(57)【要約】  抗ＣＤ１２２および／またはγｃ抗体およびその断片を開示する。こうした抗体および断片を含む組成物、ならびにこれらの使用およびこれらを用いた方法もまた開示する。
2018527912.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣＤ１２２および共通γ鎖（γｃ）に結合可能な、場合によって単離された、抗体または抗原結合断片。
【請求項２】
二重特異性抗体または二重特異性抗原結合断片である、請求項１記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項３】
アミノ酸配列ｉ）からｖｉ）：
【化１】
2018527912.tif 000029
あるいは配列ｉ）〜ｖｉ）の１またはそれより多くにおいて、１または２または３アミノ酸が別のアミノ酸で置換されているその変異体、式中、Ｘ１＝ＨまたはＤ；  Ｘ２＝ＶまたはＩ；  Ｘ３＝Ｉ、ＮまたはＦ；  Ｘ４＝ＰまたはＡ；  Ｘ５＝ＬまたはＶ；  Ｘ６＝ＭまたはＩ；およびＸ７＝ＹまたはＮである、を含む、ＣＤ１２２に結合可能な、場合によって単離された、抗体または抗原結合断片。
【請求項４】
ＬＣ−ＣＤＲ１が、ＴＧＴＳＳＤＩＧＨＹＤＦＶＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２）、ＴＧＴＳＳＤＩＧＤＹＤＦＶＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８）、ＴＧＴＳＳＤＩＧＨＹＤＦＩＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５）、ＲＡＧＱＡＩＳＳＷＬＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６）、ＱＡＳＱＤＩＧＮＹＬＮ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：  １０）、またはＴＲＳＳＧＳＩＡＳＮＹＶＱ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：  １４）の１つである、請求項３記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項５】
ＬＣ−ＣＤＲ２が、ＤＩＮＮＲＰＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３）、ＤＮＮＮＲＰＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０）、ＤＦＮＮＲＰＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６）、ＤＩＮＮＲＡＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２）、ＫＡＳＮＬＥＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７）、ＤＡＳＮＬＥＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１）、またはＤＤＮＱＲＰＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５）の１つである、請求項３または請求項４記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項６】
ＬＣ−ＣＤＲ３が、ＳＡＹＴＳＳＤＴＬＶ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４）、ＳＡＹＴＳＳＤＴＶＶ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２）、ＱＹＱＳＹＰＹＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８）、ＬＱＬＹＤＹＰＬＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２）、またはＱＳＳＨＳＴＡＶＶ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６）の１つである、請求項３〜５のいずれか一項記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項７】
ＨＣ−ＣＤＲ１が、ＮＹＹＭＨ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６）、ＮＹＹＩＨ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４）、ＴＹＡＭＨ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４０）、ＳＹＡＭＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４４）、またはＧＹＹＷＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８）の１つである、請求項３〜６のいずれか一項記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項８】
ＨＣ−ＣＤＲ２が、ＡＩＭＰＳＲＧＧＴＳＹＰＱＫＦＱＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３７）、ＷＩＮＴＧＮＧＮＴＫＹＳＱＮＦＱＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４１）、ＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４５）、またはＥＩＮＨＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４９）の１つである、請求項３〜７のいずれか一項記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項９】
ＨＣ−ＣＤＲ３が、ＧＥＹＹＹＤＳＳＧＹＹＹ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３８）、ＧＥＹＹＹＤＳＳＧＹＹＮ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５２）、ＤＬＧＱＬＥＲＬＹＦＷ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４２）、ＤＬＧＤＹ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６）、またはＳＳＳＧＤＡＦＤ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５０）の１つである、請求項３〜８のいずれか一項記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項１０】
以下のＣＤＲ：
【化２】
2018527912.tif 000030
を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を有する、請求項３〜９のいずれか一項記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項１１】
以下のＣＤＲ：
【化３】
2018527912.tif 000031
を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を有する、請求項３〜９のいずれか一項記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項１２】
以下のＣＤＲ：
【化４】
2018527912.tif 000032
を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を有する、請求項３〜９のいずれか一項記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項１３】
以下のＣＤＲ：
【化５】
2018527912.tif 000033
を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を有する、請求項３〜９のいずれか一項記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項１４】
以下のＣＤＲ：
【化６】
2018527912.tif 000034
を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を有する、請求項３〜９のいずれか一項記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項１５】
以下のＣＤＲ：
【化７】
2018527912.tif 000035
を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を有する、請求項３〜９のいずれか一項記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項１６】
以下のＣＤＲ：
【化８】
2018527912.tif 000036
を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を有する、請求項３〜９のいずれか一項記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項１７】
以下のＣＤＲ：
【化９】
2018527912.tif 000037
を取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を有する、請求項３〜９のいずれか一項記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項１８】
以下のＣＤＲ：
【化１０】
2018527912.tif 000038
を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を有する、請求項３〜９のいずれか一項記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項１９】
以下のＣＤＲ：
【化１１】
2018527912.tif 000039
を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を有する、請求項３〜９のいずれか一項記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項２０】
以下のＣＤＲ：
【化１２】
2018527912.tif 000040
を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を有する、請求項３〜９のいずれか一項記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項２１】
以下のＣＤＲ：
【化１３】
2018527912.tif 000041
を取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を有する、請求項３〜２０のいずれか一項記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項２２】
以下のＣＤＲ：
【化１４】
2018527912.tif 000042
を取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を有する、請求項３〜２０のいずれか一項記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項２３】
以下のＣＤＲ：
【化１５】
2018527912.tif 000043
を取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を有する、請求項３〜２０のいずれか一項記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項２４】
以下のＣＤＲ：
【化１６】
2018527912.tif 000044
を取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を有する、請求項３〜２０のいずれか一項記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項２５】
以下のＣＤＲ：
【化１７】
2018527912.tif 000045
を取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を有する、請求項３〜２０のいずれか一項記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項２６】
以下のＣＤＲ：
【化１８】
2018527912.tif 000046
を取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を有する、請求項３〜２０のいずれか一項記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項２７】
ＣＤ１２２に結合可能であり、軽鎖および重鎖可変領域配列を含む、場合によって単離された、抗体または抗原結合断片であって：
軽鎖が、ＬＣ−ＣＤＲ１：  ＴＧＴＳＳＤＩＧＸ１ＹＤＦＸ２Ｓ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８５）、ＲＡＧＱＡＩＳＳＷＬＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６）；  ＱＡＳＱＤＩＧＮＹＬＮ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０）；またはＴＲＳＳＧＳＩＡＳＮＹＶＱ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４）の１つ；  ＬＣ−ＣＤＲ２：  ＤＸ３ＮＮＲＸ４Ｓ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８６）；  ＫＡＳＮＬＥＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７）；  ＤＡＳＮＬＥＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１）；またはＤＤＮＱＲＰＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５）の１つ；  ＬＣ−ＣＤＲ３：  ＳＡＹＴＳＳＤＴＸ５Ｖ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８７）；ＱＱＹＱＳＹＰＹＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８）；  ＬＱＬＹＤＹＰＬＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２）；またはＱＳＳＨＳＴＡＶＶ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６）の１つに、少なくとも８５％の全体の配列同一性を有する、ＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、ＬＣ−ＣＤＲ３を含み、そして
重鎖が、ＨＣ−ＣＤＲ１：  ＮＹＹＸ６Ｈ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８８）；  ＴＹＡＭＨ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４０）；  ＳＹＡＭＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４４）；またはＧＹＹＷＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８）の１つ；  ＨＣ−ＣＤＲ２：  ＡＩＭＰＳＲＧＧＴＳＹＰＱＫＦＱＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３７）；  ＷＩＮＴＧＮＧＮＴＫＹＳＱＮＦＱＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４１）；  ＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４５）；またはＥＩＮＨＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４９）の１つ；  ＨＣ−ＣＤＲ３：  ＧＥＹＹＹＤＳＳＧＹＹＸ７（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８９）；  ＤＬＧＱＬＥＲＬＹＦＷ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４２）；  ＤＬＧＤＹ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６）；またはＳＳＳＧＤＡＦＤ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５０）の１つに、少なくとも８５％の全体の配列同一性を有する、ＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、ＨＣ−ＣＤＲ３を含む；
式中、Χ１＝ＨまたはＤ；  Ｘ２＝ＶまたはＩ；  Ｘ３＝Ｉ、ＮまたはＦ；  Ｘ４＝ＰまたはＡ；  Ｘ５＝ＬまたはＶ；  Ｘ６＝ＭまたはＩ；およびＸ７＝ＹまたはＮである、前記抗体または抗原結合断片。
【請求項２８】
ＣＤ１２２に結合可能であり、場合によって単離された、軽鎖および重鎖可変領域配列を含む抗体または抗原結合断片であって：
軽鎖配列が、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１、１７、１９、２１、２３、２４、２７、２８、２９、３０、３１、３３、３４、１４８、１４９、５、９、または１３（図１）の１つの軽鎖配列に少なくとも８５％の配列同一性を有し、そして
重鎖配列が、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３５、５１、５３、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、１５０、１５１、３９、４３、または４７（図２）の１つの重鎖配列に少なくとも８５％の配列同一性を有する
前記抗体または抗原結合断片。
【請求項２９】
ＣＤ１２２に結合可能であり、場合によって単離された、二重特異性抗体または二重特異性抗原結合断片である抗体または抗原結合断片であって、（ｉ）請求項３〜２８のいずれか一項記載の抗原結合断片、および（ｉｉ）共通γ鎖（γｃ）への結合が可能な抗原結合断片を含む、前記抗体または抗原結合断片。
【請求項３０】
共通γ鎖（γｃ）に結合可能であり、場合によって単離された、抗体または抗原結合断片であって、アミノ酸配列ｉ）〜ｖｉ）：
【化１９】
2018527912.tif 000047
あるいは配列ｉ）〜ｖｉ）の１またはそれより多くにおいて、１または２または３アミノ酸が別のアミノ酸で置換されているその変異体、式中、Ｘ８＝ＳまたはＦである、を含む、前記抗体または抗原結合断片。
【請求項３１】
ＬＣ−ＣＤＲ１が、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＹＮＹＬＤ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６８）またはＳＧＤＡＬＰＫＱＦＡＦ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７２）である、請求項３０記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項３２】
ＬＣ−ＣＤＲ２が、ＬＧＳＮＲＤＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６９）またはＫＤＴＥＲＰＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７３）である、請求項３０または請求項３１記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項３３】
ＬＣ−ＣＤＲ３が、ＭＱＧＴＨＷＰＷＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７０）またはＱＳＰＤＳＳＧＴＶＥＶ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７４）である、請求項３０〜３２のいずれか一項記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項３４】
ＨＣ−ＣＤＲ１が、ＧＹＹＷＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８）またはＳＳＳＹＹＷＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７９）である、請求項３０〜３３のいずれか一項記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項３５】
ＨＣ−ＣＤＲ２が、ＥＩＮＨＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４９）、ＥＩＮＨＦＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８３）、またはＳＩＹＹＳＧＳＴＹＹＮＰＳＬＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８０）の１つである、請求項３０〜３４のいずれか一項記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項３６】
ＨＣ−ＣＤＲ３が、ＳＰＧＧＹＳＧＧＹＦＱＨ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７７）またはＤＩＬＴＧＹＡＬＤＹ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８１）である、請求項３０〜３５のいずれか一項記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項３７】
以下のＣＤＲ：
【化２０】
2018527912.tif 000048
を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を有する、請求項３０〜３６のいずれか一項記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項３８】
以下のＣＤＲ：
【化２１】
2018527912.tif 000049
を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を有する、請求項３０〜３６のいずれか一項記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項３９】
以下のＣＤＲ：
【化２２】
2018527912.tif 000050
を取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を有する、請求項３０〜３８のいずれか一項記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項４０】
以下のＣＤＲ：
【化２３】
2018527912.tif 000051
を取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を有する、請求項３０〜３８のいずれか一項記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項４１】
以下のＣＤＲ：
【化２４】
2018527912.tif 000052
を取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を有する、請求項３０〜３８のいずれか一項記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項４２】
共通γ鎖（γｃ）に結合可能であり、場合によって単離された、軽鎖および重鎖可変領域配列を含む抗体または抗原結合断片であって：
軽鎖が、ＬＣ−ＣＤＲ１：  ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＹＮＹＬＤ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６８）またはＳＧＤＡＬＰＫＱＦＡＦ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７２）；  ＬＣ−ＣＤＲ２：  ＬＧＳＮＲＤＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６９）またはＫＤＴＥＲＰＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７３）；  ＬＣ−ＣＤＲ３：  ＭＱＧＴＨＷＰＷＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７０）またはＱＳＰＤＳＳＧＴＶＥＶ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７４）に、少なくとも８５％の全体の配列同一性を有する、ＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、ＬＣ−ＣＤＲ３を含み、そして
重鎖が、ＨＣ−ＣＤＲ１：  ＧＹＹＷＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８）またはＳＳＳＹＹＷＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７９）；  ＨＣ−ＣＤＲ２：  ＥＩＮＨＸ８ＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９０）またはＳＩＹＹＳＧＳＴＹＹＮＰＳＬＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８０）；  ＨＣ−ＣＤＲ３：  ＳＰＧＧＹＳＧＧＹＦＱＨ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７７）またはＤＩＬＴＧＹＡＬＤＹ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８１）に、少なくとも８５％の全体の配列同一性を有する、ＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、ＨＣ−ＣＤＲ３を含む；
式中、Χ８＝ＳまたはＦである、前記抗体または抗原結合断片。
【請求項４３】
共通γ鎖（γｃ）に結合可能であり、場合によって単離された、軽鎖および重鎖可変領域配列を含む抗体または抗原結合断片であって：
軽鎖配列が、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６７、１５２、７１、または７５（図３）の１つの軽鎖配列に少なくとも８５％の配列同一性を有し、そして；
重鎖配列が、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７６、１５３、７８、８２または８４（図４）の１つの重鎖配列に少なくとも８５％の配列同一性を有する
前記抗体または抗原結合断片。
【請求項４４】
共通γ鎖（γｃ）に結合可能であり、場合によって単離された、二重特異性抗体または二重特異性抗原結合断片である抗体または抗原結合断片であって、（ｉ）請求項３０〜４３のいずれか一項記載の抗原結合断片、および（ｉｉ）ＣＤ１２２への結合が可能な抗原結合断片を含む、前記抗体または抗原結合断片。
【請求項４５】
共通γ鎖（γｃ）およびＣＤ１２２に結合可能であり、場合によって単離された、抗体または抗原結合断片であって：
（ｉ）請求項３〜２８のいずれか一項記載の抗原結合断片：および
（ｉｉ）請求項３０〜４３のいずれか一項記載の抗原結合断片
を含む、前記抗体または抗原結合断片。
【請求項４６】
ＣＤ１２２に結合する、請求項１〜２９または請求項４５のいずれか一項記載の、場合によって抗体または抗原結合断片が共通γ鎖（γｃ）に結合している、場合によって単離された、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ複合体。
【請求項４７】
共通γ鎖（γｃ）に結合する、請求項３０〜４５のいずれか一項記載の、場合によって抗体または抗原結合断片がＣＤ１２２に結合している、場合によって単離された、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ複合体。
【請求項４８】
薬剤部分または検出可能部分にコンジュゲート化されている、請求項１〜４５のいずれか一項記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項４９】
請求項１〜４５のいずれか一項記載の抗原結合断片を含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。
【請求項５０】
請求項４９記載のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む細胞。
【請求項５１】
請求項１〜４５または請求項４８〜５０のいずれか一項の抗体、抗原結合断片、コンジュゲート、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または細胞、および少なくとも１つの薬学的に許容されうるキャリアーを含む、組成物。
【請求項５２】
請求項１〜４５、４８または４９のいずれか一項の抗体、抗原結合断片、コンジュゲート、またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする、単離核酸。
【請求項５３】
請求項５２の核酸を含むベクター。
【請求項５４】
請求項５３のベクターを含む宿主細胞。
【請求項５５】
請求項１〜４５、４８または４９のいずれか一項の抗体、抗原結合断片、コンジュゲート、またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を作製するための方法であって、抗体、抗原結合断片、コンジュゲートまたはＣＡＲをコードするベクターの発現に適した条件下で、請求項５４の宿主細胞を培養し、そして抗体、抗原結合断片、ポリペプチド、コンジュゲートまたはＣＡＲを回収する工程を含む、前記方法。
【請求項５６】
療法において、または医学的治療法において、使用するための、請求項１〜４５または請求項４８〜５１のいずれか一項の抗体、抗原結合断片、ポリペプチド、コンジュゲート、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、細胞または組成物。
【請求項５７】
癌の治療において使用するための、請求項１〜４５または請求項４８〜５１のいずれか一項の抗体、抗原結合断片、ポリペプチド、コンジュゲート、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、細胞または組成物。
【請求項５８】
感染性疾患の治療において使用するための、請求項１〜４５または請求項４８〜５１のいずれか一項の抗体、抗原結合断片、ポリペプチド、コンジュゲート、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、細胞または組成物。
【請求項５９】
癌の治療において使用するための薬剤製造における、請求項１〜４５または請求項４８〜５１のいずれか一項の抗体、抗原結合断片、ポリペプチド、コンジュゲート、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、細胞または組成物の使用。
【請求項６０】
感染性疾患の治療において使用するための薬剤製造における、請求項１〜４５または請求項４８〜５１のいずれか一項の抗体、抗原結合断片、ポリペプチド、コンジュゲート、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、細胞または組成物の使用。
【請求項６１】
癌を治療する方法であって、請求項１〜４５または請求項４８〜５１のいずれか一項の抗体、抗原結合断片、ポリペプチド、コンジュゲート、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、細胞または組成物を、癌に罹患した患者に投与する工程を含む、前記方法。
【請求項６２】
感染性疾患を治療する方法であって、請求項１〜４５または請求項４８〜５１のいずれか一項の抗体、抗原結合断片、ポリペプチド、コンジュゲート、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、細胞または組成物を、感染性疾患に罹患した患者に投与する工程を含む、前記方法。
【請求項６３】
ＣＤ１２２および／または共通γ鎖（γｃ）を含有するかまたは含有すると推測される試料を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、請求項１〜４５または請求項４８〜５１のいずれか一項の抗体、抗原結合断片、ポリペプチド、コンジュゲート、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、細胞または組成物と接触させ、そしてＣＤ１２２および／またはγｃと、抗体、抗原結合断片、コンジュゲート、ＣＡＲまたは細胞の複合体の形成を検出する工程を含む、方法。
【請求項６４】
被験体において、疾患または状態を診断する方法であって、被験体由来の試料を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、請求項１〜４５または請求項４８〜５１のいずれか一項の抗体、抗原結合断片、コンジュゲート、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、細胞または組成物と接触させ、そしてＣＤ１２２および／または共通γ鎖（γｃ）と、抗体、抗原結合断片、コンジュゲート、ＣＡＲまたは細胞の複合体の形成を検出する工程を含む、前記方法。
【請求項６５】
ＣＤ１２２および／または共通γ鎖（γｃ）をターゲティングする剤での治療に関して、被験体を選択するかまたは層別化する方法であって、被験体由来の試料を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、請求項１〜４５または請求項４８〜５１のいずれか一項の抗体、抗原結合断片、コンジュゲート、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、細胞または組成物と接触させ、そしてＣＤ１２２および／またはγｃと、抗体、抗原結合断片、コンジュゲート、ＣＡＲまたは細胞の複合体の形成を検出する工程を含む、前記方法。
【請求項６６】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏでのＣＤ１２２および／または共通γ鎖（γｃ）の検出のための、請求項１〜４５または請求項４８〜５１のいずれか一項の抗体、抗原結合断片、コンジュゲート、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、細胞または組成物の使用。
【請求項６７】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏ診断または予後診断剤としての、請求項１〜４５または請求項４８〜５１のいずれか一項の抗体、抗原結合断片、コンジュゲート、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、細胞または組成物の使用。
【請求項６８】
Ｔ細胞および／またはＮＫ細胞集団を増殖させるための方法であって、Ｔ細胞および／またはＮＫ細胞を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｉｎ  ｖｉｖｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏで、請求項１〜４５または請求項４８〜５１のいずれか一項の抗体、抗原結合断片、コンジュゲート、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、細胞または組成物と接触させる、前記方法。
【請求項６９】
被験体において、感染性疾患または癌を治療する方法であって、Ｔ細胞および／またはＮＫ細胞集団が増殖するように、被験体由来の血液試料から得たＴ細胞および／またはＮＫ細胞を、請求項１〜４５または請求項４８〜５１のいずれか一項の抗体、抗原結合断片、コンジュゲート、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、細胞または組成物の存在下で培養し、増殖したＴ細胞および／またはＮＫ細胞を収集し、そして治療の必要がある被験体に、増殖したＴ細胞および／またはＮＫ細胞を投与する工程を含む、前記方法。
【請求項７０】
被験体において、感染性疾患または癌を治療する方法であって、Ｔ細胞および／またはＮＫ細胞集団が増殖するように、被験体に、請求項１〜４５または請求項４８〜５１のいずれか一項の抗体、抗原結合断片、コンジュゲート、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、細胞または組成物を投与する工程を含む、前記方法。
【請求項７１】
（ｉ）第一のＩＬ−２Ｒβ結合ポリペプチド：
（ａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１、５、９、または１３のアミノ酸配列からなる結合ユニットＶＬ１、あるいは結合ユニットＶＬ１に少なくとも１つのアミノ酸置換、挿入または欠失を含有するその変異体；
（ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３５、３９、４３、または４７のアミノ酸配列からなる結合ユニットＶＨ１、あるいは結合ユニットＶＨ１に少なくとも１つのアミノ酸置換、挿入または欠失を含有するその変異体；
（ｉｉ）第二のＩＬ−２Ｒγ結合ポリペプチド：
（ｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６７または７１のアミノ酸配列からなる結合ユニットＶＬ２、あるいは結合ユニットＶＬ２に少なくとも１つのアミノ酸置換、挿入または欠失を含有するその変異体；
（ｄ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７６または７８のアミノ酸配列からなる結合ユニットＶＨ２、あるいは結合ユニットＶＨ２に少なくとも１つのアミノ酸置換、挿入または欠失を含有するその変異体
を含む、単離ＩＬ−２Ｒ二重特異性抗原結合タンパク質。
【請求項７２】
被験体において、感染性疾患または癌を治療する方法であって、こうした治療を必要とする被験体に、請求項７１において定義するような単離抗原結合タンパク質を投与する工程を含む、前記方法。
【請求項７３】
感染性疾患または癌を治療するための薬剤の製造における、請求項７１において定義するような単離抗原結合タンパク質の使用。
【請求項７４】
請求項７１において定義するような単離ＩＬ−２Ｒ二重特異性抗原結合タンパク質および薬学的に許容されうるキャリアーを含む、組成物。
【請求項７５】
請求項７１において定義するような単離ＩＬ−２Ｒ二重特異性抗原結合タンパク質を産生可能である、単離細胞株。
【請求項７６】
請求項７１において定義するような単離ＩＬ−２Ｒ二重特異性抗原結合タンパク質を、使用のための説明書とともに含む、キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、インターロイキン２受容体β（ＩＬ−２Ｒβ；ＣＤ１２２）および共通γ鎖（γｃ；ＣＤ１３２）に結合する抗体に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＩＬ−２は、Ｔ細胞ホメオスタシスを維持し、そして適切な免疫反応を仲介する際に中心的な役割を果たす必須サイトカインである。免疫刺激因子としてのその高い強度は、癌およびＡＩＤＳを含むある範囲の状態を治療するための臨床的使用を導いてきており；多様なエフェクター細胞の活性化および増殖を刺激するため、ワクチン接種のアジュバントとしても広く用いられている。
【０００３】
しかし、特定の疾患の有効な治療に必要とされる高用量のＩＬ−２は、非常に毒性が高い。こうした療法の主な副作用には、血管漏洩症候群（ＶＬＳ）が含まれ、該症候群は、肺および肝臓などの臓器における血管内液体の集積を生じ、続いて肺浮腫および肝臓損傷が起こる。療法を止める以外にＶＬＳの治療法はない。
【０００４】
ＩＬ−２は、異なる細胞タイプ上に発現される受容体構成要素：アルファ鎖（ＩＬ−２Ｒα、ＣＤ２５としても知られる）、ベータ鎖（ＩＬ−２Ｒβ、またはＣＤ１２２）、および共通サイトカイン受容体ガンマ鎖（ＩＬ−２Ｒγ、γｃ、またはＣＤ１３２）の異なる組み合わせに結合することによって、多様な機能を発揮する。
【０００５】
単離ＩＬ−２Ｒαは、「低アフィニティ」ＩＬ−２受容体と称され（結合アフィニティＫＤ〜１０ｎＭ）、そしてシグナル伝達に関与しない。ＩＬ−２Ｒβおよびγｃの複合体は、中程度のアフィニティ（ＫＤ〜１ｎＭ）でＩＬ−２に結合するが、ＩＬ−２Ｒβは単独では非常に低いアフィニティ（ＫＤ〜１００ｎＭ）を有し、そしてγｃは単独では、ＩＬ−２に対して検出可能なアフィニティを実質的には持たない。３つすべてのサブユニット、ＩＬ−２Ｒα、ＩＬ−２Ｒβ、およびγｃを含む複合体は、高アフィニティ（ＫＤ〜１０ｐＭ）でＩＬ−２に結合する。
【０００６】
細胞質ドメインの相互作用およびそれに続く多数のシグナル伝達経路のキナーゼ活性化を通じた有効なシグナル伝達には、ＩＬ−２Ｒβおよびγｃのヘテロ二量体化が必要で、そして十分である；ＩＬ−２Ｒはシグナル伝達には役割を果たさない。
【０００７】
高アフィニティα−β−γｃ  ＩＬ−２Ｒは、典型的には、ＣＤ４＋  Ｔ制御細胞（Ｔｒｅｇ）ならびに活性化されたばかりのＴ細胞上で見られる。中程度のアフィニティのβ−γｃ  ＩＬ−２Ｒは、未刺激ＣＤ８＋細胞上に低レベルで存在するが、抗原経験（メモリー）およびメモリー表現型（ＭＰ）ＣＤ８＋  Ｔ細胞ならびにナチュラルキラー（ＮＫ）細胞上に顕著である。ＭＰＣＤ８＋  Ｔ細胞およびＮＫ細胞は、ＩＬ−２Ｒβを非常に高レベルで発現し、そしてＩＬ−２に容易に反応する。
【０００８】
以前の研究は、ＶＬＳが、ＩＬ−２活性化ＮＫ細胞からの炎症促進性サイトカインの放出によって引き起こされることを示している。しかし、最近の研究は、ＩＬ−２誘導性肺浮腫が、機能性高アフィニティα−β−γｃ  ＩＬ−２Ｒを発現する肺内皮細胞へのＩＬ−２の直接結合から生じうることを示唆した。これは、ＩＬ−２と肺内皮細胞の相互作用が、ブロッキング抗ＩＬ−２Ｒαモノクローナル抗体（ｍＡｂ）によって、ＩＬ−２Ｒα不全宿主細胞において抑止される観察によって、またはＩＬ−２／抗ＩＬ−２  ｍＡｂ（ＩＬ−２／ｍＡｂ）複合体を使用して、ここで抗体がＩＬ−２／ＩＬ−２Ｒα相互作用を防止し、こうしてＶＬＳを防止することによって、立証された。
【発明の概要】
【０００９】
本発明は、ＣＤ１２２および／または共通γ鎖（γｃ）に結合する抗体、または抗原結合断片に関する。ＣＤ１２２および共通γ鎖（γｃ）結合抗体の重鎖および軽鎖ポリペプチドもまた開示する。抗体、抗原結合断片およびポリペプチドは、単離および／または精製型で提供されてもよく、そして研究、療法および診断における使用に適した組成物に配合されてもよい。
【００１０】
第一の側面において、本発明は、ＣＤ１２２および共通γ鎖（γｃ）に結合可能な、場合によって単離された、抗体または抗原結合断片を提供する。
いくつかの態様において、抗体または抗原結合断片は、二重特異性抗体または二重特異性抗原結合断片である。
【００１１】
別の側面において、本発明は、アミノ酸配列ｉ）からｖｉ）：
【００１２】
【化１】
2018527912.tif 000003
【００１３】
あるいは配列ｉ）〜ｖｉ）の１またはそれより多くにおいて、１または２または３アミノ酸が別のアミノ酸で置換されているその変異体、式中、Ｘ１＝ＨまたはＤ；  Ｘ２＝ＶまたはＩ；  Ｘ３＝Ｉ、ＮまたはＦ；  Ｘ４＝ＰまたはＡ；  Ｘ５＝ＬまたはＶ；  Ｘ６＝ＭまたはＩ；およびＸ７＝ＹまたはＮである、を含む、ＣＤ１２２に結合可能な、場合によって単離された、抗体または抗原結合断片を提供する。
【００１４】
いくつかの態様において、ＬＣ−ＣＤＲ１は、ＴＧＴＳＳＤＩＧＨＹＤＦＶＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２）、ＴＧＴＳＳＤＩＧＤＹＤＦＶＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８）、ＴＧＴＳＳＤＩＧＨＹＤＦＩＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５）、ＲＡＧＱＡＩＳＳＷＬＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６）、ＱＡＳＱＤＩＧＮＹＬＮ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：  １０）、またはＴＲＳＳＧＳＩＡＳＮＹＶＱ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：  １４）の１つである。
【００１５】
いくつかの態様において、ＬＣ−ＣＤＲ２は、ＤＩＮＮＲＰＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３）、ＤＮＮＮＲＰＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０）、ＤＦＮＮＲＰＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６）、ＤＩＮＮＲＡＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２）、ＫＡＳＮＬＥＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７）、ＤＡＳＮＬＥＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１）、またはＤＤＮＱＲＰＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５）の１つである。
【００１６】
いくつかの態様において、ＬＣ−ＣＤＲ３は、ＳＡＹＴＳＳＤＴＬＶ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４）、ＳＡＹＴＳＳＤＴＶＶ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２）、ＱＹＱＳＹＰＹＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８）、ＬＱＬＹＤＹＰＬＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２）、またはＱＳＳＨＳＴＡＶＶ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６）の１つである。
【００１７】
いくつかの態様において、ＨＣ−ＣＤＲ１は、ＮＹＹＭＨ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６）、ＮＹＹＩＨ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４）、ＴＹＡＭＨ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４０）、ＳＹＡＭＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４４）、またはＧＹＹＷＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８）の１つである。
【００１８】
いくつかの態様において、ＨＣ−ＣＤＲ２は、ＡＩＭＰＳＲＧＧＴＳＹＰＱＫＦＱＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３７）、ＷＩＮＴＧＮＧＮＴＫＹＳＱＮＦＱＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４１）、ＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４５）、またはＥＩＮＨＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４９）の１つである。
【００１９】
いくつかの態様において、ＨＣ−ＣＤＲ３は、ＧＥＹＹＹＤＳＳＧＹＹＹ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３８）、ＧＥＹＹＹＤＳＳＧＹＹＮ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５２）、ＤＬＧＱＬＥＲＬＹＦＷ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４２）、ＤＬＧＤＹ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６）、またはＳＳＳＧＤＡＦＤ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５０）の１つである。
【００２０】
多様な側面にしたがったいくつかの態様において、本発明は、以下のＣＤＲ：
【００２１】
【化２】
2018527912.tif 000004
【００２２】
を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を有する、抗体または断片、あるいは単離軽鎖ポリペプチドを提供する。
多様な側面にしたがったいくつかの態様において、本発明は、以下のＣＤＲ：
【００２３】
【化３】
2018527912.tif 000005
【００２４】
を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を有する、抗体または断片、あるいは単離軽鎖ポリペプチドを提供する。
多様な側面にしたがったいくつかの態様において、本発明は、以下のＣＤＲ：
【００２５】
【化４】
2018527912.tif 000006
【００２６】
を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を有する、抗体または断片、あるいは単離軽鎖ポリペプチドを提供する。
多様な側面にしたがったいくつかの態様において、本発明は、以下のＣＤＲ：
【００２７】
【化５】
2018527912.tif 000007
【００２８】
を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を有する、抗体または断片、あるいは単離軽鎖ポリペプチドを提供する。
多様な側面にしたがったいくつかの態様において、本発明は、以下のＣＤＲ：
【００２９】
【化６】
2018527912.tif 000008
【００３０】
を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を有する、抗体または断片、あるいは単離軽鎖ポリペプチドを提供する。
多様な側面にしたがったいくつかの態様において、本発明は、以下のＣＤＲ：
【００３１】
【化７】
2018527912.tif 000009
【００３２】
を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を有する、抗体または断片、あるいは単離軽鎖ポリペプチドを提供する。
多様な側面にしたがったいくつかの態様において、本発明は、以下のＣＤＲ：
【００３３】
【化８】
2018527912.tif 000010
【００３４】
を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を有する、抗体または断片、あるいは単離軽鎖ポリペプチドを提供する。
多様な側面にしたがったいくつかの態様において、本発明は、以下のＣＤＲ：
【００３５】
【化９】
2018527912.tif 000011
【００３６】
を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を有する、抗体または断片、あるいは単離軽鎖ポリペプチドを提供する。
多様な側面にしたがったいくつかの態様において、本発明は、以下のＣＤＲ：
【００３７】
【化１０】
2018527912.tif 000012
【００３８】
を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を有する、抗体または断片、あるいは単離軽鎖ポリペプチドを提供する。
多様な側面にしたがったいくつかの態様において、本発明は、以下のＣＤＲ：
【００３９】
【化１１】
2018527912.tif 000013
【００４０】
を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を有する、抗体または断片、あるいは単離軽鎖ポリペプチドを提供する。
多様な側面にしたがったいくつかの態様において、本発明は、以下のＣＤＲ：
【００４１】
【化１２】
2018527912.tif 000014
【００４２】
を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を有する、抗体または断片、あるいは単離軽鎖ポリペプチドを提供する。
多様な側面にしたがったいくつかの態様において、本発明は、以下のＣＤＲ：
【００４３】
【化１３】
2018527912.tif 000015
【００４４】
を取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を有する、抗体または断片、あるいは単離重鎖ポリペプチドを提供する。
多様な側面にしたがったいくつかの態様において、本発明は、以下のＣＤＲ：
【００４５】
【化１４】
2018527912.tif 000016
【００４６】
を取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を有する、抗体または断片、あるいは単離重鎖ポリペプチドを提供する。
多様な側面にしたがったいくつかの態様において、本発明は、以下のＣＤＲ：
【００４７】
【化１５】
2018527912.tif 000017
【００４８】
を取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を有する、抗体または断片、あるいは単離重鎖ポリペプチドを提供する。
多様な側面にしたがったいくつかの態様において、本発明は、以下のＣＤＲ：
【００４９】
【化１６】
2018527912.tif 000018
【００５０】
を取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を有する、抗体または断片、あるいは単離重鎖ポリペプチドを提供する。
多様な側面にしたがったいくつかの態様において、本発明は、以下のＣＤＲ：
【００５１】
【化１７】
2018527912.tif 000019
【００５２】
を取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を有する、抗体または断片、あるいは単離重鎖ポリペプチドを提供する。
多様な側面にしたがったいくつかの態様において、本発明は、以下のＣＤＲ：
【００５３】
【化１８】
2018527912.tif 000020
【００５４】
を取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を有する、抗体または断片、あるいは単離重鎖ポリペプチドを提供する。
多様な側面にしたがったいくつかの態様において、本発明は、以下のＣＤＲ：
【００５５】
【化１９】
2018527912.tif 000021
【００５６】
を取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を有する、抗体または断片、あるいは単離重鎖ポリペプチドを提供する。
別の側面において、本発明は、ＣＤ１２２に結合可能であり、場合によって単離された、軽鎖および重鎖可変領域配列を含む抗体または抗原結合断片であって：
軽鎖が、ＬＣ−ＣＤＲ１：  ＴＧＴＳＳＤＩＧＸ１ＹＤＦＸ２Ｓ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８５）、ＲＡＧＱＡＩＳＳＷＬＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６）；  ＱＡＳＱＤＩＧＮＹＬＮ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０）；またはＴＲＳＳＧＳＩＡＳＮＹＶＱ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４）の１つ；  ＬＣ−ＣＤＲ２：  ＤＸ３ＮＮＲＸ４Ｓ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８６）；  ＫＡＳＮＬＥＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７）；  ＤＡＳＮＬＥＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１）；またはＤＤＮＱＲＰＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５）の１つ；  ＬＣ−ＣＤＲ３：  ＳＡＹＴＳＳＤＴＸ５Ｖ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８７）；ＱＱＹＱＳＹＰＹＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８）；  ＬＱＬＹＤＹＰＬＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２）；またはＱＳＳＨＳＴＡＶＶ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６）の１つに、少なくとも８５％の全体の配列同一性を有する、ＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、ＬＣ−ＣＤＲ３を含み、そして
重鎖が、ＨＣ−ＣＤＲ１：  ＮＹＹＸ６Ｈ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８８）；  ＴＹＡＭＨ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４０）；  ＳＹＡＭＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４４）；またはＧＹＹＷＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８）の１つ；  ＨＣ−ＣＤＲ２：  ＡＩＭＰＳＲＧＧＴＳＹＰＱＫＦＱＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３７）；  ＷＩＮＴＧＮＧＮＴＫＹＳＱＮＦＱＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４１）；  ＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４５）；またはＥＩＮＨＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４９）の１つ；  ＨＣ−ＣＤＲ３：  ＧＥＹＹＹＤＳＳＧＹＹＸ７（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８９）；  ＤＬＧＱＬＥＲＬＹＦＷ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４２）；  ＤＬＧＤＹ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６）；またはＳＳＳＧＤＡＦＤ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５０）の１つに、少なくとも８５％の全体の配列同一性を有する、ＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、ＨＣ−ＣＤＲ３を含む；
式中、Χ１＝ＨまたはＤ；  Ｘ２＝ＶまたはＩ；  Ｘ３＝Ｉ、ＮまたはＦ；  Ｘ４＝ＰまたはＡ；  Ｘ５＝ＬまたはＶ；  Ｘ６＝ＭまたはＩ；およびＸ７＝ＹまたはＮである、前記抗体または抗原結合断片を提供する。
【００５７】
いくつかの態様において、配列同一性の度合いは、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の１つであってもよい。
【００５８】
別の側面において、本発明は、ＣＤ１２２に結合可能であり、場合によって単離された、軽鎖および重鎖可変領域配列を含む抗体または抗原結合断片であって：
軽鎖配列が、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１、１７、１９、２１、２３、２４、２７、２８、２９、３０、３１、３３、３４、１４８、１４９、５、９、または１３（図１）の１つの軽鎖配列に少なくとも８５％の配列同一性を有し、そして
重鎖配列が、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３５、５１、５３、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、１５０、１５１、３９、４３、または４７（図２）の１つの重鎖配列に少なくとも８５％の配列同一性を有する
前記抗体または抗原結合断片を提供する。
【００５９】
いくつかの態様において、配列同一性の度合いは、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の１つであってもよい。
【００６０】
別の側面において、本発明は、ＣＤ１２２に結合可能であり、場合によって単離された、二重特異性抗体または二重特異性抗原結合断片である抗体または抗原結合断片であって、（ｉ）本発明記載の抗原結合断片、および（ｉｉ）共通γ鎖（γｃ）への結合が可能な抗原結合断片を含む、前記抗体または抗原結合断片を提供する。
【００６１】
別の側面において、本発明は、共通γ鎖（γｃ）に結合可能であり、場合によって単離された、抗体または抗原結合断片であって、アミノ酸配列ｉ）〜ｖｉ）：
【００６２】
【化２０】
2018527912.tif 000022
【００６３】
あるいは配列ｉ）〜ｖｉ）の１またはそれより多くにおいて、１または２または３アミノ酸が別のアミノ酸で置換されているその変異体、式中、Ｘ８＝ＳまたはＦである、を含む、前記抗体または抗原結合断片を提供する。
【００６４】
いくつかの態様において、ＬＣ−ＣＤＲ１は、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＹＮＹＬＤ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６８）またはＳＧＤＡＬＰＫＱＦＡＦ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７２）である。
【００６５】
いくつかの態様において、ＬＣ−ＣＤＲ２は、ＬＧＳＮＲＤＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６９）またはＫＤＴＥＲＰＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７３）である。
いくつかの態様において、ＬＣ−ＣＤＲ３は、ＭＱＧＴＨＷＰＷＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７０）またはＱＳＰＤＳＳＧＴＶＥＶ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７４）である。
【００６６】
いくつかの態様において、ＨＣ−ＣＤＲ１は、ＧＹＹＷＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８）またはＳＳＳＹＹＷＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７９）である。
いくつかの態様において、ＨＣ−ＣＤＲ２は、ＥＩＮＨＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４９）、ＥＩＮＨＦＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８３）、またはＳＩＹＹＳＧＳＴＹＹＮＰＳＬＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８０）の１つである。
【００６７】
いくつかの態様において、ＨＣ−ＣＤＲ３は、ＳＰＧＧＹＳＧＧＹＦＱＨ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７７）またはＤＩＬＴＧＹＡＬＤＹ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８１）である。
多様な側面にしたがったいくつかの態様において、本発明は、以下のＣＤＲ：
【００６８】
【化２１】
2018527912.tif 000023
【００６９】
を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を有する、抗体または断片、あるいは単離軽鎖ポリペプチドを提供する。
多様な側面にしたがったいくつかの態様において、本発明は、以下のＣＤＲ：
【００７０】
【化２２】
2018527912.tif 000024
【００７１】
を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を有する、抗体または断片、あるいは単離軽鎖ポリペプチドを提供する。
多様な側面にしたがったいくつかの態様において、本発明は、以下のＣＤＲ：
【００７２】
【化２３】
2018527912.tif 000025
【００７３】
を取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を有する、抗体または断片、あるいは単離重鎖ポリペプチドを提供する。
多様な側面にしたがったいくつかの態様において、本発明は、以下のＣＤＲ：
【００７４】
【化２４】
2018527912.tif 000026
【００７５】
を取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を有する、抗体または断片、あるいは単離重鎖ポリペプチドを提供する。
多様な側面にしたがったいくつかの態様において、本発明は、以下のＣＤＲ：
【００７６】
【化２５】
2018527912.tif 000027
【００７７】
を取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を有する、抗体または断片、あるいは単離重鎖ポリペプチドを提供する。
別の側面において、本発明は、共通γ鎖（γｃ）に結合可能であり、場合によって単離された、軽鎖および重鎖可変領域配列を含む抗体または抗原結合断片であって：
軽鎖が、ＬＣ−ＣＤＲ１：  ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＹＮＹＬＤ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６８）またはＳＧＤＡＬＰＫＱＦＡＦ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７２）；  ＬＣ−ＣＤＲ２：  ＬＧＳＮＲＤＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６９）またはＫＤＴＥＲＰＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７３）；  ＬＣ−ＣＤＲ３：  ＭＱＧＴＨＷＰＷＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７０）またはＱＳＰＤＳＳＧＴＶＥＶ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７４）に、少なくとも８５％の全体の配列同一性を有する、ＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、ＬＣ−ＣＤＲ３を含み、そして
重鎖が、ＨＣ−ＣＤＲ１：  ＧＹＹＷＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８）またはＳＳＳＹＹＷＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７９）；  ＨＣ−ＣＤＲ２：  ＥＩＮＨＸ８ＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９０）またはＳＩＹＹＳＧＳＴＹＹＮＰＳＬＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８０）；  ＨＣ−ＣＤＲ３：  ＳＰＧＧＹＳＧＧＹＦＱＨ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７７）またはＤＩＬＴＧＹＡＬＤＹ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８１）に、少なくとも８５％の全体の配列同一性を有する、ＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、ＨＣ−ＣＤＲ３を含む；
式中、Χ８＝ＳまたはＦである、前記抗体または抗原結合断片を提供する。
【００７８】
いくつかの態様において、配列同一性の度合いは、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の１つであってもよい。
【００７９】
別の側面において、本発明は、共通γ鎖（γｃ）に結合可能であり、場合によって単離された、軽鎖および重鎖可変領域配列を含む抗体または抗原結合断片であって：
軽鎖配列が、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６７、１５２、７１、または７５（図３）の１つの軽鎖配列に少なくとも８５％の配列同一性を有し、そして；
重鎖配列が、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７６、１５３、７８、８２または８４（図４）の１つの重鎖配列に少なくとも８５％の配列同一性を有する
前記抗体または抗原結合断片を提供する。
【００８０】
いくつかの態様において、配列同一性の度合いは、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の１つであってもよい。
【００８１】
別の側面において、本発明は、共通γ鎖（γｃ）に結合可能であり、場合によって単離された、二重特異性抗体または二重特異性抗原結合断片である抗体または抗原結合断片であって、（ｉ）本発明記載の抗原結合断片、および（ｉｉ）ＣＤ１２２への結合が可能な抗原結合断片を含む、前記抗体または抗原結合断片を提供する。
【００８２】
別の側面において、本発明は、共通γ鎖（γｃ）およびＣＤ１２２に結合可能であり、場合によって単離された、抗体または抗原結合断片であって：
（ｉ）本発明記載のγｃ結合抗原結合断片：および
（ｉｉ）本発明記載のＣＤ１２２結合抗原結合断片
を含む、前記抗体または抗原結合断片を提供する。
【００８３】
別の側面において、本発明は、ＣＤ１２２に結合する、本発明記載の、場合によって抗体または抗原結合断片が共通γ鎖（γｃ）に結合している、場合によって単離された、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ複合体を提供する。
【００８４】
別の側面において、本発明は、共通γ鎖（γｃ）に結合する、本発明記載の、場合によって抗体または抗原結合断片がＣＤ１２２に結合している、場合によって単離された、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ複合体を提供する。
【００８５】
いくつかの態様において、本発明記載の抗体または抗原結合断片は、薬剤部分または検出可能部分にコンジュゲート化されている。
別の側面において、本発明は、本発明記載の抗原結合断片、場合によって二重特異性抗原結合断片を含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を提供する。
【００８６】
別の側面において、本発明は、本発明記載のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む細胞を提供する。
別の側面において、本発明は、本発明記載の抗体、抗原結合断片、コンジュゲート、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または細胞、および少なくとも１つの薬学的に許容されうるキャリアー、賦形剤、アジュバントまたは希釈剤を含む、組成物を提供する。
【００８７】
別の側面において、本発明は、本発明記載の抗体、抗原結合断片、コンジュゲート、またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする、単離核酸を提供する。核酸は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６または１４７（図１７および１８）の１つの配列、あるいは遺伝暗号の結果として縮重しているコード配列を有してもよいし、あるいはこれらに、少なくとも７０％の同一性、場合によって、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するヌクレオチド配列を有してもよい。
【００８８】
別の側面において、本発明は、本発明記載の核酸を含むベクターを提供する。
別の側面において、本発明は、本発明記載のベクターを含む宿主細胞を提供する。例えば、宿主細胞は、真核生物、哺乳動物、例えばチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）、またはヒトであってもよいし、あるいは原核細胞、例えば大腸菌（Ｅ．  ｃｏｌｉ）であってもよい。
【００８９】
別の側面において、本発明は、本発明記載の抗体、抗原結合断片、コンジュゲート、またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を作製するための方法であって、抗体、抗原結合断片、コンジュゲートまたはＣＡＲをコードするベクターの発現に適した条件下で、本発明記載の宿主細胞を培養し、そして抗体、抗原結合断片、ポリペプチド、コンジュゲートまたはＣＡＲを回収する工程を含む、前記方法を提供する。
【００９０】
別の側面において、本発明は、療法において、または医学的治療法において、使用するための、本発明記載の抗体、抗原結合断片、ポリペプチド、コンジュゲート、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、細胞または組成物を提供する。
【００９１】
別の側面において、本発明は、癌の治療において使用するための、本発明記載の抗体、抗原結合断片、ポリペプチド、コンジュゲート、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、細胞または組成物を提供する。
【００９２】
別の側面において、本発明は、感染性疾患の治療において使用するための、本発明記載の抗体、抗原結合断片、ポリペプチド、コンジュゲート、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、細胞または組成物を提供する。
【００９３】
別の側面において、本発明は、癌の治療において使用するための薬剤製造における、本発明記載の抗体、抗原結合断片、ポリペプチド、コンジュゲート、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、細胞または組成物の使用を提供する。
【００９４】
別の側面において、本発明は、感染性疾患の治療において使用するための薬剤製造における、本発明記載の抗体、抗原結合断片、ポリペプチド、コンジュゲート、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、細胞または組成物の使用を提供する。
【００９５】
別の側面において、本発明は、癌を治療する方法であって、本発明記載の抗体、抗原結合断片、ポリペプチド、コンジュゲート、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、細胞または組成物を、癌に罹患した患者に投与する工程を含む、前記方法を提供する。
【００９６】
別の側面において、本発明は、感染性疾患を治療する方法であって、本発明記載の抗体、抗原結合断片、ポリペプチド、コンジュゲート、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、細胞または組成物を、感染性疾患に罹患した患者に投与する工程を含む、前記方法を提供する。
【００９７】
別の側面において、本発明は、ＣＤ１２２および／または共通γ鎖（γｃ）を含有するかまたは含有すると推測される試料を、好ましくはｉｎ  ｖｉｔｒｏで、本発明記載の抗体、抗原結合断片、ポリペプチド、コンジュゲート、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、細胞または組成物と接触させ、そしてＣＤ１２２および／またはγｃと、抗体、抗原結合断片、コンジュゲート、ＣＡＲまたは細胞の複合体の形成を検出する工程を含む、方法を提供する。
【００９８】
別の側面において、本発明は、被験体において、疾患または状態を診断する方法であって、被験体由来の試料を、好ましくはｉｎ  ｖｉｔｒｏで、本発明記載の抗体、抗原結合断片、コンジュゲート、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、細胞または組成物と接触させ、そしてＣＤ１２２および／または共通γ鎖（γｃ）と、抗体、抗原結合断片、コンジュゲート、ＣＡＲまたは細胞の複合体の形成を検出する工程を含む、前記方法を提供する。
【００９９】
別の側面において、本発明は、ＣＤ１２２および／または共通γ鎖（γｃ）をターゲティングする剤での治療に関して、被験体を選択するかまたは層別化する方法であって、被験体由来の試料を、好ましくはｉｎ  ｖｉｔｒｏで、本発明記載の抗体、抗原結合断片、コンジュゲート、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、細胞または組成物と接触させ、そしてＣＤ１２２および／またはγｃと、抗体、抗原結合断片、コンジュゲート、ＣＡＲまたは細胞の複合体の形成を検出する工程を含む、前記方法を提供する。
【０１００】
別の側面において、本発明は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏでのＣＤ１２２および／または共通γ鎖（γｃ）の検出のための、本発明記載の抗体、抗原結合断片、コンジュゲート、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、細胞または組成物の使用を提供する。
【０１０１】
別の側面において、本発明は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏ診断または予後診断剤としての、本発明記載の抗体、抗原結合断片、コンジュゲート、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、細胞または組成物の使用を提供する。
【０１０２】
別の側面において、本発明は、Ｔ細胞および／またはＮＫ細胞集団を増殖させるための方法であって、Ｔ細胞および／またはＮＫ細胞を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｉｎ  ｖｉｖｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏで、本発明記載の抗体、抗原結合断片、コンジュゲート、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、細胞または組成物と接触させる、前記方法を提供する。
【０１０３】
別の側面において、本発明は、被験体において、感染性疾患または癌を治療する方法であって、Ｔ細胞および／またはＮＫ細胞集団が増殖するように、被験体由来の血液試料から得たＴ細胞および／またはＮＫ細胞を、本発明記載の抗体、抗原結合断片、コンジュゲート、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、細胞または組成物の存在下で培養し、増殖したＴ細胞および／またはＮＫ細胞を収集し、そして治療の必要がある被験体に、増殖したＴ細胞および／またはＮＫ細胞を投与する工程を含む、前記方法を提供する。
【０１０４】
別の側面において、本発明は、被験体において、感染性疾患または癌を治療する方法であって、Ｔ細胞および／またはＮＫ細胞集団が増殖するように、被験体に、本発明記載の抗体、抗原結合断片、コンジュゲート、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、細胞または組成物を投与する工程を含む、前記方法を提供する。
【０１０５】
以下の番号付けした段落は、本発明のさらなる側面を記載する：
１．
（ｉ）第一のＩＬ−２Ｒβ結合ポリペプチド：
（ａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１、５、９、または１３のアミノ酸配列からなる結合ユニットＶＬ１、あるいは結合ユニットＶＬ１に少なくとも１つのアミノ酸置換、挿入または欠失を含有するその変異体；
（ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３５、３９、４３、または４７のアミノ酸配列からなる結合ユニットＶＨ１、あるいは結合ユニットＶＨ１に少なくとも１つのアミノ酸置換、挿入または欠失を含有するその変異体；
（ｉｉ）第二のＩＬ−２Ｒγ結合ポリペプチド：
（ｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６７または７１のアミノ酸配列からなる結合ユニットＶＬ２、あるいは結合ユニットＶＬ２に少なくとも１つのアミノ酸置換、挿入または欠失を含有するその変異体、および
（ｄ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７６または７８のアミノ酸配列からなる結合ユニットＶＨ２、あるいは結合ユニットＶＨ２に少なくとも１つのアミノ酸置換、挿入または欠失を含有するその変異体
を含む、単離ＩＬ−２Ｒ二重特異性抗原結合タンパク質。
【０１０６】
２．  前記の第一のＩＬ−２Ｒβ結合ポリペプチドおよび前記の第二のＩＬ−２Ｒγ結合ポリペプチドが、ペプチドリンカーによって連結されている、段落１に定義するような単離ＩＬ−２Ｒ二重特異性抗原結合タンパク質。
【０１０７】
３．  前記ペプチドリンカーが長さ５〜２３アミノ酸である、段落２に定義するような単離ＩＬ−２Ｒ二重特異性抗原結合タンパク質。
４．  前記の第一のＩＬ−２Ｒβ結合ポリペプチドが、ＣＨ３ドメインを含むＦｃ部分をさらに含み、ここで該ＣＨ３ドメインが、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９２のアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなり、そして前記の第二のＩＬ−２Ｒγ結合ポリペプチドが、ＣＨ３ドメインを含むＦｃ部分をさらに含み、ここで該ＣＨ３ドメインが、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９４のアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなる、段落１に定義するような単離ＩＬ−２Ｒ二重特異性抗原結合タンパク質。
【０１０８】
５．  前記の第一および第二のポリペプチドが、ＣＨ３ドメイン内の操作された界面で出会い、ここで隆起を空洞内に配す（ｐｒｏｔｕｂｅｒａｎｃｅ−ｉｎｔｏ−ｃａｖｉｔｙ）対形成が形成されるように、第一のポリペプチドが、前記界面における少なくとも１つの操作された隆起を含み、前記隆起が少なくとも１つの改変された接触残基を含み、そして第二のポリペプチドが、前記界面における少なくとも１つの操作された空洞を含み、前記空洞が少なくとも１つの改変された接触残基を含む、段落４に定義するような単離ＩＬ−２Ｒ二重特異性抗原結合タンパク質。
【０１０９】
６．  前記結合ユニットが、リンカーによって前記Ｆｃ部分に連結される、段落４または段落５に定義するような単離ＩＬ−２Ｒ二重特異性抗原結合タンパク質。
７．  前記リンカーが、長さ５〜２３アミノ酸である、段落６に定義するような単離ＩＬ−２Ｒ二重特異性抗原結合タンパク質。
【０１１０】
８．
（ｉ）第一のＩＬ−２Ｒβ結合ポリペプチド：
（ａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸配列からなる結合ユニットＶＬ１、あるいは結合ユニットＶＬ１に少なくとも１つのアミノ酸置換、挿入または欠失を含有するその変異体；
（ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３５のアミノ酸配列からなる結合ユニットＶＨ１、あるいは結合ユニットＶＨ１に少なくとも１つのアミノ酸置換、挿入または欠失を含有するその変異体；
（ｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９２のアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなるＣＨ３ドメインを含む、Ｆｃ部分、ならびに
（ｉｉ）第二のＩＬ−２Ｒγ結合ポリペプチド：
（ｄ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６７のアミノ酸配列からなる結合ユニットＶＬ２、あるいは結合ユニットＶＬ２に少なくとも１つのアミノ酸置換、挿入または欠失を含有するその変異体；
（ｅ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７６のアミノ酸配列からなる結合ユニットＶＨ２、あるいは結合ユニットＶＨ２に少なくとも１つのアミノ酸置換、挿入または欠失を含有するその変異体、および
（ｆ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９４のアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなるＣＨ３ドメインを含む、Ｆｃ部分
を含む、段落４〜７のいずれか１つに定義するような単離ＩＬ−２Ｒ二重特異性抗原結合タンパク質。
【０１１１】
９．  １．４６ｘ１０−７ＭのヒトＩＬ−２Ｒβに対する解離定数（ＫＤ）および２．０９ｘ１０−８ＭのヒトＩＬ−２Ｒγに対する解離定数（ＫＤ）を有する、段落８に定義するような単離ＩＬ−２Ｒ二重特異性抗原結合タンパク質。
【０１１２】
１０．
（ｉ）第一のＩＬ−２Ｒβ結合ポリペプチド：
（ａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５のアミノ酸配列からなる結合ユニットＶＬ１、あるいは結合ユニットＶＬ１に少なくとも１つのアミノ酸置換、挿入または欠失を含有するその変異体；
（ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３９のアミノ酸配列からなる結合ユニットＶＨ１、あるいは結合ユニットＶＨ１に少なくとも１つのアミノ酸置換、挿入または欠失を含有するその変異体；
（ｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９２のアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなるＣＨ３ドメインを含む、Ｆｃ部分、ならびに
（ｉｉ）第二のＩＬ−２Ｒγ結合ポリペプチド：
（ｄ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７１のアミノ酸配列からなる結合ユニットＶＬ２、あるいは結合ユニットＶＬ２に少なくとも１つのアミノ酸置換、挿入または欠失を含有するその変異体；
（ｅ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７８のアミノ酸配列からなる結合ユニットＶＨ２、あるいは結合ユニットＶＨ２に少なくとも１つのアミノ酸置換、挿入または欠失を含有するその変異体、および
（ｆ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９４のアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなるＣＨ３ドメインを含む、Ｆｃ部分
を含む、段落４〜７のいずれか１つに定義するような単離ＩＬ−２Ｒ二重特異性抗原結合タンパク質。
【０１１３】
１１．  １．０１ｘ１０−７ＭのヒトＩＬ−２Ｒβに対する解離定数（ＫＤ）および７．９８ｘ１０−８ＭのヒトＩＬ−２Ｒγに対する解離定数（ＫＤ）を有する、段落１０に定義するような単離ＩＬ−２Ｒ二重特異性抗原結合タンパク質。
【０１１４】
１２．
（ｉ）第一のＩＬ−２Ｒβ結合ポリペプチド：
（ａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９のアミノ酸配列からなる結合ユニットＶＬ１、あるいは結合ユニットＶＬ１に少なくとも１つのアミノ酸置換、挿入または欠失を含有するその変異体；
（ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４３のアミノ酸配列からなる結合ユニットＶＨ１、あるいは結合ユニットＶＨ１に少なくとも１つのアミノ酸置換、挿入または欠失を含有するその変異体；
（ｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９２のアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなるＣＨ３ドメインを含む、Ｆｃ部分、ならびに
（ｉｉ）第二のＩＬ−２Ｒγ結合ポリペプチド：
（ｄ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６７のアミノ酸配列からなる結合ユニットＶＬ２、あるいは結合ユニットＶＬ２に少なくとも１つのアミノ酸置換、挿入または欠失を含有するその変異体；
（ｅ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７６のアミノ酸配列からなる結合ユニットＶＨ２、あるいは結合ユニットＶＨ２に少なくとも１つのアミノ酸置換、挿入または欠失を含有するその変異体、および
（ｆ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９４のアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなるＣＨ３ドメインを含む、Ｆｃ部分
を含む、段落４〜７のいずれか１つに定義するような単離ＩＬ−２Ｒ二重特異性抗原結合タンパク質。
【０１１５】
１３．  １．８１ｘ１０−７ＭのヒトＩＬ−２Ｒβに対する解離定数（ＫＤ）および７．８７ｘ１０−８ＭのヒトＩＬ−２Ｒγに対する解離定数（ＫＤ）を有する、段落１２に定義するような単離ＩＬ−２Ｒ二重特異性抗原結合タンパク質。
【０１１６】
１４．
（ｉ）第一のＩＬ−２Ｒβ結合ポリペプチド：
（ａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３のアミノ酸配列からなる結合ユニットＶＬ１、あるいは結合ユニットＶＬ１に少なくとも１つのアミノ酸置換、挿入または欠失を含有するその変異体；
（ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４７のアミノ酸配列からなる結合ユニットＶＨ１、あるいは結合ユニットＶＨ１に少なくとも１つのアミノ酸置換、挿入または欠失を含有するその変異体；
（ｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９２のアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなるＣＨ３ドメインを含む、Ｆｃ部分、ならびに
（ｉｉ）第二のＩＬ−２Ｒγ結合ポリペプチド：
（ｄ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６７のアミノ酸配列からなる結合ユニットＶＬ２、あるいは結合ユニットＶＬ２に少なくとも１つのアミノ酸置換、挿入または欠失を含有するその変異体；
（ｅ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７６のアミノ酸配列からなる結合ユニットＶＨ２、あるいは結合ユニットＶＨ２に少なくとも１つのアミノ酸置換、挿入または欠失を含有するその変異体、および
（ｆ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９４のアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなるＣＨ３ドメインを含む、Ｆｃ部分
を含む、段落４〜７のいずれか１つに定義するような単離ＩＬ−２Ｒ二重特異性抗原結合タンパク質。
【０１１７】
１５．  １．２８ｘ１０−７ＭのヒトＩＬ−２Ｒβに対する解離定数（ＫＤ）および３．３７ｘ１０−７ＭのヒトＩＬ−２Ｒγに対する解離定数（ＫＤ）を有する、段落１４に定義するような単離ＩＬ−２Ｒ二重特異性抗原結合タンパク質。
【０１１８】
１６．  ＩＬ−２ＲがヒトまたはサルＩＬ−２Ｒである、段落１〜１５のいずれか１つに定義するような単離ＩＬ−２Ｒ二重特異性抗原結合タンパク質。
１７．  完全にヒトである、段落１〜１６のいずれか１つに定義するような単離ＩＬ−２Ｒ二重特異性抗原結合タンパク質。
【０１１９】
１８．  免疫接着分子、画像化剤、療法剤、および細胞傷害剤からなる群より選択される剤をさらに含む、段落１〜１７のいずれか１つに定義するような単離ＩＬ−２Ｒ二重特異性抗原結合タンパク質。
【０１２０】
１９．  前記剤が、放射標識、酵素、蛍光標識、発光標識、生物発光標識、磁気標識、およびビオチンからなる群より選択される画像化剤である、段落１８の単離ＩＬ−２Ｒ二重特異性抗原結合タンパク質。
【０１２１】
２０．  前記剤が、代謝拮抗剤、アルキル化剤、抗生物質、抗ウイルス剤、増殖因子、サイトカイン、抗血管形成剤、抗有糸分裂剤、アントラサイクリン、毒素およびアポトーシス剤からなる群より選択される療法剤または細胞傷害剤である、段落１８の単離ＩＬ−２Ｒ二重特異性抗原結合タンパク質。
【０１２２】
２１．  ＩＬ−２Ｒのアゴニストである、段落１〜２０のいずれか１つに定義するような単離ＩＬ−２Ｒ二重特異性抗原結合タンパク質。
２２．  被験体において、感染性疾患または癌を治療する方法であって、こうした治療を必要とする被験体に、段落１〜２１のいずれか１つに定義するような単離抗原結合タンパク質を投与する工程を含む、前記方法。
【０１２３】
２３．  癌が黒色腫、腎癌または膀胱癌である、段落２２に定義するような方法。
２４．  感染性疾患または癌を治療するための薬剤の製造における、段落１〜２１のいずれか１つに定義するような単離抗原結合タンパク質の使用。
【０１２４】
２５．  癌が黒色腫、腎癌または膀胱癌である、段落２４に定義するような方法。
２６．  段落１〜２１のいずれか１つに定義するような単離ＩＬ−２Ｒ二重特異性抗原結合タンパク質および薬学的に許容されうるキャリアーを含む、組成物。
【０１２５】
２７．  １またはそれより多い療法剤をさらに含む、段落２６の組成物。
２８．  前記の１またはそれより多い療法剤が、抗生物質剤、抗ウイルス剤、抗真菌剤、化学療法剤、小分子阻害剤、免疫療法剤、ワクチン、養子細胞療法剤、免疫チェックポイント阻害剤または抗体療法剤より選択される、段落２７の組成物。
【０１２６】
２９．  段落１〜２１のいずれか１つに定義するような単離ＩＬ−２Ｒ二重特異性抗原結合タンパク質を産生可能である、単離細胞株。
３０．  段落１〜２１のいずれか１つに定義するような単離ＩＬ−２Ｒ二重特異性抗原結合タンパク質を、使用のための説明書とともに含む、キット。
【図面の簡単な説明】
【０１２７】
本発明の原理を例示する態様および実験を、ここで、付随する図に言及しながら論じる。
【図１−１】抗ＩＬ−２Ｒβ抗体クローンの軽鎖可変ドメイン配列。ＣＤＲに下線を引き、そして別個に示す。
【図１−２】抗ＩＬ−２Ｒβ抗体クローンの軽鎖可変ドメイン配列。ＣＤＲに下線を引き、そして別個に示す。
【図１−３】抗ＩＬ−２Ｒβ抗体クローンの軽鎖可変ドメイン配列。ＣＤＲに下線を引き、そして別個に示す。
【図１−４】抗ＩＬ−２Ｒβ抗体クローンの軽鎖可変ドメイン配列。ＣＤＲに下線を引き、そして別個に示す。
【図１−５】抗ＩＬ−２Ｒβ抗体クローンの軽鎖可変ドメイン配列。ＣＤＲに下線を引き、そして別個に示す。
【図２−１】抗ＩＬ−２Ｒβ抗体クローンの重鎖可変ドメイン配列。ＣＤＲに下線を引き、そして別個に示す。
【図２−２】抗ＩＬ−２Ｒβ抗体クローンの重鎖可変ドメイン配列。ＣＤＲに下線を引き、そして別個に示す。
【図２−３】抗ＩＬ−２Ｒβ抗体クローンの重鎖可変ドメイン配列。ＣＤＲに下線を引き、そして別個に示す。
【図２−４】抗ＩＬ−２Ｒβ抗体クローンの重鎖可変ドメイン配列。ＣＤＲに下線を引き、そして別個に示す。
【図２−５】抗ＩＬ−２Ｒβ抗体クローンの重鎖可変ドメイン配列。ＣＤＲに下線を引き、そして別個に示す。
【図３】抗γｃ抗体クローンの軽鎖可変ドメイン配列。ＣＤＲに下線を引き、そして別個に示す。
【図４−１】抗γｃ抗体クローンの重鎖可変ドメイン配列。ＣＤＲに下線を引き、そして別個に示す。
【図４−２】抗γｃ抗体クローンの重鎖可変ドメイン配列。ＣＤＲに下線を引き、そして別個に示す。
【図５】抗ＩＬ−２Ｒβ抗体クローンの軽鎖ＣＤＲ配列を示す表。
【図６】抗ＩＬ−２Ｒβ抗体クローンの重鎖ＣＤＲ配列を示す表。
【図７】抗γｃ抗体クローンの軽鎖ＣＤＲ配列を示す表。
【図８】抗γｃ抗体クローンの重鎖ＣＤＲ配列を示す表。
【図９】Ｐ２Ｃ４由来抗ＩＬ−２Ｒβ抗体クローンの軽鎖ＣＤＲ配列を示す表。
【図１０】Ｐ２Ｃ４由来抗ＩＬ−２Ｒβ抗体クローンの重鎖ＣＤＲ配列を示す表。
【図１１】Ｐ１Ａ３由来抗γｃ抗体クローンの軽鎖ＣＤＲ配列を示す表。
【図１２】Ｐ１Ａ３由来抗γｃ抗体クローンの重鎖ＣＤＲ配列を示す表。
【図１３】抗ＩＬ−２Ｒβ抗体クローンＰ２Ｃ４のＣＨ２およびＣＨ３ドメイン配列。
【図１４】抗γｃ抗体クローンＰ１Ａ３のＣＨ２およびＣＨ３ドメイン配列。
【図１５−１】抗ＩＬ−２Ｒβ抗体クローンのアミノ酸配列。ＶＨドメインを下線で示す。（ＧＧＧＳ）３リンカー（およびその変異体）を太字で示す。ＶＬドメインを二重下線で示す。短いリンカーを斜字および太字で示す。ヒンジを斜字で示す。ＣＨ２ドメインを点線の下線で示す。ＣＨ３ドメインを破線の下線で示す。
【図１５−２】抗ＩＬ−２Ｒβ抗体クローンのアミノ酸配列。ＶＨドメインを下線で示す。（ＧＧＧＳ）３リンカー（およびその変異体）を太字で示す。ＶＬドメインを二重下線で示す。短いリンカーを斜字および太字で示す。ヒンジを斜字で示す。ＣＨ２ドメインを点線の下線で示す。ＣＨ３ドメインを破線の下線で示す。
【図１５−３】抗ＩＬ−２Ｒβ抗体クローンのアミノ酸配列。ＶＨドメインを下線で示す。（ＧＧＧＳ）３リンカー（およびその変異体）を太字で示す。ＶＬドメインを二重下線で示す。短いリンカーを斜字および太字で示す。ヒンジを斜字で示す。ＣＨ２ドメインを点線の下線で示す。ＣＨ３ドメインを破線の下線で示す。
【図１５−４】抗ＩＬ−２Ｒβ抗体クローンのアミノ酸配列。ＶＨドメインを下線で示す。（ＧＧＧＳ）３リンカー（およびその変異体）を太字で示す。ＶＬドメインを二重下線で示す。短いリンカーを斜字および太字で示す。ヒンジを斜字で示す。ＣＨ２ドメインを点線の下線で示す。ＣＨ３ドメインを破線の下線で示す。
【図１５−５】抗ＩＬ−２Ｒβ抗体クローンのアミノ酸配列。ＶＨドメインを下線で示す。（ＧＧＧＳ）３リンカー（およびその変異体）を太字で示す。ＶＬドメインを二重下線で示す。短いリンカーを斜字および太字で示す。ヒンジを斜字で示す。ＣＨ２ドメインを点線の下線で示す。ＣＨ３ドメインを破線の下線で示す。
【図１６−１】抗γｃ抗体クローンのアミノ酸配列。ＶＨドメインを下線で示す。（ＧＧＧＳ）３リンカー（およびその変異体）を太字で示す。ＶＬドメインを二重下線で示す。短いリンカーを斜字および太字で示す。ヒンジを斜字で示す。ＣＨ２ドメインを点線の下線で示す。ＣＨ３ドメインを破線の下線で示す。
【図１６−２】抗γｃ抗体クローンのアミノ酸配列。ＶＨドメインを下線で示す。（ＧＧＧＳ）３リンカー（およびその変異体）を太字で示す。ＶＬドメインを二重下線で示す。短いリンカーを斜字および太字で示す。ヒンジを斜字で示す。ＣＨ２ドメインを点線の下線で示す。ＣＨ３ドメインを破線の下線で示す。
【図１７−１】抗ＩＬ−２Ｒβ抗体クローンのヌクレオチド配列。
【図１７−２】抗ＩＬ−２Ｒβ抗体クローンのヌクレオチド配列。
【図１７−３】抗ＩＬ−２Ｒβ抗体クローンのヌクレオチド配列。
【図１７−４】抗ＩＬ−２Ｒβ抗体クローンのヌクレオチド配列。
【図１７−５】抗ＩＬ−２Ｒβ抗体クローンのヌクレオチド配列。
【図１７−６】抗ＩＬ−２Ｒβ抗体クローンのヌクレオチド配列。
【図１８−１】抗γｃ抗体クローンのヌクレオチド配列。
【図１８−２】抗γｃ抗体クローンのヌクレオチド配列。
【図１８−３】抗γｃ抗体クローンのヌクレオチド配列。
【図１９】二重特異性抗ＩＬ−２Ｒβ／γｃ抗体の模式図。
【図２０】表面プラズモン共鳴分析によって決定されるような、（Ａ）ヒトＩＬ−２Ｒβおよび（Ｂ）ヒトγｃに対する二重特異性抗ＩＬ−２Ｒβ／γｃ抗体の結合を示すセンソグラム。
【図２１−１】フローサイトメトリーによって決定されるような、（Ａ）ＩＬ−２Ｒβ／γｃを発現する細胞（および発現しない対照細胞）、および（Ｂ）ＰＢＭＣに対する二重特異性抗ＩＬ−２Ｒβ／γｃ抗体の結合を示すヒストグラム。
【図２１−２】フローサイトメトリーによって決定されるような、（Ａ）ＩＬ−２Ｒβ／γｃを発現する細胞（および発現しない対照細胞）、および（Ｂ）ＰＢＭＣに対する二重特異性抗ＩＬ−２Ｒβ／γｃ抗体の結合を示すヒストグラム。
【図２２】フローサイトメトリーによって決定されるような、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＩＬ−２または二重特異性抗ＩＬ−２Ｒβ／γｃ抗体でのＮＫ９２細胞の処理による、ＳＴＡＴ５、ＡｋｔおよびＥＲＫ仲介シグナル伝達の誘導を示すヒストグラム。
【図２３】フローサイトメトリーによって決定されるような、異なる免疫細胞サブセットに関する、ＩＬ−２または二重特異性抗ＩＬ−２Ｒβ／γｃ抗体での処理に反応したＳＴＡＴ５リン酸化パーセントを示すグラフ。
【図２４】二重特異性抗ＩＬ−２Ｒβ／γｃ抗体、あるいはＩＬ−２Ｒβまたはγｃのみに対する特異性を示す対照抗体での処理に反応した、ＩＬ−２依存性ＮＫ９２細胞の増殖を示すグラフ。
【図２５−１】抗ＩＬ−２Ｒβ／γｃ抗体による結合に対する、リンカーの長さの分析結果を示すグラフおよび図。（Ａ）抗体およびｓｃＦｖ形式の模式図、ならびにリンカー（リンカーを斜字で示す）。（Ｂ）異なる長さのリンカーを含む二重特異性抗ＩＬ−２Ｒβ／γｃ抗体での処理に反応した、ＮＫ９２細胞の増殖を示すグラフ。（Ｃ）異なる長さのリンカーを含むビス−ｓｃＦｃ形式の二重特異性抗ＩＬ−２Ｒβ／γｃでの処理に反応した、ＮＫ９２細胞の増殖を示すグラフ。
【図２５−２】抗ＩＬ−２Ｒβ／γｃ抗体による結合に対する、リンカーの長さの分析結果を示すグラフおよび図。（Ａ）抗体およびｓｃＦｖ形式の模式図、ならびにリンカー（リンカーを斜字で示す）。（Ｂ）異なる長さのリンカーを含む二重特異性抗ＩＬ−２Ｒβ／γｃ抗体での処理に反応した、ＮＫ９２細胞の増殖を示すグラフ。（Ｃ）異なる長さのリンカーを含むビス−ｓｃＦｃ形式の二重特異性抗ＩＬ−２Ｒβ／γｃでの処理に反応した、ＮＫ９２細胞の増殖を示すグラフ。
【図２６】フローサイトメトリーによって決定されるような、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＩＬ−２または二重特異性抗ＩＬ−２Ｒβ／γｃ抗体での処理によるカニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ  ｍａｃａｑｕｅ）脾臓細胞におけるＳＴＡＴ５シグナル伝達誘導を示すヒストグラム。
【図２７−１】組換えヒトＩＬ−２または二重特異性抗ＩＬ−２Ｒβ／γｃ抗体（Ｍｅｇａ２）の示す量の存在下で１週間ＰＢＭＣを培養した後の、Ｔ細胞数および比を示すグラフ。（Ａ）ＣＤ３＋細胞、（Ｂ）ＣＤ４＋細胞、（Ｃ）ＣＤ８＋細胞、および（Ｄ）ＣＤ８＋対ＣＤ４＋細胞の比。
【図２７−２】組換えヒトＩＬ−２または二重特異性抗ＩＬ−２Ｒβ／γｃ抗体（Ｍｅｇａ２）の示す量の存在下で１週間ＰＢＭＣを培養した後の、Ｔ細胞数および比を示すグラフ。（Ａ）ＣＤ３＋細胞、（Ｂ）ＣＤ４＋細胞、（Ｃ）ＣＤ８＋細胞、および（Ｄ）ＣＤ８＋対ＣＤ４＋細胞の比。
【図２８】組換えヒトＩＬ−２または二重特異性抗ＩＬ−２Ｒβ／γｃ抗体（Ｍｅｇａ２）の示す量の存在下で１週間ＰＢＭＣを培養した後の、Ｔｒｅｇの割合を示すグラフ。
【図２９】組換えヒトＩＬ−２または二重特異性抗ＩＬ−２Ｒβ／γｃ抗体（Ｍｅｇａ２）の示す量の存在下で１週間ＰＢＭＣを培養した後の、ＣＤ８＋細胞の割合としてのＣＤ８＋  Ｔ細胞サブセットを示すグラフ。各サブセットに関して、左から右に、データ点は：ＩＬ−２  ２００ｎｇ／ｍｌ、Ｍｅｇａ２  ３μｇ／ｍｌ、Ｍｅｇａ２  １μｇ／ｍｌ、Ｍｅｇａ２  ０．３μｇ／ｍｌ、Ｍｅｇａ２  ０．３μｇ／ｍｌおよびＣＤ３／２８である。
【図３０−１】ＥＢＶ−ＬＣＬおよび組換えヒトＩＬ−２または二重特異性抗ＩＬ−２Ｒβ／γｃ抗体（Ｍｅｇａ２）の示す量の存在下で、ＥＢＶ血清陽性ドナー由来のＰＢＭＣを培養した後の、Ｔ細胞数および比を示すグラフ。（Ａ）ＣＤ３＋細胞、（Ｂ）ＣＤ４＋細胞、（Ｃ）ＣＤ８＋細胞、および（Ｄ）ＣＤ８＋対ＣＤ４＋細胞の比。
【図３０−２】ＥＢＶ−ＬＣＬおよび組換えヒトＩＬ−２または二重特異性抗ＩＬ−２Ｒβ／γｃ抗体（Ｍｅｇａ２）の示す量の存在下で、ＥＢＶ血清陽性ドナー由来のＰＢＭＣを培養した後の、Ｔ細胞数および比を示すグラフ。（Ａ）ＣＤ３＋細胞、（Ｂ）ＣＤ４＋細胞、（Ｃ）ＣＤ８＋細胞、および（Ｄ）ＣＤ８＋対ＣＤ４＋細胞の比。
【図３１−１】ＥＢＶ−ＬＣＬおよび組換えヒトＩＬ−２または二重特異性抗ＩＬ−２Ｒβ／γｃ抗体（Ｍｅｇａ２）の示す量の存在下で、ＥＢＶ血清陽性ドナー由来のＰＢＭＣを培養した後の、Ｔ細胞サブセットを示すグラフ。（Ａ）ＣＤ８＋細胞の割合としてのＣＤ８＋  Ｔ細胞サブセット。各サブセットに関して、左から右に、データ点は：ＩＬ−２  ２００ｎｇ／ｍｌ、Ｍｅｇａ２  ３μｇ／ｍｌ、Ｍｅｇａ２  １μｇ／ｍｌ、Ｍｅｇａ２  ０．３μｇ／ｍｌ、Ｍｅｇａ２  ０．３μｇ／ｍｌおよびＣＤ３／２８である。（Ｂ）ＣＤ８＋細胞の割合としてのＣＤ８＋ＰＤ１＋細胞、および（Ｃ）ＣＤ４＋細胞の割合としてのＴｒｅｇ。
【図３１−２】ＥＢＶ−ＬＣＬおよび組換えヒトＩＬ−２または二重特異性抗ＩＬ−２Ｒβ／γｃ抗体（Ｍｅｇａ２）の示す量の存在下で、ＥＢＶ血清陽性ドナー由来のＰＢＭＣを培養した後の、Ｔ細胞サブセットを示すグラフ。（Ａ）ＣＤ８＋細胞の割合としてのＣＤ８＋  Ｔ細胞サブセット。各サブセットに関して、左から右に、データ点は：ＩＬ−２  ２００ｎｇ／ｍｌ、Ｍｅｇａ２  ３μｇ／ｍｌ、Ｍｅｇａ２  １μｇ／ｍｌ、Ｍｅｇａ２  ０．３μｇ／ｍｌ、Ｍｅｇａ２  ０．３μｇ／ｍｌおよびＣＤ３／２８である。（Ｂ）ＣＤ８＋細胞の割合としてのＣＤ８＋ＰＤ１＋細胞、および（Ｃ）ＣＤ４＋細胞の割合としてのＴｒｅｇ。
【図３２】ＥＢＶ−ＬＣＬおよび組換えヒトＩＬ−２または二重特異性抗ＩＬ−２Ｒβ／γｃ抗体（Ｍｅｇａ２）の示す量の存在下で、ＥＢＶ血清陽性ドナー由来のＰＢＭＣを培養した後の、ＣＴＬ細胞傷害性を示すグラフ。
【図３３−１】Ｐ１Ａ３ファミリークローンの熱安定性を示す棒グラフ。熱処理前および後の、γｃに対する、Ｐ１Ａ３ならびに突然変異クローン（Ａ）Ｂ４およびＥ９ならびに（Ｂ）Ｂ３およびＥ８の結合。２つ組の平均±ＳＤを示す。
【図３３−２】Ｐ１Ａ３ファミリークローンの熱安定性を示す棒グラフ。熱処理前および後の、γｃに対する、Ｐ１Ａ３ならびに突然変異クローン（Ａ）Ｂ４およびＥ９ならびに（Ｂ）Ｂ３およびＥ８の結合。２つ組の平均±ＳＤを示す。
【図３４−１】Ｐ２Ｃ４ファミリークローンの熱安定性を示す棒グラフ。熱処理前および後の、ＩＬ−２Ｒβに対する、Ｐ２Ｃ４ならびに突然変異クローン（Ａ）Ａ９、Ｂ１、Ｂ５、Ｂ６、Ｂ８、Ｃ４、Ｃ７、Ｃ１２、Ｅ２、Ｅ３、Ｅ７、Ｅ８、Ｅ９、Ｇ２、Ｇ１１、Ｈ１、Ｈ２、およびＨ３ならびに（Ｂ）Ａ４、Ｂ１２、Ｃ１、Ｄ１０、Ｅ６、Ｆ８、Ｆ１１およびＣ１Ｄ１０の結合。２つ組の平均±ＳＤを示す。
【図３４−２】Ｐ２Ｃ４ファミリークローンの熱安定性を示す棒グラフ。熱処理前および後の、ＩＬ−２Ｒβに対する、Ｐ２Ｃ４ならびに突然変異クローン（Ａ）Ａ９、Ｂ１、Ｂ５、Ｂ６、Ｂ８、Ｃ４、Ｃ７、Ｃ１２、Ｅ２、Ｅ３、Ｅ７、Ｅ８、Ｅ９、Ｇ２、Ｇ１１、Ｈ１、Ｈ２、およびＨ３ならびに（Ｂ）Ａ４、Ｂ１２、Ｃ１、Ｄ１０、Ｅ６、Ｆ８、Ｆ１１およびＣ１Ｄ１０の結合。２つ組の平均±ＳＤを示す。
【図３５】（Ａ）ＩＬ−２Ｒβに対するＰ２Ｃ４＿ＦＷ２一本鎖抗体、および（Ｂ）γｃに対するＰ１Ａ３＿ＦＷ２一本鎖抗体の結合を示すグラフ。
【図３６】ＮＳＧＡＧＴＡＡＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５７）またはＧＧＧＧＳＡＡＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５８）の短いリンカーを有する抗体に関する、（Ａ）ＩＬ−２Ｒβ、および（Ｂ）γｃに対する二重特異性抗体クローンＰ２Ｃ４／Ｐ１Ａ３の結合を示すグラフ。
【図３７】（Ａ）ＩＬ−２Ｒβ、および（Ｂ）γｃに対する二重特異性操作抗体クローンの結合を示すグラフ。
【図３８】フローサイトメトリーによって測定されるような、二重特異性抗ＩＬ−２Ｒβ／γｃ抗体曝露に対する抗原特異的ＣＤ８＋  Ｔ細胞のｉｎ  ｖｉｔｒｏ反応を示すグラフ。（Ａ）ＣＤ８＋  Ｔ細胞の二重特異性抗ＩＬ−２Ｒβ／γｃ抗体依存性増殖。（Ｂ）自己ＬＣＬ共培養後、ＩＬ−２に比較した抗体に対する曝露後のＣＤ８：ＣＤ４＋  Ｔ細胞比。＊ｐ値＜０．０５。
【図３９】（Ａ）抗原特異的、または（Ｂ）非特異的セッティングにおいて、フローサイトメトリーによって測定されるような、二重特異性抗ＩＬ−２Ｒβ／γｃ抗体曝露に対するＴｒｅｇ細胞のｉｎ  ｖｉｔｒｏ反応を示すグラフ。＊ｐ値＜０．０５。
【図４０−１】Ｌｕｍｉｎｅｘ分析によって測定されるようなサイトカインレベルを示す棒グラフ。抗ＩＬ−２Ｒβ／γｃ抗体の投与前および投与後の、非ヒト霊長類血漿における（Ａ）ＩＦＮγ、（Ｂ）ＩＬ−１５、（Ｃ）ＩＬ−１β、（Ｄ）ＩＬ−６、および（Ｅ）ＴＮＦα。
【図４０−２】Ｌｕｍｉｎｅｘ分析によって測定されるようなサイトカインレベルを示す棒グラフ。抗ＩＬ−２Ｒβ／γｃ抗体の投与前および投与後の、非ヒト霊長類血漿における（Ａ）ＩＦＮγ、（Ｂ）ＩＬ−１５、（Ｃ）ＩＬ−１β、（Ｄ）ＩＬ−６、および（Ｅ）ＴＮＦα。
【図４０−３】Ｌｕｍｉｎｅｘ分析によって測定されるようなサイトカインレベルを示す棒グラフ。抗ＩＬ−２Ｒβ／γｃ抗体の投与前および投与後の、非ヒト霊長類血漿における（Ａ）ＩＦＮγ、（Ｂ）ＩＬ−１５、（Ｃ）ＩＬ−１β、（Ｄ）ＩＬ−６、および（Ｅ）ＴＮＦα。
【図４１−１】フローサイトメトリーによって測定されるような、二重特異性抗ＩＬ−２Ｒβ／γｃ抗体注射に対するＴ細胞サブセットのｉｎ  ｖｉｖｏ反応を示す棒グラフ。（Ａ）総白血球集団の割合としてのＴ細胞、（Ｂ）総ＣＤ８＋  Ｔ細胞集団の割合としてのＫｉ−６７＋陽性ＣＤ８＋細胞。（Ｃ）総ＣＤ４＋  Ｔ細胞集団の割合としてのＫｉ−６７＋陽性ＣＤ４＋細胞。二重特異性抗体依存性増殖は、総白血球集団に比較した、Ｔ細胞増加によって示される。
【図４１−２】フローサイトメトリーによって測定されるような、二重特異性抗ＩＬ−２Ｒβ／γｃ抗体注射に対するＴ細胞サブセットのｉｎ  ｖｉｖｏ反応を示す棒グラフ。（Ａ）総白血球集団の割合としてのＴ細胞、（Ｂ）総ＣＤ８＋  Ｔ細胞集団の割合としてのＫｉ−６７＋陽性ＣＤ８＋細胞。（Ｃ）総ＣＤ４＋  Ｔ細胞集団の割合としてのＫｉ−６７＋陽性ＣＤ４＋細胞。二重特異性抗体依存性増殖は、総白血球集団に比較した、Ｔ細胞増加によって示される。
【図４２】フローサイトメトリーによって測定されるような、二重特異性抗ＩＬ−２Ｒβ／γｃ抗体注射に対するＮＫ細胞のｉｎ  ｖｉｖｏ反応を示す棒グラフ。（Ａ）投与前総白血球の比率としてのＮＫ細胞、（Ｂ）総ＮＫ細胞集団の比率としてのＫｉ−６７＋陽性ＮＫ細胞。
【発明を実施するための形態】
【０１２８】
本発明は、インターロイキン−２受容体（ＩＬ−２Ｒ）鎖βおよびγに対する特異性を持ち、中程度のアフィニティのＩＬ−２Ｒ  β−γを発現する細胞を刺激可能であり、そして高アフィニティＩＬ−２Ｒ  α−β−γを発現する細胞を優先的には刺激可能でない、二重特異性抗体のヌクレオチドおよびアミノ酸配列を含む。
【０１２９】
本開示は、受容体活性化が、抗ＩＬ−２Ｒβ（ＣＤ１２２）および抗γｃ（ＣＤ１４３）特異性を所持する二重特異性抗体（または二重官能性タンパク質）によるβ−γｃ構成要素のヘテロ二量体化を通じて達成される、ＩＬ−２Ｒα非依存性ＩＬ−２Ｒアゴニストの設計を記載する。こうした分子の使用は、高アフィニティα−β−γｃ  ＩＬ−２Ｒを発現する細胞の優先的でそして高い活性化を伴わずに、免疫細胞、特にＴ細胞の活性化によって、望ましい免疫刺激を伝達可能である。こうした分子は、ワクチンアジュバントとして有用であろう。
【０１３０】
ＩＬ−２Ｒβ（ＣＤ１２２）またはＩＬ２Ｒγｃ（ＣＤ１３２）に結合する２つの完全ヒトモノクローナル抗体に関する単離ヌクレオチドおよびアミノ酸配列を記載する。
ＩＬ−２ＲβおよびＩＬ２Ｒγｃに対する一価特異性を示す操作抗体のヌクレオチドおよびアミノ酸配列を記載する。
【０１３１】
前述の単離モノクローナル抗体由来の可変ドメインを含有し、そしてＩＬ−２ＲβおよびＩＬ２Ｒγｃ両方に結合可能である二重特異性抗体構築物を記載する。
前述の単離モノクローナル抗体の配列に由来するＩＬ−２ＲβおよびＩＬ２Ｒγｃ結合ドメインを含有する二重官能性タンパク質を記載する。
【０１３２】
ＩＬ−２Ｒβ／γｃに結合し、そしてＳＴＡＴ５および／またはＡｋｔのリン酸化を誘発する抗体または二重官能性タンパク質を記載する。
ＩＬ−２Ｒβ／γｃに結合し、そしてより高いアフィニティでＩＬ−２Ｒα／β／γｃ（ＣＤ２５）に結合しない、抗体または二重官能性タンパク質を記載する。
【０１３３】
ＩＬ−２Ｒβ／γｃにアゴニスト性に結合し、そして細胞内シグナル伝達を誘発し、そして細胞内シグナル伝達を誘発することなくＩＬ−２Ｒα／β／γｃ（ＣＤ２５）にアンタゴニスト性に結合する、抗体または二重官能性タンパク質を記載する。
【０１３４】
単独での、あるいは抗癌剤または抗感染性薬剤と組み合わせた、癌または感染性疾患の治療におけるこれらの分子いずれかの使用を記載する。
抗体
本発明記載の抗体は、好ましくは、ＣＤ１２２（インターロイキン２受容体β（ＩＬ−２Ｒβ））および／または共通γ鎖（γｃ）に結合する。いくつかの態様において、抗体／断片は、ヒトＣＤ１２２および／またはヒトγｃに結合する。いくつかの態様において、抗体／断片は、非ヒト霊長類ＣＤ１２２および／または非ヒト霊長類γｃに結合する。
【０１３５】
「抗体」によって、本発明者らは、その断片または誘導体、あるいは合成抗体または合成抗体断片も含める。本発明記載の抗体は、単離型で提供されてもよい。
モノクローナル抗体技術に関連した今日の技術を考慮すると、抗体は、大部分の抗原に対して調製可能である。抗原結合部分は、抗体の部分（例えばＦａｂ断片）または合成抗体断片（例えば一本鎖Ｆｖ断片［ＳｃＦｖ］）であってもよい。選択した抗原に対する適切なモノクローナル抗体は、既知の技術、例えば、“Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ”，  Ｈ  Ｚｏｌａ（ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，  １９８８）に、そして“Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ”，  Ｊ  Ｇ  Ｒ  Ｈｕｒｒｅｌｌ（ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，  １９８２）に開示されるものによって調製可能である。キメラ抗体は、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら（１９８８，  ８ｔｈ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｐａｒｔ  ２，  ７９２−７９９）によって論じられる。
【０１３６】
モノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、本発明の方法において有用であり、そして抗原上の単一のエピトープを特異的にターゲティングする抗体の均質な集団である。
ＦａｂおよびＦａｂ２断片などの、抗体の抗原結合断片もまた用いて／提供してもよく、遺伝子操作した抗体および抗体断片もまた用いて／提供してもよい。抗体の可変重鎖（ＶＨ）および可変軽鎖（ＶＬ）ドメインは、抗原認識に関与し、この事実は、初期のプロテアーゼ消化実験によって最初に認識された。さらなる確認は、齧歯類抗体の「ヒト化」によって見出された。齧歯類起源の可変ドメインを、ヒト起源の定常ドメインに融合させて、生じる抗体が、齧歯類親抗体の抗原特異性を保持するようにしてもよい（Ｍｏｒｒｉｓｏｎら（１９８４）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８１，  ６８５１−６８５５）。
【０１３７】
抗原特異性は可変ドメインによって与えられ、そして定常ドメインからは独立であることは、すべて１またはそれより多くの可変ドメインを含有する抗体断片の細菌発現を伴う実験から知られる。これらの分子には、Ｆａｂ様分子（Ｂｅｔｔｅｒら（１９８８）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４０，  １０４１）；  Ｆｖ分子（Ｓｋｅｒｒａら（１９８８）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４０，  １０３８）；  ＶＨおよびＶＬパートナードメインが柔軟なオリゴペプチドを通じて連結される、一本鎖Ｆｖ（ＳｃＦｖ）分子（Ｂｉｒｄら（１９８８）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２，  ４２３；  Ｈｕｓｔｏｎら（１９８８）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８５，  ５８７９）；ならびに単離Ｖドメインを含む単一ドメイン抗体（ｄＡｂ）（Ｗａｒｄら（１９８９）  Ｎａｔｕｒｅ  ３４１，  ５４４）が含まれる。特異的結合部位を保持する抗体断片合成に関与する技術の一般的な概説は、Ｗｉｎｔｅｒ  ＆  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ（１９９１）  Ｎａｔｕｒｅ  ３４９，  ２９３−２９９中に見出されるはずである。
【０１３８】
「ＳｃＦｖ分子」によって、本発明者らは、ＶＨおよびＶＬパートナードメインが、例えば柔軟なオリゴペプチドによって、共有結合されている分子を意味する。
Ｆａｂ、Ｆｖ、ＳｃＦｖおよびｄＡｂ抗体断片は、すべて大腸菌において発現可能であり、そして大腸菌から分泌可能であり、したがって、多量の前記断片の容易な産生が可能になる。
【０１３９】
全抗体、およびＦ（ａｂ’）２断片は「二価」である。「二価」によって、本発明者らは、前記抗体およびＦ（ａｂ’）２断片が２つの抗原結合部位を有することを意味する。対照的に、Ｆａｂ、Ｆｖ、ＳｃＦｖおよびｄＡｂ断片は一価であり、１つの抗原結合部位しか持たない。
【０１４０】
本発明は、ＣＤ１２２およびγｃに結合可能である、抗体または抗原結合断片を提供する。いくつかの態様において、抗体／断片は、二重特異性抗体または二重特異性抗原結合断片である。いくつかの態様において、二重特異性抗体または二重特異性抗原結合断片は単離されていてもよい。
【０１４１】
いくつかの態様において、二重特異性抗体および二重特異性抗原結合断片は、ＣＤ１２２に結合可能な抗体／断片、例えば本明細書記載の抗体／断片を含む。
いくつかの態様において、二重特異性抗体および二重特異性抗原結合断片は、γｃに結合可能な抗体／断片、例えば本明細書記載の抗体／断片を含む。
【０１４２】
いくつかの態様において、二重特異性抗体／断片は、ＣＤ１２２に結合可能な抗体／断片、および別のターゲットタンパク質に結合可能な抗体／断片を含む。
いくつかの態様において、二重特異性抗体／断片は、γｃに結合可能な抗体／断片、および別のターゲットタンパク質に結合可能な抗体／断片を含む。
【０１４３】
別のターゲットタンパク質に結合可能な抗原結合断片は、ＣＤ１２２またはγｃ以外の別のタンパク質に結合可能であってもよい。
本発明の１つの側面において、γｃに結合するが、ＣＤ１２２に結合しない二重特異性抗体を提供する。
【０１４４】
本発明記載の二重特異性抗体／断片の抗原結合断片は、抗原に結合可能なポリペプチドの任意の断片であってもよい。
いくつかの態様において、抗原結合断片は、ともに抗体の抗原結合領域または抗原結合断片を定義する少なくとも３つの軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）（すなわちＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２およびＬＣ−ＣＤＲ３）および３つの重鎖ＣＤＲ（すなわちＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２およびＨＣ−ＣＤＲ３）を含む。いくつかの態様において、抗原結合断片は、抗体または抗原結合断片の軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメインを含んでもよい。いくつかの態様において、抗原結合断片は、抗体または抗原結合断片の軽鎖ポリペプチドおよび重鎖ポリペプチドを含んでもよい。
【０１４５】
本発明記載の二重特異性抗体および断片は、任意の適切な形式、例えば本明細書にその全体が援用されるＫｏｎｔｅｒｍａｎｎ  ＭＡｂｓ  ２０１２，  ４（２）：  １８２−１９７に記載される形式で提供されてもよい。例えば、二重特異性抗体または二重特異性抗原結合断片は、二重特異性抗体コンジュゲート（例えばＩｇＧ２、Ｆ（ａｂ’）２またはＣｏｖＸ−Ｂｏｄｙ）、二重特異性ＩｇＧまたはＩｇＧ様分子（例えばＩｇＧ、ｓｃＦｖ４−Ｉｇ、ＩｇＧ−ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−ＩｇＧ、ＤＶＤ−Ｉｇ、ＩｇＧ−ｓＶＤ、ｓＶＤ−ＩｇＧ、２イン１−ＩｇＧ、ｍＡｂ２、またはＴａｎｄｅｍａｂ共通ＬＣ）、非対称二重特異性ＩｇＧまたはＩｇＧ様分子（例えばｋｉｈ  ＩｇＧ、ｋｉｈ  ＩｇＧ共通ＬＣ、ＣｒｏｓｓＭａｂ、ｋｉｈ  ＩｇＧ−ｓｃＦａｂ、ｍＡｂ−Ｆｖ、電荷対（ｃｈａｒｇｅ  ｐａｉｒ）またはＳＥＥＤ−ｂｏｄｙ）、小分子二重特異性抗体分子（例えばＤｉａｂｏｄｙ（Ｄｂ）、ｄｓＤｂ、ＤＡＲＴ、ｓｃＤｂ、ｔａｎｄＡｂｓ、タンデムｓｃＦｖ（ｔａＦｖ）、タンデムｄＡｂ／ＶＨＨ、三重ボディ、三重ヘッド、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ、またはＦ（ａｂ’）２−ｓｃＦｖ２）、二重特異性ＦｃおよびＣＨ３融合タンパク質（例えばｔａＦｖ−Ｆｃ、Ｄｉ−ディアボディ、ｓｃＤｂ−ＣＨ３、ｓｃＦｖ−Ｆｃ−ｓｃＦｖ、ＨＣＡｂ−ＶＨＨ、ｓｃＦｖ−ｋｉｈ−Ｆｃ、またはｓｃＦｖ−ｋｉｈ−ＣＨ３）、または二重特異性融合タンパク質（例えばｓｃＦｖ２−アルブミン、ｓｃＤｂ−アルブミン、ｔａＦｖ−毒素、ＤＮＬ−Ｆａｂ３、ＤＮＬ−Ｆａｂ４−ＩｇＧ、ＤＮＬ−Ｆａｂ４−ＩｇＧ−サイトカイン２）であってもよい。特に、Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ  ＭＡｂｓ  ２０１２，  ４（２）：  １８２−１９の図２を参照されたい。
【０１４６】
いくつかの態様において、各々、異なる抗原に対する特異的結合を示す、２つのｓｃＦｖが、例えば図２５Ａ右に例示するように、リンカーによって連結されている、ｓｃＦｖ二量体形式が好ましい。
【０１４７】
リンカーは、任意の望ましい長さ、例えば２〜５０アミノ酸、５〜５０アミノ酸、５〜４０アミノ酸、５〜３０アミノ酸、５〜２０アミノ酸、または５〜１０アミノ酸の１つのアミノ酸配列であってもよい。
【０１４８】
当業者は、本発明記載の二重特異性抗体および二重特異性抗原結合断片を設計し、そして調製することが可能である。二重特異性抗体を産生するための方法には、例えば還元可能ジスルフィドまたは還元不能チオエーテル結合を用いた、例えば本明細書にその全体が援用されるＳｅｇａｌおよびＢａｓｔ，  ２００１．  二重特異性抗体の産生。  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．  １４：ＩＶ：２．１３：２．１３．１−２．１３．１６に記載されるような、抗体または抗体断片の化学的架橋が含まれる。例えば、Ｎ−スクシニミジル−３−（−２−ピリジルジチオ）−プロピオネート（ＳＰＤＰ）を用いて、例えばヒンジ領域ＳＨ基を通じてＦａｂ断片を化学的に架橋して、ジスルフィド連結二重特異性Ｆ（ａｂ）２ヘテロ二量体を生成してもよい。
【０１４９】
二重特異性抗体を産生するための他の方法には、抗体産生ハイブリドーマを、例えばポリエチレングリコールで融合させて、例えばＤ．  Ｍ．およびＢａｓｔ，  Ｂ．  Ｊ．  ２００１．  二重特異性抗体の産生。  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．  １４：ＩＶ：２．１３：２．１３．１−２．１３．１６に記載されるような二重特異性抗体を分泌可能なクアドローマ細胞を産生することが含まれる。
【０１５０】
本発明記載の二重特異性抗体および二重特異性抗原結合断片はまた、組換え的に、例えばどちらも本明細書にその全内容が援用される、Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ：  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，  第２版（Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，  ２０１２），  第４０章：  二重特異性抗体の産生：ディアボディおよびタンデムｓｃＦｖ（ＨｏｒｎｉｇおよびＦａｒｂｅｒ−Ｓｃｈｗａｒｚ）、または  Ｆｒｅｎｃｈ，  二重特異性抗体作製法，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．  Ｍｅｄ．  ２０００；  ４０：３３３−３３９に記載されるような、抗原結合性分子のためのポリペプチドをコードする核酸構築物からの発現によって産生可能である。
【０１５１】
例えば、２つの抗原結合断片のための軽鎖および重鎖可変ドメイン（すなわちＣＤ１２２またはγｃに結合可能な抗原結合断片のための軽鎖および重鎖可変ドメイン、ならびに別のターゲットタンパク質に結合可能な抗原結合断片のための軽鎖および重鎖可変ドメイン）をコードし、そして抗原結合断片間に適切なリンカーまたは二量体化ドメインをコードする配列を含むＤＮＡ構築物を、分子クローニング技術によって調製してもよい。その後、組換え二重特異性抗体を、適切な宿主細胞（例えば哺乳動物宿主細胞）において構築物を発現させる（例えばｉｎ  ｖｉｔｒｏ）ことによって産生してもよく、そして次いで、発現した組換え二重特異性抗体を場合によって精製してもよい。
【０１５２】
非修飾親抗体に比較して、抗原に対する抗体のアフィニティが改善されている修飾抗体を生成する、アフィニティ成熟プロセスによって抗体を産生してもよい。当該技術分野に知られる方法、例えばＭａｒｋｓら，  Ｒｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：７７９−７８３（１９９２）；  Ｂａｒｂａｓら  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９１：３８０９−３８１３（１９９４）；  Ｓｃｈｉｅｒら  Ｇｅｎｅ  １６９：１４７−１５５（１９９５）；  Ｙｅｌｔｏｎら  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １５５：１９９４−２００４（１９９５）；  Ｊａｃｋｓｏｎら，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １５４（７）：３３１  ０−１５  ９（１９９５）；およびＨａｗｋｉｎｓら，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２２６：８８９−８９６（１９９２）によって、アフィニティ成熟抗体を産生してもよい。
【０１５３】
本発明記載の抗体は、ＣＤ１２２、および／またはγｃに対する特異的結合を示してもよい。
ターゲット分子に特異的に結合する抗体は、好ましくは、他のターゲットに結合するよりもより高いアフィニティで、および／またはより長い期間、ターゲットに結合する。いくつかの態様において、本発明の抗体は、Ｉ型サイトカイン受容体ファミリーの１またはそれより多いメンバーに対するよりも、ＣＤ１２２および／またはγｃにより高いアフィニティで結合しうる。いくつかの態様において、非関連ターゲットに対する抗体の結合の度合いは、例えばＥＬＩＳＡ、ＳＰＲ、Ｂｉｏ−Ｌａｙｅｒインターフェロメトリーによってまたはラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定されるような、ターゲットに対する抗体の結合の約１０％未満である。あるいは、結合特異性は、本発明の抗ＣＤ１２２および／またはγｃ抗体が、別のターゲット分子に対する抗体のＫＤよりも少なくとも０．１桁分（すなわち０．１ｘ１０ｎ、式中、ｎは桁を示す整数である）高いＫＤで、ＣＤ１２２および／またはγｃに結合する結合アフィニティの観点から、反映されうる。これは、場合によって、少なくとも０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．５、または２．０の１つであってもよい。
【０１５４】
ターゲットに対する抗体の結合アフィニティは、しばしば、解離定数（ＫＤ）の観点で記載される。結合アフィニティは、当該技術分野に知られる方法によって、例えば、ＥＬＩＳＡ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ；例えばＨｅａｒｔｙら，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  （２０１２）  ９０７：４１１−４４２を参照されたい）、Ｂｉｏ−Ｌａｙｅｒインターフェロメトリー（例えばＬａｄら，  （２０１５）  Ｊ  Ｂｉｏｍｏｌ  Ｓｃｒｅｅｎ  ２０（４）：  ４９８−５０７を参照されたい）によって、または抗体のＦａｂ型および抗原分子で行う放射標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）によって、測定可能である。
【０１５５】
いくつかの態様において、本発明記載の抗体は、≦１ｘ１０−６Ｍ、≦７．５ｘ１０−７Ｍ、≦５ｘ１０−７Ｍ、≦４．５ｘ１０−７Ｍ、≦４ｘ１０−７Ｍ、≦５ｘ１０−７Ｍ、≦４．５ｘ１０−７Ｍ、≦３ｘ１０−７Ｍ、≦３．５ｘ１０−７Ｍ、≦３ｘ１０−７Ｍ、≦２．５ｘ１０−７Ｍ、≦２ｘ１０−７Ｍ、≦１．９ｘ１０−７Ｍ、≦１．８ｘ１０−７Ｍ、≦１．７ｘ１０−７Ｍ、≦１．６ｘ１０−７Ｍ、≦１．５ｘ１０−７Ｍ、≦１．４ｘ１０−７Ｍ、≦１．３ｘ１０−７Ｍ、≦１．２ｘ１０−７Ｍ、≦１．１ｘ１０−７Ｍ、≦１ｘ１０−７Ｍ、≦８ｘ１０−８Ｍ、≦６ｘ１０−８Ｍ、≦４ｘ１０−８Ｍ、または≦２ｘ１０−８Ｍの１つのＣＤ１２２に対する解離定数（ＫＤ）を有する。
【０１５６】
いくつかの態様において、本発明記載の抗体は、≦１０ｘ１０−７Ｍ、≦７．５ｘ１０−７Ｍ、≦５ｘ１０−７Ｍ、≦２．５ｘ１０−７Ｍ、≦１ｘ１０−７Ｍ、≦９．５ｘ１０−８Ｍ、≦９ｘ１０−８Ｍ、≦８．５ｘ１０−８Ｍ、≦８ｘ１０−８Ｍ、≦７．５ｘ１０−８Ｍ、≦７ｘ１０−８Ｍ、≦６．５ｘ１０−８Ｍ、≦６ｘ１０−８Ｍ、≦５．５ｘ１０−８Ｍ、≦５ｘ１０−８Ｍ、≦４．５ｘ１０−８Ｍ、≦４ｘ１０−８Ｍ、≦３．５ｘ１０−８Ｍ、≦３ｘ１０−８Ｍ、≦２．５ｘ１０−８Ｍ、≦２ｘ１０−８Ｍ、≦１．５ｘ１０−８Ｍ、≦１ｘ１０−８Ｍ、≦８ｘ１０−９Ｍ、≦６ｘ１０−９Ｍ、≦４ｘ１０−９Ｍまたは≦２ｘ１０−９Ｍの１つのγｃに対するＫＤを有する。
【０１５７】
いくつかの態様において、本発明記載の抗体は、≦１ｘ１０−６Ｍ、≦７．５ｘ１０−７Ｍ、≦５ｘ１０−７Ｍ、≦４．５ｘ１０−７Ｍ、≦４ｘ１０−７Ｍ、≦５ｘ１０−７Ｍ、≦４．５ｘ１０−７Ｍ、≦３ｘ１０−７Ｍ、≦３．５ｘ１０−７Ｍ、≦３ｘ１０−７Ｍ、≦２．５ｘ１０−７Ｍ、≦２ｘ１０−７Ｍ、≦１．９ｘ１０−７Ｍ、≦１．８ｘ１０−７Ｍ、≦１．７ｘ１０−７Ｍ、≦１．６ｘ１０−７Ｍ、≦１．５ｘ１０−７Ｍ、≦１．４ｘ１０−７Ｍ、≦１．３ｘ１０−７Ｍ、≦１．２ｘ１０−７Ｍ、≦１．１ｘ１０−７Ｍ、≦１ｘ１０−７Ｍ、≦８ｘ１０−８Ｍ、≦６ｘ１０−８Ｍ、≦４ｘ１０−８Ｍ、または≦２ｘ１０−８Ｍの１つのＣＤ１２２に対するＫＤ、および≦１０ｘ１０−７Ｍ、≦７．５ｘ１０−７Ｍ、≦５ｘ１０−７Ｍ、≦２．５ｘ１０−７Ｍ、≦１ｘ１０−７Ｍ、≦９．５ｘ１０−８Ｍ、≦９ｘ１０−８Ｍ、≦８．５ｘ１０−８Ｍ、≦８ｘ１０−８Ｍ、≦７．５ｘ１０−８Ｍ、≦７ｘ１０−８Ｍ、≦６．５ｘ１０−８Ｍ、≦６ｘ１０−８Ｍ、≦５．５ｘ１０−８Ｍ、≦５ｘ１０−８Ｍ、≦４．５ｘ１０−８Ｍ、≦４ｘ１０−８Ｍ、≦３．５ｘ１０−８Ｍ、≦３ｘ１０−８Ｍ、≦２．５ｘ１０−８Ｍ、≦２ｘ１０−８Ｍ、≦１．５ｘ１０−８Ｍ、≦１ｘ１０−８Ｍ、≦８ｘ１０−９Ｍ、≦６ｘ１０−９Ｍ、≦４ｘ１０−９Ｍまたは≦２ｘ１０−９Ｍの１つのγｃに対するＫＤを有する。
【０１５８】
いくつかの態様において、本発明記載の抗体は、ＣＤ１２２および／またはγｃを発現する細胞の細胞表面で発現するＣＤ１２２および／またはγｃに結合する。こうした結合は、抗体とインキュベーションされたＰＢＭＣ、またはＣＤ１２２および／またはγｃを発現する構築物でトランスフェクションされた細胞への抗体の結合の分析、ならびに例えばフローサイトメトリーによって抗体結合の続く分析によって分析可能である。
【０１５９】
いくつかの態様において、本発明記載の抗体は、ＣＤ１２２および／またはγｃを含む受容体、例えばＩＬ−２受容体および／またはＩＬ−１５受容体を通じたシグナル伝達によって活性化される１またはそれより多いシグナル伝達経路のアゴニストである。いくつかの態様において、抗体は、ＣＤ１２２および／またはγｃを含む、１またはそれより多い免疫受容体複合体、例えばＩＬ−２受容体および／またはＩＬ−１５受容体を通じたシグナル伝達を刺激可能である。
【０１６０】
いくつかの態様において、抗体はＩＬ−２受容体アゴニストである。したがって、いくつかの態様において、抗体は、ＩＬ−２／ＩＬ−２受容体仲介シグナル伝達および関連機能を活性化可能である。例えば、いくつかの態様において、抗体は、ＩＬ−２受容体を発現する細胞の細胞分裂／増殖／生存を促進可能である。
【０１６１】
いくつかの態様において、抗体はＩＬ−１５受容体アゴニストである。したがって、いくつかの態様において、抗体は、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５受容体仲介シグナル伝達および関連機能を活性化可能である。例えば、いくつかの態様において、抗体は、ＩＬ−１５受容体を発現する細胞の細胞分裂／増殖／生存を促進可能である。
【０１６２】
いくつかの態様において、本発明記載の二重特異性抗体は、ＣＤ２５をさらに含む受容体に比較して、ＣＤ１２２およびγｃを含むかまたはこれらからなる受容体に、優先的に（例えばより高いアフィニティおよび／または特異性で）結合可能である。二重特異性抗体は、ＣＤ１２２およびγｃを含むかまたはこれらからなる受容体（または受容体を発現する細胞）を優先的に刺激可能であるが、ＣＤ２５をさらに含む受容体を優先的に刺激可能ではない。
【０１６３】
いくつかの態様において、ＣＤ１２２およびγｃに結合する本発明記載の二重特異性抗体は、共通ガンマ鎖を有し、そしてＣＤ１２２を含有しない受容体、例えばＩＬ−２ＲおよびＩＬ−１５Ｒ以外の受容体へのリガンド結合の有意な阻害を優先的に示さない。例えば、本発明記載の二重特異性抗体は、γｃを含むがＣＤ１２２を含まない受容体よりも、ＣＤ１２２およびγｃ両方を含む受容体に対して特異的でありうる。
【０１６４】
いくつかの態様において、本発明記載の抗体は、以下の細胞内シグナル伝達経路：ＳＴＡＴ５、Ａｋｔ、ＥＲＫの１またはそれより多くを通じたＣＤ１２２：γｃ仲介シグナル伝達を刺激可能である。ＳＴＡＴ５、Ａｋｔ、ＥＲＫ細胞内シグナル伝達経路を通じたシグナル伝達は、当業者に周知の方法によって、例えばそれぞれ、ＣＤ１２２および／またはγｃを発現している細胞の抗体での刺激後のリン酸化ＳＴＡＴ５、リン酸化Ａｋｔおよび場合によってリン酸化ＥＲＫの検出によって、分析可能である。
【０１６５】
いくつかの態様において、本発明記載の抗体は、ＩＬ−２よりも、Ｔｒｅｇ細胞における細胞内シグナル伝達のより強力でない刺激因子である。例えば、該抗体での処理は、ＩＬ−２での処理に比較した際、ＳＴＡＴ５のより少ないリン酸化を生じうる。
【０１６６】
いくつかの態様において、抗体は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで免疫細胞の増殖を刺激可能である。増殖刺激は、増殖が刺激された細胞タイプの数の増加を生じ、細胞集団の増殖を達成するために有効である。例えば、抗体は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで白血球の増殖および／または増殖を刺激する際に有用であり、好ましくはＩＬ−２の対応する量の効果に比較した際、減少した毒性を示す。
【０１６７】
いくつかの態様において、抗体は、ＩＬ−２依存性細胞の増殖を刺激可能である。いくつかの態様において、抗体は、ＣＤ３＋  Ｔ細胞（例えばＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞）および／またはＮＫ細胞の増殖を刺激可能である。
【０１６８】
抗体が細胞の増殖を刺激可能であるかどうかは、当該技術分野に周知の方法によって、例えば刺激前および刺激後の、所定の細胞タイプの数の分析によって、そして／または別のアッセイ、例えばチミジン取り込み、ＣＦＳＥ希釈（例えばＡｎｔｈｏｎｙら，  ２０１２  Ｃｅｌｌｓ  １：１２７−１４０に記載されるようなもの）、アラマーブルーシグナル等によって、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで分析可能である。
【０１６９】
いくつかの態様において、本発明記載の抗体は、非ヒト霊長類（例えばカニクイザル）ＣＤ１２２および／またはγｃに結合可能である。抗体は、ヒトおよび非ヒト霊長類ＣＤ１２２および／またはγｃに対して交差反応性であってもよい。したがって、いくつかの態様において、抗体は、非ヒト霊長類（例えばカニクイザル）ＣＤ１２２および／またはγｃを発現している細胞において、ＩＬ−２／ＩＬ−２受容体および／またはＩＬ−１５／ＩＬ−１５受容体仲介性シグナル伝達を刺激可能である。
【０１７０】
いくつかの態様において、本発明の抗体は、ＣＤ３＋  Ｔ細胞の増殖を刺激可能である。いくつかの態様において、本発明の抗体は、ＣＤ４＋  Ｔ細胞の増殖を刺激可能である。いくつかの態様において、本発明の抗体は、ＣＤ８＋  Ｔ細胞の増殖を刺激可能である。
【０１７１】
いくつかの態様において、本発明の抗体は、ＣＤ８＋  Ｔ細胞対ＣＤ４＋  Ｔ細胞の比を増加させることが可能である。すなわち、いくつかの態様において、ＣＤ８＋  Ｔ細胞およびＣＤ４＋  Ｔ細胞を含む細胞集団の（例えばｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏの）刺激後、ＣＤ８＋  Ｔ細胞対ＣＤ４＋  Ｔ細胞の比は、刺激前に比較して、刺激後により高いことも可能である。
【０１７２】
いくつかの態様において、本発明の抗体は、ＣＤ４＋ＦｏｘＰ３＋細胞（すなわちＴｒｅｇ）の増殖の強力な刺激因子ではない。いくつかの態様において、抗体は、Ｔｒｅｇの増殖を刺激しない。
【０１７３】
いくつかの態様において、本発明の抗体は、ＩＬ−２よりも低い度合いまで、Ｔｒｅｇの増殖を刺激する。すなわち、いくつかの態様において、本発明の抗体は、ＩＬ−２よりも、Ｔｒｅｇの増殖のより強力でないアゴニストである。いくつかの態様において、本発明の抗体は、所定のアッセイにおいて、匹敵する濃度でのＩＬ−２での処理によって刺激されたＴｒｅｇの増殖レベルの≦１倍、≦０．８倍、≦０．６倍、≦０．４倍、≦０．２倍、≦０．１倍の度合いまで、Ｔｒｅｇの増殖を刺激する。
【０１７４】
いくつかの態様において、本発明の抗体は、セントラルメモリーＣＤ８＋  Ｔ細胞および未刺激ＣＤ８＋  Ｔ細胞集団よりも、ＣＤ８＋  Ｔ細胞のエフェクターメモリーサブセットの増殖を刺激する。
【０１７５】
いくつかの態様において、本発明の抗体は、所定のアッセイにおいて、匹敵する濃度のＩＬ−２よりも高い度合いまで、エフェクターメモリーＣＤ８＋  Ｔ細胞の増殖を刺激する。
【０１７６】
いくつかの態様において、本発明の抗体は、抗原特異的Ｔ細胞、例えば抗原特異的ＣＤ８＋  Ｔ細胞および／または抗原特異的ＣＤ４＋  Ｔ細胞の増殖を刺激可能である。刺激は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで起こりうる。いくつかの態様において、本発明の抗体は、抗原特異的ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）の増殖を刺激可能である。細胞が抗原特異的Ｔ細胞の増殖を刺激する能力は、例えば本明細書の実施例８および１１に記載するように、例えば抗体の存在下で関心対象の抗原を提示する細胞とインキュベーションしたＴ細胞の増殖の分析によって、評価可能である。
【０１７７】
いくつかの態様において、本発明の抗体は、所定のアッセイにおいて、匹敵する濃度のＩＬ−２よりも高い度合いまで、抗原特異的Ｔ細胞の増殖を刺激可能である。
いくつかの態様において、本発明の抗体は、所定のアッセイにおいて、匹敵する濃度のＩＬ−２よりも高い度合いまで、抗原特異的ＣＤ８＋  Ｔ細胞の増殖を刺激可能である。
【０１７８】
いくつかの態様において、本発明の抗体は、抗原特異的ＣＤ８＋  Ｔ細胞対ＣＤ４＋  Ｔ細胞の比を増加させることが可能である。これは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで起こりうる。すなわち、いくつかの態様において、抗原特異的ＣＤ８＋  Ｔ細胞およびＣＤ４＋  Ｔ細胞を含む細胞集団の（例えばｉｎ  ｖｉｔｒｏの）刺激後、ＣＤ８＋  Ｔ細胞対ＣＤ４＋  Ｔ細胞の比は、刺激前に比較した際、刺激後でより高い。いくつかの態様において、本発明の抗体は、所定のアッセイにおいて、匹敵する濃度のＩＬ−２よりも高い度合いまで、抗原特異的ＣＤ８＋  Ｔ細胞対ＣＤ４＋  Ｔ細胞の比を増加させることが可能である。
【０１７９】
いくつかの態様において、本発明の抗体は、ＣＤ８＋ＰＤ１＋  Ｔ細胞（例えば抗原特異的ＣＤ８＋ＰＤ１＋  Ｔ細胞）の増殖を刺激可能である。いくつかの態様において、本発明の抗体は、所定のアッセイにおいて、匹敵する濃度のＩＬ−２よりも高い度合いまで、ＣＤ８＋ＰＤ１＋  Ｔ細胞の増殖を刺激可能である。
【０１８０】
いくつかの態様において、本発明の抗体は、ＣＤ４＋  Ｔ細胞の比率としてのＴｒｅｇの比率を減少させることが可能である。すなわち、いくつかの態様において、抗体でのＣＤ４＋  Ｔ細胞集団の処理後、ＴｒｅｇであるＣＤ４＋  Ｔ細胞の割合は減少する。いくつかの態様において、本発明の抗体は、所定のアッセイにおいて、匹敵する濃度のＩＬ−２よりも高い度合いまで、ＣＤ４＋  Ｔ細胞の比率としてのＴｒｅｇの比率を減少させることが可能である。
【０１８１】
いくつかの態様において、本発明の抗体は、ＣＴＬ細胞傷害性を刺激することが可能である。抗体がＣＴＬ細胞傷害性を刺激する能力は、当業者に知られる方法によって測定可能である。所定のターゲット細胞に対するＴ細胞の細胞傷害性は、例えば、本明細書にその全体が援用される、Ｚａｒｉｔｓｋａｙａら，  Ｅｘｐｅｒｔ  Ｒｅｖ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ（２０１１），  ９（６）：６０１−６１６に概説される方法のいずれかを用いて、調査可能である。
【０１８２】
いくつかの態様において、抗体は、ｉｎ  ｖｉｖｏでの免疫細胞の増殖を刺激可能である。いくつかの態様において、抗体は、ｉｎ  ｖｉｖｏでのＣＤ３＋細胞の増殖を刺激可能である。いくつかの態様において、抗体は、ｉｎ  ｖｉｖｏでのＣＤ８＋  Ｔ細胞の増殖を刺激可能である。いくつかの態様において、抗体は、ｉｎ  ｖｉｖｏでのＣＤ４＋  Ｔ細胞の増殖を刺激可能である。いくつかの態様において、抗体は、ｉｎ  ｖｉｖｏでのＮＫ細胞の増殖を刺激可能である。
【０１８３】
本発明の側面および態様において、所望の特性を有する細胞の刺激または増殖は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで生じうる。ｉｎ  ｖｉｔｒｏ刺激または増殖は、被験体への投与を含んでもよい、所望の目的のために収集および使用可能な、所望の特性に関して濃縮されている細胞集団を提供可能である。ｉｎ  ｖｉｖｏ刺激または増殖は、例えば疾患を治療または防止する際、被験体に有益である細胞集団に関して濃縮することも可能である。ｉｎ  ｖｉｖｏ刺激または増殖は、アジュバント効果または作用を有してもよい。
【０１８４】
いくつかの側面において、本発明の抗体は、ＣＤ１２２結合抗体クローンの抗体／断片を含む。いくつかの側面において、抗体は、クローンＰ２Ｃ４またはＰ２Ｃ４の変異体の抗体／断片を含む。いくつかの側面において、抗体は、クローンＰ２Ｃ４＿Ａ４またはＰ２Ｃ４＿Ａ４の変異体の抗体／断片を含む。いくつかの側面において、抗体は、クローンＰ２Ｃ４＿Ｂ１またはＰ２Ｃ４＿Ｂ１の変異体の抗体／断片を含む。いくつかの側面において、抗体は、クローンＰ２Ｃ４＿Ｂ５またはＰ２Ｃ４＿Ｂ５の変異体の抗体／断片を含む。いくつかの側面において、抗体は、クローンＰ２Ｃ４＿Ｃ１またはＰ２Ｃ４＿Ｃ１の変異体の抗体／断片を含む。いくつかの側面において、抗体は、クローンＰ２Ｃ４＿Ｃ４またはＰ２Ｃ４＿Ｃ４の変異体の抗体／断片を含む。いくつかの側面において、抗体は、クローンＰ２Ｃ４＿Ｃ７またはＰ２Ｃ４＿Ｃ７の変異体の抗体／断片を含む。いくつかの側面において、抗体は、クローンＰ２Ｃ４＿Ｄ１０またはＰ２Ｃ４＿Ｄ１０の変異体の抗体／断片を含む。いくつかの側面において、抗体は、クローンＰ２Ｃ４＿Ｅ６またはＰ２Ｃ４＿Ｅ６の変異体の抗体／断片を含む。いくつかの側面において、抗体は、クローンＰ２Ｃ４＿Ｅ７またはＰ２Ｃ４＿Ｅ７の変異体の抗体／断片を含む。いくつかの側面において、抗体は、クローンＰ２Ｃ４＿Ｆ８またはＰ２Ｃ４＿Ｆ８の変異体の抗体／断片を含む。いくつかの側面において、抗体は、クローンＰ２Ｃ４＿Ｃ１Ｄ１０またはＰ２Ｃ４＿Ｃ１Ｄ１０の変異体の抗体／断片を含む。いくつかの側面において、抗体は、クローンＰ２Ｃ４＿ＦＷ２またはＰ２Ｃ４＿ＦＷ２の変異体の抗体／断片を含む。いくつかの側面において、抗体は、クローンＰ２Ｈ７またはＰ２Ｈ７の変異体の抗体／断片を含む。いくつかの側面において、抗体は、クローンＰ２Ｄ１２またはＰ２Ｄ１２の変異体の抗体／断片を含む。いくつかの側面において、抗体は、クローンＰ１Ｇ１１またはＰ１Ｇ１１の変異体の抗体／断片を含む。いくつかの側面において、抗体は、クローンＰ２Ｃ４＿Ａ９またはＰ２Ｃ４＿Ａ９の変異体の抗体／断片を含む。いくつかの側面において、抗体は、クローンＰ２Ｃ４＿Ｂ６またはＰ２Ｃ４＿Ｂ６の変異体の抗体／断片を含む。いくつかの側面において、抗体は、クローンＰ２Ｃ４＿Ｅ９またはＰ２Ｃ４＿Ｅ９の変異体の抗体／断片を含む。いくつかの側面において、抗体は、クローンＰ２Ｃ４＿Ｂ８またはＰ２Ｃ４＿Ｂ８の変異体の抗体／断片を含む。いくつかの側面において、抗体は、クローンＰ２Ｃ４＿Ｂ１２またはＰ２Ｃ４＿Ｂ１２の変異体の抗体／断片を含む。いくつかの側面において、抗体は、クローンＰ２Ｃ４＿Ｃ１２またはＰ２Ｃ４＿Ｃ１２の変異体の抗体／断片を含む。いくつかの側面において、抗体は、クローンＰ２Ｃ４＿Ｅ２またはＰ２Ｃ４＿Ｅ２の変異体の抗体／断片を含む。いくつかの側面において、抗体は、クローンＰ２Ｃ４＿Ｅ３またはＰ２Ｃ４＿Ｅ３の変異体の抗体／断片を含む。いくつかの側面において、抗体は、クローンＰ２Ｃ４＿Ｅ８またはＰ２Ｃ４＿Ｅ８の変異体の抗体／断片を含む。いくつかの側面において、抗体は、クローンＰ２Ｃ４＿Ｆ１１またはＰ２Ｃ４＿Ｆ１１の変異体の抗体／断片を含む。いくつかの側面において、抗体は、クローンＰ２Ｃ４＿Ｇ２またはＰ２Ｃ４＿Ｇ２の変異体の抗体／断片を含む。いくつかの側面において、抗体は、クローンＰ２Ｃ４＿Ｇ１１またはＰ２Ｃ４＿Ｇ１１の変異体の抗体／断片を含む。いくつかの側面において、抗体は、クローンＰ２Ｃ４＿Ｈ１またはＰ２Ｃ４＿Ｈ１の変異体の抗体／断片を含む。いくつかの側面において、抗体は、クローンＰ２Ｃ４＿Ｈ２またはＰ２Ｃ４＿Ｈ２の変異体の抗体／断片を含む。いくつかの側面において、抗体は、クローンＰ２Ｃ４＿Ｈ３またはＰ２Ｃ４＿Ｈ３の変異体の抗体／断片を含む。
【０１８５】
先行段落のＣＤ１２２結合抗体クローンのＶＬドメインのアミノ酸配列を図１に示し、Ｋａｂａｔ系にしたがって定義されたＣＤＲも示す。先行段落のＣＤ１２２結合抗体クローンのＶＨドメインのアミノ酸配列を図２に示し、Ｋａｂａｔ系にしたがって定義されたＣＤＲも示す。抗体構築物（リンカーを含む）の全アミノ酸配列を図１５に示し、そしてコードヌクレオチド配列を図１７に示す。
【０１８６】
本発明記載の抗体は、Ｐ２Ｃ４、Ｐ２Ｃ４＿Ａ４、Ｐ２Ｃ４＿Ｂ１、Ｐ２Ｃ４＿Ｂ５、Ｐ２Ｃ４＿Ｃ１、Ｐ２Ｃ４＿Ｃ４、Ｐ２Ｃ４＿Ｃ７、２Ｃ４＿Ｄ１０、Ｐ２Ｃ４＿Ｅ６、Ｐ２Ｃ４＿Ｅ７、Ｐ２Ｃ４＿Ｆ８、Ｐ２Ｃ４＿Ｃ１Ｄ１０、Ｐ２Ｃ４＿ＦＷ２、Ｐ２Ｈ７、Ｐ２Ｄ１２、Ｐ１Ｇ１１、Ｐ２Ｃ４＿Ａ９、Ｐ２Ｃ４＿Ｂ６、Ｐ２Ｃ４＿Ｅ９、Ｐ２Ｃ４＿Ｂ８、Ｐ２Ｃ４＿Ｂ１２、Ｐ２Ｃ４＿Ｃ１２、Ｐ２Ｃ４＿Ｅ２、Ｐ２Ｃ４＿Ｅ３、Ｐ２Ｃ４＿Ｅ８、Ｐ２Ｃ４＿Ｆ１１、Ｐ２Ｃ４＿Ｇ２、Ｐ２Ｃ４＿Ｇ１１、Ｐ２Ｃ４＿Ｈ１、Ｐ２Ｃ４＿Ｈ２、またはＰ２Ｃ４＿Ｈ３のＣＤＲを含んでもよい。本発明記載の抗体において、６つのＣＤＲ配列の１または２または３または４は、多様であってもよい。変異体は、６つのＣＤＲ配列の１または２に１または２のアミノ酸置換を有してもよい。
【０１８７】
本発明記載の抗体は、それぞれ、図１および２に示すＶＬおよび／またはＶＨアミノ酸配列の１またはそれより多くに対する高い配列同一性パーセントを有するアミノ酸配列を含む、ＶＬおよび／またはＶＨ鎖を含んでもよい。例えば、本発明記載の抗体には、ＣＤ１２２に結合し、そして図１に示すＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１、１７、１９、２１、２３、２４、２７、２８、２９、３０、３１、３３、３４、１４８、１４９、５、９、または１３の１つのＶＬ鎖アミノ酸配列に、少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ鎖を有する、抗体が含まれる。本発明記載の抗体には、ＣＤ１２２に結合し、そして図２に示すＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３５、５１、５３、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、１５０、１５１、３９、４３、または４７の１つのＶＨ鎖アミノ酸配列に、少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ鎖を有する、抗体が含まれる。
【０１８８】
本発明記載の抗体には、図１７に示すＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、または１４１のいずれか１つのヌクレオチド配列にコードされるアミノ酸配列を有する、抗体またはそのＣＤ１２２結合断片が含まれる。本発明の抗体には、図１７に示すＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、または１４１のいずれか１つのヌクレオチド配列にコードされるアミノ酸配列のＶＬおよび／またはＶＨドメイン配列を含む抗体が含まれる。
【０１８９】
いくつかの側面において、本発明の抗体は、γｃ結合抗体クローンの抗体／断片を含む。いくつかの側面において、抗体は、クローンＰ１Ａ３またはＰ１Ａ３の変異体の抗体／断片を含む。いくつかの側面において、抗体は、クローンＰ１Ａ３＿Ｂ３またはＰ１Ａ３＿Ｂ３の変異体の抗体／断片を含む。いくつかの側面において、抗体は、クローンＰ１Ａ３＿Ｅ８またはＰ１Ａ３＿Ｅ８の変異体の抗体／断片を含む。いくつかの側面において、抗体は、クローンＰ１Ａ３＿Ｅ９またはＰ１Ａ３＿Ｅ９の変異体の抗体／断片を含む。いくつかの側面において、抗体は、クローンＰ１Ａ３＿Ｂ４またはＰ１Ａ３＿Ｂ４の変異体の抗体／断片を含む。いくつかの側面において、抗体は、クローンＰ１Ａ３＿ＦＷ２またはＰ１Ａ３＿ＦＷ２の変異体の抗体／断片を含む。いくつかの側面において、抗体は、クローンＰ２Ｂ９またはＰ２Ｂ９の変異体の抗体／断片を含む。
【０１９０】
先行段落のγｃ結合抗体クローンのＶＬドメインのアミノ酸配列を図３に示し、Ｋａｂａｔ系にしたがって定義されたＣＤＲも示す。先行段落のγｃ結合抗体クローンのＶＨドメインのアミノ酸配列を図４に示し、Ｋａｂａｔ系にしたがって定義されたＣＤＲも示す。抗体構築物（リンカーを含む）の全アミノ酸配列を図１６に示し、そしてコードヌクレオチド配列を図１８に示す。
【０１９１】
本発明記載の抗体は、Ｐ１Ａ３、Ｐ１Ａ３＿Ｂ３、Ｐ１Ａ３＿Ｅ８、Ｐ１Ａ３＿Ｅ９、Ｐ１Ａ３＿Ｂ４、Ｐ１Ａ３＿ＦＷ２、またはＰ２Ｂ９のＣＤＲを含んでもよい。本発明記載の抗体において、６つのＣＤＲ配列の１または２または３または４は、多様であってもよい。変異体は、６つのＣＤＲ配列の１または２に１または２のアミノ酸置換を有してもよい。
【０１９２】
本発明記載の抗体は、それぞれ、図３および４に示すＶＬおよび／またはＶＨアミノ酸配列の１またはそれより多くに対する高い配列同一性パーセントを有するアミノ酸を含む、ＶＬおよび／またはＶＨ鎖を含んでもよい。例えば、本発明記載の抗体には、γｃに結合し、そして図３に示すＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６７、１５２、７１、または７５の１つのＶＬ鎖アミノ酸配列に、少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ鎖を有する、抗体が含まれる。本発明記載の抗体には、γｃに結合し、そして図４に示すＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７６、１５３、７８、８２、または８４の１つのＶＨ鎖アミノ酸配列に、少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ鎖を有する、抗体が含まれる。
【０１９３】
本発明記載の抗体には、図１８に示すＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、または１４７のいずれか１つのヌクレオチド配列にコードされるアミノ酸配列を有する、抗体またはそのγｃ結合断片が含まれる。本発明の抗体には、図１８に示すＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、または１４７のいずれか１つのヌクレオチド配列にコードされるアミノ酸配列のＶＬおよび／またはＶＨドメイン配列を含む抗体が含まれる。
【０１９４】
いくつかの側面において、本発明の抗体は、ＣＤ１２２結合抗体クローン、例えば記載するようなＣＤ１２２結合抗体クローンの抗体／断片を含み、そしてまた、γｃ結合クローン、例えば本明細書に記載するようなγｃ結合クローンも含む。
【０１９５】
本明細書に開示する軽鎖および重鎖ＣＤＲはまた、いくつかの異なるフレームワーク領域と組み合わせて特に有用でありうる。したがって、ＬＣ−ＣＤＲ１〜３またはＨＣ−ＣＤＲ１〜３を有する軽鎖および／または重鎖は、代替フレームワーク領域を所持してもよい。適切なフレームワーク領域は、当該技術分野に周知であり、そして例えば、本明細書に援用されるＭ．  Ｌｅｆｒａｎｃ  ＆  Ｇ．  Ｌｅｆｒａｎｃ  （２００１）  ”Ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ＦａｃｔｓＢｏｏｋ”，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓに記載される。
【０１９６】
本発明記載の抗体は、検出可能に標識されるか、または少なくとも検出可能であってもよい。例えば、抗体を、放射性原子または着色分子または蛍光分子または任意の他の方法で容易に検出可能な分子で標識してもよい。適切な検出可能分子には、蛍光タンパク質、ルシフェラーゼ、酵素基質、および放射標識が含まれる。結合部分を直接、検出可能標識で標識してもよいし、または間接的に標識してもよい。例えば、結合部分は、それ自体標識されている別の抗体によって検出可能な、非標識抗体であってもよい。あるいは、第二の抗体が該抗体に結合したビオチンを有してもよく、そしてビオチンに対する標識ストレプトアビジンの結合を用いて、第一の抗体を間接的に標識する。
【０１９７】
キメラ抗原受容体
本発明は、ＣＤ１２２および／またはγｃに結合可能なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を提供する。ＣＡＲは、本発明記載の１またはそれより多い抗原結合断片またはポリペプチドを含む。
【０１９８】
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、抗原結合機能およびＴ細胞活性化機能の両方を提供する組換え受容体である。ＣＡＲ構造および操作は、例えば本明細書にその全体が援用されるＤｏｔｔｉら，  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｖ（２０１４）２５７（１）に概説される。
【０１９９】
本発明記載の抗原結合断片は、本明細書において、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の抗原結合ドメインとして提供される。いくつかの態様において、ＣＡＲは、本明細書記載の抗体、抗原結合断片またはポリペプチドの任意の態様にしたがったＶＬドメインおよびＶＨドメインを含む。したがって、本発明記載のＣＡＲが結合する抗原は、ＣＤ１２２および／またはγｃである。
【０２００】
ＣＡＲを、共刺激リガンド、キメラ共刺激受容体またはサイトカインと組み合わせて、Ｔ細胞強度、特異性および安全性をさらに増進させてもよい（本明細書に特に援用される、Ｓａｄｅｌａｉｎら，  キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）設計の基本的原理。  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｉｓｃｏｖ．  ２０１３  Ａｐｒｉｌ；３（４）：３８８−３９８．  ｄｏｉ：１０．１１５８／２１５９−８２９０．ＣＤ−１２−０５４８）。
【０２０１】
本発明はまた、本発明記載のＣＡＲを含む細胞も提供する。本発明記載のＣＡＲを用いて、ＣＤ１２２および／またはγｃを発現する細胞をターゲティングするＴ細胞を生成することも可能である。
【０２０２】
養子Ｔ細胞療法のためのＴ細胞増殖中に起こるように、形質導入および増殖のため、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで培養中にＴ細胞内へのＣＡＲの操作を行ってもよい。形質導入は、多様な方法を利用可能であるが、クローン性に増殖し、そして持続するＴ細胞において、持続性のＣＡＲ発現を可能にするためには、安定遺伝子移入が必要である。
【０２０３】
ＣＡＲは、典型的には、単一キメラタンパク質中に、抗原結合ドメインと、ＣＤ３ゼータ鎖またはＦｃγＲＩタンパク質の細胞内ドメインを組み合わせる。ＣＡＲの構造的特徴は、Ｓｊｏｕｋｅら（第二世代キメラ抗原受容体の薬理学。  Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，  １４，  ４９９  ５０９（２０１５）ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｒｄ４５９７）に記載される。ＣＡＲは、典型的には、膜貫通ドメインおよびエンドドメインに連結された、細胞外抗原結合ドメインを有する。場合によるヒンジまたはスペーサードメインは、結合部分および膜貫通ドメインの間に分離を提供可能であり、そして柔軟なリンカーとして作用可能である。
【０２０４】
本発明にしたがって、ＣＡＲの抗原認識ドメインは、本明細書に記載するような、ＣＤ１２２および／またはγｃに結合可能な抗体、抗原結合断片またはポリペプチドであるか、またはこれらに由来する。
【０２０５】
ＣＡＲのヒンジまたはスペーサー領域は、結合部分が異なる方向に配向することを可能にする柔軟なドメインであってもよい。ヒンジまたはスペーサー領域は、免疫グロブリンのＩｇＧ１またはＣＨ２ＣＨ３領域に由来していてもよい。
【０２０６】
膜貫通ドメインは、細胞膜に渡る、疎水性アルファらせんであってもよい。エンドドメインと会合する膜貫通ドメインは共通して用いられる。
エンドドメインは、抗原結合後の受容体クラスター形成／二量体化に、そして細胞へのシグナル伝達の開始に関与する。共通して用いられる１つの膜貫通ドメインは、ＣＤ３ゼータ膜貫通およびエンドドメインである。１またはそれより多い共刺激タンパク質受容体、例えばＣＤ２８  ４−１ＢＢ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ由来の細胞内ドメインを、ＣＡＲの細胞質テール内に場合によって取り込んで、さらなる共刺激シグナル伝達を提供してもよく、これは、抗腫瘍活性に関して，有益でありうる。
【０２０７】
１つの態様において、ＣＡＲは、抗原認識ドメインを有する細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞質ドメインを含む。ＣＡＲ中のドメインの１つと天然に会合する膜貫通ドメインを用いてもよいし、あるいは膜貫通ドメインを選択するかまたはアミノ酸置換によって修飾して、同じまたは異なる表面膜タンパク質の膜貫通ドメインにこうしたドメインが結合するのを回避し、受容体複合体の他のメンバーとの相互作用を最小限にすることも可能である。
【０２０８】
細胞質ドメインをそれ自体がＣＤ２８および／または４−１ＢＢシグナル伝達ドメインを含むように設計してもよいし、または任意の他の所望の細胞質ドメイン（単数または複数）と組み合わせてもよい。細胞質ドメインが、ＣＤ３ゼータのシグナル伝達ドメインをさらに含むように設計してもよい。例えば、ＣＡＲの細胞質ドメインには、限定されるわけではないが、ＣＤ３ゼータ、４−１ＢＢおよびＣＤ２８シグナル伝達モジュールおよびその組み合わせが含まれてもよい。
【０２０９】
本発明はまた、本発明記載のＣＤ１２２および／またはγｃに結合可能な抗原結合断片をＣＡＲとして含むＣＡＲ  Ｔ細胞も提供する。
所望のＣＡＲ、例えば抗ＩＬ２Ｒβ／γｃ、ＣＤ８ａヒンジおよび膜貫通ドメイン、ならびにヒト４−１ＢＢおよびＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインを含むＣＡＲを含むレンチウイルスベクターを、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで細胞内に導入することによって、本発明のＣＡＲ  Ｔ細胞を生成することも可能である。本発明のＣＡＲ  Ｔ細胞は、ｉｎ  ｖｉｖｏで複製可能であり、持続性腫瘍制御を導きうる、長期持続を生じる。
【０２１０】
１つの態様において、本発明は、リンパ球注入を用いて、癌を有するか、あるいは癌または感染性疾患を有するリスクがある患者を治療するため、ＣＤ１２２および／またはγｃに結合可能なＣＡＲを発現する遺伝子修飾Ｔ細胞を投与することに関する。好ましくは、治療において、自己リンパ球注入を用いる。自己ＰＢＭＣを、治療を必要とする患者から収集し、そして本明細書に記載され、そして当該技術分野に知られる方法を用いてＴ細胞を活性化し、そして増殖させ、そして次いで、患者に注入し直す。
【０２１１】
検出法
本明細書記載の抗体または抗原結合断片を、ＣＤ１２２および／またはγｃに対する抗体または抗原結合断片の結合を伴う方法で用いてもよい。こうした方法は、抗体または抗原結合断片ならびにＣＤ１２２および／またはγｃの結合した複合体の検出を伴うことも可能である。こうしたものとして、１つの態様において、ＣＤ１２２および／またはγｃを含有するかまたは含有すると推測される試料を、本明細書に記載するような抗体または抗原結合断片と接触させ、そして抗体または抗原結合断片ならびにＣＤ１２２および／またはγｃの複合体の形成を検出する工程を含む方法を提供する。
【０２１２】
サンドイッチアッセイ、例えばＥＬＩＳＡなどのイムノアッセイを含む適切な方法形式は、当該技術分野に周知である。該方法は、抗体または抗原結合断片、あるいはＣＤ１２２および／またはγｃ、あるいは両方を、検出可能標識、例えば蛍光、発光または放射標識で標識することを伴ってもよい。ＣＤ１２２および／またはγｃ発現を、例えば生検によって得られた組織試料の免疫組織化学（ＩＨＣ）によって測定することも可能である。
【０２１３】
この種の方法は、ＣＤ１２２および／またはγｃの検出および／または定量化を必要とする疾患または状態の診断法の基礎を提供しうる。こうした方法を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、患者試料に対して、または患者試料のプロセシング後に行ってもよい。試料をひとたび収集したら、診断のｉｎ  ｖｉｔｒｏ法が実行されるために、患者が居合わせる必要はなく、そしてしたがって、方法は、ヒトまたは動物の身体に対して行わないものであることも可能である。
【０２１４】
こうした方法は、患者試料に存在するＣＤ１２２および／またはγｃの量を決定することを伴ってもよい。該方法は、診断に到達するプロセスの一部として、標準または参照値に対して、決定した量を比較する工程をさらに含んでもよい。他の診断試験を、本明細書に記載するものと組み合わせて用いて、診断または予後診断の正確さを増進するか、あるいは本明細書に記載する試験を用いることによって得られる結果を確認してもよい。
【０２１５】
患者試料に存在するＣＤ１２２および／またはγｃのレベルは、患者が抗ＣＤ１２２および／または抗γｃ抗体での治療に反応しうることを示しうる。試料中の高レベルのＣＤ１２２および／またはγｃの存在を用いて、抗ＣＤ１２２および／または抗γｃ抗体での治療のために患者を選択することも可能である。したがって、本発明の抗体を用いて、抗ＣＤ１２２および／または抗γｃ抗体療法を用いた治療のための患者を選択することも可能である。
【０２１６】
抗ＣＤ１２２および／または抗γｃ抗体の試料における検出を、患者における感染性疾患、自己免疫障害または癌性状態の診断、感染性疾患、自己免疫障害または癌性状態に対する素因の診断の目的のために、あるいは感染性疾患、自己免疫障害または癌性状態の予後診断を提供する（予言する）ために、用いてもよい。診断または予後は、存在する（以前診断された）感染性疾患、自己免疫障害または癌性状態に関連することも可能である。
【０２１７】
任意の組織または体液から試料を採取してもよい。試料は：ある量の血液；フィブリン塊および血球を除去した後に得られる、血液の液体部分を含んでもよい、個体の血液由来のある量の血清；組織試料または生検；あるいは前記個体から単離された細胞を含んでもよいし、またはこれらに由来してもよい。
【０２１８】
本発明記載の方法は、好ましくはｉｎ  ｖｉｔｒｏで行われてもよい。用語「ｉｎ  ｖｉｔｒｏ」は、培養中の細胞を用いた実験を含むよう意図され、一方、用語「ｉｎ  ｖｉｖｏ」は、損なわれていない（ｉｎｔａｃｔ）多細胞生物を用いた実験および／またはその治療を含むよう意図される。
【０２１９】
療法適用
本発明記載の抗体、抗原結合断片およびポリペプチド、ならびにこうした剤を含む組成物を、医学的治療法において使用するために提供してもよい。治療を、治療を必要とする疾患または状態を有する被験体に提供してもよい。
【０２２０】
医学的治療法は、方法の工程が、癌性細胞の根絶において、免疫系を補助するかまたはブーストする、ヒト被験体において、悪性腫瘍を軽減させるか、治療するか、または防止する方法による、癌の治療を伴うことも可能である。こうした方法には、癌性細胞を破壊する能動免疫反応を誘発する（または受動免疫反応を達成する）、本発明記載の細胞、抗体、タンパク質、または核酸の投与が含まれてもよい。治療法には、場合によって、癌を治療するための慣用的療法、例えば化学療法、放射線照射、または手術と組み合わせた、生物学的アジュバント（例えばインターロイキン、サイトカイン、カルメットゲラン桿菌、モノホスホリル脂質Ａ等）の同時投与が含まれてもよい。治療法には、免疫系を活性化して、癌細胞増殖を防止するかまたは破壊することによって作用するワクチンとして、本発明記載の組成物を投与する工程が含まれてもよい。医学的治療法はまた、自己および／または異種細胞または不死化細胞株を用いるものを含む、ｉｎ  ｖｉｖｏ、ｅｘ  ｖｉｖｏ、および養子免疫療法も含んでもよい。
【０２２１】
疾患または状態は、感染性疾患、自己免疫障害（例えばクローン病、多発性硬化症）、癌、炎症性疾患（例えば関節炎）、ＩＬ−２仲介シグナル伝達不全および／またはＩＬ−１５仲介シグナル伝達不全に関連する疾患／障害、Ｔ細胞増殖不全またはＴ細胞機能不全の１つであってもよい。
【０２２２】
いくつかの態様において、治療は、ＩＬ−２仲介シグナル伝達増加および／またはＩＬ−１５仲介シグナル伝達増加が療法性である疾患または障害のものである。
いくつかの態様において、治療は、Ｔ細胞反応不全、例えばＣＤ８＋  Ｔ細胞反応不全に関連する疾患または障害のものである。
【０２２３】
治療は：ＣＤ３＋  Ｔ細胞数増加、ＣＤ４＋  Ｔ細胞数増加、ＣＤ８＋  Ｔ細胞数増加、ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞（例えばＣＴＬ）数増加、ＮＫ細胞数増加、ＣＤ８＋  Ｔ細胞対ＣＤ４＋  Ｔ細胞比増加、またはＴｒｅｇ比率減少の１またはそれより多くによる疾患／障害の防止または治療を目的としてもよい。
【０２２４】
Ｔ細胞機能不全障害は、感染として、または感染に対する有効な免疫反応を開始することが出来ない状態として現れる可能性もある。感染は、慢性、持続性、不顕性または緩慢であってもよく、そして細菌、ウイルス、真菌または寄生虫感染の結果であってもよい。こうしたものとして、細菌、ウイルスまたは真菌感染を有する患者に、治療を提供してもよい。細菌感染の例には、ヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ）での感染が含まれる。ウイルス感染の例には、ＥＢＶ、ＨＩＶ、Ｂ型肝炎またはＣ型肝炎での感染が含まれる。
【０２２５】
Ｔ細胞機能不全障害は、癌、例えば腫瘍免疫エスケープと関連する可能性もある。多くのヒト腫瘍は、Ｔ細胞によって認識され、そして免疫反応を誘導可能な腫瘍関連抗原を発現する。
【０２２６】
Ｔ細胞機能不全障害の徴候がない場合の癌もまた、治療可能であるが、本発明記載の抗体、抗原結合断片またはポリペプチドの使用は、有効な免疫反応を開始することを可能にする。
【０２２７】
治療は、ＩＬ−２仲介シグナル伝達および／またはＩＬ−１５仲介シグナル伝達の不全／減少と関連する疾患／障害の防止を目的としてもよい。こうしたものとして、抗体、抗原結合断片およびポリペプチドを用いて、薬学的組成物または薬剤を配合して、そして被験体を疾患状態の発展に対して予防的に治療してもよい。これは、疾患状態の症状の開始前に行ってもよく、そして／または疾患または障害のリスクがより高いと見なされる被験体に対して行ってもよい。
【０２２８】
治療は、ワクチン、例えばＴ細胞ワクチンとの併用療法を含んでもよく、これは、同時、別個または連続療法を伴ってもよいし、あるいは単一組成物中のワクチンおよび抗体、抗原結合断片またはポリペプチドの組み合わせ投与であってもよい。この背景において、抗体、抗原結合断片またはポリペプチドを、ワクチンに対するアジュバントとして提供してもよい。
【０２２９】
抗体、抗原結合断片またはポリペプチドの投与は、好ましくは、「療法的有効量」であり、これは、個体に利益を示すために十分な量である。投与する実際の量、ならびに投与速度および時間経過は、治療する疾患の性質および重症度に応じるであろう。治療の処方、例えば投薬量の決定等は、開業医および他の医師の責任の範囲内であり、そして典型的には、治療しようとする障害、個々の患者の状態、送達部位、投与法、および医師に知られる他の要因が考慮されるであろう。上述の技術およびプロトコルの例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  第２０版，  ２０００，  Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ刊行に見出されうる。
【０２３０】
本発明のＣＡＲおよびＣＡＲを含む細胞（すなわちＣＡＲ−Ｔ細胞）は、自己免疫障害、例えばクローン病、多発性硬化症を治療するための使用を見出す。こうした治療において、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＣＤ１２２および／またはγｃを発現する自己免疫凝集素細胞（例えば自己反応性Ｔ細胞）を死滅させる際に有効である。
【０２３１】
薬学的に有用な組成物および薬剤の配合
本発明記載の抗体、抗原結合断片およびポリペプチド、ＣＡＲおよび細胞は、臨床的使用のための薬学的組成物または薬剤として配合可能であり、そして薬学的に許容されうるキャリアー、希釈剤、賦形剤またはアジュバントを含んでもよい。
【０２３２】
本発明にしたがって、薬学的に有用な組成物の産生のためにも方法を提供し、こうした産生法は：本明細書に記載するような抗体、抗原結合断片、ポリペプチド、ＣＡＲまたは細胞を単離し；そして／または本明細書に記載するような単離抗体、抗原結合断片またはポリペプチドを、薬学的に許容されうるキャリアー、アジュバント、賦形剤または希釈剤と混合する工程より選択される１またはそれより多い工程を含んでもよい。
【０２３３】
例えば、本発明のさらなる側面は、医学的治療法において使用するための薬剤または薬学的組成物を配合するかまたは産生する方法であって、本明細書に記載するような抗体、抗原結合断片、ポリペプチド、ＣＡＲまたは細胞を、薬学的に許容されうるキャリアー、アジュバント、賦形剤または希釈剤と混合することによって、薬学的組成物または薬剤を配合する工程を含む、前記方法に関する。
【０２３４】
感染
感染は、いかなる感染または感染性疾患、例えば細菌、ウイルス、真菌、または寄生虫感染であってもよい。いくつかの態様において、慢性／持続性感染、例えばこうした感染がＴ細胞機能不全またはＴ細胞消耗に関連する場合の感染を治療することが特に望ましい可能性もある。
【０２３５】
Ｔ細胞消耗が、多くの慢性感染（ウイルス、細菌および寄生虫感染を含む）中に、ならびに癌において（Ｗｈｅｒｒｙ  Ｎａｔｕｒｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｖｏｌ．  １２，  Ｎｏ．６，  ｐ４９２−４９９，  ２０１１年６月）生じるＴ細胞機能不全状態であることがよく確立されている。
【０２３６】
治療可能な細菌感染の例には、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）種、百日咳菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）、クロストリジウム属（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）種、コリネバクテリウム属（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）種、コレラ菌（Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｌｏｅｒａｅ）、スタフィロコッカス属（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種、ストレプトコッカス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）種、エシェリキア属（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）、クレブシエラ属（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、プロテウス属（Ｐｒｏｔｅｕｓ）、エルシニア属（Ｙｅｒｓｉｎｉａ）、エルウィナ属（Ｅｒｗｉｎａ）、サルモネラ属（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、リステリア属（Ｌｉｓｔｅｒｉａ）種、ヘリコバクター・ピロリ、ミコバクテリア（例えば結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ））および緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）が含まれる。例えば、細菌感染は、敗血症または結核であってもよい。
【０２３７】
治療可能なウイルス感染の例には、エプスタイン・バーウイルス、インフルエンザウイルス、麻疹ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）、単純ヘルペスウイルスおよびヒトパピローマウイルスが含まれる。
【０２３８】
治療可能な真菌感染の例には、アルテルナリア属（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ）種、アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）種、カンジダ属（Ｃａｎｄｉｄａ）種およびヒストプラズマ属（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ）種による感染が含まれる。真菌感染は、真菌敗血症またはヒストプラズマ症であることも可能である。治療可能な寄生虫感染の例には、プラスモジウム属種（例えば熱帯熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）、ネズミマラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｙｏｅｌｉ）、卵形マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｏｖａｌｅ）、三日熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｖｉｖａｘ）、またはプラスモジウム・シャバウディ・シャバウディ（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｃｈａｂａｕｄｉ  ｃｈａｂａｕｄｉ））による感染が含まれる。寄生虫感染は、例えばマラリア、リーシュマニア症およびトキソプラズマ症であってもよい。
【０２３９】
癌
癌は、任意の望ましくない細胞増殖（または望ましくない細胞増殖によって現れる任意の疾患）、新生物または腫瘍、あるいは望ましくない細胞増殖、新生物または腫瘍に対するリスクまたは素因の増加であることも可能である。癌は、良性または悪性であってもよく、そして原発性または続発性（転移性）であってもよい。新生物または腫瘍は、細胞の任意の異常な成長または増殖であってもよく、そして任意の組織に位置していてもよい。組織の例には、副腎、副腎髄質、肛門、虫垂、膀胱、血液、骨、骨髄、脳、乳房、盲腸、中枢神経系（脳を含むまたは除く）、小脳、子宮頸部、結腸、十二指腸、子宮内膜、上皮細胞（例えば腎上皮）、胆嚢、食道、グリア細胞、心臓、回腸、空腸、腎臓、涙腺、喉頭、肝臓、肺、リンパ、リンパ節、リンパ芽球、上顎骨、縦隔、腸間膜、子宮筋、上咽頭、頤、口腔、卵巣、膵臓、耳下腺、末梢神経系、腹膜、胸膜、前立腺、唾液腺、Ｓ状結腸、皮膚、小腸、柔組織、脾臓、胃、精巣、胸腺、甲状腺、舌、扁桃腺、気管、子宮、外陰部、白血球が含まれる。
【０２４０】
治療されうる腫瘍は、神経系または非神経系腫瘍であってもよい。神経系腫瘍は、中枢または末梢神経系のいずれから生じてもよく、例えば神経膠腫、髄芽腫、髄膜腫、神経線維腫、上衣腫、シュワン腫、神経線維肉腫、星状細胞腫および乏突起神経膠腫であってもよい。非神経系癌／腫瘍は、任意の他の非神経組織で生じてもよく、例には、黒色腫、中皮腫、リンパ腫、骨髄腫、白血病、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、ホジキンリンパ腫、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、肝細胞腫、類表皮癌、前立腺癌、乳癌、肺癌、結腸癌、卵巣癌、膵臓癌、胸腺癌、ＮＳＣＬＣ、血液学的癌および肉腫が含まれる。
【０２４１】
特に、黒色腫、腎癌（例えば腎癌腫）または膀胱癌が意図される。
いくつかの態様において、癌はＥＢＶまたはＨＰＶ陽性癌である。
養子細胞移入療法
養子細胞移入療法は、一般的に、典型的には血液試料を抜き取り、そこから白血球を分離し、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏで増殖させ、そして同じ被験体または異なる被験体のいずれかに戻すことによって、白血球が被験体から除去されるプロセスを指す。治療は、典型的には、被験体において必要とされる細胞集団の活性型の量／濃度を増加させることを目的とする。
【０２４２】
本発明の抗体／断片は、ＣＤ１２２および／またはγｃを発現する細胞の数を拡大し、そして／またはその活性を増進させる手段を提供する。いくつかの態様において、細胞はＴ細胞および／またはＮＫ細胞である。
【０２４３】
したがって、本発明のさらなる側面において、細胞を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｉｎ  ｖｉｖｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏで、本発明記載の抗体、抗原結合断片、ポリペプチドまたは組成物と接触させる、細胞集団を増殖させるための方法を提供する。被験体において細胞集団を増殖させるための方法であって、本発明記載の抗体、抗原結合断片、ポリペプチドまたは組成物を被験体に投与する工程を含む、前記方法もまた提供する。
【０２４４】
いくつかの態様において、本発明の抗体／断片は、ＣＤ１２２および／またはγｃを発現する細胞への生存シグナルを送達可能である。いくつかの態様において、抗体／断片は、細胞または細胞集団（例えばＴ細胞（例えばＣＤ８＋  Ｔ細胞（例えばＣＴＬ）、ＣＤ４＋  Ｔ細胞）および／またはＮＫ細胞）の生存を、例えばｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｉｎ  ｖｉｖｏ、またはｅｘ  ｖｉｖｏで増進／促進するために有用である。
【０２４５】
したがって、本発明のさらなる側面において、細胞または細胞集団の生存を増進／促進する方法であって、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｉｎ  ｖｉｖｏ、またはｅｘ  ｖｉｖｏで、本発明記載の抗体、抗原結合断片、ポリペプチドまたは組成物と細胞を接触させる、前記方法を提供する。被験体において、細胞または細胞集団の生存を増進／促進する方法であって、本発明記載の抗体／抗体断片、抗原結合断片、ポリペプチドまたは組成物を、被験体に投与する工程を含む前記方法もまた提供する。
【０２４６】
該方法は、場合によって、以下の工程：被験体から血液試料を採取する工程；血液試料から細胞（例えばＰＢＭＣ、Ｔ細胞、ＮＫ細胞等の１つ）を単離する工程；ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏ細胞培養中で細胞を培養し（ここで該細胞を抗体、抗原結合断片またはポリペプチドと接触させてもよい）、細胞の増殖集団を収集する工程；細胞をアジュバント、希釈剤、またはキャリアーと混合する工程；増殖細胞を被験体に投与する工程の１またはそれより多くを含んでもよい。
【０２４７】
したがって、本発明のいくつかの側面において、被験体、例えばＴ細胞機能不全障害を有する被験体の治療法であって、治療が必要な被験体から血液試料を得て、Ｔ細胞集団が増殖するように、本発明記載の抗体、抗原結合断片、ポリペプチドまたは組成物の存在下で、血液試料から得たＴ細胞を培養し、増殖したＴ細胞を収集し、そして増殖したＴ細胞を、治療が必要な被験体に投与する工程を含む、前記治療法を提供する。
【０２４８】
治療が必要な被験体からＴ細胞を得てもよく、そして単離し、そして／または精製してもよい。これらはＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋  Ｔ細胞集団であってもよい。これらはＣＤ１２２＋および／またはγｃ＋集団であってもよい。
【０２４９】
培養中、Ｔ細胞が望ましい細胞数に増殖することを可能にする条件下で、そしてそれに適した期間、Ｔ細胞を、抗体、抗原結合断片、ポリペプチドまたは組成物と接触させてもよい。適切な期間の後、Ｔ細胞を採取し、場合によって濃縮してもよく、そして適切なキャリアー、アジュバントまたは希釈剤と混合し、そして被験体の体内に戻してもよい。被験体は、こうした療法の１またはそれより多い周期を経てもよい。
【０２５０】
Ｔ細胞増殖法は、当該技術分野に周知であり、例えばＫａｌａｍａｓｚら，  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ  ２００４  Ｓｅｐ−Ｏｃｔ；  ２７（５）：４０５−１８；  Ｍｏｎｔｅｓら，  Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００５年１１月；１４２（２）：２９２−３０２；  ＷｏｅｌｆｌおよびＧｒｅｅｎｂｕｒｇ  Ｎａｔｕｒｅ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ９  ｐ９５０−９６６  ２０１４年３月２７日；  ＴｒｉｃｋｅｔｔおよびＫｗａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｖｏｌ．  ２７５，  Ｉｓｓｕｅｓ  １−２，  ２００３年４月１日，  ｐ２５１−２５５；  Ｂｕｔｌｅｒら  ＰＬｏＳＯＮＥ  ７（１）  １２  ２０１２年１月に記載されるものがある。
【０２５１】
同時または連続投与
治療しようとする状態に応じて、組成物を単独で、あるいは他の治療と組み合わせて、同時にまたは連続してのいずれかで投与してもよい。
【０２５２】
本明細書において、本発明の抗体、抗原結合断片、ポリペプチド、ＣＡＲ、細胞または組成物、および抗感染剤または化学療法剤（療法剤）を同時にまたは連続して投与してもよい。
【０２５３】
いくつかの態様において、本発明の抗体、抗原結合断片またはポリペプチドでの治療には、化学療法が付随してもよい。
同時投与は、抗体、抗原結合断片またはポリペプチドおよび療法剤の一緒の投与、例えば両方の剤を含有する薬学的組成物（組み合わせ調製物）としての投与、あるいは互いの直後の、そして場合によって同じ投与経路を通じた、例えば同じ動脈、静脈または他の血管への投与を指す。
【０２５４】
連続投与は、抗体、抗原結合断片またはポリペプチドまたは療法剤の１つの投与に続く、所定の時間間隔後の他の剤の別個の投与を指す。２つの剤が同じ経路で投与される必要はないが、いくつかの態様ではこれに当てはまる。時間間隔は、任意の時間間隔であってもよい。
【０２５５】
いくつかの態様において、本発明の抗体、抗原結合断片、ポリペプチドまたは組成物を、養子細胞移入による治療を受けている患者に投与してもよい。投与は、ｉｎ  ｖｉｖｏで患者における養子移入細胞の増殖刺激を目的としてもよい。
【０２５６】
抗感染剤
感染治療において、本発明の抗体、抗原結合断片またはポリペプチドを、上述のように、抗感染剤と組み合わせて投与してもよい。抗感染剤は、感染の原因となる微生物またはウイルスに対する作用を有することが知られる剤であってもよい。
【０２５７】
適切な抗感染剤には、抗生物質（例えばペニシリン、セファロスポリン、リファマイシン、リピアルマイシン、キノロン、スルホンアミド、マクロライド、リンコサミド、テトラサイクリン、環状リポペプチド、グリシルサイクリン、オキサゾリジノン、およびリピアルマイシン）、抗ウイルス剤（例えば逆転写酵素阻害剤、インテグラーゼ阻害剤、転写因子阻害剤、アンチセンスおよびｓｉＲＮＡ剤およびプロテアーゼ阻害剤）、抗真菌剤（例えばポリエン、イミジアゾール、トリアゾール、チアゾール、アリルアミン、およびエキノキャンディン）、および抗寄生虫剤（例えば抗線虫剤、抗条虫剤、抗吸虫剤、抗アメーバ剤および抗原生動物剤）が含まれる。
【０２５８】
化学療法
化学療法および放射線療法は、それぞれ、薬剤または電離放射線（例えばＸ線またはγ線を用いた放射療法）での癌の治療を指す。
【０２５９】
薬剤は、化学実体、例えば小分子薬剤、抗生物質、ＤＮＡ挿入剤、タンパク質阻害剤（例えばキナーゼ阻害剤）、あるいは生物学的剤、例えば抗体、抗体断片、核酸またはペプチドアプタマー、核酸（例えばＤＮＡ、ＲＮＡ）、ペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質であってもよい。薬剤を、薬学的組成物または薬剤として配合してもよい。配合物は、１またはそれより多い薬剤（例えば１またはそれより多い活性剤）を１またはそれより多い薬学的に許容されうる希釈剤、賦形剤またはキャリアーと一緒に含んでもよい。
【０２６０】
治療は、１より多い薬剤の投与を伴ってもよい。治療しようとする状態に応じて、薬剤を、単独で、あるいは他の治療と組み合わせて同時にまたは連続してのいずれかで投与してもよい。例えば、化学療法は、２つの薬剤の投与を伴う併用療法であってもよく、これらの１つまたはそれより多くが、癌を治療するよう意図されてもよい。
【０２６１】
化学療法は、１またはそれより多い投与経路、例えば非経口、静脈内注射、経口、皮下、皮内または腫瘍内経路によって投与されてもよい。
化学療法は治療措置にしたがって投与されてもよい。治療措置は、医者または医師によって準備されることが可能であり、そして治療を必要とする患者に合わせてあつらえることも可能である、化学療法投与のあらかじめ決定されたタイムテーブル、計画、スキームまたはスケジュールであってもよい。
【０２６２】
治療措置は：患者に投与する化学療法のタイプ；各薬剤または放射線の用量；投与間の時間間隔；各治療の長さ；あるとすれば任意の治療休止日の数および性質等の１またはそれより多くを指してもよい。併用療法に関して、各薬剤をどのように投与するかを示す単一の治療措置を提供してもよい。
【０２６３】
化学療法薬剤および生物製剤は以下から選択してもよい：アルキル化剤、例えばシスプラチン、カルボプラチン、メクロレタミン、シクロホスファミド、クロラムブシル、イホスファミド；プリンまたはピリミジン代謝拮抗剤、例えばアザチオプリンまたはメルカプトプリン；アルカロイドおよびテルペノイド、例えばビンカアルカロイド（例えばビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、ビンデシン）、ポドフィロトキシン、エトポシド、テニポシド、タキサン、例えばパクリタキセル（タキソールＴＭ）、ドセタキセル；トポイソメラーゼ阻害剤、例えばＩ型トポイソメラーゼ阻害剤、カンプトテシン、イリノテカンおよびトポテカン、またはＩＩ型トポイソメラーゼ阻害剤、アムサクリン、エトポシド、リン酸エトポシド、テニポシド；抗腫瘍抗生物質（例えばアントラサイクリン抗生物質）、例えばダクチノマイシン、ドキソルビシン（アドリアマイシンＴＭ）、エピルビシン、ブレオマイシン、ラパマイシン；抗体に基づく剤、例えば抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＴＩＭ−３抗体、抗ＣＴＬＡ−４、抗４−１ＢＢ、抗ＧＩＴＲ、抗ＣＤ２７、抗ＢＬＴＡ、抗ＯＸ４３、抗ＶＥＧＦ、抗ＴＮＦα、抗ＩＬ−２、抗ＧｐＩＩｂ／ＩＩＩａ、抗ＣＤ−５２、抗ＣＤ２０、抗ＲＳＶ、抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ｅｒｂＢ２）、抗ＴＮＦ受容体、抗ＥＧＦＲ抗体、モノクローナル抗体または抗体断片、例には：セツキシマブ、パニツムマブ、インフリキシマブ、バシリキシマブ、ベバシズマブ（アバスチン（登録商標））、アブシキシマブ、ダクリズマブ、ゲムツズマブ、アレムツズマブ、リツキシマブ（マブテラ（登録商標））、パリビズマブ、トラスツズマブ、エタネルセプト、アダリムマブ、ニモツズマブが含まれる；ＥＧＦＲ阻害剤、例えばエルロチニブ、セツキシマブおよびゲフィチニブ；抗血管新生剤、例えばベバシズマブ（アバスチン（登録商標））；癌ワクチン、例えばシプルーセル−Ｔ（プロベンジ（登録商標））。
【０２６４】
１つの態様において、化学療法剤は、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＴＩＭ−３抗体、抗ＬＡＧ−３、抗ＣＴＬＡ−４、抗４１ＢＢ、抗ＧＩＴＲ、抗ＣＤ２７、抗ＢＬＴＡ、抗ＯＸ４３、抗ＶＥＧＦ、抗ＴＮＦα、抗ＩＬ２、抗ＧｐＩＩｂ／ＩＩＩａ、抗ＣＤ−５２、抗ＣＤ２０、抗ＲＳＶ、抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ｅｒｂＢ２）、抗ＴＮＦ受容体、抗ＥＧＦＲ抗体または他の抗体である。いくつかの態様において、化学療法剤は、免疫チェックポイント阻害剤または共刺激分子である。
【０２６５】
さらなる化学療法薬剤は:１３−シス−レチノイン酸、２−クロロデオキシアデノシン、５−アザシチジン５−フルオロウラシル、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、アブラキサン、アキュタン（登録商標）、アクチノマイシン−Ｄ、アドリアマイシン（登録商標）、アドルシル（登録商標）、アフィニトール（登録商標）、アグリリン（登録商標）、Ａｌａ−コート（登録商標）、アルデスロイキン、アレムツズマブ、ＡＬＩＭＴＡ、アリトレチノイン、アルカバン−ＡＱ（登録商標）、アルケラン（登録商標）、オールトランスレチノイン酸、アルファ・インターフェロン、アルトレタミン、アメトプテリン、アミフォスチン、アミノグルテチミド、アナグレリド、アナンドロン（登録商標）、アナストロゾール、アラビノシルシトシン、アラネスプ（登録商標）、アレジア（登録商標）、アリミデックス（登録商標）、アロマシン（登録商標）、アラノン（登録商標）、亜ヒ酸、アスパラギナーゼ、ＡＴＲＡ  アバスチン（登録商標）、アザシチジン、ＢＣＧ、ＢＣＮＵ、ベンダムスチン、ベバシズマス、ベキサロテン、ＢＥＸＸＡＲ（登録商標）、ビカルタミド、ＢｉＣＮＵ、ブレノキサン（登録商標）、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、ブスルファン、ブスルフェックス（登録商標）、カルシウムロイコボリン、カンパス（登録商標）、カンプトサル（登録商標）、カンプトテシン−１１、カペシタビン、カラックＴＭ、カルボプラチン、カルムスチン、カソデックス（登録商標）、ＣＣ−５０１３、ＣＣＩ−７７９、ＣＣＮＵ、ＣＤＤＰ、ＣｅｅＮＵ、セルビジン（登録商標）、セツキシマブ、クロラムブシル、シスプラチン、シトロボルム因子、クラドリビン、コルチゾン、コスメゲン（登録商標）、ＣＰＴ−１１、シクロホスファミド、シタドレン（登録商標）、シタラビン  シトサール−Ｕ（登録商標）、シトキサン（登録商標）、ダコゲン、ダクチノマイシン、ダルベポエチン・アルファ、ダサチニブ、ダウノマイシン、ダウノルビシン、ダウノルビシン塩酸、ダウノルビシン・リポソーマル、ダウノキソーム（登録商標）、デカドロン、デシタビン、デルタ−コルテフ（登録商標）、デルタゾン（登録商標）、デニロイキン、ディフチトックス、デポシトＴＭ、デキサメタゾン、酢酸デキサメタゾン、リン酸デキサメタゾンナトリウム、デキサゾン、デクスラゾキサン、ＤＨＡＤ、ＤＩＣ、ジオデックス、ドセタキセル、ドキシル（登録商標）、ドキソルビシン、ドキソルビシン・リポソーマル、ドロキシアＴＭ、ＤＴＩＣ、ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（登録商標）、デュラロン（登録商標）、エリガードＴＭ、エレンスＴＭ、エロキサチンＴＭ、エルスパー（登録商標）、エンシット（登録商標）、エピルビシン、エポエチン・アルファ、エルビタックス、エルロチニブ、エルウィニアＬ−アスパラギナーゼ、エストラムスチン、エチヨル・エトポフォス（登録商標）、エトポシド、リン酸エトポシド、ユーレキシン（登録商標）、エベロリムス、エビスタ（登録商標）、エキセメスタン、ファスロデックス（登録商標）、フェマラ（登録商標）、フィルグラスチム、フロクスウリジン、フルダラ（登録商標）、フルダラビン、フルオロプレックス（登録商標）、フルオロウラシル、フロキシメステロン、フ���タミド、フォリン酸、ＦＵＤＲ（登録商標）、フルベストラント、ゲフィチニブ、ゲムシタビン、ゲムツヅマブ・オゾガマイシン、グリーベックＴＭ、グリアデル（登録商標）ウェーハ、ゴセレリン、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、ハーセプチン（登録商標）、ヘキサドロール、ヘキサレン（登録商標）、ヘキサメチルメラミン、ＨＭＭ、ヒカムチン（登録商標）、ヒドレア（登録商標）、酢酸ヒドロコルト（登録商標）、ヒドロコルチゾン、リン酸ヒドロコルチゾンナトリウム、コハク酸ヒドロコルチゾンナトリウム、リン酸ヒドロコルトン、ヒドロキシ尿素、イブリツモマブ、イブリツモマブ・チウキセタン、イダマイシン（登録商標）、イダルビシン、イフェックス（登録商標）、ＩＦＮ−アルファ、イホスファミド、ＩＬ−１１、ＩＬ−２、メシル酸イマチニブ、イミダゾールカルボキサミド、インターフェロン・アルファ、インターフェロン・アルファ−２ｂ（ＰＥＧコンジュゲート）、インターロイキン−２、インターロイキン−１１、イントロンＡ（登録商標）（インターフェロン・アルファ−２ｂ）、イレッサ（登録商標）、イリノテカン、イソトレチノイン、イキサベピロン、イキセンプラＴＭ、キドロラーゼ、ラナコート（登録商標）、ラパチニブ、Ｌ−アスパラギナーゼ、ＬＣＲ、レナリドミド、レトロゾール、ロイコボリン、ロイケラン、ロイカインＴＭ、リュープロリド、リューロクリスチン、ロイスタチンＴＭ、リポソーマルＡｒａ−Ｃ、液体プレド（登録商標）、ロムスチン、Ｌ−ＰＡＭ、Ｌ−サルコリシン、リュプロン（登録商標）、リュプロンデポ（登録商標）、マツラン（登録商標）、マキシデックス、メクロレタミン、メクロレタミン塩酸、メドラロン（登録商標）、メドロール（登録商標）、メゲース（登録商標）、メゲストロール、酢酸メゲストロール、メルファラン、メルカプトプリン、メスナ、メスネックスＴＭ、メトトレキセート、メトトレキセートナトリウム、メチルプレドニゾロン、メチコルテン（登録商標）、マイトマイシン、マイトマイシン−Ｃ、ミトキサントロン、Ｍ−プレドニゾール（登録商標）、ＭＴＣ、ＭＴＸ、ムスターゲン（登録商標）、ムスチン、ムタマイシン（登録商標）、ミレラン（登録商標）、ミロセルＴＭ、ミロターグ（登録商標）、ナベルビン（登録商標）、ネララビン、ネオサール（登録商標）、ニューラスタＴＭ、ニューメガ（登録商標）、ニューポゲン（登録商標）、ネキサバール（登録商標）、ニランドロン（登録商標）、ニルタミド、ニペント（登録商標）、ナイトロジェンマスタード、ノバルデックス（登録商標）、ノバントロン（登録商標）、オクトレオチド、酢酸オクトレオチド、オンコスパー（登録商標）、オンコビン（登録商標）、オンタック（登録商標）、オンキサルＴＭ、オプレベルキン、オラプレッド（登録商標）、オラゾン（登録商標）、オキサリプラチン、パクリタキセル、パクリタキセルタンパク質結合型、パミドロネート、パニツムマブ、パンレチン（登録商標）、パラプラチン（登録商標）、ペディアプレド（登録商標）、ＰＥＧインターフェロン、ペガスパルガーゼ、ペグフィルグラスティム、ＰＥＧ−イントロンＴＭ、ＰＥＧ−Ｌ−アスパラギナーゼ、ＰＥＭＥＴ���ＥＸＥＤ、ペントスタチン、フェニルアラニンマスタード、プラチノール（登録商標）、プラチノール−ＡＱ（登録商標）、プレドニゾロン、プレドニゾン、プレロン（登録商標）、プロカルバジン、ＰＲＯＣＲＩＴ（登録商標）、プロロイキン（登録商標）、カルムスチン・インプラント・プリネトール（登録商標）を含むプロリフプロスパン２０、ラロキシフェン、レブリミド（登録商標）、リューマトレックス（登録商標）、リツキサン（登録商標）、リツキシマブ、ロフェロン−Ａ（登録商標）（インターフェロン・アルファ−２ａ）、リューベックス（登録商標）、ルビドマイシン塩酸、サンドスタチン（登録商標）、サンドスタチンＬＡＲ（登録商標）、サルグラモスチン、ソリュ−コルテフ（登録商標）、ソリュ−メドロール（登録商標）、ソラフェニブ、ＳＰＲＹＣＥＬＴＭ、ＳＴＩ−５７１、ストレプトゾシン、ＳＵ１１２４８、スニチニブ、スーテント（登録商標）、タモキシフェン、タルセバ（登録商標）、タルグレチン（登録商標）、タキソール（登録商標）、タキソテール（登録商標）、テモダール（登録商標）、テモゾロミド、テムシロリムス、テニポシド、ＴＥＳＰＡ、サリドマイド、タロミド（登録商標）、テラシス（登録商標）、チオグアニン、チオグアニンタブロイド（登録商標）、チオホスホアミド、チオプレックス（登録商標）、チオテパ、ＴＩＣＥ（登録商標）、トポサール（登録商標）、トポテカン、トレミフェン、トリセル（登録商標）、トシツモマブ、トラスツズマブ、トレアンダ（登録商標）、トレチノイン、トレキサールＴＭ、トリセノックス（登録商標）、ＴＳＰＡ、ＴＹＫＥＲＢ（登録商標）、ＶＣＲ、ベクチビックスＴＭ、ベルバン（登録商標）、ベルケード（登録商標）、ベペシド（登録商標）、ベサノイド（登録商標）、ビアデュルＴＭ、ビダザ（登録商標）、ビンブラスチン、硫酸ビンブラスチン、ビンカサールＰｆｓ（登録商標）、ビンクリスチン、ビノレルビン、酒石酸ビノレルビン、ＶＬＢ、ＶＭ−２６、ボリノスタット、ＶＰ−１６、ヴモン（登録商標）、キセロダ（登録商標）、ザノサール（登録商標）、ゼバリンＴＭ、ジネカード（登録商標）、ゾラデックス（登録商標）、ゾレドロン酸、ゾリンザ、ゾメタ（登録商標）より選択されてもよい。
【０２６６】
投与経路
本発明の側面にしたがった抗体、抗原結合断片、ポリペプチドおよび他の療法剤、薬剤および薬学的組成物を、限定されるわけではないが、非経口、静脈内、動脈内、筋内、皮下、皮内、腫瘍内および経口を含む、いくつかの経路による投与のために配合してもよい。抗体、抗原結合断片、ポリペプチドおよび他の療法剤は、液体または固体型で配合可能である。ヒトまたは動物の体の選択した領域への注射による投与のため、液体配合物を配合してもよい。
【０２６７】
投薬措置
本発明の抗体、抗原結合断片、ポリペプチド、ＣＡＲ、細胞、または組成物の多数回の用量を提供してもよい。用量の１つまたはそれより多くまたは各々には、別の療法剤の同時または連続投与が付随していてもよい。
【０２６８】
多数回用量は、あらかじめ決定した時間間隔によって分かれていてもよく、これは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、または３１日、あるいは１、２、３、４、５または６ヶ月の１つより選択されてもよい。例えば、用量を、７、１４、２１または２８日ごとに１回投与してもよい（プラスまたはマイナス３、２、または１日）。
【０２６９】
本発明の抗体は、療法剤として、ＩＬ−２と比較した際、好ましい薬物動態を有する。本発明の抗体／断片の利点は、ＩＬ−２に比較した際、例えば血液または血清中のｉｎ  ｖｉｖｏの半減期の改善であり、これは、抗体／断片の投与がより頻繁でなく、そして／または剤の量がより少なくてよいことを意味する。
【０２７０】
キット
本発明のいくつかの側面において、部分のキットを提供する。いくつかの態様において、キットは、あらかじめ決定された量の抗体、断片、ポリペプチド、ＣＡＲ、細胞または組成物を有する少なくとも１つの容器を有してもよい。キットは、薬剤または薬学的組成物の形で、抗体、断片、ポリペプチド、ＣＡＲまたは細胞を提供してもよく、そして明記する疾患または状態を治療するため、患者に投与するための使用説明書とともに提供されてもよい。抗体、断片、ポリペプチド、ＣＡＲ、細胞または組成物を、腫瘍へのまたは血液への注射または注入に適切であるように配合してもよい。
【０２７１】
いくつかの態様において、キットはさらに、あらかじめ決定した量の別の療法剤（例えば抗感染剤または化学療法剤）を有する少なくとも１つの容器を含んでもよい。こうした態様において、キットはまた、２つの薬剤または薬学的組成物が特定の疾患または状態に対する組み合わせ治療を提供するように、これらを同時にまたは別個に投与可能であるように、第二の薬剤または薬学的組成物も含んでもよい。療法剤はまた、腫瘍または血液への注射または注入に適切であるように配合してもよい。
【０２７２】
被験体
治療しようとする被験体は、任意の動物またはヒトであってもよい。被験体は好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトである。被験体は、非ヒト哺乳動物であってもよいが、より好ましくはヒトである。被験体は男性または女性であってもよい。被験体は患者であってもよい。被験体は治療が必要な疾患または状態を有すると診断されていてもよいし、あるいはこうした疾患または状態を有すると推測されていてもよい。
【０２７３】
タンパク質発現
細胞において本発明記載の抗体、断片、ポリペプチドまたはＣＡＲを産生するために適した分子生物学技術は、当該技術分野に周知であり、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  ニューヨーク：Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，  １９８９に示されるものがある。
【０２７４】
ポリペプチドはヌクレオチド配列から発現されてもよい。ヌクレオチド配列は、細胞中に存在するベクターに含有されてもよいし、または細胞のゲノム内に取り込まれていてもよい。
【０２７５】
「ベクター」は、本明細書において、細胞内に外因性遺伝物質をトランスファーするためのビヒクルとして用いられるオリゴヌクレオチド分子（ＤＮＡまたはＲＮＡ）である。ベクターは、細胞において、遺伝物質を発現させるための発現ベクターであることも可能である。こうしたベクターには、発現しようとする遺伝子配列をコードするヌクレオチド配列に機能可能であるように連結されたプロモーター配列が含まれることも可能である。ベクターにはまた、末端コドンおよび発現エンハンサーも含まれることも可能である。当該技術分野に知られる任意の適切なベクター、プロモーター、エンハンサーおよび終結コドンを用いて、本発明記載のベクターからポリペプチドを発現させることも可能である。適切なベクターには、プラスミド、バイナリーベクター、ウイルスベクターおよび人工染色体（例えば酵母人工染色体）が含まれる。
【０２７６】
本明細書において、用語「機能可能であるように連結される」には、選択されたヌクレオチド配列および制御ヌクレオチド配列（例えばプロモーターおよび／またはエンハンサー）が、制御配列の影響または調節下で、ヌクレオチド配列の発現を達成するような方式で、共有連結される（それによって発現カセットを形成する）状況が含まれうる。したがって、制御配列がヌクレオチド配列の転写を達成可能であるならば、制御配列は、選択されたヌクレオチド配列に、機能可能であるように連結されている。適切な場合、生じた転写物は、次いで、望ましいタンパク質またはポリペプチドに翻訳されることも可能である。
【０２７７】
本発明記載のペプチドを産生するため、ポリペプチドの発現に適した任意の細胞が使用可能である。細胞は、原核細胞または真核細胞であることも可能である。適切な原核細胞には大腸菌が含まれる。真核細胞の例には、酵母細胞、植物細胞、昆虫細胞または哺乳動物細胞が含まれる。いくつかの場合、ある原核細胞は、真核細胞と同じ翻訳後修飾を可能にしないため、細胞は原核細胞ではない。さらに、真核細胞では非常に高い発現レベルが可能であり、そして適切なタグを用いると、真核細胞からタンパク質を精製することがより容易でありうる。培地へのタンパク質の分泌を増進させる特定のプラスミドもまた、利用可能である。
【０２７８】
関心対象のポリペプチドを産生する方法は、ポリペプチドを発現するように修飾された細胞の培養または発酵を伴うことも可能である。培養または発酵は、栄養素、空気／酸素および／または増殖因子の適切な供給を提供されるバイオリアクター中で実行可能である。細胞から、培地／発酵ブロスを分配し、タンパク質内容物を抽出し、そして個々のタンパク質を分離して、分泌されたポリペプチドを単離することによって、分泌されたタンパク質を収集することも可能である。培養、発酵および分離技術は、当業者に周知である。
【０２７９】
バイオリアクターには、その中で細胞を培養可能である１またはそれより多い容器が含まれる。バイオリアクター中の培養は、連続して生じてもよく、リアクター内への反応物の連続流動、およびリアクターからの培養細胞の連続流動が伴う。あるいは、培養はバッチで生じてもよい。バイオリアクターは、培養中の細胞のために最適な条件が提供されるように、ｐＨ、酸素、容器内へのおよび容器外への流速、ならびに容器内の攪拌などの環境条件を監視し、そして調節する。
【０２８０】
関心対象のポリペプチドを発現する細胞の培養後、好ましくはそのポリペプチドを単離する。当該技術分野に知られる、細胞培養からポリペプチド／タンパク質を分離するための任意の適切な方法が使用可能である。培養から関心対象のポリペプチド／タンパク質を単離するため、まず、関心対象のポリペプチド／タンパク質を含有する培地から、培養された細胞を分離する必要がある可能性もある。関心対象のポリペプチド／タンパク質が細胞から分泌される場合、分泌されたポリペプチド／タンパク質を含有する培地から、遠心分離によって細胞を分離することも可能である。関心対象のポリペプチド／タンパク質が細胞内に集積する場合、遠心分離前に、例えば超音波、迅速凍結融解または浸透圧溶解を用いて、細胞を破壊する必要があるであろう。遠心分離は、培養細胞を含有するペレット、または培養細胞の細胞破片、ならびに培地および関心対象のポリペプチド／タンパク質を含有する上清を生じるであろう。
【０２８１】
次いで、他のタンパク質および非タンパク質構成要素も含有しうる上清または培地から、関心対象のポリペプチド／タンパク質を単離することが望ましい可能性もある。上清または培地からポリペプチド／タンパク質構成要素を分離するための一般的なアプローチは、沈殿による。異なる溶解度のポリペプチド／タンパク質は、硫酸アンモニウムなどの沈殿剤の異なる濃度で沈殿する。例えば、低濃度の沈殿剤では、水溶性タンパク質が抽出される。したがって、増加する濃度の沈殿剤を添加することによって、異なる溶解度のタンパク質が区別可能である。続いて、透析を用いて、分離されたタンパク質から硫酸アンモニウムを除去することも可能である。
【０２８２】
異なるポリペプチド／タンパク質を区別するための他の方法が当該技術分野に知られ、例えばイオン交換クロマトグラフィおよびサイズクロマトグラフィがある。これらを沈殿の代替法として用いてもよいし、または沈殿に続いて行ってもよい。
【０２８３】
関心対象のポリペプチド／タンパク質が、ひとたび培養から単離されたら、タンパク質を濃縮する必要がある可能性もある。関心対象のタンパク質を濃縮するためのいくつかの方法が当該技術分野に知られ、例えば限外濾過または凍結乾燥がある。
【０２８４】
配列同一性
アミノ酸またはヌクレオチド配列同一性パーセントを決定する目的のための整列を、当業者に知られる多様な方式で達成してもよく、例えば公的に入手可能なコンピュータソフトウェア、例えばＣｌｕｓｔａｌＷ  １．８２．  Ｔ−ｃｏｆｆｅｅまたはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアを用いてもよい。こうしたソフトウェアを用いる場合、好ましくは、デフォルトパラメータ、例えばギャップペナルティおよび伸長ペナルティに関するものを用いる。ＣｌｕｓｔａｌＷ  １．８２のデフォルトパラメータは：タンパク質ギャップ・オープンペナルティ＝１０．０、タンパク質ギャップ伸長ペナルティ＝０．２、タンパク質マトリックス＝Ｇｏｎｎｅｔ、タンパク質／ＤＮＡ  ＥＮＤＧＡＰ＝−１、タンパク質／ＤＮＡ  ＧＡＰＤＩＳＴ＝４である。
【０２８５】
本発明には、記載する側面および好ましい特徴の組み合わせが含まれるが、こうした組み合わせが明らかに許容されえないかまたは明らかに回避される場合を除く。
本明細書に用いるセクション見出しは、構成上の目的のみのためであり、そして記載する主題を限定するとは意図されないものとする。
【０２８６】
本発明の側面および態様はここで、例として、付随する図を参照しながら例示されるであろう。さらなる側面および態様は、当業者には明らかであろう。本文中に言及するすべての文書が本明細書に援用される。
【０２８７】
本明細書全体に渡って、続く請求項を含めて、背景が別であることを必要としない限り、単語「含む」、ならびに変形、例えば「含む」および「含んでいる」は、言及する整数または工程、あるいは整数または工程の群の包含を意味するが、いかなる他の整数または工程、あるいは整数または工程の群も排除しないことが理解されるであろう。
【０２８８】
本明細書および付随する請求項において、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」には、背景が明らかに別のように示さない限り、複数の指示対象が含まれることに留意しなければならない。範囲は、本明細書において、「約」１つの特定の値から、そして／または「約」別の特定の値までとして表されることも可能である。こうした範囲を示した場合、別の態様には、１つの特定の値から、そして／または他の特定の値までが含まれる。同様に、値を近似値で表した場合、先行する「約」を使用することによって、特定の値が別の態様を形成することが理解されるであろう。
【実施例】
【０２８９】
以下の実施例において、本発明者らは、抗ＩＬ−２Ｒβおよび抗γｃ抗体の単離、二重特異性抗ＩＬ−２Ｒβ／γｃ抗体の構築、操作ならびにｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏ機能的特徴付けを記載する。
【０２９０】
実施例１：抗ヒトＩＬ−２Ｒβおよび抗ヒトγｃ抗体の単離
抗ＩＬ−２Ｒβおよび抗γｃ抗体を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ選択を通じて、ヒト抗体ファージディスプレイライブラリーから単離した。抗原として組換えＩＬ−２Ｒβおよびγｃタンパク質を用いて、ＥＬＩＳＡによって特異的Ｆａｂ抗体を最初に同定した。
【０２９１】
実施例２：中程度のアフィニティのＩＬ−２Ｒβ−γｃをターゲティングする二重特異性抗体の構築
ＥＬＩＳＡにおいて強い結合を示すクローン（実施例１）を選択し、そしてこれを用いて、図１９に模式化するようなＩｇＧ１主鎖Ｆｃ領域に連結された一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）に基づいて、「ノブ・イン・ホール」一価二重特異性ヒト抗体を構築した。
【０２９２】
「ノブ・イン・ホール」形式は、ホモ二量体化および二価単一特異性抗体の形成を防止する。
ＬＡＬＡ突然変異（野生型重鎖定常ドメイン２中のロイシン残基２３４および２３５のアラニンによる置換）を抗体のＦｃ部分内に導入して、Ｆｃ受容体の結合を抑制した。
【０２９３】
ｓｃＦｖドメインおよびＦｃドメインの間のリンカーのサイズは、構築物の機能に影響を及ぼさない（実施例６．２および図２５を参照されたい）。
二重特異性ｓｃＦｖ（ビス−ｓｃＦｖ）形式：
Ｐ１Ａ３およびＰ２Ｃ４  ｓｃＦｖをリンカーで結びつけて、リンカーによって連結された２つの一本鎖可変ドメインで構成される二重特異性抗体を形成した（図２５Ａ、右）。異なるリンカーサイズを試験し（図２５Ｃ）、そしてＮＫ９２細胞増殖を測定することによって、活性を試験した。
【０２９４】
ビス−ｓｃＦｖは、ＩＬ−２の非存在下で、ＮＫ９２細胞の増殖を維持する際に有効であった。２つの一本鎖断片の間のリンカーサイズは、二重特異性化合物活性に影響を及ぼさなかった（図２５Ｃ）。
【０２９５】
実施例３：ＩＬ−２Ｒ鎖への結合の分析
ＩＬ−２Ｒβまたはγｃのいずれかへの二重特異性抗体の結合をフローサイトメトリーによって分析した。
【０２９６】
ＩＬ−２Ｒβまたはγｃのいずれかをコードする構築物であらかじめトランスフェクションしておいたＨＥＫ−２９３．６Ｅ細胞と、抗体をインキュベーションした。
蛍光コンジュゲート化二次抗体を用いて、細胞への結合を検出した。アイソタイプＩｇＧ１を陰性対照として用いた。ＩＬ−２Ｒβまたはγｃいずれかおよび関連しないターゲットに対する特異性を持つ二重特異性構築物もまた試験した。
【０２９７】
抗ＩＬ−２Ｒβ／γｃ抗体は、ターゲットを発現する細胞に結合することが示された（図２１Ａ）。
実施例４：ＩＬ−２Ｒ鎖に対するアフィニティの分析
受容体鎖への／からの抗ＩＬ−２Ｒβ／γｃ二重特異性抗体の会合／解離を、チップ上に固定された組換えＩＬ−２Ｒβまたはγｃ鎖を用い、そして表面上に多様な濃度の抗体を流動させる表面プラズモン共鳴において測定した。
【０２９８】
抗体は、ＩＬ−２Ｒβまたはγｃ鎖に対して非常に高いアフィニティを示し、非常に迅速に結合し、そして非常に緩慢に解離した（図２０）。
二重特異性抗ＩＬ−２Ｒβ／γｃ抗体Ｐ２Ｃ４／Ｐ１Ａ３、および表１に示す他の二重特異性抗体に関して、アフィニティを測定した。
【０２９９】
表１：
【０３００】
【表１】
2018527912.tif 000028
【０３０１】
実施例５：ＰＢＭＣサブセットへの結合
二重特異性ＩｇＧ抗ＩＬ−２Ｒβ／γｃ抗体を、健康なドナーから単離されたＰＢＭＣに対して試験して、どの細胞サブセットが結合するかをチェックした。抗体またはアイソタイプＩｇＧ対照をＰＢＭＣに添加して、そしてフローサイトメトリーアッセイにおいて、蛍光コンジュゲート化二次抗ヒトＩｇＧ抗体で検出した。
【０３０２】
抗ＩＬ−２Ｒβ／γｃ二重特異性抗体は、ＣＤ４＋またはＣＤ８＋  Ｔ細胞に高い結合は示さなかった。しかし、抗体は、ＣＤ５６＋  ＮＫ細胞、ＣＤ１９＋  Ｂ細胞およびＣＤ１４＋／ＣＤ１６＋単球に効率的に結合した（図２１Ｂ）。
【０３０３】
実施例６；抗ＩＬ−２Ｒβ／γｃ二重特異性抗体の活性／ＩＬ−２アゴニスト効果
６．１  シグナル伝達経路リン酸化
ＩＬ−２は、ＳＴＡＴ５、ＥＲＫおよびＡｋｔ経路を通じて、細胞内シグナル伝達を誘発することが知られる。これらの経路を通じてシグナル伝達を誘導する能力に関して、抗ＩＬ−２Ｒβ／γｃ二重特異性抗体を試験した。
【０３０４】
ＩＬ−２感受性ＮＫ９２細胞を血清枯渇させ、そして次いで、ＩＬ−２（１００Ｕ／ｍｌ、すなわち〜０．５ｎＭ１）または抗ＩＬ−２Ｒβ／γｃ抗体（１０μｇ／ｍｌ、すなわち〜９５ｎＭ２）のいずれかで３０分間刺激し、そしてフローサイトメトリーアッセイにおいて蛍光抗体を用いて、ＳＴＡＴ５、ＡｋｔおよびＥＲＫのリン酸化を検出した。
【０３０５】
抗ＩＬ−２Ｒβ／γｃ抗体は、ＳＴＡＴ５およびＡｋｔリン酸化を誘導したが、ＩＬ−２よりも穏やかな方式であった（図２２）。このアッセイにおいて、ＩＬ−２Ｒβ／γｃ抗体は、ＥＲＫのリン酸化を誘発しなかった（図２２）。
【０３０６】
ＩＬ−２の療法使用に対する最大の障害の１つは、高アフィニティヘテロ三量体受容体ＣＤ２５を発現する細胞、例えば制御Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、活性化Ｔ細胞、活性化Ｂ細胞、いくつかの骨髄前駆細胞、および上皮細胞の優先的な刺激である。
【０３０７】
ＩＬ−２または抗ＩＬ−２Ｒβ／γｃ抗体の存在下でのＳＴＡＴ５のリン酸化を、健康なドナーから得たＴｒｅｇ、ＣＤ８＋  Ｔ細胞およびＮＫ細胞におけるフローサイトメトリーによって測定した。
【０３０８】
ＮＫまたはＴ細胞を活性化するには、少量のＩＬ−２で十分であるが、低レベルのＩＬ−２であっても、Ｔｒｅｇが優先的にそして強く活性化された。ＮＫまたはＣＤ８＋  Ｔ細胞において、ＳＴＡＴ５シグナル伝達経路の２０％未満の活性化を生じる濃度であっても、Ｔｒｅｇはすでに１００％活性化を示した（図２３）。
【０３０９】
対照的に、二重特異性抗体は、Ｔｒｅｇのより低い優先的活性化を伴う、異なる活性化プロファイルを示した。ＮＫおよびＣＤ８＋  Ｔ細胞の２０％活性化を生じる濃度で、Ｔｒｅｇは、３９〜４９％の間のＳＴＡＴ５リン酸化を示した。ＮＫおよびＣＤ８＋  Ｔ細胞の５０％活性化を生じる濃度で、Ｔｒｅｇ集団はなお完全には活性化されず、７３〜７８％のＳＴＡＴ５リン酸化であった（図２３）。
【０３１０】
６．２  ＩＬ−２依存性細胞の増殖
ＮＫ９２細胞の生存および増殖を、ＩＬ−２の非存在下で、アラマーブルー色素を用いて測定した。
【０３１１】
抗ＩＬ−２Ｒβ／γｃ抗体は、ＩＬ−２の非存在下で、ＮＫ９２細胞の増殖を維持可能であった一方、ＩＬ−２受容体の１つの鎖にしか結合しない抗体構築物は、いかなる影響も示さなかった（図２４）。
【０３１２】
リンカーの長さが抗体の機能性に対して影響を有するかどうかを評価するため、異なるリンカーサイズを持つ抗体を用いて、同じアッセイを行った。
ＮＫ９２細胞の増殖は、リンカーサイズによって影響を受けなかった（図２５Ｂ）。最短および最長のリンカー（５〜２３アミノ酸の間）を用いて、図２５Ｂのデータを得た。
【０３１３】
図２５Ａに模式的に示すように、二重特異性抗体形式、または二重特異性ｓｃＦｖ形式で、異なる長さのリンカーを分析した。簡潔には、Ｐ１Ａ３およびＰ２Ｃ４  ｓｃＦｖを、異なるサイズのリンカーで連結し、そしてＮＫ９２細胞増殖を測定することによって活性を試験した。
【０３１４】
結果を図２５Ｂおよび２５Ｃに示す。ビス−ｓｃＦｖは、ＩＬ−２の非存在下で、ＮＫ９２細胞の増殖を維持する際に有効であり、そして２つのｓｃＦｖ断片の間のリンカーのサイズは、活性に影響を及ぼさない。
【０３１５】
６．３  カニクイザル細胞との交差反応性
抗ＩＬ−２Ｒβ／γｃ抗体をまた、非ヒト霊長類細胞に対しても試験した。簡潔には、カニクイザル脾臓細胞を、ヒトＩＬ−２または二重特異性抗体の存在下でインキュベーションし、そしてＳＴＡＴ５リン酸化を測定した。抗体は、カニクイザルＩＬ−２Ｒと交差反応性であることが見出され、そしてヒトＩＬ−２と同じくらい効率的にＳＴＡＴ５のリン酸化を誘発した（図２６）。
【０３１６】
６．４  結論
総合すると、これらのデータは、抗ＩＬ−２Ｒβ／γｃ二重特異性抗体が、ＩＬ−２に対するある程度のアゴニスト効果を有し、そしてこれらの効果がＣＤ２５発現細胞に非常に優先的には向けられていないことを示す。
【０３１７】
実施例７：免疫反応の調節：非特異的刺激セッティングにおけるＴ細胞増殖の制御
末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）をボランティア・ドナーから単離し、そして組換えヒトＩＬ−２（２００ｎｇ／ｍｌ）、抗ＩＬ−２Ｒβ／γｃ二重特異性抗体（３、１、０．３、０．１、または０．０３μｇ／ｍｌ）または陽性対照としての抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズの存在下で、１週間培養した。１週間後、絶対細胞数を測定することによって細胞増殖を評価し；細胞サブセット比率をＦＡＣＳによって測定した。
【０３１８】
７．１  Ｔ細胞の増殖
匹敵する濃度で（ＩＬ−２  ２００ｎｇ／ｍｌ≒１２ｎＭ；二重特異性抗ＩＬ−２Ｒβ／γｃ抗体  ３μｇ／ｍｌ≒２０ｎＭ）、抗体は、ＩＬ−２よりも低い度合いまで、Ｔ細胞増殖を誘発する（図２７Ａ〜２７Ｃ）。二重特異性抗体は、Ｔ細胞増殖に対して、用量依存性効果を示す（図２７Ａ〜２７Ｄ）。非特異的刺激セッティングにおいて、ＣＤ８：ＣＤ４細胞比は、細胞がＩＬ−２と培養された場合に比較して、抗ＩＬ−２Ｒβ／γｃ抗体の存在下では、有意に異ならなかった（図２７Ｄ）。
【０３１９】
７．２  制御Ｔ細胞の刺激
制御Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）は、高アフィニティＩＬ−２受容体サブ鎖ＩＬ−２Ｒαを発現する。非特異的刺激セッティングにおいて、ＩＬ−２は、ＣＤ３＋  ＣＤ４＋  Ｔ細胞の中の制御Ｔ細胞を優先的に刺激し；こうしたＴｒｅｇ増殖は、二重特異性抗ＩＬ−２Ｒβ／γｃ抗体によっては誘発されなかった（図２８）。
【０３２０】
７．３  エフェクター対メモリー細胞の刺激
メモリーＣＤ８＋リンパ球に関して、二重特異性抗ＩＬ−２Ｒβ／γｃ抗体は、ＩＬ−２での刺激に反応した増殖と比較して、エフェクターメモリーＣＤ８＋  Ｔ細胞サブセットのより大きな増殖を誘発し、一方、セントラルメモリーおよび未刺激ＣＤ８＋  Ｔ細胞サブセットのより少ない増殖を誘発した。
【０３２１】
実施例８：免疫反応の調節：特異的刺激セッティングにおけるＴ細胞増殖の制御
エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）血清陽性ボランティア・ドナー由来のＰＢＭＣを、ＥＢＶに感染させて、リンパ芽球細胞株（ＬＣＬ）を作製した。ＬＣＬをソーティングし、そして続く増殖を阻害するために、γ照射した。照射ＬＣＬを１ｘ１０５細胞／ｍｌの密度で、２ｘ１０６自己ＰＢＭＣ／ｍｌと、ＩＬ−２、抗ＩＬ−２Ｒβ／γｃ二重特異性抗体または抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズ（陽性対照）の存在下で２週間共培養した。次いで、増殖および異なる細胞サブセットの比率に関して、細胞を分析した。
【０３２２】
グランザイムＢおよびカスパーゼ８に関する蛍光ペプチド基質を用いて、細胞傷害性殺傷アッセイを行った。増殖Ｔ細胞を生存ＬＣＬと２：１の比で１時間共培養した。フローサイトメトリーによるペプチド蛍光陽性細胞の分析によって死滅を測定し、これは、ＣＴＬ誘導性プログラム細胞死を経ている細胞を示した。
【０３２３】
８．１  Ｔ細胞の増殖
二重特異性抗体は、低濃度であっても、Ｔ細胞の増殖を誘発する。抗ＩＬ−２Ｒβ／γｃ二重特異性抗体仲介性Ｔ細胞増殖は、ＩＬ−２での刺激後に観察される増殖よりもわずかに高い（図３０Ａ）。抗体は、ＣＤ４＋  Ｔ細胞数に有意に影響を及ぼさない（図３０Ｂ）が、抗体は、ＩＬ−２よりも高い度合いまで、ＣＤ８＋  Ｔ細胞数の増加を誘発し（図３０Ｃ）、そしてしたがって、ＣＤ８：ＣＤ４細胞比を増加させた（図３０Ｄ）。
【０３２４】
８．２  Ｔ細胞サブセットに対する影響
最高濃度（１μｇ／ｍｌ）で、抗ＩＬ−２Ｒβ／γｃ抗体は、ＩＬ−２での刺激に比較した際、ＣＤ８＋メモリー細胞よりも、エフェクターＣＤ８＋  Ｔ細胞の増殖を支持する（図３１Ａ）。ＩＬ−２刺激に比較して、抗ＩＬ−２Ｒβ／γｃ抗体はまた、ＣＤ８＋  ＰＤ−１＋サブセットの増加も誘発する（図３１Ｂ）一方、Ｔｒｅｇの比率を減少させる（図３１Ｃ）。
【０３２５】
８．３  細胞傷害性Ｔリンパ球仲介性殺傷
抗ＩＬ−２Ｒβ／γｃ二重特異性抗体は、ＣＴＬ細胞傷害性を誘発可能である。匹敵するモル濃度で（ＩＬ−２に関して１２ｎＭ（２００ｎｇ／ｍｌ）対抗体に対する７ｎＭ（１μｇ／ｍＬ））、抗体仲介性細胞傷害性は、ＩＬ−２によって誘発される細胞傷害性よりも低い（図３２）。
【０３２６】
８．４  結論
総合すると、データは、二重特異性抗ＩＬ−２Ｒβ／γｃ抗体が、ＩＬ−２のものとは異なる作用機構を誘発することを示唆する。抗体は、エフェクターＣＤ８＋  Ｔ細胞の増殖を優先的に誘発する。抗体は、細胞傷害性Ｔ細胞の刺激を可能にするが、ＩＬ−２がするようには、Ｔｒｅｇを優先的に刺激しない。
【０３２７】
実施例９：安定性を改善するための配列操作
二重特異性抗体を構築する際の最大の困難の１つは、異種構築物の安定性である。単一特異的ＩｇＧと異なり、本発明の二重特異性抗ＩＬ−２Ｒβ／γｃ抗体は、軽鎖／重鎖の２つの異なる対の人工的な組み立てである。
【０３２８】
構築物の一般的な安定性を改善するため、元来の抗体クローンＰ２Ｃ４およびＰ１Ａ３を操作して、熱安定性を増加させた。
９．１  熱安定クローン
親クローンＰ２Ｃ４およびＰ１Ａ３からランダムに突然変異させたクローンのライブラリーを構築し、そして２ラウンドのパニング後のＥＬＩＳＡで、それぞれのターゲットに対する結合に関して、突然変異体をスクリーニングした。次いで、結合物質を５５℃の加熱に供した。加熱後もなお結合している突然変異体を配列決定し、そしてユニークなクローンを同定した。
【０３２９】
４５℃〜６５℃の間で４時間加熱した後、ＥＬＩＳＡにおいて、それぞれのターゲット、γｃ（図３３Ａおよび３３Ｂ）またはＩＬ−２Ｒβ（図３４Ａおよび３４Ｂ）のいずれかへの結合を測定することによって、クローンの熱安定性を評価した。突然変異クローンは、親クローンよりも高い熱安定性を示した。
【０３３０】
９．１  高安定性フレームワークの移植
抗体の安定性をさらに増加させるため、非常に安定性であることが知られる抗体のフレームワーク中にクローンを移植した。
【０３３１】
非常に安定性であることが知られる抗体のフレームワーク内にＰ２Ｃ４およびＰ１Ａ３を移植した。ＥＬＩＳＡ実験を行って、新規クローンがＩＬ−２Ｒβおよびγｃへの結合能を保持することを確認した。
【０３３２】
Ｐ２Ｃ４＿ＦＷ２およびＰ１Ａ３＿ＦＷ２は、それぞれ、ＩＬ−２Ｒβおよびγｃへの用量依存性結合プロファイルを示した（図３５Ａおよび３５Ｂ）。
実施例１０：ＩＬ−２Ｒβ／γｃへの新規二重特異性構築物の結合
１０．１  可変および定常ドメイン間の短いリンカー
ｓｃＦｖおよび定常ドメイン間に、以下の短いリンカーの１つを含む、二重特異性抗体構築物を調製した（抗体形式：ＶＨドメイン−リンカー−ＶＬドメイン−短いリンカー−ヒンジ−ＣＨ２ドメイン（＋ＬＡＬＡ）−ＣＨ３ドメイン（＋ノブ／ホール＋ｃｙｓ））：ＮＳＧＡＧＴＡＡＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５７）またはＧＧＧＧＳＡＡＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５８）。
【０３３３】
ＮＳＧＡＧＴＡＡＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５７）またはＧＧＧＧＳＡＡＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５８）の短いリンカーを含む二重特異性構築物を生成し、そしてＥＬＩＳＡによって、ＩＬ−２Ｒβおよびγｃへの結合に関して試験した。
【０３３４】
二重特異性抗体は、短いリンカーの同一性に関わらず類似のアフィニティで結合することが見出された（図３６Ａおよび３６Ｂ）。
新規配列を持つ二重特異性抗体を構築し、そしてＩＬ−２ＲβまたはＩＬ−２Ｒγｃのいずれかに対する結合を、ＥＬＩＳＡによって評価した。構築物は、ＩＬ−２Ｒに対して、親二重特異性抗体と類似かまたはそれよりも優れたアフィニティで結合することが見出された（図３７Ａおよび３７Ｂ）。
【０３３５】
実施例１１：Ｔ細胞増殖および極性化に対する影響
ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＴ細胞増殖に対する抗ＩＬ−２Ｒβ／γｃ二重特異性抗体の影響ならびに抗原特異的および非特異的定性的極性化およびサブセット特異性に対するその影響を測定するため、Ｔ細胞を用いたアッセイを行った。ＥＢＶ陽性個体由来の末梢血を用いて、ＥＢＶ形質転換リンパ芽球様Ｂ細胞株（ＬＣＬ）およびＥＢＶ特異的ＣＴＬ株の両方を生成した。
【０３３６】
簡潔には、ＬＣＬを生成するため、ＰＢＭＣをシクロスポリンおよびＥＢＶの存在下で１週間培養し、そしてシクロスポリンを含むがＥＢＶを含まない交換した新鮮な培地中でさらに２週間培養した。培養後、細胞をＧ−Ｒｅｘカラムにトランスファーし、そして増殖を監視した。ＣＴＬの生成のため、ＬＣＬを照射して、ＣＬＴの抗原供給源として用いた。ＰＢＭＣをＬＣＬと、４０：１のエフェクター対刺激因子（Ｅ：Ｓ）比で共培養した。ＩＬ−２、抗ＩＬ−２Ｒβ／γｃ二重特異性抗体、またはＣＤ３／２８ビーズの添加によって、細胞を刺激した。
【０３３７】
７日後、細胞は培地交換およびさらなる刺激を経た。第１０日、リンパ球増殖および表現型に関して、フローサイトメトリーによって細胞を分析した。
二重特異性抗体の添加は、ＩＬ−２での刺激に反応した増殖に比較した際、抗原特異的ＣＤ８＋  Ｔ細胞増殖の有意な増加を生じることが見出された（図３８Ａ）。さらに、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ培養は、抗体刺激後、改善されたＣＤ８：ＣＤ４比を示した（図３８Ｂ）。
【０３３８】
次いで、制御Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の増殖に対する二重特異性抗体の影響を測定し、そして抗原特異的（自己ＬＣＬ共培養）および非特異的（抗ＣＤ３／ＣＤ２８マイクロビーズ）セッティングにおいて、ＩＬ−２での刺激に反応したＴｒｅｇの増殖に比較した。二重特異性抗体の添加は、非特異的（図３９Ａ）および抗原特異的刺激セッティング（図３９Ｂ）の両方において、ＩＬ−２に反応したＴｒｅｇ増殖に比較した際、Ｔｒｅｇの有意に減少した増殖を生じる。
【０３３９】
実施例１２：非ヒト霊長類におけるｉｎ  ｖｉｖｏデータ
抗ＩＬ−２Ｒβ／γｃ二重特異性抗体の静脈内（ｉｖ）注射の影響、Ｔ細胞およびＮＫ細胞の増殖を駆動する能力、ならびに「サイトカインストーム」を通じた潜在的な毒性を測定するため、カニクイザルにおいて、用量上昇実験を確立した。
【０３４０】
３匹のサルに、単一用量の抗ＩＬ−２Ｒβ／γｃ抗体を、大腿動脈を通じて静脈内投与した；サルＡには１ｍｇ／ｋｇ、サルＢには５ｍｇ／ｋｇ、そしてサルＣには１０ｍｇ／ｋｇを投与した。抗体注射前、ならびに抗体注射１時間後、２４時間後、７２時間後、および１２０時間後に、血液を収集した。
【０３４１】
研究全体で、そして次いで、さらに３週間、バイタルサイン検査および身体検査を行った。ＰＢＭＣをすべての時点で単離し、免疫染色およびフローサイトメトリーによって白血球サブセットを分析し、そしてＫｉ−６７発現分析によって、細胞増殖を評価した。すべての時点で、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）によって、血漿サイトカインレベルを測定した。
【０３４２】
獣医学的身体検査は、全体の外見、粘膜、心臓血管、呼吸器、外皮、消化器、筋骨格、神経系、尿生殖器系、聴覚系、または視覚系に異常を示さなかった。動物は、熱性疾病または抑鬱の臨床的知見を示さなかった。１匹の動物（サルＢ）は、穏やかな体重喪失を示したが、研究経過中に回復した。動物は、ＩＬ−２投与に一般的に関連する毒性の明白な徴候は示さなかった（ＰＭＩＤ：１４１８６９８および８４５４４１６）。
【０３４３】
これらの観察と一致して、サイトカイン分析は、注射後の炎症性仲介因子の穏やかな増加しか示さなかった（図４０Ａ〜４０Ｅ）。フローサイトメトリー分析は、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋  Ｔ細胞集団の顕著な増殖を示した（図４１Ａ〜４１Ｃ）。
【０３４４】
ＮＫ細胞増殖もまた、抗体処理に反応して観察された（図４２Ａおよび４２Ｂ）。この増殖は、ＩＬ−２に必要な連続注入または反復投与と比較して、抗体の単一投与後に観察され、抗ＩＬ−２Ｒβ／γｃ二重特異性抗体がＩＬ−２よりも長い半減期を有することが示唆されることに注目すべきである。
【図１−１】
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【図１−２】
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【図１−３】
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【図１−４】
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【図１−５】
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【図２−１】
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【図２−２】
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【図２−３】
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【図２−４】
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【図２−５】
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【図３】
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【図４−１】
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【図４−２】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５−１】
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【図１５−２】
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【図１５−３】
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【図１５−４】
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【図１５−５】
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【図１６−１】
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【図１６−２】
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【図１７−１】
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【図１７−２】
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【図１７−３】
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【図１７−４】
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【図１７−５】
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【図１７−６】
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【図１８−１】
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【図１８−２】
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【図１８−３】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１−１】
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【図２１−２】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５−１】
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【図２５−２】
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【図２６】
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【図２７−１】
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【図２７−２】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０−１】
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【図３０−２】
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【図３１−１】
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【図３１−２】
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【図３２】
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【図３３−１】
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【図３３−２】
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【図３４−１】
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【図３４−２】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９】
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【図４０−１】
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【図４０−２】
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【図４０−３】
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【図４１−１】
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【図４１−２】
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【図４２】
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【国際調査報告】
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