(57)【要約】本開示は、概して、抗体、例えば、モノクローナル、キメラ、ヒト化抗体、抗体断片などであって、ＣＤ３３タンパク質、例えば、ヒトＣＤ３３または哺乳動物ＣＤ３３内の１つ以上のエピトープに特異的に結合する抗体を含む組成物、ならびに、それを必要とする個体の予防、リスクの低減、または治療におけるそのような組成物の使用に関する。【選択図】図１６Ｄ
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
単離抗ＣＤ３３抗体であって、ＣＤ３３の細胞レベルを低下させる、もしくはＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用を阻害する、またはその両方であるとともに、以下の特性の１つ以上を示す、前記抗ＣＤ３３抗体：
ａ．ヒトＣＤ３３に対する解離定数（ＫＤ）が抗ＣＤ３３抗体であるゲムツズマブのものよりも低い、
ｂ．ヒト樹状細胞に対して、抗ＣＤ３３抗体であるゲムツズマブもしくはリンツズマブのものよりも低いＥＣ５０で結合する、
ｃ．ＣＤ３３の細胞レベルを、抗ＣＤ３３抗体であるゲムツズマブもしくはリンツズマブのものよりも低いＥＣ５０で低下させる、
ｄ．ヒトＣＤ３３に対して、３００ｐＭ〜１０ｐＭの範囲の解離定数（ＫＤ）を有し、この場合、前記ＫＤは、温度約２５℃で測定される、
ｅ．ヒト樹状細胞に対して、２００ｐＭ〜１０ｐＭの範囲のＥＣ５０で結合し、この場合、前記ＥＣ５０は、温度約４℃で測定される、
ｆ．ＣＤ３３の細胞レベルを６５ｐＭ〜２０ｐＭの範囲のＥＣ５０で低下させる、または、
ｇ．インビボにおいてＣＤ３３の細胞レベルを８．０ｍｇ／ｋｇ〜２．０ｍｇ／ｋｇの範囲のＥＣ５０で低下させる。
【請求項２】
ＣＤ３３の細胞表面レベルを低下させる、ＣＤ３３の細胞内レベルを低下させる、ＣＤ３３の合計レベルを低下させる、またはそれらの任意の組合せである、請求項１に記載の抗ＣＤ３３抗体。
【請求項３】
ＣＤ３３の分解、ＣＤ３３の開裂、ＣＤ３３の内在化、ＣＤ３３の脱落、ＣＤ３３発現の下方制御、またはそれらの任意の組合せを誘導する、請求項１または請求項２に記載の抗ＣＤ３３抗体。
【請求項４】
ＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用を阻害することなくＣＤ３３の細胞レベルを低下させる、請求項１〜３のいずれか一項に記載の抗ＣＤ３３抗体。
【請求項５】
ＣＤ３３の細胞レベルを低下させ、ＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用を阻害する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の抗ＣＤ３３抗体。
【請求項６】
インビボにおいてＣＤ３３の細胞レベルを２．０ｍｇ／ｋｇ未満のＥＣ５０で低下させる、請求項１〜５のいずれか一項に記載の抗ＣＤ３３抗体。
【請求項７】
ＣＤ３３の細胞レベルを低下させることなくＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用を阻害する、請求項１に記載の抗ＣＤ３３抗体。
【請求項８】
ＣＤ３３の細胞表面クラスター化を阻害する、請求項１〜７のいずれか一項に記載の抗ＣＤ３３抗体。
【請求項９】
１つ以上のＣＤ３３活性を阻害する、請求項１〜８のいずれか一項に記載の抗ＣＤ３３抗体。
【請求項１０】
前記１つ以上のＣＤ３３活性が、以下からなる群から選択される、請求項９に記載の抗ＣＤ３３抗体：
（ａ）シアル酸含有糖タンパク質、もしくはシアル酸含有糖脂質、またはその両方に対するＣＤ３３の結合、
（ｂ）調節された１つ以上の抗炎症性サイトカインの発現、任意に、前記１つ以上の抗炎症性サイトカインはＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＩＬ−３５、ＩＬ−１６、ＴＧＦ−ベータ、ＩＬ−１Ｒａ、Ｇ−ＣＳＦ、及びＴＮＦ、ＩＦＮ−ベータ１ａ、ＩＦＮ−ベータ１ｂ、またはＩＬ−６に対する可溶性受容体からなる群から選択される、
（ｃ）マクロファージ、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、及びミクログリア細胞からなる群から選択される１つ以上の細胞における１つ以上の抗炎症性サイトカインの調節された発現、
（ｄ）調節された１つ以上の炎症性サイトカインの発現、任意に、前記１つ以上の炎症性サイトカインは、ＩＦＮ−ａ４、ＩＦＮ−ｂ、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＬＩＦ、ＩＦＮ−ガンマ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＣＸＣＬ１０、ＩＬ−３３、ＣＲＰ、ＩＬ−３３、ＭＣＰ−１、及びＭＩＰ−１−ベータからなる群から選択される、
（ｅ）マクロファージ、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、及びミクログリア細胞からなる群から選択される１つ以上の細胞における１つ以上の炎症性サイトカインの調節された発現、
（ｆ）Ｃ１ｑａ、Ｃ１ｑＢ、Ｃ１ｑＣ、Ｃ１ｓ、Ｃ１Ｒ、Ｃ４、Ｃ２、Ｃ３、ＩＴＧＢ２、ＨＭＯＸ１、ＬＡＴ２、ＣＡＳＰ１、ＣＳＴＡ、ＶＳＩＧ４、ＭＳ４Ａ４Ａ、Ｃ３ＡＲ１、ＧＰＸ１、ＴｙｒｏＢＰ、ＡＬＯＸ５ＡＰ、ＩＴＧＡＭ、ＳＬＣ７Ａ７、ＣＤ４、ＩＴＧＡＸ、ＰＹＣＡＲＤ、ＣＤ１４、ＣＤ１６、ＨＬＡ−ＤＲ、及びＣＣＲ２からなる群から選択される１つ以上のタンパク質の調節された発現、
（ｇ）樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、Ｍ２ミクログリア、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、及びＭ２マクロファージからなる群から選択される１つ以上の細胞によって誘導されるＴ細胞増殖の低減、
（ｈ）樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及びＭ２ミクログリアからなる群から選択される１つ以上の細胞の増殖の低減、
（ｉ）樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及びＭ２ミクログリアからなる群から選択される１つ以上の細胞の１つ以上の機能の低減、
（ｊ）アポトーシス性ニューロン、神経組織破片、機能不全シナプス、非神経組織破片、細菌、他の異物、病原タンパク質、病原ペプチド、病原核酸、または腫瘍細胞の１つ以上の食作用の阻害、任意に、前記病原核酸は、アンチセンスＧＧＣＣＣＣ（Ｇ２Ｃ４）反復拡張ＲＮＡであり、前記病原タンパク質は、アミロイドベータ、オリゴマーアミロイドベータ、アミロイドベータ斑、アミロイド前駆体タンパク質もしくはその断片、タウ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（染色体９オープンリーディングフレーム７２）、ｃ９ＲＡＮタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メジン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、反復関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）反復ペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）反復ペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）反復ペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）反復ペプチド、ユビキチン、ならびにプロリン−アルギニン（ＰＲ）反復ペプチドからなる群から選択され、前記腫瘍細胞は、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、または甲状腺癌からなる群から選択される癌由来である、
（ｋ）腫瘍細胞上のＣＤ３３リガンドへの結合、
（ｌ）好中球、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、ミクログリア、及びマクロファージからなる群から選択される細胞上のＣＤ３３リガンドへの結合、
（ｍ）ミクログリア、マクロファージ、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、または細胞傷害性Ｔ細胞の１つ以上による腫瘍細胞の殺傷の阻害、
（ｎ）ミクログリア、マクロファージ、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、または細胞傷害性Ｔ細胞の１つ以上の抗腫瘍細胞増殖活性の阻害、
（ｏ）免疫抑制樹状細胞、免疫抑制マクロファージ、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ、免疫抑制好中球、及び制御性Ｔ細胞の１つ以上の機能の促進、
（ｐ）免疫抑制樹状細胞、免疫抑制マクロファージ、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ、免疫抑制好中球、非腫瘍形成性ＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄細胞、及び制御性Ｔ細胞の１つ以上の、腫瘍内への浸潤の増大、
（ｑ）腫瘍、末梢血、またはその他のリンパ器官における腫瘍促進性骨髄／顆粒球免疫抑制性細胞数及び／または非腫瘍形成性ＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄細胞数の増大、
（ｒ）非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）及び／または非腫瘍形成性ＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄細胞の腫瘍促進性作用の強化、
（ｓ）非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）及び／または非腫瘍形成性ＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄細胞の生存の増大、
（ｔ）腫瘍死滅能を備えた腫瘍特異的Ｔリンパ球の活性化の低減、
（ｕ）腫瘍死滅能を備えたＣＤ４５＋ＣＤ３＋Ｔリンパ球の活性化の低減、
（ｖ）腫瘍死滅能を備えた腫瘍特異的ＮＫ細胞の浸潤の低減、
（ｗ）免疫応答を強化する能力を備えた腫瘍特異的Ｂリンパ球の浸潤の低減、
（ｘ）腫瘍死滅能を備えた腫瘍特異的Ｔリンパ球の浸潤の低減、
（ｙ）ＣＤ４５＋ＣＤ３＋Ｔリンパ球の浸潤の低減、
（ｚ）腫瘍体積の増大、
（ａａ）腫瘍増殖率の増大、ならびに
（ｂｂ）抗腫瘍Ｔ細胞応答を調節する１つ以上の免疫療法であって、任意に、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ３、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ、ＤＲ−５、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、ＣＳＦ−１受容体、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される１つ以上のタンパク質を標的とする免疫療法である前記１つ以上の免疫療法、もしくは１つ以上の化学療法剤、及び／または癌ワクチンの有効性の低減。
【請求項１１】
以下からなる群から選択される１つ以上の活性を示す、請求項１〜８のいずれか一項に記載の抗ＣＤ３３抗体：
（ａ）腫瘍浸潤ＣＤ３＋Ｔ細胞数の増大、
（ｂ）非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞におけるＣＤ３３の細胞レベルの低減、任意に、前記非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞は、腫瘍浸潤細胞であるか、または、任意に、前記非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞は、血中に含まれる、
（ｃ）非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞数の低減、任意に、前記非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞は、腫瘍浸潤細胞であるか、または、任意に、前記非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞は、血中に含まれる、
（ｄ）１つ以上の細胞におけるＰＤ−Ｌ１レベルの低減、任意に、前記１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、
（ｅ）１つ以上の細胞におけるＰＤ−Ｌ２レベルの低減、任意に、前記１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、
（ｆ）１つ以上の細胞におけるＢ７−Ｈ２レベルの低減、任意に、前記１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、
（ｇ）１つ以上の細胞におけるＢ７−Ｈ３レベルの低減、任意に、前記１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、
（ｈ）１つ以上の細胞におけるＣＤ２００Ｒレベルの低減、任意に、前記１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、
（ｉ）１つ以上の細胞におけるＣＤ１６３レベルの低減、任意に、前記１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、
（ｊ）１つ以上の細胞におけるＣＤ２０６レベルの低減、任意に、前記１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、
（ｋ）固形腫瘍の腫瘍増殖率の低減、
（ｌ）腫瘍体積の低減、
（ｍ）１つ以上のＰＤ−１阻害剤の有効性の向上、
（ｎ）１つ以上のチェックポイント阻害剤療法及び／または免疫調節療法の有効性の向上、任意に前記１つ以上のチェックポイント阻害剤療法及び／または免疫調節療法は、ＣＴＬ４、アデノシン経路、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＯＸ４０、ＴＩＭ３、ＬＡＧ−３、またはそれらの任意の組合せの１つ以上を標的とする、
（ｏ）１つ以上の化学療法剤の有効性の向上、任意に、前記１つ以上の化学療法剤は、ゲムシタビン、カペシタビン、アントラサイクリン、ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標））、エピルビシン（Ｅｌｌｅｎｃｅ（登録商標））、タキサン、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標））、カルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））、及びそれらの任意の組合せである、
（ｐ）非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の存在下でのＴ細胞増殖の増大、
（ｑ）非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の分化、生存、及び／または１つ以上の機能の阻害、ならびに
（ｒ）化学的または放射性毒素に複合化された場合の、固形腫瘍ならびに関連する血管におけるＣＤ３３発現免疫抑制非腫瘍形成性骨髄細胞及び／または非腫瘍形成性ＣＤ１４発現細胞の殺傷。
【請求項１２】
不連続ＣＤ３３エピトープと結合する、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の抗ＣＤ３３抗体。
【請求項１３】
前記不連続ＣＤ３３エピトープが、２つ以上のペプチド、３つ以上のペプチド、４つ以上のペプチド、５つ以上のペプチド、６つ以上のペプチド、７つ以上のペプチド、８つ以上のペプチド、９つ以上のペプチド、または１０個以上のペプチドを含む、請求項１２に記載の抗ＣＤ３３抗体。
【請求項１４】
前記ペプチドの各々が、配列番号１のアミノ酸配列の、５つ以上、６つ以上、７つ以上、８つ以上、９つ以上、１０個以上、１１個以上、１２個以上、１３個以上、１４個以上、１５個以上、１６個以上、１７個以上、１８個以上、１９個以上、もしくは２０個以上のアミノ酸残基、または、配列番号１のアミノ酸配列に対応する哺乳動物ＣＤ３３タンパク質の５つ以上、６つ以上、７つ以上、８つ以上、９つ以上、１０個以上、１１個以上、１２個以上、１３個以上、１４個以上、１５個以上、１６個以上、１７個以上、１８個以上、１９個以上、もしくは２０個以上のアミノ酸残基を含む、請求項１３に記載の抗ＣＤ３３抗体。
【請求項１５】
ＣＤ３３の配座エピトープに結合する、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の抗ＣＤ３３抗体。
【請求項１６】
配列番号１のアミノ酸残基１９〜２５９、１９〜１３５、１４５〜２２８、もしくは２２９〜２５９内の１つ以上のアミノ酸、または、配列番号１のアミノ酸残基１９〜２５９、１９〜１３５、１４５〜２２８、もしくは２２９〜２５９に対応する哺乳動物ＣＤ３３タンパク質のアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の抗ＣＤ３３抗体。
【請求項１７】
以下からなる群から選択されるアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の抗ＣＤ３３抗体：
ｉ．配列番号１のアミノ酸残基３９〜５１、または、配列番号１のアミノ酸残基３９〜５１に対応する哺乳動物ＣＤ３３タンパク質のアミノ酸残基、
ｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基４８〜５４、または、配列番号１のアミノ酸残基４８〜５４に対応する哺乳動物ＣＤ３３タンパク質のアミノ酸残基、
ｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基８８〜９８、または、配列番号１のアミノ酸残基８８〜９８に対応する哺乳動物ＣＤ３３タンパク質のアミノ酸残基、
ｉｖ．配列番号１のアミノ酸残基１１０〜１２０、または、配列番号１のアミノ酸残基１１０〜１２０に対応する哺乳動物ＣＤ３３タンパク質のアミノ酸残基、
ｖ．配列番号１のアミノ酸残基１１２〜１２２、または、配列番号１のアミノ酸残基１１２〜１２２に対応する哺乳動物ＣＤ３３タンパク質のアミノ酸残基、
ｖｉ．配列番号１のアミノ酸残基３９〜５１、８８〜９８、及び１１０〜１２０、または、配列番号１のアミノ酸残基３９〜５１、８８〜９８、及び１１０〜１２０に対応する哺乳動物ＣＤ３３タンパク質のアミノ酸残基、
ｖｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基３９〜５１、８８〜９８、及び１１２〜１２２、または、配列番号１のアミノ酸残基３９〜５１、８８〜９８、及び１１２〜１２２に対応する哺乳動物ＣＤ３３タンパク質のアミノ酸残基、ならびに
ｖｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基３９〜５１、８８〜９８、１１０〜１２０、及び１１２〜１２２、または、配列番号１のアミノ酸残基３９〜５１、８８〜９８、１１０〜１２０、及び１１２〜１２２に対応する哺乳動物ＣＤ３３タンパク質のアミノ酸残基。
【請求項１８】
配列番号１のＤ１８、Ｐ１９、Ｎ２０、Ｆ２１、Ｆ４４、Ｐ４６、Ｙ４９、Ｙ５０、Ｋ５２、及びＮ５３からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基、または、配列番号１のＤ１８、Ｐ１９、Ｎ２０、Ｆ２１、Ｆ４４、Ｐ４６、Ｙ４９、Ｙ５０、Ｋ５２、及びＮ５３からなる群から選択されるアミノ酸残基に対応する哺乳動物ＣＤ３３タンパク質の１つ以上のアミノ酸残基に結合する、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の抗ＣＤ３３抗体。
【請求項１９】
ＣＤ３３に対する結合について、１Ａ８、２Ｂ４、２Ｅ１２、２Ｆ５、３Ａ１２ａ、３Ａ１２ｂ、６Ａ３ａ、６Ａ３ｂ、６Ｃ７ａ、６Ｃ７ｂ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される１つ以上の抗体と競合する、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の抗ＣＤ３３抗体。
【請求項２０】
ＣＤ３３の前記細胞レベルが、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、ミクログリア、Ｔ細胞、及びマクロファージからなる群から選択される初代細胞、または細胞株で測定され、この場合、ＣＤ３３の前記細胞レベルは、インビトロ細胞アッセイを利用して測定される、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の抗ＣＤ３３抗体。
【請求項２１】
前記１つ以上のＣＤ３３リガンドが、赤血球で発現されるＣＤ３３リガンド、細菌細胞で発現されるＣＤ３３リガンド、アポトーシスを起こした細胞で発現されるＣＤ３３リガンド、腫瘍細胞で発現されるＣＤ３３リガンド、ウイルスで発現されるＣＤ３３リガンド、樹状細胞で発現されるＣＤ３３リガンド、神経細胞で発現されるＣＤ３３リガンド、グリア細胞で発現されるＣＤ３３リガンド、ミクログリア細胞で発現されるＣＤ３３リガンド、アストロサイトで発現されるＣＤ３３リガンド、ベータアミロイド斑上のＣＤ３３リガンド、タウのもつれ上のＣＤ３３リガンド、病原タンパク質上のＣＤ３３リガンド、病原ペプチド上のＣＤ３３リガンド、マクロファージで発現されるＣＤ３３リガンド、ナチュラルキラー細胞で発現されるＣＤ３３リガンド、Ｔ細胞で発現されるＣＤ３３リガンド、Ｔヘルパー細胞で発現されるＣＤ３３リガンド、細胞傷害性Ｔ細胞で発現されるＣＤ３３リガンド、Ｂ細胞で発現されるＣＤ３３リガンド、腫瘍埋没免疫抑制樹状細胞で発現されるＣＤ３３リガンド、腫瘍埋没免疫抑制マクロファージで発現されるＣＤ３３リガンド、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞で発現されるＣＤ３３リガンド、制御性Ｔ細胞で発現されるＣＤ３３リガンド、分泌されたムチン、シアル酸、シアル酸含有糖脂質、シアル酸含有糖タンパク質、アルファ−２，６結合シアル酸含有糖脂質、アルファ−２，６結合シアル酸含有糖タンパク質、アルファ−２，３結合シアル酸含有糖脂質、アルファ−２，３結合シアル酸含有糖タンパク質、アルファ−１酸性糖タンパク質（ＡＧＰ）、ＣＤ２４タンパク質、及びガングリオシドからなる群から選択される、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の抗ＣＤ３３抗体。
【請求項２２】
軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含む請求項１〜２１のいずれか一項に記載の抗ＣＤ３３抗体であって、前記軽鎖可変ドメイン、もしくは前記重鎖可変ドメイン、またはその両方が、１Ａ８、２Ｂ４、２Ｅ１２、２Ｅ１２．１、２Ｆ５、２Ｆ５．１、３Ａ１２ａ、３Ａ１２ｂ、６Ａ３ａ、６Ａ３ｂ、６Ｃ７ａ、６Ｃ７ｂ、及び６Ｃ７．２からなる群から選択される抗体のＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、ＨＶＲ−Ｌ３、ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む、前記抗ＣＤ３３抗体。
【請求項２３】
請求項２２に記載の抗ＣＤ３３抗体であって：
（ａ）前記ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号９のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号１５のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号１８のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号２２のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号２６のアミノ酸配列を含むか、
（ｂ）前記ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１０のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号１３のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号１６のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号１９のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号２３のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号２７のアミノ酸配列を含むか、
（ｃ）前記ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１０のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号６９のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号７２のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号１９のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号２３のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号２７のアミノ酸配列を含むか、
（ｄ）前記ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号１４のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号１７のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号２０のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号２４のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号２８のアミノ酸配列を含むか、
（ｅ）前記ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号６８のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号７１のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号７４のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号７５のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号７７のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号２８のアミノ酸配列を含むか、
（ｆ）前記ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号６７のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号７０のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号７３のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号２１のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号２５のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号２９のアミノ酸配列を含むか、
（ｇ）前記ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号６７のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号７０のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号７３のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号２１のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号７６のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号２９のアミノ酸配列を含むか、
（ｈ）前記ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号２１のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号２５のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号２９のアミノ酸配列を含むか、
（ｉ）前記ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号２１のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号７６のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号２９のアミノ酸配列を含むか、
（ｊ）前記ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１８４のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号１８５のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号１７のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号７５のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号１８６のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号１８７のアミノ酸配列を含むか、
（ｋ）前記ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１０のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号１３のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号７２のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号２３１のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号２３のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号２７のアミノ酸配列を含むか、または、
（ｌ）前記ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号２２８のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号２２９のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号２３０のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号２３２のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号２３３のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号２９のアミノ酸配列を含む、前記抗ＣＤ３３抗体。
【請求項２４】
軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含む請求項１〜２１のいずれか一項に記載の抗ＣＤ３３抗体であって、前記軽鎖可変ドメインが、
（ａ）配列番号９〜１１、６７、６８、１８４、及び２２８からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号９〜１１、６７、６８、１８４、及び２２８からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性があるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
（ｂ）配列番号１２〜１４、６９〜７１、１８５、及び２２９からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１２〜１４、６９〜７１、１８５、及び２２９からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性があるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、ならびに
（ｃ）配列番号１５〜１７、７２〜７４、及び２３０からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１５〜１７、７２〜７４、及び２３０からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性があるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み、
前記重鎖可変ドメインが、
（ａ）配列番号１８〜２１、７５、２３１、及び２３２からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１８〜２１、７５、２３１、及び２３２からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性があるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
（ｂ）配列番号２２〜２５、７６、７７、１８６、及び２３３からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号２２〜２５、７６、７７、１８６、及び２３３からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性があるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、ならびに
（ｃ）配列番号２６〜２９、及び１８７からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号２６〜２９、及び１８７からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性があるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む、前記抗ＣＤ３３抗体。
【請求項２５】
配列番号３０〜４８、１１２〜１５３、１９２〜２０２、及び２４１〜２４３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、及び／または、配列番号４９〜６６、１５４〜１８３、２０３〜２１３、及び２４４〜２４６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の抗ＣＤ３３抗体。
【請求項２６】
１Ａ８、２Ｂ４、２Ｅ１２、２Ｅ１２．１、２Ｆ５、２Ｆ５．１、３Ａ１２ａ、３Ａ１２ｂ、６Ａ３ａ、６Ａ３ｂ、６Ｃ７ａ、６Ｃ７ｂ、及び６Ｃ７．２からなる群から選択される抗体の軽鎖可変ドメイン、及び／または１Ａ８、２Ｂ４、２Ｅ１２、２Ｅ１２．１、２Ｆ５、２Ｆ５．１、３Ａ１２ａ、３Ａ１２ｂ、６Ａ３ａ、６Ａ３ｂ、６Ｃ７ａ、６Ｃ７ｂ、及び６Ｃ７．２からなる群から選択される抗体の重鎖可変ドメインを含む、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の抗ＣＤ３３抗体。
【請求項２７】
配列番号１のアミノ酸残基１９〜２５９、１９〜１３５、１４５〜２２８、もしくは２２９〜２５９内の１つ以上のアミノ酸、または、配列番号１のアミノ酸残基１９〜２５９、１９〜１３５、１４５〜２２８、もしくは２２９〜２５９に対応する哺乳動物ＣＤ３３タンパク質のアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する、単離抗ＣＤ３３抗体。
【請求項２８】
以下からなる群から選択されるアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する、請求項２７に記載の抗ＣＤ３３抗体：
ｉ．配列番号１のアミノ酸残基３９〜５１、または、配列番号１のアミノ酸残基３９〜５１に対応する哺乳動物ＣＤ３３タンパク質のアミノ酸残基、
ｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基４８〜５４、または、配列番号１のアミノ酸残基４８〜５４に対応する哺乳動物ＣＤ３３タンパク質のアミノ酸残基、
ｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基８８〜９８、または、配列番号１のアミノ酸残基８８〜９８に対応する哺乳動物ＣＤ３３タンパク質のアミノ酸残基、
ｉｖ．配列番号１のアミノ酸残基１１０〜１２０、または、配列番号１のアミノ酸残基１１０〜１２０に対応する哺乳動物ＣＤ３３タンパク質のアミノ酸残基、
ｖ．配列番号１のアミノ酸残基１１２〜１２２、または、配列番号１のアミノ酸残基１１２〜１２２に対応する哺乳動物ＣＤ３３タンパク質のアミノ酸残基、
ｖｉ．配列番号１のアミノ酸残基３９〜５１、８８〜９８、及び１１０〜１２０、または、配列番号１のアミノ酸残基３９〜５１、８８〜９８、及び１１０〜１２０に対応する哺乳動物ＣＤ３３タンパク質のアミノ酸残基、
ｖｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基３９〜５１、８８〜９８、及び１１２〜１２２、または、配列番号１のアミノ酸残基３９〜５１、８８〜９８、及び１１２〜１２２に対応する哺乳動物ＣＤ３３タンパク質のアミノ酸残基、ならびに
ｖｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基３９〜５１、８８〜９８、１１０〜１２０、及び１１２〜１２２、または、配列番号１のアミノ酸残基３９〜５１、８８〜９８、１１０〜１２０、及び１１２〜１２２に対応する哺乳動物ＣＤ３３タンパク質のアミノ酸残基。
【請求項２９】
配列番号１のＤ１８、Ｐ１９、Ｎ２０、Ｆ２１、Ｆ４４、Ｐ４６、Ｙ４９、Ｙ５０、Ｋ５２、及びＮ５３からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基、または、配列番号１のＤ１８、Ｐ１９、Ｎ２０、Ｆ２１、Ｆ４４、Ｐ４６、Ｙ４９、Ｙ５０、Ｋ５２、及びＮ５３からなる群から選択されるアミノ酸残基に対応する哺乳動物ＣＤ３３タンパク質の１つ以上のアミノ酸残基に結合する、単離抗ＣＤ３３抗体。
【請求項３０】
軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含む単離抗ＣＤ３３抗体であって、前記重鎖可変ドメイン、もしくは前記軽鎖可変ドメイン、またはその両方が、１Ａ８、２Ｂ４、２Ｅ１２、２Ｅ１２．１、２Ｆ５、２Ｆ５．１、３Ａ１２ａ、３Ａ１２ｂ、６Ａ３ａ、６Ａ３ｂ、６Ｃ７ａ、６Ｃ７ｂ、６Ｃ７．２、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される抗体のＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、ＨＶＲ−Ｌ３、ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む、前記抗ＣＤ３３抗体。
【請求項３１】
請求項３０に記載の抗ＣＤ３３抗体であって：
（ａ）前記ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号９のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号１５のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号１８のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号２２のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号２６のアミノ酸配列を含むか、
（ｂ）前記ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１０のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号１３のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号１６のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号１９のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号２３のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号２７のアミノ酸配列を含むか、
（ｃ）前記ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１０のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号６９のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号７２のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号１９のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号２３のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号２７のアミノ酸配列を含むか、
（ｄ）前記ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号１４のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号１７のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号２０のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号２４のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号２８のアミノ酸配列を含むか、
（ｅ）前記ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号６８のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号７１のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号７４のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号７５のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号７７のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号２８のアミノ酸配列を含むか、
（ｆ）前記ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号６７のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号７０のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号７３のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号２１のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号２５のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号２９のアミノ酸配列を含むか、
（ｇ）前記ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号６７のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号７０のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号７３のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号２１のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号７６のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号２９のアミノ酸配列を含むか、
（ｈ）前記ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号２１のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号２５のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号２９のアミノ酸配列を含むか、
（ｉ）前記ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号２１のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号７６のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号２９のアミノ酸配列を含むか、
（ｊ）前記ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１８４のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号１８５のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号１７のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号７５のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号１８６のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号１８７のアミノ酸配列を含むか、
（ｋ）前記ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１０のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号１３のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号７２のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号２３１のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号２３のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号２７のアミノ酸配列を含むか、または、
（ｌ）前記ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号２２８のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号２２９のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号２３０のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号２３２のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号２３３のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号２９のアミノ酸配列を含む、前記抗ＣＤ３３抗体。
【請求項３２】
請求項３０に記載の抗ＣＤ３３抗体であって、前記軽鎖可変ドメインが、
（ａ）配列番号９〜１１、６７、６８、１８４、及び２２８からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号９〜１１、６７、６８、１８４、及び２２８からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性があるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
（ｂ）配列番号１２〜１４、６９〜７１、１８５、及び２２９からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１２〜１４、６９〜７１、１８５、及び２２９からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性があるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、ならびに
（ｃ）配列番号１５〜１７、７２〜７４、及び２３０からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１５〜１７、７２〜７４、及び２３０からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性があるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み、
前記重鎖可変ドメインが、
（ａ）配列番号１８〜２１、７５、２３１、及び２３２からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１８〜２１、７５、２３１、及び２３２からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性があるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
（ｂ）配列番号２２〜２５、７６、７７、１８６、及び２３３からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号２２〜２５、７６、７７、１８６、及び２３３からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性があるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、ならびに
（ｃ）配列番号２６〜２９、及び１８７からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号２６〜２９、及び１８７からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性があるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む、前記抗ＣＤ３３抗体。
【請求項３３】
配列番号３０〜４８、１１２〜１５３、１９２〜２０２、及び２４１〜２４３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、及び／または、配列番号４９〜６６、１５４〜１８３、２０３〜２１３、及び２４４〜２４６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む、単離抗ＣＤ３３抗体。
【請求項３４】
１Ａ８、２Ｂ４、２Ｅ１２、２Ｅ１２．１、２Ｆ５、２Ｆ５．１、３Ａ１２ａ、３Ａ１２ｂ、６Ａ３ａ、６Ａ３ｂ、６Ｃ７ａ、６Ｃ７ｂ、及び６Ｃ７．２からなる群から選択される抗体の軽鎖可変ドメイン、及び／または１Ａ８、２Ｂ４、２Ｅ１２、２Ｅ１２．１、２Ｆ５、２Ｆ５．１、３Ａ１２ａ、３Ａ１２ｂ、６Ａ３ａ、６Ａ３ｂ、６Ｃ７ａ、６Ｃ７ｂ、及び６Ｃ７．２からなる群から選択される抗体の重鎖可変ドメインを含む、単離抗ＣＤ３３抗体。
【請求項３５】
ＣＤ３３に対する結合について、１Ａ８、２Ｂ４、２Ｅ１２、２Ｅ１２．１、２Ｆ５、２Ｆ５．１、３Ａ１２ａ、３Ａ１２ｂ、６Ａ３ａ、６Ａ３ｂ、６Ｃ７ａ、６Ｃ７ｂ、６Ｃ７．２、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される１つ以上の抗体と競合する、単離抗ＣＤ３３抗体。
【請求項３６】
１Ａ８、２Ｂ４、２Ｅ１２、２Ｅ１２．１、２Ｆ５、２Ｆ５．１、３Ａ１２ａ、３Ａ１２ｂ、６Ａ３ａ、６Ａ３ｂ、６Ｃ７ａ、６Ｃ７ｂ、及び６Ｃ７．２からなる群から選択される抗体と本質的に同じＣＤ３３エピトープと結合する、単離抗ＣＤ３３抗体。
【請求項３７】
軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含む単離抗ＣＤ３３抗体であって、前記軽鎖可変ドメインが、
（ａ）配列番号９〜１１、６７、６８、１８４、及び２２８からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号９〜１１、６７、６８、１８４、及び２２８からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性があるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
（ｂ）配列番号１２〜１４、６９〜７１、１８５、及び２２９からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１２〜１４、６９〜７１、１８５、及び２２９からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性があるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、ならびに
（ｃ）配列番号１５〜１７、７２〜７４、及び２３０からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１５〜１７、７２〜７４、及び２３０からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性があるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含むか、または、
前記重鎖可変ドメインが、
（ａ）配列番号１８〜２１、７５、２３１、及び２３２からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１８〜２１、７５、２３１、及び２３２からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性があるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
（ｂ）配列番号２２〜２５、７６、７７、１８６、及び２３３からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号２２〜２５、７６、７７、１８６、及び２３３からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性があるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、ならびに
（ｃ）配列番号２６〜２９、及び１８７からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号２６〜２９、及び１８７からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性があるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む、前記抗ＣＤ３３抗体。
【請求項３８】
ＩｇＧクラス、ＩｇＭクラス、またはＩｇＡクラスの抗体である、請求項１〜３７のいずれか一項に記載の抗ＣＤ３３抗体。
【請求項３９】
ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４アイソタイプを有する、請求項３８に記載の抗ＣＤ３３抗体。
【請求項４０】
阻害性Ｆｃ受容体と結合する、請求項３９に記載の抗ＣＤ３３抗体。
【請求項４１】
前記阻害性Ｆｃ受容体が、阻害性Ｆｃ−ガンマ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＩＩＢ）である、請求項４０に記載の抗ＣＤ３３抗体。
【請求項４２】
請求項４１に記載の抗ＣＤ３３抗体であって、
（ａ）ヒトＩｇＧ１アイソタイプを有し、残基の番号がＥＵ付番に従うＮ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ、Ｄ２７０Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｄ、Ｌ３２８Ｅ、Ｅ２３３Ｄ、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ、Ａ３３０Ｒ、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｎ２９７Ｑ、Ｐ２３８Ｓ、Ｐ２３８Ａ、Ａ３２７Ｑ、Ａ３２７Ｇ、Ｐ３２９Ａ、Ｋ３２２Ａ、Ｔ３９４Ｄ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される残基位置で、前記Ｆｃ領域に１つ以上のアミノ酸置換を含むか、または、グリシン２３６に対応する位置で、前記Ｆｃ領域にアミノ酸の欠失があるか、
（ｂ）ヒトＩｇＧ１アイソタイプを有し、ＩｇＧ２アイソタイプ重鎖定常ドメイン１（ＣＨ１）及びヒンジ領域を含み、任意に、前記ＩｇＧ２アイソタイプＣＨ１及びヒンジ領域は、アミノ酸配列ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰ  ＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥ  ＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫ  ＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳ  ＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳ  ＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴ  ＶＰＳＳＮＦＧＴＱＴ  ＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳ  ＮＴＫＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号２１４）を含み、任意に、前記抗体のＦｃ領域は、残基の番号がＥＵ付番に従うＳ２６７Ｅのアミノ酸置換、もしくはＬ３２８Ｆのアミノ酸置換、もしくはその両方、及び／またはＮ２９７ＡもしくはＮ２９７Ｑのアミノ酸置換を含むか、
（ｃ）ヒトＩｇＧ２アイソタイプを有し、残基の番号がＥＵ付番に従うＰ２３８Ｓ、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｈ２６８Ａ、Ｈ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｃ２１４Ｓ、Ｃ２３２Ｓ、Ｃ２３３Ｓ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｈ２６８Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ａ３３０Ｌ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される残基位置で、前記Ｆｃ領域に１つ以上のアミノ酸置換を含むか、
（ｄ）ヒトＩｇＧ４アイソタイプを有し、残基の番号がＥＵ付番に従うＬ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３６Ｅ、Ｓ２６７Ｅ、Ｅ３１８Ａ、Ｌ３２８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ａ／Ｆ２３４Ａ、Ｓ２２８Ｐ、Ｓ２４１Ｐ、Ｌ２４８Ｅ、Ｔ３９４Ｄ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｌ２３５Ｅ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される残基位置で、前記Ｆｃ領域に１つ以上のアミノ酸置換を含むか、または、
（ｅ）ハイブリッドＩｇＧ２／４アイソタイプを有し、任意に、残基の番号がＥＵまたはＫａｂａｔ付番に従うヒトＩｇＧ２のアミノ酸１１８から２６０、及びヒトＩｇＧ４のアミノ酸２６１から４４７を含むアミノ酸配列を含む、前記抗ＣＤ３３抗体。
【請求項４３】
請求項３９に記載の抗ＣＤ３３抗体であって、
（ａ）ヒトＩｇＧ１アイソタイプを有し、残基の番号がＥＵ付番に従うＮ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｄ２７０Ａ、Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｐ２３８Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｐ２３８Ａ、Ａ３２７Ｑ、Ａ３２７Ｇ、Ｐ３２９Ａ、Ｋ３２２Ａ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、Ｔ３９４Ｄ、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される残基位置で、前記Ｆｃ領域に１つ以上のアミノ酸置換を含むか、
（ｂ）ヒトＩｇＧ２アイソタイプを有し、残基の番号がＥＵ付番に従うＰ２３８Ｓ、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｈ２６８Ａ、Ｈ２６８Ｑ、Ｈ２６８Ｅ、Ｖ３０９Ｌ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｃ２３２Ｓ、Ｃ２３３Ｓ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される残基位置で、前記Ｆｃ領域に１つ以上のアミノ酸置換を含むか、または、
（ｃ）ヒトＩｇＧ４アイソタイプを有し、残基の番号がＥＵ付番に従うＥ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ａ／Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｅ３１８Ａ、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３６Ｅ、Ｓ２４１Ｐ、Ｌ２４８Ｅ、Ｔ３９４Ｄ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される残基位置で、前記Ｆｃ領域に１つ以上のアミノ酸置換を含む、前記抗ＣＤ３３抗体。
【請求項４４】
請求項４３に記載の抗ＣＤ３３抗体であって、
（ａ）前記Ｆｃ領域は、さらに、残基の番号がＥＵ付番に従うＡ３３０Ｌ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される位置で、１つ以上のさらなるアミノ酸置換を含むか、
（ｂ）前記Ｆｃ領域は、さらに、残基の番号がＥＵ付番に従うＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される位置で、１つ以上のさらなるアミノ酸置換を含むか、または、
（ｃ）前記Ｆｃ領域は、さらに、ＥＵ付番に従うＳ２２８Ｐのアミノ酸置換を含む、前記抗ＣＤ３３抗体。
【請求項４５】
前記ＣＤ３３タンパク質が哺乳動物タンパク質またはヒトタンパク質である、請求項１〜４４のいずれか一項に記載の抗ＣＤ３３抗体。
【請求項４６】
前記ＣＤ３３タンパク質が野生型タンパク質である、請求項１〜４５のいずれか一項に記載の抗ＣＤ３３抗体。
【請求項４７】
前記ＣＤ３３タンパク質が、天然に存在するバリアントである、請求項１〜４５のいずれか一項に記載の抗ＣＤ３３抗体。
【請求項４８】
前記ＣＤ３３タンパク質が、ヒト樹状細胞、ヒトマクロファージ、ヒト単球、ヒト破骨細胞、ヒト好中球、ヒトＴ細胞、ヒトＴヘルパー細胞、ヒト細胞傷害性Ｔ細胞、ヒト顆粒球、及びヒトミクログリアからなる群から選択される１つ以上の細胞で発現される、請求項１〜４７のいずれか一項に記載の抗ＣＤ３３抗体。
【請求項４９】
哺乳動物ＣＤ３３タンパク質、もしくはヒトＣＤ３３タンパク質、またはその両方に特異的に結合する、請求項１〜４８のいずれか一項に記載の抗ＣＤ３３抗体。
【請求項５０】
ヒトＣＤ３３、もしくはマウスＣＤ３３、またはその両方に特異的に結合する、請求項１〜４８のいずれか一項に記載の抗ＣＤ３３抗体。
【請求項５１】
ｐＨ依存的にＣＤ３３に結合する、請求項１〜５０のいずれか一項に記載の抗ＣＤ３３抗体。
【請求項５２】
ｐＨ５．５〜８．０の範囲でＣＤ３３に結合する、請求項５１に記載の抗ＣＤ３３抗体。
【請求項５３】
ｐＨ５．０未満でＣＤ３３から解離する、請求項５１に記載の抗ＣＤ３３抗体。
【請求項５４】
ヒトＣＤ３３または哺乳動物ＣＤ３３タンパク質のアミノ酸残基を含むエピトープに結合する抗体断片である、請求項１〜５３のいずれか一項に記載の抗ＣＤ３３抗体。
【請求項５５】
ヒトＣＤ３３、天然に存在するヒトＣＤ３３のバリアント、及びヒトＣＤ３３の疾患バリアントからなる群から選択される１つ以上のヒトタンパク質に結合する抗体断片である、請求項１〜５３のいずれか一項に記載の抗ＣＤ３３抗体。
【請求項５６】
前記抗体断片が、ヒトＣＤ３３、天然に存在するヒトＣＤ３３のバリアント、及びヒトＣＤ３３の疾患バリアントからなる群から選択される１つ以上のヒトタンパク質に結合する第二の抗体断片に架橋される、請求項５４または請求項５５に記載の抗ＣＤ３３抗体。
【請求項５７】
前記断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、またはｓｃＦｖ断片である、請求項５４〜５６のいずれか一項に記載の抗ＣＤ３３抗体。
【請求項５８】
マウス抗体である、請求項１〜５７のいずれか一項に記載の抗ＣＤ３３抗体。
【請求項５９】
ヒト化抗体、二重特異性抗体、モノクローナル抗体、多価抗体、複合抗体、またはキメラ抗体である、請求項１〜５７のいずれか一項に記載の抗ＣＤ３３抗体。
【請求項６０】
第一の抗原及び第二の抗原を認識する二重特異性抗体である、請求項１〜５７のいずれか一項に記載の抗ＣＤ３３抗体。
【請求項６１】
前記第一の抗原がＣＤ３３であり、前記第二の抗原が、
（ａ）血液脳関門を通過する輸送を促進する抗原、
（ｂ）トランスフェリン受容体（ＴＲ）、インスリン受容体（ＨＩＲ）、インスリン様成長因子受容体（ＩＧＦＲ）、低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質１及び２（ＬＰＲ−１及び２）、ジフテリア毒素受容体、ＣＲＭ１９７、ラマ単一ドメイン抗体、ＴＭＥＭ  ３０（Ａ）、タンパク質形質導入ドメイン、ＴＡＴ、Ｓｙｎ−Ｂ、ペネトラチン、ポリアルギニンペプチド、アンギオペプ（ａｎｇｉｏｐｅｐ）ペプチド、ならびにＡＮＧ１００５からなる群から選択される血液脳関門を通過する輸送を促進する抗原、
（ｃ）病原ペプチドまたはタンパク質及び病原核酸からなる群から選択される病原体であって、前記病原ペプチドまたはタンパク質は、アミロイドベータ、オリゴマーアミロイドベータ、アミロイドベータ斑、アミロイド前駆体タンパク質もしくはその断片、タウ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（染色体９オープンリーディングフレーム７２）、ｃ９ＲＡＮタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メジン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、反復関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）反復ペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）反復ペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）反復ペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）反復ペプチド、ユビキチン、ならびにプロリン−アルギニン（ＰＲ）反復ペプチドからなる群から選択され、前記病原核酸は、アンチセンスＧＧＣＣＣＣ（Ｇ２Ｃ４）反復拡張ＲＮＡであり、
（ｄ）免疫細胞で発現されるリガンド及び／またはタンパク質であって、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ３、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ、及びホスファチジルセリンからなる群から選択されるリガンド及び／またはタンパク質、ならびに
（ｅ）１つ以上の腫瘍細胞で発現されるタンパク質、脂質、多糖、または糖脂質である、請求項６０に記載の抗ＣＤ３３抗体。
【請求項６２】
複合抗体である、請求項１〜６１のいずれか一項に記載の抗ＣＤ３３抗体。
【請求項６３】
検出可能なマーカー、毒素、または治療薬に複合化される、請求項６２に記載の抗ＣＤ３３抗体。
【請求項６４】
リシン、リシンＡ鎖、ドキソルビシン、ダウノルビシン、メイタンシノイド、タキソール、エチジウムブロマイド、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ジヒドロキシアントラシンジオン、アクチノマイシン、ジフテリア毒素、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ外毒素（ＰＥ）Ａ、ＰＥ４０、アブリン、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、アルファ−サルシン、ゲロニン、ミトゲリン、レトストリクトシン（ｒｅｔｓｔｒｉｃｔｏｃｉｎ）、フェノマイシン、エノマイシン、キュリシン（ｃｕｒｉｃｉｎ）、クロチン、カリケアマイシン、Ｓａｐｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ阻害剤、糖質コルチコイド、アウリスタチン、オーロマイシン（ａｕｒｏｍｙｃｉｎ）、イットリウム、ビスマス、コンブレスタチン、デュオカルマイシン、ドラスタチン、ｃｃ１０６５、及びシスプラチンからなる群から選択される毒素に複合化される、請求項６３に記載の抗ＣＤ３３抗体。
【請求項６５】
病原ペプチド、病原タンパク質、アミロイドベータ、オリゴマーアミロイドベータ、アミロイドベータ斑、アミロイド前駆体タンパク質もしくはその断片、タウ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（染色体９オープンリーディングフレーム７２）、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メジン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、反復関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）反復ペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）反復ペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）反復ペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）反復ペプチド、ユビキチン、及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）反復ペプチド、ならびにそれらの任意の組合せからなる群から選択される病原体と特異的に結合する１つ以上の抗体と組み合わせて、または、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ３、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、Ｓｉｇｌｅｃ−５、Ｓｉｇｌｅｃ−７、Ｓｉｇｌｅｃ−９、Ｓｉｇｌｅｃ−１１、ホスファチジルセリン、病原核酸、アンチセンスＧＧＣＣＣＣ（Ｇ２Ｃ４）反復拡張ＲＮＡ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される免疫調節タンパク質と結合する１つ以上の抗体と組み合わせて用いられる、請求項１〜６４のいずれか一項に記載の抗ＣＤ３３抗体。
【請求項６６】
約１００ｎＭ〜約１００ｐＭの範囲、または１００ｐＭ未満のマウスＣＤ３３に対する解離定数（ＫＤ）を有し、この場合、前記ＫＤは温度２５℃で測定される、先行請求項のいずれか一項に記載の抗ＣＤ３３抗体。
【請求項６７】
先行請求項のいずれか一項に記載の抗ＣＤ３３抗体をコードする核酸を含む単離核酸。
【請求項６８】
請求項６７に記載の核酸を含むベクター。
【請求項６９】
請求項６８に記載のベクターを含む単離宿主細胞。
【請求項７０】
抗ＣＤ３３抗体の産生方法であって、前記抗ＣＤ３３抗体が産生されるように請求項６９の宿主細胞を培養することを含む、前記方法。
【請求項７１】
さらに、前記宿主細胞によって産生される前記抗ＣＤ３３抗体を回収することを含む、請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
請求項７０または請求項７１に記載の方法によって産生される単離抗ＣＤ３３抗体。
【請求項７３】
請求項１〜６６のいずれか一項に記載の抗ＣＤ３３抗体及び医薬的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項７４】
認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、タウパチー病、感染症、及び癌からなる群から選択される疾患、障害、もしくは損傷の予防、リスクの低減、または治療方法であって、それを必要とする個体に対して、ＣＤ３３の細胞レベルを低下させる、もしくはＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用を阻害する、またはその両方の薬剤の治療有効量を投与することを含む、前記方法。
【請求項７５】
前記疾患、障害、もしくは損傷が癌である、請求項７４に記載の方法。
【請求項７６】
前記癌が、ＣＤ３３または１つ以上のＣＤ３３リガンドを発現する、請求項７４または請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
前記癌が、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、及び多発性骨髄腫からなる群から選択される、請求項７４〜７６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７８】
前記薬剤が、以下からなる群から選択される１つ以上のＣＤ３３活性を阻害する、請求項７４〜７７のいずれか一項に記載の方法：
（ａ）免疫抑制樹状細胞、免疫抑制マクロファージ、免疫抑制好中球、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ、非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞、及び制御性Ｔ細胞の１つ以上の増殖、成熟、遊走、分化、及び／または機能の促進、
（ｂ）免疫抑制樹状細胞、免疫抑制マクロファージ、免疫抑制好中球、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ、及び制御性Ｔ細胞の１つ以上の、腫瘍内への浸潤の増大、
（ｃ）腫瘍、末梢血、またはその他のリンパ器官における腫瘍促進性骨髄／顆粒球免疫抑制性細胞数及び／または非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞数の増大、
（ｄ）非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞及び／または非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞の腫瘍促進性作用の強化、
（ｅ）腫瘍または末梢血における腫瘍促進性サイトカインの発現の増大、任意に、前記腫瘍促進性サイトカインは、ＴＧＦ−ベータまたはＩＬ−１０である、
（ｆ）腫瘍促進性ＦｏｘＰ３＋調節性Ｔリンパ球の腫瘍浸潤の増大、
（ｇ）腫瘍死滅能を備えた腫瘍特異的Ｔリンパ球の活性化の低減、
（ｈ）腫瘍死滅能を備えた腫瘍特異的Ｔリンパ球の浸潤の低減、
（ｉ）腫瘍死滅能を備えた腫瘍特異的ＮＫ細胞の浸潤の低減、
（ｊ）ＮＫ細胞の腫瘍死滅能の低減、
（ｋ）免疫応答を強化する能力を備えた腫瘍特異的Ｂリンパ球の浸潤の低減、
（ｌ）腫瘍体積の増大、
（ｍ）腫瘍増殖率の増大、
（ｎ）転移の増大、
（ｏ）腫瘍再発率の増大、
（ｐ）１つ以上のＰＤ−１リガンドの発現の増大、
（ｑ）抗腫瘍Ｔ細胞応答を調節する１つ以上の免疫療法であって、任意に、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ３、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ、ＤＲ−５、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、ＣＳＦ−１受容体、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される１つ以上のタンパク質を標的とする免疫療法である前記１つ以上の免疫療法、または１つ以上の癌ワクチンの有効性の低減、
（ｒ）ＰＬＣγ／ＰＫＣ／カルシウム動員の阻害、
（ｓ）ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ、Ｒａｓ／ＭＡＰＫシグナル伝達の阻害、ならびに
（ｔ）１つ以上の化学療法剤の有効性の低減、任意に、前記１つ以上の化学療法剤は、ゲムシタビン、カペシタビン、アントラサイクリン、ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標））、エピルビシン（Ｅｌｌｅｎｃｅ（登録商標））、タキサン、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標））、カルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））、及びそれらの任意の組合せである。
【請求項７９】
前記薬剤が、以下からなる群から選択される１つ以上の活性を示す、請求項７４〜７７のいずれか一項に記載の方法：
（ａ）腫瘍浸潤ＣＤ３＋Ｔ細胞数の増大、
（ｂ）非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞におけるＣＤ３３の細胞レベルの低減、任意に、前記非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞は、腫瘍浸潤細胞であるか、または、任意に、前記非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞は、血中に含まれる、
（ｃ）非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞数の低減、任意に、前記非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞は、腫瘍浸潤細胞であるか、または、任意に、前記非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞は、血中に含まれる、
（ｄ）１つ以上の細胞におけるＰＤ−Ｌ１レベルの低減、任意に、前記１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、
（ｅ）１つ以上の細胞におけるＰＤ−Ｌ２レベルの低減、任意に、前記１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、
（ｆ）１つ以上の細胞におけるＢ７−Ｈ２レベルの低減、任意に、前記１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、
（ｇ）１つ以上の細胞におけるＢ７−Ｈ３レベルの低減、任意に、前記１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、
（ｈ）１つ以上の細胞におけるＣＤ２００Ｒレベルの低減、任意に、前記１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、
（ｉ）１つ以上の細胞におけるＣＤ１６３レベルの低減、任意に、前記１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、
（ｊ）１つ以上の細胞におけるＣＤ２０６レベルの低減、任意に、前記１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、
（ｋ）固形腫瘍の腫瘍増殖率の低減、
（ｌ）腫瘍体積の低減、
（ｍ）１つ以上のＰＤ−１阻害剤の有効性の向上、
（ｎ）１つ以上のチェックポイント阻害剤療法及び／または免疫調節療法の有効性の向上、任意に、前記１つ以上のチェックポイント阻害剤療法及び／または免疫調節療法は、ＣＴＬ４、アデノシン経路、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＯＸ４０、ＴＩＭ３、ＬＡＧ−３、またはそれらの任意の組合せの１つ以上を標的とする、
（ｏ）１つ以上の化学療法剤の有効性の向上、任意に、前記１つ以上の化学療法剤は、ゲムシタビン、カペシタビン、アントラサイクリン、ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標））、エピルビシン（Ｅｌｌｅｎｃｅ（登録商標））、タキサン、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標））、カルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））、及びそれらの任意の組合せである、
（ｐ）非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の存在下でのＴ細胞増殖の増大、
（ｑ）非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の分化、生存、及び／または１つ以上の機能の阻害、ならびに
（ｒ）化学的または放射性毒素に複合化された場合の、固形腫瘍ならびに関連する血管におけるＣＤ３３発現免疫抑制骨髄細胞及び／またはＣＤ１４発現細胞の殺傷。
【請求項８０】
１つ以上の免疫細胞の生存、成熟、機能、遊走、または増殖の誘導または促進を必要とする個体においてこれを誘導または促進する方法であって、前記個体に対して、ＣＤ３３の細胞レベルを低下させる、ＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用を阻害する、またはその両方の薬剤の治療有効量を投与することを含む、前記方法。
【請求項８１】
前記１つ以上の免疫細胞が、樹状細胞、マクロファージ、ミクログリア、好中球、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される、請求項８１に記載の方法。
【請求項８２】
前記薬剤が、抗体、可溶性ＣＤ３３受容体、ＣＤ３３−Ｆｃ融合タンパク質、ＣＤ３３イムノアドヘシン、可溶性Ｓｉｇｌｅｃ受容体、Ｓｉｇｌｅｃ−Ｆｃ融合タンパク質、Ｓｉｇｌｅｃイムノアドヘシン、アンチセンス分子、ｓｉＲＮＡ、小分子阻害剤、タンパク質、及びペプチドからなる群から選択される、請求項７４〜８１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８３】
前記薬剤が、単離抗ＣＤ３３抗体である、請求項７４〜８１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８４】
前記抗ＣＤ３３抗体が、請求項１〜６６のいずれか一項に記載の抗ＣＤ３３抗体である、請求項８３に記載の方法。
【請求項８５】
制御性Ｔ細胞、腫瘍埋没免疫抑制樹状細胞、腫瘍埋没免疫抑制マクロファージ、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）細胞、もしくは慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）細胞の活性、機能、または生存の低減を必要とする個体においてこれを低減する方法であって、前記個体に対して、ＣＤ３３と結合またはこれと相互作用する薬剤の治療有効量を投与することを含む、前記方法。
【請求項８６】
前記薬剤が、単離抗ＣＤ３３抗体または抗ＣＤ３３抗体複合体である、請求項８５に記載の方法。
【請求項８７】
前記抗ＣＤ３３抗体が、請求項１〜６６のいずれか一項に記載の抗ＣＤ３３抗体である、請求項８６に記載の方法。
【請求項８８】
１つ以上の細胞のＣＤ３３の細胞レベルの低減、もしくはＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用の阻害、またはその両方を必要とする個体におけるその方法であって、前記個体に対して、治療有効量の単離抗ＣＤ３３抗体を投与することを含む、前記方法。
【請求項８９】
前記抗ＣＤ３３抗体が、インビボでＣＤ３３の細胞レベルを低下させる、請求項８８に記載の方法。
【請求項９０】
前記抗ＣＤ３３抗体が、ＣＤ３３の細胞レベルを６５ｐＭ〜２０ｐＭの範囲のＥＣ５０で低下させる、請求項８８または請求項８９に記載の方法。
【請求項９１】
前記抗ＣＤ３３抗体が、インビボにおいてＣＤ３３の細胞レベルを約８．０ｍｇ／ｋｇ〜約２．０ｍｇ／ｋｇの範囲のＥＣ５０で低下させる、請求項８８〜９０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９２】
前記抗ＣＤ３３抗体が、ヒトＣＤ３３に対して、３００ｐＭ〜１０ｐＭの範囲の解離定数（ＫＤ）を有し、この場合、前記ＫＤは、温度約２５℃で測定される、請求項８８〜９１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９３】
前記抗ＣＤ３３抗体が、ヒト樹状細胞に対して、２００ｐＭ〜１０ｐＭの範囲のＥＣ５０で結合し、この場合、前記ＥＣ５０は、温度約４℃で測定される、請求項８８〜９２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９４】
前記抗ＣＤ３３抗体が、請求項１〜６６のいずれか一項に記載の抗ＣＤ３３抗体である、請求項８８または請求項８９に記載の方法。
【請求項９５】
前記個体がＣＤ３３のバリアントを含む、請求項７４〜９４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９６】
前記バリアントが、
（ａ）ＳＮＰ  ｒｓ３８６５４４４ＡＣ、
（ｂ）ＳＮＰ  ｒｓ３８６５４４４ＣＣ、
（ｃ）ＳＮＰ  ｒｓ３５１１２９４０ＧＧ，ＡＡ，ＡＧ、
（ｄ）ＳＮＰ  ｒｓ１２４５９４１９ＣＣ，ＣＴまたはＴＴ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される１つ以上の多型を含む、請求項９５に記載の方法。
【請求項９７】
さらに、前記個体に対して、抑制性チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体、及び／または１つ以上の標準的もしくは試験研究中の抗癌治療を施すことを含む、請求項７４〜９６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９８】
抑制性チェックポイント分子に特異的に結合する前記少なくとも１つの抗体が、前記抗ＣＤ３３抗体と組み合わせて投与される、請求項９７に記載の方法。
【請求項９９】
抑制性チェックポイント分子に特異的に結合する前記少なくとも１つの抗体が、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ−Ｌ２抗体、抗ＰＤ−１抗体、抗Ｂ７−Ｈ３抗体、抗Ｂ７−Ｈ４抗体、及び抗ＨＶＥＭ抗体、抗Ｂ及びＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）抗体、抗キラー阻害性受容体（ＫＩＲ）抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗ＴＩＭ−３抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、抗ＬＡＧ−３抗体、抗ホスファチジルセリン抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＴＮＦａ抗体、抗Ｓｉｇｌｅｃ−５抗体、抗Ｓｉｇｌｅｃ−７抗体、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体、抗Ｓｉｇｌｅｃ−１１抗体、アンタゴニスト抗ＴＲＥＭｌ抗体、アンタゴニスト抗−ＴＲＥＭ２抗体、ならびにそれらの任意の組合せからなる群から選択される、請求項９７または請求項９８に記載の方法。
【請求項１００】
前記１つ以上の標準的もしくは試験研究中の抗癌治療が、放射線療法、細胞毒性化学療法、標的療法、イマチニブ療法、トラスツズマブ療法、エタネルセプト療法、養子細胞移入（ＡＣＴ）療法、キメラ抗原受容体Ｔ細胞移入（ＣＡＲ−Ｔ）療法、ワクチン療法、及びサイトカイン療法からなる群から選択される、請求項９７に記載の方法。
【請求項１０１】
さらに、前記個体に対して、抑制性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１つの抗体を投与することを含む、請求項７４〜１００のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０２】
抑制性サイトカインに特異的に結合する前記少なくとも１つの抗体が、前記抗ＣＤ３３抗体と組み合わせて投与される、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０３】
抑制性サイトカインに特異的に結合する前記少なくとも１つの抗体が、抗ＣＣＬ２抗体、抗ＣＳＦ−１抗体、抗ＩＬ−２抗体、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される、請求項１０１または請求項１０２に記載の方法。
【請求項１０４】
さらに、前記個体に対して、刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する少なくとも１つのアゴニスト抗体を投与することを含む、請求項７４〜１０３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０５】
刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する前記少なくとも１つのアゴニスト抗体が、前記抗ＣＤ３３抗体と組み合わせて投与される、請求項１０４に記載の方法。
【請求項１０６】
刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する前記少なくとも１つのアゴニスト抗体が、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体、アゴニスト抗ＯＸ４０抗体、アゴニスト抗ＩＣＯＳ抗体、アゴニスト抗ＣＤ２８抗体、アゴニスト抗ＴＲＥＭｌ抗体、アゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体、アゴニスト抗ＣＤ  １３７／４−１ＢＢ抗体、アゴニスト抗ＣＤ２７抗体、アゴニスト抗糖質コルチコイド誘導性ＴＮＦＲ関連タンパク質ＧＩＴＲ抗体、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される、請求項１０４または請求項１０５に記載の方法。
【請求項１０７】
さらに、前記個体に対して、少なくとも１つの刺激性サイトカインを投与することを含む、請求項７４〜１０６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０８】
前記少なくとも１つの刺激性サイトカインが、前記抗ＣＤ３３抗体と組み合わせて投与される、請求項１０７に記載の方法。
【請求項１０９】
前記少なくとも１つの刺激性サイトカインが、ＩＦＮ−ａ４、ＩＦＮ−ｂ、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＬＩＦ、ＩＦＮ−ガンマ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＣＸＣＬ１０、ＩＬ−３３、ＣＲＰ、ＩＬ−３３、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１−ベータ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される、請求項１０７または請求項１０８に記載の方法。
【請求項１１０】
ＣＤ３３と結合またはこれと相互作用する薬剤での治療に対して、それを必要とする対象の選択方法であって、
ａ．前記対象から試料を採取すること、
ｂ．前記対象に含まれるＣＤ３３対立遺伝子を検出すること、及び、
ｃ．前記対象が１つ以上のＣＤ３３対立遺伝子を有する場合、前記対象をＣＤ３３と結合またはこれと相互作用する前記薬剤での治療のために選択することを含み、前記１つ以上のＣＤ３３対立遺伝子は、ｒｓ３８６５４４４ＡＣ、及びｒｓ３８６５４４４ＣＣからなる群から選択されるものである、前記方法。
【請求項１１１】
ＣＤ３３と結合またはこれと相互作用する薬剤に対する、それを必要とする対象の反応性を評価する方法であって、
ａ．抗ＣＤ３３抗体を前記対象に投与する前の前記対象から採取した血液試料における、非腫瘍形成性骨髄細胞でのＣＤ４５＋及びＣＤ１４＋の発現レベルを測定すること、
ｂ．前記対象に対して、治療有効量の前記薬剤を投与すること、ならびに、
ｃ．前記抗ＣＤ３３抗体を投与した後の前記対象から採取した血液試料における、非腫瘍形成性骨髄細胞でのＣＤ４５＋及びＣＤ１４＋の発現レベルを測定することを含み、
（ａ）前記抗ＣＤ３３抗体を投与した後の非腫瘍形成性骨髄細胞でのＣＤ４５＋ＣＤ１４＋のレベルの低下が、前記対象が前記薬剤に対して反応するということを示すものである、前記方法。
【請求項１１２】
さらに、１つ以上の追加の治療有効量の前記薬剤を投与することを含む、請求項１１１に記載の方法。
【請求項１１３】
前記薬剤が、抗体、可溶性ＣＤ３３受容体、ＣＤ３３−Ｆｃ融合タンパク質、ＣＤ３３イムノアドヘシン、可溶性Ｓｉｇｌｅｃ受容体、Ｓｉｇｌｅｃ−Ｆｃ融合タンパク質、Ｓｉｇｌｅｃイムノアドヘシン、アンチセンス分子、ｓｉＲＮＡ、小分子阻害剤、タンパク質、及びペプチドからなる群から選択される、請求項１１０〜１１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１４】
前記薬剤が、単離抗ＣＤ３３抗体または抗ＣＤ３３抗体複合体である、請求項１１０〜１１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１５】
前記抗ＣＤ３３抗体が、請求項１〜６６のいずれか一項に記載の抗ＣＤ３３抗体である、請求項１１３または１１４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１５年６月１２日出願の米国仮特許出願第６２／１７５，１５２号及び２０１５年１０月１４日出願の米国仮特許出願第６２／２４１，７０１号の利益を主張し、その各々全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
【０００２】
ＡＳＣＩＩテキストファイルの配列表の提出
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの以下提出物の内容は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる：配列表のコンピュータ可読形式（ＣＲＦ）（ファイル名称：７３５０２２０００７４０ＳＥＱＬＩＳＴＩＮＧ．ＴＸＴ、記録日：２０１６年６月１１日、サイズ：２００ＫＢ）。
【０００３】
発明の分野
本開示は、抗ＣＤ３３抗体及びそのような抗体の治療的使用に関する。
【背景技術】
【０００４】
骨髄細胞表面抗原ＣＤ３３前駆体（ＣＤ３３）は、Ｓｉｇｌｅｃ−３としても知られ、未成熟及び成熟骨髄細胞、樹状細胞、ならびにミクログリア細胞を含めた免疫細胞及び造血細胞上で発現される１型免疫グロブリン様膜貫通タンパク質である（Ｃｒｏｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．７：２５５−２６６、ＭｃＭｉｌｌａｎ  ａｎｄ  Ｃｒｏｃｋｅｒ（２００８）Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ  Ｒｅｓ．３４３：２０５０−２０５６、Ｖｏｎ  Ｇｕｎｔｅｎ  ａｎｄ  Ｂｏｃｈｎｅｒ（２００８）Ａｎｎ  ＮＹ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．１１４３：６１−８２、Ｈａｎｄｇｒｅｔｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｌｅｔｔ．３７：２２３−２２８、及びＨｅｒｎａｎｄｅｚ−Ｃａｓｅｌｌｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｊ  Ｌｅｕｋｏｃ  Ｂｉｏｌ．７９：４６−５８）。ＣＤ３３発現は、末梢顆粒球及び常在性マクロファージ上では低いレベルに下方制御され、このタンパク質は、アストロサイト、オリゴデンドロサイト、内皮細胞、及び休止Ｔ細胞には存在しないと報告された（Ｇｒｉｆｆｉｎ  ＪＤ．ｅｔ  ａｌ．，（１９８４）Ｌｅｕｋｅｍｉａ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｖｏｌ．Ｓ，Ｎｏ．４，ｐｐ．５２１−５３４）。ＣＤ３３は、レクチンのＳｉｇｌｅｃファミリーのメンバーであり、糖タンパク質及び糖脂質のシアル酸残基と結合する。Ｓｉｇｌｅｃタンパク質に対する１つの可能な結合標的は、ガングリオシドであり、これはすなわち、シアル化グリカンに結合したセラミドからなる糖脂質である。大半のガングリオシドは、共通のラクト−セラミドコア及び１つ以上のシアル酸残基を共有する。Ｓｉｇｌｅｃリガンドの多様性は、他の中性糖及びシアル酸の異なる連結による付加、ならびにシアル酸自体の変性によって生成される。
【０００５】
１４種のＳｉｇｌｅｃタンパク質がヒトで同定されており、マウスでは９種が同定され、これらは、シアル酸結合部位を含むアミノ末端のＶセットドメインを含む２〜１７の細胞外Ｉｇドメインで構成される。シアル酸結合領域は、ＶセットＩｇ様ドメイン上に位置し、これは全てのＳｉｇｌｅｃにおいて高度に保存される２つの芳香族残基及び１つのアルギニンモチーフを含有する（Ｃｒｏｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．７：２５５−２６６、ＭｃＭｉｌｌａｎ  ａｎｄ  Ｃｒｏｃｋｅｒ（２００８）Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ  Ｒｅｓ．３４３：２０５０−２０５６、Ｖｏｎ  Ｇｕｎｔｅｎ  ａｎｄ  Ｂｏｃｈｎｅｒ（２００８）Ａｎｎ  ＮＹ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．１１４３：６１−８２、Ｍａｙ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ．１：７１９−７２８、Ｃｒｏｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｊ．３４１：３５５−３６１、及びＣｒｏｃｋｅｒ  ａｎｄ  Ｖａｒｋｉ（２００１）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２：３３７−３４２）。シアル化リガンドへの結合部位は、共結晶構造によりマッピングされている（Ａｔｔｒｉｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，（２００６）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８１：３２７７４−３２７８３、及びＶａｒｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ，１６  ｐｐ．１Ｒ−２７Ｒ）。細胞膜はシアル酸が豊富なため、Ｓｉｇｌｅｃによるリガンド結合は、ｃｉｓ及びｔｒａｎｓで生じる可能性があり、両方ともそれらの機能特性に影響を及ぼす。各Ｓｉｇｌｅｃは、哺乳動物細胞の表面上で見られる多様な種類のシアル化グリカンと結合する点で異なる選好を有する（Ｃｒｏｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．７：２５５−２６６、及びＣｒｏｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．７：２５５−２６６）。Ｓｉｇｌｅｃ−３を含めた大半のＣＤ３３関連Ｓｉｇｌｅｃは、それらの細胞質尾部に１つ以上の免疫受容体チロシンベース阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）配列を含み、それらはチロシンホスファターゼＳＨＰ１及びＳＨＰ２の動員を通して免疫機能の阻害性受容体及び負の制御因子としての可能性をそれらに与える（Ｃｒｏｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．７：２５５−２６６、ＭｃＭｉｌｌａｎ  ａｎｄ  Ｃｒｏｃｋｅｒ（２００８）Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ  Ｒｅｓ．３４３：２０５０−２０５６、及びＶｏｎ  Ｇｕｎｔｅｎ  ａｎｄ  Ｂｏｃｈｎｅｒ（２００８）Ａｎｎ  ＮＹ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．１１４３：６１−８２）。ある特定のＳｉｇｌｅｃは、それらの細胞質尾部に免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）配列を含み、それらは脾臓チロシンキナーゼ（Ｓｙｋ）の予測された動員によって免疫機能の活性化受容体及び正の制御因子として作用する可能性をそれらに与える（Ｍａｃａｕｌｅｙ  ＳＭ．ｅｔ  ａｌ．，（２０１４）Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １４，６５３−６６６）。Ｓｉｇｌｅｃタンパク質ファミリーは、複数のヒト疾患と関連し、この疾患は自己免疫、感染に対する感受性、リンパ腫、白血病、及び急性骨髄性白血病を含めた複数の癌型、全身性エリテマトーデス、関��リウマチ、神経変性障害、喘息、アレルギー、敗血症、慢性閉鎖性肺疾患、移植片対宿主病、好酸球増加、ならびに骨粗鬆症を含む（Ｍａｃａｕｌｅｙ  ＳＭ．ｅｔ  ａｌ．，（２０１４）Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １４，６５３−６６６）。
【０００６】
Ｓｉｇｌｅｃ−３（ＣＤ３３）は、１９８８年にクローニングされ（Ｐｅｉｐｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｂｌｏｏｄ．７２：３１４−３２１、Ｓｉｍｍｏｎｓ  ａｎｄ  Ｓｅｅｄ（１９８８）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４１：２７９７−２８００）、選択的発現は、骨髄の芽球、前骨髄球、及び骨髄球上で、ならびに末梢血単球によって検出された（Ｇｒｉｆｆｉｔ  Ｊ．Ｄ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８４）Ｌｅｕｋｅｍｉａ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｖｏｌ．Ｓ，Ｎｏ．４，ｐｐ．５２１−５３４）。マイトジェンまたは同種抗原活性化ヒトＴ細胞及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞のサブセット上における発現も報告されている（Ｈｅｒｎａｎｄｅｚ−Ｃａｓｅｌｌｅｓ  Ｔ．ｅｔ  ａｌ．，（２００６）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｂｉｏｌｏｇｙ．７９，４６−５８）。加えて、ＣＤ３３は、急性骨髄性白血病の成人及び小児症例の８５〜９０％で発現される（Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ｊ．Ｄ．，ｅｔ  ａｌ．，（１９８４）．Ｌｅｕｋ  Ｒｅｓ  ８，５２１−５３４）。
【０００７】
ＣＤ３３は、Ｉｇ様Ｃ２型（免疫グロブリン様）及びＩｇ様Ｖ型（免疫グロブリン様）細胞外ドメイン、加えてその細胞質ドメインに２つのＩＴＩＭ様モチーフを含む。ＣＤ３３の３つの選択的スプライシング型（アイソフォーム）が同定されており、これはＣＤ３３Ｍという名称の高分子量バリアントならびにＩｇ様Ｖ型ドメイン（リガンド結合部位）、及びＶドメインとＣドメインを連結させるジスルフィド結合を欠いているより小さなアイソフォームＣＤ３３ｍを含む。加えて、ＣＤ３３の組織特異的翻訳後修飾が報告されている（Ｈｅｒｎａｎｄｅｚ−Ｃａｓｅｌｌｅｓ  Ｔ．ｅｔ  ａｌ．，（２００６）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｂｉｏｌｏｇｙ．７９，４６−５８、及びＰｅｒｅｚ−Ｏｌｉｖａ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１１）Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌ．２１，７５７−７７０）。ＣＤ３３は、プロテインキナーゼＣによるセリン３０７（Ｓｅｒ−３０７）及びセリン３４２（Ｓｅｒ−３４２）のリガンド誘導リン酸化（Ｇｒｏｂｅ，Ｋ  ｅｔ  ａｌ．，（２００２）Ｂｌｏｏｄ  ９９，３１８８−３１９６）、ならびにＬＣＫなどのＳｒｃファミリーチロシンキナーゼによりＴｙｒ−３４０及びＴｙｒ−３５８でリガンド誘導性リン酸化（Ｐａｕｌ，Ｓ．Ｐ．，ｅｔ  ａｌ．，（２０００）．Ｂｌｏｏｄ  ９６，４８３−４９０）を受ける。
【０００８】
そのＩＴＩＭドメインの主にＴｙｒ−３４０、さらにＴｙｒ−３５８におけるリン酸化後、ＣＤ３３は、ＳＨＰ−２／ＰＴＰＮ１１及びＳＨＰ−１／ＰＴＰＮ６と結合する。これらのホスファターゼとＣＤ３３との結合は、ＣＤ３３とＣＤ６４との共ライゲーション後に強化される（Ｔａｙｌｏｒ，Ｖ．Ｃ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９９），Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４，１１５０５−１１５１２）。ホスファターゼ活性は、細胞内カルシウム動員の減少、及び複数のタンパク質におけるチロシンリン酸化の減少（Ｕｌｙａｎｏｖａ，Ｔ．，ｅｔ  ａｌ．，（１９９９）Ｅｕｒ  Ｊ  ｌｍｍｕｎｏｌ  ２９，３４４０−３４４９、Ｐａｕｌ，Ｓ．Ｐ．，ｅｔ  ａｌ．，（２０００）．Ｂｌｏｏｄ  ９６，４８３−４９０）、ならびに、一部には、ＩＴＡＭモチーフ、パターン認識受容体、Ｔｏｌｌ様受容体、及び損傷関連分子パターン（ＤＡＭＰ）受容体を含むものなどの隣接する活性化受容体上のシグナル伝達分子の脱リン酸化を介したシグナル伝達及び免疫応答の遮断と関連している。ＣＤ３３の活性化はまた、プロトコンコジーン（ｐｒｏｔｏｃｏｎｃｏｇｅｎｅ）ｃ−Ｃｂｌ、Ｖａｖ、及びＳｙｋのチロシンリン酸化ならびにそれらとの関連をもたらす。（Ｂａｌａｉａｎ，Ｌ．ｅｔ  ａｌ．，（２００１）．Ｌｅｕｋ  Ｒｅｓ  ２５，１１１５−１１２５）。ｃ−Ｃｂｌは、Ｅ３ユビキチンリガーゼであり、活性化時、ＣＤ３３のＣＢＬ依存性ユビキチン化及びプロテオソーム分解（ｐｒｏｔｅｏｓｏｍａｌ  ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ）ならびにレチノイン酸誘導性遺伝子を誘導する（Ｔａｙｌｏｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２７４：１１５０５−１１５１２、Ｕｌｙａｎｏｖａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２９：３４４０−３４４９、Ｐａｕｌ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｂｌｏｏｄ．９６：４８３−４９０、及びＬａｊａｕｎｉａｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．３５：２４３−２５１）。全てではないがいくつかのＳｉｇｌｅｃリガンドは、受容体の下方制御を誘導する（（Ｍａｃａｕｌｅｙ  ＳＭ．ｅｔ  ａｌ．，（２０１４）Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １４，６５３−６６６）。同様の機序のリガンド誘導性受容体分解がチロシンキナーゼ受容体（Ｍｏｎｓｏｎｅｇｏ−Ｏｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２００２）Ｆｅｂｓ  ｌｅｔｔｅｒｓ  ５２８，８３−８９、及びＦａｓｅｎ ｅｔ  ａｌ．，（２００８）Ｃｅｌｌ  ＆  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ９．２５１−２６６）、ならびにステロイド受容体（Ｃａｌｌｉｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，（２００５）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．２５．４３４９−４３５８、及びＰｏｌｌｅｎｚ  ｅｔ  ａｌ．，（２００６）Ｃｈｅｍｉｃｏ−Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ．１６４．４９−５９）に対して報告されている。
【０００９】
ＣＤ３３のシグナル伝達の活性化は、自然免疫細胞からの炎症性サイトカインＩＬ−１βｅｔａ、ＩＬ−８、及びＴＮＦ−αｌｐｈａの産生の低下と関連することが示されている。ＣＤ３３のこれら活性は、ホスホイノシチド３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）の活性化を介して媒介されると思われる（Ｌａｊａｕｎｉａｓ  Ｆ．ｅｔ  ａｌ．（２００５）．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００５．３５：  ２４３−２５１）。ＩＴＩＭ含有Ｓｉｇｌｅｃ受容体及び活性化受容体間の会合は、これら受容体を結合及び架橋する細胞外リガンドによって媒介され得ることが提案されている（（Ｍａｃａｕｌｅｙ  ＳＭ．ｅｔ  ａｌ．，（２０１４）Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １４，６５３−６６６）。
【００１０】
複数の研究で、自然免疫の調節における、及び免疫応答を阻害または制限する細胞間相互作用の媒介におけるＣＤ３３の阻害的役割が示されている（Ｃｒｏｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１２）Ａｎｎ．Ｎ  Ｙ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１２５３，１０２−１１１、Ｐｉｌｌａｉ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１２）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３０，３５７−３９２．、ｖｏｎ  Ｇｕｎｔｅｎ  ａｎｄ  Ｂｏｃｈｎｅｒ（２００８）Ａｎｎ．Ｎ  Ｙ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１１４３，６１−８２、Ｇｒｉｃｉｕｃ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１３）Ｎｅｕｒｏｎ  ７８，１−１３、Ｆｅｒｌａｚｚｏ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．３０：８２７−８３３、Ｖｉｔａｌｅ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．９８：５７６４−５７６９、及びＨｅｒｎａｎｄｅｚ−Ｃａｓｅｌｌｅｓ  Ｔ．ｅｔ  ａｌ．，（２００６）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｂｉｏｌｏｇｙ．７９，４６−５８）。マウスにおけるＣＤ３３不活化は、明らかな発達異常、組織学的異常、または行動異常をもたらさず、ＣＤ３３欠損マウスは正常に繁殖し、ＣＤ３３が不可欠な遺伝子ではなく、その機能は自然免疫に限定される可能性があることを示している（Ｂｒｉｎｋｍａｎ−Ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｌｉｎｄｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２００３）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．２３，４１９９−４２０６）。
【００１１】
拡大されたコホート（例えば、数千個体）で実施されたゲノムワイド関連解析（ＧＷＡＳ）で、ＣＤ３３の一塩基多型（ＳＮＰ）ｒｓ３８６５４４４ＣＣ（ｒｓ３８２６６５６としても知られる）及びｒｓ３８６５４４４ＡＡが、遅発性アルツハイマー病に対するリスクの遺伝子調節因子として同定された。より少ないホモ接合対立遺伝子ｒｓ３８６５４４４ＡＡＳＮＰは、全長ＣＤ３３タンパク質レベルの減少及びＩｇ−Ｖリガンド結合ドメインを欠くＣＤ３３アイソフォームの発現増加と関連しており（Ｒａｊ  Ｔ．ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｈｕｍａｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）、アルツハイマー病（ＡＤ）に対する保護を付与すると示唆されている。対照的に、ホモ接合ｒｓ３８６５４４４ＣＣ対立遺伝子は、ＡＤに対するリスク対立遺伝子を構成すると示唆されており、若年者及び高齢者の末梢血単球中の全長ＣＤ３３の細胞表面発現の約７倍の増加と関連している。ヘテロ接合ｒｓ３８６５４４４ＡＣは、ＣＤ３３の細胞表面発現において３〜４倍の増加を示し、これもＡＤに対するリスクであると考えられている。ＣＤ３３は、ミクログリア及びマクロファージの活性化の３つの全ての段階で発現されるが、ＣＤ３３の表面発現に年齢の影響はない。多型対立遺伝子ｒｓ３８６５４４４ＣＣ及びｒｓ３８６５４４４ＡＣはまた、インビトロで単球がアミロイドベータ４２（Ａ−ベータ４２）ペプチドを貪食する能力の減少ならびにインビボでの神経炎アミロイド病変及び線維性アミロイドの増加にも関連する。
【００１２】
機能が低く、アミロイドベータ斑を除去できない場合がある活性化ヒトミクログリア数の増加もまた、リスク対立遺伝子に関して報告されており、これはｒｓ３８６５４４４Ｃ対立遺伝子が、機能形質について優性であり得ること及びアルツハイマー病（ＡＤ）の前駆症状段階でのアミロイドの蓄積に関与し得ることを示している。ｒｓ３８６５４４４Ｃは神経炎アミロイド斑量の増加に関連しているが、神経原線維変化の量には関連していない（Ｂｒａｄｓｈａｗ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１３）Ｎａｔ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１６，８４８−８５０．）。このＳＮＰは、ＣＤ３３遺伝子の５’ＵＴＲの上流に局在するが、コード領域に位置する機能的バリアント（複数可）での連鎖不均衡を示す場合があり（Ｂｅｒｔｒａｍ，ｅｔ  ａｌ．（２００８）．Ａｍ．Ｊ．Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．８３，６２３−６３２、Ｈｏｌｌｉｎｇｗｏｒｔｈ，ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．４３，４２９−４３５、及びＮａｊ，ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｎａｔ  Ｇｅｎｅｔ．４３，４３６−４４１）、これが選択的スプライシング及びエキソン２によってコードされるリガンド結合ドメインの除去をもたらし得る（Ｍａｌｉｋ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１３）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓ，３３：  １３３２０−１３３２５、及びＲａｊ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１４），Ｈｕｍａｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，２３，２７２９）。ＣＤ３３  ｍＲＮＡ及びタンパク質レベル、ならびにＣＤ３３陽性ミクログリア数は、年齢適合対照と比較してＡＤの脳で増加することが示されている。しかしながら、ｒｓ３８６５４４４ＡＡ対立遺伝子の保因者からのＡＤ脳ミクログリアは、ｒｓ３８６５４４４Ｃ非保護対立遺伝子の保因者からのＡＤ脳と比較して、依然として低レベルのＣＤ３３発現及び不溶性Ａ−ベータ４２ペプチドレベルの減少と関連していた。
【００１３】
ＣＤ３３免疫応答性ミクログリア細胞数の増加は、アルツハイマー病（ＡＤ）症例における高レベルの不溶性Ａ−ベータ４２及び高いアミロイド斑量と相関することが示されている。斑及び神経原線維変化病変の半定量的組織学的手段を使用して、Ｗａｌｋｅｒらは、ＳＮＰのｒｓ３８６５４４４ＣＣ（ｒｓ３８２６６５６としても知られる）及びｒｓ３８６５４４４ＡＡ対立遺伝子間の病変に有意な差がないと示唆した（Ｗａｌｋｅｒ  ａｔ  ａｌ．，（２０１５）Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ａｇｉｎｇ  ３６  ５７１−５８２）。しかしながら、ＣＤ３３  ｍＲＮＡの発現増加は、側頭皮質脳試料におけるＡＤ病変の増加と関連している（Ｗａｌｋｅｒ  ａｔ  ａｌ．，（２０１５）Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ａｇｉｎｇ  ３６  ５７１−５８２）。
【００１４】
機能獲得及び喪失の研究は、ＣＤ３３がＡ−ベータ４２のミクログリア取込を阻害するために必要かつ十分であるということを示した。さらに、シアル酸結合Ｖ型免疫グロブリン様（Ｖ−Ｉｇ）ドメインが欠失しているＣＤ３３ｍバリアントの分析で、シアル酸結合が、ミクログリアによるＡ−ベータ４２の食作用及びクリアランスの阻害を媒介するためにＣＤ３３に必要であるということが示される（Ｐｅｒｅｚ−Ｏｌｉｖａ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１１）Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌ．２１，７５７−７７０）。さらに、ＣＤ３３遺伝子が除去されたアルツハイマー病のＡＰＰ／ＰＳ１トランスジェニックマウスモデルは、不溶性Ａ−ベータ４２レベル及びＡ−ベータ斑量の顕著な減少を示す（Ｇｒｉｃｉｕｃ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１３）Ｎｅｕｒｏｎ  ７８，１−１３、及びＢｒａｄｓｈａｗ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１３）Ｎａｔ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１６，８４８−８５０）。
【００１５】
腫瘍学では、ＣＤ３３の発現の減少をもたらすＣＤ３３バリアントは、小児急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）からの生存率の改善と関連することが示されている。寛解からの３年全生存率は、バリアントｒｓ３５１１２９４０ＧＧを持つ患者では８４％＋／−８％であり、これは、ＣＤ３３の全長発現低下と関連するｒｓ３８６５４４４ＡＡバリアントとの強い連鎖不均衡にある。非保護対立遺伝子の寛解率は６８％＋／−１５％である。保護対立遺伝子の保因者もまた、再発のリスクが低く、無病生存率が高い。同様に、全長ＣＤ３３の発現が４６％以上低いｒｓ１２４５９４１９のより少ないバリアント対立遺伝子（ＴＴ）のホモ接合体患者は、バリアントＣＣ及びＣＴの保因者よりも疾患の転帰がより良好である可能性が高く（５２％対３１％）、特徴的な芽球のＣＤ３３発現が他の遺伝子型より有意に低い。これは、抗ＣＤ３３抗体及び毒性カリケアマイシン−ガンマ誘導体での治療を受けている患者でさえも見られる症例である（Ｍｏｒｔｌａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１３）Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ、１−８）。全長ＣＤ３３の発現に２５％超の減少を示す２４５９４１９ＴＴ対立遺伝子の保因者ならびにｒｓ１２４５９４１９ＣＴ対立遺伝子の保因者もまた、アルツハイマー病のリスクの低さを示す（Ｍａｌｉｋ  Ｍ．ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｈｕｍａｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，１−１４）。このことは、ＣＤ３３の発現または機能の減少が、アルツハイマー病及び癌に有益であり得るということを示唆する。しかしながら、生理的に関連のある一次免疫細胞において、抗ＣＤ３３抗体のＣＤ３３を下方制御する能力、またはＣＤ３３リガンド／受容体相互作用を遮断する能力に関するデータは報告されていない。
【００１６】
ＣＤ３３に対する抗体は、例えば、ＵＳ７，３４２，１１０、ＵＳ７，５５７，１８９、ＵＳ  ８１１９７８７、ＵＳ  ８，３３７，８５５、ＵＳ８，１２４，０６９、ＵＳ５，７３０，９８２、ＵＳ７，６９５，７１、ＷＯ２０１２０７４０９７、ＷＯ２００４０４３３４４、ＷＯ１９９３０２０８４８、ＷＯ２０１２０４５７５２、ＷＯ２００７０１４７４３、ＷＯ２００３０９３２９８、ＷＯ２０１１０３６１８３、ＷＯ１９９１００９０５８、ＷＯ２００８０５８０２１、ＷＯ２０１１０３８３０１、Ｈｏｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）Ａｍ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐａｔｈｏｌ．１２９，３１６−３２３，Ｒｏｌｌｉｎｓ−Ｒａｖａｌ  ａｎｄ  Ｒｏｔｈ，（２０１２）Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ  ６０，９３３−９４２），Ｐｅｒｅｚ−Ｏｌｉｖａ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１１）Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌ．２１，７５７−７７０），Ｆｅｒｌａｚｚｏ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．３０：８２７−８３３，Ｖｉｔａｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，（２００１）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．９８：５７６４−５７６９，Ｊａｎｄｕｓ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１１）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．８２，３２３−３３２，Ｏ’Ｒｅｉｌｌｙ  ａｎｄ  Ｐａｕｌｓｏｎ，（２００９）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｃｉ．３０，２４０−２４８，Ｊｕｒｃｉｃ，（２０１２）Ｃｕｒｒ  Ｈｅｍａｔｏｌ  Ｍａｌｉｇ  Ｒｅｐ  ７，６５−７３，及びＲｉｃａｒｔ，（２０１１）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１７，６４１７−６４２７に記載されている。しかしながら、これらの抗体は、主に、細胞上のＣＤ３３を検出するため、または、ＣＤ３３を発現する白血病細胞を殺傷するためにカリケアマイシン−ガンマ誘導体などの毒素を標的とするためのいずれかに使用される。さらに、ＣＤ３３を発現しない固形腫瘍細胞を、抗腫瘍免疫応答を高めることによって治療する抗ＣＤ３３抗体の能力を示すデータは示されていない。
【００１７】
したがって、望ましくないＣＤ３３活性に関連する１つ以上の疾患、障害、及び状態を処置するための治療抗体が必要である。
【００１８】
特許、特許出願、及び特許公報を含む、本明細書で引用される全ての参考文献は、その内容全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
【発明の概要】
【００１９】
本開示は、概して、抗ＣＤ３３抗体などのＣＤ３３剤、及びそのようなＣＤ３３剤の使用方法に関する。本明細書に提供する方法は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウパチー病、那須・ハコラ病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、ループス、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満症、マラリア、本態性振戦、中枢神経系ループス、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫性疾患、サルコイドーシス、加齢に伴う病気、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身性感染症、ループス、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨のパジェット病、固形及び血液癌、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性赤血球増加症、本態性血小板血症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化、骨髄由来腫瘍、ＣＤ３３を発現する腫瘍、甲状腺癌、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルージ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、Ｉ型ＨＩＶ、ならびにインフルエンザ菌を有する個体の予防、リスクの低減、または治療において用途を見出す。本明細書に提供する方法はまた、１つ以上の免疫細胞の生存、成熟、機能、遊走、もしくは増殖を誘導または促進することにおける用途を、それを必要とする個体において見出す。本明細書に提供する方法は、制御性Ｔ細胞、腫瘍埋没免疫抑制樹状細胞、腫瘍埋没免疫抑制マクロファージ、骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）細胞、または慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）細胞の活性、機能、または生存を減少することにおけるさらなる用途を、それを必要とする個体において見出す。
【００２０】
本開示のある特定の態様は、少なくとも一部は、ヒト一次免疫細胞及びＣＤ３３発現細胞株における細胞表面のＣＤ３３レベルを低下させることが可能な、及び／または赤血球上のＣＤ３３リガンドのＣＤ３３への結合を阻害することが可能な抗ＣＤ３３抗体の特定に基づいている（例えば、実施例１〜５参照）。有利には、該抗ＣＤ３３抗体は、６５ｐＭ〜２０ｐＭの範囲の半数効果濃度（ＥＣ５０）でＣＤ３３の細胞レベルを低下させ、８．０ｍｇ／ｋｇ〜２．０ｍｇ／ｋｇの範囲の半数効果濃度（ＥＣ５０）でインビボにおいてＣＤ３３の細胞レベルを低下させ、ヒト樹状細胞などのヒト細胞に２００ｐＭ〜１０ｐＭの範囲のＥＣ５０で結合し、ヒトＣＤ３３に対して３００ｐＭ〜１０ｐＭの範囲の解離定数（ＫＤ）を有する。
【００２１】
したがって、本開示のある特定の態様は、単離（例えば、モノクローナル）抗ＣＤ３３抗体に関し、該抗ＣＤ３３抗体は、ＣＤ３３の細胞レベルを低下させる、もしくはＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用を阻害する、またはその両方である。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、以下の特性の１つ以上を示す：ａ．ヒトＣＤ３３に対する解離定数（ＫＤ）が抗ＣＤ３３抗体であるゲムツズマブのものよりも低い、ｂ．ヒト樹状細胞に対して、抗ＣＤ３３抗体であるゲムツズマブもしくはリンツズマブのものよりも低いＥＣ５０で結合する、ｃ．ＣＤ３３の細胞レベルを、抗ＣＤ３３抗体であるゲムツズマブもしくはリンツズマブのものよりも低いＥＣ５０で低下させる、ｄ．ヒトＣＤ３３に対して、３００ｐＭ〜１０ｐＭの範囲の解離定数（ＫＤ）を有し、この場合、該ＫＤは、温度約２５℃で測定される、ｅ．ヒト樹状細胞に対して、２００ｐＭ〜１０ｐＭの範囲のＥＣ５０で結合し、この場合、該ＥＣ５０は、温度約４℃で測定される、ｆ．ＣＤ３３の細胞レベルを６５ｐＭ〜２０ｐＭの範囲のＥＣ５０で低下させる、または、ｇ．インビボにおいてＣＤ３３の細胞レベルを８．０ｍｇ／ｋｇ〜２．０ｍｇ／ｋｇの範囲のＥＣ５０で低下させる。いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ３３に対する該解離定数（ＫＤ）は、３００ｐＭ未満であり、この場合、該ＫＤは、温度約２５℃で測定される。いくつかの実施形態では、該ＫＤは、一価抗体を用いて測定される。いくつかの実施形態では、該ＫＤは、一価形態の完全長抗体を用いて測定される。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ヒト樹状細胞に対して、２００ｐＭ未満のＥＣ５０で結合し、この場合、該ＥＣ５０は、温度約４℃で測定される。いくつかの実施形態では、インビボにおいてＣＤ３３の細胞レベルを低下させるためのＥＣ５０は、マウスを用いて測定される。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ＣＤ３３の細胞レベルを６５ｐＭ〜２２ｐＭの範囲の、または２２ｐＭ未満のＥＣ５０で低下させる。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ＣＤ３３の細胞レベルを６５ｐＭ以下、６０ｐＭ以下、５５ｐＭ以下、５０ｐＭ以下、４５ｐＭ以下、４０ｐＭ以下、３５ｐＭ以下、３０ｐＭ以下、２５ｐＭ以下、２４ｐＭ以下、２３ｐＭ以下、２２ｐＭ以下、２１ｐＭ以下、２０ｐＭ以下、１０ｐＭ以下、９ｐＭ以下、８ｐＭ以下、７ｐＭ以下、６ｐＭ以下、または５ｐＭ以下のＥＣ５０で低下させる。
【００２２】
本開示の他の態様は、単離（例えば、モノクローナル）抗ＣＤ３３抗体に関し、該抗ＣＤ３３抗体は、ＣＤ３３の細胞レベルを低下させる、ＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用を阻害する、またはその両方であり、かつ、該抗ＣＤ３３抗体は、以下の特性の１つ以上を示す：ａ．ヒトＣＤ３３に対する解離定数（ＫＤ）が、抗ＣＤ３３抗体であるゲムツズマブのものよりも低い、ｂ．ヒト樹状細胞に対して、抗ＣＤ３３抗体であるゲムツズマブもしくはリンツズマブのものよりも低いＥＣ５０で結合する、ｃ．ＣＤ３３の細胞レベルを、抗ＣＤ３３抗体であるゲムツズマブもしくはリンツズマブのものよりも低いＥＣ５０で低下させる、ｄ．ヒトＣＤ３３に対して、３００ｐＭ〜１０ｐＭの範囲の解離定数（ＫＤ）を有し、この場合、該ＫＤは、温度約２５℃で測定される、ｅ．ヒト樹状細胞に対して、２００ｐＭ〜１０ｐＭの範囲のＥＣ５０で結合し、この場合、該ＥＣ５０は、温度約４℃で測定される、ｆ．ＣＤ３３の細胞レベルを６５ｐＭ〜２０ｐＭの範囲のＥＣ５０で低下させる、または、ｇ．インビボにおいてＣＤ３３の細胞レベルを８．０ｍｇ／ｋｇ〜２．０ｍｇ／ｋｇの範囲のＥＣ５０で低下させる。いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ３３に対する該解離定数（ＫＤ）は、３００ｐＭ未満であり、この場合、該ＫＤは、温度約２５℃で測定される。いくつかの実施形態では、該ＫＤは、一価抗体を用いて測定される。いくつかの実施形態では、該ＫＤは、一価形態の完全長抗体を用いて測定される。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ヒト樹状細胞に対して、２００ｐＭ未満のＥＣ５０で結合し、この場合、該ＥＣ５０は、温度約４℃で測定される。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ＣＤ３３の細胞レベルを６５ｐＭ〜２２ｐＭの範囲の、または２２ｐＭ未満のＥＣ５０で低下させる。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ＣＤ３３の細胞レベルを６５ｐＭ以下、６０ｐＭ以下、５５ｐＭ以下、５０ｐＭ以下、４５ｐＭ以下、４０ｐＭ以下、３５ｐＭ以下、３０ｐＭ以下、２５ｐＭ以下、２４ｐＭ以下、２３ｐＭ以下、２２ｐＭ以下、２１ｐＭ以下、２０ｐＭ以下、１０ｐＭ以下、９ｐＭ以下、８ｐＭ以下、７ｐＭ以下、６ｐＭ以下、または５ｐＭ以下のＥＣ５０で低下させる。いくつかの実施形態では、インビボにおいてＣＤ３３の細胞レベルを低下させるためのＥＣ５０は、マウスを用いて測定される。
【００２３】
前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ＣＤ３３の細胞表面レベルを低下させる、ＣＤ３３の細胞内レベルを低下させる、ＣＤ３３の合計レベルを低下させる、またはそれらの任意の組合せである。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ＣＤ３３の分解、ＣＤ３３の開裂、ＣＤ３３の内在化、ＣＤ３３の脱落、ＣＤ３３発現の下方制御、またはそれらの任意の組み合わせを誘導する。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用を阻害することなくＣＤ３３の細胞レベルを低下させる。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ＣＤ３３の細胞レベルを低下させ、かつＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用を阻害する。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該抗体は、インビボでＣＤ３３の細胞レベルを低下させる。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、インビボにおいてＣＤ３３の細胞レベルを約８．０ｍｇ／ｋｇ〜約２．０ｍｇ／ｋｇの範囲の、または２．０ｍｇ／ｋｇ未満のＥＣ５０で低下させる。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ＣＤ３３の細胞レベルを低下させることなくＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用を阻害する。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ＣＤ３３の細胞表面クラスター化を阻害する。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、１つ以上のＣＤ３３活性を阻害する。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該１つ以上のＣＤ３３活性は、以下からなる群から選択される：（ａ）シアル酸含有糖タンパク質、シアル酸含有糖脂質、またはその両方に対するＣＤ３３の結合、（ｂ）ＳＨＰ１またはＳＨＰ２に対するＣＤ３３の結合、（ｃ）１つ以上のＳＲＣファミリーチロシンキナーゼによって誘導されるＴｙｒ−３４０、Ｔｙｒ−３５８、またはその両方のリン酸化、任意に、該１つ以上のＳＲＣファミリーチロシンキナーゼは、Ｓｙｋ、ＬＣＫ、及びＦＹＭからなる群から選択される、（ｄ）Ｓｅｒ−３０７、Ｓｅｒ−３４２、またはその両方のリン酸化、任意に、該リン酸化はプロテインキナーゼＣによって誘導される、（ｅ）１つ以上の抗炎症性サイトカインの調節された発現、任意に、該１つ以上の抗炎症性サイトカインはＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＩＬ−３５、ＩＬ−１６、ＴＧＦ−ベータ、ＩＬ−１Ｒａ、Ｇ−ＣＳＦ、及びＴＮＦ、ＩＦＮ−ベータ１ａ、ＩＦＮ−ベータ１ｂ、またはＩＬ−６に対する可溶性受容体からなる群から選択される、（ｆ）マクロファージ、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、及びミクログリア細胞からなる群から選択される１つ以上の細胞における１つ以上の抗炎症性サイトカインの調節された発現、（ｇ）１つ以上の炎症性サイトカインの調節された発現、任意に、該１つ以上の炎症性サイトカインは、ＩＦＮ−ａ４、ＩＦＮ−ｂ、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＬＩＦ、ＩＦＮ−ガンマ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＣＸＣＬ１０、ＩＬ−３３、ＣＲＰ、ＩＬ−３３、ＭＣＰ−１、及びＭＩＰ−１−ベータからなる群から選択される、（ｈ）マクロファージ、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、及びミクログリア細胞からなる群から選択される１つ以上の細胞における１つ以上の炎症性サイトカインの調節された発現、（ｉ）Ｃ１ｑａ、Ｃ１ｑＢ、Ｃ１ｑＣ、Ｃ１ｓ、Ｃ１Ｒ、Ｃ４、Ｃ２、Ｃ３、ＩＴＧＢ２、ＨＭＯＸ１、ＬＡＴ２、ＣＡＳＰ１、ＣＳＴＡ、ＶＳＩＧ４、ＭＳ４Ａ４Ａ、Ｃ３ＡＲ１、ＧＰＸ１、ＴｙｒｏＢＰ、ＡＬＯＸ５ＡＰ、ＩＴＧＡＭ、ＳＬＣ７Ａ７、ＣＤ４、ＩＴＧＡＸ、ＰＹＣＡＲＤ、ＣＤ１４、ＣＤ１６、ＨＬＡ−ＤＲ、及びＣＣＲ２からなる群から選択される１つ以上のタンパク質の調節された発現、（ｊ）細胞外シグナル制御キナーゼ（ＥＲＫ）のリン酸化の阻害、（ｋ）複数の細胞タンパク質におけるチロシンリン酸化の低減、（ｌ）ＣＣケモカイン受容体７（ＣＣＲ７）の調節された発現、（ｍ）ＣＣＬ１９及びＣＣＬ２１発現細胞へのミクログリア細胞の走化性の阻害、（ｎ）樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、Ｍ２ミクログリア、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、及びＭ２マクロファージからなる群から選択される１つ以上の細胞によって誘導されるＴ細胞増殖の低減、（ｏ）破骨細胞産生の阻害、破骨細胞形成速度の低減、またはその両方、（ｐ）樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及びＭ２ミクログリアからなる群から選択される１つ以上の細胞の生存の低減、（ｑ）樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及びＭ２ミクログリアからなる群から選択される１つ以上の細胞の増殖の低減、（ｒ）樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及びＭ２ミクログリアからなる群から選択される１つ以上の細胞の遊走の阻害、（ｓ）樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロフ��ージ、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及びＭ２ミクログリアからなる群から選択される１つ以上の細胞の１つ以上の機能の低減、（ｔ）樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及びＭ２ミクログリアからなる群から選択される１つ以上の細胞の成熟の阻害、（ｕ）アポトーシス性ニューロンの除去、神経組織破片の除去、機能不全シナプスの除去、非神経組織破片の除去、細菌の除去、他の異物の除去、病原タンパク質の除去、病原ペプチドの除去、及び腫瘍細胞の除去からなる群から選択される１つ以上の種類の除去の阻害、任意に、該病原タンパク質は、アミロイドベータ、オリゴマーアミロイドベータ、アミロイドベータ斑、アミロイド前駆体タンパク質もしくはその断片、タウ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（染色体９オープンリーディングフレーム７２）、ｃ９ＲＡＮタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メジン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、反復関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）反復ペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）反復ペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）反復ペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）反復ペプチド、ユビキチン、ならびにプロリン−アルギニン（ＰＲ）反復ペプチドからなる群から選択され、該腫瘍細胞は、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、及び甲状腺癌からなる群から選択される癌由来である、（ｖ）アポトーシス性ニューロン、神経組織破片、機能不全シナプス、非神経組織破片、細菌、他の異物、病原タンパク質、病原ペプチド、病原核酸、または腫瘍細胞の１つ以上の食作用の阻害、任意に、該病原核酸は、アンチセンスＧＧＣＣＣＣ（Ｇ２Ｃ４）反復拡張ＲＮＡであり、該病原タンパク質は、アミロイドベータ、オリゴマーアミロイドベータ、アミロイドベータ斑、アミロイド前駆体タンパク質もしくはその断片、タウ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（染色体９オープンリーディングフレーム７２）、ｃ９ＲＡＮタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、ア��キシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メジン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、反復関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）反復ペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）反復ペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）反復ペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）反復ペプチド、ユビキチン、ならびにプロリン−アルギニン（ＰＲ）反復ペプチドからなる群から選択され、該腫瘍細胞は、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、
線維肉腫、または甲状腺癌からなる群から選択される癌由来である、（ｗ）腫瘍細胞上のＣＤ３３リガンドへの結合、（ｘ）好中球、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、ミクログリア、及びマクロファージからなる群から選択される細胞上のＣＤ３３リガンドへの結合、（ｙ）ミクログリア、マクロファージ、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、または細胞傷害性Ｔ細胞の１つ以上による腫瘍細胞の殺傷の阻害、（ｚ）ミクログリア、マクロファージ、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、または細胞傷害性Ｔ細胞の１つ以上の抗腫瘍細胞増殖活性の阻害、（ａａ）ミクログリア、マクロファージ、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、または細胞傷害性Ｔ細胞の１つ以上の抗腫瘍細胞転移活性の阻害、（ｂｂ）１つ以上のＩＴＡＭモチーフ含有受容体の阻害、任意に、該１つ以上のＩＴＡＭモチーフ含有受容体は、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、ＦｃｇＲ、ＤＡＰ１０、及びＤＡＰ１２からなる群から選択される、（ｃｃ）１つ以上のパターン認識受容体（ＰＲＲ）によるシグナル伝達の阻害、任意に、該１つ以上のＰＲＲは、病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）を識別する受容体、損傷関連分子パターン（ＤＡＭＰ）を識別する受容体、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される、（ｄｄ）モチーフＤ／Ｅｘ０−２ＹｘｘＬ／ＩＸ６−８ＹｘｘＬ／Ｉ（配列番号２４７）を含む１つ以上の受容体の阻害、（ｅｅ）１つ以上のＴｏｌｌ様受容体によるシグナル伝達の阻害、（ｆｆ）ＪＡＫ−ＳＴＡＴシグナル伝達経路の阻害、（ｇｇ）活性化Ｂ細胞核内因子カッパ軽鎖エンハンサー（ＮＦκＢ）の阻害、（ｈｈ）ＩＴＡＭモチーフ含有受容体の脱リン酸化、（ｉｉ）１つ以上の炎症性受容体の調節された発現、任意に、該１つ以上の炎症性受容体は、ＣＤ８６を含み、該１つ以上の炎症性受容体は、ミクログリア、マクロファージ、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、または細胞傷害性Ｔ細胞の１つ以上で発現される、（ｊｊ）１つ以上のＣＤ３３依存性遺伝子の発現の増大、（ｋｋ）破壊されたＣＤ３３依存性遺伝子発現の正常化、（ｌｌ）１つ以上のＩＴＡＭ依存性遺伝子の発現の低減、任意に、該１つ以上のＩＴＡＭ依存性遺伝子は、活性化Ｔ細胞核内因子（ＮＦＡＴ）の転写因子によって活性化される、（ｍｍ）免疫抑制樹状細胞、免疫抑制マクロファージ、骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ、免疫抑制好中球、及び制御性Ｔ細胞の１つ以上の分化の促進、（ｎｎ）免疫抑制樹状細胞、免疫抑制マクロファージ、骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ、免疫抑制好中球、及び制御性Ｔ細胞の１つ以上の機能の促進、（ｏｏ）免疫抑制樹状細胞、免疫抑制マクロファージ、骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ、免疫抑制好中球、及び制御性Ｔ細胞の１つ以上の、腫瘍内への浸潤の増大、（ｐｐ）腫瘍、末梢血、またはその他のリンパ器官における腫瘍促進性骨髄／顆粒球免疫抑制性細胞数の増大、（ｑｑ）骨髄由来サプレッサー細胞の腫瘍促進性作用の強化、（ｒｒ）腫瘍または末梢血における腫瘍促進性サイトカインの発現の増大、任意に���該腫瘍促進性サイトカインは、ＴＧＦ−ベータまたはＩＬ−１０である、（ｓｓ）腫瘍促進性ＦｏｘＰ３＋調節性Ｔリンパ球の腫瘍浸潤の増大、（ｔｔ）骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の腫瘍促進性作用の強化、（ｕｕ）腫瘍死滅能を備えた腫瘍特異的Ｔリンパ球の活性化の低減、（ｖｖ）腫瘍死滅能を備えた腫瘍特異的ＮＫ細胞の浸潤の低減、（ｗｗ）免疫応答を強化する能力を備えた腫瘍特異的Ｂリンパ球の浸潤の低減、（ｘｘ）腫瘍死滅能を備えた腫瘍特異的Ｔリンパ球の浸潤の低減、（ｙｙ）腫瘍体積の増大、（ｚｚ）腫瘍増殖率の増大、（ａａａ）腫瘍再発率の増大、（ｂｂｂ）抗腫瘍Ｔ細胞応答を調節する１つ以上の免疫療法であって、任意に、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ３、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ、ＤＲ−５、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、ＣＳＦ−１受容体、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される１つ以上のタンパク質を標的とする免疫療法である該１つ以上の免疫療法、または１つ以上の癌ワクチンの有効性の低減、、（ｃｃｃ）ＰＬＣγ／ＰＫＣ／カルシウム動員の阻害、ならびに（ｄｄｄ）ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ、Ｒａｓ／ＭＡＰＫシグナル伝達の阻害。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該１つ以上のＣＤ３３活性は、以下からなる群から選択される：（ａ）シアル酸含有糖タンパク質、シアル酸含有糖脂質、またはその両方に対するＣＤ３３の結合、（ｂ）１つ以上の抗炎症性サイトカインの調節された発現、任意に、該１つ以上の抗炎症性サイトカインは、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＩＬ−３５、ＩＬ−１６、ＴＧＦ−ベータ、ＩＬ−１Ｒａ、Ｇ−ＣＳＦ、及びＴＮＦ、ＩＦＮ−ベータ１ａ、ＩＦＮ−ベータ１ｂ、またはＩＬ−６に対する可溶性受容体からなる群から選択される、（ｃ）マクロファージ、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、及びミクログリア細胞からなる群から選択される１つ以上の細胞における１つ以上の抗炎症性サイトカインの調節された発現、（ｄ）１つ以上の炎症性サイトカインの調節された発現、任意に、該１つ以上の炎症性サイトカインは、ＩＦＮ−ａ４、ＩＦＮ−ｂ、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＬＩＦ、ＩＦＮ−ガンマ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＣＸＣＬ１０、ＩＬ−３３、ＣＲＰ、ＩＬ−３３、ＭＣＰ−１、及びＭＩＰ−１−ベータからなる群から選択される、（ｅ）マクロファージ、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、及びミクログリア細胞からなる群から選択される１つ以上の細胞における１つ以上の炎症性サイトカインの調節された発現、（ｆ）Ｃ１ｑａ、Ｃ１ｑＢ、Ｃ１ｑＣ、Ｃ１ｓ、Ｃ１Ｒ、Ｃ４、Ｃ２、Ｃ３、ＩＴＧＢ２、ＨＭＯＸ１、ＬＡＴ２、ＣＡＳＰ１、ＣＳＴＡ、ＶＳＩＧ４、ＭＳ４Ａ４Ａ、���３ＡＲ１、ＧＰＸ１、ＴｙｒｏＢＰ、ＡＬＯＸ５ＡＰ、ＩＴＧＡＭ、ＳＬＣ７Ａ７、ＣＤ４、ＩＴＧＡＸ、ＰＹＣＡＲＤ、ＣＤ１４、ＣＤ１６、ＨＬＡ−ＤＲ、及びＣＣＲ２からなる群から選択される１つ以上のタンパク質の調節された発現、（ｇ）樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、Ｍ２ミクログリア、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、及びＭ２マクロファージからなる群から選択される１つ以上の細胞によって誘導されるＴ細胞増殖の低減、（ｈ）樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及びＭ２ミクログリアからなる群から選択される１つ以上の細胞の増殖の低減、（ｉ）樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及びＭ２ミクログリアからなる群から選択される１つ以上の細胞の１つ以上の機能の低減、（ｊ）アポトーシス性ニューロン、神経組織破片、機能不全シナプス、非神経組織破片、細菌、他の異物、病原タンパク質、病原ペプチド、病原核酸、または腫瘍細胞の１つ以上の食作用の阻害、任意に、該病原核酸は、アンチセンスＧＧＣＣＣＣ（Ｇ２Ｃ４）反復拡張ＲＮＡであり、該病原タンパク質は、アミロイドベータ、オリゴマーアミロイドベータ、アミロイドベータ斑、アミロイド前駆体タンパク質もしくはその断片、タウ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（染色体９オープンリーディングフレーム７２）、ｃ９ＲＡＮタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メジン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、反復関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）反復ペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）反復ペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）反復ペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）反復ペプチド、ユビキチン、ならびにプロリン−アルギニン（ＰＲ）反復ペプチドからなる群から選択され、該腫瘍細胞は、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、または甲状腺癌からなる群から選択される癌由来である、（ｋ）
腫瘍細胞上のＣＤ３３リガンドへの結合、（ｌ）好中球、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、ミクログリア、及びマクロファージからなる群から選択される細胞上のＣＤ３３リガンドへの結合、（ｍ）ミクログリア、マクロファージ、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、または細胞傷害性Ｔ細胞の１つ以上による腫瘍細胞の殺傷の阻害、（ｎ）ミクログリア、マクロファージ、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、または細胞傷害性Ｔ細胞の１つ以上の抗腫瘍細胞増殖活性の阻害、（ｏ）免疫抑制樹状細胞、免疫抑制マクロファージ、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ、免疫抑制好中球、及び制御性Ｔ細胞の１つ以上の機能の促進、（ｐ）免疫抑制樹状細胞、免疫抑制マクロファージ、骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ、免疫抑制好中球、非腫瘍形成性ＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄細胞、及び制御性Ｔ細胞の１つ以上の、腫瘍内への浸潤の増大、（ｑ）腫瘍、末梢血、またはその他のリンパ器官における腫瘍促進性骨髄／顆粒球免疫抑制性細胞数の増大、（ｒ）非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞及び／または非腫瘍形成性ＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄細胞の腫瘍促進性作用の強化、（ｓ）非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）及び／または非腫瘍形成性ＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄細胞の生存の増大、（ｔ）腫瘍死滅能を備えた腫瘍特異的Ｔリンパ球の活性化の低減、（ｕ）腫瘍死滅能を備えたＣＤ４５＋ＣＤ３＋Ｔリンパ球の活性化の低減、（ｖ）腫瘍死滅能を備えた腫瘍特異的ＮＫ細胞の浸潤の低減、（ｗ）免疫応答を強化する能力を備えた腫瘍特異的Ｂリンパ球の浸潤の低減、（ｘ）腫瘍死滅能を備えた腫瘍特異的Ｔリンパ球の浸潤の低減、（ｙ）ＣＤ４５＋ＣＤ３＋Ｔリンパ球の浸潤の低減、（ｚ）腫瘍体積の増大、（ａａ）腫瘍増殖率の増大、ならびに（ｂｂ）抗腫瘍Ｔ細胞応答を調節する１つ以上の免疫療法であって、任意に、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ３、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ、ＤＲ−５、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、ＣＳＦ−１受容体、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される１つ以上のタンパク質を標的とする免疫療法である該１つ以上の免疫療法、もしくは１つ以上の化学療法剤、及び／または癌ワクチンの有効性の低減。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、以下からなる群から選択される１つ以上の活性を示す：（ａ）腫瘍浸潤ＣＤ３＋Ｔ細胞数の増大、（ｂ）非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞におけるＣＤ３３の細胞レベルの低減、任意に、該非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞は、腫瘍浸潤細胞であるか、または、任意に、該非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞は、血中に含まれる、（ｃ）非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞数の低減、任意に、該非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞は、腫瘍浸潤細胞であるか、または、任意に、該非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞は、血中に含まれる、（ｄ）１つ以上の細胞におけるＰＤ−Ｌ１レベルの低減、任意に、該１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、（ｅ）１つ以上の細胞におけるＰＤ−Ｌ２レベルの低減、任意に、該１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、（ｆ）１つ以上の細胞におけるＢ７−Ｈ２レベルの低減、任意に、該１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、（ｇ）１つ以上の細胞におけるＢ７−Ｈ３レベルの低減、任意に、該１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、（ｈ）１つ以上の細胞におけるＣＤ２００Ｒレベルの低減、任意に、該１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、（ｉ）１つ以上の細胞におけるＣＤ１６３レベルの低減、任意に、該１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、（ｊ）１つ以上の細胞におけるＣＤ２０６レベルの低減、任意に、該１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、（ｋ）固形腫瘍の腫瘍増殖率の低減、（ｌ）腫瘍体積の低減、（ｍ）１つ以上のＰＤ−１阻害剤の有効性の向上：（ｎ）１つ以上のチェックポイント阻害剤療法及び／または免疫調節療法の有効性の向上、任意に、該１つ以上のチェックポイント阻害剤療法及び／または免疫調節療法は、ＣＴＬ４、アデノシン経路、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＯＸ４０、ＴＩＭ３、ＬＡＧ−３、またはそれらの任意の組合せの１つ以上を標的とする、（ｏ）１つ以上の化学療法剤の有効性の向上、任意に、該１つ以上の化学療法剤は、ゲムシタビン、カペシタビン、アントラサイクリン、ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標））、エピルビシン（Ｅｌｌｅｎｃｅ（登録商標））、タキサン、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標））、カルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））、及びそれらの任意の組合せである、（ｐ）非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の存在下でのＴ細胞増殖の増大、（ｑ）非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の分化、生存、及び／または１つ以上の機能の阻害、ならびに（ｒ）化学的または放射性毒素に複合化された場合の、固形腫瘍ならびに関連する血管におけるＣＤ３３発現免疫抑制非腫瘍形成性骨髄細胞及び／または非腫瘍形成性ＣＤ１４発現細胞の殺傷。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、薬剤と複合化されず、任意に、該薬剤は、薬物、毒素、化学療法剤、または放射性同位体である。
【００２４】
前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、不連続ＣＤ３３エピトープと結合する。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該不連続ＣＤ３３エピトープは、２つ以上のペプチド、３つ以上のペプチド、４つ以上のペプチド、５つ以上のペプチド、６つ以上のペプチド、７つ以上のペプチド、８つ以上のペプチド、９つ以上のペプチド、または１０個以上のペプチドを含む。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該ペプチドの各々は、配列番号１のアミノ酸配列の、５つ以上、６つ以上、７つ以上、８つ以上、９つ以上、１０個以上、１１個以上、１２個以上、１３個以上、１４個以上、１５個以上、１６個以上、１７個以上、１８個以上、１９個以上、もしくは２０個以上のアミノ酸残基、または、配列番号１のアミノ酸配列に対応する哺乳動物ＣＤ３３タンパク質の５つ以上、６つ以上、７つ以上、８つ以上、９つ以上、１０個以上、１１個以上、１２個以上、１３個以上、１４個以上、１５個以上、１６個以上、１７個以上、１８個以上、１９個以上、もしくは２０個以上のアミノ酸残基を含む。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ＣＤ３３の配座エピトープに結合する。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、配列番号１のアミノ酸残基１９〜２５９、１９〜１３５、１４５〜２２８、もしくは２２９〜２５９内の１つ以上のアミノ酸、または、配列番号１のアミノ酸残基１９〜２５９、１９〜１３５、１４５〜２２８、もしくは２２９〜２５９に対応する哺乳動物ＣＤ３３タンパク質のアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、以下からなる群から選択されるアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する：ｉ．配列番号１のアミノ酸残基３９〜５１、または、配列番号１のアミノ酸残基３９〜５１に対応する哺乳動物ＣＤ３３タンパク質のアミノ酸残基、ｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基４８〜５４、または、配列番号１のアミノ酸残基４８〜５４に対応する哺乳動物ＣＤ３３タンパク質のアミノ酸残基、ｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基８８〜９８、または、配列番号１のアミノ酸残基８８〜９８に対応する哺乳動物ＣＤ３３タンパク質のアミノ酸残基、ｉｖ．配列番号１のアミノ酸残基１１０〜１２０、または、配列番号１のアミノ酸残基１１０〜１２０に対応する哺乳動物ＣＤ３３タンパク質のアミノ酸残基、ｖ．配列番号１のアミノ酸残基１１２〜１２２、または、配列番号１のアミノ酸残基１１２〜１２２に対応する哺乳動物ＣＤ３３タンパク質のアミノ酸残基、ｖｉ．配列番号１のアミノ酸残基３９〜５１、８８〜９８、及び１１０〜１２０、または、配列番号１のアミノ酸残基３９〜５１、８８〜９８、及び１１０〜１２０に対応する哺乳動物ＣＤ３３タンパク質のアミノ酸残基、ｖｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基３９〜５１、８８〜９８、及び１１２〜１２２、または、配列番号１のアミノ酸残基３９〜５１、８８〜９８、及び１１２〜１２２に対応する哺乳動物ＣＤ３３タンパク質のアミノ酸残基、ならびにｖｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基３９〜５１、８８〜９８、１１０〜１２０、及び１１２〜１２２、または、配列番号１のアミノ酸残基３９〜５１、８８〜９８、１１０〜１２０、及び１１２〜１２２に対応する哺乳動物ＣＤ３３タンパク質のアミノ酸残基。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、配列番号１のＤ１８、Ｐ１９、Ｎ２０、Ｆ２１、Ｆ４４、Ｐ４６、Ｙ４９、Ｙ５０、Ｋ５２、及びＮ５３からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基、または、配列番号１のＤ１８、Ｐ１９、Ｎ２０、Ｆ２１、Ｆ４４、Ｐ４６、Ｙ４９、Ｙ５０、Ｋ５２、及びＮ５３からなる群から選択されるアミノ酸残基に対応する哺乳動物ＣＤ３３タンパク質の１つ以上のアミノ酸残基に結合する。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、配列番号１のＹ４９、Ｙ５０、及びＫ５２からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基、または、配列番号１のＹ４９、Ｙ５０、及びＫ５２からなる群から選択されるアミノ酸残基に対応する哺乳動物ＣＤ３３タンパク質の１つ以上のアミノ酸残基に結合する。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、配列番号１のアミノ酸残基Ｙ４９及びＫ５２、または、配列番号１のアミノ酸残基Ｙ４９及びＫ５２に対応する哺乳動物ＣＤ３３タンパク質のアミノ酸残基に結合する。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、配列番号１のアミノ酸残基Ｙ４９、Ｙ５０、及びＫ５２、または、配列番号１のアミノ酸残基Ｙ４９、Ｙ５０、及びＫ５２に対応する哺乳動物ＣＤ３３タンパク質のアミノ酸残基に結合する。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ＣＤ３３に対する結合について、１Ａ８、２Ｂ４、２Ｅ１２、２Ｅ１２．１、２Ｆ５、２Ｆ５．１、３Ａ１２ａ、３Ａ１２ｂ、６Ａ３ａ、６Ａ３ｂ、６Ｃ７ａ、６Ｃ７ｂ、６Ｃ７．２１Ａ８、２Ｂ４、２Ｅ１２、２Ｅ１２．１、２Ｆ５、２Ｆ５．１、３Ａ１２ａ、３Ａ１２ｂ、６Ａ３ａ、６Ａ３ｂ、６Ｃ７ａ、６Ｃ７ｂ、６Ｃ７．２、ならびにそれらの任意の組合せからなる群から選択される１つ以上の抗体と競合する。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、１Ａ８、２Ｂ４、２Ｅ１２、２Ｅ１２．１、２Ｆ５、２Ｆ５．１、３Ａ１２ａ、３Ａ１２ｂ、６Ａ３ａ、６Ａ３ｂ、６Ｃ７ａ、６Ｃ７ｂ、及び６Ｃ７．２１Ａ８、２Ｂ４、２Ｅ１２、２Ｅ１２．１、２Ｆ５、２Ｆ５．１、３Ａ１２ａ、３Ａ１２ｂ、６Ａ３ａ、６Ａ３ｂ、６Ｃ７ａ、６Ｃ７ｂ、ならびに６Ｃ７．２からなる群から選択される抗体と本質的に同じＣＤ３３エピトープと結合する。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、ＣＤ３３の細胞レベルは、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、ミクログリア、Ｔ細胞、及びマクロファージからなる群から選択される初代細胞、または細胞株で測定され、この場合、ＣＤ３３の該細胞レベルは、インビトロ細胞アッセイを利用して測定される。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該１つ以上のＣＤ３３リガンドは、赤血球で発現されるＣＤ３３リガンド、細菌細胞で発現されるＣＤ３３リガンド、アポトーシスを起こした細胞で発現されるＣＤ３３リガンド、腫瘍細胞で発現されるＣＤ３３リガンド、ウイルスで発現されるＣＤ３３リガンド、樹状細胞で発現されるＣＤ３３リガンド、神経細胞で発現されるＣＤ３３リガンド、グリア細胞で発現されるＣＤ３３リガンド、ミクログリア細胞で発現されるＣＤ３３リガンド、アストロサイトで発現されるＣＤ３３リガンド、ベータアミロイド斑上のＣＤ３３リガンド、Ｔａｕのもつれ上のＣＤ３３リガンド、病原タンパク質上のＣＤ３３リガンド、病原ペプチド上のＣＤ３３リガンド、マクロファージで発現されるＣＤ３３リガンド、ナチュラルキラー細胞で発現されるＣＤ３３リガンド、Ｔ細胞で発現されるＣＤ３３リガンド、Ｔヘルパー細胞で発現されるＣＤ３３リガンド、細胞傷害性Ｔ細胞で発現されるＣＤ３３リガンド、Ｂ細胞で発現されるＣＤ３３リガンド、腫瘍埋没免疫抑制樹状細胞で発現されるＣＤ３３リガンド、腫瘍埋没免疫抑制マクロファージで発現されるＣＤ３３リガンド、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞で発現されるＣＤ３３リガンド、制御性Ｔ細胞で発現されるＣＤ３３リガンド、分泌されたムチン、シアル酸、シアル酸含有糖脂質、シアル酸含有糖タンパク質、アルファ−２，６結合シアル酸含有糖脂質、アルファ−２，６結合シアル酸含有糖タンパク質、アルファ−２，３結合シアル酸含有糖脂質、アルファ−２，３結合シアル酸含有糖タンパク質、アルファ−１酸性糖タンパク質（ＡＧＰ）、ＣＤ２４タンパク質、及びガングリオシドからなる群から選択される。
【００２５】
前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含むとともに、該軽鎖可変ドメイン、該重鎖可変ドメイン、またはその両方は、以下からなる群から選択される抗体のＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、ＨＶＲ−Ｌ３、ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む：１Ａ８、２Ｂ４、２Ｅ１２、２Ｅ１２．１、２Ｆ５、２Ｆ５．１、３Ａ１２ａ、３Ａ１２ｂ、６Ａ３ａ、６Ａ３ｂ、６Ｃ７ａ、６Ｃ７ｂ、及び６Ｃ７．２１Ａ８、２Ｂ４、２Ｅ１２、２Ｅ１２．１、２Ｆ５、２Ｆ５．１、３Ａ１２ａ、３Ａ１２ｂ、６Ａ３ａ、６Ａ３ｂ、６Ｃ７ａ、６Ｃ７ｂ、ならびに６Ｃ７．２。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、（ａ）該ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号９のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号１５のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号１８のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号２２のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号２６のアミノ酸配列を含むか、（ｂ）該ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１０のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号１３のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号１６のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号１９のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号２３のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号２７のアミノ酸配列を含むか、（ｃ）該ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１０のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号６９のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号７２のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号１９のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号２３のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号２７のアミノ酸配列を含むか、（ｄ）該ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号１４のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号１７のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号２０のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号２４のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号２８のアミノ酸配列を含むか、（ｅ）該ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号６８のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号７１のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号７４のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号７５のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号７７のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号２８のアミノ酸配列を含むか、（ｆ）該ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号６７のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号７０のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号７３のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号２１のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号２５のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号２９のアミノ酸配列を含むか、（ｇ）該ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号６７のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号７０のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号７３のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号２１のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号７６のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号２９のアミノ酸配列を含むか、（ｈ）該ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号２１のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号２５のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号２９のアミノ酸配列を含むか、（ｉ）該ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号２１のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号７６のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号２９のアミノ酸配列を含むか、（ｊ）該ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１８４のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号１８５のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号１７のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号７５のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号１８６のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号１８７のアミノ酸配列を含むか、（ｋ）該ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１０のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号１３のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号７２のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号２３１のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号２３のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号２７のアミノ酸配列を含むか、または、（ｌ）該ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号２２８のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号２２９のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号２３０のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号２３２のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号２３３のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号２９のアミノ酸配列を含む。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含むとともに、該軽鎖可変ドメインは、（ａ）配列番号９〜１１、６７、６８、１８４、及び２２８からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号９〜１１、６７、６８、１８４、及び２２８からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性があるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１２〜１４、６９〜７１、１８５、及び２２９からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１２〜１４、６９〜７１、１８５、及び２２９からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性があるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、ならびに（ｃ）配列番号１５〜１７、７２〜７４、及び２３０からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１５〜１７、７２〜７４、及び２３０からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性があるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み、該重鎖可変ドメインは、（ａ）配列番号１８〜２１、７５、２３１、及び２３２からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１８〜２１、７５、２３１、及び２３２からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性があるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２２〜２５、７６、７７、１８６、及び２３３からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号２２〜２５、７６、７７、１８６、及び２３３からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性があるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、ならびに（ｃ）配列番号２６〜２９、及び１８７からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号２６〜２９、及び１８７からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性があるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含むとともに、該軽鎖可変ドメインは、ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、ＨＶＲ−Ｌ３を含み、該重鎖可変ドメインは、ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３を含み、該ＨＶＲ−Ｈ３は、１Ａ８、２Ｂ４、２Ｅ１２、２Ｅ１２．１、２Ｆ５、２Ｆ５．１、３Ａ１２ａ、３Ａ１２ｂ、６Ａ３ａ、６Ａ３ｂ、６Ｃ７ａ、６Ｃ７ｂ、及び６Ｃ７．２１Ａ８、２Ｂ４、２Ｅ１２、２Ｅ１２．１、２Ｆ５、２Ｆ５．１、３Ａ１２ａ、３Ａ１２ｂ、６Ａ３ａ、６Ａ３ｂ、６Ｃ７ａ、６Ｃ７ｂ、ならびに６Ｃ７．２からなる群から選択される抗体のＨＶＲ−Ｈ３である。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含むとともに、該軽鎖可変ドメインは、ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、ＨＶＲ−Ｌ３を含み、該重鎖可変ドメインは、ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３を含み、該ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号２６〜２９、及び１８７からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号２６〜２９、及び１８７からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性があるアミノ酸配列を含む。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、配列番号３０〜４８、１１２〜１５３、１９２〜２０２、及び２４１〜２４３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、及び／または、配列番号４９〜６６、１５４〜１８３、２０３〜２１３、及び２４４〜２４６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、１Ａ８、２Ｂ４、２Ｅ１２、２Ｅ１２．１、２Ｆ５、２Ｆ５．１、３Ａ１２ａ、３Ａ１２ｂ、６Ａ３ａ、６Ａ３ｂ、６Ｃ７ａ、６Ｃ７ｂ、及び６Ｃ７．２１Ａ８、２Ｂ４、２Ｅ１２、２Ｅ１２．１、２Ｆ５、２Ｆ５．１、３Ａ１２ａ、３Ａ１２ｂ、６Ａ３ａ、６Ａ３ｂ、６Ｃ７ａ、６Ｃ７ｂ、ならびに６Ｃ７．２からなる群から選択される抗体の軽鎖可変ドメイン、及び／または１Ａ８、２Ｂ４、２Ｅ１２、２Ｅ１２．１、２Ｆ５、２Ｆ５．１、３Ａ１２ａ、３Ａ１２ｂ、６Ａ３ａ、６Ａ３ｂ、６Ｃ７ａ、６Ｃ７ｂ、及び６Ｃ７．２１Ａ８、２Ｂ４、２Ｅ１２、２Ｅ１２．１、２Ｆ５、２Ｆ５．１、３Ａ１２ａ、３Ａ１２ｂ、６Ａ３ａ、６Ａ３ｂ、６Ｃ７ａ、６Ｃ７ｂ、ならびに６Ｃ７．２からなる群から選択される抗体の重鎖可変ドメインを含む。
【００２６】
本開示の他の態様は、単離（例えば、モノクローナル）抗ＣＤ３３抗体に関するとともに、該抗ＣＤ３３抗体は、配列番号１のアミノ酸残基１９〜２５９、１９〜１３５、１４５〜２２８、もしくは２２９〜２５９内の１つ以上のアミノ酸、または、配列番号１のアミノ酸残基１９〜２５９、１９〜１３５、１４５〜２２８、もしくは２２９〜２５９に対応する哺乳動物ＣＤ３３タンパク質のアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、以下からなる群から選択されるアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する：ｉ．配列番号１のアミノ酸残基３９〜５１、または、配列番号１のアミノ酸残基３９〜５１に対応する哺乳動物ＣＤ３３タンパク質のアミノ酸残基、ｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基４８〜５４、または、配列番号１のアミノ酸残基４８〜５４に対応する哺乳動物ＣＤ３３タンパク質のアミノ酸残基、ｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基８８〜９８、または、配列番号１のアミノ酸残基８８〜９８に対応する哺乳動物ＣＤ３３タンパク質のアミノ酸残基、ｉｖ．配列番号１のアミノ酸残基１１０〜１２０、または、配列番号１のアミノ酸残基１１０〜１２０に対応する哺乳動物ＣＤ３３タンパク質のアミノ酸残基、ｖ．配列番号１のアミノ酸残基１１２〜１２２、または、配列番号１のアミノ酸残基１１２〜１２２に対応する哺乳動物ＣＤ３３タンパク質のアミノ酸残基、ｖｉ．配列番号１のアミノ酸残基３９〜５１、８８〜９８、及び１１０〜１２０、または、配列番号１のアミノ酸残基３９〜５１、８８〜９８、及び１１０〜１２０に対応する哺乳動物ＣＤ３３タンパク質のアミノ酸残基、ｖｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基３９〜５１、８８〜９８、及び１１２〜１２２、または、配列番号１のアミノ酸残基３９〜５１、８８〜９８、及び１１２〜１２２に対応する哺乳動物ＣＤ３３タンパク質のアミノ酸残基、ならびにｖｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基３９〜５１、８８〜９８、１１０〜１２０、及び１１２〜１２２、または、配列番号１のアミノ酸残基３９〜５１、８８〜９８、１１０〜１２０、及び１１２〜１２２に対応する哺乳動物ＣＤ３３タンパク質のアミノ酸残基。
【００２７】
本開示の他の態様は、単離（例えば、モノクローナル）抗ＣＤ３３抗体に関するとともに、該抗ＣＤ３３抗体は、配列番号１のアミノ酸残基１９〜２２８内の１つ以上のアミノ酸、または、配列番号１のアミノ酸残基１９〜２２８に対応する哺乳動物ＣＤ３３タンパク質のアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、以下からなる群から選択されるアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する：ｉ．配列番号１のアミノ酸残基３９〜５１、または、配列番号１のアミノ酸残基３９〜５１に対応する哺乳動物ＣＤ３３タンパク質のアミノ酸残基、ｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基４８〜５４、または、配列番号１のアミノ酸残基４８〜５４に対応する哺乳動物ＣＤ３３タンパク質のアミノ酸残基、ｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基８８〜９８、または、配列番号１のアミノ酸残基８８〜９８に対応する哺乳動物ＣＤ３３タンパク質のアミノ酸残基、ｉｖ．配列番号１のアミノ酸残基１１０〜１２０、または、配列番号１のアミノ酸残基１１０〜１２０に対応する哺乳動物ＣＤ３３タンパク質のアミノ酸残基、ｖ．配列番号１のアミノ酸残基１１２〜１２２、または、配列番号１のアミノ酸残基１１２〜１２２に対応する哺乳動物ＣＤ３３タンパク質のアミノ酸残基、ｖｉ．配列番号１のアミノ酸残基３９〜５１、８８〜９８、及び１１０〜１２０、または、配列番号１のアミノ酸残基３９〜５１、８８〜９８、及び１１０〜１２０に対応する哺乳動物ＣＤ３３タンパク質のアミノ酸残基、ｖｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基３９〜５１、８８〜９８、及び１１２〜１２２、または、配列番号１のアミノ酸残基３９〜５１、８８〜９８、及び１１２〜１２２に対応する哺乳動物ＣＤ３３タンパク質のアミノ酸残基、ならびにｖｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基３９〜５１、８８〜９８、１１０〜１２０、及び１１２〜１２２、または、配列番号１のアミノ酸残基３９〜５１、８８〜９８、１１０〜１２０、及び１１２〜１２２に対応する哺乳動物ＣＤ３３タンパク質のアミノ酸残基。
【００２８】
本開示の他の態様は、単離（例えば、モノクローナル）抗ＣＤ３３抗体に関するとともに、該抗ＣＤ３３抗体は、配列番号１のＤ１８、Ｐ１９、Ｎ２０、Ｆ２１、Ｆ４４、Ｐ４６、Ｙ４９、Ｙ５０、Ｋ５２、及びＮ５３からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基、または、配列番号１のＤ１８、Ｐ１９、Ｎ２０、Ｆ２１、Ｆ４４、Ｐ４６、Ｙ４９、Ｙ５０、Ｋ５２、及びＮ５３からなる群から選択されるアミノ酸残基に対応する哺乳動物ＣＤ３３タンパク質の１つ以上のアミノ酸残基に結合する。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、配列番号１のＹ４９、Ｙ５０、及びＫ５２からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基、または、配列番号１のＹ４９、Ｙ５０、及びＫ５２からなる群から選択されるアミノ酸残基に対応する哺乳動物ＣＤ３３タンパク質の１つ以上のアミノ酸残基に結合する。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、配列番号１のアミノ酸残基Ｙ４９及びＫ５２、または、配列番号１のアミノ酸残基Ｙ４９及びＫ５２に対応する哺乳動物ＣＤ３３タンパク質のアミノ酸残基に結合する。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、配列番号１のアミノ酸残基Ｙ４９、Ｙ５０、及びＫ５２、または、配列番号１のアミノ酸残基Ｙ４９、Ｙ５０、及びＫ５２に対応する哺乳動物ＣＤ３３タンパク質のアミノ酸残基に結合する。
【００２９】
本開示の他の態様は、単離（例えば、モノクローナル）抗ＣＤ３３抗体に関するとともに、該抗ＣＤ３３抗体は、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含み、該重鎖可変ドメイン、該軽鎖可変ドメイン、またはその両方は、１Ａ８、２Ｂ４、２Ｅ１２、２Ｅ１２．１、２Ｆ５、２Ｆ５．１、３Ａ１２ａ、３Ａ１２ｂ、６Ａ３ａ、６Ａ３ｂ、６Ｃ７ａ、６Ｃ７ｂ、６Ｃ７．２１Ａ８、２Ｂ４、２Ｅ１２、２Ｅ１２．１、２Ｆ５、２Ｆ５．１、３Ａ１２ａ、３Ａ１２ｂ、６Ａ３ａ、６Ａ３ｂ、６Ｃ７ａ、６Ｃ７ｂ、６Ｃ７．２、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される抗体のＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、ＨＶＲ−Ｌ３、ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む。いくつかの実施形態では、（ａ）該ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号９のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号１５のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号１８のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号２２のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号２６のアミノ酸配列を含むか、（ｂ）該ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１０のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号１３のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号１６のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号１９のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号２３のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号２７のアミノ酸配列を含むか、（ｃ）該ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１０のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号６９のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号７２のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号１９のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号２３のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号２７のアミノ酸配列を含むか、（ｄ）該ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号１４のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号１７のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号２０のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号２４のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号２８のアミノ酸配列を含むか、（ｅ）該ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号６８のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号７１のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号７４のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号７５のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号７７のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号２８のアミノ酸配列を含むか、（ｆ）該ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号６７のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号７０のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号７３のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号２１のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号２５のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号２９のアミノ酸配列を含むか、（ｇ）該ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号６７のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号７０のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号７３のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号２１のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号７６のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号２９のアミノ酸配列を含むか、（ｈ）該ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号２１のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号２５のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号２９のアミノ酸配列を含むか、（ｉ）該ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号２１のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号７６のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号２９のアミノ酸配列を含むか、（ｊ）該ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１８４のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号１８５のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号１７のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号７５のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号１８６のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号１８７のアミノ酸配列を含むか、（ｋ）該ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１０のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号１３のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号７２のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号２３１のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号２３のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号２７のアミノ酸配列を含むか、または、（ｌ）該ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号２２８のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号２２９のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号２３０のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号２３２のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号２３３のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号２９のアミノ酸配列を含む。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該軽鎖可変ドメインは、（ａ）配列番号９〜１１、６７、６８、１８４、及び２２８からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号９〜１１、６７、６８、１８４、及び２２８からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性があるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１２〜１４、６９〜７１、１８５、及び２２９からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１２〜１４、６９〜７１、１８５、及び２２９からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性があるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、ならびに（ｃ）配列番号１５〜１７、７２〜７４、及び２３０からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１５〜１７、７２〜７４、及び２３０からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性があるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み、該重鎖可変ドメインは、（ａ）配列番号１８〜２１、７５、２３１、及び２３２からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１８〜２１、７５、２３１、及び２３２からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性があるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２２〜２５、７６、７７、１８６、及び２３３からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号２２〜２５、７６、７７、１８６、及び２３３からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性があるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、ならびに（ｃ）配列番号２６〜２９、及び１８７からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号２２６〜２９、及び１８７からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性があるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【００３０】
本開示の他の態様は、単離（例えば、モノクローナル）抗ＣＤ３３抗体に関するとともに、該抗ＣＤ３３抗体は、配列番号３０〜４８、１１２〜１５３、１９２〜２０２、及び２４１〜２４３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、及び／または、配列番号４９〜６６、１５４〜１８３、２０３〜２１３、及び２４４〜２４６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む。本開示の他の態様は、単離（例えば、モノクローナル）抗ＣＤ３３抗体に関するとともに、該抗ＣＤ３３抗体は、１Ａ８、２Ｂ４、２Ｅ１２、２Ｅ１２．１、２Ｆ５、２Ｆ５．１、３Ａ１２ａ、３Ａ１２ｂ、６Ａ３ａ、６Ａ３ｂ、６Ｃ７ａ、６Ｃ７ｂ、及び６Ｃ７．２からなる群から選択される抗体の軽鎖可変ドメイン、及び／または１Ａ８、２Ｂ４、２Ｅ１２、２Ｅ１２．１、２Ｆ５、２Ｆ５．１、３Ａ１２ａ、３Ａ１２ｂ、６Ａ３ａ、６Ａ３ｂ、６Ｃ７ａ、６Ｃ７ｂ、及び６Ｃ７．２１Ａ８、２Ｂ４、２Ｅ１２、２Ｅ１２．１、２Ｆ５、２Ｆ５．１、３Ａ１２ａ、３Ａ１２ｂ、６Ａ３ａ、６Ａ３ｂ、６Ｃ７ａ、６Ｃ７ｂ、ならびに６Ｃ７．２からなる群から選択される抗体の重鎖可変ドメインを含む。本開示の他の態様は、単離（例えば、モノクローナル）抗ＣＤ３３抗体に関するとともに、該抗ＣＤ３３抗体は、ＣＤ３３に対する結合について、１Ａ８、２Ｂ４、２Ｅ１２、２Ｅ１２．１、２Ｆ５、２Ｆ５．１、３Ａ１２ａ、３Ａ１２ｂ、６Ａ３ａ、６Ａ３ｂ、６Ｃ７ａ、６Ｃ７ｂ、６Ｃ７．２１Ａ８、２Ｂ４、２Ｅ１２、２Ｅ１２．１、２Ｆ５、２Ｆ５．１、３Ａ１２ａ、３Ａ１２ｂ、６Ａ３ａ、６Ａ３ｂ、６Ｃ７ａ、６Ｃ７ｂ、６Ｃ７．２、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される１つ以上の抗体と競合する。本開示の他の態様は、単離（例えば、モノクローナル）抗ＣＤ３３抗体に関するとともに、該抗ＣＤ３３抗体は、１Ａ８、２Ｂ４、２Ｅ１２、２Ｅ１２．１、２Ｆ５、２Ｆ５．１、３Ａ１２ａ、３Ａ１２ｂ、６Ａ３ａ、６Ａ３ｂ、６Ｃ７ａ、６Ｃ７ｂ、及び６Ｃ７．２１Ａ８、２Ｂ４、２Ｅ１２、２Ｅ１２．１、２Ｆ５、２Ｆ５．１、３Ａ１２ａ、３Ａ１２ｂ、６Ａ３ａ、６Ａ３ｂ、６Ｃ７ａ、６Ｃ７ｂ、ならびに６Ｃ７．２からなる群から選択される抗体と本質的に同じＣＤ３３エピトープと結合する。本開示の他の態様は、単離（例えば、モノクローナル）抗ＣＤ３３抗体に関するとともに、該抗ＣＤ３３抗体は、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含み、該軽鎖可変ドメインは、（ａ）配列番号９〜１１、６７、６８、１８４、及び２２８からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号９〜１１、６７、６８、１８４、及び２２８からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性があるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１２〜１４、６９〜７１、１８５、及び２２９からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１２〜１４、６９〜７１、１８５、及び２２９からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性があるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、ならびに（ｃ）配列番号１５〜１７、７２〜７４、及び２３０からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１５〜１７、７２〜７４、及び２３０からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性があるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含むか、または、該重鎖可変ドメインは、（ａ）配列番号１８〜２１、７５、２３１、及び２３２からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１８〜２１、７５、２３１、及び２３２からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性があるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２２〜２５、７６、７７、１８６、及び２３３からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号２２〜２５、７６、７７、１８６、及び２３３からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性があるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、ならびに（ｃ）配列番号２６〜２９、及び１８７からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号２６〜２９、及び１８７からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性があるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。本開示の他の態様は、単離（例えば、モノクローナル）抗ＣＤ３３抗体に関するとともに、該抗ＣＤ３３抗体は、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含み、該軽鎖可変ドメインは、ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、ＨＶＲ−Ｌ３を含み、該重鎖可変ドメインは、ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３を含み、該ＨＶＲ−Ｈ３は、１Ａ８、２Ｂ４、２Ｅ１２、２Ｅ１２．１、２Ｆ５、２Ｆ５．１、３Ａ１２ａ、３Ａ１２ｂ、６Ａ３ａ、６Ａ３ｂ、６Ｃ７ａ、６Ｃ７ｂ、及び６Ｃ７．２１Ａ８、２Ｂ４、２Ｅ１２、２Ｅ１２．１、２Ｆ５、２Ｆ５．１、３Ａ１２ａ、３Ａ１２ｂ、６Ａ３ａ、６Ａ３ｂ、６Ｃ７ａ、６Ｃ７ｂ、ならびに６Ｃ７．２からなる群から選択される抗体のＨＶＲ−Ｈ３である。本開示の他の態様は、単離（例えば、モノクローナル）抗ＣＤ３３抗体に関するとともに、抗ＣＤ３３抗体は、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含み、該軽鎖可変ドメインは、ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、ＨＶＲ−Ｌ３を含み、該重鎖可変ドメインは、ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３を含み、該ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号２６〜２９、及び１８７からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号２６〜２９、及び１８７からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性があるアミノ酸配列を含む。
【００３１】
前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該抗体は、ＩｇＧクラス、ＩｇＭクラス、またはＩｇＡクラスのものである。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４のアイソタイプを有する。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該抗体は、阻害性Ｆｃ受容体と結合する。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該阻害性Ｆｃ受容体は、阻害性Ｆｃ−ガンマ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＩＩＢ）である。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、（ａ）該抗ＣＤ３３抗体は、ヒトＩｇＧ１アイソタイプを有し、残基の番号がＥＵ付番に従うＮ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ、Ｄ２７０Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｄ、Ｌ３２８Ｅ、Ｅ２３３Ｄ、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ、Ａ３３０Ｒ、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｎ２９７Ｑ、Ｐ２３８Ｓ、Ｐ２３８Ａ、Ａ３２７Ｑ、Ａ３２７Ｇ、Ｐ３２９Ａ、Ｋ３２２Ａ、Ｔ３９４Ｄ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される残基位置で、該Ｆｃ領域に１つ以上のアミノ酸置換を含むか、または、グリシン２３６に対応する位置で、該Ｆｃ領域にアミノ酸の欠失を含むか、（ｂ）該抗ＣＤ３３抗体は、ヒトＩｇＧ１アイソタイプを有し、ＩｇＧ２アイソタイプ重鎖定常ドメイン１（ＣＨ１）及びヒンジ領域を含み、任意に、該ＩｇＧ２アイソタイプＣＨ１及びヒンジ領域は、アミノ酸配列ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰ  ＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥ  ＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫ  ＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳ  ＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳ  ＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴ  ＶＰＳＳＮＦＧＴＱＴ  ＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳ  ＮＴＫＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号２１４）を含み、任意に、該抗体のＦｃ領域は、残基の番号がＥＵ付番に従うＳ２６７Ｅのアミノ酸置換、Ｌ３２８Ｆのアミノ酸置換、もしくはその両方、及び／またはＮ２９７ＡもしくはＮ２９７Ｑのアミノ酸置換を含むか、（ｃ）該抗ＣＤ３３抗体は、ヒトＩｇＧ２アイソタイプを有し、残基の番号がＥＵ付番に従うＰ２３８Ｓ、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｈ２６８Ａ、Ｈ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｃ２１４Ｓ、Ｃ２３２Ｓ、Ｃ２３３Ｓ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｈ２６８Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ａ３３０Ｌ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される残基位置で、該Ｆｃ領域に１つ以上のアミノ酸置換を含むか、（ｄ）該抗ＣＤ３３抗体は、ヒトＩｇＧ４アイソタイプを有し、残基の番号がＥＵ付番に従うＬ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３６Ｅ、Ｓ２６７Ｅ、Ｅ３１８Ａ、Ｌ３２８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ａ／Ｆ２３４Ａ、Ｓ２２８Ｐ、Ｓ２４１Ｐ、Ｌ２４８Ｅ、Ｔ３９４Ｄ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｌ２３５Ｅ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される残基位置で、該Ｆｃ領域に１つ以上のアミノ酸置換を含むか、または、（ｅ）該抗ＣＤ３３抗体は、ハイブリッドＩｇＧ２／４アイソタイプを有し、任意に、該抗体は、残基の番号がＥＵ付番に従うヒトＩｇＧ２のアミノ酸１１８から２６０、及びヒトＩｇＧ４のアミノ酸２６１から４４７を含むアミノ酸配列を含む。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、（ａ）該抗ＣＤ３３抗体は、ヒトＩｇＧ１アイソタイプを有し、残基の番号がＥＵ付番に従うＮ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｄ２７０Ａ、Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｐ２３８Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｐ２３８Ａ、Ａ３２７Ｑ、Ａ３２７Ｇ、Ｐ３２９Ａ、Ｋ３２２Ａ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、Ｔ３９４Ｄ、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される残基位置で、該Ｆｃ領域に１つ以上のアミノ酸置換を含むか、（ｂ）該抗ＣＤ３３抗体は、ヒトＩｇＧ２アイソタイプを有し、残基の番号がＥＵ付番に従うＰ２３８Ｓ、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｈ２６８Ａ、Ｈ２６８Ｑ、Ｈ２６８Ｅ、Ｖ３０９Ｌ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｃ２３２Ｓ、Ｃ２３３Ｓ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される残基位置で、該Ｆｃ領域に１つ以上のアミノ酸置換を含むか、または、（ｃ）該抗ＣＤ３３抗体は、ヒトＩｇＧ４アイソタイプを有し、残基の番号がＥＵ付番に従うＥ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ａ／Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｅ３１８Ａ、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３６Ｅ、Ｓ２４１Ｐ、Ｌ２４８Ｅ、Ｔ３９４Ｄ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される残基位置で、該Ｆｃ領域に１つ以上のアミノ酸置換を含む。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、（ａ）該Ｆｃ領域は、さらに、残基の番号がＥＵ付番に従うＡ３３０Ｌ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される位置で、１つ以上のさらなるアミノ酸置換を含むか、（ｂ）該Ｆｃ領域は、さらに、残基の番号がＥＵ付番に従うＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される位置で、１つ以上のさらなるアミノ酸置換を含むか、または、（ｃ）該Ｆｃ領域は、さらに、ＥＵ付番に従うＳ２２８Ｐのアミノ酸置換を含む。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該ＣＤ３３タンパク質は、哺乳動物タンパク質またはヒトタンパク質である。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該ＣＤ３３タンパク質は、野生型タンパク質である。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該ＣＤ３３タンパク質は、天然に存在するバリアントである。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該ＣＤ３３タンパク質は、ヒト樹状細胞、ヒトマクロファージ、ヒト単球、ヒト破骨細胞、ヒト好中球、ヒトＴ細胞、ヒトＴヘルパー細胞、ヒト細胞傷害性Ｔ細胞、ヒト顆粒球、及びヒトミクログリアからなる群から選択される１つ以上の細胞上に発現される。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、哺乳動物ＣＤ３３タンパク質、ヒトＣＤ３３タンパク質、またはその両方に特異的に結合する。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ヒトＣＤ３３、マウスＣＤ３３、またはその両方に特異的に結合する。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ｐＨ依存的にＣＤ３３に結合する。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ｐＨ５．５〜８．０の範囲でＣＤ３３に結合する。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ｐＨ５．０未満でＣＤ３３から解離する。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ヒトＣＤ３３または哺乳動物ＣＤ３３タンパク質のアミノ酸残基を含むエピトープに結合する抗体断片である。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ヒトＣＤ３３、天然に存在するヒトＣＤ３３のバリアント、及びヒトＣＤ３３の疾患バリアントからなる群から選択される１つ以上のヒトタンパク質に結合する抗体断片である。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該抗体断片は、ヒトＣＤ３３、天然に存在するヒトＣＤ３３のバリアント、及びヒトＣＤ３３の疾患バリアントからなる群から選択される１つ以上のヒトタンパク質に結合する第二の抗体断片に架橋される。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、またはｓｃＦｖ断片である。
前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、マウスの抗体である。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ヒト化抗体、二重特異性抗体、モノクローナル抗体、多価抗体、複合抗体、またはキメラ抗体である。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、第一の抗原及び第二の抗原を認識する二重特異性抗体である。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該第一の抗原はＣＤ３３であり、該第二の抗原は、（ａ）血液脳関門を通過する輸送を促進する抗原、（ｂ）トランスフェリン受容体（ＴＲ）、インスリン受容体（ＨＩＲ）、インスリン様成長因子受容体（ＩＧＦＲ）、低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質１及び２（ＬＰＲ−１及び２）、ジフテリア毒素受容体、ＣＲＭ１９７、ラマ単一ドメイン抗体、ＴＭＥＭ  ３０（Ａ）、タンパク質形質導入ドメイン、ＴＡＴ、Ｓｙｎ−Ｂ、ペネトラチン、ポリアルギニンペプチド、アンギオペプ（ａｎｇｉｏｐｅｐ）ペプチド、ならびにＡＮＧ１００５からなる群から選択される血液脳関門を通過する輸送を促進する抗原、（ｃ）病原ペプチドもしくはタンパク質及び病原核酸からなる群から選択される病原体であって、該病原ペプチドもしくはタンパク質は、アミロイドベータ、オリゴマーアミロイドベータ、アミロイドベータ斑、アミロイド前駆体タンパク質もしくはその断片、タウ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（染色体９オープンリーディングフレーム７２）、ｃ９ＲＡＮタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メジン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、反復関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）反復ペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）反復ペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）反復ペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）反復ペプチド、ユビキチン、ならびにプロリン−アルギニン（ＰＲ）反復ペプチドからなる群から選択され、該病原核酸は、アンチセンスＧＧＣＣＣＣ（Ｇ２Ｃ４）反復拡張ＲＮＡである病原体、（ｄ）免疫細胞で発現されるリガンド及び／またはタンパク質であって、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ３、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ、及びホスファチジルセリンからなる群から選択されるリガンド及び／またはタンパク質、ならびに（ｅ）１つ以上の腫瘍細胞で発現さ���るタンパク質、脂質、多糖、または糖脂質である。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、複合抗体である。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、検出可能なマーカー、毒素、または治療薬に複合化される。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、リシン、リシンＡ鎖、ドキソルビシン、ダウノルビシン、メイタンシノイド、タキソール、エチジウムブロマイド、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ジヒドロキシアントラシンジオン、アクチノマイシン、ジフテリア毒素、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ外毒素（ＰＥ）Ａ、ＰＥ４０、アブリン、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、アルファ−サルシン、ゲロニン、ミトゲリン、レトストリクトシン（ｒｅｔｓｔｒｉｃｔｏｃｉｎ）、フェノマイシン、エノマイシン、キュリシン（ｃｕｒｉｃｉｎ）、クロチン、カリケアマイシン、Ｓａｐｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ阻害剤、糖質コルチコイド、アウリスタチン、オーロマイシン（ａｕｒｏｍｙｃｉｎ）、イットリウム、ビスマス、コンブレスタチン、デュオカルマイシン、ドラスタチン、ｃｃｌ０６５、及びシスプラチンからなる群から選択される毒素に複合化される。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、抗ＣＤ３３抗体は、病原ペプチド、病原タンパク質、アミロイドベータ、オリゴマーアミロイドベータ、アミロイドベータ斑、アミロイド前駆体タンパク質もしくはその断片、タウ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（染色体９オープンリーディングフレーム７２）、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メジン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、反復関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）反復ペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）反復ペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）反復ペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）反復ペプチド、ユビキチン、及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）反復ペプチド、ならびにそれらの任意の組合せからなる群から選択される病原体に特異的に結合する１つ以上の抗体と組み合わせて、または、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ３、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、Ｓｉｇｌｅｃ−５、Ｓｉｇｌｅｃ−７、Ｓｉｇｌｅｃ−９、Ｓｉｇｌｅｃ−��１、ホスファチジルセリン、病原核酸、アンチセンスＧＧＣＣＣＣ（Ｇ２Ｃ４）反復拡張ＲＮＡ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される免疫調節タンパク質に結合する１つ以上の抗体と組み合わせて用いられる。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ヒトＣＤ３３及びマウスＣＤ３３に対する解離定数（ＫＤ）が、約１００ｎＭ〜約１００ｐＭの範囲、または１００ｐＭ未満であり、この場合、該ＫＤは温度２５℃で測定される。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ヒトＣＤ３３に対する解離定数（ＫＤ）が、約１０ｎＭ〜約５００ｐＭの範囲、または５００ｐＭ未満であり、この場合、該ＫＤは温度２５℃で測定される。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ヒトＣＤ３３に対する解離定数（ＫＤ）が、約１００ｎＭ〜約１００ｐＭの範囲、または１００ｐＭ未満であり、この場合、該ＫＤは温度２５℃で測定される。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、マウスＣＤ３３に対する解離定数（ＫＤ）が、約１００ｎＭ〜約１００ｐＭの範囲、または１００ｐＭ未満であり、この場合、該ＫＤは温度２５℃で測定される。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該ＫＤは、一価抗体を用いて測定される。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該ＫＤは、一価形態の完全長抗体を用いて測定される。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、薬剤に複合化されず、任意に、該薬剤は薬物、毒素、化学療法剤、または放射性同位体である。
【００３２】
本開示の他の態様は、前述の実施形態のいずれかの抗ＣＤ３３抗体をコードする核酸配列を含む単離核酸に関する。本開示の他の態様は、前述の実施形態のいずれかの核酸を含むベクターに関する。本開示の他の態様は、前述の実施形態のいずれかのベクターを含む宿主細胞に関する。本開示の他の態様は、抗ＣＤ３３抗体の産生方法であって、当該抗ＣＤ３３抗体が産生されるように前述の実施形態のいずれかの宿主細胞を培養することを含む該方法に関する。いくつかの実施形態では、該方法は、さらに、該宿主細胞によって産生される抗ＣＤ３３抗体を回収することを含む。本開示の他の態様は、前述の実施形態のいずれかの方法によって産生される単離抗ＣＤ３３抗体に関する。本開示の他の態様は、前述の実施形態のいずれかの抗ＣＤ３３抗体及び医薬的に許容される担体を含む医薬組成物に関する。
【００３３】
本開示の他の態様は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウパチー病、那須・ハコラ病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、ループス、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満症、マラリア、本態性振戦、中枢神経系ループス、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫性疾患、サルコイドーシス、加齢に伴う病気、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身性感染症、ループス、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨のパジェット病、癌、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性赤血球増加症、本態性血小板血症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化、骨髄由来腫瘍、ＣＤ３３を発現する腫瘍、甲状腺癌、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルージ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、Ｉ型ＨＩＶ、及びインフルエンザ菌からなる群から選択される疾患、障害、もしくは損傷の予防、リスクの低減、または治療方法であって、それを必要とする個体に対して、ＣＤ３３の細胞レベルを低下させる、ＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用を阻害する、またはその両方の薬剤の治療有効量を投与することを含む該方法に関する。本開示の他の態様は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウパチー病、那須・ハコラ病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、ループス、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満症、マラリア、本態性振戦、中枢神経系ループス、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫性疾患、サルコイドーシス、加齢に伴う病気、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身性感染症、ループス、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨のパジェット病、癌、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌���黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性赤血球増加症、本態性血小板血症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化、骨髄由来腫瘍、ＣＤ３３を発現する腫瘍、甲状腺癌、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルージ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、Ｉ型ＨＩＶ、及びインフルエンザ菌からなる群から選択される疾患、障害、もしくは損傷の予防、リスクの低減、または治療用の、ＣＤ３３の細胞レベルを低下させる、ＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用を阻害する、またはその両方の薬剤に関する。本開示の他の態様は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウパチー病、那須・ハコラ病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、ループス、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満症、マラリア、本態性振戦、中枢神経系ループス、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫性疾患、サルコイドーシス、加齢に伴う病気、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身性感染症、ループス、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨のパジェット病、癌、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性赤血球増加症、本態性血小板血症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化、骨髄由来腫瘍、ＣＤ３３を発現する腫瘍、甲状腺癌、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルージ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、Ｉ型ＨＩＶ、及びインフルエンザ菌からなる群から選択される疾患、障害、もしくは損傷の予防、リスクの低減、または治療用の薬の製造における、ＣＤ３３の細胞レベルを低下させる、ＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用を阻害する、またはその両方の薬剤の使用に関する。いくつかの実施形態では、該薬剤は、抗体、可溶性ＣＤ３３受容体、ＣＤ３３−Ｆｃ融合タンパク質、ＣＤ３３イムノアドヘシン、１つ以上のＣＤ３３リガンドに結合する可溶性Ｓｉｇｌｅｃ受容体、Ｓｉｇｌｅｃ−Ｆｃ融合タンパク質、Ｓｉｇｌｅｃイムノアドヘシン、アンチセンス分子、ｓｉＲＮＡ、小分子阻害剤、タンパク質、及びペプチドからなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、該薬剤は単離抗ＣＤ３３抗体である。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、前述の実施形態のいずれかの抗ＣＤ３３抗体である。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該疾患、障害、または損傷は癌である。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該薬剤は、以下からなる群から選択される１つ以上のＣＤ３３活性を阻害する：（ａ）免疫抑制樹状細胞、免疫抑制マクロファージ、免疫抑制好中球、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ、非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞、及び制御性Ｔ細胞の１つ以上の増殖、成熟、遊走、分化、及び／または機能の促進、（ｂ）免疫抑制樹状細胞、免疫抑制マクロファージ、免疫抑制好中球、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ、及び制御性Ｔ細胞の１つ以上の、腫瘍内への浸潤の増大、（ｃ）腫瘍、末梢血、またはその他のリンパ器官における腫瘍促進性骨髄／顆粒球免疫抑制性細胞数及び／または非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞数の増大、（ｄ）非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞及び／または非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞の腫瘍促進性作用の強化、（ｅ）腫瘍または末梢血における腫瘍促進性サイトカインの発現の増大、任意に、該腫瘍促進性サイトカインは、ＴＧＦ−ベータまたはＩＬ−１０である、（ｆ）腫瘍促進性ＦｏｘＰ３＋調節性Ｔリンパ球の腫瘍浸潤の増大、（ｇ）腫瘍死滅能を備えた腫瘍特異的Ｔリンパ球の活性化の低減、（ｈ）腫瘍死滅能を備えた腫瘍特異的Ｔリンパ球の浸潤の低減、（ｉ）腫瘍死滅能を備えた腫瘍特異的ＮＫ細胞の浸潤の低減、（ｊ）ＮＫ細胞の腫瘍死滅能の低減、（ｋ）免疫応答を強化する能力を備えた腫瘍特異的Ｂリンパ球の浸潤の低減、（ｌ）腫瘍体積の増大、（ｍ）腫瘍増殖率の増大、（ｎ）転移の増大、（ｏ）腫瘍再発率の増大、（ｐ）１つ以上のＰＤ−１リガンドの発現の増大、（ｑ）抗腫瘍Ｔ細胞応答を調節する１つ以上の免疫療法であって、任意に、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ３、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ、ＤＲ−５、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、ＣＳＦ−１受容体、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される１つ以上のタンパク質を標的とする免疫療法である該１つ以上の免疫療法、または１つ以上の癌ワクチンの有効性の低減、（ｒ）ＰＬＣγ／ＰＫＣ／カルシウム動員の阻害、（ｓ）ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ、Ｒａｓ／ＭＡＰＫシグナル伝達の阻害、ならびに（ｔ）１つ以上の化学療法剤の有効性の低減、任意に、該１つ以上の化学療法剤は、ゲムシタビン、カペシタビン、アントラサイクリン、ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標））、エピルビシン（Ｅｌｌｅｎｃｅ（登録商標））、タキサン、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標））、カルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標���）、及びそれらの任意の組合せである。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該薬剤は、以下からなる群から選択される１つ以上の活性を示す：（ａ）腫瘍浸潤ＣＤ３＋Ｔ細胞数の増大、（ｂ）非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞におけるＣＤ３３の細胞レベルの低減、任意に、該非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞は、腫瘍浸潤細胞であるか、または、任意に、該非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞は、血中に含まれる、（ｃ）非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞数の低減、任意に、該非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞は、腫瘍浸潤細胞であるか、または、任意に、該非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞は、血中に含まれる、（ｄ）１つ以上の細胞におけるＰＤ−Ｌ１レベルの低減、任意に、該１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、（ｅ）１つ以上の細胞におけるＰＤ−Ｌ２レベルの低減、任意に、該１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、（ｆ）１つ以上の細胞におけるＢ７−Ｈ２レベルの低減、任意に、該１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、（ｇ）１つ以上の細胞におけるＢ７−Ｈ３レベルの低減、任意に、該１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、（ｈ）１つ以上の細胞におけるＣＤ２００Ｒレベルの低減、任意に、該１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、（ｉ）１つ以上の細胞におけるＣＤ１６３レベルの低減、任意に、該１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、（ｊ）１つ以上の細胞におけるＣＤ２０６レベルの低減、任意に、該１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、（ｋ）固形腫瘍の腫瘍増殖率の低減、（ｌ）腫瘍体積の低減、（ｍ）１つ以上のＰＤ−１阻害剤の有効性の向上：（ｎ）１つ以上のチェックポイント阻害剤療法及び／または免疫調節療法の有効性の向上、任意に、該１つ以上のチェックポイント阻害剤療法及び／または免疫調節療法は、ＣＴＬ４、アデノシン経路、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＯＸ４０、ＴＩＭ３、ＬＡＧ３、またはそれらの任意の組合せの１つ以上を標的とする、（ｏ）１つ以上の化学療法剤の有効性の向上、任意に、該１つ以上の化学療法剤は、ゲムシタビン、カペシタビン、アントラサイクリン、ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標））、エピルビシン（Ｅｌｌｅｎｃｅ（登録商標））、タキサン、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標））、カルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））、及びそれらの任意の組合せである、（ｐ）非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の存在下でのＴ細胞増殖の増大、及び（ｑ）非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の分化、生存、及び／または１つ以上の機能の阻害、ならびに（ｒ）化学的または放射性毒素に複合化された場合の、固形腫瘍ならびに関連する血管におけるＣＤ３３発現免疫抑制非腫瘍形���性骨髄細胞及び／またはＣＤ１４発現細胞の殺傷。
【００３４】
本開示の他の態様は、ｄ  認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、タウパチー病、感染症、及び癌からなる群から選択される疾患、障害、もしくは損傷の予防、リスクの低減、または治療方法であって、それを必要とする個体に対して、ＣＤ３３の細胞レベルを低下させる、ＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用を阻害する、またはその両方の薬剤の治療有効量を投与することを含む該方法に関する。本開示の他の態様は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、タウパチー病、感染症、及び癌からなる群から選択される疾患、障害、もしくは損傷の予防、リスクの低減、または治療用の、ＣＤ３３の細胞レベルを低下させる、ＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用を阻害する、またはその両方の薬剤に関する。本開示の他の態様は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、タウパチー病、感染症、及び癌からなる群から選択される疾患、障害、もしくは損傷の予防、リスクの低減、または治療用の薬の製造における、ＣＤ３３の細胞レベルを低下させる、ＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用を阻害する、またはその両方の薬剤の使用に関する。いくつかの実施形態では、該薬剤は、抗体、可溶性ＣＤ３３受容体、ＣＤ３３−Ｆｃ融合タンパク質、ＣＤ３３イムノアドヘシン、１つ以上のＣＤ３３リガンドに結合する可溶性Ｓｉｇｌｅｃ受容体、Ｓｉｇｌｅｃ−Ｆｃ融合タンパク質、Ｓｉｇｌｅｃイムノアドヘシン、アンチセンス分子、ｓｉＲＮＡ、小分子阻害剤、タンパク質、及びペプチドからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、該薬剤は単離抗ＣＤ３３抗体である。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、前述の実施形態のいずれかの抗ＣＤ３３抗体である。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該疾患、障害、または損傷は癌である。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該癌は、ＣＤ３３を発現する。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該癌は、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、及び多発性骨髄腫からなる群から選択される。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該薬剤は、以下からなる群から選択される１つ以上のＣＤ３３活性を阻害する：（ａ）免疫抑制樹状細胞、免疫抑制マクロファージ、免疫抑制好中球、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ、非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞、及び制御性Ｔ細胞の１つ以上の増殖、成熟、遊走、分化、及び／または機能の促進、（ｂ）免疫抑制樹状細胞、免疫抑制マクロファージ、免疫抑制好中球、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ、及び制御性Ｔ細胞の１つ以上の、腫瘍内への浸潤の増大、（ｃ）腫瘍、���梢血、またはその他のリンパ器官における腫瘍促進性骨髄／顆粒球免疫抑制性細胞数及び／または非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞数の増大、（ｄ）非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞及び／または非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞の腫瘍促進性作用の強化、（ｅ）腫瘍または末梢血における腫瘍促進性サイトカインの発現の増大、任意に、該腫瘍促進性サイトカインは、ＴＧＦ−ベータまたはＩＬ−１０である、（ｆ）腫瘍促進性ＦｏｘＰ３＋調節性Ｔリンパ球の腫瘍浸潤の増大、（ｇ）腫瘍死滅能を備えた腫瘍特異的Ｔリンパ球の活性化の低減、（ｈ）腫瘍死滅能を備えた腫瘍特異的Ｔリンパ球の浸潤の低減、（ｉ）腫瘍死滅能を備えた腫瘍特異的ＮＫ細胞の浸潤の低減、（ｊ）ＮＫ細胞の腫瘍死滅能の低減、（ｋ）免疫応答を強化する能力を備えた腫瘍特異的Ｂリンパ球の浸潤の低減、（ｌ）腫瘍体積の増大、（ｍ）腫瘍増殖率の増大、（ｎ）転移の増大、（ｏ）腫瘍再発率の増大、（ｐ）１つ以上のＰＤ−１リガンドの発現の増大、（ｑ）抗腫瘍Ｔ細胞応答を調節する１つ以上の免疫療法であって、任意に、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ３、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ、ＤＲ−５、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、ＣＳＦ−１受容体、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される１つ以上のタンパク質を標的とする免疫療法である該１つ以上の免疫療法、または１つ以上の癌ワクチンの有効性の低減、、（ｒ）ＰＬＣγ／ＰＫＣ／カルシウム動員の阻害、（ｓ）ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ、Ｒａｓ／ＭＡＰＫシグナル伝達の阻害、ならびに（ｔ）１つ以上の化学療法剤の有効性の低減、任意に、該１つ以上の化学療法剤は、ゲムシタビン、カペシタビン、アントラサイクリン、ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標））、エピルビシン（Ｅｌｌｅｎｃｅ（登録商標））、タキサン、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標））、カルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））、及びそれらの任意の組合せである。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該薬剤は、以下からなる群から選択される１つ以上の活性を示す：（ａ）腫瘍浸潤ＣＤ３＋Ｔ細胞数の増大、（ｂ）非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞におけるＣＤ３３の細胞レベルの低減、任意に、該非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞は、腫瘍浸潤細胞であるか、または、任意に、該非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞は、血中に含まれる、（ｃ）非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞数の低減、任意に、該非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞は、腫瘍浸潤細胞であるか、または、任意に、該非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞は、血中に含まれる、（ｄ）１つ以上の細胞におけるＰＤ−Ｌ１レベルの低減、任意に、該１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、（ｅ）１つ以上の細胞におけるＰＤ−Ｌ２レベルの低減、任意に、該１つ以上の細胞は、非腫瘍形成��骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、（ｆ）１つ以上の細胞におけるＢ７−Ｈ２レベルの低減、任意に、該１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、（ｇ）１つ以上の細胞におけるＢ７−Ｈ３レベルの低減、任意に、該１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、（ｈ）１つ以上の細胞におけるＣＤ２００Ｒレベルの低減、任意に、該１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、（ｉ）１つ以上の細胞におけるＣＤ１６３レベルの低減、任意に、該１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、（ｊ）１つ以上の細胞におけるＣＤ２０６レベルの低減、任意に、該１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、（ｋ）固形腫瘍の腫瘍増殖率の低減、（ｌ）腫瘍体積の低減、（ｍ）１つ以上のＰＤ−１阻害剤の有効性の向上、（ｎ）１つ以上のチェックポイント阻害剤療法及び／または免疫調節療法の有効性の向上、任意に、該１つ以上のチェックポイント阻害剤療法及び／または免疫調節療法は、ＣＴＬ４、アデノシン経路、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＯＸ４０、ＴＩＭ３、ＬＡＧ−３、またはそれらの任意の組合せの１つ以上を標的とする、（ｏ）１つ以上の化学療法剤の有効性の向上、任意に、該１つ以上の化学療法剤は、ゲムシタビン、カペシタビン、アントラサイクリン、ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標））、エピルビシン（Ｅｌｌｅｎｃｅ（登録商標））、タキサン、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標））、カルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））、及びそれらの任意の組合せである、（ｐ）非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の存在下でのＴ細胞増殖の増大、（ｑ）非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の分化、生存、及び／または１つ以上の機能の阻害、ならびに（ｒ）化学的及び放射性毒素に複合化された場合の、固形腫瘍ならびに関連する血管におけるＣＤ３３発現免疫抑制骨髄細胞及び／またはＣＤ１４発現細胞の殺傷。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該疾患、障害、または損傷は、感染症である。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該感染症は、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルージ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、Ｉ型ＨＩＶ、及びインフルエンザ菌からなる群から選択される。
【００３５】
本開示の他の態様は、癌の予防、リスクの低減、または治療方法であって、それを必要とする個体に対して、ＣＤ３３の細胞レベルを低下させる、ＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用を阻害する、またはその両方の薬剤の治療有効量を投与することを含む該方法に関する。本開示の他の態様は、癌の予防、リスクの低減、または治療を必要とする個体における、癌の予防、リスクの低減、または治療用の、ＣＤ３３の細胞レベルを低下させる、ＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用を阻害する、またはその両方の薬剤に関する。本開示の他の態様は、癌の予防、リスクの低減、または治療を必要とする個体における癌の予防、リスクの低減、または治療用の薬の製造における、ＣＤ３３の細胞レベルを低下させる、ＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用を阻害する、またはその両方の薬剤の使用に関する。いくつかの実施形態では、該薬剤は、抗体、可溶性ＣＤ３３受容体、ＣＤ３３−Ｆｃ融合タンパク質、ＣＤ３３イムノアドヘシン、１つ以上のＣＤ３３リガンドに結合する可溶性Ｓｉｇｌｅｃ受容体、Ｓｉｇｌｅｃ−Ｆｃ融合タンパク質、Ｓｉｇｌｅｃイムノアドヘシン、アンチセンス分子、ｓｉＲＮＡ、小分子阻害剤、タンパク質、及びペプチドからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、該薬剤は、単離抗ＣＤ３３抗体である。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、前述の実施形態のいずれかの抗ＣＤ３３抗体である。いくつかの実施形態では、該癌は、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、及び多発性骨髄腫からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、該癌は、ＣＤ３３を発現する癌である。いくつかの実施形態では、該癌は、ＣＤ３３を発現する腫瘍を含む。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該薬剤は、以下からなる群から選択される１つ以上のＣＤ３３活性を阻害する：（ａ）免疫抑制樹状細胞、免疫抑制マクロファージ、免疫抑制好中球、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ、非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞、及び制御性Ｔ細胞の１つ以上の増殖、成熟、遊走、分化、及び／または機能の促進、（ｂ）免疫抑制樹状細胞、免疫抑制マクロファージ、免疫抑制好中球、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ、及び制御性Ｔ細胞の１つ以上の、腫瘍内への浸潤の増大、（ｃ）腫瘍、末梢血、またはその他のリンパ器官における腫瘍促進性骨髄／顆粒球免疫抑制性細胞数及び／または非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞数の増大、（ｄ）非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞及び／または非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞の腫瘍促進性作用の強化、（ｅ）腫瘍または末梢血における腫瘍促進性サイトカインの発現の増大、任意に、該腫瘍促進性サイトカインは、ＴＧＦ−ベータまたはＩＬ−１０である、（ｆ）腫瘍促進性ＦｏｘＰ３＋調節性Ｔリンパ球の腫瘍浸潤の増大、（ｇ）腫瘍死滅能を備えた腫瘍特異的Ｔリンパ球の活性化の低減、（ｈ）腫瘍死滅能を備えた腫瘍特異的Ｔリンパ球の浸潤の低減、（ｉ）腫瘍死滅能を備えた腫瘍特異的ＮＫ細胞の浸潤の低減、（ｊ）ＮＫ細胞の腫瘍死滅能の低減、（ｋ）免疫応答を強化する能力を備えた腫瘍特異的Ｂリンパ球の浸潤の低減、（ｌ）腫瘍体積の増大、（ｍ）腫瘍増殖率の増大、（ｎ）転移の増大、（ｏ）腫瘍再発率の増大、（ｐ）１つ以上のＰＤ−１リガンドの発現の増大、（ｑ）抗腫瘍Ｔ細胞応答を調節する１つ以上の免疫療法であって、任意に、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ３、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ、ＤＲ−５、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、ＣＳＦ−１受容体、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される１つ以上のタンパク質を標的とする免疫療法である該１つ以上の免疫療法、または１つ以上の癌ワクチンの有効性の低減、（ｒ）ＰＬＣγ／ＰＫＣ／カルシウム動員の阻害、（ｓ）ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ、Ｒａｓ／ＭＡＰＫシグナル伝達の阻害、ならびに（ｔ）１つ以上の化学療法剤の有効性の低減、任意に、該１つ以上の化学療法剤は、ゲムシタビン、カペシタビン、アントラサイクリン、ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標））、エピルビシン（Ｅｌｌｅｎｃｅ（登録商標））、タキサン、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標））、カルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））、及びそれらの任意の組合せである。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該薬剤は、以下からなる群から選択される１つ以上の活性を示す（ａ）腫瘍浸潤ＣＤ３＋Ｔ細胞数の増大、（ｂ）非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞におけるＣＤ３３の細胞レベルの低減、任意に、該非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞は、腫瘍浸潤細胞であるか、または、任意に、該非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞は、血中に含まれる、（ｃ）非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞数の低減、任意に、該非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞は、腫瘍浸潤細胞であるか、または、任意に、該非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞は、血中に含まれる、（ｄ）１つ以上の細胞におけるＰＤ−Ｌ１レベルの低減、任意に、該１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、（ｅ）１つ以上の細胞におけるＰＤ−Ｌ２レベルの低減、任意に、該１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、（ｆ）１つ以上の細胞におけるＢ７−Ｈ２レベルの低減、任意に、該１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、（ｇ）１つ以上の細胞におけるＢ７−Ｈ３レベルの低減、任意に、該１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、（ｈ）１つ以上の細胞におけるＣＤ２００Ｒレベルの低減、任意に、該１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）���ある、（ｉ）１つ以上の細胞におけるＣＤ１６３レベルの低減、任意に、該１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、（ｊ）１つ以上の細胞におけるＣＤ２０６レベルの低減、任意に、該１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、（ｋ）固形腫瘍の腫瘍増殖率の低減、（ｌ）腫瘍体積の低減、（ｍ）１つ以上のＰＤ−１阻害剤の有効性の向上：（ｎ）１つ以上のチェックポイント阻害剤療法及び／または免疫調節療法の有効性の向上、任意に、該１つ以上のチェックポイント阻害剤療法及び／または免疫調節療法は、ＣＴＬ４、アデノシン経路、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＯＸ４０、ＴＩＭ３、ＬＡＧ３、またはそれらの任意の組合せの１つ以上を標的とする、（ｏ）１つ以上の化学療法剤の有効性の向上、任意に、該１つ以上の化学療法剤は、ゲムシタビン、カペシタビン、アントラサイクリン、ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標））、エピルビシン（Ｅｌｌｅｎｃｅ（登録商標））、タキサン、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標））、カルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））、及びそれらの任意の組合せである、（ｐ）非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の存在下でのＴ細胞増殖の増大、及び（ｑ）非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の分化、生存、及び／または１つ以上の機能の阻害、ならびに（ｒ）化学的及び放射性毒素に複合化された場合の、固形腫瘍ならびに関連する血管におけるＣＤ３３発現免疫抑制骨髄細胞及び／または非腫瘍形成性ＣＤ１４発現細胞の殺傷。
【００３６】
本開示の他の態様は、１つ以上の免疫細胞の生存、成熟、機能、遊走、もしくは増殖の誘導または促進を必要とする個体において、これを誘導または促進する方法であって、該個体に対して、ＣＤ３３の細胞レベルを低下させる、ＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用を阻害する、またはその両方の薬剤の治療有効量を投与することを含む該方法に関する。本開示の他の態様は、１つ以上の免疫細胞の生存、成熟、機能、遊走、もしくは増殖の誘導または促進を必要とする個体において、これを誘導または促進するための、ＣＤ３３の細胞レベルを低下させる、ＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用を阻害する、またはその両方の薬剤に関する。本開示の他の態様は、１つ以上の免疫細胞の生存、成熟、機能、遊走、もしくは増殖の誘導または促進を必要とする個体において、これを誘導または促進するための薬の製造における、ＣＤ３３の細胞レベルを低下させる、ＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用を阻害する、またはその両方の薬剤の使用に関する。いくつかの実施形態では、該薬剤は、抗体、可溶性ＣＤ３３受容体、ＣＤ３３−Ｆｃ融合タンパク質、ＣＤ３３イムノアドヘシン、１つ以上のＣＤ３３リガンドに結合する可溶性Ｓｉｇｌｅｃ受容体、Ｓｉｇｌｅｃ−Ｆｃ融合タンパク質、Ｓｉｇｌｅｃイムノアドヘシン、アンチセンス分子、ｓｉＲＮＡ、小分子阻害剤、タンパク質、及びペプチドからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、該薬剤は単離抗ＣＤ３３抗体である。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、前述の実施形態のいずれかの抗ＣＤ３３抗体である。いくつかの実施形態では、該１つ以上の免疫細胞は、樹状細胞、マクロファージ、ミクログリア、好中球、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される。
【００３７】
本開示の他の態様は、制御性Ｔ細胞、腫瘍埋没免疫抑制樹状細胞、腫瘍埋没免疫抑制マクロファージ、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）細胞、もしくは慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）細胞の活性、機能、または生存の低減を必要とする個体において、これを低減する方法であって、該個体に対して、ＣＤ３３と結合またはこれと相互作用する薬剤の治療有効量を投与することを含む該方法に関する。本開示の他の態様は、制御性Ｔ細胞、腫瘍埋没免疫抑制樹状細胞、腫瘍埋没免疫抑制マクロファージ、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）細胞、もしくは慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）細胞の活性、機能、または生存の低減を必要とする個体において、これを低減するための、ＣＤ３３と結合またはこれと相互作用する薬剤に関する。本開示の他の態様は、制御性Ｔ細胞、腫瘍埋没免疫抑制樹状細胞、腫瘍埋没免疫抑制マクロファージ、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）細胞、もしくは慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）細胞の活性、機能、または生存の低減を必要とする個体において、これを低減するための薬の製造における、ＣＤ３３と結合またはこれと相互作用する薬剤の使用に関する。いくつかの実施形態では、該薬剤は、抗体、アンタゴニスト抗体、不活性抗体、アゴニスト抗体、ＣＤ３３リガンド、ＣＤ３３リガンドアゴニスト断片、ＣＤ３３イムノアドヘシン、ＣＤ３３リガンド模倣体、可溶性ＣＤ３３受容体、ＣＤ３３−Ｆｃ融合タンパク質、１つ以上のＣＤ３３リガンドに結合する可溶性Ｓｉｇｌｅｃ受容体、１つ以上のＣＤ３３リガンドに結合するＳｉｇｌｅｃ−Ｆｃ融合タンパク質、及び小分子化合物からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、該薬剤は、単離抗ＣＤ３３抗体または抗ＣＤ３３抗体複合体である。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体複合体は、検出可能なマーカー、毒素、または治療薬に複合化された抗ＣＤ３３抗体を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３３抗体複合体は、リシン、リシンＡ鎖、ドキソルビシン、ダウノルビシン、メイタンシノイド、タキソール、エチジウムブロマイド、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ジヒドロキシアントラシンジオン、アクチノマイシン、ジフテリア毒素、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ外毒素（ＰＥ）Ａ、ＰＥ４０、アブリン、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、アルファ−サルシン、ゲロニン、ミトゲリン、レトストリクトシン（ｒｅｔｓｔｒｉｃｔｏｃｉｎ）、フェノマイシン、エノマイシン、キュリシン（ｃｕｒｉｃｉｎ）、クロチン、カリケアマイシン、Ｓａｐｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ阻害剤、糖質コルチコイド、アウリスタチン、オーロマイシン（ａｕｒｏｍｙｃｉｎ）、イットリウム、ビスマス、コンブレスタチン、デュオカルマイシン、ドラスタチン、ｃｃｌ０６５、及びシスプラチンからなる群から選択される毒素に複合化された抗ＣＤ３３抗体を含む���前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ＣＤ３３の細胞表面レベルを大きく低下させない、及び／または、ＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用を阻害しない、前述の実施形態のいずれかの抗ＣＤ３３抗体である。
【００３８】
本開示の他の態様は、１つ以上の細胞のＣＤ３３の細胞レベルの低減、ＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用の阻害、またはその両方を必要とする個体におけるその方法であって、該個体に対して、治療有効量の単離抗ＣＤ３３抗体を投与することを含む該方法に関する。本開示の他の態様は、１つ以上の細胞のＣＤ３３の細胞レベルの低減、ＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用の阻害、またはその両方を必要とする個体における、該低減、阻害、またはその両方用の、単離抗ＣＤ３３抗体に関する。本開示の他の態様は、１つ以上の細胞のＣＤ３３の細胞レベルの低減、ＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用の阻害、またはその両方を必要とする個体における、該低減、阻害、またはその両方用の薬の製造における、単離抗ＣＤ３３抗体の使用に関する。いくつかの実施形態では、該１つ以上の細胞は、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、ミクログリア、Ｔ細胞、及びマクロファージから選択される、及び／または細胞株である。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、インビボにおいて、ＣＤ３３の細胞レベルを低下させる。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ＣＤ３３の細胞レベルを６５ｐＭ〜２０ｐＭの範囲のＥＣ５０で低下させる。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ＣＤ３３の細胞レベルを、６５ｐＭ以下、６０ｐＭ以下、５５ｐＭ以下、５０ｐＭ以下、４５ｐＭ以下、４０ｐＭ以下、３５ｐＭ以下、３０ｐＭ以下、２５ｐＭ以下、２４ｐＭ以下、２３ｐＭ以下、２２ｐＭ以下、２１ｐＭ以下、２０ｐＭ以下、１０ｐＭ以下、９ｐＭ以下、８ｐＭ以下、７ｐＭ以下、６ｐＭ以下、または５ｐＭ以下のＥＣ５０で低下させる。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ＣＤ３３の細胞レベルを６５ｐＭ〜２２ｐＭの範囲の、または２２ｐＭ未満のＥＣ５０で低下させる。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、インビボにおいてＣＤ３３の細胞レベルを約８．０ｍｇ／ｋｇ〜約２．０ｍｇ／ｋｇの範囲のＥＣ５０で低下させる。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ヒトＣＤ３３に対して３００ｐＭ〜１０ｐＭの範囲の解離定数（ＫＤ）を有し、この場合、該ＫＤは、温度約２５℃で測定される。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ヒトＣＤ３３に対して３００ｐＭ未満の解離定数（ＫＤ）を有し、この場合、該ＫＤは、温度約２５℃で測定される。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該ＫＤは、一価抗体を用いて測定される。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該ＫＤは、一価形態の完全長抗体を用いて測定される。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ヒト樹状細胞に対して、２００ｐＭ〜１０ｐＭの範囲のＥＣ５０で結合し、この場合、該ＥＣ５０は、温度約４℃で測定される。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ヒト樹状細胞に対して、２００ｐＭ未満のＥＣ５０で結合し、この場合、該ＥＣ５０は、温度約４℃で測定される。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、アンタゴニスト抗ＣＤ３３抗体、不活性抗ＣＤ３３抗体、及びアゴニスト抗ＣＤ３３抗体からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、前述の実施形態のいずれかの抗ＣＤ３３抗体である。
【００３９】
前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該個体はＣＤ３３のバリアントを含む。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該バリアントは、（ａ）ＳＮＰ  ｒｓ３８６５４４４ＡＣ、（ｂ）ＳＮＰ  ｒｓ３８６５４４４ＣＣ、（ｃ）ＳＮＰ  ｒｓ３５１１２９４０ＧＧ，ＡＡ，ＡＧ、（ｄ）ＳＮＰ  ｒｓ１２４５９４１９  ＣＣ，ＣＴまたはＴＴ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される１つ以上の多型を含む。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該個体に対して、該方法は、さらに、抑制性チェックポイント分子に特異的に結合する抗体、及び／または１つ以上の標準的もしくは試験研究中の抗癌治療を施すことを含んでいる。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、抑制性チェックポイント分子に特異的に結合する該少なくとも１つの抗体は、該抗ＣＤ３３抗体と組み合わせて投与される。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、抑制性チェックポイント分子に特異的に結合する該少なくとも１つの抗体は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ−Ｌ２抗体、抗ＰＤ−１抗体、抗Ｂ７−Ｈ３抗体、抗Ｂ７−Ｈ４抗体、及び抗ＨＶＥＭ抗体、抗Ｂ及びＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）抗体、抗キラー阻害性受容体（ＫＩＲ）抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗ＴＩＭ３抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、抗ＬＡＧ−３抗体、抗ホスファチジルセリン抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＴＮＦａ抗体、抗Ｓｉｇｌｅｃ−５抗体、抗Ｓｉｇｌｅｃ−７抗体、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体、抗Ｓｉｇｌｅｃ−１１抗体、アンタゴニスト抗ＴＲＥＭｌ抗体、アンタゴニスト抗−ＴＲＥＭ２抗体、ならびにそれらの任意の組合せからなる群から選択される。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該１つ以上の標準的もしくは試験研究中の抗癌治療は、放射線療法、細胞毒性化学療法、標的療法、イマチニブ療法、トラスツズマブ療法、エタネルセプト療法、養子細胞移入（ＡＣＴ）療法、キメラ抗原受容体Ｔ細胞移入（ＣＡＲ−Ｔ）療法、ワクチン療法、及びサイトカイン療法からなる群から選択される。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該方法は、さらに、該個体に対して、抑制性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１つの抗体を投与することを含んでいる。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、抑制性サイトカインに特異的に結合する該少なくとも１つの抗体は、該抗ＣＤ３３抗体と組み合わせて投与される。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、抑制性サイトカインに特異的に結合する該少なくとも１つの抗体は、抗ＣＣＬ２抗体、抗ＣＳＦ−１抗体、抗ＩＬ−２抗体、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該方法は、さらに、該個体に対して、刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する少なくとも１つのアゴニスト抗体を投与することを含んでいる。前述の実施形態のいずれかと組み合わ��てもよいいくつかの実施形態では、刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する該少なくとも１つのアゴニスト抗体は、該抗ＣＤ３３抗体と組み合わせて投与される。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する該少なくとも１つのアゴニスト抗体は、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体、アゴニスト抗ＯＸ４０抗体、アゴニスト抗ＩＣＯＳ抗体、アゴニスト抗ＣＤ２８抗体、アゴニスト抗ＴＲＥＭｌ抗体、アゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体、アゴニスト抗ＣＤ  １３７／４−１ＢＢ抗体、アゴニスト抗ＣＤ２７抗体、アゴニスト抗糖質コルチコイド誘導性ＴＮＦＲ関連タンパク質ＧＩＴＲ抗体、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該方法は、さらに、該個体に対して、少なくとも１つの刺激性サイトカインを投与することを含んでいる。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該少なくとも１つの刺激性サイトカインは、該抗ＣＤ３３抗体と組み合わせて投与される。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該少なくとも１つの刺激性サイトカインは、ＩＦＮ−ａ４、ＩＦＮ−ｂ、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＬＩＦ、ＩＦＮ−ガンマ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＣＸＣＬ１０、ＩＬ−３３、ＣＲＰ、ＩＬ−３３、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１−ベータ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される。
【００４０】
本開示の他の態様は、ＣＤ３３と結合またはこれと相互作用する薬剤での治療に対して、それを必要とする対象の選択方法であって、ａ．該対象から試料を採取すること、ｂ．該対象に含まれるＣＤ３３対立遺伝子を検出すること、及び、ｃ．ＣＤ３３と結合またはこれと相互作用する薬剤での治療に対する、１つ以上のＣＤ３３対立遺伝子を有する対象を選択することを含み、該１つ以上のＣＤ３３対立遺伝子は、ｒｓ３８６５４４４ＡＣ、及びｒｓ３８６５４４４ＣＣからなる群から選択されるものである該方法に関する。本開示の他の態様は、ＣＤ３３と結合またはこれと相互作用する薬剤での治療に対する、それを必要とする対象の反応性を評価する方法であって、ａ．抗ＣＤ３３抗体を該対象に投与する前の該対象から採取した血液試料における、非腫瘍形成性骨髄細胞でのＣＤ４５＋及びＣＤ１４＋の発現レベルを測定すること、ｂ．該対象に対して、治療有効量の該薬剤を投与すること、及び、ｃ．抗ＣＤ３３抗体を投与した後の該対象から採取した血液試料における、非腫瘍形成性骨髄細胞でのＣＤ４５＋及びＣＤ１４＋の発現レベルを測定することを含み、該抗ＣＤ３３抗体を投与した後の非腫瘍形成性骨髄細胞でのＣＤ４５＋ＣＤ１４＋のレベルの低下は、該対象が該薬剤に対して反応するということを示すものである方法に関する。いくつかの実施形態では、該反応性を評価する方法は、さらに、１つ以上の追加の治療有効量の該薬剤を投与することを含む。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該薬剤は、抗体、可溶性ＣＤ３３受容体、ＣＤ３３−Ｆｃ融合タンパク質、ＣＤ３３イムノアドヘシン、可溶性Ｓｉｇｌｅｃ受容体、Ｓｉｇｌｅｃ−Ｆｃ融合タンパク質、Ｓｉｇｌｅｃイムノアドヘシン、アンチセンス分子、ｓｉＲＮＡ、小分子阻害剤、タンパク質、及びペプチドからなる群から選択される。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該薬剤は、単離抗ＣＤ３３抗体または抗ＣＤ３３抗体複合体である。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、前述の実施形態のいずれかの抗ＣＤ３３抗体である。
【図面の簡単な説明】
【００４１】
【図１】ＣＤ３３の構造を示すとともに、ＣＤ３３のドメイン構造を示す図、ならびにリン酸化もしくはユビキチン化事象への関与が示されている、または、比較的頻度の高い非同義的単一ヌクレオチド多型（ＳＮＰ）の残基であることが特定されている個々のアミノ酸を示す。略語：ＣＢＬ：カシータＢ系統リンパ腫Ｅ３ユビキチンリガーゼ、Ｃ２：Ｃ２セットＩｇ様ドメイン、ＥＣＳ：エロンギンＢ／Ｃ−Ｃｕｌｌｉｎ−５  ＳＰＲＹドメインユビキチンリガーゼ、Ｐ：ホスホ、ＰＫＣ：プロテインキナーゼＣ、ＳＦＫｓ：Ｓｒｃファミリーキナーゼ、ＳＨＰ−１／２：Ｓｒｃ相同性領域２ドメイン含有ホスファターゼ−１及び−２、ＳＯＣＳ３：サイトカインシグナル伝達サプレッサー３、Ｕｂ：ユビキチン、Ｖ：ＶセットＩｇ様ドメイン（Ｃｏｗａｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１３）Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  １８：１３１１−１３３４）。
【図２−１】ヒトＣＤ３３（配列番号１）と、マウスＣＤ３３（配列番号２）、ラットＣＤ３３（配列番号３）、チンパンジーＣＤ３３（配列番号４）、アカゲザルＣＤ３３（配列番号：５）、イヌＣＤ３３（配列番号６）、ウシＣＤ３３（配列番号７）、及びゼブラフィッシュＣＤ３３（配列番号８）間のアミノ酸配列アラインメントを示す。アスタリスク（「＊」）は、単一の完全に保存された残基を有する位置を示す。コロン（「：」）は、著しく類似した特性の群間、すなわち、Ｇｏｎｎｅｔ  ＰＡＭ２５０マトリックスにおけるスコア０．５超の保存を示す。ピリオド（「．」）は、弱く類似した特性の群間、すなわち、Ｇｏｎｎｅｔ  ＰＡＭ２５０マトリックスにおけるスコア０．５以下の保存を示す。
【図２−２】ヒトＣＤ３３（配列番号１）と、マウスＣＤ３３（配列番号２）、ラットＣＤ３３（配列番号３）、チンパンジーＣＤ３３（配列番号４）、アカゲザルＣＤ３３（配列番号：５）、イヌＣＤ３３（配列番号６）、ウシＣＤ３３（配列番号７）、及びゼブラフィッシュＣＤ３３（配列番号８）間のアミノ酸配列アラインメントを示す。アスタリスク（「＊」）は、単一の完全に保存された残基を有する位置を示す。コロン（「：」）は、著しく類似した特性の群間、すなわち、Ｇｏｎｎｅｔ  ＰＡＭ２５０マトリックスにおけるスコア０．５超の保存を示す。ピリオド（「．」）は、弱く類似した特性の群間、すなわち、Ｇｏｎｎｅｔ  ＰＡＭ２５０マトリックスにおけるスコア０．５以下の保存を示す。
【図３】ＣＤ３３などのヒトＳｉｇｌｅｃタンパク質のグリカン結合特異性を示す。この図は、通常検討されるシアル酸付加グリカンに対する通常報告される特異性の概要を示す。各Ｓｉｇｌｅｃの検討内の相対的結合は、＋＋（強い結合）、＋（検出可能な結合）、及び−（非常に弱いまたは検出できない結合）として示す。最近になって報告された、６’−硫酸化シアリルルイスｘ（ｓＬｅｘ）に対するｈＳｉｇｌｅｃ−８及びｍＳｉｇｌｅｃ−Ｆの強い結合選好ならびに６−硫酸化ｓＬｅｘに対するｈＳｉｇｌｅｃ−９の強い結合選好は示していない。多少の例外（ＣＤ２２及びＭＡＧ）を除いて、異なるアッセイを用いた異なる研究者によるヒトＳｉｇｌｅｃの結合特異性の検討の結果は、有意に異なるもとなっている。アッセイの構成及びグリカンのリンカーの問題に加えて、検討されたリガンドの密度及び配置が、この変動の原因となった可能性がある（Ｖａｒｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，（２００６）Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌ．１６：１Ｒ−２７Ｒ）。
【図４】哺乳動物の脳におけるガングリオシドの構造及び代謝を示す。この図におけるガングリオシドの命名は、Ｓｖｅｎｎｅｒｈｏｌｍ（１９６４）Ｊ．Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓ．５：１４５−１５５（Ａｒｉｇａ  Ｔ  ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｊ．Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓ．４９：１１５７−１１７５）のシステムに従う。
【図５Ａ】ヒト一次免疫細胞におけるＣＤ３３の発現を示すＦＡＣＳ分析の結果を示す。
【図５Ｂ】精製ＣＤ３３−ｈｉｓタグタンパク質に対するＣＤ３３抗体１Ａ８の結合親和性を示すＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。
【図５Ｃ】精製ＣＤ３３−ｈｉｓタグタンパク質に対するＣＤ３３抗体２Ｅ１２の結合親和性を示すＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。
【図５Ｄ】精製ＣＤ３３−ｈｉｓタグタンパク質に対するＣＤ３３抗体２Ｆ５の結合親和性を示すＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。
【図５Ｅ】精製ＣＤ３３−ｈｉｓタグタンパク質に対するＣＤ３３抗体６Ａ３の結合親和性を示すＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。
【図５Ｆ】精製ＣＤ３３−ｈｉｓタグタンパク質に対するＣＤ３３抗体６Ｃ７の結合親和性を示すＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。
【図５Ｇ】精製ＣＤ３３−ｈｉｓタグタンパク質に対するＣＤ３３抗体ゲムツズマブの結合親和性を示すＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。
【図５Ｈ】ヒト初代樹状細胞上のＣＤ３３に結合するＣＤ３３抗体２Ｆ５及び６Ｃ７の結合曲線を示す。
【図５Ｉ】ヒト初代樹状細胞上のＣＤ３３に結合するＣＤ３３抗体ゲムツズマブ及びリンツズマブの結合曲線を示す。
【図６Ａ】ヒトＣＤ３３タンパク質の抗体結合部位を示す。本開示の抗ＣＤ３３抗体を利用して、抗ＣＤ３３抗体の直線状エピトープ結合部位を示す。ＣＤ３３骨格は、透明灰色の描写で表す。抗体の特定された直線状の結合領域をこの図に記載する。
【図６Ｂ】ヒトＣＤ３３タンパク質の抗体結合部位を示す。抗体１Ａ８に対する不連続エピトープの結合部位を表す素描を示す。不連続結合領域３９ＶＰＣＴＦＦＨＰＩＰＹＹＤ５１、８８ＧＲＦＲＬＬＧＤＰＳ０Ｒ９８、及び１１０ＲＲＤＮＧＳＹＦＦＲＭ１２０をこの図に記載する。
【図６Ｃ】ＣＤ３３変異体に対する本開示の抗体の結合反応性を、野生型ＣＤ３３への百分率（ＷＴ％）で示す。
【図６Ｄ】抗体結合に関与するアミノ酸残基を示すＣＤ３３のモデルを示す。
【図７】樹状細胞上のシアル酸ＣＤ３リガンドが、ヒト初代細胞との混合リンパ球反応の過程でＴ細胞の増殖を制限することを示すＦＡＣＳ分析を示す。
【図８】樹状細胞上のシアル酸ＣＤ３３リガンドが、混合リンパ球反応の過程でＴ細胞の増殖を制限することを示す結果を示す。
【図９Ａ】図９Ａ〜９Ｆは、様々な刺激によって誘導されたヒト骨髄細胞におけるＣＤ３３及びＣＤ３３リガンドの発現の増加を示す結果を示す。図９Ａ及び図９Ｂは、腫瘍上清での処理後のヒト初代樹状細胞でのＣＤ３３発現の増加を示す結果を示す。図９Ｃ及び図９Ｄは、ＬＰＳ誘発炎症反応の過程でヒト樹状細胞でのＣＤ３３発現の増加を示す結果を示す。図９Ｅ及び図９Ｆは、ＬＰＳ誘発炎症反応の過程でヒト骨髄細胞でのシアル酸発現の増加を示す結果を示す。
【図９Ｂ】図９Ａ〜９Ｆは、様々な刺激によって誘導されたヒト骨髄細胞におけるＣＤ３３及びＣＤ３３リガンドの発現の増加を示す結果を示す。図９Ａ及び図９Ｂは、腫瘍上清での処理後のヒト初代樹状細胞でのＣＤ３３発現の増加を示す結果を示す。図９Ｃ及び図９Ｄは、ＬＰＳ誘発炎症反応の過程でヒト樹状細胞でのＣＤ３３発現の増加を示す結果を示す。図９Ｅ及び図９Ｆは、ＬＰＳ誘発炎症反応の過程でヒト骨髄細胞でのシアル酸発現の増加を示す結果を示す。
【図９Ｃ】図９Ａ〜９Ｆは、様々な刺激によって誘導されたヒト骨髄細胞におけるＣＤ３３及びＣＤ３３リガンドの発現の増加を示す結果を示す。図９Ａ及び図９Ｂは、腫瘍上清での処理後のヒト初代樹状細胞でのＣＤ３３発現の増加を示す結果を示す。図９Ｃ及び図９Ｄは、ＬＰＳ誘発炎症反応の過程でヒト樹状細胞でのＣＤ３３発現の増加を示す結果を示す。図９Ｅ及び図９Ｆは、ＬＰＳ誘発炎症反応の過程でヒト骨髄細胞でのシアル酸発現の増加を示す結果を示す。
【図９Ｄ】図９Ａ〜９Ｆは、様々な刺激によって誘導されたヒト骨髄細胞におけるＣＤ３３及びＣＤ３３リガンドの発現の増加を示す結果を示す。図９Ａ及び図９Ｂは、腫瘍上清での処理後のヒト初代樹状細胞でのＣＤ３３発現の増加を示す結果を示す。図９Ｃ及び図９Ｄは、ＬＰＳ誘発炎症反応の過程でヒト樹状細胞でのＣＤ３３発現の増加を示す結果を示す。図９Ｅ及び図９Ｆは、ＬＰＳ誘発炎症反応の過程でヒト骨髄細胞でのシアル酸発現の増加を示す結果を示す。
【図９Ｅ】図９Ａ〜９Ｆは、様々な刺激によって誘導されたヒト骨髄細胞におけるＣＤ３３及びＣＤ３３リガンドの発現の増加を示す結果を示す。図９Ａ及び図９Ｂは、腫瘍上清での処理後のヒト初代樹状細胞でのＣＤ３３発現の増加を示す結果を示す。図９Ｃ及び図９Ｄは、ＬＰＳ誘発炎症反応の過程でヒト樹状細胞でのＣＤ３３発現の増加を示す結果を示す。図９Ｅ及び図９Ｆは、ＬＰＳ誘発炎症反応の過程でヒト骨髄細胞でのシアル酸発現の増加を示す結果を示す。
【図９Ｆ】図９Ａ〜９Ｆは、様々な刺激によって誘導されたヒト骨髄細胞におけるＣＤ３３及びＣＤ３３リガンドの発現の増加を示す結果を示す。図９Ａ及び図９Ｂは、腫瘍上清での処理後のヒト初代樹状細胞でのＣＤ３３発現の増加を示す結果を示す。図９Ｃ及び図９Ｄは、ＬＰＳ誘発炎症反応の過程でヒト樹状細胞でのＣＤ３３発現の増加を示す結果を示す。図９Ｅ及び図９Ｆは、ＬＰＳ誘発炎症反応の過程でヒト骨髄細胞でのシアル酸発現の増加を示す結果を示す。
【図１０】Ｅ．ｃｏｌｉからＣＤ３３リガンドを除去するためのシアリダーゼ処理がヒト初代樹状細胞による食作用を増進することを示す結果を示す。
【図１１Ａ】抗ＣＤ３３抗体が、初代ヒトマクロファージによるＥ．ｃｏｌｉの食作用の増進をもたらすことを示す結果を示す。Ｂｉｏｐａｒｔｉｃｌｅ対照、ｍＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体、及び抗ＣＤ３３抗体２Ｅ１２を示す。
【図１１Ｂ】抗ＣＤ３３抗体が、初代ヒトマクロファージによるＥ．ｃｏｌｉの食作用の増進をもたらすことを示す結果を示す。抗ＣＤ３３抗体２Ｆ５、抗ＣＤ３３抗体６Ａ３、及び抗ＣＤ３３抗体６Ｃ７を示す。
【図１２Ａ】アルツハイマー病の脳（ＡＤ）及び健康な脳（非ＡＤ）由来の脳切片におけるＣＤ３３リガンドの発現を示す。ＡＤ及び非ＡＤ脳のＣＤ３３−Ｆｃの免疫組織化学染色を示す。対照のＩｇＧ１−Ｆｃはこれらの細胞に結合しない。
【図１２Ｂ】アルツハイマー病の脳（ＡＤ）及び健康な脳（非ＡＤ）由来の脳切片におけるＣＤ３３リガンドの発現を示す。５つのＡＤ及び５つの非ＡＤ脳試料からのＣＤ３３−Ｆｃ及び対照受容体染色の一元配置分散分析の統計分析の結果を示し、抑制性ＣＤ３３リガンドがＡＤの病理に寄与することを示している。
【図１３Ａ】アルツハイマー病の脳（ＡＤ）及び健康な脳（非ＡＤ）由来の脳切片におけるＣＤ３３受容体の発現を示す。ＡＤ及び非ＡＤ脳切片において、アイソタイプ対照と比較したＣＤ３３抗体の免疫組織化学染色を示す。
【図１３Ｂ】アルツハイマー病の脳（ＡＤ）及び健康な脳（非ＡＤ）由来の脳切片におけるＣＤ３３受容体の発現を示す。５つのＡＤ及び５つの非ＡＤ脳試料からのＣＤ３３抗体及びアイソタイプ対照染色の一元配置分散分析の統計分析の結果を示す。
【図１４Ａ】図１４Ａ〜１４Ｄは、培養中及びインビボにおける腫瘍細胞のＣＤ３３及び抑制性ＣＤ３３リガンドの発現を示す。図１４Ａは、抑制性ＣＤ３３リガンドの発現が、黒色腫細胞、肺腫瘍細胞、及び結腸癌細胞で約２０倍増加することを示す結果を示す。図１４Ｂは、ヒトＣＤ４５＋免疫細胞及び患者由来黒色腫を移植された、成熟マウスＴ細胞、Ｂ細胞、及びＮＫ細胞を欠く免疫不全マウスモデルからの、末梢血及び脾臓由来のヒト免疫細胞、ならびに、患者由来黒色腫からの細胞浸潤物におけるＣＤ３３の発現を示す結果を示す。図１４Ｃは、マウス腫瘍モデルからの、脾臓ならびに乳癌腫瘍ＥＭＴ−６から浸潤した細胞由来のＣＤ３＋Ｔ細胞、ＣＤ１１ｂ＋免疫細胞、及びＧｒ１＋ＣＤ１１ｂ＋免疫細胞におけるＣＤ３３の発現を示す結果を示す。図１４Ｄは、マウス腫瘍モデルからの、脾臓ならびに乳癌腫瘍ＥＭＴ−６から浸潤した細胞由来のＣＤ４５−Ｔ細胞、Ｇｒ１＋細胞、及びＧｒ１−ＣＤ１１ｂ−免疫細胞におけるＣＤ３３の発現を示す結果を示す。これらの結果は、ＣＤ３３及びＣＤ３３免疫抑制性リガンドが、複数の種類の固形腫瘍に対する免疫応答に関与することを示す。
【図１４Ｂ】図１４Ａ〜１４Ｄは、培養中及びインビボにおける腫瘍細胞のＣＤ３３及び抑制性ＣＤ３３リガンドの発現を示す。図１４Ａは、抑制性ＣＤ３３リガンドの発現が、黒色腫細胞、肺腫瘍細胞、及び結腸癌細胞で約２０倍増加することを示す結果を示す。図１４Ｂは、ヒトＣＤ４５＋免疫細胞及び患者由来黒色腫を移植された、成熟マウスＴ細胞、Ｂ細胞、及びＮＫ細胞を欠く免疫不全マウスモデルからの、末梢血及び脾臓由来のヒト免疫細胞、ならびに、患者由来黒色腫からの細胞浸潤物におけるＣＤ３３の発現を示す結果を示す。図１４Ｃは、マウス腫瘍モデルからの、脾臓ならびに乳癌腫瘍ＥＭＴ−６から浸潤した細胞由来のＣＤ３＋Ｔ細胞、ＣＤ１１ｂ＋免疫細胞、及びＧｒ１＋ＣＤ１１ｂ＋免疫細胞におけるＣＤ３３の発現を示す結果を示す。図１４Ｄは、マウス腫瘍モデルからの、脾臓ならびに乳癌腫瘍ＥＭＴ−６から浸潤した細胞由来のＣＤ４５−Ｔ細胞、Ｇｒ１＋細胞、及びＧｒ１−ＣＤ１１ｂ−免疫細胞におけるＣＤ３３の発現を示す結果を示す。これらの結果は、ＣＤ３３及びＣＤ３３免疫抑制性リガンドが、複数の種類の固形腫瘍に対する免疫応答に関与することを示す。
【図１４Ｃ】図１４Ａ〜１４Ｄは、培養中及びインビボにおける腫瘍細胞のＣＤ３３及び抑制性ＣＤ３３リガンドの発現を示す。図１４Ａは、抑制性ＣＤ３３リガンドの発現が、黒色腫細胞、肺腫瘍細胞、及び結腸癌細胞で約２０倍増加することを示す結果を示す。図１４Ｂは、ヒトＣＤ４５＋免疫細胞及び患者由来黒色腫を移植された、成熟マウスＴ細胞、Ｂ細胞、及びＮＫ細胞を欠く免疫不全マウスモデルからの、末梢血及び脾臓由来のヒト免疫細胞、ならびに、患者由来黒色腫からの細胞浸潤物におけるＣＤ３３の発現を示す結果を示す。図１４Ｃは、マウス腫瘍モデルからの、脾臓ならびに乳癌腫瘍ＥＭＴ−６から浸潤した細胞由来のＣＤ３＋Ｔ細胞、ＣＤ１１ｂ＋免疫細胞、及びＧｒ１＋ＣＤ１１ｂ＋免疫細胞におけるＣＤ３３の発現を示す結果を示す。図１４Ｄは、マウス腫瘍モデルからの、脾臓ならびに乳癌腫瘍ＥＭＴ−６から浸潤した細胞由来のＣＤ４５−Ｔ細胞、Ｇｒ１＋細胞、及びＧｒ１−ＣＤ１１ｂ−免疫細胞におけるＣＤ３３の発現を示す結果を示す。これらの結果は、ＣＤ３３及びＣＤ３３免疫抑制性リガンドが、複数の種類の固形腫瘍に対する免疫応答に関与することを示す。
【図１４Ｄ】図１４Ａ〜１４Ｄは、培養中及びインビボにおける腫瘍細胞のＣＤ３３及び抑制性ＣＤ３３リガンドの発現を示す。図１４Ａは、抑制性ＣＤ３３リガンドの発現が、黒色腫細胞、肺腫瘍細胞、及び結腸癌細胞で約２０倍増加することを示す結果を示す。図１４Ｂは、ヒトＣＤ４５＋免疫細胞及び患者由来黒色腫を移植された、成熟マウスＴ細胞、Ｂ細胞、及びＮＫ細胞を欠く免疫不全マウスモデルからの、末梢血及び脾臓由来のヒト免疫細胞、ならびに、患者由来黒色腫からの細胞浸潤物におけるＣＤ３３の発現を示す結果を示す。図１４Ｃは、マウス腫瘍モデルからの、脾臓ならびに乳癌腫瘍ＥＭＴ−６から浸潤した細胞由来のＣＤ３＋Ｔ細胞、ＣＤ１１ｂ＋免疫細胞、及びＧｒ１＋ＣＤ１１ｂ＋免疫細胞におけるＣＤ３３の発現を示す結果を示す。図１４Ｄは、マウス腫瘍モデルからの、脾臓ならびに乳癌腫瘍ＥＭＴ−６から浸潤した細胞由来のＣＤ４５−Ｔ細胞、Ｇｒ１＋細胞、及びＧｒ１−ＣＤ１１ｂ−免疫細胞におけるＣＤ３３の発現を示す結果を示す。これらの結果は、ＣＤ３３及びＣＤ３３免疫抑制性リガンドが、複数の種類の固形腫瘍に対する免疫応答に関与することを示す。
【図１５Ａ】ＣＤ３３が遺伝学的方法で中和されたマウスにおける結腸癌腫瘍増殖の阻害を示す結果を示す。正常なＣＤ３３発現を有する対照マウス（ＷＴマウス）を示す。
【図１５Ｂ】ＣＤ３３が遺伝学的方法で中和されたマウスにおける結腸癌腫瘍増殖の阻害を示す結果を示す。ＣＤ３３が遺伝子的に不活化されたマウス（ＣＤ３３ＫＯマウス）を示す。
【図１５Ｃ】ＣＤ３３が遺伝学的方法で中和されたマウスにおける結腸癌腫瘍増殖の阻害を示す結果を示す。図１５Ａ及び１５Ｂの結果の概要を示し、腫瘍体積の中央値を示している。
【図１５Ｄ】ＣＤ３３が遺伝学的方法で中和されたマウスにおける結腸癌腫瘍増殖の阻害を示す結果を示す。結腸癌を有するＣＤ３３ＫＯマウスは、対応する結腸癌を有するＷＴマウスより長く生存することを示すカプラン・マイヤー生存率プロットを示す。
【図１５Ｅ】ＣＤ３３が遺伝学的方法で中和されたマウスにおける結腸癌腫瘍増殖の阻害を示す結果を示す。マウスのＣＤ３３発現のＦＡＣＳ分析を示す。特異的な細胞集団分析をＷＴマウス及びＣＤ３３ＫＯマウス由来の脾臓及び腫瘍、ならびにナイーブ脾臓で行った。これらの結果はＣＤ３３機能の妨害（遺伝子的または薬理学的に）が、癌に有益な結果をもたらすことを示す。
【図１５Ｆ】免疫学的にヒト化したマウスにおける患者由来の癌のマウスモデルについてのＰＤ−１／ＣＤ３３の混合抗体処置プロトコルを示す。
【図１５Ｇ】ヒトドナー１６５５４７１１２及び１７５０９１１２由来の免疫幹細胞を移植された個々のマウスにおける抗体処置後の腫瘍体積を示す。マウスは、Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）（ペンブロリズマブ）抗ＰＤ−１抗体単独または抗ＣＤ３３抗体２Ｆ５との併用で処置した。
【図１５Ｈ】ヒトドナー１６５５４７１１２及び１７５０９１１２由来のマウス移植ヒト免疫幹細胞においてＫｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）（ペンブロリズマブ）抗ＰＤ−１抗体単独または抗ＣＤ３３抗体２Ｆ５との併用で２５日間処置後の平均腫瘍体積を示す。
【図１５Ｉ】ヒトドナー１６５５４７１１２、１７５０９１１２、及び９８４４８０１１２由来の免疫幹細胞を移植された個々のマウスにおけるＫｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）（ペンブロリズマブ）抗ＰＤ−１抗体単独またはＫｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）（ペンブロリズマブ）抗ＰＤ−１抗体と抗ＣＤ３３抗体２Ｆ５との併用処置後の腫瘍体積を示す。２Ｆ５対アイソタイプ対照に関して、＊：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１、＊＊＊：ｐ＜０．００１。処理群ごとの平均を示す。エラーバーは標準誤差を示す。
【図１５Ｊ】マウスにおいて、Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）（ペンブロリズマブ）抗ＰＤ−１抗体単独または抗ＣＤ３３抗体２Ｆ５との併用処置後の平均腫瘍体積を示す。２Ｆ５対アイソタイプ対照に関して、＊：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１、＊＊＊：ｐ＜０．００１。処理群ごとの平均を示す。エラーバーは標準誤差を示す。
【図１５Ｋ】ヒトドナー９８４４８０１１２由来のマウス移植ヒト免疫幹細胞においてＫｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）（ペンブロリズマブ）抗ＰＤ−１抗体単独または抗ＣＤ３３抗体２Ｆ５との併用で処置後の平均腫瘍体積を示す。
【図１５Ｌ】ヒトドナー１６５５４７１１２及び１７５０９１１２由来のマウス移植ヒト免疫幹細胞においてＫｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）（ペンブロリズマブ）抗ＰＤ−１抗体単独または抗ＣＤ３３抗体２Ｆ５との併用で２８日間処置後の平均腫瘍体積を示す。
【図１５Ｍ】Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）（ペンブロリズマブ）抗ＰＤ−１抗体単独または抗ＣＤ３３抗体２Ｆ５との併用で処置されたマウスにおけるインビボでの腫瘍増殖率を示す。＊＊：ｐ＜０．０１、＋：平均、箱ひげ図の中央線：中央値、箱の上下の境界は、第一及び第三四分位数（２５及び７５パーセンタイル）に対応する。
【図１５Ｎ】Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）（ペンブロリズマブ）抗ＰＤ−１抗体単独または抗ＣＤ３３抗体２Ｆ５との併用で処置されたマウス由来の末梢血ヒト（ｈ）ＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄細胞のＣＤ３３の細胞表面レベルのインビボにおける低下を示す。＋：平均、箱ひげ図の中央線：中央値、箱の上下の境界は、第一及び第三四分位数（２５及び７５パーセンタイル）に対応する。
【図１５Ｏ】Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）（ペンブロリズマブ）抗ＰＤ−１抗体単独または抗ＣＤ３３抗体２Ｆ５との併用で処置されたマウス由来の腫瘍浸潤ヒト（ｈ）ＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄細胞のインビボにおける低下を示す。＊＊：ｐ＜０．０１、＊＊＊：ｐ＜０．００１、＋：平均、箱ひげ図の中央線：中央値、箱の上下の境界は、第一及び第三四分位数（２５及び７５パーセンタイル）に対応する。
【図１５Ｐ】Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）（ペンブロリズマブ）抗ＰＤ−１抗体単独または抗ＣＤ３３抗体２Ｆ５との併用で処置されたマウス由来の腫瘍浸潤ヒト（ｈ）ＣＤ４５＋ＣＤ３＋Ｔ細胞のインビボにおける増加を示す。２Ｆ５対アイソタイプ対照に関して、（＊）：ｐ＜０．１０、＊＊：ｐ＜０．０１、ドナーに対して及び動物の殺処分日に対して補正している、＋：平均、箱ひげ図の中央線：中央値、箱の上下の境界は、第一及び第三四分位数（２５及び７５パーセンタイル）に対応する。
【図１５Ｑ】Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）（ペンブロリズマブ）抗ＰＤ−１抗体単独または抗ＣＤ３３抗体２Ｆ５との併用で処置されたマウス由来の末梢血ヒト（ｈ）ＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄細胞のインビボにおける減少を示す。２Ｆ５対アイソタイプ対照に関して、＊＊＊：ｐ＜０．００１、＊＊：ｐ＜０．０１、＊：ｐ＜０．０５、ドナーに対して及び動物の殺処分日に対して補正している、＋：平均、箱ひげ図の中央線：中央値、箱の上下の境界は、第一及び第三四分位数（２５及び７５パーセンタイル）に対応する。
【図１５Ｒ】免疫学的にヒト化したマウスにおける患者由来の癌のマウスモデルについての抗ＣＤ３３抗体処置プロトコルを示す。
【図１５Ｓ】個々のマウスにおいて、抗ＣＤ３３抗体２Ｆ５またはアイソタイプ対照（Ｃｔｌ）抗体での処置後の腫瘍体積を示す。２Ｆ５対アイソタイプ対照に関して、＊:ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１、＊＊＊：ｐ＜０．００１。処理群ごとの平均を示す。エラーバーは標準誤差を示す。
【図１５Ｔ】マウスにおいて、抗ＣＤ３３抗体２Ｆ５またはアイソタイプ対照（Ｃｔｌ）抗体での処理後の平均腫瘍体積を示す。２Ｆ５対アイソタイプ対照に関して、＊:ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１、＊＊＊：ｐ＜０．００１。処理群ごとの平均を示す。エラーバーは標準誤差を示す。
【図１５Ｕ】抗ＣＤ３３抗体２Ｆ５またはアイソタイプ対照（Ｃｔｌ）抗体で処置されたマウスでのインビボにおける腫瘍増殖率を示す。２Ｆ５対アイソタイプ対照に関して、＊＊：ｐ＜０．０１、＊＊＊：ｐ＜０．００１、＋：平均、箱ひげ図の中央線：中央値、箱の上下の境界は、第一及び第三四分位数（２５及び７５パーセンタイル）に対応する。
【図１５Ｖ】アルツハイマー病ＣＤ３３対立遺伝子のｒｓ３８６５４４４  Ａ／Ａ対立遺伝子、Ａ／Ｃ対立遺伝子、及びＣ／Ｃ対立遺伝子のいずれかを含み、抗ＣＤ３３抗体２Ｆ５またはアイソタイプ対照（Ｃｔｌ）抗体で処置されたマウスでのインビボにおける腫瘍増殖率を示す。２Ｆ５対アイソタイプ対照に関して、＊：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１、＊＊＊：ｐ＜０．００１、＋：平均、箱ひげ図の中央線：中央値、箱の上下の境界は、第一及び第三四分位数（２５及び７５パーセンタイル）に対応する。
【図１５Ｗ】アルツハイマー病ｒｓ３８６５４４４  Ｃ／Ｃ対立遺伝子を含むマウスでのインビボにおける腫瘍増殖率を示す。２Ｆ５対アイソタイプ対照に関して、＊：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１、＊＊＊：ｐ＜０．００１、＋：平均、箱ひげ図の中央線：中央値、箱の上下の境界は、第一及び第三四分位数（２５及び７５パーセンタイル）に対応する。
【図１５Ｘ】アルツハイマー病ｒｓ３８６５４４４  Ａ／Ａ対立遺伝子を含むマウスでのインビボにおける腫瘍増殖率を示す。２Ｆ５対アイソタイプ対照に関して、＊：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１、＊＊＊：ｐ＜０．００１、＋：平均、箱ひげ図の中央線：中央値、箱の上下の境界は、第一及び第三四分位数（２５及び７５パーセンタイル）に対応する。
【図１５Ｙ】抗ＣＤ３３抗体２Ｆ５またはアイソタイプ対照（Ｃｔｌ）抗体で処置されたマウス由来の末梢血ヒト（ｈ）ＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄細胞のＣＤ３３の細胞表面レベルのインビボにおける低下を示す。２Ｆ５対アイソタイプ対照に関して、＊＊＊：ｐ＜０．００１、ドナーに対して及び動物の殺処分日に対して補正している。＋：平均、箱ひげ図の中央線：中央値、箱の上下の境界は、第一及び第三四分位数（２５及び７５パーセンタイル）に対応する。
【図１５Ｚ】アルツハイマー病ＣＤ３３対立遺伝子のｒｓ３８６５４４４  Ａ／Ａ対立遺伝子、Ａ／Ｃ対立遺伝子、及びＣ／Ｃ対立遺伝子のいずれかを含み、抗ＣＤ３３抗体２Ｆ５またはアイソタイプ対照（Ｃｔｌ）抗体で処置されたマウス由来の末梢血ヒト（ｈ）ＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄細胞のＣＤ３３の細胞表面レベルのインビボにおける低下を示す。２Ｆ５対アイソタイプ対照に関して、＊＊＊：ｐ＜０．００１、ドナーに対して及び動物の殺処分日に対して補正している。＋：平均、箱ひげ図の中央線：中央値、箱の上下の境界は、第一及び第三四分位数（２５及び７５パーセンタイル）に対応する。
【図１５ＡＡ】アルツハイマー病のｒｓ３８６５４４４  Ｃ／Ｃ対立遺伝子を含み、抗ＣＤ３３抗体２Ｆ５またはアイソタイプ対照（Ｃｔｌ）抗体で処置されたマウス由来の末梢血ヒト（ｈ）ＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄細胞のＣＤ３３の細胞表面レベルのインビボにおける低下を示す。２Ｆ５対アイソタイプ対照に関して、＊＊＊：ｐ＜０．００１、ドナーに対して及び動物の殺処分日に対して補正している。＋：平均、箱ひげ図の中央線：中央値、箱の上下の境界は、第一及び第三四分位数（２５及び７５パーセンタイル）に対応する。
【図１５ＢＢ】アルツハイマー病のｒｓ３８６５４４４  Ａ／Ａ対立遺伝子を含み、抗ＣＤ３３抗体２Ｆ５またはアイソタイプ対照（Ｃｔｌ）抗体で処置されたマウス由来の末梢血ヒト（ｈ）ＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄細胞のＣＤ３３の細胞表面レベルのインビボにおける低下を示す。「ｎ．ｓ．」：統計的に有意でない、＋：平均、箱ひげ図の中央線：中央値、箱の上下の境界は、第一及び第三四分位数（２５及び７５パーセンタイル）に対応する。
【図１５ＣＣ】抗ＣＤ３３抗体２Ｆ５またはアイソタイプ対照（Ｃｔｌ）抗体で処置されたマウス由来の腫瘍浸潤ヒト（ｈ）ＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄細胞のＣＤ３３の細胞表面レベルのインビボにおける低下を示す。２Ｆ５対アイソタイプ対照に関して、＊＊＊：ｐ＜０．００１、ドナーに対して及び動物の殺処分日に対して補正している。＋：平均、箱ひげ図の中央線：中央値、箱の上下の境界は、第一及び第三四分位数（２５及び７５パーセンタイル）に対応する。
【図１５ＤＤ】アルツハイマー病ＣＤ３３対立遺伝子のｒｓ３８６５４４４  Ａ／Ａ対立遺伝子、Ａ／Ｃ対立遺伝子、及びＣ／Ｃ対立遺伝子のいずれかを含み、抗ＣＤ３３抗体２Ｆ５またはアイソタイプ対照（Ｃｔｌ）抗体で処置されたマウス由来の腫瘍浸潤ヒト（ｈ）ＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄細胞のＣＤ３３の細胞表面レベルのインビボにおける低下を示す。２Ｆ５対アイソタイプ対照に関して、＊＊＊：ｐ＜０．００１、ドナーに対して及び動物の殺処分日に対して補正している、＋：平均、箱ひげ図の中央線：中央値、箱の上下の境界は、第一及び第三四分位数（２５及び７５パーセンタイル）に対応する。
【図１５ＥＥ】アルツハイマー病のｒｓ３８６５４４４  Ｃ／Ｃ対立遺伝子を含み、抗ＣＤ３３抗体２Ｆ５またはアイソタイプ対照（Ｃｔｌ）抗体で処置されたマウス由来の腫瘍浸潤ヒト（ｈ）ＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄細胞のＣＤ３３の細胞表面レベルのインビボにおける低下を示す。２Ｆ５対アイソタイプ対照に関して、＊＊＊：ｐ＜０．００１、ドナーに対して及び動物の殺処分日に対して補正している、＋：平均、箱ひげ図の中央線：中央値、箱の上下の境界は、第一及び第三四分位数（２５及び７５パーセンタイル）に対応する。
【図１５ＦＦ】アルツハイマー病のｒｓ３８６５４４４  Ａ／Ａ対立遺伝子を含み、抗ＣＤ３３抗体２Ｆ５またはアイソタイプ対照（Ｃｔｌ）抗体で処置されたマウス由来の腫瘍浸潤ヒト（ｈ）ＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄細胞のＣＤ３３の細胞表面レベルのインビボにおける低下を示す。「ｎ．ｓ．」：統計的に有意でない、＋：平均、箱ひげ図の中央線：中央値、箱の上下の境界は、第一及び第三四分位数（２５及び７５パーセンタイル）に対応する。
【図１５ＧＧ】抗ＣＤ３３抗体２Ｆ５またはアイソタイプ対照（Ｃｔｌ）抗体で処置されたマウス由来の腫瘍浸潤ヒト（ｈ）ＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄細胞のインビボにおける減少を示す。２Ｆ５対アイソタイプ対照に関して、＊＊＊：ｐ＜０．０１、＊＊＊：ｐ＜０．００１、ドナーに対して及び動物の殺処分日に対して補正している。＋：平均、箱ひげ図の中央線：中央値、箱の上下の境界は、第一及び第三四分位数（２５及び７５パーセンタイル）に対応する。
【図１５ＨＨ】アルツハイマー病ＣＤ３３対立遺伝子のｒｓ３８６５４４４  Ａ／Ａ対立遺伝子、Ａ／Ｃ対立遺伝子、及びＣ／Ｃ対立遺伝子のいずれかを含み、抗ＣＤ３３抗体２Ｆ５またはアイソタイプ対照（Ｃｔｌ）抗体で処置されたマウス由来の腫瘍浸潤ヒト（ｈ）ＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄細胞のインビボにおける減少を示す。２Ｆ５対アイソタイプ対照に関して、＊＊＊：ｐ＜０．００１、ドナーに対して及び動物の殺処分日に対して補正している、＋：平均、箱ひげ図の中央線：中央値、箱の上下の境界は、第一及び第三四分位数（２５及び７５パーセンタイル）に対応する。
【図１５ＩＩ】アルツハイマー病のｒｓ３８６５４４４  Ｃ／Ｃ対立遺伝子を含み、抗ＣＤ３３抗体２Ｆ５またはアイソタイプ対照（Ｃｔｌ）抗体で処置されたマウス由来の腫瘍浸潤ヒト（ｈ）ＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄細胞のインビボにおける減少を示す。２Ｆ５対アイソタイプ対照に関して、＊＊：ｐ＜０．０１、ドナーに対して及び動物の殺処分日に対して補正している、＋：平均、箱ひげ図の中央線：中央値、箱の上下の境界は、第一及び第三四分位数（２５及び７５パーセンタイル）に対応する。
【図１５ＪＪ】アルツハイマー病のｒｓ３８６５４４４  Ａ／Ａ対立遺伝子を含み、抗ＣＤ３３抗体２Ｆ５またはアイソタイプ対照（Ｃｔｌ）抗体で処置されたマウス由来の腫瘍浸潤ヒト（ｈ）ＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄細胞のインビボにおける減少を示す。＊：ｐ＜０．０５、ドナーに対して及び動物の殺処分日に対して補正している、＋：平均、箱ひげ図の中央線：中央値、箱の上下の境界は、第一及び第三四分位数（２５及び７５パーセンタイル）に対応する。
【図１５ＫＫ】抗ＣＤ３３抗体２Ｆ５またはアイソタイプ対照（Ｃｔｌ）抗体で処置されたマウス由来の腫瘍浸潤ヒト（ｈ）ＣＤ４５＋ＣＤ３＋Ｔ細胞のインビボにおける増加を示す。２Ｆ５対アイソタイプ対照に関して、（＊）：ｐ＜０．１０、＊＊：ｐ＜０．０１、ドナーに対して及び動物の殺処分日に対して補正している、＋：平均、箱ひげ図の中央線：中央値、箱の上下の境界は、第一及び第三四分位数（２５及び７５パーセンタイル）に対応する。
【図１５ＬＬ】アルツハイマー病ＣＤ３３対立遺伝子のｒｓ３８６５４４４  Ａ／Ａ対立遺伝子、Ａ／Ｃ対立遺伝子、及びＣ／Ｃ対立遺伝子のいずれかを含み、抗ＣＤ３３抗体２Ｆ５またはアイソタイプ対照（Ｃｔｌ）抗体で処置されたマウス由来の腫瘍浸潤ヒト（ｈ）ＣＤ４５＋ＣＤ３＋Ｔ細胞のインビボにおける増加を示す。２Ｆ５対アイソタイプ対照に関して、（＊）：ｐ＜０．１０、ドナーに対して及び動物の殺処分日に対して補正している、＋：平均、箱ひげ図の中央線：中央値、箱の上下の境界は、第一及び第三四分位数（２５及び７５パーセンタイル）に対応する。ｒｓ３８６５４４４  Ａ／Ａ対立遺伝子について、ｐ＝０．００４２及びｒｓ３８６５４４４  Ｃ／Ｃ対立遺伝子について、ｐ＝０．５９。
【図１５ＭＭ】アルツハイマー病のｒｓ３８６５４４４  Ｃ／Ｃ対立遺伝子を含み、抗ＣＤ３３抗体２Ｆ５またはアイソタイプ対照（Ｃｔｌ）抗体で処置されたマウス由来の腫瘍浸潤ヒト（ｈ）ＣＤ４５＋ＣＤ３＋Ｔ細胞のインビボにおける増加を示す。「ｎ．ｓ．」：統計的に有意でない、＋：平均、箱ひげ図の中央線：中央値、箱の上下の境界は、第一及び第三四分位数（２５及び７５パーセンタイル）に対応する。
【図１５ＮＮ】アルツハイマー病のｒｓ３８６５４４４  Ａ／Ａ対立遺伝子を含み、抗ＣＤ３３抗体２Ｆ５またはアイソタイプ対照（Ｃｔｌ）抗体で処置されたマウス由来の腫瘍浸潤ヒト（ｈ）ＣＤ４５＋ＣＤ３＋Ｔ細胞のインビボにおける増加を示す。２Ｆ５対アイソタイプ対照に関して、＊＊：ｐ＜０．００１、ドナーに対して及び動物の殺処分日に対して補正している、＋：平均、箱ひげ図の中央線：中央値、箱の上下の境界は、第一及び第三四分位数（２５及び７５パーセンタイル）に対応する。
【図１５ＯＯ】抗ＣＤ３３抗体２Ｆ５またはアイソタイプ対照（Ｃｔｌ）抗体で処置されたマウス由来の末梢血ヒト（ｈ）ＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄細胞のインビボにおける減少を示す。２Ｆ５対アイソタイプ対照に関して、＊：ｐ＜０．０５、ドナーに対して及び動物の殺処分日に対して補正している。＋：平均、箱ひげ図の中央線：中央値、箱の上下の境界は、第一及び第三四分位数（２５及び７５パーセンタイル）に対応する。
【図１５ＰＰ】アルツハイマー病ＣＤ３３対立遺伝子のｒｓ３８６５４４４  Ａ／Ａ対立遺伝子、Ａ／Ｃ対立遺伝子、及びＣ／Ｃ対立遺伝子のいずれかを含み、抗ＣＤ３３抗体２Ｆ５またはアイソタイプ対照（Ｃｔｌ）抗体で処置されたマウス由来の末梢血ヒト（ｈ）ＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄細胞のインビボにおける減少を示す。２Ｆ５対アイソタイプ対照に関して、＊：ｐ＜０．０５、ドナーに対して及び動物の殺処分日に対して補正している。＋：平均、箱ひげ図の中央線：中央値、箱の上下の境界は、第一及び第三四分位数（２５及び７５パーセンタイル）に対応する。
【図１５ＱＱ】アルツハイマー病のｒｓ３８６５４４４  Ｃ／Ｃ対立遺伝子を含み、抗ＣＤ３３抗体２Ｆ５またはアイソタイプ対照（Ｃｔｌ）抗体で処置されたマウス由来の末梢血ヒト（ｈ）ＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄細胞のインビボにおける減少を示す。２Ｆ５対アイソタイプ対照に関して、＊：ｐ＜０．０５、ドナーに対して及び動物の殺処分日に対して補正している。＋：平均、箱ひげ図の中央線：中央値、箱の上下の境界は、第一及び第三四分位数（２５及び７５パーセンタイル）に対応する。
【図１５ＲＲ】アルツハイマー病のｒｓ３８６５４４４  Ａ／Ａ対立遺伝子を含み、抗ＣＤ３３抗体２Ｆ５またはアイソタイプ対照（Ｃｔｌ）抗体で処置されたマウス由来の末梢血ヒト（ｈ）ＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄細胞のインビボにおける減少を示す。「ｎ．ｓ．」：統計的に有意でない、＋：平均、箱ひげ図の中央線：中央値、箱の上下の境界は、第一及び第三四分位数（２５及び７５パーセンタイル）に対応する。
【図１６Ａ】図１６Ａ〜１６Ｊは、様々な一次免疫細胞でのＣＤ３３の細胞表面レベルの低下を示す結果を示す。図１６Ａ〜１６Ｃは、抗ＣＤ３３抗体で処理されたヒト初代ミクログリアでのＣＤ３３の細胞表面レベルの低下を示す結果を示す。図１６Ａは、抗体なしの対照（ｍＡｂなし）及びアイソタイプ対照抗体（アイソタイプ）を示す。
【図１６Ｂ】図１６Ｂは、抗ＣＤ３３抗体１Ａ８（１Ａ８．２）、２Ｅ１２、及び２Ｆ５を示す。
【図１６Ｃ】図１６Ｃは、抗ＣＤ３３抗体６Ａ３及び６Ｃ７（６Ｃ７．２）を示す。
【図１６Ｄ】図１６Ｄは、抗ＣＤ３３抗体２Ｅ１２、６Ａ３、及び６Ｃ７で処理されたヒト初代単球でのＣＤ３３の細胞表面レベルにおける用量依存的低下を示す結果を示す。
【図１６Ｅ】図１６Ｅは、抗ＣＤ３３抗体２Ｅ１２、６Ａ３、及び６Ｃ７で処理されたヒト初代樹状細胞でのＣＤ３３の細胞表面レベルにおける用量依存的低下を示す結果を示す。
【図１６Ｆ】図１６Ｆ〜１６Ｈは、脱グリコシル化抗ＣＤ３３抗体１Ａ８（１Ａ８．２）、２Ｅ１２、６Ａ３、及び６Ｃ７（６Ｃ７．２）で処理されたヒト初代樹状細胞でのＣＤ３３の細胞表面レベルにおける低下を示す結果を示す。図１６Ｆは、患者ドナー２５８から採取されたヒト初代樹状細胞でのＣＤ３３の細胞表面レベルにおける低下を示す。
【図１６Ｇ】図１６Ｇは、患者ドナー２５９から採取されたヒト初代樹状細胞でのＣＤ３３の細胞表面レベルにおける低下を示す。
【図１６Ｈ】図１６Ｈは、抗ＣＤ３３抗体で処理されたドナー２５８及び２５９由来の細胞間での細胞表面低下（下方制御）の変化率（デルタ％）を示す。
【図１６Ｉ】図１６Ｉ及び図１６Ｊは、ＮＯＤ−ｓｃｉｄ  ＩＬ２Ｒｇｎｕｌｌ−３／ＧＭ／ＳＦ、ＮＳＧ−ＳＧＭ３、ヒトＩＬ３を発現するトリプルトランスジェニックＮＳＧ−ＳＧＭ３（ＮＳＧＳ）マウス、抗ＣＤ３３抗体２Ｆ５またはアイソタイプ対照（ｍＩｇＧ１）で処置されたＧＭ−ＣＳＦ及びＳＣＦ（ＮＳＧＳ）マウスから単離されたヒト単球でのＣＤ３３発現ならびにＳｉｇｌｅｃ−９発現のＦＡＣＳ分析を示す。図１６Ｉは、ＣＤ３３の細胞表面発現を低減するためのＣＤ３３抗体２Ｆ５、６Ｃ７、ゲムツズマブ、及びリンツズマブの半数濃度（ＥＣ５０）を示す１２点滴定曲線を示す。
【図１６Ｊ】図１６Ｊは、ＣＤ１１ｃの細胞表面発現を低減するためのＣＤ３３抗体２Ｆ５、６Ｃ７、及びゲムツズマブの半数濃度（ＥＣ５０）を示す１２点滴定曲線を示す。
【図１６Ｋ】図１６Ｋは、インビボでの抗体処置後のＣＤ３３の細胞表面レベルにおける低下を示す。
【図１６Ｌ】図１６Ｌは、無関係の受容体Ｓｉｇｌｅｃ−９の発現を示す。Ｓｉｇｌｅｃ−９は対照として用いた。Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞表面レベルは、インビボでの抗体処置後変化しなかった。
【図１６Ｍ】図１６Ｍは、４０ｍｇ／ｋｇ、８．０ｍｇ／ｋｇ、１．６ｍｇ／ｋｇ、または０．３ｍｇ／ｋｇのＣＤ３３抗体２Ｆ５でのインビボ処置後のＣＤ３３の細胞表面レベルにおけるインビボでの低下を示す。
【図１６Ｎ】図１６Ｎは、４０ｍｇ／ｋｇ、８．０ｍｇ／ｋｇ、１．６ｍｇ／ｋｇ、または０．３ｍｇ／ｋｇのＣＤ３３抗体２Ｆ５でのインビボ処置後の対照受容体（Ｓｉｇｌｅｃ−９）のインビボでの細胞表面レベルを示す。
【図１７Ａ】異なる抗体濃度でのヒト初代単球に対するＣＤ３３抗体の結合を示す。この図では、各々示された濃度に対して、以下の抗体が左から右に並べられている：単球アイソタイプ対照抗体（ｍＩｇＧ１）、抗ＣＤ３３抗体２Ｆ５（Ｃ−２Ｆ５）、抗ＣＤ３３抗体２Ｅ１２（Ｃ−２Ｅ１２）、抗ＣＤ３３抗体６Ａ３（Ｃ−６Ａ３．１）、抗ＣＤ３３抗体６Ｃ７（Ｃ−６Ｃ７．２）、ヒトアイソタイプ対照抗体（ヒトアイソタイプ）、抗ＣＤ３３抗体Ｃ−６４、抗ＣＤ３３抗体ゲムツズマブ、及び抗ＣＤ３３抗体リンツズマブ。
【図１７Ｂ】異なる抗体濃度のＣＤ３３抗体で処理後のヒト初代単球でのＣＤ３３の細胞表面レベルを示す。
【図１７Ｃ】異なる抗体濃度のＣＤ３３抗体で処理後のヒト初代単球でのＣＤ１４の細胞表面レベルを示す。
【図１８Ａ】野生型及びＣＤ３３ノックアウトＴＨＰ−１細胞でのＣＤ３３の発現レベルを示す。
【図１８Ｂ】野生型及びＣＤ３３ノックアウトＴＨＰ−１細胞でのＣＤ１４の発現レベルを示す。
【図１８Ｃ】異なる濃度のＬＰＳで、またはＩＬ−６、ＩＬ−８、及びＧＭ−ＣＳＦで処理された野生型及びＣＤ３３ノックアウトＴＨＰ−１細胞におけるサイトカインのレベルを示す。
【図１８Ｄ】異なる濃度のＬＰＳで、またはＩＬ−６、ＩＬ−８、及びＧＭ−ＣＳＦで処理された野生型及びＣＤ３３ノックアウトＴＨＰ−１細胞における活性化マーカーのレベルを示す。
【図１９Ａ】抗ＣＤ３３抗体２Ｆ５で処理された骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）におけるＣＤ３３及びＰＤ−Ｌ１の発現レベルを示す。この図では、「ＭＤＳＣ未処理」は、抗体で処理されていない細胞を指し、「ＭＤＳＣ＋アイソタイプ」は、アイソタイプ対照抗体で処理された細胞を指し、「ＭＤＳＣ＋Ｃ−２Ｆ５」は、抗ＣＤ３３抗体２Ｆ５で処理された細胞を指す。
【図１９Ｂ】アイソタイプ対照抗体で処理された骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）及び抗ＣＤ３３抗体２Ｆ５で処理された細胞間でのＣＤ１６３、ＣＤ３３、ＣＤ２０６、ＰＤ−Ｌ２、ＣＤ２００Ｒ、Ｂ７  Ｈ３、及びＰＤ−Ｌ１の発現の変化の定量化を示す。
【図１９Ｃ】未処理のままであったか、抗ＣＤ３３抗体２Ｆ５、マウスアイソタイプ対照抗体（ｍＩｇＧ１）、または抗ＰＤ−Ｌ１抗体（ＰＤＬ１）で処理された骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）により誘導されたＣＤ３＋Ｔ細胞増殖及びＣＤ８＋Ｔ細胞増殖の割合（％）を示す。このＭＤＣＳは、子宮頸癌細胞順化培地でＴ細胞とともに共培養した。＊＊：ｐ＜０．０１。
【図１９Ｄ】未処理のままであったか、抗ＣＤ３３抗体２Ｆ５、マウスアイソタイプ対照抗体（ｍＩｇＧ１）、または抗ＰＤ−Ｌ１抗体（ＰＤＬ１）で処理された骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）により誘導されたＣＤ３＋Ｔ細胞増殖及びＣＤ８＋Ｔ細胞増殖の割合（％）を示す。＊＊：ｐ＜０．０１。このＭＤＣＳは、膠芽腫細胞順化培地でＴ細胞とともに共培養した。
【図２０】抗ＣＤ３３抗体が非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞を選択的に殺傷することを示す結果を示す。上段：細胞形態学による生／死ゲート：Ｃ−６Ｃ７での死細胞ゲートの増加。中段：染料を用いた生／死細胞におけるゲーティング：染料高陽性細胞は死んでおり、染料低細胞は生きている。６Ｃ７処理細胞において、死細胞が３０％増加。ヒストグラム：ヒストグラム形式で生／死細胞染色を示し、２Ｆ５ではピークなし、他のｍＡｂで死細胞のピーク。
【発明を実施するための形態】
【００４２】
一般的方法
本明細書に記載または参照される技術及び手順は、当業者によって従来の方法を用いて一般によく理解され、通常採用される、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  ３ｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ（２００１）Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ  ａｌ．ｅｄｓ．，（２００３））、シリーズ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）：  ＰＣＲ  ２：  Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｍ．Ｊ．ＭａｃＰｈｅｒｓｏｎ，Ｂ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ  ａｎｄ  Ｇ．Ｒ．Ｔａｙｌｏｒ  ｅｄｓ．（１９９５）），Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，ｅｄｓ．（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，及びＡｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，ｅｄ．（１９８７））、Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ，ｅｄ．，１９８４）、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｎｏｔｅｂｏｏｋ（Ｊ．Ｅ．Ｃｅｌｌｉｓ，ｅｄ．，１９９８）Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ），ｅｄ．，１９８７）、Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｊ．Ｐ．Ｍａｔｈｅｒ  ａｎｄ  Ｐ．Ｅ．Ｒｏｂｅｒｔｓ，１９９８）Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ：  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ（Ａ．Ｄｏｙｌｅ，Ｊ．Ｂ．Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ，ａｎｄ  Ｄ．Ｇ．Ｎｅｗｅｌｌ，ｅｄｓ．，１９９３−８）Ｊ．Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｄ．Ｍ．Ｗｅｉｒ  ａｎｄ  Ｃ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，ｅｄｓ．）、Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ（Ｊ．Ｍ．Ｍｉｌｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ，ｅｄｓ．，１９８７）、ＰＣＲ：  Ｔｈｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ，（Ｍｕｌｌｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９４）、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９１）、Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，１９９９）、Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ（Ｃ．Ａ．Ｊａｎｅｗａｙ  ａｎｄ  Ｐ．Ｔｒａｖｅｒｓ，１９９７）、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｐ．Ｆｉｎｃｈ，１９９７）、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｄ．Ｃａｔｔｙ．，ｅｄ．，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，１９８８−１９８９）、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒ��ａｃｈ（Ｐ．Ｓｈｅｐｈｅｒｄ  ａｎｄ  Ｃ．Ｄｅａｎ，ｅｄｓ．，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，２０００）、Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｅ．Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｄ．Ｌａｎｅ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，１９９９）、Ｔｈｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｍ．Ｚａｎｅｔｔｉ  ａｎｄ  Ｊ．Ｄ．Ｃａｐｒａ，ｅｄｓ．，Ｈａｒｗｏｏｄ  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，１９９５）、ならびにＣａｎｃｅｒ：  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ（Ｖ．Ｔ．ＤｅＶｉｔａ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｊ．Ｂ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９３）に記載の広く利用されている方法などである。
【００４３】
定義
本明細書で使用される、「予防」という用語には、個体において、特定の疾患、障害、または状態の発症または再発に対する予防を提供することが含まれる。個体は、特定の疾患、障害、もしくは状態に罹りやすい素因を有し、その影響を受けやすいか、または、そのような疾患、障害、もしくは状態の発病のリスクがあり得るが、まだ該疾患、障害、もしくは状態と診断されていない。
【００４４】
本明細書で使用される、特定の疾患、障害、または状態の発症の「リスクがある」個体は、検出可能な疾患または疾患の症状を有していてもいなくてもよく、検出可能な疾患または疾患の症状を本明細書に記載の治療方法の前に示していても示していなくてもよい。「リスクがある」とは、個体が、当技術分野で知られているように、特定の疾患、障害、または状態の発症と相関する測定可能なパラメータである１つ以上のリスク因子を有するということを意味する。これらのリスク因子を１つ以上有する個体は、これらのリスク因子を１つ以上有さない個体より、特定の疾患、障害、または状態の発症の確率が高い。
【００４５】
本明細書で使用される、「治療」という用語とは、臨床病理の経過中に、治療される個体の自然経過を修正するように設計された臨床的介入を指す。治療の望ましい効果としては、特定の疾患、障害、または状態の進行速度の低減、病的状態の改善または緩和、及び寛解または予後の改善が挙げられる。例えば、特定の疾患、障害、または状態に伴う１つ以上の症状が軽減または除去される場合に個体は順調に「治療される」。
【００４６】
「有効量」とは、所望の治療効果または予防効果を達成するために必要な用量及び期間で少なくとも有効な量を指す。有効量は、１回以上の投与でもたらすことができる。本明細書において有効量は、当該個体の病状、年齢、性別、及び体重などの要因、ならびに該個体において当該治療が所望の反応を誘発する能力に応じて変化し得る。有効量はまた、当該治療の有毒または有害作用を、治療に有益な効果が上回るものである。予防的使用については、有益な、または所望の結果としては、当該疾患、その合併症、及び該疾患の発症の過程で見られる中間の病理学的表現型の生化学的、組織学的、及び／または行動上の症状を含めた該疾患のリスクの除去もしくは低減、重症度の軽減、または発症の遅延などの結果が挙げられる。治療的使用については、有益な、または所望の結果としては、臨床結果、例えば、当該疾患に起因する１つ以上の症状の軽減、当該疾患の罹患者の生活の質の向上、当該疾患の治療に必要な他の薬の投薬量の低減、例えば標的化を介した別の薬の効果の増強、当該疾患の進行の遅延、及び／または生存の延長が挙げられる。薬物、化合物、または医薬組成物の有効量は、直接もしくは間接的に予防的または治療的処置を達成するのに十分な量である。臨床状況で理解されるように、薬物、化合物、または医薬組成物の有効量は、別の薬物、化合物、または医薬組成物と併せて達成されてもされなくてもよい。したがって、「有効量」は、１つ以上の治療薬の投与に照らして検討され得るとともに、単一の薬剤は、１つ以上の他の薬剤と併せて所望の結果が達成され得るまたは達成される場合に、有効量で与えられると見なされ得る。
【００４７】
「治療有効量」は、特定の疾患、障害、または状態の測定可能な改善をもたらすのに必要な少なくとも最低濃度である。本明細書において治療有効量は、当該患者の病状、年齢、性別、及び体重などの要因、ならびに該個体において該ＣＤ３３タンパク質アンタゴニストが所望の反応を誘発する能力に応じて変化し得る。治療有効量はまた、該ＣＤ３３タンパク質アンタゴニストの有毒または有害作用を、治療に有益な効果が上回るものである。
【００４８】
本明細書で使用される、別の化合物または組成物と「併せた」投与には、同時投与及び／または異なる時間での投与が含まれる。併せた投与はまた、同時処方としての投与または別々の組成物としての投与を包含し、異なる投薬回数や投与間隔、及び同じ投与経路や異なる投与経路の使用を含む。
【００４９】
治療、予防、またはリスクの低減の目的のための「個体」とは、ヒト、家畜及び農場の動物、ならびに動物園の動物、競技の動物、または愛玩動物、例えば、イヌ、ウマ、ウサギ、ウシ、ブタ、ハムスター、スナネズミ、マウス、フェレット、ラット、ネコなどを含めた哺乳動物として分類される任意の動物を指す。好ましくは、該個体はヒトである。
【００５０】
「免疫グロブリン」（Ｉｇ）という用語は、本明細書では「抗体」と互換的に使用される。「抗体」という用語は、本明細書では、最も広い意味で使用され、具体的にはモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、少なくとも２つの無傷の抗体から形成される多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び所望の生物活性を示すだけの抗体断片を含める。
【００５１】
基本的な４本鎖の抗体単位は、２本の同一の軽（Ｌ）鎖及び２本の同一の重（Ｈ）鎖からなるヘテロテトラマーの糖タンパク質である。ＶＨとＶＬが一緒に対を形成することで、単一の抗原結合部位が形成される。異なるクラスの抗体の構造及び特性については、例えば、Ｂａｓｉｃ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，８ｔｈ  Ｅｄ．，Ｄａｎｉｅｌ  Ｐ．Ｓｔｉｔｅｓ，Ａｂｂａ  Ｉ．Ｔｅｒｒ  ａｎｄ  Ｔｒｉｓｔｒａｍ  Ｇ．Ｐａｒｓｌｏｗ（ｅｄｓ．），Ａｐｐｌｅｔｏｎ  ＆  Ｌａｎｇｅ，Ｎｏｒｗａｌｋ，ＣＴ，１９９４，ｐａｇｅ  ７１及びＣｈａｐｔｅｒ  ６を参照されたい。
【００５２】
任意の脊椎動物種由来のＬ鎖は、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（「κ」）及びラムダ（「λ」）と呼ばれる２つの明らかに異なる種類のうちの１つに割り当てることができる。それらの重鎖定常ドメイン（ＣＨ）のアミノ酸配列に応じて、免疫グロブリンは異なるクラスまたはアイソタイプに割り当てることができる。５つのクラスの免疫グロブリン、すなわち、それぞれアルファ（「α」）、デルタ（「δ」）、イプシロン（「ε」）、ガンマ（「γ」）、及びミュー（「μ」）と指定された重鎖を有するＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭがある。該γ及びαクラスは、該ＣＨ配列及び機能における比較的小さな差異を基にさらにサブクラス（アイソタイプ）に分けられる。例えば、ヒトは以下のサブクラスを発現する：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２。該サブユニット構造及び異なるクラスの免疫グロブリンの三次元形状は周知であり、例えば、Ａｂｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈ  ｅｄ．（Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ  Ｃｏ．，２０００）に一般的に記載されている。
【００５３】
「自然抗体」は、通常、２本の同一の軽（Ｌ）鎖及び２本の同一の重（Ｈ）鎖からなる約１５０,０００ダルトンのヘテロテトラマーの糖タンパク質である。各軽鎖は、１つの共有ジスルフィド結合によって重鎖と連結されているが、ジスルフィド結合の数は、異なる免疫グロブリンのアイソタイプの重鎖により異なる。各重鎖及び軽鎖はまた、規則的間隔の鎖内ジスルフィド架橋も有している。各重鎖は、一端に可変ドメイン（ＶＨ）を有し、複数の定常ドメインがそれに続く。各軽鎖は、一端に可変ドメイン（ＶＬ）、その他端に定常ドメインを有し、軽鎖の定常ドメインは、重鎖の第一の定常ドメインと揃えられ、軽鎖可変ドメインは、重鎖の可変ドメインと揃えられている。特定のアミノ酸残基が、軽鎖及び重鎖の可変ドメイン間の界面を形成すると考えられている。
【００５４】
「単離」抗体、例えば、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、その産生環境（例えば、天然または組み換え）の成分から確認、分離、及び／または回収されたものである。好ましくは、単離ポリペプチドは、その産生環境由来の全ての他の混入物質成分を伴わない。その産生環境由来の混入物質成分、例えば、組み換えトランスフェクト細胞に起因するものは、通常、抗体としての研究、診断、または治療的使用を妨げる物質であり、酵素、ホルモン、及び他のタンパク性または非タンパク性の溶質を含み得る。好ましい実施形態において、該ポリペプチドは、（１）例えば、ローリー法で測定される抗体の９５重量％超まで、及びいくつかの実施形態では、９９重量％超まで、（２）スピニングカップシークエネーターの使用による少なくとも１５残基のＮ末端または内部アミノ酸配列を得るのに十分な程度まで、または（３）クマシー・ブルー、もしくは、好ましくは銀染色を用いた非還元または還元条件下でのＳＤＳ−ＰＡＧＥによる均質性まで精製される。単離抗体には、組み換えＴ細胞内のインサイチュの抗体が含まれるが、これは、該抗体の自然環境の少なくとも１つの成分が存在しないためである。通常、しかしながら、単離ポリペプチドまたは抗体は、少なくとも１つの精製段階によって調製される。
【００５５】
本開示の抗ＣＤ３３抗体等の抗体の「可変領域」または「可変ドメイン」とは、該抗体の重鎖または軽鎖のアミノ末端ドメインを指す。該重鎖及び軽鎖の可変ドメインは、それぞれ「ＶＨ」及び「ＶＬ」と呼ばれる場合がある。これらのドメインは、通常、（同じクラスの他の抗体と比較して）該抗体の最も変化しやすい部分であり、抗原結合部位を含む。
【００５６】
「可変」という用語は、該可変ドメインのある特定のセグメントが、抗体、例えば、本開示の抗ＣＤ３３抗体間で広範囲にて配列が異なるという事実を指す。該Ｖドメインは、抗原結合を媒介し、特定の抗体のその特定の抗原に対する特異性を決める。しかしながら、該可変性は、該可変ドメインの全範囲にわたって均一に分布しているわけではない。むしろ、これは該軽鎖及び重鎖可変ドメインの両方で超可変領域（ＨＶＲ）と呼ばれる３つのセグメントに集中している。可変ドメインのより高度に保存された部分は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。天然の重鎖及び軽鎖の可変ドメインは各々、４つのＦＲ領域を含み、主としてベータシート構造をとり、３つのＨＶＲで接続され、これらが該ベータシート構造を接続する、及びいくつかの場合にはその一部を形成するループを形成する。各鎖のＨＶＲは、該ＦＲ領域によってごく接近して、かつ他の鎖由来のＨＶＲと結合しており、抗体の抗原結合部位の形成に寄与している（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）参照）。定常ドメインは、抗原に対する抗体の結合に直接関与しないが、様々なエフェクター機能、例えば、該抗体の抗体依存性細胞傷害性における関与を示す。
【００５７】
本明細書で使用される、「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均質な抗体の集団から得られる本開示の抗ＣＤ３３抗体などの抗体を指し、言い換えれば、該集団を構成する個々の抗体は、少量で存在する場合がある、起こり得る自然に生じる突然変異及び／または翻訳後修飾（例えば、異性化、アミド化）を除いて同じである。モノクローナル抗体は高度に特異的であり、１つ以上の抗原部位に対して向けられる。いくつかの実施形態では、本開示のモノクローナル抗体は、二重特異性抗体であり得る。異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を通常含むポリクローナル抗体調製物と対照的に、各モノクローナル抗体は、１つ以上の抗原部位上の単一の決定基に対するものである。「モノクローナル」という修飾語は、実質的に均質な抗体の集団から得られる抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による該抗体の産生を必要とするとは解釈されない。例えば、本開示に従って使用されるモノクローナル抗体は、例えば、ファージ提示技術（例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８（１９９１）、Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９２）、Ｓｉｄｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：  ２９９−３１０（２００４）、Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３−１０９３（２００４）、Ｆｅｌｌｏｕｓｅ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０１（３４）：１２４６７−４７２（２００４）、及びＬｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２８４（１−２）：１１９−１３２（２００４）参照、ハイブリドーマ法（例えば、Ｋｏｈｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ．，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５−９７（１９７５）、Ｈｏｎｇｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ，１４（３）：２５３−２６０（１９９５），Ｈａｒｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，２ｄ  ｅｄ．１９８８）、Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，ｉｎ：  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｔ−Ｃｅｌｌ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ５６３−６８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８１））、組み換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号参照）、ならびに、ヒト免疫グロブリン遺伝子座もしくはヒト免疫グロブリン配列をコードする遺伝子の一部または全部を有する動物においてヒトまたはヒト様抗体を産生する技術（例えば、ＷＯ  １９９８／２４８９３、ＷＯ  １９９６／３４０９６、ＷＯ  １９９６／３３７３５、ＷＯ  １９９１／１０７４１、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：２５５１（１９９３）、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３６２：２５５−２５８（１９９３）、Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｙｅａｒ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．７：３３（１９９３）、米国特許第５，５４５，８０７号、第５，５４５，８０６号、第５，５６９，８２５号、第５，６２５，１２６号、第５，６３３，４２５号、及び第５，６６１，０１６号、Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：７７９−７８３（１９９２）、Ｌｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：８５６−８５９（１９９４）、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：８１２−８１３（１９９４）、Ｆｉｓｈｗｉｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：８４５−８５１（１９９６）、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：８２６（１９９６）、ならびにＬｏｎｂｅｒｇ  ａｎｄ  Ｈｕｓｚａｒ，Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５−９３（１９９５）参照）を含めた様々な技術によって製造され得る。
【００５８】
「完全長抗体」、「無傷の抗体」、または「全抗体」という用語は、互換的に使用され、抗体断片の対語として、その実質的に無傷の形態での抗体、例えば、本開示の抗ＣＤ３３抗体を指す。具体的には、全抗体には、Ｆｃ領域を含む重鎖及び軽鎖を備えたものが含まれる。当該定常ドメインは、天然配列の定常ドメイン（例えば、ヒトの天然配列の定常ドメイン）でも、そのアミノ酸配列バリアントでもよい。いくつかの場合では、該無傷の抗体は、１つ以上のエフェクター機能を有していてもよい。
【００５９】
「抗体断片」は、無傷の抗体の部分、好ましくは、該無傷の抗体の抗原結合及び／または可変領域を含む。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片、二重特異性抗体（ｄｉａｂｏｄｙ）、直線状抗体（米国特許第５，６４１，８７０号、実施例２、Ｚａｐａｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．８（１０）：１０５７−１０６２（１９９５）参照）、一本鎖抗体分子、及び抗体断片から形成される多重特異性抗体が挙げられる。
【００６０】
本開示の抗ＣＤ３３抗体などの抗体のパパイン分解は、「Ｆａｂ」断片と呼ばれる２つの同一の抗原結合断片、及び残りの、容易に結晶化する能力を反映した記号である「Ｆｃ」断片を産生する。Ｆａｂ断片は、全Ｌ鎖とともに、Ｈ鎖の可変領域ドメイン（ＶＨ）及び１本の重鎖の第一の定常ドメイン（ＣＨ１）からなる。各Ｆａｂ断片は、抗原結合に関しては一価であり、言い換えれば、それは単一の抗原結合部位を有する。抗体のペプシン処理によって、異なる抗原結合活性を有し、依然として抗原を架橋可能な２つのジスルフィド結合されたＦａｂ断片におおむね相当する単一の大きなＦ（ａｂ’）２断片が得られる。Ｆａｂ’断片は、ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端に、当該抗体のヒンジ領域由来の１つ以上のシステインを含めたいくつかのさらなる残基を有することによってＦａｂ断片とは異なる。Ｆａｂ’−ＳＨは、本明細書では、該定常ドメインのシステイン残基（複数可）が遊離のチオール基を有するＦａｂ’の記号である。Ｆ（ａｂ’）２抗体断片は、もともと、それらの間にヒンジシステインを有するＦａｂ’断片の対として産生された。抗体断片のその他の化学的結合も知られている。
【００６１】
Ｆｃ断片は、ジスルフィド結合で結合している両Ｈ鎖のカルボキシ末端部分を含む。抗体のエフェクター機能は、Ｆｃ領域の配列によって決まり、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）によって認識もされる該領域は、特定の種類の細胞で見られる。
【００６２】
「Ｆｖ」は、完全な抗原認識及び結合部位を含む最小の抗体断片である。この断片は、１つの重鎖可変領域ドメイン及び１つの軽鎖可変領域ドメインの密接な非共有結合性会合のダイマーからなる。これら２つのドメインの折り畳みが６つの超可変ループ（Ｈ及びＬ鎖から各々３ループ）を生じ、これらが抗原結合用のアミノ酸残基を与え、当該抗体に抗原結合特異性を付与する。しかしながら、全結合部位より親和性は低いものの、単一の可変ドメイン（または、抗原特異的な３つのＨＶＲのみ含むＦｖの半分）でも、抗原を認識し、結合する能力を有する。
【００６３】
「ｓＦｖ」または「ｓｃＦｖ」とも略される「一本鎖Ｆｖ」は、１本のポリペプチド鎖に接続されたＶＨ及びＶＬ抗体ドメインを含む抗体断片である。好ましくは、該ｓＦｖポリペプチドはさらに、該ｓＦｖが、抗原結合にとって望ましい構造を形成できるようにする、ＶＨ及びＶＬドメイン間のポリペプチドリンカーを含む。ｓＦｖの総説については、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ  ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ  ａｎｄ  Ｍｏｏｒｅ  ｅｄｓ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９−３１５（１９９４）を参照されたい。
【００６４】
抗体、例えば、本開示の抗ＣＤ３３抗体の「機能的断片」は、通常、当該無傷の抗体の抗原結合もしくは可変領域、または、ＦｃＲ結合能を保持する、もしくは修飾されたＦｃＲ結合能を有する抗体のＦ領域を含めた無傷の抗体の部分を含む。抗体断片の例としては、直線状抗体、一本鎖抗体分子、及び抗体フラグメントから形成される多重特異性抗体が挙げられる。
【００６５】
「二重特異性抗体（ｄｉａｂｏｄｙ）」という用語は、ＶＨ及びＶＬドメイン間で短いリンカー（約５〜１０）残基）により、該Ｖドメインの鎖内ではなく鎖間の対を達成し、それによって二価の断片、すなわち、２つの抗原結合部位を有する断片ができるように、ｓＦｖ断片（前の段落参照）を構築することによって調製される小さい抗体断片を指す。二重特異性であるｄｉａｂｏｄｙは、２つの「交差する」ｓＦｖ断片のヘテロダイマーであって、該２つの抗体のＶＨ及びＶＬドメインは、異なるポリペプチド鎖上に存在する。ｄｉａｂｏｄｙは、例えば、ＥＰ  ４０４，０９７、ＷＯ  ９３／１１１６１、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４−４８（１９９３）に詳細に記載されている。
【００６６】
本明細書で使用される、「キメラ抗体」とは、本開示の抗ＣＤ３３抗体などの抗体（免疫グロブリン）であって、当該重鎖及び／または軽鎖の一部が、特定の種由来の、または特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一または相同である一方、該鎖（複数可）の残りが、別の種由来の抗体における、または別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一または相同である抗体、ならびに、所望の生物活性を示す限り、そのような抗体の断片を指す（米国特許第４，８１６，５６７号、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１−５５（１９８４））。本明細書における目的のキメラ抗体としては、ＰＲＩＭＡＴＩＺＥＤ（登録商標）抗体が挙げられ、該抗体の抗原結合領域は、例えば、目的の抗原でマカクサルに免疫を与えることによって産生される抗体由来である。本明細書で使用される、「ヒト化抗体」は、「キメラ抗体」のサブセットで使用される。
【００６７】
本開示の抗ＣＤ３３抗体などの非ヒト（例えば、マウス）抗体の「ヒト化」形態は、最小限の非ヒト免疫グロブリン由来の配列を含むキメラ抗体である。１つの実施形態では、ヒト化抗体は、レシピエントのＨＶＲ由来の残基が、非ヒト種、例えば、所望の特異性、親和性、及び／または能力を有するマウス、ラット、ウサギ、または非ヒト霊長類のＨＶＲ由来の残基（ドナー抗体）で置き換えられているヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。いくつかの例では、ヒト免疫グロブリンのＦＲ残基は、対応する非ヒト残基で置き換えられる。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にもドナー抗体にも見られない残基を含んでもよい。これらの修飾は、さらに結合親和性などの抗体性能を改良するために行ってもよい。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、通常は２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、その場合、非ヒト免疫グロブリン配列のものに対応する超可変ループの全てもしくは実質的に全て、ならびに該ＦＲ領域の全てもしくは実質的に全てが、ヒト免疫グロブリン配列のものであるが、該ＦＲ領域は、結合親和性、異性化、免疫原性などの抗体性能を改良する１つ以上の個々のＦＲ残基の置換を含んでもよい。該ＦＲのこれらのアミノ酸置換の数は、通常、Ｈ鎖で６を超えず、Ｌ鎖では３を超えない。該ヒト化抗体は、任意に、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、通常はヒト免疫グロブリンのものも含む。さらなる詳細については、例えば、Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５（１９８６）、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２９（１９８８）、及びＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３−５９６（１９９２）を参照されたい。例えば、Ｖａｓｗａｎｉ  ａｎｄ  Ｈａｍｉｌｔｏｎ，Ａｎｎ．Ａｌｌｅｒｇｙ，Ａｓｔｈｍａ  ＆  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１：１０５−１１５（１９９８）、Ｈａｒｒｉｓ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ  ２３：１０３５−１０３８（１９９５）、Ｈｕｒｌｅ  ａｎｄ  Ｇｒｏｓｓ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．５：４２８−４３３（１９９４）、ならびに米国特許第６，９８２，３２１号及び第７，０８７，４０９号も参照のこと。
【００６８】
「ヒト抗体」は、ヒトによって産生された、本開示の抗ＣＤ３３抗体などの抗体のものに対応するアミノ酸配列を有するもの、及び／または、本明細書に開示のヒト抗体の製造技術のいずれかを用いて製造されたものである。このヒト抗体の定義は、特定的に非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を除外する。ヒト抗体は、ファージ提示ライブラリーを含めた当技術分野で既知の様々な技術を用いて産生することができる。Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１（１９９１）、Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１（１９９１）。ヒトモノクローナル抗体の調製に同様に利用可能なのは、Ｃｏｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，ｐ．７７（１９８５）、Ｂｏｅｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７（１）：８６−９５（１９９１）に記載の方法である。ｖａｎ  Ｄｉｊｋ  ａｎｄ  ｖａｎ  ｄｅ  Ｗｉｎｋｅｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８−７４（２００１）も参照のこと。ヒト抗体は、抗原投与に反応してそのような抗体を産生するように改変されているが、その内因性遺伝子座は無効にされたトランスジェニック動物、例えば、免疫化ゼノマウス（例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）に関する米国特許第６，０７５，１８１号及び第６，１５０，５８４号参照）に抗原を投与することによって調製することができる。例えば、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術によって生成されるヒト抗体に関するＬｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０３：３５５７−３５６２（２００６）も参照のこと。
【００６９】
本明細書で使用される、「超可変領域」、「ＨＶＲ」、または「ＨＶ」という用語は、本開示の抗ＣＤ３３抗体のものなどの抗体可変ドメインの領域であって、配列が超可変、及び／または、構造的に明確なループを形成する領域を指す。一般に、抗体は６つのＨＶＲ、すなわち、ＶＨに３つ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）及びＶＬに３つ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）を含む。自然抗体では、Ｈ３及びＬ３が、６つのＨＶＲの中で最大の多様性を示し、特にＨ３は、抗体に対する細かい特異性の付与において独自の役割を果たすと考えられている。例えば、Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １３：３７−４５（２０００）、Ｊｏｈｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｗｕ  ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２４８：１−２５（Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３））を参照されたい。実際、重鎖のみからなる天然に存在するラクダ抗体は、軽鎖の非存在下で機能性かつ安定である。例えば、Ｈａｍｅｒｓ−Ｃａｓｔｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３６３：４４６−４４８（１９９３）及びＳｈｅｒｉｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．３：７３３−７３６（１９９６）を参照されたい。
【００７０】
複数のＨＶＲの描写が使用されており、本明細書に包含される。ＥＵまたはＫａｂａｔ相補性決定領域（ＣＤＲ）であるＨＶＲは、配列多様性に基づいており、最も一般的に用いられている（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．、前出）。Ｃｈｏｔｈｉａは、その代わりに構造的ループの位置を指す（Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ  Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７））。ＡｂＭ  ＨＶＲは、ＥＵまたはＫａｂａｔのＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａの構造的ループの中間を表し、Ｏｘｆｏｒｄ  ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアによって使用される。「接触（ｃｏｎｔａｃｔ）」ＨＶＲは、利用可能な複合体結晶構造の分析に基づいている。これらＨＶＲの各々に由来する残基を以下に示す。
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【００７１】
ＨＶＲは、以下の「拡張ＨＶＲ」を含んでもよい：ＶＬにおいて、２４〜３６または２４〜３４（Ｌ１）、４６〜５６または５０〜５６（Ｌ２）、及び８９〜９７または８９〜９６（Ｌ３）、ならびにＶＨにおいて、２６〜３５（Ｈ１）、５０〜６５または４９〜６５（好ましい実施形態）（Ｈ２）、及び９３〜１０２、９４〜１０２，または９５〜１０２（Ｈ３）。該可変ドメインの残基は、ＥＵまたはＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．、前出、にしたがって、これら拡張ＨＶＲの定義の各々に対して番号付けられる。
【００７２】
「フレームワーク」または「ＦＲ」残基は、本明細書で定義されるＨＶＲ残基以外の可変ドメイン残基である。
【００７３】
「ＥＵまたはＫａｂａｔに従う可変ドメイン残基付番」または「ＥＵまたはＫａｂａｔに従うアミノ酸位置付番」という表現及びその変形は、ＥＵまたはＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．、前出、における抗体の編集（ｃｏｍｐｉｌａｔｉｏｎ）の重鎖可変ドメインまたは軽鎖可変ドメインに使用される付番方式を指す。この付番方式を用いると、実際の線形アミノ酸配列が、当該可変ドメインのＦＲもしくはＨＶＲの短縮、またはそれへの挿入に対応する、より少ない、または追加のアミノ酸を含む場合がある。例えば、重鎖可変ドメインは、Ｈ２の残基５２の後に単一のアミノ酸の挿入（Ｋａｂａｔに従って、残基５２ａ）、ならびに、重鎖ＦＲ残基８２の後に、挿入された残基（例えば、Ｋａｂａｔに従って、残基８２ａ、８２ｂ、及び８２ｃなど）を含む場合がある。残基のＥＵまたはＫａｂａｔ付番は、「標準」Ｋａｂａｔ番号配列の抗体の配列の相同領域でのアラインメントによって、所与の抗体に対して決定され得る。
【００７４】
該ＥＵまたはＫａｂａｔ付番方式は、通常、可変領域の残基（おむね軽鎖の１〜１０７残基及び重鎖の１〜１１３残基）（例えば、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ．５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１））に言及する場合に用いられる。該「ＥＵまたはＫａｂａｔ付番方式」または「ＥＵインデックス」は、通常、免疫グロブリン重鎖定常領域における残基に言及する場合に用いられる（例えば、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．、前出、に報告されたＥＵインデックス）。該「Ｋａｂａｔに従うＥＵインデックス」は、ヒトＩｇＧ１  ＥＵ抗体の残基の番号を指す。本明細書で特に明記しない限り、抗体の可変ドメインの残基番号への言及は、Ｋａｂａｔ付番方式による残基番号を意味する。本明細書で特に明記しない限り、抗体の定常ドメインの残基番号への言及は、ＥＵまたはＫａｂａｔ付番方式による残基番号を意味する（例えば、米国特許公開第２０１０−２８０２２７号参照）。
【００７５】
本明細書で使用される、「アクセプターヒトフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワーク由来のＶＬまたはＶＨフレームワークのアミノ酸配列を含むフレームワークである。ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワーク「由来の」アクセプターヒトフレームワークは、その同じアミノ酸配列を含んでも、既存のアミノ酸配列の変化を含んでもよい。いくつかの実施形態では、既存のアミノ酸変化の数は、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、または２以下である。既存のアミノ酸変化がＶＨに存在する場合、好ましいそれらの変化は、７１Ｈ、７３Ｈ、及び７８Ｈのうちの３つ、２つ、または１つの位置のみで生じ、例えば、それらの位置での該アミノ酸残基は、７１Ａ、７３Ｔ、及び／または、７８Ａであり得る。１つの実施形態では、該ＶＬのアクセプターヒトフレームワークは、ＶＬヒト免疫グロブリンフレームワーク配列またはヒトコンセンサスフレームワーク配列と配列が同一である。
【００７６】
「ヒトコンセンサスフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨフレームワーク配列の選択において、最も一般的に生じるアミノ酸残基を表すフレームワークである。一般に、該ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列の下位群からである。一般に、該配列の下位群は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）に従う下位群である。該ＶＬに関する例が含まれ、該下位群は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．、前出、に従う下位群カッパＩ、カッパＩＩ、カッパＩＩＩ、またはカッパＩＶでよい。さらに、該ＶＨに関しては、該下位群は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．、前出、に従う下位群Ｉ、下位群ＩＩ、または下位群ＩＩＩでよい。
【００７７】
例えば、本開示の抗ＣＤ３３抗体の特定の位置での「アミノ酸の修飾」は、特定の残基の置換もしくは欠失、または該特定の残基に隣接する少なくとも１つのアミノ酸残基の挿入を指す。特定の残基に「隣接」する挿入とは、その１〜２残基以内の挿入を意味する。該挿入は、該特定の残基のＮ末端側でもＣ末端側でもよい。本明細書において好ましいアミノ酸の修飾は、置換である。
【００７８】
本開示の抗ＣＤ３３抗体などの「親和性成熟」抗体とは、その１つ以上のＨＶＲに１つ以上の変更があるものであって、それらの変更（複数可）を有さない親抗体と比較して、抗原に対する抗体の親和性に改良をもたらす変更のあるものである。１つの実施形態では、親和性成熟抗体は、標的抗原に対して、ナノモルまたはピコモルですらある親和性を有する。親和性成熟抗体は、当技術分野で既知の手順によって産生される。例えば、Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：７７９−７８３（１９９２）は、ＶＨ及びＶＬドメインのシャフリングによる親和性成熟を記載している。ＨＶＲ及び／またはフレームワーク残基のランダム変異導入法は、例えば、Ｂａｒｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９１：３８０９−３８１３（１９９４）、Ｓｃｈｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｇｅｎｅ  １６９：１４７−１５５（１９９５）、Ｙｅｌｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５：１９９４−２００４（１９９５）、Ｊａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４（７）：３３１０−９（１９９５）、及びＨａｗｋｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２６：８８９−８９６（１９９２）によって記載されている。
【００７９】
本明細書で使用される、「特異的に認識する」または「特異的に結合する」という用語は、標的と抗体、例えば、本開示の抗ＣＤ３３抗体の間の引力や結合などの測定可能かつ再現可能な相互作用、すなわち、生体分子を含めた異種分子集団の存在下での該標的の存在の決定要因を指す。例えば、標的もしくはエピトープに特異的または優先的に結合する抗体、例えば、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、この標的もしくはエピトープに対して、これが他の標的や該標的の他のエピトープに結合するよりも大きな親和性、結合力で、より容易に、及び／または、より長い期間結合する抗体である。本定義を読むと、例えば、第一の標的に特異的または優先的に結合する抗体（または部分）が、第二の標的に特異的または優先的に結合する場合もしない場合もあることも理解される。したがって、「特異的結合」または「優先的結合」は、排他的結合を（含むことはできるが）必ずしも必要としない。標的に特異的に結合する抗体は、少なくとも約１０３Ｍ−１もしくは１０４Ｍ−１、時には約１０５Ｍ−１もしくは１０６Ｍ−１、他の例では約１０６Ｍ−１もしくは１０７Ｍ−１、約１０８Ｍ−１〜１０９Ｍ−１、または約１０１０Ｍ−１〜１０１１Ｍ−１もしくはそれ以上の結合定数を有し得る。様々なイムノアッセイ形式を用いて、特定のタンパク質と特異的に免疫反応する抗体を選択することができる。例えば、固相ＥＬＩＳＡイムノアッセイは、タンパク質と特異的に免疫反応するモノクローナル抗体を選択するために通常用いられる。例えば、特定の免疫反応性を測定するために用いることができるイムノアッセイ形式及び条件の記載については、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋを参照されたい。
【００８０】
本明細書で使用される、ＣＤ３３タンパク質と第二のタンパク質間の「相互作用」は、制限なく、タンパク質間相互作用、物理的相互作用、化学的相互作用、結合、共有結合、及びイオン結合を包含する。本明細書で使用される場合、当該抗体が当該２つのタンパク質間相互作用を中断、低減、または完全に除外する場合、抗体は、２つのタンパク質間の「相互作用を阻害する」。本開示の抗体またはその断片は、該抗体またはその断片が当該２つのタンパク質の１つに結合する場合に、２つのタンパク質間の「相互作用を阻害する」。
【００８１】
「アゴニスト」抗体または「活性化」抗体は、本開示のアゴニスト抗ＣＤ３３抗体などの抗体であり、これは、該抗体が抗原に結合した後に該抗原の１つ以上の活性または機能を誘導する（例えば、増加させる）。
【００８２】
「遮断」抗体、「アンタゴニスト」抗体、または「阻害」抗体は、本開示の抗ＣＤ３３抗体などの抗体であり、これは、該抗体が抗原に結合した後に１つ以上のリガンドに対する抗原結合を阻害もしくは低減し（例えば、減少させ）、及び／または、該抗体が抗原に結合した後、該抗原の１つ以上の活性もしくは機能を阻害または低減する（例えば、減少させる）。いくつかの実施形態では、遮断抗体、アンタゴニスト抗体、または阻害抗体は、１つ以上のリガンドに対する抗原結合、及び／または、該抗原の１つ以上の活性もしくは機能を実質的または完全に阻害する。
【００８３】
抗体の「エフェクター機能」とは、抗体のＦｃ領域（天然配列のＦｃ領域またはアミノ酸配列バリアントＦｃ領域）に起因する生物活性を指し、該抗体のアイソタイプにより異なる。
【００８４】
本明細書において、「Ｆｃ領域」という用語は、天然配列のＦｃ領域及びバリアントＦｃ領域を含めた免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために用いられる。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は異なり得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、通常、Ｃｙｓ２２６の位置でのアミノ酸残基から、またはＰｒｏ２３０から、そのカルボキシル末端まで伸長すると定義される。該Ｆｃ領域のＣ末端のリジン（ＥＵまたはＫａｂａｔ付番方式に従う残基４４７）は、例えば、該抗体の産生もしくは精製の過程で、または、該抗体の重鎖をコードする核酸を組み換え技術によって作り出すことによって、除去されてもよい。したがって、無傷の抗体の組成物は、全てのＫ４４７残基が除去された抗体集団、Ｋ４４７残基が除去されていない抗体集団、ならびにＫ４４７残基がある抗体とない抗体の混合物を有する抗体集団を含み得る。本開示の抗体に適した天然配列Ｆｃ領域としては、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４が挙げられる。
【００８５】
「天然配列Ｆｃ領域」は、天然に見られるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む。天然配列ヒトＦｃ領域には、天然配列ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域（非Ａ及びＡアロタイプ）、天然配列ヒトＩｇＧ２のＦｃ領域、天然配列ヒトＩｇＧ３のＦｃ領域、及び天然配列ヒトＩｇＧ４のＦｃ領域、ならびにその天然に存在するバリアントが含まれる。
【００８６】
「バリアントＦｃ領域」は、少なくとも１つのアミノ酸の修飾、好ましくは１つ以上のアミノ酸置換によって、天然配列Ｆｃ領域とは異なるアミノ酸配列を含む。好ましくは、該バリアントＦｃ領域は、天然配列Ｆｃ領域または親ポリペプチドのＦｃ領域に対して少なくとも１つのアミノ酸置換、例えば、約１〜約１０のアミノ酸置換、好ましくは、約１〜約５のアミノ酸置換を天然配列Ｆｃ領域または親ポリペプチドのＦｃ領域に有する。本明細書において該バリアントＦｃ領域は、天然配列Ｆｃ領域及び／または親ポリペプチドのＦｃ領域と好ましくは、少なくとも約８０％の相同性、最も好ましくは、それと少なくとも約９０％の相同性、より好ましくは、それと少なくとも約９５％の相同性を有する。
【００８７】
「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を表す。好ましいＦｃＲは、天然配列ヒトＦｃＲである。さらに、好ましいＦｃＲは、ＩｇＧ抗体（ガンマ受容体）に結合するものであり、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩサブクラスの受容体ならびにこれら受容体の対立遺伝子多型及び選択的スプライスによる形態を含む。ＦｃγＲＩＩ受容体は、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）及びＦｃγＲＩＩＢ（「阻害性受容体」）を含み、これらは主にその細胞質ドメインが異なる同様のアミノ酸配列を有する。活性化受容体ＦｃγＲＩＩＡは、免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（「ＩＴＡＭ」）をその細胞質ドメインに含む。阻害性受容体ＦｃγＲＩＩＢは、免疫受容体チロシンベース阻害モチーフ（「ＩＴＩＭ」）をその細胞質ドメインに含む（Ｍ．Ｄａｅｒｏｎ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５：２０３−２３４（１９９７））。ＦｃＲは、Ｒａｖｅｔｃｈ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７−９２（１９９１）、Ｃａｐｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ  ４：２５−３４（１９９４）、及びｄｅ  Ｈａａｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．１２６：  ３３０−４１（１９９５）に概説されている。今後同定されるものを含め、他のＦｃＲは、本明細書では「ＦｃＲ」によって包含される。ＦｃＲはまた、抗体の血清半減期を延長することもできる。
【００８８】
インビボでのＦｃＲｎへの結合及びヒトＦｃＲｎ高親和性結合ポリペプチドの血清半減期は、例えば、ヒトＦｃＲｎを発現するトランスジェニックマウスもしくはトランスフェクトヒト細胞株、またはバリアントＦｃ領域を有するポリペプチドが投与される霊長類においてアッセイすることができる。ＷＯ  ２００４／４２０７２（Ｐｒｅｓｔａ）は、ＦｃＲに対する結合が改良または減少された抗体バリアントを記載している。例えば、Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．９（２）：６５９１−６６０４（２００１）も参照されたい。
【００８９】
ペプチド、ポリペプチド、または抗体配列に関して本明細書で使用される、「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」及び「相同性」とは、当該配列を整列し、必要であればギャップを導入して最大限の配列同一性パーセントを得た後、配列同一性の一部として保存的置換を考慮せずに、特定のペプチドまたはポリペプチド配列のアミノ酸残基と同一のアミノ酸残基の候補配列における割合（％）を指す。アミノ酸配列同一性パーセントを決定する目的のためのアラインメントは、当業者が備えている技術の範囲内にある様々な方法で、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、またはＭＥＧＡＬＩＧＮ（商標）（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公開されているコンピュータソフトウェアを用いて達成することができる。当業者であれば、比較される配列の全長にわたって最大限のアラインメントを実現するのに必要な当技術分野で既知の任意のアルゴリズムを含め、アラインメントの比較のための適切なパラメータを決めることができる。
【００９０】
抗体をコードする「単離」核酸分子、例えば、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、同定された核酸分子であり、かつ、それが製造された環境では通常会合している少なくとも１つの混入核酸分子から分離された核酸分子である。好ましくは、該単離核酸は、当該産生環境で会合しているすべての成分との会合がない。本明細書におけるポリペプチド及び抗体をコードする単離核酸分子は、それが天然に見られる形態や状況以外の形態である。単離核酸分子はしたがって、細胞に天然に存在する本明細書におけるポリペプチド及び抗体をコードする核酸とは区別される。
【００９１】
本明細書で使用される、「ベクター」は、核酸分子であって、それが結合している別の核酸を輸送することができる核酸を指すことを意図する。ベクターの一種は「プラスミド」であり、これは、さらなるＤＮＡ部分が中に結合され得る環状二本鎖ＤＮＡを指す。ベクターの別の種類はファージベクターである。ベクターのもう１つの種類がウイルスベクターであり、この場合、さらなるＤＮＡ部分が当該ウイルスゲノム中に結合され得る。ある特定のベクターは、それらが導入される宿主細胞内で自己複製が可能である（例えば、細菌の複製起点を有する細菌ベクター及びエピソーム哺乳動物ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞への導入時に宿主細胞のゲノムに組み込むことができ、それによって、宿主のゲノムとともに複製される。さらに、ある特定のベクターは、それらが作動可能に連結された遺伝子の発現を指示することができる。そのようなベクターは、本明細書では「組み換え発現ベクター」、または単に「発現ベクター」と呼ばれる。一般に、組み換えＤＮＡ技術において有用な発現ベクターは、多くの場合プラスミドの形態である。プラスミドが最も一般的に用いられるベクターの形態であるため、本明細書では、「プラスミド」及び「ベクター」は互換的に用いられる場合がある。
【００９２】
本明細書で互換的に使用される、「ポリヌクレオチド」または「核酸」は、任意の長さのヌクレオチドのポリマーを指し、ＤＮＡ及びＲＮＡを含む。該ヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、修飾ヌクレオチド、もしくは塩基、及び／または、それらの類似体、または、ＤＮＡもしくはＲＮＡポリメラーゼによって、もしくは合成反応によってポリマーに導入することができる任意の基質であり得る。ポリヌクレオチドは、修飾ヌクレオチド、例えば、メチル化ヌクレオチド及びそれらの類似体を含んでよい。ヌクレオチド構造に対する修飾がある場合には、該修飾は当該ポリマーの組織化の前または後に付与され得る。ヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチド成分によって中断されてもよい。ポリヌクレオチドは、例えば、標識への結合のような、合成後になされる修飾（複数可）を含んでもよい。修飾の他の種類としては、例えば、「キャップ」、類似体による１つ以上の天然に存在するヌクレオチドの置換、ヌクレオチド間の修飾、例えば、非荷電結合（例えば、メチルホスホネート、ホスホトリエステル、ホスホアミデート、カルバメートなど）及び荷電結合（例えば、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエートなど）でのもの、懸垂部分を含むもの、例えば、タンパク質（例えば、ヌクレアーゼ、毒素、抗体、シグナルペプチド、ｐｌｙ−Ｌ−リジンなど）、挿入剤（例えば、アクリジン、ソラレンなど）によるもの、キレート剤（例えば、金属、放射性金属、ボロン、酸化金属など）を含むもの、アルキル化剤を含むもの、修飾された結合によるもの（例えば、アルファアノマ核酸など）、ならびに、該ポリヌクレオチド（複数可）の未修飾形態が挙げられる。さらに、糖に通常存在するヒドロキシル基のいずれもが、例えば、ホスホネート基、ホスフェート基で置換されても、標準的な保護基で保護されても、もしくはさらなるヌクレオチドに対するさらなる結合を作るように活性化されてもよく、または、固体もしくは半固体の支持体に結合されてもよい。５’及び３’末端のＯＨは、リン酸化することも、アミン置換することも、１〜２０個の炭素原子の有機キャッピング基部分で置換することもできる。他のヒドロキシルもまた、標準的な保護基に誘導体化してもよい。ポリヌクレオチドはまた、当技術分野で一般に知られているリボースまたはデオキシリボース糖の類似形態、例えば、２’−Ｏ−メチルリボース、２’−Ｏ−アリルリボース、２’−フルオロリボース、もしくは２’−アジドリボース、炭素環式糖類似体、α−アノマー糖、エピマー糖、例えば、アラビノース、キシロース、もしくはリキソース、ピラノース糖、フラノース糖、セドヘプツロース、非環式類似体、及び塩基性ヌクレオシド類似体、例えば、メチルリボシドを含むことができる。１つ以上のリン酸ジエステル結合が代替的な結合基によって置換され得る。これらの代替的な結合基としては、ホスフェートがＰ（Ｏ）Ｓ（［チオエート」）、Ｐ（Ｓ）Ｓ（「ジチオエート」）、（Ｏ）ＮＲ２（「アミデート」）、Ｐ（Ｏ）Ｒ、Ｐ（Ｏ）ＯＲ’、ＣＯ、もしくはＣＨ２（「ホルムアセタール」）であって、各ＲまたはＲ’が独立して、Ｈ、または、任意にエーテル（−Ｏ−）結合を含む置換もしくは未置���アルキル（１−２０Ｃ）、アリール、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、もしくはアラルジル（ａｒａｌｄｙｌ）であるもので置換されている実施形態が挙げられるがこれらに限定されない。ポリヌクレオチドにおける全ての結合が同一である必要はない。前述の説明は、ＲＮＡ及びＤＮＡを含めた本明細書で言及する全てのポリヌクレオチドに適用される。
【００９３】
「宿主細胞」は、ポリヌクレオチド挿入物の導入のためのベクター（複数可）用の、レシピエントになることができる、またはレシピエントである個々の細胞もしくは細胞培養を含む。宿主細胞には、単一の宿主細胞の後代が含まれ、該後代は、自然、偶発、もしくは計画的突然変異のため、元の親細胞と完全に同一である必要はない場合がある（形態またはゲノムＤＮＡ相補体において）。宿主細胞には、インビボにおいて本開示のポリヌクレオチド（複数可）でトランスフェクトされた細胞が含まれる。
【００９４】
本明細書で使用される、「担体」には、採用される用量及び濃度でそれらに曝露される細胞もしくは哺乳動物に対して毒性がない、医薬的に許容される担体、賦形剤、または安定剤が含まれる。多くの場合、生理学的に許容される担体は、ｐＨ緩衝水溶液である。生理学的に許容される担体の例としては、リン酸、クエン酸、及び他の有機酸などの緩衝剤、アルコルビン酸を含めた酸化防止剤、低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド、タンパク質、例えば血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリン、親水性ポリマー、例えばポリビニルピロリドン、アミノ酸、例えばグリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、もしくはリジン、グルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含めた単糖類、二糖類、及び他の炭水化物、キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ、糖アルコール、例えば、マンニトールもしくはソルビトール、塩形成性対イオン、例えば、ナトリウム、及び／または、ノニオン界面活性剤、例えば、ＴＷＥＥＮ（商標）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、及びＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）が挙げられる。
【００９５】
本明細書で使用される、「アポトーシス」という用語は、遺伝子が指示する細胞内細胞破壊の過程を指す。アポトーシスは、壊死とは区別される。これには、細胞骨格の破壊、細胞質の収縮及び凝縮、細胞膜の外表面におけるホスファチジルセリンの発現、ならびに小疱形成が含まれ、結果として、細胞膜に束縛された小胞、またはアポトーシス小体の形成が生じる。該過程は、「プログラム細胞死」とも呼ばれる。アポトーシスの過程で、特徴的な現象、例えば、湾曲した細胞表面、核クロマチンの凝縮、染色体ＤＮＡの断片化、及びミトコンドリア機能の喪失が認められる。様々な既知の技術、例えば、アネキシンＶ、ヨウ化プロピジウム、ＤＮＡ断片化アッセイ、及びＹＯ−ＰＲＯ−１（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）での細胞染色を用いてアポトーシスが検出され得る。いくつかの実施形態では、アネキシンＶ及びヨウ化プロピジウムでの染色が用いられる場合があり、アネキシンＶ＋／ＰＩ＋、アネキシンＶ＋／ＰＩ−、及びアネキシンＶ−／ＰＩ＋集団を合わせた割合（％）が死細胞と見なされる。
【００９６】
本明細書で使用される、表現「ＣＤ３３の細胞レベルを低下させる、ＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用を阻害する、またはその両方の薬剤」とは、インビトロ、インサイチュ、及び／または、インビボにおいて、ＣＤ３３（哺乳動物の、例えば、ヒトＣＤ３３）の生物活性を低下（著しくを含む）させる、減少させる、遮断する、阻害する、または妨害する分子を指す。「ａｇｅｎｔ（薬剤）」という用語は、いかなる特定の生物作用機序を意味するものでもなく、直接であっても間接的であっても、また、ＣＤ３３との相互作用であっても１つ以上のそのリガンドとの相互作用であっても、または他の機序を介した相互作用でも、ＣＤ３３とのすべての可能な薬理学的、生理学的、及び生化学的相互作用、ならびに様々な異なる及び化学的に異なる組成物によって実現され得るその結果を明白に含みかつ網羅する。例示的な薬剤としては、制限なく、ＣＤ３３に特異的に結合する抗ＣＤ３３抗体、可溶性ＣＤ３３受容体タンパク質、可溶性ＣＤ３３−Ｆｃ融合タンパク質（例えば、ＣＤ３３イムノアドヘシン）、ＣＤ３３リガンドに結合する可溶性Ｓｉｇｌｅｃ受容体、ＣＤ３３リガンドに結合するＳｉｇｌｅｃ−Ｆｃ融合タンパク質（例えば、Ｓｉｇｌｅｃイムノアドヘシン）、ＣＤ３３をコードする核酸に対するアンチセンス分子、ＣＤ３３をコードする核酸に対する短干渉ＲＮＡ（「ｓｉＲＮＡ」）分子、ＣＤ３３阻害化合物、ＣＤ３３に結合するＲＮＡもしくはＤＮＡアプタマー、ならびにＣＤ３３の構造類似体が挙げられる。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３阻害剤（例えば、抗体）は、ＣＤ３３の細胞レベルを低下させる、ＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用を阻害する、またはその両方の薬剤と結合し（物理的に相互作用し）、ＣＤ３３リガンドに結合し、及び／または、ＣＤ３３の合成もしくは産生を阻害する（低減する）。他の実施形態では、本開示の阻害剤の薬剤は、ＣＤ３３に結合し、１つ以上のそのリガンドに対するその結合を防ぐ。さらに他の実施形態では、本開示の薬剤は、ＣＤ３３の発現（すなわち、転写もしくは翻訳）を低減または排除する。ＣＤ３３の細胞レベルを低下させる、ＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用を阻害する、またはその両方の薬剤の種類の例を本明細書に提供する。
【００９７】
本明細書で使用される、「ＣＤ３３と結合またはこれと相互作用する薬剤」という表現は、ＣＤ３３タンパク質と直接または間接的のいずれかで相互作用する分子を指す。「薬剤」という用語は、いかなる特定の生物作用機序を意味するものでもなく、直接であっても間接的であっても、また、ＣＤ３３との相互作用であっても、他の機序を介した相互作用でも、ＣＤ３３とのすべての可能な薬理学的、生理学的、及び生化学的相互作用、ならびに様々な異なる及び化学的に異なる組成物によって実現され得るその結果を明示的に含みかつ網羅する。例示的な薬剤としては、制限なく、ＣＤ３３に特異的に結合する抗ＣＤ３３抗体が挙げられる。
【００９８】
本明細書で使用される、「ＲＮＡ干渉」または「ＲＮＡｉ」という用語は、一般に、２本鎖ＲＮＡ分子もしくは短ヘアピンＲＮＡ分子が、該２本鎖もしくは短ヘアピンＲＮＡ分子が実質的または完全な相同性を共有する核酸配列の発現を低減または阻害する過程を指す。「短干渉ＲＮＡ］もしくは「ｓｉＲＮＡ」または「ＲＮＡｉ剤」という用語は、ＲＮＡ干渉を誘発するＲＮＡ配列を指す。Ｋｒｅｕｔｚｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＷＯ  ００／４４８９５、Ｚｅｒｎｉｃｋａ−Ｇｏｅｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，ＷＯ  ０１／３６６４６、Ｆｉｒｅ，ＷＯ  ９９／３２６１９、Ｍｅｌｌｏ  ａｎｄ  Ｆｉｒｅ，ＷＯ  ０１／２９０５８を参照されたい。本明細書で使用される、ｓｉＲＮＡ分子としては、化学的に修飾されたヌクレオチド及び非ヌクレオチドを包含するＲＮＡ分子が挙げられる。「ｄｄＲＮＡｉ剤」という用語は、ＤＮＡ依存性ＲＮＡｉ剤を指し、これは外因性ベクターから転写される。「短ヘアピンＲＮＡ」または「ｓｈＲＮＡ」という用語は、２本鎖領域及びループ領域を有するＲＮＡ構造を指す。ある特定の実施形態では、ｄｄＲＮＡｉ剤は、最初にｓｈＲＮＡとして発現される。
【００９９】
本明細書で使用される、「アプタマー」という用語は、所望の分子標的、例えば、一般的な代謝補因子（例えば、補酵素Ａ、Ｓ−アデノシルメチオニンなど）、タンパク質（例えば、補体タンパク質Ｃ５、抗体など）、または核酸分子で保存された構造要素（例えば、転写因子の結合に重要な構造など）に緊密かつ特異的に結合することができる異種オリゴヌクレオチドを指す。アプタマーは通常、約１０〜約１００ヌクレオチドの長さ、約１０〜約７５ヌクレオチドの長さ、約１０〜約５０ヌクレオチドの長さ、約１０〜約３５ヌクレオチドの長さ、及び約１０〜約２５ヌクレオチドの長さの範囲のＤＮＡまたはＲＮＡヌクレオチド配列を含む。合成ＤＮＡまたはＲＮＡオリゴヌクレオチドは、標準的な固相ホスホロアミダイト法及び機器を用いて、例えば、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（カリフォルニア州フォスターシティ）から入手可能な３９００  Ｈｉｇｈ  Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  ＤＮＡ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ（商標）を用いて製造することができる。アプタマーは、しばしば、骨格または結合の修飾（例えば、ペプチド核酸（ＰＮＡ）もしくはホスホチオエート結合）を含め、ＤＮＡ及びＲＮＡに見られる通常存在するヌクレオチド（例えば、Ａ、Ｇ、Ｃ、及びＴ／Ｕ）の誘導体または類似体を組み込み、ヌクレアーゼに対する耐性、結合親和力を向上させ、さもなければそれらの薬物速度論的特性を変更する。例示的な修飾は、米国特許第６，４５５，３０８号、第４，４６９，８６３号、第５，５３６，８２１号、第５，５４１，３０６号、第５，６３７，６８３号、第５，６３７，６８４号、第５，７００，９２２号、第５，７１７，０８３号、第５，７１９，２６２号、第５，７３９，３０８号、第５，７７３，６０１号、第５，８８６，１６５号、第５，９２９，２２６号、第５，９７７，２９６号、第６，１４０，４８２号、ならびにＷＩＰＯ公開第ＷＯ  ００／５６７４６号及び第ＷＯ  ０１／１４３９８号に記載されている。そのような類似体または誘導体を含むオリゴヌクレオチドの合成方法は、例えば、上記に引用した特許公報、ならびに米国特許第６，４５５，３０８号、第５，６１４，６２２号、第５，７３９，３１４号、第５，９５５，５９９号、第５，９６２，６７４号、第６，１１７，９９２号、及びＷＯ  ００／７５３７２に開示されている。
【０１００】
本明細書で使用される、「約」という用語は、本技術分野の当業者に容易に知られるそれぞれの値に対する通常の誤差の範囲を指す。本明細書では、「約」値またはパラメータへの言及は、その値またはパラメータ自体を対象にする実施形態を含む（及び示す）。
【０１０１】
本明細書及び添付の特許請求の範囲において使用される、単数形「ａ」、「ａｎ」、ならびに「ｔｈｅ」は、文脈が明らかに他の意味を示さない限り、複数の指示を含む。例えば、ａｎ  「ａｎｔｉｂｏｄｙ」（「抗体」）への言及は、１つから多くの抗体、例えば、モル量への言及であり、当業者に既知のその等価物などを含む。
【０１０２】
本明細書に記載の本開示の態様及び実施形態は、「含む」、「からなる」、及び「から本質的になる」態様及び実施形態を含むと理解される。
【０１０３】
概要
本開示は、ＣＤ３３の細胞レベルを低下させる、及び／または、ＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用を阻害する薬剤（例えば、抗ＣＤ３３抗体）、そのような薬剤（例えば、抗ＣＤ３３抗体）の製造方法及び使用方法、そのような薬剤（例えば、抗ＣＤ３３抗体）を含む医薬組成物、そのような薬剤（例えば、抗ＣＤ３３抗体）をコードする核酸、ならびにそのような薬剤（例えば、抗ＣＤ３３抗体）をコードする核酸を含む宿主細胞に関する。
【０１０４】
いくつかの実施形態では、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、該抗体がＣＤ３３と１つ以上の天然のグリカンリガンド間の相互作用を阻害する能力に少なくとも一部起因する１つ以上のアンタゴニスト活性を有する。いくつかの実施形態では、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、該抗体が、ＣＤ３３の分解、下方制御、開裂、受容体脱感作、及び／または、リソソーム標的化の誘導によって、ＣＤ３３の細胞発現（例えば、細胞表面発現）を低減する能力に少なくとも一部起因する１つ以上のアンタゴニスト活性を有し得る。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、以下の特性の１つ以上を示す：ａ．ヒトＣＤ３３に対する解離定数（ＫＤ）が抗ＣＤ３３抗体であるゲムツズマブのものよりも低い、ｂ．ヒト樹状細胞などのヒト細胞に対して、抗ＣＤ３３抗体であるゲムツズマブもしくはリンツズマブのものよりも低い半数効果濃度（ＥＣ５０）で結合する、ｃ．ＣＤ３３の細胞レベルを、抗ＣＤ３３抗体であるゲムツズマブもしくはリンツズマブのものよりも低い半数効果濃度（ＥＣ５０）で低下させる、ｄ．ヒトＣＤ３３に対して、３００ｐＭ〜１０ｐＭの範囲であり得る解離定数（ＫＤ）を有し、例えば、この場合、該ＫＤは、温度約２５℃で測定される、ｅ．ヒト樹状細胞などのヒト細胞に対して、２００ｐＭ〜１０ｐＭの範囲であり得る半数効果濃度（ＥＣ５０）で結合し、例えば、この場合、該ＥＣ５０は、温度約４℃で測定される、ｆ．ＣＤ３３の細胞レベルを６５ｐＭ〜２０ｐＭの範囲であり得る半数効果濃度（ＥＣ５０）で低下させる、または、ｇ．インビボにおいてＣＤ３３の細胞レベルを８．０ｍｇ／ｋｇ〜２．０ｍｇ／ｋｇの範囲であり得る半数効果濃度（ＥＣ５０）で低下させる。本明細書で開示される半数効果濃度（ＥＣ５０）は、本開示の抗ＣＤ３３抗体がＣＤ３３の細胞上もしくは細胞内の細胞レベルを低減する濃度、または、該抗体が細胞上のＣＤ３３に対する最大半量の結合を達成する濃度を指す。
【０１０５】
有利には、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、ゲムツズマブ及びリンツズマブなどの市販の抗ＣＤ３３抗体と比較して、ＣＤ３３の結合のＥＣ５０が改良されており（例えば、およそ３倍良好）、ゲムツズマブ及びリンツズマブなどの市販の抗ＣＤ３３抗体と比較して、より強力に（例えば、より低いＥＣ５０で）細胞表面発現を低下させる（例えば、およそ５倍良好）（実施例１及び３）。市販の抗ＣＤ３３抗体ゲムツズマブの重鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号２４８に示され、抗ＣＤ３３抗体ゲムツズマブの軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号２４９に示される。市販の抗ＣＤ３３抗体リンツズマブの重鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号２５０に示され、抗ＣＤ３３抗体リンツズマブの軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号２５１に示される。
【０１０６】
いくつかの実施形態では、抗体誘導性のＣＤ３３活性は、本明細書に開示される技術のいずれか（例えば、実施例１〜５参照）によってインビトロで測定または試験され得る。該技術としては、制限なく、ＣＤ３３に曝露された抗体の密度を増加させる完全長抗ＣＤ３３抗体のプレート結合の試験、二次抗体での抗ＣＤ３３抗体の架橋、１つ以上のＦｃｇ受容体（例えば、ＦｃｇＲＩＩＢ）を発現する細胞での抗ＣＤ３３抗体の架橋、溶液中でのＣＤ３３抗体の使用、及びＣＤ３３抗体のＦａｂ断片の使用が挙げられる。
【０１０７】
本開示のある特定の態様は、ＣＤ３３に対する結合について、１つ以上のＣＤ３３リガンドと競合する能力、及び／または、細胞上のＣＤ３３の細胞表面レベルを減少させる能力であって、１つ以上のＣＤ３３活性の低下、中和、防止、または抑制をもたらす能力を示す、抗ＣＤ３３抗体などの薬剤の同定に少なくとも一部基づいている。該ＣＤ３３活性としては、制限なく、ＬＣＫ及びＦＹＮなどのＳｒｃファミリーチロシンキナーゼによるＴｙｒ−３４０及びＴｙｒ−３５８のリン酸化の１つ以上の妨害、チロシン特異的タンパク質ホスファターゼＳＨＰ１及びＳＨＰ２の動員及びそれらへの結合、Ｄｙｎａｍｉｎｉ−１に対するグアニンヌクレオチド交換因子として作用するＰＬＣ−ガンマ１の動員及びそれへの結合、ＳＨ２ドメイン含有タンパク質（例えば、Ｃｒｋｌ）の動員及びそれへの結合、脾臓チロシンキナーゼＳｙｋの動員及びそれへの結合、ＳＨ３−ＳＨ２−ＳＨ３増殖因子受容体結合タンパク質２（Ｇｒｂ２）の動員及びそれへの結合、複数のＳＨ２含有タンパク質の動員及びそれへの結合、プロテインキナーゼＣによるＳｅｒ−３０７及びＳｅｒ−３４２のリン酸化、１つ以上の抗炎症性サイトカイン、例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＩＬ−３５、ＩＬ−１６、ＴＧＦ−ベータ、ＩＬ−１Ｒａ、Ｇ−ＣＳＦ、及びＴＮＦ、ＩＦＮ−ベータ１ａ、ＩＦＮ−ベータ１ｂ、またはＩＬ−６に対する可溶性受容体のマクロファージ、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、及び／または、ミクログリア細胞における調節された発現、細胞内カルシウム動員の減少、１つ以上の炎症性サイトカイン、例えば、ＩＦＮ−ａ４、ＩＦＮ−ｂ、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＬＩＦ、ＩＦＮ−ガンマ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＣＸＣＬ１０、ＩＬ−３３、ＣＲＰ、ＩＬ−３３、ＭＣＰ−１、及びＭＩＰ−１−ベータのマクロファージ、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、及び／またはミクログリア細胞における調節された発現、Ｃ１ｑａ、Ｃ１ｑＢ、Ｃ１ｑＣ、Ｃ１ｓ、Ｃ１Ｒ、Ｃ４、Ｃ２、Ｃ３、ＩＴＧＢ２、ＨＭＯＸ１、ＬＡＴ２、ＣＡＳＰ１、ＣＳＴＡ、ＶＳＩＧ４、ＭＳ４Ａ４Ａ、Ｃ３ＡＲ１、ＧＰＸ１、ＴｙｒｏＢＰ、ＡＬＯＸ５ＡＰ、ＩＴＧＡＭ、ＳＬＣ７Ａ７、ＣＤ４、ＩＴＧＡＸ、ＰＹＣＡＲＤ、ＣＤ１４、ＣＤ１６、ＨＬＡ−ＤＲ、及びＣＣＲ２から選択される１つ以上のタンパク質の調節された発現、細胞外シグナル制御キナーゼ（ＥＲＫ）のリン酸化の阻害、複数の細胞タンパク質におけるチロシンリン酸化の低減、Ｃ−Ｃケモカイン受容体７（ＣＣＲ７）の調節された発現、ＣＣＬ１９及びＣＣＬ２１発現細胞へのミクログリア細胞の走化性の阻害、ホスホイノシチド３−キナーゼの活性化、単球、マクロファージ、Ｔ細胞、樹状細胞、及び／または、ミクログリアの細胞増殖の低減、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、Ｍ２ミクロ��リア、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、及び／またはＭ２マクロファージによって誘導されるＴ細胞増殖の低減、破骨細胞産生の阻害、破骨細胞形成速度の低減、またはその両方、好中球、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及び／または、Ｍ２ミクログリアの生存の低減、好中球、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及び／または、Ｍ２ミクログリアの増殖の低減、好中球、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及び／またはＭ２ミクログリアの遊走の阻害、好中球、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及び／またはＭ２ミクログリアの１つ以上の機能の低減、好中球、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及び／またはＭ２ミクログリアの成熟の阻害、単球、マクロファージ、Ｔ細胞、樹状細胞、好中球、及び／またはミクログリアの細胞死及びアポトーシスの増大、単球、マクロファージ、Ｔ細胞、樹状細胞、好中球、及び／またはミクログリアの食作用活性の低減、単球、マクロファージ、Ｔ細胞、樹状細胞、好中球、及び／またはミクログリアの増殖の低減、単球、マクロファージ、Ｔ細胞、樹状細胞、好中球、及び／またはミクログリアの全体的な機能の低減、ＩＴＡＭ含有受容体のリン酸化、ＩＴＡＭシグナル伝達を媒介するシグナル伝達分子のリン酸化、パターン認識受容体の活性化の低減、Ｔｏｌｌ様受容体の活性化の低減、損傷関連の細胞及びタンパク質の破片の除去の活性化の低減、ＣＤ３３と１つ以上のそのリガンド間の相互作用、ＣＤ３３とＣＤ６４などの補助受容体間の相互作用、アポトーシス性ニューロンの除去、神経組織破片の除去、機能不全シナプスの除去、非神経組織破片の除去、細菌もしくは他の異物の除去、病原タンパク質の除去、及び腫瘍細胞の除去から選択される１つ以上の種類の除去の低減、アポトーシス性ニューロン、神経組織破片、機能不全シナプス、非神経組織破片、細菌、他の異物、病原タンパク質、病原ペプチド、病原核酸、病原脂質、または腫瘍細胞の１つ以上の食作用の阻害、例えば、病原核酸がアンチセンスＧＧＣＣＣＣ��Ｇ２Ｃ４）反復拡張ＲＮＡである病原核酸の除去の阻害、アミロイドベータ、アミロイドベータ斑、アミロイド前駆体タンパク質もしくはその断片、タウ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（染色体９オープンリーディングフレーム７２）、ｃ９ＲＡＮタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メジン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、反復関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）反復ペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）反復ペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）反復ペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）反復ペプチド、ユビキチン、ならびにプロリン−アルギニン（ＰＲ）反復ペプチドから選択される病原タンパク質の除去の活性化、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、及び甲状腺癌から選択される異なる種類の癌に対する有益な免疫応答の阻害、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウパチー病、那須・ハコラ病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、本態性振戦、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫性疾患、サルコイドーシス、加齢に伴う病気、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、及び多発性硬化症から選択される異なる種類の神経障害に対する有益な免疫応答の阻害、ループス、急性及び慢性大腸炎、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満症、マラリア、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身性感染症、ループス、関節炎、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、及び骨のパジェット病から選択される異なる種類の炎症及び感染症に対する有益な免疫応答の阻害、腫瘍細胞上のＣＤ３３リガンドへの結合、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、ミクログリア、Ｔ細胞、好中球、及び／またはマクロファージ上のＣＤ３３リガンドへの結合、ミクログリア、マクロファージ、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、または細胞傷害性Ｔ細胞の１つ以上による腫瘍細胞殺傷の阻害、ミクログリア、マクロファージ、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、または細胞傷害性Ｔ細胞の１つ以上の抗腫瘍細胞増殖活性の阻害、ミクログリア、マクロファージ、樹状細胞、骨髄由来樹状��胞、好中球、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、または細胞傷害性Ｔ細胞の１つ以上による腫瘍細胞殺傷の阻害、ミクログリア、マクロファージ、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、または細胞傷害性Ｔ細胞の１つ以上の抗腫瘍細胞転移活性の阻害、免疫抑制樹状細胞、免疫抑制マクロファージ、
骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ、または制御性Ｔ細胞の促進、１つ以上のＩＴＡＭモチーフ含有受容体、例えば、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、ＦｃｇＲ、ＤＡＰ１０、及びＤＡＰ１２の阻害、モチーフＤ／Ｅｘ０−２ＹｘｘＬ／ＩＸ６−８ＹｘｘＬ／Ｉ（配列番号２４７）を含む１つ以上の受容体の阻害、１つ以上のパターン認識受容体（ＰＲＲ）、例えば、病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）を識別する受容体、及び損傷関連分子パターン（ＤＡＭＰ）を識別する受容体によるシグナル伝達の阻害、１つ以上のＴｏｌｌ様受容体によるシグナル伝達の阻害、ＪＡＫ−ＳＴＡＴシグナル伝達経路の阻害、活性化Ｂ細胞核内因子カッパ軽鎖エンハンサー（ＮＦκＢ）の阻害、１つ以上の炎症性受容体、例えば、ＣＤ８６であって、ミクログリア、マクロファージ、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、または細胞傷害性Ｔ細胞の１つ以上で発現される受容体の調節された発現、１つ以上のＣＤ３３依存性遺伝子の発現の増大、破壊されたＣＤ３３依存性遺伝子発現の正常化、及び１つ以上のＩＴＡＭ依存性遺伝子、例えば、ＮＦＡＴ転写因子の発現の低減、免疫抑制樹状細胞、免疫抑制マクロファージ、骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ、免疫抑制好中球、及び制御性Ｔ細胞の１つ以上の分化の促進、免疫抑制樹状細胞、免疫抑制マクロファージ、骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ、免疫抑制好中球、及び制御性Ｔ細胞の１つ以上の機能の促進、免疫抑制樹状細胞、免疫抑制マクロファージ、骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ、免疫抑制好中球、及び制御性Ｔ細胞の１つ以上の、腫瘍への浸潤の増大、腫瘍、末梢血、またはその他のリンパ器官における腫瘍促進性骨髄／顆粒球免疫抑制性細胞数の増大、骨髄由来サプレッサー細胞の腫瘍促進性作用の強化、腫瘍または末梢血における腫瘍促進性サイトカイン、例えば、ＴＧＦ−ベータまたはＩＬ−１０の発現の増大、腫瘍促進性ＦｏｘＰ３＋調節性Ｔリンパ球の腫瘍浸潤の増大、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の腫瘍促進性作用の強化、腫瘍死滅能を備えた腫瘍特異的Ｔリンパ球の活性化の低減、腫瘍死滅能を備えたＣＤ４５＋ＣＤ３＋Ｔリンパ球の活性化の低減、腫瘍死滅能を備えた腫瘍特異的ＮＫ細胞の浸潤の低減、免疫応答を強化する能力を備えた腫瘍特異的Ｂリンパ球の浸潤の低減、腫瘍死滅能を備えた腫瘍特異的Ｔリンパ球の浸潤の低減、ＣＤ４５＋ＣＤ３＋Ｔリンパ球の浸潤の低減、腫瘍体積の増大、腫瘍増殖率の増大、腫瘍再発率の増大、抗腫瘍Ｔ細胞応答を調節する１つ以上の免疫療法であって、任意に、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ３、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ、ＤＲ−５、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、ＣＳＦ−１受容体、及びそれらの任意の組合せから選択される１つ以上のタンパク質を標的とする免疫療法である該１つ以上の免疫療法、または、１つもしくは化学療法剤及び／またはより多くの癌ワクチンの有効性の低減、ＰＬＣγ／ＰＫＣ／カルシウム動員��阻害、ならびにＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ、Ｒａｓ／ＭＡＰＫシグナル伝達の阻害が挙げられる。
【０１０８】
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３遮断抗体などの薬剤での癌の治療は：（ｉ）癌患者の腫瘍、末梢血、及びリンパ器官に蓄積する腫瘍促進性骨髄／顆粒球免疫抑制性細胞の生存、増殖、成熟、分化、及び／または機能を直接もしくは間接的に低減し、（ｉｉ）癌患者の腫瘍、末梢血、及びその他のリンパ器官における腫瘍促進性骨髄／顆粒球免疫抑制性細胞数を低減し、（ｉｉｉ）骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の腫瘍促進性作用を遮断し、（ｉｖ）癌患者の腫瘍及び末梢血における腫瘍促進性サイトカイン、例えば、ＴＧＦ−ベータ及びＩＬ−１０の発現を低減し、（ｖ）腫瘍促進性ＦｏｘＰ３＋調節性Ｔリンパ球の腫瘍浸潤を低減し、（ｖｉ）ミクログリア、マクロファージ、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、または細胞傷害性Ｔ細胞の１つ以上による腫瘍細胞殺傷を増大し、（ｖｉｉ）ミクログリア、マクロファージ、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、または細胞傷害性Ｔ細胞の１つ以上の抗腫瘍細胞増殖活性を増大し、（ｖｉｉｉ）ミクログリア、マクロファージ、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、または細胞傷害性Ｔ細胞の１つ以上の抗腫瘍細胞転移活性を増大し、（ｉｘ）１つ以上のＩＴＡＭモチーフ含有受容体、例えば、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、ＦｃｇＲ、ＤＡＰ１０、及びＤＡＰ１２を増大し、（ｘ）１つ以上のパターン認識受容体（ＰＲＲ）、例えば、病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）を識別する受容体、損傷関連分子パターン（ＤＡＭＰ）を識別する受容体、及びそれらの任意の組合せによるシグナル伝達を増大し、（ｘｉ）モチーフＤ／Ｅｘ０−２ＹｘｘＬ／ＩＸ６−８ＹｘｘＬ／Ｉ（配列番号２４７）を含む１つ以上の受容体を増大し、（ｘｉｉ）１つ以上のＴｏｌｌ様受容体によるシグナル伝達を増大し、（ｘｉｉｉ）ＪＡＫ−ＳＴＡＴシグナル伝達経路を増大し、（ｘｉｖ）活性化Ｂ細胞核内因子カッパ軽鎖エンハンサー（ＮＦκＢ）を増大し、（ｘｖ）ＩＴＡＭモチーフ含有受容体をリン酸化し、（ｘｖｉ）例えば、活性化Ｔ細胞核内因子（ＮＦＡＴ）の転写因子によって活性化される１つ以上のＩＴＡＭ依存性遺伝子の発現を増大し、（ｘｖｉｉ）免疫抑制樹状細胞、免疫抑制マクロファージ、骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ、免疫抑制好中球、及び制御性Ｔ細胞の１つ以上の分化及び／または機能を阻害し、（ｘｖｉｉｉ）免疫抑制樹状細胞、免疫抑制マクロファージ、骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ、免疫抑制好中球、及び制御性Ｔ細胞の１つ以上の、腫瘍への浸潤を低減もしくは阻害し、（ｘｉｘ）腫瘍、末梢血、またはその他のリンパ器官における腫瘍促進性骨髄／顆粒球免疫抑制性細胞数を低減し、（ｘｘ）骨髄由来サプレッサー細胞の腫瘍促進性作用を低減もしくは阻害し、（ｘｘｉ）腫瘍または末梢血における腫瘍促進性サイトカイン、例えば、ＴＧＦ−ベータまたはＩＬ−１０の発現を低減し、（ｘｘｉｉ）腫瘍死滅能を備えた腫瘍特異的Ｔリンパ球の活性を増大し、（ｘｘｉｉｉ）腫瘍死滅能を備えた腫瘍特異的ＮＫ細胞の浸潤を増大し、（ｘｘｉｖ）ＮＫ細胞の腫瘍死滅能を増大し、（ｘｘｖ）免疫応答を強化する���力を備えた腫瘍特異的Ｂリンパ球の浸潤を増大し、（ｘｘｖｉ）腫瘍体積を低減または抑制し、（ｘｘｖｉｉ）腫瘍増殖率を低減または抑制し、（ｘｘｖｉｉｉ）転移を低減または抑制し、（ｘｘｉｘ）腫瘍再発率を低減または抑制し、（ｘｘｘ）抗腫瘍Ｔ細胞応答を調節する１つ以上の免疫療法、例えば、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ３、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ、ＤＲ−５、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、ＣＳＦ１受容体、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される１つ以上のタンパク質を標的とする免疫療法、または１つ以上の癌ワクチンの有効性を増大し、（ｘｘｘｉ）ＰＬＣγ／ＰＫＣ／カルシウム動員を活性化し、ならびに（ｘｘｘｉｉ）ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ、Ｒａｓ／ＭＡＰＫシグナル伝達を活性化する。いくつかの実施形態では、本開示の骨髄細胞としては、制限なく、ＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄細胞、ＣＤ１４＋骨髄細胞、及び骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）が挙げられる。いくつかの実施形態では、本開示の骨髄細胞は、非腫瘍形成性骨髄細胞である。
【０１０９】
免疫抑制細胞は、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）とも呼ばれることがある。ヒトにおいて、ＭＤＳＣは、以下の組合せのマーカーの１つによって定義することができる。：（１）ＣＤ１４＋ＨＬＡ−ＤＲ低／−、（２）ＣＤ１４＋ＩＬ４Ｒα＋、（３）ＣＤ１４＋ＨＬＡ−ＤＲ−ＩＬ４Ｒα＋、（４）ＣＤ３４＋ＣＤ１４＋ＣＤ１１ｂ＋ＣＤ３３＋、（５）ＣＤ１１ｂ＋ＣＤ１４＋ＣＤ３３＋、（６）ＣＤ３３＋ＨＬＡ−ＤＲ−、（７）Ｌｉｎ−ＨＬＡ−ＤＲ−、（８）Ｌｉｎ−ＨＬＡ−ＤＲ−ＣＤ３３＋、（９）Ｌｉｎ−ＨＬＡ−ＤＲ−ＣＤ３３＋ＣＤ１１ｂ＋、（１０）Ｌｉｎ−ＣＤ３３＋ＣＤ１１ｂ＋ＣＤ１５＋、（１１）Ｌｉｎ−ＨＬＡ−ＤＲ−ＣＤ３３＋ＣＤ１１ｂ＋ＣＤ１４−ＣＤ１５＋、（１２）ＣＤ１１ｂ＋ＣＤ１４−ＣＤ３３＋、（１３）ＣＤ１１ｂ＋ＣＤ１４−ＨＬＡ−ＤＲ−ＣＤ３３＋ＣＤ１５＋、（１４）ＣＤ３３＋ＨＬＡ−ＤＲ−ＣＤ１５＋、（１５）ＣＤ１５＋ＩＬ４Ｒα＋、（１６）ＣＤ１１ｂ＋ＣＤ１５＋ＣＤ６６ｂ＋、（１７）ＣＤ１５＋ＦＳＣ低ＳＳＣ高、（１８）ＣＤ１５高ＣＤ３３＋、（１９）ＣＤ１１ｂ＋ＣＤ１４−ＣＤ１５＋、（２０）ＣＤ６６ｂ＋ＳＳＣ高、及び（２１）ＣＤ１１ｂ＋ＣＤ１５＋（Ｓｏｌｉｔｏ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＮＹ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２０１４も参照のこと）。マウスでは、ＭＤＳＣは、表面マーカーＣＤ４５＋、ＣＤ１１ｂ＋、Ｇｒ１＋、及び／またはＩｌ４Ｒａ＋の発現によって定義することができる。さらなる例示的な免疫抑制単球系統は、ＣＤ４５＋、ＣＤ１１ｂ＋、Ｇｒ１低、及びＣＤ４５＋、ＣＤ１１ｃ＋である。
【０１１０】
本開示はさらに、ＣＤ３３と結合またはこれと相互作用する薬剤、例えば、抗ＣＤ３３抗体に関する。ある特定の実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ＣＤ３３の細胞表面レベルを大きく減少させない、及び／または、ＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用を阻害しない。
【０１１１】
ＣＤ３３タンパク質
１つの態様において、本開示は、本開示のＣＤ３３タンパク質内でエピトープなどの領域と相互作用するか、さもなければこれに結合する単離（例えば、モノクローナル）抗体などの薬剤を提供する。いくつかの実施形態では、本開示の抗ＣＤ３３抗体などの本開示の薬剤は、ＣＤ３３タンパク質に結合し、ＣＤ３３タンパク質に結合した後に１つ以上のＣＤ３３活性、例えば、細胞におけるＣＤ３３の発現と関連する活性を調節する。本開示のＣＤ３３タンパク質としては、制限なく、哺乳動物ＣＤ３３タンパク質、ヒトＣＤ３３タンパク質、マウスＣＤ３３タンパク質、及びラットＣＤ３３タンパク質が挙げられる。
【０１１２】
ＣＤ３３は、様々に、ＣＤ３３分子、Ｓｉｇｌｅｃ３、Ｓｉｇｌｅｃ−３、ＣＤ３３抗原（Ｇｐ６７）、Ｐ６７、Ｇｐ６７、シアル酸結合−Ｉｇ様レクチン３、骨髄細胞表面抗原ＣＤ３３、またはＦＬＪ００３９１と呼ばれる。
【０１１３】
ＣＤ３３は、制限なく、マクロファージ、樹状細胞、破骨細胞、単球、及びミクログリアなどの骨髄系統の細胞で主に発現される免疫グロブリン様受容体である。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３は、ＣＤ６４と受容体シグナル伝達複合体を形成する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３シグナル伝達は、ＰＩ３Ｋまたは他の細胞内シグナルの下流阻害をもたらす。骨髄細胞上では、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）シグナルがＣＤ３３活性の阻害にとって、例えば、感染応答の観点から重要である。ＴＬＲ、例えば、マクロファージ及び樹状細胞で発現されるＴＬＲはまた、病的炎症反応において重要な役割を果たす。
【０１１４】
様々なＣＤ３３ホモログが知られており、制限なく、ヒトＣＤ３３、マウスＣＤ３３、ラットＣＤ３３、チンパンジーＣＤ３３、アカゲザルＣＤ３３、イヌＣＤ３３、ウシＣＤ３３、ゼブラフィッシュＣＤ３３、カモノハシＣＤ３３、及びトカゲＣＤ３３が挙げられる。ヒトＣＤ３３のアミノ酸配列を配列番号１として以下に記載する。
2018518176.tif 000004
【０１１５】
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３は、シグナル配列を含む前駆タンパク質である。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３は、成熟タンパク質である。いくつかの実施形態では、該成熟ＣＤ３３タンパク質は、シグナル配列を含まない。いくつかの実施形態では、該成熟ＣＤ３３タンパク質は、細胞上で発現される。いくつかの実施形態では、該成熟ＣＤ３３タンパク質は、制限なく、ヒト樹状細胞、ヒトマクロファージ、ヒト単球、ヒト破骨細胞、ヒト好中球、ヒトＴ細胞、ヒトＴヘルパー細胞、ヒト細胞傷害性Ｔ細胞、ヒト顆粒球、及びヒトミクログリアを含めた細胞上、例えば、細胞表面で発現される。本開示の薬剤、例えば、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、本明細書に開示の任意の細胞で発現される本開示のＣＤ３３タンパク質のいずれかと結合し得る。
【０１１６】
本開示のＣＤ３３タンパク質、例えば、ヒトＣＤ３３は、制限なく、配列番号１のアミノ酸残基１〜１７に位置するシグナル配列、配列番号１のアミノ酸残基１９〜１３５に位置する細胞外免疫グロブリン様可変型（ＩｇＶ）ドメイン、配列番号１のアミノ酸残基１４５〜２２８に位置するＩｇ様Ｃ２型ドメイン、配列番号１のアミノ酸残基２６０〜２８２に位置する膜貫通ドメイン、配列番号１のアミノ酸残基３３８〜３４３に位置するＩＴＩＭモチーフ１、及び配列番号１のアミノ酸残基３５６〜３６１に位置するＩＴＩＭモチーフ２を含めたいくつかのドメインを含む。当業者であれば理解するように、本開示のドメインの始まり及び終わりの残基は、該ドメインの決定に使用されるコンピューターモデリングプログラムまたは方法に応じて異なり得る。
【０１１７】
本開示のある特定の態様は、ヒトＣＤ３３、または、制限なく、哺乳動物ＣＤ３３タンパク質及び他の種由来のＣｄ３３オルソログを含めたそのホモログに結合する抗ＣＤ３３抗体を提供する。例示的なＣＤ３３ホモログ及びオルソログを表Ａに記載する。
表Ａ：ＣＤ３３ホモログ及びオルソログ
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【０１１８】
したがって、本明細書で使用される、本開示の「ＣＤ３３」タンパク質としては、制限なく、哺乳動物ＣＤ３３タンパク質、ヒトＣＤ３３タンパク質、霊長類ＣＤ３３タンパク質、マウスＣＤ３３タンパク質、及びラットＣＤ３３タンパク質が挙げられる。さらに、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、哺乳動物ＣＤ３３タンパク質、ヒトＣＤ３３タンパク質、霊長類ＣＤ３３、マウスＣＤ３３タンパク質、及びラットＣＤ３３タンパク質の１つ以上の中のエピトープと結合し得る。いくつかの実施形態では、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、哺乳動物ＣＤ３３タンパク質、ヒトＣＤ３３タンパク質、またはその両方に特異的に結合し得る。ある特定の実施形態では、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、ヒトＣＤ３３、マウスＣＤ３３、またはその両方に特異的に結合し得る。
【０１１９】
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３の細胞レベルを低下させる、及び／またはＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用を阻害する、または、ＣＤ３３と結合もしくはこれと相互作用する本開示の薬剤、例えば、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、ｐＨ依存的にＣＤ３３と結合し得る。いくつかの実施形態では、本開示の薬剤、例えば、抗ＣＤ３３抗体は、中性ｐＨでＣＤ３３に結合することができ、該ＣＤ３３タンパク質から解離することなく内在化され得る。別の方法として、酸性ｐＨで本開示の薬剤、例えば、抗ＣＤ３３抗体は、それらが内在化されるとＣＤ３３から解離し得、その後エンドソーム／リソソーム経路によって分解される。ある特定の実施形態では、抗ＣＤ３３抗体は、ｐＨ５．５〜８．０、５．５〜７．５、５．５〜７．０、５．５〜６．５、５．５〜６．０、６．０〜８．０、６．５〜８．０、７．０〜８．０、７．５〜８．０、６．０〜７．５、６．０〜７．０、６．５〜７．５の範囲でＣＤ３３と結合する。ある特定の実施形態では、抗ＣＤ３３抗体は、ｐＨ６．０未満、５．５未満、５．０未満、４．５未満、４．０未満、３．５未満、３．０未満、２．５、または２．０未満でＣＤ３３から解離する。
【０１２０】
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３の細胞レベルを低下させる、及び／またはＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用を阻害する、または、ＣＤ３３に結合もしくはこれと相互作用する本開示の薬剤、例えば、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、本開示の野生型ＣＤ３３タンパク質、その天然に存在するバリアント、及び／またはその疾患バリアントに結合する。
【０１２１】
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３の細胞レベルを低下させる、及び／またはＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用を阻害する、または、ＣＤ３３と結合もしくはこれと相互作用する本開示の薬剤、例えば、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、ヒトＣＤ３３のバリアントであって、（Ｃ）ヌクレオチドの単一ヌクレオチド多型（ＳＮＰ）ｒｓ３８６５４４４Ｃを含むバリアントと結合する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３の細胞レベルを低下させる、及び／またはＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用を阻害する、または、ＣＤ３３と結合もしくはこれと相互作用する本開示の薬剤、例えば、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、ヒトＣＤ３３のバリアントであって、（Ａ）ヌクレオチドのＳＮＰ  ｒｓ３８６５４４４を含むバリアントと結合する。いくつかの実施形態では、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、ヒトＣＤ３３のバリアントであって、ＳＮＰ  ｒｓ３８６５４４４ＡＣまたはｒｓ３８６５４４４ＣＣを含むバリアントと結合する。
【０１２２】
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３の細胞レベルを低下させる、及び／またはＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用を阻害する、または、ＣＤ３３と結合もしくはこれと相互作用する本開示の薬剤、例えば、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、ヒトＣＤ３３のバリアントであって、ＧＧヌクレオチド、ＡＡヌクレオチド、またはＡＧヌクレオチドのＳＮＰ  ｒｓ３５１１２９４０を含むバリアントと結合する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３の細胞レベルを低下させる、及び／またはＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用を阻害する、または、ＣＤ３３と結合もしくはこれと相互作用する本開示の薬剤、例えば、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、ヒトＣＤ３３のバリアントであって、ＣＣ、ＣＴ、またはＴＴ遺伝子型のＳＮＰ  ｒｓ１２４５９４１９を含むバリアントと結合する。ある特定の実施形態では、当該対象は、ＧＧヌクレオチド、ＣＧヌクレオチド、またはＣＣヌクレオチドのコードＳＮＰ、ｒｓ１８０３に対してホモ接合性またはヘテロ接合性を有する。
【０１２３】
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３の細胞レベルを低下させる、及び／またはＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用を阻害する、または、ＣＤ３３と結合もしくはこれと相互作用する本開示の薬剤、例えば、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、制限なく、ヒト樹状細胞、ヒトマクロファージ、ヒト単球、ヒト破骨細胞、ヒト好中球、ヒトＴ細胞、ヒトＴヘルパー細胞、ヒト細胞傷害性Ｔ細胞、ヒト顆粒球、及びヒトミクログリアを含めた細胞表面で発現されるＣＤ３３タンパク質と結合する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３の細胞レベルを低下させる、及び／またはＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用を阻害する、または、ＣＤ３３と結合もしくはこれと相互作用する本開示の薬剤、例えば、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、細胞表面で発現されるＣＤ３３タンパク質に結合し、表面発現されたＣＤ３３タンパク質に結合した後、少なくとも１つの本開示のＣＤ３３活性を調節（例えば、誘導または阻害）する。本開示のいくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ＣＤ３３タンパク質に特異的に結合する。本開示のいくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、さらに、少なくとも１つのさらなるＳｉｇｌｅｃタンパク質に結合する。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、該少なくとも１つのさらなるＳｉｇｌｅｃタンパク質の１つ以上の活性、または該少なくとも１つのさらなるＳｉｇｌｅｃタンパク質を発現する細胞の１つ以上の活性を調節する。
【０１２４】
ＣＤ３３リガンド
本開示のＣＤ３３タンパク質は、１つ以上のＣＤ３３リガンドと相互作用する（例えば、それに結合する）ことができる。
【０１２５】
例示的なＣＤ３３リガンドとしては、制限なく、シアル酸、シアル酸含有糖脂質、シアル酸含有糖タンパク質、アルファ−２，６結合シアル酸含有糖脂質、アルファ−２，６結合シアル酸含有糖タンパク質、アルファ−２，３結合シアル酸含有糖脂質、アルファ−２，３結合シアル酸含有糖タンパク質、アルファ−１酸性糖タンパク質（ＡＧＰ）、ＣＤ２４タンパク質、ガングリオシド（例えば、シアル化グリカンに結合したセラミドを含む糖脂質）、分泌されたムチン、赤血球で発現されるＣＤ３３リガンド、細菌細胞で発現されるＣＤ３３リガンド、アポトーシスを起こした細胞で発現されるＣＤ３３リガンド、腫瘍細胞で発現されるＣＤ３３リガンド、ウイルスで発現されるＣＤ３３リガンド、樹状細胞で発現されるＣＤ３３リガンド、神経細胞で発現されるＣＤ３３リガンド、グリア細胞で発現されるＣＤ３３リガンド、ミクログリアで発現されるＣＤ３３リガンド、アストロサイトで発現されるＣＤ３３リガンド、ベータアミロイド斑上のＣＤ３３リガンド、タウのもつれ上のＣＤ３３リガンド、病原タンパク質上のＣＤ３３リガンド、病原ペプチド上のＣＤ３３リガンド、マクロファージで発現されるＣＤ３３リガンド、ナチュラルキラー細胞で発現されるＣＤ３３リガンド、Ｔ細胞で発現されるＣＤ３３リガンド、Ｔヘルパー細胞で発現されるＣＤ３３リガンド、細胞傷害性Ｔ細胞で発現されるＣＤ３３リガンド、Ｂ細胞で発現されるＣＤ３３リガンド、腫瘍埋没免疫抑制樹状細胞で発現されるＣＤ３３リガンド、腫瘍埋没免疫抑制マクロファージで発現されるＣＤ３３リガンド、骨髄由来サプレッサー細胞で発現されるＣＤ３３リガンド、及び制御性Ｔ細胞で発現されるＣＤ３３リガンドが挙げられる。いくつかの実施形態では、本開示のＣＤ３３リガンドはガングリオシドである。ガングリオシドは一般に、共通のラクト−セラミドコア及び１つ以上のシアル酸残基を共有する。
【０１２６】
適切なＣＤ３３リガンドのさらなる例を図３に示す。
【０１２７】
適切なガングリオシドリガンドのさらなる例を図４に示し、表Ｂに記載する。一般に、ガングリオシドは、糖鎖上に１つ以上のシアル酸（例えば、ｎ−アセチルノイラミン酸、ＮＡＮＡ）が結合したスフィンゴ糖脂質からなる分子である。
表Ｂ：例示的なガングリオシドのＣＤ３３リガンド構造
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【０１２８】
ＣＤ３３剤
本開示の特定の態様は、ＣＤ３３の細胞レベルを低下させる、及び／またはＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用を阻害する薬剤（例えば、ＣＤ３３剤）に関する。本開示の他の態様は、ＣＤ３３と結合またはこれと相互作用する薬剤（例えば、ＣＤ３３剤）に関する。いくつかの実施形態では、本開示の薬剤は、インビトロ、インサイチュ、及び／または、インビボにおいて、ＣＤ３３タンパク質の１つ以上の活性を遮断する、阻害する、減少させる、または妨害する。いくつかの実施形態では、本開示の薬剤は、インビトロ、インサイチュ、及び／または、インビボにおいて、ＣＤ３３タンパク質の１つ以上の活性を遮断せず、阻害せず、減少させず、妨害もしない。いくつかの実施形態では、本開示の薬剤は、インビトロ、インサイチュ、及び／または、インビボにおいて、ＣＤ３３タンパク質の１つ以上の活性を増大、活性化、または誘導する。
【０１２９】
ある特定の実施形態では、本開示の薬剤は、ＣＤ３３の細胞レベルを低下させる、及び／またはＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用を阻害する薬剤（例えば、ＣＤ３３剤）である。ＣＤ３３の細胞レベルを低下させる、及び／またはＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用を阻害する本開示の薬剤は、１つ以上の以下の特性を有する分子である：（１）１つ以上のＣＤ３３活性を阻害または低下させる、（２）ＣＤ３３のそのリガンドの１つ以上に対する結合を阻害または低下させる能力、（３）ＣＤ３３発現細胞におけるＣＤ３３発現（例えば、ｍＲＮＡレベル及び／またはタンパク質レベルで）を低下させる能力、（４）ＣＤ３３タンパク質と相互作用する、これに結合する、またはこれを認識する能力、（５）ＣＤ３３タンパク質と特異的に相互作用するまたはこれに結合する能力、ならびに（６）本明細書で記載または企図される疾患もしくは障害の任意の態様を治療、改善、または予防する能力。
【０１３０】
ＣＤ３３の産生を阻害する例示的な薬剤としては、制限なく、ＣＤ３３の合成及び／または放出を特異的に阻害する化合物、ＣＤ３３に対するアンチセンス分子、またはＣＤ３３をコードする核酸に対する短干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）分子が挙げられる。１つ以上のＣＤ３３活性を阻害するさらなる例示的な薬剤としては、制限なく、ＣＤ３３タンパク質に特異的に結合する抗ＣＤ３３抗体、１つ以上のＣＤ３３活性を特異的に阻害する化合物、例えば、小分子阻害剤及び／またはペプチド阻害剤、ＣＤ３３の１つ以上のリガンドに対する結合を特異的に阻害する化合物、ＣＤ３３構造類似体、またはＣＤ３３に結合するＲＮＡもしくはＤＮＡアプタマーが挙げられる。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３の細胞レベルを低下させる、及び／またはＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用を阻害する薬剤は、アロステリック阻害剤である。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３の細胞レベルを低下させる、及び／またはＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用を阻害する薬剤は、オルソステリック阻害剤である。
【０１３１】
ある特定の実施形態では、ＣＤ３３の細胞レベルを低下させる、及び／またはＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用を阻害する薬剤は、制限なく、小ペプチドまたはペプチド様分子、可溶性ペプチド、及び合成非ペプチジル有機もしくは無機化合物を含めた小分子阻害剤である。小分子阻害剤は、分子量約１００〜約２０，０００ダルトン（Ｄａ）、約５００〜約１５，０００Ｄａ、約１０００〜約１０，０００Ｄａのいずれかを有し得る。１つ以上のＣＤ３３活性に対して小分子が有する阻害効果をもたらす方法及びこれを試験する方法は、当技術分野では周知であり、そのような方法を用いてＣＤ３３活性に対する該小分子阻害剤の効果を評価することができる。例えば、本明細書に開示の方法及びアッセイのいずれかを用いて、ＣＤ３３の細胞レベルを低下させる、及び／またはＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用を阻害する小分子阻害剤をスクリーニングしてもよい。
【０１３２】
ある特定の実施形態では、ＣＤ３３の細胞レベルを低下させる、及び／またはＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用を阻害する薬剤は、ＣＤ３３と結合またはこれと物理的に相互作用する抗ＣＤ３３抗体である。該抗体は、標的抗原（例えば、ＣＤ３３）に対して、ナノモルまたはピコモルですらある親和性を有し得る。ある特定の実施形態では、該抗体のＫＤは、約０．０５〜約１００ｎＭである。ある特定の実施形態では、該抗体の解離定数（ＫＤ）は、約０．５〜約１０ｎＭである。例えば、該抗体のＫＤは、約１００ｎＭ、約５０ｎＭ、約１０ｎＭ、約９ｎＭ、約８ｎＭ、約７ｎＭ、約６ｎＭ、約５ｎＭ、約４ｎＭ、約３ｎＭ、約２ｎＭ、約１ｎＭ、約５００ｐＭ、約４００ｐＭ、約３００ｐＭ、約２００ｐＭ、約１７５ｐＭ、約１７０ｐＭ、約１６９ｐＭ、約１６８ｐＭ、約１６７ｐＭ、約１６６ｐＭ、約１６６．２ｐＭ、約１６５ｐＭ、約１６４ｐＭ、約１６３ｐＭ、約１６２ｐＭ、約１６１ｐＭ、約１６０ｐＭ、約１５０ｐＭ、約１４５ｐＭ、約１４０ｐＭ、約１３９ｐＭ、約１３８ｐＭ、約１３８．２ｐＭ、約１３７ｐＭ、約１３６ｐＭ、約１３５ｐＭ、約１３４ｐＭ、約１３３ｐＭ、約１３２ｐＭ、約１３１ｐＭ、約１３０ｐＭ、約１２０ｐＭ、約１１０ｐＭ、約１００ｐＭ、または約５０ｐＭのいずれかから、約２ｐＭ、約５ｐＭ、約１０ｐＭ、約１５ｐＭ、約２０ｐＭ、または約４０ｐＭのいずれかである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に対する解離定数（ＫＤ）は、温度約２５℃で測定される。いくつかの実施形態では、該ＫＤは、一価抗体（例えば、Ｆａｂ）または完全長抗体を一価形態で用いて測定される。特異的にＣＤ３３と相互作用する及び／またはこれに結合する抗体の調製ならびに選択方法を本明細書に記載する（例えば、実施例１参照）。
【０１３３】
ある特定の実施形態では、ＣＤ３３の細胞レベルを低下させる、及び／またはＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用を阻害する薬剤は、ＣＤ３３をコードする核酸を標的とすることによって機能的ＣＤ３３の発現を遮断する、または減少させることが可能な少なくとも１つのアンチセンス分子を含む。ＣＤ３３の核酸配列は、当技術分野で既知である。例えば、ヒトＣＤ３３は、ＮＣＢＩアクセッション番号ＮＭ＿００１０８２６１８．１で示される核酸配列を有し得、マウスＣＤ３３は、ＮＣＢＩアクセッション番号ＮＭ＿００１１１１０５８．１で示される核酸配列を有し得る。アンチセンスオリゴヌクレオチド分子の調製方法が知られており、そのような方法を用いて、他のポリヌクレオチドと交差反応することなく、ＣＤ３３ｍＲＮＡの１つ以上に特異的に結合するアンチセンスオリゴヌクレオチドを調製することができる。例示的な標的化部位としては、開始コドン、５’調節領域、任意の保存されたコンセンサス領域を含めたコード配列、及び３’非翻訳領域が挙げられるがこれらに限定されない。ある特定の実施形態では、該アンチセンスオリゴヌクレオチドは、長さ約１０〜約１００ヌクレオチド、長さ約１５〜約５０ヌクレオチド、長さ約１８〜約２５ヌクレオチド、またはそれ以上である。ある特定の実施形態では、該オリゴヌクレオチドはさらに、ヌクレアーゼ耐性などを増加させるための化学的修飾、例えば、当業者に既知のホスホロチオエート結合及び２’−Ｏ−糖修飾を含む。
【０１３４】
ある特定の実施形態では、ＣＤ３３の細胞レベルを低下させる、及び／またはＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用を阻害する薬剤は、ＣＤ３３をコードする核酸を標的とすることによって機能的ＣＤ３３の発現を遮断する、または減少させることが可能な少なくとも１つのｓｉＲＮＡ分子を含む。ｓｉＲＮＡ分子の調製方法は当技術分野で周知であり、そのような方法を用いて、他のポリヌクレオチドと交差反応することなく、ＣＤ３３ｍＲＮＡを特異的に標的とするｓｉＲＮＡ分子を調製することができる。ｓｉＲＮＡ分子は、例えば、通常の固相オリゴヌクレオチド合成によるなどの方法によって生成され得る、多くの場合、ｓｉＲＮＡ剤の半減期及び／または有効性を増加させるための、及び／またはより堅牢な送達製剤を可能にするための化学的修飾を組み込む。別の方法として、ｓｉＲＮＡ分子は、ｓｉＲＮＡの細胞内転写用の発現カセットをコードするベクターを用いて送達される。
【０１３５】
ある特定の実施形態では、ＣＤ３３の細胞レベルを低下させる、及び／またはＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用を阻害する薬剤は、ＣＤ３３と結合もしくはこれと物理的に相互作用し、ＣＤ３３と１つ以上のそのリガンド間の相互作用を遮断するＲＮＡまたはＤＮＡアプタマーである。特定の実施形態では、該アプタマーは、ＣＤ３３の成熟形態に結合する少なくとも１つのＲＮＡまたはＤＮＡアプタマーを含む。
【０１３６】
ある特定の実施形態では、ＣＤ３３の細胞レベルを低下させる、及び／またはＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用を阻害する薬剤は、少なくとも１つのＣＤ３３構造類似体を含む。ＣＤ３３構造類似体という用語は、ＣＤ３３のそれの一部と同様の３次元構造を有する化合物であって、インビトロまたはインビボにおける生理的条件下で１つ以上のＣＤ３リガンドに結合する化合物を指し、この場合、該結合は、少なくとも部分的にＣＤ３３の生物活性を阻害する。適切なＣＤ３３構造類似体は、リガンド、例えば、本開示のＣＤ３３リガンドに対するＣＤ３３結合の分子モデリングによって設計及び合成することができる。該ＣＤ３３構造類似体は、モノマー、ダイマー、または、親和性及び生物学的効果の改良を得るために望ましい任意の同一または異なる構造の組合せでのより高次の多量体であることができる。いくつかの実施形態では、該薬剤は、ＣＤ３３のアミノ酸配列に結合またはこれと相互作用する。
【０１３７】
ある特定の実施形態では、ＣＤ３３の細胞レベルを低下させる、及び／またはＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用を阻害する薬剤は、可溶性ＣＤ３３受容体タンパク質、可溶性ＣＤ３３−Ｆｃ融合タンパク質（例えば、ＣＤ３３イムノアドヘシン）、ＣＤ３３リガンドに結合する可溶性Ｓｉｇｌｅｃ受容体、ＣＤ３３リガンドに結合するＳｉｇｌｅｃ−Ｆｃ融合タンパク質（例えば、Ｓｉｇｌｅｃイムノアドヘシン）を含む。ある特定の実施形態では、そのような薬剤は、１つ以上のＣＤ３３リガンドと結合し、それによって所与のＣＤ３３リガンドと機能的ＣＤ３３受容体間の相互作用を妨ぐ。
【０１３８】
ある特定の実施形態では、本開示の薬剤は、ＣＤ３３と結合またはこれと相互作用する薬剤（例えば、ＣＤ３３剤）である。ＣＤ３３と結合またはこれと相互作用する例示的な薬剤としては、制限なく、不活性抗ＣＤ３３抗体、アゴニスト抗ＣＤ３３抗体、ＣＤ３３リガンド、ＣＤ３３リガンドアゴニスト断片、ＣＤ３３イムノアドヘシン、ＣＤ３３可溶性受容体、Ｓｉｇｌｅｃ−Ｆｃ融合タンパク質（例えば、Ｓｉｇｌｅｃイムノアドヘシン）、可溶性Ｓｉｇｌｅｃ受容体、ＣＤ３３リガンド模倣体、及び小分子化合物が挙げられる。小分子化合物は、分子量約１００〜約２０，０００ダルトン（Ｄａ）、約５００〜約１５，０００Ｄａ、約１０００〜約１０，０００Ｄａのいずれかを有し得る。１つ以上のＣＤ３３活性に対して薬剤が有する効果をもたらす方法及びこれを試験する方法は、当技術分野では周知であり、そのような方法を用いてＣＤ３３活性に対する該小分子阻害剤の効果を評価することができる。例えば、本明細書に開示の方法及びアッセイのいずれかを用いて、ＣＤ３３と結合またはこれと相互作用する小分子阻害剤をスクリーニングしてもよい。
【０１３９】
アッセイ
ＣＤ３３の細胞レベルを低下させる、及び／またはＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用を阻害する薬剤は、当技術分野で周知の方法、例えば、放射性標識阻害剤アッセイ、光学的アッセイ、タンパク質結合アッセイ、生化学的スクリーニングアッセイ、イムノアッセイ、質量シフト測定アッセイ、蛍光アッセイ、及び／または蛍光ペプチド開裂アッセイを用いて同定され、及び／または特徴づけられ得る。
【０１４０】
結合アッセイ及び他のアッセイ
ある特定の実施形態では、ＣＤ３３の細胞レベルを低下させる、及び／またはＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用を阻害する薬剤は、当技術分野で周知の、ＣＤ３３剤の候補のＣＤ３３に対する相互作用及び／または結合親和性の存在を検出する技術によって同定することができる。
【０１４１】
ある特定の実施形態では、ＣＤ３３と相互作用する薬剤は、放射性標識阻害剤アッセイを用いて同定することができる。例えば、既知量の放射性標識薬剤候補が、既知量の固定化ＣＤ３３及び緩衝液とともにインキュベートされ得る。続いて、該固定化ＣＤ３３は、緩衝液で洗浄され得、該固定化ＣＤ３３は、例えば、ガンマカウンターなどの当技術分野で既知の技術を用いて放射性標識ＣＤ３３剤候補の残りの存在について測定され得る。放射性標識物質の存在を示す測定結果は、該放射性標識薬剤候補が、ＣＤ３３と相互作用する、及び／またはこれに結合することが可能であることを示し得る。
【０１４２】
ある特定の実施形態では、ＣＤ３３と相互作用する薬剤は、光学技術を用いて同定され得る。ＣＤ３３剤を検出するための例示的な光学技術は、例えば、ＣＤ３３を比色共鳴グラフト表面に結合させ、それによって、光が取らざるを得ない光路の変化による反射光の波長をシフトさせ、続いて、候補薬剤をＣＤ３３と相互作用させた場合の反射光の波長のさらなる変化を測定することを含み得る。例えば、薬剤がＣＤ３３とインキュベートされた際に測定された反射光の波長に変化がないということは、該薬剤候補がＣＤ３３と相互作用することができないことを示し得る。薬剤候補がＣＤ３３とインキュベートされた際に測定された反射光の波長の変化は、該薬剤候補がＣＤ３３に結合及び／またはこれと相互作用することができることを示し得る。
【０１４３】
ある特定の実施形態では、ＣＤ３３と相互作用する薬剤は、タンパク質結合アッセイを用いて同定され得る。ＣＤ３３剤を検出するための例示的なタンパク質結合アッセイは、例えば、該薬剤候補の存在下でのＣＤ３３の免疫共沈降を含み得る。例えば、ＣＤ３３は、緩衝液中で該薬剤候補とインキュベートされ得、続いて、ＣＤ３３を捕捉する特定の固定化分子、例えば、抗ＣＤ３３抗体を用いてＣＤ３３を該薬剤候補の存在下で捕捉し、かつ当技術分野で既知の洗浄手順の過程でＣＤ３３を潜在的に相互作用剤候補と結合させてもよい。続いて、ＣＤ３３は、可能性として相互作用剤候補とともに放出され得るとともに、薬剤候補の存在は、例えば、質量分析及び／またはウェスタンブロットなどの技術によって、該薬剤候補の特性に基づいて検出され得る。
【０１４４】
ある特定の実施形態では、ＣＤ３３と相互作用する薬剤は、当技術分野で周知の生化学的アッセイ及び／またはイムノアッセイを用いて特定され得る。例示的な技術としては、例えば、ＣＤ３３濃度及び／またはタンパク質半減期の変化を、例えば、ウェスタンブロット、免疫染色、及び免疫共沈降などの技術を用いて定量的に測定するアッセイが挙げられ得る。例えば、薬剤候補は、ＣＤ３３を含む試料、例えば、ＣＤ３３を発現する細胞とともにインキュベートされ得、続いて、ＣＤ３３タンパク質の量及び／または細胞レベルが経時変化試験の過程の点で測定され得る。対照処理に対するタンパク質の量、細胞レベル、及び／またはタンパク質の半減期の変化は、該ＣＤ３３剤候補がＣＤ３３の半減期及び／または活性を変更することが可能であり得ることを示し得る。
【０１４５】
ある特定の実施形態では、質量シフト測定アッセイが、ＣＤ３３と相互作用する薬剤を同定するために使用され得る。例示的な質量シフト測定アッセイは、例えば、該薬剤候補がＣＤ３３と相互作用しているときに、例えば、これに限定されないが質量分析計などの機器を用いてＣＤ３３質量の変化を測定することによって、強固に結合した、及び／または共有結合したＣＤ３３剤の存在を検出することを含み得る。例えば、質量シフトアッセイは、該薬剤候補の相互作用の性質に応じて全タンパク質及び／またはペプチドベースの分析で実施され得る。当該薬剤対象のＣＤ３３への添加と相関する質量シフトの検出は、該薬剤候補がＣＤ３３と相互作用すること、さもなければこれを阻害することができ得ることを示し得る。さらに、例示的な質量シフト測定アッセイは、例えば、該薬剤候補がＣＤ３３と相互作用しているときに、例えば、表面プラズモン共鳴などの技術を用いて、それぞれの薬剤候補の質量と相関するＣＤ３３への質量の増加分を検出することを含み得る。例えば、光の屈折率の変化が測定され、センサー表面に付着したＣＤ３３の質量の変化と相関し得る。
【０１４６】
ある特定の実施形態では、化学的架橋アッセイを用いてＣＤ３３と相互作用するＣＤ３３剤が同定され得る。例えば、薬剤候補は、ＣＤ３３と、インビボまたはインビトロにおいて、ＣＤ３３と相互作用する薬剤候補を当該ＣＤ３３分子に共有結合することが可能な分子架橋剤とともにインキュベートされ得る。続いて、質量分析及び／またはウェスタンブロットなどであるがこれらに限定されない技術を用いて、ＣＤ３３と相互作用、さもなければこれを阻害することができ得る薬剤候補が特定され得る。例えば、該薬剤候補と共有結合的に架橋したＣＤ３３の検出は、ＣＤ３３と相互作用、さもなければこれを阻害することができ得る薬剤候補を示し得る。
【０１４７】
ある特定の実施形態では、ＣＤ３３と相互作用する薬剤は、蛍光アッセイを用いて同定され得る。例えば、既知量の蛍光剤候補が、既知量の固定化ＣＤ３３及び緩衝液とともにインキュベートされ得る。続いて、該固定化ＣＤ３３は、緩衝液で洗浄され得、該固定化ＣＤ３３は、例えば、蛍光検出などであるがこれに限定されない当技術分野で既知の技術を用いて蛍光ＣＤ３３剤候補の残りの存在について測定され得る。蛍光物質の存在を示す測定結果は、該蛍光剤候補が、ＣＤ３３と相互作用する、及び／またはこれに結合することが可能であることを示し得る。
【０１４８】
活性アッセイ
当技術分野で既知のアッセイ及び本明細書に記載のアッセイ（例えば、実施例１〜１０）を、本開示のＣＤ３３剤の生物活性を同定ならびに試験するために用いることができる。いくつかの実施形態では、１つ以上のＣＤ３３活性を調節するＣＤ３３剤の能力を試験するためのアッセイを提供する。
【０１４９】
抗ＣＤ３３抗体
本開示のある特定の態様は、ＣＤ３３の細胞レベルを低下させる、及び／またはＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用（例えば、結合）を阻害する抗ＣＤ３３抗体に関する。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用（例えば、結合）を阻害することなくＣＤ３３の細胞レベルを低下させる。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ＣＤ３３の細胞レベルを低下させることなくＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用（例えば、結合）を阻害する。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ＣＤ３３の細胞レベルを低下させ、かつＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用（例えば、結合）を阻害する。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ヒトＣＤ３３に対する解離定数（ＫＤ）が、市販の抗ＣＤ３３抗体（例えば、ゲムツズマブ）のものより低い。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、樹状細胞などのヒト細胞に、市販の抗ＣＤ３３抗体（例えば、ゲムツズマブもしくはリンツズマブ）のものより低い半数効果濃度（ＥＣ５０）で結合する。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ＣＤ３３の細胞レベルを、市販の抗ＣＤ３３抗体（例えば、ゲムツズマブもしくはリンツズマブ）のものより低い半数効果濃度（ＥＣ５０）で低下させる。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ヒトＣＤ３３に対する解離定数（ＫＤ）が、例えば、該ＫＤが温度約２５℃で測定された場合に、３００ｐＭ〜１０ｐＭの範囲であり得る。いくつかの実施形態では、該ＫＤは、一価の抗体、または一価形態の完全長抗体を用いて測定される。いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ３３に対する該解離定数（ＫＤ）は、例えば、該ＫＤが温度約２５℃で測定された場合に、３００ｐＭ未満である。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ヒト細胞、例えば、樹状細胞に、半数効果濃度（ＥＣ５０）が、例えば、温度約４℃で測定された場合に２００ｐＭ〜１０ｐＭの範囲であり得るＥＣ５０で結合する。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、６５ｐＭ〜２０ｐＭの範囲であり得るＥＣ５０でＣＤ３３の細胞レベルを低下させる。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、８．０ｍｇ／ｋｇ〜２．０ｍｇ／ｋｇの範囲であり得るＥＣ５０で、インビボにおいてＣＤ３３の細胞レベルを低下させる。いくつかの実施形態では、インビボでのＣＤ３３の細胞レベルを低下させるためのＥＣ５０は、適切なげっ歯類、例えば、ラットまたはマウスを用いて測定される。いくつかの実施形態では、インビボでのＣＤ３３の細胞レベルを低下させるためのＥＣ５０は、マウスモデル、例えば、実施例３に記載のものを用いて測定される。
【０１５０】
いくつかの実施形態では、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、ヒトＣＤ３３に対する解離定数（ＫＤ）が、市販の抗ＣＤ３３抗体（例えば、ゲムツズマブ）のヒトＣＤ３３に対するＫＤより、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２０％、少なくとも２０％、少なくとも２０％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、またはそれを超えるパーセンテージ低い。本明細書に記載の任意の適切な方法（例えば、実施例１参照）を用いて、該解離定数（ＫＤ）を測定してもよい。いくつかの実施形態では、該ＫＤは、温度約２５℃で測定される。いくつかの実施形態では、該ＫＤは、一価抗体または一価形態の完全長抗体を用いて測定される（例えば、実施例１に記載のＢｉａＣｏｒｅアッセイで）。
【０１５１】
いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ヒト細胞、例えば、初代樹状細胞に、市販の抗ＣＤ３３抗体（例えば、ゲムツズマブもしくはリンツズマブ）のものより、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２０％、少なくとも２０％、少なくとも２０％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、またはそれを超えるパーセンテージ低い半数効果濃度（ＥＣ５０）で結合する。本明細書に記載の任意の適切な方法（例えば、実施例１参照）を用いて、ＥＣ５０を計算してもよい。いくつかの実施形態では、該ＥＣ５０は、温度約４℃で測定される。
【０１５２】
いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ＣＤ３３の細胞レベルを、市販の抗ＣＤ３３抗体（例えば、ゲムツズマブもしくはリンツズマブ）のものより、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２０％、少なくとも２０％、少なくとも２０％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、またはそれを超えるパーセンテージ低い半数効果濃度（ＥＣ５０）で低下させる。本明細書に記載の任意の適切な方法（例えば、実施例４及び４５参照）を用いて、ＥＣ５０を計算してもよい。
【０１５３】
いくつかの実施形態では、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、ヒト細胞、例えば、初代樹状細胞に、５００ｐＭ未満、４００ｐＭ未満、３００ｐＭ未満、２００ｐＭ未満、１７５ｐＭ未満、１７０ｐＭ未満、１６９ｐＭ未満、１６８ｐＭ未満、１６７ｐＭ未満、１６６ｐＭ未満、１６６．２ｐＭ未満、１６５ｐＭ未満、１６４ｐＭ未満、１６３ｐＭ未満、１６２ｐＭ未満、１６１ｐＭ未満、１６０ｐＭ未満、１５０ｐＭ未満、１４５ｐＭ未満、１４０ｐＭ未満、１３９ｐＭ未満、１３８ｐＭ未満、１３８．２ｐＭ未満、１３７ｐＭ未満、１３６ｐＭ未満、１３５ｐＭ未満、１３４ｐＭ未満、１３３ｐＭ未満、１３２ｐＭ未満、１３１ｐＭ未満、１３０ｐＭ未満、１２０ｐＭ未満、１１０ｐＭ未満、１００ｐＭ未満、９０ｐＭ未満、８０ｐＭ未満、７０ｐＭ未満、６０ｐＭ未満、５０ｐＭ未満、４０ｐＭ未満、３０ｐＭ未満、２０ｐＭ未満、または１０ｐＭ未満であり得る半数効果濃度（ＥＣ５０）で結合する。いくつかの実施形態では、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、ヒト細胞、例えば、初代樹状細胞に、約３００ｐＭ〜約１０ｐＭの範囲の、または１０ｐＭ未満のＥＣ５０で結合する。本明細書に記載の任意の適切な方法（例えば、実施例１参照）を用いて、ＥＣ５０を計算してもよい。いくつかの実施形態では、該ＥＣ５０は、温度約４℃で測定される。
【０１５４】
いくつかの実施形態では、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、ＣＤ３３の細胞レベルを、７０ｐＭ未満、６９ｐＭ未満、６８ｐＭ未満、６７ｐＭ未満、６６ｐＭ未満、６５ｐＭ未満、６４ｐＭ未満、６３ｐＭ未満、６２ｐＭ未満、６１ｐＭ未満、６０ｐＭ未満、５５ｐＭ未満、５０ｐＭ未満、４５ｐＭ未満、４０ｐＭ未満、３９ｐＭ未満、３８ｐＭ未満、３７ｐＭ未満、３６ｐＭ未満、３５ｐＭ未満、３４．８ｐＭ未満、３４ｐＭ未満、３３ｐＭ未満、３２ｐＭ未満、３１ｐＭ未満、３０ｐＭ未満、２５ｐＭ未満、２４ｐＭ未満、２３ｐＭ未満、２２ｐＭ未満、２１ｐＭ未満、２１．５ｐＭ未満、２０ｐＭ未満、１９ｐＭ未満、１８ｐＭ未満、１７ｐＭ未満、１６ｐＭ未満、１５ｐＭ未満、１４ｐＭ未満、１３ｐＭ未満、１２ｐＭ未満、１１ｐＭ未満、または１０ｐＭ未満であり得る半数効果濃度（ＥＣ５０）で低下させる。いくつかの実施形態では、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、ＣＤ３３の細胞レベルを、約６５ｐＭ〜約２０ｐＭの範囲の、または２０ｐＭ未満の半数効果濃度（ＥＣ５０）で低下させる。任意の適切な方法（例えば、実施例１及び３に記載のもの）を用いて、該ＣＤ３３抗体を投与しない対応する細胞と比較した、細胞のＣＤ３３の細胞レベルを低下させるための半数効果濃度（ＥＣ５０）を測定してもよい。
【０１５５】
ＣＤ３３の細胞レベルとは、制限なく、ＣＤ３３の細胞表面レベル、ＣＤ３３の細胞内レベル、及びＣＤ３３の合計レベルを指し得る。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３の細胞レベルの低下は、ＣＤ３３の細胞表面レベルの低下を含む。本明細書で使用される、抗ＣＤ３３抗体は、それが、本明細書に記載の、もしくは当技術分野で既知の任意のインビトロでの細胞ベースのアッセイまたは適切なインビボモデルによって、例えば、フローサイトメトリー、例えば、蛍光活性化細胞分類（ＦＡＣＳ）を用いて、ＣＤ３３の細胞表面レベルを測定することによって測定される、ＣＤ３３の細胞表面レベルにおいて２１％以上の減少を誘導する場合に、ＣＤ３３の細胞表面レベルを低下させる。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３の細胞レベルの低下は、ＣＤ３３の細胞内レベルの低下を含む。本明細書で使用される、抗ＣＤ３３抗体は、それが、本明細書に記載の、もしくは当技術分野で既知の任意のインビトロでの細胞ベースのアッセイまたは適切なインビボモデルによって、例えば、免疫染色、ウェスタンブロット分析、免疫共沈降、及び細胞サイトメトリーによって測定される、ＣＤ３３の細胞内レベルにおいて２１％以上の減少を誘導する場合に、ＣＤ３３の細胞内レベルを低下させる。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３の細胞レベルの低下は、ＣＤ３３の合計レベルの低下を含む。本明細書で使用される、抗ＣＤ３３抗体は、それが、本明細書に記載の、もしくは当技術分野で既知の任意のインビトロでの細胞ベースのアッセイまたは適切なインビボモデルによって、例えば、免疫染色、ウェスタンブロット分析、免疫共沈降、及び細胞サイトメトリーによって測定される、ＣＤ３３の合計レベルにおいて２１％以上の減少を誘導する場合に、ＣＤ３３の合計レベルを低下させる。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ＣＤ３３の分解、ＣＤ３３の開裂、ＣＤ３３の内在化、ＣＤ３３の脱落、及び／またはＣＤ３３発現の下方制御を誘導する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３の細胞レベルは、インビトロ細胞アッセイを利用して、初代細胞（例えば、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、ミクログリア、及びマクロファージ）で、または細胞株で測定される。
【０１５６】
いくつかの実施形態では、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、ＣＤ３３の細胞レベルを、該抗ＣＤ３３抗体の非存在下でのＣＤ３３の細胞レベルと比較して、少なくとも２１％、少なくとも２２％、少なくとも２３％、少なくとも２４％、少なくとも２５％、少なくとも２６％、少なくとも２７％、少なくとも２８％、少なくとも２９％、少なくとも３０％、少なくとも３１％、少なくとも３２％、少なくとも３３％、少なくとも３４％、少なくとも３５％、少なくとも３６％、少なくとも３７％、少なくとも３８％、少なくとも３９％、少なくとも４０％、少なくとも４１％、少なくとも４２％、少なくとも４３％、少なくとも４４％、少なくとも４５％、少なくとも４６％、少なくとも４７％、少なくとも４８％、少なくとも４９％、少なくとも５０％、少なくとも５１％、少なくとも５２％、少なくとも５３％、少なくとも５４％、少なくとも５５％、少なくとも５６％、少なくとも５７％、少なくとも５８％、少なくとも５９％、少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、またはそれ以上低下させる。
【０１５７】
いくつかの実施形態では、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、インビボにおいて、ＣＤ３３の細胞レベルを、４０ｍｇ／ｋｇ未満、３５ｍｇ／ｋｇ未満、３０ｍｇ／ｋｇ未満、２５ｍｇ／ｋｇ未満、２０ｍｇ／ｋｇ未満、１５ｍｇ／ｋｇ未満、１０ｍｇ／ｋｇ未満、９．０ｍｇ／ｋｇ未満、８．０ｍｇ／ｋｇ未満、７．０ｍｇ／ｋｇ未満、６．０ｍｇ／ｋｇ未満、５．０ｍｇ／ｋｇ未満、４．０ｍｇ／ｋｇ未満、３．０ｍｇ／ｋｇ未満、２．０ｍｇ／ｋｇ未満、１．９ｍｇ／ｋｇ未満、１．８ｍｇ／ｋｇ未満、１．６ｍｇ／ｋｇ未満、１．５ｍｇ／ｋｇ未満、１．４ｍｇ／ｋｇ未満、１．３ｍｇ／ｋｇ未満、１．２ｍｇ／ｋｇ未満、１．１ｍｇ／ｋｇ未満、または１．０ｍｇ／ｋｇ未満のＥＣ５０で低下させる。いくつかの実施形態では、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、インビボにおいて、ＣＤ３３の細胞レベルを、約８．０ｍｇ／ｋｇ〜約２．０ｍｇ／ｋｇの範囲の、または２．０ｍｇ／ｋｇ未満のＥＣ５０で低下させる。任意の適切な方法（例えば、実施例１及び３に記載のもの）を用いて、該ＣＤ３３抗体を投与されない対応する対象と比較して、対象における（すなわち、インビボでの）ＣＤ３３の細胞レベルを低下させるＥＣ５０を測定してもよい。いくつかの実施形態では、インビボにおいて、ＣＤ３３の細胞レベルを低下させるＥＣ５０は、適切なげっ歯類、例えば、ラットまたはマウスを用いて測定される。いくつかの実施形態では、インビボにおいて、ＣＤ３３の細胞レベルを低下させるＥＣ５０は、マウスモデル、例えば、実施例３に記載のものを用いて測定される。
【０１５８】
本明細書に記載の、もしくは当技術分野で既知の任意のインビトロでの細胞ベースのアッセイまたは適切なインビボモデルを用いて、ＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用（例えば、結合）の阻害を測定してもよい。いくつかの実施形態では、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、ＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用（例えば、結合）を、本明細書に記載の、もしくは当技術分野で既知の任意のインビトロでのアッセイまたは細胞ベースの培養アッセイを用いて、飽和抗体濃度（例えば、６７ｎＭ）において、少なくとも２１％、少なくとも２２％、少なくとも２３％、少なくとも２４％、少なくとも２５％、少なくとも２６％、少なくとも２７％、少なくとも２８％、少なくとも２９％、少なくとも３０％、少なくとも３１％、少なくとも３２％、少なくとも３３％、少なくとも３４％、少なくとも３５％、少なくとも３６％、少なくとも３７％、少なくとも３８％、少なくとも３９％、少なくとも４０％、少なくとも４１％、少なくとも４２％、少なくとも４３％、少なくとも４４％、少なくとも４５％、少なくとも４６％、少なくとも４７％、少なくとも４８％、少なくとも４９％、少なくとも５０％、少なくとも５１％、少なくとも５２％、少なくとも５３％、少なくとも５４％、少なくとも５５％、少なくとも５６％、少なくとも５７％、少なくとも５８％、少なくとも５９％、少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、またはそれ以上阻害する。
【０１５９】
いくつかの実施形態では、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、ＣＤ３３の細胞表面クラスター化を阻害する。いくつかの実施形態では、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、制限なく、ＬＣＫ及びＦＹＮなどのＳｒｃファミリーチロシンキナーゼによるＴｙｒ−３４０及びＴｙｒ−３５８のリン酸化の１つ以上の妨害、チロシン特異的タンパク質ホスファターゼＳＨＰ１及びＳＨＰ２の動員及びそれらへの結合、Ｄｙｎａｍｉｎｉ−１に対するグアニンヌクレオチド交換因子として作用するＰＬＣ−ガンマ１の動員及びそれへの結合、ＳＨ２ドメイン含有タンパク質（例えば、Ｃｒｋｌ）の動員及びそれへの結合、脾臓チロシンキナーゼＳｙｋの動員及びそれへの結合、ＳＨ３−ＳＨ２−ＳＨ３増殖因子受容体結合タンパク質２（Ｇｒｂ２）の動員及びそれへの結合、複数のＳＨ２含有タンパク質の動員及びそれへの結合、プロテインキナーゼＣによるＳｅｒ−３０７及びＳｅｒ−３４２のリン酸化、１つ以上の抗炎症性サイトカイン、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＩＬ−３５、ＩＬ−１６、ＴＧＦ−ベータ、ＩＬ−１Ｒａ、Ｇ−ＣＳＦ、及びＴＮＦ、ＩＦＮ−ベータ１ａ、ＩＦＮ−ベータ１ｂ、またはＩＬ−６に対する可溶性受容体の単球、マクロファージ、Ｔ細胞、樹状細胞、好中球、及び／またはミクログリアにおける調節された発現、細胞内カルシウム動員の減少、１つ以上の炎症性サイトカインＩＦＮ−ａ４、ＩＦＮ−ｂ、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＬＩＦ、ＩＦＮ−ガンマ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＣＸＣＬ１０、ＩＬ−３３、ＣＲＰ、ＩＬ−３３、ＭＣＰ−１、及びＭＩＰ−１−ベータの単球、マクロファージ、Ｔ細胞、樹状細胞、好中球、及び／またはミクログリアにおける調節された発現、Ｃ１ｑａ、Ｃ１ｑＢ、Ｃ１ｑＣ、Ｃ１ｓ、Ｃ１Ｒ、Ｃ４、Ｃ２、Ｃ３、ＩＴＧＢ２、ＨＭＯＸ１、ＬＡＴ２、ＣＡＳＰ１、ＣＳＴＡ、ＶＳＩＧ４、ＭＳ４Ａ４Ａ、Ｃ３ＡＲ１、ＧＰＸ１、ＴｙｒｏＢＰ、ＡＬＯＸ５ＡＰ、ＩＴＧＡＭ、ＳＬＣ７Ａ７、ＣＤ４、ＩＴＧＡＸ、ＰＹＣＡＲＤ、ＣＤ１４、ＣＤ１６、ＨＬＡ−ＤＲ、及びＣＣＲ２から選択される１つ以上のタンパク質の調節された発現、細胞外シグナル制御キナーゼ（ＥＲＫ）のリン酸化の阻害、複数の細胞タンパク質におけるチロシンリン酸化の低減、Ｃ−Ｃケモカイン受容体７（ＣＣＲ７）の調節された発現、ＣＣＬ１９及びＣＣＬ２１発現細胞へのミクログリア細胞の走化性の阻害、ホスホイノシチド３−キナーゼの活性化、単球、マクロファージ、Ｔ細胞、樹状細胞、及び／または、ミクログリアの細胞増殖の低減、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、Ｍ２ミクログリア、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、及び／またはＭ２マクロファージによって誘導されるＴ細胞増殖の低減、破骨細胞産生の阻害、破骨細胞形成速度の低減、またはその両方、好中球、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、��胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及び／またはＭ２ミクログリアの生存の低減、好中球、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及び／またはＭ２ミクログリアの増殖の低減、好中球、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及び／またはＭ２ミクログリアの遊走の阻害、好中球、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及び／またはＭ２ミクログリアの１つ以上の機能の低減、好中球、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及び／またはＭ２ミクログリアの成熟の阻害、単球、マクロファージ、Ｔ細胞、樹状細胞、好中球、及び／またはミクログリアの細胞死及びアポトーシスの増大、単球、マクロファージ、Ｔ細胞、樹状細胞、好中球、及び／またはミクログリアの食作用活性の低減、単球、マクロファージ、Ｔ細胞、樹状細胞、好中球、及び／またはミクログリアの増殖の低減、単球、マクロファージ、Ｔ細胞、樹状細胞、好中球、及び／またはミクログリアの全体的な機能の低減、ＩＴＡＭ含有受容体のリン酸化、ＩＴＡＭシグナル伝達を媒介するシグナル伝達分子のリン酸化、パターン認識受容体の活性化の低減、Ｔｏｌｌ様受容体の活性化の低減、損傷関連の細胞及びタンパク質の破片の除去の活性化の低減、ＣＤ３３と１つ以上のそのリガンド間の相互作用、ＣＤ３３とＣＤ６４などの補助受容体間の相互作用、アポトーシス性ニューロンの除去、神経組織破片の除去、機能不全シナプスの除去、非神経組織破片の除去、細菌もしくは他の異物の除去、病原タンパク質の除去、及び腫瘍細胞の除去から選択される１つ以上の種類の除去の阻害、アポトーシス性ニューロン、神経組織破片、非神経組織破片、細菌、他の異物、病原タンパク質、病原ペプチド、病原核酸、病原脂質、または腫瘍細胞の１つ以上の食作用の阻害、例えば、病原核酸がアンチセンスＧＧＣＣＣＣ（Ｇ２Ｃ４）反復拡張ＲＮＡである病原核酸の除去の阻害、アミロイドベータ、アミロイドベータ斑、アミロイド前駆体タンパク質もしくはその断片、タウ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（染色体９オープンリーディングフレーム７２）、ｃ９ＲＡＮタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムター��、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メジン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、反復関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）反復ペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）反復ペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）反復ペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）反復ペプチド、ユビキチン、ならびにプロリン−アルギニン（ＰＲ）反復ペプチドから選択される病原タンパク質の除去の活性化、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、及び甲状腺癌から選択される異なる種類の癌に対する有益な免疫応答の阻害、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウパチー病、那須・ハコラ病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、本態性振戦、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫性疾患、サルコイドーシス、加齢に伴う病気、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、及び多発性硬化症から選択される異なる種類の神経障害に対する有益な免疫応答の阻害、ループス、急性及び慢性大腸炎、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満症、マラリア、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身性感染症、ループス、関節炎、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、及び骨のパジェット病から選択される異なる種類の炎症及び感染症に対する有益な免疫応答の阻害、腫瘍細胞上のＣＤ３３リガンドへの結合、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、ミクログリア、Ｔ細胞、好中球、及び／またはマクロファージ上のＣＤ３３リガンドへの結合、ミクログリア、マクロファージ、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、または細胞傷害性Ｔ細胞の１つ以上による腫瘍細胞殺傷の阻害、ミクログリア、マクロファージ、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、または細胞傷害性Ｔ細胞の１つ以上の抗腫瘍細胞増殖活性の阻害、ミクログリア、マクロファージ、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、または細胞傷害性Ｔ細胞の１つ以上の抗腫瘍細胞転移活性の阻害、免疫抑制樹状細胞、免疫抑制マクロファージ、骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ、または制御性Ｔ細胞の促進、１つ以上のＩＴＡＭモチーフ含有受容体、例えば、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、ＦｃｇＲ、ＤＡＰ１０、及びＤＡＰ１２の阻害、モチーフＤ／Ｅｘ０−２ＹｘｘＬ／ＩＸ６−８Ｙｘ��Ｌ／Ｉ（配列番号２４７）を含む１つ以上の受容体の阻害、１つ以上のパターン認識受容体（ＰＲＲ）、例えば、病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）を識別する受容体、及び損傷関連分子パターン（ＤＡＭＰ）を識別する受容体によるシグナル伝達の阻害、１つ以上のＴｏｌｌ様受容体によるシグナル伝達の阻害、ＪＡＫ−ＳＴＡＴシグナル伝達経路の阻害、活性化Ｂ細胞核内因子カッパ軽鎖エンハンサー（ＮＦκＢ）の阻害、ＰＬＣγ／ＰＫＣ／カルシウム動員の阻害、ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ、Ｒａｓ／ＭＡＰＫシグナル伝達の阻害、１つ以上の炎症性受容体、例えば、ＣＤ８６であって、ミクログリア、マクロファージ、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、または細胞傷害性Ｔ細胞の１つ以上で発現される受容体の調節された発現、１つ以上のＣＤ３３依存性遺伝子の発現の増大、破壊されたＣＤ３３依存性遺伝子発現の正常化、ならびに１つ以上のＩＴＡＭ依存性遺伝子、例えば、ＮＦＡＴ転写因子の発現の低減を含めた１つ以上のＣＤ３３タンパク質の活性を阻害する。
【０１６０】
いくつかの実施形態では、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、制限なく、腫瘍浸潤ＣＤ３＋Ｔ細胞数の増大、ＣＤ１４＋骨髄細胞、例えば、腫瘍浸潤ＣＤ１４＋骨髄細胞及び血中に含まれるＣＤ１４＋骨髄細胞におけるＣＤ３３の細胞レベルの低減、ＣＤ１４＋骨髄細胞、例えば、腫瘍浸潤ＣＤ１４＋骨髄細胞及び血中に含まれるＣＤ１４＋骨髄細胞の数の低減、１つ以上の細胞、例えば、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）におけるＰＤ−Ｌ１レベルの低減、１つ以上の細胞、例えば、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）におけるＰＤ−Ｌ２レベルの低減、１つ以上の細胞、例えば、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）におけるＢ７−Ｈ２レベルの低減、１つ以上の細胞、例えば、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）におけるＢ７−Ｈ３レベルの低減、１つ以上の細胞、例えば、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）におけるＣＤ２００Ｒレベルの低減、１つ以上の細胞、例えば、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）におけるＣＤ１６３レベルの低減、１つ以上の細胞、例えば、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）におけるＣＤ２０６レベルの低減、固形腫瘍の腫瘍増殖率の低減、腫瘍体積の低減、１つ以上のＰＤ−１阻害剤の有効性の向上：１つ以上のチェックポイント阻害剤療法及び／または免疫調節療法、例えば、ＣＴＬ４、アデノシン経路、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＯＸ４０、ＴＩＭ３、ＬＡＧ−３、またはそれらの任意の組合せの１つ以上を標的とするチェックポイント阻害剤療法及び／または免疫調節療法の有効性の向上、１つ以上の化学療法剤の有効性の向上、任意に、該１つ以上の化学療法剤は、ゲムシタビン、カペシタビン、アントラサイクリン、ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標））、エピルビシン（Ｅｌｌｅｎｃｅ（登録商標））、タキサン、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標））、カルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））、及びそれらの任意の組合せである、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の存在下でのＴ細胞増殖の増大、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の分化、生存、及び／または１つ以上の機能の阻害、ならびに化学的及び放射性毒素に複合化された場合の、固形腫瘍ならびに関連する血管におけるＣＤ３３発現免疫抑制非腫瘍形成性骨髄細胞及び／または非腫瘍形成性ＣＤ１４発現細胞の殺傷を含めた１つ以上のＣＤ３３タンパク質の活性を示す。
【０１６１】
いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、本開示のＣＤ３３タンパク質と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用（例えば、結合）を阻害し、該１つ以上のＣＤ３３リガンドとしては、制限なく、赤血球で発現されるＣＤ３３リガンド、細菌細胞で発現されるＣＤ３３リガンド、アポトーシスを起こした細胞で発現されるＣＤ３３リガンド、腫瘍細胞で発現されるＣＤ３３リガンド、ウイルスで発現されるＣＤ３３リガンド、樹状細胞で発現されるＣＤ３３リガンド、神経細胞で発現されるＣＤ３３リガンド、グリア細胞で発現されるＣＤ３３リガンド、ミクログリアで発現されるＣＤ３３リガンド、アストロサイトで発現されるＣＤ３３リガンド、ベータアミロイド斑上のＣＤ３３リガンド、タウのもつれ上のＣＤ３３リガンド、病原タンパク質上のＣＤ３３リガンド、病原ペプチド上のＣＤ３３リガンド、マクロファージで発現されるＣＤ３３リガンド、ナチュラルキラー細胞で発現されるＣＤ３３リガンド、Ｔ細胞で発現されるＣＤ３３リガンド、Ｔヘルパー細胞で発現されるＣＤ３３リガンド、細胞傷害性Ｔ細胞で発現されるＣＤ３３リガンド、Ｂ細胞で発現されるＣＤ３３リガンド、腫瘍埋没免疫抑制樹状細胞で発現されるＣＤ３３リガンド、腫瘍埋没免疫抑制マクロファージで発現されるＣＤ３３リガンド、骨髄由来サプレッサー細胞で発現されるＣＤ３３リガンド、制御性Ｔ細胞で発現されるＣＤ３３リガンド、分泌されたムチン、シアル酸、シアル酸含有糖脂質、シアル酸含有糖タンパク質、アルファ−２，６結合シアル酸含有糖脂質、アルファ−２，６結合シアル酸含有糖タンパク質、アルファ−２，３結合シアル酸含有糖脂質、アルファ−２，３結合シアル酸含有糖タンパク質、アルファ−１酸性糖タンパク質（ＡＧＰ）、ＣＤ２４タンパク質、及びガングリオシドが挙げられる。
【０１６２】
いくつかの実施形態では、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、細胞表面で発現される本開示のＣＤ３３タンパク質に結合し、該裸の抗体は、該ＣＤ３３タンパク質と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用（例えば、結合）を阻害する。いくつかの実施形態では、本ＣＤ３３タンパク質に結合する本開示の抗ＣＤ３３抗体は、該細胞表面上または該細胞の内部のこれらタンパク質との相互作用に利用できる効果的なＣＤ３３レベルを低下させることによって、該ＣＤ３３タンパク質と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用（例えば、結合）を阻害する。いくつかの実施形態では、本ＣＤ３３タンパク質に結合する本開示の抗ＣＤ３３抗体は、ＣＤ３３の分解を誘導することによって、該ＣＤ３３タンパク質と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用（例えば、結合）を阻害する。
【０１６３】
本開示の他の態様は、ＣＤ３３の細胞表面レベルを大きく減少させない、及び／または、ＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用を阻害しない抗ＣＤ３３抗体に関する。
【０１６４】
本明細書で使用される、抗ＣＤ３３抗体は、本明細書に記載の、もしくは当技術分野で既知の任意のインビトロでの細胞ベースのアッセイまたは適切なインビボモデルを用いて、該抗ＣＤ３３抗体の非存在下でのＣＤ３３の細胞レベルと比較して、ＣＤ３３へのリガンド結合を２０％未満減少させる場合に、ＣＤ３３の細胞表面レベルを大きく減少させない。いくつかの実施形態では、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、該抗ＣＤ３３抗体の非存在下でのＣＤ３３の細胞レベルと比較して、ＣＤ３３の細胞表面レベルを、２０％未満、１９％未満、１８％未満、１７％未満、１６％未満、１５％未満、１４％未満、１３％未満、１２％未満、１１％未満、１０％未満、９％未満、８％未満、７％未満、６％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、または１％未満減少させる。
【０１６５】
本明細書で使用される、抗ＣＤ３３抗体は、本明細書に記載の、もしくは当技術分野で既知の任意のインビトロでのアッセイまたは細胞ベースの培養アッセイを用いて、飽和抗体濃度（例えば、６７ｎＭ）において、ＣＤ３３へのリガンド結合を２０％未満減少させる場合に、ＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用（例えば、結合）を阻害しない。いくつかの実施形態では、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、本明細書に記載の、もしくは当技術分野で既知の任意のインビトロでのアッセイまたは細胞ベースの培養アッセイを用いて、飽和抗体濃度（例えば、６７ｎＭ）において、ＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用（例えば、結合）を、２０％未満、１９％未満、１８％未満、１７％未満、１６％未満、１５％未満、１４％未満、１３％未満、１２％未満、１１％未満、１０％未満、９％未満、８％未満、７％未満、６％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、または１％未満阻害する。
【０１６６】
本明細書で使用される、ＣＤ３３のレベルとは、ＣＤ３３をコードする遺伝子の発現レベル、ＣＤ３３をコードする１つ以上の転写産物の発現レベル、ＣＤ３３タンパク質の発現レベル、及び／または細胞内及び／または細胞表面に存在するＣＤ３３タンパク質の量を指す場合がある。遺伝子発現、転写、翻訳、及び／またはタンパク質量もしくは局在化のレベルを測定するための当技術分野で既知の任意の方法を用いて、ＣＤ３３のレベルが測定され得る。
【０１６７】
さらに、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウパチー病、那須・ハコラ病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、ループス、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満症、マラリア、本態性振戦、中枢神経系ループス、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫性疾患、サルコイドーシス、加齢に伴う病気、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身性感染症、ループス、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨のパジェット病、以下のものを含めた癌、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性赤血球増加症、本態性血小板血症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化、骨髄由来腫瘍、ＣＤ３３を発現する腫瘍、甲状腺癌、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルージ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、Ｉ型ＨＩＶ、及び／またはインフルエンザ菌の予防、リスクの低減、または治療のために用いることができる。いくつかの実施形態では、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、１つ以上の免疫細胞の生存、成熟、機能、遊走、または増殖を誘導もしくは促進するために、それを必要とする個体において、または、制御性Ｔ細胞、腫瘍埋没免疫抑制樹状細胞、腫瘍埋没免疫抑制マクロファージ、骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）細胞、または慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）細胞の活性、機能、または生存を減少させるために、それを必要とする個体において、用いることができる。いくつかの実施形態では、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、モノクローナル抗体である。
【０１６８】
いくつかの実施形態では、本開示の単離抗ＣＤ３３抗体は、ＣＤ３３の細胞レベル（例えば、細胞表面レベル、細胞内レベル、及び／または合計レベル）を低下させる。いくつかの実施形態では、本開示の単離抗ＣＤ３３抗体は、ＣＤ３３の下方制御を誘導する。いくつかの実施形態では、本開示の単離抗ＣＤ３３抗体は、ＣＤ３３の開裂を誘導する。いくつかの実施形態では、本開示の単離抗ＣＤ３３抗体は、ＣＤ３３の内在化を誘導する。いくつかの実施形態では、本開示の単離抗ＣＤ３３抗体は、ＣＤ３３の脱落を誘導する。いくつかの実施形態では、本開示の単離抗ＣＤ３３抗体は、ＣＤ３３の分解を誘導する。いくつかの実施形態では、本開示の単離抗ＣＤ３３抗体は、ＣＤ３３の脱感作を誘導する。いくつかの実施形態では、本開示の単離抗ＣＤ３３抗体は、ＣＤ３３を一時的に活性化するリガンド模倣体の役割を果たす。いくつかの実施形態では、本開示の単離抗ＣＤ３３抗体は、リガンド模倣体の役割を果たし、ＣＤ３３の細胞レベルの低下及び／またはＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用（例えば、結合）の阻害の誘導の前に、一時的にＣＤ３３を活性化する。いくつかの実施形態では、本開示の単離抗ＣＤ３３抗体は、リガンド模倣体の役割を果たし、ＣＤ３３の分解を誘導する前に、一時的にＣＤ３３を活性化する。いくつかの実施形態では、本開示の単離抗ＣＤ３３抗体は、リガンド模倣体の役割を果たし、ＣＤ３３の開裂を誘導する前に、一時的にＣＤ３３を活性化する。いくつかの実施形態では、本開示の単離抗ＣＤ３３抗体は、リガンド模倣体の役割を果たし、ＣＤ３３の内在化を誘導する前に、一時的にＣＤ３３を活性化する。いくつかの実施形態では、本開示の単離抗ＣＤ３３抗体は、リガンド模倣体の役割を果たし、ＣＤ３３の脱落を誘導する前に、一時的にＣＤ３３を活性化する。いくつかの実施形態では、本開示の単離抗ＣＤ３３抗体は、リガンド模倣体の役割を果たし、ＣＤ３３発現の下方制御を誘導する前に、一時的にＣＤ３３を活性化する。いくつかの実施形態では、本開示の単離抗ＣＤ３３抗体は、リガンド模倣体の役割を果たし、ＣＤ３３の脱感作を誘導する前に、一時的にＣＤ３３を活性化する。
【０１６９】
いくつかの実施形態では、本開示の単離抗ＣＤ３３抗体は、マウス抗体である。いくつかの実施形態では、本開示の単離抗ＣＤ３３抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体、モノクローナル抗体、多価抗体、またはキメラ抗体である。そのような抗体の例示的な説明は、本開示を通して見出される。
【０１７０】
いくつかの実施形態では、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、ヒトＣＤ３３、または、制限なく、哺乳動物ＣＤ３３タンパク質、マウスＣＤ３３タンパク質（ＮＣＢＩアクセッション番号ＮＰ＿００１１０４５２８．１）、ラットＣＤ３３タンパク質（ＮＣＢＩアクセッション番号ＸＰ＿００８７５７６４５．１）、チンパンジーＣＤ３３タンパク質（ＮＣＢＩアクセッション番号ＸＰ＿５１２８５０．３）、アカゲザルＣＤ３３タンパク質（ＮＣＢＩアクセッション番号ＸＰ＿００１１１４６１６．２）、イヌＣＤ３３タンパク質（ＮＣＢＩアクセッション番号ＸＰ＿００５６１６３０６．１）、もしくはウシＣＤ３３タンパク質（ＮＣＢＩアクセッション番号ＸＰ＿００５２１９１９７．１）を含めたそのホモログに結合する。いくつかの実施形態では、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、ヒトＣＤ３３に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、マウスＣＤ３３に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、ヒトＣＤ３３及びマウスＣＤ３３の両方に特異的に結合する。
【０１７１】
いくつかの実施形態では、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、細胞表面で発現される本開示のＣＤ３３タンパク質に結合し、該表面発現されたＣＤ３３タンパク質に結合した後に本開示の１つ以上のＣＤ３３活性を調節（例えば、誘導もしくは阻害）するアゴニスト抗体またはアンタゴニスト抗体である。いくつかの実施形態では、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、不活性抗体である。
【０１７２】
抗ＣＤ３３抗体結合領域
本開示のある特定の態様は、ヒトＣＤ３３（配列番号１）のアミノ酸残基１９〜２５９、１９〜１３５、１４５〜２２８、もしくは２２９〜２５９内の１つ以上のアミノ酸、または、配列番号１のアミノ酸残基１９〜２５９、１９〜１３５、１４５〜２２８、もしくは２２９〜２５９に対応するＣＤ３３ホモログもしくはオルソログのアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する抗ＣＤ３３抗体を提供する。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ヒトＣＤ３３（配列番号１）のアミノ酸残基３９〜５１内の１つ以上のアミノ酸、または、配列番号１のアミノ酸残基３９〜５１に対応するＣＤ３３ホモログもしくはオルソログのアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ヒトＣＤ３３（配列番号１）のアミノ酸残基４８〜５４内の１つ以上のアミノ酸、または、配列番号１のアミノ酸残基４８〜５４に対応するＣＤ３３ホモログもしくはオルソログのアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ヒトＣＤ３３（配列番号１）のアミノ酸残基８８〜９８内の１つ以上のアミノ酸、または、配列番号１のアミノ酸残基８８〜９８に対応するＣＤ３３ホモログもしくはオルソログのアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ヒトＣＤ３３（配列番号１）のアミノ酸残基１１０〜１２０内の１つ以上のアミノ酸、または、配列番号１のアミノ酸残基１１０〜１２０に対応するＣＤ３３ホモログもしくはオルソログのアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ヒトＣＤ３３（配列番号１）のアミノ酸残基１１２〜１２２内の１つ以上のアミノ酸、または、配列番号１のアミノ酸残基１１２〜１２２に対応するＣＤ３３ホモログもしくはオルソログのアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ヒトＣＤ３３（配列番号１）のアミノ酸残基３９〜５１、８８〜９８、及び１１０〜１２０内の１つ以上のアミノ酸、または、配列番号１のアミノ酸残基３９〜５１、８８〜９８、及び１１０〜１２０に対応するＣＤ３３ホモログもしくはオルソログのアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ヒトＣＤ３３（配列番号１）のアミノ酸残基３９〜５１、８８〜９８、及び１１２〜１２２内の１つ以上のアミノ酸、または、配列番号１のアミノ酸残基３９〜５１、８８〜９８、及び１１２〜１２２に対応するＣＤ３３ホモログもしくはオルソログのアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ヒトＣＤ３３（配列番号１）のアミノ酸残基３９〜５１、８８〜９８、１１０〜１２０、及び１１２〜１２２内の１つ以上のアミノ酸、または、配列番号１のアミノ酸残基３９〜５１、８８〜９８、１１０〜１２０、及び１１２〜１２２に対応するＣＤ３３ホモログもしくはオルソログのアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ヒトＣＤ３３（配列番号１）のアミノ酸残基１３７〜１４７内の１つ以上のアミノ酸、または、配列番号１のアミノ酸残基１３７〜１４７に対応するＣＤ３３ホモログもしくはオルソログのアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、配列番号１のＤ１８、Ｐ１９、Ｎ２０、Ｆ２１、Ｆ４４、Ｐ４６、Ｙ４９、Ｙ５０、Ｋ５２、及びＮ５３から選択される１つ以上のアミノ酸残基、または、配列番号１のＤ１８、Ｐ１９、Ｎ２０、Ｆ２１、Ｆ４４、Ｐ４６、Ｙ４９、Ｙ５０、Ｋ５２、及びＮ５３から選択されるアミノ酸残基に対応する哺乳動物ＣＤ３３タンパク質の１つ以上のアミノ酸残基に結合する。
【０１７３】
本開示の他の態様は、ＣＤ３３の細胞レベルを低下させる、及び／またはＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用（例えば、結合）を阻害する抗ＣＤ３３抗体であって、ヒトＣＤ３３（配列番号１）のアミノ酸残基１９〜２２８内の１つ以上のアミノ酸、または、配列番号１のアミノ酸残基１９〜２２８に対応するＣＤ３３ホモログもしくはオルソログのアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する抗ＣＤ３３抗体を提供する。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ヒトＣＤ３３（配列番号１）のアミノ酸残基３９〜５１内の１つ以上のアミノ酸、または、配列番号１のアミノ酸残基３９〜５１に対応するＣＤ３３ホモログもしくはオルソログのアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ヒトＣＤ３３（配列番号１）のアミノ酸残基４８〜５４内の１つ以上のアミノ酸、または、配列番号１のアミノ酸残基４８〜５４に対応するＣＤ３３ホモログもしくはオルソログのアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ヒトＣＤ３３（配列番号１）のアミノ酸残基８８〜９８内の１つ以上のアミノ酸、または、配列番号１のアミノ酸残基８８〜９８に対応するＣＤ３３ホモログもしくはオルソログのアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ヒトＣＤ３３（配列番号１）のアミノ酸残基１１０〜１２０内の１つ以上のアミノ酸、または、配列番号１のアミノ酸残基１１０〜１２０に対応するＣＤ３３ホモログもしくはオルソログのアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ヒトＣＤ３３（配列番号１）のアミノ酸残基１１２〜１２２内の１つ以上のアミノ酸、または、配列番号１のアミノ酸残基１１２〜１２２に対応するＣＤ３３ホモログもしくはオルソログのアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ヒトＣＤ３３（配列番号１）のアミノ酸残基３９〜５１、８８〜９８、及び１１０〜１２０内の１つ以上のアミノ酸、または、配列番号１のアミノ酸残基３９〜５１、８８〜９８、及び１１０〜１２０に対応するＣＤ３３ホモログもしくはオルソログのアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ヒトＣＤ３３（配列番号１）のアミノ酸残基３９〜５１、８８〜９８、及び１１２〜１２２内の１つ以上のアミノ酸、または、配列番号１のアミノ酸残基３９〜５１、８８〜９８、及び１１２〜１２２に対応するＣＤ３３ホモログもしくはオルソログのアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ヒトＣＤ３３（配列番号１）のアミノ酸残基３９〜５１、８８〜９８、１１０〜１２０、及び１１２〜１２２内の１つ以上のアミノ酸、または、配列番号１のアミノ酸残基３９〜５１、８８〜９８、１１０〜１２０、及び１１２〜１２２に対応するＣＤ３３ホモログもしくはオルソログのアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ヒトＣＤ３３（配列番号１）のアミノ酸残基１３７〜１４７内の１つ以上のアミノ酸、または、配列番号１のアミノ酸残基１３７〜１４７に対応するＣＤ３３ホモログもしくはオルソログのアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、配列番号１のＤ１８、Ｐ１９、Ｎ２０、Ｆ２１、Ｆ４４、Ｐ４６、Ｙ４９、Ｙ５０、Ｋ５２、及びＮ５３から選択される１つ以上のアミノ酸残基、または、配列番号１のＤ１８、Ｐ１９、Ｎ２０、Ｆ２１、Ｆ４４、Ｐ４６、Ｙ４９、Ｙ５０、Ｋ５２、及びＮ５３から選択されるアミノ酸残基に対応する哺乳動物ＣＤ３３タンパク質の１つ以上のアミノ酸残基に結合する。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、配列番号１のＹ４９、Ｙ５０、及びＫ５２から選択される１つ以上のアミノ酸残基、または、配列番号１のＹ４９、Ｙ５０、及びＫ５２から選択されるアミノ酸残基に対応する哺乳動物ＣＤ３３タンパク質の１つ以上のアミノ酸残基に結合する。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、配列番号１のアミノ酸残基Ｙ４９及びＫ５２、または、配列番号１のアミノ酸残基Ｙ４９及びＫ５２に対応する哺乳動物ＣＤ３３タンパク質のアミノ酸残基に結合する。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、配列番号１のアミノ酸残基Ｙ４９、Ｙ５０、及びＫ５２、または、配列番号１のアミノ酸残基Ｙ４９、Ｙ５０、及びＫ５２に対応する哺乳動物ＣＤ３３タンパク質のアミノ酸残基に結合する。
【０１７４】
本開示の他の態様は、ＣＤ３３の細胞表面レベルを大きく低下させない抗ＣＤ３３抗体及び／またはＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用（例えば、結合）を阻害しない抗ＣＤ３３抗体であって、ヒトＣＤ３３（配列番号１）のアミノ酸残基１９〜２５９内の１つ以上のアミノ酸、または、配列番号１のアミノ酸残基１９〜２５９に対応するＣＤ３３ホモログもしくはオルソログのアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する抗ＣＤ３３抗体を提供する。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ヒトＣＤ３３（配列番号１）のアミノ酸残基３９〜５１内の１つ以上のアミノ酸、または、配列番号１のアミノ酸残基３９〜５１に対応するＣＤ３３ホモログもしくはオルソログのアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ヒトＣＤ３３（配列番号１）のアミノ酸残基４８〜５４内の１つ以上のアミノ酸、または、配列番号１のアミノ酸残基４８〜５４に対応するＣＤ３３ホモログもしくはオルソログのアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ヒトＣＤ３３（配列番号１）のアミノ酸残基８８〜９８内の１つ以上のアミノ酸、または、配列番号１のアミノ酸残基８８〜９８に対応するＣＤ３３ホモログもしくはオルソログのアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ヒトＣＤ３３（配列番号１）のアミノ酸残基１１０〜１２０内の１つ以上のアミノ酸、または、配列番号１のアミノ酸残基１１０〜１２０に対応するＣＤ３３ホモログもしくはオルソログのアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ヒトＣＤ３３（配列番号１）のアミノ酸残基１１２〜１２２内の１つ以上のアミノ酸、または、配列番号１のアミノ酸残基１１２〜１２２に対応するＣＤ３３ホモログもしくはオルソログのアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ヒトＣＤ３３（配列番号１）のアミノ酸残基３９〜５１、８８〜９８、及び１１０〜１２０内の１つ以上のアミノ酸、または、配列番号１のアミノ酸残基３９〜５１、８８〜９８、及び１１０〜１２０に対応するＣＤ３３ホモログもしくはオルソログのアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ヒトＣＤ３３（配列番号１）のアミノ酸残基３９〜５１、８８〜９８、及び１１２〜１２２内の１つ以上のアミノ酸、または、配列番号１のアミノ酸残基３９〜５１、８８〜９８、及び１１２〜１２２に対応するＣＤ３３ホモログもしくはオルソログのアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ヒトＣＤ３３（配列番号１）のアミノ酸残基３９〜５１、８８〜９８、１１０〜１２０、及び１１２〜１２２内の１つ以上のアミノ酸、または、配列番号１のアミノ酸残基３９〜５１、８８〜９８、１１０〜１２０、及び１１２〜１２２に対応するＣＤ３３ホモログもしくはオルソログのアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ヒトＣＤ３３（配列番号１）のアミノ酸残基１３７〜１４７内の１つ以上のアミノ酸、または、配列番号１のアミノ酸残基１３７〜１４７に対応するＣＤ３３ホモログもしくはオルソログのアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、配列番号１のＤ１８、Ｐ１９、Ｎ２０、Ｆ２１、Ｆ４４、Ｐ４６、Ｙ４９、Ｙ５０、Ｋ５２、及びＮ５３から選択される１つ以上のアミノ酸残基、または、配列番号１のＤ１８、Ｐ１９、Ｎ２０、Ｆ２１、Ｆ４４、Ｐ４６、Ｙ４９、Ｙ５０、Ｋ５２、及びＮ５３から選択されるアミノ酸残基に対応する哺乳動物ＣＤ３３タンパク質の１つ以上のアミノ酸残基に結合する。
【０１７５】
いくつかの実施形態では、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、立体構造エピトープと結合し得る。いくつかの実施形態では、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、不連続ＣＤ３３エピトープと結合し得る。いくつかの実施形態では、該不連続ＣＤ３３エピトープは、２つ以上のペプチド、３つ以上のペプチド、４つ以上のペプチド、５つ以上のペプチド、６つ以上のペプチド、７つ以上のペプチド、８つ以上のペプチド、９つ以上のペプチド、または１０以上のペプチドを含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、１つ以上のペプチドを含むＣＤ３３エピトープと結合し得る。本明細書に開示するように、ＣＤ３３エピトープは、配列番号１のアミノ酸配列の５つ以上、６つ以上、７つ以上、８つ以上、９つ以上、１０以上、１１以上、１２以上、１３以上、１４以上、１５以上、１６以上、１７以上、１８以上、１９以上、もしくは２０以上のアミノ酸残基、または、配列番号１のアミノ酸配列に対応する哺乳動物ＣＤ３３タンパク質の５つ以上、６つ以上、７つ以上、８つ以上、９つ以上、１０以上、１１以上、１２以上、１３以上、１４以上、１５以上、１６以上、１７以上、１８以上、１９以上、もしくは２０以上のアミノ酸残基を含む１つ以上のペプチドを含み得る。
【０１７６】
いくつかの実施形態では、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、表１、２、３Ａ、３Ｂ、６Ａ、及び６Ｂに記載の抗体のいずれかから選択される少なくとも１つの抗体の結合を競合的に阻害する。いくつかの実施形態では、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、１Ａ８、２Ｂ４、２Ｅ１２、２Ｅ１２．１、２Ｆ５、２Ｆ５．１、３Ａ１２ａ、３Ａ１２ｂ、６Ａ３ａ、６Ａ３ｂ、６Ｃ７ａ、６Ｃ７ｂ、及び６Ｃ７．２から選択される少なくとも１つの抗体の結合を競合的に阻害する。いくつかの実施形態では、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、該抗ＣＤ３３抗体が、該抗ＣＤ３３抗体の非存在下でのＣＤ３３に対する結合と比較して、１Ａ８、２Ｂ４、２Ｅ１２、２Ｅ１２．１、２Ｆ５、２Ｆ５．１、３Ａ１２ａ、３Ａ１２ｂ、６Ａ３ａ、６Ａ３ｂ、６Ｃ７ａ、６Ｃ７ｂ、及び６Ｃ７．２、ならびにそれらの任意の組合せから選択される１つ以上の抗体のＣＤ３３に対する結合を、約５０％〜１００％の範囲の量減少させる場合に、ＣＤ３３に対する結合について、１Ａ８、２Ｂ４、２Ｅ１２、２Ｅ１２．１、２Ｆ５、２Ｆ５．１、３Ａ１２ａ、３Ａ１２ｂ、６Ａ３ａ、６Ａ３ｂ、６Ｃ７ａ、６Ｃ７ｂ、及び６Ｃ７．２、ならびにそれらの任意の組合せから選択される１つ以上の抗体と競合する。いくつかの実施形態では、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、該抗ＣＤ３３抗体が、該抗ＣＤ３３抗体の非存在下でのＣＤ３３に対する結合と比較して、１Ａ８、２Ｂ４、２Ｅ１２、２Ｅ１２．１、２Ｆ５、２Ｆ５．１、３Ａ１２ａ、３Ａ１２ｂ、６Ａ３ａ、６Ａ３ｂ、６Ｃ７ａ、６Ｃ７ｂ、及び６Ｃ７．２、ならびにそれらの任意の組合せから選択される１つ以上の抗体の結合を、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％減少させる場合に、ＣＤ３３に対する結合について、１Ａ８、２Ｂ４、２Ｅ１２、２Ｅ１２．１、２Ｆ５、２Ｆ５．１、３Ａ１２ａ、３Ａ１２ｂ、６Ａ３ａ、６Ａ３ｂ、６Ｃ７ａ、６Ｃ７ｂ、及び６Ｃ７．２、ならびにそれらの任意の組合せから選択される１つ以上の抗体と競合する。いくつかの実施形態では、１Ａ８、２Ｂ４、２Ｅ１２、２Ｅ１２．１、２Ｆ５、２Ｆ５．１、３Ａ１２ａ、３Ａ１２ｂ、６Ａ３ａ、６Ａ３ｂ、６Ｃ７ａ、６Ｃ７ｂ、及び６Ｃ７．２、ならびにそれらの任意の組合せから選択される１つ以上の抗体のＣＤ３３に対する結合を１００％減少させる本開示の抗ＣＤ３３抗体は、該抗ＣＤ３３抗体が、１Ａ８、２Ｂ４、２Ｅ１２、２Ｅ１２．１、２Ｆ５、２Ｆ５．１、３Ａ１２ａ、３Ａ１２ｂ、６Ａ３ａ、６Ａ３ｂ、６Ｃ７ａ、６Ｃ７ｂ、及び６Ｃ７．２、ならびにそれらの任意の組合せから選択される１つ以上の抗体のＣＤ３３に対する結合を本質的に完全に遮断することを示す。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体ならびに１Ａ８、２Ｂ４、２Ｅ１２、２Ｅ１２．１、２Ｆ５、２Ｆ５．１、３Ａ１２ａ、３Ａ１２ｂ、６Ａ３ａ、６Ａ３ｂ、６Ｃ７ａ、６Ｃ７ｂ、及び６Ｃ７．２、ならびにそれらの任意の組合せから選択される１つ以上の抗体は、抗ＣＤ３３抗体の１Ａ８、２Ｂ４、２Ｅ１２、２Ｅ１２．１、２Ｆ５、２Ｆ５．１、３Ａ１２ａ、３Ａ１２ｂ、６Ａ３ａ、６Ａ３ｂ、６Ｃ７ａ、６Ｃ７ｂ、及び６Ｃ７．２、ならびにそれらの任意の組合せから選択される１つ以上の抗体に対する比が、１０：１比、９：１比、８：１比、７：１比、６：１比、５：１比、４：１比、３：１比、２：１比、１：１比、０．７５：１比、０．５：１比、０．２５：１比、０．１：１比、０．０７５：１比、０．０５０：１比、０．０２５：１比、０．０１：１比、０．００７５：  比、０．００５０：１比、０．００２５：１比、０．００１：比、０．０００７５：１比、０．０００５０：１比、０．０００２５：１比、０．０００１：比、１：１０比、１：９比、１：８比、１：７比、１：６比、１：５比、１：４比、１：３比、１：２比、１：０．７５比、１：０．５比、１：０．２５比、１：０．１比、１：０．０７５比、１：０．０５０比、１：０．０２５比、１：０．０１比、１：０．００７５比、１：０．００５０比、１：０．００２５比、１：０．００１比、１：０．０００７５比、１：０．０００５０比、１：０．０００２５比、または１：０．０００１比に対応する量で存在する。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、１Ａ８、２Ｂ４、２Ｅ１２、２Ｅ１２．１、２Ｆ５、２Ｆ５．１、３Ａ１２ａ、３Ａ１２ｂ、６Ａ３ａ、６Ａ３ｂ、６Ｃ７ａ、６Ｃ７ｂ、及び６Ｃ７．２、ならびにそれらの任意の組合せから選択される１つ以上の抗体の量と比較して、約１．５倍〜１００倍の範囲の、または１００倍を超える量過剰に存在する。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、１Ａ８、２Ｂ４、２Ｅ１２、２Ｅ１２．１、２Ｆ５、２Ｆ５．１、３Ａ１２ａ、３Ａ１２ｂ、６Ａ３ａ、６Ａ３ｂ、６Ｃ７ａ、６Ｃ７ｂ、及び６Ｃ７．２、ならびにそれらの任意の組合せから選択される１つ以上の抗体の量と比較して、約２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、３５倍、４０倍、４５倍、５０倍、５５倍、６０倍、６５倍、７０倍、７５倍、８０倍、８５倍、９０倍、９５倍、または１００倍過剰の量で存在する。
【０１７７】
いくつかの実施形態では、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、表１、２、３Ａ、３Ｂ、６Ａ、及び６Ｂに記載の抗体のいずれかから選択される少なくとも１つの抗体によって結合されるＣＤ３３エピトープと同じまたはこれと重複するヒトＣＤ３３エピトープに結合する。いくつかの実施形態では、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、１Ａ８、２Ｂ４、２Ｅ１２、２Ｅ１２．１、２Ｆ５、２Ｆ５．１、３Ａ１２ａ、３Ａ１２ｂ、６Ａ３ａ、６Ａ３ｂ、６Ｃ７ａ、６Ｃ７ｂ、及び６Ｃ７．２から選択される少なくとも１つの抗体によって結合されるＣＤ３３エピトープと同じまたはこれと重複するヒトＣＤ３３エピトープに結合する。
【０１７８】
いくつかの実施形態では、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、表１、２、３Ａ、３Ｂ、６Ａ、及び６Ｂに記載の抗体のいずれかから選択される少なくとも１つの抗体によって結合される本質的に同じＣＤ３３エピトープと結合する。いくつかの実施形態では、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、１Ａ８、２Ｂ４、２Ｅ１２、２Ｅ１２．１、２Ｆ５、２Ｆ５．１、３Ａ１２ａ、３Ａ１２ｂ、６Ａ３ａ、６Ａ３ｂ、６Ｃ７ａ、６Ｃ７ｂ、及び６Ｃ７．２から選択される少なくとも１つの抗体によって結合される本質的に同じＣＤ３３エピトープと結合する。抗体が結合するエピトープの例示的なマッピング方法の詳細は、Ｍｏｒｒｉｓ（１９９６）“Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，”  ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｖｏｌ．６６（Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ）に示されている。
【０１７９】
いくつかの実施形態では、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、ＣＤ３３に対する結合について、１Ａ８、２Ｂ４、２Ｅ１２、２Ｅ１２．１、２Ｆ５、２Ｆ５．１、３Ａ１２ａ、３Ａ１２ｂ、６Ａ３ａ、６Ａ３ｂ、６Ｃ７ａ、６Ｃ７ｂ、６Ｃ７．２、及びそれらの任意の組合せから選択される１つ以上の抗体と競合する。
【０１８０】
当技術分野で既知の任意の適切な競合アッセイまたはＣＤ３３結合アッセイ、例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ分析、ＥＬＩＳＡアッセイ、またはフローサイトメトリーを用いて、抗ＣＤ３３抗体が、ＣＤ３３に対する結合について、１Ａ８、２Ｂ４、２Ｅ１２、２Ｅ１２．１、２Ｆ５、２Ｆ５．１、３Ａ１２ａ、３Ａ１２ｂ、６Ａ３ａ、６Ａ３ｂ、６Ｃ７ａ、６Ｃ７ｂ、６Ｃ７．２、及びそれらの任意の組合せから選択される１つ以上の抗体と競合するかどうかが判断され得る。例示的な競合アッセイでは、固定化ＣＤ３３または細胞表面でＣＤ３３を発現する細胞を、ＣＤ３３（例えば、ヒトまたは非ヒト霊長類）に結合する一次標識抗体、及びＣＤ３３に対する結合について該一次抗体と競合するその能力について試験される二次未標識抗体を含む溶液中でインキュベートする。該二次抗体は、ハイブリドーマ上清に存在し得る。対照として、固定化ＣＤ３３またはＣＤ３３を発現する細胞を、該一次標識抗体を含むが二次未標識抗体を含まない溶液中でインキュベートする。ＣＤ３３に対する該一次抗体の結合が可能な条件下でのインキュベート後、過剰な未結合抗体を除去し、固定化ＣＤ３３またはＣＤ３３を発現する細胞と会合した標識の量を測定する。固定化ＣＤ３３またはＣＤ３３を発現する細胞と会合した標識の量が対照試料に対して試験試料で実質的に減少している場合、該二次抗体がＣＤ３３に対する結合について該一次抗体と競合していることを示す。Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  ｃｈ．１４（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、ニューヨーク州コールド・スプリング・ハーバー）を参照されたい。いくつかの実施形態では、利用される競合アッセイは、実施例２及び４に記載の競合アッセイの１つ以上である。
【０１８１】
抗ＣＤ３３抗体の軽鎖及び重鎖可変領域
いくつかの実施形態では、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、（ａ）表１、２、３Ａ、３Ｂ、６Ａ、及び６Ｂに記載の抗体、または、１Ａ８、２Ｂ４、２Ｅ１２、２Ｅ１２．１、２Ｆ５、２Ｆ５．１、３Ａ１２ａ、３Ａ１２ｂ、６Ａ３ａ、６Ａ３ｂ、６Ｃ７ａ、６Ｃ７ｂ、６Ｃ７．２、及びそれらの任意の組合せから選択される抗体のいずれか１つのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む軽鎖可変領域、及び／または（ｂ）表１、２、３Ａ、３Ｂ、６Ａ、及び６Ｂに記載の抗体、または、１Ａ８、２Ｂ４、２Ｅ１２、２Ｅ１２．１、２Ｆ５、２Ｆ５．１、３Ａ１２ａ、３Ａ１２ｂ、６Ａ３ａ、６Ａ３ｂ、６Ｃ７ａ、６Ｃ７ｂ、６Ｃ７．２、及びそれらの任意の組合せから選択される抗体のいずれか１つのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、該ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、ＨＶＲ−Ｌ３、ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３は、表１、２、３Ａ、３Ｂ、６Ａ、及び６Ｂに示す通りの、または、１Ａ８、２Ｂ４、２Ｅ１２、２Ｅ１２．１、２Ｆ５、２Ｆ５．１、３Ａ１２ａ、３Ａ１２ｂ、６Ａ３ａ、６Ａ３ｂ、６Ｃ７ａ、６Ｃ７ｂ、６Ｃ７．２、及びそれらの任意の組合せから選択される抗体由来のＥＵもしくはＫａｂａｔのＣＤＲ、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ、またはＣｏｎｔａｃｔのＣＤＲ配列を含む。
【０１８２】
いくつかの実施形態では、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、（ｉ）表１、２、３Ａ、３Ｂ、６Ａ、及び６Ｂに記載の、または１Ａ８、２Ｂ４、２Ｅ１２、２Ｅ１２．１、２Ｆ５、２Ｆ５．１、３Ａ１２ａ、３Ａ１２ｂ、６Ａ３ａ、６Ａ３ｂ、６Ｃ７ａ、６Ｃ７ｂ、及び６Ｃ７．２から選択される抗体由来のＨＶＲ−Ｌ１配列のいずれかのアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）表１、２、３Ａ、３Ｂ、６Ａ、及び６Ｂに記載の、または１Ａ８、２Ｂ４、２Ｅ１２、２Ｅ１２．１、２Ｆ５、２Ｆ５．１、３Ａ１２ａ、３Ａ１２ｂ、６Ａ３ａ、６Ａ３ｂ、６Ｃ７ａ、６Ｃ７ｂ、及び６Ｃ７．２から選択される抗体由来のＨＶＲ−Ｌ２配列のいずれかのアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、（ｉｉｉ）表１、２、３Ａ、３Ｂ、６Ａ、及び６Ｂに記載の、または１Ａ８、２Ｂ４、２Ｅ１２、２Ｅ１２．１、２Ｆ５、２Ｆ５．１、３Ａ１２ａ、３Ａ１２ｂ、６Ａ３ａ、６Ａ３ｂ、６Ｃ７ａ、６Ｃ７ｂ、及び６Ｃ７．２から選択される抗体由来のＨＶＲ−Ｌ３配列のいずれかのアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、（ｉｖ）表１、２、３Ａ、３Ｂ、６Ａ、及び６Ｂに記載の、または１Ａ８、２Ｂ４、２Ｅ１２、２Ｅ１２．１、２Ｆ５、２Ｆ５．１、３Ａ１２ａ、３Ａ１２ｂ、６Ａ３ａ、６Ａ３ｂ、６Ｃ７ａ、６Ｃ７ｂ、及び６Ｃ７．２から選択される抗体由来のＨＶＲ−Ｈ１配列のいずれかのアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｖ）表１、２、３Ａ、３Ｂ、６Ａ、及び６Ｂに記載の、または１Ａ８、２Ｂ４、２Ｅ１２、２Ｅ１２．１、２Ｆ５、２Ｆ５．１、３Ａ１２ａ、３Ａ１２ｂ、６Ａ３ａ、６Ａ３ｂ、６Ｃ７ａ、６Ｃ７ｂ、及び６Ｃ７．２から選択される抗体由来のＨＶＲ−Ｈ２配列のいずれかのアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、ならびに（ｖｉ）表１、２、３Ａ、３Ｂ、６Ａ、及び６Ｂに記載の、または１Ａ８、２Ｂ４、２Ｅ１２、２Ｅ１２．１、２Ｆ５、２Ｆ５．１、３Ａ１２ａ、３Ａ１２ｂ、６Ａ３ａ、６Ａ３ｂ、６Ｃ７ａ、６Ｃ７ｂ、及び６Ｃ７．２から選択される抗体由来のＨＶＲ−Ｈ３配列のいずれかのアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む。
【０１８３】
いくつかの実施形態では、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含むとともに、該軽鎖可変ドメインは、（ａ）配列番号９〜１１、６７、６８、１８４、及び２２８からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号９〜１１、６７、６８、１８４、及び２２８からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性があるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号２〜１４、６９〜７１、１８５、及び２２９からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号２〜１４、６９〜７１、１８５、及び２２９からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性があるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、ならびに（ｃ）配列番号１５〜１７、７２〜７４、及び２３０からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１５〜１７、７２〜７４、及び２３０からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性があるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３の1つ以上を含み、及び／または、該重鎖可変ドメインは、（ａ）配列番号１８〜２１、７５、２３１、及び２３２からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１８〜２１、７５、２３１、及び２３２からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性があるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２２〜２５、７６、７７、１８６、及び２３３からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号２２〜２５、７６、７７、１８６、及び２３３からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性があるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、ならびに（ｃ）配列番号２６〜２９、及び１８７からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号２６〜２９、及び１８７からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性があるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３の１つ以上を含む。
【０１８４】
いくつかの実施形態では、本開示の本開示の抗体の抗ＣＤ３３抗体は、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含むとともに、（ａ）該ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号９のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号１５のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号１８のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号２２のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号２６のアミノ酸配列を含むか、（ｂ）該ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１０のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号１３のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号１６のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号１９のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号２３のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号２７のアミノ酸配列を含むか、（ｃ）該ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１０のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号６９のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号７２のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号１９のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号２３のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号２７のアミノ酸配列を含むか、（ｄ）該ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号１４のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号１７のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号２０のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号２４のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号２８のアミノ酸配列を含むか、（ｅ）該ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号６８のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号７１のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号７４のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号７５のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号７７のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号２８のアミノ酸配列を含むか、（ｆ）該ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号６７のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号７０のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号７３のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号２１のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号２５のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号２９のアミノ酸配列を含むか、（ｇ）該ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号６７のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号７０のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号７３のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号２１のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号７６のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号２９のアミノ酸配列を含むか、（ｈ）該ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号２１のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号２５のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号２９のアミノ酸配列を含むか、（ｉ）該ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号２１のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号７６のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号２９のアミノ酸配列を含むか、（ｊ）該ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１８４のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号１８５のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号１７のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号７５のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号１８６のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号１８７のアミノ酸配列を含むか、（ｋ）該ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１０のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号１３のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号７２のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号２３１のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号２３のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号２７のアミノ酸配列を含むか、または、（ｌ）該ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号２２８のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号２２９のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号２３０のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号２３２のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号２３３のアミノ酸配列を含み、該ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号２９のアミノ酸配列を含む。
【０１８５】
いくつかの実施形態では、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、表１、２、３Ａ、３Ｂ、６Ａ、及び６Ｂに記載の抗体の、または、１Ａ８、２Ｂ４、２Ｅ１２、２Ｅ１２．１、２Ｆ５、２Ｆ５．１、３Ａ１２ａ、３Ａ１２ｂ、６Ａ３ａ、６Ａ３ｂ、６Ｃ７ａ、６Ｃ７ｂ、及び６Ｃ７．２から選択される抗体のいずれか１つの軽鎖可変領域、及び／または表１、２、３Ａ、３Ｂ、６Ａ、及び６Ｂに記載の抗体の、または、１Ａ８、２Ｂ４、２Ｅ１２、２Ｅ１２．１、２Ｆ５、２Ｆ５．１、３Ａ１２ａ、３Ａ１２ｂ、６Ａ３ａ、６Ａ３ｂ、６Ｃ７ａ、６Ｃ７ｂ、及び６Ｃ７．２から選択される抗体のいずれか１つの重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、配列番号３０〜４８、１１２〜１５３、１９２〜２０２、及び２４１〜２４３のいずれかから選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、及び／または、配列番号４９〜６６、１５４〜１８３、２０３〜２１３、及び２４４〜２４６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む。
【０１８６】
本開示の抗体のいずれも、細胞株によって産生され得る。いくつかの実施形態では、該細胞株は、哺乳動物細胞株であり得る。特定の実施形態では、該細胞株は、ハイブリドーマ細胞株であり得る。他の実施形態では、該細胞株は、酵母細胞株であり得る。抗体産生に適する当技術分野で既知の任意の細胞株が、本開示の抗体の産生に使用され得る。抗体産生用の例示的な細胞株は、本開示を通して記載される。
【０１８７】
いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、１Ａ８、２Ｂ４、２Ｅ１２、２Ｅ１２．１、２Ｆ５、２Ｆ５．１、３Ａ１２ａ、３Ａ１２ｂ、６Ａ３ａ、６Ａ３ｂ、６Ｃ７ａ、６Ｃ７ｂ、及び６Ｃ７．２から選択される抗ＣＤ３３モノクローナル抗体である。ある特定の実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、アンタゴニスト抗体である。ある特定の実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、アゴニスト抗体または不活性抗体である。
【０１８８】
抗ＣＤ３３抗体の結合親和性
ヒトＣＤ３３、マウスＣＤ３３、またはその両方に対する抗ＣＤ３３抗体の解離定数（ＫＤ）は、１００ｎＭ未満、９０ｎＭ未満、８０ｎＭ未満、７０ｎＭ未満、６０ｎＭ未満、５０ｎＭ未満、４０ｎＭ未満、３０ｎＭ未満、２０ｎＭ未満、１０ｎＭ未満、９ｎＭ未満、８ｎＭ未満、７ｎＭ未満、６ｎＭ未満、５ｎＭ未満、４ｎＭ未満、３ｎＭ未満、２ｎＭ未満、１ｎＭ未満、０．９ｎＭ未満、０．８ｎＭ未満、０．７ｎＭ未満、０．６ｎＭ未満、０．５ｎＭ未満、ｌ  ０．４ｎＭ未満、０．３ｎＭ未満、０．２ｎＭ未満、０．１９ｎＭ未満、０．１８ｎＭ未満、０．１７ｎＭ未満、０．１６ｎＭ未満、０．１５ｎＭ未満、０．１４ｎＭ未満、０．１３ｎＭ未満、０．１２ｎＭ未満、０．１１ｎＭ未満、０．１ｎＭ未満、０．０５ｎＭ未満、０．０１ｎＭ未満、または０．００５ｎＭ未満であり得る。いくつかの実施形態では、該抗体は、約１００ｎＭ〜約１００ｐＭの範囲の、または１００ｐＭ（すなわち、０．１ｎＭ）未満のヒトＣＤ３３、マウスＣＤ３３、またはその両方に対する抗ＣＤ３３抗体の解離定数（ＫＤ）を有する。いくつかの実施形態では、該抗体は、約１０ｎＭ〜約５００ｐＭの範囲の、または５００ｐＭ（すなわち、０．５ｎＭ）未満のヒトＣＤ３３、マウスＣＤ３３、またはその両方に対する抗ＣＤ３３抗体の解離定数（ＫＤ）を有する。
【０１８９】
ヒトＣＤ３３及びマウスＣＤ３３に対する抗ＣＤ３３抗体の解離定数（ＫＤ）は、１００ｎＭ未満、９０ｎＭ未満、８０ｎＭ未満、７０ｎＭ未満、６０ｎＭ未満、５０ｎＭ未満、４０ｎＭ未満、３０ｎＭ未満、２０ｎＭ未満、１０ｎＭ未満、９ｎＭ未満、８ｎＭ未満、７ｎＭ未満、６ｎＭ未満、５ｎＭ未満、４ｎＭ未満、３ｎＭ未満、２ｎＭ未満、１ｎＭ未満、０．９ｎＭ未満、０．８ｎＭ未満、０．７ｎＭ未満、０．６ｎＭ未満、０．５ｎＭ、ｌ  ０．４ｎＭ未満、０．３ｎＭ未満、０．２ｎＭ未満、０．１ｎＭ未満、０．０５ｎＭ未満、０．０１ｎＭ未満、または０．００５ｎＭ未満であり得る。いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ３３タンパク質に対する抗ＣＤ３３抗体の解離定数は、約１００ｎＭ〜約１００ｐＭ、または１００ｐＭ（すなわち、０．１ｎＭ）未満の範囲である。いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ３３タンパク質に対する抗ＣＤ３３抗体の解離定数は、約１０ｎＭ〜約５００ｐＭ、または５００ｐＭ（すなわち、０．５ｎＭ）未満の範囲である。いくつかの実施形態では、マウスＣＤ３３タンパク質に対する抗ＣＤ３３抗体の解離定数は、約１００ｎＭ〜約１００ｐＭ、または１００ｐＭ（すなわち、０．１ｎＭ）未満の範囲である。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に対する解離定数（ＫＤ）は、温度約２５℃で測定される。いくつかの実施形態では、該ＫＤは、一価抗体（例えば、Ｆａｂ）または一価形態の完全長抗体を用いて測定される。
【０１９０】
ヒトＣＤ３３及び／またはマウスＣＤ３３に対する抗ＣＤ３３抗体の解離定数（ＫＤ）は、５００ｐＭ未満、４５０ｐＭ未満、４００ｐＭ未満、３５０ｐＭ未満、３００ｐＭ未満、２５０ｐＭ未満、２００ｐＭ未満、１７５ｐＭ未満、１５０ｐＭ未満、１４５ｐＭ未満、１４０ｐＭ未満、１３５ｐＭ未満、１３０ｐＭ未満、１２５ｐＭ未満、１２０ｐＭ未満、１１５ｐＭ未満、１１０ｐＭ未満、１００ｐＭ未満、９０ｐＭ未満、８０ｐＭ未満、７０ｐＭ未満、６０ｐＭ未満、５０ｐＭ未満、４０ｐＭ未満、３０ｐＭ未満、２０ｐＭ未満、または１０ｐＭ未満であり得る。いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ３３タンパク質に対する抗ＣＤ３３抗体の解離定数は、約３００ｎＭ〜約１０ｐＭ、または１０ｐＭ未満の範囲である。いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ３３タンパク質に対する抗ＣＤ３３抗体の解離定数は、約３００ｐＭ以下である。解離定数は、任意の生化学的もしくは生物物理学的技術、例えば、ＥＬＩＳＡ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、バイオレイヤー干渉法（例えば、ＦｏｒｔｅＢｉｏ製Ｏｃｔｅｔ  Ｓｙｓｔｅｍ参照）、等温滴定熱量計（ＩＴＣ）、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）、円偏光二色性（ＣＤ）、ストップトフロー分析、及び比色もしくは蛍光タンパク質融解分析を含めた任意の分析技術によって測定され得る。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に対する解離定数（ＫＤ）は、温度約２５℃で測定される。いくつかの実施形態では、該ＫＤは、一価抗体（例えば、Ｆａｂ）または完全長抗体を用いて測定される。いくつかの実施形態では、該ＫＤは、一価形態の完全長抗体を用いて測定される。例えば、本明細書に記載の表面プラズモン共鳴アッセイを利用する（例えば、実施例１参照）。
【０１９１】
さらなる抗ＣＤ３３抗体、例えば、本開示のＣＤ３３タンパク質に特異的に結合する抗体は、当技術分野で既知の様々なアッセイによって、それらの物理的／化学的特性及び／または生物活性について同定され、スクリーニングされ、及び／または特徴づけられ得る。
【０１９２】
Ｆｃガンマ受容体に結合可能な抗ＣＤ３３抗体
いくつかの実施形態では、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、Ｆｃガンマ受容体と結合する能力を保持している。いくつかの実施形態では、そのような抗体が受容体活性化に対応する的確なエピトープ特異性を有する場合、それらは、それらが、例えば、該ＣＤ３３受容体をクラスター化し、一時的に刺激できるようにする特徴を有し得る。いくつかの実施形態では、そのような抗体は、続いて、ＣＤ３３の分解、ＣＤ３３の脱感作、ＣＤ３３の開裂、ＣＤ３３の内在化、ＣＤ３３の脱落、ＣＤ３３の発現の下方制御、及び／またはＣＤ３３のリソソーム分解を誘導することによって、ＣＤ３３の発現及び／または１つ以上のＣＤ３３タンパク質の活性の長期的阻害剤として作用し得る。
【０１９３】
インビボにおいて、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、任意の１つ以上の多重潜在的機序によって、受容体をクラスター化し、ＣＤ３３を一時的に活性化し得る。ＩｇＧ２などのヒト抗体のいくつかのアイソタイプは、それらの固有の構造により、受容体をクラスター化する、または、クラスター化構造に受容体を保持する内因性の能力を有し、それによって、Ｆｃ受容体に結合することなくＣＤ３３などの受容体を一時的に活性化する（例えば、Ｗｈｉｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１５）Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ２７，１３８−１４８）。
【０１９４】
いくつかの実施形態では、他の抗体は、隣接細胞上のＦｃｇ受容体に結合することによって、受容体（例えば、ＣＤ３３）をクラスター化し得る。いくつかの実施形態では、該抗体のＦｃｇ受容体に対する該定常ＩｇＧ  Ｆｃ領域の結合は、該抗体の凝集をもたらす場合があり、該抗体は次に、それらがそれらの可変領域を介して結合する受容体を凝集させ得る（Ｃｈｕ  ｅｔ  ａｌ（２００８）Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ，４５：３９２６−３９３３、及びＷｉｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１１）Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  １９，１０１−１１３）。いくつかの実施形態では、サイトカイン分泌、酸化的破壊、食作用の増加、及び抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の増強を誘発しない阻害性Ｆｃｇ受容体ＦｃｇＲ（ＦｃｇＲＩＩＢ）に対する結合は、ＦｃｇＲＩＩＢに対する結合が悪い免疫反応効果と関連しないために、インビボでの好ましい抗体クラスター化方法である。
【０１９５】
本開示の抗ＣＤ３３抗体が受容体をクラスター化することができる他の機序がある。例えば、架橋している抗体断片（例えば、Ｆａｂ断片）を用いて、上記の通りＦｃｇ受容体に結合するＦｃ領域を備えた抗体と同様の方法で受容体（例えば、ＣＤ３３）をクラスター化してもよい。いくつかの実施形態では、架橋された抗体断片（例えば、Ｆａｂ断片）は、それらが細胞表面で受容体のクラスター化を誘導し、標的（例えば、ＣＤ３３）上の適切なエピトープに結合する場合、一時的にアゴニスト抗体として機能しうる。
【０１９６】
したがって、いくつかの実施形態では、ＣＤ３３タンパク質に結合する本開示の抗体は、例えば、それらがＣＤ３３の細胞レベルを低下させる前、１つ以上のＣＤ３３活性を阻害する前、及び／またはＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用（例えば、結合）を阻害する前に、それらのエピトープが特異的にＣＤ３３に結合し、１つ以上のＣＤ３３活性を一時的に活性化することによるものであるアゴニスト抗体を含み得る。いくつかの実施形態では、そのような抗体は、ＣＤ３３上のリガンド結合部位に結合し、天然のリガンドの作用を一時的に模倣し得るか、またはリガンド結合部位ではない１つ以上のドメインに結合することによって、標的抗原を刺激してシグナルを伝達し得る。いくつかの実施形態では、そのような抗体は、リガンド結合を妨害しないであろう。いくつかの実施形態では、抗体がＣＤ３３のリガンド結合部位に結合するしないにかかわらず、該抗体は、続いて、ＣＤ３３の分解、ＣＤ３３の脱感作、ＣＤ３３の開裂、ＣＤ３３の内在化、ＣＤ３３の脱落、ＣＤ３３の発現の下方制御、及び／またはＣＤ３３のリソソーム分解を誘導することによって、ＣＤ３３の発現及び／またはＣＤ３３タンパク質の１つ以上の活性の長期的阻害剤として作用し得る。
【０１９７】
いくつかの実施形態では、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、ＣＤ３３タンパク質の１つ以上の活性を一時的に誘導する一時的アゴニスト抗体である。いくつかの実施形態では、該抗体は、細胞で発現されるＣＤ３３タンパク質に結合した後に該１つ以上の活性を一時的に誘導する。いくつかの実施形態では、該ＣＤ３３タンパク質は、細胞表面で発現される。いくつかの実施形態では、本開示の一時的アゴニスト抗ＣＤ３３抗体によって一時的に誘導されるＣＤ３３タンパク質の該１つ以上の活性としては、制限なく、ＬＣＫ及びＦＹＮなどのＳｒｃファミリーチロシンキナーゼによるＴｙｒ−３４０及びＴｙｒ−３５８のリン酸化、チロシン特異的タンパク質ホスファターゼＳＨＰ１及びＳＨＰ２の動員及びそれらへの結合、Ｄｙｎａｍｉｎｉ−１に対するグアニンヌクレオチド交換因子として作用するＰＬＣ−ガンマ１の動員及びそれへの結合、ＳＨ２ドメイン含有タンパク質（例えば、Ｃｒｋｌ）の動員及びそれへの結合、脾臓チロシンキナーゼＳｙｋの動員及びそれへの結合、ＳＨ３−ＳＨ２−ＳＨ３増殖因子受容体結合タンパク質２（Ｇｒｂ２）の動員及びそれへの結合、複数のＳＨ２含有タンパク質の動員及びそれへの結合、プロテインキナーゼＣによるＳｅｒ−３０７及びＳｅｒ−３４２のリン酸化、１つ以上の抗炎症性サイトカイン、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＩＬ−３５、ＩＬ−１６、ＴＧＦ−ベータ、ＩＬ−１Ｒａ、Ｇ−ＣＳＦ、及びＴＮＦ、ＩＦＮ−ベータ１ａ、ＩＦＮ−ベータ１ｂ、またはＩＬ−６に対する可溶性受容体の単球、マクロファージ、Ｔ細胞、樹状細胞、好中球、及び／または、ミクログリアにおける調節された発現、細胞内カルシウム動員の減少、１つ以上の炎症性サイトカインであるＩＦＮ−ａ４、ＩＦＮ−ｂ、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＬＩＦ、ＩＦＮ−ガンマ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＣＸＣＬ１０、ＩＬ−３３、ＣＲＰ、ＩＬ−３３、ＭＣＰ−１、及びＭＩＰ−１−ベータの単球、マクロファージ、Ｔ細胞、樹状細胞、好中球、及び／またはミクログリアにおける調節された発現、Ｃ１ｑａ、Ｃ１ｑＢ、Ｃ１ｑＣ、Ｃ１ｓ、Ｃ１Ｒ、Ｃ４、Ｃ２、Ｃ３、ＩＴＧＢ２、ＨＭＯＸ１、ＬＡＴ２、ＣＡＳＰ１、ＣＳＴＡ、ＶＳＩＧ４、ＭＳ４Ａ４Ａ、Ｃ３ＡＲ１、ＧＰＸ１、ＴｙｒｏＢＰ、ＡＬＯＸ５ＡＰ、ＩＴＧＡＭ、ＳＬＣ７Ａ７、ＣＤ４、ＩＴＧＡＸ、ＰＹＣＡＲＤ、ＣＤ１４、ＣＤ１６、ＨＬＡ−ＤＲ、及びＣＣＲ２から選択される１つ以上のタンパク質の調節された発現、細胞外シグナル制御キナーゼ（ＥＲＫ）のリン酸化の阻害、複数の細胞タンパク質におけるチロシンリン酸化の低減、Ｃ−Ｃケモカイン受容体７（ＣＣＲ７）の調節された発現、ＣＣＬ１９及びＣＣＬ２１発現細胞へのミクログリア細胞の走化性の阻害、ホスホイノシチド３−キナーゼの活性化、単球、マクロファージ、Ｔ細胞、樹状細胞、及び／または、ミクログリアの細胞増殖の低減、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、Ｍ２ミクログリア、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ��マクロファージ、及び／またはＭ２マクロファージによって誘導されるＴ細胞増殖の低減、破骨細胞産生の阻害、破骨細胞形成速度の低減、またはその両方、好中球、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及び／または、Ｍ２ミクログリアの生存の低減、好中球、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及び／または、Ｍ２ミクログリアの増殖の低減、好中球、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及び／またはＭ２ミクログリアの遊走の阻害、好中球、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及び／またはＭ２ミクログリアの１つ以上の機能の低減、好中球、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及び／またはＭ２ミクログリアの成熟の阻害、単球、マクロファージ、Ｔ細胞、樹状細胞、好中球、及び／またはミクログリアの細胞死及びアポトーシスの増大、単球、マクロファージ、Ｔ細胞、樹状細胞、好中球、及び／またはミクログリアの食作用活性の低減、単球、マクロファージ、Ｔ細胞、樹状細胞、好中球、及び／またはミクログリアの増殖の低減、単球、マクロファージ、Ｔ細胞、樹状細胞、好中球、及び／またはミクログリアの全体的な機能の低減、ＩＴＡＭ含有受容体のリン酸化、ＩＴＡＭシグナル伝達を媒介するシグナル伝達分子のリン酸化、パターン認識受容体の活性化の低減、Ｔｏｌｌ様受容体の活性化の低減、損傷関連の細胞及びタンパク質の破片の除去の活性化の低減、ＣＤ３３と１つ以上のそのリガンド間の相互作用、ＣＤ３３とＣＤ６４などの補助受容体間の相互作用、アポトーシス性ニューロンの除去、機能不全シナプスの除去、神経組織破片の除去、非神経組織破片の除去、細菌もしくは他の異物の除去、病原タンパク質の除去、及び腫瘍細胞の除去から選択される１つ以上の種類の除去の低減、アポトーシス性ニューロン、神経組織破片、非神経組織破片、細菌、他の異物、病原タンパク質、病原ペプチド、病原核酸、病原脂質、または腫瘍細胞の１つ以上の食作用の阻害、例えば、病原核酸がアンチセンスＧＧＣＣＣＣ（Ｇ２Ｃ４）反復拡張ＲＮＡである病原核酸の除去の阻害、アミロイドベータ��アミロイドベータ斑、アミロイド前駆体タンパク質もしくはその断片、タウ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（染色体９オープンリーディングフレーム７２）、ｃ９ＲＡＮタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メジン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、反復関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）反復ペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）反復ペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）反復ペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）反復ペプチド、ユビキチン、ならびにプロリン−アルギニン（ＰＲ）反復ペプチドから選択される病原タンパク質の除去の活性化、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、及び甲状腺癌から選択される異なる種類の癌に対する有益な免疫応答の阻害、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウパチー病、那須・ハコラ病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、本態性振戦、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫性疾患、サルコイドーシス、加齢に伴う病気、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、及び多発性硬化症から選択される異なる種類の神経障害に対する有益な免疫応答の阻害、ループス、急性及び慢性大腸炎、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満症、マラリア、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身性感染症、ループス、関節炎、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、及び骨のパジェット病から選択される異なる種類の炎症及び感染症に対する有益な免疫応答の阻害、アポトーシス性ニューロン、神経組織破片、機能不全シナプス、非神経組織破片、細菌、他の異物、病原タンパク質、病原ペプチド、病原核酸、または腫瘍細胞の１つ以上の食作用の阻害、ここで、該病原核酸は、アンチセンスＧＧＣＣＣＣ（Ｇ２Ｃ４）反復拡張ＲＮＡの場合があり、該病原タンパク質には、アミロイドベータ、オリゴマーアミロイドベータ、アミロイドベータ斑、アミロイド前駆体タンパク質もしくはその断片、タウ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（染色体９オープンリーディングフレーム７２）、ｃ９ＲＡＮタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハン��ンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メジン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、反復関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）反復ペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）反復ペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）反復ペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）反復ペプチド、ユビキチン、ならびにプロリン−アルギニン（ＰＲ）反復ペプチドが含まれる場合があり、該腫瘍細胞は、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、及び甲状腺癌から選択される癌由来の場合がある、腫瘍細胞上のＣＤ３３リガンドへの結合、
樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、ミクログリア、Ｔ細胞、好中球、及び／またはマクロファージ上のＣＤ３３リガンドへの結合、ミクログリア、マクロファージ、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、または細胞傷害性Ｔ細胞の１つ以上による腫瘍細胞殺傷の阻害、ミクログリア、マクロファージ、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、または細胞傷害性Ｔ細胞の１つ以上の抗腫瘍細胞増殖活性の阻害、ミクログリア、マクロファージ、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、または細胞傷害性Ｔ細胞の１つ以上の抗腫瘍細胞転移活性の阻害、免疫抑制樹状細胞、免疫抑制マクロファージ、骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ、または制御性Ｔ細胞の促進、１つ以上のＩＴＡＭモチーフ含有受容体、例えば、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、ＦｃｇＲ、ＤＡＰ１０、及びＤＡＰ１２の阻害、モチーフＤ／Ｅｘ０−２ＹｘｘＬ／ＩＸ６−８ＹｘｘＬ／Ｉ（配列番号２４７）を含む１つ以上の受容体の阻害、１つ以上のパターン認識受容体（ＰＲＲ）、例えば、病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）を識別する受容体、及び損傷関連分子パターン（ＤＡＭＰ）を識別する受容体によるシグナル伝達の阻害、１つ以上のＴｏｌｌ様受容体によるシグナル伝達の阻害、ＪＡＫ−ＳＴＡＴシグナル伝達経路の阻害、活性化Ｂ細胞核内因子カッパ軽鎖エンハンサー（ＮＦκＢ）の阻害、ＰＬＣγ／ＰＫＣ／カルシウム動員の阻害、ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ、Ｒａｓ／ＭＡＰＫシグナル伝達の阻害、１つ以上の炎症性受容体、例えば、ＣＤ８６であって、ミクログリア、マクロファージ、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、または細胞傷害性Ｔ細胞の１つ以上で発現される受容体の調節された発現、１つ以上のＣＤ３３依存性遺伝子の発現の増大、破壊されたＣＤ３３依存性遺伝子発現の正常化、ならびに１つ以上のＩＴＡＭ依存性遺伝子、例えば、ＮＦＡＴ転写因子の発現の低減が挙げられ得る。本開示の抗ＣＤ３３抗体は、当技術分野で既知の、及び本明細書に開示の任意の適切な技術またはアッセイを利用して、ＣＤ３３タンパク質の１つ以上の活性を一時的に誘導するそれらの能力について試験され得る。そのような抗体が一時的に誘導する活性にかかわらず、そのような抗体は、続いて、ＣＤ３３の分解、ＣＤ３３の脱感作、ＣＤ３３の開裂、ＣＤ３３の内在化、ＣＤ３３の脱落、ＣＤ３３の発現の下方制御、及び／またはＣＤ３３のリソソーム分解を誘導することによって、ＣＤ３３の発現及び／またはＣＤ３３タンパク質の１つ以上の活性の長期的阻害剤として作用し得る。いくつかの実施形態では、該ＣＤ３３抗体は、Ｆｃ受容体に対する結合とは独立して、ＣＤ３３タンパク質の１つ以上の活性を一時的に誘導する。
【０１９８】
例示的な抗体のＦｃアイソタイプ及び修飾を以下の表Ｃに示す。いくつかの実施形態では、Ｆｃガンマ受容体に結合することが可能な本開示の抗ＣＤ３３抗体は、以下の表Ｃに記載のＦｃアイソタイプを有する。
表Ｃ：Ｆｃガンマ受容体に結合することが可能な例示的な抗ＣＤ３３抗体のＦｃアイソタイプ
2018518176.tif 000007
【０１９９】
表Ｃに記載のアイソタイプに加えて、理論に拘束されることを望むものではないが、ヒトのＦｃｇ受容体Ｉ、ＩＩＡ、ＩＩＣ、ＩＩＩＡ、ＩＩＩＢ及び／またはマウスのＦｃｇ受容体Ｉ、ＩＩＩ、及びＩＶに結合するヒトＩｇＧ１もしくはＩｇＧ３アイソタイプ及びその変異体（例えば、Ｓｔｒｏｈｌ（２００９）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２００９、２０：６８５−６９１）を備えた抗体は、一時的アゴニスト抗体としても作用し得ると考えられている。
【０２００】
いくつかの実施形態では、該Ｆｃガンマ受容体結合抗体は、ＩｇＧクラス、ＩｇＭクラス、またはＩｇＡクラスのものである。いくつかの実施形態では、該Ｆｃガンマ受容体結合抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４アイソタイプを有する。
【０２０１】
ある特定の実施形態では、該Ｆｃガンマ受容体結合抗体は、ＩｇＧ２アイソタイプを有する。いくつかの実施形態では、該Ｆｃガンマ受容体結合抗体は、ヒトＩｇＧ２の定常領域を含む。いくつかの実施形態では、該ヒトＩｇＧ２定常領域は、Ｆｃ領域を含む。いくつかの実施形態では、該Ｆｃガンマ受容体結合抗体は、阻害性Ｆｃ受容体と結合する。ある特定の実施形態では、該阻害性Ｆｃ受容体は、阻害性Ｆｃガンマ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＩＩＢ）である。いくつかの実施形態では、該Ｆｃ領域は、１つ以上の修飾を含む。例えば、いくつかの実施形態では、該Ｆｃ領域は、１つ以上のアミノ酸置換（例えば、同じアイソタイプの野生型Ｆｃ領域に対して）を含む。いくつかの実施形態では、該１つ以上のアミノ酸置換は、Ｖ２３４Ａ（Ａｌｅｇｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ５７：１５３７−１５４３．３１、Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ．，（２０００）Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００：１６−２６）、Ｇ２３７Ａ（Ｃｏｌｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ、６８：５６３−５７１）、Ｈ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ（ＵＳ  ２００７／０１４８１６７、Ａｒｍｏｕｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２９：  ２６１３−２６２４、Ａｒｍｏｕｒ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｔｈｅ  Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ  Ｊｏｕｒｎａｌ  １（Ｓｕｐｐｌ．１）：２７、Ａｒｍｏｕｒ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｔｈｅ  Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ  Ｊｏｕｒｎａｌ  １（Ｓｕｐｐｌ．１）：２７）、Ｃ２３２Ｓ、及び／またはＣ２３３Ｓ（Ｗｈｉｔｅ  ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ２７，１３８−１４８）、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ（Ｃｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，４５：３９２６−３９３３）、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及び／またはＴ２５６Ｅから選択される。この場合、該アミノ酸位置は、ＥＵまたはＫａｂａｔ付番規則に従う。
【０２０２】
いくつかの実施形態では、該Ｆｃガンマ受容体結合抗体は、Ｃ１２７Ｓアミノ酸置換を含む重鎖定常ドメインを備えたＩｇＧ２アイソタイプを有する。この場合、該アミノ酸位置は、ＥＵまたはＫａｂａｔ付番規則に従う（Ｗｈｉｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１５）Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ２７，１３８−１４８、Ｌｉｇｈｔｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１０）ＰＲＯＴＥＩＮ  ＳＣＩＥＮＣＥ  １９：７５３−７６２、及びＷＯ２００８０７９２４６）。
【０２０３】
いくつかの実施形態では、該Ｆｃガンマ受容体結合抗体は、Ｃ２１４Ｓアミノ酸置換を含むカッパ軽鎖定常ドメインを備えたＩｇＧ２アイソタイプを有する。この場合、該アミノ酸位置は、ＥＵまたはＫａｂａｔ付番規則に従う（Ｗｈｉｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１５）Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ２７，１３８−１４８、Ｌｉｇｈｔｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１０）ＰＲＯＴＥＩＮ  ＳＣＩＥＮＣＥ  １９：７５３−７６２、及びＷＯ２００８０７９２４６）。
【０２０４】
ある特定の実施形態では、該Ｆｃガンマ受容体結合抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプを有する。いくつかの実施形態では、該Ｆｃガンマ受容体結合抗体は、マウスＩｇＧ１定常領域を含む。いくつかの実施形態では、該Ｆｃガンマ受容体結合抗体は、ヒトＩｇＧ１定常領域を含む。いくつかの実施形態では、該ヒトＩｇＧ１定常領域は、Ｆｃ領域を含む。いくつかの実施形態では、該Ｆｃガンマ受容体結合抗体は、阻害性Ｆｃ受容体と結合する。ある特定の実施形態では、該阻害性Ｆｃ受容体は、阻害性Ｆｃガンマ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＩＩＢ）である。いくつかの実施形態では、該Ｆｃ領域は、１つ以上の修飾を含む。例えば、いくつかの実施形態では、該Ｆｃ領域は、１つ以上のアミノ酸置換（例えば、同じアイソタイプの野生型Ｆｃ領域に対して）を含む。いくつかの実施形態では、該１つ以上のアミノ酸置換は、Ｎ２９７Ａ（Ｂｏｌｔ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２３：４０３−４１１）、Ｄ２６５Ａ（Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｒ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６，６５９１−６６０４）、Ｄ２７０Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ（Ｈｕｔｃｈｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ，９２：１１９８０−１１９８４、Ａｌｅｇｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ５７：１５３７−１５４３．３１、Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ．，（２０００）Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００：１６−２６）、Ｇ２３７Ａ（Ａｌｅｇｒｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ５７：１５３７−１５４３．３１、Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００：１６−２６）、Ｐ２３８Ｄ、Ｌ３２８Ｅ、Ｅ２３３Ｄ、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ、Ａ３３０Ｒ、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ（ＭｃＥａｒｃｈｅｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）Ｂｌｏｏｄ，１０９：１１８５−１１９２）、Ｐ３３１Ｓ（Ｓａｚｉｎｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ２００８，１０５：２０１６７−２０１７２）、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｎ２９７Ｑ、Ｐ２３８Ｓ、Ｐ２３８Ａ、Ａ３２７Ｑ、Ａ３２７Ｇ、Ｐ３２９Ａ、Ｋ３２２Ａ、及び／またはＴ３９４Ｄから選択される。この場合、該アミノ酸位置は、ＥＵまたはＫａｂａｔ付番規則に従う。
【０２０５】
いくつかの実施形態では、該抗体は、ＩｇＧ２アイソタイプ重鎖定常ドメイン１（ＣＨ１）及びヒンジ領域を含む（Ｗｈｉｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１５）Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ２７，１３８−１４８）。ある特定の実施形態では、該ＩｇＧ２アイソタイプＣＨ１及びヒンジ領域は、アミノ酸配列ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＮＦＧＴＱＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号２１４）を含む。いくつかの実施形態では、該抗体Ｆｃ領域は、Ｓ２６７Ｅアミノ酸置換、Ｌ３２８Ｆアミノ酸置換、もしくはその両方、及び／またはＮ２９７ＡもしくはＮ２９７Ｑアミノ酸置換を含み、この場合、該アミノ酸位置は、ＥＵまたはＫａｂａｔ付番規則に従う。
【０２０６】
ある特定の実施形態では、該Ｆｃガンマ受容体結合抗体は、ＩｇＧ４アイソタイプを有する。いくつかの実施形態では、該Ｆｃガンマ受容体結合抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域を含む。いくつかの実施形態では、該ヒトＩｇＧ４定常領域は、Ｆｃ領域を含む。いくつかの実施形態では、該Ｆｃガンマ受容体結合抗体は、阻害性Ｆｃ受容体と結合する。ある特定の実施形態では、該阻害性Ｆｃ受容体は、阻害性Ｆｃガンマ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＩＩＢ）である。いくつかの実施形態では、該Ｆｃ領域は、１つ以上の修飾を含む。例えば、いくつかの実施形態では、該Ｆｃ領域は、１つ以上のアミノ酸置換（例えば、同じアイソタイプの野生型Ｆｃ領域に対して）を含む。いくつかの実施形態では、該１つ以上のアミノ酸置換は、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３６Ｅ（Ｒｅｄｄｙ  ｅｔ  ａｌ．，（２０００）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，１６４：１９２５−１９３３）、Ｓ２６７Ｅ、Ｅ３１８Ａ、Ｌ３２８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及び／またはＴ２５６Ｅから選択される。この場合、該アミノ酸位置は、ＥＵまたはＫａｂａｔ付番規則に従う。
【０２０７】
ある特定の実施形態では、該Ｆｃガンマ受容体結合抗体は、ハイブリッドＩｇＧ２／４アイソタイプを有する。いくつかの実施形態では、該Ｆｃガンマ受容体結合抗体は、ヒトＩｇＧ２のＥＵもしくはＫａｂａｔ付番に従うアミノ酸１１８〜２６０、及びヒトＩｇＧ４のＥＵもしくはＫａｂａｔ付番に従うアミノ酸２６１〜４４７を含むアミノ酸配列を含む（ＷＯ  １９９７／１１９７１、ＷＯ  ２００７／１０６５８５）。
【０２０８】
特定の実施形態では、該抗体は、マウスＩｇＧ４定常領域を含む（Ｂａｒｔｈｏｌｏｍａｅｕｓ，ｅｔ  ａｌ．（２０１４）．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９２，２０９１−２０９８）。
【０２０９】
いくつかの実施形態では、該Ｆｃ領域はさらに、ＥＵもしくはＫａｂａｔ付番に従うＡ３３０Ｌ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、またはＰ３３１Ｓ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される１つ以上のさらなるアミノ酸置換を含む。
【０２１０】
不活性抗体
本開示の抗ＣＤ３３抗体の別のクラスには、不活性抗体が含まれる。本明細書で使用される、「不活性」抗体とは、それらの標的抗原（例えば、ＣＤ３３）と特異的に結合するが、抗原機能を調節（例えば、低減／阻害または活性化／誘導）しない抗体を指す。例えば、ＣＤ３３の場合、不活性抗体は、ＣＤ３３の細胞レベルを調節せず、ＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用（例えば、結合）も調節せず、ＣＤ３３タンパク質の１つ以上の活性も調節しない。いくつかの実施形態では、細胞表面でＣＤ３３をクラスター化する能力を有さない抗体は、それらが受容体活性化に対応するエピトープ特異性を有していても、不活性抗体であり得る。
【０２１１】
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３タンパク質と結合する抗体としては、ＣＤ３３と結合するが、それらのエピトープ特異性、または特性のため、ＣＤ３３の細胞レベルを低下させず、及び／またはＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用（例えば、結合）を阻害しない抗体が挙げられ得る。いくつかの実施形態では、そのような抗体は、例えば、毒素（例えば、化学療法剤）を腫瘍細胞内に輸送するためのカーゴとして使用することができる。そのような抗体は、現在市販されているＣＤ３３の細胞レベルを低下させる抗ＣＤ３３抗体、例えば、カリケアマイシンのクラスの細胞毒性薬に結合され、急性骨髄性白血病腫瘍を標的化及び殺傷するために使用されるゲムツズマブゾガマイシン（ｇｅｍｔｕｚｕｍａｂ  ｚｏｇａｍｉｃｉｎ）より優れている可能性がある（Ｎａｉｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，（２０００），Ｌｅｕｋｅｍｉａ，１４，１４３６−１４４３、Ｒｉｃａｒｔ（２０１１）Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  １７、６４１７−６４３６、Ｈａｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２００２）Ｊｏｕｒｎａｌ：  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１３，４７−５８、Ｂｅｉｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，（２００１）Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ７  、１４９０−６、及びＭａｌｉｋ  Ｍ．ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｈｕｍａｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，１−１４．）。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３の細胞レベルを低下させない抗体は、腫瘍細胞表面のＣＤ３３を無傷のまま残すため、本開示の不活性抗ＣＤ３３抗体は、さらなる毒素結合抗体による標的化に、ゲムツズマブゾガマイシン（ｇｅｍｔｕｚｕｍａｂ  ｚｏｇａｍｉｃｉｎ）などの市販の抗体より優れている可能性がある。対照的に、ＣＤ３３の細胞レベルを低下させる抗体は、細胞表面からＣＤ３３を除去し、毒素結合抗体によるさらなる標的化からの腫瘍細胞の防御につながる。したがって、いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、ＣＤ３３と結合するが、ＣＤ３３の細胞レベルを低下させることができず、ＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用（例えば、結合）も阻害することができず、ＣＤ３３タンパク質の１つ以上の活性を誘発することもできない不活性抗体である。
【０２１２】
細胞におけるＣＤ３３の細胞レベルを低下させるまたは低下させない抗体は、１つ以上のＦｃｇ受容体に対する結合の低下を示す不活性Ｆｃ領域と組み合わせることができる。そのようなＦｃ領域及び修飾の例を以下の表Ｄに示す。いくつかの実施形態では、不活性Ｆｃ領域を備えた抗体は、以下の表Ｄに記載のＦｃアイソタイプを有する。
【０２１３】
アンタゴニスト抗ＣＤ３３抗体
本開示の抗ＣＤ３３抗体の第三のクラスには、アンタゴニスト抗体が含まれる。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３タンパク質と結合する抗体は、ＣＤ３３の細胞レベルを低下させ、ＣＤ３３及び／または１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用（例えば、結合）を阻害し、ＣＤ３３タンパク質の１つ以上の活性を阻害するアンタゴニスト抗体を含む場合がある。そのような抗体は、ＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンド間の相互作用（例えば、結合）を妨げること、または、１つ以上のＣＤ３３リガンドの存在下でＣＤ３３の細胞外ドメインから該細胞の細胞質へのシグナル伝達を妨げることのいずれかによって、ＣＤ３３タンパク質の１つ以上の活性を阻害する。アンタゴニスト抗体はまた、ＣＤ３３の分解、ＣＤ３３の脱感作、ＣＤ３３の開裂、ＣＤ３３の内在化、ＣＤ３３の脱落、ＣＤ３３の発現の下方制御、及び／またはＣＤ３３のリソソーム分解を誘導することにより、ＣＤ３３の細胞表面レベルを低下させることによって、ＣＤ３３タンパク質の１つ以上の活性を阻害することができる。いくつかの実施形態では、そのようなアンタゴニスト抗ＣＤ３３抗体は、一時的にＣＤ３３を活性化しない可能性がある。
【０２１４】
いくつかの実施形態では、本開示のアンタゴニスト抗ＣＤ３３抗体は、本開示の一時的アゴニスト抗ＣＤ３３抗体のエピトープ特異性を有し得るが、Ｆｃｇ受容体に結合することができず、ひいては、例えば、ＣＤ３３を一時的にクラスター化すること及び活性化することができないＦｃドメインを有する。
【０２１５】
いくつかの実施形態では、本開示のアンタゴニスト抗ＣＤ３３抗体は、制限なく、以下の活性の１つ以上を有する：シアル酸含有糖脂質またはシアル酸含有糖タンパク質などの１つ以上のＣＤ３３リガンドに対するＣＤ３３タンパク質の結合を低下させる能力、サイトカインシグナル伝達サプレッサー（ＳＯＣＳ）タンパク質（例えば、ＳＯＣＳ３タンパク質）のＣＤ３３タンパク質に対する結合を低下させる能力、ＣＤ３３タンパク質のプロテアソーム分解を増加させる能力、循環樹状細胞、マクロファージ、単球、Ｔ細胞、及び／またはミクログリアの表面でＣＤ３３の機能的発現を低下させる能力、ＬＣＫ及びＦＹＮなどのＳｒｃファミリーチロシンキナーゼによるＴｙｒ−３４０及びＴｙｒ−３５８のリン酸化を減少させる能力、チロシン特異的タンパク質ホスファターゼＳＨＰ１及びＳＨＰ２の動員及びそれらへの結合を減少させる能力、Ｄｙｎａｍｉｎ−１に対するグアニンヌクレオチド交換因子として作用するＰＬＣ−ｇ１の動員及びそれへの結合を減少させる能力、Ｃｒｋｌの動員及びそれへの結合を減少させる能力、脾臓チロシンキナーゼＳｙｋの動員及びそれへの結合を減少させる能力、ＳＨ３−ＳＨ２−ＳＨ３増殖因子受容体結合タンパク質２（Ｇｒｂ２）の動員及びそれへの結合を減少させる能力、複数のＳＨ２含有タンパク質の動員及びそれへの結合を減少させる能力、細胞内カルシウム動員を増加させる能力、炎症性サイトカインＩＬ−１β、ＩＬ−８、及びＴＮＦ−αの産生を調節する能力、ホスホイノシチド３−キナーゼの活性化を低下させる能力、単球、マクロファージ、樹状細胞、Ｔ細胞、及び／または、ミクログリアの増殖を増大させる能力、単球、マクロファージ、樹状細胞、Ｔ細胞、及び／またはミクログリアの生存を増加させる能力、複数の細胞タンパク質のチロシンリン酸化を増加させる能力、単球、マクロファージ、樹状細胞、及び／またはミクログリアの食作用活性を増加させる能力、単球、マクロファージ、樹状細胞、Ｔ細胞、及び／またはミクログリアの細胞増殖を増加させる能力、ＩＴＡＭシグナル伝達を媒介するシグナル伝達分子のリン酸化を増加させる能力、パターン認識受容体の機能を増加させる能力、Ｔｏｌｌ様受容体の機能を増加させる能力、損傷関連分子パターン（ＤＡＭＰ）受容体の機能を増加させる能力、Ｃ−Ｃケモカイン受容体７（ＣＣＲ７）の発現を調節する能力、ならびに細胞及びタンパク質の破片の除去を増加させる能力。
【０２１６】
いくつかの実施形態では、本開示のアンタゴニスト抗ＣＤ３３抗体は、１つ以上のＦｃｇ受容体に対する結合の減少を示すＦｃ領域を有する。そのようなＦｃ領域及び修飾の例を以下の表Ｄに示す。いくつかの実施形態では、該抗体は、以下の表Ｄに記載するＦｃアイソタイプを有する。
【０２１７】
Ｆｃガンマ受容体に対する結合が減少した抗体のＦｃアイソタイプ
いくつかの実施形態では、Ｆｃガンマ受容体に対する結合が減少した抗ＣＤ３３抗体は、以下の表Ｄに記載のＦｃアイソタイプを有する。
表Ｄ：Ｆｃガンマ受容体に対する結合が減少した例示的な抗ＣＤ３３抗体のＦｃアイソタイプ
2018518176.tif 000008
【０２１８】
ある特定の実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプを有する。いくつかの実施形態では、該抗体は、マウスＩｇＧ１定常領域を含む。いくつかの実施形態では、該抗体は、ヒトＩｇＧ１定常領域を含む。いくつかの実施形態では、該ヒトＩｇＧ１定常領域は、Ｆｃ領域を含む。いくつかの実施形態では、該Ｆｃ領域は、１つ以上の修飾を含む。例えば、いくつかの実施形態では、該Ｆｃ領域は、１つ以上のアミノ酸置換（例えば、同じアイソタイプの野生型Ｆｃ領域に対して）を含む。
【０２１９】
いくつかの実施形態では、該１つ以上のアミノ酸置換は、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ（Ｂｏｌｔ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２３：４０３−４１１）、Ｄ２６５Ａ、Ｄ２７０Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ（ＭｃＥａｒｃｈｅｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）Ｂｌｏｏｄ，１０９：１１８５−１１９２）、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ（ＭｃＥａｒｃｈｅｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）Ｂｌｏｏｄ，１０９：１１８５−１１９２）、Ｐ２３８Ｓ（Ｄａｖｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）Ｊ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ，３４：２２０４−２２１０）、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ（ＭｃＥａｒｃｈｅｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）Ｂｌｏｏｄ，１０９：１１８５−１１９２）、Ｐ２３８Ａ、Ａ３２７Ｑ、Ａ３２７Ｇ、Ｐ３２９Ａ（Ｓｈｉｅｌｄｓ  ＲＬ．ｅｔ  ａｌ．，（２００１）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２７６（９）：６５９１−６０４）、Ｋ３２２Ａ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ（Ｈｅｚａｒｅｈ，ｅｔ  ａｌ．，（２００１）Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  ７５，１２１６１−１２１６８、Ｏｇａｎｅｓｙａｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）．Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｉｃａ  ６４，７００−７０４）、Ｐ３３１Ｓ（Ｏｇａｎｅｓｙａｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｉｃａ  ６４，７００−７０４）、Ｔ３９４Ｄ（Ｗｉｌｋｉｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）ＭＡｂｓ  ５（３）：  ４０６−４１７）、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及び／またはＴ２５６Ｅから選択される。この場合、該アミノ酸位置は、ＥＵまたはＫａｂａｔ付番規則に従う。特定の実施形態では、該Ｆｃ領域はさらに、ＥＵまたはＫａｂａｔ付番規則に従うグリシン２３６に対応する位置にアミノ酸欠失がある。
【０２２０】
いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ＥＵまたはＫａｂａｔ付番規則に従うＣ２２０Ｓアミノ酸置換を含む重鎖定常領域を備えたＩｇＧ１アイソタイプを有する。いくつかの実施形態では、該Ｆｃ領域はさらに、ＥＵもしくはＫａｂａｔ付番規則に従うＡ３３０Ｌ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、及び／またはＰ３３１Ｓから選択される１つ以上のさらなるアミノ酸置換を含む。ある特定の実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ＩｇＧ２アイソタイプを有する。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ヒトＩｇＧ２定常領域を含む。いくつかの実施形態では、該ヒトＩｇＧ２定常領域は、Ｆｃ領域を含む。いくつかの実施形態では、該Ｆｃ領域は、１つ以上の修飾を含む。例えば、いくつかの実施形態では、該Ｆｃ領域は、１つ以上のアミノ酸置換（例えば、同じアイソタイプの野生型Ｆｃ領域に対して）を含む。いくつかの実施形態では、該１つ以上のアミノ酸置換は、Ｐ２３８Ｓ、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｈ２６８Ａ、Ｈ２６８Ｑ、Ｈ２６８Ｅ、Ｖ３０９Ｌ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｃ２３２Ｓ、Ｃ２３３Ｓ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及び／またはＴ２５６Ｅから選択される。この場合、該アミノ酸位置は、ＥＵまたはＫａｂａｔ付番規則に従う（Ｖａｆａ  Ｏ．ｅｔ  ａｌ．，（２０１４）Ｍｅｔｈｏｄｓ  ６５：１１４−１２６）。
【０２２１】
ある特定の実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ＩｇＧ４アイソタイプを有する。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３３抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域を含む。いくつかの実施形態では、該ヒトＩｇＧ４定常領域は、Ｆｃ領域を含む。いくつかの実施形態では、該Ｆｃ領域は、１つ以上の修飾を含む。例えば、いくつかの実施形態では、該Ｆｃ領域は、１つ以上のアミノ酸置換（例えば、同じアイソタイプの野生型Ｆｃ領域に対して）を含む。いくつかの実施形態では、該１つ以上のアミノ酸置換は、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｅ３１８Ａ（Ｈｕｔｃｈｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ，９２：１１９８０−１１９８４）、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３４Ａ／Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３６Ｅ、Ｓ２４１Ｐ、Ｌ２４８Ｅ（Ｒｅｄｄｙ  ｅｔ  ａｌ．，（２０００）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，１６４：１９２５−１９３３、Ａｎｇａｌ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９３）Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．３０（１）：１０５−８、ＵＳ  ８６１４２９９  Ｂ２、Ｖａｆａ  Ｏ．ｅｔ  ａｌ．，（２０１４）Ｍｅｔｈｏｄｓ  ６５：１１４−１２６）、Ｔ３９４Ｄ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｎ２９７Ａ、及び／またはＮ２９７Ｑから選択される。この場合、該アミノ酸位置は、ＥＵまたはＫａｂａｔ付番規則に従う。
【０２２２】
いくつかの実施形態では、該Ｆｃ領域はさらに、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及び／またはＴ２５６Ｅから選択される１つ以上のさらなるアミノ酸置換を含む。この場合、該アミノ酸位置は、ＥＵまたはＫａｂａｔ付番規則に従う。
【０２２３】
さらなるＩｇＧ変異
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＩｇＧ１バリアントの１つ以上は、補体活性化を排除するため、アミノ酸位置がＥＵまたはＫａｂａｔ付番規則に従うＡ３３０Ｌ変異（Ｌａｚａｒ  ｅｔ  ａｌ．，（２００６）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ，１０３：４００５−４０１０）、または、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、及び／またはＰ３３１Ｓ変異の１つ以上（Ｓａｚｉｎｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ，１０５：２０１６７−２０１７２）と組み合わせてもよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＩｇＧバリアントは、ヒト血清中での該抗ＣＤ３３抗体の半減期を向上させるために１つ以上の変異と組み合わせてもよい（例えば、ＥＵまたはＫａｂａｔ付番規則に従うＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ変異）（Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ  ｅｔ  ａｌ．，（２００６）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ，２８１：２３５１４−２３５２４、及びＳｔｒｏｈｌ  ｅ  ａｌ．，（２００９）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０：６８５−６９１）。
【０２２４】
いくつかの実施形態では、本開示のＩｇＧ４バリアントは、抗体安定性を向上させるため、ＥＵまたはＫａｂａｔ付番規則に従うＳ２２８Ｐ変異（Ａｎｇａｌ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９３）Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，３０：１０５−１０８）、及び／または、Ｐｅｔｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１２）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．１３、２８７（２９）：２４５２５−３３）に記載の１つ以上の変異と組み合わせてもよい。
【０２２５】
二重特異性抗体
本開示のある特定の態様は、本開示のＣＤ３３タンパク質の１つ以上のドメイン及び第二の抗原に結合する二重特異性抗体に関する。二重特異性抗体の生成方法は、当技術分野で周知であり、本明細書に記載される。いくつかの実施形態では、本開示の二重特異性抗体は、本開示のＣＤ３３タンパク質の１つ以上のアミノ酸残基、例えば、ヒトＣＤ３３（配列番号１）の１つ以上のアミノ酸残基、または配列番号１のアミノ酸残基に対応するＣＤ３３タンパク質のアミノ酸残基に結合する。いくつかの実施形態では、本開示の二重特異性抗体は、第一の抗原及び第二の抗原を認識する。いくつかの実施形態では、該第一の抗原は、ＣＤ３３タンパク質または天然に存在するそのバリアントである。いくつかの実施形態では、該第二の抗原もまた、ＣＤ３３タンパク質または天然に存在するそのバリアントである。いくつかの実施形態では、該第二の抗原は、血液脳関門を通過する輸送を促進する抗原である（例えば、Ｇａｂａｔｈｕｌｅｒ  Ｒ．，Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．Ｄｉｓ．３７（２０１０）４８−５７参照）。そのような第二の抗原としては、制限なく、トランスフェリン受容体（ＴＲ）、インスリン受容体（ＨＩＲ）、インスリン様成長因子受容体（ＩＧＦＲ）、低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質１及び２（ＬＰＲ−１及び２）、ジフテリア毒素受容体、ＣＲＭ１９７、ラマ単一ドメイン抗体、ＴＭＥＭ  ３０（Ａ）、タンパク質形質導入ドメイン、ＴＡＴ、Ｓｙｎ−Ｂ、ペネトラチン、ポリアルギニンペプチド、アンギオペプ（Ａｎｇｉｏｐｅｐ）ペプチド、例えば、ＡＮＧ１００５（例えば、Ｇａｂａｔｈｕｌｅｒ，２０１０参照）、ならびに血液脳関門内皮細胞で豊富な他の細胞表面タンパク質（例えば、Ｄａｎｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ．２０１０  Ｏｃｔ  ２９、５（１０）：ｅ１３７４１参照）が挙げられる。いくつかの実施形態では、該第二の抗原は、制限なく、アミロイドベータ、オリゴマーアミロイドベータ、アミロイドベータ斑、アミロイド前駆体タンパク質もしくはその断片、タウ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（染色体９オープンリーディングフレーム７２）、ｃ９ＲＡＮタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メジン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、反復関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）反復ペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）反復ペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）反復ペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）反復ペプチド、ユビキチン、ならびにプロリン−アルギニン（ＰＲ）反復ペプチドを含めた病原タンパク質である。いくつかの実施形態では、該第二の抗���は、制限なく、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ３、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ、ＤＲ−５、ＣＤ３、及びホスファチジルセリンを含めた免疫細胞で発現される１つ以上のリガンド及び／またはタンパク質である。いくつかの実施形態では、該第二の抗原は、１つ以上の腫瘍細胞で発現されるタンパク質、脂質、多糖、または糖脂質である。
【０２２６】
抗体断片
本開示の特定の態様は、本開示のＣＤ３３タンパク質、天然に存在するＣＤ３３タンパク質のバリアント、及びＣＤ３３タンパク質の疾患バリアントの１つ以上に結合する抗体断片に関する。いくつかの実施形態では、該抗体断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、またはｓｃＦｖ断片である。
【０２２７】
いくつかの実施形態では、該抗体断片は、第二のＣＤ３３抗体と組み合わせて、及び／または、アミロイドベータ、オリゴマーアミロイドベータ、アミロイドベータ斑、アミロイド前駆体タンパク質もしくはその断片、タウ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（染色体９オープンリーディングフレーム７２）、ｃ９ＲＡＮタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メジン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、反復関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）反復ペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）反復ペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）反復ペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）反復ペプチド、ユビキチン、及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）反復ペプチド、ならびにそれらの任意の組合せから選択される病原タンパク質に特異的に結合する１つ以上の抗体と組み合わせて、または、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ３、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ、ＤＲ５、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、ＣＳＦ−１受容体、Ｓｉｇｌｅｃ−５、Ｓｉｇｌｅｃ−７、Ｓｉｇｌｅｃ−９、Ｓｉｇｌｅｃ−１１、ホスファチジルセリン、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される免疫調節タンパク質と結合する１つ以上の抗体と組み合わせて使用される。
【０２２８】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体断片は、本開示の抗ＣＤ３３抗体のいずれかと同じエピトープと結合する機能的断片であり得る。いくつかの実施形態では、該抗体断片は、本開示の抗ＣＤ３３抗体または抗体断片の小型化された型であって、対応する完全長抗体と同じエピトープを有するが、はるかに小さい分子量を有する。そのような小型化された抗ＣＤ３３抗体断片は、より良好な脳透過性及びより短い半減期を有する可能性があり、このことは、造影及び診断的有用性にとって有利である（例えば、Ｌｕｔｊｅ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ  Ｃｈｅｍ．２０１４  Ｆｅｂ  １９、２５（２）：３３５−４１、Ｔａｖａｒｅ  Ｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．２０１４  Ｊａｎ  ２１、１１１（３）：１１０８−１３、及びＷｉｅｈｒ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｓｔａｔｅ．２０１４  Ｍａｙ、７４（７）：７４３−５５参照）。したがって、いくつかの実施形態では、本開示の抗ＣＤ３３抗体断片は、それらの対応する完全長抗体と比較して、良好な脳透過性を有し、及び／または、それらの対応する完全長抗体と比較して、短い半減期を有する。
【０２２９】
抗体フレームワーク
本明細書に記載の抗体のいずれも、さらにフレームワークを含む。いくつかの実施形態では、該フレームワークは、ヒト免疫グロブリンフレームワークである。例えば、いくつかの実施形態では、抗体（例えば、抗ＣＤ３３抗体）は、上記実施形態のいずれかのＨＶＲを含み、さらに、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。ヒト免疫グロブリンフレームワークは、ヒト抗体の一部であってもよいし、非ヒト抗体を、ヒトフレームワーク領域（複数可）で１つ以上の内因性フレームワークを置き換えることによってヒト化してもよい。ヒト化に用いてもよいヒトフレームワーク領域としては：「最良適合」法を用いて選択されるフレームワーク領域（例えば、Ｓｉｍｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）参照）、特定の下位群の軽鎖または重鎖可変領域のヒト抗体のコンセンサス配列由来のフレームワーク領域（例えば、Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５（１９９２）、及びＰｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３（１９９３）参照）、ヒト成熟（体細胞変異した）フレームワーク領域またはヒト生殖細胞系列フレームワーク領域（例えば、Ａｌｍａｇｒｏ  ａｎｄ  Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）参照）、ならびにＦＲライブラリーのスクリーニング由来のフレームワーク領域（例えば、Ｂａｃａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８−１０６８４（１９９７）及びＲｏｓｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２２６１１−２２６１８（１９９６）参照）が挙げられるがこれらに限定されない。
【０２３０】
いくつかの実施形態では、抗体は、本開示のＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３、ならびに表３Ａに示す軽鎖可変領域の軽鎖フレームワーク領域の１つ、２つ、３つ、または４つを含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、本開示のＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３、ならびに表３Ｂに示す重鎖可変領域の重鎖フレームワーク領域の１つ、２つ、３つ、または４つを含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、本開示のＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３、ならびに表３Ａに示す軽鎖可変領域の軽鎖フレームワーク領域の１つ、２つ、３つ、または４つを含む軽鎖可変領域を含み、さらに、本開示のＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３、ならびに表３Ｂに示す重鎖可変領域の重鎖フレームワーク領域の１つ、２つ、３つ、または４つを含む重鎖可変領域を含む。
【０２３１】
抗体の調製
本開示の抗ＣＤ３３抗体は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、ヒト化及びキメラ抗体、ヒト抗体、抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、及びＦ（ａｂ’）２）、二重特異性及び多重特異性抗体、多価抗体、ヘテロ複合抗体、複合抗体、ライブラリー由来の抗体、修飾されたエフェクター機能を有する抗体、抗体部分を含む融合タンパク質、ならびに、抗体のグリコシル化バリアント、抗体のアミノ酸配列バリアント、及び共有結合的に修飾された抗体を含めた、抗原認識部位、例えば、本開示のＣＤ３３タンパク質のアミノ酸残基を有するエピトープを含む免疫グロブリン分子の任意の他の修飾された構造を包含することができる。該抗ＣＤ３３抗体は、ヒト、マウス、ラット、または任意の他の起源であり得る（キメラまたはヒト化抗体を含む）。
【０２３２】
（１）ポリクローナル抗体
ポリクローナル抗体、例えば、ポリクローナル抗ＣＤ３３抗体は、関連する抗原及びアジュバントの複数回の皮下（ｓｃ）または腹腔内（ｉｐ）注射によって動物内で通常産生される。免疫化される種において免疫原性であるタンパク質、例えば、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、血清アルブミン、ウシサイログロブリン、または大豆トリプシンインヒビターに対して、二官能性もしくは誘導体化剤、例えば、マレイミドベンゾイルスルホスクシンイミドエステル（システイン残基を介する結合）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（リジン残基を介して）、グルタルアルデヒド、無水コハク酸、ＳＯＣｌ２、またはＲ及びＲ１が独立して低級アルキル基であるＲ１Ｎ＝Ｃ＝ＮＲを用いて、関連する抗原（例えば、本開示の精製もしくは組み換えＣＤ３３タンパク質）を結合させることが有用である場合がある。使用され得るアジュバントの例としては、フロイント完全アジュバント及びＭＰＬ−ＴＤＭアジュバント（モノホスホリル脂質Ａ、合成トレハロースジコリノミコレート）が挙げられる。当該免疫化プロトコルは、必要以上の実験を行うことなく当業者によって選択され得る。
【０２３３】
動物は、所望の抗原、免疫原性複合体、もしくは誘導体に対して、例えば、１００μｇ（ウサギ用）または５μｇ（マウス用）のタンパク質または複合体を３体積のフロイント完全アジュバントと組み合わせ、該溶液を複数の部位に皮内注射することによって免疫化される。１ヶ月後、該動物は、ペプチドもしくは複合体のフロイント完全アジュバント溶液の元の量の１／５〜１／１０を複数の部位に皮下注射することによってブーストされる。７〜１４日後、該動物から採血し、血清を抗体力価についてアッセイする。力価がプラトーに達するまで動物はブーストされる。複合体は、組み換え細胞培養中で、タンパク質融合として製造することもできる。さらに、ミョウバンなどの凝集剤も、免疫応答を高めるのに適している。
【０２３４】
（２）モノクローナル抗体
モノクローナル抗体、例えば、モノクローナル抗ＣＤ３３抗体は、実質的に均質な抗体の集団、すなわち、該集団を構成する個々の抗体が、少量で存在する場合がある、起こり得る自然に生じる突然変異及び／または翻訳後修飾（例えば、異性化、アミド化）を除いて同じである集団から得られる。したがって、修飾語「モノクローナル」は、個別の抗体の混合物ではない抗体の特徴を示す。
【０２３５】
例えば、該モノクローナル抗ＣＤ３３抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５（１９７５）によって最初に記載されたハイブリドーマ法を用いて製造される場合も、組み換えＤＮＡ法（米国特許第４，８１６，５６７号）によって製造される場合もある。
【０２３６】
ハイブリドーマ法では、マウスまたは他の適切な宿主動物、例えば、ハムスターを、以上に記載の通りに免疫化し、免疫化に使用されたタンパク質（例えば、本開示の精製もしくは組み換えＣＤ３３タンパク質）に特異的に結合する抗体を産生する、または産生することが可能なリンパ球を誘発する。別の方法として、リンパ球をインビトロで免疫化してもよい。リンパ球をその後、ポリエチレングリコールなどの適切な融剤を用いて骨髄腫細胞と融合させ、ハイブリドーマ細胞を形成する（Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，ｐｐ．５９−１０３（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９８６））。
【０２３７】
免疫剤は、通常、抗原性タンパク質（例えば、本開示の精製もしくは組み換えＣＤ３３タンパク質）またはその融合バリアントを含む。一般に、ヒト起源の細胞が望ましい場合には末梢血リンパ球（「ＰＢＬ」）が用いられ、非ヒト哺乳動物起源が望ましい場合には脾臓またはリンパ節細胞が用いられる。該リンパ球をその後、ポリエチレングリコールなどの適切な融剤を用いて不死化細胞株と融合させ、ハイブリドーマ細胞を形成する。Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ（１９８６），ｐｐ．５９−１０３。
【０２３８】
不死化細胞株は、通常、形質転換哺乳動物細胞、とりわけ、げっ歯類、ウシ、またはヒト由来の骨髄腫細胞である。通常、ラットまたはマウス骨髄腫細胞株が用いられる。このようにして調製されたハイブリドーマ細胞を、未融合の親骨髄腫細胞の増殖または生存を阻害する１つ以上の物質を好ましくは含む適切な培地に播種し、増殖させる。例えば、親骨髄腫細胞が酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴまたはＨＰＲＴ）を欠いている場合、当該ハイブリドーマ用の培地は、通常、ＨＧＰＲＴ欠損細胞の増殖を防ぐ物質であるヒポキサンチン、アミノプテリン、及びチミジンを含む（ＨＡＴ培地）。
【０２３９】
好ましい不死化骨髄腫細胞は、効率よく融合し、選択された抗体産生細胞による抗体の安定した高レベルの産生を支持し、ＨＡＴ培地などの培地に感受性であるものである。これらの中でも、マウス骨髄腫株、例えば、ＭＯＰＣ−２１及びＭＰＣ−１１マウス腫瘍（米国カリフォルニア州サンディエゴ、Ｓａｌｋ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  Ｃｅｎｔｅｒより入手可能）、ならびにＳＰ−２細胞及びその誘導体（例えば、Ｘ６３−Ａｇ８−６５３）（米国バージニア州マナッサス、ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎより入手可能）が好ましい。ヒト骨髄腫及びマウス−ヒトヘテロ骨髄腫細胞株もまた、ヒトモノクローナル抗体の産生について記載されている（Ｋｏｚｂｏｒ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）、Ｂｒｏｄｅｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１−６３（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８７））。
【０２４０】
ハイブリドーマ細胞が増殖している培地を、抗原（例えば、本開示のＣＤ３３タンパク質）に対するモノクローナル抗体の産生についてアッセイする。好ましくは、ハイブリドーマ細胞によって産生されるモノクローナル抗体の結合特異性は、免疫沈降またはインビトロ結合アッセイ、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）もしくは酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によって測定される。
【０２４１】
該ハイブリドーマ細胞が培養される培地は、所望の抗原（例えば、本開示のＣＤ３３タンパク質）に対するモノクローナル抗体の存在についてアッセイすることができる。好ましくは、該モノクローナル抗体の結合親和性及び特異性は、免疫沈降またはインビトロ結合アッセイ、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）もしくは酵素結合アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によって測定され得る。そのような技術及びアッセイは、当技術分野で既知である。例えば、結合親和性は、Ｍｕｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１０７：２２０（１９８０）のスキャチャード解析によって測定され得る。
【０２４２】
所望の特異性、親和性、及び／または活性の抗体を産生するハイブリドーマ細胞を同定した後、当該クローンを限界希釈手順によってサブクローニングし、標準的な方法で増殖させてもよい（Ｇｏｄｉｎｇ、前出）。この目的に適した培地としては、例えば、Ｄ−ＭＥＭまたはＲＰＭＩ−１６４０培地が挙げられる。加えて、該ハイブリドーマ細胞は、哺乳動物の腫瘍として、インビボで増殖させてもよい。
【０２４３】
該サブクローンによって分泌されたモノクローナル抗体は、従来の免疫グロブリン精製手順、例えば、プロテインＡ−セファロースクロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、アフィニティークロマトグラフィー、及び上記の他の方法などによって、当該培地、腹水、または血清から適切に分離される。
【０２４４】
抗ＣＤ３３モノクローナル抗体はまた、組み換えＤＮＡ法、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号に開示のものによって、及び上記の通り製造してもよい。該モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を用いて（例えば、マウス抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合するオリゴヌクレオチドプローブを用いることによって）容易に単離及び配列決定される。該ハイブリドーマ細胞は、そのようなＤＮＡの好ましい供給源として役立つ。単離されると、該ＤＮＡは発現ベクターに入れられ、これはその後、宿主細胞、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、または他の場合には免疫グロブリンタンパク質を産生しない骨髄腫細胞にトランスフェクトされ、そのような組み換え宿主細胞でモノクローナル抗体を合成する。該抗体をコードするＤＮＡの細菌での組み換え発現に関する総説としては、Ｓｋｅｒｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，５：２５６−２６２（１９９３）及びＰｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．１３０：１５１−１８８（１９９２）が挙げられる。
【０２４５】
ある特定の実施形態では、抗ＣＤ３３抗体は、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３４８：５５２−５５４（１９９０）に記載の技術を用いて生成される抗体ファージライブラリーから単離することができる。Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８（１９９１）及びＭａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１−５９７（１９９１）は、それぞれ、ファージライブラリーからのマウス及びヒト抗体の単離を記載した。その後の刊行物は、鎖シャフリングによる高親和性（ナノモル（「ｎＭ」）の範囲）ヒト抗体の産生（Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１０：７７９−７８３（１９９２））、ならびに、非常に大きなファージライブラリーを構築するための戦略としてのコンビナトリアル感染及びインビボ組み換え（Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，２１：２２６５−２２６６（１９９３））を記載している。したがって、これらの技術は、所望の特異性のモノクローナル抗体（例えば、本開示のＣＤ３３タンパク質に結合するもの）の単離用の従来のモノクローナル抗体ハイブリドーマ技術に代わる実行可能な手段である。
【０２４６】
抗体またはその断片をコードするＤＮＡはまた、例えば、相同マウス配列の代わりにヒト重鎖及び軽鎖定常ドメインのコード配列を置換することによって（米国特許第４，８１６，５６７号、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１（１９８４））、または、非免疫グロブリンポリペプチドのコード配列のすべてもしくは一部を免疫グロブリンのコード配列に共有結合で結合することによって修飾されてもよい。通常、そのような非免疫グロブリンポリペプチドは、抗体の定常ドメインと置換されるか、または、抗体の１つの抗原結合部位の可変ドメインと置換され、抗原に対する特異性を有する１つの抗原結合部位及び異なる抗原に対する特異性を有する別の抗原結合部位を含むキメラ二価抗体を形成する。
【０２４７】
本明細書に記載のモノクローナル抗体（例えば、本開示の抗ＣＤ３３抗体またはその断片）は、一価でよく、その調製は当技術分野で周知である。例えば、１つの方法は、免疫グロブリン軽鎖及び修飾された重鎖の組み換え発現を含む。該重鎖は、重鎖の架橋を防ぐため、一般にＦｃ領域の任意の点で切断される。別の方法として、関連するシステイン残基を、架橋を防ぐために別のアミノ酸残基で置換してもよいし、削除してもよい。インビトロ法もまた、一価抗体を調製するためにふさわしい。抗体の断片、とりわけＦａｂ断片を産生するための抗体の消化を、当技術分野で既知の通常の技術を用いて達成することができる。
【０２４８】
キメラまたはハイブリッド抗ＣＤ３３抗体はまた、架橋剤を含むものを含めた合成タンパク質化学において既知の方法を用いてインビトロで調製され得る。例えば、免疫毒素は、ジスルフィド交換反応を用いて、またはチオエーテル結合を形成することによって構築してもよい。この目的に適した試薬の例としては、イミノチオレート及びメチル−４−メルカプトブチリミデートが挙げられる。
【０２４９】
（３）ヒト化抗体
本開示の抗ＣＤ３３抗体またはその抗体断片には、さらにヒト化もしくはヒト抗体が含まれ得る。非ヒト（例えば、マウス）抗体のヒト化形態は、最小限の非ヒト免疫グロブリン由来の配列を含むキメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、またはその断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ’）２、または抗体の他の抗原結合サブ配列）である。ヒト化抗体は、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）を含み、この中で、該レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）由来の残基が、所望の特異性、親和性、及び能力を有するマウス、ラット、またはウサギなどの非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲ由来の残基で置換されている。いくつかの例では、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク残基が対応する非ヒト残基で置換される。ヒト化抗体はまた、レシピエント抗体にも、取り込まれたＣＤＲやフレームワーク配列にも見られない残基を含んでもよい。一般に、該ヒト化抗体は、少なくとも１つ、通常は２つの可変ドメインの実質的にすべてを含み、この中で、該ＣＤＲ領域のすべてまたは実質的にすべてが非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、該ＦＲ領域のすべてまたは実質的にすべては、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである。該ヒト化抗体は、最適には、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、通常はヒト免疫グロブリンのものの少なくとも一部もまた含む。Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：  ５２２−５２５（１９８６）、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：  ３２３−３２９（１９８８）及びＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：  ５９３−５９６（１９９２）。
【０２５０】
非ヒト抗ＣＤ３３抗体のヒト化方法は当技術分野で周知である。一般に、ヒト化抗体は、その中に導入された非ヒト起源からの１つ以上のアミノ酸残基を有する。これら非ヒトアミノ酸残基は、しばしば「取り込み」残基と呼ばれ、これらは通常、「取り込み」可変ドメインから通常取り込まれる。ヒト化は、基本的に、Ｗｉｎｔｅｒ  ａｎｄ  ｃｏ−ｗｏｒｋｅｒｓ，Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５（１９８６）、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２７（１９８８）、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４−１５３６（１９８８）の方法に従って、または、げっ歯類ＣＤＲまたはＣＤＲ配列で対応するヒト抗体の配列を置換することによって行うことができる。したがって、そのような「ヒト化」抗体は、キメラ抗体（米国特許第４，８１６，５６７号）であって、ここでは、非ヒト種由来の対応する配列によって、無傷のヒト可変ドメインに実質的に満たないものが置換されている。実際には、ヒト化抗体は、通常、いくつかのＣＤＲ残基及び場合によりいくつかのＦＲ残基が、げっ歯類抗体の類似部位由来の残基で置換されるヒト抗体である。
【０２５１】
ヒト化抗体の製造に使用される軽鎖及び重鎖の両方のヒト可変領域の選択は、抗原性を低下させるために非常に重要である。いわゆる「最良適合」法に従って、げっ歯類抗体の可変領域の配列は、既知のヒト可変ドメイン配列のライブラリー全体に対してスクリーニングされる。該げっ歯類のものに最も近いヒト配列が次にヒト化抗体用のヒトフレームワーク（ＦＲ）として受容される。Ｓｉｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２２９６（１９９３）、Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１（１９８７）。別の方法は、軽鎖または重鎖の特定の下位群のすべてのヒト抗体のコンセンサス配列由来の特定のフレームワークを用いる。いくつかの異なるヒト化抗体に対して、同じフレームワークを使用してもよい。Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：４２８５（１９９２）、Ｐｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２６２３（１９９３）。
【０２５２】
さらに、抗体は、抗原に対する高い親和性及び他の好適な生物学的特性を保持してヒト化されることが重要である。この目標を達成するため、好ましい方法によれば、ヒト化抗体は、親配列及びヒト化配列の３次元モデルを用いて、親配列及び様々な概念的ヒト化産物の分析過程によって調製される。３次元免疫グロブリンモデルは、一般に入手可能であり、当業者にはよく知られている。選択された候補免疫グロブリン配列の推定される３次元立体配座構造を図解して示すコンピュータープログラムが利用可能である。これらの表示を検査することで、候補免疫グロブリン配列の機能において、当該残基の可能性のある役割の分析、すなわち、候補免疫グロブリンがその抗原と結合する能力に影響する残基の分析が可能になる。このようにして、ＦＲ残基は、標的抗原または複数の標的抗原（例えば、本開示のＣＤ３３タンパク質）に対する親和性の増加などの所望の抗体特性が達成されるように、レシピエント及び取り込み配列から選択及び組み合わせることができる。一般に、ＣＤＲ残基は、抗原結合に影響を及ぼすことに直接かつ最も頻繁に関与している。
【０２５３】
様々な形態のヒト化抗ＣＤ３３抗体が企図される。例えば、該ヒト化抗ＣＤ３３抗体は、Ｆａｂなどの抗体断片でよく、これは任意に、１つ以上の細胞毒性薬（複数可）と複合化され、免疫複合体を生成する。別の方法として、該ヒト化抗ＣＤ３３抗体は、無傷の抗体、例えば、無傷のＩｇＧ１抗体でよい。
【０２５４】
（４）ヒト抗体
別の方法として、ヒト抗ＣＤ３３抗体を生成することができる。例えば、免疫化の際に、内因性の免疫グロブリン産生の非存在下、ヒト抗体の全レパートリーを産生することが可能なトランスジェニック動物（例えば、マウス）を産生することが可能になった。キメラ及び生殖細胞系列変異マウスにおける抗体の重鎖結合域（ＪＨ）遺伝子のホモ接合型欠失は、内因性抗体産生の完全な阻害をもたらす。そのような生殖細胞系列変異マウスにおける該ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン遺伝子配列の転移は、抗原投与の際にヒト抗体の産生をもたらす。例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：２５５１（１９９３）、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３６２：２５５−２５８（１９９３）、Ｂｒｕｇｇｅｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｙｅａｒ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，７：３３（１９９３）、米国特許第５，５９１，６６９号及びＷＯ  ９７／１７８５２を参照されたい。
【０２５５】
別の方法として、ファージ提示技術を用いて、免疫化されていないドナー由来の免疫グロブリン可変（Ｖ）ドメイン遺伝子レパートリーから、インビトロにおいてヒト抗ＣＤ３３抗体及び抗体断片を産生することができる。ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５３（１９９０）、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：  ３８１（１９９１）。この手法によれば、抗体Ｖドメイン遺伝子は、Ｍ１３またはｆｄなどの糸状バクテリオファージのメジャーもしくはマイナーコートタンパク質遺伝子のいずれかにインフレームでクローニングされ、該ファージ粒子の表面で機能的抗体断片として提示される。該糸状粒子は該ファージゲノムの一本鎖ＤＮＡコピーを含むので、該抗体の機能特性に基づく選択はまた、それらの特性を示す抗体をコードする遺伝子の選択につながる。したがって、該ファージは、Ｂ細胞のいくつかの特性を再現する。ファージ提示は、例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｋｅｖｉｎ  Ｓ．ａｎｄ  Ｃｈｉｓｗｅｌｌ，Ｄａｖｉｄ  Ｊ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．３：５６４−５７１（１９９３）に概説される様々な様式で行うことができる。いくつかのＶ遺伝子断片源をファージ提示に用いることができる。Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８（１９９１）は、免疫化マウスの脾臓由来のＶ遺伝子の小規模ランダムコンビナトリアルライブラリーから、抗オキサゾロン抗体の多様な配列を単離した。Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９１）、またはＧｒｉｆｆｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．１２：７２５−７３４（１９９３）によって記載されている技術に基本的に従って、免疫化されていないヒトドナー由来のＶ遺伝子のレパートリーを構築することができ、また、多様な一連の抗原（自己抗原を含む）に対する抗体を単離することができる。米国特許第５，５６５，３３２号及び第５，５７３，９０５号も参照されたい。さらに、酵母提示技術を用いて、インビトロでヒト抗ＣＤ３３抗体及び抗体断片を産生することができる（例えば、ＷＯ  ２００９／０３６３７９、ＷＯ  ２０１０／１０５２５６、ＷＯ  ２０１２／００９５６８、ＵＳ  ２００９／０１８１８５５、ＵＳ  ２０１０／００５６３８６、及びＦｅｌｄｈａｕｓ  ａｎｄ  Ｓｉｅｇｅｌ（２００４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２９０：６９−８０）。他の実施形態では、リボソーム提示技術を用いて、インビトロでヒト抗ＣＤ３３抗体及び抗体断片を産生することができる（例えば、Ｒｏｂｅｒｔｓ  ａｎｄ  Ｓｚｏｓｔａｋ（１９９７）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ９４：１２２９７−１２３０２、Ｓｃｈａｆｆｉｔｚｅｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２３１：１１９−１３５、Ｌｉｐｏｖｓｅｋ  ａｎｄ  Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ（２００４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２９０：５１−６７）。
【０２５６】
Ｃｏｌｅら及びＢｏｅｒｎｅｒらの手法もまた、ヒト抗ＣＤ３３モノクローナル抗体の調製に利用可能である（Ｃｏｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，ｐ．７７（１９８５）及びＢｏｅｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７（１）：  ８６−９５（１９９１）。同様に、ヒト抗ＣＤ３３抗体は、ヒト免疫グロブリンの遺伝子座を、内因性免疫グロブリン遺伝子が部分的にまたは完全に不活性化されているトランスジェニック動物、例えば、マウスに導入することによって製造することができる。投与すると、ヒト抗体産生が認められ、これはあらゆる点で、遺伝子再構成、組み立て、及び抗体レパートリーを含め、ヒトで見られるものと酷似している。この方法は、例えば、米国特許第５，５４５，８０７号、第５，５４５，８０６号、第５，５６９，８２５号、第５，６２５，１２６号、第５，６３３，４２５号、第５，６６１，０１６号、ならびに以下の科学出版物：Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：  ７７９−７８３（１９９２）、Ｌｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：  ８５６−８５９（１９９４）、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：  ８１２−１３（１９９４），Ｆｉｓｈｗｉｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４：  ８４５−５１（１９９６），Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４：  ８２６（１９９６）及びＬｏｎｂｅｒｇ  ａｎｄ  Ｈｕｓｚａｒ，Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：  ６５−９３（１９９５）に記載されている。
【０２５７】
最後に、ヒト抗ＣＤ３３抗体はまた、活性化Ｂ細胞によってインビトロで生成してもよい（米国特許第５，５６７，６１０号及び第５，２２９，２７５号参照）。
【０２５８】
（５）抗体断片
ある特定の実施形態では、抗ＣＤ３３抗体全体ではなく、抗ＣＤ３３抗体断片を用いることに利点がある。断片サイズがより小さいと、急速なクリアランス及びより良好な脳透過性という効果がある。
【０２５９】
抗体断片の産生に向けて、様々な技術が開発されている。従来、これらの断片は、無傷の抗体のタンパク質分解を介して生成された（例えば、Ｍｏｒｉｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｍｅｔｈｏｄ．２４：１０７−１１７（１９９２）、及びＢｒｅｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：８１（１９８５）参照）。しかしながらこれらの断片は、例えば、本開示の抗ＣＤ３３抗体をコードする核酸を用いて、今や組み換え宿主細胞によって直接産生することができる。Ｆａｂ、Ｆｖ、及びｓｃＦｖ抗体断片はすべて、Ｅ．ｃｏｌｉで発現すること及びＥ．ｃｏｌｉから分泌させることができ、ひいては、大量のこれら断片の容易な産生が可能になる。抗ＣＤ３３抗体断片はまた、上記で論じた抗体ファージライブラリーから単離することもできる。別の方法として、Ｆａｂ’−ＳＨ断片は、Ｅ．ｃｏｌｉから直接回収することができ、化学的に結合してＦ（ａｂ’）２断片を形成することができる（Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：１６３−１６７（１９９２））。別の方法によれば、Ｆ（ａｂ’）２断片は、組み換え宿主細胞培養から直接単離することができる。インビボ半減期が延長されたＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２抗体断片の産生は、米国特許第５，８６９，０４６号に記載されている。他の実施形態では、最適な抗体は、一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）である。ＷＯ  ９３／１６１８５、米国特許第５，５７１，８９４号及び米国特許第５，５８７，４５８号を参照されたい。抗ＣＤ３３抗体断片はまた、例えば、米国特許第５，６４１，８７０号に記載の「直線状抗体」でよい。そのような直線状抗体断片は、単一特異性でも二重特異性でもよい。
【０２６０】
（６）二重特異性及び多特異性抗体
二重特異性抗体（ＢｓＡｂ）は、同一または別のタンパク質（例えば、本開示の１つ以上のＣＤ３３タンパク質）上のものを含め、少なくとも２つの異なるエピトープに対して結合特異性を有する抗体である。別の方法として、ＢｓＡｂの１つの部分は、標的ＣＤ３３抗原に結合するアームとすることができ、もう一方は、第二のタンパク質に結合するアームと組み合わせることができる。そのような抗体は、完全長抗体または抗体断片（例えばＦ（ａｂ’）２二重特異性抗体）に由来し得る。
【０２６１】
二重特異性抗体の製造方法は当技術分野で既知である。完全長二重特異性抗体の従来の産生は、２つの免疫グロブリン重鎖／軽鎖対の共発現に基づいており、この場合、該２本の鎖は異なる特異性を有している。Ｍｉｌｌｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３０５：５３７−５３９（１９８３）。免疫グロブリン重鎖及び軽鎖のランダムな取り合わせのため、これらのハイブリドーマ（クアドローマ）は、可能性がある１０個の異なる抗体分子の混合物を産生し、そのうちの１つのみが正しい二重特異性構造を有する。通常アフィニティークロマトグラフィー段階で行われる正しい分子の精製は、かなり煩雑であり、製品収量は低い。同様の手順は、ＷＯ  ９３／０８８２９及びＴｒａｕｎｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．，１０：３６５５−３６５９（１９９１）に開示されている。
【０２６２】
異なる方法によれば、所望の結合特異性の抗体可変ドメイン（抗体−抗原結合部位）は、免疫グロブリン定常ドメイン配列に融合される。該融合は、好ましくは、ヒンジ、ＣＨ２、及びＣＨ３領域の少なくとも一部を含む免疫グロブリン重鎖定常領域とである。軽鎖の結合に必要な部位を含む、該融合の少なくとも一方に存在する第一の重鎖定常領域（ＣＨ１）を有することが好ましい。該免疫グロブリン重鎖融合及び、必要に応じて、該免疫グロブリン軽鎖をコードするＤＮＡが、別々の発現ベクターに挿入され、適切な宿主生物に同時にトランスフェクトされる。これは、該構築物に用いられる３つのポリペプチド鎖の不均等な比が最適収量をもたらす場合の実施形態において、３つのポリペプチド断片の相互の割合の調節において高い柔軟性を与える。しかしながら、少なくとも２本のポリペプチド鎖の等比での発現が高収量をもたらす場合、または、該比が特に重要でない場合に、２本または３本すべてのポリペプチド鎖に対するコード配列を１つの発現ベクターに挿入することは可能である。
【０２６３】
この方法の好ましい実施形態では、該二重特異性抗体は、１つのアームに第一の結合特異性を備えたハイブリッド免疫グロブリン重鎖、及び他のアームにハイブリッド免疫グロブリン重鎖−軽鎖対（第二の結合特異性を与える）からなる。この非対称構造は、該二重特異性分子の半分のみの免疫グロブリン軽鎖の存在が、簡単な分離方法を与えるので、不要な免疫グロブリン鎖の組合せからの所望の二重特異性化合物の分離を容易にすることが分かった。この方法は、ＷＯ  ９４／０４６９０に開示されている。二重特異性抗体生成のさらなる詳細については、例えば、Ｓｕｒｅｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １２１：  ２１０（１９８６）を参照されたい。
【０２６４】
ＷＯ  ９６／２７０１１または米国特許第５，７３１，１６８号に記載の別の方法によれば、１対の抗体分子間の界面は、組み換え細胞培養から回収されるヘテロダイマーの割合（％）を最大にするように改変することができる。好ましい界面は、抗体定常ドメインのＣＨ３領域の少なくとも一部を含む。この方法では、第一の抗体分子の界面からの１つ以上の小さいアミノ酸側鎖が、より大きな側鎖（例えば、チロシンまたはトリプトファン）で置き換えられる。該大きな側鎖（複数可）と同一または同様のサイズの代償的「空洞」は、大きなアミノ酸側鎖を小さなもの（例えば、アラニンまたはスレオニン）で置き換えることによって、第二の抗体分子の界面に作られる。これは、ホモダイマーなどの不要なその他の最終産物よりヘテロダイマーの収量を増加させる機序を与える。
【０２６５】
抗体断片から二重特異性抗体を生成する技術は、文献に記載されている。例えば、二重特異性抗体は、化学結合を用いて調製することができる。Ｂｒｅｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：８１（１９８５）は、無傷の抗体がタンパク質分解によって切断されてＦ（ａｂ’）２断片を生成する手順を記載している。これらの断片は、ジチオール錯化剤亜ヒ酸ナトリウムの存在下で還元され、隣接ジチオールを安定化させ、分子間ジスルフィド形成を防止する。生成された該Ｆａｂ’断片は、次に、チオニトロベンゾエート（ＴＮＢ）誘導体に変換される。該Ｆａｂ’−ＴＮＢ誘導体の１つは、次に該Ｆａｂ’−ＴＮＢ誘導体に再変換され、二重特異性抗体を形成する。産生された二重特異性抗体は、酵素の選択的固定化のための薬剤として使用することができる。
【０２６６】
Ｆａｂ’断片は、Ｅ．ｃｏｌｉから直接回収し、化学結合させて二重特異性抗体を形成してもよい。Ｓｈａｌａｂｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７５：  ２１７−２２５（１９９２）は、完全ヒト化二重特異性抗体Ｆ（ａｂ’）２分子の産生を記載している。各Ｆａｂ’断片は、Ｅ．ｃｏｌｉから別々に分泌されインビトロで指令化学結合に供されて二重特異性抗体を形成する。このようにして形成された二重特異性抗体は、ＥｒｂＢ２受容体を過剰発現する細胞及び正常ヒトＴ細胞に結合することができ、ヒト細胞傷害性リンパ球のヒト乳房の腫瘍標的に対する溶解活性を誘発する。
【０２６７】
組み換え細胞培養から直接二価抗体断片を製造及び単離する様々な技術が記載されている。例えば、二価ヘテロダイマーがロイシンジッパーを用いて産生されている。Ｋｏｓｔｅｌｎｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８（５）：１５４７−１５５３（１９９２）。Ｆｏｓ及びＪｕｎタンパク質由来のロイシンジッパーペプチドが、遺伝子融合によって２つの異なる抗体のＦａｂ’部分に結合された。該抗体ホモダイマーは、ヒンジ領域で還元されてモノマーを形成し、その後再び酸化されて抗体ヘテロダイマーを形成した。Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：  ６４４４−６４４８（１９９３）によって記載された「ｄｉａｂｏｄｙ」技術は、二重特異性／二価抗体断片製造のための代替機序を提供した。該断片は、同じ鎖上の２つのドメイン間の対合を可能にするには短すぎるリンカーによって軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に連結された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。したがって、１つの断片のＶＨ及びＶＬドメインは、別の断片の相補的ＶＬ及びＶＨドメインと対にさせられ、それによって、２つの抗原結合部位を形成する。一本鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）ダイマーの使用による二重特異性／二価抗体断片製造のための別の戦略もまた報告されている。Ｇｒｕｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：５３６８（１９９４）参照。
【０２６８】
二価を超える抗体もまた企図される。例えば、三重特異性抗体を調製することができる。Ｔｕｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）。
【０２６９】
例示的な二重特異性抗体は、所与の分子（例えば、本開示のＣＤ３３タンパク質）上の２つの異なるエピトープに結合し得る。別の方法として、ＣＤ３３シグナル伝達成分を標的とするアームを、Ｔ細胞受容体分子（例えば、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ２８、またはＢ７）などの白血球、または、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）、及びＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）などのＩｇＧに対するＦｃ受容体（ＦｃγＲ）上の誘発分子に結合するアームと組み合わせ、細胞防御機構を、特定のタンパク質を発現する細胞に集中させてもよい。二重特異性抗体はまた、細胞毒性薬を特定のタンパク質を発現する細胞に局在化させるために用いられる場合もある。そのような抗体は、タンパク質結合アーム、及び細胞毒性薬または放射性核種キレート剤、例えば、ＥＯＴＵＢＥ、ＤＰＴＡ、ＤＯＴＡ、またはＴＥＴＡと結合するアームを有する。目的の別の二重特異性抗体は、目的のタンパク質と結合し、さらに組織因子（ＴＦ）と結合する。
【０２７０】
（７）多価抗体
多価抗体は、該抗体が結合する抗原を発現する細胞によって、二価抗体よりも速く内在化（及び／または異化）され得る。本開示の抗ＣＤ３３抗体またはその抗体断片は、３つ以上の抗原結合部位の多価抗体（ＩｇＭクラス以外）（例えば、４価抗体）であり得、これは、該抗体のポリペプチド鎖をコードする核酸の組み換え発現によって容易に産生することができる。該多価抗体は、ダイマー化ドメイン及び３つ以上の抗原結合部位を含むことができる。好ましいダイマー化ドメインは、Ｆｃ領域またはヒンジ領域を含む。この状況では、該抗体は、Ｆｃ領域及び３つ以上の抗原結合部位を該Ｆｃ領域に対してアミノ末端に有するであろう。本明細書における好ましい多価抗体は、３つから約８つであるが、好ましくは４つの抗原結合部位を含む。該多価抗体は、少なくとも１つのポリペプチド鎖（及び好ましくは２つのポリペプチド鎖）を含み、該ポリペプチド鎖または複数のポリペプチド鎖は２つ以上の可変領域を含む。例えば、該ポリペプチド鎖または複数のポリペプチド鎖は、ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−（Ｘ２）ｎ−Ｆｃを含み得、この場合、ＶＤ１は第一の可変ドメインであり、ＶＤ２は第二の可変ドメインであり、ＦｃはＦｃ領域の１つのポリペプチド鎖であり、Ｘ１及びＸ２はアミノ酸またはポリペプチドを表し、ｎは０または１である。同様に、該ポリペプチド鎖または複数のポリペプチド鎖は、ＶＨ−ＣＨ１−柔軟なリンカー−ＶＨ−ＣＨ１−Ｆｃ領域鎖、またはＶＨ−ＣＨ１−ＶＨ−ＣＨ１−Ｆｃ領域鎖を含み得る。本明細書での該多価抗体は、好ましくは、さらに、少なくとも２つの（好ましくは４つの）軽鎖可変ドメインポリペプチドを含む。本明細書での該多価抗体は、例えば、約２〜約８つの軽鎖可変ドメインポリペプチドを含み得る。ここで企図される軽鎖可変ドメインポリペプチドは、軽鎖可変ドメインを含み、任意に、さらにＣＬドメインを含む。該多価抗体は、ＣＤ３３抗原ならびに、制限なく、さらなる抗原Ａベータペプチド、抗原もしくはアルファシヌクレインタンパク質抗原、もしくはタウタンパク質抗原、もしくはＴＤＰ−４３タンパク質抗原、もしくはプリオンタンパク質抗原、もしくはハンチンチンタンパク質抗原、もしくはグリシン−アラニン（ＧＡ）、グリシン−プロリン（ＧＰ）、グリシン−アルギニン（ＧＲ）、プロリン−アラニン（ＰＡ）、及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）からなるジペプチドリピート、（ＤＰＲペプチド）を含めたＲＡＮ、翻訳産物抗原、インスリン受容体、インスリン様成長因子受容体、トランスフェリン受容体、または血液脳関門を通過する抗体輸送を促進する任意の他の抗原を認識し得る。
【０２７１】
（８）ヘテロ複合抗体
ヘテロ複合抗体もまた、本開示の範囲に含まれる。ヘテロ複合抗体は、２つの共有結合した抗体（例えば、本開示の抗ＣＤ３３抗体またはその断片）からなる。例えば、該ヘテロ複合体における抗体の一方は、アビジンに結合することができ、他方はビオチンに結合することができる。そのような抗体は、例えば、免疫系細胞を不要な細胞に対して標的化させるために提案され、米国特許第４，６７６，９８０号、ＨＩＶ感染症の治療に使用されている。国際公開第ＷＯ  ９１／００３６０号、第ＷＯ  ９２／２００３７３号、及びＥＰ  ０３０８９３６。架橋剤を含むものを含めた合成タンパク質化学における既知の方法を用いて、該抗体がインビトロで調製され得ることが企図される。例えば、免疫毒素は、ジスルフィド交換反応を用いて、または、チオエーテル結合形成によって構築される。この目的のために適切な試薬の例としては、イミノチオレート及びメチル−４−メルカプトブチリミデート、ならびに、例えば米国特許第４，６７６，９８０号に開示のものが挙げられる。ヘテロ複合抗体は、任意の便宜的な架橋法を用いて製造され得る。適切な架橋剤は、当技術分野で周知であり、また、米国特許第４，６７６，９８０号に、複数の架橋技術とともに開示されている。
【０２７２】
（９）エフェクター機能の操作
本開示の抗ＣＤ３３抗体を修飾し、エフェクター機能を修飾すること、及び／または該抗体の血清半減期を延長することが望ましい場合もある。例えば、定常領域でのＦｃ受容体結合部位を修飾し、または変異させ、ある特定のＦｃ受容体、例えば、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及び／またはＦｃγＲＩＩＩに対する結合親和性を除去、または低減してもよい。いくつかの実施形態では、該エフェクター機能は、該抗体のＦｃ領域（例えば、ＩｇＧのＣＨ２ドメイン内）のＮ−グリコシル化を除去することによって損なわれる。いくつかの実施形態では、該エフェクター機能は、ＰＣＴ  ＷＯ  ９９／５８５７２及びＡｒｍｏｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ４０：  ５８５−５９３（２００３）、Ｒｅｄｄｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １６４：１９２５−１９３３（２０００）に記載のように、ヒトＩｇＧの２３３〜２３６、２９７、及び／または３２７〜３３１などの領域を修飾することによって損なわれる。
【０２７３】
該抗体の血清半減期を延長するため、例えば、米国特許第５，７３９，２７７号に記載の通り、抗体（とりわけ、抗体断片）にサルベージ受容体結合エピトープを組み込んでもよい。本明細書で使用される、「サルベージ受容体結合エピトープ」という用語は、ＩｇＧ分子のインビボ血清半減期の増加に関与するＩｇＧ分子（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４）のＦｃ領域のエピトープを指す。
【０２７４】
（１０）その他のアミノ酸配列の修飾
本開示の抗ＣＤ３３抗体、またはその抗体断片のアミノ酸配列の修飾もまた企図される。例えば、該抗体または抗体断片の結合親和性及び／または他の生物学的特性を改良することが望ましい場合がある。該抗体または抗体断片のアミノ酸配列バリアントが、該抗体または抗体断片をコードする核酸に適切なヌクレオチドの変化を導入することによって、または、ペプチド合成によって調製される。そのような修飾としては、例えば、該抗体のアミノ酸配列内の残基からの削除、及び／またはそれへの挿入、及び／またはその置換が挙げられる。削除、挿入、及び置換の任意の組合せを行い、最終構築物が所望の特性（すなわち、本開示のＣＤ３３タンパク質に結合または物理的に相互作用する能力）を有するという条件で最終構築物に達する。該アミノ酸の変化はまた、該抗体の翻訳後過程も変更する場合があり、例えば、グリコシル化部位の数や位置を変更する。
【０２７５】
Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ａｎｄ  Ｗｅｌｌｓ  ｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１−１０８５（１９８９）によって記載されるように、突然変異誘発に好ましい位置である抗ＣＤ３３抗体のある特定の残基または領域の有用な同定方法は、「アラニン走査突然変異誘発」と呼ばれる。ここでは、残基または標的残基の群を特定し（例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、及びｇｌｕなどの荷電残基）、中性または負に荷電したアミノ酸（最も好ましくはアラニンもしくはポリアラニン）で置換し、該アミノ酸と標的抗原の相互作用に影響を与える。該置換に対して機能的感受性を示すこれらアミノ酸位置を次に、さらなる、または他のバリアントを、置換部位で、もしくはそれに対して導入することによって絞り込む。したがって、アミノ酸配列変異を導入する部位が予め決められる一方、突然変異自体の性質を予め決める必要はない。例えば、所与の部位での突然変異の性能を分析するため、アラニン走査またはランダム突然変異誘発を標的コドンまたは領域で行い、発現された抗体バリアントを所望の活性についてスクリーニングする。
【０２７６】
アミノ酸配列挿入には、１つの残基から、１００以上の残基を含むポリペプチドに至る長さの範囲のアミノ（「Ｎ」）及び／またはカルボキシ（「Ｃ」）末端融合、ならびに単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入が含まれる。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニル残基の抗体、または細胞毒性ポリペプチドに融合された抗体が挙げられる。他の挿入による抗体分子のバリアントとしては、該抗体の血清半減期を延長する酵素またはポリペプチドに対する該抗体のＮ末端またはＣ末端への融合が挙げられる。
【０２７７】
別の種類のバリアントは、アミノ酸置換バリアントである。これらのバリアントは、抗体分子中に、異なる残基で置換された少なくとも１つのアミノ酸残基を有する。置換による突然変異誘発にとって最も重要な部位としては超可変領域が挙げられるが、ＦＲの変更もまた企図される。保存的置換は、以下の表Ｅに「好ましい置換」という題目に分類して示す。そのような置換が生物活性の変化をもたらす場合、表Ｅ内の「例示的置換」で表されるより実質的な変化、または以下にさらに記載されるアミノ酸クラスを参照して紹介される場合及びスクリーニングされた産物である場合がある。
表Ｅ：アミノ酸置換
2018518176.tif 000009
【０２７８】
該抗体の生物学的特性における実質的な修飾は、（ａ）置換領域のポリペプチド骨格の構造、例えば、シートもしくはらせん構造として、（ｂ）標的部位での分子の電荷もしくは疎水性、または（ｃ）該側鎖のかさを維持する上でのそれらの影響が大幅に異なる置換を選択することによって達成される。天然に生じる残基は、共通の側鎖の特性を基にグループに分けられる：
（１）疎水性：ノルロイシン、ｍｅｔ、ａｌａ、ｖａｌ、ｌｅｕ、ｉｌｅ、
（２）中性親水性：ｃｙｓ、ｓｅｒ、ｔｈｒ、
（３）酸性：ａｓｐ、ｇｌｕ、
（４）塩基性：ａｓｎ、ｇｌｎ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、ａｒｇ、
（５）鎖配向に影響する残基：ｇｌｙ、ｐｒｏ、及び
（６）芳香族：ｔｒｐ、ｔｙｒ、ｐｈｅ。
【０２７９】
非保存的置換は、これらのクラスの１つのメンバーを別のクラスと交換することを伴う。
【０２８０】
該抗体の適切な配座を維持することに関与しない任意のシステイン残基もまた、通常はセリンと置換し、当該分子の酸化安定性を改良し、異常な架橋を防止してもよい。反対に、システイン結合（複数可）を該抗体に付加し、その安定性を改良してもよい（とりわけ、該抗体が抗体断片、例えば、Ｆｖ断片である場合）。
【０２８１】
特に好ましい種類の置換型バリアントは、親抗体（例えば、ヒト化またはヒト抗ＣＤ３３抗体）の超可変領域の残基の１つ以上を置換することを含む。一般に、さらなる開発のために選択された、得られたバリアント（複数可）は、それらが生成される親抗体に対して改良された生物学的特性を有する。そのような置換型バリアントを生成するのに便利な方法は、ファージ提示を用いた親和性成熟を含む。簡潔には、いくつかの超可変領域部位（例えば、６〜７部位）を変異させ、各部位ですべての可能なアミノ酸置換を生成する。このようにして生成された抗体バリアントは、糸状ファージ粒子から、各粒子内にパッケージされたＭ１３の遺伝子ＩＩＩ産物に対する融合として一価の形式で提示される。該ファージ提示されたバリアントは、本明細書に開示の通りその後それらの生物活性（例えば、結合親和性）に対してスクリーニングされる。修飾用の候補超可変領域部位を特定するため、アラニン置換突然変異誘発を行い、抗原結合に大きく寄与する超可変領域部位を特定することができる。別の方法として、またはさらに、該抗原抗体複合体の結晶構造を解析し、該抗体と該抗原（例えば、本開示のＣＤ３３タンパク質）間の接触点を特定することが有益な場合がある。そのような接触残基及び隣接残基は、本明細書で詳述される手法による置換の候補である。そのようなバリアントが生成されると、本明細書に記載の通り、バリアントのパネルはスクリーニングに供され、１つ以上の関連するアッセイにおいて優れた特性を備えた抗体が、さらなる開発のために選択され得る。
【０２８２】
抗体の別の種類のアミノ酸バリアントは、抗体の元のグリコシル化パターンを改変する。改変とは、抗体に見られる１つ以上の炭水化物部分の欠失、及び／または抗体中に存在しない１つ以上のグリコシル化部位の付加を意味する。
【０２８３】
抗体のグリコシル化は、典型的に、Ｎ結合型またはＯ結合型のいずれかである。Ｎ結合とは、炭水化物部分のアスパラギン残基の側鎖への結合を指す。トリペプチド配列であるアスパラギン−Ｘ−セリン及びアスパラギン−Ｘ−スレオニン（式中、Ｘは、プロリン以外の任意のアミノ酸である）は、炭水化物部分のアスパラギン側鎖への酵素結合の認識配列である。したがって、ポリペプチド内でのこれらのトリペプチド配列のいずれかの存在により、潜在的なグリコシル化部位がもたらされる。Ｏ結合型グリコシル化とは、糖類であるＮ−アセイルガラクトサミン（ａｃｅｙｌｇａｌａｃｔｏｓａｍｉｎｅ）、ガラクトースまたはキシロースのうちの１つのヒドロキシアミノ酸、最も一般的にはセリンまたはスレオニンへの結合を指すが、５−ヒドロキシプロリンまたは５−ヒドロキシリジンも使用され得る。
【０２８４】
グリコシル化部位の抗体への付加は、（Ｎ結合型グリコシル化部位のための）上述のトリペプチド配列のうちの１つ以上を含有するようにアミノ酸配列を改変することによって好都合に達成される。改変は、（Ｏ結合型グリコシル化部位のための）元の抗体の配列への１つ以上のセリンまたはスレオニン残基の付加、またはこれらの残基よる置換によっても行われ得る。
【０２８５】
抗ＩｇＥ抗体のアミノ酸配列バリアントをコードする核酸分子は、該技術分野において既知の種々の方法によって調製される。これらの方法には、天然源からの単離（天然アミノ酸配列のバリアントの場合）、または抗体（例えば、本開示の抗ＣＤ３３抗体）もしくは抗体断片の先に調製されたバリアントもしくは非バリアント型のオリゴヌクレオチドによる（または部位特異的）変異導入、ＰＣＲ変異導入及びカセット変異導入による調製が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２８６】
（１１）抗体複合体
本開示の抗ＣＤ３３抗体またはその抗体断片は、検出可能なマーカー、毒素または治療薬に複合化することができる。検出可能なマーカー、毒素または治療薬などの分子を抗体に複合化させるには、当該技術分野で知られている任意の好適な方法を使用することができる。
【０２８７】
例えば、薬物複合化は、特定の腫瘍マーカー（例えば、理想的には腫瘍細胞中にのみ、または腫瘍細胞上にのみ見られるタンパク質）を特異的に標的にする抗体に、生物学的に活性な細胞毒性（抗癌）ペイロードまたは薬物をカップリングすることを伴う。抗体は、体内でこれらのタンパク質を追跡し、癌細胞の表面に結合する。抗体と標的タンパク質（抗原）との間の生化学的反応は、腫瘍細胞内でシグナルを誘発し、これにより、腫瘍細胞は、細胞毒性とともに抗体を吸収し、または内在化させる。ＡＤＣが内在化されると、細胞毒性薬物が放出され、癌が殺傷される。該薬物は、この標的化により、理想的には、他の化学療法剤よりも副作用が低く、治療可能時間域がより広い。抗体の複合化手法は、当該技術分野において既知である（例えば、Ｊａｎｅ  ｄｅ  Ｌａｒｔｉｇｕｅ，ＯｎｃＬｉｖｅ  Ｊｕｌｙ  ５，２０１２；ＡＤＣ  Ｒｅｖｉｅｗ  ｏｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｒｕｇ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ；及びＤｕｃｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１０）．Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２１（１）：５-１３参照）。
【０２８８】
いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、リシン、リシンＡ鎖、ドキソルビシン、ダウノルビシン、メイタンシノイド、タキソール、臭化エチジウム、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ジヒドロキシアントラシンジオン、アクチノマイシン、ジフテリア毒素、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ外毒素（ＰＥ）Ａ、ＰＥ４０、アブリン、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、アルファ−サルシン、ゲロニン、ミトゲリン、レトストリクトシン（ｒｅｔｓｔｒｉｃｔｏｃｉｎ）、フェノマイシン、エノマイシン、キュリシン（ｃｕｒｉｃｉｎ）、クロチン、カリケアミシン、Ｓａｐｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ阻害剤、グルココルチコイド、アウリスタチン、オーロマイシン（ａｕｒｏｍｙｃｉｎ）、イットリウム、ビスマス、コンブレスタチン、デュオカルマイシン、ドラスタチン、ｃｃ１０６５及びシスプラチンから選択される毒素に複合化することができる。
【０２８９】
（１２）他の抗体修飾
本開示の抗ＣＤ３３抗体またはその抗体断片は、当該技術分野において既知であり、容易に入手可能な更なる非タンパク質性部分を含有するように更に修飾され得る。好ましくは、抗体の誘導化に好適な部分は、水溶性ポリマーである。水溶性ポリマーの非限定的な例には、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマーまたはランダムコポリマーのいずれか）及びデキストランまたはポリ（ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、ならびにそれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中でのその安定性に起因して、製造における利点を有し得る。ポリマーは、任意の分子量のものであってもよく、分岐していても非分岐であってもよい。抗体に結合されるポリマーの数は様々であり得、１つを超えるポリマーが結合される場合、それらは同じ分子であっても異なる分子であってもよい。一般に、誘導体化に使用されるポリマーの数及び／または種類は、限定するものではないが、改善対象の抗体の特定の特性または機能、抗体誘導体が規定の条件下での療法において使用されるかどうかなどの考慮に基づいて、決定することができる。こうした技法及び他の好適な処方は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２０ｔｈ  Ｅｄ．，Ａｌｆｏｎｓｏ  Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｅｄ．，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  ａｎｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ（２０００）に開示されている。
【０２９０】
結合アッセイ及び他のアッセイ
本開示の抗ＣＤ３３抗体は、抗原結合活性に関して、例えば、ＥＬＩＳＡ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、ウェスタンブロットなどの既知の方法によって試験することができる。
【０２９１】
いくつかの実施形態において、競合アッセイは、表１、２、３Ａ、３Ｂ、６Ａ及び６Ｂに列挙される抗体、または１Ａ８、２Ｂ４、２Ｅ１２、２Ｅ１２．１、２Ｆ５、２Ｆ５．１、３Ａ１２ａ、３Ａ１２ｂ、６Ａ３ａ、６Ａ３ｂ、６Ｃ７ａ、６Ｃ７ｂ及び６Ｃ７．２から選択される抗体のうちのいずれかと競合する抗体を特定するために使用することができる。ある特定の実施形態において、そのような競合抗体は、表１、２、３Ａ、３Ｂ、６Ａ、及び６Ｂに列挙される抗体、または１Ａ８、２Ｂ４、２Ｅ１２、２Ｅ１２．１、２Ｆ５、２Ｆ５．１、３Ａ１２ａ、３Ａ１２ｂ、６Ａ３ａ、６Ａ３ｂ、６Ｃ７ａ、６Ｃ７ｂ及び６Ｃ７．２から選択される抗体のうちのいずれかが結合するのと同じエピトープ（例えば、線状または高次構造エピトープ）に結合する。抗体が結合するエピトープをマッピングするための具体的な例示的方法は、Ｍｏｒｒｉｓ（１９９６）“Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，”  ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｖｏｌ．６６（Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ）に提供されている。
【０２９２】
例示的な競合アッセイにおいて、固定化されたＣＤ３３または細胞表面上の細胞発現ＣＤ３３は、ＣＤ３３（例えば、ヒトまたは非ヒト霊長類）に結合する第１の標識抗体と、ＣＤ３３への結合に関して第１の抗体と競合する能力が試験される第２の非標識抗体とを含む溶液中でインキュベートされる。第２の抗体は、ハイブリドーマ上清中に存在してもよい。対照として、固定化されたＣＤ３３または細胞発現ＣＤ３３が、第１の標識抗体を含むが、第２の非標識抗体を含まない溶液中でインキュベートされる。第１の抗体のＣＤ３３への結合を許容する条件下におけるインキュベーション後、過剰な非結合抗体を除去し、固定化されたＣＤ３３または細胞発現ＣＤ３３に関連する標識の量を測定する。固定化されたＣＤ３３または細胞発現ＣＤ３３に関連する標識の量が、対照試料と比較して試験試料中で実質的に低減される場合、それは、第２の抗体がＣＤ３３への結合について第１の抗体と競合していることを示す。Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  ｃｈ．１４（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ）を参照されたい。
【０２９３】
核酸、ベクター及び宿主細胞
本開示の抗ＣＤ３３抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号に記載の組み換え方法及び組成物を使用して産生され得る。いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ３３抗体のうちのいずれかをコードするヌクレオチド配列を有する単離核酸が提供される。かかる核酸は、抗ＣＤ３３抗体のＶＬを含有するアミノ酸配列及び／またはＶＨを含有するアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖及び／または重鎖）をコードし得る。いくつかの実施形態において、かかる核酸を含有する１つ以上のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。いくつかの実施形態において、かかる核酸を含有する宿主細胞もまた提供される。いくつかの実施形態において、宿主細胞は、（１）抗体のＶＬを含有するアミノ酸配列及び抗体のＶＨを含有するアミノ酸配列をコードする核酸を含有するベクター、または（２）抗体のＶＬを含有するアミノ酸配列をコードする核酸を含有する第１のベクター及び抗体のＶＨを含有するアミノ酸配列をコードする核酸を含有する第２のベクターを含有する（例えば、形質導入されている）。いくつかの実施形態において、宿主細胞は、真核生物、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞またはリンパ系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。
【０２９４】
本開示の抗ＣＤ３３抗体の作製方法が提供される。いくつかの実施形態において、該方法は、抗ＣＤ３３抗体をコードする核酸を含有する本開示の宿主細胞を、抗体の発現に好適な条件下で培養することを含む。いくつかの実施形態において、該抗体は、その後、宿主細胞（または宿主細胞培養培地）から回収される。
【０２９５】
本開示の抗ＣＤ３３抗体を組み換え産生するためには、該抗ＣＤ３３抗体をコードする核酸を単離し、これを、宿主細胞における更なるクローニング及び／または発現のために、１つ以上のベクター中に挿入する。かかる核酸は、従来の手順を使用して（例えば、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）、容易に単離され、配列決定され得る。
【０２９６】
本開示の抗ＣＤ３３抗体または本明細書に記載のそのポリペプチド断片（抗体を含む）のうちのいずれかをコードする核酸配列を含有する好適なベクターには、限定するものではないが、クローニングベクター及び発現ベクターが含まれる。好適なクローニングベクターは、標準的技法に従って構築することができ、あるいは当該技術分野において入手可能な多数のクローニングベクターから選択してもよい。選択されるクローニングベクターは、使用しようとする宿主細胞に応じて変わり得るが、有用なクローニングベクターは、一般に、自己複製能を有し、特定の制限エンドヌクレアーゼの標的を１つ有し得、かつ／またはベクターを含有するクローンの選択に用いることができるマーカーのための遺伝子を保持し得る。好適な例には、プラスミド及び細菌ウイルス、例えば、ｐＵＣ１８、ｐＵＣ１９、Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（例えば、ｐＢＳ  ＳＫ＋）及びその誘導体、ｍｐ１８、ｍｐ１９、ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９、ＣｏｌＥ１、ｐＣＲ１、ＲＰ４、ファージＤＮＡ、ならびにｐＳＡ３及びｐＡＴ２８などのシャトルベクターが挙げられる。これらのクローニングベクター及び多くの他のクローニングベクターが、ＢｉｏＲａｄ、Ｓｔｒａｔｅｇｅｎｅ及びＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎなどの商業的供給業者から入手可能である。
【０２９７】
発現ベクターは、一般に、本開示の核酸を含有する複製可能なポリヌクレオチド構築物である。発現ベクターは、エピソームまたは染色体ＤＮＡの構成部分のいずれかとして、宿主細胞内で複製可能であり得る。好適な発現ベクターには、プラスミド、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルスを含むウイルスベクター、コスミド及びＰＣＴ国際公開番号ＷＯ８７／０４４６２に記載の発現ベクターが挙げられるが、これらに限定されない。ベクター構成要素は、一般に、シグナル配列、複製起点、１つ以上のマーカー遺伝子、好適な転写調節エレメント（プロモーター、エンハンサー及びターミネーターなど）のうちの１つ以上を含み得るが、これらに限定されない。発現（すなわち、翻訳）には、リボソーム結合部位、翻訳開始部位及び終止コドンなどの１つ以上の翻訳調節エレメントも通常必要である。
【０２９８】
目的の核酸を含有するベクターは、エレクトロポレーション、塩化カルシウム、塩化ルビジウム、リン酸カルシウム、ＤＥＡＥデキストランまたは他の物質を用いるトランスフェクション、微粒子銃、リポフェクション及び感染（例えば、この場合のベクターはワクシニアウイルスなどの感染因子である）を含む、いくつかの適切な手段のいずれかによって、宿主細胞に導入することができる。導入ベクターまたはポリヌクレオチドの選択は、多くの場合、宿主細胞の特徴に依存する。いくつかの実施形態において、ベクターは、本開示の抗ＣＤ３３抗体をコードする１つ以上のアミノ酸配列を含有する核酸を含有する。
【０２９９】
抗体コーディングベクターのクローニングまたは発現に好適な宿主細胞には、原核細胞または真核細胞が含まれる。例えば、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、特にグリコシル化及びＦｃエフェクター機能が必要とされない場合には、細菌において産生され得る。細菌での抗体断片及びポリペプチドの発現については、（例えば、米国特許第５，６４８，２３７号、同第５，７８９，１９９号及び同第５，８４０，５２３号；ならびにＣｈａｒｌｔｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３），ｐｐ．２４５−２５４（Ｅ．ｃｏｌｉ．における抗体断片の発現に関して記載されている））。発現後、抗体は、可溶性画分中の細菌細胞ペーストから単離され得、更に精製することができる。
【０３００】
原核生物に加えて、糸状菌または酵母などの真核微生物もまた、抗体コーディングベクターに好適なクローニング宿主または発現宿主であり、これらには、グリコシル化経路が「ヒト化」されており、部分的または完全なヒトグリコシル化パターンを有する抗体の産生をもたらす、真菌株及び酵母株が含まれる（例えば、Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２：１４０９−１４１４（２００４）；及びＬｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４：２１０−２１５（２００６））。
【０３０１】
グリコシル化抗体の発現に好適な宿主細胞は、多細胞生物（無脊椎動物及び脊椎動物）から得ることもできる。無脊椎動物細胞の例としては、植物細胞及び昆虫細胞が挙げられる。昆虫細胞、特に、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞のトランスフェクションとともに使用することができる、多数のバキュロウイルス株が同定されている。植物細胞培養物もまた、宿主として利用することができる（例えば、米国特許第５，９５９，１７７号、同第６，０４０，４９８号、同第６，４２０，５４８号、同第７，１２５，９７８号及び同第６，４１７，４２９号（トランスジェニック植物で抗体を産生するための植物抗体（ＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ（商標））技術について記載されている））。
【０３０２】
脊椎動物細胞もまた、宿主として使用され得る。例えば、懸濁液中で成長するように適合された哺乳動物細胞株が、有用であり得る。有用な哺乳動物宿主細胞株の例は、ＳＶ４０により形質転換したサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ−７）；ヒト胚性腎臓株（２９３細胞または例えばＧｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ  Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７）に記載の２９３細胞）、ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）、マウスセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３−２５１（１９８０）に記載のＴＭ４細胞）、サル腎臓細胞（ＣＶ１）、アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６）、ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ）、イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ、バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ  ３Ａ）、ヒト肺細胞（Ｗ１３８）、ヒト肝細胞（Ｈｅｐ  Ｇ２）、マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ  ０６０５６２）、例えば、Ｍａｔｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ  Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４−６８（１９８２）に記載のＴＲＩ細胞、ＭＲＣ  ５細胞、及びＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳動物細胞株には、ＤＨＦＲ−ＣＨＯ細胞（Ｕｒｌａｕｂ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：４２１６（１９８０））を含むチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ならびにＹ０、ＮＳ０及びＳｐ２／０などの骨髄腫細胞株が挙げられる。抗体産生に好適な特定の哺乳動物宿主細胞株の概説については、例えば、Ｙａｚａｋｉ  ａｎｄ  Ｗｕ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ），ｐｐ．２５５−２６８（２００３）を参照されたい。
【０３０３】
ＣＤ３３活性
ＰＩ３Ｋ活性化
いくつかの実施形態において、本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体は、細胞上に発現されたＣＤ３３タンパク質に結合すると、ＰＩ３Ｋの活性化を誘導することができる。
【０３０４】
ＰＩ３Ｋは、ホスファチジルイノシトール（ＰｔｄＩｎｓ）のイノシトール環３位のヒドロキシル基をホスホリル化することができる、関連する細胞内シグナル伝達キナーゼのファミリーである。ＰＩ３Ｋファミリーは、一次構造、制御及びｉｎ  ｖｉｔｒｏでの脂質基質特異性に基づいて、３つの異なるクラス（クラスＩ、クラスＩＩ及びクラスＩＩＩ）に分けられる。
【０３０５】
活性化されたＰＩ３Ｋは、限定するものではないが、ＰｔｄＩｎｓ３Ｐ、ＰｔｄＩｎｓ（３，４）Ｐ２、ＰｔｄＩｎｓ（３，５）Ｐ２及びＰｔｄＩｎｓ（３，４，５）Ｐ３を含む、種々の３−リン酸化ホスホイノシチドを産生する。これらの３−リン酸化ホスホイノシチドは、シグナル伝達タンパク質を種々の細胞膜に動員させる機構において機能する。これらのシグナル伝達タンパク質は、限定するものではないが、ＰＸドメイン、プレクストリン相同ドメイン（ＰＨドメイン）及びＦＹＶＥドメインを含む、ホスホイノシチド結合ドメインを含有する。ＰＩ３Ｋ活性化の決定には、当該技術分野で知られている任意の方法を使用することができる。
【０３０６】
いくつかの実施形態において、本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体は、限定するものではないが、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウパチー病、那須・ハコラ病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、ループス、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満症、マラリア、本態性振戦、中枢神経系ループス、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫性疾患、サルコイドーシス、加齢に伴う病気、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身性感染症、ループス、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨のパジェット病、ならびに癌、例えば、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性赤血球増加症、本態性血小板血症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化症、骨髄由来腫瘍、ＣＤ３３を発現する腫瘍、甲状腺癌、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルージ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、Ｉ型ＨＩＶ、ならびにインフルエンザ菌を含む、ＰＩ３Ｋ活性レベルの低下に関連する状態及び／または疾患を予防し、そのリスクを低下させ、または治療するのに有益である。
【０３０７】
サイトカインの発現調節
いくつかの実施形態において、本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体は、細胞表面上に発現されたＣＤ３３タンパク質に結合すると、脳の炎症促進性メディエーターを調節する（例えば、増加または減少させる）ことができる。ある特定の実施形態において、本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体は、細胞上に発現されたＣＤ３３タンパク質に結合すると、サイトカイン（例えば、炎症促進性メディエーター）の発現を調節し、かつ／または抗炎症性メディエーターの発現を調節する。
【０３０８】
炎症は、病原体、損傷を受けた細胞及び刺激物などの有害な刺激因子に対する血管組織の複雑な生物学的反応の一部である。急性炎症の古典的徴候は、疼痛、熱感、発赤及び腫脹である。炎症は、免疫系の細胞を動員し、活性化して損傷部位を制限し、または感染を除去することによって生体を保護する免疫応答である。炎症反応は、生体に損傷が生じないように、その持続期間及び重症度が厳密に制御され、限定される。炎症は、急性か慢性かのいずれかに分類することができる。急性炎症は、まず、有害な刺激因子を認識し、損傷組織に血液から白血球を動員する、自然免疫応答によって引き起こされる。生化学的イベントのカスケードは、サイトカイン及びケモカインの放出を含め、炎症反応を伝播するものであり、損傷組織内の局所血管系、免疫系及び種々の細胞が関与する。慢性炎症は、長期持続性のものであり、炎症反応に関与する免疫細胞の種類が漸進的に変化する。慢性炎症は、炎症過程の結果として生じる組織の進行性破壊及び繊維形成を特徴とする。
【０３０９】
本明細書で使用されるとき、抗炎症性メディエーターは、炎症反応を低減し、阻害し、または不活化する機序に直接的または間接的に（例えば、抗炎症性シグナル伝達経路を介して）関与するタンパク質である。抗炎症性メディエーターの同定及び特徴付けには、当該技術分野で知られている任意の方法を使用することができる。抗炎症性メディエーターの例には、限定するものではないが、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＩＬ−３５、ＩＬ−１６、ＩＦＮ−アルファ、ＴＧＦ−ベータ、ＩＬ−１ｒａ、Ｇ−ＣＳＦなどのサイトカイン、及びＴＮＦ−アルファまたはＩＬ−６に対する可溶性受容体が挙げられる。炎症促進性メディエーターの例には、限定するものではないが、ＩＦＮ−ａ４、ＩＦＮ−ｂ、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＬＩＦ、ＩＦＮ−ガンマ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＣＸＣＬ１０、ＩＬ−３３、ＣＲＰ、ＩＬ−３３、ＭＣＰ−１、及びＭＩＰ−１−ベータなどのサイトカインが挙げられる。
【０３１０】
いくつかの実施形態において、本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体は、ＩＬ−１β、ＩＬ−８及びＴＮＦ−αなどのサイトカインの発現を調節する（例えば、増加または減少させる）ことができる。ある特定の実施形態において、サイトカインの調節された発現は、マクロファージ、樹状細胞、単球、破骨細胞、皮膚のランゲルハンス細胞、クッパー細胞、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞及び／またはミクログリア細胞において生じる。調節された発現は、限定するものではないが、遺伝子発現の増加、転写発現の増加、またはタンパク質発現の増加を含み得る。遺伝子、転写産物（例えば、ｍＲＮＡ）、及び／またはタンパク質の発現を決定するには、当該技術分野で知られている任意の方法を使用することができる。例えば、サイトカインの遺伝子発現レベルを決定するにはノーザンブロット分析を使用することができ、サイトカインの転写レベルを決定するにはＲＴ−ＰＣＲを使用することができ、サイトカインのタンパク質レベルを決定するにはウェスタンブロット分析を使用することができる。
【０３１１】
本明細書で使用されるとき、サイトカインは、本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体などによる治療を受けた対象の１つ以上の細胞におけるその発現が、該ＣＤ３３剤による治療を受けていない対応する対象の１つ以上の細胞で発現された同一サイトカインの発現と比較して調節される場合、調節された発現を有し得る。いくつかの実施形態において、本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体は、対象の１つ以上の細胞におけるサイトカイン発現を、例えば、該ＣＤ３３剤による治療を受けていない対応する対象の１つ以上の細胞におけるサイトカイン発現と比較したとき、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１１０％、少なくとも１１５％、少なくとも１２０％、少なくとも１２５％、少なくとも１３０％、少なくとも１３５％、少なくとも１４０％、少なくとも１４５％、少なくとも１５０％、少なくとも１６０％、少なくとも１７０％、少なくとも１８０％、少なくとも１９０％、または少なくとも２００％調節することができる。他の実施形態において、本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体は、対象の１つ以上の細胞におけるサイトカイン発現を、例えば、該ＣＤ３３剤による治療を受けていない対応する対象の１つ以上の細胞におけるサイトカイン発現と比較したとき、少なくとも１．５倍、少なくとも１．６倍、少なくとも１．７倍、少なくとも１．８倍、少なくとも１．９倍、少なくとも２．０倍、少なくとも２．１倍、少なくとも２．１５倍、少なくとも２．２倍、少なくとも２．２５倍、少なくとも２．３倍、少なくとも２．３５倍、少なくとも２．４倍、少なくとも２．４５倍、少なくとも２．５倍、少なくとも２．５５倍、少なくとも３．０倍、少なくとも３．５倍、少なくとも４．０倍、少なくとも４．５倍、少なくとも５．０倍、少なくとも５．５倍、少なくとも６．０倍、少なくとも６．５倍、少なくとも７．０倍、少なくとも７．５倍、少なくとも８．０倍、少なくとも８．５倍、少なくとも９．０倍、少なくとも９．５倍、または少なくとも１０倍調節する。
【０３１２】
いくつかの実施形態において、本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体は、限定するものではないが、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウパチー病、那須・ハコラ病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、ループス、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満症、マラリア、本態性振戦、中枢神経系ループス、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫性疾患、サルコイドーシス、加齢に伴う病気、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身性感染症、ループス、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨のパジェット病、ならびに癌、例えば、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性赤血球増加症、本態性血小板血症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化症、骨髄由来腫瘍、ＣＤ３３を発現する腫瘍、甲状腺癌、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルージ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、Ｉ型ＨＩＶ、ならびにインフルエンザ菌を含む、１つ以上の炎症促進性メディエーターの異常なレベルに関連する状態及び／または疾患を予防し、そのリスクを低下させ、または治療するのに有用である。
【０３１３】
炎症促進性メディエーターの調節された発現
いくつかの実施形態において、本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体は、細胞上に発現されたＣＤ３３タンパク質に結合すると、炎症促進性メディエーターの発現を調節する（例えば、増加または減少させる）ことができる。
【０３１４】
本明細書で使用されるとき、炎症促進性メディエーターは、炎症反応を誘発し、活性化し、促進し、または増加させる機序に直接的または間接的に（例えば、炎症促進性シグナル伝達経路を介して）関与するタンパク質である。炎症促進性メディエーターの同定及び特徴付けには、当該技術分野で知られている任意の方法を使用することができる。
【０３１５】
炎症促進性メディエーターの例には、限定するものではないが、Ｉ型及びＩＩ型インターフェロン、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＩＬ−３３、ＬＩＦ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ならびにＣＲＰなどのサイトカインが挙げられる。
【０３１６】
いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、Ｉ型及びＩＩ型インターフェロン、ＩＦＮ−ａ４、ＩＦＮ−ｂ、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＬＩＦ、ＩＦＮ−ガンマ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＣＸＣＬ１０、ＩＬ−３３、ＣＲＰ、ＩＬ−３３、ＭＣＰ−１、ならびにＭＩＰ−１−ベータなどの炎症促進性メディエーターの機能的発現及び／または分泌を調節することができる。ある特定の実施形態において、炎症促進性メディエーターの調節された発現は、マクロファージ、樹状細胞、単球、破骨細胞、皮膚のランゲルハンス細胞、クッパー細胞、Ｔ細胞及び／またはミクログリア細胞において生じる。調節された発現は、限定するものではないが、調節された遺伝子、調節された転写、または調節されたタンパク質発現を含み得る。遺伝子、転写産物（例えば、ｍＲＮＡ）、及び／またはタンパク質の発現を決定するには、当該技術分野で知られている任意の方法を使用することができる。例えば、炎症促進性メディエーターの遺伝子発現レベルを決定するにはノーザンブロット分析を使用することができ、炎症促進性メディエーターの転写レベルを決定するにはＲＴ−ＰＣＲを使用することができ、炎症促進性メディエーターのタンパク質レベルを決定するにはウェスタンブロット分析を使用することができる。
【０３１７】
ある特定の実施形態において、炎症促進性メディエーターには、炎症性サイトカインが含まれる。したがって、ある特定の実施形態において、本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体は、１つ以上の炎症性サイトカインの分泌を調節することができる。本開示の抗ＣＤ３３抗体によって分泌が調節され得る炎症性サイトカインの例には、限定するものではないが、Ｉ型及びＩＩ型インターフェロン、ＩＦＮ−ａ４、ＩＦＮ−ｂ、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＬＩＦ、ＩＦＮ−ガンマ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＣＸＣＬ１０、ＩＬ−３３、ＣＲＰ、ＩＬ−３３、ＭＣＰ−１、ならびにＭＩＰ−１−ベータなどが挙げられる。
【０３１８】
ある特定の実施形態において、炎症促進性メディエーターには、炎症性受容体が含まれる。したがって、ある特定の実施形態において、本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体は、１つ以上の炎症性受容体の発現を調節することができる。本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体などによって発現が調節され得る炎症性受容体の例には、限定するものではないが、ＣＤ８６、ＣＤ８０及びＣＤ８３が挙げられる。
【０３１９】
本明細書で使用されるとき、炎症促進性メディエーターは、ＣＤ３３剤、例えば本開示のアゴニスト抗ＣＤ３３抗体などによる治療を受けた対象の１つ以上の細胞におけるその発現が、アゴニスト該抗ＣＤ３３抗体による治療を受けていない対応する対象の１つ以上の細胞で発現された同一炎症促進性メディエーターの発現と比較して調節される（例えば、増加または減少する）場合、調節された発現を有し得る。いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、対象の１つ以上の細胞における炎症促進性メディエーター発現を、例えば、該抗ＣＤ３３抗体による治療を受けていない対応する対象の１つ以上の細胞における炎症促進性メディエーター発現と比較したとき、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１１０％、少なくとも１１５％、少なくとも１２０％、少なくとも１２５％、少なくとも１３０％、少なくとも１３５％、少なくとも１４０％、少なくとも１４５％、少なくとも１５０％、少なくとも１６０％、少なくとも１７０％、少なくとも１８０％、少なくとも１９０％、または少なくとも２００％調節することができる。他の実施形態において、抗ＣＤ３３抗体は、対象の１つ以上の細胞における炎症促進性メディエーター発現を、例えば、該抗ＣＤ３３抗体による治療を受けていない対応する対象の１つ以上の細胞における炎症促進性メディエーター発現と比較したとき、少なくとも少なくとも１．５倍、少なくとも１．６倍、少なくとも１．７倍、少なくとも１．８倍、少なくとも１．９倍、少なくとも２．０倍、少なくとも２．１倍、少なくとも２．１５倍、少なくとも２．２倍、少なくとも２．２５倍、少なくとも２．３倍、少なくとも２．３５倍、少なくとも２．４倍、少なくとも２．４５倍、少なくとも２．５倍、少なくとも２．５５倍、少なくとも３．０倍、少なくとも３．５倍、少なくとも４．０倍、少なくとも４．５倍、少なくとも５．０倍、少なくとも５．５倍、少なくとも６．０倍、少なくとも６．５倍、少なくとも７．０倍、少なくとも７．５倍、少なくとも８．０倍、少なくとも８．５倍、少なくとも９．０倍、少なくとも９．５倍、または少なくとも１０倍調節することができる。
【０３２０】
いくつかの実施形態において、本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体は、限定するものではないが、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウパチー病、那須・ハコラ病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、ループス、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満症、マラリア、本態性振戦、中枢神経系ループス、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫性疾患、サルコイドーシス、加齢に伴う病気、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身性感染症、ループス、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨のパジェット病、ならびに癌、例えば、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性赤血球増加症、本態性血小板血症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化症、骨髄由来腫瘍、ＣＤ３３を発現する腫瘍、甲状腺癌、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルージ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、Ｉ型ＨＩＶ、ならびにインフルエンザ菌を含む、１つ以上の炎症促進性メディエーターの異常なレベルに関連する状態及び／または疾患を予防し、そのリスクを低下させ、または治療するのに有用であり得る。
【０３２１】
ＥＲＫリン酸化
いくつかの実施形態において、本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体は、細胞上に発現されたＣＤ３３タンパク質に結合すると、細胞外シグナル制御キナーゼ（ＥＲＫ）のリン酸化を誘導することができる。
【０３２２】
細胞外シグナル制御キナーゼ（ＥＲＫ）は、例えば、分化細胞での減数分裂、有糸分裂及び有糸分裂後の機能の調節に関与する、広範に発現されたタンパク質キナーゼ細胞内シグナル伝達キナーゼである。成長因子、サイトカイン、ウイルス感染、ヘテロ三量体Ｇタンパク質共役受容体のリガンド、形質転換因子及び発癌性物質などの種々の刺激因子がＥＲＫ経路を活性化する。ＥＲＫのリン酸化は、そのキナーゼ活性の活性化をもたらす。
【０３２３】
いくつかの実施形態において、本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体は、限定するものではないが、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウパチー病、那須・ハコラ病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、ループス、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満症、マラリア、本態性振戦、中枢神経系ループス、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫性疾患、サルコイドーシス、加齢に伴う病気、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身性感染症、ループス、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨のパジェット病、ならびに癌、例えば、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性赤血球増加症、本態性血小板血症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化症、骨髄由来腫瘍、ＣＤ３３を発現する腫瘍、甲状腺癌、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルージ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、Ｉ型ＨＩＶ、ならびにインフルエンザ菌を含む、ＥＲＫリン酸化レベルの低下に関連する状態及び／または疾患を予防し、そのリスクを低下させ、または治療するのに有益である。
【０３２４】
Ｓｙｋリン酸化
いくつかの実施形態において、本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体は、細胞上に発現されたＣＤ３３タンパク質に結合すると、脾臓チロシンキナーゼ（Ｓｙｋ）のリン酸化を誘導することができる。
【０３２５】
脾臓チロシンキナーゼ（Ｓｙｋ）は、ＣＤ３３の下流で機能する細胞内シグナル伝達分子であり、いくつかの基質をリン酸化することにより、細胞活性化及び炎症過程をもたらすシグナル伝達複合体の形成を促進する。
【０３２６】
いくつかの実施形態において、本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体は、限定するものではないが、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウパチー病、那須・ハコラ病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、ループス、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満症、マラリア、本態性振戦、中枢神経系ループス、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫性疾患、サルコイドーシス、加齢に伴う病気、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身性感染症、ループス、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨のパジェット病、ならびに癌、例えば、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性赤血球増加症、本態性血小板血症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化症、骨髄由来腫瘍、ＣＤ３３を発現する腫瘍、甲状腺癌、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルージ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、Ｉ型ＨＩＶ、ならびにインフルエンザ菌を含む、Ｓｙｋリン酸化レベルの低下に関連する状態及び／または疾患を予防し、そのリスクを低下させ、または治療するのに有益である。
【０３２７】
ＣＤ３３リン酸化
いくつかの実施形態において、本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体は、細胞上に発現されたＣＤ３３タンパク質に結合すると、Ｓｒｃ、Ｓｙｋ、Ｆｙｎ、Ｆｇｒ、Ｌｃｋ、Ｈｃｋ、Ｂｌｋ、Ｌｙｎ及びＦｒｋなどのＳｒｃファミリーチロシンキナーゼによるＴｙｒ−３４０及びＴｙｒ−３５８のＣＤ３３リン酸化を一過的に誘導することができる。
【０３２８】
いくつかの実施形態において、本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体は、限定するものではないが、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウパチー病、那須・ハコラ病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、ループス、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満症、マラリア、本態性振戦、中枢神経系ループス、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫性疾患、サルコイドーシス、加齢に伴う病気、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身性感染症、ループス、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨のパジェット病、ならびに癌、例えば、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性赤血球増加症、本態性血小板血症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化症、骨髄由来腫瘍、ＣＤ３３を発現する腫瘍、甲状腺癌、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルージ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、Ｉ型ＨＩＶ、ならびにインフルエンザ菌を含む、ＣＤ３３リン酸化レベルの低下に関連する状態及び／または疾患を予防し、そのリスクを低下させ、または治療するのに有益である。
【０３２９】
ＩＴＡＭモチーフ含有受容体のリン酸化
いくつかの実施形態において、本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体は、細胞上に発現されたＣＤ３３タンパク質に結合すると、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、ＦｃｇＲ、ＤＡＰ１０及びＤＡＰ１２などのＩＴＡＭモチーフ含有受容体のリン酸化を誘導することができる。
【０３３０】
いくつかの実施形態において、本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体は、限定するものではないが、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウパチー病、那須・ハコラ病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、ループス、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満症、マラリア、本態性振戦、中枢神経系ループス、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫性疾患、サルコイドーシス、加齢に伴う病気、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身性感染症、ループス、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨のパジェット病、ならびに癌、例えば、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性赤血球増加症、本態性血小板血症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化症、骨髄由来腫瘍、ＣＤ３３を発現する腫瘍、甲状腺癌、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルージ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、Ｉ型ＨＩＶ、ならびにインフルエンザ菌を含む、ＩＴＡＭモチーフ含有受容体のリン酸化レベルの低下に関連する状態及び／または疾患を予防し、そのリスクを低下させ、または治療するのに有益である。
【０３３１】
Ｃ−Ｃケモカイン受容体７の調節された発現
いくつかの実施形態において、本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体は、細胞上に発現されたＣＤ３３タンパク質に結合すると、Ｃ−Ｃケモカイン受容体７（ＣＣＲ７）の発現を調節することができる。調節された発現（例えば、増加または減少）は、限定するものではないが、遺伝子発現の調節、転写発現の調節、またはタンパク質発現の調節を含み得る。遺伝子、転写産物（例えば、ｍＲＮＡ）、及び／またはタンパク質の発現を決定するには、当該技術分野で知られている任意の方法を使用することができる。例えば、抗炎症性メディエーターの遺伝子発現レベルを決定するにはノーザンブロット分析を使用することができ、抗炎症性メディエーターの転写レベルを決定するにはＲＴ−ＰＣＲを使用することができ、抗炎症性メディエーターのタンパク質レベルを決定するにはウェスタンブロット分析を使用することができる。
【０３３２】
Ｃ−Ｃケモカイン受容体７（ＣＣＲ７）は、Ｇタンパク質共役受容体ファミリーのメンバーである。ＣＣＲ７は、種々のリンパ組織で発現し、Ｂ細胞及びＴ細胞を活性化することができる。いくつかの実施形態において、ＣＣＲ７は、リンパ節などの二次リンパ器官へのメモリーＴ細胞の遊走を調節することができる。他の実施形態において、ＣＣＲ７は、樹状細胞の成熟を刺激することができる。ＣＣＲ７は、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンドＣＣＬ１９／ＥＬＣ及びＣＣＬ２１に結合することができる受容体タンパク質である。
【０３３３】
本明細書で使用されるとき、ＣＣＲ７は、本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体などによる治療を受けた対象の１つ以上の細胞におけるその発現が、該ＣＤ３３剤による治療を受けていない対応する対象の１つ以上の細胞で発現されたＣＣＲ７の発現と比較して調節される（例えば、増加または減少する）場合、調節された発現を有し得る。いくつかの実施形態において、本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体は、対象の１つ以上の細胞におけるＣＣＲ７発現を、例えば、該ＣＤ３３剤による治療を受けていない対応する対象の１つ以上の細胞におけるＣＣＲ７発現と比較したとき、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１１０％、少なくとも１１５％、少なくとも１２０％、少なくとも１２５％、少なくとも１３０％、少なくとも１３５％、少なくとも１４０％、少なくとも１４５％、少なくとも１５０％、少なくとも１６０％、少なくとも１７０％、少なくとも１８０％、少なくとも１９０％、または少なくとも２００％調節することができる。他の実施形態において、本開示のＣＤ３３剤、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、対象の１つ以上の細胞におけるＣＣＲ７発現を、例えば、該ＣＤ３３剤による治療を受けていない対応する対象の１つ以上の細胞におけるＣＣＲ７発現と比較したとき、少なくとも１．５倍、少なくとも１．６倍、少なくとも１．７倍、少なくとも１．８倍、少なくとも１．９倍、少なくとも２．０倍、少なくとも２．１倍、少なくとも２．１５倍、少なくとも２．２倍、少なくとも２．２５倍、少なくとも２．３倍、少なくとも２．３５倍、少なくとも２．４倍、少なくとも２．４５倍、少なくとも２．５倍、少なくとも２．５５倍、少なくとも３．０倍、少なくとも３．５倍、少なくとも４．０倍、少なくとも４．５倍、少なくとも５．０倍、少なくとも５．５倍、少なくとも６．０倍、少なくとも６．５倍、少なくとも７．０倍、少なくとも７．５倍、少なくとも８．０倍、少なくとも８．５倍、少なくとも９．０倍、少なくとも９．５倍、または少なくとも１０倍調節する。
【０３３４】
いくつかの実施形態において、ＣＣＲ７の調節された発現は、マクロファージ、樹状細胞及び／またはミクログリア細胞において生じる。ＣＣＲ７の調節された発現は、ケモカインであるＣＣＬ１９及びＣＣＬ２１を発現している細胞へのミクログリア細胞の走化性を誘導し得る。したがって、ある特定の実施形態において、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、ＣＣＬ１９及びＣＣＬ２１発現細胞へのミクログリア細胞の走化性を誘導し得る。
【０３３５】
いくつかの実施形態において、本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体は、限定するものではないが、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウパチー病、那須・ハコラ病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、ループス、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満症、マラリア、本態性振戦、中枢神経系ループス、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫性疾患、サルコイドーシス、加齢に伴う病気、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身性感染症、ループス、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨のパジェット病、ならびに癌、例えば、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性赤血球増加症、本態性血小板血症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化症、骨髄由来腫瘍、ＣＤ３３を発現する腫瘍、甲状腺癌、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルージ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、Ｉ型ＨＩＶ、ならびにインフルエンザ菌を含む、ＣＣＲ７の異常なレベルに関連する状態及び／または疾患を予防し、そのリスクを低下させ、または治療するのに有用である。
【０３３６】
免疫関連タンパク質の調節された発現
いくつかの実施形態において、本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体は、細胞上に発現されたＣＤ３３タンパク質に結合すると、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、Ｂ７−Ｈ２、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ２００Ｒ、ＣＤ１６３及び／またはＣＤ２０６の発現を調節することができる。調節された発現（例えば、増加または減少）は、限定するものではないが、遺伝子発現の調節、転写発現の調節、またはタンパク質発現の調節を含み得る。遺伝子、転写産物（例えば、ｍＲＮＡ）、及び／またはタンパク質の発現を決定するには、当該技術分野で知られている任意の方法を使用することができる。例えば、抗炎症性メディエーターの遺伝子発現レベルを決定するにはノーザンブロット分析を使用することができ、抗炎症性メディエーターの転写レベルを決定するにはＲＴ−ＰＣＲを使用することができ、抗炎症性メディエーターのタンパク質レベルを決定するにはウェスタンブロット分析を使用することができる。
【０３３７】
本明細書で使用されるとき、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、Ｂ７−Ｈ２、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ２００Ｒ、ＣＤ１６３及び／またはＣＤ２０６は、本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体などによる治療を受けた対象の１つ以上の細胞におけるその発現が、該ＣＤ３３剤による治療を受けていない対応する対象の１つ以上の細胞で発現されたＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、Ｂ７−Ｈ２、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ２００Ｒ、ＣＤ１６３及び／またはＣＤ２０６の発現と比較して調節される（例えば、増加または減少する）場合、調節された発現を有し得る。いくつかの実施形態において、本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体は、対象の１つ以上の細胞におけるＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、Ｂ７−Ｈ２、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ２００Ｒ、ＣＤ１６３及び／またはＣＤ２０６発現を、例えば、該ＣＤ３３剤による治療を受けていない対応する対象の１つ以上の細胞におけるＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ２００Ｒ、ＣＤ１６３及び／またはＣＤ２０６発現と比較したとき、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１１０％、少なくとも１１５％、少なくとも１２０％、少なくとも１２５％、少なくとも１３０％、少なくとも１３５％、少なくとも１４０％、少なくとも１４５％、少なくとも１５０％、少なくとも１６０％、少なくとも１７０％、少なくとも１８０％、少なくとも１９０％、または少なくとも２００％調節することができる。他の実施形態において、本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体は、対象の１つ以上の細胞におけるＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、Ｂ７−Ｈ２、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ２００Ｒ、ＣＤ１６３及び／またはＣＤ２０６発現を、例えば、該ＣＤ３３剤による治療を受けていない対応する対象の１つ以上の細胞におけるＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、Ｂ７−Ｈ２、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ２００Ｒ、ＣＤ１６３及び／またはＣＤ２０６発現と比較したとき、少なくとも１．５倍、少なくとも１．６倍、少なくとも１．７倍、少なくとも１．８倍、少なくとも１．９倍、少なくとも２．０倍、少なくとも２．１倍、少なくとも２．１５倍、少なくとも２．２倍、少なくとも２．２５倍、少なくとも２．３倍、少なくとも２．３５倍、少なくとも２．４倍、少なくとも２．４５倍、少なくとも２．５倍、少なくとも２．５５倍、少なくとも３．０倍、少なくとも３．５倍、少なくとも４．０倍、少なくとも４．５倍、少なくとも５．０倍、少なくとも５．５倍、少なくとも６．０倍、少なくとも６．５倍、少なくとも７．０倍、少なくとも７．５倍、少なくとも８．０倍、少なくとも８．５倍、少なくとも９．０倍、少なくとも９．５倍、または少なくとも１０倍調節する。
【０３３８】
いくつかの実施形態において、本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体は、限定するものではないが、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウパチー病、那須・ハコラ病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、ループス、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満症、マラリア、本態性振戦、中枢神経系ループス、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫性疾患、サルコイドーシス、加齢に伴う病気、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身性感染症、ループス、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨のパジェット病、ならびに癌、例えば、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性赤血球増加症、本態性血小板血症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化症、骨髄由来腫瘍、ＣＤ３３を発現する腫瘍、甲状腺癌、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルージ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、Ｉ型ＨＩＶ、ならびにインフルエンザ菌を含む、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、Ｂ７−Ｈ２、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ２００Ｒ、ＣＤ１６３及び／またはＣＤ２０６の異常なレベルに関連する状態及び／または疾患を予防し、そのリスクを低下させ、または治療するのに有用である。
【０３３９】
骨髄由来樹状細胞の抗原特異的Ｔ細胞増殖を誘導する能力の向上または正常化
いくつかの実施形態において、本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体は、細胞上に発現されたＣＤ３３タンパク質に結合すると、骨髄由来樹状細胞の抗原特異的Ｔ細胞増殖を誘導する能力を向上及び／または正常化することができる。
【０３４０】
いくつかの実施形態において、本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示のアンタゴニスト抗ＣＤ３３抗体は、対象の１つ以上の骨髄由来樹状細胞における骨髄由来樹状細胞の抗原特異的Ｔ細胞増殖を誘導する能力を、該剤による治療を受けていない対応する対象の１つ以上の骨髄由来樹状細胞における骨髄由来樹状細胞の抗原特異的Ｔ細胞増殖を誘導する能力と比較したとき、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１１０％、少なくとも１１５％、少なくとも１２０％、少なくとも１２５％、少なくとも１３０％、少なくとも１３５％、少なくとも１４０％、少なくとも１４５％、少なくとも１５０％、少なくとも１６０％、少なくとも１７０％、少なくとも１８０％、少なくとも１９０％、または少なくとも２００％向上及び／または正常化することができる。他の実施形態において、ＣＤ３３剤、例えばアンタゴニスト抗ＣＤ３３抗体は、対象の１つ以上の骨髄由来樹状細胞における骨髄由来樹状細胞の抗原特異的Ｔ細胞増殖を誘導する能力を、例えば、該ＣＤ３３剤による治療を受けていない対応する対象の１つ以上の骨髄由来樹状細胞における骨髄由来樹状細胞の抗原特異的Ｔ細胞増殖を誘導する能力と比較したとき、少なくとも少なくとも１．５倍、少なくとも１．６倍、少なくとも１．７倍、少なくとも１．８倍、少なくとも１．９倍、少なくとも２．０倍、少なくとも２．１倍、少なくとも２．１５倍、少なくとも２．２倍、少なくとも２．２５倍、少なくとも２．３倍、少なくとも２．３５倍、少なくとも２．４倍、少なくとも２．４５倍、少なくとも２．５倍、少なくとも２．５５倍、少なくとも３．０倍、少なくとも３．５倍、少なくとも４．０倍、少なくとも４．５倍、少なくとも５．０倍、少なくとも５．５倍、少なくとも６．０倍、少なくとも６．５倍、少なくとも７．０倍、少なくとも７．５倍、少なくとも８．０倍、少なくとも８．５倍、少なくとも９．０倍、少なくとも９．５倍、または少なくとも１０倍向上及び／または正常化することができる。
【０３４１】
いくつかの実施形態において、本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体は、限定するものではないが、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウパチー病、那須・ハコラ病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、ループス、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満症、マラリア、本態性振戦、中枢神経系ループス、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫性疾患、サルコイドーシス、加齢に伴う病気、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身性感染症、ループス、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨のパジェット病、ならびに癌、例えば、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性赤血球増加症、本態性血小板血症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化症、骨髄由来腫瘍、ＣＤ３３を発現する腫瘍、甲状腺癌、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルージ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、Ｉ型ＨＩＶ、ならびにインフルエンザ菌を含む、骨髄由来樹状細胞の抗原特異的Ｔ細胞増殖を誘導する能力の低下または調節不全に関連する状態及び／または疾患を予防し、そのリスクを低下させ、または治療するのに有益である。
【０３４２】
破骨細胞生成
いくつかの実施形態において、本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体は、細胞上に発現されたＣＤ３３タンパク質に結合すると、破骨細胞生成を誘導し、かつ／または破骨細胞形成率を増大させることができる。
【０３４３】
本明細書で使用されるとき、破骨細胞とは、石灰化した基質を除去し、生体骨を分解すること（例えば、骨吸収）によって骨組織を除去することができる骨細胞の一種類である。破骨細胞は、骨髄系統の細胞の融合によって形成され得る。いくつかの実施形態において、破骨細胞は、酒石酸耐性酸性ホスファターゼ（ＴＲＡＰ）及びカテプシンＫの高発現を特徴とし得る。
【０３４４】
本明細書で使用されるとき、破骨細胞形成率は、本開示のＣＤ３３剤、例えばアンタゴニスト抗ＣＤ３３抗体による治療を受けた対象の破骨細胞形成の率が、該ＣＤ３３剤による治療を受けていない対応する対象の破骨細胞形成の率よりも大きくなる場合、増大し得る。いくつかの実施形態において、ＣＤ３３剤、例えば本開示のアンタゴニスト抗ＣＤ３３抗体は、対象の破骨細胞形成率を、例えば、該ＣＤ３３剤による治療を受けていない対応する対象の破骨細胞形成の速度と比較したとき、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１１０％、少なくとも１１５％、少なくとも１２０％、少なくとも１２５％、少なくとも１３０％、少なくとも１３５％、少なくとも１４０％、少なくとも１４５％、少なくとも１５０％、少なくとも１６０％、少なくとも１７０％、少なくとも１８０％、少なくとも１９０％、または少なくとも２００％増大させることができる。他の実施形態において、ＣＤ３３剤、例えば本開示のアンタゴニスト抗ＣＤ３３抗体は、対象の破骨細胞形成率を、例えば、該ＣＤ３３剤による治療を受けていない対応する対象の破骨細胞形成率と比較したとき、少なくとも１．５倍、少なくとも１．６倍、少なくとも１．７倍、少なくとも１．８倍、少なくとも１．９倍、少なくとも２．０倍、少なくとも２．１倍、少なくとも２．１５倍、少なくとも２．２倍、少なくとも２．２５倍、少なくとも２．３倍、少なくとも２．３５倍、少なくとも２．４倍、少なくとも２．４５倍、少なくとも２．５倍、少なくとも２．５５倍、少なくとも３．０倍、少なくとも３．５倍、少なくとも４．０倍、少なくとも４．５倍、少なくとも５．０倍、少なくとも５．５倍、少なくとも６．０倍、少なくとも６．５倍、少なくとも７．０倍、少なくとも７．５倍、少なくとも８．０倍、少なくとも８．５倍、少なくとも９．０倍、少なくとも９．５倍、または少なくとも１０倍増大させることができる。
【０３４５】
本明細書で使用されるとき、破骨細胞形成率は、ＣＤ３３剤、例えばアゴニスト抗ＣＤ３３抗体などによる治療を受けた対象の破骨細胞形成率が、該ＣＤ３３剤による治療を受けていない対応する対象の破骨細胞形成率よりも小さくなる場合、減少し得る。いくつかの実施形態において、ＣＤ３３剤、例えば本開示のアゴニスト抗ＣＤ３３抗体は、対象の破骨細胞形成率を、例えば、該ＣＤ３３剤による治療を受けていない対応する対象の破骨細胞形成率と比較したとき、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１１０％、少なくとも１１５％、少なくとも１２０％、少なくとも１２５％、少なくとも１３０％、少なくとも１３５％、少なくとも１４０％、少なくとも１４５％、少なくとも１５０％、少なくとも１６０％、少なくとも１７０％、少なくとも１８０％、少なくとも１９０％、または少なくとも２００％減少させることができる。他の実施形態において、ＣＤ３３剤、例えば本開示のアゴニスト抗ＣＤ３３抗体は、対象の破骨細胞形成率を、例えば、該ＣＤ３３剤による治療を受けていない対応する対象の破骨細胞形成率と比較したとき、少なくとも１．５倍、少なくとも１．６倍、少なくとも１．７倍、少なくとも１．８倍、少なくとも１．９倍、少なくとも２．０倍、少なくとも２．１倍、少なくとも２．１５倍、少なくとも２．２倍、少なくとも２．２５倍、少なくとも２．３倍、少なくとも２．３５倍、少なくとも２．４倍、少なくとも２．４５倍、少なくとも２．５倍、少なくとも２．５５倍、少なくとも３．０倍、少なくとも３．５倍、少なくとも４．０倍、少なくとも４．５倍、少なくとも５．０倍、少なくとも５．５倍、少なくとも６．０倍、少なくとも６．５倍、少なくとも７．０倍、少なくとも７．５倍、少なくとも８．０倍、少なくとも８．５倍、少なくとも９．０倍、少なくとも９．５倍、または少なくとも１０倍減少させることができる。
【０３４６】
いくつかの実施形態において、本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体は、骨密度の病的低下に関連する骨粗鬆症及び骨密度の病的増加に関連する骨多孔症を含む、異常な骨形成及び維持に関連する状態及び／または疾患を予防し、そのリスクを低下させ、または治療するのに有益である。
【０３４７】
ＣＤ３３発現細胞の増殖及び生存
いくつかの実施形態において、本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体は、細胞上に発現されたＣＤ３３タンパク質に結合すると、樹状細胞、マクロファージ、単球、好中球、破骨細胞、皮膚のランゲルハンス細胞、クッパー細胞、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞及びミクログリア細胞の増殖、生存及び／または機能を増大させることができる。
【０３４８】
ミクログリア細胞は、脳及び脊髄の常在マクロファージであるグリア細胞の一種であり、このため、中枢神経系（ＣＮＳ）において能動免疫防御の一次及び主要形態として作用する。ミクログリア細胞は、脳内の総グリア細胞集団の２０％を構成する。ミクログリア細胞は、ＣＮＳから斑、損傷ニューロン及び感染因子を絶えず除去している。脳及び脊髄は、大部分の病原体が脆弱な神経組織に到達するのを防いでいる血液脳関門として知られる一連の内皮細胞によって身体の他の部分から分離されている「免疫特権」器官と考えられている。感染因子が脳内に直接取り込まれるか、血液脳関門を通過した場合、ミクログリア細胞は、影響を受けやすい神経組織が損傷を受ける前に、迅速に反応して炎症を制限し、感染因子を破壊しなければならない。身体の他の部分からの抗体を利用できない（血液脳関門を通過できるほど小さい抗体はほとんどない）ため、ミクログリアは、異物を認識し、それらを飲み込み、Ｔ細胞を活性化させる抗原提示細胞として機能できなければならない。この過程は、致命的損傷の可能性を避けるために迅速に行われなければならないので、ミクログリア細胞は、ＣＮＳ中の極めて小さな病的変化に対してでさえ非常に敏感である。ミクログリア細胞は、細胞外カリウムのわずかな変化にさえ反応する独特のカリウムチャネルを有することによって、この感度を部分的には達成する。
【０３４９】
本明細書で使用されるとき、本開示のマクロファージには、限定するものではないが、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ及びＭ２マクロファージが含まれる。本明細書で使用されるとき、本開示のミクログリア細胞には、限定するものではないが、Ｍ１ミクログリア細胞、活性化Ｍ１ミクログリア細胞及びＭ２ミクログリア細胞が含まれる。
【０３５０】
いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、樹状細胞、単球及び／またはマクロファージ上のＣＤ８０、ＣＤ８３及び／またはＣＤ８６の発現を増加させ得る。
【０３５１】
本明細書で使用されるとき、マクロファージ、樹状細胞、単球、Ｔ細胞、好中球及び／またはミクログリアの増殖率、生存及び／または機能は、ＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体などによる治療を受けた対象の樹状細胞、マクロファージ、単球、好中球、破骨細胞、皮膚のランゲルハンス細胞、クッパー細胞及び／またはミクログリアの増殖率、生存及び／または機能が、該ＣＤ３３剤による治療を受けていない対応する対象の樹状細胞、マクロファージ、単球、破骨細胞、皮膚のランゲルハンス細胞、クッパー細胞、Ｔ細胞、好中球及び／またはミクログリアの増殖率、生存及び／または機能よりも大きくなる場合、発現の増加を伴い得る。いくつかの実施形態において、ＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体は、対象の樹状細胞、マクロファージ、単球、破骨細胞、皮膚のランゲルハンス細胞、クッパー細胞、Ｔ細胞及び／またはミクログリアの増殖率、生存及び／または機能を、例えば、該ＣＤ３３剤による治療を受けていない対応する対象の樹状細胞、マクロファージ、単球、破骨細胞、皮膚のランゲルハンス細胞、クッパー細胞、Ｔ細胞及び／またはミクログリアの増殖率、生存及び／または機能と比較したとき、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１１０％、少なくとも１１５％、少なくとも１２０％、少なくとも１２５％、少なくとも１３０％、少なくとも１３５％、少なくとも１４０％、少なくとも１４５％、少なくとも１５０％、少なくとも１６０％、少なくとも１７０％、少なくとも１８０％、少なくとも１９０％、または少なくとも２００％増大させることができる。他の実施形態において、ＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体は、対象の樹状細胞、マクロファージ、単球、破骨細胞、皮膚のランゲルハンス細胞、クッパー細胞、Ｔ細胞及び／またはミクログリアの増殖率、生存及び／または機能を、例えば、該ＣＤ３３剤による治療を受けていない対応する対象の樹状細胞、マクロファージ、単球、破骨細胞、皮膚のランゲルハンス細胞、クッパー細胞、Ｔ細胞及び／またはミクログリアの増殖率、生存及び／または機能と比較したとき少なくとも１．５倍、少なくとも１．６倍、少なくとも１．７倍、少なくとも１．８倍、少なくとも１．９倍、少なくとも２．０倍、少なくとも２．１倍、少なくとも２．１５倍、少なくとも２．２倍、少なくとも２．２５倍、少なくとも２．３倍、少なくとも２．３５倍、少なくとも２．４倍、少なくとも２．４５倍、少なくとも２．５倍、少なくとも２．５５倍、少なくとも３．０倍、少なくとも３．５倍、少なくとも４．０倍、少なくとも４．５倍、少なくとも５．０倍、少なくとも５．５倍、少なくとも６．０倍、少なくとも６．５倍、少なくとも７．０倍、少なくとも７．５倍、少なくとも８．０倍、少なくとも８．５倍、少なくとも９．０倍、少なくとも９．５倍、または少なくとも１０倍増大させることができる。
【０３５２】
いくつかの実施形態において、本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体は、限定するものではないが、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウパチー病、那須・ハコラ病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、ループス、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満症、マラリア、本態性振戦、中枢神経系ループス、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫性疾患、サルコイドーシス、加齢に伴う病気、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身性感染症、ループス、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨のパジェット病、ならびに癌、例えば、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性赤血球増加症、本態性血小板血症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化症、骨髄由来腫瘍、ＣＤ３３を発現する腫瘍、甲状腺癌、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルージ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、Ｉ型ＨＩＶ、ならびにインフルエンザ菌を含む、樹状細胞、好中球、マクロファージ、単球、破骨細胞、皮膚のランゲルハンス細胞、クッパー細胞、Ｔ細胞及び／またはミクログリアの増殖減少、生存、アポトーシス増加及び／または機能に関連する状態及び／または疾患を予防し、そのリスクを低下させ、または治療するのに有益である。
【０３５３】
クリアランス及び食作用
いくつかの実施形態において、本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体は、細胞上に発現されたＣＤ３３タンパク質に結合すると、アポトーシス性ニューロン、神経系の神経組織破片、機能不全シナプス、神経系の非神経組織破片、細菌、他の異物、病原タンパク質、病原ペプチド、病原核酸または腫瘍細胞のうちの１つ以上のクリアランス及び／または食作用を誘導することができる。ある特定の実施形態において、病原タンパク質には、限定するものではないが、アミロイドベータ、オリゴマーアミロイドベータ、アミロイドベータ斑、アミロイド前駆体タンパク質またはその断片、タウ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（染色体９オープンリーディングフレーム７２）、ｃ９ＲＡＮタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メジン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、反復関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）反復ペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）反復ペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）反復ペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）反復ペプチド、ユビキチン及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）反復ペプチドが含まれる。ある特定の実施形態において、病原核酸には、限定するものではないが、アンチセンスＧＧＣＣＣＣ（Ｇ２Ｃ４）反復伸長ＲＮＡが含まれる。
【０３５４】
いくつかの実施形態において、本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体は、限定するものではないが、アポトーシス性ニューロンのクリアランス、神経組織破片のクリアランス、非神経組織破片のクリアランス、細菌または他の異物のクリアランス、病原タンパク質のクリアランス、病原ペプチドのクリアランス、病原核酸のクリアランス及び腫瘍細胞のクリアランスを含む、１つ以上の種類のクリアランスを誘導することができる。
【０３５５】
いくつかの実施形態において、本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体は、アポトーシス性ニューロン、神経組織破片、非神経組織破片、細菌、他の異物、病原タンパク質、病原ペプチド、病原核酸及び／または腫瘍細胞のうちの１つ以上の食作用を誘導することができる。
【０３５６】
いくつかの実施形態において、本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体は、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）のレベルが低下した条件下で、好中球、マクロファージ、樹状細胞、単球及び／またはミクログリアによる食作用を増加させることができる。
【０３５７】
いくつかの実施形態において、本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体は、限定するものではないが、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウパチー病、那須・ハコラ病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、ループス、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満症、マラリア、本態性振戦、中枢神経系ループス、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫性疾患、サルコイドーシス、加齢に伴う病気、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身性感染症、ループス、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨のパジェット病、ならびに癌、例えば、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性赤血球増加症、本態性血小板血症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化症、骨髄由来腫瘍、ＣＤ３３を発現する腫瘍、甲状腺癌、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルージ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、Ｉ型ＨＩＶ、ならびにインフルエンザ菌を含む、アポトーシス性ニューロン、神経系の神経組織破片、機能不全シナプス、神経系の非神経組織破片、細菌、他の異物、病原タンパク質に関連する状態及び／または疾患を予防し、そのリスクを低下させ、または治療するのに有益である。
【０３５８】
ＣＤ３３依存性遺伝子発現
いくつかの実施形態において、本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示のアンタゴニスト抗ＣＤ３３抗体は、ＣＤ３３依存性遺伝子の活性及び／または発現を減少させることができ、これにより、免疫系を活性化させるシグナル伝達カスケードに関連する遺伝子発現、例えば、ＩＴＡＭ含有受容体、パターン認識受容体、Ｔｏｌｌ様受容体、損傷関連分子パターン（ＤＡＭＰ）受容体、活性化Ｔ細胞核内因子（ＮＦＡＴ）転写因子ファミリーのうちの１つ以上の転写因子などに関連する遺伝子発現を増加させることができる。
【０３５９】
いくつかの実施形態において、本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示のアンタゴニスト抗ＣＤ３３抗体は、限定するものではないが、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウパチー病、那須・ハコラ病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、ループス、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満症、マラリア、本態性振戦、中枢神経系ループス、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫性疾患、サルコイドーシス、加齢に伴う病気、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身性感染症、ループス、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨のパジェット病、ならびに癌、例えば、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性赤血球増加症、本態性血小板血症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化症、骨髄由来腫瘍、ＣＤ３３を発現する腫瘍、甲状腺癌、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルージ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、Ｉ型ＨＩＶ、ならびにインフルエンザ菌を含む、高レベルのＣＤ３３依存性遺伝子に関連する状態及び／または疾患を予防し、そのリスクを低下させ、または治療するのに有益である。
【０３６０】
免疫細胞のＣＤ３３依存性活性化
いくつかの実施形態において、本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示のアンタゴニスト抗ＣＤ３３抗体は、細胞傷害性Ｔ細胞  ヘルパーＴ細胞またはその両方の活性を増加させることができる。いくつかの実施形態において、本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示のアンタゴニスト抗ＣＤ３３抗体は、限定するものではないが、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫及び甲状腺癌などの固形腫瘍を含む腫瘍を含む、細胞傷害性Ｔ細胞  ヘルパーＴ細胞またはその両方の活性低下に関連する状態及び／または疾患を予防し、そのリスクを低下させ、または治療するのに有益である。
【０３６１】
いくつかの実施形態において、本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示のアンタゴニスト抗ＣＤ３３抗体は、Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ＣＤ３＋Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、樹状細胞、マクロファージ、単球、好中球、破骨細胞、皮膚のランゲルハンス細胞、クッパー細胞及び／またはミクログリア細胞の増殖、生存、活性及び／または数の増加を誘導することができる。いくつかの実施形態において、本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示のアンタゴニスト抗ＣＤ３３抗体は、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の存在下で、Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ＣＤ３＋Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、樹状細胞、マクロファージ、単球、好中球、破骨細胞、皮膚のランゲルハンス細胞、クッパー細胞及び／またはミクログリア細胞の増殖、生存、活性及び／または数の増加を誘導する。
【０３６２】
本明細書で使用されるとき、Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ＣＤ３＋Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、樹状細胞、マクロファージ、単球、好中球、破骨細胞、皮膚のランゲルハンス細胞、クッパー細胞及び／またはミクログリア細胞の増殖率、生存、活性及び／または数は、ＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体などによる治療を受けた対象のＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ＣＤ３＋Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、樹状細胞、マクロファージ、単球、好中球、破骨細胞、皮膚のランゲルハンス細胞、クッパー細胞及び／またはミクログリア細胞の増殖率、生存、活性及び／または数が、該ＣＤ３３剤による治療を受けていない対応する対象のＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ＣＤ３＋Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、樹状細胞、マクロファージ、単球、好中球、破骨細胞、皮膚のランゲルハンス細胞、クッパー細胞及び／またはミクログリア細胞の増殖率、生存、活性及び／または数よりも大きくなる場合、増加した率を伴い得る。いくつかの実施形態において、ＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体は、対象のＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ＣＤ３＋Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、樹状細胞、マクロファージ、単球、好中球、破骨細胞、皮膚のランゲルハンス細胞、クッパー細胞及び／またはミクログリア細胞の増殖、生存、活性及び／または数を、例えば、該ＣＤ３３剤による治療を受けていない対応する対象のＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ＣＤ３＋Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、樹状細胞、マクロファージ、単球、好中球、破骨細胞、皮膚のランゲルハンス細胞、クッパー細胞及び／またはミクログリア細胞の増殖、生存、活性及び／または数のレベルと比較したとき、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１１０％、少なくとも１１５％、少なくとも１２０％、少なくとも１２５％、少なくとも１３０％、少なくとも１３５％、少なくとも１４０％、少なくとも１４５％、少なくとも１５０％、少なくとも１６０％、少なくとも１７０％、少なくとも１８０％、少なくとも１９０％、または少なくとも２００％増加させることができる。他の実施形態において、ＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体は、対象のＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ＣＤ３＋Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、樹状細胞、マクロファージ、単球、好中球、破骨細胞、皮膚のランゲルハンス細胞、クッパー細胞及び／またはミクログリア細胞の増殖、生存、活性及び／または数を、例えば、該ＣＤ３３剤による治療を受けていない対応する対象のＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ＣＤ３＋Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、樹状細胞、マクロファージ、単球、好中球、破骨細胞、皮膚のランゲルハンス細胞、クッパー細胞及び／またはミクログリア細胞の増殖、生存、活性及び／または数のレベルと比較したとき、少なくとも１．５倍、少なくとも１．６倍、少なくとも１．７倍、少なくとも１．８倍、少なくとも１．９倍、少なくとも２．０倍、少なくとも２．１倍、少なくとも２．１５倍、少なくとも２．２倍、少なくとも２．２５倍、少なくとも２．３倍、少なくとも２．３５倍、少なくとも２．４倍、少なくとも２．４５倍、少なくとも２．５倍、少なくとも２．５５倍、少なくとも３．０倍、少なくとも３．５倍、少なくとも４．０倍、少なくとも４．５倍、少なくとも５．０倍、少なくとも５．５倍、少なくとも６．０倍、少なくとも６．５倍、少なくとも７．０倍、少なくとも７．５倍、少なくとも８．０倍、少なくとも８．５倍、少なくとも９．０倍、少なくとも９．５倍、または少なくとも１０倍増加させることができる。
【０３６３】
好中球のＣＤ３３依存性活性化
いくつかの実施形態において、本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示のアゴニスト抗ＣＤ３３抗体は、好中球またはその両方の活性を増加させることができる。いくつかの実施形態において、本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示のアゴニスト抗ＣＤ３３抗体は、限定するものではないが、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫及び甲状腺癌などの固形腫瘍を含む腫瘍を含む、ナチュラルキラー細胞、好中球またはその両方の活性の活性低下に関連する状態及び／または疾患を予防し、そのリスクを低下させ、または治療するのに有益である。
【０３６４】
腫瘍関連免疫細胞のＣＤ３３依存性抑制
いくつかの実施形態において、本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示のアゴニスト抗ＣＤ３３抗体は、ＣＤ１４＋骨髄細胞の活性の低下、増殖の減少、生存の減少、機能性の低下、腫瘍もしくはリンパ器官（例えば、脾臓及びリンパ節）への浸潤、数の減少、腫瘍成長率の減少、腫瘍体積の減少、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の分化、生存及び／もしくは１つ以上の機能の低減もしくは阻害、ならびに／またはＴ制御性細胞もしくは抑制性腫瘍埋没免疫抑制性樹状細胞もしくは腫瘍関連マクロファージもしくは骨髄由来サプレッサー細胞のアポトーシスの促進を行うことができる。いくつかの実施形態において、本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示のアゴニスト抗ＣＤ３３抗体は、限定するものではないが、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、甲状腺癌などのＣＤ３３を発現しない固形腫瘍、及び白血病細胞などのＣＤ３３を発現する血液腫瘍を含む腫瘍を含む、１つ以上の種類の免疫抑制性細胞の活性に関連する状態及び／または疾患を予防し、そのリスクを低下させ、または治療するのに有益である。
【０３６５】
いくつかの実施形態において、本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示のアンタゴニスト抗ＣＤ３３抗体は、ＣＤ１４＋骨髄細胞の数を減少させ、腫瘍成長率を減少させ、腫瘍体積を減少させ、または骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の分化、生存及び／もしくは１つ以上の機能を低減もしくは阻害することができる。
【０３６６】
いくつかの実施形態において、ＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体は、例えば、該ＣＤ３３剤による治療を受けていない対応する対象のＣＤ１４＋骨髄細胞の数、腫瘍成長率、腫瘍体積、または骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の分化、生存及び／もしくは１つ以上の機能のレベルと比較したとき、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１１０％、少なくとも１１５％、少なくとも１２０％、少なくとも１２５％、少なくとも１３０％、少なくとも１３５％、少なくとも１４０％、少なくとも１４５％、少なくとも１５０％、少なくとも１６０％、少なくとも１７０％、少なくとも１８０％、少なくとも１９０％、または少なくとも２００％、対象のＣＤ１４＋骨髄細胞の数を減少させ、腫瘍成長率を減少させ、腫瘍体積を減少させ、または骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の分化、生存及び／もしくは１つ以上の機能を低減もしくは阻害することができる。他の実施形態において、ＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体は、例えば、該ＣＤ３３剤による治療を受けていない対応する対象のＣＤ１４＋骨髄細胞の数、腫瘍成長率、腫瘍体積、または骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の分化、生存及び／もしくは１つ以上の機能のレベルと比較したとき、少なくとも１．５倍、少なくとも１．６倍、少なくとも１．７倍、少なくとも１．８倍、少なくとも１．９倍、少なくとも２．０倍、少なくとも２．１倍、少なくとも２．１５倍、少なくとも２．２倍、少なくとも２．２５倍、少なくとも２．３倍、少なくとも２．３５倍、少なくとも２．４倍、少なくとも２．４５倍、少なくとも２．５倍、少なくとも２．５５倍、少なくとも３．０倍、少なくとも３．５倍、少なくとも４．０倍、少なくとも４．５倍、少なくとも５．０倍、少なくとも５．５倍、少なくとも６．０倍、少なくとも６．５倍、少なくとも７．０倍、少なくとも７．５倍、少なくとも８．０倍、少なくとも８．５倍、少なくとも９．０倍、少なくとも９．５倍、または少なくとも１０倍、対象のＣＤ１４＋骨髄細胞の数を減少させ、腫瘍成長率を減少させ、腫瘍体積を減少させ、または骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の分化、生存及び／もしくは１つ以上の機能を低減もしくは阻害することができる。
【０３６７】
チェックポイント阻害療法の増大した有効性
いくつかの実施形態において、本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示のアンタゴニスト抗ＣＤ３３抗体は、ＣＴＬ４、アデノシン経路、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＯＸ４０、ＴＩＭ３及び／またはＬＡＧ３のうちの１つ以上を標的にする、ＰＤ−１阻害薬または療法などの１つ以上のチェックポイント阻害療法及び／または免疫調節療法の有効性を増大させることができる。
【０３６８】
いくつかの実施形態において、ＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体は、ＣＴＬ４、アデノシン経路、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＯＸ４０、ＴＩＭ３及び／またはＬＡＧ３のうちの１つ以上を標的にする、ＰＤ−１阻害薬または療法などの１つ以上のチェックポイント阻害療法及び／または免疫調節療法の有効性を、該療法の１つ以上を受けている対象において、例えば、該ＣＤ３３剤による治療を受けていない該療法の１つ以上を受けている対応する対象における、ＣＴＬ４、アデノシン経路、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＯＸ４０、ＴＩＭ３及び／またはＬＡＧ３のうちの１つ以上を標的にする、ＰＤ−１阻害薬または療法などの１つ以上のチェックポイント阻害療法及び／または免疫調節療法の有効性レベルと比較したとき、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１１０％、少なくとも１１５％、少なくとも１２０％、少なくとも１２５％、少なくとも１３０％、少なくとも１３５％、少なくとも１４０％、少なくとも１４５％、少なくとも１５０％、少なくとも１６０％、少なくとも１７０％、少なくとも１８０％、少なくとも１９０％、または少なくとも２００％増大させることができる。他の実施形態において、ＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体は、ＣＴＬ４、アデノシン経路、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＯＸ４０、ＴＩＭ３及び／またはＬＡＧ３のうちの１つ以上を標的にする、ＰＤ−１阻害薬または療法などの１つ以上のチェックポイント阻害療法及び／または免疫調節療法の有効性を、該療法の１つ以上を受けている対象において、例えば、該ＣＤ３３剤による治療を受けていない該療法の１つ以上を受けている対応する対象における、ＣＴＬ４、アデノシン経路、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＯＸ４０、ＴＩＭ３及び／またはＬＡＧ３のうちの１つ以上を標的にする、ＰＤ−１阻害薬または療法などの１つ以上のチェックポイント阻害療法及び／または免疫調節療法の有効性レベルと比較したとき、少なくとも１．５倍、少なくとも１．６倍、少なくとも１．７倍、少なくとも１．８倍、少なくとも１．９倍、少なくとも２．０倍、少なくとも２．１倍、少なくとも２．１５倍、少なくとも２．２倍、少なくとも２．２５倍、少なくとも２．３倍、少なくとも２．３５倍、少なくとも２．４倍、少なくとも２．４５倍、少なくとも２．５倍、少なくとも２．５５倍、少なくとも３．０倍、少なくとも３．５倍、少なくとも４．０倍、少なくとも４．５倍、少なくとも５．０倍、少なくとも５．５倍、少なくとも６．０倍、少なくとも６．５倍、少なくとも７．０倍、少なくとも７．５倍、少なくとも８．０倍、少なくとも８．５倍、少なくとも９．０倍、少なくとも９．５倍、または少なくとも１０倍増大させることができる。
【０３６９】
化学療法剤の増大した有効性
いくつかの実施形態において、本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示のアンタゴニスト抗ＣＤ３３抗体は、ゲムシタビン、カペシタビン、アントラサイクリン、ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標））、エピルビシン（Ｅｌｌｅｎｃｅ（登録商標））、タキサン、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標））及び／またはカルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））などの１つ以上の化学療法剤の有効性を増大させることができる。
【０３７０】
いくつかの実施形態において、ＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体は、１つ以上の化学療法剤の有効性を、該療法を１つ以上受けている対象において、例えば、該ＣＤ３３剤による治療を受けていない該療法の１つ以上を受けている対応する対象における、１つ以上の化学療法剤の有効性レベルと比較したとき、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１１０％、少なくとも１１５％、少なくとも１２０％、少なくとも１２５％、少なくとも１３０％、少なくとも１３５％、少なくとも１４０％、少なくとも１４５％、少なくとも１５０％、少なくとも１６０％、少なくとも１７０％、少なくとも１８０％、少なくとも１９０％、または少なくとも２００％増大させることができる。他の実施形態において、ＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体は、１つ以上の化学療法剤の有効性を、該療法を１つ以上受けている対象において、例えば、該ＣＤ３３剤による治療を受けていない該療法の１つ以上を受けている対応する対象における、１つ以上の化学療法剤の有効性レベルと比較したとき、少なくとも１．５倍、少なくとも１．６倍、少なくとも１．７倍、少なくとも１．８倍、少なくとも１．９倍、少なくとも２．０倍、少なくとも２．１倍、少なくとも２．１５倍、少なくとも２．２倍、少なくとも２．２５倍、少なくとも２．３倍、少なくとも２．３５倍、少なくとも２．４倍、少なくとも２．４５倍、少なくとも２．５倍、少なくとも２．５５倍、少なくとも３．０倍、少なくとも３．５倍、少なくとも４．０倍、少なくとも４．５倍、少なくとも５．０倍、少なくとも５．５倍、少なくとも６．０倍、少なくとも６．５倍、少なくとも７．０倍、少なくとも７．５倍、少なくとも８．０倍、少なくとも８．５倍、少なくとも９．０倍、少なくとも９．５倍、または少なくとも１０倍増大させることができる。
【０３７１】
医薬組成物
本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体は、抗ＣＤ３３抗体などの剤を適切な薬学的に許容される担体または希釈剤と組み合わせることによって、種々の治療投与向けの製剤に組み込むことができ、また、固体、半固体、液体または気体の各形態の製剤へと製剤化され得る。そのような製剤の例には、限定するものではないが、錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、軟膏剤、液剤、坐剤、注射剤、吸入剤、ゲル剤、ミクロスフェア及びエアゾール剤が挙げられる。医薬組成物は、所望の製剤に応じて、動物またはヒト投与のための医薬組成物を製剤化するために一般的に使用されるビヒクルである、薬学的に許容される無毒性の希釈剤の担体を含み得る。希釈剤は、その組み合わせの生物学的活性に影響を与えないように選択される。そのような希釈剤の例には、限定するものではないが、蒸留水、緩衝水、生理食塩水、ＰＢＳ、リンゲル液、ブドウ糖溶液及びハンクス液が挙げられる。本開示の医薬組成物または製剤は、他の担体、補助剤または非治療的無毒性非免疫原性安定剤、賦形剤などを更に含み得る。組成物はまた、生理学的条件に近似させるための更なる物質、例えば、ｐＨ調製剤及び緩衝剤、毒性調製剤、湿潤剤ならびに界面活性剤を含み得る。
【０３７２】
本開示の医薬組成物はまた、種々の安定化剤のうちのいずれか、例えば、抗酸化剤などを含み得る。医薬組成物がポリペプチドを含む場合、該ポリペプチドは、ポリペプチドのｉｎ  ｖｉｖｏ安定性を向上させるか、あるいはその薬理学的特性を向上させる（例えば、ポリペプチドの半減期を延長させる、その毒性を低減させる、また溶解性または取り込みを向上させる）種々の既知の化合物と複合化され得る。そのような修飾剤または錯化剤の例には、限定するものではないが、硫酸塩、グルコン酸塩、クエン酸塩及びリン酸塩が挙げられる。組成物のポリペプチドはまた、ｉｎ  ｖｉｖｏ属性を向上させる分子と複合化され得る。そのような分子には、限定するものではないが、炭水化物、ポリアミン，アミノ酸、他のペプチド、イオン（例えば、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、マンガン）及び脂質が含まれる。
【０３７３】
様々な種類の投与に適した製剤の更なる例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ，１７ｔｈ  ｅｄ．（１９８５）に見出すことができる。薬物送達のための方法の簡潔な論評については、Ｌａｎｇｅｒ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７−１５３３（１９９０）を参照されたい。
【０３７４】
経口投与の場合、有効成分は、カプセル剤、錠剤及び散剤などの固形製剤、またはエリキシル剤、シロップ剤及び懸濁剤などの液体製剤で投与することができる。有効成分（複数可）は、グルコース、ラクトース、スクロース、マンニトール、デンプン、セルロースまたはセルロース誘導体、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、サッカリンナトリウム、タルク、炭酸マグネシウムなどの不活性成分及び粉末状担体とともに、ゼラチンカプセルに封入することができる。所望の色、味、安定性、緩衝能、分散性または他の既知の所望の特徴をもたらすために添加され得る更なる不活性成分の例は、赤色酸化鉄、シリカゲル、ラウリル硫酸ナトリウム、二酸化チタン及び食用白色インクである。同様の希釈剤を使用して圧縮錠を作製することができる。錠剤及びカプセル剤の両方は、数時間にわたって薬剤の連続放出を提供する徐放性製品として製造することができる。圧縮錠は、任意の不快な味をマスキングし、錠剤を大気から保護するために糖衣もしくはフィルムコーティングが施され得、または胃腸管における選択的崩壊のために腸溶コーティングされ得る。経口投与用の液体製剤は、患者の許容性を高めるために、着色料及び矯味矯臭剤を含有し得る。
【０３７５】
非経口投与に好適な製剤には、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤及び製剤を対象のレシピエントの血液と等張にする溶質を含有し得る、水性及び非水性の等張性無菌注射剤と、懸濁化剤、可溶化剤、粘稠化剤、安定剤及び防腐剤を含み得る、水性及び非水性の無菌懸濁剤とが含まれる。
【０３７６】
医薬組成物を製剤化するために使用される成分は、好ましくは高純度のものであり、潜在的に有害な汚染物質を実質的に含まない（例えば、少なくとも国民食（ＮＦ）グレード、一般には少なくとも分析グレード、より典型的には少なくとも医薬品グレード）。更に、ｉｎ  ｖｉｖｏ使用を意図した組成物は、通常無菌である。所与の化合物を使用前に合成する必要がある場合には、得られる生成物は、典型的に、その合成または精製プロセス中に存在し得る、潜在的に有毒ないずれの作用物質、特に、あらゆる内毒素を実質的に含まない。非経口投与用の組成物もまた、無菌であり、実質的に等張であり、ＧＭＰ条件下で作製される。
【０３７７】
製剤は、脳または中枢神経系で保持され、安定化するように最適化され得る。剤が頭蓋区画内に投与される場合、その剤がその区画内に保持され、拡散せず、または拡散しても血液脳関門を通過しないことが望ましい。安定化技法には、分子量の増加を達成するために、架橋、多量体化、またはポリエチレングリコール、ポリアクリルアミド、中性タンパク質担体などの基への連結が含まれる。
【０３７８】
保持を増加させるための他の方策には、本開示の薬剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体などを生分解性または生体浸食性インプラント中に封じ込めることが含まれる。治療的活性剤の放出速度は、ポリマーマトリックスを介した輸送速度及びインプラントの生分解速度によって制御される。ポリマーバリアを通過する薬物の輸送はまた、化合物の溶解性、ポリマーの親水性、ポリマーの架橋度、ポリマーバリアの薬物に対する透過性を高めるような吸水時のポリマーの膨張、インプラントの形状などにより影響を受ける。インプラントは、埋込部位として選択された領域の大きさ及び形状に相応する寸法のものである。インプラントは、粒子、シート、パッチ、プレート、繊維、マイクロカプセルなどであってよく、選択された挿入部位に適合する任意の大きさまたは形状であってよい。
【０３７９】
インプラントは、モノリシックであってよく、すなわち、活性物質がポリマーマトリックス全体に均一に分布されていてよく、またはカプセル化され得、この場合、活性剤のリザーバがポリマーマトリックスによってカプセル化される。採用されるポリマー組成物の選択は、投与部位、所望の治療期間、患者の耐性、治療対象の疾患の性質などによって変化する。ポリマーの特徴には、埋込部位での生分解性、目的の薬物との適合性、カプセル化の容易性、生理学的環境での半減期が含まれる。
【０３８０】
採用することができる生分解性ポリマー組成物は、分解されたときにモノマーなどの生理学的に許容される分解生成物を生じる、有機エステルまたはエーテルであり得る。無水物、アミド、オルトエステルなどを、単独でまたは他のモノマーと組み合わせて使用することができる。ポリマーは、縮合ポリマーである。ポリマーは、架橋されていても架橋されていなくてもよい。特に興味深いのは、ヒドロキシ脂肪族カルボン酸のポリマー、ホモポリマーまたはコポリマーのいずれか、及び多糖である。関心対象となるポリエステルには、Ｄ−乳酸、Ｌ−乳酸、ラセミ乳酸、グリコール酸、ポリカプロラクトン及びこれらの組み合わせのポリマーが含まれる。Ｌ−乳酸エステルまたはＤ−乳酸エステルを採用すると、ゆっくり生分解するポリマーが得られ、ラセミ体では分解が実質的に増大する。グリコール酸と乳酸のコポリマーは、生分解速度がグリコール酸の乳酸に対する比率により制御されることから特に興味深い。最も迅速に分解されるコポリマーは、ほぼ同量のグリコール酸と乳酸を有するものであり、いずれかのホモポリマーは、分解に対する抵抗性がより大きい。グリコール酸の乳酸に対する比率は、インプラントの脆性に影響し、大きい形状には、可撓性のより大きいインプラントが望ましい。関心対象となる多糖は、アルギン酸カルシウム及び官能化セルロースであり、特に、非水溶性であり分子量が約５ｋＤ〜５００ｋＤであることなどを特徴とするカルボキシメチルセルロースエステルである。生分解性ヒドロゲルを本開示のインプラントに採用してもよい。ヒドロゲルは、典型的に、液体を吸収する能力を特徴とするコポリマー材料である。採用することができる例示的な生分解性ヒドロゲルは、Ｈｅｌｌｅｒ  ｉｎ：Ｈｙｄｒｏｇｅｌｓ  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｎ．Ａ．Ｐｅｐｐｅｓ  ｅｄ．，Ｖｏｌ．ＩＩＩ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，Ｆｌａ．，１９８７，ｐｐ  １３７−１４９に記載されている。
【０３８１】
薬物の用量
本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体などを含有する本開示の医薬組成物は、既知の方法に従って、例えば、ボーラスとしてもしくはある期間にわたる連続注入による静脈内投与、筋肉内、腹腔内、脳髄内、頭蓋内、脊髄内、皮下、関節内、髄液内、髄腔内、経口、局所または吸入の各経路によって、ＣＤ３３剤での治療を必要とする個体、好ましくはヒトに投与することができる。
【０３８２】
本開示の医薬組成物の用量及び所望の薬物濃度は、想定される具体的な用途に応じて変化し得る。適切な用量または投与経路の決定は、十分に当業者の技術範囲内である。動物実験は、ヒト治療に対する有効量を決定するための信頼性の高い指針を提供する。有効量の種間スケーリングは、Ｍｏｒｄｅｎｔｉ，Ｊ．ａｎｄ  Ｃｈａｐｐｅｌｌ，Ｗ．“Ｔｈｅ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｓｐｅｃｉｅｓ  Ｓｃａｌｉｎｇ  ｉｎ  Ｔｏｘｉｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ，”  Ｉｎ  Ｔｏｘｉｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｎｅｗ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｙａｃｏｂｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｄｓ，Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  １９８９，ｐｐ．４２−４６に記載の原則に従って実施することができる。
【０３８３】
本開示のＣＤ３３剤のうちのいずれか、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体のうちのいずれかのｉｎ  ｖｉｖｏ投与について、通常の用量は、投与経路に応じて、１日あたり個体の体重１ｋｇあたり約１０ｎｇ〜約１００ｍｇ以上、好ましくは約１ｍｇ／ｋｇ／日〜１０ｍｇ／ｋｇ／日で変化し得る。数日またはそれより長い期間の反復投与について、治療は、治療される疾患、障害または状態の重症度に応じて、症状の所望の抑制が達成されるまで継続される。
【０３８４】
例示的な投薬レジメンは、約２ｍｇ／ｋｇの初回用量の本開示のＣＤ３３剤、例えば抗ＣＤ３３抗体などを投与し、続いて、約１ｍｇ／ｋｇの週１回の維持用量を隔週で投与することを含み得る。医師が達成しようとする薬物動態減衰のパターンに応じて、他の投薬レジメンが有用である場合もある。例えば、週１〜２１回の個体への投薬が本明細書において企図される。ある特定の実施形態において、約３μｇ／ｋｇ〜約２ｍｇ／ｋｇの範囲（約３μｇ／ｋｇ、約１０μｇ／ｋｇ、約３０μｇ／ｋｇ、約１００μｇ／ｋｇ、約３００μｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ及び約２／ｍｇ／ｋｇなど）での投薬を用いることができる。ある特定の実施形態において、投薬頻度は、１日３回、１日２回、１日１回、１日おきに１回、週１回、２週間に１回、４週間に１回、５週間に１回、６週間に１回、７週間に１回、８週間に１回、９週間に１回、１０週間に１回もしくは月１回、２ヶ月に１回、３ヶ月に１回またはそれ以上である。療法の経過は、従来の技法及びアッセイによって容易に観察される。投薬レジメンは、投与される抗ＣＤ３３抗体などのＣＤ３３剤を含め、使用される用量とは関係なく、経時的に変えてもよい。
【０３８５】
特定の抗ＣＤ３３抗体などの特定のＣＤ３３剤の用量は、抗ＣＤ３３抗体などのＣＤ３３剤の投与を１回以上受けている個体で経験的に決定され得る。抗ＣＤ３３抗体などのＣＤ３３剤の漸増用量が個体に投与される。抗ＣＤ３３抗体などのＣＤ３３剤の有効性を評価するために、本開示の疾患、障害または状態（例えば、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、発作、網膜ジストロフィー、外傷性脳損傷、脊髄損傷、長期抑圧、アテローム動脈硬化性血管疾患及び正常老化の望しくない症状）のうちのいずれかの臨床症状が観察され得る。
【０３８６】
本開示の抗ＣＤ３３抗体などのＣＤ３３剤の投与は、例えば、レシピエントの生理学的状態、投与の目的が治療的であるか予防的であるか、及び当業者に既知の他の因子に応じて、連続的または断続的であり得る。抗ＣＤ３３抗体などのＣＤ３３剤の投与は、予め選択された期間にわたって本質的に連続的になされてもよいし、一連の間隔を空けた投与であってもよい。
【０３８７】
具体的な用量及び送達の方法に関する指針は、文献に提供されており、例えば、米国特許第４，６５７，７６０号；同第５，２０６，３４４号；または同第５，２２５，２１２号を参照されたい。異なる処方が異なる治療及び異なる疾患に有効であり、特定の器官または組織の治療を意図した投与が別の器官または組織への投与とは異なる方法で送達される必要があり得ることは、本開示の範囲内である。更に、用量は、１回以上の別個の投与によって、または連続注入によって投与され得る。数日またはそれより長い期間の反復投与について、治療は、状態に応じて、疾患症状の所望の抑制が生じるまで継続される。しかしながら、他の投薬レジメンが有用な場合もある。この療法の経過は、従来の技法及びアッセイによって容易に観察される。
【０３８８】
治療用途
本開示の更なる態様は、個体における１つ以上のＣＤ３３活性を調節する（例えば、活性化させるまたは阻害する）ために、治療上有効な量の本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体などを個体に投与することによって、１つ以上のＣＤ３３活性を調節する（例えば、活性化させるまたは阻害する）方法を提供し、限定するものではないが、それを必要とする対象において、本開示のＣＤ３３タンパク質、チロシン特異的タンパク質ホスファターゼＳＨＰ１及びＳＨＰ２の動員及び結合を調節する（例えば、活性化させるまたは阻害する）こと、Ｄｙｎａｍｉｎｉ−１に対するグアニンヌクレオチド交換因子として機能するＰＬＣ−γの動員及び結合を調節する（例えば、活性化させるまたは阻害する）こと、ＳＨ２ドメイン含有タンパク質Ｃｒｋｌの動員及び結合を調節する（例えば、活性化させるまたは阻害する）こと、ＳＨ３−ＳＨ２−ＳＨ３成長因子受容体結合タンパク質２（Ｇｒｂ２）の動員及び結合を調節する（例えば、活性化させるまたは阻害する）こと、複数のＳＨ２含有タンパク質の動員及び結合を調節する（例えば、活性化させるまたは阻害する）こと、タンパク質キナーゼＣによるＳｅｒ−３０７及びＳｅｒ−３４２のリン酸化を調節する（例えば、活性化させるまたは阻害する）こと、癌原遺伝子ｃ−Ｃｂｌ、Ｖａｖ及びＳｙｋとの会合及びその活性化を調節する（例えば、活性化させるまたは阻害する）こと、ＣＤ３３自体及びレチノイン酸誘導型遺伝子のＣｂｌ依存性ユビキチン化及びプロテオソーム分解を調節する（例えば、活性化させるまたは阻害する）こと、細胞内カルシウム動員を調節する（例えば、活性化させるまたは阻害する）こと、炎症促進性サイトカインＩＬ−１β、ＩＬ−８及びＴＮＦ−αの産生、ホスホイノシチド３−キナーゼの活性化を調節する（例えば、活性化させるまたは阻害する）こと、単球、マクロファージ、Ｔ細胞、好中球、ナチュラルキラー細胞、樹状細胞、腫瘍埋没免疫抑制性樹状細胞、腫瘍関連マクロファージ、骨髄由来サプレッサー細胞及び／または制御性Ｔ細胞及び／またはミクログリアの細胞成長を調節する（例えば、活性化させるまたは阻害する）こと、単球、マクロファージ、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、好中球、樹状細胞、腫瘍埋没免疫抑制性樹状細胞、免疫抑制性マクロファージ、骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ及び／または制御性Ｔ細胞及び／またはミクログリアの細胞死及びアポトーシスを調節する（例えば、活性化させるまたは阻害する）こと、複数の細胞タンパク質に対するチロシンリン酸化を調節する（例えば、活性化させるまたは阻害する）こと、単球、マクロファージ、樹状細胞及び／またはミクログリアの食作用を調節する（例えば、活性化させるまたは阻害する）こと、単球、マクロファージ、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、樹状細胞及び／またはミクログリアの増殖を調節する（例えば、活性化させるまたは阻害する）こと、単球、マクロファージ、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞好中球、樹状細胞、腫瘍埋没免疫抑制性樹状細胞、免疫抑制性マクロファージ、骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ、制御性Ｔ細胞及び／またはミクログリアの全体的機能を調節する（例えば、活性化させるまたは阻害する）こと、ＩＴＡＭ含有受容体のリン酸化を調節する（例えば、活性化させるまたは阻害する）こと、ＩＴＡＭシグナル伝達を媒介するシグナル伝達分子のリン酸化を調節する（例えば、活性化させるまたは阻害する）こと、パターン認識受容体の活性を調節する（例えば、活性化させるまたは阻害する）こと、Ｔｏｌｌ様受容体の活性を調節する（例えば、活性化させるまたは阻害する）こと、あるいは損傷関連分子パターン（ＤＡＭＰ）受容体の活性を調節する（例えば、活性化させるまたは阻害する）ことを含む。
【０３８９】
本明細書で開示されるように、ＣＤ３３の細胞レベルを低下させ、かつ／またはＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンドとの間の相互作用を阻害する本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウパチー病、那須・ハコラ病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、ループス、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満症、マラリア、本態性振戦、中枢神経系ループス、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫性疾患、サルコイドーシス、加齢に伴う病気、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身性感染症、ループス、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨のパジェット病、ならびに癌、例えば、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性赤血球増加症、本態性血小板血症、原発性もしくは特発性骨髄線維症、原発性もしくは特発性骨髄硬化症、骨髄由来腫瘍、ＣＤ３３を発現する腫瘍、甲状腺癌、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルージ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、Ｉ型ＨＩＶ、ならびに／またはインフルエンザ菌を予防し、リスクを低下させ、または治療するために使用することができる。いくつかの実施形態において、該剤は、抗体、可溶性ＣＤ３３受容体、ＣＤ３３−Ｆｃ融合タンパク質、ＣＤ３３イムノアドヘシン、１つ以上のＣＤ３３リガンドと結合する可溶性Ｓｉｇｌｅｃ受容体、Ｓｉｇｌｅｃ−Ｆｃ融合タンパク質、Ｓｉｇｌｅｃイムノアドヘシン、アンチセンス分子、ｓｉＲＮＡ、小分子阻害剤、タンパク質及びペプチドから選択される。いくつかの実施形態において、該ＣＤ３３剤は、アゴニスト抗体である。いくつかの実施形態において、該ＣＤ３３剤は、不活性抗体である。いくつかの実施形態において、該ＣＤ３３剤は、アンタゴニスト抗体である。
【０３９０】
いくつかの実施形態において、本開示は、ＣＤ３３の細胞レベルを低下させ、ＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンドとの間の相互作用を阻害し、またはその両方を行う、治療上有効な量の本開示の薬剤を、それを必要とする個体に投与することによって、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウパチー病、那須・ハコラ病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、ループス、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満症、マラリア、本態性振戦、中枢神経系ループス、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫性疾患、サルコイドーシス、加齢に伴う病気、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身性感染症、ループス、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨のパジェット病、癌、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性赤血球増加症、本態性血小板血症、原発性もしくは特発性骨髄線維症、原発性もしくは特発性骨髄硬化症、骨髄由来腫瘍、ＣＤ３３を発現する腫瘍、甲状腺癌、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルージ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、Ｉ型ＨＩＶ、ならびに／またはインフルエンザ菌を予防し、リスクを低下させ、または治療する方法を提供する。いくつかの実施形態において、該薬剤は、抗体、可溶性ＣＤ３３受容体、ＣＤ３３−Ｆｃ融合タンパク質、ＣＤ３３イムノアドヘシン、１つ以上のＣＤ３３リガンドに結合する可溶性Ｓｉｇｌｅｃ受容体、Ｓｉｇｌｅｃ−Ｆｃ融合タンパク質、Ｓｉｇｌｅｃイムノアドヘシン、アンチセンス分子、ｓｉＲＮＡ、小分子阻害剤、タンパク質及びペプチドから選択される。いくつかの実施形態において、該薬剤は、本開示の抗ＣＤ３３抗体である。
【０３９１】
いくつかの実施形態において、本開示は、ＣＤ３３の細胞レベルを低下させ、ＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンドとの間の相互作用を阻害し、またはその両方を行う、治療上有効な量の本開示の薬剤を、それを必要とする個体に投与することによって、癌を予防し、リスクを低下させ、または治療する方法を提供する。いくつかの実施形態において、該薬剤は、抗体、可溶性ＣＤ３３受容体、ＣＤ３３−Ｆｃ融合タンパク質、ＣＤ３３イムノアドヘシン、１つ以上のＣＤ３３リガンドに結合する可溶性Ｓｉｇｌｅｃ受容体、Ｓｉｇｌｅｃ−Ｆｃ融合タンパク質、Ｓｉｇｌｅｃイムノアドヘシン、アンチセンス分子、ｓｉＲＮＡ、小分子阻害剤、タンパク質及びペプチドからなる群から選択される。ある特定の実施形態において、該薬剤は、本開示の抗ＣＤ３３抗体である。いくつかの実施形態において、該薬剤は、以下から選択される１つ以上のＣＤ３３活性を阻害する：（ａ）免疫抑制性樹状細胞、免疫抑制性マクロファージ、免疫抑制性好中球、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ、非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞及び制御性Ｔ細胞のうちの１つ以上の増殖、成熟、遊走、分化及び／または機能性を促進すること、（ｂ）免疫抑制性樹状細胞、免疫抑制性マクロファージ、免疫抑制性好中球、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ及び制御性Ｔ細胞のうちの１つ以上の腫瘍への浸潤を増大させること、（ｃ）末梢血または他のリンパ器官の腫瘍における腫瘍促進性骨髄／顆粒球免疫抑制性細胞及び／または非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞の数を増加させること、（ｄ）非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞及び／または非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞の腫瘍促進活性を増大させること、（ｅ）腫瘍または末梢血中における腫瘍促進性サイトカインの発現を増加させること（任意に、腫瘍促進性サイトカインはＴＧＦ−βまたはＩＬ−１０である）、（ｆ）腫瘍促進性ＦｏｘＰ３＋制御性Ｔリンパ球の腫瘍浸潤を増加させること、（ｇ）腫瘍殺傷能力を有する腫瘍特異的Ｔリンパ球の活性化を低下させること、（ｈ）腫瘍殺傷能力を有する腫瘍特異的Ｔリンパ球の浸潤を減少させること、（ｉ）腫瘍殺傷能力を有する腫瘍特異的ＮＫ細胞の浸潤を減少させること、（ｊ）ＮＫ細胞の腫瘍殺傷能力を低下させること、（ｋ）免疫応答を向上させる能力がある腫瘍特異的Ｂリンパ球の浸潤を減少させること、（ｌ）腫瘍体積を増加させること、（ｍ）腫瘍成長率を増大させること、（ｎ）転移を増加させること、（ｏ）腫瘍再発率を上げること、（ｐ）１つ以上のＰＤ−１リガンドの発現を増加させること、（ｑ）抗腫瘍Ｔ細胞応答を調節する１つ以上の免疫療法の有効性を低下させること（任意に、１つ以上の免疫療法は、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ３、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ、ＤＲ−５、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、ＣＳＦ−１受容体及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される１つ以上のタンパク質を標的にする免疫療法であるか、１つ以上の癌ワクチンの���疫療法である）、（ｒ）ＰＬＣγ／ＰＫＣ／カルシウム動員を阻害すること、（ｓ）ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ、Ｒａｓ／ＭＡＰＫシグナル伝達を阻害すること、ならびに（ｔ）１つ以上の化学療法剤の有効性を低下させること（任意に、化学療法剤のうちの１つは、ゲムシタビン、カペシタビン、アントラサイクリン、ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標））、エピルビシン（Ｅｌｌｅｎｃｅ（登録商標））、タキサン、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標））、カルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））及びこれらの任意の組み合わせである）。いくつかの実施形態において、該薬剤は、以下から選択される１つ以上の活性を呈する：（ａ）腫瘍浸潤ＣＤ３＋Ｔ細胞の数を増加させること、（ｂ）非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞において、ＣＤ３３の細胞レベルを低下させること（任意に、該非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞は腫瘍浸潤細胞であるか、任意に、非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞は血中に存在する）、（ｃ）非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞の数を減少させること（任意に、該非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞は腫瘍浸潤細胞であるか、任意に、非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞は血中に存在する）、（ｄ）１つ以上の細胞において、ＰＤ−Ｌ１レベルを低下させること（任意に、該１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である）、（ｅ）１つ以上の細胞において、ＰＤ−Ｌ２レベルを低下させること（任意に、該１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である）、（ｆ）１つ以上の細胞において、Ｂ７−Ｈ２レベルを低下させること（任意に、該１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である）、（ｇ）１つ以上の細胞において、Ｂ７−Ｈ３レベルを低下させること（任意に、該１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である）、（ｈ）１つ以上の細胞において、ＣＤ２００Ｒレベルを低下させること（任意に、該１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である）、（ｉ）１つ以上の細胞において、ＣＤ１６３レベルを低下させること（任意に、該１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である）、（ｊ）１つ以上の細胞において、ＣＤ２０６レベルを低下させること（任意に、該１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である）、（ｋ）固形腫瘍の腫瘍成長率を下げること、（ｌ）腫瘍体積を低減させること、（ｍ）１つ以上のＰＤ−１阻害剤の有効性を増加させること、（ｎ）１つ以上のチェックポイント阻害療法及び／または免疫調節療法の有効性を増大させること（任意に、該１つ以上のチェックポイント阻害療法及び／または免疫調節療法は、ＣＴＬ４、アデノシン経路、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＯＸ４０、ＴＩＭ３、ＬＡＧ３またはこれらの任意の組み合わせのうちの１つ以上を標的にする）、（ｏ）１つ以上の化学療法剤の有効性を増大させること（任意に、該化学療法剤のうちの１つ��上は、ゲムシタビン、カペシタビン、アントラサイクリン、ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標））、エピルビシン（Ｅｌｌｅｎｃｅ（登録商標））、タキサン、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標））、カルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））及びこれらの任意の組み合わせである）（ｐ）非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の存在下でＴ細胞の増殖を増加させること、ならびに（ｑ）非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の分化、生存及び／または１つ以上の機能を阻害すること、ならびに（ｒ）化学的または放射性毒素に複合化されている場合、固形腫瘍及び関連する血管中のＣＤ３３発現免疫抑制性骨髄細胞及び／またはＣＤ１４発現細胞を殺傷すること。
【０３９２】
本明細書で開示されるように、本開示の薬剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体は、１つ以上の免疫細胞（例えば、自然免疫細胞または適応免疫細胞）の生存  成熟、機能性、遊走または増殖を誘導及び／または促進するためにも使用することができる。いくつかの実施形態において、本開示は、ＣＤ３３の細胞レベルの低下、ＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンドとの間の相互作用の阻害、またはその両方をもたらす治療上有効な量の本開示の薬剤を個体に投与することによって、それを必要とする個体において、１つ以上の免疫細胞の生存、成熟、機能性、遊走または増殖を誘発し、または促進する方法を提供する。いくつかの実施形態において、該薬剤は、抗体、可溶性ＣＤ３３受容体、ＣＤ３３−Ｆｃ融合タンパク質、ＣＤ３３イムノアドヘシン、１つ以上のＣＤ３３リガンドと結合する可溶性Ｓｉｇｌｅｃ受容体、Ｓｉｇｌｅｃ−Ｆｃ融合タンパク質、Ｓｉｇｌｅｃイムノアドヘシン、アンチセンス分子、ｓｉＲＮＡ、小分子阻害剤、タンパク質及びペプチドからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、該薬剤は、本開示の単離された抗ＣＤ３３抗体である。いくつかの実施形態において、１つ以上の免疫細胞は、樹状細胞、マクロファージ、ミクログリア、好中球、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、及びこれらの任意の組み合わせから選択される。
【０３９３】
いくつかの実施形態において、該薬剤は、アゴニスト抗ＣＤ３３抗体である。いくつかの実施形態において、該薬剤は、最初はアゴニストとして作用し、次いで長期アンタゴニスト抗体として作用する、本開示の一過性アゴニスト抗ＣＤ３３抗体である。いくつかの実施形態において、該薬剤は、不活性抗ＣＤ３３抗体である。いくつかの実施形態において、該薬剤は、アンタゴニスト抗ＣＤ３３抗体である。いくつかの実施形態において、該抗ＣＤ３３抗体は、ＣＤ３３の細胞（例えば、細胞表面、細胞内または合計）レベルを低下させる。いくつかの実施形態において、該抗ＣＤ３３抗体は、ＣＤ３３の分解を誘導する。いくつかの実施形態において、該抗ＣＤ３３抗体は、ＣＤ３３の切断を誘導する。いくつかの実施形態において、該抗ＣＤ３３抗体は、ＣＤ３３の内在化を誘導する。いくつかの実施形態において、該抗ＣＤ３３抗体は、ＣＤ３３の放出（ｓｈｅｄｄｉｎｇ）を誘導する。いくつかの実施形態において、該抗ＣＤ３３抗体は、ＣＤ３３発現の下方制御を誘導する。いくつかの実施形態において、該抗ＣＤ３３抗体は、ＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンドとの間の相互作用（例えば、結合）を阻害する。いくつかの実施形態において、該抗ＣＤ３３抗体は、ＣＤ３３を一時的に活性化し、次いで、その分解を誘導する。いくつかの実施形態において、該抗ＣＤ３３抗体は、ＣＤ３３を一時的に活性化し、次いで、その切断を誘導する。いくつかの実施形態において、該抗ＣＤ３３抗体は、ＣＤ３３を一時的に活性化し、次いで、ＣＤ３３の内在化を誘導する。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ３３抗体は、ＣＤ３３を一時的に活性化し、次いで、その放出を誘導する。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ３３抗体は、ＣＤ３３を一時的に活性化し、次いで、その発現の下方制御を誘導する。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ３３抗体は、ＣＤ３３を一時的に活性化し、次いで、その低下した発現を誘導する。ある特定の実施形態において、個体は、一塩基多型（ＳＮＰ）ｒｓ３８６５４４４  ＣＣまたはＡＣを有するＣＤ３３バリアント対立遺伝子を有する。ある特定の実施形態において、個体は、一塩基多型（ＳＮＰ）２４５９４１９  ＣＣまたはＣＴを有するＣＤ３３バリアント対立遺伝子を有する。
【０３９４】
本明細書で開示されるように、ＣＤ３３と結合し、またはＣＤ３３と相互作用する本開示の薬剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体は、更に、制御性Ｔ細胞、腫瘍埋没免疫抑制性樹状細胞、腫瘍埋没免疫抑制性マクロファージ、骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）細胞及び／または慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）細胞の活性、機能性または生存を低下させるために使用することができる。いくつかの実施形態において、本開示は、ＣＤ３３と結合し、またはＣＤ３３と相互作用する薬剤の治療上有効な量を個体に投与することによって、それを必要とする個体において、制御性Ｔ細胞、腫瘍埋没免疫抑制性樹状細胞、腫瘍埋没免疫抑制性マクロファージ、骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）細胞または慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）細胞の活性、機能性または生存を低下させる方法を提供する。いくつかの実施形態において、該薬剤は、抗体、アンタゴニスト抗体、不活性抗体、アゴニスト抗体、ＣＤ３３リガンド、ＣＤ３３リガンドアゴニスト断片、ＣＤ３３イムノアドヘシン、ＣＤ３３リガンド模倣体、可溶性ＣＤ３３受容体、ＣＤ３３−Ｆｃ融合タンパク質、１つ以上のＣＤ３３リガンドと結合する可溶性Ｓｉｇｌｅｃ受容体、１つ以上のＣＤ３３リガンドと結合するＳｉｇｌｅｃ−Ｆｃ融合タンパク質、及び小分子化合物から選択される。いくつかの実施形態において、該薬剤は、本開示の単離された抗ＣＤ３３抗体または抗ＣＤ３３抗体複合体である。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ３３抗体複合体は、検出可能なマーカー、毒素または治療薬に複合化された抗ＣＤ３３抗体を含む。
【０３９５】
本明細書で開示されるように、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、１つ以上の細胞におけるＣＤ３３の細胞レベルの低下、ＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンドとの間の相互作用の阻害、またはその両方をｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏでもたらすために使用することができる。いくつかの実施形態において、本開示は、治療上有効な量の本開示の単離された抗ＣＤ３３抗体を個体に投与することによって、それを必要とする個体において、１つ以上の細胞におけるＣＤ３３の細胞レベルの低下、ＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンドとの間の相互作用の阻害、またはその両方をもたらす方法を提供する。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ３３抗体は、ｉｎ  ｖｉｖｏで、ＣＤ３３の細胞レベルを低下させる。
【０３９６】
本明細書で開示されるように、本開示の抗ＣＤ３３抗体は、限定するものではないが、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、ミクログリア、Ｔ細胞及びマクロファージならびに／または細胞株を含む１つ以上の細胞におけるＣＤ３３の細胞レベルを低下させるために使用することができる。いくつかの実施形態において、本開示は、治療上有効な量の本開示の抗ＣＤ３３抗体を個体に投与することによって、それを必要とする個体において、１つ以上の細胞におけるＣＤ３３の細胞レベルを低下させる方法を提供する。いくつかの実施形態において、該１つ以上の細胞は、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、ミクログリア、Ｔ細胞及びマクロファージならびにこれらの任意の組み合わせから選択される。いくつかの実施形態において、該抗ＣＤ３３抗体は、ｉｎ  ｖｉｖｏで、ＣＤ３３の細胞レベルを低下させる。ＣＤ３３の細胞レベルは、限定するものではないが、ＣＤ３３の細胞表面レベル、ＣＤ３３の細胞内レベル及びＣＤ３３の合計レベルを指し得る。いくつかの実施形態において、ＣＤ３３の細胞レベルの低下は、ＣＤ３３の細胞表面レベルの低下を含む。本明細書で使用されるとき、ＣＤ３３の細胞表面レベルは、本明細書に記載されるまたは当該技術分野にて知られている任意のｉｎ  ｖｉｔｒｏセルベースアッセイまたは好適なｉｎ  ｖｉｖｏモデルによって測定することができる。いくつかの実施形態において、ＣＤ３３の細胞レベルの低下は、ＣＤ３３の細胞内レベルの低下を含む。本明細書で使用されるとき、ＣＤ３３の細胞内レベルは、本明細書に記載されるまたは当該技術分野にて知られている任意のｉｎ  ｖｉｔｒｏセルベースアッセイまたは好適なｉｎ  ｖｉｖｏモデルによって測定することができる。いくつかの実施形態において、ＣＤ３３の細胞レベルの低下は、ＣＤ３３の合計レベルの低下を含む。本明細書で使用されるとき、ＣＤ３３の合計レベルは、本明細書に記載されるまたは当該技術分野にて知られている任意のｉｎ  ｖｉｔｒｏセルベースアッセイまたは好適なｉｎ  ｖｉｖｏモデルによって測定することができる。いくつかの実施形態において、該抗ＣＤ３３抗体は、ＣＤ３３分解、ＣＤ３３切断、ＣＤ３３内在化、ＣＤ３３放出及び／またはＣＤ３３発現の下方制御を誘導する。いくつかの実施形態において、ＣＤ３３の細胞レベルは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏセルアッセイを利用して、初代細胞（例えば、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、ミクログリア、Ｔ細胞及びマクロファージ）または細胞株にて測定される。
【０３９７】
本開示の他の態様は、ＣＤ３３と結合し、またはＣＤ３３と相互作用する薬剤剤による治療のために、それを必要とする対象を選択する方法に関し、該方法は、ａ．対象から試料（例えば、血液試料）を得ること、ｂ．対象中に存在するＣＤ３３対立遺伝子を検出すること、ｃ．ＣＤ３３と結合し、またはＣＤ３３と相互作用する剤による治療のために対象を選択することは、該対象が１つ以上のＣＤ３３対立遺伝子を有することであり、ここで、該１つ以上のＣＤ３３対立遺伝子は、ｒｓ３８６５４４４ＡＣ及びｒｓ３８６５４４４ＣＣからなる群から選択されることを含む。本開示の他の態様は、ＣＤ３３と結合し、またはＣＤ３３と相互作用する薬剤に対する、それを必要とする対象の応答性を評価する方法に関し、該方法は、ａ．抗ＣＤ３３抗体を対象に投与する前に、対象から得た血液試料中の非腫瘍形成性骨髄細胞におけるＣＤ４５＋及びＣＤ１４＋の発現レベルを測定すること、ｂ．治療上有効な量の薬剤を該対象に投与すること、ｃ．該抗ＣＤ３３抗体の投与後に、該対象から得た血液試料中の非腫瘍形成性骨髄細胞におけるＣＤ４５＋及びＣＤ１４＋の発現レベルを測定し、ここで、該抗ＣＤ３３抗体の投与後の非腫瘍形成性骨髄細胞におけるＣＤ４５＋ＣＤ１４＋のレベル低下は、該対象が該薬剤に応答性であることを示すことを含む。血液試料などの試料を得るには、任意の好適な方法を使用することができる。更に、ＳＮＰ解析などの、ＣＤ３３バリアント及び／または対立遺伝子を検出する任意の既知の方法を使用できることが理解される。いくつかの実施形態において、応答性を評価する方法は、１つ以上の追加の治療上有効な量の該薬剤を投与することを更に含む。いくつかの実施形態において、該薬剤は、抗体、可溶性ＣＤ３３受容体、ＣＤ３３−Ｆｃ融合タンパク質、ＣＤ３３イムノアドヘシン、可溶性Ｓｉｇｌｅｃ受容体、Ｓｉｇｌｅｃ−Ｆｃ融合タンパク質、Ｓｉｇｌｅｃイムノアドヘシン、アンチセンス分子、ｓｉＲＮＡ、小分子阻害剤、タンパク質及びペプチドからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、該薬剤は、単離された抗ＣＤ３３抗体または抗ＣＤ３３抗体複合体である。いくつかの実施形態において、該抗ＣＤ３３抗体は、本開示の抗ＣＤ３３抗体である。いくつかの実施形態において、該対象はヒトである。
【０３９８】
いくつかの実施形態において、該個体は、ＣＤ３３のバリアントを有する。いくつかの実施形態において、該バリアントには、限定するものではないが、（ａ）ＳＮＰ  ｒｓ３８６５４４４ＡＣ、（ｂ）ＳＮＰ  ｒｓ３８６５４４４ＣＣ、（ｃ）ＳＮＰ  ｒｓ３５１１２９４０ＧＧ、ＡＡ、ＡＧ；及び（ｄ）ＳＮＰ  ｒｓ１２４５９４１９ＣＣ、ＣＴまたはＴＴ；及びこれらの任意の組み合わせから選択される１つ以上の多型が含まれる。
【０３９９】
いくつかの実施形態において、本開示の方法は、ＣＤ３３剤、例えば抗ＣＤ３３抗体または二重特異性抗ＣＤ３３抗体を、パターン認識受容体に結合する抗体、Ｔｏｌｌ様受容体に結合する抗体、損傷関連分子パターン（ＤＡＭＰ）受容体に結合する抗体、及び／またはサイトカインに結合する抗体もしくはインターロイキン）に結合する抗体と共投与することを更に含み得る。
【０４００】
いくつかの実施形態において、本開示の方法は、抑制性チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体、及び／または１つ以上の標準的もしくは試験的抗癌療法を該個体に施すことを更に含み得る。いくつかの実施形態において、該抑制性チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体は、該抗ＣＤ３３抗体と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態において、該抑制性チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ−Ｌ２抗体、抗ＰＤ−１抗体、抗Ｂ７−Ｈ３抗体、抗Ｂ７−Ｈ４抗体及び抗ＨＶＥＭ抗体、抗Ｂ及びＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）抗体、抗キラー細胞抑制受容体（ＫＩＲ）抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗ＴＩＭ３抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、抗ＬＡＧ−３抗体、抗ホスファチジルセリン抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＴＮＦａ抗体、抗Ｓｉｇｌｅｃ−５抗体、抗Ｓｉｇｌｅｃ−７抗体、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体、抗Ｓｉｇｌｅｃ−１１抗体、アンタゴニスト抗ＴＲＥＭ１抗体、アンタゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体、ならびにこれらの任意の組み合わせから選択される。いくつかの実施形態において、該１つ以上の標準的または試験的抗癌療法は、放射線療法、細胞傷害性化学療法、標的化療法、イマチニブ療法、トラスツズマブ療法、エタネルセプ療法、養子細胞移入（ＡＣＴ）療法、キメラ抗原受容体Ｔ細胞移入（ＣＡＲ−Ｔ）療法、ワクチン療法及びサイトカイン療法から選択される。
【０４０１】
いくつかの実施形態において、本開示の方法は、抑制性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１つの抗体を該個体に投与することを更に含み得る。いくつかの実施形態において、該抑制性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１つの抗体は、抗ＣＤ３３抗体などのＣＤ３３剤と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態において、該抑制性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１つの抗体は、抗ＣＣＬ２抗体、抗ＣＳＦ−１抗体、抗ＩＬ−２抗体及びこれらの任意の組み合わせから選択される。
【０４０２】
いくつかの実施形態において、本開示の方法は、刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する少なくとも１つのアゴニスト抗体を個体に投与することを更に含み得る。いくつかの実施形態において、該刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する少なくとも１つのアゴニスト抗体は、抗ＣＤ３３抗体などのＣＤ３３剤と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態において、該刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する少なくとも１つのアゴニスト抗体は、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体、アゴニスト抗ＯＸ４０抗体、アゴニスト抗ＩＣＯＳ抗体、アゴニスト抗ＣＤ２８抗体、アゴニスト抗ＴＲＥＭ１抗体、アゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体、アゴニスト抗ＣＤ１３７／４−１ＢＢ抗体、アゴニスト抗ＣＤ２７抗体、アゴニスト抗グルココルチコイド誘導性ＴＮＦＲ関連タンパク質ＧＩＴＲ抗体、及びこれらの任意の組み合わせから選択される。
【０４０３】
いくつかの実施形態において、本開示の方法は、少なくとも１つの刺激性サイトカインを個体に投与することを更に含む。いくつかの実施形態において、該少なくとも１つの刺激性サイトカインは、抗ＣＤ３３抗体などのＣＤ３３剤と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態において、該少なくとも１つの刺激性サイトカインは、ＩＦＮ−ａ４、ＩＦＮ−ｂ、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＬＩＦ、ＩＦＮ−ガンマ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＣＸＣＬ１０、ＩＬ−３３、ＣＲＰ、ＩＬ−３３、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１−ベータ、及びこれらの任意の組み合わせから選択される。
【０４０４】
いくつかの実施形態において、対象または個体は、哺乳動物である。哺乳動物には、限定するものではないが、飼育動物（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ及びウマ）、霊長類（例えば、ヒト及びサルなどの非ヒト霊長類）、ウサギ及び齧歯類（例えば、マウス及びラット）が含まれる。いくつかの実施形態において、該対象または個体は、ヒトである。
【０４０５】
認知症
【０４０６】
認知症は、これまでに障害のなかった人において、正常な老化から予想され得るものを越える全体的認知能力の重大な損失として現れる非特異的症候群（すなわち、一連の徴候及び症状）である。認知症は、固有の全体的な脳損傷の結果として、変化しないこともある。あるいは、認知症は、進行性である場合もあり、身体の損傷または疾患によって長期的な減退がもたらされる。認知症は、高齢者集団においてより多く一般的にみられるが、６５歳以前に発症することもある。認知症によって影響を受ける認知領域には、限定するものではないが、記憶、注意持続時間、言語及び問題解決が含まれる。一般に、個体が認知症と診断されるまでには、少なくとも６ヶ月間、症状が存在する必要がある。
【０４０７】
認知症の例示的な形態には、限定するものではないが、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、意味性認知症及びレビー小体型認知症が含まれる。
【０４０８】
いくつかの実施形態において、本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体などを投与することは、認知症を予防し、リスクを低下させ、及び／または治療することができる。いくつかの実施形態において、ＣＤ３３剤、例えば抗ＣＤ３３抗体などを投与することは、認知症を有する個体において、１つ以上のＣＤ３３活性を調節し得る。
【０４０９】
前頭側頭型認知症
前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）は、脳の前頭葉の進行性変性から生じる病状である。この変性は、時間の経過とともに側頭葉に進むことがある。罹患率では、ＦＴＤは、アルツハイマー病（ＡＤ）に次いで、初老年性認知症症例の２０％を占める。ＦＴＤの臨床的特徴には、記憶障害、行動異常、人格変化及び言語障害が含まれる（Ｃｒｕｔｓ，Ｍ．＆Ｖａｎ  Ｂｒｏｅｃｋｈｏｖｅｎ，Ｃ．，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｇｅｎｅｔ．２４：１８６−１９４（２００８）；Ｎｅａｒｙ，Ｄ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ５１：１５４６−１５５４（１９９８）；Ｒａｔｎａｖａｌｌｉ，Ｅ．，Ｂｒａｙｎｅ，Ｃ．，Ｄａｗｓｏｎ，Ｋ．＆Ｈｏｄｇｅｓ，Ｊ．Ｒ．，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ５８：１６１５−１６２１（２００２））。
【０４１０】
ＦＴＤ症例のかなりの部分が常染色体優性の様式で遺伝するが、症状は、たとえ１つの家族であっても、行動障害を伴うＦＴＤから、原発性進行性失語まで、大脳皮質基底核神経節変性症までの範囲にわたることがある。ＦＴＤは、ほとんどの神経変性疾患と同様に、罹患脳における特定のタンパク質凝集の病理学的存在によって特徴付けることができる。歴史的に、ＦＴＤに関する最初の記載は、神経原線維変化またはピック球における異常にリン酸化されたタウタンパク質の神経細胞内蓄積の存在を認めたものである。微小管関連タンパク質タウの因果的役割は、いくつかの家族において、タウタンパク質をコードする遺伝子の変異を特定することによって裏付けられた（Ｈｕｔｔｏｎ，Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３９３：７０２−７０５（１９９８）。しかしながら、ＦＴＤ脳の大部分は、異常にリン酸化されたタウの蓄積を示さず、ユビキチン（Ｕｂ）及びＴＡＲ  ＤＮＡ結合タンパク質（ＴＤＰ４３）に対して免疫反応性を示す（Ｎｅｕｍａｎｎ，Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｃｈ．Ｎｅｕｒｏｌ．６４：１３８８−１３９４（２００７））。Ｕｂ封入体（ＦＴＤ−Ｕ）を有するこれらのＦＴＤ症例の大部分は、プログラニュリン遺伝子に変異を持つことが示された。
【０４１１】
いくつかの実施形態において、本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体などを投与することは、ＦＴＤを予防し、リスクを低下させ、及び／または治療することができる。いくつかの実施形態において、ＣＤ３３剤、例えば抗ＣＤ３３抗体などを投与することは、ＦＴＤを有する個体において、１つ以上のＣＤ３３活性を調節し得る。
【０４１２】
アルツハイマー病
アルツハイマー病（ＡＤ）は、認知症の最も一般的な形態である。この疾患に治療法はなく、進行するにつれて悪化し、最終的には死に至る。ほとんどの場合、ＡＤは、６５歳を越えた人において診断される。しかしながら、あまり一般的ではない早期発症型のアルツハイマー病は、より早期に発症することがある。
【０４１３】
アルツハイマー病の一般的症状には、近時事象の想起困難などの行動症状、認知症状、混乱、易刺激性及び攻撃性、気分変動、言語障害ならびに長期の記憶喪失が含まれる。疾患が進行するにつれて、身体機能が失われ、最終的に死に至る。アルツハイマー病は、完全に明らかになるまでに未知の可変時間量で発症し、何年も診断未確定で進行する場合がある。
【０４１４】
いくつかの実施形態において、本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体などを投与することは、アルツハイマー病を予防し、リスクを低下させ、及び／または治療することができる。いくつかの実施形態において、ＣＤ３３剤、例えば抗ＣＤ３３抗体などを投与することは、アルツハイマー病を有する個体において、１つ以上のＣＤ３３活性を調節し得る。
【０４１５】
パーキンソン病
パーキンソン病は、特発性もしくは原発性パーキンソニズム低運動性硬直症候群（ＨＲＳ）、または振戦麻痺とも呼ばれることがあり、運動系制御に影響を与える神経変性脳障害である。脳内におけるドーパミン産生細胞の進行性死がパーキンソン病の腫瘍な症状を引き起こす。ほとんどの場合、パーキンソン病は、５０歳を越えた人において診断される。パーキンソン病は、ほとんどの人で特発性（原因不明）である。しかしながら、遺伝的要因がこの疾患にも関与している。
【０４１６】
パーキンソン病の症状には、限定するものではないが、手、腕、足、顎及び顔の振戦、四肢及び胴の筋強剛、運動の遅さ（運動緩慢）、姿勢反射障害、歩行困難、神経精神障害、発語または行動の変化、うつ病、不安、疼痛、精神病、認知症、幻覚ならびに睡眠問題が含まれる。
【０４１７】
いくつかの実施形態において、本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体などを投与することは、パーキンソン病を予防し、リスクを低下させ、及び／または治療することができる。いくつかの実施形態において、ＣＤ３３剤、例えば抗ＣＤ３３抗体などを投与することは、パーキンソン病を有する個体において、１つ以上のＣＤ３３活性を調節し得る。
【０４１８】
筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）
本明細書で使用されるとき、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）または運動ニューロン疾患またはルーゲーリッグ病は、互換的に使用され、急速に進行する筋力低下、筋萎縮及び線維束性収縮、筋痙縮、発話困難（構音障害）、嚥下困難（嚥下障害）ならびに呼吸困難（呼吸障害）を特徴とする様々な病因を有する消耗性疾患を指す。
【０４１９】
プログラニュリンがＡＬＳに関与し（Ｓｃｈｙｍｉｃｋ，ＪＣ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）Ｊ  Ｎｅｕｒｏｌ  Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ．；７８：７５４−６）、ＴＤＰ−４３などのタンパク質に起因するＡＬＳによって生じる損傷を再保護する（Ｌａｉｒｄ，ＡＳ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１０）．ＰＬｏＳ  ＯＮＥ  ５：ｅ１３３６８）ことが示されている。ｐｒｏ−ＮＧＦがｐ７５を介して脊髄損傷後の希突起膠細胞及び皮質脊髄ニューロンの死を誘導することも実証された（Ｂｅａｔｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｎ（２００２），３６，ｐｐ．３７５−３８６；Ｇｉｅｈｌ  ｅｔ  ａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ（２００４），１０１，ｐｐ  ６２２６−３０）。
【０４２０】
いくつかの実施形態において、本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体などを投与することは、ＡＬＳを予防し、リスクを低下させ、及び／または治療することができる。いくつかの実施形態において、ＣＤ３３剤、例えば抗ＣＤ３３抗体などを投与することは、筋萎縮性側索硬化症を有する個体において、１つ以上のＣＤ３３活性を調節し得る。
【０４２１】
ハンチントン病
ハンチントン病（ＨＤ）は、ハンチンチン遺伝子（ＨＴＴ）の常染色体優性変異によって引き起こされる遺伝性神経変性疾患である。ハンチンチン遺伝子内のサイトカイン−アデニン−グアニン（ＣＡＧ）のトリプレットリピートが増加すると、該遺伝子によってコードされたハンチンチンタンパク質（Ｈｔｔ）の変異体が産生される。この変異ハンチンチンタンパク質（ｍＨｔｔ）は、毒性であり、ニューロン死に関与する。ハンチントン病の症状は、３５〜４４歳の間に現れるのが最も一般的であるが、あらゆる年齢で発生し得る。
【０４２２】
ハンチントン病の症状には、限定するものではないが、運動機能障害、発作様不規則運動（舞踏運動）、異常な眼球運動、バランス障害、発作、咀嚼困難、嚥下困難、認知障害、発語変化、記憶障害、思考困難、不眠、疲労、認知症、人格変化、うつ病、不安及び強迫的行動が含まれる。
【０４２３】
いくつかの実施形態において、本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体などを投与することは、ハンチントン病（ＨＤ）を予防し、リスクを低下させ、及び／または治療することができる。いくつかの実施形態において、ＣＤ３３剤、例えば抗ＣＤ３３抗体などを投与することは、ハンチントン病を有する個体において、１つ以上のＣＤ３３活性を調節し得る。
【０４２４】
タウパチー病
タウパチー病またはタウオパチーは、脳内における微小管関連タンパク質タウの凝集によって引き起こされる神経変性疾患の一種である。アルツハイマー病（ＡＤ）が最もよく知られたタウパチー病であり、タウタンパク質がニューロン内で不溶性神経原線維変化（ＮＦＴ）の形態で蓄積することを伴う。他のタウパチー病及び障害には、進行性核上性麻痺、ボクサー認知症（慢性外傷性脳症）、染色体１７に連鎖する前頭側頭型認知症パーキンソニズム、Ｌｙｔｉｃｏ−Ｂｏｄｉｇ病（グアムのパーキンソン−認知症複合症候群）、神経原線維変化優性認知症、神経節膠腫及び神経節細胞腫、髄膜血管腫症、亜急性硬化性全脳炎、鉛脳症、結節性硬化症、ハレルフォルデン・スパッツ病、リポフスチン症、ピック病、皮質基底核変性症、嗜銀顆粒病（ＡＧＤ）、ハンチントン病、ならびに前頭側頭葉変性症が含まれる。
【０４２５】
いくつかの実施形態において、本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体などを投与することは、タウパチー病を予防し、リスクを低下させ、及び／または治療することができる。いくつかの実施形態において、ＣＤ３３剤、例えば抗ＣＤ３３抗体などを投与することは、タウパチー病を有する個体において、１つ以上のＣＤ３３活性を調節し得る。
【０４２６】
多発性硬化症
多発性硬化症（ＭＳ）は、散在性硬化症または散在性脳脊髄炎と呼ばれることもある。ＭＳは、脳及び脊髄の軸索を覆う脂質性ミエリン鞘が損傷を受けて、脱髄及び瘢痕化ならびに広範な徴候及び症状が生じる炎症性疾患である。ＭＳは、脳及び脊髄の神経細胞が互いに有効的に情報伝達を行う能力に影響を及ぼす。神経細胞は、ミエリンと呼ばれる絶縁性物質内にある軸索と呼ばれる長い線維に沿って活動電位と呼ばれる電気信号を送ることによって情報を伝達している。ＭＳでは、身体自体の免疫系がミエリンを攻撃し、損傷を与える。ミエリンが失われると、軸索は、シグナル伝達を有効的に行うことができなくなる。ＭＳ発症は、通常、若年成人で起こり、女性でより一般的である。
【０４２７】
ＭＳの症状には、限定するものではないが、感覚欠如または打診痛などの感覚変化、感覚減退及び感覚異常などの刺痛またはしびれ感、筋力低下、クローヌス、筋発作、移動困難、運動失調などの協調及びバランス困難、構音障害などの発語障害または嚥下障害などの嚥下困難、眼振、視神経炎（眼閃を含む）及び複視などの視覚問題、疲労、急性もしくは慢性の疼痛、ならびに膀胱及び腸管障害、様々な程度の認知障害、うつ病または気分不安定の感情症状、通常の周辺温度よりも高い温度に曝されることにより現存する症状が憎悪するウートホフ現象、ならびに頸部を曲げると背中から下方に電気が走ったような感覚があるレルミット徴候が含まれる。
【０４２８】
いくつかの実施形態において、本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体などを投与することは、多発性硬化症を予防し、リスクを低下させ、及び／または治療することができる。いくつかの実施形態において、ＣＤ３３剤、例えば抗ＣＤ３３抗体などを投与することは、多発性硬化症を有する個体において、１つ以上のＣＤ３３活性を調節し得る。
【０４２９】
癌
本開示の更なる態様は、治療上有効な量の本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示の単離された抗ＣＤ３３抗体などを、それを必要とする個体に投与することによって、癌を予防し、リスクを低下させ、または治療する方法を提供する。本開示の単離された抗体はいずれも、これらの方法で使用することができる。いくつかの実施形態において、該単離された抗体は、本開示のアゴニスト抗体である。他の実施形態において、該単離された抗体は、本開示のアンタゴニスト抗体である。他の実施形態において、該単離された抗体は、本開示の不活性抗体である。他の実施形態において、該単離された抗体は、本開示の抗体複合体である。
【０４３０】
本明細書で開示されるように、腫瘍微小環境は、Ｔリンパ球、マクロファージ及び骨髄／顆粒球系統の細胞を含む不均質な免疫浸潤を含有することが知られている。腫瘍中の制御性Ｔ細胞、腫瘍埋没免疫抑制性骨髄細胞及び／またはＭ２−マクロファージの存在及び活性は、予後不良に関連する。対照的に、細胞傷害性Ｔ細胞の存在及び活性は、癌療法に有益である。細胞傷害性Ｔ細胞の活性を直接的または間接的に向上させ、様々な免疫抑制性細胞の数及び活性を低下させる療法は、大きな治療上の利益をもたらすことが期待される。重要な前臨床試験では、免疫抑制性細胞を標的にする薬物（例えば、ＣＳＦ１／ＣＳＦ１Ｒ遮断抗体）と、細胞傷害性Ｔ細胞を活性化する免疫チェックポイント遮断抗体との間の相乗効果が示されており、これは、個々の療法が十分に効果的でない腫瘍モデルにおいて、両方の細胞種を操作することが効果的であることを示唆している（Ｚｈｕ  Ｙ；Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２０１４  Ｓｅｐ  １５；７４（１８）：５０５７−６９）。したがって、いくつかの実施形態において、骨髄細胞、Ｔ細胞のサブセット及び腫瘍関連免疫細胞上に発現しているＣＤ３３を遮断することは、有益な抗腫瘍免疫応答を刺激し、これにより治療上の抗腫瘍免疫応答をもたらすことができる。
【０４３１】
いくつかの実施形態において、癌を予防し、リスクを低下させ、または癌を有する個体を治療するための方法は、抑制性チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体を個体に投与することを更に含む。抑制性チェックポイント分子に特異的に結合する抗体の例には、限定するものではないが、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ−Ｌ２抗体、抗ＰＤ−１抗体、抗Ｂ７−Ｈ３抗体、抗Ｂ７−Ｈ４抗体及び抗ＨＶＥＭ抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗ＴＩＭ３抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、抗ＬＡＧ−３抗体、抗ホスファチジルセリン抗体、ならびにこれらの任意の組み合わせが含まれる。いくつかの実施形態において、抑制性チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体は、本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示のアンタゴニスト抗ＣＤ３３抗体などと組み合わせて投与される。
【０４３２】
いくつかの実施形態において、本開示の方法によって予防または治療される癌には、限定するものではないが、扁平上皮細胞癌（例えば、上皮扁平上皮細胞癌）、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌及び肺扁平上皮癌を含む肺癌、腹膜癌、肝細胞癌、胃腸癌及び消化管間質癌を含む胃癌、膵臓癌、膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、尿路癌、ヘパトーマ、乳癌、結腸癌、直腸癌、大腸癌、子宮内膜または子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝癌、肛門癌、陰茎癌、黒色腫、表在拡大型黒色腫、悪性黒子型黒色腫、末端黒子型黒色腫、結節性黒色腫、多発性骨髄腫及びＢ細胞リンパ腫、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、毛様細胞性白血病、慢性骨髄芽球性白血病、及び移植後リンパ球増殖性疾患（ＰＴＬＤ）、及び母斑症に関連した以上な血管増殖、浮腫（脳腫瘍に関連するものなど）、メイグス症候群、脳及び頭部及び頸部癌、ならびに及び関連転移が含まれる。いくつかの実施形態において、該癌は、大腸癌である。いくつかの実施形態において、該癌は、非小細胞肺癌、膠芽腫、神経芽細胞腫、腎細胞癌、膀胱癌、卵巣癌、黒色腫、乳癌、胃癌及び肝細胞癌から選択される。いくつかの実施形態において、該癌は、トリプルネガティブ乳癌である。いくつかの実施形態において、該癌は、早期癌であっても末期癌であってもよい。いくつかの実施形態において、該癌は、原発性腫瘍であり得る。いくつかの実施形態において、該癌は、上記の種類の癌のいずれかに由来する、第２の部位の転移性腫瘍であり得る。
【０４３３】
いくつかの実施形態において、本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体は、限定するものではないが、膀胱癌、乳癌、結腸及び直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫ならびに甲状腺癌を含む癌を予防し、リスクを低下させ、または治療するために使用することができる。
【０４３４】
いくつかの実施形態において、本開示は、治療上有効な量の本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示の抗ＣＤ３３抗体などを個体に投与することによって、癌を予防し、リスクを低下させ、または癌を有する個体を治療する方法を提供する。
【０４３５】
いくつかの実施形態において、方法は、抑制性免疫チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体、及び／または別の標準的もしくは試験的抗癌療法を個体に施すことを更に含む。いくつかの実施形態において、該抑制性免疫チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体は、本開示の抗ＣＤ３３抗体などのＣＤ３３剤と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態において、該抑制性免疫チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ−Ｌ２抗体、抗ＰＤ−１抗体、抗Ｂ７−Ｈ３抗体、抗Ｂ７−Ｈ４抗体及び抗ＨＶＥＭ抗体、抗Ｂ及びＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）抗体、抗キラー細胞抑制受容体（ＫＩＲ）抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗ＴＩＭ３抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、抗ＬＡＧ−３抗体、抗ホスファチジルセリン抗体、抗ＣＤ２７抗体、ならびにこれらの任意の組み合わせから選択される。いくつかの実施形態において、該標準的または試験的抗癌療法は、放射線療法、細胞傷害性化学療法、標的化療法、イマチニブ（Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標））、トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））、養子細胞移入（ＡＣＴ）、キメラ抗原受容体Ｔ細胞移入（ＣＡＲ−Ｔ）、ワクチン療法及びサイトカイン療法から選択される１つ以上の療法である。
【０４３６】
いくつかの実施形態において、該方法は、抑制性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１つの抗体を個体に投与することを更に含む。いくつかの実施形態において、該抑制性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１つの抗体は、本開示の抗ＣＤ３３抗体などのＣＤ３３剤と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態において、該抑制性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１つの抗体は、抗ＣＣＬ２抗体、抗ＣＳＦ−１抗体、抗ＩＬ−２抗体及びこれらの任意の組み合わせから選択される。
【０４３７】
いくつかの実施形態において、該方法は、刺激性免疫チェックポイントタンパク質に特異的に結合する少なくとも１つのアゴニスト抗体を個体に投与することを更に含む。いくつかの実施形態において、該刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する少なくとも１つのアゴニスト抗体は、本開示の抗ＣＤ３３抗体などのＣＤ３３剤と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態において、該刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する少なくとも１つのアゴニスト抗体は、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体、アゴニスト抗ＯＸ４０抗体、アゴニスト抗ＩＣＯＳ抗体、アゴニスト抗ＣＤ２８抗体、アゴニスト抗ＣＤ１３７／４−１ＢＢ抗体、アゴニスト抗ＣＤ２７抗体、アゴニスト抗グルココルチコイド誘導性ＴＮＦＲ関連タンパク質ＧＩＴＲ抗体、及びこれらの任意の組み合わせから選択される。
【０４３８】
いくつかの実施形態において、該方法は、少なくとも１つの刺激性サイトカインを個体に投与することを更に含む。いくつかの実施形態において、該少なくとも１つの刺激性サイトカインは、本開示の抗ＣＤ３３抗体などのＣＤ３３剤と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態において、該少なくとも１つの刺激性サイトカインは、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＬＩＦ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＬ−２、ＩＬ−１８、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、及びこれらの任意の組み合わせから選択される。
【０４３９】
キット／製造品
本開示はまた、本開示のＣＤ３３剤（例えば、本明細書に記載される抗ＣＤ３３抗体）またはその機能性断片を含有するキット及び／または製造品を提供する。本開示のキット及び／または製造品は、本開示の精製された抗体を含む１つ以上の容器を含み得る。いくつかの実施形態において、該キット及び／または製造品は、本開示の方法に従って使用するための説明書を更に含む。いくつかの実施形態において、これらの説明書は、本開示の任意の方法に従って、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウパチー病、那須・ハコラ病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、ループス、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満症、マラリア、本態性振戦、中枢神経系ループス、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫性疾患、サルコイドーシス、加齢に伴う病気、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身性感染症、ループス、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨のパジェット病、ならびに癌、例えば、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性赤血球増加症、本態性血小板血症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化症、骨髄由来腫瘍、ＣＤ３３を発現する腫瘍、甲状腺癌、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルージ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、Ｉ型ＨＩＶ、ならびにインフルエンザ菌から選択される疾患、障害または損傷を予防し、リスクを低下させ、それらを有する個体を治療するための本開示のＣＤ３３剤（例えば、本明細書に記載される抗ＣＤ３３抗体）の投与に関する説明を含む。
【０４４０】
いくつかの実施形態において、該説明書は、例えば、個体において、組織試料において、または細胞において、ＣＤ３３タンパク質を検出する方法の説明を含む。キット及び／または製造品は、治療に適した個体の選択を、該個体が疾患を有し、どの段階の疾患を有するかの判断に基づいて行うための説明を更に含み得る。
【０４４１】
いくつかの実施形態において、該キット及び／または製造品は、本開示の別の抗体（例えば、抑制性チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体、抑制性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１つの抗体、及び／または刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する少なくとも１つのアゴニスト抗体）及び／または少なくとも１つの刺激性サイトカインを更に含み得る。いくつかの実施形態において、キット及び／または製造品は、本開示の任意の方法に従って、抗体及び／もしくは刺激性サイトカインを本開示のＣＤ３３剤（例えば、本明細書に記載の抗ＣＤ３３抗体）と組み合わせて使用するための説明書、本開示のＣＤ３３剤（例えば、本明細書に記載の抗ＣＤ３３抗体）を抗体及び／もしくは刺激性サイトカインと組み合わせて使用するための説明書、または本開示のＣＤ３３剤（例えば、本明細書に記載の抗ＣＤ３３抗体）と抗体及び／もしくは刺激性サイトカインとを使用するための説明書を更に含み得る。
【０４４２】
該説明書は、一般に、目的の治療のための用量、投与計画及び投与経路に関する情報を含む。該容器は、単位用量、バルク包装（例えば、複数回用量包装）または分割単位用量でもよい。本開示のキット及び／または製造品に付属される説明書は、典型的には、ラベルまたは添付文書（例えば、キットに含まれる書面）上に書かれた説明書であるが、機械で読み取り可能な説明書（例えば、磁気または光学式記憶ディスク上に保持された説明書）も許容される。
【０４４３】
ラベルまたは添付文書は、その組成物が、例えば、本開示の疾患を治療するために使用されることを示す。本明細書に記載される方法のうちのいずれかを実施するための説明書が提供されてもよい。
【０４４４】
本開示のキット及び／または製造品は、好適な包装がなされる。好適な包装には、バイアル、ボトル、ジャー、軟包装（例えば、密閉されたＭｙｌａｒまたはプラスチックバッグ）などが含まれるが、これらに限定されない。特定の器具、例えば、吸入器、経鼻投与器具（例えば、アトマイザー）またはミニポンプなどの注入器具と組み合わせて使用するためのパッケージも企図される。キット及び／または製造品は、滅菌アクセスポートを有し得る（例えば、該容器は、皮下注射針によって貫通可能な栓を有する静脈注射用溶液バッグまたはバイアルであってよい）。容器も同様に、滅菌アクセスポートを有し得る（例えば、該容器は、皮下注射針によって貫通可能な栓を有する静脈注射用溶液バッグまたはバイアルであってよい）。組成物中の少なくとも１つの活性物質は、本開示のＣＤ３３剤（例えば、本明細書に記載の抗ＣＤ３３抗体）である。容器は、第２の薬学的活性物質を更に含んでもよい。
【０４４５】
キット及び／または製造品は、必要に応じて、緩衝液及び説明的情報などの追加の構成要素を備えてもよい。通常、キットは、容器と、その容器上または容器に付属するラベルまたは添付文書（複数可）とを含む。
【０４４６】
診断用途
本開示のＣＤ３３剤、例えば本開示の単離された抗体（例えば、本明細書に記載の抗ＣＤ３３抗体）などは、診断的実用性も有し得る。したがって、本開示は、個体におけるまたは個体由来の組織試料におけるＣＤ３３タンパク質の検出などの診断目的のために、本開示の抗体またはその機能性断片を使用する方法を提供する。
【０４４７】
いくつかの実施形態において、該個体は、ヒトである。いくつかの実施形態において、該個体は、本開示の疾患、障害もしくは損傷を患っているヒト患者、またはその発症の危険性のあるヒト患者である。いくつかの実施形態において、該診断方法は、生検試料、組織または細胞などの生体試料中のＣＤ３３タンパク質を検出することを伴う。本開示のＣＤ３３剤（例えば、本明細書に記載の抗ＣＤ３３抗体）を該生体試料に接触させ、抗原に結合した抗体を検出する。例えば、生検試料は、疾患関連細胞を検出及び／または定量するために、本明細書に記載の抗ＣＤ３３抗体で染色され得る。該検出法は、抗原に結合した抗体の定量を含み得る。生体試料中の抗体検出は、免疫蛍光顕微鏡法、免疫細胞化学、免疫組織化学、ＥＬＩＳＡ、ＦＡＣＳ分析、免疫沈降またはマイクロポジトロン放出断層撮影を含む、当該技術分野において既知の任意の方法で行うことができる。ある特定の実施形態において、該抗体は、例えば、１８Ｆで放射性標識され、その後、マイクロポジトロン放出断層撮影分析を利用して検出される。抗体結合はまた、ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）、Ｘ線コンピュータ断層撮影、単一光子放射コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）及びコンピュータ体軸断層撮影（ＣＡＴ）などの非侵襲性技法によって、患者において定量され得る。
【０４４８】
他の実施形態において、本開示の単離された抗体（例えば、本明細書に記載の抗ＣＤ３３抗体）は、例えば、前臨床疾患モデル（例えば、非ヒト疾患モデル）から採取した脳試料のミクログリアを検出及び／または定量するために使用することができる。したがって、本開示の単離された抗体（例えば、本明細書に記載の抗ＣＤ３３抗体）は、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、発作、網膜ジストロフィー、アテローム動脈硬化性血管疾患、那須・ハコラ病または多発性硬化症などの神経系疾患または損傷のモデルにおける治療後の治療応答を対照と比較して評価するのに有用であり得る。
【０４４９】
本開示は、以下の実施例を参照することによって、より十分に理解されるであろう。しかしながら、これらは、本開示の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。本開示全体にわたる全ての引用は、参照により明示的に本明細書に援用される。
【実施例】
【０４５０】
実施例１：抗ＣＤ３３抗体の産生、特定及び特性評価
序文
ヒトＣＤ３３のアミノ酸配列を以下の配列番号１に示す。ヒトＣＤ３３は、配列番号１のアミノ酸残基１〜１７に位置するシグナル配列、配列番号１のアミノ酸残基１９〜１３５に位置する細胞外免疫グロブリン様可変型（ＩｇＶ）ドメイン、配列番号１のアミノ酸残基１４５〜２２８に位置するＩｇ様Ｃ２型ドメイン、配列番号１のアミノ酸残基２６０〜２８２に位置する膜貫通ドメイン、配列番号１のアミノ酸残基３３８〜３４３に位置するＩＴＩＭモチーフ１、及び配列番号１のアミノ酸残基３５６〜３６１に位置するＩＴＩＭモチーフ２を含有する。ＣＤ３３の構造を図１に示す。ＣＤ３３の一部とＣＤ３３ホモログとのアライメントを図２に示す。
【０４５１】
ＣＤ３３アミノ酸配列（配列番号１）：
2018518176.tif 000010
【０４５２】
以下の実施例の目的は、樹状細胞、単球、マクロファージ、Ｔ細胞、好中球、ＮＫ細胞及び／またはミクログリアの有益な効果を増大させるＣＤ３３結合抗体（例えば、アンタゴニスト抗体、ＣＤ３３特異的抗体）を作製することであった。ＣＤ３３の細胞外ドメイン、特に、ＩｇＶドメイン（配列番号１のアミノ酸残基１９〜１３５）と結合する抗体は、マウスハイブリドーマ技術、ファージディスプレイ技術及び酵母ディスプレイ技術を使用して作製される。以下の実施例に記載するように、抗体を特定し、次いで、ＣＤ３３リガンドとＣＤ３３への結合に関して競合する能力、ＣＤ３３の下方制御を誘導する能力、ＣＤ３３の脱感作を誘導する能力、ＣＤ３３の分解を誘導する能力、ＣＤ３３のリソソーム標的化を誘導する能力、ＣＤ３３の切断を誘導する能力、ＣＤ３３のシグナル伝達及び／または細胞及び動物のｉｎ  ｖｉｖｏにおける１つ以上の機能を調節する能力についてスクリーニングする。ＣＤ３３が結合する例示的なリガンドを図３及び図４に示す。
【０４５３】
例えば、ＩｇＶドメイン（ＣＤ３３のアミノ酸残基１９〜１３５）を標的にする抗ＣＤ３３抗体が選択される。ＩｇＶドメインは、シアル酸標的に結合し、この結合は、該抗体によって遮断することができる。したがって、アミノ酸残基１９〜１３５は、ＣＤ３３の１つ以上の内因性標的（例えば、リガンド）への結合を遮断する抗体に対するＣＤ３３ペプチド標的に対応する。
【０４５４】
ヒトＣＤ３３タンパク質内の有用な部位を特定するための別の方法としては、ＩｇＶドメイン内に概して認められる、ＣＤ３３Ｍと比較してＣＤ３３ｍに存在しない部位を標的にする抗体を選択することである。ＣＤ３３ｍは、アミロイドベータペプチドのクリアランスを阻害することができない。有用な抗体を特定する別の方法としては、単球、マクロファージ、樹状細胞、好中球、ミクログリア及び／またはＴ細胞の細胞表面上にあるＣＤ３３のレベルを低下させる抗体を選択することである。
【０４５５】
本明細書に記載のとおり、７つの抗ＣＤ３３抗体を特定し、特性評価した。
【０４５６】
結果
抗ＣＤ３３抗体の産生
免疫付与手順
急速抗原接種法：以下の手順を使用して、５０日齢の雌ＢＡＬＢ／ｃマウス４匹を免疫化した。ヒトＣＤ３３抗原を含有するが、アジュバントを含有しない一連の水性皮下注射剤を１９日の期間にわたって投与した。マウスをＬａｂ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ製の換気ラックシステムに収容した。マウス４匹全てを１９日目に安楽死させ、ハイブリドーマ細胞株生成のためにリンパ球を採取した。
【０４５７】
標準的な方法：以下の手順を使用して、５０日齢の雌ＢＡＬＢ／ｃまたはＮＺＢ／Ｗマウス４匹を免疫化した。マウスをＬａｂ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ製の換気ラックシステムに収容した。ＣｐＧ−ＯＤＮアジュバントと混合したヒトＣＤ３３抗原を、１マウスあたりタンパク質抗原２５μｇで、３週間ごとにマウスに腹腔内注射した（合計体積１２５μＬ／マウス）。２回目の追加免疫から７日後に、伏在静脈穿刺によって試験採血を行った。試験採血（免疫血清）を間接ＥＬＩＳＡアッセイによって試験して、融合に関して、最も応答の良い２匹のマウスを決定した。マウスは、３回目及び４回目の追加免疫と、融合前に力価を評価するために、追加免疫７日後に試験採血をもう１回行う必要があることがある。抗体力価が十分高くなったら、最も応答の良いマウス２匹に側方尾静脈を介した最後の静脈内追加免疫を行う。ＩＶ追加免疫から４日後、マウスを融合のために安楽死させた。脾臓を採取し、脾臓から単離したリンパ球を融合プロセスに使用してハイブリドーマを作製した。
【０４５８】
ハイブリドーマ作製
リンパ球を単離し、標準的なＲｏｃｈｅプロトコルに従って、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ１５００）の存在下で、ネズミＳＰ２／０骨髄腫細胞と融合させた。１段階クローニング法（ＨＡＴ選択）を使用して融合細胞を培養した。この方法は、半固体メチルセルロースベースのＨＡＴ選択培地を使用して、ハイブリドーマ選択とクローニングを１つのステップに合わせたものであり、１つの細胞に由来するハイブリドーマは固体媒体培地上にモノクローナルコロニーを形成するように成長する。融合を行ってから１０日後に、得られたハイブリドーマクローンのうち９４８個を９６ウェル組織培養プレートに移し、対数増殖期中期に達するまで（５日）、ＨＴ含有培地で成長させた。
【０４５９】
ハイブリドーマスクリーニング
間接ＥＬＩＳＡによって、９４８個のハイブリドーマ由来の組織培養上清をスクリーニング抗原（一次スクリーニング）で試験し、ヤギ抗ＩｇＧ／ＩｇＭ（Ｈ＆Ｌ）−ＨＲＰ二次抗体を使用してＩｇＧ及びＩｇＭ抗体の両方にプローブし、ＴＭＢ基質で発色させた。このアッセイでＯＤが０．２を超えるクローンを次の試験ラウンドに用いた。陽性培養物をスクリーニング抗原で再試験して分泌を確認し、無関係の抗原（ヒトトランスフェリン）で試験して非特異的または「粘着性」ｍＡｂを排除し、偽陽性を除外した。目的の全クローンについて、抗体補足ＥＬＩＳＡによってアイソタイピングを行い、ＩｇＧまたはＩｇＭアイソタイプであるかを決定した。
【０４６０】
ハイブリドーマ細胞培養
９６ウェルプレートに移した後、目的のハイブリドーマ細胞株を２４ウェル培養プレートで３２日間培養維持した。これを安定期と呼び、クローンが安定を保ち、かつ分泌を継続するかどうかを試験する。この安定期中に、目的の全クローンについて、−８０℃で保存するための一時的に凍結された細胞株のバックアップを作製する（６ヶ月間生存可能）。この期間中、ハイブリドーマの分泌及び特異性を定期的に試験した。
【０４６１】
サブクローニング
上位ハイブリドーマ細胞株（クローン）をサブクローンしてモノクローナル性を確保した。サブクローニングは、１段階クローニングシステムを使用して、親クローンを再度培養することによって実施した。２４〜９０個のサブクローンを９６ウェル培養プレートに移した。間接ＥＬＩＳＡ及び抗体補足ＥＬＩＳＡによって、サブクローンをスクリーニングした。各親の上位サブクローンを培養拡大のために回収した。クローン性が５０％未満である親クローンについては、いずれも２回目のサブクローニングを実施した。
【０４６２】
次いで、抗体をＣＤ３３結合についてスクリーニングした。ヒトＣＤ３３への結合が陽性であった抗体を、複数の細胞種におけるリガンド結合を遮断する能力及びＣＤ３３の表面レベルを低下させる能力について試験した。
【０４６３】
抗体重鎖及び軽鎖可変ドメイン配列
標準的技法を使用して、生成された抗体の軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインをコードするアミノ酸配列を決定した。各抗体のＥＵまたはＫａｂａｔ軽鎖ＣＤＲ配列を表１に記載する。各抗体のＥＵまたはＫａｂａｔ重鎖ＣＤＲ配列を表２に記載する。各抗体のＥＵまたはＫａｂａｔ軽鎖フレームワーク（ＦＲ）配列を表３Ａに記載する。各抗体のＥＵまたはＫａｂａｔ重鎖フレームワーク（ＦＲ）配列を表３Ｂに記載する。
表１：抗ＣＤ３３抗体のＥＵまたはＫａｂａｔ軽鎖ＨＶＲ配列
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表２：抗ＣＤ３３抗体のＥＵまたはＫａｂａｔ重鎖ＨＶＲ配列
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表３Ａ：マウス抗ＣＤ３３抗体のＥＵまたはＫａｂａｔ軽鎖フレームワーク配列
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表３Ｂ：マウス抗ＣＤ３３抗体のＥＵまたはＫａｂａｔ重鎖フレームワーク配列
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【０４６４】
ＣＤ３３抗体結合の特性評価
ＣＤ３３抗体の最初の特性評価は、ＣＨＯ細胞株、ヒト初代単球、ヒト初代樹状細胞及びヒト初代マクロファージ上に発現しているＣＤ３３に結合する能力を決定することに関した。細胞を回収し、９６ウェルプレートに１０６／ｍｌで播種し、２％ＦＢＳ、２ｍＭ  ＥＤＴＡ及び１０μｇ／ｍｌの抗体及びＦｃブロッキング試薬を含有する１００μｌのＰＢＳ中で、１時間、氷中でインキュベートした。細胞を２回洗浄し、２％ＦＢＳ、２ｍＭ  ＥＤＴＡ及び５μｇ／ｍｌのＰＥ結合二次抗体を含有する１００ｕｌのＰＢＳ中で、３０分間、氷上でインキュベートした。冷ＰＢＳ中で細胞を２回洗浄し、ＢＤ  ＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏのフローサイトメトリーによって分析した。データ解析及び平均蛍光強度（ＭＦＩ）値の計算は、ＦｌｏｗＪｏ（ＴｒｅｅＳｔａｒ）ソフトウェアバージョン１０．０．７で行った。
【０４６５】
ＦＡＣＳ染色解析は、ＣＤ３３が、ヒト初代単球、マクロファージ、樹状細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞及び好中球を含む初代骨髄・リンパ細胞上に発現していることを示している（図５Ａ）。
【０４６６】
表４は、組換えヒトＣＤ３３（ＣＨＯ  ｈＣＤ３３）を発現するＣＨＯ細胞株に結合する抗体を示す。ＣＤ３３抗体が結合した細胞型の陽性結合パーセント及び平均蛍光強度（ＭＦＩ）値を表４に列挙する。結合を親ＣＨＯ細胞株と比較する。表４中、「アイソタイプ」は、アイソタイプｍＩｇＧ１対照抗体を指す。
表４：ＣＤ３３抗体のＣＨＯ細胞への結合
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【０４６７】
ＣＤ３３抗体が結合した細胞種の陽性結合パーセント及び平均蛍光強度（ＭＦＩ）値を表５に列挙する。結合をアイソタイプ対照と比較する。該抗体は、ヒト初代単球、ヒト初代樹状細胞及びヒト初代マクロファージに結合する。表５中、「アイソタイプ」は、アイソタイプｍＩｇＧ１対照抗体を指し、「ＤＣ」は、樹状細胞を指す。
表５Ａ：ＣＤ３３抗体のヒト初代細胞への結合
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【０４６８】
次いで、ＣＤ３３抗体の見かけの親和定数を決定した。ＳＰＲデータを、ＢｉａＣｏｒｅ  Ｔ２００機器で１０Ｈｚの速度で２５℃にて収集した。データ解析は、ＢｉａＣｏｒｅ  Ｔ２００  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアバージョン２．０を使用して実施した。ＨＢＳ−ＥＰ＋（１００ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、１．５Ｍ  ＮａＣｌ、３０ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．５％ｖ／ｖ界面活性剤Ｐ２０、ｐＨ７．４）をランニングバッファーとして、また試薬の調製のために使用した。抗マウスＩｇＧを固定化したＣＭ５センサーチップ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上に、抗ＣＤ３３抗体１Ａ８、２Ｅ１２、２Ｆ５、６Ａ３、６Ｃ７及びゲムツズマブ（２０ｎＭ）のそれぞれを捕捉した（接触時間６０秒、流量３０μＬ／分、安定化時間０秒）。次いで、２０ｎＭのヒスチジンタグ付きヒトＣＤ３３（Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）を、捕捉した抗ＣＤ３３表面全体上に流した（接触時間１２０秒、流量３０μＬ／分、解離時間３００秒）。単一濃度試験を２回（ｎ＝２）実施し、ブランク（抗原０ｎＭ）試料を差し引いた。サイクルとサイクルとの間に１０ｍＭのグリシン−ＨＣｌ（ｐＨ１．７）を使用してチップ表面を再生した（接触時間６０秒、流量３０μＬ／分、安定化時間６０秒）。結果として生じるＳＰＲシグナルを、空のフローセル上で実施した測定との応答の差として得た。１：１相互作用モデルを使用して単一濃度カイネティクス解析（Ｃａｎｚｉａｎｉ，ｅｔ  ａｌ．Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３２５（２００４），３０１−３０７）を実施して、各抗体の会合速度定数及び解離速度定数（それぞれｋａ及びｋｄ）を出した。見かけの親和定数（ＫＤ）をｋｄ／ｋａの比から算出した。以前の一連の実験における複数濃度法（５つの抗原濃度を使用し、ブランクは１つ）により単一濃度解析を検証した。結果を図５Ｂ〜５Ｇ及び表５Ｂに示す。
表５Ｂ：ＣＤ３３抗体のヒトＣＤ３３への結合
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【０４６９】
ＣＤ３３抗体２Ｆ５、６Ｃ７、ゲムツズマブ及びリンツズマブのヒト初代樹状細胞への結合の半数効果濃度（ＥＣ５０）についても、約０．００３ｎＭ〜約３ｎＭの範囲の抗体濃度を使用した結合曲線によって決定した。図５Ｈに示すように、ＣＤ３３抗体は、２００ｐＭ未満のＥＣ５０でヒト初代樹状細胞に結合した。特に、抗体２Ｆ５は、１３８．２ｐＭのＥＣ５０で結合し、抗体６Ｃ７は、１６６．２ｐＭのＥＣ５０で結合した（図５Ｈ）。対照的に、市販抗体のゲムツズマブ及びリンツズマブは、それぞれ６１２．５ｐＭ及び８４５．３ｐＭのＥＣ５０でヒト初代樹状細胞に結合した（図５Ｉ）。図５Ｈ及び５Ｉの結果は、抗体２Ｆ５及び６Ｃ７のヒト細胞（例えば、初代樹状細胞）への結合が改善し、市販抗体のゲムツズマブ及びリンツズマブよりも低いＥＣ５０を有すること示している。結果は更に、抗体２Ｆ５及び６Ｃ７が、市販の抗ＣＤ３３抗体と比較して、ヒト初代骨髄細胞への改善した標的結合を有することを示している。
【０４７０】
抗体のヒト化
ヒト投与における免疫原性を防ぐために、抗体のヒト化を使用して、異なる種で産生された抗体を配列及び構造的関係の点でヒト抗体に最も似るように変更する。異なる種に由来する抗体は、非ヒト抗体の特異性決定領域（ＳＤＲ）をヒト抗体フレームワーク上にグラフト化することを可能にする、特徴的な配列及び構造的特徴を共有する。これにより、非ヒト抗体の特異性が保持される。ヒト化プロセスは、フレームワーク領域及びＳＤＲを含む、非ヒト抗体の配列及び特徴の特定を伴う。抗体のヒト化には、以下の基準が使用される。１）非ヒト抗体と既知のヒト抗体との間のフレームワーク領域の類似性パーセント；２）非ヒト抗体と既知のヒト抗体との間のＳＤＲの長さ類似性；３）ヒト抗体のフレームワーク領域を生成するために使用される遺伝子、及び４）ヒト抗体フレームワークのヒト化及び治療としての以前の使用。フレームワーク領域及びＳＤＲ長さの類似性は、その差が抗体の特異性を変更し得る抗体の構造的差異を生じる場合があるので、重要である。ヒト抗体のフレームワークを生成するために使用される特定の遺伝子は、抗体の安定性または特異性にとって有益または不利になることが知られており、それに従って選択的に使用され、または回避される。最後に、ヒト治療で使用されているものを含む、これまでに効を奏している望ましい半減期を有する忍容性の良好なヒト化フレームワークが、将来性のあるヒト化候補である可能性が高い。
【０４７１】
表６Ａ及び６Ｂに示すように、抗体１Ａ８については、４つのヒト化軽鎖及び重鎖可変領域配列を特定し、抗体２Ｅ１２については、７つの軽鎖可変領域配列及び４つの重鎖可変領域配列を特定し、抗体６Ａ３については、５つの軽鎖可変領域配列及び４つの重鎖可変領域配列を特定し、抗体６Ｃ７については、１つの重鎖可変領域配列を特定し、抗体３Ａ１２については、１つの重鎖可変領域配列を特定した。表６Ａ及び６Ｂ中、太字はＣＤＲ配列を示す。
表６Ａ：ヒト化軽鎖可変領域
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表６Ｂ：ヒト化重鎖可変領域
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【０４７２】
実施例２：ＣＤ３３抗体のエピトープマッピング
ＣＤ３３抗体を、ヒトＣＤ３３全体にわたる１５ｍｅｒまたは２５ｍｅｒペプチドと結合する能力について試験した。また、ＣＤ３３結合領域を決定することによって、ＣＤ３３抗体を参照ＣＤ３３抗体と比較した。
【０４７３】
方法
ヒトＣＤ３３（配列番号１）の配列に基づいて、１４残基が重複する１５ｍｅｒの線状ペプチドを合成した。加えて、ヒトＣＤ３３（配列番号１）またはマウスＣＤ３３（配列番号２）の配列に基づいて、１残基シフトを有する２５ｍｅｒの線状ペプチドを合成した。ＣＤ３３抗体の各合成ペプチドへの結合をＥＬＩＳＡに基づく方法で試験した。このアッセイにおいて、ペプチドアレイを一次抗体溶液とともにインキュベートした（４℃で一晩）。洗浄後、ペプチドアレイを抗体ペルオキシダーゼ複合体（ＳＢＡ、カタログ番号２０１０−０５）の１／１０００希釈物とともに２５℃で１時間インキュベートした。洗浄後、ペルオキシダーゼ基質である２，２’−アジノ−ジ−３−エチルベンゾチアゾリンスルホン酸塩（ＡＢＴＳ）及び２μｌ／ｍｌの３％Ｈ２Ｏ２を添加した。１時間後、発色を測定した。発色は、電荷結合素子（ＣＣＤ）カメラ及び画像処理システムで定量した。
【０４７４】
標準的なサンドイッチ形式のビニングアッセイを使用して、Ｆｏｒｔｅ  Ｂｉｏ  Ｏｃｔｅｔ  Ｒｅｄ３８４システム（Ｐａｌｌ  Ｆｏｒｔｅ  Ｂｉｏ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｍｅｎｌｏ  Ｐａｒｋ，ＣＡ））で抗体のエピトープビニングを実施した（Ｅｓｔｅｐ  ｅｔ  ａｌ，（２０１３）ＭＡｂｓ  ５（２）：２７０−８参照）。対照の抗標的ＩｇＧをＡＨＱセンサー上に充填し、センサー上の非占有Ｆｃ結合部位を非関連ヒトＩｇＧ１抗体でブロッキングした。次いで、センサーを１００ｎＭの標的抗原に曝露し、続いて、抗標的二次抗体に曝露した。ＦｏｒｔｅＢｉｏのデータ解析ソフトウェア７．０を使用してデータを処理した。抗原結合後の二次抗体による更なる結合は非占有エピトープ（非競合物）を指し、一方、結合なしはエピトープブロッキング（競合物）を指す。
【０４７５】
別の方法として、標的分子のエピトープを再構築するために、ループ及びコンビナトリアルペプチドのライブラリーを合成した。独自の親水性ポリマー配合物をグラフト化し、続いて、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）をＮ−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）とともに使用してｔ−ブチルオキシカルボニル−ヘキサメチレンジアミン（ＢｏｃＨＭＤＡ）と反応させた後、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を使用してＢｏｃ基を切断することによってアミノ官能化ポリプロピレン支持体を得た。このアミノ官能化固体支持体上で、特注変更したＪＡＮＵＳ液体処理ステーション（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）により、標準的なＦｍｏｃペプチド合成を使用して、ペプチドを合成した。
【０４７６】
構造模倣体の合成は、Ｐｅｐｓｃａｎ独自のスカフォールド上化学的結合ペプチド（ＣＬＩＰＳ）技法を使用して実施した。ＣＬＩＰＳ技法により、ペプチドを単一ループ及び二重ループに構築することができる。ＣＬＩＰＳテンプレートは、システイン残基に結合される。ペプチド中の複数のシステインの側鎖が１または２つのＣＬＩＰＳテンプレートに結合される。例えば、ｍＰ２  ＣＬＩＰＳ（２，６−ビス（ブロモメチル）ピリジン）の０．５ｍＭ溶液を炭酸水素アンモニウム（２０ｍＭ、ｐＨ７．８）／アセトニトリル（１：３（ｖ／ｖ））に溶解する。この溶液をペプチドアレイに加える。ＣＬＩＰＳテンプレートは、ペプチドアレイ（３μｌウェルの４５５ウェルプレート）の固相結合ペプチド中に存在する２つのシステインの側鎖に結合する。ペプチドアレイを溶液で完全に覆った状態で、溶液中、３０〜６０分間穏やかに振盪する。最後に、ペプチドアレイを過剰のＨ２Ｏで十分に洗浄し、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）中の１％ＳＤＳ／０．１％β−メルカプトエタノール含有破壊緩衝液中で、７０℃にて３０分間超音波処理し、続いて、Ｈ２Ｏ中で更に４５分間超音波処理する。Ｔ３  ＣＬＩＰＳ（２，４，６−トリス（ブロモメチル）ピリジン）担持ペプチドについては、同様の方法だが、今回は３つのシステインを使用して、作製した。
【０４７７】
ループペプチド：長さ１７の拘束ペプチド。位置２〜１６は、標的配列に由来する１５ｍｅｒである。天然Ｃｙｓ残基は、アセトアミドメチル基（ＡＣＭ）で保護する。位置１及び１７は、ｍＰ２  ＣＬＩＰＳ部分が結合するＣｙｓである。
【０４７８】
コンビナトリアルペプチド（不連続模倣体）：長さ３３の拘束ペプチド。位置２〜１６及び１８〜３２は、標的配列に由来する１５ｍｅｒペプチドであり、天然Ｃｙｓ残基は、ＡＣＭで保護する。位置１、１７及び３３は、Ｔ３  ＣＬＩＰＳ部分が結合するＣｙｓである。
【０４７９】
抗体の各合成ペプチドへの結合をＰＥＰＳＣＡＮに基づくＥＬＩＳＡで試験する。ペプチドアレイを、実験的な至適濃度の試験抗体と、ブロッキング溶液（例えば、ＰＢＳ／１％Ｔｗｅｅｎ８０中４％ウマ血清、５％オボアルブミン（ｗ／ｖ））とから構成される試験抗体溶液とともにインキュベートする。ペプチドアレイを試験抗体溶液とともに４℃で一晩インキュベートする。洗浄緩衝液（１×ＰＢＳ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ８０）で十分洗浄した後、ペプチドアレイを適切な抗体ペルオキシダーゼ複合体の１／１０００希釈物とともに２５℃で１時間インキュベートする。洗浄緩衝液で洗浄後、ペルオキシダーゼ基質である２，２’−アジノ−ジ−３−エチルベンゾチアゾリンスルホン酸塩（ＡＢＴＳ）及び２μｌ／ｍｌの３％Ｈ２Ｏ２を添加する。１時間後、発色を測定する。発色は、電荷結合素子（ＣＣＤ）カメラ及び画像処理システムで定量する。
【０４８０】
別の方法として、質量分析法を使用して、高次構造エピトープを特定する。抗ＣＤ３３抗体が結合するＣＤ３３タンパク質上の高次構造エピトープの重要な残基を高分解能で決定するために、抗体／抗原複合体を重水素化架橋剤とともにインキュベートし、多酵素によるタンパク質分解切断に供する。架橋したペプチドの濃縮後、試料を高分解能質量分析（ｎＬＣ−Ｏｒｂｉｔｒａｐ  ＭＳ）によって分析し、生成されたデータを、ＸＱｕｅｓｔソフトウェアを使用して解析する。具体的には、ＣＤ３３抗原と抗体の等モル溶液（各５μｌで４μＭ）を混合することによって、ＣＤ３３  ＥＣＤ／抗体複合体を作製する。得られた混合物１μｌを、アセトニトリル／水（１：１、ｖ／ｖ）、ＴＦＡ０．１％中の再結晶化シナピン酸マトリックス（１０ｍｇ／ｍｌ）（Ｋ２００  ＭＡＬＤＩキット）から構成されるマトリックス１μｌと混合する。混合後、各試料１μｌをＭＡＬＤＩプレート（ＳＣＯＵＴ  ３８４）上にスポットする。室温で結晶化した後、プレートをＭＡＬＤＩ質量分析計に導入し、直ちに分析する。分析は、３回の繰り返しで行う。単量体抗体、抗原及び抗体ならびに抗原／抗体複合体を表すピークを予想分子量で検出する。
【０４８１】
次いで、高次構造結合のエピトープが、タンパク質分解によって生成された非構造化Ｃ１ｑペプチドと競合するかどうか決定する。具体的には、ＣＤ３３  ＥＣＤ／抗体複合体が線状ペプチドと競合可能かどうかを決定するために、ＣＤ３３  ＥＣＤ抗原を固定化ペプシンで消化する。濃度１０μＭの抗原２５μｌを５μＭの固定化ペプシンと混合し、室温で３０分間インキュベートする。インキュベーション時間後、試料を遠心分離し、上清をピペットで採取する。タンパク質分解の完了は、リニアモードにおけるＨｉｇｈ−Ｍａｓｓ  ＭＡＬＤＩ質量分析によって制御される。ペプシンタンパク質分解は、１０００〜３５００Ｄａ範囲のペプチドを多量に得られるように最適化する。次に、タンパク質分解によって生成された５μｌの抗原ペプチドを５μｌの抗体（８μＭ）と混合し、３７℃で６時間インキュベートする。抗体とＣＤ３３抗原ペプチドのインキュベーション後、最終混合物がＣＤ３３／抗体／ＣＤ３３抗原ペプチドを２μＭ／２μＭ／２．５μＭで含有するように、５μｌの混合物を５μｌのインタクトＣＤ３３抗原（４μＭ）と混合する。標準窒素レーザーを備えるＣｏｖａｌＸのＨＭ３相互作用モジュールを使用し、０〜２０００ｋＤａの異なる質量範囲に合わせて、ＭＡＬＤＩ  ＴｏＦ  ＭＳ分析を実施する。この分析には、次の質量分析計パラメータを適用する。リニア・ポジティブモード；イオン源１：２０ｋＶ；イオン源２：１７ｋＶ；パルスイオン抽出：４００ｎｓ；ＨＭ３について：ゲイン電圧：３．１４ｋＶ；ゲイン電圧：３．１４ｋＶ；加速電圧：２０ｋＶ。機器を校正するために、インスリン、ＢＳＡ及びＩｇＧのクラスターを有する外部校正器を適用する。各試料について、３つのスポットを分析する（１スポットあたりレーザーショット数３００）。示されたスペクトルは、合計３００のレーザーショット数に対応する。Ｃｏｍｐｌｅｘ  Ｔｒａｃｋｅｒ解析ソフトウェアバージョン２．０（ＣｏｖａｌＸ  Ｉｎｃ）を使用してＭＳデータを解析する。ＣＤ３３の抗体への結合に関する高次構造エピトープを特定するために、化学的架橋、Ｈｉｇｈ−Ｍａｓｓ  ＭＡＬＤＩ質量分析及びｎＬＣＯｒｂｉｔｒａｐ質量分析を使用して、抗原と抗体との間の相互作用界面を以下の手順に従って調べる。最終濃度が２μＭ／２μＭの抗体／抗原混合物を得るために、５μｌの試料抗原（濃度４μＭ）を５μｌの試料抗体（濃度４μＭ）と混合する。混合物を３７℃で１８０分間インキュベートする。第１のステップにおいて、１ｍｇのスベリン酸ジスクシンイミジルＨ１２（ＤＳＳ−Ｈ１２）架橋剤を１ｍｇのスベリン酸ジスクシンイミジルＤ１２（ＤＳＳ−Ｄ１２）架橋剤と混合する。この調製した２ｍｇを、ＤＳＳ  Ｈ１２／Ｄ１２の２ｍｇ／ｍｌ溶液を得るために、１ｍｌのＤＭＦと混合した。先に調製した１０μｌの抗体／抗原混合物を、調製した架橋剤ｄ０／ｄ１２（２ｍｇ／ｍｌ）の１μｌ溶液と混合した。架橋反応を達成させるために、この溶液を室温で１８０分間インキュベートする。
【０４８２】
タンパク質分解を促進するために、タンパク質中に存在するジスルフィド結合を還元する必要がある。架橋済み試料を２０μｌの炭酸水素アンモニウム（２５ｍＭ、ｐＨ８．３）と混合する。２．５μｌのＤＴＴ（５００ｍＭ）を混合後、溶液に添加する。次いで、混合物を５５℃で１時間インキュベートする。インキュベーション後、２．５μｌのヨードアセトアミド（１Ｍ）を添加してから、暗室中、室温で１時間インキュベートする。インキュベーション後、タンパク質分解に使用する緩衝液１２０μｌを添加することによって、溶液を１／５に希釈する。１４５μｌの還元／アルキル化架橋済み試料を２μｌのトリプシン（Ｓｉｇｍａ、Ｔ６５６７）と混合する。タンパク質分解混合物を３７℃で一晩インキュベートする。ａ−キモトリプシンタンパク質分解の場合、タンパク質分解の緩衝液は、Ｔｒｉｓ−ＨＣＬ  １００ｍＭ、ＣａＣｌ２  １０ｍＭ、ｐＨ７．８である。１４５μｌの還元／アルキル化架橋済み複合体を２μｌのα−キモトリプシン２００μＭと混合し、３０℃で一晩インキュベートする。この分析には、ｎＬＣをオービトラップ質量分析と組み合わせて使用する。Ｘｑｕｅｓｔバージョン２．０及びｓｔａｖｒｏｘソフトウェアを使用して架橋ペプチドを解析する。次いで、ペプチド及び架橋アミノ酸を特定する。
【０４８３】
結果
４つの抗ＣＤ３３抗体について、ＣＤ３３結合領域を決定した。結合領域を表７Ａに列挙する。図６Ａ及び６Ｂは、ヒトＣＤ３３の模式図を示し、抗ＣＤ３３抗体が結合した領域を示す。
表７Ａ：ＣＤ３３抗体結合領域
2018518176.tif 000027
【０４８４】
表７Ａに示すように、抗体３Ａ１２、６Ｃ７及び１Ａ８は、ＣＤ３３の細胞外免疫グロブリン様可変型（ＩｇＶ）ドメイン内のペプチドに対してのみ強固な結合を示した。
【０４８５】
表７Ａに示すように、抗体３Ａ１２及び６Ｃ７によって認識されたペプチドは、配列番号１のアミノ酸残基４８〜５４に対応し、アミノ酸配列：ＰＹＹＤＫＮＳを有する。抗体ＡＦ５によって認識されたペプチドは、配列番号１のアミノ酸残基１３７〜１４７に対応し、アミノ酸配列：ＨＶＴＤＬＴＨＲＰＫＩを有する。１Ａ８の抗体によって認識されたペプチドは、配列番号１のアミノ酸残基３９〜５１、８８〜９８、１１０〜１２０及び１１２〜１２２に対応し、アミノ酸配列：ＶＰＣＴＦＦＨＰＩＰＹＹＤ、ＧＲＦＲＬＬＧＤＰＳＲ、ＲＲＤＮＧＳＹＦＦＲＭ及びＤＮＧＳＹＦＦＲＭＥＲを有する。
【０４８６】
各抗体が結合したペプチドを図６Ａ及び６Ｂに示す。
【０４８７】
機能性マッピング
抗ＣＤ３３抗体２Ｅ１２、２Ｆ５、６Ｃ７及び６Ａ３のショットガン変異導入エピトープマッピングを、ＣＤ３３タンパク質のアラニンスキャニングライブラリーを使用して実施した。Ｃ末端Ｖ５エピトープタグをコードするＣＤ３３発現構築物（Ｕｎｉｐｒｏｔ  ｉｄ  Ｐ２０１３８）を高速アラニンスキャニング変異導入に供して包括的な変異体ライブラリーを作製した（Ｄａｖｉｄｓｏｎ  ａｎｄ  Ｄｏｒａｎｚ，（２０１４）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １４３：１３−２０）。ＣＤ３３細胞外ドメインである残基８〜２５９のそれぞれを、ほぼアラニンに変異させ、一方、アラニンコドンはセリンに変異させた。合計で、２５２個のＣＤ３３変異発現構築物を作製し、配列を確認し、３８４ウェルプレートに１ウェルあたり１変異体で配置した。
【０４８８】
３８４ウェルマイクロプレートに配置したＣＤ３３変異体ライブラリークローンをＨＥＫ−２９３Ｔ細胞にそれぞれトランスフェクトし、２２時間発現させた。次いで、細胞を、１０％正常ヤギ血清（ＮＧＳ）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ））で希釈した抗ＣＤ３３抗体とともにインキュベートした。ライブラリースクリーニングの前に、野生型ＣＤ３３（ＷＴ）を発現するＴ細胞に対する独立した免疫蛍光滴定曲線を使用して、一次抗体スクリーニング濃度を決定した。これにより、最適なシグナル対バックグラウンド比（５：１超）であることが特定され、シグナルが線形検出範囲内であることが確保された。１０％ＮＧＳ中ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８結合二次抗体３．７５μｇ／ｍｌ（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｗｅｓｔｇｒｏｖｅ，ＰＡ））を使用して、抗ＣＤ３３抗体を検出した。カルシウムもマグネシウムも含まないＰＢＳで細胞を２回洗浄し、０．１％ＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ））を含むＣｅｌｌｓｔｒｉｐｐｅｒ（Ｃｅｌｌｇｒｏ（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ））中に再懸濁した。Ｉｎｔｅｌｌｉｃｙｔ高速フローサイトメーター（ＨＴＦＣ、Ｉｎｔｅｌｌｉｃｙｔ（Ａｌｂｕｑｕｅｒｑｕｅ，ＮＭ））を使用して、平均細胞蛍光を検出した。バックグラウンド蛍光は、ベクターをトランスフェクトした対照細胞の蛍光測定によって決定した。各変異体クローンに対する抗体反応性を、モックトランスフェクト対照からのシグナルを差し引き、野生型ＣＤ３３トランスフェクト対照からのシグナルに対して正規化することによって、野生型ＣＤ３３タンパク質の反応性と比較して算出した。
【０４８９】
変異残基が試験抗体の反応性を維持せず、市販の参照抗体ＷＭ５３  Ｍａｂ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号３０３４０２）または追加の抗ＣＤ３３抗体の反応性を維持するのであれば、抗ＣＤ３３抗体エピトープにとって重要であるものとして、重要クローン内の変異残基であると特定した。このカウンタースクリーニング法により、局所的なミスフォールディングまたは発現欠損を有したＣＤ３３変異体の排除が容易になった。
【０４９０】
図６Ｃは、スクリーニングで特定された全ての重要残基の平均結合反応性及び範囲を示す。範囲は、２回行った実験の結合値の差である。一次重要残基を赤色で囲んだ。これらは、変異が試験抗体結合に対して陰性であるが（ＷＴに対する結合の３０％未満）、対照抗体に対しては陽性である（ＷＴの８０％超）残基であると特定された。青色で囲った残基は、追加の二次残基であり、閾値ガイドラインを満たさないが、その結合活性の減少及び重要残基への近接性は、それらが抗体エピトープの一部である可能性を示している（図６Ｃ）。図６Ｄは、Ｓｉｇｌｅｃ−７のＩｇＶドメインの結晶構造モデルを示し（ＰＤＢ  ＩＤ  １ＮＫＯ；Ｄｉｍａｓｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００４）、重要残基を赤色の球で示し、二次残基を青色の球で示している。抗体結合に重要なアミノ酸残基及び二次残基を表７Ｂに列挙する。
表７Ｂ：抗ＣＤ３３抗体結合に関与する残基
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【０４９１】
表７Ｂに示すように、抗体２Ｅ１２及び２Ｆ５による結合に関与する重要ＣＤ３３残基は、配列番号１のアミノ酸残基Ｙ４９及びＫ５２に対応し、抗体２Ｅ１２及び２Ｆ５による結合に関与する二次残基は、配列番号１のアミノ酸残基Ｙ５０に対応する。抗体６Ｃ７による結合に関与する重要ＣＤ３３残基は、配列番号１のアミノ酸残基Ｙ４９及びＮ５３に対応し、抗体６Ｃ７による結合に関与する二次残基は、配列番号１のアミノ酸残基Ｙ５０及びＫ５２に対応する。抗体６Ａ３による結合に関与する重要ＣＤ３３残基は、配列番号１のアミノ酸残基Ｄ１８、Ｎ２０、Ｆ２１及びＰ４６に対応し、抗体６Ａ３による結合に関与する二次残基は、配列番号１のアミノ酸残基Ｐ１９及びＦ４４に対応する。
【０４９２】
実施例３：ｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏでのＣＤ３３抗体誘導によるＣＤ３３の細胞表面レベルの低下
ＣＤ３３のｉｎ  ｖｉｔｒｏ発現
以下の実施例の目的は、抗ＣＤ３３及び／またはＣＤ３３二重特異性抗体が、単球、マクロファージ、樹状細胞、好中球、Ｔ細胞及び／またはミクログリア上のＣＤ３３の細胞表面レベルを低下させるかどうかを試験することであった。
【０４９３】
組織球性リンパ腫細胞株Ｕ９３７、ならびにヒト初代単球、末梢血単球に由来するヒト初代樹状細胞（ＤＣ）、末梢血単球に由来するヒト初代マクロファージ及びヒト単球に由来するヒト初代ミクログリア細胞上のＣＤ３３の細胞表面レベルを低下させる抗ＣＤ３３抗体の能力を評価した。
【０４９４】
ヒトミクログリア細胞は、Ｅｔｅｍａｄ  ｅｔ  ａｌ．，ＪＩ（２０１２）及びＯｈｇｉｄａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｒｅｐｏｒｔｓ（２０１４）に記載されているプロトコルに従って、末梢血単球から、１％Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ、ＧＭ−ＣＳＦ  １０ｎｇ／ｍｌ、Ｍ−ＣＳＦ  １０ｎｇ／ｍｌ、β−ＮＧＦ  １０ｎｇ／ｍｌ、ＣＣＬ−２  １００ｎｇ／ｍｌ、ＩＬ−３４  １００ｎｇ／ｍｌを含む無血清ＲＰＭＩ中で培養することによって調製した。分化形態が現れた７〜１０日目に細胞を回収した。ＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐ（登録商標）単球単離抗体カクテル（ＳｔｅｍＣｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用してヒト末梢血試料から単球を単離し、ＧＭ−ＣＳＦ及びＩＬ−４（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ）を用いて樹状細胞に分化させ、５日間培養した。１０％ウシ胎児血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ）を含有するＲＰＭＩ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を入れた培養皿に細胞を播種し、５％ＣＯ２、３７℃で培養した。非付着細胞を採取し、食作用実験に使用した。ヒトマクロファージを生成するために、ヒト末梢血試料から単球を単離し、５日間、５０μｇ／ｍｌのＭ−ＣＳＦを用いてマクロファージに分化させるか、１００μｇ／ｍｌのＧＭ−ＣＳＦ及び１００μｇ／ｍｌのＩＬ−４を用いて樹状細胞に分化させた。
【０４９５】
２４ウェルプレートに２００，０００細胞／ｍｌまたは６ウェルディッシュに５００，０００細胞で、１０％Ｈｙｃｌｏｎｅ  ＦＢＳ、２ｍＭ  グルタミン、ｐｅｎ／ｓｔｒｅｐ及び非必須アミノ酸を添加したＲＰＭＩ  ２ｍｌ中に細胞試料を播種した。ＣＤ３３抗体または対照のアイソタイプを１．０μｇ／ｍｌで添加し、５％ＣＯ２、３７℃で、２４時間インキュベートした。
【０４９６】
受容体動態を評価するために、抗体を細胞に１時間結合させ、洗浄し、２４時間及び４８時間後にＣＤ３３の表面レベルを決定した。
【０４９７】
細胞表面の受容体発現をＦＡＣＳ解析によって検出した。細胞を抗ＣＤ３３−ＦＩＴＣクローンＨＩＭ３−４及び対照表面マーカー（Ｕ９３７：Ｓｉｇｌｅｃ−５、ヒト単球：ＣＤ１４、ヒト樹状細胞：ＣＤ１１ｃ、ヒトマクロファージ：ＣＤ１１ｂ）と氷上で、暗所中、３０分間インキュベートした。細胞をＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ＋２％ＦＢＳ、２ｍＭ  ＥＤＴＡ）中で２回洗浄し、ＢＤ  ＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏでフローサイトメトリーを実施した。ＴｒｅｅＳｔａｒ  ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用してデータを解析した。データは、それぞれ対応するフルオロフォアのＭＦＩ値を使用して、抗体がない状態での受容体発現のパーセントとして算出した。
【０４９８】
表８Ａは、ヒト細胞でのＣＤ３３細胞表面レベルの結果を示す。表８Ａ中、「アイソタイプ」は、アイソタイプｍＩｇＧ１対照抗体を指す。
表８Ａ：ＣＤ３３抗体はヒト細胞上のＣＤ３３の細胞表面レベルを低下させる
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【０４９９】
表８Ｂは、ヒトミクログリア細胞でのＣＤ３３細胞表面レベルの結果を示す。表８Ｂ中、「アイソタイプ」は、アイソタイプｍＩｇＧ１対照抗体を指し、「ＮＤ」は、未決定を指す。
表８Ｂ：ＣＤ３３抗体はヒトミクログリア細胞上のＣＤ３３の細胞表面レベルを低下させる
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【０５００】
表８Ａ及び８Ｂならびに図１６Ａ〜１６Ｈに示すように、抗体１Ａ８、２Ｅ１２、２Ｆ５、３Ａ１２、６Ａ３及び６Ｃ７と、程度が小さくなるが２Ｂ４は、複数種のヒト細胞上のＣＤ３３の細胞表面レベルを低下させることができた。
【０５０１】
更に、ＣＤ３３抗体２Ｆ５、６Ｃ７、ゲムツズマブ及びリンツズマブを１２点曲線のために２倍で滴定し、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの表面ＣＤ３３下方制御試験を実施した（図１６Ｉ）。対照受容体ＣＤ１１ｃについて、類似の滴定曲線となった（図１６Ｊ）。次いで、半数効果濃度（ＥＣ５０）の算出を実施例１に記載のとおりに実施した。図１６Ｊに示すように、対照受容体ＣＤ１１ｃの細胞表面発現は、いずれの抗体でも調節されなかった。結果は、ＣＤ３３抗体２Ｆ５が２１．４７ｐＭのＥＣ５０でＣＤ３３の細胞表面発現を低下させ、ＣＤ３３抗体６Ｃ７が３４．８１ｐＭのＥＣ５０でＣＤ３３の細胞表面発現を低下させ、市販抗体ゲムツズマブが１０７．５ｐＭのＥＣ５０でＣＤ３３の細胞表面発現を低下させることを示している（図１６Ｉ）。結果は、抗体２Ｆ５及び６Ｃ７が、ＣＤ３３の細胞表面発現低下について、ほとんどの試験濃度で、市販抗体ゲムツズマブまたはリンツズマブよりも強力かつ堅固であることを示している（図１６Ｉ）。
【０５０２】
ＣＤ３３のｉｎ  ｖｉｖｏ発現
ＣＤ３３抗体のＣＤ３３の細胞表面レベルを低下させる能力をｉｎ  ｖｉｖｏで試験するために、ヒト化ＮＳＧＳマウス（ｈｕ−ＮＳＧＳ）を利用した。Ｈｕ−ＮＳＧＳマウス（ＮＯＤ−ｓｃｉｄ  ＩＬ２Ｒｇｎｕｌｌ−３／ＧＭ／ＳＦとも呼ぶ）は、ＣＭＶプロモーターの制御下でヒトＩＬ−３、ヒトＣＳＦ２及びヒトＫＩＴＬ導入遺伝子を発現する、トランスジェニックＮＳＧマウスである。また、Ｈｕ−ＮＳＧＳマウスに、ヒトＣＤ３４＋造血幹細胞を生着させた。雌のＨｕ−ＮＳＧＳマウスをＪａｘから購入し、ヒト細胞の生着から１５週間後に利用した。０日目に、４０ｍｇ／Ｋｇの抗ＣＤ３３抗体２Ｆ５またはアイソタイプコントロールマウスＩｇＧ１抗体（クローンＭＯＰＣ−２１）をマウスに腹腔内注射した。−７、１、３及び７日目に、マウスからの血液試料をヘパリン中に採取し、ＦＡＣＳ解析用に処理した。簡潔に述べれば、血液試料をまず氷冷ＡＣＫ溶解緩衝液中で５分間インキュベートして赤血球を溶解し、次いで、冷ＰＢＳで十分洗浄した。この手順を２回繰り返した。次いで、細胞を、抗ヒトＣＤ４５−Ｐｅ−Ｃｙ７、抗マウス−ＣＤ４５−ＡＰＣ−Ｃｙ７、抗ヒトＣＤ３−ＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５、抗ヒトＣＤ１４−ＦＩＴＣ、抗ヒトＣＤ１１ｃ−ＰＢ、抗ＣＤ３３−ＰＥ、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９−ＡＰＣ及び生存率色素（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号Ｌ３４９５７）の存在下で、ＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ＋２％ＦＢＳ、２ｍＭ  ＥＤＴＡ）中、Ｆｃブロック溶液の存在下で、氷上で３０分間インキュベートし、次いで、冷ＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄した。次いで、４％ＰＦＡ固定試料を得た。ＢＤ  ＦＡＣＳ  ＣＡＮＴＯ（登録商標）ＩＩサイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）でデータを取得し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアで解析した。ｈＣＤ４５＋、ｈＣＤ１４＋細胞集団中のＣＤ３３及びＳｉｇｌｅｃ９の発現レベルを決定した。
【０５０３】
図１６Ｋ及び１６Ｌに示すように、抗ＣＤ３３抗体２Ｆ５で処置すると、対照抗体の処置及び処置前レベルと比較したとき、処置したｈｕ−ＮＳＧＳマウスの末梢血細胞中のＣＤ３３の細胞表面レベルを低下させることができた。ＣＤ３３発現は、抗体処置後１日という早い段階で約８０％減少し、最後の試験時点（処置後７日）まで低いままであった。比較として、関係のない表面受容体Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞表面発現は、処置前レベルと比べて変化しなかった。
【０５０４】
更に、末梢単球上の細胞表面発現を減少させる半数効果濃度（ＥＣ５０）を決定するために、ＣＤ３３抗体２Ｆ５を滴定し、ｉｎ  ｖｉｖｏでの表面ＣＤ３３下方制御試験を実施した。ＣＤ３３抗体２Ｆ５を４０ｍｇ／ｋｇ、８．０ｍｇ／ｋｇ、１．６ｍｇ／ｋｇまたは０．３ｍｇ／ｋｇのいずれかの単回腹腔内注射でＴａｃｏｎｉｃのＮＯＧヒト化マウスに注射した。以下の時間点で、ＣＤ３３及び対照受容体Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞表面レベルをＦＡＣＳにより測定した。処置の７日前（−７日目）、処置後１日、その後３５日目まで毎週。末梢ヒトＣＤ４５＋ＣＤ１４＋単球上のＣＤ３３及びＳｉｇｌｅｃ−９の細胞表面レベルをＦＡＣＳにより評価した。−７日目のＭＦＩを使用して、１００％細胞表面発現のベースラインを設定し、低下率（％）を算出した。図１６Ｍに示すように、抗体２Ｆ５は、試験した全ての抗体濃度で、ｉｎ  ｖｉｖｏでヒト化マウスの末梢単球上のＣＤ３３の細胞表面レベルを経時的に持続的に減少させた。ＣＤ３３の細胞表面レベルの５０％減少が、４０ｍｇ／ｋｇ、８．０ｍｇ／ｋｇ及び１．６ｍｇ／ｋｇの抗体濃度で観察された（図１６Ｍ及び１６Ｎ）が、対照受容体では観察されなかった。
【０５０５】
実施例４：ＣＤ３３抗体はヒトＣＤ３３への結合に関してＣＤ３３リガンドと競合する
以下の実施例の目的は、抗ＣＤ３３抗体が、ＣＤ３３上のリガンド結合部位を認識し、ＣＤ３３受容体に対するリガンド結合と競合するかどうかを試験することであった。
【０５０６】
抗体がＣＤ３３へのリガンド結合と競合することを決定するために、赤血球（ＲＢＣ）固着アッセイを標準的なプロトコルに従って実施した（Ｋｅｌｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，１９９４）。赤血球は、シアル酸を含有する糖タンパク質で高度に修飾されている。したがって、固定化ＣＤ３３に対する赤血球結合を遮断する抗体の能力を使用してリガンド干渉を決定することができる。簡潔に述べれば、９６ウェルのＩｍｍｕｎｏｌｏｎプレート中に５μｇ／ｍｌのＣＤ３３−Ｆｃを室温で一晩コーティングし、次いで、ＰＢＳで洗浄し、結合緩衝液（％０．２５  ＢＳＡ  １ｍＭ  ＣａＣｌ２含有ＰＢＳ）で１時間ブロッキングした。ＣＤ３３抗体（０．５μｇ／ｍｌまたは１．０μｇ／ｍｌ）またはＦａｂ（２５μｇ／ｍｌ）を、穏やかな振動を与えながら室温で１時間結合させた。結合しなかった抗体を除去した後、各ウェルに赤血球を３．０×１０６細胞／ｍｌの濃度で添加し、室温で１時間インキュベートした。次いで、結合しなかった赤血球をＰＢＳで注意深く３回洗浄し、結合した赤血球を低張溶解させるために、各ウェルに水を加えた。プレートを−８０℃に１０分間移した後、３７℃に１５分間移した。２Ｎ硫酸で反応を停止させた後、結合した赤血球をペルオキシダーゼ活性によって検出した。シグナルは、４５０ｎＭで検出した。データは、抗体がない状態でのプレート結合ＣＤ３３−Ｆｃに対する赤血球結合のパーセントとして算出した。
【０５０７】
リガンド競合アッセイの結果を表９に示す。表９中、「アイソタイプ」は、アイソタイプｍＩｇＧ１対照抗体を指す。
表９：ＣＤ３３抗体はリガンド結合と競合する
2018518176.tif 000031
【０５０８】
表９に示すように、抗体１Ａ８、２Ｅ１２、２Ｆ５、３Ａ１２、６Ａ３及び６Ｃ７と、程度が小さくなるが２Ｂ４は、ＣＤ３３への赤血球結合を遮断することができることから、これらの抗体がＣＤ３３上のリガンド結合部位に対して競合的結合を示し、ＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンドとの間の相互作用を阻害する（すなわち、ＣＤ３３へのリガンド結合を遮断する）能力が示されている。
【０５０９】
実施例５：ＣＤ３３抗体機能性試験の概要
表１０は、上の実施例３及び４に記載した細胞表面発現及びリガンド結合試験の結果をまとめたものである。表１０に示すように、ＣＤ３３抗体の全般的なクラスが１つ存在した。このクラスの抗体は、ＣＤ３３の細胞表面レベルを低下させ、ＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンドとの間の相互作用を阻害する。
【０５１０】
ＣＤ３３の細胞表面レベルを低下させ、ＣＤ３３と１つ以上のＣＤ３３リガンドとの間の相互作用を阻害する抗体クラスの抗体には、１Ａ８、２Ｂ４、２Ｅ１２、２Ｅ１２．１、２Ｆ５、２Ｆ５．１、３Ａ１２ａ、３Ａ１２ｂ、６Ａ３ａ、６Ａ３ｂ、６Ｃ７ａ、６Ｃ７ｂ及び６Ｃ７．２が含まれる。
表１０：ＣＤ３３抗体機能性試験
2018518176.tif 000032
【０５１１】
実施例６：樹状細胞上のＣＤ３３へのリガンド結合によるＴ細胞の増殖及び食作用の阻害
ヒト樹状細胞（ＤＣ）を末梢血単球からＧＭ−ＣＳＦ及びＩＬ−４を用いて分化させ、５日間培養した。未成熟（浮遊）ＤＣを回収し、１２ウェルディッシュに２００，０００細胞／ｍｌの密度で播種した。ＴＮＦａ（５０μｇ／ｍｌ）、ＩＬ−１β（５０μｇ／ｍｌ）、ＩＬ−６（１５０ｎｇ／ｍｌ）及びプロスタグランジンＥ２（１μｇ／ｍｌ）のサイトカインカクテルで、２４時間、ＤＣを活性化させた。樹状細胞の成熟は、ＬＩＮ、ＣＤ１１ｃ、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ８６及びＣＤ８３（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に対する市販抗体を用いて、フローサイトメトリーにより決定した。同種単離Ｔ細胞と共培養する直前に、活性化ＤＣを、無血清培地中でＶｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａ由来のノイラミニダーゼ１００ｍＵ／ｍｌにより３７℃で２時間シアリダーゼ処理するか、未処理とした。血清含有培地の添加によって酵素活性を消失させ、細胞をペレット化し、完全培地中に再懸濁した。シアリダーゼ活性化ＤＣ、未処理活性化ＤＣまたは不活性化ＤＣを、同種ＣＦＳＥ標識Ｔ細胞と、１：１０の比で共培養した。ＣＤ３／ＣＤ２８  Ｄｙｎａｌビーズを陽性対照としてＴ細胞単独に加えた。５日後、Ｔ細胞の増殖をＢＤ  ＦＡＣＳ  ＣａｎｔｏでＣＦＳＥ希釈によって測定した。
【０５１２】
図７及び８は、樹状細胞上のシアル酸が混合リンパ球反応（ＭＬＲ）中にＴ細胞の増殖を制限することを示す。図８は、抑制性リガンドを通常発現しているＤＣでは、低レベルのＴ細胞の増殖が誘導されるのに対し（左図）、ＤＣ上の抑制性リガンドを除去すると、Ｔ細胞の増殖が増加すること（右図）を示している。
【０５１３】
図７及び８に示すように、活性化ＤＣからシアル酸を酵素的に除去すると、未処理の活性化ＤＣと比較したとき、Ｔ細胞増殖が増加した。これらの結果は、ＤＣ上に存在するシアル酸が、Ｔ細胞に対して抑制的に作用し、同種ＤＣと共培養するとき、Ｔ細胞の増殖を制限することを示している。これらの結果は、Ｔ細胞または樹状細胞上のＣＤ３３を遮断する抗体が、Ｔ細胞及び／または樹状細胞の機能性を向上させることを示している。ＣＤ３／ＣＤ２８  Ｄｙｎａｌビーズを、陽性対照として使用した。更に、これらの結果は、ＤＣまたは任意の他の細胞もしくは生物源との相互作用を阻害することにより、Ｔ細胞の機能性を増加させることができることを示している。
【０５１４】
実施例７：炎症状態により骨髄細胞のＣＤ３３発現が誘導される
ヒト樹状細胞（ＤＣ）を末梢血単球からＧＭ−ＣＳＦ及びＩＬ−４を用いて分化させ、５日間培養した。未成熟ヒトＤＣを５日目に回収し、Ｂ１６、ルイス肺、ＭＣ３８腫瘍上清に由来する滅菌濾過済み上清または１０ｎｇ／ｍｌのＬＰＳと共培養した。２４時間後、ＣＤ３３発現について、直接結合したＣＤ３３−ＰＥ抗体を用いてフローサイトメトリーにより決定した。シアル酸リガンド発現を、ヒトＩｇＧ１−Ｆｃに融合した可溶性ＣＤ３３  ５０μｇ／ｍｌと、氷上で３０分間インキュベーションすることによって評価した。ＩｇＧ１−Ｆｃ単独をヒトＦｃブロックの存在下で陰性対照に使用した。細胞上のシアル酸への可溶性受容体の結合は、洗浄ステップを行い、抗ヒトＰＥ結合二次抗体と氷上で３０分間インキュベーションした後、検出した。フローサイトメトリー解析は、ＢＤ  ＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏで実施した。
【０５１５】
初代マクロファージを誘導するために、ヒト末梢血試料からヒト単球を単離し、それをそのまま使用するか、５０μｇ／ｍｌのＭ−ＣＳＦを用いてマクロファージに５日間分化させる。炎症性サイトカイン産生におけるＣＤ３３の役割を決定するために、ヒトマクロファージを様々な炎症性メディエーターとともに培養し、培養上清中のサイトカインレベルを測定する。ヒトマクロファージを生成するために、ヒト末梢血試料から単球を単離し、それをそのまま使用するか、５日間、５０μｇ／ｍｌのＭ−ＣＳＦを用いてマクロファージに分化させるか、１００μｇ／ｍｌのＧＭ−ＣＳＦ及び１００μｇ／ｍｌのＩＬ−４を用いて樹状細胞に分化させる。細胞を５日間培養し、付着細胞をＰＢＳ中１ｍＭ  ＥＤＴＡで剥がした。細胞を９６ウェルプレートに１０５細胞／ウェルで播種し、３７℃で４時間接着培養する。次いで、ＴＬＲアゴニストＬＰＳ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ａｂｏｒｔｕｓ  ｅｑｕｉ）またはザイモサン（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）を０．０１〜１００ｎｇ／ｍｌ（ＬＰＳ）または０．０１〜１００μｇ／ｍｌ（ザイモサン）の範囲の濃度で用いて、細胞を刺激する。別の方法として、マクロファージを１０ｎｇ／ｍｌのサイトカインＩＬ−４または５０ｎｇ／ｍｌのＩＦＮ−ｇの存在下で培養する。刺激から２４または４８時間後に細胞培養上清を回収し、ＴＮＦａ、ＩＬ−６、ＩＬ−１０及びＭＣＰ−１サイトカインのレベルを、Ｃｙｔｏｍｅｔｒｉｃ  Ｂｅａｄ  Ａｒｒａｙ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（ＢＤ）を製造元のプロトコルに従って使用して測定する。炎症性メディエーターＬＰＳまたはザイモサンを用いて刺激したマクロファージは、ＣＤ３３アンタゴニスト抗体または抑制性グリコールリガンドを除去する酵素で処置した場合、より多くの炎症性サイトカインＴＮＦａ、ＩＬ−６、ＩＬ−１０及びＭＣＰ−１を分泌することが予測される。
【０５１６】
図９Ａ及び９Ｂは、腫瘍上清に曝露後、ヒト樹状細胞上のＣＤ３３発現が増加していることを示す。図９Ｃ及び９Ｄは、ＬＰＳ誘導炎症中に、ヒト樹状細胞上のＣＤ３３発現が増加していることを示す。図９Ｅ及び９Ｆは、ＬＰＳ誘導炎症によりシアル酸（ＣＤ３３リガンド）の発現が増加していることを示す。
【０５１７】
これらの結果は、炎症状態及び腫瘍環境がＣＤ３３とシアル酸リガンドの両方の上方制御をもたらすことを示している。結果はまた、ＣＤ３３の機能が増大することで、ヒト初代樹状細胞が免疫抑制され得ることを示している。これらの結果は、下方制御抗体または遮断抗体でＣＤ３３を阻害することで、免疫抑制された骨髄由来細胞または腫瘍関連骨髄細胞を減らし、免疫機能を回復できることを示している。これらの結果は、更に、骨髄細胞上のＣＤ３３を遮断する抗体が骨髄細胞の機能性を向上させることを示している。
【０５１８】
実施例８：シアリダーゼ処理を用いた樹状細胞によるＥ．ｃｏｌｉ食作用の増加
以下の実施例の目的は、アンタゴニスト抗ＣＤ３３抗体及び／またはＣＤ３３二重特異性抗体が、単球、樹状細胞マクロファージ及びミクログリアなどの骨髄系統由来細胞において、アポトーシス性ニューロン、神経組織破片、非神経組織破片、細菌、他の異物及び病原タンパク質、例えば、Ａβペプチド、αシヌクレインタンパク質、タウタンパク質、ＴＤＰ−４３タンパク質、プリオンタンパク質、ハンチンチンタンパク質、ＲＡＮ翻訳産物抗原、例えば、グリシン−アラニン（ＧＡ）、グリシン−プロリン（ＧＰ）、グリシン−アルギニン（ＧＲ）、プロリン−アラニン（ＰＡ）またはプロリン−アルギニン（ＰＲ）から構成されるジペプチドリピート（ＤＰＲペプチド）の食作用を誘導するかどうかを試験することであった。二重特異性抗体は、ＣＤ３３抗原及び第２の抗原、例えば、限定するものではないが、ＣＤ３、Ａβペプチド抗原またはαシヌクレインタンパク質抗原またはタウタンパク質抗原またはＴＤＰ−４３タンパク質抗原またはプリオンタンパク質抗原またはハンチンチンタンパク質抗原またはＲＡＮ翻訳産物抗原、例えば、グリシン−アラニン（ＧＡ）、グリシン−プロリン（ＧＰ）、グリシン−アルギニン（ＧＲ）、プロリン−アラニン（ＰＡ）もしくはプロリン−アルギニン（ＰＲ）から構成されるジペプチドリピート（ＤＰＲペプチド）を認識する抗体であり得る。
【０５１９】
ＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐ（登録商標）単球単離抗体カクテル（ＳｔｅｍＣｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用してヒト末梢血試料から単球を単離し、ＧＭ−ＣＳＦ及びＩＬ−４（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ）を用いて樹状細胞に分化させ、５日間培養した。１０％ウシ胎児血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ）を含有するＲＰＭＩ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を入れた培養皿に細胞を播種し、５％ＣＯ２、３７℃で培養した。非付着細胞を採取し、食作用実験に使用した。
【０５２０】
細菌食作用アッセイを実施するために、樹状細胞を回収し、９６ウェル平底プレート中、サイトカインなしで、２時間培養した。ｐＨｒｏｄｏ標識Ｅ．ｃｏｌｉ  ＢｉｏＰａｒｔｉｃｌｅｓを製造元のプロトコルに従って再懸濁させ、Ｖｉｂｒｏ  ｃｈｏｌｅｒａ由来のシアリダーゼ０．２Ｕ／ｍｌもしくは０．４Ｕ／ｍｌまたはＰＢＳ単独を用いて、３７℃で２．５時間処理した。ＢｉｏＰａｒｔｉｃｌｅｓを洗浄し、ＲＰＭＩ中に再懸濁させ、２０μｇ／ウェルで加えた。樹状細胞とＥ．ｃｏｌｉ細胞を混合し、ペレット化し、３７℃で３０分間インキュベートした。サイトカラシンＤを対照ウェルに１０μＭで加えた。ＦＡＣＳ解析の直前に、細胞を氷上に移し、ＦＡＣＳ緩衝液中、４℃で２回洗浄した。ｐＨｒｏｄｏ標識Ｅ．ｃｏｌｉ食作用を、ＢＤ  ＦＡＣＳ  ＣａｎｔｏのフローサイトメトリーによってＰＥチャンネルで検出した。
【０５２１】
図１０は、シアリダーゼ処理によりＥ．ｃｏｌｉの樹状細胞媒介性食作用が増加したことを示す。これらの結果は、例えば、ＣＤ３３の細胞表面発現を減少させ、かつ／あるいは１つ以上のＣＤ３３リガンドのＣＤ３３への結合を阻害するアンタゴニスト抗ＣＤ３３抗体及び／またはＣＤ３３二重特異性抗体を使用して、食作用を誘導し、または食作用を増加させることも可能であることを示している。
【０５２２】
図１１Ａ及び１１Ｂは、ＣＤ３３抗体２Ｆ５及び６Ｃ７がＥ．ｃｏｌｉのマクロファージ食作用を増加させることを示している。これらの結果は、ＣＤ３３の細胞表面レベルを下方制御するＣＤ３３抗体が、マクロファージの食作用性を高めることができ、ＣＤ３３抗体の存在下で、細菌基質の取込みを増加させることができるが、アイソタイプ対照ではできないことを示している。結果はまた、マクロファージが、ＣＤ３３発現の減少によって、したがってＣＤ３３機能の低下によって、その食作用機能を増加させることを示している。
【０５２３】
実施例９：アルツハイマー病患者の脳切片におけるＣＤ３３リガンドの発現増加
ビオチン化したＣＤ３３−Ｆｃ（Ｒ＆Ｄ）及び陰性対照のＩｇＧ１−Ｆｃによる免疫組織化学によって、正常患者及びアルツハイマー病（ＡＤ）患者の脳におけるシアル酸リガンド発現を検出した。ＥＺ−Ｌｉｎｋ  Ｓｕｌｆｏ−ＮＨＳ−Ｂｉｏｔｉｎ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を製造元の説明書に従って用いて、ＣＤ３３−Ｆｃ及び対照ＩｇＧ−Ｆｃタンパク質をビオチン化した。ＩＨＣ手順は、終夜のインキュベーションを除き、シェーカー上で実施した。試料を１０％ＭｅＯＨ、３％Ｈ２Ｏ２のＰＢＳ中で１５分間インキュベートし、続いて４％血清含有ＰＢＳ中で３回洗浄した。次に、試料を０．２％トリトン−Ｘ、４％血清、０．０１９％Ｌ−リシンのＰＢＳ中で３０分間インキュベートした後、次いで、４％血清含有ＰＢＳ中で一次抗体と４℃で一晩インキュベートした。翌日、試料をシェーカー上に１時間置き、続いて３回洗浄し、次いで、試料をＡＢＣ緩衝液中で１時間インキュベートし、３回洗浄した。試料をＶｅｃｔｏｒ  ＤＡＢペルオキシダーゼキットで発色させ、３回洗浄し、脱水し、カラーカメラ付きＮｉｋｏｎ  ９０ｉ顕微鏡を用いて倍率２００Ｘで撮影した。Ｎｉｋｏｎ  ＥｌｅｍｅｎｔｓＢＲ画像解析ソフトウェアを使用して定量を実施した。
【０５２４】
図１２Ａ及び１２Ｂは、ＡＤ患者由来脳切片において、シアル酸ＣＤ３３リガンドが上方制御されていることを示す。５つのＡＤヒト脳及び５つの非ＡＤヒト脳からのデータは、ＣＤ３３シアル酸リガンドの発現に関して、一元配置により、対照試薬ＩｇＧ１−Ｆｃ（ｐ＝０．１８４２）と比較して、統計的に有意な増加（ｐ＝０．０００２）を示している（図１２Ｂ）。図１３Ａ及び１３Ｂは、ＡＤ患者由来の脳切片において、ＣＤ３３発現が正常患者（非ＡＤ）と比較して増加していることを示す。図１３Ｂのデータは、５つのＡＤヒト脳及び５つの非ＡＤヒト脳からのものである。
【０５２５】
完全長ＣＤ３３発現の増加に関連するＳＮＰを特定した遺伝子データは、ＡＤリスクを増大させる。図１２及び１３に示す結果は、いくつかのＡＤ脳におけるＣＤ３３の上方制御に加えて、ＡＤ脳では、ＣＤ３３のシアル酸リガンドも増加していることを示す。
【０５２６】
これらの結果は、細胞表面からＣＤ３３を除外する抗体またはリガンド相互作用の増加を遮断する抗体が、脳のミクログリア細胞または他の骨髄細胞における抑制性ＣＤ３３依存シグナル伝達を減らし、これらの細胞に正常な機能を取り戻させ、アルツハイマー病に対して有益な効果を持つであろうことを示している。
【０５２７】
実施例１０：癌細胞におけるＣＤ３３及びＣＤ３３リガンドの発現増加ならびにＣＤ３３除去作用
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ試験
Ｂ１６、ルイス肺及びＭＣ３８結腸癌細胞におけるシアル酸リガンド発現を、ヒトＩｇＧ１−Ｆｃに融合した可溶性ＣＤ３３（Ｒ＆Ｄ）５０μｇ／ｍｌと、氷上で３０分間インキュベーションすることによって評価した。ＩｇＧ１−Ｆｃ単独をヒトＦｃブロックの存在下で陰性対照に使用した。細胞上のシアル酸への可溶性受容体の結合は、洗浄ステップを行い、抗ヒトＰＥ結合二次抗体と氷上で３０分間インキュベーションした後、検出した。フローサイトメトリー解析は、ＢＤ  ＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏで実施した。
【０５２８】
図１４Ａは、抑制性ＣＤ３３リガンドの発現が、黒色腫細胞、肺腫瘍細胞及び結腸癌細胞において、バックグラウンドに対して少なくとも２０倍増加していることを示す。理論に束縛されるものではないが、これらの腫瘍細胞上の抑制性シアル酸リガンド発現の特定は、癌細胞の免疫認識及びクリアランスの回避に寄与している機序を示唆するものである。腫瘍細胞上のシアル酸リガンドは、骨髄系及びリンパ系免疫細胞上に発現されたＣＤ３３を介して、免疫抑制相互作用を媒介することができる（図１４Ｂ〜１４Ｄ）。これらの結果は、細胞表面からＣＤ３３を除去する抗体またはリガンド相互作用の増加を遮断する抗体が、免疫系に対する腫瘍の抑制作用を減らし、癌療法を向上させ得ることを示している。
【０５２９】
ｉｎ  ｖｉｖｏ試験
ＣＤ３３の不存在下または存在下におけるｉｎ  ｖｉｖｏでのＭＣ３８結腸癌成長を試験するために、８〜１０週齢のＣ５７ＢＬ／６ＮＪ野生型マウス（ＷＴ；ｎ＝７）またはＣＤ３３ノックアウトマウス（ＫＯ；ｎ＝１０）に、０．１ｍＬのＰＢＳ中の１ｘ１０６のＭＣ３８結腸癌細胞を脇腹に皮下接種した。腫瘍が２０００ｍｍ３のサイズになるまで、測径器を用いて腫瘍成長を３〜４日ごとに観察した。
【０５３０】
ｉｎ  ｖｉｖｏでのＣＤ３３の発現を決定するために、４週齢の雌のＴａｃｏｎｉｃ  ＮＯＧマウスに約２４時間の骨髄抑制を行った後、静脈内注射によってヒト胎児肝臓ＣＤ３４＋細胞（１００，０００細胞／マウス）を移植した。免疫細胞の再構築を末梢血のフローサイトメトリーによって観察した。生着から１２週間後、Ｃｈａｍｐｉｏｎｓ  ＴｕｍｏｒＧｒａｆｔ（登録商標）黒色腫モデルを皮下移植した。約８〜１０週後、腫瘍が１５０〜２００ｍｍ３の大きさに達したら、血液、脾臓及び腫瘍細胞を採取し、ＢＤ  ＦＡＣＳＣａｎｔｏ（登録商標）でのフローサイトメトリーによる解析用に処理した。フローサイトメトリー解析を実施して、ＣＤ３３の発現をヒト（ｈＣＤ４５＋）免疫系の異なる区画で特定した。具体的には、ＣＤ３＋Ｔ細胞、ＣＤ１４＋単球／マクロファージ及び他のＣＤ３−ＣＤ１４−ヒト免疫細胞の各細胞における発現を解析した。データは、ＴｒｅｅＳｔａｒのＦｌｏｗＪｏソフトウェアバージョン１０．０．６で解析した。
【０５３１】
図１４Ｂ〜１４Ｄは、ｉｎ  ｖｉｖｏでの腫瘍細胞のＣＤ３３発現を示す。図１４Ｂは、成熟マウスＴ細胞、Ｂ細胞及びＮＫ細胞を欠失しており、かつヒトＣＤ４５＋免疫細胞及び患者由来黒色腫を移植した免疫不全マウスモデルからの末梢血及び脾臓に由来するヒト免疫細胞と、患者由来黒色腫に由来する細胞浸潤物におけるＣＤ３３発現を示す。図１４Ｃは、マウス腫瘍モデルからの脾臓に由来するＣＤ３＋Ｔ細胞、ＣＤ１１ｂ＋免疫細胞及びＧｒ１＋ＣＤ１１ｂ＋免疫細胞と、乳癌腫瘍ＥＭＴ−６に由来する細胞浸潤物におけるＣＤ３３発現を示す。図１４Ｄは、マウス腫瘍モデルからの脾臓に由来するＣＤ４５−Ｔ細胞、Ｇｒ１＋細胞及びＧｒ１−ＣＤ１１ｂ−免疫細胞と、乳癌腫瘍ＥＭＴ−６に由来する細胞浸潤物におけるＣＤ３３発現を示す。
【０５３２】
図１５Ａ〜１５Ｃは、野生型マウスと比較して、ＣＤ３３  ＫＯマウスでは、皮下ＭＣ３８腫瘍体積が減少したことを示している。図１５Ｄは、カプラン・マイヤー生存データを示し、ＣＤ３３  ＫＯマウスが野生型マウスよりも良好にＭＣ３８腫瘍接種に耐えることを示している。
【０５３３】
図１５Ｅは、野生型マウス（ＷＴ）の脾臓及び腫瘍から単離された免疫細胞上のＣＤ３３の発現を示すが、ＣＤ３３  ＫＯマウスでは示さない。ＣＤ３３は、ナイーブマウスと比較して、腫瘍接種ＷＴマウスでは、脾臓マクロファージ／単球ＣＤ４５＋ＣＤ１１ｂ＋Ｇｒ１ｌｏ細胞、ＣＤ４５＋ＣＤ１１ｂ＋Ｇｒ１ｈｉ骨髄由来サプレッサー細胞及びＣＤ１１ｃ＋樹状細胞で上方制御されている。ＣＤ３３発現はさらに、ＷＴ腫瘍接種マウスまたはナイーブＷＴマウスと比較すると、腫瘍浸潤ＣＤ４５＋ＣＤ１１ｂ＋Ｇｒ１ｌｏ細胞で更に増加し、脾臓ＣＤ４５＋ＣＤ１１ｂ＋Ｇｒ１ｈｉ細胞と同じレベルのままであり、腫瘍浸潤ＣＤ１１ｃ＋細胞で高度に上方制御され、ＮＫ細胞でわずかに上方制御されている。
【０５３４】
これらの結果は、ＣＤ３３の阻害により、皮下腫瘍の限定された成長または制限が可能であることを示している。結果はまた、腫瘍成長を制限し、免疫系が腫瘍クリアランスを経ることを可能にする有益な免疫応答をＣＤ３３の機能が抑制していることを示している。これらの結果は、さらに、ＣＤ３３遮断抗体が、部分的には、腫瘍浸潤免疫抑制性細胞の数を減らし、その機能を変更し、かつ／もしくは浸潤する細胞傷害性Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞の数を増やし、または他の免疫学的腫瘍クリアランス機序を増大させることによって、固形腫瘍成長を減少させ得ることを示している。ＣＤ３３抗体は、ＣＤ３３発現を減少さるか、抑制性シアル酸リガンド相互作用を遮断するかのいずれかによって、固形腫瘍成長を減少させ得る。本明細書で示されるように、ＣＤ３３  ＫＯマウスは、腫瘍を接種すると、ＷＴマウスよりも生存が良好であり、これは、ＣＤ３３遮断抗体が癌の治療に有益な効果を有する可能性があることを示唆している。本実施例では更に、腫瘍接種マウスの脾臓ＣＤ３３＋細胞と比較して、腫瘍浸潤骨髄細胞がＣＤ３３を上方制御することが示されており、ナイーブマウスと比較すると上方制御はより大きいことが示されている。
【０５３５】
抗ＣＤ３３抗体処置のｉｎ  ｖｉｖｏ効果
ＣＤ３３遮断抗体の有益な作用を試験するために、ＭＣ３８結腸癌、Ｂ１６黒色腫またはＥＭＴ−６マウス乳癌などの同系腫瘍を野生型（ＷＴ）雌のＢＡＬＢ／ｃマウスに注射する。８〜１２週齢のマウスに、０％Ｍａｔｒｉｇｅｌ  ｓｃ中の５×１０６個のＥＭＴ−６腫瘍細胞を、マウス１匹あたり０．１ｍＬの体積で、脇腹に注射する。１日目に、体重に基づいて、マウスを処置群に無作為割り当てする。体重を、実験終了まで隔週で測定する。１、４、８、１５及び２２日目に、腫瘍を投与したマウスに、２０〜１００ｍｇ／ｋｇのＣＤ３３または対照抗体を、単独で、または抗ＣＴＬＡ４  ９Ｈ１０抗体もしくは抗ＰＤ１抗体のいずれかと組み合わせて注射する。次いで、腫瘍サイズを測径器測定により終了時まで隔週で測定する。有害反応または死亡を観察する。体重減少が３０％を超える個々の動物または腫瘍サイズの３回連続した測定で体重減少が２５％を超える個々の動物を安楽死させる。実験のエンドポイントは、腫瘍体積２０００ｍｍ３または４５日のいずれか早い時点とする。反応を示す動物は、より長く継続してもよい。エンドポイントに達成したら、動物を安楽死させる。腫瘍体積及び生存に対する抗体の効果を観察する。
【０５３６】
抗ＣＤ３３抗体と抗ＰＤ−１抗体の併用処置のｉｎ  ｖｉｖｏ効果
ＣＴＧ−０２０２患者由来黒色腫腫瘍を、ヒト化マウスへの移植前に、予備試験マウスでまず継代した。腫瘍がストックマウスで１〜１．５ｃｍ３の体積に達したら、予備試験マウスに再移植するために腫瘍を採取した。腫瘍断片を予備試験マウスの左脇腹に片側移植した。継代数６のＣＴＧ−０２０２黒色腫腫瘍を使用した。
【０５３７】
雌の免疫不全マウス（Ｔａｃｏｎｉｃ  ＮＯＧ）を胎児肝臓由来ＣＤ３４＋造血細胞でヒト化した（Ｃｈａｍｐｉｏｎ  ＴｕｍｏｒＧｒａｆｔ（登録商標）黒色腫モデルＣＴＧ−０２０２）。マウスを、個別にＨＥＰＡ換気したケージ（Ｉｎｎｏｃａｇｅ（登録商標）ＩＶＣ、Ｉｎｎｏｖｉｖｅ  ＵＳＡ）中で、照射滅菌済みペーパーツイスト補充１／８”コーンコブ床敷（Ｓｈｅｐｅｒｄ）上、１２時間の明暗サイクル、６８〜７４°Ｆ（２０〜２３℃）及び湿度３０〜７０％で飼育した。マウスには、水（逆浸透、２ｐｐｍ  Ｃｌ２）を自由摂取で与え、タンパク質１９％、脂肪９％及び繊維４％からなる照射滅菌済み試験げっ歯類飼料（Ｔｅｋｌａｄ２９１９）を与えた。４８匹のヒト化マウスに移植を行い、移植後７〜１０日から各実験について予備試験の腫瘍体積を記録した。腫瘍が約８０〜２００ｍｍ３の体積に達したら、マウスを腫瘍体積に合わせて処置群または対照群に分け、０日目に開始する投与に使用した。処置群には、抗ＰＤ−１抗体Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）（ペンブロリズマブ）を、単独で、または抗ＣＤ３３抗体２Ｆ５と組み合わせて投与した。対照群には、抗ＰＤ−１抗体とアイソタイプ対照抗体または低親和性／非リガンド遮断抗ＣＤ３３抗体との組み合わせを投与した。その後、０日目に投与を開始した。表１１及び図１５Ｆは、投与計画、投与量及び投与経路を示す。
表１１：抗体投与計画
2018518176.tif 000033
【０５３８】
表１１中、「Ｎ」は、各処置群における反復数を指し、「ＣＴＲ  ｍＡｂ」は、アイソタイプ対照抗体または低親和性／非リガンド遮断抗ＣＤ３３抗体を指し、「２Ｆ５  ｍＡｂ」は、抗ＣＤ３３抗体２Ｆ５を指し、「ＲＯＡ」は、投与経路を指し、「ＩＰ」は、腹腔内を指し、「ｑ５ｄｘ６」は、５日ごとの投与で合計６回の投与計画を指す。
【０５３９】
０日目から開始して、マウスを毎日観察し、デジタルスケールを使用して週２回、体重を計測した。腫瘍寸法をデジタル測径器により週２回測定し、個々の推定腫瘍体積と平均推定腫瘍体積（平均腫瘍体積±標準誤差）を含むデータを各群について記録した。腫瘍体積は、式（１）：腫瘍体積＝短径２×長径×０．５２を使用して算出した。試験終了時に、初期（ｉ）及び最終（ｆ）の腫瘍測定値を使用して、各処置群（Ｔ）対対照群（Ｃ）についての腫瘍成長阻害率（％ＴＧＩ）の値を式（２）：％ＴＧＩ＝１−（Ｔｆ−Ｔｉ）／（Ｃｆ−Ｃｉ）により算出し、報告した。
【０５４０】
２回連続した測定で腫瘍体積が０日目の測定値の５０％以下であると記録された個々のマウスを、部分奏効動物（ＰＲ）とみなした。触診可能な腫瘍を有さない個々のマウス（２回連続した測定で４×４ｍｍ２未満）を完全奏効動物（ＣＲ）に分類し、試験終了まで生存したＣＲは、無腫瘍生存動物（ＴＦＳ）とした。腫瘍倍加時間（ＤＴ）は、式（３）：ＤＴ＝（Ｄｉ−Ｄｆ）＊ｌｏｇ２／（ｌｏｇＴＶｉ−ｌｏｇＴＶ）ｆ（式中、Ｄ＝日数、ＴＶ＝腫瘍体積）を使用して、ビヒクル処置群について決定した。二元配置ＡＮＯＶＡを使用して、腫瘍体積の統計上の差を決定した。対照群の平均腫瘍体積が２８日目に１５００ｍｍ３に達した時点で試験を終了した。
【０５４１】
試験終了時に、採取した腫瘍をアイスパック上の培地中、翌日配達で発送し、翌日に処理を行った。全血試料を心臓穿刺により採取し、ヘパリンナトリウム中発送し、翌日の配達された時点で処理した。腫瘍試料をコラゲナーゼで３７℃にて３０分間処理した。試料をセルストレーナーに通して分離し、２％ＦＢＳのＰＢＳ中に再懸濁した。ＡＣＫ溶解緩衝液を使用して全血試料中の赤血球を溶解し、次いで、細胞を２％ＦＢＳのＰＢＳ中で２回洗浄した。血球計算盤を使用して細胞を計数し、１００万個の細胞を蛍光色素結合抗体により氷上で３０分間染色し、次いで、２％ＦＢＳのＰＢＳで洗浄した。４％パラホルムアルデヒドＰＢＳで細胞を固定した。染色した全ての細胞をＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏ（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で解析し、データをＦｌｏｗＪｏソフトウェア（ＴｒｅｅＳｔａｒ）で解析した。受容体の下方制御を評価するために、マウス（ｍ）ＣＤ４５、ヒト（ｈ）ＣＤ４５、ヒト（ｈ）ＣＤ３及びヒト（ｈ）ＣＤ１４抗体を使用して、ＣＤ１４＋集団をゲーティングした。腫瘍浸潤免疫細胞を特定するために、標準的な手順に従って、ｈＣＤ４５、ｈＣＤ３、ｈＣＤ４、ｈＣＤ８及びｈＣＤ１４抗体を使用して、集団をゲーティングした。
【０５４２】
図１５Ｇ及び図１５Ｈは、ヒト癌を治療するための治療薬としての抗ＣＤ３３抗体２Ｆ５の前臨床有効性を示す。抗体２Ｆ５は、強力な受容体下方制御物質であり、リガンド遮断抗体である。抗ＰＤ−１抗体ペンブロリズマブと組み合わせて投与すると、抗体２Ｆ５は、黒色腫腫瘍の腫瘍体積を有意に減少させた（図１５Ｇ及び１５Ｈ）。注目すべきことに、アイソタイプコントロールまたは低親和性／非リガンド遮断ＣＤ３３抗体（ＣＴＲｍＡｂ）と組み合わせたペンブロリズマブは、腫瘍成長を阻害しなかった（図１５Ｇ及び１５Ｈ）。
【０５４３】
図１５Ｉ及び１５Ｊに示すように、ＣＤ３３抗体２Ｆ５と抗ＰＤ−１抗体による併用処置は、ヒト免疫幹細胞を生着させたマウスの患者由来黒色腫腫瘍モデルにおいて、腫瘍成長をｉｎ  ｖｉｖｏで阻害した。各時点での腫瘍体積は、Ｒ  ｌｍ（）関数を使用した多重線形回帰によって、ドナー、０時点での腫瘍サイズ及びマウスの体重で補正した。各時点での統計的有意性は、Ｒのｌｍ（）関数を使用して評価した。
【０５４４】
図１５Ｋ及び１５Ｌに示すように、ＣＤ３３抗体２Ｆ５と抗ＰＤ−１抗体による併用処置は、異なるヒトドナー（９８４４８０１１２、１６５５４７１１及び１７５０９１１２）に由来するヒト免疫幹細胞を正着させたマウスに移植した患者由来黒色腫腫瘍モデルにおいて、腫瘍成長をｉｎ  ｖｉｖｏで阻害した。抗腫瘍効果をドナーごとに示す。
【０５４５】
図１５Ｍに示すように、ＣＤ３３抗体２Ｆ５と抗ＰＤ−１抗体による併用処置は、ヒト免疫幹細胞を生着させたマウスの患者由来黒色腫腫瘍モデルにおいて、腫瘍成長率をｉｎ  ｖｉｖｏで遅延させた。腫瘍の指数関数的成長は、Ｒ  のｔｕｍｇｒパッケージを使用して、０日目〜１２日目について、マウスの体重で補正して、評価した。統計的有意性は、Ｒのｌｍ（）関数を使用した多重線形回帰によって、ドナー、動物の体重及び初期腫瘍体積で補正して、評価した。
【０５４６】
図１５Ｎに示すように、ＣＤ３３抗体２Ｆ５と抗ＰＤ−１抗体による併用処置は、ヒト免疫幹細胞及び患者由来異種移植ＣＴＧ−０２０２黒色腫腫瘍を移植したマウス腫瘍モデルにおいて、末梢血ｈＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄細胞のＣＤ３３の細胞表面レベルを低下させた。統計的有意性は、Ｒのｌｍ（）関数を使用した多重線形回帰によって評価した。
【０５４７】
図１５Ｏに示すように、ＣＤ３３抗体２Ｆ５と抗ＰＤ−１抗体による併用処置は、ヒト免疫幹細胞及び患者由来異種移植ＣＴＧ−０２０２黒色腫腫瘍を移植したマウス腫瘍モデルにおいて、腫瘍浸潤ｈＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄細胞の数を減少させた。統計的有意性は、Ｒのｌｍ（）関数を使用した多重線形回帰によって評価した。
【０５４８】
図１５Ｐに示すように、ＣＤ３３抗体２Ｆ５と抗ＰＤ−１抗体による併用処置は、ヒト免疫幹細胞及び患者由来異種移植ＣＴＧ−０２０２黒色腫腫瘍を移植したマウス腫瘍モデルにおいて、腫瘍浸潤ｈＣＤ４５＋ＣＤ３＋Ｔ細胞の数を増加させた。統計的有意性は、Ｒのｌｍ（）関数を使用した多重線形回帰によって評価した。
【０５４９】
図１５Ｑに示すように、ＣＤ３３抗体２Ｆ５と抗ＰＤ−１抗体による併用処置は、ヒト免疫幹細胞及び患者由来異種移植ＣＴＧ−０２０２黒色腫腫瘍を移植したマウス腫瘍モデルにおいて、末梢血ｈＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄細胞の数を減少させた。統計的有意性は、Ｒのｌｍ（）関数を使用した多重線形回帰によって評価した。
【０５５０】
抗ＣＤ３３抗体処置のｉｎ  ｖｉｖｏ効果
ＣＴＧ−０２０２患者由来黒色腫腫瘍を、ヒト化マウスへの移植前に、予備試験マウスでまず継代した。腫瘍がストックマウスで１〜１．５ｃｍ３の体積に達したら、予備試験マウスに再移植するために腫瘍を採取した。腫瘍断片を予備試験マウスの左脇腹に片側移植した。継代数７のＣＴＧ−０２０２黒色腫腫瘍を使用した。
【０５５１】
雌の免疫不全マウス（Ｔａｃｏｎｉｃ  ＮＯＧ）を胎児肝臓由来ＣＤ３４＋造血細胞でヒト化した。マウスは、個別にＨＥＰＡ換気したケージ（Ｉｎｎｏｃａｇｅ（登録商標）ＩＶＣ、Ｉｎｎｏｖｉｖｅ  ＵＳＡ）中で、照射滅菌済みペーパーツイスト補充１／８”コーンコブ床敷（Ｓｈｅｐｅｒｄ）上、１２時間の明暗サイクル、６８〜７４°Ｆ（２０〜２３℃）及び湿度３０〜７０％で飼育した。マウスには、水（逆浸透、２ｐｐｍ  Ｃｌ２）を自由摂取で与え、タンパク質１９％、脂肪９％及び繊維４％からなる照射滅菌済み試験げっ歯類飼料（Ｔｅｋｌａｄ２９１９）を与えた。ヒト化マウスに移植を行い、移植後７〜１０日から各実験について予備試験の腫瘍体積を記録した。腫瘍が約８０〜２００ｍｍ３に達したら、マウスを腫瘍体積に合わせて処置群または対照群に分け、０日目に開始する投与に使用した。
【０５５２】
処置群には、抗ＣＤ３３抗体２Ｆ５を投与した。対照群には、アイソタイプ対照抗体を投与した。その後、０日目に投与を開始した。表１２及び図１５Ｒは、投与計画、投与量及び投与経路を示す。
表１２：抗体投与計画
2018518176.tif 000034
【０５５３】
表１２中、「Ｎ」は、各処置群における反復数を指し、「ＣＴＲ  ｍＡｂ」は、アイソタイプ対照抗体または低親和性／非リガンド遮断抗ＣＤ３３抗体を指し、「２Ｆ５  ｍＡｂ」は、抗ＣＤ３３抗体２Ｆ５を指し、「ＲＯＡ」は、投与経路を指し、「ＩＰ」は、腹腔内を指し、「ｑ４ｄｘ６」は、４日ごとの投与で合計６回の投与計画を指す。
【０５５４】
０日目から開始して、マウスを毎日観察し、デジタルスケールを使用して週２回、体重を計測した。腫瘍寸法をデジタル測径器により週２回測定し、個々の推定腫瘍体積と平均推定腫瘍体積（平均腫瘍体積±標準誤差）を含むデータを各群について記録した。腫瘍体積は、式（１）：腫瘍体積＝短径２×長径×０．５２を使用して算出した。試験終了時に、初期（ｉ）及び最終（ｆ）の腫瘍測定値を称揚して、各処置群（Ｔ）対対照群（Ｃ）についての腫瘍成長阻害率（％ＴＧＩ）の値を式（２）：％ＴＧＩ＝１−（Ｔｆ−Ｔｉ）／（Ｃｆ−Ｃｉ）に使用して、算出し、報告した。
【０５５５】
２回連続した測定で腫瘍体積が０日目の測定値の５０％以下であると記録された個々のマウスを、部分奏効動物（ＰＲ）とみなした。触診可能な腫瘍を有さない個々のマウス（２回連続した測定で４×４ｍｍ２未満）を完全奏効動物（ＣＲ）に分類し、試験終了まで生存したＣＲは、無腫瘍生存動物（ＴＦＳ）とした。腫瘍倍加時間（ＤＴ）は、式（３）：ＤＴ＝（Ｄｉ−Ｄｆ）＊ｌｏｇ２／（ｌｏｇＴＶｉ−ｌｏｇＴＶ）ｆ（式中、Ｄ＝日数、ＴＶ＝腫瘍体積）を使用して、ビヒクル処置群について決定した。二元配置ＡＮＯＶＡを使用して、腫瘍体積の統計上の差を決定した。試験中、採取時点は、複数生じた。最終的な試験終了のために、２５、３２及び３９日目に、１５００ｍｍ３を超える腫瘍体積のエンドポイント要件に従って、処置群にかかわらず、マウスを屠殺した。
【０５５６】
試験終了時に、採取した腫瘍をアイスパック上の培地中、翌日配達で発送し、、翌日に処理を行った。全血試料を心臓穿刺により採取し、ヘパリンナトリウム中発送し、翌日の配達された時点で処理した。腫瘍試料をコラゲナーゼで３７℃にて３０分間処理した。試料をセルストレーナーに通して分離し、２％ＦＢＳのＰＢＳ中に再懸濁した。ＡＣＫ溶解緩衝液を使用して全血試料中の赤血球を溶解し、次いで、細胞を２％ＦＢＳのＰＢＳ中で２回洗浄した。血球計算盤を使用して細胞を計数し、１００万個の細胞を蛍光色素結合抗体により氷上で３０分間染色し、次いで、２％ＦＢＳのＰＢＳで洗浄した。４％パラホルムアルデヒドＰＢＳで細胞を固定した。染色した全ての細胞をＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏ（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で解析し、データをＦｌｏｗＪｏソフトウェア（ＴｒｅｅＳｔａｒ）で解析した。受容体の下方制御を評価するために、マウス（ｍ）ＣＤ４５、ヒト（ｈ）ＣＤ４５、ヒト（ｈ）ＣＤ３及びヒト（ｈ）ＣＤ１４抗体を使用して、ＣＤ１４＋集団をゲーティングした。腫瘍浸潤免疫細胞を特定するために、標準的な手順に従って、ｈＣＤ４５、ｈＣＤ３、ｈＣＤ４、ｈＣＤ８及びｈＣＤ１４抗体を使用して、集団をゲーティングした。
【０５５７】
図１５Ｓ及び１５Ｔに示すように、ＣＤ３３抗体２Ｆ５単独による処置は、ヒト免疫幹細胞を生着させたマウスの患者由来黒色腫腫瘍モデルにおいて、腫瘍成長をｉｎ  ｖｉｖｏで阻害した。各時点での腫瘍体積は、Ｒのｌｍ（）関数を使用した多重線形回帰によって、ドナー、０時点での腫瘍サイズ及びマウスの体重で補正した。各時点での統計的有意性は、Ｒのｌｍ（）関数を使用して評価した。
【０５５８】
図１５Ｕに示すように、ＣＤ３３抗体２Ｆ５単独による処置は、ヒト免疫幹細胞を生着させたマウスの患者由来黒色腫腫瘍モデルにおいて、腫瘍成長率をｉｎ  ｖｉｖｏで遅延させた。腫瘍の指数関数的成長は、Ｒのｔｕｍｇｒパッケージを使用して、０日目〜１１日目について、マウスの体重で補正して、評価した。統計的有意性は、Ｒのｌｍ（）関数を使用した多重線形回帰によって、ドナー、動物の体重及び初期腫瘍体積で補正して、評価した。
【０５５９】
図１５Ｖ、１５Ｗ及び１５Ｘに示すように、ＣＤ３３抗体２Ｆ５単独による処置は、ヒト免疫幹細胞及び患者由来異種移植ＣＴＧ−０２０２黒色腫腫瘍を移植したマウス腫瘍モデルに存在するＣＤ３３一塩基多型（ＳＮＰ）ＣＤ３３対立遺伝子ｒｓ３８６５４４４Ａ／Ａ、Ａ／ＣまたはＣ／Ｃに関係なく、腫瘍成長率を減少させた。ｒｓ３８６５４４４Ｃ／Ｃ対立遺伝子はアルツハイマー病のリスク対立遺伝子であり、一方、ｒｓ３８６５４４４Ａ／Ａ対立遺伝子はアルツハイマー病の保護的対立遺伝子である。
【０５６０】
図１５Ｙに示すように、ＣＤ３３抗体２Ｆ５単独による処置は、ヒト免疫幹細胞及び患者由来異種移植ＣＴＧ−０２０２黒色腫腫瘍を移植したマウス腫瘍モデルの末梢血ｈＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄細胞のＣＤ３３の細胞表面レベルを低下させた。統計的有意性は、Ｒのｌｍ（）関数を使用した多重線形回帰によって評価した。
【０５６１】
図１５Ｚ、１５ＡＡ及び１５ＢＢに示すように、ＣＤ３３抗体２Ｆ５単独による処置は、ヒト免疫幹細胞及び患者由来異種移植ＣＴＧ−０２０２黒色腫腫瘍を移植したマウス腫瘍モデル（該マウスには一塩基多型（ＳＮＰ）ＣＤ３３対立遺伝子ｒｓ３８６５４４４Ａ／Ａ、Ａ／ＣまたはＣ／Ｃが存在する）の末梢血ｈＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄細胞のＣＤ３３の細胞表面レベルを低下させた。ＣＤ３３の細胞表面レベルの低下は、アルツハイマー病リスク対立遺伝子ｒｓ３８６５４４４Ｃ／Ｃの保因動物であったマウスでは統計的に有意であったが（図１５Ｚ及び１５ＡＡ）、アルツハイマー病保護的対立遺伝子ｒｓ３８６５４４４Ａ／Ａの保因動物であったマウスでは統計的に有意ではなかった（図１５ＢＢ）。
【０５６２】
図１５ＣＣＣに示すように、ＣＤ３３抗体２Ｆ５単独による処置は、ヒト免疫幹細胞及び患者由来異種移植ＣＴＧ−０２０２黒色腫腫瘍を移植したマウス腫瘍モデルの腫瘍浸潤ｈＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄細胞のＣＤ３３の細胞表面レベルを低下させた。統計的有意性は、Ｒのｌｍ（）関数を使用した多重線形回帰によって評価した。
【０５６３】
図１５ＤＤ、１５ＥＥ及び１５ＦＦに示すように、ＣＤ３３抗体２Ｆ５単独による処置は、ヒト免疫幹細胞及び患者由来異種移植ＣＴＧ−０２０２黒色腫腫瘍を移植したマウス腫瘍モデル（該マウスには一塩基多型（ＳＮＰ）ＣＤ３３対立遺伝子ｒｓ３８６５４４４Ａ／Ａ、Ａ／ＣまたはＣ／Ｃが存在する）の腫瘍浸潤ｈＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄細胞のＣＤ３３の細胞表面レベルを低下させた。ＣＤ３３の細胞表面レベルの低下は、アルツハイマー病リスク対立遺伝子ｒｓ３８６５４４４Ｃ／Ｃの保因動物であったマウスでは統計的に有意であったが（図１５ＤＤ及び１５ＥＥ）、アルツハイマー病保護的対立遺伝子ｒｓ３８６５４４４Ａ／Ａの保因動物であったマウスでは統計的に有意ではなかった（図１５ＦＦ）。
【０５６４】
図１５ＧＧに示すように、ＣＤ３３抗体２Ｆ５単独による処置は、ヒト免疫幹細胞及び患者由来異種移植ＣＴＧ−０２０２黒色腫腫瘍を移植したマウス腫瘍モデルにおいて、腫瘍浸潤ｈＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄細胞の数を減少させた。統計的有意性は、Ｒのｌｍ（）関数を使用した多重線形回帰によって評価した。
【０５６５】
図１５ＨＨ、１５ＩＩ及び１５ＪＪに示すように、ＣＤ３３抗体２Ｆ５単独による処置は、ヒト免疫幹細胞及び患者由来異種移植ＣＴＧ−０２０２黒色腫腫瘍を移植したマウス腫瘍モデル（該マウスには一塩基多型（ＳＮＰ）ＣＤ３３対立遺伝子ｒｓ３８６５４４４Ａ／Ａ、Ａ／ＣまたはＣ／Ｃが存在する）において、腫瘍浸潤ｈＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄細胞の数を減少させた。腫瘍浸潤ｈＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄細胞の減少は、アルツハイマー病リスク対立遺伝子ｒｓ３８６５４４４Ｃ／Ｃ及びアルツハイマー病保護的対立遺伝子ｒｓ３８６５４４４Ａ／Ａの保因動物であったマウスで統計的に有意であった（図１５ＨＨ、１５ＩＩ及び１５ＪＪ）。
【０５６６】
図１５ＫＫに示すように、ＣＤ３３抗体２Ｆ５単独による処置は、ヒト免疫幹細胞及び患者由来異種移植ＣＴＧ−０２０２黒色腫腫瘍を移植したマウス腫瘍モデルにおいて、腫瘍浸潤ｈＣＤ４５＋ＣＤ３＋Ｔ細胞の数を増加させた。統計的有意性は、Ｒのｌｍ（）関数を使用した多重線形回帰によって評価した。
【０５６７】
図１５ＬＬ、１５ＭＭ及び１５ＮＮに示すように、ＣＤ３３抗体２Ｆ５単独による処置は、ヒト免疫幹細胞及び患者由来異種移植ＣＴＧ−０２０２黒色腫腫瘍を移植したマウス腫瘍モデルに存在するＣＤ３３一塩基多型（ＳＮＰ）ＣＤ３３対立遺伝子ｒｓ３８６５４４４Ａ／Ａ、Ａ／ＣまたはＣ／Ｃに関係なく、腫瘍浸潤ｈＣＤ４５＋ＣＤ３＋Ｔ細胞の数を増加させた。ｒｓ３８６５４４４Ｃ／Ｃ対立遺伝子はアルツハイマー病のリスク対立遺伝子であり、一方、ｒｓ３８６５４４４Ａ／Ａ対立遺伝子はアルツハイマー病の保護的対立遺伝子である。
【０５６８】
図１５ＯＯに示すように、ＣＤ３３抗体２Ｆ５単独による処置は、ヒト免疫幹細胞及び患者由来異種移植ＣＴＧ−０２０２黒色腫腫瘍を移植したマウス腫瘍モデルにおいて、末梢血ｈＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄細胞の数を減少させた。統計的有意性は、Ｒのｌｍ（）関数を使用した多重線形回帰によって評価した。
【０５６９】
図１５ＰＰ、１５ＱＱ及び１５ＲＲに示すように、ＣＤ３３抗体２Ｆ５単独による処置は、ヒト免疫幹細胞及び患者由来異種移植ＣＴＧ−０２０２黒色腫腫瘍を移植したマウス腫瘍モデルに存在するＣＤ３３一塩基多型（ＳＮＰ）ＣＤ３３対立遺伝子ｒｓ３８６５４４４Ａ／Ａ、Ａ／ＣまたはＣ／Ｃに関係なく、末梢血ｈＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄細胞の数を減少させた。ｒｓ３８６５４４４Ｃ／Ｃ対立遺伝子はアルツハイマー病のリスク対立遺伝子であり、一方、ｒｓ３８６５４４４Ａ／Ａ対立遺伝子はアルツハイマー病の保護的対立遺伝子である。
【０５７０】
抗体処置のｉｎ  ｖｉｖｏ効果に関する結論
図１５Ｆ〜１５ＲＲに示す結果は、ヒト癌（例えば、黒色腫）を治療するための治療薬としての抗ＣＤ３３抗体２Ｆ５の前臨床有効性を示す。２Ｆ５抗体は、強力な受容体下方制御物質であり、リガンド遮断抗体である。２Ｆ抗体は、単剤療法として投与した場合（図１５Ｒ〜１５ＲＲ）、または抗ＰＤ−１抗体と組み合わせて投与した場合（図１５Ｆ〜１５Ｑ）、黒色腫腫瘍の腫瘍体積及び腫瘍成長率を有意に減少させる。注目すべきことに、アイソタイプ対照（または低親和性／非リガンド遮断ＣＤ３３抗体）の単独投与または抗ＰＤ−１抗体との併用投与は、腫瘍成長を阻害しなかった。
【０５７１】
ＣＤ３３抗体の単剤療法または抗ＰＤ−１抗体との併用のいずれかで処置した腫瘍浸潤免疫細胞集団の解析は、腫瘍浸潤ＣＤ３＋Ｔ細胞の数の有意な増加を示した（図１５Ｐ及び１５ＫＫ〜１５ＮＮ）。骨髄系細胞集団は、ＣＤ３３抗体の単剤療法または抗ＰＤ−１抗体との併用によって減少した（図１５Ｏ、１５Ｑ、１５ＧＧ〜１５ＪＪ及び１５ＯＯ〜１５ＲＲ）。腫瘍浸潤ＣＤ１４＋骨髄細胞と末梢血ｉＣＤ１４＋骨髄細胞の両方において、有意な減少が観察された。
【０５７２】
注目すべきは、本マウス試験において、腫瘍及び腫瘍に応答している免疫系の両方がヒトであることである。マウスの免疫系は、マウス免疫系を遺伝的に除去し、これをヒトドナーＣＤ３４＋造血幹細胞及び前駆細胞に置き換え、それが再増殖して骨髄系及びリンパ系免疫細胞に成長するという方法を使用して、ヒト化されている。腫瘍は、患由来黒色腫である。結果は、ヒト特異的抗ＣＤ３３抗体（２Ｆ５）が、標的特異的結合を呈し、ヒトＣＤ３３の細胞表面レベルを低下させることを示している。ＣＤ３３の細胞表面レベルの下方制御は、末梢及び腫瘍ＣＤ１４＋骨髄細胞で有意であった。したがって、腫瘍体積、腫瘍成長率、ＣＤ３＋Ｔ細胞の腫瘍浸潤数の増加、及びＣＤ１４＋細胞数の減少に対するいずれの効果も、２Ｆ５抗体を媒介したヒト骨髄系免疫細胞上のＣＤ３３の下方制御の結果である。
【０５７３】
更に、結果は、腫瘍移植マウスの免疫系を再増殖させるために使用したヒトドナーのＣＤ３３遺伝子型を考慮に入れている。アルツハイマー病リスク対立遺伝子であることが実証されているＣＤ３３  ＳＮＰ  ｒｓ３８６５４４４について評価すると、保護的ｒｓ３８６５４４４Ａ／Ａ対立遺伝子を有するドナーは、ｒｓ３８６５４４４Ｃリスク対立遺伝子の保因動物であったドナーと比較して、より低いＣＤ３３細胞表面レベルを示し、より減少した腫瘍成長率を示した。更に、ＣＤ３３抗体２Ｆ５による処置は、２Ｆ５抗体が、両試験で、ＣＤ１４＋骨髄細胞上の細胞表面ＣＤ３３レベルを低下させ、腫瘍成長率を減少させたという点で、ＣＤ３３遺伝子型をフェノコピーするものであった。
【０５７４】
実施例１１：骨髄細胞におけるアンタゴニスト及び／または二重特異性ＣＤ３３抗体による抗炎症性サイトカインＩＬ−１０の減少
本実施例の目的は、骨髄に由来する骨髄細胞が、アンタゴニスト抗ＣＤ３３及び／またはＣＤ３３二重特異性抗体で処理し、１００ｎｇ／ｍｌのＬＰＳ（Ｓｉｇｍａ）での刺激後に、アポトーシス細胞との共培養、または類似の刺激物質により、抗炎症性サイトカインＩＬ−１０及び他の抗炎症性メディエーターの減少を示すかどうかを試験することである。
【０５７５】
ヒト骨髄系前駆細胞の単離を、先に記載のとおりに実施する。５日後に培地を交換し、更に１０〜１１日間、細胞を培養する。２４時間後に上清を回収し、細胞から放出されたＩＬ−１０及び他の抗炎症性サイトカインのレベルを、ＩＬ−１０  ＥＬＩＳＡを製造元の説明書（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）に従って使用して決定する（ＪＥＭ（２００５），２０１；６４７−６５７；及びＰＬｏＳ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（２００４），４｜Ｉｓｓｕｅ  ４｜ｅ１２４）。
【０５７６】
実施例１２：骨髄系統由来細胞におけるアンタゴニスト及び／または二重特異性ＣＤ３３抗体による食作用の誘導
本実施例の目的は、アンタゴニスト抗ＣＤ３３抗体及び／またはＣＤ３３二重特異性抗体が、単球、樹状細胞マクロファージ及びミクログリアなどの骨髄系統由来細胞において、アポトーシス性ニューロン、神経組織破片、非神経組織破片、細菌、他の異物及び病原タンパク質、例えば、Ａβペプチド、αシヌクレインタンパク質、Ｔａｕタンパク質、ＴＤＰ−４３タンパク質、プリオンタンパク質、ハンチンチンタンパク質、ＲＡＮ翻訳産物抗原、例えば、グリシン−アラニン（ＧＡ）、グリシン−プロリン（ＧＰ）、グリシン−アルギニン（ＧＲ）、プロリン−アラニン（ＰＡ）またはプロリン−アルギニン（ＰＲ）から構成されるジペプチドリピート（ＤＰＲペプチド）の食作用を誘導するかどうかを試験することである。二重特異性抗体は、ＣＤ３３抗原及び第２の抗原、例えば、限定するものではないが、Ａベータペプチド抗原またはアルファシヌクレインタンパク質抗原またはタウタンパク質抗原またはＴＤＰ−４３タンパク質抗原またはプリオンタンパク質抗原またはハンチンチンタンパク質抗原またはＲＡＮ翻訳産物抗原、例えば、グリシン−アラニン（ＧＡ）、グリシン−プロリン（ＧＰ）、グリシン−アルギニン（ＧＲ）、プロリン−アラニン（ＰＡ）もしくはプロリン−アルギニン（ＰＲ）から構成されるジペプチドリピート（ＤＰＲペプチド）を認識する抗体であり得る。
【０５７７】
ＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐ単球単離抗体カクテル（ＳｔｅｍＣｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用してヒト末梢血試料から単球を単離し、５日間、Ｍ−ＣＳＦ（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ）５０μｇ／ｍｌを用いてマクロファージに分化させる。１０％ウシ胎児血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ）を含有するＲＰＭＩ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を入れた培養皿に細胞を播種し、５％ＣＯ２、３７℃で培養する。付着細胞を優しく掻き取って回収し、食作用実験に使用する。
【０５７８】
ヒトミクログリア細胞は、Ｅｔｅｍａｄ  ｅｔ  ａｌ．，ＪＩ（２０１２）及びＯｈｇｉｄａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｒｅｐｏｒｔｓ（２０１４）に記載されているプロトコルに従って、末梢血単球から、１％Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ、１０ｎｇ／ｍｌ  ＧＭ−ＣＳＦ、１０ｎｇ／ｍｌ  Ｍ−ＣＳＦ、１０ｎｇ／ｍｌ  ベータ−ＮＧＦ、１００ｎｇ／ｍｌ  ＣＣＬ−２、１００ｎｇ／ｍｌ  ＩＬ−３４を含む無血清ＲＰＭＩ中で培養することによって調製する。分化形態が現れた７〜１０日目に細胞を回収した。
【０５７９】
食作用アッセイを実施するために、ミクログリア、マクロファージまたは樹状細胞を、アポトーシス性ニューロン、神経組織破片、非神経組織破片、細菌、他の異物及び病原タンパク質とともに培養する。ニューロンを５〜１０日間培養し、次いで、オカダ酸を最終濃度３０ｎＭで３時間加え、アポトーシスを誘導する。神経細胞膜をＣｅｌｌＴｒａｃｋｅｒ  ＣＭ−ＤｉＩ膜色素（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ）で標識する。インキュベーション後、アポトーシス性ニューロンまたは食作用の他の標的を２回洗浄し、エフェクター／標的比１：２０で形質導入したミクログリア培養物に加える。アポトーシス性ニューロンの添加後１時間及び２４時間に、共焦点蛍光顕微鏡（Ｌｅｉｃａ）下で、貪食した神経細胞膜を有するミクログリアの数を計数する。アポトーシス細胞は、倍率６０で３つの異なる領域で計数する。食作用の量をフローサイトメトリーで確認する。更に、アポトーシス性ニューロンを添加して２４、４８または７２時間後に、細胞を回収し、サイトカインのＲＴ−ＰＣＲに使用する。
【０５８０】
ミクロスフェアビーズまたは細菌食作用アッセイを実施するために、ミクログリア、マクロファージまたは樹状細胞を抗ＣＤ３３アゴニスト抗体で処理する。細胞を回収し、９６ウェル平底プレート中、サイトカインなしで、２時間培養する。ｐＨｒｏｄｏ標識Ｅ．ｃｏｌｉ  ＢｉｏＰａｒｔｉｃｌｅｓを製造元のプロトコルに従って再懸濁させ、Ｖｉｂｒｏ  ｃｈｏｌｅｒａ由来のシアリダーゼ０．２Ｕ／ｍｌもしくは０．４Ｕ／ｍｌまたはＰＢＳ単独を用いて、３７℃で２．５時間処理する。ＢｉｏＰａｒｔｉｃｌｅｓを洗浄し、ＲＰＭＩ中に再懸濁させ、２０μｇ／ウェルで加える。細胞とＥ．ｃｏｌｉを混合し、ペレット化し、３７℃で３０分間インキュベートした。サイトカラシンＤを対照ウェルに１０μＭで加える。ＦＡＣＳ解析の直前に、細胞を氷上に移し、ＦＡＣＳ緩衝液中、４℃で２回洗浄する。ｐＨｒｏｄｏ標識Ｅ．ｃｏｌｉ食作用を、ＢＤ  ＦＡＣＳ  ＣａｎｔｏのフローサイトメトリーによってＰＥチャンネルで検出する。
【０５８１】
２４時間後、１．００μｍの赤色蛍光ミクロスフェアビーズ（Ｆｌｕｏｒｅｓｂｒｉｔｅ  Ｐｏｌｙｃｈｒｏｍａｔｉｃ  Ｒｅｄ  Ｍｉ−ｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ；Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｉｎｃ．）を１時間加える。ミクログリアによるミクロスフェアビーズの食作用を蛍光顕微鏡法によって分析する。更に、培養プレートからミクログリアを回収し、フローサイトメトリーにより分析する。貪食したビーズを有するミクログリアのパーセンテージを決定する。食作用は実験ごとに異なるので、食作用の相対変化も決定する。データは、アゴニスト抗体とともに培養したミクログリアと、対照抗体とともに培養したミクログリアとの間の食作用の相対変化として示す。
【０５８２】
炎症性遺伝子転写産物を分析するＲＴ−ＰＣＲを実施するために、ＣＤ３３ベクターまたはＧＦＰ１対照ベクターをミクログリアに形質導入する。次いで、細胞をディッシュで培養し、抗ＣＤ３３アゴニスト抗体で処理する。２４、４８及び７２時間後、ＲＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ）を使用してミクログリアからＲＮＡを単離する。また、ｓｈ−ＣＤ３３ＲＮＡ、ｓｈ−対照ＲＮＡ、ｗＣＤ３３、ＧＦＰ２、ｍｔＤＡＰ１２−ＧＦＰ及びＧＦＰ１ベクターを形質導入し、アポトーシス性ニューロンとともに４８時間共培養したミクログリアからもＲＮＡを回収する。
【０５８３】
次いで、ＲＮＡの逆転写を行う。ＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎによる定量ＲＴ−ＰＣＲをＡＢＩ  Ｐｒｉｓｍ  ５７００  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）で実施する。試料の正規化には、ＧＡＰＤＨの増幅を使用する。増幅プロトコルは、ＧｅｎｅＡｍｐ  ５７００Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ（バージョン１．３）に従った。ＧＡＰＤＨ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１、ＮＯＳ２及びＴＧＦ−β転写産物の検出には、以下のフォワード及びリバースプライマーを最終濃度２００ｎＭで使用した。
【０５８４】
ＧＡＰＤＨフォワードプライマー：５’−ＣＴＣＣＡＣＴＣＡＣＧＧＣＡＡＡＴＴＣＡＡ−３’（配列番号２１８）及びＧＡＰＤＨリバースプライマー：５’−ＧＡＴＧＡＣＡＡＧＣＴＴＣＣＣＡＴＴＣＴＣＧ−３’（配列番号２１９）；
ＴＮＦ−αフォワードプライマー：５’−ＣＣＧＴＣＡＧＣＣＧＡＴＴＴＧＣＴＡＴＣＴ−３’（配列番号２２０）及びＴＮＦ−αリバースプライマー：５’−ＡＣＧＧＣＡＧＡＧＡＧＧＡＧＧＴＴＧＡＣＴＴ−３’（配列番号２２１）；
ＩＬ−１αフォワードプライマー：５’−ＡＣＡＡ−ＣＡＡＡＡＡＡＧＣＣＴＣＧＴＧＣＴＧ−３’（配列番号２２２）及びＩＬ−１αリバースプライマー：５’−ＣＣＡＴＴＧＡＧＧＴＧＧＡＧＡＧＣＴＴＴＣＡ−３’（配列番号２２３）；
ＮＯＳ２フォワードプライマー：５’−ＧＧＣＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＴＣＴＡＣＧＴＴＣ−３’（配列番号２２４）ＮＯＳ２リバースプライマー：５’−ＴＡＣＣＴＣＡＴＴＧＧＣＣＡＧＣＴＧＣＴＴ−３’（配列番号２２５）；ならびに
ＴＧＦ−β１フォワードプライマー：５’−ＡＧＧＡＣＣＴＧＧＧＴＴＧＧＡＡＧＴＧＧ−３’（配列番号２２６）及びＴＧＦ−β１リバースプライマー：５’−ＡＧＴＴＧＧＣＡＴＧＧＴＡＧＣＣＣＴＴＧ−３’（配列番号２２７）。
【０５８５】
アミロイド食作用アッセイを実施するために、ＨｉＬｙｔｅＦｌｕｏｒ（登録商標）６４７（Ａｎａｓｐｅｃ）−Ａベータ−（１−４０）をＴｒｉｓ／ＥＤＴＡ（ｐＨ８．２）中に２０ｍＭで再懸濁し、次いで、暗所で３７℃にて３日間インキュベートして凝集を促進する。ミクログリア、マクロファージまたは樹状細胞を低血清（インスリンを添加した０．５％ＦＢＳ）、ＬＰＳ（５０ｎｇ／ｍｌ）、ＩＦＮｃ（１００単位／ｍｌ）及び抗ＣＤ３３アンタゴニスト抗体中で２４時間前処理し、その後、凝集した蛍光標識Ａβペプチドを加える。１００ｎＭの凝集したＨｉＬｙｔｅＦｌｕｏｒＴＭ  ６４７−Ａｂ−（１−４０）を添加してから５時間後、アミロイド食作用及びＣＤ３３の表面発現をフローサイトメトリー解析により決定する（ＡＳＮ  ＮＥＵＲＯ（２０１０）２（３）：１５７−１７０）。他の病原タンパク質の食作用を類似の方法で実施する。
【０５８６】
実施例１３：アンタゴニストＣＤ３３抗体及び／または二重特異性抗体によるＳＹＫ及び／またはＥＲＫ活性化の誘導
本実施例の目的は、アゴニスト抗ＣＤ３３抗体及び／またはＣＤ３３／二重特異性抗体が、Ｓｙｋ及びＥＲＫ活性化を誘導するかどうかを試験することである。
【０５８７】
ミクログリア、マクロファージまたは樹状細胞をアゴニスト抗ＣＤ３３及び／またはＣＤ３３二重特異性抗体に１時間曝露する。刺激後、細胞をウェスタンブロット分析用の試料還元緩衝液で溶解する。ＥＲＫのリン酸化ならびにＳｙｋ及び／またはＥＲＫの総量を、抗ホスホＳｙｋ抗体または抗ホスホＥＲＫ及び抗Ｓｙｋ抗体または抗ＥＲＫ抗体（いずれもＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ製）をそれぞれ用いるウェスタンブロット分析により、免疫検出法によって決定する（ＪＥＭ（２００５），２０１，６４７−６５７）。
【０５８８】
実施例１４：ＣＤ３３抗体及び／または二重特異性抗体はＳｙｋリン酸化を誘導する
脾臓チロシンキナーゼ（Ｓｙｋ）は、ＣＤ３３の下流で機能する細胞内シグナル伝達分子であり、いくつかの基質をリン酸化することにより、細胞活性化及び炎症過程をもたらすシグナル伝達複合体の形成を促進する。アゴニストＣＤ３３抗体がＳｙｋ活性化を誘導する能力は、ヒトマクロファージ及びヒト初代樹状細胞を培養し、細胞抽出物のＳｙｋタンパク質のリン酸化状態を測定することによって決定する。
【０５８９】
ヒト初代樹状細胞を１％血清ＲＰＭＩ中で４時間飢餓状態にし、次いで、組織培養皿からＰＢＳ−ＥＤＴＡで剥がし、ＰＢＳで洗浄し、計数する。細胞を完全長アゴニストＣＤ３３抗体または対照抗体で、氷上で１５分間コーティングする。冷ＰＢＳで洗浄後、細胞を、ヤギ抗ヒトＩｇＧの存在下、３７℃で指定時間インキュベートする。刺激後、細胞を溶解緩衝液（１％ｖ／ｖ  ＮＰ−４０％、５０Ｍｍ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、１．５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１０％グリセロールならびにプロテアーゼ及びホスファターゼ阻害剤）で溶解し、続いて、４℃で１０分間、１６，０００ｇで遠心分離し、不溶性物質を除去する。次いで、溶解物を抗Ｓｙｋ抗体（ヒトＤＣの場合４Ｄ１０、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）で免疫沈降させる。沈殿したタンパク質をＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分画し、ＰＶＤＦ膜に移し、抗ホスホチロシンＡｂ（４Ｇ１０、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）でプローブする。全ての基質が十分に免疫沈降したことを確認するために、免疫ブロットに抗Ｓｙｋ（Ｎｏｖｕｓ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ、ヒトＤＣ用）をリプローブする。記載されているように（例えば、Ｐｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１０）Ｓｃｉ  Ｓｉｇｎａｌ．，３（１２２）：ｒａ３８）、増強化学ルミネセンス（ＥＣＬ）システム（ＧＥ  ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）により可視化を行う。
【０５９０】
実施例１５：ミクログリア、マクロファージ、Ｔ細胞及び樹状細胞におけるアンタゴニストＣＤ３３抗体及び／または二重特異性抗体によるＣＣＲ７ならびにＣＣＬ１９及びＣＣＬ２１への遊走の誘導
本実施例の目的は、抗ＣＤ３３及び／またはＣＤ３３／二重特異性抗体が、ミクログリア細胞、マクロファージ及び樹状細胞において、ＣＣＲ７ならびにＣＣＬ１９及びＣＣＬ２１への遊走を誘導するかどうかを試験することである。
【０５９１】
ミクログリア、マクロファージまたは樹状細胞をアゴニスト抗ＣＤ３３及び／もしくはＣＤ３３／ＤＡＰ１２二重特異性抗体、または対照抗体のいずれかとともに培養する。７２時間後に細胞を回収し、ＣＣＲ７特異的抗体で免疫標識し、フローサイトメトリーにより解析する。
【０５９２】
ＣＣＲ７発現の増加による機能的帰結を決定するために、走化性アッセイを実施する。ミクログリア、マクロファージまたは樹状細胞をアンタゴニスト抗ＣＤ３３及び／またはＣＤ３３／ＤＡＰ１２二重特異性抗体によりＣＤ３３を介して刺激し、２チャンバーシステムに入れる。ケモカインリガンドＣＣＬ１９及びＣＣＬ２１に向かって遊走したミクログリア細胞の数を定量する（ＪＥＭ（２００５），２０１，６４７−６５７）。
【０５９３】
走化性アッセイのために、ミクログリア、マクロファージまたは樹状細胞をアンタゴニスト抗ＣＤ３３またはＣＤ３３／二重特異性抗体に曝露し、１μｇ／ｍｌ  ＬＰＳで処理する。ミクログリア、マクロファージまたは樹状細胞を、下側チャンバーに１００ｎｇ／ｍｌのＣＣＬ１９またはＣＣＬ２１（いずれもＰｅｐｒｏＴｅｃｈ製）を含む培地４５０μｌを含有するトランスウェルシステム（孔径３μｍフィルター；Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）の上側チャンバーに移す。１時間のインキュベーション期間後、下側チャンバーに遊走したミクログリア、マクロファージまたは樹状細胞の数を顕微鏡法によって３つの個別領域で計数する（ＪＥＭ（２００５），２０１，６４７−６５７）。
【０５９４】
実施例１６：ミクログリア、マクロファージ、Ｔ細胞及び樹状細胞におけるアンタゴニストＣＤ３３抗体及び／または二重特異性抗体によるＦ−アクチンの誘導
本実施例の目的は、アンタゴニスト抗ＣＤ３３またはＣＤ３３二重特異性抗体が、ミクログリア細胞、マクロファージ及び樹状細胞において、Ｆ−アクチンを誘導するかどうかを試験することである。
【０５９５】
ＣＤ３３を形質導入したか、ＣＤ３３を発現するミクログリア、マクロファージまたは樹状細胞及び目的の他の細胞を培養プレートに加え、次いで、アンタゴニスト抗ＣＤ３３及び／もしくはＣＤ３３二重特異性抗体、または対照抗体に曝露する。細胞を固定し、ブロックし、次いで、１時間後にＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ５４６結合ファロイジン（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ）で染色し、Ｆ−アクチを蛍光色素で標識する。４０ｘ対物レンズ（Ｌｅｉｃａ）を備える共焦点レーザー走査顕微鏡により画像を取得する（ＪＥＭ（２００５），２０１，６４７−６５７）。
【０５９６】
実施例１７：アンタゴニストＣＤ３３抗体及び／または二重特異性抗体による破骨細胞生成の誘導及び増大した破骨細胞形成率
本実施例の目的は、アンタゴニスト抗ＣＤ３３抗体及び／またはＣＤ３３二重特異性抗体が、破骨細胞生成を誘導し、破骨細胞形成率を増大させるかどうかを試験することである。
【０５９７】
１０％ＦＢＳ（Ａｔｌａｎｔｉｃ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ（Ａｔｌａｎｔａ，ＧＡ，ＵＳＡ））及びペニシリン−ストレプトマイシン−グルタミン（Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ）を添加したＲＰＭＩ−１６４０培地（Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ）または別の適切な培地中に、ヒト単球由来単球／マクロファージを維持する。１０％ＦＢＳ、ペニシリン−ストレプトマイシン−グルタミン、ＲＡＮＫＬ  ５０ｎｇ／ｍｌ及びＭ−ＣＳＦ  ２０ｎｇ／ｍｌを添加したアルファ−ＭＥＭ培地を入れた９６ウェルプレートに、細胞を３０００細胞／ウェルで播種する。培地を３日ごとに交換し、抗ＣＤ３３アンタゴニスト抗体に曝露し、多核性（少なくとも３核）ＴＲＡＣＰ＋破骨細胞の数を計数し、光学顕微鏡法により評価する。複雑性及び大きさを決定するために、破骨細胞を核の数ごとに計数する（１０を超える核または３〜１０核）。破骨細胞の表面積もＩｍａｇｅ  Ｊソフトウェア（ＮＩＨ）を使用して測定する。更に、破骨細胞遺伝子の発現レベルを決定する。異なる時点で、破骨細胞形成培養物からＴＲＩｚｏｌ試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して全ＲＮＡを抽出する。ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ  ＩＩＩキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用してファーストストランドｃＤＮＡを合成した後、Ｎｆａｔｃ１、Ａｃｐ５、Ｃｔｓｋ、Ｃａｌｃｒ及びＣｃｎｄ１についてリアルタイム定量ＰＣＲ反応を実施する。標的ｍＲＮＡ発現の相対定量を算出し、シクロフィリンの発現に対して正規化し、（標的遺伝子のｍＲＮＡ／シクロフィリンのｍＲＮＡ）３×１０６として表す（Ｊ．ＯＦ  ＢＯＮＥ  ＡＮＤ  ＭＩＮＥＲＡＬ  ＲＥＳＥＡＲＣＨ（２００６），２１，２３７−２４５；Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２０１２；１８８：２６１２−２６２１）。
【０５９８】
あるいは、マクロファージを三連ウェルでプレートに播種し、ＲＡＮＫＬ、Ｍ−ＣＳＦならびに抗ＣＤ３３及び／もしくはＣＤ３３二重特異性抗体またはアイソタイプ適合対照モノクローナル抗体で処理する。大きな多核細胞が目視できるまで、培地を３日ごとに交換する。培養３〜５日後、細胞を３．７％ホルムアルデヒドＰＢＳで１０分間固定する。次いで、プレートをＰＢＳ中で２回洗浄し、５０％アセトン及び５０％エタノール溶液中で３０秒間インキュベートし、ＰＢＳで洗浄する。Ｓｉｇｍａ製キット（製品４３５）を用いて、細胞を酒石酸抵抗性酸ホスファターゼ（ＴＲＡＰ）で染色する。次いで、記載されているように（例えば、Ｐｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１０）Ｓｃｉ  Ｓｉｇｎａｌ．，３（１２２）：ｒａ３８）、多核性（３核以上）ＴＲＡＰ陽性細胞を光学顕微鏡法により計数する。
【０５９９】
実施例１８：全身動物でのＥＡＥ及びクプリゾンからのｉｎ  ｖｉｖｏ保護
７〜９週齢の雌の成体Ｃ５７ＢＬ／６マウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから取得）に、不完全フロイントアジュバント（Ｄｉｆｃｏ）中に１００μｇのミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質ペプチド３５〜５５（アミノ酸ＭＥＶＧＷＹＲＳＰＦＳＲＶＶＨＬＹＲＮＧＫ（配列番号２１５）；Ｓｅｑｌａｂ）及び１ｍｇのヒト型結核菌Ｈ３７  Ｒａ（Ｄｉｆｃｏ）を含有する接種源２００μｌを尾根部の両側に注射する。免疫付与後０日目及び２日目に百日咳毒素（２００ｎｇ；Ｌｉｓｔ  Ｂｉｏ−ｌｏｇｉｃａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を注射する。臨床的徴候を次のようにスコア付けする。０：臨床的徴候なし、１：完全な尾の弛緩（ｌｉｍｐ  ｔａｉｌ）、２、完全な尾の弛緩及び歩行異常、３：一方の後肢不全対麻痺、４：完全な後肢不全対麻痺；ならびに５：前肢及び後肢の麻痺または瀕死状態。１４日目に疾患を発症しているマウス（臨床スコア１以上）のみを実験に使用する。最初の臨床症状があった日または任意の他の所望の時間に、アゴニスト抗ＣＤ３３及び／またはＣＤ３３二重特異性抗体をＥＡＥ疾患マウスに腹腔内または静脈内注射する（ＰＬｏＳ  Ｍｅｄ（２００７）４（４）：ｅ１２４）。
【０６００】
若齢または高齢の野生型（ＷＴ）マウスにシュウ酸ビス（シクロヘキシリデンヒドラジド）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を粉末化した０．２％クプリゾン（ＣＰＺ）を含有する標準飼料（Ｈａｒｌａｎ）を４、６または１２週間与える。組織学及び免疫組織化学分析のために、４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）によるマウス灌流後に脳を取り出し、４％ＰＦＡ中で２４時間固定し、続いて、３０％スクロース中に２４〜４８時間浸漬する。ミエリンの完全性及び損傷ならびに細胞増殖を評価するために、炎症切片またはマウス脳を、抗ＭＢＰ（１：１００；Ａｂｃａｍ、ａｂ７３４９）、抗ｄＭＢＰ（１：２０００；Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、ａｂ５８６４）、抗βＡＰＰ（１：１００；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、５１−２７００）、抗ＳＭＩ−３１（１：１０００；Ｃｏｖａｎｃｅ、ｓｍｉ−３１Ｒ）、抗Ｉｂａ１（１：６００；Ｗａｋｏ、０１９−１９７４１），抗ＢｒｄＵ（１：２５０；Ａｂｃａｍ、ａｂ１８９３）、抗ＧＦＡＰ（１：２００；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、１３−０３００）、抗ｉＮＯＳ（１：１００；ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ、６１０３２９）、抗ＬＰＬ（１：４００、Ｄｒ．Ｇ．Ｏｌｉｖｅｃｒｏｎａより）及び抗ＭＨＣＩＩ（１：１００；ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ、５５３５４９）で染色する。抗体の行動影響に関しては、透明ポリスチレン製囲い及びコンピュータ化された光線機器を使用してマウスの自発運動を解析する。全般的な活動変数（全移動、垂直立ち上がり）を、消費時間、移動距離及びエントリーを含め、情動性の指標とともに解析する。バランス（レッジ及びプラットフォーム）、強さ（逆スクリーン）、協調（ポール及び傾斜スクリーン）及び移動の開始（歩行開始）を評価するために、感覚運動試験バッテリーを実施する。運動協調性及びバランスは、ロータロッドプロトコルを使用して調べる（Ｃａｎｔｏｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｃｔａ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ（２０１５）１２９（３）：４２９−４７）。
【０６０１】
実施例１９：確立された外傷性脳損傷動物モデルにおけるアンタゴニストＣＤ３３抗体及び／またはＣＤ３３二重特異性抗体の治療用途の特徴付け
アンタゴニスト抗ＣＤ３３及び／またはＣＤ３３二重特異性抗体の治療的有用性を、確立された外傷性脳損傷動物モデルで試験する（Ｔａｎａｋａ，Ｙ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  ２３１  ４９−６０）。標準マウス、または細菌人工染色体もしくは骨髄プロモーター下でヒトＣＤ３３遺伝子を発現するマウスのいずれかを使用することができる。例えば、ミクログリア及びアストロサイトの活性化を誘導する外傷性脳損傷モデルを使用する。８週または９週齢の雄のＣ５７ＢＬ／６ＪＷＴマウスを使用する（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  ＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓまたはＪａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから購入）。滅菌生理食塩水中に溶解したキシラジン塩酸塩（８ｍｇ／ｋｇ）及び抱水クロラール（３００ｍｇ／ｋｇ）の腹腔内投与によりマウスに麻酔をかけ、その後、脳定位固定装置（ナリシゲ（日本国東京））上に置く。頭皮を切開し、頭蓋を露出させる。頭蓋から骨膜を除去し、右大脳半球上に歯科用ドリルで穴を空け、ニードル先端で硬膜を取り除く。０．５ｍｍの外径を有するステンレス鋼製カニューレを使用して、右半球に長手方向の刺創を施す。正中線に対して１．３ｍｍの横方向及びブレグマの１ｍｍ後方にカニューレを配置し、先端が２ｍｍの深さに達するまで脳内に導入する。次いで、カニューレを２ｍｍ尾側（ブレグマ３ｍｍ）に移動させた後、２ｍｍ吻側に移動させて元の位置に戻す。最後に、カニューレを脳から取り外し、頭皮の傷を縫合する。次いで、標準的手順に従ってアンタゴニスト抗ＣＤ３３及び／またはＣＤ３３二重特異性抗体でマウスを処置し、次いで、組織及び免疫蛍光染色ならびに行動試験によって分析する。かかる実験は、細菌人工染色体に由来するヒトＣＤ３３遺伝子もしくは骨髄プロモーターにより駆動されるｃＤＮＡに由来するヒトＣＤ３３遺伝子を発現するマウス、またはｈＣＤ３３  ｃＤＮＡを含有するレンチウイルスもしくはＡＡＶウイルスを形質導入したマウスでも行うことができる。
【０６０２】
実施例２０：毒素誘発外傷に伴う神経炎症モデル及びニューロン損失モデルにおけるアンタゴニストＣＤ３３抗体及び／またはＣＤ３３二重特異性抗体の治療用途の特徴付け
アゴニスト抗ＣＤ３３及び／またはＣＤ３３二重特異性抗体の治療的有用性を、毒素誘発外傷に伴う神経炎症モデル及びニューロン損失モデルで試験する（Ｍａｒｔｅｎｓ，ＬＨ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１２）Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ，１２２，３９５５）。３ヶ月齢の標準マウスを、１日４回のＭＰＴＰ（１−メチル−４−フェニル−１，２，３，６−テトラヒドロピリジン）腹腔内注射２日間（４μｇ／ｇ体重）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）またはＰＢＳで処置する。標準的プロトコルに従ってアゴニスト抗ＣＤ３３及び／またはＣＤ３３二重特異性抗体でマウスを処置し、次いで、黒質緻密部（ＳＮｐｃ）中のドーパミンニューロン及びミクログリアを定量するために立体解析学的計数を記載のとおりに使用して解析する。かかる実験は、細菌人工染色体に由来するヒトＣＤ３３遺伝子もしくは骨髄プロモーターにより駆動されるｃＤＮＡに由来するヒトＣＤ３３遺伝子を発現するマウス、またはｈＣＤ３３  ｃＤＮＡを含有するレンチウイルスもしくはＡＡＶウイルスを形質導入したマウスでも行うことができる。
【０６０３】
実施例２１：老化、発作、脊髄損傷、網膜ジストロフィー、前頭側頭型認知症及びアルツハイマー病の動物モデルにおけるアンタゴニストＣＤ３３抗体及び／またはＣＤ３３二重特異性抗体の治療用途の特徴付け
アンタゴニスト抗ＣＤ３３及び／またはＣＤ３３二重特異性抗体の治療的有用性を、先に記載されているように、老化、発作、脊髄損傷、網膜ジストロフィー、前頭側頭型認知症、ハンチントン病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症及びアルツハイマー病の動物モデルで試験する（例えば、Ｂｅａｔｔｉｅ，ＭＳ  ｅｔ  ａｌ．，（２００２）Ｎｅｕｒｏｎ  ３６，３７５−３８６；Ｖｏｌｏｓｉｎ，Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（２００６）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２６，７７５６−７７６６；Ｎｙｋｊａｅｒ，Ａ  ｅｔ  ａｌ．，（２００５）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．１５，４９−５７；Ｊａｎｓｅｎ，Ｐ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）Ｎａｔ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１０，１４４９−１４５７；Ｖｏｌｏｓｉｎ，Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２８，９８７０−９８７９；Ｆａｈｎｅｓｔｏｃｋ，Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（２００１）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１８，２１０−２２０；Ｎａｋａｍｕｒａ，Ｋ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）Ｃｅｌｌ  Ｄｅａｔｈ．Ｄｉｆｆｅｒ．１４，１５５２−１５５４；Ｙｕｎｅ，Ｔ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．１１８３，３２−４２；Ｗｅｉ，Ｙ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｌｅｔｔ．４２９，１６９−１７４；Ｐｒｏｖｅｎｚａｎｏ，ＭＪ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）Ｌａｒｙｎｇｏｓｃｏｐｅ  １１８，８７−９３；Ｎｙｋｊａｅｒ，Ａ  ｅｔ  ａｌ．，（２００４）Ｎａｔｕｒｅ  ４２７，８４３−８４８；Ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎ，ＡＷ  ｅｔ  ａｌ．，（２００４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１０１，６２２６−６２３０；Ｔｅｎｇ，ＨＫ  ｅｔ  ａｌ．，（２００５）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２５，５４５５−５４６３；Ｊａｎｓｅｎ，Ｐ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）Ｎａｔ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１０，１４４９−１４５７；Ｖｏｌｏｓｉｎ，Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２８，９８７０−９８７９；Ｆａｎ，ＹＪ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２７，２３８０−２３９０；Ａｌ−Ｓｈａｗｉ，Ｒ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２７，２１０３−２１１４；及びＹａｎｏ，Ｈ  ｅｔ  ａｌ．，（２００９）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２９，１４７９０−１４８０２）。かかる実験は、細菌人工染色体に由来するヒトＣＤ３３遺伝子もしくは骨髄プロモーターにより駆動されるｃＤＮＡに由来するヒトＣＤ３３遺伝子を発現するマウス、またはｈＣＤ３３  ｃＤＮＡを含有するレンチウイルスもしくはＡＡＶウイルスを形質導入したマウスでも行うことができる。
【０６０４】
実施例２２：感染症モデルにおけるアンタゴニストＣＤ３３抗体及び／またはＣＤ３３二重特異性抗体の治療用途の特徴付け
アンタゴニスト抗ＣＤ３３抗体及び／またはＣＤ３３二重特異性抗体の治療的有用性を感染症モデルで試験する。例えば、先に記載されているように、正常マウスにおけるＬｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓまたは他の感染症を使用することができる（例えば、Ｙｉｎ，Ｆ  ｅｔ  ａｌ．，（２００９）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ，２０７，１１７−１２８）。標準マウス、または細菌人工染色体もしくは骨髄プロモーター下でヒトＣＤ３３遺伝子を発現するマウスのいずれかを使用することができる。
【０６０５】
実施例２３：炎症性疾患モデルにおけるアンタゴニストＣＤ３３抗体及び／またはＣＤ３３二重特異性抗体の治療用途の特徴付け
アンタゴニスト抗ＣＤ３３抗体及び／またはＣＤ３３二重特異性抗体の治療的有用性を炎症性疾患モデルで試験する。例えば、関節リウマチまたは別の炎症性疾患の確立されたモデル（Ｍｉｚｏｇｕｃｈｉ（２０１２）Ｐｒｏｇ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｓｃｉ．，１０５：２６３−３２０；及びＡｓｑｕｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，（２００９）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．３９：２０４０−４）。かかる実験は、細菌人工染色体に由来するヒトＣＤ３３遺伝子もしくは骨髄プロモーターにより駆動されるｃＤＮＡに由来するヒトＣＤ３３遺伝子を発現するマウス、またはｈＣＤ３３  ｃＤＮＡを含有するレンチウイルスもしくはＡＡＶウイルスを形質導入したマウスでも行うことができる。
【０６０６】
実施例２４：ＣＤ３３のリン酸化及び下流シグナル伝達分子を誘導または阻害する抗ＣＤ３３抗体及び／またはＣＤ３３二重特異性抗体のスクリーニング
組織培養皿から細胞（Ｊ７７４、ＲＡＷ２６４．７、ＢＭＭ細胞、ヒト初代単球、マクロファージ、樹状細胞、Ｔ細胞ミクログリアまたは破骨細胞）をＰＢＳ−ＥＤＴＡで剥がし、ＰＢＳで洗浄し、計数する。細胞を抗ＣＤ３３抗体及び／もしくはＣＤ３３二重特異性抗体またはアイソタイプ適合対照抗体とともに、１μｇ／１０６細胞で、氷上または他の条件下、２０分間、インキュベートする。細胞を氷冷放射性免疫沈降アッセイ（ＲＩＰＡ）緩衝液中で２０分間溶解し、続いて、４℃で１０分間、１６，０００ｇで遠心分離し、不溶性物質を除去する。得られた上清を指定抗体（ＤＡＰ１２、ＥＲＫまたはＡＫＴ）及びタンパク質Ａアガロースまたはタンパク質Ｇアガロース（Ｓｉｇｍａ）との免疫沈降反応に供する。ビーズをＲＩＰＡ緩衝液で十分に洗浄し、タンパク質をＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）によって分離する。次いで、ウェスタンブロットによってタンパク質をニトロセルロース膜に移し、適切な抗体（ＤＡＰ１２、ＥＲＫ、Ｓｙｋ、ＬＣＫ、ＦＹＮ、Ｃ−Ｃｂｌ、ＶＡＶまたはＡＫＴのリン酸化チロシンまたはリン酸化形態を特異的に認識する抗体）とともにインキュベートし、記載されているように（例えば、Ｐｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１０）Ｓｃｉ  Ｓｉｇｎａｌ．，３（１２２）：ｒａ３８）、増強化学ルミネセンス（ＥＣＬ）システム（Ｐｉｅｒｃｅ）により可視化する。
【０６０７】
実施例２５：カルシウム流を誘導または阻害する抗ＣＤ３３及び／またはＣＤ３３二重特異性抗体のスクリーニング
ＢＭＭ細胞をＨＥＰＥＳ含有緩衝液［２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．３）、１２０ｍＭ  ＮａＣｌ、１ｍＭ  ＣａＣｌ、１ｍＭ  ＭｇＣｌ、５ｍＭ  ＫＣｌ、グルコース（１ｍｇ／ｍｌ）、ウシ血清アルブミン（１ｍｇ／ｍｌ）］で２回洗浄し、続いて、０．０５％Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ−１２７（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）及び１μＭ  Ｉｎｄｏ−１  ＡＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中、３７℃で２０分間、インキュベートする。細胞をＨＥＰＥＳ緩衝液で２回洗浄し、次いで、抗ＣＤ３３抗体及び／もしくはＣＤ３３二重特異性抗体（１６μｇ／ｍｌ）または対照抗体（１６μｇ／ｍｌ）で刺激し、分光光度計（ＰＴＬ  Ｐｈｏｔｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）によりモニターする。製造元の説明書に従って、Ｉｎｄｏ−１蛍光発光をカルシウム（Ｃａ２＋）に変換する（例えば、Ｐｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１０）Ｓｃｉ  Ｓｉｇｎａｌ．，３（１２２）：ｒａ３８）。
【０６０８】
実施例２６：ＣＤ３３はマクロファージ、Ｔ細胞及び樹状細胞の生存を増加させる
細胞生存におけるＣＤ３３の役割を評価するために、ヒトまたはマウスのマクロファージ、ミクログリア、Ｔ細胞及び樹状細胞を炎症性メディエーターの存在下で培養し、細胞生存を測定する。
【０６０９】
脛骨及び大腿骨の骨髄細胞を冷ＰＢＳでフラッシングすることによって、ＣＤ３３  ＷＴ、Ｈｅｔ及びＫＯマウスに由来するマウス骨髄前駆細胞を得る。ＰＢＳで１回洗浄した後、ＡＣＫ溶解緩衝液（Ｌｏｎｚａ）を使用して赤血球を溶解し、ＰＢＳで２回洗浄し、０．５×１０６細胞／ｍｌで、マクロファージを得る場合にはＭ−ＣＳＦ  ５０ｎｇ／ｍｌまたは樹状細胞を得るにはＧＭ−ＣＳＦ  １０ｎｇ／ｍｌの指定量を含む完全ＲＰＭＩ培地（１０％ＦＣＳ、Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ、Ｇｌｎ、ｎｅＡＡ）中に懸濁する。Ｍ２型マクロファージについては、１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−４を培養細胞に添加する。Ｍ１型マクロファージについては、５０ｎｇ／ｍｌのＩＦＮを添加する。いくつかの実験において、５日目に、ＬＰＳまたはザイモサンを１μｇ／ｍｌ〜０．０１ｎｇ／ｍｌの濃度範囲で細胞培養物に添加する。組み換えサイトカインは、Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈから購入する。
【０６１０】
骨髄由来マクロファージの生存率を分析するために、細胞を上記のとおり調製し、ＭＣＳＦ中で培養する。細胞を、９６ウェルプレートに１０５／２００ｕｌ（ルシフェラーゼによるアッセイを使用する生存率分析用）または組織培養処理していないプレートの６ウェルプレートで０．５×１０６／１ｍｌ（トリパンブルー排除細胞計数用）のいずれかで播種する。３日目に新鮮なＭ−ＣＳＦを含有する培地を添加する。指定時点で、３ｍＭ  ＥＤＴＡにより細胞をプレートから穏やかに剥離し、Ｂｕｒｋｅｒチャンバーを使用して計測する。生細胞のＦＡＣＳ解析のために、マクロファージを、５０ｎｇ／ｍｌ  ＭＣＳＦ中６日間（＋ＭＣＳＦ）または５０ｎｇ／ｍｌ  ＭＣＳＦ中４日間後ＭＣＳＦを除去して更に３６時間（−ＭＣＳＦ）のいずれかで培養する。ＣＤ１１ｂ抗体及びＤＡＰＩを使用して細胞を染色する。ルシフェラーゼ生存率アッセイについては、階的濃度の成長因子ＧＭＣＳＦ（樹状細胞）、ＭＣＳＦ（Ｍ１マクロファージ）またはＭＣＳＦ＋ＩＬ−４（Ｍ２マクロファージ）での培養５日目に細胞生存率を測定する。細胞をＴｏｘＧｌｏ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）と直接インキュベートし、ルシフェラーゼ活性（発光）を決定する。炎症性メディエーターＩＦＮ、ＬＰＳまたはザイモサンの存在下で培養した生存マクロファージのＦＡＣＳ解析のために、細胞を５日目に回収し、ＣＤ１１ｂ抗体及びＤＡＰＩを使用して染色する。
【０６１１】
実施例２７：ＣＤ３３はマクロファージの炎症性細胞表面マーカーの発現を増加させる
炎症性マーカーの発現におけるＣＤ３３の役割を決定するために、マクロファージを様々な炎症性メディエーターとともに培養し、ＣＤ３３抗体の存在下または不存在下で、表面マーカーＣＤ８６及びＣＤ２０６の発現を測定する。
【０６１２】
マクロファージを播種し、３７℃で４時間接着培養し、ＴＬＲアゴニストＬＰＳ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ａｂｏｒｔｕｓ  ｅｑｕｉ）及びザイモサン（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）を０．０１〜１００ｎｇ／ｍｌ（ＬＰＳ）または０．０１〜１０μｇ／ｍｌ（ザイモサン）の範囲の濃度で加える。あるいは、マクロファージをサイトカインＩＬ−４（１０ｎｇ／ｍｌ）またはＩＦＮ（０．５〜５０ｎｇ／ｍｌ）の存在下で培養する。４８時間後に、ＣＤ８６及びＣＤ２０６のＦＡＣＳ解析をＢＤ  ＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏで実施する。ＦｌｏｗＪｏ（ＴｒｅｅＳｔａｒ）ソフトウェアバージョン１０．０．７によりデータ解析を行う。
【０６１３】
実施例２８：ＣＤ３３欠損マウスにおける腫瘍成長分析
１０匹のＣＤ３３野生型（ＷＴ）、ＣＤ３３ヘテロ接合型（ＨＥＴ）及びＣＤ３３ノックアウト（ＫＯ）マウス（性別及び年齢を一致させた同腹仔、８週齢（＋／−２週））コホートに、１００ｕｌ  ＰＢＳ中に懸濁した腫瘍細胞（例えば、１×１０５〜１×１０６のＭＣ３８結腸癌、ルイス肺癌またはＢ１６黒色腫細胞）を皮下接種する。移植前に、イソフルランを用いて動物に麻酔をかける。腫瘍成長を測径器により隔週で観察し、４日目から腫瘍成長を測定する。実験のエンドポイントは、腫瘍体積２０００ｍｍ３または６０日である。腫瘍成長及び生存率（％）が結果指標である。腫瘍の生着・成長率の減少及び腫瘍浸潤免疫抑制性マクロファージの数の減少は、ＣＤ３３  ＫＯマウスにおけるエフェクターＴ細胞の腫瘍への流入の増加を示す。
【０６１４】
浸潤腫瘍関連免疫抑制性マクロファージ及びＴ細胞の数を決定するために、性別及び年齢を一致させた同腹仔６〜８匹の群を使用する。８週齢（＋／−２週）のＷＴ−ＨＥＴ−ＫＯ同腹仔に、２００ｕｌ  Ｍａｔｒｉｇｅｌ（Ｍａｔｒｉｇｅｌ  Ｍａｔｒｉｘ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｄｕｃｅｄ；ＢＤ）中に懸濁した腫瘍細胞（例えば、１×１０５〜１×１０６のＭＣ３８、ルイス肺またはＢ１６細胞）を皮下接種する。移植前に、イソフルランを用いて動物に麻酔をかける。腫瘍注射から７日及び１０日後、マトリゲルプラグを摘出し、１ｍｇ／ｍｌのコラゲナーゼＤ（Ｓｉｇｍａ）とともに３７℃で１時間インキュベートし、分離して単細胞懸濁液を得、セルストレーナーで濾過する。腫瘍に動員されたＴ細胞の量及びエフェクターＴ細胞と制御性Ｔ細胞との比を決定するために、５×１０６個の細胞を抗ＣＤ４５．２  ＰｅｒｃｐＣｙ５．５、抗ＣＤ３−ＦＩＴＣ、抗ＣＤ８−ＰＥ−Ｃｙ７、抗ＣＤ４−ＡＰＣ、抗ＦｏｘＰ３−ＰＥ（ＢＤ）及びＤＡＰＩで染色する。腫瘍に動員された単球／マクロファージ系統細胞の量を決定するために、５×１０６個の細胞を抗ＣＤ４５．２  ＰｅｒｃｐＣｙ５．５、抗ＣＤ１１ｂ−ＰＥＣＹ７、抗Ｆ４／８０−ＦＩＴＣ、抗Ｌｙ６Ｃ／Ｇ−ＡＰＣ、抗ＣＤ８６−ＰＥ及びＤＡＰＩで染色する。細胞をＢＤ  ＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏで取得する。ＦｌｏｗＪｏ（ＴｒｅｅＳｔａｒ）ソフトウェアバージョン１０．０．７によりデータ解析を行う。
【０６１５】
実施例２９：ＣＤ３３抗体及び／または二重特異性抗体の抗癌作用の分析
１０匹の８週齢（＋／−２週）のＣ５７Ｂｌ６／ＮＴａｃマウス群（標準マウスまたは細菌人工染色体もしくは骨髄プロモーターに由来するヒトＣＤ３３遺伝子を発現するマウスのいずれか）に、１００ｕｌ  ＰＢＳ中に懸濁した腫瘍細胞（例えば、１×１０５〜１×１０６のＭＣ３８、ルイス肺またはＢ１６細胞）を皮下接種する。移植前に、イソフルランを用いて動物に麻酔をかける。２日目から、実施例３８及び４０に記載するものなどのアンタゴニスト抗ＣＤ３３抗体をそれぞれ２００ｕｇの４回用量でマウス群に３日ごとに腹腔内注射する。腫瘍成長を測径器により隔週で観察し、４日目から腫瘍成長を測定する。実験のエンドポイントは、腫瘍体積２０００ｍｍ３または６０日である。腫瘍成長及び生存率（％）が結果指標である。腫瘍の生着・成長速度の減少、腫瘍浸潤免疫抑制性マクロファージの数の減少及びエフェクターＴ細胞の腫瘍への流入の増加は、遮断抗ＣＤ３３抗体の抗癌作用を示す。
【０６１６】
かかる試験には、ヒトＩＬ−３、ヒトＧＭ−ＣＳＦ、ヒトＩＬ−６、ヒトＩＬ−２を発現し、かつヒト胎盤、胎児肝臓、末梢血または別の供給源に由来するヒト免疫細胞を接種した免疫不全マウスまたは免疫欠損トランスジェニックマウスも使用することができる（Ｉｔｏ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）Ｃｕｒｒ  Ｔｏｐ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．；３２４：５３−７６；Ｉｔｏ  Ｒ．，ｅｔ  ａｌ．，（２０１２）Ｃｅｌｌｕｌａｒ＆Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ９，２０８−２１４；Ｂｒｅｈｍ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１０）Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｏｂｅｓ．１７（２）：１２０−１２５；Ｚｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔｅｒｓ．３４４，１３−１９）。そのようなマウスは、細胞株腫瘍または患者由来ヒト腫瘍異種移植片のいずれかとともに使用することができる（Ｓｉｏｌａｓ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．；７３（１７）：５３１５−５３１９）。
【０６１７】
かかる実験は、細菌人工染色体に由来するヒトＣＤ３３遺伝子もしくは骨髄プロモーターにより駆動されるｃＤＮＡに由来するヒトＣＤ３３遺伝子を発現するマウス、またはｈＣＤ３３  ｃＤＮＡを含有するレンチウイルスもしくはＡＡＶウイルスを形質導入したマウスでも行うことができる。
【０６１８】
実施例３０：ＣＤ３３抗体及び／または二重特異性抗体と抑制性チェックポイントタンパク質または抑制性サイトカイン／ケモカイン及びその受容体に対する抗体とを組み合わせた併用療法の相加的抗腫瘍作用の分析
１５匹の８週齢（＋／−２週）のＣ５７Ｂｌ６／ＮＴａｃマウス群に、実施例３５に記載する腫瘍細胞を皮下接種する。移植前に、イソフルランを用いて動物に麻酔をかける。２日目から、マウスに、２００ｕｇの抗ＣＤ３３抗体を単独で、または３、６及び９日目のチェックポイントタンパク質に対する抗体（例えば、抗ＰＤＬ１  ｍＡｂクローン１０Ｆ．９Ｇ２及び／または抗ＣＴＬＡ４  ｍＡｂクローンＵＣ１０−４Ｆ１０−１１）と組み合わせて、４回用量で３日ごとに腹腔内注射する。処置群は、抗ＣＤ３３、抗ＣＴＬＡ４、抗ＰＤＬ１、抗ＣＤ３３＋抗ＣＴＬＡ４、抗ＣＤ３３＋抗ＰＤＬ１、及びアイソタイプ対照を含む。腫瘍成長を測径器により隔週で観察し、４日目から腫瘍成長を測定する。実験のエンドポイントは、腫瘍体積２０００ｍｍ３または６０日である。腫瘍成長及び生存率（％）が結果指標である。併用療法による腫瘍成長の減少及び生存率（％）の増加は、抗ＣＤ３３抗体が抗チェックポイント抗体との相加的または相乗的治療効果を有することを示す。チェックポイント分子に対するアンタゴニスト抗体には、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２、ＰＤ１、ＣＴＬＡ４、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ３、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ−３及びホスファチジルセリンに対する抗体が含まれる。抑制性サイトカインに対するアンタゴニスト抗体には、ＣＣＬ２、ＣＳＦ−１及びＩＬ−２に対する抗体が含まれる。かかる試験には、ヒトＩＬ−３、ヒトＧＭ  ＣＳＦ、ヒトＩＬ−６、ヒトＩＬ２を発現し、かつヒト胎盤、胎児肝臓、末梢血または別の供給源に由来するヒト免疫細胞を接種した免疫欠損マウスまたは免疫欠損トランスジェニックマウスも使用することができる（Ｉｔｏ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）Ｃｕｒｒ  Ｔｏｐ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．；３２４：５３−７６；Ｉｔｏ  Ｒ．，ｅｔ  ａｌ．，（２０１２）Ｃｅｌｌｕｌａｒ＆Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ９，２０８−２１４；Ｂｒｅｈｍ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１０）Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｏｂｅｓ．１７（２）：１２０−１２５；Ｚｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔｅｒｓ．３４４，１３−１９）。そのようなマウスは、細胞株腫瘍または患者由来ヒト腫瘍異種移植片のいずれかとともに使用することができる（Ｓｉｏｌａｓ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．；７３（１７）：５３１５−５３１９）。
【０６１９】
かかる実験は、細菌人工染色体に由来するヒトＣＤ３３遺伝子もしくは骨髄プロモーターにより駆動されるｃＤＮＡに由来するヒトＣＤ３３遺伝子を発現するマウス、またはｈＣＤ３３  ｃＤＮＡを含有するレンチウイルスもしくはＡＡＶウイルスを形質導入したマウスでも行うことができる。
【０６２０】
実施例３１：ＣＤ３３抗体及び／または二重特異性抗体と刺激性チェックポイントタンパク質を活性化する抗体とを組み合わせた併用療法の相加的抗腫瘍作用の分析
１５匹の８週齢（＋／−２週）のＣ５７Ｂｌ６／ＮＴａｃマウス群に、実施例３５に記載する腫瘍細胞を皮下接種する。移植前に、イソフルランを用いて動物に麻酔をかける。２日目から、マウスに、２００ｕｇの抗ＣＤ３３抗体を単独で、または３、６及び９日目の刺激性チェックポイントタンパク質を活性化するアゴニスト抗体（例えば、ＯＸ４０またはＩＣＯＳ  ｍＡｂ）と組み合わせて、４回用量で３日ごとに腹腔内注射する。腫瘍成長を測径器により隔週で観察し、４日目から腫瘍成長を測定する。実験のエンドポイントは、腫瘍体積２０００ｍｍ３または６０日である。腫瘍成長及び生存率（％）が結果指標である。併用療法による腫瘍成長の減少及び生存率（％）の増加は、抗ＣＤ３３抗体が刺激性チェックポイント抗体との相加的または相乗的治療効果を有することを示す。刺激性チェックポイント抗体には、ＣＤ２８、ＩＣＯＳ、ＣＤ１３７、ＣＤ２７、ＣＤ４０及びＧＩＴＲに対するアゴニスト／刺激性抗体が含まれる。
【０６２１】
かかる試験には、ヒトＩＬ−３、ヒトＧＭ  ＣＳＦ、ヒトＩＬ−６、ヒトＩＬ２を発現し、かつヒト胎盤、胎児肝臓、末梢血または別の供給源に由来するヒト免疫細胞を接種した免疫欠損マウスまたは免疫欠損トランスジェニックマウスも使用することができる（Ｉｔｏ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）Ｃｕｒｒ  Ｔｏｐ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．；３２４：５３−７６；Ｉｔｏ  Ｒ．，ｅｔ  ａｌ．，（２０１２）Ｃｅｌｌｕｌａｒ＆Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ９，２０８−２１４；Ｂｒｅｈｍ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１０）Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｏｂｅｓ．１７（２）：１２０−１２５；Ｚｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔｅｒｓ．３４４，１３−１９）。そのようなマウスは、細胞株腫瘍または患者由来ヒト腫瘍異種移植片のいずれかとともに使用することができる（Ｓｉｏｌａｓ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．；７３（１７）：５３１５−５３１９）。
【０６２２】
かかる実験は、細菌人工染色体に由来するヒトＣＤ３３遺伝子もしくは骨髄プロモーターにより駆動されるｃＤＮＡに由来するヒトＣＤ３３遺伝子を発現するマウス、またはヒトＣＤ３３  ｃＤＮＡを含有するレンチウイルスもしくはＡＡＶウイルスを形質導入したマウスでも行うことができる。
【０６２３】
実施例３２：ＣＤ３３抗体及び／または二重特異性抗体と刺激性サイトカインとを組み合わせた併用療法の相加的抗腫瘍作用の分析
１５匹の８週齢（＋／−２週）のＣ５７Ｂｌ６／ＮＴａｃマウス群に、実施例３５に記載する腫瘍細胞を皮下接種する。移植前に、イソフルランを用いて動物に麻酔をかける。２日目から、マウスに、２００ｕｇの抗ＣＤ３３抗体を単独で、または刺激性サイトカイン（例えば、ＩＬ−１２、ＩＦＮ−ａ）と組み合わせて、４回用量で３日ごとに腹腔内注射する。腫瘍成長を測径器により隔週で観察し、４日目から腫瘍成長を測定する。実験のエンドポイントは、腫瘍体積２０００ｍｍ３または６０日である。腫瘍成長及び生存率（％）が結果指標である。併用療法による腫瘍成長の減少及び生存率（％）の増加は、抗ＣＤ３３抗体が免疫刺激性サイトカインとの相加的または相乗的治療効果を有することを示す。刺激性サイトカインには、ＩＦＮ−ａ／ｂ、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、ＧＭ−ＣＳＦ及びＧ−ＣＳＦが含まれる。
【０６２４】
かかる試験には、ヒトＩＬ−３、ヒトＧＭ  ＣＳＦ、ヒトＩＬ−６、ヒトＩＬ２を発現し、かつヒト胎盤、胎児肝臓、末梢血または別の供給源に由来するヒト免疫細胞を接種した免疫欠損マウスまたは免疫欠損トランスジェニックマウスも使用することができる（Ｉｔｏ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）Ｃｕｒｒ  Ｔｏｐ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．；３２４：５３−７６；Ｉｔｏ  Ｒ．，ｅｔ  ａｌ．，（２０１２）Ｃｅｌｌｕｌａｒ＆Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ９，２０８−２１４；Ｂｒｅｈｍ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１０）Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｏｂｅｓ．１７（２）：１２０−１２５；Ｚｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔｅｒｓ．３４４，１３−１９）。そのようなマウスは、細胞株腫瘍または患者由来ヒト腫瘍異種移植片のいずれかとともに使用することができる（Ｓｉｏｌａｓ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．；７３（１７）：５３１５−５３１９）。
【０６２５】
かかる実験は、細菌人工染色体に由来するヒトＣＤ３３遺伝子もしくは骨髄プロモーターにより駆動されるｃＤＮＡに由来するヒトＣＤ３３遺伝子を発現するマウス、またはｈＣＤ３３  ｃＤＮＡを含有するレンチウイルスもしくはＡＡＶウイルスを形質導入したマウスでも行うことができる。
【０６２６】
実施例３３：ＣＤ３３抗体及び／または二重特異性抗体Ｆａｂの自然免疫及び適応免疫細胞の生存を刺激する能力の分析
プレートに結合した架橋済み抗ＣＤ３３抗体Ｆａｂ断片のアゴニスト機能性を、自然免疫細胞（例えば、マクロファージ）または適応免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）にて評価する。
【０６２７】
Ｍ−ＣＳＦ及びプレート結合ＣＤ３３抗体Ｆａｂの存在下でマクロファージを培養し、細胞生存率を測定した。
【０６２８】
架橋済みＣＤ３３  Ｆａｂを１２．５ｎＭまたは１００ｎＭのいずれかで予めコーティングした組織培養処理していない９６ウェルプレートに、ヒト単球に由来するマクロファージ及びＤＣならびにヒト単球に由来するＴ細胞及びヒトミクログリアを播種した。細胞を１０ｎｇ／ｍｌのＭ−ＣＳＦ存在下で４８時間培養した。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（商標）キット（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して生存率分析を実施した。ＢｉｏＴｅｋ  Ｓｙｎｅｒｇｙ  Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ  ＲｅａｄｅｒによりＧＥＮ５２．０４ソフトウェアを使用して、プレートを読み取った。
【０６２９】
実施例３４：ＣＤ３３抗体及び／または二重特異性抗体のＮＦＡＴ依存性遺伝子を調節する能力の分析
ルシフェラーゼレポーター遺伝子をＮＦＡＴ（活性化Ｔ細胞の核因子）プロモーターの制御下で使用して、アンタゴニスト抗ＣＤ３３抗体がＮＦＡＴ依存性遺伝子を活性化する能力を評価する。
【０６３０】
ＩＴＡＭモチーフ含有共受容体ＤＡＰ１２及びそのリガンド結合パートナーＴＲＥＭ２を発現するマウスＴリンパ球ＢＷ５１４７．Ｇ．１．４（ＡＴＣＣ（登録商標）ＴＩＢ４８（登録商標））に由来する細胞株にヒトＣＤ３３及びＣｉｇｎａｌ  Ｌｅｎｔｉ  ＮＦＡＴ−Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅウイルス（Ｑｉａｇｅｎ）を感染させる。ルシフェラーゼシグナル伝達をプレート結合抗ＴＲＥＭ２抗体によって活性化する。完全長及びＦａｂ断片の抗ＣＤ３３抗体をＴＲＥＭ２抗体と共培養するか、溶液中に入れる。プレート結合については、抗体をＤＰＢＳ中１０μｇ／ｍｌで、組織培養処理した透明底の白色９６ウェルプレート（１００μＬ／ウェル）に４℃で一晩置く。ウェルをＤＰＢＳで３回すすぎ、その後、１％血清を含む培地中に１００，０００細胞／ウェルで播種する。シグナル伝達の陽性対照として、ＰＭＡ（０．０５μｇ／ｍｌ）及びイオノマイシン（０．２５ｕＭ）を一緒に添加する。細胞を６時間インキュベートし、ＯＮＥ−Ｇｌｏ（登録商標）試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）を各ウェルに添加し、プレートシェーカー上で室温にて３分間インキュベートすることによって、ルシフェラーゼ活性を測定する。ルシフェラーゼシグナルは、ＢｉｏＴｅｋプレートリーダーを使用して測定する。
【０６３１】
実施例３５：ＣＤ３３抗体及び／または二重特異性抗体の抗脳卒中効果の分析
ヒト脳卒中によく似ているモデルである中大脳動脈（ＭＣＡＯ）の一過性閉塞を使用して、マウスで脳梗塞を誘発する。右総頸動脈の切開を介して内頸動脈にモノフィラメント（７０ＳＰＲｅ、Ｄｏｃｃｏｌ  Ｃｏｒｐ（ＵＳＡ））を導入する。様々な再灌流時間（６時間、１２時間、２４時間、２日、７日及び２８日）で中大脳動脈を３０分間閉塞する。１２時間及び７日の時点で偽手術動物を使用して手術の影響をコントロールする。偽手術動物は、中大脳動脈の閉塞を含まない同じ手術手順を受ける。アンタゴニスト抗ＣＤ３３抗体または対照抗体で処置したＭＣＡＯ動物を、梗塞体積、急性炎症反応（１２時間の再灌流）、炎症促進性サイトカインＴＮＦａ、ＩＬ−１ａ及びＩＬ−１βの転写、ミクログリア活性（ＣＤ６８、Ｉｂａ１）、ケモカインＣＣＬ２（ＭＣＰ１）、ＣＣＬ３（ＭＩＰ１ａ）及びケモカイン受容体ＣＸ３ＣＲ１の転写、ならびにＣＤ３陽性Ｔ細胞の浸潤について試験する（Ｓｉｅｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）ＰＬｏＳ  ＯＮＥ  ８（１）：ｅ５２９８２．ｄｏｉ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．００５２９８２．）。かかる実験は、標準マウス、あるいは細菌人工染色体に由来するヒトＣＤ３３遺伝子もしくは骨髄プロモーターにより駆動されるｃＤＮＡに由来するヒトＣＤ３３遺伝子を発現するマウス、またはｈＣＤ３３  ｃＤＮＡを含有するレンチウイルスもしくはＡＡＶウイルスを形質導入したマウスで行うことができる。
【０６３２】
実施例３６：抗ＣＤ３３抗体及び／または二重特異性抗体の抗アルツハイマー病効果の分析
アンタゴニスト抗ＣＤ３３抗体がアルツハイマー病（ＡＤ）の発症を遅延させ、防止し、または逆転させる能力を評価するために、５Ｘ  ＦＡＤマウスが使用される。５Ｘ  ＦＡＤマウスは、２つのＦＡＤ変異Ｍ１４６Ｌ及びＬ２８６Ｖを有するヒトＰＳ１に加えて、スウェーデン（Ｋ６７０Ｎ、Ｍ６７１Ｌ）、フロリダ（Ｉ７１６Ｖ）及びロンドン（Ｖ７１７Ｉ）の家族性アルツハイマー病（ＦＡＤ）変異を有する変異型ヒトＡＰＰ（６９５）を過剰発現する。どちらの導入遺伝子もマウスＴｈｙ１プロモーターによって制御され、脳における過剰発現を促進し、ＡＤの主要な特徴を再現する。アゴニスト抗ＣＤ３３抗体または対照抗体で処置したマウスのＡベータ斑量を組織抽出物の免疫組織化学及びＥＬＩＳＡによって試験する。更に、脳中のミクログリア数、ならびにモリス水迷路（空間学習及び記憶課題）、放射状水迷路（空間学習及び記憶課題）、Ｙ字型迷路（空間認知の尺度として自発的交替を定量する）、オープンフィールドにおける新規嗜好性、学習及び記憶を評価するための自発的学習、及び恐怖条件付けを使用した認知障害の低減についても試験する（ウェブサイトｍｏｕｓｅｂｉｏｌｏｇｙ．ｏｒｇ；Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１５）Ｃｅｌｌ．ｐｉｉ：Ｓ００９２−８６７４（１５）００１２７−０）。かかる実験は、細菌人工染色体に由来するヒトＣＤ３３遺伝子もしくは骨髄プロモーターにより駆動されるｃＤＮＡに由来するヒトＣＤ３３遺伝子を発現するマウス、またはｈＣＤ３３  ｃＤＮＡを含有するレンチウイルスもしくはＡＡＶウイルスを形質導入したマウスでも行うことができる。
【０６３３】
実施例３７：気道感染症におけるＣＤ３３抗体及び／または二重特異性抗体の保護効果の分析
アンタゴニストＣＤ３３抗体が細菌性気道感染症を遅延し、予防し、または治療する能力を評価するために、Ｃ５７Ｂｌ６マウスにＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅを接種することを伴う前臨床マウスモデルを使用する。このモデルは、記載されているように（例えば、Ｓｈａｒｉｆ  Ｏ  ｅｔ  ａｌ，２０１４  ＰＬｏＳ  Ｐａｔｈｏｇ．２０１４  Ｊｕｎ；１０（６）：ｅ１００４１６７；及びＳｃｈａｂｂａｕｅｒ  Ｇ  ｅｔ  ａｌ，２０１０  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １８５：４６８−４７６参照）、１０５ＣＦＵのＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ血清型３（ＡＴＣＣ６３０３）の経鼻（ｉ．ｎ．）投与を伴う。このモデルでは、約９０％ＷＴ  Ｃ５７Ｂｌ６マウスが感染後６日以内に感染発症する。
【０６３４】
１群あたり１０〜１５匹のマウスにＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅを接種し、同時に、０日目から開始して、アンタゴニスト抗ＣＤ３３抗体による処置を隔日で行う。抗ＣＤ３３抗体の初回用量は、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａ接種の３時間前に投与する。１５日間、マウスを毎日観察し、死亡イベントを確認する。細菌接種に生き延びたマウスの割合（％）を求める。
【０６３５】
別個の実験において、血液中及び肺中の細菌量の計数及びサイトカイン発現についても決定する。感染から２４または４８時間後、血液をＥＤＴＡ含有チューブ中に回収し、これを寒天プレート上で培養して血漿中の細菌ＣＦＵを計数する。血漿は、ＥＬＩＳＡによるサイトカイン分析のために、−２０℃で保存する。肺を採取し、ホモジナイズし、寒天プレート上で培養して細菌ＣＦＵを計数するか、溶解緩衝液中で３０分間インキュベートしてサイトカイン測定について上清を分析する。
【０６３６】
別個の実験において、Ｈ＆Ｅ病理分析のために、細菌感染から４０時間後に肺を回収し、１０％ホルマリンで固定し、パラフィンに包理する。
【０６３７】
かかる実験は、細菌人工染色体に由来するヒトＣＤ３３遺伝子もしくは骨髄プロモーターにより駆動されるｃＤＮＡに由来するヒトＣＤ３３遺伝子を発現するマウス、またはｈＣＤ３３  ｃＤＮＡを含有するレンチウイルスもしくはＡＡＶウイルスを形質導入したマウスでも行うことができる。
【０６３８】
実施例３８：敗血症におけるＣＤ３３抗体及び／または二重特異性抗体の保護効果の分析
アンタゴニストＣＤ３３抗体が敗血症を遅延し、予防し、または治療する能力を評価するために、Ｃ５７Ｂｌ６マウスにＬＰＳを全身投与することを伴う前臨床マウスモデルを使用する。このモデルは、記載されているように（例えば、Ｇａｗｉｓｈ  Ｒ  ｅｔ  ａｌ，２０１４  ＦＡＳＥＢ  Ｊ参照）、３７ｍｇ／ｍｌのＬＰＳの腹腔内（ｉ．ｐ．）投与を伴う。このモデルでは、９５％を超えるＷＴ  Ｃ５７Ｂｌ６マウスがＬＰＳ注入後４０時間以内に感染発症する。
【０６３９】
マウスコホートにＬＰＳを投与し、同時に、０日目から開始して、アンタゴニスト抗ＣＤ３３抗体による処置を毎日行う。抗ＣＤ３３抗体の初回用量は、ＬＰＳ投与の３時間前に投与する。マウスを日中約４時間ごとに観察し、死亡イベントを確認する。ＬＰＳ投与に生き延びたマウスの割合（％）を求める。
【０６４０】
別個の実験において、腹腔洗浄液（ＰＬＦ）を回収する。ＥＬＩＳＡによるサイトカイン分析のために上清を−２０℃で保存し、ペレット化した細胞を計数して腹膜腔に動員された炎症性細胞を定量する。類似の試験を実施して、他の感染症モデルにおけるＣＤ３３抗体の有効性を試験することができる（例えば、Ｓｕｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１３）Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ．１７；５４（５）：３４５１−６２参照）。
【０６４１】
かかる実験は、細菌人工染色体に由来するヒトＣＤ３３遺伝子もしくは骨髄プロモーターにより駆動されるｃＤＮＡに由来するヒトＣＤ３３遺伝子を発現するマウス、またはｈＣＤ３３  ｃＤＮＡを含有するレンチウイルスもしくはＡＡＶウイルスを形質導入したマウスでも行うことができる。
【０６４２】
実施例３９：急性及び慢性大腸炎におけるＣＤ３３抗体及び／または二重特異性抗体の保護効果の分析
アンタゴニスト抗ＣＤ３３抗体が大腸炎を遅延し、予防し、または治療する能力を評価するために、急性及び慢性大腸炎の前臨床マウスモデルを使用する。ＤＳＳ誘発大腸炎の場合、マウスに３％ＤＳＳの飲料水を自由摂取で８日間与える。ＴＮＢＳ誘発大腸炎の場合、マウスに麻酔をかけ、２０％エタノール（ｖｏｌ／ｖｏｌ）中の、３ｍｇのＴＮＢＳ、または対照としてのビヒクル単独を直腸内注射を用いて処置する。慢性大腸炎モデルの場合、全てのマウスを３サイクルの２％ＤＳＳで５日間処置し、続いて、１０日の回復期間を設ける。全モデルについて、記載されているように（例えば、Ｃｏｒｒｅａｌｅ  Ｃ，２０１３，Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，Ｆｅｂｒｕａｒｙ  ２０１３，ｐｐ．３４６−３５６．ｅ３参照）、体重減少、便の硬さ及び便潜血の存在を毎日観察し、疾患活動度指数の算出に使用する。
【０６４３】
マウスコホートに、０日目から開始して、アンタゴニスト抗ＣＤ３３抗体による処置を毎日行い、ＤＳＳまたはＴＮＢＳ投与を行う。マウスを毎日観察し、記載されているように（例えば、Ｓ．Ｖｅｔｒａｎｏ，Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，１３５（２００８），ｐｐ．１７３−１８４参照）、体重減少、便の硬さ及び便潜血の存在を確認するために毎日観察し、疾患活動度指数の算出に使用した。
【０６４４】
別個の実験において、粘膜損傷の内視鏡画像及び組織学画像を取得し、炎症性細胞の浸潤及び粘膜損傷を評価する。類似の試験を実施して、クローン病、炎症性腸疾患及び潰瘍性大腸炎を含む他の自己免疫モデルにおけるＣＤ３３抗体の有益性を試験することができる（例えば、Ｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１３）Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓ  Ｄｅｖｅｌ  Ｔｈｅｒ．；７：１３４１−１３５７；及びＳｏｌｌｉｄ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）ＰＬｏＳ  Ｍｅｄ  ５（９）：ｅ１９８参照）。
【０６４５】
かかる実験は、細菌人工染色体に由来するヒトＣＤ３３遺伝子もしくは骨髄プロモーターにより駆動されるｃＤＮＡに由来するヒトＣＤ３３遺伝子を発現するマウス、またはｈＣＤ３３  ｃＤＮＡを含有するレンチウイルスもしくはＡＡＶウイルスを形質導入したマウスでも行うことができる。
【０６４６】
実施例４０：創傷治癒におけるＣＤ３３抗体及び／または二重特異性抗体の保護効果の分析
アゴニスト抗ＣＤ３３抗体が外傷後の結腸創傷治癒を増大させる能力を評価するために、結腸の生検損傷のマウスモデルを使用する。このモデルでは、外側手術シースを備える内視鏡を下行結腸中央部まで挿入し、粘膜を肛門直腸移行部まで調べる。次いで、粘膜及び粘膜下層全体の単一の完全な厚さ領域を、直径３フレンチの軟性生検鉗子で筋層に貫通しないように取り除く。各マウスに結腸の背側に沿った３〜５部位で生検損傷を施す（例えば、Ｓｅｎｏ  Ｈ，２００８，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．２００９  Ｊａｎ  ６；１０６（１）：２５６−２６１参照）。
【０６４７】
生検損傷から２日または３日後に、マウスコホートをアゴニスト抗ＣＤ３３抗体で処置する。１５日間、マウスを毎日観察して、体重減少を調べ、損傷の表面積を測定することによって創傷治癒を確認する。
【０６４８】
かかる実験は、細菌人工染色体に由来するヒトＣＤ３３遺伝子もしくは骨髄プロモーターにより駆動されるｃＤＮＡに由来するヒトＣＤ３３遺伝子を発現するマウス、またはｈＣＤ３３  ｃＤＮＡを含有するレンチウイルスもしくはＡＡＶウイルスを形質導入したマウスでも行うことができる。
【０６４９】
実施例４１：網膜変性におけるＣＤ３３抗体及び／または二重特異性抗体の保護効果の分析
ＡＭＤは、外網膜の変性疾患である。炎症、特に炎症性サイトカイン及びマクロファージがＡＭＤの疾患進行に関与すると考えられている。
【０６５０】
ＡＭＤ病変の近傍にマクロファージが存在することは、ドルーゼン、ブルック膜、脈絡膜及び網膜において記載されている。マクロファージは、組織因子（ＴＦ）及び血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）を放出し、ＶＥＦＧは、脈絡膜新生血管を示す患者において新血管形成の拡大を引き起こす。
【０６５１】
黄斑の脈絡膜に存在するマクロファージの種類は加齢とともに変化し、老年の眼では若年の眼と比較してＭ２マクロファージのレベル上昇が示される。しかしながら、進行性ＡＭＤの黄斑では、剖検された同様の年齢の正常な眼と比較して、Ｍ１：Ｍ２比がより高かった（例えば、Ｃａｏ  Ｘ  ｅｔ  ａｌ，（２０１１），Ｐａｔｈｏｌ  Ｉｎｔ  ６１（９）：ｐｐ５２８−３５参照）。これは、後期発症のＡＭＤ進行の眼における古典的活性化Ｍ１マクロファージとの関連を示唆している。
【０６５２】
網膜のミクログリア細胞は、組織常在性マクロファージであり、通常、内網膜にも存在する。ミクログリアは、損傷が生じた場合に活性化し、炎症メディエーターとして作用することができる。活性化したミクログリアは、ＡＭＤ組織試料で検出されており、ＡＭＤの病因につながる炎症性プロセスの有力な寄与因子の１つであることが提案されている（Ｇｕｐｔａ  ｅｔ  ａｌ．，（２００３）Ｅｘｐ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ．，７６（４）：４６３−７１．）。ＣＤ３３抗体がＡＭＤを予防し、遅延し、または逆転させる能力を１つ以上のＡＭＤモデルで試験する（例えば、Ｐｅｎｎｅｓｉ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１２）Ｍｏｌ  Ａｓｐｅｃｔｓ  Ｍｅｄ．；３３（４）：４８７−５０９参照）。
【０６５３】
総じて、炎症性マクロファージ（Ｍ１及び／または活性化ミクログリアのいずれか）は、ＡＭＤの疾患進行と相関することが記載されていることから、アンタゴニストＣＤ３３抗体の治療標的となる。緑内障及び遺伝型または網膜色素変性症などの網膜変性において、同様の治療上の利益が達成され得る。
【０６５４】
ＣＤ３３抗体が緑内障の網膜神経節細胞変性を予防し、遅延させ、または逆転させる能力を緑内障モデルで試験する（例えば、Ｅｌ−Ｄａｎａｆ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１５）．Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１１；３５（６）：２３２９−４３参照）。同様に、遺伝子的に誘発された網膜変性及び網膜色素変性症におけるＲＥＭ２の治療上の利益は、Ｃｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，（２００２）Ｖｉｓｉｏｎ  Ｒｅｓ．；４２（４）：５１７−２５及び“Ｒｅｔｉｎａｌ  Ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  Ｒａｔ  Ｍｏｄｅｌ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅ  Ａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ  ｏｆ  Ｐ２３Ｈ  ａｎｄ  Ｓ３３４ｔｅｒ  Ｍｕｔａｎｔ  Ｒｈｏｄｏｐｓｉｎ  Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  Ｒａｔｓ  ａｎｄ  ＲＣＳ  Ｉｎｂｒｅｄ  ａｎｄ  ＲＣＳ  Ｃｏｎｇｅｎｉｃ  Ｓｔｒａｉｎｓ  ｏｆ  Ｒａｔｓ，”  ＭＭ  ＬａＶａｉｌ，Ｊｕｎｅ  ３０，２０１１に記載のとおり試験される。
【０６５５】
かかる実験は、細菌人工染色体に由来するヒトＣＤ３３遺伝子もしくは骨髄プロモーターにより駆動されるｃＤＮＡに由来するヒトＣＤ３３遺伝子を発現するマウス、またはｈＣＤ３３  ｃＤＮＡを含有するレンチウイルスもしくはＡＡＶウイルスを形質導入したマウスでも行うことができる。
【０６５６】
実施例４２：脂肪生成及び食餌誘発性肥満症におけるＣＤ３３抗体及び／または二重特異性抗体の保護効果の分析
脂肪生成及び肥満症におけるＣＤ３３抗体の効果を試験するために、高脂肪食（ＨＦＤ）のマウスモデルを使用する（例えば、Ｐａｒｋ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１５）Ｄｉａｂｅｔｅｓ．６４（１）：１１７−２７参照）。
【０６５７】
かかる実験は、細菌人工染色体に由来するヒトＣＤ３３遺伝子もしくは骨髄プロモーターにより駆動されるｃＤＮＡに由来するヒトＣＤ３３遺伝子を発現するマウス、またはｈＣＤ３３  ｃＤＮＡを含有するレンチウイルスもしくはＡＡＶウイルスを形質導入したマウスでも行うことができる。
【０６５８】
実施例４３：骨粗鬆症におけるアンタゴニストＣＤ３３抗体及び／または二重特異性抗体の保護効果の分析
骨は、カルシウムホメオスタシス及び構造的必要性を支援するために絶えずリモデリングを行う動的な器官である。破骨細胞は、骨の有機及び無機の両成分を取り除く役割を担う細胞である。破骨細胞は、マクロファージ系統の造血前駆細胞に由来し、腫瘍壊死因子ファミリーサイトカインＮＦκＢ活性化受容体リガンドに応答して分化する。破骨細胞は、唯一の骨吸収細胞であり、骨粗鬆症及び大理石骨病の病因として重要である（Ｎｏｖａｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖ  Ｐａｔｈｏｌ．，３：４５７−８４）。
【０６５９】
骨粗鬆症は、骨量及び骨密度の減少を特徴とする進行性骨疾患であり、骨折のリスクを増大させる可能性がある。多くの場合、骨代謝回転が加速され、破骨細胞と骨芽細胞の両方の活性が増大する閉経後１年に顕在化する。しかしながら、吸収と合成のプロセスにおける不均衡により、正味効果は骨損失であり、主に骨梁で減少する。したがって、骨粗鬆症における骨折の最も一般的な部位は、骨全体の強度にとって骨梁構造が重要である手首、大腿骨頸部及び椎体である。
【０６６０】
破骨細胞の機能の低下は、ＤＡＰ１２  ＩＴＡＭシグナル伝達アダプターを欠損している動物モデルにおいて観察されたように、骨量の増加及び骨髄空間の消失を伴う大理石骨病の原因になり、破骨細胞様細胞の分化に著しい欠如が生じる（Ｋｏｇａ，ｅｔ  ａｌ．，（２００４）Ｎａｔｕｒｅ  ４２８：７５８−７６３）。
【０６６１】
したがって、本開示のアンタゴニスト抗ＣＤ３３抗体の投与により、骨粗鬆症を予防し、その危険性を低減させ、かつ／または治療することができる。いくつかの実施形態において、アゴニスト抗ＣＤ３３抗体を投与することは、大理石骨病を有する個体において１つ以上のＣＤ３３活性を誘導し得る（例えば、ＤＡＰ１２リン酸化、Ｓｙｋ活性化及び破骨細胞への分化の加速）（Ｐｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ（２０１０）．Ｓｃｉ  Ｓｉｇｎａｌ．２０１０  １８；３  １２２；及びＨｕｍｐｈｒｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，（２００６）Ｊ  Ｂｏｎｅ  Ｍｉｎｅｒ  Ｒｅｓ．，２１（２）：２３７−４５）。
【０６６２】
かかる実験は、細菌人工染色体に由来するヒトＣＤ３３遺伝子もしくは骨髄プロモーターにより駆動されるｃＤＮＡに由来するヒトＣＤ３３遺伝子を発現するマウス、またはｈＣＤ３３  ｃＤＮＡを含有するレンチウイルスもしくはＡＡＶウイルスを形質導入したマウスでも行うことができる。
【０６６３】
実施例４４：ＣＤ３３抗体及び／または二重特異性抗体のＳＨＰ１、ＳＨＰ２及び他のシグナル伝達分子に対するＣＤの結合を調節する能力の分析
ヒト初代単球、マクロファージ、樹状細胞、Ｔ細胞、ミクログリアまたは破骨細胞を組織培養皿からＰＢＳ−ＥＤＴＡで剥がし、ＰＢＳで洗浄し、計数する。細胞を抗ＣＤ３３及び／もしくはＣＤ３３二重特異性抗体またはアイソタイプ適合対照抗体とともに、１μｇ／１０６細胞で、氷上または他の条件下、２０分間、インキュベートする。細胞を氷冷放射性免疫沈降アッセイ（ＲＩＰＡ）緩衝液中で２０分間溶解し、続いて、４℃で１０分間、１６，０００ｇで遠心分離し、不溶性物質を除去する。得られた上清を指定抗体（ＳＨＰ１、ＳＨＰ２、ｃ−Ｃｂｌ．、Ｖａｖ、Ｓｙｋ、ＬｃＫ、Ｆｙｎ、ＧＲｂ２、ＰＬＣ−γ、Ｔｏｌｌ様受容体、ＤＡＭＰ受容体、パターン認識受容体）及びタンパク質Ａアガロースまたはタンパク質Ｇアガロース（Ｓｉｇｍａ）との免疫沈降反応に供する。ビーズをＲＩＰＡ緩衝液で十分に洗浄し、タンパク質をＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）によって分離する。次いで、ウェスタンブロットによってタンパク質をニトロセルロース膜に移し、適切なＣＤ３３抗体とともにインキュベートし、記載されているように（例えば、Ｐｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１０）Ｓｃｉ  Ｓｉｇｎａｌ．，３（１２２）：ｒａ３８）、増強化学ルミネセンス（ＥＣＬ）システム（Ｐｉｅｒｃｅ）により可視化する。あるいは、細胞を抗ＣＤ３３及び／もしくはＣＤ３３二重特異性抗体またはアイソタイプ適合対照抗体とともに、１μｇ／１０６細胞で、氷上または他の条件下、２０分間、インキュベートする。細胞を氷冷放射性免疫沈降アッセイ（ＲＩＰＡ）緩衝液中で２０分間溶解し、続いて、４℃で１０分間、１６，０００ｇで遠心分離し、不溶性物質を除去する。得られた上清を２つ目のＣＤ３３抗体との免疫沈降反応に供する。次いで、ウェスタンブロットによってタンパク質をニトロセルロース膜に移し、指定抗体（ＳＨＰ１、ＳＨＰ２、ｃ−Ｃｂｌ．、Ｖａｖ、Ｓｙｋ、ＬｃＫ、Ｆｙｎ、ＧＲｂ２、ＰＬＣ−ガンマ、Ｔｏｌｌ様受容体、ＤＡＭＰ受容体、パターン認識受容体）とともにインキュベートする。
【０６６４】
実施例４５：ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおけるＣＤ３３抗体のＣＤ３３への結合能力及びＣＤ３３細胞表面レベルの低下能力の比較
ＣＤ３３抗体結合の比較
ヒト初代単球上に発現したＣＤ３３への種々の抗ＣＤ３３抗体の結合能力を決定した。抗ＣＤ３３抗体２Ｆ５、２Ｅ１２、６Ａ３及び６Ｃ７の結合能力を市販抗ＣＤ３３抗体ゲムツズマブ及びリンツズマブの結合能力と比較した。マウスＩｇＧ１（ｍＩｇＧ１）アイソタイプ対照及びヒトアイソタイプ対照を対照として使用した。細胞を回収し、９６ウェルプレートに１０６／ｍｌで播種し、２％ＦＢＳ、２ｍＭ  ＥＤＴＡ及び１μｇ／ｍｌ、０．１μｇ／ｍｌまたは０．０１μｇ／ｍｌの抗ＣＤ３３抗体及びＦｃブロッキング試薬を含有する１００μｌのＰＢＳ中で、１時間、氷上でインキュベートした。細胞を２回洗浄し、２％ＦＢＳ、２ｍＭのＥＤＴＡ及び５μｇ／ｍｌのＰＥ結合二次抗体を含有する１００ｕｌのＰＢＳ中で、３０分間、氷上でインキュベートした。冷ＰＢＳ中で細胞を２回洗浄し、ＢＤ  ＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏのフローサイトメトリーによって分析した。データ解析及び平均蛍光強度（ＭＦＩ）値の計算は、ＦｌｏｗＪｏ（ＴｒｅｅＳｔａｒ）ソフトウェアバージョン１０．０．７で行った。
【０６６５】
図１７Ａに示すように、抗ＣＤ３３抗体２Ｆ５、２Ｅ１２、６Ａ３及び６Ｃ７は、０．１μｇ／ｍｌの抗体濃度で、市販抗体のゲムツズマブ及びリンツズマブよりも高いＭＦＩでヒト初代単球に結合する。結果は、本開示の抗ＣＤ３３抗体が、ヒト初代骨髄細胞において、市販抗体と比較して改善した標的結合を呈することを示している。
【０６６６】
ＣＤ３３のｉｎ  ｖｉｔｒｏ発現の比較
抗ＣＤ３３抗体２Ｆ５、２Ｅ１２、６Ａ３及び６Ｃ７がヒト初代単球上のＣＤ３３の細胞表面レベルを低下させる能力と、市販の抗ＣＤ３３抗体ゲムツズマブ及びリンツズマブがヒト初代単球上のＣＤ３３の細胞表面レベルを低下させる能力とを比較した。マウスＩｇＧ１（ｍＩｇＧ１）アイソタイプ対照及びヒトアイソタイプ対照を対照として使用した。
【０６６７】
ＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐ（登録商標）単球単離抗体カクテル（ＳｔｅｍＣｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用してヒト末梢血試料から単球を単離した。２４ウェルプレートに２００，０００細胞／ｍｌまたは６ウェルディッシュに５００，０００細胞で、１０％Ｈｙｃｌｏｎｅ  ＦＢＳ、２ｍＭグルタミン、ｐｅｎ／ｓｔｒｅｐ及び非必須アミノ酸を添加したＲＰＭＩ  ２ｍｌ中に細胞試料を播種した。ＣＤ３３抗体または対照アイソタイプを１．０μｇ／ｍｌ、０．１μｇ／ｍｌ、０．０１μｇ／ｍｌ、０．００１μｇ／ｍｌ、０．０００１μｇ／ｍｌ及び０．００００１μｇ／ｍｌで添加し、５％ＣＯ２、３７℃で、２４時間インキュベートした。
【０６６８】
受容体動態を評価するために、抗体を細胞に１時間結合させ、洗浄し、２４時間及び４８時間後にＣＤ３３の表面レベルを決定した。
【０６６９】
細胞表面の受容体発現をＦＡＣＳ解析によって検出した。細胞を抗ＣＤ３３−ＦＩＴＣクローンＨＩＭ３−４（図１７Ｂ）及び対照表面マーカーＣＤ１４（図１７Ｃ）と氷上で，暗所中、３０分間インキュベートした。細胞をＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ＋２％ＦＢＳ、２ｍＭ  ＥＤＴＡ）中で２回洗浄し、ＢＤ  ＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏでフローサイトメトリーを実施した。ＴｒｅｅＳｔａｒ  ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用してデータを解析した。データは、それぞれ対応するフルオロフォアのＭＦＩ値を使用して、抗体がない状態での受容体発現のパーセントとして算出した。
【０６７０】
図１７Ｂは、抗ＣＤ３３抗体を６点曲線のために１０倍で滴定した、ヒト細胞のＣＤ３３細胞表面レベルの結果を示す。結果は、ＣＤ３３の表面レベルが、１．０μｇ／ｍｌ未満の抗体濃度で低下したことを示しているが、対照受容体ＣＤ１４では示していない（図１７Ｂ及び１７Ｃ）。０．０１μｇ／ｍｌの濃度での抗体２Ｆ５、２Ｅ１２、６Ａ３及び６Ｃ７は、ＣＤ３３の細胞表面レベルを約２０％まで低下させたのに対し、市販抗体のリンツズマブがＣＤ３３の細胞表面レベルを低下させる能力は、０．０１μｇ／ｍｌの濃度で完全に消失した（図１７Ｂ）。更に、市販抗体のゲムツズマブがＣＤ３３の細胞表面レベルを低下させる能力は、０．０１μｇ／ｍｌの濃度で下方制御機能が有意に低下し、０．００１μｇ／ｍｌの濃度で完全に失われた（図１７Ｂ）。対照的に、０．００１μｇ／ｍｌ濃度での抗体２Ｆ５、２Ｅ１２、６Ａ３及び６Ｃ７は、ＣＤ３３の表面レベルを約５０〜３０％まで低下させることが可能であった（図１７Ｂ）。図１７Ｃに示すように、ＣＤ１４対照受容体の細胞表面レベルは、抗ＣＤ３３抗体のいずれによっても調節されなかった。
【０６７１】
結果は、抗ＣＤ３３抗体２Ｆ５、２Ｅ１２、６Ａ３及び６Ｃ７が、ＣＤ３３の細胞表面レベルを強力に低下させ、市販抗体と比較して改善した能力を有することを示している。特に、抗体２Ｆ５、２Ｅ１２、６Ａ３及び６Ｃ７は、ＣＤ３３の細胞表面レベルを低下させることにおいて、市販抗体のゲムツズマブよりも約１０倍優れており、ＣＤ３３の細胞表面レベルを低下させることにおいて、市販抗体のリンツズマブよりも約１００倍優れていた（図１７Ｂ）。
【０６７２】
実施例４６：ＣＤ３３発現消失のサイトカイン産生及び細胞活性化に対する効果
単球細胞株ＴＨＰ−１に、レンチウイルスにより、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９  Ａｌｌ−ｉｎ−Ｏｎｅ  Ｌｅｎｔｉｖｅｃｔｏｒ（ｐＬｅｎｔｉ−Ｕ６−ｓｇＲＮＡ−ＳＦＦＶ−Ｃａｓ９−２Ａ−Ｐｕｒｏ、ＡＢＭ）から発現されるスクランブル小ガイドＲＮＡ（標的配列：ＧＣＡＣＴＣＡＣＡＴＣＧＣＴＡＣＡＴＣＡ（配列番号２１６））またはＣＤ３３小ガイドＲＮＡ（標的配列：ＣＴＡＧＡＧＴＧＣＣＡＧＧＧＡＴＧ（配列番号２１７））を２４ウェルディッシュ中に５０，０００細胞／ウェルで、５％ＣＯ２、３７℃にて一晩、形質導入した。翌日、培地を添加した。レンチウイルス添加から３日後、形質導入細胞をピューロマイシン０．５μｇ／ｍｌにより２週間選択し、新しい培地及び抗生物質を２〜３日ごとに添加した。ＣＤ３３受容体発現及び対照ＣＤ１４発現をＦＡＣＳにより検出した（図１８Ａ及び１８Ｂ）。
【０６７３】
サイトカイン産生及び細胞活性化状態を評価するために、スクランブルｓｇＲＮＡ発現ＴＨＰ−１細胞またはＣＤ３３  ｓｇＲＮＡ発現ＴＨＰ−１細胞を２４ウェルディッシュ中に１００，０００細胞／ウェルで播種し、ＬＰＳなし、ＬＰＳ  １．０μｇ／ｍｌ、ＬＰＳ  １００ｎｇ／ｍｌまたはＬＰＳ  １０ｎｇ／ｍｌで処理した。サイトカインで刺激したウェル中に、ＧＭ−ＣＳＦ  １０ｎｇ／ｍｌ、ＩＬ−６  １０ｎｇ／ｍｌ及びＩＬ−８  １０ｎｇ／ｍｌを添加した。刺激から３日後、細胞上清をヒト炎症性サイトメトリックビーズアレイキット（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）でサイトカイン産生について分析した（図１８Ｃ）。データは、ＰＥ検出器の平均蛍光強度（ＭＦＩ）として示す。刺激から３日後、細胞をＣＤ１４（Ｐａｃｉｆｉｃ  Ｂｌｕｅ、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＣＤ１６（ｖ５００、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＨＬＡ−ＤＲ（ＡＰＣ−Ｃｙ７、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）及びＣＣＲ２（ＰＥ、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）の発現についてＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）でＦＡＣＳ解析し、ＦｌｏｗＪｏ  １０．１ｒ５（ＴｒｅｅＳｔａｒ）でデータ処理した（図１８Ｄ）。データは、未処理と比較したＭＦＩ変化として示す。
【０６７４】
サイトカイン産生及び細胞活性化に対するＣＤ３３発現の消失の効果を評価するために、ＣＲＩＳＰＲ  ＣＤ３３  ＫＯ  ＴＨＰ−１細胞株を作製し、対照のスクランブルｓｇＲＮＡ形質導入細胞と比較した。基本状態では、ＣＤ３３  ＣＲＩＳＰＲ  ＫＯ細胞は、サイトカインまたは活性化マーカーの大きく異なる発現を示さなかった（図１８Ｃ及び１８Ｄ）。しかしながら、滴定量のＬＰＳで刺激すると、ＣＤ３３  ＫＯ細胞は、上昇したレベルのＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１β、ＩＬ−１２、ＴＮＦ−α及びＩＬ−１０を産生し、ＣＤ１４、ＣＤ１６、ＨＬＡ−ＤＲ及びＣＣＲ２を上方制御した（図１８Ｃ及び１８Ｄ）。これらの結果は、ＣＤ３３欠損細胞がより免疫応答性であることを示している。
【０６７５】
実施例４７：ＣＤ３３抗体の免疫チェックポイントに対する作用
全血からフィコール遠心分離によりヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を分離した。赤血球のＡＣＫ溶解後、１０％ＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、Ｌ−グルタミン、Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ、非必須アミノ酸、ピルビン酸ナトリウム及び抑制性サイトカインカクテル（１０ｎｇ／ｍｌの組み換えＩＬ−６（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）、ＩＬ−８（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）及びＧＭ−ＣＳＦ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を含有）を添加したＲＰＭＩ培地中でヒトＰＢＭＣを培養した。いくつかの実験において、１０ｎｇ／ｍｌのＧＭ−ＣＳＦを添加した腫瘍馴化培地でヒトＰＢＭＣを培養した。腫瘍馴化培地は、腫瘍細胞株培養物（子宮頸癌細胞または膠芽腫細胞）から回収し、０．２μＭ膜で滅菌濾過した、ＩＬ−６及びＩＬ−８を除く上記の添加物を含むＲＰＭＩ培地である。サイトカイン、抗体（ＣＤ３３抗体２Ｆ５またはアイソタイプ対照）またはｒｈＧＭ−ＣＳＦをスパイクした腫瘍上清をヒトＰＢＭＣに２〜３日ごとに１週間添加した。
【０６７６】
ＦＡＣＳ解析のために、浮遊細胞及び接着細胞を回収し、標準的なＦＡＣＳ手順によって、指定受容体の発現について試験した。
【０６７７】
Ｔ細胞増殖アッセイのために、培養７日後、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ８、ＣＤ１９及びＣＤ５６に対する抗体カクテル（ＳＴＥＭＣＥＬＬ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用した磁気による陰性選択によって骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）を単離した。単離したＭＤＳＣを平底ＴＣ処理なし９６ウェルプレートに５０，０００細胞／ウェルで播種し、ＣＤ３３抗体２Ｆ５、マウスアイソタイプ対照抗体（ｍＩｇＧ１）または抗ＰＤ−Ｌ１抗体で処理した後、Ｔ細胞を添加した。
【０６７８】
ＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐ選択法（ＳＴＥＭＣＥＬＬ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して全血から非自己由来ドナーＣＤ３Ｔ細胞またはＣＤ８Ｔ細胞を単離し、ＣＦＳＥ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で標識し、ＩＬ−２  １０Ｕ／ｍｌ及び１：１比のＣＤ３／ＣＤ２８  Ｔ−Ａｃｔｉｖａｔｏｒ  Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で活性化した。ＭＤＳＣとＴ細胞を１：２または５０，０００：１００，０００細胞／ウェルの比で共培養した。共培養から３日後に、ＣＦＳＥをＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で検出した。データをＦｌｏｗＪｏバージョン１０．１（ＴｒｅｅＳｔａｒ）ソフトウェアで解析した。
【０６７９】
図１９Ａに示すように、抗ＣＤ３３抗体２Ｆ５は、ＭＤＳＣ上の免疫抑制性リガンドＰＤ−Ｌ１の発現を減少させ、腫瘍に対するＴ細胞機能の抑制を減少させた。また、抗ＣＤ３３抗体２Ｆ５と培養したＭＤＳＣは、表現型の変化を呈し、免疫抑制能力の低下が示唆される。２Ｆ５抗体で培養したＭＤＳＣ（ＭＤＳＣ＋Ｃ−２Ｆ５）は、培地のみの対照（未処理ＭＤＳＣ）またはアイソタイプ対照抗体で処理した細胞（ＭＤＳＣ＋アイソタイプ）と比較すると、より低いレベルのＰＤ−１リガンド（ＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２）、低下したレベルのＢ７−Ｈ３（強力なＴ細胞チェックポイント阻害物質）、低下したレベルのＣＤ２００Ｒ（抑制性シグナル伝達受容体）、及び低下したレベルのＭ２型マーカーＣＤ１６３及びＣＤ２０６を発現している（図１９Ｂ）。結果は、抗体媒介性標的結合と、それに続くＣＤ３３の細胞表面レベルの下方制御が、抑制性リガンド及び受容体を減少させるような表現型の変化をもたらすことを示している。
【０６８０】
図１９Ｃ及び１９Ｄに示すように、抗ＣＤ３３抗体２Ｆ５は、ＭＤＳＣの存在下でＴ細胞の増殖を増大させ、より多くの抗腫瘍Ｔ細胞の生成を可能にした。活性化Ｔ細胞と共培養したＭＤＳＣは、Ｔ細胞の増殖を抑制する。これらの試験において、抗体２Ｆ５で処理したＭＤＳＣは、総ＣＤ３Ｔ細胞または総細胞傷害性ＣＤ８Ｔ細胞のどちらのＴ細胞の増殖に対しても、より少ない抑制を誘導した（図１９Ｃ及び１９Ｄ）。アイソタイプ対照抗体（ｍＩｇＧ１）では、Ｔ細胞増殖のＭＤＳＣ依存性抑制は変わらなかった（図１９Ｃ及び１９Ｄ）。更に、２Ｆ５抗体は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体と比較して、ＭＤＳＣ媒介性Ｔ細胞抑制を軽減することにおいて、より効果的であった（図１９Ｃ及び１９Ｄ）。結果は、抑制性リガンド及び受容体の発現を低下させることによってＭＤＳＣを表現型的に変化させることができる抗ＣＤ３３抗体が、Ｔ細胞増殖などの下流機能にも影響を与えることができることを示している。
【０６８１】
実施例４８：骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）に対するＣＤ３３抗体の作用
ヒト末梢血細胞をフィコール処理し、赤血球をＡＣＫ溶解緩衝液で溶解し、細胞を３回洗浄した後、１０％ＦＢＳ、Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ、１ｍＭ  グルタミン、非必須アミノ酸及びピルビン酸ナトリウムを含むＲＰＭＩ中で培養した。ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、次のサイトカイン、すなわちｒｈＧＭ−ＣＳＦ（Ｒ＆Ｄ）  １０ｎｇ／ｍｌ、ｒｈＩＬ−８（Ｒ＆Ｄ）  １０ｎｇ／ｍｌ及びｒｈＩＬ−６（Ｓｉｇｍａ）  １０ｎｇ／ｍｌとともに、５％ＣＯ２、３７℃で１週間培養した。次いで、ｍＩｇＧ１（ＢｉｏＸｃｅｌｌ）アイソタイプまたはＣＤ３３抗体２Ｆ５もしくは６Ｃ７をフラスコに加えた。２〜３日ごとに、培地、サイトカイン及び抗体（該当する場合）を補充した。培養の７日後、細胞を掻き取り、摩砕して回収し、ＦＡＣＳ解析のために、２％ＦＢＳ及び１ｍＭ  ＥＤＴＡを含むＰＢＳ中に再懸濁した。生存細胞及び死細胞集団を評価するために、Ｌｉｖｅ／Ｄｅａｄ  Ｆｉｘａｂｌｅ  Ａｑｕａ  ｄｅａｄｃｅｌｌｓｔａｉｎ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）を２％ＦＢＳ及び１ｍＭ  ＥＤＴＡを含むＰＢＳ中に１：５００で希釈し、氷上で３０分間インキュベートした。細胞を緩衝液中で３回洗浄し、前方散乱光及び側方散乱光ならびにＡｍＣｙａｎ蛍光についてＢＤ  ＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で解析した。データをＦｌｏｗＪｏ（Ｔｒｅｅ  Ｓｔａｒ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ）で解析した。
【０６８２】
図２０に示すように、ＣＤ３３抗体６Ｃ７は、分化中の骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の細胞死を誘導することができる。
【図１】
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【図２−１】
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【図２−２】
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【図３】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図５Ｄ】
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【図５Ｅ】
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【図５Ｆ】
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【図５Ｇ】
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【図５Ｈ】
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【図５Ｉ】
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【図６Ａ】
2018518176.tif 000049
【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図６Ｄ】
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【図７】
2018518176.tif 000053
【図８】
2018518176.tif 000054
【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図９Ｃ】
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【図９Ｄ】
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【図９Ｅ】
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【図９Ｆ】
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【図１０】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１４Ｃ】
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【図１４Ｄ】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１５Ｃ】
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【図１５Ｄ】
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【図１５Ｅ】
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【図１５Ｆ】
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【図１５Ｇ】
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【図１５Ｈ】
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【図１５Ｉ】
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【図１５Ｊ】
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【図１５Ｋ】
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【図１５Ｌ】
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【図１５Ｍ】
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【図１５Ｎ】
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【図１５Ｏ】
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【図１５Ｐ】
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【図１５Ｑ】
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【図１５Ｒ】
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【図１５Ｓ】
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【図１５Ｔ】
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【図１５Ｕ】
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【図１５Ｖ】
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【図１５Ｗ】
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【図１５Ｘ】
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【図１５Ｙ】
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【図１５Ｚ】
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【図１５ＡＡ】
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【図１５ＢＢ】
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【図１５ＣＣ】
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【図１５ＤＤ】
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【図１５ＥＥ】
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【図１５ＦＦ】
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【図１５ＧＧ】
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【図１５ＨＨ】
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【図１５ＩＩ】
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【図１５ＪＪ】
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【図１５ＫＫ】
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【図１５ＬＬ】
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【図１５ＭＭ】
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【図１５ＮＮ】
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【図１５ＯＯ】
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【図１５ＰＰ】
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【図１５ＱＱ】
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【図１５ＲＲ】
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【図１６Ａ】
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【図１６Ｂ】
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【図１６Ｃ】
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【図１６Ｄ】
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【図１６Ｅ】
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【図１６Ｆ】
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【図１６Ｇ】
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【図１６Ｈ】
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【図１６Ｉ】
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【図１６Ｊ】
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【図１６Ｋ】
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【図１６Ｌ】
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【図１６Ｍ】
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【図１６Ｎ】
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【図１７Ａ】
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【図１７Ｂ】
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【図１７Ｃ】
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【図１８Ａ】
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【図１８Ｂ】
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【図１８Ｃ】
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【図１８Ｄ】
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【図１９Ａ】
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【図１９Ｂ】
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【図１９Ｃ】
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【図１９Ｄ】
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【図２０】
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【配列表】
2018518176000001.app
【国際調査報告】
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