(57)【要約】本明細書において提供されるのは、野生型プロテアーゼ活性化受容体２（ＰＡＲ２）の変異フラグメントを含むペプチドである。疎水性部分を含むペプチドは、細胞膜を透過してＰＡＲ２のアンタゴニストとして作用することができる。また本明細書において提供されるのは、当該ペプチドを含む組成物および細胞、ならびに当該ペプチドを使用する方法である。
2018537529.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の配列：
Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０Ｘ１１Ｘ１２Ｘ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６Ｘ１７Ｘ１８Ｘ１９Ｘ２０（配列番号４２）、
ここで：
Ｘ４は、不在、Ａ、Ｇ、Ｐ、またはＮ末端リンカーであり；
Ｘ５は、Ｍ、Ｇ、Ｐ、Ｉ、Ｌ、Ｖ、ノルロイシン（Ｊ）、メチオニンスルホキシド（Ｍ（ＳＯ））、またはメチオニンスルホン（Ｍ（ＳＯ２））、またはＸ４が不在である場合は不在であり；
Ｘ６は、Ｄ、Ｅ、Ｈ、またはＸ４〜Ｘ５が不在である場合は不在であり；
Ｘ７は、Ｄ、Ｅ、Ｈ、またはＸ４〜Ｘ６が不在である場合は不在であり；
Ｘ８は、Ｎ、Ｄ、またはＥであり；
Ｘ９は、任意のアミノ酸であり；
Ｘ１０は、任意のアミノ酸であり；
Ｘ１１は、任意のアミノ酸もしくはそのＤ−アミノ酸、２−アミノイソ酪酸（Ｂ）、ヒドロキシプロリン（Ｈｙｐ）、Ｐ、プロリン相同体、Ｇ、または硬化剤／ヘリックス破壊剤部分であり；
Ｘ１２は、Ｋ、Ｒ、Ｐ、または不在であり；
Ｘ１３は、任意のアミノ酸またはシトルリン（Ｃｉｔ）であり；
Ｘ１４は、Ｋ、またはＸ１３とＸ１４との間のペプチド結合を切断不可能にする任意のアミノ酸、または正の電荷を減少させる任意のアミノ酸であり；
Ｘ１５は、任意のアミノ酸またはベータ−Ａであり；
Ｘ１６は、Ａ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ｑ、ベータ−Ａ、２−アミノイソ酪酸（Ｂ）、または不在であり；
Ｘ１７は、Ｉ、Ａ、ＬまたはＶであり；
Ｘ１８は、Ｋ、Ｉ、またはＦであり；および
Ｘ１９は、疎水性アミノ酸、そのＤ−アミノ酸、または不在である、
を含む、ペプチド。
【請求項２】
Ｘ９が、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫであり；Ｘ１０が、ＥまたはＤであり；およびＸ１８が、Ｋ、Ｉ、またはＦである、請求項１に記載のペプチド。
【請求項３】
以下の配列：
Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８ＳＥＸ１１Ｘ１２Ｘ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６Ｘ１７ＫＸ１９（配列番号４３）、
ここで：
Ｘ４は、不在、Ａ、Ｇ、Ｐ、またはＮ末端リンカーであり；
Ｘ５は、Ｍ、Ｇ、Ｐ、Ｉ、Ｌ、Ｖ、ノルロイシン（Ｊ）、メチオニンスルホキシド（Ｍ（ＳＯ））、またはメチオニンスルホン（Ｍ（ＳＯ２））、またはＸ４が不在である場合は不在であり；
Ｘ６は、Ｄ、Ｅ、Ｈ、またはＸ４〜Ｘ５が不在である場合は不在であり；
Ｘ７は、Ｄ、Ｅ、Ｈ、またはＸ４〜Ｘ６が不在である場合は不在であり；
Ｘ８は、Ｎ、Ｄ、またはＥであり；
Ｘ１１は、任意のアミノ酸もしくはそのＤ−アミノ酸、２−アミノイソ酪酸（Ｂ）、ヒドロキシプロリン（Ｈｙｐ）、Ｐ、プロリン相同体、Ｇ、または硬化剤／ヘリックス破壊剤部分であり；
Ｘ１２は、Ｋ、Ｒ、Ｐ、または不在であり；
Ｘ１３は、任意のアミノ酸またはシトルリン（Ｃｉｔ）であり；
Ｘ１４は、ＫまたはＸ１３とＸ１４との間のペプチド結合を切断不可能にする任意のアミノ酸、または正の電荷を減少させる任意のアミノ酸であり；
Ｘ１５は、任意のアミノ酸またはベータ−Ａであり；
Ｘ１６は、Ａ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ｑ、ベータ−Ａ、２−アミノイソ酪酸（Ｂ）、または不在であり；
Ｘ１７は、Ｉ、Ａ、ＬまたはＶであり；および
Ｘ１９は、疎水性アミノ酸、そのＤ−アミノ酸、または不在である、
を含む、請求項２または３に記載のペプチド。
【請求項４】
Ｘ１３が、Ｒ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、またはシトルリン（Ｃｉｔ）である、請求項１〜３のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項５】
Ｘ１３が、Ｒである、請求項１〜４のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項６】
Ｘ１３が、Ｆである、請求項１〜５のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項７】
Ｘ１１が、ヒドロキシプロリン（Ｈｙｐ）である、請求項１〜６のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項８】
Ｘ１１が、Ｋである、請求項１〜６のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項９】
Ｘ１１が、Ｐである、請求項１〜６のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１０】
Ｘ４が、ｅＫ、アミノヘキサン酸（Ａｈｘ）、プロリン、またはグリシンからなる群より選択されるＮ末端リンカーである、請求項１〜９のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１１】
Ｘ４が、Ｇである、請求項１〜９のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１２】
Ｘ４が、Ａである、請求項１〜９のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１３】
Ｘ４が、不在である、請求項１〜９のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１４】
Ｎ末端においてＸ３をさらに含み、ここで、Ｘ３が、Ｓ、Ｇ、Ｐ、Ｎ末端リンカー、またはヘリックス破壊剤である、請求項１〜１２のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１５】
Ｘ３が、ｅＫ、アミノヘキサン酸（Ａｈｘ）、プロリン、またはグリシンからなる群より選択されるＮ末端リンカーである、請求項１４に記載のペプチド。
【請求項１６】
Ｘ３が、ｅＫである、請求項１５に記載のペプチド。
【請求項１７】
Ｎ末端においてＸ２をさらに含み、ここで、Ｘ２が、Ｓである、請求項１４〜１６のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１８】
Ｎ末端においてＸ１をさらに含み、ここで、Ｘ１が、Ｒである、請求項１７に記載のペプチド。
【請求項１９】
ペプチドのＮ末端において、Ｘ３；Ｘ２Ｘ３；またはＸ１Ｘ２Ｘ３を含む、請求項１〜１８のいずれか一項に記載のペプチドであって、ここで：
Ｘ３は、Ｓ、Ｇ、Ｐ、Ｎ末端リンカー、またはヘリックス破壊剤であり；
Ｘ２は、ＳまたはＴであり；および
Ｘ１は、ＲまたはＫである、前記ペプチド。
【請求項２０】
Ｎ末端リンカーが、ｅＫまたはアミノヘキサン酸（Ａｈｘ）である、請求項１９に記載のペプチド。
【請求項２１】
Ｘ６が、Ｄである、請求項１〜２０のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項２２】
Ｘ６が、Ｈである、請求項１〜２０のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項２３】
Ｘ６が、Ｅである、請求項１〜２０のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項２４】
Ｘ７が、Ｅである、請求項１〜２３のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項２５】
Ｘ７が、Ｈである、請求項１〜２３のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項２６】
Ｘ８が、Ｎである、請求項１〜２５のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項２７】
Ｘ８が、Ｄである、請求項１〜２５のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項２８】
Ｘ６Ｘ７Ｘ８が、ＨＨＤである、請求項１〜２０のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項２９】
Ｘ６Ｘ７Ｘ８が、ＤＥＮである、請求項１〜２０のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項３０】
Ｘ１５が、Ｑである、請求項１〜２９のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項３１】
Ｘ１５が、Ｓである、請求項１〜２９のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項３２】
Ｘ１５が、ベータ−Ａである、請求項１〜２９のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項３３】
Ｘ１６が、Ａである、請求項１〜３２のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項３４】
Ｘ１６が、Ｂである、請求項１〜３２のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項３５】
Ｘ１５がベータ−Ａである場合、Ｘ１６が不在である、請求項１〜３２のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項３６】
Ｘ１７が、Ｉである、請求項１〜３５のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項３７】
位置Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７におけるアミノ酸残基が、不在である、請求項１〜９または２６〜３６のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項３８】
Ｘ１９が、Ｉ、Ｖ、Ｌ、ＡまたはそのＤ−アミノ酸である、請求項１〜３７のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項３９】
Ｘ１９が、Ｉ、Ｖ、ＬまたはＡのＤ−アミノ酸である、請求項３８に記載のペプチド。
【請求項４０】
Ｘ１９が、ｄＬまたはｄＶである、請求項３９に記載のペプチド。
【請求項４１】
Ｘ１９が、Ｌである、請求項３８に記載のペプチド。
【請求項４２】
Ｘ１９が、不在である、請求項１〜３７のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項４３】
Ｘ２０をＣ末端において含む、請求項１〜４１のいずれか一項に記載のペプチドであって、Ｘ２０が、疎水性残基またはそのＤ−アミノ酸である、前記ペプチド。
【請求項４４】
Ｘ２０が、Ｉ、Ｖ、Ｌ、ＡまたはそのＤ−アミノ酸である、請求項４３に記載のペプチド。
【請求項４５】
Ｘ２０が、Ｉ、Ｖ、ＬまたはＡのＤ−アミノ酸である、請求項４４に記載のペプチド。
【請求項４６】
Ｘ２０が、ｄＩまたはｄＶである、請求項４５に記載のペプチド。
【請求項４７】
Ｘ１４が、中性の、または負に荷電したアミノ酸である、請求項１〜４６のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項４８】
Ｘ１４が、ＫまたはｄＫである、請求項１〜４６のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項４９】
Ｘ４が、Ｎ末端リンカーであり；Ｘ５が、Ｇ、ＩまたはＬであり；Ｘ１５が、Ｓであり；およびＸ２０が、Ｉ、Ｖ、Ｌ、ＡまたはそのＤ−アミノ酸である、請求項１〜９、１４〜３６、３８〜４１または４３〜４８のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項５０】
Ｎ末端リンカーが、ｅＫ、アミノヘキサン酸（Ａｈｘ）、プロリン、またはグリシンである、請求項４９に記載のペプチド。
【請求項５１】
Ｘ４が、Ｇであり；Ｘ５が、Ｌであり；Ｘ１５が、Ｓであり；Ｘ２０が、Ｉ、Ｖ、Ｌ、ＡまたはそのＤ−アミノ酸である、請求項１〜９、１４〜３６、３８〜４１または４３〜４８のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項５２】
Ｘ５とＸ６；Ｘ１１とＸ１２；またはＸ１２とＸ１３との間にアミノ酸挿入をさらに含む、請求項１〜５１のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項５３】
アミノ酸挿入が、Ｐである、請求項１〜５２のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項５４】
配列番号１〜６８および７０から選択されるアミノ酸配列を含む、ペプチド。
【請求項５５】
配列番号１〜６８および７０のアミノ酸配列に対して約５０％〜約９９％相同である配列を含む、ペプチド。
【請求項５６】
配列番号１〜６８および７０のアミノ酸配列に対して約５０％〜約９９％同一である配列を含む、ペプチド。
【請求項５７】
１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸の変更を有する配列番号１〜６８および７０のアミノ酸配列を含む配列を含む、請求項５４〜５６のいずれか一項に記載のペプチドであって、ここで、変更が、アミノ酸の置換、欠失および／または付加である、前記ペプチド。
【請求項５８】
配列番号４３のアミノ酸配列に対して約５０％〜約９９％相同である配列を含む、請求項１〜５３のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項５９】
配列番号４３のアミノ酸配列に対して約７５％〜約９９％同一である配列を含む、請求項１〜５３のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項６０】
配列番号４１の配列を含むペプチドであって、アミノ酸配列が、位置Ｘ５およびＸ１５において変異を含み；およびここで、ペプチドが、少なくとも１５アミノ酸長である、前記ペプチド。
【請求項６１】
配列番号４１の配列を含むペプチドであって、アミノ酸配列が、位置Ｘ５およびＸ１５において変異を、Ｘ１９およびＸ２０において追加のアミノ酸を含み、ここで、Ｘ１９およびＸ２０は、独立して、疎水性アミノ酸またはＤ−アミノ酸である、前記ペプチド。
【請求項６２】
Ｘ１４およびＸ２０のうちの少なくとも１つは、Ｄ−アミノ酸である、請求項６１に記載のペプチド。
【請求項６３】
位置Ｘ１３において変異をさらに含む、請求項６０〜６２のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項６４】
位置Ｘ１１において変異をさらに含む、請求項６０〜６３のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項６５】
位置Ｘ４およびＸ１９において追加のアミノ酸をさらに含む、請求項６０〜６４のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項６６】
Ｘ４が、Ａ、またはｅＫ、アミノヘキサン酸（Ａｈｘ）、プロリン、またはグリシンからなる群より選択されるＮ末端リンカーである、請求項６０〜６５のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項６７】
Ｘ１９が、疎水性アミノ酸、そのＤ−アミノ酸である、請求項６０〜６６のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項６８】
位置Ｘ２０において追加のアミノ酸をさらに含む、請求項６０〜６７のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項６９】
Ｘ２０が、Ｄ−アミノ酸である、請求項６８に記載のペプチド。
【請求項７０】
Ｘ５が、Ｍ、Ｇ、Ｐ、Ｉ、Ｌ、Ｖ、ノルロイシン（Ｊ）、Ｍ（ＳＯ）、またはＭ（ＳＯ２）である、請求項６０〜６９のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項７１】
Ｘ１５が、ＳまたはＱである、請求項６０〜７０のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項７２】
Ｘ６におけるＤ、Ｅ、またはＨ；Ｘ７におけるＤ、Ｅ、またはＨ；およびＸ８におけるＤ、Ｅ、またはＮから選択される少なくとも１つの変異をさらに含む、請求項６０〜７１のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項７３】
Ｘ１４においてＤ−アミノ酸をさらに含む、請求項６０〜７２のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項７４】
野生型プロテアーゼ活性化受容体２（ＰＡＲ２）の変異フラグメントを含むペプチドであって、配列中、ヒトＰＡＲ２配列の位置２７０〜２９０に対応するアミノ酸位置において、少なくとも３個の連続したアミノ酸残基が、野生型ＰＡＲ２と共通し、ここで前記ＰＡＲ２の変異フラグメント中の少なくとも１つの変異が、ヒトＰＡＲ２配列の位置２８２に対応するアミノ酸位置にある、前記ペプチド。
【請求項７５】
ヒトＰＡＲ２配列の位置２８０に対応するアミノ酸位置が、変異していない、請求項７４に記載のペプチド。
【請求項７６】
野生型プロテアーゼ活性化受容体２（ＰＡＲ２）の変異フラグメントを含むペプチドであって、配列中、ヒトＰＡＲ２配列の２７０〜２９０に対応するアミノ酸位置において、少なくとも３個の連続したアミノ酸残基が、野生型ＰＡＲ２と共通し、ここで、前記のＰＡＲ２の変異フラグメント中の少なくとも１つの変異は、ヒトＰＡＲ２配列の位置２８０に対応するアミノ酸位置にある、前記ペプチド。
【請求項７７】
ヒトＰＡＲ２配列の位置２８２に対応するアミノ酸位置が、変異していない、請求項７６に記載のペプチド。
【請求項７８】
野生型プロテアーゼ活性化受容体２（ＰＡＲ２）の変異フラグメントを含むペプチドであって、配列中、ヒトＰＡＲ２配列の位置２７０〜２９０に対応するアミノ酸位置において、少なくとも３個の連続したアミノ酸残基が、野生型ＰＡＲ２と共通し、ここで、前記のＰＡＲ２の変異フラグメント中の少なくとも１つの変異は、ヒトＰＡＲ２配列の位置２７３に対応するアミノ酸位置にある、前記ペプチド。
【請求項７９】
野生型プロテアーゼ活性化受容体２（ＰＡＲ２）の変異フラグメントを含むペプチドであって、配列中、ヒトＰＡＲ２配列の２７０〜２９０に対応するアミノ酸位置において、少なくとも３個の連続したアミノ酸残基が、野生型ＰＡＲ２と共通し、ここで、前記のＰＡＲ２の変異フラグメント中の少なくとも１つの変異は、ヒトＰＡＲ２配列の位置２７５、２７６、または２７７に対応するアミノ酸位置にある、前記ペプチド。
【請求項８０】
野生型プロテアーゼ活性化受容体２（ＰＡＲ２）の変異フラグメントを含むペプチドであって、配列中、ヒトＰＡＲ２配列の２７０〜２９０に対応するアミノ酸位置において、少なくとも３個の連続したアミノ酸残基が、野生型ＰＡＲ２と共通し、ここで、前記のＰＡＲ２の変異フラグメント中の少なくとも１つの変異は、ヒトＰＡＲ２配列の位置２７３、２７４、または２８４に対応するアミノ酸位置にある、前記ペプチド。
【請求項８１】
位置２７３におけるアミノ酸が、Ａ、またはｅＫ、アミノヘキサン酸（Ａｈｘ）、プロリンおよびグリシンから選択されるＮ末端リンカーである、請求項８０に記載のペプチド。
【請求項８２】
野生型プロテアーゼ活性化受容体２（ＰＡＲ２）の変異フラグメントを含むペプチドであって、配列中、ヒトＰＡＲ２配列の位置２７０〜２９０に対応するアミノ酸位置において、少なくとも３個の連続したアミノ酸残基が、野生型ＰＡＲ２と共通し、ここで、前記のＰＡＲ２の変異フラグメント中の少なくとも１つの変異は、ヒトＰＡＲ２配列の位置２７４、２７５、２７６、２７７、または２８４に対応するアミノ酸位置にある、前記ペプチド。
【請求項８３】
位置２７４におけるアミノ酸が、Ｍ、Ｇ、Ｐ、Ｉ、Ｌ、Ｖ、ノルロイシン（Ｊ）、Ｍ（ＳＯ）、またはＭ（ＳＯ２）である、請求項８０〜８２のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項８４】
位置２７５におけるアミノ酸が、Ｄ、Ｅ、Ｈである、請求項７９〜８３のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項８５】
位置２７６におけるアミノ酸が、Ｄ、Ｅ、またはＨである、請求項７９〜８４のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項８６】
位置２７７におけるアミノ酸が、Ｄ、Ｅ、またはＮである、請求項７９〜８５のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項８７】
位置２８４におけるアミノ酸が、任意のアミノ酸、またはベータ−Ａである、請求項８０〜８６のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項８８】
ヒトＰＡＲ２配列の位置２８０に対応するアミノ酸位置においてさらに変異を含む、請求項８０〜８７のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項８９】
位置２８０におけるアミノ酸が、任意のアミノ酸、２−アミノイソ酪酸（Ｂ）、ヒドロキシプロリン（Ｈｙｐ）、プロリン相同体、または硬化剤／ヘリックス破壊剤部分である、請求項８８に記載のペプチド。
【請求項９０】
ヒトＰＡＲ２配列の位置２８２に対応するアミノ酸位置においてさらに変異を含む、請求項８０〜８９のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項９１】
位置２８２におけるアミノ酸が、任意のアミノ酸またはシトルリン（Ｃｉｔ）である、請求項９０に記載のペプチド。
【請求項９２】
位置２８２におけるアミノ酸が、Ｒ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、またはシトルリン（Ｃｉｔ）である、請求項９１に記載のペプチド。
【請求項９３】
ヒトＰＡＲ２配列の位置２８９に対応するアミノ酸位置においてさらに変異を含む、請求項７４〜９２のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項９４】
位置２８９に対応する位置におけるアミノ酸が、疎水性アミノ酸またはそのＤ−アミノ酸である、請求項９３に記載のペプチド。
【請求項９５】
位置２８９に対応する位置におけるアミノ酸が、Ｉ、Ｖ、Ｌ、ＡまたはそのＤ−アミノ酸である、請求項９３に記載のペプチド。
【請求項９６】
ヒトＰＡＲ２配列の位置２８８に対応するアミノ酸位置においてさらに変異を含む、請求項７４〜９５のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項９７】
位置２８８に対応する位置におけるアミノ酸が、疎水性アミノ酸またはそのＤ−アミノ酸である、請求項９６に記載のペプチド。
【請求項９８】
位置２８８に対応する位置におけるアミノ酸が、Ｘ１９が、Ｉ、Ｖ、Ｌ、ＡまたはそのＤ−アミノ酸である、請求項９６に記載のペプチド。
【請求項９９】
ヒトＰＡＲ２配列の位置２８８および２８９の両方に対応する位置において変異を含まない、請求項１〜９９のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１００】
ヒトＰＡＲ２配列の位置２８３に対応するアミノ酸位置においてさらに変異を含む、請求項７４〜９９のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１０１】
位置２８３におけるアミノ酸が、アミノ酸位置２８２と２８３との間のペプチド結合を切断不可能にする任意のアミノ酸、または正の電荷を減少させる任意のアミノ酸である、請求項１００に記載のペプチド。
【請求項１０２】
ヒトＰＡＲ２配列の位置２８５に対応するアミノ酸位置においてさらに変異を含む、請求項７４〜１０１のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１０３】
位置２８５に対応する位置におけるアミノ酸が、Ａ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ｑ、Ｎ、ベータ−Ａ、２−アミノイソ酪酸（Ｂ）、または不在である、請求項１０２に記載のペプチド。
【請求項１０４】
ヒトＰＡＲ２配列の位置２７２に対応するアミノ酸位置においてさらに変異を含む、請求項７４〜１０３のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１０５】
位置２８２におけるアミノ酸が、Ｓ、またはｅＫ、アミノヘキサン酸（Ａｈｘ）、プロリンもしくはグリシンから選択されるＮ末端リンカーである、請求項１０４に記載のペプチド。
【請求項１０６】
野生型ＰＡＲ２の変異フラグメントを含むペプチドであって、配列中、少なくとも２個の連続したアミノ酸残基の少なくとも１つのセクション、および少なくとも３個の連続したアミノ酸残基の少なくとも１つのセクションが、野生型ＰＡＲ２配列と共通する、前記ペプチド。
【請求項１０７】
野生型ＰＡＲ２の変異フラグメントを含むペプチドであって、配列中、少なくとも２個の連続したアミノ酸残基の少なくとも２つのセクションが、野生型ＰＡＲ２配列と共通する、前記ペプチド。
【請求項１０８】
野生型ＰＡＲ２の変異フラグメントを含むペプチドであって、配列中、少なくとも３個の連続したアミノ酸残基の少なくとも２つのセクションが、野生型ＰＡＲ２配列と共通する、前記ペプチド。
【請求項１０９】
請求項１０６〜１０８のいずれか一項に記載のペプチドであって、配列中、少なくとも２個の連続したアミノ酸残基の少なくとももう１つのセクションが、野生型ＰＡＲ２配列と共通する、前記ペプチド。
【請求項１１０】
野生型ＰＡＲ２の変異フラグメントを含むペプチドであって、配列中、少なくとも３個の連続したアミノ酸残基の少なくとも３つのセクションが、野生型ＰＡＲ２配列と共通する、前記ペプチド。
【請求項１１１】
野生型ＰＡＲ２の変異フラグメントを含むペプチドであって、配列中、少なくとも３個のアミノ酸の少なくとも１つのセクション、および少なくとも４個の連続したアミノ酸残基の少なくとも１つのセクションが、野生型ＰＡＲ２配列と共通する、前記ペプチド。
【請求項１１２】
配列中、少なくとも２個の連続したアミノ酸残基の少なくとももう１つのセクションが、野生型ＰＡＲ２配列と共通する、請求項１１１に記載のペプチド。
【請求項１１３】
野生型ＰＡＲ２の変異フラグメントを含むペプチドであって、配列中、少なくとも４個の連続したアミノ酸残基の少なくとも２つのセクションが、野生型ＰＡＲ２と共通する、前記ペプチド。
【請求項１１４】
野生型ＰＡＲ２の変異フラグメントを含むペプチドであって、配列中、少なくとも４個の連続したアミノ酸残基の１つのセクション、および少なくとも６個の連続したアミノ酸残基の１つのセクションが、野生型ＰＡＲ２と共通する、前記ペプチド。
【請求項１１５】
ヒトＰＡＲ２配列の位置２７３、２７４、２７５、２７６または２７７に対応するアミノ酸位置において少なくとも１つの変異を含む、請求項１０６〜１１４のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１１６】
請求項１１５に記載のペプチドであって、ここで：
位置２７３に対応するアミノ酸位置は、Ａ、またはｅＫ、アミノヘキサン酸（Ａｈｘ）、プロリンおよびグリシンから選択されるＮ末端リンカーであり；
位置２７４に対応するアミノ酸位置は、Ｍ、Ｇ、Ｐ、Ｉ、Ｌ、Ｖ、ノルロイシン（Ｊ）、Ｍ（ＳＯ）、またはＭ（ＳＯ２）であり；
位置２７５に対応するアミノ酸位置は、Ｄ、Ｅ、Ｈであり；
位置２７６に対応するアミノ酸位置は、Ｄ、Ｅ、またはＨであり；および
位置２７７に対応するアミノ酸位置は、Ｄ、Ｅ、またはＮである、
前記ペプチド。
【請求項１１７】
ヒトＰＡＲ２配列の位置２７３、２７４、２８２または２８４に対応するアミノ酸位置において少なくとも１つの変異を含む、請求項１０６〜１１４のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１１８】
請求項１１５に記載のペプチドであって、ここで：
位置２７３に対応するアミノ酸位置は、Ａ、またはｅＫ、アミノヘキサン酸（Ａｈｘ）、プロリンおよびグリシンから選択されるＮ末端リンカーであり；
位置２７４に対応するアミノ酸位置は、Ｍ、Ｇ、Ｐ、Ｉ、Ｌ、Ｖ、ノルロイシン（Ｊ）、Ｍ（ＳＯ）、またはＭ（ＳＯ２）であり；
位置２８２に対応するアミノ酸位置は、Ｒ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、またはシトルリン（Ｃｉｔ）であり；および
位置２８４に対応するアミノ酸位置は、Ｑ、Ｓ、またはベータ−Ａである、
前記ペプチド。
【請求項１１９】
ヒトＰＡＲ２配列の位置２７４、２７５、２７６、２７７または２８４に対応するアミノ酸位置において少なくとも１つの変異を含む、請求項１０６〜１１７のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１２０】
ヒトＰＡＲ２配列の位置２８９に対応するアミノ酸位置においてさらに変異を含む、請求項１０６〜１１９のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１２１】
位置２８９に対応するアミノ酸位置が、疎水性アミノ酸またはそのＤ−アミノ酸である、請求項１２０に記載のペプチド
【請求項１２２】
位置２８９に対応するアミノ酸位置が、Ｉ、Ｖ、Ｌ、ＡまたはそのＤ−アミノ酸である、請求項１２１に記載のペプチド。
【請求項１２３】
ヒトＰＡＲ２配列の位置２８０に対応するアミノ酸位置においてさらに変異を含む、請求項１０６〜１２２のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１２４】
位置２８０に対応するアミノ酸位置が、任意のアミノ酸、２−アミノイソ酪酸（Ｂ）、ヒドロキシプロリン（Ｈｙｐ）、プロリン相同体、または硬化剤／ヘリックス破壊剤部分である、請求項１２３に記載のペプチド。
【請求項１２５】
連続したアミノ酸残基のセクションが、ヒトＰＡＲ２配列の位置２７０〜２９０内のアミノ酸残基に対応する、請求項１０６〜１２４のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１２６】
配列中、少なくとも４、５、６、７、８、９または１０個の連続したアミノ酸残基が、野生型ＰＡＲ２配列と共通する、請求項７４〜１２５のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１２７】
野生型ＰＡＲ２フラグメントと比較して２〜１５個の変異を含む、請求項１〜１２６のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１２８】
ヒトＰＡＲ２配列の位置２７５〜２７７に対応する位置においてコンセンサス配列ＨＨＤを含む、請求項１〜１２７のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１２９】
ヒトＰＡＲ２配列の位置２７５〜２７７に対応する位置においてコンセンサス配列ＤＥＮを含む、請求項１〜１２７のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１３０】
ヒトＰＡＲ２配列の位置２７３〜２７７に対応する位置においてコンセンサス配列ＧＬＨＨＤ（配列番号７８）を含む、請求項１〜１２７のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１３１】
ヒトＰＡＲ２配列の位置２７３〜２７７に対応する位置においてコンセンサス配列ＧＬＤＥＮ（配列番号７９）を含む、請求項１〜１２７のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１３２】
野生型ＰＡＲ２が、ヒトＰＡＲ２である、請求項７４〜１３１のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１３３】
連続したアミノ酸のセクションが、少なくとも１個のアミノ酸残基により分けられる、請求項７４〜１３２のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１３４】
疎水性部分を含む、請求項１〜１３３のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１３５】
少なくとも２個の疎水性部分を含む、請求項１〜１３４のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１３６】
疎水性部分が、脂質部分、アシル部分、ステロイド部分、またはアミノ酸部分を含む、請求項１３４または１３５に記載のペプチド。
【請求項１３７】
脂質部分が、以下：カプリロイル（Ｃ８）；ノナノイル（Ｃ９）；カプリル（Ｃ１０）；ウンデカノイル（Ｃ１１）；ラウロイル（Ｃ１２）；トリデカノイル（Ｃ１３）；ミリストイル（Ｃ１４）；ペンタデカノイル（Ｃ１５）；パルミトイル（Ｃ１６）；フィタノイル（メチル置換Ｃ１６）；ヘプタデカノイル（Ｃ１７）；ステアロイル（Ｃ１８）；ノナデカノイル（Ｃ１９）；アラキドイル（Ｃ２０）；ヘニコサノイル（Ｃ２１）；ベヘノイル（Ｃ２２）；トルシサノイル（Ｃ２３）；およびリグノセロイル（Ｃ２４）からなる群より選択される、請求項１３６に記載のペプチド。
【請求項１３８】
脂質部分が、ミリストイル（Ｃ１４）、ペンタデカノイル（Ｃ１５）、またはパルミトイル（Ｃ１６）である、請求項１３７に記載のペプチド。
【請求項１３９】
脂質部分が、ミリストイル（Ｃ１４）である、請求項１３８に記載のペプチド。
【請求項１４０】
脂質部分が、パルミトイル（Ｃ１６）である、請求項１３８に記載のペプチド。
【請求項１４１】
ステロイド部分が、デオキシコール酸またはリトコール酸である、請求項１３７に記載のペプチド。
【請求項１４２】
疎水性部分が、Ｎ末端、Ｃ末端に、またはペプチドの内部残基に付着している（attached）、請求項１３４〜１４１のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１４３】
疎水性部分が、ペプチドのＮ末端に付着している、請求項１４２に記載のペプチド。
【請求項１４４】
１０〜３０アミノ酸長である、請求項１〜１４３のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１４５】
１０〜２０アミノ酸長である、請求項１４４に記載のペプチド。
【請求項１４６】
１０〜１５アミノ酸長である、請求項１４４に記載のペプチド。
【請求項１４７】
１５〜２０アミノ酸長である、請求項１４４に記載のペプチド。
【請求項１４８】
１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０アミノ酸長である、請求項１４４に記載のペプチド。
【請求項１４９】
約１５００Ｄａ〜約２５００Ｄａの分子量範囲を有する疎水性部分を含む、請求項１３４〜１４８のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１５０】
約１７００Ｄａ〜約２３００Ｄａの分子量範囲を有する疎水性部分を含む、請求項１３４〜１４８のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１５１】
約２０００Ｄａ〜約２３００Ｄａの分子量範囲を有する疎水性部分を含む、請求項１３４〜１４８のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１５２】
少なくとも約２０００Ｄａの分子量範囲を有する疎水性部分を含む、請求項１３４〜１４８のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１５３】
水溶液中で、約３０ｍｇ／ｍＬ、約４０ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ、約６０ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ、または約１２０ｍｇ／ｍＬまでの溶解度を有する、請求項１〜１５２のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１５４】
Ｄ−アミノ酸を含む、請求項１〜１５３のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１５５】
１、２、３、４または５個のＤ−アミノ酸を含む、請求項１〜１５４のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１５６】
野生型ヒトＰＡＲ２の位置２８７に対応する位置において、ＫからＦへの、またはＫからＡへの変異を含まない、請求項５５〜１５５のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１５７】
野生型ヒトＰＡＲ２の位置２７４に対応する位置において、ＭからＡへの、またはＭからＧへの変異を含まない、請求項５５〜１５６のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１５８】
野生型ヒトＰＡＲ２の位置２８４に対応する位置において、ＲからＳへの、またはＲからＱへの変異を含まない、請求項５５〜１５７のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１５９】
野生型ＰＡＲ２と比較して、アミノ酸付加、欠失、または置換を含む、請求項５５〜１５８のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１６０】
ＰＡＲ２アンタゴニストである、請求項１〜１５９のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１６１】
細胞において３μＭのペプチドおよび８μＭのＳＬＩＧＲＬ（配列番号７３）アゴニストを用いるカルシウム流アッセイを用いて、少なくとも４０％のＰＡＲ２の阻害を示す、請求項１〜１６０のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１６２】
請求項１〜１６１のいずれか一項に記載のペプチドを含む、医薬組成物。
【請求項１６３】
薬学的に許容し得る賦形剤、キャリアまたは希釈剤を含む、請求項１６２に記載の医薬組成物。
【請求項１６４】
経口、鼻、局所、直腸、膣または非経口投与、または静脈内、皮下または筋肉内注射のために好適な、請求項１６２または１６３に記載の医薬組成物。
【請求項１６５】
障害を処置する方法であって、それを必要としている対象に、請求項１〜１６１のいずれか一項に記載のペプチドを投与することを含む、前記方法。
【請求項１６６】
障害が、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、アトピー性皮膚炎（ＡＤ、湿疹）、腎線維症、アルコール性脂肪性肝炎、臓器の線維症、腎線維症、骨髄線維症、肺動脈性高血圧症（ＰＡＨ）、肺線維症、掻痒症（掻痒）、膵炎、慢性腎疾患、腎炎、多発性硬化症、がん、白血病、メラノーマ、炎症性の障害および状態、敗血症、炎症関連ＣＮＳ障害、気管支炎、喘息、糖尿病、糖尿病およびＮＡＳＨの合併症、肥満、メタボリックシンドローム、線維性疾患、心臓線維症、肺線維症、炎症性腸疾患、クローン病、過敏性腸症候群、硬変、関節炎、間接線維症、ケロイド、骨髄線維症、全身性線維症、強皮症、乾癬、蕁麻疹、膿痂疹、発疹、または酒さである、請求項１６５に記載の方法。
【請求項１６７】
障害が、結腸、皮膚、メラノサイト、乳房、前立腺、中枢神経系、脳、免疫系、膵臓、頭部頸部、食道、腎臓、生殖系、卵巣、子宮内膜、および子宮頸部のがんからなる群より選択されるがんである、請求項１６５に記載の方法。
【請求項１６８】
障害が糖尿病である、請求項１６５に記載の方法。
【請求項１６９】
それを必要としている対象において糖化ヘモグロビン（ＨｂＡ１ｃ）レベルを約０．５％〜約１．０％低下させる方法であって、請求項１〜１６１のいずれか一項に記載のペプチドを、それを必要としている対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項１７０】
糖化ヘモグロビン（ＨｂＡ１ｃ）レベルを約０．８％低下させる、請求項１６９に記載の方法。
【請求項１７１】
インスリンレベルを約４０％〜約６０％低下させる方法であって、請求項１〜１６１のいずれか一項に記載のペプチドを、それを必要としている対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項１７２】
インスリンレベルを約４５％低下させる、請求項１７１に記載の方法。
【請求項１７３】
対象がヒトである、請求項１６９〜１７２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７４】
障害を処置することにおける使用のための、請求項１〜１６１のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１７５】
障害が、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、アトピー性皮膚炎（ＡＤ、湿疹）、腎線維症、アルコール性脂肪性肝炎、臓器の線維症、腎線維症、骨髄線維症、肺動脈性高血圧症（ＰＡＨ）、肺線維症、掻痒症（掻痒）、膵炎、慢性腎疾患、腎炎、多発性硬化症、がん、白血病、メラノーマ、炎症性の障害および状態、敗血症、炎症関連ＣＮＳ障害、気管支炎、喘息、糖尿病、糖尿病およびＮＡＳＨの合併症、肥満、メタボリックシンドローム、線維性疾患、心臓線維症、肺線維症、炎症性腸疾患、クローン病、過敏性腸症候群、硬変、関節炎、間接線維症、ケロイド、骨髄線維症、全身性線維症、強皮症、乾癬、蕁麻疹、膿痂疹、発疹、および酒さである、請求項１７４に記載のペプチド。
【請求項１７６】
障害が、結腸、皮膚、メラノサイト、乳房、前立腺、中枢神経系、脳、免疫系、膵臓、頭部頸部、食道、腎臓、生殖系、卵巣、子宮内膜、および子宮頸部のがんからなる群から選択されるがんである、請求項１７４に記載のペプチド。
【請求項１７７】
障害が糖尿病である、請求項１７４に記載のペプチド。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本願は、２０１５年１１月１３日に出願された米国仮出願U.S.S.N. 62/255,334に対する35 U.S.C.§119(e)下における優先権を主張し、当該仮出願は、本明細書において参照することにより援用される。
【０００２】
政府の支援
本発明は、国立衛生学研究所−国立糖尿病消化器腎臓疾患研究所（National Institute of Diabetes and Digestive and Kidney Diseases）により付与された助成金番号R42DK101240下における政府の支援によりなされた。政府は、本発明において一定の権利を有する。
【背景技術】
【０００３】
背景
多様なホルモン、神経伝達物質および生物学的に活性な物質は、細胞膜に位置する特異的な受容体を介して、生体の機能を制御、調節または調整する。酵母および哺乳動物を含む真核生物において、これらの受容体のうちの多くは、受容体がカップリングしているグアニンヌクレオチド結合タンパク質（Ｇタンパク質）を活性化させることにより、細胞内シグナルの伝達を媒介する。かかる受容体は、一般に、Ｇタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）と称され、Ｇタンパク質連動型（G protein-linked）受容体（ＧＰＬＲ）または７回膜貫通型ドメイン受容体（ＧＰＣＲ）としても知られている。ＧＰＣＲに対する、特異的なシグナル伝達分子、すなわちリガンドの結合は、受容体の立体構造変化を引き起こし得、Ｇタンパク質に結合してこれを活性化することができる形態をもたらし、それにより、最終的に生物学的応答をもたらす細胞内イベントのカスケードの引き金を引く。典型的には、ＧＰＣＲは、Ｇタンパク質と相互作用して、サイクリックＡＭＰ、イノシトールリン酸、ジアシルグリセロールおよびカルシウムイオンなどの細胞内セカンドメッセンジャーの合成を調節する。
【０００４】
既知の特徴づけられていないＧＰＣＲは、それらが多くの疾患に関連するため、薬物の作用および開発の主要な標的となっている（Jacoby et al., Chem. Med. Chem. 2006, 1:760-782）。ＧＰＣＲは、通常、３つの細胞内（ＩＬ−１／ｉ１〜ＩＬ−３／ｉ３）ループおよび３つの細胞外ループ（ＥＬ−１／ｅ１〜ＥＬ−３／ｅ３）により連結される７つの膜貫通ヘリックスドメイン（ＴＭ１〜ＴＭ７）の共通の構造モチーフを共有する。７つの膜貫通ヘリックスは、細胞膜中にバレル様の空洞を形成し、リガンドとの細胞外相互作用により惹起されるこの構造における立体構造変化こそが、ドメインを細胞内でのＧタンパク質共役のためにさらに活性化する。ＧＰＣＲは、細胞の代謝、線維化、組織リモデリング、細胞の増殖および運動性、接着、炎症、神経型のシグナル伝達、ならびに凝血を制御するシグナル伝達プロセスにおいて、不可欠の役割を果たす。
【０００５】
ＧＰＣＲは、Ｇタンパク質とエフェクター（Ｇタンパク質により調節される細胞内の酵素およびタンパク質、ならびにチャネル）と共に、細胞内セカンドメッセンジャーの状態を細胞外の入力に接続するモジュラーシグナル伝達系の成分である（Pierce et al., Nature Rev Mole Cell Bio 2002, 3, 639-650）。ＧＰＣＲのスーパーファミリーは大きく、ヒトゲノムのシークエンシングにより、それらをコードする８５０個の遺伝子が明らかとなっている（Hopkins and Groom Nature Reviews Drug Discovery 2002, 1, 727-730）。ＧＰＣＲは、配列相同性および機能的類似性に基づいて６つのクラスに分けることができる（Foord et al., Pharmacol Rev 2005, 57(2): 279-88）；クラスＡ（または１）（ロドプシン様）、クラスＢ（または２）（セクレチン受容体ファミリー）、クラスＣ（または３）（代謝型グルタミン酸／フェロモン）、クラスＤ（または４）（真菌の接合フェロモン受容体）、クラスＥ（または５）（サイクリックＡＭＰ受容体）、およびクラスＦ（または６）（Frizzled／Smoothened）。
【０００６】
ロドプシン様ＧＰＣＲ（クラスＡまたは１）の中には、プロテアーゼ活性化受容体（ＰＡＲ）があり、これは、７回膜貫通型ＧＰＣＲのサブファミリーであり、それらの細胞外ドメインの部分の切断を通して活性化され、細胞外プロテアーゼ勾配のセンサーとして作用し、細胞が、線維症、がん、凝血、ならびに無数の他のプロセス（例えば急性および慢性の炎症に関与するものなど）における組織リモデリングの間に、タンパク質分解性微小環境に対して反応することを可能にする。ＰＡＲファミリーのメンバーは、細胞外プロテアーゼ勾配のセンサーとして作用し、細胞が、組織リモデリングなどの広範な生理学的活動の間に、タンパク質分解性微小環境に反応することを可能にする。今日まで、４つの異なるＰＡＲ：ＰＡＲ１、ＰＡＲ２、ＰＡＲ３およびＰＡＲ４が同定されている。それらは、ヒトの身体全体にわたり発現される。トリプシン、トロンビン、Ｘａ、ＶＩＩａ、マトリプターゼ、ヘプシン、トリプターゼおよびＭＭＰ−１などのプロテアーゼは、個々のＰＡＲメンバーのＮ末端細胞外ドメインを切断し、それにより、繋留されたリガンドをアンマスクし、これが、受容体の外表面に結合して、細胞内Ｇタンパク質への膜貫通型シグナル伝達を活性化する。ＰＡＲ１は、元々、血小板において発見されており、この特殊化されたクラスのＧＰＣＲについてのプロトタイプとして役立つ。ＰＡＲ１は、それが受容体のＮ末端細胞外ドメイン中に位置する残基Ｒ４１−Ｓ４２の間でトロンビンにより切断された場合に、活性化される。ＰＡＲ３およびＰＡＲ４もまた、トロンビンにより活性化されるが、一方、ＰＡＲ２は、トリプシン／トリプターゼ／Ｘａ／ＶＩＩａ受容体として最もよく知られている。タンパク質分解による切断は、新たなＮ末端を露出させ、これが、通常とは異なる細胞内モードにおいて、受容体の本体に結合する。ＰＡＲ（例えばＳＦＬＬＲＮＰＡＲ１（配列番号８０）、ＴＦＬＬＲＮＰＡＲ１（配列番号７１）、ＰＲＳＦＬＬＲＮＰＡＲ１（配列番号７２）、ＳＬＩＧＲＬＰＡＲ２（配列番号７３）、ＡＹＰＧＫＦＰＡＲ４（配列番号７４）の新たに切断されたＮ末端 の第１の新しいアミノ酸に対応する合成ペプチドもまた、ＰＡＲに対する選択的な可溶性の分子間アゴニストとして機能することができる。
【０００７】
主要なトロンビン受容体であるＰＡＲ１は、内皮バリア機能、血管反応性（vasoreactivity）、内膜過形成、炎症、および恒常性を含む、心血管系の広範な生理学的および病理学的プロセスに影響を及ぼすことが知られている（Ossovskaya et al., Physiol Rev 2004, 84:579-621）。ＰＡＲ１は、in vitroで内皮細胞の増殖および遊走のメディエーターであり、発達中のマウスにおける血管新生のために必須である。ＰＡＲ１欠損マウスは、不完全な血管形成のために、妊娠中期（Ｅ９．５）において胎仔の半分の死亡をもたらす。驚くべきことに、ＰＡＲ１欠損マウスは、血小板機能の表現型の変化は有さず、このことが、ＰＡＲ４の発見につながった。ヒトにおける場合とは異なり、ＰＡＲ４は、マウスの血小板においては主要なトロンビン受容体であり、ＰＡＲ４欠損マウスは、トロンビンに対してシグナル応答しない。トリプシン様プロテアーゼの細胞表面受容体であるＰＡＲ２は、炎症性細胞、間葉系細胞（例えば線維芽細胞、筋線維芽細胞、平滑筋細胞）、間質細胞、内皮, 肝細胞、星状細胞、ケラチノサイト、膵細胞、神経細胞、心臓細胞、ならびに肺、腸、および肝胆道を含む上皮において広く発現される。ＰＡＲ２は、皮膚、関節、肺、脳、胃腸管および肝臓、ならびに血管系の多くの急性および慢性の炎症性疾患において重要な役割を果たし、肝臓、肺、腎臓および他の線維性疾患、アトピー性皮膚炎、慢性および急性の疼痛状態、掻痒、および肺動脈性高血圧症の進行に関連付けられている。ＰＡＲ３の機能的役割は不明であり、合成のＰＡＲ３に繋留されたリガンドＴＦＲＧＡＰ（配列番号７５）は、検出可能な下流のシグナル伝達を刺激しない。ＰＡＲはまた、機能的なホモダイマー／オリゴマー、およびヘテロダイマー／オリゴマーを形成することが示されている。ＰＡＲ１およびＰＡＲ３は、ＰＡＲ４のためのコファクターとして役立つことができ、ＰＡＲ１は、ＰＡＲ２をトランス活性化することができる（Kaneider et al., Nat. Immunol. 2007, 8:1303-12）。
【０００８】
各々のＰＡＲは、Ｇタンパク質の区別し得るサブセットにカップリングする。例えば、ＰＡＲ１は、Ｇα−サブユニットＧｑ、ＧｉおよびＧ１２／１３とカップリングし、これらは、異なるプロテアーゼにより個別的に活性化される。トロンビンは、３つ全てのヘテロ三量体サブユニットを同時に活性化することができ、一方、ＭＭＰ−１は、より選択的にＧ１２／１３シグナル伝達を活性化する。ＰＡＲ１−Ｇｑは、Ｃａ２＋を動態化するｌｎｓＰ３のホスホリパーゼＣ−β生成、およびタンパク質キナーゼＣ−α（ＰＫＣα）を活性化するジアシルグリセロール（ＤＡＧ）を刺激する。これらが次いで、ホスホリパーゼＡ２およびホスホリパーゼＤを活性化する。Ｇ１２／１３は、細胞の形状変化、遊走、およびｒｈｏ依存的な癌化において主要な役割を果たす。ＰＡＲ２は、Ｇｑ、Ｇｉおよびベータ−アレスチンシグナル伝達を刺激し得る。先に、ＰＡＲ１−ＰＡＲ２ヘテロダイマーに関してＧ１２／１３からＧｉへのＧタンパク質シグナル伝達のスイッチが起こることが、内皮バリア機能の維持に関与していることが示されている。Ｇｉは、ｒａｃ、ＰＩ３Ｋの活性化、およびアデニル酸シクラーゼの阻害およびｃＡＭＰの抑制に関与している。ＰＡＲ１およびＰＡＲ２が、どのようにしてＥＲＫ１／２などのＭＡＰキナーゼカスケードのメンバーを調節するかは、まだよく理解されていない。
【発明の概要】
【０００９】
PEPDUCINS（商標）と称される細胞浸透性ペプチドは、膜浸透性の疎水性部分を野生型ＧＰＣＲから誘導されるペプチドに付着させて、それにより、特異的な受容体−Ｇタンパク質シグナル伝達経路に対する人工のアゴニストおよび／またはアンタゴニストを生成することにより考案された（Covic L. et al. 2002, PNAS 99: 643-48；米国特許第6,864,229号；同第7,696,168号；同第8,389,480号；これらの各々は、本明細書において参照することにより援用される）。これらの脂質付加されたペプチドまたはポリペプチド（「リポペプチド」）は、膜を迅速にフリッピング（flip）するかまたは越えて、高度に特異的な様式において、すなわち、アロステリックな機構によるそれらのコグネートな受容体についての高い選択性により受容体−Ｇタンパク質シグナル伝達を妨害する能力を有する。ＰＡＲ、例えばＰＡＲ１、ＰＡＲ２およびＰＡＲ４についてのリポペプチド、コレシストキニンＡおよびＢ（ＣＣＫＡ、ＣＣＫＢ）、ソマトスタチン−２（ＳＳＴＲ２）、メラノコルチン−４（ＭＣ４Ｒ）、グルカゴン様ペプチド−１受容体（ＧＬＰ−１Ｒ）、およびＰ２Ｙ１２ＡＤＰ受容体が作られており、それらが由来する受容体のアゴニストおよび／またはアンタゴニストとして作用する。これらの組成物は、タンパク質ファミリーＰＡＲを含む広範なＧＰＣＲの活性を活性化または阻害するために有用である。ヒトＰＡＲは、ＰＡＲ１（Genbankアクセッション番号AF019616）、ＰＡＲ２（Genbankアクセッション番号XM003671）、ＰＡＲ３（Genbankアクセッション番号NM004101）、およびＰＡＲ４（Genbankアクセッション番号NM003950.1）を含み、これらは、本明細書において参照することにより援用される。
【００１０】
PEPDUCINs（商標）は、ＰＡＲファミリーのメンバーについて顕著かつ実質的なアゴニスト効果を有しない効果的なアンタゴニストとして用いられてきたが、一方で、受容体−Ｇタンパク質共役の機構、および受容体とＧタンパク質との間の選択的な接触に対するその関与をさらに研究するため、ならびに、ＧＰＣＲが関連付けられる多様な疾患および状態の処置および／または予防のための治療剤を作るために、より効果的なＰＡＲ２アンタゴニストについての必要性がなお存在する。候補のpepducinsは、疎水性の第２のドメインを、多かれ少なかれ、ｉ３ループなどのインターフェイス接触のいずれかを担う可能性が高いＧＰＣＲセグメントと、ＴＭ６およびＴＭ５を含むその隣接領域とを含む第１のドメインに付着させること、ならびに／または、受容体中の類似のループ／ＴＭセグメントを潜在的に置き換えるかまたはこれに挿入して、それにより受容体−Ｇタンパク質シグナル伝達を修飾することにより構築される。
【００１１】
本開示は、全長ＰＡＲ２またはそのフラグメントの修飾に基づく新たなペプチドを提供する。ある態様において、ペプチドは、キメラポリペプチドである。新たなペプチドは、ＰＡＲ２により調節されるシグナル伝達イベントをターゲティングするために、ならびにＰＡＲ２に関連する疾患および状態の処置および／または予防のために有用である。例えば、本明細書におけるペプチドおよび組成物は、増大した、または異常なＰＡＲ２の活性またはシグナル伝達に関連する、あるいは増大した、または異常なＰＡＲ２プロテアーゼ活性に関連する疾患または状態を処置するために用いられる。本明細書におけるペプチドおよび組成物はまた、構成的なＰＡＲ２活性を処置するために用いることができる。
【００１２】
一側面において提供されるのは、ＰＡＲ２に対して実質的なアンタゴニスト効果を有し、実質的なアゴニスト効果を有さない、ペプチドおよびその組成物である。ある態様において、ペプチドは、ヒトＰＡＲ２配列のアミノ酸位置２７０〜２９０に対応するペプチドの領域において、１つ以上の点変異を含む。点変異は、置換、付加、または欠失のうちのいずれかであってよく、ここで、付加または欠失は、野生型配列において、変異の点での８個までの連続した残基の付加または欠失を含む。野生型ヒトＰＡＲ２配列は、以下に配列番号６９として提供される。本明細書において用いられる場合、句「野生型ヒトＰＡＲ２」とは、配列番号６９のヒトＰＡＲ２配列を指す。
【数１】
2018537529.tif 000003
【００１３】
別の側面において、ペプチドは、細胞膜を越えてのペプチドの通過を可能にする疎水性部分（例えば脂質部分、アシル部分、ステロイド部分、またはアミノ酸部分）を含む、リポペプチドである。
【００１４】
ある態様において、ペプチドは、配列：
Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８ＳＥＸ１１Ｘ１２Ｘ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６Ｘ１７ＫＸ１９（配列番号４３）を含み、ここで、Ｘ４〜Ｘ１９変数は、本明細書において定義されるとおりであり、野生型ヒトＰＡＲ２配列のアミノ酸残基２７３〜２８８に対応する。本明細書において提供される表１は、例示のペプチド配列を列記する。ある態様において、ペプチドは、配列番号１〜４１から選択されるアミノ酸配列を含む。ある態様において、ペプチドは、配列番号１〜４１のアミノ酸配列に対して約５０％〜約９９％相同な配列を含む。ある態様において、ペプチドは、配列番号１〜４１のアミノ酸配列に対して約５０％〜約９９％同一な配列を含む。
【００１５】
ある態様において、ペプチドは、配列番号４３のアミノ酸配列に対して約５０％〜約９９％相同な配列を含む。ある態様において、ペプチドは、配列番号４３のアミノ酸配列に対して約５０％〜約９９％同一な配列を含む。
【００１６】
ある態様において、ペプチドは、配列番号４１の配列を含み、ここで、アミノ酸配列は、位置Ｘ５およびＸ１５において変異を含み；およびここで、ペプチドは、少なくとも１５アミノ酸長である。
【００１７】
ある態様において、ペプチドは、配列番号４１の配列を含み、ここで、アミノ酸配列は、位置Ｘ５およびＸ１５において変異を、ならびにＸ１９およびＸ２０において追加のアミノ酸を含み、ここで、Ｘ２０は、疎水性アミノ酸またはＤ−アミノ酸である。
【００１８】
ある態様において、ペプチドは、配列番号４１の配列を含み、ここで、アミノ酸配列は、位置Ｘ５およびＸ１５において変異を、ならびにＸ１９およびＸ２０において追加のアミノ酸を含み、ここで、Ｘ１４およびＸ２０は、Ｄ−アミノ酸である。
【００１９】
別の側面において、ペプチドは、野生型ＰＡＲ２の変異フラグメントを含み、ここで、ペプチドは、配列中、少なくとも２個の連続したアミノ酸残基の少なくとも２つのセクションが、野生型ＰＡＲ２配列と共通する（shares）。ある態様において、少なくとも２個の連続したアミノ酸残基は、ヒトＰＡＲ２配列のアミノ酸位置２７０〜２９０に対応するペプチドの位置において見出され、ここで、前記のＰＡＲ２の変異フラグメント中の少なくとも１つの変異は、ヒトＰＡＲ２配列の位置２７２、２７３、２７４、２７５、２７６、２７７、２８０、２８２、２８３、２８４、２８５、２８６、２８８、および／または２８９に対応するアミノ酸位置にある。少なくとも２個の連続したアミノ酸の追加のセクションもまた企図される。例えば、ペプチドは、少なくとも２個の連続したアミノ酸の３つのセクション；少なくとも２個および少なくとも３個の連続したアミノ酸の１つのセクション；少なくとも３個の連続したアミノ酸の２つのセクション；少なくとも３個の連続したアミノ酸の３つのセクション；少なくとも３個の連続したアミノ酸の２つのセクションおよび 少なくとも２個の連続したアミノ酸の１つのセクション；少なくとも３個の連続したアミノ酸の１つのセクションおよび少なくとも４個の連続したアミノ酸の１つのセクション；少なくとも３個の連続したアミノ酸の１つのセクション、少なくとも４個の連続したアミノ酸の１つのセクション、および少なくとも２個の連続したアミノ酸の１つのセクション；少なくとも４個の連続したアミノ酸の２つのセクション；少なくとも４個の連続したアミノ酸の１つのセクション、少なくとも６個の連続したアミノ酸の１つのセクションを有していてもよい。連続したアミノ酸のセクションは、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０アミノ酸残基により分離される。
【００２０】
ある態様において、ペプチドは、野生型プロテアーゼ活性化受容体２（ＰＡＲ２）の変異フラグメントを含み、ここで、ペプチドは、配列中、少なくとも３個の連続したアミノ酸残基が、ヒトＰＡＲ２配列のアミノ酸位置２７０〜２９０と共通し、ここで、前記のＰＡＲ２の変異フラグメント中の少なくとも１つの変異は、ヒトＰＡＲ２配列の位置２７２、２７３、２７４、２７５、２７６、２７７、２８０、２８２、２８３、２８４、２８５、２８６、２８８、および／または２８９に対応するアミノ酸位置にある。
【００２１】
別の側面において、本明細書において記載されるペプチドおよび薬学的に許容し得る賦形剤を含む医薬組成物が提供される。ある態様において、医薬組成物は、経口、エアロゾル、鼻、局所、直腸、膣または非経口投与、または静脈内、皮下、皮内、または筋肉内注射のために好適である。
【００２２】
さらに別の側面において、本明細書において記載されるペプチドおよび組成物を用いて多様な状態または障害を処置する方法が提供される。ある態様において、ペプチドまたはその組成物の治療有効量を、本明細書において記載されるような障害または状態を処置および／または予防するために、それを必要としている対象に投与する。例えば、本明細書におけるペプチドおよび組成物は、増大した、または異常なＰＡＲ２の活性またはシグナル伝達に関連する、あるいは増大した、または異常なＰＡＲ２プロテアーゼ活性に関連する疾患または状態を処置するために用いられる。本明細書におけるペプチドおよび組成物はまた、構成的なＰＡＲ２活性を処置するために用いることができる。例示の障害または状態は、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、アトピー性皮膚炎（ＡＤ、湿疹）、腎線維症、アルコール性脂肪性肝炎、臓器の線維症、腎線維症、骨髄線維症、肺動脈性高血圧症（ＰＡＨ）、肺線維症、掻痒症（pruritis）（掻痒（itch））、膵炎、慢性腎疾患、腎炎、多発性硬化症、がん、白血病、メラノーマ、炎症性の障害および状態、敗血症、炎症関連ＣＮＳ障害、気管支炎、喘息、糖尿病、糖尿病およびＮＡＳＨの合併症、肥満、メタボリックシンドローム、線維性疾患、心臓線維症、肺線維症、炎症性腸疾患、クローン病、過敏性腸症候群、硬変、関節炎、間接線維症、ケロイド、骨髄線維症、全身性線維症、強皮症、乾癬、蕁麻疹、膿痂疹、発疹、および酒さを含む。
【００２３】
ペプチドは、多様な状態または障害の処置における使用のために、他の医薬剤（例えばペプチド、低分子）と組み合わせることができる。
【００２４】
ある態様において、本明細書において記載されるペプチドは、グルカゴン様ペプチド（ＧＬＰ）−１受容体アゴニストと組み合わせて用いてもよい。かかる組み合わせは、例えば、ＮＡＳＨ、糖尿病、糖尿病およびＮＡＳＨの合併症、ならびに他の代謝障害を処置するために有用であるか、あるいは、膵炎または炎症の副作用を抑制するための抗炎症剤として有用である。ＧＬＰ−１受容体アゴニストの非限定的な例は、リラグルチド（VICTOZA（登録商標））、リキシセナチド、およびエキセナチドを含む。ある態様において、本明細書において記載されるペプチドは、リラグルチド、リキシセナチド、またはエキセナチドと組み合わせて用いてもよい。
【００２５】
ある態様において、本明細書において記載されるペプチドは、ピルフェニドンまたはニンテダニブと組み合わせて用いてもよい。かかる組み合わせは、例えば、特発性肺線維症（ＩＰＦ）または他の線維化障害を処置するために有用である。
【００２６】
さらなる側面において、本明細書において提供されるのは、本明細書において記載されるとおりのペプチドまたは組成物を含むキットである。
【００２７】
本発明の１つ以上の態様の詳細は、以下の付随する説明において記載される。本発明の他の特徴、目的および利点は、説明から明らかとなるであろう。明細書および添付の請求の範囲において、単数形態はまた、文脈が明らかに別段に指示しない限り、複数を含む。別段に定義されない限り、本明細書において用いられる全ての技術および科学用語は、本発明が属する分野における当業者により一般的に理解されるものと同じ意味を有する。矛盾する場合、定義を含む本明細書が支配する。加えて、材料、方法および例は、単に説明的なものであり、限定的であることを意図しない。本明細書において引用される全ての特許および刊行物は、適用可能な法律により許される程度まで、本明細書において参照することにより援用される。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１】図１Ａ〜１Ｂ。オスの肥満−糖尿病（ｄｂ／ｄｂ） マウス、６〜８週齢を、Charles River Labs.から購入した。ｄｂ／ｄｂマウスは、糖尿病、肥満および脂質異常症のためのモデルとして役立つレプチン欠損動物である。動物を、第２日における血中グルコースおよび体重により無作為化し、通常の固形試料を自由に食べさせた。第０日から処置を開始し、動物に、毎日７〜１０ＡＭに皮下（ＳＣ）注射（５ｍＬ／ｋｇ）を行った。第０、７、１４および２１日に、ＨｂＡ１ｃをモニタリングした。マウス（ｎ＝１０）を、毎日、１０ｍｇ／ｋｇのＮ−パルミトイル化SEQ70（PZ-235）またはビヒクル（「Ｖｅｈ」）のいずれかで処置した。摂食量（８±２ｇ／日／マウス）および体重増加量（第０日における４０±１ｇが第２１日には４７±１ｇまで増加した）は、処置群の間で３週間の期間にわたって有意には異ならなかった。非常に予想外なことに、PZ-235で処置した糖尿病マウスは、３週目のエンドポイントにおいてビヒクル群と比較して高度に有意（Ｐ＜０．００１）な０．８％の平均糖化ヘモグロビン（ＨｂＡ１ｃ）レベルの低下を有した。ビヒクル群の動物は、ビヒクル処置マウスにおいて、３週間の期間にわたって、４．７％から７．４％へのＨｂＡ１ｃの平均値の増加を有し、一方、PZ-235処置動物のＨｂＡ１ｃレベルは、４．８％から６．６％までのみ増大した。ＨｂＡ１ｃレベルは、長期の血中グルコースレベルを反映する。PZ-235によるこの予想外の結果は、ｉ３−ループ由来のペプデュシンによるＰＡＲ２の阻害が、重篤な糖尿病のセッティングにおいて、比較的短い期間（例えば３週間の処置）において、平均グルコースレベルを低下させることに対して、顕著な効果を有することを示すであろう。
【００２９】
【図２】図２．図１Ａおよび１Ｂにおける実験からの糖尿病マウスの朝の血中グルコースを、週３回測定した。図２において示すとおり、平均の基線（朝）グルコースレベルは、ビヒクル対照群において漸増した（１９ｍｍｏｌ／Ｌが２６ｍｍｏｌ／Ｌまで増大した）。PZ-235処置コホートにおいては、朝の血中グルコースレベルは相対的に低下し、このことは、図１Ａおよび１Ｂにおいて観察されたＨｂＡ１ｃに対する有益な効果と一致する。
【００３０】
【図３】図３．第１、８および２２日に、糖尿病マウスの血中グルコースプロフィールをモニタリングした。図３において示すとおり、平均血中グルコースは、PZ-235処置動物において、対照と比較して、初めの６時間の間に、一貫して２ｍｍｏｌ／Ｌ低下した。
【００３１】
【図４】図４Ａ〜４Ｂ．インスリン抵抗性は、２型糖尿病（Ｔ２ＤＭ）に関して、メタボリックシンドロームを定義する、重要な病因性の異常である。肥満により誘導されるインスリン耐性は、メタボリックシンドロームおよびＴ２ＤＭの両方の根底にあるドミナントな要因である。肥満−糖尿病ｄｂ／ｄｂマウスは、速やかに重篤なインスリン抵抗性となり、これは、血漿インスリンの大幅な増加と、同時のグルコースの増加により反映される。３週間の実験の終了時に、全血からの血漿を、糖尿病マウスから採取した。図４Ａおよび４Ｂにおいて示されるとおり、PZ-235処置動物において、対照群と比較して、顕著な４５％の平均血漿インスリンの低下（図４Ａ）およびグルカゴンレベルの２２％の増大（図４Ｂ）があった。この予想外の結果は、PZ-235により例示されるようなＰＡＲ２阻害剤が、糖尿病の動物におけるインスリンレベルを改善すること、および類似のＰＡＲ２ペプデュシンが、糖尿病のヒトにおいてインスリン抵抗性を改善することにおいて有益な効果をもたらし得ることを、初めて示すものである。
【００３２】
【図５】図５Ａ〜５Ｂ．糖尿病マウスの血漿トリグリセリドレベルを、基線において、および３週間のPZ-235（対ビヒクル）による処置の後で、測定した。図５Ａおよび５Ｂにおいて示すとおり、PZ-235処置動物において、対照動物と比較して、高度に有意（Ｐ＜０．０１）な０．７ｍｍｏｌ／Ｌの平均血漿トリグリセリド（ＴＧ）の低下があった。
【００３３】
【図６】図６．糖尿病マウスの肝臓トリグリセリドレベルを、３週間のPZ-235（対ビヒクル）による処置の後で、測定した。３週間の実験の終了時において、糖尿病マウスから肝臓を単離し、急速凍結し、肝臓トリグリセリドを測定した。図６において示すとおり、３週間のPZ-235による糖尿病マウスの処置の後で、対照動物と比較して、有意（Ｐ＜０．０５）な１５％の肝臓トリグリセリド低下があった。
【発明を実施するための形態】
【００３４】
定義
別段に定義されない限り、本明細書において用いられる全ての技術および科学用語は、当業者により一般的に理解されるものと同じ意味を有する。以下の定義は、本願の開示および請求の範囲の解釈を補助するために提供される。本セクションにおける定義が他の場所における定義と一致しない場合は、本セクションにおいて記載される定義が支配する。
【００３５】
本明細書において用いられる場合、用語「約（about）」または「約（approximately）」は、数と組み合わせて用いられる場合、参照される数の１、３、５、１０または１５％以内の任意の数を指す。
【００３６】
本明細書において用いられる場合、「膜近傍」とは、膜に近いことを意味する。
【００３７】
本明細書において用いられる場合、用語「ペプチド」または「ポリペプチド」とは、アミド結合（別名ペプチド結合）により直鎖状に連結されたモノマー（アミノ酸）からなる分子を指す。用語「ポリペプチド」とは、２個以上のアミノ酸の任意の鎖を指し、生成物の特定の長さを指さない。「ペプチド」または「ポリペプチド」とは、本明細書において用いられる場合、天然の生物学的ソースから誘導されたものであっても、組み換え技術により生成されたものであってもよいが、必ずしも指定された核酸配列から翻訳されたものではない。それは、化学合成によりものを含む任意の様式において生成される。本発明のポリペプチド中のアミノ酸の１つ以上は、例えば、炭水化物基、リン酸基、ファルネシル基、イソファルネシル基、脂肪酸基、アシル基（例えばアセチル基）、抱合のためのリンカー、官能化、または他の既知の保護基もしくはブロッキング基などの化学的実体の付加により、修飾されていてもよい。ある態様において、ペプチドの修飾は、より安定なペプチド（例えばin vivoでのより長い半減期）をもたらす。
【００３８】
用語「アミノ酸」とは、アミノ基およびカルボキシル基の両方を含む分子を指す。ある態様において、アミノ酸は、アルファ−アミノ酸である。ある態様において、アミノ酸は、天然のアミノ酸である。ある態様において、アミノ酸は、非天然のアミノ酸である。多くの既知の非天然のアミノ酸が存在し、それらのうちの任意のものを、本発明のペプチド中に含めることができる。例えば、Chemistry and Biochemistry of the Amino Acids（G. C. Barrett編、Chapman and Hall、1985年）中のS. Hunt、The Non-Protein Amino Acidsを参照。
【００３９】
例示のアミノ酸は、限定することなく、アルファ−アミノ酸、例えばペプチド中に見出される２０個の一般的に天然に存在するアルファアミノ酸のＤ−およびＬ−異性体、２０個の一般的に天然に存在するアミノ酸ではない天然のアミノ酸、および非天然のアルファ−アミノ酸を含む。本発明のペプチドの構築において用いられるアミノ酸は、有機合成により調製されても、他の経路（例えば天然のソースの分解または天然のソースからの単離など）により得られてもよい。アミノ酸は、市販のものであっても、合成されてもよい。疎水性側鎖を有するアミノ酸は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、ＴｒｐおよびＴｙｒを含む。ある態様において、疎水性側鎖を有するアミノ酸は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、ＶａｌおよびＰｈｅを含む。ある態様において、疎水性側鎖を有するアミノ酸は、Ａｌａ、Ｉｌｅ、ＬｅｕおよびＶａｌを含む。極性側鎖を有するアミノ酸は、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｈｉｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ｔｒｐを含む。ある態様において、極性側鎖を有するアミノ酸は、Ａｓｎ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｍｅｔ、ＳｅｒおよびＴｈｒを含む。芳香族側鎖を有するアミノ酸は、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、およびＨｉｓを含む。疎水性芳香族側鎖を有するアミノ酸は、Ｐｈｅ、Ｔｙｐ、およびＴｙｒを含む。荷電した側鎖を有するアミノ酸は、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、ＨｉｓおよびＬｙｓを含む。負に荷電した側鎖は、ＡｓｐおよびＧｌｕを含む。正に荷電した側鎖は、Ａｒｇ、ＨｉｓおよびＬｙｓを含む。中性のアミノ酸は、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｍｅｔ、Ｇｌｙ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｔｙｒ、ＡｓｎおよびＧｌｎからなる群より選択される。
【００４０】
本明細書において用いられる場合、用語「投与」、「投与すること」などは、医薬組成物を対象に提供することに関して用いられる場合、一般に、剤、例えばＰＡＲ２シグナル伝達経路のアゴニストまたはアンタゴニストを、適切な送達ビヒクルと組み合わせて含む、１つ以上の医薬組成物を、投与された化合物が、当該化合物がそのために投与された意図される生物学的効果のうちの１つ以上を達成するような任意の手段により、対象に提供することを指す。非限定的な例として、組成物は、非経口、皮下、静脈内、冠状動脈内（intracoronary）、直腸、筋肉内、腹腔内、経皮、または頬側の送達の経路で投与することができる。
【００４１】
一態様において、剤、例えばＰＡＲ２シグナル伝達経路のアゴニストまたはアンタゴニストの、患者への「投与」は、制御放出、すなわち、同じ量の活性成分を含む即時放出処方物が同じ期間の間に放出するであろうものよりも、持続的かつ調節された様式における、長期間にわたる、処方物からの活性成分の放出を必要とする。投与される投与量は、レシピエントの年齢、健康、体重、および／または血栓性疾患の状態、および／または他の関連するリスク要因、併用治療がある場合はその種類、処置の頻度、および／または所望される効果の性質に依存するであろう。
【００４２】
本明細書において用いられる場合、「アゴニスト」とは、任意の天然または合成のペプチド、分子、またはそれらの組み合わせであって、標準的なバイオアッセイにおいて、またはin vivoで、または治療有効用量において用いられた場合に、生物学的活性を、対照試料（例えばペプチドアゴニストを含まないバッファーまたは試料）の基線より高く、少なくとも約１．５倍、約１．８倍、約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約７倍、約１０倍、約２０倍、約５０倍、または約１００倍、またはそれより高く増大させるものを指す。
【００４３】
「部分アゴニスト」とは、任意の天然または合成のペプチド、分子、またはそれらの組み合わせであって、生物学的活性を、標準的なバイオアッセイにおいて、またはin vivoで、または治療有効用量において用いられた場合に、対照試料の基線より高く、少なくとも約１．２倍、約１．３倍、約１．４倍、または約１．５倍、またはそれより高く増大させるものを指す。
【００４４】
「アンタゴニスト」または「阻害剤」は、本明細書において交換可能に用いることができ、任意の天然または合成のペプチド、分子、またはそれらの組み合わせであって、標準的なバイオアッセイにおいて、またはin vivoで、または治療有効用量において用いられた場合に、標的の生物学的活性を、少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９８％、または約１００％妨害するものを指す。
【００４５】
本明細書において用いられる場合、「調節する（modulate）」とは、アンタゴニストとして作用すること、すなわち、部分的にまたは完全に、阻害するか、減少させるか、軽減するか、遮断するかまたは防止すること；あるいは、増大させるかまたは刺激すること、すなわち、アゴニスト、部分アゴニストまたはインバースアゴニストとして作用することを意味する。調節は、直接的または間接的またはアロステリックなものであってよい。
【００４６】
ヒト野生型ＰＡＲ２は、Genbankアクセッション番号XM-003671を有し、これは、本明細書により参照することにより援用される。ヒトＰＡＲ２の配列は、配列番号３３として提供される。
【００４７】
本開示において、ＰＡＲファミリーメンバー一般、またはＰＡＲファミリーメンバーのうちの任意の個々のメンバー、例えばＰＡＲ２への言及は、全てのスプライスバリアント、変異体（これらに限定されないが、欠失、挿入、または多型、またはアミノ酸置換を含む）、アイソフォーム、およびこれらの相同体を指すものと理解される。
【００４８】
用語「患者」または「対象」は、本明細書において用いられる場合、任意の個々の生物を指す。例えば、生物は、霊長類（すなわち、例えばヒト）などの哺乳動物であってよい。さらに、生物は、飼育動物（すなわち、例えばネコ、イヌなど）、家畜（すなわち、例えばウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギなど）、または研究動物（すなわち、例えばマウス、ウサギ、ラット、モルモットなど）であってよい。
【００４９】
句「薬学的に許容し得る」は、本明細書において、健全な医学的判断の範囲内において、過剰な毒性、刺激、アレルギー応答、または他の問題もしくは合併症を伴うことなく、妥当な利益／リスク比と釣り合った、ヒトおよび動物の組織と接触しての使用のために好適な化合物、材料、組成物および／または製剤を指すために採用される。
【００５０】
本明細書において用いられる場合、「PEPDUCIN（商標）」および「リポペプチド」は、交換可能に用いられ、受容体からＧタンパク質へのシグナル転移の細胞内阻害剤として作用する、細胞浸透性ペプチドである。リポペプチドは、細胞内Ｇタンパク質共役受容体のループの脂質付加されたフラグメントを利用して、ターゲティングされた細胞−シグナル伝達経路におけるＧＰＣＲの作用を調節する。リポペプチドは、疎水性部分に繋留されたＧＰＣＲ 細胞内ループから誘導される短いペプチドを含む。この構造が、リポペプチドが細胞膜脂質二重層中に繋留されて、ユニークな細胞内アロステリック機構を介して、ＧＰＣＲ／Ｇタンパク質インターフェイスをターゲティングすることを可能にする。PEPDUCIN（商標）リポペプチドの例は、ＰＣＴ特許出願番号WO2012/139137において、および米国特許第6,864,229号；同第8,324,172号；同第8,354,378号；同第8,389,480号；同第8,440,627号；同第8,563,519号において記載され、これらの各々は、本明細書において参照することにより援用される。
【００５１】
用語「治療有効量」は、本明細書において用いられる場合、組織、系、動物またはヒトにおいて、研究者、獣医師、医師、または他の臨床家により求められている生物学的または医学的応答を誘発する、活性なペプチドまたはその組成物の量を意味する。
【００５２】
本明細書において用いられる場合、「処置すること」または「処置」は、哺乳動物における、特にヒトにおける血栓性疾患状態の処置をカバーし、これらに限定されないが、以下を含む：（ａ）哺乳動物において疾患状態が起きることを予防すること（かかる哺乳動物が疾患状態に罹患しやすいが、まだそれを罹患していると診断されていない場合は特に）；（ｂ）疾患状態を阻害すること、すなわち、その発症を停止させること；および／または（ｃ）疾患状態を緩和すること、すなわち、疾患状態の退行を引き起こすこと。
【００５３】
用語「相同」とは、本明細書において用いられる場合、ヌクレオチドまたはアミノ酸配列のレベルにおいて高度に関連する核酸またはタンパク質を指す、当該分野において理解される用語である。互いに相同である核酸またはタンパク質は、相同体と称される。相同とは、２つの配列（すなわち、ヌクレオチド配列またはアミノ酸）の間の配列類似性の程度を指してもよい。本明細書において言及される相同性のパーセンテージの数値は、２つの配列の間で可能な最大の相同性、すなわち、２つの配列が最大数の一致する（相同な）位置を有するようにアラインメントされた場合のパーセント相同性を反映する。相同性は、公知の方法、以下において記載されるものなどにより容易に計算することができる：Computational Molecular Biology、Lesk, A. M.編、Oxford University Press、New York、1988年；Biocomputing: Informatics and Genome Projects、Smith, D. W.編、Academic Press、New York、1993年；Sequence Analysis in Molecular Biology、von Heinje, G.、Academic Press、1987年；Computer Analysis of Sequence Data、第Ｉ部、Griffin, A. M.およびGriffin, H. G.編、Humana Press、New Jersey、1994年；ならびにSequence Analysis Primer、Gribskov, M.およびDevereux, J.編、M Stockton Press、New York、1991年；これらの各々は、本明細書において参照することにより援用される。配列間の相同性を決定するために一般的に採用される方法は、これらに限定されないが、本明細書において参照することにより援用されるCarillo, H., and Lipman, D., SIAM J Applied Math., 48:1073 (1988)において開示されるものを含む。相同性を決定するための技術は、公共で利用可能なプログラム中にコードされている。２つの配列の間の相同性を決定するための例示のコンピューターソフトウェアは、これらに限定されないが、GCGプログラムパッケージ、Devereux, J., et al., Nucleic Acids Research, 12(1), 387 (1984))、BLASTP、BLASTNおよびPASTA Atschul, S. F. et al., J Molec. Biol., 215, 403 (1990)）を含む。
【００５４】
用語「相同」は、２つの配列の間の比較を指す。２つのヌクレオチド配列は、それらがコードするポリペプチドが、少なくとも２０個のアミノ酸の少なくとも１つの伸長部について、少なくとも約５０〜６０％同一、好ましくは約７０％同一である場合に、相同であるとみなされる。好ましくは、相同なヌクレオチド配列はまた、少なくとも４〜５個のユニークに特定されるアミノ酸の伸長部をコードする能力によっても特徴づけられる。これらのアミノ酸の互いに相対的な同一性およびおよそのスペーシングの両方を、ヌクレオチド配列が相同であるとみなすために考慮しなければならない。６０ヌクレオチド長未満のヌクレオチド配列については、相同性は、少なくとも４〜５個のユニークに特定されるアミノ酸の伸長部をコードする能力により決定される。
【００５５】
本明細書において用いられる場合、用語「同一性」とは、重合体分子の間、例えば核酸分子（例えばＤＮＡ分子および／またはＲＮＡ分子）の間、および／またはポリペプチド分子の間の、全体的な関連性を指す。２つのアミノ酸配列のパーセント同一性の計算は、例えば、最適な比較を目的として２つの配列をアラインメントすることにより行うことができる（例えば、第１および第２のアミノ酸配列の一方または両方において、最適なアラインメントのためにギャップを導入してもよく、比較を目的として非同一の配列を無視してもよい）。ある態様において、比較を目的としてアラインメントされる配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％である。次いで、対応する位置におけるアミノ酸を比較する。第１の配列中の位置が、第２の配列中の対応する位置として、同じアミノ酸により占められている場合、分子はその位置において同一である。２つの配列の間のパーセント同一性は、配列により共有される同一の位置の数の関数であり、これは、２つの配列の最適なアラインメントのために導入することが必要なギャップの数、各ギャップの長さを考慮する。配列の比較および２つの配列の間のパーセント同一性の決定は、数学的アルゴリズムを用いて達成することができる。例えば、パーセント同一性は、Henikoff S. and Henikoff J.G., P.N.A.S. USA 1992, 89: 10915-10919において記載されるBlosum62マトリックスなどの、類似性スコア付けマトリックスを用いる最適な配列のアラインメントにより計算することができる。Blosum62類似性マトリックスならびにNeedlemanおよびWunschのアルゴリズム（J. Mol. Biol. 1970, 48: 443-453）を用いる２つの配列のパーセント同一性および最適なアラインメントの計算は、Genetics Computer Group（GCG, Madison, Wl, USA）のＧＡＰプログラムを用いて、当該プログラムのデフォルトのパラメーターを用いて行うことができる。本発明に関するタンパク質配列および核酸配列についてのパーセント同一性を計算するための具体的なパラメーターは、以下に記載される。
【００５６】
「硬化剤（rigidifier）」または「ヘリックス破壊剤」部分は、アルファ−ヘリックス骨格の立体構造の規則性を破壊する。天然および非天然のアミノ酸は、硬化剤／ヘリックス破壊剤となり得る。硬化剤／ヘリックス破壊剤の非限定的な例は、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、ＴｒｐおよびＡｓｎなどのアミノ酸；プロリン側鎖を置換する４、５、６または７員環を有するプロリン相同体、例えばシクロブタン、シクロペンタン、シクロヘキサン、シクロヘプタン；ペプチド結合においてメチル−アミノ基を有するアミノ酸；１−アミノシクロプロパンカルボン酸（ＡＣＣ）；パラ−アミノ安息香酸（Paba）；アルファ置換されたチロシンアナログであってよい。
【００５７】
詳細な説明
PEPDUCIN（商標）リポペプチドは、ＧＰＣＲを阻害または活性化するために開発された細胞浸透性ペプチドまたはポリペプチドである（例えば米国特許第6,864,229号および同第7,696,168号を参照）。ある態様において、リポペプチドは、脂質二重層の内側表面においてＧＰＣＲを阻害する。本明細書において提供されるのは、新たなペプチドおよびリポペプチドは、プロテアーゼ活性化受容体２（ＰＡＲ２）膜貫通受容体をターゲティングする。本明細書において提供される新たなペプチドおよびリポペプチドは、他のPEPDUCIN（商標）の文献において先に教示されていない新たな変異を含む。研究は、ＰＡＲ２を、喘息（Schmidlin et al., J Immunol 2002, 169: 5315-5321）、関節炎（Ferrell et al., 2010）、痛覚過敏（Vergnolle et al., 2001）、神経性およびがん性疼痛（Lam et al., 2010）、がんの浸潤（Shi et al., Mol Cancer Res 2004, 2: 395-402）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、肺動脈性高血圧症（ＰＡＨ）、アトピー性皮膚炎（ＡＤ）、膵炎およびＩＢＤを含む広範な疾患において役割を果たすものと関連付けてい。広範な疾患は、ＰＡＲ２シグナル伝達を伴い、これは、炎症性、線維化性、および代謝性の反応を伴う多くのものを含んでいる。
【００５８】
ある態様において、本明細書において提供されるのは、以下を含むキメラポリペプチドである：（ａ）ヒトプロテアーゼ活性化受容体２（ＰＡＲ２）の変異した全長またはフラグメントを含む第１のドメイン；および（ｂ）前記第１のドメインに付着した（attached）第２のドメインであって、ここで、第２のドメインは、疎水性部分を含み；ここで、前記キメラポリペプチドは、有効なＰＡＲ２アンタゴニストである。ある態様において、疎水性部分は、天然に存在するか、または天然には存在しない。
【００５９】
ある態様において、本明細書において記載されるペプチドは、疎水性部分を含む。本明細書において用いられる場合、少なくとも１つの疎水性部分を含む本発明のペプチドは、リポペプチドと称される。例えば、本明細書においてペプチドに付着している疎水性部分は、脂質部分、アシル部分、ステロイド部分、またはアミノ酸部分であってよく、これらは、本明細書においてさらに説明される。本明細書において記載されるペプチドおよびリポペプチドは、典型的には、ＰＡＲ２の細胞内表面をターゲティングし、シグナル伝達の調節をもたらす。
【００６０】
ある態様において、ペプチドは、配列：
Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０Ｘ１１Ｘ１２Ｘ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６Ｘ１７Ｘ１８Ｘ１９Ｘ２０（配列番号４２）
を含み、ここで：
Ｘ４は、不在、Ａ、Ｇ、Ｐ、またはＮ末端リンカーであり；
Ｘ５は、Ｍ、Ｇ、Ｐ、Ｉ、Ｌ、Ｖ、ノルロイシン（Ｊ）、メチオニンスルホキシド（Ｍ（ＳＯ））、またはメチオニンスルホン（Ｍ（ＳＯ２））、またはＸ４が不在である場合は不在であり；
Ｘ６は、Ｄ、Ｅ、Ｈ、またはＸ４〜Ｘ５が不在である場合は不在であり；
Ｘ７は、Ｄ、Ｅ、Ｈ、またはＸ４〜Ｘ６が不在である場合は不在であり；
Ｘ８は、Ｎ、Ｄ、またはＥであり；
Ｘ９は、任意のアミノ酸であり；
Ｘ１０は、任意のアミノ酸であり；
Ｘ１１は、任意のアミノ酸もしくはそのＤ−アミノ酸、２−アミノイソ酪酸（Ｂ）、ヒドロキシプロリン（Ｈｙｐ）、Ｐ、プロリン相同体、Ｇ、または硬化剤／ヘリックス破壊剤部分であり；
Ｘ１２は、Ｋ、Ｒ、Ｐ、または不在であり；
Ｘ１３は、任意のアミノ酸またはシトルリン（Ｃｉｔ）であり；
Ｘ１４は、Ｋ、またはＸ１３とＸ１４との間のペプチド結合を切断不可能にする任意のアミノ酸、または正の電荷を減少させる任意のアミノ酸であり；
Ｘ１５は、任意のアミノ酸またはベータ−Ａであり；
Ｘ１６は、Ａ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ｑ、ベータ−Ａ、２−アミノイソ酪酸（Ｂ）、または不在であり；
Ｘ１７は、Ｉ、Ａ、ＬまたはＶであり；
Ｘ１８は、Ｋ、Ｉ、またはＦであり；および
Ｘ１９は、疎水性アミノ酸、そのＤ−アミノ酸、または不在である。
【００６１】
ある態様において、ペプチドは、配列：
Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８ＳＥＸ１１Ｘ１２Ｘ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６Ｘ１７ＫＸ１９（配列番号４３）
を含み、ここで：
Ｘ４は、不在、Ａ、Ｇ、Ｐ、またはＮ末端リンカーであり；
Ｘ５は、Ｍ、Ｇ、Ｐ、Ｉ、Ｌ、Ｖ、ノルロイシン（Ｊ）、メチオニンスルホキシド（Ｍ（ＳＯ））、またはメチオニンスルホン（Ｍ（ＳＯ２））、またはＸ４が不在である場合は不在であり；
Ｘ６は、Ｄ、Ｅ、Ｈ、またはＸ４〜Ｘ５が不在である場合は不在であり；
Ｘ７は、Ｄ、Ｅ、Ｈ、またはＸ４〜Ｘ６が不在である場合は不在であり；
Ｘ８は、Ｎ、Ｄ、またはＥであり；
Ｘ１１は、任意のアミノ酸もしくはそのＤ−アミノ酸、２−アミノイソ酪酸（Ｂ）、ヒドロキシプロリン（Ｈｙｐ）、Ｐ、プロリン相同体、Ｇ、または硬化剤／ヘリックス破壊剤部分であり；
Ｘ１２は、Ｋ、Ｒ、Ｐ、または不在であり；
Ｘ１３は、任意のアミノ酸またはシトルリン（Ｃｉｔ）であり；
Ｘ１４は、Ｋ、またはＸ１３とＸ１４との間のペプチド結合を切断不可能にする任意のアミノ酸、または正の電荷を減少させる任意のアミノ酸であり；
Ｘ１５は、任意のアミノ酸またはベータ−Ａであり；
Ｘ１６は、Ａ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ｑ、ベータ−Ａ、２−アミノイソ酪酸（Ｂ）、または不在であり；
Ｘ１７は、Ｉ、Ａ、ＬまたはＶであり；および
Ｘ１９は、疎水性アミノ酸、そのＤ−アミノ酸、または不在である。
【００６２】
ある態様において、ペプチドは、配列番号４３の配列を含み、ここで：
Ｘ４は、不在、Ａ、またはＮ末端リンカーであり；
Ｘ５は、Ｍ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、ノルロイシン（Ｊ）、Ｍ（ＳＯ）、Ｍ（ＳＯ２）、またはＸ４が不在である場合は不在であり；
Ｘ６は、Ｄ、Ｅ、Ｈ、またはＸ４〜Ｘ５が不在である場合は不在であり；
Ｘ７は、Ｄ、Ｅ、Ｈ、またはＸ４〜Ｘ６が不在である場合は不在であり；
Ｘ８は、Ｎ、Ｄ、またはＥであり；
Ｘ１１は、Ｋ、Ｐ、ｄＰ、２−アミノイソ酪酸（Ｂ）、ヒドロキシプロリン（Ｈｙｐ）、プロリン相同体、または硬化剤／ヘリックス破壊剤部分であり；
Ｘ１２は、Ｋまたは不在であり；
Ｘ１３は、Ｒ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、シトルリン（Ｃｉｔ）、または別のアミノ酸であり；
Ｘ１４は、Ｋ、ｄＫ、または別のアミノ酸であり；
Ｘ１５は、Ｑ、Ｓ、またはベータ−Ａであり；
Ｘ１６は、Ａ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、ベータ−Ａ、２−アミノイソ酪酸（Ｂ）、または不在であり；
Ｘ１７は、ＩまたはＡであり；
Ｘ１９は、疎水性アミノ酸、そのＤ−アミノ酸であり；および
Ｘ２０は、疎水性アミノ酸、そのＤ−アミノ酸である。
【００６３】
ある態様において、ペプチドは、配列：
ＡＩＸ６Ｘ７Ｘ８ＳＥＸ１１ＫＸ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６Ｘ１７Ｘ１８Ｘ１９（配列番号４４）
を含み、ここで、Ｘ（可変）は、本明細書において定義される。
【００６４】
ある態様において、ペプチドは、配列：
ＡＭＸ６Ｘ７Ｘ８ＳＥＸ１１ＫＸ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６Ｘ１７Ｘ１８Ｘ１９（配列番号４５）
を含み、ここで、Ｘ（可変）は、本明細書において定義される。
【００６５】
ある態様において、ペプチドは、配列：
ＧＬＸ６Ｘ７Ｘ８ＳＥＸ１１ＫＸ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６Ｘ１７Ｘ１８Ｘ１９（配列番号４６）
を含み、ここで、Ｘ（可変）は、本明細書において定義される。
【００６６】
ある態様において、ペプチドは、配列：
ＧＤＥＮＳＥＸ１１ＫＸ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６Ｘ１７Ｘ１８Ｘ１９（配列番号４７）
を含み、ここで、Ｘ（可変）は、本明細書において定義される。
【００６７】
ある態様において、ペプチドは、配列：
ＧＤＥＮＸ９ＥＸ１１ＫＸ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６Ｘ１７Ｘ１８Ｘ１９（配列番号４８）
を含み、ここで、Ｘ（可変）は、本明細書において定義される。
【００６８】
ある態様において、ペプチドは、配列：
ＧＬＨＨＤＸ９ＥＸ１１ＫＸ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６Ｘ１７Ｘ１８Ｘ１９（配列番号４９）
を含み、ここで、Ｘ（可変）は、本明細書において定義される。
【００６９】
ある態様において、ペプチドは、配列：
ＧＬＤＥＮＸ９ＥＸ１１ＫＸ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６Ｘ１７Ｘ１８Ｘ１９（配列番号５０）
を含み、ここで、Ｘ（可変）は、本明細書において定義される。
【００７０】
ある態様において、ペプチドは、配列：
ＧＬＸ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９ＥＸ１１ＫＸ１３Ｘ１４Ｘ１５ＡＩＫＸ１９（配列番号５１）
を含み、ここで、Ｘ（可変）は、本明細書において定義される。
【００７１】
ある態様において、ペプチドは、配列：
ＧＬＨＨＤＸ９ＥＸ１１ＫＸ１３Ｘ１４Ｘ１５ＡＩＫＸ１９（配列番号５２）
を含み、ここで、Ｘ（可変）は、本明細書において定義される。
【００７２】
ある態様において、ペプチドは、配列：
ＧＬＤＥＮＸ９ＥＸ１１ＫＸ１３Ｘ１４Ｘ１５ＡＩＫＸ１９（配列番号５３）
を含み、ここで、Ｘ（可変）は、本明細書において定義される。
【００７３】
ある態様において、ペプチドは、配列：
ＧＬＨＨＤＳＥＸ１１ＫＸ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６Ｘ１７Ｘ１８Ｘ１９（配列番号５４）
を含み、ここで、Ｘ（可変）は、本明細書において定義される。
【００７４】
ある態様において、ペプチドは、配列：
ＧＬＤＥＮＳＥＸ１１ＫＸ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６Ｘ１７Ｘ１８Ｘ１９（配列番号５５）
を含み、ここで、Ｘ（可変）は、本明細書において定義される。
【００７５】
ある態様において、ペプチドは、配列：
ＧＬＸ６Ｘ７Ｘ８ＳＥＸ１１ＫＸ１３Ｘ１４Ｘ１５ＡＩＫＸ１９（配列番号５６）
を含み、ここで、Ｘ（可変）は、本明細書において定義される。
【００７６】
ある態様において、ペプチドは、配列：
ＧＬＨＨＤＳＥＸ１１ＫＸ１３Ｘ１４Ｘ１５ＡＩＫＸ１９（配列番号５７）
を含み、ここで、Ｘ（可変）は、本明細書において定義される。
【００７７】
ある態様において、ペプチドは、配列：
ＧＬＤＥＮＳＥＸ１１ＫＸ１３Ｘ１４Ｘ１５ＡＩＫＸ１９（配列番号５８）
を含み、ここで、Ｘ（可変）は、本明細書において定義される。
【００７８】
ある態様において、ペプチドは、配列：
Ｘ４Ｘ５ＨＨＤＸ９Ｘ１０Ｘ１１Ｘ１２Ｘ１３Ｘ１４Ｘ１５ＡＩＫＸ１９（配列番号５９）
を含み、ここで、Ｘ（可変）は、本明細書において定義される。
【００７９】
ある態様において、ペプチドは、配列：
Ｘ４Ｘ５ＨＨＤＳＥＸ１１ＫＸ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６Ｘ１７Ｘ１８Ｘ１９（配列番号６０）
を含み、ここで、Ｘ（可変）は、本明細書において定義される。
【００８０】
ある態様において、ペプチドは、配列：
Ｘ４Ｘ５ＤＥＮＳＥＸ１１Ｘ１２Ｘ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６Ｘ１７Ｘ１８Ｘ１９（配列番号６１）
を含み、ここで、Ｘ（可変）は、本明細書において定義される。
【００８１】
ある態様において、ペプチドは、配列：
Ｘ４Ｘ５ＤＥＮＳＥＫＸ１２Ｘ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６Ｘ１７Ｘ１８Ｘ１９（配列番号６２）
を含み、ここで、Ｘ（可変）は、本明細書において定義される。
【００８２】
ある態様において、ペプチドは、配列：
Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０Ｘ１１Ｘ１２Ｘ１３Ｘ１４Ｘ１５ＡＩＫＸ１９（配列番号６３）
を含み、ここで、Ｘ（可変）は、本明細書において定義される。
【００８３】
ある態様において、ペプチドは、配列：
Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８ＳＥＸ１１Ｘ１２Ｘ１３Ｘ１４Ｘ１５ＡＩＫＸ１９（配列番号６４）
を含み、ここで、Ｘ（可変）は、本明細書において定義される。
【００８４】
ある態様において、ペプチドは、配列：
Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８ＳＥＸ１１Ｘ１２Ｘ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６Ｘ１７Ｘ１８Ｘ１９（配列番号６５）
を含み、ここで、Ｘ（可変）は、本明細書において定義される。
【００８５】
ある態様において、ペプチドは、配列：
Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０ＫＫＲＫＸ１５Ｘ１６Ｘ１７Ｘ１８Ｘ１９（配列番号６６）
を含み、ここで、Ｘ（可変）は、本明細書において定義される。
【００８６】
ある態様において、ペプチドは、配列：
Ｘ４Ｘ５ＤＸ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０Ｘ１１ＫＸ１３Ｘ１４Ｘ１５ＡＩＫＸ１９（配列番号６７）
を含み、ここで、Ｘ（可変）は、本明細書において定義される。
【００８７】
ある態様において、ペプチドは、配列：
Ｘ４ＬＸ６Ｘ７Ｘ８ＳＥＸ１１ＫＸ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６ＩＫＸ１９（配列番号６８）
を含み、ここで、Ｘ（可変）は、本明細書において定義される。
【００８８】
ある態様において、配列番号４２〜６８を含むペプチドは、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ１９および／またはＸ２０に位置する追加のアミノ酸残基をさらに含む。ある態様において、配列番号７０を含むペプチドは、Ｘ１９および／またはＸ２０に位置する追加のアミノ酸残基をさらに含む。ある態様において、ペプチドは、Ｘ３をさらに含み、これは、Ｘ４のＮ末端側に位置する。ある態様において、ペプチドは、Ｘ２Ｘ３をさらに含む。ある態様において、ペプチドは、Ｘ１Ｘ２Ｘ３をさらに含む。Ｘ１、Ｘ２およびＸ３は、本明細書において定義されるとおりである。ある態様において、ペプチドは、Ｘ２０が不在である場合、Ｘ１９を含まない。Ｘ１９は、Ｘ１８のＣ末端側に位置する。ある態様において、ペプチドは、Ｘ１９Ｘ２０をさらに含む。Ｘ１９およびＸ２０は、本明細書において定義されるとおりである。
【００８９】
ある態様において、ペプチドは、アミノ酸位置のいずれかの間に少なくとも１個の挿入を含む。ある態様において、ペプチドは、アミノ酸位置のいずれかの間に少なくとも２個の挿入を含む。ある態様において、挿入は、Ｐである。ある態様において、ペプチドは、アミノ酸位置のいずれかの間に少なくとも２個のＰの挿入を含む。ある態様において、ペプチドは、アミノ酸Ｘ５とＸ６；Ｘ１１とＸ１２；またはＸ１２とＸ１３との間に挿入を含む。ある態様において、挿入は、Ｐである。ある態様において、ペプチドは、アミノ酸Ｘ５とＸ６；Ｘ１１とＸ１２；またはＸ１２とＸ１３との間にＰの挿入を含む。
【００９０】
本明細書において一般的に定義されるとおり、Ｘ１は、Ｘ２のＮ末端側に位置し、ＲまたはＫであってよい。ある態様において、Ｘ１は、Ｒである。
【００９１】
本明細書において一般的に定義されるとおり、Ｘ２は、Ｘ３のＮ末端側に位置し、ＳまたはＴであってよい。ある態様において、Ｘ２は、Ｓである。
【００９２】
本明細書において一般的に定義されるとおり、Ｘ３は、Ｘ４のＮ末端側に位置し、Ｓ、Ｇ、Ｐ、Ｎ末端リンカー、またはヘリックス破壊剤であってよい。ある態様において、Ｘ３は、Ｓ、Ｇ、Ｐである。ある態様において、Ｘ３は、ｅＫおよびアミノヘキサン酸（Ａｈｘ）からなる群より選択されるＮ末端リンカーである。ある態様において、Ｘ３は、Ａｈｘである。ある態様において、Ｘ３は、ｅＫである。ある態様において、Ｘ３は、本明細書において定義されるようなヘリックス破壊剤である。ある態様において、Ｘ３は、Ｐである。ある態様において、Ｘ３は、Ｇである。
【００９３】
本明細書において一般的に定義されるとおり、Ｘ４は、Ｎ末端リンカー、Ａ、Ｇ、Ｐ、または不在である。ある態様において、Ｘ４は、ｅＫまたはＡｈｘである。ある態様において、Ｘ４は、Ａ、Ｇ、もしくはＰである。ある態様において、Ｘ４は、Ｇである。ある態様において、Ｘ４は、Ａである。ある態様において、Ｘ４は、Ｐである。ある態様において、Ｘ４は、不在である。
【００９４】
本明細書において一般的に定義されるとおり、Ｘ５は、Ｍ、Ｇ、Ｐ、Ｉ、Ｌ、Ｖ、ノルロイシン（Ｊ）、メチオニンスルホキシド（Ｍ（ＳＯ））、またはメチオニンスルホン（Ｍ（ＳＯ２））、または不在である。ある態様において、Ｘ５は、Ｍ、Ｇ、Ｐ、Ｉ、Ｌ、またはＶである。ある態様において、Ｘ４は不在であり、Ｘ５は、Ｍ、Ｇ、Ｐ、Ｉ、Ｌ、Ｖ、ノルロイシン（Ｊ）、メチオニンスルホキシド（Ｍ（ＳＯ））、またはメチオニンスルホン（Ｍ（ＳＯ２））である。ある態様において、Ｘ５は、ＬまたはＰ（すなわち、Ｘ５とＸ６との間の挿入）である。ある態様において、Ｘ５は、Ｌである。
【００９５】
ある態様において、Ｘ４およびＸ５は、不在である。ある態様において、Ｘ４およびＸ５は、いずれも存在する。ある態様において、ペプチドは、以下のアミノ酸を含む：Ｘ４は、Ｐであり、Ｘ５は、Ｌである。ある態様において、ペプチドは、以下のアミノ酸を含む：Ｘ４は、ｅＫ、Ａｈｘ、Ｇ、もしくはＰであり；Ｘ５は、Ｌである。ある態様において、ペプチドは、以下のアミノ酸を含む：Ｘ４は、Ｇであり、Ｘ５は、ＬまたはＰである。ある態様において、ペプチドは、以下のアミノ酸を含む：Ｘ４は、Ｇであり、Ｘ５は、Ｌである。ある態様において、ペプチドは、以下のアミノ酸を含む：Ｘ４は、Ａであり、Ｘ５は、Ｉである。ある態様において、ペプチドは、以下のアミノ酸を含む：Ｘ４は、Ａであり、Ｘ５は、Ｍである。ある態様において、ペプチドは、Ｘ４を含まず、Ｘ５は、Ｍ、Ｇ、Ｐ、Ｉ、Ｌ、またはＶである。
【００９６】
本明細書において一般的に定義されるとおり、Ｘ６は、Ｈ、Ｄ、Ｅ、またはＸ４〜Ｘ５が不在である場合は不在である。ある態様において、Ｘ６は、Ｈである。ある態様において、Ｘ６は、Ｄである。ある態様において、Ｘ６は、Ｅである。
【００９７】
本明細書において一般的に定義されるとおり、Ｘ７は、Ｈ、Ｄ、Ｅ、またはＸ４〜Ｘ６が不在である場合は不在である。ある態様において、Ｘ７は、Ｈである。ある態様において、Ｘ７は、Ｄである。ある態様において、Ｘ７は、Ｅである。
【００９８】
ある態様において、ペプチドは、Ｘ１〜Ｘ７を含まない。
【００９９】
本明細書において一般的に定義されるとおり、Ｘ８は、Ｄ、Ｅ、またはＮである。ある態様において、Ｘ８は、Ｎである。ある態様において、Ｘ８は、Ｄである。ある態様において、Ｘ８は、Ｅである。
【０１００】
ある態様において、ペプチドは、以下のアミノ酸を含む：Ｘ６は、Ｈ、Ｄ、またはＥであり、Ｘ７は、ＨまたはＥであり、Ｘ８は、ＤまたはＥである。ある態様において、Ｘ６は、Ｄであり、Ｘ７は、Ｈであり、Ｘ８は、Ｎである。ある態様において、ペプチドは、以下のアミノ酸を含む：Ｘ６は、Ｈであり、Ｘ７は、Ｈであり、Ｘ８は、Ｄである。ある態様において、Ｘ６は、Ｈであり、Ｘ７は、Ｈであり、Ｘ８は、Ｅである。ある態様において、Ｘ６は、Ｈであり、Ｘ７は、Ｈであり、Ｘ８は、Ｎである。ある態様において、Ｘ６は、Ｄであり、Ｘ７は、Ｅであり、Ｘ８は、Ｎである。ある態様において、Ｘ６は、Ｈであり、Ｘ７は、Ｅであり、Ｘ８は、Ｎである。
【０１０１】
本明細書において一般的に定義されるとおり、Ｘ９は、任意のアミノ酸である。ある態様において、Ｘ９は、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫである。ある態様において、Ｘ９は、ＳまたはＨである。ある態様において、Ｘ９は、ＳまたはＴである。ある態様において、Ｘ９は、ＲまたはＬである。
【０１０２】
本明細書において一般的に定義されるとおり、Ｘ１０は、任意のアミノ酸である。ある態様において、Ｘ１０は、ＥまたはＤである。ある態様において、Ｘ１０は、Ｅである。ある態様において、Ｘ１０は、Ｄである。
【０１０３】
本明細書において一般的に定義されるとおり、Ｘ１１は、任意のアミノ酸もしくはそのＤ−アミノ酸、２−アミノイソ酪酸（Ｂ）、ヒドロキシプロリン（Ｈｙｐ）、Ｐ、プロリン相同体、Ｇ、または硬化剤／ヘリックス破壊剤部分であってよい。ある態様において、Ｘ１１は、Ｋである。ある態様において、Ｘ１１は、２−アミノイソ酪酸（Ｂ）である。ある態様において、Ｘ１１は、硬化剤／ヘリックス破壊剤部分である。ある態様において、Ｘ１１は、Ｐまたはプロリン相同体である。ある態様において、Ｘ１１は、Ｐである。ある態様において、Ｘ１１は、Ｇである。ある態様において、Ｘ１１は、ｄＰまたはＨｙｐである。
【０１０４】
本明細書において一般的に定義されるとおり、Ｘ１２は、Ｋ、Ｒ、Ｐ、または不在であってよい。ある態様において、Ｘ１２は、Ｋである。ある態様において、Ｘ１２は、Ｒである。ある態様において、Ｘ１２は、Ｐである。ある態様において、Ｘ１２は不在（すなわち欠失）である。
【０１０５】
ある態様において、ペプチドは、以下のアミノ酸を含む：Ｘ１１は、Ｋであり、Ｘ１２は、Ｋである。ある態様において、ペプチドは、以下のアミノ酸を含む：Ｘ１１は、Ｂであり；Ｘ１２は、Ｋである。ある態様において、ペプチドは、以下のアミノ酸を含む：Ｘ１１は、Ｐ、ｄＰ、またはＨｙｐであり；Ｘ１２は、Ｋである。ある態様において、ペプチドは、以下のアミノ酸を含む：Ｘ１１は、Ｋ、Ｐ、ｄＰ、またはＨｙｐであり；Ｘ１２は、不在である。
【０１０６】
本明細書において一般的に定義されるとおり、Ｘ１３は、任意のアミノ酸またはシトルリン（Ｃｉｔ）であってよい。ある態様において、Ｘ１３は、シトルリンである。ある態様において、Ｘ１３は、任意の中性の芳香族アミノ酸である。ある態様において、Ｘ１３は、Ｒである。ある態様において、Ｘ１３は、Ｆ、Ｗ、またはＹである。ある態様において、Ｘ１３は、Ｙである。ある態様において、Ｘ１３は、Ｆである。ある態様において、Ｘ１３は、Ｗである。
【０１０７】
本明細書において一般的に定義されるとおり、Ｘ１４は、Ｋ、またはプロテアーゼによるＸ１３とＸ１４との間のペプチド結合の切断を不可能にする任意のアミノ酸、または正の電荷を減少させる任意のアミノ酸（すなわち、中性の、または負に荷電したアミノ酸）である。ある態様において、Ｘ１４は、Ｋである。プロテアーゼによるペプチド結合の切断を不可能にするアミノ酸は、Ｄ−アミノ酸、またはペプチド結合においてＮ−メチルを有するアミノ酸を含む。ある態様において、Ｘ１４は、任意のＤ−アミノ酸である。ある態様において、Ｘ１４は、ペプチド結合においてＮ−メチルを有するアミノ酸である。ある態様において、Ｘ１４は、正の電荷を減少させる任意のアミノ酸（すなわち、中性の、または負に荷電したアミノ酸）である。ある態様において、Ｘ１４は、ｄＫである。ある態様において、Ｘ１４は、Ｌ、Ｉ、またはＶである。ある態様において、Ｘ１４は、ｄＬ、ｄＩ、またはｄＶである。ある態様において、Ｘ１４は、正の電荷を減少させる任意のアミノ酸（すなわち、中性の、または負に荷電したアミノ酸）である。ある態様において、Ｘ１４は、中性のアミノ酸である。ある態様において、Ｘ１４は、負に荷電したアミノ酸である。ある態様において、Ｘ１４は、ＤおよびＥなどの負に荷電した側鎖である。ある態様において、Ｘ１４は、Ａ、Ｓ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｆ、Ｗ、Ｍ、Ｇ、Ｔ、Ｃ、Ｙ、Ｎ、およびＱから選択される中性の荷電した側鎖である。
【０１０８】
本明細書において一般的に定義されるとおり、Ｘ１５は、任意のアミノ酸、またはベータ−Ａである。ある態様において、Ｘ１５は、Ｑ、Ｎ、Ｈ、Ｓ、Ｔ、Ｙ、Ｃ、Ｍ、またはＷなどの極性アミノ酸である。ある態様において、Ｘ１５は、ＱまたはＳなどの極性アミノ酸である。ある態様において、Ｘ１５は、Ｗ、Ｙ、またはＦである。ある態様において、Ｘ１５は、Ｑ、Ｓ、またはＷである。ある態様において、Ｘ１５は、ベータ−Ａである。
【０１０９】
本明細書において一般的に定義されるとおり、Ｘ１６は、Ａ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ｑ、Ｎ、ベータ−Ａ、２−アミノイソ酪酸（Ｂ）、または不在（すなわち欠失）である。ある態様において、Ｘ１６は、不在である。ある態様において、Ｘ１６は、Ａ、ＢまたはＱである。ある態様において、Ｘ１６は、Ａである。ある態様において、Ｘ１６は、Ｂである。ある態様において、Ｘ１６は、Ｑである。
【０１１０】
本明細書において一般的に定義されるとおり、Ｘ１７は、Ｉ、Ａ、ＬまたはＶである。ある態様において、Ｘ１７は、ＩまたはＡである。ある態様において、Ｘ１７は、Ａである。ある態様において、Ｘ１７は、Ｉである。
【０１１１】
本明細書において一般的に定義されるとおり、Ｘ１８は、Ｋ、Ｉ、またはＦである。ある態様において、Ｘ１８は、ＫまたはＩである。ある態様において、Ｘ１８は、Ｉである。ある態様において、Ｘ１８は、Ｋである。ある態様において、Ｘ１８は、Ｆである。ある態様において、Ｘ１８は、Ｆではない。
【０１１２】
本明細書において一般的に定義されるとおり、Ｘ１９は、疎水性アミノ酸、そのＤ−アミノ酸、またはプロテアーゼによるＸ１８とＸ１９との間のペプチド結合の切断を不可能にする任意のアミノ酸、または不在。ある態様において、Ｘ１９は、プロテアーゼによるＸ１８とＸ１９との間のペプチド結合の切断を不可能にする任意のアミノ酸である。ある態様において、Ｘ１９は、Ｇ、Ｐ、Ａ、Ｉ、Ｌ、Ｖ、Ｆ、またはそれらのＤ−アミノ酸である。ある態様において、Ｘ１９は、Ｌ、Ｉ、Ｖ、ｄＬ、ｄＩ、またはｄＶである。
【０１１３】
本明細書において一般的に定義されるとおり、Ｘ２０は、Ｘ１９のＣ末端側にあり、疎水性アミノ酸、そのＤ−アミノ酸、プロテアーゼによるＸ１９とＸ２０との間のペプチド結合の切断を不可能にする任意のアミノ酸、または不在。ある態様において、Ｘ２０は、プロテアーゼによるＸ１９とＸ２０との間のペプチド結合の切断を不可能にする任意のアミノ酸である。ある態様において、Ｘ２０は、Ｇ、Ｐ、Ａ、Ｉ、Ｌ、Ｖ、Ｆ、またはそれらのＤ−アミノ酸である。ある態様において、Ｘ２０は、Ｌ、Ｉ、Ｖ、ｄＬ、ｄＩ、またはｄＶである。
【０１１４】
位置Ｘ１〜Ｘ２０におけるアミノ酸について列記される前述のおよびこの後の態様ならびに請求される態様のうちのいずれも、ヒトＰＡＲ２配列の位置２８０〜２８９に対応するアミノ酸に対して適用可能であり、逆もまた然りである。
【０１１５】
本明細書において言及される野生型ＰＡＲ２は、任意のソースに由来するものであってよい。ある態様において、野生型プロテアーゼ活性化受容体２（ＰＡＲ２）は、霊長類またはげっ歯類に由来するものである。ある態様において、野生型ＰＡＲ２は、サルに由来するものである。ある態様において、野生型ＰＡＲ２は、マウスまたはラットに由来するものである。ある態様において、野生型ＰＡＲ２は、ヒトに由来するものである。
【０１１６】
ある態様において、ペプチドは、配列番号１〜６８および７０から選択されるアミノ酸を含む。表１は、例示のペプチド配列を列記する。位置Ｘ１〜Ｘ２０は、ヒトＰＡＲ２配列の位置２７０〜２８９に対応する。野生型ヒトＰＡＲ２の位置２７４〜２８７において見出されるアミノ酸は、表１において提供される配列番号４１のＸ５〜Ｘ１８として示される。本明細書において用いられる場合、ｅＫは、イプシロンリジンであり、Ａｈｘは、アミノヘキサン酸であり、Ｂは、２−アミノイソ酪酸であり、Ｈｙｐは、ヒドロキシプロリンであり、Ｃｉｔは、シトルリンであり、βＡは、ベータ−アラニンであり、Ｊは、ノルロイシンである。Ｄ−アミノ酸は、１文字略号の前の小文字のｄで示される（例えばｄＫ、ｄＩ、ｄＰ）。ダッシュ（−）は、欠失を示す。
【表１−１】
2018537529.tif 000004
【表１−２】
2018537529.tif 000005
【０１１７】
ある態様において、ペプチドは、配列番号１〜６８および７０のアミノ酸配列のうちのいずれかに対して、少なくとも約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％相同である配列を含む。ある態様において、ペプチドは、配列番号１〜６８および７０のアミノ酸配列のうちのいずれかに対して約５０％〜約９９％、約６０％〜約９９％、約７０％〜約９９％、約７５％〜約９９％、約８０％〜約９９％、約８５％〜約９９％、約９０％〜約９９％、約９５％〜約９９％相同である配列を含む。
【０１１８】
ある態様において、ペプチドは、少なくとも１３アミノ酸長である。ある態様において、ペプチドは、少なくとも１５アミノ酸長である。ある態様において、ペプチドは、少なくとも２０アミノ酸長である。ある態様において、ペプチドは、少なくとも２５アミノ酸長である。ある態様において、ペプチドは、１３〜２５アミノ酸長である。ある態様において、ペプチドは、１３〜２０アミノ酸長である。ある態様において、ペプチドは、１３〜１８アミノ酸長である。ある態様において、ペプチドは、１５〜２５アミノ酸長である。ある態様において、ペプチドは、１５〜２０アミノ酸長である。ある態様において、ペプチドは、１５〜１８アミノ酸長である。ある態様において、ペプチドは、１６〜１８アミノ酸長である。ある態様において、ペプチドは、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４または２５アミノ酸長である。
【０１１９】
ある態様において、ペプチドは、少なくとも１個の非天然のアミノ酸を含む。ある態様において、ペプチドは、１個または２個の非天然のアミノ酸を含む。ある態様において、ペプチドは、少なくとも１個のＤ−アミノ酸を含む。ある態様において、ペプチド１個または２個のＤ−アミノ酸を含む。ある態様において、ペプチドは、１〜５個のＤ−アミノ酸を含む。ある態様において、ペプチドは、１〜１０個のＤ−アミノ酸を含む。ある態様において、ペプチドは、全てＤ−アミノ酸を含む。ある態様において、ペプチドは、分子量が少なくとも２０００Ｄａである。
【０１２０】
ある態様において、ペプチドは、配列番号１〜６８および７０のアミノ酸配列のうちのいずれかに対して、少なくとも約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％同一である配列を含む。ある態様において、ペプチドは、配列番号１〜６８および７０のアミノ酸配列のうちのいずれかに対して、約５０％〜約９９％、約６０％〜約９９％、約７０％〜約９９％、約７５％〜約９９％、約８０％〜約９９％、約８５％〜約９９％、約９０％〜約９９％、約９５％〜約９９％同一である配列を含む。
【０１２１】
ある態様において、ペプチドは、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸の変更（例えばアミノ酸置換、欠失および／または付加）を有する、配列番号１〜６８および７０のアミノ酸配列を含む。ある態様において、アミノ酸の変更は、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０アミノ酸が別のアミノ酸へと変異しているアミノ酸置換である。ある態様において、アミノ酸の変更は、野生型配列中の変異の点において１、２、３、４、５、６、７または８残基までの添加または欠失を含む、付加または欠失である。添加されるかまたは欠失する残基は、連続した残基であっても、非連続の残基であってもよい。
【０１２２】
別の側面において、ペプチドは、野生型ＰＡＲ２の変異フラグメントを含み、ここで、ペプチドは、配列中、少なくとも２個の連続したアミノ酸残基の少なくとも２つのセクションが、野生型ＰＡＲ２配列と共通する。ある態様において、少なくとも２個の連続したアミノ酸残基は、ヒトＰＡＲ２配列のアミノ酸位置２７０〜２９０に対応する野生型ＰＡＲ２のアミノ酸位置において見出され、ここで、前記のＰＡＲ２の変異フラグメント中の少なくとも１つの変異は、ヒトＰＡＲ２配列の位置２７２、２７３、２７４、２７５、２７６、２７７、２７８、２７９、２８０、２８１、２８２、２８３、２８４、２８５、２８６、２８７、２８８、および／または２８９に対応するアミノ酸位置にある。少なくとも２個の連続したアミノ酸の追加のセクションもまた企図される。ある態様において、ペプチドは、少なくとも２個の連続したアミノ酸の３つのセクション；少なくとも２個および少なくとも３個の連続したアミノ酸の１つのセクション；少なくとも３個の連続したアミノ酸の２つのセクション；少なくとも３個の連続したアミノ酸の３つのセクション；少なくとも３個の連続したアミノ酸の２つのセクションおよび 少なくとも２個の連続したアミノ酸の１つのセクション；少なくとも３個の連続したアミノ酸の１つのセクションおよび少なくとも４個の連続したアミノ酸の１つのセクション；少なくとも３個の連続したアミノ酸の１つのセクション、少なくとも４個の連続したアミノ酸の１つのセクション、および少なくとも２個の連続したアミノ酸の１つのセクション；少なくとも４個の連続したアミノ酸の２つのセクション；または、少なくとも４個の連続したアミノ酸の１つのセクションおよび少なくとも６個の連続したアミノ酸の１つのセクションを、野生型ＰＡＲ２配列と共に含む。連続したアミノ酸のセクションは、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２アミノ酸残基により分けられる。ある態様において、アミノ酸の連続したセクションを分けるアミノ酸残基は、野生型ＰＡＲ２配列の配列の対応する位置において見出されるものと同じ残基である。ある態様において、アミノ酸の連続したセクションを分けるアミノ酸残基は、野生型ＰＡＲ２配列の配列の対応する位置において見出される残基とは異なる。
【０１２３】
ある態様において、ペプチドは、野生型プロテアーゼ活性化受容体２（ＰＡＲ２）の変異フラグメントを含み、ここで、ペプチドは、配列中、少なくとも３個の連続したアミノ酸残基が、ヒトＰＡＲ２配列の位置２７０〜２９０に対応する位置における野生型ＰＡＲ２のアミノ酸と共通し、ここで、前記のＰＡＲ２の変異フラグメント中の少なくとも１つの変異は、ヒトＰＡＲ２配列の位置２８２に対応するアミノ酸位置におけるものである。
【０１２４】
ある態様において、ペプチドは、野生型プロテアーゼ活性化受容体２（ＰＡＲ２）の変異フラグメントを含み、ここで、ペプチドは、配列中、ヒトＰＡＲ２配列の位置２７０〜２９０に対応する位置において、少なくとも３個の連続したアミノ酸残基が、野生型ＰＡＲ２のアミノ酸と共通し、ここで、前記のＰＡＲ２の変異フラグメント中の少なくとも１つの変異は、ヒトＰＡＲ２配列の位置２８０に対応するアミノ酸位置におけるものである。
【０１２５】
ある態様において、アミノ酸位置における少なくとも１つの変異は、ヒトＰＡＲ２配列の位置２８０または２８２に対応するアミノ酸位置におけるものであるが、位置２８０または２８２の両方にはない。ある態様において、アミノ酸位置における少なくとも１つの変異は、ヒトＰＡＲ２配列の位置２８０および２８２の両方に対応するアミノ酸位置にある。
【０１２６】
ある態様において、前記のＰＡＲ２の変異フラグメントにおける少なくとも１つの変異は、ヒトＰＡＲ２配列の位置２７３に対応するアミノ酸位置におけるものである。
【０１２７】
ある態様において、前記のＰＡＲ２の変異フラグメントにおける少なくとも１つの変異は、ヒトＰＡＲ２配列の位置２７５、２７６、および／または２７７に対応するアミノ酸位置におけるものである。
【０１２８】
ある態様において、前記のＰＡＲ２の変異フラグメントにおける少なくとも１つの変異は、ヒトＰＡＲ２配列の位置２７３、２７４、２８２、および／または２８４に対応するアミノ酸位置におけるものである。
【０１２９】
ある態様において、前記のＰＡＲ２の変異フラグメントにおける少なくとも１つの変異は、ヒトＰＡＲ２配列の位置２７４、２７５、２７６、２７７、および／または２８４に対応するアミノ酸位置におけるものである。ある態様において、ペプチドは、ヒトＰＡＲ２配列の位置２８０に対応するアミノ酸位置において、さらに変異を含む。
【０１３０】
ある態様において、本明細書において記載されるペプチドは、ヒトＰＡＲ２配列の位置２８９に対応するアミノ酸位置において、さらに変異を含む。
【０１３１】
ある態様において、本明細書において記載されるペプチドは、ヒトＰＡＲ２配列の位置２８８に対応するアミノ酸位置において、さらに変異を含む。
【０１３２】
ある態様において、本明細書において記載されるペプチドは、ヒトＰＡＲ２配列の位置２８３に対応するアミノ酸位置において、さらに変異を含む。
【０１３３】
ある態様において、本明細書において記載されるペプチドは、ヒトＰＡＲ２配列の位置２８５に対応するアミノ酸位置において、さらに変異を含む。
【０１３４】
ある態様において、本明細書において記載されるペプチドは、ヒトＰＡＲ２配列の位置２８２に対応するアミノ酸位置において、さらに変異を含む。
【０１３５】
ある態様において、ＰＡＲ２の変異フラグメントは、ヒトＰＡＲ２配列の位置２７０〜２９０に対応するアミノ酸を有するＰＡＲ２配列を指す。ある態様において、本明細書において記載されるペプチドは、前記のＰＡＲ２の変異フラグメント中に、ヒトＰＡＲ２配列の位置２７３、２７４、２７５、２７６および／または２７７に対応する位置において、少なくとも１つの変異を含む。ある態様において、本明細書において記載されるペプチドは、前記のＰＡＲ２の変異フラグメント中に、ヒトＰＡＲ２配列の位置２７４、２８４または２８７に対応する位置において、少なくとも１つの変異を含む。ある態様において、ペプチドは、ヒトＰＡＲ２配列の位置２７３〜２７７に対応する位置において、配列ＡＩＨＨＤ（配列番号７６）を含む。ある態様において、ペプチドは、ヒトＰＡＲ２配列の位置２７３〜２７７に対応する位置において、配列ＡＩＤＥＮ（配列番号７７）を含む。ある態様において、ペプチドは、ヒトＰＡＲ２配列の位置２７３〜２７７に対応する位置において、配列ＧＬＨＨＤ（配列番号７８）を含む。ある態様において、ペプチドは、ヒトＰＡＲ２配列の位置２７３〜２７７に対応する位置において、配列ＧＬＤＥＮ（配列番号７９）を含む。ある態様において、本明細書において記載されるペプチドは、前記のＰＡＲ２の変異フラグメント中に、ヒトＰＡＲ２配列の位置２７３、２７４、２８２、および／または２８４に対応する位置において少なくとも１つの変異を含む。ある態様において、本明細書において記載されるペプチドは、前記のＰＡＲ２の変異フラグメント中に、ヒトＰＡＲ２配列の位置２７４、２７５、２７６、２７７、および／または２８４に対応する位置において少なくとも１つの変異を含む。ある態様において、本明細書において記載されるペプチドは、前記のＰＡＲ２の変異フラグメントにおいて、ヒトＰＡＲ２配列の位置２７５、２７６、および／または２７７に対応する位置において、少なくとも１つの変異を含む。ある態様において、本明細書において記載されるペプチドは、前記のＰＡＲ２の変異フラグメントにおいて、ヒトＰＡＲ２配列の位置２８７に対応する位置において、少なくとも１つの変異を含む。ある態様において、本明細書において記載されるペプチドは、前記のＰＡＲ２の変異フラグメント中に、ヒトＰＡＲ２配列の位置２８７に対応する位置における変異、および位置２７４または位置２８４に対応する位置における変異を含む。ある態様において、本明細書において記載されるペプチドは、ヒトＰＡＲ２配列の位置２８９に対応する位置において、さらに変異を含む。ある態様において、本明細書において記載されるペプチドは、ヒトＰＡＲ２配列の位置２８０に対応する位置において、さらに変異を含む。
【０１３６】
ある態様において、記載されるペプチドの連続したアミノ酸残基のセクションは、ＰＡＲ２の３番目の細胞内（ｉ３）ループ、５番目の膜貫通ヘリックス（ＴＭ５）、および／または６番目の膜貫通ヘリックス（ＴＭ６）において見出される。ある態様において、記載されるペプチドの連続したアミノ酸残基のセクションは、ヒトＰＡＲ２配列の位置２７０〜２９０中のアミノ酸残基に対応する野生型ＰＡＲ２の位置に配置される。ある態様において、ペプチドは、配列中、３個以上の連続したアミノ酸残基が、野生型ヒトＰＡＲ２のｉ３ループと共通する。ある態様において、ペプチドは、配列中、４個以上の連続したアミノ酸残基、５個以上の連続したアミノ酸残基、または６個以上の連続したアミノ酸残基が、野生型ヒトＰＡＲ２のｉ３ループと共通する。ある態様において、ペプチドは、配列中、３個以上の連続したアミノ酸残基が、野生型ヒトＰＡＲ２のＴＭ６と共通する。ある態様において、ペプチドは、配列中、４個以上の連続したアミノ酸残基、５個以上の連続したアミノ酸残基、または６個以上の連続したアミノ酸残基が、野生型ヒトＰＡＲ２のＴＭ６と共通する。ある態様において、ペプチドは、配列中、２個以上の連続したアミノ酸残基が、野生型ヒトＰＡＲ２のＴＭ５と共通する。ある態様において、ペプチドは、配列中、３個以上の連続したアミノ酸残基、４個以上の連続したアミノ酸残基、５個以上の連続したアミノ酸残基、または６個以上の連続したアミノ酸残基が、野生型ヒトＰＡＲ２のＴＭ５と共通する。
【０１３７】
ある態様において、ペプチドは、配列中、少なくとも４、５、６、７、８、９または１０個の連続したアミノ酸残基が、ヒトＰＡＲ２配列と共通する。
【０１３８】
ある態様において、ペプチドは、当該ペプチドが誘導される元の野生型ＰＡＲ２フラグメントと比較して、２〜１５個の変異を含む。ある態様において、ペプチドは、野生型ＰＡＲ２フラグメントと比較して、２〜１０個の変異を有する。ある態様において、ペプチドは、野生型ＰＡＲ２フラグメントと比較して、５〜１０個の変異を有する。ある態様において、ペプチドは、野生型ＰＡＲ２フラグメントと比較して、５個の変異を有する。ある態様において、ペプチドは、野生型ＰＡＲ２フラグメントと比較して、６個の変異を有する。ある態様において、ペプチドは、野生型ＰＡＲ２フラグメントと比較して、７個の変異を有する。ある態様において、ペプチドは、野生型ＰＡＲ２フラグメントと比較して、８個の変異を有する。ある態様において、ペプチドは、野生型ＰＡＲ２フラグメントと比較して、９個の変異を有する。ある態様において、ペプチドは、野生型ＰＡＲ２フラグメントと比較して、１０個の変異を有する。ある態様において、ペプチドは、野生型ＰＡＲ２フラグメントと比較して、１１個の変異を有する。ある態様において、ペプチドは、野生型ＰＡＲ２フラグメントと比較して、１２個の変異を有する。ある態様において、ペプチドは、野生型ＰＡＲ２フラグメントと比較して、６〜１２個の変異を有する。
【０１３９】
ある態様において、ペプチドは、それぞれヒトＰＡＲ２配列の位置２７８および２７９に対応するペプチドの位置において、ＳおよびＥを含む。ある態様において、ペプチドは、それぞれヒトＰＡＲ２配列の位置２７８および２７９に対応するペプチドの位置において、ＨおよびＥを含む。ある態様において、ペプチドは、ヒトＰＡＲ２配列の位置２８７に対応するペプチドの位置において、Ｋを含む。ある態様において、ペプチドは、それぞれヒトＰＡＲ２配列の位置２７８および２７９に対応するペプチドの位置においてＳおよびＥを、ヒトＰＡＲ２配列の位置２８７に対応するペプチドの位置においてＫを含む。
【０１４０】
ある態様において、ヒトＰＡＲ２配列の位置２７３に対応するアミノ酸位置における少なくとも１つの変異は、Ａ、Ｇ、Ｐ、またはＮ末端リンカーである。本明細書において用いられる場合、Ｎ末端リンカーは、これらに限定されないが、ｅＫ、アミノヘキサン酸（Ａｈｘ）、プロリンおよびグリシンを含む。ある態様において、ペプチドは、ペプチドのＮ末端における開始残基がヒトＰＡＲ２配列の位置２７４に対応するアミノ酸である場合、位置２７３に対応するアミノ酸を含まない。
【０１４１】
ある態様において、ヒトＰＡＲ２配列の位置２７４に対応するアミノ酸位置における少なくとも１つの変異は、Ｍ、Ｇ、Ｐ、Ｉ、Ｌ、ノルロイシン（Ｊ）、メチオニンスルホキシド（Ｍ（ＳＯ））、またはメチオニンスルホン（Ｍ（ＳＯ２））である。ある態様において、ペプチドは、ペプチドのＮ末端における開始残基が、ヒトＰＡＲ２配列の位置２７５に対応するアミノ酸である場合、位置２７３および２７４に対応するアミノ酸を含まない。
【０１４２】
ある態様において、ヒトＰＡＲ２配列の位置２７５に対応するアミノ酸位置における少なくとも１つの変異は、Ｄ、Ｅ、Ｈである。ある態様において、ペプチドのＮ末端における開始残基が、ヒトＰＡＲ２配列の位置２７６に対応するアミノ酸である場合、ペプチドは、位置２７３、２７４および２７５に対応するアミノ酸を含まない。
【０１４３】
ある態様において、ヒトＰＡＲ２配列の位置２７６に対応するアミノ酸位置における少なくとも１つの変異は、Ｄ、Ｅ、Ｈである。ある態様において、ペプチドのＮ末端は、位置２７７に対応するアミノ酸である。ある態様において、ペプチドのＮ末端における開始残基が、ヒトＰＡＲ２配列の位置２７７に対応するアミノ酸である場合、ペプチドは、位置２７３、２７４、２７５および２７６に対応するアミノ酸を含まない。
【０１４４】
ある態様において、ヒトＰＡＲ２配列の位置２７７に対応するアミノ酸位置における少なくとも１つの変異は、Ｎ、Ｄ、またはＥである。
【０１４５】
ある態様において、ヒトＰＡＲ２配列の位置２７８に対応するアミノ酸位置における少なくとも１つの変異は、任意のアミノ酸である。ある態様において、ヒトＰＡＲ２配列の位置２７８に対応するアミノ酸位置における少なくとも１つの変異は、Ｓ、Ｔ、Ｈ、Ｒ、およびＫである。
【０１４６】
ある態様において、ヒトＰＡＲ２配列の位置２７９に対応するアミノ酸位置における少なくとも１つの変異は、任意のアミノ酸である。ある態様において、ヒトＰＡＲ２配列の位置２７９に対応するアミノ酸位置における少なくとも１つの変異は、Ｎ、Ｄ、またはＥである。
【０１４７】
ある態様において、ヒトＰＡＲ２配列の位置２８０に対応するアミノ酸位置における少なくとも１つの変異は、任意のアミノ酸またはそのＤ−アミノ酸である。ある態様において、ヒトＰＡＲ２配列の位置２８０に対応するアミノ酸位置における少なくとも１つの変異は、Ｋ、Ｐ、ｄＰ、２−アミノイソ酪酸（Ｂ）、ヒドロキシプロリン（Ｈｙｐ）、プロリン相同体、Ｇ、または硬化剤／ヘリックス破壊剤部分である。
【０１４８】
ある態様において、ヒトＰＡＲ２配列の位置２８２に対応するアミノ酸位置における少なくとも１つの変異は、任意のアミノ酸またはシトルリン（Ｃｉｔ）である。ある態様において、ヒトＰＡＲ２配列の位置２８２に対応するアミノ酸位置における少なくとも１つの変異は、Ｒ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、またはシトルリン（Ｃｉｔ）である。
【０１４９】
ある態様において、ヒトＰＡＲ２配列の位置２８４に対応するアミノ酸位置における少なくとも１つの変異は、任意のアミノ酸またはベータ−アラニン（ベータ−Ａ；β−Ａ）である。ある態様において、ヒトＰＡＲ２配列の位置２８４に対応するアミノ酸位置における少なくとも１つの変異は、Ｑ、Ｓ、またはベータ−アラニン（ベータ−Ａ；β−Ａ）である。
【０１５０】
ある態様において、ヒトＰＡＲ２配列の位置２８９に対応するアミノ酸位置における少なくとも１つの変異は、Ｉ、Ｖ、Ｌ、Ａ、またはそのＤ−アミノ酸である。
【０１５１】
ある態様において、本明細書において記載されるペプチドは、前記のＰＡＲ２の変異フラグメントにおいて、ヒトＰＡＲ２配列の位置２７５、２７６、および／または２７７に対応する位置において、少なくとも１つの変異を含む。ある態様において、ペプチドは、ヒトＰＡＲ２配列の位置２７５〜２７７に対応する配列ＨＨＤを含む。ある態様において、ペプチドは、ヒトＰＡＲ２配列の位置２７５および２７６に対応する位置においてＨを、ヒトＰＡＲ２配列の位置２７７に対応する位置において負に荷電したアミノ酸（例えばＮ、Ｄ、Ｅ）を含む。ある態様において、ペプチドは、ヒトＰＡＲ２配列の位置２７５〜２７７に対応する位置において、配列ＤＥＮを含む。ある態様において、ペプチドは、位置２７６および２７７に対応する位置においてＥＮを、ヒトＰＡＲ２配列の位置２７５に対応する位置においてＤまたはＨを含む。態様のうちの任意のもののある態様において、ペプチドはさらに、ヒトＰＡＲ２配列の２７８（すなわち配列番号４２のＸ９）および２７９（すなわち配列番号４２のＸ１０）に対応する位置においてＳＥを含む。
【０１５２】
ある態様において、ペプチドは、野生型ヒトＰＡＲ２の位置２８７（すなわち配列番号４２のＸ１８）に対応する位置において、ＫからＦへの変異を含まない。ある態様において、ペプチドは、野生型ヒトＰＡＲ２の位置２８７に対応する位置において、ＫからＡへの変異を含まない。ある態様において、ペプチドは、野生型ヒトＰＡＲ２の位置２７４（すなわち配列番号４２のＸ５）に対応する位置において、ＭからＡへの変異を含まない。ある態様において、ペプチドは、野生型ヒトＰＡＲ２の位置２７４に対応する位置において、ＭからＧへの変異を含まない。ある態様において、ペプチドは、野生型ヒトＰＡＲ２の位置２８４（すなわち配列番号４２のＸ１５）に対応する位置において、ＲからＳへの変異を含まない。ある態様において、ペプチドは、野生型ヒトＰＡＲ２位置２８４に対応する位置において、ＲからＱへの変異を含まない。
【０１５３】
本明細書において記載されるとおり、ペプチドは、野生型ＰＡＲ２と比較して、アミノ酸付加、欠失、または置換を含む。ある態様において、ペプチドは、ヒトＰＡＲ２配列の位置２８１（すなわち配列番号４２のＸ１２）に対応する位置において、欠失を含む。ある態様において、ペプチドは、ヒトＰＡＲ２配列の位置２８５（すなわち配列番号４２のＸ１６）に対応する位置において、欠失を含む。ある態様において、ペプチドは、ヒトＰＡＲ２配列の位置２７４に対応する位置において、メチオニン（Ｍ）の、別の残基による置換または欠失を含む。ある態様において、ペプチドは、ヒトＰＡＲ２配列の位置２８４に対応する位置において、アルギニン（Ｒ）の、別の残基による置換または欠失を含む。ある態様において、ペプチドは、ヒトＰＡＲ２配列の位置２８４に対応する位置において、アルギニン（Ｒ）の、より短い側鎖を有する別の残基による置換を含む。ある態様において、ペプチドは、ヒトＰＡＲ２配列の位置２８７に対応する位置において、リジン（Ｋ）の置換または欠失 を含む。
【０１５４】
ある態様において、ペプチドは、配列番号４１の配列を含み、ここでアミノ酸配列は、位置Ｘ５およびＸ１５において変異を含み、ここで、Ｘ５は、Ｍ、Ｇ、Ｐ、Ｉ、Ｌ、ノルロイシン（Ｊ）、Ｍ（ＳＯ）、Ｍ（ＳＯ２）であり、およびここで、ペプチドは、少なくとも１５アミノ酸長である。ある態様において、ペプチドは、配列番号４１の配列を含み、ここで、アミノ酸配列は、位置Ｘ５およびＸ１５において変異を含み、ここで、Ｘ５は、Ｍ、Ｇ、Ｐ、Ｉ、Ｌ、ノルロイシン（Ｊ）、Ｍ（ＳＯ）、Ｍ（ＳＯ２）であり、ここでＸ１５は、ＳまたはＱであり、およびここで、ペプチドは、少なくとも１５アミノ酸長である。ある態様において、ペプチドは、少なくとも２０アミノ酸長である。ある態様において、ペプチドは、少なくとも２５アミノ酸長である。ある態様において、ペプチドは、１５〜２５アミノ酸長である。ある態様において、ペプチドは、１５〜２０アミノ酸長である。ある態様において、ペプチドは、１５〜１８アミノ酸長である。ある態様において、ペプチドは、１６〜１８アミノ酸長である。ある態様において、ペプチドは、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４または２５アミノ酸長である。ある態様において、ペプチドは、少なくとも１個の非天然のアミノ酸を含む。ある態様において、ペプチドは、１個または２個の非天然のアミノ酸を含む。ある態様において、ペプチドは、少なくとも１個のＤ−アミノ酸を含む。ある態様において、ペプチド１個または２個のＤ−アミノ酸を含む。ある態様において、ペプチドは、１〜５個のＤ−アミノ酸を含む。ある態様において、ペプチドは、１〜１０個のＤ−アミノ酸を含む。ある態様において、ペプチドは、全てＤ−アミノ酸を含む。ある態様において、ペプチドは、分子量が少なくとも２０００Ｄａである。ある態様において、ペプチドは、ＰＡＲ２の７０％または少なくとも８０％の阻害を示すことが、細胞において１０μＭのペプチドおよび８μＭのＳＬＩＧＲＬ（配列番号７３）アゴニストを用いるカルシウム流により評価される。ある態様において、ペプチドは、少なくとも４０％または少なくとも５０％のＰＡＲ２の阻害を示すことが、細胞において３μＭのペプチドおよび８μＭのＳＬＩＧＲＬ（配列番号７３）アゴニストを用いるカルシウム流により評価される。
【０１５５】
ある態様において、ペプチドは、配列番号４１の配列を含み、ここで、アミノ酸配列は、位置Ｘ５およびＸ１５において変異を含み、位置Ｘ４およびＸ１９において、追加のアミノ酸をさらに含む。ある態様において、ペプチドは、配列番号４１の配列を含み、ここで、アミノ酸配列は、位置Ｘ５およびＸ１５において変異を含み、位置Ｘ４、Ｘ１９およびＸ２０において、追加のアミノ酸をさらに含む。。ある態様において、位置Ｘ４における追加のアミノ酸は、Ａである。ある態様において、位置Ｘ４における追加のアミノ酸は、ｅＫ、アミノヘキサン酸（Ａｈｘ）、プロリン、またはグリシンからなる群より選択されるＮ末端リンカーである、ある態様において、位置Ｘ４における追加のアミノ酸は、ｅＫである。ある態様において、位置Ｘ４における追加のアミノ酸は、Ａｈｘである。ある態様において、位置Ｘ４における追加のアミノ酸は、プロリンである。ある態様において、位置Ｘ４における追加のアミノ酸は、グリシンである。ある態様において、位置Ｘ１９における追加のアミノ酸は、疎水性アミノ酸、そのＤ−アミノ酸、または不在である。ある態様において、位置Ｘ１９における追加のアミノ酸は、疎水性アミノ酸である。ある態様において、位置Ｘ１９における追加のアミノ酸は、Ａ、Ｉ、Ｌ、Ｆ、Ｖ、ＰまたはＧである。ある態様において、位置Ｘ１９における追加のアミノ酸は、Ｌである。ある態様において、位置Ｘ１９における追加のアミノ酸は、疎水性アミノ酸のＤ−アミノ酸である。ある態様において、位置Ｘ１９における追加のアミノ酸は、ＬのＤ−アミノ酸である。ある態様において、位置Ｘ１９における追加のアミノ酸は、ＶのＤ−アミノ酸である。Ｘ１９についての態様は、Ｘ２０に対しても適用可能である。ある態様において、ペプチドは、配列番号４１の配列を含み、ここで、アミノ酸配列は、位置Ｘ５およびＸ１５において変異を含み、位置Ｘ４およびＸ１９においてさらに追加のアミノ酸を含み、ここでＸ４はＧであり、Ｘ１９は、疎水性アミノ酸またはそのＤ−アミノ酸である。ある態様において、ペプチドは、少なくとも２０アミノ酸長である。ある態様において、ペプチドは、少なくとも２５アミノ酸長である。ある態様において、ペプチドは、１５〜２５アミノ酸長である。ある態様において、ペプチドは、１５〜２０アミノ酸長である。ある態様において、ペプチドは、１５〜１８アミノ酸長である。ある態様において、ペプチドは、１６〜１８アミノ酸長である。ある態様において、ペプチドは、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４または２５アミノ酸長である。ある態様において、ペプチドは、少なくとも１個の非天然のアミノ酸を含む。ある態様において、ペプチドは、１個または２個の非天然のアミノ酸を含む。ある態様において、ペプチドは、少なくとも１個のＤ−アミノ酸を含む。ある態様において、ペプチド１個または２個のＤ−アミノ酸を含む。ある態様において、ペプチドは、１〜５個のＤ−アミノ酸を含む。ある態様において、ペプチドは、１〜１０個のＤ−アミノ酸を含む。ある態様において、ペプチドは、全てＤ−アミノ酸を含む。ある態様において、ペプチドは、分子量が少なくとも２０００Ｄａである。ある態様において、ペプチドは、ＰＡＲ２の７０％または少なくとも８０％の阻害を示すことが、１０μＭのペプチドを用いるカルシウム流により評価される。
【０１５６】
ある態様において、ペプチドは、配列番号４１の配列を含み、ここで、アミノ酸配列は、位置Ｘ５およびＸ１５における変異、ならびに、Ｘ６におけるＥまたはＨ；Ｘ７におけるＤまたはＨ；およびＸ８におけるＤまたはＥから選択される少なくとも１つの変異を含む。ある態様において、ペプチドは、配列番号４１の配列を含み、ここで、アミノ酸配列は、位置Ｘ５およびＸ１５における変異、ならびに、Ｘ６におけるＨ；Ｘ７におけるＨ；およびＸ８におけるＤから選択される少なくとも１つの変異を含む。ある態様において、前述のペプチドは、Ｘ６におけるＨ；Ｘ７におけるＨ；およびＸ８におけるＤを含む。ある態様において、ペプチドは、少なくとも２０アミノ酸長である。ある態様において、ペプチドは、少なくとも２５アミノ酸長である。ある態様において、ペプチドは、１５〜２５アミノ酸長である。ある態様において、ペプチドは、１５〜２０アミノ酸長である。ある態様において、ペプチドは、１５〜１８アミノ酸長である。ある態様において、ペプチドは、１６〜１８アミノ酸長である。ある態様において、ペプチドは、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４または２５アミノ酸長である。ある態様において、ペプチドは、少なくとも１個の非天然のアミノ酸を含む。ある態様において、ペプチドは、１個または２個の非天然のアミノ酸を含む。ある態様において、ペプチドは、少なくとも１個のＤ−アミノ酸を含む。ある態様において、ペプチド１個または２個のＤ−アミノ酸を含む。ある態様において、ペプチドは、１〜５個のＤ−アミノ酸を含む。ある態様において、ペプチドは、１〜１０個のＤ−アミノ酸を含む。ある態様において、ペプチドは、全てＤ−アミノ酸を含む。ある態様において、ペプチドは、分子量が少なくとも２０００Ｄａである。ある態様において、ペプチドは、ＰＡＲ２の７０％または少なくとも８０％の阻害を示すことが、１０μＭのペプチドを用いるカルシウム流により評価される。
【０１５７】
ある態様において、ペプチドは、配列番号４１の配列を含み、ここで、アミノ酸配列は、位置Ｘ５およびＸ１５において変異を、Ｘ１４においてＤ−アミノ酸を含む。ある態様において、ペプチドは、配列番号４１の配列を含み、ここで、アミノ酸配列は、位置Ｘ５およびＸ１５において変異を、Ｘ１９において追加のアミノ酸を含み、ここで、Ｘ１９は、Ｄ−アミノ酸である。ある態様において、ペプチドは、配列番号４１の配列を含み、ここで、アミノ酸配列は、位置Ｘ５およびＸ１５において変異を、Ｘ１９およびＸ２０において追加のアミノ酸を含み、ここで、Ｘ２０は、疎水性アミノ酸またはＤ−アミノ酸である。ある態様において、ペプチドは、配列番号４１の配列を含み、ここで、アミノ酸配列は、位置Ｘ５およびＸ１５において変異を、Ｘ１９において追加のアミノ酸を含み、ここで、Ｘ１４およびＸ１９は、Ｄ−アミノ酸である。ある態様において、ペプチドは、配列番号４１の配列を含み、ここで、アミノ酸配列は、位置Ｘ５およびＸ１５において変異を、Ｘ１９およびＸ２０において追加のアミノ酸を含み、ここで、Ｘ１４およびＸ２０は、Ｄ−アミノ酸である。
【０１５８】
ある態様において、ペプチドは、配列番号４１の配列を含み、ここで、アミノ酸配列は、位置Ｘ５およびＸ１５において変異を含み、およびここで、ペプチドは、少なくとも１５アミノ酸長である。ある態様において、前述のペプチドは、最長で２０アミノ酸長である。ある態様において、前述のペプチドは、少なくとも２０００Ｄａの長さである。ある態様において、前述のペプチドは、ＰＡＲ２の７０％または少なくとも８０％の阻害を示すことが、細胞において１０μＭのペプチドおよび８μＭのＳＬＩＧＲＬ（配列番号７３）アゴニストを用いるカルシウム流により評価される。ある態様において、前述のペプチドは、￥少なくとも４０％または少なくとも５０％のＰＡＲ２の阻害を示すことが、細胞において３μＭのペプチドおよび８μＭのＳＬＩＧＲＬ（配列番号７３）アゴニストを用いるカルシウム流により評価される。
【０１５９】
ある態様において、ペプチドは、少なくとも１個のＤ−アミノ酸を含む。ある態様において、前述のペプチド１個または２個のＤ−アミノ酸を含む。ある態様において、ペプチドは、位置Ｘ１３においてさらに変異を含む。Ｘ１３についての態様は、本明細書において記載される。ある態様において、ペプチドは、位置Ｘ１１においてさらに変異を含む。Ｘ１１についての態様は、本明細書において記載される。ある態様において、前述のペプチドは、Ｘ１１またはＸ１３のいずれかにおいて変異を含むが、両方の位置においてではない。
【０１６０】
ある態様において、ペプチドは、疎水性部分を含む。ある態様において、ペプチドは、少なくとも２個の疎水性部分を含む。ある態様において、ペプチドは、少なくとも３つの疎水性部分を含む。 疎水性部分は、Ｎ末端、Ｃ末端に、および／または、Ｎ末端とＣ末端との間のアミノ酸残基に付着していてもよい。疎水性部分は、ペプチドが細胞膜を越えることを可能にする。ある態様において、疎水性部分は、天然に存在する。ある態様において、疎水性部分は、天然には存在しない。ある態様において、疎水性部分は、脂質部分、アシル部分、ステロイド部分、またはアミノ酸部分を含む。ある態様において、疎水性部分は、リン脂質、コレステロール、ステロイド、スフィンゴシン、セラミド、オクチルグリシン、２−シクロヘキシルアラニン、ベンゾイルフェニルアラニン、またはＣ１もしくはＣ２アシル基を含む。ある態様において、疎水性部分は、ステロイド部分を含む。ある態様において、ステロイド部分は、デオキシコール酸、リトコール酸、またはそれらの塩である。ステロイド部分は、ペプチド上の、Ｎ末端上またはアミノ酸側鎖上のものなどの、遊離のアミノ基にカップリングしていてもよい。
【０１６１】
脂質部分は、直鎖脂肪酸であってよい。ある態様において、脂質部分は、以下からなる群より選択される：カプリロイル（Ｃ８）；ノナノイル（Ｃ９）；カプリル（Ｃ１０）；ウンデカノイル（Ｃ１１）；ラウロイル（Ｃ１２）；トリデカノイル（Ｃ１３）；ミリストイル（Ｃ１４）；ペンタデカノイル（Ｃ１５）；パルミトイル（Ｃ１６）；フィタノイル（メチル置換Ｃ１６）；ヘプタデカノイル（Ｃ１７）；ステアロイル（Ｃ１８）；ノナデカノイル（Ｃ１９）；アラキドイル（Ｃ２０）；ヘニコサノイル（heneicosanoyl）（Ｃ２１）；ベヘノイル（Ｃ２２）；トルシサノイル（trucisanoyl）（Ｃ２３）；およびリグノセロイル（Ｃ２４）。ある態様において、脂質部分は、ミリストイル（Ｃ１４）、ペンタデカノイル（Ｃ１５）、またはパルミトイル（Ｃ１６）である。ある態様において、疎水性部分は、パルミトイルである。
【０１６２】
疎水性部分は、アミド結合、エステル結合、エーテル結合、炭素−炭素結合、炭素−窒素結合、炭素−酸素結合、または硫黄−硫黄結合を通して、ペプチドに付着していてもよい。疎水性部分は、ペプチド上の基、例えば、これらに限定されないが、スルフヒドリル、アミン、アルコールおよびフェノール性の基を用いて、当該ペプチドに付着していてもよい。疎水性部分を付着させるために有用な他のペプチド基および結合の型は、当該分野において公知である。他の細胞浸透性および／または膜繋留性の疎水性部分は、コレステロール、リン脂質、ステロイド、スフィンゴシン、セラミド、オクチル−グリシン、２−シクロヘキシルアラニン、ベンゾイルフェニルアラニン、Ｃ１もしくはＣ２アシル基、またはＣ３〜Ｃ８脂肪酸を含む。
【０１６３】
ある態様において、疎水性部分は、ペプチドのＮ末端に、Ｃ末端に、Ｎ末端とＣ末端の両方の端部に、またはペプチド内部残基（すなわち、Ｃ末端アミノ酸とＮ末端アミノ酸との間のアミノ酸に付着している。
【０１６４】
ある態様において、疎水性部分は、ペプチドのＮ末端に付着している。ある態様において、疎水性部分は、ペプチドのＣ末端に付着している。ある態様において、疎水性部分は、Ｎ末端またはＣ末端に位置しない、ペプチドの内部残基に付着している。ある態様において、疎水性部分は、Ｎ末端から３残基以内である残基に付着している。ある態様において、疎水性部分は、Ｎ末端から５残基以内である残基に付着している。ある態様において、疎水性部分は、Ｎ末端から８残基以内である残基に付着している。ある態様において、疎水性部分は、Ｃ末端から３残基以内である残基に付着している。ある態様において、疎水性部分は、Ｃ末端から５残基以内である残基に付着している。ある態様において、疎水性部分は、Ｃ末端から８残基以内である残基に付着している。 前述のペプチドの疎水性部分の位置は、本明細書において記載されるペプチドおよび多様な態様のうちのいずれかに適用可能なものである。
【０１６５】
ある態様において、ペプチドは、約１０〜３０アミノ酸長である。ある態様において、ペプチドは、約１０〜２０アミノ酸長である。ある態様において、ペプチドは、約１０〜１５アミノ酸長である。ある態様において、ペプチドは、約１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０アミノ酸長である。ある態様において、ペプチドは、少なくとも１３アミノ酸長である。ある態様において、ペプチドは、少なくとも１５アミノ酸長である。ある態様において、ペプチドは、少なくとも２０アミノ酸長である。ある態様において、ペプチドは、少なくとも２５アミノ酸長である。ある態様において、ペプチドは、１３〜２５アミノ酸長である。ある態様において、ペプチドは、１３〜２０アミノ酸長である。ある態様において、ペプチドは、１３〜１８アミノ酸長である。ある態様において、ペプチドは、１５〜２５アミノ酸長である。ある態様において、ペプチドは、１５〜２０アミノ酸長である。ある態様において、ペプチドは、１５〜１８アミノ酸長である。ある態様において、ペプチドは、１６〜１８アミノ酸長である。ある態様において、ペプチドは、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４または２５アミノ酸長である。前述のペプチドの長さは、本明細書において記載されるペプチドおよび多様な態様のうちのいずれかに適用可能なものである。
【０１６６】
ある態様において、ペプチドは、約１５００Ｄａ〜約２５００Ｄａの分子量範囲を有する疎水性部分を含む。ある態様において、ペプチドは、約１７００Ｄａ〜約２３００Ｄａの分子量範囲を有する疎水性部分を含む。ある態様において、ペプチドは、約２０００Ｄａ〜約２３００Ｄａの分子量範囲を有する疎水性部分を含む。前述の分子量範囲は、本明細書において記載されるペプチドおよび多様な態様のうちのいずれかに適用可能なものである。
【０１６７】
ある態様において、ペプチドは、水溶液中で、約３０ｍｇ／ｍＬ、約４０ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ、約６０ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ、または約１２０ｍｇ／ｍＬまでの溶解度を有する。
【０１６８】
本明細書において記載されるペプチドは、Ｌ−アミノ酸、Ｄ−アミノ酸、またはそれらの組み合わせを含んでもよい。ある態様において、ペプチド中の全ての残基は、Ｌ−アミノ酸である。ある態様において、ペプチド中の全ての残基は、Ｄ−アミノ酸である。ある態様において、ペプチド中の残基は、Ｌ−アミノ酸とＤ−アミノ酸との組み合わせである。ある態様において、ペプチドは、Ｄ−アミノ酸である１〜５個の残基を含む。ある態様において、ペプチド配列の少なくとも５％は、Ｄ−アミノ酸を含む。ある態様において、ペプチド配列の少なくとも１０％は、Ｄ−アミノ酸を含む。ある態様において、ペプチド配列の少なくとも２０％は、Ｄ−アミノ酸を含む。ある態様において、ペプチド配列の最大１５％は、Ｄ−アミノ酸を含む。ある態様において、ペプチド配列の最大２０％は、Ｄ−アミノ酸を含む。ある態様において、ペプチド配列の最大５０％は、Ｄ−アミノ酸を含む。ある態様において、ペプチド配列の最大６０％は、Ｄ−アミノ酸を含む。ある態様において、ペプチド配列の最大８０％は、Ｄ−アミノ酸を含む。ある態様において、ペプチド配列の最大９０％は、Ｄ−アミノ酸を含む。ある態様において、ペプチド配列の約５〜１５％は、Ｄ−アミノ酸を含む。ある態様において、ペプチド配列の約５〜２０％は、Ｄ−アミノ酸を含む。ある態様において、ペプチド配列の約５〜５０％は、Ｄ−アミノ酸を含む。
【０１６９】
ある態様において、ペプチドは、ＰＡＲ２アンタゴニストである。ある態様において、ペプチドは、少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、または９５％のＰＡＲ２の阻害を示す。ある態様において、ペプチドは、少なくとも７０％のＰＡＲ２の阻害を示す。ある態様において、ペプチドは、少なくとも８０％のＰＡＲ２の阻害を示す。アンタゴニスト活性を測定するための多様な方法が公知である。例えば、アンタゴニスト活性は、例えば３μＭまたは１０μＭのペプチドを用いるカルシウム流の実験により測定することができる。最大カルシウムシグナルまたは勾配の減少は、アンタゴニスト活性を示す。
【０１７０】
ある態様において、ペプチドは、実質的なアンタゴニスト効果を示し、実質的なアゴニスト効果を示さない。ある態様において、ペプチドは、約３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、または５％未満のアゴニスト効果を示す。
【０１７１】
使用および処置の方法
トリプシン様プロテアーゼの細胞表面受容体であるＰＡＲ２は、炎症性細胞、間葉系細胞（例えば線維芽細胞、筋線維芽細胞、平滑筋細胞）、間質細胞、内皮、肝細胞、星状細胞、ケラチノサイト、膵細胞、神経細胞、心臓細胞、ならびに肺、腸および肝胆道を含む上皮において、広く発現される。ＰＡＲ２は、皮膚、関節、肺、脳、胃腸管および肝臓、ならびに血管系の多くの急性および慢性の炎症性疾患において役割を果たし、肝臓、肺、腎臓および他の線維性疾患、アトピー性皮膚炎、慢性および急性の疼痛状態、掻痒、ならびに肺動脈性高血圧症の進行において関連付けられてきた。
【０１７２】
血管の生物学におけるそのよく認識された役割に加えて、ＰＡＲはまた、生存。アポトーシス、および腫瘍の増殖の調節に関与することが提案されている（例えばYang et al., Cancer Res 2009, 69:6223-31）。ＰＡＲ２は、メラノーマにおける腫瘍細胞の生物学において（Tellez C, et al., Oncogene 2003, 22:3130-37）、肝細胞癌において、ならびに乳がん、卵巣がん、結腸がんおよび膵臓がんの浸潤および転移のプロセスにおいて、重要である。
【０１７３】
ＰＡＲ２は、急性および慢性の炎症、関節炎、アレルギー反応、敗血症、炎症性疼痛、ならびにがん細胞の浸潤および転移に関与する多くの（病態）生理学的経路を媒介する。ＰＡＲ２により活性化される多面的な下流の経路は、カルシウムの動態化、ホスホリパーゼＣ−β依存的なイノシトールリン酸およびジアシルグリセロールの生成、ＲｈｏおよびＲａｃの活性化、ＭＡＰＫおよびベータ−アレスチンシグナル伝達、および遺伝子転写を含む（Ossovskaya et al., 2004、上記）。
【０１７４】
プロテアーゼの細胞表面センサーとして、ＰＡＲ２は、炎症の間に起こる迅速に変化するタンパク質分解性微小環境に対して応答または過剰応答する能力を与える。ＰＡＲ２欠損マウスは、顆粒球の浸潤および組織損傷の減少、ならびに腸の炎症のモデルにおける炎症性サイトカインの抑制、自己免疫、ならびに脳脊髄炎を示す（Noorbakhsh, et al., J Exp Med 2006, 203:425-35; Cenac et al., Am J Pathol 2002, 161:1903-15）。ＰＡＲ２欠損マウスにおいては、心虚血／再灌流傷害の減少もまた観察され、これは、炎症メディエーターの低下と相関した（Antoniak et al., Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2010, 30: 2136-42）。逆に、ＰＡＲ２の過剰刺激は、重篤な浮腫、顆粒球の浸潤、増大した組織浸透性、組織の損傷および低血圧をもたらし得る（Vergnolle et al., Br J Pharmacol 1999, 127: 1083-90；Cenac et al., 2002、上記）。トリプシンおよび合成のＳＬＩＧＲＬ（配列番号７３）ペプチドを含むＰＡＲ２のアゴニストはまた、感覚ニューロンからのカルシトニンおよびサブスタンスＰの放出を引き起こし、これは、好中球の浸潤、浮腫、痛覚過敏、およびがん性疼痛を引き起こす（Vergnolle et al., Nat Med 2001, 7:821-26; Lam et al., Pain 2010, 149: 263-72）。ＰＡＲ２は、関節炎に関連付けられており、これは、ＰＡＲ２欠損マウスにおける関節の炎症の著しい減少（Ferrell et al. J Clin Invest 2003, 111: 35-41）、ならびに変形性関節症および関節リウマチの滑膜組織における受容体の発現の上方調節（Ferrell et al., Ann Rheum Dis. 2010, 69: 2051-2054）により証明されている。Sievertおよび同僚ら（Knight V, Tchongue J, Lourensz D, Tipping P, Sievert W. Protease-activated receptor 2 promotes experimental liver fibrosis in mice and activates human hepatic stellate cells. Hepatology 2012;55:879-87）は、ＰＡＲ２欠損マウスが、マウスモデルにおける肝臓線維症に対して顕著な保護を提供することを示した。RufおよびSamadによる最近の報告（Badeanlou L, Furlan-Freguia C, Yang G, Ruf W, Samad F. Tissue factor-protease-activated receptor 2 signaling promotes diet-induced obesity and adipose inflammation. Nat Med 2011;17:1490-7）は、食餌誘発性の肥満および脂肪組織の炎症をもたらす、マクロファージ由来組織因子（ＴＦ）により媒介されるＰＡＲ−２シグナル伝達の役割についてのエビデンスを提供する。
【０１７５】
アトピー性皮膚炎（ＡＤ）または重篤な湿疹は、米国において約１８００万人において存在する、最も一般的な慢性炎症性皮膚疾患である。典型的な臨床所見は、複数の炎症病変、苔癬化を伴う糜爛、線維性丘疹、および感染に対する感受性が増大した重篤な乾燥肌を含む。主要な制御されていない症状は、強い痒みおよびさらなる剥脱、糜爛および感染を引き起こし得る過剰な引っ掻きである。現在の処方箋に基づく薬物処置は、局所または全身性副腎皮質ステロイド、または最も深刻に患っている患者に対するカルシニューリン阻害剤からなり、これは、重篤な副作用を示し得、一般に、長期の処置には適していない。ＰＡＲ２は、ＡＤの病態形成における重要なメディエーターとして同定されている（Steinhoff, M., C.U. Corvera, M.S. Thoma, W. Kong, B.E. McAlpine, G.H. Caughey, J.C. Ansel, and N.W. Bunnett. Proteinase-activated receptor-2 in human skin: tissue distribution and activation of keratinocytes by mast cell tryptase. (1999) Exp Dermatol 8: 282-94；Lee, S.E., S.K. Jeong, and S.H. Lee. Protease and protease-activated receptor-2 signaling in the pathogenesis of atopic dermatitis. (2010) Yonsei Med J 51: 808-22）。ＰＡＲ２は、急性から慢性皮膚炎への進行の間に、ケラチノサイト、炎症性細胞および感覚神経末端を含む、複数の皮膚の細胞型において上方調節される（Frateschi, S., E. Camerer, G. Crisante, S. Rieser, M. Membrez, R.P. Charles, F. Beermann, J.C. Stehle, B. Breiden, K. Sandhoff, S. Rotman, M. Haftek, A. Wilson, S. Ryser, M. Steinhoff, S.R. Coughlin, and E. Hummler. PAR2 absence completely rescues inflammation and ichthyosis caused by altered CAP1/Prss8 expression in mouse skin. (2011) Nat Commun 2: 161；Seeliger, S., C.K. Derian, N. Vergnolle, N.W. Bunnett, R. Nawroth, M. Schmelz, P.Y. Von Der Weid, J. Buddenkotte, C. Sunderkotter, D. Metze, P. Andrade-Gordon, E. Harms, D. Vestweber, T.A. Luger, and M. Steinhoff. Proinflammatory role of proteinase-activated receptor-2 in humans and mice during cutaneous inflammation in vivo. (2003) FASEB J 17: 1871-85；Rattenholl, A. and M. Steinhoff. Proteinase-activated receptor-2 in the skin: receptor expression, activation and function during health and disease. (2008) Drug News Perspect 21: 369-81；Buddenkotte, J., C. Stroh, I.H. Engels, C. Moormann, V.M. Shpacovitch, S. Seeliger, N. Vergnolle, D. Vestweber, T.A. Luger, K. Schulze-Osthoff, and M. Steinhoff. Agonists of proteinase-activated receptor-2 stimulate upregulation of intercellular cell adhesion molecule-1 in primary human keratinocytes via activation of NF-kappa B. (2005) J Invest Dermatol 124: 38-45）。環境的なソース（例えばイエダニからのDerP/F）、および肥満細胞トリプターゼ（Kawakami, T., T. Ando, M. Kimura, B.S. Wilson, and Y. Kawakami. Mast cells in atopic dermatitis. (2009) Curr Opin Immunol 21: 666-78）、カリクレイン−５およびカテプシンＳ（Viode, C., O. Lejeune, V. Turlier, A. Rouquier, C. Casas, V. Mengeaud, D. Redoules, and A.M. Schmitt. Cathepsin S, a new pruritus biomarker in clinical dandruff/seborrhoeic dermatitis evaluation. (2014) Exp Dermatol 23: 274-5）などの局所炎症性プロテアーゼからの皮膚におけるプロテアーゼ活性の増加が、異常なＰＡＲ２シグナル伝達ならびに炎症応答および掻痒の活性化の原因となる（Briot, A., C. Deraison, M. Lacroix, C. Bonnart, A. Robin, C. Besson, P. Dubus, and A. Hovnanian. Kallikrein 5 induces atopic dermatitis-like lesions through PAR2-mediated thymic stromal lymphopoietin expression in Netherton syndrome. (2009) J Exp Med 206: 1135-47; de Veer, S.J., L. Furio, J.M. Harris, and A. Hovnanian. Proteases: common culprits in human skin disorders. (2014) Trends Mol Med 20: 166-178）。ＰＡＲ２の切断は、胸腺間質性リンパ球新生因���（ＴＳＬＰ）の過剰発現を刺激し（Duchatelet, S. and A. Hovnanian. Genetics of Atopic Dermatitis: Beyond Filaggrin-the Role of Thymic Stromal Lymphopoietin in Disease Persistence. (2014) JAMA Dermatol 150: 248-50）、Ｃ線維のサブセットを通して、ＡＤの病変形成および掻痒を引き起こす（Wilson, S.R., L. The, L.M. Batia, K. Beattie, G.E. Katibah, S.P. McClain, M. Pellegrino, D.M. Estandian, and D.M. Bautista. The epithelial cell-derived atopic dermatitis cytokine TSLP activates neurons to induce itch. (2013) Cell 155: 285-95）。
【０１７６】
間質性肺疾患（ＩＬＤ）の最も一般的なものである特発性肺線維症（ＩＰＦ）は、米国において約１２８，０００人において起こり、毎年４８，０００人の新たな症例が診断される。典型的な臨床経過は、組織が酸素を輸送する能力の不可逆的な喪失を引き起こす、肺の瘢痕形成および「蜂巣状化（honeycombing）」により特徴づけられる、進行性の線維性疾患である。合併型（co-morbid）肺高血圧症は、ＩＰＦを有する患者において一般的に観察され、臨床的予後の悪化の原因となる。ＩＰＦは、最終的に患者から呼吸する能力を奪い、診断後５年時において６６％の致死率をもたらす。このことは、認められていない多さの１年間あたりの死亡数に対応し（ｎ＝４０，０００）、これは、乳がんに起因する死亡数とほぼ同じ年率である。現在の処置は、主に、肺線維芽細胞の増殖を遮断することに注目してきた。汎用チロシンキナーゼ阻害剤であるニンテダニブは、患者にとって重要な予後において、何らかの利益（より遅い疾患の進行）を有すると考えられるが、３回の臨床治験において、死亡率に対する著しい効果は検出されなかった。作用機序が不明なＩＰＦ薬であるピルフェニドンは、死亡率の僅かな減少と努力肺活量（ＦＶＣ）減少の速度の低下を示した。これらの２つの新たに承認された薬物の出現にも関わらず、ＩＰＦのための（特により進行した疾患を有する対象のための）真に有効な処置は、今だ存在せず、両方の薬物により著しいＧＩおよび肝臓の毒性が起こり、ピルフェニドンは、発疹／光線過敏症を誘発する。ＰＡＲ２は、最近、ＩＰＦの病態形成における重要なメディエーターとして同定されてきた（Wygrecka, M., G. Kwapiszewska, E. Jablonska, S. von Gerlach, I. Henneke, D. Zakrzewicz, A. Guenther, K.T. Preissner, and P. Markart. Role of protease-activated receptor-2 in idiopathic plumonary fibrosis. (2011) Am J Respir Crit Care Med 183: 1703-14；Wygrecka, M., B.K. Dahal, D. Kosanovic, F. Petersen, B. Taborski, S. von Gerlach, M. Didiasova, D. Zakrzewicz, K.T. Preissner, R.T. Schermuly, and P. Markart. Mast cells and fibroblasts work in concert to aggravate plumonary fibrosis: role of transmembrane SCF and the PAR-2/PKC-alpha/Raf-1/p44/42 signaling pathway. (2013) Am J Pathol 182: 2094-108；Park, Y.S., C.M. Park, H.J. Lee, J.M. Goo, D.H. Chung, S.M. Lee, J.J. Yim, Y.W. Kim, S.K. Han, and C.G. Yoo. Clinical implication of protease-activated receptor-2 in idiopathic plumonary fibrosis. (2012) Respir Med 107: 256-62）。ＰＡＲ２は、ＩＰＦの進行の間に肺上皮、線維芽細胞、および炎症性細胞 において上方調節され、肺においてＰＡＲ２が高発現しているＩＰＦ患者は、より悪い全体的な生存率および肺の蜂巣状化を有する。肺における血液凝固促進性のプロテアーゼ（ＶＩＩａ／Ｘａ／ＴＦ因子）活性および肥満細胞トリプターゼなどの局所炎症性プロテアーゼの増大は、異常なＰＡＲ２シグナル伝達および線維化応答の活性化を誘発する。線維性肺疾患を有する患者の肺における肥満細胞の数もまた増加し、線維症の重篤度と相関する。ＰＡＲ２のタンパク質分解による切断は、ＴＧＦ−βの過剰発現を刺激し、ＥＲＫ１／２経路を通しての線維芽細胞の病変形成およびαＳＭＡの産生を誘発する。したがって、有効なＰＡＲ２の遮断は、肺上皮、線維芽細胞および炎症性細胞における、トリプターゼにより駆動される慢性の正のフィードバック機構、およびＰＡＲ２の血液凝固促進性プロテアーゼ活���を妨げ、ＩＰＦ患者における線維化応答がユニークな疾患改変剤として作用することを抑制する。
【０１７７】
ＰＡＲ２の発現の増大はまた、膵臓および実験的なラットの肝臓線維症においても実証され、ＩｇＡ腎症における間質性線維症の程度と相関することが示された（Michael, E.S., A. Kuliopulos, L. Covic, M.L. Steer, and G. Perides. Pharmacological inhibition of PAR2 with the pepducin P2pal-18S protects mice against acute experimental biliary pancreatitis. (2013) Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 304: G516-26；Grandaliano, G., P. Pontrelli, G. Cerullo, R. Monno, E. Ranieri, M. Ursi, A. Loverre, L. Gesualdo, and F.P. Schena. Protease-activated receptor-2 expression in IgA nephropathy: a potential role in the pathogenesis of interstitial fibrosis. (2003) J Am Soc Nephrol 14: 2072-83；Ikeda, O., H. Egami, T. Ishiko, S. Ishikawa, H. Kamohara, H. Hidaka, S. Mita, and M. Ogawa. Expression of proteinase-activated receptor-2 in human pancreatic cancer: a possible relation to cancer invasion and induction of fibrosis. (2003) Int J Oncol 22: 295-300）。肺疾患においては、ＰＡＨにおけるＰＡＲ２の高い発現（Kwapiszewska, G., P. Markart, B.K. Dahal, B. Kojonazarov, L.M. Marsh, R.T. Schermuly, C. Taube, A. Meinhardt, H.A. Ghofrani, M. Steinhoff, W. Seeger, K.T. Preissner, A. Olschewski, N. Weissmann, and M. Wygrecka. PAR-2 inhibition reverses experimental pulmonary hypertension. (2012) Circ Res 110: 1179-91）、気管支肺異形成症および小児呼吸促迫症候群（Cederqvist, K., C. Haglund, P. Heikkila, M.D. Hollenberg, R. Karikoski, and S. Andersson. High expression of pulmonary proteinase-activated receptor 2 in acute and chronic lung injury in preterm infants. (2005) Pediatr Res 57: 831-6）が観察されている。ＰＡＲ２は、線維化肺において、過形成性のＡＴＩＩ細胞および線維芽細胞／筋線維芽細胞に局在した。加えて、ＩＰＦの肺から単離した線維芽細胞は、ドナー肺から抽出された線維芽細胞が示すよりも、著しく高いＰＡＲ２レベルを示した。ＩＰＦの病態形成に決定的に関与することが知られているサイトカインであるＴＧＦ−βは、ドナー肺線維芽細胞において、ＰＡＲ２合成を強力に誘導した。静止状態の組織線維芽細胞は、より低いレベルのＰＡＲ２を構成的に発現するが、線維芽細胞の活性化を促進する条件は、ＰＡＲ２発現を著しく増大する。したがって、低ＰＡＲ２から高ＰＡＲ２への正の線維芽細胞の形質転換は、創傷モデル、ならびにヒトの正常および肥厚性瘢痕において起こる（Materazzi, S., S. Pellerito, C. Di Serio, M. Paglierani, A. Naldini, C. Ardinghi, F. Carraro, P. Geppetti, G. Cirino, M. Santucci, F. Tarantini, and D. Massi. Analysis of protease-activated receptor-1 and -2 in human scar formation. (2007) J Pathol 212: 440-9）。まとめると、これらのデータは、組織傷害／損傷が、細胞外プロテアーゼによるＰＡＲ２の誘導および活性化を誘発して、それが病理学的組織応答に対して生理学的組織修復を駆動して結果的に患者において線維症を引き起こすという機序を支持する。
【０１７８】
主要な炎症促進性セリンプロテアーゼであるトリプターゼもまた、ＰＡＲ２を切断してこれを活性化することができる。局所または全身性の高レベルの肥満細胞由来トリプターゼの放出は、急性喘息、全身性肥満細胞症、およびアナフィラキシーを含む生命を脅かす結果を有し得（Caughey, Immunol Rev 2007, 217: 141-54）、特発性肺線維症の原因となり得る。特異的かつ有効なＰＡＲ２の薬理学的阻害剤は、したがって、有益な抗炎症効果を提供し、肥満細胞、好中球、単球および／またはマクロファージ、Ｔ細胞、ならびに他のＰＡＲ２を過剰発現して組織損傷の原因となるリンパ球の有害な活性を減少させる潜在能力を有する。
【０１７９】
リポペプチドのバージョンを含む新たなペプチドは、ＰＡＲ２により調節されるシグナル伝達イベント、ならびにその上流または下流の効果をターゲティングするために有用である。例えば、本明細書におけるペプチド、リポペプチドおよび組成物は、増大した、または異常なＰＡＲ２の活性またはシグナル伝達に関連する、あるいは増大した、または異常なＰＡＲ２プロテアーゼ活性に関連する、疾患または状態を処置するために用いられる。本明細書におけるペプチドおよび組成物はまた、構成的なＰＡＲ２活性を処置するために用いることもができる。本明細書において提供されるのは、それを必要としている対象において、ＰＡＲ２と関連する疾患または状態を処置する方法であって、本明細書において記載されるとおりのペプチドまたはリポペプチドの有効量を、対象に投与することを含む。本明細書において提供されるのは、それを必要としている対象において、ＰＡＲ２と関連する疾患または状態を処置する方法であって、対象に、本明細書において記載されるとおりのペプチドの当該対象にとっての有効量を服用するように指示することを含む。また本明細書において提供されるのは、それを必要としている対象においてＰＡＲ２と関連する疾患または状態を処置することにおける使用のためのペプチドである。
【０１８０】
ある態様において、本明細書におけるペプチドおよびリポペプチドは、これらに限定されないが、以下を含む多様なＰＡＲ２障害のための処置の方法において有用である：非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、アトピー性皮膚炎（ＡＤ、湿疹）、腎線維症、アルコール性脂肪性肝炎、臓器の線維症、腎線維症、骨髄線維症、肺動脈性高血圧症（ＰＡＨ）、肺線維症、掻痒、膵炎、慢性腎疾患、腎炎、多発性硬化症、がん、白血病、メラノーマ、炎症性の障害および状態、敗血症、炎症関連ＣＮＳ障害、気管支炎、喘息、糖尿病、糖尿病およびＮＡＳＨの合併症、肥満、メタボリックシンドローム、線維性疾患、心臓線維症、肺線維症、炎症性腸疾患、クローン病、過敏性腸症候群、硬変、関節炎、間接線維症、ケロイド、骨髄線維症、全身性線維症、強皮症、乾癬、蕁麻疹、膿痂疹、発疹、および酒さ。ある態様において、障害は、アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、アトピー性皮膚炎（ＡＤ、湿疹）、腎線維症、アルコール性脂肪性肝炎、臓器の線維症、腎線維症、骨髄線維症、肺動脈性高血圧症（ＰＡＨ）、肺線維症、掻痒症（掻痒）、膵炎、慢性腎疾患、腎炎、多発性硬化症、がん、白血病、メラノーマ、炎症性の障害および状態、敗血症、炎症関連ＣＮＳ障害、気管支炎、喘息、糖尿病、糖尿病およびＮＡＳＨの合併症、肥満、メタボリックシンドローム、線維性疾患、心臓線維症、肺線維症、炎症性腸疾患、クローン病、過敏性腸症候群、硬変、関節炎、間接線維症、ケロイド、骨髄線維症、全身性線維症、強皮症、乾癬、蕁麻疹、膿痂疹、発疹、または酒さである。ある態様において、ＰＡＲ２障害は、ＮＡＳＨである。ある態様において、障害は、ＮＡＳＨである。ある態様において、障害は、糖尿病である。ある態様において、ＰＡＲ２障害は、結腸、皮膚、メラノサイト、乳房、前立腺、中枢神経系、脳、免疫系、膵臓、頭部頸部、食道、腎臓、生殖系、卵巣、子宮内膜、および子宮頸部のがんからなる群より選択されるがんである。ある態様において、障害は、結腸、皮膚、メラノサイト、乳房、前立腺、中枢神経系、脳、免疫系、膵臓、頭部頸部、食道、腎臓、生殖系、卵巣、子宮内膜、および子宮頸部のがんからなる群から選択されるがんである。
【０１８１】
ある態様において、本明細書におけるペプチドおよびリポペプチドは、炎症を伴う状態のための処置の方法において有用である。ある態様において、本明細書におけるペプチドおよびリポペプチドは、膵炎、喘息、関節リウマチ、変形性関節症、がん、慢性疼痛、内臓疼痛、がん性疼痛、多発性硬化症、炎症性腸疾患、過敏性腸症候群、肥満細胞疾患、肥満細胞症、痛風、敗血症、動脈再狭窄、アテローム性動脈硬化症、気道および胃腸管の炎症性疾患、掻痒、魚鱗癬（ichthyoses）、 掻痒症、炎症性皮膚疾患、乾癬およびアルツハイマー病のための処置の方法において有用である。
【０１８２】
ある態様において、本明細書におけるペプチドおよびリポペプチドは、ペプチドおよびリポペプチドで処置される対象において、ペプチドおよびリポペプチドで処置されないビヒクル対照群と比較して、糖化ヘモグロビン（ＨｂＡ１ｃ）レベルを約０．５％〜約１．０％低下させるための処置の方法において有用である。ある態様において、本明細書におけるペプチドおよびリポペプチドは、ＨｂＡ１ｃレベルを、約０．４％〜約１．０％、約０．５％〜約１．０％、約０．６％〜約１．０％、約０．８％〜約１．０％、または約０．９％〜約１．０％低下させるために有用である。ある態様において、本明細書におけるペプチドおよびリポペプチドは、ＨｂＡ１ｃレベルを、約０．４％、０．５％、０．６％、０．７％、０．８％、または０．９％低下させるために有用である。ある態様において、本明細書におけるペプチドおよびリポペプチドは、ペプチドおよびリポペプチドで処置される対象において、ペプチドおよびリポペプチドで処置されないビヒクル対照群と比較して、インスリンレベルを約４０％〜約６０％低下させるための処置の方法において有用である。ある態様において、本明細書におけるペプチドおよびリポペプチドは、インスリンレベルを、約４０％〜約６０％、約４５％〜約６０％、約４５％〜約５０％、約５０％〜約６０％、約５０％〜約５５％、または約５５％〜約６０％低下させるために有用である。ある態様において、本明細書におけるペプチドおよびリポペプチドは、インスリンレベルを、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、または約６０％低下させるために有用である。ある態様において、対象は、哺乳動物である。ある態様において、対象は、ヒトである。ある態様において、対象は、非ヒト動物である。
【０１８３】
医薬組成物
本明細書において提供されるのは、本明細書において記載されるとおりのペプチドと、薬学的に許容し得る賦形剤とを含む、医薬組成物である。医薬組成物は、治療的使用のための組成物を含む。かかる組成物は、１つ以上のさらなる治療活性剤を含んでもよい。アンタゴニストペプチドは、標準的な薬務に従って、医薬組成物中で、単独で、または薬学的に許容し得るキャリア、賦形剤または希釈剤と組み合わせて、ヒトを含む処置を必要とする哺乳動物に、投与することができる。化合物は、経口または非経口で投与することができ、これは、静脈内、筋肉内、腹腔内、皮下、直腸および局所の投与の経路を含む。句「活性成分」または「剤」は、一般に、本明細書において記載されるとおりのペプチドを指す。
【０１８４】
本明細書において提供される医薬組成物の記載は、主にヒトへの投与のための医薬組成物を対象としているが、当業者は、かかる組成物が、全ての種類の動物への投与のために一般に好適であることを理解するであろう。多様な動物への投与のための医薬組成物の改変は、よく理解されており、一般的な技術を有する獣医薬理学者は、必要な場合には単なる通常の実験により、かかる改変を設計および／または実施することができる。
【０１８５】
本明細書において記載される医薬組成物は、薬理学の分野において公知であるかまたは今後開発される任意の方法により調製することができる。一般的に、かかる調製方法は、活性成分を賦形剤および／または１つ以上の他の付属成分と関連させて、次いで、必要および／または望ましい場合には、生成物を所望される単回用量または複数用量単位中に成形および／または包装するステップを含む。
【０１８６】
本発明の医薬組成物は、バルクで、単回単位用量として、複数の単回単位用量として、調製、包装、および／または販売することができる。本明細書において用いられる場合、「単位用量」は、予め決定された量の活性成分を含む、医薬組成物の個別の量である。活性成分の量は、一般に、対象に投与される活性成分の投与量、および／またはかかる投与量の便利な分数量、例えばかかる投与量の半分または三分の一と等しい。
【０１８７】
本発明の医薬組成物中の活性成分、薬学的に許容し得る賦形剤、および／または任意の付加成分の相対量は、処置される対象のアイデンティティー、サイズおよび／または障害に依存して、およびさらに組成物が投与されるべき経路に依存して、変化するであろう。例として、組成物は、０．１％〜１００％（ｗ／ｗ）の活性成分を含んでもよい。
【０１８８】
本明細書において用いられる場合、薬学的に許容し得る賦形剤は、所望される特定の投与形態に適する、任意のおよび全ての溶媒、懸濁媒、希釈剤または他の液体のビヒクル、分散または懸濁補助剤、界面活性剤、等張化剤、増粘剤または乳化剤、保存剤、固体の結合剤、潤滑剤などを含む。Remington’s The Science and Practice of Pharmacy、第２１版、A. R. Gennaro,（Lippincott, Williams & Wilkins, Baltimore, MD, 2006）は、医薬組成物を処方することにおいて用いられる多様な賦形剤、およびそれらの調製のための公知の技術を開示する。任意の望ましくない生物学的効果をもたらすか、または他の方法で医薬組成物の任意の他の成分と有害な様式で相互作用するなど、任意の従来のキャリア媒体が、物質またはその誘導体と適合しない場合を除いて、その使用は、本発明の範囲内であることを企図される。
【０１８９】
いくつかの態様において、薬学的に許容し得る賦形剤は、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％純粋である。いくつかの態様において、賦形剤は、ヒトにおける使用について、および獣医学的使用について、承認されている。いくつかの態様において、賦形剤は、米国食品医薬品局により承認されている。いくつかの態様において、賦形剤は、医薬グレードである。いくつかの態様において、賦形剤は、米国薬局方（ＵＳＰ）、欧州薬局方（ＥＰ）、英国薬局方、および／または国際薬局方の基準に合致する。
【０１９０】
医薬組成物の製造において用いられる薬学的に許容し得る賦形剤は、これらに限定されないが、不活性な希釈剤、分散および／または造粒剤、界面活性剤および／または乳化剤、崩壊剤、結合剤、保存剤、緩衝化剤、潤滑剤および／または油脂を含む。かかる賦形剤は、本発明の処方物中に任意に含まれてもよい。カカオバターおよび坐剤用ワックスなどの賦形剤、着色剤、コーティング剤、甘味剤、香味剤および芳香剤は、処方者の判断に従って、組成物中に存在してもよい。
【０１９１】
活性成分を含む医薬組成物は、経口での使用のために好適な、例えば、錠剤、トローチ、ロゼンジ、水性もしくは油性の懸濁液、分散可能な粉末もしくは顆粒、エマルジョン、ハードもしくはソフトカプセル、またはシロップもしくはエリキシルとしての形態におけるものであってもよい。経口での使用を意図される組成物は、医薬組成物の製造のための当該分野において公知の任意の方法に従って調製することができ、かかる組成物は、薬剤としてエレガントかつ美味な調製物を提供するために、甘味剤、香味剤、着色剤、および保存剤からなる群より選択される１つ以上の剤を含んでもよい。錠剤は、活性成分を、錠剤の製造のために好適な非毒性の薬学的に許容し得る賦形剤と混合して含む。これらの賦形剤は、例えば、不活性な希釈剤、例えば炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウムまたはリン酸ナトリウム；造粒および崩壊剤、例えば、微晶質セルロース、クロスカルメロースナトリウム、コーンスターチまたはアルギン酸；結合剤、例えば、デンプン、ゼラチン、ポリビニルピロリドンまたはアラビアゴム、ならびに潤滑剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルクであってよい。錠剤は、コーティングされていなくても、薬物の不快な味をマスクするため、または胃腸管における崩壊および吸収を遅延させて、それにより長期間にわたる持続した作用を提供するための公知の技術によりコーティングされていてもよい。例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロースもしくはヒドロキシプロピルセルロースなどの水溶性の味覚マスク剤、またはエチルセルロース、酢酸酪酸セルロースなどの時間遅延材料を採用してもよい。
【０１９２】
経口での使用のための処方物は、活性成分が不活性な固体の希釈剤、例えば、炭酸カルシウム、リン酸カルシウムまたはカオリンと混合されるハードゼラチンカプセルとして、あるいは活性成分が水溶性のキャリア、例えばポリエチレングリコールまたは油性の媒体、例えばピーナツ油、流動パラフィンもしくはオリーブ油と混合されるソフトゼラチンカプセルとして提示してもよい。
【０１９３】
水性懸濁液は、活性材料を、水性懸濁液の製造のために好適な賦形剤と混合して含む。かかる賦形剤は、懸濁剤、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントガムおよびアラビアゴムであってよい；分散剤または湿潤化剤は、天然に存在するホスファチド、例えば、レシチン、またはアルキレンオキシドと脂肪酸との縮合生成物、例えば、ステアリン酸ポリオキシエチレン、またはエチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールとの縮合生成物、例えば、ヘプタデカエチレン−オキセタノール、またはエチレンオキシドと、脂肪酸およびヘキシトールから誘導される部分エステルとの縮合生成物、例えばポリオキシエチレンソルビトールモノラウラート、またはエチレンオキシドと、脂肪酸およびヘキシトール無水物から誘導される部分エステルとの縮合生成物、例えば、ポリエチレンソルビタンモノラウラートであってよい。水性懸濁液はまた、１つ以上の保存剤、例えば、エチル、またはｎ−プロピルｐ−ヒドロキシ安息香酸、１つ以上の着色剤、１つ以上の香味剤、および１つ以上の甘味剤、と例えばスクロース、サッカリンまたはアスパルテームを含んでもよい。
【０１９４】
油性懸濁液は、活性成分を、植物油、例えばピーナツ油、オリーブ油、ゴマ油もしくはココナッツ油中で、または流動パラフィンなどの鉱油中で懸濁することにより処方することができる。油性懸濁液は、増粘剤、例えばミツロウ、固形パラフィンまたはセチルアルコールを含んでもよい。美味な経口調製物を提供するために、上記のもののような甘味剤、および香味剤を添加してもよい。これらの組成物は、ブチルヒドロキシアニソールまたはアルファ−トコフェロールなどの抗酸化剤の添加により保存することができる。
【０１９５】
水の添加による水性懸濁液の調製のために好適な分散可能な粉末および顆粒は、活性成分を、分散剤または湿潤化剤、懸濁「剤」および１つ以上の保存剤と混合して提供する。好適な分散剤または湿潤化剤および懸濁剤は、既に上述したものにより例示される。さらなる賦形剤、例えば、甘味剤、香味剤および着色剤もまた存在してもよい。これらの組成物は、アスコルビン酸などの抗酸化剤の添加により保存することができる。
【０１９６】
本発明の医薬組成物はまた、水中油型エマルジョンの形態であってもよい。油相は、植物油、例えばオリーブ油もしくはピーナツ油、または鉱油、例えば流動パラフィン、またはこれらの混合物であってもよい。好適な乳化剤は、天然に存在するホスファチド、例えば、ダイズレシチン、および脂肪酸およびヘキシトール無水物から誘導されるエステルまたは部分エステル、例えば、ソルビタンモノラウラート、および前記部分エステルとエチレンオキシドとの縮合生成物、例えば、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウラートであってよい。エマルジョンはまた、甘味剤、香味剤、保存剤および抗酸化剤を含んでもよい。
【０１９７】
シロップおよびエリキシルは、甘味剤、例えばグリセロール、プロピレングリコール、ソルビトールまたはスクロースを用いて処方することができる。かかる処方物はまた、粘滑剤、保存剤、香味剤および着色剤および抗酸化剤を含んでもよい。
【０１９８】
医薬組成物は、無菌の注射可能水溶液の形態であってもよい。採用してもよい許容し得るビヒクルおよび溶媒の中には、水、リンガー溶液および等張塩化ナトリウム溶液がある。
【０１９９】
無菌の注射可能調製物はまた、活性成分が油相中に溶解している無菌の注射可能水中油型マイクロエマルジョンであってもよい。例えば、活性成分を、初めにダイズ油とレシチンとの混合物中に溶解してもよい。油性溶液を、次いで水とグリセロールとの混合物中に導入して、マイクロエマルジョンを形成するように処理してもよい。
【０２００】
注射可能溶液またはマイクロエマルジョンは、局所ボーラス注射により患者の血流中に導入してもよい。あるいは、溶液またはマイクロエマルジョンを、本化合物の一定の循環濃度を維持するような様式において投与することが有利である場合もある。かかる一定の濃度を維持するために、持続的静脈内送達デバイスを利用してもよい。かかるデバイスの一例は、Deltec CADD-PLUS（商標）モデル5400 静脈内ポンプである。
【０２０１】
医薬組成物は、筋肉内および皮下投与のための無菌の注射可能な水性または油脂性（oleagenous）懸濁液の形態であってもよい。この懸濁液は、公知の技術に従って、上述されるそれらの好適な分散剤または湿潤化剤および懸濁剤を用いて処方することができる。無菌の注射可能調製物はまた、非毒性の非経口的に許容し得る希釈剤または溶媒中の無菌の注射可能溶液または懸濁液、例えば１，３−ブタンジオール中の溶液としてのものであってもよい。加えて、無菌の不揮発性油が、溶媒または懸濁媒として従来採用されている。この目的のために、合成のモノ−またはジグリセリドを含む任意の無刺激性（bland）の不揮発性油を採用してもよい。加えて、オレイン酸などの脂肪酸が、注射可能物の調製において用途を見出される。
【０２０２】
本発明のための化合物は、鼻内形態において、好適な鼻内用ビヒクルおよび送達デバイスの局所使用を介して、または経皮経路を介して、当業者に周知の経皮貼付剤の形態を用いて投与することができる。経皮送達システムの形態において投与されるために、投与量の投与は、無論、投与レジメン全体にわたり、間欠的であるよりは寧ろ持続的である。本発明の化合物はまた、カカオバター、グリセリンゼラチン、水添植物油、多様な分子量のポリエチレングリコールの混合物、およびポリエチレングリコールの脂肪酸エステルなどの基剤を採用した坐剤として送達されてもよい。本発明の化合物はまた、小さい単層ベジクル、大きな単層ベジクルおよび複層ベジクルなどのリポソーム送達系の形態において投与することができる。リポソームは、コレステロール、ステアリルアミンまたはホスファチジルコリンなどの多様なリン脂質から形成することができる、本発明の化合物はまた、化合物分子がカップリングする個々のキャリアとしてのモノクローナル抗体の使用により送達されてもよい。本発明の化合物はまた、ターゲティング可能な薬物キャリアとしての可溶性ポリマーとカップリングしていてもよい。かかるポリマーは、ポリビニルピロリドン、ピランコポリマー、ポリヒドロキシプロピルメタクリルアミド−フェノール、ポリヒドロキシ−エチルアスパルトアミド−フェノール、またはパルミトイル残基で置換されたポリエチレンオキシド−ポリリジンを含み得る。さらに、本発明の化合物は、薬物の制御放出を達成することにおいて有用な生分解性ポリマーのクラス、例えば、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリ乳酸とポリグリコール酸とのコポリマー、ポリイプシロンカプロラクトン、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリアセタール、ポリジヒドロピラン、ポリシアノアクリラート、および架橋された、または両親媒性のハイドロゲルのブロックコポリマーにカップリングしていてもよい。
本発明による組成物がヒト対象に投与される場合、処方する医師は、通常、個々の患者の年齢、体重および応答、ならびに患者の症状の重篤度に従って変化する投与量により、日毎の投与量を決定する。一態様において、好適な「剤」の量が、血栓症の処置を受けている哺乳動物に投与される。投与は、１日あたり体重１ｋｇあたり約０．１ｍｇ〜約６０ｍｇ、または１日あたり体重１ｋｇあたり０．５ｍｇ〜約４０ｍｇの「剤」の量において行われる。本発明の組成物を含む別の治療的投与量は、約０．０１ｍｇ〜約１０００ｍｇの剤を含む。別の態様において、投与量は、約１ｍｇ〜約５０００ｍｇの剤を含む。
【０２０３】
キット
別の側面において、キットは、組成物（例えば提供されるペプチドを含むもの、またはそれを生成するための組成物）の１つ以上を含む。「キット」は、本明細書において用いられる場合、典型的には、本発明の組成物の１つ以上、および／または本発明に関連する他の組成物、例えば本明細書において記載されるとおりのものを含む、パッケージまたは集合を定義する。キットは、単離または精製されたペプチド、リポペプチド、ポリヌクレオチド、定義するペプチドをコードするベクター、および／または提供されるペプチドを発現するかまたはこれを発現することができる細胞、およびこれらの組み合わせを含んでもよい。キットの組成物の各々は、液体の形態において（例えば溶液中で）、固体の形態（例えば乾燥粉末）において提供されても、または細胞の凍結懸濁液などの懸濁液であってもよい。ある場合において、組成物のいくつかは、例えば、好適な溶媒または他の種（これは、キットと共に提供されても提供されなくともよい）の添加により構成可能（constitutable）であるかまたは他に処理可能（例えば活性な形態に）であってもよい。本発明に関連する他の組成物または成分の例は、これらに限定されないが、例えば、特定の用途のために、例えば試料および／または対象に対して、組成物成分を使用する、投与する、改変する、組み立てる、貯蔵する、包装する、調製する、混合する、希釈する、および／または保存するための、溶媒、界面活性剤、希釈剤、塩、緩衝化剤、キレート剤、充填剤、抗酸化剤、結合剤、嵩高剤、保存剤、乾燥剤、抗菌剤、針、シリンジ、包装材料、試験管、ボトル、フラスコ、ビーカー、ディッシュ、フリット、フィルター、リング、クランプ、ラップ、パッチ、容器などを含む。
キットは、いくつかの場合において、本発明の組成物に関連して提供される、任意の形態における指示を、当業者がその指示が本発明の組成物に関連するべきことを理解するであろうような様式において、含んでもよい。例えば、指示は、組成物および／またはキットに関連する他の組成物の使用、改変、活性化、混合、希釈、保存、投与、組み立て、貯蔵、包装および／または保存のための指示を含んでもよい。いくつかの場合において、指示はまた、例えば材料および／または対象に対する、例えば特定の用途のための、組成物の送達および／または投与のための指示を含んでもよい。
【０２０４】
例
本明細書において記載される発明が、より完全に理解され得るために、以下の例を記載する。これらの例は、説明のみを目的とするものであり、本発明を任意の様式に限定するものとして解釈されるべきではないことが、理解されるべきである。
【０２０５】
表１において見出されるペプチドは、アシル鎖脂肪酸を用いて調製した。特に、Ｎ−パルミトイル化ペプチドを、Ｃ末端アミドを用いる標準的なｆｍｏｃ固相合成法により、先に記載されるように合成した（Covic, et al. (2002) Pepducin-based intervention of thrombin-receptor signaling and systemic platelet activation.  Nat. Med.  8:1161-1165を参照）。
【０２０６】
パルミチン酸を、５０％Ｎ−メチルピロリドン／５０％塩化メチレン中に溶解し、ペプチドの脱保護したＮ末端アミドに一晩カップリングさせた。樹脂から切断した後、パルミトイル化ペプチドを、＞９５％の純度まで、Ｃ１８、Ｃ５またはＣ４逆相クロマトグラフィーにより精製した。
【０２０７】
表２は、生じた表１のパルミトイル化ペプチド（配列番号１〜１１、１３〜４１および７０）についてのアンタゴニスト活性を提供する。表２はまた、生じた表１のミリストイル化ペプチド（配列番号１２）についてのアンタゴニスト活性を提供する。ペプチドのアンタゴニスト活性は、内因的にＰＡＲ２を発現するＳＷ６２０ヒト結腸腺癌細胞によるカルシウム流アッセイを用いて測定した。３μＭまたは１０μＭのパルミトイル化ペプチドによる１分間の前処置の後での、１００μＭのＳＬＩＧＲＬ（配列番号７３）のカルシウムシグナル。ＤＭＳＯビヒクルの最終濃度は、０．２％であった。８μＭのＳＬＩＧＲＬ（配列番号７３；既知のＰＡＲ２アゴニスト）に対する３μＭおよび１０μＭのペプチドのアンタゴニスト活性は、最大カルシウム流により測定した。実験は、少なくとも各２〜３回繰り返し、類似の結果を得た。
【表２】
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【０２０８】
均等物および範囲
請求の範囲において、「a」、「an」および「the」などの冠詞は、逆が示されない限り、または文脈から別段に明らかでない限り、１つ、または１つより多くを意味し得る。グループの１つ以上のメンバーの間に「or」を含む請求項または記載は、逆が示されない限り、または文脈から別段に明らかでない限り、グループメンバーのうちの１つ、１つより多く、または全てが、所与の生成物またはプロセス中に存在するか、それにおいて使用されるか、または他に関連する場合に、満たされたものとみなされる。本発明は、グループの正確に１つのメンバーが、生成物またはプロセス中に存在するか、それにおいて採用されるか、またはそれに他の方法で関連する態様を含む。本発明は、グループのメンバーのうちの１つより多く、または全てが、生成物またはプロセス中に存在するか、それにおいて採用されるか、またはそれに他の方法で関連する態様を含む。
【０２０９】
さらに、本発明は、列記される請求項のうちの１つ以上からの、１つ以上の限定、要素、条項、および説明用語が、別の請求項中に導入される、全てのバリエーション、組み合わせおよび並べ替えを包含する。例えば、別の請求項に従属する任意の請求項は、同じ基礎請求項に従属する任意の他の請求項中に見出される１つ以上の限定を含むように改変することができる。要素が、例えばマーカッシュ群形式において、リストとして提示される場合、要素の各々のサブグループもまた開示され、任意の要素をグループから取り除くことができる。一般的に、本発明、または本発明の側面が、特定の要素および／または特徴を含むものとして言及される場合、本発明のある態様または本発明の側面は、かかる要素および／または特徴からなるか、これらから本質的になることが、理解されるべきである。簡潔化のために、これらの態様は、本明細書において文言としては特には記載されていない。また、用語「含む（comprising）」および「含む（containing）」は、オープンであることを意図され、さらなる要素またはステップの包含を可能にすることに留意する。範囲が示される場合、エンドポイントが含められる。さらに、別段に示されない限り、または文脈および当業者の理解から別段に明らかでない限り、範囲として表される値は、本発明の異なる態様において記述される範囲内の任意の特定の値または部分範囲を、文脈が明らかに別段に示さない限り、当該範囲の下限の単位の１０分の１まで想定し得る。
【０２１０】
本願は、多様な発行された特許、公開された特許出願、雑誌の記事、および他の刊行物を参照し、それらの全ては、本明細書において参照することにより援用される。援用された参考文献のいずれかと本明細書との間で矛盾が存在する場合、本明細書が支配すべきである。加えて、先行技術の範囲内に該当する本発明の任意のある態様は、請求項の１つ以上から明示的に除外され得る。かかる態様は、当業者に公知であるものと考えられるので、それらは、除外が本明細書において明示的に記載されていない場合であっても、除外され得る。本発明の任意のある態様は、先行技術の存在に関係するか否かに関わらず、任意の請求項から任意の理由のために除外することができる。
【０２１１】
当業者は、本明細書において記載される特定の態様に対する多くの均等物を認識するか、または慣用的な実験のみを用いてこれを確認することができる。本明細書において記載される本態様の範囲は、上の説明に限定することは意図されないが、寧ろ、添付の請求の範囲において記載される。当業者は、以下の請求の範囲において定義されるような本発明の精神または範囲から逸脱することなく、この記載に対する多様な変更および改変が行い得ることを認識するであろう。
【０２１２】
明細書において同定される任意の特許、特許出願、刊行物または他の開示材料は、本明細書においてその全体において参照することにより援用される。本明細書において参照することにより援用されると言われる任意の材料、またはその部分であるが、本明細書において記載される既存の定義、声明または他の開示材料と矛盾するものは、援用された材料と本開示の材料との間に矛盾が生じない程度までのみ、援用される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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