(57)【要約】  本発明は、ＩＬ−２に特異的に結合し、ＩＬ−２Ｒａ及びＩＬ−２ＲβへのＩＬ−２結合の親和性を低減する抗体、またはその抗原結合部分を提供する。本発明はさらに、かかる抗体及びそれをコードする核酸を得る方法を提供する。本発明はさらに、本抗体及びＩＬ−２を含む複合体を投与することを含むが、これに限定されない、自己免疫疾患、障害もしくは病態の治療及び／または予防のため、ならびに免疫抑制のためにこれらの抗体を使用するための組成物及び治療方法に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトＩＬ−２（ｈＩＬ−２）に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、前記抗体は、ｈＩＬ−２のヘリックスＡ及びＣならびにＢ−Ｃループに結合する、単離された抗体またはその抗原結合部分。
【請求項２】
ヒトＩＬ−２（ｈＩＬ−２）に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、前記抗体は、ｈＩＬ−２のＩＬ−２Ｒαへの結合親和性を１〜１９９分の１に低減する、単離された抗体またはその抗原結合部分。
【請求項３】
前記抗体は、ｈＩＬ−２のＩＬ−２Ｒαへの結合親和性を１０分の１に低減する、請求項２に記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項４】
ヒトＩＬ−２（ｈＩＬ−２）に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、前記抗体は、
（ａ）ＩＬ−２Ｒα及びＩＬ−２ＲβへのｈＩＬ−２結合を低減し、ＣＤ８＋Ｔ細胞における活性を、制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞におけるよりも高い度合で阻害する、
（ｂ）ＩＬ−２Ｒα及びＩＬ−２ＲβへのｈＩＬ−２結合を低減し、ＣＤ８＋Ｔ細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化を、制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞におけるよりも高い度合で阻害する、
（ｃ）ＩＬ−２Ｒα及びＩＬ−２ＲβへのｈＩＬ−２結合を低減し、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）培養物中でまたは再構成アッセイにおいて測定したとき、ＣＤ８＋もしくはＣＤ４＋Ｔ細胞に対して、またはＮＫ細胞に対して制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞の比率を増加させる、あるいは
（ｄ）ＩＬ−２Ｒα及びＩＬ−２ＲβへのｈＩＬ−２結合を低減し、制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞におけるＦＯＸＰ３、ＣＤ２５、及びＩｃｏｓのうちの１つ以上の発現を増加させる、
単離された抗体またはその抗原結合部分。
【請求項５】
前記抗体または抗原結合部分は、次の特性：
ａ）約４．５３×１０−４ｓ−１超のオフレートでのｈＩＬ−２への結合、及び
ｂ）約１．１４×１０−１０Ｍ超のＫＤでのｈＩＬ−２への結合
のうちの少なくとも一方を有する、請求項１に記載の単離された抗体または抗原結合部分。
【請求項６】
前記抗体は、ヒト抗体である、請求項１に記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項７】
ヒトＩＬ−２に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、前記抗体は、
（ｉ）
（ａ）配列番号７３、７４、もしくは７５を含むＨＣＤＲ１、配列番号７６、もしくは７７を含むＨＣＤＲ２、配列番号７８を含むＨＣＤＲ３、配列番号７９を含むＬＣＤＲ１、配列番号８０を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号８１を含むＬＣＤＲ３、
（ｂ）配列番号８２、８３、もしくは８４を含むＨＣＤＲ１、配列番号８５、もしくは８６を含むＨＣＤＲ２、配列番号８７を含むＨＣＤＲ３、配列番号８８を含むＬＣＤＲ１、配列番号８９を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号９０を含むＬＣＤＲ３、
（ｃ）配列番号９１、９２、もしくは９３を含むＨＣＤＲ１、配列番号９４、もしくは９５を含むＨＣＤＲ２、配列番号９６を含むＨＣＤＲ３、配列番号９７を含むＬＣＤＲ１、配列番号９８を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号９９を含むＬＣＤＲ３、
（ｄ）配列番号１００、１０１、もしくは１０２を含むＨＣＤＲ１、配列番号１０３、もしくは１０４を含むＨＣＤＲ２、配列番号１０５を含むＨＣＤＲ３、配列番号１０６を含むＬＣＤＲ１、配列番号１０７を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１０８を含むＬＣＤＲ３、
（ｅ）配列番号１０９、１１０、もしくは１１１を含むＨＣＤＲ１、配列番号１１２、もしくは１１３を含むＨＣＤＲ２、配列番号１１４を含むＨＣＤＲ３、配列番号１１５を含むＬＣＤＲ１、配列番号１１６を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１１７を含むＬＣＤＲ３、
（ｆ）配列番号１１８、１１９、もしくは１２０を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２１、もしくは１２２を含むＨＣＤＲ２、配列番号１２３を含むＨＣＤＲ３、配列番号１２４を含むＬＣＤＲ１、配列番号１２５を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１２６を含むＬＣＤＲ３、
（ｇ）配列番号１２７、１２８、もしくは１２９を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３０、もしくは１３１を含むＨＣＤＲ２、配列番号１３２を含むＨＣＤＲ３、配列番号１３３を含むＬＣＤＲ１、配列番号１３４を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１３５を含むＬＣＤＲ３、
（ｈ）配列番号１３６、１３７、もしくは１３８を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３９、もしくは１４０を含むＨＣＤＲ２、配列番号１４１を含むＨＣＤＲ３、配列番号１４２を含むＬＣＤＲ１、配列番号１４３を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１４４を含むＬＣＤＲ３、
（ｉ）配列番号１４５、１４６、もしくは１４７を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４８、もしくは１４９を含むＨＣＤＲ２、配列番号１５０を含むＨＣＤＲ３、配列番号１５１を含むＬＣＤＲ１、配列番号１５２を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１５３を含むＬＣＤＲ３、
（ｊ）配列番号１５４、１５５、もしくは１５６を含むＨＣＤＲ１、配列番号１５７、もしくは１５８を含むＨＣＤＲ２、配列番号１５９を含むＨＣＤＲ３、配列番号１６０を含むＬＣＤＲ１、配列番号１６１を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１６２を含むＬＣＤＲ３、
（ｋ）配列番号１６３、１６４、もしくは１６５を含むＨＣＤＲ１、配列番号１６６、もしくは１６７を含むＨＣＤＲ２、配列番号１６８を含むＨＣＤＲ３、配列番号１６９を含むＬＣＤＲ１、配列番号１７０を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１７１を含むＬＣＤＲ３、
（ｌ）配列番号１７２、１７３、もしくは１７４を含むＨＣＤＲ１、配列番号１７５、もしくは１７６を含むＨＣＤＲ２、配列番号１７７を含むＨＣＤＲ３、配列番号１７８を含むＬＣＤＲ１、配列番号１７９を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１８０を含むＬＣＤＲ３、
（ｍ）配列番号１８１、１８２、もしくは１８３を含むＨＣＤＲ１、配列番号１８４、もしくは１８５を含むＨＣＤＲ２、配列番号１８６を含むＨＣＤＲ３、配列番号１８７を含むＬＣＤＲ１、配列番号１８８を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１８９を含むＬＣＤＲ３、
（ｎ）配列番号１９０、１９１、もしくは１９２を含むＨＣＤＲ１、配列番号１９３、もしくは１９４を含むＨＣＤＲ２、配列番号１９５を含むＨＣＤＲ３、配列番号１９６を含むＬＣＤＲ１、配列番号１９７を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１９８を含むＬＣＤＲ３、
（ｏ）配列番号１９９、２００、もしくは２０１を含むＨＣＤＲ１、配列番号２０２、もしくは２０３を含むＨＣＤＲ２、配列番号２０４を含むＨＣＤＲ３、配列番号２０５を含むＬＣＤＲ１、配列番号２０６を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号２０７を含むＬＣＤＲ３、
（ｐ）配列番号２０８、２０９、もしくは２１０を含むＨＣＤＲ１、配列番号２１１、もしくは２１２を含むＨＣＤＲ２、配列番号２１３を含むＨＣＤＲ３、配列番号２１４を含むＬＣＤＲ１、配列番号２１５を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号２１６を含むＬＣＤＲ３、または
（ｑ）配列番号２１７を含むＨＣＤＲ１、配列番号２１８を含むＨＣＤＲ２、配列番号２１９を含むＨＣＤＲ３、配列番号２２０を含むＬＣＤＲ１、配列番号２２１を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号２２２を含むＬＣＤＲ３、
（ｉｉ）
ａ）表７に示される配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、もしくは７１におけるＨＣＤＲ３、または
ｂ）表７に示される配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、もしくは７１におけるＨＣＤＲ１〜３
を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、
（ｉｉｉ）
ａ）表７に示される配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、もしくは７２におけるＬＣＤＲ３、または
ｂ）表７に示される配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、もしくは７２におけるＬＣＤＲ１〜３
を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、
（ｉｖ）
ａ）表７に示される配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、もしくは７１におけるＨＣＤＲ３、
ｂ）表７に示される配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、もしくは７１におけるＨＣＤＲ１〜３、または
ｃ）配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、もしくは７１のアミノ酸配列
を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、
（ｖ）
ａ）表７に示される配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、もしくは７２におけるＬＣＤＲ３、
ｂ）表７に示される配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、もしくは７２におけるＬＣＤＲ１〜３、または
ｃ）配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、もしくは７２のアミノ酸配列
を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、
（ｖｉ）表７に示される、
ａ）それぞれ配列番号１及び２、
ｂ）それぞれ配列番号３及び４、
ｃ）それぞれ配列番号５及び６、
ｄ）それぞれ配列番号７及び８、
ｅ）それぞれ配列番号９及び１０、
ｆ）それぞれ配列番号１１及び１２、
ｇ）それぞれ配列番号１３及び１４、
ｈ）それぞれ配列番号１５及び１６、
ｉ）それぞれ配列番号１７及び１８、
ｊ）それぞれ配列番号１９及び２０、
ｋ）それぞれ配列番号２１及び２２、
ｌ）それぞれ配列番号２３及び２４、
ｍ）それぞれ配列番号２５及び２６、
ｎ）それぞれ配列番号２７及び２８、
ｏ）それぞれ配列番号２９及び３０、
ｐ）それぞれ配列番号３１及び３２、または
ｑ）それぞれ配列番号７１及び７２
に示されるＨＣＤＲ１〜３及びＬＣＤＲ１〜３アミノ酸配列、
（ｖｉｉ）
ａ）それぞれ配列番号１及び２、
ｂ）それぞれ配列番号３及び４、
ｃ）それぞれ配列番号５及び６、
ｄ）それぞれ配列番号７及び８、
ｅ）それぞれ配列番号９及び１０、
ｆ）それぞれ配列番号１１及び１２、
ｇ）それぞれ配列番号１３及び１４、
ｈ）それぞれ配列番号１５及び１６、
ｉ）それぞれ配列番号１７及び１８、
ｊ）それぞれ配列番号１９及び２０、
ｋ）それぞれ配列番号２１及び２２、
ｌ）それぞれ配列番号２３及び２４、
ｍ）それぞれ配列番号２５及び２６、
ｎ）それぞれ配列番号２７及び２８、
ｏ）それぞれ配列番号２９及び３０、
ｐ）それぞれ配列番号３１及び３２、または
ｑ）それぞれ配列番号７１及び７２
に示されるアミノ酸配列
を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分。
【請求項８】
前記抗体は、ＩｇＧ抗体である、請求項７に記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項９】
Ｃ末端リジンを含むまたは含まない配列番号３３のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域をさらに含む、請求項８に記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項１０】
配列番号３５のアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域をさらに含む、請求項７（ｖｉｉ）（ｇ）に記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項１１】
請求項７に記載の抗体または抗原結合部分の前記重鎖、前記軽鎖、または両方をコードする、単離された核酸。
【請求項１２】
ヒトインターロイキン−２（ｈＩＬ−２）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分の前記重鎖、前記軽鎖、または両方をコードする、単離された核酸であって、前記核酸は、
ａ）配列番号３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、もしくは６６のヌクレオチド配列、
ｂ）配列番号３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、もしくは６７のヌクレオチド配列、または
ｃ）次のヌクレオチド配列対：
配列番号３６及び３７、
配列番号３８及び３９、
配列番号４０及び４１、
配列番号４２及び４３、
配列番号４４及び４５、
配列番号４６及び４７、
配列番号４８及び４９、
配列番号５０及び５１、
配列番号５２及び５３、
配列番号５４及び５５、
配列番号５６及び５７、
配列番号５８及び５９、
配列番号６０及び６１、
配列番号６２及び６３、
配列番号６４及び６５、または
配列番号６６及び６７
のうちの１つ
を含む、単離された核酸。
【請求項１３】
請求項１２に記載の核酸を含むベクター。
【請求項１４】
請求項１３に記載の核酸を含む宿主細胞。
【請求項１５】
前記細胞は哺乳類細胞である、請求項１４に記載の宿主細胞。
【請求項１６】
ヒトインターロイキン−２（ｈＩＬ−２）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分を生産する方法であって、前記方法は、
ａ）請求項１５に記載の宿主細胞を、前記抗体または抗原結合部分が発現されるのを可能にする条件下で培養することであって、前記宿主細胞は、前記抗体または抗原結合部分の前記重鎖及び軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含む、培養することと、
ｂ）前記抗体または抗原結合部分を前記培養物から単離することと
を含む、方法。
【請求項１７】
ヒトインターロイキン−２（ｈＩＬ−２）に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、前記抗体は、ｈＩＬ−２への結合について請求項７に記載の抗体または抗原結合部分と競合する、あるいはそれと同じエピトープに結合する、単離された抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１８】
前記抗体は、請求項７（ｖｉｉ）（ｇ）に記載のアミノ酸配列とそれぞれ少なくとも９５％同一であるＶＨアミノ酸配列及びＶＬアミノ酸配列を含む、請求項１７に記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項１９】
請求項７に記載の抗体または抗原結合部分と、薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む、薬学的組成物。
【請求項２０】
ヒト対象における炎症性病態を治療するための方法であって、前記対象に、有効量の請求項７に記載の抗体または抗原結合部分を投与することを含む、方法。
【請求項２１】
免疫抑制の誘発を必要とするヒト対象において前記免疫抑制を誘発させる方法であって、前記対象に、有効量の請求項７に記載の抗体または抗原結合部分を投与することを含む、方法。
【請求項２２】
炎症性病態を有するまたは免疫抑制を必要とするヒト対象の治療において使用するための、請求項７に記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項２３】
炎症性病態の治療または免疫抑制の誘発を必要とするヒト対象において前記炎症性病態を治療するまたは前記免疫抑制を誘発させるための医薬品の製造における、請求項７に記載の抗体または抗原結合部分の使用。
【請求項２４】
前記対象は、自己免疫疾患または移植片対宿主病を有する、請求項２１に記載の方法。
【請求項２５】
前記抗体は、ＩＬ−２と複合して投与される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２６】
前記対象は１型糖尿病を有する、請求項２１に記載の方法。
【請求項２７】
ヒトＩＬ−２と複合された請求項７に記載の抗体またはその抗原結合部分を含む組成物。
【請求項２８】
ヒトＩＬ−２と複合された請求項７に記載の抗体またはその抗原結合部分と、薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む、薬学的組成物。
【請求項２９】
ヒト対象における炎症性病態を治療するための方法であって、前記対象に、ヒトＩＬ−２と複合された有効量の請求項７に記載の抗体またはその抗原結合部分を投与することを含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
共同研究契約の当事者
特許請求された当該発明は、下記に列挙される共同研究契約の当事者によってまたはこれに代わってなされた。当該共同研究契約は、この特許請求された発明がなされた日付以前に有効であり、かつ特許請求された発明は、共同研究契約の範囲内で行われた活動の結果としてなされた。共同研究契約の当事者は、ＰＦＩＺＥＲ  ＩＮＣ．及びＴＨＥ  ＲＥＧＥＮＴＳ  ＯＦ  ＴＨＥ  ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ  ＯＦ  ＣＡＬＩＦＯＲＮＩＡである。
【０００２】
関連出願
本出願は、２０１６年１０月１４日に出願された米国仮出願第６２／４０８，３６０号、及び２０１５年１０月２３日に出願された米国仮出願第６２／２４５，６００号の利益を主張するものであり、これらの出願の各々の内容は参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
【０００３】
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式でテキストファイルとして電子的に提出された、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる配列表を含む。２０１６年１０月２１に作成された該テキストファイルは、ＰＣＦＣ−９９３−ＷＯ１−ＳＬ．ｔｘｔと名付けられ、１０６，５４９バイトのサイズである。
【０００４】
開示の分野
本開示は、インターロイキン−２（ＩＬ−２）に特異的に結合する抗体、例えば、完全長抗体及びその抗原結合部分に関する。本開示はさらに、ＩＬ−２に対する抗体を含む組成物、及び本抗体を医薬品として使用する方法に関する。抗ＩＬ−２抗体は、自己免疫疾患、障害及び病態の治療及び予防、ならびに免疫抑制に有用である。
【背景技術】
【０００５】
開示の背景
インターロイキン−２（ＩＬ−２）は、免疫応答において重要な役割を果たし、自己免疫疾患、障害及び病態などの免疫応答に関連する疾患の治療、ならびに免疫抑制のための潜在的な標的である。ＩＬ−２媒介性疾患、障害、及び病態を治療するための新規の治療薬に対する未だ対処されていない必要性が長年存在する。本開示はこれらの必要性を満たす。
【発明の概要】
【０００６】
開示の概要
本発明者らは、新規で有利な抗ＩＬ−２抗体を生成した。ある特定の態様において、本開示は、ヒトＩＬ−２（ｈＩＬ−２）に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分に関し、本抗体は、ＩＬ−２受容体鎖ＩＬ−２Ｒα及びＩＬ−２ＲβへのｈＩＬ−２結合を低減し、ＣＤ８＋Ｔ細胞における活性を、制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞におけるよりも高い度合で阻害する。
【０００７】
ある特定の態様において、本開示は、ヒトＩＬ−２（ｈＩＬ−２）に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分に関し、本抗体は、ｈＩＬ−２のヘリックスＡ及びＣならびにＢ−Ｃループに結合する。
【０００８】
ある特定の態様において、本開示は、ヒトＩＬ−２（ｈＩＬ−２）への結合について配列番号１３及び１４のアミノ酸配列を含む抗体と競合する、またはそれと同じｈＩＬ−２のエピトープに結合する、単離された抗体またはその抗原結合部分に関する。
【０００９】
ある特定の態様において、本開示は、ヒトＩＬ−２（ｈＩＬ−２）に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分に関し、本抗体は、ｈＩＬ−２のＩＬ−２Ｒαへの結合親和性を１〜１９９分の１に低減する。ある特定の実施形態において、本抗体は、ｈＩＬ−２のＩＬ−２Ｒαへの結合親和性を１０分の１に低減する。
【００１０】
ある特定の態様において、本開示は、ｈＩＬ−２に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分に関し、本抗体または部分は、ＩＬ−２Ｒα及びＩＬ−２ＲβへのｈＩＬ−２結合を低減し、ＣＤ８＋Ｔ細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化を、Ｔｒｅｇ細胞におけるよりも高い度合で阻害する。
【００１１】
ある特定の態様において、本開示は、ｈＩＬ−２に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分に関し、本抗体または部分は、ＩＬ−２Ｒα及びＩＬ−２ＲβへのｈＩＬ−２結合を低減し、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）培養物または再構成アッセイにおいて測定したとき、体内でのＴｒｅｇ細胞の、ＣＤ８＋もしくはＣＤ４＋Ｔ細胞に対する、またはＮＫ細胞に対する比率を増加させる。
【００１２】
ある特定の態様において、本開示は、ｈＩＬ−２に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分に関し、本抗体または部分は、ＩＬ−２Ｒα及びＩＬ−２ＲβへのｈＩＬ−２結合を低減し、Ｔｒｅｇ細胞におけるＦＯＸＰ３、ＣＤ２５、及びＩｃｏｓのうちの１つ以上の発現を増加させる。
【００１３】
ある特定の態様において、本開示は、単離された抗体または抗原結合部分に関し、本抗体または部分は、ａ）約４．５３×１０−４ｓ−１以上のｈＩＬ−２結合オフレート、及び／またはｂ）約１．１４×１０−１０Ｍ以上のｈＩＬ−２に対する結合親和性を有する。
【００１４】
ある特定の態様において、本開示は、単離された抗体または抗原結合部分に関し、本抗体または部分は、
（ａ）配列番号７３（Ｋａｂａｔ）、７４（Ｃｈｏｔｈｉａ）、もしくは７５（拡張型）を含むＨＣＤＲ１、配列番号７６（Ｋａｂａｔ）、もしくは７７（Ｃｈｏｔｈｉａ）を含むＨＣＤＲ２、配列番号７８を含むＨＣＤＲ３、配列番号７９を含むＬＣＤＲ１、配列番号８０を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号８１を含むＬＣＤＲ３、
（ｂ）配列番号８２（Ｋａｂａｔ）、８３（Ｃｈｏｔｈｉａ）、もしくは８４（拡張型）を含むＨＣＤＲ１、配列番号８５（Ｋａｂａｔ）、もしくは８６（Ｃｈｏｔｈｉａ）を含むＨＣＤＲ２、配列番号８７を含むＨＣＤＲ３、配列番号８８を含むＬＣＤＲ１、配列番号８９を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号９０を含むＬＣＤＲ３、
（ｃ）配列番号９１（Ｋａｂａｔ）、９２（Ｃｈｏｔｈｉａ）、もしくは９３（拡張型）を含むＨＣＤＲ１、配列番号９４（Ｋａｂａｔ）、もしくは９５（Ｃｈｏｔｈｉａ）を含むＨＣＤＲ２、配列番号９６を含むＨＣＤＲ３、配列番号９７を含むＬＣＤＲ１、配列番号９８を含むＬＣＤＲ２を含む、及び配列番号９９を含むＬＣＤＲ３、
（ｄ）配列番号１００（Ｋａｂａｔ）、１０１（Ｃｈｏｔｈｉａ）、もしくは１０２（拡張型）を含むＨＣＤＲ１、配列番号１０３（Ｋａｂａｔ）、もしくは１０４（Ｃｈｏｔｈｉａ）を含むＨＣＤＲ２、配列番号１０５を含むＨＣＤＲ３、配列番号１０６を含むＬＣＤＲ１、配列番号１０７を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１０８を含むＬＣＤＲ３、
（ｅ）配列番号１０９（Ｋａｂａｔ）、１１０（Ｃｈｏｔｈｉａ）、もしくは１１１（拡張型）を含むＨＣＤＲ１、配列番号１１２（Ｋａｂａｔ）、もしくは１１３（Ｃｈｏｔｈｉａ）を含むＨＣＤＲ２、配列番号１１４を含むＨＣＤＲ３、配列番号１１５を含むＬＣＤＲ１、配列番号１１６を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１１７を含むＬＣＤＲ３、
（ｆ）配列番号１１８（Ｋａｂａｔ）、１１９（Ｃｈｏｔｈｉａ）、もしくは１２０（拡張型）を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２１（Ｋａｂａｔ）、もしくは１２２（Ｃｈｏｔｈｉａ）を含むＨＣＤＲ２、配列番号１２３を含むＨＣＤＲ３、配列番号１２４を含むＬＣＤＲ１、配列番号１２５を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１２６を含むＬＣＤＲ３、
（ｇ）配列番号１２７（Ｋａｂａｔ）、１２８（Ｃｈｏｔｈｉａ）、もしくは１２９（拡張型）を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３０（Ｋａｂａｔ）、もしくは１３１（Ｃｈｏｔｈｉａ）を含むＨＣＤＲ２、配列番号１３２を含むＨＣＤＲ３、配列番号１３３を含むＬＣＤＲ１、配列番号１３４を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１３５を含むＬＣＤＲ３、
（ｈ）配列番号１３６（Ｋａｂａｔ）、１３７（Ｃｈｏｔｈｉａ）、もしくは１３８（拡張型）を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３９（Ｋａｂａｔ）、もしくは１４０（Ｃｈｏｔｈｉａ）を含むＨＣＤＲ２、配列番号１４１を含むＨＣＤＲ３、配列番号１４２を含むＬＣＤＲ１、配列番号１４３を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１４４を含むＬＣＤＲ３、
（ｉ）配列番号１４５（Ｋａｂａｔ）、１４６（Ｃｈｏｔｈｉａ）、もしくは１４７（拡張型）を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４８（Ｋａｂａｔ）、もしくは１４９（Ｃｈｏｔｈｉａ）を含むＨＣＤＲ２、配列番号１５０を含むＨＣＤＲ３、配列番号１５１を含むＬＣＤＲ１、配列番号１５２を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１５３を含むＬＣＤＲ３、
（ｊ）配列番号１５４（Ｋａｂａｔ）、１５５（Ｃｈｏｔｈｉａ）、もしくは１５６（拡張型）を含むＨＣＤＲ１、配列番号１５７（Ｋａｂａｔ）、もしくは１５８（Ｃｈｏｔｈｉａ）を含むＨＣＤＲ２、配列番号１５９を含むＨＣＤＲ３、配列番号１６０を含むＬＣＤＲ１、配列番号１６１を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１６２を含むＬＣＤＲ３、
（ｋ）配列番号１６３（Ｋａｂａｔ）、１６４（Ｃｈｏｔｈｉａ）、もしくは１６５（拡張型）を含むＨＣＤＲ１、配列番号１６６（Ｋａｂａｔ）、もしくは１６７（Ｃｈｏｔｈｉａ）を含むＨＣＤＲ２、配列番号１６８を含むＨＣＤＲ３、配列番号１６９を含むＬＣＤＲ１、配列番号１７０を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１７１を含むＬＣＤＲ３、
（ｌ）配列番号１７２（Ｋａｂａｔ）、１７３（Ｃｈｏｔｈｉａ）、もしくは１７４（拡張型）を含むＨＣＤＲ１、配列番号１７５（Ｋａｂａｔ）、もしくは１７６（Ｃｈｏｔｈｉａ）を含むＨＣＤＲ２、配列番号１７７を含むＨＣＤＲ３、配列番号１７８を含むＬＣＤＲ１、配列番号１７９を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１８０を含むＬＣＤＲ３、
（ｍ）配列番号１８１（Ｋａｂａｔ）、１８２（Ｃｈｏｔｈｉａ）、もしくは１８３（拡張型）を含むＨＣＤＲ１、配列番号１８４（Ｋａｂａｔ）、もしくは１８５（Ｃｈｏｔｈｉａ）を含むＨＣＤＲ２、配列番号１８６を含むＨＣＤＲ３、配列番号１８７を含むＬＣＤＲ１、配列番号１８８を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１８９を含むＬＣＤＲ３、
（ｎ）配列番号１９０（Ｋａｂａｔ）、１９１（Ｃｈｏｔｈｉａ）、もしくは１９２（拡張型）を含むＨＣＤＲ１、配列番号１９３（Ｋａｂａｔ）、もしくは１９４（Ｃｈｏｔｈｉａ）を含むＨＣＤＲ２、配列番号１９５を含むＨＣＤＲ３、配列番号１９６を含むＬＣＤＲ１、配列番号１９７を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１９８を含むＬＣＤＲ３、
（ｏ）配列番号１９９（Ｋａｂａｔ）、２００（Ｃｈｏｔｈｉａ）、もしくは２０１（拡張型）を含むＨＣＤＲ１、配列番号２０２（Ｋａｂａｔ）、もしくは２０３（Ｃｈｏｔｈｉａ）を含むＨＣＤＲ２、配列番号２０４を含むＨＣＤＲ３、配列番号２０５を含むＬＣＤＲ１、配列番号２０６を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号２０７を含むＬＣＤＲ３、
（ｐ）配列番号２０８（Ｋａｂａｔ）、２０９（Ｃｈｏｔｈｉａ）、もしくは２１０（拡張型）を含むＨＣＤＲ１、配列番号２１１（Ｋａｂａｔ）、もしくは２１２（Ｃｈｏｔｈｉａ）を含むＨＣＤＲ２、配列番号２１３を含むＨＣＤＲ３、配列番号２１４を含むＬＣＤＲ１、配列番号２１５を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号２１６を含むＬＣＤＲ３、または
（ｑ）配列番号２１７を含むＨＣＤＲ１、配列番号２１８を含むＨＣＤＲ２、配列番号２１９を含むＨＣＤＲ３、配列番号２２０を含むＬＣＤＲ１、配列番号２２１を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号２２２を含むＬＣＤＲ３
を含む。
【００１５】
いくつかの実施形態において、本抗体または抗原結合部分は、ａ）表７に示される配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９もしくは７１における重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）３、またはｂ）表７に示される配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９もしくは７１におけるＨＣＤＲ１〜３を含む、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。
【００１６】
いくつかの実施形態において、本開示の本抗体または抗原結合部分は、ａ）表７に示される配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、もしくは７２における軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）３、またはｂ）表７に示される配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、もしくは７２におけるＬＣＤＲ１〜３を含む、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。
【００１７】
上記の実施形態のうちのいくつかにおいて、本抗体または抗原結合部分は、ａ）表７に示される配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、もしくは７１におけるＨＣＤＲ１〜３、及び／またはｂ）表７に示される配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、もしくは７２におけるＬＣＤＲ１〜３を含む。
【００１８】
ある特定の態様において、本開示は、ａ）表７に示される配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、もしくは７１におけるＨＣＤＲ３、ｂ）表７に示される配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、もしくは７１におけるＨＣＤＲ１〜３、またはｃ）配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、もしくは７１のアミノ酸配列を含む、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む、ヒトインターロイキン−２（ｈＩＬ−２）に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分に関する。
【００１９】
ある特定の態様において、本開示は、ａ）表７に示される配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、もしくは７２におけるＬＣＤＲ３、ｂ）表７に示される配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、もしくは７２におけるＬＣＤＲ１〜３、またはｃ）配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、もしくは７２のアミノ酸配列を含む、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む、ｈＩＬ−２に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分に関する。
【００２０】
いくつかの実施形態において、本開示は、ＶＨが、ａ）表７に示される配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、もしくは７１におけるＨＣＤＲ３、ｂ）表７に示される配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、もしくは７１におけるＨＣＤＲ１〜３、またはｃ）配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、もしくは７１のアミノ酸配列を含み、ＶＬが、ａ）表７に示される配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、もしくは７２におけるＬＣＤＲ３、ｂ）表７に示される配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、もしくは７２におけるＬＣＤＲ１〜３、またはｃ）配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、もしくは７２のアミノ酸配列を含む、単離された抗体または抗原結合部分に関する。
【００２１】
ある特定の態様において、本開示は、ｈＩＬ−２に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分に関し、本抗体は、表７に示される、それぞれ
配列番号１及び２、
配列番号３及び４、
配列番号５及び６、
配列番号７及び８、
配列番号９及び１０、
配列番号１１及び１２、
配列番号１３及び１４、
配列番号１５及び１６、
配列番号１７及び１８、
配列番号１９及び２０、
配列番号２１及び２２、
配列番号２３及び２４、
配列番号２５及び２６、
配列番号２７及び２８、
配列番号２９及び３０、
配列番号３１及び３２、または
配列番号７１及び７２
におけるＨＣＤＲ１〜３及びＬＣＤＲ１〜３アミノ酸配列を含む。
【００２２】
ある特定の態様において、本開示は、ＶＨ及びＶＬが、
それぞれ、配列番号１及び２、
配列番号３及び４、
配列番号５及び６、
配列番号７及び８、
配列番号９及び１０、
配列番号１１及び１２、
配列番号１３及び１４、
配列番号１５及び１６、
配列番号１７及び１８、
配列番号１９及び２０、
配列番号２１及び２２、
配列番号２３及び２４、
配列番号２５及び２６、
配列番号２７及び２８、
配列番号２９及び３０、
配列番号３１及び３２、または
配列番号７１及び７２
のアミノ酸配列を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分に関する。
【００２３】
本開示のいくつかの実施形態において、単離された抗体は、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４）である。本抗体は、配列番号３３のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域、及び／または配列番号３４もしくは３５のアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域を含み得る。これらの実施形態のうちのいくつかにおいて、重鎖Ｃ末端リジンは不在である。
【００２４】
ある特定の態様において、本開示は、ｈＩＬ−２に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分に関し、本抗体は、上述の抗体のうちのいずれかと同じエピトープに結合するか、またはＩＬ−２Ｒα及びＩＬ−２Ｒβへの結合について上述の抗体のうちのいずれかと競合する。
【００２５】
ある特定の態様において、本開示は、ＶＨ及びＶＬアミノ酸配列が、それぞれ
配列番号１及び２、
配列番号３及び４、
配列番号５及び６、
配列番号７及び８、
配列番号９及び１０、
配列番号１１及び１２、
配列番号１３及び１４、
配列番号１５及び１６、
配列番号１７及び１８、
配列番号１９及び２０、
配列番号２１及び２２、
配列番号２３及び２４、
配列番号２５及び２６、
配列番号２７及び２８、
配列番号２９及び３０、または
配列番号３１及び３２
のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９５％、９８％、または９９％）同一である、抗体または抗原結合部分に関する。
【００２６】
本開示の上述の実施形態のうちのいくつかにおいて、本抗体は、ヒト抗体である。
【００２７】
本開示はまた、本開示の抗体または抗原結合部分の重鎖、軽鎖、または両方をコードする単離された核酸も提供する。ある特定の態様において、単離された核酸は、ａ）配列番号３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、もしくは６６のヌクレオチド配列、ｂ）配列番号３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、もしくは６７のヌクレオチド配列、またはｃ）ａ）及びｂ）の両方を含む。例えば、単離された核酸は、
配列番号３６及び３７、
配列番号３８及び３９、
配列番号４０及び４１、
配列番号４２及び４３、
配列番号４４及び４５、
配列番号４６及び４７、
配列番号４８及び４９、
配列番号５０及び５１、
配列番号５２及び５３、
配列番号５４及び５５、
配列番号５６及び５７、
配列番号５８及び５９、
配列番号６０及び６１、
配列番号６２及び６３、
配列番号６４及び６５、または
配列番号６６及び６７
のヌクレオチド配列を含み得る。
【００２８】
ある特定の態様において、本開示は、上記の単離された核酸のうちの１つ以上を含むベクターに関する。他の態様において、本開示は、本開示の抗体または抗原結合部分の重鎖、軽鎖、または両方をコードする単離された核酸またはベクターを含む宿主細胞（例えば、ＮＳ０細胞及びＣＨＯ細胞などの哺乳類細胞）を提供する。本開示はまた、ａ）宿主細胞を、抗体または抗原結合部分が発現されるのを可能にする条件下で培養することであって、この宿主細胞は、該抗体または抗原結合部分の重鎖及び軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含む、培養することと、ｂ）該抗体または抗原結合部分を培養物から単離することとを含む、ｈＩＬ−２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分を生産する方法も提供する。
【００２９】
ある特定の態様において、本開示は、本開示の抗体または抗原結合部分と、薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む、薬学的組成物に関する。
【００３０】
ある特定の態様において、本開示は、炎症性病態の治療または免疫抑制の誘発を必要とするヒト対象に、有効量の本開示の抗体もしくは抗原結合部分または本開示の薬学的組成物を投与することを含む、該対象において自己免疫疾患などの炎症性病態を治療するためまたは免疫抑制を誘発させるための方法に関する。いくつかの実施形態において、本抗体は、ＩＬ−２と複合して投与される。関連する態様において、本開示は、自己免疫疾患などの炎症性病態を有するまたは免疫抑制を必要とするヒト対象の治療において使用するための、本開示の抗体もしくは抗原結合部分または本開示の薬学的組成物を提供し、本抗体または部分は任意選択で、ＩＬ−２と複合して投与され；かつまた、自己免疫疾患などの炎症性病態を治療するためまたは免疫抑制を誘発させるための医薬品の製造における、本開示の抗体または抗原結合部分の使用を提供し、本抗体または部分は任意選択で、ＩＬ−２と複合して投与される。
【００３１】
本組成物（本明細書に記載される抗体または抗体／ＩＬ−２複合体を含むがこれらに限定されない）及び方法で治療され得る病態には、乾癬及び皮膚炎（例えば、アトピー性皮膚炎）を含む炎症性皮膚疾患、皮膚筋炎、全身性強皮症及び硬化症、炎症性腸疾患（クローン病及び潰瘍性大腸炎など）に関連する病態、大腸炎、胃炎、呼吸窮迫症候群（成人呼吸窮迫症候群及びＡＲＤＳを含む）、皮膚炎、髄膜炎、脳炎、ブドウ膜炎、糸球体腎炎、湿疹及び喘息などのアレルギー病態ならびにＴ細胞の浸潤及び慢性炎症性応答を伴う他の病態、アテローム性動脈硬化症、白血球粘着不全症、関節リウマチ、全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）、真性糖尿病（例えば、Ｉ型真性糖尿病）、多発性硬化症、レイノー症候群、自己免疫性甲状線炎、アレルギー性脳脊髄炎、シェーグレン症候群；若年発症性糖尿病；ならびに結核、サルコイドーシス、多発性筋炎、肉芽腫症及び血管炎において典型的に見られるサイトカイン及びＴリンパ球によって媒介される急性及び遅発性過敏症に関連する免疫応答、ウェゲナー病、悪性貧血（アジソン病）；白血球の漏出を伴う疾患、中枢神経系（ＣＮＳ）炎症性障害、多臓器損傷症候群、溶血性貧血（クリオグロブリン血症（ｃｒｙｏｇｌｏｂｉｎｅｍｉａ）またはクームス試験陽性貧血を含むがこれらに限定されない）、重症筋無力症；抗原−抗体複合体媒介性疾患；抗糸球体基底膜疾患、抗リン脂質症候群、アレルギー性神経炎；グレーブス病、ランバート・イートン筋無力症候群、水疱性類天疱瘡、天疱瘡；自己免疫性多腺性内分泌障害、白斑、ライター病、スティフ・マン症候群、ベーチェット病、巨細胞性動脈炎；免疫複合体腎炎、ＩｇＡ腎症、ＩｇＭ多発性神経炎、免疫性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）または自己免疫性血小板減少症及び自己免疫性溶血性疾患、橋本甲状腺炎、自己免疫性肝炎、自己免疫性血友病；自己免疫性リンパ球増殖性症候群（ＡＬＰＳ）；自己免疫性ブドウ膜網膜炎、ギランバレー症候群、グッドパスチャー症候群；混合性結合組織疾患、自己免疫関連性不妊症、結節性多発性動脈炎、円形脱毛症、特発性粘液水腫、移植片対宿主病；ならびに筋ジストロフィー（デュシェンヌ型、ベッカー型、筋強直性、肢帯型、顔面肩甲上腕型、先天性、眼咽頭型、遠位型、及びエメリ・ドレフュス型）が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、本組成物（本明細書に記載される抗体または抗体／ＩＬ−２複合体を含むがこれらに限定されない）及び方法で治療され得る病態は、真性糖尿病（例えば、Ｉ型真性糖尿病）である。いくつかの実施形態において、本組成物（本明細書に記載される抗体または抗体／ＩＬ−２複合体を含むがこれらに限定されない）及び方法で治療され得る病態は、Ｉ型真性糖尿病である。いくつかの実施形態において、本組成物（本明細書に記載される抗体または抗体／ＩＬ−２複合体を含むがこれらに限定されない）及び方法で治療され得る病態は、若年発症性糖尿病である。
【００３２】
本開示の他の特徴及び利点は、次の詳細な説明から、及び例となる実施形態から明らかとなろう。
【図面の簡単な説明】
【００３３】
本特許または出願ファイルは、カラーで作成された少なくとも１つの図面を含む。カラー図面（複数可）を含む本特許または特許出願の写しは、要請及び必要費用の支払いに応じて特許庁により提供される。
【００３４】
【図１】抗体／ＩＬ−２親和性及びＩＬ−２Ｒα及びＩＬ−２Ｒβ結合を図示する。応答は、ＩＬ−２と複合した２つの代表的クローンｄ１Ｃ７及び１６Ｃ３の、それぞれＩＬ−２Ｒα及びＩＬ−２Ｒβへの結合のパーセンテージとしての、６０秒後のＩＬ−２α及びＩＬ−２Ｒβへの結合として報告される。
【図２】抗体／ＩＬ−２親和性及びＩＬ−２Ｒα及びＩＬ−２Ｒβ結合を図示する。親及び親和性成熟クローンの両方が、クローンｄ１Ｃ７／ＩＬ−２複合体と比較して、ＩＬ−２Ｒβへの本抗体／ＩＬ−２複合体結合の完全な阻害、及びＩＬ−２Ｒαへの結合の低減を示した。
【図３】ＩＬ−２：抗ＩＬ−２  ｍＡｂ処理後のＴｒｅｇの表現型を図示する。Ｔｒｅｇ集団を、ｈＣＤ４５＋ＣＤ３＋ＣＤ４＋Ｈｅｌｉｏｓ＋ＦｏｘＰ３＋細胞でゲーティングした。
【図４】図４Ａ〜Ｃは、ｈＩＬ−２と複合した１６Ｃ３（２５μｇ）及びＦ５．１．１１．０２（１、５、及び２５μｇ）が、Ｔｒｅｇ／ＣＤ４、Ｔｒｅｇ／ＣＤ８及びＴｒｅｇ／ＮＫ細胞比率を増加させたことを図示する。図４Ｄ〜Ｆは、ｈＩＬ−２と複合した１６Ｃ３（２５μｇ）及びＦ５．１．１１．０２（１μｇ、５μｇ、及び２５μｇ）が、Ｔｒｅｇ／ＣＤ４、Ｔｒｅｇ／ＣＤ８及びＴｒｅｇ／ＮＫ細胞比率を増加させたことを図示する。
【図５】図５Ａ〜Ｃは、ｈＩＬ−２と複合した１６Ｃ３（２５μｇ）及びＦ５．１．１１．０２（１、５、及び２５μｇ）が、脾臓におけるＣＤ４＋、ＣＤ８＋細胞及びＴｒｅｇの総数を増加させたことを図示する。図５Ｄ〜Ｆは、ｈＩＬ−２と複合した１６Ｃ３（２５μｇ）及びＦ５．１．１１．０２（１μｇ、５μｇ、及び２５μｇ）が、脾臓におけるＣＤ４＋、ＣＤ８＋細胞及びＴｒｅｇの総数を増加させたことを図示する。
【図６】図６Ａ〜Ｃは、抗体処理後のＴｒｅｇ上でのＣＤ２５、Ｉｃｏｓ及びＦｏｘＰ３の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を図示する。
【図７】図７Ａ〜Ｖは、抗体処理後のＣＤ８＋エフェクターＴ細胞及びＴｒｅｇ細胞におけるｐＳＴＡＴ５シグナル伝達を図示する。曲線は、０．２ｎｇ／ｍＬ  ｈＩＬ−２、１０ｎｇ／ｍＬ  ｈＩＬ−２、または５００ｎｇ／ｍＬ  ｈＩＬ−２での処理を表す。
【図８】図８Ａ〜Ｆは、抗体処理後のＣＤ８＋エフェクターＴ細胞及びＴｒｅｇ細胞におけるｐＳＴＡＴ５シグナル伝達を図示する。曲線は、０．５ｎｇ／ｍＬ  ｈＩＬ−２、５ｎｇ／ｍＬ  ｈＩＬ−２、５０ｎｇ／ｍＬ  ｈＩＬ−２、または５００ｎｇ／ｍＬ  ｈＩＬ−２での処理を表す。
【図９】図９Ａ〜Ｄは、抗体処理後のＣＤ８＋／ＣＤ２５高Ｔ細胞、ＣＤ８＋／ＣＤ２５低Ｔ細胞及びＴｒｅｇ細胞におけるｐＳＴＡＴ５シグナル伝達を図示する。ｘ軸は、抗体ｎＭである。曲線は、０．８ｎｇ／ｍＬ  ｈＩＬ−２、２０ｎｇ／ｍＬ  ｈＩＬ−２、または５００ｎｇ／ｍＬ  ｈＩＬ−２での処理を表す。
【図１０】図１０Ａ及びＢは、様々な濃度のＩＬ−２でのＣＤ８＋／ＣＤ２５高Ｔ細胞、ＣＤ８＋／ＣＤ２５低Ｔ細胞及びＴｒｅｇ細胞におけるｐＳＴＡＴ５シグナル伝達を図示する。
【図１１】図１１Ａ〜Ｈは、抗体Ｆ５．１．９、Ｆ５．１．９．５、及びＦ５．１．１１．０４処理後のＣＤ８＋エフェクターＴ細胞及びＴｒｅｇ細胞におけるｐＳＴＡＴ５シグナル伝達を図示する。ｘ軸は、抗体ｎＭである。曲線は、０．８ｎｇ／ｍＬ  ｈＩＬ−２、２０ｎｇ／ｍＬ  ｈＩＬ−２、または５００ｎｇ／ｍＬ  ｈＩＬ−２での処理を表す。
【図１２】図１２Ａ及びＢは、マウス脾細胞のＰＭＡ／イオノマイシンによる体外刺激後のＩＬ−２の産生を図示する。
【図１３】図１３Ａ及びＢは、ｈＩＬ−２Ｔｇ、ＮＯＤ、またはＮＯＤ  ｍＩＬ−２＋／−マウスにおける活性化（ＣＤ４４＋ＣＤ６２Ｌ−）ＣＤ４＋またはＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージを図示する。
【図１４】ｈＩＬ−２  Ｔｇ、ＮＯＤ、またはＮＯＤ  ｍＩＬ−２＋／−マウス由来のＴｒｅｇ上でのＣＤ２５の細胞表面発現を図示する。
【図１５】７日目の脾臓の全体的な細胞充実度に対するＦ５．１．１１．０２：ＩＬ−２複合体の効果を図示する。
【図１６】図１６Ａ〜Ｉは、脾臓、ｐＬＮ及び膵臓におけるＴｒｅｇパーセンテージに対するＦ５．１．１１．０２：ＩＬ−２複合体の効果を図示する。
【図１７】図１７Ａ〜Ｆは、脾臓、ｐＬＮ及び膵臓におけるＴｒｅｇ／ＣＤ４及びＴｒｅｇ／ＣＤ８比率に対する、ｈＩＬ−２と複合したＦ５．１．１１．０２（２５μｇ）の効果を図示する。
【図１８】図１８Ａ〜Ｃは、脾臓、ｐＬＮ及び膵臓におけるＴｒｅｇでのＣＤ２５平均蛍光強度（ＭＦＩ）に対するＦ５．１．１１．０２：ＩＬ−２複合体（５μｇ及び２５μｇ  Ｆ５．１．１１．０２）の効果を図示する。
【図１９】図１９Ａ及びＢは、総脾細胞数に対する、ｈＩＬ−２と複合した２５μｇのＦ５．１．１１．０２の効果を図示する。
【図２０】図２０Ａ〜Ｆは、脾臓におけるＴｅｆｆ及びＴｒｅｇ総細胞数に対するＦ５．１．１１．０２抗体：ＩＬ−２複合体の効果を図示する。Ｔｒｅｇ集団を、ｈＣＤ４５＋ＣＤ３＋ＣＤ４＋Ｈｅｌｉｏｓ＋ＦｏｘＰ３＋細胞でゲーティングした。
【図２１】図２１Ａ〜Ｄは、脾臓におけるＴｒｅｇ／ＣＤ４及びＴｒｅｇ／ＣＤ８比率に対するＦ５．１．１１．０２抗体：ＩＬ−２複合体の効果を図示する。Ｔｒｅｇ集団を、ｈＣＤ４５＋ＣＤ３＋ＣＤ４＋Ｈｅｌｉｏｓ＋ＦｏｘＰ３＋細胞でゲーティングした。
【図２２】図２２Ａ〜Ｈは、Ｔｒｅｇの増殖に対するＦ５．１．１１．０２抗体：ＩＬ−２複合体処理の効果を図示する。
【図２３】図２３Ａ〜Ｈは、ＣＤ８  Ｔ細胞の増殖に対するＦ５．１．１１．０２抗体：ＩＬ−２複合体処理の効果を図示する。
【図２４】図２４Ａ及びＢは、Ｆ５．１．１１．０２抗体：ＩＬ−２複合体の両方の用量での処理が、アイソタイプ対照と比較して、脾臓におけるＴｒｅｇ上及びＣＤ８集団でのＣＤ２５平均蛍光強度（ＭＦＩ）の増加を誘発したことを図示する。
【図２５】図２５Ａ〜Ｄは、Ｔｒｅｇ及びＣＤ８細胞数に対するＦ５．１．１１．０２とＦ５．１．１１との間の効果の比較を図示する。
【図２６】図２６Ａ〜Ｃは、Ｔｒｅｇ／ＣＤ８比率に対するＦ５．１．１１．０２とＦ５．１．１１との間の効果の比較を図示する。
【図２７】図２７Ａ〜Ｈは、種々の用量でのＴｒｅｇ増殖に対する抗体の効果を図示する。
【図２８】図２８Ａ〜Ｈは、種々の用量でのＣＤ８細胞増殖に対する抗体の効果を図示する。
【図２９】図２９Ａ及びＢは、漸増濃度のＩＬ−２（Ａ）及びＩＬ−２／Ｆ５．１．１１  Ｆａｂ（Ｂ）へのＩＬ−２Ｒα結合についての平衡結合分析を図示する。
【図３０】軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ１及びＣＤＲ３ループ及び重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ループを介したＩＬ−２とのＦ５．１．１１  Ｆａｂ相互作用を図示する。
【図３１】Ｆ５．１．１１  Ｆａｂ及びＩＬ−２Ｒβの結合部位が重複していることを示す、ＩＬ−２−受容体四元複合体と重ね合わせたＦ５．１．１１  Ｆａｂ／ＩＬ−２複合体を図示する（左側パネル）。Ｆ５．１．１１  Ｆａｂに結合したときのＩＬ−２立体構造は、受容体結合ＩＬ−２と比べて、ＩＬ−２Ｒα結合部位のアロステリック調節をもたらす立体構造の変化を示す（右側パネル）。
【図３２】非ヒト霊長類交差反応性についての構造ベースのライブラリ設計を図示する。ヒト（配列番号２２４、ＮＣＢＩ受託番号ＮＰ＿０００５７７．２）及びカニクイザル（配列番号２２５、参照ゲノムＮＣＢＩ受託番号ＮＣ＿０２２２７６．１から予測）ＩＬ−２アミノ酸配列のアライメントは、ＩＬ−２可変ループがＦ５．１．１１  Ｆａｂ結合界面に対応することを示す。
【図３３】図３３Ａ及びＢは、脾細胞及びｈＣＤ４５＋細胞充実度に対するＦ５．１．１１．０２及びＦ５．１．１１との間の効果の比較を図示する。
【図３４】図３４Ａ及びＢは、Ｔｒｅｇ及びＣＤ８細胞のＣＤ２５発現に対するＦ５．１．１１．０２とＦ５．１．１１との間の効果の比較を図示する。
【図３５】図３５Ａ及びＢは、処理から５日後のＴｒｅｇ、ＣＤ４、及びＣＤ８総細胞数に対するＦ５．１．１１．０２抗体：ＩＬ−２複合体効果を図示する。
【図３６】図３６Ａ及びＢは、処理から５日後のＴｒｅｇ／ＣＤ４及びＴｒｅｇ／ＣＤ８細胞比率に対するＦ５．１．１１．０２抗体：ＩＬ−２複合体効果を図示する。
【図３７】図３７Ａ及びＢは、アイソタイプ対照と比較した、Ｔｒｅｇ及びＣＤ８集団のＣＤ２５平均蛍光強度（ＭＦＩ）に対するＦ５．１．１１．０２抗体：ＩＬ−２複合体での処理の効果を図示する。
【図３８】ＴｒｅｇでのＦｏｘＰ３平均蛍光強度（ＭＦＩ）に対するＦ５．１．１１．０２抗体：ＩＬ−２複合体での処理の効果を図示する。
【図３９】図３９Ａ及びＢは、ＩＬ−２上の異なるエピトープに結合し、それによって、異なる受容体エピトープ／結合ドメインへの結合を阻害する抗体、すなわちＩＬ−２Ｒα遮断剤（１６Ｃ３．４）、ＩＬ２Ｒβ遮断剤（ｄ１Ｃ７）、及びＩＬ２のＩＬ−２Ｒαへの結合もまた低減したＩＬ２Ｒβ遮断剤（Ｆ５．１．１１．０２）を使用した、分化Ｔｒｅｇ増殖の促進を図示する。１６Ｃ３．４対ｄ１ｃ７または１６Ｃ３．４対Ｆ５．１．１１．０２統計的一元配置分散分析。
【図４０】アイソタイプ対照と比較した、Ｔｒｅｇ及びＣＤ８集団でのＣＤ２５平均蛍光強度（ＭＦＩ）に対する１６Ｃ３．４、ｄ１Ｃ７、及びＦ５．１．１１．０２での処理の効果を図示する。
【図４１】Ｆ５．１．１１．０２抗体：ＩＬ−２複合体による糖尿病寛解を図示する。
【図４２】脾臓におけるＴｒｅｇ数及び特性に対するＦ５．１．１１．０２抗体：ＩＬ−２複合体効果の効果を図示する。
【発明を実施するための形態】
【００３５】
開示の詳細な説明
本発明者らは、ｈＩＬ−２に特異的に結合し、ＩＬ−２Ｒα及びＩＬ−２ＲβへのｈＩＬ−２結合を低減する、新規で有利な抗ＩＬ−２抗体またはその抗原結合部分を発明した。これらの抗体及び部分は、非Ｔｒｅｇ細胞（エフェクターＣＤ８＋、非Ｔｒｅｇ  ＣＤ４＋及びＮＫ細胞を含む）の増殖を、それらがＴｒｅｇ細胞の増殖を阻害するよりも大きく阻害する；アイソタイプ対照抗体と比較してＴｒｅｇ増殖を増加させる；及び／または非Ｔｒｅｇ細胞に対してＴｒｅｇ細胞の比率を増加させるもしくはＴｒｅｇマーカーを維持することができる。本抗体はＩＬ−２ＲαへのｈＩＬ−２結合を低減するが、抑止はせず、かつＩＬ−２ＲβへのｈＩＬ−２結合を遮断するため、本抗体は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１５／０１１７９４（現在は国際公開第ＷＯ２０１５／１０９２１２号として２０１５年７月２３日に公開されている）に記載されるＩＬ−２Ｒα遮断抗体とは明確に異なる。
【００３６】
抗ＩＬ−２抗体またはその抗原結合部分は、ＩＬ−２活性によって引き起こされる及び／またはＩＬ−２活性に関連する疾患、障害または病態の予防、治療、及び／または回復において使用することができる。本明細書に開示される教示を提供された当業者には理解されるであろうが、かかる疾患、障害または病態には、とりわけ、１型糖尿病、自己免疫疾患、移植片対宿主病及びＴｒｅｇが炎症を媒介する他の免疫性疾患が含まれるが、これらに限定されない。
【００３７】
一般的技術
本明細書において別途定義されない限り、本開示に関連して使用される科学用語及び技術用語は、当業者によって一般的に理解される意味を有するものとする。さらに、文脈上他の解釈を要する場合を除き、単数形は複数形を含むものとし、複数形は単数形を含むものとする。一般に、本明細書に記載される細胞及び組織培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝学、ならびにタンパク質及び核酸の化学作用及びハイブリダイゼーションに関連して使用される用語、及びそれらの技法は、当該技術分野で周知かつ一般的に使用されるものである。
【００３８】
本開示の実施は、別途指定されない限り、分子生物学（組み換え技法を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学及び免疫学の従来の技法を用いることになり、それらは当業者の技能の範囲内にある。かかる技法は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，ｓｅｃｏｎｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９）Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ、Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ，ｅｄ．，１９８４）、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｎｏｔｅｂｏｏｋ（Ｊ．Ｅ．Ｃｅｌｌｉｓ，ｅｄ．，１９９８）Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，ｅｄ．，１９８７）、Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｊ．Ｐ．Ｍａｔｈｅｒ  ａｎｄ  Ｐ．Ｅ．Ｒｏｂｅｒｔｓ，１９９８）Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ（Ａ．Ｄｏｙｌｅ，Ｊ．Ｂ．Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ，ａｎｄ  Ｄ．Ｇ．Ｎｅｗｅｌｌ，ｅｄｓ．，１９９３−１９９８）Ｊ．Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｄ．Ｍ．Ｗｅｉｒ  ａｎｄ  Ｃ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，ｅｄｓ．）、Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ（Ｊ．Ｍ．Ｍｉｌｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ，ｅｄｓ．，１９８７）、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，１９８７）、ＰＣＲ：Ｔｈｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ，（Ｍｕｌｌｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９４）、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９１）、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ａｎｄ  Ｒｕｓｓｅｌｌ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，３ｒｄ．ｅｄ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ（２００１）、Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，ＮＹ（２００２）、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ  Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ（１９９８）、Ｃｏｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，ＮＹ（２００３）、Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  ��ｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，１９９９）、Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ（Ｃ．Ａ．Ｊａｎｅｗａｙ  ａｎｄ  Ｐ．Ｔｒａｖｅｒｓ，１９９７）、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｐ．Ｆｉｎｃｈ，１９９７）、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｄ．Ｃａｔｔｙ．，ｅｄ．，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，１９８８−１９８９）、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、ａ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐ．Ｓｈｅｐｈｅｒｄ  ａｎｄ  Ｃ．Ｄｅａｎ，ｅｄｓ．，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，２０００）、Ｕｓｉｎｇ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｍａｎｕａｌ（Ｅ．Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｄ．Ｌａｎｅ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，１９９９）、及びＴｈｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｍ．Ｚａｎｅｔｔｉ  ａｎｄ  Ｊ．Ｄ．Ｃａｐｒａ，ｅｄｓ．，Ｈａｒｗｏｏｄ  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，１９９５）などの文献において完全に説明される。
【００３９】
酵素反応及び精製技法は、製造業者の仕様に従って、当該技術分野で一般的に遂行されるように、または本明細書に記載されるように行われる。本明細書に記載される分析化学、生化学、免疫学、分子生物学、合成有機化学、ならびに医化学及び薬化学と関連して使用される命名法、ならびにそれらの実験手順及び技法は、当該技術分野で周知かつ一般的に使用されるものである。標準技術が、化学合成、化学分析、医薬品調製、製剤化、及び送達、ならびに患者の治療に使用される。
【００４０】
定義
次の用語は、別途指定されない限り、次の意味を有するように理解されるものとする。「単離された分子」（分子が、例えば、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、または抗体またはその部分である場合）という用語は、その誘導起源もしくは誘導源に基づいて、（１）その天然状態でそれに付随する天然に結合した構成成分に結合していない、（２）同じ種由来の他の分子を実質的に含まない、（３）異なる種由来の細胞によって発現される、または（４）天然に生じない、分子である。それ故、化学合成される、またはその天然起源の細胞とは異なる細胞系において発現される分子は、その天然に結合した構成成分から「単離される」とされる。分子はまた、当該技術分野で周知の精製技法を用いた単離によって、天然に結合した構成成分を実質的に含まないようにされ得る。分子純度または均質性は、当該技術分野で周知のいくつかの手段によってアッセイされ得る。例えば、ポリペプチド試料純度は、ポリアクリルアミドゲル電気泳動法、及び当該技術分野で周知の技法を用いたポリペプチドを可視化するためのゲルの染色を用いてアッセイされ得る。ある特定の目的では、より高い分解能が、ＨＰＬＣまたは精製に関して当該技術分野で周知の他の手段によって提供されてもよい。
【００４１】
本明細書で使用されるとき、「実質的に純粋」とは、目的の種が、優勢的に存在する種である（すなわち、モル濃度に基づいて、それが組成物中で任意の他の個々の種よりも豊富である）ことを意味し、いくつかの実施形態において、実質的に精製された画分は、目的の種（例えば、抗体または受容体を含めた糖タンパク質）が、存在するすべての高分子種の少なくとも約５０パーセント（モル濃度に基づいて）を構成する、組成物である。一般に、実質的に純粋な組成物は、組成物に存在するすべての高分子種の約８０パーセント超、いくつかの実施形態においては、約８５％、９０％、９５％、及び９９％超を構成する。いくつかの実施形態において、目的の種は、本質的に均質（混入種が従来の検出方法では組成物中で検出不可能である）になるまで精製され、その組成物は、単一の高分子種から本質的になる。ある特定の実施形態において、実質的に純粋な材料は、少なくとも５０％純粋（すなわち、混入物を含まない）、いくつかの実施形態においては、少なくとも９０％純粋、いくつかの実施形態においては、少なくとも９５％純粋、なおもいくつかの実施形態においては、少なくとも９８％純粋、そしていくつかの実施形態においては、少なくとも９９％純粋である。これらの量は、限定的であることを意図せず、列挙されるパーセンテージの間の増分が本開示の一部として具体的に想定される。
【００４２】
「抗体」とは、免疫グロブリン分子の可変ドメインに位置する少なくとも１つの抗原認識部位を介して、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、ポリペプチド等といった標的に特異的に結合することが可能な免疫グロブリン分子である。本明細書で使用されるとき、この用語は、無傷のポリクローナルまたはモノクローナル抗体だけでなく、別途明記されない限り、特異的結合について無傷の抗体と競合するその任意の抗原結合部分、抗原結合部分を含む融合タンパク質、及び抗原認識部位を含む免疫グロブリン分子の任意の他の修飾構成もまた包含する。抗原結合部分には、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｖ、ドメイン抗体（ｄＡｂ、例えば、サメ及びラクダ科抗体）、相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む部分、１本鎖可変断片抗体（ｓｃＦｖ）、マキシボディ、ミニボディ、イントラボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ｖ−ＮＡＲ及びビス−ｓｃＦｖ、ならびにポリペプチドに特異的抗原結合を付与するのに十分である免疫グロブリンの少なくとも一部分を含有するポリペプチドが含まれる。その重鎖の定常領域の抗体のアミノ酸配列に応じて、免疫グロブリンは、異なるクラスに割り当てられ得る。５つの主要な免疫グロブリンのクラス（すなわち、アイソタイプ）ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭが存在し、これらのうちのいくつかは、サブクラス（サブタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２にさらに分類され得る。これらの異なる免役グロブリンのクラスに対応する重鎖定常領域は、それぞれ、アルファ、デルタ、イプシロン、及びミューと呼ばれる。異なる免疫グロブリンのクラスのサブユニット構造及び三次元構成は周知のことである。
【００４３】
本明細書で交換可能に使用される、抗体の「抗原結合部分」または「抗原結合断片」（または簡略に「抗体部分」）という用語は、抗原（例えば、ＩＬ−２）に特異的に結合する能力を保持する抗体の１つ以上の部分を指す。抗体の抗原結合機能は、完全長抗体の一部分によっても果たされ得ることが示されてきた。抗体の「抗原結合部分」という用語に包含される結合部分の例としては、（ｉ）Ｆａｂ部分、すなわち、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１ドメインからなる一価の部分、（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２部分、すなわち、ヒンジ領域においてジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ部分を含む二価の部分、（ｉｉｉ）ＶＨ及びＣＨ１ドメインからなるＦｄ部分、（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬ及びＶＨドメインからなるＦｖ部分、（ｖ）ＶＨドメインからなるｄＡｂ部分（Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４−５４６）、ならびに（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。ジスルフィド連結したＦｖ（ｄｓＦｖ）、ならびに抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体及びイントラボディが挙げられる。さらに、Ｆｖ部分の２つのドメインＶＬ及びＶＨは、別個の遺伝子によってコードされるが、それらは、組換え法を使用して、ＶＬ及びＶＨ領域が対合して一価の分子（１本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる；例えば、Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６  （１９８８）  ａｎｄ  Ｈｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３  （１９８８）を参照されたい）を形成する１本のタンパク質鎖としてそれらを作製することを可能にする合成リンカーによって、連結することができる。かかる１本鎖抗体もまた、抗体の「抗原結合部分」という用語に包含されることを意図する。ダイアボディなどの他の形態の１本鎖抗体もまた包含される。ダイアボディは、ＶＨ及びＶＬドメインが１本のポリペプチド鎖上で発現されるが、ただし、同じ鎖上の２つのドメイン間の対合を可能にするには短すぎるリンカーを使用し、それによって、ドメインが別の鎖の相補性ドメインと対合するよう強制して２つの抗原結合部位を作出する、二価の二重特異性抗体である（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８（１９９３）、Ｐｏｌｊａｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ２：１１２１−１１２３を参照されたい）。
【００４４】
抗体の「可変ドメイン」とは、単独であれ組み合わせであれ、抗体軽鎖（ＶＬ）の可変ドメインまたは抗体重鎖（ＶＨ）の可変ドメインを指す。当該技術分野で既知であるように、重鎖及び軽鎖の可変ドメインは各々、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）、別名、超可変領域によって接続された４つのフレームワーク領域（ＦＲ）からなり、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する。対象となる可変ドメインの変異型、特に、ＣＤＲ（すなわち、フレームワーク領域内）の外側にあるアミノ酸残基における置換を有する変異型が所望される場合、適切なアミノ酸置換、いくつかの実施形態においては保存的アミノ酸置換が、対象となる可変ドメインを、対象となる可変ドメインと同じ標準的クラスのＣＤＲ１及びＣＤＲ２配列を含有する他の抗体の可変ドメインと比較することによって特定され得る（例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６（４）：９０１−９１７，１９８７を参照されたい）。
【００４５】
ある特定の実施形態において、ＣＤＲの決定的な境界設定、及び抗体の結合部位を含む残基の特定には、抗体の構造を解析すること及び／または抗体−リガンド複合体の構造を解析することが伴う。ある特定の実施形態において、それは、Ｘ線結晶解析などの当業者に既知の多様な技法のうちのいずれかによって遂行され得る。ある特定の実施形態において、種々の解析方法を用いて、適切なＣＤＲを特定またはそれに近似させてもよい。ある特定の実施形態において、種々の解析方法を用いて、適切なＣＤＲを特定またはそれに近似させてもよい。かかる方法の例としては、Ｋａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、ＡｂＭ定義、コンタクト定義、立体構造的定義及びＩＭＧＴ定義が挙げられるが、これらに限定されない。
【００４６】
Ｋａｂａｔ定義は、抗体における残基を番号付けするための標準であり、ＣＤＲ領域を特定するために典型的に使用される。例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎ  ＆  Ｗｕ，２０００，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，２８：２１４−８を参照されたい。Ｃｈｏｔｈｉａ定義は、Ｋａｂａｔ定義と同様であるが、Ｃｈｏｔｈｉａ定義は、ある特定の構造的ループ領域の位置を考慮に入れる。例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１−１７、Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｎａｔｕｒｅ，３４２：８７７−８３を参照されたい。ＡｂＭ定義は、抗体構造をモデル化するＯｘｆｏｒｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｇｒｏｕｐによって作成された統合コンピュータプログラム一式を使用する。例えば、Ｍａｒｔｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ（ＵＳＡ），８６：９２６８−９２７２；“ＡｂＭ（商標），Ａ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｐｒｏｇｒａｍ  ｆｏｒ  Ｍｏｄｅｌｉｎｇ  Ｖａｒｉａｂｌｅ  Ｒｅｇｉｏｎｓ  ｏｆ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，”  Ｏｘｆｏｒｄ，ＵＫ；Ｏｘｆｏｒｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ，Ｌｔｄ．を参照されたい。ＡｂＭ定義は、知識データベース、及びＳａｍｕｄｒａｌａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，“Ａｂ  Ｉｎｉｔｉｏ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ  Ｕｓｉｎｇ  ａ  Ｃｏｍｂｉｎｅｄ  Ｈｉｅｒａｒｃｈｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，”  ｉｎ  ＰＲＯＴＥＩＮＳ，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｕｐｐｌ．，３：１９４−１９８によって記載されるものなどのａｂ  ｉｎｉｔｉｏ法の組み合わせを用いて、一次配列からの抗体の三次構造をモデル化する。コンタクト定義は、利用可能な複合体結晶構造の解析に基づく。例えば、ＭａｃＣａｌｌｕｍ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，５：７３２−４５を参照されたい。別の手法において、本明細書でＣＤＲの「立体構造的定義」と称される、ＣＤＲの位置は、抗原結合にエンタルピー寄与をもたらす残基として特定され得る。例えば、Ｍａｋａｂｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００８，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２８３：１１５６−１１６６を参照されたい。依然として他のＣＤＲ境界定義は、上記の手法のうちの１つに厳密に従わない可能性があるが、それでもＫａｂａｔ  ＣＤＲの少なくとも一部分と重複するものの、それらは、特定の残基または残基の群が抗原結合に大きく影響しないという予測または実験結果に照らして短縮または延長され得る。本明細書で使用されるとき、ＣＤＲは、手法の組み合わせを含めて、当該技術分野で既知の任意の手法によって定義されるＣＤＲを指してもよい。本明細書で使用される方法は、これらの手法のうちのいずれにより定義されるＣＤＲを利用してもよい。１つよりも多くのＣＤＲを含む任意の所与の実施形態に関して、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、拡張型、ＡｂＭ、コンタクト、及び／または立体構造的定義のうちのいずれに従って定義されてもよい。ある特定の実施形態において、拡張型ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａ法によって特定されるアミノ酸残基のすべてを指す。
【００４７】
残基に特異的に結合した抗体または抗原に関して本明細書で使用される「接触残基」は、同族抗体／抗原上に存在するアミノ酸残基の重原子から４Å以内にある少なくとも１個の重原子（すなわち、水素でない）を含む、抗体／抗原上に存在するアミノ酸残基を指す。
【００４８】
当該技術分野で既知であるように、抗体の「定常領域」は、単独であれ組み合わせであれ、抗体軽鎖の定常領域または抗体重鎖の定常領域を指す。
【００４９】
本明細書で使用されるとき、「モノクローナル抗体」は、実質的に同種の抗体の集団から得られた、すなわち、その集団を構成する個々の抗体が、微量で存在し得る潜在的な自然発生変異を除いて同一である、抗体を指す。モノクローナル抗体は、単一の抗原決定部位に対して指向されるため、高度に特異的である。さらに、異なる決定基（エピトープ）に対して指向される異なる抗体を典型的に含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対して指向される。「モノクローナル」という修飾語は、実質的に同種の抗体の集団から得られるという抗体の特徴を示すものであり、いずれかの特定の方法による抗体の産生を必要とするものとして解釈されないものとする。例えば、本開示に従って使用されるモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，１９７５，Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５によって最初に記載されたハイブリドーマ法によって作製されてもよく、または米国特許第４，８１６，５６７号に記載されるような組換えＤＮＡ法によって作製されてもよい。モノクローナル抗体はまた、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５４に記載される技法を用いて生成されたファージライブラリから単離されてもよい。本明細書で使用されるとき、「ヒト化」抗体は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含有する、非ヒト（例えば、マウス）抗体、キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、またはその部分（Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２または抗体の他の抗原結合部分配列（ｓｕｂｓｅｑｕｅｎｃｅ）など）の形態を指す。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、レシピエントのＣＤＲ由来の残基が、所望の特異性、親和性、及び能力を有するマウス、ラット、またはウサギなどの非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲ由来の残基に置き換えられる、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。ヒト化抗体は、レシピエント抗体にも移入ＣＤＲまたはフレームワーク配列にも見られないが、抗体性能をさらに改良及び最適化するために含められる、残基を含み得る。
【００５０】
「ヒト抗体」とは、ヒトによって産生された、及び／または本明細書に開示されるヒト抗体を作製するための技法のうちのいずれかを利用して作製された抗体のアミノ酸配列に対応する、アミノ酸配列を保有するものである。このヒト抗体の定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を特定的に除外する。
【００５１】
「キメラ抗体」という用語は、可変ドメイン配列が１つの種に由来し、定常領域配列が別の種に由来する抗体、例えば、可変ドメイン配列がマウス抗体に由来し、定常領域配列がヒト抗体に由来する、またはその逆である抗体を指すことを意図する。この用語はまた、１つの種に属する１つの個体（例えば、第１のマウス）由来のＶ領域、及び同じ種に属する別の個体（例えば、第２のマウス）由来の定常領域を含む抗体を包含する。
【００５２】
「抗原（Ａｇ）」という用語は、そのＡｇを認識する抗体（Ａｂ）を産生させるため、または発現ライブラリ（例えば、とりわけファージ、酵母またはリボソームディスプレイライブラリ）をスクリーニングするための、免疫適格性の脊椎動物の免役化に使用される分子実体を指す。本明細書において、Ａｇはより広義に呼ばれ、一般に、そのＡｂによって特異的に認識される標的分子を含むことを意図し、それ故、Ａｂを産生させるための免疫化プロセスにおいてまたはＡｂを選択するためのライブラリスクリーニングにおいて使用される分子の部分または模倣体を含む。それ故、ＩＬ−２に結合する本開示の抗体に関して、その単量体及び多量体、例えば、二量体、三量体等、ならびにＩＬ−２の切断変異型及び他の変異型を含む、哺乳類種由来の完全長ＩＬ−２（例えば、ヒト、サル、マウス及びラットＩＬ−２）が、抗原と称される。
【００５３】
一般に、「エピトープ」という用語は、抗体が特異的に結合する抗原のエリアまたは領域、すなわち、抗体と物理的に接触するエリアまたは領域を指す。それ故、「エピトープ」という用語は、ある分子のうち、抗体の抗原結合領域のうちの１つ以上において抗体によって認識され、抗体が結合することが可能な部分を指す。典型的には、エピトープは、「抗体、またはその抗原結合部分」（Ａｂ）と、その対応する抗原との間の分子間相互作用の関連において定義される。エピトープはしばしば、アミノ酸または糖側鎖などの分子の表面群化からなり、特異的な３次元構造特性ならびに特異的な電荷特性を有し得る。いくつかの実施形態において、エピトープは、タンパク質エピトープであり得る。タンパク質エピトープは、線形または立体構造的であり得る。線形エピトープにおいて、タンパク質と相互作用分子（抗体など）との間の相互作用点のすべては、タンパク質の一次アミノ酸配列に沿って線形で生じる。「非線形エピトープ」または「立体構造的エピトープ」は、抗原決定タンパク質内に、そのエピトープに特異的な抗体が結合する非連続ポリペプチド（またはアミノ酸）を含む。本明細書で使用される「抗原決定エピトープ」という用語は、当該技術分野で周知の任意の方法、例えば、従来のイムノアッセイによって決定される、抗体が特異的に結合し得る抗原の一部分として定義される。代替的に、発見プロセス中に、抗体の生成及び特徴付けが、望ましいエピトープについての情報を明確化し得る。この情報から、次いで、同じエピトープへの結合について抗体を競合的にスクリーニングすることが可能である。これを達成するための手法は、競合及び交差競合研究を実施して、ＩＬ−２への結合について互いに競合または交差競合する抗体を見出すことであり、例えば、抗体は、その抗原への結合について競合する。
【００５４】
本明細書で使用されるとき、「野生型アミノ酸」、「野生型ＩｇＧ」、「野生型抗体」、または「野生型ｍＡｂ」という用語は、ある特定の集団（例えば、ヒト、マウス、ラット、細胞等）内で自然に生じるアミノまたは核酸の配列を指す。
【００５５】
本明細書の別の箇所で概説されるように、抗体分子のある特定の位置は、改変され得る。本明細書で使用される「位置」とは、タンパク質の配列における場所を意味する。位置は、順次に、または確立されたフォーマットに従って番号付けされてもよく、例えばＥＵインデックス及びＫａｂａｔインデックスを使用して、抗体のアミノ酸残基を番号付けすることができる。例えば、２９７位は、ヒト抗体ＩｇＧ１における位置である。対応する位置は、一般的には他の親配列とのアライメントによって、上記に概説されるように決定される。
【００５６】
本明細書で使用される「残基」とは、タンパク質及びその関連するアミノ酸同一性における位置を意味する。例えば、アスパラギン２９７（Ａｓｎ２９７とも称される、Ｎ２９７とも称される）は、ヒト抗体ＩｇＧ１における残基である。
【００５７】
「Ｔ制御性細胞」または「Ｔｒｅｇ」という用語は、当業者に既知の機能または生物学的マーカーによって特徴付けられ得るＴ細胞の一種を指す（Ｓｃｈｍｅｔｔｅｒｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＦＡＳＥＢ  Ｖｏｌ．２６（２０１２）を参照されたい）。ある特定の実施形態において、Ｔｒｅｇ細胞は、次のマーカーのうちの１つ以上を発現する。ＴＣＲ／ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ２５、及びＦＯＸＰ３遺伝子座の必要不可欠なゲノム要素の脱メチル化に基づく安定化ＦＯＸＰ３。
【００５８】
「Ｔｒｅｇスペアリング抗体」という用語は、ＩＬ−２に結合し、Ｔｒｅｇ：ＣＤ８＋細胞の比をＴｒｅｇ細胞が優勢である方に検出可能にシフトする抗体を指す。いくつかの実施形態において、Ｔｒｅｇスペアリング抗体は、ＣＤ８＋細胞の増殖を、それがＴｒｅｇの増殖を阻害するよりも高い程度に阻害する。いくつかの実施形態において、Ｔｒｅｇスペアリング抗体は、Ｔｒｅｇ：ＣＤ８＋細胞比を少なくとも２倍増加させる。
【００５９】
当該技術分野で既知であるように、本明細書で交換可能に使用される「ポリヌクレオチド」、または「核酸」は、任意の長さのヌクレオチドの鎖を指し、ＤＮＡ及びＲＮＡを含む。ヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、修飾ヌクレオチドまたは塩基、及び／もしくはそれらの類似体、またはＤＮＡもしくはＲＮＡポリメラーゼによって鎖に組み込まれ得る任意の基質であり得る。ポリヌクレオチドは、メチル化ヌクレオチド及びそれらの類似体などの修飾ヌクレオチドを含み得る。存在する場合、ヌクレオチド構造に対する修飾は、鎖の組織化の前または後に付与されてよい。ヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチド構成要素によって分断されてもよい。ポリヌクレオチドは、例えば標識構成要素とのコンジュゲーションによって、重合後にさらに修飾されてもよい。他の種類の修飾には、例えば、「キャップ」、類似体による自然発生ヌクレオチドのうちの１つ以上の置換、例えば、非荷電の結合を有するもの（例えば、ホスホン酸メチル、ホスホトリエステル、ホスホアミダート、カルバマート等）及び荷電の結合を有するもの（例えば、ホスホロチオアート、ホスホロジチオアート等）などのヌクレオチド間修飾、例えば、タンパク質（例えば、ヌクレアーゼ、毒素、抗体、シグナルペプチド、ポリ−Ｌ−リジン等）などのペンダント部分を含有するもの、インターカレーター（例えば、アクリジン、ソラレン等）を有するもの、キレート剤（例えば、金属、放射性金属、ボロン、酸化的金属等）を含有するもの、アルキル化剤を含有するもの、修飾結合（例えば、アルファ芳香族核酸等）を有するもの、ならびにポリヌクレオチド（複数可）の未修飾形態が含まれる。さらに、通常は糖に存在するヒドロキシル基のうちのいずれかが、例えば、ホスホン酸基、リン酸基によって置き換えられても、標準的な保護基によって保護されても、もしくは追加のヌクレオチドへの追加の結合を作製するために活性化されてもよく、または固体支持体にコンジュゲートされてもよい。５’及び３’末端ＯＨは、リン酸化するか、またはアミンもしくは１〜２０個の炭素原子の有機キャッピング基部分で置換することができる。他のヒドロキシルがまた、標準的な保護基に誘導体化されてもよい。ポリヌクレオチドは、当該技術分野で一般に既知のリボースまたはデオキシリボース糖の類似形態も含有し得、これには例えば、２’−Ｏ−メチル−、２’−Ｏ−アリル、２’−フルオロ−または２’−アジド−リボース、炭素環式糖類似体、アルファ−またはベータ−芳香族糖、エピマー糖、例えば、アラビノース、キシロースまたはリキソース、ピラノース糖、フラノース糖、セドヘプツロース、非環式類似体及び脱塩基ヌクレオシド類似体、例えば、メチルリボシドが含まれる。１つ以上のホスホジエステル結合が、代替的な結合基によって置き換えられてもよい。これらの代替的な結合基には、ホスファートが、Ｐ（Ｏ）Ｓ（「チオアート」）、Ｐ（Ｓ）Ｓ（「ジチオアート」）、（Ｏ）ＮＲ２（「アミダート」）、Ｐ（Ｏ）Ｒ、Ｐ（Ｏ）ＯＲ’、ＣＯまたはＣＨ２（「ホルムアセタール」）（式中、ＲまたはＲ’は、独立してＨであるかまたは任意選択で、エーテル（−Ｏ−）結合を含有する置換もしくは非置換アルキル（１〜２０Ｃ）、アリール、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニルまたはアラルジル（ａｒａｌｄｙｌ）である）によって置き換えられる実施形態が含まれるが、これらに限定されない。ポリヌクレオチドにおけるすべての結合が同一である必要はない。先の説明は、ＲＮＡ及びＤＮＡを含めて、本明細書で言及されるすべてのポリヌクレオチドに当てはまる。
【００６０】
エピトープに「優先的に結合する」または「特異的に結合する」（本明細書で交換可能に使用される）抗体とは、当該技術分野で十分に理解されている用語であり、かかる特異的または優先的結合を決定する方法もまた、当該技術分野で周知のことである。分子は、特定の細胞または物質と、それが代替的な細胞または物質と反応するまたは会合するよりもより頻繁に、より迅速に、より長い持続時間でかつ／またはより大きな親和性で、反応するまたは会合する場合、「特異的結合」または「優先的結合」を示すといわれる。抗体は、標的に、それが他の物質に結合するよりもより大きな親和性、結合活性で、より迅速に、かつ／またはより長い持続時間で結合する場合、「特異的に結合する」または「優先的に結合する」。また、抗体は、試料中の標的に、それが試料中に存在する他の物質に結合するよりもより大きな親和性、結合活性で、より迅速に、かつ／またはより長い持続時間で結合する場合、その標的に「特異的に結合する」または「優先的に結合する」。例えば、ＩＬ−２エピトープに特異的にまたは優先的に結合する抗体は、このエピトープに、それが他のＩＬ−２エピトープまたは非ＩＬ−２エピトープに結合するよりもより大きな親和性、結合活性で、より迅速に、かつ／またはより長い持続時間で結合する抗体である。また、この定義を読むことにより、例えば、第１の標的に特異的にまたは優先的に結合する抗体（または部分もしくはエピトープ）は、第２の標的に特異的にまたは優先的に結合することもしないこともあることが理解される。したがって、「特異的結合」または「優先的結合」は、必ずしも排他的結合を必要とするわけではない（しかしそれを含み得る）。
【００６１】
多様なアッセイフォーマットを用いて、目的とする分子に特異的に結合する抗体またはペプチドを選択してもよい。例えば、抗原もしくは受容体と特異的に反応する抗体、または同種リガンドもしくは結合パートナーと特異的に結合するそのリガンド結合部分を同定するために使用され得る、多くのアッセイの中でもとりわけ、固相ＥＬＩＳＡイムノアッセイ、免疫沈降法、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）、ＫｉｎＥｘＡ、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）、Ｏｃｔｅｔ（商標）（ＦｏｒｔｅＢｉｏ、Ｉｎｃ．、Ｍｅｎｌｏ  Ｐａｒｋ、ＣＡ）及びウェスタンブロット分析がある。典型的に、特異的または選択的反応は、バックグラウンドシグナルまたはノイズの少なくとも２倍、より典型的にはバックグラウンドの１０倍超、さらにより典型的にはバックグラウンドの５０倍超、より典型的にはバックグラウンドの１００倍超、なおもより典型的にはバックグラウンドの５００倍超、さらにより典型的はバックグラウンドの１０００倍超、及びさらにより典型的にはバックグラウンドの１０，０００倍超であろう。また、抗体は、平衡解離定数（ＫＤ）が≦７ｎＭであるとき、抗原に「特異的に結合する」といわれる。
【００６２】
「結合親和性」という用語は、本明細書で、２分子間、例えば、抗体またはその部分と抗原との非共有結合性の相互作用の強度の尺度として使用される。「結合親和性」という用語は、一価相互作用（固有活性）を説明して使用される。２分子間の結合親和性は、解離定数（ＫＤ）の決定によって定量され得る。次いで、ＫＤは、例えば、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）法（Ｂｉａｃｏｒｅ）を用いた、複合体形成及び解離の動態の測定によって決定することができる。一価複合体の会合及び解離に対応する速度定数は、それぞれ、会合速度定数ｋａ（またはｋｏｎ）及び解離速度定数ｋｄ（またはｋｏｆｆ）と称される。ＫＤは、等式ＫＤ＝ｋｄ／ｋａによるｋａ及びｋｄに関連する。解離定数の値は、周知の方法によって直接決定することができ、複合体混合物の場合であっても、Ｃａｃｅｃｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９８４，Ｂｙｔｅ  ９：３４０−３６２）に記載される方法などの方法によって計算することができる。例えば、ＫＤは、Ｗｏｎｇ  ＆  Ｌｏｈｍａｎ（１９９３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：５４２８−５４３２）によって開示されるアッセイなどの２重フィルターニトロセルロースフィルター結合アッセイを用いて、確立されてもよい。例えば、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロット、ＲＩＡ、及びフローサイトメトリー分析、ならびに本明細書の他の箇所に例示される他のアッセイを含む、標的抗原に対する抗体の結合能力を評価するための他の標準的なアッセイが当該技術分野で既知である。抗体の結合動態及び結合親和性もまた、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）系、またはＫｉｎＥｘＡを使用することによる、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）などの、当該技術分野で既知の標準的なアッセイによって評価することができる。
【００６３】
いくつかの実施形態において、本抗体は、約１．１４×１０−１０Ｍ以上のＫＤでｈＩＬ−２に結合し得る。例えば、本抗体は、約９×１０−１１Ｍ以上のＫＤでｈＩＬ−２に結合し得る。いくつかの実施形態において、本抗体は、約８×１０−１１Ｍ以上のＫＤでｈＩＬ−２に結合し得る。いくつかの実施形態において、本抗体は、約７×１０−１１Ｍ以上のＫＤでｈＩＬ−２に結合し得る。いくつかの実施形態において、本抗体は、約６×１０−１１Ｍ以上のＫＤでｈＩＬ−２に結合し得る。いくつかの実施形態において、本抗体は、約５．００×１０−１１Ｍ以上のＫＤでｈＩＬ−２に結合し得る。これらの量は、限定的であることを意図せず、列挙される値の間の増分が本開示の一部として具体的に想定される。いくつかの実施形態において、本抗体は、表３に示される抗体のＫＤとほぼ同じｋｄでｈＩＬ−２に結合し得る。
【００６４】
いくつかの実施形態において、本抗体は、約４．５３×１０−４ｓ−１以上のｋｄでｈＩＬ−２に結合し得る。例えば、本抗体は、約３×１０−４ｓ−１以上のｋｄでｈＩＬ−２に結合し得る。いくつかの実施形態において、本抗体は、約１×１０−４ｓ−１以上のｋｄでｈＩＬ−２に結合し得る。いくつかの実施形態において、本抗体は、約９×１０−５ｓ−１以上のｋｄでｈＩＬ−２に結合し得る。いくつかの実施形態において、本抗体は、約７×１０−５ｓ−１以上のｋｄでｈＩＬ−２に結合し得る。いくつかの実施形態において、本抗体は、約５．００×１０−５ｓ−１以上のｋｄでｈＩＬ−２に結合し得る。これらの量は、限定的であることを意図せず、列挙される値の間の増分が本開示の一部として具体的に想定される。いくつかの実施形態において、本抗体は、表３に示される抗体のｋｄとほぼ同じｋｄでｈＩＬ−２に結合し得る。
【００６５】
競合結合アッセイを実施することができ、このアッセイにおいては、抗体の標的抗原への結合が、通常であれば標的に結合する別の抗体または可溶性受容体などの、その標的の別のリガンドによる標的の結合と比較される。５０％阻害が生じる濃度は、Ｋｉとして知られている。理想的条件下で、Ｋｉは、ＫＤに等しい。Ｋｉ値がＫＤ未満となることは決してないため、Ｋｉの測定が、ＫＤの上限を提供するために好都合に代用され得る。
【００６６】
上記の定義に従って、異なる分子間相互作用に関連する結合親和性、例えば、所与の抗原に対する異なる抗体の結合親和性の比較が、個々の抗体／抗原複合体についてのＫＤ値の比較によって比較されてもよい。同様に、相互作用の特異性が、目的とする相互作用、例えば、抗体と抗原との間の特異的相互作用についてのＫＤ値の決定、及び目的としない相互作用、例えば、ＩＬ−２に結合しないことが知られている対照抗体のＫＤ値とのその比較によって、評価されてもよい。
【００６７】
その標的に特異的に結合する抗体は、高い親和性で、つまり、上記に考察された低いＫＤを示して、その標的に結合し得、他の非標的分子にはより低い親和性で結合し得る。例えば、本抗体は、１×１０−６Ｍ以上、いくつかの実施形態においては、１×１０−５Ｍ以上、いくつかの実施形態においては、１×１０−４Ｍ以上、いくつかの実施形態においては、１×１０−３Ｍ以上、いくつかの実施形態においては、１×１０−２Ｍ以上のＫＤで、非標的分子に結合し得る。本開示の抗体は、いくつかの実施形態において、別の非ＩＬ−２分子への結合に対するその親和性よりも少なくとも２倍、１０倍、５０倍、１００倍  ２００倍、５００倍、１，０００倍もしくは１０，０００倍またはそれよりも大きな親和性で、その標的に結合可能である。これらの量は、限定的であることを意図せず、列挙される値の間の増分が本開示の一部として具体的に想定される。
【００６８】
抗体：ＩＬ−２「複合体」とは、この用語が本明細書で使用されるとき、ＩＬ−２に特異的に結合する、本開示の少なくとも１つの抗体、またはその抗原結合部分と、少なくとも１つのＩＬ−２サイトカイン分子とを含む、複合体を指す。この複合体は、共有結合、非共有結合、または任意の他の力によって会合している抗体及びＩＬ−２分子を含む。好ましくは、本抗体及びＩＬ−２は、この複合体が投与された後であっても複合体として会合したままである。本抗体及びＩＬ−２は、他の可変要素の中でもとりわけ、それらの間の結合相互作用についてのＫＤ値に基づいて、複合体を形成することが理解される。
【００６９】
「宿主細胞」とは、ポリヌクレオチド挿入物の導入のためのベクター（複数可）に対するレシピエントとなることができるまたはレシピエントであった、個々の細胞または細胞培養物を含む。宿主細胞には、単一の宿主細胞の子孫が含まれ、子孫は、天然、偶発的、または意図的変異に起因して、元の親細胞と（形態学においてまたはゲノムＤＮＡ補体において）必ずしも完全に同一であるとは限らない。宿主細胞には、本開示のポリヌクレオチドにより体内でトランスフェクトされた及び／または形質転換された細胞が含まれる。
【００７０】
当該技術分野で既知であるように、「Ｆｃ領域」という用語は、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義して使用される。「Ｆｃ領域」は、天然配列Ｆｃ領域でも変異型Ｆｃ領域でもあり得る。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は様々であり得るものの、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、通常、Ｃｙｓ２２６位のアミノ酸残基から、またはＰｒｏ２３０位から、そのカルボキシル末端に及ぶと定義される。Ｆｃ領域における残基の番号付けは、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．，１９９１に記載されるＥＵインデックスの番号付けである。免疫グロブリンのＦｃ領域は一般に、２つの定常ドメインＣＨ２及びＣＨ３を含む。当該技術分野で既知であるように、Ｆｃ領域は、二量体または単量体形態で存在し得る。
【００７１】
「機能的Ｆｃ領域」は、天然配列Ｆｃ領域の少なくとも１つのエフェクター機能を保有する。例となる「エフェクター機能」には、Ｃ１ｑ結合、補体依存性細胞傷害作用、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞−媒介性細胞傷害作用、食作用、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方制御等が含まれる。かかるエフェクター機能は一般に、Ｆｃ領域が結合ドメイン（例えば、抗体可変ドメインまたはその抗原結合部分）と組み合わされることを必要とし、かかる抗体エフェクター機能を評価するための当該技術分野で既知の種々のアッセイを用いて評価され得る。
【００７２】
「天然配列Ｆｃ領域」とは、天然に見出されるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む。「変異型Ｆｃ領域」とは、少なくとも１つのアミノ酸修飾に基づいて天然配列Ｆｃ領域のアミノ酸配列とは異なるが、なおも天然配列Ｆｃ領域の少なくとも１つのエフェクター機能を保持する、アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、変異型Ｆｃ領域は、天然配列Ｆｃ領域または親ポリペプチドのＦｃ領域と比較して少なくとも１つのアミノ酸置換、例えば、天然配列Ｆｃ領域または親ポリペプチドのＦｃ領域における約１個〜約１０個のアミノ酸置換、いくつかの実施形態においては、約１個〜約５アミノ酸置換を有する。本明細書における変異型Ｆｃ領域は、いくつかの実施形態において、天然配列Ｆｃ領域との及び／または親ポリペプチドのＦｃ領域との少なくとも約８０％の配列同一性、いくつかの実施形態においては、それらとの少なくとも約９０％の配列同一性、いくつかの実施形態においては、それらとの少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％の配列同一性を保有する。これらの量は、限定的であることを意図せず、列挙されるパーセンテージの間の増分が本開示の一部として具体的に想定される。
【００７３】
当該技術分野で使用されるとき、「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」とは、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を説明する。いくつかの実施形態において、ＦｃＲは、天然配列ヒトＦｃＲである。さらに、いくつかの実施形態において、ＦｃＲは、ＩｇＧ抗体（ガンマ受容体）に結合するものであり、これらの受容体のアレル変異型及び代替的にはスプライシング形態を含め、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩサブクラスの受容体を含む。ＦｃγＲＩＩ受容体は、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）及びＦｃγＲＩＩＢ（「阻害受容体」）を含み、これらは、主にその細胞質ドメインが異なる同様のアミノ酸配列を有する。ＦｃＲｓは、Ｒａｖｅｔｃｈ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔ，１９９１，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，９：４５７−９２；Ｃａｐｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ，４：２５−３４、及びｄｅ  Ｈａａｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．，１２６：３３０−４１に概説される。「ＦｃＲ」はまた、母体ＩｇＧｓの胎児への移行に関与する新生児受容体ＦｃＲｎも含む（Ｇｕｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９７６，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１１７：５８７、及びＫｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２４：２４９）。
【００７４】
本明細書で使用されるとき、第１の抗体は、第１の抗体の存在が第２の抗体の抗原（または第２の抗体のエピトープ）への結合を検出可能に減少させる場合、抗原（またはエピトープ）への結合について第２の抗体と競合するといわれる。第１の抗体の抗原（またはそのエピトープ）への結合もまた第２の抗体の存在下で検出可能に減少する、逆の場合が真であり得るが、その必要はない。しかしながら、各抗体が、同じ程度であれ異なる程度であれ、他の抗体が共通の抗原に結合するのを検出可能に阻害する場合、その抗体は、その抗原の結合について互いに「交差競合する」といわれる。競合抗体及び交差競合抗体の両方が本開示によって包含される。かかる競合または交差競合が生じる機構にかかわらず（例えば、立体障害、立体構造的変化、または共通のエピトープもしくはその部分（複数可）への結合）、当業者であれば、本明細書に提供される教示に基づいて  かかる競合及び／または交差競合抗体が包含されており、本明細書に開示される方法に有用であり得ることを理解するであろう。
【００７５】
本明細書で使用されるとき、「治療」とは、有益なまたは所望の臨床結果を得るための手法である。本開示の目的で、有益なまたは所望の臨床結果には、下記のうちの１つ以上が含まれるが、これらに限定されない。生存率の改善（死亡率の低下）、炎症の低減、組織線維症の量の減少、疾患病変の外観の改善、病理学的病変の病巣部位への限定化、疾患による損傷の程度の減少、疾患の持続期間の減少、及び／または疾患に関連する症状の数、程度、もしくは持続期間の低減。この用語は、本開示の化合物または薬剤を投与して、疾患の症状、合併症、もしくは生化学的兆候の発現を予防するもしくは遅延させること、疾患、病態、もしくは障害の症状を緩和すること、または疾患、病態、もしくは障害のさらなる発症を停止させるもしくは阻害することを含む。治療は、予防的（疾患の発現を予防するもしくは遅延させること、またはその臨床的もしくは亜臨床的症状の発現を予防すること）、または疾患の症状発現後の症状の治療的抑制もしくは緩和であり得る。
【００７６】
「回復させる」とは、ＩＬ−２抗体を投与しない場合と比較した、１つ以上の症状の減少または改善を意味する。「回復させる」はまた、症状の持続期間の短縮または低減も含む。
【００７７】
本明細書で使用されるとき、薬物、化合物、または薬学的組成物の「有効投薬量」または「有効量」とは、いずれか１つ以上の有益なまたは所望の結果に影響を及ぼすのに十分な量である。より具体的な態様において、有効量は、疾患もしくは感染症の症状を予防する、緩和するもしくは回復させ、かつ／または治療されている対象の生存期間を延長する。予防的使用の場合、有益なまたは所望の結果には、疾患の生化学的、組織学的、及び／または挙動的症状、その合併症、ならびに疾患の発症中に現れる中間病理学的表現型を含む、疾患のリスクの排除もしくは低減、疾患の重症度の軽減、または疾患の発生の遅延が含まれる。治療的使用の場合、有益なまたは所望の結果には、ＩＬ−２媒介性疾患、障害もしくは病態またはＩＬ−２欠損疾患、障害もしくは病態の１つ以上の症状の低減、疾患の治療に必要とされる他の薬剤の用量の減少、別の薬物治療の効果の増強、及び／あるいは患者の疾患の進行の遅延などの臨床結果が含まれる。有効投薬量は、１回以上の投与において投与することができる。本開示の目的で、薬物、化合物、または薬学的組成物の有効投薬量は、直接的であれ間接的であれ予防的または治療的治療を達成するのに十分な量である。臨床分野において理解されるように、薬物、化合物、または薬学的組成物の有効投薬量は、別の薬物、化合物、または薬学的組成物と併せて達成される場合も、されない場合もある。したがって、「有効投薬量」とは、１つ以上の治療剤を投与することに関連して考慮され得、単剤は、１つ以上の他の薬剤と併せたときに望ましい結果が達成され得るまたは達成される場合、有効量で与えられるとみなされ得る。
【００７８】
本明細書で使用されるとき、「ベクター」とは、宿主細胞において目的とする１つ以上の遺伝子（複数可）または配列（複数可）を送達可能、及びいくつかの実施形態においては、発現可能である、構築物を意味する。ベクターの例としては、ウイルスベクター、ネイキッドＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、プラスミド、コスミドまたはファージベクター、カチオン性縮合剤に関連するＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、リポソームに封入されたＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、及びプロデューサー細胞などのある特定の真核細胞が挙げられるが、これらに限定されない。
【００７９】
本明細書で使用されるとき、「発現制御配列」とは、核酸の転写を導く核酸配列を意味する。発現制御配列は、構成的もしくは誘導性プロモーターなどのプロモーター、またはエンハンサーであり得る。発現制御配列は、転写対象の核酸配列に作動可能に連結される。
【００８０】
本明細書で使用されるとき、「薬学的に許容される担体」または「薬学的に許容される賦形剤」には、有効成分と組み合わされるとき、その成分が生物学的活性を保持することを許容し、対象の免疫系と反応性でない、任意の材料が含まれる。例としては、リン酸緩衝液、水、油／水エマルションなどのエマルション、及び種々の種類の湿潤剤などの、標準的な薬学的担体のうちのいずれかが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、エアロゾルまたは非経口投与用の希釈剤は、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）または生理（０．９％）食塩水である。かかる担体を含む組成物は、周知の従来方法によって製剤化される（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ，ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ，１９９０、及びＲｅｍｉｎｇｔｏｎ，Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  ２０ｔｈ  Ｅｄ．Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，２０００を参照されたい）。
【００８１】
本明細書における「約」値またはパラメータへの言及は、その値またはパラメータそのものを対象とする実施形態を含む（かつ説明する）。例えば、「約Ｘ」に言及する説明は、「Ｘ」の説明を含む。数値範囲は、その範囲を定義する数字を含む。
【００８２】
本開示の広範な範囲を述べる数値範囲及びパラメータが近似値であるにもかかわらず、具体的な実施形態に記載される数値は、可能な限り正確に報告される。任意の数値は、しかしながら、それらの対応する試験測定値に見出される標準偏差から必然的にもたらされるある特定の誤差を本質的に含む。さらに、本明細書に開示されるすべての範囲は、その範囲に包摂されるありとあらゆる部分範囲を包含することが理解されよう。例えば、「１〜１０」と記載される範囲は、最小値１と最大値１０の間の（及びそれらの端点を含む）ありとあらゆる部分範囲、つまり、１以上の最小値から始まり（例えば１〜６．１）、１０以下の最大値で終わる（例えば、５．５〜１０）すべての部分範囲を含むようにみなされるべきである。
【００８３】
別途規定されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語及び科学用語は、本開示が属する技術分野の専門家によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。矛盾が生じる場合、定義を含めて本明細書が優位に立つ。本明細書及び特許請求の範囲全体を通して、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という語、または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」もしくは「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などの変形は、記載される整数または整数の群の包含を暗示するが、任意の他の整数または整数の群の除外を暗示してはいないことが理解される。さらに、文脈上他の解釈を要する場合を除き、単数形は複数形を含むものとし、複数形は単数形を含むものとする。「例えば（ｅ．ｇ．）」または「例えば（ｆｏｒ  ｅｘａｍｐｌｅ）」という用語に続く任意の例（複数可）は、排他的または限定的であることを意図しない。
【００８４】
実施形態が、「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という言語を用いて本明細書に記載される場合はいずれも、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」及び／または「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」という用語で記載されることを除いては類似した実施形態もまた、提供されることが理解される。
【００８５】
本開示の態様または実施形態が、マーカッシュ群または代替法の他の群分けの用語で記載される場合、本開示は、全体として列挙される群全体だけでなく、その群の個々の各成員及び主要群のすべての考えられる部分群、また、その群の成員のうちの１つ以上が不在である主要群も包含する。本開示また、特許請求される開示における群の成員のうちの任意のものの１つ以上を明示的に除外することも想定する。
【００８６】
例となる方法及び材料が本明細書に記載されるが、本明細書に記載されるものと同様または同等の方法及び材料もまた、本開示の実施または試験において使用することができる。材料、方法、及び例は、例示説明にすぎず、限定することは意図しない。
【００８７】
概要
インターロイキン−２（ＩＬ−２）は、Ｔ細胞及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む、広範囲の白血球のための成長因子として機能する、４ヘリックスバンドルのＩ型サイトカインである。ＡＩＤＳから癌に及ぶ多様な免疫障害に対する治療標的としてのＩＬ−２の研究において、相当の努力が投入されてきた。組換えヒトＩＬ−２（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標））は、転移性黒色腫及び腎細胞癌を治療するために高用量で使用される。しかしながら、患者の小さな部分集団（５〜１０％）のみが、かかる治療による長期生存を経験する。インフルエンザ様の症状から生命にかかわる血管漏出症候群及び肺浮腫までに及ぶ、高用量ＩＬ−２療法の有害作用が、その使用を大きく制限してきた。重要なことに、ＩＬ−２治療は、予測不可能な生物学的作用を有する。
【００８８】
ＩＬ−２は、３本の鎖ＣＤ２５（ＩＬ−２Ｒα）、ＣＤ１２２（ＩＬ−２Ｒβ）、及び共通のガンマ鎖（γｃ）から構成される複合体受容体への結合によってその効果を媒介し、このため、この受容体はＩＬ−２Ｒαβγと称される。これら３本の鎖は、差次的に発現され、このうち受容体三量体が最も高い親和性を示す。個別では、四元複合体にあるこれら３本の受容体鎖の各々は、低い親和性でｈＩＬ−２に結合し、このうちｈＩＬ−２Ｒαが最も強力な相対的親和性（ＫＤ約１０ｎＭ）を有する。ｈＩＬ−２Ｒαの発現は、Ｔ細胞に対するｈＩＬ−２のオン速度を増加させ、これら３つの受容体は、ＫＤ約１０ｐＭでｈＩＬ−２に協働的に結合する。ＩＬ−２Ｒαによって捕捉されると、ＩＬ−２は、ＩＬ−２Ｒβ、及び次いでγｃ（おそらくはあらかじめ形成された（ｐｒｅ−ｆｏｒｍｅｄ）受容体二量体にある）に提示されて、四元シグナル伝達複合体を形成する。ｈＩＬ−２は単独でも、低い親和性（ＫＤ約１５０〜３００ｎＭ）でｈＩＬ−２Ｒβに結合するが、ｈＩＬ−２／ｈＩＬ−２Ｒα複合体は、より高い親和性（ＫＤ約６０ｎＭ）でｈＩＬ−２Ｒβに結合し、それでも、四元受容体複合体においてＩＬ−２ＲαとＩＬ−２Ｒβとの間に直接の接触はない。最近の研究では、野生型ＩＬ−２が「休止」形態で存在し、これが、ＩＬ−２Ｒαに結合する高親和性形態を表す構造的に変化した立体構造へと誘導されることが示唆されている。
【００８９】
Ｔエフェクター細胞（Ｔｅｆｆ）またはＴ制御性細胞（Ｔｒｅｇ）のいずれかを選択的に標的とするその能力を修飾することによってその治療的可能性を改善するために、ＩＬ−２を操作または修飾する試みが行われてきた。興味深いことに、より有効で指向性のＩＬ−２へのいくつかの手法が存在してきた。マウスモデルにおいて、ヒトに直接的に類似するわけでないが、Ｂｏｙｍａｎ及び同僚らは、一部の状況下で、ラット抗マウスＩＬ−２  ｍＡｂ（ＪＥＳ６−１）が野生型ＩＬ−２と複合され得、ＴＲＥＧ集団を優先的に増強するために使用され得ることを実証した（Ｂｏｙｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００６，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３１１：１９２４−１９２７、及び国際特許出願第ＷＯ２００７／０９５６４３号）。この効果についての機構的根拠は明確化されなかったものの、いかなる理論にも拘束されることを望むものではないが、ある特定の抗体と複合したＩＬ−２が立体構造において「固定され」、これが個々のＴＲＥＧまたはＴＥＦＦ細胞部分集団の選択的増大をもたらす特徴的シグナルを選択的に誘発するということがあり得る。さらに、３分子ＩＬ−２Ｒ複合体ＣＤ２５へのＩＬ−２結合を増加させることによってＣＤ２５＋Ｔ細胞の活性化を増強し、ＣＤ２５−ＮＫ細胞の活性化を最小化する、ＩＬ−２変異体タンパク質を開発することにいくつかの努力が向けられてきた。この点に関し、ＩＬ−２Ｒβγｃに対して有意により低い親和性を有する変異体ＩＬ−２が、この変異型ＩＬ−２での処理がＮＫまたはメモリーＣＤ８＋Ｔ細胞を活性化しない可能性があるとの期待により、Ｂａｙｅｒによって作製された。しかしながら、上述のＩＬ−２変異体及びＩＬ−２／抗ＩＬ−２抗体複合体手法は、炎症性Ｔ細胞応答中に産生されている内因性野生型ＩＬ−２を変化させる薬物の能力欠如の可能性を考慮に入れていない。さらに、内因性ＩＬ−２誘導する（実証されたフィードバック機構）ＩＬ−２変異型でのいずれの治療法も、体外では観察されなかった可能性のある野生型ＩＬ−２作用を体内でもたらし得る。
【００９０】
したがって、ＩＬ−２は、エフェクターＴ細胞（ＴＥＦＦ）及びＮＫ機能を増強するその能力に起因して、免疫刺激剤として元々開発されたが、ＩＬ−２の一次機能は免疫の活性化ではなく、むしろ、免疫応答を阻害し、自己免疫疾患を防止するように機能する、ＴＲＥＧの生成及び存続である。ＩＬ−２及びＩＬ−２受容体（ＩＬ−２Ｒ）欠損マウスを含めた動物モデルを使用して、ＩＬ−２がＴＲＥＧ細胞によって媒介される末梢免疫寛容において必要不可欠な役割を果たすという理解が高まってきた。研究では、低用量ＩＬ−２療法が高親和性ＩＬ−２Ｒのその構成的発現に起因してＴＲＥＧを優先的に活性化することが示されてきた。より具体的には、増加した数の動物研究で、ＴＲＥＧがＧＶＨＤ及び自己免疫を抑制し得ることが実証されてきた。さらに、この潜在的な抑制機能は、２件の最近の研究、１件はＧＶＨＤで、もう１件は自己免疫性血管炎で、ヒトにおいて実証され、それらの研究では、短期的な低用量療法が一部の個人において疾患の回復をもたらした。それ故、エフェクター免疫応答と対比して免疫寛容原性を選択的に活性化するＩＬ−２に基づく治療薬、すなわち、ＴＲＥＧ：ＴＥＦＦ均衡をＴＲＥＧの方へ傾け、それによって広範な疾患を治療するように設計された治療法に対する必要性が長年存在する。本開示は、その必要性を満たす。
【００９１】
ＩＬ−２抗体
本発明は、ＩＬ−２に特異的に結合する抗体に関し、すなわち、それらはＩＬ−２に結合するが、それらは他の分子に検出可能に結合しないか、またはより低い親和性で結合する。いくつかの実施形態において、本抗体は、ヒトＩＬ−２に特異的に結合する。いくつかの実施形態において、本抗体は、ｈＩＬ−２のヘリックスＡ及びＣならびにＢ−Ｃループに特異的に結合する。いくつかの実施形態において、本抗体は、ｈＩＬ−２のヘリックスＡに特異的に結合する。いくつかの実施形態において、本抗体は、ｈＩＬ−２のヘリックスＣに特異的に結合する。いくつかの実施形態において、本抗体は、ｈＩＬ−２のヘリックスＡ及びＣに特異的に結合する。いくつかの実施形態において、本抗体は、ｈＩＬ−２のＢ−Ｃループに特異的に結合する。いくつかの実施形態において、本抗体は、ヒトＩＬ−２（ｈＩＬ−２）への結合について配列番号１３、１４、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、及び１３４のアミノ酸配列を含む抗体と競合する、またはそれと同じｈＩＬ−２のエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、本抗体は、ヒトＩＬ−２（ｈＩＬ−２）に特異的に結合し、ｈＩＬ−２のＩＬ−２Ｒαへの結合親和性を約１倍〜約１９９分の１に低減する。いくつかの実施形態において、本抗体は、ｈＩＬ−２のＩＬ−２Ｒαへの結合親和性を約１０分の１に低減する。いくつかの実施形態において、本抗体は、ｈＩＬ−２のＩＬ−２Ｒαへの結合親和性を約２、１０、２５、５０、７５、１００、１２５、１５０、または１７５分の１に低減する。
【００９２】
いくつかの実施形態において、ＩＬ−２抗体は、ＩＬ−２Ｒα及びＩＬ−２ＲβへのＩＬ−２結合を低減し、かつ制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞の活性を阻害しない。例えば、いくつかの実施形態において、ＩＬ−２抗体は、ＩＬ−２ＲβへのＩＬ−２結合を遮断し、ＩＬ−２ＲαへのｈＩＬ−２結合の親和性を低減する。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２抗体は、ＩＬ−２ＲαへのＩＬ−２結合を約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、または９９％低減する。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２抗体は、ＩＬ−２ＲβへのＩＬ−２結合を少なくとも５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、または９９％低減する。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２抗体は、ＩＬ−２ＲβへのＩＬ−２結合を完全に遮断する。特に、本開示は、ＩＬ−２に特異的に結合する抗体、及びさらに、非Ｔｒｅｇ細胞（エフェクターＣＤ８＋、非Ｔｒｅｇ  ＣＤ４＋及びＮＫ細胞を含む）の増殖を、それらがＴｒｅｇ細胞の増殖を阻害するよりも大きく阻害する、またはアイソタイプ対照抗体と比較してＴｒｅｇ増殖を増加させる、または非Ｔｒｅｇ細胞に対してＴｒｅｇ細胞の比率を増加させるもしくはＴｒｅｇマーカーを維持することができる、あるいはこれらの組み合わせである、抗体に関する。いくつかの実施形態において、本抗体は、ＣＤ８＋、非Ｔｒｅｇ  ＣＤ４＋またはＮＫ細胞の増殖を、該抗体がＴｒｅｇの増殖を阻害するよりも少なくとも２倍大きく阻害する。いくつかの実施形態において、本抗体は、ＣＤ８＋、非Ｔｒｅｇ  ＣＤ４＋またはＮＫ細胞の増殖を、該抗体がＴｒｅｇの増殖を阻害するよりも少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０倍大きく阻害する。いくつかの実施形態において、本抗体は、ＩＬ−２Ｒα及びＩＬ−２ＲβへのＩＬ−２結合を低減し、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）培養物中でまたは再構成アッセイにおいてＣＤ８＋、非Ｔｒｅｇ  ＣＤ４＋またはＮＫ細胞に対してＴ制御性細胞（Ｔｒｅｇ）の比率を増加させる。いくつかの実施形態において、この比率は、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０倍またはそれを超えて増加する。いくつかの実施形態において、本抗体は、Ｔｒｅｇ：ＣＤ８＋細胞比を２倍またはそれを超えて増加させ、増加したＴｒｅｇ増殖を表し得る。いくつかの実施形態において、本抗体は、体外でＩＬ−２が限定的、例えば、１ｎＭ未満の濃度であるとき、Ｔ制御性細胞（Ｔｒｅｇ）増殖を、アイソタイプ対照よりも大きく増強する。いくつかの実施形態において、本抗体は、ＣＤ８＋細胞の増殖を阻害する。いくつかの実施形態において、本抗体は、ＩＬ−２Ｒα及びＩＬ−２ＲβへのＩＬ−２結合を低減し、Ｔｒｅｇ細胞における１つ以上のＦＯＸＰ３、ＣＤ２５、及びＩｃｏｓの発現を維持する。いくつかの実施形態において、本抗体は、ＩＬ−２Ｒα及びＩＬ−２ＲβへのＩＬ−２結合を低減し、Ｔｒｅｇ細胞における１つ以上のＦＯＸＰ３、ＣＤ２５、及びＩｃｏｓの発現を増加させる。いくつかの��施形態において、本開示のＩＬ−２抗体は、これらの特徴のうちの少なくとも１つを有し、いくつかの実施形態において、本抗体は、これらの特徴のうちの２つ以上を有する。いくつかの実施形態において、本抗体は、これらの特徴のすべてを有する。
【００９３】
いくつかの実施形態において、ＩＬ−２に特異的に結合する本抗体、またはその抗原結合部分は、ＩＬ−２Ｒα及びＩＬ−２ＲβへのＩＬ−２結合を低減し、ＣＤ８＋Ｔ細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化を、制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞におけるよりも高い度合で阻害する。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２抗体、または抗原結合部分は、ＴｒｅｇにおけるＳＴＡＴ５リン酸化を５０％超維持する。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２抗体、または抗原結合部分は、ＴｒｅｇにおけるＳＴＡＴ５リン酸化を６０％超維持する。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２抗体、または抗原結合部分は、ＴｒｅｇにおけるＳＴＡＴ５リン酸化を７０％超維持する。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２抗体、または抗原結合部分は、ＴｒｅｇにおけるＳＴＡＴ５リン酸化を８０％超維持する。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２抗体、または抗原結合部分は、ＴｒｅｇにおけるＳＴＡＴ５リン酸化を９０％超維持する。いくつかの実施形態において、本抗体は、ｈＩＬ−２に特異的に結合する。これらの量は、限定的であることを意図せず、列挙されるパーセンテージの間の増分が本開示の一部として具体的に想定される。
【００９４】
本開示はまた、かかる抗体を含む組成物、ならびに治療的使用及び薬学的使用を含めたかかる抗体についての使用に関する。
【００９５】
「ＩＬ−２」という用語は、単量体であれ、二量体、三量体等を含めた多量体であれ、任意の好適な生物に由来してよい、ＩＬ−２の任意の自然発生形態を意味する。本明細書で使用されるとき、「ＩＬ−２」は、ヒト、ラットまたはマウス、ならびに非ヒト霊長類、ウシ、ヒツジ、またはブタＩＬ−２などの哺乳類ＩＬ−２を指す。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２は、ヒト（例えば、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号Ｐ６０５６８を参照されたい）または「ｈＩＬ−２」である。ＩＬ−２はまた、カニクイザルＩＬ−２（例えば、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号Ｑ２９６１５を参照されたい）でもあり得る。「ＩＬ−２」という用語またかかるＩＬ−２分子の部分、変異型、アイソフォーム、及び他のホモログも包含する。変異型ＩＬ−２分子は一般に、ＩＬ−２受容体結合する能力、及び受容体媒介性活性を誘導する能力などの、自然発生ＩＬ−２と同じ種類の活性を有することを特徴とする。
【００９６】
ＩＬ−２は、１個以上、２個以上、３個以上、４個以上、５個以上、６個以上、７個以上、８個以上、９個以上、１０個以上、１２個以上または１５個以上のＩＬ−２の表面接触可能残基を含み得る。ＩＬ−２がＩＬ−２のホモ多量体形態を含む場合、標的は、１個以上、２個以上、３個以上、４個以上、５個以上、６個以上、７個以上、８個以上、９個以上、１０個以上、１２個以上または１５個以上の第１のＩＬ−２サブユニットの表面接触可能残基、及び１個以上、２個以上、３個以上、４個以上、５個以上、６個以上、７個以上、８個以上、９個以上、１０個以上、１２個以上または１５個以上の第２のＩＬ−２サブユニットの表面接触可能残基を含み得る。
【００９７】
標的分子は、ＩＬ−２からの既知のエピトープを含み得る。標的分子は、ｈＩＬ−２からの既知のエピトープを含み得る。いくつかの実施形態において、標的は、ｈＩＬ−２のヘリックスＡを含み得る。いくつかの実施形態において、標的は、ｈＩＬ−２のヘリックスＣを含み得る。いくつかの実施形態において、標的は、ｈＩＬ−２のヘリックスＡ及びＣを含み得る。いくつかの実施形態において、標的は、ｈＩＬ−２のＢ−Ｃループを含み得る。いくつかの実施形態において、標的は、ｈＩＬ−２のヘリックスＡ及びＣならびにＢ−Ｃループを含み得る。
【００９８】
一実施形態において、本開示は、次のうちのいずれか、または次の抗体のうちのいずれかに由来する軽鎖配列、またはその部分、及び重鎖、またはその部分を有する抗体を含む組成物（薬学的組成物を含む）を提供する。Ｆ４．７．６、Ｆ４．７．８、Ｆ５．１．１１、Ｆ５．１．９、Ｆ４．７．０６２、Ｆ５．１１．１．０１、Ｆ５．１．１１．０２、Ｆ５．１．１１．０３、Ｆ５．１．１１．０４、Ｆ５．１．１１．０５、Ｆ５．１．１１．０６、Ｆ５．１．１１．０７、Ｆ５．１．１１．０８、Ｆ５．１．１１．０９、Ｆ５．１．９．５、またはｄ１Ｃ７。抗体Ｆ５．１．１１は、抗体Ｆ５１１１、５．１．１１、５１１１とも称される。これらの用語は、交換可能である。この親抗体の変異型は、この命名法により、数字を追加して言及され得る（例えば、抗体Ｆ５１１１．２、５．１．１１．２、Ｆ５．１．１１．０２、または５１１１．２；または抗体Ｆ５．１．１１．０１、Ｆ５１１１．１、５．１．１１．１、または５１１１．１）。
【００９９】
本開示において有用な抗体は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、抗体部分（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、Ｆｃ等）、キメラ抗体、二重特異性抗体、ヘテロコンジュゲート（ｈｅｔｅｒｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ）抗体、１本鎖（ＳｃＦｖ）、その変異体、抗体部分（例えば、ドメイン抗体）を含む融合タンパク質、ヒト化抗体、ならびに、抗体のグリコシル化変異型、抗体のアミノ酸配列変異型、及び共有結合修飾抗体を含めて、所要の特異性の抗原認識部位を含む免疫グロブリン分子の任意の他の修飾構成を包含することができる。本抗体は、マウス、ラット、ヒト、または任意の他の起源（キメラまたはヒト化抗体を含む）であってよい。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２抗体は、モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態において、本抗体は、ヒトまたはヒト化抗体である。
【０１００】
本開示のＩＬ−２抗体は、当該技術分野で既知の任意の方法によって作製されてよい。ヒト及びマウス抗体の生産のための一般的な技法は、当該技術分野で既知であり、かつ／または本明細書に記載される。
【０１０１】
ＩＬ−２抗体は、ＩＬ−２活性の低減、回復、または中和、例えば、ｐＡＫＴ及び／またはｐＳＴＡＴ５が検出及び／または測定される、当該技術分野で既知の方法を用いて同定するまたは特徴付けることができる。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２抗体は、候補薬剤（例えば、ＩＬ−２）をＩＬ−２受容体とともにインキュベートし、ＩＬ−２の結合及び／またはそれに伴うＩＬ−２の生物学的活性の低減もしくは阻害を監視することによって同定される。いくつかの実施形態において、ｈＩＬ−２抗体は、ｈＩＬ−２活性の低減、回復、または中和、例えば、ｐＡＫＴ及び／またはｐＳＴＡＴ５が検出及び／または測定される、当該技術分野で既知の方法を用いて同定するまたは特徴付けることができる。いくつかの実施形態において、ｈＩＬ−２抗体は、候補薬剤（例えば、ｈＩＬ−２）をｈＩＬ−２受容体とともにインキュベートし、ｈＩＬ−２の結合及び／またはそれに伴うｈＩＬ−２の生物学的活性の低減もしくは阻害を監視することによって同定される。結合アッセイは、例えば、精製ＩＬ−２ポリペプチド（複数可）とともに、または種々の受容体を天然に発現する、もしくはＩＬ−２受容体を発現するようにトランスフェクトされた細胞とともに行ってもよい。一実施形態において、結合アッセイは、ＩＬ−２結合について既知のＩＬ−２抗体と競合する候補抗体の結合が評価される、競合結合アッセイである。このアッセイは、ＥＬＩＳＡフォーマットを含めて種々のフォーマットで行われてよい。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２抗体は、候補抗体をＩＬ−２とともにインキュベートし、結合を監視することによって同定される。
【０１０２】
最初の同定に続いて、候補ＩＬ−２抗体の活性は、標的とされる生物学的活性を試験することで知られるバイオアッセイによって、さらに確認及び精査することができる。いくつかの実施形態において、候補ＩＬ−２抗体をさらに特徴付けるために体外細胞アッセイが用いられる。例えば、バイオアッセイを用いて候補を直接スクリーニングすることができる。ＩＬ−２抗体を同定する及び特徴付ける方法のうちのいくつかが、実施例に詳述される。
【０１０３】
ＩＬ−２抗体は、当該技術分野で周知の方法を用いて特徴付けられてもよい。例えば、１つの方法は、それが結合するエピトープを同定すること、つまり「エピトープマッピング」である。抗体−抗原複合体の結晶構造の解析、競合アッセイ、遺伝子断片発現アッセイ、及び例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌの１１章、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９９に記載されるような、合成ペプチドベースのアッセイを含めて、タンパク質上のエピトープの位置をマッピングする及び特徴付けるための、当該技術分野で既知の多くの方法が存在する。追加の例において、エピトープマッピングを用いて、ＩＬ−２抗体が結合する配列を決定することができる。エピトープマッピングは、種々の供給源、例えば、Ｐｅｐｓｃａｎ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｅｄｅｌｈｅｒｔｗｅｇ  １５，８２１９  ＰＨ  Ｌｅｌｙｓｔａｄ，Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）から商業的に利用可能である。エピトープは、線形エピトープであり得る、すなわち、単一のアミノ酸の区間に包含され得るか、または単一の区間に必ずしも包含されるとは限らない、アミノ酸の３次元相互作用によって形成される立体構造的エピトープであり得る。様々な長さ（例えば、少なくとも４〜６アミノ酸長）のペプチドが、単離または合成され（例えば、組換えにより）、ＩＬ−２抗体での結合アッセイに使用され得る。別の例においては、ＩＬ−２抗体が結合するエピトープは、ＩＬ−２配列に由来する重複ペプチドを使用して、抗体による結合を決定する、系統的スクリーニングにおいて決定することができる。遺伝子断片発現アッセイによれば、ＩＬ−２をコードするオープンリーディングフレームがランダムにまたは特異的な遺伝子構築物によってのいずれかで断片化され得、ＩＬ−２の発現された断片の、試験対象の抗体との反応性が決定される。遺伝子断片は、例えば、ＰＣＲによって生産され、次いで、放射性アミノ酸の存在下で、体外においてタンパク質へと転写及び翻訳されてもよい。放射標識されたＩＬ−２断片への抗体の結合が次いで、免疫沈降法及びゲル電気泳動法によって決定される。ある特定のエピトープはまた、ファージ粒子（ファージライブラリ）または酵母（酵母ディスプレイ）の表面上に提示されたランダムペプチド配列の大型ライブラリを使用して同定することができる。代替的に、簡略な結合アッセイにおいて、重複ペプチド断片の定義されたライブラリを試験抗体への結合について試験することができる。追加の例においては、抗原の変異誘発、ドメインスワッピング実験及びアラニン走査変異誘発を行って、エピトープ結合に要求される、十分な、かつ／または必要な残基を同定することができる。例えば、アラニン走査変異誘発実験は、ＩＬ−２ポリペプチドの種々の残基がアラニンと置き換えられた変異体ＩＬ−２を使用して行うことができる。変異体ＩＬ−２への抗体の結合を評価することによって、抗体結合にとっての特定のＩＬ−２残基の重要性を評価することができる。
【０１０４】
ＩＬ−２抗体を特徴付けるために使用され得るなおも別の方法は、同じ抗原に結合することが知られている他の抗体、すなわち、ＩＬ−２上の種々の断片との競合アッセイを用いて、ＩＬ−２抗体が他の抗体と同じエピトープに結合するかどうかを決定することである。競合アッセイは、当業者に周知のことである。
【０１０５】
さらに、所与の抗体／抗原結合対に対するエピトープは、多様な実験的及び計算的エピトープマッピング法を用いて、異なる詳細レベルで定義し、特徴付けることができる。実験的方法には、変異誘発法、Ｘ線結晶解析法、核磁気共鳴（ＮＭＲ）分光法、水素／重水素交換質量分析法（Ｈ／Ｄ−ＭＳ）及び当該技術分野で周知の種々の競合結合方法が含まれる。各方法とも固有の原則に依存するため、エピトープの説明は、それが決定された方法に密接に関連付けられる。それ故、所与の抗体／抗原対に対するエピトープは、用いられるエピトープマッピング法に応じて異なって定義されることになる。
【０１０６】
その最も詳細なレベルにおいて、ＡｇとＡｂとの間の相互作用に対するエピトープは、Ａｇ−Ａｂ相互作用に存在する原子接触部を定義する空間座標、ならびに結合の熱力学へのそれらの相対的な寄与についての情報によって、定義することができる。詳細度のより低いレベルにおいて、エピトープは、ＡｇとＡｂとの間の原子接触部を定義する空間座標によって特徴付けることができる。詳細度のさらにより低いレベルにおいて、エピトープは、特定の基準によって、例えば、Ａｂ及びＡｇにおける原子（例えば、重い、すなわち水素でない原子）間の距離によって定義される、それが含むアミノ酸残基によって特徴付けることができる。詳細度のさらにより低いレベルにおいて、エピトープは、機能により、例えば、他のＡｂとの競合結合によって、特徴付けることができる。エピトープはまた、別のアミノ酸により置換するとＡｂとＡｇとの間の相互作用の特性が変化する（例えば、アラニン走査を用いて）アミノ酸残基を含むものとして、より包括的に定義され得る。
【０１０７】
エピトープの説明及び定義が、使用されるエピトープマッピング法に依存して、異なる詳細レベルで得られるという事実から、同じＡｇ上への様々なＡｂに対するエピトープの比較も同様に、異なる詳細レベルで実施され得るということになる。
【０１０８】
アミノ酸レベルで説明される、例えば、Ｘ線構造から決定されるエピトープは、それらが同じアミノ酸残基の組を含有する場合、同一といわれる。エピトープは、それらのエピトープによって少なくとも１つのアミノ酸が共有される場合、重複するといわれる。エピトープは、それらのエピトープによって共有されるアミノ酸残基がない場合、別個（固有）であるといわれる。
【０１０９】
競合結合によって特徴付けられるエピトープは、対応する抗体の結合が相互排他的である、すなわち、一方の抗体の結合が他方の抗体の同時または逐次の結合を除外する場合、重複しているといわれる。エピトープは、抗原が対応する両抗体の結合を同時に受入れ可能である場合、別個（固有）であるといわれる。
【０１１０】
「パラトープ」という用語の定義は、「エピトープ」の上記の定義から、観点を逆にして導出される。それ故、「パラトープ」という用語は、抗原に特異的に結合する抗体上のエリアまたは領域、すなわち、抗原（ＩＬ−２）と接触する（「接触」は、本明細書の他の箇所で定義される）抗体上のアミノ酸残基を指す。
【０１１１】
所与の抗体／抗原対に対するエピトープ及びパラトープは、通例の方法によって同定されてよい。例えば、エピトープの大まかな位置が、異なる断片または変異型ＩＬ−２ポリペプチドに結合する抗体の能力を評価することによって決定され得る。抗体と接触するＩＬ−２内の特定のアミノ酸（エピトープ）及びＩＬ−２と接触する抗体における特定のアミノ酸（パラトープ）もまた、実施例に記載される方法などの通例の方法を用いて決定され得る。例えば、抗体及び標的分子が組み合わされてもよく、抗体／抗原複合体が結晶化されてもよい。複合体の結晶構造が決定され、これを使用して、抗体とその標的との間の相互作用の特定の部位が特定され得る。
【０１１２】
本開示によるある抗体は、本明細書に具体的に開示される本開示の抗体と同じＩＬ−２のエピトープまたはドメインに結合し得る。例えば、本開示の他の未だ同定されていない抗体が、ＩＬ−２へのそれらの結合を、次のモノクローナル抗体、すなわちＦ４．７．６、Ｆ４．７．８、Ｆ５．１．１１、Ｆ５．１．９、Ｆ４．７．０６２、Ｆ５．１１．１．０１、Ｆ５．１．１１．０２、Ｆ５．１．１１．０３、Ｆ５．１．１１．０４、Ｆ５．１．１１．０５、Ｆ５．１．１１．０６、Ｆ５．１．１１．０７、Ｆ５．１．１１．０８、Ｆ５．１．１１．０９、Ｆ５．１．９．５、もしくはｄ１Ｃ７、及びそれらの変異型のうちのいずれかの結合と比較することによって、または未だ同定されていない抗体の機能を本明細書に記載される抗体の機能と比較することによって、ならびに／または未だ同定されていない抗体のＩＬ−２上のエピトープ／接触残基を本開示の抗体のエピトープ／接触残基と比較することによって、同定され得る。かかる同定の目的で用いられ得る分析及びアッセイには、実施例１〜５に記載される生物学的活性アッセイにおいて、目的とする抗体とＩＬ−２受容体との間のＩＬ−２の結合についての競合を評価するアッセイ、及び抗体の結晶構造の分析におけるアッセイが含まれる。
【０１１３】
本開示の抗体は、本明細書に記載されるＩＬ−２への結合について、本開示の別の抗体と競合または交差競合する能力を有し得る。例えば、本開示の抗体は、ＩＬ−２への、または本明細書に開示される抗体が結合するＩＬ−２の好適な断片もしくは変異型への結合について、本明細書に記載される抗体と競合または交差競合し得る。
【０１１４】
つまり、第１の抗体が、ＩＬ−２への結合について第２の抗体と競合するが、第２の抗体がＩＬ−２に最初に結合した場合には競合しないのであれば、それは、第２の抗体と「競合」するとされる（一方向性競合とも称される）。どちらの抗体がＩＬ−２に最初に結合したかを問わず、ある抗体が別の抗体と競合する場合、その抗体は、ＩＬ−２への結合について他方の抗体と「交差競合」する。かかる競合または交差競合抗体は、標準的な結合アッセイにおいて、本開示の既知の抗体と競合／交差競合するそれらの能力に基づいて同定され得る。例えば、ＳＰＲ（例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）系を使用することによる）、ＥＬＩＳＡアッセイまたはフローサイトメトリーを用いて、競合／交差競合を実証してもよい。かかる競合／交差競合は、２つの抗体が同一の、重複するまたは同様のエピトープに結合することを示唆し得る。
【０１１５】
本開示の抗体はしたがって、試験抗体が、標的分子上の結合部位について本開示の参照抗体（例えば、Ｆ４．７．６、Ｆ４．７．８、Ｆ５．１．１１、Ｆ５．１．９、Ｆ４．７．０６２、Ｆ５．１１．１．０１、Ｆ５．１．１１．０２、Ｆ５．１．１１．０３、Ｆ５．１．１１．０４、Ｆ５．１．１１．０５、Ｆ５．１．１１．０６、Ｆ５．１．１１．０７、Ｆ５．１．１１．０８、Ｆ５．１．１１．０９、Ｆ５．１．９．５、またはｄ１Ｃ７）と競合／交差競合可能であるか否かを評価する結合アッセイを含む方法によって、同定され得る。競合結合アッセイを実施するための方法は、本明細書に開示される、かつ／または当該技術分野で周知のことである。例えば、それらは、本開示の参照抗体を、その抗体が標的分子に結合できる条件下で標的分子に結合させることを伴い得る。抗体／標的複合体は次いで、試験／第２の抗体に曝露され得、試験抗体が本開示の参照抗体を抗体／標的複合体からどの程度置き換え可能であるかが評価され得る。代替的な方法は、試験抗体を、抗体結合を可能にする条件下で標的分子と接触させ、次いで、その標的分子に結合可能である本開示の参照抗体を追加し、本開示の参照抗体が、試験抗体を抗体／標的複合体からどの程度置き換え可能であるかまたは標的に同時に結合可能であるか（すなわち、非競合抗体）を評価することを伴い得る。
【０１１６】
本開示の参照抗体が標的に結合するのを阻害する試験抗体の能力は、試験抗体が、標的への結合について本開示の参照抗体と競合し得ること、及びそれ故、試験抗体が、本開示の参照抗体と同じ、または実質的に同じＩＬ−２タンパク質上のエピトープまたは領域に結合することを実証する。かかる方法において本開示の参照抗体と競合するものとして同定される試験抗体もまた、本開示の抗体である。試験抗体が本開示の参照抗体と同じ領域においてＩＬ−２に結合し得、本開示の参照抗体と競合し得るという事実は、試験抗体が本開示の抗体と同じ結合部位においてリガンドとして作用し得ること、及び試験抗体がしたがって参照抗体の作用を模倣し得、それ故、本開示の抗体であることを示唆する。これは、本明細書の他の箇所でより完全に説明されるアッセイを用いて、試験抗体の存在下でのＩＬ−２の活性を、参照抗体の存在下でのＩＬ−２の活性と、その他の点では同一の条件下で比較することによって確認することができる。
【０１１７】
本開示の参照抗体は、本明細書に記載される抗体、例えば、Ｆ４．７．６、Ｆ４．７．８、Ｆ５．１．１１、Ｆ５．１．９、Ｆ４．７．０６２、Ｆ５．１１．１．０１、Ｆ５．１．１１．０２、Ｆ５．１．１１．０３、Ｆ５．１．１１．０４、Ｆ５．１．１１．０５、Ｆ５．１．１１．０６、Ｆ５．１．１１．０７、Ｆ５．１．１１．０８、Ｆ５．１．１１．０９、Ｆ５．１．９．５、もしくはｄ１Ｃ７、またはＩＬ−２に結合する能力を保持する本明細書に記載されるその任意の変異型、もしくは部分であり得る。本開示の抗体は、本明細書に記載される参照抗体、またはＩＬ−２に結合する能力を保持する本明細書に記載されるその任意の変異型もしくは部分と同じエピトープに結合し得る。
【０１１８】
本明細書の他の箇所で前述したように、特異的結合が、標的でない分子への抗体の結合を参照して評価され得る。この比較は、標的に結合する及び別の分子に結合する抗体の能力を比較することによって行われ得る。この比較は、ＫＤまたはＫｉの評価において上述のように行われ得る。かかる比較において使用される他方の分子は、標的分子でない任意の分子であってよい。いくつかの実施形態において、他方の分子は、標的分子と同一ではない。いくつかの実施形態において、標的分子は、標的分子の断片ではない。
【０１１９】
特異的結合を決定するために使用される他方の分子は、構造または機能において標的と無関係であり得る。例えば、他方の分子は、無関係の材料または環境において付随する材料であり得る。
【０１２０】
特異的結合を決定するために使用される他方の分子は、標的分子、すなわち、ＩＬ−２と同じ体内経路に関与する別の分子であり得る。本開示の抗体が別のかかる分子よりもＩＬ−２に対して特異性を有することを確実にすることによって、不要な体内交差反応性が回避され得る。
【０１２１】
本開示の抗体は、標的分子に関連するいくつかの分子に結合する能力を保持してもよい。
【０１２２】
代替的に、本開示の抗体は、標的分子に対する特異性を有してもよい。例えば、それは、本明細書に記載される１つの標的分子に結合し得るが、本明細書に記載される異なる標的分子には結合しない場合があるか、または有意に低減された親和性でそれに結合し得る。例えば、完全長成熟ヒトＩＬ−２が標的として使用されてもよいが、その標的に結合する抗体は、例えば、他の哺乳類ＩＬ−２などの、他の種由来の他のＩＬ−２タンパク質には結合不能であり得るか、またはより低い親和性でそれに結合し得る。いくつかの実施形態において、本抗体は、ヒト及びマウス両方のＩＬ−２に結合する。
【０１２３】
本開示によるポリペプチドまたは抗体「断片」または「部分」は、切断によって、例えば、ポリペプチドのＮ末端及び／またはＣ末端からの１つ以上のアミノ酸の除去によって、作製されてもよい。最大１０、最大２０、最大３０、最大４０またはそれよりも多くのアミノ酸が、このようにしてＮ末端及び／またはＣ末端から除去されてもよい。部分はまた、１つ以上の内部欠失によって生成されてもよい。
【０１２４】
本開示の抗体は、抗体Ｆ４．７．６、Ｆ４．７．８、Ｆ５．１．１１、Ｆ５．１．９、Ｆ４．７．０６２、Ｆ５．１１．１．０１、Ｆ５．１．１１．０２、Ｆ５．１．１１．０３、Ｆ５．１．１１．０４、Ｆ５．１．１１．０５、Ｆ５．１．１１．０６、Ｆ５．１．１１．０７、Ｆ５．１．１１．０８、Ｆ５．１．１１．０９、Ｆ５．１．９．５、もしくはｄ１Ｃ７、またはその変異型のうちのいずれか１つの一部分であり得るか、またはそれを含み得る。本開示の抗体は、この抗体またはその変異型の抗原結合部分であり得るか、またはそれを含み得る。例えば、本開示の抗体は、この抗体もしくはその変異型のＦａｂ部分であってもよく、またはこの抗体もしくはその変異型に由来する１本鎖抗体であってよい。
【０１２５】
Ａ変異型抗体は、上記に考察された具体的配列及び部分からの１、２、３、４、５、最大１０、最大２０、最大３０個またはそれよりも多くのアミノ酸の置換及び／または欠失及び／または挿入を含み得る。「欠失」変異型は、個々のアミノ酸の欠失、２、３、４もしくは５つのアミノ酸などの小さなアミノ酸の群の欠失、または特異的アミノ酸ドメインもしくは他の特徴などのより大きなアミノ酸領域の欠失を含み得る。「挿入」変異型は、個々のアミノ酸の挿入、２、３、４もしくは５つのアミノ酸などの小さなアミノ酸の群の挿入、または特異的アミノ酸ドメインもしくは他の特徴などのより大きなアミノ酸領域の挿入を含み得る。いくつかの実施形態における「置換」変異型は、１つ以上のアミノ酸を同じ数のアミノ酸と置き換えること、及び保存的アミノ酸置換を行うことを伴う。例えば、アミノ酸は、同様の特性を有する代替的なアミノ酸、例えば、別の塩基性アミノ酸、別の酸性アミノ酸、別の中性アミノ酸、別の荷電アミノ酸、別の親水性アミノ酸、別の疎水性アミノ酸、別の極性アミノ酸、別の芳香族アミノ酸または別の脂肪族アミノ酸で置換されてもよい。好適な置換基を選択するために使用され得る２０個の主要アミノ酸のいくつかの特性は、下記に記載される通りである。
【０１２６】
置換変異型は、抗体分子中の少なくとも１つのアミノ酸残基が除去され、異なる残基がその位置に挿入されている。置換変異誘発のために最も注目される部位には、超可変ドメインが含まれるが、フレームワークの改変もまた企図される。保存的置換が、「保存的置換」の見出しの下に表１に示される。かかる置換が生物学的活性の変化をもたらす場合、下記に示される「例となる置換」と命名される、またはアミノ酸クラスを参照して下記にさらに示される、より実質的な変化が導入され、生成物がスクリーニングされ得る。
【０１２７】
（表１）アミノ酸置換
2018537962.tif 000002
【０１２８】
抗体の生物学的特性の実質的な修飾は、（ａ）例えば、β−シートもしくはらせん立体構造としての、置換エリアにおけるポリペプチド骨格の構造、（ｂ）標的部位における分子の電荷もしくは疎水性度、または（ｃ）側鎖のかさ、を維持することに対するそれらの効果が著しく異なる置換を選択することによって遂行される。自然発生残基は、共通の側鎖特性に基づいて次の群に分類される。
（１）非極性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、
（２）電荷を持たない極性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、
（３）酸性（負荷電性）：Ａｓｐ、Ｇｌｕ、
（４）塩基性（正電荷性）：Ｌｙｓ、Ａｒｇ、
（５）鎖配向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、及び
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、Ｈｉｓ。
【０１２９】
非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーを別のクラスと交換することによって行われる。
【０１３０】
例えば、行われ得る置換の一種は、抗体において、化学的に反応性であり得る１つ以上のシステインを別の残基、例えば、限定するものではないが、アラニンまたはセリンに変化させることである。例えば、非標準的システインの置換が可能である。置換は、抗体の可変ドメインのＣＤＲもしくはフレームワーク領域において、または定常領域において行われ得る。いくつかの実施形態において、システインは、標準的である。分子の酸化安定度を改善し、異常な架橋を防止するために、抗体の適正な立体構造の維持に関与しない任意のシステイン残基もまた、一般的にはセリンで置換されてよい。逆に、抗体の安定度を改善するために、特に抗体がＦｖ部分などの抗体部分である場合には、システイン結合（複数可）が抗体に追加されてもよい。
【０１３１】
本開示はまた、ＩＬ−２抗体を生成、選択、及び作製する方法も提供する。本開示の抗体は、当該技術分野で既知の手順によって作製することができる。いくつかの実施形態において、抗体は、当該技術分野で既知の任意の方法を用いて、組換えにより作製され、発現されてもよい。本開示はまた、ｈＩＬ−２抗体を生成、選択、及び作製する方法も提供する。本開示の抗体は、当該技術分野で既知の手順によって作製することができる。いくつかの実施形態において、抗体は、当該技術分野で既知の任意の方法を用いて、組換えにより作製され、発現されてもよい。
【０１３２】
いくつかの実施形態において、抗体が調製され、ファージディスプレイ技術によって選択されてもよい。例えば、米国特許第５，５６５，３３２号、同第５，５８０，７１７号、同第５，７３３，７４３号、及び同第６，２６５，１５０号、ならびにＷｉｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２：４３３−４５５，１９９４を参照されたい。代替的に、ファージディスプレイ技術（ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５３，１９９０）を用いて、未免疫ドナー由来の免疫グロブリン可変（Ｖ）ドメイン遺伝子レパートリーから、体外でヒト抗体及び抗体部分を産生させることができる。この技法によれば、抗体Ｖドメイン遺伝子は、インフレームで、Ｍ１３またはｆｄなどの繊維状ファージの主要または副外被タンパク質遺伝子にクローニングされ、ファージ粒子の表面上の機能的抗体部分として提示される。繊維状粒子は、ファージゲノムの１本鎖ＤＮＡコピーを含有するため、抗体の機能的特性に基づく選択はまた、それらの特性を呈する抗体をコードする遺伝子の選択ももたらす。それ故、ファージは、Ｂ細胞の特性のうちのいくつかを模倣する。ファージディスプレイは、多様なフォーマットで行うことができ、概説については、例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｋｅｖｉｎ  Ｓ．ａｎｄ  Ｃｈｉｓｗｅｌｌ，Ｄａｖｉｄ  Ｊ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ３：５６４−５７１，１９９３を参照されたい。Ｖ遺伝子セグメントのいくつかの源がファージディスプレイに使用され得る。Ｃｌａｃｋｓｏｎら（Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８，１９９１）は、多様な数々の抗オキサゾロン抗体を、免疫化マウスの脾臓に由来するＶ遺伝子の小さなランダムコンビナトリアルライブラリから単離した。ヒトドナー由来のＶ遺伝子のレパートリーを構築することができ、多様な数々の抗原（自己抗原を含む）に対する抗体を、Ｍａｒｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７、またはＧｒｉｆｆｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，ＥＭＢＯ  Ｊ．１２：７２５−７３４によって記載される技法に本質的に従って単離することができる。自然免疫応答において、抗体遺伝子は、高頻度で変異を蓄積する（体細胞超変異）。導入される変化のうちのいくつかは、より高い親和性を付与し、高親和性表面免疫グロブリンを提示しているＢ細胞が、後続の抗原チャレンジ中に優先的に複製及び分化される。この天然プロセスは、「鎖シャフリング」として知られる技法を用いることによって模倣することができる。（Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌ．１０：７７９−７８３）。この方法において、ファージディスプレイによって得られた「一次」ヒト抗体の親和性は、重鎖及び軽鎖Ｖ領域遺伝子を、未免疫ドナーから得られたＶドメイン遺伝子の自然発生変異型（レパートリー）のレパートリーと順次に置き換えることによって、改善され得る。この技法は、ｐＭ〜ｎＭ範囲の親和性を有する抗体及び抗体部分の生産を可能にする。非常に大きなファージ抗体レパートリー（別名「マザー・オブ・オール・ライブラリ（ｍｏｔｈｅｒ−ｏｆ−ａｌｌ  ｌｉｂｒ���ｒｉｅｓ）」）を作製するための戦略が、Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２１：２２６５−２２６６，１９９３に記載されている。遺伝子シャフリングもまた用いて、ヒト抗体をげっ歯類抗体から得ることができ、このヒト抗体は、出発げっ歯類抗体と同様の親和性及び特異性を有する。「エピトープインプリンティング（ｅｐｉｔｏｐｅ  ｉｍｐｒｉｎｔｉｎｇ）」とも称される、この方法に従って、ファージディスプレイ技法によって得られたげっ歯類抗体の重鎖または軽鎖Ｖドメイン遺伝子は、ヒトＶドメイン遺伝子のレパートリーと置き換えられて、げっ歯類−ヒトキメラを作出する。抗原上の選択は、機能的抗原結合部位を回復可能なヒト可変ドメインの単離をもたらし、すなわち、エピトープがパートナーの選択を統制する（インプリントする）。げっ歯類Ｖドメインを置き換えるためにこのプロセスが反復されるとき、ヒト抗体が得られる（ＰＣＴ公報第ＷＯ９３／０６２１３号）。ＣＤＲグラフティングによる慣習的なげっ歯類抗体のヒト化とは異なり、この技法は、げっ歯類起源のフレームワークまたはＣＤＲ残基を何ら有しない、完全なヒト抗体を提供する。
【０１３３】
いくつかの実施形態において、抗体は、ハイブリドーマ技術を用いて作製されてもよい。ヒトを含めた任意の哺乳類対象またはそれに由来する抗体産生細胞が、ヒトを含めた哺乳類ハイブリドーマ細胞株の生産の基盤としての役割を果たすように操作され得ることが企図される。宿主動物の免疫化の経路及びスケジュールは一般に、本明細書にさらに記載されるように、抗体刺激及び生産のための確立された従来の技法と一致する。典型的に、宿主動物は、腹腔内、筋肉内、経口、皮下、足底内、及び／または経皮で、本明細書に記載されるようなものを含む、ある量の免疫原を接種される。
【０１３４】
ハイブリドーマは、Ｋｏｈｌｅｒ，Ｂ．ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｃ．，１９７５，Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５−４９７による、またはＢｕｃｋ，Ｄ．Ｗ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ，１８：３７７−３８１，１９８２によって修正される、一般的な体細胞ハイブリダイゼーション技法を用いて、リンパ球及び不死化骨髄腫細胞から調製され得る。Ｘ６３−Ａｇ８．６５３、及びＳａｌｋ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  Ｃｅｎｔｅｒ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．，ＵＳＡ提供の骨髄腫細胞株を含むがこれらに限定されない、利用可能な骨髄腫細胞株が、ハイブリダイゼーションに使用され得る。一般に、この技法は、ポリエチレングリコールなどの融合剤を使用して、または当業者に周知の電気的手段によって、骨髄腫細胞及びリンパ系細胞を融合することを伴う。融合後、細胞は、ハイブリダイズされていない親細胞を排除するために、融合培地から分離され、ヒポキサンチン−アミノプテリン−チミジン（ＨＡＴ）培地などの選択的成長培地で成長させられる。血清を補充されてもされなくても、本明細書に記載される培地のうちのいずれも、モノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマを培養するために使用することができる。細胞融合技法に代わる別の代替手段として、ＥＢＶ固定化Ｂ細胞を使用して、本開示のＩＬ−２モノクローナル抗体を産生させてもよい。ハイブリドーマまたは他の固定化Ｂ細胞は、所望であれば、増殖及びサブクローニングされ、上清が、従来のイムノアッセイ手順（例えば、放射イムノアッセイ、酵素イムノアッセイ、または蛍光イムノアッセイ）によって、抗免疫原活性についてアッセイされる。
【０１３５】
抗体の源として使用され得るハイブリドーマは、ＩＬ−２に特異的なモノクローナル抗体を産生する親ハイブリドーマのすべての誘導体、子孫細胞、またはその一部分を包含する。
【０１３６】
かかる抗体を産生するハイブリドーマは、既知の手順を用いて体外でも体内でも成長させられ得る。モノクローナル抗体は、所望であれば、硫酸アンモニウム、ゲル電気泳動、透析、クロマトグラフィー、及び限外濾過などの従来の免疫グロブリン精製手順によって、培養培地または体液から単離され得る。望まれない活性は、存在する場合、例えば、調製物を、固相に結合された免疫原で作製された吸着剤にかけて流し、所望の抗体を免疫原から溶出するまたは放出させることによって、除去され得る。二重機能性または誘導体化剤、例えば、マレイミドベンゾイルスルホスクシンイミドエステル（システイン残基を介した）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（リジン残基を介した）、グルタルアルデヒド、無水コハク酸、ＳＯＣｌ２、またはＲ１Ｎ＝Ｃ＝ＮＲ（式中、Ｒ及びＲ１は、異なるアルキル基である）を使用して、免疫化対象の種において免疫原性であるタンパク質、例えば、キーホールリンペットヘモシアニン、血清アルブミン、ウシサイログロブリン、またはダイズトリプシン阻害剤にコンジュゲートされた、ＩＬ−２ポリペプチド、または標的アミノ酸配列を含有する一部分での宿主細胞の免疫化は、抗体（例えば、モノクローナル抗体）の集団を生み出し得る。
【０１３７】
所望であれば、目的とするＩＬ−２抗体（モノクローナルまたはポリクローナル）は、配列決定されてもよく、そのポリヌクレオチド配列が次いで、発現または伝播のためにベクターにクローニングされてもよい。目的とする抗体をコードする配列は、宿主細胞内のベクターにおいて維持され得、宿主細胞を次いで増殖させ、将来の使用のために凍結することができる。細胞培養における組換えモノクローナル抗体の生産は、当該技術分野で既知の手段によって、Ｂ細胞からの抗体遺伝子のクローニングを介して実施することができる。例えば、Ｔｉｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００８，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３２９，１１２、米国特許第７，３１４，６２２号を参照されたい。
【０１３８】
表２に示されるプラスミドは、ブダペスト条約に準拠した契約の下でＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）、１０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｌｖｄ．，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ  ２０１１０−２２０９に受託されている。プラスミドには次の受託番号が割り当てられている。
【０１３９】
（表２）
2018537962.tif 000003
【０１４０】
いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチド配列は、抗体を「ヒト化する」ため、または抗体の親和性もしくは他の特性を改善するための遺伝子操作に使用されてもよい。抗体はまた、例えば、イヌ、ネコ、霊長類、ウマ及びウシにおいて使用するためにカスタマイズされてもよい。
【０１４１】
いくつかの実施形態において、完全ヒト抗体は、特定のヒト免疫グロブリンタンパク質を発現するように操作された市販のマウスを使用して得られてもよい。より望ましい（例えば、完全ヒト抗体）またはより強固な免疫応答を引き起こすように設計されているトランスジェニック動物もまた、ヒト化またはヒト抗体の生成に使用され得る。かかる技術の例は、Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｉｎｃ．（Ｆｒｅｍｏｎｔ，ＣＡ）によるＸｅｎｏｍｏｕｓｅ（商標）ならびにＭｅｄａｒｅｘ，Ｉｎｃ．（Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，ＮＪ）によるＨｕＭＡｂ−Ｍｏｕｓｅ（登録商標）及びＴＣ  Ｍｏｕｓｅ（商標）である。
【０１４２】
抗体は、まず抗体及び抗体産生細胞を宿主動物から単離し、遺伝子配列を得、その遺伝子配列を使用して、宿主細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）において抗体を組換え発現させることによって作製され得る。用いられ得る別の方法は、抗体配列を植物（例えば、タバコ）またはトランスジェニック乳汁において発現させることである。抗体を植物またはトランスジェニック乳汁において組換え発現させるための方法が開示されている。例えば、Ｐｅｅｔｅｒｓ，ｅｔ  ａｌ．Ｖａｃｃｉｎｅ  １９：２７５６，２００１、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．ａｎｄ  Ｄ．Ｈｕｓｚａｒ  Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  １３：６５，１９９５、及びＰｏｌｌｏｃｋ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２３１：１４７，１９９９を参照されたい。抗体の誘導体、例えば、ドメイン、１本鎖等を作製するための方法が、当該技術分野で既知である。
【０１４３】
イムノアッセイ、及び蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）などのフローサイトメトリー選別技法もまた、ＩＬ−２に特異的である抗体を単離するために用いることができる。
【０１４４】
モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を用いて（例えば、モノクローナル抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合可能であるオリゴヌクレオチドプローブを使用して）容易に単離及び配列決定される。いくつかの実施形態において、ハイブリドーマ細胞は、かかるＤＮＡの源としての役割を果たす。いったん単離されると、ＤＮＡは、発現ベクター（ＰＣＴ公報第ＷＯ８７／０４４６２号に開示される発現ベクターなど）の中に配置され、これが次いで、通常であれば免疫グロブリンタンパク質を産生しないＥ．ｃｏｌｉ細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、または骨髄腫細胞などの宿主細胞の中にトランスフェクトされて、組換え宿主細胞内でモノクローナル抗体の合成を得る。例えば、ＰＣＴ公報第ＷＯ８７／０４４６２号を参照されたい。ＤＮＡはまた、例えば、相同マウス配列の代わりにヒト重鎖及び軽鎖定常ドメインのコード配列で置換することによって（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８１：６８５１，１９８４）、または非免疫グロブリンポリペプチドのコード配列の全部もしくは一部を免疫グロブリンコード配列に共有結合性で連結することによって、修飾されてもよい。このようにして、本明細書のＩＬ−２抗体の結合特異性を有する「キメラ」または「ハイブリッド」抗体が調製される。
【０１４５】
抗体部分は、抗体のタンパク質分解または他の分解によって、上述の組換え法（すなわち、単一または融合ポリペプチド）によってまたは化学合成によって、生産することができる。本抗体のポリペプチド、とりわけ、最大約５０アミノ酸のより短いポリペプチドは、化学合成によって好都合に作製される。化学合成の方法は、当該技術分野で既知であり、市販されている。例えば、抗体は、固相法を用いた自動化ポリペプチド合成装置によって生産可能である。米国特許第５，８０７，７１５号、同第４，８１６，５６７号、及び同第６，３３１，４１５もまた参照されたい。
【０１４６】
いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、本開示のＩＬ−２抗体の重鎖及び／または軽鎖可変ドメインをコードする配列を含む。目的とする抗体をコードする配列は、宿主細胞内のベクターにおいて維持され得、宿主細胞を次いで増殖させ、将来の使用のために凍結することができる。ベクター（発現ベクター）及び宿主細胞が本明細書にさらに記載される。
【０１４７】
本開示は、親和性成熟させた実施形態を含む。例えば、親和性成熟させた抗体は、当該技術分野で既知の手順によって生産することができる（Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１０：７７９−７８３、Ｂａｒｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ，ＵＳＡ  ９１：３８０９−３８１３、Ｓｃｈｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｇｅｎｅ，１６９：１４７−１５５、Ｙｅｌｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５５：１９９４−２００４、Ｊａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５４（７）：３３１０−９、Ｈａｗｋｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２６：８８９−８９６、及びＰＣＴ公報第ＷＯ２００４／０５８１８４号）。
【０１４８】
次の方法が、抗体の親和性を調整し、ＣＤＲを特徴付けるために用いられてもよい。「ライブラリ走査変異誘発」と呼ばれる、抗体のＣＤＲを特徴付ける及び／または抗体などのポリペプチドの結合親和性を改変する（改善するなど）１つのやり方。一般に、ライブラリ走査変異誘発は、次のように機能する。ＣＤＲにおける１つ以上のアミノ酸位置が、当該技術分野で認識される方法を用いて、２つ以上（３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個など）のアミノ酸と置き換えられる。これは、クローンの小さなライブラリを生成し（いくつかの実施形態においては、分析される各アミノ酸位置に対して１つ）、各々が２つ以上のメンバーの複雑度を有する（各位置において２つ以上のアミノ酸が置換される場合）。一般に、ライブラリはまた、天然（非置換）アミノ酸を含むクローンを含む。各ライブラリからの少数のクローン、例えば、約２０〜８０個のクローン（ライブラリの複雑度に応じて）が、標的ポリペプチド（または他の結合標的）に対する結合親和性についてスクリーニングされ、増加した、同じ、減少した結合を有する、または結合を有しない候補が同定される。結合親和性を決定するための方法は、当該技術分野で周知のことである。結合親和性は、例えば、約２倍またはそれを超える結合親和性の差異を検出するＢｉａｃｏｒｅ（商標）表面プラズモン分析、Ｋｉｎｅｘａ（登録商標）Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ、シンチレーション近接アッセイ、ＥＬＩＳＡ、ＯＲＩＧＥＮ（登録商標）イムノアッセイ、蛍光消光法、蛍光移動法、及び／または酵母ディスプレイを用いて、決定され得る。結合親和性はまた、好適なバイオアッセイを用いてスクリーニングされてもよい。Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）は、出発抗体がすでに比較的高い親和性、例えば、約１０ｎＭ以下のＫＤで結合する場合、特に有用である。
【０１４９】
いくつかの実施形態において、ＣＤＲにおける各アミノ酸位置（いくつかの実施形態においては、１度に１つ）が、当該技術分野で認識される変異誘発法（これらのうちのいくつかが本明細書に記載される）を用いて、２０個すべての天然アミノ酸と置き換えられる。これは、クローンの小さなライブラリを生成し（いくつかの実施形態においては、分析される各アミノ酸位置に対して１つ）、各々が２０メンバーの複雑度を有する（各位置において２０個すべてのアミノ酸が置換される場合）。いくつかの実施形態において、ＣＤＲにおける各アミノ酸位置（いくつかの実施形態においては、１度に１つ）が、当該技術分野で認識される変異誘発法を用いて、システインを除く２０個すべての天然アミノ酸と置き換えられる
【０１５０】
いくつかの実施形態において、スクリーニング対象のライブラリは、２つ以上の位置において置換を含み、これは同じＣＤＲにあっても２つ以上のＣＤＲにあってもよい。それ故、ライブラリは、１つのＣＤＲにおける２つ以上の位置において置換を含んでもよい。ライブラリは、２つ以上のＣＤＲにおける２つ以上の位置において置換を含んでもよい。ライブラリは、３、４、５つ、またはそれよりも多くの位置において置換を含んでもよく、該位置は、２、３、４、５または６つのＣＤＲにおいて見出される。置換は、低冗長性コドンを使用して調製され得る。例えば、Ｂａｌｉｎｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｇｅｎｅ  １３７（１）：１０９−１８の表２を参照されたい。
【０１５１】
ＣＤＲは、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）ＣＤＲ３及び／または軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）ＣＤＲ３であってもよい。ＣＤＲは、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及び／またはＶＬ  ＣＤＲ３のうちの１つ以上であってもよい。ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ、拡張型ＣＤＲ、ＡｂＭ  ＣＤＲ、コンタクトＣＤＲ、または立体構造的ＣＤＲであってもよい。
【０１５２】
いくつかの実施形態において、ライブラリは、配列番号７１及び７２に従って作製される。
【０１５３】
改善された結合を有する候補が配列決定され得、それによって改善された親和性（「改善された」置換とも呼ばれる）をもたらすＣＤＲ置換変異体を特定する。結合する候補もまた配列決定され得、それによって結合を保持するＣＤＲ置換を特定する。
【０１５４】
複数回のスクリーニングが実施されてもよい。例えば、改善された結合を有する候補（各々が１つ以上のＣＤＲの１つ以上の位置でアミノ酸置換を含む）はまた、改善された各ＣＤＲ位置（すなわち、置換変異体が改善された結合を示す、ＣＤＲにおけるアミノ酸位置）で少なくとも元の及び置換されたアミノ酸を含有する第２のライブラリの設計に有用である。このライブラリの調製、及びスクリーニングまたは選択が下記でさらに考察される。
【０１５５】
ライブラリ走査変異誘発はまた、改善された結合、同じ結合、減少した結合を有する、または結合を有しないクローンの頻度がまた、抗体−抗原複合体の安定性に対する各アミノ酸位置の重要性に関する情報も提供する限りにおいて、ＣＤＲを特徴付けるための手段も提供する。例えば、ＣＤＲのある位置が、２０個すべてのアミノ酸に変化されたときに結合を保持する場合、その位置は、抗原結合に必要とされる可能性が低い位置として特定される。逆に、ＣＤＲのある位置が、小さなパーセンテージの置換でのみ結合を保持する場合、その位置は、ＣＤＲ機能に重要である位置として特定される。それ故、ライブラリ走査変異誘発法は、多くの異なるアミノ酸（２０個すべてのアミノ酸を含む）に変化され得るＣＤＲにおける位置、及び変化不可能であるかまたは少数のアミノ酸にのみ変化可能であるＣＤＲにおける位置に関する情報を生成する。
【０１５６】
改善された親和性を有する候補は、第２のライブラリにおいて組み合わされ得、この第２のライブラリは、その位置で改善されたアミノ酸、元のアミノ酸を含み、所望されるまたは所望のスクリーニングもしくは選択方法を用いて許容されるライブラリの複雑度に応じて、その位置で追加の置換をさらに含み得る。その上、所望であれば、隣接するアミノ酸位置が少なくとも２つ以上のアミノ酸にランダム化され得る。隣接するアミノ酸のランダム化は、変異体ＣＤＲにおける追加の立体構造的柔軟性を許容し得、これが今度は、より多数の改善変異の導入を許容または促進し得る。ライブラリはまた、第１回目のスクリーニングにおいて改善された親和性を示さなかった位置で置換を含み得る。
【０１５７】
第２のライブラリは、Ｂｉａｃｏｒｅ、Ｋｉｎｅｘａ（商標）バイオセンサー分析を用いたスクリーニング、ならびにファージディスプレイ、酵母ディスプレイ、及びリボソームディスプレイを含む、選択のための当該技術分野で既知の任意の方法を用いた選択を含む、当該技術分野で既知の任意の方法を用いて、改善された及び／または改変された結合親和性を有するライブラリメンバーについてスクリーニングまたは選択される。
【０１５８】
本開示のＩＬ−２抗体を発現させるために、ＶＨ及びＶＬ領域をコードするＤＮＡ断片が、上述の方法のうちのいずれかを用いてまず獲得され得る。種々の修飾、例えば変異、欠失、及び／または付加もまた、当業者に既知の標準的方法を用いてＤＮＡ配列に導入され得る。例えば、変異誘発は、ＰＣＲ介在性変異誘発などの標準的方法を用いて実施され得、ＰＣＲ介在性変異誘発においては、ＰＣＲ産物が所望の変異または部位特異的変異誘発を含有するように、変異したヌクレオチドがＰＣＲプライマーに組み込まれる。
【０１５９】
本開示は、表７に示される可変ドメイン及びＣＤＲへの修飾を包含する。例えば、本開示は、それらの特性に著しく影響しない機能的に均等の可変ドメイン及びＣＤＲならびに活性及び／または親和性を増強したまたは減少させた変異型を含む、抗体を含む。例えば、アミノ酸配列は、ＩＬ−２に対する所望の結合親和性を有する抗体を得るために変異され得る。いくつかの実施形態において、アミノ酸配列は、ＩＬ−２に対する所望の結合親和性を有する抗体を得るために変異され得る。修飾ポリペプチドの例としては、アミノ酸残基の保存的置換、ポリペプチドの機能的活性を著しく有害に変化させない、もしくはポリペプチドのそのリガンドに対する親和性を成熟させる（増強する）アミノ酸の１つ以上の欠失もしくは付加を有するポリペプチド、または化学類似体の使用が挙げられる。
【０１６０】
アミノ酸配列挿入には、１残基から１００以上の残基を含有するポリペプチドに及ぶ長さのアミノ末端及び／またはカルボキシル末端の融合、ならびに単一もしくは複数のアミノ酸残基の配列内挿入が含まれる。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体またはエピトープタグに融合された抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入変異型には、抗体のＮ末端もしくはＣ末端への、血液循環中の抗体の半減期を増加させる酵素またはポリペプチドの融合が含まれる。
【０１６１】
本抗体はまた、例えば、重鎖及び／または軽鎖の可変ドメインにおいて、例えば、抗体の結合特性を改変するように、修飾され得る。可変ドメインにおける変化は、結合親和性及び／または特異性を改変し得る。いくつかの実施形態において、１〜５箇所以内の保存的アミノ酸置換がＣＤＲドメイン内で行われる。他の実施形態において、１〜３箇所以内の保存的アミノ酸置換がＣＤＲドメイン内で行われる。例えば、ＩＬ−２に対する抗体のＫＤを増加もしくは減少させる、抗体のｋｏｆｆを増加もしくは減少させる、またはその結合特異性を改変する変異が、ＣＤＲ領域のうちの１つ以上において作製され得る。部位特異的変異誘発の技法は、当該技術分野で周知のことである。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．ａｎｄ  Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．（上記参照）を参照されたい。
【０１６２】
ＩＬ−２抗体の半減期を増加させるための修飾または変異がまた、フレームワーク領域または定常領域において行われてもよい。例えば、ＰＣＴ公報第ＷＯ００／０９５６０号を参照されたい。抗体の免疫原性を改変する、別の分子への共有結合もしくは非共有結合のための部位を提供する、または補体結合、ＦｃＲ結合及び抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性などの特性を改変する、フレームワーク領域または定常領域における変異もまた行われ得る。本開示によれば、単一の抗体が、可変ドメインのＣＤＲもしくはフレームワーク領域いずれか１つ以上においてまたは定常領域において変異を有してもよい。
【０１６３】
修飾にはまた、グリコシル化及び非グリコシル化ポリペプチド、ならびに例えば、様々な糖のグリコシル化、アセチル化、及びリン酸化などの他の翻訳後修飾を有するポリペプチドも含まれる。抗体は、それらの定常領域における保存された位置でグリコシル化される（Ｊｅｆｆｅｒｉｓ  ａｎｄ  Ｌｕｎｄ，１９９７，Ｃｈｅｍ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６５：１１１−１２８、Ｗｒｉｇｈｔ  ａｎｄ  Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，１９９７，ＴｉｂＴＥＣＨ  １５：２６−３２）。免疫グロブリンのオリゴ糖側鎖は、タンパク質の機能（Ｂｏｙｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：１３１１−１３１８、Ｗｉｔｔｗｅ  ａｎｄ  Ｈｏｗａｒｄ，１９９０，Ｂｉｏｃｈｅｍ．２９：４１７５−４１８０）及び糖タンパク質の部分間の分子内相互作用に影響を及ぼし、これは、糖タンパク質の立体構造及び提示された３次元表面に影響を及ぼし得る（Ｊｅｆｆｅｒｉｓ  ａｎｄ  Ｌｕｎｄ（上記参照）、Ｗｙｓｓ  ａｎｄ  Ｗａｇｎｅｒ，１９９６，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．７：４０９−４１６）。オリゴ糖はまた、所与の糖タンパク質を特異的認識構造に基づいてある特定の分子に標的合わせする役割も果たし得る。抗体のグリコシル化はまた、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）に影響を及ぼすことも報告されている。特に、分岐（ｂｉｓｅｃｔｉｎｇ）ＧｌｃＮＡｃの形成を触媒する糖転移酵素である、β（１，４）−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ）のテトラサイクリン調節性発現を有するＣＨＯ細胞によって産生される抗体は、改善されたＡＤＣＣ活性を有することが報告された（Ｕｍａｎａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．１７：１７６−１８０）。
【０１６４】
抗体のグリコシル化は、典型的に、Ｎ結合型またはＯ結合型のいずれかである。Ｎ結合型は、アスパラギン残基の側鎖への炭水化物部分の付加を指す。トリペプチド配列アスパラギン−Ｘ−セリン、アスパラギン−Ｘ−スレオニン、及びアスパラギン−Ｘ−システイン（Ｘは、プロリンを除く任意のアミノ酸である）は、アスパラギン側鎖への炭水化物部分の酵素的付加のための認識配列である。それ故、ポリペプチドにおけるこれらのトリペプチド配列のいずれかの存在が、可能性のあるグリコシル化部位を作出する。Ｏ結合型グリコシル化は、糖類であるＮ−アセチルガラクトサミン、ガラクトース、またはキシロースのうちの１つの、ヒドロキシアミノ酸、最も一般的にはセリンまたはスレオニンへの付加を指すが、５−ヒドロキシプロリンまたは５−ヒドロキシリジンもまた使用され得る。
【０１６５】
抗体へのグリコシル化部位の付加は、（Ｎ結合型グリコシル化部位については）アミノ酸配列を、それが上述のトリペプチド配列のうちの１つ以上を含有するように改変することによって、好都合に達成される。この改変はまた、（Ｏ結合型グリコシル化部位については）元の抗体の配列への１つ以上のセリンまたはスレオニン残基の付加、またはそれらによる置換によって、行われてもよい。
【０１６６】
抗体のグリコシル化パターンはまた、根本的なヌクレオチド配列を改変することなく改変されてもよい。グリコシル化は主として、抗体を発現させるために使用される宿主細胞に依存する。可能性のある治療薬としての組換え糖タンパク質、例えば抗体の発現に使用される細胞型が天然細胞であることはまれであり、抗体のグリコシル化パターンの変形形態が予想され得る（例えば、Ｈｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：９０６２−９０７０）。
【０１６７】
宿主細胞の選定に加えて、抗体の組換え生産中のグリコシル化に影響を及ぼす要因には、成長様式、媒体配合、培養密度、酸素化、ｐＨ、精製スキーム等が含まれる。オリゴ糖生産に関与するある特定の酵素の導入または過剰発現を含む、特定の宿主生物において達成されるグリコシル化パターンを改変するための種々の方法が提案されてきた（米国特許第５，０４７，３３５号、同第５，５１０，２６１号及び同第５，２７８，２９９号）。グリコシル化、またはある特定の種類のグリコシル化は、例えば、エンドグリコシダーゼＨ（エンドＨ）、Ｎ−グリコシダーゼＦ、エンドグリコシダーゼＦ１、エンドグリコシダーゼＦ２、エンドグリコシダーゼＦ３を使用して、糖タンパク質から酵素的に除去され得る。その上、組換え宿主細胞は、ある特定の種類の多糖類をプロセスすることにおいて欠陥を有するように遺伝子操作することができる。これらの技法及び同様の技法は、当該技術分野で周知のことである。
【０１６８】
他の修飾方法には、酵素的手段、酸化的置換及びキレートを含むがこれらに限定されない、当該技術分野で既知のカップリング技法の使用が含まれる。修飾は、例えば、イムノアッセイ用の標識の結合に使用され得る。修飾ポリペプチドは、当該技術分野で確立された手順を用いて作製され、当該技術分野で既知の標準的なアッセイを用いてスクリーニングされ得、これらのうちのいくつかが下記及び実施例に記載される。
【０１６９】
いくつかの実施形態において、本抗体は、ヒトＦｃガンマ受容体に対して増加したもしくは減少した結合親和性を有する、免疫学的に不活性もしくは部分的に不活性である、例えば、補体媒介性溶解を誘発しない、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）を刺激しない、もしくはミクログリアを活性化しない、または補体媒介性溶解の誘発、ＡＤＣＣの刺激、もしくはミクログリアの活性化のうちのいずれか１つ以上において低減された活性を有する（未修飾抗体と比較して）、修飾定常領域を含む。定常領域の異なる修飾を用いて、エフェクター機能の最適なレベル及び／または組み合わせを達成してもよい。例えば、Ｍｏｒｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ８６：３１９−３２４，１９９５、Ｌｕｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １５７：４９６３−９  １５７：４９６３−４９６９，１９９６、Ｉｄｕｓｏｇｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １６４：４１７８−４１８４，２０００、Ｔａｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １４３：２５９５−２６０１，１９８９、及びＪｅｆｆｅｒｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  １６３：５９−７６，１９９８．を参照されたい。いくつかの実施形態において、定常領域は、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９９，２９：２６１３−２６２４、ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＧＢ９９／０１４４１号、及び／または英国特許出願第９８０９９５１．８号に記載されるように修飾される。
【０１７０】
いくつかの実施形態において、抗体定常領域は、Ｆｃガンマ受容体ならびに補体及び免疫系との相互作用を回避するように修飾され得る。かかる抗体の調製のための技法は、ＷＯ９９／５８５７２に記載される。例えば、定常領域は、抗体が治験及びヒトにおける治療で使用される場合に免疫応答を回避するために、ヒト定常領域により類似するように操作されてもよい。例えば、米国特許第５，９９７，８６７号及び同第５，８６６，６９２号を参照されたい。
【０１７１】
いくつかの実施形態において、定常領域は、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９９，２９：２６１３−２６２４、ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＧＢ９９／０１４４１号、及び／または英国特許出願第９８０９９５１．８号に記載されるように修飾される。かかる実施形態において、Ｆｃは、ヒトＩｇＧ２またはヒトＩｇＧ４であり得る。Ｆｃは、変異Ａ３３０Ｐ３３１〜Ｓ３３０Ｓ３３１（ＩｇＧ２Δａ）を含有するヒトＩｇＧ２であり得、これらのアミノ酸残基は、野生型ＩｇＧ２配列を参照して番号付けされる。Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９９，２９：２６１３−２６２４。いくつかの実施形態において、本抗体は、次の変異（Ａｒｍｏｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ４０  ５８５−５９３）：Ｅ２３３Ｆ２３４Ｌ２３５〜Ｐ２３３Ｖ２３４Ａ２３５（ＩｇＧ４Δｃ）を含むＩｇＧ４の定常領域をみ、この番号付けは、野生型ＩｇＧ４を参照している。なおも別の実施形態において、Ｆｃは、欠失Ｇ２３６を伴うヒトＩｇＧ４  Ｅ２３３Ｆ２３４Ｌ２３５〜Ｐ２３３Ｖ２３４Ａ２３５（ＩｇＧ４Δｂ）である。別の実施形態において、Ｆｃは、ヒンジ安定化変異Ｓ２２８〜Ｐ２２８を含有する任意のヒトＩｇＧ４  Ｆｃ（ＩｇＧ４、ＩｇＧ４ΔｂまたはＩｇＧ４Δｃ）である（Ａａｌｂｅｒｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １０５，９−１９）。
【０１７２】
いくつかの実施形態において、本抗体は、次の変異：Ａ３３０Ｐ３３１〜Ｓ３３０Ｓ３３１（アミノ酸番号付けは野生型ＩｇＧ２配列を参照）を含むヒト重鎖ＩｇＧ２定常領域を含む。Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９９，２９：２６１３−２６２４。依然として他の実施形態において、定常領域は、Ｎ結合型グリコシル化に関して脱グリコシル化されている。いくつかの実施形態において、定常領域は、定常領域におけるＮ−グリコシル化認識配列の一部であるオリゴ糖付加残基及び／または隣接残基を変異させることによって、Ｎ結合型グリコシル化に関して脱グリコシル化されている。例えば、Ｎ−グリコシル化部位Ｎ２９７は、例えば、Ａ、Ｑ、Ｋ、またはＨに変異され得る。Ｔａｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １４３：２５９５−２６０１，１９８９、及びＪｅｆｆｅｒｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  １６３：５９−７６，１９９８を参照されたい。いくつかの実施形態において、定常領域は、Ｎ結合型グリコシル化に関して脱グリコシル化されている。定常領域は、酵素的に（酵素ＰＮＧａｓｅによって炭水化物を除去するなど）、またはグリコシル化欠損宿主細胞における発現によって、Ｎ結合型グリコシル化に関して脱グリコシル化され得る。
【０１７３】
他の抗体修飾には、ＰＣＴ公報第ＷＯ９９／５８５７２号に記載されるように修飾された抗体が含まれる。これらの抗体は、標的分子に指向される結合ドメインに加えて、ヒト免疫グロブリン重鎖の定常領域の全部または一部と実質的に相同なアミノ酸配列を有するエフェクタードメインを含む。これらの抗体は、著しい標的の補体依存性溶解、または細胞媒介性破壊を伴わずに標的分子に結合可能である。いくつかの実施形態において、エフェクタードメインは、ＦｃＲｎ及び／またはＦｃγＲＩＩｂに特異的に結合可能である。これらは、典型的に、２つ以上のヒト免疫グロブリン重鎖ＣＨ２ドメインに由来するキメラドメインに基づく。この様態での抗体修飾は、従来の抗体療法に対する炎症性反応及び他の副作用を回避するために、長期抗体療法において使用するのに特に好適である。
【０１７４】
本開示はまた、さらに修飾され得る抗体定常ドメインも提供する。Ｆｃ領域の変異型、例えば、アミノ酸置換、挿入、及び／または付加及び／または欠失は、エフェクター機能を増強するまたは減弱することが知られている。例えば、Ｐｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ，２００２，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．３０：４８７−４９０、Ｓｔｒｏｈｌ，２００９，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０（６）：６８５−６９１、米国特許５，６２４，８２１号、同第５，６４８，２６０号、同第５，８８５，５７３号、同第６，７３７，０５６号、同第７，３１７，０９１号、同第ＰＣＴ公報第ＷＯ９９／５８５７２号、同第ＷＯ００／４２０７２号、同第ＷＯ０４／０２９２０７号、同第ＷＯ２００６／１０５３３８号、同第ＷＯ２００８／０２２１５２号、同第ＷＯ２００８／１５０４９４号、同第ＷＯ２０１０／０３３７３６号、同第米国特許出願公開第２００４／０１３２１０１号、同第２００６／００２４２９８号、同第２００６／０１２１０３２号、同第２００６／０２３５２０８号、同第２００７／０１４８１７０；Ａｒｍｏｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２９（８）：２６１３−２６２４（低減されたＡＤＣＣ及びＣＤＣ）、Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６（９）：６５９１−６６０４（低減されたＡＤＣＣ及びＣＤＣ）、Ｉｄｕｓｏｇｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．．１６４（８）：４１７８−４１８４（増加したＡＤＣＣ及びＣＤＣ）、Ｓｔｅｕｒｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５（３）：１１６５−１１７４（低減されたＡＤＣＣ及びＣＤＣ）、Ｉｄｕｓｏｇｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６６（４）：２５７１−２５７５（増加したＡＤＣＣ及びＣＤＣ）、Ｌａｚａｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００６，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０３（１１）：４００５−４０１０（増加したＡＤＣＣ）、Ｒｙａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００７，Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ．Ｔｈｅｒ．，６：３００９−３０１８（増加したＡＤＣＣ）、Ｒｉｃｈａｒｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００８，Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．７（８）：２５１７−２５２７を参照されたい。
【０１７５】
いくつかの実施形態において、本抗体は、未修飾抗体と比較して、ＦｃＲｎに対して増加した結合親和性及び／または増加した血清半減期を有する修飾定常領域を含む。
【０１７６】
「生殖細胞系列化（ｇｅｒｍｌｉｎｉｎｇ）」として知られるプロセスにおいては、ＶＨ及びＶＬ配列におけるある特定のアミノ酸が、生殖細胞系ＶＨ及びＶＬ配列において天然に見出されるアミノ酸と一致するように変異され得る。特に、ＶＨ及びＶＬ配列におけるフレームワーク領域のアミノ酸配列は、抗体が投与される際の免疫原性の危険性を低減するために、生殖細胞系配列と一致するように変異され得る。生殖細胞系列ヒトＶＨ及びＶＬ遺伝子に関するＤＮＡ配列は、当該技術分野で既知である（例えば、「Ｖｂａｓｅ」ヒト生殖細胞系列配列データベースを参照されたい。また、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２、Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：７７６−７９８、及びＣｏｘ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：８２７−８３６も参照されたい）。
【０１７７】
行われ得る別の種類のアミノ酸置換は、抗体において潜在的なタンパク質分解部位を除去することである。かかる部位は、抗体の可変ドメインのＣＤＲもしくはフレームワーク領域において、または定常領域において生じ得る。システイン残基の置換及びタンパク質分解部位の除去は、抗体製品における異質性の危険性を減少させ、ひいてはその均質性を増加させ得る。別の種類のアミノ酸置換は、潜在的な脱アミド化部位を形成するアスパラギン−グリシン対を、これらの残基の一方または両方を変化させることによって排除することである。別の例においては、本開示のＩＬ−２抗体の重鎖のＣ末端リジンが、切断または別様に除去され得る。本開示の種々の実施形態において、本抗体の重鎖及び軽鎖は、任意選択で、シグナル配列を含んでもよい。
【０１７８】
いったん本開示のＶＨ及びＶＬセグメントをコードするＤＮＡ断片が得られると、これらのＤＮＡ断片は、例えば、可変ドメイン遺伝子を完全長抗体鎖遺伝子に、Ｆａｂ断片遺伝子に、またはｓｃＦｖ遺伝子に変換するように、標準的な組換えＤＮＡ技法によってさらに操作することができる。これらの操作において、ＶＬまたはＶＨをコードするＤＮＡ断片は、抗体定常領域または可動性リンカーなどの別のタンパク質をコードする別のＤＮＡ断片に作動的に連結される。この関連で使用される「作動的に連結される」という用語は、２つのＤＮＡ断片によってコードされるアミノ酸配列がインフレームにとどまるよう２つのＤＮＡ断片が連結されることを意味するように意図される。
【０１７９】
ＶＨ領域をコードする単離されたＤＮＡは、ＶＨをコードするＤＮＡを重鎖定常領域（ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３）をコードする別のＤＮＡ分子に作動的に連結することによって、完全長重鎖遺伝子に変換され得る。ヒト重鎖定常領域遺伝子の配列は、当該技術分野で既知であり（例えば、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２を参照されたい）、これらの領域を包含するＤＮＡ断片は、標準的なＰＣＲ増幅によって得ることができる。重鎖定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭまたはＩｇＤ定常領域であり得るが、いくつかの実施形態においては、ＩｇＧ１またはＩｇＧ２定常領域である。ＩｇＧ定常領域配列は、Ｇｍ（１）、Ｇｍ（２）、Ｇｍ（３）、及びＧｍ（１７）などの異なる個体間で生じることが知られている種々の対立遺伝子またはアロタイプのうちのいずれでもあり得る。これらのアロタイプは、ＩｇＧ１定常領域における自然発生アミノ酸置換を代表する。Ｆａｂ断片重鎖遺伝子の場合、ＶＨをコードするＤＮＡは、重鎖ＣＨ１定常領域のみをコードする別のＤＮＡ分子に作動的に連結され得る。ＣＨ１重鎖定常領域は、重鎖遺伝子のうちのいずれに由来してもよい。
【０１８０】
ＶＬ領域をコードする単離されたＤＮＡは、ＶＬをコードするＤＮＡを軽鎖定常領域ＣＬをコードする別のＤＮＡ分子に作動的に連結することによって、完全長軽鎖遺伝子（ならびにＦａｂ軽鎖遺伝子）に変換され得る。ヒト軽鎖定常領域遺伝子の配列は、当該技術分野で既知であり（例えば、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２を参照されたい）、これらの領域を包含するＤＮＡ断片は、標準的なＰＣＲ増幅によって得ることができる。軽鎖定常領域は、カッパ定常領域でもラムダ定常領域でもあり得る。カッパ定常領域は、Ｉｎｖ（１）、Ｉｎｖ（２）、及びＩｎｖ（３）などの異なる個体間で生じることが知られている種々の対立遺伝子のうちのいずれであってもよい。ラムダ定常領域は、３つのラムダ遺伝子のうちのいずれに由来してもよい。
【０１８１】
ｓｃＦｖ遺伝子を作出するために、ＶＨ及びＶＬをコードするＤＮＡ断片は、ＶＬ及びＶＨ領域が可動性リンカーによって連結されてＶＨ及びＶＬ配列が連続した１本鎖タンパク質として発現され得るように、可動性リンカーをコードする別の断片に作動的に連結される（例えば、Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６、Ｈｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５４を参照されたい。他の配列のリンカーが設計及び使用されてきた（Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８（上記参照））。リンカーが今度は、薬物の結合または固体支持体への結合などの追加の機能のために修飾され得る。１本鎖抗体は、１本鎖ＶＨ及びＶＬが使用される場合のみ一価であり得、２本のＶＨ及びＶＬが使用される場合には二価、あるいは２本よりも多くのＶＨ及びＶＬが使用される場合には多価であり得る。ＩＬ−２にそして別の分子に特異的に結合する、二重特異性または多価抗体が生成されてもよい。１本鎖変異型は、組換えによっても合成によっても生産することができる。ｓｃＦｖの合成生産の場合、自動化合成装置が使用され得る。ｓｃＦｖの組換え生産の場合、ｓｃＦｖをコードするポリヌクレオチドを含有する好適なプラスミドが、酵母、植物、昆虫または哺乳類細胞などの真核生物であれ、Ｅ．ｃｏｌｉなどの原核生物であれ、好適な宿主細胞に組み込まれ得る。目的とするｓｃＦｖをコードするポリヌクレオチドは、ポリヌクレオチドのライゲーションなどの通例の操作によって作製することができる。結果として生じるｓｃＦｖは、当該技術分野で既知の標準的なタンパク質精製技法を用いて単離することができる。
【０１８２】
ダイアボディなどの他の形態の１本鎖抗体もまた包含される。ダイアボディは、ＶＨ及びＶＬが１本のポリペプチド鎖上で発現されるが、ただし、同じ鎖上の２つのドメイン間の対合を可能にするには短すぎるリンカーを使用し、それによって、ドメインが別の鎖の相補性ドメインと対合するよう強制して２つの抗原結合部位を作出する、二価の二重特異性抗体である（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ．，ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８；ａｎｄ  Ｐｏｌｊａｋ，Ｒ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ２：１１２１−１１２３を参照されたい）。
【０１８３】
２つの共有結合で連結した抗体を含むヘテロコンジュゲート抗体もまた、本開示の範囲内にある。かかる抗体は、免疫系細胞を不要な細胞に標的合わせするために（米国特許第４，６７６，９８０号）、及びＨＩＶ感染の治療に（ＰＣＴ公報第ＷＯ９１／００３６０及び同第ＷＯ９２／２００３７３号、ならびにＥＰ０３０８９）使用されてきた。ヘテロコンジュゲート抗体は、任意の好都合な架橋方法を用いて作製され得る。好適な架橋剤及び技法は、当該技術分野で周知のことであり、米国特許第４，６７６，９８０号に記載される。
【０１８４】
キメラまたはハイブリッド抗体もまた、架橋剤が関与する方法を含めて、既知の合成タンパク質化学反応方法を用いて体外で調製され得る。例えば、ジスルフィド交換反応を用いてまたはチオエーテル結合の形成によって、免疫毒素が構築されてもよい。この目的での好適な試薬の例としては、イミノチオラート及びメチル−４−メルカプトブチルイミダートが挙げられる。
【０１８５】
本開示はまた、本明細書に開示される抗体由来の１つ以上の部分または領域を含む融合タンパク質を包含する。いくつかの実施形態において、本開示のＩＬ−２抗体の全部または一部分が別のポリペプチドに連結された、融合抗体が作製されてもよい。別の実施形態においては、ＩＬ−２抗体の可変ドメインのみがポリペプチドに連結されている。別の実施形態においては、ＩＬ−２抗体のＶＨドメインが第１のポリペプチドに連結されている一方で、ＩＬ−２抗体のＶＬドメインは、ＶＨ及びＶＬドメインが互いに相互作用して抗原結合部位を形成できるような様態で第１のポリペプチドと会合する、第２のポリペプチドに連結されている。別の実施形態においては、ＶＨドメインは、ＶＨ及びＶＬドメインが互いに相互作用し得るように、リンカーによってＶＬドメインから分離されている。ＶＨ−リンカー−ＶＬ抗体は次いで、目的とするポリペプチドに連結される。その上、２つ（またはそれよりも多く）の１本鎖抗体が互いに連結されている、融合抗体を作出することができる。これは、１本のポリペプチド鎖上に二価もしくは多価抗体を作出することが所望される場合、または二重特異性抗体を作出することが所望される場合に有用である。
【０１８６】
いくつかの実施形態において、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、もしくは７２に示される可変軽鎖領域の少なくとも１０個の連続アミノ酸及び／または配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、もしくは７１に示される可変重鎖領域の少なくとも１０個のアミノ酸を含む、融合ポリペプチドが提供される。他の実施形態において、可変軽鎖領域の少なくとも約１０、少なくとも約１５、少なくとも約２０、少なくとも約２５、または少なくとも約３０個の連続アミノ酸及び／または可変重鎖領域の少なくとも約１０、少なくとも約１５、少なくとも約２０、少なくとも約２５、または少なくとも約３０個の連続アミノ酸を含む、融合ポリペプチドが提供される。別の実施形態において、融合ポリペプチドは、１つ以上のＣＤＲ（複数可）を含む。依然として他の実施形態において、融合ポリペプチドは、ＶＨ  ＣＤＲ３及び／またはＶＬ  ＣＤＲ３を含む。本開示の目的で、融合タンパク質は、１つ以上の抗体、及び天然分子においてはそれに結合しない別のアミノ酸配列、例えば、異種配列または別の領域由来の同種配列を含有する。例となる異種配列には、ＦＬＡＧタグまたは６Ｈｉｓタグ（配列番号２２３）などの「タグ」が含まれるが、これらに限定されない。タグは、当該技術分野で周知のことである。
【０１８７】
融合ポリペプチドが、当該技術分野で既知の方法によって、例えば、合成によりまたは組換えにより、作出され得る。典型的には、本開示の融合タンパク質は、本明細書に記載される組換え法を用いてそれらをコードするポリヌクレオチド調製し、発現させることによって作製されるが、それらはまた、例えば、化学合成を含めて、当該技術分野で既知の他の手段によって調製されてもよい。
【０１８８】
他の実施形態において、他の修飾抗体が、ＩＬ−２抗体をコードする核酸分子を使用して調製されてもよい。例えば、「カッパボディ（Ｋａｐｐａ  ｂｏｄｉｅｓ）」（Ｉｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．１０：９４９−５７）、「ミニボディ」（Ｍａｒｔｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，ＥＭＢＯ  Ｊ．１３：５３０３−９）、「ダイアボディ」（Ｈｏｌｌｉｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．、（上記参照））、または「ヤヌシン（Ｊａｎｕｓｉｎｓ）」（Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，ＥＭＢＯ  Ｊ．１０：３６５５−３６５９及びＴｒａｕｎｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ（Ｓｕｐｐｌ．）７：５１−５２）が、本明細書の教示に従って、標準的な分子生物学的技法を用いて調製されてもよい。
【０１８９】
例えば、少なくとも２つの異なる抗原に対して結合特異性を有する、二重特異性抗体、モノクローナル抗体が、本明細書に開示される抗体を使用して調製され得る。二重特異性抗体を作製するための方法は、当該技術分野で既知である（例えば、Ｓｕｒｅｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １２１：２１０を参照されたい）。例えば、二重特異性抗体または抗原結合部分は、ハイブリドーマの融合またはＦａｂ’部分の連結によって生産され得る。例えば、Ｓｏｎｇｓｉｖｉｌａｉ  ＆  Ｌａｃｈｍａｎｎ，１９９０，Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７９：３１５−３２１、及びＫｏｓｔｅｌｎｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１５４７−１５５３を参照されたい。慣習的には、二重特異性抗体の組換え生産は、２本の重鎖が異なる特異性を有する、２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖対の共発現に基づいていた（Ｍｉｌｌｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｃｕｅｌｌｏ，１９８３，Ｎａｔｕｒｅ  ３０５，５３７−５３９）。その上、二重特異性抗体は、「ダイアボディ」または「ヤヌシン」として形成されてもよい。いくつかの実施形態において、二重特異性抗体は、ＩＬ−２の２つの異なるエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、上述の修飾抗体は、本明細書に提供されるＩＬ−２抗体由来の可変ドメインまたはＣＤＲ領域のうちの１つ以上を使用して調製される。
【０１９０】
二重特異性抗体を作製するための１つの手法によれば、所望の結合特異性を有する抗体可変ドメイン（抗体−抗原結合部位）が、免疫グロブリン定常領域配列に融合される。いくつかの実施形態において、ヒンジ、ＣＨ２及びＣＨ３領域のうちの少なくとも一部を含む、免疫グロブリン重鎖定常領域との融合が行われる。いくつかの実施形態において、軽鎖結合に必要な部位を含有する第１の重鎖定常領域（ＣＨ１）が、融合物のうちの少なくとも１つに存在する。免疫グロブリン重鎖融合物、及び所望であれば、免疫グロブリン軽鎖をコードするＤＮＡは、別個の発現ベクターに挿入され、好適な宿主生物中に共トランスフェクトされる。これは、構築において使用される３つのポリペプチド鎖の不均等な比率が最適な収率を提供する場合の実施形態において、３つのポリペプチド部分の相互の割合を調整する上での柔軟性を提供する。しかしながら、均等な比率での少なくとも２つのポリペプチド鎖の発現が高収率をもたらす場合、または比率が特に重要でない場合には、１つの発現ベクターにおいて２つまたは３つすべてのポリペプチド鎖のコード配列を挿入することが可能である。
【０１９１】
１つの手法において、二重特異性抗体は、一方のアームにおける第１の結合特異性を有するハイブリッド免疫グロブリン重鎖、及び他方のアームにおけるハイブリッド免疫グロブリン重鎖−軽鎖対（第２の結合特異性を提供する）から構成される。免疫グロブリン軽鎖が二重特異性分子の半分にのみ存在する、この非対称構造は、不要な免疫グロブリン鎖の組み合わせからの所望の二重特異性化合物の分離を容易にする。この手法は、ＰＣＴ公報第ＷＯ９４／０４６９０号に記載される。
【０１９２】
本開示はまた、固体支持体への結合を容易にする薬剤（ビオチンまたはアビジンなど）にコンジュゲートされた（例えば、連結された）抗体を含む、組成物も提供する。簡略化のために、これらの方法が本明細書に記載されるＩＬ−２結合実施形態のいずれにも適用されるとの理解を前提に、抗体に対して一般に言及がなされる。コンジュゲーションとは一般に、これらの構成要素を本明細書に記載されるように連結することを指す。連結（概してこれらの構成要素を少なくとも投与のために近接して固定している）は、任意の数のやり方で達成され得る。例えば、薬剤及び抗体の各々が他方と反応可能である置換基を保有する場合、それらの間の直接反応が可能である。例えば、一方の上にあるアミノ基またはスルフヒドリル基などの求核性基が、他方の上にある無水物もしくは酸ハロゲン化物などのカルボニル含有基と、または良好な脱離基（例えば、ハロゲン化物）を含有するアルキル基と、反応可能であり得る。
【０１９３】
本抗体は、多くの異なる担体に結合され得る。担体は、活性及び／または不活性であり得る。周知の担体の例としては、ポリプロピレン、ポリスチレン、ポリエチレン、デキストラン、ナイロン、アミラーゼ、ガラス、天然及び修飾セルロース、ポリアクリルアミド、アガロースならびに磁鉄鉱が挙げられる。担体の性質は、本開示の目的で可溶性、不溶性のいずれでもあり得る。当業者であれば、抗体を結合するための他の好適な担体について知っているか、または通例の実験を用いてそのようなものを確知可能であろう。
【０１９４】
本開示の抗体またはポリペプチドは、蛍光分子、放射性分子または当該技術分野で既知の任意の他の標識などの標識剤に連結されてもよい。概してシグナルを（直接的れあれ間接的であれ）提供する標識が、当該技術分野で既知である。
【０１９５】
本明細書に開示されるＩＬ−２抗体の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）及び重鎖可変ドメイン（ＶＨ）のアミノ酸配列は、配列識別番号によって表７に要約される。
【０１９６】
本開示の抗体は、
ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号２のアミノ酸配列を含むＶＬ、
ｂ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号４のアミノ酸配列を含むＶＬ、
ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＶＬ、
ｄ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＬ、
ｅ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＬ、
ｆ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＬ、
ｇ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＶＬ、
ｈ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ、
ｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＶＬ、
ｊ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号２０のアミノ酸配列を含むＶＬ、
ｋ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号２２のアミノ酸配列を含むＶＬ、
ｌ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号２４のアミノ酸配列を含むＶＬ、
ｍ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号２６のアミノ酸配列を含むＶＬ、
ｎ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号２８のアミノ酸配列を含むＶＬ、
ｏ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号３０のアミノ酸配列を含むＶＬ、
ｐ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号３２のアミノ酸配列を含むＶＬ、または
ｑ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号７２のアミノ酸配列を含むＶＬ
の両方を含み得る。。
【０１９７】
別の態様において、本抗体は、これらの配列の変異型を含み、かかる変異型は、保存的及び非保存的両方の置換、欠失、ならびに／または付加を含み得、典型的には、本明細書に開示される具体的配列のいずれかとの少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８７％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を共有するペプチドを含む。
【０１９８】
例えば、一態様において、本開示は、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、もしくは配列番号７２に記載されるＶＬ鎖アミノ酸配列、またはそれらの変異型を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を提供する。一態様において、該抗体変異型は、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、または配列番号７２に対する、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、もしくは１５個の保存的もしくは非保存的置換、ならびに／または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、もしくは１５個の付加及び／もしくは欠失を含む。さらなる態様において、該変異型は、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、または配列番号７２と少なくとも６５％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を共有し、該抗体または抗原結合部分は、ＩＬ−２に特異的に結合する。いくつかの実施形態において、該抗体または抗原結合部分は、ｈＩＬ−２に特異的に結合する。
【０１９９】
さらなる態様において、本開示は、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、もしくは配列番号７１に記載されるＶＨ鎖アミノ酸配列、またはそれらの変異型を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を提供する。一態様において、該抗体変異型は、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、または配列番号７１に対する、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、もしくは１５個の保存的もしくは非保存的置換、ならびに／または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、もしくは１５個の付加及び／もしくは欠失を含む。さらなる態様において、該変異型は、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、または配列番号７１と少なくとも６５％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を共有し、該抗体または抗原結合部分は、ＩＬ−２に特異的に結合する。いくつかの実施形態において、該抗体または抗原結合部分は、ｈＩＬ−２に特異的に結合する。
【０２００】
本開示の抗体は、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、または配列番号７１のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖を含み得、本抗体は、重鎖定常ドメインをさらに含む。本明細書の他の箇所でより完全に記載されるように、本抗体の重鎖定常ドメインは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭまたはＩｇＤ定常領域から選択され得るが、いくつかの実施形態では、それはＩｇＧ１またはＩｇＧ２定常領域である。ＩｇＧ定常領域配列は、Ｇｍ（１）、Ｇｍ（２）、Ｇｍ（３）、及びＧｍ（１７）などの異なる個体間で生じることが知られている種々の対立遺伝子またはアロタイプのうちのいずれでもあり得る。Ｆａｂ部分重鎖遺伝子の場合、ＶＨをコードするＤＮＡは、重鎖ＣＨ１定常領域のみをコードする別のＤＮＡ分子に作動的に連結され得る。ＣＨ１重鎖定常領域は、重鎖遺伝子のうちのいずれに由来してもよい。
【０２０１】
一態様において、本抗体は、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、または配列番号７１のアミノ酸配列を含むＶＨから選択されるＶＨを含む重鎖を含み得、Ｆｃエフェクター機能を減少させるまたは消滅させる三重変異（ｈＩｇＧ１−３ｍ、配列番号２）を含むＩｇＧ１定常ドメインをさらに含む。一態様において、該抗体変異型は、完全長重鎖に対する１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、もしくは１５個の保存的または非保存的置換、ならびに／または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、もしくは１５個の付加及び／もしくは欠失を含む。さらなる態様において、該変異型は、完全長重鎖と少なくとも６５％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を共有し、該抗体または抗原結合部分は、ＩＬ−２に特異的に結合する。
【０２０２】
本開示の抗体は、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、または配列番号７２のアミノ酸配列を含むＶＬを含む軽鎖を含み得、本抗体は、軽鎖定常ドメインをさらに含む。本明細書の他の箇所でより完全に記載されるように、本抗体軽鎖定常ドメインは、ＣκまたはＣλ定常領域（例えば、配列番号１のＣλ定常領域）から選択され得る。一態様において、該抗体変異型は、完全長軽鎖に対する１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、もしくは１５個の保存的または非保存的置換、ならびに／または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、もしくは１５個の付加及び／もしくは欠失を含む。さらなる態様において、該変異型は、完全長軽鎖と少なくとも６５％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を共有し、該抗体または抗原結合部分は、ＩＬ−２に特異的に結合する。
【０２０３】
本開示の抗体は、表７に示されるＶＬまたはＶＨアミノ酸配列のうちの１つの一部分を含み得る。例えば、本開示の抗体は、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、もしくは配列番号７１を含むＶＨからの、または配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、もしくは配列番号７２を含むＶＬからの、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１２、少なくとも１５、少なくとも１８、少なくとも２０または少なくとも２５個の連続アミノ酸の一部分を含み得る。かかる一部分は好ましくは、ＩＬ−２に結合する能力などの、上記に考察された機能のうちの１つ以上を保持する。いくつかの実施形態において、かかる一部分は好ましくは、ｈＩＬ−２に結合する能力などの、上記に考察された機能のうちの１つ以上を保持する。
【０２０４】
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、表７に示されるＫａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、もしくは拡張型配列に従ったＶＨ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、ならびに／またはＫａｂａｔ及び／もしくはＣｈｏｔｈｉａアミノ酸に従ったＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、次のＫａｂａｔアミノ酸配列、すなわち配列番号７３、配列番号８２、配列番号９１、配列番号１００、配列番号１０９、配列番号１１８、配列番号１２７、配列番号１３６、配列番号１４５、配列番号１５４、配列番号１６３、配列番号１７２、配列番号１８１、配列番号１９０、配列番号１９９、または配列番号２０８に従ったＶＨ  ＣＤＲ１を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、次のＣｈｏｔｈｉａアミノ酸配列、すなわち配列番号７４、配列番号８３、配列番号９２、配列番号１０１、配列番号１１０、配列番号１１９、配列番号１２８、配列番号１３７、配列番号１４６、配列番号１５５、配列番号１６４、配列番号１７３、配列番号１８２、配列番号１９１、配列番号２００、または配列番号２０９に従ったＶＨ  ＣＤＲ１を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、次の複合型アミノ酸配列、すなわち配列番号７５、配列番号８４、配列番号９３、配列番号１０２、配列番号１１１、配列番号１２０、配列番号１２９、配列番号１３８、配列番号１４７、配列番号１５６、配列番号１６５、配列番号１７４、配列番号１８３、配列番号１９２、配列番号２０１、または配列番号２１０に従ったＶＨ  ＣＤＲ１を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、次のＫａｂａｔアミノ酸配列、すなわち配列番号７６、配列番号８５、配列番号９４、配列番号１０３、配列番号１１２、配列番号１２１、配列番号１３０、配列番号１３９、配列番号１４８、配列番号１５７、配列番号１６６、配列番号１７５、配列番号１８４、配列番号１９３、配列番号２０２、または配列番号２１１に従ったＶＨ  ＣＤＲ２を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、次のＣｈｏｔｈｉａアミノ酸配列、すなわち配列番号７７、配列番号８６、配列番号９５、配列番号１０４、配列番号１１３、配列番号１２２、配列番号１３１、配列番号１４０、配列番号１４９、配列番号１５８、配列番号１６７、配列番号１７６、配列番号１８５、配列番号１９４、配列番号２０３、または配列番号２１２に従ったＶＨ  ＣＤＲ２を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、次のアミノ酸配列、すなわち配列番号７８、配列番号８７、配列番号９６、配列番号１０５、配列番号１１４、配列番号１２３、配列番号１３２、配列番号１４１、配列番号１５０、配列番号１５９、配列番号１６８、配列番号１７７、配列番号１８６、配列番号１９５、配列番号２０４、または配列番号２１３に従ったＶＨ  ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、次のアミノ酸配列、すなわち配列番号７９、配列番号８８、配列番号９７、配列番号１０６、配列番号１１５、配列番号１２４、配列番号１３３、配列番号１４２、配列番号１５１、配列番号１６０、配列番号１６９、配列番号１７８、配列番号１８７、配列番号１９６、��列番号２０５、配列番号２１４、または配列番号２２０に従ったＶＬ  ＣＤＲ１を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、次のアミノ酸配列、すなわち配列番号８０、配列番号８９、配列番号９８、配列番号１０７、配列番号１１６、配列番号１２５、配列番号１３４、配列番号１４３、配列番号１５２、配列番号１６１、配列番号１７０、配列番号１７９、配列番号１８８、配列番号１９７、配列番号２０６、配列番号２１５、または配列番号２２１に従ったＶＬ  ＣＤＲ２を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、次のアミノ酸配列、すなわち配列番号８１、配列番号９０、配列番号９９、配列番号１０８、配列番号１１７、配列番号１２６、配列番号１３５、配列番号１４４、配列番号１５３、配列番号１６２、配列番号１７１、配列番号１８０、配列番号１８９、配列番号１９８、配列番号２０７、配列番号２１６、または配列番号２２２に従ったＶＬ  ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２１７に従ったＶＨ  ＣＤＲ１を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２１８に従ったＶＨ  ＣＤＲ２を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２１９に従ったＶＨ  ＣＤＲ３を含む。
ある特定の実施形態において、本開示の抗体は、表７に示されるＦ４．７．６  ＶＨ、Ｆ４．７．８  ＶＨ、Ｆ５．１．１１  ＶＨ、Ｆ５．１．９  ＶＨ、Ｆ４．７．０６２  ＶＨ、Ｆ５．１．１１．０１  ＶＨ、Ｆ５．１．１１．０２  ＶＨ、Ｆ５．１．１１．０３  ＶＨ、Ｆ５．１．１１．０４  ＶＨ、Ｆ５．１．１１．０５  ＶＨ、Ｆ５．１．１１．０６  ＶＨ、Ｆ５．１．１１．０７  ＶＨ、Ｆ５．１．１１．０８  ＶＨ、Ｆ５．１．１１．０９  ＶＨ、Ｆ５．１．９．５  ＶＨ、ｄ１Ｃ７  ＶＨ、Ｆ４．７．６  ＶＬ、Ｆ４．７．８  ＶＬ、Ｆ５．１．１１  ＶＬ、Ｆ５．１．９  ＶＬ、Ｆ４．７．０６２  ＶＬ、Ｆ５．１．１１．０１  ＶＬ、Ｆ５．１．１１．０２  ＶＬ、Ｆ５．１．１１．０３  ＶＬ、Ｆ５．１．１１．０４  ＶＬ、Ｆ５．１．１１．０５  ＶＬ、Ｆ５．１．１１．０６  ＶＬ、Ｆ５．１．１１．０７  ＶＬ、Ｆ５．１．１１．０８  ＶＬ、Ｆ５．１．１１．０９  ＶＬ、Ｆ５．１．９．５  ＶＬ、またはｄ１Ｃ７  ＶＬから選択される抗体の、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、もしくは拡張型配列に従ったＶＨ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、ならびに／またはＫａｂａｔ及び／もしくはＣｈｏｔｈｉａアミノ酸配列に従ったＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態において、本開示の抗体は、表７に示される抗体Ｆ５．１．１１．０２の、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、もしくは拡張型配列に従ったＶＨ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、ならびに／またはＫａｂａｔ及び／もしくはＣｈｏｔｈｉａアミノ酸に従ったＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。
【０２０５】
これらのＶＨまたはＶＬ配列のうちのいずれかの好適な部分または変異型が、ＩＬ−２に結合する能力を保持する。いくつかの実施形態において、それは好ましくは、ＩＬ−２に特異的に結合する能力を保持する。いくつかの実施形態において、それは好ましくは、その元となる抗体と同じまたは同様のＩＬ−２分子のエピトープまたは領域に特異的に結合する能力を保持する。いくつかの実施形態において、それは好ましくは、とりわけｈＩＬ−２に結合する、ＩＬ−２Ｒα及びＩＬ−２ＲβへのｈＩＬ−２結合を低減する、ならびにＴｒｅｇスペアリングであるといった、その元となる抗体の１つ以上の追加の機能を保持する。
【０２０６】
いくつかの実施形態において、これらのＶＨまたはＶＬ配列のうちのいずれかの好適な部分または変異型が、ｈＩＬ−２に結合する能力を保持する。いくつかの実施形態において、それは、ｈＩＬ−２に特異的に結合する能力を保持する。いくつかの実施形態において、それは、その元となる抗体と同じまたは同様のｈＩＬ−２分子のエピトープまたは領域に特異的に結合する能力を保持する。いくつかの実施形態において、それは、とりわけｈＩＬ−２に結合する、ＩＬ−２Ｒα及びＩＬ−２ＲβへのｈＩＬ−２結合を低減する、ならびにＴｒｅｇスペアリングであるといった、その元となる抗体の１つ以上の追加の機能を保持する。
【０２０７】
本開示の抗体は、配列番号１〜３２内からのＣＤＲ領域などの、本明細書に特定される具体的な抗体由来のＣＤＲ領域を含み得る。いくつかの実施形態において、かかる抗体は好ましくは、本明細書に記載されるＩＬ−２に結合する能力を保持する。いくつかの実施形態において、かかる抗体は好ましくは、本明細書に記載されるｈＩＬ−２に結合する能力を保持する。例えば、本開示の抗体のＣＤＲ配列は、配列表（表７）に示され、これらの配列番号が表６に示される。ある特定の実施形態において、本開示の抗体は、本開示の抗体内に由来する１、２、３、４、５または６つのＣＤＲを含む。
【０２０８】
一態様において、本開示は、上記に列挙されるＣＤＲのうちの１つ以上に対する１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、もしくは１５個の保存的または非保存的置換、ならびに／または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、もしくは１５個の付加及び／もしくは欠失を含む、抗体変異型を提供する。さらなる態様において、この変異型は、上記に列挙されるＣＤＲのうちの１つ以上と少なくとも６５％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を共有し、本抗体または抗原結合部分は、ＩＬ−２に特異的に結合する。いくつかの実施形態において、本抗体または抗原結合部分は、ｈＩＬ−２に特異的に結合する。
【０２０９】
ポリヌクレオチド、ベクター、及び宿主細胞
本開示はまた、例えば、エフェクター機能障害を有する抗体などの本明細書に記載される抗体部分及び修飾抗体を含む、本抗体のうちのいずれかをコードするポリヌクレオチドも提供する。別の態様において、本開示は、本明細書に記載されるポリヌクレオチドのうちのいずれかを作製する方法を提供する。ポリヌクレオチドは、当該技術分野で既知の手技によって作製及び発現され得る。したがって、本開示は、次のＩＬ−２抗体及びその抗原結合部分：Ｆ４．７．６  ＶＨ、Ｆ４．７．８  ＶＨ、Ｆ５．１．１１  ＶＨ、Ｆ５．１．９  ＶＨ、Ｆ４．７．０６２  ＶＨ、Ｆ５．１．１１．０１  ＶＨ、Ｆ５．１．１１．０２  ＶＨ、Ｆ５．１．１１．０３  ＶＨ、Ｆ５．１．１１．０４  ＶＨ、Ｆ５．１．１１．０５  ＶＨ、Ｆ５．１．１１．０６  ＶＨ、Ｆ５．１．１１．０７  ＶＨ、Ｆ５．１．１１．０８  ＶＨ、Ｆ５．１．１１．０９  ＶＨ、Ｆ５．１．９．５  ＶＨ、ｄ１Ｃ７  ＶＨ、Ｆ４．７．６  ＶＬ、Ｆ４．７．８  ＶＬ、Ｆ５．１．１１  ＶＬ、Ｆ５．１．９  ＶＬ、Ｆ４．７．０６２  ＶＬ、Ｆ５．１．１１．０１  ＶＬ、Ｆ５．１．１１．０２  ＶＬ、Ｆ５．１．１１．０３  ＶＬ、Ｆ５．１．１１．０４  ＶＬ、Ｆ５．１．１１．０５  ＶＬ、Ｆ５．１．１１．０６  ＶＬ、Ｆ５．１．１１．０７  ＶＬ、Ｆ５．１．１１．０８  ＶＬ、Ｆ５．１．１１．０９  ＶＬ、Ｆ５．１．９．５  ＶＬ、もしくはｄ１Ｃ７  ＶＬ、またはＩＬ−２に結合する能力を有するその任意の部分または一部のうちのいずれかをコードするポリヌクレオチド、またはポリヌクレオチドを含む薬学的組成物などの組成物を提供する。
【０２１０】
一実施形態において、ＶＨ及びＶＬドメイン、またはその抗原結合部分、または完全長ＨＣもしくはＬＣは、別個のポリヌクレオチドによってコードされる。代替的に、ＶＨ及びＶＬの両方、またはその抗原結合部分、またはＨＣ及びＬＣは、単一のポリヌクレオチドによってコードされる。
【０２１１】
別の態様において、本開示は、ＩＬ−２抗体をコードするポリヌクレオチド及びその変異型を提供し、かかる変異型ポリヌクレオチドは、本明細書に開示される特定の核酸のうちのいずれかと少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８７％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を共有する。これらの量は、限定的であることを意図せず、列挙されるパーセンテージの間の増分が本開示の一部として具体的に想定される。
【０２１２】
任意のかかる配列に相補的なポリヌクレオチドも、本開示によって包含される。ポリヌクレオチドは、一本鎖（コードもしくはアンチセンス）または二本鎖であり得、ＤＮＡ分子（ゲノム、ｃＤＮＡ、もしくは合成）またはＲＮＡ分子であり得る。ＲＮＡ分子としては、イントロンを含み、かつＤＮＡ分子に一対一様式で対応するＨｎＲＮＡ分子、及びイントロンを含まないｍＲＮＡ分子が挙げられる。追加のコード配列または非コード配列は、必須ではないが、本開示のポリヌクレオチド内に存在し得、ポリヌクレオチドは、必須ではないが、他の分子及び／または支持材料に連結され得る。
【０２１３】
ポリヌクレオチドは、天然配列（すなわち、抗体またはその部分をコードする内因性配列）を含み得るか、またはかかる配列の変異型を含み得る。ポリヌクレオチド変異型は、コードされたポリペプチドの免疫反応性が天然免疫反応性分子と比較して減少されないように、１つ以上の置換、付加、欠失、及び／または挿入を含む。コードされたポリペプチドの免疫反応性への影響は、一般に、本明細書に記載されるように評価され得る。いくつかの実施形態において、変異型は、天然抗体またはその部分をコードするポリヌクレオチド配列と少なくとも約７０％の同一性、いくつかの実施形態では少なくとも約８０％の同一性、いくつかの実施形態では少なくとも約９０％の同一性、及びいくつかの実施形態では少なくとも約９５％の同一性を呈する。これらの量は、限定的であることを意図せず、列挙されるパーセンテージの間の増分が本開示の一部として具体的に想定される。
【０２１４】
２つのポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列は、それらの２つの配列におけるヌクレオチドまたはアミノ酸の配列が以下に記載されるように最大限に一致するようにアライメントされたときに同じである場合、「同一である」といわれる。２つの配列間の比較は、典型的には、比較ウィンドウ上でそれらの配列を比較して、配列類似性の局所領域を特定及び比較することによって行われる。本明細書で使用される「比較ウィンドウ」とは、少なくとも約２０、通常３０〜約７５、または４０〜約５０の隣接する位置のセグメントを指し、ここで、２つの配列が最適にアライメントされた後に、配列が同じ数の隣接する位置の参照配列と比較され得る。
【０２１５】
比較に最適な配列アライメントは、初期パラメータを使用して、バイオインフォマティクスソフトウエア（ＤＮＡＳＴＡＲ（登録商標），Ｉｎｃ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）のＬａｓｅｒｇｅｎｅ（登録商標）スイート内のＭｅｇＡｌｉｇｎ（登録商標）プログラムを使用して行われ得る。このプログラムは、次の参考文献：Ｄａｙｈｏｆｆ，Ｍ．Ｏ．，１９７８，Ａ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ  ｃｈａｎｇｅ  ｉｎ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  −Ｍａｔｒｉｃｅｓ  ｆｏｒ  ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ  ｄｉｓｔａｎｔ  ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ．Ｉｎ  Ｄａｙｈｏｆｆ，Ｍ．Ｏ．（ｅｄ．）Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  ＤＣ  Ｖｏｌ．５，Ｓｕｐｐｌ．３，ｐｐ．３４５−３５８、Ｈｅｉｎ  Ｊ．，１９９０，Ｕｎｉｆｉｅｄ  Ａｐｐｒｏａｃｈ  ｔｏ  Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｓ  ｐｐ．６２６−６４５  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ｖｏｌ．１８３，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ、Ｈｉｇｇｉｎｓ，Ｄ．Ｇ．ａｎｄ  Ｓｈａｒｐ，Ｐ．Ｍ．，１９８９，ＣＡＢＩＯＳ  ５：１５１−１５３、Ｍｙｅｒｓ，Ｅ．Ｗ．ａｎｄ  Ｍｕｌｌｅｒ  Ｗ．，１９８８，ＣＡＢＩＯＳ  ４：１１−１７、Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，Ｅ．Ｄ．，１９７１，Ｃｏｍｂ．Ｔｈｅｏｒ．１１：１０５、Ｓａｎｔｏｕ，Ｎ．，Ｎｅｓ，Ｍ．，１９８７，Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｅｖｏｌ．４：４０６−４２５、Ｓｎｅａｔｈ，Ｐ．Ｈ．Ａ．ａｎｄ  Ｓｏｋａｌ，Ｒ．Ｒ．，１９７３，Ｎｕｍｅｒｉｃａｌ  Ｔａｘｏｎｏｍｙ  ｔｈｅ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｎｕｍｅｒｉｃａｌ  Ｔａｘｏｎｏｍｙ，Ｆｒｅｅｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ、Ｗｉｌｂｕｒ，Ｗ．Ｊ．ａｎｄ  Ｌｉｐｍａｎ，Ｄ．Ｊ．，１９８３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８０：７２６−７３０に記載されるいくつかのアライメントスキームを具体化する。
【０２１６】
いくつかの実施形態において、「配列同一性のパーセンテージ」は、少なくとも２０の位置の比較ウィンドウ上で２つの最適にアライメントされた配列を比較することによって決定され、比較ウィンドウ内のポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列の部分は、これらの２つの配列の最適なアライメントの参照配列（付加または欠失を含まない）と比較して、２０パーセント以下、通常５〜１５パーセント、または１０〜１２パーセントの付加または欠失（すなわち、ギャップ）を含み得る。パーセンテージは、同一の核酸塩基またはアミノ酸残基が両方の配列に存在する位置の数を決定して一致した位置の数を得て、一致した位置の数を参照配列における位置の総数（すなわち、ウィンドウサイズ）で除し、その結果に１００を乗じて配列同一性のパーセンテージを得ることによって計算される。
【０２１７】
変異型は、加えて、または代替的に、天然遺伝子、またはその部分もしくは補体と実質的に相同であり得る。かかるポリヌクレオチド変異型は、適度にストリンジェントな条件下で天然抗体をコードする天然発生ＤＮＡ配列（または相補的配列）にハイブリダイズすることが可能である。
【０２１８】
好適な「適度にストリンジェントな条件」は、５×ＳＳＣ、０．５％ＳＤＳ、１．０ｍＭ  ＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）の溶液中で予洗浄すること、５０℃〜６５℃、５×ＳＳＣ中で一晩ハイブリダイズすること、その後、０．１％ＳＤＳを含有する２×ＳＳＣ、０．５×ＳＳＣ、及び０．２×ＳＳＣの各々で、６５℃で２０分間にわたって２回洗浄することを含む。
【０２１９】
本明細書で使用されるとき、「高度にストリンジェントな条件」または「高ストリンジェンシー条件」とは、（１）洗浄のために、低イオン強度及び高温、例えば、５０℃で０．０１５Ｍ塩化ナトリウム／０．００１５Ｍクエン酸ナトリウム／０．１％ドデシル硫酸ナトリウムを用いるか、（２）ハイブリダイゼーション中に、ホルムアミド、例えば、５０ｖ／ｖ％ホルムアミドなどの変性剤を、０．１％ウシ血清アルブミン／０．１％Ｆｉｃｏｌｌ／０．１％ポリビニルピロリドン／５０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．５）と、７５０ｍＭ塩化ナトリウム、７５ｍＭクエン酸ナトリウムとともに４２℃で用いるか、または（３）５０％ホルムアミド、５×ＳＳＣ（０．７５Ｍ  ＮａＣｌ、０．０７５Ｍクエン酸ナトリウム）、５０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ６．８）、０．１％ピロリン酸ナトリウム、５×デンハルト溶液、超音波処理サケ精子ＤＮＡ（５０μｇ／ｍＬ）、０．１％ＳＤＳ、及び１０％硫酸デキストランを４２℃で用いて、４２℃の０．２×ＳＳＣ（塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム）中及び５５℃の５０％ホルムアミド中で洗浄し、続いて、ＥＤＴＡを含有する０．１×ＳＳＣからなる高ストリンジェンシー洗浄を５５℃で行う条件である。当業者であれば、必要に応じて、温度、イオン強度等を調整して、例えばプローブ長などの要因に適応する方法を認識する。
【０２２０】
遺伝コードの縮重の結果として、本明細書に記載されるポリペプチドをコードする多くのヌクレオチド配列が存在することが当業者により理解されるであろう。これらのポリヌクレオチドのうちのいくつかは、任意の天然遺伝子のヌクレオチド配列と最小の相同性を有する。それにもかかわらず、コドン使用の差異により異なるポリヌクレオチドが、本開示により具体的に企図される。さらに、本明細書に提供されるポリヌクレオチド配列を含む遺伝子の対立遺伝子が、本開示の範囲内である。対立遺伝子は、ヌクレオチドの欠失、付加、及び／または置換などの１つ以上の変異の結果として改変された内因性遺伝子である。結果として生じるｍＲＮＡ及びタンパク質は、必須ではないが、改変された構造または機能を有し得る。対立遺伝子は、標準的な技法（ハイブリダイゼーション、増幅、及び／またはデータベース配列比較など）を使用して特定され得る。
【０２２１】
本開示のポリヌクレオチドは、化学合成、組換え方法、またはＰＣＲを使用して得ることができる。ポリヌクレオチド化学合成法は、当該技術分野で周知のことであり、本明細書で詳細に説明される必要はない。当業者であれば、本明細書に提供される配列及び商用ＤＮＡ合成装置を使用して、所望のＤＮＡ配列を生成することができる。
【０２２２】
組換え方法を使用してポリヌクレオチドを調製するために、所望の配列を含むポリヌクレオチドが好適なベクターに挿入され、次いで、本明細書でさらに論じられるように、このベクターが好適な宿主細胞に導入されて、複製及び増幅される。ポリヌクレオチドは、当該技術分野で既知の任意の手段によって宿主細胞に挿入され得る。細胞は、直接取り込み、エンドサイトーシス、トランスフェクション、Ｆ−接合、または電気穿孔により外因性ポリヌクレオチドを導入することによって形質転換される。導入されると、外因性ポリヌクレオチドは、組み込まれていないベクター（プラスミドなど）として細胞内で維持され得るか、または宿主細胞ゲノムに組み込まれ得る。そのように増幅されたポリヌクレオチドは、当該技術分野で周知の方法によって宿主細胞から単離され得る。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９を参照されたい。
【０２２３】
代替的に、ＰＣＲは、ＤＮＡ配列の再生を可能にする。ＰＣＲ技術は、当該技術分野で周知のことであり、米国特許第４，６８３，１９５号、同第４，８００，１５９号、同第４，７５４，０６５号、及び同第４，６８３，２０２号、ならびにＰＣＲ：Ｔｈｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ，Ｍｕｌｌｉｓ  ｅｔ  ａｌ．ｅｄｓ．，Ｂｉｒｋａｕｓｗｅｒ  Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｓｔｏｎ，１９９４に記載されている。
【０２２４】
ＲＮＡは、適切なベクター内の単離されたＤＮＡを使用し、それを好適な宿主細胞に挿入することによって得ることができる。細胞が複製し、ＤＮＡがＲＮＡに転写されると、ＲＮＡは、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，（上記参照）に記載されるように、当業者に周知の方法を使用して単離され得る。
【０２２５】
好適なクローニングベクターは、標準的な技法に従って構築され得るか、または当該技術分野で入手可能な多数のクローニングベクターから選択され得る。選択されるクローニングベクターが使用を意図する宿主細胞により異なり得るが、有用なクローニングベクターは、一般に、自己複製する能力を有し、特定の制限エンドヌクレアーゼの単一標的を有し得、かつ／またはベクターを含むクローンを選択する際に使用され得るマーカーの遺伝子を持ち得る。好適な例としては、プラスミド及び細菌ウイルス、例えば、ｐＵＣ１８、ｐＵＣ１９、Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（例えば、ｐＢＳ  ＳＫ＋）及びその誘導体、ｍｐ１８、ｍｐ１９、ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９、ＣｏｌＥ１、ｐＣＲ１、ＲＰ４、ファージＤＮＡ、ならびにシャトルベクター、例えば、ｐＳＡ３及びｐＡＴ２８が挙げられる。これら及び多くの他のクローニングベクターは、ＢｉｏＲａｄ、Ｓｔｒａｔｅｇｅｎｅ、及びＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎなどの商用ベンダーから入手可能である。
【０２２６】
発現ベクターがさらに提供される。発現ベクターは、一般に、本開示によるポリヌクレオチドを含む複製可能なポリヌクレオチド構築物である。発現ベクターが、エピソームまたは染色体ＤＮＡの不可欠な部分いずれかとして、宿主細胞内で複製可能でなければならないことが暗示される。好適な発現ベクターとしては、プラスミド、ウイルスベクター、例えば、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルス、コスミド、及びＰＣＴ公報第ＷＯ８７／０４４６２号に開示される発現ベクター（複数可）が挙げられるが、これらに限定されない。ベクター成分としては、一般に、シグナル配列、複製起点、１つ以上のマーカー遺伝子、好適な転写制御要素（プロモーター、エンハンサー、及びターミネーターなど）うちの１つ以上が挙げられるが、これらに限定されない。発現（すなわち、翻訳）の場合、リボソーム結合部位、翻訳開始部位、及び終止コドンなどの１つ以上の翻訳制御要素も通常必要とされる。
【０２２７】
目的とするポリヌクレオチドを含むベクター及び／またはポリヌクレオチド自体が、電気穿孔、塩化カルシウム、塩化ルビジウム、リン酸カルシウム、ＤＥＡＥ−デキストラン、または他の物質を用いたトランスフェクション、微粒子銃、リポフェクション、及び感染（例えば、ベクターがワクシニアウイルスなどの感染体である場合）を含むいくつかの適切な手段のうちのいずれかによって宿主細胞に導入され得る。ベクターまたはポリヌクレオチドの導入の選択は、多くの場合、宿主細胞の特徴に依存する。
【０２２８】
本開示は、本明細書に記載されるポリヌクレオチドのうちのいずれかを含む宿主細胞も提供する。異種ＤＮＡを過剰発現することが可能な任意の宿主細胞は、目的とする抗体、ポリペプチド、またはタンパク質をコードする遺伝子を単離する目的のために使用され得る。哺乳類宿主細胞の非限定的な例としては、ＣＯＳ、ＨｅＬａ、及びＣＨＯ細胞が挙げられるが、これらに限定されない。ＰＣＴ公報第ＷＯ８７／０４４６２号も参照されたい。好適な非哺乳類宿主細胞としては、原核生物（Ｅ．ｃｏｌｉまたはＢ．ｓｕｂｔｉｌｌｉｓなど）及び酵母（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓａｅ、Ｓ．ｐｏｍｂｅ、またはＫ．ｌａｃｔｉｓなど）が挙げられる。いくつかの実施形態において、宿主細胞は、存在する場合、宿主細胞内の目的とする対応する内因性抗体またはタンパク質のレベルよりも約５倍高いレベルで、いくつかの実施形態では１０倍高いレベルで、いくつかの実施形態では２０倍高いレベルでｃＤＮＡを発現させる。ＩＬ−２への特異的結合についての宿主細胞をスクリーニングは、イムノアッセイまたはＦＡＣＳによって達成される。目的とする抗体またはタンパク質を過剰発現する細胞が特定され得る。
【０２２９】
発現ベクターは、ＩＬ−２抗体の直接発現に使用され得る。当業者であれば、外因性タンパク質を体内で発現させるための発現ベクターの投与に精通している。例えば、米国特許第６，４３６，９０８号、同第６，４１３，９４２号、及び同第６，３７６，４７１号を参照されたい。発現ベクターの投与としては、注射を含む局所または全身投与、経口投与、粒子銃またはカテーテルでの投与、及び局所的投与が挙げられる。別の実施形態において、発現ベクターは、交感神経幹もしくは神経節、または冠状動脈、心房、心室、もしくは心膜に直接投与される。
【０２３０】
発現ベクターまたはサブゲノムポリヌクレオチドを含有する治療組成物の標的送達も使用され得る。受容体媒介性ＤＮＡ送達技法については、例えば、Ｆｉｎｄｅｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１９９３，１１：２０２、Ｃｈｉｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  Ｏｆ  Ｄｉｒｅｃｔ  Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ，Ｊ．Ａ．Ｗｏｌｆｆ，ｅｄ．，１９９４、Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９８８，２６３：６２１、Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９９４，２６９：５４２、Ｚｅｎｋｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９９０，８７：３６５５、Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９９１，２６６：３３８に記載されている。ポリヌクレオチドを含有する治療組成物は、遺伝子療法プロトコルにおける局所投与の場合、約１００ｎｇ〜約２００ｍｇのＤＮＡの範囲で投与される。約５００ｎｇ〜約５０ｍｇ、約１μｇ〜約２ｍｇ、約５μｇ〜約５００μｇ、及び約２０μｇ〜約１００μｇのＤＮＡの濃度範囲も遺伝子療法プロトコル中に使用され得る。治療ポリヌクレオチド及びポリペプチドは、遺伝子送達ビヒクルを使用して送達され得る。遺伝子送達ビヒクルは、ウイルスまたは非ウイルス起源のものであり得る（概して、Ｊｏｌｌｙ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ，１９９４，１：５１、Ｋｉｍｕｒａ，Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ，１９９４，５：８４５、Ｃｏｎｎｅｌｌｙ，Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ，１９９５，１：１８５、ａｎｄ  Ｋａｐｌｉｔｔ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，１９９４，６：１４８を参照されたい）。かかるコード配列の発現は、内因性哺乳類または異種プロモーターを使用して誘導され得る。コード配列の発現は、構成的または調節的のいずれかであり得る。
【０２３１】
所望のポリヌクレオチドの送達及び所望の細胞内での発現のためのウイルスベースのベクターは、当該技術分野で周知のことである。例となるウイルスベースのビヒクルとしては、組換えレトロウイルス（例えば、ＰＣＴ公報第ＷＯ９０／０７９３６号、同第ＷＯ９４／０３６２２号、同第ＷＯ９３／２５６９８号、同第ＷＯ９３／２５２３４号、同第ＷＯ９３／１１２３０号、同第ＷＯ９３／１０２１８号、同第ＷＯ９１／０２８０５号、米国特許第５、２１９，７４０号及び同第４，７７７，１２７号、英国特許第２，２００，６５１号、ならびに欧州特許第０  ３４５  ２４２号を参照されたい）、アルファウイルスベースのベクター（例えば、シンドビスウイルスベクター、セムリキ森林熱ウイルス（ＡＴＣＣ  ＶＲ−６７、ＡＴＣＣ  ＶＲ−１２４７）、ロスリバーウイルス（ＡＴＣＣ  ＶＲ−３７３、ＡＴＣＣ  ＶＲ−１２４６）及びベネズエラウマ脳炎ウイルス（ＡＴＣＣ  ＶＲ−９２３、ＡＴＣＣ  ＶＲ−１２５０、ＡＴＣＣ  ＶＲ  １２４９、ＡＴＣＣ  ＶＲ−５３２））、及びアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター（例えば、ＰＣＴ公報第ＷＯ９４／１２６４９号、同第ＷＯ９３／０３７６９号、同第ＷＯ９３／１９１９１号、同第ＷＯ９４／２８９３８号、同第ＷＯ９５／１１９８４号、及び同第ＷＯ９５／００６５５号を参照されたい）が挙げられるが、これらに限定されない。Ｃｕｒｉｅｌ，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．，１９９２，３：１４７に記載される死滅アデノウイルスに連結したＤＮＡの投与を用いることもできる。
【０２３２】
死滅アデノウイルスのみに連結しているか、または連結していないポリカチオン凝縮ＤＮＡ（例えば、Ｃｕｒｉｅｌ，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．，１９９２，３：１４７を参照されたい）、リガンド連結ＤＮＡ（例えば、Ｗｕ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９８９，２６４：１６９８５を参照されたい）、真核細胞送達ビヒクル細胞（例えば、米国特許第５，８１４，４８２号、ＰＣＴ公報第ＷＯ９５／０７９９４号、同第ＷＯ９６／１７０７２号、同第ＷＯ９５／３０７６３号、及び同第ＷＯ９７／４２３３８号を参照されたい）、及び核電荷中和または細胞膜との融合を含むが、これらに限定されない、非ウイルス送達ビヒクル及び方法を用いることもできる。ネイキッドＤＮＡを用いることもできる。例となるネイキッドＤＮＡ導入方法については、ＰＣＴ公報第ＷＯ９０／１１０９２号及び米国特許第５，５８０，８５９号に記載されている。遺伝子送達ビヒクルの役割を果たし得るリポソームについては、米国特許第５，４２２，１２０号、ＰＣＴ公報第ＷＯ９５／１３７９６号、同第ＷＯ９４／２３６９７号、同第ＷＯ９１／１４４４５号、及び欧州特許第０５２４９６８号に記載されている。追加の手法については、Ｐｈｉｌｉｐ，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，１９９４，１４：２４１１、及びＷｏｆｆｅｎｄｉｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，１９９４，９１：１５８１に記載されている。
【０２３３】
治療方法
治療を必要とする対象に、ＩＬ−２抗体、抗原結合部分、または本明細書に記載されるＩＬ−２抗体を含む抗体：ＩＬ−２複合体の治療有効量または「有効量」を投与することを含む治療方法が、本開示により企図される。本明細書で使用されるとき、「治療有効」量または「有効」量とは、単回投与として、または複数回投与レジメンに従ってのいずれかでの、単独または他の薬剤との組み合わせでの、疾患症状の重症度の低減、疾患症状なし期間の頻度及び持続期間の増加、または疾患苦痛による機能障害（ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ）もしくは能力障害（ｄｉｓａｂｉｌｉｔｙ）の予防をもたらすのに十分な量の抗体またはその部分の量を指す。当業者であれば、対象の大きさ、対象の症状の重症度、及び選択される特定の組成物または投与経路等の要因に基づいて、かかる量を決定することができるであろう。対象は、ヒトまたは非ヒト動物（例えば、ウサギ、ラット、マウス、サル、または他のより下位の霊長類）であり得る。
【０２３４】
抗体、抗原結合部分、または本開示のＩＬ−２抗体を含む抗体：ＩＬ−２複合体は、既知の医薬品と併用投与され得、いくつかの例では、本抗体自体が修飾され得る。例えば、抗体が免疫毒素または放射性同位体にコンジュゲートされて、効力を潜在的にさらに増加させ得る。追加の治療剤との併用投与に関して、かかる治療剤には、細胞傷害剤、放射性毒性剤、または免疫抑制剤が含まれ得る。本抗体は、（免疫複合体として）薬剤に連結され得るか、またはその薬剤とは別個に投与され得る。後者（別個の投与）の場合、本抗体は、薬剤の前、薬剤の後、または薬剤と同時に投与され得るか、または他の既知の療法、例えば、抗癌療法、例えば、放射線療法と併用投与され得る。ＩＬ−２抗体、その抗原結合部分、または本開示のＩＬ−２抗体を含む抗体：ＩＬ−２複合体の治療剤との併用投与は、異なる機構により作動する２つの薬剤を提供し、ヒト疾患に治療効果及び恐らく相乗効果を提供し得る。
【０２３５】
本抗体、抗原結合部分、及び本明細書に開示されるＩＬ−２抗体を含む抗体：ＩＬ−２複合体は、自己免疫疾患などの炎症性病態などのＩＬ−２が望ましくない程度に活性である多様な状況において、または免疫抑制が所望される状況において、治療薬または診断ツールとして使用され得る。ある特定の実施形態において、免疫抑制療法は、臓器または骨髄移植に備えたものであり得る。炎症経路、ならびに多数の疾患、障害、及び病態へのＩＬ−２の関与を考慮して、多くのかかる疾患、障害または、病態は、抗体、抗原結合部分、または本開示のＩＬ−２抗体を含む抗体：ＩＬ−２複合体での治療に特に好適である。したがって、ＩＬ−２抗体、その抗原結合部分、または本開示のＩＬ−２抗体を含む抗体：ＩＬ−２複合体は、ＩＬ−２−媒介性障害またはＩＬ−２欠損障害の治療または予防に使用され得る。加えて、本開示は、ＩＬ−２−媒介性障害またはＩＬ−２欠損障害の治療または予防に使用するための医薬品の製造におけるＩＬ−２抗体、その抗原結合部分、または本開示のＩＬ−２抗体を含む抗体：ＩＬ−２複合体の使用を提供する。別の実施形態において、本出願は、ＩＬ−２−媒介性障害またはＩＬ−２欠損障害の治療に使用するためのＩＬ−２抗体、その抗原結合部分、または本開示のＩＬ−２抗体を含む抗体：ＩＬ−２複合体を開示する。さらなる実施形態において、本出願は、ＩＬ−２−媒介性疾患またはＩＬ−２欠損障害の治療または予防に使用するためのＩＬ−２抗体、その抗原結合部分、または本開示のＩＬ−２抗体を含む抗体：ＩＬ−２複合体を含む薬学的組成物を開示する。ある特定の実施形態において、本抗体は、ｈＩＬ−２に特異的に結合する。
【０２３６】
ある特定の実施形態において、これらの疾患には、移植片対宿主疾患などの免疫学的疾患が含まれる。ある特定の実施形態において、疾患は、筋ジストロフィー及び肥満などのＩＬ−２に関連する任意の疾患であり得る。本抗体、その抗原結合部分、または本明細書に提供されＩＬ−２抗体を含む抗体：ＩＬ−２複合体で治療され得る例となる自己免疫疾患及び障害としては、例えば、炎症性応答、例えば、乾癬及び皮膚炎（例えば、アトピー性皮膚炎）を含む炎症性皮膚疾患、皮膚筋炎、全身性強皮症及び硬化症、炎症性腸疾患（クローン病及び潰瘍性大腸炎など）に関連する応答、呼吸窮迫症候群（成人呼吸窮迫症候群及びＡＲＤＳを含む）、皮膚炎、髄膜炎、脳炎、ブドウ膜炎、大腸炎、胃炎、糸球体腎炎、湿疹及び喘息などのアレルギー病態ならびにＴ細胞の浸潤及び慢性炎症性応答を伴う他の病態、アテローム性動脈硬化症、白血球粘着不全症、関節リウマチ、全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）、真性糖尿病（例えば、Ｉ型真性糖尿病）、多発性硬化症、レイノー症候群、自己免疫性甲状線炎、アレルギー性脳脊髄炎、シェーグレン症候群；若年発症性糖尿病；ならびに結核、サルコイドーシス、多発性筋炎、肉芽腫症及び血管炎において典型的に見られるサイトカイン及びＴリンパ球によって媒介される急性及び遅発性過敏症に関連する免疫応答、ウェゲナー病、悪性貧血（アジソン病）；白血球の漏出を伴う疾患、中枢神経系（ＣＮＳ）炎症性障害、多臓器損傷症候群、溶血性貧血（クリオグロブリン血症（ｃｒｙｏｇｌｏｂｉｎｅｍｉａ）またはクームス試験陽性貧血を含むがこれらに限定されない）、重症筋無力症；抗原−抗体複合体媒介性疾患；抗糸球体基底膜疾患、抗リン脂質症候群、アレルギー性神経炎；グレーブス病、ランバート・イートン筋無力症候群、水疱性類天疱瘡、天疱瘡；自己免疫性多腺性内分泌障害、白斑、ライター病、スティフ・マン症候群、ベーチェット病、巨細胞性動脈炎；免疫複合体腎炎、ＩｇＡ腎症、ＩｇＭ多発性神経炎、免疫性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）または自己免疫性血小板減少症及び自己免疫性溶血性疾患、橋本甲状腺炎、自己免疫性肝炎、自己免疫性血友病；自己免疫性リンパ球増殖性症候群（ＡＬＰＳ）；自己免疫性ブドウ膜網膜炎、ギランバレー症候群、グッドパスチャー症候群；混合性結合組織疾患、自己免疫関連性不妊症、結節性多発性動脈炎、円形脱毛症、ならびに特発性粘液水腫が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、本組成物及び方法で治療され得る病態は、真性糖尿病（例えば、Ｉ型真性糖尿病）である。いくつかの実施形態において、疾患は、Ｉ型真性糖尿病である。いくつかの実施形態において、疾患は、若年発症性糖尿病である。
【０２３７】
前述の障害のうちのいずれかを治療するために、本開示に従って使用するための薬学的組成物は、１つ以上の薬学的に許容される担体または賦形剤を使用して従来の様式で製剤化され、以下でより完全に論じられるように投与され得る。
【０２３８】
本開示に従う、抗体、その抗原結合部分、または本開示のＩＬ−２抗体を含む抗体：ＩＬ−２複合体の治療有効量の決定は、特定の患者特性、投与経路、及び治療される障害の性質に大いに依存し、以下でより完全に論じられる。
【０２３９】
本抗体、その抗原結合部分、または本開示のＩＬ−２抗体を含む抗体：ＩＬ−２複合体の投与及び投薬は、下記の他の箇所でより完全に論じられる。
【０２４０】
診断方法
本明細書に開示されるＩＬ−２抗体またはその抗原結合部分は、診断試験及び画像診断に使用され得る。例えば、ＩＬ−２抗体またはその抗原結合部分は、ＥＬＩＳＡアッセイに使用され得る。本抗体またはその抗原結合部分は、放射性標識モノクローナル抗体として使用することもできる。例えば、Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ（ｅｄ．），Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｆｏｒ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ（１９８８）、Ｃｈａｓｅ，“Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｒａｄｉｏｉｓｏｔｏｐｅｓ，”ｉｎ  Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｇｅｎｎａｒｏ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，ｐｐ．６２４−６５２（１９９０）、及びＢｒｏｗｎ，“Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，”ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｐｅｚｚｕｔｏ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｃｈａｐｍａｎ  ａｎｄ  Ｈａｌｌ，ｐｐ．２２７−２４９（１９９３）、Ｇｒｏｓｓｍａｎ，１９８６，Ｕｒｏｌ．Ｃｌｉｎ．Ｎｏｒｔｈ  Ａｍｅｒ．１３：４６５−４７４、Ｕｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５，Ｉｎｖｅｓｔ．Ｒａｄｉｏｌ．２０：６９３−７００、ならびにＫｈａｗ  ｅｔ  ａｌ．，１９８０，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２０９：２９５−２９７を参照されたい。この技法（別名、免疫シンチグラフィー）は、ガンマカメラを使用して、モノクローナル抗体にコンジュゲートしたガンマ放射放射性同位体の位置を検出する。画像診断を使用して、癌、自己免疫疾患、感染性疾患、及び／または心臓血管疾患を診断することができる。（例えば、Ｂｒｏｗｎ（上記参照）を参照されたい。）
【０２４１】
一実施形態において、ＩＬ−２抗体またはその抗原結合部分を使用して、免疫関連疾患を含むＩＬ−２関連疾患、障害、または病態を診断することができる。例えば、本抗体またはその抗原結合部分を使用して、他の使用の中でもとりわけ、患者におけるＩＬ−２レベルを検出することができる。
【０２４２】
診断に加えて、ＩＬ−２抗体またはその抗原結合部分を使用して、治療応答を監視し、疾患の再発を検出し、その後の臨床的判断を導くことができる。
【０２４３】
いくつかの実施形態において、診断及び監視目的のために、放射性同位体が、中間官能基を使用することによって、抗体部分に直接または間接的に結合され得る。かかる中間官能基には、例えば、ＤＴＰＡ（ジエチレントリアミン五酢酸）及びＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）が含まれる。患者に送達される放射線量は、典型的には、可能な限り低レベルで維持される。これは、検出及び正確な測定を可能にする、最小半減期、体内での最小保持、及び同位体の最小量の最良の組み合わせのための同位体の選択によって達成され得る。抗体に結合することができ、かつ画像診断に適切な放射性同位体の例としては、９９ｍＴｃ及び１１１Ｉｎが挙げられる。
【０２４４】
抗体部分、特にＦａｂ及びＦａｂ’が、好適な腫瘍／バックグラウンド比率を提供することが研究によって示されている。（例えば、Ｂｒｏｗｎ（上記参照）を参照されたい。）
【０２４５】
ＩＬ−２抗体またはその抗原結合部分は、体内診断のために常磁性イオンで標識することもできる。磁気共鳴映像法に特に有用な元素には、Ｇｄ、Ｍｎ、Ｄｙ、及びＦｅイオンが含まれる。
【０２４６】
ＩＬ−２抗体またはその抗原結合部分は、ＩＬ−２の存在を体外で検出することもできる。かかるイムノアッセイでは、本抗体またはその抗原結合部分が液相で利用され得るか、または固相担体に結合し得る。例えば、無傷の抗体またはその抗原結合部分は、本抗体成分を、ポリマーでコーティングされたビーズ、プレート、またはチューブなどの不溶性支持体に連結するために、アミノデキストランなどのポリマーに結合し得る。いくつかの実施形態において、検出のためのＩＬ−２は、ヒトＩＬ−２（ｈＩＬ−２）である。いくつかの実施形態において、検出のためのｈＩＬ−２は、体外で０．１ｎｇ／ｍＬ〜１０００ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。いくつかの実施形態において、検出のためのｈＩＬ−２は、体外で０．１ｎｇ／ｍＬ〜７５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。いくつかの実施形態において、検出のためのｈＩＬ−２は、体外で０．５ｎｇ／ｍＬ〜５００ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。いくつかの実施形態において、検出のためのｈＩＬ−２は、体外で０．５ｎｇ／ｍＬ〜２５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。いくつかの実施形態において、検出のためのｈＩＬ−２は、体外で０．５ｎｇ／ｍＬ〜１００ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。いくつかの実施形態において、検出のためのｈＩＬ−２は、体外で０．５ｎｇ／ｍＬ〜５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。いくつかの実施形態において、検出のためのｈＩＬ−２は、体外で０．５ｎｇ／ｍＬ〜２５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。いくつかの実施形態において、検出のためのｈＩＬ−２は、体外で０．５ｎｇ／ｍＬ〜１０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。いくつかの実施形態において、検出のためのｈＩＬ−２は、体外で０．５ｎｇ／ｍＬ〜５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。いくつかの実施形態において、検出のためのｈＩＬ−２は、体外で０．５ｎｇ／ｍＬ〜１ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。いくつかの実施形態において、検出のためのｈＩＬ−２は、体外で０．１ｎｇ／ｍＬ〜５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。いくつかの実施形態において、検出のためのｈＩＬ−２は、体外で０．１ｎｇ／ｍＬ〜１ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。いくつかの実施形態において、検出のためのｈＩＬ−２は、体外で０．８ｎｇ／ｍＬ〜５００ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。いくつかの実施形態において、検出のためのｈＩＬ−２は、体外で１ｎｇ／ｍＬ〜５００ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。いくつかの実施形態において、検出のためのｈＩＬ−２は、体外で１ｎｇ／ｍＬ〜２５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。いくつかの実施形態において、検出のためのｈＩＬ−２は、体外で１ｎｇ／ｍＬ〜１００ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。いくつかの実施形態において、検出のためのｈＩＬ−２は、体外で１ｎｇ／ｍＬ〜５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。いくつかの実施形態において、検出のためのｈＩＬ−２は、体外で１ｎｇ／ｍＬ〜２５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。いくつかの実施形態において、検出のためのｈＩＬ−２は、体外で１ｎｇ／ｍＬ〜１０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。いくつかの実施形態において、検出のためのｈＩＬ−２は、体外で５０ｎｇ／ｍＬ〜５００ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。いくつかの実施形態において、検出のためのｈＩＬ−２は、体外で１００ｎｇ／ｍＬ〜５００ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。いくつかの実施形態において、検出のためのｈＩＬ−２は、体外で２５０ｎｇ／ｍＬ〜５００ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。いくつかの実施形態において、検出のためのｈＩＬ−２は、体外で４００ｎｇ／ｍＬ〜５００ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。いくつかの実施形態において、検出のためのｈＩＬ−２は、体外で５００ｎｇ／ｍＬ〜１０００ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。いくつかの実施形態において、検出のためのｈＩＬ−２は、体外で７５０ｎｇ／ｍＬ〜１０００ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。いくつかの実施形態において、検出のためのｈＩＬ−２は、体外で０．８ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。いくつかの実施形態において、検出のためのｈＩＬ−２は、体外で５００ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。これらの量は、限定的であることを意図せず、列挙される値の間の増分が本開示の一部として具体的に想定される。
【０２４７】
代替的に、ＩＬ−２抗体またはその抗原結合部分を使用して、組織学的検体から調製された組織切片中の特定の抗原の存在を検出することができる。かかるその場検出は、例えば、検出可能な標識ＩＬ−２抗体またはその抗原結合部分を組織切片に適用することによって達成され得る。その場検出を使用して、特定の抗原の存在を決定し、試験される組織中の抗原の分布を決定することができる。その場検出の一般的な技法は、当業者に周知のことである。（例えば、Ｐｏｎｄｅｒ，“Ｃｅｌｌ  Ｍａｒｋｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｉｒ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ，”ｉｎ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｍｏｎｋ（ｅｄ．），ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，ｐｐ．１１５−１３８（１９８７）、Ｃｏｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．（上記参照）を参照されたい。）
【０２４８】
検出可能な標識、例えば、酵素、蛍光化合物、電子移動剤等は、当該技術分野で周知の従来の方法によって担体に結合し得る。これらの標識担体及びそれらから調製された抗体コンジュゲートは、体外イムノアッセイ及びその場検出に使用することができるが、抗体コンジュゲートは、標識の抗体への直接結合によっても調製され得る。抗体コンジュゲートに複数の標識を装填することにより、イムノアッセイまたは組織学的手技の感度を増加させることができ、低程度の本抗体または抗体部分の標的抗原への結合のみが達成される。
【０２４９】
組成物
本開示はまた、本明細書に記載される有効量のＩＬ−２抗体を含む薬学的組成物も提供する。かかる組成物の例、ならびに製剤化方法も、本明細書に記載される。いくつかの実施形態において、組成物は、１つ以上のＩＬ−２抗体を含む。他の実施形態において、ＩＬ−２抗体は、ＩＬ−２を認識する。他の実施形態において、ＩＬ−２抗体は、ヒト抗体である。他の実施形態において、ＩＬ−２抗体は、ヒト化抗体である。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２抗体は、抗体媒介性溶解またはＡＤＣＣなどの所望の免疫応答を誘発することが可能な定常領域を含む。他の実施形態において、ＩＬ−２抗体は、抗体媒介性溶解またはＡＤＣＣなどの望まれないまたは望ましくない免疫応答を誘発しない定常領域を含む。他の実施形態において、ＩＬ−２抗体は、本抗体の１つ以上のＣＤＲ（複数可）（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、またはいくつかの実施形態では６つすべてのＣＤＲ）を含む。
【０２５０】
本組成物が１つよりも多くのＩＬ−２抗体（例えば、ＩＬ−２の異なるエピトープを認識するＩＬ−２抗体の混合物）を含み得ることが理解される。他の例となる組成物は、同じエピトープ（複数可）を認識するか、またはＩＬ−２の異なるエピトープに結合するＩＬ−２抗体の異なる種を認識する１つよりも多くのＩＬ−２抗体を含む。いくつかの実施形態において、本組成物は、ＩＬ−２の異なる変異型を認識するＩＬ−２抗体の混合物を含む。
【０２５１】
本開示で使用される組成物は、薬学的に許容される担体、賦形剤、または安定剤を、凍結乾燥製剤または水溶液の形態でさらに含み得る（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  ２０ｔｈ  Ｅｄ．，２０００，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｅｄ．Ｋ．Ｅ．Ｈｏｏｖｅｒ）。許容される担体、賦形剤、または安定剤は、投薬量及び濃度でレシピエントに非毒性であり、リン酸、クエン酸、及び他の有機酸などの緩衝液；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤；保存料（塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル、またはベンジルアルコール；メチルもしくはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；及びｍ−クレゾールなど）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、もしくはリジンなどのアミノ酸；グルコース、マンノース、もしくはデキストランを含む、単糖、二糖、及び他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロース、もしくはソルビトールなどの糖；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属複合体（例えば、Ｚｎ−タンパク質複合体）；ならびに／またはＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）、もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤を含み得る。薬学的に許容される賦形剤は、さらに本明細書に記載される。
【０２５２】
ＩＬ−２抗体及びその組成物は、薬剤の有効性を増強及び／または補完する役割を果たす他の薬剤と併せて使用することもできる。
【０２５３】
ある特定の実施形態において、ＩＬ−２抗体は、投与前にＩＬ−２と複合される。ある特定の実施形態において、ＩＬ−２抗体は、投与前にＩＬ−２と複合されない。
【０２５４】
本開示はまた、本開示のポリヌクレオチドのうちのいずれかを含む薬学的組成物などの組成物も提供する。いくつかの実施形態において、本組成物は、本明細書に記載される抗体をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを含む。他の実施形態において、本組成物は、本明細書に記載される本抗体のうちのいずれかをコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを含む。なお他の実施形態において、本組成物は、配列番号１及び配列番号２に示される配列をコードするポリヌクレオチドのいずれかまたは両方、配列番号３及び配列番号４に示される配列をコードするポリヌクレオチドのいずれかまたは両方、配列番号５及び配列番号６に示される配列をコードするポリヌクレオチドのいずれかまたは両方、配列番号７及び配列番号８に示される配列をコードするポリヌクレオチドのいずれかまたは両方、配列番号９及び配列番号１０に示される配列をコードするポリヌクレオチドのいずれかまたは両方、配列番号１１及び配列番号１２に示される配列をコードするポリヌクレオチドのいずれかまたは両方、配列番号１３及び配列番号１４に示される配列をコードするポリヌクレオチドのいずれかまたは両方、配列番号１５及び配列番号１６に示される配列をコードするポリヌクレオチドのいずれかまたは両方、配列番号１７及び配列番号１８に示される配列をコードするポリヌクレオチドのいずれかまたは両方、配列番号１９及び配列番号２０に示される配列をコードするポリヌクレオチドのいずれかまたは両方、配列番号２１及び配列番号２２に示される配列をコードするポリヌクレオチドのいずれかまたは両方、配列番号２３及び配列番号２４に示される配列をコードするポリヌクレオチドのいずれかまたは両方、配列番号２５及び配列番号２６に示される配列をコードするポリヌクレオチドのいずれかまたは両方、配列番号２７及び配列番号２８に示される配列をコードするポリヌクレオチドのいずれかまたは両方、配列番号２９及び配列番号３０に示される配列をコードするポリヌクレオチドのいずれかまたは両方、または配列番号３１及び配列番号３２に示される配列をコードするポリヌクレオチドのいずれかまたは両方を含む。なお他の実施形態において、本組成物は、配列番号３６及び配列番号３７に示される配列を含むポリヌクレオチドのいずれかまたは両方、配列番号３８及び配列番号３９に示される配列を含むポリヌクレオチドのいずれかまたは両方、配列番号４０及び配列番号４１に示される配列を含むポリヌクレオチドのいずれかまたは両方、配列番号４２及び配列番号４３に示される配列を含むポリヌクレオチドのいずれかまたは両方、配列番号４４及び配列番号４５に示される配列を含むポリヌクレオチドのいずれかまたは両方、配列番号４６及び配列番号４７に示される配列を含むポリヌクレオチドのいずれかまたは両方、配列番号４８及び配列番号４９に示される配列を含むポリヌクレオチドのいずれかまたは両方、配列番号５０及び配列番号５１に示される配列を含むポリヌクレオチドのいずれかまたは両方、配列番号５２及び配列番号５３に示される配列を含むポリヌクレオチドのいずれかまたは両方、配列番号５４及び配列番号５５に示される配列を含むポリヌクレオチドのいずれかまたは両方、配列番号５６及び配列番号５７に示される配列を含むポリヌクレオチドのいずれかまたは両方、配列番号５８及び配列番号５９に示される配列を含むポリヌクレオチドのいずれかまたは両方、配列番号６０及び配列番号６１に示される配列を含むポリヌクレオチドのいずれかまたは両方、配列番号６２及び配列番号６３に示される配列を含むポリヌクレオチドのいずれかまたは両方、配列番号６４及び配列番号６５に示される配列を含むポリヌクレオチドのいずれかまたは両方、または配列番号６６及び配列番号６７に示される配列を含むポリヌクレオチドのいずれかまたは両方を含む。
【０２５５】
別の態様において、ポリヌクレオチドは、本開示の抗体のＶＨ、ＶＬ、及び／またはＶＨ及びＶＬの両方をコードし得る。すなわち、本組成物は、本開示の抗体またはその抗原結合部分をコードする単一のポリヌクレオチドまたは１つよりも多くのポリヌクレオチドを含む。
【０２５６】
本開示の薬学的組成物は、例えば、他の薬剤と組み合わせた併用療法において投与することもできる。例えば、併用療法は、本開示のＩＬ−２抗体またはその抗原結合部分を少なくとも１つの他の療法と組み合わせて含み、併用療法は、手術、免疫療法、または薬物療法であり得る。
【０２５７】
本開示の薬学的化合物は、１つ以上の薬学的に許容される塩を含み得る。かかる塩の例としては、酸付加塩及び塩基付加塩が挙げられる。酸付加塩には、非毒性無機酸、例えば、塩酸、硝酸、リン酸、硫酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、亜リン酸等に由来するもの、ならびに非毒性有機酸、例えば、脂肪族モノ及びジカルボン酸、フェニル置換アルカン酸、ヒドロキシアルカン酸、芳香族酸、脂肪族及び芳香族スルホン酸等に由来するものが含まれる。塩基付加塩には、アルカリ土類金属、例えば、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム等に由来するもの、ならびに非毒性有機アミン、例えば、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、Ｎ−メチルグルカミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、プロカイン等に由来するものが含まれる。
【０２５８】
本開示の薬学的組成物は、薬学的に許容される抗酸化剤も含み得る。薬学的に許容される抗酸化剤の例としては、（１）水溶性抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸、塩酸システイン、重硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウム等、（２）油溶性抗酸化剤、例えば、パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、アルファ−トコフェロール等、及び（３）金属キレート剤、例えば、クエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸等が挙げられる。
【０２５９】
本開示の薬学的組成物に用いられ得る好適な水性及び非水性担体の例としては、水、エタノール、ポリオール（などのグリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール等）、及びそれらの好適な混合物、オリーブ油などの植物油、ならびにオレイン酸エチルなどの注入可能な有機エステルが挙げられる。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング材料の使用により、分散の場合には要求される粒径の維持により、かつ界面活性剤の使用により維持され得る。
【０２６０】
これらの組成物は、保存料、湿潤剤、乳化剤、及び分散剤などのアジュバントも含有し得る。微生物の存在の阻止は、滅菌手技と、種々の抗菌剤及び抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸等の包含との両方により確実になり得る。糖、塩化ナトリウム等などの等張剤を本組成物に包含することが望ましい場合もある。加えて、注入可能な薬学的形態の持続的吸収は、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンなどの吸収を遅延させる薬剤の包含によりもたらされ得る。
【０２６１】
薬学的組成物は、典型的には、滅菌であり、製造及び保管条件下で安定していなければならない。本組成物は、溶液、マイクロエマルション、リポソーム、または高薬物濃度に好適な他の秩序構造として製剤化され得る。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコール等）、ならびにそれらの好適な混合物を含有する溶媒または分散媒体であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用により、分散の場合には要求される粒径の維持により、かつ界面活性剤の使用により維持され得る。多くの場合、等張剤、例えば、糖、マンニトールなどのポリアルコール、ソルビトール、または塩化ナトリウムを本組成物中に包含することが好適であろう。注入可能な組成物の持続的吸収は、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸塩及びゼラチンを組成物中に包含することによりもたらされ得る。
【０２６２】
注入可能な滅菌溶液は、必要に応じて、上に列挙される成分うちの１つまたはそれらの組み合わせを有する適切な溶媒中に活性化合物を必要な量で組み込み、続いて、滅菌精密濾過を行うことによって調製され得る。
【０２６３】
一般に、分散剤は、塩基性分散媒体及び上に列挙される成分からの必要な他の成分を含有する滅菌ビヒクル中に活性化合物を組み込むことによって調製される。注入可能な滅菌溶液の調製のための滅菌粉末の場合、好ましい調製方法は、その事前に滅菌濾過された溶液から活性成分及び任意の追加の所望の成分の粉末を生産する真空乾燥及びフリーズドライ（凍結乾燥）である。
【０２６４】
本開示の薬学的組成物は、眼投与に好適な製剤に調製され得るか、パッケージングされ得るか、または販売され得る。かかる製剤は、例えば、水性または油性液体担体中０．１ｗ／ｗ％〜１．０ｗ／ｗ％の活性成分溶液または懸濁液を含む、例えば、点眼薬の形態であり得る。かかる点眼薬は、緩衝剤、塩、または本明細書に記載される追加の成分のうちの他の１つ以上をさらに含み得る。有用な他の眼投与可能な製剤には、微結晶形態またはリポソーム調製物での活性成分を含むものが含まれる。
【０２６５】
本明細書で使用されるとき、「追加の成分」には、賦形剤、表面活性剤、分散剤、不活性希釈剤、造粒剤及び崩壊剤、結合剤、滑沢剤、甘味剤、香味剤、着色剤、保存料、ゼラチンなどの生理学的に分解可能な組成物、水性ビヒクル及び溶媒、油性ビヒクル及び溶媒、懸濁化剤、分散剤または湿潤剤、乳化剤、粘滑剤、緩衝液、塩、増粘剤、充填剤、乳化剤、抗酸化剤、抗生物質、抗真菌薬、安定剤；ならびに薬学的に許容されるポリマー材料または疎水性材料のうちの１つ以上が含まれるが、これらに限定されない。本開示の薬学的組成物に含まれ得る他の「追加の成分」は、当該技術分野で既知であり、例えば、参照により本明細書に組み込まれる、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｇｅｎａｒｏ，ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ（１９８５）に記載されている。
【０２６６】
一実施形態において、ＩＬ−２抗体またはその抗原結合部分は、酢酸ナトリウム、ポリソルベート８０、及び塩化ナトリウム（約５〜６の範囲のｐＨ）とともに、５ｍｇ／ｍＬ、またはいくつかの実施形態では約１０ｍｇ／ｍＬ、またはいくつかの実施形態では約１５ｍｇ／ｍＬ、またはいくつかの実施形態では約２０ｍｇ／ｍＬの抗体を含有する滅菌水溶液として静脈内投与製剤中で投与される。いくつかの実施形態において、静脈内投与製剤は、２０ｍＭの酢酸ナトリウム、０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、及び１４０ｍＭの塩化ナトリウム（ｐＨ５．５）とともに、５ｍｇ／ｍＬまたは１０ｍｇ／ｍＬの抗体を含有する滅菌水溶液である。さらに、抗体またはその抗原結合部分を含む溶液は、多くの他の化合物の中でもとりわけ、ヒスチジン、マンニトール、スクロース、トレハロース、グリシン、ポリ（エチレン）グリコール、ＥＤＴＡ、メチオニン、及びこれらの任意の組み合わせ、ならびに関連技術分野で既知の多くの他の化合物を含む。
【０２６７】
一実施形態において、本開示の薬学的組成物は、次の構成要素：１００ｍｇの本開示のＩＬ−２抗体または抗原結合部分、１０ｍＭのヒスチジン、５％スクロース、及び０．０１％ポリソルベート８０（ｐＨ５．８）を含む。この組成物は、凍結乾燥粉末として提供され得る。粉末が全体積で再構成されると、本組成物は、同じ製剤を保持する。代替的に、粉末は、半体積で再構成され得、この場合、本組成物は、１００ｍｇの本開示のＩＬ−２抗体またはその抗原結合部分、２０ｍＭのヒスチジン、１０％スクロース、及び０．０２％ポリソルベート８０（ｐＨ５．８）を含む。
【０２６８】
一実施形態において、用量の一部は、静脈内ボーラスにより投与され、残りは、抗体製剤の注入により投与される。例えば、ＩＬ−２抗体またはその抗原結合部分の０．０１ｍｇ／ｋｇ静脈注射がボーラスとして与えられ得、抗体用量の残りが、静脈注射により投与され得る。所定の用量のＩＬ−２抗体またはその抗原結合部分が、例えば、１時間半〜２時間、２時間〜５時間の期間にわたって投与され得る。
【０２６９】
治療剤に関して、薬剤が、例えば、小分子の場合、それは、例えば、当該技術分野で周知の生理学的に許容されるカチオンまたはアニオンと組み合わせて、生理学的に許容されるエステルまたは塩の形態で薬学的組成物中に存在し得る。
【０２７０】
本明細書に記載される薬学的組成物の製剤は、薬理学分野で既知の、または今後開発される任意の方法により調製され得る。一般に、かかる調製方法は、活性成分を担体または１つ以上の副成分と会合させる工程と、その後、必要であるか、または望ましい場合に、生成物を所望の単回または複数回投与単位に成形またはパッケージングする工程とを含む。
【０２７１】
一実施形態において、本開示の組成物は、ピロゲンを含まない製剤であり、これは、内毒素及び／または関連発熱性物質を実質的に含まない。内毒素には、微生物内に閉じ込められており、かつ微生物が分解されるか、または死んだときに放出される毒素を含む。発熱性物質は、細菌及び他の微生物の外膜由来の熱誘導型の熱安定性物質（糖タンパク質）も含む。これらの物質はいずれも、ヒトに投与されると、発熱、低血圧、及びショック状態を引き起こし得る。潜在的な悪影響のため、低量の内毒素を静脈内投与される薬学的薬物溶液から除去することが有利である。Ｔｈｅ  Ｆｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ（「ＦＤＡ」）は、静脈内薬物適用の単回１時間にわたって、５内毒素単位（ＥＵ）／用量／キログラム体重の上限を設定している（Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａｌ  Ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎ，Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａｌ  Ｆｏｒｕｍ  ２６（１）：２２３（２０００））。治療タンパク質が体重１キログラムあたり数百または数千ミリグラムの量で投与される場合、微量の内毒素さえも除去することが有利である。一実施形態において、組成物中の内毒素及びピロゲンレベルは、１０ＥＵ／ｍｇ未満、または５ＥＵ／ｍｇ未満、または１ＥＵ／ｍｇ未満、または０．１ＥＵ／ｍｇ未満、または０．０１ＥＵ／ｍｇ未満、または０．００１ＥＵ／ｍｇ未満である。別の実施形態において、組成物中の内毒素及びピロゲンレベルは、約１０ＥＵ／ｍｇ未満、または約５ＥＵ／ｍｇ未満、または約１ＥＵ／ｍｇ未満、または約０．１ＥＵ／ｍｇ未満、または約０．０１ＥＵ／ｍｇ未満、または約０．００１ＥＵ／ｍｇ未満である。
【０２７２】
一実施形態において、本開示は、組成物を投与することを含み、該投与は、経口、非経口、筋肉内、鼻腔内、膣内、直腸、舌、舌下、口腔、口腔内、静脈内、皮膚、皮下、または経皮である。
【０２７３】
別の実施形態において、本開示は、手術、化学療法、ホルモン療法、生物学的療法、免疫療法、または放射線療法などの他の療法と組み合わせて、組成物を投与することをさらに含む。
【０２７４】
投薬／投与
本開示のＩＬ−２抗体またはその抗原結合部分を含む薬学的または滅菌組成物を調製するために、本抗体は、薬学的に許容される担体または賦形剤と混合される。治療剤及び診断剤の製剤は、例えば、凍結乾燥粉末、スラリー、水溶液、ローション、または懸濁液の形態で、生理学的に許容される担体、賦形剤、または安定剤と混合することによって調製され得る（例えば、Ｈａｒｄｍａｎ，ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．、Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００）Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．、Ａｖｉｓ，ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．）（１９９３）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ、Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．）（１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｔｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ、Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．）（１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｄｉｓｐｅｒｓｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ、Ｗｅｉｎｅｒ  ａｎｄ  Ｋｏｔｋｏｓｋｉｅ（２０００）Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ  Ｔｏｘｉｃｉｔｙ  ａｎｄ  Ｓａｆｅｔｙ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．を参照されたい）。
【０２７５】
治療薬の投与レジメンの選択は、実体の血清または組織ターンオーバー、症状のレベル、実体の免疫原性、及び生体生物学的マトリックス中の標的細胞の到達性を含む、いくつかの要因に依存する。ある特定の実施形態において、投与レジメンは、許容されるレベルの副作用と一致する患者に送達される治療薬の量を最大にする。したがって、送達される生物学的薬剤の量は、特定の実体及び治療される病態の重症度に部分的に依存する。抗体、サイトカイン、及び小分子の適切な用量を選択する際の手引きが入手可能である（例えば、Ｗａｗｒｚｙｎｃｚａｋ，１９９６，Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｂｉｏｓ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｕｂ．Ｌｔｄ，Ｏｘｆｏｒｄｓｈｉｒｅ，ＵＫ、Ｋｒｅｓｉｎａ（ｅｄ．），１９９１，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  ａｎｄ  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．、Ｂａｃｈ（ｅｄ．），１９９３，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．、Ｂａｅｒｔ，ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：６０１−６０８、Ｍｉｌｇｒｏｍ，ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４１：１９６６−１９７３、Ｓｌａｍｏｎ，ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４４：７８３−７９２、Ｂｅｎｉａｍｉｎｏｖｉｔｚ，ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４２：６１３−６１９、Ｇｈｏｓｈ，ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：２４−３２、Ｌｉｐｓｋｙ，ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４３：１５９４−１６０２を参照されたい）。
【０２７６】
適切な用量の決定は、例えば、治療に影響を及ぼすことが当該技術分野で既知であるもしくは疑われているか、または治療に影響を及ぼすと予測されるパラメータまたは要因を使用して、臨床医によって行われる。一般に、用量は、最適用量よりもいくらか少ない量から始まり、その後、いずれの負の副作用と比較して所望のまたは最適な効果が達成されるまで、わずかな増分で増加する。重要な診断測定には、例えば、産生される炎症性サイトカインの炎症またはレベルの症状の測定が含まれる。
【０２７７】
本開示の薬学的組成物中の活性成分の実際の投薬量レベルは、患者に毒性になることなく、特定の患者、組成物、及び投与方法に所望の治療応答を達成するのに有効な活性成分の量を得るように変化し得る。選択される投薬量レベルは、用いられる本開示の特定の組成物の活性、またはそのエステル、塩、もしくはアミド、投与経路、投与時間、用いられる特定の化合物の排出速度、治療期間、用いられる特定の組成物と組み合わせて使用される他の薬物、化合物、及び／または材料、治療される患者の年齢、性別、体重、状態、一般的健康、及び病歴、ならびに医学分野で周知の同類の要因を含む、多様な薬物動態学的要因に依存する。
【０２７８】
本開示のＩＬ−２抗体またはその抗原結合部分を含む組成物は、連続注入によって、または例えば、１日、１週間、または週１〜７回の間隔での投与によって提供され得る。用量は、静脈内、皮下、局所、経口、経鼻、直腸、筋肉内、脳内に、または吸入により提供され得る。特定の用量プロトコルは、重大な望ましくない副作用を回避する最大用量または用量頻度を含むものである。合計週用量は、少なくとも０．０５μｇ／ｋｇ体重、少なくとも０．２μｇ／ｋｇ、少なくとも０．５μｇ／ｋｇ、少なくとも１μｇ／ｋｇ、少なくとも１０μｇ／ｋｇ、少なくとも１００μｇ／ｋｇ、少なくとも０．２ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１．０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２．０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２５ｍｇ／ｋｇ、または少なくとも５０ｍｇ／ｋｇであり得る（例えば、Ｙａｎｇ，ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４９：４２７−４３４、Ｈｅｒｏｌｄ，ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４６：１６９２−１６９８、Ｌｉｕ，ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．Ｐｓｙｃｈ．６７：４５１−４５６、Ｐｏｒｔｉｅｌｊｉ，ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｃａｎｃｅｒ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５２：１３３−１４４を参照されたい）。用量は、少なくとも１５μｇ、少なくとも２０μｇ、少なくとも２５μｇ、少なくとも３０μｇ、少なくとも３５μｇ、少なくとも４０μｇ、少なくとも４５μｇ、少なくとも５０μｇ、少なくとも５５μｇ、少なくとも６０μｇ、少なくとも６５μｇ、少なくとも７０μｇ、少なくとも７５μｇ、少なくとも８０μｇ、少なくとも８５μｇ、少なくとも９０μｇ、少なくとも９５μｇ、または少なくとも１００μｇであり得る。対象に投与される用量の数は、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、もしく１２、またはそれ以上であり得る。
【０２７９】
本開示のＩＬ−２抗体またはその抗原結合部分の場合、患者に投与される投薬量は、０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ（患者の体重）であり得る。投薬量は、０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ、０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ、０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇ、０．０００１〜２ｍｇ／ｋｇ、０．０００１〜１ｍｇ／ｋｇ、０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜０．７５ｍｇ／ｋｇ、０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜０．５ｍｇ／ｋｇ、０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜０．２５ｍｇ／ｋｇ、０．０００１〜０．１５ｍｇ／ｋｇ、０．０００１〜０．１０ｍｇ／ｋｇ、０．００１〜０．５ｍｇ／ｋｇ、０．０１〜０．２５ｍｇ／ｋｇ、または０．０１〜０．１０ｍｇ／ｋｇ（患者の体重）であり得る。
【０２８０】
ＩＬ−２抗体またはその抗原結合部分の投薬量は、ｍｇ／ｋｇ単位の投与される用量を乗じたキログラム（ｋｇ）単位の患者の体重を使用して計算され得る。本開示の抗体の投薬量は、１５０μｇ／ｋｇ以下、１２５μｇ／ｋｇ以下、１００μｇ／ｋｇ以下、９５μｇ／ｋｇ以下、９０μｇ／ｋｇ以下、８５μｇ／ｋｇ以下、８０μｇ／ｋｇ以下、７５μｇ／ｋｇ以下、７０μｇ／ｋｇ以下、６５μｇ／ｋｇ以下、６０μｇ／ｋｇ以下、５５μｇ／ｋｇ以下、５０μｇ／ｋｇ以下、４５μｇ／ｋｇ以下、４０μｇ／ｋｇ以下、３５μｇ／ｋｇ以下、３０μｇ／ｋｇ以下、２５μｇ／ｋｇ以下、２０μｇ／ｋｇ以下、１５μｇ／ｋｇ以下、１０μｇ／ｋｇ以下、５μｇ／ｋｇ以下、２．５μｇ／ｋｇ以下、２μｇ／ｋｇ以下、１．５μｇ／ｋｇ以下、１μｇ／ｋｇ以下、０．５μｇ／ｋｇ以下、または０．１μｇ／ｋｇ（患者の体重）以下であり得る。
【０２８１】
本開示のＩＬ−２抗体またはその抗原結合部分の単位用量は、０．１ｍｇ〜２００ｍｇ、０．１ｍｇ〜１７５ｍｇ、０．１ｍｇ〜１５０ｍｇ、０．１ｍｇ〜１２５ｍｇ、０．１ｍｇ〜１００ｍｇ、０．１ｍｇ〜７５ｍｇ、０．１ｍｇ〜５０ｍｇ、０．１ｍｇ〜３０ｍｇ、０．１ｍｇ〜２０ｍｇ、０．１ｍｇ〜１５ｍｇ、０．１ｍｇ〜１２ｍｇ、０．１ｍｇ〜１０ｍｇ、０．１ｍｇ〜８ｍｇ、０．１ｍｇ〜７ｍｇ、０．１ｍｇ〜５ｍｇ、０．１〜２．５ｍｇ、０．２５ｍｇ〜２０ｍｇ、０．２５〜１５ｍｇ、０．２５〜１２ｍｇ、０．２５〜１０ｍｇ、０．２５〜８ｍｇ、０．２５ｍｇ〜７ｍｇ、０．２５ｍｇ〜５ｍｇ、０．５ｍｇ〜２．５ｍｇ、１ｍｇ〜２０ｍｇ、１ｍｇ〜１５ｍｇ、１ｍｇ〜１２ｍｇ、１ｍｇ〜１０ｍｇ、１ｍｇ〜８ｍｇ、１ｍｇ〜７ｍｇ、１ｍｇ〜５ｍｇ、または１ｍｇ〜２．５ｍｇであり得る。
【０２８２】
本開示のＩＬ−２抗体またはその抗原結合部分の投薬量は、対象において、少なくとも０．１μｇ／ｍＬ、少なくとも０．５μｇ／ｍＬ、少なくとも１μｇ／ｍＬ、少なくとも２μｇ／ｍＬ、少なくとも５μｇ／ｍＬ、少なくとも６μｇ／ｍＬ、少なくとも１０μｇ／ｍＬ、少なくとも１５μｇ／ｍＬ、少なくとも２０μｇ／ｍＬ、少なくとも２５μｇ／ｍＬ、少なくとも５０μｇ／ｍＬ、少なくとも１００μｇ／ｍＬ、少なくとも１２５μｇ／ｍＬ、少なくとも１５０μｇ／ｍＬ、少なくとも１７５μｇ／ｍＬ、少なくとも２００μｇ／ｍＬ、少なくとも２２５μｇ／ｍＬ、少なくとも２５０μｇ／ｍＬ、少なくとも２７５μｇ／ｍＬ、少なくとも３００μｇ／ｍＬ、少なくとも３２５μｇ／ｍＬ、少なくとも３５０μｇ／ｍＬ、少なくとも３７５μｇ／ｍＬ、または少なくとも４００μｇ／ｍＬの血清力価を達成し得る。代替的に、本開示の抗体の投薬量は、対象において、少なくとも０．１μｇ／ｍＬ、少なくとも０．５μｇ／ｍＬ、少なくとも１μｇ／ｍＬ、少なくとも、２μｇ／ｍＬ、少なくとも５μｇ／ｍＬ、少なくとも６μｇ／ｍＬ、少なくとも１０μｇ／ｍＬ、少なくとも１５μｇ／ｍＬ、少なくとも２０μｇ／ｍＬ、少なくとも２５μｇ／ｍＬ、少なくとも５０μｇ／ｍＬ、少なくとも１００μｇ／ｍＬ、少なくとも１２５μｇ／ｍＬ、少なくとも１５０μｇ／ｍＬ、少なくとも１７５μｇ／ｍＬ、少なくとも２００μｇ／ｍＬ、少なくとも２２５μｇ／ｍＬ、少なくとも２５０μｇ／ｍＬ、少なくとも２７５μｇ／ｍＬ、少なくとも３００μｇ／ｍＬ、少なくとも３２５μｇ／ｍＬ、少なくとも３５０μｇ／ｍＬ、少なくとも３７５μｇ／ｍＬ、または少なくとも４００μｇ／ｍＬの血清力価を達成し得る。
【０２８３】
本開示のＩＬ−２抗体またはその抗原結合部分の用量は繰り返され得、投与は、少なくとも１日間、２日間、３日間、５日間、１０日間、１５日間、３０日間、４５日間、２ヶ月、７５日間、３ヶ月、または少なくとも６ヶ月離され得る。
【０２８４】
特定の患者の有効量は、治療される病態、患者の健康全般、投与方法、投与経路、及び投与用量、ならびに副作用の重症度などの要因によって変化し得る（例えば、Ｍａｙｎａｒｄ，ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ａ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  ＳＯＰｓ  ｆｏｒ  Ｇｏｏｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｉｎｔｅｒｐｈａｒｍ  Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，ＦＩａ．、Ｄｅｎｔ，２００１，Ｇｏｏｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ａｎｄ  Ｇｏｏｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｕｒｃｈ  Ｐｕｂｌ，Ｌｏｎｄｏｎ，ＵＫ）。
【０２８５】
投与経路は、例えば、局所もしくは皮膚塗布、静脈内、腹腔内、脳内、筋肉内、眼内、動脈内、脳脊髄内、病巣内による注射もしくは注入、または徐放系もしくはインプラントにより得る（例えば、Ｓｉｄｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８３，Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ  ２２：５４７−５５６、Ｌａｎｇｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，１９８１，Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔｅｒ．Ｒｅｓ．１５：１６７−２７７、Ｌａｎｇｅｒ，１９８２，Ｃｈｅｍ．Ｔｅｃｈ．１２：９８−１０５、Ｅｐｓｔｅｉｎ，ｅｔ  ａｌ．，１９８５，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２：３６８８−３６９２、Ｈｗａｎｇ，ｅｔ  ａｌ．，１９８０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：４０３０−４０３４、米国特許第６，３５０４６６号及び同第６，３１６，０２４号を参照されたい）。必要に応じて、本組成物は、可溶化剤及び注射部位の疼痛を和らげるためのリドカインなどの局所麻酔薬も含み得る。加えて、例えば、吸入器または噴霧器及びエアロゾル化剤を有する製剤の使用による肺投与が用いられ得る。例えば、各々が参照により全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第６，０１９，９６８号、同第５，９８５，３２０号、同第５，９８５，３０９号、同第５，９３４，２７２号、同第５，８７４，０６４号、同第５，８５５，９１３号、同第５，２９０，５４０号、及び同第４，８８０，０７８号、ならびにＰＣＴ公報第ＷＯ９２／１９２４４号、同第ＷＯ９７／３２５７２号、同第ＷＯ９７／４４０１３号、同第ＷＯ９８／３１３４６号、及び同第ＷＯ９９／６６９０３号を参照されたい。一実施形態において、ＩＬ−２抗体もしくはその抗原結合部分、または本開示の組成物は、Ａｌｋｅｒｍｅｓ  ＡＩＲ（商標）肺薬物送達技術（Ａｌｋｅｒｍｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，Ｍａｓｓ．）を使用して投与される。
【０２８６】
本開示の組成物は、当該技術分野で既知の多様な方法のうちの１つ以上を使用して１つ以上の投与経路により投与することもできる。当業者に理解されるように、投与経路及び／または投与方法は、所望の結果によって異なる。本開示の抗体に選択される投与経路としては、静脈内、筋肉内、皮内、腹腔内、皮下、脊髄、または他の非経口投与経路、例えば、注射または注入が挙げられる。非経口投与は、通常注射による腸内及び局所投与以外の投与方法を表し得、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内、硬膜外、及び胸骨内注射及び注入を含むが、これらに限定されない。代替的に、本開示の組成物は、非非経口経路、例えば、局所、表皮、または粘膜投与経路、例えば、鼻腔内、経口、膣内、直腸、舌下、または局所投与経路により投与され得る。
【０２８７】
本開示のＩＬ−２抗体またはその抗原結合部分が制御放出または徐放系で投与される場合、ポンプを使用して、制御放出または徐放を達成することができる（Ｌａｎｇｅｒ（上記参照）、Ｓｅｆｔｏｎ，１９８７，ＣＲＣ  Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２０、Ｂｕｃｈｗａｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９８０，Ｓｕｒｇｅｒｙ  ８８：５０１、Ｓａｕｄｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２１：５１４を参照されたい）。
【０２８８】
ポリマー材料を使用して、本開示の療法の制御放出または徐放を達成することができる（例えば、Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，Ｌａｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｗｉｓｅ（ｅｄｓ．），ＣＲＣ  Ｐｒｅｓ．，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，ＦＩａ．（１９７４）、Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ，Ｄｒｕｇ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ，Ｓｍｏｌｅｎ  ａｎｄ  Ｂａｌｌ（ｅｄｓ．），Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８４）、Ｒａｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｐｅｐｐａｓ，１９８３，Ｊ．，Ｍａｃｒｏｍｏｌ．ＳｃＬ  Ｒｅｖ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．２３：６１を参照されたく、Ｌｅｖｙ  ｅｔ  ａｌ，１９８５，Ｓｃｉｅｎｃｅ  １１  ２２５：１９０、Ｄｕｒｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９Ｚ９，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．２５：３５１、Ｈｏｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ，１９８９，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．７１：１０５）、米国特許第５，６７９，３７７号、米国特許第５，９１６，５９７号、米国特許第５，９１２，０１５号、米国特許第５，９８９，４６３号、米国特許第５，１２８，３２６号、ＰＣＴ公報第ＷＯ９９／１５１５４号、及びＰＣＴ公報第ＷＯ９９／２０２５３号も参照されたい。徐放製剤に使用されるポリマーの例としては、ポリ（２−ヒドロキシエチルメタクリレート）、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（アクリル酸）、ポリ（エチレン−コ−酢酸ビニル）、ポリ（メタクリル酸）、ポリグリコリド（ＰＬＧ）、ポリ無水物、ポリ（Ｎ−ビニルピロリドン）、ポリビニルアルコール）、ポリアクリルアミド、ポリエチレングリコール）、ポリラクチド（ＰＬＡ）、ポリオエアクチド（ｏｅａｃｔｉｄｅ）−コ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）、及びポリオルトエステルが挙げられるが、これらに限定されない。一実施形態において、徐放製剤に使用されるポリマーは、不活性であり、浸出性不純物を含まず、保存時に安定しており、滅菌であり、生分解性である。制御放出または徐放系は、予防または治療標的に近接して置かれ得、故に、全身用量のほんの一部しか必要としない（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ，ｉｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ（上記参照）ｖｏｌ．２，ｐｐ．１１５−１３８（１９８４）を参照されたい）。
【０２８９】
制御放出系については、Ｌａｎｇｅｒ，１９９０，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７−１５３３による概説で論じられている。当業者に既知の任意の技法を使用して、本開示の１つ以上の抗体またはそのコンジュゲートを含む徐放製剤を生産することができる。例えば、各々が参照により全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第４，５２６，９３８号、国際特許公開第ＷＯ９１／０５５４８号、同第ＷＯ９６／２０６９８号、Ｎｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，“Ｉｎｔｒａｔｕｍｏｒａｌ  Ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｈｙ  ｏｆ  ａ  Ｈｕｍａｎ  Ｃｏｌｏｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｘｅｎｏｇｒａｆｔ  Ｕｓｉｎｇ  ａ  Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ−Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｇｅｌ，”Ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ  ａｎｄ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ５９：１７９−１８９、Ｓｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，“Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｌｕｎｇ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｏｆ  Ｌｏｎｇ−Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ  Ｅｍｕｌｓｉｏｎｓ，”ＰＤＡ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ５０：３７２−３９７、Ｃｌｅｅｋ  ｅｔ  ａｈ，１９９７，“Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  ｆｏｒ  ａ  ｂＦＧＦ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｆｏｒ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ，”Ｐｒｏ．Ｍｌ．Ｓｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌ．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔｅｒ．２４：８５３−８５４、及びＬａｍ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，“Ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｆｏｒ  Ｌｏｃａｌ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，”Ｐｒｏｃ．Ｍｌ．Ｓｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｒｅｌ．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔｅｒ．２４：７５９−１６０を参照されたい。
【０２９０】
本開示のＩＬ−２抗体またはその抗原結合部分が局所投与される場合、それは、軟膏、クリーム、経皮パッチ、ローション、ゲル、シャンプー、スプレー、エアロゾル、溶液、エマルション、または当業者に周知の他の形態で製剤化され得る。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ａｎｄ  Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ，１９ｔｈ  ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂ．Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．（１９９５）を参照されたい。噴霧不能な局所剤形の場合、局所適用と適合性の担体または１つ以上の賦形剤を含み、かついくつかの例では水を超える動的粘度を有する粘性〜半固体または固体形態が、典型的に用いられる。好適な製剤としては、所望の場合、滅菌されているか、または例えば、浸透圧などの種々の特性に影響を与えるために助剤（例えば、保存料、安定剤、湿潤剤、緩衝液、もしくは塩）と混合される、溶液、懸濁液、エマルション、クリーム、軟膏、粉末、塗布薬、膏薬等が挙げられるが、これらに限定されない。他の好適な局所剤形としては、活性成分（いくつかの例では、固体または液体不活性担体と組み合わせて）が、加圧揮発物（例えば、フレオンなどのガス状推進剤）との混合物中に、またはスクイーズボトル内にパッケージングされる噴霧可能なエアロゾル調製物が挙げられる。所望の場合、保湿剤または保水剤も薬学的組成物及び剤形に添加され得る。かかる追加の成分の例は、当該技術分野で周知のことである。
【０２９１】
ＩＬ−２抗体またはその抗原結合部分を含む組成物が鼻腔内投与される場合、これは、エアロゾル形態、スプレー、ミスト、または液滴形態で製剤化され得る。具体的には、本開示による使用のための予防剤または治療剤は、好適な推進剤（例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素、または他の好適なガス）を使用して、加圧パックまたは噴霧器からエアロゾルスプレー提示の形態で好都合に送達され得る。加圧エアロゾルの場合、投薬量単位は、定量を送達するための値を提供することによって決定され得る。化合物とラクトースまたはデンプンなどの好適な粉末基剤との粉末ミックスを含有する、吸入器または吹送器に使用するためのカプセル及びカートリッジ（例えば、ゼラチンから成る）が製剤化され得る。
【０２９２】
第２の治療剤、例えば、サイトカイン、ステロイド、化学療法剤、抗生物質、または放射線との併用投与方法または治療方法は、当該技術分野で周知のことである（例えば、Ｈａｒｄｍａｎ，ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．）（２００１）Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，１０ｔｈ  ｅｄ．，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．、Ｐｏｏｌｅ  ａｎｄ  Ｐｅｔｅｒｓｏｎ（ｅｄｓ．）（２００１）Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ｆｏｒ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａ．，Ｐａ．、Ｃｈａｂｎｅｒ  ａｎｄ  Ｌｏｎｇｏ（ｅｄｓ．）（２００１）Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａ．，Ｐａ．を参照されたい）。治療薬の有効量は、症状を少なくとも１０パーセント、少なくとも２０パーセント、少なくとも約３０パーセント、少なくとも４０パーセント、または少なくとも５０パーセント軽減し得る。
【０２９３】
本開示のＩＬ−２抗体または抗原結合部分と組み合わせて投与され得る追加の療法（例えば、予防剤または治療剤）は、本開示の抗体と５分間未満差で、３０分間未満差で、１時間差で、約１時間差で、約１〜約２時間差で、約２時間〜約３時間差で、約３時間〜約４時間差で、約４時間〜約５時間差で、約５時間〜約６時間差で、約６時間〜約７時間差で、約７時間〜約８時間差で、約８時間〜約９時間差で、約９時間〜約１０時間差で、約１０時間〜約１１時間差で、約１１時間〜約１２時間差で、約１２時間〜１８時間差で、１８時間〜２４時間差で、２４時間〜３６時間差で、３６時間〜４８時間差で、４８時間〜５２時間差で、５２時間〜６０時間差で、６０時間〜７２時間差で、７２時間〜８４時間差で、８４時間〜９６時間差で、または９６時間〜１２０時間差で投与され得る。２つ以上の療法が患者の１回の同じ来院時に投与され得る。
【０２９４】
本開示のＩＬ−２抗体またはその抗原結合部分、及び他の療法は、周期的に投与され得る。循環療法は、ある期間にわたる第１の療法（例えば、第１の予防剤または治療剤）の投与、続いて、ある期間にわたる第２の療法（例えば、第２の予防剤または治療剤）の投与、任意選択で、続いて、ある期間にわたる第３の療法（例えば、予防剤または治療剤）の投与等、及びこの逐次投与、すなわち、サイクルの繰り返しを含み、療法のうちの１つに対する耐性の発現を低減し、療法のうちの１つの副作用を回避もしく軽減し、かつ／または療法の効力を向上させる。
【０２９５】
一実施形態において、本開示のＩＬ−２抗体は、アドリアマイシン、アザチオプリン、ブスルファン、シクロホスファミド、シクロスポリンＡ、シトキサン、フルダラビン、５−フルオロウラシル、メトトレキサート、ミコフェノール酸モフェチル、６−メルカプトプリン、コルチコステロイド、非ステロイド性抗炎症薬、シロリムス（ラパマイシン）、及びタクロリムス（ＦＫ−５０６）を含むが、これらに限定されない、自己免疫疾患及び障害治療するための組成物と併用投与され得る。代替的な実施形態において、免疫調節剤または免疫抑制剤は、当業者に既知のムロモナブ−ＣＤ３、アレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ（登録商標））、バシリキシマブ、ダクリズマブ、ムロモナブ（ＯＫＴ３（登録商標））、リツキシマブ、抗胸腺細胞グロブリン及びＩＶＩｇ等からなる群から選択される抗体である。
【０２９６】
一実施形態において、本開示のＩＬ−２抗体は、ビグアニド（例えば、ブホルミン、メトホルミン、及びフェンホルム）、ホルモン及びその類似体（アミリン、インスリン、インスリンアスパルト、インスリンデテミル、インスリングラルギン、インスリングルリジン、インスリンリスプロ、リラグルチド、及びプラムリンチド）、スルホニル尿素誘導体（アセトヘキサミド、カルブタミド、クロルプロパミド、グリボルヌリド、グリクラジド、グリメピリド、グリピジド、グリキドン、グリソキセピド、グリブリド、グリブチアゾール、グリブゾール、グリヘキサミド、グリミジン、トラザミド、トルブタミド、及びトルシクラミド）、チアゾリジンジオン（ピオグリタゾン、ロシグリタゾン、及びトログリタゾン）、アカルボース、エキセナチド、ミグリトール、ミチグリニド、ムラグリタザル、ナテグリニド、レパグリニド、シタグリプチン、テサグリタザル、ビルダグリプチン、及びボグリボースを含むが、これらに限定されない、糖尿病を治療するための組成物と併用投与され得る。
【０２９７】
ある特定の実施形態において、本開示のＩＬ−２抗体またはその抗原結合部分は、体内での適切な分散を確実にするように製剤化され得る。例えば、血液脳関門（ＢＢＢ）は、多くの高親水性化合物を排除する。本開示の治療化合物がＢＢＢを横断する（所望の場合）ことを確実にするために、それらは、例えば、リポソーム中に製剤化され得る。リポソームの製造方法については、例えば、米国特許第４，５２２，８１１号、同第５，３７４，５４８号、及び同第５，３９９，３３１号を参照されたい。リポソームは、特異的細胞または臓器に選択的に輸送される１つ以上の部分を含み得、故に、標的薬物送達を増強することができる（例えば、Ｖ．Ｖ．Ｒａｎａｄｅ，１９８９，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２９：６８５を参照されたい）。例となる標的部分には、葉酸塩またはビオチン（例えば、米国特許第５，４１６，０１６号を参照されたい）、マンノシド（Ｕｍｅｚａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１５３：１０３８）、抗体（Ｐ．Ｇ．Ｂｌｏｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．３５７：１４０、Ｍ．Ｏｗａｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．３９：１８０）、界面活性剤タンパク質Ａ受容体（Ｂｒｉｓｃｏｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．１２３３：１３４）、ｐｌ２０（Ｓｃｈｒｅｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：９０９０を参照されたい）が含まれ、Ｋ．Ｋｅｉｎａｎｅｎ；Ｍ．Ｌ．Ｌａｕｋｋａｎｅｎ，１９９４，ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．３４６：１２３、Ｋｉｌｌｉｏｎ；Ｆｉｄｌｅｒ，１９９４；Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ  ４：２７３も参照されたい。
【０２９８】
本開示は、本開示のＩＬ−２抗体またはその抗原結合部分を含む薬学的組成物の、単独または他の療法と組み合わせでの、それを必要とする対象への投与のためのプロトコルを提供する。
本開示の併用療法の療法（例えば、予防剤または治療剤）は、対象に同時にまたは順次に投与され得る。本開示の併用療法の療法（例えば、予防剤または治療剤）は、周期的にも投与され得る。循環療法は、ある期間にわたる第１の療法（例えば、第１の予防剤または治療剤）の投与、続いて、ある期間にわたる第２の療法（例えば、第２の予防剤または治療剤）の投与、及びこの逐次投与、すなわち、サイクルの繰り返しを含み、療法（例えば、薬剤）のうちの１つに対する耐性の発現を低減し、療法（例えば、薬剤）のうちの１つの副作用を回避もしく軽減し、かつ／または療法の効力を向上させる。
【０２９９】
本開示の併用療法の療法（例えば、予防剤または治療剤）は、対象に同時に投与され得る。「同時に」という用語は、療法（例えば、予防剤または治療剤）の全く同時の投与に限定されず、むしろ、本開示の抗体またはそのコンジュゲートが他の療法（複数可）と一緒に作用して、それらが別様に投与された場合よりも増加した利益を提供するように、本開示のＩＬ−２抗体またはその抗原結合部分を含む薬学的組成物が、ある順序で、かつある時間間隔内で対象に投与されることを意味する。例えば、各療法は、同時に、または異なる時点で任意の順序で順次に対象に投与され得るが、同時に投与されない場合、それらは、所望の治療または予防効果を提供するように十分に短い時間間隔で投与されなければならない。各療法は、任意の適切な形態で、かつ任意の好適な経路により、対象に別個に投与され得る。種々の実施形態において、療法（例えば、予防剤または治療剤）は、１５分間未満差で、３０分間未満差で、１時間未満差で、約１時間差で、約１時間〜約２時間差で、約２時間〜約３時間差で、約３時間〜約４時間差で、約４時間〜約５時間差で、約５時間〜約６時間差で、約６時間〜約７時間差で、約７時間〜約８時間差で、約８時間〜約９時間差で、約９時間〜約１０時間差で、約１０時間〜約１１時間差で、約１１時間〜約１２時間差で、２４時間差で、４８時間差で、７２時間差で、または１週間差で対象に投与される。他の実施形態において、２つ以上の療法（例えば、予防剤または治療剤）が、患者の同じ来院時に投与され得る。
【０３００】
併用療法の予防剤または治療剤は、同じ薬学的組成物で対象に投与され得る。代替的に、併用療法の予防剤または治療剤は、別個の薬学的組成物で対象に同時に投与され得る。予防剤または治療剤は、同じまたは異なる投与経路により対象に投与され得る。
【０３０１】
キット
本開示はまた、本明細書に記載される抗体のうちのいずれかまたはすべてを含むキットも提供する。本開示のキットは、本明細書に記載されるＩＬ−２抗体を含む１つ以上の容器及び本明細書に記載される本開示の方法のうちのいずれかに従って使用するための説明書を含む。一般に、これらの説明書は、上述の治療的治療のための本抗体の投与の説明を含む。いくつかの実施形態において、キットは、単回投与単位をもたらすために提供される。ある特定の実施形態において、キットは、乾燥タンパク質を有する第１の容器及び水性製剤を有する第２の容器の両方を含み得る。ある特定の実施形態において、塗布器、例えば、単腔及び多腔予充填シリンジ（例えば、液体シリンジ及び分散シリンジ）を含むキットが含まれる。
【０３０２】
ＩＬ−２抗体の使用に関する説明書は、一般に、意図される治療のための投薬量、投薬スケジュール、及び投与経路に関する情報を含む。容器は、単位用量、バルクパッケージ（例えば、複数回投与パッケージ）、またはサブユニット用量であり得る。本開示のキット内に供給される説明書は、典型的には、ラベルまたは添付文書上の書面での説明書（例えば、キットに含まれる紙シート）であるが、機械可読説明書（例えば、磁気または光学記憶ディスクに収録された説明書）も許容される。
【０３０３】
本開示のキットは、好適なパッケージング内にある。好適なパッケージングとしては、バイアル、ボトル、瓶、可撓性パッケージング（例えば、密封マイラーまたはプラスチック袋）等が挙げられるが、これらに限定されない。吸入器、鼻腔投与デバイス（例えば、アトマイザー）、またはミニポンプなどの注入デバイスなどの特定のデバイスと組み合わせて使用するためのパッケージも企図される。キットは、滅菌アクセスポートを有し得る（例えば、容器は、皮下注射針によって穿孔可能な止め具を有する静脈注射用溶液袋またはバイアルであり得る）。容器も、滅菌アクセスポート有し得る（例えば、容器は、皮下注射針によって穿孔可能な止め具を有する静脈注射用溶液袋またはバイアルであり得る）。本開示の組成物中の少なくとも１つの活性薬剤は、ＩＬ−２抗体である。容器は、第２の薬学的に活性な薬剤をさらに含み得る。
【０３０４】
キットは、任意選択で、緩衝液などの追加の構成要素及び解釈情報を提供し得る。通常、キットは、容器、及び容器上のラベルもしくは添付文書（複数可）または容器に関連するラベルもしくは添付文書（複数可）を含む。
【０３０５】
本開示はまた、本明細書に記載される抗体のうちのいずれかまたはすべてを含む診断キットも提供する。診断キットは、例えば、試料中のＩＬ−２の存在の検出に有用である。いくつかの実施形態において、診断キットを使用して、ＩＬ−２−媒介性疾患、障害、もしくは病態、またはＩＬ−２欠損疾患、障害、もしくは病態を発症する危険にさらし得る潜在的疾患、障害、もしくは病態を有する個体を特定することができる。いくつかの実施形態において、診断キットを使用して、ＩＬ−２媒介性疾患、またはＩＬ−２欠損疾患、障害、もしくは病態を有する疑いのある個体におけるＩＬ−２の存在及び／またはレベルを検出することができる。
【０３０６】
本開示の診断キットは、本明細書に記載されるＩＬ−２抗体を含む１つ以上の容器及び本明細書に記載される本開示の方法のうちのいずれかに従って使用するための説明書を含む。一般に、これらの説明書は、ＩＬ−２媒介性疾患、またはＩＬ−２欠損疾患、障害、もしくまたは病態の危険性を有するか、またはそれを有する疑いのある個体におけるＩＬ−２の存在の検出するためのＩＬ−２抗体の使用の説明を含む。いくつかの実施形態において、例となる診断キットは、例えば、ＩＬ−２抗体、陰性対照試料、陽性対照試料などの試薬、及び本キットの使用説明書を含むように構成され得る。
【０３０７】
均等物
前述の記述及び以下の実施例は、本開示のある特定の具体的な実施形態を詳述し、本発明者らによって企図される最良の態様を説明する。しかしながら、前述のものが文中でどれほど詳細に見えようとも、本開示が多くの方法で実施されてもよく、本開示が添付の特許請求の範囲及びその任意の均等物に従って解釈されるべきであることが理解される。
【０３０８】
開示される教示が種々の適用、方法、キット、及び組成物を参照して説明されているが、本明細書及び以下の特許請求される開示の教示から逸脱することなく、種々の変更及び修飾が行われ得ることが理解される。以下の実施例は、開示される教示をさらに例証するために提供されており、本明細書に提示される教示の範囲を制限するようには意図されていない。本教示がこれらの例となる実施形態に関して説明されているが、当業者であれば、これらの例となる実施形態の多数の変形及び修飾が過度の実験なしに可能であることを容易に理解するであろう。すべてのかかる変形及び修飾は、本教示の範囲内である。
【０３０９】
特許、特許出願、論文、教科書等を含む本明細書に引用されるすべての参考文献、及びそれらに引用される参考文献は、それらが引用されていない範囲で、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。定義される用語、用語の使用法、説明される技法等を含むが、これらに限定されない、組み込まれた文献及び同様の資料のうちの１つ以上が本出願と異なるか、またはそれと矛盾する場合、本出願が優位に立つものとする。
【０３１０】
例となる実施形態
本開示は、次の実験的実施例を参照することによりさらに詳細に説明される。これらの実施例は、例証目的のみのために提供されており、別途明記されない限り、限定するようには意図されていない。故に、本開示は、決して以下の実施例に限定されるものと解釈されるべきではなく、むしろ、本明細書に提供される教示の結果として明らかになるありとあらゆる変形を包含するものと解釈されるべきである。
【実施例】
【０３１１】
実施例１．ＩＬ−２抗体結合動態及び親和性
ＩＬ−２に対する本抗体の親和性を、Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００機器（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を使用して表面プラズモン共鳴により決定した。抗ＩＬ−２  ＩｇＧを、製造業者（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）の指示に従ってＢｉａｃｏｒｅ  Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｃａｐｔｕｒｅ  Ｋｉｔを使用して調製した抗ヒトＩｇＧによりＣＭ５センサチップ上に捕捉した。マウス抗ヒトＩＬ−２クローン５３４４（クローン５３４４．１１１、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を、製造業者（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）の指示に従ってＢｉａｃｏｒｅ  Ｍｏｕｓｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｃａｐｔｕｒｅ  Ｋｉｔを使用して調製した抗マウスＩｇＧ捕捉表面上に捕捉した。実験を、０．０１Ｍ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、及び０．００５ｖ／ｖ％界面活性剤Ｐ２０（ＨＢＳ−Ｐ）緩衝液中で３０μＬ／分の流量を使用して２５℃で行った。各サイクル後、チップ表面を３Ｍ  ＭｇＣｌ２で再生し、新たな抗体を捕捉した。組換えＩＬ−２（Ｈｕｍａｎｚｙｍｅ，Ｃｈｉｃａｇｏ，ＩＬ）を表面上に３分間注入し、会合をさらに２０分間監視した。データを、Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアを使用して分析し、抗体毎に、緩衝液のみの注入に加えて、捕捉抗体のみが固定化された隣接する制御フローセルからのシグナルをバックグラウンド除去した。１：１のラングミュア結合モデルを使用して、すべての結合曲線に当てはめた。
【０３１２】
結果
試験したヒト抗体は、５３６ｐＭ〜１３．４ｎＭの範囲の親和性でＩＬ−２に結合する（表３）。ＩＬ−２Ｒβ結合を阻害し、かつｄ１Ｃ７／ＩＬ−２複合体と比較してＩＬ−２Ｒαへの結合を減少するそれらの能力について同定された抗体は、比較クローン１６Ｃ３及びｄ１Ｃ７と比較してＩＬ−２に対してより弱い親和性を有する。５３４４抗体は、Ｂｉａｃｏｒｅ機器の検出限界を超えて非常に安定したオフレートを有することが見出され、計算される親和性は、５０ｐＭ以下と推定され、試験したヒト抗体クローンと比較して有意により遅いオフレートを有する。５３４４の有意により遅いオフレートは、本出願の以下（実施例５）に記載される他のｈＩＬ−２抗体が呈する所望のＴｒｅｇスペアリング特性を有しない抗体に寄与し得る。
【０３１３】
（表３）
2018537962.tif 000004
＊オフレートは、機器の規格外であり、５．０Ｅ−０５以下のオフレートが推定された。
【０３１４】
抗体Ｆ５．１．１１、ｄ１Ｃ７、１３Ａ１０、及び１６Ｃ３を用いたｍＩＬ−２及びｈＩＬ−２結合研究は、Ｆ５．１．１１及びｄ１Ｃ７がｍＩＬ−２に結合せず、１３Ａ１０及び１６Ｃ３がｈＩＬ−２と比較して低減した親和性でｍＩＬ−２に結合することを示す（データ示さず）。
【０３１５】
実施例２．ＩＬ−２／抗体複合体受容体結合
ＩＬ−２受容体ＩＬ−２Ｒα及びＩＬ−２ＲβへのＩＬ−２結合を修飾する抗体の能力を、Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００機器（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を使用して評価した。組換えＩＬ−２α及びＩＬ−２Ｒβタンパク質をビオチン標識し、Ｂｉａｃｏｒｅストレプトアビジンチップ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上に捕捉した。実験を、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、及び０．００５ｖ／ｖ％界面活性剤Ｐ２０緩衝液中で１０μＬ／分の流量を使用して２５℃で行った。ＩＬ−２（３３３ｎＭ）を、ＩｇＧ（１０００ｎＭ）と少なくとも２０分間事前インキュベートした。ＩＬ−２／抗体複合体を受容体結合チップ表面上に６０秒間注入し、２０分間解離させた。データを、隣接する制御フローセル及び緩衝液のみの注入を使用してバックグラウンド除去した。応答を、ＩＬ−２と複合した２つの代表的クローンｄ１Ｃ７及び１６Ｃ３の、それぞれ、ＩＬ−２Ｒα及びＩＬ−２Ｒβへの結合のパーセンテージとしての、６０秒後のＩＬ−２α及びＩＬ−２Ｒβへの結合として報告する。
【０３１６】
結果
クローン１６Ｃ３／ＩＬ−２複合体は、ＩＬ−２Ｒβに結合したが、ＩＬ−２Ｒαには結合せず、ｄ１Ｃ７／ＩＬ−２複合体は、ＩＬ−２Ｒαに結合したが、ＩＬ−２Ｒβには結合しなかった。これらの２つの抗体／ＩＬ−２複合体を代表的クローンとして使用して、ＩＬ−２Ｒα及びＩＬ−２Ｒβ結合について正規化した。試験した抗体／ＩＬ−２複合体を各々、それらの受容体の各々への相対的結合として報告する。クローン４．７．０６２、Ｆ５．１．１１、Ｆ４．７．６、Ｆ４．７．８、Ｆ５．１．９、及び市販の５３４４（クローン５３４４．１１１、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）はすべて、ｄ１Ｃ７／ＩＬ−２複合体と同様に、ＩＬ−２のＩＬ−２Ｒβへの結合を阻害し、ｄ１Ｃ７／ＩＬ−２複合体と比較して低減したＩＬ−２Ｒαへの結合を示した。故に、これらの抗体を、ＩＬ−２ＲβへのＩＬ−２結合を遮断し、かつＩＬ−２Ｒαへの結合率を低減するそれらの能力について特定した（図１）。
【０３１７】
実施例３．親和性成熟クローンの抗体／ＩＬ−２親和性及び受容体結合
親和性成熟Ｆ５．１．１１抗体／ＩＬ−２複合体の結合動態及び受容体結合プロファイルを、親抗体について記載される（実施例１）ように、表面プラズモン共鳴を使用して測定した。
【０３１８】
結果
親和性成熟活動は、親和性クローンＦ５．１．１１のＩＬ−２への見かけの結合を最大１６倍増加させた。３つの親和性成熟変異型Ｆ５．１．１１．０２、Ｆ５．１．１１．０４、及びＦ５．１．１１．０８は、それぞれ、１１４ｐＭ、６２４ｐＭ、及び２０５ｐＭのＩＬ−２への結合親和性を有すると測定された。ＩＬ−２Ｒα及びＩＬ−２Ｒβへの本抗体／ＩＬ−２複合体結合の特徴付けは、親分子と比較してより高い親和性の変異型の受容体結合プロファイルが維持されることを見出した。親クローン及び親和性成熟クローンの両方が、クローンｄ１Ｃ７／ＩＬ−２複合体と比較して、ＩＬ−２Ｒβへの本抗体／ＩＬ−２複合体結合の完全な阻害、及びＩＬ−２Ｒαへの結合の低減を示した。ＩＬ−２Ｒαへの親Ｆ５．１．１１／ＩＬ−２結合のいくらかのばらつきが本実験にわたって観察され、これを、潜在的範囲を図示するグラフ上の点線で表す。３つのより高い親和性の変異型Ｆ５．１．１１．０２、Ｆ５．１．１１．０４、及びＦ５．１．１１．０８はすべて、この範囲内に入った（表４及び図２）。
【０３１９】
（表４）
2018537962.tif 000005
【０３２０】
実施例４．ＩＬ−２：抗ＩＬ−２  ｍＡｂ処理後、ＩＬ−２−抗ＩＬ−２複合体処理後のＴｒｅｇの表現型
ＰＢＭＣを、Ｆｉｃｏｌｌにより健常ドナーから単離し、１２．５ｎｇ／ｍＬの抗ＣＤ３及び２５ｎｇ／ｍＬの抗ＣＤ２８で一晩活性化した。一晩インキュベートした後、細胞を収集し、ＰＢＳ中で十分に洗浄し、３０×１０６細胞の濃度で２００μＬのＰＢＳ中に再懸濁した。ＰＢＭＣをＮＳＧレシピエントに静脈注射した。ヒトＰＢＭＣを注射したＮＳＧマウスに、２５μｇのアイソタイプ、２５μｇの１６Ｃ３、１μｇ、５μｇ、または２５μｇのＡｂ  Ｆ５．１．１１．０２と３７℃で３０分間複合した８，０００Ｕ  ｈＩＬ−２（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ）を５日間にわたって腹腔内注射した。
【０３２１】
脾細胞の単離及び細胞染色
マウスをＣＯ２で屠殺し、脾細胞を収集し、抗ヒトＣＤ４５  Ｐａｃｉｆｉｃ  Ｏｒａｎｇｅ、ＣＤ４  ＰｅｒｃＰＣｙ  ５．５、ＣＤ３  ＰｅＣｙ７／Ｐａｃｉｆｉｃ  Ｂｌｕｅ／ＰｅｒｃＰ、ＣＤ２５  ＡＰＣ−Ｃｙ７／Ｐｅ、ＣＤ２３８  Ｐｅ、ＣＤ３９  ＰｅＣｙ７、ＣＤ８  ＡＰＣ−Ｈ７、Ｋｉ６７  Ｐｅ、ＮＫＧ２Ｄ  ＰｅＣｙ７、ＣＤ４４  Ｖ４５０で細胞外染色し、抗ヒトＨｅｌｉｏｓ  ＦＩＴＣ及びＦｏｘＰ３  ＡＰＣで細胞内染色した。標識抗体を、ＢＤ  ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎまたはＥｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅから購入した。染色した単一細胞懸濁液を、ＦＡＣＳＤｉｖａを起動するＦｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーター（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）ならびにＦＬＯＷＪＯソフトウェアで分析及び提示されたＦＳＣ  ３．０ファイルを用いて分析した。
【０３２２】
結果
ｈＩＬ−２と複合した抗体１６Ｃ３は、脾臓におけるＴｒｅｇパーセンテージを増加させた。Ｔｒｅｇパーセンテージの増分増加は、２つの異なる用量（５μｇ及び２５μｇ）の抗体Ｆ５．１．１１．０２での処理にも応答して観察された。Ｔｒｅｇ集団を、ｈＣＤ４５＋ＣＤ３＋ＣＤ４＋Ｈｅｌｉｏｓ＋ＦｏｘＰ３＋細胞でゲーティングした（図３）。ｈＩＬ−２と複合した１６Ｃ３及びＦ５．１．１１．０２の両方は、Ｔｒｅｇ／Ｔｅｆｆ及びＴｒｅｇ／ＮＫ細胞比率を増加させる。
【０３２３】
ｈＩＬ−２と複合した１６Ｃ３（２５μｇ）は、Ｔｒｅｇ／ＣＤ４、Ｔｒｅｇ／ＣＤ８、及びＴｒｅｇ／ＮＫ細胞比率を増加させた。第１の実験における最も低い用量（１μｇ）でのＦ５．１．１１．０２での処理は、比率の増加を示さなかった。代わりに、ｈＩＬ−２と複合した５μｇ及び２５μｇのＦ５．１．１１．０２に応答したＴｒｅｇ／ＣＤ４、Ｔｒｅｇ／ＣＤ８、及びＴｒｅｇ／ＮＫ細胞比率の有意な増加が観察された（図４Ａ〜Ｃ）。第２の実験において、１６Ｃ３ならびに５μｇ及び２５μｇのＦ５．１．１１．０２についての同じ結果が観察され、加えて、比率の増加も低用量のＦ５．１．１１．０２（１μｇ）で明らかであった（図４Ｄ〜Ｆ）。ｈＩＬ−２と複合した１６Ｃ３及びＦ５．１．１１．０２の両方は、Ｔｅｆｆ及びＴｒｅｇ総細胞数を増加させる。ｈＩＬ−２と複合した１６Ｃ３（２５μｇ）は、これらの２つの実験において、脾臓におけるＣＤ４＋、ＣＤ８＋細胞、及びＴｒｅｇの総数を増加させた。
【０３２４】
ｈＩＬ−２と複合したＦ５．１．１１．０２も、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、及びＴｒｅｇ総細胞数の増加を示した。効果は、第１の実験において、５μｇ及び２５μｇのＦ５．１．１１．０２の用量でより明らかであった（図５Ａ〜Ｃ）。第２の実験は、用量依存的様式でＦ５．１．１１．０２に応答して、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋細胞、及びＴｒｅｇの総数の増加を示した（図５Ｄ〜Ｆ）。Ｆ５．１．１１．０２での処理は、１６Ｃ３の存在下では観察されなかった、ＴｒｅｇのＣＤ２５、Ｉｃｏｓ、及びＦｏｘＰ３の平均蛍光強度（ＭＦＩ）の増加も誘導した（図６Ａ〜Ｃ）。
【０３２５】
実施例５．抗ＩＬ−２抗体はｐＳＴＡＴ５を阻害する
Ｆｏｘｐ３プロモーターの制御下でＧＦＰを発現するＣ５７Ｂｌ６由来の脾細胞を収集し、単一細胞懸濁液に処理し、ＲＰＭＩ  ０．１％ＢＳＡ中に再懸濁した。細胞を、アッセイ時間になるまで（１〜２時間）組織培養インキュベーター内に３７℃で静置した。
【０３２６】
ＰＢＭＣをヒトＴｒｉｍａ残渣（Ｂｌｏｏｄ  Ｃｅｎｔｅｒｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｐａｃｉｆｉｃ）から精製し、ＲＰＭＩ  ０．１％ＢＳＡ中に再懸濁した。細胞を、アッセイ時間になるまで（１〜２時間）組織培養インキュベーター内に３７℃で静置した。
【０３２７】
ＩＬ−２誘導ｐＳＴＡＴ５アッセイ
ＰＢＭＣまたは脾細胞を、５０μＬの体積で、１００万個の細胞が各ウェルに存在するように、９６ウェルＶ底プレートにプレーティングした（ＲＰＭＩ、０．１％ＢＳＡ）。プレートを３７℃のインキュベーターに戻して、温度を維持した。抗体（ＪＥＳ６−１（ＪＥＳ６−１Ａ１２  ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）または抗ヒトＩＬ−２）を滴定し、ＩＬ−２を、４つの濃度、５００ｎｇ／ｍＬ、５０ｎｇ／ｍＬ、５ｎｇ／ｍＬ、及び０．５ｎｇ／ｍＬで試験した。
【０３２８】
市販のマウスＩＬ−２モノクローナル抗体ＪＥＳ６−１は、ＩＬ−２のＩＬ２Ｒα界面及びＩＬ２Ｒβ界面の両方を遮断する（参照により全体が本明細書に組み込まれる、Ｌｅｏｎ  ｅｔ  ａｌ．２０１３，“Ｍａｔｈｅｍａｔｉｃａｌ  ｍｏｄｅｌｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｉｍｐａｃｔ  ｏｆ  ＩＬ２  ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ  ｏｎ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｄｙｎａｍｉｃｓ，”Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４：４３９）。ＪＥＳ６−１は、ｍＩＬ−２に結合し、ｈＩＬ−２に結合せず、これは、エピトープがｈＩＬ−２に保存されないためである。ｈＩＬ−２残基Ｑ２２及びＭ２３に対応するｍＩＬ−２残基Ｑ３６及びＥ３７を含むＩＬ−２へのＪＥＳ６−１の結合に主要なアミノ酸残基は、参照により全体が本明細書に組み込まれる、Ｓｐａｎｇｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．２０１５，“Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｔｏ  Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２  Ｅｌｉｃｉｔ  Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｓｕｂｓｅｔ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｈｒｏｕｇｈ  Ｄｉｓｔｉｎｃｔ  Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ，”Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，４２：８１５の図３、４、Ｓ２、Ｓ３、及びＳ４に詳述されている。ｍＩＬ−２／ｍＩＬ−２ＲβのＫＤは、Ｓｐａｎｇｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．により７μＭ超と報告されており、ｍＩＬ−２／ｍＩＬ−２Ｒαの場合、ＫＤは、ｈＩＬ−２よりも２〜４倍弱い。マウス及びヒトＩＬ−２アミノ酸配列の比較は、参照により全体が本明細書に組み込まれる、Ｙｏｋｏｔａ  ｅｔ  ａｌ．１９８５，“Ｕｓｅ  ｏｆ  ａ  ｃＤＮＡ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｖｅｃｔｏｒ  ｆｏｒ  ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｏｕｓｅ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ２  ｃＤＮＡ  ｃｌｏｎｅｓ：Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｇｒｏｗｔｈ−ｆａｃｔｏｒ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ａｆｔｅｒ  ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｏｎｋｅｙ  ｃｅｌｌｓ，”Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８２：６８の図６で入手可能である。
【０３２９】
等体積（５０μＬ）の２×ＩＬ２：抗体複合体（３７℃で１時間調製したもの）をウェルに添加し、細胞を３７℃のインキュベーター内で４０分間培養した。細胞を、１００μＬのＩＣ固定緩衝液（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）によって固定した。１５分間固定した後、細胞を洗浄し、染色するまでＦＡＣｓ緩衝液（ＰＢＳ＋０．２％ＢＳＡ）中に保管した。
【０３３０】
アッセイプレートを遠心分離してペレット細胞にし、透過化緩衝液ＩＩＩ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して細胞を再懸濁し、続いて、氷上で３０分間インキュベートした。細胞をＦＡＣｓ緩衝液中で２回洗浄し、次のＰＢＭＣに対するＡｂ：抗ヒトＣＤ３  ＡＰＣ  ｅ７８０、ＣＤ４  Ｐｅｒｃｐ  ｅ７１０、及びＣＤ１２７（ＰＥ）（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ製）で染色した。ＣＤ８  ＦＩＴＣ、ＣＤ２５（ＰｅＣｙ７）、ＦｏｘＰ３（ｅ６６０）、及びｐＳＴＡＴ５（Ｐａｃｉｆｉｃ  ｂｌｕｅ）を、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから購入した。脾細胞の場合、次の抗マウス抗体：ＣＤ４  ｅ６６０及びＣＤ８ａ  ＰｅＣｙ７（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ製）を使用した。ｐＳＴＡＴ５  Ｐａｃｉｆｉｃ  Ｂｌｕｅ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）をマウス細胞及びヒト細胞の両方に使用した。
【０３３１】
データをＬＳＲ  Ｆｏｒｔｅｓｓａで収集し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用して分析した。データを、各細胞型（ＩＬ２  ５００ｎｇ／ｍＬ＋アイソタイプ）の最大シグナルに正規化した、バックグラウンド除去したＭＦＩとしてプロットする。バックグラウンドを、染色したが、刺激していないｐＳＴＡＴ５と定義する。ヒトＴｒｅｇを、ＣＤ３＋ＣＤ８−ＣＤ４＋ＣＤ２５ｈｉＣＤ１２７ｌｏと定義する。マウスＴｒｅｇを、ＣＤ８−ＣＤ４＋Ｆｏｘｐ３．ＧＦＰ＋細胞と定義する。
【０３３２】
結果
ＰＢＭＣにおけるｐＳＴＡＴ５の阻害：Ｆ５．１．１１親和性変異型
Ｆ５．１．１１の親和性変異型は、Ｆ５．１．１１．０２及びＦ５．１．１１．０８などのＩＬ−２に対する親和性の増加を有する抗体が、ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞及び非Ｔｒｅｇ  ＣＤ４＋Ｔ細胞におけるｐＳＴＡＴ５シグナル伝達の阻害により有効であったことを実証した。Ｔｒｅｇ  ｐＳＴＡＴ５は、５〜５００ｎｇ／ｍＬのＩＬ−２濃度で５０％超維持された。試験した最も低い濃度の（０．５ｎｇ／ｍＬ）ＩＬ−２で、ＴｒｅｇにおけるｐＳＴＡＴ５レベルが最大シグナルの５０％未満阻害されたが、ｐＳＴＡＴ５は、すべてのＡｂ濃度にわたって依然として検出可能であった（図７Ａ〜Ｖ）。５３４４抗体もｐＳＴＡＴ５シグナル伝達アッセイで試験し、Ｔｒｅｇにおいて、ｐＳＴＡＴ５は、低濃度のＩＬ−２でもはや検出不能であった（データ示さず）。
【０３３３】
ＪＥＳ６−１と抗体Ｆ５．１．１１．０２の比較
マウスＩＬ−２抗体ＪＥＳ６−１は、アイソタイプ対照と同様に、試験した最も高いＩＬ−２濃度で、Ｔｒｅｇ  ｐＳＴＡＴ５シグナル伝達を温存した（図８Ａ〜Ｆ）。対照的に、ＩＬ−２誘導ｐＳＴＡＴ５シグナル伝達は、試験したすべてのＩＬ−２濃度でマウスＣＤ８＋Ｔ細胞におけるＪＥＳ６−１によって強く阻害された。このデータは、ＩＬ−２と複合したＪＥＳ６−１が体内でＴｒｅｇ細胞の成長を促進するという公開された観察結果と一致する。
【０３３４】
抗ヒトＩＬ−２抗体Ｆ５．１．１１．０２は、試験した最も高いＩＬ−２濃度で、ヒトＴｒｅｇ  ｐＳＴＡＴ５シグナル伝達を大いに温存した。ＣＤ８＋Ｔ細胞ｐＳＴＡＴ５は、試験したすべてのＩＬ−２濃度で、ＩＬ−２抗体Ｆ５．１．１１．０２によって阻害された。全体的に、ＣＤ８及びＴｒｅｇにおけるＩＬ−２抗体Ｆ５．１．１１．０２のｐＳＴＡＴ５阻害のパターンは、マウスＩＬ−２抗体ＪＥＳ６−１で観察されたパターンと同様である。
【０３３５】
表５において、図８Ａ〜ＦからのｐＳＴＡＴ５最大値％を使用して、アイソタイプまたは抗ＩＬ−２抗体のいずれかで処理したＴｒｅｇ細胞またはＣＤ８細胞のいずれかの濃度曲線下面積値を生成した。各濃度のＩＬ−２のＴｒｅｇ／ＣＤ８のＡＵＣ比を列記した。アイソタイプ処理試料において、ＩＬ−２の量の減少がＡＵＣ比の増加をもたらし、ＣＤ８＋エフェクター細胞よりもＴｒｅｇにおいてより高いｐＳＴＡＴ５シグナル伝達を反映する。絶対数が異なるものの、この観察結果は、マウス細胞及びヒト細胞間で一貫していた。
【０３３６】
ＪＥＳ６−１処理は、この比率をより高い濃度のＩＬ−２でＴｒｅｇが優勢である方にシフトした。ＡＵＣ比の同様の変化がＦ５．１．１１．０２抗体で処理したヒト細胞において生じた。
【０３３７】
全体的に、Ｆ５．１．１１．０２は、ＪＥＳ６−１と同様のｐＳＴＡＴ５シグナル伝達プロファイルを有するように見えた。
【０３３８】
（表５）
2018537962.tif 000006
【０３３９】
ＣＤ２５ｈｉ  ＣＤ８＋Ｔ細胞のｐＳＴＡＴ５阻害に対する抗体エピトープの影響
いくつかの末梢ＣＤ８＋Ｔ細胞は、ＣＤ２５（ＩＬ−２Ｒα）を発現する。図１０Ａ〜Ｂに示されるように、細胞をＣＤ２５発現に基づいてゲーティングした場合、ＣＤ２５ｈｉ  ＣＤ８細胞は、低レベルのＩＬ−２により感受性であった。したがって、ＩＬ−２抗体によるＣＤ２５結合の遮断が、すべてまたは部分的に、ＣＤ２５ｈｉ  ＣＤ８＋Ｔ細胞におけるｐＳＴＡＴ５シグナル伝達を阻害するために必要とされ得る。
【０３４０】
図９に示されるように、低用量のＩＬ−２（０．８ｎｇ／ｍＬ）によって誘導されたｐＳＴＡＴ５は、１３Ａ１０またはＦ５．１．１１．０２などのＩＬ−２へのＩＬ−２Ｒα結合を遮断したＩＬ−２抗体によって最も良好に阻害された。逆に、恐らくシグナル伝達を可能にするためにＩＬ−２Ｒαの存在を必要としない高濃度のＩＬ−２（５００ｎｇ／ｍＬ）は、ｄ１Ｃ７またはＦ５．１．１１．０２などのＩＬ−２ＲβへのＩＬ−２の結合を遮断する抗体によって最も良好に阻害された。抗体Ｆ５．１．１１．０２は、一連のＩＬ−２濃度にわたってＣＤ８＋エフェクターＴ細胞におけるｐＳＴＡＴ５シグナル伝達を最も良好に阻害することができた。
【０３４１】
ＩＬ−２抗体Ｆ５．１．９によるｐＳＴＡＴ５阻害
ＩＬ−２抗体Ｆ５．１．９及び変異型Ｆ５．１．９．５を、ｐＳＴＡＴ５の阻害について評価した（図１１Ａ〜Ｈ）。Ｆ５．１．９の親和性変異型Ｆ５．１．９．５は、それがＴｒｅｇにおけるｐＳＴＡＴ５シグナル伝達を阻害した程度よりも高い程度に、ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞におけるｐＳＴＡＴ５シグナル伝達の阻害に有効であった。Ｆ５．１．９．５のｋａ（Ｍ−１ｓ−１）は１．２３Ｅ＋０６であり、ｋｄ（ｓ−１）は８．１８Ｅ−０４であり、ＫＤ（Ｍ）は６．６３Ｅ−１０であった。
【０３４２】
実施例６．ＮＯＤ  ｍＩＬ−２−／−ｈＩＬ−２＋／−マウスの生成
マウスＩＬ−２含有細菌人工染色体（ＢＡＣ）（クローンＲＰ２３−２９０Ｄ８）を、ヒトＩＬ−２コード配列を発現するように操作した。以下の修飾をＢＡＣに行った：マウスＩＬ−２プロモーター、５’及び３’ＵＴＲ、ならびにイントロンを無傷のまま残し、マウスシグナルペプチドをヒトシグナルペプチドに置き換え、シグナルペプチド下流のエクソン１の３’側半分、エクソン２、及びエクソン３をヒト配列に置き換え、エクソン４の５’側半分をヒトコード配列に置き換えた。
【０３４３】
その後、操作したＢＡＣを、前核注入により、ＦＶＢ／ＮＪ（フレンドウイルスＢ）雌マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ）の受精卵母細胞に移した。次いで、受精卵母細胞をＦＶＢ雌マウスに移植して、ＦＶＢ  ｍＩＬ−２＋／＋ｈＩＬ−２  ＢＡＣ＋マウスを生成した。ｍＩＬ２の発現を欠くＮＯＤバックグラウンドを持つマウスを生成するために、ＦＶＢ  ｍＩＬ−２＋／＋ｈＩＬ−２  ＢＡＣ＋マウスをＮＯＤ  ｍＩＬ−２−／−マウスと戻し交配した。この初期繁殖により生成されたＮＯＤ  ｍＩＬ−２−／−ｈＩＬ−２  ＢＡＣ＋／−マウスをＮＯＤ  ｍＩＬ−２−／−マウスと８世代にわたって戻し交配して、Ｉ型糖尿病を有するマウスを生成した。得られたマウスを実験に使用した。
【０３４４】
方法
全血（１００μＬ）を、ＡＣＫ溶解後、ＰＭＡ／イオノマイシンで一晩刺激し、上清（１２５μＬ）を収集し、ＥＬＩＳＡをｍＩＬ−２（５０μＬ）及びｈＩＬ−２（５０μＬ）の両方に行った（ＥＬＩＳＡ：ｅｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）。
【０３４５】
雌ＮＯＤ  ｍＩＬ２−／−ｈＩＬ２＋／−マウスに１４週齢時点で注射し、それらに、２５μｇのアイソタイプ、または５μｇもしくは２５μｇのＦ５．１．１１．０２抗体と複合した８，０００ＩＵ  ｈＩＬ−２（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ）を５日間にわたって腹腔内注射した。ＩＬ２：抗体複合体を、ＩＬ−２及び抗体を一緒に３７℃で３０分間インキュベートすることによって形成した。
【０３４６】
異なる臓器の単離及び細胞染色
マウスＣＯ２で屠殺し、その直後に、流出物が透明になるまで左室を通してＰＢＳを灌流した。脾細胞及び膵リンパ節（ｐＬＮ）を収集し、ＣＤ２５  ＰｅＣｙ７、ＣＤ４  ＢＶ６０５、ＣＤ８  ＰｅｒｃＰ−Ｃｙ５．５、ＣＤ４４  Ｐｅ、ＣＤ６２Ｌ  Ａｌ６４７での細胞外染色、及びＦｏｘＰ３  ＦＩＴＣでの細胞内染色を行った。
【０３４７】
全膵臓を、０．８ｍｇ／ｍＬのＣｏｌｌａｇｅｎａｓｅ  Ｐ及び２０μｇ／ｍＬのＤＮａｓｅ（Ｒｏｃｈｅ）で、３７℃で３０分間消化し、続いて、切り刻むことによって調製した。消化後、ホモジネートを、４０μｍの細胞濾過器を使用して２回濾過し、ＣＤ４５  ＰｅｒｃＰ  Ｃｙ５．５、ＣＤ２５  Ｐｅ、ＣＤ４  ＰｅＣｙ７、ＣＤ８  Ａｌ６４７、Ｔｈｙ１．２  ＢＶ６０５での細胞外染色、及びＦｏｘＰ３  ＦＩＴＣでの細胞内染色を行った。標識抗体を、ＢＤ  ＰｈａｒｍｉｎｇｅｎまたはＥｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅから購入した。染色した単一細胞懸濁液を、ＦＬＯＷＪＯソフトウェア分析及び提示した。
【０３４８】
結果
ヒトＩＬ−２トランスジェニック（ｈＩＬ−２  Ｔｇ）マウスの表現型
ＰＭＡ／イオノマイシンでのマウス脾細胞の体外刺激（図１２Ａ〜Ｂ）により、トランスジェニックマウスからのヒトＩＬ−２の産生が確認されが、ヒトＩＬ−２が野生型マウス由来のマウスＩＬ２よりも低いレベルで産生された。ｈＩＬ−２  Ｔｇ／ｍＩＬ−２−／−マウスは、健常で生存可能であるように見えた。しかしながら、ｈＩＬ−２Ｔｇマウスは、ＮＯＤまたはＮＯＤ  ｍＩＬ−２＋／−マウスと比較して、活性化（ＣＤ４４＋ＣＤ６２Ｌ−）ＣＤ４＋またはＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージの増加を有した（図１３Ａ〜Ｂ）。Ｔｒｅｇ頻度がＮＯＤまたはＮＯＤ  ｍＩＬ−２＋／−マウスと同様であったが、ｈＩＬ−２  Ｔｇマウス由来のＴｒｅｇは、ＣＤ２５の細胞表面発現の低減を有した（図１４）。
【０３４９】
ｈＩＬ−２  ＴｇマウスのＦ５．１．１１．０２：ｈＩＬ−２複合体での処理
ｈＩＬ−２  Ｔｇマウスを、上述（方法）のようにＦ５．１．１１．０２：ＩＬ−２複合体で処理した。処理は、７日目に脾臓の全体的な細胞充実度を増加させず、総脾細胞数のわずかな減少が５μｇ処理群で観察された（図１５）。ｐＬＮ以外のすべての臓器において、アイソタイプ対照と比較して、Ｔｒｅｇパーセンテージの増加がｈＩＬ−２と複合したＦ５．１．１１．０２の両方の用量での処理に応じて観察され、膵臓における増加がより有意であった（図１６Ａ〜Ｉ）。脾臓及びｐＬＮにおいて、Ｔｒｅｇ集団を、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦｏｘＰ３＋細胞でゲーティングし、膵臓において、Ｔｒｅｇ細胞を、ＣＤ４５＋Ｔｈｙ１．２＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦｏｘＰ３＋細胞でゲーティングすることによって特定した。
【０３５０】
複合体での処理後、ＣＤ４、ＣＤ８、及びＴｒｅｇ総細胞数の減少が脾臓及びｐＬＮで観察された。しかしながら、膵臓では、Ｆ５．１．１１．０２複合体処理は、２５μｇ用量のＦ５．１．１１．０２に応答して、Ｔｒｅｇ総細胞数のわずかな増加をもたらした。ＣＤ４及びＣＤ８総細胞数の差は、膵臓で観察されなかった（データ示さず）。
【０３５１】
ｈＩＬ−２  ＴｇマウスのｈＩＬ−２と複合したＦ５．１．１１．０２（２５μｇ）での処理は、脾臓においてＴｒｅｇ／ＣＤ４及びＴｒｅｇ／ＣＤ８細胞比率のわずかな増加をもたらした（図１７Ａ〜Ｆ）。同じ結果が膵臓で観察され、Ｔｒｅｇ／ＣＤ４及びＴｒｅｇ／ＣＤ８の両方の比率の有意な増加が５μｇ及び２５μｇのＦ５．１．１１．０２で観察された。Ｆ５．１．１１．０２：ＩＬ２複合体処理は、膵リンパ節における細胞比率にほとんど影響を及ぼさなかった。
【０３５２】
最後に、ｈｕＩＬ２  ＴｇマウスのＦ５．１．１１．０２：ＩＬ−２複合体（５μｇ及び２５μｇ  Ｆ５．１．１１．０２）での処理は、すべての臓器において、ＴｒｅｇのＣＤ２５平均蛍光強度（ＭＦＩ）の増加をもたらした（図１８Ａ〜Ｃ）。この増加は、ＴｒｅｇのＣＤ２５  ＭＦＩが処理前に非常に低かった膵臓において特に有意であった。
【０３５３】
ＣＴＶでのＮＳＧ実験
ＰＢＭＣを、Ｆｉｃｏｌｌにより健常ドナーから単離し、１２．５ｎｇ／ｍＬの抗ＣＤ３及び２５ｎｇ／ｍＬの抗ＣＤ２８で一晩活性化した。一晩活性化した後、細胞を収集し、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ  Ｖｉｏｌｅｔ（Ｌｉｆｅ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）で、１μＬ  ＣＴＶ／１０×１０６細胞の濃度で標識した。染色後、細胞をＰＢＳ中で十分に洗浄し、３０×１０６細胞の濃度で２００μＬのＰＢＳ中に再懸濁した。ＰＢＭＣをＮＳＧレシピエントに静脈注射した。ヒトＰＢＭＣを注射したＮＳＧマウスに、示される量でアイソタイプまたは抗体と３７℃で３０分間複合した８，０００Ｕ  ｈＩＬ−２（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ）を５日間にわたって毎日腹腔内注射した。
【０３５４】
脾細胞の単離及び細胞染色
マウスを３日目及び５日目にＣＯ２で屠殺し、脾細胞を収集し、抗ヒトＣＤ４５  Ｐａｃｉｆｉｃ  Ｏｒａｎｇｅ、ＣＤ４  ＰｅｒｃＰＣｙ５．５、ＣＤ２５Ｐｅ、ＣＤ８  ＡＰＣ−Ｈ７、ＮＫＧ２Ｄ  ＰｅＣｙ７で細胞外染色し、抗ヒトＨｅｌｉｏｓ  ＦＩＴＣ及びＦｏｘＰ３  ＡＰＣで細胞内染色した。標識抗体を、ＢＤ  ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎまたはＥｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅから購入した。染色した単一細胞懸濁液を、ＦＡＣＳＤｉｖａを起動するＦｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーター（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）ならびにＦＬＯＷＪＯソフトウェアで分析及び提示されたＦＳＣ  ３．０ファイルを用いて分析した。
【０３５５】
結果
ｈＩＬ−２と複合した２５μｇのＦ５．１．１１．０２での処理は、総脾細胞数の増加を５日目にもたらしたが、３日目にはもたらされなかった（図１９Ａ〜Ｂ）。
【０３５６】
Ｆ５．１．１１．０２抗体：ＩＬ−２複合体は、脾臓において５日目にＴｅｆｆ及びＴｒｅｇ総細胞数（図２０Ａ〜Ｆ）及びＴｒｅｇ／ＣＤ４及びＴｒｅｇ／ＣＤ８比率（図２１Ａ〜Ｄ）を増加させることもでき、この結果は、３日目には観察されなかった。Ｔｒｅｇ集団を、ｈＣＤ４５＋ＣＤ３＋ＣＤ４＋Ｈｅｌｉｏｓ＋ＦｏｘＰ３＋細胞でゲーティングした。
【０３５７】
導入及び処理前にＣＴＶ標識を含めることによって、我々は、Ｆ５．１．１１．０２抗体：ＩＬ−２複合体での処理が、アイソタイプと比較して、Ｔｒｅｇの増殖をもたらすことを観察し、この効果は３日目にすでに明らかであり、５日目までに小数の非分裂細胞しか残さなかった（図２２Ａ〜Ｈ）。ＣＤ８  Ｔ細胞の増殖も、Ｆ５．１．１１．０２抗体：ＩＬ−２複合体での処理により増加したが、これは、５日目にのみ有意であり、Ｔｒｅｇ集団よりも多くの非分裂細胞が残った（図２３Ａ〜Ｈ）。全体的に、このＣＴＶデータは、観察されたＴｒｅｇ／ＣＤ８比率のシフトの根底にあるものとしてＴｒｅｇ増殖の増加を裏付ける。
【０３５８】
最後に、両方の用量の複合体での脾臓処理において、アイソタイプ対照と比較して、Ｔｒｅｇ及びＣＤ８集団のＣＤ２５平均蛍光強度（ＭＦＩ）の増加がもたらされた（図２４Ａ〜Ｂ）。しかしながら、ＴｒｅｇでのＣＤ２５の絶対発現は、ＣＤ８細胞よりも何倍も高かった。
【０３５９】
後続実験において、我々は、Ｆ５．１．１１．０２をより低い親和性の「親」抗体Ｆ５．１．１１と比較した。我々は、用量範囲をｈＩＬ２と複合した抗体１２５μｇに広げて、より低い親和性の抗体のより高い用量が体内で同等の効果を有するかどうかを評価した。１２５μｇで、Ｆ５．１．１１は、Ｔｒｅｇ及びＣＤ８細胞数に同等の効果を有し、Ｔｒｅｇ／ＣＤ８比率及び細胞充実度を増加させ、これらは２５μｇのＦ５．１．１１．０２に相当した（図２５Ａ〜Ｄ、２６Ａ〜Ｃ、及び３３Ａ〜Ｂ）。これは、この場合も同様に、ＣＴＶ希釈において観察されるように、Ｔｒｅｇ増殖の増加によって裏付けられた（図２７Ａ〜Ｈ、２８Ａ〜Ｈ、及び３８Ａ〜Ｂ）。我々は、体外で、Ｆ５．１．１１．０２がヒトＴｒｅｇにおけるＦｏｘｐ３及びＣＤ２５タンパク質レベルを同様に増加させるであろうことを予測した。
【０３６０】
実施例７．カニクイザルＩＬ−２に対するＩＬ−２抗体結合親和性
組換えカニクイザル（Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）ＩＬ−２を哺乳類細胞で発現させ、固定化金属イオン親和性クロマトグラフィー（ＩＭＡＣ）を使用して精製した。カニクイザルＩＬ−２（１〜１００ｎＭ）に対する本抗体の親和性を、ヒトＩＬ−２について記載される表面プラズモン共鳴（実施例１）を使用して測定した。１：１のラングミュア結合モデルを使用して、結合曲線に当てはめるか、または定常状態親和性定数を濃度−応答曲線から計算した。クローンを、１〜１００ｎＭ  ＩＬ−２で観察された濃度−応答関係が見かけの結合親和性を計算するには不十分であった場合に、「非常に弱い」と指定した。
【０３６１】
結果
試験したヒト抗体クローンは、５１６ｐＭから本アッセイでは定量することができない非常に弱い会合までの範囲の親和性でカニクイザルＩＬ−２に結合する（表６）。試験したクローンの大半を、ＩＬ−２Ｒβ結合を阻害するそれらの能力に基づいて選択し（実施例２及び３）、これらのクローンは、ヒトＩＬ−２と比較して、カニクイザルＩＬ−２に対する親和性の有意な損失を示した。ＩＬ−２Ｒα結合を阻害することが観察された１６Ｃ３（実施例２）は、ヒトＩＬ−２及びカニクイザルＩＬ−２の両方への同等の結合を示した。これらの結果は、ヒトＩＬ−２とカニクイザルＩＬ−２との間の分岐領域がＩＬ−２Ｒβ結合部位及びＦ５．１．１１抗体クローンのエピトープの両方に収まることを見出した我々の構造分析（実施例９）と一致する。
【０３６２】
（表６）
2018537962.tif 000007
＊オフレートは、機器の規格外であり、５．０Ｅ−０５以下のオフレートが推定された。
【０３６３】
実施例８．ＩＬ−２／Ｆａｂ複合体受容体結合親和性
ＩＬ−２またはＩＬ−２／Ｆ５．１．１１  Ｆａｂ複合体に対するＩＬ−２Ｒαの親和性を、Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００機器（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を使用して測定した。組換えＩＬ−２αをビオチン標識し、Ｂｉａｃｏｒｅストレプトアビジンチップ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上に捕捉した。実験を、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、及び０．００５ｖ／ｖ％界面活性剤Ｐ２０緩衝液中で１０μＬ／分の流量を使用して２５℃で行った。ＩＬ−２（１〜５０ｎＭ）またはＩＬ−２／Ｆ５．１．１１  Ｆａｂ（１〜５００ｎＭ過剰Ｆａｂ事前複合型ＩＬ−２）を受容体結合チップ表面上に３０μＬ／分で１２０秒間注入し、５分間解離させた。データを、隣接する制御フローセル及び緩衝液のみの注入を使用してバックグラウンド除去した。相互作用の親和性を、平衡状態で濃度−応答関係から計算した。
【０３６４】
結果
ＩＬ−２／Ｆ５．１．１１  Ｆａｂ複合体は、非リガンドＩＬ−２と比較してより低い親和性でＩＬ−２Ｒαに結合する。複合体及び非リガンドＩＬ−２の平衡結合分析により、ＩＬ−２に結合したＦ５．１．１１  ＦａｂがＩＬ−２Ｒαに対しておよそ７倍弱い親和性（７０．１ｎＭと比較して９．９７ｎＭ）を有することが見出された（図２９Ａ〜Ｂ）。この結果は、ＩＬ−２／抗体複合体受容体結合アッセイ（実施例２）及びＩＬ−２／Ｆ５．１．１１  Ｆａｂ結晶構造の分析（実施例９）で観察された結合の低減と一致する。
【０３６５】
実施例９．ヒトＩＬ−２に結合したＦ５．１．１１  Ｆａｂの結晶構造
インターロイキン−２発現及び精製
完全長ＩＬ−２（残基１〜１３３）を、記載される（Ｒｉｃｋｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，２００４）ように精製した。手短に言えば、遺伝子を、ｐＡｃｇｐ６７Ａベクターに、ベクターのｇｐ６７Ａシグナル配列、続いて、Ｃ末端ヘキサヒスチジンタグとインフレームでクローニングした（配列番号２２３）。Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ（Ｓｆ９）細胞を使用して、高力価組換えウイルスを生成した。Ｉｎｓｅｃｔ  Ｘｐｒｅｓｓ培地（Ｌｏｎｚａ）で成長したＴｒｉｃｈｏｐｕｌｓｉａ  ｎｉ（Ｈｉｇｈ−Ｆｉｖｅ）細胞をウイルスに感染させ、タンパク質を２８℃で４８時間発現させた。タンパク質をＮｉ−ＮＴＡにより精製し、カルボキシペプチダーゼＡ及びＢで、４℃で一晩消化し、その後、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ  ２００ゲル濾過カラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上で精製した。
【０３６６】
５．１．１１  Ｆａｂとインターロイキン−２との複合体の結晶化
Ｆ５．１．１１  Ｆａｂを１．５倍過剰のＩＬ−２と混合し、複合体を、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ  ２００カラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上でＦＰＬＣにより精製した。精製したＦａｂ／ＩＬ−２複合体を、１．４９ｍＬ×ｍｇ−１×ｃｍ−１の消衰係数を使用して２８０ｎｍで測定された１０ｍｇ／ｍＬに濃縮した。複合体を等体積の沈殿剤溶液（１００ｍＭクエン酸ナトリウム（ｐＨ５．０）、２０％ポリエチレングリコール６０００）と混合し、滴下蒸気拡散を沈殿剤溶液のリザーバー上に受けさせることによって結晶化した。柱状結晶が１週間以内に生じた。結晶を、グリセロールの添加によって凍結保護して３０ｖ／ｖ％にし、収集し、液体窒素中に浸すことによって急冷した。
【０３６７】
結晶学的データ収集及び精査
回折データをＡｄｖａｎｃｅｄ  Ｌｉｇｈｔ  Ｓｏｕｒｃｅ  Ｂｅａｍｌｉｎｅ  ８．２．１（Ｂｅｒｋｅｌｅｙ，ＣＡ）で収集した。結晶を、単位セル寸法ａ＝８６．０１Å、ｂ＝１４５．７３Å、ｃ＝１０７．３２Å、β＝９５．３８°を有する空間群Ｐ２１においてインデックス付けした。２．７５Åの最高分解能を、構造解析及び精査に使用した。構造を、プログラムＰｈａｓｅｒ（ＭｃＣｏｙ  ｅｔ  ａｌ．，２００７）を使用して分子置換によって解析した。探索モデルは、ＰＤＢエントリー３Ｕ１Ｓからの重鎖定常ドメイン、４ＮＰＹからの重鎖可変ドメイン、３Ｎ９Ｇからの軽鎖定常ドメイン、４ＨＰ０からの軽鎖可変ドメイン、及び２Ｂ５Ｉからのインターロイキン−２を含んだ（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２００５、ＭｃＬｅｌｌａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１、Ｏｇａｔａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３、Ｓｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３、Ｋａｕｆｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．）。Ｆａｂ／ＩＬ−２複合体の４つのコピーを非対称ユニットにおいてモデル化した。構造を、プログラムＣｏｏｔ（Ｅｍｓｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０）及びＰＨＥＮＩＸ（Ａｄａｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０）を使用して手動での再構築及び精査の反復サイクルによって構築した。タンパク質−タンパク質相互作用を、Ｃｏｏｔにおいて、かつＰＩＳＡ（Ｋｒｉｓｓｉｎｅｌ  ａｎｄ  Ｈｅｎｒｉｃｋ，２００５；２００７）を用いて目視検査によって分析した。カニクイザル（Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）ＩＬ−２の相同モデルを、ヒトアポ−ＩＬ−２（ＰＤＢ  ＩＤ  １Ｍ４７（Ａｒｋｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００３））を鋳型として使用して、Ｉ−ＴＡＳＳＥＲ（Ｒｏｙ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０、Ｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）で調製した。
【０３６８】
結果
Ｆ５．１．１１は、軽鎖ＣＤＲ１及びＣＤＲ３ループならびに重鎖ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ループを介してヘリックスＡ及びＣならびにＢ−ＣループでＩＬ−２と相互作用する（図３０）。ＩＬ−２／ＩＬ−２Ｒβ／γｃ／ＣＤ２５四元構造（ＰＤＢ  ＩＤ  ２Ｂ５Ｉ）との比較により、Ｆ５．１．１１が、ｏｃｃｌｕｄｅｓ  ＩＬ−２のＩＬ−２Ｒβ結合部位を閉塞するが、ＣＤ２５またはγｃ結合部位は閉塞しないことが明らかになる。ＩＬ−２の全体構造は、アポ構造（９５個のＣα原子にわたってＲＭＳＤ  ０．３５９Å）と類似している。有意な混乱が、Ｆ５．１．１１がＩＬ−２のＢ−Ｃループに結合する場所で生じ、この混乱は、隣接するＩＬ−２  Ａ−Ｂループにまで広がっている（図３１）。Ａ−Ｂループが四元複合体におけるＣＤ２５結合部位の一部を形成するため、この動向は、ＣＤ２５に対するＦ５．１．１１／ＩＬ−２の親和性の低減について説明することができる。
【０３６９】
Ｆ５．１．１１のカニクイザルＩＬ−２への弱い交差反応性について説明するために、我々は、カニクイザルＩＬ−２の相同モデルをアポヒトＩＬ−２構造に基づいて生成した。配列が９５％同一であるものの、カニクイザルＩＬ−２のＢ−Ｃループにおける挿入が、軽鎖ＣＤＲ１残基（Ａｌａ３０、Ｓｅｒ３１、Ａｓｎ３２、及びＴｙｒ３３）及び重鎖ＣＤＲ３残基（Ｇｌｙ１０５及びＡｓｐ１０６）との相互作用を妨害するように見える（図３２）。
【０３７０】
ｍＡｂ  Ｆ５．１．１１．０２の非ヒト霊長類ＩＬ−２への結合を改善するために、側鎖がヒトＩＬ−２とカニクイザルＩＬ−２との間で異なるＩＬ−２ループと接触する標的ｍＡｂ残基を、Ｆ５．１．１１  Ｆａｂ／ｈＩＬ−２結晶構造に基づいて選択した。重鎖におけるＣＤＲＨ３の残基Ｇｌｙ１０５、Ａｓｐ１０６、及び軽鎖におけるＣＤＲＬ１のＡｌａ３０、Ｓｅｒ３１、Ａｓｎ３２、Ｔｙｒ３３に対応するコドンを、１９個のアミノ酸（システインを除く）をコードする縮重オリゴヌクレオチドを用いてＰＣＲによってコンビナトリアル的にランダム化した。ｓｃＦｖ形式の結果として生じたライブラリを、表面ディスプレイ法によって、カニクイザルＩＬ−２及びヒトＩＬ−２の両方への結合についてスクリーニングした。
【０３７１】
実施例１０．ＩＬ−２複合体抗ＩＬ−２：ＩＬ−２複合体処理による糖尿病寛解
ＰＢＭＣを、Ｆｉｃｏｌｌにより健常ドナーから単離し、１２．５ｎｇ／ｍＬの抗ＣＤ３及び２５ｎｇ／ｍＬの抗ＣＤ２８で一晩活性化した。一晩インキュベートした後、細胞を収集し、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ  Ｖｉｏｌｅｔ（Ｌｉｆｅ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）で、１μＬ  ＣＴＶ／１０×１０６細胞の濃度で標識した。染色後、細胞をＰＢＳ中で十分に洗浄し、３０×１０６細胞の濃度で２００μＬのＰＢＳ中に再懸濁した。ＰＢＭＣをＮＳＧレシピエントに静脈注射した。抗体：ＩＬ−２複合体を、示される濃度でアイソタイプまたは抗ＩＬ−２抗体を８０００ＵヒトＩＬ２（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ）と３７℃で３０分間インキュベートすることによって形成した。ヒトＰＢＭＣを注射したＮＳＧマウスに、抗体：ＩＬ−２複合体を５日間にわたって毎日腹腔内注射した。
【０３７２】
脾細胞の単離及び細胞染色
マウスをＣＯ２で屠殺し、脾細胞を収集し、抗ヒトＣＤ４５  Ｐａｃｉｆｉｃ  Ｏｒａｎｇｅ、ＣＤ４  ＰｅｒｃＰＣｙ  ５．５、ＣＤ３  ＰｅＣｙ７／Ｐａｃｉｆｉｃ  Ｂｌｕｅ／ＰｅｒｃＰ、ＣＤ２５  ＡＰＣ−Ｃｙ７／Ｐｅ、ＣＤ２３８  Ｐｅ、ＣＤ３９  ＰｅＣｙ７、ＣＤ８  ＡＰＣ−Ｈ７、Ｋｉ６７  Ｐｅ、ＮＫＧ２Ｄ  ＰｅＣｙ７、ＣＤ４４  Ｖ４５０で細胞外染色し、抗ヒトＨｅｌｉｏｓ  ＦＩＴＣ及びＦｏｘＰ３  ＡＰＣで細胞内染色した。細胞内染色前に、固定化及び透過化のために、ＦｏｘＰ３緩衝液キット（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を製造業者の説明書通りに使用した。標識抗体を、ＢＤ  ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎまたはＥｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅから購入した。染色した単一細胞懸濁液を、ＦＡＣＳＤｉｖａを起動するＦｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーター（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）ならびにＦＬＯＷＪＯソフトウェアで分析及び提示されたＦＳＣ  ３．０ファイルを用いて分析した。
【０３７３】
ＩＬ２複合体による糖尿病寛解
自然初発糖尿病ＮＯＤマウス（２５０ｍｇ／ｄｌ〜３５０ｍｇ／ｄｌの血中グルコース濃度）を、１２５μｇのアイソタイプまたは１２５μｇのＦ５．１．１１．０２と複合された８，０００Ｕ  ｈＩＬ−２（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ）、ならびに５μｇのＪＥＳ６−１（Ｅｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）と複合された０．５μｇのｍＩＬ２（Ｅｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）で５日間処理した。血中グルコース濃度を経時的に監視した。
【０３７４】
寛解の１週間後、数匹のマウスを屠殺し、膵臓を分析した。全膵臓を、０．８ｍｇ／ｍＬのＣｏｌｌａｇｅｎａｓｅ  Ｐ及び２０μｇ／ｍＬのＤＮａｓｅ（Ｒｏｃｈｅ）で、３７℃で３０分間消化し、続いて、切り刻むことによって調製した。消化後、ホモジネートを、４０μｍ細胞濾過器を使用して２回濾過し、ＣＤ４５  ＰｅｒｃＰ  Ｃｙ５．５、ＣＤ２５  Ｐｅ、ＣＤ４  ＰｅＣｙ７、ＣＤ８  Ａｌ６４７、Ｔｈｙ１．２  ＢＶ６０５で細胞外染色し、ＦｏｘＰ３  ＦＩＴＣで細胞内染色した。標識抗体を、ＢＤ  ＰｈａｒｍｉｎｇｅｎまたはＥｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅから購入した。染色した単一細胞懸濁液を、ＦＬＯＷＪＯソフトウェア分析及び提示した。
【０３７５】
結果
ｈＩＬ２と複合したＦ５．１．１１．０２（Ｆ５．１．１１．０２：ＩＬ２複合体）での処理は、脾臓におけるＴｒｅｇのパーセントの増加をもたらした。Ｔｒｅｇ集団を、ｈＣＤ４５＋ＣＤ３＋ＣＤ４＋Ｈｅｌｉｏｓ＋ＦｏｘＰ３＋細胞でゲーティングした。Ｆ５．１．１１．０２抗体：ＩＬ−２複合体がＴｒｅｇ総細胞数を増加させたが、総ＣＤ４及びＣＤ８細胞数の増加も観察された（図３５Ａ〜Ｂ）。全体的に、Ｔｒｅｇ／ＣＤ４比率及びＴｒｅｇ／ＣＤ８（図３６Ａ）比率が用量依存的様式で増加した。効果は、１μｇの用量から始まって有意であった。
【０３７６】
導入及び処理前にＣＴＶ標識を含めることによって、我々は、Ｆ５．１．１１．０２抗体：ＩＬ−２複合体での処理が、アイソタイプと比較して、Ｔｒｅｇの増殖の増加をもたらしたことを観察した。ＣＤ８  Ｔ細胞の増殖もＦ５．１．１１．０２抗体：ＩＬ−２複合体での処理により増加したが、Ｔｒｅｇ集団よりも多数の非分裂細胞がＣＤ８集団に残った（図３６Ｂ）。全体的に、このＣＴＶデータは、観察されたＴｒｅｇ／ＣＤ８比率のシフトの根底にあるものとしてＴｒｅｇ増殖の増加を裏付ける。
【０３７７】
脾臓において、複合体のすべての用量での処理が、アイソタイプ対照と比較して、Ｔｒｅｇ及びＣＤ８集団においてＣＤ２５平均蛍光強度（ＭＦＩ）の増加をもたらした。しかしながら、ＴｒｅｇでのＣＤ２５の絶対発現は、ＣＤ８細胞よりも何倍も高かった（図３７Ａ〜Ｂ）。加えて、Ｆ５．１．１１．０２：ＩＬ−２複合体での処理後、ＴｒｅｇにおけるＦｏｘＰ３  ＭＦＩの増加も確認された（図３８）。総じて、これらのデータは、増殖したＴｒｅｇが表現型及び機能を維持することを示唆する。
【０３７８】
体外データは、ＩＬ２ＲｂのＩＬ−２への結合を遮断する抗ＩＬ２抗体が、分化Ｔｒｅｇ増殖をより良好に促進することができることを示唆した。この仮説を直接試験するために、我々は、ＩＬ−２上の異なる受容体エピトープを遮断した抗体：ＩＬ−２Ｒα遮断剤（１６Ｃ３．４）、ＩＬ２Ｒβ遮断剤（ｄ１Ｃ７）、及びＩＬ２のＩＬ−２Ｒαへの結合も低減したＩＬ２Ｒβ遮断剤（Ｆ５．１．１１．０２）を比較した。ｈＩＬ２と複合した３つすべての抗体が、Ｔｒｅｇ細胞数を増加させ、より低い程度に、ＣＤ４及びＣＤ８細胞数も増加した。ＣＤ８細胞数の増加は、ＩＬ−２Ｒｂ遮断抗体（ｄ１Ｃ７またはＦ５．１．１１．０２）のいずれかよりも１６Ｃ３．４に応答してより高かった（図３９Ａ）。
【０３７９】
変化した細胞数と一致して、ｄ１Ｃ７及びＦ５．１．１１．０２：ＩＬ−２複合体は、Ｔｒｅｇ／ＣＤ４及びＴｒｅｇ／ＣＤ８比率の増加を示し、これは、１６Ｃ３．４では観察されなかった（図３９Ｂ）。ｄ１Ｃ７及びＦ５．１．１１．０２複合体での処理は、Ｔｒｅｇ及びＣＤ８においてＣＤ２５  ＭＦＩを増加させたが、ＣＤ８でのＣＤ２５発現は、ｄ１Ｃ７でより高く、Ｆ５．１．１１．０２がＴｒｅｇに対してより選択的であり得ることを示唆した（図４０）。
【０３８０】
最後に、我々は、５日間のＦ５．１．１１．０２：ＩＬ−２複合体投与がＮＯＤマウスにおける臨床的糖尿病を治癒するのに有効であり得るかどうかを評価した。注目すべきことには、この処理が、１週間以内にマウスの５０％に糖尿病寛解をもたらし、マウスの大半が４週間の実験にわたって正常血糖のままであった。ＪＥＳ６−１：マウスＩＬ−２複合体は、Ｆ５．１．１１．０２よりも低い治癒効果を提供し、いずれの効果もアイソタイプに応答して観察されなかった（図４１）。
【０３８１】
Ｆ５．１．１１．０２抗体：ＩＬ−２複合体効果が膵臓におけるＴｒｅｇ数及び特性の変更に関連するかどうかを確証するために、我々は、寛解１週間後に膵臓におけるそれらの割合を定量した。我々は、膵臓ＴｒｅｇのパーセンテージがＦ５．１．１１．０２複合体での処理後に有意に増加したことを観察した。我々は、この複合体での処理が、ＣＤ２５及びＦｏｘＰ３などのＴｒｅｇ細胞機能に関連するマーカーの発現の上昇に関連することも観察し、これは、アイソタイプ対照では観察されなかった（図４２）。全体的に、これらのデータは、処理後の膵臓におけるＴｒｅｇの増加が、糖尿病マウスにおける破壊性膵島炎への進行を制御し得ることを示唆する。
【０３８２】
参考文献
2018537962.tif 000008
2018537962.tif 000009
【０３８３】
本発明の特定の実施形態が次の番号付けされた段落に記載される。
１．ヒトＩＬ−２（ｈＩＬ−２）に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、該抗体は、ｈＩＬ−２のヘリックスＡ及びＣならびにＢ−Ｃループに結合する、単離された抗体またはその抗原結合部分。
２．ヒトＩＬ−２（ｈＩＬ−２）への結合について配列番号１３及び１４のアミノ酸配列を含む抗体と競合する、またはそれと同じｈＩＬ−２のエピトープに結合する、単離された抗体またはその抗原結合部分。
３．ヒトＩＬ−２（ｈＩＬ−２）に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、該抗体は、ｈＩＬ−２のＩＬ−２Ｒαへの結合親和性を１〜１９９分の１に低減する、単離された抗体またはその抗原結合部分。
４．該抗体は、ｈＩＬ−２のＩＬ−２Ｒαへの結合親和性を１０分の１に低減する、第３段落に記載の抗体または抗原結合部分。
５．ヒトＩＬ−２（ｈＩＬ−２）に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、該抗体は、ＩＬ−２Ｒα及びＩＬ−２ＲβへのｈＩＬ−２結合を低減し、ＣＤ８＋Ｔ細胞における活性を、制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞におけるよりも高い度合で阻害する、単離された抗体またはその抗原結合部分。
６．ヒトインターロイキン−２（ｈＩＬ−２）に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、該抗体は、ＩＬ−２Ｒα及びＩＬ−２ＲβへのｈＩＬ−２結合を低減し、ＣＤ８＋Ｔ細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化を、制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞におけるよりも高い度合で阻害する、単離された抗体またはその抗原結合部分。
７．ヒトインターロイキン−２（ｈＩＬ−２）に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、該抗体は、ＩＬ−２Ｒα及びＩＬ−２ＲβへのｈＩＬ−２結合を低減し、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）培養物または再構成アッセイにおいて測定したとき、ＣＤ８＋もしくはＣＤ４＋Ｔ細胞に対して、またはＮＫ細胞に対して制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞の比率を増加させる、単離された抗体またはその抗原結合部分。
８．ヒトインターロイキン−２（ｈＩＬ−２）に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、該抗体は、ＩＬ−２Ｒα及びＩＬ−２ＲβへのｈＩＬ−２結合を低減し、制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞におけるＦＯＸＰ３、ＣＤ２５、及びＩｃｏｓのうちの１つ以上の発現を増加させる、単離された抗体またはその抗原結合部分。
９．該抗体または抗原結合部分は、次の特性：
ａ）約４．５３×１０−４ｓ−１超のオフレートでのｈＩＬ−２への結合、及び
ｂ）約１．１４×１０−１０Ｍ超のＫＤでのｈＩＬ−２への結合
のうちの少なくとも一方を有する、第１〜８段落のいずれか１つに記載の単離された抗体または抗原結合部分。
１０．該抗体は、ヒト抗体である、第１〜９段落のいずれか１つに記載の抗体または抗原結合部分。
１１．
（ａ）配列番号７３（Ｋａｂａｔ）、７４（Ｃｈｏｔｈｉａ）、もしくは７５（拡張型）を含むＨＣＤＲ１、配列番号７６（Ｋａｂａｔ）、もしくは７７（Ｃｈｏｔｈｉａ）を含むＨＣＤＲ２、配列番号７８を含むＨＣＤＲ３、配列番号７９を含むＬＣＤＲ１、配列番号８０を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号８１を含むＬＣＤＲ３、
（ｂ）配列番号８２（Ｋａｂａｔ）、８３（Ｃｈｏｔｈｉａ）、もしくは８４（拡張型）を含むＨＣＤＲ１、配列番号８５（Ｋａｂａｔ）、もしくは８６（Ｃｈｏｔｈｉａ）を含むＨＣＤＲ２、配列番号８７を含むＨＣＤＲ３、配列番号８８を含むＬＣＤＲ１、配列番号８９を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号９０を含むＬＣＤＲ３、
（ｃ）配列番号９１（Ｋａｂａｔ）、９２（Ｃｈｏｔｈｉａ）、もしくは９３（拡張型）を含むＨＣＤＲ１、配列番号９４（Ｋａｂａｔ）、もしくは９５（Ｃｈｏｔｈｉａ）を含むＨＣＤＲ２、配列番号９６を含むＨＣＤＲ３、配列番号９７を含むＬＣＤＲ１、配列番号９８を含むＬＣＤＲ２を含む、及び配列番号９９を含むＬＣＤＲ３、
（ｄ）配列番号１００（Ｋａｂａｔ）、１０１（Ｃｈｏｔｈｉａ）、もしくは１０２（拡張型）を含むＨＣＤＲ１、配列番号１０３（Ｋａｂａｔ）、もしくは１０４（Ｃｈｏｔｈｉａ）を含むＨＣＤＲ２、配列番号１０５を含むＨＣＤＲ３、配列番号１０６を含むＬＣＤＲ１、配列番号１０７を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１０８を含むＬＣＤＲ３、
（ｅ）配列番号１０９（Ｋａｂａｔ）、１１０（Ｃｈｏｔｈｉａ）、もしくは１１１（拡張型）を含むＨＣＤＲ１、配列番号１１２（Ｋａｂａｔ）、もしくは１１３（Ｃｈｏｔｈｉａ）を含むＨＣＤＲ２、配列番号１１４を含むＨＣＤＲ３、配列番号１１５を含むＬＣＤＲ１、配列番号１１６を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１１７を含むＬＣＤＲ３、
（ｆ）配列番号１１８（Ｋａｂａｔ）、１１９（Ｃｈｏｔｈｉａ）、もしくは１２０（拡張型）を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２１（Ｋａｂａｔ）、もしくは１２２（Ｃｈｏｔｈｉａ）を含むＨＣＤＲ２、配列番号１２３を含むＨＣＤＲ３、配列番号１２４を含むＬＣＤＲ１、配列番号１２５を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１２６を含むＬＣＤＲ３、
（ｇ）配列番号１２７（Ｋａｂａｔ）、１２８（Ｃｈｏｔｈｉａ）、もしくは１２９（拡張型）を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３０（Ｋａｂａｔ）、もしくは１３１（Ｃｈｏｔｈｉａ）を含むＨＣＤＲ２、配列番号１３２を含むＨＣＤＲ３、配列番号１３３を含むＬＣＤＲ１、配列番号１３４を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１３５を含むＬＣＤＲ３、
（ｈ）配列番号１３６（Ｋａｂａｔ）、１３７（Ｃｈｏｔｈｉａ）、もしくは１３８（拡張型）を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３９（Ｋａｂａｔ）、もしくは１４０（Ｃｈｏｔｈｉａ）を含むＨＣＤＲ２、配列番号１４１を含むＨＣＤＲ３、配列番号１４２を含むＬＣＤＲ１、配列番号１４３を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１４４を含むＬＣＤＲ３、
（ｉ）配列番号１４５（Ｋａｂａｔ）、１４６（Ｃｈｏｔｈｉａ）、もしくは１４７（拡張型）を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４８（Ｋａｂａｔ）、もしくは１４９（Ｃｈｏｔｈｉａ）を含むＨＣＤＲ２、配列番号１５０を含むＨＣＤＲ３、配列番号１５１を含むＬＣＤＲ１、配列番号１５２を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１５３を含むＬＣＤＲ３、
（ｊ）配列番号１５４（Ｋａｂａｔ）、１５５（Ｃｈｏｔｈｉａ）、もしくは１５６（拡張型）を含むＨＣＤＲ１、配列番号１５７（Ｋａｂａｔ）、もしくは１５８（Ｃｈｏｔｈｉａ）を含むＨＣＤＲ２、配列番号１５９を含むＨＣＤＲ３、配列番号１６０を含むＬＣＤＲ１、配列番号１６１を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１６２を含むＬＣＤＲ３、
（ｋ）配列番号１６３（Ｋａｂａｔ）、１６４（Ｃｈｏｔｈｉａ）、もしくは１６５（拡張型）を含むＨＣＤＲ１、配列番号１６６（Ｋａｂａｔ）、もしくは１６７（Ｃｈｏｔｈｉａ）を含むＨＣＤＲ２、配列番号１６８を含むＨＣＤＲ３、配列番号１６９を含むＬＣＤＲ１、配列番号１７０を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１７１を含むＬＣＤＲ３、
（ｌ）配列番号１７２（Ｋａｂａｔ）、１７３（Ｃｈｏｔｈｉａ）、もしくは１７４（拡張型）を含むＨＣＤＲ１、配列番号１７５（Ｋａｂａｔ）、もしくは１７６（Ｃｈｏｔｈｉａ）を含むＨＣＤＲ２、配列番号１７７を含むＨＣＤＲ３、配列番号１７８を含むＬＣＤＲ１、配列番号１７９を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１８０を含むＬＣＤＲ３、
（ｍ）配列番号１８１（Ｋａｂａｔ）、１８２（Ｃｈｏｔｈｉａ）、もしくは１８３（拡張型）を含むＨＣＤＲ１、配列番号１８４（Ｋａｂａｔ）、もしくは１８５（Ｃｈｏｔｈｉａ）を含むＨＣＤＲ２、配列番号１８６を含むＨＣＤＲ３、配列番号１８７を含むＬＣＤＲ１、配列番号１８８を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１８９を含むＬＣＤＲ３、
（ｎ）配列番号１９０（Ｋａｂａｔ）、１９１（Ｃｈｏｔｈｉａ）、もしくは１９２（拡張型）を含むＨＣＤＲ１、配列番号１９３（Ｋａｂａｔ）、もしくは１９４（Ｃｈｏｔｈｉａ）を含むＨＣＤＲ２、配列番号１９５を含むＨＣＤＲ３、配列番号１９６を含むＬＣＤＲ１、配列番号１９７を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１９８を含むＬＣＤＲ３、
（ｏ）配列番号１９９（Ｋａｂａｔ）、２００（Ｃｈｏｔｈｉａ）、もしくは２０１（拡張型）を含むＨＣＤＲ１、配列番号２０２（Ｋａｂａｔ）、もしくは２０３（Ｃｈｏｔｈｉａ）を含むＨＣＤＲ２、配列番号２０４を含むＨＣＤＲ３、配列番号２０５を含むＬＣＤＲ１、配列番号２０６を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号２０７を含むＬＣＤＲ３、
（ｐ）配列番号２０８（Ｋａｂａｔ）、２０９（Ｃｈｏｔｈｉａ）、もしくは２１０（拡張型）を含むＨＣＤＲ１、配列番号２１１（Ｋａｂａｔ）、もしくは２１２（Ｃｈｏｔｈｉａ）を含むＨＣＤＲ２、配列番号２１３を含むＨＣＤＲ３、配列番号２１４を含むＬＣＤＲ１、配列番号２１５を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号２１６を含むＬＣＤＲ３、または
（ｑ）配列番号２１７を含むＨＣＤＲ１、配列番号２１８を含むＨＣＤＲ２、配列番号２１９を含むＨＣＤＲ３、配列番号２２０を含むＬＣＤＲ１、配列番号２２１を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号２２２を含むＬＣＤＲ３
を含む、第１〜１０段落のいずれか１つに記載の抗体または抗原結合部分。
１２．
（ａ）
ｉ）表７に示される配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、もしくは７１におけるＨＣＤＲ３、または
ｉｉ）表７に示される配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、もしくは７１におけるＨＣＤＲ１〜３
を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、あるいは
（ｂ）
ｉ）表７に示される配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、もしくは７２におけるＬＣＤＲ３、または
ｉｉ）表７に示される配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、もしくは７２におけるＬＣＤＲ１〜３
を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）
を含む、第１〜１０段落のいずれか１つに記載の抗体または抗原結合部分。
１３．ヒトインターロイキン−２（ｈＩＬ−２）に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、
ａ）表７に示される配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、もしくは７１におけるＨＣＤＲ３、
ｂ）表７に示される配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、もしくは７１におけるＨＣＤＲ１〜３、または
ｃ）配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、もしくは７１のアミノ酸配列
を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分。
１４．ヒトインターロイキン−２（ｈＩＬ−２）に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、
ａ）表７に示される配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、もしくは７２におけるＬＣＤＲ３、
ｂ）表７に示される配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、もしくは７２におけるＬＣＤＲ１〜３、または
ｃ）配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、もしくは７２のアミノ酸配列
を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分。
１５．ヒトＩＬ−２（ｈＩＬ−２）に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、該抗体は、表７に示される、それぞれ
配列番号１及び２、
配列番号３及び４、
配列番号５及び６、
配列番号７及び８、
配列番号９及び１０、
配列番号１１及び１２、
配列番号１３及び１４、
配列番号１５及び１６、
配列番号１７及び１８、
配列番号１９及び２０、
配列番号２１及び２２、
配列番号２３及び２４、
配列番号２５及び２６、
配列番号２７及び２８、
配列番号２９及び３０、
配列番号３１及び３２、または
配列番号７１及び７２
におけるＨＣＤＲ１〜３及びＬＣＤＲ１〜３アミノ酸配列を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分。
１６．該抗体は、
配列番号１及び２、
配列番号３及び４、
配列番号５及び６、
配列番号７及び８、
配列番号９及び１０、
配列番号１１及び１２、
配列番号１３及び１４、
配列番号１５及び１６、
配列番号１７及び１８、
配列番号１９及び２０、
配列番号２１及び２２、
配列番号２３及び２４、
配列番号２５及び２６、
配列番号２７及び２８、
配列番号２９及び３０、
配列番号３１及び３２、または
配列番号７１及び７２のアミノ酸配列を含む、第１５段落に記載の単離された抗体または抗原結合部分。
１７．該抗体は、ＩｇＧ抗体である、第１５または１６段落に記載の抗体または抗原結合部分。
１８．配列番号３３のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域をさらに含む、第１７段落に記載の抗体または抗原結合部分。
１９．Ｃ末端リジンを含まない配列番号３３のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域をさらに含む、第１７段落に記載の抗体または抗原結合部分。
２０．配列番号３４または３５のアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域をさらに含む、第１８または１９段落に記載の抗体または抗原結合部分。
２１．第１１〜２０段落のいずれか１つに記載の抗体または抗原結合部分の該重鎖、該軽鎖、または両方をコードする、単離された核酸。
２２．ヒトインターロイキン−２（ｈＩＬ−２）に特異的に結合する抗体または抗原結合部分の該重鎖、該軽鎖、または両方をコードする、単離された核酸であって、該核酸は、
ａ）配列番号３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、もしくは６６のヌクレオチド配列、
ｂ）配列番号３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、もしくは６７のヌクレオチド配列、または
ｃ）次のヌクレオチド配列対：
配列番号３６及び３７、
配列番号３８及び３９、
配列番号４０及び４１、
配列番号４２及び４３、
配列番号４４及び４５、
配列番号４６及び４７、
配列番号４８及び４９、
配列番号５０及び５１、
配列番号５２及び５３、
配列番号５４及び５５、
配列番号５６及び５７、
配列番号５８及び５９、
配列番号６０及び６１、
配列番号６２及び６３、
配列番号６４及び６５、または
配列番号６６及び６７
のうちの１つ
を含む、単離された核酸。
２３．第２１または２２段落に記載の核酸を含むベクター。
２４．第２１もしくは２２段落に記載の核酸または第２３段落に記載のベクターを含む、宿主細胞。
２５．該細胞は哺乳類細胞である、第２４段落に記載の宿主細胞。
２６．ヒトインターロイキン−２（ｈＩＬ−２）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分を生産する方法であって、該方法は、
ａ）第２４または２５段落に記載の宿主細胞を、該抗体または抗原結合部分が発現されるのを可能にする条件下で培養することであって、該宿主細胞は、該抗体または抗原結合部分の該重鎖及び軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含む、培養することと、
ｂ）該抗体または抗原結合部分を該培養物から単離することと
を含む、方法。
２７．ヒトインターロイキン−２（ｈＩＬ−２）に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、該抗体は、ｈＩＬ−２への結合について第１６段落に記載の抗体または抗原結合部分と競合する、あるいはそれと同じエピトープに結合する、単離された抗体またはその抗原結合部分。
２８．該抗体は、次のアミノ酸配列：
配列番号１及び２、
配列番号３及び４、
配列番号５及び６、
配列番号７及び８、
配列番号９及び１０、
配列番号１１及び１２、
配列番号１３及び１４、
配列番号１５及び１６、
配列番号１７及び１８、
配列番号１９及び２０、
配列番号２１及び２２、
配列番号２３及び２４、
配列番号２５及び２６、
配列番号２７及び２８、
配列番号２９及び３０、または
配列番号３１及び３２、とそれぞれ少なくとも９５％同一であるＶＨアミノ酸配列及びＶＬアミノ酸配列を含む、第２７段落に記載の抗体または抗原結合部分。
２９．第１〜２０、２７、及び２８段落のいずれか１つに記載の抗体または抗原結合部分と、薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む、薬学的組成物。
３０．ヒト対象における炎症性病態を治療するための方法であって、該対象に、有効量の、第１〜２０、２７、及び２８段落のいずれか１つに記載の抗体または抗原結合部分、あるいは第２９段落に記載の薬学的組成物を投与することを含む、方法。
３１．免疫抑制の誘発を必要とするヒト対象において該免疫抑制を誘発させる方法であって、該対象に、有効量の、第１〜２０、２７、及び２８段落のいずれか１つに記載の抗体または抗原結合部分、あるいは第２９段落に記載の薬学的組成物を投与することを含む、方法。
３２．炎症性病態を有するまたは免疫抑制を必要とするヒト対象の治療において使用するための、第１〜２０、２７、及び２８段落のいずれか１つに記載の抗体または抗原結合部分、あるいは第２９段落に記載の薬学的組成物。
３３．炎症性病態の治療または免疫抑制の誘発を必要とするヒト対象において該炎症性病態を治療するまたは該免疫抑制を誘発させるための医薬品の製造における、第１〜２０、２７、及び２８段落のいずれか１つに記載の抗体または抗原結合部分の使用。
３４．該対象は、自己免疫疾患または移植片対宿主病を有する、第３０または３１段落に記載の方法、第３２段落に記載の抗体、部分または薬学的組成物、あるいは第３３段落に記載の使用。
３５．該抗体または部分は、ＩＬ−２と複合して投与される、第３０または３１段落に記載の方法、第３２段落に記載の抗体、部分または薬学的組成物、あるいは第３３段落に記載の使用。
３６．該対象は、真性糖尿病を有する、第３０または３１段落に記載の方法、第３２段落に記載の抗体、部分または薬学的組成物、あるいは第３３段落に記載の使用。
３７．該対象は、Ｉ型糖尿病を有する、第３０または３１段落に記載の方法、第３２段落に記載の抗体、部分または薬学的組成物、あるいは第３３段落に記載の使用。
３８．ヒトＩＬ−２と複合された第１〜２０、２７、及び２７段落のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合部分を含む組成物。
３９．ヒトＩＬ−２と複合された第１〜２０、２７、及び２８段落のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合部分と、薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む、薬学的組成物。
４０．ヒト対象における炎症性病態を治療するための方法であって、該対象に、有効量の、ヒトＩＬ−２と複合された第１〜２０、２７、及び２８段落のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合部分、第２９段落に記載の薬学的組成物、第３８段落に記載の組成物、あるいは第３９段落に記載の薬学的組成物を投与することを含む、方法。
４１．ヒトインターロイキン−２（ｈＩＬ−２）に特異的に結合する単離された抗体Ｆ５．１．１１．０２またはその抗原結合部分であって、該抗体は、ＡＴＣＣ受託番号＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿の下に寄託されたプラスミドのｃＤＮＡ挿入物によってコードされるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、及び／またはＡＴＣＣ受託番号＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿の下に寄託されたプラスミドのｃＤＮＡ挿入物によってコードされるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む、単離された抗体Ｆ５．１．１１．０２またはその抗原結合部分。
【０３８４】
（表７）配列表一覧
Ｋａｂａｔ  ＣＤＲアミノ酸配列は、太字表示である。Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲアミノ酸配列は、下線付きである。拡張型ＣＤＲアミノ酸配列は、下線付きアミノ酸残基及び太字表示のアミノ酸残基の両方を含む。
2018537962.tif 000010
2018537962.tif 000011
2018537962.tif 000012
2018537962.tif 000013
2018537962.tif 000014
2018537962.tif 000015
2018537962.tif 000016
2018537962.tif 000017
2018537962.tif 000018
2018537962.tif 000019
2018537962.tif 000020
2018537962.tif 000021
2018537962.tif 000022
2018537962.tif 000023
2018537962.tif 000024
2018537962.tif 000025
2018537962.tif 000026
2018537962.tif 000027
2018537962.tif 000028
2018537962.tif 000029
2018537962.tif 000030
2018537962.tif 000031
2018537962.tif 000032
2018537962.tif 000033
2018537962.tif 000034
2018537962.tif 000035
2018537962.tif 000036
2018537962.tif 000037
2018537962.tif 000038
2018537962.tif 000039
2018537962.tif 000040
2018537962.tif 000041
2018537962.tif 000042
【０３８５】
（表８）
2018537962.tif 000043
【図１】
2018537962.tif 000044
【図２】
2018537962.tif 000045
【図３】
2018537962.tif 000046
【図４−１】
2018537962.tif 000047
【図４−２】
2018537962.tif 000048
【図５−１】
2018537962.tif 000049
【図５−２】
2018537962.tif 000050
【図６】
2018537962.tif 000051
【図７−１】
2018537962.tif 000052
【図７−２】
2018537962.tif 000053
【図７−３】
2018537962.tif 000054
【図７−４】
2018537962.tif 000055
【図７−５】
2018537962.tif 000056
【図７−６】
2018537962.tif 000057
【図８−１】
2018537962.tif 000058
【図８−２】
2018537962.tif 000059
【図９】
2018537962.tif 000060
【図１０】
2018537962.tif 000061
【図１１−１】
2018537962.tif 000062
【図１１−２】
2018537962.tif 000063
【図１２】
2018537962.tif 000064
【図１３】
2018537962.tif 000065
【図１４】
2018537962.tif 000066
【図１５】
2018537962.tif 000067
【図１６】
2018537962.tif 000068
【図１７】
2018537962.tif 000069
【図１８】
2018537962.tif 000070
【図１９】
2018537962.tif 000071
【図２０】
2018537962.tif 000072
【図２１】
2018537962.tif 000073
【図２２】
2018537962.tif 000074
【図２３】
2018537962.tif 000075
【図２４】
2018537962.tif 000076
【図２５】
2018537962.tif 000077
【図２６】
2018537962.tif 000078
【図２７】
2018537962.tif 000079
【図２８】
2018537962.tif 000080
【図２９】
2018537962.tif 000081
【図３０】
2018537962.tif 000082
【図３１】
2018537962.tif 000083
【図３２】
2018537962.tif 000084
【図３３】
2018537962.tif 000085
【図３４】
2018537962.tif 000086
【図３５Ａ】
2018537962.tif 000087
【図３５Ｂ】
2018537962.tif 000088
【図３６】
2018537962.tif 000089
【図３７】
2018537962.tif 000090
【図３８】
2018537962.tif 000091
【図３９】
2018537962.tif 000092
【図４０】
2018537962.tif 000093
【図４１】
2018537962.tif 000094
【図４２】
2018537962.tif 000095
【配列表】
2018537962000001.app
【国際調査報告】
2018537962.tif 000096
2018537962.tif 000097
2018537962.tif 000098
2018537962.tif 000099
2018537962.tif 000100
2018537962.tif 000101