(57)【要約】本発明は、アピリモドで癌を処置するための方法、ならびに関連の組成物および方法に関する。【選択図】図１Ｂ
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
癌を処置する必要がある対象において癌を処置するための方法であって、当該対象の癌細胞における細胞ＰＩＫｆｙｖｅ活性を阻害するのに有効な量のアピリモドを含む組成物を当該対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項２】
癌が、脳癌、神経膠腫、肉腫、乳癌、肺癌、非小細胞肺癌、中皮腫、虫垂癌、泌尿生殖器癌、腎細胞癌、前立腺癌、膀胱癌、精巣癌、陰茎癌、子宮頚癌、卵巣癌、フォン・ヒッペル・リンドウ病、頭頚部癌、胃腸癌、肝細胞癌、胆嚢癌、食道癌、胃癌、結腸直腸癌、膵臓癌、神経内分泌腫瘍、甲状腺腫瘍、下垂体腫瘍、副腎腫瘍、血液悪性腫瘍、リンパ腫、または白血病である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
癌がＢ細胞リンパ腫である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
癌が非ホジキンＢ細胞リンパ腫である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記対象がヒトである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
投与工程を少なくとも１サイクルで実施し、当該サイクルが、アピリモドを含む前記組成物を投与する少なくとも１日と、それに続く、アピリモドを含む前記組成物を投与しない連続した少なくとも１日とからなる、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
投与工程を２から１０までのサイクルで実施する、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
投与工程を２から５までのサイクルで実施する、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記サイクルが、前記組成物を投与する連続した１から１０日と、それに続く、前記組成物を投与しない連続した１から５日とからなる、請求項６〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記サイクルが、前記組成物を投与する連続した２から５日と、それに続く、前記組成物を投与しない連続した１から２日とからなる、請求項６〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記サイクルが、前記組成物を投与する連続した５日と、それに続く、前記組成物を投与しない連続した２日とからなる、請求項６〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記アピリモド組成物がアピリモド遊離塩基またはアピリモド・ジメシレートを含む、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記アピリモド組成物が経口剤形または静脈内投与に適した剤形である、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
非ホジキンＢ細胞リンパ腫が、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、バーキットリンパ腫、縦隔Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、およびマントル細胞リンパ腫から選択される、請求項４〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
非ホジキンＢ細胞リンパ腫が濾胞性リンパ腫である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
非ホジキンＢ細胞リンパ腫が治療抵抗性または再発性である、請求項１４または１５に記載の方法。
【請求項１７】
少なくとも１種類の追加の有効薬剤を、アピリモドを含む前記組成物と組み合わせて投与する、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
少なくとも１種類の追加の有効薬剤を、アピリモドを含む前記組成物と同じ組成物中において、またはアピリモドを含む前記組成物とは別個の組成物中において投与する、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
少なくとも１種類の追加の有効薬剤が、アルキル化剤、インターカレート剤、チューブリン結合剤、コルチコステロイド、およびその組合わせからなる群から選択される、請求項１７または１８に記載の方法。
【請求項２０】
少なくとも１種類の追加の有効薬剤が、イブルチニブ、リツキシマブ、ドキソルビシン、プレドニゾロン、ビンクリスチン、ベルケイド、およびその組合わせからなる群から選択される療法剤である、請求項１７または１８に記載の方法。
【請求項２１】
少なくとも１種類の追加の有効薬剤が、シクロホスファミド、ヒドロキシダウノルビシン（ドキソルビシンまたはＡｄｒｉａｍｙｃｉｎ（商標）とも呼ばれる）、ビンクリスチン（Ｏｎｃｏｖｉｎ（商標）とも呼ばれる）、プレドニゾン、プレドニゾロン、およびその組合わせから選択される療法剤である、請求項１７または１８に記載の方法。
【請求項２２】
少なくとも１種類の追加の有効薬剤が非療法剤である、請求項１７または１８に記載の方法。
【請求項２３】
非療法剤が、前記アピリモド組成物の１以上の副作用を改善するように選択される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
非療法剤が、オンダンセトロン、グラニセトロン、ドラセトロンおよびパロノセトロンからなる群から選択される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
非療法剤が、ピンドロールおよびリスペリドンからなる群から選択される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
非療法剤が、前記アピリモド組成物中のアピリモドの生物学的利用能を増大させるように選択される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２７】
非療法剤がＣＹＰ３Ａ阻害剤である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
ＣＹＰ３Ａ阻害剤がリトナビルまたはコビシスタットである、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
対象において癌を処置するためのアピリモド組成物であって、アピリモド遊離塩基またはアピリモド・ジメシレート、ならびにアルキル化剤、インターカレート剤、チューブリン結合剤、コルチコステロイド、ＣＹＰ３Ａ阻害剤、ならびにプログラム死１（ＰＤ−１）受容体および／またはそれのリガンド（ＰＤ−Ｌ１／２）が関連するチェックポイントシグナル伝達経路の阻害剤からなる群から選択される少なくとも１種類の追加の有効薬剤を含む前記組成物。
【請求項３０】
イブルチニブ、リツキシマブ、ドキソルビシン、プレドニゾロン、ビンクリスチン、ベルケイド、およびエベロリムスのうち１種類以上を含む、請求項２９に記載の組成物。
【請求項３１】
プレドニゾロン、ベルケイド、およびエベロリムスのうち１種類以上を含む、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３２】
イブルチニブを含む、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３３】
ビンクリスチンを含む、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３４】
ＣＹＰ３Ａ阻害剤を含む、請求項２９〜３３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３５】
ＣＹＰ３Ａ阻害剤が、リトナビルおよびコビシスタットから選択される、請求項３４に記載の組成物。
【請求項３６】
プログラム死１（ＰＤ−１）受容体および／またはそれのリガンド（ＰＤ−Ｌ１／２）が関連するチェックポイントシグナル伝達経路の阻害剤を含む、請求項２９〜３５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３７】
阻害剤が、ＢＭＳ−９３６５５９／ＭＤＸ−１１０５、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ、ＭＥＤＩ４７３、ＣＴ−０１１／ピジリズマブ、ＢＭＳ−９３６５５８／ＭＤＸ−１１０６／ニボルマブ、およびペンブロリズマブ、ならびにそれらのうちいずれか２以上の組合わせから選択される、請求項３６に記載の組成物。
【請求項３８】
さらに、オンダンセトロン、グラニセトロン、ドラセトロン、パロノセトロン、ピンドロールおよびリスペリドンのうち１種類以上を含む、請求項２９〜３７のいずれか１項に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
[01]  本出願は、U.S. Provisional Patent Application Serial No. 62/194,367, 2014年7月20日出願に基づく優先権を主張し、その内容全体を本明細書に援用する。
【０００２】
発明の分野
[02]  本発明は、アピリモド(apilimod)を含む組成物、およびそれを使用する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
[03]  アピリモド（ＳＴＡ−５３２６とも呼ばれる，以下、“アピリモド”）はＩＬ−１２およびＩＬ−２３の有効な転写阻害剤として認識されている。たとえば、Wada et al. Blood 109 (2007): 1156-1164を参照。ＩＬ−１２およびＩＬ−２３は、免疫細胞、たとえばＢ細胞およびマクロファージが抗原刺激に応答して正常に産生する炎症性サイトカインである。慢性炎症を特徴とする自己免疫障害および他の障害は、一部はこれらのサイトカインの不適正な産生を特徴とする。免疫細胞において、アピリモドによるＩＬ−１２／ＩＬ−２３転写の選択的阻害はホスファチジルイノシトール−３−ホスフェート  ５−キナーゼ（ＰＩＫｆｙｖｅ）へのアピリモドの直接結合により仲介されることが最近示された。たとえば、Cai et al. Chemistry and Biol. 20 (2013):912-921を参照。ＰＩＫｆｙｖｅは、自然免疫に重要なＴｏｌｌ様受容体シグナル伝達において役割を果たす。
【０００４】
[04]  アピリモドは、免疫調節剤およびＩＬ−１２／ＩＬ−２３の特異的阻害剤としてのそれの活性に基づいて、自己免疫性および炎症性の疾患および障害を治療するのに有用なものとして提唱された。たとえば、US 6,858,606および6,660,733を参照（ＩＬ−１２またはＩＬ−２３の過剰産生を特徴とする疾患および障害、たとえば関節リウマチ、敗血症、クローン病、多発性硬化症、乾癬、またはインスリン依存性糖尿病を治療するのに有用とされるアピリモドを含めた一群のピリミジン化合物を記載）。同様に、アピリモドは、ｃ−ＲｅｌまたはＩＬ−１２／２３を阻害するそれの活性に基づいて、特定の癌の治療に、特にこれらのサイトカインが異常な細胞増殖を促進する役割を果たすと考えられる癌に有用であると示唆された。たとえば、WO 2006/128129、およびBaird et al., Frontiers in Oncology 3:1 (それぞれ2013)を参照。
【０００５】
[05]  アピリモドの３つの臨床試験がそれぞれ、自己免疫疾患および炎症性疾患におけるそれの潜在効力に注目した。それらの試験は、乾癬、関節リウマチ、およびクローン病を伴う患者において実施された。乾癬を伴う患者におけるオープンラベル臨床試験は、アピリモドの経口投与がＴＨ１−およびＴＨ１７−仲介炎症性疾患の治療のためのＩＬ−１２／ＩＬ−２３合成阻害を支持する免疫調節活性を示すと結論づけた。Wada et al., PLosOne 7:e35069 (April 2012)。しかし、関節リウマチ、およびクローン病における対照付き試験の結果は、アピリモドによるＩＬ−１２／ＩＬ−２３阻害が臨床改善になるという考えをこれらの適応症のいずれにおいても支持しなかった。関節リウマチを伴う患者におけるアピリモドのランダム化二重盲検プラセボ対照付き第ＩＩ相臨床試験において、アピリモドは滑膜ＩＬ−１２およびＩＬ−２３発現を変化させることができなかった。Krauz et al., Arthritis & Rheumatism 64:1750-1755 (2012)。その著者らは、“結果は、アピリモドによるＩＬ−１２／ＩＬ−２３阻害がＲＡにおける確固たる臨床改善を誘導できるという見解を支持しない”と結論づけた。同様に、活動性クローン病の治療についてのアピリモドのランダム化二重盲検プラセボ対照付き試験は、アピリモドは良好に耐容されたけれどもプラセボを上回る有効性を示さなかったと結論づけた。Sands et al Inflamm Bowel Dis. 2010 Jul;16(7):1209-18。
【０００６】
[06]  哺乳類ラパマイシン標的(mammalian target of rapamycin)（ｍＴＯＲ）経路は、細胞成長、細胞増殖、代謝、タンパク質合成、およびオートファジーを含めた多数の生理的機能に関与する重要な細胞シグナル伝達経路である(La Plante et al Cell 2012, (149 (2), pp.274-293)。ｍＴＯＲは、アミノ酸、ストレス、酸素、エネルギー、および成長因子のレベルを伝達する細胞内と細胞外の情報(cue)を統合し、これらの環境情報に対する細胞応答を調節する、キナーゼである。癌、肥満症、糖尿病、および神経変性を含めた広範な障害および疾患においてｍＴＯＲ脱調節が示唆されている。これらの疾患のうちあるものを治療するための薬物ターゲットとして、ｍＴＯＲ経路の特定の成分が探査された。しかし、療法効力はたとえばある種の癌の治療に限定され、あるｍＴＯＲ阻害剤は代謝に対する有害作用をもつことが示された。結節性硬化症複合体腫瘍抑制遺伝子(tuberous sclerosis complex tumor suppressor gene)ＴＳＣ１およびＴＳＣ２はｍＴＯＲの負の調節物質である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】US 6,858,606
【特許文献２】US 6,660,733
【特許文献３】WO 2006/128129
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Wada et al. Blood 109 (2007): 1156-1164
【非特許文献２】Cai et al. Chemistry and Biol. 20 (2013):912-921
【非特許文献３】Baird et al., Frontiers in Oncology 3:1 (2013)
【非特許文献４】Wada et al., PLosOne 7:e35069 (April 2012)
【非特許文献５】Krauz et al., Arthritis & Rheumatism 64:1750-1755 (2012)
【非特許文献６】Sands et al Inflamm Bowel Dis. 2010 Jul;16(7):1209-18
【非特許文献７】La Plante et al Cell 2012, (149 (2), pp.274-293
【発明の概要】
【０００９】
[07]  本発明は、一部は、アピリモドがＴＳＣヌル細胞(TSC null cell)に対して細胞毒性の高い薬剤であるという予想外の知見に基づく。これらの細胞においては、ｍＴＯＲ経路が構成性活性である。ｍＴＯＲ経路は多数の癌において活性化され、１００を超える癌細胞系のさらなるスクリーニングでアピリモドは多様な癌に由来する細胞系において抗増殖活性を示した。アピリモド感受性細胞系のうち、Ｂ細胞リンパ腫が最も感受性であった。しかし、予想外に、アピリモドに対するＢ細胞リンパ腫の差示感受性はこれらの細胞においてｃ−Ｒｅｌ発現、ＩＬ−１２発現、またはＩＬ−２３発現と相関しなかった。以前の研究は異常な細胞増殖に際してｃ−Ｒｅｌおよび／またはＩＬ−１２／２３の発現が決定的である癌に対してアピリモドが有用であろうと示唆していたので、これは意外であった。そうではなく、癌細胞におけるアピリモドの細胞毒性は細胞内トラフィッキング(intracellular trafficking)の阻害、ならびに対応するアポトーシス増大によるものであることを本発明者らは立証した。この活性はアピリモドのＩＬ−１２／２３産生阻害による免疫調節活性に基づいては予測されなかった。さらに、４５０種類を超えるキナーゼのスクリーニングにより、ヒト癌細胞系においてＰＩＫｆｙｖｅがアピリモドに対する唯一の高親和性結合ターゲット（Ｋｄ＝７５ｐＭ）として同定された。
【００１０】
[08]  本発明は、癌の処置、特にＢ細胞リンパ腫、殊に標準化学療法計画に対して耐性または治療抵抗性であるものの処置におけるアピリモドの療法使用のための新規方法を提供する。
【００１１】
[09]  一態様において、本発明は、癌を処置する必要がある対象において癌を処置するための方法であって、対象の癌細胞における細胞ＰＩＫｆｙｖｅ活性を阻害するのに有効な量のアピリモドを含む組成物を対象に投与することを含む前記方法を提供する。一態様において、対象はヒトである。
【００１２】
[10]  一態様において、癌は、脳癌、神経膠腫、肉腫、乳癌、肺癌、非小細胞肺癌、中皮腫、虫垂癌、泌尿生殖器癌、腎細胞癌、前立腺癌、膀胱癌、精巣癌、陰茎癌、子宮頚癌、卵巣癌、フォン・ヒッペル・リンドウ病(Hippel Lindau disease)、頭頚部癌、胃腸癌、肝細胞癌、胆嚢癌、食道癌、胃癌、結腸直腸癌、膵臓癌、神経内分泌腫瘍、甲状腺腫瘍、下垂体腫瘍、副腎腫瘍、血液悪性腫瘍、リンパ腫、または白血病である。一態様において癌はリンパ腫であり、さらなる態様において癌は非ホジキンリンパ腫である。
【００１３】
[11]  一態様において、癌はＤＬＢＣＬ、濾胞性リンパ腫(follicular lymphoma)、辺縁帯リンパ腫(marginal zone lymphoma)（ＭＺＬ）、ＣＬＬ／ＳＬＬ（慢性リンパ性白血病／小リンパ球性リンパ腫(Chronic lymphocytic leukemia/small lymphocytic lymphoma)）、およびマントル細胞リンパ腫(mantle cell lymphoma)から選択される。
【００１４】
[12]  一態様において、投与工程を少なくとも１サイクルで実施し、当該サイクルは、アピリモドを含む当該組成物を投与する少なくとも１日と、それに続く、アピリモドを含む当該組成物を投与しない連続した少なくとも１日とからなる。特定の態様において、２から１０までのサイクル、または２から５までのサイクルで投与工程を実施する。一態様において、サイクルは、当該組成物を投与する連続した１から１０日と、それに続く、当該組成物を投与しない連続した１から５日までとからなる。他の態様において、サイクルは、当該組成物を投与する連続した２から５日と、それに続く、当該組成物を投与しない連続した１から２日とからなる。さらなる態様において、サイクルは、当該組成物を投与する連続した５日と、それに続く、当該組成物を投与しない連続した２日とからなる。
【００１５】
[13]  特定の態様において、本発明は、２８日サイクルにおける５日のアピリモドによる処置と、それに続く２日のオフ（休薬）処置(off treatment)とからなる計画で、１から２か月まで、１から３か月まで、１から４か月まで、１から５か月まで、１から６か月まで、又は６から１２か月までの範囲の期間、アピリモドを用いて癌を処置する方法を提供する。他の態様を以下にさらに詳細に記載する。
【００１６】
[14]  一側面において、本発明は癌を処置する必要がある対象において癌を処置するための方法であって、本発明の療法有効量のアピリモド組成物を対象に投与することを含む前記方法を提供し、その組成物はアピリモド、またはその医薬的に許容できる塩、溶媒和物、包接化合物、水和物、多型、プロドラッグ、アナログもしくは誘導体を含む。一態様において、本方法は対象の癌細胞における細胞ＰＩＫｆｙｖｅ活性を阻害するのに有効な量のアピリモドを含む組成物を対象に投与することを含む。一態様において、アピリモド組成物はアピリモド遊離塩基またはアピリモド・ジメシレートを含む。
【００１７】
[15]  一態様において、本方法はさらに、少なくとも１種類の追加の有効薬剤を対象に投与することを含む。少なくとも１種類の追加の有効薬剤は、療法剤または非療法剤であってよい。少なくとも１種類の追加の有効薬剤をアピリモド組成物との単一剤形で、またはアピリモドとは別個の剤形で投与することができる。一態様において、少なくとも１種類の追加の有効薬剤は、アルキル化剤、インターカレート剤、チューブリン結合剤、コルチコステロイド、およびその組合わせからなる群から選択される。
【００１８】
[16]  一態様において、少なくとも１種類の追加の薬剤は、プログラム死１(programmed death 1)（ＰＤ−１）受容体およびそれのリガンド（ＰＤ−Ｌ１／２）が関連するチェックポイントシグナル伝達経路の阻害剤である。一態様において、本方法は抗ＰＤ−Ｌ１剤および抗ＰＤ−１剤の組合わせを含む。一態様において、阻害剤は、ＢＭＳ−９３６５５９／ＭＤＸ−１１０５（ＰＤ−Ｌ１に対する完全ヒト型、高親和性、免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｇ４モノクローナル抗体）、ＭＰＤＬ３２８０Ａ（ＰＤ−Ｌ１をターゲティングする工学作製したヒトモノクローナル抗体）、ＭＳＢ００１０７１８ＣおよびＭＥＤＩ４７３から選択される抗ＰＤ−Ｌ１剤である。一態様において、阻害剤は、ＣＴ−０１１／ピジリズマブ(pidilizumab)、ＢＭＳ−９３６５５８／ＭＤＸ−１１０６／ニボルマブ(nivolumab)、およびペンブロリズマブ(pembrolizumab)から選択される抗ＰＤ−１剤である。一態様において、阻害剤は、ＢＭＳ−９３６５５９／ＭＤＸ−１１０５、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ、ＭＥＤＩ４７３、ＣＴ−０１１／ピジリズマブ、ＢＭＳ−９３６５５８／ＭＤＸ−１１０６／ニボルマブ、およびペンブロリズマブ、ならびにそれらのうちいずれか２以上の組合わせから選択される。
【００１９】
[17]  一態様において、少なくとも１種類の追加の有効薬剤は、イブルチニブ(ibrutinib)、リツキシマブ(rituximab)、ドキソルビシン(doxorubicin)、プレドニゾロン(prednisolone)、ビンクリスチン(vincristine)、ベルケイド(velcade)、およびエベロリムス(everolimus)、並びのその組み合わせからなる群から選択される療法剤である。一態様において、少なくとも１種類の追加の有効薬剤は、シクロホスファミド(cyclophosphamide)、ヒドロキシダウノルビシン(hydroxydaunorubicin)（ドキソルビシンまたはＡｄｒｉａｍｙｃｉｎ（商標）とも呼ばれる）、ビンクリスチン（Ｏｎｃｏｖｉｎ（商標）とも呼ばれる）、プレドニゾン、プレドニゾロン、およびその組合わせから選択される療法剤である。一態様において、少なくとも１種類の追加の有効薬剤は、ＢＭＳ−９３６５５９／ＭＤＸ−１１０５、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ、ＭＥＤＩ４７３、ＣＴ−０１１／ピジリズマブ、ＢＭＳ−９３６５５８／ＭＤＸ−１１０６／ニボルマブ、およびペンブロリズマブ、ならびにそれらのうちいずれか２以上の組合わせから選択される療法剤である。
【００２０】
[18]  一態様において、少なくとも１種類の追加の有効薬剤は非療法剤である。一態様において、非療法剤はアピリモド組成物の１以上の副作用を改善するように選択される。一態様において、非療法剤はオンダンセトロン(ondansetron)、グラニセトロン(granisetron)、ドラセトロン(dolasetron)およびパロノセトロン(palonosetron)からなる群から選択される。一態様において、非療法剤はピンドロール(pindolol)およびリスペリドン(risperidone)からなる群から選択される。一態様において、非療法剤はアピリモド組成物中のアピリモドの生物学的利用能を増大させるように選択される。この態様の一側面において、非療法剤はＣＹＰ３Ａ阻害剤である。特定の態様において、ＣＹＰ３Ａ阻害剤はリトナビル(ritonavir)およびコビシスタット(cobicistat)である。
【００２１】
[19]  一態様において、アピリモド組成物の剤形は経口剤形である。他の態様において、アピリモド組成物の剤形は静脈内投与に適している。一態様において、剤形が静脈内投与に適している場合、投与は単回注射または点滴バッグによる。
【００２２】
[20]  一態様において、対象はヒト癌患者である。一態様において、本発明のアピリモド組成物による処置を必要とするヒト癌患者は、その癌が標準化学療法計画に対して治療抵抗性である者である。一態様において、アピリモド組成物による処置を必要とするヒト癌患者は、その癌が標準化学療法計画による処置の後に再発した者である。一態様において、癌はリンパ腫である。一態様において、癌はＢ細胞リンパ腫である。一態様において、Ｂ細胞リンパ腫は非ホジキンＢ細胞リンパ腫である。一態様において、非ホジキンＢ細胞リンパ腫は、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫(diffuse large B cell lymphoma)（ＤＬＢＣＬ）、バーキットリンパ腫(Burkitt’s lymphoma)、縦隔Ｂ細胞リンパ腫(mediastinal B cell lymphoma)、マントル細胞リンパ腫(mantle cell lymphoma)、および濾胞性リンパ腫(follicular lymphoma)から選択される。一態様において、非ホジキンＢ細胞リンパ腫はＤＬＢＣＬである。一態様において、ＤＬＢＣＬはＧＣＢサブタイプである。
【００２３】
[21]  一態様において、標準化学療法計画はイブルチニブ、リツキシマブ、ドキソルビシン、プレドニゾロン、ビンクリスチン、ベルケイド、シクロホスファミド、デキサメタゾンおよびエベロリムスからなる群から選択される１種類以上の療法剤を含む。一態様において、標準化学療法計画は、ＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ヒドロキシダウノルビシン、Ｏｎｃｏｖｉｎ（商標）（ビンクリスチン）、およびプレドニゾン(prednisone)またはプレドニゾロン）、ＣＯＯＰ（シクロホスファミド、硫酸ビンクリスチン、塩酸プロカルバジン(procarbazine hydrochloride)、プレドニゾン）、ＣＶＰ（シクロホスファミド、硫酸ビンクリスチン、プレドニゾン）、ＥＰＯＣＨ（エトポシド(etoposide)、プレドニゾン、硫酸ビンクリスチン、シクロホスファミド、塩酸ドキソルビシン）、Ｈｙｐｅｒ−ＣＶＡＤ（シクロホスファミド、硫酸ビンクリスチン、塩酸ドキソルビシン、デキサメタゾン(dexamethasone)）、ＩＣＥ（イホスファミド(ifosfamide)、カルボプラチン(carboplatin)、エトポシド）、Ｒ−ＣＨＯＰ（リツキシマブ、シクロホスファミド、硫酸ビンクリスチン、塩酸プロカルバジン、プレドニゾン）、およびＲ−ＣＶＰ（リツキシマブ、シクロホスファミド、硫酸ビンクリスチン、プレドニゾン）から選択される。
【００２４】
[22]  一態様において、本方法は、アピリモド組成物およびリンパ腫の処置のための化学療法計画を含む併用療法を用いてリンパ腫を処置する方法である。一態様において、標準化学療法計画はＣＨＯＰ計画である。他の態様において、標準化学療法計画はＣＯＯＰ、ＣＶＰ、ＥＰＯＣＨ、Ｈｙｐｅｒ−ＣＶＡＤ、ＩＣＥ、Ｒ−ＣＨＯＰ、およびＲ−ＣＶＰから選択される。計画は前記の１種類以上の追加の非療法剤、たとえば１種類以上のＣＹＰ３Ａ阻害剤から選択される非療法剤、たとえばリトナビルまたはコビシスタット、オンダンセトロン、グラニセトロン、ドラセトロン、パロノセトロン、ピンドロールおよびリスペリドンをも含むことができる。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１Ａ】[23]  図１Ａ：ＴＳＣ２欠損細胞はアピリモドに対して高感受性である（ＩＣ５０＝１９．５ｎＭ）。
【図１Ｂ】[24]  図１Ｂ：アピリモドが非癌（正常）細胞と比較して癌細胞の細胞生存性に及ぼす影響。
【図２Ａ】[25]  図２Ａ：化合物と共にインキュベートした３、５および７日目の、アピリモドに対するＨＣＴ１１６結腸直腸癌細胞の１０点用量応答。
【図２Ｂ】[26]  図２Ｂ：７日間アッセイにおけるアピリモドに対する種々のＮＨＬサブタイプの感受性（ＩＣ５０＜１２５ｎＭ）。
【図３】[27]  図３：手作業でキュレートした９３種類の薬物のライブラリーを用いた、アピリモド（１０ｎＭ）有りと無しのＳＵ−ＤＨＬ−４細胞スクリーニングにより、イブルチニブがアピリモドと併用した際に相乗活性を発揮する薬物と同定された。
【図４】[28]  図４：アピリモドはＳＵ−ＤＨＬ−６  ＤＬＢＣＬ異種移植腫瘍の増殖を阻害する；上の線は下記を示す：ビヒクル塩類溶液（菱形，淡灰色実線）  ＱＤ（１日１回）×５、２日のオフ（休薬），ＱＤ×５  ｉ．ｖ．（静脈内）；０．５％メチルセルロース（三角、濃灰色実線）  ＱＤ×５、２日のオフ，ＱＤ×５  ｐ．ｏ．（経口）；アピリモド・ジメシレート（四角，破線）  ６７．５ｍｇ／ｋｇ（４７ｍｇ／ｋｇの遊離塩基）  ＱＤ×５  ｉ．ｖ．，２日のオフ、ＱＤ×５；アピリモド遊離塩基（四角，淡灰色実線）  １５０ｍｇ／ｋｇ  ＱＤ×５，２日のオフ、ＱＤ×５  ｐ．ｏ；アピリモド遊離塩基（×印，実線）  ７５ｍｇ／ｋｇ  ＢＩＤ（１日２回）×５，２日のオフ、ＢＩＤ×５  ｐ．ｏ．。
【図５】[29]  図５：イブルチニブと組み合わせたアピリモドのＤＬＢＣＬ腫瘍に対するインビボでの抗腫瘍活性；上の線は下記を示す：ビヒクル（菱形，淡灰色実線）  ＱＤ×５，２日のオフ，ＱＤ×５  ｐ．ｏ．＋ｉ．ｖ．；イブルチニブ（三角，濃灰色実線）  １０ｍｇ／ｋｇ  ＱＤ×１２  ｉ．ｖ．；アピリモド遊離塩基（四角，破線）  ７５ｍｇ／ｋｇ  ＱＤ×５，２日のオフ，ＱＤ×５  ｐ．ｏ．；イブルチニブ（×印，黒色実線）  ２０ｍｇ／ｋｇ  ＱＤ×１２  ｉ．ｖ．；アピリモド遊離塩基７５ｍｇ／ｋｇ  ＱＤ×５，２日のオフ，ＱＤ×５  ｐ．ｏ．＋イブルチニブ１０ｍｇ／ｋｇ  ＱＤ×１２  ｉ．ｖ．（四角，淡灰色実線）；アピリモド遊離塩基７５ｍｇ／ｋｇ  ＱＤ×５，２日のオフ，ＱＤ×５  ｐ．ｏ．＋イブルチニブ１０ｍｇ／ｋｇ  ＱＤ×１２  ｉ．ｖ．（丸，中等度灰色実線）。
【図６】[30]  図６：アピリモドは高親和性でＰＩＫｆｙｖｅに結合する（Ｋｄ＝７５ｐＭ）。
【図７】[31]  図７：ＩＬ−２３Ａ発現は、非ホジキンＢ細胞リンパ腫における感受性の統計学的に有意な予測子ではない。アピリモド感受性（下，濃色）および非感受性（上，淡色）ＮＨＢ細胞系を示す。
【図８Ａ】[32]  図８Ａ：指示した濃度のアピリモドで２４時間処理したＨ４神経膠腫細胞におけるホスホイノシチドＰＩ（３，５）Ｐ２の免疫染色。
【図８Ｂ】[33]  図８Ｂ：ビヒクル（左）または１００ｎＭアピリモド（右）のいずれかで２４時間処理したＨ４神経膠腫細胞の微分干渉コントラスト(Differential Interference Contrast)（ＤＩＣ）イメージ。
【図９Ａ】[34]  図９Ａ：左：非ターゲティングｓｈＲＮＡ（対照）またはＰＩＫＦＹＶＥをターゲティングしたヘアピン（ｓｈＰＩＫＦＹＶＥ）のいずれかをトランスダクションしたＨ４のＤＩＣイメージ。右：対照またはドキシサイクリンで誘導した後のＰＩＫＦＹＶＥ  ｓｈＲＮＡのいずれかのＨ４細胞の生存性。
【図９Ｂ】[35]  図９Ｂ：Ｈ４神経膠腫におけるＰＩＫＦＹＶＥノックダウン。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
[36]  本発明は、癌の処置を必要とする対象、好ましくはヒト対象において癌を処置するためのアピリモドの使用に関連する組成物および方法を提供する。本発明は一般的に、リンパ由来および非リンパ由来の両方の広範な癌細胞に対するアピリモドの細胞毒性を予想外に見出したことに基づくアピリモドの新規使用に関するものであり、それはアピリモドの既知の免疫調節活性およびＩＬ−１２／２３阻害活性に明らかには関連しない、あるいはそれらから予測できない活性である。さらに、本発明は、アピリモドを単独で単剤療法として、または少なくとも１種類の追加の療法剤、たとえば追加の抗癌（化学療法）剤と組み合わせて使用する療法計画に基づく、癌処置に対する新規療法を提供する。本明細書に記載する療法計画は、非癌（正常）細胞と比較した癌細胞に対するアピリモドの選択的細胞毒性、およびある期間にわたって投与したアピリモドに対する癌細胞の感受性の増大を利用する。
【００２７】
[37]  本明細書中で用いる用語“アピリモド組成物”は、アピリモドそのもの（遊離塩基）を含む組成物を表わすことができ、あるいは後記のようにアピリモドの医薬的に許容できる塩類、溶媒和物、包接化合物、水和物、多型、プロドラッグ、アナログまたは誘導体を含むことができる。アピリモドの構造を式Ｉに示す。
【００２８】
【化１】
2018525358.tif 000003
【００２９】
[38]  アピリモドの化学名は、２−［２−ピリジン−２−イル）−エトキシ］−４−Ｎ’−（３−メチル−ベンジリデン）−ヒドラジノ］−６−（モルホリン−４−イル）−ピリミジン（ＩＵＰＡＣ名：（Ｅ）−４−（６−（２−（３−メチルベンジリデン）ヒドラジニル）−２−（２−（ピリジン−２−イル）エトキシ）ピリミジン−４−イル）モルホリン）であり、ＣＡＳ番号は５４１５５０−１９−０である。
【００３０】
[39]  アピリモドは、たとえばU.S. Patent No. 7,923,557および7,863,270、ならびにWO 2006/128129に記載された方法に従って製造できる。
[40]  本明細書中で用いる用語“医薬的に許容できる塩”は、たとえばアピリモド組成物の酸性基および塩基性基から形成される塩である。具体的な塩類には下記のものが含まれるが、それらに限定されない：硫酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、クロリド、ブロミド、ヨージド、硝酸塩、硫酸水素塩、リン酸塩、酸性リン酸塩、イソニコチン酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、酸性クエン酸塩、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン酸塩、パントテン酸塩、酒石酸水素塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ベシル酸塩、ゲンチシン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルカロン酸塩、サッカリン酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、およびパモ酸塩（たとえば、１，１’−メチレン−ビス−（２−ヒドロキシ−３−ナフトエート））。好ましい態様において、アピリモドの塩はメタンスルホン酸塩を含む。
【００３１】
[41]  用語“医薬的に許容できる塩”はまた、酸性官能基、たとえばカルボン酸官能基をもつアピリモド組成物と医薬的に許容できる無機塩基または有機塩基から製造される塩を表わす。
【００３２】
[42]  用語“医薬的に許容できる塩”はまた、塩基性官能基、たとえばアミノ官能基をもつアピリモド組成物と、医薬的に許容できる無機酸または有機酸から製造される塩を表わす。
【００３３】
[43]  本明細書に記載する化合物の塩類は、親化合物から、一般的な化学的方法、たとえば下記に記載された方法により合成できる：Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, P. Hemrich Stalil (Editor), Camille G. Wermuth (Editor), ISBN: 3-90639-026-8, August 2002。一般に、そのような塩類は、親化合物と適宜な酸を水中もしくは有機溶媒中または両者の混合物中で反応させることにより製造できる。
【００３４】
[44]  本明細書に記載する化合物のある塩形態を、当業者に周知の方法により遊離塩基に、また所望により他の塩形態に変換できる。たとえば、遊離塩基はアミン固定相を収容したカラム（たとえば、Ｓｔｒａｔａ−ＮＨ２カラム）に塩溶液を通すことにより形成できる。あるいは、水中の塩溶液を炭酸水素ナトリウムで処理して塩を分解し、遊離塩基を析出させることができる。次いでその遊離塩基を常法により他の酸と結合させることができる。
【００３５】
[45]  本明細書中で用いる用語“多型”は、本発明の化合物（たとえば、２−［２−ピリジン−２−イル）−エトキシ］−４−Ｎ’−（３−メチル−ベンジリデン）−ヒドラジノ］−６−（モルホリン−４−イル）−ピリミジン）またはその複合体の固体結晶形態を意味する。異なる多型の同一化合物が、異なる物理的、化学的および／または分光分析特性を示す可能性がある。異なる物理的特性には、安定性（たとえば、熱または光に対するもの）、圧縮適性および密度（配合および製品製造において重要）、および溶解速度（それは生物学的利用能に影響を及ぼす可能性がある）が含まれるが、これらに限定されない。安定性の相異は下記の変化から生じる可能性がある：化学反応性（たとえば、酸化較差；それによって、剤形はある多型から構成された場合に他の多型から構成された場合より急速に変色する）もしくは機械的特性（たとえば、動力学的に好ましい多型がより熱力学的に安定な多型に変換するのに伴なって、錠剤は貯蔵に際して崩壊する）または両者（たとえば、ある多型の錠剤は高湿度ではより分解しやすい）。多型の異なる物理的特性は、それらの加工に影響を及ぼす可能性がある。たとえば、ある多型は、たとえばそれの粒子の形状または粒度分布のため、他の多型より溶媒和物を形成する傾向がより大きく、あるいは濾過または洗浄して不純物を除くのがより困難である可能性がある。
【００３６】
[46]  本明細書中で用いる用語“水和物”は、本発明の化合物（たとえば、２−［２−ピリジン−２−イル）−エトキシ］−４−Ｎ’−（３−メチル−ベンジリデン）−ヒドラジノ］−６−（モルホリン−４−イル）−ピリミジン）またはその塩が、さらに非共有結合分子間力により結合した化学量論的量または非−化学量論的量の水を含むものを意味する。
【００３７】
[47]  本明細書中で用いる用語“包接化合物”は、空間（たとえば、チャネル）を含む結晶格子の形態の本発明化合物（たとえば、２−［２−ピリジン−２−イル）−エトキシ］−４−Ｎ’−（３−メチル−ベンジリデン）−ヒドラジノ］−６−（モルホリン−４−イル）−ピリミジン）またはその塩が、内部にトラップされたゲスト分子（たとえば、溶媒または水）をもつものを意味する。
【００３８】
[48]  本明細書中で用いる用語“プロドラッグ”は、本明細書に記載する化合物（たとえば、２−［２−ピリジン−２−イル）−エトキシ］−４−Ｎ’−（３−メチル−ベンジリデン）−ヒドラジノ］−６−（モルホリン−４−イル）−ピリミジン）の誘導体であって、生物学的条件下で（インビトロまたはインビボで）加水分解され、酸化され、または他の様式で反応して、本発明の化合物を供給できるものを意味する。プロドラッグは生物学的条件下でのそのような反応に際して初めて活性になる場合があり、あるいはそれらはそれらの未反応形態で活性をもつ場合がある。本発明において考慮されるプロドラッグの例には、本明細書に記載する化合物（たとえば、２−［２−ピリジン−２−イル）−エトキシ］−４−Ｎ’−（３−メチル−ベンジリデン）−ヒドラジノ］−６−（モルホリン−４−イル）−ピリミジン）のアナログまたは誘導体であって、生加水分解性(biohydrolyzable)部分を含むもの、たとえば生加水分解性アミド、生加水分解性エステル、生加水分解性カルバメート、生加水分解性カーボネート、生加水分解性ウレイド、および生加水分解性ホスフェートアナログが含まれるが、これらに限定されない。プロドラッグの他の例には、本明細書に開示するいずれかの式の化合物の誘導体であって、−ＮＯ、−ＮＯ２、−ＯＮＯ、または−ＯＮＯ２部分を含むものが含まれる。プロドラッグは、一般に、周知の方法、たとえばBurger’s Medicinal Chemistry and Drug Discovery (1995) 172-178, 949-982 (Manfred E. Wolff ed., 5th ed)に記載された方法を用いて製造できる。
【００３９】
[49]  本明細書中で用いる用語“溶媒和物”または“医薬的に許容できる溶媒和物”は、本明細書に記載する化合物の１つ（たとえば、２−［２−ピリジン−２−イル）−エトキシ］−４−Ｎ’−（３−メチル−ベンジリデン）−ヒドラジノ］−６−（モルホリン−４−イル）−ピリミジン）への１個以上の溶媒分子の会合から形成された溶媒和物である。溶媒和物という用語には、水和物（たとえば、半−水和物、１水和物、２水和物、３水和物、４水和物など）が含まれる。
【００４０】
[50]  本明細書中で用いる用語“アナログ”は、構造的には他と類似するけれども組成においてわずかに異なる化学物質を表わす（１個の原子が異なる元素の原子により置き換えられた場合、または特定の官能基が存在する場合、または１つの官能基が他の官能基により置き換えられた場合のように）。よって、アナログは、機能および外観においては基準化合物と類似または同等であるけれども構造または由来においてはそうでない化合物である。本明細書中で用いる用語“誘導体”は、共通のコア構造をもち、本明細書に記載する種々の基で置換された化合物を表わす。
【００４１】
処置方法
[51]  本発明は、療法有効量の本発明のアピリモド組成物を投与することにより、癌を処置する必要がある対象において癌を処置するための方法を提供し、その組成物はアピリモド、またはその医薬的に許容できる塩、溶媒和物、包接化合物、水和物、多型、プロドラッグ、アナログまたは誘導体を含む。一態様において、アピリモド組成物はアピリモド遊離塩基またはアピリモド・ジメシレートを含む。本発明はさらに、癌の処置に有用な医薬を調製するための、アピリモド組成物の使用を提供する。
【００４２】
[52]  一態様において、癌は脳癌、神経膠腫、肉腫、乳癌、肺癌、非小細胞肺癌、中皮腫、虫垂癌、泌尿生殖器癌、腎細胞癌、前立腺癌、膀胱癌、精巣癌、陰茎癌、子宮頚癌、卵巣癌、フォン・ヒッペル・リンドウ病、頭頚部癌、胃腸癌、肝細胞癌、胆嚢癌、食道癌、胃癌、結腸直腸癌、膵臓癌、神経内分泌腫瘍、甲状腺腫瘍、下垂体腫瘍、副腎腫瘍、血液悪性腫瘍、リンパ腫、または白血病である。
【００４３】
[53]  一態様において、癌はリンパ腫である。一態様において、リンパ腫はＢ細胞リンパ腫である。一態様において、Ｂ細胞リンパ腫はホジキンＢ細胞リンパ腫および非ホジキンＢ細胞リンパ腫からなる群から選択される。一態様において、Ｂ細胞リンパ腫はＤＬＢＣＬ、濾胞性リンパ腫、辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）、または粘膜関連リンパ組織型リンパ腫(mucosa associated lymphatic tissue lymphoma)（ＭＡＬＴ）、小リンパ球性リンパ腫（慢性リンパ性白血病とオーバーラップする）、およびマントル細胞リンパ腫から選択される非ホジキンＢ細胞リンパ腫である。一態様において、Ｂ細胞リンパ腫は下記のものからなる群から選択される非ホジキンＢ細胞リンパ腫である：バーキットリンパ腫、バーキットリンパ腫、原発性縦隔（胸腺）大細胞型Ｂ細胞リンパ腫(primary mediastinal (thymic) large B-cell lymphoma)、リンパ形質細胞性リンパ腫(lymphoplasmacytic lymphoma)：これはワルデンシュトレーム・マクログロブリン血症(Waldenstroem macroglobulinemia)として顕性になる可能性がある、節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫(nodal marginal zone B cell lymphoma)細胞リンパ腫（ＮＭＺＬ）、脾臓辺縁帯リンパ腫(splenic marginal zone lymphoma)（ＳＭＺＬ）、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫(intravascular B cell lymphoma)、原発性滲出液リンパ腫(primary effusion lymphoma)、リンパ腫様肉芽腫症(lymphomatoid granulomatosis)、Ｔ細胞／組織球豊富大細胞型Ｂ細胞リンパ腫(histiocyte-rich large B-cell lymphoma)、原発性中枢神経系リンパ腫、原発性皮膚びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫(primary cutaneous diffuse large B-cell lymphoma)、下肢型（原発性皮膚ＤＬＢＣＬ，下肢型）、高齢者のＥＢＶ陽性びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、炎症関連のびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、ＡＬＫ陽性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、および形質芽細胞リンパ腫(plasmablastic lymphoma)。
【００４４】
[54]  一態様において、癌はＤＬＢＣＬ、濾胞性リンパ腫、辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）、ＣＬＬ／ＳＬＬ（慢性リンパ性白血病／小リンパ球性リンパ腫）、およびマントル細胞リンパ腫から選択されるリンパ腫である。
【００４５】
[55]  一態様において、本発明の方法は、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を処置する必要がある対象においてそれを処置するための療法計画である。一態様において、本方法は、対象の癌細胞において細胞のＰＩＫｆｙｖｅ活性を阻害するのに有効な１日量のアピリモド組成物を対象に投与することを含む。一態様において、アピリモド組成物は、アピリモドを含む組成物を投与する少なくとも１日と、それに続く、アピリモドを含む組成物を投与しない連続した少なくとも１日とからなる計画で投与される。一態様において、投与工程を２から１０まで、または２から５までのサイクルで実施する。一態様において、サイクルは、当該組成物を投与する連続した１から１０日までと、それに続く、当該組成物を投与しない連続した１から５日までとからなる。一態様において、サイクルは、当該組成物を投与する連続した２から５日と、それに続く、当該組成物を投与しない連続した１から２日とからなる。一態様において、サイクルは、当該組成物を投与する連続した５日と、それに続く、当該組成物を投与しない連続した２日とからなる。
【００４６】
[56]  一態様において、本方法は下記を含むか、あるいはそれからなる：２８日のサイクルにおいて５日のアピリモドによる処置と、それに続く２日のオフ（休薬）処置を、１から２か月まで、１から３か月まで、１から４か月まで、１から５か月まで、１から６か月まで、または６から１２か月までの範囲の期間。
【００４７】
[57]  これらの態様のいずれかによれば、アピリモド組成物はアピリモド遊離塩基またはアピリモド・ジメシレートを含むことができる。一態様において、ＮＨＬは濾胞性リンパ腫である。一態様において、ＮＨＬはマントル細胞リンパ腫である。一態様において、ＮＨＬはバーキットリンパ腫である。一態様において、ＮＨＬはびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、バーキットリンパ腫、縦隔Ｂ細胞リンパ腫、またはマントル細胞リンパ腫である。一態様において、ＮＨＬはＤＬＢＣＬである。一態様において、ＤＬＢＣＬは治療抵抗性である。一態様において、治療抵抗性ＤＬＢＣＬはＤＬＢＣＬ−ＡＢＣまたはＤＬＢＣＬ−ＧＣＢである。一態様において、治療抵抗性ＤＬＢＣＬは二重ｍｙｃ／ｂｃｌ２トランスロケーション（“ダブルヒットＤＬＢＣＬ”）を含む。一態様において、ＤＬＢＣＬは標準ＣＨＯＰ治療に対して治療抵抗性である。
【００４８】
併用療法
[58]  本発明はまた、併用療法を含む方法を提供する。本明細書中で用いる“併用療法(combination therapy)”または“共療法(co-therapy)”は、アピリモド組成物と追加の有効薬剤との共作用から有益な効果を得ることを意図した特定の治療計画の一部として、療法有効量のアピリモド組成物を少なくとも１種類の追加の有効薬剤と共に投与することを含む。“併用療法”は、意図または予測しなかった有益な効果を偶発的かつ恣意的に生じる２種類以上の療法化合物を別個の単剤療法計画の一部として投与することを含まないものとする。
【００４９】
[59]  一態様において、本方法は、アピリモド組成物および癌の処置のための化学療法計画を含む併用療法を用いて癌を処置する方法である。一態様において、化学療法計画はＣＨＯＰ計画である。ＣＨＯＰは、非ホジキンリンパ腫の処置に一般に用いられる、下記の有効薬剤からなる計画を表わす：（Ｃ）yclophosphamide（シクロホスファミド），ＤＮＡに結合して架橋を形成することによりＤＮＡに損傷を与えるアルキル化剤；（Ｈ）ydroxydaunorubicin（ヒドロキシダウノルビシン）(ドキソルビシンまたはＡｄｒｉａｍｙｃｉｎとも呼ばれる），それ自体をＤＮＡ塩基間に挿入することによりＤＮＡに損傷を与えるインターカレーション剤；（Ｏ）ncovin(ビンクリスチン），タンパク質チューブリンに結合することにより細胞が複製するのを阻止する；および（Ｐ）rednisone（プレドニゾン）または（Ｐ）rednisolone（プレドニゾロン），これらはコルチコステロイドである。他の態様において、化学療法計画はＣＯＯＰ（シクロホスファミド、硫酸ビンクリスチン、塩酸プロカルバジン、プレドニゾン）、ＣＶＰ（シクロホスファミド、硫酸ビンクリスチン、プレドニゾン）、ＥＰＯＣＨ（エトポシド、プレドニゾン、硫酸ビンクリスチン、シクロホスファミド、塩酸ドキソルビシン）、Ｈｙｐｅｒ−ＣＶＡＤ（シクロホスファミド、硫酸ビンクリスチン、塩酸ドキソルビシン、デキサメタゾン）、ＩＣＥ（イホスファミド、カルボプラチン、エトポシド）、Ｒ−ＣＨＯＰ（リツキシマブ、シクロホスファミド、硫酸ビンクリスチン、塩酸プロカルバジン、プレドニゾン）、およびＲ−ＣＶＰ（リツキシマブ、シクロホスファミド、硫酸ビンクリスチン、プレドニゾン）から選択される。
【００５０】
[60]  少なくとも１種類の追加の有効薬剤は、療法剤、たとえば抗癌剤もしくは癌化学療法剤、または非療法剤、およびその組合わせであってもよい。療法剤に関して、組合わせの有益な効果には療法有効化合物の組合わせから生じる薬物動態的または薬力学的な共作用が含まれるが、これらに限定されない。非療法剤に関して、組合わせの有益な効果は組合わせ中の療法有効化合物に関連する毒性、副作用、または有害事象の緩和に関係する可能性がある。
【００５１】
[61]  一態様において、少なくとも１種類の追加薬剤は、アピリモド組成物の１以上の副作用、すなわち吐き気、嘔吐、頭痛、めまい(dizziness)、立ちくらみ(lightheadedness)、眠気(drowsiness)およびストレスのいずれかから選択される１以上の副作用を緩和する非療法剤である。この態様の一側面において、非療法剤はセロトニン受容体（５−ヒドロキシトリプタミン受容体または５−ＨＴ受容体としても知られる）のアンタゴニストである。一側面において、非療法剤は５−ＨＴ３または５−ＨＴ１ａ受容体のアンタゴニストである。一側面において、非療法剤はオンダンセトロン、グラニセトロン、ドラセトロンおよびパロノセトロンからなる群から選択される。他の側面において、非療法剤はピンドロールおよびリスペリドンからなる群から選択される。
【００５２】
[62]  一態様において、少なくとも１種類の追加の有効薬剤は療法剤である。一態様において、療法剤は抗癌剤である。一態様において、抗癌剤はイブルチニブである。一態様において、アピリモド組成物をイブルチニブと一緒に単一剤形で、または別個の剤形で投与する。一態様において、剤形は経口剤形である。他の態様において、剤形は静脈内投与に適している。
【００５３】
[63]  一態様において、抗癌剤はリンパ腫の処置に使用するために承認された薬物である。そのような薬物の限定ではない例には、下記のものが含まれる：ａｂｉｔｒｅｘａｔｅ((メトトレキセート(methotrexate))、アドセトリス(adcetris))(ブレンツキシマブ  ベドチン(brentuximab vedotin))、アンボクロリン(ambochlorin)(クロラムブシル(chlorambucil))、アンボクロリン(amboclorin)(クロラムシル(chloramucil))、アラノン(arranon)(ネララビン(nelarabine))、ベセナム(becenum)(カルムスチン(carmustine))、ベロオダク(beleodaq)(ベリノスタット(belinostat))、ベリノスタット、塩酸ベンダムスチン(bendamustine hydrochloride)、ｂｅｘｘａｒ(トシツモマブ(tositumomab)およびヨウ素Ｉ１３１トシツモマブ)、ＢｉＣＮＵ(カルムスチン)、ブレノキサン(blenoxane)（ブレオマイシン）、ブレオマイシン、ボルテゾミブ(bortezomib)、ブレンツキシマブ  ベドチン、カルムブリス(carmubris)（カルムスチン）、カルムスチン、クロラムブシル、クラフェン(clafen)（シクロホスファミド）、シクロホスファミド、シトキサン(cytoxan)（シクロホスファミド）、デニロイキン  ディフチトックス(denileukin diftitox)、ＤｅｐｏＣｙｔ(シタラビンリポソーム(liposomal cytarabine))、塩酸ドキソルビシン、ｆｏｌｅｘ（メトトレキセート）、フォロチン(folotyn)(プララトレキセート(pralatrexate))、イブリツモマブ  チウキセタン(ibritumomab tiuxetan)、イブルチニブ、イデラリシブ(idelalisib)、イムブルビカ(imbruvica)(イブツルチニブ(ibtrutinib))、イントロンＡ（組換えインターフェロンアルファ−２ｂ）、イストダックス(istodax)(ロミデプシン(romidepsin))、レナリドミド(lenalidomide)、ロイケラン(leukeran)（クロラムブシル）、リンホリジン(linfolizin)（クロラムブシル）、シタラビンリポソーム、塩酸メクロレタミン(mechlorethamine hydrochloride)、メトトレキセート、ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔe  ＬＰＦ(メトトレキセート)、ｍｅｘａｔｅ(メトトレキセート)、ｍｅｘａｔｅ−ＡＱ（メトトレキセート）、モゾビル(mozobil)(ペリキサフォル(perixafor))、ｍｕｓｔａｒｇｅｎ(塩酸メクロレタミン(mechlorethamine hydrochloride))、ネララビン(nelarabine)、ネオサール(neosar)（シクロホスファミド）、オンタック(ontak)（デニロイキン  ディフチトックス）、ペリキサフォル(perixafor)、プララトレキセート、プレドニゾン、組換えインターフェロンアルファ−２ｂ、リブリミド(revlimid)（レナリドミド）、リツキサン(rituxan)(リツキシマブ(rituximab))、リツキシマブ、ロミブプシン、トシツモマブおよびヨウ素Ｉ１３１トシツモマブ、トレアンダ(treanda)（塩酸ベンダムスチン）、ベルバン(velban)(硫酸ビンブラスチン(vinblastine sulfate))、ベルケイド（ボルテゾミブ）、ベルサール(velsar)（硫酸ビンブラスチン）、硫酸ビンブラシン、ビンカサルＰＦＳ(vincasar PFS)（硫酸ビンクリスチン）、硫酸ビンクリスチン、ボリノスタット(vorinostat)、ゼバリン(zevalin)（イブリツモマブ  チウキセタン）、ゾリンザ(zolinza)(ボリノスタット)、およびザイデリッヒ(zydelig)（イデラリシブ）。
【００５４】
[64]  一態様において、抗癌剤はＥＺＨ２の阻害剤から選択される：たとえばＥＰＺ−６４３８。一態様において、抗癌剤はタキソール(taxol)、ビンクリスチン、ドキソルビシン、テムシロリムス(temsirolimus)、カルボプラチン、オファツムマブ(ofatumumab)、リツキシマブおよびその組合わせから選択される。
【００５５】
[65]  一態様において、少なくとも１種類の追加の薬剤はＢ細胞受容体経路阻害剤である。ある態様において、Ｂ細胞受容体経路阻害剤はＣＤ７９Ａ阻害剤、ＣＤ７９Ｂ阻害剤、ＣＤ  １９阻害剤、Ｌｙｎ阻害剤、Ｓｙｋ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、Ｂｌｎｋ阻害剤、ＰＬＣｙ阻害剤、ＰＫＣＰ阻害剤、またはその組合わせである。ある態様において、少なくとも１種類の追加の薬剤は抗体、Ｂ細胞受容体シグナル伝達阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＩＡＰ阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、放射免疫療法剤(radioimmunotherapeutic)、ＤＮＡ損傷剤、プロテオソーム阻害剤、ヒストンデアシラーゼ阻害剤、プロテインキナーゼ阻害剤、ヘッジホッグ阻害剤、Ｈｓｐ９０阻害剤、テロメラーゼ阻害剤、Ｊａｋｌ／２阻害剤、プロテアーゼ阻害剤、ＰＫＣ阻害剤、ＰＡＲＰ阻害剤、またはその組合わせである。
【００５６】
[66]  一態様において、少なくとも１種類の追加の薬剤は、クロラムブシル、イホスファミド(ifosphamide)、ドキソルビシン、メザラジン(mesalazine)、サリドマイド(thalidomide)、レナリドミド、テムシロリムス、エベロリムス、フルダラビン(fludarabine)、ホスタマチニブ(fostamatinib)、パクリタキセル(paclitaxel)、ドセタキセル(docetaxel)、オファツムマブ、リツキシマブ、デキサメタゾン、プレドニゾン、ＣＡＬ−１０１、イブリツモマブ、トシツモマブ、ボルテゾミブ、ペントスタチン(pentostatin)、エンドスタチン(endostatin)、またはその組合わせから選択される。
【００５７】
[67]  一態様において、少なくとも１種類の追加薬剤は、モノクローナル抗体、たとえばアレムツヅマブ(alemtuzumab)、ベバシズマブ、カツマキソマブ(catumaxomab)、セツキシマブ(cetuximab)、エドレコロマブ(edrecolomab)、ゲムツヅマブ(gemtuzumab)、オファツムマブ、パニツムマブ(panitumumab)、リツキシマブ、トラスツヅマブ(trastuzumab)、エクリズマブ(eculizumab)、エファリズマブ(efalizumab)、ｍｕｒｏｍａｂ−ＣＤ３、ナタリズマブ(natalizumab)、アダリムマブ(adalimumab)、アフェリモマブ(afelimomab)、セルトリズマブ  ペゴル(certolizumab pegol)、ゴリムマブ(golimumab)、インフリキシマブ(infliximab)、バシリキシマブ(basiliximab)、カナキヌマブ(canakinumab)、ダクリズマブ(daclizumab)、メポリズマブ(mepolizumab)、トシリズマブ(tocilizumab)、ウステキヌマブ(ustekinumab)、イブリツモマブ  チウキセタン(ibritumomab tiuxetan)、トシツモマブ、アバゴボマブ(abagovomab)、アデカツムマブ(adecatumumab)、アレムツヅマブ、抗−ＣＤ３０モノクローナル抗体Ｘｍａｂ２５１３、抗−ＭＥＴモノクローナル抗体ＭｅｔＭａｂ、アポリズマブ(apolizumab)、アポマブ(apomab)、アルシツモマブ(arcitumomab)、バシリキシマブ、二重特異性抗体２Ｂ１、ブリナツモマブ(blinatumomab)、ブレンツキシマブ  ベドチン(brentuximab vedotin)、カプロマブ  ペンデチド(capromab pendetide)、シクスツムマブ(cixutumumab)、クラウディキシマブ(claudiximab)、コナツムマブ(conatumumab)、ダセツズマブ(dacetuzumab)、デノスマブ(denosumab)、エクリズマブ、エプラツヅマブ(epratuzumab)、エルツマキソマブ(ertumaxomab)、エトラシズマブ(etaracizumab)、フィギツムマブ(figitumumab)、フレソリムマブ(fresolimumab)、ガリキシマブ(galiximab)、ガニツマブ(ganitumab)、ゲムツヅマブ  オゾガマイシン(gemtuzumab ozogamicin)、グレムバツムマブ(glembatumumab)、イブリツモマブ、イノツズマブ  オゾガマイシン(inotuzumab ozogamicin)、イピリムマブ、レキサツムマブ(lexatumumab)、リンツズマブ(lintuzumab)、リンツズマブ、ルカツムマブ(lucatumumab)、マパツムマブ(mapatumumab)、マツズマブ(matuzumab)、ミラツズマブ(milatuzumab)、モノクローナル抗体ＣＣ４９、ネシツムマブ(necitumumab)、ニモツズマブ(nimotuzumab)、オファツムマブ、オレゴボマブ(oregovomab)、ペルツズマブ(pertuzumab)、ラマクリマブ(ramacurimab)、ラニビズマブ(ranibizumab)、シプリズマブ(siplizumab)、ソネプシズマブ(sonepcizumab)、タネズマブ(tanezumab)、トシツモマブ、トラスツヅマブ、トレメリムマブ(tremelimumab)、ツコツズマブ  セルモロイキン(tucotuzumab celmoleukin)、ベルツズマブ(veltuzumab)、ビシリズマブ(visilizumab)、ボロシキシマブ(volociximab)、およびザルツムマブ(zalutumumab)である。
【００５８】
[68]  併用療法に関して、アピリモド組成物の投与は１種類以上の追加の有効薬剤の投与と同時またはそれの投与後であってもよい。他の態様において、併用療法の異なる成分の投与は異なる頻度であってもよい。１種類以上の追加薬剤を、本発明化合物の投与の前（たとえば、５分前、１５分前、３０分前、４５分前、１時間前、２時間前、４時間前、６時間前、１２時間前、２４時間前、４８時間前、７２時間前、９６時間前、１週間前、２週間前、３週間前、４週間前、５週間前、６週間前、８週間前、または１２週間前）、それと同時、またはその後（たとえば、５分後、１５分後、３０分後、４５分後、１時間後、２時間後、４時間後、６時間後、１２時間後、２４時間後、４８時間後、７２時間後、９６時間後、１週間後、２週間後、３週間後、４週間後、５週間後、６週間後、８週間後、または１２週間後）に投与することができる。
【００５９】
[69]  より詳細に本明細書に記載するように、１種類以上の追加の有効薬剤をアピリモド組成物との共投与のために単一剤形中に配合することができる。１種類以上の追加の有効薬剤を、本発明の化合物を含む剤形とは別個に投与することができる。アピリモド組成物とは別個に追加の有効薬剤を投与する場合、それはアピリモド組成物と同一または異なる投与経路によるものであってよい。
【００６０】
[70]  好ましくは、アピリモド組成物を１種類以上の追加薬剤と組み合わせて投与することにより、処置される対象において相乗的応答が得られる。これに関して、用語“相乗的”は、組合わせの有効性がいずれかの単剤療法のみの相加効果より有効であることを表わす。本発明による併用療法の相乗効果によって、組合わせ中の少なくとも１種類の薬剤を、その組合わせ以外のそれの用量および／または頻度と比較してより低い投与量および／またはより少ない投与頻度で使用できる。組合わせのさらに他の有益な効果は、組合わせ中のいずれかの療法を単独で使用すること（単剤療法とも呼ばれる）に関連する有害または目的外の副作用が回避または低減されることに現われる可能性がある。
【００６１】
[71]  “併用療法”は、本発明の化合物を非薬物療法（たとえば、外科処置または放射線処置）とのさらなる組合わせで投与することをも含む。併用療法がさらに非薬物処置を含む場合、療法用化合物と非薬物処置の組合わせの共作用からの有益な効果が達成される限り、非薬物処置はいずれか適切な時点で実施できる。たとえば、適切な場合、療法用化合物の投与から非薬物処置を時間的におそらく数日または数週間すら離した場合にもなお、有益な効果が達成される。
【００６２】
[72]  非薬物処置は、化学療法、放射線療法、ホルモン療法、抗エストロゲン療法、遺伝子療法、および外科処置から選択できる。たとえば、非薬物療法は下記のものである：卵巣摘除（たとえば、体内のエストロゲンのレベルを低下させるために）、胸郭穿刺術(thoracentesis)（たとえば、胸部から体液を除去するための）、穿刺術(paracentesis)（たとえば、腹部から体液を除去するための）、血管筋脂肪腫を摘除もしくは縮小するための外科処置、肺移植（場合により、移植による感染を阻止するために抗生物質と共に）、または酸素療法（たとえば、両鼻腔内に配置する２つの細いプラスチックチューブまたはプロング(prong)を収容した鼻カニューレによるか、あるいは鼻と口の上にフィットするマスクによるか、あるいは首の前から気管に挿入した細いチューブを通して（経気管酸素療法とも呼ばれる））。
【００６３】
[73]  本明細書に記載する方法に関して、対象に投与するアピリモド組成物の量は療法有効量である。用語“療法有効量” は、処置される疾患もしくは障害を処置し、その症状を改善し、重症度を軽減し、持続時間を短縮し、または他の療法の療法効果を増強もしくは改善するのに十分な、あるいは対象において検知可能な効果を示すのに十分な量を表わす。一態様において、アピリモド組成物の療法有効量はＰＩＫｆｙｖｅキナーゼ活性を阻害するのに有効な量である。
【００６４】
[74]  アピリモド組成物の有効量は、約０．００１ｍｇ／ｋｇから約１０００ｍｇ／ｋｇまで、約０．０１ｍｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇまで、約１０ｍｇ／ｋｇから約２５０ｍｇ／ｋｇまで、約０．１ｍｇ／ｋｇから約１５ｍｇ／ｋｇまでの範囲；または範囲の下限が０．００１ｍｇ／ｋｇ〜９００ｍｇ／ｋｇのいずれかの量であり、範囲の上限が０．１ｍｇ／ｋｇ〜１０００ｍｇ／ｋｇのいずれかの量であるいずれかの範囲であってもよい（たとえば、０．００５ｍｇ／ｋｇ〜２００ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ）。当業者に認識されるように、有効量は処置される疾患、投与経路、賦形剤の使用、および他の療法処置との共使用、たとえば他の薬剤の使用の可能性によっても変動するであろう。たとえば、U.S. Patent No. 7,863,270を参照；本明細書に援用する。
【００６５】
[75]  より具体的な側面において、アピリモド組成物を３０〜１０００ｍｇ／日（たとえば、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、または３００ｍｇ／日）、少なくとも１週間（たとえば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、３６、４８、またはそれ以上の週間）の投与計画で投与する。好ましくは、アピリモド組成物を１００〜１０００ｍｇ／日、４または１６週間の投与計画で投与する。あるいは、または続いて、アピリモド組成物を１００ｍｇ〜３００ｍｇ、１日２回、８週間または所望により５２週間の投与計画で投与する。あるいは、または続いて、アピリモド組成物を５０ｍｇ〜１０００ｍｇ、１日２回、８週間または所望により５２週間の投与計画で投与する。
【００６６】
[76]  有効量のアピリモド組成物を、１日１回、１日２回、または１日２回から５回まで、最大で１日２回、または最大で１日３回、または最大で１日８回、投与することができる。一態様において、アピリモド組成物を、１日３回、１日２回、１日１回、１４日のオン（投薬）（１日４回、１日３回、または１日２回、または１日１回）と７日のオフ（休薬）で３週間のサイクル、最大で５または７日のオン（１日４回、１日３回、または１日２回、または１日１回）と１４〜１６日のオフで３週間のサイクル、あるいは２日毎に１回、または週１回、または２週毎に１回、または３週毎に１回、投与する。
【００６７】
[77]  一態様において、アピリモド組成物を１日１回または１日２回、５日のオン、２日のオフ、２８日間のサイクルで、１〜２か月、１〜３か月、１〜４か月、１〜５か月、１〜６か月、または６〜１２か月の期間、投与する。
【００６８】
[78]  本明細書に記載する方法によれば、“処置する必要がある対象”は、ある疾患、障害もしくは状態を伴う対象、または一般集団と対比してある疾患、障害もしくは状態を発現するリスクが高い対象である。処置する必要がある対象は、その疾患または障害、たとえば癌に現在利用できる療法に対して“不応答”または“治療抵抗性”である対象であってもよい。これに関して、用語“不応答”および“治療抵抗性”は、療法に対する対象の応答がその疾患または障害に関連する１以上の症状を軽減するのに臨床的に適切でないものを表わす。本明細書に記載する方法の一側面において、処置する必要がある対象は、癌を伴っており、その癌が標準療法に対して治療抵抗性であるか、あるいはその癌が標準処置後に再発した対象である。
【００６９】
[79]  “対象”には哺乳類が含まれる。哺乳類は、たとえばいずれかの哺乳類、たとえばヒト、霊長類、脊椎動物、鳥類、マウス、ラット、ニワトリ、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ヤギ、ラクダ、ヒツジまたはブタであってもよい。好ましくは、哺乳類はヒトである。用語“患者”はヒト対象を表わす。
【００７０】
[80]  本発明はまた、本明細書に記載する疾患、障害または状態の処置のための単剤療法を提供する。本明細書中で用いる“単剤療法”は、処置する必要がある対象に単一の有効化合物または療法化合物を投与することを表わす。
【００７１】
[81]  本明細書中で用いる“治療（処置）(treatment)”、“治療（処置）すること(treating)”または“治療（処置）する(treat)”は、疾患、状態または障害に対処する目的のための患者の管理およびケアを記述し、その疾患、状態または障害の１以上の症状または合併症を軽減するために、あるいは疾患、状態または障害を排除するために、アピリモド組成物を投与することを含む。
【００７２】
[82]  本明細書中で用いる“予防(prevention)”、“予防すること(preventing)”または“予防する(prevent))”は、疾患、状態または障害の症状または合併症の発症を軽減または排除することを記述し、その疾患、状態または障害の症状または合併症の発症、発現または再発を低減するために、アピリモド組成物を投与することを含む。
【００７３】
[83]  一態様において、アピリモド組成物の投与は処置される疾患または障害の症状または合併症の排除をもたらすが、排除は要求されない。一態様において、症状の重症度が低減する。癌に関して、そのような症状には重症度または進行度の臨床マーカーを含めることができ、それには、腫瘍が増殖因子を分泌する、細胞外マトリックスを分解する、血管形成する、近位組織への接着性を喪失する、または転移する程度、ならびに転移数が含まれる。
【００７４】
[84]  本明細書に記載する方法に従った癌の処置は、腫瘍サイズの低減を生じることができる。腫瘍サイズの低減は“腫瘍退縮”とも呼ぶことができる。好ましくは、処置後に腫瘍サイズが処置前のそれのサイズと対比して５％以上、低減する；より好ましくは、腫瘍サイズが１０％以上、低減する；より好ましくは、２０％以上、低減する；より好ましくは、３０％以上、低減する；より好ましくは、４０％以上、低減する；よりさらに好ましくは、５０％以上、低減する；最も好ましくは、７５％以上またはそれ以上、低減する。腫瘍のサイズはいずれか再現性のある測定手段で測定できる。腫瘍のサイズは腫瘍の直径として測定できる。
【００７５】
[85]  本明細書に記載する方法に従った癌の処置は、腫瘍体積の低減を生じることができる。好ましくは、処置後に腫瘍体積が処置前のそれのサイズと対比して５％以上、低減する；より好ましくは、腫瘍体積が１０％以上、低減する；より好ましくは、２０％以上、低減する；より好ましくは、３０％以上、低減する；より好ましくは、４０％以上、低減する；よりさらに好ましくは、５０％以上、低減する；最も好ましくは、７５％以上またはそれ以上、低減する。腫瘍体積はいずれか再現性のある測定手段で測定できる。
【００７６】
[86]  本明細書に記載する方法に従った癌の処置は、腫瘍数の低減を生じることができる。好ましくは、処置後に腫瘍数が処置前の数と対比して５％以上、低減する；より好ましくは、腫瘍数が１０％以上、低減する；より好ましくは、２０％以上、低減する；より好ましくは、３０％以上、低減する；より好ましくは、４０％以上、低減する；よりさらに好ましくは、５０％以上、低減する；最も好ましくは、７５％以上、低減する。腫瘍の数はいずれか再現性のある測定手段で測定できる。腫瘍の数は肉眼または特定倍率で見える腫瘍を計数することにより測定できる。好ましくは、特定倍率は２×、３×、４×、５×、１０×、または５０×である。
【００７７】
[87]  本明細書に記載する方法に従った癌の処置は、原発腫瘍部位から離れた他の組織または臓器における転移病巣の数の低減を生じることができる。好ましくは、処置後に転移病巣の数が処置前の数と対比して５％以上、低減する；より好ましくは、転移病巣の数が１０％以上、低減する；より好ましくは、２０％以上、低減する；より好ましくは、３０％以上、低減する；より好ましくは、４０％以上、低減する；よりさらに好ましくは、５０％以上、低減する；最も好ましくは、７５％以上、低減する。転移病巣の数はいずれか再現性のある測定手段で測定できる。転移病巣の数は肉眼または特定倍率で見える転移病巣を計数することにより測定できる。好ましくは、特定倍率は２×、３×、４×、５×、１０×、または５０×である。
【００７８】
[88]  本明細書中で用いる用語“選択的に”は、ある集団において他の集団より高い頻度で起きる傾向があることを意味する。比較する集団は細胞集団であってもよい。好ましくは、本明細書に記載するアピリモド組成物は正常細胞と比較して過剰増殖している細胞または異常増殖している細胞に選択的に作用する。本明細書中で用いる“正常細胞”は、“細胞増殖性障害”の一部として分類できない細胞である。正常細胞は、不都合な状態または疾患の発現をもたらす可能性のある、無制御な増殖もしくは異常な増殖または両者を示さない。好ましくは、正常細胞は正常に機能している細胞周期チェックポイント制御機序を備えている。好ましくは、アピリモド組成物は、ある分子ターゲット（たとえば、ターゲットキナーゼ）を調節するけれども他の分子ターゲット（たとえば、非ターゲットキナーゼ）を有意には調節しないように選択的に作用する。本発明はまた、酵素、たとえばキナーゼの活性を選択的に阻害する方法を提供する。好ましくは、ある事象が集団Ｂと比較して集団Ａにおいて２倍を超える頻度で起きれば、それは集団Ｂと対比して集団Ａにおいて選択的に起きる。ある事象が集団Ａにおいて５倍を超える頻度で起きれば、それは選択的に起きる。ある事象が集団Ｂと比較して集団Ａにおいて１０倍を超える頻度；より好ましくは５０倍を超える頻度；よりさらに好ましくは１００倍を超える頻度；最も好ましくは１０００倍を超える頻度で起きれば、それは集団Ａにおいて選択的に起きる。たとえば、罹患している細胞または過剰増殖している細胞において正常細胞と比較して２倍を超える頻度で細胞死が起きれば、それは罹患している細胞または過剰増殖している細胞において選択的に起きると言われるであろう。
【００７９】
医薬組成物および配合物
[89]  本発明は、哺乳類、好ましくはヒトに使用するのに適した、好ましくは医薬的に許容できる組成物であるアピリモド組成物を提供する。これに関して、組成物はさらに少なくとも１種類の医薬的に許容できる賦形剤またはキャリヤーを含むことができ、その量は疾患または障害の処置のために効果的である。一態様において、疾患または障害は癌、好ましくはリンパ腫、最も好ましくはＢ細胞リンパ腫である。一態様において、疾患または障害はｍＴＯＲ疾患または障害である。
【００８０】
[90]  一態様において、アピリモド組成物はアピリモド遊離塩基またはアピリモド・ジメシレートを含む。
[91]  一態様において、アピリモド組成物を少なくとも１種類の追加の有効薬剤と単一剤形中で組み合わせる。一態様において、組成物はさらに抗酸化剤を含む。
【００８１】
[92]  一態様において、少なくとも１種類の追加の有効薬剤は、アルキル化剤、インターカレート剤、チューブリン結合剤、コルチコステロイド、およびその組合わせからなる群から選択される。一態様において、少なくとも１種類の追加の有効薬剤は、イブルチニブ、リツキシマブ、ドキソルビシン、プレドニゾロン、ビンクリスチン、ベルケイド、およびエベロリムス、ならびにその組合わせからなる群から選択される療法剤である。一態様において、少なくとも１種類の追加の有効薬剤は、シクロホスファミド、ヒドロキシダウノルビシン（ドキソルビシンまたはＡｄｒｉａｍｙｃｉｎ（商標）とも呼ばれる）、ビンクリスチン（Ｏｎｃｏｖｉｎ（商標）とも呼ばれる）、プレドニゾン、プレドニゾロン、およびその組合わせから選択される療法剤である。一態様において、少なくとも１種類の追加の有効薬剤は、アピリモド組成物の１以上の副作用を改善するように選択された非療法剤である。一態様において、非療法剤はオンダンセトロン、グラニセトロン、ドラセトロンおよびパロノセトロンからなる群から選択される。一態様において、非療法剤はピンドロールおよびリスペリドンからなる群から選択される。
【００８２】
[93]  一態様において、少なくとも１種類の追加の有効薬剤は、ｍＴＯＲ経路の阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、二重ＰＩ３Ｋ／ｍＴＯＲ阻害剤、ＳＲＣ阻害剤、ＶＥＧＦ阻害剤、ヤヌスキナーゼ(Janus kinase)（ＪＡＫ）阻害剤、Ｒａｆ阻害剤、Ｅｒｋ阻害剤、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、抗−有糸分裂剤、多剤耐性排出阻害剤(multi-drug resistance efflux inhibitor)、抗生物質、および療法用抗体から選択される。一態様において、少なくとも１種類の追加の有効薬剤は、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤（たとえば、ティピファルニブ(tipifarnib))、抗−有糸分裂剤（たとえば、ドセタキセル）、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤（たとえば、ボリノスタット(vorinostat))、および多剤耐性排出阻害剤から選択される。
【００８３】
[94]  一態様において、抗−有糸分裂剤は、グリセオフルビン(Griseofulvin)、酒石酸ビノレルビン(vinorelbine tartrate)、パクリタキセル、ドセタキセル、ビンクリスチン、ビンブラスチン、エポチロン(Epothilone)Ａ、エポチロンＢ、ＡＢＴ−７５１、ＣＹＴ９９７(レキシブリン(Lexibulin))、酒石酸ビンフルニン(vinflunine tartrate)、フォスブレタブリン(Fosbretabulin)、ＧＳＫ４６１３６４、ＯＮ−０１９１０(リゴセルチブ(Rigosertib))、Ｒｏ３２８０、ＢＩ２５３６、ＮＭＳ−Ｐ９３７、ＢＩ  ６７２７(ボラセルチブ(Volasertib))、ＨＭＮ−２１４およびＭＬＮ０９０５から選択される。
【００８４】
[95]  一態様において、ポリエーテル系抗生物質は、モネンシンナトリウム(sodium monensin)、ニゲリシン(nigericin)、バリノマイシン(valinomycin)、サリノマイシン(salinomycin)から選択される。
【００８５】
[96]  “医薬組成物”は、本明細書に記載する化合物を、対象に投与するのに適した医薬的に許容できる形態で含有する配合物である。本明細書中で用いる句“医薬的に許容できる”は、堅実な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症なしに、妥当なリスク・ベネフィット比に相応して、ヒトおよび動物の組織と接触させて使用するのに適した化合物、物質、組成物、キャリヤー、および／または剤形を表わす。
【００８６】
[97]  “医薬的に許容できる賦形剤”は、医薬組成物を調製するのに有用な、一般的に安全、無毒性であり、かつ生物学的にも他の点でも不都合でない賦形剤を意味し、動物医療用にもヒトの医療用にも許容できる賦形剤を含む。医薬的に許容できる賦形剤の例には、限定ではなく、無菌の液体である水、緩衝塩類溶液、エタノール、ポリオール（たとえば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコールなど）、油類、界面活性剤、懸濁化剤、炭水化物（たとえば、グルコース、ラクトース、スクロースまたはデキストラン）、抗酸化剤（たとえば、アスコルビン酸またはグルタチオン）、キレート化剤、低分子量タンパク質、またはその適切な混合物が含まれる。
【００８７】
[98]  医薬組成物はバルクまたは単位剤形で供給できる。投与の容易さおよび投与量の均一性のために、医薬組成物を単位剤形で配合することが特に有利である。本明細書中で用いる用語“単位剤形”は、処置される対象のための単位投与量として適した物理的に分離した単位を表わす；各単位は、目的とする療法効果を生じるように計算された前決定量の有効化合物を必要な医薬用キャリヤーと共に含有する。本発明の単位剤形についての詳細は、有効化合物の独自の特性および達成すべき特定の療法効果によって支配され、それらに直接依存する。単位剤形は、アンプル、バイアル、坐剤、糖衣丸、錠剤、カプセル剤、ＩＶバッグ、またはエアゾールインヘラーにおける１回の圧出であってもよい。
【００８８】
[99]  療法適用に際して、投与量は、選択した投与量に影響を及ぼす他の要因のうち、特に薬剤、レシピエント患者の年齢、体重、および臨床状態、ならびにその療法を施す臨床医または専門医の経験および判断に応じて変動する。一般に、用量は療法有効量であるべきである。投与量はｍｇ／ｋｇ／日の測定単位で提示できる（その用量は患者の体重ｋｇ、体表面積ｍ２、および年齢に合わせることができる）。医薬組成物の有効量は、臨床医または資格をもつ他の観察者が認めるような客観的に同定できる改善をもたらすものである。たとえば、障害、疾患または状態の症状の軽減。本明細書中で用いる用語“有効投与量”は、対象または細胞において目的とする生物学的効果を生じる医薬組成物の量を表わす。
【００８９】
[100]  たとえば、単位剤形は１ナノグラム〜２ミリグラム、もしくは０．１ミリグラム〜２グラム；または１０ミリグラムから１グラムまで、もしくは５０ミリグラムから５００ミリグラムまで、もしくは１マイクログラムから２０ミリグラムまで；または１マイクログラムから１０ミリグラムまで；または０．１ミリグラムから２ミリグラムまでを含むことができる。
【００９０】
[101]  一態様において、単位剤形は２５、５０、７５、１００、２００、または３００ミリグラムの有効医薬成分、たとえばアピリモド遊離塩基またはアピリモド・ジメシレートを含む。一態様において、単位剤形は経口送達用の錠剤またはカプセル剤の形態である。
【００９１】
[102]  医薬組成物は、いずれか希望する経路（たとえば、肺、吸入、鼻内、経口、口腔、舌下、非経口、皮下、静脈内、筋肉内、腹腔内、胸膜腔内、クモ膜下、経皮、経粘膜、直腸など）による投与のためのいずれか適切な形態をとることができる（たとえば、液体、エアゾール剤、液剤、吸入剤、ミスト剤(mist)、スプレー剤；または固体、散剤、軟膏剤、パスタ剤、クリーム剤、ローション剤、ゲル剤、パッチ剤など）。たとえば、本発明の医薬組成物は、吸入または吹入によるエアゾール投与（口または鼻を通した）のための水溶液または粉末の形態；経口投与のための錠剤またはカプセル剤の形態；直接注射によるかまたは静脈内注入用の無菌注入液への添加による投与に適した無菌水性液剤または分散液剤の形態；あるいは経皮または経粘膜投与のためのローション剤、クリーム剤、発泡製剤、パッチ剤、懸濁液剤、液剤、または坐剤の形態であってもよい。
【００９２】
[103]  医薬組成物は経口用として許容できる剤形の形態であってもよく、それにはカプセル剤、錠剤、口腔剤形、トローチ剤、ロゼンジ、および乳剤、水性懸濁液剤、分散液剤または液剤の形態の経口液体が含まれるが、これらに限定されない。カプセル剤は、本発明の化合物と、不活性な増量剤および／または希釈剤、たとえば医薬的に許容できるデンプン（たとえば、トウモロコシ、バレイショまたはタピオカのデンプン）、糖類、人工甘味料、粉末状のセルロース、たとえば結晶質および微結晶質セルロース、穀粉、ゼラチン、ガムなどとの混合物を収容することができる。経口用錠剤の場合、慣用されるキャリヤーには、ラクトースおよびトウモロコシデンプンが含まれる。滑沢剤、たとえばステアリン酸マグネシウムも添加できる。カプセル剤の形態での経口投与のために、有用な希釈剤にはラクトースおよび乾燥トウモロコシデンプンが含まれる。水性懸濁液剤および／また乳剤を経口投与する場合、乳化剤および／または懸濁化剤と混和した油相に本発明化合物を懸濁または溶解することができる。所望により、ある甘味料および／または矯味矯臭剤および／または着色剤を添加してもよい。
【００９３】
[104]  医薬組成物は錠剤の形態であってもよい。錠剤は、単位量の本発明化合物を、不活性な希釈剤またはキャリヤー、たとえば糖または糖アルコール、たとえばラクトース、スクロース、ソルビトールまたはマンニトールと一緒に含むことができる。錠剤はさらに非糖由来の希釈剤、たとえば炭酸ナトリウム、リン酸カルシウム、炭酸カルシウム、またはセルロースもしくはその誘導体、たとえばメチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、およびデンプン、たとえばトウモロコシデンプンを含むことができる。錠剤はさらに、結合剤および造粒剤、たとえばポリビニルピロリドン、崩壊剤（たとえば膨潤性の架橋ポリマー、たとえば架橋カルボキシメチルセルロース）、滑沢剤（たとえば、ステアレート）、保存剤（たとえば、パラベン類）、抗酸化剤（たとえば、ＢＨＴ）、緩衝剤（たとえば、リン酸緩衝液またはクエン酸緩衝液）、および発泡剤、たとえばシトレート／バイカーボネート混合物を含むことができる。
【００９４】
[105]  錠剤はコーティング錠であってもよい。コーティングは、保護膜コーティング（たとえば、ろうまたはワニス）、または有効薬剤の放出を制御するためにデザインされた、たとえば遅延放出（摂取後の前決定した遅滞時間後に有効薬剤を放出）もしくは胃腸管内の特定位置での放出のためのコーティングであってもよい。後者は、たとえば腸溶膜コーティング、たとえば商品名Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）で販売されているものを用いて達成できる。
【００９５】
[106]  錠剤配合物は一般的な圧縮法、湿式造粒法または乾式造粒法により調製でき、医薬的に許容できる希釈剤、結合剤、滑沢剤、崩壊剤、表面改質剤（界面活性剤を含む）、懸濁化剤または安定剤を使用し、それにはステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、タルク、ラウリル硫酸ナトリウム、微結晶性セルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、ポリビニルピロリドン、ゼラチン、アルギン酸、アラビアゴム、キサンタンガム、クエン酸ナトリウム、複合ケイ酸塩、炭酸カルシウム、グリシン、デキストリン、スクロース、ソルビトール、リン酸二カルシウム、硫酸カルシウム、ラクトース、カオリン、マンニトール、塩化ナトリウム、タルク、乾燥デンプンおよび粉末糖が含まれるが、これらに限定されない。好ましい表面改質剤には、非イオンおよびアニオン表面改質剤が含まれる。表面改質剤の代表例には、ポロキサマー１８８、塩化ベンザルコニウム、ステアリン酸カルシウム、セトステアリルアルコール、セトマクロゴール(cetomacrogol)系乳化ろう、ソルビタンエステル、コロイド二酸化ケイ素、ホスフェート、ドデシル硫酸ナトリウム、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、およびトリエタノールアミンが含まれるが、これらに限定されない。
【００９６】
[107]  医薬組成物はハードまたはソフトゼラチンカプセル剤の形態であってもよい。この配合によれば、本発明の化合物は固体、半固体または液体の形態であってもよい。
[108]  医薬組成物は、非経口投与に適した無菌の水性液剤または分散液剤であってもよい。本明細書中で用いる非経口という用語は、皮下、皮内、静脈内、筋肉内、関節内、動脈内、滑液包内、胸骨内、クモ膜下、病巣内および頭蓋内への注射法または注入法を含む。
【００９７】
[109]  医薬組成物は、直接注射による、または静脈内注入用の無菌注入液への添加による投与のいずれかに適した、無菌の水性液剤または分散液剤の形態であってもよく、水、エタノール、ポリオール（たとえば、グリセロール、プロピレングリコールおよび液体ポリエチレングリコール）、その適切な混合物、または１種類以上の植物油を含有する溶媒または分散媒を含む。遊離塩基または医薬的に許容できる塩としての本発明化合物の液剤または懸濁液剤は、適切に界面活性剤と混合した水中に調製できる。適切な界面活性剤の例を後記に挙げる。分散液剤も、たとえばグリセロール、液体ポリエチレングリコール、および油中におけるそれの混合物中に調製できる。
【００９８】
[110]  本発明の方法に使用するための医薬組成物は、配合物中に存在するいずれかのキャリヤーまたは希釈剤（たとえば、ラクトースまたはマンニトール）のほかに、さらに１種類以上の添加剤を含むことができる。この１種類以上の添加剤は、１種類以上の界面活性剤を含むかまたはそれからなることができる。界面活性剤は一般に１以上の長い脂肪族鎖、たとえば脂肪酸をもち、それによりそれらは細胞の脂質構造体中へ直接挿入されて薬物の透過および吸収を増強することができる。界面活性剤の相対的な親水性および疎水性を特徴づけるために一般に用いられる経験的パラメーターは、親水性−疎水性バランス（“ＨＬＢ”値）である。より低いＨＬＢ値をもつ界面活性剤はより疎水性であって油中においてより大きな溶解度をもち、一方、より高いＨＬＢ値をもつ界面活性剤はより親水性であって水溶液中においてより大きな溶解度をもつ。よって、親水性界面活性剤は一般に約１０より大きいＨＬＢ値をもつ化合物であるとみなされ、疎水性界面活性剤は一般に約１０より小さいＨＬＢ値をもつものである。しかし、多くの界面活性剤についてＨＬＢ値はＨＬＢ値を決定するために選択する経験的方法に応じて約８ＨＬＢ単位も異なる可能性があるので、これらのＨＬＢ値は指標にすぎない。
【００９９】
[111]  本発明の組成物中に使用する界面活性剤には、下記のものが含まれる：ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）−脂肪酸ならびにＰＥＧ−脂肪酸モノおよびジエステル、ＰＥＧグリセロールエステル、アルコール−油エステル交換生成物、ポリグリセリル脂肪酸、プロピレングリコール脂肪酸エステル、ステロールおよびステロール誘導体、ポリエチレングリコールソルビタン脂肪酸エステル、ポリエチレングリコールアルキルエーテル、糖およびそれの誘導体、ポリエチレングリコールアルキルフェノール、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレン（ＰＯＥ−ＰＯＰ）ブロックコポリマー、ソルビタン脂肪酸エステル、イオン性界面活性剤、脂溶性ビタミンおよびそれらの塩類、水溶性ビタミンおよびそれらの両親媒性誘導体、アミノ酸およびそれらの塩類、ならびに有機酸およびそれらのエステルおよび無水物。
【０１００】
[112]  本発明はまた、本発明の方法に使用するための医薬組成物を含むパッケージングおよびキットを提供する。キットは、ボトル、バイアル、アンプル、ブリスターパック、および注射器からなる群から選択される１以上の容器を含むことができる。キットはさらに、本発明の疾患、状態または障害を治療および／または防止する際に使用するための１以上の指示、１以上の注射器、１以上のアプリケーター、または本発明の医薬組成物を再構成するのに適した無菌溶液を含むことができる。
【０１０１】
[113]  本明細書中で用いるすべてのパーセントおよび比率は、別に指示しない限り重量による。本発明の他の特徴および利点は種々の例から明らかである。提示した例は、本発明を実施するのに有用な種々の成分および方法を示す。それらの例は特許請求の範囲に示す発明を限定しない。本開示に基づいて、当業者は本発明を実施するのに有用な他の成分および方法を同定および利用できる。
【実施例】
【０１０２】
実施例１：アピリモドは癌細胞において高選択的細胞毒である
[114]  構成的に増大したｍＴＯＲシグナル伝達活性を特徴とするＴＳＣ２−／−  マウス胎仔線維芽細胞(mouse embryonic fibroblast)（ＴＳＣ２−／−  ＭＥＦ）を用いるハイスループット細胞生存性スクリーニングで、アピリモドを同定した。要約すると、被験化合物（５μｌ原液，希望する最終ウェル濃度の６×）を３８４ウェルアッセイプレートに分注し、ＴＳＣ２−／−  ＭＥＦ細胞（ウェル当たり１０００個の細胞，２５μＬの培地中）をプレートに添加し、プレートを３７℃で７２時間（３日間）、５％  ＣＯ２雰囲気下に加湿インキュベーター内で３日間インキュベートした。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）蛍光アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）で製造業者の指示に従って細胞生存率を決定した。生存率を非処理対照細胞に対するパーセントとして表示した。一例として、アピリモドについてＭＥＦ−ＥＶ細胞生存率（平均±標準偏差，ｎ＝３）は０．５μＭで２．１６±０．３６％、５μＭで１．９４±０．０７％であった。１０ポイント用量応答曲線において、アピリモドは被験ＴＳＣ２−／−  ＭＥＦ細胞について１９．５ｎＭのＩＣ５０で細胞生存性を阻害した（図１）。次いでＢ細胞リンパ腫（ＳＵＤＨＬ−１０）、神経膠腫（Ｈ４）および結腸直腸癌（ＨＣＴ１１６）を含めた他の癌細胞系について、ならびに脾臓、肺および結腸に由来する非癌（正常）細胞系について、アピリモドを試験した。これらの細胞生存性アッセイにおいて、アピリモドは、癌細胞のものより２０〜２００倍高い範囲にあるはるかに高い非癌（正常）細胞のＩＣ５０値により立証されるように、非癌（正常）細胞と対比して癌細胞における細胞生存性の高選択的阻害剤であった。これらの結果を図１Ｂに示す。
【０１０３】
[115]  ２４の腫瘍タイプを表わす１２２のヒト癌細胞系を用いて、３日間のＣｅｌｌＴｉｔｅｒＧｌｏ（商標）アッセイでアピリモドの細胞毒性をさらに査定した。この３日間のアッセイにおいて、ＩＣ５０が５００ｎＭ未満であれば細胞系をアピリモド感受性と呼んだ。このアッセイにおいて３５の細胞系をアピリモド誘導による細胞毒性に対して感受性と同定した。アピリモド感受性細胞には、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、結腸直腸癌および肺癌を含めた数種類の異なる癌に由来する細胞が含まれていた。試験したうち最も感受性であるものは非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）細胞系であった。試験したＮＨＬ細胞系のちょうど５０％以上がアピリモドに対して感受性であり、あるサブタイプのＮＨＬは１００ｎＭ未満のＩＣ５０値でアピリモドに対して著しく感受性であった（このスクリーニングの感受性／非感受性カットオフ５００ｎＭと比較して）。これらには、ヒトバーキットリンパ腫（ＳＴ４８６）、ヒトマントル細胞リンパ腫（ＪｅＫｏ−１）およびヒトＤＬＢＣＬ（ＳＵＤＨＬ−４，ＩＣ５０＝５０ｎＭ）が含まれていた。このアッセイにおいて感受性ではなかった唯一のＮＨＬサブタイプは濾胞性のものであった。ＤＬＢＣＬ−ＧＣＢおよび−ＡＢＣサブタイプは両方ともアピリモド感受性であり、このことは、標準治療に対してしばしば治療抵抗性である、より侵攻性(aggressive)のサブタイプを含めた多数のＮＨＬ癌に対して、アピリモドが有効な可能性があることを示す。
【０１０４】
[116]  ＮＨＬは、増殖の遅いものから侵攻性のものにまでわたるサブタイプを含む多様な重症度の広範なグループの造血細胞系悪性疾患を表わす。ＮＨＬのサブタイプには、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、バーキットリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、および濾胞性Ｂ細胞リンパ腫が含まれる。ＤＬＢＣＬは遺伝子発現および起源細胞に基づいて２つのサブタイプ、ＧＣＢとＡＢＣに分類される。ＧＣＢは胚中心(germinal center)Ｂ細胞タイプであって普通の胚中心Ｂ細胞から発生し、ＡＢＣは活性化Ｂ細胞タイプであって形質細胞に分化する過程の後−胚中心(post-germinal center)Ｂ細胞から発生する。
【０１０５】
[117]  次いでアピリモドをより長期の細胞生存性アッセイにおいて試験し、３、５および７日間にわたって試験した細胞の感受性を比較した。アピリモドへの曝露時間の増大に伴ってすべての細胞系の感受性が増大し、７日間の曝露について１２５ｎＭ未満のＩＣ５０になった。これをＨＣＴ１１６結腸直腸癌細胞について図２Ａに例示する。種々のＮＨＬサブタイプがそれぞれ同様に７日間のアッセイにおいてアピリモドに対して増大した感受性を示した（ＩＣ５０＜１２５ｎＭ）（図２Ｂ）。かつ、マントル細胞性、濾胞性、バーキット、ＤＬＢＣＬ−ＡＢＣ、ＤＬＢＣＬ−ＧＣＢ、およびダブルヒット(double-hit)ＤＬＢＣＬを含めて、すべてのＮＨＬサブタイプがこのアッセイにおいて感受性であった。特に、二重ｍｙｃ／ｂｃｌ２トランスロケーション（“ダブルヒットＤＬＢＣＬ”）をもつものおよびマントル細胞リンパ腫を含めて、侵攻性リンパ腫を示すすべての細胞系が感受性であった。全体として３２の被験ＮＨＬ細胞系のうち７２％がアピリモドに対して感受性であり、非癌（正常）細胞の１５．８マイクロモル濃度（ｕＭ）と比較して平均ＩＣ５０値は６９ｎＭであった。
【０１０６】
実施例２：アピリモドはＣＨＯＰの成分と相乗作用する
[118]  前記で考察したように、ＮＨＬ細胞は本発明者らの癌細胞系スクリーニングにおいてアピリモドに対して格別の感受性を示した。ＤＬＢＣＬは最も一般的タイプのＮＨＬであり、西洋諸国におけるリンパ腫の３０〜４０％を占める。ＤＬＢＣＬは成熟Ｂ細胞の侵攻性新生物である。すべてのＤＬＢＣＬ患者のうちおおよそ４０％が第一選択治療後に再発する。多くの治療抵抗性ＤＬＢＣＬ−ＧＣＢ癌がＭＹＣおよびＢＣＬ２の単一および二重トランスロケーションを示す。これらの遺伝子バリアントを伴う患者は、少なくとも一部はＭＹＣおよびＢＣＬ２の過剰発現のため、より予後不良となる傾向がある。特に、アピリモドはこれらのトランスロケーションを示すＤＬＢＣＬ−ＧＣＢ細胞系においてすら有効であり（表２）、これは侵攻性サブタイプのＮＨＬの処置においてすら、アピリモドが単独で単剤療法として、または標準治療との組合わせで果たす役割を支持する。
【０１０７】
【表１】
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【０１０８】
[119]  ＮＨＬに対して有効な他の臨床薬剤と対比してインビトロ試験した場合、アピリモドは試験したうちで最も有効な薬物のひとつであることが証明された（表３）。
【０１０９】
【表２】
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【０１１０】
[120]  侵攻性ＮＨＬ腫瘍に対するアピリモドの有効性をさらに評価するために、そのような多くの癌に対する標準第一選択治療を含めた他の多数の化学療法剤のいずれかとアピリモドが相乗作用する能力を試験した。これらには、たとえばシクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチンおよびプレドニゾン（“ＣＨＯＰ”化学療法計画と呼ばれる）、ならびに再発したマントル細胞リンパ腫に適用される化学療法剤ベルケイドが含まれる。
【０１１１】
[121]  相乗作用試験のために、下記のＤＬＢＣＬ−ＧＣＢ細胞系を用いた：ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２、ＳＵＤＨＬ−４およびＳＵＤＨＬ−６。細胞を９６ウェルプレートにそれらの最適密度で播種した。単独またはアピリモドと組み合わせたそれぞれの薬剤で細胞を処理した。細胞を７２時間（３日間）処理した後、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒＧｌｏ（登録商標）（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて増殖を査定した。相乗作用の計算のために、ＣａｌｃｕＳｙｎ（バージョン２．１１，Ｂｉｏｓｏｆｔ）を用いて、Chou et al., Adv. Enzyme. Regul. (1984) 22:27-55により定義される組合わせ指数(combination index)（ＣＩ）を決定した。よって、ＣＩ値＞１を生じる薬物組合わせを拮抗的、ＣＩ＝１を相加的、ＣＩ＜１を相乗的と判定した。
【０１１２】
[122]  表４に示すように、アピリモドは３つの細胞系すべてにおいてすべての被験薬剤（シクロホスファミド、ドキソルビシン、プレドニゾロン、ビンクリスチンおよびベルケイド）との相乗活性を示した。これらの結果は、アピリモドとの併用療法が、標準化学療法計画後に再発する患者またはその計画に対して治療抵抗性である患者に有益な処置についてのアンメットメディカルニーズに対処するための有望な新規アプローチを表わすことを立証する；
【０１１３】
【表３】
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【０１１４】
ＤＬＢＣＬ−ＧＣＢ細胞系におけるアピリモドとＣＨＯＰの個々の成分、ベルケイドまたはエベロリムスとの薬物併用効果のまとめ。ＣＨＯＰ（シクロホスファミド（マホスファミド(mafosfamide)，２０）＝Ｍａｆ；ドキソルビシン＝Ｄｏｘ；ビンクリスチン＝Ｖｉｎ；プレドニゾロン＝Ｐｒｅｄ）成分、またはベルケイド（Ｖｅｌ）のいずれかとの組合わせにおける、フラクション効果(Fraction effect)（Ｆａ）を生じるアピリモド（Ａｐｉｌｉ）の濃度を示す。組合わせ指数（ＣＩ）を用いて併用効果を判定した；ＣＩ＞１は拮抗的、ＣＩ＝１は相加的、ＣＩ＜１は相乗的であり、その際、Ｆａ＞０．７５である。
【０１１５】
実施例３：アピリモドとイブルチニブとの相乗活性
[123]  イブルチニブは、Ｂ細胞性悪性疾患をターゲティングするＦＤＡ承認薬であり、マントル細胞リンパ腫および慢性リンパ性白血病を処置する際の単剤療法用として適用される。それはＰＣＩ−３２７６５としても知られており、商品名Ｉｍｂｒｕｖｉｃａ（商標）で市販されている。イブルチニブは、酵素ブルトン型チロシンキナーゼ(Bruton's tyrosine kinase)（ＢＴＫ）の選択的かつ共有接合性阻害剤である。ＢＴＫは、並行して起きる少なくとも３つの重要なＢ細胞生存促進機序(pro-survival mechanism)における鍵メディエーターである−アポトーシス、細胞接着、ならびに細胞の移動およびホーミング(homing)の調節。アピリモドとイブルチニブとの相乗活性はさらに、アピリモドが他の化学療法剤、特にＢ細胞リンパ腫をターゲティングする薬剤との併用療法に用いるための有望な薬剤であることを指摘する。イブルチニブは、イブルチニブまたはアピリモド単独と比較してアピリモドの存在下でＳＵＤＨＬ−４細胞生存率を有意に低下させた。参照：図３。この結果は他の２種類の被験細胞系ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２およびＳＵＤＨＬ−６において確証された。
【０１１６】
実施例４：インビボでのＤＬＢＣＬ腫瘍に対するアピリモドの抗腫瘍活性 
[124]  アピリモドがインビボで腫瘍増殖を阻害する能力を、単独およびイブルチニブとの組合わせの両方において次に試験した。後記のように、アピリモドは単独で腫瘍増殖を有意に低減し、アピリモドとイブルチニブの組合わせはいずれかの薬剤単独より大きな増殖阻害をもたらした。
【０１１７】
[125]  この試験の目的は、皮下ＳＵＤＨＬ−６ヒトＤＬＢＣＬ癌異種移植モデルの処置におけるアピリモドのインビボ療法効力を、単独またはイブルチニブとの組合わせで前臨床評価することであった。
【０１１８】
[126]  試験の第１アームにおいては、アピリモドを単独で試験した。ＳＵＤＨＬ−６細胞系を、１０％ウシ胎仔血清およびＬ−グルタミン（２ｍＭ）を補足したＲＰＭＩ−１６４０培地中、３７℃で５％  ＣＯ２雰囲気に維持した。腫瘍細胞を週２回継代培養し、腫瘍接種のために指数増殖期に収穫した。接種の２４時間前にＮＯＤ−ＳＣＩＤマウスをγ線照射した。各マウスの右腹部にＳＵ−ＤＨＬ−６腫瘍細胞（５×１０６）を０．１ｍｌのＭａｔｒｉｇｅｌ含有ＰＢＳ（１：１）中において皮下接種した。次いで腫瘍をおおよそ８０〜１２０ｍｍ３の平均サイズまで増殖させ、次いでマウスを５グループに分けて表５に詳述するように処理した。
【０１１９】
【表４】
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【０１２０】
[127]  腫瘍サイズを週２回、カリパスで２方向に測定し、次式を用いて体積をｍｍ３で表示する：Ｖ＝０．５ａ×ｂ２；式中のａおよびｂはそれぞれ腫瘍の長径および短径である。マウスを２９日間モニターし、すべてのアピリモド処理アームに有意の増殖阻害がみられた。静脈内投与は腫瘍サイズを５８％（４７ｍｇ／ｋｇ）低減し、経口投与は増殖を６８％（１５０ｍｇ／ｋｇの分割投与）または６４％（１５０ｍｇ／ｋｇの単回投与）低減し、体重に対する影響は無視できる程度であった（参照：図４）。よって、アピリモドの静脈内投与と経口投与はＳＵ−ＤＨＬ−６腫瘍のインビボ増殖損傷において類似の効力を示した。
【０１２１】
[128]  第２アームの試験は、前記と同じプロトコルを用いて同じＳＵＤＨＬ−６ヒトＤＬＢＣＬ癌異種移植モデルにおいてイブルチニブと組み合わせた場合のアピリモドの効力を評価した。各マウスの右腹部にＳＵ−ＤＨＬ−６腫瘍細胞（５×１０６）を０．１ｍｌのＭａｔｒｉｇｅｌ含有ＰＢＳ（１：１）中において皮下接種した。次いで腫瘍をおおよそ８０〜１２０ｍｍ３の平均サイズまで増殖させ、次いでマウスを６グループに分けて表６に詳述するように処理した。
【０１２２】
【表５】
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【０１２３】
[129]  腫瘍サイズを週２回、カリパスで２方向に測定し、次式を用いて体積をｍｍ３で表示する：Ｖ＝０．５ａ×ｂ２；式中のａおよびｂはそれぞれ腫瘍の長径および短径である。マウスを３１日間モニターし、７５ｍｇ／ｋｇ  アピリモド（５７％）、１０ｍｇ／ｋｇ  イブルチニブ（５４％）、および２０ｍｇ／ｋｇ  イブルチニブ（６４％）処理アームに有意の増殖阻害がみられた。７５ｍｇ／ｋｇアピリモドとイブルチニブの組合わせはさらに用量依存性で腫瘍増殖を低減した；１０ｍｇ／ｋｇイブルチニブ（６５％）および２０ｍｇ／ｋｇイブルチニブ（７０％）（参照：図５）。
【０１２４】
実施例５：アピリモドはＰＩＫｆｙｖｅキナーゼの高選択的結合剤である
[130]  癌細胞におけるアピリモドの細胞ターゲットを同定するために、ヒト神経膠腫細胞から調製した全細胞溶解物を用いて化合物捕獲質量分析(chemical capture mass spectrometry)（ＣＣＭＳ）によりそれの結合パートナーを同定した。この作業はＣａｐｒｏｔｅｃ  Ｂｉｏａｎａｌｙｔｉｃｓ  ＧｍｂＨ（ドイツ、ベルリン）で実施された。参照：Michaelis et al., J. Med. Chem., 55 3934-44 (2012)およびそれに引用された参考文献。要約すると、単一配向(single orientation)で結合したアピリモドを選択性官能基(selectivity function)として用いる２種類の捕獲化合物バリアントを合成し、ＬＣ−ＭＳおよび１Ｈ−ＮＭＲにより分析して同一性および純度を確認した。全細胞溶解物における捕獲条件を最適化した；たとえば、タンパク質と捕獲化合物の非特異的相互作用の最小化、タンパク質と捕獲化合物の最大結合を得るための試薬およびタンパク質の濃度など。アピリモドを競合リガンドとして用いるＣＣＭＳ実験で特異的タンパク質バインダーを同定するために、１つの捕獲化合物を選択した。捕獲アッセイにおいてＬＣ−Ｓにより検出され、かつ競合対照実験で有意に低減するタンパク質を、特異的バインダーとみなす。これらの特異的バインダーにさらにストリンジェントデータ解析基準を施して、不偏データ(unbiased data)評価後に特異性を判定した。特異的タンパク質バインダーを、捕獲実験におけるそれらの倍率変化(fold change)（ＦＣ）値に従ってランク付けした。２種類のタンパク質のみがアピリモドの高確率候補ターゲットタンパク質と同定された：ＰＩＫｆｙｖｅおよびＶａｃ１４。４つの異なる捕獲化合物濃度実験におけるこれらのタンパク質についてのＦＣおよびｐ−値を表７に示す。
【０１２５】
【表６】
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【０１２６】
[131]  別の試験において、アピリモドのプロテインキナーゼプロファイリングを実施して、キナーゼターゲットを同定した（ＤｉｓｃｏｖｅＲｘ，カリフォルニア州フリーモント）。アピリモドを漸増濃度（０．０５〜３０００ｎＭ）で用いて、アピリモドの既知ターゲットであるＰＩＫｆｙｖｅに対する解離定数（Ｋｄ）試験を実施した。実験を二重に実施し、Ｋｄは０．０７５ｎＭ（範囲０．０６９〜０．０８１ｎＭ）であると決定された（図６）。
【０１２７】
[132]  次に、アピリモドをキナーゼの包括パネル（ＰＩＫｆｙｖｅを含まない）に対してスクリーニングした。疾患関連キナーゼを含む合計４５６種類のキナーゼをそれらがアピリモドと結合する能力についてアッセイした。アピリモドのスクリーニング濃度は１μＭ、すなわちＰＩＫｆｙｖｅに対するアピリモドのＫｄより＞１０，０００倍高い濃度であった。このスクリーニングからの結果は、アピリモドが４５６種類の被験キナーゼのいずれにも結合しないことを示した。
【０１２８】
[133]  合わせると、これらの結果はアピリモドが癌細胞において単一の細胞キナーゼ、ＰＩＫｆｙｖｅに高選択性で結合することを立証する。ＰＩＫｆｙｖｅはＰＩ（３）Ｐに結合して脂質セカンドメッセンジャーであるＰＩ（３，５）Ｐ２およびＰＩ（５）Ｐの形成を触媒する酵素であり、他の人々がアピリモドは正常細胞においてもこのキナーゼＰＩＫｆｙｖｅの有効かつ特異的な阻害剤であることを示している。Cai X et al., Chem Biol. 2013 Jul 25;20(7):912-21。以下においてより詳細に考察するように、癌細胞に対するアピリモドの選択的細胞毒性の機序を理解するために、本発明者らは癌細胞におけるそれの生物活性を解明することを目的とした一連の実験を実施した。
【０１２９】
実施例６：アピリモドの抗癌活性の機序
[134]  アピリモドは炎症性サイトカインＩＬ−１２およびＩＬ−２３の有効な阻害剤であることが知られている。アピリモドが疾患または障害の処置のために適用される限り、それはこの活性を意味していた。アピリモドの臨床試験は自己免疫疾患および炎症性疾患、たとえば乾癬、関節リウマチおよびクローン病におけるそれの有望な効力に注目したが、アピリモドが癌、具体的にはｃ−ｒｅｌまたはＩＬ−１２／２３が増殖促進因子として作用する癌に対して有用な可能性があるという示唆はわずかしか公表されていない。たとえば、それぞれWO 2006/128129およびBaird et al., Frontiers in Oncology 3:1 (2013)を参照。意外にも、アピリモドのＩＬ−１２／２３阻害活性について断定されたこれらの予想に反して、本発明者らは被験細胞系においてｃ−Ｒｅｌ発現（ｃ−ＲｅｌはＩＬ−１２／２３遺伝子の転写因子である）、ＩＬ−１２またはＩＬ−２３発現のいずれかとアピリモドに対する感受性との間に相関性を見出さなかった。要約すると、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  Ｌｉｎｅ  Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ（ＣＣＬＥ）からの遺伝子発現データを、本発明者らがアピリモドに対する用量応答曲線を得た２２種類のＢ細胞リンパ腫系統について分析した（参照：表８）。
【０１３０】
【表７−１】
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【０１３１】
【表７−２】
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【０１３２】
[135]  ｃ−ＲＥＬの発現を、感受性（ＩＣ５０が５００ｎＭ未満）系統と非感受性（ＩＣ５０が５００ｎＭを超える）系統において、対応のないｔ検定(unpaired t-test)により比較した。ｃ−ＲＥＬ発現と感受性の間に統計的に有意の関係はみられなかった（ｐ＝０．９７）。さらに、データが公表されている細胞系において、アピリモドに対する感受性と構成性核ｃ−ＲＥＬまたはエプスタイン−バーウイルス感染のいずれかの存在との間に有意の関係は検出されなかった。被験細胞系には下記のアピリモド感受性（＃１〜１３）および非感受性（＃１４〜２２）Ｂ細胞リンパ腫系統が含まれていた：ヒトバーキットリンパ腫細胞系１〜４（ＳＴ４８６，Ｄａｕｄｉ，ＥＢ１，ＧＡ−１０）、ヒトマントル細胞リンパ腫５〜６（Ｒｅｃ−１，ＪｅＫｏ−１）、ヒトびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫−ＧＣＢ  ７〜１３（ＳＵＤＨＬ−４，ＳＵＤＨＬ−６，ＤＢ，Ｔｏｌｅｄｏ，ＳＵＤＨＬ−１０，ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２，ＯＣｌ−Ｌｙ１９）、ヒトバーキットリンパ腫１４〜１６（Ｎａｍａｌｗａ，ＣＡ４６，Ｒａｊｉ）、ヒトマントル細胞リンパ腫１７（ＧＲＡＮＴＡ−５１９）、ヒト濾胞性Ｂ細胞リンパ腫１８（ＲＬ）、ヒト濾胞性リンパ腫−ＤＬＢＣＬ−ＧＣＢ  １９（ＤＯＨＨ−２）、ヒトびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫−ＧＣＢ（ＨＴ，Ｐｆｅｉｆｆｅｒ，ＫＡＲＰＡＳ−４２２）。
【０１３３】
[136]  ＩＬ−１２Ａ、ＩＬ−１２ＲＢ１、ＩＬ−１２ＲＢ２、ＩＬ−１２Ｂ、ＩＬ−２３ＡおよびＩＬ−２３Ｒの発現を、前記２２種類のリンパ腫系統を含む多様なグループの７５種類の癌細胞系においてさらに分析した（参照：表９）。
【０１３４】
【表８−１】
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【０１３５】
【表８−２】
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【０１３６】
【表８−３】
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【０１３７】
[137]  要約すると、アピリモドに対する用量応答曲線が得られた７５種類の癌細胞系についてＣＣＬＥからの遺伝子発現データを解析した。各インターロイキン遺伝子の発現を、感受性（５００ｎＭ未満のＩＣ５０）系統と非感受性（５００ｎＭより大きいＩＣ５０）系統において、対応のないｔ検定により比較した。ＩＬ−２３Ａ（ｐ＝０．０２２）のみを除いて、統計的に有意の関係はみられなかった。ＩＬ−２３Ａはアピリモド感受性非小細胞肺癌系統において増大すると以前に指摘され、組換えＩＬ−２３Ａは非小細胞肺癌系統の増殖を増大させると指摘された(参照：Baird et al. 2013,前掲)。重要なことに、感受性癌系統におけるＩＬ−２３Ａ発現の統計的有意性が完全に誘導されるのはわずか２つの結腸癌系統によってであると思われる。さらに、ＩＬ−２３Ａ発現は非ホジキンＢ細胞リンパ腫における感受性の統計的に有意の予測子ではない（図７）。
【０１３８】
[138]  ＰＩＫｆｙｖｅは脂質生成物ＰＩ（３，５）Ｐ２およびＰＩ５Ｐを産生し、それらが今度は膜一体性(membrane identity)を樹立してエンドリソソーム動態(endolysosomal dynamics)を制御する作用をする。ＰＩＫｆｙｖｅの阻害から生じるＰＩ（３，５）Ｐ２枯渇は腫脹したエンドリソソーム表現型を生じることが試験により示された。これらの試験に基づいて、アピリモド、ＰＩＫｆｙｖｅ阻害およびエンドリソソーム機能不全の間の関係を調べた。図８に示すように、本発明者らの実験は、アピリモドが２４時間後にＨ４神経膠腫細胞においておおよそ７０％のＰＩ（３，５）Ｐ２減少を誘導し（図８Ａ）、これらの細胞は著しく腫脹したエンドリソソーム（液胞(vacuole)）表現型を示す（図８Ｂ）ことを立証した。この表現型は可逆性であり、癌細胞系は薬物除去後３〜４日以内に正常な外観に戻った。
【０１３９】
[139]  次に、ＰＩＫｆｙｖｅ遺伝子生成物の抑制がアピリモドでみられた細胞毒性を再現できるかどうかを、被験細胞系の１つであるＨ４神経膠腫細胞において試験した。図９に示すように、ＰＩＫＦＹＶＥ転写体をターゲティングするドキシサイクリン誘導によるヘアピンは、腫脹したエンドリソソーム表現型および激的な細胞生存性低減をＨ４において誘導した。
【０１４０】
[140]  ここに提示するデータを合わせると、アピリモドの抗癌特性はそれのＰＩＫｆｙｖｅ阻害により生じるという結論が支持される。
実施例７：ヒトにおけるアピリモドの薬物動態
[141]  本発明者らの前臨床データは、適切な血漿濃度を臨床試験で達成できればアピリモドがＮＨＬ患者に有効な可能性があることを示唆する。これまでレポートしていないが、アピリモドの薬物動態（ＰＫ）を第１相試験で樹立した。要約すると、普通の健康なボランティアにおいて、下記の投与スキーム（表１０）に従って、１回量での、または１０時間離した２回量に分割した、１日の経口投与後に、アピリモドのＰＫパラメーターを決定した。
【０１４１】
【表９】
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【０１４２】
[142]  アピリモド濃度の経時ＰＫ曲線を図５に示す。１０５ｍｇ  ＢＩＤ（２１０ｍｇの総１日量）で、アピリモドはＡＭおよびＰＭでそれぞれ１９２および１４９ｎｇ／ｍｌの平均血漿濃度をもっていた（表１１）。
【０１４３】
表１１：ヒト血漿中のアピリモド遊離塩基についての男女合わせたＰＫパラメーターのまとめ。ａ  ＡＭとＰＭの投与間を１０時間で１日２回で投与した用量；ただし、コホートＡには１回で投与した。すべてのコホートについて被験者数はｎ＝９であった；ただし、Ｅでは異常濃度のため１人の被験者を分析に含めなかった。示したＣｍａｘ値は８または９人の被験者の平均である
【０１４４】
【表１０】
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【０１４５】
[143]  さらに、２４時間の期間の約５０％について、アピリモド血漿濃度は５０ｎｇ／ｍｌ（１２５ｎＭに等しい）より高い状態を維持した；図３Ｂ中の感受性についてのカットオフＩＣ５０。アピリモドは２４時間の処置後に末梢血単核細胞において液胞形成を誘導するので、これらの血漿濃度は薬力学的（ＰＤ）効果をもつことも期待される。
【０１４６】
[144]  これまでのスポンサーの慢性炎症性疾患状態における第２相有効性試験は大部分が１００ｍｇ（またはそれ未満）の総１日量で実施されたが、アピリモドは１０５ｍｇ  ＢＩＤで耐容できる安全性プロフィールをもっていた。これらのデータは、インビトロでＮＨＬ増殖を効果的に抑制できかつＰＤ効果をもつ可能性があるアピリモド濃度をヒトにおいて達成できることを立証し、よって本発明者らが企画したＮＨＬにおけるアピリモドの第１相の用量漸増試験を支持する。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【国際調査報告】
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