(57)【要約】モジュレータを免疫細胞、および／または、他の細胞におけるＣＤ１１ｂと結合させることによってＰＤ−Ｌ１の発現を制御できる。それによって慢性感染症、敗血症、がんにおける免疫不全、または、加齢による免疫老化などの免疫抑制、および／または、免疫疲弊に関連する病気を治療および／または予防することができる。
2018524300.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
免疫細胞におけるＰＤ−Ｌ１の発現を阻害する方法であって、
前記免疫細胞のＣＤ１１ｂに結合するＣＤ１１ｂモジュレータと前記免疫細胞を接触させることによって、前記免疫細胞におけるＰＤ−Ｌ１の発現を阻害することを含む、方法。
【請求項２】
免疫抑制または免疫疲弊を解除するか、または、免疫細胞に先在する免疫を誘発する方法であって、
免疫細胞のＣＤ１１ｂに結合するＣＤ１１ｂモジュレータと前記免疫細胞を接触させることを含む、方法。
【請求項３】
ＣＤ１１ｂモジュレータに反応する被検体を決定する方法であって、
生体サンプルまたは被検体における免疫細胞をＣＤ１１ｂモジュレータと接触させることによって、前記生体サンプルまたは前記被検体内におけるＰＤ−Ｌ１を阻害するか否かを検出し、
前記免疫細胞における前記ＰＤ−Ｌ１の阻害をさらに検出することを含み、
前記ＰＤ−Ｌ１の阻害は、前記被検体が前記ＣＤ１１ｂモジュレータに反応することを示す、方法。
【請求項４】
前記ＣＤ１１ｂモジュレータは、ＣＤ１１ｂの発現を阻害するＲＮＡｉ薬剤、抗ＣＤ１１ｂ抗体、ＣＤ１１ｂに結合するヌクレオチドアナログ、または、ＣＤ１１ｂに結合する小分子化合物である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記ＲＮＡｉ薬剤は、ＣＤ１１ｂの発現を阻害するミクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、または、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記抗ＣＤ１１ｂ抗体は、モノクローナル、キメラ、ヒト化、ヒトもしくは二重特異性抗ＣＤ１１ｂ抗体、または、その抗原結合フラグメントである、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記小分子化合物は、以下を含む、請求項４に記載の方法。
【化１】
2018524300.tif 000009
2018524300.tif 000010
2018524300.tif 000011
【請求項８】
前記免疫細胞は、単球、顆粒球、マクロファージ、骨髄由来サプレッサー細胞、ナチュラルキラー細胞、または、Ｔ細胞である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
ＣＤ１１ｂの結合により、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１２、または、ＣＤ８Ｔ細胞が増加する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＣＤ１１ｂモジュレータを細胞のＣＤ１１ｂと結合させることにより、免疫抑制または免疫疲弊に関連する病気を治療、および／または、予防する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記免疫抑制または免疫疲弊に関連する病気は、急性および／または慢性感染症、敗血症、がん、または、加齢による免疫老化である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
急性および／または慢性感染症、敗血症、がん、または、加齢による免疫老化を治療、または、予防する方法であって、
有効量のＣＤ１１ｂモジュレータを被検体に投与することを含む、方法。
【請求項１３】
前記がんは、メラノーマ、肺がん、肺の扁平上皮がん、頭頚部がん、乳がん、卵巣がん、子宮がん、前立腺がん、胃がん、子宮頸がん、食道がん、膀胱がん、腎臓がん、脳ガン、肝臓がん、大腸がん、骨肉腫、膵臓がん、皮膚がん、皮膚または眼内悪性黒色腫、卵巣がん、直腸がん、肛門部のがん、胃がん、精巣がん、卵管がん、子宮内膜がん、頸がん、膣がん、外陰がん、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、食道がん、小腸がん、内分泌系がん、甲状腺がん、副甲状腺がん、副腎がん、軟部組織の肉腫、尿道がん、陰茎がん、急性骨髄性白血病を含む慢性または急性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病、小児の固形腫瘍、リンパ球性リンパ腫、腎盂がん、中枢神経系（ＣＮＳ）の腫瘍、中枢神経系原発リンパ腫、腫瘍の血管新生、脊髄軸腫瘍、脳幹グリオーマ、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮がん、扁平上皮細胞がん、および、Ｔ細胞リンパ腫を含む、請求項１１または１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記がんは、がん転移、難治性がん、再発性がん、または、進行がんである、請求項１１または１２に記載の方法。
【請求項１５】
前記がんを治療、または、予防する方法は、追加の活性薬剤を投与または追加の治療法を行うことを含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１６】
前記追加の活性薬剤または追加の治療法は、免疫チェックポイント療法、放射線療法、または、化学療法を含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記ＣＤ１１ｂモジュレータの投与と、前記免疫チェックポイント療法、放射線療法、または、化学療法とは、同時に、順に、または、別々に行われる、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記免疫チェックポイント療法は、免疫チェックポイントタンパク質を投与することを含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記免疫チェックポイントタンパク質は、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−１リガンド、抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＣＴＬＡ−４リガンド、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１リガンド、その抗原結合性フラグメント、または、それらの任意の組合せである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記抗ＰＤ−１抗体は、ニボルマブ、または、ペムブロリズマブであり、前記抗ＣＴＬＡ−４抗体は、イピリムマブであり、前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、アテゾリズマブである、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記化学療法は、化学療法剤の投与を含む、請求項１６または１７に記載の方法。
【請求項２２】
前記化学療法剤は、アルキル化剤、代謝拮抗薬、抗微小管剤、トポイソメラーゼ阻害剤、または、細胞障害性抗生物である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記化学療法剤は、シスプラチン、フルオロウラシル（５−Ｆｕ）、タキソール、ドセタキセル、ビノレルビン、ビンデシン、ビンフルニン、ゲムシタビン、メトトレキサート、ゲフィチニブ、ラパチニブ、または、エルロチニブである、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
抗ＣＤ１１ｂ抗体、または、その抗原結合部分であって、
ＮＹＷＩＮ（配列番号１）もしくはＧＦＳＬＴＳＮＳＩＳ（配列番号２）のアミノ酸残基、または、配列番号１もしくは２と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有する変異体からなる重鎖相補性決定領域１（Ｈ−ＣＤＲ１）、
ＮＩＹＰＳＤＴＹＩＮＨＮＱＫＦＫＤ（配列番号３）もしくは、ＡＩＷＳＧＧＧＴＤＹＮＳＤＬＫＳ（配列番号４）のアミノ酸残基、または、配列番号３もしくは４と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有する変異体からなる重鎖相補性決定領域２（Ｈ−ＣＤＲ２）、および、
ＳＡＹＡＮＹＦＤＹ（配列番号５）もしくはＲＧＧＹＰＹＹＦＤＹ（配列番号６）のアミノ酸残基、または、配列番号５もしくは６と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有する変異体からなる重鎖相補性決定領域３（Ｈ−ＣＤＲ３）の少なくとも１つと、
ＲＡＳＱＮＩＧＴＳＩＨ（配列番号７）もしくはＫＳＳＱＳＬＬＹＳＥＮＱＥＮＹＬＡ（配列番号８）のアミノ酸残基、または、配列番号７もしくは８と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有する変異体からなる軽鎖相補性決定領域１（Ｌ−ＣＤＲ１）、
ＹＡＳＥＳＩＳ（配列番号９）もしくはＷＡＳＴＲＱＳ（配列番号１０）のアミノ酸残基、または、配列番号９もしくは１０と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有する変異体からなる軽鎖相補性決定領域２（Ｌ−ＣＤＲ２）、および、
ＱＱＳＤＳＷＰＴＬＴ（配列番号１１）もしくはＱＱＹＹＤＴＰＬＴ（配列番号１２）のアミノ酸残基、または、配列番号１１もしくは１２と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有する変異体からなる軽鎖相補性決定領域３（Ｌ−ＣＤＲ３）の少なくとも１つと、を含み、
単離された抗体またはその抗原結合部分は、ＣＤ１１ｂと結合する、抗ＣＤ１１ｂ抗体、または、その抗原結合部分。
【請求項２５】
（ｉ）配列番号１を有するＨ−ＣＤＲ１、配列番号３を有するＨ−ＣＤＲ２、および、配列番号５を有するＨ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、
（ｉｉ）配列番号７を有するＬ−ＣＤＲ１、配列番号９を有するＬ−ＣＤＲ２、および、配列番号１１を有するＬ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域と、を含むか、または、
（ｉｉｉ）配列番号２を有するＨ−ＣＤＲ１、配列番号４を有するＨ−ＣＤＲ２、および、配列番号６を有するＨ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、
（ｉｖ）配列番号８を有するＬ−ＣＤＲ１、配列番号１０を有するＬ−ＣＤＲ２、および、配列番号１２を有するＬ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域と、を含む、
請求項２４に記載の抗ＣＤ１１ｂ抗体、または、その抗原結合部分。
【請求項２６】
キメラ、ヒト化、または、ヒト抗体である、請求項２４または２５に記載の抗ＣＤ１１ｂ抗体、または、その抗原結合部分。
【請求項２７】
配列番号１または２からなるアミノ酸配列を有するＨ−ＣＤＲ１と、配列番号３または４からなるアミノ酸配列を有するＨ−ＣＤＲ２と、配列番号５または６からなるアミノ酸配列を有するＨ−ＣＤＲ３とを含む重鎖可変領域、または、その抗原結合部分。
【請求項２８】
配列番号７または８からなるアミノ酸配列を有するＬ−ＣＤＲ１と、配列番号９または１０からなるアミノ酸配列を有するＬ−ＣＤＲ２と、配列番号１１または１２からなるアミノ酸配列を有するＬ−ＣＤＲ３とを含む軽鎖可変領域、または、その抗原結合部分。
【請求項２９】
（ｉ）配列番号１３〜２２のアミノ酸配列のいずれかと少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、
（ｉｉ）配列番号２３〜３２のアミノ酸配列のいずれかと少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含むヒト化抗ＣＤ１１ｂ抗体、または、その抗原結合部分。
【請求項３０】
配列番号１３〜２２からなるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号２３〜３２からなるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含む、請求項２９に記載のヒト化抗ＣＤ１１ｂ抗体、または、その抗原結合部分。
【請求項３１】
ヒト化抗ＣＤ−１１ｂ抗体、または、その抗原結合部分であって、
（ａ）配列番号１３からなるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および、配列番号２３からなるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、
（ｂ）配列番号１４からなるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および、配列番号２４からなるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、
（ｃ）配列番号１５からなるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および、配列番号２５からなるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、
（ｄ）配列番号１６からなるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および、配列番号２６からなるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、
（ｅ）配列番号１７からなるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および、配列番号２７からなるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、
（ｆ）配列番号１８からなるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および、配列番号２８からなるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、
（ｇ）配列番号１９からなるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および、配列番号２９からなるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、
（ｈ）配列番号２０からなるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、および、配列番号３０からなるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、
（ｉ）配列番号２１からなるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および、配列番号３１からなるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、または、
（ｊ）配列番号２２からなるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および、配列番号３２からなるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、ヒト化抗ＣＤ−１１ｂ抗体、または、その抗原結合部分。
【請求項３２】
請求項２４〜３１のいずれか一項に記載の抗ＣＤ−１１ｂ抗体、または、その抗原結合部分を含む組成物。
【請求項３３】
追加の活性薬剤を含む、請求項３２に記載の組成物。
【請求項３４】
前記追加の活性薬剤は、免疫チェックポイントタンパク質、または、化学療法剤である、請求項３３に記載の組成物。
【請求項３５】
前記免疫チェックポイントタンパク質は、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−１リガンド、抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＣＴＬＡ−４リガンド、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１リガンド、その抗原結合性フラグメント、または、それらの任意の組合せである、請求項３４に記載の組成物。
【請求項３６】
前記抗ＰＤ−１抗体は、ニボルマブ、または、ペムブロリズマブであり、前記抗ＣＴＬＡ−４抗体は、イピリムマブであり、前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、アテゾリズマブである、請求項３５に記載の組成物。
【請求項３７】
前記化学療法剤は、アルキル化剤、代謝拮抗薬、抗微小管剤、トポイソメラーゼ阻害剤、または、細胞障害性抗生物である、請求項３４に記載の組成物。
【請求項３８】
前記化学療法剤は、シスプラチン、フルオロウラシル（５−Ｆｕ）、タキソール、ドセタキセル、ビノレルビン、ビンデシン、ビンフルニン、ゲムシタビン、メトトレキサート、ゲフィチニブ、ラパチニブ、または、エルロチニブである、請求項３４に記載の組成物。
【請求項３９】
免疫細胞におけるＰＤ−Ｌ１の発現を阻害する方法であって、
前記免疫細胞のＣＤ１１ｂに結合する請求項２４〜３１のいずれか一項に記載の抗ＣＤ１１ｂ抗体、または、その抗原結合部分と前記免疫細胞を接触させることによって、前記免疫細胞におけるＰＤ−Ｌ１の発現を阻害することを含む、方法。
【請求項４０】
免疫抑制または免疫疲弊を解除するか、または、免疫細胞に先在する免疫を誘発する方法であって、
免疫細胞のＣＤ１１ｂに結合する請求項２４〜３１のいずれか一項に記載の抗ＣＤ１１ｂ抗体、または、その抗原結合部分と前記免疫細胞を接触させることを含む、方法。
【請求項４１】
ＣＤ１１ｂモジュレータに反応する被検体を決定する方法であって、
生体サンプルまたは被検体における免疫細胞を、請求項２４〜３１のいずれか一項に記載の抗ＣＤ１１ｂ抗体、または、その抗原結合部分と接触させることによって、前記生体サンプルまたは前記被検体におけるＰＤ−１を阻害するか否かを検出し、前記免疫細胞におけるＰＤ−Ｌ１の阻害をさらに検出することを含む、方法。
【請求項４２】
前記免疫細胞は、単球、顆粒球、マクロファージ、骨髄由来サプレッサー細胞、ナチュラルキラー細胞、または、Ｔ細胞である、請求項３９〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４３】
ＣＤ１１ｂの結合により、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１２、ＴＮＦ−α、または、ＣＤ８Ｔ細胞が増加する、請求項３９〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
前記抗ＣＤ１１ｂ抗体またはその抗原結合部分を細胞のＣＤ１１ｂと結合させることにより、免疫抑制または免疫疲弊に関連する病気を治療、および／または、予防する、請求項３９〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４５】
前記免疫抑制または免疫疲弊に関連する病気は、急性および／または慢性感染症、敗血症、がん、または、加齢による免疫老化である、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
急性および／または慢性感染症、敗血症、がん、または、加齢による免疫老化を治療、または、予防する方法であって、
請求項２４〜３１のいずれか一項に記載の抗ＣＤ１１ｂ抗体、または、その抗原結合部分の有効量を被検体に投与することを含む、方法。
【請求項４７】
前記がんは、メラノーマ、肺がん、肺の扁平上皮がん、頭頚部がん、乳がん、卵巣がん、子宮がん、前立腺がん、胃がん、子宮頸がん、食道がん、膀胱がん、腎臓がん、脳ガン、肝臓がん、大腸がん、骨肉腫、膵臓がん、皮膚がん、皮膚または眼内悪性黒色腫、卵巣がん、直腸がん、肛門部のがん、胃がん、精巣がん、卵管がん、子宮内膜がん、頸がん、膣がん、外陰がん、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、食道がん、小腸がん、内分泌系がん、甲状腺がん、副甲状腺がん、副腎がん、軟部組織の肉腫、尿道がん、陰茎がん、急性骨髄性白血病を含む慢性または急性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病、小児の固形腫瘍、リンパ球性リンパ腫、腎盂がん、中枢神経系（ＣＮＳ）の腫瘍、中枢神経系原発リンパ腫、腫瘍の血管新生、脊髄軸腫瘍、脳幹グリオーマ、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮がん、扁平上皮細胞がん、および、Ｔ細胞リンパ腫を含む請求項４５または４６に記載の方法。
【請求項４８】
前記がんは、がん転移、難治性がん、再発性がん、または、進行がんである、請求項４５または４６に記載の方法。
【請求項４９】
前記がんを治療、または、予防する方法は、追加の活性薬剤を投与または追加の治療法を行うことを含む、請求項４５または４６に記載の方法。
【請求項５０】
前記追加の活性薬剤または追加の治療法は、免疫チェックポイント療法、放射線療法、または、化学療法を含む、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
請求項２４〜３１のいずれか一項に記載の抗ＣＤ１１ｂ抗体、または、その抗原結合部分の投与と、前記免疫チェックポイント療法、放射線療法、または、化学療法とは、同時に、順に、または、別々に行われる、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記免疫チェックポイント療法は、免疫チェックポイントタンパク質を投与することを含む、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
前記免疫チェックポイントタンパク質は、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−１リガンド、抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＣＴＬＡ−４リガンド、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１リガンド、その抗原結合性フラグメント、または、それらの任意の組合せである、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
前記抗ＰＤ−１抗体は、ニボルマブ、または、ペムブロリズマブであり、前記抗ＣＴＬＡ−４抗体は、イピリムマブであり、前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、アテゾリズマブである、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記化学療法は、化学療法剤の投与を含む、請求項５０に記載の方法。
【請求項５６】
前記化学療法剤は、アルキル化剤、代謝拮抗薬、抗微小管剤、トポイソメラーゼ阻害剤、または、細胞障害性抗生物である、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
前記化学療法剤は、シスプラチン、フルオロウラシル（５−Ｆｕ）、タキソール、ドセタキセル、ビノレルビン、ビンデシン、ビンフルニン、ゲムシタビン、メトトレキサート、ゲフィチニブ、ラパチニブ、または、エルロチニブである、請求項５５に記載の方法。
【請求項５８】
請求項２４〜３１のいずれか一項に記載の抗ＣＤ１１ｂ抗体、または、その抗原結合部分の有効量は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ（体重）〜４０ｍｇ／ｋｇである、請求項３９、４０、または、４６に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、免疫療法の分野に関する。
特に、本発明は、細胞におけるＣＤ１１ｂの発現を制御することにより免疫応答を調節する方法および抗体に関する。
【背景技術】
【０００２】
免疫原性抗原を発現するがん細胞が、腫瘍形成に対抗する効果的な免疫応答を誘発する可能性があることは、広く知られている。さらに、腫瘍微小環境には、ＴＬＲ（Ｔｏｌｌ様受容体）シグナル伝達に抗腫瘍反応を起こさせ得る成分が豊富に存在する(Standiford TJ, Keshamouni VG (2012) Breaking the tolerance for tumor: Targeting negative regulators of TLR signaling. Oncoimmunology 1: 340-345)。これは、病気の初期段階で、がん細胞は、発達中の腫瘍に対し、宿主を保護し、腫瘍をモデル化する免疫機構による認識を受け、排除され得るということを意味する。しかし、がん細胞は、また、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子のダウンレギュレーションなどの免疫監視機構を逃れるための多くの負の調節機構、または、抑制性サイトカインの分泌を増大させ、抑制分子を発現させることによってがん細胞への免疫寛容を誘発する抗原処理および提示機構を有してもいる。がん患者が、多くの場合免疫不全であると考えられるのはこのためである。したがって、がんに関連する免疫抑制を解除する薬剤または治療法の開発が必要とされている。
【０００３】
インテグリンαＭ（ＣＤ１１ｂ、ＣＲ３Ａ、および、ＩＴＧＡＭ）は、単球、顆粒球、マクロファージ、樹枝状細胞、ナチュラルキラー細胞、および、骨髄由来免疫抑制細胞（ＭＤＳＣ）を含む多くの免疫細胞の表面に発現するヘテロ二量体インテグリンαＭβ２分子を形成する１つのタンパク質サブユニットである。インテグリンαＭβ２は、その多種類のリガンドを通じて細胞接着、移動、走化性、および、食作用を制御することによって炎症を媒介する。最近の研究では、ＴＬＲ４応答の調節が炎症に対して重要な役割を果たしていることが示されている(Han C, Jin J, Xu S, Liu H, Li N, et al. (2010) Integrin CD11b negatively regulates TLR-triggered inflammatory responses by activating Syk and promoting degradation of MyD88 and TRIF via Cbl-b. Nat Immunol 11: 734-742)。フィブリノゲンなどの血管の内腔側にあるさまざまな内因性インテグリンαＭβ２のリガンドは、ＴＬＲ４シグナル伝達のトリガとなり得る。β２インテグリンに結合したＩＴＡＭ（免疫受容体チロシン活性化モチーフ）の高効率なライゲーションによってＴＬＲの活性化を一時的に誘導するが、Ｃｂｌ−ｂを媒介したタンパク質分解においてＭｙＤ８８およびＴＲＩＦを標的にすることによってＴＬＲシグナル伝達をすばやく阻止する。したがって、インテグリンαＭβ２は、ＴＬＲファミリーの影響を抑えるべく、ＴＬＲシグナル伝達経路の成分を選択的に阻害する負のモジュレータとして機能し得る(Wang L, Gordon RA, Huynh L, Su X, Park Min KH, et al. (2010) Indirect inhibition of Toll-like receptor and type I interferon responses by ITAM-coupled receptors and integrins. Immunity 32: 518-530)。
【０００４】
ＰＤ−Ｌ１は、多種の免疫細胞に異なるレベルで発現する共阻害タンパク質の１つであり、単球、マクロファージ、樹枝状細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、上皮細胞、および、血管内皮細胞に構成的に発現する。ＰＤ−Ｌ１は、ＩＦＮ−γおよび細胞分裂刺激などの陽性誘導に応じてさらにアップレギュレーションされる。ＰＤ−Ｌ１は、活性化Ｔ細胞に見られるその受容体ＰＤ−１と結合し、Ｔ細胞アポトーシスおよびアネルギーを促進する共阻害信号を活性化Ｔ細胞内で誘発することによって、強力な免疫抑制をもたらす。（Butte MJ, Keir ME, Phamduy TB, Sharpe AH, Freeman GJ (2007) Programmed death-1 ligand 1 interacts specifically with the B7-1 costimulatory molecule to inhibit T cell responses. Immunity 27: 111-122;Francisco LM, Salinas VH, Brown KE, Vanguri VK, Freeman GJ, et al. (2009) PD-L1 regulates the development, maintenance, and function of induced regulatory T cells. J Exp Med 206: 3015-3029)。過剰な免疫応答を避けるためには、ＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−１の相互作用の一貫性も重要である。ＰＤ−Ｌ１とＰＤ−１との間の相互作用が一貫性に欠けると、免疫応答の伝播が制御不能になり、自己免疫疾患、過敏症、移植拒絶、および、移植片対宿主障害などの症状が起き得る。
【０００５】
特許文献１は、単離されたモノクローナル抗体、特に、ＰＤ−１と特異的に結合するヒトモノクローナル抗体を提供する。特許文献２はヒトプログラム死受容体１（ｈＰＤ−１）とそのリガンド（ｈＰＤ−Ｌ１またはｈＰＤ−Ｌ２）との結合を阻害する抗体に関する。特許文献３は、ｈＰＤ−１とｈＰＤ−Ｌ１またはｈＰＤ−Ｌ２との結合を阻害する抗体、および、ＰＤ−１経路を介して免疫細胞の活性を高める（または抑制的調節を抑制する）方法を開示している。特許文献４、および、特許文献５は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、または、ＰＤ−Ｌ２によって誘発される免疫抑制信号を阻止することで免疫を強化することによって、がんまたは感染症を治療する組成物、および、それを用いた治療法を提供する。特許文献６は、がんまたは感染症への免疫応答を誘発する方法を提供する。方法は、がんまたは感染症を患う被検体に以下からなるグループから選択された２つ以上の薬剤の組合せを投与することを含む。（ｉ）ＡＤＡＭ１７、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ６、ＣＤ８、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１４、ＣＤ１６、ＣＤ１６ｂ、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ３２ａ、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４４、ＣＤ４５、ＣＤ５６、ＣＤ５７、ＣＤ６４、ＣＤ６９、ＣＤ７４、ＣＤ８９、ＣＤ９０、ＣＤ１３７、ＣＤ１７７、ＣＥＡＣＡＭ６、ＣＥＡＣＡＭ８、ＨＬＡ−ＤＲα鎖、ＫＩＲ、および、ＳＬＣ４４Ａ２；（ｉｉ）インターフェロン；（ｉｉｉ）ＣＴＬＡ４、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、ＬＡＧ３、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＫＩＲ、および、ＴＩＭ３を含むチェックポイント阻害剤抗体；および（ｉｖ）抗体薬物結合体（ＡＤＣ）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】米国特許第８，００８，４４９号明細書
【特許文献２】米国特許第８，３５４，５０９号明細書
【特許文献３】米国特許第８，９００，５８７号明細書
【特許文献４】米国特許第９，０６７，９９９号明細書
【特許文献５】米国特許第９，０７３，９９４号明細書
【特許文献６】米国特許出願公開第２０１４／００９９２５４号明細書
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
しかしながら、上記特許文献１〜５に記載されている抗体は、治療への反応速度が遅い。また、先行技術６は、多数の周知の免疫関連物質を組み合わせているにすぎず、物質間の相互作用については記載していない。
【０００８】
本発明では、免疫細胞、および／または、他の細胞におけるＣＤ１１ｂと結合するＣＤ１１ｂモジュレータによってＰＤ−Ｌ１の発現を抑制できるという予期せぬ発見をした。ＣＤ１１ｂモジュレータをＣＤ１１と結合させることにより、ＬＰＳ（リポ多糖体）刺激を受けた単球におけるＰＤ−Ｌ１の発現が減少する。ＬＰＳ誘導性免疫抑制単球、または、敗血症性ショックの患者からの単球において、ＣＤ１１ｂモジュレータをＣＤ１１ｂと結合させることにより、細胞がさらにＬＰＳに刺激された場合にＰＤ−Ｌ１の発現を減少させる。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、免疫細胞におけるＰＤ−Ｌ１の発現を阻害する方法を提供する。方法は、免疫細胞のＣＤ１１ｂに結合するＣＤ１１ｂモジュレータと免疫細胞を接触させることによって、免疫細胞におけるＰＤ−Ｌ１の発現を阻害することを含む。
本発明は、免疫抑制または免疫疲弊を解除するか、または、免疫細胞に先在する免疫を誘発する方法であって、免疫細胞のＣＤ１１ｂに結合するＣＤ１１ｂモジュレータと前記免疫細胞を接触させることを含む方法を提供する。
【００１０】
本発明の他の側面では、ＣＤ１１ｂモジュレータに反応する被検体を決定する方法を提供する。方法は、生体サンプルまたは被検体における免疫細胞をＣＤ１１ｂモジュレータと接触させることによって、生体サンプルまたは被検体内におけるＰＤ−Ｌ１を阻害するか否かを検出し、ＣＤ１１モジュレータによる免疫細胞におけるＰＤ−Ｌ１の阻害を検出することを含む。ＰＤ−Ｌ１が阻害されるということは、被検体がＣＤ１１ｂモジュレータに反応するということを示す。
【００１１】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されたＣＤ１１ｂモジュレータは、ＣＤ１１ｂの発現を阻害するＲＮＡｉ薬剤、抗ＣＤ１１ｂ抗体、または、ＣＤ１１ｂを調節する小分子化合物である。
【００１２】
一実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞、単球、顆粒球、マクロファージ、骨髄由来サプレッサー細胞、または、ナチュラルキラー細胞である。
一実施形態では、ＣＤ１１ｂの結合は、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１２、または、ＣＤ８Ｔ細胞を増加させる。
他の実施形態では、ＣＤ１１ｂモジュレータを、細胞のＣＤ１１ｂに結合させることにより、免疫抑制に関連する病気を治療、および／または、予防する。
さらなる実施形態では、免疫抑制または免疫疲弊に関連する病気は、急性および／または慢性感染症、敗血症、がんにおける免疫不全、または、加齢による免疫老化におけるＴ細胞の疲弊である。
【００１３】
一実施形態では、がんを治療および／または予防する方法は、追加の活性薬剤を投与、または、追加の治療法を行うことを含む。
いくつかの実施形態では、追加の活性薬剤または追加の治療法は、免疫チェックポイント療法、放射線療法、または、化学療法である。
【００１４】
また、本発明は、抗ＣＤ１１ｂ抗体、または、その抗原結合部分を提供する。抗ＣＤ１１ｂ抗体、または、その抗原結合部分は、ＮＹＷＩＮ（配列番号１）もしくはＧＦＳＬＴＳＮＳＩＳ（配列番号２）のアミノ酸残基、または、配列番号１もしくは２と少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一であるアミノ酸配列を有する変異体からなる重鎖相補性決定領域１（Ｈ−ＣＤＲ１）、ＮＩＹＰＳＤＴＹＩＮＨＮＱＫＦＫＤ（配列番号３）もしくはＡＩＷＳＧＧＧＴＤＹＮＳＤＬＫＳ（配列番号４）のアミノ酸残基、または、配列番号３もしくは４と少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一であるアミノ酸配列を有する変異体からなる重鎖相補性決定領域２（Ｈ−ＣＤＲ２）、および、ＳＡＹＡＮＹＦＤＹ（配列番号５）もしくはＲＧＧＹＰＹＹＦＤＹ（配列番号６）のアミノ酸残基、または、配列番号５もしくは６と少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一であるアミノ酸配列を有する変異体からなる重鎖相補性決定領域３（Ｈ−ＣＤＲ３）の少なくとも１つと、ＲＡＳＱＮＩＧＴＳＩＨ（配列番号７）もしくはＫＳＳＱＳＬＬＹＳＥＮＱＥＮＹＬＡ（配列番号８）のアミノ酸残基、または、配列番号７もしくは８と少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一であるアミノ酸配列を有する変異体からなる軽鎖相補性決定領域１（Ｌ−ＣＤＲ１）、ＹＡＳＥＳＩＳ（配列番号９）もしくはＷＡＳＴＲＱＳ（配列番号１０）のアミノ酸残基、または、配列番号９もしくは１０と少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一であるアミノ酸配列を有する変異体からなる軽鎖相補性決定領域２（Ｌ−ＣＤＲ２）、および、ＱＱＳＤＳＷＰＴＬＴ（配列番号１１）もしくはＱＱＹＹＤＴＰＬＴ（配列番号１２）のアミノ酸残基、または、配列番号１１もしくは１２と少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一であるアミノ酸配列を有する変異体からなる軽鎖相補性決定領域３（Ｌ−ＣＤＲ３）の少なくとも１つと、を含み、単離された抗体またはその抗原結合部分は、ＣＤ１１ｂと結合する。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されたＣＤＲは、１つ以上の挿入、置換、および／または、欠失を含む。
【００１５】
本発明のさらなる実施形態では、抗ＣＤ１１ｂ抗体、または、その抗原結合部分が提供される。抗ＣＤ１１ｂ抗体、または、その抗原結合部分は、（ｉ）配列番号１を有するＨ−ＣＤＲ１、配列番号３を有するＨ−ＣＤＲ２、および、配列番号５を有するＨ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、（ｉｉ）配列番号７を有するＬ−ＣＤＲ１、配列番号９を有するＬ−ＣＤＲ２、および、配列番号１１を有するＬ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域と、を含むか、または、（ｉｉｉ）配列番号２を有するＨ−ＣＤＲ１、配列番号４を有するＨ−ＣＤＲ２、および、配列番号６を有するＨ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、（ｉｖ）配列番号８を有するＬ−ＣＤＲ１、配列番号１０を有するＬ−ＣＤＲ２、および、配列番号１２を有するＬ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域と、を含む。
【００１６】
さらなる実施形態では、Ｈ−ＣＤＲ１は、配列番号１または２からなるアミノ酸配列を有し、Ｈ−ＣＤＲ２は、配列番号３または４からなるアミノ酸配列を有し、Ｈ−ＣＤＲ３は、配列番号５または６からなるアミノ酸配列を有し、Ｌ−ＣＤＲ１は、配列番号７または８からなるアミノ酸配列を有し、Ｌ−ＣＤＲ２は、配列番号９または１０からなるアミノ酸配列を有し、Ｌ−ＣＤＲ３は、配列番号１１または１２からなるアミノ酸配列を有する。
【００１７】
さらに、本発明は、以下を含むヒト化抗ＣＤ−１１ｂ抗体、または、その抗原結合部分を提供する。（ａ）配列番号１３からなるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および、配列番号２３からなるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、（ｂ）配列番号１４からなるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および、配列番号２４からなるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、（ｃ）配列番号１５からなるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および、配列番号２５からなるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、（ｄ）配列番号１６からなるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および、配列番号２６からなるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、（ｅ）配列番号１７からなるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および、配列番号２７からなるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、（ｆ）配列番号１８からなるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および、配列番号２８からなるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、（ｇ）配列番号１９からなるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および、配列番号２９からなるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、（ｈ）配列番号２０からなるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、および、配列番号３０からなるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、（ｉ）配列番号２１からなるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および、配列番号３１からなるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、または、（ｊ）配列番号２２からなるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および、配列番号３２からなるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域。
【００１８】
また、本発明は、抗ＣＤ１１ｂ抗体またはその抗原結合部分含む組成物を提供する。本発明は、本発明のヒト化抗ＣＤ１１ｂ抗体を被検体に投与する方法を提供する。このような方法は、免疫細胞におけるＰＤ−Ｌ１の発現を阻害し、免疫抑制もしくは免疫疲弊を解除するか、または、免疫細胞に先在する免疫を誘発し、被検体内のＰＤ−Ｌ１を検出し、急性および／または慢性感染症、敗血症、がんにおける免疫不全、または、加齢による免疫老化を治療または予防することを含む。
本発明の抗ＣＤ１１ｂ抗体は、上記方法において使用できる。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】ＣＤ１１ｂを抗ＣＤ１１ｂ抗体と結合させることにより、ＰＤ−Ｌ１の表面発現が変化することを示している。アイソタイプコントロールであるＩｇＧ、または、抗ＣＤ１１ｂ抗体（ＩＣＲＦ４４）の存在下で、ヒト単球をＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍｌ）で１８時間刺激した。細胞を収穫し、フローサイトメトリーを用いてＨＬＡ−ＤＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＤ８０、および、ＣＤ８６分子を分析した。表面の分子発現をＭＦＩとして示している。値は、３つの別々の実験からの平均値±標準誤差として示している。
【図２】フィブリノゲンへの細胞接着の効果、および、ＣＤ１１ｂの結合によるＰＤ−Ｌ１発現の減少を示す。（Ａ）は、フィブリノゲンへのＫ５６２／ＣＤ１１ｂ細胞接着に対するＭＬ−Ｃ１９−Ａの効果を示す。１０μＭのＭＬ−Ｃ１９−Ａ、または、ＤＭＳＯの存在下、フィブリノゲン（２０μｇ／ｍｌ）でコーティングしたウェルの底部への２５０００個のＫ５６２／ＣＤ１１ｂ細胞の接着を３７℃で２０分間行った。結果をルシフェラーゼ発光試薬（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  Ｇｌｏ（登録商標）、Ｐｒｏｍｅｇａ社製）で数量化した。各バーは、代表的な実験からの３回繰り返しの測定の平均値±標準誤差を示す。（Ｂ）は、ＣＤ１１ｂをＣＤ１１ｂアンタゴニストと結合させることにより、単球におけるＰＤ−Ｌ１の発現が減少することを示している。ＤＭＳＯコントロール、または、１０μＭのＭＬ−Ｃ１９−Ａの存在下で、ヒト単球をＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍｌ）で１８時間刺激した。細胞を収穫し、フローサイトメトリーを用いてＰＤ−Ｌ１分子を分析した。表面の分子発現をＭＦＩとして示している。値は、１０の別々の実験からの平均値±標準誤差として示している。
【図３】Ｂ１６Ｆ１０腫瘍の成長に対する抗ＣＤ１１ｂ抗体による単独療法の効果を示す。初日、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに２×１０５個のＢ１６Ｆ１０細胞を皮下注射した。７日目、マウス（１グループにつき５匹）にコントロールのＩｇＧ（５ｍｇ／ｋｇ）、または、ラット抗マウスＣＤ１１ｂ抗体を腹腔内注射した。３〜４日おきに注射を繰り返した。１８日目、マウスを屠殺した。腫瘍体積を測定し、結果を平均値±標準誤差として示している。
【図４】抗ＣＤ１１ｂ抗体での治療後の腫瘍浸潤白血球におけるＭＤＳＣおよびＣＤ８Ｔ細胞集団を示す。初日、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに２×１０５個のＢ１６Ｆ１０細胞を皮下注射した。７日目、マウス（１グループにつき５匹）にコントロールのＩｇＧ（５ｍｇ／ｋｇ）、または、ラット抗マウスＣＤ１１ｂ抗体を腹腔内注射した。３〜４日おきに注射を繰り返した。１８日目、マウスを屠殺した。腫瘍をコラゲナーゼで消化し、腫瘍浸潤白血球をフローサイトメトリーで分析した。
【図５】抗ＣＤ１１ｂ抗体で治療した後の血液中のＷＢＣおよびＩＡＩＥ＋／ＣＤ８Ｔ細胞におけるＰＤ−Ｌ１の発現を示す。初日、各マウスに２×１０５個のＢ１６Ｆ１０細胞を尾静脈から注射した。１日目、マウス（１グループにつき３匹）にコントロールのＩｇＧ（５ｍｇ／ｋｇ）、または、抗マウスＣＤ１１ｂ抗体（５ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内注射した。３〜４日おきに注射を繰り返した。１５日目、マウスを屠殺した。ＷＢＣ細胞を収穫し、ＰＤ−Ｌ１分子、および、ＩＡＩＥ＋／ＣＤ８Ｔ細胞をフローサイトメトリーで分析した。
【図６】腫瘍のできたマウスにおけるＩＦＮ−γ、ＩＬ−１２、および、ＴＮＦ−αの生成が抗ＣＤ１１ｂ抗体による治療によって逆になることを示す。初日、各マウスに２×１０５個のＢ１６Ｆ１０細胞を尾静脈から注射した。１日目、マウス（１グループにつき３匹）にコントロールのＩｇＧ（５ｍｇ／ｋｇ）、または、ラット抗マウスＣＤ１１ｂ抗体（５ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内注射した。３〜４日おきに注射を繰り返した。９日目、マウスを屠殺した。ＢＤ  ＣＢＡマウス炎症キットにより血漿サイトカインを定量化した。
【図７】ＬＬＣ１腫瘍の成長に対する抗ＣＤ１１ｂ抗体による単独療法の効果を示す。初日、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに１×１０６個のＬＬＣ１細胞を皮下注射した。７日目、マウス（１グループにつき５匹）にコントロールのＩｇＧ（５ｍｇ／ｋｇ）、または、ラット抗マウスＣＤ１１ｂ抗体を腹腔内注射した。３〜４日おきに注射を繰り返した。腫瘍体積を測定し、結果を平均値±標準誤差として示している。
【図８】ＬＬＣ１腫瘍モデルでの生存率に対する抗ＣＤ１１ｂ抗体による単独療法の効果を示す。初日、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに１×１０６個のＬＬＣ１細胞を皮下注射した。７日目、マウス（１グループにつき５匹）にコントロールのＩｇＧ（５ｍｇ／ｋｇ）、または、ラット抗マウスＣＤ１１ｂ抗体を腹腔内注射した。３〜４日おきに注射を繰り返した。治療された各グループのマウスの長期生存に対する抗ＣＤ１１ｂ抗体の効果を分析した。
【図９】ＬＬＣ１肺転移モデルに対する抗ＣＤ１１ｂ抗体と抗ＰＤ１抗体とによる併用療法の効果を示す。初日、各マウスに１×１０６個のＬＬＣ１細胞を尾静脈から注射した。１日目、マウス（１グループにつき３匹）にコントロールのＩｇＧ（１０ｍｇ／ｋｇ）、抗マウスＣＤ１１ｂ抗体（１０ｍｇ／ｋｇ）、抗ＰＤ１抗体（１０ｍｇ／ｋｇ）、または、抗ＣＤ１１ｂ抗体（１０ｍｇ／ｋｇ）＋抗ＰＤ１抗体（１０ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内注射した。３〜４日おきに注射を繰り返した。１５日目、マウスを屠殺した。腫瘍播種の量を、肺に存在する小節の合計数として顕微鏡下で数えた。
【図１０】肺転移モデルでの生存率に対する抗ＣＤ１１ｂ抗体と抗ＰＤ１抗体とによる併用療法の効果を示す。初日、各マウスに１×１０６個のＬＬＣ１細胞を尾静脈から注射した。１日目、マウス（１グループにつき４〜５匹）にコントロールのＩｇＧ（１０ｍｇ／ｋｇ）、抗マウスＣＤ１１ｂ抗体（１０ｍｇ／ｋｇ）、抗ＰＤ１抗体（１０ｍｇ／ｋｇ）、または、抗ＣＤ１１ｂ抗体（１０ｍｇ／ｋｇ）＋抗ＰＤ１抗体（１０ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内注射した。３〜４日おきに注射を繰り返した。治療された各グループのマウスの長期生存に対する併用療法の効果を分析した。
【図１１】Ｂ１６Ｆ１０腫瘍の成長に対する抗ＣＤ１１ｂ抗体とタキソールとの併用療法の効果を示す。初日、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに２×１０５個のＢ１６Ｆ１０細胞を皮下注射した。７日目、マウス（１グループにつき５匹）にコントロールのＩｇＧ（５ｍｇ／ｋｇ）、抗マウスＣＤ１１ｂ抗体（５ｍｇ／ｋｇ）、タキソール（１０ｍｇ／ｋｇ）＋コントロールのＩｇＧ（５ｍｇ／ｋｇ）、または、タキソール（１０ｍｇ／ｋｇ）＋抗ＣＤ１１ｂ抗体（５ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内注射した。３〜４日おきに注射を繰り返した。腫瘍体積を測定し、結果を平均値±標準誤差として示している。
【図１２】Ｂ１６Ｆ１０モデルにおける生存率に対する抗ＣＤ１１ｂ抗体とタキソールとの併用療法の効果を示す。初日、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに２×１０５個のＢ１６Ｆ１０細胞を皮下注射した。７日目、マウス（１グループにつき５匹）にコントロールのＩｇＧ（５ｍｇ／ｋｇ）、抗マウスＣＤ１１ｂ抗体（５ｍｇ／ｋｇ）、タキソール（１０ｍｇ／ｋｇ）＋コントロールのＩｇＧ（５ｍｇ／ｋｇ）、または、タキソール（１０ｍｇ／ｋｇ）＋抗ＣＤ１１ｂ抗体（５ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内注射した。３〜４日おきに注射を繰り返した。治療された各グループのマウスの長期生存に対する併用療法の効果を分析した。
【図１３】ＣＤ１１ｂと抗ＣＤ１１ｂ抗体とを結合することにより、ＬＰＳ誘導性免疫抑制単球が１μｇ／ｍｌのＬＰＳで刺激された場合にＰＤ−Ｌ１の発現が減少することを示す。（Ａ）は、有志で構成された健康な被験者からヒト単球を単離し、１００ｎｇ／ｍｌのＬＰＳで２日間前処理することによって免疫抑制を誘発することを示している。（Ｂ）は、１０μｇ／ｍｌのＩｇＧ１、または、抗ＣＤ１１ｂ抗体（ＩＣＲＦ４４）の存在下で、ＬＰＳ誘導性免疫抑制単球を１μｇ／ｍｌのＬＰＳで１８時間、さらに刺激したことを示している。処理した細胞を洗浄し、フローサイトメトリーで分析した。表面のＰＤ−Ｌ１発現をＭＦＩとして示している。
【図１４】ＣＤ１１ｂと抗ＣＤ１１ｂ抗体とを結合することにより、敗血症性ショックの患者からのヒト単球が１μｇ／ｍｌのＬＰＳで刺激された場合にＰＤ−Ｌ１の発現が減少することを示す。敗血症性ショックの患者からヒト単球を単離し、１０μｇ／ｍｌのＩｇＧ１、または、抗ＣＤ１１ｂ抗体の存在下で、１μｇ／ｍｌのＬＰＳで１８時間刺激した。処理した細胞を洗浄し、フローサイトメトリーで分析した。表面のＰＤ−Ｌ１発現をＭＦＩとして示している。
【図１５】ヒト化ＣＤ１１ｂ抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。ＣＤＲ（相補性決定領域）は太字で示されている。
【図１６】ヒト化ＣＤ１１ｂ抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。ＣＤＲ（相補性決定領域）は太字で示されている。
【図１７】ヒト化ＣＤ１１ｂ抗体の結合活性を示す。Ｋ５６２細胞、または、ヒトＣＤ１１ｂをトランスフェクションした細胞（Ｋ５６２／ＣＤ１１ｂ）を１０μｇ／ｍｌのヒト化抗ＣＤ１１ｂ抗体と共に３０分間インキュベートした。ＦＩＴＣ結合マウス抗ヒトＩｇＧによって結合した抗体が検出された。細胞をフローサイトメトリーで分析した。点線は、Ｋ５６２細胞に結合した抗体を示している。実線は、Ｋ５６２／ＣＤ１１ｂ細胞に結合した抗体を示している。
【図１８】ＣＤ１１ｂを抗ＣＤ１１ｂ抗体と結合させることにより、ＬＰＳ刺激を受けたヒト単球におけるＰＤ−Ｌ１の発現が減少することを示す。アイソタイプコントロールであるＩｇＧ、抗ＣＤ１１ｂ抗体（ＩＣＲＦ４４）、または、ヒト化抗ＣＤ１１ｂ抗体の存在下で、ＬＰＳで刺激された単球を１８時間インキュベートした。細胞を収穫し、単球におけるＰＤ−Ｌ１の発現をフローサイトメトリーで分析した。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
まず、本発明の組成物、方法、および、単離方法は変化し得るので、本発明はこれらに限定されないことが理解されるべきである。また、本明細書で用いられる専門用語は、特定の実施形態を説明する目的で用いられており、限定する意図はないことも理解されるべきである。
【００２１】
本発明では、モジュレータを免疫細胞、および／または、他の細胞におけるＣＤ１１ｂと結合させることにより、ＰＤ−Ｌ１の発現を抑制し、それによって、慢性感染症、敗血症、がんにおける免疫不全、および、加齢による免疫老化などの免疫抑制に関連する病気を治療、および／または、予防できるという驚くべき発見をした。
【００２２】
［定義］
特に定義しない限り、本明細書で用いられるすべての技術および科学用語は、当業者によって一般的に理解される意味と同じである。本発明の実施または試験には本明細書に記載されるものと同様または同等のいかなる方法および材料を用いることができる。したがって、変更および修正は、本開示の趣旨および範囲内に収まることが理解されよう。
【００２３】
特に指定しない限り、単数形は複数形を含む。
【００２４】
本明細書で用いられるアミノ酸残基は、以下のように短縮される：アラニン（Ａｌａ；Ａ）、アスパラギン（Ａｓｎ；Ｎ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ；Ｄ）、アルギニン（Ａｒｇ；Ｒ）、システイン（Ｃｙｓ；Ｃ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ；Ｅ）、グルタミン（Ｇｌｎ；Ｑ）、グリシン（Ｇｌｙ；Ｇ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ；Ｈ）、イソロイシン（Ｉｌｅ；Ｉ）、ロイシン（Ｌｅｕ；Ｌ）、リジン（Ｌｙｓ；Ｋ）、メチオニン（Ｍｅｔ；Ｍ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ；Ｆ）、プロリン（Ｐｒｏ；Ｐ）、セリン（Ｓｅｒ；Ｓ）、スレオニン（Ｔｈｒ；Ｔ）、トリプトファン（Ｔｒｐ；Ｗ）、チロシン（Ｔｙｒ；Ｙ）、および、バリン（Ｖａｌ；Ｖ）。
【００２５】
本明細書で用いられる用語「ＣＤ１１ｂ」とは、インテグリンαＭ（ＩＴＧＡＭ）のことであって、ヘテロダイマーのインテグリンαＭβ２の第１のサブユニットである。インテグリンαＭβ２の第２のサブユニットは、ＣＤ１８として知られるインテグリンβ２である。インテグリンαＭβ２は、マクロファージ１抗原（Ｍａｃ−１）、または、補体レセプター３（ＣＲ３）とも呼ばれ、単球、顆粒球、マクロファージ、および、ナチュラルキラー細胞を含む白血球の表面に発現する。
【００２６】
本明細書で用いられる用語「ＰＤ−Ｌ１」とは、プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）、ＣＤ２７４、または、Ｂ７ホモログ１（Ｂ７−Ｈ１）を指す。ＰＤ−Ｌ１は、妊娠、自己免疫疾患、がん、敗血症などの特定の事象の間、および、結核菌、サイトメガロウィルス、および、肝炎などの他の感染症において免疫系を抑制するという重要な役割を果たす４０ｋＤａのタイプ１膜貫通タンパク質である。
【００２７】
本明細書で用いられる用語「単球」は、単核白血球とも呼ばれ、最も重要な防御機構に関与するタイプの白血球に属し、樹枝状細胞、または、マクロファージ前駆細胞に分化され得ると認識されている。単球は、通常、血液系内を移動する。単球は、外部の刺激信号に反応して、多くの免疫調節サイトカインを分泌し、組織における感染部位に移動し、マクロファージへと分化する。
【００２８】
本明細書で用いられる用語「調節する」は、一般的に、コントロールと比較して統計的にまたは生理的に顕著な量で「減少する」または「低下する」だけでなく「増加する」、または、「刺激する」ことを含む。
【００２９】
本明細書で用いられる用語「被検体」とは、治療または治療法のために選択されたヒトまたは非ヒト動物を意味する。
【００３０】
本明細書で用いられる用語「同一性」とは、配列の比較によって決定されるような２つ以上のポリペプチド、または、タンパク質配列の間の関係を指す。技術的には、「同一性」は、そのような配列における列同士の一致によって決定されるような、ポリペプチドまたはタンパク質間の配列の相関度のことを指す。「同一性」は、周知の生体情報による方法によって簡単に計算できる。２つのポリヌクレオチド、または、２つのポリペプチド配列の「パーセント同一性」は、デフォルトパラメータを用いるＧＡＰコンピュータプログラム（ＧＣＧウィスコンシンパッケージ、バージョン１０．３（アクセルリス、カリフォルニア州サンディエゴ）を使用して配列を比較することによって決定される。
【００３１】
本明細書で用いられる用語「ペプチド」、「ポリペプチド」、および、「タンパク質」は、それぞれ、ペプチド結合によって互いに結合される２つ以上のアミノ酸残基からなる分子のことを指す。これらの用語は、翻訳後に、または、共有結合もしくは非共有結合で修飾されたタンパク質の他に、例えば、天然タンパク質、人工タンパク質、タンパク質小片、および、タンパク質配列のポリペプチド類似体（突然変異タンパク質、変異体、および、融合タンパク質）を含む。ペプチド、ポリペプチド、または、タンパク質は、モノマーまたはポリマーであってよい。
【００３２】
本明細書で用いられる用語「親和性」とは、分子（例えば抗体）の単一の結合部位とその結合パートナーとの間の非共有相互作用において全体的な強度を意味する。特に明示しない限り、本明細書で用いられる「結合親和性」とは、結合対（例えば、抗体と抗原）の間の１対１の相互作用を反映する固有の結合親和性のことを指す。分子ＸのパートナーＹに対する親和性は、一般的に、解離定数（Ｋｄ）によって表され得る。親和性は、本明細書に記載されたものを含む従来知られている一般的な方法で測定されてよい。結合親和性を測定するための特定の例示的実施形態は、以下に記載されている。
【００３３】
本明細書で用いられる用語「抗体」は、広い意味合いをもち、特に、モノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、多特異的抗体（例えば、二重特異性抗体）、一価抗体、多価抗体、および、抗体フラグメントなど、所望の生物活性（例えば、Ｆａｂおよび／または単一アーム抗体）を示すものであればよい。
【００３４】
本明細書で用いられる用語「抗体フラグメント」とは、抗原が結合する部分を含むインタクトな抗体以外の分子のことを指す。抗体フラグメントの例は、これらに限定されないが、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２；ダイアボディ；線形抗体；単鎖抗体分子（ｓｃＦｖなど）；抗体フラグメントから形成される多特異的抗体を含む。
【００３５】
本明細書で用いられる用語である、抗体の「抗原結合フラグメント」 とは、抗原と特異的に結合する能力を保持する抗体の１つ以上の部分のことを指す。抗体の抗原結合機能は、全長抗体のフラグメントにより果たされ得ることが分かっている。抗体の「抗原結合フラグメント」という用語に含まれる結合フラグメントの例は、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる一価フラグメントであるＦａｂフラグメント、（ｉｉ）ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって結合される２つのＦａｂフラグメントを含む二価フラグメントであるＦ（ａｂ’）２フラグメント、（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄフラグメント、（ｉｖ）抗体の単一のアームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖフラグメント、（ｖ）ＶＨドメインからなるｄＡｂフラグメント、（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。これらの抗体フラグメントは、タンパク質分解法などの従来の手法を用いて得られる（J. Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, pp 98-118 (N.Y. Academic Press 1983参照)。フラグメントの有用性は、インタクトな抗体と同じやり方で検査される。
【００３６】
本明細書で用いられる用語「相補性決定領域」（ＣＤＲ）とは、抗体内でそれらのタンパク質が抗原の形状を補足する領域のことを指す。本明細書では、ＣＤＲという頭文字が「相補性決定領域」を意味する。
【００３７】
抗体の「可変領域」とは、抗体の軽鎖可変領域、および、抗体の重鎖可変領域のいずれかまたはその組み合わせのことを指す。重鎖および軽鎖可変領域のそれぞれは、超可変領域としても知られる３つのＣＤＲによって接続された４つのフレームワーク領域（ＦＲ）からなる。各鎖におけるＣＤＲは、他の鎖からのＣＤＲとフレームワーク領域によって緊密にまとまり、抗体の抗原結合部分の形成に寄与する。ＣＤＲの境界を識別するのに用いられ得る例示的な規則は、例えば、カバット定義、および、コチア定義を含む。カバット定義は、配列可変性に基づくものである（Kabat et al., 1992, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed., Public Health Service, NIH, Washington D.C.参照）。コチア定義は、構造ループ領域の位置に基づくものである（Chothia et al., 1989, Nature 342:877-883参照）。ＣＤＲ識別のための他のアプローチには、「ＩＭＧＴ定義」（Lefranc, M.-P. et al., 1999, Nucleic Acids Res. 27:209-212）、および、カバットとコチアとの折衷であり、オックスフォード分子ＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアを用いて導出される「ＡｂＭ定義」、または、観察される抗原接着に基づくＣＤＲの「接着定義」（MacCallum et al., 1996, J. Mol. Biol. 262:732-745）が含まれる。本明細書で用いられるＣＤＲは、カバットナンバリングシステムによって定義されるＣＤＲであり得る。
【００３８】
本明細書で用いられる用語「ヒト化抗体」、または、「ヒト化抗体フラグメント」とは、免疫グロブリンアミノ酸配列変異体を含む特定のタイプのキメラ抗体、または、そのフラグメントを含み、予め決められた抗原と結合することができ、ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を実質的に有する１つ以上のフレームワーク領域（ＦＲ）、および、非ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を実質的に有する１つ以上のＣＤＲからなる。非ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列は、「インポート」配列とも呼ばれ、通常は「インポート」抗体ドメイン、特に、可変ドメインから得られる。一般に、ヒト化抗体は、ヒト重鎖または軽鎖可変ドメインのＦＲ間に挿入される、非ヒト抗体の少なくともＣＤＲまたは超可変領域（ＨＶＬ）を含む。
【００３９】
本明細書で用いられる「ヒト抗体」とは、ヒトもしくはヒト細胞から生成されるか、または、ヒト抗体レパートリーまたは他のヒト抗体コード化配列を利用する非ヒト供与源から導かれる抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有するものを指す。このようなヒト抗体の定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を特に除外する。
【００４０】
本明細書で用いられる用語「キメラ抗体」とは、１つの抗体からの１つ以上の領域、および、１つ以上の他の抗体からの１つ以上の領域を含む抗体のことを指す。
【００４１】
本明細書で用いられる用語「重鎖」とは、エピトープに特異性を与える十分な可変領域配列を有する全長重鎖およびそのフラグメントを含む。全長重鎖は、可変領域のドメインＶＨと、３つの不変領域のドメインＣＨ１、ＣＨ２、および、ＣＨ３とを含む。ＶＨドメインは、ポリペプチドのアミノ末端にあり、ＣＨ３ドメインは、カルボキシル末端にある。
【００４２】
本明細書で用いられる用語「軽鎖」は、エピトープに特異性を与える十分な可変領域配列を有する全長軽鎖およびそのフラグメントを含む。全長軽鎖は、可変領域のドメインＶＬと、不変領域のドメインＣＬとを含む。重鎖と同様、軽鎖の可変領域のドメインもポリペプチドのアミノ末端にある。
【００４３】
本明細書に用いられる用語「薬学的に許容可能な担体」とは、活性成分以外の、被検体に対して毒性のない医薬組成物中の成分を指す。薬学的に許容可能な担体は、これに限定されないが、緩衝液、賦形剤、安定剤、または、防腐剤を含む。
【００４４】
本明細書で用いられる用語「被検体」とは、脊椎動物、好ましくは、哺乳類、より好ましくは、ヒトを意味する。哺乳類は、これらに限定されないが、ヒト、家畜、変種動物、および、ペットである。
【００４５】
本明細書で用いられる用語「有効量」とは、有益なまたは所望の臨床結果をもたらすのに十分な量を意味する。有効量は、複数回に分けて投与されてよい。本発明によれば、有効量は、病状を診断、緩和、改善、安定、回復、または、病状の進行を遅らせるもしくは遅延させるのに十分な量のことを指す。
【００４６】
本明細書で用いられる用語「治療」、「治療する」などは、一般的に、所望の薬理学的、および／または、生理学的効果を得ることを意味する。効果は、病気またはその症状を完全に、または、一部予防するという観点では、予防であってよく、および／または、病気、および／または、病気の副作用を一部または完全に安定化または治癒する観点では治療であってよい。本明細書で用いられる「治療」とは、哺乳類、特に、ヒトの病気のあらゆる治療を含み、（ａ）病気またはその症状になりそうだがまだそうとは診断されていない患者がその病気または症状になるのを予防する、（ｂ）病徴を阻害する、すなわち、病気の発症を抑制する、または、（ｃ）病徴を軽減する、すなわち、病気または症状を退行させることを含む。
【００４７】
本明細書で用いられる用語「予防」とは、患者または被検体が病状または病態になるのを阻止する予防または予防的手段が取られていることを意味する。予防とは、患者または被検体が病態または病状になる可能性を低減し、その病状または病態の発症を阻害または抑制することも含む。
【００４８】
値の範囲が与えられる場合、特に明確に指示しなければ、その範囲の上限値と下限値との間の各介在値（文脈によって明示的に示されない限り、下限値の単位の１０分の１まで）、および、その記載範囲の中の任意の他の記載値または介在値は、本発明内に包含されることが理解される。これらのより小さい範囲の上限値および下限値は、独立してより小さい範囲内に含まれ得、また、本発明内に包含され、記載範囲内の任意の具体的に除外された限界に従う。記載範囲が一方または両方の限界を含む場合には、それらの包含された限界の一方または両方を除外する範囲もまた、本発明に含まれる。
【００４９】
［ＣＤ−１１ｂモジュレータの結合は、ＰＤ−Ｌ１の発現に影響を及ぼす］
本発明では、免疫細胞の表面に発現するＣＤ１１ｂ分子と反応するＣＤ１１ｂモジュレータによる治療を通じて、敗血症、慢性感染症、および、がんを含む免疫抑制状態に関連する症状を解除するという驚くべき発見をした。
【００５０】
本発明の一側面では、免疫細胞におけるＰＤ−Ｌ１の発現を阻害する方法を提供する。方法は、免疫細胞を、免疫細胞におけるＣＤ１１ｂと結合するＣＤ１１ｂモジュレータと接触させることによって、免疫細胞におけるＰＤ−Ｌ１の発現を阻害することを含む。あるいは、本発明は、免疫細胞におけるＰＤ−Ｌ１の発現を阻害するための製剤の製造において、ＣＤ１１ｂモジュレータを使用することを含む。本発明は、また、免疫細胞におけるＰＤ−Ｌ１の発現を阻害するＣＤｂ１１モジュレータを提供する。
【００５１】
本発明の他の側面では、免疫抑制または免疫疲弊を解除するか、または、免疫細胞に先在する免疫を誘発する方法を提供する。方法は、免疫細胞を、免疫細胞におけるＣＤ１１ｂと結合するＣＤ１１ｂモジュレータと接触させることを含む。あるいは、本発明は、免疫抑制または免疫疲弊を解除するか、または、免疫細胞に先在する免疫を誘発するための製剤の製造において、ＣＤ１１ｂモジュレータを使用することを含む。本発明は、また、免疫抑制または免疫疲弊を解除するか、または、免疫細胞に先在する免疫を誘発するためのＣＤ１１ｂモジュレータを提供する。
【００５２】
本発明の他の側面では、ＣＤ１１ｂモジュレータに反応する被検体を決定する方法を提供する。方法は、生体サンプルまたは被検体における免疫細胞をＣＤ１１ｂモジュレータと接触させることによって、生体サンプルまたは被検体内においてＰＤ−Ｌ１が阻害されているか否かを検出し、ＣＤ１１ｂモジュレータによる、免疫細胞におけるＰＤ−Ｌ１の阻害を検出することを含む。ＰＤ−Ｌ１が阻害されるということは、被検体がＣＤ１１ｂモジュレータに反応するということを示す。
【００５３】
一実施形態では、本明細書に記載されたＣＤ１１ｂモジュレータは、ＣＤ１１ｂの発現を阻害するＲＮＡｉ薬剤、抗ＣＤ１１ｂ抗体、または、ＣＤ１１ｂを調節する小分子化合物である。
【００５４】
いくつかの実施形態では、ＣＤ１１ｂの発現を阻害するＲＮＡｉ薬剤は、ＣＤ１１ｂの発現を阻害するマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、または、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１１ｂ抗体は、モノクローナル、キメラ、ヒト化、ヒト、または、二重特異性抗ＣＤ１１ｂ抗体である。いくつかの実施形態では、ＣＤ１１ｂを調節する小分子化合物の例は、これらに限定されないが、ＵＳ８，２６８，８１６、ＵＳ２０１２００３５１５４、ＷＯ００２００７０３９６１６、ＷＯ００２００６１１１３７１、ＷＯ００２００７０５４１２８、ＷＯ００１９９９０１２５８、および、J Immunol 2010, 184, pp.3917-26, and Cancer Discov, 2012, 2, pp.1091-99に記載された化合物を含む。好ましくは、化合物は、以下からなるグループから選択される。
【００５５】
【化１】
2018524300.tif 000003
2018524300.tif 000004
2018524300.tif 000005
【００５６】
一実施形態では、免疫細胞は、単球、顆粒球、マクロファージ、骨髄由来サプレッサー細胞、ナチュラルキラー細胞、または、Ｔ細胞である。
【００５７】
一実施形態では、ＣＤ１１ｂの結合は、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１２、または、ＣＤ８Ｔ細胞を増加させる。他の実施形態では、細胞のＣＤ１１ｂにＣＤ１１ｂモジュレータを結合させることにより、免疫抑制に関連する病気を治療、および／または、予防する。
【００５８】
さらなる実施形態では、免疫抑制、または、免疫疲弊に関連する病気は、急性および／または慢性感染症、敗血症、がんにおける免疫不全、または、加齢による免疫老化におけるＴ細胞の疲弊によるものである。したがって、本発明は、被検体の急性および／または慢性感染症、敗血症、がんにおける免疫不全、または、加齢による免疫老化を治療または予防する方法を提供する。方法は、有効量のＣＤ１１ｂモジュレータを被検体に投与することを含む。
【００５９】
一実施形態では、本明細書に記載されるがんは、免疫療法に反応するがんである。
免疫療法に反応するがんの例は、これらに限定されないが、メラノーマ、肺がん、肺の扁平上皮がん、頭頚部がん、乳がん、卵巣がん、子宮がん、前立腺がん、胃がん、子宮頸がん、食道がん、膀胱がん、腎臓がん、脳ガン、肝臓がん、大腸がん、骨肉腫、膵臓がん、皮膚がん、皮膚または眼内悪性黒色腫、卵巣がん、直腸がん、肛門部のがん、胃がん、精巣がん、卵管がん、子宮内膜がん、頸がん、膣がん、外陰がん、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、食道がん、小腸がん、内分泌系がん、甲状腺がん、副甲状腺がん、副腎がん、軟部組織の肉腫、尿道がん、陰茎がん、急性骨髄性白血病を含む慢性または急性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病、小児の固形腫瘍、リンパ球性リンパ腫、腎盂がん、中枢神経系（ＣＮＳ）の腫瘍、中枢神経系原発リンパ腫、腫瘍の血管新生、脊髄軸腫瘍、脳幹グリオーマ、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮がん、扁平上皮細胞がん、および、Ｔ細胞リンパ腫が挙げられる。
【００６０】
一実施形態では、がんは、がん転移、難治性がん、再発性がん、または、進行がんである。
【００６１】
一実施形態では、がんを治療および／または予防する方法は、追加の活性薬剤を投与、または、追加の治療法を行うことを含む。いくつかの実施形態では、追加の活性薬剤または追加の治療法は、免疫チェックポイント療法、放射線療法、または、化学療法である。
【００６２】
一実施形態では、ＣＤ１１ｂモジュレータと、免疫チェックポイント療法、放射線療法、または、化学療法とは、同時に、順に、または、別々に投与される。さらなる実施形態では、免疫チェックポイント療法は、免疫チェックポイントタンパク質を投与することを含む。好ましくは、免疫チェックポイントタンパク質は、抗ＰＤ−１リガンド、抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、その抗原結合性フラグメント、または、それらの任意の組合せである。抗ＰＤ−１リガンドの例は、これらに限定されないが、抗ＰＤ−１抗体（ニボルマブおよびペムブロリズマブなど）、および、抗ＣＴＬＡ−４抗体（イピリムマブなど）が挙げられる。
【００６３】
他の実施形態では、化学療法は、化学療法剤を投与することを含む。化学療法剤の例は、これらに限定されないが、アルキル化剤、代謝拮抗物質、抗微小管剤、トポイソメラーゼ阻害剤、および、細胞障害性抗生物質が挙げられる。好ましくは、化学療法剤は、シスプラチン、フルオロウラシル（５−Ｆｕ）、タキソール、ドセタキセル、ビノレルビン、ビンデシン、ビンフルニン、ゲムシタビン、メトトレキサート、ゲフィチニブ、ラパチニブ、または、エルロチニブである。
【００６４】
本明細書に記載されるＣＤ１１ｂモジュレータ、および、他の薬剤は、製剤または組成物として調製されてよい。本発明の製剤、または、医薬品組成物は、局所療法および全身療法のいずれが要求されるかによって、また、治療される部位によって、多くの方法で投与されてよい。投与は、経口または非経口でよい。
【００６５】
特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物および組成物は、非経口で投与される。非経口投与は、静脈内、動脈内、皮下、腹腔内、または、筋肉内注射または注入を含む。
【００６６】
特定の実施形態では、非経口投与のための製剤または組成物は、緩衝液、希釈液、および、他の適切な添加剤を含み得る滅菌水溶液であってよい。他の適切な添加剤とは、例えば、これに限定されないが、浸透促進剤、担体化合物、および、他の薬学的に許容可能な担体または賦形剤などを含み得る。特定の実施形態では、経口投与のための製剤または組成物は、これらに限定されないが、薬剤担体、賦形剤、粉末、顆粒、微粒子、ナノ粒子、水または非水性媒体に懸濁させたまたは溶かしたもの、カプセル、ゲルカプセル、小袋、錠剤、または、小錠剤を含み得る。増粘剤、香料、希釈液、乳化剤、分散助剤、または、結合剤も望ましい。
【００６７】
投薬は、治療過程が数日であるものから数か月に及ぶものもある、治療される病気の重症度、および、反応性に左右されるか、または、治癒するまで、もしくは、病状が改善するまで行われる。投薬は、薬効および代謝にも左右される。
【００６８】
免疫細胞におけるＰＤ−Ｌ１の発現量は、免疫抑制および免疫疲弊を解除し、先在する免疫を誘発する新規な治療標的としての役割を果たす。
【００６９】
［本発明の抗ＣＤ１１ｂ抗体］
本発明によれば、新規な抗ＣＤ１１ｂ抗体、および、この抗ＣＤ１１ｂ抗体をがん免疫療法、慢性感染症、敗血症、がんによる免疫欠損、および、加齢による免疫老化におけるＴ細胞疲弊などの免疫抑制、および、免疫疲弊に関連する病気の治療、および／または、予防に用いる方法が提供される。
【００７０】
本発明の一側面では、抗ＣＤ１１ｂ抗体、または、その抗原結合部分を提供する。抗ＣＤ１１ｂ抗体、または、その抗原結合部分は、ＮＹＷＩＮ（配列番号１）もしくはＧＦＳＬＴＳＮＳＩＳ（配列番号２）のアミノ酸残基、または、配列番号１もしくは２と少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一であるアミノ酸配列を有する変異体からなる重鎖相補性決定領域１（Ｈ−ＣＤＲ１）、ＮＩＹＰＳＤＴＹＩＮＨＮＱＫＦＫＤ（配列番号３）もしくはＡＩＷＳＧＧＧＴＤＹＮＳＤＬＫＳ（配列番号４）のアミノ酸残基、または、配列番号３もしくは４と少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一であるアミノ酸配列を有する変異体からなる重鎖相補性決定領域２（Ｈ−ＣＤＲ２）、および、ＳＡＹＡＮＹＦＤＹ（配列番号５）もしくはＲＧＧＹＰＹＹＦＤＹ（配列番号６）のアミノ酸残基、または、配列番号５もしくは６と少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一であるアミノ酸配列を有する変異体からなる重鎖相補性決定領域３（Ｈ−ＣＤＲ３）の少なくとも１つと、ＲＡＳＱＮＩＧＴＳＩＨ（配列番号７）もしくはＫＳＳＱＳＬＬＹＳＥＮＱＥＮＹＬＡ（配列番号８）のアミノ酸残基、または、配列番号７もしくは８と少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一であるアミノ酸配列を有する変異体からなる軽鎖相補性決定領域１（Ｌ−ＣＤＲ１）、ＹＡＳＥＳＩＳ（配列番号９）もしくはＷＡＳＴＲＱＳ（配列番号１０）のアミノ酸残基、または、配列番号９もしくは１０と少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一であるアミノ酸配列を有する変異体からなる軽鎖相補性決定領域２（Ｌ−ＣＤＲ２）、および、ＱＱＳＤＳＷＰＴＬＴ（配列番号１１）もしくはＱＱＹＹＤＴＰＬＴ（配列番号１２）のアミノ酸残基、または、配列番号１１もしくは１２と少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一であるアミノ酸配列を有する変異体からなる軽鎖相補性決定領域３（Ｌ−ＣＤＲ３）の少なくとも１つと、を含み、単離された抗体またはその抗原結合部分は、ＣＤ１１ｂと結合する。
【００７１】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されたＣＤＲは、１つ以上の挿入、置換、および／または、欠失を含む。
【００７２】
本発明のさらなる実施形態では、抗ＣＤ１１ｂ抗体、または、その抗原結合部分が提供される。抗ＣＤ１１ｂ抗体、または、その抗原結合部分は、（ｉ）配列番号１を有するＨ−ＣＤＲ１、配列番号３を有するＨ−ＣＤＲ２、および、配列番号５を有するＨ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、（ｉｉ）配列番号７を有するＬ−ＣＤＲ１、配列番号９を有するＬ−ＣＤＲ２、および、配列番号１１を有するＬ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域と、を含むか、または、（ｉｉｉ）配列番号２を有するＨ−ＣＤＲ１、配列番号４を有するＨ−ＣＤＲ２、および、配列番号６を有するＨ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、（ｉｖ）配列番号８を有するＬ−ＣＤＲ１、配列番号１０を有するＬ−ＣＤＲ２、および、配列番号１２を有するＬ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域と、を含む。さらなる実施形態では、Ｈ−ＣＤＲ１は、配列番号１または２からなるアミノ酸配列を有し、Ｈ−ＣＤＲ２は、配列番号３または４からなるアミノ酸配列を有し、Ｈ−ＣＤＲ３は、配列番号５または６からなるアミノ酸配列を有し、Ｌ−ＣＤＲ１は、配列番号７または８からなるアミノ酸配列を有し、Ｌ−ＣＤＲ２は、配列番号９または１０からなるアミノ酸配列を有し、Ｌ−ＣＤＲ３は、配列番号１１または１２からなるアミノ酸配列を有する。
【００７３】
本発明の一側面では、重鎖可変領域、または、その抗原結合部分が提供される。重鎖可変領域は、配列番号１または２からなるアミノ酸配列を有するＨ−ＣＤＲ１と、配列番号３または４からなるアミノ酸配列を有するＨ−ＣＤＲ２と、配列番号５または６からなるアミノ酸配列を有するＨ−ＣＤＲ３とを含む。
【００７４】
本発明の一側面では、軽鎖可変領域、または、その抗原結合部分が提供される。軽鎖可変領域、または、その抗原結合部分は、配列番号７または８からなるアミノ酸配列を有するＬ−ＣＤＲ１と、配列番号９または１０からなるアミノ酸配列を有するＬ−ＣＤＲ２と、配列番号１１または１２からなるアミノ酸配列を有するＬ−ＣＤＲ３とを含む。
【００７５】
本発明の一実施形態では、ヒト化抗ＣＤ１１ｂ抗体、または、その抗原結合部分が提供される。ヒト化抗ＣＤ１１ｂ抗体、または、その抗原結合部分は、（ｉ）配列番号１３〜２２のアミノ酸配列のいずれかと少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、（ｉｉ）配列番号２３〜３２のアミノ酸配列のいずれかと少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含む。
【００７６】
本発明のさらなる実施形態では、ヒト化抗ＣＤ１１ｂ抗体、または、その抗原結合部分が提供される。ヒト化抗ＣＤ１１ｂ抗体、または、その抗原結合部分は、配列番号１３〜２２からなるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号２３〜３２からなるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含む。
【００７７】
好ましくは、本発明は、以下を含むヒト化抗ＣＤ−１１ｂ抗体、または、その抗原結合部分を提供する。（ａ）配列番号１３からなるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および、配列番号２３からなるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、（ｂ）配列番号１４からなるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および、配列番号２４からなるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、（ｃ）配列番号１５からなるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および、配列番号２５からなるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、（ｄ）配列番号１６からなるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および、配列番号２６からなるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、（ｅ）配列番号１７からなるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および、配列番号２７からなるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、（ｆ）配列番号１８からなるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および、配列番号２８からなるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、（ｇ）配列番号１９からなるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および、配列番号２９からなるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、（ｈ）配列番号２０からなるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、および、配列番号３０からなるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、（ｉ）配列番号２１からなるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および、配列番号３１からなるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、または、（ｊ）配列番号２２からなるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および、配列番号３２からなるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域。
【００７８】
配列番号１３〜３２のアミノ酸配列は、以下のとおりである。
【００７９】
【表１】
2018524300.tif 000006
2018524300.tif 000007
2018524300.tif 000008
【００８０】
標的抗原に実質的に対抗するモノクローナル抗体を調製する技術は、当技術分野では周知である（例えば、Kohler and Milstein, Nature 256: 495 (1975), and Coligan et al. (eds.), Current Protocols In Immunology, Vol. 1, pages 2.5.1-2.6.7 (John Wiley & Sons 1991)参照）。モノクローナル抗体は、マウスまたはニワトリに抗原を含む組成物を注射し、Ｂリンパ球を得るために脾臓を除去し、Ｂリンパ球と骨髄腫細胞とを融合させてハイブリドーマを生成し、ハイブリドーマをクローニングし、抗原に対する抗体を産出する陽性クローンを選択し、抗原に対する抗体を産出する陽性クローンを培養し、ハイブリドーマ培養から抗体を単離することによって得ることができる。
【００８１】
キメラまたはヒト化抗体を生成するようなさまざまな技術は、抗体クローニング、および、抗体構築の手順を含み得る。対象となる抗体の抗原結合可変軽鎖および重鎖配列は、さまざまな分子クローニング手順によって得られる。キメラ抗体は、ヒト抗体の可変領域が、例えば、相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むマウス抗体の可変領域と置き換えられている組み換えタンパク質である。キメラ抗体が被検体に投与されると、免疫原性の低下、および、安定性の向上が見られる。キメラ抗体を構築する方法は、当技術分野では周知である。キメラモノクローナル抗体は、マウスの免疫グロブリンの重鎖および軽鎖可変ドメインからヒト抗体の対応する可変ドメインへとマウスのＣＤＲをトランスファーすることによってヒト化され得る。キメラモノクローナル抗体におけるマウスフレームワーク領域は、ヒトフレームワーク領域の配列と置換されてもよい。
【００８２】
例えば、ＣＤ１１ｂを特異的に結合するヒト化抗体のＶＬおよび／またはＶＨをコードする核酸は、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、リガーゼ連鎖反応（ＬＣＲ）、転写に基づく増幅系（ＴＡＳ）などのインビトロ法によってクローン化、または、増幅され得る。例えば、タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、分子のＤＮＡ配列に基づくプライマーを用いて、ｃＤＮＡのポリメラーゼ連鎖反応によって単離され得る。当業者にとって、多種多様なクローニングおよびインビトロ増幅方法は周知である。ポリヌクレオチドは、厳格なハイブリダイゼーション条件の下で、所望のポリヌクレオチド配列から選択されたプローブによってゲノムまたはｃＤＮＡライブラリをスクリーニングすることによっても単離され得る。
【００８３】
ポリヌクレオチドは、ベクター、自己複製プラスミドもしくはウィルス、または、原核生物もしくは真核生物のゲノムＤＮＡに組み込まれるか、または、他の配列とは独立した別の分子（例えば、ｃＤＮＡ）として存在する組み換えＤＮＡを含む。本発明のヌクレオチドは、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、または、どちらかのヌクレオチドの改変形態であってよい。この用語は、一重鎖および二重鎖ＤＮＡを含む。
【００８４】
ＣＤ１１ｂを特異的に結合するヒト化抗体のＶＬおよび／またはＶＨをコードするＤＮＡ配列は、適切な宿主細胞にＤＮＡをトランスファーすることによってインビトロで発現させることができる。細胞は、原核細胞または真核細胞であってよい。この用語は、被検体の宿主細胞のいかなる子孫も含む。複製中に突然変異が起きることもあるので、すべての子孫が親細胞と同一ではないかもしれないことが理解される。安定にトランスファーする方法では、外来性ＤＮＡが宿主細胞に継続して維持されるが、これは、当技術分野では周知である。ＣＤ１１ｂを特異的に結合するヒト化抗体のＶＬおよび／またはＶＨをコードするポリヌクレオチド配列は、発現制御配列と機能的に連結され得る。コード配列と機能的に連結された発現制御配列は、コード配列が発現制御配列と整合する条件下で発現するようライゲーションされる。発現制御配列は、これらに限定されないが、適切なプロモータ、エンハンサ、転写ターミネータ、タンパク質コード遺伝子の開始コドン（例えばＡＴＧ）、イントロンを除去してｍＲＮＡの適切な翻訳を可能にするためにその遺伝子の正しい読み枠を維持するスプライシングシグナル、および、終止コドンを含む。
【００８５】
ＣＤ１１ｂを特異的に結合するヒト化抗体のＶＬおよび／またはＶＬをコードするポリヌクレオチド配列は、発現ベクターに挿入され得る。発現ベクターの例は、これらに限定されないが、配列の挿入または組み込みを可能にするよう操作され、原核生物または真核生物に発現し得るプラスミド、ウィルス、および、他のビヒクルが挙げられる。宿主は、微生物、イースト、昆虫、および、哺乳動物を含み得る。原核生物において真核生物またはウィルスの配列を有するＤＮＡ配列を発現する方法は、当技術分野では周知である。宿主内で発現および複製可能である、生物学的に機能的なウィルスおよびプラスミドＤＮＡベクターは、当技術分野では周知である。組み換えＤＮＡによる宿主細胞の形質転換は、当業者に周知の従来技術によって行われてよい。
【００８６】
組み換えによって発現したポリペプチドの単離および精製は、分取クロマトグラフィ、および、免疫学的分離を含む従来の手段によって行われ得る。
【００８７】
ヒト化は、齧歯動物のＣＤＲ配列をヒト抗体の対応する配列と置換することによって、通常、当技術分野では周知である以下の従来の方法により行われ得る。従って、このような「ヒト化」抗体は、インタクトなヒト可変ドメインが、非ヒトからの対応する配列によって置換されている抗体ではない。特に、ヒト化抗体は、一般的に、いくつかのＣＤＲ残基、そして場合によってはいくつかのＦＲ残基が、例えば、齧歯動物の抗体といった非ヒトの類似部位からの残基と置換されるヒト抗体である。
【００８８】
ヒト化抗体を作製するために軽鎖および重鎖の両方のヒト可変領域を選択することは、抗原性を低下させるのに非常に重要なことである。齧歯動物の抗体の可変領域ドメインの配列は、周知のヒト可変領域ドメインの配列の全体のライブラリに対してスクリーニングされる。その後、齧歯動物の配列と最も近いヒトの配列がヒト化抗体のヒトフレームワーク領域（ＦＲ）として受け入れられる。他の方法では、軽鎖または重鎖の特定のサブグループのすべてのヒト抗体のコンセンサス配列から導かれた特定のフレームワーク領域を用いる。いくつかの異なるヒト化抗体に対して同じフレームワーク領域が用いられてよい。
【００８９】
抗体結合部分は、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ）２、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖなどを含む。これらのフラグメントは、例えば、パパイン（Ｆａｂフラグメントを生成する）、または、ペプシン（Ｆ（ａｂ’）２フラグメントを生成する）などの酵素によるタンパク質切断といった当技術分野では周知である方法を用いてインタクトな抗体から生成される。
【００９０】
本明細書に記載されるポリペプチドをコードする核酸の修飾は、その生物活性を損なうことなく行われ得る。いくつかの修飾は、クローニング、発現、または、標的分子を融合タンパク質に取り込むために行われてよい。このような修飾は、当業者には周知であり、例えば、終止コドン、開始部位を設けるためにアミノ末端に追加されたメチオニン、都合のよい位置に制限部位を形成するためにどちらかの末端に配置された追加のアミノ酸、または、精製ステップを補助する追加のアミノ酸を含む。本開示の抗体は、組み換え方法に加えて、当技術分野では周知である標準的なペプチド合成を用いて全体または一部が構築され得る。
【００９１】
本発明の他の側面では、本発明の抗ＣＤ１１ｂ抗体を含む組成物が提供される。いくつかの実施形態では、このような組成物が被検体に投与され得る。いくつかの実施形態では、本発明の抗ＣＤ１１ｂ抗体は、これらに限定されないが、薬学的に許容可能な担体、アジュバント、湿潤または乳化剤、ｐＨ緩衝剤、防腐剤、および／または、組成物の使用目的に適した他の成分のうち、１つ以上の異なる成分を有する組成物に含まれてよい。このような組成物は、溶液、懸濁液、エマルジョンなどの形態をとり得る。用語「薬学的に許容可能な担体」とは、さまざまな希釈剤、賦形剤、および／または、ビヒクルを含む。薬学的に許容可能な担体は、これに限定されないが、ヒトおよび／または他の動物の被検体への送達に安全なことが知られている、および／または、連邦または州政府の規制機関によって認可されている、および／または、米国薬局方に掲載されている、および／または、他の一般的に認識されている薬局方に掲載されている、および／または、人間および／または他の動物に使用するために１つ以上の一般的に認識されている規制機関から特定または個別の承認を受けている担体を含む。このような薬学的に許容可能な担体は、これらに限定されないが、水、水溶液（食塩水、緩衝液など）、有機溶剤（特定のアルコール、および、石油、動物油、植物性または合成油（落花生油、大豆油、鉱油、胡麻油など）を含む油）などを含む。
【００９２】
一実施形態では、本発明のヒト化抗ＣＤ１１ｂ抗体は、がんの治療に用いられる化学物質である１つ以上の化学療法剤を含む、抗腫瘍薬とも呼ばれる組成物に含まれ得る。抗腫瘍薬は、薬物の化学構造の違い、および、化学的起源に基づいて、通常、アルキル化剤、代謝拮抗薬、抗腫瘍性抗生物質、アントラサイクリン抗生物質、抗腫瘍植物薬、および、ホルモンに分類される。周期または位相特異性に基づき、腫瘍に対する化学療法薬は、（１）アルキル化剤、抗腫瘍抗生物質、白金配位錯体などの細胞周期非特異的薬剤（ＣＣＮＳＡ）、および、（２）代謝拮抗薬、ビンカアルカロイドなどの細胞周期特異的薬剤（ＣＣＳＡ）に分類され得る。
【００９３】
いくつかの実施形態では、本発明の組成物は、「有効量」の本発明の抗ＣＤ１１ｂ抗体を含む。「有効量」とは、所望の成果を得るのに必要とされる量である。本発明のヒト化抗ＣＤ１１ｂ抗体の、所望の成果を得るために有効な量は、様々な要因に左右される。様々な要因は、これらに限定されないが、対象とする被検体の種（ヒトかまたは他の動物種かどうか）、対象とする被検体の年齢および／または性別、計画された投与経路、計画された投与方式、進行中の病気または状態の重篤度などを含む。ある範囲の有効量は、例えば、インビトロアッセイ、および／または、対象とする被検体種、または、適切な動物モデル種におけるインビボアッセイを用いて、過度の実験なしの標準的な技術によって決定され得る。適切なアッセイは、これらに限定されないが、用量反応曲線、および／または、インビトロおよび／またはインビボモデルシステムから導出された他のデータからの外挿を含む。いくつかの実施形態では、有効量は、特定の状況に基づく医師または獣医の判断に従い決定され得る。
【００９４】
一実施形態では、ヒト化抗ＣＤ１１ｂ抗体の有効量は、一回の投与につき約０．０１ｍｇ／ｋｇ（体重）〜４０ｍｇ／ｋｇであり、好ましくは、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜３０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ〜４０ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ〜３０ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ〜４０ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ〜３０ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ〜４０ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ〜３０ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ、または、約１ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇである。
【００９５】
いくつかの実施形態では、本発明は、ヒト化抗ＣＤ１１ｂ抗体を被検体に投与する方法を提供する。このような方法は、免疫細胞におけるＰＤ−Ｌ１の発現を阻害し、免疫抑制もしくは免疫疲弊を解除するか、または、免疫細胞に先在する免疫を誘発し、被検体内のＰＤ−Ｌ１を検出し、急性および／または慢性感染症、敗血症、がんにおける免疫不全、または、加齢による免疫老化を治療または予防することを含む。本発明の抗ＣＤ１１ｂ抗体は、上記方法において用いることができる。
【００９６】
本明細書に記載されるがんは、免疫療法に反応するがんであり、がんの例は、本明細書に記載されるとおりである。がんを予防および／または治療する方法は、追加の活性薬剤を投与または追加の治療法を行うことを含む。追加の活性薬剤、それらの実施形態、および、投与は、本明細書に記載されるとおりである。
【００９７】
本発明の抗ＣＤ１１ｂ抗体、または、抗ＣＤ１１ｂ抗体を含む組成物が（例えば治療方法の過程で）投与され得る被検体は、あらゆる動物種を含む。いくつかの実施形態では、被検体は、哺乳類種である。哺乳類の被検体は、これらに限定されないが、ヒト、非ヒト霊長類、齧歯動物、ウサギ、および、フェレットを含む。
【００９８】
当技術分野ではさまざまなデリバリーシステムが周知であり、本発明の組成物を被検体に投与するためにいかなる適切なデリバリーシステムが用いられてよい。このようなデリバリーシステムは、これらに限定されないが、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、および、経口デリバリーシステムを含む。本発明の組成物は、例えば、点滴またはボーラス注射、上皮または皮膚粘膜裏打ち（例えば、口腔粘膜、直腸および腸粘膜）を介した吸収によるいかなる都合のよい経路によって投与されてよく、他の生物活性材料と共に投与されてもよい。投与は、全身または局所投与であってよい。
【００９９】
いくつかの実施形態では、単回投与が望ましい。しかしながら、他の実施形態では、所望の効果をもたらすべく、同じまたは異なる経路で追加の投与が行われてよい。
いくつかの実施形態では、投与方式は、単回投与を含み得る。
他の実施形態では、投与方式は、複数回投与を含み得る。
【実施例】
【０１００】
以下、実施例で用いられる材料および方法を記載する。
【０１０１】
［材料および方法］
ヒト細胞の単離および培養
【０１０２】
有志で構成された健康な被験者の白血球濃縮物を台湾血液基金会（台北市、台湾）から入手した。本研究の各参加者にインフォームドコンセントを記入してもらい、馬偕紀念医院の施設内倫理委員会の承認を得た。ヒト単球を上記のとおり単離した。簡単に説明すると、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）をＦｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ  Ｐｌｕｓ（ＧＥヘルスケア社）を用いた勾配遠心分離によって単離した。ＣＤ１４  ＭＡＣＳマイクロビーズ（ミルテニーバイオテク社）を用いてＣＤ１４の選定を行うことにより、単球をさらに精製した。フローサイトメトリー分析により確認した単球の純度は、およそ９０％であった。
【０１０３】
動物および腫瘍細胞株
【０１０４】
台湾国家実験動物センター（台北市、台湾）より、Ｃ５７ＢＬ／６マウス（６〜８週齢）を購入した。すべての動物実験は、特定の無菌条件下で、馬偕紀念医院の動物実験委員会に認可された規則に従い行われた。治療開始時、および、治療期間の毎日、各マウスの体重を測定した。Ｂ１６Ｆ１０は、マウスのメラノーマ細胞であり、ＬＬＣ１は、マウスのルイス肺がんである。すべての細胞は、Ｃ５７ＢＬ／６マウスから得たものである。細胞を１０％の加熱不活性化したウシ胎仔血清、２ｍＭのＬ−グルタミン酸、ペニシリン（１００Ｕ／ｍｌ）、および、ストレプトマイシン（１００μｇ／ｍｌ）を含むダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）にて３７℃、５％ＣＯ２を含む湿気のある雰囲気下で維持した。
【０１０５】
抗体および試薬
【０１０６】
ヒト単球の研究
【０１０７】
大腸菌（Ｏ１１１：Ｂ４）のＬＰＳをシグマ社から入手した。ヒトＣＤ１１ｂ（ＩＣＲＦ４４）に特異的であるマウス結合抗体、および、コントロールの抗体に用いるマウスＩｇＧ１をバイオレジェンド社より購入した。
【０１０８】
マウスのがんモデル
【０１０９】
マウスのＣＤ１１ｂ（Ｍ１／７０）に特異的なラット結合抗体、コントロールであるラットＩｇＧ２ｂ抗体（ＬＴＦ−２）、アメリカンハムスター由来の抗マウスＰＤ１（Ｊ４３）、および、コントロールであるアメリカンハムスターＩｇＧをＢｉｏＸｃｅｌｌ社より購入した。タキソールは、馬偕紀念医院から入手した化学療法薬である。
【０１１０】
がん治療のプロトコル
【０１１１】
皮下腫瘍モデル
【０１１２】
Ｃ５７ＢＬ／６マウスに２×１０５個のＢ１６Ｆ１０細胞、または、１×１０６個のＬＬＣ１細胞を皮下接種した。腫瘍接種の７日後に治療を開始した。週２回、異なる抗体および化学療法薬を腹腔内投与して腫瘍のできたマウスを治療した。週２回、触知可能な腫瘍の形成をモニタおよび記録し、腫瘍が予め決められたサイズである３０００ｍｍ３を超えた場合、マウスを屠殺した。腫瘍体積をノギスで測定し、式Ａ×Ｂ２×０．５４を用いて計算した。式中、Ａは、最大直径、Ｂは、最小直径である。
【０１１３】
肺転移モデル
【０１１４】
初日、２×１０５個のＢ１６Ｆ１０細胞、または、ＬＬＣ１細胞を各マウスの尾静脈から注射した。１日目、マウスにさまざまな抗体を腹腔内注射した。３〜４日おきに注射を繰り返した。１５日目、マウスを屠殺し、腫瘍播種の量を、肺に存在する小節の総数として顕微鏡下で数えた。他の実験では、治療を受けたマウスの長期生存に対する併用療法の効果をグループごとに分析した。
【０１１５】
フローサイトメトリー分析
【０１１６】
ヒト単球の研究
【０１１７】
単球を、抗ＣＤ１１ｂ抗体（ＩＣＲ４４）、または、適切なアイソタイプコントロール抗体で１時間プレインキュベートした。１００ｎｇ／ｍｌのＬＰＳを連続的に細胞に添加し、一晩インキュベートした。ＬＰＳ刺激を受けた単球の表面表現型を分析すべく、１％のＢＳＡを含むリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で希釈したモノクローナル抗体（ｍＡｂ）であるＰＤ−Ｌ１−ＦＩＴＣ、ＣＤ８０−ＰＥ、ＣＤ８６−ＰＥ、ＨＬＡ−ＤＲ−ＰＥ、および、ＣＤ１４−ＰｅｒＣＰ（ＢＤバイオサイエンス社）と共に、細胞を、暗所にて氷上で３０分インキュベートした。単球、多形核白血球（ＰＭＮ）、および、リンパ球をそれらのＦＳＣ／ＳＳＣ特性に基づきゲーティングした。ＦＡＣＳ  Ｃａｌｉｂｕｒを用いて蛍光を検出し、ＦＣＳ  Ｅｘｐｒｅｓｓバージョン３（Ｄｅ  Ｎｏｖｏ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ社）を用いてデータを分析した。
【０１１８】
マウスがんの研究
【０１１９】
腫瘍浸潤白血球を得るべく、腫瘍組織をコラゲナーゼＩＶ（Ｓｉｇｍａ社）で消化した。単細胞懸濁液を、抗体ＣＤ４５−ＰＥ、Ｌｙ−６Ｇ−ＦＩＴＣ、Ｌｙ−６Ｃ−ＡＰＣ、および、ＣＤ８ｂ．２−ＦＩＴＣで染色した。腫瘍浸潤白血球をＣＤ４５＋集団からゲーティングした。ＦＡＣＳ  Ｃａｌｉｂｕｒを用いて蛍光を検出し、ＦＣＳ  Ｅｘｐｒｅｓｓバージョン３（Ｄｅ  Ｎｏｖｏ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ社）を用いてデータを分析した。
【０１２０】
各実験装置から白血球（ＷＢＣ）を単離すべく、血球全体をＲＢＣ溶解緩衝液によって溶解させた。単細胞懸濁液を、抗体ＰＤ−Ｌ１−ＡＰＣ、ＩＡＩＥ−ＡＰＣ、および、ＣＤ８ｂ．２−ＦＩＴＣ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ社）で染色した。単球、多形核白血球（ＰＭＮ）、および、リンパ球をそれらのＦＳＣ／ＳＳＣ特性に基づきゲーティングした。ＦＡＣＳ  Ｃａｌｉｂｕｒを用いて蛍光を検出し、ＦＣＳ  Ｅｘｐｒｅｓｓバージョン３（Ｄｅ  Ｎｏｖｏ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ社）を用いてデータを分析した。
【０１２１】
サイトカインの数量化
【０１２２】
培養液上清のヒトＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、および、ＴＮＦ−αを、市販の酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ；Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社）を用いて、製造者の説明書に従い検出した。血漿におけるマウスＬ−１２、ＩＦＮ−γ、および、ＴＮＦ−αをＢＤ  ＣＢＡマウス炎症キットにより定量化した。
【０１２３】
［実施例１  ＣＤ１１ｂの結合は、ＬＰＳ刺激を受けた単球におけるＰＤ−Ｌ１の発現を減少させる。］
本実施例では、インテグリンαＭβ２（Ｍａｃ−１）を遮断することによりＴＬＲ（Ｔｏｌｌ様受容体）応答を機能的に高めるか否かを調べた。図１に示すように、抗ＣＤ１１ｂ抗体（ＩＣＲＦ４４）などのＣＤ１１ｂ結合剤を投与することによって、ＬＰＳ刺激を受けた単球におけるＰＤ−Ｌ１の発現を減少させ得る。それに対し、抗ＣＤ１１ｂ抗体で治療しても、ＬＰＳ刺激を受けた単球におけるＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ８０、および、ＣＤ８６の発現量は変わらなかった。ＣＤ１１ｂをＣＤ１１ｂアンタゴニストの小分子であるＭＬ−Ｃ１９−Ａ（図２（Ａ））と結合させても、ＬＰＳ刺激を受けた単球におけるＰＤ−Ｌ１の発現を阻害することを示した（図２（Ｂ））。これらの結果は、ＬＰＳ刺激を受けた単球におけるＰＤ−Ｌ１発現の誘発にＣＤ１１ｂが重要な役割を果たしていることを示唆している。
【０１２４】
［実施例２  抗腫瘍免疫におけるＣＤ１１ｂの結合の効果］
抗腫瘍免疫におけるＣＤ１１ｂの結合の効果を調べるべく、抗マウスＣＤ１１ｂ抗体（Ｍ１／７０）をＢ１６Ｆ１０マウス腫瘍モデルにおける単独療法に用いた。初日、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにＢ１６Ｆ１０細胞を皮下注射した。７日目、マウスにコントロールのＩｇＧ（５ｍｇ／ｋｇ）、または、抗マウスＣＤ１１ｂ抗体（５ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内注射した。３〜４日おきに注射を繰り返した。各グループの腫瘍体積および長期生存をモニタして効果を決定した。図３に示すように、ＣＤ１１ｂを抗マウスＣＤ１１ｂ抗体に結合させることにより、Ｂ１６Ｆ１０腫瘍の皮下成長を著しく阻害した（１８日目：コントロールのＩｇＧは、１０５４±３８５．４ｍｍ３、それに対し、抗ＣＤ１１ｂ抗体は５０２．７±２６８．２ｍｍ３）。腫瘍における免疫細胞集団の比率を調べた。腫瘍接種後１８日目、ＣＤ１１ｂを抗ＣＤ１１ｂ抗体に結合することにより、Ｔ細胞を抑制する腫瘍浸潤骨髄由来免疫抑制細胞（ＭＤＳＣ）の局所的蓄積を減少させ、腫瘍浸潤ＣＤ８Ｔ細胞を増加させる結果になった（図４）。ＣＤ１１ｂを抗ＣＤ１１ｂ抗体と結合させることにより、免疫抑制的な腫瘍内微小環境は、抗腫瘍効果に積極的に貢献する免疫賦活性状態へと変化した。抗ＣＤ１１ｂ抗体による治療後の腫瘍周辺における免疫細胞集団の比率をさらに調べた。腫瘍接種後１５日目、抗ＣＤ１１ｂ抗体による治療によってＣＤ１１ｂ陽性白血球におけるＰＤ−Ｌ１の発現は減少したが、ＣＤ８Ｔ細胞における活性化Ｔ細胞であるＩＡＩＥ陽性ＣＤ８Ｔ細胞の比率は高くなった（図５）。
ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１２、および、ＴＮＦ−αの血漿中濃度は、さまざまな炎症性または悪性疾患の免疫賦活性状態を反映する。抗ＣＤ１１ｂ抗体で治療した腫瘍を患うマウスの血漿中のＩＦＮ−γ、ＩＬ−１２、および、ＴＮＦ−αの濃度を測定した。コントロールのＩｇＧで治療したものより、抗ＣＤ１１ｂ抗体で治療したマウスの血漿中のＩＦＮ−γ、ＩＬ−１２、および、ＴＮＦ−αの濃度のほうが高いことを示した（図６）。
【０１２５】
ＣＤ１１ｂの結合は、別の同系ＬＬＣ１腫瘍モデルにおいても有効性を示した。５ｍｇ／ｋｇの抗ＣＤ１１ｂ抗体で治療することにより、ＬＬＣ１腫瘍の成長を著しく阻害し（図７）、動物の生存期間を延ばした（図８）。平均生存期間は、コントロールのＩｇＧが３１日、抗ＣＤ１１ｂ抗体では４２日であった。
【０１２６】
［実施例３  抗腫瘍免疫におけるＣＤ１１ｂ結合と免疫チェックポイント療法との相乗効果］
併用療法は、別の同系ＬＬＣ１肺移転モデルにおける有効性を示した。抗ＣＤ１１ｂ抗体（１０ｍｇ／ｋｇ）＋抗ＰＤ−１抗体（１０ｍｇ／ｋｇ）による治療は、ＬＬＣ１腫瘍の小節を著しく減少させ（図９）（１５日目：コントロールのＩｇＧは２００±１３、抗ＣＤ１１ｂ抗体は１６７、抗ＰＤ−１抗体は１６４±１１、抗ＣＤ１１ｂ＋抗ＰＤ−１抗体は１３１±２）、動物の生存期間を延ばした（図１０）。平均生存期間は、コントロールのＩｇＧが２４日、抗ＣＤ１１ｂ抗体が２４日、抗ＰＤ−１抗体が２２日、抗ＣＤ１１ｂ＋抗ＰＤ−１抗体は２６日であった。
【０１２７】
［実施例４  抗腫瘍免疫におけるＣＤ１１ｂ結合と化学療法との相乗効果］
ＣＤ１１ｂの結合は、化学療法にも有効である。例としては、初日、Ｂ１６Ｆ１０細胞を移植した。７日目、マウスにコントロールのＩｇＧ（５ｍｇ／ｋｇ）、抗マウスＣＤ１１ｂ抗体（５ｍｇ／ｋｇ）、タキソール（１０ｍｇ／ｋｇ）＋コントロールのＩｇＧ（５ｍｇ／ｋｇ）、または、タキソール（１０ｍｇ／ｋｇ）＋抗ＣＤ１１ｂ抗体（５ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内注射した。３〜４日おきに注射を繰り返した。図１１に示すように、タキソールと抗ＣＤ１１ｂ抗体との併用療法が腫瘍の成長を効果的に制御した。併用療法の有効性は、生存期間を延ばすことでも確認された。平均生存期間は、コントロールのＩｇＧで２５日、抗ＣＤ１１ｂ抗体で３２日、タキソール＋コントロールのＩｇＧで２５日、タキソール＋抗ＣＤ１１ｂ抗体では３２日であった（図１２）。
【０１２８】
［実施例５  ＬＰＳ誘導性免疫抑制単球、または、敗血症性ショックの患者からの単球がさらにＬＰＳ刺激を受けた場合、ＣＤ１１ｂを抗ＣＤ１１ｂ抗体と結合させることによって、ＰＤ−Ｌ１の発現を減少させる。］
重症感染症によって引き起こされる全身炎症反応症候群である敗血症は、世界的な医療問題であり、生命に関わる病気である。敗血症は、経時的に変化する二相免疫反応を引き起こすことが次第に明らかになりつつある。敗血症の初期段階において、全身の高炎症性免疫反応により、血行動態の不安定化、多臓器機能不全、凝固異常、および、ショック状態を引き起こし得るインターロイキン（ＩＬ）−１、ＩＬ−６、および、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）αを含む炎症性サイトカインが全身に放出され得る。高炎症性免疫反応は、抗炎症性サイトカインであるＩＬ−１０、および、ＴＧＦ（腫瘍増殖因子）−βの発現とほぼ同時に起きる。免疫系は、急速に、免疫麻痺状態と呼ばれる免疫反応低下状態に陥り、一次感染、および、晩期の院内感染の発生を食い止めることができなくなる。敗血症を患う患者に見られる免疫麻痺状態の兆候は、リンパ球の異常、ヒト白血球抗原ＤＲ（ＨＬＡ−ＤＲ）の表面発現の減少による単球の不活性化、および、ＴＮＦ−α生成の低下（生体外シミュレーションによる）を含む。単球におけるＨＬＡ−ＤＲ発現の持続的な減少は、院内感染、および、敗血症患者の死のリスクが高いことを示している。最近では、敗血症性ショックの患者の単球ではプログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）の発現が増加することが観察され、これは、二次院内感染および死亡率の増加に関係する(Guignant C, Lepape A, Huang X, Kherouf H, Denis L, et al. (2011) Programmed death-1 levels correlate with increased mortality, nosocomial infection and immune dysfunctions in septic shock patients. Crit Care 15: R99)。したがって、単球におけるＰＤ−Ｌ１の発現量は、免疫麻痺状態の新たなマーカーとして役立つ。単球をＬＰＳに２日間事前曝露することにより、免疫抑制単球になることが報告されている(Wolk K, Docke WD, von Baehr V, Volk HD, and Sabat R. (2000) Impaired antigen presentation by human monocytes during endotoxin tolerance. Blood 96: 218)。臨床的には、これらの細胞は、免疫麻痺状態、および、死亡率に関係がある。ヒト単球を１００ｎｇ／ｍｌのＬＰＳで２日間プレインキュベートすることにより、再現可能なＬＰＳ誘導性免疫抑制単球を得た。ＬＰＳ誘導性免疫抑制単球の細胞表面におけるＰＤ−Ｌ１発現量は、単離された新鮮なヒト単球より多い（図１３（Ａ））。ＬＰＳ誘導性免疫抑制単球におけるＣＤ１１ｂモジュレータの効果を調べるべく、ＩｇＧ１または抗ＣＤ１１ｂ抗体（ＩＣＲＦ４４）の存在下で、細胞を１μｇ／ｍｌのＬＰＳに１８時間曝露した。図１３（Ｂ）に示すように、ＣＤ１１ｂを抗ＣＤ１１ｂ抗体（ＩＣＲＦ４４）と結合させることによって、細胞がＬＰＳにさらに刺激されると、ＬＰＳ誘導性免疫抑制単球におけるＰＤ−Ｌ１の発現量が減少した。さらに、抗ＣＤ１１ｂ抗体（ＩＣＲＦ４４）による治療は、インビトロでＬＰＳ刺激した敗血症性ショックの患者からの単球におけるＰＤ−Ｌ１の発現量も減少させた（図１４）。
【０１２９】
［実施例６  ヒトＣＤ１１ｂを結合するヒト化抗体］
マウスの抗ヒトＣＤ１１ｂ抗体の可変領域ドメインの配列をヒト抗体データベースと対照して調べた。マウスの抗ヒトＣＤｂ１１抗体と高度な一致を示す１０組のヒトフレームワーク領域の配列を、軽鎖および重鎖両方のヒトアクセプタとして選んだ。一方で、Ｎ−グリコシル化モチーフを分析した。候補のヒト可変領域における潜在的なグリコシレーション部位は、避けるべきである。１０個の軽鎖のヒト化可変領域のドメインをＶＬ１、ＶＬ２、ＶＬ３、ＶＬ４、ＶＬ５、ＬＣ１、ＬＣ２、ＬＣ３、ＬＣ４、および、ＬＣ５として示し（図１５）、１０個の重鎖のヒト化可変領域のドメインをＶＨ１、ＶＨ２、ＶＨ３、ＶＨ４、ＶＨ５、ＨＣ１、ＨＣ２、ＨＣ３、ＨＣ４、および、ＨＣ５として示した（図１６）。これらの軽鎖および重鎖ペプチド配列は、ヒト化抗体、または、高親和性を有するヒト抗ＣＤ１１ｂ抗体と結合する抗原結合部分を提供し得る。
【０１３０】
［実施例７  ヒト化ＣＤ１１ｂ抗体の機能活性］
ヒト化抗ＣＤ１１ｂ抗体の特異性を、ＣＤ１１ｂを発現しているＫ５６２細胞を用いて、フローサイトメトリーにより決定した。図１７に示すように、本実施例におけるすべてのヒト化抗ＣＤ１１ｂ抗体は、ＣＤ１１ｂをトランスフェクションしたＫ５６２細胞と結合することができた。それに対し、これらの抗体は、Ｋ５６２細胞と結合しなかった。これらの結果は、ヒト化抗ＣＤ１１ｂ抗体は、ＣＤ１１ｂエピトープと特異的に結合し得ることを示している。
【０１３１】
単球の表面におけるＰＤ−Ｌ１発現を阻害する抗体の能力を測定すべく、ＬＰＳ刺激を受けた単球にヒト化抗ＣＤ１１ｂ抗体を用いて、その機能活性を調べた。図１８に示すように、ＬＰＳによるＰＤ−Ｌ１のアップレギュレーションは、ヒト化抗ＣＤ１１ｂ抗体によって著しく低下し得る。つまり、一連のヒト化抗ＣＤ１１ｂ抗体は、ヒトインテグリンαＭのドメインを標的とするものである。ヒト化抗ＣＤ１１ｂ抗体の結合は、ＬＰＳ刺激を受けた単球におけるＰＤ−Ｌ１の発現を減少させることができた。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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