(57)【要約】  本発明は、食品保存の分野に関し、より具体的には、別の抗微生物剤と組み合わせた、食品の保存における抗微生物剤としての使用のためのキサントフモールを含む組成物に関する。特に、本発明は、乳酸菌に対する抗微生物組成物としての、キサントフモールとさらなる抗微生物剤とを含む組成物の使用を提供する。このような組成物およびこのような組成物を含む食品も、本発明に包含される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
乳酸菌および／またはカビに対する抗微生物剤としての組成物の使用であって、当該組成物は、第１の微生物剤としての式（１）
【化１】
2018537430.tif 000012
を有するキサントフモールまたはその塩と、第２またはさらなる微生物剤とを含む、使用。
【請求項２】
前記第２またはさらなる抗微生物剤が、抗真菌剤であり、好ましくは、抗カビ剤および／または抗酵母剤および／または乳酸菌に対して活性な薬剤である、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記第２またはさらなる抗微生物剤が、プロピオン酸塩および酢酸塩；ケイ皮酸またはその塩、好ましくはケイ皮酸カリウム；セダー油；有機酸、例えば、プロピオン酸、乳酸もしくは酢酸、またはこれらの塩、好ましくは、プロピオン酸カルシウム、ラクチド、ＡＣＥ５０；またはこれらの薬剤のいずれかの組合せを含む、プロピオニバクテリウム（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）によって発酵した糖組成物から選択される、請求項１または２に記載の使用。
【請求項４】
前記第２またはさらなる抗微生物剤が、有機酸、好ましくはプロピオン酸またはその塩、最も好ましくはプロピオン酸カルシウムから選択される、請求項１〜３のいずれかに記載の使用。
【請求項５】
前記第２またはさらなる抗微生物剤が、乳酸菌および／またはカビに対する抗微生物剤として、プロピオン酸塩および酢酸塩、好ましくは、Ｖｅｒｄａｄ  Ｆ９５を含む、プロピオニバクテリウム（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）によって発酵した糖組成物から選択される、請求項１〜４のいずれかに記載の使用。
【請求項６】
前記組成物が、ラクトバチルス・アシドフィルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｄｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトバチルス・ブレビス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｒｅｖｉｓ）、ラクトバチルス・カルバタス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｕｒｖａｔｕｓ）、ラクトバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ）、ラクトバチルス・ファルシミニス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆａｒｃｉｍｉｎｉｓ）、ラクトバチルス・スンキイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｎｋｉｉ）、ラクトバチルス・フルクティボランス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆｒｕｃｔｉｖｏｒａｎｓ）、ロイコノストック・メセンテロイデス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ  ｍｅｓｅｎｔｅｒｉｏｄｅｓ）に対する、またはこれらの組合せに対する抗微生物剤として使用される、請求項１〜５のいずれかに記載の使用。
【請求項７】
前記組成物が、ムコール・プランベウス（Ｍｕｃｏｒ  ｐｌｕｍｂｅｕｓ）、アスペルギルス・フラバス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｌａｖｕｓ）、アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）、ペシロミセス・バリオッティ（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ  ｖａｒｉｏｔｉｉ）、フザリウム・オキシスポルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）、リゾプス・ストロニファー（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｓｔｏｌｏｎｉｆｅｒ）、ペニシリウム・ロックフォルティ（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｒｏｑｕｅｆｏｒｔｉ）に対する、またはこれらの組合せに対する抗微生物剤として使用される、請求項１〜６のいずれかに記載の使用。
【請求項８】
前記組成物が、フムルス・ルプルス（Ｈｕｍｕｌｕｓ  ｌｕｐｕｌｕｓ）の抽出物を含み、この抽出物が、乾燥重量基準で少なくとも２重量％のキサントフモール、好ましくは少なくとも５０重量％のキサントフモール、最も好ましくは少なくとも８０重量％のキサントフモールを含む、請求項１〜７のいずれかに記載の使用。
【請求項９】
フムルス・ルプルス（Ｈｕｍｕｌｕｓ  ｌｕｐｕｌｕｓ）の抽出物が、水抽出物であり、
ａ）超臨界二酸化炭素抽出法および／またはエタノール抽出法によって、フムルス・ルプルス（Ｈｕｍｕｌｕｓ  ｌｕｐｕｌｕｓ）の抽出物を調製する工程と、
ｂ）得られた抽出物を６０℃以上で水抽出し、フムルス・ルプルス（Ｈｕｍｕｌｕｓ  ｌｕｐｕｌｕｓ）の水抽出物にする工程と
を含む方法によって調製されたものである、請求項８に記載の使用。
【請求項１０】
前記組成物が、少なくとも１％の希釈剤、好ましくは、水、エタノール、油、プロピレングリコール、より好ましくは、水、プロピレングリコール、またはこれらの組合せを含む、請求項１〜９のいずれかに記載の使用。
【請求項１１】
前記組成物が、食品に抗微生物剤として、好ましくは、新鮮な食肉、鶏肉、魚、調理済の食肉、即席食品、ソース、ペストリー、パン、ベーカリー製品または液体食品に抗微生物剤として使用される、請求項１〜１０のいずれかに記載の使用。
【請求項１２】
前記食品が、０．０００１０〜０．０５重量％、好ましくは０．００１０〜０．０１重量％のキサントフモールまたはその食用の塩を含む、請求項１〜１１のいずれかに記載の使用。
【請求項１３】
食品に使用するのに適した抗微生物組成物であって、
−０．００１〜５０重量％の式（１）
【化２】
2018537430.tif 000013
を有するキサントフモールまたはその塩と、
−０．０１〜２０重量％の少なくとも１つの追加の抗微生物剤と
を含む、抗微生物組成物。
【請求項１４】
担体として６０〜９９重量％の珪藻土をさらに含む、請求項１３に記載の抗微生物組成物。
【請求項１５】
前記追加の抗微生物剤が、抗真菌剤であり、好ましくは、抗カビ剤および／または抗酵母剤および／または乳酸菌に対して活性な薬剤である、請求項１３または１４に記載の抗微生物組成物。
【請求項１６】
前記第２またはさらなる抗微生物剤が、プロピオン酸塩および酢酸塩；ケイ皮酸またはその塩、好ましくはケイ皮酸カリウム；セダー油；有機酸、例えば、プロピオン酸、乳酸もしくは酢酸、またはこれらの塩、好ましくは、プロピオン酸カルシウム、ラクチド、ＡＣＥ５０；またはこれらの薬剤のいずれかの組合せを含む、プロピオニバクテリウム（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）によって発酵した糖組成物から選択される、請求項１３〜１５のいずれかに記載の抗微生物組成物。
【請求項１７】
前記組成物が、
−０．００１〜５０重量％のキサントフモールと、
−０．０１〜２０重量％のセダー油またはプロピオン酸またはこれらの塩、好ましくは、プロピオン酸カルシウム、またはプロピオン酸塩と酢酸塩を含むプロピオニバクテリウム（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）によって発酵した糖組成物と、
−６０〜９９重量％の珪藻土と
を含む、請求項１３〜１６のいずれかに記載の抗微生物組成物。
【請求項１８】
前記組成物が、
−０．００１〜５０重量％のキサントフモールと、
−０．０１〜２０重量％のラクチドと
を含む、請求項１３〜１７のいずれかに記載の抗微生物組成物。
【請求項１９】
前記組成物が、フムルス・ルプルス（Ｈｕｍｕｌｕｓ  ｌｕｐｕｌｕｓ）の抽出物を含む、請求項１３〜１８のいずれかに記載の抗微生物組成物。
【請求項２０】
フムルス・ルプルス（Ｈｕｍｕｌｕｓ  ｌｕｐｕｌｕｓ）の抽出物が、
ａ）超臨界二酸化炭素抽出法および／またはエタノール抽出法によって、フムルス・ルプルス（Ｈｕｍｕｌｕｓ  ｌｕｐｕｌｕｓ）の抽出物を調製する工程と、
ｂ）得られた抽出物を６０℃以上で水抽出し、フムルス・ルプルス（Ｈｕｍｕｌｕｓ  ｌｕｐｕｌｕｓ）の水抽出物にする工程と
を含む方法によって得ることができる水抽出物である、請求項１９に記載の抗微生物組成物。
【請求項２１】
前記組成物が、液体または粉末として、好ましくは液体として配合される、請求項１３〜２０のいずれかに記載の抗微生物組成物。
【請求項２２】
食品における、乳酸菌および／またはカビおよび／または酵母に対する抗微生物剤としての請求項１３〜２１のいずれかに記載の抗微生物組成物の使用。
【請求項２３】
請求項１３〜２２のいずれかに記載の抗微生物組成物を含む食品。
【請求項２４】
前記食品が、パン、ベーカリー製品、新鮮な食肉、鶏肉、魚、調理済の食肉、即席食品、ソース、ペストリーまたは液体食品である、請求項２３に記載の食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、乳酸菌および／またはカビに対する抗微生物組成物としての、キサントフモールと第２またはさらなる微生物剤とを含む組成物の使用に関する。本発明は、さらに、上述の組成物自体、および乳酸菌および／またはカビに対する抗微生物組成物としての食品におけるその使用に関する。本発明は、さらに、上述の抗微生物組成物を含む食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
食品および飲料は、腐敗微生物の成長に弱く、ほとんどの場合、これらの製品の貯蔵寿命が制限され、消費者にとって健康問題の脅威となっている。実際に、微生物の食品腐敗、したがって消費者の安全性は、例えば、新鮮な食肉、鶏肉、魚、加工食肉、調理済の食肉、硬化した肉、硬化した魚、ベーカリー製品、ケーキ、即席食品、（調理）ソース、デリサラダ、ペストリー、前処理した食品または液体食品の加工および貯蔵に関し、食品産業において主要な関心事である。微生物の増殖は、これらの製品の貯蔵寿命を短くし、上述の製品の製造、貯蔵および配給の間に汚染および腐敗を防止することは、非常に厳しい作業である。
【０００３】
食肉および調理済食品において、問題を引き起こす腐敗細菌の一種は、乳酸菌（ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌａｌｅｓ）、ＬＡＢ）、すなわち、細菌のラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）科のメンバーである。現代の食品生産プロセスは、現在、微生物の成長を阻害するために二酸化炭素のレベルを増加させることを用いる、雰囲気を改変した包装を含む。残念ながら、乳酸菌は二酸化炭素の影響を受けにくい。さらに、ラクトバチルス（ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌａｌｅｓ）目のメンバー（例えば、ラクトバチルス・オリゴフェルメンタンス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｏｌｉｇｏｆｅｒｍｅｎｔａｎｓ）およびロイコノストック・ガシコミタタム（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ  ｇａｓｉｃｏｍｉｔａｔｕｍ））は、低温耐性の乳酸菌である。このことは、例えば、食肉などの新鮮な製品の低温貯蔵の有用性を著しく制限する。
【０００４】
食物の腐敗を引き起こすことが多い別の種類の微生物は、カビである。いくつかのカビは特定の食品の必須部分であるが、カビの成長は、強い異臭と食品の外観の劣化を引き起こすことが多く、ヒトが食べるには不適切なものとなる。さらに、ある種のカビは、胃腸病から癌に至るまで、広範なヒト疾患に関連するマイコトキシンとして知られる有毒な代謝産物を産生する能力を有する。
【０００５】
食物の腐敗を十分に予防する試みにおいて、微生物汚染を防止するため、または微生物の成長を抑制するために、食品産業において様々な方法および（人工の）防腐剤が使用されている。しかし、これらの防腐剤は、本質的に合成物であることが多い（例えば、亜硝酸塩、安息香酸塩、ソルビン酸カリウムなど）。さらに、いくつかの防腐剤が食品に付与してしまう可能性がある異臭と、食品にこれらの化合物を使用することに伴う健康上の問題は、これらの防腐剤の有用性を大幅に低下させる。消費者は、防腐剤の供給源に対してもますます批判的になりつつあり、非天然の防腐剤が使用された食品を消費しようとする意欲が低下しつつある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
したがって、悪臭をほとんど付与しないか、または全く付与せず、抗微生物剤が天然の供給源に由来する、乳酸菌およびカビの成長を抑制または阻害するのに有効な抗微生物剤が依然として必要である。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明の第１の態様は、乳酸菌および／またはカビに対する抗微生物剤としての組成物の使用であって、当該組成物は、第１の微生物剤としての式（１）
【化１】
2018537430.tif 000002
を有するキサントフモールまたはその塩と、第２またはさらなる微生物剤とを含む、組成物の使用に関する。
【０００８】
驚くべきことに、本発明者らは、キサントフモールを含む組成物が、乳酸菌およびカビに対して非常に有効であることを見出した。さらに、キサントフモールは、フムルス・ルプルス（Ｈｕｍｕｌｕｓ  ｌｕｐｕｌｕｓ）の毬花（一般にホップと呼ばれる）に由来するため、天然物であると考えられる。このことは、食品に非天然の成分を使用することに消費者がますます関心を寄せているという理由から、有利である。本発明者らは、さらに、他の抗微生物剤と組み合わせると、食品の腐敗を引き起こす微生物（特に乳酸菌およびカビ）の成長を著しく低下させることを見出した。
【０００９】
本発明の第２の態様は、食品に使用するのに適した抗微生物組成物であって、
−０．００１〜５０重量％の式（１）
【化２】
2018537430.tif 000003
を有するキサントフモールまたはその塩と、
−０．０１〜２０重量％の少なくとも１つの追加の抗微生物剤とを含む、抗微生物組成物に関する。
【００１０】
他の抗微生物剤と組み合わせてキサントフモールを使用することが有利であることがさらに見出されている。本発明者らは、キサントフモールを他の抗微生物剤と組み合わせて使用すると、食物の腐敗を引き起こす微生物、特に乳酸菌およびカビの成長が著しく減少することを見出した。
【００１１】
本発明の第３の態様は、食品における、乳酸菌および／またはカビに対する抗微生物剤としての上述の抗微生物組成物の使用に関する。
【００１２】
本発明の第４の態様は、上述の抗微生物組成物を含む食品に関する。
【００１３】
定義
本明細書で使用される「抗微生物剤」または「抗微生物性」との用語は、その従来からある意味を有し、食品で、または食品の付近での微生物の成長を阻害または抑制し、食品で、または食品の付近で微生物を殺すことができる薬剤を指す。
【００１４】
本明細書で使用される「乳酸菌」との用語は、その従来からある意味を有し、炭水化物発酵の主要な代謝最終産物として乳酸を産生するグラム陽性菌を指す。乳酸菌の主要な属は、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）である。
【００１５】
本明細書で使用される「カビ（ｍｏｌｄ）」または「カビ（ｍｏｕｌｄ）」との用語は、相互に置き換え可能であり、それらの従来の意味を有しており、糸状菌を指す。
【００１６】
本明細書で使用される「最小発育阻止濃度」または「ＭＩＣ」との用語は、その従来からある意味を有し、例えば、重量％またはｍｇ／ｍｌまたはパーツパーミリオン（ｐｐｍ）で表されてもよく、微生物を阻害するか、または殺す抗微生物剤の最低濃度を指し、一晩インキュベートした後に微生物のｉｎ  ｖｉｔｒｏでの目に見える成長の阻害として評価される。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】プロピオン酸カルシウムおよび／またはキサントフモールによるＰ．ロックフォルティ（Ｐ．ｒｏｑｕｅｆｏｒｔｉｉ）の阻害。
【図２】プロピオン酸カルシウムおよび／またはキサントフモールによるＦ．オキシスポルム（Ｆ．ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）の阻害。
【図３】プロピオン酸カルシウムおよび／またはキサントフモールによるＰ．バリオッティ（Ｐ．ｖａｒｉｏｔｉｉ）の阻害。
【図４】プロピオン酸カルシウムおよび／またはキサントフモールによるＡ．フラバス（Ａ．ｆｌａｖｕｓ）の阻害。
【図５】プロピオン酸カルシウムおよび／またはキサントフモールによるＭ．プランベウス（Ｍ．ｐｌｕｍｂｅｕｓ）の阻害。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
本発明の第１の態様は、乳酸菌および／またはカビに対する抗微生物剤としての組成物の使用であって、当該組成物は、第１の微生物剤としての式（１）
【化３】
2018537430.tif 000004
を有するキサントフモールまたはその塩と、第２またはさらなる微生物剤とを含む、使用に関する。好ましくは、本発明の組成物は、食品に抗微生物剤として使用される。
【００１９】
本願発明者らは、組成物が、キサントフモールまたはその塩を第２またはさらなる抗微生物剤、好ましくは抗真菌剤、好ましくは抗カビ剤および／または抗酵母剤および／またはＬＡＢに対して活性な薬剤と組み合わせて含むとき、特に良好な効果が得られることを見出した。理論によって束縛されることを望まないが、異なる薬剤によって同じ腐敗微生物を複数回攻撃すると、微生物がこのような攻撃から復活する可能性を抑制すると考えられる。上述の微生物を攻撃するために、異なる生物学的機構を用いる抗微生物剤を使用することが特に有利である。
【００２０】
第２またはさらなる抗微生物剤は、好ましくは、プロピオン酸を含み、場合により、乳酸および酢酸などの他の有機酸またはその塩と共に含む、プロピオニバクテリウム（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）によって発酵した糖組成物である。また、第２またはさらなる抗微生物剤は、ケイ皮酸またはその食用の塩、例えばケイ皮酸カリウムであってもよい。また、セダー油または有機酸、例えば、プロピオン酸、乳酸もしくは酢酸、またはこれらの塩、好ましくはプロピオン酸カルシウムを、第２またはさらなる抗微生物剤として使用してもよい。この観点で、上述の薬剤のいずれかの組合せも、キサントフモールを含む薬剤と組み合わせて使用されてもよいことに留意されたい。
【００２１】
キサントフモールは、フムルス・ルプルス  Ｌ．（Ｈｕｍｕｌｕｓ  ｌｕｐｕｌｕｓ  Ｌ．）（Ｃａｎｎａｂａｃｅａｅ）の樹脂状の雌花序から得られてもよく、ホップの実または球果と呼ばれることが多く、その苦味と芳香の特徴のため、主に醸造産業で使用される。キサントフモールは、新鮮なホップ中に最も豊富に存在するプレニル化フラボノイドであり、十分に知られた抽出技術によって、ホップから誘導され得る。
【００２２】
当該技術分野では、食品処理装置における細菌の成長を防止するためのバイオフィルム防止剤としてのキサントフモールの使用が記載されている。この観点で、Ｒｏｚａｌｓｋｉら、ＢｉｏＭｅｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、２０１３  ｐｐ．１−７の文献を参照されたい。しかし、驚くべきことに、キサントフモールは、食品処理装置における細菌に対するバイオフィルム防止剤として使用されるだけではなく、他の抗微生物剤と組み合わせて、乳酸菌およびカビに対する抗微生物剤として使用されてもよいことを見出した。
【００２３】
具体的には、キサントフモールを、食品に抗微生物剤として、好ましくは、新鮮な食肉、鶏肉、魚、調理済の食肉、即席食品、ソース、ペストリー、パン、ベーカリー製品または液体食品に抗微生物剤として使用してもよい。
【００２４】
さらに、キサントフモールは、フムルス・ルプルス（Ｈｕｍｕｌｕｓ  ｌｕｐｕｌｕｓ）の毬花に由来するため、天然物であると考えられる。このことは、食品に非天然の成分を使用することに消費者がますます関心を寄せているという理由から、有利である。
【００２５】
いくつかの食品において、乳酸菌の成長は意図的であるが、多くの食品において、乳酸菌の成長は、異臭を生じさせ、および／または食品の貯蔵寿命を制限するので避けるべきである。本発明の組成物により、非天然の抗微生物剤を使用することを必要とせず、乳酸菌の成長を効率的に防止または阻害することが可能になった。
【００２６】
本発明の組成物は、好ましくは、一般的に食品中で見つかる乳酸菌、例えば、ラクトバチルス・アシドフィルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｄｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトバチルス・ブレビス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｒｅｖｉｓ）、ラクトバチルス・カルバタス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｕｒｖａｔｕｓ）、ラクトバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ）、ラクトバチルス・ファルシミニス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆａｒｃｉｍｉｎｉｓ）、ラクトバチルス・スンキイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｎｋｉｉ）、ラクトバチルス・フルクティボランス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆｒｕｃｔｉｖｏｒａｎｓ）、ロイコノストック・メセンテロイデス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ  ｍｅｓｅｎｔｅｒｉｏｄｅｓ）、好ましくはラクトバチルス・アシドフィルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｄｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトバチルス・ブレビス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｒｅｖｉｓ）、ラクトバチルス・カルバタス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｕｒｖａｔｕｓ）、ラクトバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ）、ラクトバチルス・ファルシミニス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆａｒｃｉｍｉｎｉｓ）、ラクトバチルス・スンキイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｎｋｉｉ）、ロイコノストック・メセンテロイデス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ  ｍｅｓｅｎｔｅｒｉｏｄｅｓ）に対する抗微生物剤として使用される。
【００２７】
さらに、本発明のキサントフモールを含む組成物を、カビの成長を阻害または防止するためにも使用可能であることが見出された。乳酸菌と同様に、カビの増殖が有益であると考えられるいくつかの食品がある。しかし、多くの食品において、食品の味および外観に悪影響を与えるという理由から、カビの増殖を防止すべきである。
【００２８】
本発明の組成物は、好ましくは、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）属またはペニシリウム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）属に由来するカビに対する抗微生物剤として使用される。好ましくは、本発明の組成物は、ムコール・プランベウス（Ｍｕｃｏｒ  ｐｌｕｍｂｅｕｓ）、アスペルギルス・フラバス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｌａｖｕｓ）、アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）、ペシロミセス・バリオッティ（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ  ｖａｒｉｏｔｉｉ）、フザリウム・オキシスポルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）、リゾプス・ストロニファー（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｓｔｏｌｏｎｉｆｅｒ）、ペニシリウム・ロックフォルティ（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｒｏｑｕｅｆｏｒｔｉ）といったカビまたはこれらの組合せに対して使用される。より好ましくは、本発明の組成物は、ムコール・プランベウス（Ｍｕｃｏｒ  ｐｌｕｍｂｅｕｓ）、アスペルギルス・フラバス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｌａｖｕｓ）、ペシロミセス・バリオッティ（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ  ｖａｒｉｏｔｉｉ）、フザリウム・オキシスポルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）、ペニシリウム・ロックフォルティ（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｒｏｑｕｅｆｏｒｔｉ）といったカビまたはこれらの組合せに対して使用される。
【００２９】
フムルス・ルプルス（Ｈｕｍｕｌｕｓ  ｌｕｐｕｌｕｓ）の毬花（一般に「ホップ」と呼ばれる）は、キサントフモールの豊富な供給源である。キサントフモールを含むホップ抽出物は市販されているが、乳酸菌および／またはカビに対する抗微生物剤としての使用はこれまで報告されていない。これまで、キサントフモール抽出物は、食品中に存在する乳酸菌およびカビに対する抗微生物剤として使用し得ることも報告されていない。
【００３０】
したがって、一実施形態では、本発明は、本発明のキサントフモールを含む抗微生物組成物の使用に関し、この組成物が、フムルス・ルプルス（Ｈｕｍｕｌｕｓ  ｌｕｐｕｌｕｓ）の抽出物を含み、この抽出物は、乾燥重量基準で少なくとも５重量％のキサントフモール、好ましくは少なくとも５０重量％のキサントフモール、最も好ましくは少なくとも８０重量％のキサントフモールを含む。
【００３１】
本発明の組成物に使用されるフムルス・ルプルス（Ｈｕｍｕｌｕｓ  ｌｕｐｕｌｕｓ）の抽出物は、好ましくは、水抽出物であり、まず、例えばホップ（フムルス・ルプルス（Ｈｕｍｕｌｕｓ  ｌｕｐｕｌｕｓ）の毬花）に対して超臨界二酸化炭素抽出法および／またはエタノール抽出法を行うことによって、フムルス・ルプルス（Ｈｕｍｕｌｕｓ  ｌｕｐｕｌｕｓ）の抽出物を調製することによって調製された。これらの方法は、上述のＲｏｚａｌｓｋｉら、２０１３の論文に記載されているように、当技術分野で一般的に知られている。さらなる工程において、これらの方法の一方または両方を用いて得られた抽出物は、６０℃以上の温度で水抽出に供される。その中にキサントフモールを含む水抽出物は、抗微生物剤として直接使用してもよいが、この抽出物を濃縮または乾燥することも可能である。
【００３２】
本発明の種々の態様での適用に適した典型的な市販のフムルス・ルプルス（Ｈｕｍｕｌｕｓ  ｌｕｐｕｌｕｓ）の抽出物は、ホップから単離された、珪藻土に担持したＸａｎｔｈｏ−Ｆｌａｖ抽出物である（Ｈｏｐｓｔｅｉｎｅｒ、Ｓｉｍｏｎ  Ｈ．Ｓｔｅｉｎｅｒ、Ｈｏｐｆｅｎ、ＧｍｂＨ、マインブルク、ドイツ）。
【００３３】
本発明の組成物中のキサントフモールの合計量は、好ましくは、０．００１〜５０重量％の範囲である。より好ましくは、本発明の組成物中のキサントフモールの量は、０．００５重量％〜２０重量％、最も好ましくは０．０１重量％〜１０重量％の範囲である。
【００３４】
本発明のキサントフモールを含む抗微生物組成物の現時点で予見可能な大部分の実用化のために、この組成物を、注ぐことができる配合物、例えば、希釈剤（好ましくは、水、エタノール、油、プロピレングリコール、より好ましくは、水、プロピレングリコール）を含む配合物になるように配合することが好都合である。さらに、本発明の抗微生物組成物に例えば水および／またはプロピレングリコールのような希釈剤を組み込むことにより、例えば、キサントフモールと、場合により上述の組成物に含まれる１種以上のさらなる抗微生物剤のより簡便で正確な濃度調整が可能になる。
【００３５】
したがって、一実施形態では、本発明は、キサントフモールを含む抗微生物組成物の使用を提供し、この組成物は、少なくとも１重量％の希釈剤（好ましくは、水、エタノール、油、プロピレングリコール、より好ましくは、水および／またはプロピレングリコール）を含む。
【００３６】
本発明の抗微生物組成物は、好ましくは、食物、食品、前処理した食品および調理済食品（一般的に「食品」と呼ばれる）の貯蔵寿命を延ばすために使用される。
【００３７】
乳酸菌による汚染および／またはカビによる汚染の受けやすさという点で知られている典型的な食品は、特に、新鮮な食肉、鶏肉、魚、加工食肉、硬化した肉、調理済の食肉、即席食品、（調理）ソース、デリサラダ、マヨネーズ系のサラダ、シリアルバー、（濃縮）グレービー、ペストリーおよび液体食品、フルーツジュース、二酸化炭素を含まない飲料、ベーカリー製品、ケーキ、ディップ、スプレッド、食品フィリング、食品スタッフィングおよび食物成分である。好ましくは、本発明のキサントフモールを含む抗微生物組成物をこのように使用し、これらの食品を防腐し、腐敗するのを防ぐ。
【００３８】
したがって、本発明の抗微生物組成物は、食品に抗微生物剤として、好ましくは、新鮮な食肉、鶏肉、魚、調理済の食肉、即席食品、ソース、ペストリー、パン、ベーカリー製品または液体食品で抗微生物剤として使用される。
【００３９】
本発明の組成物が乳酸菌またはカビに対する抗微生物剤として使用される食品は、好ましくは、０．０００１０〜０．０５重量％、好ましくは０．００１〜０．０１重量％のキサントフモールまたはその食用の塩を含む。このような濃度のキサントフモールは、乳酸菌および／またはカビの成長を効果的に阻害または防止することがわかっている。
【００４０】
この観点で、本発明の第２の態様は、食品に使用するのに適した抗微生物組成物であって、
−０．００１〜５０重量％の式（１）
【化４】
2018537430.tif 000005
を有するキサントフモールまたはその塩と、
−０．０１〜２０重量％の少なくとも１つの追加の抗微生物剤とを含む、抗微生物組成物に関する。
【００４１】
試験は、キサントフモールを用いた食品の抗微生物処理の効力が、第２またはさらなる抗微生物剤と組み合わせると高まることを示している。理論によって束縛されることを望まないが、異なる薬剤によって同じ腐敗微生物を複数回攻撃すると、微生物がこのような攻撃から復活する可能性を防止すると考えられる。上述の微生物を攻撃するために、異なる生物学的機構を用いる抗微生物剤を使用することが特に有利である。
【００４２】
本発明の好ましい実施形態では、上述の第２またはさらなる抗微生物剤は、抗真菌剤であり、好ましくは、抗カビ剤または抗酵母剤および／またはＬＡＢに対して活性な薬剤である。
【００４３】
キサントフモールと他の抗微生物剤とを組み合わせる別の理由は、１つの抗微生物組成物を使用するだけで、特定の食品中の異なる微生物の成長を回避することである。例えば、新鮮な食肉またはベーカリー製品などの特定の製品の食品腐敗は、異なる微生物によって引き起こされることが一般的に知られている。したがって、他の抗微生物剤と組み合わせて乳酸菌および／またはカビに対して有効なキサントフモールを使用することが有利である。
【００４４】
上述のように、本発明のキサントフモールを含む組成物は、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）属またはペニシリウム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）属に由来するカビ、特に、ムコール・プランベウス（Ｍｕｃｏｒ  ｐｌｕｍｂｅｕｓ）、アスペルギルス・フラバス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｌａｖｕｓ）、アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）、ペシロミセス・バリオッティ（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ  ｖａｒｉｏｔｉｉ）、フザリウム・オキシスポルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）、リゾプス・ストロニファー（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｓｔｏｌｏｎｉｆｅｒ）、ペニシリウム・ロックフォルティ（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｒｏｑｕｅｆｏｒｔｉ）、より詳細には、ムコール・プランベウス（Ｍｕｃｏｒ  ｐｌｕｍｂｅｕｓ）、アスペルギルス・フラバス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｌａｖｕｓ）、ペシロミセス・バリオッティ（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ  ｖａｒｉｏｔｉｉ）、フザリウム・オキシスポルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）、ペニシリウム・ロックフォルティ（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｒｏｑｕｅｆｏｒｔｉ）といったカビに対する抗微生物剤として特に適している。
【００４５】
さらに、本発明のキサントフモールを含む組成物は、乳酸菌、例えば、ラクトバチルス・アシドフィルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｄｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトバチルス・ブレビス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｒｅｖｉｓ）、ラクトバチルス・カルバタス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｕｒｖａｔｕｓ）、ラクトバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ）、ラクトバチルス・ファルシミニス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆａｒｃｉｍｉｎｉｓ）、ラクトバチルス・スンキイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｎｋｉｉ）、ラクトバチルス・フルクティボランス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆｒｕｃｔｉｖｏｒａｎｓ）、ロイコノストック・メセンテロイデス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ  ｍｅｓｅｎｔｅｒｉｏｄｅｓ）に対する抗微生物剤としても特に適している。
【００４６】
好ましくは、追加の抗微生物剤は、プロピオン酸塩および酢酸塩、ケイ皮酸またはその塩、好ましくはケイ皮酸カリウム、セダー油または有機酸、例えば、プロピオン酸、乳酸もしくは酢酸、またはこれらの塩、好ましくは、プロピオン酸カルシウム、またはこれらの薬剤のいずれかの組合せを含む、プロピオニバクテリウム（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）によって発酵した糖組成物から選択される。
【００４７】
ケイ皮酸およびその塩、例えば、ケイ皮酸カリウム（「Ｋｃｉｎ」）に関して、これは抗微生物活性を有する天然物であることに留意されたい。文献では、抗微生物組成物中の唯一の抗微生物剤としてのその使用が記載されている。したがって、本発明によれば、キサントフモールをケイ皮酸またはその塩、特にＫｃｉｎと組み合わせて使用することが有利である。
【００４８】
さらに、Ｋｃｉｎとバニリンとの組合せは、既に比較的低い濃度で、カビの成長の阻害に対して正の効果を有することが報告されている。したがって、代替の実施形態では、本発明の組成物は、有効量のキサントフモール、バニリンおよびケイ皮酸またはその塩、例えばＫｃｉｎを含む。
【００４９】
種々の有機酸またはその塩の抗微生物活性は当該技術分野で知られているが、驚くべきことに、キサントフモールとプロピオン酸、乳酸および酢酸などの有機酸とを組み合わせると、カビの成長を顕著に阻害することがわかった。したがって、本発明の抗微生物組成物は、好ましくは、キサントフモールと、１種以上の有機酸、好ましくは、プロピオン酸またはその塩、例えばプロピオン酸カルシウムとを含む。
【００５０】
キサントフモールと、プロピオニバクテリウム（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）によって発酵した糖組成物とを組み合わせると、乳酸菌の成長に対して顕著な阻害効果を有することがさらに見出されている。発酵した糖組成物は、好ましくは、プロピオン酸塩と酢酸塩を含む。
【００５１】
プロピオニバクテリウム（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）によって発酵した糖組成物は、一般に、少なくともプロピオン酸塩と酢酸塩を含有する。２工程の発酵手法を適用する場合（すなわち、（工程１）糖から乳酸へ、（工程２）乳酸からプロピオン酸へ）、および／または発酵した製品に乳酸を添加する場合、発酵した糖組成物には、乳酸塩も存在するだろう。好ましい発酵した糖組成物は、１５〜３３重量％のプロピオン酸塩と、５〜１７重量％の酢酸塩と、１０〜３３重量％の乳酸塩とを含む。特に好ましい発酵した糖組成物は、１５〜２０重量％のプロピオン酸塩と、５〜１０重量％の酢酸塩と、１０〜２０重量％の乳酸塩とを含む。または、特に好ましい発酵した糖組成物は、すべて乾燥重量基準で、２５〜３３重量％のプロピオン酸塩と、８〜１７重量％の酢酸塩と、１７〜３３重量％の乳酸塩とを含む。本発明の組成物に使用するのに有利な市販の製品は、オランダのＣｏｒｂｉｏｎによって市販されているＶｅｒｄａｄ  Ｆ９５である。
【００５２】
したがって、本発明の組成物の好ましい実施形態では、組成物は、
−０．００１〜５０重量％のキサントフモールと、
−０．０１〜２０重量％のプロピオニバクテリウム（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）によって発酵した糖組成物とを含み、この糖組成物は、１５〜２０重量％のプロピオン酸塩と、５〜１０重量％の酢酸塩と、１０〜２０重量％の乳酸塩とを含む。
【００５３】
最も好ましくは、発酵した糖組成物は、Ｖｅｒｄａｄ  Ｆ９５である。
【００５４】
さらに、キサントフモールとセダー油を組み合わせると、様々な乳酸菌の成長に対して顕著かつ強力な相乗効果を有することが見出されている。
【００５５】
本発明の抗微生物組成物は、好ましくは、注ぐことができる配合物、例えば、希釈剤（好ましくは、水、エタノール、油、プロピレングリコール、より好ましくは、水、プロピレングリコール）を含む配合物になるように配合される。さらに、本発明の抗微生物組成物に例えば水および／またはプロピレングリコールのような希釈剤を組み込むことにより、例えば、キサントフモールと、場合により上述の組成物に含まれる１種以上のさらなる抗微生物剤のより簡便で正確な濃度調整が可能になる。
【００５６】
本発明の抗微生物組成物には、キサントフモールをそのまま使用してもよい。しかし、組成物中にキサントフモールを含むフムルス・ルプルス（Ｈｕｍｕｌｕｓ  ｌｕｐｕｌｕｓ）の抽出物を使用することも可能である。上述の抽出物中のキサントフモールの量に応じて、組成物中の必要なキサントフモール含量を達成するために、比較的多量または少量の抽出物を使用する必要がある。これに関して、抽出物をそのまま使用することも可能であることにも留意されたい。
【００５７】
本発明の好ましい実施形態では、いわゆるフムルス・ルプルス（Ｈｕｍｕｌｕｓ  ｌｕｐｕｌｕｓ）の水抽出物が、キサントフモール源として使用される。この水抽出物は、本発明の第１の態様に関して既に記載したように調製されてもよい。
【００５８】
フムルス・ルプルス（Ｈｕｍｕｌｕｓ  ｌｕｐｕｌｕｓ）の抽出物が使用される場合、上述の組成物は、乾燥形態で配合されてもよく、担体として珪藻土を含んでいてもよい。本発明の組成物の一実施形態では、組成物は、担体として６０〜９９重量％の珪藻土を含む。組成物を食品に適用する前に、上述の組成物を水などの溶媒と共にインキュベートし、キサントフモールおよび追加の抗微生物剤を珪藻土から分離する。続いて、この液相を食品と混合してもよく、または食品に塗布してもよい。
【００５９】
特に好ましい実施形態では、本発明の抗微生物組成物は、
−０．００１〜５０重量％のキサントフモールと、
−０．０１〜２０重量％のセダー油またはプロピオン酸またはこれらの塩、好ましくは、プロピオン酸カルシウム、またはプロピオン酸塩と酢酸塩を含むプロピオニバクテリウム（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）によって発酵した糖組成物と、
−６０〜９９重量％の珪藻土とを含む。
【００６０】
さらに好ましい実施形態では、本発明の抗微生物組成物は、キサントフモールとラクチドを含む。したがって、本発明の特に好ましい実施形態は、本発明による抗微生物組成物であって、この組成物は、
−０．００１〜５０重量％のキサントフモールと、
−０．０１〜２０重量％のラクチド、好ましくは０．０５〜５重量％、より好ましくは０．１〜０．５重量％のラクチドとを含む。
【００６１】
本発明の抗微生物組成物は、好ましくは、液体または粉末として配合される。最も好ましくは、組成物は、液体として配合される。
【００６２】
本発明の第３の態様は、食品における、乳酸菌および／またはカビおよび／または酵母に対する抗微生物剤としての上述の抗微生物組成物の使用に関する。
【００６３】
上述の抗微生物組成物は、好ましくは、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）属またはペニシリウム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）属に由来するカビ、特に、ムコール・プランベウス（Ｍｕｃｏｒ  ｐｌｕｍｂｅｕｓ）、アスペルギルス・フラバス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｌａｖｕｓ）、アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）、ペシロミセス・バリオッティ（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ  ｖａｒｉｏｔｉｉ）、フザリウム・オキシスポルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）、リゾプス・ストロニファー（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｓｔｏｌｏｎｉｆｅｒ）、ペニシリウム・ロックフォルティ（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｒｏｑｕｅｆｏｒｔｉ）、より詳細には、ムコール・プランベウス（Ｍｕｃｏｒ  ｐｌｕｍｂｅｕｓ）、アスペルギルス・フラバス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｌａｖｕｓ）、ペシロミセス・バリオッティ（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ  ｖａｒｉｏｔｉｉ）、フザリウム・オキシスポルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）、ペニシリウム・ロックフォルティ（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｒｏｑｕｅｆｏｒｔｉ）といったカビに対して使用される。上述の組成物は、ラクトバチルス・アシドフィルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｄｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトバチルス・ブレビス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｒｅｖｉｓ）、ラクトバチルス・カルバタス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｕｒｖａｔｕｓ）、ラクトバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ）、ラクトバチルス・ファルシミニス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆａｒｃｉｍｉｎｉｓ）、ラクトバチルス・スンキイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｎｋｉｉ）、ラクトバチルス・フルクティボランス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆｒｕｃｔｉｖｏｒａｎｓ）、ロイコノストック・メセンテロイデス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ  ｍｅｓｅｎｔｅｒｉｏｄｅｓ）といった乳酸菌に対して使用されてもよい。
【００６４】
第４の態様は、上述の抗微生物組成物を含む食品に関する。キサントフモールは、乳酸菌またはカビに対して特に有効であるので、パン、ベーカリー製品、新鮮な食肉、鶏肉、魚、調理済の食肉、即席食品、ソース、ペストリー、乳製品または液体食品でこの組成物を使用することが有利である。
【００６５】
本発明を以下の非限定的な実施例によってさらに説明する。
実施例
【実施例１】
【００６６】
本発明の態様で使用するためのキサントフモールの調製
珪藻土に担持したキサントフモールＸａｎｔｈｏ−Ｆｌａｖ抽出物（２％のキサントフモールを含む）１部を、激しく振とうしながら１分未満沸騰させた１００℃の熱水９部と共にインキュベートする。インキュベートした後、固体物質を捨てる。このようにして、１０％のキサントフラブまたは約０．２％のキサントフモール（２ｍｇ／ｍｌ）を含むストック溶液が得られ、これを以下の実施例で使用する。
【００６７】
比較実験１：キサントフモールのみを含む組成物の抗微生物活性
抗微生物活性を試験するために、キサントフモールを含む試験組成物を適用した。試験組成物を以下のように調製した。最も高い濃度で、２ｍｇ／ｍｌのキサントフモールストック水溶液１００μｌ（実施例１を参照）を、２倍濃度のＭＲＳ培地１００μｌに加え、ＭＲＳ培地中に１ｍｇ／ｍｌのキサントフモールを含む試験組成物を得る。
【００６８】
試験細菌の予備培養物を、標準的な技術を用いて培養した。実験を開始する４８時間前に、細菌をＭＲＳ培地中で培養した。
【００６９】
５μｌの細菌予備培養物を２００μｌの試験培地（培地＋成分＋水）に入れ、一連の濃度のキサントフモールを含む試験組成物と混合した。一晩の実験開始時の最終的な細菌密度は、１０５ｃｆｕ／ｍｌであった。
【００７０】
キサントフモールを０．０１ｍｇ／ｍｌの濃度まで試験した（０．０５％ｗ／ｗまでのキサントフラブ添加レベルに基づく）。ネガティブコントロールをブロスに接種し、ポジティブコントロールをＭＲＳ培地に接種した。試験生物を以下の表１に列挙する。細菌培養物を３０℃で一晩、一定条件で振り混ぜつつ、培養した。インキュベートした後、各試験生物の最小発育阻止濃度にスコアを付けた（表１）。
【００７１】
【表１】
2018537430.tif 000006
【００７２】
この結果は、キサントフモールを含む組成物が、様々な乳酸菌の成長を阻害するのに強力であることを示している。
【実施例２】
【００７３】
種々の乳酸菌の阻害におけるキサントフモールおよびＶｅｒｄａｄ  Ｆ９５を含む組成物の抗微生物効率
異なる乳酸菌を、ｐＨ＝５．８のＭＲＳブロスに１０５細菌／ｍｌのレベルで接種した。同じ様式で、実施例１からの０．１３％ｗ／ｗの作業溶液を含むブロス（したがって０．０００２６％のキサントフモールに相当する０．０１３％のキサントフラブを含有する）に接種した。また、これらを、１．５％のＰｕｒａｃ  Ｖｅｒｄａｄ  ９５（Ｃｏｒｂｉｏｎ  Ｐｕｒａｃ、オランダ）、約２５％のプロピオン酸ナトリウムを含む培養糖を含有するブロスに接種した。また、これらを、１．５％のＶｅｒｄａｄ  Ｆ９５および０．１３％のキサントフモールストック溶液を含むブロスにも接種した。３０℃で７２時間インキュベートした後、波長５９５ｎｍでの光学密度を、７２時間で成長した細胞の量の尺度として測定した。
【００７４】
【表２】
2018537430.tif 000007
【実施例３】
【００７５】
種々のカビの阻害におけるキサントフモールおよびプロピオン酸塩を含む組成物の抗微生物効率
プロピオン酸塩と組み合わせたキサントフモールの併用効果について、ペニシリウム・ロックフォルティ（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｒｏｑｕｅｆｏｒｔｉｉ）、アスペルギルス・フラバス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｌａｖｕｓ）、フザリウム・オキシスポルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）、ペシロミセス・バリオッティ（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ  ｖａｒｉｏｔｉｉ）およびムコール・プランベウス（Ｍｕｃｏｒ  ｐｌｕｍｂｅｕｓ）の５種類のカビを試験した。この実施例では、上の実施例１に記載したのと同様の様式で調製した０．５２％のキサントフラブ（０．０１０４％ｗ／ｗのキサントフモールに相当）のストック溶液と、１．６％ｗ／ｗのプロピオン酸カルシウムのストック溶液を使用した。５０ｇのＭａｌｔ  Ｅｘｔｒａｃｔブロス（Ｏｘｏｉｄ）と、７．５ｇのＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｇａｒ  Ｎｏ．１（Ｏｘｏｉｄ）とを混合し、２倍の還元寒天ＭＥＡを作成することによって、改変された半固体ＭＥＡ寒天を調製した。これを１２０℃で１５分間、オートクレーブ処理した。播種の準備ができるまで、このＭＥＡの瓶を５０℃に保持し、播種の時点で、上に列挙したカビのうち１種類の株を約１０４胞子／ｍｌで接種した。このレベルの播種により、９６ウェルプレート中のウェルあたり５００〜１０００個の胞子を確実にする。すべての培地をｐＨ６に設定した。
【００７６】
９６ウェルプレート中、自動化プレート充填器を用い、上述の２倍のＭＥＡを、キサントフモールのストック溶液、プロピオン酸カルシウム、希釈剤としての滅菌Ｈ２Ｏと混合し、１つの軸に沿って０％から０．５％までの範囲のプロピオン酸カルシウムの濃度勾配と、他の軸に沿って０％から０．００１９５％までの範囲のキサントフモールの濃度勾配を作成した。両方の抗微生物剤を０％含有するウェルは、コントロールとして役立った。これにより、上述の２種類の抗微生物剤の約２４種類の異なる組合せを１つのプレートで試験することができた。各ウェルは、７５μｌの接種した２倍還元寒天ＭＥＡと、７５μｌの抗微生物剤／希釈剤の混合物を含んでおり、寒天をセットした後に７５μｌのパラフィン油で蓋をした。次いで、ウェルの汚染を防ぐために、９６個のウェルプレートを酸素透過性膜で密封した。
【００７７】
ＯＤ測定を約１回／日行い、（ＯＤの増加によって測定した）成長を経時的に追跡した。最終的な読み（１３日目）での測定値を３Ｄグラフに配置し、２種類の抗微生物剤の相加効果を、プレート全体でのそれぞれの増加したレベルとして視覚化した。
【００７８】
結果を図１〜５のグラフで視覚化する。キサントフモールは、既にそれ自体で阻害効果を有しており、プロピオン酸カルシウムとキサントフモールとの組合せは、個々の構成要素では容易に達成することができない阻害レベルをもたらすことがわかっている。
【実施例４】
【００７９】
種々のカビの阻害におけるキサントフモールおよびプロピオン酸塩を含む組成物の抗微生物効率
プロピオン酸塩と組み合わせたキサントフモールの併用効果について、アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）およびペニシリウム・ロックフォルティ（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｒｏｑｕｅｆｏｒｔｉｉ）の２種類のカビを試験した。ＭＥＡブロスに真菌の胞子を１０４胞子／ｍｌの濃度になるように接種した。この実施例では、上の実施例１に記載したキサントフモールのストック溶液を使用した。このストック溶液４ｍｌをブロス９６ｍｌに加え、ブロス中０．００８％ｗ／ｗの溶液を得た。
【００８０】
プロピオン酸塩を、ブロス中のプロピオン酸塩の最終濃度が０．０８５％になるまで添加した。また、ブロス中に０．００８％ｗ／ｗのキサントフモールと０．０８５％のプロピオン酸塩を含む溶液を作製した。コントロール実験として、抗微生物性の構成要素を含まないブロスを使用した。すべての培地のｐＨを３．５に設定した。２５℃で１４日間インキュベートした後、カビの菌糸の目に見える成長について、ブロスを観察した。これらの試験の結果を表３に示す。
【００８１】
【表３】
2018537430.tif 000008
【００８２】
比較実験２：ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）で汚染された食品における、キサントフモールを含む組成物の抗微生物効果
この実施例では、ベビーフードおよびパスタソースにおけるラクトバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ）の成長に対するキサントフモールの影響を評価した。この目的のために、ベビーフードを滅菌し、ｐＨをｐＨ４．８に調整し、パスタソースを滅菌し、ｐＨをｐＨ４．２に調整した。
【００８３】
ｔ＝０時点で、ベビーフードおよびパスタソースの３種類のサンプルに、最終的なラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）細胞密度が約１×１０４細胞／ｍｌになるように、ラクトバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ）スターター培養物を接種した。ベビーフードおよびパスタソースについて、それぞれ１つのサンプルに、０．２重量％のキサントフモール組成物存在下、食品中のキサントフモールの最終濃度が０．００４ｍｇ／ｍｌになるように接種した。食品中のラクトバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ）細胞密度を、ｔ＝０およびｔ＝２４時間で測定した。ラクトバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ）成長に対するキサントフモールの結果を表４に示す。
【００８４】
表４から、キサントフモールの使用は、ベビーフードとパスタソース中のラクトバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ）に対して強い阻害効果を有することは明らかである。
【００８５】
【表４】
2018537430.tif 000009
【実施例５】
【００８６】
ソーセージの貯蔵寿命の延長
実施例７では、キサントフラブ単独、あるいは「ＡＣＥ５０」またはラクチドのいずれか、またはその両方と組み合わせたキサントフラブのソーセージの貯蔵寿命延長に対する影響を分析した。Ａｃｅ５０は、Ｃｏｒｂｉｏｎ  Ｐｕｒａｃ（オランダ）から市販されているＯｐｔｉ．ｆｏｒｍ粉末Ａｃｅ  Ｓ５０である。Ａｃｅ５０は、４９．５％の乳酸ナトリウムと、４９．５％の酢酸ナトリウムとを含む粉末である。ラクチド（ＣＡＳ  ４５１１−４２−６および９５−９６−５、Ｃｏｒｂｉｏｎ  Ｐｕｒａｃ（オランダ）製のＰＵＲＡＬＡＣＴ）は、ダイマーであり、２つのＬ−乳酸分子から作られるＬ−ラクチド、２つのＤ−乳酸分子から作られるＤ−ラクチド、Ｌ−乳酸とＤ−乳酸から作られるメソ−ラクチドの３種類の光学異性体として存在する乳酸の環状エステルである。
【００８７】
調製
以下の手順に従ってソーセージを製造した。表５に重量％として規定される成分をソーセージの調製に使用した。実施例１に適用したような調製工程を行わずに、キサントフラブをそのまま使用した。
【００８８】
最初に食肉を細断し、塩、トリポリリン酸塩と半分量の水を加えた。十分によく混合した後、他の成分を加えた。食肉生地を調理クリンプ袋に入れ、減圧密封した。密封した後、袋を缶詰に入れた。ソーセージは、調理キャビネット中、７５℃で１２０分間調理され、その後１５℃に冷却された。最後のソーセージを０℃で保存した。
【００８９】
調理中にソーセージからの水分消失が起こっていないことが観察された。ラクチドが添加されていなければ、ソーセージのｐＨは６．６であった（実験「成分：３番、６番、７番」、表５を参照）。ラクチドが含まれる実験では、ラクチドが少なくとも部分的に乳酸に分解するため、ｐＨは、５．３〜５．５であった。
【００９０】
【表５】
2018537430.tif 000010
【００９１】
微生物学的耐性の評価
第１の工程において、以下のように播種材料を調製した。乳酸菌（Ｌ．ｃｕｒｖａｔｕｓ（Ｌ．カルバタス）、３倍のＬ．ｐｌａｎｔａｒｕｍ（Ｌ．プランタルム）およびＬ．ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ（Ｌ．メセンテロイデス））の培養をプレートから始め、１０ｍｌのＭＲＳブロスの入ったネジ付き蓋のついたチューブ（１００×１６ｍｍ）中、３０℃で一晩インキュベートする。
【００９２】
ソーセージに、製品１ｇあたりの最終レベルが約１０００（１０３）ＣＦＵになるように接種した。ソーセージに、１％の接種材料（５００ｇの粉砕食肉あたり約５ｍｌの接種材料）を接種した。粉砕したソーセージをバッグフィルター中にはかり取り、減圧密封し（Ｔｕｒｂｏｖａｃ、減圧時間：６、ガス時間：Ｇ、密封時間：２）、７℃で保存した。
【００９３】
適切な時間間隔で、各バッチの接種した粉砕したソーセージのサンプルを、微生物分析のために３個ずつ採取する。サンプルの入ったバッグフィルターを開け、滅菌希釈液（８．５％（ｗ／ｗ）のＮａＣｌと０．１（ｗ／ｗ）の細菌ペプトン）で３倍に希釈した。Ｓｔｏｍａｃｈｅｒ中、混合物を１分間かけて均質化した。滅菌希釈液で、同様にさらなる希釈を行った。
【００９４】
５０μｌの均質化物または希釈物を、その後、Ｅｄｄｙｊｅｔ型１．２３スパイラルプレーター（ＩＵＬ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ、バルセロナ、スペイン）を用い、ＭＲＳ寒天に蒔いた。プレートを３０℃で４８時間または室温で７２時間インキュベートした。Ｓｙｎｏｐｔｉｃｓソフトウェアパッケージを用い、Ａｃｏｌｙｔｅ  Ｓｕｐｅｒｃｏｕｎｔ自動コロニーカウンター（Ｓｙｎｏｐｔｉｃｓ、ケンブリッジ、ＵＫ）でコロニーを計測した。
【００９５】
試験の結果を、プレートカウント数が対数値７に達するまでの日数として表６に示す。
【００９６】
表６は、それぞれ、１％のＡＣＥ５０を含む変種（２番）、０．８％のラクチドを含む変種（３番）、０．２％のキサントフモールを含む変種（４番）または１％のＡＣＥ５０＋０．２％のキサントフラブを含む変種（５番）が、コントロールと比較して、貯蔵寿命が約４日間向上していることを示す。０．２％のキサントフラブ＋０．８％のラクチドを用いると（６番）、貯蔵寿命はさらに向上し、コントロールと比較して約１４日間の向上であった。１％のＡＣＥ５０＋０．２％のキサントフラブ＋０．８％のラクチドを含む変種（７番）は、最良の機能を発揮し、コントロールと比較して、貯蔵寿命が１９日より長く延長された。
【００９７】
【表６】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際調査報告】
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