(57)【要約】  本出願は、ポリアニオン性およびポリ非イオン性のシクロデキストリン系デンドリマーを含む医薬組成物を提供する。この組成物は、賦形剤として、またはレスキュー薬としての使用などにおいて化合物に結合させて対象から望ましくない薬物および代謝産物を除去するために、使用できる。対象の処置における使用の方法も提供される。【選択図】図２
2018510912.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式：
【化１】
2018510912.tif 000015
のポリアニオン性化合物であって、式中、
Ｘ（−）は１つ以上の負荷電部分であり、
Ｙ（＋）は１つ以上の対カチオンであり、
Ｌは１つ以上のリンカーであり、
Ｇは結合であるか１つ以上の架橋基であり、
ｐは整数であり、
Ｒは１つ以上の置換基である、
化合物を医薬的に許容される希釈剤と共に含む医薬組成物。
【請求項２】
Ｘ（−）は、任意の好適な負荷電部分であり、
Ｌは、置換もしくは非置換アルキル基、および／または置換もしくは非置換ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）基、あるいは１つ以上のアルキル基と１つ以上のＰＥＧ基との組み合わせ、を含み、
ｐは、６、７または８であり、
Ｇは、結合であるか、あるいは任意の１つ以上の好適な架橋基または置換もしくは非置換１，２，３−トリアゾールを表し、
Ｒは、Ｈ、任意選択で置換されていてもよいアルキル基または任意選択で置換されていてもよいアシル基であり、
Ｙ（＋）は、Ｎａ＋またはＫ＋である、
請求項１の組成物。
【請求項３】
Ｘ（−）は−ＳＯ３−、−ＣＯ２−、−ＯＳＯ３−または−ＯＰＯ３−である、請求項１または２の組成物。
【請求項４】
ＬはＣ１〜Ｃ１１アルキル基である、請求項１〜３のいずれか１項の組成物。
【請求項５】
ｐは７である、請求項１〜４のいずれか１項の組成物。
【請求項６】
Ｇは、エステル、アミド、アミンまたは硫黄であるか、あるいは以下の構造：
【化２】
2018510912.tif 000016
のうちの一方を含む基で置換された基を含む、請求項１〜５のいずれか１項の組成物。
【請求項７】
Ｇは−Ｓ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−ＳＯ−または−ＳＯ２−である、請求項６の組成物。
【請求項８】
Ｒは、任意選択で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ１８のアルキル基またはアシル基である、請求項１〜７のいずれか１項の組成物。
【請求項９】
前記ＰＥＧ基は式−ＣＨＺ（ＣＨ２ＯＣＨＺ）ｍＣＨ２−のものであり、ここで、ＺはＨまたはＣＨ３であり、ｍは１〜２０である、請求項１〜８のいずれか１項の組成物。
【請求項１０】
Ｌは、任意の非置換または置換アルキル基；非置換または置換ＰＥＧ基を含むか、あるいは
ＬはＰＥＧ基を含み、このＰＥＧ基は、そのＰＥＧ基の片側または両側に隣接する１つ以上のアルキル基を有さないか、有する、
請求項１〜９のいずれか１項の組成物。
【請求項１１】
前記アルキル基がＰＥＧ基で置換されている、請求項１０の組成物。
【請求項１２】
前記ＰＥＧ基が１つ以上のアルキル基で置換されている、請求項１０の組成物。
【請求項１３】
前記アルキル基のＣＨ２基のうちの１つ以上が原子または官能基に置き換えられている、請求項１〜１２のいずれか１項の組成物。
【請求項１４】
原子または官能基が−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、−ＣＯＮＨ−、−ＣＯＯ−、−ＮＺ−または置換もしくは非置換１，２，３−トリアゾール基である、請求項１３の組成物。
【請求項１５】
前記１，２，３−トリアゾール基が、以下の構造：
【化３】
2018510912.tif 000017
のうちの一方を含む基で置換されている、請求項１４の組成物。
【請求項１６】
式：
【化４】
2018510912.tif 000018
の非イオン性シクロデキストリン系化合物であって、式中、
Ｘ’は１つ以上の中性部分であり、
Ｌは１つ以上のリンカーであり、
Ｇは結合であるか１つ以上の架橋基であり、
ｐは整数であり、
Ｒは１つ以上の置換基である、
化合物を医薬的に許容される希釈剤と共に含む医薬組成物。
【請求項１７】
Ｘ’は、非置換もしくは置換アミド（そのＮ−置換形態を含む）、ニトリル基（−ＣＮ）、またはポリヒドロキシル化された残基である、請求項１６の組成物。
【請求項１８】
前記アミドが−ＣＯＮＨ２である、請求項１７の組成物。
【請求項１９】
Ｘ’が炭水化物である、請求項１７の組成物。
【請求項２０】
ＬはＣ１〜Ｃ１１アルキル基である、請求項１６〜１９のいずれか１項の組成物。
【請求項２１】
ｐは６、７または８である、請求項１６〜２０のいずれか１項の組成物。
【請求項２２】
ｐは７である、請求項２１の組成物。
【請求項２３】
Ｇは、エステル、アミド、アミンまたは硫黄であるか、あるいは以下の構造：
【化５】
2018510912.tif 000019
のうちの一方を含む基で置換された基を含む、請求項１６〜２２のいずれか１項の組成物。
【請求項２４】
Ｇは−Ｓ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−ＳＯ−または−ＳＯ２−である、請求項２３の組成物。
【請求項２５】
Ｒは、任意選択で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ１８のアルキル基またはアシル基である、請求項１６〜２４のいずれか１項の組成物。
【請求項２６】
前記ＰＥＧ基は式−ＣＨＺ（ＣＨ２ＯＣＨＺ）ｍＣＨ２−のものであり、ここで、ＺはＨまたはＣＨ３であり、ｍは１〜２０である、請求項１６〜２５のいずれか１項の組成物。
【請求項２７】
Ｌは、任意の非置換または置換アルキル基；非置換または置換ＰＥＧ基を含むか、あるいは
ＬはＰＥＧ基を含み、このＰＥＧ基は、そのＰＥＧ基の片側または両側に隣接する１つ以上のアルキル基を有さないか、有する、
請求項１６〜２６のいずれか１項の組成物。
【請求項２８】
前記アルキル基がＰＥＧ基で置換されている、請求項２７の組成物。
【請求項２９】
前記ＰＥＧ基が１つ以上のアルキル基で置換されている、請求項２７の組成物。
【請求項３０】
前記アルキル基のＣＨ２基のうちの１つ以上が、原子または官能基に置き換えられている、請求項１６〜２９のいずれか１項の組成物。
【請求項３１】
原子または官能基が−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、−ＣＯＮＨ−、−ＣＯＯ−、−ＮＺ−または置換もしくは非置換１，２，３−トリアゾール基である、請求項３０の組成物。
【請求項３２】
前記１，２，３−トリアゾール基が、以下の構造：
【化６】
2018510912.tif 000020
のうちの一方を含む基で置換されている、請求項３１の組成物。
【請求項３３】
式：
【化７】
2018510912.tif 000021
のポリアニオン性シクロデキストリン系化合物であって、式中、
ｐは６（α−シクロデキストリン）、７（β−シクロデキストリン）または８（γ−シクロデキストリン）であり、
Ｘ（−）は−ＣＯ２−または−ＳＯ３−であり、
Ｇは−Ｓ−であり、
Ｌは−（ＣＨ２）ｋ−（ここでｋは１〜１１、任意選択で７〜１１、である）であるか、またはＬは
【化８】
2018510912.tif 000022
（ここでｑは０〜２０であり、ｎは１〜５、任意選択で１〜１１、である）もしくは
【化９】
2018510912.tif 000023
（ここでｌは１〜２０である）であり、
ＲはＨ、任意選択で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ１８アルキル、または任意選択で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ１８アシルである、
ポリアニオン性シクロデキストリン系化合物。
【請求項３４】
請求項３３の化合物を医薬的に許容される希釈剤と共に含む組成物。
【請求項３５】
レスキュー薬としての使用のための、請求項１〜３２および３４のいずれか１項の組成物において定義される化合物。
【請求項３６】
生物から化合物を除去するための、請求項１〜３２および３４のいずれか１項の組成物において定義される化合物の使用。
【請求項３７】
レスキュー薬としての、請求項３６に記載の使用。
【請求項３８】
賦形剤としての、請求項１〜３２および３４のいずれか１項の組成物において定義される化合物の使用。
【請求項３９】
対象における望ましくない分子の除去のために処置を必要とする前記対象を処置する方法であって、請求項１〜３２および３４のいずれか１項の組成物を、前記化合物が前記分子に結合して前記対象からそれを除去するように前記対象に投与することを含む方法。
【請求項４０】
本明細書に実質的に記載されるような化合物を医薬的に許容される希釈剤と共に含む医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、シクロデキストリンの分野に関する。より詳細には、本出願は、例えば賦形剤またはレスキュー薬（rescue medicines）などの医薬用途における使用のためのシクロデキストリン系のポリアニオン性デンドリマーおよび非イオン性デンドリマーに関する。
【背景技術】
【０００２】
シクロデキストリン（ＣＤ）は、疎水性の空洞を有する、非毒性の水溶性Ｄ−グルコース系大環状分子のクラスである。ＣＤは通常、グルコース単位の数によって異なる。一般的なメンバーには、空洞サイズの増大と共に、α−ＣＤ（６つのグルコース単位）、β−ＣＤ（７つのグルコース単位）およびγ−ＣＤ（８つのグルコース単位）が包含される。その多様な空洞サイズは、幅広い様々な用途（特に薬物送達モデル）において高い有用性をもたらす。例えば、薬物を空洞内に包接して運搬する「包接複合体」を形成するためにＣＤを使用できる。これは、薬物の水溶性、化学的安定性、および特定の薬物の副作用（望ましくない味など）の除去を向上させるための医薬賦形剤として使用できる。また、人工酵素、遺伝子送達ビヒクル、センサー、および新規の超分子集合体の設計において、ＣＤは、化粧品添加物産業および食品添加物産業で関心を集めてもいる。
【０００３】
ＣＤは、天然のものであるか、その一次面（ｐｒｉｍａｒｙ  ｆａｃｅ）および／または二次面（ｓｅｃｏｎｄａｒｙ  ｆａｃｅ）のいずれかまたは両方において化学修飾されたものであってよい。通常、包接複合体は、天然のＣＤよりも水溶性が低いことが多い。ＣＤの化学修飾は、ＣＤの物理化学的特性を変化させ得る。例えば、β−ＣＤの一次面にトシル基を付加すると、その分子は室温においてほぼ不溶となるが、ＯＨ−６およびＯＨ−２の位置にメチル基を付加すると、水溶性が著しく増大する。また、分子の毒性も変化し得る。従って、ＣＤ分子の修飾は、いくつかの利点をもたらす可能性がある。しかし、ＣＤの化学修飾は通常、達成するのが困難であり、多くの場合、分離するのが困難な複数の生成物の混合物の形成をもたらす。
【０００４】
一次面または二次面に付加される基は、中性であるか、荷電していてよい。例えば、Ｃａｐｔｉｓｏｌ（登録商標）は、いくつかの薬物と共に使用するための賦形剤である。これは、Ｄ−グルコースの酸素原子を介して直接それに結合したスルホブチルエーテルナトリウム基（sodium sulfobutyl ether group）を１〜１０個有するβ−ＣＤ誘導体のポリアニオン性混合物である（米国特許第５，１３４，１２７号（Ｓｔｅｌｌａ  ｅｔ  ａｌ））。Ｃａｐｔｉｓｏｌは、水中でβ−ＣＤを１，４−ブチルスルトンおよび水酸化ナトリウムと反応させることにより調製される。得られた生成物は、ＣＤ上の異なる酸素の位置における置換（ＣＤ上のＯ−２、Ｏ−３およびＯ−６における置換など）の程度が様々である位置異性体（positional and regioisomers）を多数含む混合物である（Ｌｕｎａ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．Ｒｅｓ．，  ２９９，  １０３−１１０，  １９９７；Ｌｕｎａ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．Ｒｅｓ．，  ２９９，  １１１−１１８，  １９９７；Ｒｏｇｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．Ｒｅｓ．，  ３２７，  ２７５−２８５，  ２０００；ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃａｐｔｉｓｏｌ．ｃｏｍ／ｆａｑ／ｓｏｌｕｔｉｏｎ−ａｎｄ−ｓｏｌｉｄ−ｓｔａｔｅ−ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ−ｉｎ−ｃａｐｔｉｓｏｌ）。
【０００５】
Ｃａｐｔｉｓｏｌにはいくつかの欠点がある。Ｃａｐｔｉｓｏｌは化合物の混合物を含み、従って、多様な組成をもたらすため、製品組成を画定して特徴付けることが、不可能ではないにしても、困難である。
【０００６】
現在市販されている別のポリアニオン性ＣＤ化合物はＳｕｇａｍｍａｄｅｘ（Ｍｅｒｃｋ）であり、これは、γ−ＣＤから得られるポリアニオン性の作用物質である。Ｓｕｇａｍｍａｄｅｘは、神経筋作用薬の活性を遮断する（Ｙａｎ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｄｒｕｇｓ，  ２００９：６９，  ９１９−４２；Ｃａｌｄｅｒｏｎ−Ａｃｅｄｏｓ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｅｕｒ．Ｊ．Ｈｏｓｐ．Ｐｈａｒｍ．  ２０１２：１９，  ２４８）。また、米国特許第６，６７０，３４０号（Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．）および米国特許第６，９４９，５２７号（Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．）も参照のこと。
【０００７】
非イオン性ＣＤ系化合物も当技術分野で公知である。一例としては、ヒドロキシプロピル−βＣＤ（ＨＰＢＣＤ）が挙げられる。しかし、これは化合物の混合物として存在し、同様に、多様な組成をもたらす。
【０００８】
医薬産業における様々な用途のための純粋なアニオン性または非イオン性のＣＤ誘導体が必要とされている。
【０００９】
この背景技術情報は、本発明に関連する可能性があると本出願人が思料する公知の情報を作成する目的で提供される。前述の情報のいずれかが本発明に対する先行技術を構成すると認めることを必ずしも意図するものではないし、そのように解釈されるべきでもない。
【発明の概要】
【００１０】
本発明の目的は、様々な医薬用途における使用のための、改良された純粋なポリアニオン性シクロデキストリン系化合物および非イオン性シクロデキストリン系化合物を提供することである。
【００１１】
本発明の態様によれば、式：
【化１】
2018510912.tif 000003
のポリアニオン性化合物であって、式中、
Ｘ（−）は１つ以上の負荷電部分であり、
Ｙ（＋）は１つ以上の対カチオンであり、
Ｌは１つ以上のリンカーであり、
Ｇは結合であるか１つ以上の架橋基であり、
ｐは整数であり、
Ｒは１つ以上の置換基である、
化合物を医薬的に許容される希釈剤と共に含む医薬組成物が提供される。
【００１２】
荷電部分Ｘ（−）は、任意の好適な負荷電部分であってよい。非限定的な例としては、例えば、−ＳＯ３−、−ＣＯ２−、−ＯＳＯ３−、−ＯＰＯ３−が挙げられる。
【００１３】
リンカーＬは、置換もしくは非置換アルキル基（例えば、Ｃ１〜Ｃ１１アルキル基など）、および／または置換もしくは非置換ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）基、あるいは１つ以上のアルキル基と１つ以上のＰＥＧ基との組み合わせを含んでよい。例示的な実施形態において、ＰＥＧ基は、例えば、式−ＣＨＺ（ＣＨ２ＯＣＨＺ）ｍＣＨ２−のものであり、ここで、ＺはＨまたはＣＨ３であり、ｍは１〜２０である。しかし、任意の好適なＰＥＧ基が存在するのであれば、それが意図されてよい。特定の実施形態において、Ｌは、任意の非置換または置換アルキル基を含んでよい。例えば、アルキル基は、ＰＥＧ基で置換されていてよい。しかし、任意の好適な置換基が意図されてよい。他の実施形態において、Ｌは、非置換または置換ＰＥＧ基を含んでよい。例えば、ＰＥＧ基は、１つ以上のアルキル基で置換されていてよい。しかし、任意の好適な置換基が意図されてよい。特定の他の実施形態において、ＬはＰＥＧ基を含み、このＰＥＧ基は、そのＰＥＧ基の片側または両側に隣接する１つ以上のアルキル基を有さないか、有する。アルキル基のＣＨ２基のうちの１つ以上が原子または官能基に置き換えられていてよい。原子または官能基の非限定な例としては、例えば、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、−ＣＯＮＨ−、−ＣＯＯ−、−ＮＺ−、または置換もしくは非置換１，２，３−トリアゾール基が挙げられる。置換１，２，３−トリアゾール基の例には、以下の構造：
【化２】
2018510912.tif 000004
のうちの一方を含む基で置換されたものが包含されてよい。
【００１４】
化合物中のシクロデキストリンは、例えば、６、７または８つのグルコース単位（典型的には７つ）を含んでよい。従って、ｐは、６、７または８（典型的には７）であってよい。
【００１５】
特定の実施形態において、Ｇは、任意の１つ以上の好適な架橋基を表す。Ｇは、例えば、エステル、アミド、アミン、硫黄、または置換もしくは非置換１，２，３−トリアゾールを表してよい。Ｇについての架橋基の非限定的な例としては、−Ｓ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、または置換もしくは非置換１，２，３−トリアゾール基が挙げられる。置換１，２，３−トリアゾール基の例には、以下の構造：
【化３】
2018510912.tif 000005
のうちの一方を含む基で置換されたものが包含されてよい。しかし、他の好適な架橋基が意図されてよい。特定の他の実施形態において、Ｇは結合である。
【００１６】
置換基Ｒは、任意の１つ以上の好適な置換基であってよい。非限定的な例としては、Ｈ、任意選択で置換されていてもよいアルキル基または任意選択で置換されていてもよいアシル基が挙げられる。特定の実施形態において、任意選択で置換されていてもよいアルキル基またはアシル基は、例えば、Ｃ１〜Ｃ１８の基である。
【００１７】
Ｙ（＋）は、例えば、任意の医薬的に許容されるカチオン（典型的にはＮａ＋またはＫ＋）であってよい。
【００１８】
本発明の別の態様によれば、式：
【化４】
2018510912.tif 000006
の非イオン性シクロデキストリン系化合物であって、式中、
Ｘ’は１つ以上の中性部分であり、
Ｌは１つ以上のリンカーであり、
Ｇは結合であるか１つ以上の架橋基であり、
ｐは整数であり、
Ｒは１つ以上の置換基である、
化合物を医薬的に許容される希釈剤と共に含む医薬組成物が提供される。
【００１９】
中性部分Ｘ’の非限定的な例には、例えば、非置換もしくは置換アミド（そのＮ−置換形態を含む）（例えば−ＣＯＮＨ２など）、ニトリル基（−ＣＮ）、またはポリヒドロキシル化された残基（例えば炭水化物など）が包含されてよい。
【００２０】
リンカーＬは、置換もしくは非置換アルキル基（例えば、Ｃ１〜Ｃ１１アルキル基など）、および／または置換もしくは非置換ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）基、あるいは１つ以上のアルキル基と１つ以上のＰＥＧ基との組み合わせを含んでよい。例示的な実施形態において、ＰＥＧ基は、例えば、式−ＣＨＺ（ＣＨ２ＯＣＨＺ）ｍＣＨ２−のものであり、ここで、ＺはＨまたはＣＨ３であり、ｍは１〜２０である。しかし、任意の好適なＰＥＧ基が存在するのであれば、それが意図されてよい。特定の実施形態において、Ｌは、任意の非置換または置換アルキル基を含んでよい。例えば、アルキル基は、ＰＥＧ基で置換されていてよい。しかし、任意の好適な置換基が意図されてよい。他の実施形態において、Ｌは、非置換または置換ＰＥＧ基を含んでよい。例えば、ＰＥＧ基は、１つ以上のアルキル基で置換されていてよい。しかし、任意の好適な置換基が意図されてよい。特定の他の実施形態において、ＬはＰＥＧ基を含み、このＰＥＧ基は、そのＰＥＧ基の片側または両側に隣接する１つ以上のアルキル基を有さないか、有する。アルキル基のＣＨ２基のうちの１つ以上が原子または官能基に置き換えられていてよい。原子または官能基の非限定な例としては、例えば、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、−ＣＯＮＨ−、−ＣＯＯ−、−ＮＺ−、または置換もしくは非置換１，２，３−トリアゾール基が挙げられる。置換１，２，３−トリアゾール基の例には、以下の構造：
【化５】
2018510912.tif 000007
のうちの一方を含む基で置換されたものが包含されてよい。
【００２１】
化合物中のシクロデキストリンは、例えば、６、７または８つのグルコース単位（典型的には７つ）を含んでよい。従って、ｐは、６、７または８（典型的には７）であってよい。
【００２２】
特定の実施形態において、Ｇは、任意の１つ以上の好適な架橋基を表す。Ｇは、例えば、エステル、アミド、アミン、硫黄、または置換もしくは非置換１，２，３−トリアゾールを表してよい。Ｇについての架橋基の非限定的な例としては、−Ｓ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、または置換もしくは非置換１，２，３−トリアゾール基が挙げられる。置換１，２，３−トリアゾール基の例には、以下の構造：
【化６】
2018510912.tif 000008
のうちの一方を含む基で置換されたものが包含されてよい。しかし、他の好適な架橋基が意図されてよい。特定の他の実施形態において、Ｇは結合である。
【００２３】
置換基Ｒは、任意の１つ以上の好適な置換基であってよい。Ｒの非限定的な例としては、Ｈ、任意選択で置換されていてもよいアルキル基または任意選択で置換されていてもよいアシル基が挙げられる。特定の実施形態において、任意選択で置換されていてもよいアルキル基またはアシル基は、例えば、Ｃ１〜Ｃ１８の基である。
【００２４】
特定の実施形態において、本出願は、本明細書で説明されるようなポリアニオン性シクロデキストリン系化合物を提供し、ここでｐは６（α−シクロデキストリン）、７（β−シクロデキストリン）または８（γ−シクロデキストリン）であり、Ｘ（−）は−ＣＯ２−または−ＳＯ３−であり、Ｇは−Ｓ−であり、Ｌは−（ＣＨ２）ｋ−（ここでｋは１〜１１、任意選択で７〜１１、である）であるか、またはＬは
【化７】
2018510912.tif 000009
（ここでｑは０〜２０であり、ｎは１〜５、任意選択で１〜１１、である）もしくは
【化８】
2018510912.tif 000010
（ここでｌは１〜２０である）であり、ＲはＨ、任意選択で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ１８アルキル、または任意選択で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ１８アシルである。
【００２５】
本明細書で説明されるような化合物は、賦形剤などの様々な医薬用途において、または望ましくない薬物および／またはその代謝産物を除去するためのレスキュー薬としての使用などのためにゲスト分子を包接させることによって、使用できる。
【００２６】
本出願は、本明細書に実質的に記載されるような化合物を希釈剤と共に含む医薬組成物を提供する。本明細書で説明されるような化合物は、例えば、賦形剤として、またはヒト対象などの生物からの化合物の除去などのためのレスキュー薬として、使用できる。本出願はまた、望ましくない分子の処置を必要とする対象を処置する方法であって、本明細書で説明されるような化合物を、その化合物が前記分子に結合して前記対象からそれを除去するように前記対象に投与することを含む方法も提供する。
【００２７】
本発明の、ならびに他の態様の、さらにはそれらの特徴の、より良好な理解のために、添付の図面と併せて使用されるべきである以下の説明を参照する。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１】図１は、追加的なＰＥＧ化リンカー基を有するチオエーテル連結型ポリアニオン性ＣＤの例示的な図を示す。
【図２】図２は、ＰＥＧ鎖の繰り返し単位を２つあるいは３つ含む例示的なポリアニオン性スルホＰＥＧ（sulfoPEG）チオエーテルＣＤを示す。
【図３】図３は、ＰＥＧリンカーを含む例示的な水溶性または両親媒性のポリアニオン性ＣＤを示す。
【図４】図４は、例示的なポリ非イオン性チオエーテルＣＤ類似体を示す。
【図５】図５は、例示的なポリ非イオン性チオエーテルＣＤポリアミドを示す。
【図６】図６は、チオエーテル連結型スルホアルキル基を含む水溶性または両親媒性のポリアニオン性ＣＤの例示的な図を示す。
【図７】図７は、１Ｈ−ＮＭＲ分光法によるポリアニオン性γ−ＣＤ誘導体（構造３）と臭化ロクロニウムでの包接研究を示す。
【図８】図８は、１Ｈ−ＮＭＲ分光法によるポリアニオン性γ−ＣＤ誘導体（構造６）と臭化ロクロニウムでの別の包接研究を示す。
【図９】図９は、１Ｈ−ＮＭＲ分光法によるポリアニオン性γ−ＣＤ誘導体（構造３）とドキソルビシンでの包接研究を示す。
【図１０】図１０は、１Ｈ−ＮＭＲ分光法によるポリアニオン性γ−ＣＤ誘導体（構造６）とクエン酸タモキシフェンでの包接研究を示す。
【図１１】図１１は、１Ｈ−ＮＭＲ分光法によるポリ非イオン性γ−ＣＤ誘導体（構造１４）とクエン酸タモキシフェンでの包接研究を示す。
【図１２】図１２は、１Ｈ−ＮＭＲ分光法によるポリアニオン性γ−ＣＤ誘導体（構造６）とジルチアゼムでの包接研究を示す。
【図１３】図１３は、１Ｈ−ＮＭＲ分光法によるポリ非イオン性γ−ＣＤ誘導体（構造１１）とジルチアゼムでの別の包接研究を示す。
【図１４】図１４は、１Ｈ−ＮＭＲ分光法によるポリ非イオン性γ−ＣＤ誘導体（構造１４）とジルチアゼムでの別の包接研究を示す。
【図１５】図１５は、１Ｈ−ＮＭＲ分光法によるポリアニオン性γ−ＣＤ誘導体（構造３）と塩酸ナロキシン（Naloxine hydrochloride）での包接研究を示す。
【図１６】図１６は、１Ｈ−ＮＭＲ分光法によるポリアニオン性γ−ＣＤ誘導体（構造３）とバルサルタンでの包接研究を示す。
【図１７】図１７は、１Ｈ−ＮＭＲ分光法によるポリアニオン性β−ＣＤ誘導体（構造２）とカプロフェンでの包接研究を示す。
【図１８】図１８は、１Ｈ−ＮＭＲ分光法によるポリアニオン性β−ＣＤ誘導体（構造２）とフルルビプロフェンでの包接研究を示す。
【図１９】図１９は、１Ｈ−ＮＭＲ分光法によるポリアニオン性γ−ＣＤ誘導体（構造３）とナフチフィンＨＣｌでの包接研究を示す。
【図２０】図２０は、１Ｈ−ＮＭＲ分光法によるポリアニオン性γ−ＣＤ誘導体（構造３）とオキシテトラサイクリンＨＣｌでの包接研究を示す。
【図２１】図２１は、１Ｈ−ＮＭＲ分光法によるポリアニオン性γ−ＣＤ誘導体（構造３）とドキシサイクリンヒクラートでの包接研究を示す。
【図２２】図２２は、１Ｈ−ＮＭＲ分光法によるポリアニオン性γ−ＣＤ誘導体（構造３）とアミトリプチリンＨＣｌでの包接研究を示す。
【図２３】図２３は、１Ｈ−ＮＭＲ分光法によるポリアニオン性γ−ＣＤ誘導体（構造３）とアセブトロールＨＣｌでの包接研究を示す。
【図２４】図２４は、１Ｈ−ＮＭＲ分光法によるポリアニオン性β−ＣＤ誘導体（構造２）とブピバカインＨＣｌでの包接研究を示す。
【図２５】図２５は、１Ｈ−ＮＭＲ分光法によるポリアニオン性β−ＣＤ誘導体（構造２）と臭化イプラトロピウムでの包接研究を示す。
【図２６】図２６は、１Ｈ−ＮＭＲ分光法によるポリアニオン性β−ＣＤ誘導体（構造２）と臭化チキジウムでの包接研究を示す。
【図２７】図２７は、構造３によるネホパム塩酸（Nefopam hydrochloric acid）の包接についてのＮＭＲの結果を示す。
【図２８】図２８は、構造３によるクロミプラミン塩酸（Clomipramine hydrochloric acid）の包接についてのＮＭＲの結果を示す。
【図２９】図２９は、構造３による硝酸イソコナゾールの包接についてのＮＭＲの結果を示す。
【図３０】図３０は、構造３によるボリコナゾールの包接についてのＮＭＲの結果を示す。
【図３１】図３１は、構造３による硝酸ブトコナゾールの包接についてのＮＭＲの結果を示す。
【図３２】図３２は、構造３による硫酸イマザリルの包接についてのＮＭＲの結果を示す。
【図３３】図３３は、構造３によるジプラシドン塩酸（Ziprasidone hydrochloric acid）の包接についてのＮＭＲの結果を示す。
【図３４】図３４は、構造３によるエコナゾールの包接についてのＮＭＲの結果を示す。
【図３５】図３５は、構造３による硝酸セルタコナゾールの包接についてのＮＭＲの結果を示す。
【図３６】図３６は、構造３によるイリノテカンＨＣｌの包接についてのＮＭＲの結果を示す。
【図３７】図３７は、エレクトロスプレーイオン化質量分析によるポリアニオン性γ−ＣＤ誘導体（構造３および６）での包接研究に使用された、選択された市販の薬物の構造を示す。
【図３８】図３８は、エレクトロスプレーイオン化質量分析によるポリアニオン性γ−ＣＤ誘導体（構造３）と臭化ロクロニウムでの包接研究を示す。
【図３９】図３９は、エレクトロスプレーイオン化質量分析によるポリアニオン性γ−ＣＤ誘導体（構造６）と臭化ロクロニウムでの包接研究を示す。
【図４０】図４０は、１０ｍＭの酢酸アンモニウム（ｐＨ６．８）中でＥＳＩ−ＭＳによって測定された、様々な薬物に結合するＣＤの構造３（ＰＺ７０９５）および構造６（ＰＺ７０８６）についてのＫｄ，ａｐｐを示す。
【図４１】図４１は、１０ｍＭの酢酸アンモニウム（ｐＨ６．８）中でＥＳＩ−ＭＳによって測定された、様々な薬物に結合するＣＤ（構造３、ＰＺ７０９５）についてのＫｄ，ａｐｐを示す。
【図４２】図４２は、ポリスルホネート構造２、３、５および６についての溶血の結果を示す。
【図４３】図４３は、本発明に従うカルボキシＰＥＧチオエーテルＣＤの２つの例（構造１７および１８）を示す。
【図４４】図４４は、カルボキシＰＥＧチオエーテルＣＤ類似体（構造１７および１８）の例示的な合成を示す。
【図４５】図４５は、構造１８によるジルチアゼムの包接についてのＮＭＲの結果を示す。
【図４６】図４６は、構造１８によるアミトリプリン（amitripline）の包接についてのＮＭＲの結果を示す。
【図４７】図４７は、構造１８によるクロミプラミンの包接についてのＮＭＲの結果を示す。
【図４８】図４８は、構造１８によるクエン酸タモキシフェンの包接についてのＮＭＲの結果を示す。
【図４９】図４９は、構造１８によるクエン酸トレミフェンの包接についてのＮＭＲの結果を示す。
【図５０】図５０は、構造１８によるボリコナゾールの包接についてのＮＭＲの結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２９】
詳細な説明
【００３０】
本明細書で使用される技術用語および科学用語は全て、そうではないことが定義されていない限り、本発明の属する技術分野における通常の知識を有する者が一般に理解するのと同じ意味を有する。
【００３１】
本願の明細書および特許請求の範囲において使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、そうではないことが文脈上明確に示されていない限り、複数への言及を包含する。
【００３２】
本明細書で使用される「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」なる用語は、それに続くリストが非網羅的であり、且つ、任意の他の好適な項目を追加的に（例えば、必要に応じて１つ以上の特徴（複数可）、構成要素（複数可）および／または成分（複数可）をさらに）包含してもしなくてもよいことを意味すると理解されるであろう。
【００３３】
本明細書で使用される場合、「脂肪族」なる用語は、直鎖状、分枝状または環状の、飽和非芳香族炭化水素または不飽和非芳香族炭化水素を指す。脂肪族炭化水素の例としては、アルキル基が挙げられる。
【００３４】
本明細書で使用される場合、「アルキル」なる用語は、非置換であってよいか、または任意選択で１つ以上の置換基で置換されていてもよい、直鎖状、分枝状または環状の、飽和炭化水素基または不飽和炭化水素基を指す。飽和直鎖アルキル基または飽和分枝鎖アルキル基の例としては、限定されるものではないが、メチル、エチル、１−プロピル、２−プロピル、１−ブチル、２−ブチル、２−メチル−１−プロピル、２−メチル−２−プロピル、１−ペンチル、２−ペンチル、３−ペンチル、２−メチル−１−ブチル、３−メチル−１−ブチル、２−メチル−３−ブチル、２，２−ジメチル−１−プロピル、１−ヘキシル、２−ヘキシル、３−ヘキシル、２−メチル−１−ペンチル、３−メチル−１−ペンチル、４−メチル−１−ペンチル、２−メチル−２−ペンチル、３−メチル−２−ペンチル、４−メチル−２−ペンチル、２，２−ジメチル−１−ブチル、３，３−ジメチル−１−ブチルおよび２−エチル−１−ブチル、１−ヘプチルおよび１−オクチルが挙げられる。本明細書で使用される場合、「アルキル」なる用語は、環状アルキル、またはシクロアルキル基を包含する。本明細書で使用される「シクロアルキル」なる用語は、少なくとも３つの炭素原子を含む非芳香族で飽和の単環式、二環式または三環式の炭化水素環系を指す。Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル基の例としては、限定されるものではないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、ノルボルニル、アダマンチル、ビシクロ［２．２．２］オクタ−２−エニル、およびビシクロ［２．２．２］オクチルが挙げられる。鎖長の延長を助けるために、エーテル、チオエーテル、スルホキシド、またはアミン、アミド、アンモニウム、エステル、フェニル、１，２，３−トリアゾール等などの化学官能基にアルキル基を組み込んでよい。
【００３５】
本明細書で使用される場合、「置換された」なる用語は、１つ以上の置換基を有する構造を指す。置換基は、親分子体に結合している１つ以上の水素原子と置き換わったとみなすことができる原子または結合した原子の群である。置換基の例としては、脂肪族基、ハロゲン、アリールカルボニルオキシ、アルコキシカルボニルオキシ、アリールオキシカルボニルオキシ、アルコキシカルボニル、アミノカルボニル、アルキルチオカルボニル、アルコキシル、リン酸エステル、ホスホナト、ホスフィナト、シアノ、第三級アミノ、第三級アシルアミノ、第三級アミド、イミノ、アルキルチオ、アリールチオ、スルホナト、スルファモイル、第三級スルホンアミド、ニトリル、トリフルオロメチル、ヘテロシクリル、芳香族、およびヘテロ芳香族部分、エーテル、エステル、ホウ素含有部分、第三級ホスフィン、およびケイ素含有部分が挙げられる。
【００３６】
本明細書で使用される場合、「親水性」なる用語は、水に混和および／または溶解する傾向があるか選択的に水分子と相互作用する分子もしくは化学物質または分子内の置換基の物理的性質を指す。親水性基には極性基が包含され得る。対照的に、本明細書で使用される場合、「疎水性」なる用語は、水に混和および／または溶解しない傾向があるか選択的に水分子と反発する分子もしく化学物質または分子内の置換基の物理的性質を指す。
【００３７】
本明細書で使用される場合、「両親媒性」なる用語は、親水性の性質および疎水性の性質の両方を有する分子または化学物質の物理的性質を指す。
【００３８】
本明細書で使用される場合、「アニオン性」なる用語は、負荷電分子、または負電荷をもたらすその一部分を指す。
【００３９】
本明細書で使用される場合、「賦形剤」は、医薬組成物中の薬物または他の活性物質のためのビヒクルまたは媒体として働く不活性物質を指す。
【００４０】
本明細書で使用される場合、「レスキュー薬」は、別の化合物に結合させるために用いることができる任意の化合物または前記化合物を含む組成物を指してよい。典型的には、レスキュー薬は、他の化合物に結合させて、その化合物を生物（ヒト対象など）から除去するためのものである。他の化合物は、薬物またはその代謝産物であってよい。特定の実施形態では、薬物またはその代謝産物は、生物において望ましくなく、毒性であり、および／または生物内で過剰量である。
【００４１】
本文書では、親水性基がＣＤの一次面に配置される一方で、疎水性基はＣＤの二次面に配置されるように説明されている。これら２種の基を交換してＣＤの逆の面に連結することができる。
【００４２】
本出願は、様々なゲスト分子のための運搬体分子としての（理想的には純粋な形態の）ポリアニオン性ＣＤ系化合物および非イオン性ＣＤ系化合物の使用を提供する。
【００４３】
本出願は、レスキュー薬としての使用のためのポリアニオン性ＣＤ系化合物または非イオン性ＣＤ系化合物を含む組成物を提供する。本明細書で説明されるような化合物は、いくつかのゲスト分子と結合する賦形剤として使用できる。これらの化合物はまた、例えば望ましくない薬物および／またはその代謝産物の除去において、使用することもできる。
【００４４】
理想的なことに、本明細書で説明されるようなポリアニオン性ＣＤ系化合物および非イオン性ＣＤ系化合物は、当技術分野において以前に行われたようなエーテルに代えて、チオエーテルまたはその酸化形態（スルホンまたはスルホキシド）を連結基として使用できる。これは、特徴付けがより容易である、純粋な形態の構造的に明確に画定されたポリアニオン性ＣＤ系化合物および非イオン性ＣＤ系化合物をもたらす。従って、本出願のポリアニオン性ＣＤ系化合物および非イオン性ＣＤ系化合物は、明確に画定された組成の薬物製剤を作製するのに適している。
【００４５】
有利なことに、本発明のポリアニオン性ＣＤ系化合物および非イオン性ＣＤ系化合物は、ＣＤ内の空洞の対称性に起因して、より良好な親和性で他の分子に結合できる。ポリアニオン性ＣＤまたは非イオン性ＣＤはα類似体、β類似体、またはγ類似体であってよいため、空洞は、より大きな分子またはより小さな分子を収容できる。
【００４６】
ポリアニオン性ＣＤ系化合物および非イオン性ＣＤ系化合物は、（短鎖（ＲがＨ、メチル〜ｎ−プロピル、またはアセチル〜ｎ−プロパノイルである場合）を用いて）完全に水溶性であるように、あるいは（より長い鎖（Ｒがｎ−ブチル〜ｎ−オクタデシルまたはｎ−ブタノイル〜ｎ−オクタデカノイルである場合）を用いて）自己集合して水中でナノ粒子（ミセル）を形成するように、設計できる。これらの構造は、アルキル鎖およびＰＥＧリンカー基のおかげで、より良好な親和性で疎水性薬物分子に理想的に結合する。
【００４７】
シクロデキストリンに結合されるリンカーの数は変動してよいが、典型的には、所与のＣＤ系分子内において同一の長さである。
【００４８】
ＣＤのコア（すなわち、Ｄ）は、任意の数のグルコース単位を含む。特定の実施形態において、６、７または８つのグルコース単位（典型的には７つ）が存在する。従って、特定の実施形態において、β−ＣＤが意図される。
【００４９】
１つ以上（典型的には複数）の置換基ＲがＣＤの二次面上に結合される。置換基は、Ｈ、アルキル基またはアシル基であってよい。特定の実施形態において、鎖は、ＣＤ基のＯ２またはＯ３のいずれかに、あるいはＯ２基およびＯ３基の両方に、結合される。基の長さは、例えば、Ｃ１からＣ１８まで変動してよい。
【００５０】
本明細書で説明される発明について、より良好な理解を得るために、以下の実施例を説明する。これらの実施例は説明を目的とするものに過ぎないということが理解されるべきである。従って、これらは決して本発明の範囲を限定するものではない。
【実施例】
【００５１】
実施例１：水溶性のポリアニオン性ＣＤ系化合物
【００５２】
図１は、本明細書で説明されるようなＣＤのα、βおよびγの実施形態を示す。これらの実施形態において、天然のシクロデキストリンの６−ヒドロキシル基は、部分的または完全に、式−Ｇ−Ｌ−Ｘ−Ｙ＋、−Ｓ−Ｇ−Ｌ−Ｘ−Ｙ＋または−ＯＨというＲ基に置き換わっている。Ｇ、Ｌ、ＸおよびＹは、上記で定義された通りである。
【００５３】
図２は、合成されたスルホＰＥＧチオエーテルＣＤ類似体の例（１〜６）を示す。左側のパネルは、異なる長さのリンカーを含む２種のα−ＣＤ誘導体（構造１および４）を示し、中央のパネルは２種のβ−ＣＤ類似体（２および５）を示し、右側のパネルは２種のγ−ＣＤ類似体（３および６）を示す。示される例の各ペアにおいて、ＰＥＧ基の数は２〜３単位の間で変動する。しかし、上述の通り、任意の数のＰＥＧ基が存在してよいことが意図されてよい。
【００５４】
実施例２：水溶性および両親媒性のポリアニオン性ＣＤ系化合物
【００５５】
図３は、ＰＥＧ化リンカー基を有する例示的なポリアニオン性ＣＤを示す。示されるように、アニオン性基は、例えば−ＳＯ３−または−ＣＯ２−など、任意の好適な基であってよい。ＰＥＧセグメントは、１〜２０個の反復するエチレングリコール基を含んでよい。典型的には、ＰＥＧセグメントをＤ−グルコースに連結するために使用される架橋基は、（１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル基または（１，２，３−トリアゾール−４−イル）カルボニル基など、置換された１，２，３−トリアゾール基である。化合物は、水溶性のポリイオン性シクロデキストリン（Ｒ＝Ｈ（構造７）、メチル〜ｎ−ブチル（構造８））であってよいか、あるいは水中で自己集合可能（Ｒ＝ｎ−ブチルよりも長い、構造８）であってよい。Ｙ＋は、Ｎａ＋、Ｋ＋または任意の他の医薬的に許容されるカチオンであってよい。
【００５６】
実施例３：非イオン性ＣＤ系化合物
【００５７】
図４は、本明細書で説明されるようなＣＤのα、βおよびγの実施形態を示す。これらの実施形態において、天然のシクロデキストリンの６−ヒドロキシル基は、部分的または完全に、式−Ｇ−Ｌ−Ｘ’（−Ｓ−Ｌ−Ｘ’など）というＲ基または−ＯＨに置き換わっている。Ｇ、ＬおよびＸ’は、上記で定義された通りである。
【００５８】
図５は、合成された非イオン性ＣＤ系チオエーテルポリアミドの例（９〜１４）を示す。左側のパネルは、異なる長さのリンカーを含む２種のα−ＣＤ誘導体（構造９および１２）を示す。中央のパネルは２種のβ−ＣＤ類似体（１０および１３）を示し、右側のパネルは２種のγ−ＣＤ類似体（１１および１４）を示す。示される例の各ペアにおいて、組み込まれたＰＥＧ基の数は０または２単位であった。しかし、上述の通り、任意の数のＰＥＧ基が存在してよいことが意図されてよい。
【００５９】
実施例４：チオエーテル連結型スルホアルキルポリアニオン性ＣＤ
【００６０】
図６は、例示的なチオエーテル連結型スルホアルキルポリアニオン性ＣＤ系化合物を示す。この分子は、アルキルリンカー（典型的にはプロピル（トリメチレン）またはブチル（テトラメチレン））および当該リンカーをＣＤに連結するための架橋性官能基としてのチオエーテルによるＣＤ基の飽和を含む。リンカーの長さは変動してよい。ＣＤの二次面上の例示的なＲ基が示されている。
【００６１】
実施例４：ＮＭＲを用いた市販薬での包接実験
【００６２】
本明細書で説明されるＣＤ系ポリアニオン性スルホＰＥＧチオエーテルおよび非イオン性チオエーテルポリアミドが、種々のファミリーの薬物分子との包接を達成するのに適しているかどうかを決定するために包接研究を実施した。
【００６３】
臭化ロクロニウム、臭化ピペクロニウム、臭化パンクロニウムおよび臭化ベクロニウムは、非脱分極性神経筋遮断薬として作用するアミノステロイドのファミリーに属する。これらは、現代の麻酔において使用される。アミノステロイドを複合化することが可能な分子ホストは、投与されたアミノステロイドの効果を逆転させる可能性がある。
【００６４】
図７は、ＮＭＲ実験によるスルホＰＥＧγ−ＣＤ誘導体３と臭化ロクロニウムについての包接研究を示す（下のパネル：化合物３単独、上のパネル：化合物３と臭化ロクロニウム）。図８は、化合物６と臭化ロクロニウムについての追加的な包接研究を示す（上のパネル：化合物６単独、下のパネル：化合物６と臭化ロクロニウム）。両方のＣＤ分子について化学シフトの顕著な変化が観察されたが、これは、ゲスト分子とＣＤの空洞およびＰＥＧ鎖との相互作用を示唆する。従って、本発明に従うポリアニオン性ＣＤ化合物は、臭化ロクロニウムとの包接複合体を形成させるために使用することができ、また、その類似体との使用に適用できる可能性がある。
【００６５】
塩酸ドキソルビシンは抗癌化学療法薬である。図９は、ＮＭＲ実験によるポリアニオン性γ−ＣＤ３と塩酸ドキソルビシンとの間での包接研究を示す（下のパネル：化合物３単独、上のパネル：化合物３と塩酸ドキソルビシン）。ドキソルビシンとの混合の前後でホストＣＤ分子（３）の化学シフトの顕著な変化が見出されたが、これは、ＣＤホスト３がドキソルビシンとの包接複合体を形成できることを示唆する。
【００６６】
クエン酸タモキシフェン（Tomoxifen citrate）は、別の抗癌化学療法薬である。図１０は、ＮＭＲによるポリアニオン性γ−ＣＤ３とクエン酸タモキシフェンとの間での包接研究を示す（下のパネル：化合物３単独、上のパネル：化合物３とクエン酸タモキシフェン）。図１１は、非アニオン性チオエーテルγ−ＣＤポリアミド１４とクエン酸タモキシフェンとの間での追加的な包接研究を示す。クエン酸タモキシフェンとの混合の前後でホストＣＤ分子（３および１４）の化学シフトの顕著な変化が観察されたが、これは、本発明に従うポリアニオン性ＣＤホストおよび非イオン性ＣＤホストが両方とも、タモキシフェンとの包接複合体を形成させるために使用することができ、また、その類似体との使用に適用できる可能性があるということを示唆する。
【００６７】
塩酸ジルチアゼムは、カルシウムチャネル遮断薬と呼称される医薬のクラスに属し、高血圧を処置するために、およびアンギナ（胸痛）を抑制するために、使用される。図１２は、ＮＭＲによるポリアニオン性γ−ＣＤ６と塩酸ジルチアゼムとの間での包接研究を示す（下のパネル：化合物６単独、上のパネル：化合物６と塩酸ジルチアゼム）。図１３は、ＮＭＲ実験による非アニオン性チオエーテルγ−ＣＤポリアミド１１と塩酸ジルチアゼムとの間での追加的な包接研究を示す（下のパネル：化合物１１単独、上のパネル：化合物１１と塩酸ジルチアゼム）。図１４は、ＮＭＲによる非アニオン性チオエーテルγ−ＣＤポリアミド１４と塩酸ジルチアゼムとの間での追加的な包接研究を示す（下のパネル：化合物１４単独、上のパネル：化合物１４と塩酸ジルチアゼム）。全ての場合において、塩酸ジルチアゼムとの混合の前後でホストＣＤ分子（３、１１および１４）の化学シフトの顕著な変化が観察されたが、これは、本発明に従うポリアニオン性ＣＤホストおよび非イオン性ＣＤホストが両方とも、ジルチアゼムとの包接複合体を形成させるために使用することができ、また、その類似体との使用に適用できる可能性があるということを示唆する。
【００６８】
ナロキソンは、手術中に、または疼痛を処置するために、使用される麻薬の効果を逆転させるために使用される。図１５は、ＮＭＲによるポリアニオン性γ−ＣＤ３と塩酸ナロキソンとの間での包接研究を示す（下のパネル：化合物３単独、上のパネル：化合物３と塩酸ナロキソン）。塩酸ナロキソンとの混合の前後でホストＣＤ分子（３）の化学シフトの顕著な変化が観察されたが、これは、本発明に従うポリアニオン性ＣＤホストを、ナロキソンとの包接複合体を形成させるために使用することができ、また、関連する麻薬との使用に適用できる可能性があるということを示唆する。
【００６９】
バルサルタンは、高血圧およびうっ血性心不全を処置するために使用される。図１６は、ＮＭＲによるポリアニオン性γ−ＣＤ３とバルサルタンとの間での包接研究を示す（下のパネル：化合物３単独、上のパネル：化合物３とバルサルタン）。バルサルタンとの混合の前後でホストＣＤ分子（３）の化学シフトの顕著な変化が観察されたが、これは、本発明に従うポリアニオン性ＣＤホストを、バルサルタンとの包接複合体を形成させるために使用することができ、また、その類似体との使用に適用できる可能性があるということを示唆する。
【００７０】
カプロフェンは、特徴的な鎮痛解熱活性を有する非麻薬性の非ステロイド性抗炎症薬である。フルルビプロフェンは、特定の関節炎の状態および軟部組織損傷の炎症および疼痛を処置するために処方される、同じファミリーの別の薬物である。図１７は、ＮＭＲによるポリアニオン性β−ＣＤ２とカプロフェンとの間での包接研究を示し（下のパネル：化合物２単独、上のパネル：化合物２とカプロフェン）、図１８は、ＮＭＲによるポリアニオン性β−ＣＤ２とフルルビプロフェンとの間での包接研究を示す（下のパネル：化合物２単独、上のパネル：化合物２とフルルビプロフェン）。カプロフェンまたはフルルビプロフェンのいずれかとの混合の前後でホストＣＤ分子（２）の化学シフトの顕著な変化が観察されたが、これは、本発明に従うポリアニオン性ＣＤホストを、カプロフェンまたはフルルビプロフェンとの包接複合体を形成させるために使用することができ、また、関連するそれらの類似体との使用に適用できる可能性があるということを示唆する。
【００７１】
塩酸ナフチフィンは、皮膚の感染症の処置において使用される抗真菌薬である。図１９は、ＮＭＲによるポリアニオン性γ−ＣＤ３と塩酸ナフチフィンとの間での包接研究を示す（下のパネル：化合物３単独、上のパネル：化合物３と塩酸ナフチフィン）。塩酸ナフチフィンとの混合の前後でホストＣＤ分子（３）の化学シフトの顕著な変化が観察されたが、これは、本発明に従うポリアニオン性ＣＤホストを、塩酸ナフチフィンとの包接複合体を形成させるために使用することができ、また、関連するその類似体との使用に適用できる可能性があるということを示唆する。
【００７２】
塩酸オキシテトラサイクリンおよびドキシサイクリンヒクラートは両方とも、テトラサイクリンファミリーの抗細菌薬である。図２０は、ＮＭＲによるポリアニオン性γ−ＣＤ３と塩酸オキシテトラサイクリンとの間での包接研究を示し（下のパネル：化合物３単独、上のパネル：化合物３と塩酸オキシテトラサイクリン）、図２１は、ＮＭＲによるポリアニオン性γ−ＣＤ３とドキシサイクリンヒクラートとの間での包接研究を示す（下のパネル：化合物３単独、上のパネル：化合物３とドキシサイクリンヒクラート）。両方の場合において、テトラサイクリン誘導体との混合の前後でホストＣＤ分子（３）の化学シフトの顕著な変化が観察されたが、これは、本発明に従うポリアニオン性ＣＤホストを、塩酸オキシテトラサイクリンおよびドキシサイクリンヒクラートとの包接複合体を形成させるために使用することができ、また、関連するそれらの類似体との使用に適用できる可能性があるということを示唆する。
【００７３】
塩酸アミトリプチリンは、三環系抗うつ薬であり、うつの症状を処置するために使用される。図２２は、ＮＭＲによるポリアニオン性γ−ＣＤ３と塩酸アミトリプチリンとの間での包接研究を示す（下のパネル：化合物３単独、上のパネル：化合物３と塩酸アミトリプチリン）。塩酸アミトリプチリンとの混合の前後でホストＣＤ分子（３）の化学シフトの顕著な変化が観察されたが、これは、本発明に従うポリアニオン性ＣＤホストを、塩酸アミトリプチリンとの包接複合体を形成させるために使用することができ、また、関連するその類似体との使用に適用できる可能性があるということを示唆する。
【００７４】
塩酸アセブトロールは、高血圧および心室性不整脈を有する患者を処置するために使用される。図２３は、ＮＭＲによるポリアニオン性γ−ＣＤ３と塩酸アセブトロールとの間での包接研究を示す（下のパネル：化合物３単独、上のパネル：化合物３と塩酸アセブトロール）。塩酸アセブトロールとの混合の前後でホストＣＤ分子（３）の化学シフトの顕著な変化が観察されたが、これは、本発明に従うポリアニオン性ＣＤホストを、塩酸アセブトロールとの包接複合体を形成させるために使用することができ、また、関連するその類似体との使用に適用できる可能性があるということを示唆する。
【００７５】
塩酸ブピバカインは局所麻酔薬である。図２４は、ＮＭＲによるポリアニオン性β−ＣＤ２と塩酸ブピバカインとの間での包接研究を示す（下のパネル：化合物２単独、上のパネル：化合物２と塩酸ブピバカイン）。塩酸ブピバカインとの混合の前後でホストＣＤ分子（２）の化学シフトの顕著な変化が観察されたが、これは、本発明に従うポリアニオン性ＣＤホストを、塩酸ブピバカインおよびその類似体との包接複合体を形成させるために使用してよいということを示唆する。
【００７６】
臭化イプラトロピウムは、慢性閉塞性肺疾患および急性喘息の処置に使用される抗コリン薬である。図２５は、ＮＭＲによるポリアニオン性β−ＣＤ２と臭化イプラトロピウムとの間での包接研究を示す（下のパネル：化合物２単独、上のパネル：化合物２と臭化イプラトロピウム）。臭化イプラトロピウムとの混合の前後でホストＣＤ分子（２）の化学シフトの顕著な変化が観察されたが、これは、本発明に従うポリアニオン性ＣＤホストを、臭化イプラトロピウムおよびその類似体との包接複合体を形成させるために使用してよいということを示唆する。
【００７７】
臭化チキジウムは、抗痙攣痛調節薬（antispasdomdic pain mediating drug）として使用される抗ムスカリン薬である。図２６は、ＮＭＲ実験によるポリアニオン性β−ＣＤ２と臭化チキジウムとの間での包接研究を示す（下のパネル：化合物２単独、上のパネル：化合物２と臭化チキジウム）。臭化チキジウムとの混合の前後でホストＣＤ分子（２）の化学シフトの顕著な変化が観察されたが、これは、本発明に従うポリアニオン性ＣＤホストを、臭化チキジウムおよびその類似体との包接複合体を形成させるために使用してよいということを示唆する。
【００７８】
図２７は、構造３によるネホパムの包接についてのＮＭＲの結果を示す。
【００７９】
図２８は、構造３によるクロミプラミンの包接についてのＮＭＲの結果を示す。
【００８０】
図２９は、構造３による硝酸イソコナゾールの包接についてのＮＭＲの結果を示す。
【００８１】
図３０は、構造３によるボリコナゾールの包接についてのＮＭＲの結果を示す。
【００８２】
図３１は、構造３による硝酸ブトコナゾールの包接についてのＮＭＲの結果を示す。
【００８３】
図３２は、構造３による硫酸イマザリルの包接についてのＮＭＲの結果を示す。
【００８４】
図３３は、構造３によるジプラシドンＨＣｌの包接についてのＮＭＲの結果を示す。
【００８５】
図３４は、構造３による硝酸エコナゾールの包接についてのＮＭＲの結果を示す。
【００８６】
図３５は、構造３による硝酸セルタコナゾールの包接についてのＮＭＲの結果を示す。
【００８７】
図３６は、構造３によるイリノテカンＨＣｌの包接についてのＮＭＲの結果を示す。
【００８８】
実施例５：エレクトロスプレー質量分析および結合定数の決定による市販薬での包接研究
【００８９】
この実施例では、質量分析からの結果が提示される。これらの結果は、例示的なポリアニオン性シクロデキストリンデンドリマーによる様々な薬物の包接を示す。
【００９０】
図３７は、ポリアニオン性γ−ＣＤ３および６の両方との結合定数を測定するために使用された、選択された市販薬（臭化ロクロニウム、臭化ピペクロニウム、臭化パンクロニウム、臭化ベクロニウム、臭化チキジウム、臭化イプラトロピウムおよびホマトロピンメチルブロミド）の構造を示す。
【００９１】
図３８は、ＥＳＩ質量分析によるポリアニオン性スルホＰＥＧγ−ＣＤ誘導体３と臭化ロクロニウムについての例示的な包接研究を示す（上のパネル：化合物３単独、下のパネル：化合物３と臭化ロクロニウム）。
【００９２】
同様に、図３９は、ＥＳＩ質量分析によるポリアニオン性スルホＰＥＧγ−ＣＤ誘導体６と臭化ロクロニウムについての例示的な包接研究を示す（上のパネル：化合物６単独、下のパネル：化合物６と臭化ロクロニウム）。ＣＤホスト（化合物３または６のいずれか、２．５ｍＭ）、および臭化ロクロニウム（２．５ｍＭ）と混合したＣＤホスト（化合物３または６、２．５ｍＭ）、の１０ｍＭ酢酸アンモニウム水溶液（ｐＨ６．８）を用いてネガティブモードＥＳＩ質量スペクトルを得た。荷電状態が−３〜−８のＣＤホストおよび荷電状態が−３〜−７の（ＣＤ＋薬物）複合体に対応する特徴的なｍ／ｚピークが観察された。
【００９３】
（ＣＤ＋薬物）複合体の見かけの結合定数（Ｋｄ，ａｐｐ）は、式：
【数１】
2018510912.tif 000011
を用いてＥＳＩ質量スペクトルから算出した。ここで、［ＣＤ＋薬物］、［ＣＤ］および［薬物］遊離はそれぞれ、複合体、遊離しているＣＤおよび薬物の濃度である。平衡濃度は、以下の式：
【数２】
2018510912.tif 000012
を用いてＥＳＩ−ＭＳによって測定された（ＣＤ＋薬物）およびＣＤのイオンの相対的存在量（Ａｂ）および質量バランスの考慮から算出した。
【００９４】
ＣＤおよびロクロニウムの３種の異なる濃度においてＥＳＩ−ＭＳ測定を実施し、各濃度において３回の反復測定を実施した。これらの測定から、ＣＤホスト３および６について、それぞれ１．２（±０．１）×１０−６Ｍおよび６．５（±０．１）×１０−６ＭというＫｄ，ａｐｐ値が決定された（表１）。注目すべきことに、これらの値は、等温滴定熱量測定（ＩＴＣ）を用いて測定された値（それぞれ１．５（±０．２）×１０−６Ｍおよび７．７（±０．９）×１０−６Ｍ）と極めてよく一致しており、これは、ポリアニオン性化合物３および６が両方とも、臭化ロクロニウムと非常に強い包接複合体を形成するということを示唆する。
【００９５】
【表１】
2018510912.tif 000013
【００９６】
ＥＳＩ−ＭＳ測定は信頼のおける結合を提示するということが確立されたため、このアッセイを用いて、図３７に列挙される他の選択された薬物分子に対するＣＤホスト３および６の結合を定量化した。カチオン性薬物分子の全てについて結合が検出され、Ｋｄ，ａｐｐは１．２×１０−６〜１．１×１０−３Ｍという範囲であった（表２）。これらのデータは、ポリアニオン性化合物３および６が両方とも、異なる親和性で市販薬に結合できるということを示す。
【００９７】
【表２】
2018510912.tif 000014
【００９８】
図４０は、１０ｍＭの酢酸アンモニウム（ｐＨ６．８）中でＥＳＩ−ＭＳによって測定された、様々な薬物に結合するＣＤの構造３（ＰＺ７０９５）および構造６（ＰＺ７０８６）についてのＫｄ，ａｐｐを示す。
【００９９】
図４１は、１０ｍＭの酢酸アンモニウム（ｐＨ６．８）中でＥＳＩ−ＭＳによって測定された、様々な薬物に結合するＣＤ（構造３、ＰＺ７０９５）についてのＫｄ，ａｐｐを示す。
【０１００】
図４２は、ポリスルホネート化合物２〜３、５〜６についての溶血の結果を示す。６段階の倍加希釈で各サンプルを試験した：１５ｍｇ／ｍＬ、７．５ｍｇ／ｍＬ、３．７５ｍｇ／ｍＬ、１．８７５ｍｇ／ｍＬ、０．９３８ｍｇ／ｍＬおよび０．４６９ｍｇ／ｍＬ。各サンプルの希釈物は全て、溶血を示さなかった。
【０１０１】
実施例６：スプラーグドーリーラットにおける静脈内注射の後の化合物３（ＰＺ７０９５）の最大耐量毒性研究
【０１０２】
３０匹の個別に飼育されたスプラーグドーリーラット（１５匹の雄、２００〜３５０ｇ；１５匹の雌、１７０〜２９０ｇ）を５つの群（１群あたり３匹の雄および３匹の雌）に分け、以下の投与量レベルに従って化合物３（ＰＺ７０９５）を各動物に１回投与した：群１（対照）：０ｍｇ／ｋｇ；群２：１００ｍｇ／ｋｇ；群３：３５０ｍｇ／ｋｇ；群４：１０００ｍｇ／Ｋｇ；群５：３０００ｍｇ／ｋｇ。注射量は、各動物について５ｍＬ／ｋｇであった。
【０１０３】
生存した全ての動物を８日間観察した。８日目に、全ての動物を屠殺した。終了前に、個々の動物の血液学、凝固、臨床化学および尿検査のために血液および尿のサンプルを採取した。
【０１０４】
生存期間中、臨床化学分析または剖検のための採血の前の一晩の絶食を除いて、動物は全て自由摂食であり、摂食量を毎週記録した。水は、水ボトルを介して自由に与えられた。
【０１０５】
死亡の徴候、瀕死、全体的な健康状態および毒性の徴候について１日２回、各動物を症状観察した。１日目の投与の前および剖検の日に、詳細な臨床観察も行った。これらには、皮膚、毛皮、眼および粘膜ならびに呼吸器系、循環器系、自律神経系および中枢神経系ならびに身体運動活動（somatomotor activity）および行動パターンの変化が包含された。
【０１０６】
１日目の投与の前、剖検の前の日および剖検の日に、個々の動物の体重を記録した。
【０１０７】
８日目に、生存している全ての主要研究動物を安楽死させ、全ての動物を肉眼による全剖検に供した。この肉眼による全剖検は、身体の外表面、全ての開口部、頭蓋腔、脳の外表面、胸腔、腹腔および骨盤腔とそれらの内臓、子宮頸部領域、枝肉および生殖器の肉眼検査を包含する。
【０１０８】
予定された剖検において、全ての予定通りに死亡させた動物の器官の重量をできるだけ早く測定した。対になった器官は、まとめて重量測定されるであろう。
【０１０９】
結果
【０１１０】
群１〜４の動物は全て生存した。群５（投与量が最も多い群）の６匹の動物については、３匹の雄の動物が投与直後に死亡したことが見出されたが、３匹の雌の動物は全て、投与後も生存した。群５の３匹の死亡した雄の動物の剖検をプロトコルに従って実施したが、肉眼による所見は認められなかった。
【０１１１】
投与を生き延びた動物は全て、８日目まで生きていた。全ての動物の群において、肉眼による所見は認められなかった。
【０１１２】
結論として、化合物３（ＰＺ７０９５）は、１０００ｍｇ／Ｋｇまでの単回静脈内投与では、スプラーグドーリーラットに十分許容されたようである。投与量がさらに多い群（群５）の３匹の雌のラットが健康なままであったという事実は、化合物３（ＰＺ７０９５）が、１０００ｍｇ／Ｋｇよりもさらに多い投与量においても十分に許容され得るということを示唆する可能性がある。
【０１１３】
実施例７：例示的なポリカルボキシレートの合成および様々な薬物との包接研究
【０１１４】
図４３は、本発明に従うカルボキシＰＥＧチオエーテルの２つの例を示す。
【０１１５】
図４４は、これらのカルボキシＰＥＧチオエーテルＣＤ類似体の、ペル−６−ブロモ−シクロデキストリンからの例示的な合成を示す。必要とされる、末端カルボキシ基を含むチオアセテート（２３）は、一塩素化ＰＥＧから、まずｔｅｒｔ−ブチルアクリレートへのマイケル付加を実施した後、塩化物をチオアセテートで置換し、最後にｔｅｒｔ−ブチル基をトリフルオロ酢酸で円滑に除去することによって、調製した。
【０１１６】
図４５は、高い純度を示す、得られたポリカルボキシレート１８の１Ｈ ＮＭＲスペクトル（下）を示す。
【０１１７】
図４５はまた、構造１８によるジルチアゼムの包接についての結果も示す。
【０１１８】
図４６は、構造１８によるアミトリプリンの包接についてのＮＭＲの結果を示す。
【０１１９】
図４７は、構造１８によるクロミプラミンの包接についてのＮＭＲの結果を示す。
【０１２０】
図４８は、構造１８によるクエン酸タモキシフェンの包接についてのＮＭＲの結果を示す。
【０１２１】
図４９は、構造１８によるクエン酸トレミフェンの包接についてのＮＭＲの結果を示す。
【０１２２】
図５０は、構造１８によるボリコナゾールの包接についてのＮＭＲの結果を示す。
【０１２３】
ポリカルボキシレート構造１７および１８と臭化ロクロニウムに対してＥＳＩ−ＭＳ測定も実施した。ＣＤホスト１７および１８について、それぞれ１．２６（±０．１０）×１０−４および１．５９（±０．１０）×１０−６ＭというＫｄ，ａｐｐ値が決定された。
【０１２４】
このように、上記の実施例は、本明細書で説明されるような化合物が、賦形剤またはレスキュー薬として、様々な薬物の包接のために使用され得るということを示す。
【０１２５】
参考文献
【０１２６】
米国特許第７，６３２，９４１号、Ｄｅｆａｙｅ，  Ｊ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎ  Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ，  Ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ｔｈｅｒｅｏｆ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  ｔｈｅｒｅｏｆ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｓｏｌｕｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ  Ａｃｔｉｖｅ  Ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ．
【０１２７】
ＵＳ１２／３７４，２１１、Ｄｅｆａｙｅ，  Ｊ．  （Ｃｅｎｔｒｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  ｄｅ  ｌａ  Ｒｅｃｈｅｒｃｈｅ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｑｕｅ），  Ｎｏｖｅｌ  Ａｍｐｈｉｐｈｉｌｉｃ  Ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎ  Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ．
【０１２８】
ＰＣＴ／ＦＲ２００４／０００６９１、Ｄｅｆａｙｅ，  Ｊ．  （Ｃｅｎｔｒｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  ｄｅ  ｌａ  Ｒｅｃｈｅｒｃｈｅ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｑｕｅ），  Ｎｏｖｅｌ  Ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎ  Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  Ｔｈｅｒｅｏｆ  ａｎｄ  ｕｓｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｓｏｌｕｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ  Ａｃｔｉｖｅ  Ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ．
【０１２９】
米国特許第６，６７０，３４０号、６−Ｍｅｒｃａｐｔｏ−Ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎ  Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ：  Ｒｅｖｅｒｓａｌ  Ａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｄｒｕｇ−Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｎｅｕｒｏｍｕｓｃｕｌａｒ  Ｂｌｏｃｋ．
【０１３０】
米国特許第６，９４９，５２７号、６−Ｍｅｒｃａｐｔｏ−Ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎ  Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ：  Ｒｅｖｅｒｓａｌ  Ａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｄｒｕｇ−Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｎｅｕｒｏｍｕｓｃｕｌａｒ  Ｂｌｏｃｋ．
【０１３１】
ＤＥ１０２０１００１２２８１、Ｂｉｃｈｉｍａｉｅｒ，  Ｉ．，  Ｐｈａｒｍａｚｅｕｔｉｓｃｈｅ  ｚｕｓａｍｍｅｎｓｅｔｚｕｎｇｅｎ  ｅｎｔｈａｌｔｅｎｄ  ｓｕｂｓｔｉｔｕｉｅｒｔｅｓ  ６−ｄｅｏｘｙ−６−ｓｕｌｆａｎｙｌｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎ．
【０１３２】
Ｂｕｌｌ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｃｈｉｍ．Ｆｒ．  １３２（８），  ８５７-８６６，  １９９５．
【０１３３】
本明細書において言及された刊行物、特許および特許出願は全て、本発明の属する技術分野における通常の知識を有する者の技術水準を示すものであり、個々の刊行物、特許、または特許出願がそれぞれ参照により組み込まれることが具体的かつ個別に示されたのと同程度に、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１３４】
以上のように本発明を説明したが、これらは様々に変更され得るということは明らかであろう。そのような変更は、本発明の趣旨および範囲からの逸脱と見なすべきではなく、当業者に明らかであるような改変は全て、添付の特許請求の範囲内に包含されることが意図される。
【図１】
2018510912.tif 000024
【図２】
2018510912.tif 000025
【図３】
2018510912.tif 000026
【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
2018510912.tif 000030
【図８】
2018510912.tif 000031
【図９】
2018510912.tif 000032
【図１０】
2018510912.tif 000033
【図１１】
2018510912.tif 000034
【図１２】
2018510912.tif 000035
【図１３】
2018510912.tif 000036
【図１４】
2018510912.tif 000037
【図１５】
2018510912.tif 000038
【図１６】
2018510912.tif 000039
【図１７】
2018510912.tif 000040
【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
2018510912.tif 000043
【図２１】
2018510912.tif 000044
【図２２】
2018510912.tif 000045
【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
2018510912.tif 000049
【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９】
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【図４０】
2018510912.tif 000063
【図４１】
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【図４２】
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【図４３】
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【図４４】
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【図４５】
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【図４６】
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【図４７】
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【図４８】
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【図４９】
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【図５０】
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【国際調査報告】
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