(57)【要約】本発明は、抗痙攣活性を有するジエンニトリル化合物に関し、疼痛を処置するのにも使用できる。これらの化合物は、電位依存性ナトリウムチャネル活性を変調するのに有用であり、てんかんおよび慢性または急性の疼痛の処置に用いることができる。式（Ｉ）の化合物のＥおよびＺ混合物を使用して、患者における痙攣作用またはてんかん発作を排除するか、または減少させる。化合物は、脱分極により誘起される正常な不活状態から回復するための電位依存性ナトリウムチャネルに必要な時間を延ばし、異常な脳の挙動を抑制する。本願は、痙攣作用またはてんかん発作の重症度を減少させるための化合物および方法に関する。
2018518532.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式（Ｉ）により表される化合物：
【化１７】
2018518532.tif 000029
式中、
Ｒ＝Ｈ、ＣＨ３、Ｃ２〜Ｃ６（直線状または分岐状）、ｃＣ３Ｈ５、ｃＣ５Ｈ９、ｃＣ６Ｈ１１、ＣＨ＝ＣＨ２、またはＣＨ２Ａｒ、
Ｒ１＝Ｒ２＝ＨまたはＣＨ３、
Ｒ３＝Ｒ４＝ＨまたはＣＨ３、
Ｒ５＝Ｈ、ＣＨ３、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２Ａｒ、Ｃｌ、またはＢｒ、および
Ｒ６＝ＨまたはＣＨ３。
【請求項２】
式中、Ｒ＝Ｈ、ＣＨ３、Ｃ２〜Ｃ６（直線状または分岐状）、ｃＣ３Ｈ５、ｃＣ５Ｈ９、またはｃＣ６Ｈ１１である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
式中、Ｒ５＝ＨまたはＣＨ３である、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
式中、Ｒ＝Ｈ、ＣＨ３または、Ｃ２〜Ｃ６（直線状または分岐状）である、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
式中、Ｒ＝ＨまたはＣＨ３である、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
式（Ｉ）により表される化合物が、以下の式：
【化１８】
2018518532.tif 000030
により表される化合物である、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
式（Ｉ）により表される化合物が、２−（３，５，５−トリメチルシクロヘキサ−２−エン−１−イリデン）ペンタンニトリルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
式（Ｉ）により表される化合物が、３−メチル−２−（３，５，５−トリメチルシクロヘキサ−２−エン−１−イリデン）ブタンニトリルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
式（Ｉ）により表される化合物が、以下の式：
【化１９】
2018518532.tif 000031
により表される化合物である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１０】
式（Ｉ）により表される化合物が、以下の式：
【化２０】
2018518532.tif 000032
により表される化合物である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１１】
式（Ｉ）により表される化合物が、以下の式：
【化２１】
2018518532.tif 000033
により表される化合物である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１２】
式（Ｉ）により表される化合物が、以下の式：
【化２２】
2018518532.tif 000034
により表される化合物である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１３】
以下の式（Ｉ）：
【化２３】
2018518532.tif 000035
式中、
Ｒ＝Ｈ、ＣＨ３、Ｃ２〜Ｃ６（直線状または分岐状）、ｃＣ３Ｈ５、ｃＣ５Ｈ９、ｃＣ６Ｈ１１、ＣＨ＝ＣＨ２、またはＣＨ２Ａｒ、
Ｒ１＝Ｒ２＝ＨまたはＣＨ３、
Ｒ３＝Ｒ４＝ＨまたはＣＨ３、
Ｒ５＝Ｈ、ＣＨ３、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２Ａｒ、Ｃｌ、またはＢｒ、および
Ｒ６＝ＨまたはＣＨ３、
により表される化合物またはその薬学的に許容し得る塩または溶媒和物、および薬学的に許容し得る賦形剤を含む、痙攣活性の重症度を減少させるための医薬組成物。
【請求項１４】
式中、Ｒ＝Ｈ、ＣＨ３、Ｃ２〜Ｃ６（直線状または分岐状）、ｃＣ３Ｈ５、ｃＣ５Ｈ９、またはｃＣ６Ｈ１１である、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
式中、Ｒ５＝ＨまたはＣＨ３である、請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
式中、Ｒ＝Ｈ、ＣＨ３、またはＣ２〜Ｃ６（直線状または分岐状）である、請求項１５に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
式中、Ｒ＝ＨまたはＣＨ３である、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
式（Ｉ）により表される化合物が、以下の式：
【化２４】
2018518532.tif 000036
により表される化合物である、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
式（Ｉ）により表される化合物が、２−（３，５，５−トリメチルシクロヘキサ−２−エン−１−イリデン）ペンタンニトリルである、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
式（Ｉ）により表される化合物が、３−メチル−２−（３，５，５−トリメチルシクロヘキサ−２−エン−１−イリデン）ブタンニトリルである、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
式（Ｉ）により表される化合物が、以下の式：
【化２５】
2018518532.tif 000037
により表される化合物である、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
式（Ｉ）により表される化合物が、以下の式：
【化２６】
2018518532.tif 000038
により表される化合物である、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
式（Ｉ）により表される化合物が、以下の式：
【化２７】
2018518532.tif 000039
により表される化合物である、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
式（Ｉ）により表される化合物が、以下の式：
【化２８】
2018518532.tif 000040
により表される化合物である、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
治療的有効量の以下の式（Ｉ）：
【化２９】
2018518532.tif 000041
式中、
Ｒ＝Ｈ、ＣＨ３、Ｃ２〜Ｃ６（直線状または分岐状）、ｃＣ３Ｈ５、ｃＣ５Ｈ９、ｃＣ６Ｈ１１、ＣＨ＝ＣＨ２、またはＣＨ２Ａｒ、
Ｒ１＝Ｒ２＝ＨまたはＣＨ３、
Ｒ３＝Ｒ４＝ＨまたはＣＨ３、
Ｒ５＝Ｈ、ＣＨ３、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２Ａｒ、Ｃｌ、またはＢｒ、および
Ｒ６＝ＨまたはＣＨ３、
により表される化合物を対象に投与することを含む、痙攣活性の重症度を減少させるための方法。
【請求項２６】
式中、Ｒ＝Ｈ、ＣＨ３、Ｃ２〜Ｃ６（直線状または分岐状）、ｃＣ３Ｈ５、ｃＣ５Ｈ９、またはｃＣ６Ｈ１１である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
式中、Ｒ５＝ＨまたはＣＨ３である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
式中、Ｒ＝Ｈ、ＣＨ３、またはＣ２〜Ｃ６（直線状または分岐状）である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
式中、Ｒ＝ＨまたはＣＨ３である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
式（Ｉ）により表される化合物が、以下の式：
【化３０】
2018518532.tif 000042
により表される化合物である、請求項２５に記載の方法。
【請求項３１】
式（Ｉ）により表される化合物が、２−（３，５，５−トリメチルシクロヘキサ−２−エン−１−イリデン）ペンタンニトリルである、請求項２５に記載の方法。
【請求項３２】
式（Ｉ）により表される化合物が、３−メチル−２−（３，５，５−トリメチルシクロヘキサ−２−エン−１−イリデン）ブタンニトリルである、請求項２５に記載の方法。
【請求項３３】
式（Ｉ）により表される化合物が、以下の式：
【化３１】
2018518532.tif 000043
により表される化合物である、請求項２５に記載の方法。
【請求項３４】
式（Ｉ）により表される化合物が、以下の式：
【化３２】
2018518532.tif 000044
により表される化合物である、請求項２５に記載の方法。
【請求項３５】
式（Ｉ）により表される化合物が、以下の式：
【化３３】
2018518532.tif 000045
により表される化合物である、請求項２５に記載の方法。
【請求項３６】
式（Ｉ）により表される化合物が、以下の式：
【化３４】
2018518532.tif 000046
により表される化合物である、請求項２５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明の分野
本発明は、抗痙攣性および疼痛活性を有する化合物に関する。これらの化合物は電位依存性ナトリウムチャネル活性を変調するのに有用であり、よって、てんかんおよび慢性または急性疼痛の処置に有用である。
【背景技術】
【０００２】
背景
抗痙攣性化合物は、てんかんを含む種々の状態および疾患の処置に現在広く使用されている。てんかんは、神経系に影響を及ぼす神経学的状態であり、てんかんを有する個体は発作に見舞われる。これらの発作は、脳内のニューロン間の電気的伝達の崩壊により引き起こされる。てんかんを、不適切に同期する脳の活動として概念化することができる。発作は、脳の領域にわたって生じる高増幅神経放電として、脳波図（ＥＥＧｓ）中にしばしばみられる。この脳の活動は、バランスの損失、痙攣する筋肉の動き、視覚的な障害、および意識の喪失を含む作用の障害を伴う。世界の人口の約０．５％が、何らかの形態のてんかんを有していると見積もられる。てんかんは終生の状態であり、復帰率（reversion  rate）は極めて低く、まれではあるが致命的である。制御されないてんかんを有する人は、しばしば就職難の状態であるか、または無職である。
【０００３】
これらすべての要因の組み合わせにより、てんかんは、世界で最も高額な健康管理負担の１つとなる。北米単独では、直接的な健康管理コストおよび経済活動の損失によるてんかんのコストは、毎年数十億ドルであると見積もられる。てんかんのための既知の治療法は知られていない。
【０００４】
てんかんの発作の制御は、まだ対処されていない医学的課題である。現在の薬物療法は、中枢神経系（ＣＮＳ）における多数のサイトを標的化することより発作を制御する。これらの薬物は有効である一方で、コンプライアンス、およびそのために効力を減少させるという、所望されない副作用をしばしば生成する。報告によれば、てんかんを有する３０％近くの個体が、薬物および脳刺激療法の両方を含むいかなる現在の治療にも応答しない。したがって、これらの個体のための有効な代替物を提供するために、新規な抗痙攣薬を開発する必要性が存在する。
【０００５】
同様に、急性および慢性疼痛の管理が進行中の問題である。種々の形態の慢性疼痛を有して生活する数百万の人々が存在する。ナトリウムチャネルをブロックすることは、多くの処置の１つである。
【発明の概要】
【０００６】
発明の概要
一態様において、本開示は、式（Ｉ）により表される化合物のＥおよびＺ混合物の治療的有効量を対象に投与することにより、痙攣作用またはてんかん発作の重症度を排除するか、または減少させるための方法を含む。
【化１】
2018518532.tif 000003
式中、Ｒ＝Ｈ、ＣＨ３、Ｃ２〜Ｃ６（直線状または分岐状）、ｃＣ３Ｈ５、ｃＣ５Ｈ９、ｃＣ６Ｈ１１、ＣＨ＝ＣＨ２、またはＣＨ２Ａｒ
Ｒ１＝Ｒ２＝ＨまたはＣＨ３
Ｒ３＝Ｒ４＝ＨまたはＣＨ３
Ｒ５＝Ｈ、ＣＨ３、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２Ａｒ、Ｃｌ、またはＢｒ
Ｒ６＝ＨまたはＣＨ３
【０００７】
別の態様において、前記方法は、ＥおよびＺ異性体の混合物である、以下の化学式により表される化合物の治療的有効量を対象に投与することを含む。
【化２】
2018518532.tif 000004
【０００８】
なお別の態様において、前記方法は、以下の化学式により表される化合物のＺ異性体の治療的有効量を対象に投与することを含む。
【化３】
2018518532.tif 000005
【０００９】
別の側面において、本発明は、薬学的に許容し得る賦形剤と共に、式（Ｉ）により表される化合物、またはその薬学的に許容し得る塩または溶媒和物を含む医薬組成物に関する。
【００１０】
別の態様において、組成物は、以下の化学式により表される化合物を含み、ＥおよびＺ異性体の混合物である。
【化４】
2018518532.tif 000006
【００１１】
なお別の態様において、組成物は、以下の化学式により表される化合物のＺ異性体を含む。
【化５】
2018518532.tif 000007
本発明のさらなる特徴は、一連の以下の詳細な説明において記載され、または明らかとなるであろう。
【００１２】
図面の簡単な説明
本発明をより明確に理解することができるように、その好ましい態様を、添付の図面を参照して例の意味により、これから詳細に説明し、ここで：
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】図１は、本発明による好ましい化合物の存在下で、および対照サンプル中での、脳の活動を並べて比較したものである。
【図２】図２は、本発明による好ましい化合物の存在下で、および対照サンプル中で、電位依存性ナトリウムチャネルの不活化からの回復時間を示すグラフである。
【００１４】
好ましい態様の説明
本願において記載される特定の化合物が、抗痙攣性活性を有する電位依存性ナトリウムチャネル阻害剤であることが見出された。電位依存性ナトリウムチャネルは、中枢および末梢神経系のニューロン中に見出され、活動電位の迅速な上昇を生じさせる役割を担う。それらは、電気信号を生じさせて伝播させる神経系の能力に必須である。
【００１５】
本発明は、以下の式（Ｉ）により表される化合物を提供する：
【化６】
2018518532.tif 000008
式中、Ｒ＝Ｈ、ＣＨ３、Ｃ２〜Ｃ６（直線状または分岐状）、ｃＣ３Ｈ５、ｃＣ５Ｈ９、ｃＣ６Ｈ１１、ＣＨ＝ＣＨ２、またはＣＨ２Ａｒ
Ｒ１＝Ｒ２＝ＨまたはＣＨ３
Ｒ３＝Ｒ４＝ＨまたはＣＨ３
Ｒ５＝Ｈ、ＣＨ３、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２Ａｒ、Ｃｌ、またはＢｒ
Ｒ６＝ＨまたはＣＨ３
【００１６】
上記の化合物は、ＥおよびＺ異性体の混合物として得られる。１つまたは２つ以上の不斉炭素原子を含む、本発明の化合物は、２種または３種以上の立体異性体として存在し得る。本発明の範囲に含まれるのは、本発明の化合物の全ての立体異性体およびそれらの１種または２種以上の混合物である。
【００１７】
式（Ｉ）により表される化合物は、電位依存性ナトリウムチャネル活性の阻害剤であり、てんかん発作および疼痛の処置に有用である。本発明の好ましい化合物は、以下の例においてリスト化されたもの、およびその薬学的に許容し得る塩および溶媒和物である。
【００１８】
てんかん発作は、脳の電気的活動における障害により引き起こされる。特に、過剰の電気的な脳の活動は、てんかん発作の証明である。脳の電気的活動は、主に電位依存性ナトリウムチャネルにより媒介される。よって、電位依存性ナトリウムチャネル活性の減衰は、てんかん障害を制御するための一般的なターゲットである。
【００１９】
本発明はまた、薬学的に許容し得る賦形剤と共に、式（Ｉ）により表される化合物、またはその薬学的に許容し得る塩または溶媒和物の治療的有効量を対象に投与することにより、痙攣作用またはてんかん発作の重症度を排除するか、または減少させるための方法を提供する。
【００２０】
本発明の化合物を、経口で、非経口で、または局所的に投与してもよい。局所的投与が、疼痛の処置には好ましい。
本発明の化合物を、以下で説明する手順により調製してもよい。第１手順によれば、式（Ｉ）により表される好ましい化合物を、以下で示される反応シーケンスにより例示されるとおりの以下の方法により調製してもよい：
【００２１】
アルファ−リチウム化されたニトリル（１）を、窒素雰囲気下、−７８℃で、乾燥テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）中で、対応するニトリルのリチウムジイソプロピルアミド（ＬＤＡ）との反応により調製する。シクロヘキサ−２−エン−１−オンである、例えばイソホロン（２）を、−７８℃でアルファリチオニトリル（１）のＴＨＦ溶液に添加する。反応混合物を、１０％  ＮＨ４Ｃｌ溶液の添加によりクエンチするか、またはクエンチの前に０℃まで温めることができ；これにより、ヒドロキシニトリル（３）の生成がもたらされる。
【化７】
2018518532.tif 000009
【００２２】
次のステップにおいて、精製されたヒドロキシニトリル（３）を、室温でトルエンまたはジクロロメタン中の触媒量の酸と撹拌する。これにより、（３）から水の損失を誘導し、典型的には、５種の異性体（４ａ〜４ｃ、５Ｅ、および５Ｚ）の生成がもたらされる。
【化８】
2018518532.tif 000010
【００２３】
還流トルエン中のｐ−トルエンスルホン（ＴｓＯＨ）酸と加熱する場合には、異性体の混合物を、５Ｅおよび５Ｚ異性体の混合物にきれいに（cleanly）変換する。
【化９】
2018518532.tif 000011
【００２４】
例えば高圧（high  pressure）液体クロマトグラフィーなどを含む個別の鏡像異性体を単離するための既知の手法を使用して、得られた立体異性体の混合物を分離してもよい。鏡像異性体が存在する場合には、キラルＨＰＬＣを使用するか、または混合物を好適な光学活性化合物と反応させて、それにより、混合物をジアステレオマー混合物に変換してもよく、これを、一方または両方のジアステレオマーを既知の手法により対応する純粋な鏡像異性体に変換して戻す前に、クロマトグラフィーまたは分別結晶を使用して分離してもよい。
【００２５】
ジエンニトリルの調製のための一般的手順
一般的手順１：カップリング反応
所望のニトリルを、窒素雰囲気下でシリンジを介して無水ＴＨＦ（５〜１０ｍＬ）中の−７８℃のＬＤＡ溶液（２Ｍ）に滴下により添加する。エノンを滴下により添加する前に、この溶液をこれらの条件下で５分間撹拌する。反応混合物を低温に保持し、１０％  ＮＨ４Ｃｌ水溶液の添加により１分後にクエンチする。ワークアップ（workup）は、ＥｔＯＡｃ（３×１０ｍＬ）での抽出を伴う。合わせた有機抽出物を水で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させてろ過し、真空中で濃縮する。ＥｔＯＡｃおよびヘキサンの濃度勾配系を使用する勾配カラムクロマトグラフィーにより、生成物を精製する。
【００２６】
一般的手順２：室温脱水
触媒量のＰＴＳＡを含むトルエン（１０〜１５ｍＬ）中で、室温で、一般的手順１を介して得られた精製された生成物を、生成物の形成が観察されて出発材料が消費されるまで撹拌する。反応混合物を１０％  ＮａＨＣＯ３水溶液で１ｈ後にクエンチし、ＥｔＯＡｃ（３×１０ｍＬ）で抽出する。合わせた抽出物を水で洗浄し、乾燥させて（ＭｇＳＯ４）ろ過し、真空中で濃縮する。カラムクロマトグラフィーによる精製は、５種までの異性体の混合物を与える。
【００２７】
一般的手順３：Ｅ／Ｚ異性体への異性化
一般的手順２からの混合物を、触媒量のＰＴＳＡを含むトルエン中で溶解させ、３時間還流し、次いで１０％  ＮａＨＣＯ３水溶液でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（３×１０ｍＬ）で抽出する。合わせた抽出物を水で洗浄し、乾燥させて（ＭｇＳＯ４）ろ過し、真空中で濃縮する。カラムクロマトグラフィーによる精製は、所望の化合物のＥ／Ｚ異性体を与える。
【００２８】
代替的シーケンス．
一般的手順１を介して得られた粗ヒドロキシル化合物に、還流トルエン中で直接脱水を実施してもよい（一般的手順３）。
【００２９】
例１．本発明の好ましい化合物のＥ／Ｚ混合物の調製を、以下に示して説明する。
【化１０】
2018518532.tif 000012
【００３０】
この化合物は、以下の一般的手順１、２、および３に従って得られる。一般的手順１を無水ＴＨＦ（１０ｍＬ）中のプロピオニトリル（３．９８ｇ、７２．４ｍｍｏｌ）、ＬＤＡ（３６．２ｍＬ、７２．３５ｍｍｏｌ）、および無水ＴＨＦ（５ｍＬ）中のイソホロン（５ｇ、３６．８ｍｍｏｌ）で出発して実施する。粗生生物（６．５０ｇ）を勾配カラムクロマトグラフィーにより精製して、生成物として薄黄色油を得る（５．５３ｇ、７８％、４：１  ヘキサン：ＥｔＯＡｃ中でＲｆ＝０．３３）。
【００３１】
準精製（semi−purified）カップリング生成物を一般的手順２により脱水して、カラムクロマトグラフィーの後に粘性油として５．２０ｇのジエンの混合物を得る（３：２  ヘキサン：ＥｔＯＡｃ中でＲｆ＝０．８１）。
【数１】
2018518532.tif 000013
【００３２】
ジエンの上記混合物を、一般的手順３によりＥとＺのジエンの５：４の混合物に変換する。カラムクロマトグラフィーを介した精製により、５．２０ｇの薄黄色油が提供される（３：２  ヘキサン：ＥｔＯＡｃ中でＲｆ＝０．８１）。−２０Ｃの冷凍庫中に保管される場合に、この物質は凝固する。
【数２】
2018518532.tif 000014
【００３３】
ＥとＺジエンの５：４の混合物を、アルケン水素による６．４５および６．１８ｐｐｍでのピークの積分の比較により決定する。
【数３】
2018518532.tif 000015
【００３４】
５：４のＥ：Ｚジエン混合物を、室温でヘキサンから連続して２回再結晶させて、９１％の純粋なＥ異性体を得る。
【数４】
2018518532.tif 000016
【００３５】
例２．本発明の別の好ましい化合物（２−（３，５，５−トリメチルシクロヘキサ−２−エン−１−イリデン）ペンタンニトリル）のＥ／Ｚ混合物の調製を、以下に示して説明する。
【化１１】
2018518532.tif 000017
【００３６】
一般的手順１、２、および３に従って、Ｅ／Ｚ混合物を上記のスキームにより調製する。異性化（一般的手順３）については、一般的手順２により製造された０．１８ｇの５種の構成成分の混合物を、触媒量のＴｓＯＨを含む１０ｍＬのトルエン中で３ｈ還流する。粗生成物をクロマトグラフィーにより精製し、０．０８ｇの無色油を得る。
【数５】
2018518532.tif 000018
５：４のＥ：Ｚ混合物を、アルケン水素による６．４４および６．１９ｐｐｍでのピークの積分の比較により決定する。
【００３７】
例３．本発明の別の好ましい化合物（３−メチル−２−（３，５，５−トリメチルシクロヘキサ−２−エン−１−イリデン）ブタンニトリル）のＥ／Ｚ混合物の調製を、以下に示して説明する。
【化１２】
2018518532.tif 000019
【００３８】
一般的手順１、２、および３に従って、Ｅ／Ｚ混合物を上記のスキームにより調製した。異性化（一般的手順３）については、一般的手順２により製造された０．０５ｇの５種の構成成分の混合物を、触媒量のＴｓＯＨを含む１０ｍＬのトルエン中で３ｈ還流する。粗生成物をクロマトグラフィーにより精製し、０．０４ｇの無色油を得る。
【数６】
2018518532.tif 000020
アルケン水素による６．４３および６．２４ｐｐｍでのピークの積分の比較により決定された２：１のＥ：Ｚ混合物。
【００３９】
例４．本発明の別の好ましい化合物（２−シクロプロピル−２−（３，５，５−トリメチルシクロヘキサ−２−エン−１−イリデン）アセトニトリル）のＥ／Ｚ混合物の調製を、以下で説明する。
【化１３】
2018518532.tif 000021
【００４０】
一般的手順１、２、および３に従って、Ｅ／Ｚ混合物を上記のスキームにより調製する。異性化（一般的手順３）については、一般的手順２により製造された０．１ｇの５種の構成成分の混合物を、触媒量のＴｓＯＨを含む１０ｍＬのトルエン中で３ｈ還流する。粗生成物をクロマトグラフィーにより精製し、０．０９ｇの無色油を得る。
【数７】
2018518532.tif 000022
１：１のＥ：Ｚを、アルケン水素による６．４４および６．４０ｐｐｍでのピークの積分の比較により決定する。
【００４１】
例５．本発明の別の好ましい化合物（２−（３−メチルシクロヘキサ−２−エン−１−イリデン）プロピオニトリル）のＥ／Ｚ混合物の調製を、以下で説明する。
【化１４】
2018518532.tif 000023
【００４２】
一般的手順１、２、および３に従って、Ｅ／Ｚ混合物を上記のスキームにより調製する。異性化（一般的手順３）については、一般的手順２により製造された１．０４ｇの５種の構成成分の混合物を、触媒量のＴｓＯＨを含む１０ｍＬのトルエン中で３ｈ還流する。粗生成物をクロマトグラフィーにより精製し、０．５０ｇの無色油を得る。
【数８】
2018518532.tif 000024
１：１のＥ：Ｚ混合物を、アルケン水素による６．６５および６．１６ｐｐｍでのピークの積分の比較により決定する。
【００４３】
例６．本発明の別の好ましい化合物（２−（４，４−ジメチルシクロヘキサ−２−３ネン−１−イリデンプロパンノトリル（2−(4，4−dimethylcyclohex−2−3nen−1−ylidenepropanenotrile））のＥ／Ｚ混合物の調製を、以下で説明する。
【化１５】
2018518532.tif 000025
【００４４】
一般的手順１、２、および３に従って、Ｅ／Ｚ混合物を上記のスキームにより調製する。異性化（一般的手順３）については、一般的手順２からの０．０４ｇのフラッシュされた（flushed）物質を、触媒量のＴｓＯＨを含む１０ｍＬのトルエン中で３ｈ還流した。粗生成物をクロマトグラフィーにより精製し、０．４０ｇの無色油を得る。
【数９】
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１：１のＥ：Ｚ混合物を、アルケン水素による６．４８および６．２３ｐｐｍでのピークの積分の比較により決定する。
【００４５】
例７．本発明の別の好ましい化合物のＥ／Ｚ混合物の調製を、以下に示して説明する。
【化１６】
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【００４６】
一般的手順１および２に従って、Ｅ／Ｚ混合物を上記のスキームにより調製する。脱水（一般的手順２）については、一般的手順１から得られた０．６２ｇのカップリング生成物を、触媒量のＴｓＯＨを含む１０ｍＬのトルエン中で１ｈ撹拌する。粗生成物をクロマトグラフィーにより精製し、薄黄色油を得る（０．５３ｇ、９２％、７：３  ヘキサン：ＥｔＯＡｃ中でＲｆ＝０．７４）。
【数１０】
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ＨＲＭＳ：Ｃ１１Ｈ１５Ｎについて、理論値＝１６１．２４３５０、実測値＝１６１．２４０５４
５：４のＥ：Ｚ混合物を、アルケン水素による４．９および４．７ｐｐｍでのピークの積分の比較により決定する。
【００４７】
上記の例において記載した化合物は、脳の電気的活性をトラックする、in  vitroおよびin  vivoアッセイで活性を示す。第１アッセイは、膜電位感受性色素イメージングを使用してなされる。これは、人工脳脊髄液（ＡＣＳＦ）中で生存させた、摘出されたラットの脳のスライスに対してなされる。電気的刺激を与えると、スライスはその中の神経集合体を活性化させる。例えばｄｉ−４−ＡＮＥＰＰＳなどの膜電位感受性色素を、脳のスライスと共に、組織中への色素浸透を強化する好適な溶液中で１時間インキュベートする。色素は反応して、脳のスライス中のニューロンの細胞膜にわたって電圧を変化させる。例の化合物を、２００ｎＭ〜１μＭの間の既知の濃度でＡＣＳＦに添加する。脳のスライスに次いで、スライス中のニューロンを活性化させる電気的刺激を与える。色素が反応して、観察して定量できる電圧を変化させるにつれて、例の化合物の存在により脳の活性化を減衰させる程度が評価される。
【００４８】
上記で例示した例１の化合物は、２００ｎＭの濃度で脳のスライスの活動の活性化を６５±１７％抑制することができた。図１において、活動の抑制は、ラットの梨状皮質の層ＩＩの蛍光の変化の減少した増幅により示される。図１に示されるとおり、例１の化合物は、梨状皮質から調製されたラットの脳のスライスの活性化を抑制した。Ａにおいて、刺激後約２秒で記録されたカメラの２つのフレームが示される。２つのフレームは、外側嗅索を通して送達される６０Ｈｚの刺激の流れ（stimulus  train）に応答する梨状皮質の層２におけるニューロンの増加した興奮（excitation）を示す。Ｂにおいて、一連の記録全体にわたって、層２内のスポットにわたる活動の増加を定量する２つのトレースが示される。例１の化合物は、応答の持続時間および増幅の両方を減少させた。これは、脳の活動を抑制する化合物の能力を示す。
【００４９】
第２アッセイにおいて、電位依存性ナトリウムチャネルの活性に対する例の化合物による阻害を、パッチクランプ電気生理学を使用して決定する。この分析は、ラットから摘出された培養皮質ニューロン（cultured  cortical  neurons）に対してなされる。
【００５０】
例１の化合物が１００ｎＭで試験され、ナトリウムチャネル不活化の回復を約３倍（１３ｍｓ対３５ｍｓ）遅らせることを示した。図２に示されるとおり、上側のカーブは、培養物中の単一ニューロンに対してなされた対照記録（control  recordings）の回復の速度を示す。破線は、回復の速度の単一指数フィット（single  exponential  fit）を示す。これは、１２．９ｍｓの時定数を有することが見出された。下側の実線は、例１の化合物（１００ｎＭ）の存在下で得られたデータを示す。下側の破線は、回復の速度の単一指数フィットである。例１の化合物の存在下では、回復の速度はより遅く、３４．３ｍｓの時定数を有することが見出された。
【００５１】
例の化合物は、脱分極により誘起される正常に生じる不活状態から回復するための電位依存性ナトリウムチャネルに必要な時間を延ばす。ナトリウムチャネル活性の高レベル（周波数）で、これらの化合物は、低（非発作）レベルの活性でのものより有効な減数活性を有する。よって、例の化合物は、正常な脳の挙動より高度に、異常な脳の挙動を抑制する傾向がある。
【００５２】
本発明の多数の態様を記載してきた。そうではあるが、態様は、本願において例示的に記載され、特許請求の範囲に記載される本発明の範囲を限定することを意味しない。上記態様の変形は、当業者には明らかであり、本発明者により以下の特許請求の範囲により包含されることが意図される。
【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
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