(57)【要約】肺サーファクタントに基づく、新規な医療用および美容用の皮膚ケア製造物、ならびに、皮膚を処置するための組成物が提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
皮膚の障害の防止または処置における使用のための、肺サーファクタントまたはその生物学的に活性な誘導体の医薬組成物であって、前記皮膚に局所投与されることを特徴とする医薬組成物。
【請求項２】
前記障害が、皮膚創傷、線維症、熱傷、組織増強、組織欠損、炎症、過敏、アレルギー、随伴炎症を伴う遺伝性または後天性の皮膚疾患、良性または悪性の奇形、瘢痕形成、ならびに、皮膚移植、再建手術および皮膚手術との組合せでの補完的処置、または、任意の局所的な表皮内皮膚処置もしくは皮内皮膚処置からなる群から選択される、請求項１に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項３】
ケラチノサイトの上皮移動を促進させるための、または、皮膚の美容的処置のための、例えば、皮膚の瘢痕、しわ、変色、皮膚過敏、体積増大、脱毛症の処置で、皮膚剥離、表皮切除および医学的穿刺の後での処置のための、肺サーファクタントまたはその生物学的に活性な誘導体の組成物の使用。
【請求項４】
前記肺サーファクタントまたはその生物学的に活性な誘導体が、皮膚に対する抗炎症効果をもたらすことにおいて効果的である、請求項１または２に記載の使用のための医薬組成物あるいは請求項３に記載の使用。
【請求項５】
前記肺サーファクタントが、ポラクタントアルファ、カルファクタント、ボバクタントおよびベラクタントからなる群から選択される、請求項１、２または４に記載の使用のための医薬組成物あるいは請求項３または４に記載の使用。
【請求項６】
前記肺サーファクタントがボバクタントである、請求項５に記載の使用のための医薬組成物または請求項５に記載の使用。
【請求項７】
組成物における前記肺サーファクタントまたはその生物学的に活性な誘導体が、薬学的に許容され得る担体とともに配合される、請求項１、２または４〜６のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物あるいは請求項３〜６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項８】
前記担体が溶媒であり、好ましくは水性溶媒、両親媒性溶媒または親油性溶媒である、請求項７に記載の使用のための医薬組成物または請求項７に記載の使用。
【請求項９】
前記肺サーファクタントまたはその生物学的に活性な誘導体が、０．００５ｍｇ／ｍｌ〜１００ｍｇ／ｍｌの濃度および単位用量で、好ましくは約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約０．５ｍｇ／ｍｌの濃度および単位用量で、最も好ましくは約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約０．１ｍｇ／ｍｌの濃度で配合物に存在する、請求項７または８に記載の使用のための医薬組成物あるいは請求項７または８に記載の使用。
【請求項１０】
前記肺サーファクタントまたはその生物学的に活性な誘導体が、０．０１μｇ／ｍｍ２〜１００ｍｇ／ｍｍ２の投薬量で、好ましくは０．１μｇ／ｍｍ２〜０．５μｇ／ｍｍ２の投薬量で投与される、請求項１、２または４〜９のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物あるいは請求項３〜９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１１】
さらなる活性な薬剤、好ましくは、抗炎症性、抗線維化、遊走促進性、血管形成促進性、創傷治癒促進性、瘢痕化軽減性、皮膚過敏軽減性および／または抗アレルギー性であることが好ましい皮膚活性な薬剤をさらに含む、請求項１、２または４〜１０のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物あるいは請求項３〜１０のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１２】
皮膚の障害を処置することにおいて使用されるための抗炎症性医薬品としての、請求項１〜１１のいずれか一項に定義される組成物。
【請求項１３】
請求項１〜１１のいずれか一項に定義される肺サーファクタントまたはその生物学的に活性な誘導体を好ましくは乾燥形態で含む第１の容器と、生理学的に許容され得る水性希釈剤を含む第２の容器と、皮膚表面における局所投与のための説明書とを含む医薬用包装物。
【請求項１４】
皮膚に対する抗炎症効果、遊走促進効果、抗線維化効果および／または増強された創傷閉鎖効果をもたらすために効果的である、請求項１〜１１のいずれか一項に定義される組成物を含む皮膚創傷ケア処置製造物、皮膚科学的製造物または化粧用製造物。
【請求項１５】
（ａ）局所適用可能な製造物（例えば、ゲル、軟膏、ローションまたはクリームなど）である；
（ｂ）絆創膏、ガーゼ、ガーメント、シリコン、ポリエステルネットまたはポリプロピレンネットからなる担体であって、前記組成物、前記ゲル、軟膏、ローションまたはクリームが塗布されて、これにより、前記組成物、ゲル、軟膏、ローションまたはクリームが含浸され、または取り込まれる皮膚パッチ、脂肪ガーゼ、加圧ガーメント、シリコンシート、ヒドロセルラー（ｈｙｄｒｏｃｅｌｌｕｌａｒ）（ポリウレタン）フォームプレートをもたらす担体、あるいは、前記組成物、ゲル、軟膏、ローションまたはクリームと混合されるアルギン酸塩を含む；
（ｃ）スプレー剤である；あるいは
（ｄ）他の任意の皮膚創傷処置製造物または治癒療法剤である、
請求項１４に記載の製造物。
【請求項１６】
皮膚細胞アッセイ（好ましくはケラチノサイトアッセイ）、皮膚アッセイおよび／または創傷治癒アッセイにおける、請求項１４に記載の製造物の使用。
【請求項１７】
皮膚障害（例えば、創傷、局所的炎症および／または瘢痕形成など）を処置する方法であって、その必要性のある対象に肺サーファクタントまたはその生物学的に活性な誘導体を、前記対象の皮膚に対する抗炎症効果、遊走促進効果、抗線維化効果および／または増強された創傷閉鎖効果をもたらすために効果的である量で投与することを含む方法。
【請求項１８】
前記肺サーファクタントまたはその生物学的に活性な誘導体が、請求項１〜１１のいずれか一項に記載される組成物の形態で投与され、あるいは請求項１４または１５に記載される製造物を適用することによって投与される、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記肺サーファクタントまたはその生物学的に活性な誘導体が前記対象の皮膚表面に局所投与される、請求項１７または１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記皮膚障害が、請求項１〜４のいずれか一項に定義される皮膚障害または状態である、請求項１７〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は概して、肺サーファクタントまたはその誘導体に基づく皮膚ケア製造物および皮膚処置製造物に関連する。具体的には、本発明は、皮膚の損傷および／または障害の防止または処置において使用されるための、肺サーファクタントまたはその生物学的に活性な誘導体を含む組成物に関連する。さらに、本発明は、皮膚の皮膚科学的処置および美容的処置のためのそのような組成物の使用に関連する。加えて、本発明は、肺サーファクタントまたはその生物学的に活性な誘導体を含む前記組成物を含む、皮膚への適用（好ましくは皮膚表面への適用）のために設計された医薬用の組成物、包装物および製造物に関連する。
【背景技術】
【０００２】
西欧諸国では、熱傷害の発生率が４％（１）〜１０％（２）の間である。ドイツでは、２０，０００件の熱傷傷害が一年間に記録され、４，０００人の患者が一般病院での治療を必要とし、１，２００人が熱傷センターの専門集中治療施設に入院する（１）。小児および高齢者は熱傷傷害の高リスク群であり、発生率がそれぞれ、１５％（３）〜５８％（４）または２０％（２）の間である。深部熱傷および全層性熱傷では、壊死組織が外科的に除去され、一般には分層植皮片により置き換えられる。創傷治癒が完了した後には、継続的なアフターケアが、肥厚性瘢痕形成を防止するために、軟膏、物理療法、作業療法およびシリコーン被覆材とともに必要となる。加えて、個別に調節された加圧ガーメントが処方されるが、その有益な効果についての証拠は低いものである（５〜７）。深部熱傷では、瘢痕化および拘縮が引き起こされる。熱傷傷害後の病理学的瘢痕化の発生率が３０％〜９１％の間で変化し（６、８）、熱傷部の創傷深さおよび総体表面積が、重篤な瘢痕化についての予測因子である（９）。断切性瘢痕化の場合には、二次的な外科的介入が瘢痕除去および形成外科的再建とともに必要となる。全体ではおよそ３億ユーロが、すなわち、患者あたりおよそ２７０，０００ユーロが年間、熱傷後遺症に費やされた（１０）。瘢痕の処置では、他の熱傷後遺症のための費用よりも大きい費用が、瘢痕化に起因する外科的介入のための複数の外科的介入のために生じている（１１）。
【０００３】
皮膚創傷治癒の生理学
創傷修復の主たる目標は、物理的損傷、化学的損傷および微生物損傷に対する完全なバリアの回復である（１２）。気液相間での再上皮化には、創傷面最小化が並行する。達成された創傷閉鎖の後において、ケラチノサイトが最終分化し、新しい多層表皮を形成する。この形態変化は、同時に細胞外環境の再構築を伴って、例えば、隙間のない細胞間接触を有するヘミデスモソーム、デスモソームおよびアドヒーレンスジャンクションの形成を伴って、細胞の基底接触領域の収縮をもたらす（１３）。それにより、表皮細胞は収縮し、その外表面を気液相間において効果的に最小化する。機械的張力の差が、下に位置する細胞外マトリックスに伝わり、分泌された増殖因子と一緒になって筋線維芽細胞の整列および収縮を刺激する（１４）。アルファ−平滑筋アクチン（ＡＳＭＡ）を含有する筋線維芽細胞が、創傷収縮の第２段階における重要な役割を果たしている（１４）。機構的には、細胞内のアクチン微小線維が、細胞内アクチン束を細胞外マトリックス（ＥＣＭ）とつなぐ細胞表面での接着複合体において終結する。それにより、機械的な力が筋線維芽細胞によってもたらされ、周囲のＥＣＭに伝達され、その結果、マトリックス再編成および創傷収縮が生じる（１４）。
【０００４】
異常な創傷治癒の病態生理学
異常な皮膚創傷治癒が、２つの正反対の実体によって、すなわち、長期にわたる非治癒性の創傷と、瘢痕化および拘縮形成を伴う過度な創傷治癒とによって特徴づけられる。
【０００５】
長期または非治癒性の創傷は、妥当な期間で、通常の場合には３０日として定義される期間で上皮化および閉鎖が行われない開放創である。これらの創傷は典型的には、臨床的に停滞しており、堅固な肉芽組織を形成することができない。多くの要因が、これらの患者における治癒を阻害することに寄与しており、しかし、どの統合理論も、それぞれの個々の非治癒性創傷の原因病理論を説明することができない（１５）。多くの医学的状態が、損なわれた創傷治癒に寄与しており、例えば、糖尿病、動脈不全、静脈疾患、リンパ浮腫、圧迫壊死および感染症などに寄与している（１５）。様々な研究により、糖尿病性創傷における増殖因子の変化した発現プロファイルが暗示されている（１６）。持続した炎症が、炎症促進性のサイトカイン（１７）および細胞（例えば、マクロファージ、Ｂ細胞、創縁における形質細胞）（１８）における増大によって際立っている。ＭＭＰ産生が、炎症促進性ＭＭＰ−９の潰瘍床への移行を伴って脱調節される（１９、２０）。終末糖化産物および炎症性メディエータにより、線維芽細胞および血管細胞はアポトーシスを受け、また、肉芽組織形成が損なわれる（２１）。糖尿病患者の線維芽細胞およびケラチノサイトは増殖速度およびコラーゲン生成が低下している（２２）。
【０００６】
非治癒性創傷の最先端処置
それぞれの場合において、処置が、どのような壊死組織であっても、存在する壊死組織の創面切除から始まる（２３）。しかしながら、それぞれの臨床的問題のための最適な処置にもかかわらず、これらの創傷はしばしば依然として治癒せず、外科的介入が必要となる。処置が壊死組織の創面切除から始まり、これにより、細菌感染の潜在的な源が取り除かれる。細菌負荷に応じて、細菌の薬物耐性に合わせて調節される全身の抗菌剤処置が推奨される。最適な治癒状態を提供するためには、創傷部水分の不均衡が、適切な包帯および圧迫療法により正されなければならない（２４）。活動的な医学的併存疾患が積極的に処置される。創傷がきれいになり、再建のための準備が整うまで、または、数か月にわたって続き得る二次癒合によって治癒するまで、ケアが続けられる。
【０００７】
過度な瘢痕化および線維症の病態生理学
正常な創傷は、真皮欠損が閉じられ、上皮化が完了したときには修復プロセスを停止させる様々な「停止」シグナルを有する。これらのシグナルが存在しないか、または効果的でないとき、修復プロセスは弱らずに継続し、過度な瘢痕化を引き起こす場合がある。プログラム細胞死（アポトーシス）が修復の終わりになく、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）成分を分泌する活性化された線維芽細胞（例えば、筋線維芽細胞）が引き続き存在することが関係している（２５）。肥厚性瘢痕の線維芽細胞により、より多くの結合組織増殖因子（ＣＴＧＦ）がＴＧＦ−β刺激後に産生される（２６）。ＣＴＧＦにより、走化性、増殖、マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）発現およびＥＣＭ産生が刺激される（２７）。プロテオグリカンのデコリンがＴＧＦ−βに結合し、コラーゲン原線維形成を、ＴＧＦ−β産生をダウンレギュレーションすることによって調節する（２８、２９）。正常な真皮線維芽細胞とは対照的に、肥厚性瘢痕由来の線維芽細胞はより少ないデコリンを分泌しており、おそらくは、それによって、持続したＴＧＦ−β活性に寄与しているであろう（３０）。プログラム細胞死が、過度な瘢痕化における持続する筋繊維芽細胞を伴う創傷閉鎖後の筋線維芽細胞消失の根底にあると考えられている（１５）。
【０００８】
瘢痕のための最先端処置
過度な瘢痕化のリスクが高い患者は、シリコーンゲル被覆材または軟膏、低アレルギー性微孔性テープおよび同時病巣内ステロイド注射を含む様々な防止的技術から利益を受ける（３１）。様々な防止的措置にもかかわらず、過度な瘢痕化が起こり、瘢痕拘縮を引き起こす場合がある。集学的治療法が、過度な瘢痕化を処置するために一般に使用される；これらには、シリコーンゲル被覆材、適合するように仕立てられた加圧ガーメント、および、単独での理学療法、または、マッサージ、電気刺激もしくは超音波を伴う理学療法が含まれる。特に困難な領域のステロイド注入がときには必要である。レーザー処置が有用である可能性がある（３２）。Ｚ成形術、切除および移植、ならびに皮膚弁再建を伴う外科的処置がしばしば必要となる（３１）。今日に至るまで、皮膚の創傷治癒を促進させ、付随する炎症反応を減弱させ、かつ、過度な瘢痕化を効果的に防止する治療法はない。したがって、これらの処置目的での改善された特性を伴って、創傷、局所的炎症および瘢痕形成を処置することにおいて使用されるための新規な処置方法および物質が求められている。
【０００９】
この技術的課題が、特許請求の範囲において特徴づけられるような、また、下記においてさらに説明されるような本発明の実施形態によって解決された。
【発明の概要】
【００１０】
本発明は概して、皮膚の過度な瘢痕化および他の異常（例えば、創傷閉鎖にしばしば伴う線維症など）を回避しながら、または防止しながら、皮膚損傷の局所的処置を行うために特に好適である、肺サーファクタントに基づく医薬組成物を含む皮膚の医療用製造物およびケア製造物に関連する。
【００１１】
肺サーファクタント（ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ、すなわち、ｌｕｎｇ  ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ）は、肺において肺胞細胞によって産生され、肺胞の気液界面を覆う脂質およびタンパク質の複雑な組成物である。肺サーファクタントは虚脱気道の漸増を容易にし、また、肺コンプライアンス、すなわち、肺および胸郭が拡張する能力を増大させ、そして、呼気終末の肺胞崩壊を、おそらくは表面張力および粘度を低下させることによって妨げている（４２）。そのうえ、肺サーファクタントは肺において液体貯留を軽減させ、また、自然免疫応答に関与している（４３）。
【００１２】
これまで、様々な肺サーファクタントが、新生児呼吸窮迫症候群（ＩＲＤＳ）および成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）を引き起こす大きな要因であるサーファクタント欠乏に関連づけられる障害の処置（ただし、この場合、サーファクタントは吸入または吸引によって患者に投与される）において適用されている。呼吸窮迫症候群の処置において使用されるための様々な肺サーファクタントが、例えば、国際出願ＷＯ２０１１／０２９５２５に記載される。
【００１３】
本発明は、改変された天然の肺サーファクタント、すなわち、ボバクタント（ｂｏｖａｃｔａｎｔ）（Ａｌｖｅｏｆａｃｔ（コピーライト））が、ケラチノサイトの上皮移動を細胞系アッセイにおいて促進させることができ、また、関連する標準化された切除創傷治癒マウスモデルにおいて創傷閉鎖を増強することができ、そして、この場合、炎症（促進）性サイトカインの減少および低下した瘢痕形成が処置に伴うという驚くべき観察結果に基づいている。理論によってとらわれることを意図しないが、添付された実施例に記載される実験によれば、創傷部の再表面形成および収縮に対する肺サーファクタントの影響は、気液相間における表皮ケラチノサイトにより、創傷収縮が創傷表面の最小化によって誘発されるからであると考えられている。それにより、表皮ケラチノサイトは、筋線維芽細胞によるマトリックス収縮を真皮区画において誘導する。局所適用されたサーファクタント様物質は、その抗菌性サーファクタントタンパク質により表面張力を低下させ、創傷治癒に影響を及ぼし得る。実際に、本発明の知見は、熱傷の処置に特に重点を置く、皮膚創傷治癒のための肺サーファクタントの臨床使用に変換される。この新規なアプローチは、皮膚創傷治療における転換を、創傷治癒研究のためだけでなく、患者の生活のための根本的な影響により際立たせている。
【００１４】
したがって、本発明の範囲内で実施された実験において得られる知見により、肺サーファクタントおよびその生物学的に活性な誘導体の新規な使用であって、皮膚創傷、線維症、熱傷、組織増大、組織欠損、炎症、過敏、アレルギー、良性または悪性の奇形、瘢痕形成（これらに限定されない）を含めて広範囲の様々な皮膚障害の処置における使用、ならびに、皮膚移植、再建手術および皮膚手術との組合せでの補完的処置、または、任意の局所的な表皮内皮膚処置もしくは皮内皮膚処置における使用、同様にまた、非医学的処置における使用、例えば、皮膚の瘢痕、しわ、変色（ｄｙｓｃｏｌｏｒａｔｉｏｎ）、皮膚過敏、体積増大、脱毛症の皮膚科学的処置または美容的処置における使用、皮膚剥離、表皮切除、医学的穿刺の後での処置における使用、および、また、任意の局所的な表皮内皮膚処置、皮内皮膚処置または皮下皮膚処置における使用が提供される。
【００１５】
さらに、本発明はまた、ケラチノサイトの上皮移動をインビトロまたはインビボにおいて促進させるための、肺サーファクタントまたはその生物学的に活性な誘導体の使用にも関連する。
【００１６】
定義
「単位用量」は、１回の投与で患者に投与されるサーファクタントの量を示す。単位用量は、体重および／または皮膚タイプに関連して計算することができる。
【００１７】
用語「約」は、本明細書中で使用される場合、この用語を使用しないで定義されるような値の１％〜３０％の範囲における、特に１％〜２０％の範囲における、特に１％〜１０％の範囲における、特に１％〜５％の範囲における、特に１％〜２％の範囲における当該値からの起こり得るずれを規定する。
【００１８】
明示的に別途特定されないならば、用語「肺サーファクタント」は、本明細書中で使用される場合、例えば、肺または羊水から回収される天然サーファクタント（４６）；例えば、肺または羊水から抽出され、かつ、好ましくは、脂質および／またはサーファクタントタンパク質または他の表面活性物質が補充される改変された天然サーファクタント；人工的なもの；ならびに、再構成サーファクタントを示す。Ｗｉｌｓｏｎ、Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ．、２（２００１）、１４７９〜１４９３によれば、これらの種類の肺サーファクタントは下記のように具体的に挙げることができる：
（ｉ）抽出によることなく肺または羊水からそのまま回収されたサーファクタントであり、天然の内在性サーファクタントの脂質／タンパク質組成を有する「天然」サーファクタント。
（ｉｉ）哺乳動物の切り刻まれた肺、肺洗浄液または羊水の脂質抽出物である「改変された天然」サーファクタント。製造プロセスにおいて使用される脂質抽出プロセスのために、親水性タンパク質のＳＰ−ＡおよびＳＰ−Ｄが失われているか、または、それらは量が大幅に減少している。これらの調製物は様々な量のＳＰ−ＢおよびＳＰ−Ｃを有しており、抽出方法に依存して、非界面活性な脂質、タンパク質または他の成分を含有する場合がある。Ｓｕｒｖａｎｔａ（上記参照）のような、市場に存在する改変された天然サーファクタントのいくつかには、合成成分（例えば、トリパルミチン、ジパルミトイルホスファチジルコリンおよびパルミチン酸など）が加えられる；
（ｉｉｉ）天然サーファクタントの脂質組成物および挙動を模倣するように配合される合成化合物（主にリン脂質および他の脂質）の単に混合物である「人工」サーファクタント。人工サーファクタントは、界面活性なアポタンパク質を欠いている；
ｉｖ）動物から単離される界面活性なタンパク質／ペプチド、または、組換え技術（例えば、国際出願ＷＯ９５／３２９９２に記載される組換え技術など）により製造されるタンパク質／ペプチドが加えられている人工サーファクタントである、あるいは、合成されたサーファクタントタンパク質アナログ（例えば、国際出願ＷＯ８９／０６６５７、同ＷＯ９２／２２３１５および同ＷＯ００／４７６２３に記載されるサーファクタントタンパク質アナログなど）である「再構成」サーファクタント。
【００１９】
「薬学的に許容され得る」は、幼児に投与されたときにアレルギー反応または類似した有害反応を生じさせない媒体を示す。
【００２０】
肺サーファクタント調製物についての「サーファクタント活性」は、表面張力を低下させる能力として定義される。外因性サーファクタント調製物のインビトロ効力は、表面張力を低下させるその能力を、好適な装置（例えば、Ｗｉｌｈｅｌｍｙ  Ｂａｌａｎｃｅ、Ｐｕｌｓａｔｉｎｇ  Ｂｕｂｂｌｅ  Ｓｕｒｆａｃｔｏｍｅｔｅｒ、Ｃａｐｔｉｖｅ  Ｂｕｂｂｌｅ  Ｓｕｒｆａｃｔｏｍｅｔｅｒ、および、Ｃａｐｉｌｌａｒｙ  Ｓｕｒｆａｃｔｏｍｅｔｅｒなど）を使用して測定することによって一般に試験される。
【００２１】
これまで、外因性サーファクタント調製物のインビボ効力は、肺力学を公知の方法に従って早産動物モデルにおいて測定することによって試験されている。本発明によれば、肺サーファクタント調製物および肺サーファクタント調製物を含む組成物のインビボ効力、例えば、創傷閉鎖、抗炎症効果および／または遊走促進効果を増強する能力を、実施例に記載される細胞系アッセイおよび動物モデルを使用して試験することができる。
【００２２】
肺サーファクタントの誘導体、例えば、人工および再構成の肺サーファクタントは、実施例において例示される改変された肺サーファクタントのボバクタントの本質的特徴を示すならば、すなわち、ケラチノサイトの上皮移動を単一培養物において促進させることが、ひっかき傷モデルを使用して、用量依存的な様式で可能であり、その一方で、線維芽細胞遊走および収縮性が実質的に影響されず、かつ／または、切除創傷治癒が動物モデルにおいて可能であるならば、本発明によれば、生物学的に活性であると言われる。加えて、または代替において、本発明の目的のための肺サーファクタントの誘導体の適合性を評価するために、実施例２および実施例３において例示されるような発現プロファイリングを行うことができ、この場合、前記誘導体は好ましくは、ボバクタントに類似する発現パターンまたは実質的に同一の発現パターンを示す。すなわち、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ−アルファ）の発現（ＴＮＦ−アルファのシグナル伝達によって誘導される下流側のシグナル伝達分子およびタンパク質またはプロセスの発現を含む）、ＴＮＦ−アルファ変換酵素（ＴＡＣＥ）の発現および／または他の炎症促進性のサイトカインもしくはプロテアーゼもしくは媒介因子の発現を低下させること、また、ＴＮＦ−アルファ受容体を低下させること；ならびに／あるいは、抗線維化、例えば、筋線維芽細胞、または筋線維芽細胞への細胞の分化、または、線維症を二次的に誘導する線維化促進細胞もしくは他の細胞の活性化を低下させること、例えば、下流のシグナル伝達を含むトランスフォーミング増殖因子−ベータ（ＴＧＦ−ベータ）、ＴＧＦ−ベータ受容体、アンギオテンシノーゲン、アンギオテンシン、アンギオテンシンＩＩ受容体（ＡＴＩＩ−Ｒ）、また、ＡＴＩＩおよびアンギオテンシン受容体によって誘導される下流側のシグナル伝達分子および／またはシグナル伝達プロセスを低下させること、ならびに／あるいは、結合組織増殖因子（ＣＴＧＦ）を低下させること、また、すべての挙げられた分子によって誘導される下流側のシグナル伝達分子またはシグナル伝達プロセスを低下させることを示す。
【００２３】
肺サーファクタントの誘導体、例えば、改変された天然サーファクタントのポラクタントアルファ、カルファクタント、ボバクタントまたはベラクタントなどを調製するための様々な手段および方法が、当業者には知られている；例えば、国際出願ＷＯ０２／１７８７８、２７頁、表１（Ｄ．Ｇｏｍｍｅｒｓ、学位論文、１９９８年、ロッテルダム大学、「Ｆａｃｔｏｒｓ  ａｆｆｅｃｔｉｎｇ  ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ  ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｎｅｓｓ」からの引用）；Ｒｕｄｉｇｅｒ他（２００５）（４２）、例えば、表１、Ｌ３８０頁；Ｈｅｒｔｉｎｇ他（２００１）（４４）、例えば、節Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ（４５頁）および図１（４６頁）；およびＢｅｒｎｈａｒｄ他（２０００）（４５）、例えば、節「Ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌｌｙ  ａｖａｉｌａｂｌｅ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｓｕｒｆａｃｔａｎｔｓ」ならびにそれにおける引用文献１５および引用文献１６を参照のこと、それらの内容は本明細書により、参照によってその全体が組み込まれる。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】異なる濃度でのＡｌｖｅｏｆａｃｔの存在下または非存在下におけるケラチノサイト遊走。ヒト初代ケラチノサイトをコンフルエントになるまで培養し、遊走を標準化ひっかき傷によって誘導し、３日間にわたってモニターした。０．０１ｍｇ／ｍｌでのＡｌｖｅｏｆａｃｔ（三角を伴う点線）は、コントロール（菱形を伴う二点鎖線）と比較して、あるいは、Ａｌｖｅｏｆａｃｔが０．１ｍｇ／ｍｌである場合（四角を伴う破線）または１ｍｇ／ｍｌである場合（丸を伴う連続線）と比較して上皮移動を増大させた。平均±ＳＤ。
【図２】初代ヒト線維芽細胞をコラーゲンゲル内に播種し、ゲル収縮を７日間にわたってモニターした。（Ａ）Ａｌｖｅｏｆａｃｔの生理食塩水溶液または生理食塩水単独（コントロール）をインキュベーション培地に加えた。Ａｌｖｅｏｆａｃｔは線維芽細胞遊走（示されず）にも収縮性にも影響しなかった。（Ｂ）線維芽細胞が播種されたコラーゲンゲルを用いた実験モデルの異なる時点での肉眼による外観。
【図３】コントロール（ＮａＣｌ＝生理食塩水）、脂肪ガーゼ、０．０１ｍｇ／ｍｌまたは０．５ｍｇ／ｍｌのＡｌｖｅｏｆａｃｔのいずれかによる１４日間の処置の後における切除創の肉眼での創傷閉鎖（Ａ）および顕微鏡での創傷長さ（Ｂ）。平均±ＳＤ。
【図４】（Ａ）ＨＥ染色（ヘマトキシリンおよびエオシン）切片の光学顕微鏡検査法によって評価される表皮幅。平均±ＳＤ。光学顕微鏡写真：（Ｂ）−正常な皮膚、（Ｃ）−Ａｌｖ／ＮａＣｌ処置の皮膚、および、（Ｄ）−脂肪ガーゼ処置の皮膚。
【図５】１８時間にわたってインキュベーションされる均質化された創傷組織のゼラチンザイモグラフィー。活性型ＭＭＰ−２および潜在性ＭＭＰ−２のバンドにおける差異が群間において見出されなかった。ＭＭＰ−９の低下したレベルが、Ａｌｖの０．０１処置により認められる。組換えマウスＭＭＰ−２およびｒｍＭＭＰ−９の標準物を並行して処理した。矢印はＭＭＰ−２とＭＭＰ−９についてのバンドを示す。
【図６】ＮａＣｌ（コントロール）あるいは０．０１ｍｇ／ｍｌまたは０．５ｍｇ／ｍｌのＡｌｖｅｏｆａｃｔによる８日間の処置の後におけるＡＳＭＡ（アルファ−平滑筋アクチン）についての切除創のウエスタン免疫ブロッティング。Ａｌｖの０．０１による低下したレベルのＡＳＭＡには留意されたい。ＭＷ：分子量マーカー。組換えマウスＭＭＰ−３および組換えヒトｒｈＭＭＰ−１０の標準物を並行して処理した。
【図７】ＮａＣｌ（コントロール）あるいは０．０１ｍｇ／ｍｌまたは０．５ｍｇ／ｍｌのＡｌｖｅｏｆａｃｔによる８日間の処置の後における切除創のＥ−カドヘリンのウエスタン免疫ブロッティング。Ａｌｖｅｏｆａｃｔの０．０１による低下したレベルの断片化Ｅ−カドヘリンおよび全長型Ｅ−カドヘリンに注目されたい。ＭＷ：分子量マーカー。図における右側の矢印は、２４ｋＤａおよびおよそ６０ｋＤａでのＥ−カドヘリン（４１）を示す。
【発明の詳細な説明】
【００２５】
本発明は概して、皮膚への適用（好ましくは皮膚表面への適用）のために適合化および／または設計され、かつ、急性の皮膚創傷および長期の皮膚創傷の処置において有用であり、また、瘢痕化および線維症の防止および処置のために有用である、肺サーファクタントに基づく医薬用および美容用の組成物を含む皮膚ケア製造物および皮膚処置製造物に関連する。
【００２６】
第１の態様において、本発明は、皮膚の障害の防止または処置における治療的使用のための、肺サーファクタントまたはその生物学的に活性な誘導体を含む組成物に関する。
【００２７】
皮膚の障害には、皮膚の正常な結合緊密性（ｃｏｈｅｒｅｎｃｅ）および／または機能に影響をおよぼす創傷、過敏または外科処置が含まれるが、これらに限定されない。皮膚創傷は典型的には、皮膚に対する直接的傷害（例えば、「病変」、「切断」、「表皮剥離」など）によって引き起こされる皮膚組織の連続性における断絶として理解される。いくつかのタイプにより、皮膚創傷が一般には特徴づけられる；例えば、穿刺創、切開創（様々な外科的手順によって生じるものを含む）、切除創、裂傷、擦過傷、萎縮性皮膚創傷または壊死性創傷および熱傷（大きな熱傷領域を含む）。好ましい実施形態において、本発明による使用のための組成物であって、障害が、皮膚創傷、線維症、熱傷、組織増大、組織欠損、炎症、過敏、アレルギー、随伴炎症を伴う遺伝性または後天性の皮膚疾患、良性または悪性の奇形、瘢痕形成、ならびに、皮膚移植、再建手術および皮膚手術との組合せでの補完的処置、または、任意の局所的な表皮内皮膚処置、皮内皮膚処置もしくは皮下皮膚処置からなる群から選択されることになる、組成物が提供される。
【００２８】
さらなる態様において、本発明は、皮膚の非医学的処置のための、例えば、病理学的ではなく、皮膚科学的な望ましくない皮膚異常に伴う皮膚状態の非医学的処置のための、肺サーファクタントまたはその生物学的に活性な誘導体を含む組成物に関連する。したがって、本発明はまた、皮膚の非医学的処置、例えば、皮膚の美容的処置のための、例えば、皮膚の瘢痕、しわ、変色、皮膚過敏、体積増大、脱毛症の処置で、皮膚剥離、表皮切除および医学的穿刺の後での処置のための、肺サーファクタントまたはその生物学的に活性な誘導体を含む組成物の使用にも関連する。
【００２９】
好ましい実施形態において、改変された天然の肺サーファクタントが本発明に従って使用され、例えば、カルファクタント（Ｉｎｆａｓｕｒｆ（登録商標）、ＯＮＹ，Ｉｎｃ．、Ａｍｈｅｒｓｔ、ＮＹ、米国）、ボバクタント（Ａｌｖｅｏｆａｃｔ（登録商標）、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ  Ｐｈａｒｍａ、Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ、ドイツ）、ポラクタントアルファ（Ｃｕｒｏｓｕｒｆ（登録商標）、Ｃｈｉｅｓｉ  Ｆａｒｍａｃｅｕｔｉｃｉ  ＳｐＡ、Ｐａｒｍａ、イタリア）およびベラクタント（Ｓｕｒｖａｎｔａ（登録商標）、Ａｂｂｖｉｅ  Ｉｎｃ．、Ｎｏｒｔｈ  Ｃｈｉｃａｇｏ、ＩＬ、米国）などが使用される。ボバクタントはウシ肺洗浄液から脂質抽出によって得られ、ベラクタントは、切り刻まれたウシ肺の脂質抽出によって調製され、ポラクタントアルファは天然のブタ肺サーファクタントの抽出物であり、カルファクタントは子ウシの肺に由来する。
【００３０】
合成／人工サーファクタントの例として、ルシナクタント（Ｓｕｒｆａｘｉｎ（登録商標））、パルミチン酸コルホスセリル（Ｅｘｏｓｕｒｆ（登録商標））およびルスプルチド（Ｌｕｓｕｐｕｌｔｉｄｅ）（Ｖｅｎｔｉｃｕｔｅ（登録商標））が挙げられる。すべての合成／人工サーファクタントは、主に界面活性脂質成分を含み、タンパク質含有量が大幅に低下しているか、あるいはタンパク質またはペプチドを全く含んでいない。サーファクタントタンパク質の機能のいくつかを回復させるために、ルシナクタントは、ＳＰ−ＢのＣ末端における疎水性残基および親水性残基の反復パターンを模倣するペプチドフラグメントを含み、ルスプルチドは組換えＳＰ−Ｃを含む。パルミチン酸コルホスセリルはタンパク質非含有の界面活性な調製物であり、ＤＰＰＣ、ヘキサデカノールおよびチロキサポールを１３．５：１．５：１の関係で含有し、質量比で８４％のＤＰＰＣが唯一のリン脂質として存在し、ヘキサデカノールおよびチロキサポールにより、サーファクタントタンパク質の機能が、ある程度ではあるが、模倣されている（４５）。
【００３１】
述べられたように、改変された天然の肺サーファクタントにおいて、サーファクタントタンパク質の量が約１％にまで大きく低下しており、ただし、ＳＰ−ＢおよびＳＰ−Ｃは依然としてリン脂質と会合しており、しかし、ＳＰ−ＡおよびＳＰ−Ｄの量は大きく低下しているか、または検出さえできない（４５）。異なるサーファクタントの様々な組成物が、例えば、国際出願ＷＯ０２／１７８７８、２７頁、表１（Ｄ．Ｇｏｍｍｅｒｓ、学位論文、１９９８年、ロッテルダム大学、「Ｆａｃｔｏｒｓ  ａｆｆｅｃｔｉｎｇ  ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ  ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｎｅｓｓ」からの引用）；Ｒｕｄｉｇｅｒ他（２００５）（４２）、例えば、表１、Ｌ３８０頁；Ｈｅｒｔｉｎｇ他（２００１）（４４）、例えば、節Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ（４５頁）および図１（４６頁）；およびＢｅｒｎｈａｒｄ他（２０００）（４５）、例えば、節「Ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌｌｙ  ａｖａｉｌａｂｌｅ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｓｕｒｆａｃｔａｎｔｓ」ならびにそれにおける引用文献１５および引用文献１６に記載される（それらの開示内容は、参照によってその全体が援用される）。
【００３２】
好ましくは、本発明の組成物は、天然サーファクタントと同様な組成を有する（すなわち、脂質成分およびタンパク質成分を含む）、改変された肺サーファクタントまたはその生物学的に活性な誘導体を含む。具体的には、上記で述べられたように、肺サーファクタントのリン脂質成分に基づく、先行技術（例えば、米国特許出願ＵＳ２０１０／００４８５１４など）において使用される改変された肺サーファクタントとは対照的に、本発明に従って使用される肺サーファクタントは好ましくは、また好都合には、親水性タンパク質ＳＰ−Ａを少なくとも含み、好ましくはさらにＳＰ−ＢおよびＳＰ−Ｃを含み、最も好ましくはさらに、または代替として、ＳＰ−Ｄを含む。これに関連して、上記で記載されるように、天然の親水性タンパク質のいずれもが、天然タンパク質の（一部分における）疎水性残基および親水性残基のパターンを模倣し、かつ、肺サーファクタントの調製全体に関連して、同じ生物学的活性（上記参照）を示すタンパク質フラグメント、同等のタンパク質またはペプチドによって置き換えられる場合がある。本発明の好ましい実施形態において、肺サーファクタントは、ポラクタントアルファ、カルファクタント、ボバクタントおよびベラクタントからなる群から選択される。最も好ましくは、改変された肺サーファクタントはボバクタントである。
【００３３】
所望の治療効果または美容効果を有するために、本発明の組成物は好ましくは、処置すべき皮膚領域と接触させられる。したがって、本発明の１つの実施形態において、組成物は、皮膚内への、または好ましくは皮膚表面への局所投与、病巣内投与、上皮内投与、表皮内投与、皮内投与または皮下投与のために設計される。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、皮膚（例えば、傷ついた皮膚）の表面への局所投与のために設計される。
【００３４】
好ましくは、本発明による使用のための組成物における肺サーファクタントまたはその生物学的に活性な誘導体は、薬学的に許容され得る担体とともに配合される。薬学的に許容され得る担体および投与経路を、当業者に知られている対応する文献から採用することができる。本発明の医薬組成物は、この技術分野においてよく知られている様々な方法に従って配合することができる。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ（２０００）（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、ＩＳＢＮ０−６８３−３０６４７２）；Ｖａｃｃｉｎｅ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ、第２版、Ｒｏｂｉｎｓｏｎ他、Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ、米国、２００３年；Ｂａｎｇａ、Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ，Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ，ａｎｄ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、第２版、ＴａｙｌｏｒおよびＦｒａｎｃｉｓ（２００６）、ＩＳＢＮ０−８４９３−１６３０−８を参照のこと。好適な医薬用担体の様々な例がこの技術分野ではよく知られており、これらには、リン酸塩緩衝化生理的食塩水溶液、水、エマルション（例えば、油／水エマルションなど）、様々なタイプの湿潤化剤、滅菌溶液などが含まれる。好ましくは、医薬用担体は、好適な生理学的に耐えられる溶媒であり、好ましくは水性溶媒、両親媒性溶媒または親油性溶媒である。好ましい実施形態において、溶媒は、好ましくは無菌である水溶液（例えば、塩化ナトリウム溶液、リンゲル液またはリンゲル酢酸塩溶液など）であり、これらはまた、ｐＨ緩衝化剤および他の薬学的に許容され得る賦形剤を含む場合があり、例えば、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０またはソルビタンモノラウラートを湿潤化剤として、また、塩化ナトリウムを好ましくは０．９％ｗ／ｖの濃度で等張性薬剤として含む場合がある。そのような担体を含む組成物は、よく知られている従来法によって配合することができる。これらの医薬組成物は、好適な用量で対象に投与することができる。好適な組成物の投与が様々な異なる方法によって達成される場合がある。上記で示されたように、好ましくは、投与は、皮膚表面における、または皮膚内への局所的方法、病巣内方法、上皮内方法、表皮内方法、皮内方法または皮下方法によって行われる。エアロゾル配合物（例えば、創傷スプレー配合物など）には、保存剤および等張剤を伴う活性な薬剤の精製された水溶液または他の溶液が含まれる場合がある。直腸投与または膣投与のための配合物が、好適な担体を伴う坐剤として提供される場合がある；Ｏ´Ｈａｇａｎ他、Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ、Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、２（９）（２００３）、７２７〜７３５もまた参照のこと。様々なタイプの投与のために好適である配合物に関するさらなる指針を、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ´ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｍａｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、ＰＡ；第１７版（１９８５））および対応する更新版において見出すことができる。薬物送達の���めの様々な方法の簡単な概説については、Ｌａｎｇｅｒ、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４９（１９９０）、１５２７〜１５３３を参照のこと。
【００３５】
配合物は、単位用量容器または複数用量容器において、例えば、密封されたアンプルおよびバイアルにおいて提供される場合があり、あるいは、無菌の液体担体を使用直前に添加することのみを必要とする凍結状態または凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅ−ｄｒｉｅｄ）（凍結乾燥（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅｄ））状態で貯蔵される場合がある。好ましくは、配合物は、単回使用バイアルにおける緩衝化された生理学的な食塩水（０．９％（ｗ／ｖ）塩化ナトリウム）水溶液での無菌懸濁物として供給される。好ましい実施形態において、肺サーファクタントまたはその生物学的に活性な誘導体は、約０．００５ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌの濃度で、好ましくは約０．００５ｍｇ／ｍｌ〜約５０ｍｇ／ｍｌの濃度で、より好ましくは約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約５ｍｇ／ｍｌの濃度で、一層より好ましくは約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約０．５ｍｇ／ｍｌの濃度で配合物に存在する。実施例において示されるように、例示的な改変された肺サーファクタントの０．０１ｍｇ／ｍｌの濃度が皮膚創傷閉鎖の最も良い増強を示したので、特に好ましい実施形態において、肺サーファクタントまたはその生物学的に活性な誘導体は約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約０．１ｍｇ／ｍｌの濃度で配合物に存在する。
【００３６】
肺サーファクタントまたは生物学的に活性な誘導体が懸濁されている配合物の体積は、所望された濃度に依存するであろう。好都合には、配合物の体積は５．０ｍｌ以下でなければならず、好ましくは４．０ｍｌ〜０．５ｍｌでなければならず、より好ましくは２．０ｍｌ〜１．０ｍｌでなければならない。投薬計画が主治医および様々な臨床上の要因によって決定されるであろう。医療技術分野ではよく知られているように、どのような患者であれ、一人の患者のための投薬量は、患者または動物のサイズ、処置すべき体表面積、投与される具体的な化合物、性別、投与時間および投与経路、全身の健康状態、ならびに、他の薬物が同時に投与されることを含めて多くの要因に依存する。肺サーファクタントまたはその生物学的に活性な誘導体により処置される領域はほぼ平面であるので、用量は下記では表面との関連で記載される。
【００３７】
本発明による使用のための組成物についての典型的な単位用量において、肺サーファクタントまたはその生物学的に活性な誘導体は、約０．０１μｇ／ｍｍ２から約１００ｍｇ／ｍｍ２までの、または約１０ｍｇ／ｍｍ２までの投薬量で、好ましくは約０．０５μｇ／ｍｍ２〜約１ｍｇ／ｍｍ２の投薬量で、より好ましくは約０．０５μｇ／ｍｍ２〜約０．５ｍｇ／ｍｍ２の投薬量で、さらにより好ましくは約０．１μｇ／ｍｍ２〜約２５μｇ／ｍｍ２の投薬量または約０．１μｇ／ｍｍ２〜約１０μｇ／ｍｍ２の投薬量で、最も好ましくは約０．１μｇ／ｍｍ２〜約２μｇ／ｍｍ２の投薬量または約０．１μｇ／ｍｍ２〜約０．５μｇ／ｍｍ２の投薬量で投与され、例えば、実施例における０．０１ｍｇ／ｍｌの好都合な単位用量について実施例において示されるように約０．２μｇ／ｍｍ２の投薬量で投与される；しかしながら、この範囲よりも少ない用量、または、この範囲を超える用量が、とりわけ上述の要因を考慮して想定される。
【００３８】
処置または使用の経過を定期的な評価によってモニターすることができる。皮膚表面における、または皮膚内への局所投与、病巣内投与、上皮内投与、表皮内投与、皮内投与または皮下投与のための調製物には、例えば、両親媒性（ａｍｐｈｉｐｈｉｌｉｃ（これはａｍｂｉｐｈｉｌｉｃとしても知られている））および／または親油性の溶媒および配合物を含む水性または非水性の溶液、懸濁物およびエマルションが含まれる。非水性溶媒の例として、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油（例えば、オリーブ油など）および注射可能な有機エステル（例えば、オレイン酸エチルなど）が挙げられる。水性担体には、生理食塩水および緩衝化媒体を含めて、水、アルコール性／水性の溶液、エマルションまたは懸濁物が含まれる。非経口用ビヒクルには、塩化ナトリウム溶液、リンゲルブドウ糖、デキストロースおよび塩化ナトリウム、乳酸加リンゲルまたは固定油が含まれる。保存剤および他の添加剤もまた存在する場合があり、例えば、抗菌剤、抗酸化剤、キレート化剤および不活性ガスなどが存在する場合がある。さらに、本発明の医薬組成物は、医薬組成物の意図された使用に依存して、さらなる薬剤を含む場合がある。
【００３９】
標準化された切除創傷治癒マウスモデルで実施例２において例示されるように、１日おきに１回適用されると、本発明に従ってボバクタントにより創傷閉鎖を達成することができた。したがって、本発明の１つの実施形態において、肺サーファクタントまたはその生物学的に活性な誘導体が約１日おきに１回投与される。特に好ましい実施形態において、本発明による使用のための組成物は、肺サーファクタントまたはその生物学的に活性な誘導体が約０．１μｇ／ｍｍ２〜約１ｍｇ／ｍｍ２の用量で約１日おきに１回、皮膚表面に投与されるように適合化され、または設計される。
【００４０】
本発明に従った肺サーファクタントまたはその生物学的に活性な誘導体の投与に加えて、他の治療剤の共投与での投与が望ましい場合があり、例えば、抗生物質、抗真菌剤または鎮痛剤が、典型的には皮膚障害（特に創傷）に伴う感染症の防止および痛みの改善のためにそれぞれ、共投与により投与される場合がある。したがって、１つの実施形態において、本発明による使用のための組成物はさらに、さらなる活性な薬剤を含む。好ましくは、さらなる薬剤は、皮膚活性な薬剤および／または治療剤（例えば、抗炎症性薬物、抗線維化剤、遊走促進剤、血管形成促進剤および創傷治癒促進剤、瘢痕化および皮膚過敏を軽減する薬剤、抗アレルギー性薬物、抗生物性薬物、抗真菌性薬物または鎮痛性薬物など）から選択される。
【００４１】
代替において、肺サーファクタントまたはその生物学的に活性な誘導体と、１つまたは複数のさらなる薬剤とが別々に投与されるとき、それぞれの個々の活性な成分が別々に配合されることがある。この場合、個々の活性な成分は、無条件に同時に投与される必要はない。別々に投与される場合には、それぞれの個々の活性な成分の配合物が、好適な容器に同時に包装されて、キットを形成することがある。
【００４２】
実施例において例示されるように、改変された天然の肺サーファクタントは、皮膚表面に適用されたとき、創傷閉鎖を増強することにおいて特に効果的である。したがって、本発明は、肺サーファクタントまたはその誘導体の上記で記載された組成物および配合物のいずれか１つを含む、皮膚表面における局所投与において使用されるための医薬組成物を提供し、また、そのような医薬組成物に関連する。したがって、皮膚の障害を処置することに関して、肺サーファクタントまたはその生物学的に活性な誘導体は好ましくは、本発明による使用のための組成物における唯一の治療有効成分または美容有効成分である。
【００４３】
本発明による使用のための肺サーファクタントまたは生物学的に活性な誘導体の組成物または配合物は、キット、医薬用包装物または化粧用包装物で製造される場合があり、例えば、当該組成物または配合物を含む第１の容器と、例えば、当該組成物および配合物と併せて適用されるための第２のものを含む第２の容器とをそれぞれ含み、かつ、生理学的に許容され得る水性希釈剤と、皮膚表面における局所投与のための説明書とを含むキット、医薬用包装物または化粧用包装物として製造される場合がある。
【００４４】
加えて、本発明は、本明細書中で定義されるような肺サーファクタントまたはその生物学的に活性な誘導体を好ましくは乾燥形態で含む第１の容器と、生理学的に許容され得る水性希釈剤を含む第２の容器と、そして、皮膚表面における局所投与のための説明書とを含むキットまたは医薬用包装物もしくは化粧用包装物に関連する。キットにはそれぞれ、本発明の包装物には、例えば、キットまたは包装物を含む容器の内部に、医薬製造物の製造、使用または販売を規制する政府機関によって定められる形式での通知が伴い得る（ただし、そのような通知は、ヒトへの投与のための、製造、使用または販売の当局による承認を反映する）。キットまたは包装物が化粧用途のために設計される場合、キットまたは包装物は、適切な使用のための説明書を含む。さらに、キットまたは包装物は、肺サーファクタントまたはその生物学的に活性な誘導体を生理学的に許容され得る水性希釈剤と混合するための手段（例えば、シリンジ、ピペット、さじなど）、および／または、混合物がこれらに取られ、含浸され、もしくは取り込まれた後で混合物を皮膚に施すための手段（例えば、シリンジ、ピペット、絆創膏、ガーゼ、ガーメント、ポリエステルネットまたはポリプロピレンネッなど）を含むことができる。本発明のキットの好ましい実施形態において、改変された肺サーファクタントが、好ましくはボバクタントが、乾燥形態で、かつ、２５ｍｇ〜１００ｍｇの間の濃度で、好ましくは５０ｍｇの濃度で容器（例えば、バイアル）に存在する。別の好ましい実施形態において、改変された肺サーファクタントの、好ましくはボバクタントの組成物または配合物は、直ちに使用できるキットに設計され、例えば、皮膚パッチとして設計される。
【００４５】
実施例において述べられ、また、例示されるように、改変された天然の肺サーファクタントは、皮膚表面に適用されたとき、創傷閉鎖を、過度な瘢痕化を伴うことなく増強すること、および、抗炎症効果を誘導することにおいて特に効果的である。したがって、本発明は、本明細書中で定義されるような肺サーファクタントまたはその生物学的に活性な誘導体の組成物を含む皮膚創傷ケア処置製造物、皮膚科学的製造物または化粧用製造物であって、皮膚に対する抗炎症効果、遊走促進効果、ならびに／あるいは、特に抗線維化効果および／または増強された創傷閉鎖効果をもたらすために効果的である製造物を提供し、また、そのような製造物に関連する。言い換えれば、本発明は、本明細書中に記載される皮膚障害を好ましくは皮膚表面への局所投与によって処置することにおいて抗炎症性医薬品として使用されるための肺サーファクタントを提供し、また、そのような肺サーファクタントに関連する。典型的には、医療用および美容用の皮膚ケア製造物が、好ましくは不活性な担体（例えば、パッチ、絆創膏、ガーゼ、ガーメント、ポリエステルネットまたはポリプロピレンネットなど）の形態において製造され、または、好ましくは不活性な担体（例えば、パッチ、絆創膏、ガーゼ、ガーメント、ポリエステルネットまたはポリプロピレンネットなど）に適用される；例えば、ハチミツに基づいた創傷ケア処置製造物を記載する国際出願ＷＯ２００７／１３７８８１の参照のこと。したがって、これらが創傷処置の分野における医療用製造物に関して知られており、または、皮膚ケア製造物については化粧品の分野において知られているように、本発明の製造物は様々な形態のものが可能である。好ましい実施形態において、本発明による製造物は下記の通りである：
（ａ）局所適用可能な製造物、例えば、ゲル、軟膏、ローションまたはクリームなど；
（ｂ）絆創膏、ガーゼ、ガーメント、シリコン、ポリエステルネットまたはポリプロピレンネットからなる担体であって、組成物、ゲル、軟膏、ローションまたはクリームがその上に塗布されて、これにより、組成物、ゲル、軟膏、ローションまたはクリームが含浸され、または取り込まれる皮膚パッチ、脂肪ガーゼ、加圧ガーメント、シリコンシート、ヒドロセルラー（ｈｙｄｒｏｃｅｌｌｕｌａｒ）（ポリウレタン）フォームプレートをもたらす担体、あるいは、組成物、ゲル、軟膏、ローションまたはクリームと混合されるアルギン酸塩；
（ｃ）スプレー剤；
（ｄ）他の任意の皮膚創傷処置製造物または皮膚創傷治癒療法剤；あるいは
（ｅ）ケラチノサイトアッセイ、皮膚アッセイおよび／または創傷治癒アッセイにおいて使用されるための製造物。
【００４６】
最後の製造物には、例えば、細胞（例えば、ケラチノサイトなど）、細胞培養培地、細胞培養プレート、標準化された濃度の肺サーファクタントおよび／またはその誘導体、実施例１および実施例２において記載されるようなアッセイ（これはさらに、例えば、皮膚活性な薬剤のスクリーニングまたは毒性学試験のために設計されることがある）において特に有用である溶媒を必要な場合にはさらに含むキットおよび組成物が含まれるが、それらに限定されない。
【００４７】
これらの実施形態および他の実施形態が本発明の説明および実施例によって開示され、また、包含される。本発明に従って用いられるための材料、方法、使用および化合物のいずれか１つに関するさらなる文献が、例えば、電子デバイスを使用して、公立図書館および公開データベースから検索され得る。例えば、公開データベース「Ｍｅｄｌｉｎｅ」が利用される場合がある（このデータベースは国立バイオテクノロジー情報センターおよび／または国立衛生研究所の国立医学図書館によって主催される）。さらなるデータベースおよびウェブアドレスが、例えば、欧州バイオインフォマティクス研究所（ＥＢＩ）（これは欧州分子生物学研究所（ＥＭＢＬ）の一部である）などが当業者には知られており、これらもまた、インターネット検索エンジンを使用して得ることができる。バイオテクノロジーにおける特許情報、ならびに、遡及的検索およびカレントアウェアネスのために有用である関連した特許情報源の調査の概要が、Ｂｅｒｋｓ、ＴＩＢＴＥＣＨ、１２（１９９４）、３５２〜３６４に示される。
【００４８】
上記開示は本発明を一般的に説明している。いくつかの文書が本明細書の本文中に引用されている。完全な書誌的引用が特許請求の範囲の直前の明細書の最後に見出され得る。すべての引用文献（背景の節における開示、および、製造者の仕様書、説明書などを含めて、本出願を通して引用されるような参考文献、発行された特許、公開された特許出願を含む）の内容が本明細書により、参照によって明示的に組み込まれる；しかしながら、引用されるどの文書も実際に、本発明に関して先行技術であるということを認めるものではない。
【００４９】
より完全な理解を、例示目的のみのために本明細書中に提供され、かつ、発明の範囲を限定することが意図されない下記の具体的な実施例を参照することによって得ることができる。
【実施例】
【００５０】
材料および方法
肺サーファクタント
創傷治癒および収縮を、細胞レベルで開始し、インビボ実験で終了するボトムアップ様式で行った。小児における呼吸窮迫症候群治療のために使用される標準的なサーファクタントをインビトロおよびインビボでの局所適用によって試験した。
【００５１】
様々なサーファクタントが、肺胞の表面張力を早産児において低下させるための標準治療として使用される（３３）。サーファクタントタンパク質を伴うリン脂質薄膜により、肺胞マクロファージの形状および活性が、表面張力を制御することによって調節される（３４）。この処置の重要な特徴がサーファクタント薄膜の親油性である。これまで、湿性の創傷治癒が表皮創傷のための標準処置である。サーファクタントを皮膚創傷に適用することは、皮膚創傷治癒および収縮に対処するための革新的で、並外れた、かつ、型破りな、それにもかかわらず、簡便な方法である。皮膚のために特別に作製され、皮膚創傷に適用されるサーファクタントは、表面張力を低下させること、および、ケラチノサイト収縮を促進させることが可能であった。これまでは、皮膚のサーファクタント療法についての公表データは何ら存在しない。
【００５２】
乳児呼吸窮迫症候群（ＩＲＤＳ）の処置のために、ウシの肺サーファクタントがＡｌｖｅｏｆａｃｔ（登録商標）の商品名でドイツでは市販されている。本発明に関連して実施された細胞培養実験において、用量応答実験が、０．０１ｍｇ／ｍｌ、０．１ｍｇ／ｍｌおよび１ｍｇ／ｍｌのＡｌｖｅｏｆａｃｔ（登録商標）が培養培地に添加されて実施された。インビボ実験のために、Ａｌｖｅｏｆａｃｔ（登録商標）を製造者の説明書に従って０．９％生理食塩水に溶解し、０．０１ｍｇ／ｍｌおよび０．５ｍｇ／ｍｌの濃度で皮膚創傷に局所的に加えた。創傷包帯を、Ａｌｖｅｏｆａｃｔ（登録商標）またはコントロール群としての生理食塩水単独の新たな適用とともに１日おきに取り替えた。
【００５３】
実験設定
創傷治癒に対するＡｌｖｅｏｆａｃｔの影響を、細胞培養（３５）および器官培養（３６）を含む標準的な実験モデル、ならびに、インビボ切除創マウスモデル（３７）を使用して分析した。
【００５４】
行われた分析：
−創縁をトレースし、創傷領域を分析した（３７）。
−培養培地および組織をタンパク質の分泌および局在化について分析した。
−組織学、免疫組織化学および免疫蛍光による分析（３８）
−基質ザイモグラフィー（３９）、ウエスタン免疫ブロッティング（３９）、ＥＬＩＳＡ、ＲＴ−ＰＣＲ、遺伝子アレイ分析（４０）を含む生化学分析および生体分子分析。
【００５５】
テーラーメードのアレイによる遺伝子発現分析
全ＲＮＡ（ｍｇ）を、Ａｕｒｕｍ全脂肪・線維組織キット（Ｂｉｏｒａｄ、Ｍｕｎｉｃｈ、ドイツ）を使用して単離した。逆転写の間に、ＲＮＡをフルオレセイン（Ｆｌ）標識ｃＤＮＡおよびビオチン（Ｂ）標識ｃＤＮＡに変換した。特異的に結合したＦｌ標識ｃＤＮＡおよびＢ標識ｃＤＮＡを、一連のコンジュゲートレポータを用いて、最終的にはＴｙｒａｍｉｄｅ−Ｃｙ３およびＴｙｒａｍｉｄｅ−Ｃｙ５を用いて連続して検出した。ハイブリダイゼーション後のチップを、異なる設定でＡｘｏｎ  ４００Ｂスキャナーにより６回スキャンした。一次画像解析を、ソフトウェアツールのＧｅｎｅ  Ｐｉｘ  Ｐｒｏ６．０を使用して行った。
【００５６】
統計学
遺伝子発現分析のそれぞれの遺伝子についての平均値は９つの反復実験物に基づく。遺伝子反復実験の中での外れ値をＮａｌｉｍｏｖによる外れ値検定に従って除外した。スチューデントｔ検定の適合化、例えば、分析されたサンプルの不等分散についてのウェルチｔ検定を平均の比較のために使用した。ｐ＜０．０５の値を、有意であるとみなし、平均±ＳＤ（標準偏差）またはＳＥＭ（平均の標準誤差）として表した。
【００５７】
実施例１：細胞培養での用量応答性
最初に、用量応答実験を、ひっかき傷モデルを使用してケラチノサイト単一培養物に対して行った。この場合、細胞（４×〜８×１０４細胞／ウェル）を単独またはボバクタント（Ａｌｖｅｏｆａｃｔ（登録商標））含有のどちらかでの培養培地に懸濁した。０．０１ｍｇ／ｍｌでのＡｌｖｅｏｆａｃｔ（登録商標）は上皮移動を促進させ、これに対して、０．１ｍｇ／ｍｌの濃度はコントロール処置と同じ影響を有し、１ｍｇ／ｍｌはケラチノサイト遊走を遅らせた（図１）。線維芽細胞遊走および収縮性がＡｌｖｅｏｆａｃｔ（登録商標）によって低濃度では影響されなかった（図２Ａ、Ｂ）。
【００５８】
実施例２：インビボでの切除創傷治癒
標準化された切除創傷治癒マウスモデルを使用して、マウスにおける皮膚の上皮移動および創傷収縮をインビボで調べた。８ｍｍのパンチ生検をマウスの背部に対して行い、創傷を、異なる包帯を用いて、すなわち、１ｍｌの０．９％生理食塩水（コントロール）、０．２μｇ／ｍｍ２および１０μｇ／ｍｍ２の濃度と等価である０．０１ｍｇ／ｍｌまたは０．５ｍｇ／ｍｌのＡｌｖｅｏｆａｃｔ（登録商標）を用いて閉じた。ヒト創傷処置のための臨床での究極の基準として、脂肪ガーゼを第４の群において創傷に適用した。
【００５９】
最も速い創傷閉鎖が脂肪ガーゼにより認められ、０．０１ｍｇ／ｍｌでのＡｌｖｅｏｆａｃｔ（登録商標）が続いた。生理食塩水コントロールは０．５ｍｇ／ｍｌのＡｌｖｅｏｆａｃｔ（登録商標）の創傷閉鎖速度に匹敵した。このことが、細胞培養実験において認められる結果の根拠となっており、Ａｌｖｅｏｆａｃｔ（登録商標）の０．０１ｍｇ／ｍｌが皮膚創傷閉鎖の増強のための最適な濃度である（図３）。
【００６０】
組織学的分析により、非常に興味深い結果が得られた。コントロール処置またはＡｌｖｅｏｆａｃｔ（登録商標）処置と比較して、脂肪ガーゼ処置により、皮膚の幅が、ほぼ倍増し、細胞量が多く、かつ、コラーゲンに富む真皮層を有する肥厚性瘢痕の組織学的表現型を有していた。Ａｌｖｅｏｆａｃｔ（登録商標）処置により、過度な瘢痕化に対する徴候を何ら伴うことなく、薄い表皮層、そして、ふわふわした真皮区画を認められた（図４）。
【００６１】
実施例３：遺伝子発現アレイ分析
創傷部を−８０℃で急速凍結し、ＲＮＡを標準的なプロトコルに従って抽出した。テーラーメードの遺伝子アレイを作製して、関与する１５９個の遺伝子を皮膚創傷治癒および皮膚瘢痕化について分析した。ファミリーまたは機能で分類した、分析対象の遺伝子のサブグループが別紙Ｉに示される（別紙Ｉ．遺伝子アレイ分析によって分析された、創傷治癒期間中に発現される遺伝子）。異なる濃度でのＡｌｖｅｏｆａｃｔ（登録商標）により処置される創傷部の遺伝子発現を、ビヒクル（ＮａＣＬ）単独により処置される創傷部と術後８日目または１４日目に比較した。
表１：遺伝子アレイ分析：異なる群および時点についての炎症、線維症または遊走における発現遺伝子。統計学的に有意な値（ｐ＜０．０５）が黒背景の白抜きで表される；０．０５１＜ｐ＜０．０７５の間のｐ値が黒の斜体字で表され、灰色背景である；０．０７６＜ｐ＜０．１の間の値は下線が引かれ、斜体字で表され、明るい灰色の背景であり、セルの右側に整列している。
【表１−１】
2018514545.tif 000002
【表１−２】
2018514545.tif 000003
【００６２】
炎症促進性ＴＮＦ−アルファについての有意に低下した値が、Ａｌｖｅｏｆａｃｔ（登録商標）の０．０１ｍｇ／ｍｌおよび０．５ｍｇ／ｍｌにより８日目および１４日目に見出された。０．５ｍｇ／ｍｌでのＡｌｖｅｏｆａｃｔ（登録商標）はＴＡＣＥ発現を全観察期間の期間中において有意に低下させた。そのうえ、Ａｌｖｅｏｆａｃｔ（登録商標）の０．０１ｍｇ／ｍｌ処置はＩＬ−１ベータの発現を１４日目に有意に低下させた（表１）。
【００６３】
線維化促進性のＴＧＦ−ベータ２、ＴＧＦｂ−ＲＩおよびＭＭＰ−３のダウンレギュレーションが、８日目に、また、部分的には１４日目に見出された。有意に低下した値が、コントロールとの比較で、筋線維芽細胞マーカーのアルファ−平滑筋アクチン（ＡＳＭＡ）と、アンギオテンシンＩＩ受容体−２（ＡＴＩＩ−Ｒ２）とについて両方の群において見出された。注目すべきことに、線維化促進性の結合組織増殖因子（ＣＴＧＦ）が、両方のＡｌｖｅｏｆａｃｔ（登録商標）濃度により１４日目において低下した（表１）。
【００６４】
細胞培養において、また、創傷治癒期間中に顕微鏡により観察される高まった細胞遊走が、全観察期間の期間中での本発明者らの遺伝子アレイ分析における遊走促進遺伝子の上昇によって反映された（表１）。遊走促進性ＭＭＰ−１３の発現が、Ａｌｖｅｏｆａｃｔ処置により８日目および１４日目において有意に増大した（表１）。
【００６５】
ゼラチンザイモグラフィーおよびウエスタン免疫ブロッティング
ＮａＣｌまたはＡｌｖｅｏｆａｃｔ（登録商標）の０．５ｍｇ／ｍｌと比較して、炎症促進性ＭＭＰ−９についての低下したタンパク質値が、Ａｌｖｅｏｆａｃｔ（登録商標）の０．０１ｍｇ／ｍｌにより見出された（図５）。
【００６６】
筋線維芽細胞マーカーのＡＳＭＡについてのウエスタン免疫ブロッティングでは、ＮａＣｌまたはＡｌｖｅｏｆａｃｔ（登録商標）の０．０５ｍｇ／ｍｌと比較して、Ａｌｖｅｏｆａｃｔ（登録商標）の０．０１ｍｇ／ｍｌ処置による低下した値が示された（図６）。Ｅ−カドヘリンは上皮細胞の細胞間接触タンパク質である。遊走期間中に、Ｅ−カドヘリンのレベルの低下が、Ａｌｖｅｏｆａｃｔ（登録商標）の０．０１ｍｇ／ｍｌ処置により認められた（図７）。
【００６７】
結論
肺サーファクタントおよびその成分は、皮膚創傷治癒に対する、抗炎症性、遊走促進性かつ抗線維化の効果を有するようである。この発見は新規であり、これまで記載されていない。肺サーファクタントまたはその成分の局所適用または病巣内適用は、ヒトまたは動物の皮膚創傷治癒（例えば、瘢痕化を含む、急性、長期または異常な創傷治癒）に対する有益な効果を有する可能性がある。創傷を肺サーファクタントまたはその成分により処置することによって、皮膚創傷治癒が促進され、局所的炎症が軽減され、それにより、創傷閉鎖が増強され、瘢痕形成が軽減され得る。このことは、皮膚創傷治癒のための革新的かつ新規な処置戦略であり、また、皮膚瘢痕化についての防止のための革新的かつ新規な処置戦略であるといえる。
【００６８】
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【図１】
2018514545.tif 000004
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【国際調査報告】
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2018514545.tif 000012
2018514545.tif 000013
2018514545.tif 000014
2018514545.tif 000015