(57)【要約】本発明は、ＣＬＬ−１結合ドメイン及びＣＤ３結合ドメインを含む抗ＣＬＬ−１抗体（例えば、抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３Ｔ細胞依存性二重特異性（ＴＤＢ）抗体）を含む抗ＣＬＬ−１抗体、ならびにその使用方法に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
単離された抗ＣＬＬ−１抗体であって、前記抗体が、
（ｉ）ＣＬＬ−１結合ドメインであって、配列番号４９のアミノ酸を含むＣＬＬ−１エピトープ及び／または重複ＣＬＬ−１エピトープと結合し、かつ配列番号５０及び／または配列番号５１を含むエピトープとは結合しない、ＣＬＬ−１結合ドメイン、ならびに
（ｉｉ）ＣＤ３結合ドメインであって、前記ＣＤ３結合ドメインが、ヒトＣＤ３εポリペプチド及びｃｙｎｏ  ＣＤ３εポリペプチドと結合し、かつヒトＣＤ３εのアミノ酸１〜２６（配列番号８６）または１〜２７（配列番号８７）からなる前記ヒトＣＤ３εポリペプチドの断片内のＣＤ３エピトープに結合し、前記ヒトＣＤ３εポリペプチドのアミノ酸残基Ｇｌｕ５が前記ＣＤ３結合ドメインの結合に必要ではない、ＣＤ３結合ドメインを含む、前記単離された抗ＣＬＬ−１抗体。
【請求項２】
前記ＣＬＬ−１エピトープが、ヒドロキシルラジカルフットプリント法によって決定される、請求項１に記載のＣＬＬ−１抗体。
【請求項３】
前記ＣＬＬ−１結合ドメインが、（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３の６つの超可変領域（ＨＶＲ）を含む、請求項１または２のいずれか１項に記載の抗ＣＬＬ−１抗体。
【請求項４】
前記ＣＬＬ−１結合ドメインが、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む、請求項３に記載の抗ＣＬＬ−１抗体。
【請求項５】
前記ＣＬＬ−１結合ドメインが、配列番号４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む、請求項３に記載の抗ＣＬＬ−１抗体。
【請求項６】
前記ＣＬＬ−１結合ドメインが、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む、請求項５に記載の抗ＣＬＬ−１抗体。
【請求項７】
前記ＣＬＬ−１結合ドメインが、配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む、請求項５に記載の抗ＣＬＬ−１抗体。
【請求項８】
前記ＣＬＬ−１結合ドメインが、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む、請求項５に記載の抗ＣＬＬ−１抗体。
【請求項９】
前記抗体が、
ａ）配列番号３３の配列を含む重鎖可変領域及び配列番号３２の配列を含む軽鎖可変領域、
ｂ）配列番号３４の配列を含む重鎖可変領域及び前記配列番号３２の配列を含む軽鎖可変領域、
ｃ）配列番号４６の配列を含む重鎖可変領域及び前記配列番号３２の配列を含む軽鎖可変領域、または
ｄ）配列番号４８の配列を含む重鎖可変領域及び前記配列番号３２の配列を含む軽鎖可変領域を含む、ＣＬＬ−１結合ドメインを含む、請求項３に記載の抗ＣＬＬ−１抗体。
【請求項１０】
前記ＣＬＬ−１結合ドメインが、（ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３の６つのＨＶＲを含む、請求項１または２のいずれか１項に記載の抗ＣＬＬ−１抗体。
【請求項１１】
前記抗体が、（ａ）配列番号４０の配列を含む重鎖可変領域及び（ｂ）配列番号３９の配列を含む軽鎖可変領域を含むＣＬＬ−１結合ドメインを含む、請求項９に記載の抗ＣＬＬ−１抗体。
【請求項１２】
前記抗体が、
ａ．組換えヒトＣＬＬ−１に結合する、
ｂ．組換えカニクイザルＣＬＬ−１に結合する、
ｃ．ヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）の表面上の内因性ＣＬＬ−１に結合する、
ｄ．カニクイザルＰＢＭＣの表面上の内因性ＣＬＬ−１に結合する、
ｅ．癌細胞の表面上の内因性ＣＬＬ−１に結合する、
ｆ．ＡＭＬ癌細胞の表面上の内因性ＣＬＬ−１に結合する、
ｇ．ＨＬ−６０細胞の表面上の内因性ＣＬＬ−１に結合する、
ｈ．ＥＯＬ−１細胞の表面上の内因性ＣＬＬ−１に結合する、
ｉ．Ｋ２４４Ｑ突然変異を含むＣＬＬ−１に結合する、
ｊ．ヒトＣＬＬ−１結合に関してＲ＆Ｄクローン６８７３１７抗体と競合する、
ｋ．１５ｎＭ未満、１０ｎＭ未満、７ｎＭ未満、５ｎＭ未満、もしくは３ｎＭ未満のＫｄで内因性ヒトＣＬＬ−１に結合する、
ｌ．１０ｎＭ未満、７ｎＭ未満、５ｎＭ未満、もしくは３ｎＭ未満のＫｄで組換えヒトＣＬＬ−１に結合する、及び／または
ｍ．１０ｎＭ未満、７ｎＭ未満、５ｎＭ未満、もしくは３ｎＭ未満、２ｎＭ未満、もしくは１ｎＭ未満のＫｄで組換えカニクイザルＣＬＬ−１に結合する特徴のうちの１つ以上を有する、ＣＬＬ−１結合ドメインを含む、先行請求項のいずれか１項に記載の抗ＣＬＬ−１抗体。
【請求項１３】
前記抗体が、ヒトＣＤ３εポリペプチドのＧｌｎ１、Ａｓｐ２、Ｇｌｕ６、及びＭｅｔ７を含む、かつ／またはそれらからなるＣＤ３エピトープに結合するＣＤ３結合ドメインを含む、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の抗ＣＬＬ−１抗体。
【請求項１４】
前記抗体が、（ａ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号９２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３の６つのＨＶＲを含む、ＣＤ３結合ドメインを含む、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の抗ＣＬＬ−１抗体。
【請求項１５】
前記ＣＤ３結合ドメインが、（ａ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｅ）配列番号７５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項１４に記載の抗ＣＬＬ−１抗体。
【請求項１６】
前記ＣＤ３結合ドメインが、（ａ）配列番号７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２を含む、請求項１４に記載の抗ＣＬＬ−１抗体。
【請求項１７】
前記ＣＤ３結合ドメインが、（ｆ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項１６に記載の抗ＣＬＬ−１抗体。
【請求項１８】
前記ＣＤ３結合ドメインが、（ｆ）前記配列番号７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項１６に記載の抗ＣＬＬ−１抗体。
【請求項１９】
前記抗体が、
ａ）配列番号８２の配列を含む重鎖可変領域及び配列番号８３の配列を含む軽鎖可変領域、
ｂ）配列番号８４の配列を含む重鎖可変領域及び配列番号８５の配列を含む軽鎖可変領域、または
ｃ）前記配列番号８４の配列を含む重鎖可変領域及び配列番号９３の配列を含む軽鎖可変領域を含む、ＣＤ３結合ドメインを含む、請求項１４に記載の抗ＣＬＬ−１抗体。
【請求項２０】
前記抗ＣＬＬ−１抗体が、モノクローナル、ヒト、ヒト化、またはキメラ抗体である、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の抗ＣＬＬ−１抗体。
【請求項２１】
前記抗ＣＬＬ−１抗体が、ＩｇＧ抗体である、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の抗ＣＬＬ−１抗体。
【請求項２２】
前記抗体が、二重特異性抗体である、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の抗ＣＬＬ−１抗体。
【請求項２３】
前記抗ＣＬＬ−１抗体が、ＣＬＬ−１及びＣＤ３と結合する抗体断片である、請求項１〜２２のいずれか１項に記載の抗ＣＬＬ−１抗体。
【請求項２４】
前記抗ＣＬＬ−１抗体断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、及び／または（Ｆａｂ’）２断片である、請求項２３に記載の抗ＣＬＬ−１抗体。
【請求項２５】
前記抗ＣＬＬ−１抗体が、完全長抗体である、請求項１〜２２のいずれか１項に記載の抗ＣＬＬ−１抗体。
【請求項２６】
前記抗ＣＬＬ−１抗体が、非グリコシル化部位突然変位を含む、請求項１〜２５のいずれか１項に記載の抗ＣＬＬ−１抗体。
【請求項２７】
前記非グリコシル化部位突然変異が、置換突然変異である、請求項２６に記載の抗ＣＬＬ−１抗体。
【請求項２８】
前記抗ＣＬＬ−１抗体が、低減したエフェクター機能を含む、請求項１〜２７のいずれか１項に記載の抗ＣＬＬ−１抗体。
【請求項２９】
前記抗ＣＬＬ−１抗体が、ＥＵ番号付けによるアミノ酸残基Ｎ２９７、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｄ２６５、及び／またはＰ３２９Ｇにおける置換突然変異を含む、請求項１〜２８のいずれか１項に記載の抗ＣＬＬ−１抗体。
【請求項３０】
前記置換突然変異が、ＥＵ番号付けによるＮ２９７Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｄ２６５Ａ、及びＰ３２９Ｇからなる群から選択される、請求項２９に記載の抗ＣＬＬ−１抗体。
【請求項３１】
前記抗体が、ＥＵ番号付けによるアミノ酸残基２９７にＮ２９７Ｇ置換突然変異を含む、請求項２９に記載の抗ＣＬＬ−１抗体。
【請求項３２】
（ａ）前記ＣＤ３結合ドメインがＦｃドメインを含み、前記ＦｃドメインがＥＵ番号付けによるＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＮ２９７Ｇ置換突然変異を含み、（ｂ）前記ＣＬＬ−１結合ドメインがＦｃドメインを含み、前記ＦｃドメインがＥＵ番号付けによるＴ３６６Ｗ及びＮ２９７Ｇ置換突然変異を含む、請求項１〜３１のいずれか１項に記載の抗ＣＬＬ−１抗体。
【請求項３３】
請求項１〜３２のいずれか１項に記載の抗ＣＬＬ−１抗体をコードする単離された核酸。
【請求項３４】
請求項３３に記載の単離された核酸を含む、ベクター。
【請求項３５】
請求項３４に記載のベクターを含む、宿主細胞。
【請求項３６】
請求項１〜３２のいずれか１項に記載の抗ＣＬＬ−１抗体の産生方法であって、請求項３５の宿主細胞を培養培地で培養することを含む、前記方法。
【請求項３７】
請求項１〜３２のいずれか１項に記載の抗ＣＬＬ−１抗体を含む、薬学的組成物。
【請求項３８】
薬剤として使用するための、請求項１〜３２のいずれか１項に記載の抗ＣＬＬ−１抗体。
【請求項３９】
細胞増殖性障害または自己免疫性障害の治療またはその進行の遅延を必要とする対象において、それに使用するための請求項１〜３２のいずれか１項に記載の抗ＣＬＬ−１抗体。
【請求項４０】
細胞増殖性障害または自己免疫性障害を有する対象において免疫機能の増強に使用するための、請求項１〜３２のいずれか１項に記載の抗ＣＬＬ−１抗体。
【請求項４１】
前記細胞増殖性障害が癌である、請求項３９または４０のいずれか１項に記載の抗ＣＬＬ−１抗体。
【請求項４２】
前記細胞増殖性障害が、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、及び／または骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）である、請求項３９〜４１のいずれか１項に記載の抗ＣＬＬ−１抗体。
【請求項４３】
前記細胞増殖性障害が、ＡＭＬである、請求項３９〜４２のいずれか１項に記載の抗ＣＬＬ−１抗体。
【請求項４４】
細胞増殖性障害または自己免疫性障害を治療する、またはその進行を遅延させるための薬剤の製造における、請求項１〜３２のいずれか１項に記載の抗ＣＬＬ−１抗体の使用。
【請求項４５】
細胞増殖性障害または自己免疫性障害を有する対象において免疫機能を増強するための薬剤の製造における、請求項１〜３２のいずれか１項に記載の抗ＣＬＬ−１抗体の使用。
【請求項４６】
前記細胞増殖性障害が癌である、請求項４４または４５のいずれか１項に記載の使用。
【請求項４７】
前記細胞増殖性障害が、ＡＭＬ、ＣＭＬ、及び／またはＭＤＳである、請求項４４〜４６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項４８】
細胞増殖性障害または自己免疫性障害の治療またはその進行の遅延を必要とする対象における、その治療方法または遅延方法であって、前記対象に請求項１〜３２のいずれか１項に記載の抗ＣＬＬ−１抗体を投与することを含む、前記方法。
【請求項４９】
細胞増殖性障害または自己免疫性障害を有する対象における免疫機能の増強方法であって、前記方法が、前記対象に有効量の請求項１〜３２のいずれか１項に記載の抗ＣＬＬ−１抗体を投与することを含む、前記方法。
【請求項５０】
前記細胞増殖性障害が癌である、請求項４８または４９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５１】
前記細胞増殖性障害が、ＡＭＬ、ＣＭＬ、及び／またはＭＤＳである、請求項４８〜５０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５２】
前記対象にダウノルビシン及び／またはシタラビンを投与することをさらに含む、請求項４８〜５１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５３】
前記対象にグルココルチコイド（デキサメタゾンなど）を投与することをさらに含む、請求項４８〜５２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５４】
前記対象にＰＤ−１軸結合アンタゴニスト（抗ＰＤ−Ｌ１抗体など）を投与することをさらに含む、請求項４８〜５３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５５】
前記ＰＤ−１軸結合アンタゴニストは、抗ＰＤ−Ｌ１抗体である、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、
（ａ）ＨＶＲ−Ｈ１配列は、ＧＦＴＦＳＤＳＷＩＨ（配列番号９９）であり、
（ｂ）ＨＶＲ−Ｈ２配列は、ＡＷＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１００）であり、
（ｃ）ＨＶＲ−Ｈ３配列は、ＲＨＷＰＧＧＦＤＹ（配列番号９８）であり、
（ｄ）ＨＶＲ−Ｌ１配列は、ＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡ（配列番号１０４）であり、
（ｅ）ＨＶＲ−Ｌ２配列は、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１０５）であり、
（ｆ）ＨＶＲ−Ｌ３配列は、ＱＱＹＬＹＨＰＡＴ（配列番号１０６）である、請求項５４〜５５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５７】
抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、配列番号９４の重鎖可変領域及び配列番号９５の軽鎖可変領域を含む、請求項５４〜５６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５８】
前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体がＭＰＤＬ３２８０Ａである、請求項５４〜５７のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１５年６月１６日に出願された米国仮出願第６２／１８０３７６号及び２０１６年３月１１日に出願された第６２／３０７００３号の優先権の利益を主張し、これらの仮出願は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。２０１６年６月７日に作成された上記ＡＳＣＩＩコピーは、Ｐ３２９２０−ＷＯ＿ＳＬ．ｔｘｔという名称であり、６２，５１０バイトのサイズである。
【０００３】
本発明は、ＣＬＬ−１結合ドメイン及びＣＤ３結合ドメインを含む抗ＣＬＬ−１抗体（例えば、抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３Ｔ細胞依存性二重特異性（ＴＤＢ）抗体）を含む抗ＣＬＬ−１抗体、ならびにその使用方法に関する。
【背景技術】
【０００４】
癌等の細胞増殖性障害は、細胞亜集団の制御されていない成長を特徴とする。これらは先進国世界における死因の第１位、及び発展途上国における死因の第２位であり、毎年１千２百万を超える新たな癌症例が診断され、７百万の癌死亡が生じている。米国国立癌研究所は、２０１３年には５０万人を超えるアメリカ人が癌によって死亡すると推定しており、これは、ほぼ米国の死亡４件中１件の割合を占める。癌の発症確率は７０歳を過ぎると２倍以上高くなるため、高齢者人口が成長するにつれて、癌の発生数も同時に上昇している。このため、癌治療は、重大かつ増え続ける社会的負担を意味する。
【０００５】
ＣＬＬ−１（ＣＬＥＣ１２Ａ、ＭＩＣＬ、及びＤＣＡＬ２とも称される）は、Ｃ型レクチン／Ｃ型レクチン様ドメイン（ＣＴＬ／ＣＴＬＤ）スーパーファミリーのメンバーをコードする。このファミリーのメンバーは、共通のタンパク質折り畳みを共有し、細胞接着、細胞間シグナル伝達、糖タンパク質ターンオーバー、ならびに炎症及び免疫応答における役割等の多様な機能を有する。ＣＬＬ−１は、単一のＣ型レクチン様ドメイン（カルシウムまたは糖のどちらにも結合しないことが予測される）、茎領域、膜貫通ドメイン、及びＩＴＩＭモチーフを含有する短細胞質尾部を含む、ＩＩ型膜貫通受容体に対して示されている。さらに、ＣＬＬ−１は、正常な末梢血及び骨髄（ＢＭ）中の単球及び顆粒球上に存在し、非血液学的組織中には存在しない。ＣＬＬ−１はまた、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、及び慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）細胞上にも発現される。具体的には、ＣＬＬ−１は、ＣＤ３４陽性（ＣＤ３４＋）ＡＭＬにおいてＣＤ３４＋ＣＤ３８−ＡＭＬ細胞の画分上に発現される白血病幹細胞（ＬＳＣ）関連表面抗原である。
【０００６】
モノクローナル抗体（ｍＡｂ）に基づく療法は、癌の重要な治療モダリティとなっている。白血病は、血液、骨髄、脾臓、及びリンパ節中の悪性細胞の接触可能性、ならびに抗原標的の特定を可能にする造血分化の種々の系列及びステージの十分に定義された免疫表現型のため、このアプローチに非常に適している。急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）に関する研究の大部分は、ＣＤ３３に焦点を置いてきた。しかしながら、複合されていない抗ＣＤ３３  ｍＡｂリンツズマブによる応答は、少量の単剤及びＡＭＬに対する活性を有し、従来の化学療法と組み合わせた際に２つの無作為治験において患者の予後を改善できなかった。
【０００７】
当該技術分野において、癌等のＣＬＬ−１関連病態の診断及び治療用の、ＣＬＬ−１を含むＡＭＬを標的とする安全で有効な薬剤が必要とされている。本発明はその必要性を満たし、また他の利益を提供する。
【発明の概要】
【０００８】
本発明は、ＣＬＬ−１結合ドメイン及びＣＤ３結合ドメインを含む抗ＣＬＬ−１抗体、ならびにその使用方法を提供する。いくつかの実施形態では、本明細書において、単離された抗ＣＬＬ−１抗体が提供され、該抗体は、（ｉ）ＣＬＬ−１結合ドメインがＣＬＬ−１エピトープと結合し、かつ／または配列番号４９のアミノ酸を含む重複ＣＬＬ−１エピトープと結合し、配列番号５０及び／もしくは配列番号５１を含むエピトープとは結合しない、ＣＬＬ−１結合ドメイン、ならびに（ｉｉ）ＣＤ３結合ドメインがヒトＣＤ３εポリペプチド及びｃｙｎｏ  ＣＤ３εポリペプチドと結合し、ＣＤ３結合ドメインがヒトＣＤ３εのアミノ酸１〜２６（配列番号８６）または１〜２７（配列番号８７）からなるヒトＣＤ３εポリペプチドの断片内のＣＤ３エピトープに結合し、かつヒトＣＤ３εポリペプチドのアミノ酸残基Ｇｌｕ５がＣＤ３結合ドメインの結合に必要ではない、ＣＤ３結合ドメインを含む。
【０００９】
いくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ−１抗体のＣＬＬ−１結合ドメインは、ＣＬＬ−１エピトープと結合し、かつ／または配列番号４９のアミノ酸を含む重複ＣＬＬ−１エピトープと結合し、配列番号５０及び／もしくは配列番号５１を含むＣＬＬ−１エピトープとは結合しない。いくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ−１抗体のＣＬＬ−１結合ドメインは配列番号４９のアミノ酸を含むＣＬＬ−１エピトープと結合する。いくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ−１抗体のＣＬＬ−１結合ドメインは、配列番号４９のアミノ酸からなる、または本質的にそれからなるＣＬＬ−１エピトープと結合する。いくつかの実施形態では、ＣＬＬ−１エピトープは、ヒドロキシルラジカルフットプリント法によって決定される。
【００１０】
例えば、本明細書において、（ｉ）（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３の６つの超可変領域（ＨＶＲ）を含む、ＣＬＬ−１結合ドメイン、ならびに（ｉｉ）ＣＤ３結合ドメインがヒトＣＤ３εポリペプチド及びｃｙｎｏ  ＣＤ３ε  ポリペプチドと結合し、ＣＤ３結合ドメインがヒトＣＤ３εのアミノ酸１〜２６（配列番号８６）または１〜２７（配列番号８７）からなるヒトＣＤ３εポリペプチドの断片内のＣＤ３エピトープに結合し、かつヒトＣＤ３εポリペプチドのアミノ酸残基Ｇｌｕ５がＣＤ３結合ドメインの結合に必要ではない、ＣＤ３結合ドメインを含む抗ＣＬＬ１抗体が提供される。いくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ−１抗体は、配列番号４６の配列を含む重鎖可変領域及び配列番号３２の配列を含む軽鎖可変領域を含むＣＬＬ−１結合ドメインを含む。
【００１１】
さらに、例えば、本明細書において、（ｉ）（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３の６つのＨＶＲを含む、ＣＬＬ−１結合ドメイン、ならびに（ｉｉ）ＣＤ３結合ドメインがヒトＣＤ３εポリペプチド及びｃｙｎｏ  ＣＤ３εポリペプチドと結合し、ＣＤ３結合ドメインがヒトＣＤ３εのアミノ酸１〜２６（配列番号８６）または１〜２７（配列番号８７）からなるヒトＣＤ３εポリペプチドの断片内のＣＤ３エピトープに結合し、かつヒトＣＤ３εポリペプチドのアミノ酸残基Ｇｌｕ５がＣＤ３結合ドメインの結合に必要ではない、ＣＤ３結合ドメインを含む抗ＣＬＬ１抗体が提供される。いくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ−１抗体は、配列番号３３の配列を含む重鎖可変領域及び配列番号３２の配列を含む軽鎖可変領域を含むＣＬＬ−１結合ドメインを含む。
【００１２】
加えて、例えば、本明細書において、（ｉ）（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３の６つのＨＶＲを含む、ＣＬＬ−１結合ドメイン、ならびに（ｉｉ）ＣＤ３結合ドメインがヒトＣＤ３εポリペプチド及びｃｙｎｏ  ＣＤ３εポリペプチドと結合し、ＣＤ３結合ドメインがヒトＣＤ３εのアミノ酸１〜２６（配列番号８６）または１〜２７（配列番号８７）からなるヒトＣＤ３εポリペプチドの断片内のＣＤ３エピトープに結合し、かつヒトＣＤ３εポリペプチドのアミノ酸残基Ｇｌｕ５がＣＤ３結合ドメインの結合に必要ではない、ＣＤ３結合ドメインを含む抗ＣＬＬ１抗体が提供される。いくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ−１抗体は、配列番号４８の配列を含む重鎖可変領域及び配列番号３２の配列を含む軽鎖可変領域を含むＣＬＬ−１結合ドメインを含む。
【００１３】
例えば、本明細書において、（ｉ）（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３の６つのＨＶＲを含む、ＣＬＬ−１結合ドメイン、ならびに（ｉｉ）ＣＤ３結合ドメインがヒトＣＤ３εポリペプチド及びｃｙｎｏ  ＣＤ３εポリペプチドと結合し、ＣＤ３結合ドメインがヒトＣＤ３εのアミノ酸１〜２６（配列番号８６）または１〜２７（配列番号８７）からなるヒトＣＤ３εポリペプチドの断片内のＣＤ３エピトープに結合し、かつヒトＣＤ３εポリペプチドのアミノ酸残基Ｇｌｕ５がＣＤ３結合ドメインの結合に必要ではない、ＣＤ３結合ドメインを含む抗ＣＬＬ１抗体が提供される。いくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ−１抗体は、配列番号３４の配列を含む重鎖可変領域及び配列番号３２の配列を含む軽鎖可変領域を含むＣＬＬ−１結合ドメインを含む。
【００１４】
さらに、例えば、本明細書において、（ｉ）（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３の６つのＨＶＲを含む、ＣＬＬ−１結合ドメイン、ならびに（ｉｉ）ＣＤ３結合ドメインがヒトＣＤ３εポリペプチド及びｃｙｎｏ  ＣＤ３εポリペプチドと結合し、ＣＤ３結合ドメインがヒトＣＤ３εのアミノ酸１〜２６（配列番号８６）または１〜２７（配列番号８７）からなるヒトＣＤ３εポリペプチドの断片内のＣＤ３エピトープに結合し、かつヒトＣＤ３εポリペプチドのアミノ酸残基Ｇｌｕ５がＣＤ３結合ドメインの結合に必要ではない、ＣＤ３結合ドメインを含む抗ＣＬＬ１抗体が提供される。
【００１５】
例えば、本明細書において、（ｉ）（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３の６つのＨＶＲを含む、ＣＬＬ−１結合ドメイン、ならびに（ｉｉ）ＣＤ３結合ドメインがヒトＣＤ３εポリペプチド及びｃｙｎｏ  ＣＤ３εポリペプチドと結合し、ＣＤ３結合ドメインがヒトＣＤ３εのアミノ酸１〜２６（配列番号８６）または１〜２７（配列番号８７）からなるヒトＣＤ３εポリペプチドの断片内のＣＤ３エピトープに結合し、かつヒトＣＤ３εポリペプチドのアミノ酸残基Ｇｌｕ５がＣＤ３結合ドメインの結合に必要ではない、ＣＤ３結合ドメインを含む抗ＣＬＬ１抗体が提供される。
【００１６】
例えば、本明細書において、（ｉ）（ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３の６つのＨＶＲを含む、ＣＬＬ−１結合ドメイン、ならびに（ｉｉ）ＣＤ３結合ドメインがヒトＣＤ３εポリペプチド及びｃｙｎｏ  ＣＤ３εポリペプチドと結合し、ＣＤ３結合ドメインがヒトＣＤ３εのアミノ酸１〜２６（配列番号８６）または１〜２７（配列番号８７）からなるヒトＣＤ３εポリペプチドの断片内のＣＤ３エピトープに結合し、かつヒトＣＤ３εポリペプチドのアミノ酸残基Ｇｌｕ５がＣＤ３結合ドメインの結合に必要ではない、ＣＤ３結合ドメインを含む抗ＣＬＬ１抗体が提供される。いくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ−１抗体は、（ａ）配列番号４０の配列を含む重鎖可変領域及び（ｂ）配列番号３９の配列を含む軽鎖可変領域を含むＣＬＬ−１結合ドメインを含む。
【００１７】
抗ＣＬＬ１抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、抗体は、ａ）組換えヒトＣＬＬ−１に結合する、ｂ）組換えカニクイザルＣＬＬ−１に結合する、ｃ）ヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）の表面上の内因性ＣＬＬ−１に結合する、ｄ）カニクイザルＰＢＭＣの表面上の内因性ＣＬＬ−１に結合する、ｅ）癌細胞の表面上の内因性ＣＬＬ−１に結合する、ｆ）ＡＭＬ癌細胞の表面上の内因性ＣＬＬ−１に結合する、ｇ）ＨＬ−６０細胞の表面上の内因性ＣＬＬ−１に結合する、ｈ）ＥＯＬ−１細胞の表面上の内因性ＣＬＬ−１に結合する、ｉ）Ｋ２４４Ｑ突然変異を含むＣＬＬ−１に結合する、ｊ）ヒトＣＬＬ−１結合に関してＲ＆Ｄクローン６８７３１７抗体と競合する、ｋ）１５ｎＭ未満、１０ｎＭ未満、７ｎＭ未満、５ｎＭ未満、もしくは３ｎＭ未満のＫｄで内因性ヒトＣＬＬ−１に結合する、ｌ）１０ｎＭ未満、７ｎＭ未満、５ｎＭ未満、もしくは３ｎＭ未満のＫｄで組換えヒトＣＬＬ−１に結合する、かつ／またはｍ）１０ｎＭ未満、７ｎＭ未満、５ｎＭ未満、もしくは３ｎＭ未満、２ｎＭ未満、または１ｎＭ未満のＫｄで組換えカニクイザルＣＬＬ−１に結合する特徴のうちの１つ以上を有するＣＬＬ−１結合ドメインを含む。
【００１８】
抗ＣＬＬ１抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、抗体は、ヒトＣＤ３εポリペプチドのＧｌｕ６を含む、かつ／またはそれからなるＣＤ３エピトープと結合するＣＤ３結合ドメインを含む。ある特定の態様では、ＣＤ３エピトープは、ＣＤ３のＧｌｎ１、Ａｓｐ２、及びＭｅｔ７からなる群から選択される１つ以上の追加のアミノ酸残基をさらに含む。抗ＣＬＬ１抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、抗体は、ヒトＣＤ３εポリペプチドのＧｌｎ１、Ａｓｐ２、及びＧｌｕ６を含む、かつ／またはそれらからなるＣＤ３エピトープと結合するＣＤ３結合ドメインを含む。抗ＣＬＬ１抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、抗体は、ヒトＣＤ３εポリペプチドのＧｌｎ１、Ａｓｐ２、Ｇｌｕ６、及びＭｅｔ７を含む、かつ／またはそれらからなるＣＤ３エピトープと結合するＣＤ３結合ドメインを含む。別の態様では、ＣＤ３エピトープは、ヒトＣＤ３εポリペプチドのアミノ酸残基Ｇｌｕ５を含まない。さらなる態様では、ＣＤ３エピトープは、ヒトＣＤ３εポリペプチドのアミノ酸残基Ｇｌｙ３及びＧｌｕ５を含まない。ある特定の態様では、ＣＤ３エピトープは、ヒトＣＤ３εポリペプチドのアミノ酸残基Ｇｌｎ１、Ａｓｐ２、Ｇｌｕ６、及びＭｅｔ７からなる。
【００１９】
いくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ１抗体のＣＤ３結合アームは、５０ｎＭ未満かつ１ｎＭ超の親和性でヒトＣＤ３と結合する。いくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ１抗体のＣＤ３結合アームは、１ｎＭ未満かつ０．１ｎＭ超の親和性でヒトＣＤ３と結合する。いくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ１抗体のＣＤ３結合アームは、０．１ｎＭ未満かつ０．０１ｎＭ超の親和性でヒトＣＤ３と結合する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合アームの親和性は、Ｂｉａｃｏｒｅによって決定される。いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ３はｈＣＤ３εγである。いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ３はｈＣＤ３ε１−２７  Ｆｃである。
【００２０】
抗ＣＬＬ１抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号９２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３の６つのＨＶＲを含む、ＣＤ３結合ドメインを含む。例えば、本明細書において、（ｉ）（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３の６つのＨＶＲを含む、ＣＬＬ−１結合ドメイン、ならびに（ｉｉ）（ａ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号９２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３の６つのＨＶＲを含む、ＣＤ３結合ドメインを含む抗ＣＬＬ１抗体が提供される。いくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ−１抗体は、配列番号３４の配列を含む重鎖可変領域及び配列番号３２の配列を含む軽鎖可変領域を含むＣＬＬ−１結合ドメインを含む。
【００２１】
抗ＣＬＬ１抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、（ａ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号７５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ−１抗体は、配列番号８２の配列を含む重鎖可変領域及び配列番号８３の配列を含む軽鎖可変領域を含むＣＤ３結合ドメインを含む。例えば、本明細書において、（ｉ）（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３の６つのＨＶＲを含む、ＣＬＬ−１結合ドメイン、ならびに（ｉｉ）（ａ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号７５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＣＤ３結合ドメインを含む抗ＣＬＬ１抗体が提供される。いくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ−１抗体は、（ｉ）配列番号３４の配列を含む重鎖可変領域及び配列番号３２の配列を含む軽鎖可変領域を含むＣＬＬ−１結合ドメイン、ならびに（ｉｉ）配列番号８２の配列を含む重鎖可変領域及び配列番号８３の配列を含む軽鎖可変領域を含むＣＤ３結合ドメインを含む。
【００２２】
抗ＣＬＬ１抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、（ａ）配列番号７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号９２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。例えば、本明細書において、（ｉ）（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３の６つのＨＶＲを含む、ＣＬＬ−１結合ドメイン、ならびに（ｉｉ）（ａ）配列番号７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号９２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＣＤ３結合ドメインを含む抗ＣＬＬ１抗体が提供される。いくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ−１抗体は、配列番号３４の配列を含む重鎖可変領域及び配列番号３２の配列を含む軽鎖可変領域を含むＣＬＬ−１結合ドメインを含む。
【００２３】
抗ＣＬＬ１抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、（ａ）配列番号７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ−１抗体は、配列番号８４の配列を含む重鎖可変領域及び配列番号８５の配列を含む軽鎖可変領域を含むＣＤ３結合ドメインを含む。例えば、本明細書において、（ｉ）（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３の６つのＨＶＲを含む、ＣＬＬ−１結合ドメイン、ならびに（ｉｉ）（ａ）配列番号７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＣＤ３結合ドメインを含む抗ＣＬＬ１抗体が提供される。いくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ−１抗体は、（ｉ）配列番号３４の配列を含む重鎖可変領域及び配列番号３２の配列を含む軽鎖可変領域を含むＣＬＬ−１結合ドメイン、ならびに（ｉｉ）配列番号８４の配列を含む重鎖可変領域及び配列番号８５の配列を含む軽鎖可変領域を含むＣＤ３結合ドメインを含む。
【００２４】
抗ＣＬＬ１抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、（ａ）配列番号７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ−１抗体は、配列番号８４の配列を含む重鎖可変領域及び  配列番号９３の配列を含む軽鎖可変領域を含むＣＤ３結合ドメインを含む。例えば、本明細書において、（ｉ）（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３の６つのＨＶＲを含む、ＣＬＬ−１結合ドメイン、ならびに（ｉｉ）（ａ）配列番号７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＣＤ３結合ドメインを含む抗ＣＬＬ１抗体が提供される。いくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ−１抗体は、（ｉ）配列番号３４の配列を含む重鎖可変領域及び配列番号３２の配列を含む軽鎖可変領域を含むＣＬＬ−１結合ドメイン、ならびに（ｉｉ）配列番号８４の配列を含む重鎖可変領域及び配列番号９３の配列を含む軽鎖可変領域を含むＣＤ３結合ドメインを含む。
【００２５】
抗ＣＬＬ−１抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ−１抗体は、モノクローナル、ヒト、ヒト化、またはキメラ抗体である。抗ＣＬＬ−１抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ−１抗体はＩｇＧ抗体である。抗ＣＬＬ−１抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、抗体は、二重特異性抗体である。抗ＣＬＬ−１抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ−１抗体は、ＣＬＬ−１及びＣＤ３と結合する抗体断片である。いくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ−１抗断片体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、及び／または（Ｆａｂ’）２断片である。抗ＣＬＬ−１抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ−１抗体は完全長抗体である。
【００２６】
抗ＣＬＬ−１抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ−１抗体は非グリコシル化（ａｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ）部位突然変異を含む。いくつかの実施形態では、非グリコシル化部位突然変異は、置換突然変異である。
【００２７】
抗ＣＬＬ−１抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ−１抗体は、低減されたエフェクター機能を備える。抗ＣＬＬ−１抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ−１抗体は、ＥＵ番号付けによるアミノ酸残基Ｎ２９７、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｄ２６５、及び／またはＰ３２９Ｇにおける置換突然変異を含む。いくつかの実施形態では、置換突然変異は、ＥＵ番号付けによるＮ２９７Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｄ２６５Ａ、及びＰ３２９Ｇからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ−１抗体は、ＥＵ番号付けによるアミノ酸残基２９７にＮ２９７Ｇ置換突然変異を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ−１抗体は、ＥＵ番号付けによるアミノ酸残基２３４、２３５、及び３２９にＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇ突然変異を含む。
【００２８】
多重特異性抗ＣＬＬ−１抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ−１抗体は１つ以上の重鎖定常ドメインを含み、この１つ以上の重鎖定常ドメインは、第１のＣＨ１（ＣＨ１１）ドメイン、第１のＣＨ２（ＣＨ２１）ドメイン、第１のＣＨ３（ＣＨ３１）ドメイン、第２のＣＨ１（ＣＨ１２）ドメイン、第２のＣＨ２（ＣＨ２２）ドメイン、及び第２のＣＨ３（ＣＨ３２）ドメインから選択される。いくつかの実施形態では、１つ以上の重鎖定常ドメインのうちの少なくとも１つは、別の重鎖定常ドメインと対合される。いくつかの実施形態では、ＣＨ３１及びＣＨ３２ドメインは各々、突起または空隙を含み、ＣＨ３１ドメイン内の該突起または空隙は、それぞれ、ＣＨ３２ドメイン内の空隙または突起中に位置付けることができる。いくつかの実施形態では、ＣＨ３１及びＣＨ３２ドメインは、該突起と空隙との間の境界面において接触する。いくつかの実施形態では、ＣＨ２１及びＣＨ２２ドメインは各々、突起または空隙を含み、ＣＨ２１ドメイン内の該突起または空隙は、それぞれ、ＣＨ２２ドメイン内の空隙または突起中に位置付けることができる。いくつかの実施形態では、ＣＨ２１及びＣＨ２２ドメインは、該突起と空隙との間の境界面において接触する。
【００２９】
抗ＣＬＬ−１抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、（ａ）ＣＤ３結合ドメインはＦｃドメインを含み、該Ｆｃドメインは、ＥＵ番号付けによるＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＮ２９７Ｇ置換突然変異を含み、（ｂ）ＣＬＬ−１結合ドメインはＦｃドメインを含み、該Ｆｃドメインは、ＥＵ番号付けによるＴ３６６Ｗ及びＮ２９７Ｇ置換突然変異を含む。抗ＣＬＬ−１抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、（ａ）ＣＤ３結合ドメインはＦｃドメインを含み、該Ｆｃドメインは、ＥＵ番号付けによるＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ置換突然変異を含み、（ｂ）ＣＬＬ−１結合ドメインはＦｃドメインを含み、該Ｆｃドメインは、ＥＵ番号付けによるＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ｇ、及びＴ３６６Ｗ置換突然変異を含む。
【００３０】
本明細書に記載される抗ＣＬＬ−１抗体をコードする単離された核酸が、さらに本明細書に提供される。本明細書に記載される抗ＣＬＬ−１抗体をコードする単離された核酸を含むベクターも本明細書に提供される。本明細書に記載される抗ＣＬＬ−１抗体をコードする単離された核酸を含むベクターを含む宿主細胞も本明細書に提供される。本明細書に記載される抗ＣＬＬ−１抗体の産生方法も提供され、該方法は、培養培地で本明細書に記載される抗ＣＬＬ−１抗体をコードする単離された核酸を含むベクターを含む宿主細胞を培養することを含む。
【００３１】
加えて、本明細書に記載される抗ＣＬＬ−１抗体を含む薬学的組成物が本明細書に提供される。
【００３２】
抗ＣＬＬ−１抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ−１抗体は、約２００ｎｇ／ｍＬ未満、例えば、約１５０、１００、５０、２５、２０、または１５ｎｇ／ｍＬ未満のうちのいずれかの細胞死滅ＥＣ５０を有する。いくつかの実施形態では、細胞死滅はヒト自家ＣＤ１４＋である。いくつかの実施形態では、細胞死滅は、例えば、Ｕ９３７細胞系、ＨＬ−６０細胞系、ＰＬ−２１細胞系、ＮＯＭＯ−１細胞系、ＥＯＬ−１細胞系、ＴＨＰ−１細胞系、ＭＬ−２細胞系、Ｍｏｌｍ−１３細胞系の細胞系細胞死滅である。多重特異性抗ＣＬＬ−１抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ−１抗体は、約５０ｎｇ／ｍＬ未満のうちのいずれか、例えば、約２５ｎｇ／ｍＬ未満または約２０ｎｇ／ｍＬ未満のうちのいずれかである細胞傷害性Ｔ細胞活性化ＥＣ５０を有する。いくつかの実施形態では、細胞傷害性Ｔ細胞活性化は、ＣＤ８＋Ｔ細胞中のＣＤ６９＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞の％で測定される。
【００３３】
薬剤として使用するための本明細書に記載される抗ＣＬＬ−１抗体が本明細書に提供される。細胞増殖性障害または自己免疫性障害の治療またはその進行の遅延を必要とする対象において、それに使用するための本明細書に記載される抗ＣＬＬ−１抗体が本明細書に提供される。細胞増殖性障害または自己免疫性障害を有する対象において、免疫機能の増強に使用するための本明細書に記載される抗ＣＬＬ−１抗体が本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、細胞増殖性障害は、癌である。いくつかの実施形態では、細胞増殖性障害は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、及び／または骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）である。いくつかの実施形態では、細胞増殖性障害は、ＣＬＬ−１陽性である。細胞増殖性障害のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、細胞増殖性障害は、抗ＡＭＬ抗体薬物複合体（例えば、抗ＣＬＬ１、抗ＣＤ１２３、及び／または抗ＣＤ３３抗体薬物複合体）を用いる治療に耐性である。いくつかの実施形態では、抗体薬物複合体の薬物は、ＤＮＡ損傷剤（例えば、ＰＢＤ）である。
【００３４】
細胞増殖性障害または自己免疫性障害を治療する、またはその進行を遅延させるための薬剤の製造における、本明細書に記載される抗ＣＬＬ−１抗体のうちのいずれかの使用が本明細書に提供される。細胞増殖性障害または自己免疫性障害を有する対象において免疫機能を増強するための薬剤の製造における、本明細書に記載される抗ＣＬＬ−１抗体のうちのいずれかの使用が本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、細胞増殖性障害は、癌である。いくつかの実施形態では、細胞増殖性障害は、ＡＭＬ、ＣＭＬ、及び／またはＭＤＳである。いくつかの実施形態では、細胞増殖性障害は、ＣＬＬ−１陽性である。細胞増殖性障害のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、細胞増殖性障害は、抗ＡＭＬ抗体薬物複合体（例えば、抗ＣＬＬ１、抗ＣＤ１２３、及び／または抗ＣＤ３３抗体薬物複合体）を用いる治療に耐性である。いくつかの実施形態では、抗体薬物複合体の薬物は、ＤＮＡ損傷剤（例えば、ＰＢＤ）である。
【００３５】
細胞増殖性障害または自己免疫性障害の治療またはその進行の遅延を必要とする対象における、治療方法または遅延方法が本明細書に提供され、該方法は、本明細書に記載される抗ＣＬＬ−１抗体を対象に投与することを含む。細胞増殖性障害または自己免疫性障害を有する対象における免疫機能の増強方法が本明細書に提供され、該方法は、有効量の本明細書に記載される抗ＣＬＬ−１抗体を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、細胞増殖性障害は、癌である。いくつかの実施形態では、細胞増殖性障害は、ＡＭＬ、ＣＭＬ、及び／またはＭＤＳである。いくつかの実施形態では、細胞増殖性障害は、ＣＬＬ−１陽性である。細胞増殖性障害のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、細胞増殖性障害は、抗ＡＭＬ抗体薬物複合体（例えば、抗ＣＬＬ１、抗ＣＤ１２３、及び／または抗ＣＤ３３抗体薬物複合体）を用いる治療に耐性である。いくつかの実施形態では、抗体薬物複合体の薬物は、ＤＮＡ損傷剤（例えば、ＰＢＤ）である。
【００３６】
方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ−１抗体は、（ａ）免疫エフェクター細胞上に位置するＣＤ３分子、及び（ｂ）細胞上に位置するＣＬＬ−１分子に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ−１抗体は、（ａ）及び（ｂ）への結合に続いて免疫エフェクター細胞を活性化する。方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、活性化された免疫エフェクター細胞は、標的細胞に対して細胞傷害性作用及び／またはアポトーシス作用を及ぼすことができる。
【００３７】
方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、方法は、対象にＰＤ−１軸結合アンタゴニストまたは追加の治療剤を投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストは、ＰＤ−１結合アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストである。
【００３８】
方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、方法は、対象にグルココルチコイドを投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、グルココルチコイドはデキサメタゾンである。
【００３９】
方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、方法は、幹細胞移植と組み合わせて使用される。
【００４０】
方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、方法は、対象に第２の治療剤を投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、第２の治療剤は、シタラビン及び／またはダウノルビシンを含む。いくつかの実施形態では、第２の治療剤は、シタラビンを含む。いくつかの実施形態では、第２の治療剤は、抗ＡＭＬ抗体薬物複合体（例えば、抗ＣＬＬ１、抗ＣＤ１２３、及び／または抗ＣＤ３３抗体薬物複合体）を含む。
【図面の簡単な説明】
【００４１】
【図１Ａ】マウス（ｍ）６Ｅ７、ｍ２１Ｃ９、ｍ２０Ｂ１、及びｍ２８Ｈ１２の軽鎖可変領域配列（出現順に、それぞれ、配列番号３０、３７、３５、及び４１）（Ａ）及び重鎖可変領域配列（出現順に、それぞれ、配列番号３１、３８、３６、及び４２）（Ｂ）のアライメントを示す。
【図１Ｂ】マウス（ｍ）６Ｅ７、ｍ２１Ｃ９、ｍ２０Ｂ１、及びｍ２８Ｈ１２の軽鎖可変領域配列（出現順に、それぞれ、配列番号３０、３７、３５、及び４１）（Ａ）及び重鎖可変領域配列（出現順に、それぞれ、配列番号３１、３８、３６、及び４２）（Ｂ）のアライメントを示す。
【図２Ａ】Ｋ１Ｈ１、ｍ６Ｅ７、ヒト化（ｈ）６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ、及びｈ６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ．Ａ５４の軽鎖可変領域配列（出現順に、それぞれ、配列番号１０９、３０、３２、及び３２）（Ａ）及び重鎖可変領域配列（出現順に、それぞれ、配列番号１１０、３１、３３、及び３４）（Ｂ）のアライメントを示す。
【図２Ｂ】Ｋ１Ｈ１、ｍ６Ｅ７、ヒト化（ｈ）６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ、及びｈ６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ．Ａ５４の軽鎖可変領域配列（出現順に、それぞれ、配列番号１０９、３０、３２、及び３２）（Ａ）及び重鎖可変領域配列（出現順に、それぞれ、配列番号１１０、３１、３３、及び３４）（Ｂ）のアライメントを示す。
【図３Ａ】Ｋ１Ｈ１、ｍ２１Ｃ９、及びｈ２１Ｃ９．Ｌ２Ｈ３の軽鎖可変領域配列（出現順に、それぞれ、配列番号１０９、３７、及び３９）（Ａ）及び重鎖可変領域配列（出現順に、それぞれ、配列番号１１０、３８、及び４０）（Ｂ）のアライメントを示す。
【図３Ｂ】Ｋ１Ｈ１、ｍ２１Ｃ９、及びｈ２１Ｃ９．Ｌ２Ｈ３の軽鎖可変領域配列（出現順に、それぞれ、配列番号１０９、３７、及び３９）（Ａ）及び重鎖可変領域配列（出現順に、それぞれ、配列番号１１０、３８、及び４０）（Ｂ）のアライメントを示す。
【図４Ａ】抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢのインビトロ死滅特徴付けを示す。（Ａ）様々な濃度のＴＤＢ（μｇ／ｍＬ）（３８Ｅ４ｖ１と組み合わせたｇＤ、ｈ６Ｅ７（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ）、ｈ６Ｅ７Ｄ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＤ５４）、ｈ６Ｅ７Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）、ｍ２０Ｂ１、及びｍ２８Ｈ１２）でのＥＯＬ−１の死滅パーセントを示す。（Ｂ）及び（Ｃ）は、それぞれ、様々な濃度のＴＤＢ（μｇ／ｍＬ）で３８Ｅ４ｖ１と組み合わせたｇＤ、６Ｅ７（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ）、及びｈ２１Ｃ９（ｈ２１Ｃ９．Ｌ２Ｈ３）を使用した、細胞死滅パーセント（ＰＢＭＣ、ＥＯＬ−１、及びＴＨＰ−１）及びＣＤ８（ＣＤ８＋、ＣＤ６９＋、ＣＤ２５＋）Ｔ細胞活性化を示す。
【図４Ｂ】抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢのインビトロ死滅特徴付けを示す。（Ａ）様々な濃度のＴＤＢ（μｇ／ｍＬ）（３８Ｅ４ｖ１と組み合わせたｇＤ、ｈ６Ｅ７（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ）、ｈ６Ｅ７Ｄ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＤ５４）、ｈ６Ｅ７Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）、ｍ２０Ｂ１、及びｍ２８Ｈ１２）でのＥＯＬ−１の死滅パーセントを示す。（Ｂ）及び（Ｃ）は、それぞれ、様々な濃度のＴＤＢ（μｇ／ｍＬ）で３８Ｅ４ｖ１と組み合わせたｇＤ、６Ｅ７（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ）、及びｈ２１Ｃ９（ｈ２１Ｃ９．Ｌ２Ｈ３）を使用した、細胞死滅パーセント（ＰＢＭＣ、ＥＯＬ−１、及びＴＨＰ−１）及びＣＤ８（ＣＤ８＋、ＣＤ６９＋、ＣＤ２５＋）Ｔ細胞活性化を示す。
【図４Ｃ】抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢのインビトロ死滅特徴付けを示す。（Ａ）様々な濃度のＴＤＢ（μｇ／ｍＬ）（３８Ｅ４ｖ１と組み合わせたｇＤ、ｈ６Ｅ７（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ）、ｈ６Ｅ７Ｄ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＤ５４）、ｈ６Ｅ７Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）、ｍ２０Ｂ１、及びｍ２８Ｈ１２）でのＥＯＬ−１の死滅パーセントを示す。（Ｂ）及び（Ｃ）は、それぞれ、様々な濃度のＴＤＢ（μｇ／ｍＬ）で３８Ｅ４ｖ１と組み合わせたｇＤ、６Ｅ７（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ）、及びｈ２１Ｃ９（ｈ２１Ｃ９．Ｌ２Ｈ３）を使用した、細胞死滅パーセント（ＰＢＭＣ、ＥＯＬ−１、及びＴＨＰ−１）及びＣＤ８（ＣＤ８＋、ＣＤ６９＋、ＣＤ２５＋）Ｔ細胞活性化を示す。
【図５Ａ】ｇＤ  ｘ  ３８Ｅ４ｖ１、ｈ２１Ｃ９（ｈ２１Ｃ９．Ｌ２Ｈ３）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１、及びｈ６Ｅ７（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１を使用して、様々なＴＤＢ濃度（μｇ／ｍＬ）で薬物に正規化された生存パーセントを比較する様々なＡＭＬ腫瘍細胞系に対する抗ＣＬＬ−１  ＴＤＢの効力を示す。
【図５Ｂ】ｇＤ  ｘ  ３８Ｅ４ｖ１、ｈ２１Ｃ９（ｈ２１Ｃ９．Ｌ２Ｈ３）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１、及びｈ６Ｅ７（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１を使用して、様々なＴＤＢ濃度（μｇ／ｍＬ）で薬物に正規化された生存パーセントを比較する様々なＡＭＬ腫瘍細胞系に対する抗ＣＬＬ−１  ＴＤＢの効力を示す。
【図５Ｃ】ｇＤ  ｘ  ３８Ｅ４ｖ１、ｈ２１Ｃ９（ｈ２１Ｃ９．Ｌ２Ｈ３）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１、及びｈ６Ｅ７（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１を使用して、様々なＴＤＢ濃度（μｇ／ｍＬ）で薬物に正規化された生存パーセントを比較する様々なＡＭＬ腫瘍細胞系に対する抗ＣＬＬ−１  ＴＤＢの効力を示す。
【図５Ｄ】ｇＤ  ｘ  ３８Ｅ４ｖ１、ｈ２１Ｃ９（ｈ２１Ｃ９．Ｌ２Ｈ３）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１、及びｈ６Ｅ７（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１を使用して、様々なＴＤＢ濃度（μｇ／ｍＬ）で薬物に正規化された生存パーセントを比較する様々なＡＭＬ腫瘍細胞系に対する抗ＣＬＬ−１  ＴＤＢの効力を示す。
【図６Ａ】様々なＴＤＢ濃度（μｇ／ｍＬ）での、全てのサブタイプのＴ細胞を含有する自家カニクイザルＰＢＭＣの存在下でのカニクイザルＣＤ１４＋細胞の死滅、及びＣＤ８（ＣＤ８＋、ＣＤ６９＋、ＣＤ２５＋）Ｔ細胞活性化である、ｈ６Ｅ７（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１、及びｈ２１Ｃ９（ｈ２１Ｃ９．Ｌ２Ｈ３）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１のインビトロ特徴付けを示す。
【図６Ｂ】様々なＴＤＢ濃度（μｇ／ｍＬ）での、全てのサブタイプのＴ細胞を含有する自家カニクイザルＰＢＭＣの存在下でのカニクイザルＣＤ１４＋細胞の死滅、及びＣＤ８（ＣＤ８＋、ＣＤ６９＋、ＣＤ２５＋）Ｔ細胞活性化である、ｈ６Ｅ７（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１、及びｈ２１Ｃ９（ｈ２１Ｃ９．Ｌ２Ｈ３）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１のインビトロ特徴付けを示す。
【図７Ａ】ｈ６Ｅ７（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１及びｇＤ  ｘ  ３８Ｅ４ｖ１を使用した、ＡＭＬ患者の骨髄に対する抗ＣＬＬ−１  ＴＤＢのインビトロ効力を示す。
【図７Ｂ】ｈ６Ｅ７（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１及びｇＤ  ｘ  ３８Ｅ４ｖ１を使用した、ＡＭＬ患者の骨髄に対する抗ＣＬＬ−１  ＴＤＢのインビトロ効力を示す。
【図８Ａ】ＨＬ６０、ＴＨＰ−１、及びＥＯＬ−１細胞系）を使用した、抗ｇＤｘ  ３８Ｅ４ｖ１対照、低親和性ＣＤ３アーム（ｈ６Ｅ７（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ）ｘ４０Ｇ５ｃ）、高親和性抗ＣＤ３アーム（ｈ６Ｅ７（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１）、及び非常に高親和性抗ＣＤ３アーム（ｈ６Ｅ７（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１１）を有する抗ＣＬＬ−１  ＴＤＢのインビトロ特徴付けを示す。
【図８Ｂ】ＨＬ６０、ＴＨＰ−１、及びＥＯＬ−１細胞系）を使用した、抗ｇＤｘ  ３８Ｅ４ｖ１対照、低親和性ＣＤ３アーム（ｈ６Ｅ７（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ）ｘ４０Ｇ５ｃ）、高親和性抗ＣＤ３アーム（ｈ６Ｅ７（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１）、及び非常に高親和性抗ＣＤ３アーム（ｈ６Ｅ７（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１１）を有する抗ＣＬＬ−１  ＴＤＢのインビトロ特徴付けを示す。
【図８Ｃ】ＨＬ６０、ＴＨＰ−１、及びＥＯＬ−１細胞系）を使用した、抗ｇＤｘ  ３８Ｅ４ｖ１対照、低親和性ＣＤ３アーム（ｈ６Ｅ７（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ）ｘ４０Ｇ５ｃ）、高親和性抗ＣＤ３アーム（ｈ６Ｅ７（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１）、及び非常に高親和性抗ＣＤ３アーム（ｈ６Ｅ７（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１１）を有する抗ＣＬＬ−１  ＴＤＢのインビトロ特徴付けを示す。
【図８Ｄ】ＨＬ６０、ＴＨＰ−１、及びＥＯＬ−１細胞系）を使用した、抗ｇＤｘ  ３８Ｅ４ｖ１対照、低親和性ＣＤ３アーム（ｈ６Ｅ７（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ）ｘ４０Ｇ５ｃ）、高親和性抗ＣＤ３アーム（ｈ６Ｅ７（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１）、及び非常に高親和性抗ＣＤ３アーム（ｈ６Ｅ７（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１１）を有する抗ＣＬＬ−１  ＴＤＢのインビトロ特徴付けを示す。
【図８Ｅ】低親和性抗ＣＤ３  Ｆａｂ（ｈ４０Ｇ５ｃ）または高親和性抗ＣＤ３  Ｆａｂ（３８Ｅ４ｖ１）と対合された、ｈ６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ  Ｎ５４−Ａもしくは−Ｓもしくは−Ｅもしくは−Ｑもしくは−Ｄヒト化Ｆａｂの変異型のインビトロ特徴付けを示す。
【図８Ｆ】低親和性抗ＣＤ３  Ｆａｂ（ｈ４０Ｇ５ｃ）または高親和性抗ＣＤ３  Ｆａｂ（３８Ｅ４ｖ１）と対合された、ｈ６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ  Ｎ５４−Ａもしくは−Ｓもしくは−Ｅもしくは−Ｑもしくは−Ｄヒト化Ｆａｂの変異型のインビトロ特徴付けを示す。
【図８Ｇ】低親和性抗ＣＤ３  Ｆａｂ（ｈ４０Ｇ５ｃ）または高親和性抗ＣＤ３  Ｆａｂ（３８Ｅ４ｖ１）と対合された、ｈ６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ  Ｎ５４−Ａもしくは−Ｓもしくは−Ｅもしくは−Ｑもしくは−Ｄヒト化Ｆａｂの変異型のインビトロ特徴付けを示す。
【図８Ｈ】高親和性抗ＣＤ３アーム（３８Ｅ４ｖ１）または低親和性抗ＣＤ３アーム（ｈ４０Ｇ５ｃ）と対合されたｈ６Ｅ７Ｎ５４変異型に応答するＣＤ８Ｔ細胞活性化を示す。
【図８Ｉ】高親和性抗ＣＤ３アーム（３８Ｅ４ｖ１）または低親和性抗ＣＤ３アーム（ｈ４０Ｇ５ｃ）と対合されたｈ６Ｅ７Ｎ５４変異型に応答するＣＤ８Ｔ細胞活性化を示す。
【図９Ａ】２重ＢＡＣ−Ｔｇ（ｈＣＬ−１／ｈＣＤ３ε）マウスにおけるｈＣＬＬ−１及びｈＣＤ３ｅ導入遺伝子の発現を示す。
【図９Ｂ】２重ＢＡＣ−Ｔｇ（ｈＣＬ−１／ｈＣＤ３ε）マウスにおけるｈＣＬＬ−１及びｈＣＤ３ｅ導入遺伝子の発現を示す。
【図１０Ａ】ホモ接合患者と比較した、ヘテロ接合２重ＢＡＣ−Ｔｇ（ｈＣＬ−１／ｈＣＤ３ε）マウスにおけるｈＣＬＬ−１及びｈＣＤ３ｅ導入遺伝子の発現を示す。
【図１０Ｂ】ホモ接合患者と比較した、ヘテロ接合２重ＢＡＣ−Ｔｇ（ｈＣＬ−１／ｈＣＤ３ε）マウスにおけるｈＣＬＬ−１及びｈＣＤ３ｅ導入遺伝子の発現を示す。
【図１０Ｃ】ホモ接合患者と比較した、ヘテロ接合２重ＢＡＣ−Ｔｇ（ｈＣＬ−１／ｈＣＤ３ε）マウスにおけるｈＣＬＬ−１及びｈＣＤ３ｅ導入遺伝子の発現を示す。
【図１０Ｄ】ホモ接合患者と比較した、ヘテロ接合２重ＢＡＣ−Ｔｇ（ｈＣＬ−１／ｈＣＤ３ε）マウスにおけるｈＣＬＬ−１及びｈＣＤ３ｅ導入遺伝子の発現を示す。
【図１１】抗ＣＬＬ−１  ＴＤＢ、ｇＤ  ｘ  ３８Ｅ４ｖ１、６Ｅ７（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１、Ｎ５４Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１、及びＮ５４Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ４０Ｇ５（４０Ｇ５ｃ）で処置した２重ＢＡＣ−Ｔｇ（ｈＣＬ−１／ｈＣＤ３ｅ）におけるＣＤ８＋Ｔ細胞のエクスビボ活性化を示す。
【図１２】抗ＣＬＬ−１  ＴＤＢ、ｇＤ  ｘ  ３８Ｅ４ｖ１、ｇＤ  ｘ  ４０Ｇ５ｃ、ｈ６Ｅ７Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ４０Ｇ５ｃ、ｈ６Ｅ７Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１、及びｈ６Ｅ７Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１１で２重ＢＡＣ−Ｔｇ（ｈＣＬ−１／ｈＣＤ３ｅ）処置したＣＤ８＋Ｔ細胞のインビボ活性化を示す。
【図１３Ａ】抗ＣＬＬ−１  ＴＤＢ、ｇＤ  ｘ  ＣＤ３高（３８Ｅ４ｖ１），ｇＤ  ｘ  ＣＤ３低（４０Ｇ５ｃ）、ＣＬＬ１（Ａ）（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ＣＤ３低（４０Ｇ５ｃ）、ＣＬＬ１（Ａ）（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ＣＤ３高（３８Ｅ４ｖ１）、及びＣＬＬ１（Ａ）（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ＣＤ３非常に高（３８Ｅ４ｖ１１）を用いた抗ＣＬＬ−１  ＴＤＢで処置したｈＣＬＬ−１／ｈＣＤ３ｅ  ＢＡＣ−ＴｇマウスにおけるｈＣＬＬ−１＋細胞のインビボ枯渇を示す。
【図１３Ｂ】抗ＣＬＬ−１  ＴＤＢ、ｇＤ  ｘ  ＣＤ３高（３８Ｅ４ｖ１），ｇＤ  ｘ  ＣＤ３低（４０Ｇ５ｃ）、ＣＬＬ１（Ａ）（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ＣＤ３低（４０Ｇ５ｃ）、ＣＬＬ１（Ａ）（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ＣＤ３高（３８Ｅ４ｖ１）、及びＣＬＬ１（Ａ）（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ＣＤ３非常に高（３８Ｅ４ｖ１１）を用いた抗ＣＬＬ−１  ＴＤＢで処置したｈＣＬＬ−１／ｈＣＤ３ｅ  ＢＡＣ−ＴｇマウスにおけるｈＣＬＬ−１＋細胞のインビボ枯渇を示す。
【図１４Ａ】正常及びＡＭＬヒト白血球に対するＣＬＬ−１（Ａ）及び（Ｂ）ならびにＣＤ３３（Ｂ）の発現プロファイルを示す。
【図１４Ｂ】正常及びＡＭＬヒト白血球に対するＣＬＬ−１（Ａ）及び（Ｂ）ならびにＣＤ３３（Ｂ）の発現プロファイルを示す。
【図１５Ａ】抗ＣＬＬ−１  ｈ６Ｅ７Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１  ＴＤＢによるヒト骨髄細胞の処置後の造血に対する影響を示す。
【図１５Ｂ】抗ＣＬＬ−１  ｈ６Ｅ７Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１  ＴＤＢによるヒト骨髄細胞の処置後の造血に対する影響を示す。
【図１５Ｃ】抗ＣＬＬ−１  ｈ６Ｅ７Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１  ＴＤＢによるヒト骨髄細胞の処置後の造血に対する影響を示す。
【図１６Ａ】３８Ｅ４ｖ１、３８Ｅ４ｖ１１、及び４０Ｇ５Ｃの軽鎖可変領域配列（出現順に、それぞれ、配列番号８５、９３、及び８３）（Ａ）及び重鎖可変領域配列（出現順に、それぞれ、配列番号８４、８４、及び８２）（Ｂ）のアライメントを示す。
【図１６Ｂ】３８Ｅ４ｖ１、３８Ｅ４ｖ１１、及び４０Ｇ５Ｃの軽鎖可変領域配列（出現順に、それぞれ、配列番号８５、９３、及び８３）（Ａ）及び重鎖可変領域配列（出現順に、それぞれ、配列番号８４、８４、及び８２）（Ｂ）のアライメントを示す。
【図１７Ａ】抗ＣＬＬ−１  ＴＤＢで処置したＳＣＩＤ．ベージュマウス（Ａ及びＢ）及びｈＣＬＬ−１／ｈＣＤ３ｅ  ＢＡＣ−Ｔｇマウス（Ｃ及びＤ）における薬物動態（ＰＫ）データを示す。
【図１７Ｂ】抗ＣＬＬ−１  ＴＤＢで処置したＳＣＩＤ．ベージュマウス（Ａ及びＢ）及びｈＣＬＬ−１／ｈＣＤ３ｅ  ＢＡＣ−Ｔｇマウス（Ｃ及びＤ）における薬物動態（ＰＫ）データを示す。
【図１７Ｃ】抗ＣＬＬ−１  ＴＤＢで処置したＳＣＩＤ．ベージュマウス（Ａ及びＢ）及びｈＣＬＬ−１／ｈＣＤ３ｅ  ＢＡＣ−Ｔｇマウス（Ｃ及びＤ）における薬物動態（ＰＫ）データを示す。
【図１７Ｄ】抗ＣＬＬ−１  ＴＤＢで処置したＳＣＩＤ．ベージュマウス（Ａ及びＢ）及びｈＣＬＬ−１／ｈＣＤ３ｅ  ＢＡＣ−Ｔｇマウス（Ｃ及びＤ）における薬物動態（ＰＫ）データを示す。
【図１８Ａ】ｈ６Ｅ７Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ｈ４０Ｇ５ｃ  ＴＤＢで処置したｈＣＬＬ−１／ｈＣＤ３ｅ  ＢＡＣ−Ｔｇマウスの末梢血（Ａ）、骨髄（Ｂ）、及び脾臓（Ｃ）における薬物動力学（ＰＤ）データを示す。
【図１８Ｂ】ｈ６Ｅ７Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ｈ４０Ｇ５ｃ  ＴＤＢで処置したｈＣＬＬ−１／ｈＣＤ３ｅ  ＢＡＣ−Ｔｇマウスの末梢血（Ａ）、骨髄（Ｂ）、及び脾臓（Ｃ）における薬物動力学（ＰＤ）データを示す。
【図１８Ｃ】ｈ６Ｅ７Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ｈ４０Ｇ５ｃ  ＴＤＢで処置したｈＣＬＬ−１／ｈＣＤ３ｅ  ＢＡＣ−Ｔｇマウスの末梢血（Ａ）、骨髄（Ｂ）、及び脾臓（Ｃ）における薬物動力学（ＰＤ）データを示す。
【図１９Ａ】ｈ６Ｅ７Ｎ５４Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１  ＴＤＢで処置したｈＣＬＬ−１／ｈＣＤ３ｅ  ＢＡＣ−Ｔｇマウスの末梢血（Ａ）、骨髄（Ｂ）、及び脾臓（Ｃ）におけるＰＤデータを示す。
【図１９Ｂ】ｈ６Ｅ７Ｎ５４Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１  ＴＤＢで処置したｈＣＬＬ−１／ｈＣＤ３ｅ  ＢＡＣ−Ｔｇマウスの末梢血（Ａ）、骨髄（Ｂ）、及び脾臓（Ｃ）におけるＰＤデータを示す。
【図１９Ｃ】ｈ６Ｅ７Ｎ５４Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１  ＴＤＢで処置したｈＣＬＬ−１／ｈＣＤ３ｅ  ＢＡＣ−Ｔｇマウスの末梢血（Ａ）、骨髄（Ｂ）、及び脾臓（Ｃ）におけるＰＤデータを示す。
【図２０Ａ】ｈ６Ｅ７Ｎ５４Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１１  ＴＤＢで処置したｈＣＬＬ−１／ｈＣＤ３ｅ  ＢＡＣ−Ｔｇマウスの末梢血（Ａ）、骨髄（Ｂ）、及び脾臓（Ｃ）におけるＰＤデータを示す。
【図２０Ｂ】ｈ６Ｅ７Ｎ５４Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１１  ＴＤＢで処置したｈＣＬＬ−１／ｈＣＤ３ｅ  ＢＡＣ−Ｔｇマウスの末梢血（Ａ）、骨髄（Ｂ）、及び脾臓（Ｃ）におけるＰＤデータを示す。
【図２０Ｃ】ｈ６Ｅ７Ｎ５４Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１１  ＴＤＢで処置したｈＣＬＬ−１／ｈＣＤ３ｅ  ＢＡＣ−Ｔｇマウスの末梢血（Ａ）、骨髄（Ｂ）、及び脾臓（Ｃ）におけるＰＤデータを示す。
【図２１Ａ】ｈ６Ｅ７Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ｈ４０Ｇ５ｃ  ＴＤＢ（Ａ及びＤ）、ｈ６Ｅ７Ｎ５４Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１  ＴＤＢ（Ｂ及びＥ）、及びｈ６Ｅ７Ｎ５４Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１１  ＴＤＢ（Ｃ及びＦ）で処置したｈＣＬＬ−１／ｈＣＤ３ｅ  ＢＡＣ−Ｔｇマウスにおける最大標的減少に関連する時間点と相関するマウスＣＤ８＋細胞に関するＣＤ６９の上方調節を示す。
【図２１Ｂ】ｈ６Ｅ７Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ｈ４０Ｇ５ｃ  ＴＤＢ（Ａ及びＤ）、ｈ６Ｅ７Ｎ５４Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１  ＴＤＢ（Ｂ及びＥ）、及びｈ６Ｅ７Ｎ５４Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１１  ＴＤＢ（Ｃ及びＦ）で処置したｈＣＬＬ−１／ｈＣＤ３ｅ  ＢＡＣ−Ｔｇマウスにおける最大標的減少に関連する時間点と相関するマウスＣＤ８＋細胞に関するＣＤ６９の上方調節を示す。
【図２１Ｃ】ｈ６Ｅ７Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ｈ４０Ｇ５ｃ  ＴＤＢ（Ａ及びＤ）、ｈ６Ｅ７Ｎ５４Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１  ＴＤＢ（Ｂ及びＥ）、及びｈ６Ｅ７Ｎ５４Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１１  ＴＤＢ（Ｃ及びＦ）で処置したｈＣＬＬ−１／ｈＣＤ３ｅ  ＢＡＣ−Ｔｇマウスにおける最大標的減少に関連する時間点と相関するマウスＣＤ８＋細胞に関するＣＤ６９の上方調節を示す。
【図２１Ｄ】ｈ６Ｅ７Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ｈ４０Ｇ５ｃ  ＴＤＢ（Ａ及びＤ）、ｈ６Ｅ７Ｎ５４Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１  ＴＤＢ（Ｂ及びＥ）、及びｈ６Ｅ７Ｎ５４Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１１  ＴＤＢ（Ｃ及びＦ）で処置したｈＣＬＬ−１／ｈＣＤ３ｅ  ＢＡＣ−Ｔｇマウスにおける最大標的減少に関連する時間点と相関するマウスＣＤ８＋細胞に関するＣＤ６９の上方調節を示す。
【図２１Ｅ】ｈ６Ｅ７Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ｈ４０Ｇ５ｃ  ＴＤＢ（Ａ及びＤ）、ｈ６Ｅ７Ｎ５４Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１  ＴＤＢ（Ｂ及びＥ）、及びｈ６Ｅ７Ｎ５４Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１１  ＴＤＢ（Ｃ及びＦ）で処置したｈＣＬＬ−１／ｈＣＤ３ｅ  ＢＡＣ−Ｔｇマウスにおける最大標的減少に関連する時間点と相関するマウスＣＤ８＋細胞に関するＣＤ６９の上方調節を示す。
【図２１Ｆ】ｈ６Ｅ７Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ｈ４０Ｇ５ｃ  ＴＤＢ（Ａ及びＤ）、ｈ６Ｅ７Ｎ５４Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１  ＴＤＢ（Ｂ及びＥ）、及びｈ６Ｅ７Ｎ５４Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１１  ＴＤＢ（Ｃ及びＦ）で処置したｈＣＬＬ−１／ｈＣＤ３ｅ  ＢＡＣ−Ｔｇマウスにおける最大標的減少に関連する時間点と相関するマウスＣＤ８＋細胞に関するＣＤ６９の上方調節を示す。
【図２２Ａ】ｈ６Ｅ７Ｎ５４Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ｈ４０Ｇ５ｃ及び抗ＰＤ−Ｌ１で処置したｈＣＬＬ−１／ｈＣＤ３ｅ  ＢＡＣ−Ｔｇマウスにおける骨髄系細胞の低減を示す。図２２Ｃ〜Ｄは、抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体で処置したｈＣＬＬ−１／ｈＣＤ３ｅ  ＢＡＣ−Ｔｇマウスにおける単球及び顆粒球に関するＰＤ−Ｌ１の上方調節を示す。
【図２２Ｂ】ｈ６Ｅ７Ｎ５４Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ｈ４０Ｇ５ｃ及び抗ＰＤ−Ｌ１で処置したｈＣＬＬ−１／ｈＣＤ３ｅ  ＢＡＣ−Ｔｇマウスにおける骨髄系細胞の低減を示す。図２２Ｃ〜Ｄは、抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体で処置したｈＣＬＬ−１／ｈＣＤ３ｅ  ＢＡＣ−Ｔｇマウスにおける単球及び顆粒球に関するＰＤ−Ｌ１の上方調節を示す。
【図２２Ｃ】図２２Ｃ〜Ｄは、抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体で処置したｈＣＬＬ−１／ｈＣＤ３ｅ  ＢＡＣ−Ｔｇマウスにおける単球及び顆粒球に関するＰＤ−Ｌ１の上方調節を示す。
【図２２Ｄ】図２２Ｃ〜Ｄは、抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体で処置したｈＣＬＬ−１／ｈＣＤ３ｅ  ＢＡＣ−Ｔｇマウスにおける単球及び顆粒球に関するＰＤ−Ｌ１の上方調節を示す。
【図２３Ａ】低親和性抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体（（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ｈ４０Ｇ５ｃ）で処置したカニクイザルにおける骨髄系細胞数またはＣＬＬ−１陽性細胞数を示す。
【図２３Ｂ】低親和性抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体（（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ｈ４０Ｇ５ｃ）で処置したカニクイザルにおける骨髄系細胞数またはＣＬＬ−１陽性細胞数を示す。
【図２３Ｃ】低親和性抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体（（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ｈ４０Ｇ５ｃ）で処置したカニクイザルにおける骨髄系細胞数またはＣＬＬ−１陽性細胞数を示す。
【図２３Ｄ】低親和性抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体（（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ｈ４０Ｇ５ｃ）で処置したカニクイザルにおける骨髄系細胞数またはＣＬＬ−１陽性細胞数を示す。
【図２４】低親和性抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体（（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ｈ４０Ｇ５ｃ）で処置したカニクイザルにおける循環リンパ球数を示す。
【図２５】抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体で処置したカニクイザルのＰＫパラメータを示す。
【発明を実施するための形態】
【００４２】
Ｉ．定義
「ＣＬＬ−１」という用語は、本明細書で使用されるとき、細胞内のＣＬＬ−１前駆体タンパク質の処理からもたらされる任意の天然の成熟ＣＬＬ−１を指す。この用語には、別途指示されない限り、霊長類（例えば、ヒト及びカニクイザル）及び齧歯類（例えば、マウス及びラット）等の哺乳動物を含む、任意の脊椎動物源由来のＣＬＬ−１が含まれる。この用語はまた、ＣＬＬ−１の自然発生変異型、例えば、スプライス変異型または対立遺伝子変異型も包含する。例示的なヒトＣＬＬ−１タンパク質配列のアミノ酸配列は、配列番号１に示される。いくつかの実施形態では、ヒトＣＬＬ−１タンパク質配列は、Ｋ２４４Ｑ  ＳＮＰ（配列番号１、配列中、Ｋ２４４はＱである）を含む。例示的な細胞外ドメインのアミノ酸配列は、配列番号２のアミノ酸である。例示的なＣ型レクチン様ドメイン（ＣＴＬＤ）のアミノ酸配列は、配列番号３のアミノ酸である。例示的なカニクイザルＣＬＬ−１タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号４に示される。
【００４３】
「ＣＬＬ−１のグリコシル化型」という用語は、炭水化物残基の付加によって翻訳後修飾されている、ＣＬＬ−１の自然発生型を指す。
【００４４】
「表面抗原分類３」または「ＣＤ３」という用語は、本明細書で使用されるとき、別途指示されない限り、霊長動物（例えばヒト）及び齧歯類（例えば、マウス及びラット）等の哺乳動物を含む、任意の脊椎動物源由来の任意の天然ＣＤ３を指し、例えば、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３α、及びＣＤ３β鎖を含む。この用語は、「完全長」のプロセシングされていないＣＤ３（例えば、プロセシングされていない、もしくは修飾されていないＣＤ３εまたはＣＤ３γ）、ならびに細胞内のプロセシングから得られるＣＤ３の任意の形態を包含する。この用語は、例えば、スプライス変異型または対立遺伝子変異型を含む、ＣＤ３の自然発生変異型も包含する。ＣＤ３は、例えば、２０７のアミノ酸長であるヒトＣＤ３εタンパク質（ＮＣＢＩ参照配列番号ＮＰ＿０００７２４）、及び１８２のアミノ酸長であるヒトＣＤ３γタンパク質（ＮＣＢＩ参照配列番号ＮＰ＿００００６４）を含む。
【００４５】
「抗ＣＬＬ−１抗体」及び「ＣＬＬ−１に結合する抗体」という用語は、抗体が、ＣＬＬ−１を標的とする際に診断剤及び／または治療剤として有用であるように、ＣＬＬ−１に十分な親和性で結合可能である抗体を指す。一実施形態では、無関係の非ＣＬＬ−１タンパク質に抗ＣＬＬ−１抗体が結合する程度は、例えば、放射免疫測定法（ＲＩＡ）によって測定されるとき、ＣＬＬ−１への抗体の結合の約１０％未満である。ある特定の実施形態では、ＣＬＬ−１に結合する抗体は、１μＭ以下、１００ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、１ｎＭ以下、０．１ｎＭ以下、０．０１ｎＭ以下、または０．００１ｎＭ以下（例えば、１０−８Ｍ以下、例えば、１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。ある特定の実施形態では、抗ＣＬＬ−１抗体は、異なる種由来のＣＬＬ−１間で保存されるＣＬＬ−１のエピトープに結合する。
【００４６】
「抗ＣＤ３抗体」及び「ＣＤ３に結合する抗体」という用語は、抗体がＣＤ３の標的とする際に診断剤及び／または治療剤として有用であるように、ＣＤ３に十分な親和性で結合可能である抗体を指す。一実施形態では、無関係の非ＣＤ３タンパク質への抗ＣＤ３抗体の結合の程度は、例えば、放射免疫測定法（ＲＩＡ）によって測定されるとき、ＣＤ３への抗体への結合の約１０％未満である。ある特定の実施形態では、ＣＤ３に結合する抗体は、１μＭ以下、１００ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、１ｎＭ以下、０．１ｎＭ以下、０．０１ｎＭ以下、または０．００１ｎＭ以下（例えば、１０−８Ｍ以下、例えば、１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。ある特定の実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、異なる種由来のＣＤ３間で保存されるＣＤ３のエピトープに結合する。
【００４７】
本明細書の「抗体」という用語は、最も広義に使用され、それらが所望の抗原結合活性を呈する限り、限定されないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び抗体断片を含む、様々な抗体構造を包含する。
【００４８】
「抗体断片」とは、無傷の抗体が結合する抗原と結合する、無傷の抗体の一部を含む無傷の抗体以外の分子を指す。抗体断片の例には、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ′、Ｆａｂ′−ＳＨ、Ｆ（ａｂ′）２；ダイアボディ；線状抗体（ＬＩＮＥＡＲ  ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ）；一本鎖抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ）；及び抗体断片から形成される多重特異性抗体が含まれるが、これらに限定されない。
【００４９】
抗体の「クラス」は、その重鎖によって保有される定常ドメインまたは定常領域の型を指す。抗体の５つの主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭが存在し、これらのうちのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２にさらに分類され得る。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれ、α、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。
【００５０】
「単離された」抗体とは、その天然環境の構成成分から分離された抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、例えば、電気泳動法（例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、等電点電気泳動（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動）、またはクロマトグラフ法（例えば、イオン交換または逆相ＨＰＬＣ）によって決定されるとき、９５％または９９％を超える純度まで精製される。抗体純度の評価のための方法の概説については、例えば、Ｆｌａｔｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｂ  ８４８：７９−８７（２００７）を参照されたい。
【００５１】
「完全長抗体」、「無傷抗体」、及び「全抗体」という用語は、本明細書で、天然抗体構造と実質的に同様の構造を有するか、または本明細書に定義されるＦｃ領域を含有する重鎖を有する抗体を指すように同義に使用される。
【００５２】
「モノクローナル抗体」という用語は、本明細書で使用されるとき、実質的に同種の抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、その集団を含む個々の抗体は、同一であり、かつ／または同じエピトープと結合するが、例えば、自然発生突然変異を含有するか、またはモノクローナル抗体調製物の産生中に生じる、起こり得る変異型抗体は例外であり、かかる変異型は一般的に少量で存在する。異なる決定基（エピトープ）に対して指向される異なる抗体を典型的に含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対して指向される。したがって、「モノクローナル」という修飾語は、実質的に同種の抗体の集団から得られる抗体の特徴を示しており、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするものとして解釈されるものではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、及びヒト免疫グロブリン遺伝子座の全てまたは一部を含有するトランスジェニック動物を利用する方法を含むが、これらに限定されない、様々な技法によって作製されてもよく、モノクローナル抗体を作製するためのこのような方法及び他の例示的な方法が、本明細書に記載されている。
【００５３】
「ヒト化」抗体は、非ヒトＨＶＲ由来のアミノ酸残基及びヒトＦＲ由来のアミノ酸残基を含む、キメラ抗体を指す。ある特定の実施形態では、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、そのＨＶＲ（例えば、ＣＤＲ）の全てまたは実質的に全てが非ヒト抗体のものに対応し、ＦＲの全てまたは実質的に全てがヒト抗体のものに対応する。ヒト化抗体は、任意に、ヒト抗体に由来する抗体定常領域の少なくとも一部分を含んでもよい。抗体、例えば非ヒト抗体の、「ヒト化型」は、ヒト化を受けた抗体を指す。
【００５４】
「キメラ抗体」という用語は、重鎖及び／または軽鎖の一部が特定の源または種に由来し、重鎖及び／または軽鎖の残りの部分が異なる源または種に由来する抗体を指す。
【００５５】
「ヒト抗体」は、ヒトもしくはヒト細胞によって産生された、またはヒト抗体レパートリーを利用する非ヒト源に由来する、抗体のアミノ酸配列、または他のヒト抗体コード配列に対応する、アミノ酸配列を保有するものである。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を具体的に除外する。
【００５６】
「裸の抗体」は、異種性部分（例えば、細胞傷害性部分）または放射標識に複合されていない抗体を指す。裸の抗体は、薬学的製剤中に存在してもよい。
【００５７】
「天然抗体」は、様々な構造を有する自然発生免疫グロブリン分子を指す。例えば、天然ＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合されている２つの同一の軽鎖及び２つの同一の重鎖から構成される、約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。Ｎ末端からＣ末端まで、各重鎖は、可変重ドメイン（ｖａｒｉａｂｌｅ  ｈｅａｖｙ  ｄｏｍａｉｎ）または重鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＨ）と、その後に３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）とを有する。同様に、Ｎ末端からＣ末端まで、各軽鎖は、可変軽ドメイン（ｖａｒｉａｂｌｅ  ｌｉｇｈｔ  ｄｏｍａｉｎ）または軽鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＬ）と、その後に定常軽（ＣＬ）ドメインとを有する。抗体の軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）及びラムダ（λ）と呼ばれる２つの型うちの１つに割り当てられ得る。
【００５８】
「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は、抗体の抗原への結合に関与する抗体の重鎖または軽鎖のドメインを指す。天然抗体の重鎖及び軽鎖（それぞれ、ＶＨ及びＶＬ）の可変ドメインは、一般的に、各ドメインが４つの保存フレームワーク領域（ＦＲ）及び３つの超可変領域（ＨＶＲ）を含む同様の構造を有する（例えば、Ｋｉｎｄｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｋｕｂｙ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６ｔｈ  ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏ．，ｐａｇｅ  ９１（２００７）を参照されたい。）単一のＶＨまたはＶＬドメインは、抗原結合特異性を付与するのに十分であり得る。さらに、特定の抗原と結合する抗体は、抗原と結合する抗体のＶＨまたはＶＬドメインを使用して単離されて、それぞれ、相補的ＶＬまたはＶＨドメインのライブラリをスクリーニングすることができる。例えば、Ｐｏｒｔｏｌａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：８８０−８８７（１９９３）、Ｃｌａｒｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８（１９９１）を参照されたい。
【００５９】
「フレームワーク」または「ＦＲ」は、超可変領域（ＨＶＲ）残基以外の可変ドメイン残基を指す。可変ドメインのＦＲは一般的に、４つのＦＲドメイン：ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４からなる。したがって、ＨＶＲ及びＦＲ配列は一般的に、ＶＨ（またはＶＬ）において次の配列：ＦＲ１−Ｈ１（Ｌ１）−ＦＲ２−Ｈ２（Ｌ２）−ＦＲ３−Ｈ３（Ｌ３）−ＦＲ４で出現する。
【００６０】
「超可変領域」または「ＨＶＲ」という用語は、本明細書で使用されるとき、配列中で超可変（「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」）であり、かつ／または構造的に定義されたループ（「超可変ループ」）を形成し、かつ／または抗原接触残基（「抗原接触体」）を含有する、抗体可変ドメインの領域の各々を指す。一般的に、抗体は、３つがＶＨ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）にあり、３つがＶＬ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）にある、６つのＨＶＲを含む。本明細書の例示的なＨＶＲは、
（ａ）アミノ酸残基２６〜３２（Ｌ１）、５０〜５２（Ｌ２）、９１〜９６（Ｌ３）、２６〜３２（Ｈ１）、５３〜５５（Ｈ２）、及び９６〜１０１（Ｈ３）で発生する超可変ループ（Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７））、
（ｂ）アミノ酸残基２４〜３４（Ｌ１）、５０〜５６（Ｌ２）、８９〜９７（Ｌ３）、３１〜３５ｂ（Ｈ１）、５０〜６５（Ｈ２）、及び９５〜１０２（Ｈ３）で発生するＣＤＲ（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１））、
（ｃ）アミノ酸残基２７ｃ〜３６（Ｌ１）、４６〜５５（Ｌ２）、８９〜９６（Ｌ３）、３０〜３５ｂ（Ｈ１）、４７〜５８（Ｈ２）、及び９３〜１０１（Ｈ３）で発生する抗原接触体（ＭａｃＣａｌｌｕｍ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２−７４５（１９９６））、ならびに
（ｄ）ＨＶＲアミノ酸残基４６〜５６（Ｌ２）、４７〜５６（Ｌ２）、４８〜５６（Ｌ２）、４９〜５６（Ｌ２）、２６〜３５（Ｈ１）、２６〜３５ｂ（Ｈ１）、４９〜６５（Ｈ２）、９３〜１０２（Ｈ３）、及び９４〜１０２（Ｈ３）を含む、（ａ）、（ｂ）、及び／または（ｃ）の組み合わせを含む。
【００６１】
別途指示されない限り、可変ドメイン（例えば、ＦＲ残基）におけるＨＶＲ残基及び他の残基は、本明細書において上記のＫａｂａｔらに従って番号付けされる。
【００６２】
本明細書における「Ｆｃ領域」という用語は、定常領域の少なくとも一部分を含有する免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するように使用される。この用語は、天然配列Ｆｃ領域及び変異型Ｆｃ領域を含む。一実施形態では、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、Ｃｙｓ２２６から、またはＰｒｏ２３０から、重鎖のカルボキシル末端に及ぶ。しかしながら、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）は、存在する場合もあれば、しない場合もある。本明細書で別途指示されない限り、Ｆｃ領域または定常領域中のアミノ酸残基の番号付けは、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９９１に記載されている、ＥＵインデックスとも称されるＥＵ番号付け方式に従う。
【００６３】
「変異型Ｆｃ領域」は、少なくとも１つのアミノ酸修飾、好ましくは１つ以上のアミノ酸置換（複数可）によって天然配列Ｆｃ領域のものとは異なるアミノ酸配列を含む。好ましくは、変異型Ｆｃ領域は、天然配列Ｆｃ領域または親ポリペプチドのＦｃ領域と比較して少なくとも１つのアミノ酸置換、例えば、天然配列Ｆｃ領域中または親ポリペプチドのＦｃ領域中に約１〜約１０のアミノ酸置換、及び好ましくは約１〜約５のアミノ酸置換を有する。本明細書の変異型Ｆｃ領域は、好ましくは、天然配列Ｆｃ領域及び／または親ポリペプチドのＦｃ領域と少なくとも約８０％の相同性、ならびに最も好ましくは、それらと少なくとも約９０％の相同性、より好ましくは、それらと少なくとも約９５％の相同性を保有する。
【００６４】
「ヒトコンセンサスフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨフレームワーク配列の選択において最も一般的に生じるアミノ酸残基を表すフレームワークである。一般的に、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列のサブグループからである。一般的に、配列のサブグループは、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ９１−３２４２，Ｂｅｔｈｅｓｄａ  ＭＤ（１９９１），ｖｏｌｓ．１−３にあるようなサブグループである。一実施形態では、ＶＬについて、サブグループは、上記のＫａｂａｔらにあるようなサブグループカッパＩである。一実施形態では、ＶＨについて、サブグループは、上記のＫａｂａｔらにあるようなサブグループＩＩＩである。
【００６５】
本明細書の目的のための「アクセプターヒトフレームワーク」は、以下に定義される、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークに由来する、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）フレームワークまたは重鎖可変ドメイン（ＶＨ）フレームワークのアミノ酸配列を含むフレームワークである。ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワーク「に由来する」アクセプターヒトフレームワークは、その同じアミノ酸配列を含み得るか、またはそれは、アミノ酸配列変化を含有し得る。いくつかの実施形態では、アミノ酸変化の数は、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、もしくは３以下、または２以下である。いくつかの実施形態では、ＶＬアクセプターヒトフレームワークの配列は、ＶＬヒト免疫グロブリンフレームワーク配列またはヒトコンセンサスフレームワーク配列と同一である。
【００６６】
「親和性」とは、分子（例えば、抗体）の単一結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有結合相互作用の合計の強度を指す。別途示されない限り、本明細書で使用されるとき、「結合親和性」とは、結合対のメンバー（例えば、抗体及び抗原）間の１：１の相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。分子ＸのそのパートナーＹに対する親和性は、一般的に、解離定数（Ｋｄ）で表され得る。親和性は、本明細書に記載の方法を含む当該技術分野で既知の一般的な方法によって測定され得る。結合親和性を測定するための具体的な例証的説明及び例示的な実施形態が、以下に記載される。
【００６７】
「親和性成熟」抗体は、変化を有しない親抗体と比較して、１つ以上の超可変領域（ＨＶＲ）において１つ以上の変化を有し、かかる変化によって抗原に対する抗体の親和性を改善する、抗体を指す。
【００６８】
「結合ドメイン」とは、標的エピトープ、抗原、リガンド、または受容体に特異的に結合する化合物または分子の一部を意味する。結合ドメインは、抗体（例えば、モノクローナル、ポリクローナル、組換え、ヒト化、及びキメラ抗体）、抗体断片またはその部分（例えば、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’２、ｓｃＦｖ抗体、ＳＭＩＰ、ドメイン抗体、ダイアボディ、ミニボディ、ｓｃＦｖ−Ｆｃ、アフィボディ、ナノボディ、ならびに抗体のＶＨ及び／またはＶＬドメイン）、受容体、リガンド、アプタマー、及び特定された結合パートナーを有する他の分子を含むが、これらに限定されない。
【００６９】
「エピトープ」という用語は、抗体が結合する抗原分子上の特定の部位を指す。いくつかの実施形態では、抗体が結合する抗原分子上の特定の部位は、ヒドロキシルラジカルフットプリント法（例えば、ＣＬＬ−１結合ドメイン）により決定される。いくつかの実施形態では、抗体が結合する抗原分子上の特定の部位は、結晶解析（例えば、ＣＤ３結合ドメイン）によって決定される。
【００７０】
「エフェクター機能」とは、抗体のアイソタイプにより異なる抗体のＦｃ領域に起因するこれらの生物学的活性を指す。抗体エフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）、食作用、細胞表面受容体の下方調節、ならびにＢ細胞活性化が挙げられる。
【００７１】
「免疫複合体」は、細胞傷害性薬剤を含むがこれに限定されない１つ以上の異種性分子（複数可）に複合体化される抗体である。
【００７２】
「細胞傷害性薬剤」という用語は、本明細書で使用されるとき、細胞機能を阻害するもしくは阻む、及び／または細胞死もしくは破壊を引き起こす物質を指す。細胞傷害性薬剤には、放射性同位体（例えば、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、及びＬｕの放射性同位体）；化学治療剤もしくは化学治療薬（例えば、メトトレキサート、アドリアマイシン、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド）、ドキソルビシン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、ダウノルビシン、または他のインターカレート剤）；成長阻害剤；核酸分解酵素などの酵素及びそれらの断片；抗生物質；細菌、真菌、植物、もしくは動物起源の小分子毒素または酵素活性毒素（それらの断片及び／または変異型を含む）などの毒素；ならびに下に記載される様々な抗腫瘍または抗癌剤が含まれるが、これらに限定されない。
【００７３】
「単離された」核酸とは、その天然環境の構成成分から分離された核酸分子を指す。単離された核酸は、通常は核酸分子を含有する細胞内に含有される核酸分子を含むが、その核酸分子が染色体外に、またはその天然染色体位置とは異なる染色体位置に存在する。
【００７４】
「抗ＣＬＬ−１抗体をコードする単離された核酸」は、抗体の重鎖及び軽鎖（またはそれらの断片）をコードする１つ以上の核酸分子を指し、単一のベクターまたは別個のベクター内のかかる核酸分子（複数可）を含み、かかる核酸分子（複数可）は、宿主細胞内の１つ以上の場所に存在する。
【００７５】
「抗ＣＤ３抗体をコードする単離された核酸」とは、抗体の重鎖及び軽鎖（またはそれらの断片）をコードする１つ以上の核酸分子を指し、単一のベクターまたは別個のベクター内のかかる核酸分子（複数可）を含み、かかる核酸分子（複数可）は、宿主細胞内の１つ以上の場所に存在する。
【００７６】
「ベクター」という用語は、本明細書で使用されるとき、連結されている別の核酸を増殖することができる核酸分子を指す。この用語は、自己複製核酸構造としてのベクター、ならびにその中に導入される宿主細胞のゲノム内に組み込まれたベクターを含む。ある特定のベクターは、それらが作動可能に結合している核酸の発現を指向することができる。かかるベクターは、本明細書において「発現ベクター」と称される。
【００７７】
「宿主細胞」、「宿主細胞系」、及び「宿主細胞培養物」という用語は、交換可能に使用され、その中に外因性核酸が導入された細胞を指し、かかる細胞の子孫を含む。宿主細胞には、初代形質転換細胞及び継代の数に関わらずそれに由来する子孫を含む、「形質転換体」及び「形質転換細胞」が含まれる。子孫は、親細胞と核酸含有量の点で完全に同一ではないが、突然変異を含み得る。元来形質転換された細胞についてスクリーニングまたは選択されたものと同じ機能または生物学的活性を有する変異子孫が、本明細書に含まれる。
【００７８】
参照ポリペプチド配列に関する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、配列を整列し、配列同一性最大パーセントを達成するために配列を整列し、必要な場合はギャップを導入した後に、いかなる保存的置換も配列同一性の部分として考慮せずに、参照ポリペプチド配列中のアミノ酸残基と同一である、候補配列におけるアミノ酸残基の割合として定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定する目的のためのアライメントは、当該技術分野の技術範囲内の様々な方法で、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ等の公的に入手可能なコンピュータソフトウェア、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアを使用して達成され得る。当業者であれば、比較される配列の全長にわたる最大アライメントを達成するのに必要な任意のアルゴリズムを含む、配列のアライメントに適切なパラメータを決定することができる。しかしながら、本明細書における目的のために、アミノ酸配列同一性％値は、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ−２を使用して生成される。ＡＬＩＧＮ−２配列比較コンピュータプログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．によって執筆され、ソースコードは、ユーザ文書と共に米国著作権局（Ｕ．Ｓ．Ｃｏｐｙｒｉｇｈｔ  Ｏｆｆｉｃｅ）、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  Ｄ．Ｃ．，２０５５９に提出されており、米国著作権登録番号ＴＸＵ５１００８７の下に登録されている  。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．，Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａから公的に入手可能であるか、またはソースコードからコンパイルされ得る。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、デジタルＵＮＩＸ  Ｖ４．０Ｄを含むＵＮＩＸオペレーティングシステムでの使用のためにコンパイルされるべきである。全ての配列比較パラメータは、ＡＬＩＧＮ−２プログラムによって設定されており、変動しない。
【００７９】
ＡＬＩＧＮ−２がアミノ酸配列比較に用いられる状況下で、所与のアミノ酸配列Ｂへの、それとの、またはそれに対する所与のアミノ酸配列Ａのアミノ酸配列同一性％（代替的に、所与のアミノ酸配列Ｂへの、それとの、またはそれに対するある特定のアミノ酸配列同一性％を有するか、または含む所与のアミノ酸配列Ａと表現され得る）は、以下のように計算される。
１００×画分Ｘ／Ｙ
式中、Ｘは、配列アライメントプログラムＡＬＩＧＮ−２によって、そのプログラムのＡ及びＢのアライメントにおいて完全な一致としてスコア化されたアミノ酸残基の数であり、Ｙは、Ｂ中のアミノ酸残基の総数である。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さと等しくない場合、Ｂに対するＡのアミノ酸配列同一性％は、Ａに対するＢのアミノ酸配列同一性％と等しくはならないことが理解されるだろう。別途具体的に記されない限り、本明細書で使用される全てのアミノ酸配列同一性％値は、直前の段落に記載されるようにＡＬＩＧＮ−２コンピュータプログラムを使用して得られる。
【００８０】
「薬学的製剤」という用語は、調製物の中に含有される活性成分の生物学的活性が有効になるような形態であり、かつ製剤が投与され得る対象にとって許容できないほど有毒である追加の構成成分を含有しない調製物を指す。
【００８１】
「薬学的に許容される担体」とは、対象にとって非毒性である活性成分以外の薬学的製剤中の成分を指す。薬学的に許容される担体には、緩衝剤、賦形剤、安定剤、または防腐剤を含むが、これらに限定されない。
【００８２】
薬剤、例えば、薬学的製剤の「有効量」とは、所望の治療的または予防的結果を達成するために必要な投薬量及び一定期間にわたる、有効な量を指す。本明細書における有効量は、患者の疾患状態、年齢、性別、及び体重、ならびに個体における所望の応答を誘発する抗体の能力などの要因に応じて異なり得る。有効量は、治療上有益な効果が治療の任意の毒性効果または有害効果を上回るものでもある。予防的使用の場合、有益なまたは所望の結果には、疾患の生化学的、組織学的、及び／または挙動的症状、その合併症、ならびに疾患の発症中に現れる中間病理学的表現型を含む、疾患のリスクの排除もしくは低減、疾患の重症度の軽減、または疾患の発生の遅延などの結果が含まれる。治療的使用の場合、有益なまたは所望の結果には、疾患に起因する１つ以上の症状の減少、疾患に罹患している者の生活の質の向上、疾患の治療に必要な他の薬剤の用量の減少、別の薬剤の効果の増強（例えば、標的による）、疾患の進行の遅延、及び／または生存期間の延長などの臨床結果が含まれる。癌または腫瘍の場合、有効量の薬物は、癌細胞の数を低減させ、腫瘍サイズを低減させ、癌細胞の末梢器官への浸潤を阻害し（すなわち、ある程度遅らせるか、または望ましくは停止し）、腫瘍転移を阻害し（すなわち、ある程度遅らせるか、または望ましくは停止し）、腫瘍成長をある程度阻害し、かつ／または障害に関連する症状のうちの１つ以上をある程度軽減する効果を有し得る。有効量は、１回以上の投与で投与され得る。本発明の目的に関しては、薬物、化合物、または薬学的組成物の有効量は、予防的または治療的治療を直接または間接的に達成するのに十分な量である。臨床分野において理解されるように、薬物、化合物、または薬学的組成物の有効量は、別の薬物、化合物、または薬学的組成物と併せて達成されても、されなくてもよい。したがって、「有効量」は、１つ以上の治療剤を投与するという点で考慮され得、単剤は、１つ以上の他の薬剤と併せて、望ましい結果が達成され得るか、または達成される場合、有効量で与えられると見なされ得る。
【００８３】
本明細書で使用されるとき、「治療」（及び「治療する」または「治療すること」等のその文法上の変形）とは、治療されている個体の自然経過を変更することを目的とした臨床介入を指し、予防のために、または臨床病理過程中のいずれかに実施され得る。治療の望ましい効果には、疾患の発生または再発の予防、症状の緩和、疾患の任意の直接的または間接的病理学的帰結の縮小、転移の予防、疾患進行速度の減少、病状の回復または寛解、及び緩解または予後の改善を含むが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、本発明の抗体を使用して、疾患の発達を遅延させるか、または疾患の進行を減速させる。
【００８４】
本明細書で使用されるとき、障害または疾患の「進行を遅延させること」とは、疾患または障害（例えば細胞増殖性障害、例えば癌）の発達を延期する、妨げる、減速させる、遅滞させる、安定化させる、及び／または延滞させることを意味する。この遅延は、治療されている病歴及び／または個体に応じて異なる期間であり得る。当業者に明らかであるように、十分または著しい遅延は、個体が疾患を発症しないという点で、予防を事実上包含し得る。例えば、転移の発症などの末期癌を遅延させることができる。
【００８５】
「低減する」または「阻害する」とは、例えば、２０％以上の、５０％以上の、または７５％、８５％、９０％、９５％、もしくはそれ以上の全体的な減少を生じる能力を意味する。ある特定の実施形態では、減少する、または阻害するとは、抗体Ｆｃ領域によって媒介される抗体のエフェクター機能を指すことができ、かかるエフェクター機能は、具体的に補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）、及び抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）を含む。
【００８６】
「化学治療剤」とは、癌の治療において有用な化学物質を指す。化学治療剤の例には、チオテパ及びシクロスホスファミド（ｃｙｃｌｏｓｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）（ＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標））等のアルキル化剤；ブスルファン、インプロスルファン、及びピポスルファン等のスルホン酸アルキル；ベンゾドーパ（ｂｅｎｚｏｄｏｐａ）、カルボコン、メツレドーパ（ｍｅｔｕｒｅｄｏｐａ）、及びウレドーパ（ｕｒｅｄｏｐａ）等のアジリジン；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホルアミド、及びトリメチロメラミンを含むエチレンイミンならびにメチルアメラミン；アセトゲニン（特にブラタシン及びブラタシノン（ｂｕｌｌａｔａｃｉｎｏｎｅ））；デルタ−９−テトラヒドロカンナビノール（ドロナビノール、ＭＡＲＩＮＯＬ（登録商標））；ベータ−ラパコン；ラパコール；コルヒチン；ベツリン酸；カンプトテシン（合成類似体トポテカン（ＨＹＣＡＭＴＩＮ（登録商標））、ＣＰＴ−１１（イリノテカン、ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（登録商標））、アセチルカンプトテシン、スコポレクチン（ｓｃｏｐｏｌｅｃｔｉｎ）、及び９−アミノカンプトテシンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン（ｃａｌｌｙｓｔａｔｉｎ）；ＣＣ−１０６５（そのアドゼレシン、カルゼルシン、及びビセレシン合成類似体を含む）；ポドフィロトキシン；ポドフィリン酸；テニポシド；クリプトフィシン（具体的にはクリプトフィシン１及びクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成類似体ＫＷ−２１８９及びＣＢ１−ＴＭ１を含む）；エリュテロビン；パンクラチスタチン（ｐａｎｃｒａｔｉｓｔａｔｉｎ）；サルコジクチン（ｓａｒｃｏｄｉｃｔｙｉｎ）；スポンジスタチン（ｓｐｏｎｇｉｓｔａｔｉｎ）；クロラムブシル、クロルナファジン、クロロホスファミド（ｃｈｌｏｒｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、酸化メクロレタミン塩酸塩、メルファラン、ノベムビチン（ｎｏｖｅｍｂｉｃｈｉｎ）、フェネステリン（ｐｈｅｎｅｓｔｅｒｉｎｅ）、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード等のナイトロジェンマスタード；カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、及びラニムヌスチン（ｒａｎｉｍｎｕｓｔｉｎｅ）等のニトロソウレア；エンジイン抗生物質（例えば、カリチアマイシン、特にカリチアマイシンガンマ１Ｉ及びカリチアマイシンオメガＩ１（例えば、Ｎｉｃｏｌａｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ  Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．，３３：１８３−１８６（１９９４）を参照されたい）；経口アルファ−４インテグリン阻害剤であるＣＤＰ３２３；ジネマイシン（ジネマイシンＡを含む）；エスペラミシン；ならびにネオカルジノスタチンクロモフォア及び関連色素タンパク質エンジイン抗生物質クロモフォア）；アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オースラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビシン（ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（登録商標）、モルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシン、ドキソルビシンＨＣｌリポソーム注射剤（ＤＯＸＩＬ（登録商標））、リポソームドキソルビシンＴＬＣ  Ｄ−９９（ＭＹＯＣＥＴ（登録商標））、ペグ化リポソームドキソルビシン（ＣＡＥＬＹＸ（登録商標））、及びデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン（マイトマイシンＣなど）、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポルフィロマイシン、ピューロマイシン、クエラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン（ｒｏｄｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；代謝拮抗剤（例えば、メトトレキサート、ゲムシタビン（ＧＥＭＺＡＲ（登録商標））、テガフール（ＵＦＴＯＲＡＬ（登録商標））、カペシタビン（ＸＥＬＯＤＡ（登録商標））、エポチロン、及び５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）など）；葉酸類似体（例えば、デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサート）；プリン類似体（例えば、フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン）；ピリミジン類似体（例えば、アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン）；アンドロゲン（例えば、カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン）；抗副腎剤（ａｎｔｉ−ａｄｒｅｎａｌ）（例えば、アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン）；葉酸補充剤（例えば、フロリン酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃ  ａｃｉｄ））；アセグラトン；アルドホスファミドグルコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトラキサート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）；デフォファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）；デメコルチン；ジアジクオン；エルフォールニチン（ｅｌｆｏｒｎｉｔｈｉｎｅ）；酢酸エリプチニウム（ｅｌｌｉｐｔｉｎｉｕｍ  ａｃｅｔａｔｅ）；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダミン；マイタンシノイド（例えば、マイタンシン及びアンサミトシンなど）；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダモール；ニトラエリン（ｎｉｔｒａｅｒｉｎｅ）；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）多糖類複合体（ＪＨＳ  Ｎａｔｕｒａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）；ラゾキサン；リゾキサン（ｒｈｉｚｏｘｉｎ）；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジクオン；２，２’，２’−トリクロロトリエチルアミン；トリコテシン（特に、Ｔ−２毒素、ベルカリン（ｖｅｒｒａｃｕｒｉｎ）Ａ、ロリジンＡ、及びアングイジン）；ウレタン；ビンデシン（ＥＬＤＩＳＩＮＥ（登録商標）、ＦＩＬＤＥＳＩＮ（登録商標））；ダカルバジン；マンノム��チン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；チオテパ；タキソイド、例えば、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標）、パクリタキセルのアルブミン操作ナノ粒子製剤（ＡＢＲＡＸＡＮＥ（商標））、及びドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）；クロラムブシル；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；白金薬剤（例えば、シスプラチン、オキサリプラチン（例えばＥＬＯＸＡＴＩＮ（登録商標））、及びカルボプラチンなど）；チューブリン重合が微小管を形成するのを阻止するビンカ（ビンブラスチン（ＶＥＬＢＡＮ（登録商標））、ビンクリスチン（ＯＮＣＯＶＩＮ（登録商標））、ビンデシン（ＥＬＤＩＳＩＮＥ（登録商標）、ＦＩＬＤＥＳＩＮ（登録商標））、及びビノレルビン（ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標））を含む）；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ロイコボリン；ノバントロン；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；イバンドロネート；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸などのレチノイド（ベキサロテン（ＴＡＲＧＲＥＴＩＮ（登録商標））を含む）；ビスホスホネート（例えば、クロドロネート（例えば、ＢＯＮＥＦＯＳ（登録商標）またはＯＳＴＡＣ（登録商標））、エチドロネート（ＤＩＤＲＯＣＡＬ（登録商標））、ＮＥ−５８０９５、ゾレドロン酸／ゾレドロネート（ＺＯＭＥＴＡ（登録商標））、アレンドロネート（ＦＯＳＡＭＡＸ（登録商標））、パミドロネート（ＡＲＥＤＩＡ（登録商標））、チルドロネート（ＳＫＥＬＩＤ（登録商標））、またはリセドロネート（ＡＣＴＯＮＥＬ（登録商標））など）；トロキサシタビン（１，３−ジオキソランヌクレオシドシトシン類似体）；アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に、異常な細胞増殖に関係付けられるシグナル伝達経路における遺伝子の発現を阻害するもの、例えば、ＰＫＣ−アルファ、Ｒａｆ、Ｈ−Ｒａｓ、及び上皮成長因子受容体（ＥＧＦ−Ｒ）など；ＴＨＥＲＡＴＯＰＥ（登録商標）ワクチン及び遺伝子療法ワクチンなどのワクチン、例えば、ＡＬＬＯＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、ＬＥＵＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、及びＶＡＸＩＤ（登録商標）ワクチン；トポイソメラーゼ１阻害剤（例えば、ＬＵＲＴＯＴＥＣＡＮ（登録商標））；ｒｍＲＨ（例えば、ＡＢＡＲＥＬＩＸ（登録商標））；ＢＡＹ４３９００６（ソラフェニブ；Ｂａｙｅｒ）；ＳＵ−１１２４８（スニチニブ、ＳＵＴＥＮＴ（登録商標）、Ｐｆｉｚｅｒ）；ペリフォシン、ＣＯＸ−２阻害剤（例えば、セレコキシブまたはエトリコキシブ）、プロテオソーム（ｐｒｏｔｅｏｓｏｍｅ）阻害剤（例えば、ＰＳ３４１）；ボルテゾミブ（ＶＥＬＣＡＤＥ（登録商標））；ＣＣＩ−７７９；ティピファニブ（Ｒ１１５７７）；オラフェニブ（ｏｒａｆｅｎｉｂ）、ＡＢＴ５１０；Ｂｃｌ−２阻害剤（例えば、オブリメルセンナトリウム（ＧＥＮＡＳＥＮＳＥ（登録商標））；ピクサントロン；ＥＧＦＲ阻害剤（以下の定義を参照されたい）；チロシンキナーゼ阻害剤；セリン−スレオニンキナーゼ阻害剤（例��ば、ラパマイシン（シロリムス、ＲＡＰＡＭＵＮＥ（登録商標）など）；ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤（例えば、ロナファーニブ（ＳＣＨ  ６６３６、ＳＡＲＡＳＡＲＴＭ）など）；ならびに上記の任意の薬学的に許容可能な塩、酸、または誘導；ならびに上記のうちの２つ以上の組み合わせ、例えば、ＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、及びプレドニゾロンの併用療法の略称）；ならびにＦＯＬＦＯＸ５−ＦＵ及びロイコボリンと組み合わされたオキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮ（商標））を用いた治療レジメンの略称）が含まれる。
【００８７】
本明細書で定義される化学治療剤は、癌の成長を促進し得るホルモンの効果を調節、低減、遮断、または阻害するように作用する「抗ホルモン剤」または「内分泌治療薬」を含む。それらは、それら自体がホルモンであってもよく、タモキシフェン（ＮＯＬＶＡＤＥＸ（登録商標））、４−ヒドロキシタモキシフェン、トレミフェン（ＦＡＲＥＳＴＯＮ（登録商標））、イドキシフェン、ドロロキシフェン、ラロキシフェン（ＥＶＩＳＴＡ（登録商標））、トリオキシフェン、ケオキシフェン、及びＳＥＲＭ３等の選択的エストロゲン受容体調節剤（ＳＥＲＭ）を含む、混合アゴニスト／アンタゴニストプロファイルを有する抗エストロゲン；フルベストラント（ＦＡＳＬＯＤＥＸ（登録商標））、及びＥＭ８００（かかる薬剤は、エストロゲン受容体（ＥＲ）二量体化を遮断する、ＤＮＡ結合を阻害する、ＥＲターンオーバーを増加させる、及び／またはＥＲレベルを抑制する場合がある）などのアゴニスト特性を有しない純粋な抗エストロゲン；ホルメスタン及びエキセメスタン（ＡＲＯＭＡＳＩＮ（登録商標））などのステロイド性アロマターゼ阻害剤、ならびにアナストラゾール（ＡＲＩＭＩＤＥＸ（登録商標））、レトロゾール（ＦＥＭＡＲＡ（登録商標））、及びアミノグルテチミドなどの非ステロイド性アロマターゼ阻害剤を含むアロマターゼ阻害剤、ならびにボロゾール（ＲＩＶＩＳＯＲ（登録商標））、メゲストロールアセテート（ＭＥＧＡＳＥ（登録商標））、ファドロゾール、及び４（５）−イミダゾールを含む、他のアロマターゼ阻害剤；リュープロリド（ＬＵＰＲＯＮ（登録商標）及びＥＬＩＧＡＲＤ（登録商標））、ゴセレリン、ブセレリン、及びトリプテレリン（ｔｒｉｐｔｅｒｅｌｉｎ）を含む、黄体形成ホルモン放出ホルモンアゴニスト；メゲストロールアセテート及びメドロキシプロゲステロンアセテートなどのプロゲスチン、ジエチルスチルベストロール及びプレマリンなどのエストロゲン、ならびにフルオキシメステロン、全てのトランスレチオン酸（ｔｒａｎｓｒｅｔｉｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）、及びフェンレチニドなどのアンドロゲン／レチノイドを含む、性ステロイド；オナプリストン；抗プロゲステロン；エストロゲン受容体下方調節剤（ＥＲＤ）；フルタミド、ニルタミド、及びビカルタミドなどの抗アンドロゲン；ならびに上記のうちのいずれかの薬学的に許容される塩、酸、または誘導体；ならびに上記のうちの２つ以上の組み合わせを含むが、これらに限定されない。
【００８８】
「免疫抑制剤」という用語は、補助療法に関して本明細書で使用されるとき、本明細書で治療されている哺乳動物の免疫系を抑制またはマスクするように作用する物質を指す。これには、サイトカイン産生を抑制するか、自己抗原発現を下方調節もしくは抑制するか、またはＭＨＣ抗原をマスクする物質が含まれることになる。かかる薬剤の例には、２−アミノ−６−アリール−５−置換ピリミジン（米国特許第４，６６５，０７７号を参照されたい）；非ステロイド性抗炎症性薬物（ＮＳＡＩＤ）；ガンシクロビル、タクロリムス、コルチゾールまたはアルドステロンなどのグルココルチコイド、シクロオキシゲナーゼ阻害剤、５−リポキシゲナーゼ阻害剤、またはロイコトリエン受容体アンタゴニストなどの抗炎症剤；アザチオプリンまたはミコフェノール酸モフェチル（ＭＭＦ）などのプリンアンタゴニスト；シクロホスファミドなどのアルキル化剤；ブロモクリプチン；ダナゾール；ダプソン；グルタルアルデヒド（米国特許第４，１２０，６４９号に記載されるようにＭＨＣ抗原をマスクする）；ＭＨＣ抗原及びＭＨＣ断片に関する抗イディオタイプ抗体；シクロスポリンＡ；コルチコステロイドまたはグルココルチコステロイドもしくはグルココルチコイド類似体などのステロイド、例えば、プレドニゾン、ＳＯＬＵ−ＭＥＤＲＯＬ（登録商標）メチルプレドニゾロンコハク酸ナトリウムを含むメチルプレドニゾロン、及びデキサメタゾン；メトトレキサート（経口または皮下）などのジヒドロ葉酸レダクターゼ阻害剤；クロロキン及びヒドロキシクロロキンなどの抗マラリア剤；スルファサラジン；レフルノミド；抗インターフェロン−アルファ、−ベータ、または−ガンマ抗体、抗腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）−アルファ抗体（インフリキシマブ（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標））またはアダリムマブ）、抗ＴＮＦ−アルファイムノアドヘシン（エタネルセプト）、抗ＴＮＦ−ベータ抗体、抗インターロイキン−２（ＩＬ−２）抗体、及び抗ＩＬ−２受容体抗体、ならびに抗インターロイキン−６（ＩＬ−６）受容体抗体及びアンタゴニスト（ＡＣＴＥＭＲＡ（商標）（トシリズマブ）など）を含む、サイトカインまたはサイトカイン受容体抗体；抗ＣＤ１１ａ及び抗ＣＤ１８抗体を含む、抗ＬＦＡ−１抗体；抗Ｌ３Ｔ４抗体；異種性抗リンパ球グロブリン；ｐａｎ−Ｔ抗体、好ましくは抗ＣＤ３または抗ＣＤ４／ＣＤ４ａ抗体；ＬＦＡ−３結合ドメインを含有する可溶性ペプチド（ＷＯ９０／０８１８７、１９９０年７月２６日公開）；ストレプトキナーゼ；トランスフォーミング成長因子−ベータ（ＴＧＦ−ベータ）；ストレプトドルナーゼ；宿主由来のＲＮＡまたはＤＮＡ；ＦＫ５０６；ＲＳ−６１４４３；クロラムブシル；デオキシスパガリン；ラパマイシン；Ｔ細胞受容体（Ｃｏｈｅｎらの米国特許第５，１１４，７２１号）；Ｔ細胞受容体断片（Ｏｆｆｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５１：４３０−４３２（１９９１）、ＷＯ９０／１１２９４、Ｉａｎｅｗａｙ，Ｎａｔｕｒｅ，３４１：４８２（１９８９）、及びＷＯ９１／０１１３３）；ＢＡＦＦ抗体及びＢＲ３抗体などのＢＡＦＦアンタゴニストならびにｚＴＮＦ４アンタゴニスト（概説については、Ｍａｃｋａｙ  ａｎｄ  Ｍａｃｋａｙ，���ｒｅｎｄｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２３：１１３−５（２００２）を参照されたく、及び以下の定義も参照されたい）；ＣＤ４０−ＣＤ４０リガンドに対する遮断抗体を含む、抗ＣＤ４０受容体または抗ＣＤ４０リガンド（ＣＤ１５４）などのＴ細胞ヘルパーシグナルに干渉する生物学的薬剤（例えば、Ｄｕｒｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２６１：１３２８−３０（１９９３）、Ｍｏｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５４：１４７０−８０（１９９５））及びＣＴＬＡ４−Ｉｇ（Ｆｉｎｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２６５：１２２５−７（１９９４））；ならびにＴ１０Ｂ９等などのＴ細胞受容体抗体（ＥＰ  ３４０，１０９）が挙げられる。本明細書のいくつかの好ましい免疫抑制剤には、シクロホスファミド、クロラムブシル、アザチオプリン、レフルノミド、ＭＭＦ、またはメトトレキサートが挙げられる。
【００８９】
「ＰＤ−１軸結合アンタゴニスト」という用語は、ＰＤ−１シグナル伝達軸上のシグナル伝達に起因するＴ細胞機能障害を除去するようにＰＤ−１軸結合パートナーとその結合パートナーのうちのいずれか１つ以上との相互作用を阻害し、結果として、Ｔ細胞機能（例えば、増殖、サイトカイン産生、標的細胞死滅）を復元または増強する分子を指す。本明細書で使用されるとき、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストは、ＰＤ−１結合アンタゴニスト、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニスト、及びＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストを含む。
【００９０】
「ＰＤ−１結合アンタゴニスト」という用語は、ＰＤ−１とその結合パートナーのうちの１つ以上、例えば、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２との相互作用に起因するシグナル伝達を減少させる、遮断する、阻害する、抑止する、または妨害する分子を指す。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＰＤ−１のその結合パートナーのうちの１つ以上への結合を阻害する分子である。具体的な一態様では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＰＤ−１のＰＤ−Ｌ１及び／またはＰＤ−Ｌ２への結合を阻害する。例えば、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、抗ＰＤ−１抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチド、ならびにＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１及び／またはＰＤ−Ｌ２との相互作用に起因するシグナル伝達を減少させる、遮断する、阻害する、抑止する、または妨害する他の分子を含む。一実施形態では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＰＤ−１を介するシグナル伝達を媒介したＴリンパ球で発現された細胞表面タンパク質によってまたはそれを介して媒介される負の共刺激シグナルを低減し、機能障害Ｔ細胞の機能障害性をより低くする（例えば、抗原認識へのエフェクター応答を増強する）。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、抗ＰＤ−１抗体である。具体的な一態様では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、本明細書に記載のＭＤＸ−１１０６（ニボルマブ）である。別の特定の態様では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、本明細書に記載されるＭＫ−３４７５（ランブロリズマブ）である。別の具体的な態様では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、本明細書に記載のＣＴ−０１１（ピジリズマブ）である。別の具体的な態様では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、本明細書に記載のＡＭＰ−２２４である。
【００９１】
「ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニスト」という用語は、ＰＤ−Ｌ１とその結合パートナーのうちのいずれか１つ以上、例えば、ＰＤ−１、Ｂ７−１との相互作用に起因するシグナル伝達を減少させる、遮断する、阻害する、抑止する、または妨害する分子を指す。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ１のその結合パートナーへの結合を阻害する分子である。具体的な一態様では、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ１のＰＤ−１及び／またはＢ７−１への結合を阻害する。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチド、及びＰＤ−Ｌ１とその結合パートナーのうちの１つ以上、例えば、ＰＤ−１、Ｂ７−１との相互作用に起因するシグナル伝達を減少させる、遮断する、阻害する、抑止する、または妨害する他の分子を含む。一実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ１を介するシグナル伝達を媒介したＴリンパ球で発現された細胞表面タンパク質によってまたはそれを介して媒介される負の共刺激シグナルを低減し、機能障害Ｔ細胞の機能障害性をより低くする（例えば、抗原認識へのエフェクター応答を増強する）。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。特定の態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、本明細書に記載されるＹＷ２４３．５５．Ｓ７０である。別の具体的な態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、本明細書に記載のＭＤＸ−１１０５である。さらに別の具体的な態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、本明細書に記載のＭＰＤＬ３２８０Ａ（ＣＡＳ登録番号１３８０７２３−４４−３）である。さらに別の具体的な態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、本明細書に記載のＭＥＤＩ４７３６である。
【００９２】
「ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニスト」という用語は、ＰＤ−Ｌ２とその結合パートナーのうちのいずれか１つ以上、例えば、ＰＤ−１との相互作用に起因するシグナル伝達を減少させる、遮断する、阻害する、抑止する、または妨害する分子を指す。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ２のその結合パートナーのうちの１つ以上への結合を阻害する分子である。具体的な一態様では、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ２のＰＤ−１への結合を阻害する。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ２アンタゴニストは、抗ＰＤ−Ｌ２抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチド、及びＰＤ−Ｌ２とその結合パートナーのうちのいずれか１つ以上、例えば、ＰＤ−１との相互作用に起因するシグナル伝達を減少させる、遮断する、阻害する、抑止する、または妨害する他の分子を含む。一実施形態では、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ２を介するシグナル伝達を媒介したＴリンパ球で発現された細胞表面タンパク質によってまたはそれを介して媒介される負の共刺激シグナルを低減し、機能障害Ｔ細胞の機能障害性をより低くする（例えば、抗原認識へのエフェクター応答を増強する）。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、イムノアドヘシンである。
【００９３】
「腫瘍」という用語は、悪性または良性にかかわらず全ての腫瘍性細胞の成長及び増殖、ならびに全ての前癌性及び癌性の細胞及び組織を指す。「癌」、「癌性」、「細胞増殖性障害」、「増殖性障害」、及び「腫瘍」という用語は、本明細書で言及される場合、相互排他的ではない。
【００９４】
「細胞増殖性障害」及び「増殖性障害」という用語は、ある程度の異常な細胞増殖に関連する障害を指す。一実施形態において、細胞増殖性障害は、癌である。
【００９５】
「癌」及び「癌性」という用語は、細胞成長／増殖の未調節によって典型的に特徴付けられる、哺乳動物における生理的状態を指すか、または説明する。いくつかの実施形態では、癌は、ＣＬＬ−１陽性癌である。癌の例には、癌腫、リンパ腫（例えば、ホジキン及び非ホジキンリンパ腫）、芽細胞腫、肉腫、及び白血病が挙げられるが、これらに限定されない。かかる癌のより具体的な例には、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄単球性白血病、急性前骨髄球性白血病（ＡＰＬ）、慢性骨髄増殖性障害、血小板性白血病、前駆体Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病（ｐｒｅ−Ｂ−ＡＬＬ）、前駆体Ｔ細胞急性リンパ芽球性白血病（ｐｒｅＴ−ＡＬＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、肥満細胞疾患、肥満細胞性白血病、肥満細胞肉腫、骨髄性肉腫、リンパ性白血病、及び未分化白血病が含まれる。いくつかの実施形態では、癌は、骨髄性白血病である。いくつかの実施形態では、癌は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である。
【００９６】
「ＣＬＬ−１陽性細胞」という用語は、その表面上でＣＬＬ−１を発現する細胞を指す。
【００９７】
「ＣＬＬ−１陽性癌」という用語は、その表面上でＣＬＬ−１を発現する細胞を含む癌を指す。いくつかの実施形態では、細胞表面上のＣＬＬ−１の発現は、例えば、免疫組織化学、ＦＡＣＳ等の方法においてＣＬＬ−１に対する抗体を使用して決定される。代替的に、ＣＬＬ−１  ｍＲＮＡ発現は、細胞表面上のＣＬＬ−１発現と相関すると考えられ、ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション及びＲＴ−ＰＣＲ（定量的ＲＴ−ＰＣＲを含む）から選択される方法によって決定され得る。
【００９８】
「個体」または「対象」は、哺乳動物である。哺乳動物には、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、及びウマ）、霊長類（例えば、ヒト、及びサルなどの非ヒト霊長類）、ウサギ、及び齧歯類（例えば、マウス及びラット）が含まれるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態では、個体または対象は、ヒトである。
【００９９】
「添付文書」という用語は、治療剤製品の適応症、使用法、投薬量、投与、併用療法、禁忌症についての情報、及び／またはその使用に関する警告を含有する、かかる治療剤製品のパッケージに通例含まれる指示書を指すように使用される。
【０１００】
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用されるとき、単数形「ａ（１つの）」、「ｏｒ（または）」、及び「ｔｈｅ（その）」は、文脈が別途明確に指示しない限り、複数の指示対象を含む。
【０１０１】
本明細書における「約」値またはパラメータへの言及は、その値またはパラメータ自体を対象とする変動を含む（かつ記述する）。例えば、「約Ｘ」を言及する記述は、「Ｘ」の記述を含む。
【０１０２】
本明細書に記載される本発明の態様及び変形は、態様及び変形「からなる」及び／または「から本質的になる」を含むことが理解される。
【０１０３】
ＩＩ．組成物及び方法
一態様では、本発明は、部分的に抗ＣＬＬ−１抗体に基づく。ある特定の実施形態では、ＣＬＬ−１結合ドメイン及びＣＤ３結合ドメインを含む抗ＣＬＬ−１抗体が提供される。ある特定の実施形態では、抗ＣＬＬ−１抗体は、抗ＣＬＬ−１Ｔ細胞依存性二重特異性（ＴＤＢ）抗体である。本発明の抗体は、例えば、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）などの癌の診断または治療に有用である。
【０１０４】
Ａ．例示的な抗ＣＬＬ−１抗体
本発明は、ＣＬＬ−１結合ドメイン及びＣＤ３結合ドメインを含む抗ＣＬＬ−１抗体、ならびにその使用方法を提供する。いくつかの実施形態では、本明細書において、単離された抗ＣＬＬ−１抗体が提供され、該抗体は、（ｉ）ＣＬＬ−１結合ドメインがＣＬＬ−１エピトープと結合し、かつ／または配列番号４９のアミノ酸を含む重複ＣＬＬ−１エピトープと結合し、配列番号５０及び／もしくは配列番号５１を含むエピトープとは結合しない、ＣＬＬ−１結合ドメイン、ならびに（ｉｉ）ＣＤ３結合ドメインがヒトＣＤ３εポリペプチド及びｃｙｎｏ  ＣＤ３εポリペプチドと結合し、ＣＤ３結合ドメインがヒトＣＤ３εのアミノ酸１〜２６（配列番号８６）または１〜２７（配列番号８７）からなるヒトＣＤ３εポリペプチドの断片内のＣＤ３エピトープに結合し、かつヒトＣＤ３εポリペプチドのアミノ酸残基Ｇｌｕ５がＣＤ３結合ドメインの結合に必要ではない、ＣＤ３結合ドメインを含む。
【０１０５】
ａ）抗ＣＬＬ１抗体のＣＬＬ−１結合ドメイン
いくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ−１抗体のＣＬＬ−１結合ドメインは、ＣＬＬ−１エピトープと結合し、かつ／または配列番号４９のアミノ酸を含むＣＬＬ−１重複エピトープと結合し、配列番号５０及び／もしくは配列番号５１を含むＣＬＬ−１エピトープとは結合しない。いくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ−１抗体のＣＬＬ−１結合ドメインは配列番号４９のアミノ酸を含むＣＬＬ−１エピトープと結合する。いくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ−１抗体のＣＬＬ−１結合ドメインは、配列番号４９のアミノ酸からなる、または本質的にそれからなるＣＬＬ−１エピトープと結合する。いくつかの実施形態では、ＣＬＬ−１エピトープは、ヒドロキシルラジカルフットプリント法によって決定される。いくつかの実施形態では、ヒドロキシルラジカルフットプリント法によって決定されるＣＬＬ−１エピトープは、約１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、または３．０超のうちのいずれかの、［抗原の速度定数］／［抗原と抗体複合体の速度定数］の比を有する。いくつかの実施形態では、ヒドロキシルラジカルフットプリント法によって決定されるＣＬＬ−１エピトープは、約２．０超の［抗原の速度定数］／［抗原と抗体複合体の速度定数］の比を有する。
【０１０６】
ヒドロキシルラジカルフットプリント法は、実施例に記載されるように実施され得る。例えば、試料は、Ｂｒｏｏｋｈａｖｅｎ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙにおいて、Ｘ２８ｃ  Ｂｅａｍ  ｌｉｎｅを使用して０、１０、１５、及び２０ミリ秒（ｍｓ）の間隔でヒドロキシルラジカルに曝露される。標識された試料は、ＰＮＧａｓｅ  Ｆを使用して脱グリコシル化され得る。試料は、アセトン中でトリクロロ酢酸を使用して沈殿され、ＬＣ−ＭＳ分析が行われ得る。次に試料を、還元化してアルキル化し、トリプシンを使用して消化した後、液体クロマトグラフィーを高解像度質量分析（ＬＣ−ＭＳ）と併用して行うことができる。ＭＳデータを、ＰｒｏｔＭａｐＭＳを使用して分析し、各ペプチドの用量応答プロットを得ることができる。遊離抗原の結果が、複合体型の各々と比較され得る。Ｓｗｉｓｓ−Ｍｏｄｅｌソフトウェアを使用して抗原の相同性に基づくモデルが生成され得、３つの複合体の各々に関して溶媒保護領域がマッピングされ得る。選択イオンクロマトグラム（ＳＩＣ）が抽出され、（特定のｍ／ｚの）ペプチドイオンの未酸化型及び全ての酸化型に関して統合され得る。これらのピーク面積値は、用量応答（ＤＲ）プロットの形式で反応速度を特徴付けるために使用され得、それは、ヒドロキシルラジカル曝露の関数として無傷のペプチドの損失を測定する。複合体内の溶媒保護領域は、遊離抗原とは対照的に段階的な酸化反応を経て、酸化の速度（速度定数、ＲＣと呼ばれる）の差は、エピトープの場所をハイライトするように機能し得る。
【０１０７】
抗ＣＬＬ１抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＣＬＬ−１結合ドメインは、組換えヒトＣＬＬ−１に結合する。抗ＣＬＬ１抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＣＬＬ−１結合ドメインは、組換えカニクイザルＣＬＬ−１に結合する。抗ＣＬＬ１抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＣＬＬ−１結合ドメインは、ヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）の表面上の内因性ＣＬＬ−１に結合する。抗ＣＬＬ１抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＣＬＬ−１結合ドメインは、カニクイザルＰＢＭＣの表面上の内因性ＣＬＬ−１に結合する。抗ＣＬＬ１抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＣＬＬ−１結合ドメインは、癌細胞の表面上の内因性ＣＬＬ−１に結合する。抗ＣＬＬ１抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＣＬＬ−１結合ドメインは、ＡＭＬ癌細胞の表面上の内因性ＣＬＬ−１に結合する。抗ＣＬＬ１抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＣＬＬ−１結合ドメインは、ＨＬ−６０細胞の表面上の内因性ＣＬＬ−１に結合する。抗ＣＬＬ１抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＣＬＬ−１結合ドメインは、ＥＯＬ−１細胞の表面上の内因性ＣＬＬ−１に結合する。抗ＣＬＬ１抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＣＬＬ−１結合ドメインは、Ｋ２４４Ｑ突然変異を含むＣＬＬ−１（Ｋ２４４Ｑを有する配列番号１）に結合する。抗ＣＬＬ１抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＣＬＬ−１結合ドメインは、ＣＬＬ−１エピトープと結合し、かつ／または配列番号４９のアミノ酸を含む重複ＣＬＬ−１エピトープと結合する。抗ＣＬＬ１抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＣＬＬ−１結合ドメインは、配列番号５０及び／または配列番号５１を含むＣＬＬ−１エピトープと結合しない。抗ＣＬＬ１抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＣＬＬ−１結合ドメインは、ヒトＣＬＬ−１結合に関してＲ＆Ｄシステムクローン６８７３１７抗体と競合する。抗ＣＬＬ１抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＣＬＬ−１結合ドメインは、１５ｎＭ未満、１０ｎＭ未満、７ｎＭ未満、５ｎＭ未満、または３ｎＭ未満のＫｄで内因性ヒトＣＬＬ−１に結合する。抗ＣＬＬ１抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＣＬＬ−１結合ドメインは、１０ｎＭ未満、７ｎＭ未満、５ｎＭ未満、または３ｎＭ未満のＫｄで組換えヒトＣＬＬ−１に結合する。抗ＣＬＬ１抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＣＬＬ−１結合ドメインは、１０ｎＭ未満、７ｎＭ未満、５ｎＭ未満、または３ｎＭ未満、２ｎＭ未満、または１ｎＭ未満のＫｄで組換えカニクイザルＣＬＬ−１に結合する。いくつかの実施形態では、Ｋｄは、本明細書、特に実施例に記載される任意の方法で決定される。いくつかの実施形態では、Ｋｄは、ＢＩＡＣＯＲＥによって決定される。いくつかの実施形態では、Ｋｄは、低密度で固定化されるＣＬＬ−１によって決定される。
【０１０８】
抗ＣＬＬ−１抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ−１抗体は、約２００ｎｇ／ｍＬ未満、例えば、約１５０、１００、５０、２５、２０、または１５ｎｇ／ｍＬ未満のうちのいずれかの細胞死滅ＥＣ５０を有する。いくつかの実施形態では、細胞死滅はヒト自家ＣＤ１４＋である。いくつかの実施形態では、細胞死滅は、例えば、Ｕ９３７細胞系、ＨＬ−６０細胞系、ＰＬ−２１細胞系、ＮＯＭＯ−１細胞系、ＥＯＬ−１細胞系、ＴＨＰ−１細胞系、ＭＬ−２細胞系、Ｍｏｌｍ−１３細胞系の細胞系細胞死滅である。多重特異性抗ＣＬＬ−１抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ−１抗体は、約５０ｎｇ／ｍＬ未満のうちのいずれか、例えば、約２５ｎｇ／ｍＬ未満または約２０ｎｇ／ｍＬ未満のうちのいずれかである細胞傷害性Ｔ細胞活性化ＥＣ５０を有する。いくつかの実施形態では、細胞傷害性Ｔ細胞活性化は、ＣＤ８＋Ｔ細胞中のＣＤ６９＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞の％で測定される。
【０１０９】
いくつかの実施形態では、ＣＬＬ−１結合ドメイン及び／またはＣＬＬ−１抗体の特徴は、以下の実施例において本明細書に記載されるように決定される。
【０１１０】
ＣＬＬ−１結合ドメイン６Ｅ７及び他の実施形態
ＣＬＬ１抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む、ＣＬＬ−１結合ドメインを含む抗ＣＬＬ−１抗体を提供する。いくつかの実施形態では、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号９のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号４７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号１１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号４３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号４４のアミノ酸配列を含む。
【０１１１】
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ  ＨＶＲ配列を含む、ＣＬＬ−１結合ドメインを含む抗ＣＬＬ−１抗体を提供する。一実施形態では、ＣＬＬ−１結合ドメインは、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。別の実施形態では、ＣＬＬ−１結合ドメインは、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。さらなる実施形態では、ＣＬＬ−１結合ドメインは、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。さらなる実施形態では、ＣＬＬ−１結合ドメインは、（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。いくつかの実施形態では、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号９のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号４７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号１１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号４３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号４４のアミノ酸配列を含む。
【０１１２】
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ  ＨＶＲ配列を含むＣＬＬ−１結合ドメインを含む、抗ＣＬＬ−１抗体を提供する。一実施形態では、ＣＬＬ−１結合ドメインは、（ａ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１１３】
別の態様では、ＣＬＬ−１結合ドメインを含む抗ＣＬＬ−１抗体は、（ａ）（ｉ））配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号１０から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ  ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、ならびに（ｂ）（ｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ  ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。
【０１１４】
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含むＣＬＬ−１結合ドメインを含む、抗ＣＬＬ−１抗体を提供する。いくつかの実施形態では、本抗体は、（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施形態では、ＣＬＬ−１結合ドメインは、（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施形態では、ＣＬＬ−１結合ドメインは、（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施形態では、ＣＬＬ−１結合ドメインは、（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施形態では、ＣＬＬ−１結合ドメインは、（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１１５】
上記の実施形態のいずれかでは、ＣＬＬ−１結合ドメインを含む抗ＣＬＬ−１抗体は、ヒト化されている。一実施形態では、ＣＬＬ−１結合ドメインを含む抗ＣＬＬ−１抗体は、上記の実施形態のいずれかにあるようなＨＶＲを含み、ヒトアクセプターフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。ある特定の実施形態では、ヒトアクセプターフレームワークは、ヒトＶＬカッパＩコンセンサス（ＶＬＫＩ）フレームワーク及び／またはＶＨフレームワークＶＨ１である。ある特定の実施形態では、ヒトアクセプターフレームワークは、以下の突然変異のうちのいずれか１つを含む、ヒトＶＬカッパＩコンセンサス（ＶＬＫＩ）フレームワーク及び／またはＶＨフレームワークＶＨ１である。
【０１１６】
別の態様では、ＣＬＬ−１結合ドメインを含む抗ＣＬＬ−１抗体は、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３４、配列番号４６、及び／または配列番号４８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。ある特定の実施形態では、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３４、配列番号４６、及び／または配列番号４８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含むＣＬＬ−１結合ドメインは、ＣＬＬ−１に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３４、配列番号４６、及び／または配列番号４８内で置換、挿入、及び／または欠失された。ある特定の実施形態において、合計１〜５個のアミノ酸が、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３４、配列番号４６、及び／または配列番号４８内で置換、挿入、及び／または欠失された。ある特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、ＣＬＬ−１結合ドメインを含む抗ＣＬＬ−１抗体は、配列番号３１、配列番号３３、及び／または配列番号３４のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。いくつかの実施形態では、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号９のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号４７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号１１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号４３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号４４のアミノ酸配列を含む。
【０１１７】
別の態様では、ＣＬＬ−１結合ドメインを含む抗ＣＬＬ−１抗体が提供され、該ＣＬＬ−１結合ドメインは、配列番号３０及び／または配列番号３２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。ある特定の実施形態では、配列番号３０及び／または配列番号３２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を有するが、その配列を含む抗ＣＬＬ−１結合ドメインは、ＣＬＬ−１に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号３０及び／または配列番号３２内で置換、挿入、及び／または欠失された。ある特定の実施形態では、合計１〜５個のアミノ酸が、配列番号３０及び／または配列番号３２内で置換、挿入、及び／または欠失された。ある特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、ＣＬＬ−１結合ドメインを含む抗ＣＬＬ−１抗体は、配列番号３０及び／または配列番号３２のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
【０１１８】
別の態様では、ＣＬＬ−１結合ドメインを含む抗ＣＬＬ−１抗体が提供され、該ＣＬＬ−１結合ドメインは、上記に提供される実施形態のいずれかにあるようなＶＨ、及び上記に提供される実施形態のいずれかにあるようなＶＬを含む。
【０１１９】
一実施形態では、ＣＬＬ−１結合ドメインは、それぞれ、配列番号３１及び配列番号３０のＶＨ及びＶＬ配列を含み、それらの配列の翻訳後修飾を含む。一実施形態では、ＣＬＬ−１結合ドメインは、それぞれ、配列番号３３及び配列番号３２のＶＨ及びＶＬ配列を含み、それらの配列の翻訳後修飾を含む。一実施形態では、ＣＬＬ−１結合ドメインは、それぞれ、配列番号３４及び配列番号３２のＶＨ及びＶＬ配列を含み、それらの配列の翻訳後修飾を含む。一実施形態では、ＣＬＬ−１結合ドメインは、それぞれ、配列番号４６及び配列番号３２のＶＨ及びＶＬ配列を含み、それらの配列の翻訳後修飾を含む。一実施形態では、ＣＬＬ−１結合ドメインは、それぞれ、配列番号４８及び配列番号３２のＶＨ及びＶＬ配列を含み、それらの配列の翻訳後修飾を含む。
【０１２０】
さらなる態様では、本明細書において、本明細書に提供されるＣＬＬ−１結合ドメインと同じエピトープに結合する抗体が提供される。例えば、ある特定の実施形態では、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３４、配列番号４６、及び／または配列番号４８のＶＨ配列、ならびに配列番号３０及び／または配列番号３２のＶＬ配列をそれぞれ含む抗ＣＬＬ−１結合ドメインと同じエピトープに結合する抗体が提供される。
【０１２１】
本明細書において、図２Ａに示されるＫａｂａｔ番号付けに従うＨＶＲ１−ＬＣ、ＨＶＲ２−ＬＣ、及びＨＶＲ３−ＬＣ配列を含む軽鎖可変ドメインと、図２Ｂに示されるＫａｂａｔ番号付けに従うＨＶＲ１−ＨＣ、ＨＶＲ２−ＨＣ、及びＨＶＲ３−ＨＣ配列を含む重鎖可変ドメインと、を含むＣＬＬ−１結合ドメインを含む抗ＣＬＬ−１抗体が提供される。いくつかの実施形態では、ＣＬＬ−１結合ドメインを含む抗ＣＬＬ−１抗体は、図２Ａに示されるＨＶＲ１−ＬＣ、ＨＶＲ２−ＬＣ、及び／またはＨＶＲ３−ＬＣ配列、ならびにＦＲ１−ＬＣ、ＦＲ２−ＬＣ、ＦＲ３−ＬＣ、及び／またはＦＲ４−ＬＣ配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態では、本抗体は、図２Ｂに示されるＨＶＲ１−ＨＣ、ＨＶＲ２−ＨＣ、及び／またはＨＶＲ３−ＨＣ配列、ならびにＦＲ１−ＨＣ、ＦＲ２−ＨＣ、ＦＲ３−ＨＣ、及び／またはＦＲ４−ＨＣ配列を含む重鎖可変ドメインを含む。
【０１２２】
本発明のさらなる態様では、上記の実施形態のいずれかによるＣＬＬ−１結合ドメインを含む抗ＣＬＬ−１抗体は、ヒト抗体を含むモノクローナル抗体である。一実施形態では、ＣＬＬ−１結合ドメインを含む抗ＣＬＬ−１抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、またはＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施形態では、ＣＬＬ−１結合ドメインを含む抗ＣＬＬ−１抗体は、実質的に完全長抗体、例えば、本明細書に定義されるＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２ａ抗体、または他の抗体クラスもしくはアイソタイプである。
【０１２３】
ＣＬＬ−１結合ドメイン２１Ｃ９及び他の実施形態
いくつかの実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む、ＣＬＬ−１結合ドメインを含む抗ＣＬＬ−１抗体を提供する。
【０１２４】
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ  ＨＶＲ配列を含む、ＣＬＬ−１結合ドメインを含む抗ＣＬＬ−１抗体を提供する。一実施形態では、ＣＬＬ−１結合ドメインは、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。別の実施形態では、ＣＬＬ−１結合ドメインは、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。さらなる実施形態では、ＣＬＬ−１結合ドメインは、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。さらなる実施形態では、ＣＬＬ−１結合ドメインは、（ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０１２５】
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ  ＨＶＲ配列を含むＣＬＬ−１結合ドメインを含む、抗ＣＬＬ−１抗体を提供する。一実施形態では、ＣＬＬ−１結合ドメインは、（ａ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１２６】
別の態様では、本発明のＣＬＬ−１結合ドメインを含む抗ＣＬＬ−１抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号２３から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ  ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、ならびに（ｂ）（ｉ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ  ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。
【０１２７】
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含むＣＬＬ−１結合ドメインを含む、抗ＣＬＬ−１抗体を提供する。いくつかの実施形態では、本抗体は、（ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１２８】
上記の実施形態のいずれかでは、ＣＬＬ−１結合ドメインを含む抗ＣＬＬ−１抗体は、ヒト化されている。一実施形態では、ＣＬＬ−１結合ドメインを含む抗ＣＬＬ−１抗体は、上記の実施形態のいずれかにあるようなＨＶＲを含み、ヒトアクセプターフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。ある特定の実施形態では、ヒトアクセプターフレームワークは、ヒトＶＬカッパＩコンセンサス（ＶＬＫＩ）フレームワーク及び／またはＶＨフレームワークＶＨ１である。ある特定の実施形態では、ヒトアクセプターフレームワークは、以下の突然変異のうちのいずれか１つを含む、ヒトＶＬカッパＩコンセンサス（ＶＬＫＩ）フレームワーク及び／またはＶＨフレームワークＶＨ１である。
【０１２９】
別の態様では、ＣＬＬ−１結合ドメインを含む抗ＣＬＬ−１抗体は、配列番号３８及び／または配列番号４０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。ある特定の実施形態では、配列番号３８及び／または配列番号４０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を有するが、その配列を含む抗ＣＬＬ−１結合ドメインは、ＣＬＬ−１に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号３８及び／または配列番号４０内で置換、挿入、及び／または欠失された。ある特定の実施形態では、合計１〜５個のアミノ酸が、配列番号３８及び／または配列番号４０内で置換、挿入、及び／または欠失された。ある特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、ＣＬＬ−１結合ドメインを含む抗ＣＬＬ−１抗体は、配列番号３８及び／または配列番号４０のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
【０１３０】
別の態様では、ＣＬＬ−１結合ドメインを含む抗ＣＬＬ−１抗体が提供され、該抗体は、配列番号３７及び／または配列番号３９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。ある特定の実施形態では、配列番号３７及び／または配列番号３９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を有するが、その配列を含む抗ＣＬＬ−１結合ドメインは、ＣＬＬ−１に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号３７及び／または配列番号３９内で置換、挿入、及び／または欠失された。ある特定の実施形態では、合計１〜５個のアミノ酸が、配列番号３７及び／または配列番号３９内で置換、挿入、及び／または欠失された。ある特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、ＣＬＬ−１結合ドメインを含む抗ＣＬＬ−１抗体は、配列番号３７及び／または配列番号３９のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
【０１３１】
別の態様では、ＣＬＬ−１結合ドメインを含む抗ＣＬＬ−１抗体が提供され、該抗体は、上記に提供される実施形態のいずれかにあるようなＶＨ、及び上記に提供される実施形態のいずれかにあるようなＶＬを含む。
【０１３２】
一実施形態では、ＣＬＬ−１結合ドメインを含む抗ＣＬＬ−１抗体は、それぞれ、配列番号３８及び配列番号３７のＶＨ及びＶＬ配列を含み、それらの配列の翻訳後修飾を含む。一実施形態では、本抗体は、それぞれ、配列番号４０及び配列番号３９のＶＨ及びＶＬ配列を含み、それらの配列の翻訳後修飾を含む。
【０１３３】
さらなる態様では、本明細書において、本明細書に提供される抗ＣＬＬ−１抗体と同じエピトープに結合するＣＬＬ−１結合ドメインを含む抗ＣＬＬ−１抗体が提供される。例えば、ある特定の実施形態では、それぞれ、配列番号３８及び／または配列番号４０のＶＨ配列、ならびに配列番号３７及び／または配列番号３９のＶＬ配列を含むＣＬＬ−１結合ドメインを含む抗ＣＬＬ−１抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。
【０１３４】
本明細書において、図３Ａに示されるＫａｂａｔ番号付けに従うＨＶＲ１−ＬＣ、ＨＶＲ２−ＬＣ、及びＨＶＲ３−ＬＣ配列を含む軽鎖可変ドメインと、図３Ｂに示されるＫａｂａｔ番号付けに従うＨＶＲ１−ＨＣ、ＨＶＲ２−ＨＣ、及びＨＶＲ３−ＨＣ配列を含む重鎖可変ドメインと、を含むＣＬＬ−１結合ドメインを含む抗ＣＬＬ−１抗体が提供される。いくつかの実施形態では、ＣＬＬ−１結合ドメインを含む抗ＣＬＬ−１抗体は、図３Ａに示されるＨＶＲ１−ＬＣ、ＨＶＲ２−ＬＣ、及び／またはＨＶＲ３−ＬＣ配列、ならびにＦＲ１−ＬＣ、ＦＲ２−ＬＣ、ＦＲ３−ＬＣ、及び／またはＦＲ４−ＬＣ配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＬＬ−１結合ドメインを含む抗ＣＬＬ−１抗体は、図３Ｂに示されるＨＶＲ１−ＨＣ、ＨＶＲ２−ＨＣ、及び／またはＨＶＲ３−ＨＣ配列、ならびにＦＲ１−ＨＣ、ＦＲ２−ＨＣ、ＦＲ３−ＨＣ、及び／またはＦＲ４−ＨＣ配列を含む重鎖可変ドメインを含む。
【０１３５】
本発明のさらなる態様では、上記の実施形態のいずれかによるＣＬＬ−１結合ドメインを含む抗ＣＬＬ−１抗体は、ヒト抗体を含むモノクローナル抗体である。一実施形態では、ＣＬＬ−１結合ドメインを含む抗ＣＬＬ−１抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、またはＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施形態では、本抗体は、実質的に完全長の抗体、例えば、本明細書に定義されるＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２ａ抗体、または他の抗体クラスもしくはアイソタイプである。
【０１３６】
ｂ）抗ＣＬＬ１抗体のＣＤ３結合ドメイン
いくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ−１抗体のＣＤ３結合ドメインは、ヒトＣＤ３ポリペプチドまたはカニクイザル（ｃｙｎｏ）ＣＤ３ポリペプチドに結合する。いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ３ポリペプチドまたはｃｙｎｏＣＤ３ポリペプチドは、それぞれ、ヒトＣＤ３εポリペプチドまたはｃｙｎｏＣＤ３εポリペプチドである。いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ３ポリペプチドまたはｃｙｎｏＣＤ３ポリペプチドは、それぞれ、ヒトＣＤ３γポリペプチドまたはｃｙｎｏＣＤ３γポリペプチドである。ある特定の実施形態では、ヒトＣＤ３εのアミノ酸１〜２６または１〜２７からなるＣＤ３（例えば、ヒトＣＤ３ε）の断片内のエピトープに結合するＣＤ３結合ドメインを含む、抗ＣＬＬ−１抗体が提供される。いくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ−１抗体は、二重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ−１抗体は、二重特異性ＩｇＧ抗体である。
【０１３７】
いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、２５０ｎＭ以下のＫｄでヒトＣＤ３εポリペプチドと結合する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、１００ｎＭ以下のＫｄでヒトＣＤ３εポリペプチドと結合する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、１５ｎＭ以下のＫｄでヒトＣＤ３εポリペプチドと結合する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、１０ｎＭ以下のＫｄでヒトＣＤ３εポリペプチドと結合する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、５ｎＭ以下のＫｄでヒトＣＤ３εポリペプチドと結合する。いくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ１抗体のＣＤ３結合アームは、５０ｎＭ未満かつ１ｎＭ超の親和性でヒトＣＤ３と結合する。いくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ１抗体のＣＤ３結合アームは、１ｎＭ未満かつ０．１ｎＭ超の親和性でヒトＣＤ３と結合する。いくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ１抗体のＣＤ３結合アームは、０．１ｎＭ未満かつ０．０１ｎＭ超の親和性でヒトＣＤ３と結合する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合アームの親和性は、Ｂｉａｃｏｒｅによって決定される。いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ３はｈＣＤ３εγである。いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ３はｈＣＤ３ε１−２７  Ｆｃである。
【０１３８】
いくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ−１抗体のＣＤ３結合ドメインは、３．５オングストローム、３．２５オングストローム、３．００オングストローム、２．７５オングストローム以下の距離でヒトＣＤ３εのアミノ酸を有する接触体と結合する。ある特定の実施形態では、３．５オングストローム、３．２５オングストローム、３．００オングストローム、２．７５オングストローム以下の距離で、１つ、２つ、３つ、４つ、または５つのヒトＣＤ３εのアミノ酸からなるエピトープに結合するＣＤ３結合ドメインが提供される。一実施形態では、抗ＣＬＬ−１抗体のＣＤ３結合ドメインは、３．５オングストローム以下の距離でヒトＣＤ３εのアミノ酸と固有に接触する。ある特定の実施形態では、３．５オングストローム以下の距離で、１つ、２つ、３つ、４つ、または５つのヒトＣＤ３εのアミノ酸からなるエピトープに結合するＣＤ３結合ドメインが提供される。例えば、ある特定の実施形態では、Ｇｌｎ１、Ａｓｐ２、Ａｓｎ４、Ｇｌｕ６、及びＭｅｔ７から選択されるヒトＣＤ３εのアミノ酸からなるエピトープに結合するＣＤ３結合ドメインが提供される。特定の一実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、具体的にＧｌｕ６を含むエピトープに結合する。ある特定の他の実施形態では、ヒトＣＤ３εアミノ酸Ｇｌｕ５を含むエピトープに結合しないＣＤ３結合ドメインが提供される。ある特定の他の実施形態では、ヒトＣＤ３εアミノ酸Ｇｌｙ３及びＧｌｕ５を含むエピトープに結合しないＣＤ３結合ドメインが提供される。
【０１３９】
ＣＤ３エピトープは、エピトープのペプチド断片に結合するＣＤ３結合ドメインにより決定され得る。代替的に、ＣＤ３エピトープは、アラニンスキャニング変異誘発により決定され得る。一実施形態では、ＣＤ３結合ドメインの突然変異したＣＤ３への結合を２０％、３０％、５０％、８０％以上低減させることは、アラニンスキャニング変異誘発アッセイにおいて突然変異させたＣＤ３のアミノ酸残基がそのＣＤ３結合ドメインのエピトープ残基であることを示す。代替的に、ＣＤ３エピトープは、質量分析により決定され得る。いくつかの実施形態では、エピトープは、結晶解析（例えば、結晶解析方法）により決定される。
【０１４０】
いくつかの実施形態では、結晶解析により決定されるＣＤ３エピトープは、ＣＤ３のアミノ酸Ｑ１−Ｍ７を使用して決定される。いくつかの実施形態では、結晶解析により決定されるＣＤ３エピトープは、ＣＤ３のアミノ酸ＱＤＧＮＥＥＭＧＧＩＴＱＴＰＹＫ（配列番号１０７）を使用して決定される。
【０１４１】
いくつかの実施形態では、結晶解析により決定されるＣＤ３エピトープは、１０ｍｇ／ｍｌで０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、２５ｍＭトリス、ｐＨ７．５に溶解された抗ＣＤ３抗体Ｆａｂを２倍のモル過剰（１ｍｇ）のＣＤ３εペプチドと混合し、シッティングドロップ蒸気拡散形式において、沈殿物の疎行列を最初にスクリーニングすることにより行われ得る。最適化された結晶は、７０％ｖ／ｖメチル−ペンタンジオールを含有するリザーバ溶液及びｐＨ７．５の０．１Ｍ  ＨＥＰＥＳ緩衝剤の１：１混合物から成長し得る。リザーバは凍結保護剤として使用され得る。結晶は、液体窒素中への急激な浸漬により極低温に移されてもよい。
【０１４２】
結晶の回折データは、ＭＡＲ３００  ＣＣＤ検出器を使用して、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｐｈｏｔｏｎ  Ｓｏｕｒｃｅ  ｂｅａｍ  ｌｉｎｅ  ２２ＩＤで収集することができる。記録した回折を統合し、プログラムＨＫＬ２０００を使用してスケール化することができる。
【０１４３】
構造は、プログラムＰｈａｓｅｒを使用する分子置換（ＭＲ）方法によって解析することができる。例えば、ＭＲサーチモデルは、ＨＧＦＡ／Ｆａｂ複合体（ＰＤＢコード：２Ｒ０Ｌ）の結晶構造に由来するＦａｂサブユニットである。ＣＤ３εペプチドは、Ｆｏ−Ｆｃマップに基づいた構造に組み込まれる。構造は、その後、収束を達成するために、最大尤度標的関数、異方性の個別Ｂ因子精密化方法、及びＴＬＳ精密化を使用してプログラムＲＥＦＭＡＣ５及びＰＨＥＮＩＸで精密化することができる。
【０１４４】
抗ＣＬＬ１抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、超可変領域（ＨＶＲ）である（ａ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号９２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、（ａ）（ｉ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む、ＶＨドメイン、ならびに（ｂ）（ｉ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号９２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＶＬドメインを含む。
【０１４５】
例えば、抗ＣＬＬ１抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ１抗体は、（ｉ）（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３の６つのＨＶＲを含む、ＣＬＬ−１結合ドメイン、ならびに（ｉｉ）（ａ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号９２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３の６つのＨＶＲを含む、ＣＤ３結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ−１抗体は、配列番号３４の配列を含む重鎖可変領域及び配列番号３２の配列を含む軽鎖可変領域を含むＣＬＬ−１結合ドメインを含む。
【０１４６】
抗ＣＬＬ１抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、超可変領域（ＨＶＲ）である（ａ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号７５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、（ａ）（ｉ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む、ＶＨドメイン、ならびに（ｂ）（ｉ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号７５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＶＬドメインを含む。いくつかの事例では、ＣＤ３結合ドメインは、配列番号８２もしくはその配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、及び／または配列番号８３もしくはその配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを有し得る。いくつかの事例では、ＣＤ３結合ドメインは、配列番号８２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び配列番号８３のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを有し得る。特定の事例では、ＣＤ３結合ドメインは、４０Ｇ５ｃ、またはその誘導体もしくはクローン類縁体であり得る。
【０１４７】
例えば、本明細書において、（ｉ）（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３の６つのＨＶＲを含む、ＣＬＬ−１結合ドメイン、ならびに（ｉｉ）（ａ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号７５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＣＤ３結合ドメインを含む抗ＣＬＬ１抗体が提供される。いくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ−１抗体は、（ｉ）配列番号３４の配列を含む重鎖可変領域及び配列番号３２の配列を含む軽鎖可変領域を含むＣＬＬ−１結合ドメイン、ならびに（ｉｉ）配列番号８２の配列を含む重鎖可変領域及び配列番号８３の配列を含む軽鎖可変領域を含むＣＤ３結合ドメインを含む。
【０１４８】
抗ＣＬＬ１抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、（ａ）配列番号７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号９２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、（ａ）（ｉ）配列番号７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む、ＶＨドメイン、ならびに（ｂ）（ｉ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号９２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＶＬドメインを含む。
【０１４９】
例えば、本明細書において、（ｉ）（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３の６つのＨＶＲを含む、ＣＬＬ−１結合ドメイン、ならびに（ｉｉ）（ａ）配列番号７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号９２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＣＤ３結合ドメインを含む抗ＣＬＬ１抗体が提供される。いくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ−１抗体は、配列番号３４の配列を含む重鎖可変領域及び配列番号３２の配列を含む軽鎖可変領域を含むＣＬＬ−１結合ドメインを含む。
【０１５０】
抗ＣＬＬ１抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、（ａ）配列番号７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、（ａ）（ｉ）配列番号７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む、ＶＨドメイン、ならびに（ｂ）（ｉ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＶＬドメインを含む。いくつかの事例では、ＣＤ３結合ドメインは、配列番号８４もしくはその配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び／または配列番号８５もしくはその配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを有し得る。いくつかの事例では、ＣＤ３結合ドメインは、配列番号８４のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び配列番号８５のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを有し得る。特定の事例では、ＣＤ３結合ドメインは、３８Ｅ４ｖ１、またはその誘導体もしくはクローン類縁体であり得る。
【０１５１】
例えば、本明細書において、（ｉ）（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３の６つのＨＶＲを含む、ＣＬＬ−１結合ドメイン、ならびに（ｉｉ）（ａ）配列番号７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＣＤ３結合ドメインを含む抗ＣＬＬ１抗体が提供される。いくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ−１抗体は、（ｉ）配列番号３４の配列を含む重鎖可変領域及び配列番号３２の配列を含む軽鎖可変領域を含むＣＬＬ−１結合ドメイン、ならびに（ｉｉ）配列番号８４の配列を含む重鎖可変領域及び配列番号８５の配列を含む軽鎖可変領域を含むＣＤ３結合ドメインを含む。
【０１５２】
抗ＣＬＬ１抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、（ａ）配列番号７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、（ａ）（ｉ）配列番号７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む、ＶＨドメイン、ならびに（ｂ）（ｉ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＶＬドメインを含む。いくつかの事例では、ＣＤ３結合ドメインは、配列番号８４もしくはその配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び／または配列番号９３もしくはその配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを有し得る。いくつかの事例では、ＣＤ３結合ドメインは、配列番号８４のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを有し得る。特定の事例では、ＣＤ３結合ドメインは、３８Ｅ４ｖ１１、またはその誘導体もしくはクローン類縁体であり得る。
【０１５３】
例えば、本明細書において、（ｉ）（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３の６つのＨＶＲを含む、ＣＬＬ−１結合ドメイン、ならびに（ｉｉ）（ａ）配列番号７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＣＤ３結合ドメインを含む抗ＣＬＬ１抗体が提供される。いくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ−１抗体は、（ｉ）配列番号３４の配列を含む重鎖可変領域及び配列番号３２の配列を含む軽鎖可変領域を含むＣＬＬ−１結合ドメイン、ならびに（ｉｉ）配列番号８４の配列を含む重鎖可変領域及び配列番号９３の配列を含む軽鎖可変領域を含むＣＤ３結合ドメインを含む。
【０１５４】
いくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ１抗体のＣＤ３結合アームは、キメラ抗マウスＣＤ３結合アームである。いくつかの実施形態では、キメラ抗マウスＣＤ３結合アームは、２Ｃ１１である（Ｌｅｏ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．８４：１３７４−１３７８，１９８７）。いくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ１抗体のＣＤ３結合アームは、マウス抗ヒトＣＤ３結合アームである。いくつかの実施形態では、マウス抗ヒトＣＤ３結合アームは、ＳＰ３４である（Ｐｅｓｓａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．Ｔｈｅ  ＥＭＢＯ  Ｊｏｕｒｎａｌ．４：３３７−３４４，１９８５）。いくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ１抗体のＣＤ３結合アームは、ＯＫＴ３である。（Ｆｅｒｎａｎｄｅｓ，Ｒ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．２０１２．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８７：１３３２４−１３３３５）。いくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ１抗体のＣＤ３結合アームは、ＵＣＨＴ１である（同上）。いくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ１抗体のＣＤ３結合アームは、ムロモノアブ−ＣＤ３（ＣＡＳ登録番号：１４０６０８−６４−６）である。いくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ１抗体のＣＤ３結合アームは、米国特許出願公開第２０１０／０１５０９１８号に記載されている。
【０１５５】
ｃ）多重特異性抗ＣＬＬ１抗体
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗ＣＬＬ−１抗体は、多重特異性抗体、例えば、二重特異性抗体である。多重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる部位に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体である。ある特定の実施形態では、結合特異性のうちの一方は、ＣＬＬ−１に対するものであり、他方は、任意の他の抗原に対するものである。ある特定の実施形態では、二重特異性抗体は、ＣＬＬ−１の２つの異なるエピトープに結合し得る。二重特異性抗体をまた使用して、細胞傷害性薬剤を、ＣＬＬ−１を発現する細胞に限局させてもよい。二重特異性抗体は、完全長抗体または抗体断片として調製され得る。
【０１５６】
多重特異性抗体を作製するための技法は、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖対の組換え同時発現（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｃｕｅｌｌｏ，Ｎａｔｕｒｅ  ３０５：５３７（１９８３））、ＷＯ９３／０８８２９、及びＴｒａｕｎｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．１０：３６５５（１９９１）を参照されたい）、ならびに「ノブ・イン・ホール（ｋｎｏｂ−ｉｎ−ｈｏｌｅ）」操作（例えば、米国特許第５，７３１，１６８号を参照されたい）が挙げられるが、これに限定されない。多重特異性抗体は、抗体Ｆｃ−ヘテロ二量体分子を作製するための静電気ステアリング（ｅｌｅｃｔｒｏｓｔａｔｉｃ  ｓｔｅｅｒｉｎｇ）作用の操作（ＷＯ２００９／０８９００４Ａ１）、２つ以上の抗体または断片の架橋（例えば、米国特許第４，６７６，９８０号、及びＢｒｅｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１（１９８５）を参照されたい）、二重特異性抗体を産生するためのロイシンジッパーの使用（例えば、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８（５）：１５４７−１５５３（１９９２）を参照されたい）、二重特異性抗体断片を作製するための「ダイアボディ」技術の使用（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４−６４４８（１９９３）を参照されたい）、及び一本鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体の使用（例えば、Ｇｒｕｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：５３６８（１９９４）を参照されたい）、ならびに例えば、Ｔｕｔｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）に記載される三重特異性抗体の調製によっても作製され得る。多重特異性抗体は、免疫グロブリンクロスオーバー（Ｆａｂドメイン交換またはＣｒｏｓｓＭａｂ形式としても知られる）技術（例えば、ＷＯ２０１３０２６８３３、ＷＯ２００９／０８０２５３、Ｓｃｈａｅｆｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０８：１１１８７−１１１９２（２０１１）を参照されたい）を使用しても操作することができる。
【０１５７】
「オクトパス（Ｏｃｔｏｐｕｓ）抗体」を含む、３つ以上の機能抗原結合部位を有する操作された抗体も、本明細書に含まれる（例えば、ＵＳ２００６／００２５５７６Ａ１、ＷＯ２０１３０２６８３３、及びＷＯ２０１２０７３９８５を参照されたい）。
【０１５８】
本明細書における抗ＣＬＬ−１抗体または断片にはまた、ＣＬＬ−１及び別の異なる抗原に結合する抗原結合部位を含む、「二重作用（Ｄｕａｌ  Ａｃｔｉｎｇ）Ｆａｂ」または「ＤＡＦ」が含まれる（例えば、ＵＳ２００８／００６９８２０を参照されたい）。
【０１５９】
さらなる態様では、上記の実施形態のうちのいずれかによるＣＬＬ−１結合ドメイン、ＣＤ３結合ドメイン、及び／またはＣＬＬ−１抗体は、以下の節１〜６に記載される特徴のうちのいずれかを、単独または組み合わせで組み込み得る。
【０１６０】
１．抗体親和性
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、１μＭ以下、１００ｎＭ以下、５０ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、５ｎＭ以下、１ｎＭ以下、０．１ｎＭ以下、０．０１ｎＭ以下、または０．００１ｎＭ以下の解離定数（Ｋｄ）を有し、任意に、１０−１３Ｍ以上（例えば、１０−８Ｍ以下、例えば、１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）である。
【０１６１】
一実施形態では、Ｋｄは、以下のアッセイにより説明されるように、目的の抗体のＦａｂバージョン及びその抗原を用いて行われる放射標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）によって測定される。抗原に対するＦａｂの溶液結合親和性は、Ｆａｂを、未標識抗原の一連の滴定の存在下で、最小濃度の（１２５Ｉ）標識抗原と平衡化し、次いで抗Ｆａｂ抗体コーティングプレートと結合した抗原を捕捉することによって、測定される（例えば、Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５−８８１（１９９９）を参照されたい）。アッセイの条件を確立するために、ＭＩＣＲＯＴＩＴＥＲ（登録商標）マルチウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を、５０ｍＭの炭酸ナトリウム（ｐＨ９．６）中５μｇ／ｍｌの捕捉抗Ｆａｂ抗体（Ｃａｐｐｅｌ  Ｌａｂｓ）で一晩コーティングし、その後、室温（およそ２３℃）で２〜５時間にわたりＰＢＳ中２％（ｗ／ｖ）のウシ血清アルブミンで遮断する。非吸着性のプレート（Ｎｕｎｃ番号２６９６２０）中で、１００ｐＭまたは２６ｐＭ［１２５Ｉ］−抗原を、目的のＦａｂの段階希釈液と混合する（例えば、Ｐｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５７：４５９３−４５９９（１９９７）における抗ＶＥＧＦ抗体Ｆａｂ−１２の評価と一貫する）。その後、目的のＦａｂを一晩インキュベートするが、インキュベーションをより長い期間（例えば、約６５時間）続けて、平衡に達することを確実にすることができる。その後、室温でのインキュベーション（例えば、１時間）のために混合物を捕捉プレートに移す。その後、溶液を除去し、プレートをＰＢＳ中０．１％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（登録商標））で８回洗浄する。プレートが乾燥したら、１５０μＬ／ウェルのシンチラント（ｓｃｉｎｔｉｌｌａｎｔ）（ＭＩＣＲＯＳＣＩＮＴ−２０（商標）；Ｐａｃｋａｒｄ）を付加し、プレートをＴＯＰＣＯＵＮＴ（商標）ガンマ計数器（Ｐａｃｋａｒｄ）上で１０分間、計数する。最大結合の２０％以下をもたらす各Ｆａｂの濃度を競合結合アッセイでの使用に選択する。
【０１６２】
別の実施形態によれば、Ｋｄは、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−２０００、ＢＡＩＣＯＲＥ（登録商標）−Ｔ２００、またはＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を使用した表面プラズモン共鳴アッセイを使用して、２５℃で、約１０応答単位（ＲＵ）で固定化された抗原ＣＭ５チップを用いて測定される。簡潔には、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサーチップ（ＣＭ５、ＢＩＡＣＯＲＥ，Ｉｎｃ．）を、供給業者の指示に従って、Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）及びＮ−ヒドロキシサクシンイミド（ＮＨＳ）で活性化する。抗原を、１０ｍＭの酢酸ナトリウム（ｐＨ４．８）で５μｇ／ｍｌまで（約０．２μＭ）希釈し、かつ／またはＨＢＳ−Ｐ（０．０１Ｍ  Ｈｅｐｅｓ  ｐＨ７．４、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、０．００５％Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ  Ｐ２０）で希釈した後、５μｌ／分及び／または３０μｌ／分の流量で注入して、カップリングされたタンパク質のおよそ１０応答単位（ＲＵ）を達成する。抗原の注入後、１Ｍのエタノールアミンを注入して、未反応基を遮断する。反応速度測定のために、Ｆａｂの２倍段階希釈液（０．７８ｎＭ〜５００ｎＭ）を、２５℃の０．０５％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（商標））界面活性剤（ＰＢＳＴ）を有するＰＢＳ中におよそ２５μＬ／分の流量で注入する。会合速度（ｋｏｎ）及び解離速度（ｋｏｆｆ）は、単純な１対１のラングミュア結合モデル（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  Ｓｏｆｔｗａｒｅバージョン３．２）を使用して、会合センサグラムと解離センサグラムとを同時に当てはめることによって計算される。平衡解離定数（Ｋｄ）をｋｏｆｆ／ｋｏｎ比として計算する。例えば、Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５−８８１（１９９９）を参照されたい。上記表面プラズモン共鳴アッセイによるオン速度が１０６Ｍ−１ｓ−１を超える場合、オン速度は、ストップトフローを備えた分光光度計（Ａｖｉｖ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）、または撹拌キュベットを備えた８０００シリーズＳＬＭ−ＡＭＩＮＣＯ（商標）分光光度計（ＴｈｅｒｍｏＳｐｅｃｔｒｏｎｉｃ）などの分光計で測定される場合に、増加する抗原濃度の存在下で、２５℃で、ＰＢＳ中２０ｎＭの抗−抗原抗体（Ｆａｂ型）（ｐＨ７．２）の蛍光発光強度（励起＝２９５ｎｍ、発光＝３４０ｎｍ、１６ｎｍ帯域通過）の増加または減少を測定する蛍光消光技法を使用して決定することができる。
【０１６３】
２．抗体断片
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、抗体断片である。抗体断片には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、及びｓｃＦｖ断片、ならびに以下に記載される他の断片が含まれるが、これらに限定されない。ある特定の抗体断片の概説については、Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）を参照されたい。ｓｃＦｖ断片の概説については、例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ  ａｎｄ  Ｍｏｏｒｅ  ｅｄｓ．，（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ），ｐｐ．２６９−３１５（１９９４）を参照されたく、また、ＷＯ９３／１６１８５号、ならびに米国特許第５，５７１，８９４号及び同第５，５８７，４５８号も参照されたい。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、増加したインビボ半減期を有する、Ｆａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片の考察については、米国特許第５，８６９，０４６号を参照されたい。
【０１６４】
ダイアボディは、二価または二重特異性であり得る２つの抗原結合部位を有する抗体断片である。例えば、ＥＰ４０４，０９７、ＷＯ１９９３／０１１６１、Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）、及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：６４４４−６４４８（１９９３）を参照されたい。トリアボディ及びテトラボディも、Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）に記載されている。
【０１６５】
単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全てもしくは一部、または軽鎖可変ドメインの全てもしくは一部を含む、抗体断片である。ある特定の実施形態では、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ、例えば、米国特許第６，２４８，５１６号を参照されたい）。
【０１６６】
抗体断片は、本明細書に記載される無傷の抗体のタンパク質消化ならびに組換え宿主細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉまたはファージ）による産生を含むが、これらに限定されない様々な技法によって作製することができる。
【０１６７】
３．  キメラ抗体及びヒト化抗体
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、キメラ抗体である。ある特定のキメラ抗体が、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号、及びＭｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１−６８５５（１９８４））に記載されている。一例において、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、または非ヒト霊長類、例えば、サルに由来する可変領域）及びヒト定常領域を含む。さらなる例において、キメラ抗体は、クラスまたはサブクラスが親抗体のクラスまたはサブクラスから変化した「クラススイッチ」抗体である。キメラ抗体は、その抗原結合断片を含む。
【０１６８】
ある特定の実施形態では、キメラ抗体は、ヒト化抗体である。典型的には、非ヒト抗体は、ヒトに対する免疫原性を低減する一方で、親非ヒト抗体の特異性及び親和性は保持するようにヒト化される。一般的に、ヒト化抗体は、１つ以上の可変ドメインを含み、そのＨＶＲ、例えば、ＣＤＲ（またはそれらの部分）は、非ヒト抗体に由来し、そのＦＲ（またはそれらの部分）は、ヒト抗体配列に由来する。ヒト化抗体は任意に、ヒト定常領域の少なくとも一部も含む。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体におけるいくつかのＦＲ残基は、例えば、抗体特異性または親和性を復元または改善するように、非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基が由来する抗体）由来の対応する残基で置換される。
【０１６９】
ヒト化抗体及びそれらの作製方法は、例えば、Ａｌｍａｇｒｏ  ａｎｄ  Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）で概説されており、例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２９（１９８８）、Ｑｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６：１００２９−１００３３（１９８９）、米国特許第５，８２１，３３７号、同第７，５２７，７９１号、同第６，９８２，３２１号、及び同第７，０８７，４０９号、Ｋａｓｈｍｉｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６：２５−３４（２００５）（特異性決定領域（ＳＤＲ）移植を記載する）、Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４８９−４９８（１９９１）（「リサーフェイシング（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）」を記載する）、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６：４３−６０（２００５）（「ＦＲシャフリング」を記載する）、ならびにＯｓｂｏｕｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６：６１−６８（２００５）及びＫｌｉｍｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，８３：２５２−２６０（２０００）（ＦＲシャフリングへの「誘導選択（ｇｕｉｄｅｄ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ）」アプローチについて記載する）にさらに記載されている。
【０１７０】
ヒト化に使用され得るヒトフレームワーク領域は、「ベスト−フィット」方法を使用して選択されるフレームワーク領域（例えば、Ｓｉｍｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）を参照されたい）、軽鎖または重鎖可変領域の特定のサブグループのヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域（例えば、Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５（１９９２）、及びＰｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３（１９９３）を参照されたい）、ヒト成熟（体細胞突然変異した）フレームワーク領域またはヒト生殖系列フレームワーク領域（例えば、Ａｌｍａｇｒｏ  ａｎｄ  Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）を参照されたい）、ならびにＦＲライブラリのスクリーニングに由来するフレームワーク領域（例えば、Ｂａｃａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８−１０６８４（１９９７）及びＲｏｓｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２２６１１−２２６１８（１９９６）を参照されたい）を含むが、これらに限定されないヒト化に使用され得る。
【０１７１】
４．ヒト抗体
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当該技術分野で既知の様々な技法を使用して産生され得る。ヒト抗体は、概して、ｖａｎ  Ｄｉｊｋ  ａｎｄ  ｖａｎ  ｄｅ  Ｗｉｎｋｅｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８−７４（２００１）及びＬｏｎｂｅｒｇ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：４５０−４５９（２００８）に記載されている。
【０１７２】
ヒト抗体は、抗原投与に応答してヒト可変領域を有する無傷のヒト抗体または無傷の抗体を産生するように修飾されたトランスジェニック動物に免疫原を投与することによって調製することができる。かかる動物は、典型的には、内因性免疫グロブリン遺伝子座を置き換えるか、または染色体外に存在するか、もしくは動物の染色体に無作為に組み込まれるヒト免疫グロブリン遺伝子座の全てまたは一部を含有する。かかるトランスジェニックマウスにおいて、内因性免疫グロブリン遺伝子座は、一般的に、不活性化されている。トランスジェニック動物からヒト抗体を得るための方法の概説については、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３：１１１７−１１２５（２００５）を参照されたい。例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術について記載している米国特許第６，０７５，１８１号及び同第６，１５０，５８４号、ＨＵＭＡＢ（登録商標）技術について記載している米国特許第５，７７０，４２９号、Ｋ−Ｍ  ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術について記載している米国特許第７，０４１，８７０号、ならびにＶＥＬＯＣＩＭＯＵＳＥ（登録商標）技術について記載しているＵＳ２００７／００６１９００を参照されたい）。かかる動物によって生成された無傷の抗体由来のヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせることによってさらに修飾され得る。
【０１７３】
ヒト抗体は、ハイブリドーマに基づく方法によって作製することもできる。ヒトモノクローナル抗体を産生するためのヒト骨髄腫及びマウス−ヒトヘテロ骨髄腫細胞系が記載されている。（例えば、Ｋｏｚｂｏｒ  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）、Ｂｒｏｄｅｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１−６３（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８７）、及びＢｏｅｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：８６（１９９１）を参照されたい。）ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術によって生成されるヒト抗体も、Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０３：３５５７−３５６２（２００６）に記載されている。追加の方法には、例えば、米国特許第７，１８９，８２６号（ハイブリドーマ細胞系由来のモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の産生を記載している）、及びＮｉ，Ｘｉａｎｄａｉ  Ｍｉａｎｙｉｘｕｅ，２６（４）：２６５−２６８（２００６）（ヒト−ヒトハイブリドーマを記載している）に記載されるものを含む。ヒトハイブリドーマ技術（トリオーマ技術）についても、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ  ａｎｄ  Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，２０（３）：９２７−９３７（２００５）及びＶｏｌｌｍｅｒｓ  ａｎｄ  Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｆｉｎｄｉｎｇｓ  ｉｎ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２７（３）：１８５−９１（２００５）に記載されている。
【０１７４】
ヒト抗体は、ヒト由来のファージディスプレイライブラリから選択されるＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することによって生成することもできる。その後、かかる可変ドメイン配列は、所望のヒト定常ドメインと組み合わせられ得る。抗体ライブラリからヒト抗体を選択するための技法が以下に記載されている。
【０１７５】
５．ライブラリ由来抗体
本発明の抗体は、所望の活性（複数可）を有する抗体に関してコンビナトリアルライブラリをスクリーニングすることにより単離され得る。例えば、ファージディスプレイライブラリを生成し、所望の結合特徴を保有する抗体についてかかるライブラリをスクリーニングするための様々な方法が、当該技術分野で既知である。かかる方法は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １７８：１−３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００１）に概説され、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５４、Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８（１９９１）、Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９２）、Ｍａｒｋｓ  ａｎｄ  Ｂｒａｄｂｕｒｙ，ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２４８：１６１−１７５（Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３）、Ｓｉｄｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９−３１０（２００４）、Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３−１０９３（２００４）、Ｆｅｌｌｏｕｓｅ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０１（３４）：１２４６７−１２４７２（２００４）、及びＬｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２８４（１−２）：１１９−１３２（２００４）にさらに記載されている。
【０１７６】
ある特定のファージディスプレイ法では、ＶＨ及びＶＬ遺伝子のレパートリーは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって別個にクローン化され、ファージライブラリ中で無作為に組換えられ、それは次いで、Ｗｉｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２：４３３−４５５（１９９４）に記載されるように、抗原結合ファージについてスクリーニングされ得る。ファージは典型的には、抗体断片を一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片またはＦａｂ断片のいずれかとして表示する。免疫化源由来のライブラリは、ハイブリドーマの構築を必要とすることなく、免疫原に高親和性抗体を提供する。代替的に、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ，１２：７２５−７３４（１９９３）によって記載されるように、ナイーブレパートリーは、クローン化され（例えば、ヒトから）、いかなる免疫化も伴わずに、幅広い非自己抗原また自己抗原に対する抗体の単一源を提供することができる。最後に、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１−３８８（１９９２）に記載されるように、ナイーブライブラリは、幹細胞から再配列されていないＶ遺伝子セグメントをクローン化し、無作為配列を含有するＰＣＲプライマーを使用して、高度可変ＣＤＲ３領域をコードし、かつインビトロで再配列を達成することによって、合成的に作製することもできる。ヒト抗体ファージライブラリを記載している特許公開には、例えば、米国特許第５，７５０，３７３号、ならびに米国特許公開第２００５／００７９５７４号、同第２００５／０１１９４５５号、同第２００５／０２６６０００号、同第２００７／０１１７１２６号、同第２００７／０１６０５９８号、同第２００７／０２３７７６４号、同第２００７／０２９２９３６号、及び同第２００９／０００２３６０号が含まれる。
【０１７７】
ヒト抗体ライブラリから単離された抗体または抗体断片は、本明細書においてヒト抗体またはヒト抗体断片と見なされる。
【０１７８】
６．抗体変異型
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体のアミノ酸配列変異体が企図される。例えば、抗体の結合親和性及び／または他の生物学的特性を改善することが望ましい場合がある。抗体のアミノ酸配列変異型は、抗体をコードするヌクレオチド配列中に適切な修飾を導入することによって、またはペプチド合成によって調製することができる。かかる修飾には、例えば、抗体のアミノ酸配列内の残基からの欠失、及び／またはそこへの挿入、及び／またはその置換が挙げられる。最終構築物に到達するために欠失、挿入、及び置換の任意の組み合わせを行うことができるが、最終構築物が所望の特徴、例えば、抗原結合を保有することを条件とする。
【０１７９】
ａ）置換、挿入、及び欠失変異型
ある特定の実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換を有する抗体変異型が提供される。置換型変異誘発の目的の部位としては、ＨＶＲ及びＦＲが挙げられる。保存的置換は、表１において「好ましい置換」の見出しの下に示される。より実質的な変化は、表１において「例示的な置換」の見出しの下に提供され、アミノ酸側鎖クラスを参照してさらに以下に記載される。アミノ酸置換が目的の抗体に導入され、生成物が所望の活性、例えば、抗原結合の保持／改善、免疫原性の減少、またはＡＤＣＣまたはＣＤＣの改善についてスクリーニングされ得る。
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【０１８０】
アミノ酸は、一般的な側鎖特性に従って群分けされ得る。
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ、
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、
（５）鎖配向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
【０１８１】
非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーと別のクラスのメンバーとの交換を伴う。
【０１８２】
ある種類の置換型変異型は、親抗体（例えば、ヒト化抗体またはヒト抗体）の１つ以上の超可変領域残基を置換することを伴う。一般的に、さらなる研究ために選択される結果として生じる変異型（複数可）は、親抗体と比較したある特定の生物学的特性（例えば、親和性の増加、免疫原性の低減）の修正（例えば、改善）を有し、かつ／または実質的に保持された親抗体のある特定の生物学的特性を有する。例示的な置換型変異型は、例えば、本明細書に記載の技法などのファージディスプレイに基づく親和性成熟技法を使用して好都合に生成され得る親和性成熟抗体である。簡潔に述べると、１つ以上のＨＶＲ残基は、突然変異され、変異体抗体がファージ上に提示され、特定の生物学的活性（例えば、結合親和性）に対してスクリーニングされる。
【０１８３】
改変（例えば、置換）がＨＶＲに行われて、例えば、抗体親和性を改善することができる。かかる改変は、ＨＶＲ「ホットスポット」、すなわち、体細胞成熟プロセス中に高頻度で突然変異を経るコドンによってコードされる残基（例えば、Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０７：１７９−１９６（２００８）を参照されたい）、及び／または抗原と接触する残基において行われてもよく、結果として生じる変異型ＶＨまたはＶＬは、結合親和性について試験される。二次ライブラリを構築し、そこから再選択することによる親和性成熟は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １７８：１−３７に記載されている（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，（２００１）。）親和性成熟のいくつかの実施形態では、多様性が、様々な方法（例えば、エラープローンＰＣＲ、鎖シャフリング、またはオリゴヌクレオチド指向性変異誘発）のうちのいずれかによって、成熟させるために選択された可変遺伝子に導入される。その後、二次ライブラリが作製される。その後、このライブラリがスクリーニングされて、所望の親和性を有する任意の抗体変異型を特定する。多様性を導入する別の方法は、数個のＨＶＲ残基（例えば、一度に４〜６個の残基）が無作為化されるＨＶＲ指向性アプローチを伴う。抗原結合に関与するＨＶＲ残基は、例えば、アラニンスキャニング変異誘発またはモデリングを使用して、特異的に特定され得る。特にＣＤＲ−Ｈ３及びＣＤＲ−Ｌ３が標的とされることが多い。
【０１８４】
ある特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、かかる改変が抗原と結合する抗体の能力を実質的に低減しない限り、１つ以上のＨＶＲ内で生じ得る。例えば、結合親和性を実質的に低減しない保存的改変（例えば、本明細書に提供される保存的置換）がＨＶＲで行われ得る。かかる改変は、例えば、ＨＶＲ内の抗原接触残基の外側であってもよい。上述の変異型ＶＨ配列及びＶＬ配列のある特定の実施形態では、各ＨＶＲは、改変されないか、または１つより多く、２つより多く、もしくは３つより多くのアミノ酸置換を含有しないかのいずれかである。
【０１８５】
変異誘発のために標的とされ得る、抗体の残基または領域の特定のための有用な方法は、「アラニンスキャニング変異誘発」と称され、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ａｎｄ  Ｗｅｌｌｓ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１−１０８５に記載されている。この方法では、標的残基の残基または基（例えば、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、及びＧｌｕなどの荷電残基）が特定され、中性または負に荷電されたアミノ酸（例えば、アラニンまたはポリアラニン）と置き換えられ、抗体の抗原との相互作用が影響を受けたかどうかを決定する。さらなる置換が最初の置換に対する機能感受性を示すアミノ酸位置に導入され得る。代替的に、または加えて、抗体と抗原との間の接触点を特定するための抗原−抗体複合体の結晶構造。かかる接触残基及び隣接する残基が置換の候補として標的とされ得るか、または排除され得る。変異型がスクリーニングされて、それらが所望の特性を有するかを決定することができる。
【０１８６】
アミノ酸配列挿入には、長さが１残基から１００以上の残基の範囲を含有するポリペプチドの範囲であるアミノ末端及び／またはカルボキシル末端の融合、ならびに単一もしくは複数のアミノ酸残基の配列内挿入が含まれる。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入変異型には、酵素（例えば、ＡＤＥＰＴのための）またはポリペプチドへの抗体のＮ末端もしくはＣ末端の融合が挙げられ、これは抗体の血清半減期を増加させる。
【０１８７】
ｂ）グリコシル化変異型
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、抗体がグリコシル化される程度を増加または減少させるように改変される。抗体へのグリコシル化部位の付加または欠失は、１つ以上のグリコシル化部位が作製または除去されるようにアミノ酸配列を改変することによって好都合に達成され得る。
【０１８８】
抗体がＦｃ領域を含む場合、それに結合した炭水化物は改変され得る。哺乳類細胞によって産生される天然抗体は、典型的には、一般的にＮ結合によってＦｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７に結合される分岐状の二分岐オリゴ糖を含む。例えば、Ｗｒｉｇｈｔ  ｅｔ  ａｌ．ＴＩＢＴＥＣＨ  １５：２６−３２（１９９７）を参照されたい。オリゴ糖としては、様々な炭水化物、例えば、マンノース、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、及びシアル酸、ならびに二分岐オリゴ糖構造の「幹」のＧｌｃＮＡｃに結合したフコースが挙げられ得る。いくつかの実施形態では、ある特定の特性が改善された抗体変異型を作製するために、本発明の抗体におけるオリゴ糖の修飾が行われ得る。
【０１８９】
一実施形態では、Ｆｃ領域に（直接的または間接的に）結合されたフコースを欠く炭水化物構造を有する抗体変異型が提供される。例えば、かかる抗体中のフコースの量は、１％〜８０％、１％〜６５％、５％〜６５％、または２０％〜４０％であり得る。フコースの量は、例えば、ＷＯ２００８／０７７５４６に記載のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析によって測定される、Ａｓｎ２９７に結合した全ての糖構造（例えば、複合体、ハイブリッド、及び高マンノース構造）の合計に対するＡｓｎ２９７での糖鎖内のフコースの平均量を計算することによって決定される。Ａｓｎ２９７とは、Ｆｃ領域内の約２９７位（Ｆｃ領域残基のＥｕ番号付け）に位置するアスパラギン残基を指すが、Ａｓｎ２９７は、抗体内のわずかな配列変異のため、２９７位から約±３アミノ酸上流または下流に、すなわち、２９４位と３００位との間に位置し得る。かかるフコシル化変異型は、改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。例えば、米国特許公開第２００３／０１５７１０８号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）、同第２００４／００９３６２１号（Ｋｙｏｗａ  Ｈａｋｋｏ  Ｋｏｇｙｏ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ）を参照されたい。「脱フコース化」または「フコース欠損」抗体変異型に関する刊行物の例には、ＵＳ２００３／０１５７１０８、ＷＯ２０００／６１７３９、ＷＯ２００１／２９２４６、ＵＳ２００３／０１１５６１４、ＵＳ２００２／０１６４３２８、ＵＳ２００４／００９３６２１、ＵＳ２００４／０１３２１４０、ＵＳ２００４／０１１０７０４、ＵＳ２００４／０１１０２８２、ＵＳ２００４／０１０９８６５、ＷＯ２００３／０８５１１９、ＷＯ２００３／０８４５７０、ＷＯ２００５／０３５５８６、ＷＯ２００５／０３５７７８、ＷＯ２００５／０５３７４２、ＷＯ２００２／０３１１４０、Ｏｋａｚａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３６：１２３９−１２４９（２００４）、Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）が挙げられる。脱フコシル化抗体を産生することができる細胞系の例としては、タンパク質フコシル化が欠損したＬｅｃ１３  ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａ  ｅｔ  ａｌ．Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９：５３３−５４５（１９８６）、米国特許出願第ＵＳ２００３／０１５７１０８Ａ１号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ）、及びＷＯ２００４／０５６３１２Ａ１（Ａｄａｍｓら）、特に実施例１１）、及びアルファ−１，６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞等のノックアウト細胞（例えば、Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）、Ｋａｎｄａ，Ｙ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，９４（４）：６８０−６８８（２００６）、及びＷＯ２００３／０８５１０７を参照されたい）が挙げられる。
【０１９０】
例えば、抗体のＦｃ領域に結合した二分岐オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃによって二分される、二分されたオリゴ糖を有する抗体変異型がさらに提供される。かかる抗体変異型は、低減されたフコシル化及び／または改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。かかる抗体変異型の例は、例えば、ＷＯ２００３／０１１８７８（Ｊｅａｎ−Ｍａｉｒｅｔ  ｅｔ  ａｌ．）、米国特許第６，６０２，６８４号（Ｕｍａｎａ  ｅｔ  ａｌ．）、及びＵＳ２００５／０１２３５４６（Ｕｍａｎａ  ｅｔ  ａｌ．）に記載されている。Ｆｃ領域に結合したオリゴ糖内に少なくとも１つのガラクトース残基を有する抗体変異型も提供される。かかる抗体変異型は、改善されたＣＤＣ機能を有し得る。かかる抗体変異型は、例えば、ＷＯ１９９７／３００８７（Ｐａｔｅｌ  ｅｔ  ａｌ．）、ＷＯ１９９８／５８９６４（Ｒａｊｕ、Ｓ．）、及びＷＯ１９９９／２２７６４（Ｒａｊｕ、Ｓ．）に記載されている。
【０１９１】
ｃ）Ｆｃ領域変異型
ある特定の実施形態では、１つ以上のアミノ酸修飾が本明細書に提供される抗体のＦｃ領域に導入され、それにより、Ｆｃ領域変異型が生成され得る。Ｆｃ領域変異型は、１つ以上のアミノ酸位置にアミノ酸修飾（例えば、置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４  Ｆｃ領域）を含み得る。
【０１９２】
ある特定の実施形態では、本発明は、全てではなくいくつかのエフェクター機能を保有し、それにより、インビボでの抗体の半減期が重要であるが、さらにある特定のエフェクター機能（補体及びＡＤＣＣなど）が不必要であるか、または有害である用途に対して望ましい候補となる、抗体変異型を企図する。インビトロ及び／またはインビボ細胞傷害性アッセイを行って、ＣＤＣ及び／またはＡＤＣＣ活性の低減／枯渇を確認することができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイを行って、抗体がＦｃγＲ結合を欠く（故にＡＤＣＣ活性を欠く可能性が高い）が、ＦｃＲｎ結合能力を保持していることを確実にすることができる。ＡＤＣＣを媒介するための初代細胞であるＮＫ細胞が、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現する一方で、単球は、Ｆｃ（ＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞でのＦｃＲ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７−４９２（１９９１）の４６４頁の表３に要約されている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのインビトロアッセイの非限定的な例は、米国特許第５，５００，３６２号（例えば、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ．ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８３：７０５９−７０６３（１９８６）を参照されたい）、及びＨｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２：１４９９−１５０２（１９８５）、５，８２１，３３７（Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６６：１３５１−１３６１（１９８７）を参照されたい）に記載されている。代替的に、非放射性アッセイ方法が用いられ得る（例えば、フローサイトメトリーのためのＡＣＴＩ（商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ，ＣＡ、及びＣｙｔｏＴｏｘ  ９６（登録商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を参照されたい。かかるアッセイに有用なエフェクター細胞としては、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。代替的に、または加えて、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、インビボで、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９５：６５２−６５６（１９９８）に開示の動物モデルなどで評価され得る。Ｃ１ｑ結合アッセイを実行して、抗体がＣ１ｑと結合することができず、それ故にＣＤＣ活性を欠くことを確認することもできる。例えば、ＷＯ２００６／０２９８７９及びＷＯ２００５／１００４０２におけるＣ１ｑ及びＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照されたい。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイが実施されてもよい（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０２：１６３（１９９６）、Ｃｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １０１：１０４５−１０５２（２００３）、及びＣｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ａｎｄ  Ｍ．Ｊ．Ｇｌｅｎｎｉｅ，Ｂｌｏｏｄ  １０３：２７３８−２７４３（２００４）を参照されたい）。ＦｃＲｎの結合及びインビボクリアランス／半減期の決定もまた、当該技術分野で既知の方法を用いて行うことができる（例えば、Ｐｅｔｋｏｖａ，Ｓ．Ｂ．ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ’ｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８（１２）：１７５９−１７６９（２００６）を参照されたい）。
【０１９３】
低減したエフェクター機能を有する抗体は、Ｆｃ領域残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７、及び３２９のうちの１つ以上の置換を有するものを含む（米国特許第６，７３７，０５６号）。かかるＦｃ突然変異体は、アラニンへの残基２６５及び２９７の置換を有するいわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ突然変異体を含む、アミノ酸２６５位、２６９位、２７０位、２９７位、及び３２７位のうちの２つ以上において置換を有するＦｃ突然変異体を含む（米国特許第７，３３２，５８１号）。
【０１９４】
いくつかの態様では、抗ＣＬＬ−１抗体（例えば、抗ＣＬＬ−１  ＴＤＢ抗体）は、Ｎ２９７Ｇ突然変異を含むＦｃ領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ−１抗体は、ＥＵ番号付けによるアミノ酸残基２３４、２３５、及び３２９にＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇ突然変異を含む。
【０１９５】
いくつかの実施形態では、Ｎ２９７Ｇ突然変異を含む抗ＣＬＬ−１抗体は、１つ以上の重鎖定常ドメインを含み、該１つ以上の重鎖定常ドメインは、第１のＣＨ１（ＣＨ１１））ドメイン、第１のＣＨ２（ＣＨ２１）ドメイン、第１のＣＨ３（ＣＨ３１）ドメイン、第２のＣＨ１（ＣＨ１２）ドメイン、第２のＣＨ２（ＣＨ２２）ドメイン、及び第２のＣＨ３（ＣＨ３２）ドメインから選択される。いくつかの事例では、１つ以上の重鎖定常ドメインのうちの少なくとも１つは、別の重鎖定常ドメインと対合される。いくつかの事例では、ＣＨ３１及びＣＨ３２ドメインは各々、突起または空隙を含み、ＣＨ３１ドメイン内の該突起または空隙は、それぞれ、ＣＨ３２ドメイン内の空隙または突起中に位置付けることができる。いくつかの事例では、ＣＨ３１及びＣＨ３２ドメインは、該突起と空隙との間の境界面において接触する。いくつかの事例では、ＣＨ２１及びＣＨ２２ドメインは各々、突起または空隙を含み、ＣＨ２１ドメイン内の該突起または空隙は、それぞれ、ＣＨ２２ドメイン内の空隙または突起中に位置付けることができる。他の事例では、ＣＨ２１及びＣＨ２２ドメインは、該突起と空隙との間の境界面において接触する。いくつかの事例では、抗ＣＤ３抗体は、ＩｇＧ１抗体である。
【０１９６】
抗ＣＬＬ−１抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、（ａ）ＣＤ３結合ドメインはＦｃドメインを含み、該Ｆｃドメインは、ＥＵ番号付けによるＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＮ２９７Ｇ置換突然変異を含み、（ｂ）ＣＬＬ−１結合ドメインはＦｃドメインを含み、該Ｆｃドメインは、ＥＵ番号付けによるＴ３６６Ｗ及びＮ２９７Ｇ置換突然変異を含む。抗ＣＬＬ−１抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、（ａ）ＣＤ３結合ドメインはＦｃドメインを含み、該Ｆｃドメインは、ＥＵ番号付けによるＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ置換突然変異を含み、（ｂ）ＣＬＬ−１結合ドメインはＦｃドメインを含み、該Ｆｃドメインは、ＥＵ番号付けによるＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ｇ、及びＴ３６６Ｗ置換突然変異を含む。
【０１９７】
ＦｃＲへの結合が改善または縮小されたある特定の抗体変異型が記載されている。（例えば、米国特許第６，７３７，０５６号、ＷＯ２００４／０５６３１２、及びＳｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．９（２）：６５９１−６６０４（２００１）を参照されたい。）
【０１９８】
ある特定の実施形態では、抗体変異型は、ＡＤＣＣを改善する１つ以上のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の２９８、３３３、及び／または３３４位（残基のＥＵ番号付け）での置換を有するＦｃ領域を含む。
【０１９９】
いくつかの実施形態では、例えば、米国特許第６，１９４，５５１号、ＷＯ９９／５１６４２、及びＩｄｕｓｏｇｉｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：４１７８−４１８４（２０００）に記載されるように、改変は、改変された（すなわち、改善または縮小されたかのいずれか）Ｃ１ｑ結合及び／または補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）をもたらすＦｃ領域において行われる。
【０２００】
増加した半減期と、胎児への母体ＩｇＧの移入に関与する新生児型Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への改善された結合（Ｇｕｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７（１９７６）及びＫｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９（１９９４））を有する抗体は、ＵＳ２００５／００１４９３４Ａ１（Ｈｉｎｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．）に記載されている。それらの抗体は、Ｆｃ領域のＦｃＲｎへの結合を改善する１つ以上の置換を有するＦｃ領域をそこに含む。かかるＦｃ変異型は、Ｆｃ領域残基：２３８、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４、または４３４のうちの１つ以上における置換、例えば、Ｆｃ領域残基４３４の置換を有するものを含む（米国特許第７，３７１，８２６号）。Ｆｃ領域変異型の他の例に関して、Ｄｕｎｃａｎ  ＆  Ｗｉｎｔｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ  ３２２：７３８−４０（１９８８）、米国特許第５，６４８，２６０号、米国特許第５，６２４，８２１号、及びＷＯ９４／２９３５１も参照されたい。
【０２０１】
ｄ）システイン操作された抗体変異型
ある特定の実施形態では、抗体の１つ以上の残基がシステイン残基で置換されている、システイン操作された抗体、例えば、「チオマブ（ｔｈｉｏＭＡｂ）」を作製することが望ましい場合がある。特定の実施形態では、置換残基は、抗体の接触可能部位において生じる。これらの残基をシステインで置換することによって、反応性のチオール基がそれにより抗体の接触可能部位に位置付けられ、それを使用して、薬物部分またはリンカー−薬物部分などの他の部分に抗体を複合体化して、本明細書にさらに記載される免疫複合体を作製することができる。ある特定の実施形態では、次の残基のうちの任意の１つ以上が、システインで置換され得る：軽鎖のＶ２０５（Ｋａｂａｔ番号付け）、重鎖のＡ１１８（ＥＵ番号付け）、及び重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵ番号付け）。システイン操作された抗体は、例えば、米国特許第７，５２１，５４１号に記載されるように生成され得る。
【０２０２】
ｅ）抗体誘導体
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、当該技術分野で既知であり、かつ容易に入手可能な、追加の非タンパク質性部分を含有するようにさらに修飾されてもよい。抗体の誘導体化に好適な部分には、水溶性ポリマーを含むが、これに限定されない。水溶性ポリマーの非限定的な例には、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマーまたはランダムコポリマーのいずれか）、及びデキストランまたはポリ（ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロプロピレン（ｐｒｏｐｒｏｐｙｌｅｎｅ）グリコールホモポリマー、プロリプロピレン（ｐｒｏｌｙｐｒｏｐｙｌｅｎｅ）オキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、ならびにそれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中でのその安定性により、製造時に有利であり得る。ポリマーは、任意の分子量のものであり得、分岐状または非分岐状であり得る。抗体に結合したポリマーの数は異なり得、２つ以上のポリマーが結合している場合、それらは、同じ分子または異なる分子であり得る。概して、誘導体化のために使用されるポリマーの数及び／または種類は、改善された抗体の特定の特性または機能、抗体の誘導体が所定の条件下で療法において使用されるかどうかなどを含むが、これらに限定されない検討事項に基づいて決定され得る。
【０２０３】
別の実施形態では、放射線への曝露によって選択的に加熱され得る、抗体及び非タンパク質性部分の複合体が提供される。一実施形態では、非タンパク質性部分は、カーボンナノチューブである（Ｋａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０２：１１６００−１１６０５（２００５））。放射線は、任意の波長のものであってもよく、通常の細胞を傷つけないが、非タンパク質性部分を、抗体−非タンパク質性部分に近位の細胞を死滅させる温度まで加熱する波長を含むが、これらに限定されない。
【０２０４】
Ｂ．組換え法及び組成物
抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号に記載される組換え法及び組成物を使用して産生され得る。一実施形態では、本明細書に記載される抗ＣＬＬ−１抗体をコードする単離された核酸が提供される。かかる核酸は、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び／または抗体のＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖及び／または重鎖）をコードし得る。さらなる実施形態では、かかる核酸を含む１つ以上のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。さらなる実施形態では、かかる核酸を含む宿主細胞が提供される。１つのかかる実施形態では、宿主細胞は、（１）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、または（２）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第１のベクター、及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第２のベクターを含む（例えば、それらで形質転換されている）。一実施形態では、宿主細胞は、真核生物のもの、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞またはリンパ系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。一実施形態では、抗ＣＬＬ−１抗体の作製方法が提供され、本方法は、上記抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を、抗体の発現に好適な条件下で培養することと、任意に、抗体を宿主細胞（または宿主細胞培養培地）から回収することとを含む。
【０２０５】
抗ＣＬＬ−１抗体の組換え産生のために、例えば、上述のものなどの、抗体をコードする核酸が単離され、宿主細胞内でのさらなるクローニング及び／または発現のために、１つ以上のベクター中に挿入される。かかる核酸は、従来の手順を使用して（例えば、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合可能であるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）、容易に単離され、配列決定され得る。
【０２０６】
抗体をコードするベクターのクローン化または発現のための好適な宿主細胞は、本明細書に記載される原核生物細胞または真核生物細胞を含む。例えば、抗体は、特にグリコシル化及びＦｃエフェクター機能が必要とされない場合に、細菌内で産生され得る。細菌における抗体断片及びポリペプチドの発現については、例えば、米国特許第５，６４８，２３７号、同第５，７８９，１９９号、及び同第５，８４０，５２３号を参照されたい。（また、Ｅ．ｃｏｌｉにおける抗体断片の発現について記載するＣｈａｒｌｔｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３），ｐｐ．２４５−２５４も参照されたい）。発現後、抗体は、可溶性画分中で細菌細胞ペーストから単離されてもよく、さらに精製されてもよい。
【０２０７】
原核生物に加えて、糸状菌または酵母などの真核微生物は、抗体をコードするベクターに好適なクローン化または発現宿主であり、グリコシル化経路が「ヒト化」されており、部分的または完全なヒトグリコシル化パターンを有する抗体の産生をもたらす、真菌及び酵母株を含む。Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２：１４０９−１４１４（２００４）、及びＬｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４：２１０−２１５（２００６）を参照されたい。
【０２０８】
グリコシル化抗体の発現に好適な宿主細胞は、多細胞生物（無脊椎動物及び脊椎動物）にも由来する。無脊椎動物細胞の例には、植物及び昆虫細胞が含まれる。昆虫細胞と併せて、特にＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞のトランスフェクションのために使用され得る、多数のｂａｃｕｌｏｖｉｒａｌ株が特定されている。
【０２０９】
植物細胞培養物も宿主として利用することができる。例えば、米国特許第５，９５９，１７７号、同第６，０４０，４９８号、同第６，４２０，５４８号、同第７，１２５，９７８号、及び同第６，４１７，４２９号（トランスジェニック植物において抗体を産生するためのＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ（商標）技術について記載している）を参照されたい。
【０２１０】
脊椎動物細胞も宿主として使用することができる。例えば、懸濁液中で成長するように適合される哺乳類細胞系が、有用である場合がある。有用な哺乳類宿主細胞系の他の例は、ＳＶ４０（ＣＯＳ−７）によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１系、ヒト胚性腎臓系（例えば、Ｇｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ  Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７）に記載される２９３または２９３細胞）、ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）、マウスセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３−２５１（１９８０）に記載されるＴＭ４細胞）、サル腎臓細胞（ＣＶ１）、アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６）、ヒト子宮頚部癌細胞（ＨＥＬＡ）、イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ、バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ  ３Ａ）、ヒト肺細胞（Ｗ１３８）、ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ  Ｇ２）、マウス乳房腫瘍（ＭＭＴ  ０６０５６２）、例えば、Ｍａｔｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ  Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４−６８（１９８２）に記載されるＴＲＩ細胞、ＭＲＣ５細胞、及びＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳類宿主細胞系には、ＤＨＦＲ−ＣＨＯ細胞（Ｕｒｌａｕｂ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：４２１６（１９８０））を含む、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ならびにＹ０、ＮＳ０、及びＳｐ２／０などの骨髄腫細胞系が挙げられる。抗体産生に好適なある特定の哺乳類宿主細胞系の概説については、例えば、Ｙａｚａｋｉ  ａｎｄ  Ｗｕ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ），ｐｐ．２５５−２６８（２００３）を参照されたい。
【０２１１】
Ｃ．アッセイ
本明細書に提供される抗ＣＬＬ−１抗体は、それらの物理／化学特性及び／または生物学的活性について、当該技術分野で既知の様々なアッセイによって、特定され、スクリーニングされ、または特徴付けられてもよい。
【０２１２】
１．結合アッセイ及び他のアッセイ
本明細書に提供される抗ＣＬＬ−１抗体は、それらの物理／化学特性及び／または生物学的活性について、当該技術分野で既知の様々なアッセイによって、特定され、スクリーニングされ、または特徴付けられてもよい。
【０２１３】
一態様では、本発明の抗体及び／または結合ドメインは、その抗原結合活性について、例えば、ＥＬＩＳＡ、ＢＩＡＣｏｒｅ（登録商標）、ＦＡＣＳ、またはウエスタンブロットなどの既知の方法によって試験される。
【０２１４】
別の態様において、競合アッセイを使用して、ＣＬＬ−１またはＣＤ３への結合について本明細書に記載される抗体のいずれかと競合する抗体及び／または結合ドメインを特定してもよい。ある特定の実施形態では、かかる競合抗体は、本明細書に記載される抗体によって結合される、同じエピトープ（例えば、直線状または立体配座エピトープ）に結合する。抗体が結合するエピトープをマッピングするための詳細な例示的方法は、Ｍｏｒｒｉｓ（１９９６）“Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，”ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｖｏｌ．６６（Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ）に提供される。
【０２１５】
例示的な競合アッセイにおいて、固定化されたＣＬＬ−１またはＣＤ３は、ＣＬＬ−１またはＣＤ３に結合する第１の標識抗体（例えば、本明細書に記載される抗体のいずれか）、及びＣＬＬ−１またはＣＤ３への結合について第１の抗体と競合するその能力について試験されている第２の未標識抗体を含む溶液中でインキュベートされる。第２の抗体は、ハイブリドーマ上清中に存在してもよい。対照として、固定化されたＣＬＬ−１またはＣＤ３が、第１の標識抗体を含むが、第２の未標識抗体を含まない溶液中でインキュベートされる。ＣＬＬ−１またはＣＤ３への第１の抗体の結合を許容する条件下でのインキュベーション後、過剰な非結合抗体が除去され、固定化されたＣＬＬ−１またはＣＤ３に関連する標識の量が測定される。固定化されたＣＬＬ−１またはＣＤ３に関連する標識の量が、対照試料と比較して試験試料中で実質的に低減される場合、それは、第２の抗体がＣＬＬ−１またはＣＤ３への結合について第１の抗体と競合していることを示す。Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  ｃｈ．１４（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ）を参照されたい。
【０２１６】
２．活性アッセイ
一態様では、アッセイは、生物学的活性を有するその抗ＣＬＬ−１抗体（例えば、抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体）を特定するために提供される。生物学的活性には、例えば、細胞成長または増殖（例えば、「細胞死滅」活性）を阻害する能力、プログラム細胞死（アポトーシス）を含む細胞死を誘発する能力、または抗原結合活性が含まれ得る。インビボ及び／またはインビトロでかかる生物学的活性を有する抗体も提供される。
【０２１７】
いくつかの実施形態では、活性は、標的細胞（例えば、ＣＬＬ−１陽性細胞）死滅を支援する能力及び／または細胞傷害性Ｔ細胞の活性化を含む。ある特定の実施形態では、本発明の抗ＣＬＬ−１抗体（例えば、抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体）は、本明細書、具体的には実施例に記載される方法のうちのいずれかによって、かかる標的細胞死滅（例えば、ＣＬＬ−１陽性細胞）及び／またはＴ細胞の生物学的活性の細胞傷害性作用の活性化について試験される。いくつかの実施形態では、ＡＭＬ腫瘍細胞系、ＰＢＭＣ、またはＡＭＬ患者の骨髄細胞などの標的細胞は、ＴＤＢのＦｃγＲの表面発現を伴う細胞への非特異的結合を阻止するために、１０％ＦＣＳ、２ｍＭグルタミン、及び０．３ｍｇ／ｍｌの精製された低内毒素ヒトＩｇＧ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎｓ，ＨＵ−ＧＦ−ＥＤ）を含有するＲＰＭＩ培地中で、３７℃で１〜２時間プレインキュベートされ得る。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、正常なヒトドナーから単離され得、ＰＢＭＣにおけるそのままのＣＤ８＋Ｔ細胞がＭｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ  ＧｍｂＨ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ；１３０−０９６−４９５）からのキットを使用して濃縮された。アッセイは、６０，０００細胞／ウェルのヒトＣＤ８＋Ｔ細胞及び２０，０００細胞／ウェルのｈＩｇＧ遮断標的細胞を含有する９６ウェル丸底プレート（Ｃｏｓｔａｒ  ３７９９）中で行われ得、エフェクター対標的の比（Ｅ：Ｔ）は３：１であった。抗ＣＬＬ−１抗体（例えば、抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体）は、０〜１０ｕｇ／ｍｌまたは０〜１ｕｇ／ｍｌにわたる最終アッセイ濃度に３倍に段階希釈された１０Ｘ使用液として添加され得る。添加の順序は、５０ｕｌの２Ｘ標的細胞、１１ｕｌの１０Ｘ３倍段階希釈されたＴＤＢ、及び５０ｕｌの２Ｘ  ＣＤ８＋Ｔ細胞であり得る。内容物は、設定６で約１５秒間、Ｔｉｔｅｒ  Ｐｌａｔｅ  Ｓｈａｋｅｒ（Ｔｈｅｒｍｏ）で混合され、約４０時間３７℃でインキュベートされ得る。プレートは毎日１回混合され得る。いくつかの実施形態では、ｈＣＬＬ−１発現ＥＯＬ−１、ＴＨＰ−１、ＨＬ−６０、Ｎｏｍｏ−１、ＭＬ−２、ＰＬ−２１、Ｕ９３７、及びＭｏｌｍ−１３細胞の枯渇は、ＦＡＣＳにより、抗ＣＤ１２３−ＡＰＣ（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ；５６００８７）または抗ＣＤ３３−ＡＰＣ試薬（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ；５５１３７８）のいずれか、及びヨウ化プロピジウムを使用して監視され得る。ＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化は、抗ＣＤ８−ＦＩＴＣ（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ；５５５６３４）、抗ＣＤ６９−ＰＥ（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ；５５５５３１）、及び抗ＣＤ２５（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ；５５５４３４）の組み合わせを使用して監視され得る。
【０２１８】
いくつかの実施形態では、ヒトまたはカニクイザルのＰＢＭＣを、ハイパック−フィコール比重遠心法（Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ  Ｐｌｕｓ，ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）により単離し、低速度で洗浄して血小板を除去し、ＴＤＢによるＦｃγＲへの非特異的結合を遮断するために、ｈＩｇＧを含有するＲＰＭＩに再懸濁してもよい。２００，０００／ウェルの濃度のＰＢＭＣが１１ｕｌの１０Ｘ３倍段階希釈された抗ＣＬＬ−１抗体（例えば、抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体）と共にインキュベートされたことを除き、アッセイは上述のように行われ得る。標的細胞死滅（ＣＤ１４＋単球）及びエフェクターＴ細胞（ＣＤ８＋）の活性化は、ＦＡＣＳにより約４０時間で評価され得る。ｈＣＬＬ−１発現ＣＤ１４＋単球の枯渇は、抗ＣＤ１４−ＡＰＣ試薬（Ｈｕｍａｎ  ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ；５５５３９９，Ｃｙｎｏ  Ｍｉｌｔｅｎｙｉ：１３０−０９１−２４３）及びヨウ化プロピジウムを使用して監視され得る。
【０２１９】
Ｄ．免疫複合体
本発明はまた、化学療法剤または化学療法薬、成長阻害剤、毒素（例えば、タンパク質毒素、細菌、真菌、植物、もしくは動物起源の酵素活性毒素、またはそれらの断片）、もしくは放射性同位体などの１つ以上の細胞傷害性薬剤と複合体化された本明細書における抗ＣＬＬ−１抗体（例えば、抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体）を含む、免疫複合体も提供する。
【０２２０】
一実施形態では、免疫複合体は、抗体が１つ以上の薬物に複合体化された抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）であり、この薬物としては、マイタンシノイド（米国特許第５，２０８，０２０号、同第５，４１６，０６４号、及び欧州特許第０  ４２５  ２３５  Ｂ１号を参照されたい）；モノメチルオーリスタチン薬物部分ＤＥ及びＤＦなどのオーリスタチン（ＭＭＡＥ及びＭＭＡＦ）（米国特許第５，６３５，４８３号及び同第５，７８０，５８８号及び同第７，４９８，２９８号を参照されたい）；ドラスタチン：カリケアマイシンまたはその誘導体（米国特許第５，７１２，３７４号、同第５，７１４，５８６号、同第５，７３９，１１６号、同第５，７６７，２８５号、同第５，７７０，７０１号、同第５，７７０，７１０号、同第５，７７３，００１号、及び同第５，８７７，２９６号、Ｈｉｎｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５３：３３３６−３３４２（１９９３）、ならびにＬｏｄｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５８：２９２５−２９２８（１９９８）を参照されたい）、ダウノマイシンまたはドキソルビシンなどのアントラサイクリン（Ｋｒａｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１３：４７７−５２３（２００６）、Ｊｅｆｆｒｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ  １６：３５８−３６２（２００６）、Ｔｏｒｇｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．１６：７１７−７２１（２００５）、Ｎａｇｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９７：８２９−８３４（２０００）、Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．＆  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ  １２：１５２９−１５３２（２００２）、Ｋｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４５：４３３６−４３４３（２００２）、及び米国特許第６，６３０，５７９号を参照されたい）；メトトレキサート；ビンデシン、ドセタキセル、パクリタキセル、ラロタキセル、テセタキセル、及びオルタタキセルなどのタキサン；トリコテシン；ならびにＣＣ１０６５を含むが、これらに限定されない。
【０２２１】
別の実施形態では、免疫複合体は、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、外毒素Ａ鎖（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、アルファ−サルシン、Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ  ｆｏｒｄｉｉタンパク質、ジアンシンタンパク質、Ｐｈｙｔｏｌａｃａ  ａｍｅｒｉｃａｎａタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、及びＰＡＰ−Ｓ）、ｍｏｍｏｒｄｉｃａ  ｃｈａｒａｎｔｉａ阻害剤、クルシン、クロチン、ｓａｐａｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、及びトリコテセンを含むが、これらに限定されない、酵素的活性毒素またはその断片に複合体化される、本明細書に記載される抗体を含む。
【０２２２】
別の実施形態では、免疫複合体は、放射性原子に複合体化されて放射性複合体を形成する、本明細書に記載される抗体を含む。様々な放射性同位体が、放射性複合体の産生のために利用可能である。例としては、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、及びＬｕの放射性同位体が挙げられる。放射性複合体が検出のために使用される場合、それは、シンチグラフィー研究のための放射性原子、例えば、ｔｃ９９ｍもしくはＩ１２３、または再びヨード−１２３、ヨード−１３１、インジウム−１１１、フッ素−１９、炭素−１３、窒素−１５、酸素−１７、ガドリニウム、マンガン、もしくは鉄などの核磁気共鳴（ＮＭＲ）画像法（磁気共鳴画像法、ｍｒｉとしても既知である）のためのスピン標識を含み得る。
【０２２３】
抗体及び細胞傷害性薬剤の複合体は、Ｎ−サクシニミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオン酸塩（ＳＰＤＰ）、サクシニミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボン酸塩（ＳＭＣＣ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（アジプイミド酸ジメチルＨＣｌなど）、活性エステル（スベリン酸ジサクシニミジルなど）、アルデヒド（グルタルアルデヒドなど）、ビス−アジド化合物（ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミンなど）、ビス−ジアゾニウム誘導体（ビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）−エチレンジアミンなど）、ジイソシアネート（トルエン  ２，６−ジイソシアネートなど）、及びビス−活性フッ素化合物（１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼンなど）などの様々な二官能性タンパク質カップリング剤を使用して作製され得る。例えば、リシン免疫毒素は、Ｖｉｔｅｔｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３８：１０９８（１９８７）に記載されるように調製することができる。炭素−１４−標識化１−イソチオシアナトベンジル−３−メチルジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＭＸ−ＤＴＰＡ）は、放射性ヌクレオチドを抗体に複合体化するための例示的なキレート剤である。ＷＯ９４／１１０２６を参照されたい。リンカーは、細胞内において細胞傷害性薬物の放出を容易にする「切断可能リンカー」であってもよい。例えば、酸不安定性リンカー、ペプチダーゼ感受性リンカー、感光性リンカー、ジメチルリンカー、またはジスルフィド含有リンカー（Ｃｈａｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５２：１２７−１３１（１９９２）、米国特許第５，２０８，０２０号）が使用され得る。
【０２２４】
本明細書の免疫複合体またはＡＤＣは、ＢＭＰＳ、ＥＭＣＳ、ＧＭＢＳ、ＨＢＶＳ、ＬＣ−ＳＭＣＣ、ＭＢＳ、ＭＰＢＨ、ＳＢＡＰ、ＳＩＡ、ＳＩＡＢ、ＳＭＣＣ、ＳＭＰＢ、ＳＭＰＨ、スルホ−ＥＭＣＳ、スルホ−ＧＭＢＳ、スルホ−ＫＭＵＳ、スルホ−ＭＢＳ、スルホ−ＳＩＡＢ、スルホ−ＳＭＣＣ、及びスルホ−ＳＭＰＢ、ならびに市販されている（例えば、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ．，Ｕ．Ｓ．Ａから）ＳＶＳＢ（サクシニミジル−（４−ビニルスルホン）安息香酸塩）を含むが、これらに限定されない架橋剤試薬を用いて調製されるかかる複合体を明白に企図するが、これに限定されない。
【０２２５】
Ｅ．診断及び検出のための方法及び組成物
一態様では、本明細書に提供される抗ＣＬＬ−１抗体（例えば、抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体）は、生物学的試料中のＣＬＬ−１の存在の検出に有用である。「検出すること」という用語は、本明細書で使用されるとき、定量または定性検出を包含する。ある特定の実施形態では、生物学的試料は、細胞または組織を含む。ある特定の実施形態では、かかる組織は、他の組織と比較して高レベルでＣＬＬ−１を発現する正常な組織及び／または癌性組織を含む。
【０２２６】
一実施形態では、診断または検出の方法に使用するための抗ＣＬＬ−１抗体が提供される。さらなる態様では、生物学的試料中のＣＬＬ−１の存在の検出方法が提供される。ある特定の実施形態では、本方法は、生物学的試料を、本明細書に記載される抗ＣＬＬ−１抗体と、ＣＬＬ−１への抗ＣＬＬ−１抗体の結合を許容する条件下で接触させることと、複合体が、抗ＣＬＬ−１抗体とＣＬＬ−１との間で形成されるかどうかを検出することとを含む。かかる方法は、インビトロ方法またはインビボ方法であり得る。一実施形態では、例えば、ＣＬＬ−１が患者の選択のためのバイオマーカーである場合、抗ＣＬＬ−１抗体を使用して、抗ＣＬＬ−１抗体での治療に適格な対象を選択する。
【０２２７】
上記の実施形態のいずれかに従って診断または検出され得る例示的な障害には、ＣＬＬ−１陽性癌、例えば、ＣＬＬ−１陽性ＡＭＬ、ＣＬＬ−１陽性ＣＭＬ、ＣＬＬ−１陽性ＭＤＳ、ＣＬＬ−１陽性慢性骨髄単球性白血病、ＣＬＬ−１陽性ＡＰＬ、ＣＬＬ−１陽性慢性骨髄増殖性障害、ＣＬＬ−１陽性血小板性白血病、ＣＬＬ−１陽性ｐｒｅ−Ｂ−ＡＬＬ、ＣＬＬ−１陽性ｐｒｅＴ−ＡＬＬ、ＣＬＬ−１陽性多発性骨髄腫、ＣＬＬ−１陽性肥満細胞疾患、ＣＬＬ−１陽性肥満細胞性白血病、ＣＬＬ−１陽性肥満細胞肉腫、ＣＬＬ−１陽性骨髄性肉腫、ＣＬＬ−１陽性リンパ性白血病、及びＣＬＬ−１陽性未分化白血病などが含まれる。いくつかの実施形態では、ＣＬＬ−１陽性癌は、「０」超の抗ＣＬＬ−１免疫組織化学（ＩＨＣ）またはｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）スコアを受ける癌であり、それは、実施例Ｂにおいて本明細書に記載される条件下での、９０％超の腫瘍細胞の非常に弱い染色または無染色に対応する。別の実施形態では、ＣＬＬ−１陽性癌は、実施例Ｂにおいて本明細書に記載される条件下で定義されるように、１＋、２＋、または３＋レベルでＣＬＬ−１を発現する。いくつかの実施形態では、ＣＬＬ−１陽性癌は、ＣＬＬ−１  ｍＲＮＡを検出する逆転写酵素ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）アッセイに従ってＣＬＬ−１を発現する癌である。いくつかの実施形態では、ＲＴ−ＰＣＲは、定量ＲＴ−ＰＣＲである。
【０２２８】
ある特定の他の方法を使用して、ＣＬＬ−１への抗ＣＬＬ−１抗体の結合を検出することができる。かかる方法には、ウエスタンブロット、ラジオイムノアッセイ、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着アッセイ）、「サンドウィッチ」イムノアッセイ、免疫沈降アッセイ、蛍光イムノアッセイ、タンパク質Ａイムノアッセイ、及び免疫組織化学法（ＩＨＣ）などの当該技術分野で周知の抗原結合アッセイが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２２９】
ある特定の実施形態では、標識された抗ＣＬＬ−１抗体が提供される。標識としては、直接検出される標識または部分（蛍光標識、発色団標識、電子密度の高い標識、化学発光標識、及び放射性標識など）、ならびに間接的に、例えば、酵素反応または分子相互作用により検出される酵素またはリガンドなどの部分が挙げられるが、これらに限定されない。例示的な標識には、放射性同位体３２Ｐ、１４Ｃ、１２５Ｉ、３Ｈ、及び１３１Ｉ、希土類キレートまたはフルオレセイン及びの誘導体などのフルオロフォア、ローダミン及びその誘導体、ダンシル、ウンベリフェロン、ルセリフェラーゼ（ｌｕｃｅｒｉｆｅｒａｓｅｓ）、例えば、ホタルルシフェラーゼ及び細菌ルシフェラーゼ（米国特許第４，７３７，４５６号）、ルシフェリン、２，３−ジヒドロフタラジンジオン、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、リゾチーム、糖質オキシダーゼ、例えば、グルコースオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、及びグルコース−６−リン酸塩デヒドロゲナーゼ、過酸化水素を用いて色素前駆体を酸化させる酵素、例えばＨＲＰ、ラクトペルオキシダーゼ、またはマイクロペルオキシダーゼとカップリングされた、ウリカーゼ及びキサンチンオキシダーゼなどの複素環式オキシダーゼ、ビオチン／アビジン、スピン標識、バクテリオファージ標識、安定した遊離ラジカル等が含まれるが、これらに限定されない。
【０２３０】
Ｆ．薬学的製剤
本明細書に記載される抗ＣＬＬ−１抗体（例えば、抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体）の薬学的製剤は、所望の程度の純度を有するかかる抗体と、１つ以上の任意の薬学的に許容される担体（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０））とを混合することによって、凍結乾燥製剤または水溶液の形態で調製される。薬学的に許容される担体は一般的に、用いられる投薬量及び濃度でレシピエントに対して非毒性であり、リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸などの緩衝剤、アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化物質、防腐剤（塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム、塩化ヘキサメトニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、フェノール、ブチル、もしくはベンジルアルコール、メチルもしくはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、３−ペンタノール、及びｍ−クレゾールなど）、低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド、血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリンなどのタンパク質、ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、もしくはリジンなどのアミノ酸、単糖類、二糖類、及びグルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含む他の炭水化物、ＥＤＴＡなどのキレート剤、スクロース、マンニトール、トレハロース、もしくはソルビトールなどの糖類、ナトリウムなどの塩形成対イオン、金属複合体（例えば、Ｚｎ−タンパク質複合体）、ならびに／またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤を含むが、これらに限定されない。本明細書における例示的な薬学的に許容される担体は、可溶性の中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）、例えば、ｒＨｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）、Ｂａｘｔｅｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．）などのヒト可溶性ＰＨ−２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質などの介在性薬物分散剤をさらに含む。ｒＨｕＰＨ２０を含むある特定の例示的なｓＨＡＳＥＧＰ及び使用方法は、米国特許公開第２００５／０２６０１８６号及び同第２００６／０１０４９６８号に記載されている。一態様では、ｓＨＡＳＥＧＰは、コンドロイチナーゼなどの１つ以上のさらなるグリコサミノグリカナーゼと組み合わせられる。
【０２３１】
例示的な凍結乾燥抗体製剤は、米国特許第６，２６７，９５８号に記載されている。水性抗体製剤は、米国特許第６，１７１，５８６号及びＷＯ２００６／０４４９０８に記載されるものを含み、後者の製剤は、ヒスチジン−アセテート緩衝剤を含む。
【０２３２】
本明細書の製剤は、治療されている特定の適応症に対して必要な２つ以上の活性化合物、好ましくは、互いに悪影響を及ぼさない相補的活性を有する活性化合物を含有してもよい。例えば、抗ＣＬＬ−１抗体に加えて、１つの製剤中に、追加の抗体、例えば、ＣＬＬ−１ポリペプチド上で異なるエピトープと結合する第２の抗ＣＬＬ−１抗体、または特定の癌の成長に影響を及ぼす成長因子などのいくつかの他の標的に対する抗体を含むことが望ましい場合がある。代替的に、または加えて、組成物は、化学治療剤、細胞傷害性薬剤、サイトカイン、成長阻害剤、抗ホルモン剤、及び／または心臓保護剤をさらに含んでもよい。かかる分子は、意図される目的に有効な量で組み合わさって存在することが好適である。
【０２３３】
活性成分は、例えば、コアセルベーション技法または界面重合によって調製されたマイクロカプセル、例えば、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチン−マイクロカプセル及びポリ−（メチルメタクリレート）マイクロカプセル中に、コロイド薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子、及びナノカプセル）中に、またはマクロエマルジョン中に封入され得る。かかる技法は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０）に開示されている。
【０２３４】
徐放性調製物が調製され得る。徐放性調製物の好適な例には、抗体を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが含まれ、これらのマトリックスは、成形物品、例えば、フィルム、またはマイクロカプセルの形態である。
【０２３５】
インビボ投与に使用される製剤は、一般的に、滅菌のものである。滅菌性は、例えば、滅菌濾過膜を介する濾過によって容易に達成され得る。
【０２３６】
Ｇ．治療方法及び組成物
本明細書に提供される抗ＣＬＬ−１抗体（例えば、抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体）のうちのいずれかが、治療方法において使用され得る。
【０２３７】
一態様では、薬剤として使用するための抗ＣＬＬ−１抗体（例えば、抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体）が提供される。さらなる態様では、細胞増殖性障害（例えば、癌及び／またはＡＭＬ）の治療またはその進行の遅延において使用するための抗ＣＬＬ−１抗体（例えば、抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体）が提供される。ある特定の実施形態では、治療方法において使用するための抗ＣＬＬ−１抗体（例えば、抗ＣＬＬ−１／抗ＣＤ３二重特異性抗体）が提供される。ある特定の実施形態では、本発明は、有効量の抗ＣＬＬ−１抗体（例えば、抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体）を個体に投与することを含む、細胞増殖性障害を有する個体を治療する方法において使用するための抗ＣＬＬ−１抗体（例えば、抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体）を提供する。１つのかかる実施形態では、本方法は、例えば、以下に記載されるような、有効量の少なくとも１つの追加の治療剤を個体に投与することをさらに含む。さらなる実施形態では、本発明は、細胞増殖性障害（例えば、ＡＭＬ）を有する個体の免疫機能の増強において使用するための抗ＣＬＬ−１抗体（例えば、抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体）を提供する。ある特定の実施形態では、本発明は、エフェクター細胞（例えばＴ細胞、例えばＣＤ８＋及び／またはＣＤ４＋Ｔ細胞）を活性化する、エフェクター細胞集団を拡張する（増加させる）、及び／または標的細胞（例えば、標的細胞）を死滅させるために有効である抗ＣＬＬ−１抗体（例えば、抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体）を個体に投与することを含む、細胞増殖性障害（例えば、ＡＭＬ）を有する個体の免疫機能を増強する方法において使用するための抗ＣＬＬ−１抗体（例えば、抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体）を提供する。上記の実施形態のうちのいずれかによる「個体」は、ヒトであり得る。
【０２３８】
さらなる態様では、本発明は、薬剤の製造または調製における抗ＣＬＬ−１抗体（例えば抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体））の使用を提供する。一実施形態では、薬剤は、細胞増殖性障害（例えば、癌及び／またはＡＭＬ）の治療のためのものである。さらなる実施形態では、薬剤は、細胞増殖性障害（例えば、ＡＭＬ）を有する個体に有効量の薬剤を投与することを含む、細胞増殖性障害（例えば、ＡＭＬ）を治療する方法において使用するためのものである。１つのかかる実施形態では、本方法は、例えば、以下に記載されるような、有効量の少なくとも１つの追加の治療剤を個体に投与することをさらに含む。さらなる実施形態では、薬剤は、個体中の、エフェクター細胞（例えばＴ細胞、例えばＣＤ８＋及び／またはＣＤ４＋Ｔ細胞）を活性化する、エフェクター細胞集団を拡張する（増加させる）、及び／または標的細胞（例えば、標的細胞）を死滅させるためのものである。さらなる実施形態では、薬剤は、エフェクター細胞（例えばＴ細胞、例えばＣＤ８＋及び／またはＣＤ４＋Ｔ細胞）を活性化する、エフェクター細胞集団を拡張する（増加させる）、及び／または標的細胞（例えば、標的細胞）を死滅させるために有効な量の薬剤を個体に投与することを含む、細胞増殖性障害（例えば、ＡＭＬ）または自己免疫性障害を有する個体の免疫機能を増強する方法において使用するためのものである。上記の実施形態のうちのいずれかによる「個体」は、ヒトであり得る。
【０２３９】
さらなる態様では、本発明は、細胞増殖性障害（例えば、癌及び／またはＡＭＬ）を治療するための方法を提供する。一実施形態では、本方法は、かかる細胞増殖性障害（例えば、ＡＭＬ）を有する個体に有効量の抗ＣＬＬ−１抗体（例えば、抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体）を投与することを含む。１つのかかる実施形態では、本方法は、例えば、以下に記載されるような、有効量の少なくとも１つの追加の治療剤を個体に投与することをさらに含む。上記の実施形態のうちのいずれかによる「個体」は、ヒトであり得る。
【０２４０】
さらなる態様では、本発明は、細胞増殖性障害（例えば、ＡＭＬ）を有する個体において、細胞増殖性障害（例えば、ＡＭＬ）を有する個体の免疫機能を増強するための方法を提供する。一実施形態では、本方法は、個体に有効量の抗ＣＬＬ−１抗体（例えば、抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体）を投与して、エフェクター細胞（例えばＴ細胞、例えばＣＤ８＋及び／またはＣＤ４＋Ｔ細胞）を活性化する、エフェクター細胞集団を拡張する（増加させる）、及び／または標的細胞（例えば、標的細胞）を死滅させることを含む。一実施形態では、「個体」は、ヒトである。
【０２４１】
本発明の抗ＣＬＬ−１抗体（例えば、抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体）は、例えば、インビトロ、エクスビボ、及びインビボ治療方法において使用され得る。一態様では、本発明は、インビボまたはインビトロのいずれかで、細胞成長または増殖を阻害するための方法を提供し、本方法は、ＣＬＬ−１への結合を許容する条件下で、細胞をその抗ＣＬＬ−１抗体に曝露することを含む。「細胞成長または増殖を阻害すること」とは、細胞の成長または増殖を、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または１００％減少させることを意味し、細胞死の誘発を含む。ある特定の実施形態では、細胞は、腫瘍細胞である。さらなる実施形態では、細胞は、単球、顆粒球、及び／または単球／顆粒球系列の前駆細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、ＦＬＴ３遺伝子内縦列反復の存在について陽性である。いくつかの実施形態では、細胞は、ＭＬＬ−ＡＦ９融合遺伝子（例えば、ＭＬＬ−ＡＦ９転座）の存在について陽性である。いくつかの実施形態では、細胞は、染色体１１ｑ２３転座の存在について陽性である。いくつかの実施形態では、細胞は、転座ｔ（９；１１）（ｐ２２；ｑ２３）の存在について陽性について陽性である。
【０２４２】
本明細書に提供される抗ＣＬＬ−１抗体（例えば、抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体）のうちのいずれかが、方法、例えば、治療方法において使用され得る。
【０２４３】
一態様では、本明細書に提供される抗ＣＬＬ−１抗体（例えば、抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体）は、ＣＬＬ−１陽性細胞の増殖（ＣＬＬ−１陽性細胞増殖性障害の阻害方法において使用され、本方法は、細胞を、細胞の表面上のＣＬＬ−１への抗ＣＬＬ−１抗体（例えば、抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体）の結合を許容する条件下で、抗ＣＬＬ−１抗体（例えば、抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体）に曝露し、それによって細胞の増殖を阻害することを含む。ある特定の実施形態では、本方法は、インビトロ方法またはインビボ方法である。さらなる実施形態では、細胞は、単球、顆粒球、及び／または単球／顆粒球系列の前駆細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、ＦＬＴ３遺伝子内縦列反復の存在について陽性である。いくつかの実施形態では、細胞は、ＭＬＬ−ＡＦ９融合遺伝子（例えば、ＭＬＬ−ＡＦ９転座）の存在について陽性である。いくつかの実施形態では、細胞は、染色体１１ｑ２３転座の存在について陽性である。いくつかの実施形態では、細胞は、転座ｔ（９；１１）（ｐ２２；ｑ２３）の存在について陽性について陽性である。
【０２４４】
インビトロでの細胞増殖の阻害は、Ｐｒｏｍｅｇａ（Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）から市販されている、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙアッセイを使用してアッセイされてもよい。そのアッセイは、代謝的に活性な細胞を示す、存在するＡＴＰの定量に基づいて、培養物中の生存細胞の数を決定する。Ｃｒｏｕｃｈ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．１６０：８１−８８、米国特許  第６６０２６７７号を参照されたい。アッセイは、自動化高処理スクリーニング（ＨＴＳ）に適した９６ウェルまたは３８４ウェル形式で行われてもよい。Ｃｒｅｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）ＡｎｔｉＣａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇｓ６：３９８−４０４を参照されたい。アッセイ手順は、単一の試薬（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）試薬）を培養細胞に直接添加することを伴う。これにより、細胞溶解及びルシフェラーゼ反応によって生み出される発光シグナルの生成がもたらされる。発光シグナルは、培養物中に存在する生存細胞の数に直接比例する、存在するＡＴＰの量に比例する。データは、ルミノメーターまたはＣＣＤカメラ画像化デバイスによって記録することができる。発光出力は、相対発光量（ＲＬＵ）として表される。
【０２４５】
別の態様では、薬剤として使用するための抗ＣＬＬ−１抗体（例えば、抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体）が提供される。さらなる態様では、治療方法において使用するための抗ＣＬＬ−１抗体（例えば、抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体）が提供される。ある特定の実施形態では、細胞増殖性障害（例えば、ＣＬＬ−１陽性癌）の治療において使用するための抗ＣＬＬ−１抗体（例えば、抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体）が提供される。ある特定の実施形態では、本発明は、細胞増殖性障害（例えば、ＣＬＬ−１陽性癌）を有する個体を治療する方法において使用するための抗ＣＬＬ−１抗体（例えば、抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体）を提供し、本方法は、有効量の抗ＣＬＬ−１抗体（例えば、抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体）を個体に投与することを含む。１つのかかる実施形態では、本方法は、例えば、以下に記載されるような、有効量の少なくとも１つの追加の治療剤を個体に投与することをさらに含む。
【０２４６】
さらなる態様では、本発明は、薬剤の製造または調製における抗ＣＬＬ−１抗体（例えば抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体）の使用を提供する。一実施形態では、薬剤は、細胞増殖性障害（例えば、ＣＬＬ−１陽性癌）の治療のためのものである。いくつかの実施形態では、癌は、ＡＭＬである。さらなる実施形態では、薬剤は、細胞増殖性障害（例えば、ＣＬＬ−１陽性癌）の治療方法において使用するためのものであり、本方法は、ＣＬＬ−１陽性癌を有する個体に有効量の薬剤を投与することを含む。１つのかかる実施形態では、本方法は、例えば、以下に記載されるような、有効量の少なくとも１つの追加の治療剤を個体に投与することをさらに含む。
【０２４７】
さらなる態様では、本発明は、ＣＬＬ−１陽性癌を治療するための方法を提供する。一実施形態では、本方法は、かかるＣＬＬ−１陽性癌を有する個体に有効量の抗ＣＬＬ−１抗体（例えば、抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体）を投与することを含む。１つのかかる実施形態では、本方法は、以下に記載されるような、有効量の少なくとも１つの追加の治療剤を個体に投与することをさらに含む。
【０２４８】
上記の実施形態のいずれかによる細胞増殖性障害（例えば、ＣＬＬ−１陽性癌）は、例えば、ＣＬＬ−１陽性ＡＭＬ、ＣＬＬ−１陽性慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、ＣＬＬ−１陽性骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、ＣＬＬ−１陽性慢性骨髄単球性白血病、ＣＬＬ−１陽性ＡＰＬ、ＣＬＬ−１陽性慢性骨髄増殖性障害、ＣＬＬ−１陽性血小板性白血病、ＣＬＬ−１陽性ｐｒｅ−Ｂ−ＡＬＬ、ＣＬＬ−１陽性ｐｒｅＴ−ＡＬＬ、ＣＬＬ−１陽性多発性骨髄腫、ＣＬＬ−１陽性肥満細胞疾患、ＣＬＬ−１陽性肥満細胞性白血病、ＣＬＬ−１陽性肥満細胞肉腫、ＣＬＬ−１陽性骨髄性肉腫、ＣＬＬ−１陽性リンパ性白血病、及びＣＬＬ−１陽性未分化白血病であり得る。いくつかの実施形態では、ＣＬＬ−１陽性癌は、「０」超の抗ＣＬＬ−１免疫組織化学（ＩＨＣ）またはｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）スコアを受ける癌であり、それは、実施例Ｂにおいて本明細書に記載される条件下での、９０％超の腫瘍細胞の非常に弱い染色または無染色に対応する。別の実施形態では、ＣＬＬ−１陽性癌は、実施例Ｂにおいて本明細書に記載される条件下で定義されるように、１＋、２＋、または３＋レベルでＣＬＬ−１を発現する。いくつかの実施形態では、ＣＬＬ−１陽性癌は、ＣＬＬ−１  ｍＲＮＡを検出する逆転写酵素ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）アッセイに従ってＣＬＬ−１を発現する癌である。いくつかの実施形態では、ＲＴ−ＰＣＲは、定量ＲＴ−ＰＣＲである。
【０２４９】
いくつかの実施形態では、上記の実施形態のいずれかによる細胞増殖性障害は、例えば、ＡＭＬ、ＣＭＬ、及び／またはＭＤＳであり得る。いくつかの実施形態では、ＣＬＬ−１陽性細胞増殖性障害は、ＣＬＬ−１陽性ＡＭＬ、ＣＬＬ−１陽性ＣＭＬ、ＣＬＬ−１陽性ＭＤＳである。いくつかの実施形態では、ＡＭＬは、ＡＭＬサブタイプ１、ＡＭＬサブタイプ２、ＡＭＬサブタイプ３、ＡＭＬサブタイプ４、ＡＭＬサブタイプ５、ＡＭＬサブタイプ６、及びＡＭＬサブタイプ７のうちの１つ以上である。いくつかの実施形態では、ＡＭＬは、ＡＭＬサブタイプ３（急性前骨髄球性白血病、ＡＰＭＬ）である。いくつかの実施形態では、ＡＭＬは、ＡＭＬサブタイプ１、ＡＭＬサブタイプ２、ＡＭＬサブタイプ４、ＡＭＬサブタイプ５、ＡＭＬサブタイプ６、及びＡＭＬサブタイプ７のうちの１つ以上であり、かつＡＭＬサブタイプ３ではない。
【０２５０】
いくつかの実施形態では、細胞増殖性障害（例えば、ＣＬＬ−１陽性癌及び／またはＡＭＬ）は、ＦＬＴ３、ヌクレオフォスミン（ＮＰＭ１）、ＣＣＡＡＴ／エンハンサー結合タンパク質アルファ（Ｃ／ＥＢＰα）（ＣＥＢＰＡ）、及び／またはｃ−ＫＩＴにおける突然変異の存在について陽性である。いくつかの実施形態では、細胞増殖性障害（例えば、ＣＬＬ−１陽性癌及び／またはＡＭＬ）は、ＦＬＴ３遺伝子内縦列反復の存在について陽性である。いくつかの実施形態では、細胞増殖性障害（例えば、ＣＬＬ−１陽性癌及び／またはＡＭＬ）は、ＦＬＴ３チロシンキナーゼドメイン点突然変異の存在について陽性である。いくつかの実施形態では、細胞増殖性障害（例えば、ＣＬＬ−１陽性癌及び／またはＡＭＬ）は、イソクエン酸デヒドロゲナーゼ１及び／または２（ＩＤＨ１及び／またはＩＤＨ２）における突然変異の存在について陽性である。いくつかの実施形態では、細胞増殖性障害（例えば、ＣＬＬ−１陽性癌及び／またはＡＭＬ）は、ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ３Ａ（ＤＮＭＴ３Ａ）における突然変異の存在について陽性である。いくつかの実施形態では、細胞増殖性障害（例えば、ＣＬＬ−１陽性癌及び／またはＡＭＬ）は、（ａ）ＮＰＭ１及びＦＬＴ３における突然変異、（ｂ）野生型ＮＰＭ１及び突然変異ＦＬＴ３、ならびに／または（ｃ）野生型ＮＰＭ１及びＦＬＴ３の存在についてＮＫ−ＡＭＬ陽性である。
【０２５１】
いくつかの実施形態では、細胞増殖性障害（例えば、ＣＬＬ−１陽性癌及び／またはＡＭＬ）は、ｔ（１５；１７）、ｔ（８；２１）、ｉｎｖ（１６）、ｔ（１６；１６）、ｔ（９；１１）（ｐ２２；ｑ２３）、ｔ（６；９）（ｐ２３；ｑ３４）、ｉｎｖ（３）（ｑ２１  ｑ２６．２）、ｉｎｖ（３；３）（ｑ２１；ｑ２６．２）、ｔ（１；２２）（ｐ１３；ｑ１３）、ｔ（８；２１）（ｑ２２；ｑ２２）、ｉｎｖ（１６）（ｐ１３；１ｑ２２）、ｔ（１６；１６）（ｐ１３．１；ｑ２２）、及び／またはｔ（１５；１７）（ｑ２２；ｑ１２）のうちの１つ以上などの陽性細胞遺伝学的異常である。いくつかの実施形態では、細胞増殖性障害（例えば、ＣＬＬ−１陽性癌及び／またはＡＭＬ）は、ＭＬＬ−ＡＦ９融合遺伝子（例えば、ＭＬＬ−ＡＦ９転座）の存在について陽性である。いくつかの実施形態では、細胞増殖性障害（例えば、ＣＬＬ−１陽性癌及び／またはＡＭＬ）は、染色体１１ｑ２３転座の存在について陽性である。いくつかの実施形態では、細胞増殖性障害（例えば、ＣＬＬ−１陽性癌）は、転座ｔ（９；１１）（ｐ２２；ｑ２３）の存在について陽性である細胞増殖性障害（例えば、ＣＬＬ−１陽性癌及び／またはＡＭＬ）である。
【０２５２】
いくつかの実施形態では、抗ＡＭＬ抗体薬物複合体に抵抗性及び／または耐性の細胞増殖性障害（（例えば、ＣＬＬ−１陽性癌及び／またはＡＭＬ）。いくつかの実施形態では、抗ＡＭＬ抗体薬物複合体は、抗ＣＤ３３抗体薬物複合体、抗ＣＬＬ１抗体薬物複合体、及び／または抗ＣＤ１２３抗体薬物複合体である。いくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ−１抗体薬物複合体は、抗ＣＬＬ−１抗体薬物複合体（例えば、抗ＣＬＬ−１ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）抗体薬物抱合体）である。いくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ−１抗体薬物抱合体は、抗ＣＤ３３抗体薬物複合体（例えば、抗ＣＤ３３ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）抗体薬物抱合体）である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１２３抗体薬物抱合体は、抗ＣＤ１２３抗体薬物抱合体（例えば、抗ＣＤ１２３ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）抗体薬物抱合体）である。いくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ−１抗体薬物複合体は、Ｕ．Ｓ．８，０８８，３７８及び／またはＵＳ２０１４／００３０２８０のうちのいずれか１つに記載されており、これらは参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
【０２５３】
上記の実施形態のうちのいずれかによる「個体」は、ヒトであり得る。
【０２５４】
さらなる態様では、本発明は、例えば、上記の治療方法のうちのいずれかにおいて使用するために、本明細書に提供される抗ＣＬＬ−１抗体（例えば、抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体）のうちのいずれかを含む、薬学的製剤を提供する。一実施形態では、薬学的製剤は、本明細書に提供される抗ＣＬＬ−１抗体のいずれかと薬学的に許容される担体とを含む。別の実施形態では、薬学的製剤は、本明細書に提供される抗ＣＬＬ−１抗体（例えば、抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体）のうちのいずれか、及び、例えば、以下に記載される少なくとも１つの追加の治療剤を含む。
【０２５５】
使用される方法のうちのいずれか及び／または本明細書に記載の薬学的製剤のいくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体は治療誘発療法として使用され得る。使用される方法のうちのいずれか及び／または本明細書に記載の薬学的製剤のいくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体は強化療法として使用され得る。使用される方法のうちのいずれか及び／または本明細書に記載の薬学的製剤のいくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体はサルベージ療法として使用され得る。
【０２５６】
本明細書に記載される抗体（例えば、抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体）は、療法において、単独で、または他の薬剤との組み合わせのいずれかで使用され得る。例えば、本明細書に記載される抗体（例えば、抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体）は、少なくとも１つの追加の治療剤と同時投与され得る。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、アントラサイクリンである。いくつかの実施形態では、アントラサイクリンは、ダウノルビシンまたはイダルビシンである。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、シタラビンである。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、クラドリビンである。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、フルダラビンまたはトポテカンである。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、５−アザシチジンまたはデシタビンまたはグアデシタビンなどの低メチル化剤である。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、ＡＴＲＡ（全トランス型レチノイン酸）である。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、三酸化ヒ素（トリセノックスとしても知られる）である。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、ダウノルビシン塩酸塩（セルビジンまたはルビドマイシンとしても知られる）である。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、シクロホスファミド（クラフェン、シトキサン、またはネオサールとしても知られる）である。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、シタラビン（シトサール（ｃｙｔｏｓａｒ）−ｕ、タラビンｐｆｓ、またはＡｒａ−Ｃとしても知られる）である。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、ドキソルビシン塩酸塩である。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、イダルビシン塩酸塩（イダマイシンとしても知られる）である。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、チオグアニン（タブロイドとしても知られる）である。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、硫酸ビンクリスチン（ビンカサール（ｖｉｎｃａｓａｒ）ｐｆｓとしても知られる）である。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、サパシタビンである。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、ラロムスチンである。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、ティピファニブである。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、ボルテゾミブ（ＶＥＬＣＡＤＥとしても知られる）である。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、ヒドロキシ尿素である。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、エトポシドである。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、ミトキサントロンである。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、クロファラビンである。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、ヒドロキシ尿素である。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、キザルチニブまたはミドスタウリンなどのＦＬＴ３阻害剤である。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、抗癌キノロン誘導体である。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、ボサロキシンである。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、ＩＤＨ１阻害剤またはＩＤＨ２阻害剤である。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、ＣＨＫ１阻害剤である。いくつかの実施形態では、ＣＨＫ１阻害剤は、ＧＤＣ−０５７５である。いくつかの実施形態では、追��の治療剤は、ボラセルチブなどのＰｌｋ阻害剤である。
【０２５７】
本方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、追加の治療剤は、ＢＣＬ２阻害剤である。いくつかの実施形態では、ＢＣＬ２阻害剤は、ベネトクラクスである。
【０２５８】
本方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、追加の治療剤は、後成的修飾剤（ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃ  ｍｏｄｉｆｉｅｒ）である。いくつかの実施形態では、後成的修飾剤は、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤である。いくつかの実施形態では、後成的修飾剤は、ＤＮＡメチルトランスフェラーゼＩ阻害剤である。いくつかの実施形態では、後成的修飾剤は、ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤である。いくつかの実施形態では、後成的修飾剤は、ＢＥＴ阻害剤である。いくつかの実施形態では、ＢＥＴ阻害剤は、第１のブロモドメイン（ＢＤ１）を選択的に標的とする。いくつかの実施形態では、ＢＥＴ阻害剤は、第２のブロモドメイン（ＢＤ２）を選択的に標的とする。いくつかの実施形態では、ＢＥＴ阻害剤は、ＧＳＫ１２１０１５１Ａ、ＧＳＫ５２５７６２、ＯＴＸ−０１、ＴＥＮ−０１０、ＣＰＩ−２０３、及びＣＰＩ−０６１０のうちの１つ以上である。
【０２５９】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体（例えば、抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体）は、化学治療剤と同時投与され得る。いくつかの実施形態では、化学治療剤は、シタラビン、ダウノルビシン塩酸塩、及びエトポシドである。いくつかの実施形態では、化学治療剤は、ダウノルビシン塩酸塩及びシタラビンである。いくつかの実施形態では、化学治療剤は、フルダラ及びオフォルタである。いくつかの実施形態では、化学治療剤は、シタラビン及びアントラサイクリンである。いくつかの実施形態では、アントラサイクリンは、ダウノルビシン、イダルビシン、ドキソルビシン、またはエピルビシンである。いくつかの実施形態では、化学治療剤は、ミトキサントロン、エトポシド、及びシタラビンである。いくつかの実施形態では、化学治療剤は、シタラビン、アントラサイクリン、及びクロファラビンである。
【０２６０】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体（例えば、抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体）は、化学治療剤及び顆粒球コロニー刺激因子と同時投与され得る。いくつかの実施形態では、化学治療剤は、フルダラビン及びシタラビンである。いくつかの実施形態では、化学治療剤は、フルダラビン、シタラビン、及びイダルビシンである。
【０２６１】
いくつかの実施形態では、本方法は、追加の療法をさらに含み得る。追加の療法は、放射線療法、手術、化学療法、遺伝子療法、ＤＮＡ療法、ウイルス療法、ＲＮＡ療法、免疫療法、骨髄移植、ナノ療法、モノクローナル抗体療法、または前述のものの組み合わせであってもよい。追加の療法は、アジュバント療法またはネオアジュバント療法の形態であり得る。いくつかの実施形態では、追加の療法は、小分子酵素阻害剤または抗転移薬の投与である。いくつかの実施形態では、追加の療法は、副作用制限剤（例えば、治療の副作用の発生及び／または重症度を軽減するよう意図された薬剤、例えば、制嘔吐剤など）の投与である。いくつかの実施形態では、追加の療法は、放射線療法である。いくつかの実施形態では、追加の療法は、手術である。いくつかの実施形態では、追加の療法は、放射線療法と手術との組み合わせである。いくつかの実施形態では、追加の療法は、ガンマ照射である。いくつかの実施形態では、追加の療法は、幹細胞移植である。いくつかの実施形態では、追加の療法は、上述の治療剤のうちの１つ以上の別個の投与であってもよい。
【０２６２】
本方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、追加の治療剤は、グルココルチコイドである。いくつかの実施形態では、グルココルチコイドは、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、コルチゾン、プレドニゾロン、プレドニゾン、メチルプレドニゾン、トリアムシノロン、パラメタゾン、ベタメタゾン、フルドロコルチゾン、ならびにそれらの薬学的に許容されるエステル、塩、及び複合体からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、グルココルチコイドはデキサメタゾンである。いくつかの実施形態では、グルココルチコイドは、デキサメタゾンの薬学的に許容されるエステル、塩、または複合体である。いくつかの実施形態では、グルココルチコイドは、プレドニゾンである。
【０２６３】
いくつかの実施形態では、追加の療法は、抗ＡＭＬ抗体薬物複合体をさらに含む。いくつかの実施形態では、抗ＡＭＬ抗体薬物複合体は、抗ＣＤ３３抗体薬物複合体、抗ＣＬＬ１抗体薬物複合体、及び／または抗ＣＤ１２３抗体薬物複合体である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３３抗体薬物複合体は、ゲムツズマブオゾガマイシン（ＭＹＬＯＴＡＲＧとしても知られる）である。いくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ−１抗体薬物複合体は、抗ＣＬＬ−１抗体薬物複合体（例えば、抗ＣＬＬ−１ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）抗体薬物抱合体）である。いくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ−１抗体薬物抱合体は、抗ＣＤ３３抗体薬物複合体（例えば、抗ＣＤ３３ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）抗体薬物抱合体）である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３３抗体薬物複合体は、バダツキシマブタリリン（ｖａｄａｓｔｕｘｉｍａｂ  ｔａｌｉｒｉｎｅ）（ＳＧＮ−ＣＤ３３Ａとしても知られる）である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１２３抗体薬物抱合体は、抗ＣＤ１２３抗体薬物抱合体（例えば、抗ＣＤ１２３ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）抗体薬物抱合体）である。いくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ−１抗体薬物複合体は、Ｕ．Ｓ．８，０８８，３７８及び／またはＵＳ２０１４／００３０２８０のうちのいずれか１つに記載されており、これらは参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
【０２６４】
本方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、追加の療法は、癌免疫療法を含む。本方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、癌免疫療法は、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストを含む。本方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、癌免疫療法は、ＰＤ−１結合アンタゴニストを含む。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、抗ＰＤ−１抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ヒトＰＤ−１に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ＭＤＸ−１１０６（（ＢＭＳ−９３６５５８／ＯＮＯ−４５３８、ニボルマブ、またはＯＰＤＩＶＯとしても知られる）である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ＭＫ−３４７５（ＳＣＨ  ９００４７５、ペムブロリズマブ、ランブロリズマブ、またはＫＥＹＴＲＵＤＡとしても知られる）である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ピジリズマブ（ＣＴ−０１１としても知られる）である。
【０２６５】
本方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、癌免疫療法は、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストを含む。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ヒトＰＤ−Ｌ１に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、モノクローナル抗体である。本明細書に記載される方法に使用され得る抗ＰＤ−Ｌ１抗体の例は、ＰＣＴ特許出願第ＷＯ２０１０／０７７６３４Ａ１号及び米国特許第８，２１７，１４９号に記載されており、これらは参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。本明細書に記載される方法に使用され得る抗ＰＤ−Ｌ１抗体のさらなる例は、ＰＣＴ特許出願第ＷＯ２００７／００５８７４号、ＷＯ２０１１／０６６３８９、及びＵＳ２０１３／０３４５５９に記載されており、これらは参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
【０２６６】
いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＰＤ−Ｌ１とＰＤ−１及び／またはＰＤ−Ｌ１とＢ７−１との間の結合を阻害することができる。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、及び（Ｆａｂ’）２断片からなる群から選択される抗体断片である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ヒト化抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ヒト抗体である。
【０２６７】
ＷＯ２０１０／０７７６３４Ａ１及びＵＳ８，２１７，１４９に記載される抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、本明細書に記載される方法において使用され得る。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＢＭＳ−９３６５５９である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＭＥＤＩ４７３６である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＭＰＤＬ３２８０Ａ（ＣＡＳ登録番号１３８０７２３−４４−３）である。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、配列番号９４の重鎖可変領域配列及び配列番号９５の軽鎖可変領域配列を含む。なおもさらなる実施形態では、重鎖可変領域及び／または軽鎖可変領域配列を含む単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体が提供され、
（ａ）該重鎖配列は、重鎖配列：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＳＷＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＷＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＨＷＰＧＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号９４）に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有し、
（ｂ）該軽鎖配列は、軽鎖配列：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＬＹＨＰＡＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号９５）に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。
【０２６８】
一実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３配列を含む重鎖可変領域を含み、
（ａ）該ＨＶＲ−Ｈ１配列は、ＧＦＴＦＳＸ１ＳＷＩＨ（配列番号９６）であり、
（ｂ）該ＨＶＲ−Ｈ２配列は、ＡＷＩＸ２ＰＹＧＧＳＸ３ＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号９７）であり、
（ｃ）該ＨＶＲ−Ｈ３配列は、ＲＨＷＰＧＧＦＤＹ（配列番号９８）であり、
さらに、配列中、Ｘ１は、ＤまたはＧであり、Ｘ２は、ＳまたはＬであり、Ｘ３は、ＴまたはＳである。
【０２６９】
一態様では、Ｘ１は、Ｄであり、Ｘ２は、Ｓであり、Ｘ３は、Ｔであり、そのため、
（ａ）ＨＶＲ−Ｈ１配列は、ＧＦＴＦＳＤＳＷＩＨ（配列番号９９）であり、
（ｂ）ＨＶＲ−Ｈ２配列は、ＡＷＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１００）であり、
（ｃ）ＨＶＲ−Ｈ３配列は、ＲＨＷＰＧＧＦＤＹ（配列番号９８）である。
【０２７０】
別の態様では、重鎖ポリペプチドは、ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む可変領域軽鎖とさらに組み合わされ、
（ａ）該ＨＶＲ−Ｌ１配列は、ＲＡＳＱＸ４Ｘ５Ｘ６ＴＸ７Ｘ８Ａ（配列番号１０１）であり、
（ｂ）該ＨＶＲ−Ｌ２配列は、ＳＡＳＸ９ＬＸ１０Ｓ（配列番号１０２）であり、
（ｃ）該ＨＶＲ−Ｌ３配列は、ＱＱＸ１１Ｘ１２Ｘ１３Ｘ１４ＰＸ１５Ｔ（配列番号１０３）であり、
配列中、Ｘ４は、ＤまたはＶであり、Ｘ５は、ＶまたはＩであり、Ｘ６は、ＳまたはＮであり、Ｘ７は、ＡまたはＦであり、Ｘ８は、ＶまたはＬであり、Ｘ９は、ＦまたはＴであり、Ｘ１０は、ＹまたはＡであり、Ｘ１１は、Ｙ、Ｇ、Ｆ、またはＳであり、Ｘ１２は、Ｌ、Ｙ、Ｆ、またはＷであり、Ｘ１３は、Ｙ、Ｎ、Ａ、Ｔ、Ｇ、Ｆ、またはＩであり、Ｘ１４は、Ｈ、Ｖ、Ｐ、Ｔ、またはＩであり、Ｘ１５は、Ａ、Ｗ、Ｒ、Ｐ、またはＴである。なおもさらなる態様では、Ｘ４は、Ｄであり、Ｘ５は、Ｖであり、Ｘ６は、Ｓであり、Ｘ７はＡであり、Ｘ８は、Ｖであり、Ｘ９は、Ｆであり、Ｘ１０は、Ｙであり、Ｘ１１は、Ｙであり、Ｘ１２は、Ｌであり、Ｘ１３は、Ｙであり、Ｘ１４は、Ｈであり、Ｘ１５は、Ａであり、そのため、
（ａ）ＨＶＲ−Ｌ１配列は、ＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡ（配列番号１０４）であり、
（ｂ）ＨＶＲ−Ｌ２配列は、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１０５）であり、
（ｃ）ＨＶＲ−Ｌ３配列は、ＱＱＹＬＹＨＰＡＴ（配列番号１０６）である。
【０２７１】
したがって、ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、以下のＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２及びＨＶＲ−Ｈ３配列を含む重鎖可変領域を含み、以下のＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３配列を含む軽鎖可変領域を含む：
（ａ）ＨＶＲ−Ｈ１配列は、ＧＦＴＦＳＤＳＷＩＨ（配列番号９９）であり、
（ｂ）ＨＶＲ−Ｈ２配列は、ＡＷＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１００）であり、
（ｃ）ＨＶＲ−Ｈ３配列は、ＲＨＷＰＧＧＦＤＹ（配列番号９８）であり、
（ｄ）ＨＶＲ−Ｌ１配列は、ＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡ（配列番号１０４）であり、
（ｅ）ＨＶＲ−Ｌ２配列は、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１０５）であり、
（ｆ）ＨＶＲ−Ｌ３配列は、ＱＱＹＬＹＨＰＡＴ（配列番号１０６）である。
【０２７２】
本方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、癌免疫療法は、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストを含む。いくつかの実施形態では、癌免疫療法は、ＰＤ−Ｌ２／ＩｇＧ１融合タンパク質（ＡＭＰ−２２４）を含む。
【０２７３】
いくつかの実施形態では、癌免疫療法は、活性化共刺激分子に対して指向されるアゴニストを含む。いくつかの実施形態では、活性化共刺激分子には、ＣＤ４０、ＣＤ２２６、ＣＤ２８、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ１３７、ＣＤ２７、ＨＶＥＭ、またはＣＤ１２７が含まれ得る。いくつかの実施形態では、活性化共刺激分子に対して指向されるアゴニストは、ＣＤ４０、ＣＤ２２６、ＣＤ２８、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ１３７、ＣＤ２７、ＨＶＥＭ、またはＣＤ１２７に結合するアゴニスト抗体である。いくつかの実施形態では、癌免疫療法は、阻害性共刺激分子に対して指向されるアンタゴニストを含む。いくつかの実施形態では、阻害性共刺激分子には、ＣＴＬＡ−４（ＣＤ１５２としても知られる）、ＴＩＭ−３、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、ＬＡＧ−３、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＩＤＯ、ＴＩＧＩＴ、ＭＩＣＡ／Ｂ、またはアルギナーゼが含まれ得る。いくつかの実施形態では、阻害性共刺激分子に対して指向されるアンタゴニストは、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＭ−３、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、ＬＡＧ−３（例えば、ＬＡＧ−３−ＩｇＧ融合タンパク質（ＩＭＰ３２１））、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＩＤＯ、ＴＩＧＩＴ、ＭＩＣＡ／Ｂ、またはアルギナーゼに結合するアンタゴニスト抗体である。
【０２７４】
本方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、癌免疫療法は、ＣＴＬＡ−４（ＣＤ１５２としても知られる）阻害を含む。いくつかの実施形態では、癌免疫療法は、ＣＴＬＡ−４アンタゴニストを含む。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ−４アンタゴニストは、抗ＣＴＬＡ−４抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＣＴＬＡ−４抗体は、イピリムマブ（ＭＤＸ−０１０、ＭＤＸ−１０１、またはＹｅｒｖｏｙ（登録商標）としても知られる）である。いくつかの実施形態では、抗ＣＴＬＡ−４抗体は、トレメリムマブ（チシリムマブまたはＣＰ−６７５，２０６としても知られる）である。
【０２７５】
いくつかの実施形態では、癌免疫療法は、Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６としても知られる）に対して指向されるアンタゴニスト、例えば、遮断抗体を含む。いくつかの実施形態では、癌免疫療法は、ＭＧＡ２７１（エノビリツズマブとしても知られる）を含む。
【０２７６】
いくつかの実施形態では、癌免疫療法は、ＴＧＦベータに対して指向されるアンタゴニスト、例えば、メテリムマブ（ｍｅｔｅｌｉｍｕｍａｂ）（ＣＡＴ−１９２としても知られる）、フレソリムマブ（ｆｒｅｓｏｌｉｍｕｍａｂ）（ＧＣ１００８としても知られる）、またはＬＹ２１５７２９９を含む。本方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、癌免疫療法は、免疫アゴニストを含む。
【０２７７】
いくつかの実施形態では、追加の療法は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するＴ細胞（例えば、細胞傷害性Ｔ細胞またはＣＴＬ）（例えば、ＣＡＲ  Ｔ細胞）の養子移動を含む。いくつかの実施形態では、追加の療法は、ＷＴ１に対して指向されるＣＡＲ  Ｔ細胞を含む。いくつかの実施形態では、ＷＴ１に対して指向されるＣＡＲ  Ｔ細胞は、ＷＴ１２８ｚである。いくつかの実施形態では、追加の療法は、ＬｅＹに対して指向されるＣＡＲ  Ｔ細胞を含む。いくつかの実施形態では、追加の療法は、ＣＤ３３に対して指向されるＣＡＲ  Ｔ細胞を含む。いくつかの実施形態では、追加の療法は、ＣＤ１２３に対して指向されるＣＡＲ  Ｔ細胞を含む。いくつかの実施形態では、追加の療法は、優性陰性ＴＧＦベータ受容体、例えば、優性陰性ＴＧＦベータＩＩ型受容体を含むＴ細胞の養子移動を含む。
【０２７８】
いくつかの実施形態では、追加の療法は、ＣＤ４７に対して指向されるアンタゴニストを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７に対して指向されるアンタゴニストは、抗ＣＤ４７抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４７抗体は、Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４である。
【０２７９】
いくつかの実施形態では、追加の療法は、ＣＤ１３７（例えば、ＴＮＦＲＳＦ９、４−１ＢＢ、またはＩＬＡとしても知られる）に対して指向されるアゴニスト、例えば活性化抗体を含む。いくつかの実施形態では、追加の療法は、ウレルマブ（ｕｒｅｌｕｍａｂ）（ＢＭＳ−６６３５１３としても知られる）を含む。いくつかの実施形態では、追加の療法は、ＣＤ４０に対して指向されるアゴニスト、例えば、活性化抗体を含む。いくつかの実施形態では、追加の療法は、ＣＰ−８７０８９３またはＲＯ７００９７８９を含む。いくつかの実施形態では、追加の療法は、ＯＸ４０（ＣＤ１３４としても知られる）に対して指向されるアゴニスト、例えば、活性化抗体を含む。いくつかの実施形態では、追加の療法は、ＣＤ２７に対して指向されるアゴニスト、例えば、活性化抗体を含む。いくつかの実施形態では、追加の療法は、ＣＤＸ−１１２７（バルリルマブ（ｖａｒｌｉｌｕｍａｂ）としても知られる）を含む。いくつかの実施形態では、追加の療法は、インドールアミン−２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）に対して指向されるアンタゴニストを含む。いくつかの実施形態では、ＩＤＯアンタゴニストは、ＧＤＣ−０９１９（ＮＬＧ９１９及びＲＧ６０７８としても知られる）である。いくつかの実施形態では、ＩＤＯアンタゴニストは、１−メチル−Ｄ−トリプトファン（１−Ｄ−ＭＴとしても知られる）である。いくつかの実施形態では、ＩＤＯアンタゴニストは、ＷＯ２０１０／００５９５８（その内容は記録により本明細書に明示的に組み込まれる）に示されるＩＤＯアンタゴニストである。いくつかの実施形態では、ＩＤＯアンタゴニストは、４−（｛２−［（アミノスルホニル）アミノ］エチル｝アミノ）−Ｎ−（３−ブロモ−４−フルオロフェニル）−Ｎ’−ヒドロキシ−１，２，５−オキサジアゾール−３−カルボキシイミドアミド（例えば、ＷＯ２０１０／００５９５８の実施例２３に記載されるような）である。いくつかの実施形態では、ＩＤＯアンタゴニストは、
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である。
【０２８０】
いくつかの実施形態では、ＩＤＯアンタゴニストは、ＩＮＣＢ２４３６０である。いくつかの実施形態では、ＩＤＯアンタゴニストは、インドキシモド（Ｉｎｄｏｘｉｍｏｄ）（１−メチル−トリプロファンのＤ異性体）である。
【０２８１】
いくつかの実施形態では、追加の療法は、抗悪性腫瘍薬を含む。いくつかの実施形態では、追加の療法は、ＣＳＦ−１Ｒ（Ｍ−ＣＳＦＲまたはＣＤ１１５としても知られる）を標的とする薬剤を含む。いくつかの実施形態では、追加の療法は、抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体（ＩＭＣ−ＣＳ４またはＬＹ３０２２８５５としても知られる）を含むいくつかの実施形態では、追加の療法は、抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体ＲＧ７１５５（ＲＯ５５０９５５４またはエマクツズマブ（ｅｍａｃｔｕｚｕｍａｂ）としても知られる）を含む。いくつかの実施形態では、追加の療法は、インターフェロン、例えば、インターフェロンアルファまたはインターフェロンガンマを含む。いくつかの実施形態では、追加の療法は、ロフェロン−Ａ（組換えインターフェロンアルファ−２ａとしても知られる）を含む。いくつかの実施形態では、追加の療法は、ＧＭ−ＣＳＦ（組換えヒト顆粒球マクロファーコロニー刺激因子、ｒｈｕ  ＧＭ−ＣＳＦ、サルグラモスチム、またはＬｅｕｋｉｎｅ（登録商標）としても知られる）を含む。いくつかの実施形態では、追加の療法は、ＩＬ−２（アルデスロイキンまたはＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）としても知られる）を含む。いくつかの実施形態では、追加の療法は、ＩＬ−１２を含む。いくつかの実施形態では、追加の療法は、ＩＬ２７を含む。いくつかの実施形態では、追加の療法は、ＩＬ−１５を含む。いくつかの実施形態では、追加の療法は、ＡＬＴ−８０３を含む。いくつかの実施形態では、追加の療法は、ＧＩＴＲを標的とする抗体を含む。いくつかの実施形態では、ＧＩＴＲを標的とする抗体は、ＴＲＸ５１８である。いくつかの実施形態では、ＧＩＴＲを標的とする抗体は、ＭＫ０４１６６（Ｍｅｒｃｋ）である。
【０２８２】
いくつかの実施形態では、追加の療法は、ブルトン型チロキシンキナーゼ（ＢＴＫ）の阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、追加の療法は、イブルチニブを含む。いくつかの実施形態では、追加の療法は、イソクエン酸デヒドロゲナーゼ１（ＩＤＨ１）及び／またはイソクエン酸デヒドロゲナーゼ２（ＩＤＨ２）の阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、追加の療法は、ＡＧ−１２０（Ａｇｉｏｓ）を含む。
【０２８３】
いくつかの実施形態では、追加の療法は、癌ワクチンを含む。いくつかの実施形態では、癌ワクチンは、個別化癌ワクチンである。いくつかの実施形態では、癌ワクチンは、ペプチド癌ワクチンである。いくつかの実施形態では、ペプチド癌ワクチンは、多価長ペプチド、多ペプチド、ペプチドカクテル、ハイブリッドペプチド、またはペプチドパルス樹状細胞ワクチンである（例えば、Ｙａｍａｄａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｃｉ，１０４：１４−２１，２０１３を参照されたい）。いくつかの実施形態では、癌ワクチンは、ＤＮＡに基づく癌ワクチンである。いくつかの実施形態では、ＤＮＡに基づく癌ワクチンは、裸のＤＮＡを含む。いくつかの実施形態では、ＤＮＡに基づく癌ワクチンは、ＤＮＡをトランスフェクトされた細胞を含む。いくつかの実施形態では、細胞は、樹状細胞である。いくつかの実施形態では、癌ワクチンは、ＲＮＡに基づく癌ワクチンである。いくつかの実施形態では、ＲＮＡに基づく癌ワクチンは、ｍＲＮＡに基づく癌ワクチンである。いくつかの実施形態では、ＲＮＡに基づく癌ワクチンは、裸のＲＮＡを含む。いくつかの実施形態では、ＲＮＡに基づく癌ワクチンは、ＲＮＡをトランスフェクトされた細胞を含む。いくつかの実施形態では、ＲＮＡは、粒子上にコーティングされる。いくつかの実施形態では、ＲＮＡは、インビトロで樹状細胞にトランスフェクトされる。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、自然免疫系を刺激するために、アジュバントとして作用するように調整される。いくつかの実施形態では、癌ワクチンは、アジュバントを含む。いくつかの実施形態では、アジュバントは、ＴＬＲアゴニスト、例えば、Ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣ（Ｈｉｌｔｏｎｏｌ（登録商標）としても知られる）、ＬＰＳ、ＭＰＬ、またはＣｐＧ  ＯＤＮを含む。いくつかの実施形態では、癌ワクチンはリポソームを含む。
【０２８４】
いくつかの実施形態では、追加の療法は、ＩＬ−１０アンタゴニストを含む。いくつかの実施形態では、追加の療法は、ＩＬ−４アンタゴニストを含む。いくつかの実施形態では、追加の療法は、ＩＬ−１３アンタゴニストを含む。いくつかの実施形態では、追加の療法は、ＩＬ−１７アンタゴニストを含む。いくつかの実施形態では、追加の療法は、ＨＶＥＭアンタゴニストを含む。いくつかの実施形態では、追加の療法は、例えば、ＩＣＯＳ−Ｌの投与によるＩＣＯＳアゴニスト、またはＩＣＯＳに対して指向されるアゴニスト抗体を含む。いくつかの実施形態では、追加の療法は、ＣＸ３ＣＬ１を標的とする治療を含む。いくつかの実施形態では、追加の療法は、ＣＸＣＬ９を標的とする治療を含む。いくつかの実施形態では、追加の療法は、ＣＸＣＬ１０を標的とする治療を含む。いくつかの実施形態では、追加の療法は、ＣＣＬ５を標的とする治療を含む。いくつかの実施形態では、追加の療法は、ＬＦＡ−１またはＩＣＡＭ１アゴニストを含む。いくつかの実施形態では、追加の療法は、セレクチンアゴニストを含む。
【０２８５】
いくつかの実施形態では、追加の療法は、ＭＥＫ１（ＭＡＰ２Ｋ１としても知られる）及び／またはＭＥＫ２（ＭＡＰ２Ｋ２としても知られる）などのＭＥＫの阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、追加の療法は、コビメチニブ（ＧＤＣ−０９７３またはＸＬ−５１８としても知られる）を含む。いくつかの実施形態では、追加の療法は、トラメチニブ（Ｍｅｋｉｎｉｓｔ（登録商標））を含む。いくつかの実施形態では、追加の療法は、ビニメチニブ（ｂｉｎｉｍｅｔｉｎｉｂ）を含む。
【０２８６】
いくつかの実施形態では、追加の療法は、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）のデルタ選択的阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、追加の療法は、イデラリシブ（ＧＳ−１１０１またはＣＡＬ−１０１としても知られる）を含む。いくつかの実施形態では、追加の療法は、タセリシブ（ｔａｓｅｌｉｓｉｂ）（ＧＤＣ−００３２としても知られる）を含む。いくつかの実施形態では、追加の療法は、ＢＹＬ−７１９を含む。
【０２８７】
いくつかの実施形態では、追加の療法は、ＬＳＤ１（ＫＤＭ１Ａとしても知られる）の阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、追加の療法は、ＯＲＹ−１００１を含む。いくつかの実施形態では、追加の療法は、ＧＳＫ２８７９５５２を含む。
【０２８８】
いくつかの実施形態では、追加の療法は、ＭＤＭ２の阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、追加の療法は、ＲＧ７１１２を含む。いくつかの実施形態では、追加の療法は、イダサヌツリン（ｉｄａｓａｎｕｔｌｉｎ）（ＲＧ７３８８またはＲＯ５５０３７８１としても知られる）を含む。いくつかの実施形態では、追加の療法は、ＤＳ−３０３２ｂを含む。いくつかの実施形態では、追加の療法は、ＳＡＲ４０５８３８を含む。いくつかの実施形態では、追加の療法は、ＣＧＭ−０９７を含む。いくつかの実施形態では、追加の療法は、ＭＫ−８２４２を含む。いくつかの実施形態では、追加の療法は、ＡＭＧ−２３２を含む。
【０２８９】
いくつかの実施形態では、追加の療法は、ＢＣＬ２の阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、追加の療法は、ベネトクラクスを含む。
【０２９０】
いくつかの実施形態では、追加の療法は、ＣＨＫ１の阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、追加の療法は、ＧＤＣ−０５７５（ＡＲＲＹ−５７５としても知られる）を含む。いくつかの実施形態では、追加の療法は、ＧＤＣ−０４２５（ＲＧ７６０２としても知られる）を含む。いくつかの実施形態では、追加の療法は、ＬＹ２６０６３６８を含む。
【０２９１】
いくつかの実施形態では、追加の療法は、活性化ヘッジホッグシグナル伝達経路の阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、追加の療法は、ＥＲＩＶＥＤＧＥを含む。
【０２９２】
いくつかの実施形態では、追加の療法は、Ｔ細胞を腫瘍に動員する薬剤を含む。いくつかの実施形態では、追加の療法は、リリルマブ（ＩＰＨ２１０２／ＢＭＳ−９８６０１５）を含む。いくつかの実施形態では、追加の療法は、イデラリシブを含む。
【０２９３】
上述のかかる併用療法は、併用投与（２つ以上の治療剤が同じまたは別個の製剤中に含まれる）、及び個別投与を包含するが、この場合、ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体の投与は、追加の治療剤及び／またはアジュバントの投与の前に、それと同時に、かつ／またはその後に行われ得る。
【０２９４】
本方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、本発明の抗体（及び任意の追加の治療剤）は、非経口、肺内、及び鼻腔内、ならびに所望に応じて局所治療のための病巣内投与を含む、任意の好適な手段によって投与することができる。非経口注入には、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、または皮下投与が含まれる。投薬は、任意の好適な経路によるもの、例えば、一部、投与が短時間であるか、または長期であるかに応じて、静脈内注射または皮下注射などの注射によるものであり得る。単回投与または様々な時点にわたる複数回投与、ボーラス投与、及びパルス注入を含むが、これらに限定されない、様々な投薬スケジュールが本明細書で企図される。いくつかの実施形態では、投与は、皮下である。
【０２９５】
本発明の抗体は、良好な医療行為と一致する様式で、製剤化され、投薬され、投与されるだろう。この内容に関連して考慮する要因には、治療される特定の障害、治療される特定の哺乳動物、個々の患者の臨床状態、障害の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与のスケジュール、及び医師に既知である他の要因が含まれる。抗体は必然的にではなく任意に、問題の障害を予防または治療するために現在使用される１つ以上の薬剤と共に製剤化される。かかる他の薬剤の有効量は、製剤中に存在する抗体の量、障害または治療の種類、及び上で考察される他の要因に依存する。これらは一般的に、本明細書に記載されるものと同じ投薬量及び投与経路で、または本明細書に記載される投薬量の約１〜９９％で、または適切であると経験的／臨床的に決定される任意の投薬量及び任意の経路で使用される。
【０２９６】
疾患の予防または治療に関して、本発明の抗体の適切な投薬量は（単独で、または１つ以上の他の追加の治療剤と組み合わせて使用される場合）、治療される疾患の種類、抗体の種類、疾患の重症度及び経過、抗体が予防目的または治療目的で投与されるかどうか、以前の療法、患者の病歴、及び抗体への応答、ならびに主治医の裁量に依存する。抗体は好適に、１回で、または一連の治療にわたって患者に投与される。
【０２９７】
一般的な提案として、ヒトに投与される抗ＣＬＬ−１抗体（例えば、抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体）の治療有効量は、１回以上の投与によるものかどうかにかかわらず、患者の体重の約０．０１〜約１００ｍｇ／ｋｇの範囲である。いくつかの実施形態では、使用される抗体は、例えば、約０．０１〜約４５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約４０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約３５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約２５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約２０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約１５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約５ｍｇ／ｋｇ、または約０．０１〜約１ｍｇ／ｋｇであり、毎日投与される。一実施形態では、本明細書に記載される抗ＣＬＬ−１抗体（例えば、抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体）は、２１日周期の１日目に約１００ｍｇ、約２００ｍｇ、約３００ｍｇ、約４００ｍｇ、約５００ｍｇ、約６００ｍｇ、約７００ｍｇ、約８００ｍｇ、約９００ｍｇ、約１０００ｍｇ、約１１００ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１３００ｍｇ、または約１４００ｍｇの用量でヒトに投与される。用量は、注入物などの、単回用量で、または複数回用量（例えば、２回用量または３回用量）で投与されてもよい。病態に応じて数日間以上にわたって反復投与では、治療は一般的に、疾患症状の所望の抑制が生じるまで持続されるだろう。抗体の１つの例示的な投薬量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの範囲だろう。したがって、約０．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇの１つ以上の用量（またはそれらの任意の組み合わせ）が、患者に投与され得る。かかる用量は、断続的に、例えば、毎週、または３週間毎に投与されてもよい（例えば、患者が、約２回〜約２０回、または例えば、約６回用量の抗ＣＬＬ−１抗体（例えば、抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体）を受容するようにする。より高い初回負荷量、続いて１回以上のより低い用量が、投与されてもよい。この療法の進行は、従来の技法及びアッセイによって容易に監視される。
【０２９８】
Ｈ．製品
本発明の別の態様では、上述の障害の治療、予防、及び／または診断に有用な材料を含有する製品が提供される。製品は、容器と、容器上のまたは容器に関連するラベルまたは添付文書と、を含む。好適な容器には、例えば、ボトル、バイアル瓶、シリンジ、ＩＶ溶液バッグなどが挙げられる。容器は、ガラスまたはプラスチックなどの様々な材料から形成され得る。容器は、それ自体で、または別の組成物と組み合わせて、病態の治療、予防、及び／または診断に有効である組成物を保持し、滅菌アクセスポートを有してもよい（例えば、容器は、静脈注射溶液バッグまたは皮下注射針によって貫通可能な栓を有するバイアル瓶であり得る）。組成物中の少なくとも１つの活性薬剤は、本発明の抗体である。ラベルまたは添付文書は、組成物が、選定した病態を治療するために使用されることを示す。さらに、製品は、（ａ）本発明の抗体を含む組成物をその中に収容した第１の容器、及び（ｂ）さらなる細胞傷害性薬剤、さもなければ治療剤を含む組成物をその中に収容した第２の容器を含み得る。本発明のこの実施形態の製品は、組成物を使用して特定の病態を治療することができることを示す添付文書をさらに含み得る。代替的に、または加えて、製品は、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝食塩水、リンガー溶液、及びデキストロース溶液などの薬学的に許容される緩衝剤を含む第２の（または第３の）容器をさらに含み得る。それは、他の緩衝剤、希釈剤、フィルター、針、及びシリンジを含む、商業的観点及びユーザの観点から望ましい他の材料をさらに含んでもよい。
【０２９９】
上記の製品のうちのいずれかは、抗体が本発明のＣＬＬ−１結合ドメイン及びＣＤ３結合ドメインを含む、抗ＣＬＬ−１抗体を含み得ることが理解される。いくつかの実施形態では、抗ＣＬＬ−１抗体は、二重特異性抗体である。
【０３００】
ＩＩＩ．実施例
以下は、本発明の方法及び組成物の実施例である。上記に提供される概要を仮定して、様々な他の実施形態が実践され得ることが理解される。
【０３０１】
実施例１−抗ＣＬＬ−１抗体
Ａ．モノクローナル抗体生成
ヒト（ｈｕ）及びカニクイザル（ｃｙｎｏ）ＣＬＬ−１に対するモノクローナル抗体を、以下の手順を使用して、動物を、哺乳動物発現系内で発現されたＮ末端Ｆｌａｇ（ＤＹＫＤＤＤＤＫ）（配列番号１０８）に融合した組換えｈｕ及びｃｙｎｏＣＬＬ−１細胞外ドメイン（ＥＣＤ、６５−２６５  ｈｕＣＬＬ−１及び６５−２６５  ｃｙｎｏＣＬＬ−１のアミノ酸）で免疫化することによって生成した。ｈｕＣＬＬ１  ＥＣＤタンパク質（アミノ酸６５−２６５）は、２９％のマイナー対立遺伝子頻度（ＭＡＦ）を有するＳＮＰ、ＡＡＡ（Ｌｙｓ，Ｋ）２４４−＞ＣＡＡ（ＧＬＮ，Ｑ）を含んだ。
【０３０２】
陽性クローンを拡張し、ＥＬＩＳＡ及びＦＡＣＳによってｈｕＣＬＬ−１及びｃｙｎｏＣＬＬ−１への結合について再スクリーニングした。組み換えｈｕ及びｃｙｎｏＣＬＬ−１を発現する安定した細胞系及び急性骨髄性白血病腫瘍細胞系上に発現された腫瘍由来ＣＬＬ−１による蛍光活性化細胞ソーティング（ＦＡＣＳ）によって、強く反応した５つのクローン、すなわちｍ３Ｈ１０、ｍ６Ｅ７、ｍ２０Ｂ１、ｍ２１Ｃ９、及びｍ２８Ｈ１２を特定した。マウス重及び軽可変ドメインのアミノ酸配列のアラインメントが、図１Ａ及びＢに示される。ｍ３Ｈ１０及びｍ２１Ｃ９は、同じ重鎖及び軽鎖ＣＤＲを共有し、ｍ２１Ｃ９重鎖及び軽鎖可変領域のアミノ酸配列のみが、図１に示される。
【０３０３】
Ｂ．種交差反応性及び結合親和性
モノクローナル抗体を試験して、それらがｃｙｎｏＣＬＬ−１細胞外ドメイン（ＥＣＤ）（ｈｕＣＬＬ−１タンパク質ＥＣＤに対して８５．０７％同一であり、８７．３５％類似である）と交差反応するかどうかを決定した。キメラ抗ＣＬＬ−１ヒトＩｇＧを、ＣＭ５センサーチップ上にコーティングしたマウス抗ヒトＩｇＧによって捕捉した。動態測定のために、ヒトまたはｃｙｎｏＣＬＬ−１の３倍段階希釈液（４．１ｎＭ〜１０００ｎＭ）を、ＨＢＳ−ＥＰ緩衝液中に注入した。会合速度（ｋｏｎ）及び解離速度（ｋｏｆｆ）を、単純な１対１Ｌａｎｇｍｕｉｒ結合モデルを使用して計算した。平衡解離定数（ＫＤ）を、比率ｋｏｆｆ／ｋｏｎとして計算した。下の表２は、５つの抗体（ｍ３Ｈ１０、ｍ６Ｅ７、ｍ２０Ｂ１、ｍ２１Ｃ９、及びｍ２８Ｈ１２）のキメラバージョンが、組み換えｈｕ及びｃｙｎｏＣＬＬ−１の両方を認識したことを示し、ｈｕ及びｃｙｎｏ−ＣＬＬ−１との相互作用の動態に関する詳細を提供する。ｃｙｎｏＣＬＬ−１に対する交差反応性のさらなる確認を、カニクイザル（モーリシャス起源）由来の血液のＦＡＣＳ分析によって行った（データは示さず）。
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【０３０４】
標準的手順（Ｈｏｌｍｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５６：１２０５−１２１０（１９９２））に従ってＳｃａｔｃｈａｒｄ分析を実施して、ｃｈ６Ｅ７及びｃｈ２１Ｃ９を含む抗体の相対結合親和性を決定した。
【０３０５】
抗ＣＬＬ−１抗体を、間接Ｉｏｄｏｇｅｎ方法を使用して［Ｉ１２５］標識した。［Ｉ１２５］標識された抗ＣＬＬ−１抗体を、ＮＡＰ−５カラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用したゲル濾過によって遊離１２５Ｉ−Ｎａから精製し、精製したヨウ素化抗ＣＬＬ−１抗体は、８〜１０mＣｉ／mｇの特異性活性の範囲を有した。固定された濃度の［Ｉ１２５］標識された抗体と減少する濃度の段階希釈した未標識抗体とを含有する５０mＬ体積の競合アッセイ混合物を、９６ウェルプレート内に定置した。組換えｈｕもしくはｃｙｎｏＣＬＬ−１を安定して発現するＨＥＫ２９３ＡＤ細胞、または内因性ＣＬＬ−１を発現するＨＬ−６０腫瘍細胞を、５％ＣＯ２中において３７°で成長培地内にて培養した。Ｓｉｇｍａ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎを使用して細胞をフラスコから分離し、１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、３００ｍＭヒトＩｇＧ、及び０．１％アジ化ナトリウムを有するＤｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ  Ｍｅｄｉｕｍ（ＤＭＥＭ）からなる結合緩衝液で洗浄した。洗浄した細胞を、０．２ｍＬの結合緩衝液中に１００，０００個の細胞の密度で９６ウェルプレートに添加した。各ウェル内の［Ｉ１２５］標識された抗体の最終濃度は、約２５０ｐＭであった。競合アッセイにおける未標識抗体の最終濃度は、１０回の２倍希釈ステップを介した１０００ｎＭ〜緩衝液のみのアッセイの０ｎＭの範囲であった。競合アッセイを、３つ組で行った。競合アッセイを、室温で２時間インキュベーションした。２時間のインキュベーションの後、競合アッセイをＭｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｍｕｌｔｉｓｃｒｅｅｎフィルタープレート（Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ，ＭＡ）に移し、結合緩衝液で４回洗浄して、結合していない（ｆｒｅｅ  ｆｒｏｍ  ｂｏｕｎｄ）［Ｉ１２５］標識された抗体を分離した。フィルターをＷａｌｌａｃ  Ｗｉｚａｒｄ  １４７０ガンマカウンター（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  Ｌｉｆｅ  ａｎｄ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｉｎｃ．、Ｗｅｌｌｅｓｌｅｙ，ＭＡ）上で計数した。Ｍｕｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｒｏｂａｒｄの適合アルゴリズムを使用して抗体の結合親和性を決定する（Ｍｕｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｒｏｂａｒｄ  １９８０）、ＮｅｗＬｉｇａｎｄソフトウェア（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）を使用して、結合データを評価した。
【０３０６】
表は３、ＨＥＫ２９３ＡＤ  ＣＬＬ−１安定細胞によって発現された組換えｈｕ及びｃｙｎｏＣＬＬ−１に対する、ならびにＨＬ−６０細胞に対する親和性（０．４５〜１．２ｎＭのｋＤ範囲）を示す。
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【０３０７】
Ｃ．モノクローナル抗体エピトープ分類
細胞に基づく競合結合ＦＡＣＳアッセイを使用して、エピトープ分類も決定した。ＨＬ−６０細胞を、５０〜１００倍過剰の未標識競合抗体と共に、または伴わずにプレインキュベーションし、次に直接標識された検出抗体で染色した。検出抗体からのシグナルの低減は、未標識競合抗体が、検出抗体と同じまたは類似のＣＬＬ−１上の領域に結合することを示す。これは、検出物質（ｄｅｔｅｃｔｏｒ）と競合物質（ｃｏｍｐｅｔｉｔｏｒ）との両方に同じ抗体が使用される場合に発生する。異なる未標識抗体による検出物質シグナルの遮断が存在しないとき、未標識抗体は、ＣＬＬ−１内の異なる領域に結合している。
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【０３０８】
表４は、ＣＬＬ−１に対する抗体のエピトープ分類を示す。ｃｈ６Ｅ７及びｃｈ２１Ｃ９はＲ＆Ｄシステム−ＰＥ（クローン６８７３１７）と結合するが、ｃｈ２０Ｂ１及びｃｈ２８Ｈ１２は結合しない。Ｒ＆Ｄシステムはまた、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅクローンＨＢ３を遮断したが、ｃｈ６Ｅ７及びｃｈ２１Ｃ９は、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅクローンＨＢ３結合を遮断することができなかった。ｃｈ２０Ｂ１及びｃｈ２８Ｈ１２は、任意の他の抗体と競合することができず、各抗体が別個のエピトープと結合することを示唆している。全ての抗体は、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓクローン５０Ｃ１と競合することができず、同様にそれが別個のエピトープと結合することを示唆している。
【０３０９】
Ｄ．抗ＣＬＬ−１抗体のヒト化
モノクローナル抗体６Ｅ７及び２１Ｃ９を、以下に記載されるようにヒト化した。残基番号は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．，Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）に従う。
【０３１０】
６Ｅ７及び２１Ｃ９のヒト化中に構築された変異型を、ＩｇＧの形態で評価した。マウス６Ｅ７及び２１Ｃ９のＶＬ及びＶＨドメインを、ヒトＶＬカッパＩ（ＶＬＫＩ）及びヒトＶＨサブグループＩ（ＶＨＩ）コンセンサス配列とアライメントさせた。マウス抗体の超可変領域を、ＶＬＫＩ及びＶＨＩアクセプターフレームワークに操作した。具体的には、ｍｕ６Ｅ７及びｍｕ２１Ｃ９  ＶＬドメインから、２４〜３４位（Ｌ１）、５０〜５６位（Ｌ２）、及び８９〜９７位（Ｌ３）を、ＶＬＫＩに移植し、ｍｕ６Ｅ７及びｍｕ２１Ｃ９  ＶＨドメインから、２６〜３５位（Ｈ１）、５０〜６５位（Ｈ２）、及び９３〜１０２位（Ｈ３）を、ＶＨＩに移植した。
【０３１１】
この部分における抗体の結合親和性を、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）Ｔ２００  Ｆｏｒｍａｔによって決定した。簡潔に述べると、供給者の指示書に従って、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）及びＮ−ヒドロキシサクシンイミド（ＮＨＳ）試薬を用いて、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）リサーチグレードＣＭ５チップを活性化した。ヤギ抗ヒトＦｃ  ＩｇＧをチップにカップリングして、各フローセルにおいておよそ１０，０００応答単位（ＲＵ）を達成した。未反応のカップリング基を、１Ｍのエタノールアミンで遮断した。動態測定のために、抗体を捕捉して、およそ３００ＲＵを達成した。ヒトＣＬＬ−１の３倍段階希釈液を、ＨＢＳ−Ｐ緩衝液（０．０１ＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、０．１５ＭのＮａＣｌ、０．００５％の界面活性剤Ｐ２０）中に、３０μｌ／分の流量で２５℃にて注入した。会合速度（ｋｏｎ）及び解離速度（ｋｏｆｆ）を、１対１Ｌａｎｇｍｕｉｒ結合モデル（ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）Ｔ２００  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  Ｓｏｆｔｗａｒｅバージョン２．０）を使用して計算した。平衡解離定数（Ｋｄ）を、比率ｋｏｆｆ／ｋｏｎとして計算した。
【０３１２】
ＣＤＲ移植ヒト化６Ｅ７抗体の結合親和性を、キメラ６Ｅ７と比較した。ＣＤＲ移植ヒト化６Ｅ７抗体の追加の変異型を作製して、ＣＬＬ−１への結合に対する他のバーニア位置の寄与を評価した。６Ｅ７に関して、初めに４つの追加の軽鎖（Ｌ１：ＣＤＲ移植＋（Ｌ４、Ｌ４８、及びＫ４９）、Ｌ２：ＣＤＲ移植＋Ｌ４、Ｌ３：ＣＤＲ移植＋Ｋ４９、及びＬ４：ＣＤＲ移植＋Ｋ４９）、及び５つの追加の重鎖（Ｈ１：ＣＤＲ移植＋（Ａ６７、Ｌ６９、Ｖ７１、Ｋ７３）、Ｈ２：ＣＤＲ移植＋Ａ６７、Ｈ３：ＣＤＲ移植＋Ｌ６９、Ｈ４：ＣＤＲ移植＋Ｖ７１、及びＨ５：ＣＤＲ移植＋Ｋ７３）。軽鎖上のＫ４９は、重要なマウスバーニア残基であり、突然変異分析に基づき、重鎖上のＬ６９及びＶ７１は、重要なマウスバーニア残基であると決定された（データは示さず）。キメラ６Ｅ７は９．５９Ｅ−１０ＭのＫＤで結合し、一方ＣＤＲ移植＋Ｋ４９（ＬＣ）＋（Ａ６７、Ｌ６９、Ｖ７１、Ｋ７３（ＨＣ））、ＣＤＲ移植＋Ｋ４９（ＬＣ）＋（Ｌ６９、Ｖ７１（ＨＣ））は、それぞれ１．４０Ｅ−９Ｍ、及び１．３７Ｅ−９ＭのＫＤで結合した。
【０３１３】
ＣＤＲ移植ヒト化２１Ｃ９抗体の結合親和性を、キメラ２１Ｃ９抗体と比較した。ＣＤＲ移植ヒト化２１Ｃ９抗体の追加の変異型を作製して、ＣＬＬ−１への結合に対する他のバーニア位置の寄与を評価した。２１Ｃ９に関して、初めに３つの追加の軽鎖（Ｌ１：ＣＤＲ移植＋（Ｆ３６及びＳ４３）、Ｌ２：ＣＤＲ移植＋Ｆ３６、Ｌ３：ＣＤＲ移植＋Ｓ４３）、及び５つの追加の重鎖（Ｈ１：ＣＤＲ移植＋（Ａ６７、Ｌ６９、Ｖ７１、Ｋ７３）、Ｈ２：ＣＤＲ移植＋Ａ６７、Ｈ３：ＣＤＲ移植＋Ｌ６９、Ｈ４：ＣＤＲ移植＋Ｖ７１、及びＨ５：ＣＤＲ移植＋Ｋ７３）。軽鎖上のＦ３６は、重要なマウスバーニア残基であった。キメラ２１Ｃ９は、８．６１５Ｅ−９ＭのＫＤで結合し、一方ＣＤＲ移植＋（Ｆ３６及びＳ４３（ＬＣ））＋Ｌ６９（ＨＣ）及びＣＤＲ移植＋Ｆ３６（ＬＣ）＋Ｌ６９（ＨＣ）は、それぞれ１．０５３Ｅ−８Ｍ及び９．７８５−９ＭのＫＤで結合した。重鎖上のＬ６９は、重要なマウスバーニア残基であると決定された。
【０３１４】
ヒト化６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ及び２１Ｃ９．Ｌ２Ｈ３を、ｃｙｎｏ結合アッセイでｃｙｎｏＣＬＬ−１をｈｕＣＬＬ−１と置き換えたことを除き、ヒト及びｃｙｎｏＣＬＬ−１と結合するそれらの能力について上述のように試験した。ヒト化抗体の結合特性は、下の表５に示される。ヒト化６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅの結合親和性は、ＨＬ−６０、ＥＯＬ−１、２９３ＡＤ／ｃｙｎｏＣＬＬ１、及び２９３ＡＤ／ｈｕＣＬＬ−１細胞を使用してＳｃａｔｃｈａｒｄによって決定したときに、それぞれ０．３４、０．２９、０．２２、及び０．３５Ｋｄ（ｎＭ）であった。ヒト化２１Ｃ９．Ｌ２Ｈ３の結合親和性は、ＨＬ−６０、ＥＯＬ−１、２９３ＡＤ／ｃｙｎｏＣＬＬ１、及び２９３ＡＤ／ｈｕＣＬＬ−１細胞を使用してＳｃａｔｃｈａｒｄによって決定したときに、それぞれ１．３、０．７４、２．４、及び３．６Ｋｄ（ｎＭ）であった。
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【０３１５】
ヒト化抗体６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ及び２１Ｃ９．Ｌ２Ｈ３を、熱応力下（４０℃、ｐＨ５．５、２週間）及び２，２’−アゾビス（２−アミジノプロパン）塩酸塩（ＡＡＰＨ）分析で試験した。試料に熱応力をかけて、産物の保存期間にわたる安定性を模倣した。試料を、２０ｍＭのＨｉｓ  Ａｃｅｔａｔｅ、２４０ｍＭのスクロース、ｐＨ５．５へと緩衝液交換し、１ｍｇ／ｍＬの濃度に希釈した。１ｍＬの試料に４０Ｃで２週間応力をかけ、２番目を対照として−７０Ｃで保管した。次に、トリプシンを使用して両試料を消化して、液体クロマトグラフィー（ＬＣ）−質量分析（ＭＳ）分析を使用して分析され得るペプチドを作製した。試料中の各ペプチドについて、ＬＣからの保持時間、ならびに高解像度精密質量及びペプチドイオン断片化情報（アミノ酸配列情報）を、ＭＳにおいて取得した。抽出イオンクロマトグラム（ＸＩＣ）を、＋−１０ｐｐｍのウィンドウにおけるデータセットから目的のペプチド（天然及び修飾ペプチドイオン）について行い、ピークを統合して、面積を決定した。（修飾ペプチドの面積）を（修飾ペプチドの面積＋天然ペプチドの面積）で除し、１００を乗ずることによって、各試料に対する修飾の相対的割合を計算した。
【０３１６】
６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ及びｈ２１Ｃ９．Ｌ２Ｈ３のどちらも、ＤＲ−Ｈ２内にＮ５４Ｇ５５を有し、これは、脱アミノ化の影響を受けやすい（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅに関して、ｔ０＝１３．２％及びｔ２ｗｋ  １４．５％、ｒ０＝１１％及びｔ２ｗｋ＝１１．９％）。両抗体のＮ５４変異型を試験して、潜在的な脱アミノ化がｈｕ及びｃｙｎｏＣＬＬ−１への結合に影響を及ぼすことなく低減され得るかどうかを決定した。表６を参照されたい。
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【０３１７】
ヒト化６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ  ＣＤＲ−Ｈ２  Ｎ５４抗体変異型について、Ａ５４は、Ｎ５４に最も類似した許容される結合特徴を有した。ヒト化２１Ｃ９．Ｌ２Ｈ３  ＣＤＲ−Ｈ２  Ｎ５４抗体変異型について、全ての変異型は、ｏｆｆ速度（１０〜３０倍）においてｈｕＣＬＬ−１に対して、及びｏｎ速度（６０〜５００倍）においてｃｙｎｏＣＬＬ−１に対して、親和性の低下を示した。ヒト化６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅの結合親和性は、２９３ＡＤ／ｃｙｎｏＣＬＬ１、２９３ＡＤ／ｈｕＣＬＬ−１、ＨＬ−６０、及びＥＯＬ−１細胞を使用してＳｃａｔｃｈａｒｄによって決定したときに、それぞれ０．６７、０．６８、０．６、及び０．２５Ｋｄ（ｎＭ）であった。ヒト化６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＮ５４Ａの結合親和性は、２９３ＡＤ／ｃｙｎｏＣＬＬ１、２９３ＡＤ／ｈｕＣＬＬ−１、ＨＬ−６０、及びＥＯＬ−１細胞を使用してＳｃａｔｃｈａｒｄによって決定したときに、それぞれ０．９、０．８９、０．６４、及び０．３２Ｋｄ（ｎＭ）であった。ヒト化６Ｅ７及び２１Ｃ９抗体の重及び軽可変ドメインアミノ酸配列のアラインメントは、それぞれ、図２Ａ〜Ｂ及び図３Ａ〜Ｂに示される。
【０３１８】
Ｅ．エピトープマッピング
ＣＬＬ−１の結合エピトープを決定するために、（ａ）遊離抗原ＣＬＬ−１及び（ｂ）３つの異なる抗原−ｍＡｂ複合体の試験を、ヒドロキシルラジカルフットプリント（ＨＲＦ）技法を使用して実施した。試料を、Ｂｒｏｏｋｈａｖｅｎ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙにおいて、Ｘ２８ｃ  Ｂｅａｍラインを使用して０、１０、１５、及び２０ミリ秒（ｍｓ）の間隔でヒドロキシルラジカルに曝露した。標識された試料を、ＰＮＧａｓｅ  Ｆを使用して脱グリコシル化させた。実験プロトコルを最適化するために、脱グリコシル化試料に対してパイロット実験を初めに行った。ＭＳを使用したパイロット調査は、試料が著しい量のポリマー汚染を含有し、追加の洗浄が必要であることを明らかにした。ポリマー汚染を除去するために、アセトン中トリクロロ酢酸を使用して試料を沈殿させ、ＬＣ−ＭＳ分析を行った。沈殿ステップは成功し、ＭＳにおけるポリマー汚染シグナルは著しく弱まった。洗浄した試料を、還元化してアルキル化し、トリプシンを使用して消化した後、液体クロマトグラフィーを高解像度質量分析（ＬＣ−ＭＳ）と併用して行った。ＭＳデータを、ＰｒｏｔＭａｐＭＳを使用して分析し、各ペプチドの用量応答プロットを得た。遊離抗原の結果を、複合体型の各々と比較した。Ｓｗｉｓｓ−Ｍｏｄｅｌソフトウェアを使用して抗原の相同性に基づくモデルを生成し、３つの複合体の各々に関して溶媒保護領域をマッピングした。
【０３１９】
トリプシンマッピングを使用して得た全体の配列包括度は、９０．０５％であった。欠けている領域は主に、４残基よりも短い長さのトリプシンペプチドからなり、これは、ＬＣカラム上でのその弱い保持特性のため、検出が本来困難であり得る。ＨＲＦ処理は、タンデム質量分析データから特定された特定の質量シフトをもたらす安定した側鎖酸化修飾を導入する。選択イオンクロマトグラム（ＳＩＣ）を抽出し、（特定のｍ／ｚの）ペプチドイオンの未酸化型及び全ての酸化型に関して統合した。これらのピーク面積値を使用して、用量応答（ＤＲ）プロットの形式で反応速度を特徴付けた。これは、ヒドロキシルラジカル曝露の関数として無傷のペプチドの損失を測定する。複合体内の溶媒保護領域は、遊離抗原とは対照的に段階的な酸化反応を経る。酸化の速度の差（速度定数、ＲＣと呼ばれる）は、エピトープの場所をハイライトするように機能し得る。
【０３２０】
ＰｒｏｔＭａｐＭＳを使用してＭＳデータを処理し、各ペプチドのＲＣ値を得た。最終的な結果は、表６に示される。ペプチドの場所及び対応する配列は、１列目及び２列目に示される。３列目は、複合体１（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４抗体及びＣＬＬ−１抗原）の保護比、ＰＲ（＝ＲＣ抗原／ＲＣ複合体）を示す。同様に、４及び５列目は、複合体２（Ｋａｂａｔ番号付けに従うＫ１４９（Ｋ１４９Ｃ）におけるシステイン残基を含む軽鎖で操作された２１Ｃ９．Ｌ２Ｈ３抗体及びＣＬＬ−１抗原）及び複合体３（Ｒ＆Ｄシステムモノクローナル抗ＣＬＬ１抗体（クローン６８７３１７）及びＣＬＬ−１抗原）の対応する保護比を示す。特定の所与のペプチドのＰＲ値が１未満である場合、対応する領域は、複合体形成中に導入される構造的変化のために溶媒露出度の増加を経た。１に近いＰＲ値は、その領域の溶媒露出度が変化していないままであることを示し、１超のＰＲは、対応する領域が複合体形成の関数として溶媒からの保護を示すことを示唆する。各複合体に関してペプチドの大部分のＰＲ値が１に近く、対応する領域の溶媒露出度の最小の変化を示している。ペプチド１４２〜１５８は、３つ全ての抗体について最も高いＰＲ値を常に示し、著しい領域の保護を示唆している。ペプチド１４２〜１５８の保護に加えて、Ｒ＆Ｄシステムモノクローナル抗ＣＬＬ１抗体（クローン６８７３１７は、６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡＧ及び２１Ｃ９．Ｌ２Ｈ３とは異なり、重複ペプチド１０３〜１１６及び１０５〜１１６によって示される通り、領域１０３〜１１６の著しい保護も示した。
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【０３２１】
Ｆ．抗ＣＬＬ−１抗体の内在化
抗ＣＬＬ−１抗体が結合時に内在化されるかどうかを決定するために、ＨＬ−６０またはＨＬ−６０細胞を、ＲＰＭＩ培地内で０．３ｍｇ／ｍｌのｈＩｇＧと共に３７℃で２時間プレインキュベーションションして、ＦｃＲへの非特異的結合を低減した後、細胞培養物で処理した４ウェルチャンバスライド（Ｎａｌｇｅ  Ｎｕｎｃ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）内に播種した。１μｇ／ｍＬの最終濃度でＤｙｌｉｇｈｔ４８８に直接複合体化された抗体を、ｈＩｇＧで遮断した細胞と共に、暗所で３０分間、氷上にてインキュベーションした。細胞を即座に撮像して膜染色（Ｔ０）を示し、その後Ｌｅｉｃａ  ＳＰ５共焦点顕微鏡を用いて３７℃で１０時間にわたってタイムラプス撮影した。代表的な例のｃｈ２１Ｃ９は、ＨＬ−６０細胞によって３０分以内に迅速に内在化される（データは示さず）。ｃｈ２１Ｃ９のリソソームへの限局化を、インビトロ細胞に基づくアッセイを使用して確認した。
【０３２２】
実施例２：ＣＬＬ１  Ｔ細胞依存性二重特異性（ＴＤＢ）抗体の有効性
以下の実施例は、一方のアーム上に抗ヒトＣＬＬ−１の結合決定基、そして他方のアーム上に抗ヒトＣＤ３ｅの結合決定基を含む操作されたＴ細胞依存性二重特異性抗体がヒトドナーからの急性骨髄性白血病腫瘍細胞及び正常な単球を死滅させるために個人の免疫系を再指向することができる強力な免疫調節分子であることを示す。ＴＤＢの有効性は、そのままのヒトＣＤ８＋Ｔ細胞によるＡＭＬ腫瘍細胞系（ＥＯＬ−１、ＨＬ−６０、ＴＨＰ−１、Ｕ９３７、Ｎｏｍｏ−１、ＰＬ−２１、ＭＬ−２、及びＭｏｌｍ−１３）の死滅を監視することにより、及びヒトＰＢＭＣの集団における自家Ｔ細胞による自家ＣＤ１４＋単核細胞の死滅を監視することにより示された。
【０３２３】
以下の実施例に使用されたＴＤＢは、１）６Ｅ７及び／または２１Ｃ９、２）２０Ｂ１、及び３）２８Ｈ１２の３つの異なるエピトープ瓶からの抗ＣＬＬ−１マウス及びヒト化モノクローナル抗体クローンからのＣＬＬ−１結合決定基、ならびにＢｉａｃｏｒｅにより決定されたとき、ヒト化抗ＣＤ３εクローン、高親和性抗体３８Ｅ４ｖ１及び低親和性抗体４０Ｇ５ｃ（ｈＣＤ３ε１−２７  Ｆｃ（それぞれ、１．０及び１３ｎＭ）、ｈＣＤ３εγ（それぞれ、０．５及び１２ｎＭ）、及びｃｙｎｏＣＤ３εγ（それぞれ、０．７及び１４ｎＭ）、ならびにｈＣＤ３と非常に高親和性抗体３８Ｅ４ｖ１１（０．０５ｎＭ；ｈＣＤ３εに対するＦａｂ  Ｂｉａｃｏｒｅ測定値−５．００Ｅ＋０７ｋａ（１／Ｍｓ）、１．６０Ｅ−０３ｋｄ（１／ｓ）、及び０．０３２ＫＤ（ｎＭ））からの結合決定基を含有した。３８Ｅ４ｖ１についてのｈＣＤ３εに対するＦａｂ  Ｂｉａｒｃｏｒｅ測定値は、８．１５Ｅ＋０６ｋａ（１／Ｍｓ）、３．１７Ｅ−０３ｋｄ（１／ｓ）、及び０．３８９ＫＤ（ｎＭ）であった。３８Ｅ４ｖ１、３８Ｅ４ｖ１１、及び４０Ｇ５ｃは、ヒトＣＤ３εポリペプチド（アミノ酸１〜２６（配列番号８６）または１〜２７（配列番号８７）からなるヒトＣＤ３εポリペプチドの断片）と結合し、ＣＤ３εのアミノ酸残基Ｇｌｕ５は、結合に必要ではない（データは示さず、参照によりその全体が組み込まれるＰＣＴ／ＵＳ１４／７０９５１も参照されたい）。
【０３２４】
Ａ．材料及び方法
全ての実験において、標的細胞であるＡＭＬ腫瘍細胞系、ＰＢＭＣ、またはＡＭＬ患者の骨髄細胞は、ＴＤＢのＦｃγＲの表面発現を伴う細胞への非特異的結合を阻止するために、１０％ＦＣＳ、２ｍＭグルタミン、及び０．３ｍｇ／ｍｌの精製された低内毒素ヒトＩｇＧ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎｓ，ＨＵ−ＧＦ−ＥＤ）を含有するＲＰＭＩ培地中で、３７℃で１〜２時間プレインキュベートされた。最初の実施例では、ＰＢＭＣは、正常なヒトドナーから単離され、ＰＢＭＣにおけるそのままのＣＤ８＋Ｔ細胞がＭｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ  ＧｍｂＨ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ；１３０−０９６−４９５）からのキットを使用して濃縮された。アッセイは、６０，０００細胞／ウェルのヒトＣＤ８＋Ｔ細胞及び２０，０００細胞／ウェルのｈＩｇＧ遮断標的細胞を含有する９６ウェル丸底プレート（Ｃｏｓｔａｒ  ３７９９）中で行われ、エフェクター対標的の比（Ｅ：Ｔ）は３：１であった。ＴＤＢ（例えば、ｈ６Ｅ７（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ）−３８Ｅ４ｖ１、ｈ２１Ｃ９（ｈ２１Ｃ９．Ｌ２Ｈ３）−３８Ｅ４ｖ１、または陰性対照抗ｇＤ−３８Ｅ４ｖ１）は、０〜１０ｕｇ／ｍｌまたは０〜１ｕｇ／ｍｌにわたる最終アッセイ濃度に３倍に段階希釈された１０Ｘ使用液として添加された。添加の順序は、５０ｕｌの２Ｘ標的細胞、１１ｕｌの１０Ｘ３倍段階希釈されたＴＤＢ、及び５０ｕｌの２Ｘ  ＣＤ８＋Ｔ細胞であった。内容物は、設定６で約１５秒間、Ｔｉｔｅｒ  Ｐｌａｔｅ  Ｓｈａｋｅｒ（Ｔｈｅｒｍｏ）で混合され、約４０時間３７℃でインキュベートされた。プレートは毎日１回混合された。ｈＣＬＬ−１発現ＥＯＬ−１、ＴＨＰ−１、ＨＬ−６０、Ｎｏｍｏ−１、ＭＬ−２、ＰＬ−２１、Ｕ９３７、及びＭｏｌｍ−１３細胞の枯渇は、ＦＡＣＳにより、抗ＣＤ１２３−ＡＰＣ（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ；５６００８７）または抗ＣＤ３３−ＡＰＣ試薬（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ；５５１３７８）のいずれか、及びヨウ化プロピジウムを使用して監視された。ＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化は、抗ＣＤ８−ＦＩＴＣ（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ；５５５６３４）、抗ＣＤ６９−ＰＥ（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ；５５５５３１）、及び抗ＣＤ２５（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ；５５５４３４）の組み合わせを使用して監視された。一定した数の事象の取得を確実にするために、Ｆｌｕｏｒｅｓｂｒｉｔｅ較正ミクロスフェア（Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｗａｒｒｉｎｇｔｏｎ，ＰＡ）を各試料に添加した。Ｆｌｏｗｊｏ  ｖ９．７．５を使用してデータ分析を行い、プログラムＰＲＩＳＭ−４（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を使用してＥＣ５０を決定した。
【０３２５】
第２の実施例では、ヒトまたはカニクイザルのＰＢＭＣを、ハイパック−フィコール比重遠心法（Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ  Ｐｌｕｓ，ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）により単離し、低速度で洗浄して血小板を除去し、ＴＤＢによるＦｃγＲへの非特異的結合を遮断するために、ｈＩｇＧを含有するＲＰＭＩに再懸濁した。２００，０００／ウェルの濃度のＰＢＭＣが１１ｕｌの１０Ｘ  ３倍段階希釈されたＴＤＢと共にインキュベートされたことを除き、アッセイは上述のように行われた。Ｅ：Ｔ比は決定されず、ドナー依存であった。標的細胞死滅（ＣＤ１４＋単球）及びエフェクターＴ細胞（ＣＤ８＋）の活性化は、ＦＡＣＳにより約４０時間で評価された。ｈＣＬＬ−１発現ＣＤ１４＋単球の枯渇は、抗ＣＤ１４−ＡＰＣ試薬（Ｈｕｍａｎ  ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ；５５５３９９，Ｃｙｎｏ  Ｍｉｌｔｅｎｙｉ：１３０−０９１−２４３）及びヨウ化プロピジウムを使用して監視された。ＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化は上の節に概説されるように行われた。
【０３２６】
ＴＤＢの生成−以前に記載されているように（Ａｔｗｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７０：２６−３５，１９９７）、ヒトＩｇＧ１として、ノブ・イントゥ・ホール（ｋｎｏｂ−ｉｎｔｏ−ｈｏｌｅ）形式の完全長抗体として、ＴＤＢ抗体を産生した。半抗体がタンパク質Ａ−親和性クロマトグラフィーによって精製されたＥ．ｃｏｌｉまたはチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞内のいずれかで発現され、以前に記載されているように（Ｓｐｉｅｓｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１３）、適切な半抗体対がインビトロでアニールされた。ＣＨＯ細胞内でＴＤＢ抗体産生を行った場合、ＴＤＢ抗体が、エフェクターのない（ｅｆｆｅｃｔｏｒ−ｌｅｓｓ）変異型であり、抗体依存性の細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を始めることが不可能であるように、抗体は、例えば、残基Ｎ２９７（例えば、Ｎ２９７Ｇ）に非グリコシル化突然変異を含み得る。
【０３２７】
アニーリング後、抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体を、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）によって精製し、分析用ゲル濾過、質量分析、及びポリアクリルアミドゲル電気泳動によって特徴付けた。精製された抗体を、単一ピーク（９９％超のシグナル）として、０．２％未満の凝集体を含むゲル濾過内を通した。質量分析では、ホモ二量体は検出されなかった。
【０３２８】
Ｂ．結果
異なる抗ＣＬＬ１抗体群の有効性をＴＤＢ形式で試験した。親ｈ６Ｅ７及びｈ６Ｅ７変異型ならびに親ｈ２１Ｃ９を含む瓶１、２０Ｂ１を含む瓶２、そして２８Ｈ１２を含む瓶３。図４Ａに示されるように、３８Ｅ４ｖ１と組み合わせた親ｈ６Ｅ７（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＮ５４）ならびに変異型６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４（ビン１）は、３８Ｅ４ｖ１と組み合わせた非標的抗ｇＤアームと比較して、顕著な腫瘍細胞（ＥＯＬ−１）死滅をもたらし、これは、用量依存性及び抗原特異的の両方であった。さらに、ｈＣＬＬ−１についての親和性を大幅に低減した（１１３．２  ｎＭ）、ｈ６Ｅ７（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＤ５４）の脱アミノ化バージョンは、３８Ｅ４ｖ１と組み合わせてごくわずかな細胞死滅しか示さなかった。ヒトＣＬＬ−１について６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４と類似する親和性を有するエピトープ瓶２の抗ＣＬＬ−１抗体２０Ｂ１は、同じ抗ＣＤ３アーム（３８Ｅ４ｖ１）と組み合わせて、大幅に低減した腫瘍細胞（ＥＯＬ−１）死滅を有した。３８Ｅ４ｖ１と組み合わせたエピトープ瓶３の抗ＣＬＬ−１抗体２８Ｈ１２は、ごくわずかな腫瘍細胞死滅しか示さなかった。図４Ａを参照されたい。結果の要約を下の表７に提供する。これらの結果に基づき、ヒト／ｃｙｎｏ  ＣＬＬ−１エピトープ瓶１をさらに調査した。
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【０３２９】
ｈ６Ｅ７及びｈ２１Ｃ９の両方はＣＬＬ−１エピトープ瓶１の一部である。単一ドナーからのヒトＣＬＬ−１を発現するＡＭＬ腫瘍細胞系（ＥＯＬ−１／ＴＨＰ−１）または自家ＣＤ１４＋細胞のいずれかを死滅させるｈ６Ｅ７及びｈ２１Ｃ９抗ＣＬＬ−１  ＴＤＢの有効性を試験するために、図４Ｂに示されるように実験を行った。両方のＣＬＬ−１  ＴＤＢ、ｈ６Ｅ７（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１及びｈ２１Ｃ９（ｈ２１Ｃ９．Ｌ２Ｈ３）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１は、１μｇ／ｍｌの最大ＴＤＢ濃度で特定の死滅またはＣＤ８＋Ｔ細胞活性化を示さなかった陰性対照ＴＤＢの抗ｇＤ  ｘ  ３８Ｅ４ｖ１と比較して、用量依存様式で標的細胞の大幅な死滅を示した。さらに、最大死滅を誘発するＴＤＢ濃度は、最大ＣＤ８＋Ｔ細胞活性化と一致した（図４Ｃ）。ｈ６Ｅ７（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１による標的細胞の死滅についてのＥＣ５０は、９．１ｎｇ／ｍｌ（ＥＯＬ−１）、５．４ｎｇ／ｍｌ（ＴＨＰ−１）、２．８ｎｇ／ｍｌ（ヒトＣＤ１４＋単球）であり、ｈ２１Ｃ９（ｈ２１Ｃ９．Ｌ２Ｈ３）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１によるＥＣ５０は、１４．８ｎｇ／ｍｌ（ヒトＣＤ１４＋単球）であった。
【０３３０】
他のドナーを使用する実験において（図５Ａ）、ｈ２１Ｃ９（ｈ２１Ｃ９．Ｌ２Ｈ３）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１は、ＥＯＬ−１（１６．３ｎｇ／ｍｌのＥＣ５０）の大幅な死滅、及びＨＬ−６０に対して非常に弱い活性を示し、一方でｈ６Ｅ７（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１は、ＥＯＬ−１（７．４ｎｇ／ｍｌのＥＣ５０）及びＨＬ−６０（９５．６ｎｇ／ｍｌのＥＣ５０）の大幅な死滅を呈した。異なるサブタイプの疾患を示すＡＭＬ細胞系からのＣＬＬ−１発現及び死滅データは、ｈＩｇＧ  Ｆｃ領域を欠くＢｉｓ−Ｆａｂ  ＴＤＢを含んだ，第３のドナー（図５Ｂ＆Ｃ）で示され、ＥＯＬ−１細胞（点線）上のｈ６Ｅ７（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１は、ｈ６Ｅ７（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１  ｈＩｇＧ  ＴＤＢと類似する死滅を有した。全体的に、ｈ６Ｅ７（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１は、良好なインビトロ効力を示し、低細胞表面ＣＬＬ−１発現細胞系Ｍｏｌｍ−１３上でも有効であった。
【０３３１】
図６Ａに示されるように、ｈ６Ｅ７（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１、及び少ない程度ではあるがｈ２１Ｃ９（ｈ２１Ｃ９．Ｌ２Ｈ３）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１は、Ｔ細胞の全てのサブタイプを含有する自家カニクイザルＰＢＭＣの存在下でのカニクイザルＣＤ１４＋細胞を死滅させることができる。加えて、ＥＯＬ−１標的細胞及び６Ｅ７（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１の存在下でＰＢＭＣから単離されたｐａｎ−Ｔ細胞は、ヒトＴ細胞で観察されたものと類似する約５ｎｇ／ｍｌのＥＣ５０で標的細胞の大幅な死滅を示した。最大死滅を誘発するＴＤＢ濃度は、最大ＣＤ８＋Ｔ細胞活性化と一致した（図６Ｂ）。
【０３３２】
複数のドナーから決定された平均ＥＣ５０の要約を表８に示す。表７に示されるように、ＨＬ−６０細胞、ＥＯＬ−１細胞、及びヒト自家ＣＤ１４＋を使用したｈ６Ｅ７（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ）の有効性は、同じ抗ＣＤ３アーム（３８Ｅ４ｖ１）を用いたｈ２１Ｃ９（ｈ２１Ｃ９．Ｌ２Ｈ３）よりも約５〜１７倍大きかった。
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【０３３３】
別の実施例では、ｈ６Ｅ７（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１  ＴＤＢの効力が、ＡＭＬの診断が確認され、フローサイトメトリーによるＣＤ３４＋細胞でのＣＤ３３及びＣＬＬ−１両方が顕著に発現する患者試料で試験された（図７Ａ）。ＡＭＬ患者からの単離されたナイーブ同種ヒトＣＤ８＋Ｔ細胞及び凍結密度勾配精製された骨髄細胞（Ｓｔａｎｆｏｒｄ  Ｂｌｏｏｄ  Ｂａｎｋ，Ｓｔａｎｆｏｒｄ，ＣＡ）を使用して、インビトロ死滅アッセイが上述のように行われた。実験は、造血幹細胞／前駆細胞を支持するために次の補足物を含有する次の培地中で行われた：Ｉｓｃｏｖｅ’ｓ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  Ｍｅｄｉｕｍ（ＩＭＤＭ）、１０％熱不活性化ＦＣＳ、２ｍＭグルタミン、１Ｘ  ＳｔｅｍＳｐａｎ  ＣＣ１００サイトカインカクテル（ＳｔｅｍＣｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、２０ｎｇ／ｍｌのヒトＧＭ−ＣＳＦ、２０ｎｇ／ｍｌのヒトＧ−ＣＳＦ、及び０．３ｍｇ／ｍｌの低内毒素ヒトＩｇＧ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎｓ，Ｎｏｖｉ，ＭＩ）。Ｅ：Ｔ比は、それぞれ、１５０，０００及び５０，０００細胞を使用して３：１であり、約４０時間、上述のように行われた。
【０３３４】
図７Ｂは、ｈ６Ｅ７  ｘ  ３８Ｅ４ｖ１がＩｇ一致非標的ＴＤＢの抗ｇＤ  ｘ  ３８Ｅ４ｖ１と比較して、用量依存様式でＡＭＬ芽細胞を死滅させることができたことを示す。生ＡＭＬ芽細胞の数は、４０時間のインキュベーション中未変化のままであり、抗ｇＤ  ｘ  ３８Ｅ４ｖ１  ＴＤＢは、ｈ６Ｅ７（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１による死滅が成長条件よるものではないＴＤＢ特異的であったことを示唆する。
【０３３５】
Ｃ．抗ＣＬＬ−１  ＴＤＢのインビボ有効性
以下の実施例に使用されたＴ細胞依存性二重特異性（ＴＤＢ）抗体は、ヒトＣＬＬ−１及びヒトＣＤ３ｅ抗原結合決定基を含む。抗ヒトＣＬＬ−１アームは、６Ｅ７（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ）または最適化された変異型ｈ６Ｅ７（Ｎ５４−Ａまたは−Ｓまたは−Ｅまたは−Ｑまたは−Ｄ）ヒト化Ｆａｂの配列のいずれか、及びｈ４０Ｇ．５ｃ、３８Ｅ４ｖ１、または３８Ｅ４ｖ１１（ｈＣＤ３εについて低、高、または非常に高親和性に対応する）ヒト化Ｆａｂのいずれかを含む抗ヒトＣＤ３ｅアーム配列を含む。
【０３３６】
ｈ６Ｅ７Ｎ５４Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４とも称される）のインビトロ特徴付けは、上記のインビトロ死滅アッセイについて記載されるように行われた。図８Ａ〜Ｄは、低親和性（ｈ４０Ｇ５ｃ）または高（３８Ｅ４ｖ１）または非常に高（３８Ｅ４ｖ１１）親和性ｈＣＤ３ｅアームのいずれかを有する６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４  ＴＤＢが用量依存様式で、類似する効力でＡＭＬ腫瘍細胞系を死滅させることができることを示す。加えて、３８Ｅ４ｖ１またはｈ４０Ｇ５ｃのいずれかを含む抗ヒトＣＤ３ε  Ｆａｂと対合されたｈ６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ  Ｎ５４−Ａまたは−Ｓまたは−Ｅまたは−Ｑまたは−Ｄヒト化Ｆａｂの最適化された変異型のインビトロ評価は、ｈＣＬＬ−１アームの効力を決定するために行われた。図８Ｅ〜Ｇは、ｈ６Ｅ７アームのヒトＣＬＬ−１に対するより高い親和性がＮ５４Ｄ変異型と比較して改善されたインビトロ効力と相関したことを示し、アスパラギン酸（Ｄ）はアスパラギン（Ｎ）脱アミド化の産物であり、このＮ５４の修飾はＣＬＬ−１への低親和性結合をもたらす。ｈ６Ｅ７変異型についての効力の順位序列は、ヒトＣＤ３εアームが３８Ｅ４ｖ１またはｈ４０Ｇ５ｃであるかどうかにかかわらず類似した。しかしながら、図８Ｈ〜Ｉに示されるように、高親和性抗ヒトＣＤ３ｅアーム（３８Ｅ４ｖ１）の利用は、低親和性ヒトＣＤ３アームｈ４０Ｇ５ｃのＴ細胞活性化と比較して、より低い二重特異性抗体濃度で上昇したレベルのＴ細胞活性化をもたらした。全体的に、ＥＣ５０は、３８Ｅ４ｖ１の存在下でのｈ６Ｅ７変異型（Ｎ５４−Ａまたは−Ｓまたは−Ｅまたは−Ｑ）、及びｈ４０Ｇ５ｃの存在下でのｈ６Ｅ７変異型（Ｎ５４−Ａまたは−Ｅまたは−Ｑ）に関して類似した。
【０３３７】
ヒトＣＬＬ−１及びヒトＣＤ３εを同時発現する遺伝子操作されたマウスを特徴付けし、インビボでの抗ヒトＣＬＬ−１  ＴＤＢの有効性を試験するために使用した。ヒトＣＬＬ−１（ＣＬＥＣ１２ａ）ＢＡＣトランスジェニックＣ５７ＢＬ／６Ｎマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ）及びヒトＣＤ３ε  ＢＡＣトランスジェニックＣ５７ＢＬ／６ＮマウスをＧｅｎｅｎｔｅｃｈで生成し、アメリカ実験動物飼育協会（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ）のガイドラインに従って維持した。加えて、ヒトＣＬＬ−１及びヒトＣＤ３εの両方を同時発現する二重ＢＡＣトランスジェニックマウスは、親ｈＣＬＬ−１及びｈＣＤ３ε  ＢＡＣトランスジェニック動物を交配させることにより達成された。インビボで抗ヒトＣＬＬ−１ｘ抗ＣＤ３ε  ＴＤＢの効力を示すための研究は、国立衛生研究所の実験動物の管理と使用に関する指針（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｇｕｉｄｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌｓ）に準拠して行われ、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈの動物実験委員会（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）により承認された。
【０３３８】
二重ＢＡＣ−Ｔｇ（２ｘＢＡＣ−Ｔｇ）マウスはフローサイトメトリーにより特徴付けされ、ヒトＣＬＬ−１及びヒトＣＤ３εの両方の導入遺伝子を発現することが示された。トランスジェニックマウスからの血液をＡＣＫ溶解緩衝液で処理して赤血球を除去し、氷上で遮断溶液（５％マウス、５％ラット、及び０．２ｍｇ／ｍｌのヒトＩｇＧ、０．５％ＢＳＡ、ＰＢＳ中２ｍＭ  ＥＤＴＡ）と共に２０分間プレインキュベートして、ＦｃγＲへの非特異的結合を低減した。２ｘＢＡＣ−Ｔｇ  ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞でのヒトＣＤ３ε表面発現の確認は、ラット抗マウスＣＤ８−ＦＩＴＣ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）及びマウス抗ヒトＣＤ３−ＰＥ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で染色することにより決定され、２ｘＢＡＣ−Ｔｇ  ＣＤ１１ｂ＋単球でのヒトＣＬＬ−１発現の確認は、ラット抗マウスＣＤ１１ｂ−ＦＩＴＣ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）及び変異型ｈ６Ｅ７Ａ（６Ｅ７Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４−Ｄｙｌｉｇｈｔ  ６５０（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）で染色することにより示された。図９は、二重ＢＡＣ−Ｔｇ（ｈＣＬＬ−１／ｈＣＤ３ε）マウスからの血液がマウスＣＤ８＋Ｔ細胞でヒトＣＤ３を発現し、マウスＣＤ１１ｂ＋単球でヒトＣＬＬ−１を発現するが、マウス顆粒球では発現しないことを示す。加えて、図１０は、いずれかの導入遺伝子の発現レベルがそれらの対応する親のものと類似することを示す。
【０３３９】
キメラＣＤ８＋Ｔ細胞（マウス及びヒトＣＤ３の両方を発現する）が抗ヒトＣＤ３εアームを含むＴＤＢにより活性化されることができることを示すために、セクションＡに記載されるように、２０〜４０時間、様々な濃度のＴＤＢで血液をエクスビボで刺激した。この実験では、ヒストパック−１０８３（Ａｌｄｒｉｃｈ−Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ  Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を使用して密度勾配遠心することにより２ｘＢＡＣ−ＴｇマウスからＰＢＭＣを単離し、続いて低速スピンにより血小板を除去した。各試験物質にＴＤＢ対照も含まなかったＴＤＢの最終濃度範囲は、０．３〜３０００ｎｇ／ｍｌであった。使用されたＴＤＢは、抗ｇＤ  ｘ  ３８Ｅ４ｖ１（アイソタイプ一致陰性対照）、または親ｈ６Ｅ７（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＮ５４）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１、または変異型ｈ６Ｅ７Ｎ５４Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１、または変異型ｈ６Ｅ７Ｎ５４Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ｈ４０Ｇ５ｃであった。約２０時間または約４０時間のいずれかの後、細胞を抗マウスＣＤ８−ＦＩＴＣ及び抗マウスＣＤ６９（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）で染色して、フローサイトメトリーによりＴ細胞エフェクター活性化を定量化した。図１１は、全てのＣＬＬ−１特異的ＴＢＤが３０００ｎｇ／ｍｌで最大活性化を達成することができたことを示す。
【０３４０】
抗ヒトＣＬＬ−１及び抗ヒトＣＤ３の様々なアームの組み合わせを含有するＴＤＢ抗体の効力を試験するためのインビボ有効性研究は、２ｘＢＡＣ−Ｔｇマウスを使用して行われた。マウスを無作為に５つの群に割り付け、０日目に０．１ｍｇ／ｋｇまたは０．５ｍｇ／ｋｇのいずれかの単一静脈内用量を与えた。マウスを以下のように無作為に割り付けた：群１（ビヒクル、ヒスチジン緩衝液）、群２（抗ｇＤ  ｘ  ３８Ｅ４ｖ１＠０．５ｍｇ／ｋｇ）、群３（抗ｇＤ  ｘ  ｈ４０Ｇ５＠０．５ｍｇ／ｋｇ）、群４（ｈ６Ｅ７Ｎ５４Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１＠０．１ｍｇ／ｋｇ）、群５（ｈ６Ｅ７Ｎ５４Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１＠０．５ｍｇ／ｋｇ）、群６（ｈ６Ｅ７Ｎ５４Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ｈ４０Ｇ５＠０．１ｍｇ／ｋｇ）、群７（ｈ６Ｅ７Ｎ５４Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ｈ４０Ｇ５＠０．５ｍｇ／ｋｇ）、及び群８（ｈ６Ｅ７Ｎ５４Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１１＠０．５ｍｇ／ｋｇ）。抗ｇＤ  ＴＤＢは、非ＣＬＬ−１標的アイソタイプ一致抗体対照を表す。無作為化及び投薬前に、両導入遺伝子の予測される発現プロファイル、及び表面ＣＤ６９の発現により判断されたときにＣＤ８＋細胞が活性化されなかったことを確認するために、フローサイトメトリーにより全動物を表現型化した。ＣＤ８＋細胞の活性化及びＣＤ１１ｂ＋単球の計数は、−６、１、７、及び１４日目にフローサイトメトリーにより行われた。分析時に、ＢＤ  ＦＡＣＳ  Ｃａｌｉｂｅｒを設定し、ベースラインを確立するために、個々のナイーブ２ｘＢＡＣ−Ｔｇマウスからの血液を使用した。終了時（１５日目）に、マウスからの血液をＰＫ分析用に回収した。
【０３４１】
図１２は、投薬日（１日目）後、群４〜８の動物のみが顕著に上昇したレベルのＣＤ６９発現を有したことを示す。我々の治療用抗体ｈ６Ｅ７またはｈ２１Ｃ９を交差遮断しないことが示された抗マウスＣＤ１１ｂ−ＦＩＴＣ及び抗ヒトＣＬＬ−１−Ａｌｅｘａ  ６４７抗体（５０Ｃ１；ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ）を使用して、ｍＣＤ１１ｂ＋／ｈＣＬＬ−１＋細胞の枯渇を監視することにより効力を測定した。効力は、ｈＣＬＬ−１＋細胞の最大枯渇が（Ｇ５）０．５ｍｇ／ｋｇのｈ６Ｅ７Ｎ５４Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１  ＴＤＢ及び（Ｇ８）０．５ｍｇ／ｋｇのｈ６Ｅ７Ｎ５４Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１１  ＴＤＢで処置されたマウスにより投薬した次の日に達成されたとき、及び（Ｇ４）ｈ６Ｅ７Ｎ５４Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１＠０．１ｍｇ／ｋｇ、または（Ｇ７）０．５ｍｇ／ｋｇのｈ６Ｅ７Ｎ５４Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ｈ４０Ｇ５ｃ、または（Ｇ６）０．１ｍｇ／ｋｇのｈ６Ｅ７（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＮ５４）ｘ  ｈ４０Ｇ５ｃで処置されたマウスにおいて顕著な枯渇が達成されたとき、ＣＤ８＋エフェクター細胞の抗原特異的活性と相関した（図１３）。実験の経過にわたって、ＴＤＢが低、高、または非常に高親和性のｈＣＤ３ε結合アームのいずれかを含んだかにかかわらず、０．５ｍｇ／ｋｇの抗ＣＬＬ−１特異的ＴＤＢが最も有効であった。１４日目に、少なくとも約２５〜５０％の枯渇が群５及び７のマウスにより維持された。ビヒクルまたは非ＣＬＬ−１標的アイソタイプ一致ＴＤＢ対照群において、ＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化またはｈＣＬＬ−１＋細胞の枯渇は観察されなかった。類似する実験では、ｈ６Ｅ７の親及び変異型の効力は非常に類似した（データは示さず）。
【０３４２】
Ｄ．抗ＣＬＬ−１  ＴＤＢのインビトロ安全性評価
ヒト造血幹細胞（ＨＳＣ；ＣＤ３４＋、ＣＤ３８−）は、ＣＤ３３を発現するが、ＣＬＬ−１を発現しないように思える。したがって、ＣＬＬ−１に特異的なＴＤＢがＴＤＢ標的ＣＤ３３よりも有効かつ安全な治療剤であり得るかどうかを決定するために、ヒト骨髄細胞を、抗ｇＤ  ｘ  ３８Ｅ４ｖ１  ＴＤＢまたはｈ６Ｅ７（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１  ＴＤＢで処理し、続いてＨＳＣ及び前駆細胞由来の得られるＧＥＭＭ（顆粒球、赤血球、単球、巨核球）コロニー形成単位を計数した。当然のことながら、ＨＳＣは、自己再生ならびに前駆細胞及び分化系列特異的細胞の形成の特性を保有するが、前駆細胞は、分化系列特異的細胞のコロニーを形成する能力を有するが、自己再生できない。我々のＨＳＣ（ＣＤ３４＋及びＣＤ３８−）の表現型ならびに前駆細胞／分化（ＣＤ３４＋  ＣＤ３８＋）細胞は、ＣＤ３４＋／ＣＤ３８−及び前駆細胞／分化細胞で検出されるＣＤ３３と比較して、後者によるＣＬＬ−１発現のみを示す（図１４）。
【０３４３】
以下の実施例では、ヒト骨髄由来ＨＳＣが培養物中で増殖及び分化する能力に対する抗ヒトＣＬＬ−１  ＴＤＢ処理の作用を決定するために、ヒトコロニー形成細胞（ＣＦＵ）アッセイＭｅｔｈｏＣｕｌｔ，（ＳｔｅｍＣｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ，ＢＣ，Ｃａｎａｄａ）を使用した。このアッセイにおいて、ＣＬＬ−１  発現を欠く未成熟造血細胞（ＨＳＣ）はＣＬＬ−１  ＴＤＢでの処理による枯渇が温存されるはずであるが、細胞表面でＣＬＬ−１を発現する系列に関与する前駆細胞及び分化細胞は処理により消滅するはずであると予測することができる。
【０３４４】
同じドナーからの新しいヒト骨髄及び血液をＡＬＬＣＥＬＬＳ（Ａｌａｍｅｄａ，ＣＡ）から取得し、密度勾配分離により加工した。ヒトＣＤ８＋Ｔ細胞を、血液ＰＢＭＣから、及びセクションＡに記載されるようにインビトロ死滅アッセイで使用された骨髄白血球と共に単離した。エフェクター（ＣＤ８＋Ｔ細胞）対標的（ＢＭ白血球）比は、３（１５０，０００細胞）：１（５０，０００細胞）であった。ＨＳＣを支持するために、次の補足物：１０％熱不活性化ＦＣＳ、２ｍＭグルタミン、ＳｔｅｍＳｐａｎ  ＣＣ１００サイトカインカクテル（ＳｔｅｍＣｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、２０ｎｇ／ｍｌのヒトＧＭ−ＣＳＦ、２０ｎｇ／ｍｌのヒトＧ−ＣＳＦ、及び０．３ｍｇ／ｍｌの低内毒素ヒトＩｇＧ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎｓ，Ｎｏｖｉ，ＭＩ）を含有するＩｓｃｏｖｅ’ｓ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  Ｍｅｄｉｕｍ（ＩＭＤＭ）に標的細胞を再懸濁し、ＦｃγＲを遮断するために３７℃で１時間プレインキュベートした後、ＣＤ８＋Ｔ細胞及びＴＤＢを添加した。１００ｕｌアッセイ体積中のＴＤＢの最終濃度は、５または５０ｎｇ／ｍｌのいずれかであった。試験物質は、ｈ６Ｅ７（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１  ＴＤＢであり、ＩｇＧ一致非標的陰性対照は、抗ヒトｇＤ  ｘ  ３８Ｅ４ｖ１  ＴＤＢであった。細胞を４０時間インキュベートした。ＦＡＣＳによるＣＤ１４＋単球の枯渇を２つの複製物で確認し、残りの３つの複製物を採取し、洗浄し、３ｍｌのＭｅｔｈｏＣｕｌｔに再懸濁した。１．１ｍｌのアリコートを１６ｇの平滑末端針を有する３ｍｌシリンジから３５ｍｍ皿（ＳｔｅｍＣｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）に分配し、処理群当たり２つ平板培養した。皿を１４日間インキュベートし、７日目から１４日目まで監視した。
【０３４５】
死滅アッセイは、抗ヒトｇＤ  ｘ  ３８Ｅ４ｖ１陰性対照ＴＤＢと比較して、５及び５０ｎｇ／ｍｌの両方の濃度でｈ６Ｅ７（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１  ＴＤＢによるＣＤ１４＋骨髄単球の特定の枯渇を示した（図１５Ａ）。これにより、抗ＣＬＬ−１  ＴＤＢが機能的であったことが確認された。ＣＦＵ−ＧＭ、−Ｍ、及び−ＧＥＭＭの計数が１０日目に行われ、図１５Ｂに結果を示す。抗ヒトｇＤ  ｘ  ３８Ｅ４ｖ１で処理された細胞または処理なしの細胞と比較して、ＣＦＵ−ＧＭ、−Ｍ、及びＧＥＭＭにおいて約８０％の低下が５ｎｇ／ｍｌ及び５０ｎｇ／ｍｌのｈ６Ｅ７（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１で処理された細胞に関して観察された。ＣＦＵのこの損失はヒトＣＬＬ−１を発現する造血骨性髄系前駆細胞及び成熟系列分化細胞の枯渇を表すと想定される。残りのＣＦＵは、おそらくヒトＣＬＬ−１（−）ＨＳＣの自己再生及び分化能の結果である可能性が高い。この結果は、ヒトＣＬＬ−１を発現するＴＤＢ標的細胞が造血の能力に大幅に影響を与えない証拠を提供する。さらに２００倍のｈ６Ｅ７（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１  ＴＤＢを使用した類似する実験も類似する結果をもたらした。加えて、赤血球の再生は１４日目に利用された。ｈ６Ｅ７（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１  ＴＤＢでの処理は、ＣＦＵ−Ｅ及びＢＦＵ−Ｅにおいて、未処理細胞と比較して約２５％、及び抗ヒトｇＤ  ｘ  ３８Ｅ４ｖ１  ＴＤＢと比較して約１６％のわずかな縮小を示した（図１５Ｃ）。結果は、ＨＳＣによる赤血球再生がほぼ無傷であったことを示唆する。最後に、ＣＤ３３またはＣＬＬ−１のいずれかを発現するヒト骨髄ＣＤ３４＋細胞の選別及びＭｅｔｈｏＣｕｌｔアッセイにおける平板培養は、ＣＤ３４＋／ＣＬＬ−１＋集団に関してＣＦＵ−ＧＭ、ＣＦＵ−Ｇ、またはＣＦＵ−Ｍの再構築のみを示したが、ＣＤ３４＋／ＣＤ３３＋集団は、より原始的な造血細胞を示す（データは示さず）さらなる細胞系列（ＣＦＵ−Ｅ及びＣＦＵ−ＧＥＭＭ）を産生した。
【０３４６】
Ｅ．抗ＣＬＬ−１  ＴＤＢのインビボ薬物動態及び薬物動力学
抗ヒトＣＬＬ−１  ｈ６Ｅ７Ｎ５４Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）及び抗ヒトＣＤ３ε（ｈ４０Ｇ５ｃまたは３８Ｅ４ｖ１または３８Ｅ４ｖ１１）二重特異性抗体の組み合わせが、末梢血、骨髄、及び脾臓におけるそれらのＰＫ及びＰＤを決定するためにインビボで研究された。非特異的及び標的特異的ＰＫは、それぞれ、ＳＣＩＤベージュ及び２ＸＢＡＣ−Ｔｇマウスにおいて特徴付けされた。マウスを無作為に３つの群に割り付け、０日目に０．５ｍｇ／ｋｇの単一静脈内用量を与えた。マウスを、群１（ｈ６Ｅ７Ｎ５４Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ｈ４０Ｇ５ｃ）、群２（ｈ６Ｅ７Ｎ５４Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１）、及び群３（ｈ６Ｅ７Ｎ５４Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１１）に割り当てた。ｈＣＬＬ−１  ｘ  ｈＣＤ３ｅ  ＢＡＣ−Ｔｇマウス（２ｘＢＡＣ−Ｔｇ）を使用する研究は上述のように行われ、血液及び組織が、−７日目（投薬前）、投薬１５分後、２時間後、６時間後、１日後、７日後、及び１４日後の時間点で回収された。投与前を除き、全ての時間点が最終である。二重特異性抗体の濃度及びサイトカインの濃度は血液において測定された。Ｔ細胞の活性化及び標的細胞数の低減は血液及び組織において測定された。フロー分析は、８色  ＢＤ  ＬＳＲ  Ｆｏｒｔｅｓｓａ細胞分析器で行われた。
【０３４７】
図１７Ａは、ＳＣＩＤマウス（Ｔ細胞（ＣＤ３）を欠き、ヒトＣＬＬ−１を発現する骨髄系細胞）において、非ＣＬＬ−１標的アイソタイプ一致抗体対照（抗ｇＤ  ｘ  ｈ４０Ｇ５ｃ及び抗ｇＤ  ｘ  ３８Ｅ４ｖ１）と比較して、二重特異性抗体（群１〜３）が経時的に類似する抗体濃度を有することを示す。ＰＫパラメータは図１７Ｂに要約され、抗ｈＣＬＬ−１ｘ抗ＣＤ３ε二重特異性抗体の標的の不在が抗ｇＤ対照と比較して類似するＰＫ及びクリアランスを示すことを図示する。これらの二重特異性抗体が両標的（ヒトＣＤ３ε及びヒトＣＬＬ−１）を発現するマウスにおいて検査されたとき、Ｃｍａｘ値がｈＣＬＬ−１ｘ抗ＣＤ３ε分子間で比較可能であった。しかしながら、曝露においてＣＤ３アーム親和性に依存する相違が観察された（図１７Ｃ）。ｈ６Ｅ７Ｎ５４Ａ  ｘ  ｈ４０Ｇ５ｃは、最も遅いクリアランスを有し（ＣＬ＝１０．６ｍＬ／ｄ／Ｋｇ）、これは、３８Ｅ４ｖ１（ＣＬ＝２３．５ｍＬ／ｄ／Ｋｇ、ＡＵＣ＝２１．３ｄ．μｇ／ｍＬ）または３８Ｅ４ｖ１１（ＣＬ＝３７．４ｍＬ／ｄ／Ｋｇ、ＡＵＣ＝１８．１ｄ．μｇ／ｍＬ）を含む二重特異性抗体と比較して、経時的により高い薬物曝露（ＡＵＣ＝４７．１ｄ．μｇ／ｍＬ）に換算される（図１７Ｄ）。
【０３４８】
ヒトＣＬＬ−１を発現するマウス細胞における低減は、末梢血、骨髄、及び脾臓におけるＰＤの基準として使用された。図１８は、ｈ６Ｅ７Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ｈ４０Ｇ５ｃの単一０．５ｍｇ／ｋｇ用量が末梢血において７日目付近で最大標的低減をもたらし、同時に骨髄及び緋想において標的細胞が縮小したことを示す。類似する作用及びより顕著な作用が、ｈ６Ｅ７Ｎ５４Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１（図１９）及びｈ６Ｅ７Ｎ５４Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ３８Ｅ４ｖ１１（図２０）で見られた。マウスＣＤ８＋細胞でのＣＤ６９の上方調節は、最大標的縮小に関連する時間点とも相関した（図２１）。血液、骨髄、及び脾臓における標的細胞の欠如は、ｈＣＬＬ−１を発現する標的細胞の縮小が骨髄または脾臓への辺縁趨向によるものではなかったことを示唆する。類似する結果がプールされたリンパ節において見られた（データは示さず）。
【０３４９】
別の実験において、２ｘＢＡＣ−Ｔｇマウスを、ビヒクル、または０．１ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ−Ｌ１（６Ｅ１１）もしくはｈ６Ｅ７Ｎ５４Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ｈ４０Ｇ５ｃ、または０．５ｍｇ／ｋｇのｈ６Ｅ７Ｎ５４Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘｈ４０Ｇ５ｃ、またはｈ６Ｅ７Ｎ５４Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ｈ４０Ｇ５ｃ及び抗ＰＤ−Ｌ１の組み合わせで処置した。抗ＰＤ−Ｌ１の投与を、０日目に１０ｍｇ／ｋｇ  ＩＶで与え、その後、５ｍｇ／ｋｇで週に２回ＩＰ投薬した。２つの独立したインビボ研究の結果は、０．５ｍｇ／ｋｇのｈ６Ｅ７Ｎ５４Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ｈ４０Ｇ５ｃ及び１０ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ−Ｌ１の組み合わせ処置が、いずれかの単剤で処置したマウスと比較して、全体的により良い骨髄低減をもたらしたことを示す（図２２Ａ〜Ｂ）。しかしながら、このマウスモデルにおいて、単球及び顆粒球、好酸球の亜集団のみがフローサイトメトリーにより検出可能なレベルのヒトＣＬＬ−１を発現する。２Ｘ−ＢＡＣ−Ｔｇモデルにおける顆粒球の大半がヒトＣＬＬ−１を発現するが、フローサイトメトリーによる検出の限界を下回る可能性がある。カニクイザル及びヒトにおいて、単球及び顆粒球でのＣＬＬ−１の顕著な細胞表面発現がある。２ｘＢＡＣ−Ｔｇモデルにおける顆粒球低減の改善は、ｈ６Ｅ７Ｎ５４Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ｈ４０Ｇ５ｃが骨髄系細胞でＰＤ−Ｌ１を上方調節することができるという事実により説明することができる。この仮説に取り組むために、ビヒクル、または０．１ｍｇ／ｋｇのｈ６Ｅ７Ｎ５４Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ｈ４０Ｇ５ｃ、または０．５ｍｇ／ｋｇのｈ６Ｅ７Ｎ５４Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ｈ４０Ｇ５ｃのいずれかで処置したマウスからの血液を、ＣＤ１１ｂ＋骨髄系細胞での細胞表面ＰＤ−Ｌ１の存在について７日目（研究終了）に分析した。図２２Ｃ〜Ｄは、単剤ｈ６Ｅ７Ｎ５４Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ｈ４０Ｇ５ｃで処置したマウスが、陰性対照群（ビヒクル）と比較して、顆粒球でＰＤ−Ｌ１発現の顕著な上方調節を呈したことを示す。類似する応答が単球で明らかであった。全体的に、ＰＤ−Ｌ１上方調節のレベルは、ｈ６Ｅ７Ｎ５４Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ｈ４０Ｇ５ｃの用量に関連した。これらの結果は、ｈ６Ｅ７Ｎ５４Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ｈ４０Ｇ５ｃが、ＰＤ−Ｌ１のような免疫チェックポイント分子を調節する能力を有し、抗ＰＤ−Ｌ１治療剤と、ｈ６Ｅ７Ｎ５４Ａ  ６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ｈ４０Ｇ５ｃまたはｈ６Ｅ７Ｎ５４Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ｈ３８Ｅ４ｖ１またはｈ６Ｅ７Ｎ５４Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ｈ３８Ｅ４ｖ１１のような抗ＣＬＬ−１指向された二重特異性抗体との組み合わせがＡＭＬの別の治療戦略であることを示す。
【０３５０】
実施例３：カニクイザルにおける毒性、毒物動態（ＴＫ）、及びＰＤ研究
上述の抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体（ｈ６Ｅ７Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ｈ４０Ｇ５ｃ（低親和性抗ヒトＣＤ３εアーム）及びｈ６Ｅ７Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ｈ３８Ｅ４ｖ１（高親和性抗ヒトＣＤ３εアーム））を、毒性、毒物動態（ＴＫ）、及び薬物動力学（ＰＤ）を決定するために、カニクイザルにおいて評価した。この研究は、モーリシャス起源の目的繁殖されたナイーブＭａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓを使用して行われた。研究に選ばれた動物は、フローサイトメトリーにより循環ＣＤ１１ｂ＋骨髄系細胞（顆粒球及び単球）でＣＬＬ−１を発現することが示された。表９に要約されるように、単一静脈内注入を介して雄のカニクイザルの４つの群に、ビヒクルまたは抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体を投与し、標的細胞枯渇及び回復について８〜２９日間研究した。
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【０３５１】
複数の時間点で血清を回収し、各血清試料中の試験物質の量を決定するために、ＥＬＩＳＡ用に−７０Ｃで保管した。ＷｉｎＮｏｎｌｉｎソフトウェア（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ；Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ，ＣＡ）を使用して、ＰＫパラメータを推定するために、血清濃度−時間プロファイルを使用した。標準的な血液学的評価（白血球分画）により、ならびにフローサイトメトリーによる末梢血及び骨髄におけるＣＤ１１ｂ＋骨髄系細胞の低減を測定することにより、ＰＤ作用を決定した。骨髄フローサイトメトリーは次のように行われた：汚染赤血球を除去するために９０％ハイパック−フィコールを使用する勾配遠心により、新しい骨髄吸引液を加工した。続いて、精製された骨髄細胞を、上述の生細胞染色条件を使用して、生体染色７ＡＡＤの存在下で、非ヒト霊長類に特異的な抗体ＣＤ４（Ｐｅ−Ｃｙ７）、ＣＤ８（Ｐａｃｉｆｉｃ  Ｂｌｕｅ）、Ｃ２０（ＦＩＴＣ）、ＣＤ１１ｂ（ＡＰＣ）、及びＣＬＬ−１（ＰＥ）で染色した。マルチプレックスアッセイで血清サイトカインレベルを分析し、標準的なアッセイを使用して血清生化学を評価した。
【０３５２】
４匹の動物を、それらの予定された剖検前に安楽死させた（群４の３匹全ての動物及び群２の１匹）。高親和性ＣＤ３アーム（ｈ６Ｅ７Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ｈ３８Ｅ４ｖ１）（０．５ｍｇ／ｋｇ）を有する抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体を与えられた群４の３匹全ての動物は、著しく上昇した血清サイトカインレベル（ＴＮＦ−α、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、及びＩＬ−６を含む）と相関した発熱及び瀕死の状態を示した。これらの動物は、１日目（Ｎ＝１）または２日目（Ｎ＝２）に安楽死され、サイトカイン放出症候群と一致する循環虚脱の顕微鏡的証拠を有した。この毒性のため、高親和性ＣＤ３アーム（ｈ６Ｅ７Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ｈ３８Ｅ４ｖ１）を有する抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体はさらに評価されなかった。
【０３５３】
群２の動物は、投薬後４〜８日の間に発熱を示した。これらの動物のうちの１匹は食欲不振及び倦怠感を発達させ、６日目に早い安楽死を必要とした。この動物の病的状態の特定の原因は特定されず、低親和性ＣＤ３アーム（ｈ６Ｅ７Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ｈ４０Ｇ５ｃ）を有する０．２ｍｇ／ｋｇの低用量の抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体が群３において調査された。この用量は、全ての動物において十分に忍容され、研究期間の間、発熱または他の臨床徴候はなかった。低親和性ＣＤ３アーム（ｈ６Ｅ７Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ｈ４０Ｇ５ｃ）を有する抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体を投与された動物において、低減したサイトカイン応答が観察され、高親和性ＣＤ３アーム（ｈ６Ｅ７Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ｈ３８Ｅ４ｖ１）を有する抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体を投与されたそれらの動物と比較して、評価された炎症誘発性サイトカインの大半において、ほとんど上昇しなかった。群３の全ての動物は、８日目（Ｎ＝３）及び２２日目（Ｎ＝３）の予定された安楽死まで生存した。
【０３５４】
一般的に、低及び高親和性ＣＤ３アームを有する抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体の臨床病理の変化は、骨髄系及びリンパ系細胞、サイトカイン放出、ならびに関連する急性相炎症応答において、類似し、標的に関連する著しい減少と一致した。群４の動物及び群２の予定外の安楽死を必要とする動物は、血液学的（ＰＤ）作用の規模は類似したが、予定された安楽死まで生存した、低親和性ＣＤ３アーム（ｈ６Ｅ７Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ｈ４０Ｇ５ｃ）を有する０．２ｍｇ／ｋｇ以上の抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体を与えられたサルと比較して、一般的により明白な急性相応答を有した。
【０３５５】
低親和性ＣＤ３アームを有する抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ｈ４０Ｇ５ｃ）を受けた動物は、二重特異性抗体の薬理学的活性により、予測された骨髄系細胞の低減を示した。それぞれ、主に２〜４日目及び４〜８日目に単球及び好中球の著しい低減があり（図２３Ａ及びＢ）、これは、６日目（予定外）及び８日目の安楽死の脾臓における骨髄及び好中球において著しく減少した後期骨髄系細胞と相関した。８日目に安楽死させた動物からの骨髄のフローサイトメトリー評価は、総ＣＤ１１ｂ＋骨髄系細胞の顕著な低減を確認した（図２３Ｃ）。加えて、ＣＤ１１ｂ＋細胞の全てがカニクイザルＣＬＬ−１を同時発現し（図２３Ｄを参照されたい）、したがって標的特異性を示し、血液及び骨髄系細胞の両方が同時に枯渇した。循環リンパ球は、２日目に低減し始めた（図２４）。１２日目までに好中球、単球、及びリンパ球の反跳回復があり、反跳応答の継続であると考えられた１５日目の０．２ｍｇ／ｋｇで好中球が著しく増加し、８日目までに生じたＧ−ＣＳＦにおける増加と相関した。個々の動物の全白血球数は２２日目または２９日目までにベースラインに向かう傾向にあるか、またはそれに近似し、それぞれ、２２日目または２９日目までに、膵臓及び骨髄において顕微鏡的変化の完全な回復かあった。
【０３５６】
高親和性バージョンと比較した臨床徴候、病的状態、及び縮小したサイトカイン放出の低減は、高親和性ＣＤ３アーム（ｈ６Ｅ７Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ｈ３８Ｅ４ｖ１）を有する抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体と比較して、低親和性ＣＤ３アーム（ｈ６Ｅ７Ａ（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ｈ４０Ｇ５ｃ）を有する抗ＣＬＬ−１／ＣＤ３  ＴＤＢ抗体の改善された安全なプロファイルを示す。
【０３５７】
薬物曝露は、処置群の全ての動物において確認された。濃度−時間プロファイル及びＰＫパラメータの要約を図２５に示す。用量に比例するＣｍａｘは、０．２〜０．５ｍｇ／ｋｇのｈ６Ｅ７Ａ  ｘ  ｈ４０Ｇ５ｃ  ＴＤＢ抗体（（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４）ｘ  ｈ４０Ｇ５ｃ）について観察された。陽性抗治療用抗体（「ＡＴＡ」）が１５日目に全ての試料において確認された。前述の発明は明確な理解のために例証及び例によって多少詳しく説明されているが、これらの説明及び例は、本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。本明細書で引用される全ての特許及び科学文献の開示は、参照によりそれらの全体が明示的に組み込まれる。
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【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図５Ｄ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図８Ｄ】
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【図８Ｅ】
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【図８Ｆ】
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【図８Ｇ】
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【図８Ｈ】
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【図８Ｉ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１０Ｃ】
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【図１０Ｄ】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１５Ｃ】
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【図１６Ａ】
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【図１６Ｂ】
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【図１７Ａ】
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【図１７Ｂ】
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【図１７Ｃ】
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【図１７Ｄ】
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【図１８Ａ】
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【図１８Ｂ】
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【図１８Ｃ】
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【図１９Ａ】
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【図１９Ｂ】
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【図１９Ｃ】
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【図２０Ａ】
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【図２０Ｂ】
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【図２０Ｃ】
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【図２１Ａ】
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【図２１Ｂ】
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【図２１Ｃ】
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【図２１Ｄ】
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【図２１Ｅ】
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【図２１Ｆ】
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【図２２Ａ】
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【図２２Ｂ】
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【図２２Ｃ】
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【図２２Ｄ】
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【図２３Ａ】
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【図２３Ｂ】
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【図２３Ｃ】
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【図２３Ｄ】
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【図２４】
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【図２５】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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2018522541.tif 000094
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