(57)【要約】  本開示は、ＣＤ２２に特異的な結合ドメインを含む抗体分子に関し、前記結合ドメインは、配列番号１、２、３、４、５および６または７を含む。本開示は、前記抗体分子を含む医薬組成物および治療における前記抗体分子／組成物の使用にも及ぶ。
2018524007.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣＤ２２に特異的な結合ドメインを含む抗体分子であって、前記結合ドメインが、
式（Ｉ）のＣＤＲＨ１：
ＧＸ１Ｘ２ＦＳＸ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８（配列番号１）
（式中、Ｘ１はＦ、ＩまたはＬ（例えばＦ）であり、Ｘ２はＳまたはＤであり、Ｘ３はＳ、ＮまたはＧ（例えばＳ）であり、Ｘ４はＳ、Ｙ、ＬまたはＧであり、Ｘ５はＹまたは不在であり、Ｘ６はＷ、ＹまたはＤ（例えばＷまたはＹ、特にＹ）であり、Ｘ７はＭまたはＩであり、Ｘ８はＣまたはＳ（特にＳ）である）；
式（ＩＩ）のＣＤＲＨ２：
Ｘ９ＩＸ１０Ｘ１１Ｘ１２Ｘ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６ＴＸ１７ＹＡＸ１８ＷＡＫＧ（配列番号２）
（式中、Ｘ９はＣまたはＳであり、Ｘ１０はＹ、Ｄ、ＶまたはＮであり、Ｘ１１はＴ、Ｐ、Ｉ、Ｇ、ＳまたはＡであり、Ｘ１２はＧ、ＳまたはＡ（特にＧ）であり、Ｘ１３はＳ、ＩまたはＴであり、Ｘ１４はＳ、Ｎまたは不在であり、Ｘ１５はＧ、Ｄ、Ｓ、ＡまたはＴであり、Ｘ１６はＤ、Ｔ、Ｓ、Ｎ、ＶまたはＧであり、Ｘ１７はＹ、ＤまたはＡであり、Ｘ１８はＴまたはＳ（特にＳ）である）；
式（ＩＩＩ）のＣＤＲＨ３：
Ｘ１９Ｘ２０Ｘ２１Ｘ２２Ｘ２３Ｘ２４Ｘ２５Ｘ２６Ｘ２７Ｘ２８Ｘ２９Ｘ３０Ｘ３１Ｘ３２Ｘ３３Ｌ（配列番号３）
（式中、Ｘ１９はＡまたは不在であり、Ｘ２０は不在、ＧまたはＹであり、Ｘ２１は不在、ＰまたはＧであり、Ｘ２２は不在、Ｙ、Ｓ、ＤまたはＥであり、Ｘ２３はＶ、Ｇ、ＹまたはＷであり、Ｘ２４はＧ、Ｙ、ＳまたはＶであり、Ｘ２５はＹ、Ｓ、ＧまたはＮであり、Ｘ２６はＧ、Ａ、ＳまたはＴであり、Ｘ２７はＹ、ＧまたはＤであり、Ｘ２８はＤ、Ｉ、Ｙ、ＷまたはＨであり、Ｘ２９はＬ、Ｇ、Ｓ、ＹまたはＫであり、Ｘ３０はＶ、Ｑ、Ｃ、Ｓ、Ｇ、ＴまたはＤであり、Ｘ３１はＹ、ＡまたはＲであり、Ｘ３２はＬまたはＦであり、Ｘ３３はＮ、ＹまたはＤ（特にＤ）である）、
を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、ならびに
軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、
を含む抗体分子。
【請求項２】
ＣＤ２２に特異的な結合ドメインを含む抗体分子であって、前記結合ドメインが、
式（ＩＶ）のＣＤＲＬ１：
ＱＸ３４ＳＸ３５Ｘ３６Ｘ３７Ｘ３８Ｘ３９Ｘ４０Ｘ４１Ｘ４２ＬＸ４３（配列番号４）
（式中、Ｘ３４はＡまたはＳ（特にＡ）であり、Ｘ３５はＱまたはＥ（特にＱ）であり、Ｘ３６はＳ、ＮまたはＴ（特にＳ）であり、Ｘ３７はＩまたはＶであり、Ｘ３８はＳ、ＹまたはＧ（例えばＳまたはＹ）であり、Ｘ３９はＴ、Ｓ、ＧまたはＮ（例えばＳまたはＮ）であり、Ｘ４０はＡ、Ｇ、Ｎ、Ｙ、ＴまたはＲであり、Ｘ４１は不在、ＮまたはＫ（特に不在）であり、Ｘ４２は不在、ＥまたはＤ（特に不在）であり、Ｘ４３はＡまたはＳ（特にＡ）である）；
式（Ｖ）のＣＤＲＬ２：
Ｘ４４Ｘ４５ＳＸ４６ＬＸ４７Ｓ（配列番号５）
（式中、Ｘ４４はＧ、Ｙ、Ｌ、ＡまたはＳであり、Ｘ４５はＡ、ＳまたはＴ（特にＡ）であり、Ｘ４６はＴ、ＲまたはＫ（特にＴ）であり、Ｘ４７はＡまたはＳ（特にＡ）である）；
式（ＶＩ）を有するＣＤＲＬ３：
ＡＧＹＫＳＸ４８Ｘ４９ＤＸ５０Ｘ５１ＴＴ（配列番号６）
（式中、Ｘ４８はＤまたはＥ（特にＤ）であり、Ｘ４９はＳ、ＡまたはＴであり、Ｘ５０はＤまたはＥ（特にＤ）であり、Ｘ５１はＧ、ＡまたはＳである）；または
式（ＶＩＩ）のＣＤＲＬ３：
ＱＸ５２Ｘ５３Ｘ５４Ｘ５５Ｘ５６ＳＸ５７Ｘ５８Ｘ５９Ｘ６０Ｘ６１Ｘ６２Ｘ６３Ｘ６４（配列番号７）
（式中、Ｘ５２はＳ、ＩまたはＧ（例えばＳまたはＧ）であり、Ｘ５３はＹ、ＨまたはＧ（特にＹ）であり、Ｘ５４はＹ、ＤまたはＦ（特にＹ）であり、Ｘ５５はＧ、ＳまたはＹ（例えばＳまたはＹ）であり、Ｘ５６はＴ、ＡまたはＳ（特にＳ）であり、Ｘ５７はＳ、Ｇ、ＶまたはＤであり、Ｘ５８はＧ、Ｓ、Ｌまたは不在であり、Ｘ５９はＧ、Ｒ、ＳまたはＮであり、Ｘ６０はＳ、ＤまたはＶ（例えばＳまたはＤ）であり、Ｘ６１はＷ、Ｙまたは不在（例えばＷまたはＹ）であり、Ｘ６２はＡ、Ｔ、Ｇまたは不在であり、Ｘ６３はＮまたは不在（特に不在）であり、Ｘ６４はＡまたは不在（特に不在）である）、
を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、ならびに
重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、
を含む抗体分子。
【請求項３】
ＣＤ２２に特異的な結合ドメインを含む抗体分子であって、前記結合ドメインが、
式（Ｉ）のＣＤＲＨ１：
ＧＸ１Ｘ２ＦＳＸ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８（配列番号１）
（式中、Ｘ１はＦ、ＩまたはＬ（例えばＦ）であり、Ｘ２はＳまたはＤであり、Ｘ３はＳ、ＮまたはＧ（例えばＳ）であり、Ｘ４はＳ、Ｙ、ＬまたはＧであり、Ｘ５はＹまたは不在であり、Ｘ６はＷ、ＹまたはＤ（例えばＷまたはＹ、特にＹ）であり、Ｘ７はＭまたはＩであり、Ｘ８はＣまたはＳ（特にＳ）である）；
式（ＩＩ）のＣＤＲＨ２：
Ｘ９ＩＸ１０Ｘ１１Ｘ１２Ｘ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６ＴＸ１７ＹＡＸ１８ＷＡＫＧ（配列番号２）
（式中、Ｘ９はＣまたはＳであり、Ｘ１０はＹ、Ｄ、ＶまたはＮであり、Ｘ１１はＴ、Ｐ、Ｉ、Ｇ、ＳまたはＡであり、Ｘ１２はＧ、ＳまたはＡ（特にＧ）であり、Ｘ１３はＳ、ＩまたはＴであり、Ｘ１４はＳ、Ｎまたは不在であり、Ｘ１５はＧ、Ｄ、Ｓ、ＡまたはＴであり、Ｘ１６はＤ、Ｔ、Ｓ、Ｎ、ＶまたはＧであり、Ｘ１７はＹ、ＤまたはＡであり、Ｘ１８はＴまたはＳ（特にＳ）である）；
式（ＩＩＩ）のＣＤＲＨ３：
Ｘ１９Ｘ２０Ｘ２１Ｘ２２Ｘ２３Ｘ２４Ｘ２５Ｘ２６Ｘ２７Ｘ２８Ｘ２９Ｘ３０Ｘ３１Ｘ３２Ｘ３３Ｌ（配列番号３）
（式中、Ｘ１９はＡまたは不在であり、Ｘ２０は不在、ＧまたはＹであり、Ｘ２１は不在、ＰまたはＧであり、Ｘ２２は不在、Ｙ、Ｓ、ＤまたはＥであり、Ｘ２３はＶ、Ｇ、ＹまたはＷであり、Ｘ２４はＧ、Ｙ、ＳまたはＶであり、Ｘ２５はＹ、Ｓ、ＧまたはＮであり、Ｘ２６はＧ、Ａ、ＳまたはＴであり、Ｘ２７はＹ、ＧまたはＤであり、Ｘ２８はＤ、Ｉ、Ｙ、ＷまたはＨであり、Ｘ２９はＬ、Ｇ、Ｓ、ＹまたはＫであり、Ｘ３０はＶ、Ｑ、Ｃ、Ｓ、Ｇ、ＴまたはＤであり、Ｘ３１はＹ、ＡまたはＲであり、Ｘ３２はＬまたはＦであり、Ｘ３３はＮ、ＹまたはＤ（特にＤ）である）、
を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、ならびに
式（ＩＶ）のＣＤＲＬ１：
ＱＸ３４ＳＸ３５Ｘ３６Ｘ３７Ｘ３８Ｘ３９Ｘ４０Ｘ４１Ｘ４２ＬＸ４３（配列番号４）
（式中、Ｘ３４はＡまたはＳ（特にＡ）であり、Ｘ３５はＱまたはＥ（特にＱ）であり、Ｘ３６はＳ、ＮまたはＴ（特にＳ）であり、Ｘ３７はＩまたはＶであり、Ｘ３８はＳ、ＹまたはＧ（例えばＳまたはＹ）であり、Ｘ３９はＴ、Ｓ、ＧまたはＮ（例えばＳまたはＮ）であり、Ｘ４０はＡ、Ｇ、Ｎ、Ｙ、ＴまたはＲであり、Ｘ４１は不在、ＮまたはＫ（特に不在）であり、Ｘ４２は不在、ＥまたはＤ（特に不在）であり、Ｘ４３はＡまたはＳ（特にＡ）である）；
式（Ｖ）のＣＤＲＬ２：
Ｘ４４Ｘ４５ＳＸ４６ＬＸ４７Ｓ（配列番号５）
（式中、Ｘ４４はＧ、Ｙ、Ｌ、ＡまたはＳであり、Ｘ４５はＡ、ＳまたはＴ（特にＡ）であり、Ｘ４６はＴ、ＲまたはＫ（特にＴ）であり、Ｘ４７はＡまたはＳ（特にＡ）である）；
式（ＶＩ）を有するＣＤＲＬ３：
ＡＧＹＫＳＸ４８Ｘ４９ＤＸ５０Ｘ５１ＴＴ（配列番号６）
（式中、Ｘ４８はＤまたはＥ（特にＤ）であり、Ｘ４９はＳ、ＡまたはＴであり、Ｘ５０はＤまたはＥ（特にＤ）であり、Ｘ５１はＧ、ＡまたはＳである）；または
式（ＶＩＩ）のＣＤＲＬ３：
ＱＸ５２Ｘ５３Ｘ５４Ｘ５５Ｘ５６ＳＸ５７Ｘ５８Ｘ５９Ｘ６０Ｘ６１Ｘ６２Ｘ６３Ｘ６４（配列番号７）
（式中、Ｘ５２はＳ、ＩまたはＧ（例えばＳまたはＧ）であり、Ｘ５３はＹ、ＨまたはＧ（特にＹ）であり、Ｘ５４はＹ、ＤまたはＦ（特にＹ）であり、Ｘ５５はＧ、ＳまたはＹ（例えばＳまたはＹ）であり、Ｘ５６はＴ、ＡまたはＳ（特にＳ）であり、Ｘ５７はＳ、Ｇ、ＶまたはＤであり、Ｘ５８はＧ、Ｓ、Ｌまたは不在であり、Ｘ５９はＧ、Ｒ、ＳまたはＮであり、Ｘ６０はＳ、ＤまたはＶ（例えばＳまたはＤ）であり、Ｘ６１はＷ、Ｙまたは不在（例えばＷまたはＹ）であり、Ｘ６２はＡ、Ｔ、Ｇまたは不在であり、Ｘ６３はＮまたは不在（特に不在）であり、Ｘ６４はＡまたは不在（特に不在）である）、
を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、
を含む抗体分子。
【請求項４】
ＣＤＲＨ１が式（Ｉａ）：
ＧＸ１Ｘ２ＦＳＸ３Ｘ４Ｘ５ＹＸ７Ｘ８（配列番号８）
（式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ７およびＸ８は式（Ｉ）について上記に定義されている通りである）である、請求項１から３のいずれか１項に記載の抗体分子。
【請求項５】
ＣＤＲＨ１が式（Ｉｂ）：
ＧＸ１Ｘ２ＦＳＸ３Ｘ４Ｘ５ＹＸ７Ｓ（配列番号９）
（式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５およびＸ７は、式Ｉについて上記に定義されている通りである）を有する、請求項４に記載の抗体分子。
【請求項６】
ＣＤＲＨ２が式（ＩＩａ）：
Ｘ９ＩＸ１０Ｘ１１ＧＸ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６ＴＸ１７ＹＡＸ１８ＷＡＫＧ（配列番号１０）
（式中、Ｘ９、Ｘ１０、Ｘ１１、Ｘ１３、Ｘ１４、Ｘ１５、Ｘ１６、Ｘ１７およびＸ１８は、式ＩＩについて上記に定義されている通りである）を有する、請求項１から５のいずれか１項に記載の抗体分子。
【請求項７】
ＣＤＲＨ２が式（ＩＩｂ）：
Ｘ９ＩＸ１０Ｘ１１Ｘ１２Ｘ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６ＴＸ１７ＹＡＳＷＡＫＧ（配列番号１１）
（式中、Ｘ９、Ｘ１０、Ｘ１１、Ｘ１２、Ｘ１３、Ｘ１４、Ｘ１５、Ｘ１６およびＸ１７は、式ＩＩについて上記に定義されている通りである）、特に、Ｘ１２がＧである式（ＩＩｂ）の配列を有する、請求項６に記載の抗体分子。
【請求項８】
ＣＤＲＨ３が式（ＩＩＩａ）：
Ｘ１９Ｘ２０Ｘ２１Ｘ２２Ｘ２３Ｘ２４Ｘ２５Ｘ２６Ｘ２７Ｘ２８Ｘ２９Ｘ３０Ｘ３１Ｘ３２ＤＬ（配列番号１２）
（式中Ｘ１９、Ｘ２０、Ｘ２１、Ｘ２２、Ｘ２３、Ｘ２４、Ｘ２５、Ｘ２６、Ｘ２７、Ｘ２８、Ｘ２９、Ｘ３０、Ｘ３１およびＸ３２は、式ＩＩＩについて上記に定義されている通りである）を有する、請求項１から７のいずれか１項に記載の抗体分子。
【請求項９】
ＣＤＲＬ１が式（ＩＶａ）：
ＱＡＳＸ３５Ｘ３６Ｘ３７Ｘ３８Ｘ３９Ｘ４０Ｘ４１Ｘ４２ＬＸ４３（配列番号１３）
（式中、Ｘ３５、Ｘ３６、Ｘ３７、Ｘ３８、Ｘ３９、Ｘ４０、Ｘ４１、Ｘ４２およびＸ４３が式ＩＶについて上記に定義されている通りである）を有する、請求項１から８のいずれか１項に記載の抗体分子。
【請求項１０】
ＣＤＲＬ１が式（ＩＶｂ）：
ＱＡＳＱＸ３６Ｘ３７Ｘ３８Ｘ３９Ｘ４０Ｘ４１Ｘ４２ＬＸ４３（配列番号１４）
（式中、Ｘ３６、Ｘ３７、Ｘ３８、Ｘ３９、Ｘ４０、Ｘ４１、Ｘ４２およびＸ４３は、式ＩＶについて上記に定義されている通りである）を有する、請求項９に記載の抗体分子。
【請求項１１】
ＣＤＲＬ１が式（ＩＶｃ）：
ＱＡＳＱＳＸ３７Ｘ３８Ｘ３９Ｘ４０Ｘ４１Ｘ４２ＬＸ４３（配列番号１５）
（式中、Ｘ３７、Ｘ３８、Ｘ３９、Ｘ４０、Ｘ４１、Ｘ４２およびＸ４３は式ＩＶについて上記に定義されている通りである）を有する、請求項９または１０に記載の抗体分子。
【請求項１２】
ＣＤＲＬ１が式（ＩＩＩｄ）：
ＱＡＳＱＳＸ３７Ｘ３８Ｘ３９Ｘ４０Ｘ４２ＬＸ４３（配列番号１６）
（式中、Ｘ３７、Ｘ３８、Ｘ３９、Ｘ４０、Ｘ４２およびＸ４３は式ＩＶについて上記に定義されている通りである）を有する、請求項９から１１のいずれか１項に記載の抗体分子。
【請求項１３】
ＣＤＲＬ１が式（ＩＶｅ）：
ＱＡＳＱＳＸ３７Ｘ３８Ｘ３９Ｘ４０ＬＸ４３（配列番号１７）
（式中、Ｘ３７、Ｘ３８、Ｘ３９、Ｘ４０およびＸ４３は式ＩＶについて上記に定義されている通りである）を有する、請求項９から１１のいずれか１項に記載の抗体分子。
【請求項１４】
ＣＤＲＬ１が式（ＩＶｆ）：
ＱＡＳＱＳＸ３７Ｘ３８Ｘ３９Ｘ４０ＬＡ（配列番号１８）
（式中、Ｘ３７、Ｘ３８、Ｘ３９およびＸ４０は式ＩＶについて上記に定義されている通りである）を有する、請求項９から１３のいずれか１項に記載の抗体分子。
【請求項１５】
ＣＤＲＬ２が式（Ｖａ）：
Ｘ４４ＡＳＸ４６ＬＸ４７Ｓ（配列番号１９）
（式中、Ｘ４４、Ｘ４６およびＸ４７は式Ｖについて上記に定義されている通りである）を有する、請求項１から１４のいずれか１項に記載の抗体分子。
【請求項１６】
ＣＤＲＬ２が式（Ｖｂ）：
Ｘ４４ＡＳＸ４６ＬＡＳ（配列番号２０）
（式中、Ｘ４４およびＸ４６は式Ｖについて上記に定義されている通りである）を有する、請求項１５に記載の抗体分子。
【請求項１７】
ＣＤＲＬ２が式（Ｖｃ）：
Ｘ４４ＡＳＴＬＡＳ（配列番号２１）
（式中、Ｘ４４は式Ｖについて上記に定義されている通りである）を有する、請求項１６に記載の抗体分子。
【請求項１８】
ＣＤＲＬ３が式（ＶＩａ）：
ＡＧＹＫＳＸ４８Ｘ４９ＤＸ５０Ｘ５１ＴＴ（配列番号２２）
（式中、Ｘ４９、Ｘ５０およびＸ５１は式Ｖについて上記に定義されている通りである）を有する、請求項１から１７のいずれか１項に記載の抗体分子。
【請求項１９】
ＣＤＲＬ３が式（ＶＩｂ）：
ＡＧＹＫＳＤＸ４９ＤＤＸ５１ＴＴ（配列番号２３）
（式中、Ｘ４９およびＸ５１は式ＶＩについて上記に定義されている通りである）を有する、請求項１８に記載の抗体分子。
【請求項２０】
ＣＤＲＬ３が式（ＶＩＩａ）：
ＱＸ５２ＹＸ５４Ｘ５５Ｘ５６ＳＸ５７Ｘ５８Ｘ５９Ｘ６０Ｘ６１Ｘ６２Ｘ６３Ｘ６４（配列番号２４）
（式中、Ｘ５２、Ｘ５４、Ｘ５５、Ｘ５６、Ｘ５７、Ｘ５８、Ｘ５９、Ｘ６０、Ｘ６１、Ｘ６２、Ｘ６３およびＸ６４は式ＶＩＩについて上記に定義されている通りである）を有する、請求項１から１７のいずれか１項に記載の抗体分子。
【請求項２１】
ＣＤＲＬ３が式（ＶＩＩｂ）：
ＱＸ５２ＹＹＸ５５Ｘ５６ＳＸ５７Ｘ５８Ｘ５９Ｘ６０Ｘ６１Ｘ６２Ｘ６３Ｘ６４（配列番号２５）
（式中、Ｘ５２、Ｘ５５、Ｘ５７、Ｘ５８、Ｘ５９、Ｘ６０、Ｘ６１、Ｘ６２、Ｘ６３およびＸ６４は式ＶＩＩについて上記に定義されている通りである）を有する、請求項２０に記載の抗体分子。
【請求項２２】
ＣＤＲＬ３が式（ＶＩＩｃ）：
ＱＸ５２ＹＹＸ５５ＳＳＸ５７Ｘ５８Ｘ５９Ｘ６０Ｘ６１Ｘ６２Ｘ６３Ｘ６４（配列番号２６）
（式中、Ｘ５２、Ｘ５５、Ｘ５６、Ｘ５７、Ｘ５８、Ｘ５９、Ｘ６０、Ｘ６１、Ｘ６２、Ｘ６３およびＸ６４は式ＶＩＩについて上記に定義されている通りである）を有する、請求項２１に記載の抗体分子。
【請求項２３】
ＣＤＲＬ３が式（ＶＩＩｄ）：
ＱＸ５２ＹＹＸ５５ＳＳＸ５７Ｘ５８Ｘ５９Ｘ６０Ｘ６１Ｘ６２Ｘ６４（配列番号２７）
（式中、Ｘ５２、Ｘ５５、Ｘ５７、Ｘ５８、Ｘ５９、Ｘ６０、Ｘ６１、Ｘ６２およびＸ６４は式ＶＩＩについて上記に定義されている通りである）を有する、請求項２１または２２に記載の抗体分子。
【請求項２４】
ＣＤＲＬ３が式（ＶＩＩｅ）：
ＱＸ５２ＹＹＸ５５ＳＳＸ５７Ｘ５８Ｘ５９Ｘ６０Ｘ６１Ｘ６２（配列番号２８）
（式中、Ｘ５２、Ｘ５５、Ｘ５７、Ｘ５８、Ｘ５９、Ｘ６０、Ｘ６１、Ｘ６２は式ＶＩＩについて上記に定義されている通りである）を有する、請求項２１または２２に記載の抗体分子。
【請求項２５】
ＣＤＲＨ１が、配列番号２９〜３９から独立して選択され、ＣＤＲＨ２が配列番号４０〜５９から独立して選択され、およびＣＤＲＨ３が配列番号６０〜６８から独立して選択される、請求項１から３のいずれか１項に記載の抗体分子。
【請求項２６】
ＣＤＲ  Ｈ１が配列番号２９または３０であり、ＣＤＲ  Ｈ２が配列番号４０または４１であり、ＣＤＲ  Ｈ３が配列番号６０である、請求項１から３および２５のいずれか１項に記載の抗体分子。
【請求項２７】
ＣＤＲ  Ｈ１が配列番号３１または３２であり、ＣＤＲ  Ｈ２が配列番号４２または４３であり、ＣＤＲ  Ｈ３が配列番号６１または６２である、請求項１から３および２５のいずれか１項に記載の抗体分子。
【請求項２８】
ＣＤＲ  Ｈ１が配列番号３３または３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２が配列番号４４または４５であり、ＣＤＲ  Ｈ３が配列番号６３である、請求項１から３または２５のいずれか１項に記載の抗体分子。
【請求項２９】
ＣＤＲ  Ｈ１が配列番号３５または３６であり、ＣＤＲ  Ｈ２が配列番号４６または４７であり、ＣＤＲ  Ｈ３が配列番号６４である、請求項１から３または２５のいずれか１項に記載の抗体分子。
【請求項３０】
ＣＤＲ  Ｈ１が配列番号３７であり、ＣＤＲ  Ｈ２が配列番号４８、４９、５０、５１、５２または５３であり、ＣＤＲ  Ｈ３が配列番号６５、６６または６７である、請求項１から３または２５のいずれか１項に記載の抗体分子。
【請求項３１】
ＣＤＲ  Ｈ１が配列番号３８または３９であり、ＣＤＲ  Ｈ２が配列番号５４、５５、５６、５７、５８または５９であり、ＣＤＲ  Ｈ３が配列番号６８である、請求項１から３または２５のいずれか１項に記載の抗体分子。
【請求項３２】
ＣＤＲＬ１が、配列番号６９〜７４から独立して選択され、ＣＤＲＬ２が配列番号７５〜８０から独立して選択され、およびＣＤＲＬ３が配列番号８１〜１０１から独立して選択される、項目１から３および２５から３１のいずれか１項に記載の抗体分子。
【請求項３３】
ＣＤＲ  Ｌ１が配列番号６９であり、ＣＤＲ  Ｌ２が配列番号７５であり、ＣＤＲ  Ｌ３が配列番号８１である、請求項１から３および２５から３２のいずれか１項に記載の抗体分子。
【請求項３４】
ＣＤＲ  Ｌ１が配列番号７０であり、ＣＤＲ  Ｌ２が配列番号７６であり、ＣＤＲ  Ｌ３が配列番号８２である、請求項３２に記載の抗体分子。
【請求項３５】
ＣＤＲ  Ｌ１が配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２が配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３が配列番号８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７または９８である、請求項１から３および２５から３２のいずれか１項に記載の抗体分子。
【請求項３６】
ＣＤＲ  Ｌ１が配列番号７２であり、ＣＤＲ  Ｌ２が配列番号７８であり、ＣＤＲ  Ｌ３が配列番号９９である、請求項１から３および２５から３２のいずれか１項に記載の抗体分子。
【請求項３７】
ＣＤＲ  Ｌ１が配列番号７３であり、ＣＤＲ  Ｌ２が配列番号７９であり、ＣＤＲ  Ｌ３が配列番号１００である、請求項３２に記載の抗体分子。
【請求項３８】
ＣＤＲ  Ｌ１が配列番号７４であり、ＣＤＲ  Ｌ２が配列番号８０であり、ＣＤＲ  Ｌ３が配列番号１０１である、請求項１から３および２５から３２のいずれか１項に記載の抗体分子。
【請求項３９】
ＶＨおよびＶＬがヒト化されている、請求項１から３８のいずれか一項に記載の抗体分子。
【請求項４０】
前記重鎖の可変ドメイン（ＶＨ）が、１１、２３、２４、３７、４７、４８、４９、６７、７１、７３、７６、７８および９４位の少なくとも１つの残基がドナー残基であるヒトフレームワーク領域を含み、前記軽鎖の可変ドメイン（ＶＬ）が、１、２、３、３６、６３、６５、６６、７０および７１位の少なくとも１つの残基がドナー残基であるヒトフレームワーク領域を含む、請求項３９に記載の抗体分子。
【請求項４１】
配列番号１０７、１０８、１０９、１１０、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２７、１２８、１２９、１３０、１３６、１３７、１３８、１３９、１４５、１４６、１４７、１４８、１５４、１５５、１５６および１５７から独立して選択されるＶＨを含む、請求項１から３または請求項３９もしくは４０のいずれか１項に記載の抗体分子。
【請求項４２】
配列番号１０６、１１５、１２６、１３５、１４４および１５３から独立して選択される配列を含むＶＬ可変ドメインを含む、請求項１から３のいずれか１項および３９から４１のいずれか１項に記載の抗体分子。
【請求項４３】
請求項１から４２のいずれか一項に記載の１または複数の抗体分子を含む組成物。
【請求項４４】
請求項１から４２のいずれか一項に記載の抗体分子をコードするヌクレオチド配列。
【請求項４５】
請求項４４に記載のヌクレオチド配列を含むベクター。
【請求項４６】
治療に使用するための、請求項１から４５のいずれか一項に記載の抗体分子または請求項４３に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、国際公開第２０１６／００９０３０号パンフレットおよび英国特許第１６０１０７７．９号明細書からの優先権を主張し、これらの両方は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本開示は、少なくとも抗原ＣＤ２２に特異的である抗体分子、当該抗体分子を含む製剤および治療におけるそれらのいずれか１つの使用に関する。本開示は、当該抗体分子および当該製剤を調製する方法にも及ぶ。
【背景技術】
【０００３】
インビボの生体機序は、シグナルの極めて複雑なカスケードであり、解析および理解が困難である。このようなシグナル伝達の例は、Ｂ細胞を活性化するために必要とされるものである。Ｂ細胞抗原受容体（ＢＣＲ）は、膜免疫グロブリン（ｍＩｇ）分子および会合したＩｇα／Ｉｇβ（ＣＤ７９ａ／ＣＤ７９ｂ）ヘテロ二量体（α／β）から構成される。ｍＩｇサブユニットは抗原と結合し、受容体凝集を生じ、α／βサブユニットはシグナルを細胞内部に伝達する。ＢＣＲ凝集は、ＳｒｃファミリーキナーゼのＬｙｎ、Ｂｌｋ、およびＦｙｎならびにＳｙｋおよびＢｔｋチロシンキナーゼを迅速に活性化する。これは、ＢＣＲ、前述のチロシンキナーゼ、ＣＤ１９およびＢＬＮＫなどのアダプタータンパク質、ならびにＰＬＣγ２、ＰＩ３Ｋ、およびＶａｖなどのシグナル伝達酵素から構成される「シグナロソーム」の形成を開始する。
【０００４】
シグナロソームから発せられるシグナルは、キナーゼ、ＧＴＰａｓｅ、および転写因子を含む複数のシグナル伝達カスケードを活性化する。これは、細胞代謝、遺伝子発現、および細胞骨格系の変化をもたらす。ＢＣＲシグナル伝達の複雑さは、生存、忍容性（アネルギー）またはアポトーシス、増殖、ならびに抗体産生細胞またはメモリーＢ細胞への分化を含む多くの異なる結果を可能にする。応答の結果は、細胞の成熟状態、抗原の性質、ＢＣＲシグナル伝達の大きさおよび持続時間、ならびにＣＤ４０、ＩＬ−２１受容体、およびＢＡＦＦ−Ｒなどの他の受容体からのシグナルによって決定される。
【０００５】
そのいくつかが受容体である多くの他の膜貫通タンパク質は、ＢＣＲシグナル伝達の特定の要素を調節する。これらのうちのいくつかとして、ＣＤ４５、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＰＩＲ−Ｂ、およびＦｃγＲＩＩＢ１（ＣＤ３２）が挙げられる。ＢＣＲのシグナル伝達の大きさおよび持続時間は、Ｌｙｎ／ＣＤ２２／ＳＨＰ−１経路、Ｃｂｐ／Ｃｓｋ経路、ＳＨＩＰ、Ｃｂｌ、Ｄｏｋ−１、Ｄｏｋ−３、ＦｃγＲＩＩＢ１、ＰＩＲ−Ｂ、およびＢＣＲの内部移行を含む負のフィードバックループによって制限される。インビボでは、多くの場合Ｂ細胞は、抗原を捕捉して、これを細胞表面上に提示する抗原提示細胞によって活性化される。このような膜関連抗原によるＢ細胞の活性化には、ＢＣＲ誘導性細胞骨格再構成が必要である。
【０００６】
自己反応性Ｂ細胞は病原性自己抗体の産生を担い、これは自己免疫状態を直接的または間接的に引き起こすか、または悪化させ得る。ＣＤ２０陽性Ｂ細胞の枯渇を使用して、多数の自己免疫状態の治療が成功してきており、したがって、Ｂ細胞が、多数の自己免疫疾患、例えば、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症およびＩ型糖尿病を引き起こすか、または維持する上で重要な役割を果たすことが結論として確立されている。Ｂ細胞の枯渇は成功した治療選択肢であったが、Ｂ細胞の増殖および活性化状態の制御もＢ細胞機能を調節する有効な方法であり得るという証拠もまた存在する。したがって、Ｂ細胞を枯渇させず、いくつかの副作用と関連することが示されているＢ細胞免疫の長期抑制を行うことなくＢ細胞を制御する柔軟性を提供する代替戦略が望ましい。さらに、すべてのＢ細胞応答または活性が有害であるわけではなく、制御性Ｂ細胞集団の維持が防御となり得るということが証拠で示唆されている。このようなアプローチは、不適切または過剰なＢｃＲシグナル伝達によって引き起こされる異常なＢ細胞機能を有する疾患において有効なはずである。このような疾患の例としては、炎症、自己免疫および癌が挙げられるが、これらに限定されない。特に興味深いのは、ＢｃＲシグナル伝達の直接要件を有するか、または液性免疫応答の阻害または刺激を必要とする疾患である。
【０００７】
Ｆｃγ受容体ＩＩｂ（ＣＤ３２ｂ）とＢ細胞受容体との共連結が起こり、特に抗原が小さな免疫複合体における抗体に結合した場合に、シグナル伝達を自然に調節する。次いで、ＣＤ３２ｂは、ＢｃＲ活性化に拮抗するホスファターゼＳＨＰ−１およびＳＨＩＰ−１を動員する。この天然の調節機序はＢ細胞機能を制御することができるが、ＣＤ３２ｂのタンパク質配列の変異によって引き起こされるＣＤ３２ｂ機能の破壊は自己免疫疾患につながり、例えば、ＳＬＥの場合のように、この受容体は自己免疫疾患においてダウンレギュレーションされ得る。したがって、Ｂ細胞活性を遮断する代替の方法が望まれ、それらはＢｃＲ機能を調節する代替の非天然の方法を提供する。これらの代替機序は、特定の疾患において自然の機序が機能しない場合に特に重要である可能性が高い。
【０００８】
ＣＤ２２は、Ｂ細胞受容体（ＢＣＲ）の阻害性共受容体であり、Ｂ細胞活性化のためのシグナル伝達閾値を確立する上で重要な役割を果たす。ＣＤ２２を標的とすることにより、Ｂ細胞の応答性低下をもたらし得る休止細胞上のＢＣＲ複合体成分の物理的ダウンレギュレーション、ならびにＢＣＲ関与後のＢＣＲシグナル伝達の程度の制限の両方が誘導される。全体的な効果は、Ｂ細胞活性化の阻害、最終的にＢ細胞によって媒介されるその後の自己免疫および炎症事象の減少である。したがって、抗体によるＣＤ２２機能の調節は、自己免疫、免疫不全および悪性腫瘍を含むＢ細胞活性化に依存する多くの疾患において治療上の利益を有することができる（例えば、ＣＤ２２：ａｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｅｎｉｇｍａ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．２００７．１２３巻：３１４−３２５頁を参照されたい）。本開示は、ＣＤ２２に特異的な多数の抗体分子を提供し、これらの抗体分子は、単独、またはさらなるＢ細胞表面受容体（例えば、ＣＤ７９）に特異的な抗体またはその結合断片などの実体と組み合わせて用いることができ、例えば、自己免疫および癌などの特定の疾患に関連する異常なＢ細胞機能の制御に有用である。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】ＣＤ２２：ａｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｅｎｉｇｍａ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．２００７．１２３巻：３１４−３２５頁
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１０】
したがって、：
ＧＸ１Ｘ２ＦＳＸ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８（配列番号１）
（式中、Ｘ１はＦ、ＩまたはＬ（例えばＦ）であり、Ｘ２はＳまたはＤであり、Ｘ３はＳ、ＮまたはＧ（例えばＳ）であり、Ｘ４はＳ、Ｙ、ＬまたはＧであり、Ｘ５はＹまたは不在であり、Ｘ６はＷ、ＹまたはＤ（例えばＷまたはＹ、特にＹ）であり、Ｘ７はＭまたはＩであり、Ｘ８はＣまたはＳ（特にＳ）である）；
式（ＩＩ）のＣＤＲＨ２：
Ｘ９ＩＸ１０Ｘ１１Ｘ１２Ｘ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６ＴＸ１７ＹＡＸ１８ＷＡＫＧ（配列番号２）
（式中、Ｘ９はＣまたはＳであり、Ｘ１０はＹ、Ｄ、ＶまたはＮであり、Ｘ１１はＴ、Ｐ、Ｉ、Ｇ、ＳまたはＡであり、Ｘ１２はＧ、ＳまたはＡ（特にＧ）であり、Ｘ１３はＳ、ＩまたはＴであり、Ｘ１４はＳ、Ｎまたは不在であり、Ｘ１５はＧ、Ｄ、Ｓ、ＡまたはＴであり、Ｘ１６はＤ、Ｔ、Ｓ、Ｎ、ＶまたはＧであり、Ｘ１７はＹ、ＤまたはＡであり、Ｘ１８はＴまたはＳ（特にＳ）である）；
式（ＩＩＩ）のＣＤＲＨ３：
Ｘ１９Ｘ２０Ｘ２１Ｘ２２Ｘ２３Ｘ２４Ｘ２５Ｘ２６Ｘ２７Ｘ２８Ｘ２９Ｘ３０Ｘ３１Ｘ３２Ｘ３３Ｌ（配列番号３）
（式中、Ｘ１９はＡまたは不在であり、Ｘ２０は不在、ＧまたはＹであり、Ｘ２１は不在、ＰまたはＧであり、Ｘ２２は不在、Ｙ、Ｓ、ＤまたはＥであり、Ｘ２３はＶ、Ｇ、ＹまたはＷであり、Ｘ２４はＧ、Ｙ、ＳまたはＶであり、Ｘ２５はＹ、Ｓ、ＧまたはＮであり、Ｘ２６はＧ、Ａ、ＳまたはＴであり、Ｘ２７はＹ、ＧまたはＤであり、Ｘ２８はＤ、Ｉ、Ｙ、ＷまたはＨであり、Ｘ２９はＬ、Ｇ、Ｓ、ＹまたはＫであり、Ｘ３０はＶ、Ｑ、Ｃ、Ｓ、Ｇ、ＴまたはＤであり、Ｘ３１はＹ、ＡまたはＲであり、Ｘ３２はＬまたはＦであり、Ｘ３３はＮ、ＹまたはＤ（特にＤ）である）；ならびに
ウサギ目由来のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２およびＣＤＬ３を含む軽鎖可変ドメイン、特に、ヒトフレームワークとウサギ目由来のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２およびＣＤＲＬ３とを含む軽鎖可変ドメイン、
を含む抗体分子が提供される。
【００１１】
一実施形態において、ＣＤＲＬ１は式（ＩＶ）：
ＱＸ３４ＳＸ３５Ｘ３６Ｘ３７Ｘ３８Ｘ３９Ｘ４０Ｘ４１Ｘ４２ＬＸ４３（配列番号４）
（式中、Ｘ３４はＡまたはＳ（特にＡ）であり、Ｘ３５はＱまたはＥ（特にＱ）であり、Ｘ３６はＳ、ＮまたはＴ（特にＳ）であり、Ｘ３７はＩまたはＶであり、Ｘ３８はＳ、ＹまたはＧ（例えばＳまたはＹ）であり、Ｘ３９はＴ、Ｓ、ＧまたはＮ（例えばＳまたはＮ）であり、Ｘ４０はＡ、Ｇ、Ｎ、Ｙ、ＴまたはＲであり、Ｘ４１は不在、ＮまたはＫ（特に不在）であり、Ｘ４２は不在、ＥまたはＤ（特に不在）であり、Ｘ４３はＡまたはＳ（特にＡ）である）を有し；
ＣＤＲＬ２は式（Ｖ）：
Ｘ４４Ｘ４５ＳＸ４６ＬＸ４７Ｓ（配列番号５）
（式中、Ｘ４４はＧ、Ｙ、Ｌ、ＡまたはＳであり、Ｘ４５はＡ、ＳまたはＴ（特にＡ）であり、Ｘ４６はＴ、ＲまたはＫ（特にＴ）であり、Ｘ４７はＡまたはＳ（特にＡ）である）を有し；
ＣＤＲＬ３は式（ＶＩ）：
ＡＧＹＫＳＸ４８Ｘ４９ＤＸ５０Ｘ５１ＴＴ（配列番号６）
（式中、Ｘ４８はＤまたはＥ（特にＤ）、Ｘ４９はＳ、ＡまたはＴであり、Ｘ５０はＤまたはＥ（特にＤ）であり、Ｘ５１はＧ、ＡまたはＳである）を有するか；または
ＣＤＲＬ３は式（ＶＩＩ）：
ＱＸ５２Ｘ５３Ｘ５４Ｘ５５Ｘ５６ＳＸ５７Ｘ５８Ｘ５９Ｘ６０Ｘ６１Ｘ６２Ｘ６３Ｘ６４（配列番号７）
（式中、Ｘ５２はＳ、ＩまたはＧ（例えばＳまたはＧ）であり、Ｘ５３はＹ、ＨまたはＧ（特にＹ）であり、Ｘ５４はＹ、ＤまたはＦ（特にＹ）であり、Ｘ５５はＧ、ＳまたはＹ（例えばＳまたはＹ）であり、Ｘ５６はＴ、ＡまたはＳ（特にＳ）であり、Ｘ５７はＳ、Ｇ、ＶまたはＤであり、Ｘ５８はＧ、Ｓ、Ｌまたは不在であり、Ｘ５９はＧ、Ｒ、ＳまたはＮであり、Ｘ６０はＳ、ＤまたはＶ（例えばＳまたはＤ）であり、Ｘ６１はＷ、Ｙまたは不在（例えばＷまたはＹ）であり、Ｘ６２はＡ、Ｔ、Ｇまたは不在であり、Ｘ６３はＮまたは不在（特に不在）であり、Ｘ６４はＡまたは不在（特に不在）である）
を有する。
【００１２】
一実施形態において、式（Ｉ）の配列は、式（Ｉａ）：
ＧＸ１Ｘ２ＦＳＸ３Ｘ４Ｘ５ＹＸ７Ｘ８（配列番号８）
（式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ７およびＸ８は式Ｉについて上記に定義されている通りである）に示された通りであり、特に式（Ｉｂ）の配列：
ＧＸ１Ｘ２ＦＳＸ３Ｘ４Ｘ５ＹＸ７Ｓ（配列番号９）
（式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５およびＸ７は式Ｉについて上記に定義されている通りである）
である。
【００１３】
一実施形態において、式（ＩＩ）の配列は、式（ＩＩａ）：
Ｘ９ＩＸ１０Ｘ１１ＧＸ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６ＴＸ１７ＹＡＸ１８ＷＡＫＧ（配列番号１０）
（式中、Ｘ９、Ｘ１０、Ｘ１１、Ｘ１３、Ｘ１４、Ｘ１５、Ｘ１６、Ｘ１７およびＸ１８は式ＩＩについて上記に定義されている通りである）に示される通りである。
【００１４】
一実施形態において、式（ＩＩ）の配列は、式（ＩＩｂ）：
Ｘ９ＩＸ１０Ｘ１１Ｘ１２Ｘ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６ＴＸ１７ＹＡＳＷＡＫＧ（配列番号１１）
（式中、Ｘ９、Ｘ１０、Ｘ１１、Ｘ１２、Ｘ１３、Ｘ１４、Ｘ１５、Ｘ１６およびＸ１７は式ＩＩについて上記に定義されている通りである）に示される通りであり、特に、Ｘ１２がＧである式（ＩＩｂ）の配列である。
【００１５】
一実施形態において、式（ＩＩＩ）の配列は、式（ＩＩＩａ）：
Ｘ１９Ｘ２０Ｘ２１Ｘ２２Ｘ２３Ｘ２４Ｘ２５Ｘ２６Ｘ２７Ｘ２８Ｘ２９Ｘ３０Ｘ３１Ｘ３２ＤＬ（配列番号１２）
（式中、Ｘ１９、Ｘ２０、Ｘ２１、Ｘ２２、Ｘ２３、Ｘ２４、Ｘ２５、Ｘ２６、Ｘ２７、Ｘ２８、Ｘ２９、Ｘ３０、Ｘ３１およびＸ３２は式ＩＩＩについて上記に定義されている通りである）に示される通りである。
【００１６】
一実施形態において、式（ＩＶ）の配列は、式（ＩＶａ）：
ＱＡＳＸ３５Ｘ３６Ｘ３７Ｘ３８Ｘ３９Ｘ４０Ｘ４１Ｘ４２ＬＸ４３（配列番号１３）
（式中、Ｘ３５、Ｘ３６、Ｘ３７、Ｘ３８、Ｘ３９、Ｘ４０、Ｘ４１、Ｘ４２およびＸ４３は式ＩＶについて上記に定義されている通りである）に示される通りであり、特に式（ＩＶｂ）の配列：
ＱＡＳＱＸ３６Ｘ３７Ｘ３８Ｘ３９Ｘ４０Ｘ４１Ｘ４２ＬＸ４３（配列番号１４）
（式中、Ｘ３６、Ｘ３７、Ｘ３８、Ｘ３９、Ｘ４０、Ｘ４１、Ｘ４２およびＸ４３は式ＩＶについて上記に定義されている通りである）であり、特に式（ＩＶｃ）の配列：
ＱＡＳＱＳＸ３７Ｘ３８Ｘ３９Ｘ４０Ｘ４１Ｘ４２ＬＸ４３（配列番号１５）
（式中、Ｘ３７、Ｘ３８、Ｘ３９、Ｘ４０、Ｘ４１、Ｘ４２およびＸ４３は式ＩＶについて上記に定義されている通りである）であり、特に式（ＩＶｄ）の配列：
ＱＡＳＱＳＸ３７Ｘ３８Ｘ３９Ｘ４０Ｘ４２ＬＸ４３（配列番号１６）
（式中、Ｘ３７、Ｘ３８、Ｘ３９、Ｘ４０、Ｘ４２およびＸ４３は式ＩＶについて上記に定義されている通りである）であり、特に式（ＩＶｅ）の配列：
ＱＡＳＱＳＸ３７Ｘ３８Ｘ３９Ｘ４０ＬＸ４３（配列番号１７）
（式中、Ｘ３７、Ｘ３８、Ｘ３９、Ｘ４０およびＸ４３は式ＩＶについて上記に定義されている通りである）であり、特に式（ＩＶｆ）の配列：
ＱＡＳＱＳＸ３７Ｘ３８Ｘ３９Ｘ４０ＬＡ（配列番号１８）
（式中、Ｘ３７、Ｘ３８、Ｘ３９およびＸ４０は式ＩＶについて上記に定義されている通りである）である。
【００１７】
一実施形態において、式（Ｖ）の配列は、式（Ｖａ）：
Ｘ４４ＡＳＸ４６ＬＸ４７Ｓ（配列番号１９）
（式中、Ｘ４４、Ｘ４６およびＸ４７は式Ｖについて上記に定義されている通りである）に示される通りであり、特に式（Ｖｂ）の配列：
Ｘ４４ＡＳＸ４６ＬＡＳ（配列番号２０）
（式中、Ｘ４４およびＸ４６は式Ｖについて上記に定義されている通りである）であり、特に式（Ｖｃ）の配列：
Ｘ４４ＡＳＴＬＡＳ（配列番号２１）
（式中、Ｘ４４は式Ｖについて上記に定義されている通りである）である。
【００１８】
一実施形態において、式（ＶＩ）の配列は、式（ＶＩａ）：
ＡＧＹＫＳＸ４８Ｘ４９ＤＸ５０Ｘ５１ＴＴ（配列番号２２）
（式中、Ｘ４８、Ｘ４９、Ｘ５０およびＸ５１は式ＶＩについて上記に定義されている通りである）に示される通りであり、特に式（ＶＩｂ）の配列：
ＡＧＹＫＳＤＸ４９ＤＤＸ５１ＴＴ（配列番号２３）
（式中、Ｘ４９およびＸ５１は式ＶＩについて上記に定義されている通りである）である。
【００１９】
一実施形態において、式（ＶＩＩ）の配列は、式（ＶＩＩａ）：
ＱＸ５２ＹＸ５４Ｘ５５Ｘ５６ＳＸ５７Ｘ５８Ｘ５９Ｘ６０Ｘ６１Ｘ６２Ｘ６３Ｘ６４（配列番号２４）
（式中、Ｘ５２、Ｘ５４、Ｘ５５、Ｘ５６、Ｘ５７、Ｘ５８、Ｘ５９、Ｘ６０、Ｘ６１、Ｘ６２、Ｘ６３およびＸ６４は式ＶＩＩについて上記に定義されている通りである）に示される通りであり、特に式（ＶＩＩｂ）の配列：
ＱＸ５２ＹＹＸ５５Ｘ５６ＳＸ５７Ｘ５８Ｘ５９Ｘ６０Ｘ６１Ｘ６２Ｘ６３Ｘ６４（配列番号２５）
（式中、Ｘ５２、Ｘ５５、Ｘ５６、Ｘ５７、Ｘ５８、Ｘ５９、Ｘ６０、Ｘ６１、Ｘ６２、Ｘ６３およびＸ６４は式ＶＩＩについて上記に定義されている通りである）であり、特に式（ＶＩＩｃ）の配列：
ＱＸ５２ＹＹＸ５５ＳＳＸ５７Ｘ５８Ｘ５９Ｘ６０Ｘ６１Ｘ６２Ｘ６３Ｘ６４（配列番号２６）
（式中、Ｘ５２、Ｘ５５、Ｘ５７、Ｘ５８、Ｘ５９、Ｘ６０、Ｘ６１、Ｘ６２、Ｘ６３およびＸ６４は式ＶＩＩについて上記に定義されている通りである）であり、特に式（ＶＩＩｄ）の配列：
ＱＸ５２ＹＹＸ５５ＳＳＸ５７Ｘ５８Ｘ５９Ｘ６０Ｘ６１Ｘ６２Ｘ６４（配列番号２７）
（式中、Ｘ５２、Ｘ５５、Ｘ５７、Ｘ５８、Ｘ５９、Ｘ６０、Ｘ６１、Ｘ６２およびＸ６４は式ＶＩＩについて上記に定義されている通りである）であり、特に式（ＶＩＩｅ）の配列：
ＱＸ５２ＹＹＸ５５ＳＳＸ５７Ｘ５８Ｘ５９Ｘ６０Ｘ６１Ｘ６２（配列番号２８）
（式中、Ｘ５２、Ｘ５５、Ｘ５７、Ｘ５８、Ｘ５９、Ｘ６０、Ｘ６１およびＸ６２は式ＶＩＩについて上記に定義されている通りである）である。
【００２０】
式（Ｉ）、（ＩＩ）および（ＩＩＩ）の定義に該当するＣＤＲの例は、以下のように提供される：
配列番号２９  ＧＦＳＦＳＳＳＹＹＭＣ（例えば、ＣＤＲＨ１として）
配列番号３０  ＧＦＳＦＳＳＳＹＹＭＳ（例えば、ＣＤＲＨ１として）
配列番号３１  ＧＩＤＦＳＳＹＹＹＭＣ（例えば、ＣＤＲＨ１として）
配列番号３２  ＧＩＤＦＳＳＹＹＹＭＳ（例えば、ＣＤＲＨ１として）
配列番号３３  ＧＦＳＦＳＮＬＹＹＭＣ（例えば、ＣＤＲＨ１として）
配列番号３４  ＧＦＳＦＳＮＬＹＹＭＳ（例えば、ＣＤＲＨ１として）
配列番号３５  ＧＬＤＦＳＳＹＷＩＣ（例えば、ＣＤＲＨ１として）
配列番号３６  ＧＬＤＦＳＳＹＷＩＳ（例えば、ＣＤＲＨ１として）
配列番号３７  ＧＦＤＦＳＧＧＹＤＩＳ（例えば、ＣＤＲＨ１として）
配列番号３８  ＧＦＳＦＳＳＳＹＷＩＣ（例えば、ＣＤＲＨ１として）
配列番号３９  ＧＦＳＦＳＳＳＹＷＩＳ（例えば、ＣＤＲＨ１として）
配列番号４０  ＣＩＹＴＧＳＳＧＤＴＹＹＡＳＷＡＫＧ（例えば、ＣＤＲＨ２として）
配列番号４１  ＳＩＹＴＧＳＳＧＤＴＹＹＡＳＷＡＫＧ（例えば、ＣＤＲＨ２として）
配列番号４２  ＣＩＤＰＡＳＳＧＴＴＹＹＡＴＷＡＫＧ（例えば、ＣＤＲＨ２として）
配列番号４３  ＳＩＤＰＡＳＳＧＴＴＹＹＡＴＷＡＫＧ（例えば、ＣＤＲＨ２として）
配列番号４４  ＣＩＤＩＳＳＳＧＳＴＹＹＡＳＷＡＫＧ（例えば、ＣＤＲＨ２として）
配列番号４５  ＳＩＤＩＳＳＳＧＳＴＹＹＡＳＷＡＫＧ（例えば、ＣＤＲＨ２として）
配列番号４６  ＣＩＶＴＧＳＳＤＮＴＹＹＡＳＷＡＫＧ（例えば、ＣＤＲＨ２として）
配列番号４７  ＳＩＶＴＧＳＳＤＮＴＹＹＡＳＷＡＫＧ（例えば、ＣＤＲＨ２として）
配列番号４８  ＣＩＹＧＧＩＮＳＶＴＤＹＡＳＷＡＫＧ（例えば、ＣＤＲＨ２として）
配列番号４９  ＣＩＹＧＧＩＮＡＶＴＤＹＡＳＷＡＫＧ（例えば、ＣＤＲＨ２として）
配列番号５０  ＣＩＹＧＧＩＮＴＶＴＤＹＡＳＷＡＫＧ（例えば、ＣＤＲＨ２として）
配列番号５１  ＳＩＹＧＧＩＮＳＶＴＤＹＡＳＷＡＫＧ（例えば、ＣＤＲＨ２として）
配列番号５２  ＳＩＹＧＧＩＮＡＶＴＤＹＡＳＷＡＫＧ（例えば、ＣＤＲＨ２として）
配列番号５３  ＳＩＹＧＧＩＮＴＶＴＤＹＡＳＷＡＫＧ（例えば、ＣＤＲＨ２として）
配列番号５４  ＣＩＮＳＧＴＧＧＴＡＹＡＳＷＡＫＧ（例えば、ＣＤＲＨ２として）
配列番号５５  ＣＩＮＡＧＴＧＧＴＡＹＡＳＷＡＫＧ（例えば、ＣＤＲＨ２として）
配列番号５６  ＣＩＮＴＧＴＧＧＴＡＹＡＳＷＡＫＧ（例えば、ＣＤＲＨ２として）
配列番号５７  ＳＩＮＳＧＴＧＧＴＡＹＡＳＷＡＫＧ（例えば、ＣＤＲＨ２として）
配列番号５８  ＳＩＮＡＧＴＧＧＴＡＹＡＳＷＡＫＧ（例えば、ＣＤＲＨ２として）
配列番号５９  ＳＩＮＴＧＴＧＧＴＡＹＡＳＷＡＫＧ（例えば、ＣＤＲＨ２として）
配列番号６０  ＧＰＹＶＧＹＧＹＤＬＱＹＬＹＬ（例えば、ＣＤＲＨ３として）
配列番号６１  ＡＹＧＳＧＧＳＧＹＩＧＣＹＦＤＬ（例えば、ＣＤＲＨ３として）
配列番号６２  ＡＹＧＳＧＧＳＧＹＩＧＳＹＦＤＬ（例えば、ＣＤＲＨ３として）
配列番号６３  ＤＹＹＳＳＤＷＧＶＲＦＮＬ（例えば、ＣＤＲＨ３として）
配列番号６４  ＧＧＧＡＧＹＳＧＡＦＤＬ（例えば、ＣＤＲＨ３として）
配列番号６５  ＤＶＳＮＳＤＨＹＴＲＬＤＬ（例えば、ＣＤＲＨ３として）
配列番号６６  ＤＶＳＮＡＤＨＹＴＲＬＤＬ（例えば、ＣＤＲＨ３として）
配列番号６７  ＤＶＳＮＴＤＨＹＴＲＬＤＬ（例えば、ＣＤＲＨ３として）
配列番号６８  ＥＷＶＳＧＹＹＫＤＡＦＤＬ（例えば、ＣＤＲＨ３として）
【００２１】
式（ＩＶ）、（Ｖ）、（ＶＩ）および（ＶＩＩ）の定義に該当するＣＤＲの例は、以下のように提供される：
配列番号６９  ＱＡＳＱＳＩＳＴＡＬＡ（例えば、ＣＤＲＬ１として）
配列番号７０  ＱＡＳＱＮＩＧＳＧＬＡ（例えば、ＣＤＲＬ１変異体１として）
配列番号７１  ＱＡＳＱＳＶＹＧＮＮＥＬＳ（例えば、ＣＤＲＬ１変異体２として）
配列番号７２  ＱＡＳＥＳＩＳＮＹＬＳ（例えば、ＣＤＲＬ１変異体３として）
配列番号７３  ＱＳＳＱＳＶＹＮＴＫＤＬＡ（例えば、ＣＤＲＬ１変異体４として）
配列番号７４  ＱＡＳＥＴＩＳＳＲＬＡ（例えば、ＣＤＲＬ１変異体５として）
配列番号７５  ＧＡＳＴＬＡＳ（例えば、ＣＤＲＬ２として）
配列番号７６  ＹＡＳＴＬＡＳ（例えば、ＣＤＲＬ２変異体１として）
配列番号７７  ＬＡＳＲＬＡＳ（例えばＣＤＲＬ２変異体２として）
配列番号７８  ＡＳＳＫＬＳＳ（例えば、ＣＤＲＬ２変異体３として）
配列番号７９  ＧＴＳＴＬＡＳ（例えば、ＣＤＲＬ２変異体４として）
配列番号８０  ＳＡＳＴＬＡＳ（例えば、ＣＤＲＬ２変異体５として）
配列番号８１  ＱＳＹＹＧＴＳＳＧＧＳＷＡ（例えば、ＣＤＲＬ３として）
配列番号８２  ＱＳＨＤＹＳＳＶＲＳＹＧＮＡ（例えば、ＣＤＲＬ３として）
配列番号８３  ＡＧＹＫＳＤＳＤＤＧＴＴ（例えば、ＣＤＲＬ３として）
配列番号８４  ＡＧＹＫＳＥＳＤＤＧＴＴ（例えば、ＣＤＲＬ３として）
配列番号８５  ＡＧＹＫＳＤＡＤＤＧＴＴ（例えば、ＣＤＲＬ３として）
配列番号８６  ＡＧＹＫＳＤＴＤＤＧＴＴ（例えば、ＣＤＲＬ３として）
配列番号８７  ＡＧＹＫＳＤＳＤＥＧＴＴ（例えば、ＣＤＲＬ３として）
配列番号８８  ＡＧＹＫＳＤＳＤＤＡＴＴ（例えば、ＣＤＲＬ３として）
配列番号８９  ＡＧＹＫＳＤＳＤＤＳＴＴ（例えば、ＣＤＲＬ３として）
配列番号９０  ＡＧＹＫＳＥＳＤＥＧＴＴ（例えば、ＣＤＲＬ３として）
配列番号９１  ＡＧＹＫＳＥＳＤＤＡＴＴ（例えば、ＣＤＲＬ３として）
配列番号９２  ＡＧＹＫＳＥＳＤＤＳＴＴ（例えば、ＣＤＲＬ３として）
配列番号９３  ＡＧＹＫＳＤＡＤＥＧＴＴ（例えば、ＣＤＲＬ３として）
配列番号９４  ＡＧＹＫＳＤＡＤＤＡＴＴ（例えば、ＣＤＲＬ３として）
配列番号９５  ＡＧＹＫＳＤＡＤＤＳＴＴ（例えば、ＣＤＲＬ３として）
配列番号９６  ＡＧＹＫＳＤＴＤＥＧＴＴ（例えば、ＣＤＲＬ３として）
配列番号９７  ＡＧＹＫＳＤＴＤＤＡＴＴ（例えば、ＣＤＲＬ３として）
配列番号９８  ＡＧＹＫＳＤＴＤＤＳＴＴ（例えば、ＣＤＲＬ３として）
配列番号９９  ＱＩＹＹＳＡＳＧＳＲＤＷＴ（例えば、ＣＤＲＬ３として）
配列番号１００  ＱＧＧＦＳＳＳＤＬＮＶ（例えば、ＣＤＲＬ３として）
配列番号１０１  ＱＧＹＹＹＳＳＧＳＤＹＧ（例えば、ＣＤＲＬ３として）
【００２２】
一実施例において、本発明は、本明細書に記載のＣＤ２２抗体を任意の適切な抗体フォーマットで提供する。したがって、実施例において、本発明は、本明細書に記載の結合ドメインの１または複数を含む抗ＣＤ２２抗体またはその断片であって、抗体４１２０、抗体４１２６、抗体４１２７、抗体４１２８、抗体４１３０または抗体４１３２に由来するウサギＣＤＲを含む、本明細書の上記および図３５に提供されるＣＤＲを含む、抗ＣＤ２２抗体またはその断片を提供する。当該ＣＤＲは、任意の適切な抗体フレームワークおよび任意の適切な抗体フォーマットに組み込むことができる。このような抗体には、完全抗体およびこれらの機能的に活性な断片または誘導体が挙げられ、これらは、限定するものではないが、モノクローナル抗体、ヒト化抗体、完全ヒト抗体またはキメラ抗体であってよい。したがって、このような抗体は、完全長の重鎖および軽鎖を有する完全抗体分子またはその断片を含むことができ、限定するものではないが、Ｆａｂ、改変Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、単一ドメイン抗体、ｓｃＦｖ、二価、三価または四価抗体、Ｂｉｓ−ｓｃＦｖ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディおよび上記のいずれかのエピトープ結合断片であってもよい（例えば、ＨｏｌｌｉｇｅｒおよびＨｕｄｓｏｎ、２００５年、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３（９）：１１２６−１１３６頁；ＡｄａｉｒおよびＬａｗｓｏｎ、２００５年、Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｒｅｖｉｅｗｓ−Ｏｎｌｉｎｅ  ２（３）、２０９−２１７頁を参照されたい）。これらの抗体断片を作製し製造する方法は、当技術分野において周知である（例えば、Ｖｅｒｍａら、１９９８年、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ、２１６、１６５−１８１頁を参照されたい）。多価抗体は、複数の特異性を含んでも、または単一特異性であってもよい（例えば、国際公開第９２／２２８５３号パンフレットおよび国際公開第０５／１１３６０５号パンフレットを参照されたい）。本発明のこの態様は、これらの抗ＣＤ２２抗体の変異体にも及びぶことが理解され、これにはヒト化型、および改変型が含まれ、これらには、本明細書で上述したように、アミノ酸がＣＤＲにおいて変異して、１または複数の、異性化、脱アミド化、グリコシル化部位またはシステイン残基を除去されているものが含まれる。
【００２３】
したがって、一実施例において、可変領域を有する重鎖もしくは重鎖断片を含む本開示の抗ＣＤ２２抗体分子（例えば、抗体またはその結合断片）が提供され、前記可変領域は、配列番号１、８または９、配列番号２、１０または１１、および配列番号３または１２から独立して選択される１、２または３つのＣＤＲを含み、例えば、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号１であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号２であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号３である。
【００２４】
したがって、一実施形態においてＣＤＲ  Ｈ１は配列番号１、８もしくは９であり、かつＣＤＲ  Ｈ２は配列番号２であり、またはＣＤＲ  Ｈ１は配列番号１、８もしくは９であり、かつＣＤＲ  Ｈ２は配列番号１０であり、またはＣＤＲ  Ｈ１は配列番号１、８もしくは９であり、かつＣＤＲ  Ｈ２は配列番号１１であり、またはＣＤＲ  Ｈ１は配列番号１、８もしくは９であり、かつＣＤＲ  Ｈ３は配列番号３であり、またはＣＤＲ  Ｈ１は配列番号１、８もしくは９であり、かつＣＤＲ  Ｈ３は配列番号１２であり、またはＣＤＲ  Ｈ２は配列番号２、１０もしくは１１であり、かつＣＤＲ  Ｈ３は配列番号３であり、またはＣＤＲ  Ｈ２は配列番号２、１０もしくは１１であり、かつＣＤＲ  Ｈ３は配列番号１２である。
【００２５】
一実施例において、本開示による抗体分子は、可変領域を有する重鎖または重鎖断片を含み、例えば配列番号２９〜６８から独立して選択される１、２または３つのＣＤＲを含み、特にＣＤＲ  Ｈ１は配列番号２９〜３９から独立して選択される配列を有し、ＣＤＲ  Ｈ２は、配列番号４０〜５９から独立して選択される配列を有し、ＣＤＲ  Ｈ３は、配列番号６０〜６８から独立して選択される配列を有する。
【００２６】
一実施例において、可変領域を有する重鎖もしくは重鎖断片を含む本開示の抗ＣＤ２２抗体分子（例えば、抗体またはその結合断片）が提供され、前記可変領域は、配列番号２９、３０、４０、４１および６０から独立して選択される１、２または３つのＣＤＲを含み、例えば、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号２９または３０であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４０または４１であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６０である。
【００２７】
したがって、一実施形態においてＣＤＲ  Ｈ１は配列番号２９もしくは３０であり、かつＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４０もしくは４１であり、またはＣＤＲ  Ｈ１は配列番号２９もしくは３０であり、かつＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６０であり、またはＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４０もしくは４１であり、かつＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６０である。
【００２８】
したがって、一実施形態においてＣＤＲ  Ｈ１は配列番号２９であり、かつＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４０であり、またはＣＤＲ  Ｈ１は配列番号２９であり、かつＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６０であり、またはＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４０であり、かつＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６０である。
【００２９】
別の実施形態においてＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３０であり、かつＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４１であり、またはＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３０であり、かつＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６０であり、またはＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４１であり、かつＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６０である。
【００３０】
別の実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号２９であり、かつＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４１である。
【００３１】
一実施例において、可変領域を有する重鎖もしくは重鎖断片を含む本開示の抗ＣＤ２２抗体分子（例えば、抗体またはその結合断片）が提供され、前記可変領域は、配列番号３１、３２、４２、４３、６１および６２から独立して選択される１、２または３つのＣＤＲを含み、例えば、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３１または３２であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４２または４３であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６１または６２である。
【００３２】
したがって、一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３１もしくは３２であり、かつＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４２もしくは４３であり、またはＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３１もしくは３２であり、かつＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６１もしくは６２であり、またはＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４２もしくは４３であり、かつＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６１もしくは６２である。したがって、一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３１であり、かつＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４２であり、またはＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３１であり、かつＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６１であり、またはＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４２であり、かつＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６１である。一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３１であり、かつＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４３であり、またはＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３１であり、かつＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６２であり、またはＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４３であり、かつＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６１である。別の実施形態においてＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３２であり、かつＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４２であり、またはＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３２であり、かつＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６１であり、またはＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４２であり、かつＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６１である。別の実施形態においてＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３２であり、かつＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４３であり、またはＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３２であり、かつＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６２であり、またはＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４３であり、かつＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６２である。
【００３３】
一実施例において、可変領域を有する重鎖もしくは重鎖断片を含む本開示の抗ＣＤ２２抗体分子（例えば、抗体またはその結合断片）が提供され、前記可変領域は、配列番号３３、３４、４４、４５および６３から独立して選択される１、２または３つのＣＤＲを含み、例えば、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３である。
【００３４】
したがって、一実施形態においてＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３もしくは３４であり、かつＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４もしくは４５であり、またはＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３もしくは３４であり、かつＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、またはＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４もしくは４５であり、かつＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３である。  したがって、一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３であり、かつＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４であり、またはＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３であり、かつＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、またはＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４であり、かつＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３である。一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３であり、かつＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４５であり、またはＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３４であり、かつＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、またはＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４５であり、かつＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３である。
【００３５】
別の実施形態においてＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３４であり、かつＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４であり、またはＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３４であり、かつＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３である。一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３４であり、かつＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４５である。
【００３６】
一実施例において、可変領域を有する重鎖もしくは重鎖断片を含む本開示による抗ＣＤ２２抗体分子（例えば、抗体またはその結合断片）が提供され、前記可変領域は、配列番号３５、３６、４６、４７および６４から独立して選択される１、２または３つのＣＤＲを含み、例えば、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３５または３６であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４６または４７であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６４である。
【００３７】
したがって、一実施形態においてＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３５もしくは３６であり、かつＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４６もしくは４７であり、またはＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３５もしくは３６であり、かつＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６４であり、またはＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４６もしくは４７であり、かつＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６４である。したがって、一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３５であり、かつＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４６であり、またはＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３５であり、かつＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６４であり、またはＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４６であり、かつＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６４である。
【００３８】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３５であり、かつＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４７であり、またはＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３６であり、かつＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６４であり、またはＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４７であり、かつＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６４である。別の実施形態においてＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３６であり、かつＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４６であり、またはＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３６であり、かつＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４７である。
【００３９】
一実施例において、可変領域を有する重鎖もしくは重鎖断片を含む本開示による抗ＣＤ２２抗体分子（例えば、抗体またはその結合断片）が提供され、前記可変領域は、配列番号３７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、６５、６６および６７から独立して選択される１、２または３つのＣＤＲを含み、例えば、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３７であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４８、４９、５０、５１、５２または５３であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６５、６６または６７である。
【００４０】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３７であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４８、４９、５０、５１、５２または５３であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６５、６６または６７である。
【００４１】
したがって、一実施形態において、
ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３７であり、かつＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４８、４９、５０、５１、５２、または５３であり、または
ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３７であり、かつＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４８であり、または
ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３７であり、かつＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４９であり、または
ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３７であり、かつＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５０であり、または
ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３７であり、かつＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５１であり、または
ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３７であり、かつＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５２であり、または
ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３７であり、かつＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５３であり、または
ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３７であり、かつＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６５であり、または
ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３７であり、かつＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６６であり、または
ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３７であり、かつＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６７である。
【００４２】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４８、４９、５０、５１、５２、または５３であり、かつＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６５である。
【００４３】
したがって、一実施形態において、
ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４８であり、かつＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６５であり、または
ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４８であり、かつＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６６であり、または
ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４８であり、かつＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６７である。
【００４４】
一実施形態において、
ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４９であり、かつＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６５であり、または
ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４９であり、かつＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６６であり、または
ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４９であり、かつＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６７である。
【００４５】
別の実施形態において、
ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５０であり、かつＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６５であり、または
ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５０であり、かつＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６６であり、または
ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５０であり、かつＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６７である。
【００４６】
別の実施形態において、
ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５１であり、かつＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６５であり、または
ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５１であり、かつＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６６であり、または
ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５１であり、かつＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６７である。
【００４７】
別の実施形態において、
ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５２であり、かつＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６５であり、または
ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５２であり、かつＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６６であり、または
ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５２であり、かつＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６７である。
【００４８】
別の実施形態において、
ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５３であり、かつＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６５であり、または
ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５３であり、かつＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６６であり、または
ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５３であり、かつＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６７である。
【００４９】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３７であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４８であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６５である。
【００５０】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３７であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４９であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６５である。
【００５１】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３７であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５０であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６５である。
【００５２】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３７であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５１であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６５である。
【００５３】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３７であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５２であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６５である。
【００５４】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３７であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５３であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６５である。
【００５５】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３７であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４８であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６６である。
【００５６】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３７であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４９であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６６である。
【００５７】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３７であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５０であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６６である。
【００５８】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３７であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５１であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６６である。
【００５９】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３７であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５２であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６６である。
【００６０】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３７であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５３であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６６である。
【００６１】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３７であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４８であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６７である。
【００６２】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３７であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４９であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６７である。
【００６３】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３７であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５０であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６７である。
【００６４】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３７であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５１であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６７である。
【００６５】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３７であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５２であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６７である。
【００６６】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３７であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５３であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６７である。
【００６７】
一実施例において、可変領域を有する重鎖もしくは重鎖断片を含む本開示の抗ＣＤ２２抗体分子（例えば、抗体またはその結合断片）が提供され、前記可変領域は、配列番号３８、３９、５４、５５、５６、５７、５８、５９および６８から独立して選択される１、２または３つのＣＤＲを含み、例えば、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３８または３９であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５４、５５、５６、５７、５８または５９であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６８である。
【００６８】
一実施形態においてＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３８もしくは３９であり、かつＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５４、５５、５６、５７、５８、５９であり、またはＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３８もしくは３９であり、かつＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６８であり、またはＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５４、５５、５６、５７、５８、５９であり、かつＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６８である。
【００６９】
一実施形態において、
ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３８であり、かつＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５４であり、または
ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３８であり、かつＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５５であり、または
ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３８であり、かつＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５６であり、または
ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３８であり、かつＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５７であり、または
ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３８であり、かつＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５８であり、または
ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３８であり、かつＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５９である。
【００７０】
一実施形態において、
ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３９であり、かつＣＤＲ  Ｈ２は配列番号６８である。ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３９であり、かつＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５４であり、または
ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３９であり、かつＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５５であり、または
ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３９であり、かつＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５６であり、または
ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３９であり、かつＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５７であり、または
ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３９であり、かつＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５８であり、または
ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３９であり、かつＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５９である。
【００７１】
一実施形態において、
ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３９であり、かつＣＤＲ  Ｈ２は配列番号６８である。
【００７２】
一実施形態において、
ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５４であり、かつＣＤＲＨ３は配列番号６８であり、または
ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５５であり、かつＣＤＲＨ３は配列番号６８であり、または
ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５６であり、かつＣＤＲＨ３は配列番号６８であり、または
ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５７であり、かつＣＤＲＨ３は配列番号６８であり、または
ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５８であり、かつＣＤＲＨ３は配列番号６８であり、または
ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５９であり、かつＣＤＲＨ３は配列番号６８である。
【００７３】
一実施形態において、
ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３８であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５４であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６８である。
ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３８であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５５であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６８である。
ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３８であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５６であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６８である。
ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３８であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５７であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６８である。
ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３８であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５８であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６８である。
ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３８であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５９であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６８である。
【００７４】
一実施形態において、上に列挙した重鎖可変領域が、本明細書に列挙した軽鎖可変領域と組み合わせて用いられる。
【００７５】
一実施例において、本開示による抗体分子は、可変領域を有する軽鎖または軽鎖断片をさらに含み、例えば配列番号６９〜１０１から独立して選択される１、２または３つのＣＤＲを含み、特にＣＤＲ  Ｌ１は配列番号６９〜７４から独立して選択される配列を有し、ＣＤＲ  Ｌ２は、配列番号７５〜８０から独立して選択される配列を有し、ＣＤＲ  Ｌ３は、配列番号８１〜１０１から独立して選択される配列を有する。
【００７６】
一実施例において、本開示による抗体分子は、可変領域を有する軽鎖または軽鎖断片を含み、例えば配列番号６９、７５および８１から独立して選択される１、２または３つのＣＤＲを含み、特にＣＤＲ  Ｌ１は配列番号６９に示される配列を有し、ＣＤＲ  Ｌ２は、配列番号７５に示される配列を有し、ＣＤＲ  Ｌ３は、配列番号８１に示される配列を有する。
【００７７】
したがって、一実施形態において、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号６９であり、かつＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７５であり、またはＣＤＲ  Ｌ１は配列番号６９であり、かつＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８１であり、またはＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７５であり、かつＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８１である。
【００７８】
一実施例において、本開示による抗体分子は、可変領域を有する軽鎖または軽鎖断片を含み、例えば配列番号７０、７６および８２から独立して選択される１、２または３つのＣＤＲを含み、特にＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７０に示される配列を有し、ＣＤＲ  Ｌ２は、配列番号７６に示される配列を有し、ＣＤＲ  Ｌ３は、配列番号８２に示される配列を有する。
【００７９】
したがって、一実施形態において、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７０であり、かつＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７６であり、またはＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７０であり、かつＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８２であり、またはＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７６であり、かつＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８２である。
【００８０】
一実施例において、本開示による抗体分子は、可変領域を有する軽鎖または軽鎖断片を含み、例えば配列番号７１、７７、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７および９８から独立して選択される１、２または３つのＣＤＲを含み、特にＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１に示される配列を有し、ＣＤＲ  Ｌ２は、配列番号７７に示される配列を有し、ＣＤＲ  Ｌ３は、配列番号８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７および９８に示される配列を有する。
【００８１】
したがって、一実施形態において、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、かつＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、またはＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、かつＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７もしくは９８であり、またはＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、かつＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７もしくは９８である。
【００８２】
一実施形態において、
ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、かつＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８３であり、または
ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、かつＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８４であり、または
ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、かつＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８５であり、または
ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、かつＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８６であり、または
ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、かつＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８７であり、または
ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、かつＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８８であり、または
ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、かつＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８９であり、または
ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、かつＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９０であり、または
ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、かつＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９１であり、または
ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、かつＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９２であり、または
ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、かつＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９３であり、または
ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、かつＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９４であり、または
ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、かつＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９５であり、または
ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、かつＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９６であり、または
ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、かつＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９７であり、または
ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、かつＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９８である。
【００８３】
一実施形態において、
ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号７７であり、かつＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８３であり、または
ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号７７であり、かつＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８４であり、または
ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号７７であり、かつＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８５であり、または
ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号７７であり、かつＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８６であり、または
ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号７７であり、かつＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８７であり、または
ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号７７であり、かつＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８８であり、または
ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号７７であり、かつＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８９であり、または
ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号７７であり、かつＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９０であり、または
ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号７７であり、かつＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９１であり、または
ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号７７であり、かつＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９２であり、または
ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号７７であり、かつＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９３であり、または
ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号７７であり、かつＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９４であり、または
ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号７７であり、かつＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９５であり、または
ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号７７であり、かつＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９６であり、または
ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号７７であり、かつＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９７であり、または
ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号７７であり、かつＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９８である。
【００８４】
一実施形態において、
ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号７７であり、かつＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８３であり、または
ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号７７であり、かつＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８４であり、または
ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号７７であり、かつＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８５であり、または
ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号７７であり、かつＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８６であり、または
ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号７７であり、かつＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８７であり、または
ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号７７であり、かつＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８８であり、または
ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号７７であり、かつＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８９であり、または
ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号７７であり、かつＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９０であり、または
ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号７７であり、かつＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９１であり、または
ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号７７であり、かつＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９２であり、または
ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号７７であり、かつＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９３であり、または
ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号７７であり、かつＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９４であり、または
ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号７７であり、かつＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９５であり、または
ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号７７であり、かつＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９６であり、または
ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号７７であり、かつＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９７であり、または
ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号７７であり、かつＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９８である。
【００８５】
一実施例において、本開示による抗体分子は、可変領域を有する軽鎖または軽鎖断片を含み、例えば配列番号７２、７８および９９から独立して選択される１、２または３つのＣＤＲを含み、特にＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７２に示される配列を有し、ＣＤＲ  Ｌ２は、配列番号７８に示される配列を有し、ＣＤＲ  Ｌ３は、配列番号９９に示される配列を有する。
【００８６】
したがって、一実施形態において、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７２であり、かつＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７８であり、またはＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７２であり、かつＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９９であり、またはＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７８であり、かつＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９９である。
【００８７】
一実施例において、本開示による抗体分子は、可変領域を有する軽鎖または軽鎖断片を含み、例えば配列番号７３、７９および１００から独立して選択される１、２または３つのＣＤＲを含み、特にＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７３に示される配列を有し、ＣＤＲ  Ｌ２は、配列番号７９に示される配列を有し、ＣＤＲ  Ｌ３は、配列番号１００に示される配列を有する。
【００８８】
したがって、一実施形態において、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７３であり、かつＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７９であり、またはＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７３であり、かつＣＤＲ  Ｌ３は配列番号１００であり、またはＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７９であり、かつＣＤＲ  Ｌ３は配列番号１００である。
【００８９】
一実施例において、本開示による抗体分子は、可変領域を有する軽鎖または軽鎖断片を含み、例えば配列番号７４、８０および１０１から独立して選択される１、２または３つのＣＤＲを含み、特にＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７４に示される配列を有し、ＣＤＲ  Ｌ２は、配列番号８０に示される配列を有し、ＣＤＲ  Ｌ３は、配列番号１０１に示される配列を有する。
【００９０】
したがって、一実施形態において、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７４であり、かつＣＤＲ  Ｌ２は配列番号８０であり、またはＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７４であり、かつＣＤＲ  Ｌ３は配列番号１０１であり、またはＣＤＲ  Ｌ２は配列番号８０であり、かつＣＤＲ  Ｌ３は配列番号１０１である。
【００９１】
一実施例において、本開示による抗体分子（抗体または結合断片など）は、配列番号２９〜１０１から選択されるＣＤＲ配列を含み、例えば、ＣＤＲ  Ｈ１は、配列番号２９〜３９から独立して選択され、ＣＤＲ  Ｈ２は、配列番号４０〜５９から独立して選択され、ＣＤＲ  Ｈ３は、配列番号６０〜６８から独立して選択され、ＣＤＲ  Ｌ１は、配列番号６９〜７４から独立して選択され、ＣＤＲ  Ｌ２は、配列番号７５〜８０から独立して選択され、およびＣＤＲ  Ｌ３は、配列番号８１〜１０１から独立して選択される。
【００９２】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号２９または３０であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４０または４１であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６０であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号６９であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７５であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８１である。
【００９３】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号２９であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４０または４１であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６０であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号６９であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７５であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８１である。
【００９４】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３０であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４０または４１であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６０であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号６９であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７５であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８１である。
【００９５】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号２９または３０であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４０であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６０であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号６９であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７５であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８１である。
【００９６】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号２９または３０であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４１であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６０であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号６９であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７５であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８１である。
【００９７】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号２９であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４０であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６０であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号６９であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７５であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８１である。
【００９８】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号２９であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４１であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６０であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号６９であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７５であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８１である。
【００９９】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３０であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４０であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６０であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号６９であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７５であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８１である。
【０１００】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３０であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４１であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６０であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号６９であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７５であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８１である。
【０１０１】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３１または３２であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４２または４３であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６１または６２であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７０であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７６であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８２である。
【０１０２】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３１であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４２または４３であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６１または６２であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７０であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７６であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８２である。
【０１０３】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３１であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４２であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６１または６２であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７０であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７６であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８２である。
【０１０４】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３１であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４３であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６１または６２であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７０であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７６であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８２である。
【０１０５】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３１であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４２または４３であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６１であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７０であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７６であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８２である。
【０１０６】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３１であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４２または４３であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６２であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７０であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７６であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８２である。
【０１０７】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３１であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４２であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６１であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７０であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７６であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８２である。
【０１０８】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３１であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４３であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６１であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７０であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７６であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８２である。
【０１０９】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３１であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４２であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６２であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７０であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７６であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８２である。
【０１１０】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３１であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４３であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６２であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７０であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７６であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８２である。
【０１１１】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３２であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４２または４３であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６１または６２であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７０であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７６であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８２である。
【０１１２】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３２であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４２であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６１または６２であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７０であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７６であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８２である。
【０１１３】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３２であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４３であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６１または６２であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７０であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７６であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８２である。
【０１１４】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３２であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４２または４３であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６１であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７０であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７６であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８２である。
【０１１５】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３２であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４２または４３であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６２であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７０であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７６であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８２である。
【０１１６】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３２であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４２であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６１であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７０であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７６であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８２である。
【０１１７】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３２であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４３であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６１であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７０であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７６であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８２である。
【０１１８】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３２であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４２であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６２であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７０であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７６であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８２である。
【０１１９】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３２であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４３であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６２であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７０であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７６であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８２である。
【０１２０】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３または３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４または４５であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７または９８である。
【０１２１】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４または４５であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７または９８である。
【０１２２】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３または３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７または９８である。
【０１２３】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４または４５であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７または９８である。
【０１２４】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３または３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７または９８である。
【０１２５】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３または３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４５であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７または９８である。
【０１２６】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４または４５であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８３である。
【０１２７】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３または３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８３である。
【０１２８】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４または４５であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８３である。
【０１２９】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３または３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８３である。
【０１３０】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３または３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４５であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８３である。
【０１３１】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４または４５であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８４である。
【０１３２】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３または３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８４である。
【０１３３】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４または４５であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８４である。
【０１３４】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３または３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８４である。
【０１３５】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３または３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４５であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８４である。
【０１３６】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４または４５であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８５である。
【０１３７】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３または３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８５である。
【０１３８】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４または４５であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８５である。
【０１３９】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３または３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８５である。
【０１４０】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３または３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４５であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８５である。
【０１４１】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４または４５であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８６である。
【０１４２】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３または３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８６である。
【０１４３】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４または４５であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８６である。
【０１４４】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３または３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８６である。
【０１４５】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３または３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４５であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８６である。
【０１４６】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４または４５であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８７である。
【０１４７】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３または３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８７である。
【０１４８】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４または４５であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８７である。
【０１４９】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３または３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８７である。
【０１５０】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３または３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４５であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８７である。
【０１５１】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４または４５であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８８である。
【０１５２】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３または３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８８である。
【０１５３】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４または４５であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８８である。
【０１５４】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３または３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８８である。
【０１５５】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３または３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４５であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８８である。
【０１５６】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４または４５であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８９である。
【０１５７】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３または３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８９である。
【０１５８】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４または４５であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８９である。
【０１５９】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３または３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８９である。
【０１６０】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３または３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４５であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号８９である。
【０１６１】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４または４５であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９０である。
【０１６２】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３または３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９０である。
【０１６３】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４または４５であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９０である。
【０１６４】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３または３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９０である。
【０１６５】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３または３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４５であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９０である。
【０１６６】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４または４５であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９１である。
【０１６７】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３または３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９１である。
【０１６８】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４または４５であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９１である。
【０１６９】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３または３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９１である。
【０１７０】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３または３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４５であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９１である。
【０１７１】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４または４５であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９２である。
【０１７２】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３または３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９２である。
【０１７３】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４または４５であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９２である。
【０１７４】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３または３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９２である。
【０１７５】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３または３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４５であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９２である。
【０１７６】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４または４５であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９３である。
【０１７７】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３または３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９３である。
【０１７８】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４または４５であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９３である。
【０１７９】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３または３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９３である。
【０１８０】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３または３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４５であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９３である。
【０１８１】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４または４５であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９４である。
【０１８２】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３または３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９４である。
【０１８３】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４または４５であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９４である。
【０１８４】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３または３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９４である。
【０１８５】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３または３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４５であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９４である。
【０１８６】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４または４５であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９５である。
【０１８７】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３または３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９５である。
【０１８８】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４または４５であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９５である。
【０１８９】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３または３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９５である。
【０１９０】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３または３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４５であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９５である。
【０１９１】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４または４５であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９６である。
【０１９２】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３または３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９６である。
【０１９３】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４または４５であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９６である。
【０１９４】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３または３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９６である。
【０１９５】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３または３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４５であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９６である。
【０１９６】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４または４５であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９７である。
【０１９７】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３または３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９７である。
【０１９８】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４または４５であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９７である。
【０１９９】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３または３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９７である。
【０２００】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３または３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４５であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９７である。
【０２０１】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４または４５であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９８である。
【０２０２】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３または３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９８である。
【０２０３】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４または４５であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９８である。
【０２０４】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３または３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４４であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９８である。
【０２０５】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３３または３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４５であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９８である。
【０２０６】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３５または３６であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４６または４７であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６４であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７２であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７８であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９９である。
【０２０７】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３５であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４６または４７であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６４であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７２であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７８であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９９である。
【０２０８】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３６であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４６または４７であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６４であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７２であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７８であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９９である。
【０２０９】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３５または３６であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４６であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６４であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７２であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７８であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９９である。
【０２１０】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３５または３６であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４７であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６４であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７２であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７８であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９９である。
【０２１１】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３５であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４６であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６４であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７２であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７８であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９９である。
【０２１２】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３６であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４６であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６４であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７２であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７８であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９９である。
【０２１３】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３６であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４７であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６４であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７２であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７８であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号９９である。
【０２１４】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３７であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４８、４９、５０、５１、５２または５３であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６５、６６または６７であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７３であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７９であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号１００である。
【０２１５】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３７であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４８であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６５、６６または６７であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７３であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７９であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号１００である。
【０２１６】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３７であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４９であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６５、６６または６７であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７３であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７９であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号１００である。
【０２１７】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３７であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５０であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６５、６６または６７であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７３であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７９であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号１００である。
【０２１８】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３７であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５１であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６５、６６または６７であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７３であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７９であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号１００である。
【０２１９】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３７であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５２であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６５、６６または６７であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７３であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７９であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号１００である。
【０２２０】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３７であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５３であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６５、６６または６７であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７３であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７９であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号１００である。
【０２２１】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３７であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４８であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６５であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７３であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７９であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号１００である。
【０２２２】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３７であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４９であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６５であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７３であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７９であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号１００である。
【０２２３】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３７であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５０であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６５であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７３であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７９であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号１００である。
【０２２４】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３７であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５１であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６５であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７３であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７９であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号１００である。
【０２２５】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３７であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５２であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６５であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７３であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７９であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号１００である。
【０２２６】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３７であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５３であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６５であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７３であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７９であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号１００である。
【０２２７】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３７であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４８であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６６であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７３であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７９であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号１００である。
【０２２８】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３７であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４９であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６６であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７３であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７９であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号１００である。
【０２２９】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３７であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５０であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６６であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７３であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７９であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号１００である。
【０２３０】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３７であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５１であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６６であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７３であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７９であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号１００である。
【０２３１】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３７であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５２であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６６であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７３であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７９であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号１００である。
【０２３２】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３７であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５３であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６６であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７３であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７９であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号１００である。
【０２３３】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３７であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４８であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６７であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７３であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７９であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号１００である。
【０２３４】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３７であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号４９であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６７であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７３であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７９であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号１００である。
【０２３５】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３７であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５０であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６７であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７３であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７９であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号１００である。
【０２３６】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３７であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５１であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６７であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７３であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７９であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号１００である。
【０２３７】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３７であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５２であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６７であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７３であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７９であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号１００である。
【０２３８】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３７であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５３であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６７であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７３であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号７９であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号１００である。
【０２３９】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３８または３９であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５４、５５、５６、５７、５８または５９であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６８であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７４であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号８０であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号１０１である。
【０２４０】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３８であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５４、５５、５６、５７、５８または５９であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６８であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７４であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号８０であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号１０１である。
【０２４１】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３９であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５４、５５、５６、５７、５８または５９であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６８であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７４であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号８０であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号１０１である。一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３８であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５４であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６８であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７４であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号８０であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号１０１である。
【０２４２】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３９であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５４であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６８であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７４であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号８０であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号１０１である。
【０２４３】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３８であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５５であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６８であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７４であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号８０であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号１０１である。
【０２４４】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３９であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５５であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６８であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７４であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号８０であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号１０１である。
【０２４５】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３８であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５６であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６８であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７４であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号８０であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号１０１である。
【０２４６】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３９であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５６であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６８であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７４であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号８０であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号１０１である。
【０２４７】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３８であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５７であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６８であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７４であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号８０であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号１０１である。
【０２４８】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３９であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５７であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６８であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７４であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号８０であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号１０１である。
【０２４９】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３８であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５８であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６８であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７４であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号８０であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号１０１である。
【０２５０】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３９であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５８であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６８であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７４であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号８０であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号１０１である。
【０２５１】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３８であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５９であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６８であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７４であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号８０であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号１０１である。
【０２５２】
一実施形態において、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号３９であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号５９であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号６８であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号７４であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号８０であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号１０１である。
【０２５３】
独立した一態様において、本開示は、配列番号６２、７１、８０、９０の配列、およびこれらのいずれか１つと少なくとも９５％同一または類似の配列（例えば、９６、９７、９８、９９％同一または類似の配列）を含む可変重鎖ドメインを提供する。
【０２５４】
独立した一態様において、配列番号１０２、１１１、１２２、１３１、１４０の配列、およびこれらのいずれか１つと少なくとも９５％同一または類似の配列（例えば、９６、９７、９８、９９％同一または類似の配列）を含む可変軽鎖領域を提供する。
【０２５５】
独立した一態様において、本開示は、配列番号１０４、１１３、１２４、１３３、１４２の配列、およびこれらのいずれか１つと少なくとも９５％同一または類似の配列（例えば、９６、９７、９８、９９％同一または類似の配列）を含む可変重鎖ドメイン、ならびに配列番号６０、６９、７８、８８の配列、およびこれらのいずれか１つと少なくとも９５％同一または類似の配列（例えば、９６、９７、９８、９９％同一または類似の配列）を含む可変軽鎖領域を提供する。
【０２５６】
一実施形態において、ＶＨおよびＶＬ対は、
・配列番号１０２またはこれと少なくとも９５％同一または類似の配列、および配列番号１０４またはこれと少なくとも９５％同一または類似の配列
・配列番号１１１またはこれと少なくとも９５％同一または類似の配列、および配列番号１１３またはこれと少なくとも９５％同一または類似の配列
・配列番号１２２またはこれと少なくとも９５％同一または類似の配列、および配列番号１２４またはこれと少なくとも９５％同一または類似の配列、ならびに
・配列番号１３１またはこれと少なくとも９５％同一または類似の配列、および配列番号１３３またはこれと少なくとも９５％同一または類似の配列
・配列番号１４０またはこれと少なくとも９５％同一または類似の配列、および配列番号１４２またはこれと少なくとも９５％同一または類似の配列
から選択される。
【０２５７】
一実施形態において、本明細書に開示される非ヒト可変ドメインのヒト化型が提供される。
【０２５８】
文脈が他のことを示さない限り、本明細書ではＫａｂａｔのナンバリングを用いる。
【０２５９】
一実施形態において、本開示による抗体分子は、ヒト化され、本明細書に記載の１または複数のＣＤＲまたはその変異体が組み込まれる。
【０２６０】
一実施形態において、本開示の抗体分子などの構築物に用いられる重鎖可変領域ヒトフレームワークは、ＩＧＨＶ３−７、ＩＧＨＶ３−９、ＩＧＨＶ３−２１、ＩＧＨＶ３−３３、ＩＧＨＶ３−６６、ＩＧＨＶ４−３８−２、ＩＧＨＶ４−４、ＩＧＨＶ４−５９およびこれらのいずれか１つの変異体を含む群から選択され、この変異体では１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれ以上のアミノ酸がシステイン以外のアミノ酸で置換され、例えば、元のウサギ目ドナー抗体の対応する位置のドナー残基で置換される。例えば、本明細書で提供されるウサギドナー抗体配列を参照されたい。
【０２６１】
一実施形態において、本開示による抗体分子がヒト化される。
【０２６２】
典型的には、ヒトフレームワークは、ＪＨ４またはＪＨ２  Ｊ領域などの適切なＪ領域配列をさらに含む。
【０２６３】
一実施形態において、本開示の抗体分子に用いられるヒトＶＨフレームワークは、１１、２３、２４、３７、４７、４８、４９、６７、７１、７３、７６、７８および９４位を含む群から選択される少なくとも１つの位置にアミノ酸置換を含み、例えば、ヒトフレームワーク中の元のアミノ酸がシステイン以外の別のアミノ酸で置換され、特に、ドナー抗体のフレームワーク中の対応する位置の残基で置換されている。
【０２６４】
一実施形態において、少なくとも７３および７６位で置換が行われる。
【０２６５】
一実施形態において、少なくとも７３、７６および７８位で置換が行われる。
【０２６６】
一実施形態において、少なくとも６７、７３、７６および７８位で置換が行われる。
【０２６７】
一実施形態において、少なくとも４８、６７、７３、７６および７８位で置換が行われる。
【０２６８】
一実施形態において、少なくとも２４、４８、６７、７３、７６および７８位で置換が行われる。
【０２６９】
一実施形態において、ＶＨフレームワークがＩＧＨＶ３型である場合、置換は、１１、２３、２４、４７、４８、４９、６７、７１、７３、７６、７８および９４位から選択される少なくとも１つの位置、少なくとも２つの位置、少なくとも３つの位置または少なくとも４つの位置（通常は５または６つの位置）、例えば７１、７３、７６および７８位（特にＩＧＨＶ３−７に適している）、または４７、４８、４９、７１、７３、７６、７８および９４位（特にＩＧＨＶ３−９に適している）、または４８、４９、７１、７３、７６および７８位（特にＩＧＨＶ３−２１に適している）、または１１（場合により２３および２４）、４８、７１、７３、７６および７８位（特にＩＧＨＶ３−３３に適している）、または４８、４９、６７、７１、７３、７６および７８位（特にＩＧＨＶ３−６６に適している）で行うことができる。
【０２７０】
一実施形態では、ＶＨフレームワークがＩＧＨＶ４型である場合、置換は少なくとも１つの位置、少なくとも２つの位置、少なくとも３つの位置、少なくとも４つの位置、５つまたはそれ以上の位置、例えば２３、２４、３７、４７、４８、４９、６７、７１、７３、７６および７８位から選択される６つの位置、例えば２４、３７、（場合により４７）、（場合により４９）、６７、７１、７３、７６および７８位（特にＩＧＨＶ４−３８−２に適切である）、または２４、（場合により４８）、（場合により４９）、（場合により６７）、７１、７３、７６および７８位（特にＩＧＨＶ４−４に滴している）、または２３、２４、３７、４９、６７、７１、７３、７６および７８位（特にＩＧＨＶ４−５９に滴している）で行うことができる。
【０２７１】
一実施形態において、置換後の１１位はロイシンである。
【０２７２】
一実施形態において、置換後の２３位はリジンである。
【０２７３】
一実施形態において、置換後の２４位はアラニンまたはグリシンである。
【０２７４】
一実施形態において、置換後の３７位はバリンである。
【０２７５】
一実施形態において、置換後の４７位はロイシンである。
【０２７６】
一実施形態において、置換後の４８位は、イソロイシン、バリンまたはセリンである。
【０２７７】
一実施形態において、置換後の４９位はアラニンまたはグリシンである。
【０２７８】
一実施形態において、置換後の６７位はフェニルアラニンまたはバリンである。
【０２７９】
一実施形態において、置換後の７１位はリジンまたはアスパラギンである。
【０２８０】
一実施形態において、置換後の７３位はセリンである。
【０２８１】
一実施形態において、置換後の７６位はスレオニンである。
【０２８２】
一実施形態において、置換後の７８位はバリンである。
【０２８３】
一実施形態において、置換後の９４位はアルギニンである。
【０２８４】
ヒトＶＨフレークムワークが１位がグルタミンのヒトフレームワークである一実施形態において、グルタミンをグルタミン酸（Ｅ１）で置換して、均質な生成物の発現および精製を得ており、抗体および抗体断片のＮ末端でグルタミンからピログルタミン酸への変換が広く報告されている。
【０２８５】
これらの置換の１または複数を組み合わせて、本発明の抗体分子に使用するためのヒト化ＶＨ領域を作製可能であることが理解されよう。
【０２８６】
本発明の独立した一態様において、本明細書に開示の任意の適切な配列、例えば、配列番号１０７、１０８、１０９、１１０、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２７、１２８、１２９、１３０、１３６、１３７、１３８、１３９、１４５、１４６、１４７、１４８、１５４、１５５、１５６、１５７、およびこれらと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％同一または類似の配列（例えば、９６、９７、９８、または９９％類似または同一の配列）から独立して選択される配列を含むヒト化ＶＨ可変ドメインが提供される。
【０２８７】
一実施形態において、ヒト化ＶＨ可変ドメインは、本明細書に開示の任意の適切な配列を含み、例えば、配列番号１０７、１０８、１０９、１１０、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２７、１２８、１２９、１３０、１３６、１３７、１３８、１３９、１４５、１４６、１４７、１４８、１５４、１５５、１５６および１５７から独立して選択される配列を含む。
【０２８８】
一実施形態において、本開示のヒト化抗体分子に用いられる軽鎖可変領域ヒトフレームワークは、ＩＧＫＶ１−５、ＩＧＫＶ１−９、ＩＧＫＶ１Ｄ−１３およびこれらのいずれか１つの変異体を含む群から選択され、この変異体では、１、２、３、４または５個のアミノ酸が、システイン以外のアミノ酸で置換され、例えば元のウサギ目ドナー抗体の対応する位置のドナー残基で置換されている。例えば、本明細書で提供されるドナーウサギ抗体配列を参照されたい。典型的には、ヒトフレームワークは、ＪＫ４  Ｊ領域などの適切なＪ領域をさらに含む。
【０２８９】
一実施形態において、本開示の抗体分子に用いられるヒトＶＬフレームワークは、１、２、３、３６、６３、６５、６６、７０および７１位を含む群から選択される少なくとも１つの位置にアミノ酸置換を含み、例えば、フレームワーク中の元のアミノ酸がシステイン以外の別のアミノ酸で置換され、特に、ドナー抗体のフレームワーク中の対応する位置の残基で置換されている。
【０２９０】
一実施形態において、少なくとも３および７０位で置換が行われる。
【０２９１】
一実施形態において、少なくとも３および７１位で置換が行われる。
【０２９２】
一実施形態において、少なくとも２、３、および７０位で置換が行われる。
【０２９３】
一実施形態において、少なくとも１、３および７１位で置換が行われる。
【０２９４】
一実施形態において、少なくとも１、３、７０および７１位で置換が行われる。
【０２９５】
一実施形態において、ＩＧＫＶ１−５ヒトフレームワークが用いられる場合、１または複数の置換が、１、３、３６、６３、６５、６６、７０および７１位、例えば３および７０位、または３および７１位、または１、３および７０位、または３、３６、６３、６５、６６および７１位で行われ得る。
【０２９６】
一実施形態において、ＩＧＫＶ１−９ヒトフレームワークが用いられる場合、１または複数、２以上または３つの置換が、１、２および３位から独立して選択される位置で行われ得る。
【０２９７】
一実施形態において、ＩＧＫＶ１Ｄ−１３ヒトフレームワークが用いられる場合、１つまたは２つまたは３つの置換が、２および３位から独立して選択される位置で行われる。
【０２９８】
一実施形態において、置換後のＶＬフレームワークの１位はアラニンである。
【０２９９】
一実施形態において、置換後のＶＬフレームワークの２位はフェニルアラニンまたはアラニンである。
【０３００】
一実施形態において、置換後のＶＬフレームワークの３位はバリンまたはグルタミン酸である。
【０３０１】
一実施形態において、置換後のＶＬフレームワークの３６位はフェニルアラニンである。
【０３０２】
一実施形態において、置換後のＶＬフレームワークの６３位はリジンである。
【０３０３】
一実施形態において、置換後のＶＬフレームワークの６５位はアスパラギン酸である。
【０３０４】
一実施形態において、置換後のＶＬフレームワークの６６位はアルギニンである。
【０３０５】
一実施形態において、置換後のＶＬフレームワークの７０位はグルタミンである。
【０３０６】
一実施形態において、置換後のＶＬフレームワークの７１位はチロシンである。
【０３０７】
これらの置換の１または複数を組み合わせて、本発明の抗体分子に使用するためのヒト化ＶＬ領域を作製可能であることが理解されよう。
【０３０８】
独立した一態様において、配列番号１０６、１１５、１２６、１３５、１４４、１５３およびこれらと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％同一または類似（例えば、９６、９７、９８、または９９％同一または類似）の配列から独立して選択される配列を含むヒト化ＶＬ可変ドメインが提供される。
【０３０９】
一実施形態において、ヒト化ＶＬ可変ドメインは、配列番号１０６、１１５、１２６、１３５、１４４および１５３から独立して選択される配列を含む。
【０３１０】
一実施形態において、配列番号１０７、１０８、１０９、１１０から独立して選択されるＶＨ、ならびに配列番号１０６で示される配列を有するＶＬを含む抗体分子が提供される。
【０３１１】
一実施形態において、配列番号１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１から独立して選択されるＶＨ、ならびに配列番号１１５で示される配列を有するＶＬを含む抗体分子が提供される。
【０３１２】
一実施形態において、配列番号１２７、１２８、１２９、１３０から独立して選択されるＶＨ、ならびに配列番号１２６で示される配列を有するＶＬを含む抗体分子が提供される。
【０３１３】
一実施形態において、配列番号１３６、１３７、１３８、１３９から独立して選択されるＶＨ、ならびに配列番号１３５で示される配列を有するＶＬを含む抗体分子が提供される。
【０３１４】
一実施形態において、配列番号１４５、１４６、１４７、１４８から独立して選択されるＶＨ、ならびに配列番号１４４で示される配列を有するＶＬを含む抗体分子が提供される。
【０３１５】
一実施形態において、配列番号１５４、１５５、１５６、１５７から独立して選択されるＶＨ、ならびに配列番号１５３で示される配列を有するＶＬを含む抗体分子が提供される。
【０３１６】
一実施形態において、本開示の抗体分子は完全長抗体である。
【０３１７】
一実施形態において、本開示の抗体分子は、ＦａｂまたはＦａｂ’断片である。
【０３１８】
一実施形態において、本開示の抗体分子はｓｃＦｖである。
【０３１９】
一実施形態において、本開示の抗体分子は、多重特異性、例えば二重特異性または三重特異性である。
【０３２０】
一実施形態において、本開示の多重特異性抗体分子（例えば、二重特異性抗体分子）は、ＣＤ２２に特異的な結合ドメインに加えて、ＣＤ７９に特異的な結合ドメインを含み、例えば、１、２、３、４、５または６つの本明細書に開示の抗ＣＤ７９  ＣＤＲまたはその変異体、例えば、本明細書に開示の可変ドメインまたは可変ドメイン対、特にヒト化された可変ドメインまたは可変ドメイン対を含む。
【０３２１】
多重特異性（二重特異性など）フォーマットにおける本開示による組合せは、機能的インビトロアッセイ、例えば以下のいずれか１つによって測定されるＢ細胞シグナル伝達の阻害において興味深い生物活性を示す：Ｂ細胞上のＣＤ８６、ＣＤ７１および／またはＣＤ４０の発現の阻害に加えて、Ａｋｔ  Ｓ４７３のリン酸化の阻害、Ｐ３８のリン酸化の阻害、およびＩｋＢのＰＬＣγ２  Ｙ７５９阻害。同じレベルの活性は、個々の成分単独または混合物中に提供される成分について明らかではない。しかし、この活性は、ＣＤ２２およびＣＤ７９に対して特異性を有する二重特異性構築物が提供される場合に明らかである。
【０３２２】
これらのアッセイで観察される特定のＢ細胞機能の阻害は、ＣＤ２２に特異的な結合ドメインおよびＣＤ７９に特異的な結合ドメインを含む本発明の多重特異性分子を使用して、Ｂ細胞機能を改変し、例えば、Ｂ細胞の枯渇に代わる治療選択肢を提供することができることを示唆している。
【０３２３】
一実施形態において、本発明の多重特異性分子の１または複数の結合ドメインは、それぞれ独立して、関連する抗原に特異的な１または２つ（例えば２つ）の抗体可変ドメイン（ＣＤ２２に特異的な少なくとも１つの結合ドメイン、およびＣＤ７９または該分子が少なくとも三重特異性である場合さらなる抗原に特異的なさらなる結合ドメインなど）を含む。
【０３２４】
一実施形態において、本開示の抗体分子はＣＤ２２に特異的である。
【０３２５】
一実施形態において、本開示の分子に用いられる抗体またはその結合断片は、ＣＤ７９ａに特異的である。
【０３２６】
一実施形態において、本開示の分子に用いられる抗体またはその結合断片は、ＣＤ７９ｂに特異的である。
【０３２７】
一実施形態において、本開示の分子に用いられる抗体またはその結合断片は、ＣＤ７９複合体に特異的であり、すなわち、複合体中に存在するエピトープ、例えばＣＤ７９ａとＣＤ７９ｂとの間の相互作用を含むエピトープを認識し、それに対して特異的である。
【０３２８】
一実施形態において、結合ドメインがＣＤ７９ａまたはＣＤ７９ｂに特異的であった場合、この結合ドメインは、複合体形態の場合もＣＤ７９ａまたはＣＤ７９ｂに結合することが理解されるであろう。
【０３２９】
１つの結合ドメインまたはそれぞれの結合ドメイン中に２つの可変領域が存在する場合、この２つの可変領域は、一般に、関連する抗原に対する特異性を提供するために協同的に機能し、例えば、これらは、同族対であるか、または親和性成熟して、このドメインが特定の抗原に特異的であるように適切な親和性を提供する。典型的には、これらは重鎖および軽鎖可変領域対（ＶＨ／ＶＬ対）である。
【０３３０】
一実施形態において、本開示の分子は二重特異性である。
【０３３１】
一実施形態において、本開示の分子は三重特異性であり、例えば第３の結合ドメインが血清アルブミン、例えばヒト血清アルブミンに特異的である。
【０３３２】
一実施形態において、本開示の分子はＣＤ７９およびＣＤ２２に対して単一特異性である、すなわち、該分子はＣＤ７９に結合する１つの結合ドメインおよびＣＤ２２に結合する１つの結合ドメインのみを含む。
【０３３３】
一実施形態において、本開示の多重特異性分子は一本鎖である。
【０３３４】
一実施形態において、本開示の多重特異性分子は、重鎖およびさらに軽鎖も含む。一実施例において、本明細書において用いる場合、重鎖および軽鎖の対形成は二量体とは呼ばれず、特に、一実施形態において、本開示の分子が、抗体、単位／断片または成分の二量体などの多量体を含まない場合、二量体とは呼ばれない。
【０３３５】
一実施形態において、分子は、ＣＤ２２に対する１以下の結合部位、およびＣＤ７９に対する１以下の結合部位を含む。
【０３３６】
本明細書において明示的に開示される抗体または結合断片と同じエピトープに結合する抗体または結合断片もまた提供される。
【０３３７】
一実施形態において、本開示の抗体分子または本明細書において明示的に開示される結合断片をヒトＣＤ２２に対して交差ブロックするか、または前記抗体によってヒトＣＤ２２との結合から交差ブロックされる抗体または結合断片が提供される。
【０３３８】
この開示はまた、本開示の抗体分子を含む医薬組成物にも及ぶ。
【０３３９】
本開示はまた、治療に使用するための多重特異性分子に含まれる任意の抗体フォーマットに用いられる、新規なＣＤ２２抗体を提供する。
【０３４０】
本開示はまた、治療有効量の抗体分子またはこれを含む医薬製剤を投与することを含む、患者を治療する方法を提供する。
【０３４１】
本開示はまた、本明細書に開示される障害の治療用医薬品の製造のための、本開示による抗体分子またはこれを含む医薬製剤の使用にも及ぶ。
【０３４２】
本開示はまた、非ヒトＣＤＲの移植に適した、本明細書中に開示される新規なフレームワークにも及ぶ。それは対応するＣＤＲのないアミノ酸変化を伴うフレームワークである。
【図面の簡単な説明】
【０３４３】
【図１】図１は、ＣＤ２２およびＣＤ７９ｂに対する特異性を有する抗体の二重特異性および二価の組合せに対する、リン酸化Ａｋｔ阻害の相対効力の棒グラフである。
【図２】図２は、ＣＤ２２およびＣＤ７９ｂに対する特異性を有する抗体の二重特異性および二価の組合せに対する、リン酸化ＰＬＣγ２阻害の相対効力の棒グラフである。
【図３】図３は、ＣＤ２２およびＣＤ７９ｂに対する特異性を有する抗体の二重特異性および二価の組合せに対する、ＣＤ８６発現阻害の相対効力の棒グラフである。
【図４】図４は、ＣＤ２２およびＣＤ７９ｂに対する特異性を有する抗体の二重特異性、二価または混合物に対する、リン酸化Ａｋｔ阻害の相対効力の棒グラフである。
【図５】図５は、ＣＤ２２およびＣＤ７９ｂに対する特異性を有する抗体の二重特異性、二価または混合物に対する、リン酸化ＰＬＣγ２阻害の相対効力の棒グラフである。
【図６】図６は、抗ＩｇＭ刺激Ｂ細胞における総ＩｋＢレベルに対する、ＣＤ２２およびＣＤ７９ｂの二重特異性組合せの効果の滴定を示すグラフである。
【図７】図７は、抗ＩｇＭ刺激Ｂ細胞におけるＣＤ８６発現に対する、ＣＤ２２およびＣＤ７９ｂの二重特異性組合せの効果の滴定を示すグラフである。
【図８】図８は、異なるＶ領域を有する、ＣＤ２２およびＣＤ７９ｂに対する特異性を有する二重特異性タンパク質に対する、リン酸化ＰＬＣγ２阻害のグラフである。
【図９】図９は、ＣｈａｎおよびＣａｒｔｅｒ、Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １０巻、２０１０年５月、３０１による抽出物であり、特定の抗体フォーマットを示している
【図１０】図１０は、抗原グリッドの交差特異性に関するデータを示す表である。抗原２＝ＣＤ７９ｂおよび抗原３＝ＣＤ２２。値は、Ｓｙｋのリン酸化の阻害パーセンテージ（活性化に対する負値）であり、評価された複数のＶ領域の組合せの平均を表す。
【図１１】図１１は、抗原グリッドの交差特異性に関するデータを示す表である。抗原２＝ＣＤ７９ｂおよび抗原３＝ＣＤ２２。値は、ＰＬＣγ２のリン酸化の阻害パーセンテージ（活性化に対する負値）であり、評価された複数のＶ領域の組合せの平均を表す。
【図１２】図１２は、抗原グリッドの交差特異性に関するデータを示す表である。抗原２＝ＣＤ７９ｂおよび抗原３＝ＣＤ２２。値は、ＡＫＴのリン酸化の阻害パーセンテージ（活性化に対する負値）であり、評価された複数のＶ領域の組合せの平均を表す。
【図１３】図１３は、Ｆａｂ−ＸのＣＤ７９ｂ特異性とＦａｂ−ＹのＣＤ２２特異性とを組み合わせるための個々のＶ領域の組合せに対する、Ｓｙｋ、ＰＬＣγ２およびＡＫＴのリン酸化の阻害パーセンテージを示すグラフである
【図１４】図１４は、Ｆａｂ−ＸのＣＤ２２特異性とＦａｂ−ＹのＣＤ７９ｂ特異性とを組み合わせるための個々のＶ領域の組合せに対する、Ｓｙｋ、ＰＬＣγ２およびＡＫＴのリン酸化の阻害パーセンテージを示すグラフである。
【図１５】図１５は、ＣＤ７９ｂおよびＣＤ２２特異的Ｆａｂ−Ｋｄ−ＦａｂまたはＢＹｂｅによる、Ｂ細胞における抗ＩｇＭ誘導性リン酸化ＰＬＣγ２の阻害パーセンテージのデータを示す
【図１６】図１６は、ＣＤ７９ｂおよびＣＤ２２特異的Ｆａｂ−Ｋｄ−ＦａｂまたはＢＹｂｅによるＢ細胞における抗ＩｇＭ誘導性リン酸化Ｐ３８の阻害パーセンテージのデータを示す
【図１７】図１７は、ＣＤ７９ｂおよびＣＤ２２特異的Ｆａｂ−Ｋｄ−ＦａｂまたはＢＹｂｅによる、Ｂ細胞における抗ＩｇＭ誘導性リン酸化Ａｋｔの阻害パーセンテージのデータを示す
【図１８】図１８は、ＣＤ７９ｂおよびＣＤ２２特異的Ｆａｂ−Ｋｄ−ＦａｂまたはＢＹｂｅによる、Ｂ細胞上の抗ＩｇＭ誘導性ＣＤ７１発現の阻害パーセンテージのデータを示す
【図１９】図１９は、ＣＤ７９ｂおよびＣＤ２２特異的Ｆａｂ−Ｋｄ−ＦａｂまたはＢＹｂｅによる、Ｂ細胞上の抗ＩｇＭ誘導性ＣＤ４０発現の阻害パーセンテージのデータを示す。
【図２０】図２０は、ＣＤ７９ｂおよびＣＤ２２特異的Ｆａｂ−Ｋｄ−ＦａｂまたはＢＹｂｅによる、Ｂ細胞上の抗ＩｇＭ誘導性ＣＤ８６発現の阻害パーセンテージのデータを示す
【図２１】図２１は、ＣＤ７９ｂおよびＣＤ２２特異的ＶＲ４４４７／ＶＲ４１２６  ＢＹｂｅおよびＶＲ４４４７／ＶＲ４１２６／ＶＲ６４５  ＢＹｂｅ／アルブミンによるＢ細胞上のＣＤ２７発現の阻害を示す
【図２２】図２２は、ＣＤ７９ｂおよびＣＤ２２特異的ＶＲ４４４７／ＶＲ４１２６  ＢＹｂｅおよびＶＲ４４４７／ＶＲ４１２６／ＶＲ６４５  ＢＹｂｅ／アルブミンによるＢ細胞上のＣＤ７１発現の阻害を示す
【図２３】図２３は、ＣＤ７９ｂおよびＣＤ２２特異的ＶＲ４４４７／ＶＲ４１２６  ＢＹｂｅおよびＶＲ４４４７／ＶＲ４１２６／ＶＲ６４５  ＢＹｂｅ／アルブミンによるＢ細胞上のＣＤ８６発現の阻害を示す
【図２４】図２４は、ＣＤ７９ｂおよびＣＤ２２特異的ＶＲ４４４７／ＶＲ４１３０  ＢＹｂｅおよびＶＲ４４４７／ＶＲ４１３０／ＶＲ６４５  ＢＹｂｅ／アルブミンによるＢ細胞上のＣＤ２７発現の阻害を示す
【図２５】図２５は、ＣＤ７９ｂおよびＣＤ２２特異的ＶＲ４４４７／ＶＲ４１３０  ＢＹｂｅおよびＶＲ４４４７／ＶＲ４１３０／ＶＲ６４５  ＢＹｂｅ  ／アルブミンによるＢ細胞上のＣＤ７１発現の阻害を示す
【図２６】図２６は、ＣＤ７９ｂおよびＣＤ２２特異的ＶＲ４４４７／ＶＲ４１３０  ＢＹｂｅおよびＶＲ４４４７／ＶＲ４１３０／ＶＲ６４５  ＢＹｂｅ／アルブミンによるＢ細胞上のＣＤ８６発現の阻害を示す。
【図２７】図２７は、ＶＲ４４４７／ＶＲ４１２６  ＢＹｂｅ、ＶＲ４４４７／ＶＲ４１２７  ＢＹｂｅおよびＶＲ４４４７／ＶＲ４１３０  ＢＹｂｅとともに培養したＰＢＭＣからの破傷風トキソイドＩｇＧ産生の阻害を示す。データは、３人のドナーからプールされたデータを表す。
【図２８】図２８は、ＶＲ４４４７／ＶＲ４１２６  ＢＹｂｅ、ＶＲ４４４７／ＶＲ４１２７  ＢＹｂｅおよびＶＲ４４４７／ＶＲ４１３０  ＢＹｂｅとともに培養した精製Ｂ細胞からの破傷風トキソイドＩｇＧ産生の阻害を示す。データは、２人のドナーからプールされたデータを表す。
【図２９】図２９は、ＶＲ４４４７／ＶＲ４１２６  ＢＹｂｅ、ＶＲ４４４７／ＶＲ４１２７  ＢＹｂｅ、ＶＲ４４４７／ＶＲ４１３０  ＢＹｂｅ、ＶＲ４４４７／ＶＲ４１２６／ＶＲ６４５  ＢＹｂｅ／アルブミンおよびＶＲ４４４７／ＶＲ４１３０／ＶＲ６４５  ＢＹｂｅ／アルブミンとともに培養したＰＢＭＣまたは精製Ｂ細胞のいずれかからの破傷風トキソイドＩｇＧ産生の阻害を示す。示されたデータは単一ドナー由来である。
【図３０】図３０は、１２人の健常者および１２人のＳＬＥ患者試料由来の非刺激Ｂ細胞におけるリン酸化のベースラインレベルを示す。
【図３１】図３１は、１２人の健常なボランティア（ＨＶ）および１２人のＳＬＥドナー由来のＢ細胞における抗ＩｇＭ誘導性ＮＦｋＢリン酸化に対するＣＤ７９ｂ＋ＣＤ２２特異的ＶＲ４４４７／ＶＲ４１３０  ＢＹｂｅの効果を示す。
【図３２】図３２は、１２人の健常なボランティア（ＨＶ）および１２人のＳＬＥドナー由来のＢ細胞における抗ＩｇＭ誘導性Ａｋｔリン酸化に対するＣＤ７９ｂ＋ＣＤ２２特異的ＶＲ４４４７／ＶＲ４１３０  ＢＹｂｅの効果を示す。
【図３３】図３３は、１２人の健常なボランティア（ＨＶ）および１２人のＳＬＥドナー由来のＢ細胞における抗ＩｇＭ誘導性Ｓｙｋリン酸化に対するＣＤ７９ｂ＋ＣＤ２２特異的ＶＲ４４４７／ＶＲ４１３０  ＢＹｂｅの効果を示す。
【図３４】図３４は、１２人の健常なボランティア（ＨＶ）および１２人のＳＬＥドナー由来のＢ細胞における抗ＩｇＭ誘導性Ｅｒｋ１および２リン酸化に対するＣＤ７９ｂ＋ＣＤ２２特異的ＶＲ４４４７／ＶＲ４１３０  ＢＹｂｅの効果を示す。
【図３５】図３５は、本開示の配列である
【発明を実施するための形態】
【０３４４】
Ｂ細胞受容体シグナル伝達は、Ｂ細胞の重要な機能であり、Ｂ細胞の抗原特異的活性化の必要条件である。ＢｃＲシグナル伝達は、Ｂ細胞発生の初期段階から、メモリーＢ細胞応答の活性化および発達に至るまで極めて重要である。Ｂ細胞受容体は、ＣＤ７９ａおよびＣＤ７９ｂのヘテロ二量体複合体と会合する表面免疫グロブリン（Ｉｇ）分子から構成される。表面Ｉｇが抗原を認識すると、これは、ＣＤ７９ａ／ｂ複合体のクラスタリングをもたらし、これが、ＳｒｃファミリーキナーゼならびにＳｙｋおよびＢｔｋチロシンキナーゼを含む即時シグナル伝達カスケードの下流活性化をもたらすと考えられる。次いで、このシグナル伝達複合体は、ＣＤ１９およびＢＬＮＫなどのアダプタータンパク質を動員し、ＰＬＣγ２およびＰＩ３Ｋの活性化をもたらし、順次、さらなる下流経路、例えばＢ細胞の増殖、生存および分化を制御する経路などを活性化することができる。このシグナル伝達複合体は、ＢＡＦＦ−Ｒ、ＩＬ−２１ＲおよびＣＤ４０によるシグナル伝達を介して他の第２のシグナルによってさらに調節され、他のシグナル伝達分子、例えばＣＤ１９、ＣＤ２１、ＣＤ８３、ＣＤ２２、ＣＤ３２ｂおよびＣＤ４５などによっても調節され得る。ＢｃＲにより抗原を認識すると、活性化される最初の応答の１つは、共刺激分子ＣＤ８０およびＣＤ８６などの表面受容体のアップレギュレーションである。これらの分子はＴ細胞上の対応する受容体に結合し、この受容体はＭＨＣクラスＩＩとの関連で抗原を認識するＴ細胞の生存および拡大を可能にするさらなる生存および活性化のシグナルを送達する。この応答は、ＭＨＣクラスＩＩとの関連において抗原を提示して、Ｔ細胞へ戻すＢ細胞の能力によってさらに増幅され、このＴ細胞はＩＬ−２およびＩＬ−２１のような因子を放出する。これらのサイトカインは、次にＢ細胞数を大きく拡大する。したがって、細胞表面上のＣＤ８６のダウンレギュレーションは、Ｂ細胞シグナル伝達の阻害を示し得る。
【０３４５】
さらに、Ｂ細胞受容体シグナル伝達の阻害は、下流機能の阻害をもたらし得る。このような結果の１つは、Ｔ細胞の機能、生存および分化の阻害をもたらすＣＤ８６などの共刺激分子の阻害（またはその発現低下）である。
【０３４６】
したがって、Ｂ細胞受容体シグナル伝達の阻害は、自己免疫および癌に関連する異常なＢ細胞機能を制御するのに有益であり得る。Ｂ細胞受容体のシグナル伝達は、自己免疫疾患におけるＢ細胞増殖、分化、抗原提示およびサイトカイン放出に必要である。したがって、ＢｃＲ活性の阻害は、免疫グロブリン分泌、Ｔ細胞活性化などのＢ細胞機能を調節し、例えば自己免疫状態に関連する不適切なＢ細胞活性を制御することができる。さらに、Ｂ細胞受容体活性化の阻害剤によって制御され得る、生存および増殖のためにＢ細胞受容体シグナル伝達を必要とするいくつかのＢ細胞白血病およびリンパ腫がある。
【０３４７】
ＣＤ２２（分化クラスター２２としても知られている）は、公知のタンパク質である。ＣＤ２２は、Ｂ細胞受容体（ＢＣＲ）の阻害性共受容体であり、Ｂ細胞活性化のためのシグナル伝達閾値を確立する上で重要な役割を果たす。ヒト配列はＵｎｉＰｒｏｔエントリー番号Ｐ２０２７３（配列番号２４４およびシグナルペプチドを含まない、配列番号２４４のアミノ酸２０−８４７）で利用可能である。マウス型はＵｎｉＰｒｏｔエントリーＰ３５３２９である。本開示は、任意の種、特にヒトおよびその天然変異体に由来するＣＤ２２のすべての形態に関する。一実施形態において、ＣＤ２２は、このタンパク質のヒト形態を指す。
【０３４８】
一実施形態において、本開示の分子におけるＣＤ２２に対する結合ドメインの親和性は、約１００ｎＭ以上の強さであり、例えば、約５０ｎＭ、２０ｎＭ、１０ｎＭ、１ｎＭ、５００ｐＭ、２５０ｐＭ、２００ｐＭ、１００ｐＭまたはそれ以上、特に、５０ｐＭ以上の強さの結合親和性である。一実施形態において、本開示の分子に用いられる抗体またはその結合断片は、ＣＤ２２に特異的である。
【０３４９】
本明細書において使用されるＣＤ７９は、ＣＤ７９ａとＣＤ７９ｂとから構成される複合体を指す。したがって、ＣＤ７９に結合する抗体または結合ドメインは、ＣＤ７９ａおよび／またはＣＤ７９ｂに結合することができる。本明細書で用いられるＣＤ７９ａおよび／またはＣＤ７９ｂへの結合は、ＣＤ７９ａに特異的、ＣＤ７９ｂに特異的、ＣＤ７９ａおよびＣＤ７９ｂの両方に特異的（すなわち、ＣＤ７９ａ上のエピトープを認識し、同じ抗体または結合ドメインがＣＤ７９ｂ上のエピトープも認識する、すなわち汎特異的）であることを指すか、またはＣＤ７９ａとＣＤ７９ｂとの複合体に特異的である（すなわち、複合体形態のＣＤ７９ａとＣＤ７９ｂの相互作用から形成されるエピトープを認識し、これにより複合体を個別の成分とは区別できる）。
【０３５０】
一実施形態において、本開示の分子に用いられる抗体またはその結合断片は、ＣＤ７９ａに特異的である。
【０３５１】
一実施形態において、本開示の分子に用いられる抗体またはその結合断片は、ＣＤ７９ｂに特異的である。
【０３５２】
一実施形態において、本開示の分子に用いられる抗体またはその結合断片は、ＣＤ７９複合体に特異的であり、すなわち、複合体中に存在するエピトープ、例えばＣＤ７９ａとＣＤ７９ｂとの間の相互作用を含むエピトープを認識し、それに対して特異的である。
【０３５３】
一実施形態において、結合ドメインがＣＤ７９ａまたはＣＤ７９ｂに特異的であった場合、２種のタンパク質は細胞表面に天然に同時発現されるので、この結合ドメインが、複合体形態の場合もＣＤ７９ａまたはＣＤ７９ｂに結合することが好ましいことは理解されるであろう。
【０３５４】
一実施形態において、特定の開示の結合ドメインを含む構築物が提供される。
【０３５５】
本明細書において用いられる結合ドメインを含む構築物は、特異的な抗原に結合できるような結合ドメインを提供することができる任意の構造を含む。構築物の例としては、限定するものではないが、キメラ抗原受容体、改変Ｔ細胞受容体、抗体分子、アプタマーなどが挙げられる。
【０３５６】
本発明の抗体分子は、他の分子フォーマットまたは構築物に組み込み可能であり、本発明によって提供される結合ドメインはＣＤ２２に結合し、それによってＣＤ２２を標的とすることが理解されよう。例えば、本発明の結合領域、例えばＦａｂまたはｓｃＦｖなどの断片は、例えばキメラ抗原受容体によるＴ細胞の形質導入（ＣＡＲ−Ｔ細胞）を介して細胞をインビボで再度方向付けし、次いでこれらの細胞を患者に移入するために使用することができる（Ｎａｔ．Ｒｅｖｓ．Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃ．２０１５年、１４、４９９−５０９頁）。したがって、本発明はまた、本明細書に記載の１または複数の結合ドメインを含むキメラ抗原受容体を提供する。
【０３５７】
１つの結合ドメインおよび／またはそれぞれの結合ドメイン中に２つの可変領域が存在する場合、この２つの可変領域は、一般に、関連する抗原に対する特異性を提供するために協同的に機能し、例えば、これらは、同族対であるか、または親和性成熟して、このドメインが特定の抗原に特異的であるように適切な親和性を提供する。典型的には、これらは重鎖および軽鎖可変領域対（ＶＨ／ＶＬ対）である。
【０３５８】
本明細書において用いられる「多重特異性分子」は、少なくとも２種の別個の抗原、例えば異なる抗原に特異的に結合する能力を有する分子を指す。一実施形態において、多重特異性分子は、二重特異性、三重特異性または四重特異性分子、特に二重特異性または三重特異性分子である。
【０３５９】
一実施形態において、本開示の分子は二重特異性である。
【０３６０】
一実施形態では、本開示の分子は三重特異性である。
【０３６１】
一実施形態において、本開示の多重特異性抗体分子（例えば、二重特異性抗体分子）は、ＣＤ２２に特異的な結合ドメインに加えて、別の抗原に特異的な結合ドメインを含む。
【０３６２】
一実施形態において、本開示の分子はＣＤ７９に対して単一特異性であり、ＣＤ２２に対して単一特異性である、すなわち、該分子はＣＤ７９に結合する１つの結合ドメインおよびＣＤ２２に結合する１つの結合ドメインのみを含む。
【０３６３】
一実施形態において、本開示の多重特異性分子は一本鎖である。
【０３６４】
一実施形態において、本開示の多重特異性分子は、重鎖およびさらに軽鎖も含む。一実施例において、本明細書において用いる場合、重鎖および軽鎖の対形成は二量体とは呼ばれず、特に、一実施形態において、本開示の分子が、抗体、単位／断片または成分の二量体などの多量体を含まない場合、二量体とは呼ばれない。
【０３６５】
したがって、一態様において、本開示は、少なくともＣＤ２２およびＣＤ７９ａに特異的な適切なフォーマットの分子、ならびに二重特異性フォーマットまたは三重特異性フォーマットなどの多重特異性分子における、ＣＤ２２およびＣＤ７９ａに特異的な抗体／断片またはこれらの組合せの使用に及ぶ。
【０３６６】
一態様において、本開示は、少なくともＣＤ２２およびＣＤ７９ｂに特異的な適切なフォーマットの分子、ならびに二重特異性フォーマットまたは三重特異性フォーマットなどの多重特異性分子における、ＣＤ２２およびＣＤ７９ｂに特異的な抗体／断片またはこれらの組合せの使用に及ぶ。
【０３６７】
一態様において、本開示は、少なくともＣＤ２２およびＣＤ７９ａ／ｂ複合体に特異的な適切なフォーマットの分子、ならびに二重特異性フォーマットまたは三重特異性フォーマットなどの多重特異性分子における、ＣＤ２２およびＣＤ７９ａ／ｂ複合体に特異的な抗体／断片またはこれらの組合せの使用に及ぶ。
【０３６８】
一実施形態において、本開示の分子は、例えば、第３の結合ドメインが、例えば血清担体タンパク質に結合することによって分子の半減期を延長することができる場合、三重特異性である。
【０３６９】
さまざまなタンパク質が血漿中に存在し、チロキシン結合タンパク質、トランスサイレチン、α１酸糖タンパク質、トランスフェリン、フィブリノーゲンおよびアルブミン、またはそれらのいずれかの断片が含まれる（Ｂａｒｔａｌｅｎａ＆Ｒｏｂｂｉｎｓ、１９９３年、Ｃｌｉｎｉｃｓ  ｉｎ  Ｌａｂ．Ｍｅｄ．１３：５８３−５９８頁；Ｂｒｅｅら、１９８６年、Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎ．１１：３３６−３４２頁；Ｇｉｔｌｉｎら、１９６４年、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１０：１９３８−１９５１頁；Ｐｅｔｅｒｓ、１９８５年、Ａｄｖ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｈｅｍ．３７：１６１−２４５頁；Ｗａｌｄｅｍａｎ＆Ｓｔｒｏｂｅｒ、１９６９年、Ｐｒｏｇｒ．Ａｌｌｅｒｇｙ、１３：１−１１０頁）。一実施例において、第３の結合ドメインは血清アルブミン、例えばヒト血清アルブミンに特異的である。
【０３７０】
多重特異性分子フォーマット
本発明に使用するための適切な多重特異性分子の例は当技術分野において公知であり、例えば、総説「Ｔｈｅ  ｃｏｍｉｎｇ  ｏｆ  Ａｇｅ  ｏｆ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ  Ｍｕｌｔｉｖａｌｅｎｔ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、Ｎｕｎｅｚ−Ｐｒａｄｏら、Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｔｏｄａｙ、２０巻５号、２０１５年３月、５８８−５９４頁、Ｄ．Ｈｏｌｍｅｓ、Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃ  ２０１１年１１月：１０；７９８頁、Ｃｈａｎ  ａｎｄ  Ｃａｒｔｅｒ、Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １０巻、２０１０年５月、３０１頁、に開示されており、当該文献は参照により本明細書に組み込まれる。
【０３７１】
一実施形態において、多重特異性フォーマットには、当技術分野において公知のものおよび本明細書に記載のものが含まれ、例えば、この分子フォーマットは、以下を含むか、または以下からなる群から選択される：
・タンデムｓｄＡｂ、タンデムｓｄＡｂ−ｓｄＡｂ（３つのｓｄＡｂ）；
・（ｓｃＦｖ）２（タンデムｓｃＦｖとも呼ばれる）、ｓｃＦｖ−ｄｓＦｖ、ｄｓｓｃＦｖ−ｄｓＦｖ（ｄｓＦｖ）２；
・ダイアボディ、ｄｓダイアボディ、ｄｉｄｓダイアボディ、
・ｓｃダイアボディ、ｄｓｓｃダイアボディ、ｄｉｄｓｓｃダイアボディ；
・Ｄａｒｔ抗体、すなわち、ＶＨ１およびＶＨ２のＣ末端がジスルフィド結合によって結合されている、ＶＬ１リンカーＶＨ２リンカーおよびＶＨ１リンカーＶＬ２；
・ＢｉＴＥ（登録商標）、ｄｓＢｉＴＥ、ｄｉｄｓＢｉＴＥ；
・Ｄｉ−ダイアボディ（Ｎｕｎｅｚ−Ｐｒａｄｏら、特にその中の図１の分子番号２５を参照されたい）、ｄｓｄｉ−ダイアボディ、ｄｉｄｓｄｉ−ダイアボディ；
・トリアボディ、ｄｓトリアボディ、ｄｉｄｓトリアボディ、ｔｒｉｄｓトリアボディ；
・テトラボディ、ｄｓテトラボディ、ｄｉｄｓテトラボディ、ｔｒｉｄｓテトラボディ、ｔｅｔｒａｄｓテトラボディ；
・ｔａｎｄａｂ（Ｎｕｎｅｚ−Ｐｒａｄｏら、特にその中の図１の分子番号２２を参照されたい）；ｄｓｔａｎｄａｂ、ｄｉｄｓｔａｎｄａｂ、ｔｒｉｄｓｔａｎｄａｂ、ｔｅｔｒａｄｓｔａｎｄａｂ；
・［ｓｃ（Ｆｖ）２］２、（Ｎｕｎｅｚ−Ｐｒａｄｏら、特にその中の図１の分子番号２２を参照されたい）、ｄｓ［ｓｃ（Ｆｖ）２］２、ｄｉｄｓ［ｓｃ（Ｆｖ）２］２、ｔｒｉｄｓ［ｓｃ（Ｆｖ）２］２、ｔｅｔｒａｄｓ［ｓｃ（Ｆｖ）２］２；
・ペンタボディ（Ｎｕｎｅｚ−Ｐｒａｄｏら、特にその中の図１の分子番号２７を参照されたい）；
・Ｆａｂ−ｓｃＦｖ（バイボディとも呼ばれる）、Ｆａｂ’ｓｃＦｖ、ＦａｂｄｓｓｃＦｖ（またはＢＹｂｅ）、Ｆａｂ’ｄｓｓｃＦｖ；
・トリボディ、ｄｓトリボディ、ｄｉｄｓトリボディ（ＦａｂｄｉｄｓｓｃＦｖまたはＴｒＹｂｅまたはＦａｂ−（ｄｓｓｃＦｖ）２とも呼ばれる）、Ｆａｂ’ｄｉｄｓＳｃＦｖ；
・Ｆａｂｄａｂ、ＦａｂＦｖ、Ｆａｂ’ｄａｂ、Ｆａｂ’Ｆｖ；
・Ｆａｂ単一リンカーＦｖ（本明細書において、国際公開第２０１４／０９６３９０号パンフレットに開示されるようにＦａｂｄｓＦｖとも呼ばれる）、Ｆａｂ’単一リンカーＦｖ（本明細書においてＦａｂ’ｄｓＦｖとも呼ばれる）；
・ＦａｂｓｃＦｖ単一リンカーＦｖ、Ｆａｂ’ｓｃＦｖ単一リンカーＦｖ；
・ＦａｂｄｓｓｃＦｖ単一リンカーＦｖ、Ｆａｂ’ｄｓｓｃＦｖ単一リンカーＦｖ；
・ＦｖＦａｂＦｖ、ＦｖＦａｂ’Ｆｖ、ｄｓＦｖＦａｂＦｖ、ｄｓＦｖＦａｂ’Ｆｖ、ＦｖＦａｂｄｓＦｖ、ＦｖＦａｂ’ｄｓＦｖ、ｄｓＦｖＦａｂｄｓＦｖ、ｄｓＦｖＦａｂ’ｄｓＦｖ、
・ＦａｂＦｖＦｖ、Ｆａｂ’ＦｖＦｖ、ＦａｂｄｓＦｖＦｖ、Ｆａｂ’ｄｓＦｖＦｖ、ＦａｂＦｖｄｓＦｖ、Ｆａｂ’ＦｖｄｓＦｖ、ＦａｂｄｓＦｖｄｓＦｖ、Ｆａｂ’ｄｓＦｖｄｓＦｖ、
・ｄｉＦａｂ、ｄｉＦａｂ’（化学的にコンジュゲートされたｄｉＦａｂ’を含む）、
・（ＦａｂｓｃＦｖ）２、（Ｆａｂ）２ｓｃＦｖｄｓＦｖ、（Ｆａｂ）２ｄｓｓｃＦｖｄｓＦｖ、（ＦａｂｄｓｃＦｖ）２、
・（Ｆａｂ’ｓｃＦｖ）２、（Ｆａｂ’）２ｓｃＦｖｄｓＦｖ、（Ｆａｂ’）２ｄｓｓｃＦｖｄｓＦｖ、（Ｆａｂ’ｄｓｃＦｖ）２、
・ＶＨＨＣＫ（Ｎｕｎｅｚ−Ｐｒａｄｏら、特にその中の図１の分子番号６を参照されたい）；
・ミニボディ、ｄｓミニボディ、ｄｉｄｓミニボディ、
・ミニ抗体（ＺＩＰ）［Ｎｕｎｅｚ−Ｐｒａｄｏら、特にその中の図１の分子番号７を参照されたい］、ｄｓミニ抗体（ＺＩＰ）およびｄｉｄｓミニ抗体（ＺＩＰ）；
・ｔｒｉｂｉ−ミニボディ［Ｎｕｎｅｚ−Ｐｒａｄｏら、特にその中の図１の分子番号１５を参照されたい］ｄｓｔｒｉｂｉ−ミニボディ、ｄｉｄｓｔｒｉｂｉ−ミニボディ、ｔｒｉｄｓｔｒｉｂｉ−ミニボディ；
・ダイアボディ−ＣＨ３、ｄｓダイアボディ−ＣＨ３、ｄｉｄｓダイアボディ−ＣＨ３、ｓｃダイアボディ−ＣＨ３、ｄｓｓｃダイアボディ−ＣＨ３、ｄｉｄｓｓｃダイアボディ−ＣＨ３；
・タンデムｓｃＦｖ−ＣＨ３、タンデムｄｓｓｃＦｖ−ＣＨ３、タンデムｄｉｄｓｓｃＦｖ−ＣＨ３、タンデムｔｒｉｄｓｓｃＦｖ−ＣＨ３、タンデムｔｅｔｒａｄｓｓｃＦｖ−ＣＨ３、
・国際公開第２００８／０１２５４３号パンフレットに記載のｓｃＦｖ−Ｆｃ（本明細書において（ｓｃＦｖＣＨ２ＣＨ３）２とも呼ばれる）およびこれらの一本鎖型、ｄｓｓｃＦｖｓｃＦｖ−Ｆｃ、ｄｓｓｃＦｖ−Ｆｃ（本明細書において（ｄｓｓｃＦｖＣＨ２ＣＨ３）２とも呼ばれる）、ｓｃＦｖ−ｄｓＦｖ−Ｆｃ、ｄｓｓｃＦｖ−ｄｓＦｖ−Ｆｃ、ｄｓＦｖ−Ｆｃ（本明細書において（ｄｓＦｖＣＨ２ＣＨ３）２とも呼ばれる）
・スコーピオン分子（ｓｃｏｒｐｉｏｎ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ）（Ｔｒｕｂｉｏｎ）すなわち、結合ドメイン、米国特許第８，４０９，５７７号明細書に記載のリンカー−ＣＨ２ＣＨ３結合ドメイン；
・ＳＭＩＰ（Ｔｒｕｂｉｏｎ）すなわち（ｓｃＦｖ−ＣＨ２ＣＨ３）２；
・（ｄｓＦｖＣＨ２ＣＨ３）２、タンデムｓｃＦｖ−Ｆｃ、タンデムｄｓｓｃＦｖｓｃＦｖ−Ｆｃ、タンデムｄｓｓｃＦｖ−Ｆｃ、
・ｓｃＦｖ−Ｆｃ−ｓｃＦｖ、ｄｓｓｃＦｖ−Ｆｃ−ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−Ｆｃ−ｄｓｓｃＦｖ、
・ダイアボディ−Ｆｃ、ｄｓダイアボディ−Ｆｃ、ｄｉｄｓダイアボディ−Ｆｃ、トリアボディ−Ｆｃ、ｄｓトリアボディ−Ｆｃ、ｄｉｄｓトリアボディ−Ｆｃ、ｔｒｉｄｓトリアボディ−Ｆｃ、テトラボディ−Ｆｃ、ｄｓテトラボディ−Ｆｃ、ｄｉｄｓテトラボディ−Ｆｃ、ｔｒｉｄｓテトラボディ−Ｆｃ、ｔｅｔｒａｄｓテトラボディ−Ｆｃ、ｄｓテトラボディ−Ｆｃ、ｄｉｄｓテトラボディ−Ｆｃ、ｔｒｉｄｓテトラボディ−Ｆｃ、ｔｅｔｒａｄｓテトラボディ−Ｆｃ、ｓｃダイアボディ−Ｆｃ、ｄｓｓｃダイアボディ、ｄｉｄｓｓｃダイアボディ；
・例えば異なる重鎖可変領域および共通の軽鎖を有する２または３官能性抗体、例えば、固定配列の共通の軽鎖および（異なるＣＤＲを含む）異なる重鎖と、異なる重鎖の二量体化（ｔｈｅ  ｄｉｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏ  ｔｈｅ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ  ｈｅａｖｙ  ｃｈａｉｎｓ）を推進するように操作されたＣＨ３ドメインとを有する、Ｍｅｒｕｓ二重特異性抗体フォーマット（Ｂｉｃｌｏｎｉｃｓ（登録商標））、
・Ｄｕｏｂｏｄｙ（すなわち、抗体中の１つの完全長鎖が抗体中の他の完全長鎖に対して異なる特異性を有する）；
・二重特異性フォーマットを作成するためにＦａｂアームの交換が用いられている完全長抗体；
・完全長抗体が共通の重鎖および異なる軽鎖を有する２または３官能性抗体、「カッパ／ラムダボディ」または「κ／λ−ボディ」とも呼ばれ、例えば国際公開第２０１２／０２３０５３号パンフレットを参照されたい；
・重鎖または軽鎖のＣ末端由来の１、２、３または４つのＩｇ−ｓｃＦｖ、重鎖または軽鎖のＮ末端由来の１、２、３または４つのｓｃＦｖ−Ｉｇ、単一リンカーＩｇ−Ｆｖ、重鎖または軽鎖のＣ末端由来の１、２、３または４つのＩｇ−ｄｓｓｃＦｖ（１、２、３または４個のジスルフィド結合を含む）；
・重鎖または軽鎖のＮ末端由来の１、２、３または４つのＩｇ−ｄｓｓｃＦｖ（１、２、３または４個のジスルフィド結合を含む）
・Ｉｇ単一リンカーＦｖ（ＰＣＴ／ＥＰ第２０１５／０６４４５０号明細書を参照されたい）、
・Ｉｇ−ｄａｂ、ｄａｂ−Ｉｇ、ｓｃＦｖ−Ｉｇ、Ｖ−Ｉｇ、Ｉｇ−Ｖ、
・ｓｃＦａｂＦｖＦｃ、ｓｃＦａｂｄｓＦｖＦｃ（単一リンカー型ｓｃＦａｖＦｖ）、（ＦａｂＦｖＦｃ）２、（ＦａｂｄｓＦｖＦｃ）２、ｓｃＦａｂ’ＦｖＦｃ、ｓｃＦａｂ’ｄｓＦｖＦｃ、（Ｆａｂ’ＦｖＦｃ）２、（Ｆａｂ’ｄｓＦｖＦｃ）２、ならびに
・ＤＶＤＩｇ、（以下に、より詳細に考察される）。
【０３７２】
一態様において、多重特異性分子フォーマットには、当技術分野において公知のもの、および本明細書に記載のものが含まれ、例えば、該分子フォーマットは、ダイアボディ、ｓｃダイアボディ、トリアボディ、トリボディ、テトラボディ、タンデムｓｃＦｖ、ＦａｂＦｖ、Ｆａｂ’Ｆｖ、ＦａｂｄｓＦｖ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ、Ｆａｂ−ｄｓｓｃＦｖ、Ｆａｂ−（ｄｓｓｃＦｖ）２、ｄｉＦａｂ、ｄｉＦａｂ’、タンデムｓｃＦｖ−Ｆｃ、ｓｃＦｖ−Ｆｃ−ｓｃＦｖ、ｓｃダイアボディ−Ｆｃ、ｓｃダイアボディ−ＣＨ３、Ｉｇ−ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−Ｉｇ、Ｖ−Ｉｇ、Ｉｇ−Ｖ、ＤｕｏｂｏｄｙおよびＤＶＤＩｇを含む群またはこれらからなる群から選択され、これらについて以下に詳細に考察する。
【０３７３】
一実施形態において、本開示の多重特異性抗体分子はＦｃドメインを含まず、すなわちＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含まず、例えば、該分子は、タンデムｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−ｄｓＦｖ、ｄｓｓｃＦｖ−ｄｓＦｖ  ｄｉｄｓＦｖ、ダイアボディ、ｄｓダイアボディ、ｄｉｄｓダイアボディ、ｓｃダイアボディ（（ｓｃＦｖ）２とも呼ばれる）、ｄｓｓｃダイアボディ、トリアボディ、ｄｓトリアボディ、ｄｉｄｓトリアボディ、ｔｒｉｄｓトリアボディ、テトラボディ、ｄｓテトラボディ、ｄｉｄｓテトラボディ、ｔｒｉｄｓテトラボディ、ｔｅｔｒａｄｓテトラボディ、トリボディ、ｄｓトリボディ、ｄｉｄｓトリボディ、Ｆａｂｄａｂ、ＦａｂＦｖ、Ｆａｂ’ｄａｂ、Ｆａｂ’Ｆｖ、Ｆａｂ単一リンカーＦｖ（国際公開第２０１４／０９６３９０号パンフレットに開示）、Ｆａｂ’単一リンカーＦｖ、ＦａｂｄｓＦｖ、Ｆａｂ’ｄｓＦｖ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ（バイボディとも呼ばれる）、Ｆａｂ’ｓｃＦｖ、ＦａｂｄｓｓｃＦｖ、Ｆａｂ’ｄｓｓｃＦｖ、ＦａｂｄｉｄｓｓｃＦｖ、Ｆａｂ’ｄｉｄｓｓｃＦｖ、ＦａｂｓｃＦｖ単一リンカーＦｖ、Ｆａｂ’ｓｃＦｖ単一リンカーＦｖ、ＦａｂｄｓｓｃＦｖｓ単一リンカーＦｖ、Ｆａｂ’ｄｓｓｃＦｖ単一リンカーＦｖ、ＦｖＦａｂＦｖ、ＦｖＦａｂ’Ｆｖ、ｄｓＦｖＦａｂＦｖ、ｄｓＦｖＦａｂ’Ｆｖ、ＦｖＦａｂｄｓＦｖ、ＦｖＦａｂ’ｄｓＦｖ、ｄｓＦｖＦａｂｄｓＦｖ、ｄｓＦｖＦａｂ’ｄｓＦｖ、ＦａｂＦｖＦｖ、Ｆａｂ’ＦｖＦｖ、ＦａｂｄｓＦｖＦｖ、Ｆａｂ’ｄｓＦｖＦｖ、ＦａｂＦｖｄｓＦｖ、Ｆａｂ’ＦｖｄｓＦｖ、ＦａｂｄｓＦｖｄｓＦｖ、Ｆａｂ’ｄｓＦｖｄｓＦｖ、ｄｉＦａｂ、化学的にコンジュゲートされたｄｉＦａｂ’を含むｄｉＦａｂ’、（ＦａｂｓｃＦｖ）２、（Ｆａｂ）２ｓｃＦｖｄｓＦｖ、（Ｆａｂ）２ｄｓｓｃＦｖｄｓＦｖ、（ＦａｂｄｓｃＦｖ）２、ミニボディ、ｄｓミニボディ、ｄｉｄｓミニボディ、ダイアボディ−ＣＨ３、ｄｓダイアボディ−ＣＨ３、ｄｉｄｓダイアボディ−ＣＨ３、ｓｃダイアボディ−ＣＨ３、ｄｓｓｃダイアボディ−ＣＨ３、ｄｉｄｓｓｃダイアボディ−ＣＨ３、タンデムｓｃＦｖ−ＣＨ３、タンデムｄｓｓｃＦｖ−ＣＨ３、タンデムｄｉｄｓｓｃＦｖ−ＣＨ３、タンデムｔｒｉｄｓｓｃＦｖ−ＣＨ３およびタンデムｔｅｔｒａｄｓｓｃＦｖ−ＣＨ３を含む群から選択される。
【０３７４】
一実施形態において、本開示の分子はＦｃドメインを含まない。
【０３７５】
一実施形態において、本開示の分子は、以下に記載されるような改変されたＦｃドメインを含む。
【０３７６】
本明細書において用いられるＦｃドメインは、文脈上他のことが明白に示されない限り、一般に−（ＣＨ２ＣＨ３）２を指す。
【０３７７】
一実施形態において、本開示の分子は、−ＣＨ２ＣＨ３断片を含まない。
【０３７８】
一実施形態において、本開示の分子は、ＣＨ２ドメインを含まない。
【０３７９】
一実施形態において、本開示の分子はＣＨ３ドメインを含まない。
【０３８０】
本明細書において用いられる分子は、有機物の、特にタンパク質性の塊を形成する原子群を指すために生化学的な意味で使用され、この塊には、複合体が形成されたら、適切な条件下で単一の実体として取り扱うのに適している複合体、例えば、２以上のポリペプチド鎖により形成される複合体が含まれる。
【０３８１】
分子および構築物は、文脈が他のことを示さない限り、本明細書において互換的に使用される。しかし構築物のほうがポリヌクレオチド分子を指すためにより頻繁に使用され、分子のほうが、主にアミノ酸配列を含む実体を指すためにより頻繁に使用される。
【０３８２】
本明細書において用いられる特異性（または特異的）は、相互作用におけるパートナーが互いのみを認識するか、非パートナーと比較してまたは互いに有意に高い親和性、例えば、結合のバックグラウンドレベルまたは他の無関係のタンパク質への結合よりも、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０倍高い親和性を有する場合を指す。
【０３８３】
本明細書において用いられる「結合ドメイン」とは、例えば抗原に対して特異的であるドメインを特徴付けるのに十分な親和性で、標的抗原に結合することができる結合領域、典型的にはポリペプチドを指す。一実施形態において、結合ドメインは、少なくとも１つの可変ドメインまたはその誘導体、例えば、可変ドメインまたはその誘導体の同族対などの可変ドメインまたはその誘導体の対を含む。通常、これはＶＨ／ＶＬ対である。
【０３８４】
任意の適切な結合ドメインが、本発明の多重特異性分子に使用され得る。これらは、任意の適切な供給源に由来し得る。
【０３８５】
一実施形態において、生体適合性のフレームワーク構造が本開示の分子の結合ドメインに使用され、このような構造は、免疫グロブリンドメイン以外のタンパク質の足場または骨格に基づく。例えば、フィブロネクチン、アンキリン、リポカリン、ネオカルチノスタチン（ｎｅｏｃａｒｚｉｎｏｓｔａｉｎ）、チトクロームｂ、ＣＰ１ジンクフィンガー、ＰＳＴ１、コイルドコイル、ＬＡＣＩ−Ｄ１、Ｚドメインおよびテンドラミサット（ｔｅｎｄｒａｍｉｓａｔ）ドメインに基づくものを使用することができる（例えば、ＮｙｇｒｅｎおよびＵｈｌｅｎ、１９９７年、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、７、４６３−４６９頁を参照されたい）。
【０３８６】
本明細書において使用される用語「多重特異性分子」はまた、アドネクチン（Ａｄｎｅｃｔｉｎ）、アフィボディ（Ａｆｆｉｂｏｄｙ）、ダルピン（Ｄａｒｐｉｎ）、フィロマー（Ｐｈｙｌｏｍｅｒ）、アビマー（Ａｖｉｍｅｒ）、アプタマー（Ａｐｔａｍｅｒ）、アンチカリン（Ａｎｔｉｃａｌｉｎ）、テトラネクチン（Ｔｅｔｒａｎｅｃｔｉｎ）、微小体、アフィリン（Ａｆｆｉｌｉｎ）およびＫｕｎｉｔｚドメインを含む、生物学的足場に基づく結合剤を含み得る。
【０３８７】
本発明の多重特異性分子は、典型的には、多重特異性抗体分子であり、すなわち、多重特異性分子の少なくとも１つまたはそれ以上の結合ドメインが、抗体またはその断片に由来する。
【０３８８】
結合ドメインが抗体に由来する場合、本明細書において用いられる「結合ドメインまたは部位」は、抗原と接触する抗体の部分である。一実施形態において、結合ドメインは、少なくとも１つの可変ドメインまたはその誘導体、例えば、可変ドメインまたはその誘導体の同族対などの可変ドメインまたはその誘導体の対を含む。通常、これはＶＨ／ＶＬ対である。
【０３８９】
可変領域（本明細書では可変ドメインとも呼ばれる）は、一般に、３つのＣＤＲおよび適切なフレームワークを含む。一実施形態において、結合ドメインは、２つの可変領域、軽鎖可変領域および重鎖可変領域を含み、これらの要素が一緒になって抗体または結合断片の結合相互作用の特異性に寄与する。
【０３９０】
一実施形態において、本開示の抗体分子中の結合ドメインの可変ドメインは、同族対である。
【０３９１】
本明細書において用いられる「同族対」は、予備形成されたカップルとして宿主から単離された重鎖および軽鎖の可変ドメイン（またはそれらの誘導体、例えばこれらのヒト化型）の対を指す。この定義は、宿主由来の元の対形成が保持されないライブラリーから単離された可変ドメインを含まない。同族対は、多くの場合に宿主内で親和性成熟しており、したがってそれらが特異的である抗原に対して、ファージライブラリーなどのライブラリーから選択された可変ドメイン対の組合せより高い親和性を有することがあるので有利であり得る。
【０３９２】
一実施形態において、本開示の抗体分子中の結合ドメインは、天然に存在する結合ドメインの誘導体である。
【０３９３】
本明細書において用いられる「天然に存在するドメインの誘導体」とは、天然に存在する配列中の１、２、３、４または５個のアミノ酸が置換または欠失されており、例えば、望ましくない特性が排除されるが、このドメインを特徴付ける（１または複数の）特性は保持されることによって、このドメインの特性が最適化された場合を指す。改変の例は、グリコシル化部位、ＧＰＩアンカーまたは溶媒に暴露されたリジンを除去するためのものである。これらの改変は、関連するアミノ酸残基を保存的アミノ酸置換で置換することによって達成することができる。
【０３９４】
ＣＤＲの改変は、例えば、１または複数個のシステインを、例えばセリン残基で置換することを含み得る。Ａｓｎは脱アミノ化のための基質であり得、この傾向は、Ａｓｎおよび／または隣接するアミノ酸を、保存的置換などの代替アミノ酸で置換することによって低減させることができる。ＣＤＲ中のアミノ酸Ａｓｐは、異性化の対象となり得る。後者は、Ａｓｐまたは隣接するアミノ酸を、例えば保存的置換の代替アミノ酸で置換することによって最小化することができる。
【０３９５】
可変領域のヒト化型もまた、本明細書の文脈において、これらの誘導体である。ヒト化としては、非ヒトフレームワークのヒトフレームワークへの置換、および場合により１または複数の残基の「ドナー残基」への復帰突然変異を挙げることができる。本明細書において用いられるドナー残基は、宿主から単離された元の可変領域に見られる残基、特に、ヒトフレームワークの所定のアミノ酸をドナーフレームワークの対応する位置のアミノ酸で置換する残基を指す。
【０３９６】
一実施形態において、結合ドメインまたは個々の結合ドメインは、抗体または抗体断片の一部である（含まれているかまたは組み込まれている）。
【０３９７】
一実施形態において、本開示の分子中の結合ドメインは、免疫グロブリン／抗体分子中にある。
【０３９８】
本明細書において使用される場合、「抗体分子」は、抗体およびその結合断片を含む。
【０３９９】
一実施形態において、本明細書において使用される「抗体」という用語は、免疫グロブリン分子の可変領域内に位置する、少なくとも１つの抗原認識部位（本明細書において結合部位または結合ドメインとも呼ばれる）を介して、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、ポリペプチド、ペプチドなどの標的抗原に特異的に結合することができる免疫グロブリン分子を指す。
【０４００】
本明細書において用いられる「抗体断片」は、限定するものではないが、Ｆａｂ、改変Ｆａｂ、Ｆａｂ’、改変Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、単一ドメイン抗体、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、二価、三価または四価抗体、Ｂｉｓ−ｓｃＦｖ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディおよび上記のいずれかのエピトープ結合断片を含む抗体の結合断片を指す（例えば、ＨｏｌｌｉｇｅｒおよびＨｕｄｓｏｎ、２００５年、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３（９）：１１２６−１１３６頁；ＡｄａｉｒおよびＬａｗｓｏｎ、２００５年、Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｒｅｖｉｅｗｓ−Ｏｎｌｉｎｅ  ２（３）、２０９−２１７頁を参照されたい）。
【０４０１】
本明細書において用いられる「結合断片」は、断片がペプチドまたは抗原に特異的であることを特徴付けるために十分な親和性で、標的ペプチドまたは抗原に結合することができる断片を指す。
【０４０２】
これらの抗体断片を作製し製造する方法は、当技術分野において周知である（例えば、Ｖｅｒｍａら、１９９８年、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ、２１６：１６５−１８１頁を参照されたい）。本開示に使用するための他の抗体断片には、国際公開第０５／００３１６９号パンフレット、国際公開第０５／００３１７０号パンフレットおよび国際公開第０５／００３１７１号パンフレットに記載のＦａｂおよびＦａｂ’断片が含まれる。多価抗体は、多重特異性を含むことができ、例えば、二重特異性であっても、または単一特異性であってもよい（例えば、国際公開第９２／２２８５３号パンフレット、国際公開第０５／１１３６０５号パンフレット、国際公開第２００９／０４０５６２号パンフレットおよび国際公開第２０１０／０３５０１２号パンフレットを参照されたい）。
【０４０３】
抗体または抗体断片を含む構築物には、キメラ抗原受容体（シグナル伝達ドメインに接した膜アンカー型抗体／断片である）および改変Ｔ細胞受容体（これもまた膜アンカー型タンパク質）が含まれる。
【０４０４】
本明細書において使用される「Ｆａｂ断片」という用語は、ＶＬ（可変軽鎖）ドメインおよび軽鎖の定常ドメイン（ＣＬ）を含む軽鎖断片と、ＶＨ（可変重鎖）ドメインおよび重鎖の第１定常ドメイン（ＣＨ１）とを含む抗体断片を指す。
【０４０５】
Ｆｖは、２つの可変ドメイン、例えば、同族対または親和性成熟可変ドメイン、すなわちＶＨおよびＶＬ対などの協同的可変ドメインを指す。
【０４０６】
本明細書において用いられる協同的可変ドメインは、互いに相補的な可変ドメインおよび／または両方が、問題の抗原に特異的なＦｖ（ＶＨ／ＶＬ対）を提供するために抗原結合に寄与する可変ドメインである。
【０４０７】
以下は、本開示の抗体分子に用いることができる例示的な抗体フォーマットのリストである。
【０４０８】
「単一ドメイン抗体」（本明細書においてｄａｂおよびｓｄＡｂとも呼ばれる）は、本明細書において使用する場合、単一の単量体可変抗体ドメインからなる抗体断片を指す。単一ドメイン抗体の例としては、ＶＨまたはＶＬまたはＶＨＨが挙げられる。
【０４０９】
タンデム−ｓｄＡｂは、本明細書において用いる場合、リンカー、例えばペプチドリンカーによって連結された、特に、異なる抗原に対して特異性を有する２つのドメイン抗体を指す。
【０４１０】
タンデム−ｓｄＡｂ−ｓｄＡｂは、本明細書において用いる場合、２つのリンカー、例えばペプチドリンカーによって直列に連結された、特に、異なる抗原に対して特異性を有する３つのドメイン抗体を指す。
【０４１１】
ｄｓＦｖは、本明細書において用いる場合、可変内ジスルフィド結合を有するＦｖを指す。ｄｓＦｖはより大きな分子の成分であってもよく、例えば、可変ドメインの１つは、例えばアミノ酸リンカーを介して別の抗体断片／成分に連結されていてもよい。
【０４１２】
（ｄｓＦｖ）２は、本明細書において用いる場合、１つのドメインが、例えば、（例えば、２つのＶＨのＣ末端の間で）ペプチドリンカーまたはジスルフィド結合を介して第２のｄｓＦｖのドメインに連結されたｄｓＦｖを指し、そのフォーマットは下記の（ｓｃＦｖ）２と類似しているが、可変領域の各対は、可変領域内ジスルフィド結合を含む。
【０４１３】
成分は、本明細書において用いる場合、本開示の多重特異性分子の基本単位または部分を指し、特に本明細書に記載のｓｃＦｖ、Ｆａｂまたは他の断片のような抗体断片である。
【０４１４】
一本鎖Ｆｖまたは略して「ｓｃＦｖ」は、本明細書において使用される場合、（例えば、ペプチドリンカーによって）連結されて単一ポリペプチド鎖を形成するＶＨおよびＶＬ抗体ドメインを含む抗体断片を指す。重鎖および軽鎖の定常領域はこのフォーマットでは省略されている。
【０４１５】
ｄｓｓｃＦｖは、本明細書において用いる場合、可変領域内ジスルフィド結合を有するｓｃＦｖを指す。
【０４１６】
タンデムｓｃＦｖ（本明細書においてｄｉｓｃＦｖまたは（ｓｃＦｖ）２とも呼ばれる）は、本明細書において用いる場合、例えば図９ｂに示すように、単一のＦｖ間リンカーが存在するように単一のリンカーを介して連結された２つのｓｃＦｖを指す。
【０４１７】
タンデムｄｓｓｃＦｖ（本明細書においてｓｃＦｖｄｓｓｃＦｖまたはｄｓｓｃＦｖｓｃＦｖとも呼ばれる）は、本明細書において用いる場合、例えば図９ｂに示すように、単一のＦｖ間リンカーが存在するように単一のリンカーを介して連結され、ｓｃＦｖの１つが可変領域内ジスルフィド結合を有する２つのｓｃＦｖを指す。
【０４１８】
タンデムｄｉｄｓｓｃＦｖ（本明細書ではｄｉｄｓｓｃＦｖとも呼ばれる）は、本明細書において用いる場合、例えば図９ｂに示すように、単一のＦｖ間リンカーが存在するように単一のリンカーを介して連結され、各ｓｃＦｖが可変領域内ジスルフィド結合を含む２つのｓｃＦｖを指す。
【０４１９】
ｓｃＦｖ−ｄｓＦｖは、本明細書において用いる場合、ｄｓＦｖを形成するようにジスルフィド結合を介して連結された２つの可変ドメインで構成されるＦｖドメインに、例えばペプチドリンカーによって連結されたｓｃＦｖである。このフォーマットでは、ｓｃＦｖのＶＨまたはＶＬを、ｄｓＦｖのＶＨまたはＶＬに連結することができる。
【０４２０】
ｄｓｓｃＦｖ−ｄｓＦｖは、本明細書において用いる場合、ｄｓＦｖを形成するようにジスルフィド結合を介して連結された２つの可変ドメインで構成されるＦｖドメインに、例えばペプチドリンカーによって連結されたｄｓｓｃＦｖである。このフォーマットでは、ｄｓｓｃＦｖのＶＨまたはＶＬを、ｄｓＦｖのＶＨまたはＶＬに連結することができる。
【０４２１】
ダイアボディは、本明細書において用いる場合、第一のＦｖのＶＨが第二のＦｖのＶＬに連結され、第一のＦｖのＶＬが第２のＦｖのＶＨに連結されるように２つのＦｖ間リンカーを有する、２つのＦｖ対、ＶＨ／ＶＬを指す。
【０４２２】
ｄｓダイアボディは、本明細書において用いる場合、可変領域内ジスルフィド結合を含むダイアボディを指す。
【０４２３】
ｄｉｄｓダイアボディは、本明細書において用いる場合、２つの可変領域内ジスルフィド結合を含む、すなわち、可変領域の各対の間に１つのｄｓを含むダイアボディを指す。
【０４２４】
ｓｃ−ダイアボディは、本明細書において用いる場合、分子が３つのリンカーを含み、２つの通常のｓｃＦｖ、例えばＶＨ１リンカーＶＬ１リンカーＶＨ２リンカーＶＬ２を形成するように、Ｆｖ内リンカーを含むダイアボディを指す。
【０４２５】
ｄｓｓｃ−ダイアボディは、本明細書において用いる場合、可変領域内ジスルフィド結合を有するｓｃ−ダイアボディを指す。
【０４２６】
ｄｉｄｓｓｃ−ダイアボディは、本明細書において用いる場合、可変領域の各対の間に可変領域内ジスルフィド結合を有するｓｃ−ダイアボディを指す。
【０４２７】
Ｄａｒｔは、本明細書において用いる場合、ＶＨ１およびＶＨ２のＣ末端がジスルフィド結合によって結合されている、ＶＬ１リンカーＶＨ２リンカーおよびＶＨ１リンカーＶＬ２を指す、Ｐａｕｌ  Ａ．Ｍｏｏｒｅら、Ｂｌｏｏｄ、２０１１年；１１７（１７）：４５４２−４５５１頁。
【０４２８】
Ｂｉｔｅ（登録商標）は、本明細書において用いる場合、以下のフォーマットで２対の可変ドメインを含む分子を指す；対１由来のドメイン（例えばＶＨ１）が、リンカーを介して対２由来のドメイン（例えば、ＶＨ２またはＶＬ２）に連結され、前記第２のドメインが、リンカーによってさらなる対１由来のドメイン（例えばＶＬ１）に連結され、次に対２由来の残りのドメイン（すなわちＶＬ２またはＶＨ２）に連結される。
【０４２９】
Ｄｉ−ダイアボディは、Ｎｕｎｅｚ−Ｐｒａｄｏら、特にその中の図１の分子番号２５を参照されたい。
【０４３０】
Ｄｓｄｉ−ダイアボディは、本明細書において用いる場合、可変領域内ジスルフィド結合を有するｄｉ−ダイアボディである。
【０４３１】
Ｄｉｄｓｄｉ−ダイアボディは、本明細書において用いる場合、可変領域の各対の間に可変領域内ジスルフィド結合を有するｄｉ−ダイアボディである。
【０４３２】
トリアボディは、本明細書において用いる場合、３つのＦｖおよび３つのＦｖ間リンカーを含む、ダイアボディに類似のフォーマットを指す。
【０４３３】
ｄｓトリアボディは、本明細書において用いる場合、可変ドメイン対の１つの間に可変領域内ジスルフィド結合を含むトリアボディを指す。
【０４３４】
Ｄｉｄｓトリアボディは、本明細書において用いる場合、２つの可変領域内ジスルフィド結合を含む、すなわち２つの可変ドメイン対のそれぞれの間に１つのｄｓを含むトリアボディを指す。
【０４３５】
Ｔｒｉｄｓトリアボディは、本明細書において用いる場合、３つの可変領域内ジスルフィド結合を含む、すなわち可変領域の各対の間に１つのｄｓを含むトリアボディを指す。
【０４３６】
テトラボディは、本明細書において用いる場合、４つのＦｖおよび４つのＦｖ間リンカーを含む、ダイアボディに類似したフォーマットを指す。
【０４３７】
ｄｓテトラボディは、本明細書において用いる場合、可変ドメイン対の１つの間に可変領域内ジスルフィド結合を含むテトラボディを指す。
【０４３８】
Ｄｉｄｓテトラボディは、本明細書において用いる場合、２つの可変領域内ジスルフィド結合を含む、すなわち２つの可変ドメイン対のそれぞれの間に１つのｄｓを含むテトラボディを指す。
【０４３９】
Ｔｒｉｄｓテトラボディは、本明細書において用いる場合、３つの可変領域内ジスルフィド結合を含む、すなわち可変領域の３つの対のそれぞれの間に１つのｄｓを含むテトラボディを指す。
【０４４０】
テトラｄｓテトラボディは、本明細書において用いる場合、４つの可変領域内ジスルフィド結合を含む、すなわち各可変ドメインの間に１つのｄｓを含むテトラボディを指す。
【０４４１】
トリボディ（Ｆａｂ（ｓｃＦｖ）２とも呼ばれる）は、本明細書において用いる場合、第１のｓｃＦｖが軽鎖のＣ末端に付加され、第２のｓｃＦｖが重鎖のＣ末端に付加されたＦａｂ断片を指す。
【０４４２】
ｄｓトリボディは、本明細書において用いる場合、２つの位置のうちの１つにｄｓｓｃＦｖを含むトリボディを指す。
【０４４３】
ｄｉｄｓトリボディまたはＴｒＹｂｅは、本明細書において用いる場合、２つのｄｓｓｃＦｖを含むトリボディを指す。
【０４４４】
ｄｓＦａｂは、本明細書において用いる場合、可変領域内ジスルフィド結合を有するＦａｂを指す。
【０４４５】
ｄｓＦａｂ’は、本明細書において用いる場合、可変領域内ジスルフィド結合を有するＦａｂ’を指す。
【０４４６】
ｓｃＦａｂは、一本鎖Ｆａｂ断片である。
【０４４７】
ｓｃＦａｂ’は、一本鎖Ｆａｂ’断片である。
【０４４８】
ｄｓｓｃＦａｂは、一本鎖のｄｓＦａｂである。
【０４４９】
ｄｓｓｃＦａｂ’は、一本鎖のｄｓＦａｂ’である。
【０４５０】
Ｆａｂｄａｂは、本明細書において用いる場合、ドメイン抗体が、場合によりリンカーを介してその重鎖または軽鎖に付加されたＦａｂ断片を指す。
【０４５１】
Ｆａｂ’ｄａｂは、本明細書において用いる場合、ドメイン抗体が、場合によりリンカーを介してその重鎖または軽鎖に付加されたＦａｂ’断片を指す。
【０４５２】
ＦａｂＦｖは、本明細書において用いる場合、追加の可変領域が、重鎖のＣＨ１および軽鎖のＣＬのそれぞれのＣ末端に付加されたＦａｂ断片を指し、例えば国際公開第２００９／０４０５６２号パンフレットを参照されたい。このフォーマットは、そのＰＥＧ化型として提供されてもよく、例えば国際公開第２０１１／０６１４９２号パンフレットを参照されたい。
【０４５３】
Ｆａｂ’Ｆｖは、本明細書において用いる場合、Ｆａｂ部分がＦａｂ’に置換された、ＦａｂＦｖに類似したものである。このフォーマットは、そのＰＥＧ化型として提供されてもよい。
【０４５４】
ＦａｂｄｓＦｖは、本明細書において用いる場合、Ｆｖ内ジスルフィド結合が、付加されたＣ末端可変領域を安定化させているＦａｂＦｖを指し、例えば国際公開第２０１０／０３５０１２号パンフレットを参照されたい。このフォーマットは、そのＰＥＧ化型として提供されてもよい。
【０４５５】
Ｆａｂ単一リンカーＦｖおよびＦａｂ’単一リンカーは、本明細書において用いる場合、例えばペプチドリンカーによって可変ドメインに連結されたＦａｂまたはＦａｂ’断片を指し、前記可変ドメインは、可変ドメイン内ジスルフィド結合を介して第２の可変ドメインに連結され、それによってｄｓＦｖを形成する（例えば、国際公開第２０１４／０９６３９０号パンフレットを参照されたい）。
【０４５６】
Ｆａｂ−ｓｃＦｖ（バイボディとも呼ばれる）は、本明細書において用いる場合、ｓｃＦｖが、場合によりリンカーを介して、軽鎖または重鎖のＣ末端に付加されたＦａｂ分子である。
【０４５７】
Ｆａｂ’−ｓｃＦｖは、本明細書において用いる場合、ｓｃＦｖが、場合によりリンカーを介して、軽鎖または重鎖のＣ末端に付加されたＦａｂ’分子である。
【０４５８】
ＦａｂｄｓｓｃＦｖまたはＢＹｂｅは、本明細書において用いる場合、一本鎖Ｆｖの可変領域間にジスルフィド結合を有するＦａｂ−ｓｃＦｖである。
【０４５９】
Ｆａｂ’ｄｓｓｃＦｖは、本明細書において用いる場合、一本鎖Ｆｖの可変領域間にジスルフィド結合を有するＦａｂ’ｓｃＦｖである。
【０４６０】
ＦａｂｓｃＦｖ−ｄａｂは、本明細書において用いる場合、ｓｃＦｖが一方の鎖のＣ末端に付加され、ドメイン抗体が他方の鎖のＣ末端に付加されたＦａｂを指す。
【０４６１】
Ｆａｂ’ｓｃＦｖ−ｄａｂは、本明細書において用いる場合、ｓｃＦｖが一方の鎖のＣ末端に付加され、ドメイン抗体が他方の鎖のＣ末端に付加されたＦａｂ’を指す。
【０４６２】
ＦａｂｄｓｓｃＦｖ−ｄａｂは、本明細書において用いる場合、ｄｓｓｃＦｖが一方の鎖のＣ末端に付加され、ドメイン抗体が他方の鎖のＣ末端に付加されたＦａｂを指す。
【０４６３】
Ｆａｂ’ｄｓｓｃＦｖ−ｄａｂは、本明細書において用いる場合、ｄｓｓｃＦｖが一方の鎖のＣ末端に付加され、ドメイン抗体が他方の鎖のＣ末端に付加されたＦａｂ’を指す。
【０４６４】
ＦａｂｓｃＦｖ単一リンカーＦｖは、本明細書において用いる場合、ＦｖのドメインがＦａｂの重鎖または軽鎖に連結され、ｓｃＦｖが他のＦａｂ鎖に連結され、Ｆｖのドメインが可変領域内ジスルフィドにより連結されたＦａｂ単一リンカーＦｖを指す。
【０４６５】
ＦａｂｄｓｓｃＦｖ単一リンカーＦｖは、本明細書において用いる場合、ｓｃＦｖが可変領域内ジスルフィド結合を含むＦａｂｓｃＦｖ単一リンカーＦｖを指す。
【０４６６】
Ｆａｂ’ｓｃＦｖ単一リンカーＦｖは、本明細書において用いる場合、ＦｖのドメインがＦａｂの重鎖または軽鎖に連結され、ｓｃＦｖが他のＦａｂ鎖に連結され、Ｆｖのドメインが、可変領域内ジスルフィドによって連結されているＦａｂ’単一リンカーＦｖを指す。
【０４６７】
Ｆａｂ’ｄｓｓｃＦｖ単一リンカーＦｖは、本明細書において用いる場合、ｓｃＦｖが、可変領域内ジスルフィド結合を含むＦａｂ’ｓｃＦｖ単一リンカーＦｖを指す。
【０４６８】
ＦｖＦａｂＦｖは、本明細書において用いる場合、第１のＦｖのドメインがＦａｂの重鎖および軽鎖のＮ末端に付加され、第２のＦｖのドメインが重鎖および軽鎖のＣ末端に付加されたＦａｂを指す。
【０４６９】
ＦｖＦａｂ’Ｆｖは、本明細書において用いる場合、第１のＦｖのドメインがＦａｂ’の重鎖および軽鎖のＮ末端に付加され、第２のＦｖのドメインが重鎖および軽鎖のＣ末端に付加されたＦａｂ’を指す。
【０４７０】
ｄｓＦｖＦａｂＦｖは、本明細書において用いる場合、第１のＦｖのドメインがＦａｂの重鎖および軽鎖のＮ末端に付加され、前記第１のＦｖが可変領域内ジスルフィド結合を含み、第２のＦｖのドメインが重鎖および軽鎖のＣ末端に付加されたＦａｂを指す。
【０４７１】
ＦｖＦａｂｄｓＦｖは、本明細書において用いる場合、第１のＦｖのドメインがＦａｂの重鎖および軽鎖のＮ末端に付加され、第２のＦｖのドメインが重鎖および軽鎖のＣ末端に付加され、前記第２のＦｖが可変領域内ジスルフィド結合を含むＦａｂを指す。
【０４７２】
ｄｓＦｖＦａｂ’Ｆｖは、本明細書において用いる場合、第１のＦｖのドメインがＦａｂ’の重鎖および軽鎖のＮ末端に付加され、前記第１のＦｖが可変領域内ジスルフィド結合を含み、第２のＦｖのドメインが重鎖および軽鎖のＣ末端に付加されたＦａｂ’を指す。
【０４７３】
ＦｖＦａｂ’ｄｓＦｖは、本明細書において用いる場合、第１のＦｖのドメインが重鎖および軽鎖のＮ末端に付加され、第２のＦｖのドメインがＦａｂ’の重鎖および軽鎖のＣ末端に付加され、前記第２のＦｖが可変領域内ジスルフィド結合を含むＦａｂ’を指す。
【０４７４】
ｄｓＦｖＦａｂｄｓＦｖは、本明細書において用いる場合、第１のＦｖのドメインがＦａｂの重鎖および軽鎖のＮ末端に付加され、前記第１のＦｖが可変領域内ジスルフィド結合を含み、第２のＦｖのドメインが重鎖および軽鎖のＣ末端に付加され、前記第２のＦｖもまた可変領域内ジスルフィド結合を含むＦａｂを指す。
【０４７５】
ｄｓＦｖＦａｂ’ｄｓＦｖは、本明細書において用いる場合、第１のＦｖのドメインがＦａｂ’の重鎖および軽鎖のＮ末端に付加され、前記第１のＦｖが可変領域内ジスルフィド結合を含み、第２のＦｖのドメインが重鎖および軽鎖のＣ末端に付加され、前記第２のＦｖもまた可変領域内ジスルフィド結合を含むＦａｂ’を指す。
【０４７６】
ＦａｂＦｖＦｖは、本明細書において用いる場合、２対のＦｖが重鎖および軽鎖のＣ末端に直列に付加されたＦａｂ断片を指し、例えば、国際公開第２０１１／０８６０９１号パンフレットを参照されたい。
【０４７７】
Ｆａｂ’ＦｖＦｖは、本明細書において用いる場合、２対のＦｖが重鎖および軽鎖のＣ末端に直列に付加されたＦａｂ’断片を指し、例えば、国際公開第２０１１／０８６０９１号パンフレットを参照されたい。
【０４７８】
ＦａｂｄｓＦｖＦｖは、本明細書において用いる場合、２対のＦｖが重鎖および軽鎖のＣ末端に直列に付加され、Ｃ末端に直接結合した第１のＦｖ対が可変領域内ジスルフィド結合を含むＦａｂ断片を指し、例えば国際公開第２０１１／０８６０９１号パンフレットを参照されたい。
【０４７９】
Ｆａｂ’ｄｓＦｖＦｖは、本明細書において用いる場合、２対のＦｖが重鎖および軽鎖のＣ末端に直列に付加され、Ｃ末端に直接結合した第１のＦｖ対が可変領域内ジスルフィド結合を含むＦａｂ’断片を指し、例えば国際公開第２０１１／０８６０９１号パンフレットを参照されたい。
【０４８０】
ＦａｂＦｖｄｓＦｖは、本明細書において用いる場合、２対のＦｖが重鎖および軽鎖のＣ末端に直列に付加され、分子の「Ｃ」末端の第２のＦｖ対が可変領域内ジスルフィド結合を含むＦａｂ断片を指す。
【０４８１】
Ｆａｂ’ＦｖｄｓＦｖは、本明細書において用いる場合、２対のＦｖが重鎖および軽鎖のＣ末端に直列に付加され、分子の「Ｃ」末端の第２のＦｖ対が可変領域内ジスルフィド結合を含むＦａｂ’断片を指す。
【０４８２】
ＦａｂｄｓＦｖｄｓＦｖは、本明細書において用いる場合、２対のＦｖが重鎖および軽鎖のＣ末端に直列に付加され、第１および第２のＦｖ対が可変領域内ジスルフィド結合を含むＦａｂ断片を指す。
【０４８３】
Ｆａｂ’ｄｓＦｖｄｓＦｖは、本明細書において用いる場合、２対のＦｖが重鎖および軽鎖のＣ末端に直列に付加され、第１および第２のＦｖが可変領域内ジスルフィド結合を含むＦａｂ’断片を指す。
【０４８４】
ＤｉＦａｂは、本明細書において用いる場合、重鎖のＣ末端を介して連結された２つのＦａｂ分子を指す。
【０４８５】
ＤｉＦａｂ’は、本明細書において用いる場合、ヒンジ領域内の１または複数のジスルフィド結合を介して連結された２つのＦａｂ’分子を指す。
【０４８６】
ＤｉＦａｂおよびＤｉＦａｂ’分子は、それらの化学的にコンジュゲートされた形態を含む。
【０４８７】
（ＦａｂｓｃＦｖ）２は、本明細書において用いる場合、２つのｓｃＦｖが付加されている、例えば、重鎖または軽鎖、例えば重鎖のＣ末端に付加されているｄｉＦａｂ分子を指す。
【０４８８】
（Ｆａｂ’ｓｃＦｖ）２は、本明細書において用いる場合、２つのｓｃＦｖが付加されている、例えば、重鎖または軽鎖、例えば重鎖のＣ末端に付加されているｄｉＦａｂ’分子を指す。
【０４８９】
（Ｆａｂ）２ｓｃＦｖｄｓＦｖは、本明細書において用いる場合、ｓｃＦｖおよびｄｓＦｖが、例えばそれぞれの重鎖Ｃ末端から１つ付加されたｄｉＦａｂを指す。
【０４９０】
（Ｆａｂ’）２ｓｃＦｖｄｓＦｖは、本明細書において用いる場合、ｓｃＦｖおよびｄｓＦｖが、例えばそれぞれの重鎖Ｃ末端から１つ付加されたｄｉＦａｂ’を指す。
【０４９１】
（Ｆａｂ）２ｄｓｓｃＦｖｄｓＦｖは、本明細書において用いる場合、ｄｓｓｃＦｖおよびｄｓＦｖが、例えば重鎖Ｃ末端から付加されたｄｉＦａｂを指す。
【０４９２】
（Ｆａｂ’）２ｄｓｓｃＦｖｄｓＦｖは、本明細書において用いる場合、ｄｓｓｃＦｖおよびｄｓＦｖが、例えば重鎖Ｃ末端から付加されたｄｉＦａｂ’を指す。
【０４９３】
ミニボディは、本明細書において用いる場合、（ＶＬ／ＶＨ−ＣＨ３）２を指す。
【０４９４】
ｄｓミニボディは、本明細書において用いる場合、１つのＶＬ／ＶＨが、可変領域内ジスルフィド結合を含む（ＶＬ／ＶＨ−ＣＨ３）２を指す。
【０４９５】
ｄｉｄｓミニボディは、本明細書において用いる場合、（ｄｓＦｖ−ＣＨ３）２を指す。
【０４９６】
「カッパ／ラムダ体」または「κ／λ体」は、２つの軽鎖が互いに異なり、一方はラムダ軽鎖（ＶＬ−ＣＬ）であり、他方はカッパ軽鎖（ＶＫ−ＣＫ）である、２つの重鎖および２つの軽鎖を有する、正常なＩｇＧのフォーマットである。重鎖は、国際公開第２０１２／０２３０５３号パンフレットに記載のようにＣＤＲにおいても同一である。
【０４９７】
ｓｃＦｖ−Ｆｃは、本明細書において用いる場合、分子が２つの結合ドメインを有するように、例えばヒンジを介して、定常領域断片−（ＣＨ２ＣＨ３）のＣＨ２ドメインのＮ末端に付加されたｓｃＦｖを指す。
【０４９８】
ｄｓｓｃＦｖ−Ｆｃは、本明細書において用いる場合、分子が２つの結合ドメインを有するように、例えばヒンジを介して、定常領域断片−（ＣＨ２ＣＨ３）２のＣＨ２ドメインのＮ末端に付加されたｄｓｓｃＦｖと第２のＣＨ２ドメインのＮ末端に付加されたｓｃＦｖとを指す。
【０４９９】
ｄｉｄｓｓｃＦｖ−Ｆｃは、本明細書において用いる場合、分子が２つの結合ドメインを有するように、例えばヒンジを介して、定常領域断片−（ＣＨ２ＣＨ３）２のＣＨ２ドメインのＮ末端に付加されたｓｃＦｖを指す。
【０５００】
タンデムｓｃＦｖ−Ｆｃは、本明細書において用いる場合、分子が４つの結合ドメインを有するように、例えばヒンジを介して、定常領域断片−（ＣＨ２ＣＨ３）のＣＨ２ドメインのＮ末端にそれぞれが直列に付加された２つのタンデムｓｃＦｖを指す。
【０５０１】
ｓｃダイアボディ−Ｆｃは、本明細書において用いる場合、それぞれが、例えばヒンジを介して、定常領域断片−ＣＨ２ＣＨ３のＣＨ２ドメインのＮ末端に付加された２つのｓｃダイアボディである。
【０５０２】
ＳｃＦｖ−Ｆｃ−ｓｃＦｖは、本明細書において用いる場合、それぞれのうちの１つが−ＣＨ２ＣＨ３断片の重鎖および軽鎖の両方のＮ末端およびＣ末端に付加された４つのｓｃＦｖを指す。
【０５０３】
ｓｃダイアボディ−ＣＨ３は、本明細書において用いる場合、それぞれが、例えばヒンジを介してＣＨ３ドメインに連結された２つのｓｃダイアボディ分子を指す。
【０５０４】
ＩｇＧ−ｓｃＦｖは、本明細書において用いる場合、各重鎖または各軽鎖のＣ末端にｓｃＦｖを有する完全長抗体である。
【０５０５】
ｓｃＦｖ−ＩｇＧは、本明細書において用いる場合、各重鎖または各軽鎖のＮ末端にｓｃＦｖを有する完全長抗体である。
【０５０６】
Ｖ−ＩｇＧは、本明細書において用いる場合、各重鎖または各軽鎖のＮ末端に可変ドメインを有する完全長抗体である。
【０５０７】
ＩｇＧ−Ｖは、本明細書において用いる場合、各重鎖または各軽鎖のＣ末端に可変ドメインを有する完全長抗体である。
【０５０８】
ＤＶＤ−Ｉｇ（二重ＶドメインＩｇＧとしても知られている）は、各重鎖および各軽鎖のＮ末端に１つずつ、４つの追加の可変ドメインを有する完全長抗体である。
【０５０９】
Ｄｕｏｂｏｄｙまたは「Ｆａｂ−アーム交換」は、本明細書において用いる場合、２つの異なるモノクローナル抗体の定常ドメイン（典型的にはＣＨ３）において適合し、相補的に操作されたアミノ酸変化が、混合の際にヘテロ二量体の形成を導く二重特異性ＩｇＧフォーマット抗体である。第１の抗体からの重鎖：軽鎖の対は、残基の工学の結果として、第２の抗体の重鎖：軽鎖の対と会合するほうを好む。例えば、国際公開第２００８／１１９３５３号パンフレット、国際公開第２０１１／１３１７４６号パンフレットおよび国際公開第２０１３／０６０８６７号パンフレットを参照されたい。
【０５１０】
一実施形態において、本開示による抗体分子は、式Ａ−Ｘ：Ｙ−Ｂ
（式中、
Ａ−Ｘは第１の融合タンパク質であり；
Ｙ−Ｂは第２の融合タンパク質であり；
Ｘ：Ｙはヘテロ二量体テザーであり；
：は、ＸとＹとの間の結合相互作用であり；
Ａは、ＦａｂまたはＦａｂ’断片から選択される二重特異性の第１のタンパク質成分であり；
Ｂは、ＦａｂまたはＦａｂ’から選択される二重特異性の第２タンパク質成分であり；
Ｘは、抗原または抗体もしくはその結合断片から独立して選択される、結合対の第１の結合パートナーであり；
Ｙは、抗原または抗体もしくはその結合断片から独立して選択される、結合対の第２の結合パートナーであり；
但し、Ｘが抗原である場合、ＹはＸで表される抗原に特異的な抗体またはその結合断片であり、Ｙが抗原である場合、ＸはＹで表される抗原に特異的な抗体またはその結合断片である）
を有する二重特異性タンパク質複合体である。
【０５１１】
一態様において、
ａ）式（Ｉ）のポリペプチド鎖：
ＶＨ−ＣＨ１−Ｘ−（Ｖ１）ｐ；
ｂ）式（ＩＩ）のポリペプチド鎖：
ＶＬ−ＣＬ−Ｙ−（Ｖ２）ｑ；
（式中、
ＶＨは、重鎖可変ドメインを表し；
ＣＨ１は、重鎖定常領域のドメイン、例えばそのドメイン１を表し；
Ｘは、結合またはリンカー、例えばアミノ酸リンカーを表し；
Ｙは、結合またはリンカー、例えばアミノ酸リンカーを表し；
Ｖ１は、ｄａｂ、ｓｃＦｖ、ｄｓｓｃＦｖまたはｄｓＦｖを表し；
ＶＬは、可変ドメイン、例えば軽鎖可変ドメインを表し；
ＣＬは、定常領域由来のドメイン、例えば軽鎖定常領域ドメイン、例えばＣカッパを表し；
Ｖ２は、ｄａｂ、ｓｃＦｖ、ｄｓｓｃＦｖまたはｄｓＦｖを表し；
ｐは、０または１であり；
ｑは、０または１であり；
ｐが１である場合、ｑは０または１であり、ｑが１である場合、ｐは０または１であり、すなわちｐおよびｑが両方とも０を表すことはない）
を含むか、またはこれらからなる多重特異性抗体分子が提供される。
【０５１２】
一実施形態において、多重特異性抗体分子は、ＣＤ２２に対する１以下の結合ドメインを含み、ＣＤ７９に対する１以下の結合ドメインを含む。
【０５１３】
一実施形態において、ｑが０であり、ｐが１である。
【０５１４】
一実施形態において、ｑが１であり、ｐが１である。
【０５１５】
一実施形態において、Ｖ１はｄａｂであり、Ｖ２はｄａｂであり、これらは一緒になって、場合によりジスルフィド結合により連結された可変領域の協同的な対、例えば同族ＶＨ／ＶＬ対の単一結合ドメインを形成する。
【０５１６】
一実施形態において、ＶＨおよびＶＬはＣＤ７９、例えばＣＤ７９ａまたはＣＤ７９ｂに特異的である。
【０５１７】
一実施形態において、Ｖ１は、ＣＤ７９、例えばＣＤ７９ａまたはＣＤ７９ｂに特異的である。
【０５１８】
一実施形態において、Ｖ２はＣＤ７９、例えばＣＤ７９ａまたはＣＤ７９ｂに特異的である。
【０５１９】
一実施形態において、Ｖ１およびＶ２は一緒になって（例えば、結合ドメインとして）、ＣＤ７９、例えばＣＤ７９ａまたはＣＤ７９ｂに特異的であり、ＶＨおよびＶＬはＣＤ２２に特異的である。
【０５２０】
一実施形態において、Ｖ１はＣＤ２２に特異的である。
【０５２１】
一実施形態において、Ｖ２はＣＤ２２に特異的である。
【０５２２】
一実施形態において、Ｖ１およびＶ２は一緒になって（例えば、１つの結合ドメインとして）、ＣＤ２２に特異的であり、ＶＨおよびＶＬはＣＤ７９に特異的である。
【０５２３】
一実施形態において、Ｖ１はＣＤ２２に特異的であり、Ｖ２はアルブミンに特異的であり、ＶＨおよびＶＬはＣＤ７９に特異的である。
【０５２４】
一実施形態において、Ｖ１はアルブミンに特異的であり、Ｖ２はＣＤ２２に特異的であり、ＶＨおよびＶＬはＣＤ７９に特異的である。
【０５２５】
一実施形態において、Ｖ１はＣＤ７９に特異的であり、Ｖ２はアルブミンに特異的であり、ＶＨおよびＶＬはＣＤ２２に特異的である。
【０５２６】
一実施形態において、Ｖ１はアルブミンに特異的であり、Ｖ２はＣＤ７９に特異的であり、ＶＨおよびＶＬはＣＤ２２に特異的である。
【０５２７】
一実施形態において、Ｖ１はＣＤ２２に特異的なｄｓｓｃＦｖであり、Ｖ２はアルブミンに特異的なｄｓｓｃＦｖであり、ＶＨおよびＶＬはＣＤ７９に特異的である。
【０５２８】
一実施形態において、Ｖ１はアルブミンに特異的なｄｓｓｃＦｖであり、Ｖ２はＣＤ２２に特異的なｄｓｃＦｖであり、ＶＨおよびＶＬはＣＤ７９に特異的である。
【０５２９】
一実施形態において、Ｖ１はＣＤ７９に特異的なｄｓｓｃＦｖであり、Ｖ２はアルブミンに特異的なｄｓｓｃＦｖであり、ＶＨおよびＶＬはＣＤ２２に特異的である。
【０５３０】
一実施形態において、Ｖ１はアルブミンに特異的なｄｓｓｃＦｖであり、Ｖ２はＣＤ７９に特異的なｄｓｓｃＦｖであり、ＶＨおよびＶＬはＣＤ２２に特異的である。
【０５３１】
上記の構築物中のＶ１、Ｖ２、ＶＨおよびＶＬは、それぞれ結合ドメインを表し、本明細書で提供される配列のいずれかを組み込むことができる。
【０５３２】
ＸおよびＹは、任意の適切なリンカーを表し、例えば、ＸおよびＹは、独立して、ＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２７１）またはＳＧＧＧＧＴＧＧＧＧＳ（配列番号２７２）であり得る。
【０５３３】
一実施形態において、Ｖ１および／またはＶ２がｄａｂ、ｄｓＦｖまたはｄｓｓｃＦｖである場合、Ｖ１および／またはＶ２の可変ドメインＶＨおよびＶＬ間のジスルフィド結合は、ＶＨ４４位およびＶＬ１００位の間に形成される。
【０５３４】
多重特異性抗体分子中の可変領域の１または複数の対がＶＨとＶＬとの間のジスルフィド結合を含む場合、これは、任意の適切な位置、例えば以下に列挙される２つの残基の間にあり得る（文脈が特に他のことを示さない限り、下記のリストにはＫａｂａｔのナンバリングが用いられる）。Ｋａｂａｔのナンバリングを参照する場合、関連する参考文献はＫａｂａｔら、１９８７年、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、ＵＳ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＨ、ＵＳＡである。
【０５３５】
一実施形態において、ジスルフィド結合は、下記を含む群から選択される位置にある：
・ＶＨ３７＋ＶＬ９５Ｃ  例えば、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ６、７８１−７８８頁、Ｚｈｕら（１９９７年）を参照されたい；
・ＶＨ４４＋ＶＬ１００  例えば、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３３  ５４５１−５４５９頁、Ｒｅｉｔｅｒら、（１９９４年）；またはＪｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２６９巻、２８、１８３２７−１８３３１頁、Ｒｅｉｔｅｒら（１９９４年）；またはＰｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、１０巻１２、１４５３−１４５９頁、Ｒａｊａｇｏｐａｌら（１９９７年）を参照されたい；
・ＶＨ４４＋ＶＬ１０５  例えばＪ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．１１８、８２５−８３１頁、Ｌｕｏら（１９９５年）を参照されたい；
・ＶＨ４５＋ＶＬ８７  例えば、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ６、７８１−７８８頁、Ｚｈｕら（１９９７年）を参照されたい；
・ＶＨ５５＋ＶＬ１０１  例えばＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ３７７  １３５−１３９頁、Ｙｏｕｎｇら（１９９５年）を参照されたい；
・ＶＨ１００＋ＶＬ５０  例えばＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２９  １３６２−１３６７頁、Ｇｌｏｃｋｓｈｕｂｅｒら（１９９０年）を参照されたい；
・ＶＨ１００ｂ＋ＶＬ４９；
・ＶＨ９８＋ＶＬ４６  例えば、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ６、７８１−７８８頁、Ｚｈｕら（１９９７年）を参照されたい；
・ＶＨ１０１＋ＶＬ４６；
・ＶＨ１０５＋ＶＬ４３  例えば、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０巻、７５３８−７５４２頁、Ｂｒｉｎｋｍａｎｎら（１９９３年）；またはＰｒｏｔｅｉｎｓ  １９、３５−４７頁、Ｊｕｎｇら（１９９４）年を参照されたい
・ＶＨ１０６＋ＶＬ５７  例えば、ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ３７７  １３５−１３９頁、Ｙｏｕｎｇら（１９９５年）を参照されたい
ならびに分子内に位置する可変領域の対の対応する位置。
【０５３６】
一実施形態において、ジスルフィド結合は、ＶＨ４４位とＶＬ１００位の間に形成される。
【０５３７】
本明細書において用いられる「単一特異性」は、標的抗原に一度だけ結合する能力を指す。
【０５３８】
したがって、一実施形態において、本発明の多重特異性分子は、各抗原に対して単一特異性である。
【０５３９】
したがって、一実施形態において、本開示による多重特異性分子の結合ドメインは単一特異性である。これは、本開示の分子が標的抗原に２回以上結合することによって抗原を架橋することができないので、いくつかの治療用途において有利である。したがって、一実施形態において、本開示の二重特異性または多重特異性分子は、例えば同じ細胞または２つの異なる細胞の２つの異なる位置において同じ標的に２回結合することによって架橋することができない。
【０５４０】
特に、同じ細胞または異なる細胞上のＣＤ７９ｂに関連する架橋は、例えば標的抗原の活性を刺激するシグナルをインビボで生成することができる。
【０５４１】
一実施例において、本発明の多重特異性分子は、ＣＤ２２に対する１以下の結合ドメインを含み、ＣＤ７９に対する１以下の結合ドメインを含む。各結合ドメインは単一特異性である。
【０５４２】
したがって、一実施例において、多重特異性分子は、ＣＤ２２に対して１価であり、ＣＤ７９に対して１価である。
【０５４３】
一実施形態において、本開示の多重特異性分子に用いられる各抗体または抗体断片は一価である。
【０５４４】
したがって、一実施形態において、本開示の多重特異性分子の結合ドメインは一価である。
【０５４５】
したがって、一実施形態において、本開示の多重特異性分子の結合ドメインは一価であり、単一特異性である。
【０５４６】
一実施形態において、本開示の多重特異性分子は、例えば本明細書に上記のような、多重特異性分子を構築する任意の適切な方法で組み合わされた、または連結された、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ＶＨ、ＶＬ、ＶＨＨ、Ｆｖ、ｄｓＦｖなどの２以上の単一特異性の一価結合ドメインで構成される。
【０５４７】
別の実施形態において、例えば、本開示の分子が少なくとも３つの結合ドメインを含む場合、２つまたは３つの結合ドメイン（例えば抗体、断片または抗体と断片との組合せ）は、異なる抗原特異性を有し、例えば３つの異なる標的抗原に結合し得る。
【０５４８】
定常領域
本開示の抗体の抗体定常領域ドメインは、例えば、完全長抗体または多重特異性分子で存在する場合、多重特異性抗体分子の指定された機能、特に必要とされ得るエフェクター機能を考慮して選択することができる。例えば、定常領域ドメインは、ヒトＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧまたはＩｇＭドメインであり得る。特に、抗体分子が治療用途に意図され、抗体エフェクター機能が必要とされる場合、特にＩｇＧ１およびＩｇＧ３アイソタイプのヒトＩｇＧ定常領域ドメインを使用することができる。または、抗体分子が治療目的で意図され、抗体エフェクター機能が必要でない場合、ＩｇＧ２およびＩｇＧ４アイソタイプを使用することができる。
【０５４９】
これらの定常領域ドメインの配列変異体もまた使用できることが理解されるであろう。例えば、Ａｎｇａｌら、１９９３年、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１９９３、３０：１０５−１０８頁に記載されているように、２４１位のセリンがプロリンに変化したＩｇＧ４分子を使用することができる。したがって、抗体がＩｇＧ４抗体である実施形態において、抗体は変異Ｓ２４１Ｐを含み得る。
【０５５０】
一実施形態において、抗体重鎖はＣＨ１ドメインを含み、抗体軽鎖はカッパまたはラムダのいずれかのＣＬドメインを含む。
【０５５１】
一実施形態において、抗体重鎖は、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインを含み、抗体軽鎖は、カッパまたはラムダのいずれかのＣＬドメインを含む。
【０５５２】
４つのヒトＩｇＧアイソタイプは、活性化Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩＩａ）、阻害性ＦｃγＲＩＩｂ受容体および補体の第１成分（Ｃ１ｑ）に異なる親和性で結合し、非常にさまざまなエフェクター機能を生じる（Ｂｒｕｈｎｓ  Ｐ．ら、２００９年、Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ  ａｎｄ  ａｆｆｉｎｉｔｙ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  Ｆｃｇａｍｍａ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ  ｖａｒｉａｎｔｓ  ｆｏｒ  ｈｕｍａｎ  ＩｇＧ  ｓｕｂｃｌａｓｓｅｓ、Ｂｌｏｏｄ．１１３（１６）：３７１６−２５頁）、さらにＪｅｆｆｒｅｙ  Ｂ．Ｓｔａｖｅｎｈａｇｅｎら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２００７  Ｓｅｐ  １５；６７（１８）：８８８２−９０頁も参照されたい。
【０５５３】
ＩｇＧのＦｃγＲまたはＣ１ｑへの結合は、ヒンジ領域およびＣＨ２ドメインに位置する残基に依存する。ＣＨ２ドメインの２つの領域は、ＦｃγＲおよびＣ１ｑの結合に重要であり、ＩｇＧ２およびＩｇＧ４に特有の配列を有する。２３３〜２３６位のＩｇＧ２残基および３２７、３３０および３３１位のＩｇＧ４残基のヒトＩｇＧ１への置換は、ＡＤＣＣおよびＣＤＣを大きく減少させることが示されている（Ａｒｍｏｕｒ  ＫＬ．ら、１９９９年、Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ｈｕｍａｎ  ＩｇＧ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ｌａｃｋｉｎｇ  Ｆｃｇａｍｍａ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｉ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ａｎｄ  ｍｏｎｏｃｙｔｅ  ｔｒｉｇｇｅｒｉｎｇ  ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ．Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２９（８）：２６１３−２４頁、ならびにＳｈｉｅｌｄｓ  ＲＬ．ら、２００１年、Ｈｉｇｈ  ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｍａｐｐｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｓｉｔｅ  ｏｎ  ｈｕｍａｎ  ＩｇＧ１  ｆｏｒ  Ｆｃ  ｇａｍｍａ  ＲＩ，Ｆｃ  ｇａｍｍａ  ＲＩＩ，Ｆｃ  ｇａｍｍａ  ＲＩＩＩ，ａｎｄ  ＦｃＲｎ  ａｎｄ  ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  ＩｇＧ１  ｖａｒｉａｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｉｍｐｒｏｖｅｄ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ｆｃ  ｇａｍｍａ  Ｒ．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２７６（９）：６５９１−６０４頁）。さらに、Ｉｄｕｓｏｇｉｅらは、Ｋ３２２を含む異なる位置でのアラニン置換が補体活性化を有意に低下させることを実証した（Ｉｄｕｓｏｇｉｅ  ＥＥ．ら、２０００年、Ｍａｐｐｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｃ１ｑ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｓｉｔｅ  ｏｎ  ｒｉｔｕｘａｎ，ａ  ｃｈｉｍｅｒｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｗｉｔｈ  ａ  ｈｕｍａｎ  ＩｇＧ１  Ｆｃ、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４（８）：４１７８−８４頁）。同様に、マウスＩｇＧ２ＡのＣＨ２ドメインにおける変異は、ＦｃγＲＩおよびＣ１ｑへの結合を減少させることが示された（Ｓｔｅｕｒｅｒ  Ｗ．ら、１９９５年、Ｅｘ  ｖｉｖｏ  ｃｏａｔｉｎｇ  ｏｆ  ｉｓｌｅｔ  ｃｅｌｌ  ａｌｌｏｇｒａｆｔｓ  ｗｉｔｈ  ｍｕｒｉｎｅ  ＣＴＬＡ４／Ｆｃ  ｐｒｏｍｏｔｅｓ  ｇｒａｆｔ  ｔｏｌｅｒａｎｃｅ、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５（３）：１１６５−７４頁）。
【０５５４】
一実施形態において、用いられるＦｃ領域は変異、特に本明細書に記載の変異をしている。一実施形態において、変異は、結合および／またはエフェクター機能を除去することである。
【０５５５】
一実施形態において、Ｆｃ変異は、Ｆｃ領域の結合を除去するための変異、エフェクター機能を増加または除去する変異、半減期を増加させる変異およびこれらの組合せを含む群から選択される。
【０５５６】
ｐＨ６．０ではＦｃＲｎに選択的に結合するがｐＨ７．４では結合しないいくつかの抗体は、さまざまな動物モデルにおいてより長い半減期を示す。ＣＨ２とＣＨ３ドメインとの間の接点に位置するいくつかの変異、例えばＴ２５０Ｑ／Ｍ４２８Ｌ（Ｈｉｎｔｏｎ  ＰＲ．ら、２００４年、Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ  ｈｕｍａｎ  ＩｇＧ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｗｉｔｈ  ｌｏｎｇｅｒ  ｓｅｒｕｍ  ｈａｌｆ−ｌｉｖｅｓ  ｉｎ  ｐｒｉｍａｔｅｓ。Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２７９（８）：６２１３−６頁）、ならびにＭ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ＋Ｈ４３３Ｋ／Ｎ４３４Ｆ（Ｖａｃｃａｒｏ  Ｃ．ら、２００５年、Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｆｃ  ｒｅｇｉｏｎ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｇ  ｔｏ  ｍｏｄｕｌａｔｅ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｌｅｖｅｌｓ。Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２３（１０）：１２８３−８頁）は、インビボでのＦｃＲｎへの結合親和性およびＩｇＧ１の半減期を増加させることが示されている。
【０５５７】
しかし、ＦｃＲｎ結合の増加と半減期の改善との間に直接の関係は必ずしも存在しない（Ｄａｔｔａ−Ｍａｎｎａｎ  Ａ．ら、２００７年、Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  ＩｇＧ１  Ｖａｒｉａｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ｎｅｏｎａｔａｌ  Ｆｃ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ：Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ  ｔｏ  Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ  ｉｎ  Ｍｉｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒｉｍａｔｅｓ。Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔａｂ．Ｄｉｓｐｏｓ．３５：８６−９４頁）。
【０５５８】
ＩｇＧ４サブクラスはＦｃ受容体（ＦｃγＲＩＩＩａ）結合の減少を示し、他のＩｇＧサブクラスの抗体は一般に強い結合を示す。これらの他のＩｇＧサブタイプにおける受容体結合の低下は、Ｐｒｏ２３８、Ａｐｓ２６５、Ａｓｐ２７０、Ａｓｎ２７０（Ｆｃ炭水化物の喪失）、Ｐｒｏ３２９、Ｌｅｕ２３４、Ｌｅｕ２３５、Ｇｌｙ２３６、Ｇｌｙ２３７、Ｉｌｅ２５３、Ｓｅｒ２５４、Ｌｙｓ２８８、Ｔｈｒ３０７、Ｇｌｎ３１１、Ａｓｎ４３４およびＨｉｓ４３５を含む群から選択される１以上のアミノ酸の改変、例えば置換によって達成することができる。
【０５５９】
一実施形態において、本開示による分子は、ＩｇＧサブクラス、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ３の、以下のＳ２２８、Ｌ２３４および／またはＤ２６５位の１つ、２つ、またはすべてにおいて変異を有するＦｃを有する。
【０５６０】
一実施形態において、Ｆｃ領域の変異は、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅおよびこれらの組合せから独立して選択される。
【０５６１】
Ｆｃ領域のエフェクター機能を低減または増加させることが望ましい場合がある。細胞表面分子、特に免疫細胞上の細胞表面分子を標的とする抗体は、エフェクター機能を無効にすることが必要である。いくつかの実施形態において、例えば、自己免疫の治療のために、負のＦｃ受容体結合（ＦｃｇＲＩＩｂまたはＣＤ３２ｂ）を増加させることによって免疫細胞上のＦｃ結合が増強されることが望ましいと思われ、Ｓｔａｖｅｎｈａｇｅｎ  ＪＢら、Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｅ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ２００７  Ｄｅｃｅｍｂｅｒ  ３  ａｎｄ  Ｖｅｒｉ  ＭＣら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ、２０１０  Ｍａｒ  ３０；６２（７）：１９３３−４３を参照されたい。反対に、腫瘍学的使用を意図した抗体では、エフェクター機能の増加は治療活性を改善し得る。
【０５６２】
多数の変異がヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメインに生じており、インビトロで試験したＡＤＣＣおよびＣＤＣに対するそれらの効果が報告されている（Ｉｄｕｓｏｇｉｅ  ＥＥ．ら、２００１年。Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｗｉｔｈ  ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｔｏ  ｒｅｃｒｕｉｔ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６６（４）：２５７１−５頁）。注目すべきことに、３３３位のアラニン置換は、ＡＤＣＣおよびＣＤＣの両方を増加させることが報告されている。Ｌａｚａｒらは、ＦｃγＲＩＩＩａに対して高い親和性を有し、ＦｃγＲＩＩｂに対して低い親和性を有し、ＡＤＣＣの増強をもたらす三重変異体（Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ／Ａ３３０Ｌ）を記載した（Ｌａｚａｒ  ＧＡ．ら、２００６年。Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｆｃ  ｖａｒｉａｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｅｆｆｅｃｔｏｒ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ。ＰＮＡＳ  １０３（１１）：４００５−４０１０頁）。同じ変異を使用して、ＡＤＣＣが増加した抗体を作製した（Ｒｙａｎ  ＭＣ．ら、２００７年。Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｏｆ  Ｂ−ｃｅｌｌ  ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｏｎ  ｍａｌｉｇｎａｎｔ  ｐｌａｓｍａ  ｃｅｌｌｓ。Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．、６：３００９−３０１８頁）。Ｒｉｃｈａｒｄｓらは、ＦｃγＲＩＩＩａ親和性およびマクロファージによる標的細胞の食作用の増強を媒介するＦｃγＲＩＩａ／ＦｃγＲＩＩｂ比を改善する、わずかに異なる三重変異体（Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ／Ｇ２３６Ａ）を研究した（Ｒｉｃｈａｒｄｓ  ＪＯら、２００８年。Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｔｏ  Ｆｃｇａｍｍａ  ＲＩＩａ  ｅｎｈａｎｃｅｓ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓ  ｏｆ  ｔｕｍｏｒ  ｃｅｌｌｓ。Ｍｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．７（８）：２５１７−２７頁）。
【０５６３】
エフェクター機能の欠如のために、ＩｇＧ４抗体は、細胞枯渇をせずに受容体のブロッキングに適したＩｇＧサブクラスを表す。ＩｇＧ４分子は、Ｆａｂアーム交換と呼ばれる動的プロセスで半分子を交換することができる。この現象は、治療抗体と内因性ＩｇＧ４との間で起こり得る。Ｓ２２８Ｐ変異は、あまり予測できない治療用ＩｇＧ４抗体の設計を可能にするこの組換えプロセスを妨げることが示されている（Ｌａｂｒｉｊｎ  ＡＦ．ら、２００９年。Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ＩｇＧ４  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｅｎｇａｇｅ  ｉｎ  Ｆａｂ−ａｒｍ  ｅｘｃｈａｎｇｅ  ｗｉｔｈ  ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ  ｈｕｍａｎ  ＩｇＧ４  ｉｎ  ｖｉｖｏ。Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２７（８）：７６７−７１頁）。この技術を用いて、二重特異性抗体分子を作製することができる。
【０５６４】
当業者には、抗体がさまざまな翻訳後修飾を受け得ることも理解されるであろう。これらの修飾のタイプおよび程度は、多くの場合、抗体を発現するために使用される宿主細胞系ならびに培養条件に依存する。このような修飾としては、グリコシル化、メチオニン酸化、ジケトピペラジン形成、アスパラギン酸異性化およびアスパラギン脱アミド化の変異を挙げることができる。頻繁な改変は、カルボキシペプチダーゼの作用によるカルボキシ末端塩基性残基（リジンまたはアルギニンなど）の喪失である（Ｈａｒｒｉｓ、ＲＪ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ  ７０５：１２９−１３４頁、１９９５年に記載されている）。したがって、抗体重鎖のＣ末端リジンは存在しなくてもよい。
【０５６５】
親和性
本開示の抗体分子は、ＣＤ２２に特異的な少なくとも１つの結合ドメインを含む。
【０５６６】
本発明の多重特異性分子は、抗原ＣＤ２２に特異的な結合ドメインならびに抗原ＣＤ７９ａおよび／またはＣＤ７９ｂに特異的な結合ドメインを含む。
【０５６７】
一実施形態において、本開示の分子に用いられる結合ドメインは、ＣＤ２２に特異的である。
【０５６８】
一実施形態において、本開示の分子に用いられる結合ドメインは、ＣＤ７９ａに特異的である。
【０５６９】
一実施形態において、本開示の分子に用いられる結合ドメインは、ＣＤ７９ｂに特異的である。
【０５７０】
一実施形態において、本開示の分子に用いられる結合ドメインは、ＣＤ７９複合体に特異的であり、すなわち、複合体中に存在するエピトープ、例えばＣＤ７９ａとＣＤ７９ｂとの間の相互作用を含むエピトープを認識し、それに対して特異的である。
【０５７１】
ＣＤ７９に対する結合ドメインは、ＣＤ７９ａおよび／またはＣＤ７９ｂに結合することができる。
【０５７２】
ＣＤ７９ａ（免疫グロブリンαおよびＢ細胞抗原受容体複合体会合タンパク質アルファ鎖としても知られている）は、公知のタンパク質である。ＣＤ７９ａの発現は、Ｂリンパ球に限定される。ヒト配列はＵｎｉＰｒｏｔのエントリーＰ１１９１２（配列番号１６２およびシグナル配列を含まない配列番号１６２のアミノ酸３３−２２６）で入手可能である。マウス型はＵｎｉＰｒｏｔのエントリー１１９１１で入手可能である。本開示は、任意の種、特にヒトおよびその任意の天然変異体に由来するＣＤ７９ａのすべての形態に関する。一実施形態において、ＣＤ７９ａは、このタンパク質のヒト形態を指す。
【０５７３】
ＣＤ７９ｂ（免疫グロブリン会合ベータおよび分化抗原クラスター（ｃｌｕｓｔｅｒ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ）７９Ｂとしても知られている）は、公知のタンパク質である。ＣＤ７９ｂの発現は、Ｂリンパ球に限定される。ヒト配列はＵｎｉＰｒｏｔのエントリーＰ４０２５９（配列番号１６３およびシグナル配列を含まない配列番号１６３アミノ酸の２９−２２９）で入手可能である。マウス型はＵｎｉＰｒｏｔのエントリーＰ１５５３０で入手可能である。本開示は、任意の種、特にヒトおよびその任意の天然変異体に由来するＣＤ７９ｂのすべての形態に関する。一実施形態において、ＣＤ７９ｂは、このタンパク質のヒト形態を指す。
【０５７４】
一実施形態において、ＣＤ７９に特異的な結合ドメインはＣＤ７９ａに結合する。
【０５７５】
一実施形態において、ＣＤ７９に特異的な結合ドメインはＣＤ７９ｂに結合する。
【０５７６】
一実施形態において、ＣＤ７９に特異的な結合ドメインは、ＣＤ７９ａおよびＣＤ７９ｂの複合体に結合する。
【０５７７】
一実施形態において、本開示の分子におけるＣＤ７９に対する結合ドメインの親和性は、約１００ｎＭ以上の強さであり、例えば、約５０ｎＭ、２０ｎＭ、１０ｎＭ、１ｎＭ、５００ｐＭ、２５０ｐＭ、２００ｐＭ、１００ｐＭまたはそれ以上、特に、５０ｐＭ以上の強さの結合親和性である。
【０５７８】
一実施形態において、本開示の分子におけるＣＤ７９ａに対する結合ドメインの親和性は、約１００ｎＭ以上の強さであり、例えば、約５０ｎＭ、２０ｎＭ、１０ｎＭ、１ｎＭ、５００ｐＭ、２５０ｐＭ、２００ｐＭ、１００ｐＭまたはそれ以上、特に、５０ｐＭ以上の強さの結合親和性である。
【０５７９】
一実施形態において、本開示の分子におけるＣＤ７９ｂに対する結合ドメインの親和性は、約１００ｎＭ以上の強さであり、例えば、約５０ｎＭ、２０ｎＭ、１０ｎＭ、１ｎＭ、５００ｐＭ、２５０ｐＭ、２００ｐＭ、１００ｐＭまたはそれ以上、特に、５０ｐＭ以上の強さの結合親和性である。
【０５８０】
ＣＤ２２に対する結合ドメインの親和性は、ＣＤ７９に対する結合ドメインの親和性と同じであっても、または異なっていてもよいことが理解されよう。
【０５８１】
一実施形態において、本開示の多重特異性抗体分子またはその抗体／断片成分は、１または複数の標的抗原に対する親和性の改善を提供するように処理される。このような変異体は、ＣＤＲを変異させること（Ｙａｎｇら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２５４、３９２−４０３頁、１９９５年）、鎖シャッフリング（Ｍａｒｋｓら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１０、７７９−７８３頁、１９９２年）、大腸菌のミューテーター株の使用（Ｌｏｗら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２５０、３５９−３６８頁、１９９６年）、ＤＮＡシャッフリング（Ｐａｔｔｅｎら、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、８、７２４−７３３頁、１９９７年）、ファージディスプレイ（Ｔｈｏｍｐｓｏｎら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２５６、７７−８８頁、１９９６年）および性的ＰＣＲ（Ｃｒａｍｅｒｉら、Ｎａｔｕｒｅ、３９１、２８８−２９１頁、１９９８年）を含む、多数の親和性成熟プロトコルにより得ることができる。Ｖａｕｇｈａｎら（前出）は、これらの親和性成熟方法を論じている。
【０５８２】
抗体およびこれらの作製
本発明に使用するための結合ドメインは、当技術分野で公知の任意の適切な方法によって作製することができ、例えばＣＤＲを市販の抗体を含む非ヒト抗体から採取して、ヒトフレームワークに移植することができ、またはキメラ抗体を非ヒト可変領域およびヒト定常領域などを用いて調製することができる。
【０５８３】
典型的には、本発明に使用するための結合ドメインは、選択された抗原に結合する抗体、例えば、ＣＤ２２またはＣＤ７９ａおよび／またはＣＤ７９ｂに結合する抗体に由来する結合ドメインである。
【０５８４】
ＣＤ２２およびＣＤ７９抗体の例は当技術分野で公知であり、これらを本明細書に記載の方法を使用して本発明の分子に直接用いることも、または適合性についてスクリーニングし、次いで、必要に応じて、本明細書に記載の方法を使用して改変、例えばヒト化することもできる。臨床講義におけるＣＤ２２抗体の例には、エプラツズマブおよびイヌツズマブが含まれる。他の治療用抗体は、例えば、米国特許出願第２００３２０２９７５号明細書および国際公開第１４／０１１５２０号パンフレットに開示されている抗ＣＤ２２抗体、国際公開第１４０１１５２１号パンフレットおよび国際公開第１５０２１０８９号パンフレットに開示されている抗ＣＤ７９ｂ抗体などが、当技術分野において記載されている。非ヒト抗ＣＤ２２抗体としては、クローンＳＰ１０４由来のウサギモノクローナル抗体ＬＳ−Ｃ２２１０３５７（ＬＳＢｉｏ）、クローン４Ｃ３由来のマウスモノクローナルＬＳ−Ｃ１７４７７８、マウスモノクローナルＬＳ−Ｃ４８０２、クローン１Ｂ１由来のマウスモノクローナルＬＳ−Ｂ９９９６、クローン２Ｅ６由来のマウスモノクローナルＬＳ−Ｃ３４０４０４、マウスモノクローナルＬＳ−Ｃ３１２２６３、マウスモノクローナルＬＳ−Ｃ１５２８６７、マウスモノクローナルＬＳ−Ｃ８７５２３、クローンＦＲＢ４由来のマウスモノクローナルＬＳ−Ｃ１３４３３３、マウスモノクローナルＬＳ−Ｃ１３４３３６、クローンＨＩＢ２２由来のマウスモノクローナルＬＳ−Ｃ４０９６１、マウスモノクローナルＬＳ−Ｃ１３４３３２、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社製の以下の抗体、ｓｃ−２７１５７９、ｓｃ−３７７３０４、ｓｃ−７０３２、ｓｃ−１８９０９、ｓｃ−７９３２、ｓｃ−７３２３、ｓｃ−７３０７、ｓｃ−７０３１、ｓｃ−２００５３、ｓｃ−１８９０００、ｓｃ−１３６４４０、ｓｃ−１３６５０７、ｓｃ−５３０３１、ｓｃ−７３３６３、ｓｃ−５３０３２、ＡｂｃａｍウサギモノクローナルＡｂ３３８５９（ＥＰ４９８Ｙ）、マウスモノクローナル抗体ＡＡ  １−６８７、カタログ番号ＡＢＩＮ１９９９４２３、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ社製クローンＨＩＢ２２由来のマウスモノクローナル、ワークショップ番号Ｖ  ＣＤ２２．１４．が挙げられる。
【０５８５】
市販の抗ＣＤ７９ａ抗体としては、クローンＨＭ５７由来のマウスモノクローナルＬＳ−Ｂ４５０４（ＬＳＢｉｏ）、マウスモノクローナルＬＳ−Ｂ８３３０、マウスモノクローナルＬＳ−Ｃ４４９５４、ウサギモノクローナルＬＳ−Ｂ９０９３、クローンＪＣＢ１１７由来のマウスモノクローナルＬＳ−Ｂ８５１３、クローンＳＰ１８由来のウサギモノクローナルＬＳ−Ｃ２１０６０７、クローン５Ｅ２由来のマウスモノクローナルＬＳ−Ｃ１７５４４１、クローン３Ｄ３由来のマウスモノクローナルＬＳ−Ｃ３３８６７０、クローンＨＭ４７／Ａ９由来のマウスモノクローナルＬＳ−Ｃ８８１２０、マウスモノクローナルＬＳ−Ｃ１９１７１４、マウスモノクローナルＬＳ−Ｃ８７５９２、マウスモノクローナルＬＳ−Ｃ４４９５５、マウスモノクローナルＬＳ−Ｃ９５９３４、マウスモノクローナルＬＳ−Ｃ１２１５８４、マウスモノクローナルＬＳ−Ｃ１２１５８５、マウスモノクローナルＬＳ−Ｃ２０４３４７、マウスモノクローナルＬＳ−Ｃ８８１２２、Ａｂｃａｍマウスモノクローナルａｂ３１２１［ＨＭ４７／Ａ９］、ウサギモノクローナルａｂ７９４１４、およびウサギモノクローナルａｂ１３３４８３が挙げられる。
【０５８６】
市販のＣＤ７９ｂ抗体としては、マウスモノクローナルＡｂｃａｍ抗体ａｂ３３２９５、ラットモノクローナルａｂ２３８２６、マウスモノクローナルａｂ１０３４２２、ウサギモノクローナルａｂ１３４１０３、ウサギモノクローナルａｂ１３４１４７およびウサギモノクローナルａｂ１８３３４３が挙げられる。
【０５８７】
このような市販の抗体は、さらなる治療用抗体の発見において有用なツールであり得る。
【０５８８】
当業者は、当技術分野で公知の任意の適切な方法を使用して、本発明の多重特異性分子に使用するための抗体を作製することができる。
【０５８９】
例えば宿主を免疫化するために、またはファージディスプレイのようなパンニングに使用する抗体を作製するために使用する抗原ポリペプチドは、発現系を含む遺伝子操作された宿主細胞から当技術分野で周知の方法によって調製することができ、または天然の生物源から回収されてもよい。本出願において、用語「ポリペプチド」には、ペプチド、ポリペプチドおよびタンパク質が含まれる。これらは、他のことが指定されない限り互換的に使用される。抗原ポリペプチドは、いくつかの例では、例えば親和性タグなどに融合された融合タンパク質などのより大きなタンパク質の一部であってもよい。一実施形態において、宿主は、関連するタンパク質またはポリペプチドでトランスフェクトされた、例えばＣＤ７９ａおよびＣＤ７９ｂで同時トランスフェクトされた、線維芽細胞などの細胞で免疫化することができる。
【０５９０】
抗原ポリペプチドに対して作製された抗体は、動物の免疫化が必要な場合、周知の慣習的なプロトコルを使用して動物、好ましくは非ヒト動物にポリペプチドを投与することにより得ることができる（例えば、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｄ．Ｍ．Ｗｅｉｒ（編）、第４巻、Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、Ｏｘｆｏｒｄ、Ｅｎｇｌａｎｄ、１９８６年を参照されたい）。ウサギ、マウス、ラット、ヒツジ、ウシ、ラクダまたはブタのような多くの温血動物を免疫化することができる。しかしながら、マウス、ウサギ、ブタおよびラットが一般に最も適している。
【０５９１】
モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ技術（Ｋｏｈｌｅｒ＆Ｍｉｌｓｔｅｉｎ、１９７５年、Ｎａｔｕｒｅ、２５６：４９５−４９７頁）、トリオーマ技術、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術（Ｋｏｚｂｏｒら、１９８３、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ、４：７２）およびＥＢＶ−ハイブリドーマ技術（Ｃｏｌｅら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ、７７−９６頁、Ａｌａｎ  Ｒ  Ｌｉｓｓ、Ｉｎｃ．、１９８５年）などの当技術分野において公知の任意の方法によって調製することができる。
【０５９２】
抗体は、特異的抗体作製のために選択された単一のリンパ球から産生された免疫グロブリン可変領域ｃＤＮＡをクローニングおよび発現させることによって、単一のリンパ球抗体法を使用して、例えば、Ｂａｂｃｏｏｋ，Ｊ．ら、１９９６年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９３（１５）：７８４３−７８４８ｌ頁；国際公開第９２／０２５５１号パンフレット；国際公開第２００４／０５１２６８号パンフレットおよび国際公開第２００４／１０６３７７号パンフレットにより記載された方法により作製することもできる。
【０５９３】
本開示における使用のための抗体はまた、当技術分野で公知のさまざまなファージディスプレイ法を用いて作製することができ、Ｂｒｉｎｋｍａｎら、（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ、１９９５年、１８２：４１−５０頁）、Ａｍｅｓら、（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ、１９９５年、１８４：１７７−１８６頁）、Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈら、（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９４年、２４：９５２−９５８頁）、Ｐｅｒｓｉｃら、（Ｇｅｎｅ、１９９７年、１８７  ９−１８頁）、Ｂｕｒｔｏｎら、（Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１９９４年、５７：１９１−２８０頁）および国際公開第９０／０２８０９号；国際公開第９１／１０７３７号；国際公開第９２／０１０４７号；国際公開第９２／１８６１９号；国際公開第９３／１１２３６号；国際公開第９５／１５９８２号；国際公開第９５／２０４０１号パンフレット；および米国特許第５，６９８，４２６号；第５，２２３，４０９号；第５，４０３，４８４号；５，５８０，７１７号；第５，４２７，９０８号；第５，７５０，７５３号；第５，８２１，０４７号；第５，５７１，６９８号；第５，４２７，９０８号；５，５１６，６３７号；第５，７８０，２２５号；第５，６５８，７２７号；第５，７３３，７４３号；第５，９６９，１０８号明細書および国際公開第２００１１／３０３０５号パンフレットにより開示された方法が挙げられる。
【０５９４】
一実施例において、本開示の多重特異性分子は完全にヒト型であり、特に可変ドメインの１または複数は完全にヒト型である。
【０５９５】
完全なヒト分子は、重鎖および軽鎖の両方の可変領域および定常領域（存在する場合）がすべてヒト起源であるか、またはヒト起源の配列と実質的に同一であり、必ずしも同じ抗体由来ではない。完全ヒト抗体の例としては、例えば、上記のファージディスプレイ法によって産生された抗体、およびマウス免疫グロブリン可変領域および場合により定常領域遺伝子がそれらのヒト対応物によって置換されたマウスによって産生された抗体、例えば、欧州特許第０５４６０７３号、米国特許第５，５４５，８０６号、米国特許第５，５６９，８２５号、米国特許第５，６２５，１２６号、米国特許第５，６３３，４２５号、米国特許第５，６６１，０１６号、米国特許第５，７７０，４２９号、欧州特許第０４３８４７４号および欧州特許第０４６３１５１号に一般用語で記載された抗体を挙げることができる。
【０５９６】
一実施例において、本開示による多重特異性分子の結合ドメインがヒト化される。
【０５９７】
本明細書において用いられるヒト化（ＣＤＲ移植抗体を含む）とは、非ヒト種由来の１または複数の相補性決定領域（ＣＤＲ）およびヒト免疫グロブリン分子由来のフレームワーク領域を有する分子を指す（例えば、米国特許第５，５８５，０８９号明細書；国際公開第９１／０９９６７号パンフレットを参照されたい）。ＣＤＲ全体ではなくＣＤＲの特異性決定残基を移入することだけが必要なことが理解されるであろう（例えば、Ｋａｓｈｍｉｒｉら、２００５年、Ｍｅｔｈｏｄｓ、３６、２５−３４頁を参照されたい）。ヒト化抗体は、場合により、ＣＤＲが由来する非ヒト種に由来する１または複数のフレームワーク残基をさらに含んでいてもよい。
【０５９８】
本明細書において使用される場合、用語「ヒト化抗体分子」は、重鎖および／または軽鎖が、アクセプター抗体（例えば、ヒト抗体）の重鎖および／または軽鎖可変領域フレームワークに移植された、ドナー抗体（例えば、マウスモノクローナル抗体）由来の１または複数のＣＤＲ（必要に応じて１または複数の改変ＣＤＲを含む）を含む抗体分子を指す。総説については、Ｖａｕｇｈａｎら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１６、５３５−５３９頁、１９９８年を参照されたい。一実施形態において、全ＣＤＲが移されるのではなく、上記のＣＤＲのいずれか１つに由来する特異性決定残基の１または複数だけがヒト抗体フレームワークに移入される（例えば、Ｋａｓｈｍｉｒｉら、２００５年、Ｍｅｔｈｏｄｓ、３６、２５−３４頁を参照されたい）。一実施形態において、本明細書に上記のＣＤＲの１または複数に由来する特異性決定残基だけがヒト抗体フレームワークに移入される。別の実施形態において、本明細書に上記のＣＤＲそれぞれに由来する特異性決定残基だけがヒト抗体フレームワークに移入される。
【０５９９】
ＣＤＲまたは特異性決定残基が移植される場合、ＣＤＲが由来するドナー抗体のクラス／タイプ（マウス、霊長類およびヒトフレームワーク領域を含む）を考慮して、任意の適切なアクセプター可変領域フレームワーク配列を用いることができる。適切には、本発明によるヒト化抗体は、ヒトアクセプターフレームワーク領域ならびに本明細書で提供される１または複数のＣＤＲを含む可変ドメインを有する。
【０６００】
本開示に使用可能なヒトフレームワークの例は、ＫＯＬ、ＮＥＷＭ、ＲＥＩ、ＥＵ、ＴＵＲ、ＴＥＩ、ＬＡＹおよびＰＯＭである（Ｋａｂａｔら、前出）。例えば、ＫＯＬおよびＮＥＷＭは重鎖に使用でき、ＲＥＩは軽鎖に使用でき、ＥＵ、ＬＡＹおよびＰＯＭは重鎖および軽鎖の両方に使用することができる。または、ヒト生殖系列配列を使用してもよく、これらはｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ２．ｍｒｃ−ｌｍｂ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／ｖｂａｓｅ／ｌｉｓｔ２．ｐｈｐで入手可能である。
【０６０１】
本開示のヒト化抗体分子において、アクセプター重鎖および軽鎖は、必ずしも同じ抗体に由来する必要はなく、所望であれば、異なる鎖に由来するフレームワーク領域を有する複合鎖を含んでいてもよい。
【０６０２】
フレームワーク領域は、アクセプター抗体のものと全く同じ配列を有する必要はない。例えば、異常な残基は、そのアクセプター鎖のクラスまたはタイプのより頻繁に生じる残基に変化させることができる。または、アクセプターフレームワーク領域中の選択された残基は、それらがドナー抗体中の同じ位置で見出される残基に対応するように変化させることができる（Ｒｅｉｃｈｍａｎｎら、１９９８年、Ｎａｔｕｒｅ、３３２、３２３−３２４頁を参照のこと）。このような変化は、ドナー抗体の親和性を回復するのに必要な最小限に保たれるべきである。変化させる必要のあるアクセプターフレームワーク領域の残基を選択するためのプロトコルは、国際公開第９１／０９９６７号パンフレットに記載されている。
【０６０３】
フレームワークの誘導体は１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸が、代替アミノ酸、例えばドナー残基で置換されていてもよい。
【０６０４】
ドナー残基は、ドナー抗体、すなわちＣＤＲが元々由来する抗体由来の残基であり、特にドナー配列由来の対応する位置の残基が採用される。ドナー残基は、ヒト受容体フレームワークに由来する適切な残基（アクセプター残基）によって置換されてもよい。
【０６０５】
抗体可変ドメイン中の残基は、Ｋａｂａｔらによって考案されたシステムに従って通常どおりナンバリングされている。このシステムは、Ｋａｂａｔら、１９８７年、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、米国保健社会福祉省（ＵＳ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ）、ＮＩＨ、米国（以下、「Ｋａｂａｔら（前出）」）に記載されている。特に他のことが記載されている場合を除いて、本明細書ではこのナンバリングシステムが使用される。
【０６０６】
Ｋａｂａｔの残基指定は、必ずしもアミノ酸残基の線形なナンバリングと直接対応するとは限らない。実際の線形アミノ酸配列は、フレームワークまたは相補性決定領域（ＣＤＲ）であろうとなかろうと、基本可変ドメイン構造の構造成分の短縮または挿入に対応する厳密なＫａｂａｔナンバリングよりも少数または追加のアミノ酸を含むことがある。抗体の配列に相同な残基と、「標準的な」Ｋａｂａｔナンバリング配列とのアラインメントにより、所定の抗体について残基の正しいＫａｂａｔナンバリングを決定することができる。
【０６０７】
重鎖可変ドメインのＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリングシステムに従って残基３１〜３５（ＣＤＲ−Ｈ１）、残基５０〜６５（ＣＤＲ−Ｈ２）および残基９５〜１０２（ＣＤＲ−Ｈ３）に位置する。しかし、Ｃｈｏｔｈｉａ（Ｃｈｏｔｈｉａ、Ｃ．およびＬｅｓｋ、Ａ．Ｍ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、１９６、９０１−９１７頁（１９８７年））によれば、ＣＤＲ−Ｈ１に相当するループは残基２６から残基３２に及ぶ。したがって、特に明記しない限り、本明細書において用いられる「ＣＤＲ−Ｈ１」は、ＫａｂａｔナンバリングシステムとＣｈｏｔｈｉａの位相的ループ定義との組合せによって記載される残基２６〜３５を指すものとする。
【０６０８】
軽鎖可変ドメインのＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリングシステムに従って残基２４〜３４（ＣＤＲ−Ｌ１）、残基５０〜５６（ＣＤＲ−Ｌ２）および残基８９〜９７（ＣＤＲ−Ｌ３）に位置する。
【０６０９】
一実施例において、ＣＤＲ  Ｈ１が配列番号１５８に示される配列を有し、ＣＤＲ  Ｈ２が配列番号１５９に示される配列を有し、ＣＤＲ  Ｈ３が配列番号１６０に示される配列を有する３つのＣＤＲを含む、ＣＤ７９に特異的な重鎖可変領域（例えばＶＨ）を含む結合ドメインが、例えば本開示の抗体分子中に提供される。
【０６１０】
一実施形態において、３つの重鎖ＣＤＲ、ＣＤＲＨ１については配列番号１７５、ＣＤＲＨ２については配列番号１７６およびＣＤＲＨ３については配列番号１７７を含む、ＣＤ７９に特異的な重鎖可変領域（例えばＶＨ）を含む結合ドメインが、例えば本開示の抗体分子中に提供される。
【０６１１】
一実施形態において、３つの軽鎖ＣＤＲ、ＣＤＲＬ１については配列番号１６１、ＣＤＲＬ２については配列番号１６２およびＣＤＲＬ３については配列番号１６３、１６４、１６５または１６６を含む、ＣＤ７９に特異的な軽鎖可変領域（例えばＶＬ）を含む結合ドメインが、例えば本開示の抗体分子中に提供される。
【０６１２】
一実施形態において、３つの軽鎖ＣＤＲ、ＣＤＲＬ１については配列番号１７８、ＣＤＲＬ２については配列番号１７９およびＣＤＲＬ３については配列番号１８０、１８１、１８２または１８３を含む、ＣＤ７９に特異的な軽鎖可変領域（例えばＶＬ）を含む結合ドメインが、例えば本開示の抗体分子中に提供される。
【０６１３】
一実施例において、３つのＣＤＲ、配列番号１５８に示される配列を有するＣＤＲ  Ｈ１、配列番号１５９に示される配列を有するＣＤＲ  Ｈ２、および配列番号１６０に示される配列を有するＣＤＲ  Ｈ３を含む、ＣＤ７９に特異的な重鎖可変領域（ＶＨ）、ならびに、３つのＣＤＲ、配列番号１６１に示される配列を有するＣＤＲ  Ｌ１、配列番号１６２に示される配列を有するＣＤＲ  Ｌ２、および配列番号１６３、１６４、１６５または１６６に示される配列を有するＣＤＲ  Ｌ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む結合ドメインが、例えば本開示の抗体分子中に提供される。
【０６１４】
一実施例において、３つのＣＤＲ、配列番号１７５に示される配列を有するＣＤＲ  Ｈ１、配列番号１７６に示される配列を有するＣＤＲ  Ｈ２、および配列番号１７７に示される配列を有するＣＤＲ  Ｈ３を含む、ＣＤ７９に特異的な重鎖可変領域（ＶＨ）、ならびに、３つのＣＤＲ、配列番号１７８に示される配列を有するＣＤＲ  Ｌ１、配列番号１７９に示される配列を有するＣＤＲ  Ｌ２、および配列番号１８０、１８１、１８２または１８３に示される配列を有するＣＤＲ  Ｌ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む結合ドメインが、例えば本開示の抗体分子中に提供される。
【０６１５】
一実施形態において、配列番号１７１および１７３、１７１および１７４、１７２および１７３、１７２および１７４、１８８および１８９ならびに１８８および１９０から選択される、ＣＤ７９ｂに特異的なＶＨおよびＶＬを含む抗体分子が提供される。
【０６１６】
ＶＨ、ＶＬおよびＣＤＲ配列を含むこれらの抗ＣＤ７９抗体（抗体４４４７および抗体４４５０）の配列は、本明細書において図３５に提供される。ＶＨ、ＶＬおよびＣＤＲ配列を含むこれらの抗ＣＤ２２抗体（抗体４１２０、４１２６、４１２７、４１２８、４１３０、４１３２）の配列は、本明細書において図３５に提供され、本発明の分子中の結合ドメインとして組み合わせることができる。
【０６１７】
一実施形態において、本明細書に開示された配列またはその変異体を有する可変ドメインまたは一対の該可変ドメインを有する結合ドメインが提供される。
【０６１８】
一実施例において、配列番号２４０に示される配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号２４２に示される配列を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、アルブミンに特異的な結合ドメインが提供される。
【０６１９】
一実施形態において、１または複数の結合ドメインがヒト化される。
【０６２０】
一実施例において、本明細書に提供される１または複数のＣＤＲは、望ましくない残基または部位、例えばシステイン残基またはアスパラギン酸（Ｄ）異性化部位またはアスパラギン（Ｎ）脱アミド部位を除去するように改変することができる。
【０６２１】
例えば、ＣＤＲのいずれか１つの中の１または複数のシステイン残基を、セリンなどの別のアミノ酸で置換することができる。
【０６２２】
一実施例において、アスパラギン脱アミド部位は、アスパラギン残基（Ｎ）および／または隣接残基を任意の他の適切なアミノ酸に変異させることによって、１または複数のＣＤＲから除去することができる。一実施例において、ＮＧまたはＮＳなどのアスパラギン脱アミド部位を、例えばＮＡまたはＮＴに変異させることができる。
【０６２３】
一実施例において、アスパラギン酸異性化部位は、アスパラギン酸残基（Ｄ）および／または隣接残基を任意の他の適切なアミノ酸に変異させることによって、１または複数のＣＤＲから除去することができる。一実施例において、ＤＧまたはＤＳなどのアスパラギン酸異性化部位を、例えばＥＧ、ＤＡまたはＤＴに変異させることができる。
【０６２４】
一実施例において、ＮＬＳのようなＮ−グリコシル化部位は、アスパラギン残基（Ｎ）を任意の他の適切なアミノ酸、例えばＳＬＳまたはＱＬＳに変異させることによって除去することができる。一実施例において、ＮＬＳのようなＮ−グリコシル化部位は、セリン残基（Ｓ）を、スレオニン（Ｔ）を除く任意の他の残基に変異させることによって除去することができる。
【０６２５】
当業者は、活性が維持されていることを確認するために、本明細書に記載されているような任意の適切なアッセイでＣＤＲまたはヒト化配列の変異体を試験することができる。
【０６２６】
抗原への特異的結合は、例えばＥＬＩＳＡまたは抗原（ＣＤ２２またはＣＤ７９）への結合を測定することができるＢＩＡｃｏｒｅなどの表面プラズモン共鳴法を含む任意の適切なアッセイを使用して試験することができる。このようなアッセイは、単離された天然もしくは組換えのＣＤ２２もしくはＣＤ７９（ａおよび／またはｂ）または適切な融合タンパク質／ポリペプチドを使用することができる。一実施例において、結合は、組換えＣＤ２２（例えば配列番号２４４に示される配列または配列番号２４４のアミノ酸２０〜８４７）またはＣＤ７９（例えば配列番号２４５および配列番号２４６に提供される配列ならびに配列番号２４５のアミノ酸３３〜２２６および配列番号２４６のアミノ酸２９〜２２９）を使用して、例えばＢＩＡｃｏｒｅなどの表面プラズモン共鳴により測定される。または、タンパク質をＨＥＫ細胞などの細胞上で発現させ、フローサイトメトリーに基づく親和性決定を用いて親和性を測定することができる。
【０６２７】
本発明による抗体分子とＣＤ２２との結合を交差ブロックする抗体、特に配列番号１０７、１０８、１０９もしくは１１０に示される重鎖配列および配列番号１０６に示される軽鎖配列を含む抗体分子；または配列番号１１６、１１７、１１８、１１９、１２０もしくは１２１に示される重鎖配列および配列番号１１５に示される軽鎖配列を含む抗体分子；または配列番号１２７、１２８、１２９、もしくは１３０に示される重鎖配列および配列番号１２６に示される軽鎖配列を含む抗体分子；または配列番号１３６、１３７、１３８もしくは１３９に示される重鎖配列および配列番号１３５に示される軽鎖配列を含む抗体分子；または配列番号１４５、１４６、１４７もしくは１４８に示される重鎖配列および配列番号１４４に示される軽鎖配列を含む抗体分子；または配列番号１５４、１５５、１５６もしくは１５７に示される重鎖配列および配列番号１５３に示される軽鎖配列を含む抗体分子は、ＣＤ２２の結合に同様に有用であり、したがって、本発明の多重特異性分子などの抗体分子に同様に有用であり得る。したがって、本発明はまた、抗原ＣＤ２２に特異的な結合ドメインおよび抗原ＣＤ７９ｂに特異的な結合ドメインを含み、ＣＤ２２に対する結合ドメインが、本明細書に上記のＣＤ２２に対する抗体分子のいずれか１つの結合を交差ブロックする、および／またはこれらの抗体のいずれか１つによってＣＤ２２に結合することから交差ブロックされる、多重特異性分子などの抗体分子を提供する。一実施形態において、このような抗体は、本明細書に上記の抗体と同じエピトープに結合する。別の実施形態において、交差ブロッキング抗体は、上記の抗体によって結合されたエピトープに隣接および／または重複するエピトープに結合する。
【０６２８】
別の実施形態において、交差ブロッキング中和抗体は、本明細書に上記の抗体によって結合されたエピトープに隣接および／または重複するエピトープに結合する。
【０６２９】
交差ブロッキング抗体は、当技術分野における任意の適切な方法、例えば競合ＥＬＩＳＡまたはＢＩＡｃｏｒｅアッセイを使用して同定することができ、該交差ブロッキング抗体と抗原（ＣＤ２２および／またはＣＤ７９）との結合が本発明の抗体の結合を妨げ、またその逆も同様である。このような交差ブロッキングアッセイは、発現された細胞、単離された天然または組換えのＣＤ２２もしくはＣＤ７９（ａおよび／またはｂ）または適切な融合タンパク質／ポリペプチドを使用することができる。一実施例において、結合および交差ブロッキングは、組換えＣＤ２２またはその適切な断片もしくは天然変異体（例えば、配列番号２４４に提供される配列もしくは配列番号２４４のアミノ酸２０〜８４７に提供される配列）、またはＣＤ７９、例えば配列番号２４５に提供される配列もしくは配列番号２４５のアミノ酸３３〜２２６（ＣＤ７９ａ）および／または配列番号２４６に提供される配列もしくは配列番号２４６のアミノ酸２９〜２２９に提供される配列を使用して、例えば８５％以上、例えば９０％以上、特に９５％以上測定される。
【０６３０】
このような交差ブロッキング抗体は、１または複数の機能アッセイにおいて、本明細書に記載される多重特異性抗体分子と同等の活性を有し得る。
【０６３１】
本開示はまた、本明細書中に開示される新規なポリペプチド配列およびそれに対して少なくとも８０％類似または同一の配列、例えば８５％以上、例えば９０％以上、特に９５％、９６％、９７％、９８％または９９％以上の類似性または同一性の配列に及ぶ。
【０６３２】
本明細書で使用される「同一性」は、アライメントされた配列中の任意の特定の位置で、アミノ酸残基が配列間で同一であることを示す。本明細書で使用される「類似性」は、アライメントされた配列中の任意の特定の位置で、アミノ酸残基が配列間で類似の型であることを示す。例えば、イソロイシンまたはバリンをロイシンに置換してもよい。多くの場合に相互に置換することができる他のアミノ酸には、限定するものではないが、
−フェニルアラニン、チロシンおよびトリプトファン（芳香族側鎖を有するアミノ酸）；
−リジン、アルギニンおよびヒスチジン（塩基性側鎖を有するアミノ酸）；
−アスパラギン酸およびグルタミン酸（酸性側鎖を有するアミノ酸）；
−アスパラギンおよびグルタミン（アミド側鎖を有するアミノ酸）；ならびに
−システインおよびメチオニン（硫黄含有側鎖を有するアミノ酸）；
が挙げられる。
【０６３３】
同一性および類似性の程度は容易に計算することができる（Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．編、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９８８年；Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ．Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｐｒｏｊｅｃｔｓ、Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｗ．編、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９９３年；Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄａｔａ、Ｐａｒｔ  １、Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．，およびＧｒｉｆｆｉｎ，Ｈ．Ｇ．編、Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ、１９９４年；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、ｖｏｎ  Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ．、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、１９８７年、Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐｒｉｍｅｒ、Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．およびＤｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．，編、Ｍ  Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９９１年、ＮＣＢＩから利用可能なＢＬＡＳＴ（商標）ソフトウェア（Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ら、１９９０年、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０頁；Ｇｉｓｈ，Ｗ．＆Ｓｔａｔｅｓ，Ｄ．Ｊ．１９９３年、Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔ．３：２６６−２７２頁．Ｍａｄｄｅｎ，Ｔ．Ｌ．ら、１９９６年、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２６６：１３１−１４１頁；Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ら、１９９７年、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２頁；Ｚｈａｎｇ，Ｊ．＆Ｍａｄｄｅｎ，Ｔ．Ｌ．１９９７年、Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．７：６４９−６５６頁）。
【０６３４】
リンカー
ある状況におけるリンカーの本明細書の教示は、リンカーが用いられる異なる状況、例えば本発明の任意の多重特異性分子のリンカーに等しく適用することができる。
【０６３５】
一実施形態において、本開示の分子に用いられるリンカーは、例えば、配列２５１〜３１４に示される配列から選択される長さ５０残基以下のアミノ酸リンカーである。
【０６３６】
表１．ヒンジリンカー配列
【表１】
2018524007.tif 000003
【０６３７】
表２．フレキシブルリンカー配列
【表２】
2018524007.tif 000004
（Ｓ）は、配列２１９〜２２３では任意選択である。
【０６３８】
剛性リンカーの例としては、ペプチド配列ＧＡＰＡＰＡＡＰＡＰＡ（配列番号２７３）、ＰＰＰＰ（配列番号２７４）およびＰＰＰが挙げられる。
【０６３９】
他のリンカーを表３に示す：
【表３】
2018524007.tif 000005
【０６４０】
エフェクター分子
所望であれば、本発明に使用するための多重特異性分子は、１または複数のエフェクター分子にコンジュゲートすることができる。エフェクター分子は、単一のエフェクター分子、または本発明の多重特異性分子に結合することができる単一の部分を形成するように連結された２以上のこのような分子を含み得ることが理解されよう。エフェクター分子に連結された本開示による抗体または多重特異性分子を得ることが望ましい場合、これは、抗体断片を直接またはカップリング剤を介してエフェクター分子に連結する標準的な化学的または組換えＤＮＡ手順によって調製することができる。このようなエフェクター分子を抗体にコンジュゲートするための技術は、当技術分野で周知である（Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍら、Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ、第２版、Ｒｏｂｉｎｓｏｎら編、１９８７年、６２３〜５３頁；Ｔｈｏｒｐｅら、１９８２年、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．、６２：１１９−５８頁およびＤｕｂｏｗｃｈｉｋら、１９９９年、Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、８３、６７−１２３頁を参照されたい）。特定の化学的手順には、例えば、国際公開第９３／０６２３１号、国際公開第９２／２２５８３号、国際公開第８９／００１９５号、国際公開第８９／０１４７６号および国際公開第０３／０３１５８１号パンフレットに記載の手順が挙げられる。または、エフェクター分子がタンパク質またはポリペプチドである場合、例えば国際公開第８６／０１５３３号パンフレットおよび欧州特許第０３９２７４５号明細書に記載の組換えＤＮＡ手順を使用して連結を達成することができる。
【０６４１】
一実施形態において、本開示の多重特異性分子は、エフェクター分子を含むことができる。
【０６４２】
本明細書で使用されるエフェクター分子という用語は、例えば、抗新生物剤、薬物、毒素、生物学的に活性なタンパク質、例えば酵素、他の抗体または抗体断片、合成または天然に存在するポリマー、核酸およびこれらの断片、例えばＤＮＡ、ＲＮＡおよびその断片、放射性核種、特に放射性ヨウ化物、放射性同位元素、キレート化金属、ナノ粒子および蛍光化合物またはＮＭＲもしくはＥＳＲ分光法によって検出され得る化合物などのレポーター基を含む。
【０６４３】
エフェクター分子の例としては、細胞毒素または細胞に有害な（例えば、死滅させる）任意の薬剤を含む細胞傷害性薬剤を挙げることができる。例としては、コンブレスタチン（ｃｏｍｂｒｅｓｔａｔｉｎｓ）、ドラスタチン、エポチロン、スタウロスポリン、マイタンシノイド、スポンギスタチン、リゾキシン、ハリコンドリン、ロリジン、ヘミアスタリン、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、エチジウムブロミド、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロールおよびピューロマイシンならびにそれらの類似体またはホモログが挙げられる。
【０６４４】
エフェクター分子としてはさらに、限定するものではないが、代謝拮抗物質（例えばメトトレキセート、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、シタラビン、５−フルオロウラシルデカルバジン）、アルキル化剤（例えばメクロレタミン、チオエパクロラムブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）およびロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロホスファミド（ｃｙｃｌｏｔｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、およびシス−白金ジクロロジアミン（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチン）、アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン、（旧ダウノマイシン）およびドキソルビシン）、抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（旧アクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラマイシン、アントラマイシン（ＡＭＣ）、カリチアマイシンまたはデュオカルマイシン）および抗有糸分裂剤（例えば、ビンクリスチンおよびビンブラスチン）が挙げられる。
【０６４５】
他のエフェクター分子としては、１１１Ｉｎおよび９０Ｙ、Ｌｕ１７７、ビスマス２１３、カルフォルニウム２５２、イリジウム１９２およびタングステン１８８／レニウム１８８などのキレート化放射性核種、または限定するものではないが、アルキルホスホコリン、トポイソメラーゼＩ阻害剤、タキソイドおよびスラミンなどの薬物が挙げられ得る。
【０６４６】
他のエフェクター分子としては、タンパク質、ペプチドおよび酵素が挙げられる。対象となる酵素としては、限定するものではないが、タンパク質分解酵素、加水分解酵素、リアーゼ、イソメラーゼ、トランスフェラーゼが挙げられる。対象となるタンパク質、ポリペプチドおよびペプチドとしては、限定するものではないが、免疫グロブリン、アブリン、リシンＡ、シュードモナス外毒素、もしくはジフテリア毒素などの毒素、インスリン、腫瘍壊死因子、α−インターフェロン、β−インターフェロン、神経成長因子、血小板由来成長因子もしくは組織プラスミノーゲンアクチベーターなどのタンパク質、血栓剤もしくは抗血管新生剤、例えば、アンジオスタチンもしくはエンドスタチン、または生体応答修飾物質、例えば、リンホカイン、インターロイキン−１（ＩＬ−１）、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、神経成長因子（ＮＧＦ）または他の成長因子および免疫グロブリンが挙げられる。
【０６４７】
他のエフェクター分子としては、例えば診断に有用な検出可能な物質が挙げられ得る。検出可能な物質の例としては、さまざまな酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質、生物発光物質、放射性核種、陽電子放出金属（陽電子放出断層撮影に使用するため）、および非放射性常磁性金属イオンが挙げられる。診断薬として使用するために抗体にコンジュゲートすることができる金属イオンについては、一般に、米国特許第４，７４１，９００号明細書を参照されたい。適切な酵素としては、ホースラッディシュペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ベータガラクトシダーゼ、またはアセチルコリンエステラーゼが挙げられ、適切な補欠分子族としては、ストレプトアビジン、アビジンおよびビオチンが挙げられ、適切な蛍光物質としては、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロライドおよびフィコエリトリンが挙げられ、適切な発光物質としては、ルミノールが挙げられ、適切な生物発光物質には、ルシフェラーゼ、ルシフェリン、およびエクオリンが挙げられ、適切な放射性核種としては、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１１１Ｉｎおよび９９Ｔｃが挙げられる。
【０６４８】
別の実施例において、エフェクター分子は、インビボでの抗体の半減期を延長し、および／または抗体の免疫原性を低下させ、および／または免疫系に対する上皮障壁を横切る抗体の送達を増強させることができる。このタイプの適切なエフェクター分子の例としては、ポリマー、アルブミン、アルブミン結合タンパク質、または国際公開第０５／１１７９８４号パンフレットに記載されているようなアルブミン結合化合物が挙げられる。
【０６４９】
エフェクター分子がポリマーである場合、それは一般に、合成または天然に存在するポリマー、例えば場合により置換された直鎖または分枝鎖ポリアルキレン、ポリアルケニレンまたはポリオキシアルキレンポリマー、または分枝状または非分枝状多糖類、例えばホモ−またはヘテロ−多糖類であってよい。
【０６５０】
上述の合成ポリマー上に存在し得る特定の任意の置換基としては、１または複数のヒドロキシ、メチルまたはメトキシ基が挙げられる。
【０６５１】
合成ポリマーの特定の例としては、場合により置換された直鎖または分枝鎖のポリ（エチレングリコール）、ポリ（プロピレングリコール）ポリ（ビニルアルコール）またはこれらの誘導体、特に場合より置換されたポリ（エチレングリコール）、例えばメトキシポリ（エチレングリコール）またはその誘導体が挙げられる。
【０６５２】
機能アッセイ
典型的には、本発明に使用するための適切な結合ドメインは、機能アッセイにおいて１つまたは複数の結合ドメイン対を試験することによって同定することができる。例えば、抗原ＣＤ２２に特異的な結合ドメインならびに抗原ＣＤ７９ａおよび／またはＣＤ７９ｂに特異的な結合ドメインを含む多重特異性分子などの抗ＣＤ２２抗体分子は、１または複数の機能アッセイで試験することができる。
【０６５３】
本明細書で使用される「機能アッセイ」は、アッセイ条件の対象となるタンパク質複合体、抗体複合体または抗体混合物の１または複数の所望の特性または活性を決定するために使用できるアッセイである。適切な機能アッセイは、結合アッセイ、アポトーシスアッセイ、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）アッセイ、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）アッセイ、細胞成長または増殖の阻害（細胞静止作用）アッセイ、細胞死滅（細胞傷害性）アッセイ、細胞シグナリングアッセイ、サイトカイン産生アッセイ、抗体産生およびアイソタイプスイッチング、ならびに細胞分化アッセイであり得る。
【０６５４】
本開示による多重特異性抗体の有効性は、当業者に一般的に公知の方法によって、このようなモデルにおいて個々の抗体または抗体（または断片）の混合物と比較することができる。
【０６５５】
機能アッセイは、結果の信頼性を高めるために必要に応じて何回も繰り返すことができる。当業者に公知のさまざまな統計的試験を用いて、統計的に有意な結果を同定し、したがって生物学的機能を有する多重特異性分子を同定することができる。
【０６５６】
適切な機能アッセイの例は、本明細書中の実施例に記載されており、Ｂ細胞活性化のマーカー、例えば、リン酸化されたＡｋｔ発現、リン酸化されたＰ３８発現、ＰＬＣγシグナル伝達、ＣＤ４０発現、ＣＤ７１発現および／またはＣＤ８６発現の阻害を検出することによって測定される、抗ＩｇＭによる刺激後のＢ細胞活性化を阻害する本発明の多重特異性分子の能力の測定が挙げられる。
【０６５７】
一実施例において、本発明の多重特異性分子などの抗体分子は、抗ＩｇＭ刺激Ｂ細胞におけるＣＤ８６発現の阻害について、５ｎＭ未満のＩＣ５０を有する。
【０６５８】
一実施形態において、マウス腫瘍モデル、自己免疫疾患のモデル、ウイルス感染または細菌感染のげっ歯類または霊長類モデルなどを含む動物モデルなどのインビボアッセイを、本開示の分子を試験するために用いることができる。
【０６５９】
本明細書において用いられる「融合タンパク質」は、別の実体、例えば結合パートナーＸまたはＹ（それぞれに見合った）に融合されたタンパク質成分、例えばＡまたはＢを含む。実施形態において、融合タンパク質は、例えばＤＮＡ構築物から宿主中で発現される遺伝子構築物に由来する、組換え技術によって発現される翻訳タンパク質である。
【０６６０】
テザーＸ：Ｙの機能は、ＡおよびＢの相乗作用が実現されるように、タンパク質ＡおよびＢを互いに近接して保持することである。
【０６６１】
本明細書において使用する「ヘテロ二量体−テザー」は、２つの結合パートナーを一緒に保持するのに十分な全体的親和性を有する、互いの間に相互作用（例えば、結合）を形成する２つの異なる結合パートナーＸおよびＹを含むテザーを指す。一実施形態において、Ｘおよび／またはＹは、ホモ二量体を形成するためには不適切である。
【０６６２】
ヘテロ二量体的につながれた、およびヘテロ二量体−テザーは、本明細書では互換的に使用される。
【０６６３】
一実施形態において、本明細書において用いられる「ホモ二量体を形成するためには不適切である」とは、Ｘ−Ｙのヘテロ二量体の形成がより好ましく、例えば、一度形成されると安定、例えば熱力学的に安定および／または物理的に安定（例えば、凝集の欠如により証明される）であることを指す。
【０６６４】
一実施形態において、Ｘ−Ｙ相互作用は、Ｘ−ＸまたはＹ−Ｙ相互作用よりも好ましい。これは、融合タンパク質Ａ−ＸおよびＢ−Ｙが混合された場合、ホモ二量体Ｘ−ＸまたはＹ−Ｙの形成を減少させる。これはまた、ホモ二量体の除去を比較的単純にし、例えばカラムクロマトグラフィーのような１つの精製工程により、本開示による実質的に純粋な融合タンパク質および／または二重特異性タンパク質複合体が提供される。
【０６６５】
一実施形態において、結合パートナーの１つ（または少なくとも１つ）はホモ二量体を形成することができず、例えば、結合パートナーのアミノ酸配列は、ホモ二量体の形成が排除または最小化されるように変異させられている。
【０６６６】
一実施形態において、結合パートナーの両方がホモ二量体を形成することができず、例えば結合パートナーの１つはペプチドであり、他の結合パートナーは前記ペプチドに特異的なＶＨＨである。
【０６６７】
一実施形態において、本開示の分子に用いられるｓｃＦｖは、ホモ二量体を形成することができない。
【０６６８】
本明細書中において使用されるホモ二量体を形成することができないとは、ホモ二量体を形成する傾向が低いかゼロであることをいう。本明細書中において使用される場合、低いとは、５％以下、例えば、４、３、２、１、０．５％またはそれ以下の凝集物をいう。
【０６６９】
一実施形態において、：は、例えば水素結合および静電相互作用などの、例えばファンデルワールス力などの引力に基づく、例えば、ペプチドなどの抗原に対する抗体特異性に基づく、結合相互作用である。
【０６７０】
一実施形態において、：は共有結合ではない。
【０６７１】
本明細書において用いられる「複合体を形成する」とは、複合体が組み立てられ、融合タンパク質が一緒に保持される適切な条件下で融合タンパク質成分Ａ−ＸおよびＢ−Ｙを接触させる場合に十分に特異的かつ強力な、結合相互作用または化学反応を含む相互作用を指す。
【０６７２】
本明細書において用いられる「一緒に保持される」とは、結合後に複合体をあたかも１分子であるかのように扱うことができ、多くの場合、単一の分子のように挙動し、作用するような、互いに近接した成分（融合タンパク質）の保持を指す。一実施形態において、保持により、本明細書に開示された方法での使用に適した、すなわち少なくとも１つの機能的スクリーニングへの使用に適した複合体が得られる。
【０６７３】
一実施形態において、結合相互作用は可逆的である。
【０６７４】
本明細書において用いられるＸおよびＹに関しての特異性は、相互作用における結合パートナーＸおよびＹが、互いだけを認識するか、または非パートナーと比較して互いに対して有意に高い親和性、例えば少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０倍高い親和性を有する場合を指す。
【０６７５】
一実施形態において、ＸとＹとの間の結合相互作用は、低い解離定数を有する。
【０６７６】
低い解離定数の例としては、１−９ｘ１０−２ｓ−１以下、例えば１−９ｘ１０−３ｓ−１、１−９ｘ１０−４ｓ−１、１−９ｘ１０−５ｓ−１、１−９ｘ１０−６ｓ−１または１−９ｘ１０−７ｓ−１が挙げられる。特に適切な解離定数としては、１ｘ１０−４ｓ−１以下、例えば１ｘ１０−５ｓ−１、１ｘ１０−６ｓ−１または１ｘ１０−７ｓ−１が挙げられる。
【０６７７】
理論に束縛されることを望むものではないが、低い解離定数（オフレートとも呼ばれる）は、分子を十分安定にし、特に機能的スクリーニングアッセイにおいて二重特異性タンパク質複合体を有用にすると考えられる。
【０６７８】
一実施形態において、ＸおよびＹのお互いの親和性は、５ｎＭまたはそれ以上の強さであり、例えば４ｎＭ、３ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭまたはそれ以上の強さである。
【０６７９】
一実施形態において、ＸとＹとの互いの親和性は９００ｐＭまたはそれ以上の強さであり、例えば８００、７００、６００、５００、４００、３００、２００、１００または５０ｐＭまたはそれ以上の強さである。
【０６８０】
別の実施形態において、ＸとＹとの互いの親和性は、１０ｐＭまたはそれ以上の強さであり、例えば９、８、７、６または５ｐＭである。
【０６８１】
親和性は、相互作用のオンオフレートから計算される値である。本明細書で使用される「親和性」という用語は、分子（例えば、抗体）の単一の結合部位とその結合パートナー（例えば、ペプチド）との間の非共有結合相互作用の総和の強さを指す。その結合パートナーに対する分子の親和性は、一般に、平衡解離定数（ＫＤ）によって表すことができる。親和性は、表面プラズモン共鳴法、特にＢＩＡｃｏｒｅのような、本明細書に記載の方法を含む、当技術分野で公知の一般的な方法によって測定することができる。
【０６８２】
一実施形態において、本開示による複数の二重特異性タンパク質複合体は、並行してまたは本質的に同時に試験される。
【０６８３】
本明細書において用いられる、同時に、は、試料／分子／複合体が同じ分析において、例えば同じ「実行」で分析される場合を指す。
【０６８４】
一実施形態において、同時に、は、信号出力が本質的に同じ時間に機器により分析される共存分析を指す。この信号は、得られた結果を解釈するためにデコンボリューションが必要な場合がある。
【０６８５】
有利には、複数の二重特異性タンパク質複合体を試験することにより、多数の二重特異性タンパク質複合体のより効率的なスクリーニング、および新規かつ興味深い関係の同定が可能になる。対象となるＣＤ２２およびＣＤ７９の標的抗原に対する明らかに異なる可変領域は、生物学的機能における微妙なニュアンスにアクセスすることができる。
【０６８６】
一実施形態において、複数の二重特異性タンパク質複合体を、上記で定義した多重体を使用し、１または複数の機能アッセイに供することによって試験する。
【０６８７】
本明細書で使用される「生物学的機能」という用語は、試験される生物学的実体に対する自然な活性またはその目的、例えば細胞、タンパク質などの天然の活性を指す。理想的には、機能の存在は、生きた哺乳動物細胞を利用するアッセイを含むインビトロ機能アッセイを使用して試験することができる。本明細書において用いられる自然機能は、癌に関連する機能などの異常な機能を含む。
【０６８８】
一実施形態において、本開示による多重特異性抗体分子は、新規なまたは相乗的な機能を有する。
【０６８９】
本明細書で使用される「相乗的機能」という用語は、本開示の二重特異性タンパク質複合体の第１および第２のタンパク質が一緒に用いられない場合には観察されないか、またはその場合に観察されるより高い生物学的活性、例えば、二重特異性形態においてのみ観察される活性を指す。したがって、「相乗的」には、新規な生物学的機能が含まれる。
【０６９０】
本明細書において用いられる新規な生物学的機能は、２以上の相乗的実体［タンパク質Ａおよびタンパク質Ｂ］が（二重特異性または他のものとして）一緒にされるまで明白でないかまたは存在しない機能か、または以前は同定されていない機能を指す。
【０６９１】
本明細書において用いられる、より高い、は、ゼロからの増加を含む活性の増加、すなわち、個々の複合体化されていない１または複数の二重特異性成分が、関連する機能アッセイにおいて活性を有さない場合の二重特異性におけるいくつかの活性を指し、さらに本明細書において新規な活性または新規な生物学的機能とも称される。本明細書において用いられる、より高い、はまた、個々の複合体化されていない二重特異性成分または二価の結合ドメインと比較して、関連機能アッセイにおいて二重特異性の相加的機能より大きい、例えば、関連活性の１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００％またはそれ以上の増加を含む。
【０６９２】
一実施形態において、新規な相乗的機能は、より高い阻害活性である。
【０６９３】
一実施形態において、本発明の多重特異性抗体分子は、単独または混合物で提供された、ＣＤ２２に対する二価結合ドメインの活性とＣＤ７９ａに対する二価結合ドメインとの活性の合計より高い阻害活性を有する。
【０６９４】
一実施形態において、結合対の第１の結合パートナーＸおよび第２の結合パートナーＹの少なくとも１つは、ペプチドおよびタンパク質から独立して選択され、例えば第１の結合パートナーまたは第２の結合パートナーはペプチドである。
【０６９５】
適切なペプチドには、ＧＣＮ４、Ｆｏｓ／Ｊｕｎ（ヒトおよびマウスのＦｏｓはそれぞれＵｎｉｐｒｏｔ番号Ｐ０１１００およびＰ０１１０１を有し、ヒトおよびマウスのｊｕｎはそれぞれＵｎｉｐｒｏｔ番号Ｐ０５４１２およびＰ０５６２７を有する）、ヒトインフルエンザ赤血球凝集素（ＨＡ）、ポリヒスチジン（Ｈｉｓ）、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）およびＦＬＡＧを含む群を含む。他のペプチドも本開示における使用に適していると考えられており、特に適切なペプチドは、このようなペプチドがそれらのそれぞれの結合パートナーに高親和性で結合する傾向があるため、タンパク質精製のための親和性タグとなる。
【０６９６】
本明細書で使用される「ペプチド」という用語は、ペプチド結合によって連結されたアミノ酸の短いポリマーを指し、このペプチドは２〜１００個のアミノ酸の範囲、例えば５〜９９、例えば６〜９８、７〜９７または８〜９６個を含む。一実施形態において、本開示に用いられるペプチドは、５０アミノ酸残基以下、例えば４０、３０、１０またはそれ以下のアミノ酸配列である。本開示で使用されるペプチドは、目的にかなった十分な長さであり、例えばペプチドがリンカーである場合、連結する断片がその生物学的機能を果たし得るような適切な長さが必要であり、またはペプチドが結合パートナーである場合、抗体などの別の実体に特異的に結合することができなければならない。
【０６９７】
一実施形態において、結合対の他方の結合パートナー（別の第１または第２の結合パートナー）はタンパク質である。
【０６９８】
本明細書において用いられるタンパク質は、１００アミノ酸以上のアミノ酸配列を意味する。一実施形態において、本明細書において用いられる「タンパク質」は、二次または三次構造を有するアミノ酸配列を指す。
【０６９９】
一実施形態において、二重特異性タンパク質複合体の第１のタンパク質Ａおよび／または第２のタンパク質Ｂは、抗体または抗体断片である。このような二重特異性タンパク質複合体は、二重特異性抗体複合体と呼ぶことができる。
【０７００】
一実施形態において、本開示の二重特異性抗体複合体に用いられる各抗体または断片は、１つの結合部位を含む。
【０７０１】
融合タンパク質（Ａ−ＸまたはＢ−Ｙ）に用いられる完全長抗体または抗体断片は、単一特異性、多価または二重特異性であり得る。
【０７０２】
有利なことに、２つの二重特異性抗体または抗体断片の使用は、本明細書に記載の二重特異性抗体複合体のような本開示の分子が、潜在的に最大４つの異なる抗原に特異的であることを可能にする（すなわちこの複合体は四重特異性であり得る）。これにより、結合活性型の効果を調べることができる。
【０７０３】
一実施形態において、本開示の分子に用いられる抗体もしくは抗体断片またはその成分、例えば第１の融合タンパク質Ａ−Ｘは、単一特異性の抗体または抗体断片、例えばＦａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖなどであり、特にＣＤ２２に特異的である。
【０７０４】
一実施形態において、本開示の分子に用いられる抗体もしくは抗体断片またはその成分、例えば第２の融合タンパク質Ｂ−Ｙは、単一特異性の抗体または抗体断片、例えばＦａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖなどであり、特にＣＤ７９ａおよび／またはＣＤ７９ｂに特異的である。
【０７０５】
一実施形態において、本開示の分子に用いられる抗体もしくは抗体断片またはその成分、例えば第２の融合タンパク質Ｂ−Ｙは多価であり、すなわち２以上の結合ドメインを有する。
【０７０６】
一実施形態において、本開示の分子に用いられる抗体もしくは抗体断片またはその成分、例えば第１の融合タンパク質Ａ−Ｘは一価であり、本開示の分子に用いられる抗体もしくは抗体断片またはその成分、例えば第２の融合タンパク質Ｂ−Ｘは一価である。
【０７０７】
したがって、一実施形態において、本開示の多重特異性分子の結合ドメインは一価である。
【０７０８】
したがって、一実施形態において、本開示の多重特異性分子の結合ドメインは一価であり、単一特異性である。
【０７０９】
一実施形態において、本開示の分子に用いられる抗体もしくは抗体断片またはその成分、例えば第１の融合タンパク質Ａ−Ｘは一価であり、本開示の分子に用いられる抗体もしくは抗体断片またはその成分、例えば第２の融合タンパク質Ｂ−Ｙは多価である。
【０７１０】
一実施形態において、本開示の分子に用いられる抗体もしくは抗体断片またはその成分、例えば第１の融合タンパク質Ａ−Ｘは多価であり、本開示の分子に用いられる抗体もしくは抗体断片またはその成分、例えば第２の融合タンパク質Ｂ−Ｙは一価である。
【０７１１】
一実施形態において、本開示の分子に用いられる抗体もしくは抗体断片またはその成分、例えば第１の融合タンパク質Ａ−Ｘは多価であり、本開示の分子に用いられる抗体もしくは抗体断片またはその成分、例えば第２の融合タンパク質Ｂ−Ｙは多価である。
【０７１２】
一実施形態において、本開示の分子の第１の抗体、第２の抗体または第１および第２の両方の抗体、またはその成分、例えば二重特異性抗体複合体は、ＩｇＧフォーマットであってよく、例えば抗ＣＤ２２および／または抗ＣＤ７９抗体は、ＩｇＧフォーマットで提供することができる。
【０７１３】
一実施形態において、抗体断片は、断片抗原（Ｆａｂ）断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）および単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、例えばｓｃＦｖからなる群から選択され、第１（Ａ−Ｘ）または第２の融合タンパク質（Ｂ−Ｙ）に用いられる。有利には、小さなサイズのｓｃＦｖは、二重特異性抗体複合体の正確な折りたたみを促進し得る。
【０７１４】
一実施形態において、本開示の二重特異性抗体複合体の第１（Ａ）、第２（Ｂ）の抗体／断片または第１および第２の両方の抗体／断片がＦａｂであってもよい。
【０７１５】
一実施形態において、本開示の二重特異性抗体複合体の第１、第２の抗体／断片または第１および第２の両方の抗体／断片がＶＨＨである。
【０７１６】
本開示の二重特異性複合体の文脈で用いられる「融合タンパク質」は、結合パートナーに結合されたタンパク質、例えば、抗体または抗体断片を指す。
【０７１７】
便宜上、本開示の二重特異性タンパク質複合体は、本明細書においてＡ−Ｘ：Ｙ−Ｂと称される。しかし、この命名法は、本発明者らの実験が、結合パートナーＸおよびＹが本方法に悪影響を及ぼすことなく逆転可能、すなわちＡ−ＹおよびＢ−Ｘであり得ることを示すので、融合タンパク質Ａ−ＸおよびＢ−Ｙがどのように設計されるかを限定することを意図するものではない。したがって、ＡおよびＢならびにＸおよびＹは、本技術の説明を助けるために参照される名目上の符号である。
【０７１８】
本明細書において用いられる「結合した」とは、直接的またはリンカー（例えば、以下にその例が議論されるペプチドリンカー）を介して間接的に連結または接続されることをいう。直接連結には、１つへの融合（例えば、ペプチド結合）または化学的コンジュゲートが含まれる。
【０７１９】
本明細書において用いられる「結合パートナー」は、結合対の１つの成分部分を指す。
【０７２０】
一実施形態において、結合パートナーの親和性は高く、５ｎＭまたはそれ以上の強さ、例えば９００、８００、７００、６００、５００、４００、３００ｐＭまたはそれ以上の強さである。
【０７２１】
本明細書において用いられる「結合対」は、互いに特異的に結合する２つの結合パートナーを指す。結合対の例としては、ペプチドおよびそれに特異的な抗体もしくは結合断片、または酵素およびリガンド、または酵素およびその酵素の阻害剤が挙げられる。
【０７２２】
一実施形態において、第１の結合パートナー（Ｘ）は、完全長抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ペプチドおよびｓｄＡｂを含む群から選択され、ｓｄＡｂの例には、ＶＨまたはＶＬまたはＶＨＨが含まれる。
【０７２３】
一実施形態において、第２のパートナー（Ｙ）は、完全長抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ペプチドおよびｓｄＡｂを含む群から選択され、ｓｄＡｂの例には、ＶＨまたはＶＬまたはＶＨＨが含まれる。
【０７２４】
一実施形態において、Ａが抗体またはその断片である場合、第１の結合パートナー（Ｘ）は、第１の抗体または抗体断片の重鎖または軽鎖のＣ末端に結合され、例えば、第１の結合パートナーは、第１の抗体または抗体断片の重鎖のＣ末端に結合される。
【０７２５】
別の実施形態において、Ｂが抗体またはその断片である場合、第２の結合パートナー（Ｙ）は、第２の抗体または抗体断片の重鎖または軽鎖のＣ末端に結合され、例えば、第２の結合パートナーは、第２の抗体または抗体断片の重鎖のＣ末端に結合される。
【０７２６】
一実施形態において、Ｘは、抗体または断片（タンパク質Ａ）の重鎖のＣ末端に結合され、Ｙは、抗体または断片（タンパク質Ｂ）のＣ末端に結合される。
【０７２７】
一実施形態において、Ｘは、抗体または断片（タンパク質Ａ）の重鎖のＣ末端にリンカー（ＡＳＧＧＧＧまたはＡＳＧＧＧＧＳＧなど）を介して結合され、Ｙは、抗体または断片（タンパク質Ｂ）のＣ末端にリンカー（ＡＳＧＧＧＧまたはＡＳＧＧＧＧＳＧなど）を介して結合される。
【０７２８】
一実施形態において、第１または第２の結合パートナー（ＸまたはＹ）はペプチドである。
【０７２９】
適切な結合対の例としては、ＧＣＮ４（配列番号２４７）またはその変異体および５２ＳＲ４（配列番号２４９）またはその変異体を挙げることができ、これはＧＣＮ４に特異的なｓｃＦｖである。
【０７３０】
一実施形態において、第１の結合パートナー（名目上Ｘ）は、ＧＣＮ４（例えば配列番号２４７に示される）またはその変異体（例えばＨｉｓタグを含まない）であり、第２の結合パートナー（名目上Ｙ）は、ＧＣＮ４に特異的なｓｃＦｖ（例えば、配列番号２４９に示される）またはその変異体である。
【０７３１】
一実施形態において、第１の結合パートナー（名目上Ｘ）は、ＧＣＮ４に特異的なｓＦｖ（例えば配列番号２４９に示される）またはその変異体であり、第２の結合パートナー（名目上Ｙ）は、ＧＣＮ４（例えば、配列番号２４７に示される）またはその変異体である。
【０７３２】
ＧＣＮ４変異体はまた、配列番号２４７と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％または９８％または９９％同一性のアミノ酸配列を含む。ＧＣＮ４変異体は、配列番号２４８のヌクレオチド配列によってコードされた配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸、またはストリンジェントな条件下で配列番号１４５とハイブリダイズするヌクレオチド配列を含む。
【０７３３】
ＧＣＮ４に特異的な適切なｓｃＦｖは、５２ＳＲ４（配列番号１４６）またはその変異体である。５２ＳＲ４の変異体は、配列番号２５０と少なくとも８０％、または８５％、または９０％、または９５％、または９８％、または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。５２ＳＲ４変異体はまた、配列番号１４６のヌクレオチド配列によってコードされる配列に対して少なくとも８０％、または８５％、または９０％、または９５％、または９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列、またはストリンジェントな条件下で配列番号２４８とハイブリダイズするヌクレオチド配列を含む。
【０７３４】
本発明者らは、一本鎖抗体５２ＳＲ４およびペプチドＧＣＮ４が、本開示の二重特異性タンパク質複合体における使用に適した結合対であることを見出した。
【０７３５】
または、任意の適切な抗体／断片および抗原（ペプチドなど）をＸおよびＹとして用いてもよい。
【０７３６】
一実施形態において、第１の結合パートナー（Ｘ）および第２の結合パートナー（Ｙ）はタンパク質である。
【０７３７】
一実施形態において、第１の結合パートナー（Ｘ）は酵素またはその活性断片であり、第２の結合パートナー（Ｙ）はリガンドであるか、またはその逆である。
【０７３８】
一実施形態において、第１の結合パートナー（Ｘ）は酵素またはその活性断片であり、第２の結合パートナー（Ｙ）はその酵素の阻害剤であるか、またはその逆である。
【０７３９】
本明細書において用いられる「活性断片」とは、実体のアミノ酸配列全体よりも少なく、本質的に同じ生物学的活性または関連する生物学的活性を、例えば５０％超の活性、例えば６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％保持するアミノ酸断片を指す。
【０７４０】
別の実施形態において、第１の結合パートナーＸはグルタチオン（ＧＳＨ）であり、第２の結合パートナーＹはグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）であるか、またはその逆である。
【０７４１】
別の実施形態において、ＸはＦｏｓであり、ＹはＪｕｎであるか、またはその逆である。
【０７４２】
別の実施形態において、ＸはＨｉｓであり、Ｙは抗Ｈｉｓであるか、またはその逆である。
【０７４３】
別の実施形態において、結合対は、カルモジュリン（ｃｌａｍｏｄｕｌｉｎ）結合ペプチドであり、Ｙはカルモジュリンであるか、またはその逆である。
【０７４４】
別の実施形態において、Ｘはマルトース結合タンパク質であり、Ｙは抗マルトース結合タンパク質またはその断片であるか、またはその逆である。
【０７４５】
他の酵素−リガンドの組合せもまた、結合パートナーへの使用のために企図される。タンパク質精製のための当該分野で公知の親和性タグもまた、それらのそれぞれの結合パートナーに高い親和性で結合する傾向があるので適切である。
【０７４６】
同一性および類似性の程度は容易に計算することができる（Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．編、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９８８年；Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ．Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｐｒｏｊｅｃｔｓ、Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｗ．編、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９９３年；Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄａｔａ、Ｐａｒｔ  １、Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．，およびＧｒｉｆｆｉｎ，Ｈ．Ｇ．編、Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ、１９９４年；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、ｖｏｎ  Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ．、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、１９８７年、Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐｒｉｍｅｒ、Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．およびＤｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．，編、Ｍ  Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９９１年、ＮＣＢＩから利用可能なＢＬＡＳＴ（商標）ソフトウェア（Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ら、１９９０年、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０頁；Ｇｉｓｈ，Ｗ．＆Ｓｔａｔｅｓ，Ｄ．Ｊ．１９９３年、Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔ．３：２６６−２７２頁．Ｍａｄｄｅｎ，Ｔ．Ｌ．ら、１９９６年、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２６６：１３１−１４１頁；Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ら、１９９７年、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２頁；Ｚｈａｎｇ，Ｊ．＆Ｍａｄｄｅｎ，Ｔ．Ｌ．１９９７年、Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．７：６４９−６５６頁）。
【０７４７】
一実施形態において、第１または第２の結合パートナー（ＸまたはＹ）はタンパク質またはペプチドである。
【０７４８】
一実施形態において、第１および第２の融合タンパク質は、１または複数のペプチドリンカーを含む。リンカーは、融合タンパク質のさまざまな位置に組み込むことができる。例えば、結合パートナーとそれに結合したタンパク質との間にリンカーを導入することができる。
【０７４９】
一実施形態において、リンカーはペプチドリンカーである。
【０７５０】
本明細書において使用される「ペプチドリンカー」という用語は、アミノ酸配列を有するペプチドを指す。さまざまな適切なペプチドリンカーが、当業者に公知であると思われる。
【０７５１】
一実施形態において、ペプチドリンカーは合成起源のもの、すなわち合成化学技術によって調製されたものであってもよい。
【０７５２】
一実施形態において、二重特異性タンパク質複合体の結合パートナーは、ペプチドリンカーを介してそれぞれのタンパク質に接続される。
【０７５３】
一実施形態において、融合タンパク質は翻訳融合体であり、すなわち融合タンパク質が発現される遺伝子構築物を含む宿主細胞で発現される融合タンパク質である。
【０７５４】
一実施形態において、融合タンパク質は、場合によりペプチドリンカーを介してＡとＸまたはＢとＹとをコンジュゲートさせることによって調製される。
【０７５５】
一実施形態において、ペプチドリンカーは、５０アミノ酸長以下であり、例えば、２０アミノ酸未満（ｏｆ  ｌｅｓｓ）である。
【０７５６】
一般に、融合タンパク質を組換え発現することがより効率的であり、したがって、直接ペプチド結合または宿主細胞によって発現され得るペプチドリンカーが有利であり得る。
【０７５７】
一実施形態において、形成された複合体は、さらなる精製工程を必要としない。
【０７５８】
一実施形態において、形成された複合体は、例えばカラムクロマトグラフィーのような１つの精製工程を必要とする。
【０７５９】
一実施形態において、本方法は、例えば本開示による融合タンパク質の発現後に、少なくとも１つの精製工程をさらに含む。
【０７６０】
本明細書で使用される「機能アッセイ」は、アッセイ条件の対象となるタンパク質複合体、抗体複合体または抗体混合物の１または複数の所望の特性または活性を決定するために使用できるアッセイである。適切な機能アッセイは、結合アッセイ、アポトーシスアッセイ、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）アッセイ、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）アッセイ、細胞成長または増殖の阻害（細胞静止作用）アッセイ、細胞死滅（細胞傷害性）アッセイ、細胞シグナリングアッセイ、サイトカイン産生アッセイ、抗体産生およびアイソタイプスイッチング、ならびに細胞分化アッセイであってよい。一実施形態において、マウス腫瘍モデル、自己免疫疾患のモデル、ウイルス感染または細菌感染のげっ歯類または霊長類モデルなどを含む動物モデルなどのインビボアッセイを、本開示の分子を試験するために用いることができる。
【０７６１】
二重特異性抗体複合体の文脈において、本開示による二重特異性抗体複合体の有効性は、当業者に一般的に公知の方法によって、このようなモデルにおいて個々の抗体または抗体（または断片）の混合物と比較することができる。
【０７６２】
機能アッセイは、結果の信頼性を高めるために、特定の二重特異性抗体複合体の異なるサンプルの有無にかかわらず、必要に応じて何度も繰り返すことができる。当業者に公知のさまざまな統計学的試験を用いて、統計的に有意な結果を同定し、したがって生物学的機能を有する二重特異性抗体複合体を同定することができ、特に本発明の多重特異性分子に使用するための最適可変領域対を同定することができる。
【０７６３】
組成物および医療用途
一態様において、本開示による分子または成分、例えば融合タンパク質、ヘテロ二量体的につながれた二重特異性タンパク質複合体、融合タンパク質または前記二重特異性タンパク質複合体を含む本発明の分子を含む組成物、本明細書において定義されるマルチプレックス、アレイ、ライブラリーが提供される。
【０７６４】
一実施形態において、本開示の分子、例えば本明細書に記載の抗体、多重特異性分子および二重特異性タンパク質複合体は治療用途に適しており、疾患を治療するための新規治療法を提供することができる。したがって、さらなる態様において、本開示の抗体分子、例えば治療に使用するための、上記の二重特異性タンパク質複合体が提供される。本明細書に記載の二重特異性タンパク質複合体を含む本開示の分子は、癌などの一連の疾患の治療に適している。
【０７６５】
本明細書に記載の多重特異性分子および二重特異性タンパク質複合体を含む本開示の分子はまた、さまざまな自己免疫疾患における免疫および自己免疫反応を制御するためにＢ細胞機能を阻害するのに特に適している。
【０７６６】
したがって、本開示は、患者における疾患を治療する方法であって、治療有効量の本開示の分子、例えば本開示の多重特異性分子または二重特異性タンパク質複合体の投与を含む方法に及ぶ。
【０７６７】
一態様において、本開示の１または複数の分子、例えば本開示の多重特異性分子を含む医薬組成物が提供される。
【０７６８】
医薬として許容され得る担体、賦形剤および／または希釈剤を含むさまざまな異なる成分が、この組成物に含まれてよい。この組成物は、場合により、本発明の多重特異性分子の集団の特性を改変、例えば、抗体の機能の低下、安定化、遅延、調節および／または活性化することができるさらなる分子を含むことができる。組成物は、固体であっても、または液体形態であってもよく、とりわけ、粉末、錠剤、溶液またはエアロゾルの形態であってもよい。
【０７６９】
本発明はまた、本発明の抗体分子または多重特異性分子を、医薬として許容され得る賦形剤、希釈剤または担体の１または複数と組み合わせて含む医薬組成物または診断組成物を提供する。したがって、病態または傷害の治療に使用するための、および治療用医薬品製造のための本発明の多重特異性分子の使用が提供される。
【０７７０】
病態
病態または障害は、例えば、感染（ウイルス性、細菌性、真菌性および寄生虫性）、感染に伴う内毒素性ショック、関節リウマチなどの関節炎、重症喘息などの喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、骨盤炎症性疾患、アルツハイマー病、炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、ペイロニー病、セリアック病、胆嚢疾患、毛巣病、腹膜炎、乾癬、血管炎、外科手術による癒着、脳卒中、Ｉ型糖尿病、ライム病、髄膜脳炎、自己免疫性ブドウ膜炎、多発性硬化症、狼瘡（全身性エリテマトーデスなど）およびギラン・バレー症候群（Ｇｕｉｌｌａｉｎ−Ｂａｒｒ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）などの中枢および末梢神経系の免疫媒介炎症性障害、アトピー性皮膚炎、自己免疫性肝炎、線維化肺胞炎、グレーブス病、ＩｇＡ腎症、特発性血小板減少性紫斑病、メニエール病、天疱瘡、原発性胆汁性肝硬変、サルコイドーシス、強皮症、ウェゲナー肉芽腫症、他の自己免疫障害、膵炎、外傷（外科手術）、移植片対宿主病、移植片拒絶反応、虚血性疾患を含む心疾患、例えば、心筋梗塞およびアテローム性動脈硬化、血管内凝固、骨吸収、骨粗鬆症、変形性関節炎、歯周炎、低酸症（ｈｙｐｏｃｈｌｏｒｈｙｄｉａ）ならびに乳癌、肺癌、胃癌、卵巣癌、肝細胞癌、結腸癌、膵臓癌、食道癌、頭頸部癌、腎臓癌および特に、腎細胞癌、前立腺癌、肝臓癌、黒色腫、肉腫、骨髄腫、神経芽細胞腫、胎盤絨毛癌、子宮頸癌、および甲状腺癌を含む癌、ならびにそれらの転移形態からなる群から選択され得る。
【０７７１】
一実施形態において、障害は癌、例えば急性リンパ芽球性白血病もしくは慢性リンパ球性白血病などのリンパ球性白血病、または急性骨髄性白血病もしくは慢性骨髄性白血病などの骨髄性白血病を含む白血病である。
【０７７２】
一実施形態において、自己免疫疾患としては、−急性播種性脳脊髄炎（ａｄｅｍ）、急性壊死性出血性白質脳炎、アジソン病、副腎不全、コルチゾール低下症、円形脱毛症、アミロイドーシス、強直性脊椎炎、脊椎関節症、シュトリュンペル−マリー病、抗ＧＢＭ／抗ＴＢＭ腎炎、抗リン脂質抗体症候群（ａｐｓ）、自己免疫性血管性浮腫、自己免疫性再生不良性貧血、自己免疫性自律神経失調症、自己免疫性肝炎、自己免疫性高脂血症、自己免疫性免疫不全、自己免疫性内耳疾患（ＡＩＥＤ）、自己免疫性リンパ増殖性症候群（ＡＬＰＳ）、カナル−スミス症候群、自己免疫性心筋炎、自己免疫性卵巣炎、自己免疫性膵炎（ＡＩＰ）、自己免疫性多内分泌腺症候群（Ｉ型、ＩＩ型およびＩＩＩ型）、自己免疫性網膜症（ＡＲ）、自己免疫性血小板減少性紫斑病（ＡＴＰ）、自己免疫性甲状腺疾患、自己免疫性蕁麻疹、軸索型／神経型ニューロパシー、バロー病、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、心筋症、キャッスルマン病、セリアック病、シャーガス病、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパシー（ＣＩＤＰ）、慢性再発性多発性骨髄炎（ｃｈｒｏｎｉｃ  ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ  ｍｕｌｔｉｆｏｃａｌ  ｏｓｔｏｍｙｅｌｉｔｉｓ）（ＣＲＭＯ）、チャーグ−ストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡／良性粘膜類天疱瘡（ＣＰ）、クローン病、炎症性腸疾患、大腸炎、腸炎、回腸炎、コーガン症候群、寒冷凝集素病、先天性心ブロック、コクサッキー心筋炎、クレスト症候群（ｃｒｅｓｔ  ｄｉｓｅａｓｅ）、クリオグロブリン血症、脱髄性ニューロパシー、疱疹状皮膚炎、デューリング病、皮膚筋炎、糖尿病、Ｉ型、円板状エリテマトーデス（ＤＬＥ）、ドレスラー症候群、子宮内膜症、表皮水疱症（ＥＢ）および後天性表皮水疱症（ｅｂ  ａｃｑｕｉｓｉｔａ）（ＥＢＡ）、好酸球性胃腸炎、食道炎、好酸球性筋膜炎、シュルマン症候群、結節性紅斑、実験的アレルギー性脳脊髄炎、エヴァンス症候群、線維化性肺胞炎、巨細胞性動脈炎（側頭動脈炎）、巨細胞性心筋炎、糸球体腎炎（非増殖性：巣状分節性糸球体硬化症および膜性糸球体腎炎  増殖性：ＩｇＡ腎症）、グッドパスチャー症候群、多発血管炎性肉芽腫症（ＧＰＡ）（以前はウェゲナー肉芽腫症と呼ばれていた）、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、ミラー・フィッシャー症候群、急性運動性軸索型ニューロパシー、急性運動感覚性軸索型ニューロパシー、急性全自律（ｐａｎａｕｔｏｎｏｍｉｃ）ニューロパシー、ビッカースタッフ型脳幹脳炎、橋本脳症、橋本甲状腺炎、溶血性貧血、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、妊娠性疱疹、低ガンマグロブリン血症、特発性肺線維症、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、ＩｇＡ腎症（ＩＧＡＮ）、ベルガー症候群、咽頭炎併発糸球体腎炎（ｓｙｎｐｈａｒｙｎｇｉｔｉｃ  ｇｌｏｍｅｒｕｌｏｎｅｐｈｒｉｔｉｓ）、ＩｇＡ天疱瘡、ＩｇＧ４関連硬化性疾患、免疫調節性不妊症（ｉｍｍｕｎｅ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｉｎｆｅｒｔｉｌｉｔｙ）、封入体筋炎、インスリン依存性糖尿病、間質性膀胱炎、アイザック症候群、神経性筋強直症、若年性関節炎、若年性筋炎、川崎症候群、ランバート・イートン症候群、白血球破壊性血管炎、扁平苔癬、硬化性苔癬、木質性結膜炎、線形ＩｇＡ皮膚症（ＬＡＤ）、類天疱瘡、ル��プス（ＳＬＥ）、ライム病、メニエール病、顕微鏡的多発血管炎（ＭＰＡ）、混合性結合組織病（ＭＣＴＤ）、単クローン性γグロブリン血症（ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ｇａｍｍａｏｐａｔｈｙ）、モーレン潰瘍、ムッハ・ハーベルマン病、多発性硬化症、重症筋無力症、筋炎、ナルコレプシー、視神経脊髄炎（デビック病）、神経性筋強直症、アイザックス症候群（後天性、腫瘍随伴、遺伝性）、好中球減少症、眼球瘢痕性類天疱瘡、視神経炎、卵巣炎、眼球クローヌス・ミオクローヌス症候群、精巣炎、回帰性リウマチ、ｐａｎｄａｓ（連鎖球菌関連小児自己免疫神経精神障害）、腫瘍随伴自己免疫多臓器症候群（ＰＡＭＳ）、傍腫瘍性小脳変性症、腫瘍随伴性天疱瘡（ＰＮＰ）、発作性夜間血色素尿症（ＰＮＨ）、パリー・ロンバーグ症候群、パーソネイジ・ターナー症候群、毛様体扁平部炎（周辺性ブドウ膜炎）、妊娠性類天疱瘡（ｐｅｍｐｇｉｇｏｉｄ  ｇｅｓｔａｔｉｏｎｉｓ）（ＰＧ）、尋常性天疱瘡（ＰＶ）、落葉状天疱瘡（ｐｅｍｐｈｉｇｕｓ  ｆｏｌｌｉａｃｅｕｓ）（ＰＦ）、末梢性ニューロパシー、静脈周囲脳脊髄炎（ｐｅｒｉｖｅｎｏｕｓ  ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ）、悪性貧血、Ｐｏｅｍｓ症候群、結節性多発動脈炎（ＰＡＮ）、リウマチ性多発筋痛症、多発性筋炎、心筋梗塞後症候群、心膜切開後症候群、黄体ホルモン皮膚炎、原発性胆汁性肝硬変、ハノット症候群、原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）、硬化性胆管炎（ｓｃｌｅｒｏｓｏｎｇ  ｃｈｏｌａｎｇｉｔｉｓ）、乾癬、乾癬性関節炎、壊疽性膿皮症、赤芽球癆、ラスムッセン脳炎、慢性限局性脳炎（ＣＦＥ）、レイノー現象、反応性関節炎、ライター症候群、リカバリン関連網膜症（ＲＡＲ）、反射性交感神経性ジストロフィー、ライター症候群、再発性多発軟骨炎、下肢静止不能症候群、後腹膜線維症、リウマチ熱、関節リウマチ、サルコイドーシス、シュミット症候群、強膜炎、強皮症、全身性硬化症、シェーグレン症候群、精液精巣自己免疫、全身硬直症候群（ｓｔｉｆｆ  ｐｅｒｓｏｎ／ｍａｎ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、亜急性細菌性心内膜炎（ＳＢＥ）、スザック症候群、交感性眼炎、高安動脈炎、側頭動脈炎／巨細胞性動脈炎、閉塞性血栓血管炎、バージャー病、血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）、トロサ・ハント症候群、横断性脊髄炎、潰瘍性大腸炎、未分化結合組織疾患（ＵＣＴＤ）、ブドウ膜炎、リウマチ性多発筋痛症、高安動脈炎、側頭動脈炎、バージャー病、皮膚血管炎、川崎病、結節性多発動脈炎、ベーチェット症候群、チャーグ・ストラウス症候群、皮膚血管炎、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、顕微鏡的多発血管炎、ウェゲナー肉芽腫症、ゴルファーの脈管炎、水疱性皮膚炎、白斑ウェゲナー肉芽腫症（Ｖｉｔｉｌｉｇｏｗｅｇｅｎｅｒ’ｓ  ｇｒａｎｕｌｏｍａｔｏｓｉｓ）（現在では多発血管炎性肉芽腫症（ＧＰＡ）と名付けられている）が挙げられる。
【０７７３】
一実施形態において、自己免疫疾患は、ＡＮＣＡ血管炎、ＩｇＡ腎症（ベルジェ病）、尋常性天疱瘡／水疱性類天疱瘡、ＩＴＰ、原発性胆汁性肝硬変、自己免疫性甲状腺炎（グレーブス病）、橋本病、ループス腎炎、膜性糸球体腎炎（または膜性腎症）、ＡＰＳ、重症筋無力症、視神経脊髄炎、原発性シェーグレン、自己免疫好中球減少症、自己免疫膵炎、皮膚筋炎（ｄｅｒｍａｔｏｓｍｙｏｓｉｔｉｓ）、自己免疫ブドウ膜炎、自己免疫網膜症、ベーチェット病、ＩＰＦ、全身性硬化症、肝線維症、自己免疫肝炎、原発性硬化性胆管炎、白斑、グッドパスチャー症候群、肺胞蛋白症、慢性自己免疫蕁麻疹、乾癬、関節リウマチ、乾癬性関節炎、軸性脊椎関節炎（ａｘｉａｌ  ｓｐｏｄｙｌｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ）、移植（ＧｖＨＤを含む）、喘息、ＣＯＰＤ、巨細胞性動脈炎、難治性自己免疫血球減少症、エヴァンス症候群（自己免疫溶血性貧血）、Ｉ型糖尿病、サルコイドーシス、多発性筋炎、潰瘍性大腸炎、クローン病、セリアック病、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、巣状分節性糸球体硬化症、慢性ライム病（ライムボレリア症）、扁平苔癬、全身硬直症候群、拡張型心筋症、自己免疫（リンパ球性）卵巣炎、後天性表皮水疱症、自己免疫萎縮性胃炎、悪性貧血、アトピー性皮膚炎、アテローム性動脈硬化、多発性硬化症、ラスムッセン脳炎、ギラン・バレー症候群、後天性神経性筋強直症、脳卒中を含む、またはからなる群から選択される。
【０７７４】
一実施形態において、障害は癌、例えば白血病、例えば、急性リンパ芽球性白血病もしくは慢性リンパ球性白血病などのリンパ球性白血病、または急性骨髄性白血病もしくは慢性骨髄性白血病などの骨髄性白血病であり、またはリンパ腫、例えば、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫またはホジキンもしくは非ホジキンリンパ腫である。
【０７７５】
本発明はまた、本明細書に記載の多重特異性分子などの本開示の分子を、医薬として許容され得る賦形剤、希釈剤または担体の１または複数と組み合わせて含む医薬組成物または診断組成物を提供する。したがって、治療および医薬品の製造において使用するための、本開示の分子、例えば本明細書に記載の多重特異性分子の使用が提供される。
【０７７６】
本組成物は、通常、医薬として許容され得る担体を標準的に含む滅菌の医薬組成物の一部として供給される。本発明の医薬組成物は、医薬として許容され得るアジュバントをさらに含むことができる。
【０７７７】
本発明はまた、本発明の多重特異性分子を、医薬として許容され得る賦形剤、希釈剤または担体の１または複数と一緒に加える工程、および混合する工程を含む、医薬組成物または診断組成物の調製方法を提供する。
【０７７８】
本明細書において使用される「医薬として許容され得る賦形剤」という用語は、本開示の組成物の所望の特性を高めるために、医薬として許容され得る製剤担体、溶液または添加剤を指す。賦形剤は当技術分野において周知であり、緩衝液（例えば、クエン酸緩衝液、リン酸緩衝液、酢酸緩衝液および重炭酸緩衝液）、アミノ酸、尿素、アルコール、アスコルビン酸、リン脂質、タンパク質（例えば、血清アルブミン）、ＥＤＴＡ、塩化ナトリウム、リポソーム、マンニトール、ソルビトール、およびグリセロールが挙げられる。溶液または懸濁液は、リポソームまたは生分解性ミクロスフェアに封入することができる。製剤は、一般的に、滅菌製造法を用いて実質的に滅菌形態で提供される。
【０７７９】
これには、製剤に使用される緩衝化溶媒溶液の濾過、滅菌緩衝化溶媒溶液への抗体の無菌懸濁、および当業者によく知られている方法での滅菌容器への製剤の分配による製造および滅菌を含むことができる。
【０７８０】
医薬として許容され得る担体は、組成物を受ける個体に有害な抗体の産生を誘発すべきではなく、有毒であってはならない。適切な担体は、タンパク質、ポリペプチド、リポソーム、多糖類、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリマー性アミノ酸、アミノ酸コポリマーおよび不活性ウイルス粒子などの、大型で緩徐に代謝される巨大分子であってもよい。
【０７８１】
医薬として許容され得る塩、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩および硫酸塩などの鉱酸塩、または酢酸塩、プロピオン酸塩、マロン酸塩および安息香酸塩などの有機酸の塩を使用することができる。
【０７８２】
治療用組成物中の医薬として許容され得る担体は、水、生理食塩水、グリセロールおよびエタノールなどの液体をさらに含有することができる。このような担体は、患者による摂取のために、医薬組成物を錠剤、丸薬、糖衣錠、カプセル、液体、ゲル、シロップ、スラリーおよび懸濁液として製剤化することを可能にする。
【０７８３】
本明細書に記載の多重特異性分子などの本開示の分子は、溶媒中に分散させて、例えば溶液または懸濁液の形態で送達することができる。本開示の分子は、適切な生理学的溶液、例えば生理食塩水、薬理学的に許容され得る溶媒または緩衝溶液に懸濁させることができる。当技術分野で公知の緩衝溶液は、ｐＨ約４．０〜５．０を達成するように、水１ｍｌあたり、０．０５ｍｇ〜０．１５ｍｇのエデト酸二ナトリウム、８．０ｍｇ〜９．０ｍｇのＮａＣｌ、０．１５ｍｇ〜０．２５ｍｇのポリソルベート、０．２５ｍｇ〜０．３０ｍｇの無水クエン酸、および０．４５ｍｇ〜０．５５ｍｇのクエン酸ナトリウムを含むことができる。前出のように、懸濁液は、例えば、凍結乾燥された抗体から作製することができる。
【０７８４】
医薬として許容され得る担体の完全な考察は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｎ．Ｊ．１９９１年）において利用可能である。
【０７８５】
本明細書で使用する「治療有効量」という用語は、標的とされる疾患もしくは状態を治療、改善もしくは予防するため、または検出可能な治療効果もしくは予防効果を発揮するために必要な治療剤の量を指す。任意の抗体について、治療有効量は、細胞培養アッセイまたは動物モデル、通常はげっ歯類、ウサギ、イヌ、ブタまたは霊長類のいずれかにおいて最初に推定することができる。動物モデルはまた、適切な濃度範囲および投与経路を決定するために使用することができる。このような情報は、その後、ヒトへの投与のための有用な用量および経路を決定するために使用することができる。
【０７８６】
ヒト対象への正確な治療有効量は、疾患状態の重篤度、対象の一般的な健康状態、対象の年齢、体重および性別、食事、投与の時間および頻度、薬物の組合せ、反応感受性および治療に対する忍容性／応答に依存するものである。この量は、日常的な実験によって決定することができ、臨床医の判断の範囲内である。一般に、治療有効量は、０．０１ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇ、例えば０．１ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇである。または、用量は１〜５００ｍｇ／日、例えば１０〜１００、２００、３００または４００ｍｇ／日であり得る。医薬組成物は、本発明の活性薬剤の所定量を含有する単位剤形で簡便に提供することができる。
【０７８７】
組成物は、患者に個別に投与しても、または他の薬剤、薬物またはホルモンと組み合わせて（例えば、同時に、逐次的にまたは別々に）投与してもよい。
【０７８８】
本開示の多重特異性分子が投与される用量は、治療すべき状態の性質、存在する炎症の程度、および抗体分子が予防的に使用されるのか、または既存の状態を治療するために使用されるのかに依存する。
【０７８９】
用量の頻度は、多重特異性分子の半減期およびその効果の持続時間に依存する。多重特異性分子の半減期が短い（例えば、２〜１０時間）場合、１日に１または複数回の用量を与えることが必要な場合がある。または、多重特異性分子の半減期が長い（例えば、２〜１５日）場合、必要な投薬量は１日１回、１週間に１回、または１または２ヶ月に１回の投与に過ぎない。
【０７９０】
本開示では、製剤のｐＨが７である場合、８〜９またはそれ以上のｐＩが適切であり得るので、最終製剤のｐＨは、多重特異性分子の等電点の値と類似しない。理論に縛られることを望むものではないが、このことが、安定性が改善された、例えば、抗体または断片が溶液中に残存する最終製剤を最終的に提供することができると考えられる。
【０７９１】
本発明の医薬組成物は、限定するものではないが、経口、静脈内、筋肉内、動脈内、髄内、髄腔内、脳室内、経皮、経皮的（例えば国際公開第９８／２０７３４号パンフレットを参照されたい）、皮下、腹腔内、鼻腔内、経腸、局所、舌下、膣内または直腸経路を含む任意の数の経路によって投与することができる。皮下噴射器もまた、本発明の医薬組成物を投与するために使用することができる。
【０７９２】
組成物の直接送達は、一般に、皮下、腹腔内、静脈内または筋肉内の注射によって達成されるか、または組織の間質腔に送達される。組成物はまた、目的の特定の組織に投与することができる。投薬治療は、単回投与スケジュールであっても、または複数回投与スケジュールであってもよい。
【０７９３】
生成物が注射または注入用である場合、それは油性または水性ビヒクル中の懸濁液、溶液または乳状液の形態をとることができ、懸濁剤、保存剤、安定化剤および／または分散剤などの製剤化剤（ｆｏｒｍｕｌａｔｏｒｙ  ａｇｅｎｔ）を含むことができる。または、多重特異性分子は、使用前に適切な滅菌液で再構成するための乾燥形態であってもよい。組成物が消化管を使用する経路によって投与される場合、組成物は、抗体を分解から保護するが、消化管から吸収されたら、二重特異性タンパク質複合体を放出する薬剤を含有する必要がある。
【０７９４】
本開示による噴霧可能な製剤は、例えば、ホイルエンベロープに包装された単回用量単位（例えば、密封されたプラスチック容器またはバイアル）として提供することができる。各バイアルは、溶媒／溶液緩衝液の体積、例えば２ｍｌ中に単位用量を含有する。
【０７９５】
本明細書において使用する「変異体」という用語は、対応する野生型のペプチドまたはタンパク質のアミノ酸配列またはヌクレオチド配列と比較して、少なくとも１つのアミノ酸配列またはヌクレオチド配列の変化を含むペプチドまたはタンパク質を指す。変異体は、対応する野生型のペプチドまたはタンパク質に対して少なくとも８０％、または８５％、または９０％、または９５％、または９８％または９９％の配列同一性を含み得る。しかし、変異体がその対応する野生型のペプチドまたはタンパク質と実質的に類似の機能を示すならば、変異体は８０％未満の配列同一性を含むことが可能である。
【０７９６】
一実施形態において、本開示の構築物は少なくとも三重特異的である。この状況では、さらなる特異性は、目的の抗原のいずれか、例えば、アルブミンまたはＦｃ新生児受容体（ＦｃＲｎ）などの半減期を延長させる抗原；Ｆｃ受容体もしくは共刺激分子を活性化または阻害するなどのエフェクター機能のための抗原；組織もしくは細胞標的化抗原；またはトランスフェリン受容体またはＬＲＰ１などの血液／脳関門（ＢＢＢ）移行を助けるための抗原を対象とする。
【０７９７】
本開示はまた、特定の抗原特異性を有する前記新規なフォーマットを含む医薬組成物などの組成物にも及ぶ。
【０７９８】
さらなる態様において、本開示は、治療における前記フォーマットおよび前記組成物の使用を含む。
【０７９９】
本発明はまた、本発明の抗体分子または多重特異性分子を、医薬として許容され得る賦形剤、希釈剤または担体の１または複数と一緒に加える工程、および混合する工程を含む、医薬組成物または診断組成物の調製方法を提供する。
【０８００】
抗体分子または多重特異性分子は、医薬組成物または診断用組成物中の唯一の活性成分であっても、または他の抗体成分またはステロイドもしくは他の薬物分子などの非抗体成分を含む他の活性成分を伴ってもよい。
【０８０１】
医薬組成物は、治療有効量の本発明の抗体を適切に含む。本明細書で使用する「治療有効量」という用語は、標的とされる疾患もしくは状態を治療、改善もしくは予防するため、または検出可能な治療効果もしくは予防効果を発揮するために必要な治療剤の量を指す。任意の抗体について、治療有効量は、細胞培養アッセイまたは動物モデル、通常はげっ歯類、ウサギ、イヌ、ブタまたは霊長類のいずれかにおいて最初に推定することができる。動物モデルはまた、適切な濃度範囲および投与経路を決定するために使用することができる。このような情報は、その後、ヒトへの投与のための有用な用量および経路を決定するために使用することができる。
【０８０２】
ヒト対象への正確な治療有効量は、疾患状態の重篤度、対象の一般的な健康状態、対象の年齢、体重および性別、食事、投与の時間および頻度、薬物の組合せ、反応感受性および治療に対する忍容性／応答に依存するものである。この量は、日常的な実験によって決定することができ、臨床医の判断の範囲内である。一般に、治療有効量は、０．０１ｍｇ／ｋｇ〜５００ｍｇ／ｋｇ、例えば０．１ｍｇ／ｋｇ〜２００ｍｇ／ｋｇ、例えば１００ｍｇ／Ｋｇである。
【０８０３】
医薬組成物は、用量あたり本発明の活性薬剤の所定量を含有する単位剤形で簡便に提供することができる。
【０８０４】
組成物は、患者に個別に投与しても、または他の薬剤、薬物またはホルモンと組み合わせて（例えば、同時に、逐次的にまたは別々に）投与してもよい。
【０８０５】
本明細書において用いられる薬剤は、投与されると生理学的影響を有する実体を指す。
【０８０６】
本明細書において用いられる薬物は、治療用量で適切な生理学的影響を有する化学的実体を指す。
【０８０７】
一実施形態において、本開示による抗体または断片は、ステロイド、特にプレドニゾンなどの免疫抑制剤療法とともに用いられる。
【０８０８】
一実施形態において、本開示による抗体または断片は、リツキシマブまたは他のＢ細胞療法とともに使用される。
【０８０９】
一実施形態において、本開示による抗体または断片は、任意のＢ細胞もしくはＴ細胞調節剤または免疫調節剤とともに使用される。例としては、メトトレキサート、ミコフェニレート（ｍｉｃｒｏｐｈｅｎｙｏｌａｔｅ）およびアザチオプリンが挙げられる。
【０８１０】
本発明の抗体分子が投与される用量は、治療すべき状態の性質、存在する炎症の程度、および抗体分子が予防的に使用されるのか、または既存の状態を治療するために使用されるのかに依存する。
【０８１１】
用量の頻度は、抗体分子の半減期およびその効果の持続時間に依存する。抗体分子の半減期が短い（例えば、２〜１０時間）場合、１日に１または複数回の用量を与えることが必要な場合がある。または、抗体分子の半減期が長い（例えば、２〜１５日）および／または薬力学的（ＰＤ）プロファイルが長く続く場合、必要な投薬量は１日１回、１週間に１回、または１または２ヶ月に１回の投与に過ぎない。
【０８１２】
一実施形態において、用量は２週間に１回、すなわち１ヶ月に２回送達される。
【０８１３】
一実施形態において、用量は、さらなる用量の投与前に、抗薬物（この場合、抗抗体）応答をウェイン（ｗａｉｎｅ）させるように間隔が空けられる。
【０８１４】
本明細書において用いられる半減期は、循環中、例えば血清／血漿中の分子の持続時間を指すことを意図する。
【０８１５】
本明細書において用いられる薬力学は、本開示による分子の生物学的作用のプロファイル、特に持続時間を指す。
【０８１６】
医薬として許容され得る担体は、組成物を受ける個体に有害な抗体の産生を誘発すべきではなく、有毒であってはならない。適切な担体は、タンパク質、ポリペプチド、リポソーム、多糖類、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリマー性アミノ酸、アミノ酸コポリマーおよび不活性ウイルス粒子などの、大型で緩徐に代謝される巨大分子であってもよい。
【０８１７】
医薬として許容され得る塩、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩および硫酸塩などの鉱酸塩、または酢酸塩、プロピオン酸塩、マロン酸塩および安息香酸塩などの有機酸の塩を使用することができる。
【０８１８】
治療用組成物中の医薬として許容され得る担体は、水、生理食塩水、グリセロールおよびエタノールなどの液体をさらに含有することができる。さらに、補助物質、例えば湿潤剤または乳化剤またはｐＨ緩衝物質が、このような組成物中に存在してもよい。このような担体は、患者による摂取のために、医薬組成物を錠剤、丸薬、糖衣錠、カプセル、液体、ゲル、シロップ、スラリーおよび懸濁液として製剤化することを可能にする。
【０８１９】
投与に適した形態には、非経口投与に適した形態、例えば、注射または注入によって、例えば、ボーラス注射または連続注入によって投与することができる。生成物が注射または注入用である場合、それは油性または水性ビヒクル中の懸濁液、溶液または乳状液の形態をとることができ、懸濁剤、保存剤、安定化剤および／または分散剤などの製剤化剤（ｆｏｒｍｕｌａｔｏｒｙ  ａｇｅｎｔ）を含むことができる。または、抗体分子は、使用前に適切な滅菌液で再構成するための乾燥形態であってもよい。
【０８２０】
製剤化したならば、本発明の組成物は、対象に直接投与され得る。治療される対象は動物であってもよい。しかし、１または複数の実施形態において、組成物はヒト対象に投与するために適合させられる。
【０８２１】
適切には、本開示による製剤において、例えば、タンパク質のｐＩが８〜９またはそれ以上の範囲にある場合、製剤はｐＨ７が適切であり得るので、最終製剤のｐＨは、抗体または断片の等電点の値と類似していない。理論に縛られることを望むものではないが、このことが、安定性が改善された、例えば、抗体または断片が溶液中に残存する最終製剤を最終的に提供することができると考えられる。
【０８２２】
一実施例において、４．０〜７．０の範囲のｐＨの医薬製剤は、１〜２００ｍｇ／ｍＬの本開示による抗体分子、１〜１００ｍＭの緩衝液、０．００１〜１％の界面活性剤、ａ）１０〜５００ｍＭの安定剤、ｂ）１０〜５００ｍＭの安定剤および５〜５００ｍＭの等張化剤、またはｃ）５〜５００ｍＭの等張化剤を含む。
【０８２３】
本発明の医薬組成物は、限定するものではないが、経口、静脈内、筋肉内、動脈内、髄内、髄腔内、脳室内、経皮、経皮的（例えば国際公開第９８／２０７３４号パンフレットを参照されたい）、皮下、腹腔内、鼻腔内、経腸、局所、舌下、膣内または直腸経路を含む任意の数の経路によって投与することができる。皮下噴射器もまた、本発明の医薬組成物を投与するために使用することができる。典型的には、治療用組成物は、液体溶液または懸濁液のいずれかの注射剤として調製することができる。注射前の液体ビヒクル中の溶液または懸濁液に適した固体形態もまた調製することができる。
【０８２４】
組成物の直接送達は、一般に、皮下、腹腔内、静脈内または筋肉内の注射によって達成されるか、または組織の間質腔に送達される。組成物は、病変部に投与することもできる。投薬治療は、単回投与スケジュールであっても、または複数回投与スケジュールであってもよい。
【０８２５】
組成物中の活性成分は抗体分子であることが理解されよう。したがって、活性成分は消化管において分解を受けやすい。したがって、組成物が消化管を使用する経路によって投与される場合、組成物は、抗体を分解から保護するが、消化管から吸収されたら、抗体を放出する薬剤を含有する必要がある。
【０８２６】
医薬として許容され得る担体の完全な考察は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｎ．Ｊ．１９９１年）において利用可能である。
【０８２７】
一実施形態において、製剤は、吸入を含む局所投与のための製剤として提供される。
【０８２８】
適切な吸入可能な調製物は、吸入可能な粉末、噴射ガスを含む計量エアロゾルまたは噴射ガスを含まない吸入可能な溶液を含む。活性物質を含有する本開示による吸入可能な粉末は、上記の活性物質単独または上記の活性物質と生理学的に許容され得る賦形剤との混合物からなることができる。
【０８２９】
これらの吸入可能な粉末としては、単糖類（例えばグルコースまたはアラビノース）、二糖類（例えばラクトース、サッカロース、マルトース）、オリゴ糖および多糖類（例えばデキストラン）、ポリアルコール（例えばソルビトール、マンニトール、キシリトール）、塩類（例えば塩化ナトリウム、炭酸カルシウム）またはこれらの混合物を挙げることができる。単糖類または二糖類が適切に使用され、特にラクトースまたはグルコースの使用がこれらの水和物の形態で適切であるが、これには限るものではない。
【０８３０】
肺に沈着するための粒子は、１０ミクロン未満、例えば１〜９ミクロン、例えば１〜５μｍなどの粒径を必要とする。活性成分（抗体または断片など）の粒径は、最も重要である。
【０８３１】
吸入可能なエアロゾルを調製するために使用できる推進ガスは、当技術分野で公知である。適切な推進ガスは、ｎ−プロパン、ｎ−ブタンまたはイソブタンなどの炭化水素、およびメタン、エタン、プロパン、ブタン、シクロプロパンまたはシクロブタンの塩素化および／またはフッ素化誘導体などのハロ炭化水素から選択される。上記の推進ガスは、単独でまたはそれらの混合物として使用することができる。
【０８３２】
特に適切な推進ガスは、ＴＧ１１、ＴＧ１２、ＴＧ１３４ａおよびＴＧ２２７から選択されるハロゲン化アルカン誘導体である。上記のハロゲン化炭化水素のうち、ＴＧ１３４ａ（１，１，１，２−テトラフルオロエタン）およびＴＧ２２７（１，１，１，２，３，３，３−ヘプタフルオロプロパン）およびそれらの混合物が特に適している。
【０８３３】
推進ガス含有吸入可能エアロゾルはまた、共溶媒、安定剤、表面活性剤（界面活性剤）、抗酸化剤、滑沢剤およびｐＨ調整手段などの他の成分を含有してもよい。これらの成分はすべて当技術分野において公知である。
【０８３４】
本発明による噴射ガス含有吸入可能エアロゾルは、５重量％までの活性物質を含有することができる。本発明によるエアロゾルは、例えば、０．００２〜５重量％、０．０１〜３重量％、０．０１５〜２重量％、０．１〜２重量％、０．５〜２重量％、または０．５〜１重量％の活性成分を含有する。
【０８３５】
または、肺への局所投与は、例えばネブライザーなどの装置、例えば圧縮機に接続されたネブライザーを用いて、液体溶液または懸濁液製剤の投与であってよい（例えば、Ｐａｒｉ  Ｍａｓｔｅｒ（登録商標）圧縮機に接続されたＰａｒｉ  ＬＣ−Ｊｅｔ  Ｐｌｕｓ（登録商標）ネブライザー、Ｐａｒｉ  Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  Ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ、Ｉｎｃ．Ｒｉｃｈｍｏｎｄ，Ｖａ．製）。
【０８３６】
本発明の抗体または多重特異性分子は、溶媒中に分散させて、例えば溶液または懸濁液の形態で送達することができる。本発明の抗体または多重特異性分子は、適切な生理学的溶液、例えば生理食塩水または他の薬理学的に許容され得る溶媒または緩衝溶液に懸濁させることができる。当技術分野で公知の緩衝溶液は、ｐＨ約４．０〜５．０を達成するように、水１ｍｌあたり、０．０５ｍｇ〜０．１５ｍｇのエデト酸二ナトリウム、８．０ｍｇ〜９．０ｍｇのＮａＣｌ、０．１５ｍｇ〜０．２５ｍｇのポリソルベート、０．２５ｍｇ〜０．３０ｍｇの無水クエン酸、および０．４５ｍｇ〜０．５５ｍｇのクエン酸ナトリウムを含むことができる。懸濁液は、例えば、凍結乾燥された抗体を用いることができる。
【０８３７】
懸濁液または溶液の治療用製剤はまた、１または複数の賦形剤を含むことができる。賦形剤は当技術分野において周知であり、緩衝液（例えば、クエン酸緩衝液、リン酸緩衝液、酢酸緩衝液および重炭酸緩衝液）、アミノ酸、尿素、アルコール、アスコルビン酸、リン脂質、タンパク質（例えば、血清アルブミン）、ＥＤＴＡ、塩化ナトリウム、リポソーム、マンニトール、ソルビトール、およびグリセロールが挙げられる。溶液または懸濁液は、リポソームまたは生分解性ミクロスフェアに封入することができる。製剤は、一般的に、滅菌製造法を用いて実質的に滅菌形態で提供される。
【０８３８】
これには、製剤に使用される緩衝化溶媒／溶液の濾過、滅菌緩衝化溶媒溶液への抗体の無菌懸濁、および当業者によく知られている方法での滅菌容器への製剤の分配による製造および滅菌を含むことができる。
【０８３９】
本開示による噴霧可能な製剤は、例えば、ホイルエンベロープに包装された単回用量単位（例えば、密封されたプラスチック容器またはバイアル）として提供することができる。各バイアルは、溶媒／溶液緩衝液の体積、例えば２ｍＬ中に単位用量を含有する。
【０８４０】
本明細書に開示される抗体は、噴霧による送達に適切であり得る。
【０８４１】
本発明の抗体は、遺伝子療法の使用によって投与され得ることも想定される。これを達成するために、抗体鎖がＤＮＡ配列から発現され、ｉｎ  ｓｉｔｕで組み立てられるように、適切なＤＮＡ成分の制御下で抗体分子の重鎖および軽鎖をコードするＤＮＡ配列を患者に導入する。
【０８４２】
一実施形態において、本明細書に記載の抗体分子などの本開示の分子を使用して、対象の１または複数の抗原の活性を機能的に改変することができる。例えば、本開示の抗体分子は、前記１または複数の抗原の活性を直接的または間接的に中和、拮抗または作動させることができる。
【０８４３】
一実施形態において、融合タンパク質、二重特異性タンパク質複合体またはそれらを含む組成物を含む本開示の分子は、実験室用試薬として使用するために提供される。
【０８４４】
本開示はまた、本開示の分子またはその成分を含むキットにも及ぶ。一実施形態において、キットは、
ａ）結合対の第１の結合パートナー（Ｘ）に結合した、ＣＤ２２またはＣＤ７９ａおよび／またはＣＤ７９ｂに特異的な第１の抗体または抗体断片（Ａ）を含む１または複数の融合タンパク質（Ａ−Ｘ）；および
ｂ）結合対の第２の結合パートナー（Ｙ）に結合した、ＣＤ２２またはＣＤ７９ａおよび／またはＣＤ７９ｂに特異的な第２の抗体または抗体断片（Ｂ）を含む１または複数の融合タンパク質（Ｂ−Ｙ）
を含み、後者が第１の結合パートナーに特異的であり、例えば、第１の結合パートナー（Ｘ）はペプチドまたはポリペプチドであり、第２の結合（Ｙ）パートナーがそれに特異的な抗体または抗体断片であり、
第２の結合パートナーＹが第１の結合パートナーＸに特異的であり、第２の結合パートナーが、例えばそれに特異的な抗体または抗体断片であり；２つの結合パートナーの特異的相互作用（例えば、結合相互作用）は、ａ）およびｂ）由来の２つの融合タンパク質を物理的に１つにして二重特異性タンパク質複合体を形成するヘテロ二量体−テザーを形成し、
ＡまたはＢの少なくとも１つはＣＤ２２に特異的であり、他方はＣＤ７９ａおよび／またはＣＤ７９ｂに特異的であり、ならびに（１または複数の）融合タンパク質は複合型または非複合型である。
【０８４５】
有利には、キットは、本開示の二重特異性タンパク質複合体を含んでも、または複合型または非複合型の融合タンパク質を含んでもよい。前者の場合、二重特異性タンパク質複合体は、便利で使いやすい「箱から取り出したままで」即時使用でき、後者の場合、異なる融合体を組み合わせることにより、二重特異性タンパク質複合体をユーザーの要求に従って組み立てることができる。
【０８４６】
別の実施形態において、キットは、使用説明書をさらに含む。
【０８４７】
さらに別の実施形態において、キットは、１または複数の機能アッセイを実施するための１つまたは複数の試薬をさらに含む。
【０８４８】
一実施形態において、融合タンパク質、二重特異性タンパク質複合体またはそれらを含む組成物を含む本開示の分子は、実験室用試薬として使用するために提供される。
【０８４９】
さらなる態様
さらなる態様において、ヌクレオチド配列、例えば上記に定義された多重特異性分子または融合タンパク質を含む、本明細書に記載の構築物をコードするＤＮＡ配列が提供される。
【０８５０】
一実施形態において、ヌクレオチド配列、例えば本開示による多重特異性分子、または二重特異性タンパク質複合体、または抗体を含む、本明細書に記載の構築物をコードするＤＮＡ配列が提供される。
【０８５１】
本明細書の開示はまた、上記で定義したヌクレオチド配列を含むベクターにも及ぶ。
【０８５２】
本明細書において使用される「ベクター」という用語は、連結されている別の核酸を輸送することができる核酸分子を指す。ベクターの例は、追加のＤＮＡセグメントを連結することができる環状二本鎖ＤＮＡループである「プラスミド」である。別のタイプのベクターは、追加のＤＮＡセグメントをウイルスゲノムに連結することができるウイルスベクターである。特定のベクターは、それらが導入される宿主細胞において自律的複製が可能である（例えば、細菌の複製起点を有する細菌ベクターおよびエピソーム哺乳動物ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム性哺乳動物ベクター）を宿主細胞のゲノムに統合することができ、その後それらは宿主ゲノムとともに複製される。本明細書において、用語「プラスミド」および「ベクター」は、プラスミドが最も一般的に使用されるベクターの形態であるため、互換的に使用され得る。
【０８５３】
ベクターを構築する一般的な方法、トランスフェクション方法および培養方法は、当業者に周知である。この点に関しては、「Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ」、１９９９年、Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ（編）、Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、Ｎｅｗ  ＹｏｒｋおよびＣｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇにより製造されたＭａｎｉａｔｉｓ  Ｍａｎｕａｌを参照されたい。
【０８５４】
本明細書において使用される「選択可能なマーカー」という用語は、その発現が、マーカー遺伝子を含むベクターで形質転換またはトランスフェクトされた細胞の同定を可能にするタンパク質を指す。広範囲の選択マーカーが当技術分野において公知である。例えば、典型的には、選択マーカー遺伝子は、ベクターが導入された宿主細胞においてＧ４１８、ハイグロマイシンまたはメトトレキセートなどの薬物に対する耐性を付与する。選択可能なマーカーは、例えば、蛍光マーカーなどの視覚的に識別可能なマーカーであってもよい。蛍光マーカーの例としては、ローダミン、ＦＩＴＣ、ＴＲＩＴＣ、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒｓおよびそれらのさまざまなコンジュゲートが挙げられる。
【０８５５】
また、本開示の抗体をコードする１または複数のＤＮＡ配列を含む、１または複数のクローニングベクターまたは発現ベクターを含む宿主細胞が提供される。任意の適切な宿主細胞／ベクター系を、本開示の抗体分子をコードするＤＮＡ配列の発現に使用することができる。細菌、例えばＥ．ｃｏｌｉ、および他の微生物系を使用してもよいし、真核生物、例えば哺乳動物の宿主細胞発現系を使用してもよい。適切な哺乳動物宿主細胞としては、ＣＨＯ、骨髄腫またはハイブリドーマ細胞が挙げられる。
【０８５６】
本開示はまた、本開示による分子またはその構成要素の製造方法であって、本開示の分子をコードするＤＮＡからタンパク質の発現を導くのに適した条件下で、本開示のベクターを含む宿主細胞を培養する工程、および前記分子を単離する工程、を含む方法を提供する。
【０８５７】
本明細書に記載の二重特異性タンパク質複合体を含む本開示の分子は、診断／検出キットに使用することができる。キットは、例えば、両方が同じ細胞型に存在する２つの抗原に特異的な二重特異性抗体複合体を含み、両方の抗原が首尾よく検出された場合にのみ陽性診断を行うことができる。非複合型の２つの別個の抗体または抗体断片ではなく、本明細書に記載の二重特異性抗体複合体などの本開示の分子を使用することにより、検出の特異性を大幅に高めることができる。
【０８５８】
一実施形態において、二重特異性抗体複合体などの本開示の分子は、固体表面上に固定される。固体表面は、例えば、チップまたはＥＬＩＳＡプレートであってよい。
【０８５９】
さらに、試料中の第１および第２のペプチドの存在を検出するための、本開示による分子、例えば本明細書に記載の二重特異性タンパク質複合体の、検出剤としての使用が提供される。
【０８６０】
本明細書に記載の二重特異性抗体複合体などの本開示の分子は、例えば、結合した抗体−抗原複合体の検出を容易にする蛍光マーカーにコンジュゲートすることができる。このような二重特異性抗体複合体は、免疫蛍光顕微鏡法に使用することができる。または、二重特異性抗体複合体をウェスタンブロッティングまたはＥＬＩＳＡに使用することもできる。
【０８６１】
一実施形態において、本開示による分子またはその成分を精製する方法が提供される
【０８６２】
一実施形態において、本開示による分子またはその成分を精製する方法であって、不純物がカラム上に保持され、前記抗体が非結合画分に維持されるように、非結合モードで陰イオン交換クロマトグラフィーを実施する工程を含む方法が提供される。この工程は、例えば、約６〜８のｐＨで行うことができる。
【０８６３】
この方法は、例えば約４〜５のｐＨで実施される陽イオン交換クロマトグラフィーを用いる初期捕捉工程をさらに含んでもよい。
【０８６４】
この方法は、生成物と方法関連不純物とが確実に生成物流から適切に分離されるための追加のクロマトグラフィー工程をさらに含んでいてもよい。
【０８６５】
精製方法は、濃縮および透析濾過工程などの１または複数の限外濾過工程を含むこともできる。
【０８６６】
前出で使用された「精製形態」は、少なくとも９０％の純度、例えば９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９ｗ／ｗ％またはそれ以上の純度を指すと意図される。
【０８６７】
本明細書の文脈において、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」として解釈されるべきである。
【０８６８】
特定の要素を含む本開示の態様はまた、関連要素「からなる」または「から本質的になる」代替の実施形態にも及ぶことを意図している。
【０８６９】
本明細書では、正当に列挙された実施形態を、否認の根拠として用いることができる。
【０８７０】
本明細書において参照されるすべての参考文献は、参照により具体的に組み込まれる。
【０８７１】
本明細書の小見出しは、明細書を構成するのを助けるために用いられ、本明細書の技術用語の意味を構築するために使用されることを意図するものではない。
【０８７２】
本開示の配列を図３５に提供する。
【０８７３】
本明細書の文脈において、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」として解釈されるべきである。
【０８７４】
特定の要素を含む本開示の態様はまた、関連要素「からなる」または「から本質的になる」代替の実施形態にも及ぶことを意図している。
【０８７５】
本明細書では、正当に列挙された実施形態を、否認の根拠として用いることができる。
【０８７６】
本明細書において参照されるすべての参考文献は、参照により具体的に組み込まれる。
【０８７７】
項目
１．ＣＤ２２に特異的な結合ドメインを含む抗体分子であって、前記結合ドメインが、
式（Ｉ）のＣＤＲＨ１：
ＧＸ１Ｘ２ＦＳＸ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８（配列番号１）
（式中、Ｘ１はＦ、ＩまたはＬ（例えばＦ）であり、Ｘ２はＳまたはＤであり、Ｘ３はＳ、ＮまたはＧ（例えばＳ）であり、Ｘ４はＳ、Ｙ、ＬまたはＧであり、Ｘ５はＹまたは不在であり、Ｘ６はＷ、ＹまたはＤ（例えばＷまたはＹ、特にＹ）であり、Ｘ７はＭまたはＩであり、Ｘ８はＣまたはＳ（特にＳ）である）；
式（ＩＩ）のＣＤＲＨ２：
Ｘ９ＩＸ１０Ｘ１１Ｘ１２Ｘ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６ＴＸ１７ＹＡＸ１８ＷＡＫＧ（配列番号２）
（式中、Ｘ９はＣまたはＳであり、Ｘ１０はＹ、Ｄ、ＶまたはＮであり、Ｘ１１はＴ、Ｐ、Ｉ、Ｇ、ＳまたはＡであり、Ｘ１２はＧ、ＳまたはＡ（特にＧ）であり、Ｘ１３はＳ、ＩまたはＴであり、Ｘ１４はＳ、Ｎまたは不在であり、Ｘ１５はＧ、Ｄ、Ｓ、ＡまたはＴであり、Ｘ１６はＤ、Ｔ、Ｓ、Ｎ、ＶまたはＧであり、Ｘ１７はＹ、ＤまたはＡであり、Ｘ１８はＴまたはＳ（特にＳ）である）；
式（ＩＩＩ）のＣＤＲＨ３：
Ｘ１９Ｘ２０Ｘ２１Ｘ２２Ｘ２３Ｘ２４Ｘ２５Ｘ２６Ｘ２７Ｘ２８Ｘ２９Ｘ３０Ｘ３１Ｘ３２Ｘ３３Ｌ（配列番号３）
（式中、Ｘ１９はＡまたは不在であり、Ｘ２０はＧ、Ｙまたは不在であり、Ｘ２１はＰ、Ｇまたは不在であり、Ｘ２２はＹ、Ｓ、Ｄ、Ｅまたは不在であり、Ｘ２３はＶ、ＧまたはＷであり、Ｘ２４はＧ、Ｓ、ＹまたはＶであり、Ｘ２５はＹ、Ｓ、ＧまたはＮであり、Ｘ２６はＧ、Ａ、ＳまたはＴであり、Ｘ２７はＹ、Ａ、ＧまたはＤであり、Ｘ２８はＷ、Ｄ、Ｉ、ＹまたはＨであり、Ｘ２９はＬ、Ｇ、Ｓ、ＹまたはＫであり、Ｘ３０はＶ、Ｑ、Ｃ、Ｓ、Ｇ、ＴまたはＤであり、Ｘ３１はＹ、ＡまたはＲであり、Ｘ３２はＬまたはＦであり、Ｘ３３はＮ、ＹまたはＤ（特にＤ）である）、
を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、ならびに
軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、
を含む抗体分子。
【０８７８】
２．ＣＤ２２に特異的な結合ドメインを含む抗体分子であって、前記結合ドメインが、
式（ＩＶ）のＣＤＲＬ１：
ＱＸ３４ＳＸ３５Ｘ３６Ｘ３７Ｘ３８Ｘ３９Ｘ４０Ｘ４１Ｘ４２ＬＸ４３（配列番号４）
（式中、Ｘ３４はＡまたはＳ（特にＡ）であり、Ｘ３５はＱまたはＥ（特にＱ）であり、Ｘ３６はＳ、ＮまたはＴ（特にＳ）であり、Ｘ３７はＩまたはＶであり、Ｘ３８はＳ、ＹまたはＧ（例えばＳまたはＹ）であり、Ｘ３９はＴ、Ｓ、ＧまたはＮ（例えばＳまたはＮ）であり、Ｘ４０はＡ、Ｇ、Ｎ、Ｙ、ＴまたはＲであり、Ｘ４１は不在、ＮまたはＫ（特に不在）であり、Ｘ４２は不在、ＥまたはＤ（特に不在）であり、Ｘ４３はＡまたはＳ（特にＡ）である）；
式（Ｖ）のＣＤＲＬ２：
Ｘ４４Ｘ４５ＳＸ４６ＬＸ４７Ｓ（配列番号５）
（式中、Ｘ４４はＧ、Ｙ、Ｌ、ＡまたはＳであり、Ｘ４５はＡ、ＳまたはＴ（特にＡ）であり、Ｘ４６はＴ、ＲまたはＫ（特にＴ）であり、Ｘ４７はＡまたはＳ（特にＡ）である）；
式（ＶＩ）を有するＣＤＲＬ３：
ＡＧＹＫＳＸ４８Ｘ４９ＤＸ５０Ｘ５１ＴＴ（配列番号６）
（式中、Ｘ４８はＤまたはＥ（特にＤ）であり、Ｘ４９はＳ、ＡまたはＴであり、Ｘ５０はＤまたはＥ（特にＤ）であり、Ｘ５１はＧ、ＡまたはＳである）；または
式（ＶＩＩ）のＣＤＲＬ３：
ＱＸ５２Ｘ５３Ｘ５４Ｘ５５Ｘ５６ＳＸ５７Ｘ５８Ｘ５９Ｘ６０Ｘ６１Ｘ６２Ｘ６３Ｘ６４（配列番号７）
（式中、Ｘ５２はＳ、ＩまたはＧ（例えばＳまたはＧ）であり、Ｘ５３はＹ、ＨまたはＧ（特にＹ）であり、Ｘ５４はＹ、ＤまたはＦ（特にＹ）であり、Ｘ５５はＧ、ＳまたはＹ（例えばＳまたはＹ）であり、Ｘ５６はＴ、ＡまたはＳ（特にＳ）であり、Ｘ５７はＳ、Ｇ、ＶまたはＤであり、Ｘ５８はＧ、Ｓ、Ｌまたは不在であり、Ｘ５９はＧ、Ｒ、ＳまたはＮであり、Ｘ６０はＳ、ＤまたはＶ（例えばＳまたはＤ）であり、Ｘ６１はＷ、Ｙまたは不在（例えばＷまたはＹ）であり、Ｘ６２はＡ、Ｔ、Ｇまたは不在であり、Ｘ６３はＮまたは不在（特に不在）であり、Ｘ６４はＡまたは不在（特に不在）である）、
を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、ならびに
重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、
を含む抗体分子。
【０８７９】
３．ＣＤ２２に特異的な結合ドメインを含む抗体分子であって、前記結合ドメインが、
式（Ｉ）のＣＤＲＨ１：
ＧＸ１Ｘ２ＦＳＸ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８（配列番号１）
（式中、Ｘ１はＦ、ＩまたはＬ（例えばＦ）であり、Ｘ２はＳまたはＤであり、Ｘ３はＳ、ＮまたはＧ（例えばＳ）であり、Ｘ４はＳ、Ｙ、ＬまたはＧであり、Ｘ５はＹまたは不在であり、Ｘ６はＷ、ＹまたはＤ（例えばＷまたはＹ、特にＹ）であり、Ｘ７はＭまたはＩであり、Ｘ８はＣまたはＳ（特にＳ）である）；
式（ＩＩ）のＣＤＲＨ２：
Ｘ９ＩＸ１０Ｘ１１Ｘ１２Ｘ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６ＴＸ１７ＹＡＸ１８ＷＡＫＧ（配列番号２）
（式中、Ｘ９はＣまたはＳであり、Ｘ１０はＹ、Ｄ、ＶまたはＮであり、Ｘ１１はＴ、Ｐ、Ｉ、Ｇ、ＳまたはＡであり、Ｘ１２はＧ、ＳまたはＡ（特にＧ）であり、Ｘ１３はＳ、ＩまたはＴであり、Ｘ１４はＳ、Ｎまたは不在であり、Ｘ１５はＧ、Ｄ、Ｓ、ＡまたはＴであり、Ｘ１６はＤ、Ｔ、Ｓ、Ｎ、ＶまたはＧであり、Ｘ１７はＹ、ＤまたはＡであり、Ｘ１８はＴまたはＳ（特にＳ）である）；
式（ＩＩＩ）のＣＤＲＨ３：
Ｘ１９Ｘ２０Ｘ２１Ｘ２２Ｘ２３Ｘ２４Ｘ２５Ｘ２６Ｘ２７Ｘ２８Ｘ２９Ｘ３０Ｘ３１Ｘ３２Ｘ３３Ｌ（配列番号３）
（式中、Ｘ１９はＡまたは不在であり、Ｘ２０は不在、ＧまたはＹであり、Ｘ２１は不在、ＰまたはＧであり、Ｘ２２は不在、Ｙ、Ｓ、ＤまたはＥであり、Ｘ２３はＶ、Ｇ、ＹまたはＷであり、Ｘ２４はＧ、Ｙ、ＳまたはＶであり、Ｘ２５はＹ、Ｓ、ＧまたはＮであり、Ｘ２６はＧ、Ａ、ＳまたはＴであり、Ｘ２７はＹ、ＧまたはＤであり、Ｘ２８はＤ、Ｉ、Ｙ、ＷまたはＨであり、Ｘ２９はＬ、Ｇ、Ｓ、ＹまたはＫであり、Ｘ３０はＶ、Ｑ、Ｃ、Ｓ、Ｇ、ＴまたはＤであり、Ｘ３１はＹ、ＡまたはＲであり、Ｘ３２はＬまたはＦであり、Ｘ３３はＮ、ＹまたはＤ（特にＤ）である）、
を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、ならびに
式（ＩＶ）のＣＤＲＬ１：
ＱＸ３４ＳＸ３５Ｘ３６Ｘ３７Ｘ３８Ｘ３９Ｘ４０Ｘ４１Ｘ４２ＬＸ４３（配列番号４）
（式中、Ｘ３４はＡまたはＳ（特にＡ）であり、Ｘ３５はＱまたはＥ（特にＱ）であり、Ｘ３６はＳ、ＮまたはＴ（特にＳ）であり、Ｘ３７はＩまたはＶであり、Ｘ３８はＳ、ＹまたはＧ（例えばＳまたはＹ）であり、Ｘ３９はＴ、Ｓ、ＧまたはＮ（例えばＳまたはＮ）であり、Ｘ４０はＡ、Ｇ、Ｎ、Ｙ、ＴまたはＲであり、Ｘ４１は不在、ＮまたはＫ（特に不在）であり、Ｘ４２は不在、ＥまたはＤ（特に不在）であり、Ｘ４３はＡまたはＳ（特にＡ）である）；
式（Ｖ）のＣＤＲＬ２：
Ｘ４４Ｘ４５ＳＸ４６ＬＸ４７Ｓ（配列番号５）
（式中、Ｘ４４はＧ、Ｙ、Ｌ、ＡまたはＳであり、Ｘ４５はＡ、ＳまたはＴ（特にＡ）であり、Ｘ４６はＴ、ＲまたはＫ（特にＴ）であり、Ｘ４７はＡまたはＳ（特にＡ）である）；
式（ＶＩ）を有するＣＤＲＬ３：
ＡＧＹＫＳＸ４８Ｘ４９ＤＸ５０Ｘ５１ＴＴ（配列番号６）
（式中、Ｘ４８はＤまたはＥ（特にＤ）であり、Ｘ４９はＳ、ＡまたはＴであり、Ｘ５０はＤまたはＥ（特にＤ）であり、Ｘ５１はＧ、ＡまたはＳである）；または
式（ＶＩＩ）のＣＤＲＬ３：
ＱＸ５２Ｘ５３Ｘ５４Ｘ５５Ｘ５６ＳＸ５７Ｘ５８Ｘ５９Ｘ６０Ｘ６１Ｘ６２Ｘ６３Ｘ６４（配列番号７）
（式中、Ｘ１９はＡまたは不在であり、Ｘ２０はＧ、Ｙまたは不在であり、Ｘ２１はＰ、Ｄ、Ｇまたは不在であり、Ｘ２２はＹ、Ｓ、Ｄ、Ｅまたは不在であり、Ｘ２３はＶ、ＧまたはＷであり、Ｘ２４はＧ、Ｓ、ＹまたはＶであり、Ｘ２５はＹ、Ｓ、ＧまたはＮであり、Ｘ２６はＧ、Ａ、ＳまたはＴであり、Ｘ２７はＹ、Ａ、ＧまたはＤであり、Ｘ２８はＷ、Ｄ、Ｉ、ＹまたはＨであり、Ｘ２９はＬ、Ｇ、Ｓ、ＹまたはＫであり、Ｘ３０はＶ、Ｑ、Ｃ、Ｓ、Ｇ、ＴまたはＤであり、Ｘ３１はＹ、ＡまたはＲであり、Ｘ３２はＬまたはＦであり、Ｘ３３はＮ、ＹまたはＤ（特にＤ）である）、
を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、
を含む抗体分子。
【０８８０】
４．ＣＤＲＨ１が式（Ｉａ）：
ＧＸ１Ｘ２ＦＳＸ３Ｘ４Ｘ５ＹＸ７Ｘ８（配列番号８）
（式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ７およびＸ８は式（Ｉ）について上記に定義されている通りである）である、項目１から３のいずれか１つに記載の抗体分子。
【０８８１】
５．ＣＤＲＨ１が式（Ｉｂ）：
ＧＸ１Ｘ２ＦＳＸ３Ｘ４Ｘ５ＹＸ７Ｓ（配列番号９）
（式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５およびＸ７は、式Ｉについて上記に定義されている通りである）を有する、項目４に記載の抗体分子。
【０８８２】
６．ＣＤＲＨ２が式（ＩＩａ）：
Ｘ９ＩＸ１０Ｘ１１ＧＸ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６ＴＸ１７ＹＡＸ１８ＷＡＫＧ（配列番号１０）
（式中、Ｘ９、Ｘ１０、Ｘ１１、Ｘ１３、Ｘ１４、Ｘ１５、Ｘ１６、Ｘ１７およびＸ１８は、式ＩＩについて上記に定義されている通りである）を有する、項目１から５のいずれか１つに記載の抗体分子。
【０８８３】
７．ＣＤＲＨ２が式（ＩＩｂ）：
Ｘ９ＩＸ１０Ｘ１１Ｘ１２Ｘ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６ＴＸ１７ＹＡＳＷＡＫＧ（配列番号１１）
（式中、Ｘ９、Ｘ１０、Ｘ１１、Ｘ１２、Ｘ１３、Ｘ１４、Ｘ１５、Ｘ１６およびＸ１７は、式ＩＩについて上記に定義されている通りである）、特に、Ｘ１２がＧである式（ＩＩｂ）の配列を有する、項目６に記載の抗体分子。
【０８８４】
８．ＣＤＲＨ３が式（ＩＩＩａ）：
Ｘ１９Ｘ２０Ｘ２１Ｘ２２Ｘ２３Ｘ２４Ｘ２５Ｘ２６Ｘ２７Ｘ２８Ｘ２９Ｘ３０Ｘ３１Ｘ３２ＤＬ（配列番号１２）
（式中Ｘ１９、Ｘ２０、Ｘ２１、Ｘ２２、Ｘ２３、Ｘ２４、Ｘ２５、Ｘ２６、Ｘ２７、Ｘ２８、Ｘ２９、Ｘ３０、Ｘ３１およびＸ３２は、式ＩＩＩについて上記に定義されている通りである）を有する、項目１から７のいずれか１つに記載の抗体分子。
【０８８５】
９．ＣＤＲＬ１が式（ＩＶａ）：
ＱＡＳＸ３５Ｘ３６Ｘ３７Ｘ３８Ｘ３９Ｘ４０Ｘ４１Ｘ４２ＬＸ４３（配列番号１３）
（式中、Ｘ３５、Ｘ３６、Ｘ３７、Ｘ３８、Ｘ３９、Ｘ４０、Ｘ４１、Ｘ４２およびＸ４３が式ＩＶについて上記に定義されている通りである）を有する、項目１から８のいずれか１つに記載の抗体分子。
【０８８６】
１０．ＣＤＲＬ１が式（ＩＶｂ）：
ＱＡＳＱＸ３６Ｘ３７Ｘ３８Ｘ３９Ｘ４０Ｘ４１Ｘ４２ＬＸ４３（配列番号１４）
（式中、Ｘ３６、Ｘ３７、Ｘ３８、Ｘ３９、Ｘ４０、Ｘ４１、Ｘ４２およびＸ４３は、式ＩＶについて上記に定義されている通りである）を有する、項目９に記載の抗体分子。
【０８８７】
１１．ＣＤＲＬ１が式（ＩＶｃ）：
ＱＡＳＱＳＸ３７Ｘ３８Ｘ３９Ｘ４０Ｘ４１Ｘ４２ＬＸ４３（配列番号１５）
（式中、Ｘ３７、Ｘ３８、Ｘ３９、Ｘ４０、Ｘ４１、Ｘ４２およびＸ４３は式ＩＶについて上記に定義されている通りである）を有する、項目９または１０に記載の抗体分子。
【０８８８】
１２．ＣＤＲＬ１が式（ＩＩＩｄ）：
ＱＡＳＱＳＸ３７Ｘ３８Ｘ３９Ｘ４０Ｘ４２ＬＸ４３（配列番号１６）
（式中、Ｘ３７、Ｘ３８、Ｘ３９、Ｘ４０、Ｘ４２およびＸ４３は式ＩＶについて上記に定義されている通りである）を有する、項目９から１１のいずれか１つに記載の抗体分子。
【０８８９】
１３．ＣＤＲＬ１が式（ＩＶｅ）：
ＱＡＳＱＳＸ３７Ｘ３８Ｘ３９Ｘ４０ＬＸ４３（配列番号１７）
（式中、Ｘ３７、Ｘ３８、Ｘ３９、Ｘ４０およびＸ４３は式ＩＶについて上記に定義されている通りである）を有する、項目９から１１のいずれか１つに記載の抗体分子。
【０８９０】
１４．ＣＤＲＬ１が式（ＩＶｆ）：
ＱＡＳＱＳＸ３７Ｘ３８Ｘ３９Ｘ４０ＬＡ（配列番号１８）
（式中、Ｘ３７、Ｘ３８、Ｘ３９およびＸ４０は式ＩＶについて上記に定義されている通りである）を有する、項目９から１３のいずれか１つに記載の抗体分子。
【０８９１】
１５．ＣＤＲＬ２が式（Ｖａ）：
Ｘ４４ＡＳＸ４６ＬＸ４７Ｓ（配列番号１９）
（式中、Ｘ４４、Ｘ４６およびＸ４７は式Ｖについて上記に定義されている通りである）を有する、項目１から１４のいずれか１つに記載の抗体分子。
【０８９２】
１６．ＣＤＲＬ２が式（Ｖｂ）：
Ｘ４４ＡＳＸ４６ＬＡＳ（配列番号２０）
（式中、Ｘ４４およびＸ４６は式Ｖについて上記に定義されている通りである）を有する、項目１５に記載の抗体分子。
【０８９３】
１７．ＣＤＲＬ２が式（Ｖｃ）：
Ｘ４４ＡＳＴＬＡＳ（配列番号２１）
（式中、Ｘ４４は式Ｖについて上記に定義されている通りである）を有する、項目１６に記載の抗体分子。
【０８９４】
１８．ＣＤＲＬ３が式（ＶＩａ）：
ＡＧＹＫＳＸ４８Ｘ４９ＤＸ５０Ｘ５１ＴＴ（配列番号２２）
（式中、Ｘ４９、Ｘ５０およびＸ５１は式Ｖについて上記に定義されている通りである）を有する、項目１から１７のいずれか１つに記載の抗体分子。
【０８９５】
１９．ＣＤＲＬ３が式（ＶＩｂ）：
ＡＧＹＫＳＤＸ４９ＤＤＸ５１ＴＴ（配列番号２３）
（式中、Ｘ４９およびＸ５１は式ＶＩについて上記に定義されている通りである）を有する、項目１８に記載の抗体分子。
【０８９６】
２０．ＣＤＲＬ３が式（ＶＩＩａ）：
ＱＸ５２ＹＸ５４Ｘ５５Ｘ５６ＳＸ５７Ｘ５８Ｘ５９Ｘ６０Ｘ６１Ｘ６２Ｘ６３Ｘ６４（配列番号２４）
（式中、Ｘ５２、Ｘ５４、Ｘ５５、Ｘ５６、Ｘ５７、Ｘ５８、Ｘ５９、Ｘ６０、Ｘ６１、Ｘ６２、Ｘ６３およびＸ６４は式ＶＩＩについて上記に定義されている通りである）を有する、項目１から１７のいずれか１つに記載の抗体分子。
【０８９７】
２１．ＣＤＲＬ３が式（ＶＩＩｂ）：
ＱＸ５２ＹＹＸ５５Ｘ５６ＳＸ５７Ｘ５８Ｘ５９Ｘ６０Ｘ６１Ｘ６２Ｘ６３Ｘ６４（配列番号２５）
（式中、Ｘ５２、Ｘ５５、Ｘ５７、Ｘ５８、Ｘ５９、Ｘ６０、Ｘ６１、Ｘ６２、Ｘ６３およびＸ６４は式ＶＩＩについて上記に定義されている通りである）を有する、項目２０に記載の抗体分子。
【０８９８】
２２．ＣＤＲＬ３が式（ＶＩＩｃ）：
ＱＸ５２ＹＹＸ５５ＳＳＸ５７Ｘ５８Ｘ５９Ｘ６０Ｘ６１Ｘ６２Ｘ６３Ｘ６４（配列番号２６）
（式中、Ｘ５２、Ｘ５５、Ｘ５６、Ｘ５７、Ｘ５８、Ｘ５９、Ｘ６０、Ｘ６１、Ｘ６２、Ｘ６３およびＸ６４は式ＶＩＩについて上記に定義されている通りである）を有する、項目２１に記載の抗体分子。
【０８９９】
２３．ＣＤＲＬ３が式（ＶＩＩｄ）：
ＱＸ５２ＹＹＸ５５ＳＳＸ５７Ｘ５８Ｘ５９Ｘ６０Ｘ６１Ｘ６２Ｘ６４（配列番号２７）
（式中、Ｘ５２、Ｘ５５、Ｘ５７、Ｘ５８、Ｘ５９、Ｘ６０、Ｘ６１、Ｘ６２およびＸ６４は式ＶＩＩについて上記に定義されている通りである）を有する、項目２１または２２に記載の抗体分子。
【０９００】
２４．ＣＤＲＬ３が式（ＶＩＩｅ）：
ＱＸ５２ＹＹＸ５５ＳＳＸ５７Ｘ５８Ｘ５９Ｘ６０Ｘ６１Ｘ６２（配列番号２８）
（式中、Ｘ５２、Ｘ５５、Ｘ５７、Ｘ５８、Ｘ５９、Ｘ６０、Ｘ６１、Ｘ６２は式ＶＩＩについて上記に定義されている通りである）を有する、項目２１または２２に記載の抗体分子。
【０９０１】
２５．ＣＤＲＨ１が、配列番号２９〜３９から独立して選択され、ＣＤＲＨ２が配列番号４０〜５９から独立して選択され、およびＣＤＲＨ３が配列番号６０〜６８から独立して選択される、項目１から３のいずれか１つに記載の抗体分子。
【０９０２】
２６．ＣＤＲ  Ｈ１が配列番号２９または３０であり、ＣＤＲ  Ｈ２が配列番号４０または４１であり、ＣＤＲ  Ｈ３が配列番号６０である、項目１から３および２５のいずれか１つに記載の抗体分子。
【０９０３】
２７．ＣＤＲ  Ｈ１が配列番号３１または３２であり、ＣＤＲ  Ｈ２が配列番号４２または４３であり、ＣＤＲ  Ｈ３が配列番号６１または６２である、項目１から３および２５のいずれか１つに記載の抗体分子。
【０９０４】
２８．ＣＤＲ  Ｈ１が配列番号３３または３４であり、ＣＤＲ  Ｈ２が配列番号４４または４５であり、ＣＤＲ  Ｈ３が配列番号６３である、項目１から３または２５のいずれか１つに記載の抗体分子。
【０９０５】
２９．ＣＤＲ  Ｈ１が配列番号３５または３６であり、ＣＤＲ  Ｈ２が配列番号４６または４７であり、ＣＤＲ  Ｈ３が配列番号６４である、項目１から３または２５のいずれか１つに記載の抗体分子。
【０９０６】
３０．ＣＤＲ  Ｈ１が配列番号３７であり、ＣＤＲ  Ｈ２が配列番号４８、４９、５０、５１、５２または５３であり、ＣＤＲ  Ｈ３が配列番号６５、６６または６７である、項目１から３または２５のいずれか１つに記載の抗体分子。
【０９０７】
３１．ＣＤＲ  Ｈ１が配列番号３８または３９であり、ＣＤＲ  Ｈ２が配列番号５４、５５、５６、５７、５８または５９であり、ＣＤＲ  Ｈ３が配列番号６８である、項目１から３または２５のいずれか１つに記載の抗体分子。
【０９０８】
３２．ＣＤＲＬ１が、配列番号６９〜７４から独立して選択され、ＣＤＲＬ２が配列番号７５〜８０から独立して選択され、およびＣＤＲＬ３が配列番号８１〜１０１から独立して選択される、項目１から３および２５から３１のいずれか１つに記載の抗体分子。
【０９０９】
３３．ＣＤＲ  Ｌ１が配列番号６９であり、ＣＤＲ  Ｌ２が配列番号７５であり、ＣＤＲ  Ｌ３が配列番号８１である、項目１から３および２５から３２のいずれか１つに記載の抗体分子。
【０９１０】
３４．ＣＤＲ  Ｌ１が配列番号７０であり、ＣＤＲ  Ｌ２が配列番号７６であり、ＣＤＲ  Ｌ３が配列番号８２である、項目３２に記載の抗体分子。
【０９１１】
３５．ＣＤＲ  Ｌ１が配列番号７１であり、ＣＤＲ  Ｌ２が配列番号７７であり、ＣＤＲ  Ｌ３が配列番号８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７または９８である、項目１から３および２５から３２のいずれか１つに記載の抗体分子。
【０９１２】
３６．ＣＤＲ  Ｌ１が配列番号７２であり、ＣＤＲ  Ｌ２が配列番号７８であり、ＣＤＲ  Ｌ３が配列番号９９である、項目１から３および２５から３２のいずれか１つに記載の抗体分子。
【０９１３】
３７．ＣＤＲ  Ｌ１が配列番号７３であり、ＣＤＲ  Ｌ２が配列番号７９であり、ＣＤＲ  Ｌ３が配列番号１００である、項目３２に記載の抗体分子。
【０９１４】
３８．ＣＤＲ  Ｌ１が配列番号７４であり、ＣＤＲ  Ｌ２が配列番号８０であり、ＣＤＲ  Ｌ３が配列番号１０１である、項目１から３および２５から３２のいずれか１つに記載の抗体分子。
【０９１５】
３９．ＣＤＲ  Ｈ１が配列番号２９または３０に示される配列を有し、ＣＤＲ  Ｈ２が配列番号４０または４１に示される配列を有し、ＣＤＲ  Ｈ３が、配列番号６０に示される配列を有し、ＣＤＲ  Ｌ１が配列番号６９に示される配列を有し、ＣＤＲ  Ｌ２が配列番号７５に示される配列を有し、ＣＤＲ  Ｌ３が配列番号８１に示される配列を有する、項目１から３および２５から３８のいずれか１つに記載の抗体分子。
【０９１６】
４０．ＣＤＲ  Ｈ１が配列番号３１または３２に示される配列を有し、ＣＤＲ  Ｈ２が配列番号４２または４３に示される配列を有し、ＣＤＲ  Ｈ３が、配列番号６１または６２に示される配列を有し、ＣＤＲ  Ｌ１が配列番号７０に示される配列を有し、ＣＤＲ  Ｌ２が配列番号７６に示される配列を有し、ＣＤＲ  Ｌ３が配列番号８２に示される配列を有する、項目１から３および２５から３８のいずれか１つに記載の抗体分子。
【０９１７】
４１．ＣＤＲ  Ｈ１が配列番号３３または３４に示される配列を有し、ＣＤＲ  Ｈ２が配列番号４４または４５に示される配列を有し、ＣＤＲ  Ｈ３が配列番号６３に示される配列を有し、ＣＤＲ  Ｌ１が配列番号７１に示される配列を有し、ＣＤＲ  Ｌ２が配列番号７７に示される配列を有し、ＣＤＲ  Ｌ３が配列番号８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７または９８に示される配列を有する、項目１から３および２５から３８のいずれか１つに記載の抗体分子。
【０９１８】
４２．ＣＤＲ  Ｈ１が配列番号３５または３６に示される配列を有し、ＣＤＲ  Ｈ２が配列番号４６または４７に示される配列を有し、ＣＤＲ  Ｈ３が配列番号６４に示される配列を有し、ＣＤＲ  Ｌ１が配列番号７２に示される配列を有し、ＣＤＲ  Ｌ２が配列番号７８に示される配列を有し、ＣＤＲ  Ｌ３が配列番号９９に示される配列を有する、項目１から３および２５から３８のいずれか１つに記載の抗体分子。
【０９１９】
４３．ＣＤＲ  Ｈ１が配列番号３７に示される配列を有し、ＣＤＲ  Ｈ２が配列番号４８、４９、５０、５１、５２または５３に示される配列を有し、ＣＤＲ  Ｈ３が、配列番号６５、６６または６７に示される配列を有し、ＣＤＲ  Ｌ１が配列番号７３に示される配列を有し、ＣＤＲ  Ｌ２が配列番号７９に示される配列を有し、ＣＤＲ  Ｌ３が配列番号１００に示される配列を有する、項目１から３および２５から３８のいずれか１つに記載の抗体分子。
【０９２０】
４４．ＣＤＲ  Ｈ１が配列番号３８または３９に示される配列を有し、ＣＤＲ  Ｈ２が配列番号５４、５５、５６、５７、５８または５９に示される配列を有し、ＣＤＲ  Ｈ３が配列番号６８に示される配列を有し、ＣＤＲ  Ｌ１が配列番号７４に示される配列を有し、ＣＤＲ  Ｌ２が配列番号８０に示される配列を有し、ＣＤＲ  Ｌ３が配列番号１０１に示される配列を有する、項目１から３および２５から３８のいずれか１つに記載の抗体分子。
【０９２１】
４５．ＶＨおよびＶＬがヒト化されている、項目１から４４のいずれか１つに記載の抗体分子。
【０９２２】
４６．重鎖の可変ドメイン（ＶＨ）が、１１、２３、２４、３７、４７、４８、４９、６７、７１、７３、７６、７８および９４位の少なくとも１つの残基がドナー残基であるヒトフレームワーク領域を含み、軽鎖の可変ドメイン（ＶＬ）が、１、２、３、３６、６３、６５、６６、７０および７１位の少なくとも１つの残基がドナー残基であるヒトフレームワーク領域を含む、項目４５に記載の抗体分子。
【０９２３】
４７．配列番号１０７、１０８、１０９、１１０、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２７、１２８、１２９、１３０、１３６、１３７、１３８、１３９、１４５、１４６、１４７、１４８、１５４、１５５、１５６および１５７から独立して選択されるＶＨを含む、項目１から３または項目４５もしくは４６のいずれか１つに記載の抗体分子。
【０９２４】
４８．配列番号１０６、１１５、１２６、１３５、１４４および１５３から独立して選択される配列を含むＶＬ可変ドメインを含む、項目１から３および４７のいずれか１つに記載の抗体分子。
【０９２５】
４９．配列番号１０７、１０８、１０９および１１０から独立して選択されるＶＨ、ならびに配列番号１０６に示される配列を有するＶＬを含む、項目１から３および４７もしくは４８のいずれか１つに記載の抗体分子。
【０９２６】
５０．配列番号１１６、１１７、１１８、１１９、１２０および１２１から独立して選択されるＶＨ、ならびに配列番号１１５に示される配列を有するＶＬを含む、項目１から３および４７もしくは４８のいずれか１つに記載の抗体分子。
【０９２７】
５１．配列番号１２７、１２８、１２９および１３０から独立して選択されるＶＨ、ならびに配列番号１２６に示される配列を有するＶＬを含む、項目１から３および４７もしくは４８のいずれか１つに記載の抗体分子。
【０９２８】
５２．配列番号１３６、１３７、１３８および１３９から独立して選択されるＶＨ、ならびに配列番号１３５に示される配列を有するＶＬを含む、項目１から３および４７もしくは４８のいずれか１つに記載の抗体分子。
【０９２９】
５３．配列番号１４５、１４６、１４７および１４８から独立して選択されるＶＨ、ならびに配列番号１４４に示される配列を有するＶＬを含む、項目１から３および４７もしくは４８のいずれか１つに記載の抗体分子。
【０９３０】
５４．配列番号１５４、１５５、１５６および１５７から独立して選択されるＶＨ、ならびに配列番号１５３に示される配列を有するＶＬを含む、項目１から３および４７もしくは４８のいずれか１つに記載の抗体分子。
【０９３１】
５５．各結合ドメインが２つの抗体可変ドメインを含む、項目１から５４のいずれか１つに記載の抗体分子。
【０９３２】
５６．２つの抗体可変ドメインがＶＨ／ＶＬ対である、項目５５に記載の抗体分子。
【０９３３】
５７．前記軽鎖の可変ドメインが、配列番号１０６、１１５、１２６、１３５、１４４および１５３の軽鎖可変ドメインと少なくとも８０％の同一性または類似性を有する配列を含み、前記重鎖の可変ドメインが、配列番号１０７、１０８、１０９、１１０、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２７、１２８、１２９、１３０、１３６、１３７、１３８、１３９、１４５、１４６、１４７、１４８、１５４、１５５、１５６および１５７の重鎖可変ドメインと少なくとも８０％の同一性または類似性を有する配列を含む、項目１から４５のいずれか１つに記載の抗体分子。
【０９３４】
５８．完全長抗体である、項目１から５７のいずれか１つに記載の抗体分子。
【０９３５】
５９．ｓｃＦｖ、Ｆｖ、ＦａｂまたはＦａｂ’断片である、項目１から５７のいずれか１つに記載の抗体分子。
【０９３６】
６０．二重特異性または三重特異性などの多重特異性分子である、項目１から５７のいずれか１つに記載の抗体分子。
【０９３７】
６１．前記多重特異性分子が、ＣＤ２２に特異的な１つの結合ドメイン、ならびにＣＤ７９ａおよび／またはＣＤ７９ｂに特異的な１つの結合ドメインを含む、項目６０に記載の抗体分子。
【０９３８】
６２．分子フォーマットが、ダイアボディ、ｓｃダイアボディ、トリアボディ、タンデムｓｃＦｖ、ＦａｂＦｖ、Ｆａｂ’Ｆｖ、ＦａｂｄｓＦｖ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ、Ｆａｂ−ｄｓｓｃＦｖ、Ｆａｂ−（ｄｓｓｃＦｖ）２  ｄｉＦａｂ、ｄｉＦａｂ’、トリボディ、タンデムｓｃＦｖ−Ｆｃ、ｓｃＦｖ−Ｆｃ−ｓｃＦｖ、ｓｃダイアボディ−Ｆｃ、ｓｃダイアボディ−ＣＨ３、Ｉｇ−ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−Ｉｇ、Ｖ−Ｉｇ、Ｉｇ−Ｖ、ＤｕｏｂｏｄｙおよびＤＶＤ−Ｉｇから選択される、項目１から６１のいずれか１つに記載の抗体分子。
【０９３９】
６３．ヒト血清アルブミンなどの血清アルブミンに特異的な結合ドメインをさらに含む、項目１から６２のいずれか１つに記載の抗体分子。
【０９４０】
６４．前記１または複数の結合ドメインがヒト化されている、項目１から６３のいずれか１つに記載の抗体分子。
【０９４１】
６５．１または複数のＣＤＲ中の１つのアミノ酸が別のアミノ酸で置換されている、項目１から６４のいずれか１つに記載の抗体分子。
【０９４２】
６６．項目１から６５のいずれか１つに記載の１または複数の抗体分子を含む組成物。
【０９４３】
６７．項目１から６５のいずれか１つに記載の抗体分子をコードするヌクレオチド配列。
【０９４４】
６８．項目６７において定義されるヌクレオチド配列を含むベクター。
【０９４５】
６９．治療に使用するための、項目１から６５のいずれか１つに記載の抗体分子または項目６６に記載の組成物。
【０９４６】
７０．治療、特に本明細書に記載の状態または障害の治療に使用する医薬品の製造のための、項目１から６５のいずれか１つに記載の抗体分子または項目６６に記載の組成物の使用。
【０９４７】
７１．項目１から６５のいずれか１つに記載の抗体分子または項目６６に記載の組成物の治療有効量を投与することを含む、患者を治療する方法。
【０９４８】
参考文献
１．Ｒｉｂｏｓｏｍｅ  ｄｉｓｐｌａｙ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｔｌｙ  ｓｅｌｅｃｔｓ  ａｎｄ  ｅｖｏｌｖｅｓ  ｈｉｇｈ−ａｆｆｉｎｉｔｙ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｆｒｏｍ  ｉｍｍｕｎｅ  ｌｉｂｒａｒｉｅｓ．Ｈａｎｅｓ  Ｊ、Ｊｅｒｍｕｔｕｓ  Ｌ、Ｗｅｂｅｒ−Ｂｏｒｎｈａｕｓｅｒ  Ｓ、Ｂｏｓｓｈａｒｄ  ＨＲ、ＰｌｕｃｋｔｈｕｎＡ（１９９８年）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９５、１４１３０−１４１３５頁
【０９４９】
２．Ｄｉｒｅｃｔｅｄ  ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｉｃ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ａ  Ｐｅｐｔｉｄｅ−ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｓｉｎｇｌｅ  Ｃｈａｉｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｆｒａｇｍｅｎｔ（ｓｃＦｖ）ｗｉｔｈ  Ｌｏｗ  Ｐｉｃｏｍｏｌａｒ  Ａｆｆｉｎｉｔｙ。Ｚｈａｎｄ  Ｃ、Ｓｐｉｎｅｌｌｉ  Ｓ、Ｌｕｇｉｎｂｕｈｌ  Ｂ、Ａｍｓｔｕｔｚ  Ｐ、Ｃａｍｂｉｌｌａｕ  Ｃ、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ  Ａ．（２００４年）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９、１８８７０−１８８７７頁
【０９５０】
３．Ａｎｔｉｇｅｎ  ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ｂｙ  ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ．Ｂｅｒｇｅｒ  Ｃ、Ｗｅｂｅｒ−Ｂｏｒｎｈａｕｓｅｒ  Ｓ、Ｅｇｇｅｎｂｅｒｇｅｒ  Ｙ、Ｈａｎｅｓ  Ｊ、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ  Ａ、Ｂｏｓｓｈａｒｄ  Ｈ．Ｒ．（１９９９年）Ｆ．Ｅ．Ｂ．Ｓ．Ｌｅｔｔｅｒｓ  ４５０、１４９−１５３頁
【実施例】
【０９５１】
実施例で使用される用語Ｆａｂ−Ｋｄ−Ｆａｂは、式Ａ−Ｘ：Ｙ−Ｂ
（式中、
Ａ−Ｘは第１の融合タンパク質であり；
Ｙ−Ｂは第２の融合タンパク質であり；
Ｘ：Ｙはヘテロ二量体−テザーであり；
Ａは、ＣＤ２２またはＣＤ７９などの抗原に特異的なＦａｂ断片を含み；
Ｂは、ＣＤ２２またはＣＤ７９などの抗原に特異的なＦａｂ断片を含み；
Ｘは、ｓｃＦｖなどの結合対の第１の結合パートナーであり；
Ｙは、ペプチドなどの結合対の第２の結合パートナーであり；
：はＸとＹとの間の相互作用（結合相互作用など）である）
を有する二重特異性タンパク質複合体を表す。
【実施例１】
【０９５２】
機能アッセイのためのＦａｂ’−Ａ（Ｆａｂ−ｓｃＦｖ［Ａ−Ｘ］）およびＦａｂ’−Ｂ（Ｆａｂ−ペプチド［Ｂ−Ｙ）の作製
クローニング戦略
抗体可変領域ＤＮＡを、ＰＣＲまたは隣接する制限酵素部位のＤＮＡ配列の遺伝子合成によって作製した。これらの部位は、可変重鎖についてはＨｉｎｄＩＩＩおよびＸｈｏＩであり、可変軽鎖についてはＨｉｎｄＩＩＩおよびＢｓｉＷＩであった。重鎖可変領域は、相補的制限部位を有するので、これにより、２つの重鎖ベクター（ＦａｂＢ−Ｙを有するｐＮＡＦＨおよびＦａｂＡ−Ｘｄｓを有するｐＮＡＦＨ［ジスルフィド安定化］）に連結しやすくなる。これは、可変領域を、マウス定常領域およびペプチドＹ（ＧＣＮ４）またはｓｃＦｖ  Ｘ（５２ＳＲ４）の上流（または５’）に連結して、全リーディングフレームを形成する。軽鎖は、同じ相補的制限部位を再び使用して標準的にハウスマウスの定常κベクター（ｐＭｍＣＫまたはｐＭｍＣＫ  Ｓ１７１Ｃ）にクローニングした。ｐＭｍＣＫ  Ｓ１７１Ｃベクターは、可変領域がウサギから単離されている場合に使用される。クローニング事象は、全オープンリーディングフレームに隣接するプライマーを用いた配列決定によって確認した。
【０９５３】
ＣＨＯ−Ｓの培養
懸濁液ＣＨＯＳ細胞を、２ｍＭ（１００×）ｇｌｕｔａｍｘを補充したＣＤＣＨＯ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に予め適合させた。細胞を、シェーカーインキュベーター（Ｋｕｎｅｒ  ＡＧ、Ｂｉｒｓｆｅｌｄｅｎ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）において１４０ｒｐｍで撹拌して対数増殖期に維持し、８％ＣＯ２を補充して３７℃で培養した。
【０９５４】
エレクトロポレーショントランスフェクション
トランスフェクションの前に、ＣＥＤＥＸ細胞カウンター（Ｉｎｎｏｖａｔｉｓ  ＡＧ．Ｂｉｅｌｅｆｅｌｄ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて細胞数および生存率を決定し、必要な量の細胞（２×１０８細胞／ｍｌ）を遠心分離コニカルチューブに移し、１４００ｒｐｍで１０分間回転させた。ペレット化した細胞を滅菌のＥａｒｌｓ  Ｂａｌａｎｃｅｄ  Ｓａｌｔｓ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎに再懸濁し、１４００ｒｐｍでさらに１０分間回転させた。上清を捨て、ペレットを所望の細胞密度に再懸濁した。
【０９５５】
ベクターＤＮＡを、２Ｘ１０８細胞／ｍｌに対して最終濃度４００ｕｇで混合し、８００μｌをＣｕｖｅｔｔｅｓ（Ｂｉｏｒａｄ）にピペットで入れ、インハウスエレクトロポレーションシステムを用いてエレクトロポレーションした。
【０９５６】
トランスフェクションした細胞を、２ｍＭのｇｌｕｔａｍｘおよび抗生物質の有糸分裂阻害剤（１００Ｘ）溶液（１／５００）で富化したＰｒｏＣＨＯ５培地を含む１×３Ｌの三角フラスコに直接移し、細胞を、３７℃、５％ＣＯ２および１４０ｒｐｍの振盪に設定したＫｕｈｎｅｒシェーカーインキュベーターにおいて培養した。トランスフェクション後２４時間目に飼料補充物２ｇ／ＬのＡＳＦ（味の素（株））を添加し、温度を３７℃に下げてさらに１３日間培養した。４日目に、３ｍＭの酪酸ナトリウム（（ｎ−ＢＵＴＲＩＣ  ＡＣＩＤ  Ｓｏｄｉｕｍ  Ｓａｌｔ、Ｓｉｇｍａ  Ｂ−５８８７）を培養物に添加した。
【０９５７】
１４日目に、培養物をチューブに移し、４０００ｒｐｍで３０分間の遠心分離後に上清を細胞から分離した。保持された上清をさらに０．２２ｕｍのＳＡＲＴＯ  ＢＲＡＮ  Ｐ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅで濾過し、続いて０．２２μｍ  Ｇａｍｍａ  ｇｏｌｄフィルターで濾過した。最終発現レベルを、プロテインＧ−ＨＰＬＣによって決定した。
【０９５８】
大規模（１．０Ｌ）精製
Ｆａｂ−ＡおよびＦａｂ−Ｂを、ＡＫＴＡ  ＸｐｒｅｓｓシステムおよびＨｉｓＴｒａｐ  Ｅｘｃｅｌプレパックニッケルカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いた親和性捕捉によって精製した。培養上清を０．２２μｍで滅菌濾過し、必要に応じて弱酸または弱塩基でｐＨを中性に調整した後、カラムに負荷した。１５〜２５ｍＭのイミダゾールを含有する二次洗浄工程を使用して、結合の弱い宿主細胞タンパク質／非特異的Ｈｉｓ結合剤をニッケル樹脂から置換した。溶出は、１０ｍＭのリン酸ナトリウム、ｐＨ７．４＋１ＭのＮａＣｌ＋２５０ｍＭイミダゾールで行い、２ｍｌの画分を回収した。１カラム容量が溶出したら、システムを１０分間一時停止させて溶出ピークを狭め、結果的に全溶出量を減少させた。最もきれいな画分をプールし、緩衝液をＰＢＳ（Ｓｉｇｍａ）、ｐＨ７．４に交換し、０．２２μｍで濾過した。最終プールを、Ａ２８０  Ｓｃａｎ、ＳＥ−ＨＰＬＣ（Ｇ３０００法）、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ（還元型および非還元型）によりアッセイし、エンドトキシンについてはＰＴＳ  Ｅｎｄｏｓａｆｅシステムを使用してアッセイした。
【実施例２】
【０９５９】
ＣＤ７９／ＣＤ２２二重特異性組合せがＡｋｔシグナル伝達を阻害するが、二価の組合せは阻害しないことを実証するための、ヘテロ二量体的テザー−二重特異性タンパク質複合体フォーマットにおけるＦａｂ’−Ａ（Ｆａｂ−ｓｃＦｖ［Ａ−Ｘ］）およびＦａｂ’−ｂ（Ｆａｂ−ペプチド［Ｂ−Ｙ］）の使用
血小板アフェレーシスコーン由来のヒトＰＢＭＣを凍結アリコートとして貯蔵した。アッセイを行う前に、細胞を解凍し、ＤＭＥＭ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で洗浄し、３７℃／５％ＣＯ２の環境に順応させた。この期間中、細胞表面タンパク質ＣＤ２２およびＣＤ７９ｂに対する抗原特異性を有する、等モル（２００ｎＭ）量のＦａｂ’−Ａ（Ｆａｂ−ｓｃＦｖ）とＦａｂ’−Ｂ（Ｆａｂ−ペプチド）を、１０％ウシ胎仔血清および２ｍＭグルタミンを含むＤＭＥＭで希釈することによって、二重特異性抗体または二価抗体のグリッドを作製した。このグリッドを表４に示す。
【０９６０】
表４：ＣＤ２２およびＣＤ７９ｂに対する特異性を有する抗体の二重特異性および二価の組
【表４】
2018524007.tif 000006
ＸはｓｃＦｖ（５２ＳＲ４）であり、Ｙはペプチド（ＧＣＮ４）である
【０９６１】
Ｆａｂ’Ａ−ＸとＦａｂ’Ｂ−Ｙとを一緒に９０分間（３７℃／５％ＣＯ２環境で）インキュベートし、その後Ｖ底９６ウェルプレート中で２．５×１０５のＰＢＭＣと混合した。次いで、ＰＢＭＣと二重特異性または二価との組合せを、さらに９０分間一緒にインキュベートした。この後、２００ｎＭのヤギＦ（ａｂ’）２抗ヒトＩｇＭ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を添加することによって、Ｂ細胞を３７℃で８分間活性化した。次いで、等量のＣｙｔｏｆｉｘ緩衝液（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を添加することにより、シグナル伝達反応を停止させた。その後、プレートを室温で１５分間放置した後、５００ｇで５分間遠心分離した。過剰の上清を細胞ペレットから捨て、フロー緩衝液（ＰＢＳ＋１％ＢＳＡ＋０．０１％ＮａＮ３）に再懸濁し、もう一度洗浄した。次いで、細胞を氷冷Ｐｅｒｍ緩衝液ＩＩＩ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に３０分間再懸濁してから、フロー緩衝液で２回洗浄した。
【０９６２】
次いで、細胞を、蛍光標識抗ＣＤ２０抗体（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）およびタンパク質の４７３位の改変セリン残基を認識する蛍光標識抗ホスホＡｋｔ抗体で染色した。次いで、プレートを再懸濁し、暗所において室温で１時間インキュベートした。この後、プレートをさらに２回洗浄し、２５μｌのフロー緩衝液に再懸濁した。ＣＤ２０およびＡｋｔの細胞発現は、Ｉｎｔｅｌｌｉｃｙｔ  ＨＴＦＣ（商標）フローサイトメーターを使用して測定した。
【０９６３】
データ解析ソフトウェアパッケージＦｏｒｅｃｙｔ（商標）（Ｉｎｔｅｌｌｉｃｙｔ）を使用して、Ｂ細胞を他の細胞集団とは異なるものとして同定し、Ａｋｔレベルの幾何平均を各ウェルについて計算した。次いで、すべてのデータを、最大応答（抗ＩｇＭのみ）からバックグラウンド（細胞のみ）を差し引いた阻害パーセンテージとして表した。ＣＤ２２およびＣＤ７９ｂの組合せの相対的効果を表５に示す（↓＝阻害、↑＝刺激および⇔＝全体的効果なし）。
【０９６４】
表５：ＣＤ２２およびＣＤ７９ｂに対する特異性を有する抗体の二重特異性および二価の組合せに対する、リン酸化Ａｋｔ阻害の相対効力の表。
【表５】
2018524007.tif 000007
ＸはｓｃＦｖ（５２ＳＲ４）であり、Ｙはペプチド（ＧＣＮ４）である。
【０９６５】
このデータは棒グラフの形でも示され（図１）、データは平均値を表し、エラーバーは９５％信頼区間である。このデータは、ＣＤ２２とＣＤ７９ｂとの組合せが、抗ＩｇＭで刺激されたＢ細胞におけるホスホ−Ａｋｔの発現を阻害し得ることを示す。対照的に、ＣＤ２２とＣＤ２２との組合せは、高レベルのホスホ−Ａｋｔの発現を示した。
【実施例３】
【０９６６】
ＣＤ７９／ＣＤ２２の二重特異性組合せがＰＬＣγ２シグナル伝達を阻害するが、二価の組合せは阻害しないことを実証するための、ヘテロ二量体的テザー−二重特異性タンパク質複合体フォーマットにおけるＦａｂ’−Ａ（Ｆａｂ−ｓｃＦｖ［Ａ−Ｘ］）およびＦａｂ’−ｂ（Ｆａｂ−ペプチド［Ｂ−Ｙ］）の使用
血小板アフェレーシスコーン由来のヒトＰＢＭＣを凍結アリコートとして貯蔵した。アッセイを行う前に、細胞を解凍し、ＤＭＥＭ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で洗浄し、３７℃／５％ＣＯ２の環境に順応させた。この期間中、細胞表面タンパク質ＣＤ２２およびＣＤ７９ｂに対する抗原特異性を有する、等モル（２００ｎＭ）量のＦａｂ’−ａ（Ｆａｂ−ｓｃＦｖ［Ａ−Ｘ］）とＦａｂ’−Ｂ（Ｆａｂ−ペプチド［Ｂ−Ｙ］）を、１０％ウシ胎仔血清および２ｍＭグルタミンを含むＤＭＥＭで希釈することによって、二重特異性抗体または二価抗体のグリッドを作製した。このグリッドを表４に示す。
【０９６７】
Ｆａｂ’Ａ−ＸとＦａｂ’Ｂ−Ｙとを一緒に９０分間（３７℃／５％ＣＯ２環境で）インキュベートし、その後Ｖ底９６ウェルプレート中で２．５×１０５のＰＢＭＣと混合した。次いで、ＰＢＭＣと二重特異性または二価との組合せを、さらに９０分間一緒にインキュベートした。この後、２００ｎＭのヤギＦ（ａｂ’）２抗ヒトＩｇＭ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を添加することによって、Ｂ細胞を３７℃で８分間活性化した。次いで、等量のＣｙｔｏｆｉｘ緩衝液（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を添加することにより、シグナル伝達反応を停止させた。その後、プレートを室温で１５分間放置した後、５００ｇで５分間遠心分離した。過剰の上清を細胞ペレットから捨て、フロー緩衝液に再懸濁し、もう一度洗浄した。次いで、細胞を氷冷Ｐｅｒｍ緩衝液ＩＩＩ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に３０分間再懸濁してから、フロー緩衝液で２回洗浄した。
【０９６８】
次いで、細胞を、蛍光標識抗ＣＤ２０抗体（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）およびタンパク質の７５９位の改変チロシン残基を認識する蛍光標識抗ホスホＰＬＣγ２抗体で染色した。次いで、プレートを再懸濁し、暗所において室温で１時間インキュベートした。この後、プレートをさらに２回洗浄し、２５μｌのフロー緩衝液に再懸濁した。ＣＤ２０およびＰＬＣγ２の細胞発現は、Ｉｎｔｅｌｌｉｃｙｔ  ＨＴＦＣ（商標）フローサイトメーターを使用して測定した。
【０９６９】
データ解析ソフトウェアパッケージＦｏｒｅｃｙｔ（商標）（Ｉｎｔｅｌｌｉｃｙｔ）を使用して、Ｂ細胞を他の細胞集団とは異なるものとして同定し、ＰＬＣγ２レベルの幾何平均を各ウェルについて計算した。次いで、すべてのデータを、最大応答（抗ＩｇＭのみ）からバックグラウンド（細胞のみ）を差し引いた阻害パーセンテージとして表した。ＣＤ２２およびＣＤ７９ｂの組合せの相対的効果を表６に示す（↓＝阻害、↑＝刺激および⇔＝全体的効果なし）。
【０９７０】
表６：ＣＤ２２およびＣＤ７９ｂに対する特異性を有する抗体の二重特異性および二価の組合せに対するリン酸化ＰＬＣｇ２阻害の相対効力の表。
【表６】
2018524007.tif 000008
ＸはｓｃＦｖであり、Ｙはペプチドである
【０９７１】
このデータは棒グラフとしても表すことができ（図２）、データは平均値を表し、エラーバーは９５％信頼区間である。このデータは、ＣＤ２２とＣＤ７９ｂとの組合せ、およびＣＤ７９ｂとＣＤ７９ｂとの組合せが、抗ＩｇＭで刺激されたＢ細胞におけるホスホ−ＰＬＣγ２の発現を阻害し得ることを示す。対照的に、ＣＤ２２とＣＤ２２との組合せは、高いレベルのホスホ−ＰＬＣγ２発現を示した。
【実施例４】
【０９７２】
ＣＤ７９／ＣＤ２２二重特異性組合せがＣＤ８６発現を阻害することを実証するための、ヘテロ二量体的テザー−二重特異性タンパク質複合体フォーマットにおけるＦａｂ’−Ａ（Ｆａｂ−ｓｃＦｖ［Ａ−Ｘ］）およびＦａｂ’−ｂ（Ｆａｂ−ペプチド［Ｂ−Ｙ］）の使用
血小板アフェレーシスコーン由来のヒトＰＢＭＣを凍結アリコートとして貯蔵した。アッセイを行う前に、細胞を解凍し、ＤＭＥＭ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で洗浄し、３７℃／５％ＣＯ２の環境に順応させた。この期間中、細胞表面タンパク質ＣＤ２２およびＣＤ７９ｂに対する抗原特異性を有する、等モル（２００ｎＭ）量のＦａｂ’−Ｘ（Ｆａｂ−ｓｃＦｖ）とＦａｂ’−Ｙ（Ｆａｂ−ペプチド）を、１０％ウシ胎仔血清および２ｍＭグルタミンを含むＤＭＥＭで希釈することによって、二重特異性抗体または二価抗体のグリッドを作製した。このグリッドを表４に示す。
【０９７３】
Ｆａｂ’Ａ−ＸとＦａｂ’Ｂ−Ｙとを一緒に９０分間（３７℃／５％ＣＯ２環境で）インキュベートし、その後Ｖ底９６ウェルプレート中で２．５×１０５のＰＢＭＣと混合した。次いで、ＰＢＭＣと二重特異性または二価との組合せを、さらに９０分間一緒にインキュベートした。この後、２００ｎＭのヤギＦ（ａｂ’）２抗ヒトＩｇＭ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を添加することによって、Ｂ細胞を３７℃で２４時間活性化した。この後、プレートを氷上に置き、氷冷したフロー緩衝液（ＰＢＳ＋１％ＢＳＡ＋０．０１％ＮａＮ３）で１回洗浄した。次いで、細胞を蛍光標識抗ＣＤ１９抗体（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）および蛍光標識抗ＣＤ８６抗体で染色し、暗所で１時間氷上でインキュベートした。この後、プレートをさらに２回洗浄し、２５μｌのフロー緩衝液に再懸濁した。ＣＤ１９およびＣＤ８６の細胞発現は、Ｉｎｔｅｌｌｉｃｙｔ  ＨＴＦＣ（商標）フローサイトメーターを用いて測定した。
【０９７４】
データ解析ソフトウェアパッケージＦｏｒｅｃｙｔ（商標）（Ｉｎｔｅｌｌｉｃｙｔ）を使用して、Ｂ細胞を他の細胞集団とは異なるものとして同定し、ＣＤ８６レベルの幾何平均を各ウェルについて計算した。次いで、すべてのデータを、最大応答（抗ＩｇＭのみ）からバックグラウンド（細胞のみ）を差し引いた阻害パーセンテージとして表した。ＣＤ２２およびＣＤ７９ｂの組合せの相対的効果を表７に示す（↓＝阻害、↑＝刺激および⇔＝全体的効果なし）。
【０９７５】
表７：ＣＤ２２およびＣＤ７９ｂに対する特異性を有する抗体の二重特異性および二価の組合せに対するＢ細胞ＣＤ８６発現の阻害の相対効力の表。
【表７】
2018524007.tif 000009
ＸはｓｃＦｖ（５２ＳＲ４）であり、Ｙはペプチド（ＧＣＮ４）である
【０９７６】
このデータは棒グラフの形でも示され（図３）、データは平均値を表し、エラーバーは９５％信頼区間である。このデータは、ＣＤ２２とＣＤ７９ｂとの組合せ、およびＣＤ７９ｂとＣＤ７９ｂとの組合せが、抗ＩｇＭで刺激されたＢ細胞上のＣＤ８６の発現を阻害し得ることを示す。対照的に、ＣＤ２２とＣＤ２２との組合せは、高レベルのＣＤ８６発現を示した。
【実施例５】
【０９７７】
ＣＤ２２およびＣＤ７９ｂの阻害効果は、抗体が二重特異性方向に配列されている場合にのみ再現され得る
血小板アフェレーシスコーン由来のヒトＰＢＭＣを凍結アリコートとして貯蔵した。アッセイを行う前に、細胞を解凍し、ＤＭＥＭ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で洗浄し、３７℃／５％ＣＯ２の環境に順応させた。この期間中、細胞表面タンパク質ＣＤ２２およびＣＤ７９ｂに対する抗原特異性を有する、等モル（２００ｎＭ）量のＦａｂ’−Ｘ（Ｆａｂ−ｓｃＦｖ）および／またはＦａｂ’−Ｙ（Ｆａｂ−ペプチド）を、１０％ウシ胎仔血清および２ｍＭグルタミンを含むＤＭＥＭで希釈することによって、抗体の二重特異性抗体、二価または混合物の組合せを作製した。これらの組合せを表８に示す。滴定曲線実験のために、次いで、これらの組合せを２．５希釈で１段階ずつ８段階に希釈して、この組合せについて用量漸増を作成した。
【０９７８】
表８：ＣＤ２２およびＣＤ７９ｂに対する特異性を有する二重特異性、二価または混合物のグリッド。
【表８】
2018524007.tif 000010
ＸはｓｃＦｖ（５２ＳＲ４）であり、Ｙはペプチド（ＧＣＮ４）である
【０９７９】
Ｆａｂ’Ａ−Ｘおよび／またはＦａｂ’Ｂ−Ｙを一緒に９０分間（３７℃／５％ＣＯ２環境で）インキュベートし、その後Ｖ底９６ウェルプレート中で２．５×１０５のＰＢＭＣと混合した。次いで、ＰＢＭＣ＋Ｆａｂ’Ａ−Ｘおよび／またはＦａｂ’Ｂ−Ｙの組合せを、さらに９０分間一緒にインキュベートした。この後、２００ｎＭのヤギＦ（ａｂ’）２抗ヒトＩｇＭ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を添加することによって、Ｂ細胞を３７℃で８分間活性化した。次いで、等量のＣｙｔｏｆｉｘ緩衝液（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を添加することにより、シグナル伝達反応を停止させた。その後、プレートを室温で１５分間放置した後、５００ｇで５分間遠心分離した。過剰の上清を細胞ペレットから捨て、フロー緩衝液（ＰＢＳ＋１％ＢＳＡ＋０．０１％ＮａＮ３）に再懸濁し、もう一度洗浄した。次いで、細胞を氷冷Ｐｅｒｍ緩衝液ＩＩＩ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に３０分間再懸濁してから、フロー緩衝液で２回洗浄した。
【０９８０】
次いで、細胞を、蛍光標識抗ＣＤ２０抗体（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、４７３位の改変されたセリン残基を認識する抗ホスホＡｋｔ抗体、および７５９位の改変チロシン残基を認識する抗ホスホＰＬＣγ２抗体で染色した。次いで、プレートを再懸濁し、暗所において室温で１時間インキュベートした。この後、プレートをさらに２回洗浄し、２５μｌのフロー緩衝液に再懸濁した。ＣＤ２０、ＡｋｔおよびＰＬＣγ２の細胞発現は、Ｉｎｔｅｌｌｉｃｙｔ  ＨＴＦＣ（商標）フローサイトメーターを使用して測定した。
【０９８１】
データ解析ソフトウェアパッケージＦｏｒｅｃｙｔ（商標）（Ｉｎｔｅｌｌｉｃｙｔ）を使用して、Ｂ細胞を他の細胞集団とは異なるものとして同定し、ＡｋｔおよびＰＬＣγ２のレベルの幾何平均を各ウェルについて計算した。次いで、すべてのデータを、最大応答（抗ＩｇＭのみ）からバックグラウンド（細胞のみ）を差し引いた阻害パーセンテージとして表した。図４および５は、ＣＤ２２とＣＤ７９ｂとの二重特異性の組合せのみがリン酸化されたＡｋｔおよびＰＬＣγ２の発現を阻害し、ＣＤ２２とＣＤ７９ｂ抗体との混合物は阻害しなかったことを示している（データは平均値を表し、エラーバーは９５％信頼区間である）。
【０９８２】
ＣＤ２２とＣＤ７９ｂとの二重特異性の組合せで見られる阻害を検証するために、この組合せと併せてＣＤ２２とＣＤ７９ｂ抗体との混合物を滴定し、全細胞内ＩｋＢ（シグナル伝達読み出し）およびＣＤ８６（２４時間後の活性化マーカー）の阻害をＢ細胞において測定した。
【０９８３】
図６に見られるように、総ＩｋＢタンパク質のレベルによる測定では、ＣＤ２２−Ｘ／ＣＤ７９ｂ−Ｙの組合せは抗ＩｇＭ刺激後のＮＦ−ｋＢシグナル活性化を阻害することができるが、ＣＤ２２−Ｘ／ＣＤ７９ｂ−Ｘの組合せはできなかった。Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ６を用いた４パラメーターロジスティック曲線フィットを用いて外挿したＩＣ５０は７．５ｎＭであった（データは平均値を表し、エラーバーは標準偏差である）。さらに、ＣＤ２２−Ｘ／ＣＤ７９ｂ−Ｙの組合せの滴定は２４時間後のＢ細胞上の抗ＩｇＭ誘導性ＣＤ８６発現を阻害することができたが、ＣＤ２２−Ｘ／ＣＤ７９ｂ−Ｘの組合せはできなかった（図７を参照されたい）。
【０９８４】
血小板アフェレーシスコーン由来のヒトＰＢＭＣを凍結アリコートとして貯蔵した。アッセイを行う前に、細胞を解凍し、ＤＭＥＭ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で洗浄し、３７℃／５％ＣＯ２の環境に順応させた。この期間中、細胞表面タンパク質ＣＤ２２およびＣＤ７９ｂに対する抗原特異性を有する、等モル（５００ｎＭ）量のＦａｂ’−Ｘ（Ｆａｂ−ｓｃＦｖ）とＦａｂ’−Ｙ（Ｆａｂ−ペプチド）を、１０％ウシ胎仔血清および２ｍＭグルタミンを含むＤＭＥＭで希釈することによって、二重特異性の組合せを作製した。次いで、これらの組合せを２．５希釈で１段階ずつ８段階に希釈して、この組合せについて用量漸増を作成した。Ｆａｂ’−ＸとＦａｂ’−Ｙとを一緒に９０分間（３７℃／５％ＣＯ２環境で）インキュベートし、その後Ｖ底９６ウェルプレートに２．５×１０５のＰＢＭＣを添加した。次いで、ＰＢＭＣをＦａｂ’−ＸおよびＦａｂ’−Ｙの組合せに加え、さらに９０分間一緒にインキュベートした。この後、Ｂ細胞を、２００ｎＭのヤギＦ（ａｂ’）２抗ヒトＩｇＭ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を３７℃で２４時間添加することにより活性化した。細胞表面活性化マーカーの検出を可能にするために、プレートを氷上に置き、氷冷フロー緩衝液（ＰＢＳ＋１％ＢＳＡ＋０．０１％ＮａＮ  ３）で１回洗浄した。次いで、細胞を蛍光標識抗ＣＤ１９抗体（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）および蛍光標識抗ＣＤ８６抗体で染色し、暗所で１時間氷上でインキュベートした。この後、プレートをさらに２回洗浄し、２５ｕｌのフロー緩衝液に再懸濁した。ＣＤ１９およびＣＤ８６の細胞発現は、Ｉｎｔｅｌｌｉｃｙｔ  ＨＴＦＣ（商標）フローサイトメーターを用いて測定した。データ解析ソフトウェアパッケージＦｏｒｅｃｙｔ（商標）（Ｉｎｔｅｌｌｉｃｙｔ）を使用して、Ｂ細胞を他の細胞集団とは異なるものとして同定し、ＣＤ８６レベルの幾何平均を各ウェルについて計算した。次いで、すべてのデータを、最大応答（抗ＩｇＭのみ）からバックグラウンド（細胞のみ）を差し引いた阻害パーセンテージとして表した。図７に見られるように、ＣＤ２２−Ｘ／ＣＤ７９ｂ−Ｙの組合せの滴定は、２４時間後のＢ細胞上の抗ＩｇＭ誘導性ＣＤ８６発現を阻害することができた。Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ６を用いた４パラメーターロジスティック曲線フィットを用いて外挿したＩＣ５０は１０．３ｎＭであった（データは平均値を表し、エラーバーは標準偏差である）。
【実施例６】
【０９８５】
ＣＤ２２およびＣＤ７９ｂ二重特異性タンパク質の阻害効果は、異なる抗体Ｖ領域を用いて再生することができる
免疫化：選択された抗原をコードするＤＮＡを、遺伝子合成または商業的供給源によって得て、強い構成的プロモーターを有する発現ベクターにクローニングした。次いで、プラスミドＤＮＡを、インハウスエレクトロポレーションシステムを使用してＲａｂ−９ウサギ線維芽細胞（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−１４１４（商標））にトランスフェクトした。２４時間後、細胞をフローサイトメトリーにより抗原発現について検査し、使用まで液体窒素中でアリコートで凍結した。同じ細胞上で同時発現させるか、または単一または複数のトランスフェクトされた細胞の混合物を作製することによって、ウサギ１羽あたり最大６つの抗原を免疫化した。ウサギを３用量の細胞で免疫化した。
【０９８６】
抗体発見：Ｂ細胞培養物を、Ｚｕｂｌｅｒら（１９８５年）によって記載された方法と同様の方法を用いて調製した。簡潔には、免疫化ウサギ由来の脾臓またはＰＢＭＣ由来Ｂ細胞を、１０％  ＦＣＳ（ＰＡＡ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  ｌｔｄ）、２％  ＨＥＰＥＳ（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）、１％Ｌ−グルタミン（Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ）、１％ペニシリン／ストレプトマイシン溶液（Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ）、０．１％β−メルカプトエタノール（Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ）、３％の活性化脾臓細胞培養上清およびガンマ線照射変異体ＥＬ４マウス胸腺腫細胞（５ｘ１０４／ウェル）を補充した２００μｌ／ウェルのＲＰＭＩ１６４０培地（Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ）を含むバーコード化９６ウェル組織培養プレート中で、ウェルあたり約２０００〜５０００細胞の密度で、３７℃、５％ＣＯ２雰囲気下で７日間培養した。
【０９８７】
Ｂ細胞培養上清中の抗原特異的抗体の存在を、ウサギを免疫化した抗原で同時トランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞を使用して、均一蛍光ベースの結合アッセイを使用して測定した。スクリーニングは、１０ｕｌの上清を、バーコード化９６ウェル組織培養プレートから、Ｍａｔｒｉｘ  Ｐｌａｔｅｍａｔｅリキッドハンドラーを用いて標的抗原でトランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞（約３０００細胞／ウェル）を含むバーコード化３８４ウェル黒色アッセイプレートに移すことを含む。結合は、ヤギ抗ウサギＩｇＧ  Ｆｃγ特異的Ｃｙ−５コンジュゲート（Ｊａｃｋｓｏｎ）を用いて明らかにした。プレートを、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ８２００細胞検出システムで読み取った。
【０９８８】
一次スクリーニング後、陽性上清を、Ａｖｉｓｏ  Ｏｎｙｘヒットピッキングロボットおよび−８０℃で凍結させた細胞培養プレート中のＢ細胞を使用して、９６ウェルバーコード化マスタープレートに固定させた。次いで、マスタープレートを、抗原で別々にトランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞および抗原の供給源として組換えタンパク質でコーティングしたＳｕｐｅｒａｖｉｄｉｎ（商標）ビーズ（Ｂａｎｇｓ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）について、均一蛍光ベースの結合アッセイでスクリーニングした。これは各ウェルの抗原特異性を決定するために行った。
【０９８９】
対象のウェルの選択から抗体可変領域遺伝子を回収するために、デコンボリューションステップを実施して、Ｂ細胞の異種集団を含む所定のウェル中の抗原特異的Ｂ細胞の同定を可能した。これは、蛍光フォーカス法（Ｃｌａｒｇｏら、２０１４年。Ｍａｂｓ  ２０１４年１月１日：６（１）１４３−１５９頁；欧州特許第１５７０２６７号明細書）を使用して達成した。簡潔には、陽性ウェル由来の免疫グロブリン分泌Ｂ細胞を、標的抗原でトランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞またはビオチン化標的抗原でコーティングしたストレプトアビジンビーズ（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ）のいずれかと、最終希釈１：１２００のヤギ抗ウサギＦｃγ断片−特異的ＦＩＴＣコンジュゲート（Ｊａｃｋｓｏｎ）と混合した。３７℃で１時間静的インキュベーションした後、抗原特異的Ｂ細胞は、そのＢ細胞を取り囲む蛍光ハローの存在により同定することができた。次いで、オリンパス顕微鏡を使用して同定された多数のこれらの個々のＢ細胞クローンをエッペンドルフマイクロマニピュレーターで採取し、ＰＣＲチューブに入れた。蛍光フォーカス法は、免疫化ウサギの骨髄に直接由来するＢ細胞の異種集団から、抗原特異的Ｂ細胞を同定するためにも使用した。
【０９９０】
重鎖および軽鎖可変領域特異的プライマーを使用して逆転写（ＲＴ）−ＰＣＲによって単一細胞から抗体可変領域遺伝子を回収した。可変領域を、マウスＦａｂ−ＸおよびＦａｂ−Ｙ（ＶＨ）またはマウスκ（ＶＬ）哺乳動物発現ベクターにクローニング可能にする制限部位を３’および５’末端に組み込んだネステッド二次ＰＣＲを用いて、２回のＰＣＲを行った。Ｆａｂ−ＸおよびＦａｂ−Ｙ発現ベクターのための重鎖および軽鎖構築物を、Ｆｅｃｔｉｎ  ２９３（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用してＨＥＫ−２９３細胞に、またはＥｘｐｉｆｅｃｔａｍｉｎｅ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用してＥｘｐｉ２９３細胞に同時トランスフェクトし、組換え抗体を、５ｍｌの容量の６ウェル組織培養プレートで発現させた。５〜７日の発現後、上清を回収した。上清を、抗原でトランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞および組換えタンパク質または抗原トランスフェクトＨＥＫ細胞でコーティングしたＳｕｐｅｒａｖｉｄｉｎ（商標）ビーズ（Ｂａｎｇｓ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）について、均一蛍光ベースの結合アッセイで試験した。これは、クローニングされた抗体の特異性を確認するために行った。
【０９９１】
小規模なＦａｂＡ−ＸおよびＦａｂＢ−Ｙの作製（小規模（５０ｍＬ）なＥｘｐｉ２９３のトランスフェクション）
Ｅｘｐｉ２９３細胞をＥｘｐｉ２９３（商標）発現培地において最終濃度０．５×１０６生存細胞／ｍＬまで日常的に継代培養し、オービタル振盪インキュベーター（Ｍｕｌｔｉｔｒｏｎ、Ｉｎｆｏｒｓ  ＨＴ）で１２０ｒｐｍ、８％ＣＯ２および３７℃でインキュベートした。
【０９９２】
トランスフェクションの日に、細胞の生存率および濃度を、自動細胞カウンター（Ｖｉ−ＣＥＬＬ、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ）を用いて測定した。２．５ｘ１０６生存細胞／ｍＬの最終細胞濃度を達成するために、適切な容積の細胞懸濁液を２５０ｍＬの滅菌エルレンマイヤー振盪フラスコに添加し、各５０ｍＬのトランスフェクションに対して、新鮮な予熱したＥｘｐｉ２９３（商標）発現培地を添加することにより容積４２．５ｍＬにした。
【０９９３】
各トランスフェクションのための脂質−ＤＮＡ複合体を調製するために、全量５０μｇの重鎖および軽鎖プラスミドＤＮＡをＯｐｔｉ−ＭＥＭ（登録商標）Ｉ培地（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で総容積２．５ｍＬに希釈し、１３５μＬのＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）２９３試薬（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）をＯｐｔｉ−ＭＥＭ（登録商標）Ｉ培地で総容積２．５ｍＬに希釈した。すべての希釈液を穏やかに混合し、室温で５分以内インキュベートした後、各ＤＮＡ溶液をそれぞれの希釈したＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）２９３試薬に加えて、総容積５ｍＬとした。ＤＮＡ−ＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）２９３試薬混合物を穏やかに混合し、室温で２０〜３０分間インキュベートして、ＤＮＡ−ＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）２９３試薬複合体を形成させた。
【０９９４】
ＤＮＡ−ＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）２９３試薬複合体のインキュベーションが完了した後、５ｍＬのＤＮＡ−ＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）２９３試薬複合体を各振盪フラスコに添加した。振盪フラスコを、１２０ｒｐｍ、８％ＣＯ２および３７℃でオービタル振盪インキュベーター（Ｍｕｌｔｉｔｒｏｎ、Ｉｎｆｏｒｓ  ＨＴ）中でインキュベートした。
【０９９５】
トランスフェクションの約１６〜１８時間後、２５０μＬのＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）２９３トランスフェクションエンハンサー１（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）および２．５ｍＬのＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）２９３トランスフェクションエンハンサー２（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を各振盪フラスコに添加した。
【０９９６】
トランスフェクションの７日後に細胞培養物を収穫した。細胞を５０ｍＬのスピンチューブ（Ｆａｌｃｏｎ）に移し、４０００ｒｐｍで３０分間遠心沈殿させた後、０．２２ｕｍのＳｔｅｒｉｃｕｐ（Ｍｅｒｃｋ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を通して滅菌濾過した。清澄化し滅菌濾過した上清を４℃において保存した。最終発現レベルを、プロテインＧ−ＨＰＬＣによって決定した。
【０９９７】
小規模（５０ｍｌ）精製：Ｆａｂ−ＸおよびＦａｂ−Ｙの両方を、小規模の真空系精製システムを使用した親和性捕捉によって別々に精製した。簡潔には、５０ｍｌの培養上清を０．２２μｍで滅菌濾過した後、５００μＬのＮｉセファロースビーズ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を添加した。次いで上清とビーズとの混合物を約１時間回転させてから、上清を真空を適用することによって除去した。次いでビーズを洗浄液１（５０ｍＭリン酸ナトリウム１Ｍ  ＮａＣｌ、ｐＨ６．２）および洗浄液２（０．５Ｍ  ＮａＣｌ）で洗浄した。溶出は５０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ４．０＋１Ｍ  ＮａＣｌで行った。溶出画分緩衝液をＰＢＳ（Ｓｉｇｍａ）、ｐＨ７．４に交換し、０．２２μｍで濾過した。最終プールを、Ａ２８０スキャン、ＳＥ−ＵＰＬＣ（ＢＥＨ２００法）、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ（還元型および非還元型）によりアッセイし、エンドトキシンについてはＰＴＳ  Ｅｎｄｏｓａｆｅシステムを使用してアッセイした。
【０９９８】
血小板アフェレーシスコーン由来のヒトＰＢＭＣを凍結アリコートとして貯蔵した。アッセイを行う前に、細胞を解凍し、ＲＰＭＩ  １６４０（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で洗浄し、３７℃／５％ＣＯ２の環境に順応させた。この期間中、抗体の二重特異性、二価または混合物の組合せを、細胞表面タンパク質ＣＤ２２およびＣＤ７９ｂに対する抗原特異性を有する、等モル（２００ｎＭ）量のＦａｂ’−Ｘ（Ｆａｂ−ｓｃＦｖ）および／またはＦａｂ’−Ｙ（Ｆａｂ−ペプチド）を、１０％ウシ胎仔血清、５０単位／ｍＬペニシリン、５０μｇ／ｍＬストレプトマイシンおよび２ｍＭ  グルタミンを含有するＲＰＭＩ１６４０で希釈することにより作製した。３つの異なるＣＤ７９ｂ  Ｆａｂ−Ｙおよび３つの異なるＣＤ２２  Ｆａｂ−Ｘのこれらの組合せを表９に示す。
【０９９９】
表９：ＣＤ２２およびＣＤ７９ｂに対する特異性を有する二重特異性タンパク質のグリッド。
【表９】
2018524007.tif 000011
ＸはｓｃＦｖ（５２ＳＲ４）であり、Ｙはペプチド（ＧＣＮ４）である
【１０００】
Ｆａｂ’Ａ−ＸとＦａｂ’Ｂ−Ｙとを一緒に６０分間（３７℃／５％ＣＯ２環境で）インキュベートし、その後Ｖ底９６ウェルプレート中で２．５×１０５のＰＢＭＣと混合した。次いで、ＰＢＭＣ＋Ｆａｂ’Ａ−Ｘおよび／またはＦａｂ’Ｂ−Ｙの組合せを、さらに９０分間一緒にインキュベートした。この後、１２．５μｇ／ｍＬのヤギＦ（ａｂ’）２抗ヒトＩｇＭ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を添加することによって、Ｂ細胞を３７℃で１０分間活性化した。次いで、等量のＣｙｔｏｆｉｘ緩衝液（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を添加することにより、シグナル伝達反応を停止させた。その後、プレートを室温で１５分間放置した後、５００ｇで５分間遠心分離した。過剰の上清を細胞ペレットから捨て、フロー緩衝液（ＰＢＳ＋１％ＢＳＡ＋０．１％ＮａＮ３＋２ｍＭ  ＥＤＴＡ）に再懸濁し、もう一度洗浄した。次いで、細胞を氷冷Ｐｅｒｍ緩衝液ＩＩＩ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に３０分間再懸濁してから、フロー緩衝液で２回洗浄した。
【１００１】
次いで、細胞を、蛍光標識抗ＣＤ２０抗体（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）および７５９位の改変チロシン残基を認識する抗ホスホＰＬＣγ２抗体で染色した。次いで、プレートを再懸濁し、暗所において室温で１時間インキュベートした。この後、プレートをさらに２回洗浄し、４０μｌのフロー緩衝液に再懸濁した。ＣＤ２０およびＰＬＣγ２の細胞発現は、Ｉｎｔｅｌｌｉｃｙｔ  ＨＴＦＣ（商標）フローサイトメーターを使用して測定した。
【１００２】
データ解析ソフトウェアパッケージＦｏｒｅｃｙｔ（商標）（Ｉｎｔｅｌｌｉｃｙｔ）を使用して、Ｂ細胞を他の細胞集団とは異なるものとして同定し、ＰＬＣγ２レベルの幾何平均を各ウェルについて計算した。次いで、すべてのデータを、最大応答（抗ＩｇＭのみ）からバックグラウンド（細胞のみ）を差し引いた阻害パーセンテージとして表した。
【１００３】
図８に見られるように、データは、異なる抗体Ｖ領域を使用するＣＤ２２とＣＤ７９ｂとの組合せが、抗ＩｇＭで刺激されたＢ細胞におけるホスホ−ＰＬＣγ２発現を阻害できることを示す。
【実施例７】
【１００４】
新規な二重特異性抗体標的を同定するためのヘテロ二量体的につながれたタンパク質複合体の大きなパネルのグリッドスクリーニング。
序論：先の実施例における二重特異性フォーマットおよびスクリーニング方法の検証成功の後、スクリーニングをより多数の抗原対に拡大した。Ｂ細胞上に発現された２３の異なる抗原に対する抗体可変（Ｖ）領域対のパネルを作製した。Ｆａｂ−Ｋｄ−Ｆａｂ［すなわち、Ａ−Ｘ：Ｙ−Ｂ、式中、ＡおよびＢはＦａｂ断片である］フォーマットを使用して、３１５の異なる抗原対の組合せそれぞれについての複数のＶ領域の組合せを表す、ヘテロ二量体的につながれたタンパク質複合体のグリッドを形成した。これらの組合せを、高スループットフローサイトメトリーアッセイでＢＣＲ（Ｂ細胞受容体）シグナル伝達を調節する能力についてスクリーニングして、二重特異性抗体の介入のための新規標的対を選択した。
【１００５】
実施例６に記載のように抗体を単離した。
【１００６】
スクリーニングアッセイ
ドナーＰＢＭＣを、３７℃に設定した水浴を用いて迅速に解凍し、注意深く５０ｍｌのファルコンチューブに移した。次いで、それらをアッセイ培地に滴下して５ｍｌに希釈し、浸透圧ショックを最小にした。次いで、細胞を２０ｍｌに慎重に希釈した後、最終培地希釈液を加えて容積５０ｍｌにした。次いで細胞を５００ｇで５分間回転させた後、上清を除去し、細胞を１ｍｌの培地に再懸濁した。次いで、細胞を計数し、１．６６×１０６細胞／ｍｌに希釈した後、Ｖ−底ＴＣプレートにウェルあたり３０μｌを分注し、５．０×１０４細胞／ウェルの最終アッセイ濃度を得た。次いで、細胞プレートを３７℃、５％ＣＯ２インキュベーター中で必要になるまでカバー付きで保存し、最低１時間静置した。
【１００７】
Ｆａｂ−ＸおよびＦａｂ−Ｙ試薬を、アッセイ培地中の最終アッセイ濃度の５倍で等モル比で混合し、３７℃、５％ＣＯ２で９０分間インキュベートした。試料を９６ウェルＵ底ポリプロピレンプレート中で調製し、インキュベーションの際はカバーをした。
【１００８】
１０μｌの５×Ｆａｂ−ＫＤ−Ｆａｂ混合物を、細胞を含む適切な試験ウェルに添加し、１０００ｒｐｍで３０秒間振盪することによって混合して、３７℃、５％ＣＯ２で９０分間インキュベートした。
【１００９】
次いで、細胞を１０μｌの抗ヒトＩｇＭで刺激した。刺激の最終アッセイ濃度は、アッセイパネルの読み取り値に依存して変化し、３種の抗体カクテルＡ、ＢおよびＣ（詳細は下記）を、５０μｇ／ｍｌ（カクテルＡおよびＣ）または２５μｇ／ｍｌ（カクテルＢ）の最終アッセイ濃度で刺激した。次いで、アッセイプレートを１０００ｒｐｍで３０秒間穏やかに混合した後、３７℃、５％ＣＯ２で５分間（抗体カクテルＡおよびＣ）または２分間（抗体カクテルＢ）インキュベートした。アッセイを、１５０μｌの氷冷ＢＤ  ＣｙｔｏＦｉｘをすべてのウェルに添加することによって停止させ、室温で１５分間インキュベートした。次いで固定された細胞を５００ｇで５分間回転させて細胞をペレット化し、ＢｉｏＴｅｋ  ＥＬｘ４０５プレート洗浄器を用いて上清を除去した。プレートを２４００ｒｐｍで３０秒間ボルテックスすることにより、ペレットを再懸濁した。次いで細胞を、１００μｌの氷冷ＢＤ細胞透過性緩衝液ＩＩＩを添加することによって、４℃で３０分間透過処理した。次いで細胞を１００μｌのＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、５００ｇで５分間回転させた。上清をＥＬｘ４０５によって再度除去した後、使用前に、２００μｌのＦＡＣＳ緩衝液を迅速に分注し、残留する透過性緩衝液をすべて洗い流した。細胞を再び５００ｇで回転させ、上清を反転によって除去した。先行する回転ステップの間、抗体カクテルをＦＡＣＳ緩衝液中で調製し、光から遮蔽したままにした。次いで、細胞をボルテックス（２４００ＲＰＭ、３０秒）によって再懸濁した後、２０μｌの抗体カクテルをすべてのウェルに添加し、プレートを１０００ｒｐｍで３０秒間振盪した。次いで、細胞を室温で６０分間暗所においてインキュベートした。
【１０１０】
次いで、細胞を５００ｇで回転させながら２００μｌのＦＡＣＳ緩衝液中で２回洗浄し、各工程後に上清を除去した。最後に、細胞を２４００ｒｐｍで３０秒間ボルテックスして再懸濁した後、最終の２０μｌのＦＡＣＳ緩衝液を添加した。次いで、（１または複数の）プレートをＩｎｔｅｌｌｉｃｙｔ  ＨＴＦＣ／ｉＱｕｅ装置で読み取った。
【１０１１】
ＦＡＣＳ緩衝液＝ＰＢＳ＋１％ＢＳＡ＋０．０５％ＮａＮ３＋２ｍＭ  ＥＤＴＡ
抗体カクテルＡ＝１：２のＣＤ２０  ＰｅｒＣｐ−Ｃｙ５．５（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）＋１：５のＰＬＣγ２  ＡＦ８８＋１：１０のＡｋｔ  ＡＦ６４７＋１：５０のＥＲＫ１／２  ＰＥ（ＦＡＣＳ緩衝液で希釈）。
抗体カクテルＢ＝１：２のＣＤ２０  ＰｅｒＣｐ−Ｃｙ５．５（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）＋１：５のＳｙｋ  ＰＥ＋１：５のＢＬＮＫ  ＡＦ６４７（ＦＡＣＳ緩衝液で希釈）
抗体カクテルＣ＝１：５のＣＤ２０  ＰｅｒＣｐ−Ｃｙ５．５（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）＋１：５のＰＬＣγ２  ＡＦ４８８＋１：１０のＡｋｔ  ＡＦ６４７＋１：５のＳｙｋ  ＰＥ（ＦＡＣＳ緩衝液で希釈）
【１０１２】
【表１０】
2018524007.tif 000012
【１０１３】
Ｆａｂ−Ｘ＋Ｆａｂ−Ｙの組合せを、抗体カクテルＡおよびＢまたはＣ単独でスクリーニングした。すべてのスクリーニングは２人の異なる献血者由来のコーン細胞について行った。市販のソフトウェアツールを使用してデータを取得し、評価した。合計２５００のＦａｂ−Ｘ＋Ｆａｂ−Ｙの組合せを３１５の異なる抗原の組合せに対してスクリーニングした。
【１０１４】
結果
各Ｆａｂ−Ｋｄ−Ｆａｂ［すなわち、Ａ−Ｘ：Ｙ−Ｂ（式中、ＡおよびＢはＦａｂ断片である）］の組合せによるＢＣＲシグナル伝達カスケードタンパク質のリン酸化の誘導の阻害パーセンテージを計算し、この実施例において、Ｂ細胞機能を阻害する新規な抗原の組合せを探しているが、陽性の組合せの基準は、Ｖ領域の少なくとも１つの組合せによる少なくとも２つホスホの読み出しの少なくとも３０％の阻害として設定した。この閾値に従って、検査した３１５のうち１１の新しい抗原対の組合せが、必要な基準を満たした。これは３．５％のヒット率を表し、所望の活性の組合せを見出すために多数の組合せをスクリーニングすることの重要性、およびＣＣ７９ｂとＣＤ２２の組合せの活性がどれほど稀であるかを示している。
【１０１５】
図１０−１２は、抗原グリッドの交差特異性に関するデータを示す。値は、それぞれＳｙｋ、ＰＬＣγ２およびＡＫＴのリン酸化の阻害パーセンテージ（活性化に対する負値）であり、評価された複数のＶ領域の組合せの平均を表す。３１５の異なる抗原の組合せが試験され、見てわかるように、抗体の異なる組合せによるＢＣＲシグナル伝達に対する効果は、図１１に示す、強い阻害、例えば、Ｆａｂ−Ｘ上の抗原２（ＣＤ７９ｂ）と組み合わせたＦａｂ−Ｙ上の抗原３（ＣＤ２２）（ホスホＳｙｋの６９．６６％の阻害）およびＦａｂ−Ｙ上の抗原２（ＣＤ７９ｂ）と組み合わせたＦａｂ−Ｘ上の抗原３（ＣＤ２２）（ホスホＳｙｋの５２．３２％の阻害）から活性化、例えば、Ｘ上の抗原６とＹ上の抗原１１（−１１８．１０％のホスホＳｙｋ、図１１）へ有意に変化した。
【１０１６】
図１０−１２に表される平均％値を表す各データ点は、Ｆａｂ−Ｘ上の抗原２（ＣＤ７９ｂ）とＦａｂ−Ｙ上の抗原３（ＣＤ２２）とについて、図１３に示されている。この場合、異なる抗体Ｖ領域の２３種の異なる組合せを評価した。同じ抗原の組合せであるが、別の配向、すなわちＦａｂ−Ｙ上の抗原２（ＣＤ７９ｂ）とＦａｂ−Ｘ上の抗原３（ＣＤ２２）とを図１４に示す。この場合、異なる抗体Ｖ領域の９種の異なる組合せを評価した。すべてのＶ領域は阻害を示すが、この方法はまた、最適なＶ領域の組合せの選択においても有利に使用することができる。
【実施例８】
【１０１７】
Ｆａｂ−Ｋｄ−Ｆａｂスクリーニングフォーマットでの抗原ＣＤ７９ｂおよび抗原ＣＤ２２の同時標的化と、分子的に連結された二重特異性ＢＹｂｅフォーマットとの活性の比較。
序論：ヘテロ二量体的につながれたスクリーニング複合体であるＦａｂ−Ｋｄ−Ｆａｂにおいて同定されたＣＤ７９ｂ／ＣＤ２２標的対の活性が、治療的な分子的に連結された別のフォーマットで同様の望ましい活性に変換され得ることを確認するために、抗原ＣＤ７９ｂ特異性（ＶＲ４４４７）および抗原ＣＤ２２特異性（ＶＲ４１３０）をＢＹｂｅ形式で作製した。このＢＹｂｅフォーマットは、リンカーＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１７）を介して抗−抗原ＣＤ７９ｂ  Ｆａｂ（ＶＲ４４４７）の重鎖に融合されたジスルフィド安定化（ｄｓ）一本鎖（ｓｃ）−Ｆｖとしての抗−抗原ＣＤ２２  Ｖ領域（ＶＲ４１３０）からなる。
【１０１８】
方法：
機能的スクリーニングのためのＢＹｂｅの精製は以下のように行った：
機能的スクリーニングのＢＹｂｅ（Ｆａｂ−ｄｓｓｃＦｖ［Ｆａｂ重鎖のＣ末端のｓｃＦｖ］）フォーマットを以下のように精製した。標準的なｅｘｐｉＨＥＫまたはＣＨＯ発現からの清澄化された細胞培養上清を、０．２２μｍで滅菌濾過した。濾過した上清を、ＰＢＳ  ｐＨ７．４（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）で平衡化した５０ｍｌのＧａｍｍａｂｉｎｄＰｌｕｓ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  ＸＫ２６カラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に２ｍｌ／分で負荷した。負荷後、カラムをＰＢＳ  ｐＨ７．４で洗浄し、次いで０．１Ｍグリシン／ＨＣｌ、ｐＨ２．７で溶出した。溶出に続いて２８０ｎｍでの吸光度を測定し、溶出ピークを集め、次いで１／２５容積の２Ｍ  Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ、ｐＨ８．５で中和した。中和された試料を、１０ｋＤａ（ＢＹｂｅ）の分子量カットオフ膜を有するＡｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５濃縮器およびスイングアウトローターにおける４０００ｘｇでの遠心分離を使用して濃縮した。濃縮した試料を、ｐＨ７．４のＰＢＳで平衡化したＸＫ１６／６０またはＸＫ２６／６０  Ｓｕｐｅｒｄｅｘ  ２００カラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）のいずれかに適用した。カラムは、それぞれ１ｍｌ／分または２．６ｍｌ／分いずれかのＰＢＳ、ｐＨ７．４の定組成勾配で展開した。画分を回収し、ＴＳＫゲルＧ３０００ＳＷＸＬ；５μｍ、７．８×３００ｍｍカラム、１ｍｌ／分で０．２Ｍリン酸塩、ｐＨ７．０の定組成勾配で展開、のサイズ排除クロマトグラフィーによって分析し、２８０ｎｍにおける吸光度によって検出した。選択された単量体画分をプールし、１０ｋＤａの分子量カットオフ膜を有するＡｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５濃縮器およびスイングアウトローターにおける４０００ｘｇでの遠心分離を使用して１ｍｇ／ｍｌ超に濃縮した。最終試料をアッセイした；濃度は、Ａ２８０スキャンＵＶ−可視分光光度計（Ｃａｒｙ  ５０Ｂｉｏ）により；単量体％は、ＴＳＫゲルＧ３０００ＳＷＸＬ；５μｍ、７．８×３００ｍｍカラム、１ｍｌ／分で０．２Ｍリン酸塩、ｐＨ７．０の定組成勾配で展開、のサイズ排除クロマトグラフィーにより、および検出は２８０ｎｍにおける吸光度により；還元型および非還元型ＳＤＳ−ＰＡＧＥを４−２０％トリス−グリシン１．５ｍｍゲル（Ｎｏｖｅｘ）において５０ｍＡ（ゲルあたり）で５３分間行い、エンドトキシンについては、Ｌｉｍｕｌｕｓ  Ａｍｅｂｏｃｙｔｅ  Ｌｙｓａｔｅ（ＬＡＬ）試験カートリッジを備えたＣｈａｒｌｅｓ  ＲｉｖｅｒのＥｎｄｏＳａｆｅ（登録商標）ポータブル試験システムによるものであった。
【１０１９】
機能アッセイ
活性化マーカーアッセイ：抗原ＣＤ７９ｂ特異的Ｆａｂ’−Ｙおよび抗原ＣＤ２２特異的Ｆａｂ’−Ｘを、等モル濃度で６０分間（３７℃および５％ＣＯ２環境で）一緒にインキュベートした。この組合せを、１００ｎＭの開始モル濃度から１：４連続希釈で滴定した。抗原ＣＤ７９ｂおよびＣＤ２２特異的ＢＹｂｅもまた、１００ｎＭの開始モル濃度から１：４連続希釈で滴定した。Ｖ底９６ウェルプレートにおいて、１．５ｘ１０５のＰＢＭＣをウェルに添加し、これに滴定されたＦａｂ’−ＸおよびＦａｂ’−Ｙの組合せまたは滴定されたＢＹｂｅを添加した。Ｆａｂ’−ＸおよびＦａｂ’−Ｙの組合せ、またはＢＹｂｅを細胞とともにさらに９０分間インキュベートした。この後、２５μｇ／ｍＬのヤギＦ（ａｂ’）２抗ヒトＩｇＭ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を添加することによって、Ｂ細胞を３７℃＋５％ＣＯ２で２４時間活性化した。
【１０２０】
ウェルに１００μＬの氷冷ＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ＋１％ＢＳＡ＋０．１％ＮａＮ３＋２ｍＭ  ＥＤＴＡ）を添加し、プレートを密閉し、湿潤氷で約１５分間覆った後、５００ｘｇで５分間４℃において遠心分離した。過剰の上清を細胞ペレットから捨て、プレートを２０００ｒｐｍで３０秒間振盪した。
【１０２１】
次いで、蛍光標識された抗ＣＤ１９、抗ＣＤ２０および抗ＣＤ７１、抗ＣＤ４０および抗ＣＤ８６抗体のカクテル（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で細胞を染色した。プレートを短時間振盪し、湿潤氷上で暗所において１時間インキュベートした。この後、プレートを２回洗浄し、２０μＬのＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁した。ＣＤ１９、ＣＤ２０およびＣＤ７１、ＣＤ４０およびＣＤ８６の細胞発現は、Ｉｎｔｅｌｌｉｃｙｔ  ｉＱＵＥ（登録商標）Ｓｃｒｅｅｎｅｒフローサイトメーターを使用して測定した。
【１０２２】
データ解析ソフトウェアパッケージＦｏｒｅｃｙｔ（商標）（Ｉｎｔｅｌｌｉｃｙｔ）を使用して、Ｂ細胞を他の細胞集団とは異なるものとして同定し、ＣＤ７１、ＣＤ４０およびＣＤ８６レベルの幾何平均を各ウェルについて計算した。次いで、すべてのデータを、最大応答（抗ＩｇＭのみ）からバックグラウンド（細胞のみ）を差し引いた阻害パーセンテージとして表した。
【１０２３】
ＰｈｏｓＦｌｏｗアッセイ：抗原ＣＤ７９ｂ特異的Ｆａｂ’−Ｙおよび抗原ＣＤ２２特異的Ｆａｂ’−Ｘを、等モル濃度で６０分間（３７℃および５％ＣＯ２環境で）一緒にインキュベートした。この組合せを、１００ｎＭの開始モル濃度から１：４連続希釈で滴定した。抗原ＣＤ７９ｂおよび抗原ＣＤ２２特異的ＢＹｂｅもまた、１００ｎＭの開始モル濃度から１：４連続希釈で滴定した。Ｖ底９６ウェルプレートにおいて、５．０×１０４のＰＢＭＣをウェルに添加し、これに、滴定されたＦａｂ’−ＸおよびＦａｂ’−Ｙの組合せまたは滴定されたＢＹｂｅを添加した。Ｆａｂ’−ＸおよびＦａｂ’−Ｙの組合せ、またはＢＹｂｅを細胞とともにさらに９０分間インキュベートした。この後、２５μｇ／ｍＬのヤギＦ（ａｂ’）２抗ヒトＩｇＭ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を添加することによって、Ｂ細胞を３７℃＋５％ＣＯ２で１５分間活性化した。次いで、等量のＣｙｔｏｆｉｘ緩衝液（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を添加することにより、シグナル伝達反応を停止させた。次いで、プレートを室温で１５分間放置した後、５００×ｇで５分間遠心分離した。過剰の上清を細胞ペレットから捨て、ＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ＋１％ＢＳＡ＋０．０１％ＮａＮ３＋２ｍＭ  ＥＤＴＡ）に再懸濁し、もう一度洗浄した。次いで、細胞を氷冷Ｐｅｒｍ緩衝液ＩＩＩ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に３０分間再懸濁してから、フロー緩衝液で２回洗浄した。
【１０２４】
次いで、蛍光標識された抗ＣＤ２０抗体（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）ならびに抗リン酸化ＰＬＣγ２、抗リン酸化Ａｋｔおよび抗リン酸化ｐ３８抗体（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で細胞を染色した。次いで、プレートを再懸濁し、暗所において室温で１時間インキュベートした。この後、プレートをさらに２回洗浄し、２０μＬのＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁した。ＣＤ２０ならびにホスホ−ＰＬＣγ２、ホスホ−Ａｋｔおよびホスホ−ｐ３８の細胞発現を、Ｉｎｔｅｌｌｉｃｙｔ  ｉＱＵＥ（登録商標）フローサイトメーターを使用して測定した。
【１０２５】
データ解析ソフトウェアパッケージＦｏｒｅｃｙｔ（商標）（Ｉｎｔｅｌｌｉｃｙｔ）を使用して、Ｂ細胞を他の細胞集団とは異なるものとして同定し、ＰＬＣγ２、Ａｋｔおよびｐ３８レベルの幾何平均を各ウェルについて計算した。次いで、すべてのデータを、最大応答（抗ＩｇＭのみ）からバックグラウンド（細胞のみ）を差し引いた阻害パーセンテージとして表した。
【１０２６】
結果
ＰｈｏｓＦｌｏｗアッセイ：図１５のデータは、Ｆａｂ−Ｋｄ−ＦａｂまたはＢＹｂｅいずれかのフォーマットで抗原ＣＤ７９ｂおよび抗原ＣＤ２２を標的とすることにより、抗ＩｇＭで刺激されたＢ細胞におけるリン酸化ＰＬＣγ２を阻害し得ることを示す。図１６のデータは、Ｆａｂ−Ｋｄ−ＦａｂまたはＢＹｂｅいずれかのフォーマットで抗原ＣＤ７９ｂおよび抗原ＣＤ２２を標的とすることにより、抗ＩｇＭで刺激されたＢ細胞におけるリン酸化Ｐ３８を阻害し得ることを示す。図１７のデータは、Ｆａｂ−Ｋｄ−ＦａｂまたはＢＹｂｅいずれかのフォーマットで抗原ＣＤ７９ｂおよび抗原ＣＤ２２を標的とすることにより、抗ＩｇＭで刺激されたＢ細胞におけるリン酸化Ａｋｔを阻害し得ることを示す。
【１０２７】
活性化マーカーアッセイ：図１８に見られるように、このデータは、Ｆａｂ−Ｋｄ−ＦａｂまたはＢＹｂｅいずれかのフォーマットで抗原ＣＤ７９ｂおよび抗原ＣＤ２２を標的とすることにより、抗ＩｇＭで刺激されたＢ細胞上のＣＤ７１の発現を阻害し得ることを示す。図１９のデータは、Ｆａｂ−Ｋｄ−ＦａｂまたはＢＹｂｅいずれかのフォーマットで抗原ＣＤ７９ｂおよび抗原ＣＤ２２を標的とすることにより、抗ＩｇＭで刺激されたＢ細胞上のＣＤ４０の発現を阻害し得ることを示す。図２０のデータは、Ｆａｂ−Ｋｄ−ＦａｂまたはＢＹｂｅいずれかのフォーマットで抗原ＣＤ７９ｂおよび抗原ＣＤ２２を標的とすることにより、抗ＩｇＭで刺激されたＢ細胞上のＣＤ８６の発現を阻害し得ることを示す。
【実施例９】
【１０２８】
分子的に連結された二重特異性Ｂｙｂｅフォーマットと、インビボ半減期の延長のために抗アルブミン結合ドメインがさらに加えられたものとにおける、抗原ＣＤ７９ｂ＋抗原ＣＤ２２同時標的化の活性の比較。
序論：ヘテロ二量体的につながれたスクリーニング複合体であるＦａｂ−Ｋｄ−Ｆａｂにおいて同定されたＣＤ７９ｂ／ＣＤ２２標的対活性が、抗アルブミン標的化によるインビボ半減期延長を有する、治療的に可能性のある分子的に連結されたフォーマットで同様の望ましい活性に変換され得ることを確認するために、抗アルブミン抗体断片を、配列ＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１７）を有するリンカーを介して、実施例８に記載のＢＹｂｅフォーマットの、抗原ＣＤ２２に対するＦａｂの軽鎖に融合させた。抗原ＣＤ７９ｂ特異性（ＶＲ４４４７）および抗原ＣＤ２２特異性（ＶＲ４１３０およびＶＲ４１２６）を、抗アルブミン断片（ＶＲ０６４５）を加えた場合と、および加えない場合とでＢｙｂｅフォーマットで作製した。
【１０２９】
この実験で使用された構築物の説明。
【表１１】
2018524007.tif 000013
【１０３０】
方法
抗アルブミンというさらなる特異性を有する／有さないＢＹｂｅの精製
ＢＹｂｅ（Ｆａｂ−ｄｓｓｃＦｖ［Ｆａｂ重鎖のＣ末端のｓｃＦｖ］）および抗アルブミンを有するＢＹｂｅ（Ｆａｂ−２ｘｄｓｓｃＦｖ［Ｆａｂ重鎖および軽鎖のＣ末端のｓｃＦｖ］）フォーマットを以下のようにして精製した。標準的なｅｘｐｉＨＥＫまたはＣＨＯ発現からの清澄化された細胞培養上清を、０．２２μｍで滅菌濾過した。濾過した上清を、ＰＢＳ  ｐＨ７．４（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）で平衡化した５０ｍｌのＧａｍｍａｂｉｎｄＰｌｕｓ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  ＸＫ２６カラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に２ｍｌ／分で負荷した。負荷後、カラムをＰＢＳ  ｐＨ７．４で洗浄し、次いで０．１Ｍグリシン／ＨＣｌ、ｐＨ２．７で溶出した。溶出に続いて２８０ｎｍでの吸光度を測定し、溶出ピークを集め、次いで１／２５容積の２Ｍ  Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ、ｐＨ８．５で中和した。中和された試料を、１０ｋＤａまたは３０ｋＤａいずれかの分子量カットオフ膜を有するＡｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５濃縮器およびスイングアウトローターにおける４０００ｘｇでの遠心分離を使用して濃縮した。濃縮した試料を、ｐＨ７．４のＰＢＳで平衡化したＸＫ１６／６０またはＸＫ２６／６０  Ｓｕｐｅｒｄｅｘ  ２００カラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）のいずれかに適用した。カラムは、それぞれ１ｍｌ／分または２．６ｍｌ／分いずれかのＰＢＳ、ｐＨ７．４の定組成勾配で展開した。画分を回収し、ＴＳＫゲルＧ３０００ＳＷＸＬ；５μｍ、７．８×３００ｍｍカラム、１ｍｌ／分で０．２Ｍリン酸塩、ｐＨ７．０の定組成勾配で展開、のサイズ排除クロマトグラフィーによって分析し、２８０ｎｍにおける吸光度によって検出した。選択された単量体画分をプールし、１０ｋＤａまたは３０ｋＤａの分子量カットオフ膜を有するＡｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５濃縮器およびスイングアウトローターにおける４０００ｘｇでの遠心分離を使用して１ｍｇ／ｍｌ超に濃縮した。最終試料をアッセイした；濃度は、Ａ２８０スキャンＵＶ−可視分光光度計（Ｃａｒｙ  ５０Ｂｉｏ）により；単量体％は、ＴＳＫゲルＧ３０００ＳＷＸＬ；５μｍ、７．８×３００ｍｍカラム、１ｍｌ／分で０．２Ｍリン酸塩、ｐＨ７．０の定組成勾配で展開、のサイズ排除クロマトグラフィーにより、および検出は２８０ｎｍにおける吸光度による；還元型および非還元型ＳＤＳ−ＰＡＧＥを４−２０％トリス−グリシン１．５ｍｍゲル（Ｎｏｖｅｘ）において５０ｍＡ（ゲルあたり）で５３分間行い、エンドトキシンについては、Ｌｉｍｕｌｕｓ  Ａｍｅｂｏｃｙｔｅ  Ｌｙｓａｔｅ（ＬＡＬ）試験カートリッジを備えたＣｈａｒｌｅｓ  ＲｉｖｅｒのＥｎｄｏＳａｆｅ（登録商標）ポータブル試験システムによるものであった。
【１０３１】
１００ｎＭの各構築物精製タンパク質を、５人の別個のドナー由来のヒトＰＢＭＣとともに、ＲＭＰＩ１６４０培地＋１０％ウシ胎仔血清および２ｍＭのＧｌｕｔａｍａｘ（Ｒ１０培地）において３７℃／５％ＣＯ２で６０分間プレインキュベートした。６０分後、Ｂ細胞のみを刺激するように設計されたヤギ抗ＩｇＭ抗体、２５ｕｇ／ｍｌにより細胞を刺激した。２４時間後、プレートを氷上に置き、すべてのさらなる細胞活性化を停止させた後、氷冷したフローサイトメトリー緩衝液（ＰＢＳ＋１％ＢＳＡ＋０．０１％ＮａＮ３）で１回洗浄した。すべての上清を除去し、細胞ペレットを再懸濁した。細胞を氷上に置き、抗−ＣＤ１９、−ＣＤ２０、−ＣＤ２７、−ＣＤ７１およびＣＤ８６抗体のカクテルを添加した。細胞を、６０分間インキュベートした後、フローサイトメトリー緩衝液で２回洗浄した。抗−ＣＤ２７、−ＣＤ７１およびＣＤ８６のＣＤ１９／ＣＤ２０陽性Ｂ細胞への結合に関するデータを、ｉＱＵＥハイスループットフローサイトメーターを使用して作成した。Ｆｏｒｅｃｙｔソフトウェアを使用してヒストグラムを作成し、Ｂ細胞に対する抗−ＣＤ２７、−ＣＤ７１およびＣＤ８６抗体の結合についての幾何平均強度の読み取り値を得た。このデータをＥｘｃｅｌにインポートして、阻害パーセンテージの値を各組合せに対して作成した。次いで、データをＧｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍにインポートし、「＋」で示される平均を有する各組合せについて箱ひげ図（ｂｏｘ  ａｎｄ  ｗｈｉｓｋｅｒ  ｃｈａｒｔ）を作成した。
【１０３２】
図２１は、ＶＲ４４４７／ＶＲ４１２６  ＢＹｂｅおよびＶＲ４４４７／ＶＲ４１２６／ＶＲ６４５  ＢＹｂｅ／アルブミンにより誘導される、Ｂ細胞上のＣＤ２７発現の阻害を示す。５人の被験ドナーにわたって、両者は、抗ＩｇＭ誘導性ＣＤ２７に対して一貫して同様のレベルの阻害を示した。図２２は、ＶＲ４４４７／ＶＲ４１２６  ＢＹｂｅおよびＶＲ４４４７／ＶＲ４１２６／ＶＲ６４５  ＢＹｂｅ／アルブミンにより誘導される、Ｂ細胞上のＣＤ７１発現の阻害を示す。５人のドナーにわたって、両者は、抗ＩｇＭ誘導性ＣＤ７１に対して一貫して同様のレベルの阻害を示した。図２３は、ＶＲ４４４７／ＶＲ４１２６  ＢＹｂｅおよびＶＲ４４４７／ＶＲ４１２６／ＶＲ６４５  ＢＹｂｅ／アルブミンにより誘導される、Ｂ細胞上のＣＤ８６発現の阻害を示す。５人のドナーにわたって、両者は、抗ＩｇＭ誘導性ＣＤ８６に対して一貫して同様のレベルの阻害を示した。
【１０３３】
図２４は、ＶＲ４４４７／ＶＲ４１３０  ＢＹｂｅおよびＶＲ４４４７／ＶＲ４１３０／ＶＲ６４５  ＢＹｂｅ／アルブミンにより誘導される、Ｂ細胞上のＣＤ２７発現の阻害を示す。５人の被験ドナーにわたって、両者は、抗ＩｇＭ誘導性ＣＤ２７に対して一貫して同様のレベルの阻害を示した。図２５は、ＶＲ４４４７／ＶＲ４１３０  ＢＹｂｅおよびＶＲ４４４７／ＶＲ４１３０／ＶＲ６４５  ＢＹｂｅ／アルブミンにより誘導される、Ｂ細胞上のＣＤ７１発現の阻害を示す。５人のドナーにわたって、両者は、抗ＩｇＭ誘導性ＣＤ７１に対して一貫して同様のレベルの阻害を示した。図２６は、ＶＲ４４４７／ＶＲ４１３０  ＢＹｂｅおよびＶＲ４４４７／ＶＲ４１３０／ＶＲ６４５  ＢＹｂｅ／アルブミンによって誘導されたＢ細胞上のＣＤ８６発現の阻害を示す。５人のドナーにわたって、両者は、抗ＩｇＭ誘導性ＣＤ８６に対して一貫して同様のレベルの阻害を示した。
【実施例１０】
【１０３４】
抗アルブミンをさらに加えた場合と、または加えない場合との、分子的に連結された二重特異性Ｂｙｂｅを使用した、メモリーＢ細胞機能に対する抗原ＣＤ７９ｂ＋抗原ＣＤ２２の同時標的化の効果。
序論：
ＣＤ７９ｂ／ＣＤ２２の標的化が長期培養でＢ細胞に機能的効果を有するかどうかを評価するために、単離培養またはＰＢＭＣとの混合培養におけるＢ細胞からのＩｇＧ産生を測定した。リコール抗原破傷風トキソイドに対する特異的抗体の測定は、メモリーＢ細胞機能の読み出しを提供する。
【１０３５】
抗原ＣＤ７９ｂ特異性（ＶＲ４４４７）および抗原ＣＤ２２特異性（ＶＲ４１２６、ＶＲ４１２７およびＶＲ４１３０）を、抗アルブミン断片（ＶＲ０６４５）を加えた場合と、または加えない場合とでＢＹｂｅフォーマットで作製した。抗アルブミン抗体断片を、配列ＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１７）を有するリンカーを介して、実施例８に記載のＢＹｂｅフォーマットの抗原ＣＤ２２に対するＦａｂの軽鎖に融合させた。
【１０３６】
この実験で使用された構築物の説明。
【表１２】
2018524007.tif 000014
【１０３７】
方法
抗アルブミンというさらなる特異性を有する／有さないＢＹｂｅの精製
ＢＹｂｅ（Ｆａｂ−ｄｓｓｃＦｖ［Ｆａｂ重鎖のＣ末端のｓｃＦｖ］）および抗アルブミンを有するＢＹｂｅ（Ｆａｂ−２ｘｄｓｓｃＦｖ［Ｆａｂ重鎖および軽鎖のＣ末端のｓｃＦｖ］）フォーマットを実施例９に記載のようにして精製した。
【１０３８】
Ｂ細胞の活性化および破傷風トキソイド特異的ＩｇＧの測定
３人までの別々のドナー由来のヒトＰＢＭＣまたは精製Ｂ細胞を、１６４０培地＋１０％ウシ胎仔血清および２ｍＭのＧｌｕｔａｍａｘ（Ｒ１０培地）中で、５００ｎｇ／ｍｌのＣＤ４０Ｌ、１ｕｇ／ｍｌのＣｐＧおよび５０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−２１により６日間刺激した。精製タンパク質の構築物を、０日目に１００ｎＭの最終濃度で添加し、アッセイ期間中、培養培地中に保持した。６日後、上清を採取し、破傷風トキソイド特異的ＩｇＧの量をＥＬＩＳＡによって検出した。簡潔には、ＭａｘｉｓｏｒｐハーフウェルＥＬＩＳＡプレート（Ｎｕｎｃ）を、ＰＢＳ中１０ｕｇ／ｍｌ破傷風トキソイドで４℃において一晩コーティングした。次いで、プレートを、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含むＰＢＳ中５％ミルク中で２時間ブロックした。上清を希釈し、次いで室温で２時間添加した。プレートをＰＢＳ−０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０で洗浄し、破傷風結合抗体を、５％ミルク−ＰＢＳ  ０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０で１ｕｇ／ｍｌに希釈したペルオキシダーゼ−ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）を用いて検出した。ＴＭＢ基質溶液（ＫＰＬ）を用いてプレートを発色させ、Ｓｙｎｅｒｇｙ  ２マイクロプレートリーダー（Ｂｉｏｔｅｋ）を使用して吸光度を４５０ｎＭにおいて測定した。データをＥｘｃｅｌにエクスポートし、試験抗体なしで培養した細胞と比較して阻害パーセンテージを計算した。次いで、データをＧｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ（登録商標）にインポートし、棒グラフとしてプロットした。
【１０３９】
図２７は、ＶＲ４４４７／ＶＲ４１２６  ＢＹｂｅ、ＶＲ４４４７／ＶＲ４１２７  ＢＹｂｅおよびＶＲ４４４７／ＶＲ４１３０  ＢＹｂｅとともに培養したＰＢＭＣからの破傷風トキソイドＩｇＧ産生の阻害を示す。データは、３人のドナーからプールされたデータを表す。
【１０４０】
図２８は、ＶＲ４４４７／ＶＲ４１２６  ＢＹｂｅ、ＶＲ４４４７／ＶＲ４１２７  ＢＹｂｅおよびＶＲ４４４７／ＶＲ４１３０  ＢＹｂｅとともに培養した精製Ｂ細胞からの破傷風トキソイドＩｇＧ産生の阻害を示す。データは、２人のドナーからプールされたデータを表す。
【１０４１】
図２９は、ＶＲ４４４７／ＶＲ４１２６  ＢＹｂｅ、ＶＲ４４４７／ＶＲ４１２７  ＢＹｂｅ、ＶＲ４４４７／ＶＲ４１３０  ＢＹｂｅ、ＶＲ４４４７／ＶＲ４１２６／ＶＲ６４５  ＢＹｂｅ／アルブミンおよびＶＲ４４４７／ＶＲ４１３０／ＶＲ６４５  ＢＹｂｅ／アルブミンとともに培養したＰＢＭＣまたは精製Ｂ細胞のいずれかからの破傷風トキソイドＩｇＧ産生の阻害を示す。示されたデータは単一ドナー由来である。
【実施例１１】
【１０４２】
ＳＬＥ患者Ｂ細胞におけるＢＣＲシグナル伝達の調節不全およびＳＬＥ  Ｂ細胞機能に対する抗原ＣＤ７９ｂ＋抗原ＣＤ２２の同時標的化の効果。
序論：ＣＤ７９ｂ／ＣＤ２２の組合せが自己免疫疾患の人々を治療するために使用できるかどうかを評価するために、本発明者らは全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）患者由来のＢ細胞をモデル系として使用した。ＣＤ７９ｂ／ＣＤ２２の組合せ（ＶＲ４４４７／ＶＲ４１３０）の影響を、Ｂ細胞機能に関与することが知られているが、健常なボランティアと比較してＳＬＥ患者で調節不全であるシグナル伝達タンパク質の活性化状態について試験した。この実験では、１２人のＳＬＥ患者および１２人の健常なボランティア由来のＢ細胞を、活性化状態にあるＣＤ７９ｂおよびＣＤ２２を同時標的化する効果について比較した。
【１０４３】
方法：
ＰｈｏｓＦｌｏｗアッセイ：すべてのアッセイは、２ｘ１０５  ＰＢＭＣ／ウェルを使用して行った。
処理した試料において、抗原ＣＤ７９ｂおよび抗原ＣＤ２２特異的ＢＹｂｅを、１００ｎＭの濃度で試験した。健常なボランティアおよびＳＬＥ患者由来の両方のＰＢＭＣをＢＹｂｅとともに３７℃で９０分間プレインキュベートした。未処理試料では、このインキュベーション期間中にＢＹｂｅは単に省略された。この後、２５μｇ／ｍＬのヤギＦ（ａｂ’）２抗ヒトＩｇＭ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）により、細胞を３７℃＋５％ＣＯ２において１０分間活性化し、固定液（Ｃｙｔｏｆｉｘ−ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）の添加により反応を停止させた。非刺激試料では、抗ヒトＩｇＭは、このインキュベーション期間中に単に省略された。室温で１５分後、細胞をペレット化し（５００ｘｇで５分間）、次いで氷冷ｐｅｒｍ  ｂｕｆｆｅｒ  ＩＩＩ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に再懸濁し、その後フロー緩衝液（ＰＢＳ＋１％ＢＳＡ＋０．０１％ＮａＮ３＋２ｍＭ  ＥＤＴＡ）で２回洗浄した。次いで、細胞を抗−ＣＤ２０、抗リン酸化（ｐ）ＮＦ−κＢ、抗ｐＳｙｋ、抗ｐＡｔｋならびに抗ｐＥｒｋ１および２で染色し、暗所において室温で１時間インキュベートした。最後に、プレートをフロー緩衝液で２回洗浄した後、ｉＱＵＥフローサイトメーター（Ｉｎｔｅｌｌｉｃｙｔ）で測定した。次に、Ｂ細胞におけるｐＮＦ−κＢ、ｐＳｙｋ、ｐＡｋｔならびにｐＥｒｋ１および２の発現の幾何平均（平均蛍光強度、ＭＦＩ）を計算し、グラフ形式で表した。
【１０４４】
結果：
図３０は、ＮＦ−κＢ、Ｓｙｋ、ＡｋｔならびにＥｒｋ１および２（非刺激および未処理）のリン酸化ベースラインが、健常なボランティア由来Ｂ細胞と比較して、ＳＬＥ患者のＢ細胞において上昇することを示す。
【１０４５】
図３１〜３４は、ＣＤ７９／ＣＤ２２  ＢＹｂｅが、健常なボランティアおよびＳＬＥ患者においてｐＮＦ−κＢ、ｐＳｙｋ、ｐＡｋｔならびにｐＥｒｋ１および２を等しく阻害し得ることを示す。
【１０４６】
結論：
このデータは、健常なボランティアと比較した場合、ＳＬＥ患者由来のＢ細胞がすべてのインビトロ刺激の前に活性化されていることを示している。Ｂ細胞受容体を介して細胞を刺激すると、健常なボランティアおよびＳＬＥ患者の両方は、バックグラウンドシグナルと比較して高レベルの活性化を示す。健常なボランティアおよびＳＬＥ患者の両方において、このシグナルは、ＣＤ７９ｂ／ＣＤ２２の組合せによって実質的にブロックされる。このデータは、ＣＤ７９ｂ／ＣＤ２２の組合せが、健常なボランティアおよび基礎自己免疫疾患を有する人々に由来する両方のＢ細胞を阻害できることを示し、この経路がＢ細胞活性化に本質的に重要であることを示している。
【実施例１２】
【１０４７】
ヒト化方法
前記実施例において得られ、図３５に提供されるウサギ抗体のヒト化型を、ウサギ抗体Ｖ領域由来のＣＤＲをヒト生殖系列抗体Ｖ領域フレームワークに移植することによって設計した。抗体活性回復の可能性を改善するために、ウサギＶ領域由来の多数のフレームワーク残基も、設計されたヒト化配列中に保持した。これらの残基は、Ａｄａｉｒら（１９９１年）（Ｈｕｍａｎｉｓｅｄ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ。国際公開第９１／０９９６７号パンフレット）によって概説されたプロトコルを使用して選択した。ドナーからアクセプター配列に移植されたＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａ／Ｋａｂａｔの組合せの定義が使用されるＣＤＲＨ１を除いて、Ｋａｂａｔ（Ｋａｂａｔら、１９８７）によって定義された通りである（Ａｄａｉｒら、１９９１年、Ｈｕｍａｎｉｓｅｄ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．国際公開第９１／０９９６７号パンフレットを参照されたい）。一般に、ウサギ抗体のＶＨ遺伝子は、選択されたヒトＶＨアクセプター遺伝子よりも短い。ヒトアクセプター配列とアライメントした場合、ウサギ抗体のＶＨ領域のフレームワーク１は、典型的には、ヒト化抗体に保持されるＮ末端残基を欠いている。ウサギ抗体ＶＨ領域のフレームワーク３はまた、典型的には、ベータシート鎖ＤおよびＥの間のループにおいて１つまたは２つの残基（７５または７５および７６）を欠いている：ヒト化抗体において、ギャップは選択されたヒトアクセプター配列由来の対応する残基で満たされる。
【１０４８】
ヒト化配列を図３５に提供し、ドナー残基を太字および下線で示す。変異体ＣＤＲ配列もまた提供される。
【１０４９】
ＣＤ７９抗体  Ａｂ４４４７
ヒトＶ領域ＩＧＫＶ１Ｄ−１３＋ＪＫ４  Ｊ領域（ＩＭＧＴ、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／）を、抗体４４４７軽鎖ＣＤＲのアクセプターとして選択した。ＣＤＲに加えて、４４４７ＶＫ遺伝子由来の以下のフレームワーク残基（ドナー残基）：グルタミン（Ｑ２）、バリン（Ｖ３）、ロイシン（Ｌ３６）、グルタミン（Ｑ４６）、ヒスチジン（Ｈ４９）およびグルタミン（Ｑ７０）の１つまたは複数は、それぞれ、２、３、３６、４６、４９および７０位（Ｋａｂａｔナンバリング）に保持され得る。
【１０５０】
ヒトＶ領域ＩＧＨＶ３−４８＋ＪＨ４  Ｊ領域（ＩＭＧＴ、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／）を抗体４４４７の重鎖ＣＤＲのアクセプターとして選択した。ＣＤＲに加えて、４４４７ＶＨ遺伝子由来の以下のフレームワーク残基（ドナー残基）：バリン（Ｖ２４）、イソロイシン（Ｉ４８）、グリシン（Ｇ４９）、リジン（Ｋ７１）、セリン（Ｓ７３）およびバリン（Ｖ７８）の１つまたは複数は、それぞれ、２４、４８、４９、７１、７３および７８位（Ｋａｂａｔナンバリング）に保持され得る。
【１０５１】
ヒトＶ領域ＩＧＨＶ４−５９＋ＪＨ４  Ｊ領域（ＩＭＧＴ、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／）を、抗体４４４７の重鎖ＣＤＲの別のアクセプターとして選択した。ＣＤＲに加えて、４４４７ＶＨ遺伝子由来の以下のフレームワーク残基（ドナー残基）：バリン（Ｖ３７）、フェニルアラニン（Ｆ６７）、リジン（Ｋ７１）、セリン（Ｓ７３）およびバリン（Ｖ７８）の１つまたは複数は、それぞれ、３７、６７、７１、７３および７８位（Ｋａｂａｔナンバリング）に保持され得る。ヒトフレームワークの１位のグルタミン残基をグルタミン酸（Ｅ１）で置換して、均質な生成物の発現および精製を得た：抗体および抗体断片のＮ末端でグルタミンからピログルタミン酸への変換が広く報告されている。場合によっては、ＣＤＲＬ３を、１対のシステイン残基を除去するように変異させることができる（ＣＤＲＬ３変異体）。
【１０５２】
ＣＤ７９抗体  Ａｂ４４５０
ヒトＶ領域ＩＧＫＶ１−６＋ＪＫ４  Ｊ領域（ＩＭＧＴ、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／）を、抗体４４５０軽鎖ＣＤＲのアクセプターとして選択した。ＣＤＲに加えて、４４５０ＶＫ遺伝子由来の以下のフレームワーク残基（ドナー残基）：アスパラギン酸（Ｄ３）およびグルタミン（Ｑ７０）の１つまたは複数は、それぞれ、３および７０位（Ｋａｂａｔナンバリング）に保持され得る。場合によっては、ＣＤＲＬ３を、潜在的なアスパラギン酸異性化部位を改変するように変異させることができる（ＣＤＲＬ３変異体１〜３）。
【１０５３】
ヒトＶ領域ＩＧＨＶ３−６６＋ＪＨ４  Ｊ領域（ＩＭＧＴ、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／）を、抗体４４５０の重鎖ＣＤＲのアクセプターとして選択した。ＣＤＲに加えて、４４５０ＶＨ遺伝子由来の以下のフレームワーク残基（ドナー残基）：バリン（Ｖ２４）、イソロイシン（Ｉ４８）、グリシン（Ｇ４９）、セリン（Ｓ７３）およびバリン（Ｖ７８）の１つまたは複数は、それぞれ、２４、４８、４９、７３および７８位（Ｋａｂａｔナンバリング）に保持され得る。
【１０５４】
ヒトＶ領域ＩＧＨＶ４−５９＋ＪＨ４  Ｊ領域（ＩＭＧＴ、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／）を、抗体４４５０の重鎖ＣＤＲの別のアクセプターとして選択した。ＣＤＲに加えて、４４５０ＶＨ遺伝子由来の以下のフレームワーク残基（ドナー残基）：バリン（Ｖ３７）、フェニルアラニン（Ｆ６７）、アルギニン（Ｒ７１）、セリン（Ｓ７３）およびバリン（Ｖ７８）の１つまたは複数は、それぞれ、３７、６７、７１、７３、７８位（Ｋａｂａｔナンバリング）に保持され得る。ヒトフレームワークの１位のグルタミン残基をグルタミン酸（Ｅ１）で置換して、均質な生成物の発現および精製を得た。
【１０５５】
ＣＤ２２抗体  Ａｂ４１２０
ヒトＶ領域ＩＧＫＶ１Ｄ−１３＋ＪＫ４  Ｊ領域（ＩＭＧＴ、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／）を、抗体４１２０軽鎖ＣＤＲのアクセプターとして選択した。ＣＤＲに加えて、４１２０ＶＫ遺伝子由来の以下のフレームワーク残基（ドナー残基）：フェニルアラニン（Ｆ２）およびグルタミン酸（Ｅ３）の１つまたは複数は、それぞれ、２および３位（Ｋａｂａｔナンバリング）に保持され得る。
【１０５６】
ヒトＶ領域ＩＧＨＶ３−３３＋ＪＨ４  Ｊ領域（ＩＭＧＴ、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／）を、抗体４１２０の重鎖ＣＤＲのアクセプターとして選択した。ＣＤＲに加えて、４１２０ＶＨ遺伝子由来の以下のフレームワーク残基（ドナー残基）：ロイシン（Ｌ１１）、イソロイシン（Ｉ４８）、リジン（Ｋ７１）、セリン（Ｓ７３）、スレオニン（Ｔ７６）およびバリン（Ｖ７８）の１つまたは複数は、それぞれ、１１、４８、７１、７３、７６、および７８位（Ｋａｂａｔナンバリング）に保持され得る。ヒトフレームワークの１位のグルタミン残基をグルタミン酸（Ｅ１）で置換して、均質な生成物の発現および精製を得た。場合によっては、ＣＤＲＨ１およびＣＤＲＨ２を、システイン残基を除去するように変異させることができる（それぞれＣＤＲＨ１変異体およびＣＤＲＨ２変異体）。
【１０５７】
ヒトＶ領域ＩＧＨＶ４−３８−２＋ＪＨ４  Ｊ領域（ＩＭＧＴ、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／）を、抗体４１２０の重鎖ＣＤＲの別のアクセプターとして選択した。ＣＤＲに加えて、４１２０ＶＨ遺伝子由来の以下のフレームワーク残基（ドナー残基）：アラニン（Ａ２４）、バリン（Ｖ３７）、アラニン（Ａ４９）、フェニルアラニン（Ｆ６７）、リジン（Ｋ７１）、セリン（Ｓ７３）、スレオニン（Ｔ７６）、およびバリン（Ｖ７８）の１つまたは複数は、それぞれ、２４、３７、４９、６７、７１、７３、７６および７８位（Ｋａｂａｔナンバリング）に保持され得る。ヒトフレームワークの１位のグルタミン残基をグルタミン酸（Ｅ１）で置換して、均質な生成物の発現および精製を得た。場合によっては、ＣＤＲＨ１およびＣＤＲＨ２を、システイン残基を除去するように変異させることができる（それぞれＣＤＲＨ１変異体およびＣＤＲＨ２変異体）。
【１０５８】
ＣＤ２２抗体  Ａｂ４１２６
ヒトＶ領域ＩＧＫＶ１−５＋ＪＫ４  Ｊ領域（ＩＭＧＴ、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／）を、抗体４１２６軽鎖ＣＤＲのアクセプターとして選択した。ＣＤＲに加えて、４１２６  ＶＫ遺伝子由来の以下のフレームワーク残基（ドナー残基）：バリン（Ｖ３）およびグルタミン（Ｑ７０）の１つまたは複数は、それぞれ、３、および７０位（Ｋａｂａｔナンバリング）に保持され得る。
【１０５９】
ヒトＶ領域ＩＧＨＶ３−７＋ＪＨ４  Ｊ領域（ＩＭＧＴ、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／）を、抗体４１２６の重鎖ＣＤＲのアクセプターとして選択した。ＣＤＲに加えて、４１２６ＶＨ遺伝子由来の以下のフレームワーク残基（ドナー残基）：リジン（Ｋ７１）、セリン（Ｓ７３）、スレオニン（Ｔ７６）およびバリン（Ｖ７８）の１つまたは複数は、それぞれ、７１、７３、７６、および７８位（Ｋａｂａｔナンバリング）に保持され得る。場合によっては、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３を、システイン残基を除去するように変異させることができる（それぞれＣＤＲＨ１変異体、ＣＤＲＨ２変異体およびＣＤＲＨ３変異体）。
【１０６０】
ヒトＶ領域ＩＧＨＶ４−４＋ＪＨ４  Ｊ領域（ＩＭＧＴ、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／）を、抗体４１２６の重鎖ＣＤＲの別のアクセプターとして選択した。ＣＤＲに加えて、４１２６ＶＨ遺伝子由来の以下のフレームワーク残基（ドナー残基）：アラニン（Ａ２４）、バリン（Ｖ４８）、アラニン（Ａ４９）、フェニルアラニン（Ｆ６７）、リジン（Ｋ７１）、セリン（Ｓ７３）、スレオニン（Ｔ７６）、およびバリン（Ｖ７８）の１つまたは複数は、それぞれ、２４、４８、４９、６７、７１、７３、７６および７８位（Ｋａｂａｔナンバリング）に保持され得る。ヒトフレームワークの１位のグルタミン残基をグルタミン酸（Ｅ１）で置換して、均質な生成物の発現および精製を得た。場合によっては、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３を、システイン残基を除去するように変異させることができる（それぞれＣＤＲＨ１変異体、ＣＤＲＨ２変異体およびＣＤＲＨ３変異体）。
【１０６１】
ＣＤ２２抗体  Ａｂ４１２７
ヒトＶ領域ＩＧＫＶ１−５＋ＪＫ４  Ｊ領域（ＩＭＧＴ、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／）を、抗体４１２７軽鎖ＣＤＲのアクセプターとして選択した。ＣＤＲに加えて、４１２７ＶＫ遺伝子由来の以下のフレームワーク残基（ドナー残基）：アラニン（Ａ１）、バリン（Ｖ３）およびグルタミン（Ｑ７０）の１つまたは複数は、それぞれ、１、３、および７０位（Ｋａｂａｔナンバリング）に保持され得る。場合によっては、ＣＤＲＬ３を、潜在的なアスパラギン酸異性化部位を改変するように変異させることができる（ＣＤＲＬ３変異体１〜１５）。
【１０６２】
ヒトＶ領域ＩＧＨＶ３−９＋ＪＨ４  Ｊ領域（ＩＭＧＴ、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／）を、抗体４１２７の重鎖ＣＤＲのアクセプターとして選択した。ＣＤＲに加えて、４１２７ＶＨ遺伝子由来の以下のフレームワーク残基（ドナー残基）：ロイシン（Ｌ４７）、イソロイシン（Ｉ４８）、グリシン（Ｇ４９）、リジン（Ｋ７１）、セリン（Ｓ７３）、スレオニン（Ｔ７６）、バリン（Ｖ７８）およびアルギニン（Ｒ９４）の１つまたは複数は、それぞれ、４７、４８、４９、７１、７３、７６、７８および９４位（Ｋａｂａｔナンバリング）に保持され得る。場合によっては、ＣＤＲＨ１およびＣＤＲＨ２を、システイン残基を除去するように変異させることができる（それぞれＣＤＲＨ１変異体およびＣＤＲＨ２変異体）。
【１０６３】
ヒトＶ領域ＩＧＨＶ４−３８−２＋ＪＨ４  Ｊ領域（ＩＭＧＴ、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／）を、抗体４１２７の重鎖ＣＤＲの別のアクセプターとして選択した。ＣＤＲに加えて、４１２７ＶＨ遺伝子由来の以下のフレームワーク残基（ドナー残基）：アラニン（Ａ２４）、バリン（Ｖ３７）、ロイシン（Ｌ４７）、フェニルアラニン（Ｆ６７）、リジン（Ｋ７１）、セリン（Ｓ７３）、スレオニン（Ｔ７６）、およびバリン（Ｖ７８）の１つまたは複数は、それぞれ、２４、３７、４７、６７、７１、７３、７６および７８位（Ｋａｂａｔナンバリング）に保持され得る。ヒトフレームワークの１位のグルタミン残基をグルタミン酸（Ｅ１）で置換して、均質な生成物の発現および精製を得た。場合によっては、ＣＤＲＨ１およびＣＤＲＨ２を、システイン残基を除去するように変異させることができる（それぞれＣＤＲＨ１変異体およびＣＤＲＨ２変異体）。
【１０６４】
ＣＤ２２抗体  Ａｂ４１２８
ヒトＶ領域ＩＧＫＶ１−５＋ＪＫ４  Ｊ領域（ＩＭＧＴ、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／）を、抗体４１２８軽鎖ＣＤＲのアクセプターとして選択した。ＣＤＲに加えて、４１２８ＶＫ遺伝子由来の以下のフレームワーク残基（ドナー残基）：バリン（Ｖ３）、フェニルアラニン（Ｆ３６）、リジン（Ｋ６３）、アスパラギン酸（Ｄ６５）、アルギニン（Ｒ６６）およびチロシン（Ｙ７１）の１つまたは複数は、それぞれ、３、３６、６３、６５、６６および７１位（Ｋａｂａｔナンバリング）に保持され得る。
【１０６５】
ヒトＶ領域ＩＧＨＶ３−３３＋ＪＨ４  Ｊ領域（ＩＭＧＴ、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／）を、抗体４１２８の重鎖ＣＤＲのアクセプターとして選択した。ＣＤＲに加えて、４１２８ＶＨ遺伝子由来の以下のフレームワーク残基（ドナー残基）：ロイシン（Ｌ１１）、リジン（Ｋ２３）、グリシン（Ｇ２４）、イソロイシン（Ｉ４８）、リジン（Ｋ７１）、セリン（Ｓ７３）、スレオニン（Ｔ７６）およびバリン（Ｖ７８）の１つまたは複数は、それぞれ、１１、２３、２４、４８、７１、７３、７６、および７８位（Ｋａｂａｔナンバリング）に保持され得る。ヒトフレームワークの１位のグルタミン残基をグルタミン酸（Ｅ１）で置換して、均質な生成物の発現および精製を得た。場合によっては、ＣＤＲＨ１およびＣＤＲＨ２を、システイン残基を除去するように変異させることができる（それぞれＣＤＲＨ１変異体およびＣＤＲＨ２変異体）。
【１０６６】
ヒトＶ領域ＩＧＨＶ４−５９＋ＪＨ４  Ｊ領域（ＩＭＧＴ、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／）を、抗体４１２８の重鎖ＣＤＲの別のアクセプターとして選択した。ＣＤＲに加えて、４１２８ＶＨ遺伝子由来の以下のフレームワーク残基（ドナー残基）：リジン（Ｋ２３）、グリシン（Ｇ２４）、バリン（Ｖ３７）、アラニン（Ａ４９）、フェニルアラニン（Ｆ６７）、リジン（Ｋ７１）、セリン（Ｓ７３）、スレオニン（Ｔ７６）、およびバリン（Ｖ７８）の１つまたは複数は、それぞれ、２３、２４、３７、４９、６７、７１、７３、７６および７８位（Ｋａｂａｔナンバリング）に保持され得る。ヒトフレームワークの１位のグルタミン残基をグルタミン酸（Ｅ１）で置換して、均質な生成物の発現および精製を得た。場合によっては、ＣＤＲＨ１およびＣＤＲＨ２を、システイン残基を除去するように変異させることができる（それぞれＣＤＲＨ１変異体およびＣＤＲＨ２変異体）。
【１０６７】
ＣＤ２２抗体  Ａｂ４１３０
ヒトＶ領域ＩＧＫＶ１−９＋ＪＫ４  Ｊ領域（ＩＭＧＴ、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／）を、抗体４１３０軽鎖ＣＤＲのアクセプターとして選択した。ＣＤＲに加えて、４１３０ＶＫ遺伝子由来の以下のフレームワーク残基（ドナー残基）：アラニン（Ａ１）、アラニン（Ａ２）およびバリン（Ｖ３）の１つまたは複数は、それぞれ、１、２および３位（Ｋａｂａｔナンバリング）に保持され得る。
【１０６８】
ヒトＶ領域ＩＧＨＶ３−６６＋ＪＨ４  Ｊ領域（ＩＭＧＴ、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／）を、抗体４１３０の重鎖ＣＤＲのアクセプターとして選択した。ＣＤＲに加えて、４１３０ＶＨ遺伝子由来の以下のフレームワーク残基（ドナー残基）：イソロイシン（Ｉ４８）、グリシン（Ｇ４９）、バリン（Ｖ６７）、リジン（Ｋ７１）、セリン（Ｓ７３）、スレオニン（Ｔ７６）およびバリン（Ｖ７８）の１つまたは複数は、それぞれ、４８、４９、６７、７１、７３、７６および７８位（Ｋａｂａｔナンバリング）に保持され得る。場合によりＣＤＲＨ２は、システイン残基を除去し、および／または潜在的なアスパラギン脱アミド部位を改変するように変異させることができる（ＣＤＲＨ２変異体１−５）。ＣＤＲＨ３もまた、潜在的なアスパラギン脱アミド部位を改変するように変異させることができる（ＣＤＲＨ３変異体１−２）。
【１０６９】
ヒトＶ領域ＩＧＨＶ４−４＋ＪＨ４  Ｊ領域（ＩＭＧＴ、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／）を、抗体４１３０の重鎖ＣＤＲの別のアクセプターとして選択した。ＣＤＲに加えて、４１３０ＶＨ遺伝子由来の以下のフレームワーク残基（ドナー残基）：アラニン（Ａ２４）、リジン（Ｋ７１）、セリン（Ｓ７３）、スレオニン（Ｔ７６）およびバリン（Ｖ７８）の１つまたは複数は、それぞれ、２４、７１、７３、７６、および７８位（Ｋａｂａｔナンバリング）に保持され得る。ヒトフレームワークの１位のグルタミン残基をグルタミン酸（Ｅ１）で置換して、均質な生成物の発現および精製を得た。場合によりＣＤＲＨ２は、システイン残基を除去し、および／または潜在的なアスパラギン脱アミド部位を改変するように変異させることができる（ＣＤＲＨ２変異体１−５）。ＣＤＲＨ３もまた、潜在的なアスパラギン脱アミド部位を改変するように変異させることができる（ＣＤＲＨ３変異体１−２）。
【１０７０】
ＣＤ２２抗体  Ａｂ４１３２
ヒトＶ領域ＩＧＫＶ１−５＋ＪＫ４  Ｊ領域（ＩＭＧＴ、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／）を、抗体４１３２軽鎖ＣＤＲのアクセプターとして選択した。ＣＤＲに加えて、４１３２ＶＫ遺伝子由来の以下のフレームワーク残基（ドナー残基）：バリン（Ｖ３）およびチロシン（Ｙ７１）の１つまたは複数は、それぞれ３および７１位（Ｋａｂａｔナンバリング）に保持され得る。
【１０７１】
ヒトＶ領域ＩＧＨＶ３−２１＋ＪＨ４  Ｊ領域（ＩＭＧＴ、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／）を、抗体４１３２の重鎖ＣＤＲのアクセプターとして選択した。ＣＤＲに加えて、４１３２ＶＨ遺伝子由来の以下のフレームワーク残基（ドナー残基）：セリン（Ｓ４８）、グリシン（Ｇ４９）、アスパラギン（Ｎ７１）、セリン（Ｓ７３）、スレオニン（Ｔ７６）およびバリン（Ｖ７８）の１つまたは複数は、それぞれ、４８、４９、７１、７３、７６および７８位（Ｋａｂａｔナンバリング）に保持され得る。場合によっては、システイン残基を除去するように、ＣＤＲＨ１を変異させることができる（ＣＤＲＨ１変異体）。ＣＤＲＨ２もまた、システイン残基を除去し、および／または潜在的なアスパラギン脱アミド部位を改変するように変異させることができる（ＣＤＲＨ２変異体１−５）。
【１０７２】
ヒトＶ領域ＩＧＨＶ４−４＋ＪＨ４  Ｊ領域（ＩＭＧＴ、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／）を、抗体４１３２の重鎖ＣＤＲの別のアクセプターとして選択した。ＣＤＲに加えて、４１３２ＶＨ遺伝子由来の以下のフレームワーク残基（ドナー残基）：アラニン（Ａ２４）、セリン（Ｓ４８）、フェニルアラニン（Ｆ６７）、アスパラギン（Ｎ７１）、セリン（Ｓ７３）、スレオニン（Ｔ７６）およびバリン（Ｖ７８）の１つまたは複数は、それぞれ、２４、４８、６７、７１、７３、７６および７８位（Ｋａｂａｔナンバリング）に保持され得る。ヒトフレームワークの１位のグルタミン残基をグルタミン酸（Ｅ１）で置換して、均質な生成物の発現および精製を得た。場合によっては、システイン残基を除去するように、ＣＤＲＨ１を変異させることができる（ＣＤＲＨ１変異体）。ＣＤＲＨ２もまた、システイン残基を除去し、および／または潜在的なアスパラギン脱アミド部位を改変するように変異させることができる（ＣＤＲＨ２変異体１−５）。
【図１】
2018524007.tif 000015
【図２】
2018524007.tif 000016
【図３】
2018524007.tif 000017
【図４】
2018524007.tif 000018
【図５】
2018524007.tif 000019
【図６】
2018524007.tif 000020
【図７】
2018524007.tif 000021
【図８】
2018524007.tif 000022
【図９−１】
2018524007.tif 000023
【図９−２】
2018524007.tif 000024
【図１０】
2018524007.tif 000025
【図１１】
2018524007.tif 000026
【図１２】
2018524007.tif 000027
【図１３】
2018524007.tif 000028
【図１４】
2018524007.tif 000029
【図１５】
2018524007.tif 000030
【図１６】
2018524007.tif 000031
【図１７】
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【図１８】
2018524007.tif 000033
【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
2018524007.tif 000039
【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
2018524007.tif 000045
【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
2018524007.tif 000048
【図３４】
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【図３５−１】
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【図３５−２】
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【図３５−３】
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【図３５−４】
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【図３５−５】
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【図３５−６】
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【図３５−７】
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【図３５−８】
2018524007.tif 000057
【図３５−９】
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【図３５−１０】
2018524007.tif 000059
【図３５−１１】
2018524007.tif 000060
【図３５−１２】
2018524007.tif 000061
【図３５−１３】
2018524007.tif 000062
【配列表】
2018524007000001.app
【国際調査報告】
2018524007.tif 000063
2018524007.tif 000064
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