(57)【要約】  本開示は、Ｍｄｍ２阻害剤の毒物学的作用を判定するための安全性バイオマーカーとしてのＧＤＦ−１５の使用、対象におけるＭｄｍ２阻害剤の毒物学的作用を判定するための、特にある用量のＭｄｍ２阻害剤の投与に応答して対象において血小板減少症の発症の可能性を判定するためのｅｘ  ｖｉｖｏ方法、対象におけるがんの処置においてＭｄｍ２阻害剤を使用する方法、がんを有する患者が、ある用量のＭｄｍ２阻害剤を用いる処置に応答して血小板減少症を発症する可能性を予測する際に使用するためのキット、がんを有する患者を処置する際に使用するためのキットおよび関連する開示実施形態に関する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｍｄｍ２阻害剤の毒性学的作用を判定するための安全性バイオマーカーとしてのＧＤＦ−１５の使用。
【請求項２】
ｉｎ  ｖｉｖｏで、対象におけるＭｄｍ２阻害剤の毒性学的作用を判定するためのｅｘ  ｖｉｖｏ方法であって、
（ｉ）前記Ｍｄｍ２阻害剤の投与前に前記対象から得られる投与前生物学的試料を準備するステップ、
（ｉｉ）前記投与前試料におけるＧＤＦ−１５の発現を測定するステップ、
（ｉｉｉ）ある用量の前記Ｍｄｍ２阻害剤を前記対象に投与するステップ、
（ｉｖ）前記Ｍｄｍ２阻害剤の前記投与後に前記対象から得られる投与後生物学的試料を準備するステップ、
（ｖ）前記投与後試料におけるＧＤＦ−１５の発現を測定するステップ、
（ｖｉ）前記投与前試料におけるＧＤＦ−１５の発現を前記投与後試料におけるＧＤＦ−１５の発現のレベルと比較するステップ
を含む方法。
【請求項３】
前記用量の前記Ｍｄｍ２阻害剤の連続投与に応答して前記対象において血小板減少症を発症する可能性が決定される、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記投与前試料と比較した前記投与後試料におけるＧＤＦ−１５発現の５０％未満の増加、より好ましくは２５％未満の増加が、患者が、前記用量の前記Ｍｄｍ２阻害剤の前記連続投与に応答して血小板減少症を発症する可能性の減少の指標である、請求項２から３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記投与前試料と比較した前記投与後試料におけるＧＤＦ−１５発現の少なくとも２５％の増加、より好ましくは５０％の増加が、患者が、前記用量の前記Ｍｄｍ２阻害剤の前記連続投与に応答して血小板減少症を発症する可能性の増加の指標である、請求項２から４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
対象におけるがんの処置における使用のためのＭｄｍ２阻害剤であって、
（ｉ）ある用量の前記Ｍｄｍ２阻害剤が前記対象に投与される前に、前記対象から得られる投与前生物学的試料におけるＧＤＦ−１５発現を測定するステップ、
（ｉｉ）ある用量の前記Ｍｄｍ２阻害剤を前記対象に投与した後に、前記対象から得られる投与後生物学的試料における前記ＧＤＦ−１５発現を測定するステップ、
（ｉｉｉ）前記投与前試料における前記ＧＤＦ−１５発現を前記投与後試料における前記ＧＤＦ−１５発現と比較するステップ、および
（ｉｖ）前記投与後試料における前記ＧＤＦ−１５発現が、前記投与前試料における前記ＧＤＦ−１５発現と比較して少なくとも２５％、好ましくは少なくとも５０％高い場合に、前記対象の前記処置を変更するステップ、または
（ｖ）前記投与後試料におけるＧＤＦ−１５発現のレベルが、前記投与前試料における前記ＧＤＦ−１５発現と比較して５０％未満、好ましくは２５％未満高い場合に、前記対象への前記Ｍｄｍ２阻害剤の投与レジメンに対する変更を加えないステップ
を含む前記処置における使用のためのＭｄｍ２阻害剤。
【請求項７】
前記処置の前記変更が、前記対象への前記Ｍｄｍ２阻害剤の前記投与レジメンの変更および／または血小板への前記Ｍｄｍ２阻害剤の作用を低減させるための手段を投与することを含む、請求項６に記載のＭｄｍ２阻害剤。
【請求項８】
前記処置の前記変更が、前記Ｍｄｍ２阻害剤の用量の低減、および／または前記Ｍｄｍ２阻害剤の投与頻度の低減を含む、請求項６または請求項７に記載のＭｄｍ２阻害剤。
【請求項９】
血小板に対する前記Ｍｄｍ２阻害剤の作用を低減させる手段が、血小板輸注および／またはトロンボポエチンの投与、および／またはトロンボポエチン受容体アゴニストの投与を含み、好ましくは血小板輸注を含む、請求項６または請求項８に記載のＭｄｍ２阻害剤。
【請求項１０】
血小板に対する前記Ｍｄｍ２阻害剤の作用を低減させる手段がトロンボポエチン受容体アゴニストの投与を含み、前記トロンボポエチン受容体アゴニストがエルトロンボパグである、請求項６から９のいずれか一項に記載のＭｄｍ２阻害剤。
【請求項１１】
前記処置の前記変更が、前記Ｍｄｍ２阻害剤を用いる前記処置の中止を含む、請求項６から１０のいずれか一項に記載のがんの処置における使用のためのＭｄｍ２阻害剤。
【請求項１２】
前記処置の変更が休薬日を含む、請求項６から１０のいずれか一項に記載のがんの処置における使用のためのＭｄｍ２阻害剤。
【請求項１３】
前記投与後試料が、前記Ｍｄｍ２阻害剤の投与の約３０分後から約２４時間後まで、好ましくは約１時間後から約１２時間後まで、約２時間後から約１２時間後まで、約３時間後から約１２時間後まで、約４時間後から約８時間後まで、約５時間後から約８時間後まで、約５時間後から約７時間後まで、約６時間後から約７時間後までの時間枠内に得られる、請求項２から５のいずれか一項に記載の方法または請求項６から１２のいずれか一項に記載のＭｄｍ２阻害剤。
【請求項１４】
前記投与後試料が、前記Ｍｄｍ２阻害剤の投与の約３０分後、約１時間後、約２時間後、約３時間後、約４時間後、約５時間後、約６時間後、約７時間後、約８時間後、約１０時間後、約１２時間後、約２４時間後に得られる、請求項１３の方法または請求項１２のＭｄｍ２阻害剤。
【請求項１５】
前記投与後試料が、前記Ｍｄｍ２阻害剤の投与の約３時間後に得られる、請求項１４に記載の方法または請求項１３に記載のＭｄｍ２阻害剤。
【請求項１６】
前記投与後試料が、前記Ｍｄｍ２阻害剤の投与の約６時間後に得られる、請求項１４に記載の方法または請求項１３に記載のＭｄｍ２阻害剤。
【請求項１７】
前記投与後試料が、前記Ｍｄｍ２阻害剤の投与の約１２時間後に得られる、請求項１４に記載の方法または請求項１３に記載のＭｄｍ２阻害剤。
【請求項１８】
前記ＧＤＦ−１５発現が、ＧＤＦ−１５遺伝子転写を測定することによってアッセイされる、請求項２から５、１３から１７のいずれか一項に記載の方法または請求項６から１７のいずれか一項に記載のＭｄｍ２阻害剤。
【請求項１９】
前記ＧＤＦ−１５遺伝子発現が、ＧＤＦ−１５をコードする核酸の領域に特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプローブによってアッセイされる、請求項１８に記載の方法または請求項１８に記載のＭｄｍ２阻害剤。
【請求項２０】
前記ＧＤＦ−１５発現が、生物学的試料におけるＧＤＦ−１５タンパク質レベルの測定によってアッセイされる、請求項２から５、１３から１７のいずれか一項に記載の方法または請求項６から１７のいずれか一項に記載のＭｄｍ２阻害剤。
【請求項２１】
前記ＧＤＦ−１５タンパク質レベルが、ＧＤＦ−１５タンパク質に結合する抗体によってアッセイされる、請求項２０に記載の方法または請求項２０に記載のＭｄｍ２阻害剤。
【請求項２２】
前記生物学的試料が、血液、血漿、血清または尿である、請求項２０から２１のいずれか一項に記載の方法または請求項１８から１９のいずれか一項に記載のＭｄｍ２阻害剤。
【請求項２３】
前記生物学的試料が血液である、請求項２０から２１のいずれか一項に記載の方法または請求項２０から２１のいずれか一項に記載のＭｄｍ２阻害剤。
【請求項２４】
前記投与前試料におけるＧＤＦ−１５発現と比較した前記投与後試料におけるＧＤＦ−１５発現の少なくとも７５％、１００％または１５０％の増加が、血小板減少症を発症する可能性の増加の指標である、請求項２から５、１３から２３のいずれか一項に記載の方法または請求項６から２３のいずれか一項に記載のＭｄｍ２阻害剤。
【請求項２５】
がんを有する患者が、ある用量のＭｄｍ２阻害剤を用いる処置に応答して血小板減少症を発症する可能性を予測する際に使用するためのキットであって、
（ｉ）ＧＤＦ−１５発現を検出することができる少なくとも１つのプローブ、および
（ｉｉ）前記ＧＤＦ−１５発現について、前記患者から得られる生物学的試料をアッセイするために前記プローブを使用するための使用説明書であって、
（ａ）前記患者への前記用量の前記Ｍｄｍ２阻害剤の投与後のＧＤＦ−１５発現の少なくとも２５％の増加、より好ましくは少なくとも５０％の増加が、前記患者が前記用量の前記Ｍｄｍ２阻害剤を用いる連続処置に応答して血小板減少症を発症する可能性の増加の指標であり、
（ｂ）前記患者への前記用量の前記Ｍｄｍ２阻害剤の投与後のＧＤＦ−１５発現における５０％未満の増加、より好ましくは２５％未満の増加が、前記患者が前記用量の前記Ｍｄｍ２阻害剤を用いる前記処置に応答して血小板減少症を発症する可能性の減少の指標である、使用説明書
を含むキット。
【請求項２６】
がんを有する患者を処置する際に使用するためのキットであって、
（ｉ）治療有効量のＭｄｍ２阻害剤、
（ｉｉ）ＧＤＦ−１５発現を検出することができる少なくとも１つのプローブ、
（ｉｉｉ）前記ＧＤＦ−１５発現に対する前記患者から得られた生物学的試料をアッセイするために前記プローブを使用するための使用説明書、および
（ｉｖ）前記治療有効量の前記Ｍｄｍ２阻害剤が前記患者に投与された後に前記患者から得られる前記生物学的試料が、前記患者から得られる投与前試料におけるＧＤＦ−１５発現のレベルと比較して少なくとも２５％増加した、より好ましくは少なくとも５０％増加したＧＤＦ−１５発現を有する場合、前記患者に手段を適用するための使用説明書
を含むキット。
【請求項２７】
前記プローブが、ＧＤＦ−１５をコードする核酸の領域に特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチド、またはＧＤＦ−１５タンパク質に結合する抗体である、請求項２５から２６のいずれか一項に記載のキット。
【請求項２８】
Ｍｄｍ２阻害剤が、
（Ｓ）−１−（４−クロロ−フェニル）−７−イソプロポキシ−６−メトキシ−２−（４−｛メチル−［４−（３−オキソ−ピペラジン−１−イル）−ｔｒａｎｓ−シクロヘキシルメチル］−アミノ｝−フェニル）−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−３−オン；
（Ｓ）−１−（４−クロロ−フェニル）−７−イソプロポキシ−６−メトキシ−２−（４−｛メチル−［４−（４−メチル−３−オキソ−ピペラジン−１−イル）−ｔｒａｎｓ−シクロヘキシルメチル］−アミノ｝−フェニル）−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−３−オン；
（Ｓ）−１−（４−クロロ−フェニル）−７−イソプロポキシ−６−メトキシ−２−（６−｛メチル−［４−（４−メチル−３−オキソ−ピペラジン−１−イル）−ｔｒａｎｓ−シクロヘキシルメチル］−アミノ｝−ピリジン−３−イル）−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−３−オン；
（Ｓ）−１−（４−クロロ−フェニル）−７−イソプロポキシ−６−メトキシ−２−（６−｛メチル−［４−（３−メチル−４−オキソ−イミダゾリジン−１−イル）−ｔｒａｎｓ−シクロヘキシルメチル］−アミノ｝−ピリジン−３−イル）−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−３−オン；
（Ｓ）−１−（４−クロロ−フェニル）−７−イソプロポキシ−６−メトキシ−２−（５−｛メチル−［４−（３−メチル−４−オキソ−イミダゾリジン−１−イル）−ｔｒａｎｓ−シクロヘキシルメチル］−アミノ｝−ピラジン−２−イル）−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−３−オン；
１−（４−クロロ−フェニル）−７−イソプロポキシ−６−メトキシ−２−（４−｛メチル−［４−（４−メチル−３−オキソ−ピペラジン−１−イル）−ｔｒａｎｓ−シクロヘキシルメチル］−アミノ｝−フェニル）−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−３−オン；
（Ｓ）−５−（５−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−６−（４−クロロ−フェニル）−２−（２，４−ジメトキシ−ピリミジン−５−イル）−１−イソプロピル−５，６−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−オン；
４−［（Ｓ）−５−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−２−（２，４−ジメトキシ−ピリミジン−５−イル）−３−イソプロピル−６−オキソ−３，４，５，６−テトラヒドロ−ピロロ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−イル］−ベンゾニトリル；
（Ｓ）−５−（５−クロロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−６−（４−クロロ−フェニル）−２−（２，４−ジメトキシ−ピリミジン−５−イル）−１−イソプロピル−５，６−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−オン；
（Ｓ）−５−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−６−（４−クロロフェニル）−２−（２，４−ジメトキシピリミジン−５−イル）−１−（（Ｒ）−１−メトキシプロパン−２−イル）−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｄ］イミダゾール−４（１Ｈ）−オン；
【化１】
2018523824.tif 000008
および
（Ｓ）−５−（５−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イル）−６−（４−クロロフェニル）−２−（２，４−ジメトキシ−ｄ６−ピリミジン−５−イル）−１−（（Ｒ）−１−メトキシプロパン−２−イル）−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｄ］イミダゾール−４（１Ｈ）−オン；または前記いずれかの薬学的に許容される塩からなる群から選択される、請求項１に記載の使用、または請求項２から５、もしくは１２から２４のいずれか一項に記載の方法、または請求項６から２４のいずれか一項に記載の使用のためのＭｄｍ２阻害剤、または請求項２５から２７のいずれか一項に記載のキット。
【請求項２９】
Ｍｄｍ２阻害剤が、（Ｓ）−５−（５−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−６−（４−クロロ−フェニル）−２−（２，４−ジメトキシ−ピリミジン−５−イル）−１−イソプロピル−５，６−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−オン、またはその薬学的に許容される塩である、請求項１に記載の使用、または請求項２から５、もしくは１２から２４のいずれか一項に記載の方法、または請求項６から２４のいずれか一項に記載の使用のためのＭｄｍ２阻害剤、または請求項２５から２７のいずれか一項に記載のキット。
【請求項３０】
Ｍｄｍ２阻害剤が、（Ｓ）−１−（４−クロロ−フェニル）−７−イソプロポキシ−６−メトキシ−２−（４−｛メチル−［４−（４−メチル−３−オキソ−ピペラジン−１−イル）−ｔｒａｎｓ−シクロヘキシルメチル］−アミノ｝−フェニル）−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−３−オン、またはその薬学的に許容される塩である、請求項１に記載の使用、または請求項２から５、もしくは１２から２４のいずれか一項に記載の方法、または請求項６から２４のいずれか一項に記載のＭｄｍ２阻害剤、または請求項２５から２７のいずれか一項に記載のキット。
【請求項３１】
投与後試料におけるＧＤＦ−１５発現が、投与前試料におけるＧＤＦ−１５発現と比較して、少なくとも２５％、好ましくは少なくとも５０％高い対象における薬物誘発性血小板減少症の予防または処置における使用のためのトロンボポエチン受容体アゴニストであって、
前記「投与前試料におけるＧＤＦ−１５発現」が、薬物誘発性血小板減少症の発症を引き起こし得るある用量の薬物が前記対象に投与される前に、前記対象から得られる投与前生物学的試料において測定されたＧＤＦ−１５発現であり、
前記「投与後試料におけるＧＤＦ−１５発現」が、薬物誘発性血小板減少症の発症を引き起こし得るある用量の前記薬物が前記対象に投与された後に、前記対象から得られる投与後生物学的試料において測定されたＧＤＦ−１５発現である、トロンボポエチン受容体アゴニスト。
【請求項３２】
薬物誘発性血小板減少症の発症を引き起こし得る前記薬物が、Ｍｄｍ２阻害剤である、請求項３１または３２に記載の使用のためのトロンボポエチン受容体アゴニスト。
【請求項３３】
Ｍｄｍ２阻害剤およびトロンボポエチン受容体アゴニストの組合せ。
【請求項３４】
医学的使用のための請求項３３に記載の組合せ。
【請求項３５】
がんの処置および薬物誘発性血小板減少症の予防または処置における使用のための、請求項３３に記載の組合せ。
【請求項３６】
前記トロンボポエチン受容体アゴニストが、エルトロンボパグである、請求項３１から３５のいずれか一項に記載のトロンボポエチン受容体アゴニスト、組合せ、または使用のための組合せ。
【請求項３７】
Ｍｄｍ２阻害剤が、（Ｓ）−５−（５−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−６−（４−クロロ−フェニル）−２−（２，４−ジメトキシ−ピリミジン−５−イル）−１−イソプロピル−５，６−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−オン、またはその薬学的に許容される塩である、請求項３１から３６のいずれか一項に記載のトロンボポエチン受容体アゴニスト、組合せ、または使用のための組合せ。
【請求項３８】
Ｍｄｍ２阻害剤が、（Ｓ）−１−（４−クロロ−フェニル）−７−イソプロポキシ−６−メトキシ−２−（４−｛メチル−［４−（４−メチル−３−オキソ−ピペラジン−１−イル）−ｔｒａｎｓ−シクロヘキシルメチル］−アミノ｝−フェニル）−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−３−オン、またはその薬学的に許容される塩である、請求項３１から３６のいずれか一項に記載のトロンボポエチン受容体アゴニスト、組合せ、または使用のための組合せ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、Ｍｄｍ２阻害剤の毒物学的作用を判定するための安全性バイオマーカーの使用、対象におけるＭｄｍ２阻害剤の毒物学的作用を判定するための、特にある用量のＭｄｍ２阻害剤の投与に応答して対象において血小板減少症の発症の可能性を判定するためのｅｘ  ｖｉｖｏ方法、対象におけるがんの処置においてＭｄｍ２阻害剤を使用する方法、がんを有する患者が、ある用量のＭｄｍ２阻害剤を用いる処置に応答して血小板減少症を発症する可能性を予測する際に使用するためのキット、がんを有する患者を処置する際に使用するためのキットおよび関連する開示実施形態に関する。
【背景技術】
【０００２】
タンパク質ｐ５３は、ＤＮＡ損傷修復、アポトーシスおよび細胞周期停止に関与する多数の標的遺伝子の発現を制御する転写因子である。野生型ｐ５３活性の損失を導く突然変異は、多くの異なる腫瘍タイプにおいて検出されることが多い。ＴＰ５３遺伝子は、ヒトのがんにおいて最も頻繁に突然変異する遺伝子の１つである。したがって、腫瘍抑制因子ｐ５３は、ヒトのがんの概ね５０％における突然変異または欠失によって機能的に損なわれる。残りのヒトのがんにおいて、ｐ５３は野生型の状態を保持するが、その機能はその主要な細胞阻害剤、マウス二重微小染色体２（Ｍｄｍ２、ＭＤＭ２；ＨＤＭ２（マウス二重微小染色体２のヒトホモログ））によって阻害される。Ｍｄｍ２は、ｐ５３腫瘍抑制因子の負の調節因子である。Ｍｄｍ２タンパク質は、ｐ５３のプロテアソーム分解を導くＥ３ユビキチンリガーゼ、およびｐ５３転写活性の阻害剤の両方として機能する。多くの場合、Ｍｄｍ２は、ｐ５３野生型腫瘍における増幅が見出される。
【０００３】
Ｍｄｍ２とｐ５３の間の相互作用は、野生型ｐ５３を保持するがんにおけるｐ５３の機能の阻害に対する主要な機構であるため、Ｍｄｍ２−ｐ５３相互作用、したがってｐ５３を再活性化することは、新規の有望な治療戦略である。Ｍｄｍ２−ｐ５３相互作用を阻害するいくつかのＭｄｍ２阻害剤が開発され、したがって、抗腫瘍効果を誘発することができる。報告された最初の有効な小分子Ｍｄｍ２阻害剤は、Ｎｕｔｌｉｎであった（Vassilev LT, et al., Science. 2004 Feb 6; 303(5659):844-8）。Ｎｕｔｌｉｎの発見に続き、いくつかのさらなる小分子Ｍｄｍ２阻害剤、例えばＭＩ−６３（Ding K, et al., J Med Chem. 2006 Jun 15; 49(12):3432-5）、およびＭＩ２１９（Shangary S, et al., Proc Natl Acad Sci U S A. 2008 Mar 11; 105(10):3933-8）が開発された。
【０００４】
薬物がクリニックに移されると、これらの薬物の毒物学的作用に注意を払う必要がある。ある種の薬物は、薬物誘発性血小板減少症、すなわち対象が血小板の相対的な減少を有する状態の発症を引き起こし得る。脂肪肉腫を有する患者における、Ｎｕｔｌｉｎファミリーの阻害剤である、単剤ＲＧ−７１１２の概念研究の証明から得られた結果により、ＲＧ−７１１２は、患者の４０％において血小板減少症を誘発したことが実証された。この研究結果は、ＲＧ−７１１２投与に伴う主な用量規定毒性の１つが血小板減少症であることを示す（Ray-Coquard I, et al. Lancet Oncol, 2012, 13: 1133-1140）。動物モデルで行われた研究は、ＲＧ−７１１２に誘発される血小板減少症が処置期間のある程度後期に起こり、薬物中止後も持続したことを示し、このことは、薬物が造血前駆細胞に初期に作用することを示唆する（Iancu-Rubun, C., et al., Experimental Hematology 2014;42:137-145）。ＲＧ−７１１２だけでなく他のＭｄｍ２阻害剤が血小板減少症を潜在的に誘発し得、したがって、この点において注意が払われるべきである。
【０００５】
血小板減少症を引き起こし得る特定の薬物を用いる処置を中止することによるか、または対応して処置を変更することによるかのいずれかで、血小板減少症の発症前または血小板減少症の非常に初期の発生において感受性患者の処置を調整することが重要である。初期段階で血小板減少症の発生を検出できないこと、および問題の薬物を用いる処置の継続が致死的転帰をもたらす場合がある。したがって、当技術分野では、後発性の薬物誘発性血小板減少症を予測すること、判定すること、監視すること、および薬物処置後、特にＭｄｍ２阻害剤の投与後に対象における毒性を管理することに対する継続した必要性が存在する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
Ｍｄｍ２阻害剤の毒性学的作用、特にＭｄｍ２阻害剤の血液毒性を判定するための安全性バイオマーカーとしてＧＤＦ−１５を提供することが本開示の目的である。特に、本開示は、Ｍｄｍ２阻害剤の投与に応答して対象において血小板減少症を発症する可能性を判定するための安全性バイオマーカーとしてのＧＤＦ−１５の使用に関する。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本開示に従って、（ｉ）対象におけるＧＤＦ−１５の発現のベースラインレベルと比較したある用量のＭｄｍ２阻害剤の投与後の同じ対象におけるＧＤＦ−１５発現のレベルの相対的増加と（ｉｉ）前記用量の前記Ｍｄｍ２阻害剤の投与の毒性学的作用、特にＭｄｍ２阻害剤の血液毒性の間に相関関係が存在することを驚くべきことに見出した。所与の投薬レジメンに関して、対象へのある用量のＭｄｍ２阻害剤の投与後のＧＤＦ−１５発現のレベルと、前記用量のＭｄｍ２阻害剤に応答して対象において血小板減少症を発症する可能性の間に相関関係が存在することが特定された。特に、Ｍｄｍ２阻害剤投与前の対象から得られた投与前試料と比較したある用量のＭｄｍ２阻害剤投与後の対象から得られた投与後試料におけるＧＤＦ−１５発現の少なくとも２５％の増加、特に少なくとも５０％の増加が、患者が、前記用量のＭｄｍ２阻害剤に応答して血小板減少症を発症する可能性の増加の指標であることが確立された。安全性バイオマーカーとしてのＧＤＦ−１５の使用は、医師が、Ｍｄｍ２阻害剤を用いた対象（患者）の処置の経過を監視し、血小板減少症を最小限にするかまたは完全に予防するための手段を適切に適用するのに十分早期に遅延性の薬物誘発性血小板減少症を予測する助けとなり得る。
【０００８】
一態様では、本開示は、対象におけるＭｄｍ２阻害剤の毒性学的作用を判定するためのｅｘ  ｖｉｖｏ方法であって、
（ｉ）前記Ｍｄｍ２阻害剤の投与前に対象から得られる投与前生物学的試料を準備するステップ、
（ｉｉ）投与前試料におけるＧＤＦ−１５の発現を測定するステップ、
（ｉｉｉ）ある用量の前記Ｍｄｍ２阻害剤を対象に投与するステップ、
（ｉｖ）前記Ｍｄｍ２阻害剤の投与後に対象から得られる投与後生物学的試料を準備するステップ、
（ｖ）投与後試料におけるＧＤＦ−１５の発現を測定するステップ、
（ｖｉ）投与前試料におけるＧＤＦ−１５の発現を投与後試料におけるＧＤＦ−１５の発現のレベルと比較するステップであって、特に前記用量のＭｄｍ２阻害剤の投与に応答して対象において血小板減少症を発症する可能性が決定されるステップ
を含む方法。
【０００９】
別の態様では、本開示は、対象におけるがんの処置であって、
（ｉ）ある用量のＭｄｍ２阻害剤が前記対象に投与される前に、前記対象から得られる投与前生物学的試料におけるＧＤＦ−１５発現を測定するステップ、
（ｉｉ）ある用量のＭｄｍ２阻害剤を前記対象に投与した後に、前記対象から得られる投与後生物学的試料におけるＧＤＦ−１５発現を測定するステップ、
（ｉｉｉ）投与前試料におけるＧＤＦ−１５発現を投与後試料におけるＧＤＦ−１５発現と比較するステップ、および
（ｉｖ）投与後試料におけるＧＤＦ−１５発現が、投与前試料におけるＧＤＦ−１５発現と比較して少なくとも２５％、好ましくは少なくとも５０％高い場合に、前記対象の処置を変更するステップ、または
（ｖ）投与後試料におけるＧＤＦ−１５発現のレベルが、投与前試料におけるＧＤＦ−１５発現と比較して５０％未満、好ましくは２５％未満高い場合に、前記対象への前記Ｍｄｍ２阻害剤の投与レジメンに対する変更を加えないステップ
を含む前記処置における使用のためのＭｄｍ２阻害剤を提供する。
【００１０】
さらなる態様において、本開示は、がんを有する患者が、ある用量のＭｄｍ２阻害剤を用いる処置に応答して血小板減少症を発症する可能性を予測する際に使用するためのキットであって、
（ｉ）ＧＤＦ−１５発現を検出することができる少なくとも１つのプローブ、および
（ｉｉ）ＧＤＦ−１５発現について、患者から得られる生物学的試料をアッセイするためにプローブを使用するための使用説明書であって、
（ａ）前記患者への前記用量の前記Ｍｄｍ２阻害剤の投与後のＧＤＦ−１５発現の少なくとも２５％の増加、より好ましくは少なくとも５０％の増加が、前記患者が前記用量のＭｄｍ２阻害剤を用いる処置に応答して血小板減少症を発症する可能性の増加の指標であり、
（ｂ）前記患者への前記用量の前記Ｍｄｍ２阻害剤の投与後のＧＤＦ−１５発現における５０％未満の増加、より好ましくは２５％未満の増加が、前記患者が前記用量のＭｄｍ２阻害剤を用いる処置に応答して血小板減少症を発症する可能性の減少の指標である使用説明書
を含むキットに関する。
【００１１】
またさらなる態様では、本開示は、がんを有する患者を処置する際に使用するためのキットであって、
（ｉ）治療有効量のＭｄｍ２阻害剤、
（ｉｉ）ＧＤＦ−１５発現を検出することができる少なくとも１つのプローブ、
（ｉｉｉ）ＧＤＦ−１５発現について、患者から得られる生物学的試料をアッセイするためにプローブを使用するための使用説明書、および
（ｉｖ）治療有効量のＭｄｍ２阻害剤を患者に投与した後に患者から得られる生物学的試料が、前記患者から得られる投与前試料におけるＧＤＦ−１５発現のレベルと比較して、少なくとも２５％増加し、より好ましくは少なくとも５０％増加した場合に、患者に手段を適用するための使用説明書
を含むキットに関する。
【００１２】
具体的には、本開示は、以下の項目に列挙されるように、それぞれ単独でまたは組み合わせて、以下の態様、有利な特徴および具体的実施形態を提供する：
１．Ｍｄｍ２阻害剤の毒性学的作用を判定するための安全性バイオマーカーとしてのＧＤＦ−１５の使用。
２．対象におけるＭｄｍ２阻害剤の毒性学的作用を判定するためのｅｘ  ｖｉｖｏ方法であって、
（ｉ）前記Ｍｄｍ２阻害剤の投与前に前記対象から得られる投与前生物学的試料を準備するステップ、
（ｉｉ）投与前試料におけるＧＤＦ−１５の発現を測定するステップ、
（ｉｉｉ）ある用量の前記Ｍｄｍ２阻害剤を対象に投与するステップ、
（ｉｖ）前記Ｍｄｍ２阻害剤の投与後に対象から得られる投与後生物学的試料を準備するステップ、
（ｖ）投与後試料におけるＧＤＦ−１５の発現を測定するステップ、
（ｖｉ）投与前試料におけるＧＤＦ−１５の発現を投与後試料におけるＧＤＦ−１５の発現のレベルと比較するステップ
を含む方法。
３．前記用量のＭｄｍ２阻害剤の投与に応答して前記対象において血小板減少症を発症する可能性が決定される、項目２に記載の方法。
４．前記投与前試料と比較した前記投与後試料におけるＧＤＦ−１５発現の５０％未満の増加、より好ましくは２５％未満の増加が、患者が、前記用量のＭｄｍ２阻害剤の投与に応答して血小板減少症を発症する可能性の減少の指標である、項目２または項目３の方法。
５．前記投与前試料と比較した前記投与後試料におけるＧＤＦ−１５発現の少なくとも２５％の増加、より好ましくは５０％の増加が、患者が、前記用量のＭｄｍ２阻害剤の投与に応答して血小板減少症を発症する可能性の増加の指標である、項目２から４のいずれか１つの方法。
６．対象におけるがんの処置であって、
（ｉ）ある用量のＭｄｍ２阻害剤が前記対象に投与される前に、前記対象から得られる投与前生物学的試料におけるＧＤＦ−１５発現を測定するステップ、
（ｉｉ）ある用量のＭｄｍ２阻害剤を前記対象に投与した後に、前記対象から得られる投与後生物学的試料におけるＧＤＦ−１５発現を測定するステップ、
（ｉｉｉ）投与前試料におけるＧＤＦ−１５発現を投与後試料におけるＧＤＦ−１５発現と比較するステップ、および
（ｉｖ）投与後試料におけるＧＤＦ−１５発現が、投与前試料におけるＧＤＦ−１５発現と比較して少なくとも２５％高く、好ましくは少なくとも５０％高い場合に、前記対象の処置を変更するステップ、または
（ｖ）投与後試料におけるＧＤＦ−１５発現のレベルが、投与前試料におけるＧＤＦ−１５発現と比較して５０％未満、好ましくは２５％未満高い場合に、前記対象への前記Ｍｄｍ２阻害剤の投与レジメンに対する変更を加えないステップ
を含む前記処置における使用のためのＭｄｍ２阻害剤。
７．処置の前記変更が、対象への前記Ｍｄｍ２阻害剤の投与レジメンの変更および／または血小板へのＭｄｍ２阻害剤の作用を低減させるための手段を投与することを含む、項目６に記載のＭｄｍ２阻害剤。
８．処置の前記変更が、前記Ｍｄｍ２阻害剤の用量の低減、および／または前記Ｍｄｍ２阻害剤の投与頻度の低減を含む、項目６または項目７に記載のＭｄｍ２阻害剤。
９．血小板に対するＭｄｍ２阻害剤の作用を低減させる手段が、血小板輸注および／またはトロンボポエチンの投与、および／またはトロンボポエチン受容体アゴニストの投与を含み、好ましくは血小板輸注を含む、項目６または項目８に記載のＭｄｍ２阻害剤。
１０．血小板に対するＭｄｍ２阻害剤の作用を低減させる手段がトロンボポエチン受容体アゴニストの投与を含み、前記トロンボポエチン受容体アゴニストがエルトロンボパグである、項目６から９のいずれか１つに記載のＭｄｍ２阻害剤。
１１．処置の前記変更が、前記Ｍｄｍ２阻害剤を用いる処置の中止を含む、項目６から１０のいずれか１つに記載のがんの処置における使用のためのＭｄｍ２阻害剤。
１２．前記処置の変更が休薬日を含む、項目６から１０のいずれか１つに記載のがんの処置における使用のためのＭｄｍ２阻害剤。
１３．前記投与後試料が、Ｍｄｍ２阻害剤の投与の約３０分後から約２４時間後まで、好ましくは約１時間後から約１２時間後まで、約２時間後から約１２時間後まで、約３時間後から約１２時間後まで、約４時間後から約８時間後まで、約５時間後から約８時間後まで、約５時間後から約７時間後まで、約６時間後から約７時間後までの時間枠内に得られる、項目２から５のいずれか１つの方法または項目６から１２のいずれか１つのＭｄｍ２阻害剤。
１４．前記投与後試料が、Ｍｄｍ２阻害剤の投与の約３０分後、約１時間後、約２時間後、約３時間後、約４時間後、約５時間後、約６時間後、約７時間後、約８時間後、約１０時間後、約１２時間後、約２４時間後に得られる、項目１３の方法または項目１３のＭｄｍ２阻害剤。
１５．前記投与後試料が、Ｍｄｍ２阻害剤の投与の約３時間後に得られる、項目１４の方法または項目１３のＭｄｍ２阻害剤。
１６．前記投与後試料が、Ｍｄｍ２阻害剤の投与の約６時間後に得られる、項目１４の方法または項目１３のＭｄｍ２阻害剤。
１７．前記投与後試料が、Ｍｄｍ２阻害剤の投与の約１２時間後に得られる、項目１４の方法または項目１３のＭｄｍ２阻害剤。
１８．前記ＧＤＦ−１５発現が、ＧＤＦ−１５遺伝子転写を測定することによってアッセイされる、項目２から５、１３から１７のいずれか１つに記載の方法または項目６から１７のいずれか１つに記載のＭｄｍ２阻害剤。
１９．前記ＧＤＦ−１５遺伝子発現が、ＧＤＦ−１５をコードする核酸の領域に特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプローブによってアッセイされる、項目１８に記載の方法または項目１８に記載のＭｄｍ２阻害剤。
２０．前記ＧＤＦ−１５発現が、生物学的試料におけるＧＤＦ−１５タンパク質レベルの測定によってアッセイされる、項目２から５、１３から１７のいずれか１つの方法または項目６から１７のいずれか１つのＭｄｍ２阻害剤。
２１．前記ＧＤＦ−１５タンパク質レベルが、ＧＤＦ−１５タンパク質に結合する抗体によってアッセイされる、項目２０に記載の方法または項目２０に記載のＭｄｍ２阻害剤。
２２．生物学的試料が、血液、血漿、血清または尿である、項目２０から２１のいずれか１つの方法または項目２０から２１のいずれか１つのＭｄｍ２阻害剤。
２３．生物学的試料が、血液である、項目２０から２１のいずれか１つの方法または項目２０から２１のいずれか１つのＭｄｍ２阻害剤。
２４．投与前試料におけるＧＤＦ−１５発現と比較した投与後試料におけるＧＤＦ−１５発現の少なくとも７５％、１００％または１５０％の増加が、血小板減少症を発症する可能性の増加の指標である、項目２から５、１３から２３のいずれか１つの方法または項目６から２３のいずれか１つのＭｄｍ２阻害剤。
２５．がんを有する患者が、ある用量のＭｄｍ２阻害剤を用いる処置に応答して血小板減少症を発症する可能性を予測する際に使用するためのキットであって、
（ｉ）ＧＤＦ−１５発現を検出することができる少なくとも１つのプローブ、および
（ｉｉ）ＧＤＦ−１５発現について、患者から得られる生物学的試料をアッセイするためにプローブを使用するための使用説明書であって、
（ａ）前記患者への前記用量の前記Ｍｄｍ２阻害剤の投与後のＧＤＦ−１５発現の少なくとも２５％の増加、より好ましくは少なくとも５０％の増加が、前記患者が前記用量のＭｄｍ２阻害剤を用いる処置に応答して血小板減少症を発症する可能性の増加の指標であり、
（ｂ）前記患者への前記用量のＭｄｍ２阻害剤の投与後のＧＤＦ−１５発現における５０％未満の増加、より好ましくは２５％未満の増加が、前記患者が前記用量のＭｄｍ２阻害剤を用いる前記処置に応答して血小板減少症を発症する可能性の減少の指標である使用説明書
を含むキット。
２６．がんを有する患者を処置する際に使用するためのキットであって、
（ｉ）治療有効量のＭｄｍ２阻害剤、
（ｉｉ）ＧＤＦ−１５発現を検出することができる少なくとも１つのプローブ、
（ｉｉｉ）ＧＤＦ−１５発現に対する患者から得られた生物学的試料をアッセイするためにプローブを使用するための使用説明書、および
（ｉｖ）治療有効量のＭｄｍ２阻害剤が患者に投与された後に患者から得られる生物学的試料が、前記患者から得られる投与前試料におけるＧＤＦ−１５発現のレベルと比較して少なくとも２５％増加した、より好ましくは少なくとも５０％増加したＧＤＦ−１５発現を有する場合、患者に手段を適用するための使用説明書
を含むキット。
２７．プローブが、ＧＤＦ−１５をコードする核酸の領域に特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチド、またはＧＤＦ−１５タンパク質に結合する抗体である、項目２５から２６のいずれか１つに記載のキット。
２８．前記Ｍｄｍ２阻害剤が、
（Ｓ）−１−（４−クロロ−フェニル）−７−イソプロポキシ−６−メトキシ−２−（４−｛メチル−［４−（３−オキソ−ピペラジン−１−イル）−ｔｒａｎｓ−シクロヘキシルメチル］−アミノ｝−フェニル）−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−３−オン；
（Ｓ）−１−（４−クロロ−フェニル）−７−イソプロポキシ−６−メトキシ−２−（４−｛メチル−［４−（４−メチル−３−オキソ−ピペラジン−１−イル）−ｔｒａｎｓ−シクロヘキシルメチル］−アミノ｝−フェニル）−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−３−オン；
（Ｓ）−１−（４−クロロ−フェニル）−７−イソプロポキシ−６−メトキシ−２−（６−｛メチル−［４−（４−メチル−３−オキソ−ピペラジン−１−イル）−ｔｒａｎｓ−シクロヘキシルメチル］−アミノ｝−ピリジン−３−イル）−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−３−オン；
（Ｓ）−１−（４−クロロ−フェニル）−７−イソプロポキシ−６−メトキシ−２−（６−｛メチル−［４−（３−メチル−４−オキソ−イミダゾリジン−１−イル）−ｔｒａｎｓ−シクロヘキシルメチル］−アミノ｝−ピリジン−３−イル）−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−３−オン；
（Ｓ）−１−（４−クロロ−フェニル）−７−イソプロポキシ−６−メトキシ−２−（５−｛メチル−［４−（３−メチル−４−オキソ−イミダゾリジン−１−イル）−ｔｒａｎｓ−シクロヘキシルメチル］−アミノ｝−ピラジン−２−イル）−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−３−オン；
１−（４−クロロ−フェニル）−７−イソプロポキシ−６−メトキシ−２−（４−｛メチル−［４−（４−メチル−３−オキソ−ピペラジン−１−イル）−ｔｒａｎｓ−シクロヘキシルメチル］−アミノ｝−フェニル）−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−３−オン；
（Ｓ）−５−（５−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−６−（４−クロロ−フェニル）−２−（２，４−ジメトキシ−ピリミジン−５−イル）−１−イソプロピル−５，６−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−オン；
４−［（Ｓ）−５−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−２−（２，４−ジメトキシ−ピリミジン−５−イル）−３−イソプロピル−６−オキソ−３，４，５，６−テトラヒドロ−ピロロ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−イル］−ベンゾニトリル；
（Ｓ）−５−（５−クロロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−６−（４−クロロ−フェニル）−２−（２，４−ジメトキシ−ピリミジン−５−イル）−１−イソプロピル−５，６−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−オン；
（Ｓ）−５−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−６−（４−クロロフェニル）−２−（２，４−ジメトキシピリミジン−５−イル）−１−（（Ｒ）−１−メトキシプロパン−２−イル）−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｄ］イミダゾール−４（１Ｈ）−オン；
【００１３】
【化１】
2018523824.tif 000003
および
（Ｓ）−５−（５−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イル）−６−（４−クロロフェニル）−２−（２，４−ジメトキシ−ｄ６−ピリミジン−５−イル）−１−（（Ｒ）−１−メトキシプロパン−２−イル）−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｄ］イミダゾール−４（１Ｈ）−オン；または前述のいずれかの薬学的に許容される塩から選択される、項目１に記載の使用、または項目２から５、もしくは１２から２４のいずれか１つに記載の方法、または項目６から２４のいずれか１つに記載のＭｄｍ２阻害剤、または項目２５から２７のいずれか１つに記載のキット。
２９．前記Ｍｄｍ２阻害剤が、（Ｓ）−５−（５−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−６−（４−クロロ−フェニル）−２−（２，４−ジメトキシ−ピリミジン−５−イル）−１−イソプロピル−５，６−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−オン、またはその薬学的に許容される塩である、項目１に記載の使用、または項目２から５、もしくは１２から２４のいずれか１つに記載の方法、または項目６から２４のいずれか１つに記載のＭｄｍ２阻害剤、または項目２５から２７のいずれか１つに記載のキット。
３０．前記Ｍｄｍ２阻害剤が、（Ｓ）−１−（４−クロロ−フェニル）−７−イソプロポキシ−６−メトキシ−２−（４−｛メチル−［４−（４−メチル−３−オキソ−ピペラジン−１−イル）−ｔｒａｎｓ−シクロヘキシルメチル］−アミノ｝−フェニル）−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−３−オン、またはその薬学的に許容される塩である、項目１に記載の使用、または項目２から５、もしくは１２から２４のいずれか１つに記載の方法、または項目６から２４のいずれか１つに記載のＭｄｍ２阻害剤、または項目２５から２７のいずれか１つに記載のキット。
３１．投与後試料におけるＧＤＦ−１５発現が、投与前試料におけるＧＤＦ−１５発現と比較して、少なくとも２５％、好ましくは少なくとも５０％高い対象における薬物誘発性血小板減少症の予防または処置における使用のためのトロンボポエチン受容体アゴニストであって、
「投与前試料におけるＧＤＦ−１５発現」が、薬物誘発性血小板減少症の発症を引き起こし得るある用量の薬物が前記対象に投与される前に、前記対象から得られる投与前生物学的試料において測定されたＧＤＦ−１５発現であり、
「投与後試料におけるＧＤＦ−１５発現」が、薬物誘発性血小板減少症の発症を引き起こし得るある用量の薬物が前記対象に投与された後に、前記対象から得られる投与後生物学的試料において測定されたＧＤＦ−１５発現である、トロンボポエチン受容体アゴニスト。
３２．薬物誘発性血小板減少症の発症を引き起こし得る薬物が、Ｍｄｍ２阻害剤である、項目３１または３２に記載の使用のためのトロンボポエチン受容体アゴニスト。
３３．Ｍｄｍ２阻害剤およびトロンボポエチン受容体アゴニストの組合せ。
３４．医学的使用のための項目３３に記載の組合せ。
３５．がんの処置および薬物誘発性血小板減少症の予防または処置における使用のための、項目３３に記載の組合せ。
３６．トロンボポエチン受容体アゴニストが、エルトロンボパグである、項目３１から３５のいずれか１つに記載のトロンボポエチン受容体アゴニスト、組合せ、または使用のための組合せ。
３７．Ｍｄｍ２阻害剤が、（Ｓ）−５−（５−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−６−（４−クロロ−フェニル）−２−（２，４−ジメトキシ−ピリミジン−５−イル）−１−イソプロピル−５，６−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−オン、またはその薬学的に許容される塩である、項目３１から３６のいずれか１つに記載のトロンボポエチン受容体アゴニスト、組合せ、または使用のための組合せ。
３８．Ｍｄｍ２阻害剤が、（Ｓ）−１−（４−クロロ−フェニル）−７−イソプロポキシ−６−メトキシ−２−（４−｛メチル−［４−（４−メチル−３−オキソ−ピペラジン−１−イル）−ｔｒａｎｓ−シクロヘキシルメチル］−アミノ｝−フェニル）−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−３−オン、またはその薬学的に許容される塩である、項目３１から３６のいずれか１つに記載のトロンボポエチン受容体アゴニスト、組合せ、または使用のための組合せ。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】週３回の連続経口投薬レジメンで（Ｓ）−１−（４−クロロ−フェニル）−７−イソプロポキシ−６−メトキシ−２−（４−｛メチル−［４−（４−メチル−３−オキソ−ピペラジン−１−イル）−ｔｒａｎｓ−シクロヘキシルメチル］−アミノ｝−フェニル）−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−３−オンを用いて処置した患者の血小板数を実測し、個々にフィットさせた時間プロファイルを示すグラフである。最初の投与は、このグラフの４００時間においてである。患者は、３回の血小板輸血イベントを受けた。
【図２】週３回投与の連続投薬レジメンで（Ｓ）−１−（４−クロロ−フェニル）−７−イソプロポキシ−６−メトキシ−２−（４−｛メチル−［４−（４−メチル−３−オキソ−ピペラジン−１−イル）−ｔｒａｎｓ−シクロヘキシルメチル］−アミノ｝−フェニル）−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−３−オンを用いて処置した患者のＧＤＦ−１５タンパク質レベルを実測し、個々にフィットさせた時間プロファイルを示すグラフである。
【図３】（Ｓ）−１−（４−クロロ−フェニル）−７−イソプロポキシ−６−メトキシ−２−（４−｛メチル−［４−（４−メチル−３−オキソ−ピペラジン−１−イル）−ｔｒａｎｓ−シクロヘキシルメチル］−アミノ｝−フェニル）−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−３−オンの週３回の連続経口投与で処置した２１人の患者についてのＧＤＦ−１５および血小板数に対する（Ｓ）−１−（４−クロロ−フェニル）−７−イソプロポキシ−６−メトキシ−２−（４−｛メチル−［４−（４−メチル−３−オキソ−ピペラジン−１−イル）−ｔｒａｎｓ−シクロヘキシルメチル］−アミノ｝−フェニル）−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−３−オンの作用についての予備データ解析を示すグラフである。各ポイントは、個々の患者を表す。Ｘ軸は、基準からの割合変化（％）におけるＧＤＦ−１５の増加を表す。Ｙ軸は、処置の過程中、同じ患者に対する最も低い実測血小板数である。
【図４】血小板動態を説明するために使用されるＰＫＰＤモデルを示す図である。ＭＭＴは平均成熟時間、Ｅ（［Ｃ］）は薬物濃度の薬効関数である。Ｃｉｒｃ．の区画は循環血小板、Ｐｒｏｌ．は増殖性未熟細胞およびＡ２、Ａ３、Ａ４は成熟区画を表す。
【図５】ＧＤＦ−１５動態を説明するために使用されるＰＫＰＤモデルの概略図である。Ｔｌａｇおよびｋａは、それぞれ遅延および一次薬物吸収速度パラメーターである。ｋ１２およびｋ２１は区画間速度であり、ｋｅは排出速度であり、Ｖｍおよびｋｍはミカエリスメンテン排出パラメーターである。ｋｏｕｔは間接応答モデルの代謝回転速度であり、ｋｉｎは０次産生である。Ｖは中央区画の見かけの体積であり、Ｑｃ／Ｖは薬物濃度である。
【図６】確立したＰＫＰＤモデルを示すグラフである。ＧＤＦ−１５のｓｌＧｉ産生に関する個々の薬物の効能を未成熟造血細胞ｓｌＰｉに関する個々の薬物の効能に対してプロットした。
【図７】１２．５ｍｇ（Ａ）、２５ｍｇ（Ｂ）、５０ｍｇ（Ｃ）、１００ｍｇ（Ｄ）、２００ｍｇ（Ｅ）、２５０ｍｇ（Ｆ）、３５０ｍｇ（Ｇ）の用量で３週サイクル（本明細書においてレジメン１Ａまたは３週に１回投与とも称される）の最初の日または１２０ｍｇ（Ｉ）の用量で４週サイクル（本明細書においてレジメン１Ｂとも称される）最初の日および８日目に式Ｉの化合物を受ける固形腫瘍を有する患者に対する、ＧＤＦ−１５の倍率変化に対する血小板数の最大変化（図７）を表すグラフである。左のグラフ：ＧＤＦ−１５の倍率変化に対する血小板数の最大変化であり、ＧＤＦ−１５は第１サイクルの１日目（Ｃ１Ｄ１）に測定される。右のグラフ：ＧＤＦ−１５の倍率変化に対する血小板数の最大変化。
【図８】１２．５ｍｇ（Ａ）、２５ｍｇ（Ｂ）、５０ｍｇ（Ｃ）、１００ｍｇ（Ｄ）、２００ｍｇ（Ｅ）、２５０ｍｇ（Ｆ）、３５０ｍｇ（Ｇ）の用量で３週サイクル（本明細書においてレジメン１Ａまたは３週に１回投与とも称される）の最初の日または１２０ｍｇ（Ｉ）の用量で４週サイクル（本明細書においてレジメン１Ｂとも称される）最初の日および８日目に式Ｉの化合物を受ける固形腫瘍を有する患者に対する、ＧＤＦ−１５の倍率変化に対する好中球数の最大変化（図８）を表すグラフである。左のグラフ：ＧＤＦ−１５の倍率変化に対する血小板数の最大変化であり、ＧＤＦ−１５は第１サイクルの１日目（Ｃ１Ｄ１）に測定される。右のグラフ：ＧＤＦ−１５の倍率変化に対する血小板数の最大変化。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
患者へのＭｄｍ２阻害剤の投与は、血小板減少症の発症を引き起こし得る。以前の研究により、Ｍｄｍ２阻害剤であるＲＧ７１１２が血小板産生を損なうことが実証された。本発明者らは、ＧＤＦ−１５をＭｄｍ２阻害剤の毒性学的作用を判定するための安全性バイオマーカーとして特定した。本開示は、（ｉ）対象におけるＧＤＦ−１５の発現の基準レベルと比較した、Ｍｄｍ２阻害剤の投与後の同じ対象におけるＧＤＦ−１５発現のレベルの相対的増加と、（ｉｉ）前記Ｍｄｍ２阻害剤の毒性学的作用、特にＭｄｍ２阻害剤の血液毒性の間の相関関係の特定に基づいている。関連づけの勾配は、Ｍｄｍ２の効能と投薬レジメンに応答して変化し得る。特に、本発明者らは、所与の投薬レジメンに関して、ある用量のＭｄｍ２阻害剤の投与後のＧＤＦ−１５発現のレベルと前記用量のＭｄｍ２阻害剤の投与に応答して対象において血小板減少症を発症する可能性の間に相関関係があることを特定した。有利には、本開示を使用して、血小板減少症の非常に初期の発生において、または血小板減少症が発症する前においても、Ｍｄｍ２阻害剤の所与の投薬レジメンについて、対象において血小板減少症を発症する可能性を判定することができる。特に、本開示を使用して、治療有効量のＭｄｍ２阻害剤の投与の第１サイクルの第１日目の後に、Ｍｄｍ２阻害剤の所与の投薬レジメンについて、対象において血小板減少症を発症する可能性を既に判定することができる。別の例では、本開示を使用して、治療有効量のＭｄｍ２阻害剤の投与の第１サイクルの第１日目から第１サイクルの第７日目まで、特に治療有効量のＭｄｍ２阻害剤の投与の第１サイクルの第１日目、第１サイクルの第２日目、または第１サイクルの第３日目の後に、Ｍｄｍ２阻害剤の所与の投薬レジメンについて、対象において血小板減少症を発症する可能性を既に判定することができる。本開示の教示を適用することによって、当業者は、同じ対象から得られる投与前および投与後試料におけるＧＤＦ−１５発現の相対的増加を、対象における所与のＭｄｍ２阻害剤の処置に応答して血小板減少症を発症する可能性に関連づける相関関係パラメーターに到達することができる。
【００１６】
一態様では、本開示は、Ｍｄｍ２阻害剤の毒性学的作用、特にＭｄｍ２阻害剤の血液毒性を判定するための安全性バイオマーカーとしてのＧＤＦ−１５の使用に関する。一実施形態では、本開示は、ある用量のＭｄｍ２阻害剤の投与に応答して対象において血小板減少症を発症する可能性を判定するための安全性バイオマーカーとしてのＧＤＦ−１５の使用に関する。
【００１７】
「対象」、「個体」または「患者」は、本明細書において互換的に使用され、脊椎動物、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトを指す。哺乳動物として、これらに限定されないが、マウス、サル、ヒト、家畜、競技用動物、およびペットが挙げられる。
【００１８】
用語「毒性学的作用」は、本明細書で使用される場合、全生物に対する作用と同様に生物の部分構造に対する作用にも関する。具体的には、この用語は、生物において血小板減少症をもたらす作用を指す。用語「血液毒性」は、本明細書で使用される場合、血液産生組織の損傷をもたらし、白血球数および／または好中球絶対数の減少を引き起こす造血系への毒性を指す。
【００１９】
用語「血小板減少症」は、本明細書で使用される場合、正常血液の血小板数（すなわち、１マイクロリットル当たり１５０，０００個の血小板）を下回る血小板数の低減を指す。これは、血小板の数を減少させる巨核球形成の異常調節によって引き起こされ得る。巨核球形成は、骨髄造血前駆細胞の増殖、成熟、血小板形成、および血小板の循環への放出のプロセスである。成人の正常な血小板数は、血液１マイクロリットル当たり１５０，０００から４５０，０００個の範囲の血小板である（Ross DW; Ayscue LH; Watson J; Bentley SA (1988). "Stability of hematologic parameters in healthy subjects. Intraindividual versus interindividual variation". American journal of clinical pathology 90 (3): 262-7）。１マイクロリットル当たり１５０，０００個未満の血小板の血小板数は正常より低く、血小板減少症を示す。１０，０００／μＬ未満の血小板数で、特発出血が増加する。５０，０００／μＬ未満の血小板数で、外科手技が出血によって難しくなる場合が多い。１００，０００／μＬ未満の血小板数で、血小板減少症の悪化および出血のリスクの増加の恐れに対する注意を要し、化学療法および放射線療法が投与される。アメリカ国立がん研究所の有害事象共通用語規準第３版（NCI Common Terminology Criteria for Adverse Events v3.0）によれば、血小板減少症は以下のように分類され、グレード１（軽度の有害事象）は血小板数ＬＬＮ（正常値の下限）未満〜７５，０００／ｍｍ３によって特徴付けられ、グレード２（中等度の有害事象）は血小板数７５，０００／ｍｍ３未満〜５０，０００／ｍｍ３で特徴付けられ、グレード３（高度の有害事象）は血小板数５０，０００／ｍｍ３未満〜２５，０００／ｍｍ３であり、グレード４（生命を脅かすかまたは活動できない有害事象）は血小板数２５，０００／ｍｍ３未満である（Common Terminology Criteria for Adverse Events v3.0 (CTCAE), August 9, 2006; http://ctep.cancer.gov/protocolDevelopment/electronic_applications/docs/ctcaev3.pdf）。
【００２０】
本明細書で使用される場合、「可能性」および「可能性が高い」は、事象が起こる蓋然性の高さの尺度である。これは、「蓋然性」と互換的に使用されてよい。可能性は、推測より高いが、確実より低い蓋然性を指す。したがって、常識、訓練または経験を有する通常人が、場合が場合ならば、事象が蓋然性が高いと結論づける場合、事象は可能性が高い。一部の実施形態では、可能性が確認されると、患者は化合物を用いて処置され（もしくは処置を継続され）得るか、または処置が変更されるかもしくは中止される必要があり得る。一実施形態では、「得る」および「可能性が高い」は、事象が起こる蓋然性の高さの、パーセントでの見込みを意味する。
【００２１】
句「可能性の増加」は、事象が起こる蓋然性の増加を指す。例えば、本明細書におけるいくつかの方法は、患者が、前記Ｍｄｍ２阻害剤の投与に応答して血小板減少症を発症する可能性の増加を示すかどうかの予測を可能にする。一実施形態では、可能性の増加は、事象が起こる５０％超の見込み、６０％超の見込み、７０％超または８０％超の見込みがあることを意味する。同様に、「可能性の減少」は、事象が起こる見込みが、それぞれ５０％未満、６０％未満、７０％未満または８０％未満であることを意味する。
【００２２】
用語「投与」、「投与すること」などは、治療剤の単回投与を指し、同様に、用語「投与」は、完全な治療レジメンまたは投薬レジメンに従った治療剤の投与を含むことも意図する。用語「投与」は、治療剤が、必ずしも同じ投与経路でまたは同時に投与される訳ではない処置レジメンを含むことも意図する。
【００２３】
用語「連続投与」は、本明細書で使用される場合、治療剤の所与の投薬に基づく処置レジメンを指す。
【００２４】
本明細書で使用される場合、用語「処置レジメン」または「投薬レジメン」は、治療剤が、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、．．２１、．．、２６、２７、２８、２９、３０．．、３５、．．．、４２、．．．、４９、．．．、５６、５７、５８、５９、６０日毎に１回投与され得る投薬レジメンを指す。この用語は、例えば、（ｉ）約１日に１回から約６０日毎に１回までの範囲の投薬周期、（ｉｉ）約２日毎に１回から約４０日もしくは６週間毎に１回までの範囲の投薬周期、（ｉｉｉ）約５日毎に１回から約月１回もしくは約４週毎もしくは３０日毎に１回までの範囲の投薬周期、（ｉｖ）約週１回もしくは７日毎に１回から約３週毎に１回もしくは約２０日毎に１回までの範囲の投薬周期、（ｖ）約週１回もしくは７日毎に１回から約２週間に１回もしくは１０日毎に１回までの範囲の投薬周期、または（ｖｉ）週に２回から週に４回までの範囲、特に週に３回の投薬周期を有する投薬レジメンを含む。各場合に、投薬の後に休薬日があり得る。３週間毎に１回の投薬レジメンが好ましい。
【００２５】
「処置レジメン」または「投薬レジメン」は、特定期間に治療剤を投与した後に休薬日があることも含む。例えば、Ｍｄｍ２阻害剤を、週に３回連続して、または週に３回を２週間投与した後に１週間の休薬日をとることができる（３週サイクル）。別の例では、阻害剤を、１日１回、２週間続け、２週間止めて投与することができる。さらに別の例では、薬物を、１週間の休薬日を有して３週間の期間１日１回（１日１回／３週間；休薬日／１週間）投与した後、次のサイクルの薬物投与（１日１回／３週間；休薬日／１週間）を行うことができる。
【００２６】
用語「ＧＤＦ−１５」（または「ＧＤＦ１５」）は、本明細書で使用される場合、ＭＩＣ−１、ＴＧＦ−ＰＬ、ＰＤＦ、ＰＬＡＢおよびＰＴＧＦＢとしても知られている増殖分化因子１５を指す。ＧＤＦ−１５に対する受託番号は、Ｑ９９９８８、ＢＣ００８９６２、ＧＩ：３８１９６９２４、ＡＡＨ０８９６２である。ＧＤＦ−１５は、形質転換増殖因子−ベータスーパーファミリーの多様なメンバーである。ＧＤＦ−１５ｍＲＮＡは、肝臓において最も豊富であり、他のいくつかの組織では低いレベルで見られる。
【００２７】
本明細書で使用される場合、「ＧＤＦ−１５発現」、「ＧＤＦ−１５発現のレベル」などは、ＧＤＦ−１５遺伝子の転写またはＧＤＦ−１５タンパク質の発現を指す。ＧＤＦ−１５遺伝子の発現は、例えば、ＧＤＦ−１５をコードする核酸の領域に特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプローブによって、アッセイされまたは測定され得る。ＧＤＦ−１５タンパク質レベルは、例えば、ＧＤＦ−１５タンパク質に結合する抗体によって、例えば、ＥＬＩＳＡアッセイによって、アッセイされまたは測定され得る。処置前および処置後の測定値など、ＧＤＦ−１５遺伝子またはタンパク質発現の測定値は、互いの間で比較される場合が多く、ＧＤＦ−１５遺伝子転写の相対的な値もしくはレベルまたはＧＤＦ−１５タンパク質発現の相対的なレベルのみが妥当であり得る。
【００２８】
用語「Ｍｄｍ２阻害剤」または「ＨＤＭ２阻害剤」は、本明細書で使用される場合、ＨＤＭ２／ｐ５３（Ｍｄｍ２／ｐ５３）相互作用による会合を阻害する任意の化合物を指す。ＨＤＭ２（マウス二重微小染色体のヒトホモログ）は、ｐ５３の負の調節因子である。Ｍｄｍ２阻害剤は、Ｍｄｍ２／ｐ５３の会合の阻害が示されるヒトまたは脊椎動物に使用する医薬組成物において、例えば、腫瘍および／またはがん細胞増殖の処置において有用である。特に、Ｍｄｍ２阻害剤は、ヒトのがんの処置において有用であり、これは、これらのがんの進行が、ｐ５３の「ゲートキーパー」機能を最優先すること、例えばＭｄｍ２の過剰発現に少なくとも部分的に依存する場合があるからである。
【００２９】
あるいは、Ｍｄｍ２阻害剤の代わりにまたはＭｄｍ２阻害剤に加えて、ｐ５３がｐ５３活性化に対する代替マーカーとして使用されるように、ｐ５３経路の任意の他の直接活性剤を、これらの薬理学的作用様式の一部として、本明細書に記載される本発明の態様において使用することができる。例えば、Ｍｄｍ２阻害剤の代替としてまたはＭｄｍ２阻害剤に加えて、Ｍｄｍ４阻害剤を、本明細書に記載される本発明の態様において使用することができる。
【００３０】
好ましい実施形態では、言及される「Ｍｄｍ２阻害剤」または「ＨＤＭ２阻害剤」は、時間分解蛍光エネルギー移動（ＴＲ−ＦＲＥＴ）アッセイによって測定した、１０μＭ未満、好ましくは１μＭ未満、好ましくはｎＭの範囲のＩＣ５０を有するＭｄｍ２／ｐ５３相互作用を阻害する。蛍光エネルギー移動（またはＦｏｅｒｓｔｅｒ共鳴エネルギー移動）によって、ドナーとアクセプター５蛍光分子の間のエネルギー移動が説明される。このアッセイに対し、Ｃ末端ビオチン部分でタグ付けされたＭＤＭ２タンパク質（アミノ酸２〜１８８）が、ドナーフルオロフォアとして作用するユーロピウム標識ストレプトアビジン（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ，  Ｉｎｃ．、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ、ＵＳＡ）と組み合わせて使用される。ｐ５３から誘導されたＣｙ５標識ペプチドＣｙ５−ＴＦＳＤＬＷＫＬＬ（ｐ５３  ａａ１８〜２６）はエネルギー受容体である。３４０ｎｍでドナー１０分子が励起されると、ＭＤＭ２とｐ５３ペプチドの間の結合相互作用がエネルギー移動および６６５ｎｍにおける受容体発光波長での応答の増強を誘発する。ＭＤＭ２のｐ５３結合部位に結合する阻害剤分子によるｐ５３−ＭＤＭ２複合体の形成の破壊により、６１５ｎｍにおけるドナー発光の増加を生じる。レシオメトリックＦＲＥＴアッセイ読み出しは、時間分解様式で測定した２つの異なる蛍光シグナルの１５個の生データから計算される（計数率６６５ｎｍ／計数率６１５ｎｍ×１０００）。アッセイを以下の手順に従って実行することができる：試験は、総体積３．１μｌで、１５３６ウェルの白色マイクロタイタープレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ  Ｂｉｏ−Ｏｎｅ  ＧｍｂＨ、Ｆｒｉｃｋｅｎｈａｕｓｅｎ  Ｇｅｒｍａｎｙ）において、９０％のＤＭＳＯ／１０％のＨ２Ｏ（３．２％のＤＭＳＯ最終濃度）に希釈した１００ｎｌの化合物と反応緩衝液（ＰＢＳ、１２５ｍＭのＮａＣｌ、０．００１％のＮｏｖｅｘｉｎ（タンパク質の溶解度および安定性を増大させるように設計された炭水化物ポリマー（Ｎｏｖｅｘｉｎポリマー）からなる；Ｎｏｖｅｘｉｎ  Ｌｔｄ．、ａｍｂｒｉｄｇｅｓｈｉｒｅ、Ｕｎｉｔｅｄ  Ｋｉｎｇｄｏｍ）、ゼラチン０．０１％、０．２％のプルロニック（エチレンオキシドとプロピレンオキシドからのブロックコポリマー、ＢＡＳＦ、Ｌｕｄｗｉｇｓｈａｆｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）、１ｍＭのＤＴＴ）中の２μｌのユーロピウム２０標識ストレプトアビジン（最終濃度２．５ｎＭ）とを組合せ、その後に、アッセイ緩衝液中で希釈した０．５μｌのＭＤＭ２−ＢｉｏまたはＭＤＭ４−Ｂｉｏ（最終濃度１０ｎＭ）を添加することによって行う。溶液を、室温で１５分間プレインキュベートさせ、続いて、アッセイ緩衝液中の０．５μｌのＣｙ５−ｐ５３ペプチド（最終濃度２０ｎＭ）を添加する。室温で１０分間インキュベートしてからプレートを読む。試料を測定するために、以下の設定３０のＡｎａｌｙｓｔ  ＧＴマルチモードマイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）を使用する：ダイクロイックミラー３８０ｎｍ、励起３３０ｎｍ、発光ドナー６１５ｎｍおよび発光アクセプター６６５ｎｍ。ＩＣ５０値は、ＸＬｆｉｔを使用するカーブフィッティングにより計算する。指定がない限り、��薬は、Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ、ＵＳＡから購入する。
【００３１】
ＭＤＭ２（Ｍｄｍ２）は、具体的には、EMBO J. 10, 1565-9, Fakharzadeh et al., 1991に記載されたＭＤＭ２に関する。ＭＤＭ２（Ｍｄｍ２）の受託番号は、Ｑ８６ＷＡ３、ＡＪ５５０５１９、ＧＩ：２９１２５７４６である。ＭＤＭ２（Ｍｄｍ２）のバリアントは、最初に記載した全長タンパク質に相当し、好ましくはＭＤＭ２のｐ５３に対する親和性の少なくとも０．５％で、より好ましくは少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％または特に５０％以上で、以下に記載するアッセイ系において、ｐ５３に依然として結合し、最初に記載されたかまたは以下に具体的に述べたＭＤＭ２またはＨＤＭ２に対して少なくとも２０％、より好ましくは少なくとも２５％の配列相同性を有するそのバリアント（例えば、アミノ酸の１つまたは複数、例えば１つから４３０個の欠失、挿入および／または交換によるスプライスバリアント、アイソフォーム、断片、変異体またはオンコジーン）を指す。他に述べられていなければ、ＭＤＭ２は、まさに定義したように、一般に、それぞれＭＤＭ２、Ｍｄｍ２、ＨＤＭ２もしくはＨｄｍ２またはそのバリアントを指す。
【００３２】
タンパク質とそのバリアントの間の、相同と称されることも多い、配列相同性の割合は、特に、ギャップ開始ペナルティ１２およびギャップ伸長ペナルティ１を有するアフィンギャップ検索を使用する、Ｇａｐプログラム（ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎのアルゴリズムを使用するＷｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐａｃｋａｇｅ、Ｖｅｒｓｉｏｎ  ８  ｆｏｒ  Ｕｎｉｘ、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｒｅｓｅａｃｈ  Ｐａｒｋ、Ｍａｄｉｓｏｎ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ、ＵＳＡ（Adv. Appl. Math. 2: 482-489 (1981)）などの、この目的のために通常用いられるコンピュータープログラムによって決定されることが好ましい。
【００３３】
言及される「そのバリアント」は、１つまたは複数のバリアントを意味する。
【００３４】
本開示によれば、Ｍｄｍ２阻害剤は、例えば、以下の式のいずれかの化合物であり得る：
（Ｓ）−１−（４−クロロ−フェニル）−７−イソプロポキシ−６−メトキシ−２−（４−｛メチル−［４−（３−オキソ−ピペラジン−１−イル）−ｔｒａｎｓ−シクロヘキシルメチル］−アミノ｝−フェニル）−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−３−オン；
（Ｓ）−１−（４−クロロ−フェニル）−７−イソプロポキシ−６−メトキシ−２−（４−｛メチル−［４−（４−メチル−３−オキソ−ピペラジン−１−イル）−ｔｒａｎｓ−シクロヘキシルメチル］−アミノ｝−フェニル）−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−３−オン；
（Ｓ）−１−（４−クロロ−フェニル）−７−イソプロポキシ−６−メトキシ−２−（６−｛メチル−［４−（４−メチル−３−オキソ−ピペラジン−１−イル）−ｔｒａｎｓ−シクロヘキシルメチル］−アミノ｝−ピリジン−３−イル）−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−３−オン；
（Ｓ）−１−（４−クロロ−フェニル）−７−イソプロポキシ−６−メトキシ−２−（６−｛メチル−［４−（３−メチル−４−オキソ−イミダゾリジン−１−イル）−ｔｒａｎｓ−シクロヘキシルメチル］−アミノ｝−ピリジン−３−イル）−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−３−オン；
（Ｓ）−１−（４−クロロ−フェニル）−７−イソプロポキシ−６−メトキシ−２−（５−｛メチル−［４−（３−メチル−４−オキソ−イミダゾリジン−１−イル）−ｔｒａｎｓ−シクロヘキシルメチル］−アミノ｝−ピラジン−２−イル）−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−３−オン；
１−（４−クロロ−フェニル）−７−イソプロポキシ−６−メトキシ−２−（４−｛メチル−［４−（４−メチル−３−オキソ−ピペラジン−１−イル）−ｔｒａｎｓ−シクロヘキシルメチル］−アミノ｝−フェニル）−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−３−オン；
（Ｓ）−５−（５−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−６−（４−クロロ−フェニル）−２−（２，４−ジメトキシ−ピリミジン−５−イル）−１−イソプロピル−５，６−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−オン；
４−［（Ｓ）−５−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−２−（２，４−ジメトキシ−ピリミジン−５−イル）−３−イソプロピル−６−オキソ−３，４，５，６−テトラヒドロ−ピロロ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−イル］−ベンゾニトリル；
（Ｓ）−５−（５−クロロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−６−（４−クロロ−フェニル）−２−（２，４−ジメトキシ−ピリミジン−５−イル）−１−イソプロピル−５，６−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−オン；
（Ｓ）−５−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−６−（４−クロロフェニル）−２−（２，４−ジメトキシピリミジン−５−イル）−１−（（Ｒ）−１−メトキシプロパン−２−イル）−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｄ］イミダゾール−４（１Ｈ）−オン；
【００３５】
【化２】
2018523824.tif 000004
もしくは
（Ｓ）−５−（５−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イル）−６−（４−クロロフェニル）−２−（２，４−ジメトキシ−ｄ６−ピリミジン−５−イル）−１−（（Ｒ）−１−メトキシプロパン−２−イル）−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｄ］イミダゾール−４（１Ｈ）−オン、または前述のいずれかの薬学的に許容される塩。
【００３６】
用語「薬学的に許容される塩」は、この開示に従って使用した場合に化合物の生物学的効果および特性を保持し、典型的には、生物学的にまたは他の意味においても望まれないものではない塩を指す。薬学的に許容される酸付加塩は、例えば酢酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベシル酸塩、臭化物塩／臭化水素酸塩、炭酸水素塩／炭酸塩、重硫酸塩／硫酸塩、カンファースルホン酸塩、塩素塩／塩酸塩、クロルテオフィロネート、クエン酸塩、エタンジスルホン酸塩、フマル酸塩、グルセプテート、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、リン酸塩／リン酸水素塩／リン酸二水素塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、スルホサリチル酸塩、酒石酸塩、トシル酸塩、トリフルオロ酢酸塩などは、無機酸および有機酸を用いて形成することができる。塩が由来し得る無機酸として、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などが挙げられる。
【００３７】
好ましい実施形態では、本開示は、Ｍｄｍ２阻害剤である（Ｓ）−５−（５−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−６−（４−クロロ−フェニル）−２−（２，４−ジメトキシ−ピリミジン−５−イル）−１−イソプロピル−５，６−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−オン、またはその薬学的に許容される塩に関する。Ｍｄｍ２阻害剤である（Ｓ）−５−（５−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−６−（４−クロロ−フェニル）−２−（２，４−ジメトキシ−ピリミジン−５−イル）−１−イソプロピル−５，６−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−オンは、新規分類のイミダゾピロリジノン化合物に属し、ＭＤＭ２／ｐ５３相互作用（この用語は、特に、Ｈｄｍ２／ｐ５３相互作用を含む）の有効な阻害を示す。特に、この化合物は、ＭＤＭ２に結合することによってＭＤＭ２のｐ５３との相互作用の阻害剤として作用する。最も好ましい実施形態では、Ｍｄｍ２阻害剤である（Ｓ）−５−（５−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−６−（４−クロロ−フェニル）−２−（２，４−ジメトキシ−ピリミジン−５−イル）−１−イソプロピル−５，６−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−オンは、式Ｉの化合物であり、国際公開第２０１３／１１１１０５号パンフレットの実施例１０２に記載されている。
【００３８】
【化３】
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【００３９】
（Ｓ）−５−（５−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−６−（４−クロロ−フェニル）−２−（２，４−ジメトキシ−ピリミジン−５−イル）−１−イソプロピル−５，６−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−オンの結晶形態は、国際公開第２０１３／１１１１０５号パンフレットの実施例６、実施例７および実施例８に記載されている。この開示には、（Ｓ）−５−（５−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−６−（４−クロロ−フェニル）−２−（２，４−ジメトキシ−ピリミジン−５−イル）−１−イソプロピル−５，６−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−オン化合物のコハク酸共結晶が包含される。
【００４０】
別の好ましい実施形態では、本開示は、Ｍｄｍ２阻害剤である（Ｓ）−１−（４−クロロ−フェニル）−７−イソプロポキシ−６−メトキシ−２−（４−｛メチル−［４−（４−メチル−３−オキソ−ピペラジン−１−イル）−ｔｒａｎｓ−シクロヘキシルメチル］−アミノ｝−フェニル）−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−３−オン、またはその薬学的に許容される塩に関する。Ｍｄｍ２阻害剤である（Ｓ）−１−（４−クロロ−フェニル）−７−イソプロポキシ−６−メトキシ−２−（４−｛メチル−［４−（４−メチル−３−オキソ−ピペラジン−１−イル）−ｔｒａｎｓ−シクロヘキシルメチル］−アミノ｝−フェニル）−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−３−オンは、式ＩＩの化合物であり、国際公開第２０１１／０７６７８６号パンフレットの実施例１０６に記載されている。
【００４１】
【化４】
2018523824.tif 000006
【００４２】
一実施形態では、（Ｓ）−１−（４−クロロ−フェニル）−７−イソプロポキシ−６−メトキシ−２−（４−｛メチル−［４−（４−メチル−３−オキソ−ピペラジン−１−イル）−ｔｒａｎｓ−シクロヘキシルメチル］−アミノ｝−フェニル）−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−３−オンの薬学的に許容される塩は、重硫酸塩である（国際公開第２０１１／０７６７８６号パンフレットに開示されている）。（Ｓ）−１−（４−クロロ−フェニル）−７−イソプロポキシ−６−メトキシ−２−（４−｛メチル−［４−（４−メチル−３−オキソ−ピペラジン−１−イル）−ｔｒａｎｓ−シクロヘキシルメチル］−アミノ｝−フェニル）−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−３−オンの重硫酸塩の結晶形態は、国際公開第２０１２／０６６０９５号パンフレットに記載されている。
【００４３】
用語「投与」は、治療剤が同じ投与経路でまたは同時に必ずしも投与される訳ではない処置レジメンを含むことを意図する。
【００４４】
一実施形態では、Ｍｄｍ２阻害剤である（Ｓ）−５−（５−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−６−（４−クロロ−フェニル）−２−（２，４−ジメトキシ−ピリミジン−５−イル）−１−イソプロピル−５，６−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−オンは、２８日サイクル毎の最初の２１日間、毎日投与される。別の実施形態では、Ｍｄｍ２阻害剤である（Ｓ）−５−（５−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−６−（４−クロロ−フェニル）−２−（２，４−ジメトキシ−ピリミジン−５−イル）−１−イソプロピル−５，６−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−オンは、２８日サイクル毎の最初の週の間、毎日投与された後、３週間の処置中止（休薬日）を伴う。さらなる実施形態では、Ｍｄｍ２阻害剤である（Ｓ）−５−（５−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−６−（４−クロロ−フェニル）−２−（２，４−ジメトキシ−ピリミジン−５−イル）−１−イソプロピル−５，６−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−オンは、２８日サイクル毎の最初の２週間、毎日投与された後、２週間の処置中止（休薬日）を伴う。さらに別の実施形態では、Ｍｄｍ２阻害剤である（Ｓ）−５−（５−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−６−（４−クロロ−フェニル）−２−（２，４−ジメトキシ−ピリミジン−５−イル）−１−イソプロピル−５，６−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−オンは、２８日サイクル毎の後の３または５日間、毎日投与された後、対応して、２５日または２３日間の処置中止（休薬日）を伴う。さらに別の実施形態では、Ｍｄｍ２阻害剤である（Ｓ）−５−（５−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−６−（４−クロロ−フェニル）−２−（２，４−ジメトキシ−ピリミジン−５−イル）−１−イソプロピル−５，６−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−オンは、３週間毎に１回投与される。
【００４５】
一実施形態では、Ｍｄｍ２阻害剤である（Ｓ）−１−（４−クロロ−フェニル）−７−イソプロポキシ−６−メトキシ−２−（４−｛メチル−［４−（４−メチル−３−オキソ−ピペラジン−１−イル）−ｔｒａｎｓ−シクロヘキシルメチル］−アミノ｝−フェニル）−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−３−オンは、２１日サイクル毎の最初の２週間、週に３回投与される（２週間に３回／１週間中止）。
【００４６】
用語「前記Ｍｄｍ２阻害剤の投与後」は、最初のサイクルまたは前記Ｍｄｍ２阻害剤の任意の連続投与の最初の日における前記Ｍｄｍ２阻害剤の投与を指す場合がある。したがって、用語「前記Ｍｄｍ２阻害剤の投与後」は、投与サイクル内に行われるＭｄｍ２阻害剤の任意の投与を指してよい。
【００４７】
用語「ある用量のＭｄｍ２」阻害剤は、本明細書で使用される場合、治療有効量の前記Ｍｄｍ２阻害剤を指す。用語Ｍｄｍ２阻害剤の「治療有効量」は、対象の生物学的または医学的応答を誘発する、例えば、症状が軽快する、状態を緩和する、疾患の進行を遅らせるかもしくは遅延させる、腫瘍増殖を減速させる、または腫瘍退縮を引き起こすなどの化合物の量を指す。一実施形態では、ｉｎ  ｖｉｖｏでの治療有効量は、投与経路に応答して、約０．１〜５００ｍｇ／ｋｇの間、または約１〜１００ｍｇ／ｋｇの間の範囲であってよい。
【００４８】
一実施形態では、（Ｓ）−５−（５−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−６−（４−クロロ−フェニル）−２−（２，４−ジメトキシ−ピリミジン−５−イル）−１−イソプロピル−５，６−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−オンの治療有効量またはある用量は、経口投与の場合、３週間毎に１００から１５００ｍｇの間、特に３週間毎に１００から８００ｍｇの間、または毎日５０から６００ｍｇの間の範囲であってよい。好ましい実施形態では、（Ｓ）−５−（５−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−６−（４−クロロ−フェニル）−２−（２，４−ジメトキシ−ピリミジン−５−イル）−１−イソプロピル−５，６−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−オンの治療有効量またはある用量は、２８日サイクル毎の最初の２１日間の毎日の投与に対して、４００ｍｇ、より好ましくは３００ｍｇである。あるいは、（Ｓ）−５−（５−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−６−（４−クロロ−フェニル）−２−（２，４−ジメトキシ−ピリミジン−５−イル）−１−イソプロピル−５，６−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−オンの総治療量または総用量は、４サイクル当たり５６０ｍｇである（２週間４０ｍｇを１日１回／２週間中止、または１週間８０ｍｇを１日１回／３週間中止）。したがって、静脈内投与はより低い必要がある。
【００４９】
一実施形態では、（Ｓ）−１−（４−クロロ−フェニル）−７−イソプロポキシ−６−メトキシ−２−（４−｛メチル−［４−（４−メチル−３−オキソ−ピペラジン−１−イル）−ｔｒａｎｓ−シクロヘキシルメチル］−アミノ｝−フェニル）−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−３−オンの治療量または用量は、経口投与の場合、５００から２０００ｍｇの間、特に５００から１２００ｍｇの間である。好ましい実施形態では、（Ｓ）−１−（４−クロロ−フェニル）−７−イソプロポキシ−６−メトキシ−２−（４−｛メチル−［４−（４−メチル−３−オキソ−ピペラジン−１−イル）−ｔｒａｎｓ−シクロヘキシルメチル］−アミノ｝−フェニル）−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−３−オンの治療量または用量は、５００ｍｇ、より好ましくは８００ｍｇである。したがって、静脈内投与はより低い必要がある。
【００５０】
各治療剤は、例えば、１回の個々の投薬単位でまたは複数の投薬単位に分けて都合よく投与してよいことが理解される。さらに、各治療剤は、１日１回投与または１日４回までの投与で都合よく投与してよいことが理解される。
【００５１】
別の態様では、本開示は、ｉｎ  ｖｉｖｏで、対象におけるＭｄｍ２阻害剤の毒性学的作用を判定するためのｅｘ  ｖｉｖｏ方法を提供する。
【００５２】
一実施形態では、本開示は、ｉｎ  ｖｉｖｏで、対象におけるＭｄｍ２阻害剤の毒性学的作用を判定するためのｅｘ  ｖｉｖｏ方法であって、
（ｉ）前記Ｍｄｍ２阻害剤の投与前に、前記対象から得られる投与前生物学的試料を準備するステップ、
（ｉｉ）投与前試料におけるＧＤＦ−１５の発現を測定するステップ、
（ｉｉｉ）ある用量の前記Ｍｄｍ２阻害剤を対象に投与するステップ、
（ｉｖ）前記Ｍｄｍ２阻害剤の投与後に対象から得られる投与後生物学的試料を準備するステップ、
（ｖ）投与後試料におけるＧＤＦ−１５の発現を測定するステップ、
（ｖｉ）投与前試料におけるＧＤＦ−１５の発現を投与後試料におけるＧＤＦ−１５の発現のレベルと比較するステップ
を含む方法に関する。
【００５３】
一実施形態では、本開示は、ｉｎ  ｖｉｖｏで、対象におけるＭｄｍ２阻害剤の毒性学的作用を判定するためのｅｘ  ｖｉｖｏ方法であって、
（ｉ）前記Ｍｄｍ２阻害剤の投与前に、前記対象から得られる投与前生物学的試料を準備するステップ、
（ｉｉ）投与前試料におけるＧＤＦ−１５の発現を測定するステップ、
（ｉｉｉ）ある用量の前記Ｍｄｍ２阻害剤を対象に投与するステップ、
（ｉｖ）前記Ｍｄｍ２阻害剤の投与後に対象から得られる投与後生物学的試料を準備するステップ、
（ｖ）投与後試料におけるＧＤＦ−１５の発現を測定するステップ、
（ｖｉ）投与前試料におけるＧＤＦ−１５の発現を投与後試料におけるＧＤＦ−１５の発現のレベルと比較するステップであって、前記用量のＭｄｍ２阻害剤の連続投与に応答して前記対象において血小板減少症を発症する可能性が決定されるステップ
を含む方法に関する。
【００５４】
一実施形態では、前記投与前試料と比較した前記投与後試料におけるＧＤＦ−１５発現の５０％未満の増加は、患者が、前記用量のＭｄｍ２阻害剤の連続投与に応答して血小板減少症を発症する可能性の減少を示す。好ましい実施形態では、前記投与前試料と比較した前記投与後試料におけるＧＤＦ−１５発現の２５％未満、より好ましくは１０％未満の増加は、患者が、前記用量のＭｄｍ２阻害剤の連続投与に応答して血小板減少症を発症する可能性の減少を示す。一実施形態では、前記投与前試料と比較した前記投与後試料におけるＧＤＦ−１５発現の少なくとも１０％の増加は、患者が、前記用量のＭｄｍ２阻害剤の連続投与に応答して血小板減少症を発症する可能性の増加を示す。別の実施形態では、前記投与前試料と比較した前記投与後試料におけるＧＤＦ−１５発現の少なくとも２５％の増加は、患者が、前記用量のＭｄｍ２阻害剤の連続投与に応答して血小板減少症を発症する可能性の増加を示す。好ましい実施形態では、前記投与前試料と比較した前記投与後試料におけるＧＤＦ−１５発現の少なくとも５０％の増加は、患者が、前記用量のＭｄｍ２阻害剤の連続投与に応答して血小板減少症を発症する可能性の増加を示す。またさらなる実施形態では、投与前試料におけるＧＤＦ−１５発現と比較した投与後試料におけるＧＤＦ−１５発現の少なくとも７５％、少なくとも１００％または少なくとも１５０％の増加は、血小板減少症を発症する可能性の増加を示す。
【００５５】
用語「生物学的試料」は、本明細書で使用される場合、検体の供給源から採取された任意の他の検体を代表するようにサンプリングによって採取された生物学的検体を指す。一実施形態では、生物学的試料は、細胞、組織、血液、血漿、血清、尿、マウスウォッシュ、便、唾液、およびこれらの組合せである。さらなる実施形態では、生物学的試料は、血液、血漿、血清、または尿である。好ましい実施形態では、生物学的試料は血液である。別の好ましい実施形態では、生物学的試料は血清である。
【００５６】
用語「投与前生物学的試料」は、本明細書で使用される場合、Ｍｄｍ２阻害剤の投与前に対象から得られる生物学的試料を指す。一実施形態では、投与前生物学的試料は、対象へのＭｄｍ２阻害剤の投与の少し前に前記対象から得られる。あるいは、投与前生物学的試料は、対象へのＭｄｍ２阻害剤の投与の約１０分前から対象へのＭｄｍ２阻害剤の投与の約７日前までに前記対象から得られる。さらなる実施形態では、投与前生物学的試料は、対象へのＭｄｍ２阻害剤の投与の約１０分、または約２０分、または約３０分、または約１時間、または約２時間、または約３時間、または約５時間、または約１０時間、または約１５時間または約１日、または約２日、または約３日、または約４日、または約５日、または約６日、または約７日前に前記対象から得られる。
【００５７】
用語「投与後生物学的試料」は、本明細書で使用される場合、Ｍｄｍ２阻害剤の投与後に対象から得られる生物学的試料を指す。一実施形態では、投与後試料は、対象へのＭｄｍ２阻害剤の投与後、約３０分から約２４時間、好ましくは約１時間から約１２時間、約２時間から約１２時間、約３時間から約１２時間、約４時間から約８時間、約５時間から約８時間、約５時間から約７時間、約６時間から約７時間の時間枠ないに前記対象から得られる。別の実施形態では、投与後試料は、Ｍｄｍ２阻害剤の投与の約３０分後、約１時間後、約２時間後、約３時間後、約４時間後、約５時間後、約６時間後、約７時間後、約８時間後、約１０時間後、約１２時間後、約２４時間後に対象から得られる。好ましい実施形態では、投与後試料は、Ｍｄｍ２阻害剤の投与の約３時間後に対象から得られる。より好ましい実施形態では、投与後試料は、Ｍｄｍ２阻害剤の投与の約６時間後に対象から得られる。さらに好ましい実施形態では、投与後試料は、Ｍｄｍ２阻害剤の投与の約１２時間後に対象から得られる。
【００５８】
数値ｘに関する用語「約」は、任意選択であり、例えば、ｘ＋１０％を意味する。
【００５９】
用語「アッセイすること」または「測定すること」は、本明細書で使用される場合、特定する、スクリーニングする、探索する、判定する、または測定する作用を指し、この作用は任意の従来の手段によって実施されてよい。例えば、試料は特定のマーカーの存在に対してアッセイされてもよく、この特定のバイオマーカーのレベルは、そのマーカーが試料中に存在するかどうかを検出するために、ＥＬＩＳＡアッセイ、ノーザンブロット、イメージングなどを使用することによって測定され得る。用語「アッセイすること」および「測定すること」は、試料を物理的試験に供することによって、１つの状態から別の状態へ物質を変形させること、例えば生物学的試料、例えば血液試料または他の組織試料を変形させることを企図する。
【００６０】
一部の実施形態では、ＧＤＦ−１５の核酸発現レベルが測定される。一部の実施形態では、ＧＤＦ−１５の核酸発現レベルは、ハイブリダイゼーションによって測定される。一部の実施形態では、ＧＤＦ−１５の核酸発現レベルは、増幅によって測定される。さらなる実施形態では、ＧＤＦ−１５の核酸発現レベルを測定するための増幅方法は、ＲＴ−ＰＣＲ増幅である。またさらなる実施形態では、ＧＤＦ−１５の核酸発現レベルを測定するために使用される方法は、核酸配列に基づく増幅（ＮＡＳＢＡ）、転写介在増幅（ＴＭＡ）、定量的ＰＣＲ（ｑＰＣＲ）、リアルタイムＰＣＲ、ループ介在等温増幅（ＬＡＭＰ）、ＴａｑＭａｎ、インベーダー、インベーダープラス、ローリングサークル、鎖置換増幅（ＳＤＡ）、Ｑ−ベータ−レプリカーゼ、ヘリカーゼ依存増幅（ＨＡＤ）、分枝ＤＮＡ、加水分解ＦＲＥＴプローブ、リガーゼ連鎖反応（ＬＣＲ）、縮重オリゴヌクレオチド初回刺激ＰＣＲ、または当業者に既知の他の方法からなる群から選択される。一実施形態では、ＧＤＦ−１５発現は、ＧＤＦ−１５遺伝子の転写を測定することによってアッセイされる。一実施形態では、ＧＤＦ−１５遺伝子発現は、ＧＤＦ−１５をコードする核酸の領域に特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプローブによってアッセイされ得る。
【００６１】
一部の実施形態では、ＧＤＦ−１５のタンパク質発現レベルが測定される。一部の実施形態では、ＧＤＦ−１５のタンパク質発現レベルは、ＧＤＦ−１５タンパク質またはその断片に特異的に結合する１種または複数の抗体を使用するイムノアッセイを実施することによって、特にＥＬＩＳＡを実施することによって測定される。一部の実施形態では、ＧＤＦ−１５のタンパク質発現レベルは、２Ｄゲル電気泳動を実施することによって測定される。好ましい実施形態では、ＧＤＦ−１５発現は、生物学的試料におけるＧＤＦ−１５タンパク質レベルの測定によってアッセイされる。ＧＤＦ−１５タンパク質レベルは、ＧＤＦ−１５タンパク質、またはその断片に結合する抗体によってアッセイすることができる。
【００６２】
別の態様では、本開示は、対象におけるがんの処置における使用のためのＭｄｍ２阻害剤であって、
（ｉ）ある用量のＭｄｍ２阻害剤が前記対象に投与される前に、前記対象から得られる投与前生物学的試料におけるＧＤＦ−１５発現を測定するステップ、
（ｉｉ）ある用量のＭｄｍ２阻害剤を前記対象に投与した後に、前記対象から得られる投与後生物学的試料におけるＧＤＦ−１５発現を測定するステップ、
（ｉｉｉ）投与前試料におけるＧＤＦ−１５発現を投与後試料におけるＧＤＦ−１５発現と比較するステップ、および
（ｉｖ）投与後試料におけるＧＤＦ−１５発現が、投与前試料におけるＧＤＦ−１５発現と比較して少なくとも２５％高く、好ましくは少なくとも５０％高い場合に、前記対象の処置を変更するステップ、または
（ｖ）投与後試料におけるＧＤＦ−１５発現のレベルが、投与前試料におけるＧＤＦ−１５発現と比較して５０％未満、好ましくは２５％未満高い場合に、前記対象への前記Ｍｄｍ２阻害剤の投与レジメンに対する変更を加えないステップ
を含む前記処置における使用のためのＭｄｍ２阻害剤を提供する。
【００６３】
一実施形態では、投与前試料におけるＧＤＦ−１５発現と比較した投与後試料におけるＧＤＦ−１５発現の少なくとも２５％、好ましくは少なくとも５０％の増加は、血小板減少症を発症する可能性の増加を示す。
【００６４】
さらなる実施形態では、投与前試料におけるＧＤＦ−１５発現と比較した投与後試料におけるＧＤＦ−１５発現の少なくとも７５％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％の増加は、血小板減少症を発症する可能性の増加を示す。
【００６５】
一実施形態では、本開示は、対象におけるがんの処置における使用のためのＭｄｍ２阻害剤であって、
（ｉ）ある用量のＭｄｍ２阻害剤が前記対象に投与される前に、前記対象から得られる投与前生物学的試料におけるＧＤＦ−１５発現を測定するステップ、
（ｉｉ）ある用量のＭｄｍ２阻害剤を前記対象に投与した後に、前記対象から得られる投与後生物学的試料におけるＧＤＦ−１５発現を測定するステップ、
（ｉｉｉ）投与前試料におけるＧＤＦ−１５発現を投与後試料におけるＧＤＦ−１５発現と比較するステップ、および
（ｉｖ）投与後試料におけるＧＤＦ−１５発現が、投与前試料におけるＧＤＦ−１５発現と比較して少なくとも７５％、好ましくは少なくとも１００％、より好ましくは少なくとも１５０％高い場合に、前記対象の処置を変更するステップ、または
（ｖ）投与後試料におけるＧＤＦ−１５発現のレベルが、投与前試料におけるＧＤＦ−１５発現と比較して１５０％未満、好ましくは１００％未満、より好ましくは７５％未満高い場合に、前記対象への前記Ｍｄｍ２阻害剤の投与レジメンに対する変更を加えないステップ
を含む前記処置における使用のためのＭｄｍ２阻害剤を提供する。
【００６６】
本明細書で使用される場合、任意の疾患または障害についての用語「処置する」、「処置すること」または「処置」は、一実施形態では、疾患または障害を軽快させること（すなわち、疾患またはその臨床症状の少なくとも１つの発症を遅らせるかまたは阻止するかまたは低減させること）を指す。別の実施形態では、「処置する」、「処置すること」または「処置」は、患者が認識できるものでないこともあるものを含む少なくとも１つの物理的パラメーターを緩和させるか軽快させることを指す。さらに別の実施形態では、「処置する」、「処置すること」または「処置」は、物理学的に（例えば、認識される症状の安定化）、生理学的に（例えば、物理学的パラメーターの安定化）、またはその両方のいずれかで、疾患または障害を調節することを指す。さらに別の実施形態では、「処置する」、「処置すること」または「処置」は、疾患または障害の開始または発症または進行を予防することまたは遅延させることを指す。
【００６７】
用語「がん」は、例えば、胸、肺、膵臓、卵巣、中枢神経系（ＣＮＳ）、子宮内膜、胃、大腸、結腸、食道、骨、泌尿器、造血、リンパ、肝臓、皮膚、メラノーマ、腎臓、軟部組織肉腫および胸膜を含むがん疾患を指す。
【００６８】
一実施形態では、処置の変更は、対象への前記Ｍｄｍ２阻害剤の投与レジメンおよび／または血小板へのＭｄｍ２阻害剤の作用を低減させるための手段を投与することの変更を含む。さらなる実施形態では、処置の変更は、Ｍｄｍ２阻害剤の用量の低減および／または前記Ｍｄｍ２阻害剤の投与頻度の低減および／または休薬日および／または処置の完全な中止を含む。好ましい実施形態では、処置の血小板へのＭｄｍ２阻害剤の作用を低減させるための手段は、血小板輸血を含む。さらに好ましい実施形態では、血小板へのＭｄｍ２阻害剤の作用を低減させるための手段は、トロンボポエチン受容体アゴニストの投与を含み、前記トロンボポエチン受容体アゴニストはエルトロンボパグである。エルトロンボパグ−（ｒＩＮＮ、コードネームＳＢ−４９７１１５−ＧＲ、商標名：Ｐｒｏｍａｃｔａ、Ｒｅｖｏｌａｄｅ）は、ホルモンであるトロンボポエチンの生理学的標的であるｃ−ｍｐｌ（ＴｐｏＲ）受容体の小分子アゴニストである。
【００６９】
別の実施形態では、処置の変更は、前記Ｍｄｍ２阻害剤を用いる処置の中止を含む。さらに別の実施形態では、処置の変更は休薬を含む。用語「休薬日」は、本明細書で使用される場合、薬物休暇、医薬休暇、構造化治療中断または戦略的治療中断と称されることもあり、ある期間、数日から数カ月または数年までのいずれかの期間、処置を中止することを指す。一実施形態では、休薬日は、１週間、２週間、３週間または４週間の期間のＭｄｍ２阻害剤を用いる処置の中止である。
【００７０】
一実施形態では、生物学的試料は、細胞、組織、血液、血漿、血清、尿、マウスウォッシュ、便、唾液、およびこれらの組合せである。さらなる実施形態では、生物学的試料は、血液、血漿、血清、または尿である。好ましい実施形態では、生物学的試料は血液である。
【００７１】
さらなる態様では、本開示は、がんを有する患者が、Ｍｄｍ２阻害剤を用いる連続した処置に応答して血小板減少症を発症する可能性を予測する際に使用するためのキットであって、
（ｉ）ＧＤＦ−１５発現を検出することができる少なくとも１つのプローブ、および
（ｉｉ）ＧＤＦ−１５発現について、患者から得られる生物学的試料をアッセイするためにプローブを使用するための使用説明書であって、
（ａ）前記患者への前記用量の前記Ｍｄｍ２阻害剤の投与後のＧＤＦ−１５発現の少なくとも２５％の増加、より好ましくは少なくとも５０％の増加が、前記患者が前記用量のＭｄｍ２阻害剤を用いる連続した処置に応答して血小板減少症を発症する可能性の増加の指標であり、
（ｂ）前記患者への前記用量の前記Ｍｄｍ２阻害剤の投与後のＧＤＦ−１５発現における５０％未満の増加、より好ましくは２５％未満の増加が、前記患者が前記用量のＭｄｍ２阻害剤を用いる連続した処置に応答して血小板減少症を発症する可能性の減少の指標である使用説明書
を含むキットに関する。
【００７２】
本明細書で使用される場合、「予測すること」は、本明細書に記載されている方法が、医療提供者に、処置を受けた個体がより高い可能性で血小板減少症を発症する可能性を判定させることができる情報を提供することを示す。これは、１００％の精度で応答を予測する能力をさすものではない。代わりに、当業者は、これが、蓋然性の増加を指すことを理解する。
【００７３】
一実施形態では、キットは、ＧＤＦ−１５をコードする核酸の領域に特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチド、またはＧＤＦ−１５タンパク質に結合する抗体であるプローブを含む。
【００７４】
またさらなる態様では、本開示は、がんを有する患者を処置する際に使用するためのキットであって、
（ｉ）治療有効量のＭｄｍ２阻害剤、
（ｉｉ）ＧＤＦ−１５発現を検出することができる少なくとも１つのプローブ、
（ｉｉｉ）ＧＤＦ−１５発現について、患者から得られる生物学的試料をアッセイするためにプローブを使用するための使用説明書、および
（ｉｖ）治療有効量のＭｄｍ２阻害剤を患者に投与した後に患者から得られる生物学的試料が、前記患者から得られる投与前試料におけるＧＤＦ−１５発現のレベルと比較して、少なくとも２５％増加し、より好ましくは少なくとも５０％増加したＧＤＦ−１５発現を有する場合に、患者に手段を適用するための使用説明書
を含むキットに関する。
【００７５】
一実施形態では、キットは、ＧＤＦ−１５をコードする核酸の領域に特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチド、またはＧＤＦ−１５タンパク質に結合する抗体であるプローブを含む。
【００７６】
本発明の態様が、医学的使用または活性医薬成分（ＡＰＩ、例えばＭｄｍ２阻害剤、トロンボポエチン受容体アゴニスト）および適応症（例えば、がん、血小板減少症）を含む処置方法に関する場合、これらの態様は、以下の代替形式で表すことができる。
【００７７】
［適応症］の処置における使用のための［ＡＰＩ］。
【００７８】
有効量の［ＡＰＩ］を投与することを含む、このような処置を必要とするヒト患者における［適応症］の処置のための方法。
【００７９】
［適応症］の処置のための医薬調製用［ＡＰＩ］。
【００８０】
［ＡＰＩ］を含む［適応症］の処置のための医薬。
【００８１】
さらに驚くべきことに、ＧＤＦ−１５発現は、がんを有する患者が血小板減少症を発症する可能性の指標となるだけでなく、がんを有する患者が好中球減少症、すなわち好中球の異常な低濃度、例えば１．５×１０９細胞／Ｌ未満の好中球数、を発症する可能性も示すことが見出された［Hsieh MM, et al. (April 2007): "Prevalence of neutropenia in the U.S. population: age, sex, smoking status, and ethnic differences". Ann. Intern. Med. 146 (7): 486-92を参照のこと］。
【００８２】
この驚くべき発見に基づき、本発明は、さらに、血小板／血小板数／血小板減少症に関して本明細書に記載されている全ての態様と、同様に、好中球／好中球数／好中球減少症に関する対応する代替バージョンも提供する。
【００８３】
以下の実施例は、上述の開示を例証するが、いかなる意味においても本開示の範囲を限定することを意図するものではない。関連する技術分野の当業者に、それ自体既知の他の紙面モデルも、特許請求された開示の有益な効果を決定することができる。
実施例
【実施例１】
【００８４】
方法：
患者を、（Ｓ）−１−（４−クロロ−フェニル）−７−イソプロポキシ−６−メトキシ−２−（４−｛メチル−［４−（４−メチル−３−オキソ−ピペラジン−１−イル）−ｔｒａｎｓ−シクロヘキシルメチル］−アミノ｝−フェニル）−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−３−オン（化合物Ａ）を用いて処置した。用量範囲は、１週間に１０から５００ｍｇを３回（３ＱＷ）を続けるか、または２週間処置して１週間中止する投薬レジメンであった。血清サンプルを、投与前および最初の処置日の投与の０．５から６時間後に各対象から回収した。
【００８５】
ＧＤＦ−１５発現の血清レベルを、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ；Ｒ＆Ｄ  ＳｙｓｔｅｍのキットＤＧＤ１５０）を使用して測定した。
【００８６】
臨床データ（血小板数を含む）を処置期間の過程中、全ての患者から回収した。
【００８７】
最大実測期間は、入手可能な血小板データに関して４４８日であった。
【００８８】
結果：
図１は、１人の患者の例について、週３回の連続投薬レジメンで、（Ｓ）−１−（４−クロロ−フェニル）−７−イソプロポキシ−６−メトキシ−２−（４−｛メチル−［４−（４−メチル−３−オキソ−ピペラジン−１−イル）−ｔｒａｎｓ−シクロヘキシルメチル］−アミノ｝−フェニル）−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−３−オンを用いて処置した患者の血小板数の典型的に実測され、個々に予測された時間プロファイルを表す。このモデルは、投薬の４週間後に任意の投薬中断と、ＰＬＴ輸血事象の影響も組み込む。図１に表されたグラフでは、最初の投与は４００時間の時間においてである。図２は、図１で表された同じ患者の例について、週３回の連続投薬レジメンで、（Ｓ）−１−（４−クロロ−フェニル）−７−イソプロポキシ−６−メトキシ−２−（４−｛メチル−［４−（４−メチル−３−オキソ−ピペラジン−１−イル）−ｔｒａｎｓ−シクロヘキシルメチル］−アミノ｝−フェニル）−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−３−オンを用いて処置した患者のＧＤＦ−１５タンパク質レベルの、実測され、個々にフィットさせた時間プロファイルを表す。
【００８９】
（Ｓ）−１−（４−クロロ−フェニル）−７−イソプロポキシ−６−メトキシ−２−（４−｛メチル−［４−（４−メチル−３−オキソ−ピペラジン−１−イル）−ｔｒａｎｓ−シクロヘキシルメチル］−アミノ｝−フェニル）−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−３−オンの連続的な週３回の経口投与で処置された２１人の患者に対するＧＤＦ−１５および血小板数に関する（Ｓ）−１−（４−クロロ−フェニル）−７−イソプロポキシ−６−メトキシ−２−（４−｛メチル−［４−（４−メチル−３−オキソ−ピペラジン−１−イル）−ｔｒａｎｓ−シクロヘキシルメチル］−アミノ｝−フェニル）−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−３−オンの予備データ解析を行った。行われたデータ解析を、図３のプロットで表す。このプロットにおいて、各ポイントは、個々の患者を表す。Ｘ軸は、基準からの割合変化（％）におけるサイクル１の１日目のＧＤＦ−１５の増加である。Ｙ軸は、処置の過程中、同じ患者に対する最も低い実測血小板数を表す。このプロットで示されるように、基準から２５％超までのＧＤＦ−１５レベルの増加は、１５０Ｇ／Ｌ未満に低下する血小板数（グレード１の血小板減少症ＣＴＣＡＥ  Ｖ４）の高い発生率に関連する。
【実施例２】
【００９０】
方法：
このアプローチは、投薬レジメンにおける異種成分、およびＧＤＦ−１５に対するサンプリング時間に関するデータ解析を可能とする。薬物濃度、ＧＤＦ−１５レベルおよび血小板（ＰＬＴ）の完全な時間経過を説明するＰＫ／ＰＤモデルを開発した。個体間のばらつきが大きいため、全てのモデリング解析を、非線形混合効果モデリングを適用して行った。
・  薬物濃度（ＰＫ）とＧＤＦ−１５動態の間の関係を産生の刺激に関する間接応答モデルによって説明した（type III, Br J Clin Pharmacol 1998; 45: 229-239）。このアプローチを適用することによって、ＧＤＦ−１５のｓｌＧｉ産生に関する個々の薬物の効能を推定した。
・  ＰＫとＰＬＴ時間経過の間の関係をＰＫＰＤモデルの模倣造血によって説明した（Friberg L. et al. J Clin Oncol. 2002 Dec 15;20(24):4713-21）。このモデルは、ＰＬＴ産生の局所的および全身的調節を含み、ＰＬＴ循環区画における注入としてＰＬＴ輸血事象を考慮に入れる。未成熟造血細胞ｓｌＰｉに関する個々の薬物の効能を推定した。
【００９１】
ＰＫＰＤモデリングに使用したデータ
患者を、（Ｓ）−１−（４−クロロ−フェニル）−７−イソプロポキシ−６−メトキシ−２−（４−｛メチル−［４−（４−メチル−３−オキソ−ピペラジン−１−イル）−ｔｒａｎｓ−シクロヘキシルメチル］−アミノ｝−フェニル）−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−３−オンを用いて処置した。合計４５人の対象を血小板減少症のＰＫＰＤモデリングに使用した。用量範囲は、連続したまたは２週間処置して１週間中止する投薬レジメンで、１０から５００ｍｇを週に３回（３ＱＷ）であった。血清サンプルを、Ｃ１Ｄ１、Ｃ１Ｄ８およびＣ２Ｄ１について、投与前および投与の０．５から８時間後に各対象から回収した。ＧＤＦ−１５タンパク質レベルの血清レベルを、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ；Ｒ＆Ｄ  ＳｙｓｔｅｍのキットＤＧＤ１５０）を使用して測定した。臨床データ（血小板数を含む）を処置期間の過程中、全ての患者から回収した。最大実測期間は、入手可能な血小板データに関して４４８日であった。
【００９２】
結果：
ＰＫＰＤモデルを図４および５で説明し、モデルコードを添付Ａ１で報告した。
【００９３】
図５は、ＧＤＦ−１５動態を説明するために使用されたＰＫＰＤモデルの概略図を表す。Ｔｌａｇおよびｋａは、それぞれ遅延および一次薬物吸収速度パラメーターである。ｋ１２およびｋ２１は区画間速度であり、ｋｅは排出速度であり、Ｖｍおよびｋｍはミカエリスメンテン排出パラメーターである。ｋｏｕｔは間接応答モデルの代謝回転速度であり、ｋｉｎは０次産生である。Ｖは中央区画の見かけの体積であり、Ｑｃ／Ｖは薬物濃度である。
【００９４】
図４は、血小板動態を説明するために使用されたＰＫＰＤモデルを表す。ＭＭＴは平均成熟時間、Ｅ（［Ｃ］）は薬物濃度の薬効関数である。Ｃｉｒｃ．の区画は循環血小板、Ｐｒｏｌ．は増殖性未熟細胞およびＡ２、Ａ３、Ａ４は成熟区画を表す。ＧＤＦ−１５と骨髄について推定した薬物の効能の間の関連づけは、ｓｌＧｉ（ＧＤＦ−１５のｓｌＧｉ産生に関する個々の薬物の効能）対ｓｌＰｉ（未成熟造血細胞に関する個々の薬物の効能）をプロットすることによって、まず調査した。
【００９５】
図６は、２つのパラメーターの間の関連づけ、すなわち未成熟造血細胞（ｓｌＰｉ）に関する個々の薬物の効能に対するＧＤＦ−１５（ｓｌＧｉ）産生に関する個々の薬物の効能の間の関連づけを調査する予備結果を示す。この解析は、４５人の患者に由来するデータを用いて行った。
【００９６】
以下の添付Ａ１において、ＰＫＰＤモデルの例示を提示する。全てのモデリングを非線形混合効果モデリングソフトウェアＭＯＮＯＬＩＸ（バージョン４．３．２）（例えば、“Estimation of population pharmacokinetic parameters of saquinavir in HIV patients with the MONOLIX software. J Pharmacokinet Pharmacodyn. 2007 Apr;34(2):229-49. Lavielle M, Mentre F.”またはhttp://www.lixoft.eu/に記載されている）を使用して行った。
【００９７】
添付Ａ１：ＭＯＮＯＬＩＸ４．３．２の下で見出されたＭＬＸＴＲＡＮ言語のＰＫＰＤモデルコード
【００９８】
【化５】
2018523824.tif 000007
【実施例３】
【００９９】
上述のように、ＰＫＰＤ血小板減少症モデルを使用して、ＧＤＦ−１５と骨髄に関する化合物Ａの薬物の効能の間の関連づけを確立した。このアプローチは、さらに、血小板減少症を最少化するか、またはこれを完全に予防する手段を適切に適用するのに十分早期に、遅延した薬物誘発性血小板減少症の予測を改善するためのバイオマーカーとしてのＧＤＦ−１５の重要性も評価した。このデータはまた、ＧＤＦ−１５と薬物誘発性血小板減少症の間と同様の相関関係が、（Ｓ）−５−（５−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−６−（４−クロロ−フェニル）−２−（２，４−ジメトキシ−ピリミジン−５−イル）−１−イソプロピル−５，６−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−オンを含む他のＭＤＭ２阻害剤についても存在するという知見を支持する。化合物Ａから学んだように、本明細書に記載されている同様のアプローチを、他のＭＤＭ２阻害剤に引き継ぐことができるガイダンスとして使用することができる。例えば、別のＭｄｍ２阻害剤が使用される場合、ある用量のＭｄｍ２阻害剤の投与後の対象におけるＧＤＦ−１５発現レベル（すなわち、対象から得られる投与後試料におけるＧＤＦ−１５発現）の、前記対象におけるＧＤＦ−１５の発現の基準レベル（すなわち、対象由来の投与前試料におけるＧＤＦ−１５発現）と比較した相対的増加と同じ対象における血小板減少症を発症する可能性の間の相関関係については、以下のステップを完了することによって到達され得る。
１）前記Ｍｄｍ２阻害剤の投与前に対象から得られる投与前生物学的試料を準備するステップ、
２）投与前試料におけるＧＤＦ−１５の発現を測定するステップ、
３）ある用量の前記別のＭｄｍ２阻害剤を対象に投与するステップ、
４）前記Ｍｄｍ２阻害剤の投与後に対象から得られる投与後生物学的試料を準備するステップ、
５）投与後試料におけるＧＤＦ−１５の発現を測定するステップ、
６）前記Ｍｄｍ２阻害剤に対して特異的であり、個々のＰＫプロファイルを説明するＰＫモデルを選択するステップ、
７）血小板およびこれらの成熟時間の基準など、モデルにおけるいくつかのＰＤパラメーター、ならびに化合物Ａモデルで使用したのと同じフィードバックパラメーターを維持しながら、造血成熟プロセスを再生産する一連の５つの区画を有する半機構モデル（添付Ａ１の化合物Ａについて記載されている）を使用して、血小板（ＰＬＴ）数の時間経過に関するＭｄｍ２阻害剤の効果を説明することによって、ＰＫＰＤの関係を確立するステップ。薬物の効能は、新規薬物に特異的であり、このモデルから推定される。Ｍｄｍ２阻害剤投薬レジメンは、このＰＫＰＤモデルで考える。
８）ＧＤＦ−１５に対するＰＫＰＤの関係を確立するステップ。構造および生理学的パラメーター（ＧＤＦ−１５の基準、回転率）は、化合物Ａモデルと同様に保つべきである。所与のＭｄｍ２ｉに特異的であり、投薬レジメンと独立したＧＤＦ−１５産生および血小板産生に関する薬物の効能は、固定値としてこのモデルから読み取られる。
９）血小板産生に関する薬物の効能と遅延した血小板減少症を予測するために必要とされるＧＤＦ−１５発現の（初期の）増加レベルを確立するためのＧＤＦ−１５の個々のパラメーターとの間の相関関係を決定するステップ。さらに、ＧＤＦ−１５に関する薬物の効能は、ＰＬＴ薬物の効能の個体間のばらつきを低減させるためのＰＬＴ産生に関する薬物作用において考えることができる。
【０１００】
最終的に、確立したＰＫＰＤモデルは、血小板減少症を予防するための適切な用量低減または任意の手段を定義するために使用されるべきである。
【０１０１】
この分野の専門家は、例えば、データポイント、したがって十分なモデルに到達するために必要とされる患者の最小数、またはデータセット、すなわち薬物毒性のばらつきに対して、データポイント（すなわち、患者）の必要数がどの程度依存するか（すなわち、ＰＬＴの数またはＧＤＦ−１５発現の差における変化のレベルにどの程度依存するか）に関して、ＰＫおよびＰＫＰＤモデルを調製する際の一般的ガイダンスを認識している。選択したＰＫモデルは、それぞれのＭｄｍ２阻害剤のＰＫプロファイルを最もよく説明するものであるはずである。所与の医薬化合物、本件ではＭｄｍ２阻害剤、特に（Ｓ）−５−（５−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−６−（４−クロロ−フェニル）−２−（２，４−ジメトキシ−ピリミジン−５−イル）−１−イソプロピル−５，６−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−オン、またはその塩に対するＰＫモデルをどのように調製するかは、当業者の一般的範囲内である。当業者はまた、“Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Data Analysis: Concepts and Applications”, Fourth Edition, 2007, Swedish Pharmaceutical Press, by Johan Gabrielsson and Daniel Weinerに対するＰＫモデリングの一般原理を参照することができる。
【実施例４】
【０１０２】
血小板数（図７）および好中球数（図８）およびＧＤＦ−１５値の最大変化を、１２．５ｍｇ（Ａ）、２５ｍｇ（Ｂ）、５０ｍｇ（Ｃ）、１００ｍｇ（Ｄ）、２００ｍｇ（Ｅ）、２５０ｍｇ（Ｆ）、３５０ｍｇ（Ｇ）の用量で、３週サイクル（本明細書では、レジメン１Ａまたは週に３回投与とも称される）の最初の日に、または１２０ｍｇ（Ｉ）の用量で４週サイクル（本明細書では、レジメン１Ｂとも称される）の最初の日および８日目に、式Ｉの化合物、すなわち（Ｓ）−５−（５−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−６−（４−クロロ−フェニル）−２−（２，４−ジメトキシ−ピリミジン−５−イル）−１−イソプロピル−５，６−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−オンを受けた、固形腫瘍を有する患者に対して決定した。左のグラフは、ＧＤＦ−１５の倍率変化に対する血小板数の最大変化を示し、ＧＤＦ−１５は第１サイクルの１日目（Ｃ１Ｄ１）に測定される。右のグラフは、ＧＤＦ−１５の倍率変化に対する血小板数の最大変化を示す。
【０１０３】
血小板／好中球数を、最初の投与を受ける前（基準）ならびにレジメン１Ａ（Ａ〜Ｇ）に対する第１および第２サイクルの１、７および１５日目、またはレジメン１Ｂ（Ｉ）に対する第１および第２サイクルの１、８、１４、２２日目に決定し、基準と比較した血小板値の最大変化を選択した。「血小板／好中球数の変化」値は、基準後の値引く基準値として計算され、血液マイクロリットル当たりの血小板／好中球の数で与えられる。
【０１０４】
ＧＤＦ−１５を、最初の投与を受ける前（基準、Ｃ１Ｄ１  投与前）ならびにレジメン１Ａ（Ａ〜Ｇ）およびレジメン１Ｂ（Ｉ）に対する第１サイクルの最初の日の最初の投与の２４時間後（Ｃ１Ｄ１  投与後２４時間）および第２サイクルの最初の日の投与の２４時間後（Ｃ２Ｄ１  投与後２４時間）に決定した。レジメン１Ｂについて、さらに１つのＧＤＦ−１５値を第１サイクルの８日目の投与の８時間後（Ｃ１Ｄ８  投与後８時間）に決定した。「ＧＤＦ−１５のＣ１Ｄ１倍率変化」をＣ１Ｄ１  投与後２４時間／Ｃ１Ｄ１  投与前として定義する。「ＧＤＦ−１５の最大倍率変化」を投与後の値の最大値をＣ１Ｄ１  投与前値で割ったものとして定義する。
【０１０５】
これにより、バイオマーカーＧＤＦ−１５の増加が、式Ｉの化合物を用いた処置の間の血小板および好中球数の減少と相関することが実証される。この相関関係は、式Ｉの化合物の最初の投与の２４時間後に決定されたＧＤＦ−１５のＣ１Ｄ１値に対して既に実測された（図７および図８の左のグラフを参照のこと）。したがって、Ｍｄｍ２阻害剤を用いる処置の初期相におけるＧＤＦ−１５値の増加は、前記処置の間の血小板および好中球数の減少を示す。
【図１】
2018523824.tif 000009
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【国際調査報告】
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2018523824.tif 000019
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