(57)【要約】  本発明は、手動注射又はインスリンポンプ若しくは低血糖症を治療するための他の注射デバイスによる投与に適した、すぐに使用することができる安全なグルカゴンの溶液組成物に関する。前記組成物は、グルカゴン、酸、ゲル化防止ポリオール、安定化塩、粘度低下剤、及び酸化防止剤を含み、約２〜５の最終ｐＨを有し、ゲル不含であり、化学的に安定であり、ポンプ供給可能である。
2018527358.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
グルカゴン、
ゲル化防止ポリオール、及び
酸
を含み、すぐに使用することができ、かつ非ゲル化性の溶液組成物であって、
前記組成物が２〜５のｐＨを有する、組成物。
【請求項２】
グルカゴン、
ゲル化防止ポリオール、
酸、
安定化塩、及び
酸化防止剤
を含み、すぐに使用することができ、非ゲル化性であり、かつ化学的に安定な溶液組成物であって、
前記組成物が２〜５のｐＨを有する、組成物。
【請求項３】
グルカゴン、
ゲル化防止ポリオール、
酸、
安定化塩、
酸化防止剤、および
粘度低下剤
を含み、すぐに使用することができ、非ゲル化性であり、安定しており、かつポンプ供給可能な溶液組成物であって、
前記組成物が２〜５のｐＨを有する、組成物。
【請求項４】
前記グルカゴンが、動物源に由来するか、合成により作製されるか、またはＤＮＡ組換え技術によって産生される、請求項１、２、又は３に記載の組成物。
【請求項５】
前記ゲル化防止ポリオールが、プロピレングリコール、グリセロール（又はグリセリン）、ソルビトール、及びポリエチレングリコール、又はそれらの混合物からなる群から選択される、請求項１、２、又は３に記載の組成物。
【請求項６】
前記酸が、塩酸、リン酸、メタンスルホン酸、硫酸、酢酸、乳酸、酒石酸、クエン酸、プロピオン酸、又はそれらの混合物からなる群から選択される、請求項１、２、又は３に記載の組成物。
【請求項７】
前記酸化防止剤が、メチオニン、システイン、ＥＤＴＡ、又はそれらの組合せからなる群から選択される、請求項２又は３に記載の組成物。
【請求項８】
前記安定化塩が、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウム、又は亜鉛のカチオンと、酢酸塩、安息香酸塩、重亜硫酸塩、重炭酸塩、炭酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、メタ重亜硫酸塩、リン酸塩、硫酸塩、亜硫酸塩、若しくは酒石酸塩の対イオン、又はそれらの組合せとからなる群から選択される、請求項２又は３に記載の組成物。
【請求項９】
前記粘度低下剤が、エタノール、中鎖トリグリセリド、オレイン酸エチル、又はそれらの組合せからなる群から選択される、請求項３に記載の組成物。
【請求項１０】
前記組成物が、更に水を含有する、請求項１、２、又は３に記載の組成物。
【請求項１１】
前記グルカゴンの濃度が、０．０１〜３ｍｇ／ｍＬである、請求項１、２、又は３に記載の組成物。
【請求項１２】
前記ゲル化防止ポリオールの濃度が、５０〜９９．５重量％である、請求項１、２、又は３に記載の組成物。
【請求項１３】
前記酸が、約２〜約５の最終ｐＨに達するのに十分な量で添加される、請求項１、２、又は３に記載の組成物。
【請求項１４】
前記水の濃度が、０．１〜２０重量％である、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１５】
前記安定化塩の濃度が、０．１〜３重量％である、請求項２又は３に記載の組成物。
【請求項１６】
前記粘度低下剤の濃度が、１〜２５重量％である、請求項３に記載の組成物。
【請求項１７】
前記組成物が、シリンジ、ペン型インジェクター、オートインジェクター、単位用量オートインジェクター若しくは注入ポンプ、又は他の注射デバイスを使用して、皮下、筋肉内または静脈内注射後に血中グルコースを上昇させることにより速効性グルカゴン効力を提供する、請求項１、２、又は３に記載の組成物。
【請求項１８】
グルカゴンを使用して低血糖症、高インスリン血症、又は他の医学的障害を治療又は予防する方法、あるいはヒト又は動物の被験体において腸運動の低下が必要な場合に、胃、十二指腸、小腸、及び結腸の放射線検査の間に腸運動を低下させる方法であって、前記方法が、有効量の請求項１から１８のいずれか１項に記載の溶液を前記被験体に投与することを含む、方法。
【請求項１９】
請求項１から１８のいずれか１項に記載の組成物を調製する方法であって、前記方法が、（１）請求項１から１８のいずれか１項に記載の全ての成分を、１又は複数のステップにおいて、結合、混合、及び溶解して透明な溶液を形成すること、（２）前記溶液をフィルターに通すこと、並びに（３）濾過した溶液を、バイアル、シリンジ、インスリンポンプカートリッジ、オートインジェクター、単位用量オートインジェクター、又は他の注射デバイスに充填することを含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１５年９月４日に出願された米国仮出願第６２／２１４，８３１号の優先権を主張するものであり、その開示は、その全体があらゆる目的のために参照により本明細書に援用される。
【０００２】
本発明の分野
本発明は、グルカゴン、ポリオール、酸、水、酸化防止剤、及び塩を含む注射用組成物に関する。前記組成物は、透明で、すぐに使用することができ、非ゲル化性で、安定しており、かつ速効性グルカゴン活性を提供することができる水性溶液であり、低血糖症及びグルカゴンが必要とされる他の疾患を治療及び予防するために、シリンジ又はインスリンポンプのような他の注射装置によって投与することができる。
【背景技術】
【０００３】
膵臓から分泌されるホルモンであるグルカゴンは、３，４８５Ｄａの分子量を有する２９アミノ酸の一本鎖からなるポリペプチドである。医学的にはグルカゴンは、主に低血糖症（正常な血中グルコース濃度より低い状態）を治療するために使用される。低血糖症は１型糖尿病患者及びインスリン使用者に共通して見られる。低血糖症は、重度の症例では、不安、発汗、振戦、動悸、吐き気、及び蒼白、発作、昏睡又は死さえも引き起こす。重度の低血糖症は生命に関わる緊急事態であって、直ちに医療的な介入又は救助が必要であり、そのための現行の標準的な治療はグルカゴン注射である。グルカゴンは、腸運動の低下が必要な場合に、胃、十二指腸、小腸、及び結腸の放射線検査の間にも使用される。
【０００４】
グルカゴンは注射されると肝臓を刺激して、貯蔵されたグリコーゲンをグルコースに変換し、それは血液中に放出される。低血糖症救助には、グルカゴンによる血中グルコースの急速な上昇が望ましく、好ましくは、注射後５〜２０分以内に症状が現れ始める。液体であり、すぐに使用することができ、かつ／又はすぐに注射することができ、速効性であるグルカゴン製剤が非常に望まれている。
【０００５】
グルカゴンは７．１の等電点を有し、生理的ｐＨ（ｐＨ４〜８）では水に不溶性である。ｐＨ３以下では、最初は可溶性であるが、凝集して数時間以内にゲルを形成する。ゲル化したグルカゴンは、分子の疎水性及びペプチドの電位を形成する鎖間−及び鎖内水素結合によって誘導されるβシート又はフィブリルから主になる（Ｃｈｏｕ，Ｐ．Ｙ．，ｅｔ  ａｌ．１９７５．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １４（１１）：２５３６−２５４１）。ゲル化した又は凝集したグルカゴンは適切ではなく、また注射にとって安全でもない。従って、液体であり、すぐに使用することができ、速効性であることに加えて、非ゲル化性であることも、グルカゴン製剤にとって望ましい特性である。
【０００６】
そのゲル化の問題に加えて、グルカゴンは、様々な種類の化学分解を受ける。溶液中では、グルカゴンは急速に分解して多くの分解産物を形成する。グルカゴンの少なくとも１６個の分解産物が報告されており、主な分解経路は、９位、１５位、及び２１位でのアスパラギン酸切断並びに３位、２０位、及び２４位でのグルタミニル脱アミドである（Ｋｉｒｓｃｈ，Ｌ．Ｅ．，ｅｔ  ａｌ．２０００．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，２０３：１１５−１２５）。グルカゴンの化学分解は迅速かつ複雑である。例えば、酸性溶液（ｐＨ２〜４）中では、グルカゴンの約５〜７０％が、３７℃で２４時間以内に多数の分解産物に分解する（米国特許出願第２０１１／００９７３８６号明細書）。溶液中でのグルカゴン分解を防止することは非常に困難であり、グルカゴン分解、特にグルカゴンのアスパラギン酸切断及びグルタミニル脱アミドを阻害するための有効な方法は報告されていない。
【０００７】
現在市販されている２つのグルカゴン薬剤である、ノボ・ノルディスク（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ  Ａ／Ｓ）のＧｌｕｃａＧｅｎ  Ｈｙｐｏｋｉｔ（グルカゴン塩酸塩）及びイーライリリー・アンド・カンパニーの注射用グルカゴン（ｒＤＮＡ由来）が、２つの部分からなるキット（「グルカゴン・エマージェンシー・キット（Ｇｌｕｃａｇｏｎ  Ｅｍｅｒｇｅｎｃｙ  Ｋｉｔ）」）として提供されている。一方の部分は、乾燥した凍結乾燥固体塊（「ケーキ」）中にグルカゴン及びラクトース１ｍｇ（１単位）を含有するバイアルであり、他方の部分は、水、グリセリン、及び塩酸を含む希釈剤を含有するシリンジである。ケーキは、グルカゴンを化学的に安定に保つ乾燥した環境を提供する。グルカゴン・エマージェンシー・キットを使用するには、まず希釈剤をケーキ中に注射してそれを溶解する。次いで、得られたグルカゴン溶液をシリンジに入れ戻してから注射する。この溶液のｐＨは、約２．０〜３．５である。このようにして得られたグルカゴン溶液は不安定であり、直ちに使用されなければならない。
【０００８】
グルカゴン・エマージェンシー・キットを使用するには、複数ステップの手順に従わなければならない。この煩雑な手順を踏むことは、健常人であっても困難である。低血糖症によって行動能力が奪われた人にとっては、キットの自己投与は非常に困難であるかまたは不可能となり得る。時宜を得たグルカゴン救助療法の投与が遅れると、死に至る可能性がある。不幸にも、１型糖尿病を有する個体の死亡の６〜１０％が低血糖症の結果である（Ｃｒｙｅｒ，Ｐ．Ｅ．２００８．Ｄｉａｂｅｔｅｓ  ５７（１２）：３１６９−３１７６）。従って、化学的に安定で、すぐに注射することができるグルカゴン溶液製剤は、救命救急的な低血糖症救助適用にとって非常に望ましい。
【０００９】
インスリンポンプは、１０年以上にわたってインスリン依存性糖尿病患者によって広く使用されてきた。インスリンポンプは、患者によって体外で身体に近接して装着されることができ、皮下に植え込まれた針を通して細いチューブからインスリンを送達することができる。皮下注射針は、１週間まで定位置に留まることができる。
【００１０】
血中グルコース値を連続的に読み取ることができる持続グルコースモニタリングセンサー又は「ＣＧＭ」を使用して、インスリンポンプに血中グルコース値情報を提供し、インスリン出力をリアルタイムで制御する。しかしながら、あまりにも多くの量のインスリンがポンプで送達された場合、現行バージョンのインスリンポンプは、既に投与されたインスリンからの血中グルコース降下及び切迫した低血糖症に対抗するための有効な手段を有していない。正常な個体では、身体は自ずとグルカゴンを分泌することによって急速な血中グルコース低下に対抗するが、１型糖尿病患者では、そのような機能は、アルファ細胞活性の低下に基づき損なわれている。
【００１１】
インスリンとグルカゴンの両方を患者に送達することができる、ＣＧＭと連結された２ホルモン又はデュアルホルモンポンプは、より良好なグルコース制御及び人工膵臓のような機能の可能性を有する。血中グルコースが低血糖値に達するか、又は低血糖値に達すると予想される場合、２ホルモンポンプはグルカゴンを送達して低血糖症に対抗する。この能力により、非１型糖尿病個体の膵臓によって行われるように、患者の血中グルコースを正常血糖値内へとより良好に調整することが可能になる。
【００１２】
２ホルモンポンプは、体温又は体温付近で、少なくとも３〜７日間まで、すぐに使用することができ、速効性で、非ゲル化性で、かつ化学的に安定である液体グルカゴン製剤を要する。これは、ポンプが患者の体温にさらされ、半週毎又は１週間毎の間隔でグルカゴンとインスリンが補充されるからである。更に、グルカゴン製剤は「ポンプ供給可能」でなければならず、即ち、ポンプによって薄肉注入チューブを通して少量（例えば１０〜５０マイクロリットル）で正確かつ確実に送達されることができる。ポンプ供給可能であるために、グルカゴン製剤は、非ゲル化性で、粘性が低く、かつポンプから身体へインスリン／グルカゴンを送達する薄肉プラスチックチューブ及び細いカテーテルからなる注入セットと適合していなければならない。
【００１３】
１型糖尿病に対する治療法が出てくるまで、患者の２ホルモンポンプの使用は、潜在的に生涯続く可能性がある。したがって、２ホルモンポンプで使用されるインスリン及びグルカゴン製剤は、慢性的な曝露の可能性故に非常に高い安全基準に保たれなければならない。それらの製剤に使用される成分は、長期間の安全性の実績が証明されたものであるか、人体に内在するもので慢性使用中の毒性を最小限に抑えるために安全量で使用されなければならない。注射剤での使用のために規制当局（ＦＤＡ等）によって事前承認されていない成分を含有する製剤は、販売承認のためにその安全性を証明する上で深刻な規制審査に確実に直面する。本明細書に開示されるグルカゴン組成物は、注射用にＦＤＡに事前承認された注射用成分のみを含有する。
【００１４】
低血糖症救助及び２ホルモンポンプの両方での使用のために、グルカゴン製剤は、速効性であり、且つ短時間で低血糖症値から血中グルコースを急速に上昇させなければならない。グルカゴン・エマージェンシー・キット（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）は、救助用量（グルカゴン１ｍｇ）での皮下注射又は筋肉内注射後２６〜３０分以内にヒトにおける血中グルコース濃度を最大（約１３６ｍｇ／ｄＬ）まで上昇させることができる。この血中グルコース濃度対時間の関係は、グルカゴンの薬力学プロファイルとも呼ばれる。
【００１５】
要約すると、低血糖症救助、インスリンポンプ、又はグルカゴンを利用する他の適応症のために、以下の特性を有する新規の製剤が必要とされている：
１．液体
２．すぐに使用することができる、即ち、直接注射できる液体
３．非ゲル化性
４．化学的に安定
５．ポンプ供給可能
６．速効性、及び
７．安全な又はＦＤＡ承認の注射可能な成分を含有。
【００１６】
本発明者の知る限り、上記の７つの要件を全て満たすことができるグルカゴン溶液組成物は先行技術において存在しない。
【００１７】
国際公開第２０１３０８６２９２Ａ１号は、薬学的に許容される希釈剤中に、グルカゴン、増量剤、及び酸性化剤を含むグルカゴン製剤を開示している。組成物は、容易に凍結乾燥し、その希釈剤で迅速に再構成することができる。増量剤は、炭水化物、アミノ酸、塩、マンニトール、ラクトース、スクロース、デキストラン、塩化ナトリウム、及びそれらの組合せを含み得る。増量剤又はマトリックス形成剤は、凍結乾燥後に固体構造又は「ケーキ」又は粉末を提供することができなければならず、且つ製剤はグリセリン不含でなければならない。マンニトールは、約１．０％〜約１０．０％（ｗ／ｖ）の濃度で増量剤として使用される。開示された組成物は、２つのチャンバーに準備され、すぐに使用することができないか、又は液体製剤ではない。
【００１８】
国際公開第２０１２０５９７６４号は、グルカゴン及び可溶化剤としてカチオン性界面活性剤を含むｐＨ４〜７の水性組成物を教示している。カチオン性界面活性剤の例には、ベンゼトニウム塩、ベンザルコニウム塩、及びセチルトリメチルアンモニウム塩が含まれる。カチオン性界面活性剤は、毒性であり、インスリン／グルカゴンポンプにおいて利用される長期間の慢性使用に対して安全ではない。
【００１９】
国際公開第２０１１０４９７１３号は、糖及び界面活性剤からなる製剤の特許保護を請求しており、「糖」は、単糖又は二糖を指し、好ましい例には、スクロース、マルトース、及びグルコースが含まれる。界面活性剤は、リン脂質又はグリセロリン脂質のような両親媒性界面活性剤であってよく、好ましい実施形態ではミリストイルリゾホスホコリン（ＬＭＰＣ）が用いられる。ゲル化を防止するために、ゲル化防止剤、例えばエタノールを、１０％ｖ／ｖまで、最も好ましくは２％ｖ／ｖまで添加することができる。ゲル化を阻害するアルコールの他の例には、一価アルコール、例えばペンタノール（アミルアルコール）及びヘキサデカン−１−オール（セチルアルコール、パルミチルアルコール）が含まれる。多価アルコール、例えばプロパン−１，２，３−トリオール（グリセリン）、ブタン−１，２，３，４−テトラオール（エリスリトール）、ペンタン−１，２，３，４，５，６−ヘキソール（マンニトール、ソルビトール）およびヘプタン−１，２，３，４，５，６，７−ヘプトール（ボレミトール）；不飽和脂肪族アルコール、例えば３，７−ジメチルオクタ−２，６−ジエン−１−オール（ゲラニオール）；および脂環式アルコール、例えばシクロヘキサン−１，２，３，４，５，６−ヘキソール（イノシトール）および２−（２−プロピル）−５−メチル−シクロヘキサン−１−オール（メントール）が含まれる。これらのアルコールについて、作用濃度範囲は提供されていない。開示された界面活性剤（例えばＬＭＰＣ）又はアルコール（例えばペンタノール）は、注射用にＦＤＡによって承認されておらず、インスリン／グルカゴンポンプの使用には危険である。
【００２０】
米国特許出願公開第２０１２０２３２００１号明細書は、安定な製剤であって、（ａ）ペプチド又はその塩（ここで、ペプチドは、不揮発性緩衝液中で乾燥されており、かつ乾燥されたペプチドは、不揮発性緩衝液中でのペプチドのｐＨにほぼ等しいｐＨ記憶を有する）と、（ｂ）非プロトン性極性溶媒（ここで、該製剤の含水率は５％未満であり、且つ乾燥されたペプチドは、該乾燥されたペプチドが非プロトン性極性溶媒中で再構成された場合、不揮発性緩衝液中でのペプチドのｐＨにほぼ等しいｐＨ記憶を維持する）を含む製造の特許保護を請求している。非プロトン性極性溶媒の例には、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、酢酸エチル、ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、および炭酸プロピレンが含まれる。開示された非プロトン性溶媒（例えばＤＭＳＯ）は、注射部位反応を引き起こすことが報告されている（Ｈａｙｍｏｎｄ，ＭＷ，Ｒｅｄｏｎｄｏ，ＭＪ，ｅｔ  ａｌ．２０１６）。１型糖尿病を有する成人における軽度低血糖症を治療するための、非水性のミニドースグルカゴン：（Ａ  ｄｏｓｅ  ｓｅｅｋｉｎｇ  ｓｔｕｄｙ．Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｃａｒｅ  ３９：４６５−４６８）は、インスリン／グルカゴンポンプの使用には危険である。
【００２１】
国際公開第１９９５０３２７３０号は、ヒスチジンを除き、グルカゴンおよび安定化量の薬学的に許容される両性電解質を含む医薬製剤を開示している。両性電解質は、アミノ酸（ヒスチジンを除く）、又はグリシンの誘導体、Ｎ−メチルグリシン（サルコシン）、トリメチルグリシンヒドロキシドの内部塩（ベタイン）、アラニン、β−アラニン、バリン、ロイシン、ノルロイシン、イソロイシン、セリン、トレオニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ヒドロキシグルタミン酸、リシン、ヒドロキシリシン、オルニチン、アルギニン、メチオニン、アスパラギン、グルタミン、ジペプチド、例えばグリシルグリシン、スルホン酸又は誘導体、例えばタウリン；クレアチニン、又はエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）である。グルカゴン１ミリグラムにつき、存在する安定化アミノ酸又はジペプチドの量は、０．１〜５０マイクロモルであり、グリシンでは０．００７５〜３．７５ｍｇ／ｍＬに相当する。この出願の発明者らは、国際公開第１９９５０３２７３０号により開示された成分を使用してグルカゴンを安定化することはできなかった。
【００２２】
欧州特許出願公開第１６８７０１９号明細書は、少なくとも１種のペプチド及びプロピレングリコールを含む医薬製剤を開示しており、ここで、前記プロピレングリコールは、前記製剤中に約１ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌの最終濃度で存在し、且つ前記製剤は、ｐＨ約７．０〜約１０．０を有する。グルカゴンを含有する任意の組成物の例、又はグルカゴン製剤の所望の特性の任意の教示又はこれらの特性を得る方法は、欧州特許出願公開第１６８７０１９号明細書に一切記載されていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２３】
【特許文献１】米国特許公開第２０１１／００９７３８６号明細書
【特許文献２】国際公開ＷＯ２０１３／０８６２９２Ａ１号公報
【特許文献３】国際公開ＷＯ２０１２／０５９７６４号公報
【特許文献４】国際公開ＷＯ２０１１／０４９７１３号公報
【特許文献５】米国特許出願公開第２０１２／０２３２００１号明細書
【特許文献６】国際公開ＷＯ１９９５／０３２７３０号公報
【特許文献７】欧州特許公開第１６８７０１９号明細書
【非特許文献】
【００２４】
【非特許文献１】Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １４（１１）（１９７５）：２５３６−２５４１
【非特許文献２】Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，２０３（２０００）：１１５−１２５）
【非特許文献３】Ｄｉａｂｅｔｅｓ  ５７（１２）（２００８）：３１６９−３１７６
【非特許文献４】Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｃａｒｅ  ３９：４６５−４６８
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２５】
開示された上記組成物のいずれも、新規のグルカゴン製剤に所望される以下の要件の全てを満たすことはできない：
１．液体
２．すぐに使用することができる
３．非ゲル化性
４．化学的に安定
５．ポンプ供給可能
６．速効性、及び
７．安全な成分を含有。
【課題を解決するための手段】
【００２６】
本発明は、以下の特性：
１．液体
２．すぐに使用することができる
３．非ゲル化性
４．化学的に安定
５．ポンプ供給可能
６．速効性、及び
７．安全な成分を含有
を有する、新規のグルカゴン製剤に関する。
【００２７】
本発明は、第１に、ポリオールと酸との組合せによって、グルカゴンの非ゲル化性溶液組成物を得ることができるという知見に関する。
【００２８】
本発明は、界面活性剤、糖、非プロトン性溶媒、リン脂質、リゾリン脂質、又は両性電解質を含有させずに、グルカゴンの非ゲル化性溶液組成物を得ることができるという知見にも関する。
【００２９】
更に、本発明は、安定化塩及び酸化防止剤をポリオールと酸の組合せを含む非ゲル化性組成物に添加することによって、グルカゴンの非ゲル化性及び化学的に安定な組成物を得ることができるという驚くべき知見に関する。
【００３０】
本発明は、粘度低下剤を、ポリゾール、酸、安定化塩、及び酸化防止剤の組合せを含む非ゲル化性及び化学的に安定な組成物に添加することによって、非ゲル化性で、化学的に安定であり、且つポンプ供給可能であるグルカゴンの組成物を得ることができるという更に別の驚くべき知見に関する。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１】グルカゴンのアミノ酸配列を示す図である。
【図２】実施例５に記載のＵＳＰ  ＨＰＬＣ法を使用して得られたＨＰＬＣサンプル希釈剤／ブランク（上部）、新たに調製した（中央）グルカゴン、及び分解した（下部）グルカゴンの代表的なＨＰＬＣクロマトグラムを示す図である。
【図３】様々な温度で測定した、かつ本発明の溶液製剤の予測貯蔵寿命を調べるためのアレニウス式を立てるのに使用したグルカゴン分解を示す図である。
【図４】グルカゴン・エマージェンシー・キット（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）と比較した本発明の２つのグルカゴン組成物（Ｆ−６１８及びＦ−６２１）の薬力学プロファイルを示す図である。Ｆ−６１８及びＦ−６２１のいずれも、２０分以内に最大血中グルコース値をもたらし、かつ速効性である。
【図５】本発明の製剤であるＦ−６４８の薬物動態（ＰＫ）（上部）プロファイル及び薬力学（ＰＤ）（下部）プロファイルを示す図である。Ｆ−６４８は速効性であり、グルカゴン・エマージェンシー・キット（ＧｌｕｃａＧｅｎまたはＧＧ）に匹敵する迅速な血中グルコース上昇をもたらす。
【発明を実施するための形態】
【００３２】
発明の詳細な説明
Ｉ．定義
本明細書中で使用される様々な用語は、以下の定義を有するものとする。
【００３３】
本明細書で使用される「約」は、目標値の両側から１０％の広がりをカバーする範囲を有する量を表す。例えば、「約１００」とは、９０と１１０を含む９０〜１１０の任意の値を意味する。
【００３４】
本明細書で使用される「酸」は、注射に適している任意の有機酸若しくは無機酸又は注射可能な酸を指す。注射可能な酸は、注射可能な薬物中で使用するためにＦＤＡによって事前承認された酸であり、ＦＤＡの不活性成分リスト（Ｉｎａｃｔｉｖｅ  Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ  Ｌｉｓｔ）において確認がとれる。本発明にとって特に有用な酸には、酢酸、アスコルビン酸、アスパラギン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、クエン酸、ギ酸、フマル酸、塩酸、臭化水素酸、乳酸、ラクトビオン酸、マレイン酸、リンゴ酸、マロン酸、メタンスルホン酸、リン酸、プロピオン酸、コハク酸、硫酸、及び酒石酸が含まれるが、これらに限定されない。好ましい酸は、５未満のｐＫａを有する酸である。より好ましい酸は、クエン酸、塩酸、乳酸、メタンスルホン酸、リン酸、プロピオン酸、硫酸、及び酒石酸である。
【００３５】
本明細書で使用される「アルコール」は、単一ヒドロキシル官能基（−ＯＨ）が炭素原子に結合しており、この炭素が飽和している、他の３個の原子に対しては単結合を有する有機化合物である。本発明の組成物にとって好ましいアルコールは、エタノールである。エタノール単独では、グルカゴンにとって良好な溶媒ではなく、注射部位で刺激又は痛みを引き起こすことから、高濃度で注射するには危険である。エタノールは、ポリオールと同じゲル化防止特性を有しておらず、本発明の組成物中のポリオールを代替することはできない。しかしながら、本発明の組成物にエタノールを低濃度で添加して組成物の粘度を低下させることで注射能又はポンプ能を改善することができる。
【００３６】
本明細書で使用される「ゲル化防止」という文言は、グルカゴンのゲル化、凝集、又はフィブリル形成を防止する特定の薬剤の能力を指す。
【００３７】
本明細書で使用される「抗菌防腐剤」は、液体組成物に添加して細菌及び真菌の増殖を阻害することができる医薬添加剤である。本発明において有用な抗菌防腐剤には、クレゾール、フェノール、ベンジルアルコール、エタノール、クロロブタノール、パラベン、イミド尿素（ｉｍｉｄｕｒａ）、塩化ベンジルコニウム、ＥＤＴＡ若しくはその塩又はそれらの組合せが含まれるが、これらに限定されない。
【００３８】
「酸化防止剤」は、活性薬物又は不活性成分の酸化を防止するために液体組成物に添加することができる医薬添加剤である。酸化防止剤には、還元剤、金属イオンキレート剤、及び不活性ガスが含まれる。
【００３９】
「アレニウスの式」は、反応速度の温度依存性についての式である。アレニウスの式は、化学反応の速度定数ｋが絶対温度Ｔ（ケルビン単位）に依存することを示し、ここで、Ａは、前指数因子（又は単純に前因子）であり、Ｅａは、活性化エネルギーであり、且つＲは、普遍気体定数である。
【００４０】
【数１】
2018527358.tif 000003
【００４１】
歴史的に、アレニウスの式は、より高い温度で収集された反応速度データを使用して、より低い温度で反応速度を予測するために使用される。
【００４２】
本明細書で使用される「体温又は体温付近の温度」は、約３０℃〜４０℃である。
【００４３】
本明細書で使用される「化学的に安定」は、組成物が、体温で３〜７日後、又は２〜８℃で２４ヶ月間の貯蔵後若しくは２５℃で１２ヶ月間の貯蔵後に、初期グルカゴン濃度の６５％以上を保持することを意味する。
【００４４】
本明細書で使用される「洗浄剤」は、水で油性物質を溶解及び洗浄するために使用することができる水溶性界面活性剤である。
【００４５】
本明細書中で使用される「速効性」という文言は、グルカゴン組成物が、皮下注射又は筋肉内注射による１ｍｇの成人ヒト用量に等しい用量を含有する組成物の投与後に、哺乳動物において血中グルコース値を、３０分以内に、好ましくは２０分以内に、より好ましくは１０分以内に１００ｍｇ／ｄｌ超に上昇させることができることを意味する。
【００４６】
本明細書で使用される「ＦＤＡ」は、米国食品医薬品局（ＦＤＡ）を指す。
【００４７】
本明細書で使用される「濾過可能」は、グルカゴンの有意な損失（５％以上）なしに、特定の細孔サイズ、例えば０．２ミクロンの濾過膜を通過する液体の能力を意味する。
【００４８】
本明細書で使用される用語「細針」には、皮下、静脈内、又は他のタイプの注射のためにシリンジ又はポンプと共に使用される小径の中空皮下注射針が含まれる。針の外径は、針ゲージシステムによって示される。スタブ針ゲージシステム（Ｓｔｕｂｓ  Ｎｅｅｄｌｅ  Ｇａｕｇｅ  ｓｙｓｔｅｍ）によれば、一般的な医療用途における皮下注射針は、７（最大）〜３３（最小）ゲージ（Ｇ）の範囲である。従って、本明細書で使用される「細針」には、２１〜３３Ｇ、好ましくは２５Ｇ〜３１Ｇ、最も好ましくは２７Ｇ〜３１Ｇの範囲の針が含まれる。
【００４９】
本明細書で使用される「ゲル不含」という文言は、肉眼で見えるグルカゴンの沈殿物、粒子、フィブリル、又はゲル化を示さないグルカゴン組成物を意味するか、あるいはグルカゴン組成物が、実施例３に記載の色素結合試験に合格することを意味する。
【００５０】
本明細書で使用される「グルカゴン」は、実験式Ｃ１５３Ｈ２２５Ｎ４３Ｏ４９Ｓ、分子量３，４８３Ｄａを有し、且つ２９アミノ酸残基を含有する一本鎖ポリペプチドからなる、図１に示されるアミノ酸配列を有する完全長ペプチドのグルカゴン、又はグルカゴン様配列を含有するか若しくはグルカゴンと同じゲル化又は化学分解の問題を共有する任意の他のペプチドであり得る。
【００５１】
本明細書で使用される「グルカゴンフィブリル」は、粒子又は繊維様構造で存在する凝集グルカゴンを意味する。グルカゴンフィブリルは、実施例３に記載される粒度分析又は色素結合分析のような特定の分析方法によって視覚的に検出又は定量することができる。
【００５２】
本明細書で使用される「ＧＲＡＳ」は、食品添加物の定義から特定の食品成分を除外するための、連邦食品医薬品化粧品法（「ＦＤ＆Ｃ法」）に対する１９５８年の食品添加物改正法において定義される、「一般に安全であると認められる」という文言の頭字語である。
【００５３】
本明細書で使用される「インスリンポンプ」は、連続皮下インスリン注入療法としても知られている、糖尿病の治療におけるインスリンの投与のために使用される医療デバイスである。このデバイスには、ポンプ（制御装置、処理モジュール、及びバッテリーを含む）、インスリン用の使い捨てリザーバー（ポンプ内）、皮下挿入（皮膚の下）用のカニューレを含む使い捨て注入セット及びインスリンリザーバーをカニューレに接続するためのチュービングシステムが含まれる。インスリンポンプは、インスリンの過剰摂取又は低血糖症を予防するためにグルカゴン組成物のような第２の溶液を送達することもできる。２つの溶液を送達することができるインスリンポンプは、２ホルモンポンプとも呼ばれる。
【００５４】
本明細書で使用される「中鎖トリグリセリド」（「ＭＣＴ」）は、グリセロールの中鎖（６〜１２個の炭素）脂肪酸エステルである。ＭＣＴは、天然源に由来するものであるか、又は合成により作製されたものであってよい。
【００５５】
「金属イオンキレート剤又はキレート化剤」という用語には、注射可能な製品で使用するのに安全な金属イオンキレート化剤が含まれる。金属イオンキレート化剤は、金属イオンに結合することによって作用し、それによって、金属イオンが酸化、加水分解、又は他の分解反応に及ぼす触媒効果を低下させる。本発明において有用な金属キレート化剤には、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ、エデト酸）、グリシン及びクエン酸並びにそれらのそれぞれの塩又はそれらの混合物が含まれ得る。好ましいキレート化剤の例には、ＥＤＴＡのナトリウム塩、カリウム塩、又はカルシウム塩が含まれる。
【００５６】
本明細書で使用される「ｐＨ」は、ｐＨを測定し表示する電子メーターに接続されたガラス電極からなる典型的なｐＨメーターによる本発明の組成物のｐＨ読取り値である。ｐＨメーターは、水性標準ｐＨ緩衝液を使用して較正した。
【００５７】
本明細書で使用される「ポリオール」は、複数のヒドロキシル基を有するアルコール分子である。本発明にとって好ましいポリオールには、プロピレングリコール、グリセリン（グリセロール）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、及び糖アルコールが含まれる。糖アルコールは、マンニトール、マルチトール、ソルビトール、キシリトール、エリスリトール、及びイソマルトを含む一群のポリオールである。糖アルコールは、通常、それらの糖アナログから穏やかな還元条件下で形成される。比較的低い分子量のポリオール（例えばプロピレングリコール、グリセリン）が、グルカゴン組成物のより低い粘度及びより良好なゲル防止特性のために、比較的高い分子量のポリオール（例えばポリエチレングリコール）よりも好ましい。より好ましいポリオールは、プロピレングリコール、グリセリン、及び低分子量ポリエチレングリコール（例えばＰＥＧ２００、ＰＥＧ３００、及びＰＥＧ４００）である。最も好ましいポリオールは、プロピレングリコールである。プロピレングリコールは、ＦＤＡの不活性成分リストに従って、皮下、筋肉内、又は静脈内注射によって投与される薬物中での使用のためにＦＤＡによって承認されている。
【００５８】
本明細書で使用される「非ゲル化性」という文言は、グルカゴン組成物が、体温で３〜７日後に、又は５℃で２４ヶ月間に相当するストレス条件下での貯蔵後に、又は２５℃で１２ヶ月間に相当するストレス条件下での貯蔵後にゲル不含であり続けることを意味する。
【００５９】
本明細書で使用される「ポンプ供給可能」という文言は、溶液が、８０〜１２０％の範囲内の送達容量精度でインスリンポンプによって送達され得ることと、溶液が、任意の強溶媒、例えば、ＤＭＳＯ、ＮＭＰ、又はインスリンポンプで使用されるポンプ又は注入セットにおけるプラスチック部品を溶解するか又はその損傷を招く可能性がある非プロトン性溶媒を含まないことを意味する。
【００６０】
本明細書で使用される「安全な成分」という文言は、注射可能な薬物中での使用のために（この出願の時点で）ＦＤＡによって承認された医薬品添加剤(excipient)を指す。安全な成分は、ＦＤＡの不活性成分リストに列記されている（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ａｃｃｅｓｓｄａｔａ．ｆｄａ．ｇｏｖ／ｓｃｒｉｐｔｓ／ｃｄｅｒ／ｉｉｇ／ｉｎｄｅｘ．ｃｆｍ）。
【００６１】
本明細書で使用される「安定化塩」という文言は、本発明の非ゲル化性組成物中のグルカゴンの化学的安定性を高めることができる塩を指す。グルカゴンの安定性は、グルカゴンＵＳＰアッセイ法を使用して主に定量される。
【００６２】
本明細書で使用される「実質的に含まない」という用語は、全組成物重量の１％未満を意味する。
【００６３】
本明細書で使用される「糖」は、浸透圧又は張度を調整するために液体組成物に通常添加される炭水化物添加剤を指す。
【００６４】
本明細書で使用される「溶液」は、１つの相のみからなる透明で均質な液体を指す。
【００６５】
本明細書で使用される「界面活性剤」は、液体の表面張力又は２つの液体間の界面張力を低下させる化合物を指す。
【００６６】
本明細書で使用される「ＵＳＰ」は、米国薬局方（Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ）の最新版を意味する。
【００６７】
本明細書で使用される「粘度低下剤」という文言は、本発明の非ゲル化性及び化学的に安定な組成物の粘度を低下させることができる液体を指す。粘度低下剤が、グルカゴンのポンプ供給可能な組成物に必要である。本発明に有用な粘度低下剤の例には、エタノール、中鎖トリグリセリド、及びオレイン酸エチル、又はそれらの混合物が含まれるが、これらに限定されない。
【００６８】
本明細書で使用される「％」という用語は、重量／体積百分率、又は％ｗ／ｖを意味する。例えば、１％は、１００ｍＬ中で１グラム又は１０ｍｇ／ｍＬを意味する。
【００６９】
本明細書で使用される「％ｗ／ｗ」という用語は、重量／重量百分率、又は％ｗ／ｗを意味する。例えば、１％ｗ／ｗは、１００ｇ中で１グラム又は１０ｍｇ／ｇを意味する。
【００７０】
ＩＩ．説明
ポリオールは、水以外で、人体に内在する（例えばグリセリン）か又は一般に安全であると認められる（ＧＲＡＳ）ことから、注射に最も適した溶媒である。ポリオール、例えばプロピレングリコール（ＰＧ）、グリセリン、ソルビトール、ポリエチレングリコールは、注射可能な薬物中で使用するためにＦＤＡによって承認されている。新規のグルカゴン製剤のための賦形剤として、ポリオールは、注射可能な医薬品添加剤として安全な使用のその長い歴史ゆえにＤＭＳＯのような他の有機溶媒よりも好ましい。本発明は、ポリオールを含むグルカゴン溶液組成物に関する。
【００７１】
グルカゴンは、純水又はアルコールに不溶性である。Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ  ａｎｄ  Ｃｏ．又はＮｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ  Ａ／Ｓから販売されているグルカゴン・エマージェンシー・キットは、グルカゴンを水に溶解し易くするために酸（ＨＣｌ）を使用する（しかし、そのような溶液は即座に、経時的にゲルを形成する）。同様に、本発明者は、酸とポリオールの組合せが、グルカゴンを溶解し得る一方で、非ゲル化性溶液を形成することを発見した。
【００７２】
しかしながら、酸−ポリオールの組合せを含むそのような非ゲル化性溶液中のグルカゴンは、化学的に安定ではない。続けて、本発明者は、酸化防止剤及び安定化塩を、酸−ポリオールの組合せを含む非ゲル化性溶液に添加すると、溶液中のグルカゴン化学的安定性が驚くべきことに改善され、その結果、非ゲル化性及び化学的に安定なグルカゴン溶液組成物が得られることを発見した。
【００７３】
グルカゴンのゲル化及び化学的安定性に様々な製剤成分が及ぼす影響を、以下の表にまとめる：
【数２】
2018527358.tif 000004
【００７４】
従って、上記目的のために同定され添加されたポリオールは、「ゲル化防止ポリオール」と呼ばれ、塩は、「安定化塩」と呼ばれる。ゲル化防止ポリオール又は安定化塩のメカニズムは知られておらず、先行技術において見出されていない。
【００７５】
ＩＩＩ．実施形態
１つの実施形態では、本発明は、グルカゴン、ゲル化防止ポリオール、及び酸を含む非ゲル化性組成物を提供し、ここで、前記組成物は、約２〜約５のｐＨを有する。
【００７６】
別の実施形態では、本発明は、グルカゴン、ゲル化防止ポリオール、酸、及び安定化塩を含む非ゲル化性及び化学的に安定な組成物を提供し、前記組成物は約２〜約５のｐＨを有する。
【００７７】
更に別の実施形態では、本発明は、グルカゴン、ゲル化防止ポリオール、酸、安定化塩、及び粘度低下剤を含む、非ゲル化性で、化学的に安定で、且つポンプ供給可能な組成物を提供し、ここで、前記組成物は、約２〜約５のｐＨを有する。
【００７８】
１つの実施形態では、製剤中のグルカゴンは、化学合成若しくはＤＮＡ組換え技術によって作製されるか、又は動物源に由来する。
【００７９】
好ましい実施形態では、グルカゴンは、化学合成又はＤＮＡ組換え技術によって作製される。
【００８０】
１つの実施形態では、ゲル化防止ポリオールは、プロピレングリコール、グリセロール（又はグリセリン）、ソルビトール、及びポリエチレングリコール、並びにそれらの混合物からなる群から選択される。
【００８１】
好ましい実施形態では、ゲル化防止ポリオールは、プロピレングリコール、グリセリン、又はそれらの組合せである。
【００８２】
１つの実施形態では、安定化塩は、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウム、又は亜鉛のカチオンと、酢酸塩、安息香酸塩、重亜硫酸塩、重炭酸塩、炭酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、メタ重亜硫酸塩、リン酸塩、硫酸塩、亜硫酸塩若しくは酒石酸塩の対イオンと、またはそれらの組合せによって形成される塩からなる群から選択される。
【００８３】
好ましい実施形態では、安定化塩は、塩化ナトリウム、酢酸ナトリウム、及び塩化カルシウムである。
【００８４】
１つの実施形態では、粘度−還元剤は、エタノール、オレイン酸エチル、若しくは中鎖トリグリセリド又はそれらの組合せからなる群から選択される。
【００８５】
好ましい実施形態では、粘度低下剤は、エタノールである。
【００８６】
１つの実施形態では、酸は、塩酸、硫酸、酢酸、クエン酸、リン酸、乳酸、酒石酸、又はメタンスルホン酸からなる群から選択される。
【００８７】
好ましい実施形態では、酸は、塩酸、硫酸、乳酸、及び酒石酸からなる群から選択される。
【００８８】
１つの実施形態では、本発明の組成物は、酸化防止剤を更に含有する。
【００８９】
好ましい実施形態では、酸化防止剤は、メチオニン、システイン、デキストロース、フルクトース、ラクトース、及びＥＤＴＡ若しくはエデト酸（ＥＤＴＡ）の塩、又はそれらの組合せを含む群から選択される。
【００９０】
より好ましい実施形態では、酸化防止剤は、メチオニンとＥＤＴＡとの組合せである。
【００９１】
１つの実施形態では、本発明の組成物は、水を含有する。
【００９２】
別の実施形態では、本発明の組成物は、実質的に水を含まない。
【００９３】
１つの実施形態では、本発明の組成物は、１ミリリットルにつき０．１〜５ｍｇのグルカゴンを含有する。
【００９４】
好ましい実施形態では、本発明の組成物は、１ミリリットルにつき０．５〜３ｍｇのグルカゴンを含有する。
【００９５】
より好ましい実施形態では、本発明の組成物は、１ミリリットルにつき約１ｍｇのグルカゴンを含有する。
【００９６】
更に別の好ましい実施形態では、本発明の組成物は、１ミリリットルにつき０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、及び３．０ｍｇのグルカゴンを含有する。
【００９７】
１つの実施形態では、ゲル化防止ポリオールは、約４０％〜９７％の最終濃度で存在する。
【００９８】
好ましい実施形態では、ゲル化防止ポリオールは、約７５％〜８５％の最終濃度で存在する。
【００９９】
より好ましい実施形態では、ゲル化防止ポリオールは、約６０％〜８０％の最終濃度で存在する。
【０１００】
別の実施形態では、ゲル化防止ポリオールは、約６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、又は９０％の最終濃度で存在する。
【０１０１】
１つの実施形態では、水は、約１％〜２０％の最終濃度で存在する。
【０１０２】
好ましい実施形態では、水は、約３％〜５％の最終濃度で存在する。
【０１０３】
より好ましい実施形態では、水は、約４％の最終濃度で存在する。
【０１０４】
別の実施形態では、水は、約３、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、又は５．０％の最終濃度で存在する。
【０１０５】
１つの実施形態では、安定化塩は、約０．１〜３％の最終濃度で存在する。
【０１０６】
好ましい実施形態では、安定化塩は、約０．５〜３％の最終濃度で存在する。
【０１０７】
より好ましい実施形態では、安定化塩は、約１％の最終濃度で存在する。
【０１０８】
別の実施形態では、安定化塩は、約０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、又は３．０％の最終濃度で存在する。
【０１０９】
１つの実施形態では、粘度低下剤は、約２％〜２０％の最終濃度で存在する。
【０１１０】
好ましい実施形態では、粘度低下剤は、約１２％〜１８％の最終濃度で存在する。
【０１１１】
より好ましい実施形態では、粘度低下剤は、約１５％の最終濃度で存在する。
【０１１２】
別の実施形態では、粘度低下剤は、約５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、又は２０％の最終濃度で存在する。
【０１１３】
１つの実施形態では、酸化防止剤は、メチオニンについて約０．１〜１％及びＥＤＴＡについて０．００１％〜０．１％の最終濃度で存在する。
【０１１４】
より好ましい実施形態では、酸化防止剤は、メチオニンについて約０．１〜０．５％及びＥＤＴＡについて０．０５％〜１％の最終濃度で存在する。
【０１１５】
別の実施形態では、酸化防止剤は、メチオニンについて約０．１５％及びＥＤＴＡについて約０．０１５％の最終濃度で存在する。
【０１１６】
１つの実施形態では、組成物のｐＨを達成するのに十分な量の酸が組成物に添加される。
【０１１７】
１つの実施形態では、組成物は、約５０〜２５０ｍＭの酸を含有する。実際の酸の量は、組成物のｐＨを達成するのに十分な量が添加される限り、酸の種類、使用されるグルカゴン、又は安定化塩の濃度に依存して変化し得る。
【０１１８】
１つの実施形態では、本発明の組成物は、約２〜約５のｐＨを有する。
【０１１９】
好ましい実施形態では、本発明の組成物は、約２．８〜約４．２のｐＨを有する。
【０１２０】
より好ましい実施形態では、本発明の組成物は、約３．４のｐＨを有する。
【０１２１】
別の実施形態では、本発明の組成物は、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、又は４．５のｐＨを有する。
【０１２２】
１つの実施形態では、本発明は、約０．１〜３ｍｇ／ｍＬのグルカゴン、約８０％〜９８％のプロピレングリコール、約０％〜２０％の水、及び組成物のｐＨを約２〜５に調整するのに十分な塩酸を含む溶液組成物を提供する。
【０１２３】
１つの実施形態では、本発明は、約０．１〜３ｍｇ／ｍＬのグルカゴン、約８０％〜９８％のグリセリン、約０％〜２０％の水、及び組成物のｐＨを約２〜５に調整するのに十分な塩酸を含む溶液組成物を提供する。
【０１２４】
１つの実施形態では、本発明は、約０．１〜２ｍｇ／ｍＬのグルカゴン、約６０％〜８０％のプロピレングリコール、約１０％〜３０％のグリセリン、約２％〜６％の水、及び組成物のｐＨを約３〜４．５に調整するのに十分な塩酸を含む溶液組成物を提供する。
【０１２５】
１つの実施形態では、本発明は、約０．１〜２ｍｇ／ｍＬのグルカゴン、６０％〜８０％のプロピレングリコール、１０％〜３０％のグリセリン、約２％〜６％の水、約０．５％〜１．５％の塩化ナトリウム、及び組成物のｐＨを約３．５〜４．５に調整するのに十分な塩酸を含む溶液組成物を提供する。
【０１２６】
１つの実施形態では、本発明は、約０．１〜２ｍｇ／ｍＬのグルカゴン、６０％〜８０％のプロピレングリコール、１０％〜３０％のグリセリン、約２％〜６％の水、約０．５％〜１．５％の酢酸ナトリウム、及び組成物のｐＨを約３．５〜４．５に調整するのに十分な塩酸を含む溶液組成物を提供する。
【０１２７】
１つの実施形態では、本発明は、約０．１〜２ｍｇ／ｍＬのグルカゴン、６０％〜８０％のプロピレングリコール、１０％〜３０％のグリセリン、約２％〜６％の水、約０．５％〜１．５％の塩化ナトリウム、及び組成物のｐＨを約３．５〜４．５に調整するのに十分な塩酸を含む溶液組成物を提供する。
【０１２８】
好ましい実施形態では、本発明は、約１ｍｇ／ｍＬのグルカゴン、約８０％のプロピレングリコール、約４％の水、約１％の塩化ナトリウム、及び組成物のｐＨを約３．５〜４．５に調整するのに十分な塩酸を含む溶液組成物を提供する。
【０１２９】
より好ましい実施形態では、本発明は、約１ｍｇ／ｍＬのグルカゴン、約６５％のプロピレングリコール、約１５％のエタノール、約４％の水、約１％の塩化ナトリウム、約０．１５％のメチオニン、約０．０１５％のＥＤＴＡ二ナトリウム二水和物、及び組成物のｐＨを約３．５〜４．５に調整するのに十分な塩酸を含む溶液組成物を提供する。
【０１３０】
１つの実施形態では、本発明の組成物は、体温（３０〜４０℃）で３〜７日間の貯蔵後にゲル不含であり続ける。
【０１３１】
別の実施形態では、本発明の組成物は、５℃で２４ヶ月間に相当するストレス条件下での貯蔵後にゲル不含であり続ける。
【０１３２】
好ましい実施形態では、本発明の組成物は、２５℃で１２ヶ月間に相当するストレス条件下での貯蔵後にゲル不含であり続ける。
【０１３３】
１つの実施形態では、本発明の組成物は、体温（３０〜４０℃）で３〜７日間の貯蔵後に、その初期グルカゴン濃度の６５％以上を保持する。
【０１３４】
別の実施形態では、本発明の組成物は、５℃で２４ヶ月間に相当するストレス条件下での貯蔵後に、その初期グルカゴン濃度の６５％以上を保持する。６５％の許容限界値は、米国薬局方「注射用グルカゴン」モノグラフ（Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ  Ｇｌｕｃａｇｏｎ  ｆｏｒ  Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ  Ｍｏｎｏｇｒａｐｈ）（ＵＳＰ−ＮＦ３６）によって定義されている。ストレス条件は、アレニウス計算（実施例７）に基づいて、５℃で２４ヶ月間に相当する。
【０１３５】
好ましい実施形態では、本発明の組成物は、２５℃で１２ヶ月間に相当するストレス条件下での貯蔵後に、その初期グルカゴン濃度の６５％以上を保持する。６５％の許容限界値は、米国薬局方「注射用グルカゴン」モノグラフ（Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ  Ｇｌｕｃａｇｏｎ  ｆｏｒ  Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ  Ｍｏｎｏｇｒａｐｈ）（ＵＳＰ−ＮＦ３６）によって定義されている。ストレス条件は、アレニウス計算（実施例７）に基づいて、２５℃で１２ヶ月間に相当する。
【０１３６】
１つの実施形態では、本発明の組成物は、室温で５０センチポアズ以下の粘度を有する。
【０１３７】
好ましい実施形態では、本発明の組成物は、ポンプ供給可能である。
【０１３８】
好ましい実施形態では、本発明の組成物は、すぐに使用することができる。
【０１３９】
１つの実施形態では、本発明の組成物は、速効性である。
【０１４０】
好ましい実施形態では、本発明の組成物は、皮下注射又は筋肉内注射による１ｍｇの成人ヒト用量に等しい用量の摂取後に、動物において血中グルコース値を３０分以内に１００ｍｇ／ｄｌ超に上昇させることができる。
【０１４１】
１つの実施形態では、本発明の組成物は、シリンジ若しくはインスリンポンプ又は他の注射デバイスによって投与される。
【０１４２】
１つの実施形態では、本発明の組成物は、濾過可能である。
【０１４３】
１つの実施形態では、本発明の組成物は、安全な成分を含む。
【０１４４】
好ましい実施形態では、本発明の組成物は、注射可能な薬物中で使用するためにＦＤＡによって承認された成分のみを含む。
【０１４５】
１つの実施形態では、本発明の組成物は、低血糖症を治療又は予防するために使用される。
【０１４６】
ＩＶ．製造方法
１つの実施形態では、本発明は、グルカゴンを含む溶液組成物を調製する方法を提供し、前記方法は、
工程１．ポリオール、酸化防止剤、安定化塩、粘度低下剤（任意）、及び水（任意）を結合（ｃｏｍｂｉｎｅ）並びに混合することで賦形剤（ｖｅｈｉｃｌｅ）を形成する；
工程２．賦形剤のｐＨを調整する；
工程３．グルカゴンを賦形剤に添加して混合することで溶解する；
工程４．必要に応じてｐＨを最終目標ｐＨに調整することで最終溶液を得る；
工程５．最終溶液を０．２ミクロンフィルターに通して滅菌する；並びに
工程６．濾過した溶液をバイアルまたはシリンジに充填する
を含む。
【０１４７】
特定の実施形態では、最終溶液が透明で目標とされたｐＨである限り、上記工程の順序は、変更又は組み合わせられるか、あるいは追加の工程が加えられる。
【０１４８】
特定の実施形態では、添加又は混合の方法の順序は、最終溶液が透明で濾過可能である限り変更される。
【０１４９】
Ｖ．使用の方法
１つの実施形態では、本発明の組成物は、ガラスバイアル又はアンプルに充填された液体である。液体は、使用前にシリンジに引き入れられる。
【０１５０】
好ましい実施形態では、本発明の組成物は、予め充填されたシリンジ又は皮下注射針が取り付けられた他の注射デバイスにおいて提供され、すぐに注射することができる。この特徴は、緊急低血糖救助のために特に望ましい。重度の低血糖症を一変させるために使用される典型的な成人用量は、グルカゴン１ｍｇである。
【０１５１】
特定の実施形態では、本発明の組成物は、静脈内、筋肉内、又は皮下注射によって投与される。
【０１５２】
別の好ましい実施形態では、本発明の組成物を、カートリッジ（リザーバー）又はバイアルに充填し、インスリンポンプに取り付け、その液体内容物を、注入セットを通して送達する。ポンプ送達によってグルカゴンを使用するために、（製造元で予め充填された、又はエンドユーザーによって自己充填された）ポンプカートリッジを、ポンプデバイスに装填する。使用期間（例えば３〜７日間）の終了時に、残りのグルカゴン溶液を廃棄し、新しいグルカゴン溶液をポンプに供給する。ポンプによって送達されるグルカゴンの用量は、患者の必要性によって決定されることになる。プロトタイプのインスリン−グルカゴン２ホルモンポンプの研究では、２４時間にわたって血中グルコース制御を達成するために使用されるグルカゴンの量は、成人では０．１２０〜０．３７７ｍｇであると報告されていた（Ｅｌ−Ｋｈａｔｉｂ，Ｆ．ｅｔ  ａｌ．２０１０．Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．２：２７ｒａ２７）。
【０１５３】
別の好ましい実施形態では、本発明の組成物は、抗菌防腐剤を含有し、バイアル又は注射デバイスに充填される（即ち、数ある構成の中でも、オートインジェクターにおいて予め充填されたシリンジ又はバイアル）。バイアル／シリンジは、複数回投与のための十分な量を含有し、前記内容物を、複数回注射において患者に投与することができる。毎回、少量で変化する容量の内容物が注入される。この複数回投与及び可変投与量の特徴は、低用量のグルカゴンが使用される、放射線試験の間に胃腸運動を阻害するための特定の放射線手法にとって特に望ましい。溶液中に抗菌防腐剤を添加することで、バイアルの複数回穿刺後の潜在的な微生物増殖により、同じプレフィルドシリンジを使用した複数回少用量又は複数回注射を排除する必要がなくなる。抗菌防腐剤は、溶液を体温に数日間曝露する可能性のある２ホルモンポンプの適用に望ましい。
【実施例】
【０１５４】
本発明は、以下の非限定的な実施例を参照することによって、更に理解されよう。
【０１５５】
実施例１：水中及びポリオール中でのグルカゴンのゲル化の比較
この研究の目的は、溶媒がグルカゴンのゲル化に及ぼす影響を比較することであった。各試験組成物について、目的の成分を結合及び混合することで賦形剤を形成し、これにグルカゴンを添加して１ｍｇ／ｍＬの濃度を得た。いくつかの賦形剤に、酸（ＨＣｌ）を添加した。各組成物の最終ｐＨを記録した。各組成物の外観は、調製直後（初期）及び室温で１０日間の貯蔵後に記録した。結果を第１表に示す。
【０１５６】
【表１】
2018527358.tif 000005
【０１５７】
実施例２：ｐＨが水及びポリオール中でのグルカゴンのゲル化に及ぼす影響
この研究の目的は、２ｍｇ／ｍＬの２つの溶媒（水又はプロピレングリコール（ＰＧ））中でのグルカゴンのゲル化にｐＨが及ぼす影響を比較することであった。試験組成物を調製するために、グルカゴン粉末を最初に水又はプロピレングリコール中に懸濁させた。懸濁液を５つの部分に分け、ＨＣｌを使用して各部分のｐＨを最終ｐＨに調整した。各組成物の外観を、室温で１６時間の撹拌後及び室温で１０日間の貯蔵後に記録した。結果を第２表に示す。
【０１５８】
【表２】
2018527358.tif 000006
【０１５９】
実施例３：チオフラビンＴを使用した製剤中のグルカゴンゲル又はフィブリルの検出
【０１６０】
蛍光色素結合試験
この試験の目的は、チオフラビンＴ（ＴｈＴ）蛍光色素結合を使用して製剤中のグルカゴンゲル又はフィブリルを検出することであった。検出は、１つには内部標準の８−アニリノ−１−ナフタレンスルホン酸ヘミマグネシウム塩水和物（ＡＮＳＡ）と、１つにはＴｈＴ−グルカゴン結合物質の２つの波長測定値を使用することよって達成される。ＴｈＴは、グルカゴンゲル又はフィブリルを含むベータシート構造との相互作用により蛍光を発する色素である。４時間の静止状態での室温インキュベーション後、各試験溶液の蛍光を測定した。この方法は、試験製剤におけるゲル形成傾向を評価することを意図している。
【０１６１】
この試験における本発明（Ｆ−６１８）の溶液組成物は、０．１％のグルカゴン、３０％のグリセリン、２％の塩化カルシウム、０．１５％のＬ−メチオニン、０．０１５％のＥＤＴＡ二ナトリウム二水和物、４％の水、約４８．８％のプロピレングリコールを含有しており、ＨＣｌを添加することでｐＨを３．４に調整した。比較のために、グルカゴン・エマージェンシー・キット（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）も試験した。
【０１６２】
試験結果（以下）は、グルカゴン・エマージェンシー・キットから調製した溶液が、３７℃で７日後にゲルを形成するのに対して、Ｆ−６１８は、同じ条件下で、それに４０℃で２１日間又は６０℃で１５日間の貯蔵後にもゲル不含であり続けた。
【０１６３】
【表３】
2018527358.tif 000007
【０１６４】
実施例４：本発明のグルカゴン溶液組成物の調製
本発明に基づくいくつかの典型的なグルカゴン溶液製剤の組成を第３表に示す。
【０１６５】
【表４】
2018527358.tif 000008
【０１６６】
本発明のグルカゴン溶液を調製するための１つのプロセスを以下に示す：
１．エデト酸二ナトリウム二水和物（ＥＤＴＡ）、Ｌ−メチオニン、ＨＣｌ、及び水を秤量して混合することで溶液＃１を得る。
２．エタノール、プロピレングリコール、及びグリセロールを秤量して混合することで溶液＃２を得る。
３．グルカゴンを秤量する。
４．グルカゴンを溶液＃１に添加し、よく混合して溶解し溶液＃３を形成する。
５．追加のＨＣｌを溶液＃３に添加し、よく混合して透明な溶液を得る（溶液＃４）。
６．安定化塩（酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、又は塩化カルシウム）を溶液＃４に添加し、よく混合して溶液＃５を得る。
７．溶液＃２を溶液＃５に添加し、よく混合する。
８．ＨＣｌ又はＮａＯＨを使用して目標ｐＨに調整することで最終溶液を得る。
９．最終溶液を０．２ミクロンフィルターに通す。
１０．濾過した溶液をガラスバイアルに充填する。ゴム栓でバイアルをクリンプシールする。
【０１６７】
選択的に、本発明のグルカゴン溶液は、以下のプロセスによって調製することができる：
１．グルカゴンを除く全ての成分を秤量して混合することで溶液＃１を得る。
２．ＨＣ１を使用してｐＨを目標付近に調整することで溶液＃２を得る。
３．溶液＃２を必要に応じてフィルターに通すことで、溶解していない任意の固形分を除去する。
４．グルカゴンを秤量し、グルカゴンを（濾過した）溶液＃２に添加し、よく混合して溶解する。
５．ＨＣｌ又はＮａＯＨを使用して目標ｐＨに調整することで最終溶液を得る。
６．最終溶液を０．２ミクロンフィルターに通す。
７．濾過した溶液をガラスバイアルに充填する。ゴム栓でバイアルをクリンプシールする。
【０１６８】
実施例５：グルカゴン安定性試験および安定性仕様に関する方法
グルカゴンアッセイ（ｇｌｕｃａｇｏｎ  ＡＳＳＡＹ）及び不純物（ＩＭＰＵＲＩＴＩＥＳ）を測定するためのＨＰＬＣ法は、「グルカゴン（Ｇｌｕｃａｇｏｎ）」及び「注射用グルカゴン（Ｇｌｕｃａｇｏｎ  ｆｏｒ  Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）」のＵＳＰ  ３６モノグラフに提供されている。このＵＳＰ  ＨＰＬＣ法を使用してグルカゴンアッセイ及び不純物を測定し、本発明のグルカゴン溶液製剤中でのグルカゴン化学的安定性を評価した。ＨＰＬＣ条件を以下の第５表に列記する。
【０１６９】
【表５】
2018527358.tif 000009
【０１７０】
この方法により、グルカゴン濃度（アッセイ）及び不純物の測定が可能になる。アッセイ値は、グルカゴンのピーク面積に比例し、不純物は、全ピークにわたるグルカゴン関連の不純物ピークのピーク面積百分率に基づいて計算される。グルカゴン脱アミド産物のピーク（デスアミドグルカゴン）も計算される（図２）。本発明の溶液製剤中でのグルカゴンの相対的安定性は、アッセイの損失速度、同じ貯蔵条件下で形成された不純物全体の増加又はデスアミドグルカゴンの増加を比較することによって測定することができる。
【０１７１】
実施例６：安定化塩の添加による本発明の溶液製剤中でのグルカゴン安定性の改善
実施例４に記載したのと同じ方法を使用して以下の溶液製剤を調製し、実施例５に記載の方法を使用してグルカゴン安定性の試験及び比較を行った。各製剤を４０℃×７日間で貯蔵してグルカゴンを分解させた。アッセイの損失速度（μｇ／ｍＬ／日）、不純物全体の増加（％ピーク面積）、及びデスアミドグルカゴンの増加（％ピーク面積）で表される各製剤の相対的安定性を第６表にまとめる。
【０１７２】
【表６】
2018527358.tif 000010
【０１７３】
このデータは、安定化塩の添加により、本発明の溶液製剤中でのアッセイの損失速度及び不純物及びデスアミドグルカゴンの形成が減少したことを示す。
【０１７４】
実施例７：本発明のグルカゴン溶液のグルカゴン分解速度及び貯蔵寿命の推定値のアレニウス研究
２つのグルカゴン溶液製剤（Ｆ−６１８及びＦ−６２１、前で記載した実施例４を作製する組成物及び方法）を、それらの化学的安定性について評価し、アレニウス式を使用してそれらの貯蔵寿命の推定値を計算した。Ｆ−６１８及びＦ−６２１を、４０℃、５０℃、及び５５℃で貯蔵し、実施例５に記載のＨＰＬＣ法を使用してグルカゴンアッセイについて試験した。各温度で、測定したアッセイ値を使用してグルカゴン分解速度（図３）を計算し、その速度の値を使用してアレニウス式を確立し、次いで、これを使用して５℃（冷蔵）及び２５℃（室温）での貯蔵寿命を計算または予測した（第７表）。貯蔵寿命を定義するために、有効期限の時点でのアッセイの６５％以上のＵＳＰ要件を使用した。
【０１７５】
【表７】
2018527358.tif 000011
【０１７６】
この研究は、本発明のグルカゴン溶液が、５℃で２４ヶ月超又は２５℃で１２ヶ月超の予測貯蔵寿命を有することを示す。これらの製剤は、（１）体温若しくは体温付近（３０〜４０℃）で７日後に、（２）５℃で２４ヶ月間に相当するストレス条件下での貯蔵後に、又は（３）２５℃で１２ヶ月間のストレス条件下での貯蔵後に、初期グルカゴン濃度の６５％以上を保持することができ、注射用グルカゴンのＵＳＰアッセイ要件を満たし得ることから化学的に安定であるとみなすことができる。
【０１７７】
実施例８  含水率がグルカゴン安定性に及ぼす影響
この研究の目的は、Ｆ−５７３（先の実施例４に記載の組成物）におけるグルカゴン安定性に含水率が及ぼす影響を調べることであった。含水率が０％〜２０％の範囲で変化するＦ−５７３製剤溶液を、以下に示すように調製した：
（１）ＥＤＴＡ、メチオニン、ＨＣｌ、及び水を混合して溶液＃１を形成する。
（２）グルカゴンを溶液＃１に添加して溶液＃２を形成する。
（３）凍結乾燥により水を除去して乾燥固体を形成する。
（４）無水エタノールとプロピレングリコールの組合せを乾燥固体に添加して混合することで固体を溶解する。
（５）ＨＣｌを使用してｐＨを約３．３に調整する。
（６）目標含有率レベル（最終重量の０％〜２０％）になるまで水を添加する。
（７）プロピレングリコールを最終重量になるまで添加して混合することで最終溶液を得る。
（８）最終溶液をガラスバイアルに分配してシールする。
（９）バイアルを２５℃、３０℃、及び４０℃に置く。
（１０）実施例５に記載のＨＰＬＣ法を使用して、グルカゴン安定性のために経時的にバイアルを試験する。
【０１７８】
【表８】
2018527358.tif 000012
【０１７９】
データに基づいて、本発明の溶液製剤中の含水率は、０％〜２０％、好ましくは１％〜５％、又はより好ましくは２％〜５％の間で変動し得る。
【０１８０】
実施例９：ｐＨがグルカゴン安定性に及ぼす影響
本発明の溶液組成物、Ｆ−５９０（実施例４で先に記載した組成物および製造方法）を調製し、いくつかの部分に分けた。各部分について、ｐＨを、ｐＨ２．８〜６．９の異なるｐＨになるようにＨＣｌで調整した。次いで、溶液をガラスバイアルに充填してシールし、２５℃及び４０℃に置き、実施例５に記載のＨＰＬＣ法を用いて、経時的なグルカゴン安定性について分析した。安定性試験結果を第８表に示す。
【０１８１】
【数３】
2018527358.tif 000013
【０１８２】
グルカゴン安定性データは、本発明の溶液製剤のｐＨが、５以下が好ましく、より好ましくは２．８〜４．２であることを示す。
【０１８３】
実施例１０：他の添加剤によるグルカゴン安定性の改善
この研究の目的は、安定化塩に加えて、他の添加剤も、本組成物の非ゲル化性溶液製剤中でのグルカゴン安定性を改善できるかどうかを調べることであった。この研究で評価した添加剤には、（１）アミノ酸（グリシン、プロリン、アスパラギン酸、アスパラギン、グルタミン、グルタミン酸、プロリン、ヒスチジン、リシン）；（２）リン脂質（卵レシチン、大豆レシチン、および水添大豆レシチン）；（３）炭水化物および糖アルコール（ラクトース、マンニトール、ソルビトール）；（４）塩（酢酸アンモニウム、酢酸ナトリウム）；（５）親水性ポリマー（カルボキシメチルセルロースナトリウム、ゼラチン）；（６）防腐剤（ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル）；（７）錯化剤（塩化亜鉛、γ−シクロデキストリン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン）；（８）油（中鎖トリグリセリド）が含まれていた。各添加剤を、Ｆ−５７３溶液（実施例４に記載）中に個別に添加した。実施例５に記載のＨＰＬＣ法を使用して、各製剤についてグルカゴン分解速度を測定した。
【０１８４】
驚くべきことに、酢酸ナトリウム等の塩は、Ｆ−５７３中でのグルカゴン化学安定性を有意に改善したが、試験した他の添加剤は、有意に改善しなかったことが見出された。
【０１８５】
実施例１０：グルカゴンの薬力学的研究
ラットへの筋肉内注射後のＦ−６１８及びＦ−６２１（実施例４）のグルカゴンの薬力学（即ち、血中グルコース対時間）を、グルカゴン・エマージェンシー・キット（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）と比較することによって、本発明のグルカゴン溶液製剤中でのグルカゴンの生物活性を確認した。
【０１８６】
グルカゴンの薬力学を測定するために、雄のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）ラットに、試験製剤中０．１ｍｇ／ｋｇのグルカゴンを筋肉内投与した。ラットの用量は、体表面積に基づく比例関係を使用して、ヒト低血糖症救助用量（ヒト６０ｋｇ当たり１ｍｇ）と等価に計算した（Ｒｅａｇａｎ−Ｓｈａｗ，Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．２００８．Ｔｈｅ  ＦＡＳＥＢ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ２２（３）：６５９−６６１）。投与してから０、１０、２０、３０、４５、６０、及び９０分後に、少量の血液サンプル（１０〜２０μＬ）を尾の先端から採取した。血中グルコース濃度は、グルコメーターを使用して測定した。
【０１８７】
Ｆ−６１８、Ｆ−６２１、及びグルカゴン・エマージェンシー・キットの代表的な薬力学（ＰＤ）プロファイルを図４に示す。この研究は、本発明のグルカゴン溶液製剤が速効性であり、血中グルコース値を即座に上昇させ、２０分以内に最大値に達することを実証した。本発明のグルカゴン溶液製剤のＰＤプロファイルは、グルカゴン・エマージェンシー・キットのプロファイルと類似していた。
【０１８８】
実施例１１：ポンプ供給可能性の評価
この研究の目的は、インスリンポンプを使用して本発明の溶液組成物を送達する精度を測定することであった。Ｍｅｄｔｒｏｎｉｃ  ＭｉｎｉＭｅｄ  Ｐａｒａｄｉｇｍ  ７２２  インスリンポンプ（ＭＭＴ−７２２ＮＡＳ参照）には、注入セット（Ｍｅｄｔｒｏｎｉｃ  Ｑｕｉｃｋ−Ｓｅｔ  Ｐａｒａｄｉｇｍ  Ｉｎｆｕｓｉｏｎ  Ｓｅｔ（ＭＭＴ−３９６参照））が備わっていた。ポンプリザーバー（Ｍｅｄｔｒｏｎｉｃ  Ｐａｒａｄｉｇｍ  Ｒｅｓｅｒｖｏｉｒ（３ｍＬ）（ＭＭＴ−３３２Ａ参照））に、対照として水を、又は本発明のグルカゴン溶液（先の実施例４で記載したＦ−６２１）を充填した。ポンプを最初にプライミングした後、「イージーボーラス（Ｅａｓｙ  Ｂｏｌｕｓ）」機能を使用して所望の容量を注射した。注入セットから排出された実際の容量を計量した。送達された容量の精度を、設定容量と実際に送達された容量とを比較することによって測定した（以下の表）。このデータは、本発明のＦ−６２１溶液がインスリンポンプによって正確に送達され得ることを示した。
【０１８９】
【数４】
2018527358.tif 000014
【０１９０】
実施例１２：本発明のグルカゴン製剤の生物学的活性
本発明の製剤の生物学的活性を、２匹の雌のＳｉｎｃｌａｉｒブタ（５０〜６０ｋｇ）で試験した。各研究の間、動物を鎮静させ、オクトレオチドを注入した（２．７〜３．６ｍｃｇ／ｋｇ／ｈｒ）。各注射の間隔は少なくとも１週間であった。ゼロ時間では、グルカゴンのボーラスを、後部わき腹に筋肉内注射した（８ｍｃｇ／ｋｇ）。研究の間、以下の時間（分）で２ｍＬの静脈血サンプルを採取した：−１０、−５、０、５、１０、１５、２０、３０、４５、６０、７５、９０、１０５、１２０。採取直後にＨｅｍｏｃｕｅ  ２０１アナライザーを使用して血中グルコースの測定を行った。血漿グルカゴンについては、静脈血サンプルを凝固させ、次いで血漿を採取するために遠心分離し、グルカゴンＲＩＡキット（Ｌｉｎｃｏ，Ｃａｔ＃ＧＬ−３２Ｋ）を使用して分析する前に−２０℃で貯蔵した。薬物動態分析ソフトウェアを使用することにより、ＡＵＣ、ｔ１／２、Ｔｍａｘ、Ｃｍａｘ、クリアランス等の標準ＰＫパラメーターを得るためのＰＫ分析を決定した。
【０１９１】
図５（上部）は、市販のグルカゴン（ＧｌｕｃａＧｅｎ（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ  Ａ／Ｓ））及び本発明のグルカゴン製剤（Ｆ−６４８）によって、Ｓｉｎｃｌａｉｒブタにおいて生じた個々の薬物動態（ＰＫ）プロファイルを示す。各ＩＭ注射の用量は、グルカゴン０．８ｍｃｇ／ｋｇであった。ＧｌｕｃａＧｅｎ及びＦ−６４８はともに、本質的に同一の急速な上昇及び血漿グルカゴンの最大濃度（Ｃｍａｘ）をもたらした。
【０１９２】
図５（下部）は、市販のグルカゴン（ＧｌｕｃａＧｅｎ（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ  Ａ／Ｓ））及び本発明のグルカゴン製剤（Ｆ−６４８）によって、Ｓｉｎｃｌａｉｒブタにおいて生じた個々の薬力学的（ＰＤ）プロファイルを示す。各ＩＭ注射の用量は、０．８ｍｃｇ／ｋｇであった。どちらの試験品も、速い割合の血中グルコース上昇を引き起こした。しかしながら、Ｆ−６４８によって生じた最大血中グルコース上昇は、ＧｌｕｃａＧｅｎよりも大きく、Ｆ−６４８は、血中グルコース上昇において少なくともＧｌｕｃａＧｅｎほどの効力があったことを示している。
【０１９３】
ＧｌｕｃａＧｅｎ又はＦ−６４８の筋肉内注射に応答して、注射部位反応も動物全体のいかなる有害反応も観察されず、Ｆ−６４８は、これらの観点で参照リスト薬物と同じように安全であることを示している。
【０１９４】
実施例１３：本発明のグルカゴン溶液の長期安定性
本発明の２つの製剤、Ｆ−６２１及びＦ−６４８を調製し、２型ガラスバイアルに充填した。バイアルは、−２０、２〜８、２５、３０、及び４０℃で直立して貯蔵した。グルカゴン濃度及び純度は、ＵＳＰ  ＨＰＬＣ法を使用して測定した。２４ヶ月までの貯蔵から得られた安定性データを、以下の第９表及び第１０表に示す。両方の製剤はいずれも、２〜８℃で２４ヶ月間、２５℃で１２ヶ月間、３０℃で６ヶ月間、及び４０℃で３ヶ月間の貯蔵後に液体であり、すぐに使用することができ、非ゲル化性であり、注射可能であり、化学的に安定であり、且つポンプ供給可能である。
【０１９５】
【表９】
2018527358.tif 000015
【０１９６】
【表１０】
2018527358.tif 000016
【０１９７】
本発明の改変及び変形は、前述の詳細な説明から当業者には明らかであり、添付の特許請求の範囲内に含まれることが意図される。本明細書に引用される全ての参考文献の教示は、参照により具体的に援用される。
【図１】
2018527358.tif 000017
【図２】
2018527358.tif 000018
【図３】
2018527358.tif 000019
【図４】
2018527358.tif 000020
【図５】
2018527358.tif 000021
【国際調査報告】
2018527358.tif 000022
2018527358.tif 000023
2018527358.tif 000024