(57)【要約】  本発明は、被験体における近視の予防的処置又は治療的処置において使用するための作用物質であって、被験体における上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）のシグナリング及び／又はアンフィレグリンに感受性がある別の受容体のシグナリングを直接的又は間接的に減少させることができる、作用物質に関する。さらに本発明は、被験体における遠視の予防的処置又は治療的処置において使用するための作用物質であって、被験体における上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）のシグナリング及び／又はアンフィレグリンに感受性がある別の受容体のシグナリングを増大させることができる、作用物質に関する。さらに、本発明は、被験体における近視又は遠視を診断する方法であって、（ａ）該被験体から生物学的試料を得る工程と、（ｂ）上記試料中のアンフィレグリンレベルを測定する工程と、（ｃ）工程（ｂ）で測定されたレベルと、正視の被験体又は正視になりかかっている被験体において見られるアンフィレグリンレベルとを比較する工程と、（ｄ）工程（ｂ）で測定されたレベルが正視の被験体又は正視になりかかっている被験体において見られるアンフィレグリンレベルより高い場合に、上記被験体が近視である又は近視を発症する傾向にあると判定し、また工程（ｂ）で測定されたレベルが正視の被験体又は正視になりかかっている被験体において見られるアンフィレグリンレベルより低い場合に、上記被験体が遠視である又は遠視を発症する傾向にあると判定する工程とを含む、方法に関する。最後に本発明は、アンフィレグリン又はその断片若しくは多様体と会合する作用物質を同定する方法に関する。【選択図】図１
2018518452.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験体における上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）のシグナリング及び／又はアンフィレグリンに感受性がある別の受容体のシグナリングを直接的又は間接的に減少させることができる、前記被験体における近視の予防的処置又は治療的処置において使用するための作用物質。
【請求項２】
前記作用物質は、
（ａ）前記被験体におけるネイティブなアンフィレグリンに対する単離抗体、抗体フラグメント又は抗体模倣物、
（ｂ）前記被験体におけるネイティブなアンフィレグリン前駆体に対する単離抗体、抗体フラグメント又は抗体模倣物、
（ｃ）前記被験体におけるＥＧＦＲに対して遮断するような単離抗体、抗体フラグメント又は抗体模倣物、
（ｄ）被験体におけるアンフィレグリンに感受性がある別の受容体に対して遮断するような単離抗体、抗体フラグメント又は抗体模倣物、
（ｅ）ＥＧＦＲ阻害剤、及び、
（ｆ）被験体におけるアンフィレグリンの発現を減少させることが可能な低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）剤、
からなる群から選択される、請求項１に記載の使用のための作用物質。
【請求項３】
前記抗体フラグメントは、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント及びＦａｂ’フラグメントからなる群から選択される、請求項２に記載の使用のための作用物質。
【請求項４】
前記抗体模倣物は、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）、単独ドメイン抗体、アフィボディ、アフィリン、アフィマー、アフィチン、アンチカリン、ＤＡＲＰｉｎ、モノボディ及びペプチドアプタマーからなる群から選択される、請求項２又は３に記載の使用のための作用物質。
【請求項５】
硝子体内、角膜上、経角膜、経強膜、経結膜、結膜下、眼内、又は全身に投与される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の使用のための作用物質。
【請求項６】
被験体における上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）のシグナリング及び／又はアンフィレグリンに感受性がある別の受容体のシグナリングを増大させることができる、前記被験体における遠視の予防的処置又は治療的処置において使用するための作用物質。
【請求項７】
前記作用物質は、
（ａ）単離アンフィレグリン又はその生物学的に活性な断片若しくは誘導体、
（ｂ）単離アンフィレグリン前駆体又はその生物学的に活性な断片若しくは誘導体、
（ｃ）前記被験体における上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）に対して活性化するような単離抗体、抗体フラグメント又は抗体模倣物、
（ｄ）被験体におけるアンフィレグリンに感受性がある別の受容体に対して活性化するような単離抗体、抗体フラグメント又は抗体模倣物、及び、
（ｅ）ＥＧＦＲ活性化剤、
からなる群から選択される、請求項６に記載の使用のための作用物質。
【請求項８】
前記アンフィレグリンは、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含む、請求項７に記載の使用のための作用物質。
【請求項９】
前記アンフィレグリンは、配列番号１に示されるアミノ酸配列からなる、請求項７又は８に記載の使用のための作用物質。
【請求項１０】
アンフィレグリンの前記生物学的に活性な断片又は誘導体は、配列番号１に示されるアミノ酸配列に対して、少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項７〜９のいずれか一項に記載の使用のための作用物質。
【請求項１１】
前記抗体フラグメントは、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント及びＦａｂ’フラグメントからなる群から選択される、請求項７〜１０のいずれか一項に記載の使用のための作用物質。
【請求項１２】
前記抗体模倣物は、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）、単独ドメイン抗体、アフィボディ、アフィリン、アフィマー、アフィチン、アンチカリン、ＤＡＲＰｉｎ、モノボディ及びペプチドアプタマーからなる群から選択される、請求項７〜１１のいずれか一項に記載の使用のための作用物質。
【請求項１３】
硝子体内、角膜上、経角膜、経強膜、経結膜、結膜下、眼内、又は全身に投与される、請求項６〜１２のいずれか一項に記載の使用のための作用物質。
【請求項１４】
被験体において近視若しくは遠視、又は近視若しくは遠視を発症する傾向を診断する方法であって、
（ａ）該被験体から生物学的試料を得る工程と、
（ｂ）前記試料中のアンフィレグリンレベルを測定する工程と、
（ｃ）工程（ｂ）で測定されたレベルと、正視の被験体又は正視になりかかっている被験体において見られるアンフィレグリンレベルとを比較する工程と、
（ｄ）工程（ｂ）で測定されたレベルが正視の被験体又は正視になりかかっている被験体において見られるアンフィレグリンレベルより高い場合に、前記被験体が近視であるか、又は近視を発症する傾向にあると判定し、また工程（ｂ）で測定されたレベルが正視の被験体又は正視になりかかっている被験体において見られるアンフィレグリンレベルより低い場合に、前記被験体が遠視であるか、又は遠視を発症する傾向にあると判定する工程と、
を含む、方法。
【請求項１５】
アンフィレグリン又はその断片若しくは多様体と会合する作用物質を同定する方法であって、
（ａ）前記アンフィレグリン若しくはその断片若しくは多様体、又はアンフィレグリン若しくはその断片若しくは多様体を発現する組換え宿主細胞を、試験化合物と接触させる工程と、
（ｂ）前記試験化合物が、アンフィレグリン又はその断片若しくは多様体に結合する能力を分析する工程と、
を含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、被験体における近視の予防的処置又は治療的処置において使用するための作用物質であって、被験体における上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）のシグナリング及び／又はアンフィレグリンに感受性がある別の受容体のシグナリングを直接的又は間接的に減少させることができる、作用物質に関する。さらに本発明は、被験体における遠視の予防的処置又は治療的処置において使用するための作用物質であって、被験体における上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）のシグナリング及び／又はアンフィレグリンに感受性がある別の受容体のシグナリングを増大させることができる、作用物質に関する。さらに、本発明は、被験体において近視又は遠視を診断する方法であって、（ａ）該被験体から生物学的試料を得る工程と、（ｂ）上記試料中のアンフィレグリンレベルを測定する工程と、（ｃ）工程（ｂ）で測定されたレベルと、正視の被験体又は正視になりかかっている被験体において見られるアンフィレグリンレベルとを比較する工程と、（ｄ）工程（ｂ）で測定されたレベルが正視の（emmetropic）被験体又は正視になりかかっている被験体において見られるアンフィレグリンレベルより高い場合に、上記被験体が近視である又は近視を発症する傾向にあると判定し、また工程（ｂ）で測定されたレベルが正視の被験体又は正視になりかかっている被験体において見られるアンフィレグリンレベルより低い場合に、上記被験体が遠視である又は遠視を発症する傾向にあると判定する工程とを含む、方法に関する。最後に本発明は、アンフィレグリン又はその断片若しくは多様体と会合する作用物質を同定する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
近視は、過去三十年で世界的な健康問題として急浮上してきている。近視は、視力障害の主要な原因の一つであると共に、網膜剥離、近視性黄斑症、緑内障及び白内障を含む失明の恐れのある眼の合併症と関連している。家系研究及び双生児研究からの証拠により、近視は、一部の家系では高度に遺伝的であり得るという見解が支持されている。その一方で、世界の多くの地域における過去数十年での近視の急増は、特に東アジアの都市部では、教育の厳しさの増加等の生活様式の変化の結果であると考えられている。近視の有病率の増加と並行して、遠視の有病率は減少している。しかしながら、遠視は、遠用眼鏡及び近用眼鏡を必要とし、そして閉塞隅角緑内障、加齢黄斑変性及び糖尿病性網膜症の有病率を増加させるといった明らかな不利益を伴う。
【０００３】
乳幼児から成人に向かう成長段階の眼の正視化（すなわち、眼鏡なしでの、かつ眼内の天然水晶体の遠近調節効果なしでの鮮明な遠見視力）の過程は、まだ明らかにされていない。強度軸性近視の発症は、非制御の正視化過程により眼球の眼軸延長が引き起こされたものとみなすことができる。眼球はその屈折力に対して長すぎると、網膜の前方に距離が置かれた位置で物体の像に焦点が合うため、網膜の解剖学的光学中心としての黄斑が焦点に位置せず、こうして、ぼやけた境界を伴うぼやけた像が受け取られる。眼球の屈折力に対して短すぎて、網膜の後方に距離が置かれた位置で物体の像に焦点が合う遠視眼球についても同様のことが言える。
【０００４】
出生時には、眼軸長は約１５ｍｍ〜１７ｍｍであり、成人になると約２３．６ｍｍ〜２４．０ｍｍにまで延長する。大部分の農耕社会の殆どの被験体は正視であるので、網膜の像の鮮明さを感知し、軸長が短すぎるか又は長すぎるかという情報を引き渡すことによってエフェクター部分と連絡し、特にその軸長での眼の成長を制御する精密に調整されたフィードバック機構が存在する必要がある。
【０００５】
上記精密に調整されたフィードバック機構は網膜に位置していると推定されている。それというのも、網膜は眼の唯一の感光性の部位であるからである。光受容及び光情報伝達の連鎖における１つ目の要素としての網膜光受容体は高度に分化されている（実験条件下では、単独の光受容体は光エネルギーの物理的最小単位、すなわち光子を検知することができる）ので、像のぼやけ（焦点外れ）を検知する過程が、主として光受容体内に位置しているとは考えられない。後続の細胞群は、内顆粒層中にある水平細胞及びアマクリン細胞である。それらの細胞は、光受容体によって得られた情報のコントラスト形成及び増強と関連していることが分かっている。水平細胞及びアマクリン細胞は、網膜の外網状層及び内網状層中に密な水平方向ネットワークを形成する。コントラストは、像のぼやけを検知する上での必須の要素であるので、水平細胞／アマクリン細胞は、網膜ミュラー細胞、双極細胞及び網膜の内顆粒層中のその他の細胞と連係して、眼の成長を制御するフィードバック機構の主要な感覚部分を形成すると考えられる。像の境界が鮮明であれば、すなわち２つの隣接する光受容体のうち一方が物体の境界の入射光によって完全に活性化され、かつその隣の光受容体が網膜上の像の鮮明な境界のため完全に暗ければ、その像は鮮明である。網膜上の像の境界での光受容体の照度の減少が、幾つかの隣接した光受容体にわたり勾配するようなものであれば、網膜上の像はぼやけている。これらの差異（勾配的な輪郭と鮮鋭な形状との差異）は、水平細胞／アマクリン細胞系によって検知することができる。
【０００６】
物体の像がぼやけていると検知された場合に（すなわち、眼の光軸の長さが、眼の光学系の屈折力と一致しない場合に）、次の工程では、眼球が短すぎる（すなわち、遠視）又は長すぎる（すなわち、近視）かが区別される。これは、眼内の光の色収差によって達成され得る：短波長（青色）光線は、長波長（赤色）光線と比較して、生理学的により大きく回折されるため、より短い光軸を有する。ここで、白色（すなわち全ての分光色の混色）像に目を向ける場合に、その像は、網膜上に投影されることとなる。青色感受性光受容体が、赤色感受性光受容体よりも鮮明な像を伝える場合に、軸長（光軸）は短すぎ、赤色感受性光受容体が、青色感受性光受容体よりも鮮明な像を伝える場合に、軸長（光軸）は長すぎる。したがって、該系は、眼軸の成長を増大又は減少させる必要があるかどうかを区別することができる。
【０００７】
正視化の過程のエフェクターは、ブルッフ膜（ＢＭ）を下に有する網膜色素上皮（ＲＰＥ）であると想定されている。これは、眼の外側の厚い被膜としての強膜が、眼球の眼軸延長の決定要因であるという一般的な認識に反するものである。近視の眼軸延長の過程において、後部強膜は、正視眼での約１ｍｍから強度近視眼での０．１ｍｍへと非常に薄くなる。この後部強膜が非常に薄くなるということを考慮して、強膜は、強度近視における過剰な眼軸延長の主要なエフェクターであり、したがって強膜が正視眼の正常な眼軸成長に役割を果たすかもしれないと通常受け入れられていた。しかしながら、この仮説は、以下の解剖学的事実によれば正しくなさそうである。この関連で、図１及び図２に、眼の肉眼的解剖学的構造及び顕微鏡的解剖学的構造についての概要を示す。
【０００８】
上記エフェクターが、主として眼を延長して眼をより長くする強膜であるとすれば、強膜と内層、特にブルッフ膜（ＢＭ）との間の距離は拡大するはずである。強膜とＢＭとの間の空間は、脈絡膜で満たされている。しかしながら、軸性近視が高まると、脈絡膜は、より大幅に薄くなり（約２５０ｐｍから３０ｐｍ未満まで）、ＢＭと強膜との間の距離は大きく減少する。これにより、強度軸性近視においては、眼の内部が（強膜の拡張及び延長によって）外側に引っ張られるのではなく、内側の過程によって外側に押し出されることが示唆され得る。さらに、強膜は、非常に栄養緩徐であり、少数の神経及び血管しか含んでいない。軸長を０．１ｍｍ未満の精度で制御する必要がある眼の正視化のような精密に調整された機構が、強膜といった小さい組織的構造に依存するとは考えられない。また入射光線は、ＢＭの内表面にあるＲＰＥに非常に近いか又はその中にある網膜光受容体の外節に焦点が合わされる必要がある。しかしながら、強膜とＲＰＥ層とは、その厚さが日中、そしておそらく体位及び脳脊髄液圧のような要因に依存して変動するスポンジ状の脈絡膜によって隔離されている。このことにより、強膜が正視化の過程における主要なエフェクターであるということは更にありそうもない。
【０００９】
これらの所見を考慮して、ＲＰＥ及びＢＭが正視化の過程のエフェクター部分を成すという見込みはより大きくなる。ＢＭは、その内側にあるＲＰＥの基底膜と、その外側にある脈絡毛細管板の基底膜と、その中心にある弾性膜によって互いに隔離された２つのコラーゲン層とからなる。ＲＰＥと一緒に、ＢＭは、脈絡膜と網膜との間の境界を形成し、漏出性の脈絡毛細管板により膠質浸透圧がその脈絡膜側で増大し、かつ網膜−血液関門により網膜組織のその内側には大抵は浮腫が含まれない。ＢＭのこの分水機能は、臨床的に重要性が高い。それというのも、ＢＭ−ＲＰＥ複合体における何らかの欠陥は、網膜組織中への流体の漏出に導き、網膜機能の二次的破壊をもたらすからである。ＢＭと強膜とは、緩く配列したスポンジ状の脈絡膜によって隔離されており、視神経頭の内側として生理学的開口を示す。その関門機能の他に、ＢＭは、生物力学的特性を有する。それというのも、ＢＭは、前方固着部としての毛様体から、間接的には強膜岬から後方固定部としての乳頭周囲輪まで及ぶ連続的な内殻であるからである。ＢＭの生物力学的特性はまだ調べられていない。同様に、眼の成長の間にＢＭで起こる能動的な変化はまだ調べられていない。ＢＭは、ＲＰＥの基底膜であるので、ＲＰＥは、あらゆる基底膜の場合と同様にＢＭ材料を連続的に産生する。強膜が、正視化過程のエフェクター部分ではないとすれば、その機能を満たす残された構造物は、ＲＰＥ／ＢＭ複合体だけである。脈絡膜自体は、何らかの圧力を働かせ得るためにはあまりにスポンジ状であり、同様に網膜もスポンジ状であり、そして光受容、光情報伝達、画像処理及び最終的には視覚的大脳中枢への情報の伝達のために高度に分化しすぎている。
【００１０】
したがって、ＲＰＥ／ＢＭ複合体が正視化（及び近視化）の過程についての主要なエフェクターであることを指し示す事実は、ＢＭが、強度近視眼において正視眼と比較してより薄くはないが、強膜が強度近視眼において大幅に薄くなることである。さらに、先天性緑内障による続発性高度近視を伴う眼においては、近視による強膜の菲薄化は、後方強膜だけが薄くなる原発性高度近視とは異なって、眼の前部においても生ずる。さらに、先天性緑内障による続発性高度近視を伴う眼においては、ＢＭは、原発性近視を伴う眼におけるよりも薄く、かつ正視眼におけるよりも薄くなると思われる。それは、続発性強度近視において、生まれてから２年以内において（既存の思考モデルによれば強膜又はＢＭが、そして前記機構によれば強膜が、まだ受動的に膨張可能である間に）高められた眼圧亢進（先天性緑内障による）が、眼の被膜の受動的な延長に導くことを示唆している。さらに、約２歳〜３歳の年齢を超えると、強膜体積はもはや増大せず、その後は軸長に依存しない。反対に、強膜の厚さは、眼の後極に近くなるほど、軸長が長くなるにつれて薄くなる。このことは、眼の生理学的成長の及ばない眼軸延長が、強膜の再構成によって起こり、能動的な強膜成長及び強膜体積の増加によっては起こらないことを示唆している。最後に、同様に約２歳〜３歳の年齢を超えると、脈絡膜体積は増大せず、その後は軸長に依存しない。反対に、脈絡膜の厚さは、眼の後極に近くなるほど、軸長が長くなるにつれて薄くなる。このことは、眼の生理学的成長の及ばない眼軸延長が、脈絡膜の再構成によって起こり、能動的な脈絡膜成長及び脈絡膜体積の増加によっては起こらないことを示唆している。
【００１１】
ＲＰＥは、ＢＭの延長及び成長をもたらす新たな基底膜材料の形成によって眼軸延長を調節する。先に指摘したように、水平細胞／アマクリン細胞が、網膜ミュラー細胞、双極細胞、及び網膜の内顆粒層内の他の細胞と連係して、正視化及び近視化の過程の感覚部分となり、かつＲＰＥ／ＢＭ複合体がエフェクター部分であるのであれば、問題は、どのようにして両方の部分が互いに連絡するのかということである。そのような情報の神経による伝達は網膜では全く起こりそうもないので（神経は、まだ見出されておらず、感覚部分（水平細胞／アマクリン細胞）とエフェクター部分（ＲＰＥ）との間の距離は短く、流体が網膜内腔からＲＰＥ／ＢＭ複合体を経て脈絡膜中まで連続的に流れている可能性がある）、シグナル伝達は、サイトカイン、ケモカイン、成長因子又は同様のタンパク質のような物質によって行われているかもしれない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
上記観点から、本発明の基礎をなす技術的課題は、水平細胞／アマクリン細胞とＲＰＥ／ＢＭ複合体との間のシグナル伝達のメディエーターを同定することであり、そのような知見に基づき、近視及び遠視の予防的処置又は治療的処置において使用することができる作用物質を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
上記の技術的課題の解決は、特許請求の範囲において特徴付けられる実施の形態によって達成される。
【００１４】
特に、第１の態様では、本発明は、被験体における上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）のシグナリング及び／又はアンフィレグリンに感受性がある別の受容体のシグナリングを直接的又は間接的に減少させることができる、上記被験体における近視の予防的処置又は治療的処置において使用するための作用物質に関する。
【００１５】
好ましくは、上記作用物質は、
（ａ）上記被験体におけるネイティブな（native：天然）アンフィレグリンに対する単離抗体、抗体フラグメント又は抗体模倣物、
（ｂ）上記被験体におけるネイティブなアンフィレグリン前駆体に対する単離抗体、抗体フラグメント又は抗体模倣物、
（ｃ）上記被験体におけるＥＧＦＲに対して遮断するような単離抗体、抗体フラグメント又は抗体模倣物、
（ｄ）被験体におけるアンフィレグリンに感受性がある別の受容体に対して遮断するような単離抗体、抗体フラグメント又は抗体模倣物、
（ｅ）ＥＧＦＲ阻害剤、及び、
（ｆ）被験体におけるアンフィレグリンの発現を減少させることが可能な低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）剤、
からなる群から選択される。
【００１６】
ＡＲＥＧとしても知られているアンフィレグリンは、ヒトにおいてはＡＲＥＧ遺伝子によってコードされるタンパク質である。アンフィレグリンは、上皮成長因子のファミリーのメンバーであり、自己分泌増殖因子であると共に、星状細胞、シュワン細胞及び線維芽細胞のためのマイトジェンである。アンフィレグリンは、上皮成長因子（ＥＧＦ）及びトランスフォーミング増殖因子α（ＴＧＦ−α）に関連している。さらに、アンフィレグリンは、通常、ＥＧＦ受容体（ＥＧＦＲ）と相互作用することで正常な上皮細胞の成長を促進するだけでなく、アンフィレグリンに感受性があるその他の受容体とも相互作用する。本発明の基礎をなすゲノムワイド共同メタ解析（本出願の実施例で提供されるデータを参照）において、ＡＲＥＧ遺伝子は、屈折異常と最も強い相関を示した。さらに、アンフィレグリンは、（例えばγ−アミノ酪酸とは異なり）神経伝達物質ではないので、アンフィレグリンの分泌は、視覚的求心性神経における正常なシグナル伝達を妨げない。さらに、上皮成長因子のファミリーのメンバーとして、アンフィレグリンは、ＲＰＥのような上皮細胞に作用する。これらの所見に基づいて、アンフィレグリンは、本発明において、網膜中層における感覚的ネットワークとＲＰＥ／ＢＭとの間のシグナル伝達分子としてのその機能により、眼軸延長の主たるメディエーターとして同定された。
【００１７】
「被験体における上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）のシグナリング及び／又はアンフィレグリンに感受性がある別の受容体のシグナリングを直接的又は間接的に減少させる」という語句は、本発明の作用物質が、例えばＥＧＦＲに対して遮断するような抗体、抗体フラグメント若しくは抗体模倣物の場合のように、受容体との直接的な相互作用によって、又は間接的な機構によって、例えばネイティブなアンフィレグリンに対する適切な抗体、抗体フラグメント若しくは抗体模倣物によるアンフィレグリンの不活性化、若しくは適切なｓｉＲＮＡによるアンフィレグリン発現の低下によって、それぞれの受容体の下流のシグナル伝達経路の活性を減少させる能力を指す。
【００１８】
好ましい実施の形態においては、シグナリングは、完全に遮断されるか、又は正常な生理学的レベルと比較して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２．５％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９８．５％、少なくとも９９％、少なくとも９９．２５％、少なくとも９９．５％、若しくは少なくとも９９．７５％減少される。
【００１９】
本明細書で使用される用語「単離抗体又は抗体フラグメント」は、単離された、すなわち精製されたネイティブなポリクローナル抗体若しくはモノクローナル抗体又は組換えにより産生されたポリクローナル抗体若しくはモノクローナル抗体及びそれらのフラグメントに関連する。抗体フラグメントは、好ましくは、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント及びＦａｂ’フラグメントからなる群から選択される。ネイティブな抗体を単離及び／又は精製する方法は、特に限定されるものではなく、当該技術分野で既知である。さらに、組換え抗体又は抗体フラグメントを生成及び発現する方法は、特に限定されるものではなく、当該技術分野で既知である。さらに、抗体フラグメントを生成する方法は、特に限定されるものではなく、当該技術分野で既知である。
【００２０】
本明細書で使用される用語「抗体模倣物」は、抗体のように、所定の標的構造に特異的に結合することが可能なタンパク質性化合物に関連する。好ましくは、抗体模倣物は、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）、単独ドメイン抗体、アフィボディ、アフィリン、アフィマー、アフィチン、アンチカリン、ＤＡＲＰｉｎ、モノボディ及びペプチドアプタマーからなる群から選択される。それぞれの抗体模倣物及びその製造方法は、特に限定されるものではなく、当該技術分野で既知である。
【００２１】
本明細書で使用される「被験体におけるネイティブなアンフィレグリン／ネイティブなアンフィレグリン前駆体／ＥＧＦＲ／アンフィレグリンに感受性がある別の受容体に対する抗体、抗体フラグメント又は抗体模倣物」という語句は、上記の抗体、抗体フラグメント又は抗体模倣物が、被験体においてネイティブなアンフィレグリンへと、ネイティブなアンフィレグリン前駆体へと、ＥＧＦＲへと、若しくはアンフィレグリンに感受性がある別の受容体へと特異的に結合する能力、すなわち、上記アンフィレグリン、アンフィレグリン前駆体、ＥＧＦＲ若しくはアンフィレグリンに感受性があるその他の受容体の特異的エピトープを認識して結合する能力を指す。この関連において、本明細書で使用される「アンフィレグリン／アンフィレグリン前駆体／ＥＧＦＲ／アンフィレグリンに感受性がある別の受容体に対する抗体」という語句は、「抗アンフィレグリン／抗アンフィレグリン前駆体／抗ＥＧＦＲ／抗受容体抗体」という語句と等価であることが意図される。
【００２２】
アンフィレグリン前駆体は、当該技術分野で既知であり、プロアンフィレグリンを含み、その際、プロアンフィレグリンは、好ましいアンフィレグリン前駆体である。さらに、ＥＧＦＲ以外のアンフィレグリンに感受性がある受容体は、当該技術分野で既知である。
【００２３】
本明細書で使用される「被験体におけるＥＧＦＲ／アンフィレグリンに感受性がある別の受容体に対して遮断するような抗体、抗体フラグメント又は抗体模倣物」という語句は、上記抗体、抗体フラグメント又は抗体模倣物が、アンフィレグリンによって直接的又は間接的に、例えばＥＧＦＲ若しくは上記その他の受容体へのアンフィレグリンの結合を立体的に阻止することによって、又はＥＧＦＲ若しくは上記その他の受容体の下流のエフェクター機能を阻害することによってＥＧＦＲ又はアンフィレグリンに感受性がある別の受容体の活性化を阻害する能力を指す。
【００２４】
ネイティブなアンフィレグリン、例えばネイティブなヒトのアンフィレグリンに対する抗体、抗体フラグメント又は抗体模倣物は、特に限定されるものではなく、当該技術分野で既知である。さらに、ＥＧＦＲ、例えばヒトのＥＧＦＲに対して遮断するような抗体は、特に限定されるものではなく、当該技術分野で既知である。アンフィレグリン前駆体に対して又はアンフィレグリンに感受性があるその他の受容体に対して遮断するような抗体、抗体フラグメント又は抗体模倣物にも同じことが言える。
【００２５】
本発明で使用するためのＥＧＦＲ阻害剤は、特に限定されるものではなく、当該技術分野で既知である。それぞれの作用物質は、好ましくは、ＥＧＦＲのモノクローナル抗体阻害剤及びＥＧＦＲチロシンキナーゼを阻害する小分子からなる群から選択される。
【００２６】
低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）剤並びにその製造方法及び使用方法は、特に限定されるものではなく、当該技術分野で既知である。本発明によれば、ｓｉＲＮＡ剤は、被験体におけるアンフィレグリンの発現を減少させることができる。好ましい実施の形態においては、そのようなｓｉＲＮＡ剤のアンチセンス鎖、すなわちアンフィレグリンｍＲＮＡを標的とする鎖は、配列番号２及び配列番号３に示される配列の１つからなる。
【００２７】
本発明による近視の予防的処置又は治療的処置において使用するために、上記作用物質は、好ましくは、硝子体内、角膜上、経角膜、経強膜、経結膜、結膜下、眼内、又は全身（例えば、経口、直腸内又は静脈内）に投与される。それぞれの投与方法並びに用量及び投与レジメンは、特に限定されるものではなく、当該技術分野で既知である。例えば抗体、抗体フラグメント又は抗体模倣物の個々の投与のための典型的な用量は、１ｍｇ〜２ｍｇの範囲にある。例えば硝子体内投与に関しては、注入容量は、一般的に５０μｌ〜２００μｌの範囲にある。
【００２８】
好ましい実施の形態においては、処置されるべき被験体は、ヒトの被験体である。
【００２９】
本発明の第１の態様による特に好ましい実施の形態においては、上記作用物質は、（ｉ）被験体におけるネイティブなアンフィレグリンに対する、又は（ｉｉ）被験体における上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）に対して遮断するような、抗体、抗体フラグメント又は抗体模倣物である。
【００３０】
第２の態様では、本発明は、被験体における上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）のシグナリング及び／又はアンフィレグリンに感受性がある別の受容体のシグナリングを増大させることができる、上記被験体における遠視の予防的処置又は治療的処置において使用するための作用物質に関する。
【００３１】
好ましくは、上記作用物質は、
（ａ）単離アンフィレグリン又はその生物学的に活性な断片若しくは誘導体、
（ｂ）単離アンフィレグリン前駆体又はその生物学的に活性な断片若しくは誘導体、
（ｃ）上記被験体における上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）に対して活性化するような単離抗体、抗体フラグメント又は抗体模倣物、
（ｄ）被験体におけるアンフィレグリンに感受性がある別の受容体に対して活性化するような単離抗体、抗体フラグメント又は抗体模倣物、及び、
（ｅ）ＥＧＦＲ活性化剤、
からなる群から選択される。
【００３２】
「被験体における上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）のシグナリング及び／又はアンフィレグリンに感受性がある別の受容体のシグナリングを増大させる」という語句は、本発明による作用物質が、それぞれの受容体の下流のシグナル伝達経路の活性を増大させる能力を指す。
【００３３】
好ましい実施の形態においては、シグナリングは、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも１００％、又はそれ以上増大される。
【００３４】
本明細書で使用される用語「単離アンフィレグリン／アンフィレグリン前駆体」は、単離された、すなわち精製されたアンフィレグリン／アンフィレグリン前駆体又は組換えにより産生されたアンフィレグリン／アンフィレグリン前駆体に関する。ネイティブなアンフィレグリン／アンフィレグリン前駆体を単離及び／又は精製する方法は、特に限定されるものではなく、当該技術分野で既知である。さらに、組換えアンフィレグリン／アンフィレグリン前駆体を生成及び発現する方法は、特に限定されるものではなく、当該技術分野で既知である。
【００３５】
アンフィレグリン前駆体は、当該技術分野で既知であり、プロアンフィレグリンを含み、その際、プロアンフィレグリンは、好ましいアンフィレグリン前駆体である。さらに、ＥＧＦＲ以外のアンフィレグリンに感受性がある受容体は、当該技術分野で既知である。
【００３６】
好ましい実施の形態において、上記アンフィレグリンは、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含むか又は好ましくはそれからなる。
【００３７】
この関連において、本明細書で使用される用語「アンフィレグリン／アンフィレグリン前駆体の生物学的に活性な断片」は、ネイティブなアンフィレグリン／アンフィレグリン前駆体に対して１つ以上のアミノ酸欠失を有するが、同時に、ＥＧＦ受容体又はアンフィレグリンに感受性がある別の受容体に結合して該受容体を活性化させる生物学的活性を保持するアンフィレグリン／アンフィレグリン前駆体の断片に関する。さらに、本明細書で使用される用語「アンフィレグリン／アンフィレグリン前駆体の誘導体」は、ネイティブなアンフィレグリン／アンフィレグリン前駆体に由来するが、ネイティブなアンフィレグリンに対して１つ以上のアミノ酸の置換、付加又は欠失を有し、その一方で同時に、ＥＧＦ受容体又はアンフィレグリンに感受性がある別の受容体に結合して該受容体を活性化させる生物学的活性を保持するポリペプチドに関する。この関連において、アンフィレグリン又はアンフィレグリン前駆体の生物学的活性を測定する方法は、特に限定されるものではなく、当該技術分野で既知である。
【００３８】
アミノ酸の置換及び／又は付加及び／又は欠失の数は、一般的に、得られるアンフィレグリン断片又はアンフィレグリン誘導体のポリペプチドの生物学的活性に関する上記条件によってのみ制限されるが、得られる断片又はポリペプチドが、ネイティブなアンフィレグリン、例えば配列番号１によるネイティブなヒトのアンフィレグリンに対して、少なくとも５０％、少なくとも５２．５％、少なくとも５５％、少なくとも５７．５％、少なくとも６０％、少なくとも６２．５％、少なくとも６５％、少なくとも６７．５％、少なくとも７０％、少なくとも７２．５％、少なくとも７５％、少なくとも７６．２５％、少なくとも７７．５％、少なくとも７８．７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１．２５％、少なくとも８３．７５％、少なくとも８５％、少なくとも８６．２５％、少なくとも８７．５％、少なくとも８８％、少なくとも８８．５％、少なくとも８９％、少なくとも８９．５％、少なくとも９０％、少なくとも９０．５％、少なくとも９１％、少なくとも９１．５％、少なくとも９２％、少なくとも９２．５％、少なくとも９３％、少なくとも９３．５％、少なくとも９４％、少なくとも９４．５％、少なくとも９５％、少なくとも９５．２５％、少なくとも９５．５％、少なくとも９５．７５％、少なくとも９６％、少なくとも９６．２５％、少なくとも９６．５％、少なくとも９６．７５％、少なくとも９７％、少なくとも９７．２５％、少なくとも９７．５％、少なくとも９７．７５％、少なくとも９８％、少なくとも９８．２５％、少なくとも９８．５％、少なくとも９８．７５％、少なくとも９９％、少なくとも９９．２５％又は少なくとも９９．５％の同一性を有することが好ましい。
【００３９】
本発明のこの第２の態様について使用される用語「単離抗体又は抗体フラグメント」及び「抗体模倣物」は、本発明の第１の態様について先に定義した通りである。用語「ＥＧＦＲ／アンフィレグリンに感受性があるその他の受容体に対する抗体、抗体フラグメント又は抗体模倣物」にも同じことが言える。
【００４０】
本明細書で使用される「被験体におけるＥＧＦＲ／アンフィレグリンに感受性があるその他の受容体に対して活性化するような抗体、抗体フラグメント又は抗体模倣物」という語句は、上記抗体、抗体フラグメント又は抗体模倣物が、ＥＧＦＲ又はアンフィレグリンに感受性がある別の受容体を、アンフィレグリンと関係なく活性化する、すなわちＥＧＦＲ又はアンフィレグリンに感受性がある上記その他の受容体の下流のエフェクター機能を惹起する能力を指す。
【００４１】
ＥＧＦＲ、例えばヒトのＥＧＦＲに対して活性化するような抗体、抗体フラグメント又は抗体模倣物は、特に限定されず、当該技術分野で既知である。アンフィレグリンに感受性があるその他の受容体に対して活性化するような抗体、抗体フラグメント又は抗体模倣物にも同じことが言える。
【００４２】
本発明で使用するためのＥＧＦＲ活性化剤は、特に限定されるものではなく、当該技術分野で既知である。それぞれの作用物質は、好ましくは、上皮成長因子（ＥＧＦ）ファミリーのメンバー（トランスフォーミング成長因子−α（ＴＧＦ−α）、アンフィレグリン（ＡＲ）、エピレグリン（ＥＰＲ）、エピジェン、ベータセルリン（ＢＴＣ）、ニューレグリン−１（ＮＲＧ１）、ニューレグリン−２（ＮＲＧ２）、ニューレグリン−３（ＮＲＧ３）及びニューレグリン−４（ＮＲＧ４）を含む）からなる群から選択される。
【００４３】
本発明による遠視の予防的処置又は治療的処置において使用するために、上記作用物質は、好ましくは、硝子体内、角膜上、経角膜、経強膜、経結膜、結膜下、眼内、又は全身（例えば、経口、直腸内又は静脈内）に投与される。それぞれの投与方法並びに用量及び投与レジメンは、特に限定されるものではなく、当該技術分野で既知である。例えば抗体、抗体フラグメント若しくは抗体模倣物、又はアンフィレグリンの個々の投与のための典型的な用量は、１ｍｇ〜２ｍｇの範囲にある。例えば硝子体内投与に関しては、注入容量は、一般的に５０μｌ〜２００μｌの範囲にある。
【００４４】
好ましい実施の形態においては、処置されるべき被験体は、ヒトの被験体である。
【００４５】
本発明の第２の態様による特に好ましい実施の形態においては、上記作用物質は、単離アンフィレグリン若しくはその生物学的に活性な断片若しくは誘導体、又は被験体における上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）に対して活性化するような単離抗体、抗体フラグメント若しくは抗体模倣物である。
【００４６】
更なる態様においては、本発明は、被験体における近視の予防的処置又は治療的処置の方法であって、上記被験体に、治療的に有効な量の本発明の第１の態様について定義された作用物質を投与する工程を含む、方法に関する。なおも更なる態様においては、本発明は、被験体における遠視の予防的処置又は治療的処置の方法であって、上記被験体に、治療的に有効な量の本発明の第２の態様について定義された作用物質を投与する工程を含む、方法に関する。
【００４７】
これらの態様の両方において、（ｉ）上記作用物質、ネイティブなアンフィレグリンに対する抗体、（ｉｉ）抗体フラグメント又は抗体模倣物、（ｉｉｉ）ネイティブなアンフィレグリン前駆体に対する抗体、抗体フラグメント又は抗体模倣物、（ｉｖ）ＥＧＦＲに対して遮断するような抗体、抗体フラグメント又は抗体模倣物、（ｖ）アンフィレグリンに感受性がある別の受容体に対して遮断するような抗体、抗体フラグメント又は抗体模倣物、（ｖｉ）アンフィレグリン又はその生物学的に活性な断片若しくは誘導体、（ｖｉｉ）アンフィレグリン前駆体又はその生物学的に活性な断片若しくは誘導体、（ｖｉｉｉ）上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）に対して活性化するような抗体、抗体フラグメント又は抗体模倣物、（ｉｘ）アンフィレグリンに感受性がある別の受容体に対して活性化するような抗体、抗体フラグメント又は抗体模倣物、（ｘ）ＥＧＦＲ阻害剤、（ｘｉ）ＥＧＦＲ活性化剤、（ｘｉｉ）ｓｉＲＮＡ剤、（ｘｉｉｉ）投与及び（ｘｉｖ）被験体は、本発明の最初の２つの態様について定義した通りである。さらに、それぞれの治療的に有効な量は、当該技術分野で既知である。
【００４８】
更なる形態において、本発明は、被験体において近視若しくは遠視、又は近視若しくは遠視を発症する傾向を診断する方法であって、
（ａ）該被験体から生物学的試料を得る工程と、
（ｂ）上記試料中のアンフィレグリンレベルを測定する工程と、
（ｃ）工程（ｂ）で測定されたレベルと、正視の被験体又は正視になりかかっている被験体において見られるアンフィレグリンレベルとを比較する工程と、
（ｄ）工程（ｂ）で測定されたレベルが正視の被験体又は正視になりかかっている被験体において見られるアンフィレグリンレベルより高い場合に、上記被験体が近視であるか、又は近視を発症する傾向にあると判定し、また工程（ｂ）で測定されたレベルが正視の被験体又は正視になりかかっている被験体において見られるアンフィレグリンレベルより低い場合に、上記被験体が遠視であるか、又は遠視を発症する傾向にあると判定する工程と、
を含む、方法に関する。
【００４９】
この方法を実施するための生物学的試料の種類は、当業者に知られており、それには血液、血清、血漿及び脳脊髄液が含まれる。さらに、生物学的試料中のアンフィレグリンレベルを測定する方法は、特に限定されるものではなく、当該技術分野で既知である。
【００５０】
最終の形態において、本発明は、アンフィレグリン又はその断片若しくは多様体と会合する作用物質を同定する方法であって、
（ａ）上記アンフィレグリン若しくはその断片若しくは多様体、又はアンフィレグリン又はその断片若しくは多様体を発現する組換え宿主細胞を、試験化合物と接触させる工程と、
（ｂ）上記試験化合物が、アンフィレグリン又はその断片若しくは多様体に結合する能力を分析する工程と、
を含む、方法に関する。
【００５１】
本方法の好ましい実施の形態においては、上記試験化合物がアンフィレグリン若しくはその断片若しくは多様体に結合する能力、又は上記試験化合物が上記アンフィレグリン若しくはその断片若しくは多様体の、ＥＧＦＲ若しくはアンフィレグリン若しくはその多様体に感受性がある任意のその他の受容体への結合を阻害する能力が分析される。
【００５２】
更なる好ましい実施の形態においては、上記方法は、上記化合物又はその薬学的に許容可能な塩を、１種以上の薬学的に許容可能な賦形剤及び／又は担体を用いて配合する工程を更に含む。
【００５３】
この関連において、アンフィレグリン又はその断片若しくは多様体、すなわちそれぞれアンフィレグリン断片又はアンフィレグリン多様体を発現する組換え宿主細胞の生成方法、上記試験化合物がアンフィレグリン又はその断片若しくは多様体に結合する能力を分析する方法、及び上記試験化合物が上記アンフィレグリン又はその断片若しくは多様体の、ＥＧＦＲ又はアンフィレグリン若しくはその多様体に感受性がある任意のその他の受容体への結合を阻害する能力を分析する方法は、特に限定されるものではなく、当該技術分野で既知である。
【００５４】
本発明の基礎をなすゲノムワイド共同メタ解析（本出願の実施例で提供されるデータを参照）において、アンフィレグリンに加えて、屈折異常と相関した更なる遺伝子及び遺伝子マーカーが同定された。これらは、（ｉ）白血球チロシンキナーゼ（ＬＴＫ）と相互作用するＦＡＭ１５０Ｂ（配列類似性１５０を有するファミリーのメンバー２）、（ｉｉ）ＬＩＮＣ００３４０、（ｉｉｉ）ＦＢＮ１（フィブリリン１）、（ｉｖ）ムスカリン性受容体と相互作用するＭＡＰ２Ｋ１（マイトジェン活性化プロテインキナーゼ１）、（ｖ）クロマチンリモデリング複合体ＰＢＡＦのサブユニットであるＡＲＩＤ２（ＡＴリッチインタラクティブドメイン２）、（ｖｉ）尿素トランスポーターであるＳＬＣ１４Ａ２（溶質輸送体ファミリー１４のメンバー２）、（ｖｉｉ）γ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）のための受容体であるＧＡＢＲＲ１、並びに（ｖｉｉｉ）ｃＡＭＰ／ｃＧＭＰを加水分解することができる酵素であるＰＤＥ１０Ａである。これらは、本発明においては、アンフィレグリンと同様に本明細書に記載されるように使用することができる。
【００５５】
本発明は、眼の正視化の生理学的過程の制御不能状態としての近視の発症における機構の知見を基礎とするものである。眼の正視化とは、眼の寸法（軸長、水平及び垂直の眼球径、水晶体前面及び水晶体後面の曲率、水晶体の位置、角膜前面及び角膜後面の曲率、様々な中間透光体の屈折率、眼の中間透光体の様々な要素の間の距離）の制御された増大の過程を指す。その機構には、網膜上の物体の像が鮮明に焦点合わせされずにぼやけていることを検知する感覚部分が含まれる。焦点外れした像の検知は、網膜の中層内の水平細胞及びアマクリン細胞の層中でなされることとなる。光受容体の軸索、水平細胞及びアマクリン細胞及び双極細胞の軸索及び樹状突起が、網膜ミュラー細胞と密に連係して絡み合うことによって提供されるネットワークは、像の縁が鮮明かぼやけているかどうかを検知することとなる。この過程は、これらの網膜層中で生理学的に起こるコントラスト感受性及びコントラスト増強又はコントラスト抑制と部分的に関連し得る。
【００５６】
像の縁の鮮明さ又はぼやけが検知されると、その絡み合ったネットワーク中の細胞は、青色の像又は赤色の像に関する縁がより鮮明かどうかを更に感知することとなる。それというのも、青色、緑色及び赤色の光は、３つの異なる種類の錐体光受容体によって知覚されるからである。色収差の物理的原理を使用すれば、赤色領域ではなく青色領域における鮮明な像は、眼軸長が短すぎることを示しており、その一方で、青色領域ではなく赤色領域における鮮明な像は、眼軸長が長すぎることを示している。したがって、鮮明な青色の像及び焦点外れした赤色の像の場合には、上記細胞のネットワークは、眼の正視化過程におけるエフェクター要素に眼軸長を増大するシグナルを与えることとなる。鮮明な赤色の像及び焦点外れした青色の像の場合には、上記細胞のネットワークは、眼の正視化過程におけるエフェクター要素に眼軸長の増大を止めるシグナル、又は眼の生理学的成長の間の軸長の増大速度を低下させるシグナルを与えることとなる。
【００５７】
眼の生理学的成長の間の眼軸延長を調節することに関与する成長する眼内の構造は、網膜色素上皮細胞（ＲＰＥ）であり、該細胞は、シグナルを受けるのに網膜中層中の網膜ネットワークの十分に近くにあり、胚発生の間の分化の程度が比較的低いため多分化能を有し、そしてとりわけそれらの基底膜としてのブルッフ膜（ＢＭ）の内側部分を形成する。ＢＭは、眼において生物力学的に重要な内殻とみなすことができ、それは、毛様筋を有する毛様体の毛様体突起に連結されており、間接的に前部中の強膜岬に連結され、かつ後部中の視神経頭の乳頭周囲輪に連結されている。網膜中層におけるネットワークがＲＰＥ細胞により多くの基底膜を生成するシグナルを与えると、これにより、より多くの基底膜材料の堆積がＢＭの内層中に生じ、引き続きＢＭが延長することとなる。ＢＭの延長は、成長に関連する圧力をスポンジ状の脈絡膜を通じて強膜へと伝達することによって、ＢＭが強膜をより外側へと押し出すことを意味する。さらに、それにより、二次的に脈絡膜の菲薄化がもたされる。それに応じて、２歳〜３歳の年齢の後（すなわち、眼球の生理学的成長が終わった後）の眼軸延長は、強膜及び脈絡膜の菲薄化と関連しているが、強膜及び脈絡膜の体積の増加とは関連しておらず、それは、正視化の過程の両組織の能動的な役割と矛盾している。当然の帰結として、ＢＭは、脈絡膜及び強膜とは異なり、眼軸延長において薄くならず、このことは、眼の成形及び最終的な形状及び長さの精密な調整におけるＢＭの能動的な役割を指摘している。
【００５８】
網膜中層における感覚的ネットワークと、エフェクター部分としてのＲＰＥ／ＢＭとの間のシグナル伝達経路は、ＲＰＥに対してより多くの基底膜材料を設けるためのインパルス又はこの材料の産生を減らすためのインパルスのいずれかを与えるサイトカイン、ケモカイン、成長因子又は同様のタンパク質のような分子を用いる。この関連において、アンフィレグリンは、本発明においては、これらの分子の１つとして、かつ眼軸延長の主たるメディエーターとして同定された。
【図面の簡単な説明】
【００５９】
【図１】眼の肉眼的解剖学的構造。成人のヒトの眼の垂直矢状断面図である。
【図２】眼の顕微鏡的解剖学的構造。網膜の組織の概略垂直断面図である。介在ニューロンは、（Ｂ）双極細胞、（Ａ）アマクリン細胞、（Ｈ）水平細胞、及び（ＩＰ）網状間細胞として示されている。実際には、網膜には細胞が詰まっており、細胞外空間は殆ど存在しない。網膜の１０層を図の右手側に列挙する：（１）網膜の色素上皮、（２）桿体及び錐体の層（光受容体の外節）、（３）外境界膜（ミュラー細胞の終足）、（４）光受容体の核の層、（５）外網状層（シナプス）、（６）内顆粒層（介在ニューロンの細胞体及びミュラー細胞の核）、（７）内網状層（シナプス）、（８）神経節細胞層、（９）神経線維層、（１０）内境界膜（ミュラー細胞の終足）。色素上皮と桿体及び錐体の層との間の潜在空間は、「眼腔」、つまり眼胞の空洞の残存物である。
【図３】Ａ）ヨーロッパ系集団及びＢ）アジア系集団における、等価球面度数に対するＳＮＰ及びＳＮＰ×教育の効果における共同メタ解析についての−ｌｏｇ１０（Ｐ）のマンハッタンプロットである。上側の水平の点線は、ｐ＜５×１０−８のゲノムワイド有意水準を示している。下側の水平の点線はｐ＜１×１０−５の示唆的な有意水準を示している。ゲノムワイド有意水準に達した新たな座位だけに名前が付けられている。
【発明を実施するための形態】
【００６０】
本発明は、以下の配列を開示している。
【００６１】
配列番号１
ヒトのアンフィレグリンのアミノ酸配列
ＭＲＡＰＬＬＰＰＡＰ  ＶＶＬＳＬＬＩＬＧＳ  ＧＨＹＡＡＧＬＤＬＮ  ＤＴＹＳＧＫＲＥＰＦ  ＳＧＤＨＳＡＤＧＦＥ  ＶＴＳＲＳＥＭＳＳＧ  ６０
ＳＥＩＳＰＶＳＥＭＰ  ＳＳＳＥＰＳＳＧＡＤ  ＹＤＹＳＥＥＹＤＮＥ  ＰＱＩＰＧＹＩＶＤＤ  ＳＶＲＶＥＱＶＶＫＰ  ＰＱＮＫＴＥＳＥＮＴ  １２０
ＳＤＫＰＫＲＫＫＫＧ  ＧＫＮＧＫＮＲＲＮＲ  ＫＫＫＮＰＣＮＡＥＦ  ＱＮＦＣＩＨＧＥＣＫ  ＹＩＥＨＬＥＡＶＴＣ  ＫＣＱＱＥＹＦＧＥＲ  １８０
ＣＧＥＫＳＭＫＴＨＳ  ＭＩＤＳＳＬＳＫＩＡ  ＬＡＡＩＡＡＦＭＳＡ  ＶＩＬＴＡＶＡＶＩＴ  ＶＱＬＲＲＱＹＶＲＫ  ＹＥＧＥＡＥＥＲＫＫ  ２４０
ＬＲＱＥＮＧＮＶＨＡ  ＩＡ  ２５２
【００６２】
配列番号２
ヒトのアンフィレグリンのｍＲＮＡを標的とするｓｉＲＮＡアンチセンス鎖
ＣＧＡＡＣ  ＣＡＣＡＡ  ＡＵＡＣＣ  ＵＧＧＣＴ  Ｔ
【００６３】
配列番号３
ヒトのアンフィレグリンのｍＲＮＡを標的とするｓｉＲＮＡアンチセンス鎖
ＣＣＵＧＧ  ＡＡＧＣＡ  ＧＵＡＡＣ  ＡＵＧＣＴ  Ｔ
【００６４】
本発明を以下の実施例によって更に説明するが、これに限定されるものではない。
【実施例】
【００６５】
実験手順：
調査対象母集団
屈折異常及び近視に関するコンソーシアム（Consortium of Refractive Error and Myopia）（ＣＲＥＡＭ）から、２５個の研究からのヨーロッパ系の４００３６人の個体と、９個の研究からのアジア系の１０３１５人の個体とを含む、全部で３４個の研究を採用した。２０歳未満の個体を除外するだけでなく、白内障手術、レーザー又は屈折を変えることができるその他の眼内処置を受けた個体も除外した。これらの研究の多くは、等価球面度数に対する以前のＣＲＥＡＭのゲノムワイド関連解析（ＧＷＡＳ）にも含まれていた。全ての研究は、ヘルシンキ宣言の主義に準拠しており、その地元の研究倫理委員会によって承認されている。全ての参加者は、研究開始前に書面によるインフォームドコンセントを提出している。
【００６６】
フェノタイピング及び教育レベル
含まれる研究における参加者は、完全な眼科学的調査を受けた。非瞳孔散大屈折（Non-dilated refraction）は、他覚的屈折及び／又は自覚的屈折によって測定した。等価球面度数は、各々の眼について、球面度数に円柱度数の半分を足したものとして計算した。右眼と左眼の平均等価球面度数は、定量的アウトカムとして使用した。片眼だけからのデータしか利用することができない場合に、その眼の等価球面度数を使用した。教育について、被験体は、修了した教育の最も高いレベル又は学校教育の年数を、自己報告によるアンケートを通じて又はインタビューにおいて報告した。
【００６７】
全ての参加者の教育を、少なくとも後期中等教育を修了した、ポリテクニックの、若しくは１２年以上の形式的教育を経た参加者からなる高教育群と、前期中等教育かそれ未満しか終えていない、又は１２年を下回る形式的教育しか経ていない個体を含む低教育群とに二分した。比較的若いヨーロッパ系の参加者の４つのコホート（全試料サイズ２３４９人）において、ほぼ全てが１２年以上の学校教育を終えていた。したがって、それは、第三次教育又は大学教育を伴う個体を、高教育群としてカテゴリー分けするために選択した。それらの４つのコホートを除外した感度分析は、メタ解析の結果を目に見えるほど変化させなかった。
【００６８】
ジェノタイピング及びインピュテーション
それぞれの研究は、ＧＷＡＳのために厳格な品質管理フィルタを適用した。一般的に、重複、低いコールレート（９５％未満）、性別ミスマッチ又は集団異常値を反映している個体を除外した。ＳＮＰは、低いジェノタイピングコールレート（５％を上回る欠測）、単型ＳＮＰ（ＭＡＦ＜１％）の場合に、又はハーディー・ワインバーグ不平衡（ｐ値＜１０−６）において除外した。品質管理（ＱＣ）フィルタリングの後に、それぞれの研究のアレイ遺伝子型を、リファレンスパネルとしての１０００個のゲノムプロジェクトデータ（ビルド３７、フェーズ１リリース、２０１２年３月）を使用してソフトウェアＭｉｎｉｍａｃ又はＩＭＰＵＴＥでインピュートした。インピュテーション品質閾値（ＭＡＣＨ：ｒ２＞０．５又はＩＭＰＵＴＥ情報スコア＞０．５）に合格したマイナーアレル頻度≧５％を有するＳＮＰを、メタ解析のために持ち越した。
【００６９】
統計モデル
それぞれの研究について、それぞれジェノタイプ又はインピュートされたＳＮＰで線形回帰モデルを、アウトカムとして平均等価球面度数を用いて構築した。相加的遺伝子モデルは、リスクアレルの数が直接的にジェノタイプされたＳＮＰについて順序変数（０、１又は２）である場合、又はインピュートされたＳＮＰについてアレル数の見込み（allele dosage probability）が０から２までの範囲の連続的な変数である場合に仮定した。主要解析モデルは、ＳＮＰ、教育、ＳＮＰ×教育相互作用という用語、並びに共変量としての年齢及び性別を含むものとした。ゲノムマーカーのバリエーションの上位の主要成分についての追加の調節は、適用することができるならば（すなわち、集団階層化の証拠が存在する場合に）個々の研究において実施した。
【００７０】
以下の相加的遺伝子モデル：
Ｙ＝β０＋βＳＮＰ×ＳＮＰ＋β教育×教育＋βＳＮＰ×教育×ＳＮＰ×教育＋βＣ×Ｃｏｖ＋ε
（モデル１）
（式中、Ｙは、平均等価球面度数であり、教育は、二分法変数（０は、低教育群であり、かつ１は、高教育群である）であり、Ｃｏｖは、年齢、性別のような一式の共変量であり、適用することができるならば最初の上位５つの主要成分である）を、ＳＮＰ（βＳＮＰ）及びＳＮＰ×教育相互作用（βＳＮＰ×教育）の、平均等価球面度数に対する共同効果について検定するために使用した。家系ベースの研究のために、血縁行列を、ＳＮＰデータから経験的に推定し、一般化混合モデルにおけるランダム効果として含めた。ＳＮＰ×教育相互作用の効果を検定するために、βＳＮＰ×教育を、モデル１から評価した。
【００７１】
それぞれの研究における線形回帰分析は、非血縁試料については、Ｑｕｉｃｋｅｓｔ（http://toby.freeshell.org/software/quicktest.shtml）又はＰｒｏｂＡＢＥＬ（http://www.genabel.org/packages/ProbABEL）を用いて行い、そして家系ベースのデータについては、ＭｉｘＡＢＥＬ（http://www.genabel.org/packages/MixABEL）を用いて行った。コマンド「ロバスト（robust）」は、上記ソフトウェアにおいて、βＳＮＰ及びβＳＮＰ×教育のロバスト（「サンドウィッチ」、Ｈｕｂｅｒ−Ｗｈｉｔｅ）標準誤差並びに複数のβの誤差の共分散を計算して、相互作用のｐ値についての偽陽性率の潜在的拡大を補正するために使用した。
【００７２】
さらにまた、それぞれの研究は、教育の等価球面度数に対する主効果を、年齢及び性別について線形回帰モデル：
Ｙ＝β０＋β教育×教育＋βＣ×Ｃｏｖ＋ε
（モデル２）
（式中、変数の定義は、モデル１と同じである）を使用して調節することによって検定した。
【００７３】
ＧＷＡＳメタ解析
固定効果モデルによる等価球面度数に関する主ＳＮＰ効果及びＳＮＰ×教育相互作用の両方を、ＳＮＰ及びＳＮＰ×教育回帰係数並びに各研究からのβの共分散行列を用いて同時に検定するために共同メタ解析（ＪＭＡ）アプローチを採用した。自由度２を有するカイ二乗分布に従うＷａｌｄ統計を、ＳＮＰ及びＳＮＰ×教育回帰係数の同時有意性を検定するために使用した。ＪＭＡは、ＭＥＴＡＬ（http://www.sph.umich.edu/csg/abecasis/metal/）によってスクリプトパッチを用いて実施した。コクランのＱ検定を、ＳＮＰ及び相互作用効果についての研究にわたるβ係数の異質性を評価するために使用した。ＳＮＰと教育との間の相互作用について検定するために、等価球面度数に関するＳＮＰ×教育相互作用の効果の二次メタ解析（自由度１）を、固定効果モデルで逆分散法を用いてＭＥＴＡＬにおいて実施した。これは、ＳＮＰ×教育相互作用自体を調査するための古典的なメタ解析である。低教育群及び高教育群における、ＳＮＰ（βＳＮＰ）の等価球面度数に対する効果及び標準誤差（βＳＮＰ＋βＳＮＰ×教育）が、ＪＭＡ出力から導き出された。
【００７４】
メタ回帰を、Ｇ×Ｅ相互作用を示す３種の座位についてのメタ解析における異質性の起源を調査するために実施した（Ｒパッケージ「ｍｅｔａｆｏｒ」；http://www.rproject.org/）。メタ回帰は、以下の研究特異的な変数：研究試料サイズ、高教育群における個体の割合、平均等価球面度数、教育の主効果、民族性研究デザイン、研究年及び平均年齢を共変量として含むものとした。
【００７５】
ＳＮＰ及び相互作用という用語についての共同検定のための研究特異的なゲノム制御の拡大係数λｇｃは、観察された中央値カイ二乗を、自由度２のカイ二乗分布の予想される中央値（１．３８２）で割った比率によって計算した、１．００９から１．１２５までの範囲であり、平均は１．０１９であった。ゲノム制御（ＧＣ）補正は、それぞれの個々の研究においてカイ二乗統計に適用した。小さい試料サイズ（Ｎ＜５００）及び１より大きいλｇｃの３個の研究について、有意な結合Ｐ値＜１×１０−５を示すＳＮＰを、メタ解析の開始前に更に除外したが、主効果も相互作用効果もどちらもそのような関連を支持しなかった。ｐ値の分位点−分位点（ＱＱ）プロットは、ＪＭＡにおける検定統計の僅かな拡大しか示さなかった（ヨーロッパ系：λｍｅｔａ＝１．０８１；アジア系：λｍｅｔａ＝１．０５３；組み合わせ：λｍｅｔａ＝１．０９２、同等の試料サイズを有する以前のゲノムワイドＪＭＡ研究と同様）。ＰＨＥＴ＜０．０００１でのメタ解析における少数のマーカーを除外した。個々の研究におけるＳＮＰ×教育相互作用という用語についてのλｇｃは、１．０１から１．０８までの範囲であり、それは、それぞれの研究について検定統計量の拡大の証拠がほとんど無いことを指摘している。
【００７６】
遺伝的多様体のアノテーション
位置情報及び多様体識別名は、ＮＣＢＩのＢ３７（ｈｇ１９）ゲノムビルドに報告され、ＵＣＳＣゲノムブラウザを用いてアノテーションされる。１０００個のゲノムプロジェクト（トップＳＮＰに隣接する１００Ｋｂ；ｈｇ１９）のヨーロッパ系集団及びアジア系集団における連鎖不平衡（ＬＤ）ブロック（ｒ２＞０．８）のそれぞれの範囲内の多様体を同定して、転写調節の実験的証拠により、ＨａｐｌｏＲｅｇ（http://www.broadinstitute.org/mammals/haploreg/haploreg.php）及びＥｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  ＤＮＡ  Ｅｌｅｍｅｎｔｓ（ＥＮＣＯＤＥ）のデータを用いて機能アノテーションを適用した。
【００７７】
ヒト組織における遺伝子発現のＧＷＡＳメタ解析及びＳＮＰ機能アノテーション
ヒト組織における遺伝子発現を評価するために、眼組織データベース（https://genome.uiowa.edu/otdb）及びＥｙｅＳＡＧＥデータベースを調査した。推定された遺伝子及びエクソームレベルの存在度は、オンラインで入手可能である。遺伝子発現の正規化は、ＧＣバックグラウンド補正を伴うプローブ対数強度誤差（Probe Logarithmic Intensity Error）（ＰＬＩＥＲ）法を使用した。
【００７８】
実施例１：
教育及びその等価球面度数に対する主効果
本発明者らのメタ解析における３４個の研究からの５０３５１人の参加者のベースライン特性は、全体で４００３６人の被験体がヨーロッパ系であり、１０３１５人がアジア系であり、参加者の年齢が、２０歳から９９歳までの範囲であったことを示している。ヨーロッパ系のなかで、後期中等教育を終えた参加者の割合は、１６．０％から９４．４％までの範囲であり、平均は５０．７％であった。アジア人においては、後期中等教育を終えた個体の割合は、６．７％から７５．９％までの範囲であり、平均は３０．０％であった。全体の研究を通じて、高教育群の個体は、平均で０．５９のジオプトリー（Ｄ）である等価球面度数屈折異常を有しており、低教育群のそれと比較してより近視性が高く、すなわち、より遠視性が低かった（β＝−０．５９；９５％  ＣＩ：−０．６４、−０．５５）。高い教育レベルは、アジア人の個体ではヨーロッパ系と比較して、２倍も高い近視性の等価球面度数と関連していた（アジア系：β＝−１．０９、９５％  ＣＩ：−１．２０、−０．９８；ヨーロッパ系：β＝−０．４９、９５％  ＣＩ：−０．５４、−０．４４）。
【００７９】
実施例２：
ヨーロッパ人における共同メタ解析
４００３６人のヨーロッパ系の個体におけるＪＭＡによるＳＮＰ主効果及びＳＮＰ×教育相互作用についてのゲノムワイド共同解析は、９種の以前から関係があるとされていた座位で等価球面度数との関連を示した。さらに、等価球面度数と関連した４種の以前には報告されていなかった座位も同定され、ゲノムワイド有意性に達した（ＪＭＡについてのＰ＜５．０×１０−８；表１及び図３Ａ）：ＦＡＭ１５０Ｂ、ＬＩＮＣ００３４０、ＦＢＮ１及びＤＩＳ３Ｌ−ＭＡＰ２Ｋ１。それらのうちの２種（ＦＡＭ１５０Ｂ及びＤＩＳ３Ｌ−ＭＡＰ２Ｋ１）を、アジア人において繰り返した（ＪＭＡについてのＰ＜０．０５；後続のセクション参照）。ＪＭＡにおける異質性の証拠は、研究全体を通して殆ど示されなかった（Ｑ検定：Ｐｈｅｔ≧０．０８６）。ヨーロッパ人におけるこれらの座位でのＪＭＡについての有意な関連は、主として、低教育層及び高教育層の両方におけるＳＮＰ効果によるものであった（それぞれ、４．４０×１０−８≦Ｐ≦１．３５×１０−６、７．６１×１０−１１≦Ｐ≦１．７５×１０−６）。ＳＮＰ×教育相互作用は、有意差無しであった（相互作用についてのＰ≧０．２０８）。等価球面度数に対するＳＮＰ効果の推定される効果サイズは、教育層全体にわたって非常に似通っていた。
【００８０】
【表１】
2018518452.tif 000003
【００８１】
実施例３：
アジア人における共同メタ解析
アジア人コホートからの１０３１５人の個体における等価球面度数についてのＪＭＡは、３種の遺伝子ＡＲＥＧ、ＧＡＢＲＲ１及びＰＤＥ１０Ａについてのゲノムワイドの有意な関連を特定した（ＪＭＡについてのＰ＜５．０×１０−８；表２及び図３Ｂ）。等価球面度数と関連したＳＮＰ×教育相互作用効果は、全ての３種の座位で観察された（相互作用についてのＰ≦８．４８×１０−５）。遺伝子型及び表現型の関連は、高教育層において高度に有意であったが（１．９７×１０−１０≦Ｐ≦８．１６×１０−８）、低教育層においてはかなり弱かった（０．００８≦Ｐ≦０．２４３）。ＡＲＥＧ、ＧＡＢＲＲ１又はＰＤＥ１０Ａ内のインデックスＳＮＰでの研究間異質性の証拠は存在しなかった（Ｑ検定：Ｐｈｅｔ≧０．１２２）。
【００８２】
ＧＡＢＲＲ１及びＰＤＥ１０ＡのインデックスＳＮＰは、ヨーロッパ人の試料においては、ＪＭＡ共同検定、ＳＮＰ主効果、又はＳＮＰ×教育相互作用のいずれについても、等価球面度数と関連していなかった（表２）。ＡＲＥＧのＳＮＰのｒｓ１２５１１０３７は、品質管理フィルタリング後にヨーロッパ人の研究のメタ解析において除外し（ＭＡＦ＜０．０５のため）、したがって、プロキシＳＮＰのｒｓ１２４６４１３を、ＬＤにおいてｒｓ１２５１１０３７（ｒ２＝０．６７、Ｄ’＝１）と一緒に検定したが、非有意な関連であった（ＪＭＡについてのＰ＝０．５２７；相互作用についてのＰ＝０．１７６）。モデルにおける共変量として研究レベル特性を含むメタ回帰分析により、ヨーロッパ系及びアジア系の集団間での異質性が確認された（ＧＡＢＲＲ１のＳＮＰのｒｓ１３２１５５６６：Ｐ＝０．００６；ＰＤＥ１０ＡのＳＮＰのｒｓ１２２０６６１０：Ｐ＝０．０４１９）。ＰＤＥ１０Ａの場合に、民族性の他に、それぞれの研究の平均等価球面度数は、相互作用効果についての研究間の異質性も明らかにした（Ｐ＝０．０２５）。
【００８３】
Ｇ×Ｅ独立性の根底にある仮定が、これらの３種のＧ×Ｅ相互作用座位で成立したかどうかを更に調査した。ロジスティック回帰分析のメタ解析を、ＡＲＥＧのｒｓ１２５１１０３７、ＧＡＢＲＲ１のｒｓ１３２１５５６６及びＰＤＥ１０Ａのｒｓ１２２９６６１０において教育レベルについて、シンガポールコホート（ｎ＝９００４）における年齢、性別及び集団階層化について調節して実施した。該解析は、これらの座位と教育レベルとの間で一切の有意な関連を示さなかった（Ｐ≧０．２００、Ｐｈｅｔ≧０．１１８）。さらに、上記３種の座位は、ヨーロッパ人コホートで最近実施されたＧＷＡＳの大規模メタ解析においても学歴と関連していなかった。このように、Ｇ×Ｅの結果は、遺伝子と教育との間の依存性によりバイアスがかけられているとは考えられない。
【００８４】
ヨーロッパ人の集団から同定された４種の座位についてのアジア人のコホートにおける等価球面度数についての関連も評価した。それらのうち２種を繰り返した（ＦＡＭ１５０Ｂ：ＪＭＡについてのＰ＝０．０１３；ＤＩＳ３Ｌ−ＭＡＰ２Ｋ１：ＪＭＡについてのＰ＝０．００４２；表１）。また、ＤＩＳ３Ｌ−ＭＡＰ２Ｋ１は、アジア人において示唆的なＳＮＰ×教育相互作用を示したが（相互作用についてのＰ＝７．９５×１０−４）、これは、ヨーロッパ人においては有意差無しであった（相互作用についてのＰ＝０．２０８）。
【００８５】
【表２】
2018518452.tif 000004
【００８６】
実施例４：
全てのコホートの共同メタ解析
引き続き、組み合わせメタ解析を、全部で３４個の研究のヨーロッパ人及びアジア人の両方の被験体を含めて実施した。この解析により、２種の追加のＳＮＰ：ＡＲＩＤ２（ＪＭＡについてのＰ＝４．３８×１０−８）及びＳＬＣ１４Ａ２（ＪＭＡについてのＰ＝２．５４×１０−８）が明らかになった。両方の座位は、ヨーロッパ人コホートにおける等価球面度数と示唆的な関連を示したが、その関連はアジア人コホートにおいては弱まった（表１）。ゲノムワイドの有意な関連は、以前のＣＲＥＡＭ  ＧＷＡＳで同定された１７種の既知の座位についての等価球面度数でも検出された。
【００８７】
実施例５：
ＧＷＡＳで既知の座位についての遺伝子及び教育の相互作用
最近の２つの大規模ＧＷＡＳから同定された３９種の座位での以前に報告された等価球面度数との関連に関して、教育との相互作用を評価した。２つのＳＮＰ×教育相互作用は、名目的に有意差があった：ヨーロッパ人におけるＴＪＰ２（ｒｓ１１１４５４８８；相互作用についてのＰ＝６．９１×１０−３）及びアジア人におけるＳＨＩＳＡ６−ＤＮＡＨ９（ｒｓ２９６９１８０；相互作用についてのＰ＝４．０２×１０−３）。一般的に、３９種の座位で検定されたインデックスＳＮＰは、等価球面度数に対してのより大きなＳＮＰ×教育相互作用効果を有していた（倍率変化に関するメタ回帰のＰ＜０．００１）。同じ方向の相互作用効果を有する２０種のＳＮＰについて、相互作用効果の規模は、アジア人においてヨーロッパ人よりも平均して４倍大きかった（メタ回帰のＰ＝０．００３）。
【００８８】
実施例６：
ヒト組織における遺伝子発現
眼組織データベースを使用して、関連遺伝子の発現を、２０人の正常なヒトドナーの眼において調査した。同定された遺伝子の大部分は、ヒトの網膜、強膜又は網膜色素上皮（ＲＰＥ）で発現していた（表３）。これらの遺伝子のなかで、ＧＡＢＲＲ１は、網膜において最も高い発現を有した。網膜におけるＧＡＢＲＲ１の発現のＰＬＩＥＲで正規化したレベルは、１２１．７であり、強膜においては２１．５の発現値を有し、それは、ＧＡＢＲＲ１の発現が、網膜内でより優勢であることを示唆している。ＦＡＭ１５０Ｂは、脈絡膜／ＲＰＥにおいて多く存在することが分かったが（３３３．３の発現値）、網膜中では大幅にそれより低いレベルで発現していた（２９．９）。ＭＡＰ２Ｋ１は、網膜、強膜及び脈絡膜中で広く発現しており、８５．７より高い発現値を有していた。
【００８９】
【表３】
2018518452.tif 000005
【００９０】
考察
上記データは、屈折異常に関する遺伝子及び教育の相互作用の今日で最も包括的なゲノムワイド解析を表す。屈折異常に関連する新規の遺伝子座を、大規模な多民族集団におけるＳＮＰ及びＳＮＰ×教育の効果の共同的寄与を検定することによって同定した。３種の遺伝子（ＡＲＥＧ、ＧＡＢＲＲ１及びＰＤＥ１０Ａ）は、アジア系の集団において教育との強い相互作用を示した。１７種の以前に発表された座位での等価球面度数との既知の関連を確認するだけでなく、組み合わされた多民族コホートを使用して、等価球面度数と有意に関連する６種の新たな座位（ＦＡＭ１５０Ｂ、ＬＩＮＣ００３４０、ＦＢＮ１、ＤＩＳ３Ｌ−ＭＡＰ２Ｋ１、ＡＲＩＤ２及びＳＬＣ１４Ａ２）が同定された。
【００９１】
新規の座位のなかでも、染色体６ｑ１５にあるＧＡＢＲＲ１（５３ｋｂ）は、近視発症における役割を示唆する特に興味深い機能的候補である。ＧＡＢＡ媒介性阻害によるシナプス可塑性の変調は、視力発達を制御する視覚的に誘導されるフィードバックの「ゲイン」を変化させるために有利な立場にあることとなる。ＧＡＢＲＲ１中のリードＳＮＰのｒｓ１２２１５５６６は、ＬＤブロック（ｒ２＞０．８）内の７種のＳＮＰと一緒に、転写調節に影響し得るイントロン内の影響を及ぼす可能性のある調節モチーフ（例えば、ｚｆｐ１２８及びｇｃｍ１）である。網膜における主要な抑制性神経伝達物質の１つとして、ＧＡＢＡは、多くの網膜細胞及びアマクリン細胞中で活性である。ＧＡＢＡ  Ａ受容体、ＧＡＢＡ  Ｂ受容体及びＧＡＢＡ  Ｃ受容体に対するアンタゴニストは、ヒナの形態覚遮断近視を、赤道次元における最大の効果をもって阻害することが報告されている。ＧＡＢＡ受容体は、網膜中のドーパミン経路とも相互作用する。最近のプロテオミクス研究により、ＧＡＢＡトランスポーター−１（ＧＡＴ−１）のレベルが、アトロピン処置後に近視マウス網膜において大幅に減少することも示されており、それは、ＧＡＢＡシグナリングが、アトロピンの抗近視効果に関係していることを示唆している。したがって、ヒトにおける本発明の結果は、動物実験と一致しており、それは、網膜におけるＧＡＢＡ系神経伝達物質のシグナル伝達経路が、近視の進行における潜在的な不可欠な存在であり得ることを支持している。
【００９２】
６番染色体にあるｒｓ１０８８９８５５は、ＡＲＩＤ２遺伝子（ＡＴリッチインタラクティブドメイン２）内のイントロン多様体であり、ＳＮＡＴ１（溶質輸送体ファミリー３８のメンバー；Ａｌｉａｓｅｓ  ＳＬＣ３８Ａ１）の約５００ｋｂ下流にある。ＳＮＡＴ１は、ＧＡＢＡの前駆体であるグルタミンのトランスポーターである。またＳＮＡＴ１は、ヒトの網膜で高度に発現される。ＣＲＥＡＭにおける以前のメタ解析においては、別のグルタミン酸受容体遺伝子ＧＲＩＡ４（イオンチャネル型グルタミン酸受容体をコードする）が同定されており、要するに最近の証拠は、網膜の神経伝達物質であるＧＡＢＡ及びグルタミンが、視力発達に関係しているかもしれないという見解を支持している。
【００９３】
遺伝子及び環境相互作用についての最も強力な関連シグナルは、ＡＲＥＧ遺伝子（アンフィレグリン）の１４ｋｂ下流に位置するｒｓ１２５１１０３７に由来するものであった。ＡＲＥＧは、正常な上皮細胞の成長を促進する上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）のリガンドであり、それは細胞分化及び細胞増殖、例えば損傷した角膜の再成長のために重要である。ＥＧＦＲはムスカリン性の系において液分泌を制御するので、ムスカリン性アセチルコリン受容体とＥＧＦＲとの間に関連が見出された。
【００９４】
もう一つの新規の関連、つまり１５番染色体にあるｒｓ１６９４９７８８は、ＤＩＳ３ＬとＭＡＰ２Ｋ１とにまたがる領域に由来する。ＭＡＰ２Ｋ１は、増殖の間にムスカリン性受容体に結合し、オールトランス型レチノイン酸に曝されたヒト強膜線維芽細胞の増殖を阻害するマイトジェン活性化プロテインキナーゼ１をコードする。ムスカリン性アンタゴニストのアトロピンは、動物モデル及びヒト介入研究において近視の発症を抑えている。オールトランス型レチノイン酸は、眼の成長のモジュレーターであり、ヒト強膜線維芽細胞の増殖を阻害する。
【００９５】
ＦＢＮ１（フィブリリン１）は、フィブリリンファミリーのメンバーである大きな細胞外マトリックスの糖タンパク質をコードする。ＦＢＮ１中の変異は、マルファン症候群という、眼、骨格及び心血管系を冒す結合組織の疾患を引き起こす。近視に関する候補遺伝子として、その近視との関連を研究する試みは以前に、おそらく、一部不十分な試料サイズによる不足研究（underpowered studies）であったため、もたらされた結果は決定的なものではなかった。大規模な多民族集団からのデータを用いて、本発明の結果は、近視発症におけるＦＢＮ１のその役割を支持している。
【００９６】
ＪＭＡに関するゲノムワイドの有意なＳＮＰは、アジア人の間での有意な相互作用に反して、ヨーロッパ人では教育と一切の相互作用を示さなかった。特に、ＡＲＥＧ、ＧＡＢＲＲ１及びＰＤＥ１０Ａと教育との相互作用は、アジア人の集団でのみ現れたが、ヨーロッパ人では現れなかった。考えられる多くの理由が存在する。第一に、観察された異質性は、アジアにおける精力的な教育システムを反映しているかもしれない。より高い教育レベルは、アジア人における屈折の１．１６Ｄの平均で近視化と関連しているが、ヨーロッパ人ではたった０．５６Ｄであった。遺伝子及び教育の相互作用は、遺伝的効果が、集団全体にわたり一般的に僅かであるため、強力な教育効果を伴うような条件においては、より顕在化し得ることが考えられる。第二に、屈折異常の集団分布は、アジア人においてより近視的である（ヨーロッパ人における０．１０Ｄに対して−０．６０Ｄ）。近視の高い有病率は、おそらく、今回の研究では考慮されなかったその他の測定されない生活様式への曝露と関連していると考えられる。第三に、教育システムは、研究全体を通して広くばらついていた。本発明者らは、教育レベルを２つのカテゴリーに分けることを選択したが、この区分は、ヨーロッパ人及びアジア人にまたがって同じ教育強度を反映していないかもしれず、又は近視についての根底にある真のリスクを反映していないかもしれない。環境測定における何らかの分類の誤りが、ヌルに近づくバイアス又はヌルから離れるバイアスを効果にかけたかもしれない。最後に、成人における教育は、累積的な近業活動にとっての正確な代用物ではないかもしれない。修了した教育レベルは、近視の発症前の決定的な年月の間の読みの強度及びコンピュータの使用の粗雑なマーカーであるかもしれない。関連したＳＮＰでの様々なアレル頻度に付随するこれらの要因は、ヨーロッパ系の個体における相互作用効果の検出力を曖昧にするかもしれない。そのようなＧ×Ｅ相互作用が祖先特異的であるかどうかが、更なる評価を保証する。
【００９７】
教育レベルは、読み及び書きのような近業の累積効果を反映している。したがって、アジア系及びヨーロッパ系の子供のコホート（合わせたｎ＝５８３５）における３種の新たに同定された座位（ＡＲＥＧ、ＧＡＢＲＲ１及びＰＤＥ１０Ａ）での等価球面度数と関連したＳＮＰ×近業相互作用についての証拠があるかどうかを調査した。ＰＤＥ１０ＡのＳＮＰのｒｓ１２２０６６１０についてＳＮＰ×近業相互作用に関する仮説的な支持が観察された（相互作用についてのＰ＝０．０３２；Ｐｈｅｔ＝０．９２７）。相互作用についてのより弱い支持は、ＧＡＢＲＲ１のＳＮＰのｒｓ１３２１５５６６（相互作用についてのＰ＝０．１０９；Ｐｈｅｔ＝０．１１８）及びＡＲＥＧのＳＮＰのｒｓ１２５１１０３７（相互作用についてのＰ＝０．８０、Ｐｈｅｔ＝０．２２４）で示されたが、相互作用効果の方向は、小児科研究にわたって成人で観察されたそれと大幅に一致した。これらの座位での強力なＳＮＰ×近業の関連の欠如は、近業以外の環境的リスクへの曝露が、成人のアジア人試料において見られるＳＮＰ×教育相互作用の根底にあるかもしれないという可能性を開く。
【００９８】
まとめると、屈折異常と関連した９種の新規の座位が、大規模な多民族コホート研究において共同メタ解析アプローチによって同定された。本発明のデータは、特定の遺伝的多様体が教育と相互作用して、視力発達に影響を及ぼし、更に近視発症におけるＧＡＢＡ神経伝達物質のシグナリングに関する役割を支持するという証拠を与える。これらの知見は、追跡研究のための見込みのある候補遺伝子を提供し、近視に対する治療的介入に関する新たな遺伝子ターゲットをもたらし得る。
【図１】
2018518452.tif 000006
【図２】
2018518452.tif 000007
【図３Ａ】
2018518452.tif 000008
【図３Ｂ】
2018518452.tif 000009
【配列表】
2018518452000001.app
【国際調査報告】
2018518452.tif 000010
2018518452.tif 000011
2018518452.tif 000012
2018518452.tif 000013