(57)【要約】本開示は、サイクリン依存性キナーゼ４／６（ＣＤＫ４／６）阻害剤化合物、（ｂ）Ｂ−Ｒａｆ阻害剤化合物、および任意に（ｃ）アルファ−アイソフォーム特異的ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤化合物を含む、がんの治療または予防のための医薬的組み合わせ、ならびにがんの治療または予防に関連する医薬組成物、使用および方法に関する。
2018525425.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）式（Ｉ）の構造を有する第１の化合物：
【化１】
2018525425.tif 000019
またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物と、
（ｂ）式（ＩＩ）の構造を有する第２の化合物：
【化２】
2018525425.tif 000020
またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物と
を含む、医薬的組み合わせ。
【請求項２】
式（Ｉ）の構造を有する前記化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物、および式（ＩＩ）の構造を有する前記化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物が、同じ製剤の中にある、請求項１に記載の医薬的組み合わせ。
【請求項３】
式（Ｉ）の構造を有する前記化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物、および式（ＩＩ）の構造を有する前記化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物が、別々の製剤の中にある、請求項１に記載の医薬的組み合わせ。
【請求項４】
前記組み合わせが、同時または順次投与のためのものである、請求項１に記載の医薬的組み合わせ。
【請求項５】
式（ＩＩＩ）の構造を有する第３の化合物：
【化３】
2018525425.tif 000021
またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物
を更に含む、請求項１に記載の医薬的組み合わせ。
【請求項６】
式（Ｉ）の構造を有する前記化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物、式（ＩＩ）の構造を有する前記化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物、および式（ＩＩＩ）の構造を有する前記化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和が、同じ製剤の中にある、請求項５に記載の医薬的組み合わせ。
【請求項７】
式（Ｉ）の構造を有する前記化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物、式（ＩＩ）の構造を有する前記化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物、および式（ＩＩＩ）の構造を有する前記化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和が、２または３つの別々の製剤の中にある、請求項５に記載の医薬的組み合わせ。
【請求項８】
前記組み合わせが、同時または順次投与のためのものである、請求項５に記載の医薬的組み合わせ。
【請求項９】
前記第１の化合物が、式（Ｉ）の構造を有する前記化合物のコハク酸塩である、請求項１から８のいずれか一項に記載の医薬的組み合わせ。
【請求項１０】
それを必要とする対象においてがんを治療または予防する方法であって、治療有効量の請求項１から９のいずれか一項に記載の医薬的組み合わせを前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項１１】
前記がんが、黒色腫、肺がん（非小細胞がん（ＮＳＣＬＣ）を含む）、結腸直腸がん（ＣＲＣ）、乳がん、腎臓がん、腎細胞癌（ＲＣＣ）、肝臓がん、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、甲状腺がん、膵がん、神経線維腫症、および肝細胞癌からなる群から選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記がんが結腸直腸がんである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
前記がんが、Ｂ−Ｒａｆ変異、Ｂ−Ｒａｆ  Ｖ６００Ｅ変異、ＰＩＫ３ＣＡ変異、およびＰＩＫ３ＣＡ過剰発現のうちの１つまたは複数により特徴付けられる、請求項１０から１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
がんの治療または予防における使用のための、請求項１〜９のいずれか一項に記載の医薬的組み合わせ。
【請求項１５】
がんの治療または予防のための医薬の製造における使用のための、請求項１〜９のいずれか一項に記載の医薬的組み合わせ。
【請求項１６】
前記がんが、黒色腫、肺がん（非小細胞がん（ＮＳＣＬＣ）を含む）、結腸直腸がん（ＣＲＣ）、乳がん、腎臓がん、腎細胞癌（ＲＣＣ）、肝臓がん、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、甲状腺がん、膵がん、神経線維腫症、および肝細胞癌からなる群から選択される、請求項１４または１５に記載の医薬的組み合わせ。
【請求項１７】
前記がんが結腸直腸がんである、請求項１６に記載の医薬的組み合わせ。
【請求項１８】
前記がんが、Ｂ−Ｒａｆ変異、Ｂ−Ｒａｆ  Ｖ６００Ｅ変異、ＰＩＫ３ＣＡ変異、およびＰＩＫ３ＣＡ過剰発現のうちの１つまたは複数により特徴付けられる、請求項１４から１６のいずれか一項に記載の医薬的組み合わせ。
【請求項１９】
がんの治療または予防のための医薬の製造のための、請求項１〜９のいずれか一項に記載の医薬的組み合わせの使用。
【請求項２０】
がんの治療または予防のための、請求項１〜９のいずれか一項に記載の医薬的組み合わせの使用。
【請求項２１】
前記がんが、黒色腫、肺がん（非小細胞がん（ＮＳＣＬＣ）を含む）、結腸直腸がん（ＣＲＣ）、乳がん、腎臓がん、腎細胞癌（ＲＣＣ）、肝臓がん、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、甲状腺がん、膵がん、神経線維腫症、および肝細胞癌からなる群から選択される、請求項１９または２０に記載の使用。
【請求項２２】
前記がんが結腸直腸がんである、請求項２１に記載の使用。
【請求項２３】
前記がんが、Ｂ−Ｒａｆ変異、Ｂ−Ｒａｆ  Ｖ６００Ｅ変異、ＰＩＫ３ＣＡ変異、およびＰＩＫ３ＣＡ過剰発現のうちの１つまたは複数により特徴付けられる、請求項１９から２２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２４】
（ａ）式（Ｉ）の構造を有する第１の化合物：
【化４】
2018525425.tif 000022
またはその薬学的に許容される塩と、
（ｂ）式（ＩＩ）の構造を有する第２の化合物：
【化５】
2018525425.tif 000023
またはその薬学的に許容される塩と
を含む、医薬組成物。
【請求項２５】
式（ＩＩＩ）の構造を有する第３の化合物：
【化６】
2018525425.tif 000024
またはその薬学的に許容される塩
を更に含む、請求項２４に記載の医薬組成物。
【請求項２６】
１つまたは複数の添加剤を更に含む、請求項２４または２５に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
技術分野
本開示は、（ａ）サイクリン依存性キナーゼ４／６（ＣＤＫ４／６）阻害剤化合物、（ｂ）Ｂ−Ｒａｆ阻害剤化合物、および任意に（ｃ）アルファ−アイソフォーム特異的ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤化合物を含む、癌の治療または予防のための医薬的組み合わせ（pharmaceutical combination）に関する。本開示は、がんの治療または予防に関連する医薬組成物、使用および方法も提供する。
【背景技術】
【０００２】
背景
腫瘍発生は、サイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）およびこれらの調節剤の遺伝子改変および調節解除に密接に関連しており、ＣＤＫの阻害剤が抗がん療法に有用でありうることを示唆している。事実、初期の結果は、転換細胞および正常細胞が、例えばサイクリンＤ／ＣＤＫ４／６に対する要件が異なっていること、ならびに従来の細胞障害性および細胞増殖抑制性薬物により観察された一般的な宿主毒性を回避する新規抗新生物剤を開発することが、可能でありうることを示唆している。
【０００３】
ＣＤＫの機能はリン酸化することであり、したがって、例えば、網膜芽細胞腫タンパク質、ラミン、ヒストンＨ１、および有糸分裂紡錘体の構成成分を含む特定のタンパク質を活性化または不活性化することである。ＣＤＫにより媒介される触媒ステップは、ＡＴＰから巨大分子酵素基質へのリン酸基転移反応を伴う。いくつかの化合物群（例えば、Fischer, P. M. Curr. Opin. Drug Discovery Dev. 2001, 4, 623-634において総説されている）が、ＣＤＫ特異的ＡＴＰ拮抗作用によって抗増殖特性を持つことが見出されている。
【０００４】
分子レベルにおいて、ＣＤＫ／サイクリン複合体活性の媒介は、一連の刺激性および阻害性のリン酸化または脱リン酸化事象を必要とする。ＣＤＫリン酸化は、一群のＣＤＫ活性化キナーゼ（ＣＡＫ）、ならびに／またはｗｅｅ１、Ｍｙｔ１、およびＭｉｋ１などのキナーゼによって実施される。脱リン酸化は、Ｃｄｃ２５（ａ＆ｃ）、ＰＰ２Ａ、またはＫＡＰなどのホスファターゼにより実施される。
【０００５】
ＣＤＫ／サイクリン複合体活性は、内在性細胞タンパク質様阻害剤の２つのファミリーである、Ｋｉｐ／ＣｉｐファミリーまたはＩＮＫファミリーによって更に調節されうる。ＩＮＫタンパク質は、ＣＤＫ４およびＣＤＫ６に特異的に結合する。ｐ１６ｉｎｋ４（ＭＴＳ１としても公知である）は、多数の原発性がんにおいて変異または欠失している、潜在的な腫瘍抑制遺伝子である。Ｋｉｐ／Ｃｉｐファミリーには、ｐ２１Ｃｉｐ１，Ｗａｆ１、ｐ２７Ｋｉｐ１、およびｐ５７ｋｉｐ２などのタンパク質が含まれ、ｐ２１は、ｐ５３により誘発され、ＣＤＫ２／サイクリン（Ｅ／Ａ）複合体を不活性化することができる。異常に低レベルのｐ２７発現が、乳がん、結腸がん、および前立腺がんにおいて観察されている。逆に、固形腫瘍におけるサイクリンＥの過剰発現は、不十分な患者予後に相関していることが示されている。サイクリンＤ１の過剰発現は、食道癌、乳癌、扁平上皮癌、および非小細胞肺癌に関連している。
【０００６】
増殖細胞における細胞周期の協調および駆動におけるＣＤＫおよびそれらの関連タンパク質の中心的役割が、上記に概説されている。ＣＤＫが主要な役割を果たすいくつかの生化学的経路も記載されている。したがって、ＣＤＫを一般的に、またはＣＤＫを特異的に標的にする治療薬を使用してがんなどの増殖性障害を治療するために、単剤療法を開発することは潜在的に極めて望ましい。
【０００７】
様々なＲａｓ  ＧＴＰアーゼおよびＢ−Ｒａｆキナーゼにおける変異は、ＭＡＰＫ経路の持続的および構成的活性化をもたらし、最終的に細胞分裂および生存の増加をもたらしうることが確認されている。この結果、これらの変異は、広範囲のヒトがんの確立、発生、および進行と強く関連している。シグナル伝達におけるＲａｆキナーゼ、具体的にはＢ−Ｒａｆの生物学的な役割は、Davies, H., et al., Nature (2002) 9:1-6; Garnett, M.J. & Marais, R., Cancer Cell (2004) 6:313-319; Zebisch, A. & Troppmair, J., Cell. Mol. Life Sci. (2006) 63:1314-1330; Midgley, R.S. & Kerr, D.J., Crit. Rev. Onc/Hematol. (2002) 44:109-120; Smith, R.A., et al., Curr. Top. Med. Chem. (2006) 6:1071-1089およびDownward, J., Nat. Rev. Cancer (2003) 3:11-22に記載されている。
【０００８】
ＭＡＰＫ経路シグナル伝達を活性化するＢ−Ｒａｆキナーゼの天然に生じる変異が、大きなパーセンテージでヒト黒色腫（Davies (2002)上記）および甲状腺がん（Cohen et al J. Nat. Cancer Inst. (2003) 95(8) 625-627およびKimura et al Cancer Res. (2003) 63(7) 1454-1457）において、ならびに低いが、依然として有意な頻度で以下において見出された。
【０００９】
バレット腺癌（Garnett et al., Cancer Cell (2004) 6 313-319およびSommerer et al Oncogene (2004) 23(2) 554-558）、胆道癌（Zebisch et al., Cell. Mol. Life Sci. (2006) 63 1314-1330）、乳がん（Davies (2002)上記）、子宮頸がん（Moreno-Bueno et al Clin. Cancer Res. (2006) 12(12) 3865-3866）、胆管細胞癌（Tannapfel et al Gut (2003) 52(5) 706-712）、神経膠芽腫、星状細胞腫および上衣細胞腫などの原発性ＣＮＳ腫瘍を含む中枢神経系腫瘍（Knobbe et al Acta Neuropathol. (Berl.) (2004) 108(6) 467-470, Davies (2002)上記およびGarnett et al., Cancer Cell (2004)上記）、ならびに二次性ＣＮＳ腫瘍（すなわち、中枢神経系の外部に由来する腫瘍の中枢神経系への転移）、大腸結腸癌を含む結腸直腸がん（Yuen et al Cancer Res. (2002) 62(22) 6451-6455, Davies (2002)上記およびZebisch et al., Cell. Mol. Life Sci. (2006））、胃がん（Lee et al Oncogene (2003) 22(44) 6942-6945）、頭頸部扁平上皮癌を含む頭頸部癌（Cohen et al J. Nat. Cancer Inst. (2003) 95(8) 625-627およびWeber et al Oncogene (2003) 22(30) 4757-4759）、白血病を含む血液がん（Garnett et al., Cancer Cell (2004)上記）、特に急性リンパ芽球性白血病（Garnett et al., Cancer Cell (2004)上記およびGustafsson et al Leukemia (2005) 19(2) 310-312）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）(Lee et al Leukemia (2004) 18(1) 170-172およびChristiansen et al Leukemia (2005) 19(12) 2232-2240）、骨髄異形成症候群（Christiansen et al Leukemia (2005)上記）および慢性骨髄性白血病（Mizuchi et al Biochem. Biophys. Res. Commun. (2005) 326(3) 645-651）、ホジキンリンパ腫（Figl et al Arch. Dermatol. (2007) 143(4) 495-499）、非ホジキンリンパ腫（Lee et al Br. J. Cancer (2003) 89(10) 1958-1960）、巨核芽球性白血病（Eychene et al Oncogene (1995) 10(6) 1159-1165）および多発性骨髄腫（Ng et al Br. J. Haematol. (2003) 123(4) 637-645）、肝細胞癌（Garnett et al., Cancer Cell (2004））、小細胞肺がん（Pardo et al EMBO J. (2006) 25(13) 3078-3088)および非小細胞肺がん（Davies (2002)上記）を含む肺がん（Brose et al Cancer Res. (2002) 62(23) 6997-7000, Cohen et al J. Nat. Cancer Inst. (2003)上記およびDavies (2002)上記）、卵巣がん（Russell & McCluggage J. Pathol. (2004) 203(2) 617-619およびDavies (2002)上記）、子宮内膜がん（Garnett et al., Cancer Cell (2004)上記およびMoreno-Bueno et al Clin. Cancer Res. (2006)上記）、膵がん（Ishimura et al Cancer Lett. (2003) 199(2) 169-173）、下垂体腺腫（De Martino et al J. Endocrinol. Invest. (2007) 30(1) RC1-3）、前立腺がん（Cho et al Int. J. Cancer (2006) 119(8) 1858-1862）、腎がん（Nagy et al Int. J. Cancer (2003) 106(6) 980-981）、肉腫（Davies (2002)上記）、ならびに皮膚がん（Rodriguez-Viciana et al Science (2006) 311(5765) 1287-1290およびDavies (2002)上記）。ｃ−Ｒａｆの過剰発現は、ＡＭＬ（Zebisch et al., Cancer Res. (2006) 66(7) 3401-3408およびZebisch (Cell. Mol. Life Sci. (2006)）、ならびに赤白血病（Zebisch et la., Cell. Mol. Life Sci. (2006)）に関連付けられている。
【００１０】
ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）は、リン酸塩がイノシトール脂質のＤ−３’位に移動してホスホイノシトール−３−リン酸（ＰＩＰ）、ホスホイノシトール−３，４−二リン酸（ＰＩＰ２）、およびホスホイノシトール−３，４，５−三リン酸（ＰＩＰ３）を産生させ、次にプレクストリン相同性、ＦＹＶＥ、Ｐｈｏｘ、および他のリン脂質結合ドメインを含有するタンパク質を、多くの場合に細胞膜にある様々なシグナル伝達複合体にドッキングさせることにより、シグナル伝達カスケードにおける第２のメッセンジャーとして作用するように触媒する、脂質キナーゼのファミリーを含む（Vanhaesebroeck et al., Annu. Rev. Biochem 70:535 (2001); Katso et al., Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 17:615 (2001)）。２つのクラス１  ＰＩ３Ｋのうち、クラス１Ａ  ＰＩ３Ｋは、ｐ８５α、ｐ５５α、ｐ５０α、ｐ８５β、またはｐ５５γでありうる調節サブユニットと構成的に会合する触媒性ｐ１１０サブユニット（α、β、δアイソフォーム）から構成されるヘテロ二量体である。クラス１Ｂサブクラスは、２つの調節サブユニットのｐ１０１またはｐ８４のうちの１つと会合する触媒性ｐ１１０γサブユニットから構成されるヘテロ二量体である、１つのファミリーメンバーを有する（Fruman et al., Annu Rev. Biochem. 67:481 (1998); Suire et al., Curr. Biol. 15:566 (2005)）。ｐ８５／５５／５０サブユニットのモジュラードメインは、特定の配列の文脈において、活性化された受容体チロシンキナーゼおよび細胞質チロシンキナーゼ上のホスホチロシン残基に結合し、クラス１Ａ  ＰＩ３Ｋの活性化および局在化をもたらす、Ｓｒｃ相同性（ＳＨ２）ドメインを含む。クラス１Ｂ  ＰＩ３Ｋは、多様なレパートリーのペプチドおよび非ペプチドリガンドに結合するＧタンパク質共役受容体によって、直接活性化される（Stephens et al., Cell 89:105 (1997)); Katso et al., Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 17:615-675 (2001)）。 したがって、もたらされたクラスＩ  ＰＩ３Ｋのリン脂質産物は、上流の受容体を、増殖、生存、走化性、細胞輸送、運動性、代謝、炎症およびアレルギー応答、転写、ならびに翻訳を含む下流の細胞活性と関連付ける（Cantley et al., Cell 64:281 (1991); Escobedo and Williams, Nature 335: 85 (1988); Fantl et al., Cell., 69: 413 (1992)）。
【００１１】
多くの場合において、ＰＩＰ２およびＰＩＰ３は、ウイルスがん遺伝子ｖ−Ａｋｔのヒト相同体の産物であるＡｋｔを、細胞膜へと動員し、そこで成長および生存にとって重要な多くの細胞内シグナル伝達経路の節点として作用する（Fantl et al., Cell 69:413-423(1992); Bader et al., Nature Rev. Cancer 5:921 (2005); Vivanco and Sawyer, Nature Rev. Cancer 2:489 (2002)）。多くの場合にＡｋｔ活性化を介して生存を増加させるＰＩ３Ｋの異常な調節は、ヒトがんにおいて最も一般的な事象の１つであり、複数のレベルにおいて生じることが示されている。イノシトール環の３’位でホスホイノシチドを脱リン酸化し、そうすることによってＰＩ３Ｋ活性を拮抗する腫瘍抑制遺伝子のＰＴＥＮは、様々な腫瘍において機能的に欠失している。他の腫瘍では、ｐ１１０αアイソフォームであるＰＩＫ３ＣＡの遺伝子、およびＡｋｔの遺伝子が増幅され、遺伝子産物のタンパク質発現が増加されることが、いくつかのヒトがんにおいて実証されている。
【００１２】
更に、ｐ８５−ｐ１１０複合体を上方調節するように機能するｐ８５αの変異および転位が、ヒトがんにおいて記載されている。最後に、下流シグナル伝達経路を活性化するＰＩＫ３ＣＡにおける体細胞ミスセンス変異が、多種多様なヒトがんにおいて著しく頻繁に記載されている（Kang at el., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102:802 (2005); Samuels et al., Science 304:554 (2004); Samuels et al., Cancer Cell 7:561-573 (2005)）。これらの観察は、ホスホイノシトール−３キナーゼ、ならびにこのシグナル伝達経路の上流および下流構成成分の調節解除が、ヒトのがんおよび増殖性疾患に関連する最も一般的な調節解除の１つであることを示している（Parsons et al., Nature 436:792 (2005); Hennessey at el., Nature Rev. Drug Disc. 4:988-1004 (2005)）。
【００１３】
下記に提示されている式（ＩＩＩ）の２−カルボキサミドシクロアミノ尿素誘導体は、有益な薬理学的特性を有すること、および例えばＰＩ３Ｋ（ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ）を阻害することが見出された。特に、これらの化合物は、好ましくは、ベータ、および／またはデルタ、および／またはガンマサブタイプに関して、ＰＩ３Ｋアルファに対して改善された選択性を示す。したがって式（ＩＩＩ）の化合物は、例えば、ＰＩ３キナーゼに依存する疾患（特に、ＰＩ３Ｋアルファに依存する、例えば、ＰＩ３Ｋアルファの過剰発現もしくは増幅を示すもの、またはＰＩＫ３ＣＡの体細胞変異を示すもの）、とりわけ腫瘍疾患および白血病などの増殖性疾患の治療における使用に適している。
【００１４】
更に、これらの組成物は、好ましくは改善された代謝安定性を示し、したがって低減されたクリアランスを示し、改善された薬物動態プロファイルをもたらす。
【００１５】
これらのがんにおいてＲａｆファミリーキナーゼが果たした役割によって、ならびにＢ−Ｒａｆキナーゼ活性の阻害を選択的に標的にするものを含む一連の前臨床および治療剤による予備的研究によって（King A.J., et al., (2006) Cancer Res. 66:11100-11105）、１つまたは複数のＲａｆファミリーキナーゼの阻害剤が、Ｒａｆキナーゼに関連するがんの治療に有用であることが一般に受け入れられている。
【００１６】
多くのがん、特に、Ｂ−Ｒａｆ変異、Ｂ−Ｒａｆ  Ｖ６００Ｅ変異、ＰＩＫ３ＣＡ変異、および／またはＰＩＫ３ＣＡ過剰発現を有するものは、例えば、Ｂ−Ｒａｆ阻害剤による治療を受け入れやすい。しかし、特定の場合において、がんは選択された治療薬に対して抵抗性を取得し、最終的には治療に対して難治性になる。
【００１７】
がん患者には多数の治療選択肢があるにもかかわらず、有効で安全な治療剤の必要性、および組み合わせ療法におけるそれらの優先的な使用の必要性が、依然として存在する。特に、がん、とりわけ現行の療法に対して抵抗性がある、および／または難治性であるがんを治療する有効な方法の必要性が存在する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１８】
要旨
第１の態様では、
（ａ）式（Ｉ）の構造を有する第１の化合物：
【００１９】
【化１】
2018525425.tif 000003
またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物と、
（ｂ）式（ＩＩ）の構造を有する第２の化合物：
【００２０】
【化２】
2018525425.tif 000004
またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物と
を含む医薬的組み合わせが、本明細書において提供される。
【００２１】
１つの実施形態において、式（Ｉ）の構造を有する化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物、および式（ＩＩ）の構造を有する化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物は、同じ製剤（formulation）の中にある。
【００２２】
１つの実施形態において、式（Ｉ）の構造を有する化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物、および式（ＩＩ）の構造を有する化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物は、別々の製剤の中にある。
【００２３】
１つの実施形態において、第１の態様の組み合わせは、同時または順次投与のためのものである。
【００２４】
第１の態様の１つの実施形態において、医薬的組み合わせは、式（ＩＩＩ）の構造を有する第３の化合物：
【００２５】
【化３】
2018525425.tif 000005
またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を更に含む。
【００２６】
１つの実施形態において、式（Ｉ）の構造を有する化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物、式（ＩＩ）の構造を有する化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物、および式（ＩＩＩ）の構造を有する化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物は、同じ製剤の中にある。
【００２７】
１つの実施形態において、式（Ｉ）の構造を有する化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物、式（ＩＩ）の構造を有する化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物、および式（ＩＩＩ）の構造を有する化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物は、２つ以上の別々の製剤の中にある。
【００２８】
１つの実施形態において、式（Ｉ）の構造を有する化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物、式（ＩＩ）の構造を有する化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物、および式（ＩＩＩ）の構造を有する化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物は、２または３つの別々の製剤の中にある。
【００２９】
１つの実施形態において、式（Ｉ）の構造を有する化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物、式（ＩＩ）の構造を有する化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物、および式（ＩＩＩ）の構造を有する化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を含む医薬的組み合わせは、同時または順次投与のためのものである。
【００３０】
上記に記載された医薬的組み合わせの特定の実施形態において、第１の化合物は、式（Ｉ）の構造を有する化合物のコハク酸塩である。
【００３１】
上記に記載された医薬的組み合わせの特定の実施形態において、第２の化合物は、式（ＩＩ）の構造を有する化合物のメシル酸塩である。
【００３２】
第２の態様では、それを必要とする対象においてがんを治療または予防する方法であって、治療有効量の上記に記載された実施形態のいずれか１つに従って医薬的組み合わせを対象に投与することを含む方法が、本明細書において提供される。
【００３３】
１つの実施形態において、がんは、黒色腫、肺がん（非小細胞がん（ＮＳＣＬＣ）を含む）、結腸直腸がん（ＣＲＣ）、乳がん、腎臓がん、腎細胞癌（ＲＣＣ）、肝臓がん、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、甲状腺がん、膵がん、神経線維腫症、および肝細胞癌からなる群から選択される。
【００３４】
特定の実施形態において、がんは、結腸直腸がんである。
【００３５】
第２の態様のある特定の実施形態において、がんは、Ｂ−Ｒａｆ変異、Ｂ−Ｒａｆ  Ｖ６００Ｅ変異、ＰＩＫ３ＣＡ変異、およびＰＩＫ３ＣＡ過剰発現のうちの１つまたは複数により特徴付けられる。
【００３６】
第３の態様では、がんの治療または予防における使用のための上記に記載された医薬的組み合わせが、本明細書において提供される。
【００３７】
第４の態様では、がんの治療または予防のための医薬（medicament）の製造における使用のための上記に記載された医薬的組み合わせが、本明細書において提供される。
【００３８】
第３および第４の態様のある実施形態において、がんは、黒色腫、肺がん（非小細胞がん（ＮＳＣＬＣ）を含む）、結腸直腸がん（ＣＲＣ）、乳がん、腎臓がん、腎細胞癌（ＲＣＣ）、肝臓がん、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、甲状腺がん、膵がん、神経線維腫症、および肝細胞癌からなる群から選択される。
【００３９】
特定の実施形態において、がんは、結腸直腸がんである。
【００４０】
第３および第４の態様のある特定の実施形態において、がんは、Ｂ−Ｒａｆ変異、Ｂ−Ｒａｆ  Ｖ６００Ｅ変異、ＰＩＫ３ＣＡ変異、およびＰＩＫ３ＣＡ過剰発現のうちの１つまたは複数により特徴付けられる。
【００４１】
第５の態様では、がんの治療または予防のための医薬の製造のための上記に記載された医薬的組み合わせの使用が、本明細書において提供される。
【００４２】
第６の態様では、がんの治療または予防のための上記に記載された医薬的組み合わせの使用が、本明細書において提供される。
【００４３】
第５および第６の態様の特定の実施形態において、がんは、黒色腫、肺がん（非小細胞がん（ＮＳＣＬＣ）を含む）、結腸直腸がん（ＣＲＣ）、乳がん、腎臓がん、腎細胞癌（ＲＣＣ）、肝臓がん、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、甲状腺がん、膵がん、神経線維腫症、および肝細胞癌からなる群から選択される。
【００４４】
特定の実施形態において、がんは、結腸直腸がんである。
【００４５】
第５および第６の態様のある特定の実施形態において、がんは、Ｂ−Ｒａｆ変異、Ｂ−Ｒａｆ  Ｖ６００Ｅ変異、ＰＩＫ３ＣＡ変異、およびＰＩＫ３ＣＡ過剰発現のうちの１つまたは複数により特徴付けられる。
【００４６】
第７の態様では、
（ａ）式（Ｉ）の構造を有する第１の化合物：
【００４７】
【化４】
2018525425.tif 000006
またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物と、
（ｂ）式（ＩＩ）の構造を有する第２の化合物：
【００４８】
【化５】
2018525425.tif 000007
またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物と
を含む医薬組成物が、本明細書において提供される。
【００４９】
第７の態様の実施形態において、医薬組成物は、式（ＩＩＩ）の構造を有する第３の化合物：
【００５０】
【化６】
2018525425.tif 000008
またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を更に含む。
【００５１】
１つの実施態様において、医薬組成物は１つまたは複数の添加剤を含む。
【図面の簡単な説明】
【００５２】
【図１】図１は、６個のＲａｆ変異結腸直腸がん細胞系における、ＬＥＥ０１１、ダブラフェニブ、ＢＹＬ７１９、およびこれらの組み合わせの用量応答曲線を示す。ｘ軸は、ｌｏｇ１０の処理希釈を示し、ｙ軸は、ＤＭＳＯと比べた、処理後の細胞計数を示す。濃い破線（strong dashed line）は、処理開始前（「ベースライン」）の細胞数を示す。
【図２】図２は、６個のＢ−Ｒａｆ変異結腸直腸がん細胞系の２４時間、４８時間、および７２時間後（異なるモノクロ階調）における、ＬＥＥ０１１、ダブラフェニブ、ＢＹＬ７１９、およびこれらの組み合わせの最大カスパーゼ３／７誘発を示す。ｘ軸は、処理を示し、ｙ軸は、各処理において見られた最大カスパーゼ３／７誘発（細胞の％）を示す。
【図３】図３は、６個のＲａｆ変異結腸直腸がん細胞系におけるＬＥＥ０１１、ダブラフェニブ、およびＬＥＥ０１１とダブラフェニブの組み合わせの用量応答曲線を示す。ｘ軸は、ｌｏｇ１０の処理希釈を示し、ｙ軸は、ＤＭＳＯと比べた、処理後の細胞計数を示す。濃い破線は、処理開始前（「ベースライン」）の細胞数を示す。
【図４】図４は、６個の結腸直腸がん細胞系の２４時間、４８時間、および７２時間後（異なるモノクロ階調）における、ＬＥＥ０１１、ダブラフェニブ、およびＬＥＥ０１１とダブラフェニブの組み合わせの最大カスパーゼ３／７誘発を示す。ｘ軸は、処理を示し、ｙ軸は、各処理において見られた最大カスパーゼ３／７誘発（細胞の％）を示す。
【発明を実施するための形態】
【００５３】
詳細な説明
阻害剤化合物
ＣＤＫ４／６阻害剤の７−シクロペンチル−２−（５−ピペラジン−１−イル−ピリジン−２−イルアミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−カルボン酸ジメチルアミド（「ＬＥＥ０１１」または「リボシクリブ」としても公知である）は、本明細書において式（Ｉ）の構造を有する化合物、または化合物（Ｉ）と呼ばれる。
【００５４】
【化７】
2018525425.tif 000009
【００５５】
化合物（Ｉ）、およびその薬学的に許容される塩または溶媒和物は、国際公開第２０１０／０２０６７５号パンフレット（例えば、実施例７４）に記載されており、その全体が参照として本明細書に組み込まれる。
【００５６】
Ｂ−Ｒａｆ阻害剤のＮ−｛３−［５−（２−アミノ−４−ピリミジニル）−２−（１，１−ジメチルエチル）−１，３−チアゾール−４−イル］−２−フルオロフェニル｝−２，６−ジフルオロベンゼンスルホンアミド（「ダブラフェニブ」としても公知である）は、本明細書において式（ＩＩ）の構造を有する化合物、または化合物（ＩＩ）と呼ばれる。
【００５７】
【化８】
2018525425.tif 000010
【００５８】
化合物（ＩＩ）、およびその薬学的に許容される塩または溶媒和物は、国際公開第２００９／１３７３９１号パンフレット（例えば、実施例５８ａ〜５８ｅ）に記載されている。この公報は、その全体が参考として本明細書に組み込まれる。化合物（ＩＩ）を実施例３の方法に従って調製してもよい。
【００５９】
アルファ−アイソフォーム特異的ＰＩ３Ｋ阻害剤化合物の（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（｛４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル｝−アミド）（「ＢＹＬ７１９」または「アルペリシブ」としても公知である）は、本明細書において式（ＩＩＩ）の構造を有する化合物、または化合物（ＩＩＩ）と呼ばれる。
【００６０】
【化９】
2018525425.tif 000011
【００６１】
化合物（ＩＩＩ）、およびその薬学的に許容される塩または溶媒和物は、国際出願第２０１０／０２９０８２号パンフレット（例えば、実施例１５）に記載されている。この公報は、その全体が参考として本明細書に組み込まれる。
【００６２】
塩および溶媒和物
本明細書に記載されている阻害剤化合物の塩は、単独で、または遊離塩基形態との混合物で存在することができ、好ましくは薬学的に許容される塩である。「薬学的に許容される塩」は、本明細書において使用されるとき、特に指示のない限り、本発明の化合物に存在しうる酸性および塩基性基の塩を含む。そのような塩は、例えば、塩基性窒素原子との反応によって、好ましくは有機または無機酸との酸付加塩として形成されうる。適切な無機酸は、例えば、塩酸、硫酸、またはリン酸などのハロゲン酸である。適切な有機酸は、例えば、フマル酸またはメタンスルホン酸などのカルボン酸またはスルホン酸である。単離または精製の目的には、薬学的に許容されない塩、例えば、ピクリン酸塩または過塩素酸塩を使用することも可能である。
【００６３】
本明細書に記載されている医薬的組み合わせの好ましい実施形態において、式（Ｉ）の構造を有する化合物は、コハク酸塩の形態である。
【００６４】
本明細書に記載されている医薬的組み合わせの好ましい実施形態において、式（ＩＩ）の構造を有する化合物は、メシル酸塩の形態である。
【００６５】
本明細書に記載されている医薬的組み合わせの好ましい実施形態において、式（ＩＩＩ）の構造を有する化合物は、遊離塩基の形態である。
【００６６】
治療用途では、薬学的に許容される塩、溶媒和物、または遊離化合物（適用可能な場合では、医薬調製物の形態）のみが用いられており、したがって、これらが好ましい。遊離形態の化合物と、例えば新規化合物の精製または特定において中間体として使用することができる塩を含む、塩形態の化合物との密接な関係を考慮すると、本明細書以上および本明細書以下の遊離化合物への参照は、対応する塩も参照することが適切および適当であることが理解されるべきである。本明細書において考慮される塩は、好ましくは薬学的に許容される塩であり、適切な対イオン形成性の薬学的に許容される塩は、当該分野において公知である。
【００６７】
治療方法
本発明は、がんの治療または予防に関する。
【００６８】
１つの実施形態において、がんは、黒色腫、肺がん（非小細胞がん（ＮＳＣＬＣ）を含む）、結腸直腸がん（ＣＲＣ）、乳がん、腎臓がん、腎細胞癌（ＲＣＣ）、肝臓がん、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、甲状腺がん、膵がん、神経線維腫症、および肝細胞癌からなる群から選択される。
【００６９】
特定の実施形態において、がんは、結腸直腸がんである。
【００７０】
第２の態様のある特定の実施形態において、がんは、Ｂ−Ｒａｆ変異、Ｂ−Ｒａｆ  Ｖ６００Ｅ変異、ＰＩＫ３ＣＡ変異、およびＰＩＫ３ＣＡ過剰発現のうちの１つまたは複数により特徴付けられる。
【００７１】
第３の態様では、がんの治療または予防における使用のための上記に記載された医薬的組み合わせが、本明細書において提供される。
【００７２】
第４の態様では、がんの治療または予防のための医薬の製造における使用のための上記に記載された医薬的組み合わせが、本明細書において提供される。
【００７３】
第３および第４の態様のある実施形態において、がんは、黒色腫、肺がん（非小細胞がん（ＮＳＣＬＣ）を含む）、結腸直腸がん（ＣＲＣ）、乳がん、腎臓がん、腎細胞癌（ＲＣＣ）、肝臓がん、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、甲状腺がん、膵がん、神経線維腫症、および肝細胞癌からなる群から選択される。
【００７４】
特定の実施形態において、がんは、結腸直腸がんである。
【００７５】
第３および第４の態様のある特定の実施形態において、がんは、Ｂ−Ｒａｆ変異、Ｂ−Ｒａｆ  Ｖ６００Ｅ変異、ＰＩＫ３ＣＡ変異、およびＰＩＫ３ＣＡ過剰発現のうちの１つまたは複数により特徴付けられる。
【００７６】
第５の態様では、がんの治療または予防のための医薬の製造のための上記に記載された医薬的組み合わせの使用が、本明細書において提供される。
【００７７】
第６の態様では、がんの治療または予防のための上記に記載された医薬的組み合わせの使用が、本明細書において提供される。
【００７８】
第５および第６の態様の特定の実施形態において、がんは、黒色腫、肺がん（非小細胞がん（ＮＳＣＬＣ）を含む）、結腸直腸がん（ＣＲＣ）、乳がん、腎臓がん、腎細胞癌（ＲＣＣ）、肝臓がん、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、甲状腺がん、膵がん、神経線維腫症、および肝細胞癌からなる群から選択される。
【００７９】
特定の実施形態において、がんは、結腸直腸がんである。
【００８０】
第５および第６の態様のある特定の実施形態において、がんは、Ｂ−Ｒａｆ変異、Ｂ−Ｒａｆ  Ｖ６００Ｅ変異、ＰＩＫ３ＣＡ変異、およびＰＩＫ３ＣＡ過剰発現のうちの１つまたは複数により特徴付けられる。
【００８１】
医薬的組み合わせおよび組成物
組み合わせおよび組成物を、細胞または組織を含む系、ならびにヒト対象（例えば、患者）または動物対象に投与することができる。
【００８２】
本発明の組み合わせおよび組成物を、様々な剤形（dosage form）および強度により、薬学的に有効な量または臨床的に有効な量で投与することができる。
【００８３】
組み合わせの両方の構成成分を別々に投与する、または固定された組み合わせ（fixed combination）、例えば組み合わせを含む単一のガレノス組成物（single galenical composition）を投与するための医薬組成物は、当該技術において公知の任意の方法で調製することができ、ヒトを含む哺乳動物（温血動物）への経口または直腸内などの経腸および非経口投与に適したものである。
【００８４】
本明細書に記載されている医薬組成物は、約０．１％〜約９９．９％、好ましくは約１％〜約６０％の治療剤を含有することができる。経腸または非経口投与のための組み合わせ療法に適した医薬組成物は、例えば、糖衣錠、錠剤、カプセル剤もしくは坐剤、またはアンプル剤などの単位剤形のものである。別段に指示のない限り、これらはそれ自体公知の方法により、例えば、様々な従来の混合、微粉砕、直接圧縮、造粒、糖衣、溶解、凍結乾燥法、または当業者に容易に理解される製作技術によって調製される。それぞれの剤形の個別の用量に含有される組み合わせ相手の単位含有量は、必要な有効量が複数の投与単位の投与により達成されうるので、それ自体有効量を構成する必要がないことが理解される。
【００８５】
薬剤の組み合わせを含有する単位剤形、または薬剤の組み合わせの個別の薬剤は、カプセル、例えばゼラチンカプセル内に封入されたマイクロ錠剤の形態でありうる。これには、Ｐｆｉｚｅｒから入手可能なＣＡＰＳＵＧＥＬとして公知である硬質ゼラチンカプセルなどの、医薬製剤に用いられるゼラチンカプセルを使用することができる。
【００８６】
本発明の単位剤形は、医薬品（pharmaceuticals）に使用される追加の従来の担体または添加剤を任意に更に含むことができる。そのような担体の例には、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、流動促進剤、安定剤、および充填剤、希釈剤、着色剤、香料、ならびに防腐剤が含まれるが、これらに限定されない。当業者は、日常的な実験により、過剰な負担を負うことなく、剤形の特定の望ましい特性に関して１つまたは複数の上述の担体を選択することができる。使用される各担体の量は、当該技術において慣用の範囲内で変わりうる。参照として全て本明細書に組み込まれる以下の参考文献は、経口剤形の製剤化に使用される技術および添加剤を開示している。The Handbook of Pharmaceutical Excipients, 4th edition, Rowe et al., Eds., American Pharmaceuticals Association (2003)、およびRemington: the Science and Practice of Pharmacy, 20thedition, Gennaro, Ed., Lippincott Williams & Wilkins (2003)を参照されたい。
【００８７】
本明細書で使用されるとき、用語「薬学的に許容される添加剤」または「薬学的に許容される担体」は、任意および全ての溶媒、分散媒体、被覆、界面活性剤、酸化防止剤、保存剤（例えば、抗菌剤、抗真菌剤）、等張剤、吸収遅延剤、塩、保存剤、薬物、薬物安定剤、結合剤、賦形剤（excipient）、崩壊剤、滑沢剤、甘味剤、香味剤、色素など、ならびにこれらの組み合わせを含み、当業者には公知である（例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed. Mack Printing Company, 1990, pp. 1289-1329を参照されたい）。任意の従来の担体が活性成分と適合性がない場合を除いて、治療用または医薬組成物におけるその使用が考慮される。
【００８８】
これらの任意の追加の従来の担体は、１つまたは複数の従来の担体を、造粒の前もしくは間に最初の混合物に組み込むことによって、または１つまたは複数の従来の担体を、薬剤の組み合わせもしくは薬剤の組み合わせの個別の薬剤を含む顆粒と組み合わせることにより経口剤形にすることによって、経口剤形に組み込むことができる。後者の実施態様では、組み合わせた混合物を、例えばＶブレンダーにより更にブレンドし、続いて錠剤、例えばモノリシック錠剤に圧縮もしくは成形する、カプセルによりカプセル化する、またはサッシュに充填することができる。
【００８９】
薬学的に許容される崩壊剤の例には、デンプン；粘土；セルロース；アルギン酸塩；ゴム；架橋ポリマー、例えば架橋ポリビニルピロリドンまたはクロスポビドン、例えばＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ（Ｗａｙｎｅ，ＮＪ）からのＰＯＬＹＰＬＡＳＤＯＮＥ  ＸＬ；架橋カルボキシメチルセルロースナトリウムまたはクロスカルメロースナトリウム、例えばＦＭＣからのＡＣ−ＤＩ−ＳＯＬ；架橋カルボキシメチルセルロースカルシウム；ダイズ多糖；およびグアーゴムが含まれるが、これらに限定されない。崩壊剤は、組成物の約０重量％〜約１０重量％の量で存在することができる。１つの実施態様において、崩壊剤は、組成物の約０．１重量％〜約５重量％の量で存在する。
【００９０】
薬学的に許容される結合剤の例には、デンプン；セルロースおよびその誘導体、例えば微晶質セルロース、例えばＦＭＣ（Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ）からのＡＶＩＣＥＬ  ＰＨ、ヒドロキシプロピルセルロース  ヒドロキシルエチルセルロース、およびＤｏｗ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｒｐ．（Ｍｉｄｌａｎｄ，ＭＩ）からのヒドロキシルプロプルメチルセルロースのＭＥＴＨＯＣＥＬ；スクロース；デキストロース；トウモロコシシロップ；多糖；ならびにゼラチンが含まれるが、これらに限定されない。結合剤は、組成物の約０重量％〜約５０重量％、例えば２〜２０重量％の量で存在することができる。
【００９１】
薬学的に許容される滑沢剤および薬学的に許容される滑流動促進剤の例には、コロイドシリカ、三ケイ酸マグネシウム、デンプン、タルク、第三リン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸アルミニウム、ステアリン酸カルシウム、炭酸マグネシウム、酸化マグネシウム、ポリエチレングリコール、粉末セルロース、および微晶質セルロースが含まれるが、これらに限定されない。滑沢剤は、組成物の約０重量％〜約１０重量％の量で存在することができる。１つの実施態様において、滑沢剤は、組成物の約０．１重量％〜約１．５重量％の量で存在することができる。滑流動促進剤は、約０．１重量％〜約１０重量％の量で存在することができる。
【００９２】
薬学的に許容される充填剤および薬学的に許容される希釈剤の例には、粉砂糖、圧縮糖、デキストラン、デキストリン、デキストロース、ラクトース、マンニトール、微晶質セルロース、粉末セルロース、ソルビトール、スクロース、およびタルクが含まれるが、これらに限定されない。充填剤および／または希釈剤は、例えば、組成物の約０重量％〜約８０重量％の量で存在することができる。
【００９３】
がんを治療または予防するためのそれぞれの組み合わせ相手の最適投与量は、公知の方法を使用してそれぞれの個体のために経験的に決定することができ、疾患の進展の程度、個体の年齢、体重、身体全体の健康、性別および食事、投与の時間および経路、ならびに個体が服用している他の薬剤を含むが、これらに限定されない様々な要因によって左右される。最適投与量は、当該技術において周知である日常的な試験および手順を使用して確立することができる。
【００９４】
担体材料と組み合わせて単一剤形を生成することができるそれぞれの組み合わせ相手の量は、治療される個体および特定の投与様式に応じて変わる。一部の実施形態において、本明細書に記載されている薬剤の組み合わせを含有する単位剤形は、薬剤が単独で投与される場合に典型的に投与される量の、組み合わせにおけるそれぞれの薬剤を含有する。
【００９５】
本発明の組み合わせに用いられるそれぞれの組み合わせ相手の有効投与量は、用いられる特定の化合物または医薬組成物、投与様式、治療される状態、および治療される状態の重篤度に応じて変わりうる。したがって、本明細書に記載されている組み合わせの投与量レジメンは、投与経路、ならびに患者の腎臓および肝臓機能を含む様々な要因によって選択される。
【００９６】
それぞれの組み合わせ相手の有効投与量は、組み合わせにおける他の化合物と比較して、化合物のうちの１つのより頻繁な投与を必要とする場合がある。したがって、適切な投与を可能にするため、包装された医薬品は、化合物の組み合わせを含有する１つまたは複数の剤形と、化合物の組み合わせのうちの１つを含有するが、組み合わせの他の化合物を含有しない１つまたは複数の剤形とを含有することができる。
【００９７】
化合物（Ｉ）（「ＬＥＥ０１１」）は、一般に、１日あたり１０ｍｇ〜２０００ｍｇの範囲の用量でヒトに投与される。１つの実施形態において、ＬＥＥ０１１は、６００ｍｇが１日に１回投与される。別の実施形態において、ＬＥＥ０１１は、３００ｍｇが１日に１回投与される。別の実施形態において、ＬＥＥ０１１は、９００ｍｇが１日に１回投与される。
【００９８】
化合物（ＩＩ）（「ダブラフェニブ」）（非塩／非溶媒和化合物の重量に基づく）は、１日あたり２０ｍｇ〜６００ｍｇの範囲の容量でヒトに投与される。１つの実施形態において、ダブラフェニブは、１００ｍｇ〜３００ｍｇが１日に１回投与される。別の実施形態において、ダブラフェニブは、１５０ｍｇが１日に１回投与される。
【００９９】
化合物（ＩＩＩ）（「ＢＹＬ７１９」）は、約１〜６．５ｍｇ／ｋｇの有効１日用量で成人または小児に経口投与されうる。化合物（ＩＩＩ）は、単回用量により、または１日あたり４回までの分割用量により、約７０ｍｇ〜４５５ｍｇ、例えば、約２００〜４００ｍｇ、または約２４０ｍｇ〜４００ｍｇ、または約３００ｍｇ〜４００ｍｇ、または約３５０ｍｇ〜４００ｍｇの１日投与量で７０ｋｇの体重の成人に経口投与されうる。好ましくは、化合物（ＩＩＩ）は、約３５０ｍｇ〜約４００ｍｇの１日投与量で７０ｋｇの体重の成人に投与される。
【０１００】
毒性を有することなく有効性を生じる本発明の組み合わせにおける組み合わせ相手（例えば、化合物（Ｉ）、化合物（ＩＩ）、および任意の化合物（ＩＩＩ））の最適比、個別のおよび組み合わせた投与量、ならびに濃度は、標的部位へ治療剤利用能の動態学に基づいており、当業者に公知の方法を使用して決定される。
【０１０１】
投与の頻度は、使用される化合物、および治療または予防される特定の状態に応じて変わりうる。一般に、有効な療法を提供するのに十分な最小投与量の使用が好ましい。治療または予防される状態に適したアッセイを使用して、治療有効性について患者を一般にモニターすることができ、このことは当業者に熟知されている。
【０１０２】
ある態様において、本明細書に記載されている医薬的組み合わせは、がんの治療もしくは予防、またはがんの治療もしくは予防のための医薬の調製に有用である。特定の実施形態において、本明細書に記載されている医薬的組み合わせは、がんの治療、またはがんの治療のための医薬の調製に有用である。
【０１０３】
ある態様では、がんを治療または予防する（例えば、がんの治療のため）方法であって、薬学的有効量の本明細書に記載されている医薬的組み合わせを、それを必要とする患者に投与することを含む方法が提供される。がんの性質は多因子性である。特定の状況下では、異なる作用機構を有する薬物を組み合わせることができる。しかし、異なる作用様式を有する治療剤の任意の組み合わせを考慮するだけでは、有利な効果を有する組み合わせをもたらすとは限らない。
【０１０４】
本明細書に記載の医薬的組み合わせの投与は、有益な効果、例えば、症状の緩和、症状の進行の遅延、または症状の抑制に関する、例えば相乗的な治療効果のみならず、本発明の組み合わせに使用される薬学的治療剤の１つのみを適用する単剤療法と比較して、更に驚くべき有益な効果、例えば、少ない副作用、より長続きする応答、改善された生活の質、または罹患率の減少をもたらすこともできる。
【０１０５】
更なる利益は、例えば、多くの場合に投与量が少量でありうるのはもちろん、少ない頻度でも適用されうるように、低い用量の治療剤の本明細書に記載の医薬的組み合わせを使用できること、または組み合わせ相手の１つの単独により観察される副作用の発生を減らすために使用できることである。このことは、治療される患者の希望および要求に合致している。
【０１０６】
本明細書に記載の医薬的組み合わせが本明細書に記載された有益な効果をもたらすことは、確立された試験モデルによって示すことができる。当業者は、そのような有益な効果を実証するために、関連した試験モデルを選択することが十分に可能である。本発明の組み合わせの薬理学的活性は、例えば、臨床研究または動物モデルによって実証することができる。
【０１０７】
１つまたは複数の成分の相乗的相互作用を決定するためには、効果におけるそれぞれの構成成分の最適な効果範囲および絶対用量範囲を、治療を必要とする患者への異なるｗ／ｗ比範囲および用量にわたる構成成分の投与により明確に測定することができる。ヒトでは、患者において臨床研究を実施する複雑さ、および費用が、相乗作用の一次モデルとしてのこの試験形態の使用を実用的でなくすることがある。しかし、特定の実験（例えば、実施例１および２を参照されたい）において相乗作用を観察することによって、他の種および存在する動物モデルにおける効果を予測することができ、相乗効果を更に測定することができる。そのような研究の結果を使用して、有効用量比の範囲、ならびに絶対用量および血漿濃度を予測することもできる。
【０１０８】
１つの実施形態では、本明細書において提供される組み合わせ、および／または組成物は、相乗効果を示す。
【０１０９】
１つの実施形態では、ヒトへの投与のための相乗的組み合わせが本明細書において提供され、この組み合わせは、本発明に記載されている阻害剤を含み、各阻害剤の用量範囲は、適切な腫瘍モデルまたは臨床研究において示唆された相乗的範囲に相当する。
【０１１０】
本発明の組み合わせに用いられる組み合わせ相手が、単剤として市販されている形態に適用されるとき、これらの投与量および投与様式は、本明細書に別段の記載がない場合は、それぞれの市販薬の添付文書に提供されている情報に従うことができる。
【０１１１】
定義
本明細書において使用される特定の用語が、下記に記載される。化合物は、標準的な命名法の使用により記載される。別段に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術および科学用語は、本開示が属する当業者により一般的に理解される意味を有する。
【０１１２】
用語「医薬組成物」は、哺乳動物またはヒトが冒されている特定の疾患または状態を予防または治療するため、対象に、例えば哺乳動物またはヒトに投与される、少なくとも１つの治療剤を含有する混合物または溶液を指すことが本明細書において定義される。
【０１１３】
用語「薬学的に許容される」は、本明細書において定義され、健全な医療判断の範囲内において、妥当な利益／危険比に見合うように、過剰な毒性、刺激アレルギー応答、および他の問題のある合併症を有することなく、対象、例えば哺乳動物またはヒトの組織との接触に適している化合物、材料、組成物、および／または剤形を指す。
【０１１４】
用語「治療する」または「治療」は、本明細書において使用されるとき、対象の少なくとも１つの症状を軽減、低減、もしくは緩和する、または疾患の進行を遅延させる治療を含む。例えば、治療は、障害の１つ、もしくはいつかの症状の減少、またはがんなどの障害の完全な消滅でありうる。本開示の意味の範囲内において、用語「治療する」は、発症を阻止すること、遅延すること（すなわち、疾患の臨床症状前の期間）、および／または疾患が発生もしくは悪化する危険性を低減することも意味する。用語「予防する」、「予防すること」、または「予防」は、本明細書において使用されるとき、予防される状態、疾患、または障害に関連する、または起因する少なくとも１つの症状を予防することを含む。
【０１１５】
用語、治療剤の組み合わせの「薬学的有効量」または「臨床有効量」は、組み合わせにより治療される障害のベースラインの臨床的に観察可能な兆候および症状に対して、観察可能な改善をもたらすのに十分な量である。
【０１１６】
用語「組み合わせ（併用（combination））」、「治療的組み合わせ」、または「医薬的組み合わせ」は、本明細書において使用されるとき、１つの単位剤形の固定された組み合わせ、もしくは固定されていない組み合わせ（non-fixed combiantion）、または２つ以上の治療剤が、同時に、もしくはある時間間隔の範囲内で、とりわけこの時間間隔が、組み合わせ相手が協調的な、例えば相乗的な効果を示すことを可能にする範囲内で別々に、独立して投与されうる組み合わせ投与のためのキットの一部を指す。
【０１１７】
用語「組み合わせ療法（combination therapy）」は、本開示に記載されている治療状態または障害を治療する、２つ以上の治療剤の投与を指す。そのような投与は、活性成分の固定比を有する単一製剤、または各活性成分が別々の製剤（例えば、カプセル剤、および／もしくは静注製剤）などの、実質的に同時の方法によるこれらの治療剤の共投与を包含する。加えて、そのような投与は、ほぼ同時または異なる時点での、順次的な、または別々の方法による、それぞれの種類の治療剤の使用も包含する。活性成分が単一製剤または別々の製剤で投与されるかにかかわらず、治療剤は、同じ治療過程の一部として同じ患者に投与される。いずれの場合においても、治療レジメンは、本明細書に記載されている状態または障害の治療に有益な効果を提供する。
【０１１８】
用語「相乗効果」は、本明細書において使用されるとき、例えば、ＣＤＫ阻害剤のＬＥＥ０１１、およびＢ−Ｒａｆ阻害剤のダブラフェニブ、ならびに任意のＰＩ３Ｋ阻害剤のＢＹＬ７１９などの２つの治療剤の効果を生じる作用、例えば、増殖性疾患、特にがん、またはその症状の症候性進行を緩徐する作用を指し、これは、治療剤単独をそれぞれ投与した効果を単に加算したものより大きい。相乗効果は、例えば、Ｓｉｇｍｏｉｄ−Ｅｍａｘ方程式（Holford, N. H. G. and Scheiner, L. B., Clin. Pharmacokinet. 6: 429-453 (1981))、Ｌｏｅｗｅ加算方程式（Loewe, S. and Muischnek, H., Arch. Exp. Pathol Pharmacol. 114: 313-326 (1926)）、および半有効方程式（Chou, T. C. and Talalay, P., Adv. Enzyme Regul. 22: 27-55 (1984)）などの適切な方法を使用して計算することができる。上記に参照されたそれぞれの方程式を実験データに適用して、薬物組み合わせの効果を評価するのに役立つ対応するグラフを生成することができる。上記に参照された方程式に関連した対応するグラフは、それぞれ、濃度効果曲線、アイソボログラム曲線、および組み合わせ指数曲線（combination index curve）である。
【０１１９】
用語「対象」または「患者」は、本明細書において使用されるとき、がん、またはがんに直接的もしくは間接的に関与する任意の障害を患う、または罹患する可能性がある動物を含む。対象の例としては、哺乳動物、例えば、ヒト、イヌ、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ネコ、マウス、ウサギ、ラット、および遺伝子導入非ヒト動物が挙げられる。好ましい実施形態において、対象は、ヒト、例えば、がんを患っている、患う危険性のある、または患う潜在的な可能性があるヒトである。
【０１２０】
用語「固定された組み合わせ」および「固定用量（fixed dose）」、および「単一製剤（single formulation）」は、本明細書において使用されるとき、２つ以上の治療剤の、がんの治療に共同で治療的に有効な量を患者に送達するように製剤化された単一の担体もしくはビヒクル、または剤形を指す。単一ビヒクルは、それぞれの薬剤の量を、任意の薬学的に許容される担体または添加剤と共に送達するように設計される。一部の実施形態において、ビヒクルは、錠剤、カプセル剤、丸剤、またはパッチ剤である。他の実施形態において、ビヒクルは、溶液剤または懸濁剤である。
【０１２１】
用語「固定されていない組み合わせ」、「キットの一部」、および「別々の製剤（separate formulations）」は、活性成分、例えばＬＥＥ０１１およびダブラフェニブが、両方とも別々の実体として、特定の時間制限なしで同時に、同時発生的に、または順次に患者に投与されることを意味し、そのような投与は、２つの化合物の治療効果レベルを、それを必要とする温血動物の身体にもたらす。後者は、カクテル療法、例えば３つ以上の活性成分の投与にも当てはまる。
【０１２２】
用語「単位用量」は、治療される患者に、１つの剤形により２つまたは３つの薬剤を一緒に同時投与することを意味するために、本明細書において使用される。一部の実施形態において、単位用量は単一製剤である。ある特定の実施形態において、単位用量は、各ビヒクルが有効量の少なくとも１つの薬剤を薬学的に許容される担体および添加剤と共に含むように、１つまたは複数のビヒクルを含む。一部の実施形態において、単位用量は、患者に同時に投与される、１つまたは複数の錠剤、カプセル剤、丸剤、注射剤、注入剤、パッチ剤などである。
【０１２３】
「経口剤形」は、経口投与用に処方または意図された単位投与量形態を含む。
【０１２４】
用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」および「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」は、特に示されない限り、開放型の非限定的な意味において本明細書に使用される。
【０１２５】
本発明を記載する文脈における（とりわけ、以下の特許請求の範囲の文脈における）用語「ａ」および「ａｎ」および「ｔｈｅ」、ならびに同様の参照は、本明細書において特に指示のない限り、または文脈により明確に否定されない限り、単数形および複数形の両方を網羅すると解釈されるべきである。複数形態が化合物、塩などに使用される場合、これは、単一の化合物、塩なども意味すると解釈される。
【０１２６】
用語「約」または「およそ」は、所定の値または範囲の１０％以内、より好ましくは５％以内を意味する。
【実施例】
【０１２７】
材料および方法
化合物を１００％ＤＭＳＯ（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ｄ２６５０）に２０ｍＭの濃度で溶解し、使用するまで−２０℃で保存した。化合物を薬物マスタープレート（drug master plate）（Ｇｒｅｉｎｅｒ、カタログ番号７８８８７６）に配列し、２０００×濃度で３倍に連続希釈（７ステップ）した。
【０１２８】
この研究に使用される結腸直腸がん細胞系を、商業的供給者のＡＴＣＣ、ＣｅｌｌＢａｎｋ  Ａｕｓｔｒａｌｉａ、およびＨＳＲＲＢ（表１）から得て、培養し、処理した。全ての細胞系の培地には、１０％ＦＢＳ（ＨｙＣｌｏｎｅ、カタログ番号ＳＨ３００７１．０３）を補充した。ＬＩＭ２５５１の培地には、０．６μｇ／ｍＬのインスリン（ＳＩＧＭＡ、カタログ番号Ｉ９２７８）、１μｇ／ｍＬのヒドロコルチゾン（ＳＩＧＭＡ、カタログ番号Ｈ０１３５）、および１０μＭの１−チオグリセロール（ＳＩＧＭＡ、カタログ番号Ｍ６１４５）を追加的に補充した。
【０１２９】
【表１】
2018525425.tif 000012
【０１３０】
細胞系を、３７℃および５％ＣＯ２のインキュベーターで培養し、Ｔ−７５フラスコで拡大させた。全ての場合において、細胞は、凍結貯蔵物から解凍し、１：３希釈を使用して≧１継代で拡大させ、平板培養する前に、ＶｉＣｅｌｌ計数器（Ｂｅｃｋｍａｎ−Ｃｏｕｌｔｅｒ）を使用して計数し、生存度について評価した。細胞系を分裂および拡大させるため、細胞を、０．２５％トリプシン−ＥＤＴＡ（ＧＩＢＣＯ、カタログ番号２５２００）を使用してフラスコから取り出した。Ｉｄｅｘｘ  Ｒａｄｉｌ（Ｃｏｌｕｍｂｉａ，ＭＯ，ＵＳＡ）により実施されたＰＣＲ検出方法により決定され、ＳＮＰパネルの検出によって正確に確認されたように、全ての細胞系には、マイコプラズマ汚染がないことが決定された。
【０１３１】
以前に記載された方法（Horn, Sandmann et al. 2011）を適用し、ＲのＢｉｏｃｏｎｄｕｃｔｏｒパッケージＥＢＩｍａｇｅ（Pau, Fuchs et al. 2010）を使用した後、画像を分析した。両方のチャンネルにおける対象物、ＤＡＰＩ（Ｈｏｅｃｈｓｔ／ＤＮＡの）およびＦＩＴＣ（カスパーゼ３／７の）を適応閾値化により別々にセグメント化し、計数した。カスパーゼ３／７陽性対象物の閾値は、陰性対照（ＤＭＳＯ）と陽性対照（スタウロスポリン）とを比較した後、細胞系１つ毎に手作業により確定した。ＤＮＡチャンネルにおいて対象物／核の１７の追加的特徴（形状および強度特徴）を分析することによって、細片／断片化核を確認した。このため、細胞系１つ毎に、陽性対照（スタウロスポリン）および陰性対照（ＤＭＳＯ）の追加的な特徴の分布を、手作業により比較した。条件によって差が生じうる特徴（例えば、ＤＭＳＯとスタウロスポリンとを比較した特徴測定分布におけるシフト）を、「生存」核の集団に対して「細片」集団を確定するために使用した。細片計数を、生の核計数から差し引いた。得られた核の数を細胞増殖の測度（「細胞計数」）として使用した。
【０１３２】
細胞増殖に対する化合物の効果を、陰性対照（ＤＭＳＯ）の細胞計数に対する処理細胞計数から計算し、図１および図３では、ｙ軸に「正規化細胞計数」（＝「ｘｎｏｒｍ」）と示されている。相乗的組み合わせは、帰無仮説の最高単剤モデル（ＨＳＡ）（Berenbaum 1989）を使用して確認した。ＨＳＡモデルにおける超過は、阻害標的間の機能的な繋がりを予測する（Lehar, Zimmermann et al. 2007, Lehar, Krueger et al. 2009）。モデルの入力は、薬物用量毎の阻害値である。
Ｉ＝１−ｘｎｏｒｍ
Ｉ：阻害
ｘｎｏｒｍ：正規化細胞計数（３回の複製の中央値）
【０１３３】
組み合わせ処理の全ての用量点において、組み合わせの阻害と、２つの単剤のより強力な方の阻害との差を計算した（＝残差モデル）。同様に、全ての用量点において三種組み合わせ（triple combinations）による相乗作用を評価するため、三種薬物（drug triple）の阻害と、最強の薬物対の阻害との差を計算した。高い阻害での組み合わせ効果が好ましいので、残差には、同じ用量点で観察された阻害を加重した。薬物組み合わせの全体的な組み合わせスコアＣは、全ての濃度の加重残差の合計である。
Ｃ＝Σ濃度（Ｉデータ＊（Ｉデータ−Ｉモデル））
Ｉデータ：測定阻害値
Ｉモデル：ＨＳＡ帰無仮説による阻害値
【０１３４】
堅牢な組み合わせｚスコア（ｚＣ）を、処理の組み合わせスコアＣと、非相互作用組み合わせの絶対偏差の中央値（ｍａｄ）との比として計算した。
ｚＣ＝Ｃ／ｍａｄ（Ｃゼロ）
Ｃゼロ：非相互作用組み合わせの組み合わせスコア
ｚＣは、組み合わせの強さの指標である。
ｚＣ≧３：相乗作用
３＞ｚＣ≧２：弱い相乗作用
ｚＣ＜２：相乗作用なし
【０１３５】
ＩＣ５０は、ＤＭＳＯに対して５０％の細胞計数をもたらす濃度である。ＩＣ５０の計算（表２および表３を参照されたい）は、ＲのＤＲＣパッケージ（Ritz and Streibig 2005）を使用し、データに４パラメーター対数ロジスティック関数を当てはめて行った。
【０１３６】
アポトーシスに対する化合物の効果は、生の細胞計数（細片を差し引く前）と比べた、処理および時点毎の活性化カスパーゼ３／７を有する細胞のパーセンテージを計算することによって決定した（図２および図４のｙ軸）。実験的に測定しなかった時点の細胞計数は、０日目および処理の最終日に対数変換細胞計数を線形モデルに当てはめる（指数細胞成長を推定する）回帰分析によって得た。
【０１３７】
実施例１：  Ｂ−Ｒａｆ変異結腸直腸がん細胞系におけるＰＩＫ３ＣＡ阻害剤のＢＹＬ７１９およびＣＤＫ４／６阻害剤のＬＥＥ０１１を、Ｂ−Ｒａｆ阻害剤のダブラフェニブと組み合わせることの増殖に対するインビトロ効果
細胞増殖に対するＢＹＬ７１９、ＬＥＥ０１１、およびダブラフェニブの組み合わせの効果を試験するため、細胞を、透明底を有する黒色３８４ウェルマイクロプレート（Ｍａｔｒｉｘ／Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号４３３２）において、ウェル１つあたり５０μＬの培地に５００〜１２５０細胞／ウェルの細胞密度（表１）で平板培養し、３７度、５％ＣＯ２で２４時間インキュベートした。２４時間後、細胞系１つあたり１つの３８４ウェルプレートを、処理を受けることなく（＝「ベースライン」）、顕微鏡検査法による細胞計数のために調製した（下記を参照されたい）。他の細胞プレートは、ＡＴＳ音響液体分配器（acoustic liquid dispenser）（ＥＣＤ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）の使用により薬物マスタープレートから２５ｎＬの２０００×化合物を移し、最終１×濃度をもたらすことによって処理した。ＢＹＬ７１９を１３ｎＭ〜１０μＭの最終濃度範囲で使用し、ＬＥＥ０１１を１３ｎＭ〜１０μＭの最終濃度範囲で使用し、ダブラフェニブを１．４ｎＭ〜１μＭの最終濃度で使用した（１：３希釈の７段階）。三種組み合わせの効果を評価するため、個別の化合物の全て、３つの対組み合わせ（three pair wise combiantions）（ＢＹＬ７１９＋ＬＥＥ０１１、ＢＹＬ７１９＋ダブラフェニブ、ＬＥＥ０１１＋ダブラフェニブ）の全て、および三種組み合わせ（ＢＹＬ７１９＋ＬＥＥ０１１＋ダブラフェニブ）を、同じ実験で試験した。対組み合わせおよび三種組み合わせを、それぞれの希釈において１：１（薬物対の）および１：１：１（三種薬物の）の固定比で試験し、処理毎に７つの組み合わせ条件をもたらした。加えて、陰性対照（ＤＭＳＯ＝「ビヒクル」）および陽性対照（スタウロスポリン＝細胞死滅、１６ｎＭ〜１μＭの用量範囲の７ポイント１：２希釈系列）を、処理対照として移し、試験細胞系に有効性のない化合物をＢＹＬ７１９およびＬＥＥ０１１と組み合わせて、組み合わせ対照（より有効な単剤の有効性を超えない組み合わせ＝「非相互作用」組み合わせ）として使用した。化合物を添加した後、５０ｎＬの２ｍＭ  ＣｅｌｌＥｖｅｎｔ  カスパーゼ３／７緑色検出試薬（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、カタログ番号Ｃ１０４２３）を、ＨＰ  Ｄ３００  Ｄｉｇｉｔａｌ  Ｄｉｓｐｅｎｓｅｒ（Ｔｅｃａｎ）の使用により３回の複製のうちの１回に加えた。カスパーゼ３／７誘発を、処理により誘発されるアポトーシスの代理として測定した。細胞を倍加時間に応じて７２時間から９６時間処理し（表１）、カスパーゼ３／７活性化を、４×対物レンズおよびＦＩＴＣ励起／発光フィルターを備えたＩｎＣｅｌｌ  Ａｎａｌｙｚｅｒ  ２０００（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、顕微鏡検査法により２４時間毎に測定した。処理の最後に、細胞を顕微鏡検査法による細胞計数のために調製した。細胞を、ＰＢＳ（Ｂｏｓｔｏｎ  Ｂｉｏｐｒｏｄｕｃｔｓ、カタログ番号ＢＭ−２２０）中の４％ＰＦＡ（Ｅｌｅｃｔｒｏｎ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号１５７１４）、０．１２％ＴＸ−１００（Ｅｌｅｃｔｒｏｎ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号２２１４０）において、４５分間にわたって固定および透過処理した。細胞をＰＢＳで３回洗浄した後、それらのＤＮＡをＨｏｅｃｈｓｔ  ３３３４２（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、カタログ番号Ｈ３５７０）により最終濃度４μｇ／ｍＬで３０分間染色した。細胞をＰＢＳで３回洗浄し、次にプレートをＰｌａｔｅＬｏｃ（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）の使用によりアルミニウムシール（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号  ０６６４４−００１）でヒートシールし、画像化するまで４℃で保存した。全ての細胞では、ウェル／処理毎に４×対物レンズおよびＤＡＰＩ励起／発光フィルターを備えたＩｎＣｅｌｌ  Ａｎａｌｙｚｅｒ  ２０００（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用する蛍光顕微鏡検査法により単一画像を撮った。
【０１３８】
ＰＩＫ３ＣＡ阻害剤のＢＹＬ７１９、ＣＤＫ４／６阻害剤のＬＥＥ０１１、およびＢ−Ｒａｆ阻害剤のダブラフェニブの有効性を、合計で６つのＢ−Ｒａｆ変異結腸直腸がん細胞系（そのうち３つはＰＩＫ３ＣＡでも変異があった）において、個別および組み合わせにより評価した（表１）。ＢＹＬ７１９は、マイクロモルＩＣ５０により、ＰＩＫ３ＣＡ変異細胞において有効であり、一方、ＬＥＥ０１１は、低マイクロモルＩＣ５０により、１つの細胞系（ＯＵＭＳ−２３）を除いて全ての細胞系において有効であった（図１および表２）。ダブラフェニブは、ナノモルから低マイクロモルのＩＣ５０により、１つの細胞系（ＯＵＭＳ−２３）を除いて全ての細胞系において有効であった（図１および表２）。三種組み合わせ（ＢＹＬ７１９＋ＬＥＥ０１１＋ダブラフェニブ）は、６つの細胞系のうち２つにおいて、薬物対よりも相乗的阻害（ＨＳＡモデルに従って）を引き起こし、６つの細胞系のうち２つにおいて弱い相乗的阻害も引き起こした（表２）。三種組み合わせは、対組み合わせよりも強くアポトーシスを誘発していない（カスパーゼ３／７誘発の測定により評価した）（図２）。まとめると、Ｂ−Ｒａｆ変異ＣＲＣにおけるＰＩＫ３ＣＡ、ＣＤＫ４／６、およびＢ−Ｒａｆを組み合わせた阻害は、それぞれの単剤と比較して改善された応答が可能である有効な治療様式を提供し、臨床においてより長続きする応答をもたらすことができる。
【０１３９】
【表２】
2018525425.tif 000013
【０１４０】
実施例２：  Ｂ−Ｒａｆ変異結腸直腸がん細胞系におけるＣＤＫ４／６阻害剤のＬＥＥ０１１を、Ｂ−Ｒａｆ阻害剤のダブラフェニブと組み合わせることの増殖に対するインビトロ効果
細胞増殖に対するＬＥＥ０１１およびダブラフェニブの組み合わせの効果を試験するため、細胞を、透明底を有する黒色３８４ウェルマイクロプレート（Ｍａｔｒｉｘ／Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号４３３２）において、ウェル１つあたり５０μＬの培地に５００〜１２５０細胞／ウェルの細胞密度（表１）で平板培養し、３７度、５％ＣＯ２で２４時間インキュベートした。２４時間後、細胞系１つあたり１つの３８４ウェルプレートを、処理を受けることなく（＝「ベースライン」）、顕微鏡検査法による細胞計数のために調製した（下記を参照されたい）。他の細胞プレートは、ＡＴＳ音響液体分配器（acoustic liquid dispenser）（ＥＣＤ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）の使用により薬物マスタープレート（drug master plate）から２５ｎＬの２０００×化合物を移し、最終１×濃度をもたらすことによって処理した。ＬＥＥ０１１を１３ｎＭ〜１０μＭの最終濃度範囲で使用し、ダブラフェニブを１．４ｎＭ〜１μＭの最終濃度範囲で使用した（１：３希釈の７段階）。ＬＥＥ０１１とダブラフェニブの組み合わせでは、単剤をそれぞれの希釈において１：１の固定比で組み合わせて、７つの組み合わせ処理をもたらした。加えて、陰性対照（ＤＭＳＯ＝「ビヒクル」）および陽性対照（スタウロスポリン＝細胞死滅、１６ｎＭ〜１μＭの用量範囲の７ポイント１：２希釈系列）を、処理対照として移し、試験細胞系に有効性のない化合物をＬＥＥ０１１およびダブラフェニブと組み合わせて、組み合わせ対照（より有効な単剤の有効性を超えない組み合わせ＝「非相互作用」組み合わせ）として使用した。化合物を添加した後、５０ｎＬの２ｍＭ  ＣｅｌｌＥｖｅｎｔカスパーゼ３／７緑色検出試薬（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、カタログ番号Ｃ１０４２３）を、ＨＰ  Ｄ３００  Ｄｉｇｉｔａｌ  Ｄｉｓｐｅｎｓｅｒ（Ｔｅｃａｎ）の使用により３回の複製のうちの１回に加えた。カスパーゼ３／７誘発を、処理により誘発されるアポトーシスの代理として測定した。細胞を倍加時間に応じて７２時間から９６時間処理し（表１）、カスパーゼ３／７活性化を、４×対物レンズおよびＦＩＴＣ励起／発光フィルターを備えたＩｎＣｅｌｌ  Ａｎａｌｙｚｅｒ  ２０００（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、顕微鏡検査法により２４時間毎に測定した。処理の最後に、細胞を顕微鏡検査法による細胞計数のために調製した。細胞を、ＰＢＳ（Ｂｏｓｔｏｎ  Ｂｉｏｐｒｏｄｕｃｔｓ、カタログ番号ＢＭ−２２０）中の４％ＰＦＡ（Ｅｌｅｃｔｒｏｎ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号１５７１４）、０．１２％ＴＸ−１００（Ｅｌｅｃｔｒｏｎ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号２２１４０）において、４５分間にわたって固定および透過処理した。細胞をＰＢＳで３回洗浄した後、それらのＤＮＡをＨｏｅｃｈｓｔ  ３３３４２（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、カタログ番号Ｈ３５７０）により最終濃度４μｇ／ｍＬで３０分間染色した。細胞をＰＢＳで３回洗浄し、次にプレートをＰｌａｔｅＬｏｃ（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）の使用によりアルミニウムシール（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号  ０６６４４−００１）でヒ��トシールし、画像化するまで４℃で保存した。全ての細胞では、ウェル／処理毎に４×対物レンズおよびＤＡＰＩ励起／発光フィルターを備えたＩｎＣｅｌｌ  Ａｎａｌｙｚｅｒ  ２０００（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用する蛍光顕微鏡検査法により単一画像を撮った。
【０１４１】
ＣＤＫ４／６阻害剤のＬＥＥ０１１、およびＢ−Ｒａｆ阻害剤のダブラフェニブの有効性を、合計で６つのＢ−Ｒａｆ結腸直腸がん細胞系（３つはＰＩＫ３ＣＡでも変異があった）において、個別および組み合わせにより評価した（表１）。ＬＥＥ０１１は、単剤として、マイクロモルのＩＣ５０値により、１つの細胞系（ＯＵＭＳ−２３）を除いて全ての細胞系の成長を阻害した（図３および表３）。ダブラフェニブは、単剤として、ナノモルからマイクロモル未満のＩＣ５０値により、１つの細胞系（ＯＵＭＳ−２３）を除いて全ての細胞系の成長を強力に阻害した（図３および表３）。組み合わせ処理は、試験した６つの細胞系のうち５の系において、異なる強度で相乗的阻害を（ＨＳＡモデルに従って）引き起こした（表３）。組み合わせは、単剤と比較して強くアポトーシスを誘発せず（カスパーゼ３／７誘発の測定により評価した）、これは、ＣＤＫ４／６の阻害後に誘発された細胞周期停止の結果でありうる（図４）。Ｂ−Ｒａｆ変異結腸直腸がんにおけるＣＤＫ４／６およびＢ−Ｒａｆを組み合わせた阻害は、それぞれの単剤と比較して改善された応答が可能ある有効な治療様式を提供し、臨床においてより長続きする応答をもたらすことができる。
【０１４２】
【表３】
2018525425.tif 000014
【０１４３】
実施例３：  ダブラフェニブの合成方法
方法１：ダブラフェニブ（第１の結晶形）  −  Ｎ−｛３−［５−（２−アミノ−４−ピリミジニル）−２−（１，１−ジメチルエチル）−１，３−チアゾール−４−イル］−２−フルオロフェニル｝−２，６−ジフルオロベンゼンスルホンアミド：
Ｎ−｛３−［５−（２−クロロ−４−ピリミジニル）−２−（１，１−ジメチルエチル）−１，３−チアゾール−４−イル］−２−フルオロフェニル｝−２，６−ジフルオロベンゼンスルホンアミド（１９６ｍｇ、０．３６４ｍｍｏｌ）および７Ｍメタノール中アンモニア（８ｍｌ、５６．０ｍｍｏｌ）の懸濁液を、密閉管において９０℃で２４時間加熱した。反応物をＤＣＭで希釈し、シリカゲルを加え、濃縮した。粗生成物を、１００％ＤＣＭ〜１：１［ＤＣＭ：（９：１  ＥｔＯＡｃ：ＭｅＯＨ）］で溶出するシリカゲルのクロマトグラフィーにかけた。透明な画分を濃縮して、粗生成物を生じた。粗生成物を、逆相ＨＰＬＣ（両方とも０．１％のＴＦＡを伴うアセトニトリル：水の勾配）により再精製した。合わせた透明な画分を濃縮し、次にＤＣＭと飽和ＮａＨＣＯ３に分配した。ＤＣＭ層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。表題化合物のＮ−｛３−［５−（２−アミノ−４−ピリミジニル）−２−（１，１−ジメチルエチル）−１，３−チアゾール−４−イル］−２−フルオロフェニル｝−２，６−ジフルオロベンゼンスルホンアミドを得た（９４ｍｇ、収率４７％）。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.83 (s, 1 H), 7.93 (d, J=5.2 Hz, 1 H), 7.55 - 7.70 (m, 1 H), 7.35 - 7.43 (m, 1 H), 7.31 (t, J=6.3 Hz, 1 H), 7.14 - 7.27 (m, 3 H), 6.70 (s, 2 H), 5.79 (d, J=5.13 Hz, 1 H), 1.35 (s, 9 H).ＭＳ（ＥＳＩ）：５１９．９［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１４４】
方法２：ダブラフェニブ（代替的な結晶形）  −  Ｎ−｛３−［５−（２−アミノ−４−ピリミジニル）−２−（１，１−ジメチルエチル）−１，３−チアゾール−４−イル］−２−フルオロフェニル｝−２，６−ジフルオロベンゼンスルホンアミド：
１９．６ｍｇのＮ−｛３−［５−（２−アミノ−４−ピリミジニル）−２−（１，１−ジメチルエチル）−１，３−チアゾール−４−イル］−２−フルオロフェニル｝−２，６−ジフルオロベンゼンスルホンアミド（実施例５８ａに従って調製することができる）を、２ｍＬのバイアル中において５００μＬの酢酸エチルと室温で合わせた。スラリーを０〜４０℃の温度サイクルに４８時間付した。得られたスラリーを室温に冷却し、固体を真空濾過により収集した。固体を、ラマン、ＰＸＲＤ、ＤＳＣ／ＴＧＡ分析により分析し、上記の実施例５８ａによりもたらされる結晶形と異なる結晶形を示した。
【０１４５】
方法３：ダブラフェニブ（代替的な結晶形、大きなバッチ）  −  Ｎ−｛３−［５−（２−アミノ−４−ピリミジニル）−２−（１，１−ジメチルエチル）−１，３−チアゾール−４−イル］−２−フルオロフェニル｝−２，６−ジフルオロベンゼンスルホンアミド：
ステップＡ：メチル３−｛［（２，６−ジフルオロフェニル）スルホニル］アミノ｝−２−フルオロベンゾエート：
【０１４６】
【化１０】
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【０１４７】
メチル３−アミノ−２−フルオロベンゾエート（５０ｇ、１当量）を反応器に投入し、続いてジクロロメタン（２５０ｍＬ、５容量）を投入した。内容物を撹拌し、約１５℃に冷却し、ピリジン（２６．２ｍＬ、１．１当量）を加えた。ピリジンを加えた後、反応器の内容物を約１５℃に調整し、２，６−ジフルオロベンゼンスルホニルクロリド（３９．７ｍＬ、１．０当量）の添加を添加漏斗により開始した。添加中の温度を＜２５℃に保持した。添加が完了した後、反応器の内容物を２０〜２５℃に温め、一晩保持した。酢酸エチル（１５０ｍＬ）を加え、ジクロロメタンを蒸留により除去した。蒸留が完了すると、反応混合物を、もう一度酢酸エチル（５容量）で希釈し、濃縮した。反応混合物を酢酸エチル（１０容量）および水（４容量）で希釈し、内容物を、全ての固体が溶解するまで撹拌しながら、５０〜５５℃で加熱した。層を沈降させ、分離した。有機層を水（４容量）で希釈し、内容物を５０〜５５℃で２０〜３０分間加熱した。層を沈殿させ、次に分離し、酢酸エチル層を減圧下で約３容量に蒸発させた。酢酸エチル（５容量）を加え、再び減圧下で約３容量に蒸発させた。次にシクロヘキサン（９容量）を反応器に加え、内容物を３０分間加熱還流し、次に０℃に冷却した。固体を濾過し、シクロヘキサン（２×１００ｍＬ）ですすいだ。固体を一晩空気乾燥して、メチル３−｛［（２，６−ジフルオロフェニル）スルホニル］アミノ｝−２−フルオロベンゾエート（９４．１ｇ、９１％）を得た。
【０１４８】
ステップＢ：Ｎ−｛３−［（２−クロロ−４−ピリミジニル）アセチル］−２−フルオロフェニル｝−２，６−ジフルオロベンゼンスルホンアミド：
【０１４９】
【化１１】
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【０１５０】
上記のステップＡに従って一般的に調製されたメチル３−｛［（２，６−ジフルオロフェニル）スルホニル］アミノ｝−２−フルオロベンゾエート（４９０ｇ、１当量）を、ＴＨＦ（２．４５Ｌ、５容量）に溶解し、撹拌し、０〜３℃に冷却した。ＴＨＦ中の１Ｍのリチウムビス（トリメチルシリル）アミド（５．２７Ｌ、３．７当量）の溶液を反応混合物に投入し、続いてＴＨＦ（２．４５Ｌ、５容量）中の２−クロロ−４−メチルピリミジン（２３８ｇ、１．３当量）を加えた。次に反応物を１時間撹拌した。反応物を４．５ＭのＨＣｌ（３．９２Ｌ、８容量）でクエンチした。水層（下側層）を除去し、廃棄した。有機層を減圧下で約２Ｌに濃縮した。ＩＰＡＣ（酢酸イソプロピル）（２．４５Ｌ）を反応混合物に加え、次にそれを約２Ｌに濃縮した。ＩＰＡＣ（０．５Ｌ）およびＭＴＢＥ（２．４５Ｌ）を加え、Ｎ２下で一晩撹拌した。固体を濾過した。固体および母濾液（mother filtrate）を一緒に戻して添加し、数時間撹拌した。固体を濾過し、ＭＴＢＥ（約５容量）で洗浄した。固体を真空オーブンの中に５０℃で一晩置いた。固体を真空オーブンにおいて３０℃で週末にかけて乾燥して、Ｎ−｛３−［（２−クロロ−４−ピリミジニル）アセチル］−２−フルオロフェニル｝−２，６−ジフルオロベンゼンスルホンアミド（４７９ｇ、７２％）を得た。
【０１５１】
ステップＣ：Ｎ−｛３−［５−（２−クロロ−４−ピリミジニル）−２−（１，１−ジメチルエチル）−１，３−チアゾール−４−イル］−２−フルオロフェニル｝−２，６−ジフルオロベンゼンスルホンアミド：
【０１５２】
【化１２】
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【０１５３】
反応容器に、Ｎ−｛３−［（２−クロロ−４−ピリミジニル）アセチル］−２−フルオロフェニル｝−２，６−ジフルオロベンゼンスルホンアミド（３０ｇ、１当量）、続いてジクロロメタン（３００ｍＬ）を投入した。反応スラリーを約１０℃に冷却し、Ｎ−ブロモスクシンイミド（「ＮＢＳ」）（１２．０９ｇ、１当量）を３つのほぼ等しい部分によって加え、それぞれの添加の間に１０〜１５分間撹拌した。ＮＢＳの最終添加の後、反応混合物を約２０℃に温め、４５分間撹拌した。次に水（５容量）を反応容器に加え、混合物を撹拌し、次に層を分離した。再び水（５容量）をジクロロメタン層に加え、混合物を撹拌し、層を分離した。ジクロロメタン層を約１２０ｍＬに濃縮した。酢酸エチル（７容量）を反応混合物に加え、約１２０ｍＬに濃縮した。次にジメチルアセトアミド（２７０ｍＬ）を反応混合物に加え、約１０℃に冷却した。２，２−ジメチルプロパンチオアミド（１．３ｇ、０．５当量）を２つの等しい部分により、反応器の内容物に加え、添加の間に約５分間撹拌した。反応物を２０〜２５℃に温めた。４５分後、容器の内容物を７５℃に加熱し、１．７５時間保持した。次に反応混合物を５℃に冷却し、温度を３０℃未満に保ちながら、水（２７０ｍｌ）をゆっくりと投入した。次に酢酸エチル（４容量）を投入し、混合物を撹拌し、層を分離した。再び酢酸エチル（７容量）を水層に投入し、内容物を撹拌し、分離した。再び酢酸エチル（７容量）を水層に投入し、内容物を撹拌し、分離した。有機層を合わせ、水（４容量）で４回洗浄し、２０〜２５℃で一晩撹拌した。次に有機層を熱および真空下で１２０ｍＬに濃縮した。次に容器の内容物を５０℃に加熱し、ヘプタン（１２０ｍＬ）をゆっくりと加えた。ヘプタンを加えた後、容器の内容物を加熱還流し、次に０℃に冷却し、約２時間保持した。固体を濾過し、ヘプタン（２×２容量）ですすいだ。次に固体生成物を真空下、３０℃で乾燥して、Ｎ−｛３−［５−（２−クロロ−４−ピリミジニル）−２−（１，１−ジメチルエチル）−１，３−チアゾール−４−イル］−２−フルオロフェニル｝−２，６−ジフルオロベンゼンスルホンアミド（２８．８ｇ、８０％）を得た。
【０１５４】
ステップＤ：Ｎ−｛３−［５−（２−アミノ−４−ピリミジニル）−２−（１，１−ジメチルエチル）−１，３−チアゾール−４−イル］−２−フルオロフェニル｝−２，６−ジフルオロベンゼンスルホンアミド：
１ガロン圧力反応器において、上記のステップＣに従って調製されたＮ−｛３−［５−（２−クロロ−４−ピリミジニル）−２−（１，１−ジメチルエチル）−１，３−チアゾール−４−イル］−２−フルオロフェニル｝−２，６−ジフルオロベンゼンスルホンアミド（１２０ｇ）および水酸化アンモニウム（２８〜３０％、２．４Ｌ、２０容量）の混合物を密閉圧力反応器中で９８〜１０３℃に加熱し、この温度で２時間撹拌した。反応物を室温（２０℃）にゆっくりと冷却し、一晩撹拌した。固体を濾過し、最小量の母液で洗浄し、真空下で乾燥した。固体を、ＥｔＯＡｃ（１５容量）／水（２容量）の混合物に加え、加熱して、６０〜７０℃で溶解を完了させ、水層を除去し、廃棄した。ＥｔＯＡｃ層に水（１容量）を投入し、ＨＣｌ水溶液により約５．４〜５．５のｐＨに中和し、水（１容量）加えた。水相を６０〜７０℃で除去し、廃棄した。有機層を水（１容量）により６０〜７０℃で洗浄し、水層を除去し、廃棄した。有機層を６０℃で濾過し、３容量に濃縮した。ＥｔＯＡｃ（６容量）を混合物に投入し、７２℃で１０分間加熱および撹拌し、次に２０℃に冷却し、一晩撹拌した。ＥｔＯＡｃを真空蒸留により除去して、反応混合物を約３容量に濃縮した。反応混合物を約６５〜７０℃で約３０分間維持した。ヘプタンスラリー中の、上記の実施例５８ｂにおいて調製された（および実施例５８ｂの手順により調製された）ものと同じ結晶形を有する生成物の結晶を、投入した。ヘプタン（９容量）を６５〜７０℃でゆっくりと加えた。スラリーを６５〜７０℃で２〜３時間撹拌し、次に０〜５℃にゆっくりと冷却した。生成物を濾過し、ＥｔＯＡｃ／ヘプタン（３／１ｖ／ｖ、４容量）で洗浄し、真空下において４５℃で乾燥して、Ｎ−｛３−［５−（２−アミノ−４−ピリミジニル）−２−（１，１−ジメチルエチル）−１，３−チアゾール−４−イル］−２−フルオロフェニル｝−２，６−ジフルオロベンゼンスルホンアミド（１０２．３ｇ、８８％）を得た。
【０１５５】
方法４：ダブラフェニブ（メシル酸塩）  −  Ｎ−｛３−［５−（２−アミノ−４−ピリミジニル）−２−（１，１−ジメチルエチル）−１，３−チアゾール−４−イル］−２−フルオロフェニル｝−２，６−ジフルオロベンゼンスルホンアミドメタンスルホネート：
【０１５６】
【化１３】
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【０１５７】
イソプロパノール（２ｍＬ）中のＮ−｛３−［５−（２−アミノ−４−ピリミジニル）−２−（１，１−ジメチルエチル）−１，３−チアゾール−４−イル］−２−フルオロフェニル｝−２，６−ジフルオロベンゼンスルホンアミド（２０４ｍｇ、０．３９３ｍｍｏｌ）の溶液に、メタンスルホン酸（０．１３１ｍＬ、０．３９３ｍｍｏｌ）を加え、溶液を室温で３時間撹拌した。白色の沈殿物が形成され、スラリーを濾過し、ジエチルエーテルですすいで、表記生成物を白色の結晶質固体（２１０ｍｇ、収率８３％）として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.85 (s, 1 H) 7.92 - 8.05 (m, 1 H) 7.56 - 7.72 (m, 1 H) 6.91 - 7.50 (m, 7 H) 5.83 - 5.98 (m, 1 H) 2.18 - 2.32 (m, 3 H) 1.36 (s, 9 H).ＭＳ（ＥＳＩ）：５２０．０［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１５８】
方法５：ダブラフェニブ（代替的なメシル酸塩の実施形態）  −  Ｎ−｛３−［５−（２−アミノ−４−ピリミジニル）−２−（１，１−ジメチルエチル）−１，３−チアゾール−４−イル］−２−フルオロフェニル｝−２，６−ジフルオロベンゼンスルホンアミドメタンスルホネート：
Ｎ−｛３−［５−（２−アミノ−４−ピリミジニル）−２−（１，１−ジメチルエチル）−１，３−チアゾール−４−イル］−２−フルオロフェニル｝−２，６−ジフルオロベンゼンスルホンアミド（実施例５８ａにより調製することができる）（２．３７ｇ、４．５６ｍｍｏｌ）を、予備濾過アセトニトリル（５．２５容量、１２．４ｍＬ）と合わせた。Ｈ２Ｏ（０．７５当量、１．７８ｍＬ）中のメシン酸（１．１当量、５．０２ｍｍｏｌ、０．４８ｇ）の予備濾過溶液を、２０℃で加えた。低い撹拌速度を維持しながら、得られた混合物の温度を５０〜６０℃に上昇させた。混合物の温度が５０〜６０に達すると、Ｎ−｛３−［５−（２−アミノ−４−ピリミジニル）−２−（１，１−ジメチルエチル）−１，３−チアゾール−４−イル］−２−フルオロフェニル｝−２，６−ジフルオロベンゼンスルホンアミドメタンスルホネート（０．２容量の予備濾過アセトニトリルでスラリー化した１．０％ｗ／ｗ）の種スラリーを加え、混合物を、固体が沈殿するのを避けるのに十分な速度で撹拌しながら、５０〜６０℃で２時間熟成させた。次に混合物を０．２５℃／分で０〜５℃に冷却し、０〜５℃で６時間保持した。混合物を濾過し、湿潤ケーキを予備濾過アセトニトリルで２回洗浄した。第１の洗浄液は、１４．２ｍｌ（６容量）の予備濾過アセトニトリルから構成され、第２の洗浄液は９．５ｍｌ（４容量）の予備濾過アセトニトリルから構成された。湿潤固体を真空下、５０℃で乾燥して、２．３９ｇ（収率８５．１％）の生成物をもたらした。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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