(57)【要約】  本発明は、カゼインキナーゼI(CKI)及び/又はインターロイキン-1受容体関連キナーゼ1(IRAKI)を阻害するピラゾールピリミジン誘導体及びその製造方法、それを含む組成物、並びに悪性疾患及び障害を治療する方法並びに炎症性疾患及び障害を治療する方法におけるそれらの使用を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
その任意の立体異性体又は塩を含む、一般式(I)を有する化合物:
【化１】
2018525441.tif 000173
(式中、
R1及びR2は、各々独立に、ハライド、ヒドロキシル、エステル、エーテル、C5-C15アリール、C3-C7ヘテロアリール、及びアミドのうちの少なくとも1つによって各々任意に置換された、H、直鎖もしくは分岐C1-C8アルキル、直鎖もしくは分岐C1-C5アルコキシ、直鎖もしくは分岐C1-C5アシル、C5-C15アリール、C3-C7ヘテロアリールから選択されるか;又は
R1及びR2は、それらが接続している窒素原子と一緒に、N、O、NH、C＝N、C＝O、もしくはSO2のうちの少なくとも1つを任意に含み得、かつ直鎖もしくは分岐C1-C5アルキル、C5-C15アリール、C3-C7ヘテロアリール、ヒドロキシル、ハライド、及びシアノのうちの少なくとも1つで任意に置換され得る、4〜7員の飽和環、不飽和環、もしくは芳香環を形成し;
R3及びR4は、各々独立に、ハライド、ヒドロキシル、アルコキシ、C5-C15アリール、C3-C7ヘテロアリール、エステル、及びアミドのうちの少なくとも1つによって任意に置換された、H、直鎖もしくは分岐C1-C8アルキルから選択されるか;又は
R1もしくはR2は、R3並びにそれらが各々接続している炭素及び窒素原子と一緒に、N、NH、O、C＝N、C＝O、SO2のうちの少なくとも1つを任意に含み得、かつ直鎖もしくは分岐C1-C5アルキル、C5-C15アリール、C3-C7ヘテロアリール、ヒドロキシル、カルボニル、及びハライドのうちの少なくとも1つで任意に置換され得る、4〜7員の飽和環、不飽和環、もしくは芳香環を形成し;
R5及びR8は、各々独立に、少なくとも1つのハライドによって任意に置換された; H、ハライド、直鎖又は分岐C1-C8アルキル、直鎖又は分岐C2-C8アルケニル、直鎖又は分岐C2-C8アルキニルから選択され;
R6は、直鎖又は分岐C1-C8アルキル、C3-C7シクロアルキル、4〜6員ヘテロシクリル、C5-C15アリール、C3-C7ヘテロアリール、ハライド、ヒドロキシル、C1-C5アルキルハライドのうちの少なくとも1つによって任意に置換された;直鎖又は分岐C1-C8アルキル、直鎖又は分岐C2-C8アルケニル、直鎖又は分岐C2-C8アルキニル、C5-C10シクロアルキル、飽和又は不飽和4〜6員ヘテロシクリルから選択され;
R7は、少なくとも1つのC3-C7シクロアルキル、4〜6員ヘテロシクリル、C5-C15アリール、C3-C7ヘテロアリール、ハライド、ヒドロキシル、C1-C5アルキルハライドによって置換された;直鎖又は分岐C1-C8アルキル、直鎖又は分岐C2-C8アルケニル、直鎖又は分岐C2-C8アルキニルから選択される)。
【請求項２】
R1及びR2が、各々独立に、ハライド、C5-C15アリール、C3-C7ヘテロアリール、ヒドロキシル、エステル、エーテル、及びアミドのうちの少なくとも1つによって任意に置換された、H、直鎖又は分岐C1-C8アルキルから選択される、請求項1記載の化合物。
【請求項３】
R1及びR2が、各々独立に、ハライド、ヒドロキシル、エステル、及びアミドのうちの少なくとも1つによって任意に置換された、H、直鎖又は分岐C1-C5アルコキシから選択される、請求項1記載の化合物。
【請求項４】
R1及びR2が、各々独立に、ハライド、ヒドロキシル、エステル、エーテル、及びアミドのうちの少なくとも1つによって任意に置換された、H、C1-C5アシルから選択される、請求項1記載の化合物。
【請求項５】
R1及びR2が、各々独立に、ハライド、ヒドロキシル、エステル、エーテル、及びアミドのうちの少なくとも1つによって任意に置換された、H、C5-C15アリールから選択される、請求項1記載の化合物。
【請求項６】
R4がHである、請求項1〜5のいずれか一項記載の化合物。
【請求項７】
R3及びR4がHである、請求項1〜6のいずれか一項記載の化合物。
【請求項８】
R5が、H、Cl、及び直鎖又は分岐C1-C4アルキルから選択される、請求項1〜7のいずれか一項記載の化合物。
【請求項９】
R5がHである、請求項1〜8のいずれか一項記載の化合物。
【請求項１０】
R8が、H、Cl、及び直鎖又は分岐C1-C4アルキルから選択される、請求項1〜9のいずれか一項記載の化合物。
【請求項１１】
R8がHである、請求項1〜10のいずれか一項記載の化合物。
【請求項１２】
R5又はR8のうちの1つがHである、請求項1〜11のいずれか一項記載の化合物。
【請求項１３】
R1及びR2のうちの少なくとも1つがHである、請求項1〜12のいずれか一項記載の化合物。
【請求項１４】
R6が、直鎖又は分岐C1-C8アルキル、C5-C10シクロアルキル、飽和又は不飽和4〜6員ヘテロシクリルから選択され;かつR7が、少なくとも1つのC3-C7シクロアルキル、4〜6員ヘテロシクリル、C5-C15アリール、C3-C7ヘテロアリール、ハライド、ヒドロキシル、C1-C5アルキルハライドによって置換された直鎖又は分岐C1-C8アルキルから選択される、請求項1〜13のいずれか一項記載の化合物。
【請求項１５】
R6が、直鎖又は分岐C1-C8アルキル、C5-C10シクロアルキル、4〜6員飽和ヘテロシクリルから選択される、請求項1〜14のいずれか一項記載の化合物。
【請求項１６】
R7が、C3-C7シクロアルキル及びヒドロキシルのうちの少なくとも1つによって置換された直鎖又は分岐C1-C8アルキルである、請求項1〜15のいずれか一項記載の化合物。
【請求項１７】
R6が、直鎖又は分岐C1-C8アルキル、C3-C7シクロアルキル、ハライド、ヒドロキシル、CF3のうちの少なくとも1つによって各々任意に置換された直鎖又は分岐C1-C8アルキル、飽和、不飽和、又は芳香族4〜6員ヘテロシクリルから選択される、請求項1〜16のいずれか一項記載の化合物。
【請求項１８】
R7が、少なくとも1つのC3-C7シクロアルキルによって置換された直鎖又は分岐C1-C8アルキルである、請求項1〜17のいずれか一項記載の化合物。
【請求項１９】
R1及びR2が、それらが接続している窒素原子と一緒に、N、O、NH、C＝N、C＝O、もしくはSO2のうちの少なくとも1つを任意に含み、かつ直鎖又は分岐C1-C5アルキル、ヒドロキシル、ハライド、及びシアノのうちの少なくとも1つで任意に置換され得る、4〜7員飽和環を形成する、請求項1〜18のいずれか一項記載の化合物。
【請求項２０】
R1及びR2が、それらが接続している窒素原子と一緒に、4〜7員飽和環を形成する、請求項1〜19のいずれか一項記載の化合物。
【請求項２１】
R1及びR2が、それらが接続している窒素原子と一緒に、N又はOのうちの少なくとも1つを含む4〜7員飽和環を形成する、請求項1〜20のいずれか一項記載の化合物。
【請求項２２】
R1及びR2が、それらが接続している窒素原子と一緒に、N又はOのうちの少なくとも1つを任意に含む4〜7員芳香環を形成する、請求項1〜21のいずれか一項記載の化合物。
【請求項２３】
R3及びR4がHである、請求項1〜22のいずれか一項記載の化合物。
【請求項２４】
R1又はR2が、R3並びにそれらが接続している炭素及び窒素原子と一緒に、N、NH、O、C＝O、SO2のうちの少なくとも1つを任意に含み、かつ直鎖又は分岐C1-C5アルキル、ヒドロキシル、カルボニル、及びハライドのうちの少なくとも1つで任意に置換され得る、4〜7員飽和環を形成する、請求項1〜23のいずれか一項記載の化合物。
【請求項２５】
R1又はR2が、R3並びにそれらが接続している炭素及び窒素原子と一緒に、NH、O、C＝Oのうちの少なくとも1つを含む4〜7員飽和環を形成する、請求項1〜24のいずれか一項記載の化合物。
【請求項２６】
以下のものから選択される、請求項1〜25のいずれか一項記載の化合物:
【化２】
2018525441.tif 000174
2018525441.tif 000175
2018525441.tif 000176
2018525441.tif 000177
2018525441.tif 000178
2018525441.tif 000179
。
【請求項２７】
請求項1〜26のいずれか一項記載の少なくとも1つの化合物を含む組成物。
【請求項２８】
治療における使用のための、請求項1〜26のいずれか一項記載の化合物。
【請求項２９】
カゼインキナーゼI(CKI)及びインターロイキン-1受容体関連キナーゼ1(IRAK1)のうちの少なくとも1つの阻害における使用のための、請求項1〜26のいずれか一項記載の化合物。
【請求項３０】
カゼインキナーゼI(CKI)の阻害における使用のための、請求項1〜26のいずれか一項記載の化合物。
【請求項３１】
インターロイキン-1受容体関連キナーゼ1(IRAK1)の阻害における使用のための、請求項1〜26のいずれか一項記載の化合物。
【請求項３２】
抗腫瘍応答の誘導における使用のための、請求項1〜26のいずれか一項記載の化合物。
【請求項３３】
前記抗腫瘍応答が癌免疫療法応答を含む、請求項32記載の使用のための化合物。
【請求項３４】
悪性疾病と関連する疾病、症状、又は疾患の治療における使用のための、請求項1〜26のいずれか一項記載の化合物。
【請求項３５】
前記悪性疾病が癌である、請求項34記載の使用のための化合物。
【請求項３６】
前記悪性疾病が、血液学的悪性腫瘍(多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群(MDS)、急性骨髄性白血病(AML)、黒色腫、及びER陰性乳癌、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫(DLBCL)、慢性骨髄性白血病(CML)、慢性リンパ球性白血病(CLL)、頭頸部癌、並びにこれらの任意の組合せから選択される、請求項34記載の使用のための化合物。
【請求項３７】
前記癌がWT p53を有する、請求項35記載の使用のための化合物。
【請求項３８】
WT p53を有する癌の治療における使用のための、請求項1〜26のいずれか一項記載の化合物であって、該WT p53が該化合物の有効性のバイオマーカーである、前記化合物。
【請求項３９】
前記癌が、多発性骨髄腫、白血病、悪性黒色腫、乳癌、前立腺癌、結腸直腸癌、及びこれらの任意の組合せから選択される、請求項35記載の使用のための化合物。
【請求項４０】
癌免疫療法応答をさらに誘導する、請求項34〜39のいずれか一項記載の使用のための化合物。
【請求項４１】
それと関連する疾病、症状、又は疾患を含む、炎症性障害及び免疫関連障害の治療における使用のための、請求項1〜26のいずれか一項記載の化合物。
【請求項４２】
その必要がある対象において、カゼインキナーゼI(CKI)及びインターロイキン-1受容体関連キナーゼ1(IRAK1)のうちの少なくとも1つを阻害する方法であって、該対象に、請求項1〜26のいずれか一項記載の少なくとも1つの化合物を投与する工程を含む、前記方法。
【請求項４３】
その必要がある対象において、カゼインキナーゼI(CKI)を阻害する方法であって、該対象に、請求項1〜26のいずれか一項記載の少なくとも1つの化合物を投与する工程を含む、前記方法。
【請求項４４】
その必要がある対象において、インターロイキン-1受容体関連キナーゼ1(IRAK1)を阻害する方法であって、該対象に、少なくとも1つの請求項1〜26のいずれか一項記載の化合物を投与する工程を含む、前記方法。
【請求項４５】
その必要がある対象において、悪性疾病と関連する疾病、症状、又は疾患を治療する方法であって、該対象に、少なくとも1つの請求項1〜26のいずれか一項記載の化合物を投与する工程を含む、前記方法。
【請求項４６】
前記悪性疾病が癌である、請求項45記載の方法。
【請求項４７】
前記癌がWT p53を有する、請求項46記載の方法。
【請求項４８】
その必要がある対象において、WT p53を有する癌を治療する方法であって、該WT p53が前記化合物の有効性のバイオマーカーである、前記方法。
【請求項４９】
前記癌が、白血病、多発性骨髄腫、悪性黒色腫、乳癌、前立腺癌、及び結腸直腸癌から選択される、請求項46記載の方法。
【請求項５０】
前記悪性疾病が、血液学的悪性腫瘍(多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群(MDS)、急性骨髄性白血病(AML)、黒色腫、及びER陰性乳癌、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫(DLBCL)、慢性骨髄性白血病(CML)、慢性リンパ球性白血病(CLL)、頭頸部癌、並びにこれらの任意の組合せから選択される、請求項45記載の方法。
【請求項５１】
癌免疫療法応答を前記対象で誘導することをさらに含む、請求項42〜50のいずれか一項記載の方法。
【請求項５２】
その必要がある対象において、免疫療法応答を誘導する方法であって、該対象に、請求項1〜26のいずれか一項記載の少なくとも1つの化合物を投与する工程を含む、前記方法。
【請求項５３】
その必要がある対象において、それと関連する疾病、症状、又は疾患を含む、炎症性障害及び免疫関連障害を治療する方法であって、該対象に、請求項1〜26のいずれか一項記載の少なくとも1つの化合物を投与する工程を含む、前記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
(技術分野)
本発明は、ピラゾールピリミジン誘導体並びに悪性疾患及び障害を治療する方法並びに炎症性疾患及び障害を治療する方法におけるその使用を提供する。
【背景技術】
【０００２】
(背景)
カゼインキナーゼ1ファミリー(CK1、又はCKI)は、ヒトにおける6つのメンバー(アイソフォーム):α、γ1、γ2、γ3、δ、及びεを有するセリン/トレオニンキナーゼである。これらは、N末端(9〜76アミノ酸)及び特にC末端(24〜200アミノ酸)の非触媒ドメインの長さ及び配列が異なる(Schittek及びSinnbergの文献、Molecular Cancer 2014, 13:231)。
【０００３】
CK1δ及びCK1εは、それらのキナーゼドメインが98％同一であり、かつそれらのC末端調節ドメインが53％同一である(Fish KJらの文献、J Biol Chem 1995, 270:14875-14883)。CK1基質リン酸化に関してはある程度の冗長性があるが、ほとんどのCK1アイソフォームは別個の生物学的役割を有する。幅広いCK1基質は、CK1ファミリーメンバーが、膜輸送、細胞質分裂、小胞輸送、リボソーム生合成、DNA修復、シグナル伝達経路、アポトーシスの調節からの複数の細胞プロセスと概日リズムとに関与していることを示している(Knippschild Uらの文献、Cell Signal 2005, 17:675-689; Cheong JK及びVirshup DMの文献、Int J Biochem Cell Biol 2011, 43:465-469; Zemp Iらの文献、J Cell Sci 2014, 127:1242-1253)。
【０００４】
CK1αは、細胞分裂期の有糸分裂紡錘体形成において及びDNA修復機構において役割を果たし、かつRNA代謝に関与する(Knippschild Uらの文献、Cell Signal 2005, 17:675-689)。それは、内在性mTORインヒビターDEPTORの持続的分解を介してmTORの活性化に寄与する(Duan Sらの文献、Mol Cell 2011, 44:317-324)。
【０００５】
CK1αは、Wnt/β-カテニンシグナル伝達経路の調節において主要な役割を果たす。本出願の発明者らは、CK1αがβ-カテニン破壊複合体の重要な構成要素であることを示した。Wnt受容体が関与していないとき、CK1αはβ-カテニンをセリン残基S45でリン酸化し、これは、別のキナーゼであるGSK3のリン酸化をプライミングするのに必要である(Amitらの文献、Genes Dev. 2002 16: 1066-1076)。
【０００６】
GSK3による残基T41、S37、及びS33でのβ-カテニンのリン酸化は、ユビキチン化デグロン(degron)を生じさせ、E3 SCF-β-TrCPを動員し、β-カテニンのユビキチン化及び分解をもたらす(Clevers H及びNusse Rの文献、Cell 2012, 149: 1192-1205)。本発明者らは、マウス腸上皮におけるCK1αの誘導性除去が大規模な上皮Wnt応答を引き起こし、これが、驚くことに、腸内ホメオスタシスを変化させず、増殖がごくわずかしか増強されず、かつ腫瘍形成が全くないことをさらに示した(Elyadaらの文献、Nature 2011, 470: 409-413)。これは、ホメオスタシスの喪失及び腫瘍形成をもたらす、APCなどの、β-カテニン破壊複合体の他の構成要素の急性除去の結果とは異なる(O.J. Sansom, O.J.らの文献、Genes Dev. 2004, 18:1385-1390)。
【０００７】
本出願の発明者らは、CK1α除去後のホメオスタシス維持の理由が、Wnt活性化と同時に、CK1α除去によって、いくつかの腫瘍抑制経路(これらの中には、DNA損傷応答(DDR)、細胞老化、及びp53経路活性化がある)が誘導されることであることを見出した(Elyada Eらの文献、Nature 2011, 470: 409-413, Pribluda Aらの文献、Cancer Cell 2013, 24: 1-5)。
【０００８】
これらの抗腫瘍経路の活性化の根底にある分子機構は未だ解明されていないが、本発明者らは、CK1α除去が、ATM活性化の兆候を伴わずに、不相応に軽微なDNA損傷を誘導することを見出し、CK1α誘導性のDDR及びp53活性化が一般的でない分子機構を伴う可能性があることを示した(Burstain Iらの文献、未発表)。さらに、本発明者らは、CK1α除去が、上皮に限定され、炎症応答の一般的な兆候(炎症細胞浸潤、熱、発赤、腫瘍、及び痛み)を伴わない、擬似炎症(parainflammation)と呼ばれる新しいタイプの炎症応答の誘導をもたらすことを見出した(Pribluda Aらの文献、Cancer Cell 2013, 24: 1-5、Lasry A及びBen-Neriah Yの文献、2015, Trends in Immunology, Vol. 36: 217-228)。擬似炎症は、腫瘍形成を抑制する際にWT p53活性化と協調するが、機能的p53の非存在下で腫瘍促進機構に切り替わる(Pribluda Aらの文献、Cancer Cell 2013, 24: 1-5、Aranらの文献、Genome Biol. 2016 Jul 8;17(1):145)。
【０００９】
CK1αがp53の主要な調節因子であることは既に立証されているが、本発明者らは、腸上皮におけるCKIδ及びCK1εの複合除去もp53活性化をもたらし、それが、CK1α誘導性p53活性化と相乗作用し得るということも見出した。
【００１０】
IRAK1は、MDS及びAMLの特定のサブセット及びトリプルネガティブ乳癌の治療標的として同定された(Garrett W. Rhyasenらの文献、2013, Cancer Cell 24, 90-104、Rhyasen GW, Bolanos L, Starczynowski DTの文献、2013, Exp Hematol. 41:1005-7、Zhen Ning Weeらの文献、2015, NATURE COMMUNICATIONS, 6:8746)。IRAK1 mRNAは、MDS患者の〜20〜30％で過剰発現され、IRAK1タンパク質は、調べられたMDS骨髄試料の大部分で劇的に過剰発現及び超活性化されている。IRAK1は、Toll様受容体(TLR)及びインターロイキン-1受容体(IL1R)から引き出されるシグナルを媒介するセリン/トレオニンキナーゼである。受容体活性化の後、IRAK1はリン酸化されるようになり、それにより、その後、TRAF6の動員が引き起こされ、TRAF6によるNF-κB及びJNK経路の活性化がもたらされる。MDS(又はAML)におけるIRAK1過剰発現及び/又は超活性化の分子源は決定されていない。MDSクローンにおけるTLR又は必要な共因子の過剰発現が感染の非存在下でさえも慢性的なIRAK1活性化をもたらし得ると考えられている。IRAK1を標的とする小分子インヒビター(IRAK1/4インヒビター、Amgen社)は、当初、自己免疫疾患及び炎症性疾患用に開発された。IRAK1がMDSで超活性化される(すなわち、リン酸化される)が、正常骨髄細胞ではそうならないことを考慮して、Starczynowskiと同僚らは、IRAKインヒビター処理(IRAK1/4、Amgen)及びIRAK1のノックダウンが、MDS細胞増殖、前駆体機能、並びにインビトロ及びインビボでの生存能力の劇的な障害をもたらすことを示した。Yuと同僚らは、IRAK1過剰発現がNF-κB関連サイトカイン分泌を通じてトリプルネガティブ乳癌細胞(TNBC)の成長上の利点を付与し、転移性TNBC細胞がIRAK1依存性の獲得を示し、IRAK1の遺伝的及び薬理学的阻害に対する高い感受性を結果として生じることを示した。TNBC細胞のパクリタキセル処理は、強いIRAK1リン酸化、炎症性サイトカイン発現の増大、癌幹細胞の濃縮、及びパクリタキセル処理に対する耐性の獲得を誘導する。IRAK1の薬理学的阻害は、大規模なアポトーシスを引き起こすことにより、パクリタキセル耐性を覆すことができた。IRAK1はDEK転写標的であることも見出された。IRAK1は、頭頸部癌細胞の生存にとって(Adams AKらの文献、Oncotarget. 2015, 22; 6(41): 43395-43407)、そしてまた、炎症性障害及び免疫関連障害の治療における潜在的標的として(Bahia MSらの文献、Cell Signal. 2015 Jun;27(6):1039-55)、きわめて重要である。
【００１１】
このように、本発明者らは、本発明の化合物が、血液学的悪性腫瘍において重要な役割を果たすNF-kB経路の重要な上流調節因子であるIRAK1を阻害することができることを見出した。
【発明の概要】
【００１２】
(概要)
本発明は、その任意の立体異性体又は塩を含む、一般式(I)を有する化合物を提供する:
【化１】
2018525441.tif 000002
(式中、
R1及びR2は、各々独立に、ハライド、ヒドロキシル、エステル、エーテル、C5-C15アリール、C3-C7ヘテロアリール、及びアミドのうちの少なくとも1つによって各々任意に置換された、H、直鎖もしくは分岐C1-C8アルキル、直鎖もしくは分岐C1-C5アルコキシ、直鎖もしくは分岐C1-C5アシル、C5-C15アリール、C3-C7ヘテロアリールから選択されるか;又は
R1及びR2は、それらが接続している窒素原子と一緒に、N、O、NH、C＝N、C＝O、もしくはSO2のうちの少なくとも1つを任意に含み得、かつ直鎖もしくは分岐C1-C5アルキル、C5-C15アリール、C3-C7ヘテロアリール、ヒドロキシル、ハライド、及びシアノのうちの少なくとも1つで任意に置換され得る、4〜7員の飽和環、不飽和環、もしくは芳香環を形成し;
R3及びR4は、各々独立に、ハライド、ヒドロキシル、アルコキシ、C5-C15アリール、C3-C7ヘテロアリール、エステル、及びアミドのうちの少なくとも1つによって任意に置換された、H、直鎖もしくは分岐C1-C8アルキルから選択されるか;又は
R1もしくはR2は、R3並びにそれらが各々接続している炭素及び窒素原子と一緒に、N、NH、O、C＝N、C＝O、SO2のうちの少なくとも1つを任意に含み得、かつ直鎖もしくは分岐C1-C5アルキル、C5-C15アリール、C3-C7ヘテロアリール、ヒドロキシル、カルボニル、及びハライドのうちの少なくとも1つで任意に置換され得る、4〜7員の飽和環、不飽和環、もしくは芳香環を形成し;
R5及びR8は、各々独立に、少なくとも1つのハライドによって任意に置換された; H、ハライド、直鎖又は分岐C1-C8アルキル、直鎖又は分岐C2-C8アルケニル、直鎖又は分岐C2-C8アルキニルから選択され;
R6は、直鎖又は分岐C1-C8アルキル、C3-C7シクロアルキル、4〜6員ヘテロシクリル、C5-C15アリール、C3-C7ヘテロアリール、ハライド、ヒドロキシル、C1-C5アルキルハライドのうちの少なくとも1つによって任意に置換された;直鎖又は分岐C1-C8アルキル、直鎖又は分岐C2-C8アルケニル、直鎖又は分岐C2-C8アルキニル、C5-C10シクロアルキル、飽和又は不飽和4〜6員ヘテロシクリルから選択され;
R7は、少なくとも1つのC3-C7シクロアルキル、4〜6員ヘテロシクリル、C5-C15アリール、C3-C7ヘテロアリール、ハライド、ヒドロキシル、C1-C5アルキルハライドによって置換された;直鎖又は分岐C1-C8アルキル、直鎖又は分岐C2-C8アルケニル、直鎖又は分岐C2-C8アルキニルから選択される)。
【００１３】
本発明は、その任意の立体異性体又は塩を含む、一般式(I)を有する化合物を提供する:
(式中、
R1及びR2は、各々独立に、ハライド、ヒドロキシル、エステル、エーテル、C5-C15アリール、C3-C7ヘテロアリール、及びアミドのうちの少なくとも1つによって各々任意に置換された、H、直鎖もしくは分岐C1-C8アルキル、直鎖もしくは分岐C2-C8アルケニル、直鎖もしくは分岐C2-C8アルキニル、直鎖もしくは分岐C1-C5アルコキシ、直鎖もしくは分岐C1-C5アシル、C5-C15アリール、C3-C7ヘテロアリールから選択されるか;又は
R1及びR2は、それらが接続している窒素原子と一緒に、N、O、NH、C＝N、C＝O、もしくはSO2のうちの少なくとも1つを任意に含み得、かつ直鎖もしくは分岐C1-C5アルキル、直鎖もしくは分岐C2-C5アルケニル、直鎖もしくは分岐C2-C5アルキニル、C5-C15アリール、C3-C7ヘテロアリール、ヒドロキシル、ハライド、及びシアノのうちの少なくとも1つで任意に置換され得る、4〜7員の飽和環、不飽和環、もしくは芳香環を形成し;
R3及びR4は、各々独立に、ハライド、ヒドロキシル、アルコキシ、エステル、C5-C15アリール、C3-C7ヘテロアリール、及びアミドのうちの少なくとも1つによって任意に置換されたH、直鎖もしくは分岐C1-C8アルキル、直鎖もしくは分岐C2-C8アルケニル、直鎖もしくは分岐C2-C8アルキニルから選択されるか;又は
R1もしくはR2は、R3並びにそれらが接続している炭素及び窒素原子と一緒に、N、NH、O、C＝N、C＝O、SO2のうちの少なくとも1つを任意に含み得、かつ直鎖もしくは分岐C1-C5アルキル、直鎖もしくは分岐C2-C5アルケニル、直鎖もしくは分岐C2-C5アルキニル、C5-C15アリール、C3-C7ヘテロアリール、ヒドロキシル、カルボニル、及びハライドのうちの少なくとも1つで任意に置換され得る、4〜7員の飽和環、不飽和環、もしくは芳香環を形成し;
R5及びR8は、各々独立に、少なくとも1つのハライド(いくつかの実施態様において、CF3)によって任意に置換された、H、ハライド、直鎖又は分岐C1-C8アルキル、直鎖又は分岐C2-C8アルケニル、直鎖又は分岐C2-C8アルキニルから選択され;
R6は、直鎖又は分岐C1-C8アルキル、C3-C7シクロアルキル、4〜6員ヘテロシクリル、C5-C15アリール、C3-C7ヘテロアリール、ハライド、ヒドロキシル、C1-C5アルキルハライドのうちの少なくとも1つによって任意に置換された;直鎖又は分岐C1-C8アルキル、直鎖又は分岐C2-C8アルケニル、直鎖又は分岐C2-C8アルキニル、C5-C10シクロアルキル、飽和又は不飽和4〜6員ヘテロシクリルから選択され;
R7は、少なくとも1つのC3-C7シクロアルキル、4〜6員ヘテロシクリル、C5-C15アリール、C3-C7ヘテロアリール、ハライド、ヒドロキシル、C1-C5アルキルハライドによって置換された;直鎖又は分岐C1-C8アルキル、直鎖又は分岐C2-C8アルケニル、直鎖又は分岐C2-C8アルキニルから選択される)。
【００１４】
いくつかの実施態様において、R1及びR2は、各々独立に、ハライド、ヒドロキシル、エステル、及びアミドのうちの少なくとも1つによって任意に置換された、H、直鎖又は分岐C1-C8アルキルから選択される。
【００１５】
いくつかの実施態様において、R1及びR2は、各々独立に、ハライド、ヒドロキシル、エステル、及びアミドのうちの少なくとも1つによって任意に置換された、H、直鎖又は分岐C1-C5アルコキシから選択される。
【００１６】
いくつかの実施態様において、R1及びR2は、各々独立に、ハライド、ヒドロキシル、エステル、エーテル、及びアミドのうちの少なくとも1つによって任意に置換された、H、C1-C5アシルから選択される。
【００１７】
他の実施態様において、R1及びR2は、各々独立に、ハライド、ヒドロキシル、エステル、エーテル、及びアミドのうちの少なくとも1つによって任意に置換された、H、C5-C15アリールから選択される。
【００１８】
いくつかの実施態様において、R1及びR2のうちの少なくとも1つはHである。
【００１９】
いくつかの実施態様において、R4はHである。いくつかの実施態様において、R3及びR4はHである。
【００２０】
いくつかの実施態様において、R5は、H、Cl、及び直鎖又は分岐C1-C4アルキルから選択される。いくつかの実施態様において、R5はHである。いくつかの実施態様において、R8は、H、Cl、及び直鎖又は分岐C1-C4アルキルから選択される。いくつかの実施態様において、R8はHである。いくつかのさらなる実施態様において、R5又はR8のうちの1つはHである(すなわち、R5又はR8のうちの1つだけがHである、言い換えると、R5又はR8のうちの1つはHとは異なる)。
【００２１】
いくつかの実施態様において、R6は、直鎖又は分岐C1-C8アルキル、C5-C10シクロアルキル、飽和又は不飽和4〜6員ヘテロシクリルから選択され;かつR7は、少なくとも1つのC3-C7シクロアルキル、4〜6員ヘテロシクリル、C5-C15アリール、C3-C7ヘテロアリール、ハライド、ヒドロキシル、C1-C5アルキルハライドによって置換された直鎖又は分岐C1-C8アルキルから選択される。
【００２２】
いくつかの実施態様において、R6は、直鎖又は分岐C1-C8アルキル、C5-C10シクロアルキル、4〜6員飽和ヘテロシクリルから選択される。
【００２３】
いくつかの実施態様において、R7は、C3-C7シクロアルキル及びヒドロキシルのうちの少なくとも1つによって置換された直鎖又は分岐C1-C8アルキルである。
【００２４】
いくつかの実施態様において、R6は、直鎖又は分岐C1-C8アルキル、C3-C7シクロアルキル、ハライド、ヒドロキシル、CF3のうちの少なくとも1つによって各々任意に置換された、直鎖又は分岐C1-C8アルキル、飽和又は不飽和4〜6員ヘテロシクリルから選択される。
【００２５】
いくつかの実施態様において、R7は、少なくとも1つのC3-C7シクロアルキルによって置換された直鎖又は分岐C1-C8アルキルである。
【００２６】
いくつかの実施態様において、R1及びR2は、それらが接続している窒素原子と一緒に、NもしくはO、NH、C＝N、C＝O、又はSO2のうちの少なくとも1つを任意に含み(すなわち、R1及びR2が接続しているN原子に加えて)、かつ直鎖又は分岐C1-C5アルキル、ヒドロキシル、ハライド、及びシアノのうちの少なくとも1つで任意に置換され得る、4〜7員飽和環を形成する。
【００２７】
いくつかの実施態様において、R1及びR2は、それらが接続している窒素原子と一緒に、4〜7員飽和環を形成する。
【００２８】
いくつかの実施態様において、R1及びR2は、それらが接続している窒素原子と一緒に、(R1及びR2が接続しているN原子に加えて)N又はOのうちの少なくとも1つを含む、4〜7員飽和環を形成する。
【００２９】
さらなる実施態様において、R1及びR2は、それらが接続している窒素原子と一緒に、(R1及びR2が接続しているN原子に加えて)N又はOのうちの少なくとも1つを任意に含む、4〜7員芳香環を形成する。
【００３０】
いくつかの実施態様において、R1又はR2は、R3並びにそれらが接続している炭素及び窒素原子と一緒に、N、NH、O、C＝O、SO2のうちの少なくとも1つを任意に含み、かつ直鎖又は分岐C1-C5アルキル、ヒドロキシル、カルボニル、及びハライドのうちの少なくとも1つで任意に置換され得る、4〜7員飽和環を形成する。
【００３１】
いくつかの実施態様において、R1又はR2は、R3並びにそれらが接続している炭素及び窒素原子と一緒に、NH、O、又はC＝Oのうちの少なくとも1つを含む4〜7員飽和環を形成する。
【００３２】
いくつかの実施態様において、本発明の化合物は、以下のものから選択される:
【化２】
2018525441.tif 000003
2018525441.tif 000004
2018525441.tif 000005
2018525441.tif 000006
2018525441.tif 000007
。
【００３３】
いくつかの実施態様において、本発明の化合物は:
【化３】
2018525441.tif 000008
である。
【００３４】
いくつかの他の実施態様において、本発明の化合物は:
【化４】
2018525441.tif 000009
である。
【００３５】
他の実施態様において、本発明の化合物は:
【化５】
2018525441.tif 000010
である。
【００３６】
「直鎖又は分岐C1-C8アルキル」という用語は、1、2、3、4、5、6、7、又は8個の炭素原子を含む、直鎖又は分岐状であることができる、炭化水素飽和鎖を包含することが理解されるべきである。
【００３７】
「直鎖もしくは分岐C2-C8アルケニル」又は「直鎖もしくは分岐C2-C5アルケニル」という用語は、それぞれ、2、3、4、5、6、7、もしくは8個の炭素原子、又は2、3、4、5個の炭素原子を含む、直鎖又は分岐状であることができる、鎖中の任意の2個の炭素原子間の少なくとも1つの二重結合を有する炭化水素鎖を包含することが理解されるべきである。
【００３８】
「直鎖又は分岐C2-C8アルキニル」という用語は、2、3、4、5、6、7、又は8個の炭素原子を含む、直鎖又は分岐状であることができる、鎖中の任意の2個の炭素原子間の少なくとも1つの三重結合を有する炭化水素鎖を包含することが理解されるべきである。
【００３９】
「直鎖又は分岐C1-C5アルコキシ」という用語は、-OR9部分(ここで、R9は、直鎖又は分岐C1-C5アルキルである)を包含することが理解されるべきである。
【００４０】
「ハライド」という用語は、-F、-Br、-Cl、-Iから選択される任意のハロゲンラジカルを包含することが理解されるべきである。
【００４１】
「C1-C5アルキルハライド」という用語は、直鎖又は分岐鎖上の任意の点において-F、-Br、-Cl、-Iから選択される少なくとも1つのハロゲンラジカルによって置換されている1〜5個の炭素原子を有する任意の直鎖又は分岐アルキル鎖を包含することが理解されるべきである。いくつかの実施態様において、アルキルハライドは、1つのハロゲンを含み;他の実施態様において、アルキルハライドは、2つのハロゲン原子(同じ又は異なる)を含み;他の実施態様において、アルキルハライドは、3つのハロゲン原子(同じ又は異なる)を含む、などである。
【００４２】
「ヒドロキシル」という用語は、-OHを包含することが理解されるべきである。
【００４３】
「エステル」という用語は、-C(＝O)OR10又は-OC(＝O)R10(ここで、R10は、直鎖又は分岐C1-C8アルキルである)のうちのいずれかを包含することが理解されるべきである。
【００４４】
「アミド」という用語は、-C(＝O)NR11R12'、-NR11C(＝O)R12'(ここで、R11及びR12'は、各々独立に、H又は直鎖もしくは分岐C1-C8アルキルである)のうちのいずれかを包含することが理解されるべきである。
【００４５】
「エーテル」という用語は、-R13OR14'又は-OR15'(ここで、R13は、直鎖又は分岐C1-C8アルキレンから選択され、かつR14'及びR15'は、各々独立に、直鎖又は分岐C1-C8アルキルから選択される)のうちのいずれかを包含することが理解されるべきである。
【００４６】
「直鎖又は分岐C1-C5アシル」という用語は、任意の-C(＝O)R16(ここで、R16は、C1-C5直鎖又は分岐アルキルである)を包含することが理解されるべきである。
【００４７】
「C5-C15アリール」という用語は、5〜7個の炭素原子を含む任意の単一又は縮合芳香環系を包含することが理解されるべきである。例としては、フェニル、ペンタレニル、ナフタレニル、アントラセニル、及びこれらの任意の組合せが挙げられるが、これらに限定されない。
【００４８】
「C3-C7ヘテロアリール」という用語は、5〜7個の炭素原子並びにN、O、及びSから選択される少なくとも1個のヘテロ原子を含む任意の単一又は縮合芳香環系を包含することが理解されるべきである。例としては、フラニル、ベンゾフラニル、イソベンゾフラニル、ピロリニル、インドリニル、イソインドリニル、チオフェニル、ベンゾチオフェニル、ベンゾ[c]チオフェニル、イミダゾリル、ベンゾイミダゾリル、プリニル、ピラゾリル、インダゾリル、オキサゾリル、ベンゾオキサゾリル、イソオキサゾリル、ベンゾイソオキサゾリル、チアソリル(thiasolyl)、ベンゾチアゾリル、ピリジニル、オーイノリニル(auinolinyl)、イソキノリニル、ピロモジニル(pyromodinyl)、キンゾリニル(quinzolinyl)、ピリダジニル、シンノリニル、及びこれらの任意の組合せが挙げられるが、これらに限定されない。
【００４９】
R1及びR2が、それらが接続している窒素原子と一緒に、4〜7員の飽和環、不飽和環、又は芳香環を形成する実施態様に言及するとき、それは、該窒素原子を含む、4員、5員、6員、又は7員を有する、形成され得る任意の環に関連することが理解されるべきである。該環は、飽和している、すなわち、全てσ結合を有するか、不飽和である、すなわち、少なくとも1つの二重結合もしくは少なくとも1つの三重結合又はこれらの任意の組合せを有するか、或いは芳香族である、すなわち、芳香族の性質を保有する環系、仮想的な局在構造(例えば、ケクレ構造)の安定性よりも顕著に大きい(非局在化に起因する)安定性を有する循環的に共役される分子環系であることができる。
【００５０】
例えば、該環は、ピペリジニル、ピロリジニル、アゼチジニルなどから選択されることができる。
【００５１】
いくつかの実施態様において、該環は、(環員内に)N、O、NH、C＝N、C＝O、又はSO2のうちの少なくとも1つを任意に含み得る。いくつかのさらなる実施態様において、該環は、(該環上の-H原子の置換によって環系上で)、直鎖又は分岐C1-C5アルキル、ヒドロキシル、ハライド、及びシアノ(-CN)のうちの少なくとも1つで任意に置換され得る。
【００５２】
R1又はR2が、R3並びにそれらが接続している炭素及び窒素原子と一緒に、4〜7員の飽和環、不飽和環、又は芳香環を形成する実施態様に言及するとき、それは、該窒素原子を含む、4員、5員、6員、又は7員を有する、形成され得る任意の環に関連することが理解されるべきである。この環は、式Iの化合物の骨格中のシクロヘキシル環とともにスピロ二環系を形成する。該環は、飽和している、すなわち、全てσ結合を有するか、或いは不飽和である、すなわち、少なくとも1つの二重結合もしくは少なくとも1つの三重結合又はこれらの任意の組合せを有することができる。いくつかの実施態様において、該環は芳香環である。
【００５３】
いくつかの実施態様において、該環は、環構造内にN、NH、O、C＝N、C＝O、SO2のうちの少なくとも1つを任意に含む。いくつかのさらなる実施態様において、該環は、(該環上の-H原子の置換によって環系上で)、直鎖又は分岐C1-C5アルキル、ヒドロキシル、カルボニル(-C(＝O)R(ここで、Rは、H又はC1-C5直鎖もしくは分岐アルキルである))、及びハライドのうちの少なくとも1つで任意に置換される。
【００５４】
「C5-C10シクロアルキル」という用語又は「C3-C7シクロアルキル」という用語は、それぞれ、5、6、7、8、9、もしくは10個の炭素原子又は3、4、5、6、もしくは7個の炭素原子を含む、飽和炭化水素環(すなわち、そのメンバーの間でσ結合のみを含有する環)を包含することが理解されるべきである。
【００５５】
「飽和、不飽和、又は芳香族4〜6員ヘテロシクリル」という用語は、そのうちの少なくとも1つがN、O、S、Pから選択されるヘテロ原子である4員、5員、又は6員を含有する、飽和環(すなわち、そのメンバーの間でσ結合のみを含有する環)、不飽和環又は芳香環(すなわち、少なくとも1つの二重結合もしくは少なくとも1つの三重結合又はこれらの任意の組合せを含有する環)を包含することが理解されるべきである。
【００５６】
「任意に置換された」という用語は、本明細書で使用される場合、当該基が非置換であるか又は指定された置換基のうちの1つもしくは複数で置換されているかのいずれかであることを意味する。当該基が複数の置換基で置換されているとき、該置換基は、同じものあっても異なるものであってもよい。
【００５７】
本明細書に記載の化合物のいくつかは、1以上のキラル中心を含有し得るか、又はそれとは異なる形で、2つのエナンチオマーもしくはいくつかのジアステレオマーとして存在することが可能であり得る。したがって、本発明の化合物は、エナンチオマーの混合物及び精製されたエナンチオマー又はエナンチオマー的に濃縮された混合物も含む。本発明の化合物は、ジアステレオマーの混合物及び精製されたジアステレオマー又はジアステレオマー的に濃縮された混合物も含む。
【００５８】
本発明は、任意の医薬として許容し得る塩を含む、式(I)の化合物の任意の塩も含み、ここで、本発明の化合物は、正味の電荷(正又は負のいずれか)を有し、(反対の負電荷又は正電荷を有する)少なくとも1つの対イオンがそれに付加されて、該塩を形成する。「医薬として許容し得る塩」という語句は、本明細書で使用される場合、哺乳動物における医薬としての使用にとって安全かつ有効である本発明の化合物の塩及び所望の生物学的活性を保有する本発明の化合物の塩を意味する。医薬として許容し得る塩としては、本発明の化合物中に存在する酸性又は塩基性基の塩が挙げられる。医薬として許容し得る酸付加塩としては、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硝酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、酸リン酸塩、イソニコチン酸塩、酢酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、パントテン酸塩、酒石酸水素塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチジン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルカロン酸塩(glucaronate)、サッカリン酸塩(saccharate)、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、p-トルエンスルホン酸塩、及びパモ酸塩(すなわち、1,1'-メチレン-ビス-(2-ヒドロキシ-3-ナフトエ酸塩))が挙げられるが、これらに限定されない。本発明のある化合物は、様々なアミノ酸とともに医薬として許容し得る塩を形成することができる。好適な塩基塩としては、アルミニウム塩、カルシウム塩、リチウム塩、マグネシウム塩、カリウム塩、ナトリウム塩、亜鉛塩、及びジエタノールアミン塩が挙げられるが、これらに限定されない。医薬として許容し得る塩に関する総説については、引用により本明細書中に組み込まれる、BERGEらの文献、66 J. PHARM. SCI. 1-19(1977)を参照されたい。
【００５９】
本発明は、本明細書中で上記及び下記に規定された少なくとも1つの化合物を含む組成物(一般式Iによる)をさらに提供する。
【００６０】
本発明は、医薬として許容し得る助剤及び任意に他の治療剤と混合した本発明の化合物を含む医薬組成物にも関する。助剤は、組成物の他の成分と適合し、かつそのレシピエントにとって有害でないという意味において「許容し得る」ものでなければならない。
【００６１】
医薬組成物には、経口、直腸、鼻腔、局所(経皮、口腔、及び舌下を含む)、膣内、もしくは非経口(皮下、筋肉内、静脈内、及び皮内を含む)投与、又はインプラントによる投与に好適なものが含まれる。該組成物は、薬学の分野で周知の任意の方法によって調製され得る。
【００６２】
そのような方法は、本発明の化合物又はその組合せを任意の助剤と関連させる工程を含む。補助成分とも称される助剤には、当技術分野で従来からあるもの、例えば、担体、増量剤、結合剤、希釈剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、香味剤、酸化防止剤、及び湿潤剤が含まれる。
【００６３】
経口投与に好適な医薬組成物は、丸薬、錠剤、糖衣錠、もしくはカプセルなどの個別の投薬単位として、又は粉末もしくは顆粒として、又は溶液もしくは懸濁液として提示され得る。活性成分は、急速静注薬又はペーストとしても提示され得る。該組成物は、直腸投与用の坐剤又は浣腸剤へとさらに加工することができる。
【００６４】
本発明は、上記のような使用のための組成物の使用説明書を含む、包装材料と組み合わせた上記のような医薬組成物をさらに含む。
【００６５】
非経口投与のために、好適な組成物は、水性及び非水性滅菌注射液を含む。該組成物は、単位用量又は複数用量容器、例えば、密閉バイアル及びアンプル中に提示されてもよく、かつ使用前に、滅菌液体担体、例えば、水の添加のみを必要とするフリーズドライ(凍結乾燥)状態で保存されてもよい。経皮投与のために、例えば、ゲル、パッチ、又はスプレーを企図することができる。例えば、鼻吸入による肺投与に好適な組成物又は製剤は、定量加圧エアロゾル、ネブライザー、又は吸入器によって発生させ得る微細な粉塵又は霧を含む。
【００６６】
組成物の正確な投与用量及び投与レジメンは、達成されるべき治療的又は栄養学的効果によって必然的に決まり、かつ特定の処方、投与経路、並びに該組成物が投与されることになる個々の対象の年齢及び状態によって変わり得る。
【００６７】
本発明は、治療における使用のための、本明細書中で上記及び下記に規定された化合物(一般式Iによる)をさらに提供する。
【００６８】
「治療(treatment)」又は「治療(therapy)」という用語は、本明細書で使用される場合、疾患、障害、又は疾病と闘う目的での患者の管理及び介護を意味する。この用語は、疾患、障害、もしくは疾病の進行の遅延、症状及び合併症の緩和もしくは軽減、並びに/又は疾患、障害、もしくは疾病の治癒もしくは消失を含むことが意図される。治療されるべき患者は、好ましくは、哺乳動物、特に、ヒトである。
【００６９】
上で示された投薬量範囲は例示的なものであるに過ぎず、本発明の範囲を限定することを意図するものではないことが理解されるべきである。当業者には明白であるように、各々の活性化合物の治療有効量は、限定されないが、使用される化合物の活性、患者の体内での活性化合物の安定性、緩和されるべき疾病の重症度、治療される患者の総重量、投与経路、体による活性化合物の吸収、分布、及び排泄のしやすさ、治療されることになる患者の年齢及び感受性などを含む因子によって変わり得る。投与の量は、様々な因子が時間とともに変化するのに従って調整することができる。
【００７０】
経口送達のために、活性化合物を組み込んで、医薬として許容し得る担体、例えば、結合剤(例えば、ゼラチン、セルロース、トラガカントガム)、賦形剤(例えば、デンプン、ラクトース)、滑沢剤(例えば、ステアリン酸マグネシウム、二酸化ケイ素)、崩壊剤(例えば、アルギネート、Primogel、及びトウモロコシデンプン)、並びに甘味剤又は香味剤(例えば、グルコース、スクロース、サッカリン、サリチル酸メチル、及びペパーミント)を含む製剤にすることができる。該製剤は、封入されたゼラチンカプセル又は圧縮錠の形態で経口送達することができる。カプセル及び錠剤は、任意の従来技法で調製することができる。カプセル及び錠剤を当技術分野で公知の様々な被覆剤でコーティングして、カプセル及び錠剤の風味、味、色、及び形状を修飾することもできる。さらに、脂肪油などの液体担体をカプセルに含めることもできる。
【００７１】
好適な経口製剤は、懸濁液、シロップ、チューインガム、ウエハー、エリキシルなどの形態であることもできる。所望の場合、風味、味、色、及び形状を修飾するための特殊な形態の従来の薬剤を含めることもできる。さらに、嚥下することができない患者における経腸栄養チューブによる好都合な投与のために、活性化合物を、オリーブ油、トウモロコシ油、及びサフラワー油などの許容し得る親油性植物油ビヒクルに溶解させることができる。
【００７２】
活性化合物は、溶液もしくは懸濁液の形態で、又は使用前に溶液もしくは懸濁液形態への変換が可能な凍結乾燥形態で非経口投与することもできる。そのような製剤において、希釈剤又は滅菌水及び生理食塩水緩衝剤などの医薬として許容し得る担体を使用することができる。他の従来の溶媒、pH緩衝剤、安定化剤、抗細菌剤、界面活性剤、及び酸化防止剤を全て含めることができる。例えば、有用な成分には、塩化ナトリウム、酢酸塩、クエン酸塩、又はリン酸塩緩衝剤、グリセリン、デキストロース、固定油、メチルパラベン、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、重硫酸ナトリウム、ベンジルアルコール、アスコルビン酸などが含まれる。非経口製剤は、バイアル及びアンプルなどの任意の従来の容器中に保存することができる。
【００７３】
局所投与の経路には、鼻腔、口腔、粘膜、直腸、又は膣内適用が含まれる。局所投与のために、活性化合物を、ローション、クリーム、軟膏、ゲル、粉末、ペースト、スプレー、懸濁液、ドロップ、及びエアロゾルへと製剤化することができる。したがって、1以上の増粘剤、保湿剤、及び安定化剤を製剤に含めることができる。そのような薬剤の例としては、ポリエチレングリコール、ソルビトール、キサンタンガム、ワセリン、蜜蝋、又は鉱油、ラノリン、スクアレンなどが挙げられるが、これらに限定されない。局所投与の特殊な形態は、経皮パッチによる送達である。経皮パッチを調製する方法は、例えば、引用により本明細書中に組み込まれる、Brownらの文献(1988)、Ann. Rev. Med. 39:221-229に開示されている。
【００７４】
活性化合物の持続放出のための皮下移植も好適な投与経路であり得る。これは、任意の好適な製剤中の活性化合物を皮下空間に、例えば、前腹壁の下に移植するための外科的処置を伴う。例えば、Wilsonらの文献(1984)、J. Clin. Psych. 45:242-247を参照されたい。ヒドロゲルを、活性化合物の持続放出のための担体として使用することができる。ヒドロゲルは、当技術分野で一般に知られている。これらは、通常、高分子量の生体適合性ポリマーを、水中で膨潤してゲル様材料を形成するネットワークへと架橋させることにより作製される。場合によっては、ヒドロゲルは、生体分解性又は生体吸収性である。本発明の目的のために、ポリエチレングリコール、コラーゲン、又はポリ(グリコール-コ-L-乳酸)でできたヒドロゲルが有用であり得る。例えば、Phillipsらの文献(1984)、J. Pharmaceut. Sci., 73: 1718-1720を参照されたい。
【００７５】
本発明は、カゼインキナーゼI(CKI)及びインターロイキン-1受容体関連キナーゼ1(IRAK1)のうちの少なくとも1つの阻害における使用のための、本明細書中で上記及び下記に規定された化合物(一般式Iによる)をさらに提供する。いくつかの実施態様において、本明細書中で上記及び下記に規定された化合物(一般式Iによる)は、CKI及びIRAK1の阻害において使用される。上記の実施態様において、本明細書中で上記及び下記に規定された本発明の化合物(式Iによる)の使用は、CKI及びIRAK1のうちの少なくとも1つ(又はいくつかの実施態様において、CKIとIRAK1の両方)と関連する疾患、障害、症状、及び疾病の治療を可能にする。そのような態様において、本発明は、CKI及びIRAK1のうちの少なくとも1つ(又はいくつかの実施態様において、CKIとIRAK1の両方)の阻害と関連する疾患、障害、症状、及び疾病の治療を提供する。
【００７６】
その態様の別のものにおいて、本発明は、インターロイキン-1受容体関連キナーゼ1(IRAK1)の阻害における使用のための、本明細書中で上記及び下記に規定された化合物(一般式Iによる)を提供する。
【００７７】
本発明は、カゼインキナーゼI(CKI)の阻害における使用のための、本明細書中で上記及び下記に規定された化合物(一般式Iによる)をさらに提供する。
【００７８】
「カゼインキナーゼI」という用語は、ほとんどの真核生物細胞型におけるシグナル伝達経路の調節因子として機能するセリン/トレオニン選択的酵素であるタンパク質キナーゼファミリーを包含することが理解されるべきである。CK1アイソフォームは、Wntシグナル伝達、概日リズム、転写因子の核-細胞質間輸送、DNA修復、p53活性化、及びDNA転写に関与する。
【００７９】
「インターロイキン-1受容体関連キナーゼ1」という用語は、血液学的悪性腫瘍、例えば、多発性骨髄腫、MDS、白血病、及びリンパ腫、乳癌、頭頸部癌、炎症性障害及び免疫関連障害などの疾患経路に関与するNF-kB経路の重要な上流調節因子であることが分かったIRAK1遺伝子によってコードされる酵素を包含することが理解されるべきである。
【００８０】
該酵素の「阻害」に言及するとき、それは、本発明の少なくとも1つの化合物の該酵素への直接的又は間接的結合による該酵素の活性の任意の定性的又は定量的減少を包含することが理解されるべきである。
【００８１】
本発明は、悪性疾病と関連する疾病、症状、又は疾患の治療における使用のための、本明細書中で上記及び下記に規定された化合物(一般式Iによる)をさらに提供する。
【００８２】
いくつかの実施態様において、該悪性疾病は癌である。他の実施態様において、該癌は、WT p53又は突然変異体p53(癌疾病に特有のp53を失活させる突然変異)のいずれかを有する。さらなる実施態様において、該癌は、白血病、悪性黒色腫、乳癌、前立腺癌、及び結腸直腸癌から選択される。いくつかの実施態様において、該癌はWT p53を有する。
【００８３】
本発明は、WT p53を有する癌の治療における使用のための、本明細書中で上記及び下記に規定された化合物をさらに提供するものであり、ここで、該WT p53は、該化合物の有効性のバイオマーカーである。したがって、この態様において、WT p53は、化合物又は本発明の化合物を含む組成物の癌治療の有効性に対する測定可能な指標としての役割を果たす。本発明は、その必要がある対象において、WT p53を有する癌を治療する方法をさらに提供するものであり、ここで、該WT p53は、該化合物の有効性のバイオマーカーである。
【００８４】
いくつかの実施態様において、該使用は、癌免疫療法応答の誘導をさらに含む。したがって、本発明のいくつかの実施態様において、化合物又は本発明の化合物を含む組成物は、癌の治療(抗腫瘍、抗悪性活性)と癌免疫療法応答の両方を提供する。
【００８５】
いくつかの実施態様において、該悪性疾病は、血液学的悪性腫瘍(多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群(MDS)、急性骨髄性白血病(AML)、黒色腫、及びER陰性乳癌、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫(DLBCL)、慢性骨髄性白血病(CML)、慢性リンパ球性白血病(CLL)、頭頸部癌、並びにこれらの任意の組合せから選択される。
【００８６】
その態様の別のものにおいて、本発明は、抗腫瘍応答の誘導における使用のための、本明細書中で上記及び下記に規定された化合物を提供する。いくつかの実施態様において、該抗腫瘍応答は、癌免疫療法応答を含む。
【００８７】
「抗腫瘍応答の誘導」という用語は、癌性腫瘍の任意の定性的又は定量的化学療法を包含することが理解されるべきである。
【００８８】
「癌免疫療法応答」という用語は、癌性細胞と戦うための対象自身の免疫系の任意の定性的又は定量的癌免疫療法誘導を包含することが理解されるべきである。通常、免疫療法は、能動的、受動的、又は混合型(能動的かつ受動的)と分類することができ、かつ癌細胞が、その表面に、腫瘍関連抗原(TAA)として知られる、対象の免疫系によって検出されることができる分子を有することが多いという事実を利用するように設計され;これらは、タンパク質又は他の巨大分子(例えば、炭水化物)であることが多い。能動的免疫療法は、TAAを標的とすることにより、免疫系に腫瘍細胞を攻撃するよう指示する。受動的免疫療法は、既存の抗腫瘍応答を増強する。
【００８９】
いくつかの実施態様において、該癌免疫療法応答は、腫瘍細胞上での、抗原提示細胞上での、T細胞上での、又はナチュラルキラー(NK)細胞上での免疫チェックポイント分子の発現の変化に関連する。
【００９０】
いくつかの実施態様において、該癌免疫療法応答は、T細胞の抗腫瘍活性の抑制を誘導する腫瘍細胞上での免疫チェックポイント分子の発現の低下に関連する。
【００９１】
いくつかの実施態様において、該癌免疫療法応答は、チェックポイントタンパク質PD-L1の発現の低下に関連する。いくつかの他の実施態様において、該免疫療法応答は、PD-L1の阻害に関連する。いくつかのさらなる態様において、本発明の化合物は、PD-L1を阻害する方法において使用される。
【００９２】
本発明は、それと関連する疾病、症状、又は疾患を含む、炎症性障害及び免疫関連障害の治療における使用のための、本明細書中で上記及び下記に規定された化合物(一般式Iによる)をさらに提供する。
【００９３】
「炎症性障害及び免疫関連障害」に言及するとき、それは、インターロイキン-1受容体関連キナーゼインヒビターで治療可能である任意のタイプの障害(それと関連する疾病、症状、及び疾患を含む)に関連することが理解されるべきである。例えば、IRAK1が、異常なサイトカインレベルを調節することができるIL-R及びTLR経路の必須の要素であり、したがって、例えば、関節リウマチ、炎症性腸疾患、乾癬、痛風、喘息、及び癌などの免疫関連障害及び炎症関連障害を管理するために利用されることができることが示されている(Bahia MSらの文献、Cell Signal. 2015 Jun;27(6):1039-55)。
【００９４】
本発明は、その必要がある対象において、悪性疾病と関連する疾病、症状、又は疾患を治療する方法であって、該対象に、本明細書中で上記及び下記に規定された少なくとも1つの化合物(一般式Iによる)を投与する工程を含む、方法をさらに提供する。
【００９５】
本発明は、その必要がある対象において、カゼインキナーゼI(CKI)及びインターロイキン-1受容体関連キナーゼ1(IRAK1)のうちの少なくとも1つを阻害する方法であって、該対象に、本明細書中で上記及び下記に規定された少なくとも1つの化合物(一般式Iによる)を投与する工程を含む、方法をさらに提供する。
【００９６】
その態様の別のものにおいて、本発明は、その必要がある対象において、インターロイキン-1受容体関連キナーゼ1(IRAK1)を阻害する方法であって、該対象に、本明細書中で上記及び下記に規定された少なくとも1つの化合物(一般式Iによる)を投与する工程を含む、方法を提供する。
【００９７】
いくつかの実施態様において、本発明の方法は、該対象において、癌免疫療法応答を誘導することをさらに含む。
【００９８】
その態様の別のものにおいて、本発明は、その必要がある対象において、癌免疫療法応答を誘導する方法であって、該対象に、本明細書中で上記及び下記に開示された少なくとも1つの化合物を投与する工程を含む、方法を提供する。
【００９９】
本発明は、それと関連する疾病、症状、又は疾患を含む、炎症性障害及び免疫関連障害を治療する方法をさらに提供し;該方法は、その必要がある対象に、本明細書中で上記及び下記に規定された化合物(一般式Iによる)を投与することを含む。
【０１００】
本発明は、その必要がある対象において、カゼインキナーゼIを阻害する方法であって、該対象に、本明細書中で上記及び下記に規定された少なくとも1つの化合物(一般式Iによる)を投与する工程を含む、方法も提供する。
【図面の簡単な説明】
【０１０１】
(図面の簡単な説明)
本明細書に開示される主題をより良く理解するために及びそれを実際に実施し得る方法を例示するために、単なる非限定的な例として、以下の添付図面を参照しながら、実施態様を説明することにする:
【図１】図1A及び1Bは、表示された本発明の化合物の用量応答(図1A、化合物A36、A39、A6、A14、A35、A51、A29、A19-4、A41、A28、A42、A43、A46;図1B、化合物A30-1、A30-2、A51、A60、A64、A65)−RKO結腸直腸細胞株におけるスクリーニングを示している。RKO細胞を表示された濃度の化合物とともに37℃で16時間インキュベートし、ウェスタンブロットによって解析した。CKIαキナーゼ阻害を示す、β-カテニン及びp53の安定化、並びにDNA損傷のマーカーであるH2AXのリン酸化(γH2AX)が示されている。β-カテニン及びp53の安定化、並びにH2AXのリン酸化はほとんどの化合物の共通の効果であるが、一部の化合物はβ-カテニンを安定化せず、一方、近縁類似体(例えば、A19-4)はβ-カテニンしか安定化しないことに留意されたい。CKIαタンパク質レベルは、ローディング対照としての役割を果たしている。
【図２】図2A〜2Dは、CKIαインヒビターA14がCML急性転化マウスから単離された骨髄細胞のアポトーシスを用量依存的な形で(エクスビボで)誘導することを示している。図2Aは、実験手順の略図である; A14又はDMSOとの8時間のインキュベーション。図2Bは、A14処置後の白血病細胞数の劇的な低下−用量応答曲線を示している。図2Cは、用量依存的な形でのアポトーシスを起こした細胞(アネキシン5+/7AAD-)のパーセンテージの増加を示している。図2Dは、用量依存的な形での死(7AAD+)細胞全体のパーセンテージの増加を示している。
【図３】図3A〜3Cは、A14がCML急性転化マウスにおいてインビボで末梢血及び骨髄中の白血病細胞負荷量を顕著に低下させることを示している。図3Aは、CML急性転化マウス由来のBM細胞(GFP+細胞)を正常C57Bl/6マウスに接種する実験手順の略図及びA14又はビヒクルのみによる日常的な処置(経口投与)である。図3Bは、処置から9日後の末梢血中のGFP+白血病細胞のパーセンテージ; A14処置マウス(N＝6)とビヒクル処置マウス(N＝6)との比較を示している。図3Cは、処置から9日後の骨髄中のGFP+白血病細胞のパーセンテージ; A14処置マウス(N＝6)とビヒクル処置マウス(N＝6)との比較を示している。
【図４】図4A〜4Fは、CML急性転化マウスのA14処置から9日後の全血算値を示し:図4Aは、末梢血中の白血球(WBC)の絶対数(109個/L)(N＝5)を示している。図4Bは、末梢血中のリンパ球(Lymph)の絶対数(109個/L)(N＝5)を示している。図4Cは、末梢血中の単球(Mono)の絶対数(109個/L)(N＝5)を示している。図4Dは、末梢血中の顆粒球(Gran)の絶対数(109個/L)を示している。図4Eは、赤血球数(RBC、1012個/L)を示している。図4Fは、ヘモグロビンレベル(HGB、g/L)を示している。
【図５】図5は、BM移植から9日後のビヒクル処置CML急性転化マウスと比較したA14処置CML急性転化マウス由来の血液塗抹の代表的な写真を示している。
【図６】図6は、AMLマウスモデルの用意の略図を示している。
【図７】図7A〜7Dは、AMLの進行に対するA14の阻害効果を示している。図7Aは、実験手順の略図である。図7Bは、ビヒクル処置マウスと比較したA14処置マウスの末梢血(PB)中のGFP+白血球のパーセンテージを示している。図7C及び7Dは、A14処置の1日前(図7C)及び3日後(図7D)のPB中のGFP+白血球の代表的なフローサイトメトリー解析プロットを示している。
【図８】図8A〜8Gは、本発明のA14によるAMLマウスの治療から9日後の全血算値を示している。図8Aは、末梢血中の白血球(WBC)の絶対数(109個/L)を示している。図8Bは、末梢血中のリンパ球(Lymph)の絶対数(109個/L)を示している。図8Cは、末梢血中の単球(Mono)の絶対数(109個/L)を示している。図8Dは、末梢血中の顆粒球(Gran)の絶対数(109個/L)を示している。図8Eは、赤血球数(RBC、1012個/L)を示している。図8Fは、ヘモグロビン(g/L)を示している。図8Gは、末梢血中の血小板(PLT)(109個/L)を示している。
【図９】図9は、1回目のA14処置から9日後のビヒクル処置AMLマウスと比較したA14処置AMLマウス由来の血液塗抹の代表的写真を示している。
【図１０】図10は、本発明のインヒビター化合物A51及びA14によるIRAK1阻害を示している。細胞を回収し、ウェスタンブロットによって解析した。ブロットを、以下の抗体:ホスホ-IRAK1(Thr209)(A1074、AssayBiothechnology; 1/1,000)、ホスホ-IKKα/β(Ser176/180)(16A6、Cell Signaling; 1/1,000)、IKKα(2682、cell signaling; 1/1,1000)、IKKβ(2370、cell signaling; 1/1,1000)、ホスホ-c-Jun(Ser 63)(9261、cell signaling; 1/1,1000)、p53(DO-1&1801ハイブリドーマ混合物;各々由来の上清の1:20の希釈物)、CKIα(C-19; 1/1,000; Santa Cruz Biotechnology)、及びホスホ-ヒストンH2AX(S139; 1/1,000; Millipore)とともにインキュベートした。二次抗体は、HRP結合ヤギ抗マウス抗体、ヤギ抗ウサギ抗体、及びウサギ抗ヤギ抗体(全て1/10,000; Jackson)であった。ホスホ-IRAK1、ホスホ-IKKα/β、及びホスホ-c-Junの阻害は、IRAK1阻害を示している。CKIαキナーゼ阻害を示す、p53安定化、及びDNA損傷のマーカーであるH2AXのリン酸化(γH2AX)。CKIαタンパク質レベルは、ローディング対照としての役割を果たしている。
【図１１】図11A〜11Eは、AMLマウスにおけるCKIインヒビターA51の単一用量処置から獲得された実験結果に関するものである。図11Aは、AMLマウスの用意及び疾患の誘導(白血病接種)から30日目のA51(20mg/Kg)によるその処置を模式的に示している。図11B〜11Eは、血液中の全白血病細胞の低下における処置から16時間後のA51の効果を(ビヒクルのみによる処置と比較して)示し:図11Bは、末梢血(PB)中のWBCの低下を示し、図11Cは、白血病脾臓の縮小を示し、図11D及び11Eは、それぞれ、末梢血(PB)及び骨髄(BM)中の白血病性芽球(GFP+細胞)の割合の低下を示している。
【図１２】図12A及び12Bは、処置されたAMLマウス由来の脾臓及び骨の写真を示している。上に開示されているようなA51による処置の後の脾臓サイズ(脾腫)の実際の低下(図12A)及び単一用量処置後に正常な色に戻った不透明な骨(図12B)。
【図１３】図13A〜13Eは、白血病マウスの骨髄から単離されたAML細胞に対するCKIインヒビターのインビトロ処理効果の結果を示している。白血病細胞における死細胞(7AAD+)のパーセンテージ及び主要な免疫チェックポイントタンパク質PD-L1の発現に対するインヒビターの効果が示されており;インヒビター処理は、いくつかの時点について、10又は100nMで行われた(5時間−図13A、6時間−図13B及び13C、並びに9時間、図13D及び13E)。
【発明を実施するための形態】
【０１０２】
(実施態様の詳細な説明)
((E)-1-シクロプロピル-4-(ジメチルアミノ)-3-(2-(メチルチオ)ピリミジン-4-イル)ブタ-3-エン-2-オン(コアA)及び4-(5-(シクロプロピルメチル)-1H-ピラゾール-4-イル)-2-(メチルチオ)ピリミジン(コアB)の調製)
【化６】
2018525441.tif 000011
(工程1:)
N,O-ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩(25.14g、257.69mmol、1.72当量)、HATU(56.97g、149.82mmol、1.00当量)、及びTEA(45.48g、449.46mmol、3.00当量)を、2-シクロプロピル酢酸(15.00g、149.82mmol、1.00当量)のDCM(500mL)溶液に0℃で添加し、その後、混合物を30℃で3時間撹拌した。得られた混合物を水(500mL)に注ぎ入れた。水性洗浄液相をDCM(3*250mL)で抽出した。合わせた有機層を無水Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー(SiO2、石油エーテル(PE):酢酸エチル(EA)＝50:1〜10:1)により精製すると、所望の化合物2(13.20g、82.97mmol、55.4％収率)が無色の液体として得られた。
【化７】
2018525441.tif 000012
【０１０３】
(工程2:)
4-メチル-2-メチルスルファニル-ピリミジン(9.00g、64.19mmol、1.00当量)のTHF(500mL)溶液に、LDA(2M、48.46mL、1.51当量)を-78℃で添加した。1時間撹拌した後、化合物2(13.79g、96.29mmol、1.50当量)のTHF(500mL)溶液を-78℃で滴加し、その後、反応混合物を-78℃で4時間撹拌した。飽和水性NH4Cl(100mL)でクエンチし、水相を酢酸エチル(3×50mL)で抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、無水Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣を石油エーテル/酢酸エチルから結晶化させると、所望の化合物4(13.60g、55.06mmol、85.8％収率)が黄色の固体として得られた。
LCMS: RT＝0.629分、m/z 223.0[M+H]+。
【０１０４】
(工程3:)
化合物4(13.60g、61.18mmol、1.00当量)のDMF-DMA(51.42g、2.45mol、40当量)溶液を90℃で2時間撹拌した。溶媒を真空中で除去した。残渣をシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィーにより精製すると、コアA(10.60g、36.30mmol、59.3％収率)が黄色の固体として得られた。
LCMS: RT＝0.634分、m/z 278.2[M+H]+
【化８】
2018525441.tif 000013
【０１０５】
(工程4:)
コアA(10.60g、38.21mmol、1.00当量)及びヒドラジン水和物(6.75g、114.63mmol、3.00当量)のエタノール(200mL)溶液を90℃で3時間撹拌した。溶媒を真空中で除去した。残渣をシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィーにより精製すると、コアB(9.00g、35.81mmol、93.7％収率)が薄黄色の固体として得られた。
LCMS: RT＝2.018分、m/z 247.1[M+H]+
【化９】
2018525441.tif 000014
【０１０６】
(4-(5-(シクロプロピルメチル)-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)-2-(メチルスルホニル)ピリミジン(コアC)の調製)
【化１０】
2018525441.tif 000015
(工程1:)
コアA(6.20g、22.35mmol、1.00当量)及びメチルヒドラジン(8.00g、69.46mmol、3.11当量)のエタノール(100mL)溶液を90℃で16時間撹拌した。溶媒を真空中で除去した。残渣をプレ-HPLC(塩基性条件)により精製すると、化合物5(1.80g、6.84mmol、30.6％収率)が黄色の固体として、異性体5A(2.00g、7.30mmol、32.6％収率)が黄色の油状物として得られた。
(化合物5:)
LCMS: RT＝2.551分、m/z 261.1[M+H]+
【化１１】
2018525441.tif 000016
(位置異性体5A:)
LCMS: RT＝2.486分、m/z 261.1[M+H]+
【化１２】
2018525441.tif 000017
【０１０７】
(工程2:)
化合物1(1.50g、5.76mmol、1.00当量)のDCM(20mL)溶液に、m-CPBA(2.98g、17.28mmol、3.00当量)を0℃で添加し、30℃で2時間撹拌した。得られた混合物を、NaHSO3(2×100mL)、飽和水性NaHCO3(100mL)、及びブラインで洗浄し、無水Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー(石油エーテル:酢酸エチル＝10:1〜1:1)により精製すると、化合物コアC(1.50g、5.08mmol、88.2％収率)が黄色の固体として得られた。
LCMS: RT＝1.891分、m/z 293.0[M+H]+
【化１３】
2018525441.tif 000018
【０１０８】
(A-nの調製のための一般的手順:)
【化１４】
2018525441.tif 000019
(方法A:化合物n_6の調製)
コアB(25mmol、1.00当量)のDMF(50mL)溶液を0℃に冷却し、NaH(1.50当量)を添加した。0℃で1時間撹拌した後、RBr(1.60当量)を添加し、反応混合物を20℃で15時間撹拌した。水(10.00mL)を添加し、酢酸エチル(3*10mL)で抽出した。合わせた有機層を水(10mL)及びブライン(10mL)で洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、濃縮すると、粗生成物が得られ、これを精製すると、化合物n_6が得られた。
【０１０９】
(方法B:化合物n_7の調製)
化合物n_6(10mmol、1.00当量)のジクロロメタン(30mL)溶液に、m-CPBA(3.00当量)を0℃で添加し、反応混合物を20〜30℃で5時間撹拌した。得られた混合物を、NaHSO3(2×50.00mL)、飽和水性NaHCO3(50mL)、及びブライン(10mL)で洗浄し、無水Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、濃縮すると、化合物n_7が得られた。
【０１１０】
(方法C:化合物A-nの調製)
DMSO(80mL)中の化合物n_7(10mmol、1.0当量)とDIEA(10.00当量)とtrans-4-アミノ-シクロヘキサノール(1.0〜3.0当量)の混合物を160℃で3時間加熱した。反応混合物を周囲温度に冷却し、水(100mL)に注ぎ入れ、その後、ジクロロメタン(3×50ml)で抽出した。合わせた層をブラインで洗浄し、無水Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をプレ-HPLC(塩基性条件)により精製すると、化合物A-nが得られた。
【０１１１】
(方法D:化合物A-nの調製)
化合物n_7(10mmol、1.00当量)及びtrans-シクロヘキサン-1,4-ジアミン(2.0〜4.0当量)のジオキサン(40mL)溶液を、マイクロ波で、130℃で2時間撹拌した。混合物を濾過し、濾液をプレ-HPLC(塩基性条件)により精製すると、A-nが得られた。
【０１１２】
((1r,4r)-N1-(4-(5-(シクロプロピルメチル)-1-イソプロピル-1H-ピラゾール-4-イル)ピリミジン-2-イル)シクロヘキサン-1,4-ジアミン(A-35)の調製)
【化１５】
2018525441.tif 000020
(工程1:)
化合物35_6を方法Aに記載されている手順に従って合成し、HPLC(TFA条件)精製後、それを黄色の固体として得た。収率:17.1％;
LCMS: RT＝1.959分、m/z 289.1[M+H]+
【化１６】
2018525441.tif 000021
【０１１３】
(工程2:)
化合物35_7を方法Bに記載されている手順に従って合成し、TLCによる精製の後、それを黄色の固体として得た。収率:57.8％;
LCMS: RT＝0.711分、m/z 321.1[M+H]+
【０１１４】
(工程3:)
化合物A-35を、trans-シクロヘキサン-1,4-ジアミン(4.0当量)を用いて、方法Dに記載されている手順に従って合成し、それを白色の固体として得た。収率:19.7％
LCMS: RT＝1.223分、m/z 355.3[M+H]+
【化１７】
2018525441.tif 000022
【０１１５】
((1R,4R)-N1-(4-(1-シクロペンチル-5-(シクロプロピルメチル)-1H-ピラゾール-4-イル)ピリミジン-2-イル)シクロヘキサン-1,4-ジアミン(A-36)の調製)
【化１８】
2018525441.tif 000023
(工程1:)
化合物36_6を方法Aに記載されている手順に従って合成し、分取HPLC(TFA条件)による精製の後、それを黄色の油状物として得た。収率:14.7％
LCMS: RT＝2.228分、m/z 315.2[M+H]+
【化１９】
2018525441.tif 000024
【０１１６】
(工程2:)
化合物36_7を方法Bに記載されている手順に従って作製し、カラムクロマトグラフィーによる精製の後、それを黄色の固体として得た。収率:66.6％
LCMS: RT＝0.707分、m/z 347.2[M+H]+
【０１１７】
(工程3:)
化合物A-36を、trans-シクロヘキサン-1,4-ジアミン(2.0当量)を用いて、方法Dに記載されている手順に従って作製し、分取HPLC(TFA条件)による精製の後、それを白色の固体として得た。収率:41.35％
LCMS: RT＝0.591分、m/z 381.4[M+H]+
【化２０】
2018525441.tif 000025
【０１１８】
((1R,4R)-N1-(4-(5-(シクロプロピルメチル)-1-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)-1H-ピラゾール-4-イル)ピリミジン-2-イル)シクロヘキサン-1,4-ジアミン(A-39)の調製)
【化２１】
2018525441.tif 000026
(工程1:)
コアB(700.00mg、2.84mmol、1.00当量)のMeCN(14mL)溶液に、CS2CO3(1.85g、5.68mmol、2.00当量)を0℃で添加した。30分後、4-ブロモテトラヒドロピラン(703.03mg、4.26mmol、1.50当量)を添加した。混合物を、密封管中で、100℃で16時間撹拌した。反応混合物を濾過し、濾液を濃縮した。粗生成物を分取HPLC(TFA)により精製すると、化合物39_6(45.0mg、136.18μmol、4.8％収率)が黄色の固体として得られた。
LCMS: RT＝0.702分、m/z 331.1[M+H]+
【化２２】
2018525441.tif 000027
【０１１９】
(工程2:)
化合物39_7を方法Bに記載されている手順に従って作製し、分取TLC精製後、それを黄色の固体として得た。収率:72.6％
LCMS: RT＝0.607分、m/z 363.1[M+H]+
【０１２０】
(工程3:)
化合物A-39を、DIEAなしで、trans-シクロヘキサン-1,4-ジアミン(3.0当量)を用いて、方法Cに記載されている手順に従って作製し、分取HPLC(塩基性条件)による精製の後、それを黄色の固体として得た。収率:40.2％
LCMS: RT＝1.104分、m/z 397.4[M+H]+
【化２３】
2018525441.tif 000028
【０１２１】
((1R,4R)-N1-(4-(5-(シクロプロピルメチル)-1-(オキセタン-3-イル)-1H-ピラゾール-4-イル)ピリミジン-2-イル)シクロヘキサン-1,4-ジアミン(A-43)の調製)
【化２４】
2018525441.tif 000029
(工程1:)
化合物43_6を方法Aに記載されている手順に従って合成し、分取HPLC(TFA条件)による精製の後、それを黄色の固体として得た。収率:17.9％
LCMS: RT＝0.664分、m/z 303.1[M+H]+
【化２５】
2018525441.tif 000030
【０１２２】
(工程2:)
化合物43_7を方法Bに記載されている手順に従って合成し、分取TLC精製後、それを黄色の固体として得た。収率:79.6％
LCMS: RT＝0.566分、m/z 335.1[M+H]+
【０１２３】
(工程3:)
化合物A-43を、trans-シクロヘキサン-1,4-ジアミン(3.0当量)を用いて、方法Dに記載されている手順に従って合成し、分取HPLC(TFA条件)による精製の後、それを白色のゴム状物質として得た。収率:24.7％;
LCMS: RT＝0.987分、m/z 369.3[M+H]+
【化２６】
2018525441.tif 000031
【０１２４】
((R)-テトラヒドロフラン-3-イルメタンスルホネート(41_4)の調製)
【化２７】
2018525441.tif 000032
(R)-テトラヒドロフラン-3-オール(500.00mg、5.68mmol、1.00当量)のDCM(5mL)溶液に、TEA(1.15g、11.36mmol、2.00当量)及び塩化メタンスルホニル(650.11mg、5.68mmol、1.00当量)を0℃で添加した。混合物を20℃で1時間撹拌した。該混合物を水(20mL)で希釈し、DCM(10mL*2)で抽出した。合わせた有機層を濃縮すると、41_4(900.00mg、5.42mmol、95.3％収率)が無色の液体として得られた。
【化２８】
2018525441.tif 000033
【０１２５】
((1R,4S)-N1-(4-(5-(シクロプロピルメチル)-1-((S)-テトラヒドロフラン-3-イル)-1H-ピラゾール-4-イル)ピリミジン-2-イル)シクロヘキサン-1,4-ジアミン(A-41)の調製)
【化２９】
2018525441.tif 000034
(工程1:)
化合物41_6を方法Aに記載されている手順に従って合成し、分取HPLC(TFA条件)による精製の後、それを黄色の固体として得た。収率:13.1％
【化３０】
2018525441.tif 000035
【０１２６】
(工程2:)
化合物41_7を方法Bに記載されている手順に従って合成し、分取TLC精製後、それを黄色の固体として得た。収率:57.5％
LCMS: RT＝0.585分、m/z 349.2[M+H]+
【０１２７】
(工程3:)
化合物A-41を、trans-シクロヘキサン-1,4-ジアミン(4.0当量)を用いて、方法Dに記載されている手順に従って合成し、分取HPLC(TFA条件)による精製の後、それを白色のゴム状固体として得た。収率:17.2％
LCMS: RT＝0.969分、m/z 383.3[M+H]+
【化３１】
2018525441.tif 000036
【０１２８】
((S)-テトラヒドロフラン-3-イルメタンスルホネート(42_4)の調製)
【化３２】
2018525441.tif 000037
化合物42_4を41_4と同じ方法で(S)-テトラヒドロフラン-3-オールから作製し、それは無色の液体であった。収率:90.0％
【化３３】
2018525441.tif 000038
【０１２９】
((1R,4R)-N1-(4-(5-(シクロプロピルメチル)-1-((R)-テトラヒドロフラン-3-イル)-1H-ピラゾール-4-イル)ピリミジン-2-イル)シクロヘキサン-1,4-ジアミン(A-42)の調製)
【化３４】
2018525441.tif 000039
(工程1:)
化合物42_6を方法Aに記載されている手順に従って合成し、分取HPLC(TFA条件)による精製の後、それを黄色の固体として得た。収率:21.4％
LCMS: RT＝0.692分、m/z 317.1[M+H]+
【化３５】
2018525441.tif 000040
【０１３０】
(工程2:)
化合物42_7を方法Bに記載されている手順に従って合成し、分取TLC精製後、それを黄色の固体として得た。収率:83.2％
LCMS: RT＝0.587分、m/z 349.1[M+H]+
【０１３１】
(工程3:)
化合物A-42を方法Dに記載されている手順に従って合成し、分取HPLC(TFA条件)による精製の後、それを白色のゴム状固体として得た。収率:51.5％
LCMS: RT＝1.078分、m/z 383.3[M+H]+
【化３６】
2018525441.tif 000041
【０１３２】
((1R,4R)-N1-(4-(5-(シクロプロピルメチル)-1-(テトラヒドロ-2H-ピラン-3-イル)-1H-ピラゾール-4-イル)ピリミジン-2-イル)シクロヘキサン-1,4-ジアミン(A-38)の調製)
【化３７】
2018525441.tif 000042
(工程1:)
MeOH(15mL)中の38_1(1.20g、11.99mmol、1.40当量)とベンジル N-アミノカルバメート(1.42g、8.56mmol、1.00当量)の混合物を30℃で2時間撹拌した。NaBH3CN(2.69g、42.82mmol、5.00当量)を添加した。得られた混合物を30℃で16時間撹拌した。該混合物を濃縮し、水(50mL)及びEA(50mL)で希釈した。有機層を濃縮し、カラムクロマトグラフィー(PE:EA＝10:1〜2:1)により精製すると、38_2(1.50g、5.99mmol、70％収率)が無色の油状物として得られた。
LCMS: RT＝0.568分、m/z 273.2[M+H]+
【化３８】
2018525441.tif 000043
【０１３３】
(工程2:)
38_2(1.60g、6.39mmol、1.00当量)のMeOH(15mL)溶液に、Pd(OH)2(179.54mg、1.28mmol、0.20当量)を添加した。混合物を、H2(15psi)下、20℃で16時間撹拌した。該混合物を濾過し、濾液を濃縮すると、38_3(450mg、粗製物)が無色の油状物として得られ、これを、精製することなく、次の工程でそのまま使用した。
【０１３４】
(工程3:)
化合物38_6を、コアBの合成について記載されているのと同じ手順に従って、コアA及び化合物38_4から作製し、分取HPLC(TFA条件)による精製の後、それを黄色の油状物として得た。収率:40.3％
LCMS: RT＝0.851分、m/z 331.1[M+H]+
【化３９】
2018525441.tif 000044
【０１３５】
(工程4:)
化合物38_7を方法Bに記載されている手順に従って合成し、分取TLC精製後、それを黄色の固体として得た。収率:56.1％
LCMS: RT＝0.739分、m/z 363.1[M+H]+
【０１３６】
(工程5:)
化合物A-38を、trans-シクロヘキサン-1,4-ジアミン(4.0当量)を用いて、方法Dに記載されている手順に従って合成し、分取HPLC(塩基性条件)による精製の後、それを黄色の固体として得た。収率:40％
LCMS: RT＝1.154分、m/z 397.3[M+H]+
【化４０】
2018525441.tif 000045
【０１３７】
(A-nの合成のための一般的手順)
【化４１】
2018525441.tif 000046
(方法E)
DMSO(8mL)中のコアC(1.00当量)とアミンn(4.00当量)の反応混合物を160℃で3時間撹拌した。該反応混合物を室温に冷却し、氷-H2O(20mL)上に注いだ。水層をEA(50mL*3)で抽出した。合わせた有機層をブライン(50mL*3)で洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィーにより精製すると、A-nが得られた。
【０１３８】
(方法F)
DMSO(10mL)中のコアC(1.00当量)とTBAF(2.00当量)とK2CO3(4.00当量)とアミンn(4.00当量)の反応混合物を160℃で3時間撹拌した。該反応混合物を15℃に冷却し、H2O(20mL)に注ぎ入れた。水層をEA(20mL*3)で抽出した。合わせた有機層をブライン(20mL*3)で洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をプレ-HPLC(HCl条件)により精製すると、A-nが得られた。
【０１３９】
(方法G)
ジオキサン(3mL)中のアミンn(1.20当量)とコアC(1.00当量)の反応混合物を、マイクロ波下、130℃で1.5時間撹拌した。該反応混合物をH2O(20mL)に注ぎ入れた。水層をEA(20mL*3)で抽出した。合わせた有機層をブライン(20mL*3)で洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をプレ-HPLC(塩基性条件)により精製すると、A-nが得られた。
【０１４０】
((1R,4R)-N1-(4-(5-(シクロプロピルメチル)-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)ピリミジン-2-イル)シクロヘキサン-1,4-ジアミン(A-14)及び(1r,4r)-N1-(4-(5-(シクロプロピルメチル)-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)ピリミジン-2-イル)-N4,N4-ジメチルシクロヘキサン-1,4-ジアミン(A-28)の調製)
【化４２】
2018525441.tif 000047
(工程1:)
化合物A-14を方法Gに記載されている手順に従って調製し、それを黄色の固体として得た。収率:38.4％
LCMS: RT＝2.043分、m/z 327.2[M+H]+。
【化４３】
2018525441.tif 000048
【０１４１】
(工程2:)
EtOH(500μL)中のA-14(18.52mg、122.53μmol、1.00当量)の混合物に、2,3-ジヒドロベンゾトリアゾール-1-イルメタノール(18.52mg、122.53μmol、1.00当量)を一度に0℃で添加した。混合物を15℃で1時間撹拌し、NaBH4(9.27mg、245.06μmol、2.00当量)を添加した。得られた混合物を15℃で1時間撹拌し、H2O(10mL)に注ぎ入れた。水層をDCM(20mL*3)で抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、NaSO4上で乾燥させ、濃縮した。残渣を分取HPLC(塩基性条件)により精製すると、A-28(5.00mg、14.10μmol、11.5％収率、100％純度)が白色の固体として得られた。
LCMS: RT＝2.535分、m/z 355.2[M+H]+
【化４４】
2018525441.tif 000049
【０１４２】
(8-アミノ-1,3-ジアザスピロ[4.5]デカン-2,4-ジオン塩酸塩(アミン-19)の調製)
【化４５】
2018525441.tif 000050
(工程1:)
NaCN(2.75g、56.02mmol、2.39当量)のH2O(10mL)溶液をEtOH(25mL)及びH2O(25mL)中の化合物19_1(5.00g、23.44mmol、1.00当量)と(NH4)2CO3(4.96g、51.57mmol、2.20当量)の混合物に添加した。反応混合物を10℃で16時間、その後、70℃でさらに24時間撹拌した。TLC(PE:EA＝3:1)により、反応物質が消費され(Rf＝0.55)、大きいスポットが形成される(Rf＝0.25)ことが示された。反応混合物を冷却させておき、濾過した。フィルターケーキをH2O(100mL)で洗浄し、乾燥させた。化合物19_2(4.00g、14.12mmol、60.2％収率)が白色の固体として得られた。
【化４６】
2018525441.tif 000051
【０１４３】
(工程2:)
MeOH(10mL)中の化合物19_2(1.00g、3.53mmol、1.00当量)の混合物に、HCl/ジオキサン(4M、10mL、11.33当量)を0℃で添加し、反応混合物を10℃で16時間撹拌した。LCMSにより、反応物質の消費が示された。該反応混合物を濃縮すると、アミン-19(700.00mg、3.19mmol、90.3％収率、HCl)が白色の固体として得られた。
【化４７】
2018525441.tif 000052
【０１４４】
(8-((4-(5-(シクロプロピルメチル)-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)ピリミジン-2-イル)アミノ)-1,3-ジアザスピロ[4.5]デカン-2,4-ジオン(A19_4)及び(1-アミノ-4-((4-(5-(シクロプロピルメチル)-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)ピリミジン-2-イル)アミノ)シクロヘキシル)メタノール(A-19)の調製)
【化４８】
2018525441.tif 000053
(工程1:)
化合物A19_4を、アミン-19(4当量)及びDIEA(4当量)を用いて、方法Eに記載されている手順に従って調製し、分取HPLC(塩基性条件)による精製の後、それを白色の固体として得た。収率:72.2％
LCMS: RT＝0.573分、m/z 397.2[M+H]+
【化４９】
2018525441.tif 000054
【０１４５】
(工程2:)
化合物A19_4(95.00mg、240.23μmol、1.00当量)をNaOH/H2O(3M、640.60μL、8.00当量)に添加し、反応混合物を120℃で16時間撹拌した。該反応混合物を15℃に冷却し、H2O(20mL)に注ぎ入れた。水層を2N HCl溶液でpH＝7に調整した。混合物を濃縮した。粗生成物をMeOH(50mL*3)で粉砕した。濾液を濃縮すると、19_5(300.00mg、粗製物)が白色の固体として得られた。
LCMS: RT＝1.148分、m/z 371.2[M+H]+
【化５０】
2018525441.tif 000055
【０１４６】
(工程3:)
THF(500μL)中の19_5(330.00mg、890.81μmol、1.00当量)の混合物に、BH3(1M、7.13mL、8.00当量)を添加し、反応混合物を100℃で16時間撹拌した。該反応混合物を15℃に冷却し、MeOH(20mL)に注ぎ入れた。混合物を濃縮した。粗生成物をプレ-HPLC(塩基性条件)により精製すると、A-19(23.00mg、64.52μmol、7.2％収率、100％純度)が白色の固体として得られた。
LCMS: RT＝1.060分、m/z 357.2[M+H]+
【化５１】
2018525441.tif 000056
【０１４７】
(8-((4-(5-(シクロプロピルメチル)-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)ピリミジン-2-イル)アミノ)-3-オキサ-1-アザスピロ[4.5]デカン-2-オン(A-26)の調製)
【化５２】
2018525441.tif 000057
THF(500μL)中のA-19(20.00mg、56.11μmol、1.00当量)の混合物に、CDI(9.1mg、56.11μmol、1.00当量)を添加し、反応混合物を25℃で16時間撹拌した。該反応混合物を濃縮した。粗生成物を分取HPLC(塩基性条件)により精製すると、A-26(4.00mg、10.46μmol、18.6％収率、100％純度)が白色の固体として得られた。
LCMS: RT＝2.210分、m/z 383.2[M+H]+
【化５３】
2018525441.tif 000058
【０１４８】
((1R,4R)-N1-(4-(5-(シクロプロピルメチル)-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)ピリミジン-2-イル)-N4-メチルシクロヘキサン-1,4-ジアミン(A-27)の調製)
【化５４】
2018525441.tif 000059
(工程1:)
化合物27_2を、アミン-27(1.0当量)及びDIEA(10当量)を160℃で6時間用いて、方法Eに記載されている手順に従って作製し、分取HPLC(TFA)による精製の後、それを黄色の固体として得た。収率:41.1％
【化５５】
2018525441.tif 000060
【０１４９】
(工程2:)
27_2(100.00mg、234.44μmol、1.00当量)のTHF(4.00mL)溶液に、LiAlH4(26.69mg、703.32μmol、3.00当量)を0℃で添加した。混合物を70℃で3時間撹拌した。該混合物を0℃に冷却し、その後、水性NH4Cl(3滴)でクエンチした。得られた溶液をNa2SO4上で乾燥させ、その後、濃縮した。残渣を分取HPLCにより精製することができなかった。したがって、Boc基で保護した後、A-27(70mg、粗製物)を精製することにする。A-27(粗製物)のTHF(1mL)溶液に、(Boc2)2(200mg、2当量)を添加した。20℃で1時間撹拌した後、反応混合物を分取TLC(EA)により精製すると、27_Boc(30mg、29.13％の全収率)が得られ、これを次の工程にそのまま使用した。
【０１５０】
(工程3:)
27_Boc(30.00mg、68.09μmol、1.00当量)のDCM(100μL)溶液に、HCl/ジオキサン(4M、85μL、5.00当量)を一度に0℃で添加し、混合物を15℃で5時間撹拌した。反応混合物を濃縮すると、A-27(12.00mg、30.88μmol、45.35％収率、97％純度、HCl)が薄黄色の固体として得られた。収率:45.4％
LCMS: RT＝2.558分、m/z 341.2[M+H]+
【化５６】
2018525441.tif 000061
【０１５１】
(N-((1R,4R)-4-アミノシクロヘキシル)-2-メトキシアセトアミド塩酸塩(アミン-29)の調製)
【化５７】
2018525441.tif 000062
(工程1:)
DCM(5mL)中の29_1(658.25mg、3.07mmol、1.0当量)と2-メトキシアセチルクロリド(500mg、4.61mmol、1.5当量)の混合物に、DIEA(310.82mg、3.07mmol、1.00当量)を0℃で添加した。その後、反応混合物を15℃で2時間撹拌した。該反応混合物を真空下で濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィーにより精製すると、29_2(490.00mg、1.71mmol、55.7％収率)が白色の固体として得られた。
【化５８】
2018525441.tif 000063
【０１５２】
(工程2:)
化合物29-2をA27の合成の工程3で示されているのと同様の方法で脱保護し、アミン-29を白色の固体として得た。収率:91.9％
【化５９】
2018525441.tif 000064
【０１５３】
(N-((1R,4R)-4-((4-(5-(シクロプロピルメチル)-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)ピリミジン-2-イル)アミノ)シクロヘキシル)-2-メトキシアセトアミド(A29_1)の調製)
【化６０】
2018525441.tif 000065
化合物A29_1を、アミン-29(1.0当量)及びDIEA(4当量)を用いて、方法Eに記載されている手順に従って作製し、分取HPLC(塩基性条件)による精製の後、それを薄黄色の固体として得た。収率:27.4％
LCMS: RT＝2.535分、m/z 355.2[M+H]+
【化６１】
2018525441.tif 000066
【０１５４】
((1R,4R)-N1-(4-(5-(シクロプロピルメチル)-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)ピリミジン-2-イル)-N4-(2-メトキシエチル)シクロヘキサン-1,4-ジアミン(A-29)の調製)
【化６２】
2018525441.tif 000067
THF(4mL)中のLAH(40.00mg、1.05mmol、10.50当量)の混合物に、A29_1(40.00mg、100.38μmol、1.00当量)のTHF(1mL)溶液を15℃で添加した。混合物を70℃で36時間撹拌した。反応混合物を冷却し、H2O(0.1mL)に注ぎ入れた。1N NaOH(0.1mL)を添加し、濾過した。濾液を濃縮した。粗生成物をプレ-HPLC(塩基性条件)により精製すると、A-29(4.00mg、9.88μmol、9.8％収率、95.0％純度)が黄色の固体として得られた。
LCMS: RT＝2.535分、m/z 355.2[M+H]+
【化６３】
2018525441.tif 000068
【０１５５】
((1R,4R)-4-(ピペリジン-1-イル)シクロヘキサンアミン塩酸塩(アミン-47)の調製)
【化６４】
2018525441.tif 000069
(工程1:)
MeCN(10mL)中の47_1(200.00mg、933.27μmol、1.00当量)と1,5-ジヨードペンタン(302.32mg、933.27μmol、1.00当量)とK2CO3(515.95mg、3.73mmol、4.00当量)の混合物を90℃で16時間撹拌した。該混合物を濾過し、濾液を濃縮すると、47_2(300mg、粗製物)が白色の固体として得られ、それを次の工程でそのまま使用した。
【０１５６】
(工程2:)
粗製物47_2をA27の合成の工程3に示されているのと同様の方法で脱保護し、アミン-47を白色の固体として得た。
【化６５】
2018525441.tif 000070
【０１５７】
(4-(5-(シクロプロピルメチル)-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)-N-((1R,4R)-4-(ピペリジン-1-イル)シクロヘキシル)ピリミジン-2-アミン(A-47)の調製)
【化６６】
2018525441.tif 000071
化合物A-47を、アミン-47を用いて、方法Fに記載されている手順に従って調製し、分取HPLC(HCl条件)による精製の後、それを白色の固体として得た。収率:49.3％
LCMS: RT＝1.530分、m/z 395.2[M+H]+
【化６７】
2018525441.tif 000072
【０１５８】
((1R,4R)-4-モルホリノシクロヘキサンアミン塩酸塩(アミン-48)の調製)
【化６８】
2018525441.tif 000073
粗アミン-48をアミン-47の合成について記載されているのと同様の方法で合成し、それを黄色の固体として得た。
【化６９】
2018525441.tif 000074
【０１５９】
(4-(5-(シクロプロピルメチル)-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)-N-((1r,4r)-4-モルホリノシクロヘキシル)ピリミジン-2-アミン(A-48)の調製)
【化７０】
2018525441.tif 000075
化合物A-48を、TBAF(1.0当量)とともにアミン-48を用いて、方法Fに記載されている手順に従って調製し、分取HPLC(HCl条件)による精製の後、それを白色の固体として得た。収率:51.2％
LCMS: RT＝2.095分、m/z 397.3[M+H]+
【化７１】
2018525441.tif 000076
【０１６０】
((1R,4R)-4-(ピロリジン-1-イル)シクロヘキサンアミン塩酸塩(アミン-49)の調製)
【化７２】
2018525441.tif 000077
粗アミン-49をアミン-47の合成について記載されているのと同様の方法で合成し、それを白色の固体として得た。
【化７３】
2018525441.tif 000078
【０１６１】
(4-(5-(シクロプロピルメチル)-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)-N-((1R,4R)-4-(ピロリジン-1-イル)シクロヘキシル)ピリミジン-2-アミン(A-49)の調製)
【化７４】
2018525441.tif 000079
化合物A-49を、アミン-49を用いて、方法Fに記載されている手順に従って調製し、分取HPLC(HCl条件)による精製の後、それを白色の固体として得た。収率:89.3％
LCMS: RT＝2.607分、m/z 381.3[M+H]+
【化７５】
2018525441.tif 000080
【０１６２】
((1R,4R)-4-(アゼチジン-1-イル)シクロヘキサンアミン塩酸塩(アミン-50)の調製)
【化７６】
2018525441.tif 000081
粗アミン-50をアミン-47の合成について記載されているのと同様の方法で合成し、それを白色の固体として得た。
【化７７】
2018525441.tif 000082
【０１６３】
(N-((1R,4R)-4-(アゼチジン-1-イル)シクロヘキシル)-4-(5-(シクロプロピルメチル)-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)ピリミジン-2-アミン(A-50)の調製)
【化７８】
2018525441.tif 000083
化合物A-50を、アミン-50を用いて、方法Fに記載されている手順に従って調製し、分取HPLC(塩基性条件)による精製の後、それを白色の固体として得た。収率:16％
LCMS: RT＝2.494分、m/z 367.3[M+H]+
【化７９】
2018525441.tif 000084
【０１６４】
((1R,4R)-N1-(4-(5-(シクロブチルメチル)-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)ピリミジン-2-イル)シクロヘキサン-1,4-ジアミン(A-45)の調製)
【化８０】
2018525441.tif 000085
(工程1:)
2-シクロブチルアセトニトリル(1.00g、10.51mmol、1.00当量)のHCl(6M、10.00mL、5.71当量)溶液を120℃で16時間撹拌した。混合物を水(50mL)で希釈し、EA(20mL*2)で抽出した。合わせた有機層を水(40mL)で洗浄し、乾燥させ、濃縮すると、45_1(750mg、6.57mmol、62.5％収率)が無色の液体として得られた。
【化８１】
2018525441.tif 000086
【０１６５】
(工程2〜4:)
化合物45_5をスキーム1.1のコアAの合成について記載されているのと同様の方法で合成した。
【０１６６】
化合物45_2を無色の液体として得た。
【化８２】
2018525441.tif 000087
【０１６７】
化合物45_4を黄色の油状物として得た。
LCMS: RT＝0.795分、m/z 237.1[M+H]+
【０１６８】
化合物45_5をこげ茶色の固体として得た:
【化８３】
2018525441.tif 000088
【０１６９】
(工程5〜6:)
化合物45_7をスキーム1.2のコアCの合成について記載されているのと同様の方法で合成した。
【０１７０】
分取HPLC(TFA条件)による精製の後、化合物45_6を黄色の油状物として得た。収率:21.2％;
【化８４】
2018525441.tif 000089
【０１７１】
プレ-TLCによる精製の後、化合物45_7を黄色の油状物として得た。収率:86.6％;
LCMS: RT＝0.706分、m/z 307.2[M+H]+
【０１７２】
(工程7:)
化合物A-45を、trans-シクロヘキサン-1,4-ジアミン(4.0当量)を用いて、方法Dに記載されている手順に従って作製し、分取HPLC(塩基性条件)による精製の後、それを黄色の固体として得た。収率:21.9％;
LCMS: RT＝0.539分、m/z 341.3[M+H]+;
【化８５】
2018525441.tif 000090
【０１７３】
((1R,4R)-N1-(4-(5-(シクロペンチルメチル)-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)ピリミジン-2-イル)シクロヘキサン-1,4-ジアミン(A-46)の調製)
【化８６】
2018525441.tif 000091
化合物A-46を化合物A-45の合成について記載されているのと同様の方法で合成した。
【０１７４】
化合物46_2を無色の油状物として得た。
【化８７】
2018525441.tif 000092
【０１７５】
化合物46_5を黄色の油状物として得た。
LCMS: RT＝1.294分、m/z 306.2[M+H]+
【０１７６】
分取TLCによる精製の後、化合物46_6を黄色の油状物として得た。収率:26.5％
LCMS: RT＝0.866分、m/z 289.1[M+H]+
【化８８】
2018525441.tif 000093
【０１７７】
分取TLCによる精製の後、化合物46_7を白色の固体として得た。収率:44.0％
LCMS: RT＝1.219分、m/z 321.2[M+H]+
【０１７８】
分取HPLC(塩基性条件)による精製の後、化合物A-46を黄色の固体として得た。収率:52.7％
LCMS: RT＝2.381分、m/z 355.2[M+H]+
【化８９】
2018525441.tif 000094
【０１７９】
((1R,4R)-N1-(5-クロロ-4-(5-(シクロプロピルメチル)-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)ピリミジン-2-イル)シクロヘキサン-1,4-ジアミン(A-51)の調製)
【化９０】
2018525441.tif 000095
(工程1:)
化合物N-メチルピラゾール(51_1、8.00g、97.44mmol、1.00当量)のTHF(160mL)溶液に、n-BuLi(2.5M、46.77mL、1.20当量)を-78℃で滴加した。得られた混合物をその温度で1時間撹拌した後、シクロプロパンカルバルデヒド(8.20g、116.93mmol、1.20当量)のTHF(80mL)溶液を滴加した。その後、反応混合物を20℃で16時間撹拌した。TLC(PE:EA＝2:1)により、反応物質1(Rf＝0.3)が消費され、生成物(Rf＝0.05)が形成されることが示された。混合物を水性NH4Cl(300mL)に注ぎ入れ、10分間撹拌した。水相を酢酸エチル(100mL*2)で抽出した。合わせた有機相をブライン(100mL)で洗浄し、無水Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー(SiO2、PE:EA＝8:1〜0:1)により精製すると、化合物51_3(12.00g、78.85mmol、80.9％収率、100％純度)が無色の油状物として得られた。
LCMS: RT＝0.118分、m/z 153.1[M+H]+
【０１８０】
(工程2:)
DCM(900mL)中の化合物51_3(9.00g、59.14mmol、1.00当量)とTFA(40.46g、354.84mmol、26.27mL、6.00当量)とEt3SiH(41.26g、354.84mmol、56.52mL、6.00当量)の反応混合物を40℃で36時間撹拌した。該混合物を水性NaHCO3でpH＝8に調整し、分離した。有機層を濃縮し、分取HPLC(塩基性条件)により精製すると、化合物51_5(2.10g、15.42mmol、26.1％収率)がこげ茶色の油状物として得られた。
LCMS: RT＝0.565分、m/z 137.1[M+H]+
【０１８１】
(工程3:)
化合物51_5(2.10g、15.42mmol、1.00当量)のDCM(21mL)溶液に、NBS(3.02g、16.96mmol、1.10当量)を0℃で添加した。混合物を20℃で2時間撹拌した。該混合物を濃縮し、カラムクロマトグラフィー(SiO2、PE:EA＝20:1)により精製すると、化合物51_6(3.00g、13.95mmol、90.5％収率)が黄色の油状物として得られた。
LCMS: RT＝0.784分、m/z 217.1[M+H]+
【化９１】
2018525441.tif 000096
【０１８２】
(工程4:)
化合物51_6(3.00g、13.95mmol、1.00当量)のTHF(60mL)溶液に、n-BuLi(2M、10.46mL、1.50当量)を-78℃で滴加した。その温度で0.5時間撹拌した後、2-イソプロポキシ-4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン(5.19g、27.90mmol、2.00当量)のTHF(6mL)溶液を添加した。得られた混合物を20℃に加温し、0.5時間撹拌した。TLC(PE:EA＝5:1)により、反応物質(Rf＝0.6)が消費され、生成物(Rf＝0.5)が形成されることが示された。混合物を飽和NH4Cl(50mL)でクエンチし、EA(100mL)で抽出した。有機層を濃縮し、カラムクロマトグラフィー(SiO2、PE:EA＝20:1〜10:1)により精製すると、化合物51_ 7(3.30g、11.40mmol、81.7％収率、90.5％純度)が無色の油状物として得られた。
LCMS: RT＝0.801分、m/z 263.2[M+H]+
【化９２】
2018525441.tif 000097
【０１８３】
(工程5:)
化合物51_7(500.00mg、1.91mmol、1.00当量)のDME(10mL)溶液に、2,4,5-トリクロロピリミジン(51_8、420.40mg、2.29mmol、1.20当量)、Na2CO3(2M、2.10mL、2.20当量)、及び触媒PdCl2(Amphos)2(67.62mg、95.50μmol、0.05当量)を窒素下で添加した。得られた混合物を、窒素下、85℃で2時間撹拌した。TLC(PE:EA＝5:1)により、反応物質(Rf＝0.4)が消費され、生成物(Rf＝0.5)が形成されることが示された。混合物を水(50mL)で希釈し、EA(50ml)で抽出した。有機層を濃縮し、シリカゲルカラム(PE:EA＝5:1)により精製すると、化合物51_9(350.0mg、1.05mmol、55％収率、85％純度)が黄色の油状物として得られた。
LCMS: RT＝0.819分、m/z 283.1[M+H]+
【０１８４】
(工程6:)
ジオキサン(4.5mL)中の化合物51_9(300.00mg、1.06mmol、1.00当量)とtrans-シクロヘキサン-1,4-ジアミン(484.17mg、4.24mmol、4.00当量)の反応混合物を、マイクロ波下、130℃で2時間撹拌した。該混合物を濾過し、濃縮した。粗製物を分取HPLC(HCl条件)により精製すると、A-51(80.00mg、200.04μmol、18.9％収率、99.3％純度、HCl)が黄色の固体として得られた。
LCMS: RT＝2.817分、m/z 361.1[M+H]+
【化９３】
2018525441.tif 000098
【０１８５】
((1R,4R)-N1-(4-(5-(シクロプロピルメチル)-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)-5-メチルピリミジン-2-イル)シクロヘキサン-1,4-ジアミン(A-52)の調製)
【化９４】
2018525441.tif 000099
(工程1:)
化合物51_7(500.00mg、1.91mmol、1.00当量)のDME(10mL)溶液に、化合物52_8(373.60mg、2.29mmol、1.20当量)、Na2CO3(水性)(2M、2.1mL、2.20当量)、及び触媒PdCl2(Amphos)2(67.62mg、95.50μmol、0.05当量)を窒素下で添加した。得られた混合物を、窒素下、85℃で2時間撹拌した。TLC(PE:EA＝5:1)により、反応物質(Rf＝0.4)が消費され、生成物(Rf＝0.25)が形成されることが示された。混合物を水(50mL)で希釈し、EA(50mL)で抽出した。有機層を濃縮し、カラムクロマトグラフィー(SiO2、PE:EA＝20:1〜5:1)により精製すると、化合物52_9(350.00mg、1.15mmol、60.3％収率、86.5％純度)が黄色の油状物として得られた。
LCMS: RT＝0.761分、m/z 263.2[M+H]+
【０１８６】
(工程2:)
ジオキサン(5mL)中の化合物52_9(350.00mg、1.33mmol、1.00当量)とtrans-シクロヘキサン-1,4-ジアミン(607.49mg、5.32mmol、4.00当量)の反応混合物を、マイクロ波下、130℃で2時間撹拌した。TLC(PE:EA＝1:1)により、反応物質(Rf＝0.6)が消費され、生成物(Rf＝0.05)が形成されることが示された。混合物を濾過し、濃縮した。粗製物を分取HPLC(HCl条件)、その後、分取HPLC(塩基性条件)により精製すると、A-52(30.0mg、88.00μmol、6.6％収率、99.8％純度)が黄色の固体として得られた。
LCMS: RT＝2.429分、m/z 341.2[M+H]+
【化９５】
2018525441.tif 000100
【０１８７】
((1R,4R)-N1-(5-クロロ-4-(5-(シクロプロピルメチル)-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)ピリミジン-2-イル)-4-メチルシクロヘキサン-1,4-ジアミン(A-30_1)及び(1S,4S)-N1-(5-クロロ-4-(5-(シクロプロピルメチル)-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)ピリミジン-2-イル)-4-メチルシクロヘキサン-1,4-ジアミン(A-30_2)の調製)
【化９６】
2018525441.tif 000101
(工程1:)
DCM(18.00mL)中の化合物30_1(900.00mg、3.96mmol、1.00当量)とBnNH2(424.26mg、3.96mmol、432.92μL、1.00当量)の混合物に、AcOH(237.77mg、3.96mmol、226.45μL、1.00当量)及びNaBH(OAc)3(1.68g、7.92mmol、2.00当量)を添加した。得られた混合物を20℃で2時間撹拌した。該混合物をH2O(50mL)でクエンチし、分離した。有機層を濃縮した。残渣をAl2O3上でのカラムクロマトグラフィー(DCM:MeOH＝20:1)により精製すると、化合物30_2(650.00mg、2.03mmol、51.3％収率、99.6％純度)が赤色の油状物として得られた。
LCMS: RT＝1.520分、m/z 319.2[M+H]+
【化９７】
2018525441.tif 000102
【０１８８】
(工程2:)
化合物30_2(350.00mg、1.10mmol、1.00当量)のMeOH(3.5mL)溶液に、Pd(OH)2(35.00mg)を添加した。混合物を、H2(16psi)下、20℃で16時間撹拌した。TLC(DCM:MeOH＝10:1)により、反応物質(Rf＝0.6)が消費され、生成物(Rf＝0.3)が形成されることが示された。混合物を濾過し、母液を濃縮すると、アミン-30(220.00mg、963.5umol、87.6％収率)が赤色の油状物として得られた。
MS: m/z 229.2[M+H]+
【化９８】
2018525441.tif 000103
【０１８９】
(工程3:)
アミン-30(300.00mg、917.99μmol、1.00当量)及びコアD(230.57mg、1.01mmol、1.10当量)のDMSO(4mL)溶液に、DIEA(480.97μL、2.75mmol、3.00当量)及びTBAF(48.00mg、2.75mmol、0.20当量)を添加した。混合物を160℃で3時間撹拌した。該混合物をEA(50mL)とH2O(50mL)の間に分離した。有機層を濃縮すると、30_3(400.00mg、粗製物)が赤色の油状物として得られた。
LCMS: RT＝1.081分、m/z 475.2[M+H]+
【０１９０】
(工程4:)
30_3(400.00mg、842.05μmol、1.00当量)のDCM(4mL)溶液に、TFA(800μL)を0℃で添加した。得られた混合物を20℃で1時間撹拌した。TLC(PE:EA＝2:1)により、反応物質(Rf＝0.6)が消費され、生成物(Rf＝0.05)が形成されることが示された。混合物を濃縮した。残渣を分取HPLC(HCl条件)により精製すると、A-30_1(55.00mg、127.60μmol、15.1％収率、95.4％純度、HCl)及びA-30_2(40.00mg、95.31μmol、11.3％収率、98.0％純度、HCl)が黄色の固体として得られた。
LCMS(A-30_1): RT＝2.495分、m/z 375.2[M+H]+
【化９９】
2018525441.tif 000104
LCMS(A-30_2): RT＝2.527分、m/z 375.2[M+H]+
【化１００】
2018525441.tif 000105
【０１９１】
((1R,4R)-N1-(4-(5-(シクロブチルメチル)-1-イソプロピル-1H-ピラゾール-4-イル)ピリミジン-2-イル)シクロヘキサン-1,4-ジアミン(A53)の調製)
【化１０１】
2018525441.tif 000106
(工程1:)
DMSO(240mL)中のNaCN(13.81g、281.82mmol、1.40当量)の混合物に、53_1(30.00g、201.30mmol、22.56mL、1.00当量)を60℃で滴加した。混合物を75℃で16時間保持した。該混合物を冷却し、水(500mL)で希釈した。溶液をEtOAc(200mL*3)で抽出した。合わせた有機層をブライン(100mL*3)で洗浄し、乾燥させた。有機層を濃縮すると、53_2(15.00g、157.66mmol、78.3％収率)が薄黄色の液体として得られた。
【化１０２】
2018525441.tif 000107
【０１９２】
(工程2:)
53_2(15.00g、157.66mmol、1.00当量)のHCl(6M、150mL、5.71当量)溶液を120℃で16時間撹拌した。混合物を水(500mL)で希釈し、EtOAc(200mL*2)で抽出した。合わせた有機層を水(400mL)で洗浄した。有機層を乾燥させ、濃縮すると、53_3(16.00g、140.18mmol、88.9％収率)が無色の液体として得られた。
【化１０３】
2018525441.tif 000108
【０１９３】
(工程3:)
53_3(16.00g、140.18mmol、1.00当量)及びN-メトキシメタンアミン(20.51g、210.27mmol、1.50当量、HCl)のDCM(160mL)溶液に、CDI(45.46g、280.36mmol、2.00当量)を0℃で少しずつ添加した。混合物を20℃で16時間撹拌した。該混合物を水(50mL)で希釈し、DCM(30mL*3)で抽出した。合わせた有機層を乾燥させ、濃縮すると、粗生成物が得られた。該粗生成物をシリカゲルカラム(PE:EA＝50:1〜10:1)により精製すると、53_4(12.00g、76.33mmol、54.4％収率)が無色の液体として得られた。
【化１０４】
2018525441.tif 000109
【０１９４】
(工程4:)
53_4(4.50g、32.09mmol、1.00当量)のTHF(225mL)溶液に、LDA(2M、24.07mL、1.50当量)を-78℃で添加した。1時間撹拌した後、2-シクロブチル-N-メトキシ-N-メチル-アセトアミド(6.05g、38.51mmol、1.20当量)のTHF(120mL)溶液をそれに-78℃で添加した。得られた混合物を-78℃で4時間撹拌し、飽和NH4Cl(200mL)でクエンチし、水相を酢酸エチル(200mL*3)で抽出した。合わせた層をブライン(200mL)で洗浄し、無水Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、濃縮すると、53_5(10.00g、粗製物)が黄色の油状物として得られた。
LCMS: RT＝0.788分、m/z 237.1[M+H]+
【０１９５】
(工程5:)
53_5(10.00g、42.31mmol、1.00当量)のDMF-DMA(201.68g、1.69mol、224.09mL、40.00当量)溶液を90℃で2時間撹拌した。混合物を濃縮すると、粗生成物が得られた。該粗生成物をシリカゲルカラム(DCM:MeOH＝1:0〜10:1)により精製すると、53_6(8.80g、粗製物)が黒茶色の固体として得られた。
【０１９６】
(工程6:)
53_6(800.00mg、2.75mmol、1.00当量)のEtOH(12mL)溶液に、イソプロピルヒドラジン(364.95mg、3.30mmol、1.20当量、HCl)及びTEA(333.93mg、3.30mmol、457.43uL、1.20当量)を添加した。混合物を90℃で1時間撹拌した。該混合物を濃縮した。粗製物をプレ-HPLC(TFA)により精製すると、53_7(600.00mg、1.88mmol、68.5％収率、95％純度)が黄色の油状物として得られた。
LCMS: RT＝0.901分、m/z 303.2[M+H]+
【０１９７】
(工程7:)
53_7(600.00mg、1.98mmol、1.00当量)のDCM(9mL)溶液に、m-CPBA(1.01g、4.96mmol、85％純度、2.50当量)を0℃で添加した。混合物を20℃で3時間撹拌した。反応物を飽和水性NaS2O3(50mL)でクエンチし、DCM(20mL*2)で抽出した。合わせた有機層を水性NaHCO3(40mL)で洗浄した。有機層を乾燥させ、濃縮した。粗製物を分取TLC(DCM:MeOH＝10:1)(Rf＝0.6)により精製すると、53_8(500.00mg、1.50mmol、75.5％収率)が黄色の油状物として得られた。
LCMS: RT＝0.803分、m/z 335.1[M+H]+
【０１９８】
(工程8:)
53_8(500.00mg、1.50mmol、1.00当量)のジオキサン(7.5mL)溶液に、trans-シクロヘキサン-1,4-ジアミン(685.14mg、6.00mmol、4.00当量)を添加した。混合物を、マイクロ波下、130℃で2時間撹拌した。該混合物を濾過し、濃縮した。粗製物を分取HPLC(塩基)及び分取HPLC(HCl)により精製すると、A-53(250.00mg、615.9μmol、41％収率、99.8％純度、HCl)が黄色の固体として得られた。
LCMS: RT＝2.57分、m/z 369.2[M+H]+
【化１０５】
2018525441.tif 000110
【０１９９】
((1R,4R)-N1-(4-(1-メチル-5-((1-メチルシクロプロピル)メチル)-1H-ピラゾール-4-イル)ピリミジン-2-イル)シクロヘキサン-1,4-ジアミン(A56)の調製)
【化１０６】
2018525441.tif 000111
(工程1:)
1-メチルシクロプロパン-1-カルボン酸(4.00g、39.95mmol、1.00当量)及びCDI(7.13g、43.95mmol、1.10当量)のDCM(40mL)溶液に、N-メトキシメタンアミン(4.68g、47.94mmol、1.20当量、HCl)を0℃で少しずつ添加した。混合物を20℃で16時間撹拌した。該混合物を水(50mL)で希釈し、DCM(20mL*3)で抽出した。合わせた有機層を乾燥させ、濃縮すると、粗生成物が得られた。該粗生成物をシリカゲルカラム(PE:EA＝30:1〜10:1)により精製すると、56_1(3.30g、23.05mmol、57.7％収率)が無色の液体として得られた。
【化１０７】
2018525441.tif 000112
【０２００】
(工程2:)
1-メチルピラゾール(1.70g、20.71mmol、1.72mL、1.00当量)のTHF(35.00mL)溶液に、n-BuLi(2.5M、9.94mL、1.20当量)を-78℃で添加した。1時間撹拌した。THF(35mL)中の化合物56_1(3.26g、22.78mmol、1.10当量)をそれに-78℃で添加した。得られた混合物を20℃で1時間撹拌した。該混合物を飽和NH4Cl(20mL)でクエンチし、EtOAc(20mL*2)で抽出した。有機層を濃縮し、シリカゲルカラム(PE:EA＝1:0〜20:1)により精製すると、56_2(2.50g、13.41mmol、64.8％収率、88.1％純度)が黄色の油状物として得られた。
LCMS: RT＝0.609分、m/z 165.1[M+H]+
【０２０１】
(工程3:)
NH2NH2.H2O(2.57g、48.72mmol、2.49mL、95％純度、4.00当量)及びジグリコール(40mL)中の56_2(2.00g、12.18mmol、1.00当量)とKOH(2.73g、48.72mmol、4.00当量)の反応混合物を110℃まで1.5時間、その後、ディーン・スタークを用いて200℃でさらに1時間加熱した。該混合物を水(50mL)で希釈し、MTBE(50mL*2)で抽出した。合わせた有機層を濃縮すると、56_3(1.10g、粗製物)が無色の油状物として得られた。
LCMS: RT＝0.639分、m/z 151.1[M+H]+
【０２０２】
(工程4:)
56_3(1.10g、7.32mmol、1.00当量)のDCM(11mL)溶液に、NBS(1.30g、7.32mmol、1.00当量)を0℃で添加した。混合物を20℃で1時間撹拌した。該混合物を濃縮した。粗製物をシリカゲルカラム(PE:EA＝1:0〜50:1)により精製すると、56_4(1.45g、5.65mmol、77.1％収率、89.2％純度)が無色の油状物として得られた。
LCMS: RT＝0.835分、m/z 229.0[M+H]+
【化１０８】
2018525441.tif 000113
【０２０３】
(工程5:)
56_4(1.45g、6.33mmol、1.00当量)のTHF(29mL)溶液に、n-BuLi(2M、4.75mL、1.50当量)を-78℃で添加した。30分後、THF(2.5mL)中の2-イソプロポキシ-4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン(2.36g、12.66mmol、2.59mL、2.00当量)をそれに添加した。得られた混合物を20℃に加温し、0.5時間撹拌した。該混合物を飽和NH4Cl(50mL)でクエンチし、EtOAc(100mL)で抽出した。有機層を濃縮し、シリカゲルカラム(PE:EA＝20:1〜10:1)により精製すると、56_5(1.25g、4.11mmol、64.9％収率、90.7％純度)が無色の油状物として得られた。
LCMS: RT＝0.928分、m/z 277.1[M+H]+
【０２０４】
(工程6:)
56_5(500.00mg、1.81mmol、1.00当量)のDME(10mL)溶液に、4-クロロ-2-メチルスルファニル-ピリミジン(290.79mg、1.81mmol、210.72μL、1.00当量)、NA2CO3(2M、1.99mL、2.20当量)、及び4-ジtert-ブチルホスファニル-N,N-ジメチル-アニリン;ジクロロパラジウム(64.09mg、90.50μmol、64.09μL、0.05当量)を窒素下で添加した。得られた混合物を、窒素下、85℃で2時間撹拌した。該混合物を水(50mL)で希釈し、EtOAc(50mL)で抽出した。有機層を濃縮し、シリカゲルカラム(PE:EA＝5:1)により精製すると、56_6(350.00mg、1.14mmol、63％収率、89％純度)が黄色の油状物として得られた。
LCMS: RT＝0.829分、m/z 275.1[M+H]+
【０２０５】
(工程7:)
56_6(350.00mg、1.28mmol、1.00当量)のDCM(5.5mL)溶液に、MCPBA(690.28mg、3.20mmol、80％純度、2.50当量)を0℃で添加した。混合物を20℃で2時間撹拌した。該混合物を水性Na2S2O3(100mL)でクエンチし、DCM(50mL*2)で抽出した。合わせた有機層を濃縮し、シリカゲルカラム(PE:EA＝1:1)により精製すると、56_7(200.00mg、617.72μmol、48.6％収率、94.6％純度)が黄色の固体として得られた。
LCMS: RT＝0.653分、m/z 307.1[M+H]+
【０２０６】
(工程8:)
ジオキサン(3mL)中の56_7(200.00mg、652.78μmol、1.00当量)とtrans-シクロヘキサン-1,4-ジアミン(298.17mg、2.61mmol、4.00当量)の混合物を、マイクロ波下、130℃で2時間撹拌した。該混合物を濾過し、濃縮した。粗製物を分取HPLC(塩基)により精製すると、A-56(50.00mg、144.85μmol、22.2％収率、98.6％純度)が黄色の固体として得られた。
LCMS: RT＝1.999分、m/z 341.2[M+H]+
【化１０９】
2018525441.tif 000114
【０２０７】
((1R,4R)-N1-(4-(1-メチル-5-ネオペンチル-1H-ピラゾール-4-イル)ピリミジン-2-イル)シクロヘキサン-1,4-ジアミン(A57)の調製)
【化１１０】
2018525441.tif 000115
化合物A-57を化合物A-56の合成について記載されているのと同様の方法で合成した。
LCMS: RT＝1.558分、m/z 343.2[M+H]+
【化１１１】
2018525441.tif 000116
【０２０８】
((4-(2-(((1R,4R)-4-アミノシクロヘキシル)アミノ)ピリミジン-4-イル)-1-メチル-1H-ピラゾール-5-イル)(シクロプロピル)メタノール(A58)の調製)
【化１１２】
2018525441.tif 000117
(工程1〜工程6:)
中間体58_6をA-56の合成について記載されているのと同じ手順で化合物51_3から合成した。
LCMS: RT＝0.676分、m/z 457.4[M+H]+
【０２０９】
(工程7:)
58_6(300.00mg、656.89μmol、1.00当量)のTHF(300μL)溶液に、TBAF.3H2O(414.51mg、1.31mmol、2.00当量)を20℃で添加した。混合物を30分間撹拌した。該混合物を濾過し、濃縮した。粗生成物を分取HPLC(塩基)により精製すると、A-58(27.00mg、76.89μmol、11.7％収率、97.5％純度)が黄色の固体として得られた。
LCMS: RT＝2.29分、m/z 343.2[M+H]+
【化１１３】
2018525441.tif 000118
【０２１０】
((1R,4R)-N1-(5-クロロ-4-(5-(シクロプロピルメチル)-1-イソプロピル-1H-ピラゾール-4-イル)ピリミジン-2-イル)シクロヘキサン-1,4-ジアミン(A59)の調製)
【化１１４】
2018525441.tif 000119
化合物A-59を化合物A-51の合成について記載されているのと同様の方法で合成した。
LCMS: RT＝2.478分、m/z 389.2[M+H]+
【化１１５】
2018525441.tif 000120
【０２１１】
((1R,4R)-N1-(4-(5-(シクロプロピルメチル)-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)シクロヘキサン-1,4-ジアミン(A60)の調製)
【化１１６】
2018525441.tif 000121
(工程1:)
60_1(2.00g、9.22mmol、1.00当量)のTHF(40mL)溶液に、ZnCl2-Et2O(1M、11.06mL、1.20当量)を、窒素保護下、0℃で添加した。混合物を0℃で2時間撹拌した。メチルスルファニルナトリウム(646.23mg、9.22mmol、587.48μL、1.00当量)を添加した。得られた混合物を20℃で16時間撹拌した。TLC(純粋なPE)により、反応物質1(Rf＝0.5)が消費され、生成物(Rf＝0.3)が形成されることが示された。混合物を1M HCl(20mL)でクエンチし、濃縮した。水層をDCM(20mL*3)で抽出した。合わせた有機層を濃縮し、シリカゲルカラム(PE:EA＝1:0〜50:1)により精製すると、60_2(1.00g、1.97mmol、21.4％収率、45.1％純度)が無色の油状物として得られた。
LCMS: RT＝0.794分、m/z 228.9[M+H]+
【化１１７】
2018525441.tif 000122
【０２１２】
(工程2:)
51_7(574.11mg、2.19mmol、1.00当量)のTHF(10mL)溶液に、60_2(500.00mg、2.19mmol、1.00当量)、K3PO4(1M、4.38mL、2.00当量)、及びAd2nBuP.ビフェニル(50.00mg)を窒素下で添加した。得られた混合物を、窒素下、85℃で2時間撹拌した。TLC(PE:EA＝1:1)により、反応物質(Rf＝0.6)が消費され、生成物(R＝0.5)が形成されることが示された。混合物を濃縮し、H2O(50mL)で希釈した。水層をEA(20mL*2)で抽出した。有機層を濃縮した。残渣をシリカゲルカラム(PE:EA＝20:1〜5:1)により精製すると、60_3(300.00mg、611.96umol、27.9％収率、66.9％純度)が黄色の固体として得られた。
LCMS: RT＝0.927分、m/z 329.0[M+H]+
【化１１８】
2018525441.tif 000123
【０２１３】
(工程3:)
60_3(400.00mg、1.22mmol、1.00当量)のDCM(7mL)溶液に、m-CPBA(657.92mg、3.05mmol、80％純度、2.50当量)を0℃で添加した。混合物を20℃で1時間撹拌した。TLC(DCM:MeOH＝20:1)により、反応物質(Rf＝0.6)が消費され、生成物(Rf＝0.5)が形成されることが示された。混合物を水性Na2S2O3(100mL)でクエンチし、DCM(50mL*2)で抽出した。有機層を濃縮し、シリカゲルカラム(PE:EA＝1:1)により精製すると、60_4(300.00mg、738.23umol、60.5％収率、88.7％純度)が黄色の固体として得られた。
LCMS: RT＝0.72分、m/z 361.0[M+H]+
【０２１４】
(工程4:)
ジオキサン(3mL)中の60_4(200.00mg、555.02μmol、1.00当量)とtrans-シクロヘキサン-1,4-ジアミン(253.51mg、2.22mmol、4.00当量)の混合物を、マイクロ波下、130℃で2時間撹拌した。該混合物を濾過し、濾液を濃縮した。残渣を分取HPLC(HCl条件)により精製すると、A-60(80.00mg、185.66μmol、33.5％収率、100％純度、HCl)が黄色の固体として得られた。
LCMS: RT＝2.417分、m/z 395.2[M+H]+
【化１１９】
2018525441.tif 000124
【０２１５】
(N-((1R,4R)-4-(1H-ピラゾール-1-イル)シクロヘキシル)-5-クロロ-4-(5-(シクロプロピルメチル)-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)ピリミジン-2-アミン(A64)の調製)
【化１２０】
2018525441.tif 000125
(工程1:)
64_1(2.00g、9.29mmol、1.00当量)のDCM(20mL)溶液に、TEA(1.88g、18.58mmol、2.58mL、2.00当量)及び塩化メタンスルホニル(1.06g、9.29mmol、719.03μL、1.00当量)を0℃で添加した。混合物を20℃で2時間撹拌した。該混合物をH2O(30mL)で希釈し、DCM(20mL*2)で抽出した。合わせた有機層を乾燥させ、濃縮すると、64_2(2.50g、8.52mmol、91.7％収率)が白色の固体として得られた。
【化１２１】
2018525441.tif 000126
【０２１６】
(工程2:)
1H-ピラゾール(195.25mg、2.87mmol、1.20当量)のMeCN(7.00mL)溶液に、Cs2CO3(1.56g、4.78mmol、2.00当量)及び64_2(700.00mg、2.39mmol、1.00当量)を添加した。混合物を100℃で2時間撹拌した。該混合物をH2O(20mL)で希釈し、EtOAc(10mL*3)で抽出した。合わせた有機層をブライン(20mL)で洗浄し、濃縮した。残渣をプレ-HPLC(塩基性条件)により精製すると、64_3(200.00mg、732.25μmol、30.6％収率、97.1％純度)が黄色の固体として得られた。
MS: m/z RT＝0.888分、266.0[M+H]+
【０２１７】
(工程3:)
64_3(180.00mg、678.35μmol、1.00当量)のDCM(2mL)溶液に、TFA(400.00μL)を0℃で添加した。混合物を20℃で1時間撹拌した。該混合物をH2O(30mL)で希釈し、DCM(10mL*2)で抽出した。水層を凍結乾燥させると、アミン-64(180.00mg、633.91μmol、93.5％収率、98.3％純度、TFA)が無色の油状物として得られた。
LCMS: RT＝0.272分、m/z 166.2[M+H]+
【０２１８】
(工程4:)
51_9(100.00mg、353.16μmol、1.00当量)のDMSO(1.5mL)溶液に、アミン-64(95.48mg、529.74μmol、1.50当量)及びDIEA(182.57mg、1.41mmol、246.71μL、4.00当量)を添加した。得られた混合物を160℃で3時間撹拌し、濾過し、母液を濃縮した。残渣をプレ-HPLC(塩基性条件)、その後、分取HPLC(HCl条件)により精製すると、A-64(10.00mg、23.42μmol、6.6％収率、100％純度)が黄色の固体として得られた。
LCMS: RT＝1.981、m/z 412.2[M+H]+
【化１２２】
2018525441.tif 000127
【０２１９】
(N-((1R,4R)-4-(1H-イミダゾール-1-イル)シクロヘキシル)-5-クロロ-4-(5-(シクロプロピルメチル)-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)ピリミジン-2-アミン(A-65)の調製)
【化１２３】
2018525441.tif 000128
化合物A-65を、化合物A-64の合成について記載されているのと同様の方法で、黄色の固体として合成した。
LCMS: RT＝1.461分、m/z 412.2[M+H]+
【化１２４】
2018525441.tif 000129
【０２２０】
((1R,4R)-N1-(5-クロロ-4-(5-(シクロプロピルメチル)-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)ピリミジン-2-イル)-N4-フェニルシクロヘキサン-1,4-ジアミン(A-68)の調製)
【化１２５】
2018525441.tif 000130
(工程1:)
tert-ブチル((1R,4R)-4-アミノシクロヘキシル)カルバメート(500.00mg、2.33mmol、1.00当量)及びヨードベンゼン(713.01mg、3.49mmol、389.63uL、1.50当量)のTHF(15mL)溶液に、t-BuOK(784.35mg、6.99mmol、3.00当量)及びRuPhosインドリン(100.00mg)を添加した。得られた混合物を、窒素下、80℃で12時間撹拌した。該混合物を濾過し、母液を濃縮した。残渣をシリカゲルカラム(PE:EA＝10:1〜4:1)により精製すると、68_1(300.00mg、869.39μmol、37.3％収率、84.1％純度)が白色の固体として得られた。
LCMS: RT＝1.024分、m/z 291.0[M+H]+
【０２２１】
(工程2及び工程3:)
化合物A-68を、化合物A-64の合成について記載されているのと同様の方法で、黄色の固体として合成した。
LCMS: RT＝1.194分、m/z 437.2[M+H]+
【化１２６】
2018525441.tif 000131
【０２２２】
((5R,8R)-8-((5-クロロ-4-(5-(シクロプロピルメチル)-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)ピリミジン-2-イル)アミノ)-1-アザスピロ[4.5]デカン-2-オン(A-71)の調製)
【化１２７】
2018525441.tif 000132
アミン-71(180.00mg、879.34μmol、1.00当量、HCl)及び51_9(248.99mg、879.34μmol、1.00当量)のDMSO(2.7mL)溶液に、DIEA(614.30μL、3.52mmol、4.00当量)及びTBAF(1M、175.87μL、0.20当量)を添加した。混合物を160℃で3時間撹拌した。該混合物を冷却し、濾過した。固体を、MeOH(10mL)により室温で、その後、EtOAc(3mL)により50℃で洗浄すると、A-71(40.00mg、90.39μmol、11.4％収率、93.7％純度)が白色の固体として得られた。
LCMS: RT＝2.836分、m/z 415.2[M+H]+
【化１２８】
2018525441.tif 000133
【０２２３】
((1R,4R)-N1-ベンジル-N4-(5-クロロ-4-(5-(シクロプロピルメチル)-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)ピリミジン-2-イル)シクロヘキサン-1,4-ジアミン(A-74)の調製)
【化１２９】
2018525441.tif 000134
A-51(200.00mg、554.20μmol、1.00当量)及びベンズアルデヒド(58.81mg、554.20umol、56.01μL、1.00当量)の溶液に、AcOH(33.28mg、554.20μmol、31.70μL、1.00当量)及びNaBH3CN(69.65mg、1.11mmol、2.00当量)を添加した。混合物を15℃で16時間撹拌した。該混合物を水性NaHCO3(1mL)でクエンチし、濃縮した。残渣を分取HPLC(カラム: Phenomenex Gemini 150*25mm*10um;移動相:[水(0.05％水酸化アンモニアv/v)-ACN];B％: 55％-85％、12分)により精製すると、A-74(100.00mg、217.80μmol、39.3％収率、98.2％純度)がピンク色の固体として得られた。
LCMS: RT＝2.74分、m/z 451.2[M+H]+
【化１３０】
2018525441.tif 000135
【０２２４】
((1R,4R)-N1-((1H-ピラゾール-4-イル)メチル)-N4-(5-クロロ-4-(5-(シクロプロピルメチル)-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)ピリミジン-2-イル)シクロヘキサン-1,4-ジアミン(A-75)の調製)
【化１３１】
2018525441.tif 000136
A-51(200.00mg、554.20μmol、1.00当量)及び1H-ピラゾール-4-カルバルデヒド(53.25mg、554.20μmol、1.00当量)の溶液に、AcOH(34.86μL、609.62umol、1.10当量)及びNaBH3CN(69.65mg、1.11mmol、2.00当量)を添加した。混合物を15℃で16時間撹拌した。該混合物を水性NaHCO3(1mL)でクエンチし、濃縮した。残渣を分取HPLC(カラム: Phenomenex Gemini 150*25mm*10um;移動相:[水(0.05％水酸化アンモニアv/v)-ACN]; B％: 39％-39％、12分)により精製すると、A-75(4.00mg、9.04μmol、1.6％収率、99.7％純度)が黄色の固体として得られた。
LCMS: RT＝2.95分、m/z 441.2[M+H]+
【化１３２】
2018525441.tif 000137
【０２２５】
((1R,4R)-N1-(5-クロロ-4-(5-(シクロプロピルメチル)-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)ピリミジン-2-イル)-N4-(ピリジン-3-イルメチル)シクロヘキサン-1,4-ジアミン(A-76)の調製)
【化１３３】
2018525441.tif 000138
A-51(200.00mg、554.20μmol、1.00当量)及びピリジン-3-カルバルデヒド(59.36mg、554.20μmol、52.07uL、1.00当量)の溶液に、AcOH(33.28mg、554.20μmol、31.70μL、1.00当量)及びNaBH3CN(69.65mg、1.11mmol、2.00当量)を添加した。混合物を15℃で16時間撹拌した。該混合物を水性NaHCO3(1mL)でクエンチし、濃縮した。残渣を分取HPLC(カラム: Phenomenex Gemini 150*25mm*10um;移動相:[水(0.05％水酸化アンモニアv/v)-ACN];B％:40％-58％、12分)により精製すると、A-76(100.00mg、219.09μmol、39.5％収率、98.8％純度)が黄色の固体として得られた。
LCMS: RT＝2.381分、m/z 452.2[M+H]+
【化１３４】
2018525441.tif 000139
【０２２６】
((1R,4R)-N1-((1H-ピラゾール-4-イル)メチル)-N4-(4-(5-(シクロプロピルメチル)-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)ピリミジン-2-イル)シクロヘキサン-1,4-ジアミン(A80)の調製)
【化１３５】
2018525441.tif 000140
A-14(200.00mg、612.67μmol、1.00当量)及び1H-ピラゾール-4-カルバルデヒド(58.87mg、612.67μmol、1.00当量)の溶液に、AcOH(36.79mg、612.67μmol、35.04uL、1.00当量)及びNaBH3CN(77.00mg、1.23mmol、2.00当量)を添加した。混合物を15℃で16時間撹拌した。該混合物を水性NaHCO3(1mL)でクエンチし、濃縮した。残渣を分取HPLC(塩基性条件)により精製すると、A-80(20.00mg、48.90μmol、8％収率、99.4％純度)が黄色の固体として得られた。
LCMS: RT＝2.418分、m/z 407.2[M+H]+
【化１３６】
2018525441.tif 000141
【０２２７】
((1R,4R)-N1-(4-(5-(シクロプロピルメチル)-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)ピリミジン-2-イル)-N4-((1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)メチル)シクロヘキサン-1,4-ジアミン(A81)の調製)
【化１３７】
2018525441.tif 000142
A-14(200.00mg、612.67μmol、1.00当量)及び化合物81_1(67.46mg、612.67μmol、1.00当量)の溶液に、AcOH(36.79mg、612.67μmol、35.04μL、1.00当量)及びNaBH3CN(77.00mg、1.23mmol、2.00当量)を添加した。混合物を15℃で16時間撹拌した。該混合物を水性NaHCO3(1mL)でクエンチし、濃縮した。残渣を分取HPLC(塩基性条件)により精製すると、A-81(40.00mg、87.81μmol、14.3％収率、92％純度)が黄色の固体として得られた。
LCMS: RT＝2.469分、m/z 421.2[M+H]+
【化１３８】
2018525441.tif 000143
【０２２８】
((1R,4R)-N1-((1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-N4-(5-クロロ-4-(5-(シクロプロピルメチル)-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)ピリミジン-2-イル)シクロヘキサン-1,4-ジアミン(A-82)の調製)
【化１３９】
2018525441.tif 000144
A-51(200.00mg、554.20μmol、1.00当量)及び1H-ピラゾール-3-カルバルデヒド(53.25mg、554.20μmol、1.00当量)の溶液に、AcOH(31.7μL、554.20μmol、1.00当量)及びNaBH3CN(69.65mg、1.11mmol、2.00当量)を添加した。混合物を15℃で16時間撹拌した。該混合物を水性NaHCO3(1mL)でクエンチし、濃縮した。残渣を分取HPLC(塩基性条件)により精製すると、A-82(35.00mg、79.28μmol、14.3％収率、99.9％純度)が黄色の固体として得られた。
LCMS: RT＝2.867分、m/z 441.2[M+H]+
【化１４０】
2018525441.tif 000145
【０２２９】
((1R,4R)-N1-(1-(1H-ピラゾール-4-イル)エチル)-N4-(5-クロロ-4-(5-(シクロプロピルメチル)-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)ピリミジン-2-イル)シクロヘキサン-1,4-ジアミン(A83)の調製)
【化１４１】
2018525441.tif 000146
A-51(100.00mg、251.67μmol、1.00当量、HCl)、化合物83_1(27.71mg、251.67μmol、1.00当量)の溶液に、TEA(503.34μmol、69.77uL、2.00当量)及びTi(i-PrO)4(149μL、503.34μmol、2.00当量)を添加した。混合物を80℃で12時間撹拌した。その後、NaBH3CN(39.54mg、629.18μmol、2.50当量)を添加した。得られた混合物を15℃で4時間撹拌した。該混合物を水性NaHCO3(50mL)でクエンチし、DCM(50mL*2)で抽出した。有機層を濃縮し、分取HPLC(塩基性条件)により精製すると、A-83(20.00mg、43.96μmol、17.5％収率)が黄色の固体として得られた。
LCMS: RT＝1.897、m/z 455.2[M+H]+
【化１４２】
2018525441.tif 000147
【０２３０】
(N-((1R,4R)-4-((5-クロロ-4-(5-(シクロプロピルメチル)-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)ピリミジン-2-イル)アミノ)シクロヘキシル)-1H-ピラゾール-4-カルボキサミド(A87)の調製)
【化１４３】
2018525441.tif 000148
化合物87_1(46.59mg、415.65μmol、1.00当量)のDCM(4mL)溶液に、DIEA(181.5μL、1.04mmol、2.50当量)、EDCI(95.62mg、498.78μmol、1.20当量)、及びHOBt(11.23mg、83.13μmol、0.20当量)を0℃で添加した。反応混合物を0℃で0.5時間撹拌した。A-51(150.00mg、415.65μmol、1.00当量)のDCM(4.5mL)溶液を添加した。得られた混合物を20℃で16時間撹拌した。該混合物をH2O(50mL)で希釈し、DCM(40mL*3)で抽出した。有機層を濃縮し、分取HPLC(HCl条件)により精製すると、A-87(80.00mg、160.61μmol、38.6％収率、98.6％純度、HCl)が黄色の固体として得られた。
LCMS: RT＝2.391、m/z 455.2[M+H]+
【化１４４】
2018525441.tif 000149
【０２３１】
((1R,4R)-N1-(5-クロロ-4-(5-(シクロプロピルメチル)-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)ピリミジン-2-イル)-N4-((5-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)メチル)シクロヘキサン-1,4-ジアミン(A-91)の調製)
【化１４５】
2018525441.tif 000150
A-51(150.00mg、415.65μmol、1.00当量)及び5-メチル-1H-ピラゾール-4-カルバルデヒド(54.92mg、498.78μmol、1.20当量)のMeOH(1.5mL)溶液に、AcOH(23.77μL、415.65μmol、1.00当量)及びNaBH3CN(78.36mg、1.25mmol、3.00当量)を添加した。混合物を15℃で16時間撹拌した。該混合物を水性NaHCO3(10mL)でクエンチし、EA(20mL*2)で抽出した。合わせた有機層を濃縮し、分取HPLC(HCl条件)により精製すると、A-91(20.00mg、36.22μmol、8.7％収率、89％純度、HCl)が白色の固体として得られた。
LCMS: RT＝2.425、m/z 455.2[M+H]+
【化１４６】
2018525441.tif 000151
【０２３２】
((1R,4R)-N1-(5-クロロ-4-(5-(シクロプロピルメチル)-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)ピリミジン-2-イル)-N4-(2,2,2-トリフルオロエチル)シクロヘキサン-1,4-ジアミン(A94)の調製)
【化１４７】
2018525441.tif 000152
A-51(150.00mg、415.65μmol、1.00当量)のTHF(4.5mL)溶液に、TEA(144.04μL、1.04mmol、2.50当量)及び2,2,2-トリフルオロエチルトリフルオロメタンスルホネート(115.77mg、498.78μmol、1.20当量)を添加した。混合物を50℃で16時間撹拌した。該混合物を濃縮し、分取HPLC(HCl条件)により精製すると、A-94(80.00mg、163.38μmol、39.3％収率、97.9％純度、HCl)が黄色の固体として得られた。
LCMS: RT＝2.137分、m/z 443.2[M+H]+
【化１４８】
2018525441.tif 000153
【０２３３】
((1R,4R)-N1-((1H-ピラゾール-4-イル)メチル)-N4-(5-クロロ-4-(5-(シクロプロピルメチル)-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)ピリミジン-2-イル)-N1-(2,2,2-トリフルオロエチル)シクロヘキサン-1,4-ジアミン(A-95)の調製)
【化１４９】
2018525441.tif 000154
A-75(150.00mg、340.16μmol、1.00当量)のMeCN(4.5mL)溶液に、Cs2CO3(221.66mg、680.32μmol、2.00当量)及び2,2,2-トリフルオロエチルトリフルオロメタンスルホネート(118.43mg、510.24μmol、1.50当量)を添加した。混合物を70℃で16時間撹拌した。該混合物を濾過し;濾液を濃縮し、分取HPLC(HCl条件)により精製すると、A-95(20.00mg、35.7μmol、10.5％収率、100％純度、HCl)が白色の固体として得られた。
LCMS: RT＝2.285、m/z 523.2[M+H]+
【化１５０】
2018525441.tif 000155
【０２３４】
((1R,4R)-N1,N1-ビス((1H-ピラゾール-4-イル)メチル)-N4-(5-クロロ-4-(5-(シクロプロピルメチル)-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)ピリミジン-2-イル)シクロヘキサン-1,4-ジアミン(A-96)の調製)
【化１５１】
2018525441.tif 000156
A-75(50.00mg、113.4μmol、1.00当量)及び化合物1H-ピラゾール-4-カルバルデヒド(32.69mg、340.17μmol、3.00当量)の溶液に、TEA(31.44μL、226.78μmol、2.00当量)及びTi(Oi-Pr)4(67.1μL、226.78μmol、2.00当量)を添加した。混合物を80℃で12時間撹拌した。NaBH3CN(21.38mg、340.17μmol、3.00当量)を添加し、得られた混合物を15℃で4時間撹拌した。反応液を水性NaHCO3(1mL)でクエンチし、濾過した。濾液を分取HPLC(TFA、その後、塩基性条件)により精製すると、A-96(7.00mg、13.10umol、11.6％収率、97.5％純度)が白色の固体として得られた。
LCMS: RT＝2.382、m/z 521.3[M+H]+
【化１５２】
2018525441.tif 000157
【０２３５】
((1R,4R)-N1-(4-(5-(シクロプロピルメチル)-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)-5-フルオロピリミジン-2-イル)シクロヘキサン-1,4-ジアミン(A-86)の調製)
【化１５３】
2018525441.tif 000158
(工程1:)
化合物51_7(800mg、3.05mmol、1.00当量)のDME(16mL)溶液に、化合物2(509.54mg、3.05mmol、1.00当量)、Na2CO3(2M、4.6mL、3.00当量)、及び4-ジtert-ブチルホスファニル-N,N-ジメチル-アニリン;ジクロロパラジウム(108.04mg、152.50μmol、108uL、0.05当量)を窒素下で添加した。得られた混合物を、窒素下、85℃で2時間撹拌した。該混合物をH2O(50mL)で希釈し、EA(50mL)で抽出した。有機層を濃縮すると、化合物86_1(1.20g、粗製物)が黄色の固油状物として得られた。
LCMS: RT＝1.819分、m/z 267.1[M+H]+
【０２３６】
(工程2:)
ジオキサン(16mL)中の化合物86_1(1.10g、4.12mmol、1.00当量)及び化合物4(1.88g、16.48mmol、4.00当量)の混合物を、マイクロ波下、130℃で8時間撹拌した。該混合物を濾過し、濃縮した。残渣をプレ-HPLC(HCl条件)により精製すると、A-86(1.30g、粗製物)が黄色の固体として得られた。A-86(300mg)を分取HPLC(HCl条件)により再精製すると、A-86(20.00mg、52.51μmol、12.1％収率、100％純度、HCl)が黄色の固体として得られた。
LCMS: RT＝2.321分、m/z 345.2[M+H]+
【化１５４】
2018525441.tif 000159
【０２３７】
((1R,4R)-N1-((1H-ピラゾール-4-イル)メチル)-N4-(4-(5-(シクロプロピルメチル)-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)-5-フルオロピリミジン-2-イル)シクロヘキサン-1,4-ジアミン(A-85)の調製)
【化１５５】
2018525441.tif 000160
A-86(300.00mg、783.90μmol、1.00当量)及び1H-ピラゾール-4-カルバルデヒド(82.86mg、862.29μmol、1.10当量)のMeOH(3mL)溶液に、AcOH(49.31μL、862.29μmol、1.10当量)及びNaBH3CN(98.52mg、1.57mmol、2.00当量)を添加した。混合物を15℃で16時間撹拌した。該混合物を水性NaHCO3(1mL)でクエンチし、濃縮した。残留生成物を分取HPLC(塩基性条件)により精製すると、A-85(50.00mg、111.53μmol、14.2％収率、94.7％純度)が黄色の固体として得られた。
LCMS: RT＝2.472分、m/z 425.3[M+H]+
【化１５６】
2018525441.tif 000161
【０２３８】
(生物学的実験手順)
(典型的なCKIα阻害活性を有する化合物についてのRKO細胞における一次スクリーニング(β-カテニン及びp53の安定化並びにヒストンH2AXのリン酸化; Elyadaらの文献、Nature 2011 Feb 17; 470(7334):409-13; Pribludaらの文献、Cancer Cell 2013 Aug 12; 24(2):242-56を参照))
RKO結腸直腸細胞を10μMの各々の該化合物とともに37℃で16時間インキュベートした。細胞をPBSで洗浄し、細胞ペレットを、プロテアーゼインヒビターカクテル(1/200; Calbiochem)並びにホスファターゼインヒビター(20mMのp-ニトロフェニルホスフェート(PNPP)、20mMのβ-グリセロホスフェート、及び300nMのオカダ酸)を含む氷冷タンパク質溶解バッファーとともにインキュベートした。ウェスタンブロット解析を標準的な技法によって実施した。ブロットを、β-カテニン(1/2,500; BD Transduction)、p53(DO-1&1801ハイブリドーマ混合物;各々由来の上清の1:20の希釈物)、CKIα(C-19; 1/1,000; Santa Cruz Biotechnology)、及びホスホ-ヒストンH2AX(S139; 1/1,000; Millipore)を検出する抗体とともにインキュベートした。二次抗体は、HRP結合ヤギ抗マウス抗体、ヤギ抗ウサギ抗体、及びウサギ抗ヤギ抗体(全て1/10,000; Jackson)であった。ブロットをECL(GE Healthcare)を用いて顕色させた。
【０２３９】
(最も活性のある化合物の用量応答アッセイ)
活性化合物を用量応答実験でさらに解析した(図1A及び1B)。一次スクリーニングと同様、RKO細胞を減少濃度の各々の活性化合物とともに37℃で16時間インキュベートした。細胞抽出物の単離及びウェスタンブロット解析は一次スクリーニングと同様であった。
【０２４０】
(CML急性転化のマウスモデルの作製及びこのモデルにおけるインヒビター研究)
BCR-ABL誘導性慢性骨髄性白血病(CML)モデルを作製するために、10週齢の野生型マウス由来の骨髄(BM)細胞を抽出し、cKit発現細胞について濃縮し(EasySep #18757)、15％FCS、L-グルタミン、Pen/Strep(Biological Industries, Israel)、並びに幹細胞因子(SCF)、IL-3、IL-6、及びTPO(Peprotech)が補充されたRPMI成長培地中で、37℃で一晩インキュベートした。その後、培養物にp210BCR-ABL-IRES-GFPレトロウイルスコンストラクト含有上清培地を4時間感染させ、その後、成長培地を添加し、感染細胞を37℃でさらに24時間インキュベートした。その後、培養物を亜致死量照射(500ラド)マウスにI.V.注射した。(FACSによる)接種マウスの末梢血中のGFP発現細胞の急速で着実な増加並びに(ライト・ギムザ染色された血液塗抹標本によって検出される)白血球及び未成熟細胞の数の増加を観察した後、マウスを屠殺し、そのBM細胞を新しい亜致死量照射WT宿主に移入し;各々のそのような移入を疾患世代と名付けた。4回目の移入までに、宿主は、疾患移入前にもはや亜致死量照射を受けなかった。急性転化の発症は、末梢血(PB)中の白血球(WBC)の30％を超える、極めて異常な数の芽球細胞、及び移入間の時間間隔の短さによって、容易に検出可能であった。CKIインヒビター研究を、PB芽球が容易に検出可能であり、宿主への照射がなく、世代時間が短い(最大12日)、後世代の疾患に対して実施した。マウスを、悪液質、体重減少、嗜眠、及びラフコート(ruff coat)について、毎日モニタリングし、瀕死状態のマウスを死ぬ寸前に屠殺した。
【０２４１】
CMLに対するCKIα阻害効果を評価するために、選択的CKIαインヒビター(A14)を、BM移植(BMT)後24時間から始めて、10mg/kgの用量で1日1回、強制経口投与により投与した(図3A)。インヒビターを0.1％Tween 80及び0.2％ポリエチレングリコールを含む1％メチルセルロース(ビヒクル)に溶解させた。対照マウスは、ビヒクルのみで処置した。
【０２４２】
(エクスビボインヒビター効果(図2A及び13A〜E))
AML(13A〜E)又はCML急性転化(2A)担持マウスから新たに単離されたBMを、15％FCS、L-グルタミン、Pen/Strep、Hepes、ピルビン酸ナトリウム、及び非必須アミノ酸(Biological Industries, Israel)が補充されたRPMI中で成長させた。CKIインヒビター(A14、A51、A75、又はA86)をDMSOに溶解させ、表示された濃度で組織培養培地に添加し;対照培養物はDMSOのみで処理した。(各々の実験で表示されている)処理から数時間後、細胞を回収し、カメラ及び標準的な倒立光学顕微鏡を用いて、手作業で計数した。死細胞は、トリパンブルー(Sigma)を用いて排除した。アネキシンV-PE(MBL)、7AAD(Tonbo)、及びPD-L1(BioLegend)染色を、メーカーの推奨に従って、FACSにより評価した。
【０２４３】
(急性骨髄性白血病(AML)のマウスモデルの作製(図6)並びにCKIαインヒビターA14(図7、8、及び9)又はA51(図11及び12)による処置)
MLL-AF9急性骨髄性白血病(AML)モデルを作製するために、10週齢の野生型マウス由来の骨髄(BM)細胞を抽出し、cKit発現細胞について濃縮し(EasySep #18757)、15％FCS、L-グルタミン、Pen/Strep(Biological Industries, Israel)、並びに幹細胞因子(SCF)、IL-3、IL-6、及びTPO(Peprotech)が補充されたRPMI中で一晩インキュベートした。培養物にMSCV-MLL-AF9-IRES-GFPレトロウイルスコンストラクト含有上清培地を4時間感染させ、その後、成長培地を添加し、感染細胞を37℃でさらに24時間インキュベートした。その後、培養物を亜致死量照射(500ラド)マウスにI.V.注射した。(FACS解析によって確認される)マウス末梢血中のGFP発現細胞の検出可能で着実な増加並びに(ライト・ギムザ染色された血液塗抹標本によって検出される)白血球数及び未成熟細胞の増加の後、マウスを屠殺し、そのBMを亜致死量照射WT宿主に移入した(1回目のBMT)。AML疾患の出現後、マウスを屠殺し、50,000個のBM細胞をWT宿主マウスに移植した(2回目のBMT)。GFP発現細胞を末梢血中でモニタリングし、PB中で＞10％のGFP+を検出したとき(BMT後11日目)、マウスをA14インヒビターで処置した(図7A)。A14を、20mg/kgの用量で1日1回、3日間、その後、10mg/kg/日でさらに6日間、強制経口投与により投与した。インヒビターを0.1％Tween 80及び0.2％ポリエチレングリコールを含む1％メチルセルロース(ビヒクル)に溶解させた。対照マウスは、ビヒクルのみで処置した。マウスを、悪液質、嗜眠、及びラフコートについて、毎日モニタリングし、瀕死状態のマウスを屠殺した。単一用量実験(図11A)のために、A51を20mg/kgの単一用量で強制経口投与により投与し、処置から16時間後に、マウスを屠殺した。
【０２４４】
(FACS解析)
全てのアッセイをBDの装置: FACS caliber、FACS ARIAソーター、又はLSR II機器で実施した。免疫染色のために、細胞を5μM EDTAを含む1％BSA/PBSバッファーに懸濁させた。その後、アネキシンV PEアポトーシス検出キット(eBioscience)、7-AAD(TONBO biosciences)、及びPE抗マウスCD274(B7-H1、PD-L1)抗体(クローン10F.9G2、BioLegend)を使用することにより、細胞を解析し;メーカーの指示に従って、アッセイを実施した。CD16及びCD32に特異的なモノクローナル抗体(Miltenyi Biotec)を染色前のFc受容体の遮断に使用した。
【０２４５】
(全血算値)
末梢静脈血を、標準的な技法を用いてマウスの顔面静脈から取得し、メーカーの指示通りに、自動血液アナライザーBC-2800(Mindray)を用いて解析した。
【０２４６】
表1は、Wnt経路活性化の指標としてのp53及びDNA損傷応答(DDR)の活性化並びにβ-カテニン安定化における本発明の化合物についての数量的な情報を提供している。p53活性化は、いくつかのウェスタンブロットアッセイでのタンパク質安定化の程度によって決定された(ウェスタンブロットの例は、図1A及び1Bに示されている)。例えば、A43は、6μMで未処理対照を上回って顕著にp53を安定化し、2μMでは活性がなく(図1A、右下のパネル)、したがって、p53活性化について+という平均値を与えられた。対照的に、A35は、0.2μMでp53を安定化し始め、1μMで安定化が最大となり(図1A、右上のパネル)、したがって、p53活性化について+++という平均値を与えられた。A19-4は、p53を安定化することも、γH2AX(DNA損傷応答[DDR]の指標)を誘導することもなかったが、最も優れたβ-カテニン安定化化合物と同様に、2μMでβ-カテニンを安定化し(図1A、左下のパネル)、したがって、β-カテニン/Wnt活性化について+++という値を与えられた。
表1:本発明の化合物のp53、DNA損傷応答、及びWnt/β-カテニン活性化
【表１】
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+は、6μMの化合物濃度での、低いけれども顕著な活性化を示し; +++は、＞2μMでの最大のβ-カテニン又はp53安定化を示し; ++++は、＞0.5μMでのp53及びDDRの最大活性化を示し、+++++は、＞0.1μMでのp53及びDDRの最大活性化を示す。
【０２４７】
(本発明の化合物によるIRAK1阻害)
RKO細胞を表示された濃度の本発明の化合物A51(1μM)及びA14(2μM)(図10)とともに37℃で16時間インキュベートした。表示された時点で、RKOをTNFα(100ユニット/ml)で処理した。細胞を回収し、ウェスタンブロットにより解析した。ブロットを、以下の抗体:ホスホ-IRAK1(Thr209)(A1074、AssayBiothechnology; 1/1,000)、ホスホ-IKKα/β(Ser176/180)(16A6、Cell Signaling; 1/1,000)、IKKα(2682、cell signaling; 1/1,1000)、IKKβ(2370、cell signaling; 1/1,1000)、ホスホ-c-Jun(Ser 63)(9261、cell signaling; 1/1,1000)、p53(DO-1&1801ハイブリドーマ混合物;各々由来の上清の1:20の希釈物)、CKIα(C-19; 1/1,000; Santa Cruz Biotechnology)、及びホスホ-ヒストンH2AX(S139; 1/1,000; Millipore)とともにインキュベートした。二次抗体は、HRP結合ヤギ抗マウス抗体、ヤギ抗ウサギ抗体、及びウサギ抗ヤギ抗体(全て1/10,000; Jackson)であった。ブロットをECL(GE Healthcare)を用いて顕色させた。図10は、IRAK1のリン酸化の阻害並びにIRAK1キナーゼ阻害を示すホスホ-IKKα/β及びホスホ-c-Junを示している。p53の安定化及びCKIαキナーゼ阻害を示すDNA損傷のマーカーであるH2AXのリン酸化(γH2AX)も示している。CKIαタンパク質レベルは、ローディング対照としての役割を果たす。
【０２４８】
A51(WXL5846、下の表2を参照)についてのキノーム親和性スキャンにより、A51の重要な標的には、少数の対照キナーゼとともに、CKIファミリーメンバー全体及びIRAK1が含まれることが示される。KINOMEscan(商標)は、固定化された活性部位指向性リガンドと競合する化合物の能力を定量的に測定する競合結合アッセイに基づいている。このアッセイは、3つの成分:DNAタグ化キナーゼ;固定化リガンド;及び試験化合物を組み合わせることにより実施される。固定化リガンドと競合する試験化合物の能力は、DNAタグの定量的PCRによって測定され;％Ctrl＝0(ゼロ)は、1μMの濃度のインヒビターによって試験されたキナーゼの完全阻害を示している(Fabian, M.A.らの文献、臨床的キナーゼインヒビターについての小分子-キナーゼ相互作用マップ(A small molecule-kinase interaction map for clinical kinase inhibitors.)、Nat. Biotechnol. 23, 329-336(2005)及びKaraman, M.W.らの文献、キナーゼインヒビター選択性の定量的解析(A quantitative analysis of kinase inhibitor selectivity.)、Nat. Biotechnol. 26, 127-132(2008))。
表2: A51(WXL5846)についてのキノーム親和性スキャン
【表２】
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【０２４９】
表3は、A14(WXL-4085)及びA51(WXL-5846)とIRAK1との相互作用についてのKd測定を示している。
表3: A14(WXL-4085)及びA51(WXL-5846)とIRAK1とのKd
【表３】
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【０２５０】
(結論)
キノームスキャンにおける優れた標的としてのIRAK1は、インヒビターの存在下でIRAK1のその標的に対するゼロ結合を示す。本発明のピラゾールピリミジン化合物A51及びA14は、IRAK1に対する優れた結合Kdを示した。該化合物は、RKO細胞におけるIRAK1活性化の阻害及びIRAK1標的IKK(IκBキナーゼ)の活性化の阻害も示した(ウェスタンブロット解析)。化合物A51がRKO細胞株において1μMの濃度でホスホ-(活性型)IRAK1の完全な(100％)阻害を示したことに留意すべきである。比較として、Garrett W. Rhyasenらは、MDS及び乳癌の治療で使用されるAmgenのIRAK1-4インヒビターが細胞株において10μMでIRAK1/4の70％しか阻害しないことを示した(Garrett W. Rhyasenらの文献、2013, Cancer Cell 24, 90-104、特に、その中の図2を参照)。したがって、本発明の化合物、例えば、A51は、血液学的悪性腫瘍(とりわけ、多発性骨髄腫、MDS、白血病及びリンパ腫、頭頸部癌、並びに乳癌を含む)において重要な役割を果たすNF-kB経路の重要な上流調節因子であるIRAK1の優れたインヒビターであることが分かる。
【０２５１】
(AMLマウスにおけるCKIインヒビターの単一用量処置効果及びPD-L1発現)
AMLマウスは、MLL-AF9腫瘍遺伝子が形質導入された骨髄細胞をC57/BL6マウスに接種することにより用意した。MLL-AF9融合は、染色体転座によって誘導される予後不良なヒトAMLのうちの1つを表す。白血病接種から30日後、レシピエントマウスは、高い白血球(WBC)カウント(正常マウスよりも10倍多い)を有し、骨髄中に＞95％の白血病芽球を保有し、これらのマウスの末梢WBCの50％はAML芽球である。これらのマウスは脾腫を有し、その骨は、急性白血病のために、色が薄くかつ脆い(図12)。A51(20mg/Kg)による16時間の経口処置は、血液中の全白血病細胞の大幅な減少(図11B)、白血病脾臓の縮小(図11C及び図12A)、それぞれ、骨髄及び血液中の白血病性芽球(GFP+細胞)の比率の50％及び＞90％低下(図11D及び図11E)をもたらす。不透明は骨は、単一用量処置後、正常な色に戻った(図12B)。
【０２５２】
(白血病マウスの骨髄から単離されたAML細胞に対するCKIインヒビターのインビトロ処理効果)
処理後6及び9時間での10又は100nMのインヒビター処理後の死細胞(7AAD+)のパーセンテージが示されている(図13B及び13D)。DMSO処理は、9時間で10％未満の死細胞を生じさせた。また、フローサイトメトリー解析による主要な免疫チェックポイントタンパク質PD-L1の白血病発現に対するインヒビターの効果: 5時間での平均蛍光強度(MFI)の低下並びに6及び9時間でのDMSO処理細胞と比較したインヒビター処理後のPD-L1陽性白血病細胞の画分の減少(DMSO対照の％で表された減少)が示されている(図13A、13C、及び13E)。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ−Ｃ】
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【図１３Ｄ−Ｅ】
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【国際調査報告】
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