(57)【要約】本発明は、エピガロカテキン-3-ガラート(EGCG)、クルクミン、グルコシノレートおよび／またはそれらの誘導体ならびに中鎖トリグリセリドを含む組成物を炎症性疾患の治療を必要とする対象に投与する段階；ならびに、任意で、ケトン食または修正ケトン食を対象に提供する段階を含む、炎症性疾患の治療を目的とする。ある態様において、炎症性疾患は、例えばパクリタキセルなどの微小管安定化剤の投与により引き起こされた、対象における炎症の増加である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
a)エピガロカテキン-3-ガラート(EGCG)、クルクミン、グルコシノレートおよび／もしくはその誘導体、中鎖トリグリセリド(MCT)、またはそれらの組み合わせを含む有効量の組成物を対象に投与する段階；ならびに、任意で、修正ケトン食(modified ketogenic diet：mKD)、ケトン、またはケトン食(KD)を対象に提供する段階；あるいは
b)修正ケトン食またはケトン食を対象に提供する段階；ならびに、任意で、エピガロカテキン-3-ガラート(EGCG)、クルクミン、グルコシノレートおよび／もしくはその誘導体、中鎖トリグリセリド(MCT)、またはそれらの組み合わせを含む有効量の組成物を対象に投与する段階
を含む、対象における炎症性疾患を治療する方法であって、該治療が、該治療の開始前の1つまたは複数の生体分子のレベルに比較して、該1つまたは複数の生体分子のレベルを少なくとも40%低減させる、前記方法。
【請求項２】
グルコシノレートの誘導体がグルコラファニンおよび／またはスルフォラファンである、請求項1に記載の方法。
【請求項３】
前記炎症性疾患が、表面抗原分類40リガンド(CD-40L)、エオタキシン、フィブリノーゲン、成長ホルモン(GH)、ケラチノサイト由来サイトカイン(KC/GRO)、インターロイキン-1β(IL-1β)、IL-6、IL-18、リンフォタクチン、ミエロペルオキシダーゼ(MPO)、組織メタロプロテアーゼ阻害物質1 (TIMP-1)、血管内皮増殖因子A (VEGF-A)、C反応性タンパク質(CRP)、マクロファージ由来ケモカイン(MDC)、マクロファージ炎症性タンパク質1α(MIP-1α)、vWF、およびオンコスタチンから選択される1つまたは複数の生体分子のレベルの変化を示す、請求項1に記載の方法。
【請求項４】
前記炎症性疾患が、アレルギー、アルツハイマー病、強直性脊椎炎、ぜんそく、自己免疫疾患、関節炎、アテローム性動脈硬化症、手根管症候群、セリアック病、クローン病、憩室炎、湿疹、線維症、ギラン・バレー疾患、狼瘡、多発性硬化症、腎炎、ニューロパチー、膵炎、パーキンソン病、乾癬、リウマチ性多発筋痛症、関節リウマチ、強皮症、または脈管炎である、請求項1に記載の方法。
【請求項５】
前記自己免疫疾患が、急性散在性脳脊髄炎(ADEM)、アジソン病、円形脱毛症、アミロイドーシス、自己免疫性網膜症、自己免疫性甲状腺疾患、軸索型および神経型ニューロパチー、慢性疲労症候群、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー(CIDP)、クローン病、コクサッキー心筋炎(Coxsackie myocarditis)、疱疹状皮膚炎、実験的アレルギー性脳脊髄炎、エヴァンス症候群、線維筋痛症、糸球体腎炎、多発血管炎性肉芽腫症(GPA)、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、橋本脳症、橋本甲状腺炎、溶血性貧血、川崎病、狼瘡、ライム病、メニエール病、多発性硬化症、重症筋無力症、筋炎、ナルコレプシー、視神経脊髄炎(デビック)、好中球減少症、強皮症、シェーグレン症候群、または全身硬直症候群である、請求項4に記載の方法。
【請求項６】
前記炎症性疾患が、化学療法剤の投与により引き起こされた炎症の増加である、請求項1に記載の方法。
【請求項７】
前記化学療法剤がパクリタキセルである、請求項6に記載の方法。
【請求項８】
炎症性疾患を治療するための1つまたは複数の追加の療法をさらに含む、請求項1に記載の方法。
【請求項９】
KDまたはmKD、ならびにエピガロカテキン-3-ガラート、クルクミン、グルコシノレートおよび／またはその誘導体、ならびに中鎖トリグリセリドを含む有効量の組成物を対象に提供する段階を含む、請求項1〜8のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
対象に併用療法を施与する段階を含む、対象における炎症性疾患を治療する方法であって、該併用療法が、
a) 有効量のEGCG、クルクミン、グルコシノレート、MCT、およびii)ケトン食もしくは修正ケトン食；
b) 有効量のEGCG、クルクミン、およびグルコシノレート；
c) 有効量のEGCG、クルクミン、グルコシノレート、およびMCT；
d) 有効量のEGCG、クルクミン、グルコシノレート、およびケトン；または
e) mKD + MCT
を含み、該治療が、該治療の開始前の1つまたは複数の生体分子のレベルに比較して、該1つまたは複数の生体分子のレベルを少なくとも40%低減させる、前記方法。
【請求項１１】
グルコシノレートの誘導体がグルコラファニンおよび／またはスルフォラファンである、請求項10に記載の方法。
【請求項１２】
前記炎症性疾患が、表面抗原分類40リガンド(CD-40L)、エオタキシン、フィブリノーゲン、成長ホルモン(GH)、ケラチノサイト由来サイトカイン(KC/GRO)、インターロイキン-1β(IL-1β)、IL-6、IL-18、リンフォタクチン、ミエロペルオキシダーゼ(MPO)、組織メタロプロテアーゼ阻害物質1 (TIMP-1)、血管内皮増殖因子A (VEGF-A)、C反応性タンパク質(CRP)、マクロファージ由来ケモカイン(MDC)、マクロファージ炎症性タンパク質1α(MIP-1α)、vWF、およびオンコスタチンから選択される1つまたは複数の生体分子のレベルの変化を示す、請求項10に記載の方法。
【請求項１３】
前記炎症性疾患が、アレルギー、アルツハイマー病、強直性脊椎炎、ぜんそく、自己免疫疾患、関節炎、アテローム性動脈硬化症、手根管症候群、セリアック病、クローン病、憩室炎、湿疹、線維症、ギラン・バレー疾患、狼瘡、多発性硬化症、腎炎、ニューロパチー、膵炎、パーキンソン病、乾癬、リウマチ性多発筋痛症、関節リウマチ、強皮症、または脈管炎である、請求項10に記載の方法。
【請求項１４】
前記自己免疫疾患が、急性散在性脳脊髄炎(ADEM)、アジソン病、円形脱毛症、アミロイドーシス、自己免疫性網膜症、自己免疫性甲状腺疾患、軸索型および神経型ニューロパチー、慢性疲労症候群、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー(CIDP)、クローン病、コクサッキー心筋炎、疱疹状皮膚炎、実験的アレルギー性脳脊髄炎、エヴァンス症候群、線維筋痛症、糸球体腎炎、多発血管炎性肉芽腫症(GPA)、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、橋本脳症、橋本甲状腺炎、溶血性貧血、川崎病、狼瘡、ライム病、メニエール病、多発性硬化症、重症筋無力症、筋炎、ナルコレプシー、視神経脊髄炎(デビック)、好中球減少症、強皮症、シェーグレン症候群、または全身硬直症候群である、請求項13に記載の方法。
【請求項１５】
前記炎症性疾患が、化学療法剤の投与により引き起こされた炎症の増加である、請求項10に記載の方法。
【請求項１６】
前記化学療法剤がパクリタキセルである、請求項15に記載の方法。
【請求項１７】
炎症性疾患を治療するための1つまたは複数の追加の療法をさらに含む、請求項10に記載の方法。
【請求項１８】
KDまたはmKD、ならびにエピガロカテキン-3-ガラート、クルクミン、グルコシノレートおよび／またはその誘導体、ならびに中鎖トリグリセリドを含む有効量の組成物を対象に提供する段階を含む、請求項10〜17のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、2015年6月26日に出願された米国仮特許出願第62/185,001号の恩典を主張し、その開示は、全ての図、表、およびアミノ酸配列または核酸配列を含むその全体が、参照により本明細書に組み入れられる。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
炎症性疾患は健康上の大きな関心事である。現在利用可能な治療は、小分子化合物、または炎症経路に関与するさまざまな作用物質に向けられた抗体を含む。炎症性疾患に対する現在の治療は重大な副作用を引き起こす。
【発明の概要】
【０００３】
発明の簡単な概要
本発明は、炎症を低減しかつ炎症性疾患を治療する、望ましくない副作用を示さない方法を提供する。一つの態様において、本発明は、炎症性疾患を治療する方法を提供し、この方法は、炎症性疾患に対する治療を必要とする対象に、1つまたは複数の天然物(化合物)を含む組成物を投与する段階、および、任意で、前記対象に低糖質食を同時に提供する段階を含む。本発明の特定の態様において、この低糖質食はケトン食(KD)、修正ケトン食(modified ketogenic diet：mKD)、またはアトキンス様食である。よって、炎症性疾患を治療する方法は、エピガロカテキン-3-ガラート(EGCG)、クルクミン、グルコシノレートおよび／またはそれらの誘導体(例えば、ブロッコリーの新芽または他のアブラナ科の野菜の新芽中に見出されるグルコラファニン(GRP)および／またはスルフォラファン(SFN))、ならびに中鎖トリグリセリド(MCT)から選択される1つまたは複数の化合物(成分)を含む組成物を対象に投与する段階；ならびに、任意で、アトキンス食、mKD、またはKDなどの低糖質食を対象に提供する段階を含む。本出願は、炎症性疾患の治療のために、さまざまな天然の化合物を単独でまたはMCT、KD、mKD、およびケトンと組み合わせて提供する。これらの併用療法は、以下のように言及される：
NU.001 = [EGCG + クルクミン + グルコシノレート] + [KDまたはmKD] + MCT；
NU.002 = [EGCG + クルクミン + グルコシノレート]；
NU.003 = [EGCG + クルクミン + グルコシノレート] + MCT；
NU.004 = [EGCG + クルクミン + グルコシノレート] + ケトン；および
NU.005 = mKD + MCT。
【図面の簡単な説明】
【０００４】
【図１−１】薬物誘導性炎症モデルを使用して、サイトカインアレイを用いて炎症性サイトカンイン、免疫系の変化、ならびに本発明者らの治療の、減弱させて正常な状態を回復させる能力について測定した。異なる治療法で処置したマウスから血漿を単離した(対照、パクリタキセル[PTX、40 mg/kg]、NU.001[CS]、およびPTX+NU.001[PTX+CS])。*はp < 0.05を示し、かつ**はp < 0.01を示す(一元配置分散分析またはt検定、対照と比較)。#はp < 0.05を示し、かつ##はp < 0.01を示す(一元配置分散分析またはt検定、PTXと比較)。
【図１−２】図1-1の続きの図である。
【図１−３】図1-2の続きの図である。
【図１−４】図1-3の続きの図である。
【図１−５】図1-4の続きの図である。
【図１−６】図1-5の続きの図である。
【図１−７】図1-6の続きの図である。
【図２】NU.001は薬物誘導性炎症モデルにおいて炎症シグナルを低減する。動物は3〜4週間NU.001または対照食の経口送達を受けた。微小管安定化剤であるパクリタキセル[40 mg/kg累積]を投与して炎症を誘導した。サイトカインアレイを使用して炎症および免疫系の状態を測定し、かつNU.001の、サイトカンインレベルを減弱させるかまたは正常なサイトカンインレベルを回復させる能力について評価した。異なる治療法で処置したマウスから血漿を単離した(対照、パクリタキセル、NU.001、およびパクリタキセル+NU.001)。結果は、炎症関連サイトカインがパクリタキセルの影響を受けて上方制御されていること、およびNU.001の導入により、リンフォタクチン、トロンボポイエチン、血管内皮増殖因子A [VEGF-A]、およびインターロイキン18 [IL-18]のレベルを対照と同様のレベルに回復させることが可能であることが示している。*はp < 0.05(一元配置分散分析、対照と比較)。治療組成物は以下の通りである：[1]対照 = 55％ 糖質、30％タンパク質、15％脂質；[2] NU.001 = 10〜20％ 糖質、50〜60％脂質(約半分はMCT由来)、30％タンパク質 + クルクミン[1200 mg/kg体重]、EGCG [1200 mg/kg体重]、SFN [25 mg/kg体重]。
【図３】NU.001は炎症促進性エフェクターを低減させることができる。3〜4週間対照食またはNU.001食を与えた後、その後の血漿単離のために、マウスを採血した。サイトカインアレイを使用して炎症の状態を評価した。結果は、組織メタロプロテアーゼ阻害物質1 [TIMP-1]、マクロファージ炎症性タンパク質-1ガンマ[MIP1-g]、レプチン、マクロファージコロニー刺激因子[MCSF]、およびケラチノサイト由来サイトカイン／成長関連タンパク質[KC/GRO]などの炎症促進性エフェクターを低減するNU.001の能力を実証している。*はp < 0.05(t検定)。
【図４】図4A〜4B. NU.001は白血病抑制因子[LIF]およびCCL22のレベルを増加させる。A. 3〜4週間対照食またはNU.001食を与えた後、サイトカインスクリーニングのために血漿を単離した。図4Aは、NU.001の、LIFの発現を刺激する能力を示している。LIFは末梢性ニューロパチーを予防または治療すると提唱されている。*はp < 0.05(t検定)。B. パクリタキセル処置は、マクロファージ由来ケモカイン[MDC/CCL22]という、多発性硬化症と診断された患者で下方制御されると記載されているサイトカインの減少を誘導した。提示されているグラフから、NU.001が、MDC/CCL22の不足を有意に軽減、予防、または遅延する能力を備えた免疫調節剤であることが確認される。**はp < 0.01(一元配置分散分析、対照と比較)；#はp < 0.05(t検定、パクリタキセルと比較)。
【発明を実施するための形態】
【０００５】
発明の詳細な説明
「約」または「およそ」という用語は当業者により決定された特定の値の許容可能な誤差範囲内であることを意味する。これは、その値がどのように測定または決定されたか、すなわち、測定システムの限界に、部分的に依存する。例えば、「約」は、当技術分野における慣例に従い、1以上の標準偏差内であることを意味し得る。あるいは、「約」は、所定の値の0〜20％、0〜10％、0〜5％まで、または1％までの範囲を意味し得る。あるいは、特に生物システムまたはプロセスに関して、本用語は、値の10倍までの範囲内、好ましくは5倍以内、およびより好ましくは2倍以内であることを意味し得る。特定の値が本出願および請求の範囲に記載されている場合、特に明記しない限り、用語「約」は前記特定の値の許容可能な誤差範囲内であることを意味すると見なされるべきである。「約」または「およそ」という用語が使用されるそれぞれの量の成分を含有する組成物に関して、このような組成物は、明記された量の成分を、その値の前後0〜20％(X±20％)の変動(誤差範囲)を伴って含有する。本明細書において用量範囲などの範囲が用いられる場合、範囲の組み合わせおよび部分的組み合わせ(例えば、開示の範囲内の部分範囲)ならびにその中の特定の態様が明示的に含まれることが意図される。
【０００６】
「治療」、「治療する」、「和らげる」、および「寛解させる」という用語(ならびにこれらの用語の全ての文法的変化形)は互換的に用いられてよい。これらの用語は、治療効果を含むがそれに限定されない有益なまたは所望の結果を得るためのアプローチを意味する。治療効果は、患者はまだ基礎疾病に罹患しているであろうにも関わらず、患者において改善が観察されるような、基礎疾病に関連する１つまたは複数の生理的症状の一掃または寛解(緩和)によって達成される。本発明に関連して、症状の寛解は、対象における、測定されるサイトカインレベルの非炎症(正常)レベルへの回帰(低減)を含む。特定の態様において、測定されるサイトカインレベルは少なくとも25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％またはそれ以上低減する。同様に、本発明に関連して、症状の寛解は、治療、損傷、疾患、生理的不均衡または生理的不調和により低減する可能性があるサイトカインレベルを増加させることを含む。本発明に関連して、治療、疾患、損傷、生理的均衡または生理的不調和による生理的症状の寛解は、正常なサイトカインレベルをかさ上げすることによって達成され得る。
【０００７】
本発明は、任意でmKDまたはKDと組み合わせて、特定の天然化合物を対象に投与することにより、炎症プロモータとして十分確立されている炎症性サイトカンインを変化させることを提供する。例えば、パクリタキセルで処置された動物は、サイトカインおよび関連した炎症性分子の増加を示した。パクリタキセル処置によりサイトカインの発現および／または量が変化した場合に、このような動物を、任意でmKDまたはKDと組み合わせて、本発明により提供される天然物の組み合わせで処置すると、血中のサイトカインが対照レベルへの回帰を示した。
【０００８】
このように、本発明の一態様は、EGCG、クルクミン、グルコシノレートおよび／またはその誘導体、ならびにMCTから選択される1つまたは複数の成分を含む組成物を、単独で、または低糖質食、例えばKDもしくはmKDと組み合わせて、対象に投与する段階を含む、対象における炎症性疾患を治療する方法を提供する。前記複数の成分は、個別的にまたはさまざまな組み合わせ(例えば、2種一組、3成分組成物、または全成分を含有する単一の組成物)で対象に投与され得る。本発明のもう一つの態様は、対象における炎症性疾患を低減するために、NU.001；NU.002；NU.003；NU.004；またはNU.005に対応する併用療法で対象を処置することを提供する。
【０００９】
EGCGは緑茶において最も豊富なカテキンである。緑茶由来のポリフェノールが抗炎症性、抗酸化性を有することは周知であり、かつがんの複数の動物モデルにおいて腫瘍細胞増殖の阻害に関与することが示されている。これらの作用は、EGCGの経口摂取で達成され得るマイクロモル濃度で見られる。
【００１０】
EGCG：保護効果および炎症
EGCGは、数々の状況および細胞タイプにおいて抗炎症効果および保護効果を示している。例えば、EGCGはさまざまな毒物から神経細胞を保護する。EGCGは、活性酸素種(ROS)スカベンジャーとして直接機能しかつ抗酸化酵素を活性化する。さらに、EGCGは神経細胞アポトーシスの活性化を減少させかつミクログリア細胞への炎症シグナルの活性化を低減する。EGCGは、アポトーシスシグナルを低減して細胞骨格分解(cytoskeletal degradation)を防ぐプロテインキナーゼCガンマシグナル伝達を活性化する。さらに、EGCGは、失われた神経学的機能の回復を促進し得る神経突起伸長を刺激するように見える。EGCGは現在、アルツハイマー病、多発性硬化症、糖尿病、およびパーキンソン病における神経保護効果について治験中である。
【００１１】
EGCGの安全性
げっ歯類での500 mg/kgの高さの経口用量は、遺伝毒性も短期毒性も有さないことが見出され、ヒトに対して提唱されている投与量より有意に高い投与量であった。同様に、予め給餌したイヌに、分割投与で13週間500 mg/kg/日を送達した場合も、有害事象も毒性も見られなかった。疫学的データによると日本人のほぼ4分の1は1日に10杯より多くの緑茶を消費すると示されているが、これはおよそ1日1000 mgのEGCGと同等である。本発明に従って投与され得るEGCGの量は、約1 mg/kg〜約500 mg/kgの範囲に及ぶ。特定の態様において、EGCGは約1 mg/kg〜約250 mg/kg、約5 mg/kg〜約50 mg/kg、または約10 mg/kg〜約25 mg/kgの範囲に及ぶ量で投与される。ヒトへの好ましい投与量は約1 mg/kg〜約20 mg/kgである。
【００１２】
クルクミンは、食事用スパイスであるターメリックから作られた活性成分である。クルクミンの生物学的機能は多岐にわたり、抗腫瘍、抗酸化、抗ウイルス、抗アミロイド、抗細菌、および抗肝毒性活性に及ぶ。クルクミンは多くのニューロパチーモデルを用いて評価されており、具体的には、オキサリプラチン誘発性脱髄を減少させ、かつ抗がん効果を減らすことなくシスプラチン媒介性の神経突起伸長の抑制を予防する。クルクミンは、坐骨神経痛および手根管症候群を患う患者の治験で神経障害性疼痛の低減を示した。動物モデルにおいて、モノアミン系への作用によって神経障害性疼痛を緩和すること、ならびに酸化ストレスの低減ならびにTNF-アルファおよびIL-6のNF-カッパbの活性化の阻害により糖尿病性ニューロパチーを低減させることが示されている。この抗炎症効果もNF-κBシグナル伝達によって媒介されるということが、虚血モデルにおいて観察されている。現在、クルクミンの神経病理に対する効果は、アルツハイマー、視神経症、および脊髄損傷についてのヒトにおける試験の最中である。
【００１３】
クルクミンの安全性
典型的なインド食でのクルクミンの平均消費量は1日約100 mgである。動物における高用量でのいくつかの毒性試験により、ラット、モルモット、およびサルなどの前臨床モデルにおいて、クルクミンが安全であることが示されている。臨床試験により最長3ヶ月間の8000 mg/日までの用量のクルクミンの安全性が示されている。5000から12,000 mg/日への用量の段階的増加は重大な有害副作用を示さなかった。いくつかの臨床試験(ほとんど単群第II相)は、慢性炎症、前悪性病変および悪性病変、ならびにAIDSにおけるクルクミンの有効性を指し示した。本発明に従って投与され得るクルクミンの量は(1日量として)約1 mg〜約12000 mgの範囲に及ぶ。特定の態様において、クルクミンは約1 mg〜約8000 mg、5000 mg〜約12000 mg、または約1000 mg/kg〜約10000 mgの範囲に及ぶ量で投与される。ヒトへの好ましい投与量は約1 mg/kg〜約200 mg/kgである。
【００１４】
アブラナ科の野菜は、その前駆体親分子であるグルコシノレートの加水分解によって形成されるイソチオシアネート(ITC)を含有している。最もよく研究されたアブラナ科野菜のITCのうちの一つはSFNであり、その前駆体であるグルコラファニン[GRP]は、ブロッコリー、カリフラワー、およびキャベツにおいて豊富であり、ブロッコリーの新芽に最も高濃度で含まれていることが見出されている。GRPの加水分解には、野菜自身および大腸細菌叢に存在するミロシナーゼ酵素の活性が必要である。SFNは80％の生物学的利用率で急速に吸収され、2時間以内にピーク血漿レベルに達し、かつ長い最終消失相より特徴付けられる。重要なことには、SFNは第I相酵素の強力な阻害剤および[NrF2を介した]第II相酵素の刺激物質であり、かつ酸化ストレスを低減しかつNF-kBを阻害することができる。さらに、SFNは強力なHDAC阻害剤である。
【００１５】
SFN：保護効果および炎症
他のイソチオシアネートと同様に、SFNは組織グルタチオンレベルを上昇させ、実質的に全ての細胞に生得的に備わっている細胞性抗酸化防御を増強することが示されている。動物およびヒトのさらなる研究により、スーパーオキシドジスムターゼ、カタラーゼ、NAD(P)H：キノンオキシドレダクターゼ1、グルタチオンペルオキシダーゼ、グルタチオンレダクターゼ、およびグルタチオン-s-トランスフェラーゼを含む多数の第II相酵素の誘導(上記のNrf2経路を介して)が示されている。ランダム化二重盲検治験もまた、SFNの、2型糖尿病における酸化ストレスを低減する能力を示した。SFNは、Nrf2を活性化することで神経ミトコンドリアを保護し、かつNF-KBを阻害することで神経炎症を低減することが示されている。さらに、SFNはその抗発がん効果について主に研究されており、また新生仔ラットモデルにおいて低酸素虚血傷害に対するその抗酸化および神経保護効果についても研究されている。SFN処置が脳でNrf2抗酸化転写因子の発現を増加させたことが観察された。SFNはまた、低酸素虚血後24時間の時点での梗塞率を低減し、およびアポトーシス細胞の数の有意に減少させた。
【００１６】
SFNの安全性
ブロッコリーの新芽は、有害作用の報告なく世界中で食物として広く消費されている。ヒトで実施された調査研究からは、SFNまたはブロッコリーの新芽などのSFNに富んだ食に由来する品目の投与の重大な有害作用は何も示されていない。SFNは低毒性であろうという見解を支持する証拠が増加している。
【００１７】
68グラムのブロッコリーの新芽の経口摂取により、がんモデルにおいて治療的であると証明された、安全で無毒な用量[100 mg]のSFNが提供されることが示されている。81人の2型糖尿病患者を4週間、副作用が報告されたことがない10グラムまでの用量のブロッコリーの新芽粉末で処置した。本発明に従って投与され得るグルコラファニンまたはSFNなどのその誘導体の量は、(1日量として)約1 mg〜約1000 mgの範囲に及ぶ。特定の態様において、グルコラファニンまたはSFNなどのその誘導体は、約1 mg〜約800 mg、50 mg〜約120 mg、または約10 mg/kg〜約250 mgの範囲に及ぶ量で投与される。ヒトへの好ましい投与量は約0.1 mg/kg〜約5 mg/kgである。
【００１８】
アブラナ科の野菜は含硫化学物質であるグルコシノレートとして公知の物質群を含有する。消化、調理、または咀嚼の間、グルコシノレートは、インドール、ニトリル、チオシアネート、イソチオシアネート、インドール-3-カルビノール、およびSFNを含むがそれらに限定されない多くの生物活性化合物に分解される。
【００１９】
SFNは、アブラナ科の野菜(例えば、芽キャベツ、キャベツ、カリフラワー、チンゲンサイ、ケール、コラード、芥蘭、ブロッコリーラーブ、コールラビ、カラシナ、カブ、ラディッシュ、アルギュラ、およびクレソン)中に見出されるグルコシノレート前駆体GRPの変換に由来する生物活性分子である。最も高濃度のSFNはブロッコリーの新芽中に見出される。有効量の、例えばGRPなどのグルコシノレート、およびSFNを含むその生物活性分解生成物は、前記のアブラナ科野菜またはアブラナ属の植物由来の新芽または新芽粉末の消費により送達され得る。
【００２０】
「グルコシノレートおよび／またはその誘導体、例えばGRPおよび／またはSFNを含む組成物」または「グルコシノレートを含む組成物」または「GRPを含む組成物」または「SFNを含む組成物」という句は、成熟したアブラナ属の植物もしくは成熟したアブラナ科野菜の１つもしくは複数の粉末、成熟したアブラナ属の植物もしくは成熟したアブラナ科野菜の消費可能な植物体、乾燥もしくは未乾燥のアブラナ属の植物の新芽もしくはアブラナ科野菜の新芽、またはアブラナ科野菜もしくはアブラナ属の植物から得た新芽粉末を含んでも良い。
【００２１】
いくつかの態様において、グルコシノレートおよび／またはその誘導体を含む組成物は、成熟したアブラナ属の植物もしくは成熟したアブラナ科野菜の粉末、成熟したアブラナ属の植物もしくは成熟したアブラナ科野菜の消費可能な植物体、乾燥もしくは未乾燥のアブラナ属の植物の新芽もしくはアブラナ科野菜の新芽から作られた粉末、またはアブラナ科野菜もしくはアブラナ属の植物から得た新芽粉末を含む。上記のように、１つまたは複数のアブラナ科野菜またはアブラナ属の植物由来の粉末は、グルコシノレートおよび／またはその誘導体を含む組成物にまとめられ得る。上記の粉末はフリーズドライ粉末の形態で提供されてもよい。そのような粉末の投与により、治療される対象に、GRP (その後ミロシナーゼによりSFNに代謝される化合物)を含むグルコシノレートが送達される。
【００２２】
KD食は肝臓のケトン体生成代謝経路を刺激する。KDは複数の神経障害に対する可能性のある治療薬であり、およびその広い神経保護特性は、細胞代謝を変化させることにより媒介され、これにより、神経細胞が代謝変動に耐え、かつ抗酸化および抗炎症機構を介して保護機構を上方制御することを可能にする。KDは高脂質[摂取カロリーの90％]および超低糖質[5％未満]を有するため、断食または飢餓の効果を模倣する、血清ケトン体の増加およびグルコースレベルの低減をもたらす。修正アトキンス食およびMCT食など、いくつかのKDの変種が利用可能である。これらKD変種は、従来のケトン食による糖質の厳しい制限および過剰な脂質消費を軽減し、規定食をより美味しくかつ健康的にしてコンプライアンスを増加させることを目指している。
【００２３】
このように、KDは、糖質含有量が対象の毎日の全摂取カロリーの約5％未満かまたはそれに等しい規定食であり、規定食の残りは脂質またはタンパク質からなる。よって、前記規定食は、毎日の全摂取カロリーの関数として、約5％またはそれ未満の糖質、約30％〜約90％の脂質、および約5％〜約70％のタンパク質を提供する。特定の態様において、前記規定食は約3％(またはそれ未満)の糖質、約57％〜約95％の脂質、および約5％〜約40％のタンパク質を提供する。いくつかの態様において、対象の規定食の脂質含有量の約30％〜約70％(例えば、約30％、約40％、約50％、約60％、または約70％)はMCTから構成され得る。他の態様は、MCTが対象の規定食の脂質含有量の約50％を構成すると定めている。
【００２４】
mKDの開発
KDは炎症の調節に関する用途を有し得るが、その厳格性(90〜95％の脂質)のために実施することが難しい。ケトン食実施中に起こる2つの重要な生理的変化は、グルコースレベルの低下と循環ケトンの増大である。mKDはKDの重要な生理的効果を模倣する。mKDは、グルコースレベルを低減させるため低糖質食[10〜20％の範囲]を消費すること、および血中ケトンレベルを増大させるMCTを消費することを含む。
【００２５】
mKDは、(対象の毎日の全摂取カロリーの関数として)少なくとも5％かつ約20％以下の糖質を含む規定食であり、対象用の規定食の残りは脂質およびタンパク質を含む。よって、前記規定食は、毎日の全摂取カロリーの関数として、約5％〜約20％の糖質、約30％〜約75％の脂質、および約5％〜約65％のタンパク質を含み得る。特定の態様において、前記規定食は、約8％〜約15％の糖質、約50％〜約70％の脂質、および約18％〜約42％のタンパク質を提供し得る。いくつかの態様において、対象の規定食の脂質含有量の約30％〜約70％(例えば、約30％、約40％、約50％、約60％、または約70％)はMCTから構成され得る。他の態様は、MCTが対象の規定食の脂質含有量の約50％を構成すると定めている。
【００２６】
2000キロカロリーという一日摂取量に基づいた(そして、1 gの糖質が4キロカロリーを提供し、1 gの脂質が9キロカロリーを提供し、1 gのタンパク質が4キロカロリーを提供し、かつ1 gのMCTが6.8キロカロリーを提供するという事実に基づいた)全食物量(グラム)の関数として、修正ケトン食は、少なくとも25 gかつ100 g以下の糖質を含む規定食であり、対象用の規定食の残りは脂質およびタンパク質を含む。よって、前記規定食は、毎日の全摂取グラムの関数として、約25 g〜100 gの糖質、約67 g〜約167 gの脂質、および約25 g〜約325 gのタンパク質を含み得る。特定の態様において、前記規定食は、約40 g〜約75 gの糖質、約111 g〜約155 gの脂質、および約90 g〜約210 gのタンパク質を提供し得る。いくつかの態様において、対象の規定食の脂質含有量の約30％〜約70％(例えば、約30％、約40％、約50％、約60％、または約70％)は中鎖トリグリセリド(MCT)から構成され得る。これは約40 g〜約165 gのMCTに相当する。
【００２７】
本発明のもう一つの態様において、本治療は、炎症性疾患の治療を必要とする対象に、mKDまたはKD食を提供する段階；ならびに、任意で、EGCG、クルクミン、グルコシノレートおよび／またはその誘導体ならびにMCTのうちの１つまたは複数を含む組成物を投与する段階を含む。様々な態様が、EGCG、クルクミン、グルコシノレートおよび／またはその誘導体ならびにMCTを含む組成物の対象への投与を提供する。
【００２８】
本発明の一つの態様において、組成物はEGCG、クルクミン、グルコシノレートおよび／またはその誘導体、例えばGRPまたはSFN、ならびにMCTのうちの１つまたは複数を含み、この場合、これらの化合物の少なくとも1つは天然に存在する。さらに、対象に投与される組成物は、単一の配合物(例えば、単一の組成物中のEGCG；クルクミン；グルコシノレートおよび／もしくはその誘導体、例えばGRPもしくはSFNを含む組成物；ならびに／またはMCTの各々)として投与され得、または各成分(EGCG；クルクミン；グルコシノレートおよび／またはその誘導体、例えばGRPまたはSFNを含む組成物；ならびにMCT)が、同時または連続的な消費用に別々に提供され得る(例えば、カプセル、カプレット、錠剤、粉薬、ゲル、または他の単位剤形の形態で)。
【００２９】
本発明は、炎症性疾患、例えば自己免疫疾患の治療に向けられている。本発明に従って治療可能なさまざまな自己免疫疾患としては、急性散在性脳脊髄炎(ADEM)、アジソン病、円形脱毛症、アミロイドーシス、自己免疫性網膜症、自己免疫性甲状腺疾患、軸索型および神経型ニューロパチー、慢性疲労症候群、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー(CIDP)、クローン病、コクサッキー心筋炎(Coxsackie myocarditis)、疱疹状皮膚炎、実験的アレルギー性脳脊髄炎、エヴァンス症候群、線維筋痛症、糸球体腎炎、多発血管炎性肉芽腫症(GPA) (以前はウェゲナー肉芽腫症と呼ばれていた)、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、橋本脳症、橋本甲状腺炎、溶血性貧血、川崎病、狼瘡(SLE)、ライム病、メニエール病、多発性硬化症、重症筋無力症、筋炎、ナルコレプシー、視神経脊髄炎(デビック)、好中球減少症、強皮症、シェーグレン症候群、全身硬直症候群が挙げられるが、これらに限定されない。
【００３０】
ある態様において、本発明に従って治療される炎症性疾患は、化学的または生物学的処置、例えば化学療法の後生成された炎症である。一つの態様において、化学療法は、パクリタキセル、5-フルオロウラシル(5-FU)、シスプラチン、メトトレキサート、アクチノマイシン、ブレオマイシン、ブスルファン、カペシタビン、シクロホスファミド、シトシンアラビノシド、ダウノマイシン、ダウノルビシン、ドセタキセル、ドキシル、ドキソルビシン、エトポシド、フロクスウリジン、ヒドロキシウレア、メクロレタミン、メルファラン、マイトマイシン、ミトキサントロン、プロカルバジン、6-メルカプトプリン、6-チオグアニン、チオテパ、ビンブラスチン、またはビノレルビンの投与を含む。
【００３１】
特定の態様において、炎症性疾患は１つまたは複数のサイトカインまたは関連生体分子のレベルの変化、例えば血中レベルの変化を示す。さらなる態様において、炎症性疾患は、表面抗原分類40リガンド(CD-40L)、エオタキシン、フィブリノーゲン、成長ホルモン(GH)、ケラチノサイト由来サイトカインまたはGRO1癌遺伝子(KC/GRO)、インターロイキン-1β(IL-1β)、IL-6、IL-18、リンフォタクチン、ミエロペルオキシダーゼ(MPO)、組織メタロプロテアーゼ阻害物質1 (TIMP-1)、血管内皮増殖因子A (VEGF-A)、C反応性タンパク質(CRP)、マクロファージ由来ケモカイン(MDC)、マクロファージ炎症性タンパク質-1α (MIP-1α)、vWF、およびオンコスタチンから選択される、１つまたは複数のサイトカインまたは関連生体分子の血中レベルの変化を示す。
【００３２】
表1は、特定のサイトカインおよび関連生体分子のレベルの変化を示す疾患の非限定的な例を提供する。
【００３３】
（表１）特定のサイトカインおよび関連生体分子のレベルの変化を示す疾患の非限定的な例
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【００３４】
特定の態様において、本発明に従って治療され得る炎症性疾患は、炎症機構の調節不全、酸化ストレス、および免疫ホメオスタシスの撹乱を伴う。
【００３５】
本発明の治療法で治療可能な状態および障害は、アレルギー、アルツハイマー病、強直性脊椎炎、ぜんそく、自己免疫疾患、関節炎、アテローム性動脈硬化症、手根管症候群、セリアック病、クローン病、憩室炎、湿疹、線維症、ギラン・バレー疾患、狼瘡、多発性硬化症、腎炎、ニューロパチー、膵炎、パーキンソン病、乾癬、リウマチ性多発筋痛症、関節リウマチ、強皮症および脈管炎を含むが、それらに限定されない。
【００３６】
本発明に従って治療され得る自己免疫疾患の非限定的な例としては、急性散在性脳脊髄炎(ADEM)、アジソン病、円形脱毛症、アミロイドーシス、自己免疫性網膜症、自己免疫性甲状腺疾患、軸索型および神経型ニューロパチー、慢性疲労症候群、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー(CIDP)、クローン病、コクサッキー心筋炎、疱疹状皮膚炎、実験的アレルギー性脳脊髄炎、エヴァンス症候群、線維筋痛症、糸球体腎炎、多発血管炎性肉芽腫症(GPA) (以前はウェゲナー肉芽腫症と呼ばれていた)、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、橋本脳症、橋本甲状腺炎、溶血性貧血、川崎病、狼瘡(SLE)、ライム病、慢性、メニエール病、多発性硬化症、重症筋無力症、筋炎、ナルコレプシー、視神経脊髄炎(デビック)、好中球減少症、強皮症、シェーグレン症候群、全身硬直症候群が挙げられる。
【００３７】
炎症性疾患の治療のための本発明の前記局面はいずれも、炎症性疾患を治療するための１つまたは複数の追加療法の施与をさらに含んでも良い。そのような追加療法の非限定的な例としては、抗炎症性抗体療法、例えば抗IgE療法、または抗炎症性小分子療法、例えば抗ヒスタミン療法、ステロイド剤、もしくは非ステロイド性抗炎症薬(NSAIDS) (例えばアスピリン、セレコキシブ、ジクロフェナク、ジフルニサル、エトフォラク、イブプロフェン、インドメタシン、ケトプロフェン、ケトロラク、ナブメトン、ナプロキセン、オキサプロジン、ピロキシカム、サルサラート、スリンダク、トルメチン、またはそれらの組み合わせ)が挙げられる。さらなる抗炎症剤は当業者に周知であり、そのような態様は本発明の範囲内である。
【００３８】
ECGC、クルクミン、グルコシノレートおよび／またはその誘導体ならびにMCTを含む組成物は、粉薬、飲料、乳剤、ゲル、カプセル、錠剤、またはそれらの混合物の形態で対象に投与できる。炎症性疾患の治療を必要とする対象は、本発明によって提供された組成物を、直接、またはそれを他の食物または飲料、例えば、水、フルーツジュース、ヨーグルト、スープ、シチュー、パスタ等と混合して摂取して良い。さらに、組成物(または個々の成分)は他の食品、例えば、ケーキ、クッキー、シリアルバー等に組み入れられても良い。
【００３９】
本明細書において言及または引用したすべての特許、特許出願、仮出願、および刊行物は、それらが本明細書の明示的な教示内容と矛盾しない範囲で、全ての図および表を含む全体が参照により組み入れられる。
【００４０】
以下は本発明を実施するための手順を例示する実施例である。これらの実施例は限定として解釈されるべきではない。特に明記しない限り、全てのパーセンテージは、重量百分率またはカロリー百分率であり、かつ全ての溶媒の混合比率は体積百分率である。
【実施例】
【００４１】
実施例1 - LC/MCT/クルクミン/EGCG/SFNを用いる、炎症の際の炎症促進性エフェクターの防止
化学療法剤であるパクリタキセルを用いて炎症を誘導した。パクリタキセル[40 mg/kg累積]による処置で動物にストレスを与え、炎症プロセスに関与する多くのサイトカインおよび関連分子に変化をもたらした。動物を3〜4週間NU.001で処置し、血漿単離のために血液を採取した。RodentMAP [Myriad/RBM]を用いて一群のサイトカインについてスクリーニングした。図1および2は、パクリタキセル処置の結果として発現が変化した多くのサイトカインにおける、対照レベルへの回帰を示している。これらの結果は、NU.001の、炎症を低減する能力をを示している。
【００４２】
実施例2 - NU.001は疼痛および有糸分裂誘発に関与する炎症促進性サイトカインを阻害する
対照食またはNU.001食を用いて3〜4週間処置された動物において、複数の炎症促進性サイトカインのレベルを比較した。このサイトカインスクリーニングの結果から、TIMP-1、MIP-1g、レプチン、マクロファージコロニー刺激因子(MCSF)および(KC/GRO)を有意に阻害するという、NU.001の能力が明らかとなった(図3)。TIMP-1は神経障害性疼痛を有する対象で増加している。MIP-1g、レプチン、およびM-CSFのレベルの増加は疼痛と相関している。高レベルのM-CSFは、強直性脊椎炎および関節リウマチとも結び付けられている。最後に、KC/GROは分裂促進性を示し、かつメラノーマ病態形成に関与している。これらのデータを合わせると、NU.001の、疼痛および有糸分裂誘発を調節する能力が示されている。
【００４３】
実施例3 - NU.001は末梢性ニューロパチーおよび多発性硬化症を調節する因子を刺激する
対照食またはNU.001食を用いて処置された動物において、白血病抑制因子(LIF)のレベルを比較した。4週間の処置後、サイトカインレベルを測定するために血液を採取して血漿を単離した。結果から、対照群と比較してNU.001で処置された動物ではLIFの濃度の増加が示され、これは、我々の治療法がニューロパチーを調節する可能性を裏付ける(図4A)。多発性硬化症患者で観察されるような、低下したレベルのCCL22は、パクリタキセルを用いて得た。パクリタキセルとNU.001を組み合わせて処置した動物は、このサイトカインについてより高い濃度を示す。CCL22は、特に女性において、多発性硬化症の病態形成に重要な役割を果たすと仮定されている。これらの結果から、NU.001を用いて多発性硬化症を治療可能であることが示唆される。
【００４４】
本明細書に記載された実施例および態様は、例示するためのものにすぎないこと、ならびにそれらを踏まえた様々な修正または変更が当業者に示唆され、かつそれらが本出願の精神および範囲内に含まれることが理解されるべきである。加えて、本明細書に開示されたあらゆる発明またはその態様の任意の要素または限定は、任意のおよび/または全ての他の要素または限定(個別にまたは任意の組み合わせで)と、または本明細書に開示されたあらゆる他の発明またはその態様と組み合わせることができ、ならびにそのような組み合わせは全て、それらを限定することなく本発明の範囲内であることが企図されている。
【００４５】
参考文献
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2018518513.tif 000009
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【図１−１】
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【図１−２】
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【図１−３】
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【図１−４】
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【図１−５】
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【図１−６】
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【図１−７】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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