルアルコール及び水を、他の成分、例えば、グリセロール、ヒドロキシエチルセルロースなどと好適には併用して製剤化され得る。いくつかの実施形態において、局所製剤は、少なくとも約０．１、少なくとも約０．２５、少なくとも約０．５、少なくとも約１、少なくとも約２、または少なくとも約５重量％の本発明の化合物または塩を含有する。局所製剤は、例えば、選択的な兆候、例えば、乾癬または他の皮膚状態の処置のための指示に場合により関連する１００ｇのチューブに好適にはパッケージ化され得る。
【０２３６】
患者に投与される化合物、塩または組成物の量は、何が投与されているか、投与の目的、例えば、予防または治療、患者の状態、投与の方式などに応じて変動する。治療用途において、組成物は、疾患及びその合併症の症状を治癒するまたは少なくとも部分的に停止させるのに十分な量で、疾患に既に罹患している患者に投与され得る。有効用量は、処置されている疾患状態に、ならびに、因子、例えば、疾患の重篤度、患者の年齢、体重、及び全身状態などに応じて担当の臨床医の判断によって左右される。
【０２３７】
患者に投与される組成物は、上記の医薬組成物の形態であり得る。これらの組成物は、従来の滅菌技術によって滅菌され得、または滅菌濾過されてよい。水溶液は、そのまま使用のためにパッケージ化されても、凍結乾燥されてもよく、凍結乾燥された調製物は、投与の前に滅菌水性担体と合わされる。化合物調製物のｐＨは、典型的には、３と１１との間、より好ましくは５〜９、最も好ましくは７〜８である。上記の賦形剤、担体、または安定剤のある特定のものの使用は、医薬塩の形成を結果として生じさせることが理解される。
【０２３８】
本願の化合物または塩の治療投薬量は、例えば、処置がなされる具体的な用途、化合物または塩の投与の方式、患者の健康及び状態、ならびに処方医師の判断にしたがって変動し得る。医薬組成物中の本発明の化合物または塩の割合または濃度は、投薬量、化学的特徴（例えば、疎水性）、及び投与の経路を含めたいくつかの因子に応じて変動し得る。例えば、本発明の化合物及び塩は、非経口投与のための約０．１〜約１０％ｗ／ｖの化合物を含有する生理緩衝水溶液において付与され得る。いくつかの典型的な用量範囲は、約１μｇ／ｋｇ〜約１ｇ／ｋｇ体重／日である。いくつかの実施形態において、用量範囲は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ体重／日である。投薬量は、疾患または障害の進行のタイプ及び程度、特定の患者の全体の健康状態、選択される化合物の相対的な生物学的効率、賦形剤の製剤化、ならびにその投与の経路などの可変するものに左右されやすい。有効用量は、インビトロまたは動物モデル試験系から誘導される用量応答曲線から外挿され得る。
【０２３９】
本発明の組成物は、１以上の付加的な医薬品、例えば、化学療法薬、ステロイド、抗炎症化合物、または免疫抑制剤をさらに含むことができ、その例は、本明細書において提供される。
【０２４０】
キット
本願はまた、ＰＩ３Ｋ関連疾患または障害、例えばがんの例えば処置または予防において有用な医薬キットも含み、治療有効量の本発明の化合物を含む医薬組成物を含有する１以上の容器を含む。かかるキットは、当業者に容易に明らかであるように、所望により、１以上の種々の従来の医薬キット構成要素、例えば、１以上の薬学的に許容可能な担体を含む容器、付加的な容器などをさらに含むことができる。投与される成分の量を指示している、挿入物としてもしくはラベルとしてのいずれかでの指示書、投与のためのガイドライン、及び／または成分を混合するためのガイドラインもまた、該キットに含まれ得る。
【０２４１】
本発明を具体的な例によってより詳細に説明する。以下の例は、説明目的で付与されるものであり、本発明をいずれの方式にも限定することは意図されていない。当業者は、同じ結果を本質的に生じさせるように変化または変更され得る種々の重要性の低いパラメータを容易に認識する。式Ｉの化合物の塩酸塩及び式Ｉの化合物は、本明細書に記載されている少なくとも１つのアッセイにしたがってＰＩ３Ｋ阻害剤であることが見出された。
【実施例】
【０２４２】
本発明を以下の具体例によってより詳細に説明する。以下の例は、説明目的で付与されるものであり、本発明をいずれの方式にも限定することは意図されていない。１以上のキラル中心を含有する例としての化合物またはその塩を、別途特定しない限り、ラセミ形態でまたは異性体混合物として得た。
【０２４３】
一般的方法
調製した化合物のいくつかの分取ＬＣ−ＭＳ精製をＷａｔｅｒｓ質量指向分画システムにおいて実施した。該システムの操作のための基本的な装置セットアップ、プロトコル、及び制御ソフトは文献に詳細に記載されている。例えば「Ｔｗｏ−Ｐｕｍｐ  Ａｔ  Ｃｏｌｕｍｎ  Ｄｉｌｕｔｉｏｎ  Ｃｏｎｆｉｇｕｒａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ  ＬＣ−ＭＳ」，Ｋ．Ｂｌｏｍ，Ｊ．Ｃｏｍｂｉ．Ｃｈｅｍ．，４，２９５（２００２）；「Ｏｐｔｉｍｉｚｉｎｇ  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ  ＬＣ−ＭＳ  Ｃｏｎｆｉｇｕｒａｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｐａｒａｌｌｅｌ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ」，Ｋ．Ｂｌｏｍ，Ｒ．Ｓｐａｒｋｓ，Ｊ．Ｄｏｕｇｈｔｙ，Ｇ．Ｅｖｅｒｌｏｆ，Ｔ．Ｈａｑｕｅ，Ａ．Ｃｏｍｂｓ，Ｊ．Ｃｏｍｂｉ．Ｃｈｅｍ．，５，６７０（２００３）；及び「Ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ  ＬＣ−ＭＳ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：Ｉｍｐｒｏｖｅｄ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄ  Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｍｅｔｈｏｄ  Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ」，Ｋ．Ｂｌｏｍ，Ｂ．Ｇｌａｓｓ，Ｒ．Ｓｐａｒｋｓ，Ａ．Ｃｏｍｂｓ，Ｊ．Ｃｏｍｂｉ．Ｃｈｅｍ．，６，８７４−８８３（２００４）を参照されたい。分離した化合物を、典型的には、純度分析のための分析用液体クロマトグラフィ質量分析（ＬＣＭＳ）に以下の条件で供した：機器；Ａｇｉｌｅｎｔ１１００シリーズ、ＬＣ／ＭＳＤ，カラム：Ｗａｔｅｒｓ  Ｓｕｎｆｉｒｅ（商標）Ｃ１８  ５μｍ、２．１×５０ｍｍ、緩衝液：移動相Ａ：水中０．０２５％ＴＦＡ、及び移動相Ｂ：アセトニトリル；流量２．０ｍＬ／分において３分で勾配２％〜８０％のＢ。
【０２４４】
調製した化合物のいくつかをまた、実施例において示されているようにＭＳ検出器またはフラッシュクロマトグラフィ（シリカゲル）による逆相高速液体クロマトグラフィ（ＲＰ−ＨＰＬＣ）によって分取スケールで分離した。典型的な分取逆相高速液体クロマトグラフィ（ＲＰ−ＨＰＬＣ）カラム条件は以下の通りである：
ｐＨ＝２精製：Ｗａｔｅｒｓ  Ｓｕｎｆｉｒｅ（商標）Ｃ１８  ５μｍ、１９×１００ｍｍカラム、移動相Ａ：水中０．１％ＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）、及び移動相Ｂ：アセトニトリルで溶離；流量は３０ｍＬ／分であり、分離勾配を、文献［「Ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ  ＬＣＭＳ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：Ｉｍｐｒｏｖｅｄ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄ  Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｍｅｔｈｏｄ  Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ」、Ｋ．Ｂｌｏｍ，Ｂ．Ｇｌａｓｓ，Ｒ．Ｓｐａｒｋｓ，Ａ．Ｃｏｍｂｓ，Ｊ．Ｃｏｍｂ．Ｃｈｅｍ．，６，８７４−８８３（２００４）を参照されたい］に記載されている化合物特異的方法最適化プロトコルを使用して各化合物について最適化した。典型的には、３０×１００ｍｍカラムで使用した流量は、６０ｍＬ／分であった。
ｐＨ＝１０精製：Ｗａｔｅｒｓ  ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｃ１８  ５μｍ、１９×１００ｍｍカラム、移動相Ａ：水中０．１５％ＮＨ４ＯＨ、及び移動相Ｂ：アセトニトリルで溶離；流量は３０ｍＬ／分であり、分離勾配を、文献［「Ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ  ＬＣＭＳ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：Ｉｍｐｒｏｖｅｄ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄ  Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｍｅｔｈｏｄ  Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ」，Ｋ．Ｂｌｏｍ，Ｂ．Ｇｌａｓｓ，Ｒ．Ｓｐａｒｋｓ，Ａ．Ｃｏｍｂｓ，Ｊ．Ｃｏｍｂ．Ｃｈｅｍ．，６，８７４−８８３（２００４）を参照されたい］に記載されている化合物特異的方法最適化プロトコルを使用して各化合物について最適化した。典型的には、３０×１００ｍｍカラムで使用した流量は、６０ｍＬ／分であった。
【０２４５】
調製した化合物のいくつかをまた、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）を介して分析した。典型的なＤＳＣ機器条件は以下の通りである：
オートサンプラによるＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ示差走査熱量測定、モデルＱ２００：１０℃／分で３０〜３５０℃；Ｔ−ゼロアルミニウムサンプルパン及び蓋；窒素ガス流：５０ｍＬ／分。
Ｍｅｔｔｌｅｒ  Ｔｏｌｅｄｏ示差走査熱量測定（ＤＳＣ）８２２機器：１０℃／分の加熱速度で４０〜３４０℃。
【０２４６】
調製した化合物のいくつかをまた、熱重量分析（ＴＧＡ）を介して分析した。典型的なＴＧＡ機器条件は以下の通りである：
ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ熱重量分析器、モデルＰｙｒｉｓ：温度ランプ：１０℃／分で２５℃〜３００℃；窒素パージガス流６０ｍＬ／分；ＴＧＡセラミック坩堝サンプルホルダー。
ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ  Ｑ５００：温度ランプ：１０℃／分で２０℃〜３００℃。
【０２４７】
調製した化合物のいくつかをまた、Ｘ線粉末回折（ＸＲＰＤ）を介して分析した。典型的なＸＲＰＤ機器条件は以下の通りである：
Ｂｒｕｋｅｒ  Ｄ２  ＰＨＡＳＥＲ  Ｘ線粉末回折機器：Ｘ線放射波長：１．０５４０６Å  ＣｕＫＡＩ；ｘ線出力：３０ＫＶ、１０ｍＡ；サンプル散剤：ゼロバックグラウンドサンプルホルダーにおいて分散；一般測定条件：開始角度：５度、停止角度：６０度、サンプリング：０．０１５度、走査速度：２度／分。
Ｒｉｇａｋｕ  Ｍｉｎｉｆｌｅｘ粉末回折計：Ｃｕ：Ｋβフィルタで１．０５４０５６Å；一般測定条件：開始角度：３度、停止角度：４５度、サンプリング：０．０２度、走査速度：２度／分。
【０２４８】
実施例１．（Ｒ）−４−（３−クロロ−６−エトキシ−２−フルオロ−５−（（Ｒ）−１−ヒドロキシエチル）フェニル）ピロリジン−２−オンの合成
【化４１】
2018510144.tif 000050
ステップ１．１−（５−クロロ−４−フルオロ−２−ヒドロキシフェニル）エタノン（ｉｉ）
【化４２】
2018510144.tif 000051
４−クロロ−３−フルオロフェノール（ｉ、１６６ｇ、１．１１ｍｏｌ）及び塩化アセチル（１０７ｍＬ、１．５０ｍｏｌ）を室温で５−Ｌフラスコに仕込んだ。反応混合物を、バッチ温度を記録して６℃に低減させながら撹拌して透明な溶液にした。反応混合物を次いで６０℃に２時間加熱した。反応混合物にニトロベンゼン（１８７．５ｍＬ、１．８２ｍｏｌ）を仕込み、続いて室温に冷却した。三塩化アルミニウム（１６０ｇ、１．２ｍｍｏｌ）を次いで混合物に３回に分けて添加した（５分間隔で５０ｇ、５０ｇ及び６０ｇ）。バッチ温度は、添加の完了時に７８℃に増加した。反応混合物を次いで１００〜１２０℃において３時間加熱し、このとき、ＨＰＬＣ分析は、反応が完了したことを示した。反応混合物を、次いで０℃に冷却し、ヘキサン（０．４５Ｌ）、酢酸エチル（０．５５Ｌ）を仕込み、次いで、１．０Ｎ塩酸水溶液（１．０Ｌ）を室温でゆっくりと仕込んだ。塩酸水溶液の添加は発熱であり、バッチ温度は、２６℃から６０℃に増加した。得られた混合物を室温で２０分間撹拌した。層を分離し、有機層を１．０Ｎ塩酸水溶液（２×６００ｍＬ）及び水（４００ｍＬ）で順次洗浄した。有機層を、次いで、１．０Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（２×１．４Ｌ）で抽出した。合わせた塩基性溶液を、さらなる析出物が分離されなくなるまで、１２Ｎ塩酸水溶液の添加によってｐＨ２に酸性化した。得られた固体を濾過によって収集し、水で洗浄し、フィルタ漏斗において吸引下で乾燥し、化合物ｉｉを黄色固体として与えた（１８７．４ｇ、８９．５％）。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  １２．４４  （ｄ，  Ｊ  ＝  １．４  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．７８  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．１  Ｈｚ，  １Ｈ），  ６．７７  （ｄ，  Ｊ  ＝  １０．２  Ｈｚ，  １Ｈ），  ２．６１  （ｓ，  ３Ｈ）。
【０２４９】
ステップ２．１−（５−クロロ−４−フルオロ−２−ヒドロキシ−３−ヨードフェニル）エタノン（ｉｉｉ）
【化４３】
2018510144.tif 000052
１−（５−クロロ−４−フルオロ−２−ヒドロキシフェニル）エタノン（ｉｉ、１００．０ｇ、５３０．３ｍｍｏｌ）を酢酸（３０２ｍＬ）に溶解し、Ｎ−ヨードスクシンイミド（１７９．２ｇ、７９６．５ｍｍｏｌ）を溶液に添加した。反応混合物を、約６１℃〜約７１℃で２時間撹拌し、このとき、ＨＰＬＣ分析が、反応が完了したことを示した。反応混合物を、次いで、室温に冷却し、水（６１３ｍＬ）を添加し、得られたスラリーを室温で３０分間撹拌した。生成物を濾過によって収集し、水でリンスして褐色固体を付与した。湿潤生成物を酢酸（４００ｍＬ）に６０℃で溶解した。水（８００ｍＬ）を（１５分かけて）溶液に添加し、純粋な生成物を析出させた。生成物を濾過によって収集し、水（１００ｍＬ）で洗浄した。生成物をフィルタ漏斗において吸引下で１８時間乾燥し、化合物ｉｉｉを褐色固体として与えた（１６４．８ｇ、９５．０％の収率）。１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ１３．３４  （ｓ，  １Ｈ），  ８．２６  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．４  Ｈｚ，  １Ｈ），  ２．６８  （ｓ，  ３Ｈ）。
【０２５０】
ステップ３．１−（５−クロロ−２−エトキシ−４−フルオロ−３−ヨードフェニル）エタノン（ｉｖ）
【化４４】
2018510144.tif 000053
冷却器及び温度計を備えた５−Ｌの三ツ口丸底フラスコにおいて、１−（５−クロロ−４−フルオロ−２−ヒドロキシ−３−ヨードフェニル）エタノン（ｉｉｉ、２８０ｇ、８４０ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（６００ｍＬ）に溶解した。溶解の際、内部温度が１９．３℃から１７．０℃まで降下した。ヨードエタン（８１．２ｍＬ、１０２０ｍｍｏｌ）を得られた混合物に添加した。炭酸カリウム（２３４ｇ、１６９０ｍｍｏｌ）を次いで２分かけて反応混合物に添加し、バッチ温度の変化が無いことを観察した。反応混合物を６０℃に３時間加熱し、このとき、ＨＰＬＣ分析が、反応が完了したことを示した。反応混合物を室温に冷却させ、生成物を濾過によって収集した。固体をＤＣＭ（１．０Ｌ）、ヘキサン（５００ｍｌ）及び水（２．１Ｌ）の混合物に溶解した。二相系を２０℃で２０分間撹拌した。層を分離し、水層をＤＣＭ（１．０Ｌ）で抽出した。合わせた有機層を水（２×２５０ｍＬ）及び塩水（６０ｍＬ）で洗浄した。有機相を分離し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して乾固させて、化合物ｉｖを黄色固体として与えた（２９２ｇ、９４％の収率）。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ７．６９  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．４  Ｈｚ，  １Ｈ），  ３．９５  （ｑ，  Ｊ  ＝  ７．０  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ２．６２  （ｓ，  ３Ｈ），  １．４９  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．０  Ｈｚ，  ３Ｈ）。Ｃ１０Ｈ１０ＣｌＦＩＯ２のＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：ｍ／ｚ＝３４２．９。
【０２５１】
ステップ４．２−（５−クロロ−２−エトキシ−４−フルオロ−３−ヨードフェニル）−２−メチル−１，３−ジオキソラン（ｖ）
【化４５】
2018510144.tif 000054
１−（５−クロロ−２−エトキシ−４−フルオロ−３−ヨードフェニル）エタノン（ｉｖ、２５０．０ｇ、６９３．４ｍｍｏｌ）及び１，２−エタンジオール（５８．０ｍＬ、１０４０ｍｍｏｌ）のトルエン（１．５Ｌ）溶液をｐ−トルエンスルホン酸一水和物（１０．６ｇ、５５．５ｍｍｏｌ）で処理した。反応フラスコをディーンスタークトラップに適合させ、混合物を還流で７時間加熱した。ＬＣＭＳ分析は、反応混合物が８．３％の出発物質及び９１．７％の生成物を含有したことを示した。反応混合物を１０６℃に冷却し、追加量の１，２−エタンジオール（１１．６ｍＬ、２０８ｍｍｏｌ）を、シリンジを介して導入した。反応混合物を、次いで、還流でさらに８時間加熱した。ＬＣＭＳ分析は、反応混合物が３．６％の出発物質及び９６．４％の生成物を含有したことを示した。反応混合物を１０６℃に冷却し、追加の１，２−エタンジオール（７．７３ｍＬ、１３９ｍｍｏｌ）を、シリンジを介して導入した。反応混合物を還流下でさらに１５．５時間加熱した。ＬＣＭＳ分析は、反応混合物が２．２％の出発物質及び９７．８％の生成物を含有したことを示した。
【０２５２】
反応混合物を次いで０℃に冷却し、水（２００ｍｌ）及び飽和ＮａＨＣＯ３溶液（３００ｍｌ）を添加して、混合物をｐＨ９に調整した。ＤＣＭ（２００ｍｌ）を添加し、バッチを１０分間撹拌した。層を分離し、水層をトルエン（３００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を、水（２００ｍｌ）及び飽和ＮａＨＣＯ３溶液（２００ｍｌ）の混合物、水（３００ｍｌ）、塩水（３００ｍｌ）で順次洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して乾固させて、粗化合物ｖを淡褐色固体（２６８ｇ、１００％の収率）として付与した。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ７．５９  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．６  Ｈｚ，  １Ｈ），  ４．２６−３．９６  （ｍ，  ４Ｈ），  ３．９２−３．７２  （ｍ，  ２Ｈ），  １．７４  （ｓ，  ３Ｈ），  １．５０  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．０  Ｈｚ，  ３  Ｈ）。Ｃ１２Ｈ１４ＣｌＦＩＯ３のＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：ｍ／ｚ＝３８７．０。
【０２５３】
ステップ５．３−クロロ−６−エトキシ−２−フルオロ−５−（２−メチル−１，３−ジオキソラン−２−イル）ベンズアルデヒド（ｖｉ）
【化４６】
2018510144.tif 000055
約０℃〜約３℃において、２−（５−クロロ−２−エトキシ−４−フルオロ−３−ヨードフェニル）−２−メチル−１，３−ジオキソラン（ｖ、１３５．０ｇ、３４９．２ｍｍｏｌ）（５．５％のケトンによるＨＰＬＣによって８６．８％の純度）の無水テトラヒドロフラン（３００ｍＬ）撹拌溶液に、ＴＨＦ（３２２．３ｍＬ、４１９．０ｍｍｏｌ）中の１．３Ｍ塩化イソプロピルマグネシウム塩化リチウム錯体を１時間かけてゆっくりと添加した。反応混合物を約０℃〜約５℃で３０分間撹拌し、このとき、ＬＣＭＳ分析が、ヨード−マグネシウム交換反応が完了したことを示した。Ｎ−ホルミルモルホリン（７１．１ｍＬ、７００ｍｍｏｌ）を、次いで、反応混合物に１時間かけて約０℃〜約８℃で添加した。反応混合物を約０℃〜約８℃でさらに１時間撹拌し、このとき、ＬＣＭＳ及びＨＰＬＣ分析は、出発物質が消費され、有意量の脱ヨード化副生成物、２−（５−クロロ−２−エトキシ−４−フルオロフェニル）−２−メチル−１，３−ジオキソランが観察されたことを示した。反応をクエン酸（１２０．８ｇ、６２８．６ｍｍｏｌ）の水（１．２０Ｌ）溶液によって０℃でクエンチした。クエンチした反応混合物を、次いで、ＥｔＯＡｃ（２×６００ｍＬ）によって抽出した。相は容易に分離された。合わせた有機層を水（３００ｍｌ）及び塩水（５００ｍＬ）で順次洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。残渣を、０〜１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンによる、シリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィによって精製して、粗生成物の化合物ｖｉを薄黄色固体として与え、これは、ＮＭＲ分析によって示されるように、３６ｍｏｌ％の脱ヨード化副生成物、２−（５−クロロ−２−エトキシ−４−フルオロフェニル）−２−メチル−１，３−ジオキソランを含有する所望の生成物３−クロロ−６−エトキシ−２−フルオロ−５−（２−メチル−１，３−ジオキソラン−２−イル）ベンズアルデヒド（ｖｉ、８０ｇ、８０％）の混合物であった。粗生成物の化合物ｖｉを、対応する重亜硫酸ナトリウム付加物の形成によってさらに精製した。
【０２５４】
重亜硫酸ナトリウム（３６．９１ｇ、３５４．７ｍｍｏｌ）を水（７４．３ｍＬ、４１２１ｍｍｏｌ）に溶解した。粗製３−クロロ−６−エトキシ−２−フルオロ−５−（２−メチル−１，３−ジオキソラン−２−イル）ベンズアルデヒド（ｖｉ、８０．００ｇ、１７７．３ｍｍｏｌ）の酢酸エチル（２５６．０ｍＬ）撹拌溶液に、新たに調製した重亜硫酸ナトリウム溶液を一回で添加した。溶液を約１０分間撹拌し、析出物が観察された。スラリーを次いでさらに１時間撹拌した。アルデヒド−重亜硫酸塩付加物を濾過によって収集し、ＥｔＯＡｃで洗浄し、真空及び窒素雰囲気下で２０時間乾燥して、白色固体（５８．２ｇ、８３．６％の収率）を与えた。１．０Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（２９６ｍＬ、２９６ｍｍｏｌ）中で混合したアルデヒド−重亜硫酸塩付加物（５８．２ｇ、１４８ｍｍｏｌ）にメチルｔ−ブチルエーテル（６００ｍＬ）（ＭＴＢＥ）を添加した。反応混合物を室温で６分間撹拌して透明な二相混合物を与え、撹拌をさらに５分間継続した。有機相を収集し、水層をＭＴＢＥ（２×３００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を塩水（３００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して、純粋な化合物ｖｉを白色結晶固体（３１．４ｇ、７３．４％の収率）として与えた。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  １０．２７  （ｓ，  １Ｈ），  ７．７８  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．５  Ｈｚ，  １Ｈ），  ４．１０−３．９６  （ｍ，  ４Ｈ），  ３．８７−３．７６  （ｍ，  ２Ｈ），  １．７２  （ｓ，  ３Ｈ），  １．４４  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．０  Ｈｚ，  ３  Ｈ）。Ｃ１３Ｈ１５ＣｌＦＯ４のＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：ｍ／ｚ＝２８９．０。
【０２５５】
ステップ６．（Ｅ）−２−（５−クロロ−２−エトキシ−４−フルオロ−３−（２−ニトロビニル）フェニル）−２−メチル−１，３−ジオキソラン（ｖｉｉ）
【化４７】
2018510144.tif 000056
オーバーヘッドスターラ、隔壁、熱電対、窒素入口及び冷却器を備えた５Ｌの４ッ口丸底フラスコに、３−クロロ−６−エトキシ−２−フルオロ−５−（２−メチル−１，３−ジオキソラン−２−イル）ベンズアルデヒド（ｖｉ、５６６．２ｇ、１９６１ｍｍｏｌ）、ニトロメタン（１０６０ｍＬ、１９６００ｍｍｏｌ）、及び氷酢酸（１１２０ｍＬ）を仕込んだ。次に、反応混合物にベンジルアミン（５３．６ｍＬ、４９０ｍｍｏｌ）を仕込み、得られた混合物を６０℃に加熱し、反応をＬＣＭＳによって５．５時間モニタリングした。最初の基本分析をｔ＝０で採取した。反応を２時間及び５時間後に確認した。２時間後、未反応の出発物質アルデヒドが約２０％存在した。５時間後、反応プロファイルは以下の通りであった：出発物質化合物ｖｉ（＜２％）、中間体イミン（＜４％）、生成物化合物ｖｉｉ（＞９３％）及びベンジルアミンマイケル付加物（検出されず）。５．５時間の反応時間で、反応が完了したようであった。反応混合物を室温に冷却し、酢酸エチル（３．０Ｌ）で希釈した。混合物を、含まれている体積が大きいため半分に分けてワークアップした。
【０２５６】
各半分を以下の手順にしたがって処理した：反応混合物を、まず、１．５Ｍ  ＮａＣｌ水溶液（２×１５００ｍＬ；各洗浄後、仕込み量と比較して水性分の体積生産量が増大し、これは、酢酸及び／またはニトロメタンが除去されていたことを示唆した）で洗浄した。混合物を次いで約１５℃に冷却し、４Ｍ  ＮａＯＨ水溶液（４×３００ｍＬ）で水性抽出物のｐＨが８〜９に達するまで洗浄した。最初の洗浄の際、水層は酸性のままであったが、水層が後の洗浄の際に僅かに塩基性になるにつれ、混合物が加熱され、抽出物が暗色になった。層を分離した。ｐＨ調整後の有機層を次いで１．５Ｍ塩化ナトリウム水溶液（１０００ｍＬ）及び水（５００ｍＬ）で洗浄した。これらの最終洗浄の際に乳化及び遅れての分割が観察された。有機相を無水ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。得られた琥珀色シロップを高真空下で一晩置いた。シロップは固化し、７４０ｇの粗生成物が得られた。
【０２５７】
ヘプタン（１．３Ｌ）を粗生成物に添加してスラリーを形成し、これを、全ての固体が溶解されるまで６０℃の水浴において加熱した。得られた溶液を、オーバーヘッドスターラ及び窒素入口を備えたクリーンな３Ｌの４ッ口丸底フラスコにおいて研磨濾過した。フィルタをヘプタン（４０ｍＬ）でリンスした。濾過した溶液を室温に冷却し、５時間撹拌した。固体析出物が観察され、スラリーを氷浴において１時間で０℃に冷却した。生成物を濾過によって収集し、得られた湿潤ケーキを５００ｍＬの氷冷ヘプタンで洗浄した。生成物を真空吸引下でフィルタにおいて部分的に乾燥し、高真空下で一晩さらに乾燥した。濾液及び洗浄溶液を減圧下で濃縮し、得られた残渣を保持してカラム精製した。
【０２５８】
ヘプタン結晶化からの固体を小容量のＤＣＭ及び２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンに溶解し、約１ｋｇのシリカゲルを含有するカラムに投入した。カラムを２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離した。所望の画分を合わせ、減圧下で濃縮して黄色固体を与えた。固体を高真空下で一晩乾燥し、４９７ｇの生成物、化合物ｖｉｉを薄黄色結晶固体として与えた。
【０２５９】
濃縮した濾液及びヘプタン結晶化からの洗浄液を、２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを使用して、上記と同じカラムに投入した。カラムを上記と同じ溶媒系を使用して溶離し、ベースライン不純物及び残存酢酸を除去した。所望の画分を合わせ、減圧下で濃縮して、赤色がかった琥珀色油を与えた。油を高真空下に置き、約２２０ｇの粗生成物を得た。この粗生成物をヘプタン（５００ｍＬ）に溶解し、少量の第１の産出物である固体生成物を蒔いた。スラリーを室温で１６時間撹拌し、次いで氷浴において３時間冷却した。第２の産出物である生成物を濾過によって収集した。生成物を高真空下で乾燥し、１１０ｇの生成物を黄色固体として得た。得られた生成物である化合物ｖｉｉの合計量は６０７ｇ（９３．３％の収率）であった。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  ７．９４  （ｓ，  ２Ｈ），  ７．６８  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．９  Ｈｚ，  １Ｈ），  ４．０７−３．９５  （ｍ，  ４Ｈ），  ３．８２−３．７３  （ｍ，  ２Ｈ），  １．６５  （ｓ，  ３Ｈ），  １．３９  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．０  Ｈｚ，  ３Ｈ）。Ｃ１４Ｈ１６ＣｌＦＮＯ５のＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：ｍ／ｚ＝３３２．０。
【０２６０】
ステップ７．（Ｒ）−ジメチル−２−（１−（３−クロロ−６−エトキシ−２−フルオロ−５−（２−メチル−１，３−ジオキソラン−２−イル）フェニル）−２−ニトロエチル）マロネート（ｖｉｉｉ）
【化４８】
2018510144.tif 000057
（Ｅ）−２−（５−クロロ−２−エトキシ−４−フルオロ−３−（２−ニトロビニル）フェニル）−２−メチル−１，３−ジオキソラン（ｖｉｉ、３５２．８ｇ、１０６４ｍｍｏｌ）を含有する、磁気撹拌棒及び窒素入口を備えた２Ｌ丸底フラスコに、無水テトラヒドロフラン（１．０６Ｌ）及びマロン酸ジメチル（１４６ｍＬ、１２８０ｍｍｏｌ）を添加した。（１Ｓ，２Ｓ）−Ｎ，Ｎ’−ジベンジルシクロヘキサン−１，２−ジアミン−ジブロモニッケル（Ｅｖａｎｓの触媒、２１．４ｇ、２６．６ｍｍｏｌ）を反応混合物に仕込んだ。反応混合物は色が褐色であり、均一な溶液が観察された。反応混合物を室温で１８．５時間撹拌した。１８．５時間後、ＨＰＬＣによって反応を分析した。未反応の出発物質、化合物ｖｉｉは２％で存在した。反応混合物を減圧下で濃縮してＴＨＦを除去し、得られた残渣を、フラッシュクロマトグラフィによって精製した（ＤＣＭ／ヘキサンを投入に使用し、１４２２ｇのシリカゲルをこのカラムに使用し、カラムを１０％〜２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離し；カラム画分を、溶離液として３０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを使用してＴＬＣによってモニタリングし、ＵＶによって可視化した）。所望の画分を合わせ、減圧下で濃縮した。残渣を高真空下で乾燥した。時間とともに、シロップが固化して淡黄色固体（５０３．３ｇ）となり、サンプルをキラルＨＰＬＣ分析で採取した。キラル純度は、９５．７％が所望の（Ｒ）−エナンチオマーであり、４．３％が望ましくない（Ｓ）−エナンチオマーであった。エタノール（１．０Ｌ）を固体に添加し、混合物を６０℃の水浴で、固体が溶解するまで加熱した。溶液を、クリーンな３Ｌの４ッ口丸底において＃１Ｗｈａｔｍａｎフィルタ紙を通して研磨濾過した。濾過した溶液を撹拌しながら室温に冷却した。結晶化が撹拌の３０分後に観察され、スラリーを室温で１６時間撹拌した。スラリーを氷浴で１時間冷却した。生成物を濾過によって収集し、得られたフィルタケーキを氷冷エタノール（５００ｍＬ）で洗浄し、フィルタにおいて部分的に乾燥した。固体を高真空下で乾燥し、所望の生成物ｖｉｉｉ（３７７．５ｇ）を白色結晶固体として与えた。キラル純度をキラルＨＰＬＣによって求め、１００％が所望の（Ｒ）−エナンチオマーであり、０％が望ましくない（Ｓ）−エナンチオマーであった。
【０２６１】
濾液及び洗浄液を合わせ、減圧下で濃縮して油（１１８．９ｇ）とした。油をエタノール（４７５．０ｍＬ）（４ｍＬ／ｇ）に溶解し、第１の産出物である結晶を蒔いた。得られたスラリーを１６時間室温で撹拌し、次いで、氷浴において５．５時間冷却した。第２の産出物である生成物を濾過によって単離し、フィルタにおいて部分的に乾燥した。これを高真空下で乾燥して第２の産出物である生成物（３１．０ｇ）を与えた。キラル純度をキラルＨＰＬＣによって求め、９８．３％が所望の（Ｒ）−エナンチオマーであり、１．７％が望ましくない（Ｓ）−エナンチオマーであった。第１及び第２の産出物の生成物の収量を合わせると４０８．５ｇであり、８２．８％の収率であった。１Ｈ  ＮＭＲ  （５００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  ７．５１  （ｄ，  Ｊ  ＝  ９．０  Ｈｚ，  １Ｈ），  ５．２０−４．８１  （ｍ，  ２Ｈ），  ４．６２  （ｍ，  １Ｈ），  ４．１４−４．０３  （ｍ，  ２Ｈ），  ４．０３−３．９７  （ｍ，  ２Ｈ），  ３．９５−３．８８  （ｍ，  １Ｈ），  ３．８４−３．７２  （ｍ，  ２Ｈ），  ３．７０  （ｓ，  ３Ｈ），  ３．３８  （ｓ，  ３Ｈ），  １．６１  （ｓ，  ３Ｈ），  １．３９  （ｔ，  Ｊ  ＝  ６．９  Ｈｚ，  ３Ｈ）。Ｃ１９Ｈ２４ＣｌＦＯ９のＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：ｍ／ｚ＝４６３．９。
【０２６２】
ステップ８．２−（１−（３−アセチル−５−クロロ−２−エトキシ−６−フルオロフェニル）−２−ニトロエチル）マロン酸（Ｒ）−ジメチル（ｉｘ）
【化４９】
2018510144.tif 000058
機械撹拌機を備えた３ッ口の５Ｌ丸底フラスコにおける（Ｒ）−ジメチル−２−（１−（３−クロロ−６−エトキシ−２−フルオロ−５−（２−メチル−１，３−ジオキソラン−２−イル）フェニル）−２−ニトロエチル）マロネート（ｖｉｉｉ、２４４．０ｇ、５２６．０ｍｍｏｌ）のアセトン（１．２Ｌ）撹拌溶液に、ヨウ素（１３．４ｇ、５２．６ｍｍｏｌ）を室温で添加した。得られた褐色溶液を水浴において５０℃で３０分間加熱し、このとき、ＬＣＭＳ分析は、反応が完了したことを示した。反応混合物を、室温に冷却し、次いで、チオ硫酸ナトリウム（１７．０ｇ、１０８ｍｍｏｌ）の水（１６０ｍＬ）溶液でクエンチして、薄黄色透明溶液を与えた。このとき、追加量の水（１．２Ｌ）をクエンチした溶液に仕込み、得られた白色スラリーを室温で１時間撹拌した。固体を次いで濾過によって収集し、アセトン（１．４Ｌ）に４０℃で再溶解した。溶液を室温に冷却し、次いで、追加の水（１．４Ｌ）を添加した。得られた白色スラリーを室温で１時間撹拌した。固体を濾過によって収集し、水（３×１００ｍｌ）で洗浄した。固体生成物をフィルタ漏斗において吸引下で窒素流によって４６時間乾燥し、化合物ｉｘを白色固体（２１２ｇ、９６％の収率）として与えた。１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ７．５４  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．６  Ｈｚ，  １Ｈ），  ５．０９−４．６７  （ｍ，  ３Ｈ），  ４．１０−３．８３  （ｍ，  ３Ｈ），  ３．９０  （ｓ，  ３Ｈ），  ３．５７  （ｓ，  ３Ｈ），  ２．５７  （ｓ，  ３Ｈ），  １．４６  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．０  Ｈｚ，  ３Ｈ）。Ｃ１７Ｈ２０ＣｌＦＮＯ８のＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：ｍ／ｚ＝４２０．１。
【０２６３】
ステップ９．２−（（Ｒ）−１−（３−クロロ−６−エトキシ−２−フルオロ−５−（（Ｒ）−１−ヒドロキシエチル）フェニル）−２−ニトロエチル）マロン酸ジメチル（ｘ）
【化５０】
2018510144.tif 000059
室温で、５Ｌ丸底フラスコ中の（３ａＳ）−１−メチル−３，３−ジフェニルテトラヒドロ−３Ｈ−ピロロ［１，２−ｃ］［１，３，２］オキサザボロール（（Ｓ）−ＭｅＣＢＳ、１６．３９ｇ、５９．１２ｍｍｏｌ、０．１当量）の無水ＴＨＦ（１００ｍＬ）撹拌溶液に、１．０Ｍのボラン−ＴＨＦ錯体のＴＨＦ（５９１ｍＬ、５９１ｍｍｏｌ、１当量）溶液、続いて、三フッ化ホウ素エーテラート（３．７５ｍＬ、２９．６ｍｍｏｌ、０．０５当量）を添加した。得られた溶液を室温で３０分間撹拌した。［（１Ｒ）−１−（３−アセチル−５−クロロ−２−エトキシ−６−フルオロフェニル）−２−ニトロエチル］マロン酸ジメチル（ｉｘ、２５３．０ｇ、５９１．２ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（１．７Ｌ）溶液を、次いで、添加漏斗を介して６０分かけて滴加した。ケトンｉｘを含有するフラスコを無水ＴＨＦ（１３５ｍＬ）でリンスし、溶液を、添加漏斗を介して反応混合物に滴加した。得られた溶液を室温でさらに１０分間撹拌し、このとき、ＬＣＭＳ分析は、ケトンからアルコールへの転換が完了したことを示した。反応を０℃でのメタノール（７１．８ｍＬ、１７７０ｍｍｏｌ）の滴加によってクエンチした。クエンチした反応混合物を室温で１５分間撹拌し、その後、真空中で濃縮して粗生成物を与えた。このバッチ及び同様のバッチ（２００ｇの出発物質を使用）の粗生成物を合わせ、０〜５％のＭｅＯＨ／ＤＣＭを溶離液として使用するシリカゲルカラムクロマトグラフィによって精製して、化合物ｘを白色固体（４３７ｇ、９７．９％の収率）として与えた。１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ７．５０  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．８  Ｈｚ，  １Ｈ），  ５．１３  （ｑ，  Ｊ  ＝  ６．３  Ｈｚ，  １Ｈ），  ５．０１−４．６５  （ｍ，  ３Ｈ），  ４．１４−３．８９  （ｍ，  ３Ｈ），  ３．７９  （ｓ，  ３Ｈ），  ３．５７  （ｓ，  ３Ｈ），  １．５７−１．４２  （ｍ，  ６Ｈ）。Ｃ１７Ｈ２１ＣｌＦＮＮａＯ８のＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｎａ）＋：ｍ／ｚ＝４４４．０。
【０２６４】
ステップ１０．４−（３−クロロ−６−エトキシ−２−フルオロ−５−（（Ｒ）−１−ヒドロキシエチル）フェニル）−２−オキソピロリジン−３−カルボン酸（４Ｒ）−メチル（ｘｉ）
【化５１】
2018510144.tif 000060
テトラヒドロフラン（８００．０ｍＬ）及びラネーニッケル（１２０ｇ、ピペットによる水の除去後）中に（（１Ｒ）−１−｛３−クロロ−６−エトキシ−２−フルオロ−５−［（１Ｒ）−１−ヒドロキシエチル］フェニル｝−２−ニトロエチル）マロン酸ジメチル（ｘ、１００．０ｇ、２３７．１ｍｍｏｌ）を含有する３ッ口モルトン丸底フラスコに、冷却器、機械撹拌機（ガラス撹拌棒及びテフロンベアリング）ならびに２つの水素ガスバルーン（真空パージ後）を適合させた。フラスコを６５℃の油浴に入れた。バッチを１６時間激しく撹拌し、バルーンを周期的に除去し、水素を再充填した。サンプルを採取し、ＨＰＬＣによって分析した。生成物である化合物ｘｉは、８３％で存在した。反応混合物中には７．８％の非環状化アミン及び５．５％のヒドロキシルアミン副生成物が存在した。触媒を濾去した（ラネーニッケルが乾燥して空気に暴露しないように注意されなければならない）。濾液を蒸発乾固して、９１ｇの粗生成物を白色泡状物として与えた。粗生成物（９１ｇ、８２．６％の面積純度）を別の同様のバッチの粗生成物（９３ｇ、７２．８％の純度）と合わせ、精製した。合わせた粗生成物（１８４ｇ）をシリカゲルにおけるカラムクロマトグラフィによって精製し（溶離液としてＥｔＯＡｃ／ヘキサン）、化合物ｘｉ（１０１．１ｇ、９３％のＨＰＬＣ純度、５９．３％の粗収率）を与えた。粗製材料をさらに精製することなく次のステップに使用した。Ｃ１６Ｈ２０ＣｌＦＮＯ５のＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：ｍ／ｚ＝３６０．０。
【０２６５】
ステップ１１．（４Ｒ）−４−（３−クロロ−６−エトキシ−２−フルオロ−５−（（Ｒ）−１−ヒドロキシエチル）フェニル）−２−オキソピロリジン−３−カルボン酸（ｘｉｉ）
【化５２】
2018510144.tif 000061
オーバーヘッドスターラ及び窒素入口を備えた５Ｌの４ッ口丸底フラスコ内に４−（３−クロロ−６−エトキシ−２−フルオロ−５−（（Ｒ）−１−ヒドロキシエチル）フェニル）−２−オキソピロリジン−３−カルボン酸（４Ｒ）−メチル（ｘｉ、２６８ｇ、５８１ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（２１５０ｍＬ、２６５００ｍｍｏｌ）溶液を仕込んだ。該溶液に、１．０Ｍの水酸化ナトリウムの水（１４２０ｍＬ、１４２０ｍｍｏｌ）溶液を仕込んだ。得られた混濁溶液が１分以内に透明になった。反応混合物を室温で一晩撹拌した。１５時間後に反応をＬＣＭＳによって分析し、出発物質が観察されなかったときに完了したとみなした。反応混合物を氷浴において９．５℃の内温まで冷却し、混合物を、３０分かけて滴下漏斗を介して６．０Ｍ塩酸水溶液（２３７．０ｍＬ、１４２２ｍｍｏｌ）を添加することによって、ｐＨ１〜２に酸性化した。反応混合物を半分に分け、各半分を酢酸エチル（２×１Ｌ）で抽出した。合わせた水層を酢酸エチル（５００ｍＬ）でさらに抽出した。２つの有機層を塩水（２０％ｗ／ｗＮａＣｌ／水、２×１０００ｍＬ）で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮して、粗製中間体である酸ｘｉｉを黄色がかった泡状物として与え、これを次の反応において直接使用した。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ１２．６８  （ｂｒ  ｓ，  １Ｈ），  ８．２６  （ｓ，  １Ｈ），  ７．５２  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．０  Ｈｚ，  １Ｈ），  ５．２７  （ｂｒ  ｓ，  １Ｈ），  ４．９０  （ｑ，  Ｊ  ＝  ６．３  Ｈｚ，  １Ｈ），  ４．２８  （ｑ，  Ｊ  ＝  ８．８  Ｈｚ，  １Ｈ），  ３．９２−３．８１  （ｍ，  １Ｈ），  ３．７６−３．６５  （ｍ，  １Ｈ），  ３．５７  （ｔ，  Ｊ  ＝  ９．６  Ｈｚ，  １Ｈ），  ３．４６  （ｄ，  Ｊ  ＝  ９．４  Ｈｚ，  １Ｈ），  ３．２３  （ｑ，  Ｊ  ＝  ９．５  Ｈｚ，  １Ｈ），  １．３３  （ｔ，  Ｊ  ＝  ６．９  Ｈｚ，  ３Ｈ），  １．２８  （ｄ，  Ｊ  ＝  ６．４  Ｈｚ，  ３Ｈ）．Ｃ１５Ｈ１７ＣｌＦＮＮａＯ５のＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｎａ）＋：ｍ／ｚ＝３６８．０。
【０２６６】
ステップ１２．（Ｒ）−４−（３−クロロ−６−エトキシ−２−フルオロ−５−（（Ｒ）−１−ヒドロキシエチル）フェニル）ピロリジン−２−オン（ｘｉｉｉ）
【化５３】
2018510144.tif 000062
粗化合物ｘｉｉを１，４−ジオキサン（９７６ｍＬ）及びトルエン（９７６ｍＬ）に溶解し、得られた黄色溶液を１００℃で加熱した。反応が進行するにつれ、溶液の色が褐色になった。サンプルを１時間、２時間及び２．５時間の時点で取り出した。２．５時間では、ＨＰＬＣ分析が、酸である化合物１２が０．３８％であり、所望の生成物である化合物ｘｉｉｉが７８．８％であったことを示した。反応混合物を、室温に冷却し、クリーンな３Ｌの丸底フラスコ内で研磨濾過した。溶液を次いで減圧下で濃縮し、得られた残渣を高真空下に置いて、褐色泡状物（２５４ｇ）を与えた。
【０２６７】
アセトニトリル（３５０ｍＬ）を褐色シロップに仕込み、６５℃の水浴において、溶解が観察されるまで加熱した。溶液を室温に冷却し、１６時間撹拌した。固体を溶液から分離した。得られたスラリーを氷浴において１時間冷却した。生成物を濾過によって収集し、フィルタケーキを４００ｍＬの氷冷アセトニトリルでリンスした。固体は吸湿性であるとみなした。固体をＤＣＭ（２．０Ｌ）に溶解し、シロップに濃縮し、これを高真空下に置いて、化合物ｘｉｉｉを白色泡状物（１０６．４ｇ）として生成した。
【０２６８】
濾液を暗色シロップ（約１２０ｇ）に濃縮し、これをフラッシュクロマトグラフィによって精製した（４×３３０ｇシリカゲルカラム、ＤＣＭを投入し、５０％〜１００％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離し、１００％ＥｔＯＡｃを溶離液として使用してＴＬＣによってモニタリングした）。クロマトグラフィからの画分を減圧下で濃縮し、高真空下に置いて、淡褐色泡状物（５４．４ｇ）を生成した。泡状物にＭＴＢＥ（４００ｍＬ）及びＭｅＯＨ（１０ｍＬ）を仕込み、５６℃の水浴で１５分間加熱すると、いくらかの固体が残存した。スラリーを撹拌しながら室温に冷却した。スラリーを濾過して不溶性物質を除去した。濾液をシロップに濃縮し、高真空下に置いて、泡状物を生成した。泡状物にアセトニトリル（７２ｍＬ、１．５ｍＬ／ｇ）を仕込み、溶液が均一になるまで６０℃の水浴において加熱した。溶液を撹拌しながら室温に冷却し、固体が溶液から析出し、非常に粘性となった。追加のアセトニトリル（２４ｍＬ）を仕込み、２ｍＬ／ｇへの希釈を調整した。スラリーを室温で１６時間撹拌し、次いで、氷浴において１時間冷却した。生成物を濾過によって収集し、アセトニトリルでリンスした。化合物ｘｉｉｉ（２５ｇ）を第２の産出物として与えた。合計１３１．４ｇの化合物ｘｉｉｉを化合物ｘｉから７４．９％の収率で得た。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  ７．８３  （ｓ，  １Ｈ），  ７．４７  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．７  Ｈｚ，  １Ｈ），  ５．２４  （ｄ，  Ｊ  ＝  ４．５  Ｈｚ，  １Ｈ），  ４．９６−４．８５  （ｍ，  １Ｈ），  ４．０８−３．９２  （ｍ，  １Ｈ），  ３．８０  （ｑｔ，  Ｊ  ＝  ６．９，  ３．５  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ３．６１−３．５１  （ｍ，  １Ｈ），  ３．２５  （ｔ，  Ｊ  ＝  ９．１  Ｈｚ，  １Ｈ），  ２．６１−２．５０  （ｍ，  １Ｈ），  ２．３５−２．２６  （ｍ，  １Ｈ），  １．３３  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．０  Ｈｚ，  ３Ｈ），  １．２７  （ｄ，  Ｊ  ＝  ６．４  Ｈｚ，  ３Ｈ）。Ｃ１４Ｈ１８ＣｌＦＮＯ３のＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：ｍ／ｚ＝３０２．０。
【０２６９】
実施例２．（Ｒ）−４−（３−クロロ−６−エトキシ−２−フルオロ−５−（（Ｒ）−１−ヒドロキシエチル）フェニル）ピロリジン−２−オンの代替合成
【化５４】
2018510144.tif 000063
【０２７０】
ステップ１．１−（５−クロロ−２−エトキシ−４−フルオロフェニル）エタノン（ｉｖ−ａ）
【化５５】
2018510144.tif 000064
１−（５−クロロ−４−フルオロ−２−ヒドロキシフェニル）エタノン（実施例１、ステップ１からの化合物ｉｉ、１３５０ｇ、７１６０ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３．３２Ｌ）、ヨードエタン（１３４０ｇ、８５９０ｍｍｏｌ）、及び炭酸カリウム（１９８０ｇ、１４３００ｍｍｏｌ）を一緒に混合し、室温で４５分間撹拌した。バッチ温度を２２℃から５５℃まで上げた。反応混合物を６０℃に１時間加熱した（バッチ温度が３０分で６７℃に達し、次いで、６０℃に降下した）。ＨＰＬＣ分析は、全ての出発物質が消費されたことを示した。水（１０Ｌ）を一回で添加した（水を分割して添加するときには振とうは止める）。得られたスラリーを室温で３０分間撹拌した。生成物を濾過によって収集し、水（３Ｌ）でリンスした。生成物をフィルタにおいて真空下で５日間乾燥し、化合物ｉｖ−ａを黄褐色固体（１４１８ｇ）として与えた。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  ７．６９  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．９  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．３０  （ｄ，  Ｊ  ＝  １１．６  Ｈｚ，  １Ｈ），  ４．１５  （ｑ，  Ｊ  ＝  ７．０  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ２．５１  （ｓ，  ３Ｈ），  １．３７  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．０  Ｈｚ，  ３Ｈ）。
【０２７１】
ステップ２．２−（５−クロロ−２−エトキシ−４−フルオロフェニル）−２−メチル−１，３−ジオキソラン（ｖ−ａ）
【化５６】
2018510144.tif 000065
１−（５−クロロ−２−エトキシ−４−フルオロフェニル）エタノン（ｉｖ−ａ、１４８１．０ｇ、６８３６．３ｍｍｏｌ）の溶液をトルエン（６Ｌ）に溶解した。１，２−エタンジオール（９５３ｍＬ、１７１００ｍｍｏｌ）及びｐ−トルエンスルホン酸一水和物（１０４ｇ、５４７ｍｍｏｌ）を溶液に添加した。反応混合物を、ディーンスタークトラップを使用して１０４〜１１０℃で還流まで加熱し、１７．４時間で水を除去した。ＨＰＬＣ分析は、３７％の出発物質が未反応で残存したことを示した。約６００ｍＬの蒸留物を除去し、反応混合物を還流下でさらに５時間（合計２２時間）加熱した。ＨＰＬＣ分析は、さらなる反応が無いことを示した。
【０２７２】
出発物質化合物ｉｖ−ａ中の残存Ｋ２ＣＯ３が反応を中断させ得ることが推測された。そのため、反応混合物を室温に冷却し、１Ｎ塩酸水溶液（３×６．６６Ｌ）で洗浄した。水性酸で洗浄後、有機層を反応ベッセルに戻した。１，２−エタンジオール（３８１ｍＬ、６８４０ｍｍｏｌ）及びｐ−トルエンスルホン酸一水和物（１０４ｇ、５４７ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を還流下で１６時間加熱した。ＨＰＬＣ分析は、約２０％の出発物質が未反応で残存したことを示した。約１００ｍＬの蒸留物を除去した。１，２−エタンジオール（３８０ｍＬ、６８００ｍｍｏｌ）を添加し、６時間（合計２２時間）還流した。ＨＰＬＣは、７％の出発物質が未反応で残存したことを示した。約１２５ｍＬの蒸留物を除去した。反応混合物を還流まで６時間（合計２８時間）加熱した。ＨＰＬＣは、５．４％の出発物質が未反応で残存したことを示した。約１２５ｍＬの蒸留物を除去した。反応混合物を、還流までさらに７時間加熱した。ＨＰＬＣ分析は、３．５％の出発物質が未反応で残存したことを示した。約８０ｍＬの蒸留物を除去した。反応は、この時点で完了したとみなした。
【０２７３】
反応混合物を１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（２×５．５Ｌ）で洗浄した。第１塩基性洗浄液をトルエン（２．１Ｌ）で抽出した。合わせたトルエン溶液を水（７Ｌ）で洗浄し、濃縮して２１５３ｇの暗色油を与えた。ＨＰＬＣ分析は、１．９０％が出発物質、０．７９％が脱ヨード生成物で、生成物純度が９３．８％であったことを示した。１Ｈ  ＮＭＲ分析は、約０．５当量のトルエン（約２５６ｇ）が生成物に残存したことを示した。化合物ｖ−ａの補正収率は８８．０％であった。１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ７．５１  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．８  Ｈｚ，  １Ｈ），  ６．７０  （ｄ，  Ｊ  ＝  １１．０  Ｈｚ，  １Ｈ），  ４．１７−３．９２  （ｍ，  ４Ｈ），  ３．９１−３．８０  （ｍ，  ２Ｈ），  １．７５  （ｓ，  ３Ｈ），  １．４６  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．０  Ｈｚ，  ３Ｈ）。
【０２７４】
ステップ３．３−クロロ−６−エトキシ−２−フルオロ−５−（２−メチル−１，３−ジオキソラン−２−イル）ベンズアルデヒド（ｖｉ）
【化５７】
2018510144.tif 000066
オーバーヘッドスターラ、５００ｍＬの添加漏斗、窒素入口、隔壁、及び熱電対を備えた、オーブン乾燥した３Ｌの４ッ口丸底フラスコに、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミン（８７．８ｍＬ、６２６ｍｍｏｌ）及び無水テトラヒドロフラン（１０９０ｍＬ、１３５００ｍｍｏｌ）を仕込んだ。この溶液を−７２℃に冷却し、ヘキサン（２６１ｍＬ、６５２ｍｍｏｌ）中２．５Ｍのｎ−ブチルリチウムを仕込んだ。ｎ−ブチルリチウム溶液を１８分かけて添加した。添加の際の最高内部温度は−６５°であった。乾燥氷−アセトン浴を氷−水浴で置き換え、反応混合物を約−５℃〜約０℃に加温し、１５分間保持した。反応混合物を、次いで、−７４．５℃に冷却した。
【０２７５】
２−（５−クロロ−２−エトキシ−４−フルオロフェニル）−２−メチル−１，３−ジオキソラン（ｖ−ａ、１３６．１ｇ、５２２．１ｍｍｏｌ）を含有する別個の１Ｌの丸底フラスコに無水テトラヒドロフラン（４５６ｍＬ）を添加して、固体を溶解した。得られた溶液を氷浴において約０℃に冷却した。化合物ｖ−ａを含有する溶液を、反応温度を−７０℃と−７２．５℃との間に維持しながら、カニューラを介して４０分かけてＬＤＡ溶液に移した。反応混合物が黄色スラリーになり、これを−７４℃で３７分間撹拌した。Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（６０．６ｍＬ、７８３ｍｍｏｌ）を、シリンジを介して１回で仕込み、この添加は、−７４．５℃から−６６．５℃への発熱を生じた。添加後、反応をＨＰＬＣで９０分間モニタリングした。出発物質は２．９％で存在した。冷浴を除去し、反応混合物を周囲温度において加温した。反応混合物をサンプリングし、３時間後に分析し、未反応の出発物質が１．５％で存在した。反応は完了したと見なし、これを、氷水（１．４Ｌ）への反応溶液の添加によってクエンチし、酢酸エチル（１．５Ｌ）で抽出した。水層を酢酸エチル（１．５Ｌ）で抽出し、有機層を合わせ、塩水（２０％ｗ／ｗＮａＣｌ水溶液、２×６００ｍＬ）で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４上で乾燥させた。ＭｇＳＯ４を濾過によって除去し、濾液を濃縮して、いくらか固体が存在する油とした。この残渣を塩化メチレンに溶解し、シリカゲルのパッド（５８６ｇ）上に投入した。シリカパッドを２％ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭで溶離した（溶離液として１００％ＤＣＭを使用してＴＬＣによってモニタリングした）。所望の画分を収集し、減圧下で濃縮して、淡琥珀色油を与えた。油を高真空下に置いて、化合物ｖｉを黄色固体（１４６．５ｇ、９５．１％の収率）として与えた。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  １０．２７  （ｓ，  １Ｈ），  ７．７８  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．５  Ｈｚ，  １Ｈ），  ４．１０−３．９６  （ｍ，  ４Ｈ），  ３．８７−３．７６  （ｍ，  ２Ｈ），  １．７２  （ｓ，  ３Ｈ），  １．４４  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．０  Ｈｚ，  ３  Ｈ）。Ｃ１３Ｈ１５ＣｌＦＯ４のＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：ｍ／ｚ＝２８９．１。
【０２７６】
ステップ４−１０．（Ｒ）−４−（３−クロロ−６−エトキシ−２−フルオロ−５−（（Ｒ）−１−ヒドロキシエチル）フェニル）ピロリジン−２−オン（ｘｉｉｉ）
表題化合物を、実施例１、ステップ６〜１２に記載されている手順と類似する手順を使用して調製した。
【０２７７】
実施例３．（Ｒ）−４−（３−（（Ｓ）−１−（４−アミノ−３−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）エチル）−５−クロロ−２−エトキシ−６−フルオロフェニル）ピロリジン−２−オン塩酸塩
【化５８】
2018510144.tif 000067
ステップ１．（Ｒ）−１−（５−クロロ−２−エトキシ−４−フルオロ−３−（（Ｒ）−５−オキソピロリジン−３−イル）フェニル）エチルメタンスルホネート（ｘｉｖ）
【化５９】
2018510144.tif 000068
（Ｒ）−４−（３−クロロ−６−エトキシ−２−フルオロ−５−（（Ｒ）−１−ヒドロキシエチル）フェニル）ピロリジン−２−オン（ｘｉｉｉ、１７２．０ｇ、５７０．０ｍｍｏｌ）（９９．８３％で、１４７ｇからなった：０．０９％のキラル純度、９９．３３％の化学純度；及び２５ｇ、８７．４６％：１２．５４％のキラル純度、８６．７４％の化学純度）を塩化メチレン（８６０ｍＬ）に溶解した。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１４９ｍＬ、８５５ｍｍｏｌ）を約−７℃〜約２℃で溶液に添加した。塩化メタンスルホニル（５７．４ｍＬ、７４１ｍｍｏｌ）を反応混合物に２５分かけて滴加した。懸濁液が透明溶液になった。３０分の反応時点で、ＨＰＬＣが、反応が完了したことを示した。化合物ｘｉｖを含有するこの反応混合物を次の反応において直接使用した。
【０２７８】
ステップ２．（Ｒ）−４−（３−クロロ−６−エトキシ−２−フルオロ−５−（（Ｓ）−１−ヒドラジニルエチル）フェニル）ピロリジン−２−オン（ｘｖ）
【化６０】
2018510144.tif 000069
０℃で、ヒドラジン（１７８．９ｍＬ、５．７ｍｏｌ）を１回で添加し、続いて、Ｎ−メチルピロリジノン（８６０ｍＬ）を、ステップ１からの化合物ｘｉｖを含有する反応混合物に添加した。反応混合物が混濁し、いくらかの析出物が形成した。混合物を４０〜５７℃において窒素下で９０分間加熱した。ＨＰＬＣは、全てのメシレートが消費されたことを示した。
【０２７９】
反応混合物を室温に冷却し、重炭酸ナトリウム（２８．３ｇ）の飽和水溶液（３００ｍＬ）を添加した。混合物を２０分間撹拌し、このとき、ジクロロメタン（３００ｍＬ）を添加した。有機層を分離し、重炭酸ナトリウム（１４．２ｇ）の水（１５０ｍＬ）溶液で撹拌した。水層をジクロロメタン（２００ｍＬ×２）で抽出した。合わせた有機層を塩水（８０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４（３１１ｇ）上で乾燥させ、濃縮し、トルエン（２５０ｍＬ）と共沸混合して、化合物ｘｖを含有する無色のＮ−メチルピロリジノン溶液を与え、これを次の反応において直接使用した。サンプルをＮＭＲ分析用に精製した。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６），  δ  ７．８８  （ｓ，  １Ｈ），  ７．６６  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．５  Ｈｚ，  １Ｈ），  ４．４２  （ｑ，  Ｊ  ＝  ６．７  Ｈｚ，  １Ｈ），  ４．０６−３．８８  （ｍ，  ２Ｈ），  ３．７９−３．６６  （ｍ，  １Ｈ），  ３．６５−３．５１  （ｍ，  １Ｈ），  ３．２４  （ｔ，  Ｊ  ＝  ８．８  Ｈｚ，  １Ｈ），  ２．６０−２．４６  （ｍ，  １Ｈ），  ２．３６−２．２５  （ｍ，  １Ｈ），  １．３７  （ｔ，  Ｊ  ＝  ６．９  Ｈｚ，  ３Ｈ），  １．２６  （ｄ，  Ｊ  ＝  ６．８  Ｈｚ，  ３Ｈ）。Ｃ１４Ｈ１９ＣｌＦＮ３Ｏ２のＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：ｍ／ｚ＝３１６．１。
【０２８０】
ステップ３．５−アミノ−１−（（Ｓ）−１−（５−クロロ−２−エトキシ−４−フルオロ−３−（（Ｒ）−５−オキソピロリジン−３−イル）フェニル）エチル）−３−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル（ｘｖｉ）
【化６１】
2018510144.tif 000070
撹拌しながら、（１−エトキシエチリデン）マロノニトリル（１０１ｇ、７４１ｍｍｏｌ）を、ステップ２からの化合物ｘｖのＮ−メチルピロリジノン溶液に分割して添加し、混合物を窒素下、室温で撹拌した。１５分後、ＨＰＬＣ分析は、生成物である化合物ｘｖｉに対して、１１％が出発物質のヒドラジン、化合物ｘｖであることを示した。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１５ｍＬ、８６ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で１５時間撹拌した。ＨＰＬＣ分析は、５．６％の出発物質が残存したことを示した。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（５ｍＬ、３０ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で５時間撹拌した。ＨＰＬＣは、５．６％の出発物質が残存したことを示した。反応混合物を２．５日間撹拌し、２つの同様のバッチと合わせ、一緒にワークアップした。
【０２８１】
化合物ｘｖｉの３つのバッチの反応混合物を合わせた。０．５Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（３．８Ｌ）を１０〜２０℃で添加し、５分間撹拌した。ＨＰＬＣは、全ての出発物質（１−エトキシエチリデン）マロノニトリルが消費されたことを示した。酢酸エチル（４．０Ｌ）を添加し、混合物を、１５分間撹拌した。層を分離した。有機層を０．５Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（２．３８Ｌ）で洗浄した。層を分離した。合わせた水層を酢酸エチル（２×２Ｌ）で抽出した。合わせた有機層を１．０Ｍ塩酸水溶液（３．５６Ｌ）で洗浄し、得られた水層のｐＨは２〜３であった。有機層を塩水（５Ｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮させ、高真空下で４０時間乾燥して、化合物ｘｖｉを淡褐色泡状固体（７０２．７ｇ）として与えた。１Ｈ  ＮＭＲ  （５００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  ７．７８  （ｓ，  １Ｈ），  ７．４４  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．４  Ｈｚ，  １Ｈ），  ６．５３  （ｓ，  ２Ｈ），  ５．６４  （ｑ，  Ｊ  ＝  ６．７  Ｈｚ，  １Ｈ），  ３．９６  （ｍ，  １Ｈ），  ３．７４  （ｍ，  １Ｈ），  ３．３４  （ｍ，  １Ｈ），  ３．５８  （ｍ，  ２Ｈ），  ２．５９−２．５０  （ｍ，  １Ｈ），  ２．２９  （ｍ，  １Ｈ），  ２．０４  （ｓ，  ３Ｈ），  １．５７  （ｄ，  Ｊ  ＝  ６．８  Ｈｚ，  ３Ｈ），  １．３７  （ｔ，  Ｊ  ＝  ６．９  Ｈｚ，  ３Ｈ）。Ｃ１９Ｈ２２ＣｌＦＮ５Ｏ２のＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：ｍ／ｚ＝４０６．１。
【０２８２】
化合物ｘｖｉの３つのステップ（メシル化、ヒドラジン分解及びピラゾール形成）の全体収率は、化合物ｘｉｉｉの合計仕込み量から７２．８％であると算出された。純度は、約８０％であることがＨＰＬＣによって求められた。ＨＰＬＣ分析は、塩基性水層にいくらかの生成物が既存していることを示し、これを、続いて、ＥｔＯＡｃ（２Ｌ）で抽出し、１．０Ｍ塩酸水溶液及び塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮し、高真空ポンプにおいて４０時間乾燥し、化合物ｘｖｉを褐色油（１３４ｇ、１３．９％）として付与した。
【０２８３】
ステップ４．（Ｒ）−４−（３−（（Ｓ）−１−（４−アミノ−３−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）エチル）−５−クロロ−２−エトキシ−６−フルオロフェニル）ピロリジン−２−オン（ｘｖｉｉ）
【化６２】
2018510144.tif 000071
５−アミノ−１−（（Ｓ）−１−（５−クロロ−２−エトキシ−４−フルオロ−３−（（Ｒ）−５−オキソピロリジン−３−イル）フェニル）エチル）−３−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル（ｘｖｉ、７０２．７ｇ、１７３１ｍｍｏｌ）を、酢酸ホルムアミジン（１８０２ｇ、１７．３１ｍｏｌ）及び１，２−エタンジオール（３．５１Ｌ）を含む反応ベッセルに添加した。反応混合物を１０２〜１０３℃で撹拌しながら１８時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、酢酸エチル（７Ｌ）及び水（６Ｌ）を添加し、二相混合物を１５分間撹拌した。有機層を分離し、水層を追加の水（４．５Ｌ）及び酢酸エチル（３Ｌ）で希釈し、１０分間撹拌した。有機層を分離した。水層を酢酸エチル（２Ｌ）でさらに抽出した。有機層を合わせ、水（４．５Ｌ）で撹拌した。水層を分離し、有機層を、セライトのパッド（約１ｋｇ）を通して濾過した。有機層を、混合物を１０分間撹拌することによって１．０Ｍ塩酸水溶液（７Ｌ）で抽出した。水層を分離した。透明な褐色有機層を追加の１．０Ｍ塩酸水溶液（３Ｌ）で１０分間撹拌した。水層を分離した。水性酸性層を合わせ、トルエン（５００ｍＬ）で洗浄した。水性酸性溶液を氷−水浴で冷却し、塩化メチレン（４Ｌ）を添加した。５〜１５℃で、水酸化ナトリウム（５３０ｇ）の水溶液（５３０ｍＬ）（５０％ＮａＯＨ溶液）を、１１〜１２の溶液ｐＨまで、ゆっくりと添加した。固体析出物を観察した。追加の塩化メチレン（３．５Ｌ）及びメタノール（３００ｍＬ）を添加し、混合物を１０〜１５分間撹拌した。固体生成物を濾過によって収集し、フィルタにおいて吸引下で１６時間乾燥して、化合物ｘｖｉｉ（２８９．７ｇ）を褐色固体として与えた。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  ８．１１  （ｓ，  １Ｈ），  ７．８２  （ｓ，  １Ｈ），  ７．５２  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．５  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．３０  （ｂｒ  ｓ，  ２Ｈ），  ６．２３  （ｑ，  Ｊ  ＝  ７．０  Ｈｚ，  １Ｈ），  ３．９７  （ｐ，  Ｊ  ＝  ９．２  Ｈｚ，  １Ｈ），  ３．９０−３．７３  （ｍ，  ２Ｈ），  ３．５７  （ｔ，  Ｊ  ＝  ９．９  Ｈｚ，  １Ｈ），  ３．２５  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ９．２，  ８．７  Ｈｚ，  １Ｈ），  ２．４８  （ｓ，  ３Ｈ），  ２．６０−２．５０  （ｍ，  １Ｈ），  ２．３６−２．２０  （ｍ，  １Ｈ），  １．６９  （ｄ，  Ｊ  ＝  ７．１  Ｈｚ，  ３  Ｈ），  １．３９  （ｔ，  Ｊ  ＝  ６．９  Ｈｚ，  ３Ｈ）。Ｃ２０Ｈ２３ＣｌＦＮ６Ｏ２のＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：ｍ／ｚ＝４３３．３。
【０２８４】
濾液を分離漏斗に移し、有機層を分離した。水層を塩化メチレン（５Ｌ）及びメタノール（２００ｍＬ）で撹拌した。合わせた有機層を無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、濃縮し、高真空ポンプにおいて１６時間乾燥して、追加量２５９．３ｇを褐色固体として与えた。ｘｖｉｉの合計収量は５４８．３ｇであり、７３．２％の収率であった。
【０２８５】
ステップ５．（Ｒ）−４−（３−（（Ｓ）−１−（４−アミノ−３−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）エチル）−５−クロロ−２−エトキシ−６−フルオロフェニル）ピロリジン−２−オン塩酸塩（ｘｖｉｉｉ）
【化６３】
2018510144.tif 000072
１．０Ｍ塩酸水（ＨＣｌ、５．０Ｌ、５．０ｍｏｌ）溶液を（Ｒ）−４−（３−（（Ｓ）−１−（４−アミノ−３−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）エチル）−５−クロロ−２−エトキシ−６−フルオロフェニル）ピロリジン−２−オン（ｘｖｉｉ、６０９．８ｇ、１．４０９ｍｏｌ）に室温で添加した。得られた粘性スラリーを、次いで、５０℃に加熱し、透明溶液を付与した。追加の１．８２Ｌの１．０Ｍ塩酸水溶液（ＨＣｌ、１．８２Ｌ、１．８２ｍｏｌ；合計６．８２Ｌ、６．８２ｍｏｌ、４．８４当量）を透明溶液に５０℃で添加し、溶液を、次いで、研磨フィルタを通しておよそ５０℃で濾過した。研磨濾過した反応混合物を２時間かけて徐々に室温まで冷却し、その後、０〜５℃にさらに冷却した。反応混合物を０〜５℃で少なくとも２０分間撹拌して析出を開始した。得られた固体を濾過によって収集し、冷母液の部分、続いて、１．０Ｍ塩酸水（ＨＣｌ、２００ｍＬ）でリンスし、フィルタ漏斗において室温にて吸引下で一定重量まで（約３９時間）乾燥して、式Ｉの化合物の塩酸塩：（Ｒ）−４−（３−（（Ｓ）−１−（４−アミノ−３−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）エチル）−５−クロロ−２−エトキシ−６−フルオロフェニル）ピロリジン−２−オン塩酸塩（ｘｖｉｉｉ、３４８．７ｇ、６６１．２ｇ、理論、５２．７％）を白色結晶粉末として付与した。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  ９．３９  （ｂｒ  ｓ，  １Ｈ），  ９．０５  （ｂｒ  ｓ，  １Ｈ），  ８．５０  （ｓ，  １Ｈ），  ７．８４  （ｓ，  １Ｈ），  ７．５９  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．４  Ｈｚ，  １Ｈ），  ６．２８  （ｑ，  Ｊ  ＝  ６．９  Ｈｚ，  １Ｈ），  ３．９５  （ｍ，  １Ｈ），  ３．７９  （ｍ，  ２Ｈ），  ３．５５  （ｍ，  １Ｈ），  ３．２２  （ｍ，  １Ｈ），  ２．５９  （ｓ，  ３Ｈ），  ２．５５  （ｄｄｄ，  Ｊ  ＝  １６．８，  １０．３，  ２．３  Ｈｚ，  １Ｈ），  ２．２８  （ｄｄｄ，  Ｊ  ＝  １６．８，  ８．６，  １．５  Ｈｚ，  １Ｈ），  １．７３  （ｄ，  Ｊ  ＝  ７．０  Ｈｚ，  ３Ｈ），  １．３８  （ｔ，  Ｊ  ＝  ６．９  Ｈｚ，  ３Ｈ）  ｐｐｍ。１３Ｃ  ＮＭＲ  （１００ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  １７５．３，  １５６．４  （ＪＣＦ  ＝  ２４９．８  Ｈｚ），  １５３．８  （ＪＣＦ  ＝  ７．０  Ｈｚ），  １５２．４，  １５０．８，  １４７．３，  １４４．３，  １３１．４  （ＪＣＦ  ＝  ３．５  Ｈｚ），  １２７．３，  １２６．４  （ＪＣＦ  ＝  １２．６  Ｈｚ），  １１６．１  （ＪＣＦ  ＝  １８．４  Ｈｚ），  ９８．０，  ７２．１，  ４９．１，  ４６．６，  ３６．０，  ２９．４，  ２１．０，  １５．４，  １４．６  ｐｐｍ．  １９Ｆ  ＮＭＲ  （３７６  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  −  １１３．６  （ｄ，  ＪＦＨ  ＝  ７．７  Ｈｚ）ｐｐｍ。Ｃ２０Ｈ２３Ｃｌ２ＦＮ６Ｏ２（ＭＷ４６９．３４）；ＬＣＭＳ（ＥＩ）ｍ／ｅ４３３．２（Ｍ＋＋Ｈ；ｘｖｉｉの正確な質量：４３２．１５）。ＫＦによる含水率：３．６３重量％；滴定による塩化物（Ｃｌ−）含有率：７．５６重量％（理論で７．５６％）。
【０２８６】
（Ｒ）−４−（３−（（Ｓ）−１−（４−アミノ−３−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）エチル）−５−クロロ−２−エトキシ−６−フルオロフェニル）ピロリジン−２−オン塩酸塩結晶形態の溶融／分解範囲を、１０℃／分の加熱速度を使用して３０℃の開始温度から３５０℃の最終温度までＤＳＣによって求めた。ＤＳＣサーモグラムにより、図１に示すような１９４．３７℃での開始及び２０６．５５℃でのピークを有する１つの吸熱事象が明らかになった。
【０２８７】
ＴＧＡサーモグラムは、２１０℃までで４．３％の合計重量損失を示した。図２に示すように、２１０℃を超えると塩が分解し始める。
【０２８８】
代表的なＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを図３に示し、表２は、相当するピーク及び強度を示す。
【表２】
2018510144.tif 000073
【０２８９】
実施例４．（Ｒ）−４−（３−（（Ｓ）−１−（４−アミノ−３−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）エチル）−５−クロロ−２−エトキシ−６−フルオロフェニル）ピロリジン−２−オン塩酸塩の代替合成
【化６４】
2018510144.tif 000074
ステップ１．（Ｒ）−４−（３−アセチル−５−クロロ−２−エトキシ−６−フルオロフェニル）ピロリジン−２−オン（ｘｉｘ）
【化６５】
2018510144.tif 000075
（４Ｒ）−４−［３−クロロ−６−エトキシ−２−フルオロ−５−（１−ヒドロキシエチル）フェニル］ピロリジン−２−オン（ピロリジノンにおいてＲ配置、及び第２級アルコールにおいてＲ−またはＳ配置を有する２つのジアステレオマーの混合物として）（ｘｉｉｉ、１６．７ｇ、５５．３ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１６７ｍＬ）に溶解した。溶液を氷−水浴において冷却し、デス−マーチンペルヨージナン（３５．２ｇ、８３．０ｍｍｏｌ）を少量ずつ添加した。反応混合物を室温で２時間撹拌し、このとき、ＨＰＬＣ分析が反応完了を示した。亜硫酸ナトリウム（２８ｇ、２２０ｍｍｏｌ）の水（７０ｍＬ）溶液を反応混合物に添加し、混合物を２０分間撹拌した。１．０Ｍの水酸化ナトリウム溶液を混合物に添加し、１０分間撹拌した。層を沈殿させ、有機層を分離し、１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（６６ｍＬ）及び水（６０ｍＬ）で順次洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。乾燥剤を濾過によって除去し、濾液を濃縮して、（Ｒ）−４−［３−アセチル−５−クロロ−２−エトキシ−６−フルオロフェニル］ピロリジン−２−オンを油として与え、これを、さらに精製することなく次の反応において使用した。
【０２９０】
ステップ２．２−（１−（５−クロロ−２−エトキシ−４−フルオロ−３−（５−オキソピロリジン−３−イル）フェニル）エチリデン）ヒドラジンカルボン酸（Ｒ，Ｅ）−ｔｅｒｔ−ブチル（ｘｘ）
【化６６】
2018510144.tif 000076
粗製（Ｒ）−４−［３−アセチル−５−クロロ−２−エトキシ−６−フルオロフェニル］ピロリジン−２−オン（ステップ１からの化合物ｘｉｘ）をメタノール（６０ｍＬ）に溶解し、カルバジン酸ｔ−ブチル（８．０４ｇ、６０．８ｍｍｏｌ）を溶液に添加した。反応混合物を６５℃で３．５日間撹拌し、このとき、ＨＰＬＣ分析が反応完了を示した。混合物を減圧下で濃縮し、残渣を酢酸エチル中０〜５％のメタノールの混合物で溶離するシリカゲルクロマトグラフィによって精製して、２−（１−（５−クロロ−２−エトキシ−４−フルオロ−３−（５−オキソピロリジン−３−イル）フェニル）エチリデン）ヒドラジンカルボン酸（Ｒ，Ｅ）−ｔｅｒｔ−ブチル（ｘｘ、１９．５ｇ、８５％）を与えた。１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  ９．８３  （ｓ，  １Ｈ），  ７．７８  （ｓ，  １Ｈ），  ７．３６  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．６  Ｈｚ，  １Ｈ），  ４．０７  （ｐ，  Ｊ  ＝  ９．１  Ｈｚ，  １Ｈ），  ３．８４−３．６９  （ｍ，  ２Ｈ），  ３．５９  （ｔ，  Ｊ  ＝  ９．５  Ｈｚ，  １Ｈ），  ３．２８  （ｔ，  Ｊ  ＝  ９．５  Ｈｚ，  １Ｈ），  ２．５４  （ｍ，  １Ｈ），  ２．３３  （ｍ，  １Ｈ），  ２．１４  （ｓ，  ３Ｈ），  １．４６  （ｓ，  ９Ｈ），  １．２５  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．０  Ｈｚ，  ３Ｈ）。Ｃ１９Ｈ２５ＣｌＦＮ３ＮａＯ４のＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｎａ）＋：ｍ／ｚ＝４３６．１。
【０２９１】
ステップ３．２−（（Ｓ）−１−（５−クロロ−２−エトキシ−４−フルオロ−３−（（Ｒ）−５−オキソピロリジン−３−イル）フェニル）エチル）ヒドラジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（ｘｘｉ）
【化６７】
2018510144.tif 000077
２−（１−（５−クロロ−２−エトキシ−４−フルオロ−３−（５−オキソピロリジン−３−イル）フェニル）エチリデン）ヒドラジンカルボン酸（Ｒ，Ｅ）−ｔｅｒｔ−ブチル（ｘｘ、０．５ｇ、１．２ｍｍｏｌ）をメタノール（２５ｍＬ）に溶解し、溶液を窒素ガスで５分間バブリングした。テトラフルオロホウ酸ビス（１，５−シクロオクタジエン）ロジウム（Ｉ）（３５ｍｇ、０．０８６ｍｍｏｌ）及び（Ｒ）−（−）−１−｛（Ｓ）−２−［ビス（４−トリフルオロメチルフェニル）ホスフィン］フェロセニル｝エチル−ジ−ｔ−ブチルホスフィン（６４ｍｇ、０．０９４ｍｍｏｌ）を溶液に添加し、得られた反応混合物を窒素ガスで３０分間バブリングした。反応混合物を、次いで、水素ガス（５６ｐｓｉ）圧下で２．５日間振とうした。反応混合物を減圧下で濃縮し、得られた残渣を、酢酸エチル中メタノール（０〜１０％）の混合物で溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィによって精製した。所望の画分を濃縮し、２−（（Ｓ）−１−（５−クロロ−２−エトキシ−４−フルオロ−３−（（Ｒ）−５−オキソピロリジン−３−イル）フェニル）エチル）ヒドラジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（ｘｘｉ、４２８ｍｇ、８５％の収率）を与えた。１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  ８．１８  （ｓ，  １Ｈ），  ７．７８  （ｓ，  １Ｈ），  ７．５３  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．２  Ｈｚ，  １Ｈ），  ４．７３  （ｓ，  １Ｈ），  ４．４１  （ｂｒ  ｓ，  １Ｈ），  ３．９８  （ｍ，  １Ｈ），  ３．７５  （ｍ，  ２Ｈ），  ３．６１  （ｍ，  １Ｈ），  ３．２６  （ｍ，  １Ｈ），  ２．５３  （ｍ，  １Ｈ），  ２．２９  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  １７．６，  ８．６  Ｈｚ，  １Ｈ），  １．３２  （ｓ，  １２Ｈ），  １．１０  （ｄ，  Ｊ  ＝  ６．５  Ｈｚ，  １Ｈ）。Ｃ１９Ｈ２７ＣｌＦＮ３ＮａＯ４のＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｎａ）＋：ｍ／ｚ＝４３７．９。キラルＨＰＬＣ分析は、生成物が、所望のジアステレオマー２−（（Ｓ）−１−（５−クロロ−２−エトキシ−４−フルオロ−３−（（Ｒ）−５−オキソピロリジン−３−イル）フェニル）エチル）ヒドラジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（ｘｘｉ）を８５．６％で、望ましくないジアステレオマー２−（（Ｒ）−１−（５−クロロ−２−エトキシ−４−フルオロ−３−（（Ｒ）−５−オキソピロリジン−３−イル）フェニル）エチル）ヒドラジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルを１４．３％で含有したことを示した。
【０２９２】
ステップ４．５−アミノ−１−（（Ｓ）−１−（５−クロロ−２−エトキシ−４−フルオロ−３−（（Ｒ）−５−オキソピロリジン−３−イル）フェニル）エチル）−３−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル（ｘｖｉ）
【化６８】
2018510144.tif 000078
２−（（Ｓ）−１−（５−クロロ−２−エトキシ−４−フルオロ−３−（（Ｒ）−５−オキソピロリジン−３−イル）フェニル）エチル）ヒドラジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（ｘｘｉ、１３０ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）及びｐ−トルエンスルホン酸一水和物（８６ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）をエタノール（３ｍＬ）に添加し、反応混合物を５０℃で２０時間加熱した。ＨＰＬＣ分析は、約８８％の未反応の出発物質が存在したことを示した。追加量のｐ−トルエンスルホン酸（８６ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）を仕込み、反応混合物を６０℃で２４時間加熱した。ＨＰＬＣ分析は、完全なＢｏｃ−脱保護を示した。この反応混合物に（１−エトキシエチリデン）マロノニトリル（６１ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２６０μＬ、１．５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で２時間撹拌した。ＨＰＬＣは、ピラゾール環形成の完了を示した。１．０Ｍ水酸化ナトリウム水溶液を反応混合物に添加し、２０分間撹拌した。酢酸エチル（２０ｍＬ）を混合物に添加し、撹拌した。二相混合物を沈殿させた。酢酸エチル層を収集し、水層を酢酸エチル（１０ｍＬ）で抽出した。合わせた酢酸エチル溶液に１Ｍ塩酸水（５ｍＬ）を添加し、１５分間撹拌した。二相混合物を沈殿させ、有機層を収集し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥した。硫酸ナトリウムを濾過によって除去し、濾液を濃縮して、５−アミノ−１−（（Ｓ）−１−（５−クロロ−２−エトキシ−４−フルオロ−３−（（Ｒ）−５−オキソピロリジン−３−イル）フェニル）エチル）−３−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル（ｘｖｉ、１２６ｍｇ、粗生成物の定量的収量）を与え、さらに精製することなく次のステップにおいて使用した。
【０２９３】
ステップ５．（Ｒ）−４−（３−（（Ｓ）−１−（４−アミノ−３−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）エチル）−５−クロロ−２−エトキシ−６−フルオロフェニル）ピロリジン−２−オン（ｘｖｉｉ）
【化６９】
2018510144.tif 000079
５−アミノ−１−｛（１Ｓ）−１−［５−クロロ−２−エトキシ−４−フルオロ−３−（５−オキソピロリジン−３−イル）フェニル］エチル｝−３−メチル−１Ｈピラゾール−４−カルボニトリル（ｘｖｉ、１２６ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）に酢酸ホルムアミジン（３２３ｍｇ、３．１ｍｍｏｌ）及び１，２−エタンジオール（２ｍＬ）を添加した。反応混合物を１０４〜１０５℃で撹拌しながら加熱した。１８時間後、ＨＰＬＣ分析は、約４４％の出発物質化合物ｘｖｉが残存していることを示した。反応混合物を１１５℃で２４時間加熱した。ＨＰＬＣ分析は、反応が完了したことを示した。反応混合物を室温に冷却し、酢酸エチル（１０ｍＬ）及び水（５ｍｌ）を添加した。二相混合物を撹拌した。層を分離させた。有機層を収集し、水層を酢酸エチル（５ｍＬ）で抽出した。合わせた酢酸エチル溶液を水（５ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥した。硫酸ナトリウムを濾過によって除去し、濾液を濃縮して、残渣とした。残渣をシリカゲルクロマトグラフィによって精製した。カラムを塩化メチレン中のメタノール（０〜５％）の混合物で溶離した。所望の画分を合わせ、蒸発させて、（Ｒ）−４−（３−（（Ｓ）−１−（４−アミノ−３−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）エチル）−５−クロロ−２−エトキシ−６−フルオロフェニル）ピロリジン−２−オン（ｘｖｉｉ、９４ｍｇ、６９．９％の収率）を与えた。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  ８．１１  （ｓ，  １Ｈ），  ７．８２  （ｓ，  １Ｈ），  ７．５２  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．５  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．３０  （ｂｒ  ｓ，  ２Ｈ），  ６．２３  （ｑ，  Ｊ  ＝  ７．０  Ｈｚ，  １Ｈ），  ３．９７  （ｐ，  Ｊ  ＝  ９．２  Ｈｚ，  １Ｈ），  ３．９０−３．７３  （ｍ，  ２Ｈ），  ３．５７  （ｔ，  Ｊ  ＝  ９．９  Ｈｚ，  １Ｈ），  ３．２５  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ９．２，  ８．７  Ｈｚ，  １Ｈ），  ２．４８  （ｓ，  ３Ｈ），  ２．６０−２．５０  （ｍ，  １Ｈ），  ２．３６−２．２０  （ｍ，  １Ｈ），  １．６９  （ｄ，  Ｊ  ＝  ７．１  Ｈｚ，  ３  Ｈ），  １．３９  （ｔ，  Ｊ  ＝  ６．９  Ｈｚ，  ３Ｈ）。Ｃ２０Ｈ２３ＣｌＦＮ６Ｏ２のＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：ｍ／ｚ＝４３３．３。
【０２９４】
生成物キラルＨＰＬＣ分析は、所望のジアステレオマー（Ｒ）−４−（３−（（Ｓ）−１−（４−アミノ−３−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）エチル）−５−クロロ−２−エトキシ−６−フルオロフェニル）ピロリジン−２−オン（ｘｖｉｉ）を８７％で、望ましくないジアステレオマー（Ｒ）−４−（３−（（Ｒ）−１−（４−アミノ−３−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）エチル）−５−クロロ−２−エトキシ−６−フルオロフェニル）ピロリジン−２−オンを１３％で含有したことを示した。
【０２９５】
ステップ６．（Ｒ）−４−（３−（（Ｓ）−１−（４−アミノ−３−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）エチル）−５−クロロ−２−エトキシ−６−フルオロフェニル）ピロリジン−２−オン塩酸塩
表題生成物を、実施例３、ステップ５に記載されている手順にしたがって調製した。得られた塩酸塩は、化学純度、キラル純度、及び固体状態の特性を含めて、あらゆる比較可能な態様において、実施例３に記載されている合成プロセスから作製される材料とよく一致している。
【０２９６】
実施例Ａ１：ＰＩ３Ｋ酵素アッセイ
液体キナーゼ基質、Ｄ−ｍｙｏ−ホスファチジルイノシトール４，５−ビスホスファート（ＰｔｄＩｎｓ（４，５）Ｐ２）Ｄ（＋）−ｓｎ−１，２−ジ−Ｏ−オクタノイルグリセリル、３−Ｏ−ホスホ結合（ＰＩＰ２）、ビオチン化Ｉ（１，３，４，５）Ｐ４、ＰＩ（３，４，５）Ｐ３検出器タンパク質を含むＰＩ３−キナーゼ発光アッセイキットをＥｃｈｅｌｏｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（ソルトレークシティ、ユタ州）から購入する。ドナー及びアクセプタービーズを含むＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ（商標）ＧＳＴ検出キットを、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（ウォルサム，マサチューセッツ州）から購入する。ＰＩ３Ｋδ（ｐ１１０δ／ｐ８５α）を、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ（ベッドフォード、マサチューセッツ州）から購入する。ＡＴＰ、ＭｇＣｌ２、ＤＴＴ、ＥＤＴＡ、ＨＥＰＥＳ及びＣＨＡＰＳをＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（セントルイス、ミズーリ州）から購入する。
【０２９７】
ＰＩ３ＫδのためのＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ（商標）アッセイ
キナーゼ反応をＴｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ製の３８４ウェルＲＥＭＰプレートにおいて４０μＬの最終容積で行う。阻害剤をまずＤＭＳＯにおいて段階希釈し、プレートウェルに添加し、その後、他の反応成分を添加する。アッセイにおけるＤＭＳＯの最終濃度は２％である。ＰＩ３Ｋアッセイを、室温で、５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、５０ｍＭ  ＮａＣｌ、５ｍＭ  ＤＴＴ及びＣＨＡＰＳ０．０４％において実施する。反応をＡＴＰの添加によって開始し、２０μＭ  ＰＩＰ２、２０μＭ  ＡＴＰ、１．２ｎＭ  ＰＩ３Ｋδからなる最終反応混合物を、２０分間インキュベートする。１０μＬの反応混合物を、次いで、クエンチ緩衝液中５μＬの５０ｎＭビオチン化Ｉ（１，３，４，５）Ｐ４：５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．４、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１０ｍＭ  ＥＤＴＡ、５ｍＭ  ＤＴＴ、０．１％Ｔｗｅｅｎ−２０に移し、その後、２５ｎＭ  ＰＩ（３，４，５）Ｐ３検出器タンパク質を含有するクエンチ緩衝液に懸濁した１０μＬのＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ（商標）ドナー及びアクセプタービーズを添加する。ドナー及びアクセプタービーズの両方の最終濃度は２０ｍｇ／ｍｌである。プレートをシールした後、プレートを暗所において室温で２時間インキュベートする。生成物の活性をＦｕｓｉｏｎ−αマイクロプレートリーダ（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ）において決定する。ＩＣ５０の決定を、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ３．０ソフトウエアを使用して、％制御活性対阻害剤濃度の対数の曲線を適合させることによって実施する。
【０２９８】
実施例Ａ２：ＰＩ３Ｋ酵素アッセイ
材料：脂質キナーゼ基質、ホスホイノシトール−４，５−ビスホスファート（ＰＩＰ２）をＥｃｈｅｌｏｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（ソルトレークシティ、ユタ州）から購入する。ＰＩ３Ｋアイソフォームα、β、δ及びγをＭｉｌｌｉｐｏｒｅ（ベッドフォード、マサチューセッツ州）から購入する。ＡＴＰ、ＭｇＣｌ２、ＤＴＴ、ＥＤＴＡ、ＭＯＰＳ及びＣＨＡＰＳをＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（セントルイス、ミズーリ州）から購入する。
【０２９９】
キナーゼ反応をＴｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ製のクリアボトム９６ウェルプレートにおいて２４μＬの最終容積で行う。阻害剤をまずＤＭＳＯにおいて段階希釈し、プレートウェルに添加し、その後、他の反応成分を添加する。アッセイにおけるＤＭＳＯの最終濃度は０．５％である。ＰＩ３Ｋアッセイを、室温で、２０ｍＭ  ＭＯＰＳ、ｐＨ６．７、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、５ｍＭ  ＤＴＴ及びＣＨＡＰＳ０．０３％において実施する。５０μＭ  ＰＩＰ２、キナーゼ及び変動濃度の阻害剤を含有する反応混合物を調製する。反応を、２．２μＣｉ［γ−３３Ｐ］ＡＴＰを含有するＡＴＰを最終濃度の１０００μＭまで添加することによって開始する。アッセイにおけるＰＩ３Ｋアイソフォームα、β、δ及びγの最終濃度は、それぞれ、１．３、９．４、２．９及び１０．８ｎＭであった。反応を１８０分間インキュベートし、１００μＬの１Ｍリン酸カリウム（ｐＨ８．０）、３０ｍＭ  ＥＤＴＡクエンチ緩衝液の添加によって終了させる。反応溶液の１００μＬアリコートを、次いで、９６ウェルＭｉｌｌｉｐｏｒｅ  ＭｕｌｔｉＳｃｒｅｅｎ  ＩＰ  ０．４５μｍ  ＰＶＤＦフィルタプレートに移す（フィルタプレートを、２００μＬの１００％エタノール、蒸留水、及び１Ｍリン酸カリウム（ｐＨ８．０）、でそれぞれ予め湿潤させる）。フィルタプレートを真空下でＭｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｍａｎｉｆｏｌｄにおいてアスピレートし、１Ｍリン酸カリウム（ｐＨ８．０）及び１ｍＭ  ＡＴＰを含有する１８×２００μＬの洗浄緩衝液で洗浄した。アスピレーション及びブロッティングによる乾燥の後、プレートをインキュベータにおいて３７℃で一晩乾燥した。Ｐａｃｋａｒｄ  ＴｏｐＣｏｕｎｔアダプタ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を次いでプレートに取り付け、続いて、各ウェルにおいて１２０μＬのＭｉｃｒｏｓｃｉｎｔ２０シンチレーションカクテル（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を添加した。プレートをシールした後、生成物の放射能をＴｏｐｃｏｕｎｔ（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ）においてシンチレーションカウントによって求めた。ＩＣ５０の決定を、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ３．０ソフトウエアを使用した、％制御活性対阻害剤濃度の対数の曲線を適合させることによって実施する。
【０３００】
（Ｒ）−４−（３−（（Ｓ）−１−（４−アミノ−３−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）エチル）−５−クロロ−２−エトキシ−６−フルオロフェニル）ピロリジン−２−オン塩酸塩を実施例Ａ２のアッセイにおいて試験し、ＰＩ３Ｋδに選択的な阻害剤であると決定した。
【０３０１】
（Ｒ）−４−（３−（（Ｓ）−１−（４−アミノ−３−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）エチル）−５−クロロ−２−エトキシ−６−フルオロフェニル）ピロリジン−２−オン塩酸塩を実施例Ａ２のアッセイにおいて試験し、ＰＩ３Ｋα、ＰＩ３Ｋβ及びＰＩ３Ｋγの各々よりもＰＩ３Ｋδに＞１００倍選択的な阻害剤であると決定した。
【０３０２】
実施例Ａ３：ＰＩ３Ｋδシンチレーション近接アッセイ
材料
［γ−３３Ｐ］ＡＴＰ（１０ｍＣｉ／ｍＬ）をＰｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ（ウォルサム、マサチューセッツ州）から購入した。液体キナーゼ基質、Ｄ−ｍｙｏ−ホスファチジルイノシトール４，５−ビスホスファート（ＰｔｄＩｎｓ（４，５）Ｐ２）Ｄ（＋）−ｓｎ−１，２−ジ−Ｏ−オクタノイルグリセリル、３−Ｏ−ホスホ結合（ＰＩＰ２）、ＣＡＳ２０４８５８−５３−７をＥｃｈｅｌｏｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（ソルトレークシティ、ユタ州）から購入した。ＰＩ３Ｋδ（ｐ１１０δ／ｐ８５α）をＭｉｌｌｉｐｏｒｅ（ベッドフォード、マサチューセッツ州）から購入した。ＡＴＰ、ＭｇＣｌ２、ＤＴＴ、ＥＤＴＡ、ＭＯＰＳ及びＣＨＡＰＳをＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（セントルイス、ミズーリ州）から購入した。Ｗｈｅａｔ  Ｇｅｒｍ  Ａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ（ＷＧＡ）  ＹＳｉ  ＳＰＡシンチレーションビーズをＧＥヘルスケアライフサイエンス（ピスカタウェイ、ニュージャージー州）から購入した。
【０３０３】
キナーゼ反応をＴｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ製のポリスチレン３８４ウェルマトリクスホワイトプレートにおいて２５μＬの最終容積で行った。阻害剤をまずＤＭＳＯにおいて段階希釈し、プレートウェルに添加し、その後、他の反応成分を添加した。アッセイにおけるＤＭＳＯの最終濃度は０．５％であった。ＰＩ３Ｋアッセイを、室温で、２０ｍＭ  ＭＯＰＳ、ｐＨ６．７、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、５ｍＭ  ＤＴＴ及びＣＨＡＰＳ  ０．０３％において実施した。反応をＡＴＰの添加によって開始し、最終反応混合物は２０μＭ  ＰＩＰ２、２０μＭ  ＡＴＰ、０．２μＣｉ［γ−３３Ｐ］ＡＴＰ、４ｎＭ  ＰＩ３Ｋδからなった。反応を２１０分間インキュベートし、クエンチ緩衝液中に懸濁した４０μＬのＳＰＡビーズ：１５０ｍＭリン酸カリウム（ｐＨ８．０）、２０％のグリセロール、２５ｍＭ  ＥＤＴＡ、４００μＭ  ＡＴＰの添加によって終了させた。ＳＰＡビーズの最終濃度は１．０ｍｇ／ｍＬであった。プレートをシールした後、プレートを室温で一晩振り、１８００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、生成物の放射能をＴｏｐｃｏｕｎｔ（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ）においてシンチレーションカウントによって求めた。ＩＣ５０の決定を、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ３．０ソフトウエアを使用して、％制御活性対阻害剤濃度の対数の曲線を適合させることによって実施した。式Ｉの化合物は、実施例Ａ３のアッセイにおいてＩＣ５０≦１０ｎＭを有することが見出された。
【０３０４】
実施例Ｂ１：Ｂ細胞増殖アッセイ
Ｂ細胞を取得するために、ヒトＰＢＭを、正常な薬物非投与ドナーの末梢血から、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｇｕｅ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、ピスカタウェイ、ニュージャージー州）での標準密度勾配遠心分離により単離して、抗−ＣＤ１９マイクロビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、オーバーン、カリフォルニア州）と共にインキュベートする。Ｂ細胞を、次いで、製造者の指示にしたがってａｕｔｏＭａｃｓ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）を使用して陽性免疫選別によりによって精製する。
【０３０５】
精製されたＢ細胞（２×１０５／ウェル／２００μＬ）を９６ウェル超低接着プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、コーニング、ニューヨーク州）において、異なる量の試験化合物の存在下、ＲＰＭＩ１６４０、１０％ＦＢＳ及びヤギＦ（ａｂ’）２抗−ヒトＩｇＭ（１０μｇ／ｍｌ）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カールスバッド、カリフォルニア州）において３日間培養する。ＰＢＳ中の［３Ｈ］−チミジン（１μＣｉ／ウェル）（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、ボストン，マサチューセッツ州）を次いでＢ細胞培養物にさらに１２時間添加した後、取り込まれた放射能をＧＦ／Ｂフィルタ（Ｐａｃｋａｒｄ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、メリデン、コネティカット州）を通して水で濾過することによって分離し、ＴｏｐＣｏｕｎｔ（Ｐａｃｋａｒｄ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）での液体シンチレーションカウントによって測定する。
【０３０６】
実施例Ｂ２：ファイファー細胞増殖アッセイ
ファイファー細胞系（びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫）をＡＴＣＣ（マナッサス、バージニア州）から購入し、推奨された培地（ＲＰＭＩ及び１０％ＦＢＳ）に維持した。化合物の抗増殖活性を測定するために、ファイファー細胞を、培地（２×１０３細胞／ウェル／２００μｌあたり）と共に、９６ウェル超低接着プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、コーニング、ニューヨーク州）に、ある濃度範囲の試験化合物の存在下または非存在下で播種した。３〜４日後、ＰＢＳ中［３Ｈ］−チミジン（１μＣｉ／ウェル）（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、ボストン，マサチューセッツ州）を次いで細胞培養にさらに１２時間添加した後、取り込まれた放射能をＧＦ／Ｂフィルタ（Ｐａｃｋａｒｄ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、メリデン、コネティカット州）を通して水で濾過することによって分離し、ＴｏｐＣｏｕｎｔ（Ｐａｃｋａｒｄ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）での液体シンチレーションカウントによって測定する。
【０３０７】
実施例Ｂ３：ＳＵＤＨＬ−６細胞増殖アッセイ
ＳＵＤＨＬ−６細胞系（びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫）をＡＴＣＣ（マナッサス、バージニア州）から購入し、推奨された培地（ＲＰＭＩ及び１０％ＦＢＳ）に維持した。ＡＴＰ定量を通して化合物の抗増殖活性を測定するために、ＳＵＤＨＬ−６細胞を、培地（５０００細胞／ウェル／２００μｌあたり）と共に、９６ウェルポリスチレン製クリアブラック組織培養プレート（ＶＷＲによるＧｒｅｉｎｅｒ−ｂｉｏ−ｏｎｅ、ニュージャージー州）に、ある濃度範囲の試験化合物の存在下または非存在下で播種した。３日後、Ｃｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ−ＧＬＯ  Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ、マディソン，ウィスコンシン州）細胞培養剤を各ウェルに室温で１０分間添加し、発光シグナルを安定化させた。これにより、存在するＡＴＰの定量に基づいた培養での生存細胞の数が求められ、これは、代謝的に活性な細胞の存在をシグナリングする。発光をＴｏｐＣｏｕｎｔ３８４（Ｐｅｒｋｉｎ  ＥｌｍｅｒによるＰａｃｋａｒｄ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、ボストン，マサチューセッツ州）によって測定した。
【０３０８】
実施例Ｃ：Ａｋｔリン酸化アッセイ
Ｒａｍｏｓ細胞（バーキットリンパ腫からのＢリンパ球）をＡＴＣＣ（マナッサス、バージニア州）から得、ＲＰＭＩ１６４０及び１０％ＦＢＳにおいて維持する。細胞（３×０７細胞／チューブ／３ｍＬ（ＲＰＭＩ中））を異なる量の試験化合物で３７℃において２時間インキュベートし、次いで、ヤギＦ（ａｂ’）２抗−ヒトＩｇＭ（５μｇ／ｍＬ）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で１７分間、３７℃の水浴において刺激する。刺激細胞を遠心分離によって４℃で沈降させ、全細胞抽出物を、３００μＬの溶解緩衝液（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、ダンバーズ，マサチューセッツ州）を使用して調製する。得られた溶解物を超音波処理し、上清を収集する。上清におけるＡｋｔのリン酸化レベルを、製造者の指示にしたがってＰａｔｈＳｃａｎ  ｐｈｏｓｐｈｏ−Ａｋｔ１（Ｓｅｒ４７３）サンドイッチＥＬＩＳＡキット（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を使用することによって分析する。
【０３０９】
本発明の種々の変更は、本明細書に記載されているものに加えて、上記の詳細な説明から当業者に明らかである。かかる変更は、添付の特許請求の範囲内にあることも意図される。本願に列挙されている全ての特許、特許出願、及び公開公報を含めた各参照文献は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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