(57)【要約】  本明細書には、インスリン治療用ペプチドと、必要としている個体の肝臓に対してインスリン治療用ペプチドを標的とする免疫グロブリン領域とを含む、免疫グロブリン融合タンパク質が開示される。さらに本明細書には、免疫グロブリン融合タンパク質を含む組成物、および被験体の疾患または疾病、例えば、糖尿病および糖尿病関連の疾病の処置または予防のために免疫グロブリン融合タンパク質を使用する方法が開示される。【選択図】図１Ａ
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
インスリン治療用ペプチドと抗原結合ドメインの１つ以上の部分を含む第１の免疫グロブリン領域とを含むインスリン免疫グロブリン融合タンパク質であって、抗原結合ドメインが、肝細胞の抗原に対する特異性を有する、インスリン免疫グロブリン融合タンパク質。
【請求項２】
抗原がアシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰＲ）である、請求項１に記載のインスリン免疫グロブリン融合タンパク質。
【請求項３】
第１の免疫グロブリン領域が、２つ以下のアミノ酸だけＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５−４７および５５から選択される配列とは異なるアミノ酸配列を有するＣＤＲを含む、請求項１または２に記載のインスリン免疫グロブリン融合タンパク質。
【請求項４】
第１の免疫グロブリン領域が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９、３４、３６−４０および４３から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約８５％相同性であるアミノ酸配列を含む、請求項１または２に記載のインスリン免疫グロブリン融合タンパク質。
【請求項５】
第２の免疫グロブリン領域をさらに含む、請求項１乃至４のいずれかに記載のインスリン免疫グロブリン融合タンパク質。
【請求項６】
第２の免疫グロブリン領域が、２つ以下のアミノ酸だけＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８−５０から選択される配列とは異なるアミノ酸配列を有するＣＤＲを含む、請求項５に記載のインスリン免疫グロブリン融合タンパク質。
【請求項７】
第２の免疫グロブリン領域が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０、３３、３５、４１、４２、および４４から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約８５％相同性であるアミノ酸配列を含む、請求項５に記載のインスリン免疫グロブリン融合タンパク質。
【請求項８】
第１の免疫グロブリン領域が、２つ以下のアミノ酸だけＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８−５０から選択される配列とは異なるアミノ酸配列を有するＣＤＲを含む、請求項１または２に記載のインスリン免疫グロブリン融合タンパク質。
【請求項９】
第１の免疫グロブリン領域が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０、３３、３５、４１、４２、および４４から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約８５％相同性であるアミノ酸配列を含む、請求項１または２に記載のインスリン免疫グロブリン融合タンパク質。
【請求項１０】
第２の免疫グロブリン領域をさらに含む、請求項８または９に記載のインスリン免疫グロブリン融合タンパク質。
【請求項１１】
第２の免疫グロブリン領域が、２つ以下のアミノ酸だけＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５−４７および５５から選択される配列とは異なるアミノ酸配列を有するＣＤＲを含む、請求項１０に記載のインスリン免疫グロブリン融合タンパク質。
【請求項１２】
第２の免疫グロブリン領域が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９、３４、３６−４０および４３から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約８５％相同性であるアミノ酸配列を含む、請求項１０に記載のインスリン免疫グロブリン融合タンパク質。
【請求項１３】
インスリン治療用ペプチドが、第１の免疫グロブリン領域のアミノ末端に結合される、請求項１乃至１２のいずれかに記載のインスリン免疫グロブリン融合タンパク質。
【請求項１４】
インスリン治療用ペプチドが、第１の免疫グロブリン領域のアミノ末端に結合され、第１の免疫グロブリン領域がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５５（ＱＶＱＬＸ１ＱＸ２ＧＡＥ）を含み、ここでＸ１およびＸ２が、自然発生または非自然発生のアミノ酸から独立して選択される、請求項１または２に記載のインスリン免疫グロブリン融合タンパク質。
【請求項１５】
Ｘ１がＱまたはＶである、請求項１４に記載のインスリン免疫グロブリン融合タンパク質。
【請求項１６】
Ｘ２がＰまたはＳである、請求項１４または１５に記載のインスリン免疫グロブリン融合タンパク質。
【請求項１７】
インスリン治療用ペプチドが、第１の免疫グロブリン領域のアミノ末端に結合され、第１の免疫グロブリン領域がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５６（ＥＸ１ＶＬＴＱＳＰＸ２Ｔ）を含み、ここでＸ１およびＸ２が、自然発生または非自然発生のアミノ酸から独立して選択される、請求項１または２に記載のインスリン免疫グロブリン融合タンパク質。
【請求項１８】
Ｘ１がＴまたはＩである、請求項１７に記載のインスリン免疫グロブリン融合タンパク質。
【請求項１９】
Ｘ２がＴまたはＧである、請求項１７または１８に記載のインスリン免疫グロブリン融合タンパク質。
【請求項２０】
インスリン治療用ペプチドが、リンカーペプチドによって第１の免疫グロブリン領域に結合される、請求項１乃至１９のいずれかに記載のインスリン免疫グロブリン融合タンパク質。
【請求項２１】
リンカーペプチドが３〜５０のアミノ酸を含み、リンカーペプチドが、（ａ）少なくとも約５０％のグリシン、セリン、またはグリシンとセリンのアミノ酸を有するアミノ酸配列；および（ｂ）少なくとも約５０％のグリシン、アラニン、またはグリシンとアラニンのアミノ酸を有するアミノ酸配列、から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項２０に記載のインスリン免疫グロブリン融合タンパク質。
【請求項２２】
リンカーペプチドが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４１−１４７のいずれか１つに対して少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項２０または２１に記載のインスリン免疫グロブリン融合タンパク質。
【請求項２３】
インスリン治療用ペプチドが、式Ｂ−Ｃ−ＡまたはＡ−Ｃ−Ｂを有する単一のアミノ酸鎖を含み、ここでＢが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６０（ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＦＹＴ）との２つ以下のアミノ酸差を有するアミノ酸配列を含み、Ａが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６１（ＧＩＶＥＱＣＣＴＳＩＣＳＬＹＱＬＥＮＹＣ）との２つ以下のアミノ酸差を有するアミノ酸配列を含み、およびＣが結合ペプチドを含む、請求項１乃至２２のいずれかに記載のインスリン免疫グロブリン融合タンパク質。
【請求項２４】
インスリン治療用ペプチドが、式Ｂ−Ｃ−ＡまたはＡ−Ｃ−Ｂを有する単一のアミノ酸鎖を含み、ここで、ＢがＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５７（ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＸＡＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＦＹＴＸＢＸＣＴ）を含み；Ａが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５８（ＧＩＶＥＱＣＣＸＤＳＩＣＳＬＹＱＬＥＮＹＣＮ）を含み；およびＣが結合ペプチドを含み；およびここでＸＡ、ＸＢ、ＸＣおよびＸＤが、自然発生または非自然発生のアミノ酸から独立して選択される、請求項１乃至２２のいずれかに記載のインスリン免疫グロブリン融合タンパク質。
【請求項２５】
ＸＡがＤまたはＨである、請求項２４に記載のインスリン免疫グロブリン融合タンパク質。
【請求項２６】
ＸＢがＤまたはＰである、請求項２４または２５に記載のインスリン免疫グロブリン融合タンパク質。
【請求項２７】
ＸＣがＰまたはＫである、請求項２４乃至２６のいずれかに記載のインスリン免疫グロブリン融合タンパク質。
【請求項２８】
ＸＤがＨまたはＴである、請求項２４乃至２７のいずれかに記載のインスリン免疫グロブリン融合タンパク質。
【請求項２９】
結合ペプチドが、少なくとも５０％のグリシンアミノ酸を含むアミノ酸配列を含む、請求項２３乃至２８のいずれかに記載のインスリン免疫グロブリン融合タンパク質。
【請求項３０】
結合ペプチドが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５９（ＧＧＧＸ１Ｘ２）を含み、ここでＸ１およびＸ２が、自然発生または非自然発生のアミノ酸から独立して選択される、請求項２３乃至２８のいずれかに記載のインスリン免疫グロブリン融合タンパク質。
【請求項３１】
Ｘ１が、Ｐ、ＧまたはＳである、請求項３０に記載のインスリン免疫グロブリン融合タンパク質。
【請求項３２】
Ｘ２が、Ｒ、Ｓ、ＧまたはＫである、請求項３０または３１に記載のインスリン免疫グロブリン融合タンパク質。
【請求項３３】
Ｃがプロテアーゼ切断部位を含む、請求項２３乃至３２のいずれかに記載のインスリン免疫グロブリン融合タンパク質。
【請求項３４】
インスリン治療用ペプチドが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６１（ＧＩＶＥＱＣＣＴＳＩＣＳＬＹＱＬＥＮＹＣ）との２つ以下のアミノ酸差を有するアミノ酸配列を含むＡペプチドを含む、請求項１乃至２２のいずれかに記載のインスリン免疫グロブリン融合タンパク質。
【請求項３５】
インスリン治療用ペプチドが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５８（ＧＩＶＥＱＣＣＸＤＳＩＣＳＬＹＱＬＥＮＹＣＮ）を含むＡペプチドを含み、ＸＤが、自然発生または非自然発生のアミノ酸である、請求項１乃至２２のいずれかに記載のインスリン免疫グロブリン融合タンパク質。
【請求項３６】
ＸＤがＨおよびＴから選択される、請求項３５に記載のインスリン免疫グロブリン融合タンパク質。
【請求項３７】
Ａペプチドの１つ以上のシステインアミノ酸が、Ｂペプチドのシステインアミノ酸を有するジスルフィド結合に存在する、請求項３４乃至３６のいずれかに記載のインスリン免疫グロブリン融合タンパク質。
【請求項３８】
Ｂペプチドが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５７（ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＸＡＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＦＹＴＸＢＸＣＴ）を含み；ＸＡ、ＸＢ、およびＸＣが、自然発生または非自然発生のアミノ酸から独立して選択される、請求項３７に記載のインスリン免疫グロブリン融合タンパク質。
【請求項３９】
ＸＡがＤまたはＨである、請求項３８に記載のインスリン免疫グロブリン融合タンパク質。
【請求項４０】
ＸＢがＤまたはＰである、請求項３８または３９に記載のインスリン免疫グロブリン融合タンパク質。
【請求項４１】
ＸＣがＰまたはＫである、請求項３８乃至４０のいずれかに記載のインスリン免疫グロブリン融合タンパク質。
【請求項４２】
Ｂペプチドが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６０（ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＦＹＴ）との２つ以下のアミノ酸差を有するアミノ酸配列を含む、請求項３７に記載のインスリン免疫グロブリン融合タンパク質。
【請求項４３】
インスリン治療用ペプチドが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０９−１４０、１５７、１５８、１６０、および１６１から選択される配列との２つ以下のアミノ酸差を有するアミノ酸配列を含む、請求項１乃至２２のいずれかに記載のインスリン免疫グロブリン融合タンパク質。
【請求項４４】
インスリン治療用ペプチドが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０９−１４０、１５７、１５８、１６０、および１６１のいずれかに対して少なくとも８５％の配列相同性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１乃至２２のいずれかに記載のインスリン免疫グロブリン融合タンパク質。
【請求項４５】
インスリン免疫グロブリン融合タンパク質が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８、７９、８１−８５、８７−９２、９５−９８のいずれかとの５以下のアミノ酸差を有するアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のインスリン免疫グロブリン融合タンパク質。
【請求項４６】
インスリン免疫グロブリン融合タンパク質が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８、７９、８１−８５、８７−９２、９５−９８のいずれかに対して少なくとも７５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のインスリン免疫グロブリン融合タンパク質。
【請求項４７】
インスリン免疫グロブリン融合タンパク質が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８、７９、８１−８５、８７−９２、９５−９８のいずれかに対して少なくとも８５％の配列相同性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のインスリン免疫グロブリン融合タンパク質。
【請求項４８】
必要としている被験体の疾患または疾病を処置する方法であって、該方法は、請求項１−４７のいずれかの治療上有効な量のインスリン免疫グロブリン融合タンパク質を被験体に投与する工程を含む、方法。
【請求項４９】
追加の治療用ペプチドを被験体に投与する工程をさらに含む、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
追加の治療用ペプチドが、肝臓または肝実質細胞に対して追加の治療薬を標的とする部分を欠くインスリンまたはインスリン含有分子を含む、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
追加の治療薬が、インスリン免疫グロブリン融合タンパク質とともに組成物で投与される、請求項４９または５０に記載の方法。
【請求項５２】
追加の治療薬が、インスリン免疫グロブリン融合タンパク質とは別に組成物で投与される、請求項４９または５０に記載の方法。
【請求項５３】
追加の治療薬が、皮下、静脈内、筋肉内、注入、経皮、経口、または鼻の経路を介して投与される、請求項４９乃至５２のいずれかに記載の方法。
【請求項５４】
インスリン免疫グロブリン融合タンパク質が、皮下、静脈内、筋肉内、注入、経皮、経口、または鼻の経路を介して投与される、請求項４８乃至５３のいずれかに記載の方法。
【請求項５５】
疾患または疾病が糖尿病である、請求項４８乃至５４のいずれかに記載の方法。
【請求項５６】
式ＸＶＩＩの分子を含む組成物であって：
Ｉ−Ｌ−Ｇ（式ＸＶＩＩ）
式中：
Ｉは、式Ｂ−Ａ、Ａ−Ｂ、Ｂ−Ｃ−Ａ、またはＡ−Ｃ−Ｂを有し；ここで、ＢはインスリンＢ鎖を含み；ＡはインスリンＡ鎖を含み；存在する場合、Ｃは、ＢおよびＡを結合するコネクターを含み；およびＢ−Ａ、Ａ−Ｂ、またはＢ−ＡおよびＡ−Ｂの両方は、部分またはジスルフィド結合によって結合され；
Ｌはリンカーを含み；および
Ｇは、免疫グロブリン、免疫グロブリンフラグメント、ペプチド、または肝実質細胞によって発現されたか又は提示された抗原に結合するための特異性を有する他のリガンドを含む、組成物。
【請求項５７】
Ｉが式Ｂ−ＡまたはＡ−Ｂを有し、Ｂ−ＡまたはＡ−Ｂがジスルフィド結合によって結合される、請求項５６に記載の組成物。
【請求項５８】
Ｉが式Ｂ−Ｃ−ＡまたはＡ−Ｃ−Ｂを有し、コネクターが結合ペプチドである、請求項５６に記載の組成物。
【請求項５９】
結合ペプチドが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５９（ＧＧＧＸ１Ｘ２）を含み、ここでＸ１およびＸ２が、自然発生または非自然発生のアミノ酸から独立して選択される、請求項５８に記載の組成物。
【請求項６０】
Ｘ１が、Ｐ、ＧまたはＳである、請求項５９に記載の組成物。
【請求項６１】
Ｘ２が、Ｒ、Ｓ、ＧまたはＫである、請求項５９または６０に記載の組成物。
【請求項６２】
Ｃがプロテアーゼ切断部位を含む、請求項５６乃至６１のいずれかに記載の組成物。
【請求項６３】
インスリンＢ鎖が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５７（ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＸＡＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＦＹＴＸＢＸＣＴ）の配列を含み；ＸＡ、ＸＢ、およびＸＣが、自然発生または非自然発生のアミノ酸から独立して選択される、請求項５６乃至６２のいずれかに記載の組成物。
【請求項６４】
ＸＡがＤまたはＨである、請求項６３に記載の組成物。
【請求項６５】
ＸＢがＤまたはＰである、請求項６３または６４に記載の組成物。
【請求項６６】
ＸＣがＰまたはＫである、請求項６３乃至６５のいずれかに記載の組成物。
【請求項６７】
インスリンＢ鎖が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６０（ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＦＹＴ）との１、２、３または４以下のアミノ酸差を有するアミノ酸配列を含む、請求項５６乃至６２のいずれかに記載の組成物。
【請求項６８】
インスリンＢ鎖が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０９−１４０、１５７、１６０のいずれか１つにおけるインスリンＢ鎖に対して少なくとも約８５％同一である配列を含む、請求項５６乃至６２のいずれかに記載の組成物。
【請求項６９】
インスリンＢ鎖が、ヒトインスリンＢ鎖、ブタインスリンＢ鎖およびウシインスリンＢ鎖から選択される、請求項５６乃至６２のいずれかに記載の組成物。
【請求項７０】
インスリンＡ鎖が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５８（ＧＩＶＥＱＣＣＸＤＳＩＣＳＬＹＱＬＥＮＹＣＮ）の配列を含み、ＸＤが、自然発生または非自然発生のアミノ酸である、請求項５６乃至６９のいずれかに記載の組成物。
【請求項７１】
ＸＤがＨおよびＴから選択される、請求項７０に記載の組成物。
【請求項７２】
インスリンＡ鎖が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６１（ＧＩＶＥＱＣＣＴＳＩＣＳＬＹＱＬＥＮＹＣ）との１、２、３または４以下のアミノ酸差を有するアミノ酸配列を含む、請求項５６乃至６９のいずれかに記載の組成物。
【請求項７３】
インスリンＡ鎖が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０９−１４０、１５８、１６１のいずれか１つにおけるインスリンＡ鎖に対して少なくとも約８５％同一である配列を含む、請求項５６乃至６９のいずれかに記載の組成物。
【請求項７４】
インスリンＡ鎖が、ヒトインスリンＡ鎖、ブタインスリンＡ鎖およびウシインスリンＡ鎖から選択される、請求項５６乃至６９のいずれかに記載の組成物。
【請求項７５】
リンカーがリンカーペプチドを含む、請求項５６乃至７４のいずれかに記載の組成物。
【請求項７６】
リンカーペプチドが、（ａ）少なくとも５０％のグリシン、セリン、またはグリシンとセリンのアミノ酸を有するアミノ酸配列；および（ｂ）少なくとも５０％のグリシン、アラニン、またはグリシンとアラニンのアミノ酸を有するアミノ酸配列、から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項７５に記載の組成物。
【請求項７７】
抗原がＡＳＧＰＲである、請求項５６乃至７６のいずれかに記載の組成物。
【請求項７８】
Ｇが、
（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５を含む重鎖可変領域配列：
（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６を含む重鎖可変領域配列：
（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５５を含む重鎖可変領域配列：
（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４７を含む重鎖可変領域配列：
（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８を含む軽鎖可変領域配列：
（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９を含む軽鎖可変領域配列：
（ｇ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５０を含む軽鎖可変領域配列：
（ｈ）（ａ）、（ｂ）および（ｄ）の組み合わせ；
（ｉ）（ａ）、（ｃ）および（ｄ）の組み合わせ；
（ｊ）（ｅ）、（ｆ）および（ｇ）の組み合わせ；
（ｋ）（ｈ）および（ｊ）の組み合わせ；または
（ｌ）（ｉ）および（ｊ）の組み合わせ、を含む免疫グロブリンまたは免疫グロブリンフラグメントを含む、請求項５６乃至７７のいずれかに記載の組成物。
【請求項７９】
Ｇが、２つ以下のアミノ酸だけＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９、３４、３６−４０および４３から選択される配列とは異なる配列を含む免疫グロブリンまたは免疫グロブリンフラグメントを含む、請求項５６乃至７７のいずれかに記載の組成物。
【請求項８０】
Ｇが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９、３４、３６−４０および４３から選択される配列に対して少なくとも約８５％相同性である配列を含む免疫グロブリンまたは免疫グロブリンフラグメントを含む、請求項５６乃至７７のいずれかに記載の組成物。
【請求項８１】
Ｇが、２つ以下のアミノ酸だけＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０、３３、３５、４１、４２、および４４から選択される配列とは異なる配列を含む免疫グロブリンまたは免疫グロブリンフラグメントを含む、請求項５６乃至７７のいずれかに記載の組成物。
【請求項８２】
Ｇが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０、３３、３５、４１、４２、および４４から選択される配列に対して少なくとも約８５％相同性である配列を含む免疫グロブリンまたは免疫グロブリンフラグメントを含む、請求項５６乃至７７のいずれかに記載の組成物。
【請求項８３】
Ｇが、ＣＨ１ドメインを含む免疫グロブリンまたは免疫グロブリンフラグメントを含む、請求項５６乃至７７のいずれかに記載の組成物。
【請求項８４】
Ｇが、ヒト化された免疫グロブリンまたはそのフラグメントを含む、請求項５６乃至７７のいずれかに記載の組成物。
【請求項８５】
Ｇが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６２を有するＡＳＧＰＲのエピトープの１つ以上のアミノ酸に結合し、１つ以上のアミノ酸が、Ｒ１０、Ｇ１１、Ｆ１９、Ｇ３５、Ｎ３６、Ｑ４７、Ｓ５６、Ｌ８３、Ｗ１３４、Ｅ１３５、Ｋ１３８、Ｖ１４０、Ｈ１４２、およびＫ１７３から選択される、請求項５６乃至７７のいずれかに記載の組成物。
【請求項８６】
必要としている被験体の疾患または疾病を処置する方法であって、該方法は、請求項５６乃至８５のいずれかの治療上有効な量の組成物を被験体に投与する工程を含む、方法。
【請求項８７】
追加の治療用ペプチドを被験体に投与する工程をさらに含む、請求項８６に記載の方法。
【請求項８８】
追加の治療用ペプチドが、肝臓または肝実質細胞に対して追加の治療薬を標的とする部分を欠くインスリンまたはインスリン含有分子を含む、請求項８７に記載の方法。
【請求項８９】
追加の治療薬が、インスリン免疫グロブリン融合タンパク質とともに組成物で投与される、請求項８７または８８に記載の方法。
【請求項９０】
追加の治療薬が、インスリン免疫グロブリン融合タンパク質とは別に組成物で投与される、請求項８７または８８に記載の方法。
【請求項９１】
追加の治療薬が、皮下、静脈内、筋肉内、注入、経皮、経口、または鼻の経路を介して投与される、請求項８７乃至９０のいずれかに記載の方法。
【請求項９２】
インスリン免疫グロブリン融合タンパク質が、皮下、静脈内、筋肉内、注入、経皮、経口、または鼻の経路を介して投与される、請求項８６乃至９１のいずれかに記載の方法。
【請求項９３】
疾患または疾病が糖尿病である、請求項８６乃至９２のいずれかに記載の方法。
【請求項９４】
アシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰＲ）に対する特異的結合のための免疫グロブリンであって、
（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５を含む重鎖可変領域配列：
（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６を含む重鎖可変領域配列：
（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５５を含む重鎖可変領域配列：
（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４７を含む重鎖可変領域配列：
（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８を含む軽鎖可変領域配列：
（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９を含む軽鎖可変領域配列：
（ｇ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５０を含む軽鎖可変領域配列：
（ｈ）（ａ）、（ｂ）および（ｄ）の組み合わせ；
（ｉ）（ａ）、（ｃ）および（ｄ）の組み合わせ；
（ｊ）（ｅ）、（ｆ）および（ｇ）の組み合わせ；
（ｋ）（ｈ）および（ｊ）の組み合わせ；または
（ｌ）（ｉ）および（ｊ）の組み合わせを含む、免疫グロブリン。
【請求項９５】
２つ以下のアミノ酸だけＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９、３４、３６−４０および４３から選択される配列とは異なる配列を含む、請求項９４に記載の免疫グロブリン。
【請求項９６】
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９、３４、３６−４０および４３から選択される配列に対して少なくとも約８５％相同性である配列を含む、請求項９４に記載の免疫グロブリン。
【請求項９７】
ＣＨ１ドメインを含む、請求項９４乃至９６のいずれかに記載の免疫グロブリン。
【請求項９８】
ＣＨ１ドメインが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０に対して少なくとも約８５％相同性である配列を含む、請求項９７に記載の免疫グロブリン。
【請求項９９】
２つ以下のアミノ酸だけＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０、３３、３５、４１、４２、および４４から選択される配列とは異なる配列を含む、請求項９４に記載の免疫グロブリン。
【請求項１００】
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０、３３、３５、４１、４２、および４４から選択される配列に対して少なくとも約８５％相同性である配列を含む、請求項９４に記載の免疫グロブリン。
【請求項１０１】
免疫グロブリンがヒト化される、請求項９４乃至１００のいずれかに記載の免疫グロブリン。
【請求項１０２】
ＡＳＧＰＲに対する結合のための請求項９４乃至１０１のいずれかの免疫グロブリンと競合する免疫グロブリン。
【請求項１０３】
必要としている被験体の肝実質細胞に対して分子を標的とする方法であって、該方法は、分子および請求項９４乃至１０３のいずれかの免疫グロブリンを含む組成物を被験体に投与する工程を含む、方法。
【請求項１０４】
分子が、免疫グロブリンに融合されるか又は結合される、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１０５】
分子が、ヒトインスリンＢ鎖、ヒトインスリンＡ鎖、またはその誘導体または組み合わせを含む、請求項１０３または１０４に記載の方法。
【請求項１０６】
被験体が糖尿病を有する、請求項１０３乃至１０５のいずれかに記載の方法。
【請求項１０７】
追加の治療用ペプチドを被験体に投与する工程をさらに含む、請求項１０３乃至１０６のいずれかに記載の方法。
【請求項１０８】
追加の治療用ペプチドが、肝臓または肝実質細胞に対して追加の治療薬を標的とする部分を欠くインスリンまたはインスリン含有分子を含む、請求項１０７に記載の方法。
【請求項１０９】
必要としている被験体のグルコース代謝に関連付けられた疾患または疾病を処置する方法であって、該方法は、インスリン治療用ペプチドと抗原結合ドメインを含む免疫グロブリン領域とを含む有効な量のインスリン免疫グロブリン融合タンパク質を投与する工程を含み、抗原結合ドメインが、肝実質細胞によって発現されたか又は提示された抗原を標的とする、方法。
【請求項１１０】
抗原がＡＳＧＰＲである、請求項１０９に記載の方法。
【請求項１１１】
追加の治療用ペプチドを被験体に投与する工程をさらに含む、請求項１０９または１１０に記載の方法。
【請求項１１２】
追加の治療用ペプチドが、インスリンまたはインスリン含有分子を含む、請求項１１１に記載の方法。
【請求項１１３】
インスリンまたはインスリン含有分子が、肝臓または肝実質細胞に対して追加の治療薬を標的とする部分を欠く、請求項１１２に記載の方法。
【請求項１１４】
追加の治療薬が、インスリン免疫グロブリン融合タンパク質とともに組成物で投与される、請求項１１１乃至１１３のいずれかに記載の方法。
【請求項１１５】
追加の治療薬が、インスリン免疫グロブリン融合タンパク質とは別に組成物で投与される、請求項１１１乃至１１３のいずれかに記載の方法。
【請求項１１６】
追加の治療薬が、皮下、静脈内、筋肉内、注入、経皮、経口、または鼻の経路を介して投与される、請求項１１１乃至１１５のいずれかに記載の方法。
【請求項１１７】
インスリン免疫グロブリン融合タンパク質が、皮下、静脈内、筋肉内、注入、経皮、経口、または鼻の経路を介して投与される、請求項１１０乃至１１６のいずれかに記載の方法。
【請求項１１８】
疾患または疾病が糖尿病である、請求項１０９乃至１１７のいずれかに記載の方法。
【請求項１１９】
インスリン治療用ペプチドが、式Ｂ−Ａ、Ａ−Ｂ、Ｂ−Ｃ−Ａ、またはＡ−Ｃ−Ｂを有し；ここで、ＢがインスリンＢ鎖を含み；ＡがインスリンＡ鎖を含み；存在する場合、Ｃが、ＢおよびＡを結合するコネクターを含み；およびＢ−Ａ、Ａ−Ｂ、またはＢ−ＡおよびＡ−Ｂの両方が、部分またはジスルフィド結合によって結合される、請求項１０９乃至１１８のいずれかに記載の方法。
【請求項１２０】
Ｂ−ＡまたはＡ−Ｂが、ジスルフィド結合によって結合される、請求項１１９に記載の方法。
【請求項１２１】
コネクターが結合ペプチドである、請求項１１９または１２０に記載の方法。
【請求項１２２】
Ｃがプロテアーゼ切断部位を含む、請求項１１９乃至１２１のいずれかに記載の方法。
【請求項１２３】
インスリンＢ鎖が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５７（ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＸＡＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＦＹＴＸＢＸＣＴ）の配列を含み；ＸＡ、ＸＢ、およびＸＣが、自然発生または非自然発生のアミノ酸から独立して選択される、請求項１１９乃至１２２のいずれかに記載の方法。
【請求項１２４】
ＸＡがＤまたはＨである、請求項１２３に記載の方法。
【請求項１２５】
ＸＢがＤまたはＰである、請求項１２３または１２４に記載の方法。
【請求項１２６】
ＸＣがＰまたはＫである、請求項１２３乃至１２５のいずれかに記載の方法。
【請求項１２７】
インスリンＢ鎖が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６０（ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＦＹＴ）との１、２、３または４以下のアミノ酸差を有するアミノ酸配列を含む、請求項１１９乃至１２２のいずれかに記載の方法。
【請求項１２８】
インスリンＢ鎖が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０９−１４０のいずれか１つにおけるインスリンＢ鎖に対して少なくとも約８５％同一である配列を含む、請求項１１９乃至１２２のいずれかに記載の方法。
【請求項１２９】
インスリンＢ鎖が、ヒトインスリンＢ鎖、ブタインスリンＢ鎖およびウシインスリンＢ鎖から選択される、請求項１１９乃至１２２のいずれかに記載の方法。
【請求項１３０】
インスリンＡ鎖が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５８（ＧＩＶＥＱＣＣＸＤＳＩＣＳＬＹＱＬＥＮＹＣＮ）の配列を含み、ＸＤが、自然発生または非自然発生のアミノ酸である、請求項１１９乃至１２９のいずれかに記載の方法。
【請求項１３１】
ＸＤがＨおよびＴから選択される、請求項１３０に記載の方法。
【請求項１３２】
インスリンＡ鎖が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６１（ＧＩＶＥＱＣＣＴＳＩＣＳＬＹＱＬＥＮＹＣ）との１、２、３または４以下のアミノ酸差を有するアミノ酸配列を含む、請求項１１９乃至１２９のいずれかに記載の方法。
【請求項１３３】
インスリンＡ鎖が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０９−１４０のいずれか１つにおけるインスリンＡ鎖に対して少なくとも約８５％同一である配列を含む、請求項１１９乃至１２９のいずれかに記載の方法。
【請求項１３４】
インスリンＡ鎖が、ヒトインスリンＡ鎖、ブタインスリンＡ鎖およびウシインスリンＡ鎖から選択される、請求項１１９乃至１２９のいずれかに記載の方法。
【請求項１３５】
免疫グロブリン領域が、
（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５を含む重鎖可変領域配列：
（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６を含む重鎖可変領域配列：
（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５５を含む重鎖可変領域配列：
（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４７を含む重鎖可変領域配列：
（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８を含む軽鎖可変領域配列：
（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９を含む軽鎖可変領域配列：
（ｇ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５０を含む軽鎖可変領域配列：
（ｈ）（ａ）、（ｂ）および（ｄ）の組み合わせ；
（ｉ）（ａ）、（ｃ）および（ｄ）の組み合わせ；
（ｊ）（ｅ）、（ｆ）および（ｇ）の組み合わせ；
（ｋ）（ｈ）および（ｊ）の組み合わせ；または
（ｌ）（ｉ）および（ｊ）の組み合わせを含む、請求項１０９乃至１３４のいずれかに記載の方法。
【請求項１３６】
免疫グロブリン領域が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９、３０および３３−４４から選択される配列に対して少なくとも約８５％相同性である配列を含む、請求項１０９乃至１３４のいずれかに記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
＜優先権＞
本出願は、２０１５年９月４日に出願の、米国仮特許出願第６２／２１４，６０５号の利益を主張し、その全体が引用によって本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
１型糖尿病（Ｔ１Ｄ）患者における現在のインスリン療法の薬理学的制限は、肝臓が末梢組織よりもインスリンの高い濃度にさらされることを保証する、門脈体循環性のインスリン濃度勾配が、Ｔ１Ｄ患者中に存在しないということである。インスリンの皮下注射は、結果として末梢高インスリン血症につながり、これは、アテローム性動脈硬化症、癌、低血糖症、および他の有害な代謝作用に関連付けられている。対照的に、Ｔ１Ｄ患者における門脈内のインスリン注入または十分な肝臓のインスリン処置は、インスリンの用量がより少ない必要があり、血漿グルコースおよびヘモグロビンのＡ１ｃレベルのより急速且つ有意な低下の他に、循環するコルチゾール、成長ホルモン、グルカゴン、および乳酸塩、ピルビン酸塩、およびアラニンなどの三炭素前駆体の正常化に関連付けられている。
【発明の概要】
【０００３】
本明細書には、インスリン組成物およびそれを使用する方法が開示され、該方法は、肝臓用の（ｌｉｖｅｒ−ｂｉａｓｅｄ）組織分布プロフィールで現在のインスリン療法の制限に取り組み、それにより、インスリンのグルコース低下効果を肝臓に集中させる。１つのそのような組成物は、肝細胞の抗原に特異的な抗原結合ドメインを有する免疫グロブリンに融合されたインスリン分子を含むインスリン融合タンパク質である。例えば、抗原結合ドメインは、肝実質細胞上で選択的に発現された分子である、アシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰＲ）に特異的である。融合タンパク質の抗ＡＳＧＰＲ部分は、インスリン分子がインスリン受容体と相互作用することを可能にするために、内部移行を欠くように又はその率が減少するように設計され得る。多くの場合では、インスリン融合タンパク質は、融合した免疫グロブリン領域なしで投与されたインスリン分子よりも有効性が改善された。したがって、インスリン融合タンパク質の投与要件は、現在のインスリン療法の要件より少ないかもしれない。さらに、幾つかの場合では、抗ＡＳＧＰＲドメインを含む融合タンパク質のインスリン分子は、ＡＳＧＰＲ（対照）に対する結合特異性を欠く抗ＡＳＧＰＲドメインを含む融合タンパク質のインスリン分子、またはインスリン分子単独の少なくとも２倍肝臓に分配され得る。
【０００４】
本開示の一態様において、本明細書には、インスリン治療用ペプチドと抗原結合ドメインの１つ以上の部分を含む第１の免疫グロブリン領域とを含むインスリン免疫グロブリン融合タンパク質が提供され、ここで抗原結合ドメインには肝細胞の抗原に対する特異性がある。幾つかの実施形態では、抗原は肝実質細胞によって発現される。幾つかの実施形態では、抗原はアシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰＲ）である。幾つかの実施形態では、抗原結合ドメインは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６２を有するＡＳＧＰＲのエピトープの１つ以上のアミノ酸に結合し、ここで１つ以上のアミノ酸は、Ｒ１０、Ｇ１１、Ｆ１９、Ｇ３５、Ｎ３６、Ｑ４７、Ｓ５６、Ｌ８３、Ｗ１３４、Ｅ１３５、Ｋ１３８、Ｖ１４０、Ｈ１４２、およびＫ１７３から選択される。幾つかの実施形態では、エピトープの１つ以上のアミノ酸は、Ｗ１３４、Ｅ１３５、Ｋ１３８、Ｖ１４０、Ｈ１４２、およびＫ１７３の任意の組み合わせを含む。
【０００５】
幾つかの実施形態では、第１の免疫グロブリン領域は、２つ以下のアミノ酸だけＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５−４７および５５の１つ以上とは異なるアミノ酸配列を有するＣＤＲを含む。幾つかの実施形態では、第１の免疫グロブリン領域は、２つ以下のアミノ酸だけＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５とは異なるアミノ酸配列を有する第１のＣＤＲを含む。幾つかの実施形態では、第１の免疫グロブリン領域は、２つ以下のアミノ酸だけＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６とは異なるアミノ酸配列を有する第２のＣＤＲを含む。幾つかの実施形態では、第１の免疫グロブリン領域は、２つ以下のアミノ酸だけＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５５とは異なるアミノ酸配列を有する第２のＣＤＲを含む。幾つかの実施形態では、第１の免疫グロブリン領域は、２つ以下のアミノ酸だけＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４７とは異なるアミノ酸配列を有する第３のＣＤＲを含む。幾つかの実施形態では、第１の免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９および４３から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約７５％同一であるアミノ酸配列を有する可変領域を含む。幾つかの実施形態では、第１の免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９および４３から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約８５％同一であるアミノ酸配列を有する可変領域を含む。幾つかの実施形態では、第１の免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９、３４、３６−４０および４３から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約７５％同一であるアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、第１の免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９、３４、３６−４０および４３から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約８５％相同性であるアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、インスリン免疫グロブリン融合タンパク質はさらに、第２の免疫グロブリン領域を含む。幾つかの実施形態では、第２の免疫グロブリン領域は、抗原結合ドメインの１つ以上の部分を含む。幾つかの実施形態では、第２の免疫グロブリン領域は、２つ以下のアミノ酸だけＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８−５０の１つ以上とは異なるアミノ酸配列を有するＣＤＲを含む。幾つかの実施形態では、第２の免疫グロブリン領域は、２つ以下のアミノ酸だけＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８とは異なるアミノ酸配列を有する第１のＣＤＲを含む。幾つかの実施形態では、第２の免疫グロブリン領域は、２つ以下のアミノ酸だけＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９とは異なるアミノ酸配列を有する第２のＣＤＲを含む。幾つかの実施形態では、第２の免疫グロブリン領域は、２つ以下のアミノ酸だけＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５０とは異なるアミノ酸配列を有する第３のＣＤＲを含む。幾つかの実施形態では、第２の免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１および４４から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約７５％同一であるアミノ酸配列を有する可変領域を含む。幾つかの実施形態では、第２の免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１および４４から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約８５％同一であるアミノ酸配列を有する可変領域を含む。幾つかの実施形態では、第２の免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０、３３、３５、４１、４２、および４４から選択されるアミノ酸配列に���して少なくとも約７５％同一であるアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、第２の免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０、３３、３５、４１、４２、および４４から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約８５％相同性であるアミノ酸配列を含む。
【０００６】
幾つかの実施形態では、第１の免疫グロブリン領域は、２つ以下のアミノ酸だけＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８−５０の１つ以上とは異なるアミノ酸配列を有するＣＤＲを含む。幾つかの実施形態では、第１の免疫グロブリン領域は、２つ以下のアミノ酸だけＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８とは異なるアミノ酸配列を有する第１のＣＤＲを含む。幾つかの実施形態では、第１の免疫グロブリン領域は、２つ以下のアミノ酸だけＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９とは異なるアミノ酸配列を有する第２のＣＤＲを含む。幾つかの実施形態では、第１の免疫グロブリン領域は、２つ以下のアミノ酸だけＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５０とは異なるアミノ酸配列を有する第３のＣＤＲを含む。幾つかの実施形態では、第１の免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１および４４から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約７５％同一であるアミノ酸配列を有する可変領域を含む。幾つかの実施形態では、第１の免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１および４４から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約８５％同一であるアミノ酸配列を有する可変領域を含む。幾つかの実施形態では、第１の免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０、３３、３５、４１、４２、および４４から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約７５％同一であるアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、第１の免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０、３３、３５、４１、４２、および４４から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約８５％相同性であるアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、インスリン免疫グロブリン融合タンパク質はさらに、第２の免疫グロブリン領域を含む。幾つかの実施形態では、第２の免疫グロブリン領域は、抗原結合ドメインの１つ以上の部分を含む。幾つかの実施形態では、第２の免疫グロブリン領域は、２つ以下のアミノ酸だけＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５−４７および５５の１つ以上とは異なるアミノ酸配列を有するＣＤＲを含む。幾つかの実施形態では、第２の免疫グロブリン領域は、２つ以下のアミノ酸だけＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５とは異なるアミノ酸配列を有する第１のＣＤＲを含む。幾つかの実施形態では、第２の免疫グロブリン領域は、２つ以下のアミノ酸だけＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６とは異なるアミノ酸配列を有する第２のＣＤＲを含む。幾つかの実施形態では、第２の免疫グロブリン領域は、２つ以下のアミノ酸だけＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５５とは異なるアミノ酸配列を有する第２のＣＤＲを含む。幾つかの実施形態では、第２の免疫グロブリン領域は、２つ以下のアミノ酸だけＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４７とは異なるアミノ酸配列を有する第３のＣＤＲを含む。幾つかの実施形態では、第２の免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９および４３から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約７５％同一であるアミノ酸配列を有する可変領域を含む。幾つかの実施形態では、第２の免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９および４３から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約８５％相同性であるアミノ酸配列を有する可変領域を含む。幾つかの実施形態では、第２の免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９、３４、３６−４０および４３から選択されるアミ���酸配列に対して少なくとも約７５％同一であるアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、第２の免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９、３４、３６−４０および４３から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約８５％相同性であるアミノ酸配列を含む。
【０００７】
幾つかの実施形態では、インスリン治療用ペプチドは、第１の免疫グロブリン領域のアミノ末端に結合される。幾つかの実施形態では、第１の免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５５（ＱＶＱＬＸ１ＱＸ２ＧＡＥ）を含み、ここでＸ１およびＸ２は、自然発生または非自然発生のアミノ酸から独立して選択される。幾つかの実施形態では、Ｘ１は、ＱまたはＶである。幾つかの実施形態では、Ｘ２は、ＰまたはＳである。幾つかの実施形態では、Ｘ１はＶであり、Ｘ２はＳである。幾つかの実施形態では、第１の免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５６（ＥＸ１ＶＬＴＱＳＰＸ２Ｔ）を含み、ここでＸ１およびＸ２は、自然発生または非自然発生のアミノ酸から独立して選択される。幾つかの実施形態では、Ｘ１は、ＴまたはＩである。幾つかの実施形態では、Ｘ２は、ＴまたはＧである。幾つかの実施形態では、Ｘ１はＩであり、Ｘ２はＧである。
【０００８】
幾つかの実施形態では、インスリン治療用ペプチドは、リンカーペプチドによって第１の免疫グロブリン領域に結合される。幾つかの実施形態では、リンカーペプチドは、３〜５０のアミノ酸を含み、リンカーペプチドは、（ａ）少なくとも５０％のグリシン、セリン、またはグリシンとセリンのアミノ酸を有する、アミノ酸配列；および（ｂ）少なくとも５０％のグリシン、アラニン、またはグリシンとアラニンのアミノ酸を有する、アミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、リンカーペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４１−１４７のいずれか１つに対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、リンカーはプロテアーゼ切断部位を含む。
【０００９】
幾つかの実施形態では、インスリン治療用ペプチドは、式Ｂ−Ｃ−ＡまたはＡ−Ｃ−Ｂを有する単一のアミノ酸鎖を含み、ここで、Ｂは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５７（ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＸＡＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＦＹＴＸＢＸＣＴ）を含み；Ａは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５８（ＧＩＶＥＱＣＣＸＤＳＩＣＳＬＹＱＬＥＮＹＣＮ）を含み；およびＣは、３〜５０のアミノ酸を有する結合ペプチドを含み；ここでＸＡ、ＸＢ、ＸＣおよびＸＤは、自然発生または非自然発生のアミノ酸から独立して選択される。幾つかの実施形態では、ＸＡは、ＤまたはＨである。幾つかの実施形態では、ＸＢは、ＤまたはＰである。幾つかの実施形態では、ＸＣは、ＰまたはＫである。幾つかの実施形態では、ＸＤは、ＨまたはＴである。幾つかの実施形態では、結合ペプチドは、少なくとも５０％のグリシンアミノ酸を含むアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、結合ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５９（ＧＧＧＸ１Ｘ２）を含み、ここでＸ１およびＸ２は、自然発生または非自然発生のアミノ酸から独立して選択される。幾つかの実施形態では、Ｘ１は、Ｐ、ＧまたはＳである。幾つかの実施形態では、Ｘ２は、Ｒ、Ｓ、ＧまたはＫである。幾つかの実施形態では、Ｃはプロテアーゼ切断部位を含む。幾つかの実施形態では、インスリン治療用ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１１、１１３、１１６、１１８、１１９−１４０から選択されるアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、インスリン治療用ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１１、１１３、１１６、１１８、１１９−１４０のいずれか１つに対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。
【００１０】
幾つかの実施形態では、インスリン治療用ペプチドは、式Ｂ−Ｃ−ＡまたはＡ−Ｃ−Ｂを有する単一のアミノ酸鎖を含み；ここで、Ｂは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６０（ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＦＹＴ）との２つ以下のアミノ酸差を有するアミノ酸配列を含み；Ａは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６１（ＧＩＶＥＱＣＣＴＳＩＣＳＬＹＱＬＥＮＹＣ）との２つ以下のアミノ酸差を有するアミノ酸配列を含み；およびＣは、３〜５０のアミノ酸を有する結合ペプチドを含む。幾つかの実施形態では、Ｂは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６０を含む。幾つかの実施形態では、Ａは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６１を含む。幾つかの実施形態では、結合ペプチドは、少なくとも５０％のグリシンアミノ酸を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、結合ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５９（ＧＧＧＸ１Ｘ２）を含み、ここでＸ１およびＸ２は、自然発生または非自然発生のアミノ酸から独立して選択される。幾つかの実施形態では、Ｘ１は、Ｐ、ＧまたはＳである。幾つかの実施形態では、Ｘ２は、Ｒ、Ｓ、ＧまたはＫである。幾つかの実施形態では、Ｃはプロテアーゼ切断部位を含む。
【００１１】
幾つかの実施形態では、インスリン治療用ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５８（ＧＩＶＥＱＣＣＸＤＳＩＣＳＬＹＱＬＥＮＹＣＮ）を含むＡペプチドを含み、ＸＤは、自然発生または非自然発生のアミノ酸である。幾つかの実施形態では、ＸＤは、ＨおよびＴから選択される。幾つかの実施形態では、Ａペプチドの１つ以上のシステインアミノ酸は、Ｂペプチドのシステインアミノ酸とのジスルフィド結合に存在する。幾つかの実施形態では、Ｂペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５７（ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＸＡＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＦＹＴＸＢＸＣＴ）を含み；ＸＡ、ＸＢ、およびＸＣは、自然発生または非自然発生のアミノ酸から独立して選択される。幾つかの実施形態では、ＸＡは、ＤまたはＨである。幾つかの実施形態では、ＸＢは、ＤまたはＰである。幾つかの実施形態では、ＸＣは、ＰまたはＫである。幾つかの実施形態では、Ｂペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６０（ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＦＹＴ）との２つ以下のアミノ酸差を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、Ｂは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６０を含む。
【００１２】
幾つかの実施形態では、インスリン治療用ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６１（ＧＩＶＥＱＣＣＴＳＩＣＳＬＹＱＬＥＮＹＣ）との２つ以下のアミノ酸差を有するアミノ酸配列を含むＡペプチドを含む。幾つかの実施形態では、Ａペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６１を含む。幾つかの実施形態では、Ａペプチドの１つ以上のシステインアミノ酸は、Ｂペプチドのシステインアミノ酸を有するジスルフィド結合に存在する。幾つかの実施形態では、Ｂペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５７（ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＸＡＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＦＹＴＸＢＸＣＴ）を含み；ＸＡ、ＸＢ、およびＸＣは、自然発生または非自然発生のアミノ酸から独立して選択される。幾つかの実施形態では、ＸＡは、ＤまたはＨである。幾つかの実施形態では、ＸＢは、ＤまたはＰである。幾つかの実施形態では、ＸＣは、ＰまたはＫである。幾つかの実施形態では、Ｂペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６０（ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＦＹＴ）との２つ以下のアミノ酸差を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、Ｂは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６０を含む。
【００１３】
幾つかの実施形態では、インスリン治療用ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０９−１４０のいずれかとの２つ以下のアミノ酸差を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、インスリン治療用ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０９−１４０のいずれかに対して少なくとも７５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、インスリン治療用ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０９−１４０のいずれかに対して少なくとも８５％の配列相同性を有するアミノ酸配列を含む。
【００１４】
幾つかの実施形態では、インスリン免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８、７９、８１−８５、８７−９２、９５−９８のいずれかとの５以下のアミノ酸差を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、インスリン免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８、７９、８１−８５、８７−９２、９５−９８のいずれかに対して少なくとも７５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、インスリン免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８、７９、８１−８５、８７−９２、９５−９８のいずれかに対して少なくとも８５％の配列相同性を有するアミノ酸配列を含む。
【００１５】
さらに本明細書には、必要としている被験体の疾患または疾病を処置する方法が提供され、該方法は、治療上有効な量のインスリン免疫グロブリン融合タンパク質を被験体に投与する工程を含む。幾つかの実施形態では、該方法はさらに、追加の治療薬を被験体に投与する工程を含む。幾つかの実施形態では、追加の治療薬は、追加の治療薬を肝臓及び／又は肝実質細胞に対する標的とする部分を欠くインスリンまたはインスリン含有分子である。幾つかの実施形態では、追加の治療薬は、インスリンＢペプチド、インスリンＡペプチド、インスリンＣペプチド、またはそれらの組み合わせを含む。幾つかの実施形態では、追加の治療薬は、２つ以下のアミノ酸だけＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３８−１４０、１５７および１５８から選択される配列とは異なるアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、追加の治療薬は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０９−１４０から選択されるアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、追加の治療薬は、インスリン免疫グロブリン融合タンパク質とともに組成物で投与される。幾つかの実施形態では、追加の治療薬は、インスリン免疫グロブリン融合タンパク質とは別に組成物で投与される。幾つかの実施形態では、インスリン免疫グロブリン融合タンパク質は、皮下、静脈内、筋肉内、注入（例えばポンプ）、経皮、経口、または鼻の経路を介して投与される。幾つかの実施形態では、追加の治療薬は、皮下、静脈内、筋肉内、注入（例えばポンプ）、経皮、経口、または鼻の経路を介して投与される。幾つかの実施形態では、疾患または疾病は、糖尿病を含む。幾つかの実施形態では、疾患または疾病は、肥満症を含む。
【００１６】
さらに本明細書には、インスリン免疫グロブリン融合タンパク質のアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む遺伝子構築物が提供される。さらに本明細書には、第１の遺伝子構築物を含む第１の発現ベクターが提供される。さらに本明細書には、第１の発現ベクターを含む哺乳動物の発現宿主が提供される。
【００１７】
本開示の別の態様において、本明細書には、式ＸＶＩＩ：の分子を含む組成物：Ｉ−Ｌ−Ｇ（式ＸＶＩＩ）が提供され、
式中：
Ｉは、式Ｂ−Ａ、Ａ−Ｂ、Ｂ−Ｃ−Ａ、またはＡ−Ｃ−Ｂを有し；ここでＢはインスリンＢ鎖を含み；ＡはインスリンＡ鎖を含み；存在する場合、Ｃは、ＢおよびＡを結合するコネクター（ｃｏｎｎｅｃｔｅｒ）を含み；およびＢ−Ａ、Ａ−Ｂ、またはＢ−ＡおよびＡ−Ｂの両方は、部分またはジスルフィド結合によって結合され；
Ｌはリンカーを含み；および
Ｇは、免疫グロブリン、免疫グロブリンフラグメント、ペプチド、または肝実質細胞によって発現されたか又は提示された抗原に結合するための特異性を有する他のリガンドを含む。
【００１８】
幾つかの実施形態では、Ｉは式Ｂ−ＡまたはＡ−Ｂを有し、Ｂ−ＡまたはＡ−Ｂはジスルフィド結合によって結合される。幾つかの実施形態では、Ｉは式Ｂ−ＡまたはＡ−Ｂを有し、Ｂ−ＡまたはＡ−Ｂは部分によって化学的に結合される。幾つかの実施形態では、Ｉは式Ｂ−Ｃ−ＡまたはＡ−Ｃ−Ｂを有し、コネクターは２〜５０のアミノ酸を含む結合ペプチドである。幾つかの実施形態では、結合ペプチドは、少なくとも５０％のグリシンアミノ酸を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、結合ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５９（ＧＧＧＸ１Ｘ２）を含み、ここでＸ１およびＸ２は、自然発生または非自然発生のアミノ酸から独立して選択される。幾つかの実施形態では、Ｘ１は、Ｐ、ＧまたはＳである。幾つかの実施形態では、Ｘ２は、Ｒ、Ｓ、ＧまたはＫである。幾つかの実施形態では、Ｃはプロテアーゼ切断部位を含む。幾つかの実施形態では、Ｉは式Ｂ−Ｃ−ＡまたはＡ−Ｃ−Ｂを有し、コネクターはＢおよびＡを化学的に結合するリンカーである。
【００１９】
幾つかの実施形態では、インスリンＢ鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５７（ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＸＡＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＦＹＴＸＢＸＣＴ）の配列を含み；ＸＡ、ＸＢ、およびＸＣは、自然発生または非自然発生のアミノ酸から独立して選択される。幾つかの実施形態では、ＸＡは、ＤまたはＨである。幾つかの実施形態では、ＸＢは、ＤまたはＰである。幾つかの実施形態では、ＸＣは、ＰまたはＫである。幾つかの実施形態では、インスリンＢ鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６０（ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＦＹＴ）との１、２、３または４以下のアミノ酸差を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、インスリンＢ鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６０を含む。幾つかの実施形態では、インスリンＢ鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０９−１４０のいずれか１つにおけるインスリンＢ鎖に対して少なくとも約７５％同一である配列を含む。幾つかの実施形態では、インスリンＢ鎖は、ヒトインスリンＢ鎖、ブタインスリンＢ鎖およびウシインスリンＢ鎖から選択される。幾つかの実施形態では、インスリンＡ鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５８（ＧＩＶＥＱＣＣＸＤＳＩＣＳＬＹＱＬＥＮＹＣＮ）の配列を含み、ＸＤは、自然発生または非自然発生のアミノ酸である。幾つかの実施形態では、ＸＤは、ＨおよびＴから選択される。
【００２０】
幾つかの実施形態では、インスリンＡ鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６１（ＧＩＶＥＱＣＣＴＳＩＣＳＬＹＱＬＥＮＹＣ）との１、２、３または４以下のアミノ酸差を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、インスリンＡ鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６１を含む。幾つかの実施形態では、インスリンＡ鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０９−１４０のいずれか１つにおけるインスリンＡ鎖に対して少なくとも約７５％同一である配列を含む。幾つかの実施形態では、インスリンＡ鎖は、ヒトインスリンＡ鎖、ブタインスリンＡ鎖およびウシインスリンＡ鎖から選択される。
【００２１】
幾つかの実施形態では、リンカーはリンカーペプチドを含む。幾つかの実施形態では、リンカーペプチドは３〜１００のアミノ酸を含む。幾つかの実施形態では、リンカーペプチドは、（ａ）少なくとも５０％のグリシン、セリン、またはグリシンとセリンのアミノ酸を有する、アミノ酸配列；および（ｂ）少なくとも５０％のグリシン、アラニン、またはグリシンとアラニンのアミノ酸を有する、アミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、リンカーペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４１−１４７のいずれか１つに対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、リンカーはプロテアーゼ切断部位を含む。
【００２２】
幾つかの実施形態では、抗原はＡＳＧＰＲである。幾つかの実施形態では、Ｇは、免疫グロブリンまたは免疫グロブリンフラグメントを含む。幾つかの実施形態では、免疫グロブリンまたは免疫グロブリンフラグメントは以下を含む：（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５を含む重鎖可変領域配列：（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６を含む重鎖可変領域配列：（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５５を含む重鎖可変領域配列：（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４７を含む重鎖可変領域配列：（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８を含む軽鎖可変領域配列：（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９を含む軽鎖可変領域配列：（ｇ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５０を含む軽鎖可変領域配列：（ｈ）（ａ）、（ｂ）および（ｄ）の組み合わせ；（ｉ）（ａ）、（ｃ）および（ｄ）の組み合わせ；（ｊ）（ｅ）、（ｆ）および（ｇ）の組み合わせ；（ｋ）（ｈ）および（ｊ）の組み合わせ；または（ｌ）（ｉ）および（ｊ）の組み合わせ。幾つかの実施形態では、免疫グロブリンまたは免疫グロブリンフラグメントは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５、４６および４７を含む重鎖可変領域配列を含む。幾つかの実施形態では、免疫グロブリンまたは免疫グロブリンフラグメントは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５、５５および４７を含む重鎖可変領域配列を含む。幾つかの実施形態では、免疫グロブリンまたは免疫グロブリンフラグメントは、２つ以下のアミノ酸だけＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９または４３とは異なる重鎖可変領域配列を含む。幾つかの実施形態では、免疫グロブリンまたは免疫グロブリンフラグメントは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９または４３に対して少なくとも約７５％同一である重鎖可変領域配列を含む。幾つかの実施形態では、免疫グロブリンまたは免疫グロブリンフラグメントは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９または４３に対して少なくとも約８５％同一である重鎖可変領域配列を含む。幾つかの実施形態では、免疫グロブリンまたは免疫グロブリンフラグメントは、２つ以下のアミノ酸だけＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９、３４、３６−４０および４３から選択される配列とは異なる配列を含む。幾つかの実施形態では、免疫グロブリンまたは免疫グロブリンフラグメントは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９、３４、３６−４０および４３から選択される配列に対して少なくとも約７５％同一である配列を含む。幾つかの実施形態では、免疫グロブリンまたは免疫グロブリンフラグメントは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９、３４、３６−４０および４３から選択される配列に対して少なくとも約８５％相同性である配列を含む。
【００２３】
幾つかの実施形態では、免疫グロブリンまたは免疫グロブリンフラグメントは、ＣＨ１ドメインを含む。幾つかの実施形態では、ＣＨ１ドメインは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０に対して少なくとも約８５％相同性である配列を含む。幾つかの実施形態では、免疫グロブリンまたは免疫グロブリンフラグメントは、ヒトＦｃ領域を含む。幾つかの実施形態では、免疫グロブリンまたは免疫グロブリンフラグメントは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８−５０を含む軽鎖可変領域配列を含む。幾つかの実施形態では、免疫グロブリンまたは免疫グロブリンフラグメントは、２つ以下のアミノ酸だけＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１または４４とは異なる軽鎖可変領域配列を含む。幾つかの実施形態では、免疫グロブリンまたは免疫グロブリンフラグメントは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１または４４に対して少なくとも約７５％同一である軽鎖可変領域配列を含む。幾つかの実施形態では、免疫グロブリンまたは免疫グロブリンフラグメントは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１または４４に対して少なくとも約８５％相同性である軽鎖可変領域配列を含む。幾つかの実施形態では、免疫グロブリンまたは免疫グロブリンフラグメントは、２つのアミノ酸だけＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０、３３、３５、４１、４２、および４４から選択される配列とは異なる配列を含む。幾つかの実施形態では、免疫グロブリンまたは免疫グロブリンフラグメントは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０、３３、３５、４１、４２、および４４から選択される配列に対して少なくとも約７５％同一である配列を含む。幾つかの実施形態では、免疫グロブリンまたは免疫グロブリンフラグメントは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０、３３、３５、４１、４２、および４４から選択される配列に対して少なくとも約８５％相同性である配列を含む。幾つかの実施形態では、免疫グロブリンまたは免疫グロブリンフラグメントは、ヒト化される。
【００２４】
幾つかの実施形態では、Ｇは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６２を有するＡＳＧＰＲのエピトープの１つ以上のアミノ酸に結合し、ここで、１つ以上のアミノ酸は、Ｒ１０、Ｇ１１、Ｆ１９、Ｇ３５、Ｎ３６、Ｑ４７、Ｓ５６、Ｌ８３、Ｗ１３４、Ｅ１３５、Ｋ１３８、Ｖ１４０、Ｈ１４２、およびＫ１７３から選択される。幾つかの実施形態では、エピトープの１つ以上のアミノ酸は、Ｗ１３４、Ｅ１３５、Ｋ１３８、Ｖ１４０、Ｈ１４２、およびＫ１７３の任意の組み合わせを含む。
【００２５】
幾つかの実施形態では、Ｇは、２つ以下のアミノ酸だけＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５−４７および５５の１つ以上とは異なるアミノ酸配列を有するＣＤＲを含む免疫グロブリンまたは免疫グロブリンフラグメントである。幾つかの実施形態では、Ｇは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９および４３から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約７５％同一であるアミノ酸配列を有する可変領域を含む免疫グロブリンまたは免疫グロブリンフラグメントである。幾つかの実施形態では、Ｇは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９および４３から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約８５％相同性であるアミノ酸配列を有する可変領域を含む免疫グロブリンまたは免疫グロブリンフラグメントである。幾つかの実施形態では、Ｇは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９、３４、３６−４０および４３から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約７５％同一であるアミノ酸配列を含む免疫グロブリンまたは免疫グロブリンフラグメントである。幾つかの実施形態では、Ｇは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９、３４、３６−４０および４３から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約８５％相同性であるアミノ酸配列を含む免疫グロブリンまたは免疫グロブリンフラグメントである。幾つかの実施形態では、Ｇは、２つ以下のアミノ酸だけＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８−５０の１つ以上とは異なるアミノ酸配列を有するＣＤＲを含む免疫グロブリンまたは免疫グロブリンフラグメントである。幾つかの実施形態では、Ｇは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１および４４から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約７５％同一であるアミノ酸配列を有する可変領域を含む免疫グロブリンまたは免疫グロブリンフラグメントである。幾つかの実施形態では、Ｇは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１および４４から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約８５％相同性であるアミノ酸配列を有する可変領域を含む免疫グロブリンまたは免疫グロブリンフラグメントである。幾つかの実施形態では、Ｇは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０、３３、３５、４１、４２、および４４から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約７５％同一であるアミノ酸配列を含む免疫グロブリンまたは免疫グロブリンフラグメントである。幾つかの実施形態では、Ｇは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０、３３、３５、４１、４２、および４４から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約８５％相同性であるアミノ酸配列を含む免疫グロブリンまたは免疫グロブリンフラグメントである。
【００２６】
さらに本明細書には、必要としている被験体の疾患または疾病を処置する方法が提供され、該方法は、式ＸＶＩＩを有する治療上有効な量の組成物を被験体に投与する工程を含む。幾つかの実施形態では、該方法はさらに、追加の治療薬を被験体に投与する工程を含む。幾つかの実施形態では、追加の治療薬は、加の治療薬を肝臓及び／又は肝実質細胞に対して追標的とする部分を欠くインスリンまたはインスリン含有分子である。幾つかの実施形態では、追加の治療薬は、インスリンＢペプチド、インスリンＡペプチド、インスリンＣペプチド、またはそれらの組み合わせを含む。幾つかの実施形態では、追加の治療薬は、２つ以下のアミノ酸だけＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３８−１４０、１５７および１５８から選択される配列とは異なるアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、追加の治療薬は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３８−１４０から選択されるアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、追加の治療薬は、式ＸＶＩＩを有する組成物とともに投与される。幾つかの実施形態では、追加の治療薬は、式ＸＶＩＩを有する組成物とは別に組成物で投与される。幾つかの実施形態では、式ＸＶＩＩを有する組成物は、皮下、静脈内、筋肉内、注入（例えばポンプ）、経皮、経口、または鼻の経路を介して投与される。幾つかの実施形態では、追加の治療薬は、皮下、静脈内、筋肉内、注入（例えばポンプ）、経皮、経口、または鼻の経路を介して投与される。幾つかの実施形態では、疾患または疾病は、糖尿病を含む。幾つかの実施形態では、疾患または疾病は、肥満症を含む。
【００２７】
本開示の別の態様において、本明細書には、アシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰＲ）に対する特異的結合のための免疫グロブリンが提供され、該免疫グロブリンは以下を含む：（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５を含む重鎖可変領域配列：（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６を含む重鎖可変領域配列：（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５５を含む重鎖可変領域配列：（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４７を含む重鎖可変領域配列：（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８を含む軽鎖可変領域配列：（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９を含む軽鎖可変領域配列：（ｇ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５０を含む軽鎖可変領域配列：（ｈ）（ａ）、（ｂ）および（ｄ）の組み合わせ；（ｉ）（ａ）、（ｃ）および（ｄ）の組み合わせ；（ｊ）（ｅ）、（ｆ）および（ｇ）の組み合わせ；（ｋ）（ｈ）および（ｊ）の組み合わせ；または（ｌ）（ｉ）および（ｊ）の組み合わせ。幾つかの実施形態では、免疫グロブリンは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５、４６および４７を含む重鎖可変領域配列を含む。幾つかの実施形態では、免疫グロブリンは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５、５５および４７を含む重鎖可変領域配列を含む。幾つかの実施形態では、免疫グロブリンは、２つ以下のアミノ酸だけＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９または４３とは異なる重鎖可変領域配列を含む。幾つかの実施形態では、免疫グロブリンは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９または４３に対して少なくとも約７５％同一である重鎖可変領域配列を含む。幾つかの実施形態では、免疫グロブリンは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９または４３に対して少なくとも約８５％相同性の重鎖可変領域配列を含む。幾つかの実施形態では、免疫グロブリンは、２つ以下のアミノ酸だけＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９、３４、３６−４０および４３から選択される配列とは異なる配列を含む。
【００２８】
幾つかの実施形態では、免疫グロブリンは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９、３４、３６−４０および４３から選択される配列に対して少なくとも約７５％同一である配列を含む。幾つかの実施形態では、免疫グロブリンは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９、３４、３６−４０および４３から選択される配列に対して少なくとも約８５％相同性である配列を含む。幾つかの実施形態では、免疫グロブリンはＣＨ１ドメインを含む。幾つかの実施形態では、ＣＨ１ドメインは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０に対して少なくとも約８５％相同性である配列を含む。幾つかの実施形態では、免疫グロブリンはヒトＦｃ領域を含む。幾つかの実施形態では、免疫グロブリンは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８−５０のいずれか１つを含む軽鎖可変領域配列を含む。
【００２９】
幾つかの実施形態では、免疫グロブリンは、２つ以下のアミノ酸だけＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１または４４とは異なる軽鎖可変領域配列を含む。幾つかの実施形態では、免疫グロブリンは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１または４４に対して少なくとも約７５％同一である軽鎖可変領域配列を含む。幾つかの実施形態では、免疫グロブリンは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１または４４に対して少なくとも約８５％相同性の軽鎖可変領域配列を含む。幾つかの実施形態では、免疫グロブリンは、２つのアミノ酸だけＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０、３３、３５、４１、４２、および４４から選択される配列とは異なる配列を含む。幾つかの実施形態では、免疫グロブリンは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０、３３、３５、４１、４２、および４４から選択される配列に対して少なくとも約７５％同一である配列を含む。幾つかの実施形態では、免疫グロブリンは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０、３３、３５、４１、４２、および４４から選択される配列に対して少なくとも約８５％相同性である配列を含む。幾つかの実施形態では、免疫グロブリンはヒト化される。
【００３０】
さらに本明細書には、ＡＳＧＰＲに結合するための本明細書に記載される免疫グロブリンと競合する免疫グロブリンが提供される。
【００３１】
さらに本明細書には、必要としている被験体における肝実質細胞に対して分子を標的とする方法が提供され、該方法は、分子および免疫グロブリンを含む組成物を被験体に投与する工程を含む。幾つかの実施形態では、分子は、免疫グロブリンに融合されるか又は結合される。幾つかの実施形態では、分子は、ヒトインスリンＢ鎖、ヒトインスリンＡ鎖、またはそれらの誘導体または組み合わせを含む。幾つかの実施形態では、被験体は糖尿病を有する。
【００３２】
本開示の別の態様において、本明細書には、必要としている被験体におけるグルコース代謝に関連付けられた疾患または疾病を処置する方法が提供され、該方法は、インスリン治療用ペプチドと抗原結合ドメインを含む免疫グロブリン領域とを含む有効な量のインスリン免疫グロブリン融合タンパク質を投与する工程を含み、ここで抗原結合ドメインは肝細胞受容体を標的とする。幾つかの実施形態では、肝細胞受容体はASGPRである。幾つかの実施形態では、疾患または疾病は、糖尿病を含む。幾つかの実施形態では、疾患または疾病は、肥満症を含む。
【００３３】
幾つかの実施形態では、該方法は、被験体に追加の治療薬を投与する工程をさらに含む。幾つかの実施形態では、追加の治療薬は、肝臓及び／又は肝実質細胞に対して追加の治療薬を標的とする部分を欠くインスリンまたはインスリン含有分子である。幾つかの実施形態では、追加の治療薬は、インスリンＢペプチド、インスリンＡペプチド、インスリンＣペプチド、またはそれらの組み合わせを含む。幾つかの実施形態では、追加の治療薬は、２つ以下のアミノ酸だけＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３８−１４０、１５７および１５８から選択される配列とは異なるアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、追加の治療薬は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３８−１４０から選択されるアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、追加の治療薬は、インスリン免疫グロブリン融合タンパク質とともに組成物で投与される。幾つかの実施形態では、追加の治療薬は、インスリン免疫グロブリン融合タンパク質とは別に組成物で投与される。幾つかの実施形態では、インスリン免疫グロブリン融合タンパク質は、皮下、静脈内、筋肉内、注入（例えばポンプ）、経皮、経口、または鼻の経路を介して投与される。幾つかの実施形態では、追加の治療薬は、皮下、静脈内、筋肉内、注入（例えばポンプ）、経皮、経口、または鼻の経路を介して投与される。
【００３４】
幾つかの実施形態では、インスリン治療用ペプチドは、式Ｂ−Ａ、Ａ−Ｂ、Ｂ−Ｃ−Ａ、またはＡ−Ｃ−Ｂを有し；ここで、ＢはインスリンＢ鎖を含み；ＡはインスリンＡ鎖を含み；存在する場合、Ｃは、ＢおよびＡを結合するコネクターを含み；およびＢ−Ａ、Ａ−Ｂ、またはＢ−ＡおよびＡ−Ｂの両方は、部分またはジスルフィド結合によって結合される。幾つかの実施形態では、Ｂ−ＡまたはＡ−Ｂ、およびＢ−ＡまたはＡ−Ｂは、ジスルフィド結合によって結合される。幾つかの実施形態では、コネクターは、２〜５０のアミノ酸を含む結合ペプチドである。幾つかの実施形態では、結合ペプチドは、少なくとも５０％のグリシンアミノ酸を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、結合ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５９（ＧＧＧＸ１Ｘ２）を含み、ここでＸ１およびＸ２は、自然発生または非自然発生のアミノ酸から独立して選択される。幾つかの実施形態では、Ｘ１は、Ｐ、ＧまたはＳである。幾つかの実施形態では、Ｘ２は、Ｒ、Ｓ、ＧまたはＫである。幾つかの実施形態では、Ｃはプロテアーゼ切断部位を含む。幾つかの実施形態では、インスリンＢ鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５７（ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＸＡＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＦＹＴＸＢＸＣＴ）の配列を含み；ＸＡ、ＸＢ、およびＸＣは、自然発生または非自然発生のアミノ酸から独立して選択される。幾つかの実施形態では、ＸＡは、ＤまたはＨである。幾つかの実施形態では、ＸＢは、ＤまたはＰである。幾つかの実施形態では、ＸＣは、ＰまたはＫである。
【００３５】
幾つかの実施形態では、インスリンＢ鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６０（ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＦＹＴ）との１、２、３または４以下のアミノ酸差を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、インスリンＢ鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０９−１４０のいずれか１つにおけるインスリンＢ鎖に対して少なくとも約７５％同一である配列を含む。幾つかの実施形態では、インスリンＢ鎖は、ヒトインスリン軽鎖、ブタインスリンＢ鎖およびウシインスリンＢ鎖から選択される。幾つかの実施形態では、インスリンＡ鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５８（ＧＩＶＥＱＣＣＸＤＳＩＣＳＬＹＱＬＥＮＹＣＮ）の配列を含み、ＸＤは、自然発生または非自然発生のアミノ酸である。幾つかの実施形態では、ＸＤは、ＨおよびＴから選択される。幾つかの実施形態では、インスリンＡ鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６１（ＧＩＶＥＱＣＣＴＳＩＣＳＬＹＱＬＥＮＹＣ）との１、２、３または４以下のアミノ酸差を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、インスリンＡ鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０９−１４０のいずれか１つにおけるインスリンＡ鎖に対して少なくとも約７５％同一である配列を含む。幾つかの実施形態では、インスリンＡ鎖は、ヒトインスリンＡ鎖、ブタインスリンＡ鎖およびウシインスリンＡ鎖から選択される。
【００３６】
幾つかの実施形態では、免疫グロブリン領域は以下を含む：（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５を含む重鎖可変領域配列：（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６を含む重鎖可変領域配列：（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５５を含む重鎖可変領域配列：（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４７を含む重鎖可変領域配列：（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８を含む軽鎖可変領域配列：（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９を含む軽鎖可変領域配列：（ｇ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５０を含む軽鎖可変領域配列：（ｈ）（ａ）、（ｂ）および（ｄ）の組み合わせ；（ｉ）（ａ）、（ｃ）および（ｄ）の組み合わせ；（ｊ）（ｅ）、（ｆ）および（ｇ）の組み合わせ；（ｋ）（ｈ）および（ｊ）の組み合わせ；または（ｌ）（ｉ）および（ｊ）の組み合わせ。幾つかの実施形態では、免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９、３０および３３−４４から選択される配列に対して少なくとも約７５％同一である配列を含む。幾つかの実施形態では、免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９、３０および３３−４４から選択される配列に対して少なくとも約８５％相同性である配列を含む。幾つかの実施形態では、免疫グロブリン領域はヒト化される。幾つかの実施形態では、抗原結合ドメインは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６２を有するＡＳＧＰＲのエピトープの１つ以上のアミノ酸に結合し、ここで、１つ以上のアミノ酸は、Ｒ１０、Ｇ１１、Ｆ１９、Ｇ３５、Ｎ３６、Ｑ４７、Ｓ５６、Ｌ８３、Ｗ１３４、Ｅ１３５、Ｋ１３８、Ｖ１４０、Ｈ１４２、およびＫ１７３から選択される。
【００３７】
本開示の別の態様において、本明細書には、インスリン治療用ペプチドと抗原結合ドメインのアミノ酸配列を含む第１の免疫グロブリン領域とを含むインスリン免疫グロブリン融合タンパク質が提供され；ここで、インスリン免疫グロブリン融合タンパク質は、肝臓に対して標的とされる。インスリン免疫グロブリン融合タンパク質は、肝実質細胞によって発現された抗原に対する抗原結合ドメインの結合によって肝臓に対して標的とされ得る。幾つかの実施形態では、抗原は、アシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰＲ）のアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、第１の免疫グロブリン領域は、抗ＡＳＧＰＲ抗体に由来するアミノ酸配列と約または少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、第１の免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９、３０、３３−５６、１６のいずれか１つ、またはそれらの組み合わせのアミノ酸配列と約または少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、インスリン免疫グロブリン融合タンパク質は、抗原結合ドメインのアミノ酸配列を介して抗原に結合するように構成されている。幾つかの実施形態では、インスリン免疫グロブリン融合タンパク質は、天然の免疫グロブリン内の抗原結合ドメインの親和性の少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または９５％である親和性で抗原に結合する。天然の免疫グロブリンは、限定することなく、抗体、または肝細胞によって発現された抗原を結合するように構成された抗原結合ドメインを含む、その領域（例えばＦａｂ）を含んでもよく、ここで抗体は、非抗体部分（例えば、治療用ペプチド／タンパク質、小分子）を含まない及び／又はそれに結合されない。
【００３８】
幾つかの実施形態では、抗原結合ドメインのアミノ酸配列は、可変軽鎖、可変重鎖、またはその両方に由来する可変領域のアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、インスリン免疫グロブリン融合タンパク質は、抗原結合ドメインの第２のアミノ酸配列を含む第２の免疫グロブリン領域をさらに含む。幾つかの場合では、抗原結合ドメインの第２のアミノ酸配列は、可変軽鎖、可変重鎖、またはその両方に由来する可変領域のアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、第１の免疫グロブリン領域はヒト化される。幾つかの実施形態では、第１の免疫グロブリン領域は、マウス免疫グロブリン領域である。
【００３９】
幾つかの実施形態では、インスリン免疫グロブリン融合タンパク質におけるインスリン治療用ペプチドの活性は、基準のインスリン治療用ペプチドの活性に匹敵する。基準の治療用ペプチドは、インスリン治療用ペプチドの天然の製剤を含んでもよく、ここで天然の製剤は、免疫グロブリンまたはその部位に結合されないインスリン治療用ペプチドを含む。幾つかの実施形態では、インスリン免疫グロブリン融合タンパク質におけるインスリン治療用ペプチドの活性は、基準のインスリン治療用ペプチドの活性の少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または９５％である。幾つかの実施形態では、インスリン免疫グロブリン融合タンパク質のインスリン治療用ペプチドは、肝細胞活性アッセイにおける基準のインスリン治療用ペプチドのＥＣ５０より少なくとも約１０％、２０％、５０％、または１００％未満であるＥＣ５０を有する。幾つかの場合では、基準のインスリン治療用ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０９−１４０、１５７、１５８、１６０、１６１のいずれか１つ、またはそれらの組み合わせのアミノ酸配列と約または少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。幾つかの場合では、基準のインスリン治療用ペプチドは、ヒトインスリン、ブタインスリン、ウシインスリン、またはそれらの組み合わせに由来するアミノ酸配列を含む。幾つかの場合では、基準のインスリン治療用ペプチドは、ヒトインスリンＢ鎖、ヒトインスリンＡ鎖、またはそれらの組み合わせに由来するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、基準のインスリンペプチドは、インスリンアナログ、またはその一部を含む。インスリンアナログの限定しない例としては、グラルギン、グルリジン、インスリンデテミル、およびインスリンデグルデクが挙げられる。
【００４０】
幾つかの実施形態では、インスリン治療用ペプチド、またはそのアミノ酸配列は、第１の免疫グロブリン領域のアミノ末端またはカルボキシル末端に結合される。幾つかの場合では、インスリン治療用ペプチド、またはそのアミノ酸配列は、第１の免疫グロブリン領域のアミノ末端に結合される。幾つかの実施形態では、インスリン治療用ペプチド、またはそのアミノ酸配列は、リンカーによって第１の免疫グロブリン領域に結合される。幾つかの場合では、リンカーはアミノ酸配列を含む。幾つかの場合では、リンカーは約３から約４０のアミノ酸を含む。幾つかの場合では、リンカーは１つ以上のグリシン残基を含み、ここで、１つ以上のグリシン残基は、リンカーアミノ酸配列の少なくとも約３０％、４０％または５０％を占める。幾つかの実施形態では、リンカーはプロテアーゼ切断部位を含む。幾つかの場合では、プロテアーゼ切断部位は、アミノ末端、カルボキシル末端に、またはリンカーペプチドアミノ酸配列内に位置する。幾つかの場合では、プロテアーゼ切断部位は、プロタンパク質転換酵素によって認識される。
【００４１】
幾つかの実施形態では、インスリン治療用ペプチドは、インスリンＢ鎖に由来するアミノ酸配列、インスリンＡ鎖に由来するアミノ酸配列、またはそれらの組み合わせを含む。幾つかの実施形態では、インスリンＢ鎖は、ヒトインスリンＢ鎖と約または少なくとも約８０％を８５％  ９０％  ９５％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、インスリンＡ鎖は、ヒトインスリンＡ鎖と約または少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、インスリン治療用ペプチドは、インスリンＢ鎖に由来するアミノ酸配列およびインスリンＡ鎖に由来するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、インスリンＢ鎖に由来するアミノ酸配列は、インスリンＡ鎖に由来するアミノ酸配列に結合される。幾つかの事例では、結合は、結合ペプチドを介するものある。幾つかの事例では、結合ペプチドは、約３から約２５のアミノ酸を含む。幾つかの事例では、結合ペプチドは１つ以上のグリシン残基を含み、ここで１つ以上のグリシン残基は、結合ペプチドアミノ酸配列の少なくとも約３０％、４０％、または５０％を占める。幾つかの場合では、結合ペプチドはプロテアーゼ切断部位を含む。幾つかの場合では、結合ペプチドのプロテアーゼ切断部位は、アミノ末端、カルボキシル末端に、または結合ペプチドアミノ酸配列内に位置する。幾つかの場合では、結合ペプチドのプロテアーゼ切断部位は、プロタンパク質転換酵素によって認識される。幾つかの実施形態では、インスリン治療用ペプチドは、アミノ末端からカルボキシル末端までを含む：インスリンＢ鎖に由来するアミノ酸配列、結合ペプチド、およびインスリンＡ鎖に由来するアミノ酸配列。幾つかの実施形態では、インスリン治療用ペプチドは、アミノ末端からカルボキシル末端までを含む：インスリンＡ鎖に由来するアミノ酸配列、結合ペプチド、およびインスリンＢ鎖に由来するアミノ酸配列。
【００４２】
幾つかの実施形態では、インスリン治療用ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０９−１４０、１５７、１５８、１６０、１６１のアミノ酸配列と約または少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
【００４３】
幾つかの実施形態では、免疫グロブリン融合タンパク質は、インスリン治療用ペプチドの第１のアミノ酸配列を含む第１の鎖；および第１の免疫グロブリン領域に結合されたインスリン治療用ペプチドの第２のアミノ酸配列を含む第２の鎖を含む。幾つかの実施形態では、インスリン治療用ペプチドの第１のアミノ酸配列は、インスリンＢ鎖に由来するアミノ酸配列を含み、インスリン治療用ペプチドの第２のアミノ酸配列は、インスリンＡ鎖に由来するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、インスリン治療用ペプチドの第１のアミノ酸配列は、インスリンＡ鎖に由来するアミノ酸配列を含み、インスリン治療用ペプチドの第２のアミノ酸配列は、インスリンＢ鎖に由来するアミノ酸配列を含む。幾つかの実装では、インスリン治療用ペプチドの第１のアミノ酸配列は、インスリン治療用ペプチドの第２のアミノ酸配列に結合される。幾つかの場合では、結合は、１つ以上のジスルフィド結合を介するものである。
【００４４】
幾つかの実施形態では、インスリン治療用ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０９−１４０、１５７、１５８、１６０、１６１のアミノ酸配列と約または少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
【００４５】
本開示の別の態様において、本明細書には、インスリン治療用ペプチド；および抗原結合ドメインのアミノ酸配列を含む第１の免疫グロブリン領域を含む、インスリン免疫グロブリン融合タンパク質が提供され；ここで、インスリン治療用ペプチド、またはその領域のアミノ酸配列は、第１の免疫グロブリン領域のアミノ末端またはカルボキシル末端に結合され；インスリン免疫グロブリン融合タンパク質は、抗原結合ドメインのアミノ酸配列を介して抗原に結合するように構成されている。幾つかの実施形態では、インスリン免疫グロブリン融合タンパク質は、天然の免疫グロブリン内の抗原結合ドメインの親和性の少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または９５％である親和性で抗原に結合する。幾つかの実施形態では、インスリン免疫グロブリン融合タンパク質におけるインスリン治療用ペプチドの活性は、基準のインスリン治療用ペプチドの活性に匹敵する。幾つかの実施形態では、インスリン免疫グロブリン融合タンパク質におけるインスリン治療用ペプチドの活性は、基準のインスリン治療用ペプチドの活性の少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または９５％である。幾つかの場合では、基準のインスリン治療用ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０９−１４０、１５７、１５８、１６０、１６１のいずれか１つ、またはそれらの組み合わせのアミノ酸配列と約または少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
【００４６】
幾つかの実施形態では、抗原結合ドメインは、肝実質細胞によって発現された抗原に結合するように構成されている。幾つかの実施形態では、抗原は、アシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰＲ）である。幾つかの実施形態では、第１の免疫グロブリン領域は、抗ＡＳＧＰＲ抗体に由来するアミノ酸配列と約または少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、第１の免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９、３０、３３−５６、１６７のいずれか１つ、またはそれらの組み合わせのアミノ酸配列と約または少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
【００４７】
幾つかの実施形態では、抗原結合ドメインのアミノ酸配列は、可変軽鎖、可変重鎖、またはその両方に由来する可変領域のアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、インスリン免疫グロブリン融合タンパク質は、抗原結合ドメインの第２のアミノ酸配列を含む第２の免疫グロブリン領域をさらに含む。幾つかの場合では、抗原結合ドメインの第２のアミノ酸配列は、可変軽鎖、可変重鎖、またはその両方に由来する可変領域のアミノ酸配列を含む。
【００４８】
幾つかの実施形態では、インスリン治療用ペプチド、またはそのアミノ酸配列は、第１の免疫グロブリン領域のアミノ末端に結合される。幾つかの実施形態では、インスリン治療用ペプチド、またはそのアミノ酸配列は、リンカーによって第１の免疫グロブリン領域に結合される。幾つかの実施形態では、リンカーはアミノ酸配列を含む。幾つかの場合では、リンカーは約３から約４０のアミノ酸を含む。幾つかの場合では、リンカーは１つ以上のグリシン残基を含み；ここで１つ以上のグリシン残基は、リンカーアミノ酸配列の少なくとも約３０％、４０％または５０％を占める。幾つかの場合では、リンカーはプロテアーゼ切断部位を含む。幾つかの場合では、プロテアーゼ切断部位は、アミノ末端、カルボキシル末端に、またはリンカーペプチドアミノ酸配列内に位置する。幾つかの場合では、プロテアーゼ切断部位は、プロタンパク質転換酵素によって認識される。
【００４９】
幾つかの実施形態では、インスリン治療用ペプチドは、インスリンＢ鎖に由来するアミノ酸配列、インスリンＡ鎖に由来するアミノ酸配列、またはそれらの組み合わせを含む。幾つかの実施形態では、インスリンＢ鎖は、ヒトインスリンＢ鎖と約または少なくとも約８０％、８５％  ９０％  ９５％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、インスリンＡ鎖は、ヒトインスリンＡ鎖と約または少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、インスリン治療用ペプチドは、インスリンＢ鎖に由来するアミノ酸配列およびインスリンＡ鎖に由来するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、インスリンＢ鎖に由来するアミノ酸配列は、インスリンＡ鎖に由来するアミノ酸配列に結合される。幾つかの実施形態では、結合は、結合ペプチドを介するものある。幾つかの場合では、結合ペプチドは約３から約２５のアミノ酸を含む。幾つかの場合では、結合ペプチドは１つ以上のグリシン残基を含み、ここで１つ以上のグリシン残基は、結合ペプチドアミノ酸配列の少なくとも約３０％、４０％、または５０％を占める。幾つかの場合では、結合ペプチドはプロテアーゼ切断部位を含む。幾つかの場合では、結合ペプチドのプロテアーゼ切断部位は、アミノ末端、カルボキシル末端に、または結合ペプチドアミノ酸配列内に位置する。幾つかの事例では、結合ペプチドのプロテアーゼ切断部位は、プロタンパク質転換酵素によって認識される。
【００５０】
幾つかの実施形態では、インスリン治療用ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０９−１４０、１５７、１５８、１６０、１６１のアミノ酸配列と約または少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
【００５１】
幾つかの実施形態では、インスリン治療用ペプチドは、アミノ末端からカルボキシル末端までを含む：インスリンＢ鎖に由来するアミノ酸配列、結合ペプチド、およびインスリンＡ鎖に由来するアミノ酸配列。幾つかの実施形態では、インスリン治療用ペプチドは、アミノ末端からカルボキシル末端までを含む：インスリンＡ鎖に由来するアミノ酸配列、結合ペプチド、およびインスリンＢ鎖に由来するアミノ酸配列。
【００５２】
幾つかの実施形態では、免疫グロブリン融合タンパク質は、インスリン治療用ペプチドの第１のアミノ酸配列を含む第１の鎖；および第１の免疫グロブリン領域に結合されたインスリン治療用ペプチドの第２のアミノ酸配列を含む第２の鎖を含む。幾つかの実施形態では、インスリン治療用ペプチドの第１のアミノ酸配列は、インスリンＢ鎖に由来するアミノ酸配列を含み、インスリン治療用ペプチドの第２のアミノ酸配列は、インスリンＡ鎖に由来するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、インスリン治療用ペプチドの第１のアミノ酸配列は、インスリンＡ鎖に由来するアミノ酸配列を含み、インスリン治療用ペプチドの第２のアミノ酸配列は、インスリンＢ鎖に由来するアミノ酸配列を含む。幾つかの場合では、インスリン治療用ペプチドの第１のアミノ酸配列は、インスリン治療用ペプチドの第２のアミノ酸配列に結合される。幾つかの場合では、結合は、１つ以上のジスルフィド結合を介するものである。
【００５３】
幾つかの実施形態では、インスリン治療用ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０９−１４０、１５７、１５８、１６０、１６１のアミノ酸配列と約または少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
【００５４】
本開示の別の態様では、本明細書に記載されるインスリン免疫グロブリン融合タンパク質のいずれかを含む医薬組成物が提供される。さらに本明細書には、様々な実施形態において、必要としている被験体の疾患または疾病を処置する方法が提供され、該方法は、本明細書に記載される治療上有効な量のインスリン免疫グロブリン融合タンパク質を被験体に投与する工程を含む。幾つかの場合では、疾患は糖尿病である。幾つかの場合では、疾患は肥満症である。
【００５５】
本開示の別の態様では、本明細書に記載されるインスリン免疫グロブリン融合タンパク質のいずれか１つのアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む第１の遺伝子構築物が提供される。様々な実施形態において、本明細書には、第１の遺伝子構築物を含む第１の発現ベクターが提供される。様々な実施形態において、本明細書には、第１の発現ベクターを含む哺乳動物の発現宿主が提供される。幾つかの場合では、哺乳動物の発現宿主は、１つ以上の追加の発現ベクターをさらに含む。幾つかの事例では、１つ以上の追加の発現ベクターの１つは、追加の免疫グロブリンドメインのアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む第２の遺伝子構築物を含む。幾つかの事例では、１つ以上の追加の発現ベクターの１つは、プロテアーゼのアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む第３の遺伝子構築物を含む。幾つかの実施形態では、第１の発現ベクターは、追加の免疫グロブリンドメインのアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む遺伝子構築物をさらに含む。幾つかの実施形態では、第１の発現ベクターは、プロテアーゼのアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む遺伝子構築物をさらに含む。
【００５６】
さらに本明細書には、様々な実施形態において、免疫グロブリン融合タンパク質を生成する方法が提供され、該方法は、一時的に哺乳動物細胞の培養物にある第１の発現ベクターをトランスフェクトする工程；制御された温度およびパーセンテージのＣＯ２で発現培地中の細胞培養物を増殖させる工程；および分泌された免疫グロブリン融合タンパク質を採取する工程、を含む。幾つかの事例では、該方法はさらに、１つ以上の追加の発現ベクターをコトランスフェクトする工程を含む。幾つかの場合では、１つ以上の追加の発現ベクターの１つは、追加の免疫グロブリンドメインのアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む第２の遺伝子構築物を含む。幾つかの場合では、１つ以上の追加の発現ベクターの１つは、プロテアーゼのアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む第３の遺伝子構築物を含む。幾つかの実施形態では、該方法は、採取された免疫グロブリン融合タンパク質を精製する工程をさらに含む。
【図面の簡単な説明】
【００５７】
以下の概要に加えて、本開示の以下の詳細な説明は、添付の図面とともに読まれたときにより一層理解される。しかしながら、本開示が、示される正確な例に限定されないことを理解されるべきである。一般的な方法に従って、図面の様々な特徴がスケールを合わされていないことが強調される。これに反して、様々な特徴の寸法は、明瞭さのために恣意的に拡大または縮小される。以下の図が図面に含まれる。
【００５８】
【図１Ａ】図１Ａは、次のものを含むインスリン免疫グロブリン融合タンパク質の模式図を示す：可変ドメイン（ＶＨ）および定常領域（ＣＨ１）を有する免疫グロブリン重鎖、および可変ドメイン（ＶＬ）および定常領域（ＣＨ１）を有する免疫グロブリン軽鎖のアミノ末端に結合されたインスリン治療用ペプチド。
【図１Ｂ】図１Ｂは、次のものを含むインスリン免疫グロブリン融合タンパク質の模式図を示す：免疫グロブリン軽鎖、および免疫グロブリン重鎖のアミノ末端に結合されたインスリン治療用ペプチド。
【図２】図２は、ＤＴＴで減少された（＋）または減少されなかった（−）精製されたインスリン融合タンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルを示す。パネルＡは、Ａｂ１Ｈ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９）およびＩｎｓ１−Ｌ１−Ａｂ１Ｌ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９）を含む、精製されたインスリン融合タンパク質Ｉｎｓ１Ｌ１−Ａｂ１Ｌ ＩｇＧを示す。パネルＢは、Ａｂ１Ｌ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０）およびＩｎｓ１−Ｌ１−Ａｂ１Ｈ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８）を含む、精製されたインスリン融合タンパク質Ｉｎｓ１Ｌ１−Ａｂ１Ｈ ＩｇＧを示す。
【図３】図３は、インビトロアッセイにおけるヒトＡＳＧＰＲに対する図２に示されるようなインスリン免疫グロブリン融合タンパク質（Ｉｎｓ１−Ｌ１−Ａｂ１Ｌ ＩｇＧ；Ｉｎｓ１−Ｌ１−Ａｂ１Ｈ ＩｇＧ）の結合を示すグラフである。
【図４】図４は、ラットＡＳＧＰＲに対する図２に示されるようなインスリン免疫グロブリン融合タンパク質（Ｉｎｓ１−Ｌ１−Ａｂ１Ｌ ＩｇＧ；Ｉｎｓ１−Ｌ１−Ａｂ１Ｈ ＩｇＧ）の結合を示すグラフである。
【図５】図５は、ＨｅｐＧ２細胞に対するインスリン免疫グロブリンタンパク質（Ｉｎｓ１Ｌ１−Ａｂ１Ｌ ＩｇＧ；Ｉｎｓ１−Ｌ１−Ａｂ１Ｈ ＩｇＧ）の活性を示すグラフである。
【図６】図６は、ＨｅｐＧ２細胞に対する図２に示されるようなインスリン免疫グロブリン融合タンパク質（Ｉｎｓ１−Ｌ１−Ａｂ１Ｌ ＩｇＧ（パネルＡ）；Ｉｎｓ１−Ｌ１−Ａｂ１Ｈ ＩｇＧ（パネルＢ））の結合を示すフローサイトメトリーのヒストグラムである。
【図７】図７は、図６のヒストグラムに対応するグラフである。
【図８】図８は、精製されたＩｎｓ１Ｌ１−Ａｂ２Ｌ ＩｇＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８０、３１）融合タンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルを示す。
【図９】図９は、酵素ＰＣ２によるタンパク質切断を伴う又は伴わない、精製されたＩｎｓ２Ｌ２−Ａｂ３Ｌ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１）およびＡｂ３Ｈ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６７）の融合タンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルを示す。
【図１０】図１０は、精製されたＩｎｓ３Ｌ２−Ａｂ３Ｌ ＩｇＧ融合タンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルを示す。
【図１１】図１１は、ＨｅｐＧ２細胞に対するインスリン免疫グロブリンタンパク質（ＰＣ２切断でのＩｎｓ１Ｌ１−Ａｂ２Ｌ ＩｇＧ；Ｉｎｓ３−Ｌ２−Ａｂ１Ｌ ＩｇＧ；Ｉｎｓ３−Ｌ２−Ａｂ１Ｌ ＩｇＧ；ＰＣ２切断でのＩｎｓ２Ｌ２−Ａｂ１Ｌ ＩｇＧ；Ｉｎｓ２−Ｌ２−Ａｂ１Ｌ ＩｇＧ）の活性を示すグラフである。
【図１２】図１２は、精製されたＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４Ｌ ＩｇＧ融合タンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルを示す。
【図１３】図１３は、精製されたＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５Ｌ ＩｇＧ融合タンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルを示す。
【図１４】図１４は、精製されたＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４Ｌ（Ｆａｂ）融合タンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルを示す。
【図１５】図１５は、ＨｅｐＧ２細胞に対するインスリン免疫グロブリンタンパク質（Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４Ｌ ＩｇＧ；Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４Ｌ（Ｆａｂ））の活性を示すグラフである。
【図１６】図１６のパネルＡ−Ｃは、ヒト、ラットまたはカニクイザルのＡＳＧＰＲの細胞外ドメインに対するインスリン免疫グロブリン融合タンパク質（Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４ＬおよびＡｂ４Ｈ；Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４ＬおよびＡｂ４Ｈ（Ｆａｂ））の結合を示すグラフである。
【図１７】図１７は、精製されたＩｎｓ４−Ｌ３−Ａｂ４Ｌ ＩｇＧ融合タンパク質およびＩｎｓ４−Ｌ３−Ａｂ２Ｌ ＩｇＧ融合タンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルを示す。
【図１８】図１８は、ＨｅｐＧ２細胞に対するインスリン免疫グロブリンタンパク質（Ｉｎｓ４−Ｌ３−Ａｂ４ＬおよびＡｂ４Ｈ；Ｉｎｓ４−Ｌ３−Ａｂ２ＬおよびＡｂ４２）の活性を示すグラフである。
【図１９】図１９は、精製されたＩｎｓ４Ｌ６−Ａｂ４Ｌ ＩｇＧ融合タンパク質；Ｉｎｓ４−Ｌ６−Ａｂ４Ｌ（Ｆａｂ）融合タンパク質；およびＩｎｓ５−Ｌ７−Ａｂ４Ｌ ＩｇＧ融合タンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルを示す。
【図２０】図２０は、ＨｅｐＧ２細胞に対するインスリン免疫グロブリンタンパク質Ｉｎｓ４Ｌ６−Ａｂ４Ｌ ＩｇＧの活性を示すグラフである。
【図２１】図２１は、ＨｅｐＧ２細胞に対するインスリン免疫グロブリンタンパク質（Ｉｎｓ４Ｌ６−Ａｂ４Ｌ（Ｆａｂ）およびＩｎｓ５−Ｌ７−Ａｂ４Ｌ ＩｇＧ）の活性を示すグラフである。
【図２２】図２２は、ＨｅｐＧ２細胞に対するインスリン免疫グロブリンタンパク質（Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４Ｌ ＩｇＧ；Ｉｎｓ１−Ｌ４−Ａｂ４Ｌ ＩｇＧ；Ｉｎｓ１−Ｌ５−Ａｂ４Ｌ ＩｇＧ）の活性を示すグラフである。
【図２３】図２３は、精製されたＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４ Ｆａｂ融合タンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルを示す。
【図２４】図２４は、精製されたＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５ Ｆａｂ融合タンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルを示す。
【図２５】図２５は、精製されたＩｎｓ７−Ｌ３−Ａｂ４ Ｆａｂ融合タンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルを示す。
【図２６】図２６は、精製されたＩｎｓ７−Ｌ３−Ａｂ５ Ｆａｂ融合タンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルを示す。
【図２７】図２７は、Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４ Ｆａｂ融合タンパク質のサイズ排除精製を示すグラフを示す。
【図２８】図２８は、Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５ Ｆａｂ融合タンパク質のサイズ排除精製を示すグラフを示す。
【図２９】図２９は、Ｉｎｓ７−Ｌ３−Ａ５ Ｆａｂ融合タンパク質のサイズ排除精製を示すグラフを示す。
【図３０】図３０は、Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４ ＦａｂおよびＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５ Ｆａｂの融合タンパク質の質量スペクトルの特徴づけのグラフを示す。
【図３１】図３１のパネルＡ−Ｃは、Ａ４Ｆａｂ、Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４ Ｆａｂ、およびＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４ Ｆａｂのゲル濾過の主要ピーク収集の熱安定性のグラフである。
【図３２】図３２は、ＷＴインスリン、Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４ Ｆａｂ、およびＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５ ＦａｂのＨｅｐＧ２細胞に対するインスリン結合の活性を示すグラフである。
【図３３】図３３は、ＷＴインスリン、Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４ Ｆａｂ、およびＩｎｓ７−Ｌ３−Ａｂ４ ＦａｂのＨｅｐＧ２細胞に対するインスリン結合の活性を示すグラフである。
【図３４】図３４は、ＷＴインスリン、Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４ Ｆａｂ、およびＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５ ＦａｂのＡ６７３細胞に対するインスリン結合の活性を示すグラフである。
【図３５】図３５は、ＷＴインスリン、Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４ Ｆａｂ、およびＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５ ＦａｂのＳＧＢＳ細胞に対するインスリン結合の活性を示すグラフである。
【図３６】図３６は、フローサイトメトリーによって測定された、ＨｅｐＧ２細胞に対するＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４ Ｆａｂ、Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５ Ｆａｂ、Ａｂ４およびＡｂ５の結合のグラフである。
【図３７】図３７は、ヒトＡＳＧＰＲの細胞外のドメインに対するＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４ ＦａｂおよびＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５ Ｆａｂの結合のグラフである。
【図３８】図３８は、ラットＡＳＧＰＲの細胞外ドメインに対するＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４ ＦａｂおよびＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５Ｆａｂの結合のグラフである。
【図３９】図３９は、カニクイザルＡＳＧＰＲの細胞外ドメインに対するＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４ ＦａｂおよびＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５ Ｆａｂの結合のグラフである。
【図４０】図４０は、１ｍｇ／ｋｇの静脈内の投与量でのＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４ ＦａｂおよびＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５ Ｆａｂの薬理動態のグラフである。
【図４１】図４１は、ビヒクル、Ｌｅｖｉｍｉｒ（６Ｕ／ｋｇ、皮下）、およびナイーブな対照と比較した、０．１ｍｇ／ｋｇまたは１ｍｇ／ｋｇの静脈内の投与量での経時的なＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４ ＦａｂおよびＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５ Ｆａｂの血中グルコース濃度のグラフである。
【図４１】図４２は、２０ｍｇ／ｋｇの静脈内の投与量でのＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４ ＦａｂおよびＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５ Ｆａｂの薬理動態のグラフである。
【図４３】図４３は、ビヒクル、Ｌｅｖｉｍｉｒ（６Ｕ／ｋｇ、皮下）、およびナイーブな対照と比較した、２０ｍｇ／ｋｇの静脈内の投与量で経時的なＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４ ＦａｂおよびＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５ Ｆａｂの血中グルコース濃度のグラフである。
【図４４】図４４は、１０ｍｇ／ｋｇの皮下の投与量でのＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４ ＦａｂおよびＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５ Ｆａｂの薬理動態のグラフである。
【図４５】図４５は、ビヒクル、Ｌｅｖｉｍｉｒ（６Ｕ／ｋｇ、皮下）、およびナイーブな対照と比較した、１０ｍｇ／ｋｇの皮下の投与量で経時的なＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４ ＦａｂおよびＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５ Ｆａｂの血中グルコース濃度のグラフである。
【図４６】図４６のパネルＡ−Ｃは、肝臓、筋肉、または脂肪組織において測定された、正常なラットにおけるＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４ ＦａｂおよびＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５ Ｆａｂの体内分布のグラフである。
【図４７】図４７は、ヒト、カニクイザル、ラットおよびマウスのＡＳＧＰＲの配列を示す。
【発明を実施するための形態】
【００５９】
本開示に一態様において、本明細書には、免疫グロブリンまたはその部分に結合されたインスリン治療用ペプチドを含むインスリン免疫グロブリン融合タンパク質が提供される。インスリン免疫グロブリン融合タンパク質は、糖尿病などの、インスリンおよびグルコース代謝に関連付けられた様々な疾患および疾病の処置に有用であり得る。様々な実施形態では、融合タンパク質の免疫グロブリン部分は、または肝実質細胞によって発現されたか又は提示された抗原に結合することによって、肝臓に対して融合タンパク質を標的とする抗原結合ドメインを含むか又はその部分である。典型的な抗原は、アシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰＲ）である。
【００６０】
本明細書に記載される主題の１つの特徴によると、インスリン免疫グロブリン融合タンパク質は、第１の免疫グロブリン領域およびインスリン治療用ペプチドを含み；ここで、インスリン治療用ペプチド、またはその領域のアミノ酸配列は、免疫グロブリン領域のアミノ末端に結合される。本明細書に記載される主題の別の特徴では、インスリン免疫グロブリン融合タンパク質は、第１の免疫グロブリン領域；およびインスリン治療用ペプチドを含み；ここで、インスリン治療用ペプチド、またはその領域のアミノ酸配列は、免疫グロブリン領域のカルボキシル末端に結合される。インスリン治療用ペプチド、またはそのアミノ酸配列は、リンカーにより免疫グロブリン領域に結合されてもよい。第１の免疫グロブリン領域は、単一の免疫グロブリンドメインまたはその部分、例えば、軽鎖ドメイン、重鎖ドメイン、またはそれらの組み合わせを含んでもよい。幾つかの実施形態では、インスリン治療用ペプチドは、第２のアミノ酸配列に結合された第１のアミノ酸配列を含む。幾つかの場合では、結合は化学結合を介するものである。幾つかの場合では、結合はジスルフィド結合を介するものである。幾つかの場合では、結合は結合ペプチドを介するものである。幾つかの実施形態では、免疫グロブリン融合タンパク質はさらに、１つ以上のプロテアーゼ切断部位を含む。インスリン免疫グロブリン融合タンパク質がリンカーを含む幾つかの場合では、リンカーはプロテアーゼ切断部位を含む。インスリン免疫グロブリン融合タンパク質が結合ペプチドを含む幾つかの場合では、結合ペプチドはプロテアーゼ切断部位を含む。
【００６１】
本明細書に記載されるインスリン免疫グロブリン融合タンパク質のインスリン治療用ペプチドは、インスリンＢ鎖、インスリンＡ鎖、またはそれらの組み合わせからのアミノ酸配列を含んでもよい。幾つかの実施形態では、インスリンＢ鎖、インスリンＡ鎖、またはその両方は、ヒトインスリンに由来するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、インスリンＢ鎖、インスリンＡ鎖、またはその両方は、ヒト以外のインスリン、限定しない例として、ブタインスリンに由来するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、インスリンＢ鎖、インスリンＡ鎖、またはその両方は、インスリンアナログに由来するアミノ酸配列を含む。
【００６２】
幾つかの実施形態では、インスリン免疫グロブリン融合タンパク質のインスリン治療用ペプチドは、単一の鎖アミノ酸配列を含む。単一の鎖アミノ酸配列は、インスリンＢ鎖、インスリンＡ鎖、またはそれらの組み合わせからのアミノ酸配列を含んでもよい。幾つかの場合では、インスリン治療用ペプチドの単一の鎖アミノ酸配列は、結合ペプチドによってインスリンＡ鎖からのアミノ酸配列に結合されたインスリンＢ鎖からのアミノ酸配列を含む。
【００６３】
幾つかの実施形態では、インスリン免疫グロブリン融合タンパク質のインスリン治療用ペプチドは、治療用ペプチドの第１のアミノ酸配列を含む第１の鎖および治療用ペプチドの第２のアミノ酸配列を含む第２の鎖を含む。幾つかの場合では、インスリン治療用タンパク質の第１のアミノ酸配列は、第１の免疫グロブリン領域に結合される。幾つかの場合では、治療用タンパク質の第２のアミノ酸配列は、第１の免疫グロブリン領域に結合される。幾つかの実施形態では、第１の鎖および第２の鎖は結合される。限定しない例として、第１の鎖および第２の鎖は、１つ以上のジスルフィド結合によって結合される。第１の鎖アミノ酸配列は、インスリンＢ鎖、インスリンＡ鎖、またはそれらの組み合わせからのアミノ酸配列を含んでもよい。幾つかの場合では、インスリン治療用ペプチドの第１の鎖アミノ酸配列は、インスリンＢ鎖からのアミノ酸配列を含み、第２の鎖アミノ酸配列は、インスリンＡ鎖からのアミノ酸配列を含む。幾つかの場合では、インスリン治療用ペプチドの第１の鎖アミノ酸配列は、インスリンＡ鎖からのアミノ酸配列を含み、第２の鎖アミノ酸配列は、インスリンＢ鎖からのアミノ酸配列を含む。
【００６４】
インスリン免疫グロブリン融合タンパク質の典型的な実施形態は、式Ｉ−ＸＶＩに示され、ここでＴは、インスリン治療用ペプチドまたは治療用ペプチドの一部であり、Ｌはリンカーであり、およびＡは免疫グロブリン領域である。治療用ペプチド、リンカー、結合ペプチド、またはそれらの任意の組み合わせは、プロテアーゼ切断部位を含んでもよい。ペプチド結合によって結合されないアミノ酸、例えば、別々の鎖であり、セミコロンによって区切られる。幾つかの実施形態では、別々の鎖の１つ以上は、非共有結合によって結合される。限定しない例として、１つ以上の別々の鎖は、１つ以上のジスルフィド結合によって結合される。
【００６５】
【表１】
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【００６６】
インスリン治療用ペプチド、Ｔｎ（ｎ＝１または２）は、インスリンペプチドに由来する１つ以上のアミノ酸配列を含む治療用ペプチドを表わす。インスリン治療用ペプチド、Ｔｎはさらに、１つ以上の結合ペプチドを含んでもよい。幾つかの実施形態では、Ｔｎは、インスリンペプチド、結合ペプチドに由来する第１のアミノ酸配列、およびインスリンペプチドに由来する第２のアミノ酸配列を含む。例えば、第１のアミノ酸配列はインスリンＢ鎖アミノ酸配列に由来し、第２のアミノ酸配列はインスリンＡ鎖アミノ酸配列に由来し、その逆もしかりである。幾つかの実施形態では、Ｔｎは、インスリンペプチドおよび結合ペプチドに由来する第１のアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、Ｔｎは、インスリンＢ鎖アミノ酸配列に由来するアミノ酸を含む。幾つかの実施形態では、Ｔｎは、インスリンＡ鎖アミノ酸配列に由来するアミノ酸を含む。幾つかの場合では、Ｔ１はインスリンＢ鎖アミノ酸配列に由来するアミノ酸配列を含み、Ｔ２はインスリンＡ鎖アミノ酸配列に由来するアミノ酸配列を含み、ここでＴ１、Ｔ２のいずれか、またはＴ１およびＴ２の両方は、１つ以上の結合ペプチドをさらに含む。幾つかの場合では、Ｔ１はインスリンＡ鎖アミノ酸配列に由来するアミノ酸配列を含み、Ｔ２はインスリンＢ鎖アミノ酸配列に由来するアミノ酸配列を含み、ここでＴ１、Ｔ２のいずれか、またはＴ１およびＴ２の両方は、１つ以上の結合ペプチドをさらに含む。幾つかの実施形態では、結合ペプチドはプロテアーゼ切断部位を含む。
【００６７】
免疫グロブリン領域、Ａｎ（ｎ＝１または２）は、第１の免疫グロブリン領域、Ａ１、および第２の免疫グロブリン領域、Ａ２を表わす。幾つかの実施形態では、Ａ１は、免疫グロブリン軽鎖のアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、Ａ２は、免疫グロブリン軽鎖のアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、Ａ１は、免疫グロブリン重鎖のアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、Ａ２は、免疫グロブリン重鎖のアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、Ａ１およびＡ２を含むインスリン融合タンパク質に関して、２つの免疫グロブリン領域が結合される。幾つかの場合では、２つの領域は、１つ以上のジスルフィド結合によって結合される。Ａ１のアミノ酸配列は、抗ＡＳＧＰＲ抗体に由来するアミノ酸配列を含んでもよい。Ａ２のアミノ酸配列は、抗ＡＳＧＰＲ抗体に由来するアミノ酸配列を含んでもよい。
【００６８】
本開示の別の態様において、本明細書には、本明細書に提供される免疫グロブリン融合タンパク質を含む医薬組成物が開示される。幾つかの実施形態では、医薬組成物は、薬学的に許容可能な賦形剤をさらに含む。
【００６９】
さらに本明細書には、様々な態様においてに、必要としている被験体の疾患または疾病を処置する方法が開示される。一般に、該方法は、インスリン治療用ペプチドを含むインスリン免疫グロブリン融合タンパク質を被験体に投与する工程を含む。幾つかの場合では、該疾患は、糖尿病及び／又はその合併症である。幾つかの実施形態では、Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩ、ＶＩＩＩ、ＩＸ、Ｘ、ＸＩ、ＸＩＩ、ＸＩＩＩ、ＸＩＶ、ＸＶ、ＸＶＩの式、あるいはその修飾、部分、または追加を有するインスリン免疫グロブリン融合タンパク質が、被験体に投与される。
【００７０】
さらに本明細書には、様々な態様において、インスリン治療用ペプチドの送達を改善する方法が開示される。該方法は、遺伝子構築物からのインスリン免疫グロブリン融合タンパク質の生成を含んでもよい。幾つかの実施形態では、インスリン免疫グロブリン融合タンパク質は、インスリン免疫グロブリン融合タンパク質をコードする遺伝子構築物から組換えで生成される。幾つかの実施形態では、遺伝子構築物は、標準の哺乳動物細胞培養技術を使用して、インビトロで発現される。幾つかの実施形態では、第１の免疫グロブリン領域のアミノ末端またはカルボキシル末端に結合されたインスリン治療用ペプチドをコードする１つの構築物は、第２の免疫グロブリン領域を含む第２の構築物と同時発現され、組換えのインスリン免疫グロブリン融合タンパク質が生成される。幾つかの実施形態では、プロテアーゼをコードする構築物は、免疫グロブリン融合タンパク質と同時発現される。該方法はさらに、リンカー、結合ペプチド、タンパク質切断部位、またはそれらの組み合わせを含む、免疫グロブリン遺伝融合構築物を生成する工程を含んでもよい。
【００７１】
本発明の方法および組成物が記載される前に、本開示が、記載される特定の方法または組成物に限定されず、そのため変更され得ることが理解されるべきである。本明細書で使用される用語が、単に特定の実施形態を記載する目的のためにあり、限定するようには意図されないことも理解されるべきである。本明細書に提供される免疫グロブリン融合タンパク質を作り使用する方法に関する開示および記載を当業者に提供するように実施例が明記され、これらは、発明者が本発明として見なすものの範囲を限定するようには意図されておらず、提供される実験が、実行される実験をすべて包含することを表わすようにも意図されていない。使用される数に関する精度を確かなものとする試みがなされているが、いくらかの実験の誤差および偏差もあることも考慮されるべきである。
【００７２】
値の範囲が提供される場合、その範囲の上限と下限の間で、文脈が他に明確に指示していない限り下限の単位の１０分の１まで、各介入値が具体的に開示されることが理解される。明示された範囲内の明示された値または介入値とその明示された範囲内の他の明示された値または介入値との間の各々のより小さな範囲が、本発明内に包含される。これらのより小さな範囲の上限および下限は、範囲内に独立して含まれるか又は除外され、上限および下限のいずれか、またはその両方が、より小さな範囲に含まれる、あるいはいずれも含まれない各範囲も、明示された範囲内の具体的に除外された上限および下限に従って、本発明に包含される。明示された範囲が上限および下限の１つ又はその両方を含む場合、これらの含まれた上限および下限のいずれかまたは両方を除く範囲もまた、本発明に包含される。
【００７３】
他に特段の定義のない限り、本明細書で使用される技術用語および科学用語はすべて、本発明が属する当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に言及されるすべての公報は、それらの公報が関連して引用される方法及び／又は物質を開示および記載するために、引用によって本明細書に組み込まれる。本開示が、矛盾がある程度まで組み込まれた公報のあらゆる開示に優先することが理解される。
【００７４】
本開示を読むことで当業者に明白となるように、本明細書に記載および例証される個々の実施形態の各々は、本発明の範囲または精神から逸脱することなく、他の幾つかの実施形態のいずれかの特徴から容易に区別され得るか又はそれらと組み合わせられ得る個別の構成要素および特徴を有する。あらゆる列挙された方法が、列挙された事象の順序で、または論理的に可能である他の順序で実行され得る。アミノ酸配列のあらゆる列挙された組み合わせも、列挙された順序、または論理的に可能である他の順序を有し得る。限定しない例として、インスリン治療用ペプチドＴおよび免疫グロブリン領域Ａを含む免疫グロブリン融合タンパク質は、例えばおよび限定することなく、Ｔ−Ａ、ＡＴ、Ｔ−ＡＴ、およびＡ−Ｔ−Ａを含む。
【００７５】
本明細書および添付の請求項において使用される通り、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈が他に明確に指示していない限り、複数の指示対象を含むことに留意しなければならない。したがって、例えば、「細胞」への言及は複数のそのような細胞を含み、「ペプチド」への言及は１つ以上のペプチドおよびそれらの同等物、例えば、当業者に既知のポリペプチドなどへの言及を含む。
【００７６】
参照配列に対して、アミノ酸配列または核酸配列に対して記載するために本明細書に使用されるときの用語「相同性である」、「相同性」、またはは「パーセント相同性」は、ＫａｒｌｉｎおよびＡｌｔｓｃｈｕｌ（Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８７： ２２６４−２２６８， １９９０， ｍｏｄｉｆｉｅｄ ａｓ ｉｎ Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ９０：５８７３−５８７７， １９９３）によって記載される式を使用して決定され得る。そのような式は、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ． （Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２１５： ４０３−４１０， １９９０）の基礎的なローカルアライメント検索ツール（ＢＬＡＳＴ）プログラムに組み込まれる。配列のパーセント相同性は、本出願の出願日の時点での、ＢＬＡＳＴの最も最近のバージョンを使用して判定されたものである。
【００７７】
＜インスリン免疫グロブリン融合タンパク質＞
本明細書に開示された様々なインスリン免疫グロブリン融合タンパク質は、第１の免疫グロブリン領域およびインスリン治療用ペプチドを含み、ここでインスリン治療用ペプチド、またはそのアミノ酸配列は、第１の免疫グロブリン領域のアミノ末端またはカルボキシル末端に結合される。様々な事例では、インスリン免疫グロブリン融合タンパク質はさらに、第２の免疫グロブリン領域を含む。免疫グロブリン領域（第１及び／又は第２）は、免疫グロブリンのあらゆる部分、一部または全体であり得る。
【００７８】
免疫グロブリン領域は、免疫グロブリン分子全体、または限定されないが、重鎖、軽鎖、可変ドメイン、定常ドメイン、相補性決定領域（ＣＤＲ）、フレームワーク領域、フラグメント抗原結合（Ｆａｂ）領域、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ’）３、Ｆａｂ’、フラグメント結晶化可能（Ｆｃ）領域、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦＶ）、ｄｉ−ｓｃＦｖ、単一ドメイン免疫グロブリン、三機能の免疫グロブリン、化学的に結合したＦ（ａｂ’）２、およびそれらのあらゆる部分または組み合わせを含む、免疫グロブリンのフラグメントを含むポリペプチドを含んでもよい。幾つかの実施形態では、免疫グロブリン重鎖は、重鎖全体または重鎖の一部を含んでもよい。例えば、重鎖に由来する可変ドメインまたはその領域は、重鎖または重鎖の領域として言及されてもよい。幾つかの実施形態では、免疫グロブリン軽鎖は、軽鎖全体または軽鎖の一部を含んでもよい。例えば、軽鎖に由来する可変ドメインまたはその領域は、軽鎖または軽鎖の領域として言及されてもよい。免疫グロブリン領域は、二重特異性または三重特異性であり得る。単一ドメイン免疫グロブリンは、限定されないが、単一の単量体可変免疫グロブリンドメインを含む。単一ドメイン免疫グロブリンは、サメの可変の新しい抗原受容体免疫グロブリンフラグメント（ＶＮＡＲ）であり得る。免疫グロブリンは、限定されないが、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＹ、ＩｇＷを含む、当業者に既知のあらゆるタイプに由来し得る。免疫グロブリン領域は糖タンパク質であり得る。免疫グロブリン領域は、限定されないが、１、２、３、４、および５のユニットを含む、１つ以上の機能ユニットを含んでもよい。免疫グロブリン領域は、１つ以上のジスルフィド結合によって結合された１つ以上のユニットを含んでもよい。免疫グロブリン領域は、ペプチドリンカーによって結合された１つ以上のユニット、例えば、ｓｃＦｖ免疫グロブリンを含んでもよい。免疫グロブリンは、アミノ酸の突然変異、置換、及び／又は欠失を有する免疫グロブリンを含む組換えの免疫グロブリンであり得る。免疫グロブリンは、化学修飾を含む組換えの免疫グロブリンであり得る。免疫グロブリンは、免疫グロブリン−薬物抱合体全体またはその部分を含み得る。免疫グロブリンは小分子を含み得る。免疫グロブリンは、小分子を含む免疫グロブリン−薬物抱合体全体またはその部分を含み得る。免疫グロブリンは、哺乳動物のソースからのものであり得る。免疫グロブリンは、キメラ免疫グロブリンであり得る。免疫グロブリン領域は、操作された免疫グロブリンまたは組換えの免疫グロブリンに全体的または部分的に由来し得る。免疫グロブリンは、ヒト化した、ヒト操作された、または完全にヒトの免疫グロブリンからのものであり得る。哺乳動物の免疫グロブリンは、ウシ免疫グロブリンであり得る。哺乳動物の免疫グロブリンは、ヒト免疫グロブリンであり得る。哺乳動物の免疫グロブリンは、マウス免疫グロブリンであり得る。哺乳動物の免疫グロブリンは、ヒト以外の霊長類免疫グロブリンであり得る。免疫グロブリンは、鳥類免疫グロブリンであり得る。免疫グロブリンは、サメ免疫グロブリンであり得る。
【００７９】
本明細書に記載される融合タンパク質は、当該技術分野に既知の手段によって修飾され得、したがって、記載される実施形態から逸脱し得る。限定しない例として、免疫グロブリン領域への言及は、抗体に限定されず、抗原に結合し得るあらゆる分子を含む。
【００８０】
本開示の一態様では、インスリン治療用ペプチドと抗原結合ドメインの１つ以上の部分を含む第１の免疫グロブリン領域とを含むインスリン免疫グロブリン融合タンパク質が提供され、ここで抗原結合ドメインは、肝細胞の抗原に対する特異性を有する。軽鎖融合および重鎖融合を示す典型的な模式図は、それぞれ、図１Ａおよび図１Ｂに示される。抗原結合ドメインによって標的とされた抗原は、肝実質細胞によって発現され得る。限定しない例として、抗原はアシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰＲ）である。抗原結合ドメインは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６２−１６５から選択される配列を有するＡＳＧＰＲのエピトープに結合し得る。抗原結合ドメインは、マウスＡＳＧＰＲよりもヒトＡＳＧＰＲに特異的であり得る。エピトープの限定しない例は、図４７の配列アライメントに示される。例えば、抗原結合ドメインは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６２を有するヒトＡＳＧＰＲのエピトープの１つ以上のアミノ酸に結合し得、ここで、１つ以上のアミノ酸は、Ｒ１０、Ｇ１１、Ｆ１９、Ｇ３５、Ｎ３６、Ｑ４７、Ｓ５６、Ｌ８３、Ｗ１３４、Ｅ１３５、Ｋ１３８、Ｖ１４０、Ｈ１４２、およびＫ１７３から選択される。幾つかの場合では、エピトープの１つ以上のアミノ酸は、Ｗ１３４、Ｅ１３５、Ｋ１３８、Ｖ１４０、Ｈ１４２、およびＫ１７３のあらゆる組み合わせも含む。
【００８１】
免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８−９８のいずれか１つに基づくか又は由来するアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８−９８のいずれか１つに対して少なくとも約５０％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８−９８のいずれか１つに対して少なくとも約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９７％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８−９８のいずれか１つに対して少なくとも約７０％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８−９８のいずれか１つに対して少なくとも約８０％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８−９８のいずれか１つに対して少なくとも約５０％同一であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８−９８のいずれか１つに対して少なくとも約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９７％同一であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８−９８のいずれか１つに対して少なくとも約７０％同一であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８−９８のいずれか１つに対して少なくとも約８０％同一であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８−９８のいずれか１つに対して１００％同一であるアミノ酸配列を含み得る。幾つかの実施形態では、免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８−９８のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９７％相同性であるアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８−９８のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９７％同一であるアミノ酸配列を含む。
【００８２】
免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８−９８のいずれか１つに基づくか又は由来する１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００またはそれ以上のアミノ酸を含むアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８−９８のいずれか１つに基づくか又は由来する１２５、１５０に、１７５、２００、２２５、２５０またはそれ以上のアミノ酸を含むアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８−９８のいずれか１つに基づくか又は由来する１０以上のアミノ酸を含むアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８−９８のいずれか１つに基づくか又は由来する５０以上のアミノ酸を含むアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８−９８のいずれか１つに基づくか又は由来する１００以上のアミノ酸を含むアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８−９８のいずれか１つに基づくか又は由来する２００以上のアミノ酸を含むアミノ酸配列を含み得る。アミノ酸は連続し得る。代替的に又は付加的に、アミノ酸は不連続である。幾つかの実施形態では、免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８−９８の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれ以上に由来するアミノ酸を含む。
【００８３】
免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７−７７のいずれか１つに基づくか又は由来する核酸配列によってコードされ得る。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７−７７のいずれか１つに対して少なくとも約５０％相同性である核酸配列によってコードされ得る。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７−７７のいずれか１つに対して少なくとも約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９７％相同性である核酸配列によってコードされ得る。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７−７７のいずれか１つに対して少なくとも約７０％相同性である核酸配列によってコードされ得る。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７−７７のいずれか１つに対して少なくとも約８０％相同性である核酸配列によってコードされ得る。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７−７７のいずれか１つに対して少なくとも約５０％同一である核酸配列によってコードされ得る。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７−７７のいずれか１つに対して少なくとも約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９７％同一である核酸配列によってコードされ得る。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７−７７のいずれか１つに対して少なくとも約７０％同一である核酸配列によってコードされ得る。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７−７７のいずれか１つに対して少なくとも約８０％同一である核酸配列によってコードされ得る。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７−７７のいずれか１つに対して１００％同一である核酸配列によってコードされ得る。幾つかの実施形態では、免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７−７７のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９７％相同性である核酸配列によってコードされる。幾つかの実施形態では、免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７−７７のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、また９７％は同一である核酸配列によってコードされる。
【００８４】
免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７−７７のいずれか１つに基づくか又は由来する１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００またはそれ以上のヌクレオチドを含む核酸配列によってコードされ得る。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７−７７のいずれか１つに基づくか又は由来する１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、４５０、５００またはそれ以上のヌクレオチドを含む核酸配列によってコードされ得る。免疫グロブリン融合タンパク質は、基づくか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：のいずれか１つに由来する１００以上のヌクレオチドを含む核酸配列によってコードされ得る。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７−７７のいずれか１つに基づくか又は由来する５００以上のヌクレオチドを含む核酸配列によってコードされ得る。ヌクレオチドは連続し得る。代替的に、または付加的に、ヌクレオチドは不連続である。幾つかの実施形態では、免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７−７７の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれ以上に由来する核酸配列によってコードされる。
【００８５】
さらに本明細書には、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７−７７のいずれか１つに基づくか又は由来する核酸配列を含むことヌクレオチド構築物が開示される。ヌクレオチド構築物は、宿主細胞における発現に対するプラスミド、例えば、哺乳動物または細菌発現プラスミドであり得る。幾つかの実施形態では、構築物は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７−７７のいずれか１つに対して少なくとも約５０％相同性である核酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ヌクレオチド構築物は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７−７７のいずれか１つに対して少なくとも約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９７％相同性である核酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ヌクレオチド構築物は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７−７７のいずれか１つに対して少なくとも約７０％相同性である核酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ヌクレオチド構築物は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７−７７のいずれか１つに対して少なくとも約８０％相同性である核酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ヌクレオチド構築物は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７−７７のいずれか１つに対して少なくとも約５０％同一である核酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ヌクレオチド構築物は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７−７７のいずれか１つに対して少なくとも約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９７％同一である核酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ヌクレオチド構築物は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７−７７のいずれか１つに対して少なくとも約７０％同一である核酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ヌクレオチド構築物は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７−７７のいずれか１つに対して少なくとも約８０％同一である核酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ヌクレオチド構築物は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７−７７のいずれか１つに対して１００％同一である核酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ヌクレオチド構築物は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７−７７のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９７％相同性である核酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ヌクレオチド構築物は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７−７７のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９７％同一である核酸配列を含む。
【００８６】
＜インスリン免疫グロブリン軽鎖融合＞
本開示の１つの特徴において、本明細書には、免疫グロブリン軽鎖の領域のアミノ末端またはカルボキシル末端に結合された１つ以上の領域を含むインスリン治療用ペプチドを含む免疫グロブリン融合タンパク質が提供され、ここで免疫グロブリン融合は、本明細書で免疫グロブリン軽鎖融合と呼ばれる。幾つかの実施形態では、免疫グロブリン融合タンパク質はさらに、免疫グロブリン重鎖の１つ以上の領域を含む。幾つかの場合では、免疫グロブリン軽鎖融合は、ジスルフィド結合またはリンカーによって免疫グロブリン重鎖の１つ以上の領域に結合される。幾つかの実施形態では、インスリン治療用ペプチドは、治療用ペプチドの１つ以上の領域を含む。幾つかの実施形態では、インスリン治療用ペプチドは、結合ペプチドによって結合された治療用ペプチドの２つの領域を含む。幾つかの実施形態では、治療用ペプチドはプロテアーゼ切断部位を含む。幾つかの実施形態では、結合ペプチドはプロテアーゼ切断部位を含む。
【００８７】
幾つかの実施形態では、免疫グロブリン軽鎖融合は、抗ＡＳＧＰＲ抗体のアミノ酸配列を含むか又はそれに由来するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、重鎖は、抗ＡＳＧＰＲ抗体のアミノ酸配列を含むか又はそれに由来するアミノ酸配列を含む。
【００８８】
本開示の一態様では、インスリン治療用ペプチドと抗原結合ドメインの１つ以上の部分を含む第１の免疫グロブリン領域とを含む軽鎖インスリン免疫グロブリン融合タンパク質が提供され、ここで抗原結合ドメインは、肝細胞の抗原に対する特異性を有する。抗原結合ドメインによって標的とされた抗原は、肝実質細胞によって発現され得る。限定しない例として、抗原はアシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰＲ）である。第１の免疫グロブリン領域は、５、４、３、２または１以下のアミノ酸だけＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８−５０の１つ以上とは異なるアミノ酸配列を有するＣＤＲを含み得る。第１の免疫グロブリン領域は、５、４、３、２または１以下のアミノ酸だけＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８とは異なるアミノ酸配列を有する第１のＣＤＲを含み得る。第１の免疫グロブリン領域は、５、４、３、２または１以下のアミノ酸だけＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９とは異なるアミノ酸配列を有する第２のＣＤＲを含み得る。第１の免疫グロブリン領域は、５、４、３、２または１以下のアミノ酸だけＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５０とは異なるアミノ酸配列を有する第３のＣＤＲを含み得る。第１の免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１および４４から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％同一であるアミノ酸配列を有する可変領域を含み得る。第１の免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１および４４から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％相同性であるアミノ酸配列を有する可変領域を含み得る。第１の免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０、３３、３５、４１、４２、および４４から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約７５％  ８０％  ８５％、９０％、または９５％同一であるアミノ酸配列を含み得る。第１の免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０、３３、３５、４１、４２、および４４から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約７５％  ８０％  ８５％、９０％、または９５％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。インスリン免疫グロブリン融合タンパク質はさらに、第２の免疫グロブリン領域を含み得る。第２の免疫グロブリン領域は、抗原結合ドメインの１つ以上の部分を含み得る。第２の免疫グロブリン領域は、５、４、３、２または１以下のアミノ酸だけＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５−４７および５５の１つ以上とは異なるアミノ酸配列を有するＣＤＲを含み得る。第２の免疫グロブリン領域は、５、４、３、２または１以下のアミノ酸だけＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５とは異なるアミノ酸配列を有する第１のＣＤＲを含み得る。第２の免疫グロブリン領域は、５、４、３、２または１以下のアミノ酸だけＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６とは異なるアミノ酸配列を有する第２のＣＤＲを含み得る。第２の免疫グロブリン領域は、５、４、３、２または１以下のアミノ酸だけＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５５とは異なるアミノ酸配列を有する第２のＣＤＲを含み得る。第２の免疫グロブリン領域は、５、４、３、２または１以下のアミノ酸だけＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４７とは異なるアミノ酸配列を有する第３のＣＤＲを含み得る。第２の免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９および４４から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％同一であるアミノ酸配列を有する可変領域を含み得る。第２の免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９および４３から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％相同性であるアミノ酸配列を有する可変領域を含み得る。第２の免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９、３４、３６−４０および４３から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約７５％  ８０％  ８５％、９０％、または９５％同一であるアミノ酸配列を含み得る。第２の免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９、３４、３６−４０および４３から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約７５％  ８０％  ８５％、９０％、または９５％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。
【００８９】
免疫グロブリン軽鎖融合は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９−９２、９４−９８のいずれか１つに基づくか又は由来するアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン軽鎖融合は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９−９２、９４−９８のいずれか１つに対して少なくとも約５０％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン軽鎖融合は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９−９２、９４−９８のいずれか１つに対して少なくとも約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９７％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン軽鎖融合は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９−９２、９４−９８のいずれか１つに対して少なくとも約７０％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン軽鎖融合は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９−９２、９４−９８のいずれか１つに対して少なくとも約８０％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン軽鎖融合は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９−９２、９４−９８のいずれか１つに対して少なくとも約５０％同一であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン軽鎖融合は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９−９２、９４−９８のいずれか１つに対して少なくとも約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９７％同一であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン軽鎖融合は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９−９２、９４−９８のいずれか１つに対して少なくとも約７０％同一であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン軽鎖融合は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９−９２、９４−９８のいずれか１つに対して少なくとも約８０％同一であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン軽鎖融合は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９−９２、９４−９８のいずれか１つに対して１００％同一であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９−９２、９４−９８のいずれか１つに基づくか又は由来するアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９−９２、９４−９８のいずれか１つに対して少なくとも約５０％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９−９２、９４−９８のいずれか１つに対して少なくとも約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９７％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９−９２、９４−９８のいずれか１つに対して少なくとも約７０％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９−９２、９４−９８のいずれか１つに対して少なくとも約８０％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９−９２、９４−９８のいずれか１つに対して少なくとも約５０％同一であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９−９２、９４−９８のいずれか１つに対して少なくとも約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９７％同一であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９−９２、９４−９８のいずれか１つに対して少なくとも約７０％同一であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９−９２、９４−９８のいずれか１つに対して少なくとも約８０％同一であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９−９２、９４−９８のいずれか１つに対して１００％同一であるアミノ酸配列を含み得る。
【００９０】
インスリン免疫グロブリン軽鎖融合は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９−９２、９４−９８のいずれか１つに基づくか又は由来する１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００またはそれ以上のアミノ酸を含むアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン軽鎖融合は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９−９２、９４−９８のいずれか１つに基づくか又は由来する１２５、１５０、１７５、２００またはそれ以上のアミノ酸を含むアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン軽鎖融合は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９−９２、９４−９８のいずれか１つに基づくか又は由来する１０以上のアミノ酸を含むアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン軽鎖融合は、ＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９−９２、９４−９８のいずれか１つに基づくか又はＳ由来する５０以上のアミノ酸を含むアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン軽鎖融合は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９−９２、９４−９８のいずれか１つに基づくか又は由来する１００以上のアミノ酸を含むアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン軽鎖融合は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９−９２、９４−９８のいずれか１つに基づくか又は由来する２００以上のアミノ酸を含むアミノ酸配列を含み得る。アミノ酸は連続し得る。代替的に、または付加的に、アミノ酸は不連続である。幾つかの実施形態では、免疫グロブリン軽鎖融合は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９−９２、９４−９８の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれ以上に由来するアミノ酸を含む。
【００９１】
免疫グロブリン軽鎖融合は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８−７１、７３−７７のいずれか１つに基づくか又は由来する核酸配列によってコードされ得る。免疫グロブリン軽鎖融合は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８−７１、７３−７７のいずれか１つに対して少なくとも約５０％相同性である核酸配列によってコードされ得る。免疫グロブリン軽鎖融合は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８−７１、７３−７７のいずれか１つに対して少なくとも約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９７％相同性である核酸配列によってコードされ得る。免疫グロブリン軽鎖融合は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８−７１、７３−７７のいずれか１つに対して少なくとも約７０％相同性である核酸配列によってコードされ得る。免疫グロブリン軽鎖融合は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８−７１、７３−７７のいずれか１つに対して少なくとも約８０％相同性である核酸配列によってコードされ得る。免疫グロブリン軽鎖融合は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８−７１、７３−７７のいずれか１つに対して少なくとも約５０％同一である核酸配列によってコードされ得る。免疫グロブリン軽鎖融合は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８−７１、７３−７７のいずれか１つに対して少なくとも約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９７％同一である核酸配列によってコードされ得る。免疫グロブリン軽鎖融合は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８−７１、７３−７７のいずれか１つに対して少なくとも約７０％同一である核酸配列によってコードされ得る。免疫グロブリン軽鎖融合は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８−７１、７３−７７のいずれか１つに対して少なくとも約８０％同一である核酸配列によってコードされ得る。免疫グロブリン軽鎖融合は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８−７１、７３−７７のいずれか１つに対して１００％同一である核酸配列によってコードされ得る。
【００９２】
免疫グロブリン軽鎖融合は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８−７１、７３−７７のいずれか１つに基づくか又は由来する１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００またはそれ以上のヌクレオチドを含む核酸配列によってコードされ得る。免疫グロブリン軽鎖融合は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８−７１、７３−７７のいずれか１つに基づくか又は由来する１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、４５０、５００またはそれ以上のヌクレオチドを含む核酸配列によってコードされ得る。免疫グロブリン軽鎖融合は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８−７１、７３−７７のいずれか１つに基づくか又は由来する１００以上のヌクレオチドを含む核酸配列によってコードされ得る。免疫グロブリン軽鎖融合は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８−７１、７３−７７のいずれか１つに基づくか又は由来する５００以上のヌクレオチドを含む核酸配列によってコードされ得る。ヌクレオチドは連続し得る。代替的に、または付加的に、ヌクレオチドは不連続である。幾つかの実施形態では、免疫グロブリン軽鎖融合は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８−７１、７３−７７の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれ以上に由来する核酸配列によってコードされる。
【００９３】
＜インスリン免疫グロブリン重鎖融合＞
本開示の１つの特徴において、本明細書には、免疫グロブリン重鎖の領域のアミノ末端またはカルボキシル末端に結合された１つ以上の領域を含むインスリン治療用ペプチドを含む免疫グロブリン融合タンパク質が提供され、ここで免疫グロブリン融合は、本明細書で免疫グロブリン重鎖融合と呼ばれる。幾つかの実施形態では、免疫グロブリン融合タンパク質はさらに、免疫グロブリン軽鎖の１つ以上の領域を含む。幾つかの場合では、免疫グロブリン重鎖融合は、ジスルフィド結合またはリンカーによって免疫グロブリン軽鎖の１つ以上の領域に結合される。幾つかの実施形態では、インスリン治療用ペプチドは、治療用ペプチドの１つ以上の領域を含む。幾つかの実施形態では、インスリン治療用ペプチドは、結合ペプチドによって結合された治療用ペプチドの２つの領域を含む。幾つかの実施形態では、治療用ペプチドはプロテアーゼ切断部位を含む。幾つかの実施形態では、結合ペプチドはプロテアーゼ切断部位を含む。
【００９４】
幾つかの実施形態では、免疫グロブリン重鎖融合は、抗ＡＳＧＰＲ抗体のアミノ酸配列を含むか又はそれに由来するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、軽鎖は、抗ＡＳＧＰＲ抗体のアミノ酸配列を含むか又はそれに由来するアミノ酸配列を含む。
【００９５】
本開示の一態様では、インスリン治療用ペプチドおよび抗原結合ドメインの１つ以上の部分を含む第１の免疫グロブリン領域を含む重鎖インスリン免疫グロブリン融合タンパク質が提供され、ここで抗原結合ドメインは、肝細胞の抗原に対する特異性を有する。抗原結合ドメインによって標的とされた抗原は、肝実質細胞によって発現され得る。限定しない例として、抗原はアシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰＲ）である。第１の免疫グロブリン領域は、５、４、３、２または１以下のアミノ酸だけＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５−４７および５５の１つ以上とは異なるアミノ酸配列を有するＣＤＲを含み得る。第１の免疫グロブリン領域は、５、４、３、２または１以下のアミノ酸だけＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５とは異なるアミノ酸配列を有する第１のＣＤＲを含み得る。第１の免疫グロブリン領域は、５、４、３、２または１以下のアミノ酸だけＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６とは異なるアミノ酸配列を有する第２のＣＤＲを含み得る。第１の免疫グロブリン領域は、５、４、３、２または１以下のアミノ酸だけＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５５とは異なるアミノ酸配列を有する第２のＣＤＲを含み得る。第１の免疫グロブリン領域は、５、４、３、２または１以下のアミノ酸だけＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４７とは異なるアミノ酸配列を有する第３のＣＤＲを含み得る。第１の免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９および４３から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％同一であるアミノ酸配列を有する可変領域を含み得る。第１の免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９および４３から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％相同性であるアミノ酸配列を有する可変領域を含み得る。第１の免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９、３４、３６−４０および４３から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約７５％  ８０％  ８５％、９０％、または９５％同一であるアミノ酸配列を含み得る。第１の免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９、３４、３６−４０および４３から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約７５％  ８０％  ８５％、９０％、または９５％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。インスリン免疫グロブリン融合タンパク質はさらに、第２の免疫グロブリン領域を含み得る。第２の免疫グロブリン領域は、抗原結合ドメインの１つ以上の部分を含み得る。第２の免疫グロブリン領域は、５、４、３、２または１以下のアミノ酸だけＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８−５０の１つ以上とは異なるアミノ酸配列を有するＣＤＲを含み得る。第２の免疫グロブリン領域は、５、４、３、２または１以下のアミノ酸だけＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８とは異なるアミノ酸配列を有する第１のＣＤＲを含み得る。第２の免疫グロブリン領域は、５、４、３、２または１以下のアミノ酸だけＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９とは異なるアミノ酸配列を有する第２のＣＤＲを含み得る。第２の免疫グロブリン領域は、５、４、３、２または１以下のアミノ酸だけＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５０とは異なるアミノ酸配列を有する第３のＣＤＲを含み得る。第２の免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１−４４から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％同一であるアミノ酸配列を有する可変領域を含み得る。第２の免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１−４４から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％相同性であるアミノ酸配列を有する可変領域を含み得る。第２の免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０、３３、３５、４１、４２、および４４から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約７５％  ８０％  ８５％、９０％、または９５％同一であるアミノ酸配列を含み得る。第２の免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０、３３、３５、４１、４２、および４４から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約７５％  ８０％  ８５％、９０％、または９５％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。
【００９６】
免疫グロブリン重鎖融合は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８または９３に基づくか又は由来するアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン重鎖融合は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８または９３に対して少なくとも約５０％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン重鎖融合は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８または９３に対して少なくとも約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９７％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン重鎖融合は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８または９３に対して少なくとも約７０％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン重鎖融合は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８または９３に対して少なくとも約８０％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン重鎖融合は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８または９３に対して少なくとも約５０％同一であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン重鎖融合は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８または９３に対して少なくとも約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９７％同一であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン重鎖融合は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８または９３に対して少なくとも約７０％同一であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン重鎖融合は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８または９３に対して少なくとも約８０％同一であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン重鎖融合は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８または９３に対して１００％同一であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン軽鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８または９３に基づくか又は由来するアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン軽鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８または９３に対して少なくとも約５０％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン軽鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８または９３に対して少なくとも約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９７％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン軽鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８または９３に対して少なくとも約７０％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン軽鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８または９３に対して少なくとも約８０％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン軽鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８または９３に対して少なくとも約５０％同一であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン軽鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８または９３に対して少なくとも約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９７％同一であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン軽鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８または９３に対して少なくとも約７０％同一であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン軽鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８または９３に対して少なくとも約８０％同一であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン軽鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８または９３に対して１００％同一であるアミノ酸配列を含み得る。
【００９７】
免疫グロブリン重鎖融合は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８または９３に基づくか又は由来する１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００またはそれ以上のアミノ酸を含むアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン重鎖融合は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８または９３に基づくか又は由来する１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、４５０、５００またはそれ以上のアミノ酸を含むアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン重鎖融合は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８または９３に基づくか又は由来する１０以上のアミノ酸を含むアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン重鎖融合は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８または９３に基づくか又は由来する５０以上のアミノ酸を含むアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン重鎖融合は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８または９３に基づくか又は由来する１００以上のアミノ酸を含むアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン重鎖融合は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８または９３に基づくか又は由来する２００以上のアミノ酸を含むアミノ酸配列を含み得る。アミノ酸は連続し得る。代替的に、または付加的に、アミノ酸は不連続である。
【００９８】
免疫グロブリン重鎖融合は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７または７２に基づくか又は由来する核酸配列によってコードされ得る。免疫グロブリン重鎖融合は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７または７２に対して少なくとも約５０％相同性である核酸配列によってコードされ得る。免疫グロブリン重鎖融合は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７または７２に対して少なくとも約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９７％相同性である核酸配列によってコードされ得る。免疫グロブリン重鎖融合は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７または７２に対して少なくとも約７０％相同性である核酸配列によってコードされ得る。免疫グロブリン重鎖融合は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７または７２に対して少なくとも約８０％相同性である核酸配列によってコードされ得る。免疫グロブリン重鎖融合は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７または７２に対して少なくとも約５０％同一である核酸配列によってコードされ得る。免疫グロブリン重鎖融合は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７または７２に対して少なくとも約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９７％同一である核酸配列によってコードされ得る。免疫グロブリン重鎖融合は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７または７２に対して少なくとも約７０％同一である核酸配列によってコードされ得る。免疫グロブリン重鎖融合は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７または７２に対して少なくとも約８０％同一である核酸配列によってコードされ得る。免疫グロブリン重鎖融合は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７または７２に対して１００％同一である核酸配列によってコードされ得る。
【００９９】
免疫グロブリン重鎖融合は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７または７２に基づくか又は由来する１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００またはそれ以上のヌクレオチドを含む核酸配列によってコードされ得る。免疫グロブリン重鎖融合は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７または７２に基づくか又は由来する１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、４５０、５００またはそれ以上のヌクレオチドを含む核酸配列によってコードされ得る。免疫グロブリン重鎖融合は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７または７２に基づくか又は由来する６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、１０００またはそれ以上のヌクレオチドを含む核酸配列によってコードされ得る。免疫グロブリン重鎖融合は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７または７２に基づくか又は由来する１００以上のヌクレオチドを含む核酸配列によってコードされ得る。免疫グロブリン重鎖融合は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７または７２に基づくか又は由来する５００以上のヌクレオチドを含む核酸配列によってコードされ得る。ヌクレオチドは連続し得る。代替的に、または付加的に、ヌクレオチドは不連続である。
【０１００】
＜インスリン免疫グロブリン融合タンパク質＞
本開示の１つの特徴において、（ａ）インスリン免疫グロブリン軽鎖融合、および（ｂ）免疫グロブリン重鎖に由来する第２の免疫グロブリン領域を含む、免疫グロブリン融合タンパク質が本明細書に提供される。幾つかの場合では、免疫グロブリン軽鎖融合は、１つ以上のジスルフィド結合及び／又はリンカーによって第２の免疫グロブリン領域に結合される。インスリン免疫グロブリン軽鎖融合は、免疫グロブリン軽鎖の領域のアミノ末端またはカルボキシル末端に結合された１つ以上の領域を含むインスリン治療用ペプチドを含む。幾つかの実施形態では、インスリン治療用ペプチドは、治療用ペプチドの１つ以上の領域を含む。幾つかの実施形態では、インスリン治療用ペプチドは、結合ペプチドによって結合された治療用ペプチドの２つの領域を含む。幾つかの実施形態では、治療用ペプチドはプロテアーゼ切断部位を含む。幾つかの実施形態では、結合ペプチドはプロテアーゼ切断部位を含む。幾つかの実施形態では、治療用ペプチドは、第１の鎖および第２の鎖を含み、ここで第１の鎖はインスリン治療用ペプチドの第１のアミノ酸配列を含み、第２の鎖はインスリン治療用ペプチドの第２のアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、免疫グロブリン軽鎖融合は、抗ＡＳＧＰＲ抗体のアミノ酸配列を含むか又はそれに由来するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、重鎖は、抗ＡＳＧＰＲ抗体のアミノ酸配列を含むか又はそれに由来するアミノ酸配列を含む。
【０１０１】
幾つかの実施形態では、インスリン免疫グロブリン融合タンパク質は、肥満症及び／又は糖尿病などの代謝疾患、及び／又はその合併症または疾病を処置するように構成されている。
【０１０２】
本開示の別の特徴において、（ａ）インスリン免疫グロブリン重鎖融合、および（ｂ）免疫グロブリン軽鎖に由来する第２の免疫グロブリン領域を含む、免疫グロブリン融合タンパク質が本明細書に提供される。幾つかの場合では、免疫グロブリン重鎖融合は、１つ以上のジスルフィド結合及び／又はリンカーによって第２の免疫グロブリン領域に結合される。インスリン免疫グロブリン重鎖融合は、免疫グロブリン重鎖の領域のアミノ末端またはカルボキシル末端に結合された１つ以上の領域を含むインスリン治療用ペプチドを含む。幾つかの実施形態では、インスリン治療用ペプチドは、治療用ペプチドの１つ以上の領域を含む。幾つかの実施形態では、インスリン治療用ペプチドは、結合ペプチドによって結合された治療用ペプチドの２つの領域を含む。幾つかの実施形態では、治療用ペプチドはプロテアーゼ切断部位を含む。幾つかの実施形態では、結合ペプチドはプロテアーゼ切断部位を含む。幾つかの実施形態では、治療用ペプチドは、第１の鎖および第２の鎖を含み、ここで第１の鎖はインスリン治療用ペプチドの第１のアミノ酸配列を含み、第２の鎖はインスリン治療用ペプチドの第２のアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、免疫グロブリン重鎖融合は、抗ＡＳＧＰＲ抗体のアミノ酸配列を含むか又はそれに由来するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、軽鎖は、抗ＡＳＧＰＲ抗体のアミノ酸配列を含むか又はそれに由来するアミノ酸配列を含む。
【０１０３】
本開示の別の特徴において、（ａ）インスリン免疫グロブリン軽鎖融合、および（ｂ）インスリン免疫グロブリン重鎖融合を含む、免疫グロブリン融合タンパク質が本明細書に提供される。
【０１０４】
幾つかの実施形態では、免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８に基づくか又は由来するアミノ酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０に基づくか又は由来するアミノ酸配列を含む。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８に対して少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、または９７％同一であるアミノ酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０に対して少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、または９７％同一であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：に７８対して１００％同一であるアミノ酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０に対して１００％同一であるアミノ酸配列を含み得る。幾つかの実施形態では、免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７に基づくか又は由来する核酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に基づくか又は由来する核酸配列によってコードされる。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７に対して少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、または９７％同一である核酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に対して少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、または９７％同一である核酸配列によってコードされ得る。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７に対して１００％同一である核酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に対して１００％同一である核酸配列によってコードされ得る。
【０１０５】
幾つかの実施形態では、免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９に基づくか又は由来するアミノ酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９に基づくか又は由来するアミノ酸配列を含む。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９に対して少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、または９７％同一であるアミノ酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９に対して少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、または９７％同一であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９に対して１００％同一であるアミノ酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９に対して１００％同一であるアミノ酸配列を含み得る。幾つかの実施形態では、免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８に基づくか又は由来する核酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に基づくか又は由来する核酸配列によってコードされる。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８に対して少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、または９７％同一である核酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に対して少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、または９７％同一である核酸配列によってコードされ得る。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８に対して１００％同一である核酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に対して１００％同一である核酸配列によってコードされ得る。
【０１０６】
幾つかの実施形態では、免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８０に基づくか又は由来するアミノ酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１に基づくか又は由来するアミノ酸配列を含む。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８０に対して少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、または９７％同一であるアミノ酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１に対して少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、または９７％同一であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８０に対して１００％同一であるアミノ酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１に対して１００％同一であるアミノ酸配列を含み得る。幾つかの実施形態では、免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９に基づくか又は由来する核酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に基づくか又は由来する核酸配列によってコードされる。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９に対して少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、または９７％同一である核酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に対して少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、または９７％同一である核酸配列によってコードされ得る。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９に対して１００％同一である核酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に対して１００％同一である核酸配列によってコードされ得る。
【０１０７】
幾つかの実施形態では、免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１に基づくか又は由来するアミノ酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６７に基づくか又は由来するアミノ酸配列を含む。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１に対して少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、または９７％同一であるアミノ酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６７に対して少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、または９７％同一であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１に対して１００％同一であるアミノ酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６７に対して１００％同一であるアミノ酸配列を含み得る。幾つかの実施形態では、免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０に基づくか又は由来する核酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６６に基づくか又は由来する核酸配列によってコードされる。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０に対して少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、または９７％同一である核酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６６に対して少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、または９７％同一である核酸配列によってコードされ得る。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０に対して１００％同一である核酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６６に対して１００％同一である核酸配列によってコードされ得る。
【０１０８】
幾つかの実施形態では、免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８２に基づくか又は由来するアミノ酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６７に基づくか又は由来するアミノ酸配列を含む。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８２に対して少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、または９７％同一であるアミノ酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６７に対して少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、または９７％同一であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８２に対して１００％同一であるアミノ酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６７に対して１００％同一であるアミノ酸配列を含み得る。幾つかの実施形態では、免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１に基づくか又は由来する核酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６６に基づくか又は由来する核酸配列によってコードされる。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１に対して少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、または９７％同一である核酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６６に対して少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、または９７％同一である核酸配列によってコードされ得る。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１に対して１００％同一である核酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６６に対して１００％同一である核酸配列によってコードされ得る。
【０１０９】
幾つかの実施形態では、免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８３に基づくか又は由来するアミノ酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６７に基づくか又は由来するアミノ酸配列を含む。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８３に対して少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、または９７％同一であるアミノ酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６７に対して少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、または９７％同一であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８３に対して１００％同一であるアミノ酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６７に対して１００％同一であるアミノ酸配列を含み得る。幾つかの実施形態では、免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２に基づくか又は由来する核酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６６に基づくか又は由来する核酸配によってコードされる。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２に対して少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、または９７％同一である核酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６６に対して少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、または９７％同一である核酸配列によってコードされ得る。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２に対して１００％同一である核酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６６に対して１００％同一である核酸配列によってコードされ得る。
【０１１０】
幾つかの実施形態では、免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８４に基づくか又は由来するアミノ酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４または３６に基づくか又は由来するアミノ酸配列を含む。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８４に対して少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、または９７％同一であるアミノ酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４または３６に対して少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、または９７％同一であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８４に対して１００％同一であるアミノ酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４または３６に対して１００％同一であるアミノ酸配列を含み得る。幾つかの実施形態では、免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３に基づくか又は由来する核酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６または８に基づくか又は由来する核酸配列によってコードされる。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３に対して少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、または９７％同一である核酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６または８に対して少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、または９７％同一である核酸配列によってコードされ得る。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３に対して１００％同一である核酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６または８に対して１００％同一である核酸配列によってコードされ得る。
【０１１１】
幾つかの実施形態では、免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８５に基づくか又は由来するアミノ酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４または３６に基づくか又は由来するアミノ酸配列を含む。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８５に対して少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、または９７％同一であるアミノ酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４または３６に対して少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、または９７％同一であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８５に対して１００％同一であるアミノ酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４または３６に対して１００％同一であるアミノ酸配列を含み得る。幾つかの実施形態では、免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４に基づくか又は由来する核酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６または８に基づくか又は由来する核酸配列によってコードされる。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４に対して少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、または９７％同一である核酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６または８に対して少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、または９７％同一である核酸配列によってコードされ得る。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４に対して１００％同一である核酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６または８に対して１００％同一である核酸配列によってコードされ得る。
【０１１２】
幾つかの実施形態では、免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６に基づくか又は由来するアミノ酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１に基づくか又は由来するアミノ酸配列を含む。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６に対して少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、または９７％同一であるアミノ酸配列および少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１に対して９７％同一であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６に対して１００％同一であるアミノ酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１に対して１００％同一であるアミノ酸配列を含み得る。幾つかの実施形態では、免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５に基づくか又は由来する核酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に基づくか又は由来する核酸配列によってコードされる。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５に対して少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、または９７％同一である核酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に対して少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、または９７％同一である核酸配列によってコードされ得る。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５に対して１００％同一である核酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に対して１００％同一である核酸配列によってコードされ得る。
【０１１３】
幾つかの実施形態では、免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８７に基づくか又は由来するアミノ酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４または３６に基づくか又は由来するアミノ酸配列を含む。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８７に対して少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、または９７％同一であるアミノ酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４または３６に対して少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、または９７％同一であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８７に対して１００％同一であるアミノ酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４または３６に対して１００％同一であるアミノ酸配列を含み得る。幾つかの実施形態では、免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６に基づくか又は由来する核酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６または８に基づくか又は由来する核酸配列によってコードされる。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６に対して少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、または９７％同一である核酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６または８に対して少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、または９７％同一である核酸配列によってコードされ得る。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６に対して１００％同一である核酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６または８に対して１００％同一である核酸配列によってコードされ得る。
【０１１４】
幾つかの実施形態では、免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８８に基づくか又は由来するアミノ酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４または３６に基づくか又は由来するアミノ酸配列を含む。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８８に対して少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、または９７％同一であるアミノ酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４または３６に対して少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、または９７％同一であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８８に対して１００％同一であるアミノ酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４または３６に対して１００％同一であるアミノ酸配列を含み得る。幾つかの実施形態では、免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７に基づくか又は由来する核酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６または８に基づくか又は由来する核酸配列によってコードされる。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７に対して少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、または９７％同一である核酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６または８に対して少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、または９７％同一である核酸配列によってコードされ得る。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７に対して１００％同一である核酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６または８に対して１００％同一である核酸配列によってコードされ得る。
【０１１５】
幾つかの実施形態では、免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８９に基づくか又は由来するアミノ酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４または３６に基づくか又は由来するアミノ酸配列を含む。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８９に対して少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、または９７％同一であるアミノ酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４または３６に対して少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、または９７％同一であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８９に対して１００％同一であるアミノ酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４または３６に対して１００％同一であるアミノ酸配列を含み得る。幾つかの実施形態では、免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８に基づくか又は由来する核酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６または８に基づくか又は由来する核酸配列によってコードされる。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８に対して少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、または９７％同一である核酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６または８に対して少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、または９７％同一である核酸配列によってコードされ得る。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８に対して１００％同一である核酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６または８に対して１００％同一である核酸配列によってコードされ得る。
【０１１６】
幾つかの実施形態において、免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９０に基づく又はそれに由来するアミノ酸配列、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４又は３６に基づく又はそれに由来するアミノ酸配列を含む。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９０に少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、又は９７％同一であるアミノ酸配列、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４又は３６に少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、又は９７％同一であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９０に１００％同一であるアミノ酸配列、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４又は３６に１００％同一であるアミノ酸配列を含み得る。幾つかの実施形態において、免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９に基づく又はそれに由来する核酸配列、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６又は８に基づく又はそれに由来する核酸配列により、コードされる。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９に少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、６９％、９５％、又は９７％同一である核酸配列、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６又は８に少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、又は９７％同一である核酸配列により、コードされ得る。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９に１００％同一である核酸配列、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６又は８に１００％同一である核酸配列により、コードされ得る。
【０１１７】
幾つかの実施形態において、免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９１に基づく又はそれに由来するアミノ酸配列、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４又は３６に基づく又はそれに由来するアミノ酸配列を含む。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９１に少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９１％、９５％、又は９７％同一であるアミノ酸配列、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４又は３６に少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、又は９７％同一であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９１に１００％同一であるアミノ酸配列、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４又は３６に１００％同一であるアミノ酸配列を含み得る。幾つかの実施形態において、免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０に基づく又はそれに由来する核酸配列、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６又は８に基づく又はそれに由来する核酸配列により、コードされる。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０に少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、６９％、９５％、又は９７％同一である核酸配列、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６又は８に少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、又は９７％同一である核酸配列により、コードされ得る。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０に１００％同一である核酸配列、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６又は８に１００％同一である核酸配列により、コードされ得る。
【０１１８】
幾つかの実施形態において、免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２に基づく又はそれに由来するアミノ酸配列、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４又は３６に基づく又はそれに由来するアミノ酸配列を含む。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２に少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９１％、９５％、又は９７％同一であるアミノ酸配列、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４又は３６に少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、又は９７％同一であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２に１００％同一であるアミノ酸配列、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４又は３６に１００％同一であるアミノ酸配列を含み得る。幾つかの実施形態において、免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１に基づく又はそれに由来する核酸配列、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６又は８に基づく又はそれに由来する核酸配列により、コードされる。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１に少なくとも約６０％、７１％、７５％、８０％、６９％、９５％、又は９７％同一である核酸配列、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６又は８に少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、又は９７％同一である核酸配列により、コードされ得る。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１に１００％同一である核酸配列、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６又は８に１００％同一である核酸配列により、コードされ得る。
【０１１９】
幾つかの実施形態において、免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９５に基づく又はそれに由来するアミノ酸配列、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４又は３６に基づく又はそれに由来するアミノ酸配列を含む。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９５に少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９１％、９５％、又は９７％同一であるアミノ酸配列、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４又は３６に少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、又は９７％同一であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９５に１００％同一であるアミノ酸配列、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４又は３６に１００％同一であるアミノ酸配列を含み得る。幾つかの実施形態において、免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７４に基づく又はそれに由来する核酸配列、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６又は８に基づく又はそれに由来する核酸配列により、コードされる。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７４に少なくとも約６０％、７１％、７５％、８０％、６９％、９５％、又は９７％同一である核酸配列、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６又は８に少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、又は９７％同一である核酸配列により、コードされ得る。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７４に１００％同一である核酸配列、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６又は８に１００％同一である核酸配列により、コードされ得る。
【０１２０】
幾つかの実施形態において、免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９６に基づく又はそれに由来するアミノ酸配列、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７又は３８に基づく又はそれに由来するアミノ酸配列を含む。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９６に少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９１％、９５％、又は９７％同一であるアミノ酸配列、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７又は３８に少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、又は９７％同一であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９６に１００％同一であるアミノ酸配列、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７又は３８に１００％同一であるアミノ酸配列を含み得る。幾つかの実施形態において、免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５に基づく又はそれに由来する核酸配列、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９又は１０に基づく又はそれに由来する核酸配列により、コードされる。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５に少なくとも約６０％、７１％、７５％、８０％、６９％、９５％、又は９７％同一である核酸配列、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９又は１０に少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、又は９７％同一である核酸配列により、コードされ得る。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５に１００％同一である核酸配列、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９又は１０に１００％同一である核酸配列により、コードされ得る。
【０１２１】
幾つかの実施形態において、免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９７に基づく又はそれに由来するアミノ酸配列、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４又は３６に基づく又はそれに由来するアミノ酸配列を含む。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９７に少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９１％、９５％、又は９７％同一であるアミノ酸配列、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４又は３６に少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、又は９７％同一であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９７に１００％同一であるアミノ酸配列、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４又は３６に１００％同一であるアミノ酸配列を含み得る。幾つかの実施形態において、免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６に基づく又はそれに由来する核酸配列、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６又は８に基づく又はそれに由来する核酸配列により、コードされる。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６に少なくとも約６０％、７１％、７５％、８０％、６９％、９５％、又は９７％同一である核酸配列、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６又は８に少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、又は９７％同一である核酸配列により、コードされ得る。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６に１００％同一である核酸配列、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６又は８に１００％同一である核酸配列により、コードされ得る。
【０１２２】
幾つかの実施形態において、免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９８に基づく又はそれに由来するアミノ酸配列、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７又は３８に基づく又はそれに由来するアミノ酸配列を含む。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９８に少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９１％、９５％、又は９７％同一であるアミノ酸配列、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７又は３８に少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、又は９７％同一であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９８に１００％同一であるアミノ酸配列、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７又は３８に１００％同一であるアミノ酸配列を含み得る。幾つかの実施形態において、免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７に基づく又はそれに由来する核酸配列、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９又は１０に基づく又はそれに由来する核酸配列により、コードされる。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７に少なくとも約６０％、７１％、７７％、８０％、６９％、９５％、又は９７％同一である核酸配列、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９又は１０に少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、又は９７％同一である核酸配列により、コードされ得る。免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７に１００％同一である核酸配列、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９又は１０に１００％同一である核酸配列により、コードされ得る。
【０１２３】
免疫グロブリン領域
本明細書に開示される免疫グロブリン融合タンパク質は、１以上の免疫グロブリン領域を含む。肝臓を標的とした融合のために、免疫グロブリン領域は、抗原結合ドメインの１以上の部分を含み、ここで抗原結合ドメインは肝細胞の抗原に対して特異性を持つ。幾つかの実施形態において、抗原は肝実質細胞により発現される。幾つかの実施形態において、抗原はアシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰＲ）である。抗原結合ドメインは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６２を持つＡＳＧＰＲのエピトープの１以上のアミノ酸に結合し得、ここで、１以上のアミノ酸は、Ｒ１０、Ｇ１１、Ｆ１９、Ｇ３５、Ｎ３６、Ｑ４７、Ｓ５６、Ｌ８３、Ｗ１３４、Ｅ１３５、Ｋ１３８、Ｖ１４０、Ｈ１４２、及びＫ１７３から選択される。エピトープの１以上のアミノ酸は、Ｗ１３４、Ｅ１３５、Ｋ１３８、Ｖ１４０、Ｈ１４２、及びＫ１７３の任意の組み合わせを含み得る。
【０１２４】
インスリン融合タンパク質の免疫グロブリン領域は：（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５を含む重鎖可変領域配列；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６を含む重鎖可変領域配列；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５５を含む重鎖可変領域配列；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４７を含む重鎖可変領域配列；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８を含む軽鎖可変領域配列；（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９を含む軽鎖可変領域配列；（ｇ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５０を含む軽鎖可変領域配列；（ｈ）（ａ）、（ｂ）、及び（ｄ）の組み合わせ；（ｉ）（ａ）、（ｃ）、及び（ｄ）の組み合わせ；（ｊ）（ｅ）、（ｆ）、及び（ｇ）の組み合わせ；（ｋ）（ｈ）と（ｊ）の組み合わせ；又は（ｌ）（ｉ）と（ｊ）の組み合わせを含む。本明細書に記載されるインスリン免疫グロブリン融合タンパク質に有用な、ＡＳＧＰＲに特異的な免疫グロブリンは、ＵＳ２０１５／０２９９３２４、ＵＳ２０１３／００７８２１６、ＷＯ２０１１／０８６１４３、ＵＳ２０１６／００６０３５４、及びＵＳ２０１６／００１５８２１の何れかに記載されるものを含む。また、市販で入手可能な抗ＡＳＧＰＲ免疫グロブリンと、本明細書に記載される任意の抗ＡＳＧＰＲと競合する免疫グロブリンが、インスリン免疫グロブリン融合タンパク質での使用のために構想される。
【０１２５】
場合によっては、免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５−４７及び５５の１以上と、５、４、３、２、又は１つ以下のアミノ酸だけ異なるアミノ酸配列を有するＣＤＲを含んでいる。場合によっては、免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５と、５、４、３、２、又は１つ以下のアミノ酸だけ異なるアミノ酸配列を有するＣＤＲを含んでいる。場合によっては、免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６と、５、４、３、２、又は１つ以下のアミノ酸だけ異なるアミノ酸配列を有するＣＤＲを含んでいる。場合によっては、免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５５と、５、４、３、２、又は１つ以下のアミノ酸だけ異なるアミノ酸配列を有するＣＤＲを含んでいる。場合によっては、免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４７と、５、４、３、２、又は１つ以下のアミノ酸だけ異なるアミノ酸配列を有するＣＤＲを含んでいる。
【０１２６】
場合によっては、免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９及びＳＥＱ：４３から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％同一であるアミノ酸配列を持つ可変領域を含む。場合によっては、免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９及びＳＥＱ：４３から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％相同性であるアミノ酸配列を持つ可変領域を含む。場合によっては、免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９、３４、３６−３０、及び４３から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％同一であるアミノ酸配列を含む。場合によっては、免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９、３４、３６−４０、及び４３から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％相同性であるアミノ酸配列を含む。
【０１２７】
場合によっては、免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８−５０の１以上と、５、４、３、２、又は１つ以下のアミノ酸だけ異なるアミノ酸配列を有するＣＤＲを含んでいる。場合によっては、免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８と、５、４、３、２、又は１つ以下のアミノ酸だけ異なるアミノ酸配列を有するＣＤＲを含んでいる。場合によっては、免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９と、５、４、３、２、又は１つ以下のアミノ酸だけ異なるアミノ酸配列を有するＣＤＲを含んでいる。場合によっては、免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５０と、５、４、３、２、又は１つ以下のアミノ酸だけ異なるアミノ酸配列を有するＣＤＲを含んでいる。
【０１２８】
場合によっては、免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１及び４４から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％同一であるアミノ酸配列を持つ可変領域を含む。場合によっては、免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１及び４４：から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％相同性であるアミノ酸配列を持つ可変領域を含む。場合によっては、免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０、３３、３５、４１、４２、及び４４から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％同一であるアミノ酸配列を含む。場合によっては、免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０、３３、３５、４１、４２、及び４４から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％相同性であるアミノ酸配列を含む。
【０１２９】
免疫グロブリン領域は、可変ドメインの少なくとも一部を含み得る。免疫グロブリン領域は１以上の可変ドメイン又はその一部を含み得る。免疫グロブリン領域は、２、３、４、５、又はそれ以上の可変ドメイン又はその一部を含み得る。免疫グロブリン領域は、１以上の可変ドメインのアミノ酸配列に基づく又はそれに由来する、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、又はそれ以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。アミノ酸は連続していてもよい。アミノ酸は連続していなくてもよい。
【０１３０】
免疫グロブリン領域は、定常ドメインの少なくとも一部を含み得る。免疫グロブリン領域は１以上の定常ドメイン又はその一部を含み得る。免疫グロブリン領域は、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、又はそれ以上の定常ドメイン又はその一部を含み得る。免疫グロブリン領域は、１以上の定常ドメインアミノ酸配列に基づく又はそれに由来する、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３５０、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１２００、１４００、又はそれ以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。アミノ酸は連続していてもよい。アミノ酸は連続していなくてもよい。
【０１３１】
免疫グロブリン領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）の少なくとも一部を含み得る。免疫グロブリン領域は、１以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）又はその一部を含み得る。免疫グロブリン領域は、２、３、４、５、又はそれ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）又はその一部を含み得る。免疫グロブリン領域は、６、７、８、又はそれ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）又はその一部を含み得る。免疫グロブリン領域は、４以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）又はその一部を含み得る。免疫グロブリン領域は、９、１０、１１、又はそれ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）又はその一部を含み得る。１以上のＣＤＲは、ＣＤＲ１、ＣＤＲ３、ＣＤＲ３、又はそれらの組み合わせであり得る。１以上のＣＤＲはＣＤＲ１でもよい。１以上のＣＤＲはＣＤＲ２でもよい。１以上のＣＤＲはＣＤＲ３でもよい。ＣＤＲは重鎖ＣＤＲでもよい。１以上のＣＤＲは軽鎖ＣＤＲでもよい。
【０１３２】
免疫グロブリン領域は、ＣＤＲのアミノ酸配列に基づく又はそれに由来する、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０又はそれ以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、ＣＤＲのアミノ酸配列に基づく又はそれに由来する、３以上のアミノ酸配列を含む、アミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、ＣＤＲのアミノ酸配列に基づく又はそれに由来する、５以上のアミノ酸配列を含む、アミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、ＣＤＲのアミノ酸配列に基づく又はそれに由来する、１０以上のアミノ酸配列を含む、アミノ酸配列を含み得る。アミノ酸は連続していてもよい。アミノ酸は連続していなくてもよい。
【０１３３】
免疫グロブリン領域は、抗Ｔ細胞受容体免疫グロブリンの少なくとも一部に基づく又はそれに由来し得る。免疫グロブリン領域は、抗Ｂ細胞受容体免疫グロブリンの少なくとも一部に基づく又はそれに由来し得る。
【０１３４】
免疫グロブリン領域は、細胞上で受容体の少なくとも一部に結合する、免疫グロブリン又は免疫グロブリンフラグメントに基づく又はそれに由来し得る。免疫グロブリン領域は、細胞上で共受容体の少なくとも一部に結合する、免疫グロブリン又は免疫グロブリンフラグメントに基づく又はそれに由来し得る。免疫グロブリン領域は、細胞上で抗原又は細胞表面マーカーの少なくとも一部に結合する、免疫グロブリン又は免疫グロブリンフラグメントに基づく又はそれに由来し得る。細胞は造血細胞であり得る。造血細胞は骨髄細胞であり得る。骨髄細胞は、赤血球、血小板、好中球、単球、マクロファージ、好酸球、好塩基球、又は肥満細胞であり得る。造血細胞はリンパ系細胞であり得る。リンパ系細胞はＢ細胞、Ｔ細胞、又はＮＫ細胞であり得る。造血細胞は白血球であり得る。造血細胞はリンパ球であり得る。
【０１３５】
免疫グロブリン領域は、肝実質細胞上で受容体の少なくとも一部に結合する、免疫グロブリン又は免疫グロブリンフラグメントに基づく又はそれに由来し得る。受容体はＡＳＰＧＲであり得る。
【０１３６】
免疫グロブリン領域は、抗ＡＳＧＰＲ免疫グロブリンに基づくか、又はそれに由来し得る。免疫グロブリン領域は、抗ＡＳＧＰＲ免疫グロブリンの少なくとも一部を含み得る。免疫グロブリン領域は、抗ＡＳＧＰＲ免疫グロブリンの少なくとも一部に少なくとも約５０％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、抗ＡＳＧＰＲ免疫グロブリンの少なくとも一部に少なくとも約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、又は９７％又はそれ以上相同性であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、抗ＡＳＧＰＲ免疫グロブリンの少なくとも一部に少なくとも約７０％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、抗ＡＳＧＰＲ免疫グロブリンの少なくとも一部に少なくとも約８０％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。
【０１３７】
免疫グロブリン領域は、抗ＡＳＧＰＲ免疫グロブリン配列の１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０又はそれ以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、抗ＡＳＧＰＲ免疫グロブリン配列の１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００又はそれ以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、抗ＡＳＧＰＲ免疫グロブリン配列の５０以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、抗ＡＳＧＰＲ免疫グロブリン配列の１００以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、抗ＡＳＧＰＲ免疫グロブリン配列の２００以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。
【０１３８】
免疫グロブリン領域は、リンパ球、Ｂ細胞、マクロファージ、単球、好中球、及び／又はＮＫ細胞の上で受容体の少なくとも一部に結合する、免疫グロブリン又は免疫グロブリンフラグメントに基づく又はそれに由来し得る。受容体はＦｃ受容体であり得る。Ｆｃ受容体は、Ｆｃ−ガンマ受容体、Ｆｃ−アルファ受容体、及び／又はＦｃ−イプシロン受容体であり得る。Ｆｃ−ガンマ受容体は、限定されないが、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）、及びＦｃγＲＩＩＩＢ（ＣＤ１６ｂ）を含む。Ｆｃ−アルファ受容体は、限定されないがＦｃαＲＩを含む。Ｆｃ−イプシロン受容体は、限定されないが、ＦｃεＲＩ及びＦｃεＲＩＩを含む。受容体は、ＣＤ８９（ＩｇＡ受容体のＦｃフラグメント又はＦＣＡＲ）であり得る。
【０１３９】
免疫グロブリン領域は、Ｔ細胞上で共受容体の少なくとも一部に結合する、免疫グロブリン免疫グロブリンフラグメントに基づく又はそれに由来し得る。共受容体はＣＤ３、ＣＤ４、及び／又はＣＤ８であり得る。免疫グロブリン領域は、ＣＤ３共受容体に結合する免疫グロブリンフラグメントに基づく又はそれに由来し得る。ＣＤ３共受容体は、ＣＤ３−ガンマ、ＣＤ３−デルタ、及び／又はＣＤ３−イプシロンを含み得る。ＣＤ８は、ＣＤ８−アルファ及び／又はＣＤ８−ベータの鎖を含み得る。
【０１４０】
幾つかの実施形態において、免疫グロブリン領域は哺乳類標的に対して特異的ではない。幾つかの実施形態において、免疫グロブリンは、抗ウイルス性免疫グロブリンである。幾つかの実施形態において、免疫グロブリンは、抗菌性免疫グロブリンである。幾つかの実施形態において、免疫グロブリンは、抗寄生虫性免疫グロブリンである。幾つかの実施形態において、免疫グロブリンは、抗真菌性免疫グロブリンである。幾つかの実施形態において、免疫グロブリン領域は、免疫グロブリンワクチンに由来する。
【０１４１】
幾つかの実施形態において、免疫グロブリン領域は、アクトクスマブ（ａｃｔｏｘｕｍａｂ）、ベズロトクスマブ（ｂｅｚｌｏｔｏｘｕｍａｂ）、ＣＲ６２６１、エドバコマブ、エファングマブ、エクスビビルマブ（ｅｘｂｉｖｉｒｕｍａｂ）、フェルビズマブ（ｆｅｌｖｉｚｕｍａｂ）、フォラビルマブ（ｆｏｒａｖｉｒｕｍａｂ）、イバリズマブ（ｉｂａｌｉｚｕｍａｂ）（ＴＭＢ−３５５、ＴＮＸ−３５５）、リビビルマブ（ｌｉｂｉｖｉｒｕｍａｂ）、モタビズマブ、ネバクマブ、パギバキシマブ、パリビズマブ、パノマクマブ、ラフィビルマブ（ｒａｆｉｖｉｒｕｍａｂ）、ラキシバクマブ、レガビルマブ、セヴィルマブ（ｓｅｖｉｒｕｍａｂ）（ＭＳＬ−１０９）、スビズマブ（ｓｕｖｉｚｕｍａｂ）、テフィバズマブ、ツビルマブ（ｔｕｖｉｒｕｍａｂ）、及びウルトキサズマブを含むがこれらに限定されない免疫グロブリンに基づく又はそれに由来する。
【０１４２】
幾つかの実施形態において、免疫グロブリン領域は、クロストリジウム・ディフィシル、オルソミクソウイルス（インフルエンザウイルスＡ、インフルエンザウイルスＢ、インフルエンザウイルスＣ、イサウイルス、ソゴトウイルス）、大腸菌、カンジダ属、狂犬病、ヒト免疫不全ウイルス、肝炎、ブドウ球菌、呼吸系発疹ウイルス、緑膿菌、炭疽菌、サイトメガロウィルス、又は黄色ブドウ球菌を標的とする免疫グロブリンに基づく又はそれに由来する。
【０１４３】
免疫グロブリン領域は、抗ウイルス性免疫グロブリンに基づく又はそれに由来し得る。抗真ウイルス性免疫グロブリンは、ウイルスタンパク質のエピトープに向けられ得る。抗菌性免疫グロブリンは、アデノウイルス、ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、パルボウィルス、レオウイルス、ピコルナウイルス、トガウイルス、オルソミクソウイルス、ラブドウイルス、レトロウイルス、及びヘパドナウイルスを含むがこれらに限定されない、１以上のウイルスを標的とし得る。ウイルスタンパク質は呼吸系発疹ウイルス由来であり得る。ウイルスタンパク質は、呼吸系発疹ウイルスのＦタンパク質であり得る。エピトープはＦタンパク質のＡ抗原部位にあり得る。抗ウイルス性免疫グロブリンはパリビズマブに基づく又はそれに由来し得る。免疫グロブリンは、抗ウイルス性ワクチンに基づく又はそれに由来し得る。抗ウイルス性免疫グロブリンは、エクスビビルマブ（ｅｘｂｉｖｉｒｕｍａｂ）、フォラビルマブ（ｆｏｒａｖｉｒｕｍａｂ）、リビビルマブ（ｌｉｂｉｖｉｒｕｍａｂ）、ラフィビルマブ（ｒａｆｉｖｉｒｕｍａｂ）、レガビルマブ、セビルマブ（ｓｅｖｉｒｕｍａｂ）、ツビルマブ（ｔｕｖｉｒｕｍａｂ）、フェルビズマブ（ｆｅｌｖｉｚｕｍａｂ）、モタビズマブ、パリビズマブ、及び／又はスビズマブ（ｓｕｖｉｚｕｍａｂ）に基づく又はそれらに由来し得る。
【０１４４】
免疫グロブリン領域は、抗ウイルス性免疫グロブリンＧに基づく又はそれに由来し得る。免疫グロブリン領域は、抗ウイルス性免疫グロブリンＧの少なくとも一部を含み得る。免疫グロブリン領域は、抗ウイルス性免疫グロブリンＧの少なくとも一部に少なくとも約５０％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、抗ウイルス性免疫グロブリンＧの少なくとも一部に少なくとも約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、又は９７％又はそれ以上相同性であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、抗ウイルス性免疫グロブリンＧの少なくとも一部に少なくとも約７０％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、抗ウイルス性免疫グロブリンＧの少なくとも一部に少なくとも約８０％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。幾つかの実施形態において、免疫グロブリン領域は、抗ウイルス性免疫グロブリンＭに基づく又はそれに由来するアミノ酸配列を含む。
【０１４５】
免疫グロブリン領域は、抗ウイルス性免疫グロブリンＧ配列の１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０又はそれ以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、抗ウイルス性免疫グロブリンＧ配列の１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００又はそれ以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、抗ウイルス性免疫グロブリンＧ配列の５０以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、抗ウイルス性免疫グロブリンＧ配列の１００以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、抗ウイルス性免疫グロブリンＧ配列の２００以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。
【０１４６】
免疫グロブリン領域は、パリビズマブ免疫グロブリンに基づく又はそれに由来し得る。免疫グロブリン領域は、パリビズマブ免疫グロブリンの少なくとも一部を含み得る。免疫グロブリン領域は、パリビズマブ免疫グロブリンの少なくとも一部に少なくとも約５０％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、パリビズマブ免疫グロブリンの少なくとも一部に少なくとも約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、又は９７％又はそれ以上相同性であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、パリビズマブ免疫グロブリンの少なくとも一部に少なくとも約７０％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、パリビズマブ免疫グロブリンの少なくとも一部に少なくとも約８０％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。
【０１４７】
免疫グロブリン領域は、パリビズマブ免疫グロブリン配列の１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０又はそれ以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、パリビズマブ免疫グロブリン配列の１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００又はそれ以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、パリビズマブ免疫グロブリン配列の５０以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、パリビズマブ免疫グロブリン配列の１００以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、パリビズマブ免疫グロブリン配列の２００以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。
【０１４８】
免疫グロブリン領域は、エクスビビルマブ、フォラビルマブ、リビビルマブ、ラフィビルマブ、レガビルマブ、セビルマブ、ツビルマブ、フェルビズマブ、モタビズマブ、パリビズマブ、及び／又はスビズマブの免疫グロブリンに基づく又はそれらに由来し得る。免疫グロブリン領域は、エクスビビルマブ、フォラビルマブ、リビビルマブ、ラフィビルマブ、レガビルマブ、セビルマブ、ツビルマブ、フェルビズマブ、モタビズマブ、パリビズマブ、及び／又はスビズマブの免疫グロブリンの少なくとも一部を含み得る。免疫グロブリン領域は、エクスビビルマブ、フォラビルマブ、リビビルマブ、ラフィビルマブ、レガビルマブ、セビルマブ、ツビルマブ、フェルビズマブ、モタビズマブ、パリビズマブ、及び／又はスビズマブの免疫グロブリンに少なくとも約５０％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、エクスビビルマブ、フォラビルマブ、リビビルマブ、ラフィビルマブ、レガビルマブ、セビルマブ、ツビルマブ、フェルビズマブ、モタビズマブ、パリビズマブ、及び／又はスビズマブの免疫グロブリンの少なくとも一部に少なくとも約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、又は９７％又はそれ以上相同性であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、エクスビビルマブ、フォラビルマブ、リビビルマブ、ラフィビルマブ、レガビルマブ、セビルマブ、ツビルマブ、フェルビズマブ、モタビズマブ、パリビズマブ、及び／又はスビズマブの免疫グロブリンに少なくとも約７０％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、エクスビビルマブ、フォラビルマブ、リビビルマブ、ラフィビルマブ、レガビルマブ、セビルマブ、ツビルマブ、フェルビズマブ、モタビズマブ、パリビズマブ、及び／又はスビズマブの免疫グロブリンに少なくとも約８０％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。
【０１４９】
免疫グロブリン領域は、エクスビビルマブ、フォラビルマブ、リビビルマブ、ラフィビルマブ、レガビルマブ、セビルマブ、ツビルマブ、フェルビズマブ、モタビズマブ、パリビズマブ、及び／又はスビズマブの免疫グロブリン配列の１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０又はそれ以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、エクスビビルマブ、フォラビルマブ、リビビルマブ、ラフィビルマブ、レガビルマブ、セビルマブ、ツビルマブ、フェルビズマブ、モタビズマブ、パリビズマブ、及び／又はスビズマブの免疫グロブリン配列の１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００又はそれ以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、エクスビビルマブ、フォラビルマブ、リビビルマブ、ラフィビルマブ、レガビルマブ、セビルマブ、ツビルマブ、フェルビズマブ、モタビズマブ、パリビズマブ、及び／又はスビズマブの免疫グロブリン配列の５０以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、エクスビビルマブ、フォラビルマブ、リビビルマブ、ラフィビルマブ、レガビルマブ、セビルマブ、ツビルマブ、フェルビズマブ、モタビズマブ、パリビズマブ、及び／又はスビズマブの免疫グロブリン配列の１００以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、エクスビビルマブ、フォラビルマブ、リビビルマブ、ラフィビルマブ、レガビルマブ、セビルマブ、ツビルマブ、フェルビズマブ、モタビズマブ、パリビズマブ、及び／又はスビズマブの免疫グロブリン配列の２００以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。
【０１５０】
免疫グロブリン領域は、抗菌性免疫グロブリンに基づくか、又はそれに由来し得る。抗菌性免疫グロブリンは、細菌タンパク質のエピトープに向けられ得る。抗菌性免疫グロブリンは細菌を標的とし、細菌は、限定されないが、Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ａｕｒａｎｔｉｕｓ、Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｒａｄｉｏｂａｃｔｅｒ、Ａｎａｐｌａｓｍａ  ｐｈａｇｏｃｙｔｏｐｈｉｌｕｍ、Ａｚｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ  ｃａｕｌｉｎｏｄａｎｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｈｒａｃｉｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｒｅｖｉｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｅｒｅｕｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｆｒａｇｉｌｉｓ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｍｅｌａｎｉｎｏｇｅｎｉｃｕｓ、Ｂａｒｔｏｎｅｌｌａ  ｑｕｉｎｔａｎａ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ、Ｂｏｒｒｅｌｉａ  ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ、Ｂｒｕｃｅｌｌａ  ａｂｏｒｔｕｓ、Ｂｒｕｃｅｌｌａ  ｍｅｌｉｔｅｎｓｉｓ、Ｂｒｕｃｅｌｌａ  ｓｕｉｓ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｍａｌｌｅｉ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｐｓｅｕｄｏｍａｌｌｅｉ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃｅｐａｃｉａ、Ｃａｌｙｍｍａｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｒａｎｕｌｏｍａｔｉｓ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｃｏｌｉ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｆｅｔｕｓ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ、Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ  ｐｓｉｔｔａｃｉ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｆｕｓｉｆｏｒｍｅ、Ｃｏｘｉｅｌｌａ  ｂｕｒｎｅｔｉｉ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｃｌｏａｃａｅ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｇａｌｌｌｉｎａｒｕｍ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｍａｌｏｒａｔｕｓ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ  ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ、Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｎｕｃｌｅａｔｕｍ、Ｇａｒｄｎｅｒｅｌｌａ  ｖａｇｉｎａｌｉｓ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｐａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｖａｇｉｎａｌｉｓ、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｌａｃｔｉｓ、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ、Ｍｅｔｈａｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｅｘｔｒｏｑｕｅｎｓ、Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｍｕｌｔｉｆｏｒｍｅ、Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｌｕｔｅｕｓ、Ｍｏｒａｘｅｌｌａ  ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｐｈｌ���ｉ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｍｅｇｍａｔｉｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｇｅｎｉｔａｌｉｕｍ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｏｍｉｎｉｓ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉｅ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ  ｍｕｌｔｏｃｉｄａ、Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ  ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ、Ｐｅｐｔｏｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ  ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ、Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ  ｍｅｌａｎｉｎｏｇｅｎｉｃａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ  ｒａｄｉｏｂａｃｔｅｒ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ  ｒｉｃｋｅｔｔｓｉｉ、Ｒｏｔｈｉａ  ｄｅｎｔｏｃａｒｉｏｓａ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ  ｄｙｓｅｎｔｅｒｉａｅ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ  ｍａｌｔｏｐｈｉｌｉａ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐａｌｌｉｄｕｍ、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｄｅｎｔｉｃｏｌａ、Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ、Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｏｍｍａ、Ｖｉｂｒｉｏ  ｐａｒａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ、Ｖｉｂｒｉｏ  ｖｕｌｎｉｆｉｃｕｓ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ、及びＹｅｒｓｉｎｉａ  ｐｓｅｕｄｏｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓを含む。免疫グロブリンは、細菌ワクチンに基づく又はそれに由来し得る。抗ウイルス性免疫グロブリンは、ネバクマブ、パノマクマブ、ラキシバクマブ、エドバコマブ、パギバキシマブ、及び／又はテフィバズマブに基づく又はそれらに由来し得る。
【０１５１】
免疫グロブリン領域は、抗菌性免疫グロブリンＧに基づくか、又はそれに由来し得る。免疫グロブリン領域は、抗菌性免疫グロブリンＧの少なくとも一部を含み得る。免疫グロブリン領域は、抗菌性免疫グロブリンＧの少なくとも一部に少なくとも約５０％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、抗菌性免疫グロブリンＧの少なくとも一部に少なくとも約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、又は９７％又はそれ以上相同性であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、抗菌性免疫グロブリンＧの少なくとも一部に少なくとも約７０％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、抗菌性免疫グロブリンＧの少なくとも一部に少なくとも約８０％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。幾つかの実施形態において、免疫グロブリン領域は、抗ウイルス性免疫グロブリンＭに基づく又はそれに由来するアミノ酸配列を含む。
【０１５２】
免疫グロブリン領域は、抗菌性免疫グロブリンＧ配列の１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０又はそれ以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、抗菌性免疫グロブリンＧ配列の１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００又はそれ以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、抗菌性免疫グロブリンＧ配列の５０以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、抗菌性免疫グロブリンＧ配列の１００以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、抗菌性免疫グロブリンＧ配列の２００以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。
【０１５３】
免疫グロブリン領域は、ネバクマブ、パノマクマブ、ラキシバクマブ、エドバコマブ、パギバキシマブ、及び／又はテフィバズマブの免疫グロブリンに基づく又はそれらに由来し得る。免疫グロブリン領域は、ネバクマブ、パノマクマブ、ラキシバクマブ、エドバコマブ、パギバキシマブ、及び／又はテフィバズマブの免疫グロブリンの少なくとも一部を含み得る。免疫グロブリン領域は、ネバクマブ、パノマクマブ、ラキシバクマブ、エドバコマブ、パギバキシマブ、及び／又はテフィバズマブの免疫グロブリンに少なくとも約５０％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、ネバクマブ、パノマクマブ、ラキシバクマブ、エドバコマブ、パギバキシマブ、及び／又はテフィバズマブの免疫グロブリンの少なくとも一部に少なくとも約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、又は９７％又はそれ以上相同性であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、ネバクマブ、パノマクマブ、ラキシバクマブ、エドバコマブ、パギバキシマブ、及び／又はテフィバズマブの免疫グロブリンに少なくとも約７０％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、ネバクマブ、パノマクマブ、ラキシバクマブ、エドバコマブ、パギバキシマブ、及び／又はテフィバズマブの免疫グロブリンに少なくとも約８０％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。
【０１５４】
免疫グロブリン領域は、ネバクマブ、パノマクマブ、ラキシバクマブ、エドバコマブ、パギバキシマブ、及び／又はテフィバズマブの免疫グロブリン配列の１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０又はそれ以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、ネバクマブ、パノマクマブ、ラキシバクマブ、エドバコマブ、パギバキシマブ、及び／又はテフィバズマブの免疫グロブリン配列の１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００又はそれ以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、ネバクマブ、パノマクマブ、ラキシバクマブ、エドバコマブ、パギバキシマブ、及び／又はテフィバズマブの免疫グロブリン配列の５０以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、ネバクマブ、パノマクマブ、ラキシバクマブ、エドバコマブ、パギバキシマブ、及び／又はテフィバズマブの免疫グロブリン配列の１００以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、ネバクマブ、パノマクマブ、ラキシバクマブ、エドバコマブ、パギバキシマブ、及び／又はテフィバズマブの免疫グロブリン配列の２００以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。
【０１５５】
免疫グロブリン領域は、抗寄生虫性免疫グロブリンに基づく又はそれに由来し得る。抗寄生虫性免疫グロブリンは、寄生虫タンパク質（ｐａｒａｓｉｔｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ）のエピトープに向けられ得る。抗寄生虫性免疫グロブリンは、寄生虫又は寄生虫タンパク質を標的とし、これらは、限定されないが、Ａｃａｎｔｈａｍｏｅｂａ、Ｂａｌａｍｕｔｈｉａ  ｍａｎｄｒｉｌｌａｒｉｓ、Ｂａｂｅｓｉａ（Ｂ．ｄｉｖｅｒｇｅｎｓ、Ｂ．  ｂｉｇｅｍｉｎａ、Ｂ．  ｅｑｕｉ、Ｂ．  ｍｉｃｒｏｆｔｉ、Ｂ．  ｄｕｎｃａｎｉ）、Ｂａｌａｎｔｉｄｉｕｍ  ｃｏｌｉ、Ｂｌａｓｔｏｃｙｓｔｉｓ、Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ、Ｄｉｅｎｔａｍｏｅｂａ  ｆｒａｇｉｌｉｓ、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ  ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ、Ｇｉａｒｄｉａ  ｌａｍｂｌｉａ、Ｉｓｏｓｐｏｒａ  ｂｅｌｌｉ、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ、Ｎａｅｇｌｅｒｉａ  ｆｏｗｌｅｒｉ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｖｉｖａｘ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｏｖａｌｅ  ｃｕｒｔｉｓｉ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｏｖａｌｅ  ｗａｌｌｉｋｅｒｉ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｍａｌａｒｉａｅ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｋｎｏｗｌｅｓｉ、Ｒｈｉｎｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ  ｓｅｅｂｅｒｉ、Ｓａｒｃｏｃｙｓｔｉｓ  ｂｏｖｉｈｏｍｉｎｉｓ、Ｓａｒｃｏｃｙｓｔｉｓ  ｓｕｉｈｏｍｉｎｉｓ、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ、Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ  ｖａｇｉｎａｌｉｓ、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｂｒｕｃｅｉ、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｃｒｕｚｉ、Ｃｅｓｔｏｄａ、Ｔａｅｎｉａ  ｍｕｌｔｉｃｅｐｓ、Ｄｉｐｈｙｌｌｏｂｏｔｈｒｉｕｍ  ｌａｔｕｍ、Ｅｃｈｉｎｏｃｏｃｃｕｓ  ｇｒａｎｕｌｏｓｕｓ、Ｅｃｈｉｎｏｃｏｃｃｕｓ  ｍｕｌｔｉｌｏｃｕｌａｒｉｓ、Ｅｃｈｉｎｏｃｏｃｃｕｓ  ｖｏｇｅｌｉ、Ｅｃｈｉｎｏｃｏｃｃｕｓ  ｏｌｉｇａｒｔｈｒｕｓ、Ｈｙｍｅｎｏｌｅｐｉｓ  ｎａｎａ、Ｈｙｍｅｎｏｌｅｐｉｓ  ｄｉｍｉｎｕｔａ、Ｔａｅｎｉａ  ｓａｇｉｎａｔａ、Ｔａｅｎｉａ  ｓｏｌｉｕｍ、Ｂｅｒｔｉｅｌｌａ  ｍｕｃｒｏｎａｔａ、Ｂｅｒｔｉｅｌｌａ  ｓｔｕｄｅｒｉ、Ｓｐｉｒｏｍｅｔｒａ  ｅｒｉｎａｃｅｉｅｕｒｏｐａｅｉ、Ｃｌｏｎｏｒｃｈｉｓ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ；Ｃｌｏｎｏｒｃｈｉｓ  ｖｉｖｅｒｒｉｎｉ、Ｄｉｃｒｏｃｏｅｌｉｕｍ  ｄｅｎｄｒｉｔｉｃｕｍ、Ｆａｓｃｉｏｌａ  ｈｅｐａｔｉｃａ、Ｆａｓｃｉｏｌａ  ｇｉｇａｎｔｉｃａ、Ｆａｓｃｉｏｌｏｐｓｉｓ  ｂｕｓｋｉ、Ｇｎａｔｈｏｓｔｏｍａ  ｓｐｉｎｉｇｅｒｕｍ、Ｇｎａｔｈｏｓｔｏｍａ  ｈｉｓｐｉｄｕｍ、Ｍｅｔａｇｏｎｉｍｕｓ  ｙｏｋｏｇａｗａｉ、Ｏｐｉｓｔｈｏｒｃｈｉｓ  ｖｉｖｅｒｒｉｎｉ、Ｏｐｉｓｔｈｏｒｃｈｉｓ  ｆｅｌｉｎｅｕｓ、Ｃｌｏｎｏｒｃｈｉｓ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ、Ｐａｒａｇｏｎｉｍｕｓ  ｗｅｓｔｅｒｍａｎｉ；Ｐａｒａｇｏｎｉｍｕｓ  ａｆｒｉｃａｎｕｓ；Ｐａｒａｇｏｎｉｍｕｓ  ｃａｌｉｅｎｓｉｓ；Ｐａｒａｇｏｎｉｍｕｓ  ｋｅｌｌｉｃｏｔｔｉ；Ｐａｒａｇｏｎｉｍｕｓ  ｓｋｒｊａｂｉｎｉ；Ｐａｒａｇｏｎｉｍｕｓ  ｕｔｅｒｏｂｉｌａｔｅｒａｌｉｓ、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ  ｓｐ．、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ  ｍａｎｓｏｎｉ、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ  ｈａｅｍａｔｏｂｉｕｍ、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ  ｊａｐｏｎｉｃｕｍ、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ  ｍｅｋｏｎｇｉ、Ｅｃｈｉｎｏｓｔｏｍａ  ｅｃｈｉｎａｔｕｍ、Ｔｒｉｃｈｏｂｉｌｈａｒｚｉａ  ｒｅｇｅｎｔｉ、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａｔｉｄａｅ、Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ  ｄｕｏｄｅｎａｌｅ、Ｎｅｃａｔｏｒ  ａｍｅｒｉｃａｎｕｓ、Ａｎｇｉｏｓｔｒｏｎｇｙｌｕｓ  ｃｏｓｔａｒｉｃｅｎｓｉｓ、Ａｎｉｓａｋｉｓ、Ａｓｃａｒｉｓ  ｓｐ．Ａｓｃａｒｉｓ  ｌｕｍｂｒｉｃｏｉｄｅｓ、Ｂａｙｌｉｓａｓｃａｒｉｓ  ｐｒｏｃｙｏｎｉｓ、Ｂｒｕｇｉａ  ｍａｌａｙｉ、Ｂｒｕｇｉａ  ｔｉｍｏｒｉ、Ｄｉｏｃｔｏｐｈｙｍｅ  ｒｅｎａｌｅ、Ｄｒａｃｕｎｃｕｌｕｓ  ｍｅｄｉｎｅｎｓｉｓ、Ｅｎｔｅｒｏｂｉｕｓ  ｖｅｒｍｉｃｕｌａｒｉｓ、Ｅｎｔｅｒｏｂｉｕｓ  ｇｒｅｇｏｒｉｉ、Ｈａｌｉｃｅｐｈａｌｏｂｕｓ  ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ、Ｌｏａ  ｆｉｌａｒｉａ、Ｍａｎｓｏｎｅｌｌａ  ｓｔｒｅｐｔｏｃｅｒｃａ、Ｏｎｃｈｏｃｅｒｃａ  ｖｏｌｖｕｌｕｓ、Ｓｔｒｏｎｇｙｌｏｉｄｅｓ  ｓｔｅｒｃｏｒａｌｉｓ、Ｔｈｅｌａｚｉａ  ｃａｌｉｆｏｒｎｉｅｎｓｉｓ、Ｔｈｅｌａｚｉａ  ｃａｌｌｉｐａｅｄａ、Ｔｏｘｏｃａｒａ  ｃａｎｉｓ、Ｔｏｘｏｃａｒａ  ｃａｔｉ、Ｔｒｉｃｈｉｎｅｌｌａ  ｓｐｉｒａｌｉｓ、Ｔｒｉｃｈｉｎｅｌｌａ  ｂｒｉｔｏｖｉ、Ｔｒｉｃｈｉｎｅｌｌａ  ｎｅｌｓｏｎｉ、Ｔｒｉｃｈｉｎｅｌｌａ  ｎａｔｉｖａ、Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ  ｔｒｉｃｈｉｕｒａ、Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ  ｖｕｌｐｉｓ、Ｗｕｃｈｅｒｅｒｉａ  ｂａｎｃｒｏｆｔｉ、Ａｒｃｈｉａｃａｎｔｈｏｃｅｐｈａｌａ、Ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｉｓ  ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｉｓ、Ｌｉｎｇｕａｔｕｌａ  ｓｅｒｒａｔａ、Ｏｅｓｔｒｏｉｄｅａ、Ｃａｌｌｉｐｈｏｒｉｄａｅ、Ｓａｒｃｏｐｈａｇｉｄａｅ、Ｔｕｎｇａ  ｐｅｎｅｔｒａｎｓ、Ｄｅｒｍａｔｏｂｉａ  ｈｏｍｉｎｉｓ、Ｉｘｏｄｉｄａｅ、Ａｒｇａｓｉｄａｅ、Ｃｉｍｅｘ  ｌｅｃｔｕｌａｒｉｕｓ、Ｐｅｄｉｃｕｌｕｓ  ｈｕｍａｎｕｓ、Ｐｅｄｉｃｕｌｕｓ  ｈｕｍａｎｕｓ  ｃｏｒｐｏｒｉｓ、Ｐｔｈｉｒｕｓ  ｐｕｂｉｓ、Ｄｅｍｏｄｅｘ  ｆｏｌｌｉｃｕｌｏｒｕｍ／ｂｒｅｖｉｓ／ｃａｎｉｓ、Ｓａｒｃｏｐｔｅｓ  ｓｃａｂｉｅｉ、Ｃｏｃｈｌｉｏｍｙｉａ  ｈｏｍｉｎｉｖｏｒａｘ、及びＰｕｌｅｘ  ｉｒｒｉｔａｎｓを含む。
【０１５６】
免疫グロブリン領域は、抗寄生虫性免疫グロブリンＧに基づく又はそれに由来し得る。免疫グロブリン領域は、抗寄生虫性免疫グロブリンＧの少なくとも一部を含み得る。免疫グロブリン領域は、抗寄生虫性免疫グロブリンＧの少なくとも一部に少なくとも約５０％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、抗寄生虫性免疫グロブリンＧの少なくとも一部に少なくとも約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、又は９７％又はそれ以上相同性であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、抗寄生虫性免疫グロブリンＧの少なくとも一部に少なくとも約７０％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、抗寄生虫性免疫グロブリンＧの少なくとも一部に少なくとも約８０％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。幾つかの実施形態において、免疫グロブリン領域は、抗寄生虫性免疫グロブリンＭに基づく又はそれに由来するアミノ酸配列を含む。
【０１５７】
免疫グロブリン領域は、抗寄生虫性免疫グロブリンＧ配列の１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０又はそれ以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、抗寄生虫性免疫グロブリンＧ配列の１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００又はそれ以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、抗寄生虫性免疫グロブリンＧ配列の５０以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、抗寄生虫性免疫グロブリンＧ配列の１００以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、抗寄生虫性免疫グロブリンＧ配列の２００以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。
【０１５８】
免疫グロブリン領域は、抗真菌性免疫グロブリンに基づくか、又はそれに由来し得る。抗真菌性免疫グロブリンは、真菌タンパク質のエピトープに向けられ得る。抗真菌性免疫グロブリンは、真菌又は真菌タンパク質を標的とし、これらは、限定されないが、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｇａｔｔｉｉ、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｔｅｌｌａｔｏｉｄｅａ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｇｌａｂｒａｔａ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｋｒｕｓｅｉ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｇｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉｉ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｖｉｓｗａｎａｔｈｉｉ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｌｕｓｉｔａｎｉａｅ、Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ  ｍｕｃｉｌａｇｉｎｏｓａ、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｐｏｍｂｅ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｂｒｅｔｔａｎｏｍｙｃｅｓ  ｂｒｕｘｅｌｌｅｎｓｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｔｅｌｌａｔａ、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｐｏｍｂｅ、Ｔｏｒｕｌａｓｐｏｒａ  ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ、Ｚｙｇｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｂａｉｌｉｉ、Ｙａｒｒｏｗｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｅｘｉｇｕｕｓ、及びＰｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓを含む。抗真菌性免疫グロブリンは、エファングマブに基づく又はそれに由来し得る。
【０１５９】
免疫グロブリン領域は、抗真菌性免疫グロブリンＧに基づく又はそれに由来し得る。免疫グロブリン領域は、抗真菌性免疫グロブリンＧの少なくとも一部を含み得る。免疫グロブリン領域は、抗真菌性免疫グロブリンＧの少なくとも一部に少なくとも約５０％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、抗真菌性免疫グロブリンＧの少なくとも一部に少なくとも約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、又は９７％又はそれ以上相同性であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、抗真菌性免疫グロブリンＧの少なくとも一部に少なくとも約７０％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、抗真菌性免疫グロブリンＧの少なくとも一部に少なくとも約８０％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。幾つかの実施形態において、免疫グロブリン領域は、抗真菌性免疫グロブリンＭに基づく又はそれに由来するアミノ酸配列を含む。
【０１６０】
免疫グロブリン領域は、抗真菌性免疫グロブリンＧ配列の１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０又はそれ以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、抗真菌性免疫グロブリンＧ配列の１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００又はそれ以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、抗真菌性免疫グロブリンＧ配列の５０以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、抗真菌性免疫グロブリンＧ配列の１００以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、抗真菌性免疫グロブリンＧ配列の２００以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。
【０１６１】
免疫グロブリン領域は、エファングマブ免疫グロブリンに基づく又はそれに由来し得る。免疫グロブリン領域は、エファングマブ免疫グロブリンの少なくとも一部を含み得る。免疫グロブリン領域は、エファングマブ免疫グロブリンの少なくとも一部に少なくとも約５０％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、エファングマブ免疫グロブリンの少なくとも一部に少なくとも約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、又は９７％又はそれ以上相同性であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、エファングマブ免疫グロブリンの少なくとも一部に少なくとも約７０％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、エファングマブ免疫グロブリンの少なくとも一部に少なくとも約８０％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。
【０１６２】
免疫グロブリン領域は、エファングマブ免疫グロブリン配列の１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０又はそれ以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、エファングマブ免疫グロブリン配列の１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００又はそれ以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、エファングマブ免疫グロブリン配列の５０以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、エファングマブ免疫グロブリン配列の１００以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、エファングマブ免疫グロブリン配列の２００以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。
【０１６３】
免疫グロブリン領域は、トラスツズマブ免疫グロブリンＧの免疫グロブリンに基づく又はそれに由来し得る。免疫グロブリン領域は、トラスツズマブ免疫グロブリンＧの免疫グロブリンの少なくとも一部を含み得る。免疫グロブリン領域は、トラスツズマブ免疫グロブリンＧの免疫グロブリンの少なくとも一部に少なくとも約５０％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、トラスツズマブ免疫グロブリンＧの免疫グロブリンの少なくとも一部に少なくとも約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、又は９７％又はそれ以上相同性であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、トラスツズマブ免疫グロブリンＧの免疫グロブリンの少なくとも一部に少なくとも約７０％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、トラスツズマブ免疫グロブリンＧの免疫グロブリンの少なくとも一部に少なくとも約８０％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。
【０１６４】
免疫グロブリン領域は、トラスツズマブ免疫グロブリンＧの免疫グロブリン配列の１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０又はそれ以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、トラスツズマブ免疫グロブリンＧの免疫グロブリン配列の１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００又はそれ以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、トラスツズマブ免疫グロブリンＧの免疫グロブリン配列の５０以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、トラスツズマブ免疫グロブリンＧの免疫グロブリン配列の１００以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、トラスツズマブ免疫グロブリンＧの免疫グロブリン配列の２００以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。
【０１６５】
免疫グロブリン領域は、抗−Ｈｅｒ２免疫グロブリンに基づく又はそれに由来し得る。免疫グロブリン領域は、抗−Ｈｅｒ２免疫グロブリンの少なくとも一部を含み得る。免疫グロブリン領域は、抗−Ｈｅｒ２免疫グロブリンの少なくとも一部に少なくとも約５０％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、抗−Ｈｅｒ２免疫グロブリンの少なくとも一部に少なくとも約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、又は９７％又はそれ以上相同性であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、抗−Ｈｅｒ２免疫グロブリンの少なくとも一部に少なくとも約７０％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、抗−Ｈｅｒ２免疫グロブリンの少なくとも一部に少なくとも約８０％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。
【０１６６】
免疫グロブリン領域は、抗−Ｈｅｒ２免疫グロブリン配列の１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０又はそれ以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、抗−Ｈｅｒ２免疫グロブリン配列の１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００又はそれ以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、抗−Ｈｅｒ２免疫グロブリン配列の５０以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、抗−Ｈｅｒ２免疫グロブリン配列の１００以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、抗−Ｈｅｒ２免疫グロブリン配列の２００以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。
【０１６７】
免疫グロブリン領域は、抗−ＣＤ４７免疫グロブリンに基づく又はそれに由来し得る。免疫グロブリン領域は、抗−ＣＤ４７免疫グロブリンの少なくとも一部を含み得る。免疫グロブリン領域は、抗−ＣＤ４７免疫グロブリンの少なくとも一部に少なくとも約５０％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、抗−ＣＤ４７免疫グロブリンの少なくとも一部に少なくとも約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、又は９７％又はそれ以上相同性であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、抗−ＣＤ４７免疫グロブリンの少なくとも一部に少なくとも約７０％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、抗−ＣＤ４７免疫グロブリンの少なくとも一部に少なくとも約８０％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。
【０１６８】
免疫グロブリン領域は、抗−ＣＤ４７免疫グロブリン配列の１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０又はそれ以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、抗−ＣＤ４７免疫グロブリン配列の１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００又はそれ以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、抗−ＣＤ４７免疫グロブリン配列の５０以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、抗−ＣＤ４７免疫グロブリン配列の１００以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、抗−ＣＤ４７免疫グロブリン配列の２００以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。
【０１６９】
免疫グロブリン領域は、抗癌免疫グロブリンに基づく又はそれに由来し得る。抗癌免疫グロブリンの例は、アブシキシマブ、アダリムマブ、アレムツズマブ、バシリキシマブ、ベリムマブ、ベバシズマブ、ブレンツキシマブ、カナキヌマブ、セルトリズマブ、セツキシマブ、ダクリズマブ、デノスマブ、エクリズマブ、エファリズマブ、ゲムツズマブ、ゴリムマブ、イブリツモマブ、インフリキシマブ、イピリムマブ、ムロモナブ−ｃｄ３、ナタリズマブ、オファツムマブ、オマリズマブ、パリビズマブ、パニツムマブ、ラニビズマブ、リツキシマブ、トシリズマブ、トシツモマブ、トラスツズマブを含むが、これらに限定されない。
【０１７０】
免疫グロブリン領域は、ヒト免疫グロブリンの少なくとも一部を含み得る。免疫グロブリン領域は、ヒト化免疫グロブリンの少なくとも一部を含み得る。免疫グロブリン領域は、キメラ免疫グロブリンの少なくとも一部を含み得る。免疫グロブリン領域は、ヒト免疫グロブリンに基づく又はそれに由来し得る。免疫グロブリン領域は、ヒト化免疫グロブリンに基づく又はそれに由来し得る。免疫グロブリン領域は、キメラ免疫グロブリンに基づく又はそれに由来し得る。免疫グロブリン領域は、モノクローナル免疫グロブリンに基づく又はそれに由来し得る。免疫グロブリン領域は、ポリクローナル免疫グロブリンに基づく又はそれに由来し得る。免疫グロブリン領域は、哺乳動物、鳥類、爬虫類、両生類、又はそれらの組み合わせからの免疫グロブリンの少なくとも一部を含み得る。哺乳動物はヒトであり得る。哺乳動物は非ヒト霊長類であり得る。哺乳動物は、イヌ、ネコ、ヒツジ、ヤギ、ウシ、ウサギ、又はマウスであり得る。
【０１７１】
免疫グロブリン領域は、１以上の免疫グロブリン及び／又は免疫グロブリンフラグメントの配列に基づく又はそれらに由来する配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、１以上の免疫グロブリン及び／又は免疫グロブリンフラグメントに基づく又はそれらに由来する配列に、少なくとも約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上相同性である配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、１以上の免疫グロブリン及び／又は免疫グロブリンフラグメントに基づく又はそれらに由来する配列に、少なくとも約７０％相同性である配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、１以上の免疫グロブリン及び／又は免疫グロブリンフラグメントに基づく又はそれらに由来する配列に、少なくとも約８０％相同性である配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、１以上の免疫グロブリン及び／又は免疫グロブリンフラグメントに基づく又はそれらに由来する配列に、少なくとも約９０％相同性である配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、１以上の免疫グロブリン及び／又は免疫グロブリンフラグメントに基づく又はそれらに由来する配列に、少なくとも約９５％相同性である配列を含み得る。配列はペプチド配列であり得る。配列は核酸配列であり得る。
【０１７２】
免疫グロブリン領域は、１以上の免疫グロブリン及び／又は免疫グロブリンフラグメントに基づく又はそれらに由来するペプチド配列と、約２００、１５０、１００、９０、８０、７０、６０、５０、４０、３０、２０、１７、１５、１２、１０、８、６、５、４又はそれ以下のアミノ酸だけ異なる、ペプチド配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、１以上の免疫グロブリン及び／又は免疫グロブリンフラグメントに基づく又はそれらに由来するペプチド配列と、約４以下のアミノ酸だけ異なる、ペプチド配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、１以上の免疫グロブリン及び／又は免疫グロブリンフラグメントに基づく又はそれらに由来するペプチド配列と、約３以下のアミノ酸だけ異なる、ペプチド配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、１以上の免疫グロブリン及び／又は免疫グロブリンフラグメントに基づく又はそれらに由来するペプチド配列と、約２以下のアミノ酸だけ異なる、ペプチド配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、１以上の免疫グロブリン及び／又は免疫グロブリンフラグメントに基づく又はそれらに由来するペプチド配列と、約１以下のアミノ酸だけ異なる、ペプチド配列を含み得る。アミノ酸は、連続的、非連続的、又はそれらの組み合わせであり得る。例えば、免疫グロブリン領域は、１以上の免疫グロブリン及び／又は免疫グロブリンフラグメントに基づく又はそれらに由来するペプチド配列と、約３未満の連続アミノ酸だけ異なる、ペプチド配列を含み得る。代替的に、又は付加的に、免疫グロブリン領域は、１以上の免疫グロブリン及び／又は免疫グロブリンフラグメントに基づく又はそれらに由来するペプチド配列と、約２未満の非連続アミノ酸だけ異なる、ペプチド配列を含み得る。別の例において、免疫グロブリン領域は、１以上の免疫グロブリン及び／又は免疫グロブリンフラグメントに基づく又はそれらに由来するペプチド配列と、約５未満のアミノ酸だけ異なる、ペプチド配列を含み得、ここで、アミノ酸の２つは連続し、他の２つは連続していない。
【０１７３】
免疫グロブリン領域は、１以上の抗体及び／又は免疫グロブリンフラグメントに基づく又はそれらに由来する核酸配列と、約５００、４００、３００、２００、１００、９０、８０、７０、６０、５０、４０、３０、２５、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、又はそれ以下のヌクレオチド又は塩基対だけ異なる、核酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、１以上の免疫グロブリン及び／又は免疫グロブリンフラグメントに基づく又はそれらに由来する核酸配列と、約１５以下のヌクレオチド又は塩基対だけ異なる、核酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、１以上の免疫グロブリン及び／又は免疫グロブリンフラグメントに基づく又はそれらに由来する核酸配列と、約１２以下のヌクレオチド又は塩基対だけ異なる、核酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、１以上の免疫グロブリン及び／又は免疫グロブリンフラグメントに基づく又はそれらに由来する核酸配列と、約９以下のヌクレオチド又は塩基対だけ異なる、核酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、１以上の免疫グロブリン及び／又は免疫グロブリンフラグメントに基づく又はそれらに由来する核酸配列と、約６以下のヌクレオチド又は塩基対だけ異なる、核酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、１以上の免疫グロブリン及び／又は免疫グロブリンフラグメントに基づく又はそれらに由来する核酸配列と、約４以下のヌクレオチド又は塩基対だけ異なる、核酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、１以上の免疫グロブリン及び／又は免疫グロブリンフラグメントに基づく又はそれらに由来する核酸配列と、約３以下のヌクレオチド又は塩基対だけ異なる、核酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、１以上の免疫グロブリン及び／又は免疫グロブリンフラグメントに基づく又はそれらに由来する核酸配列と、約２以下のヌクレオチド又は塩基対だけ異なる、核酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、１以上の免疫グロブリン及び／又は免疫グロブリンフラグメントに基づく又はそれらに由来する核酸配列と、約１以下のヌクレオチド又は塩基対だけ異なる、核酸配列を含み得る。ヌクレオチド又は塩基対は、連続的、非連続的、又はそれらの組み合わせであり得る。例えば、免疫グロブリン領域は、１以上の免疫グロブリン及び／又は免疫グロブリンフラグメントに基づく又はそれらに由来する核酸配列と、約３未満の連続ヌクレオチド又は塩基対だけ異なる、核酸配列を含み得る。代替的に、又は付加的に、免疫グロブリン領域は、１以上の免疫グロブリン及び／又は免疫グロブリンフラグメントに基づく又はそれらに由来する核酸配列と、約２未満の非連続ヌクレオチド又は塩基対だけ異なる、核酸配列を含み得る。別の例において、免疫グロブリン領域は、１以上の免疫グロブリン及び／又は免疫グロブリンフラグメントに基づくか、又はそれらに由来する核酸配列と、約５未満のヌクレオチド又は塩基対だけ異なる、核酸配列を含み得、ここで、ヌクレオチド又は塩基対の２つは連続し、他の２つは連続していない。
【０１７４】
免疫グロブリン領域のペプチド配列は、１以上のアミノ酸置換だけ、それが基づく及び／又は由来する免疫グロブリン又は免疫グロブリンフラグメントのペプチド配列と異なり得る。免疫グロブリン領域のペプチド配列は、２以上のアミノ酸置換だけ、それが基づく及び／又は由来する免疫グロブリン又は免疫グロブリンフラグメントのペプチド配列と異なり得る。免疫グロブリン領域のペプチド配列は、３以上のアミノ酸置換だけ、それが基づく及び／又は由来する免疫グロブリン又は免疫グロブリンフラグメントのペプチド配列と異なり得る。免疫グロブリン領域のペプチド配列は、４以上のアミノ酸置換だけ、それが基づく及び／又は由来する免疫グロブリン又は免疫グロブリンフラグメントのペプチド配列と異なり得る。免疫グロブリン領域のペプチド配列は、５以上のアミノ酸置換だけ、それが基づく及び／又は由来する免疫グロブリン又は免疫グロブリンフラグメントのペプチド配列と異なり得る。免疫グロブリン領域のペプチド配列は、６以上のアミノ酸置換だけ、それが基づく及び／又は由来する免疫グロブリン又は免疫グロブリンフラグメントのペプチド配列と異なり得る。免疫グロブリン領域のペプチド配列は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１４、１５、１７、２０、２５又はそれ以上のアミノ酸置換だけ、それが基づく及び／又は由来する免疫グロブリン又は免疫グロブリンフラグメントのペプチド配列と異なり得る。免疫グロブリン領域のペプチド配列は、約２０−３０、３０−４０、４０−５０、５０−６０、６０−７０、８０−９０、９０−１００、１００−１５０、１５０−２００、２００−３００又はそれ以上のアミノ酸置換だけ、それが基づく及び／又は由来する免疫グロブリン又は免疫グロブリンフラグメントのペプチド配列と異なり得る。
【０１７５】
免疫グロブリン領域の核酸配列は、１以上のヌクレオチド及び／又は塩基対の置換だけ、それが基づく及び／又は由来する免疫グロブリン又は免疫グロブリンフラグメントの核酸配列と異なり得る。免疫グロブリン領域の核酸配列は、２以上のヌクレオチド及び／又は塩基対の置換だけ、それが基づく及び／又は由来する免疫グロブリン又は免疫グロブリンフラグメントの核酸配列と異なり得る。免疫グロブリン領域の核酸配列は、３以上のヌクレオチド及び／又は塩基対の置換だけ、それが基づく及び／又は由来する免疫グロブリン又は免疫グロブリンフラグメントの核酸配列と異なり得る。免疫グロブリン領域の核酸配列は、４以上のヌクレオチド及び／又は塩基対の置換だけ、それが基づく及び／又は由来する免疫グロブリン又は免疫グロブリンフラグメントの核酸配列と異なり得る。免疫グロブリン領域の核酸配列は、５以上のヌクレオチド及び／又は塩基対の置換だけ、それが基づく及び／又は由来する免疫グロブリン又は免疫グロブリンフラグメントの核酸配列と異なり得る。免疫グロブリン領域の核酸配列は、６以上のヌクレオチド及び／又は塩基対の置換だけ、それが基づく及び／又は由来する免疫グロブリン又は免疫グロブリンフラグメントの核酸配列と異なり得る。免疫グロブリン領域の核酸配列は、９以上のヌクレオチド及び／又は塩基対の置換だけ、それが基づく及び／又は由来する免疫グロブリン又は免疫グロブリンフラグメントの核酸配列と異なり得る。免疫グロブリン領域の核酸配列は、１２以上のヌクレオチド及び／又は塩基対の置換だけ、それが基づく及び／又は由来する免疫グロブリン又は免疫グロブリンフラグメントの核酸配列と異なり得る。免疫グロブリン領域の核酸配列は、１５以上のヌクレオチド及び／又は塩基対の置換だけ、それが基づく及び／又は由来する免疫グロブリン又は免疫グロブリンフラグメントの核酸配列と異なり得る。免疫グロブリン領域の核酸配列は、１８以上のヌクレオチド及び／又は塩基対の置換だけ、それが基づく及び／又は由来する免疫グロブリン又は免疫グロブリンフラグメントの核酸配列と異なり得る。免疫グロブリン領域の核酸配列は、２０、２２、２４、２５、２７、３０又はそれ以上のヌクレオチド及び／又は塩基対の置換だけ、それが基づく及び／又は由来する免疫グロブリン又は免疫グロブリンフラグメントの核酸配列と異なり得る。免疫グロブリン領域の核酸配列は、約３０−４０、４０−５０、５０−６０、６０−７０、７０−８０、８０−９０、９０−１００、１００−２００、２００−３００、３００−４００又はそれ以上のヌクレオチド及び／又は塩基対の置換だけ、それが基づく及び／又は由来する免疫グロブリン又は免疫グロブリンフラグメントの核酸配列と異なり得る。
【０１７６】
免疫グロブリン領域は、少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、又はそれ以上のアミノ酸を含み得る。免疫グロブリン領域は、少なくとも約１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００、５２５、５５０、５７５、６００、６２５、６５０、６７５、７００又はそれ以上のアミノ酸を含み得る。免疫グロブリン領域は、少なくとも約１００のアミノ酸を含み得る。免疫グロブリン領域は、少なくとも約２００のアミノ酸を含み得る。免疫グロブリン領域は、少なくとも約４００のアミノ酸を含み得る。免疫グロブリン領域は、少なくとも約５００のアミノ酸を含み得る。免疫グロブリン領域は、少なくとも約６００のアミノ酸を含み得る。
【０１７７】
免疫グロブリン領域は、約２０００、１９００、１８００、１７００、１６００、１５００、１４００、１３００、１２００、又は１１００未満のアミノ酸を含み得る。免疫グロブリン領域は、約１０００、９５０、９００、８５０、８００、７５０、又は７００未満のアミノ酸を含み得る。免疫グロブリン領域は、約１５００未満のアミノ酸を含み得る。免疫グロブリン領域は、約１０００未満のアミノ酸を含み得る。免疫グロブリン領域は、約８００未満のアミノ酸を含み得る。免疫グロブリン領域は、約７００未満のアミノ酸を含み得る。
【０１７８】
免疫グロブリン融合タンパク質は、相補性決定領域３（ＣＤＲ３）の３０以下の連続するアミノ酸を含む、免疫グロブリン領域を更に含み得る。免疫グロブリン領域は、ＣＤＲ３の、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１以下の連続するアミノ酸を含み得る。免疫グロブリン領域は、ＣＤＲ３の１５以下の連続するアミノ酸を含み得る。免疫グロブリン領域は、ＣＤＲ３の１４以下の連続するアミノ酸を含み得る。免疫グロブリン領域は、ＣＤＲ３の１３以下の連続するアミノ酸を含み得る。免疫グロブリン領域は、ＣＤＲ３の１２以下の連続するアミノ酸を含み得る。免疫グロブリン領域は、ＣＤＲ３の１１以下の連続するアミノ酸を含み得る。免疫グロブリン領域は、ＣＤＲ３の１０以下の連続するアミノ酸を含み得る。免疫グロブリン領域は、ＣＤＲ３の９以下の連続するアミノ酸を含み得る。免疫グロブリン領域は、ＣＤＲ３の８以下の連続するアミノ酸を含み得る。免疫グロブリン領域は、ＣＤＲ３の７以下の連続するアミノ酸を含み得る。免疫グロブリン領域は、ＣＤＲ３の６以下の連続するアミノ酸を含み得る。免疫グロブリン領域は、ＣＤＲ３の５以下の連続するアミノ酸を含み得る。免疫グロブリン領域は、ＣＤＲ３の４以下の連続するアミノ酸を含み得る。免疫グロブリン領域は、ＣＤＲ３の３以下の連続するアミノ酸を含み得る。免疫グロブリン領域は、ＣＤＲ３の２以下の連続するアミノ酸を含み得る。免疫グロブリン領域は、ＣＤＲ３の１以下の連続するアミノ酸を含み得る。幾つかの例において、免疫グロブリン領域はＣＤＲ３を包含していない。
【０１７９】
免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９−５６、１５５、１５６、１６７の何れか１つに基づく又はそれらに由来するアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９−５６、１５５、１５６、１６７の何れか１つに少なくとも約５０％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９−５６、１５５、１５６、１６７の何れか１つに少なくとも約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９７％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９−５６、１５５、１５６、１６７の何れか１つに少なくとも約７０％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９−５６、１５５、１５６、１６７の何れか１つに少なくとも約８０％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９−５６、１５５、１５６、１６７の何れか１つに少なくとも約５０％同一であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９−５６、１５５、１５６、１６７の何れか１つに少なくとも約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９７％同一であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９−５６、１５５、１５６、１６７の何れか１つに少なくとも約７０％同一であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９−５６、１５５、１５６、１６７の何れか１つに少なくとも約８０％同一であるアミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９−５６、１５５、１５６、１６７の何れか１つに１００％同一であるアミノ酸配列を含み得る。幾つかの実施形態において、免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９−５６、１５５、１５６、１６７の何れか１つのアミノ酸配列に、少なくとも約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９７％相同性であるアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態において、免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９−５６、１５５、１５６、１６７の何れか１つのアミノ酸配列に、少なくとも約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９７％同一であるアミノ酸配列を含む。免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９−５６、１５５、１５６、１６７の何れか１つからの配列に基づく又はそれらに由来する、Ｆａｂ領域を含む。幾つかの実施形態において、免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９−５６、１５５、１５６、１６７の何れか１つに対し少なくとも約７０％、８０％、８０％、９０％、９５％、又は１００％である配列に由来する、アミノ酸Ｆａｂ配列を含む。
【０１８０】
免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９−５６、１５５、１５６、１６７の何れか１つに基づく又はそれらに由来する、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００又はそれ以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９−５６、１５５、１５６、１６７の何れか１つに基づく又はそれらに由来する、１２５、１５０、１７５、２００又はそれ以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９−５６、１５５、１５６、１６７の何れか１つに基づく又はそれらに由来する１０以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９−５６、１５５、１５６、１６７の何れか１つに基づく又はそれらに由来する５０以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９−５６、１５５、１５６、１６７の何れか１つに基づく又はそれらに由来する１００以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９−５６、１５５、１５６、１６７の何れか１つに基づく又はそれらに由来する２００以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。アミノ酸は連続していてもよい。代替的に、又は付加的に、アミノ酸は不連続である。幾つかの実施形態において、免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９−５６、１５５、１５６、１６７の１、２、３、又は４つに由来するアミノ酸を含む。
【０１８１】
免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１−２８、１６６の何れか１つに基づく又はそれらに由来する核酸配列によりコードされ得る。免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１−２８、１６６の何れか１つに少なくとも約５０％相同性である核酸配列によりコードされ得る。免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１−２８、１６６の何れか１つに少なくとも約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９７％相同性である核酸配列によりコードされ得る。免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１−２８、１６６の何れか１つに少なくとも約７０％相同性である核酸配列によりコードされ得る。免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１−２８、１６６の何れか１つに少なくとも約８０％相同性である核酸配列によりコードされ得る。免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１−２８、１６６の何れか１つに少なくとも約５０％同一である核酸配列によりコードされ得る。免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１−２８、１６６の何れか１つに少なくとも約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９７％同一である核酸配列によりコードされ得る。免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１−２８、１６６の何れか１つに少なくとも約７０％同一である核酸配列によりコードされ得る。免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１−２８、１６６の何れか１つに少なくとも約８０％同一である核酸配列によりコードされ得る。免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１−２８、１６６の何れか１つに１００％同一である核酸配列によりコードされ得る。免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１−２８、１６６の何れか１つからの配列に基づく又はそれらに由来する、Ｆａｂ領域を含む。幾つかの実施形態において、免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１−２８、１６６の何れか１つに対し少なくとも約７０％、８０％、８０％、９０％、９５％、又は１００％である配列に由来する、アミノ酸Ｆａｂ配列を含む。
【０１８２】
免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１−２８、１６６の何れか１つに基づく又はそれらに由来する、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００又はそれ以上のヌクレオチドを含む、核酸配列によりコードされ得る。免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１−２８、１６６の何れか１つに基づく又はそれらに由来する、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、４５０、５００又はそれ以上のヌクレオチドを含む、核酸配列によりコードされ得る。免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１−２８、１６６の何れか１つに基づく又はそれに由来する１００以上のヌクレオチドを含む、核酸配列によりコードされ得る。免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１−２８、１６６の何れか１つに基づく又はそれに由来する５００以上のヌクレオチドを含む、核酸配列によりコードされ得る。ヌクレオチドは連続してもよい。幾つかの実施形態において、免疫グロブリン領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１−２８、１６６の１、２、３、又は４つに由来する核酸配列によりコードされ得る。
【０１８３】
治療用ペプチド
本開示の１つの態様において、本明細書には、インスリン治療用ペプチドと免疫グロブリン領域を含む、免疫グロブリン融合タンパク質が提供される。免疫グロブリン融合タンパク質は２以上の治療用ペプチドを含み得る。本明細書に開示される免疫グロブリン融合タンパク質は、３、４、５又はそれ以上の治療用ペプチドを含み得る。治療用ペプチドは、リンカーを介して免疫グロブリン領域に結合され得る。幾つかの実施形態において、１以上の付加的な治療用ペプチドは、第１又は第２の免疫グロブリン領域に結合される。１以上の治療用ペプチドは、１以上の免疫グロブリン領域に結合され得る。２以上の治療用ペプチドは、２以上の免疫グロブリン領域に結合され得る。２以上の治療用ペプチドは、１以上の免疫グロブリン鎖に結合され得る。２以上の治療用ペプチドは、２以上の免疫グロブリン鎖に結合され得る。２以上の治療用ペプチドは、１以上の免疫グロブリン領域内の１以上のユニットに結合され得る。２以上の治療用ペプチドは、１以上の免疫グロブリン領域内の２以上のユニットに結合され得る。幾つかの実施形態において、治療用ペプチドは、リンカーの補助無しに免疫グロブリン領域に結合される。
【０１８４】
１つの実施形態において、リンカーは、約０〜約５０のアミノ酸を含む。１つの実施形態において、リンカーは約１〜約５０のアミノ酸を含む。１つの実施形態において、リンカーは、約１〜約２０のアミノ酸、又は、約０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、又は２０アミノ酸を含む。１つの実施形態において、リンカーのアミノ酸は規則的な二次構造を形成しない。１つの実施形態において、リンカーは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３−６９の何れか１つのアミノ酸配列と、少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む。１つの実施形態において、リンカーは、１、２、３、４又はそれ以上のグリシン残基を含む。
【０１８５】
本明細書に開示される免疫グロブリン融合タンパク質は、１以上の治療剤を含み得る。治療剤はペプチドであり得る。治療剤は小分子であり得る。本明細書に開示される免疫グロブリン融合タンパク質は、２以上の治療薬を含み得る。本明細書に開示される免疫グロブリン融合タンパク質は、３、４、５、６又はそれ以上の治療薬を含み得る。２以上の治療薬は同じものでもよい。２以上の治療薬は異なるものでもよい。
【０１８６】
治療用ペプチドは、任意の二次構造、例えば、アルファヘリックス又はベータストランドを含み得、又は通常の二次構造を含まない。治療用ペプチドは、ミリストイル化、パルミトイル化、イソプレニル化、糖化（ｇｌｙｐｉａｔｉｏｎ）、リポイル化、アシル化、アセチル化、アルキル化（ａｋｌｙｌａｔｉｏｎ）、メチル化、グリコシル化、マロニル化、ヒドロキシル化、ヨウ素化、ヌクレオチド付加、酸化、リン酸化、アデニリル化、プロピオニル化、スクシニル化、硫酸化、セレノイル化、ビオチニル化、ペグ化、脱イミノ化、脱アミド化、エリミニル化（ｅｌｉｍｉｎｙｌａｔｉｏｎ）、及びカルバモイル化を含むがこれらに限定されない、１以上の修飾を備えたアミノ酸を含み得る。治療用ペプチドは、１以上の小分子、例えば薬物に共役される１以上のアミノ酸を含み得る。幾つかの実施形態において、治療用ペプチドは、１以上の非天然のアミノ酸を含む。幾つかの実施形態において、治療用ペプチドは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、３０、４０、５０又はそれ以上の非天然のアミノ酸を含む。幾つかの実施形態において、治療用ペプチドは、１以上のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、治療用ペプチドは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、３０、４０、５０又はそれ以上のアミノ酸置換を含む。
【０１８７】
治療用ペプチドは免疫グロブリン領域に挿入され得る。免疫グロブリン領域への治療用ペプチドの挿入は、免疫グロブリン領域が基づく又は由来する、免疫グロブリンの一部の除去又は欠失を含み得る。治療用ペプチドは、重鎖の少なくとも一部を置き換え得る。治療用ペプチドは、軽鎖の少なくとも一部を置き換え得る。治療用ペプチドは、可変ドメインの少なくとも一部を置き換え得る。治療用ペプチドは、定常ドメインの少なくとも一部を置き換え得る。治療用ペプチドは、相補性決定領域（ＣＤＲ）の少なくとも一部を置き換え得る。治療用ペプチドは、ＣＤＲ１の少なくとも一部を置き換え得る。治療用ペプチドは、ＣＤＲ２の少なくとも一部を置き換え得る。治療用ペプチドは、ＣＤＲ３の少なくとも一部を置き換え得る。治療用ペプチドは、免疫グロブリン又はその一部の少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％又はそれ以上を置き換え得る。例えば、治療用ペプチドは、可変ドメインの少なくとも約５０％を置き換え得る。治療用ペプチドは、可変ドメインの少なくとも約７０％を置き換え得る。治療用ペプチドは、可変ドメインの少なくとも約８０％を置き換え得る。治療用ペプチドは、可変ドメインの少なくとも約９０％を置き換え得る。治療用ペプチドは、可変ドメインの少なくとも約９５％を置き換え得る。例えば、治療用ペプチドは、免疫グロブリン領域のアミノ末端の少なくとも約５０％を置き換え得る。治療用ペプチドは、免疫グロブリン領域のアミノ末端の少なくとも約７０％を置き換え得る。治療用ペプチドは、免疫グロブリン領域のアミノ末端の少なくとも約８０％を置き換え得る。治療用ペプチドは、免疫グロブリン領域のアミノ末端の少なくとも約９０％を置き換え得る。治療用ペプチドは、免疫グロブリン領域のアミノ末端の少なくとも約９５％を置き換え得る。治療用ペプチドは、ＣＤＲの少なくとも約５０％を置き換え得る。治療用ペプチドは、ＣＤＲの少なくとも約７０％を置き換え得る。治療用ペプチドは、ＣＤＲの少なくとも約８０％を置き換え得る。治療用ペプチドは、ＣＤＲの少なくとも約９０％を置き換え得る。治療用ペプチドは、ＣＤＲの少なくとも約９５％を置き換え得る。
【０１８８】
幾つかの実施形態において、インスリン治療用ペプチドの１以上の領域は、糖尿病及び／又は糖尿病関連の疾病を処置するように構成される。幾つかの実施形態において、治療用ペプチドの２、３、４、又は５以上の領域は、糖尿病及び／又は糖尿病関連の疾病を処置するように構成される。糖尿病は、１型糖尿病、２型糖尿病、妊娠性糖尿病、及び糖尿病前症を含み得る。幾つかの実施形態において、治療用ペプチドの１以上の領域は、肥満症及び／又は肥満症関連の疾病を処置するように構成される。幾つかの実施形態において、治療用ペプチドの２、３、４、又は５以上の領域は、肥満症及び／又は肥満症関連の疾病を処置するように構成される。疾病は合併症及び疾患を含み得る。糖尿病関連の疾病の例は、限定されないが、糖尿病性網膜症、糖尿病性腎症、糖尿病性心疾患、糖尿病性の足の不調、糖尿病性ニューロパシー、巨大血管性疾患、糖尿病性心筋症、感染症、及び糖尿病性ケトアシドーシスを含む。糖尿病性ニューロパシーは、限定されないが、対称的な多発性ニューロパシー、自律神経ニューロパシー、神経根障害、脳ニューロパシー、及びモノニューロパシーを含む。肥満症関連の疾病は、限定されないが、心疾患、卒中、高血圧症、糖尿病、変形性関節炎、痛風、睡眠時無呼吸、喘息、胆嚢疾患、胆石、異常な血中脂質量（例えば、ＬＤＬ及びＨＤＬコレステロールの異常レベル）、肥満低換気症候群、生殖上の問題、脂肪肝、及び精神健康の疾病を含む。
【０１８９】
本明細書に記載されるインスリン免疫グロブリン融合タンパク質は、インスリン治療用ペプチドを含む。場合によっては、インスリン治療用ペプチドは、式：Ｂ−Ｃ−Ａ又はＡ−Ｃ−Ｂを持つ単一のアミノ酸鎖を含み；式中、ＢはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５７（ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＸＡＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＦＹＴＸＢＸＣＴ）を含み；ＡはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５８：ＧＩＶＥＱＣＣＸＤＳＩＣＳＬＹＱＬＥＮＹＣＮを含み；及びＣは、３〜５０のアミノ酸を持つ結合ペプチドを含み；ここで、ＸＡ、ＸＢ、ＸＣ、及びＸＤは独立して、自然発生の又は非自然発生のアミノ酸から選択される。場合によっては、ＸＡはＤ又はＨである。場合によっては、ＸＡはＤである。場合によっては、ＸＡはＨである。場合によっては、ＸＢはＤ又はＰである。場合によっては、ＸＢはＤである。場合によっては、ＸＢはＰである。場合によっては、ＸＣはＰ又はＫである。場合によっては、ＸＣはＰである。場合によっては、ＸＣはＫである。場合によっては、ＸＤはＨ又はＴである。場合によっては、ＸＤはＨである。場合によっては、ＸＤはＴである。結合ペプチドは、少なくとも５０％のグリシンアミノ酸を含むアミノ酸配列を含み得る。結合ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５９（ＧＧＧＸ１Ｘ２）を含み得、ここで、Ｘ１とＸ２は独立して、自然発生の又は非自然発生のアミノ酸から選択される。場合によっては、Ｘ１はＰ、Ｇ、又はＳである。場合によっては、Ｘ１はＰである。場合によっては、Ｘ１はＧである。場合によっては、Ｘ１はＳである。場合によっては、Ｘ２はＲ、Ｓ、Ｇ、又はＫである。場合によっては、Ｘ２はＲである。場合によっては、Ｘ２はＳである。場合によっては、Ｘ２はＧである。場合によっては、Ｘ２はＫである。Ｃはプロテアーゼ切断部位を含み得る。限定されない例として、ＲＫＫＲである。インスリン治療用ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１１、１１３、１１６、１１８、１１９−１４０から選択されたアミノ酸配列を含み得る。インスリン治療用ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１１、１１３、１１６、１１８、１１９−１４０の何れか１つに少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み得る。
【０１９０】
インスリン治療用ペプチドは、式：Ｂ−Ｃ−Ａ又はＡ−Ｃ−Ｂを持つ単一のアミノ酸鎖を含み得；式中、Ｂは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６０（ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＦＹＴ）との５、４、３、２、又は１以下のアミノ酸差を有するアミノ酸配列を含み；Ａは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６１  （ＧＩＶＥＱＣＣＴＳＩＣＳＬＹＱＬＥＮＹＣ）との５、４、３、２、又は１以下のアミノ酸差を有するアミノ酸配列を含み；及びＣは、３〜５０のアミノ酸を持つ結合ペプチドを含む。場合によっては、ＢはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６０を含む。場合によっては、ＡはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６１を含む。場合によっては、結合ペプチドは、少なくとも５０％のグリシンアミノ酸を持つアミノ酸配列を含む。場合によっては、結合ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５９（ＧＧＧＸ１Ｘ２）を含み得、ここで、Ｘ１とＸ２は独立して、自然発生の又は非自然発生のアミノ酸から選択される。場合によっては、Ｘ１はＰ、Ｇ、又はＳである。場合によっては、Ｘ１はＰである。場合によっては、Ｘ１はＧである。場合によっては、Ｘ１はＳである。場合によっては、Ｘ２はＲ、Ｓ、Ｇ、又はＫである。場合によっては、Ｘ２はＲである。場合によっては、Ｘ２はＳである。場合によっては、Ｘ２はＧである。場合によっては、Ｘ２はＫである。Ｃはプロテアーゼ切断部位を含み得る。限定されない例として、ＲＫＫＲである。
【０１９１】
インスリン治療用ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５８（ＧＩＶＥＱＣＣＸＤＳＩＣＳＬＹＱＬＥＮＹＣＮ）を含むＡペプチドを含み得、ここで、ＸＤは、自然発生の又は非自然発生のアミノ酸である。場合によっては、ＸＤは、Ｈ及びＴから選択される。場合によっては、ＸＤはＨである。場合によっては、ＸＤはＴである。場合によっては、Ａペプチドの１以上のシステインアミノ酸は、Ｂペプチドのシステインアミノ酸とのジスルフィド結合に存在する。場合によっては、Ｂペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５７（ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＸＡＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＦＹＴＸＢＸＣＴ）を含み；ＸＡ、ＸＢ、及びＸＣは独立して、自然発生の又は非自然発生のアミノ酸から選択される。場合によっては、ＸＡはＤ又はＨである。場合によっては、ＸＡはＤである。場合によっては、ＸＡはＨである。場合によっては、ＸＢはＤ又はＰである。場合によっては、ＸＢはＤである。場合によっては、ＸＢはＰである。場合によっては、ＸＣはＰ又はＫである。場合によっては、ＸＣはＰである。場合によっては、ＸＣはＫである。場合によっては、Ｂペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６０（ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＦＹＴ）との５、４、３、２、又は１以下のアミノ酸差を有するアミノ酸配列を含み；場合によっては、ＢはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６０を含む。場合によっては、インスリン治療用ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：  １６１（ＧＩＶＥＱＣＣＴＳＩＣＳＬＹＱＬＥＮＹＣ）との５、４、３、２、又は１以下のアミノ酸差を有するアミノ酸配列を含む、Ａペプチドを含んでいる。場合によっては、ＡペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６１を含む。場合によっては、Ａペプチドの１以上のシステインアミノ酸は、Ｂペプチドのシステインアミノ酸とのジスルフィド結合に存在する。
【０１９２】
インスリン治療用ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６１（ＧＩＶＥＱＣＣＴＳＩＣＳＬＹＱＬＥＮＹＣ）との５、４、３、２、又は１以下のアミノ酸差を有するアミノ酸配列を含む、Ａペプチドを含み得る。場合によっては、ＡペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６１を含む。場合によっては、Ａペプチドの１以上のシステインアミノ酸は、Ｂペプチドのシステインアミノ酸とのジスルフィド結合に存在する。場合によっては、Ｂペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５７（ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＸＡＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＦＹＴＸＢＸＣＴ）を含み；ＸＡ、ＸＢ、及びＸＣは独立して、自然発生の又は非自然発生のアミノ酸から選択される。場合によっては、ＸＡはＤ又はＨである。場合によっては、ＸＡはＤである。場合によっては、ＸＡはＨである。場合によっては、ＸＢはＤ又はＰである。場合によっては、ＸＢはＤである。場合によっては、ＸＢはＰである。場合によっては、ＸＣはＰ又はＫである。場合によっては、ＸＣはＰである。場合によっては、ＸＣはＫである。場合によっては、Ｂペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６０（ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＦＹＴ）との５、４、３、２、又は１以下のアミノ酸差を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、請求項９３のインスリン免疫グロブリン融合タンパク質であって、ＢはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６０を含む。
【０１９３】
幾つかの実施形態において、治療用ペプチドのアミノ酸は、全体的又は部分的に、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０９−１４０、１５７、１５８、１６０、１６１の何れか１つに基づく又はそれらに由来する。治療用ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０９−１４０、１５７、１５８、１６０、１６１の何れか１つに少なくとも約５０％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。治療用ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０９−１４０、１５７、１５８、１６０、１６１の何れか１つに少なくとも約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９７％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。治療用ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０９−１４０、１５７、１５８、１６０、１６１の何れか１つに少なくとも約７０％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。治療用ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０９−１４０、１５７、１５８、１６０、１６１の何れか１つに少なくとも約８０％相同性であるアミノ酸配列を含み得る。治療用ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０９−１４０、１５７、１５８、１６０、１６１の何れか１つに少なくとも約５０％同一であるアミノ酸配列を含み得る。治療用ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０９−１４０、１５７、１５８、１６０、１６１の何れか１つに少なくとも約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９７％同一であるアミノ酸配列を含み得る。治療用ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０９−１４０、１５７、１５８、１６０、１６１の何れか１つに少なくとも約７０％同一であるアミノ酸配列を含み得る。治療用ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０９−１４０、１５７、１５８、１６０、１６１の何れか１つに少なくとも約８０％同一であるアミノ酸配列を含み得る。治療用ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０９−１４０、１５７、１５８、１６０、１６１の何れか１つに１００％同一であるアミノ酸配列を含み得る。幾つかの実施形態において、治療用ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０９−１４０、１５７、１５８、１６０、１６１の何れか１つのアミノ酸配列に、少なくとも約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９７％相同性であるアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態において、治療用ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０９−１４０、１５７、１５８、１６０、１６１の何れか１つのアミノ酸配列に、少なくとも約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９７％同一であるアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態において、治療用ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０９−１４０、１５７、１５８、１６０、１６１の何れか１つのアミノ酸配列に１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
【０１９４】
治療用ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０９−１４０、１５７、１５８、１６０、１６１の何れか１つに基づく又はそれらに由来する、１０、２０、３０、４０、５０、６０又はそれ以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。治療用ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０９−１４０、１５７、１５８、１６０、１６１の何れか１つに基づく又はそれらに由来する１０以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。治療用ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０９−１４０、１５７、１５８、１６０、１６１の何れか１つに基づく又はそれらに由来する５０以上のアミノ酸を含む、アミノ酸配列を含み得る。アミノ酸は連続していてもよい。代替的に、又は付加的に、アミノ酸は不連続である。例えば、１以上のアミノ酸配列は、結合ペプチド及び／又はジスルフィド結合により結合される。幾つかの実施形態において、治療用ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０９−１４０、１５７、１５８、１６０、１６１の１、２、３、又は４つに由来するアミノ酸を含む。
【０１９５】
治療用ペプチドはプロテアーゼ切断部位を含み得る。プロテアーゼ切断部位は治療用ペプチド内に挿入され得る。幾つかの実施形態において、治療用ペプチドは、第１の治療用ペプチド領域と第２の治療用ペプチド領域とを含む。幾つかの実施形態において、治療用ペプチドは、第１の治療用ペプチド領域と第２の治療用ペプチド領域との間に配置されたプロテアーゼ切断部位を含む。幾つかの実施形態において、第１の治療用ペプチド領域と第２の治療用ペプチド領域は、同じタンパク質又はアミノ酸配列のセットに由来し得る。幾つかの実施形態において、第１の治療用ペプチド領域と第２の治療用ペプチド領域は、異なるタンパク質又はアミノ酸配列のセットに由来し得る。１以上のプロテアーゼ切断部位は、治療用ペプチドの領域のＮ末端、Ｃ末端、又はＮとＣの両末端に結合され得る。
【０１９６】
治療用ペプチドは、１以上の結合ペプチドを含み得る。治療用ペプチドは、２以上の結合ペプチドを含み得る。治療用ペプチドは、３、４、５、６、７又はそれ以上の結合ペプチドを含み得る。結合ペプチドは異なるものであってもよい。結合ペプチドは同じものでもよい。１以上の結合ペプチドは、治療用ペプチドの領域のＮ末端、Ｃ末端、又はＮとＣの両末端に結合され得る。結合ペプチドは治療用ペプチド内に挿入され得る。幾つかの実施形態において、治療用ペプチドは、第１の治療用ペプチド領域と第２の治療用ペプチド領域とを含む。幾つかの実施形態において、治療用ペプチドは、第１の治療用ペプチド領域と第２の治療用ペプチド領域との間に配置された結合ペプチドを含む。幾つかの実施形態において、第１の治療用ペプチド領域と第２の治療用ペプチド領域は、同じタンパク質又はアミノ酸配列のセットに由来し得る。幾つかの実施形態において、第１の治療用ペプチド領域と第２の治療用ペプチド領域は、異なるタンパク質又はアミノ酸配列のセットに由来し得る。幾つかの実施形態において、結合ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４８−１５４の何れかのアミノ酸配列に由来する及び／又はそれを含む。幾つかの実施形態において、結合ペプチドは、反復する配列を有するアミノ酸を含む。幾つかの実施形態において、結合ペプチドは、２、３、４、５、６、７、８、９、１０又はそれ以上の反復する配列を有する。幾つかの実施形態において、結合ペプチドは低免疫原性である。幾つかの実施形態において、結合ペプチドは生物分解性である。場合によっては、結合ペプチドは、少なくとも３、４、５、又はそれ以上のグリシン残基を含む。場合によっては、少なくとも３、４、５、又はそれ以上のグリシン残基は、結合ペプチド配列において繰り返される。幾つかの実施形態において、結合ペプチドはＧＧＧＳを含む。
【０１９７】
幾つかの実施形態において、インスリン治療用ペプチドは、少なくとも５０％のグリシンアミノ酸を含むアミノ酸配列を含む、結合ペプチドを含んでいる。場合によっては、結合ペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５９（ＧＧＧＸ１Ｘ２）を含み、ここで、Ｘ１とＸ２は独立して、自然発生の又は非自然発生のアミノ酸から選択される。場合によっては、Ｘ１はＰ、Ｇ、又はＳである。場合によっては、Ｘ１はＰである。場合によっては、Ｘ１はＧである。場合によっては、Ｘ１はＳである。場合によっては、Ｘ２はＲ、Ｓ、Ｇ、又はＫである。場合によっては、Ｘ２はＲである。場合によっては、Ｘ２はＳである。場合によっては、Ｘ２はＧである。場合によっては、Ｘ２はＫである。場合によっては、結合ペプチドはプロテアーゼ切断部位を含む。限定されない例として、ＲＫＫＲ切断部位がある。
【０１９８】
タンパク質分解性切断部位
本明細書に開示される免疫グロブリン融合タンパク質は、１以上のタンパク質分解性切断部位を含み得る。本明細書に開示される免疫グロブリン融合タンパク質は、２以上のタンパク質分解性切断部位を更に含み得る。本明細書に開示される免疫グロブリン融合タンパク質は、３以上のタンパク質分解性切断部位を更に含み得る。本明細書に開示される免疫グロブリン融合タンパク質は、４、５、６、７又はそれ以上のタンパク質分解性切断部位を含み得る。本明細書に開示される治療用ペプチドは、１以上のタンパク質分解性切断部位を更に含み得る。
【０１９９】
１以上のタンパク質分解性切断部位は、治療用ペプチドのＮ末端、Ｃ末端、又はＮとＣの両末端に結合され得る。１以上のタンパク質分解性切断部位は、伸展ペプチドのＮ末端、Ｃ末端、又はＮとＣの両末端に結合され得る。１以上のタンパク質分解性切断部位は、リンカーのＮ末端、Ｃ末端、又はＮとＣの両末端に結合され得る。１以上のタンパク質分解性切断部位は、結合ペプチドのＮ末端、Ｃ末端、又はＮとＣの両末端に結合され得る。１以上のタンパク質分解性切断部位は、リンカーのＮ末端、Ｃ末端、又はＮとＣの両末端に結合され得る。１以上のタンパク質分解性切断部位は、治療用ペプチド、結合ペプチド、リンカー、免疫グロブリン領域、又はそれらの組み合わせに結合され得る。
【０２００】
幾つかの実施形態において、タンパク質分解性切断部位は、治療用ペプチド、結合ペプチド、リンカー、免疫グロブリン領域、又はそれらの組み合わせのアミノ酸配列内に位置する。治療用ペプチドは、そのアミノ酸配列内に１以上のタンパク質分解性切断部位を含み得る。
【０２０１】
２以上のタンパク質分解性切断部位は、治療用ペプチド、結合ペプチド、リンカー、免疫グロブリン領域、又はそれらの組み合わせを取り囲み得る。タンパク質分解性切断部位の消化は、２以上のタンパク質分解性切断部位の間に位置するペプチドフラグメントの放出を結果としてもたらし得る。例えば、タンパク質分解性切断部位は、治療用ペプチド−リンカーペプチドの側部にあり得る。タンパク質分解性切断部位の消化は、治療用ペプチド−リンカーの放出を結果としてもたらし得る。
【０２０２】
タンパク質分解性切断部位は、１以上のプロテアーゼにより認識され得る。１以上のプロテアーゼは、セリンプロテアーゼ、トレオニンプロテアーゼ、システインプロテアーゼ、アスパルテートプロテアーゼ、グルタミン酸プロテアーゼ（ｇｌｕｔａｍｉｃ  ｐｒｏｔｅａｓｅ）、メタロプロテアーゼ、エキソペプチダーゼ、エンドペプチダーゼ、又はそれらの組み合わせであり得る。プロテアーゼは、因子ＶＩＩ又は因子Ｘａを含む群から選択され得る。プロテアーゼの付加的な例は、限定されないが、アミノペプチダーゼ、カルボキシペプチダーゼ、トリプシン、キモトリプシン、ペプシン、パパイン、及びエラスターゼを含む。プロテアーゼは、前駆タンパク質転換酵素（ＰＣ）であり得る。場合によっては、プロテアーゼはＰＣ２である。幾つかの実施形態において、プロテアーゼはアミノ酸配列ＫＲを認識する。幾つかの実施形態において、プロテアーゼはアミノ酸配列ＲＫＫＲを認識する。
【０２０３】
幾つかの実施形態において、免疫グロブリン融合タンパク質をコードする遺伝子構築物は、プロテアーゼ切断部位をコードする核酸配列を含む。場合によっては、プロテアーゼ切断部位は、インビボでの発現後に切断され、ここで、内因性プロテアーゼ、及び／又は、融合タンパク質と同時に発現されるプロテアーゼは、切断部位で融合タンパク質を切断する。場合によっては、プロテアーゼ切断部位はＲＫＫＲであり、融合タンパク質と同時に発現されるプロテアーゼは部位のカルボキシル末端で切断する。場合によっては、プロテアーゼ切断部位はＲＫＫＲであり、内因性プロテアーゼは部位のアミノ末端で切断する。
【０２０４】
ベクター、宿主細胞、及び組み換え法
免疫グロブリン融合タンパク質は、本明細書に開示されるように、既知の組み換え法及びタンパク質精製法により発現され且つ精製され得る。幾つかの例において、免疫グロブリン融合タンパク質の活性は、発現法及び／又は精製法により影響を受ける。例えば、治療薬としての使用のために構成された免疫グロブリン融合タンパク質の活性は、発現ベクターの同一性、組み換え型の宿主の同一性、細胞株の同一性、発現反応条件、精製法、タンパク質プロセシング、又はそれらの任意の組み合わせに基づき、増強されるか、又は弱められる。発現反応条件は、限定されないが、温度、％  ＣＯ２、媒体、発現時間、補助因子、及びシャペロンを含む。精製法は、限定されないが、精製温度、クロマトグラフィー樹脂、プロテアーゼ阻害剤、及び緩衝液組成を含む。
【０２０５】
免疫グロブリン融合タンパク質は、本明細書に開示されるように、組み換え法によって発現され得る。通常、免疫グロブリン融合タンパク質をコード化する核酸は、単離され、更なるクローニング（ＤＮＡの増幅）のため、又は発現のために複製可能なベクターに挿入され得る。免疫グロブリン融合タンパク質をコードするＤＮＡは、ＰＣＲ増幅により調製され、及び、従来の手順（例えば、免疫グロブリン融合タンパク質をコードするヌクレオチドへの特異的な結合が可能なオリゴヌクレオチドプローブの使用による）を使用して配列決定され得る。例示的実施形態において、免疫グロブリン融合タンパク質をコードする核酸はＰＣＲを増幅され、制限酵素は消化され、ゲルが精製される。消化された核酸は、複製可能なベクターに挿入され得る。消化された免疫グロブリン融合タンパク質の挿入を含有する、複製可能なベクターは、更なるクローニング（ＤＮＡの増幅）のため、又は発現のために、宿主細胞に形質転換されるか、又は形質導入され得る。宿主細胞は原核細胞又は真核細胞で有り得る。
【０２０６】
免疫グロブリン融合タンパク質のポリペプチド成分（例えば、免疫グロブリン領域、伸展ペプチド、治療用ペプチド）をコードするポリ核酸配列は、ＰＣＲ増幅により得られる場合がある。ポリ核酸配列は、ポリペプチド成分をコードする核酸を包含する細胞から単離され、配列決定され得る。代替的に、又は付加的に、ポリヌクレオチドは、ヌクレオチドシンセサイザー又はＰＣＲ技術を使用して合成され得る。一旦得られると、ポリペプチド成分をコードする配列は、原核生物及び／又は真核生物の宿主において、異種のポリヌクレオチドを複製及び発現することが可能な、組み換え型ベクターに挿入され得る。
【０２０７】
加えて、宿主微生物に適合可能な、レプリコン及び制御配列を含むファージベクターは、これらの宿主に関連して形質転換ベクターとして使用され得る。例えば、λＧＥＭ（商標）−１１などのバクテリオファージは、Ｅ．ｃｏｌｉ  ＬＥ３９２などの感受性宿主細胞を形質転換するために使用され得る、組み換え型ベクターを作る際に利用され得る。
【０２０８】
免疫グロブリン融合タンパク質は、細胞内（例えば細胞質）又は細胞外（例えば分泌物）に発現され得る。細胞外の発現について、ベクターは、細胞の外側への免疫グロブリン融合タンパク質の転位を可能にする、分泌シグナルを含み得る。
【０２０９】
免疫グロブリン融合タンパク質をコードするベクターのクローニング又は発現に適切な宿主細胞は、本明細書に記載される原核細胞又は真核細胞を含む。宿主細胞は真核生物で有り得る。真核細胞の例は、限定されないが、ヒト胚腎臓（ＨＥＫ）細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、真菌、酵母菌、無脊椎の細胞（例えば植物細胞と昆虫細胞）、リンパ系細胞（例えばＹＯ、ＮＳＯ、Ｓｐ２０細胞）を含む。適切な哺乳動物宿主細胞株の他の例は、ＳＶ４０（ＣＯＳ−７）によって形質転換されるサル腎臓ＣＶ１株；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）；マウスセルトリ細胞；サル腎臓細胞（ＣＶ１）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６）；ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ）；バッファロー・ラット肝細胞（ＢＲＬ  ３Ａ）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８）；ヒト肝細胞（Ｗ１３８Ｇ２）；マウス乳房腫瘍（ＭＭＴ  ０６０５６２）；ＴＲ１細胞；ＭＲＣ  ５細胞；及びＦＳ４細胞である。宿主細胞は原核細胞（例えばＥ．ｃｏｌｉ）でもよい。
【０２１０】
宿主細胞は、免疫グロブリン融合タンパク質をコードするヌクレオチドを含有するベクターにより形質転換され得る。形質転換した宿主細胞は、培地中で培養され得る。培地は、プロモーターを誘導するか、形質転換体を選択するか、又は所望の配列をコードする遺伝子を増幅或いは発現するために、１以上の薬剤で補われ得る。宿主細胞を形質転換させる方法は当該技術分野で既知であり、電気穿孔、塩化カルシウム、又はポリエチレングリコール／ＤＭＳＯを含み得る。
【０２１１】
代替的に、宿主細胞は、免疫グロブリン融合タンパク質をコードするヌクレオチドを含有するベクターにより形質移入されるか、又は形質導入され得る。形質移入された宿主細胞又は形質導入された宿主細胞は、培地の中で培養され得る。培地は、プロモーターを誘導するか、形質移入した又は形質導入した細胞を選択するか、又は所望の配列をコードする遺伝子を発現するために、１以上の薬剤で補われ得る。
【０２１２】
発現された免疫グロブリン融合タンパク質は、宿主細胞の周辺質に分泌され且つ該周辺質から回収され、又は培地に輸送され得る。周辺質からのタンパク質の回収は、宿主細胞の破壊を含み得る。宿主細胞の破壊は、浸透圧ショック、超音波処理、又は溶解を含み得る。遠心分離又は濾過が、細胞デブリ又は全細胞を取り除くために使用されてもよい。免疫グロブリン融合タンパク質は、例えば親和性樹脂クロマトグラフィーによって、更に精製され得る。
【０２１３】
代替的に、培養培地に分泌される免疫グロブリン融合タンパク質は、その中で単離され得る。細胞は、培養物、及び、生成されるタンパク質の更なる精製のために濾過及び濃縮される培養物の上清から除去され得る。発現されたポリペプチドは更に、ポリアクリルアミドゲル電気泳動法（ＰＡＧＥ）及びウェスタンブロットアッセイなどの一般に知られている方法を使用して、単離且つ同定され得る。
【０２１４】
免疫グロブリン融合タンパク質の生成は、発酵プロセスによって大量に実行され得る。様々な大規模な流加回分発酵手順が、組み換え型タンパク質の生成に利用可能である。大規模な発酵は、少なくとも１０００リットルの容量、好ましくは１，０００〜１００，０００リットルの容量を有する。これらの発酵槽は、酸素と栄養素、特にグルコース（好ましくは炭素／エネルギー源）を分配するためにアジテーター・インペラーを使用する。小規模発酵は、容積が約１００リットル以下の発酵槽における発酵を一般的に指すが、約１リットルから約１００リットルまで変動する場合がある。
【０２１５】
発酵プロセスにおいて、タンパク質発現の誘導は典型的に、所望の密度（例えば約１８０−２２０のＯＤ５５０）に適切な条件下で細胞が成長した後に開始され、その段階では、細胞は初期の固定相に存在する。様々な誘導因子が、当該技術分野にて既知であり且つ本明細書に記載されるように、利用されるベクターコンストラクトに従って使用され得る。細胞は、誘導前により短い期間にわたり成長し得る。より長い又はより短い誘導時間が使用され得るが、細胞は通常約１２−５０時間で誘導される。
【０２１６】
本明細書に開示される免疫グロブリン融合タンパク質の生成収量及び品質を改善するために、様々な発酵条件が改変され得る。例えば、適切なアセンブリ、及び分泌された免疫グロブリン融合タンパク質ポリペプチドのフォールディングを改善するために、Ｄｓｂタンパク質（ＤｓｂＡ、ＤｓｂＢ、ＤｓｂＣ、ＤｓｂＤ、又はＤｓｂＧ）又はＦｋｐＡ（シャペロン活性を伴うペプチジルプロリル・シス，トランス−イソメラーゼ）などの、シャペロンタンパク質を過剰発現する付加的なベクターは、宿主原核細胞を同時に形質転換するために使用され得る。シャペロンタンパク質は、細菌の宿主細胞において生成された異種タンパク質の適切なフォールディング及び可溶性を促進すると実証された。
【０２１７】
発現された異種タンパク質（特に、タンパク分解性に感受性があるもの）のタンパク質分解を最小限にするために、タンパク質分解酵素には不十分な特定の宿主株が、本開示に使用され得る。例えば、宿主細胞株は、プロテアーゼＩＩＩ、ＯｍｐＴ、ＤｅｇＰ、Ｔｓｐ、プロテアーゼＩ、プロテアーゼＭｉ、プロテアーゼＶ、プロテアーゼＶＩ、及びそれらの組み合わせなどの既知の細菌プロテアーゼをコードする遺伝子における遺伝子変異を達成するために修飾され得る。幾つかのＥ．ｃｏｌｉのプロテアーゼが不十分な菌株が、利用可能である。
【０２１８】
当該技術分野にて既知の標準タンパク質精製法が利用され得る。以下の手順は、適切な精製手順の典型である：免疫親和性又はイオン交換カラム上の分画、エタノール沈澱、逆相ＨＰＬＣ、シリカ又はＤＥＡＥなどの陽イオン交換樹脂上でのクロマトグラフィー、クロマト分画、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、硫酸アンモニウム沈殿法、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動法、透析、及び親和性クロマトグラフィー、並びに、例えばＳｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−７５を使用するゲル濾過。
【０２１９】
免疫グロブリン融合タンパク質は、市販で入手可能なタンパク質濃縮フィルタ（例えば、Ａｍｉｃｏｎ又はＭｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｐｅｌｌｉｃｏｎ（登録商標）の限外濾過ユニット）を使用して濃縮され得る。
【０２２０】
プロテアーゼ阻害剤又はプロテアーゼ阻害剤のカクテルが、免疫グロブリン融合タンパク質のタンパク質分解を阻害するために前述の工程の何れかに含まれていてもよい。
【０２２１】
場合によっては、免疫グロブリン融合タンパク質は、単離後に生物活性ではない場合もある。ポリペプチドを「リフォールディングする」又はその三次構造へと変換する、及びジスルフィド結合を生成する、様々な方法が、生物活性を回復するために使用され得る。そのような方法は、通常７より上のｐＨに、及び特定の濃度のカオトロープの存在下で、可溶化したポリペプチドを晒す工程を含む。カオトロープの選択は、封入体の可溶化に使用される選択肢に非常に類似するが、通常、カオトロープは、より低い濃度で使用され、必ずしも可溶化に使用されるカオトロープと同じではない。大抵の場合、リフォールディング溶液／酸化溶液はまた、還元剤、又は、タンパク質のシステインブリッジの形成に生じるようにジスルフィドシャフリングを可能にする特定のレドックス電位を生成するために特定の比率でその酸化形態を加えた還元剤を含む。共通して使用されたレドックス対の幾つかは、システイン／シスタミン、グルタチオン（ＧＳＨ）／ジチオビスＧＳＨ、塩化第二銅、ジチオトレイトール（ＤＴＴ）／ジチアンＤＴＴ、及び２−メルカプトエタノール（ｂＭＥ）／ジ−チオ−ｂ（ＭＥ）を含む。多くの例において、助溶剤が、リフォールディングの効率を増加させるために使用され得、この目的に使用される一般の試薬は、グリセロール、様々な分子量のポリエチレングリコール、アルギニンなどを含む。
【０２２２】
組成物及び組み合わせ
本明細書には、免疫グロブリン融合タンパク質及び／又は免疫グロブリン融合タンパク質の成分を含む組成物が開示される。場合によっては、組成物は、免疫グロブリン融合タンパク質と追加の治療薬を含む。組成物は、１、２、３、４、５又はそれ以上の免疫グロブリン融合タンパク質及び／又は追加の治療薬を含み得る。組成物の免疫グロブリン融合タンパク質は、異なる免疫グロブリン領域、リンカー、治療用ペプチド、又はそれらの組み合わせを含み得る。本明細書には更に、免疫グロブリン融合タンパク質と追加の治療薬の組み合わせが開示され、追加の治療薬はインスリン免疫グロブリン融合タンパク質とは別々に製剤される。そのような場合、免疫グロブリン融合タンパク質は、追加の治療薬と一緒に、又はそれとは別々に投与され得る。限定されない例において、追加の治療薬は、インスリン（例えば、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０９−１４０、１５７、１５８、１６０、及び１６１の何れか１つから選択されたインスリンに対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、又は１００％の同一性を有しているインスリン）である。追加のインスリンは、肝臓に対してインスリンを標的とする分子の一部ではない場合もある。
【０２２３】
組成物、免疫グロブリン融合タンパク質、及び追加の治療薬は、１以上の薬学的に許容可能な塩、賦形剤、又はビヒクルを含み得る。本件医薬組成物に使用される、薬学的に許容可能な塩、賦形剤、又はビヒクルは、担体、賦形剤、希釈剤、抗酸化剤、防腐剤、着色剤、着香料及び希釈化剤、乳化剤、懸濁化剤、溶媒、充填剤、増量剤（ｂｕｌｋｉｎｇ  ａｇｅｎｔｓ）、緩衝液、送達ビヒクル、等張化剤、共溶媒、湿潤剤、錯化剤、緩衝剤、抗菌剤、及び界面活性剤を含む。
【０２２４】
中性の緩衝食塩水、又は血清アルブミンと混合された食塩水は、例示的な適切な担体である。医薬組成物は、アスコルビン酸などの抗酸化剤；低分子量ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、又は免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、又はリジンなどのアミノ酸；単糖類、二糖類、及び、グルコース、マンノース、又はデキストリンを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；マンニトール又はソルビトールなどの糖アルコール；ナトリウムなどの塩を形成する対イオン；及び／又は、Ｔｗｅｅｎ、ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ、又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤を含み得る。また、一例として、適切な浸透圧増強剤は、アルカリ金属ハロゲン化物（好ましくは塩化ナトリウム又は塩化カリウム）、マンニトール、ソルビトールなどを含む。適切な防腐剤は、塩化ベンザルコニウム、チメロサール、フェネチルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、クロルヘキシジン、ソルビン酸などを含む。過酸化水素も防腐剤として使用してもよい。適切な共溶媒は、グリセリン、プロピレングリコール、及びＰＥＧを含む。適切な錯化剤は、カフェイン、ポリビニルピロリドン、ベータ−シクロデキストリン、又はヒドロキシ−プロピル−ベータ−シクロデキストリンを含む。適切な界面活性剤又は湿潤剤は、ソルビタンエステル、ポリソルベート８０などのポリソルベート、トロメタミン、レシチン、コレステロール、チロキサポールなどを含む。緩衝液は、酢酸塩、ホウ酸塩、クエン酸塩、リン酸塩、重炭酸塩、又はＴｒｉｓ−ＨＣｌなどの従来の緩衝液であり得る。酢酸塩緩衝液は約ｐＨ４−５．５であり、Ｔｒｉｓ緩衝液は約ｐＨ７−８．５であり得る。追加の医薬品は、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ，ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９０」にて説明される。
【０２２５】
非水性溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油などの植物油、及びオレイン酸エチルなどの注入可能な有機エステルである。水性担体は、食塩水及び緩衝化した媒体を含む、水、アルコール／水溶液、エマルジョン、又は懸濁液を含む。非経口のビヒクルは、塩化ナトリウム溶液、リンゲルデキストロース、デキストロース及び塩化ナトリウム、乳酸化リンゲル（ｌａｃｔａｔｅｄ  Ｒｉｎｇｅｒ’ｓ）、又は固定油を含む。静脈内のビヒクルは、液体及び栄養素の補充液、リンゲルデキストロースに基づくものなどの電解質補充液を含む。防腐剤及び他の添加剤はまた、例えば、抗菌剤、抗酸化剤、キレート剤、不活性ガスなどに存在し得る。全体的に、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，１６ｔｈ  Ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｅｄｓ．，１９８０を参照。
【０２２６】
組成物、免疫グロブリン融合タンパク質、及び追加の治療薬は、液体の形態、又は、凍結乾燥或いは冷凍乾燥した形態でもよく、１以上のリオプロテクタント、賦形剤、界面活性剤、高分子量の構造的な添加剤、及び／又は増量剤を含み得る（例えば、米国特許第６，６８５，９４０号、第６，５６６，３２９号、及び第６，３７２，７１６号を参照）。１つの実施形態において、スクロース、ラクトース、又はトレハロースなどの非還元糖であるリオプロテクタントが含まれる。通常含まれているリオプロテクタントの量は、再構築後に、結果として生じる製剤が等張になるような量であるが、高張性又はわずかに低張性の製剤も、適切な場合がある。加えて、リオプロテクタントの量は、凍結乾燥後に、許容できない量のタンパク質の崩壊及び／又は凝集を防ぐのに十分でなくてはならない。予め凍結乾燥された製剤における糖（例えば、スクロース、ラクトース、トレハロース）についての典型的なリオプロテクタント濃度は、約１０ｍＭ乃至約４００ｍＭである。別の実施形態において、界面活性剤が含まれ、該界面活性剤は、例えば、非イオン性界面活性剤、及びポリソルベート（例えば、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０）などのイオン性界面活性剤；ポロクサマー（例えば、ポロクサマー１８８）；ポリ（エチレングリコール）フェニルエーテル（例えば、Ｔｒｉｔｏｎ）；硫酸ドデシルナトリウム（ＳＤＳ）；ラウリル硫酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ  ｌａｕｒｅｌ  ｓｕｌｆａｔｅ）；ナトリウムオクチル・グリコシド；ラウリル−、ミリスチル−、リノレイル−、又はステアリル−スルホベタイン；ラウリル−、ミリスチル−、リノレイル−、又はステアリル−サルコシン；リノレイル、ミリスチル−、又はセチル−ベタイン；ラウロアミノプロピル−、コカミドプロピル−、リノレアミドプロピル−、ミリストアミドプロピル−、パルミドプロピル−、又はイソステアルアミドプロピル−ベタイン（例えば、ラウロアミドプロピル）；ミリストアミドプロピル−、パルミドプロピル−、又はイソステアルアミドプロピル−ジメチルアミン；ナトリウムメチルココイル−、又はジナトリウムメチルオレイル（ｏｆｅｙｌ）−タウレート；ＭＯＮＡＱＵＡＴ（商標）シリーズ（Ｍｏｎａ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，  Ｉｎｃ．，  Ｐａｔｅｒｓｏｎ，  Ｎ．Ｊ．）、ポリエチルグリコール、ポリプロピルグリコール、及び、エチレンとプロピレングリコールのコポリマー（例えば、Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ，ＰＦ６８など）などである。予め凍結乾燥された製剤に存在し得る界面活性剤の典型的な量は、約０．００１−０．５％である。高分子量の構造的な添加剤（例えば、充填剤、結合剤）は、例えば、アカシア、アルブミン、アルギン酸、リン酸カルシウム（二塩基）、セルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、微結晶性セルロース、デキストラン、デキストリン、デキストラート、スクロース、チロース、α澱粉、硫酸カルシウム、アミロース、グリシン、ベントナイト、マルトース、ソルビトール、エチルセルロース、リン酸水素二ナトリウム、リン酸二ナト���ウム、ピロ亜硫酸二ナトリウム、ポリビニルアルコール、ゼラチン、グルコース、グアーガム、液状グルコース、圧縮可能な糖、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、マルトデキストリン、ポリエチレンオキシド、ポリメタクリレート、ポビドン、アルギン酸ナトリウム、トラガカント、微結晶性セルロース、デンプン、及びゼインを含み得る。高分子量の構造的な添加剤の典型的な濃度は、０．１重量％〜１０重量％である。他の実施形態において、増量剤（例えば、マンニトール、グリシン）が含まれてもよい。
【０２２７】
本明細書に記載される組成物、免疫グロブリン融合タンパク質、及び追加の治療薬は、生成物の局所濃度（例えば、ボーラス、デポ効果）及び／又は特定の局所環境において増大した安定性又は半減期を提供する様式での、制御又は維持された送達のために製剤され得る。組成物、免疫グロブリン融合タンパク質、及び追加の治療薬は、ポリ乳酸やポリグリコール酸などの高分子化合物の微粒子の調製の他に、生物分解性のマトリックス、注入可能な微粒子、マイクロカプセル粒子、マイクロカプセル、生体分解可能な粒子のビーズ、リポソームなどの薬剤、及び、デポ注入として後に送達され得る活性剤の制御又は維持された放出を提供する注入可能な送達デバイスにより、製剤され得る。そのような維持又は制御された送達手段を処方する技術は既知であり、様々なポリマーが開発され、薬物の制御放出及び送達に使用されてきた。そのようなポリマーは典型的に生物分解性且つ生体適合性である。エナンチオマーのポリマー又はポリペプチドセグメントの錯体生成によって形成されるものを含む高分子ヒドロゲル、及び熱感受性又はｐＨ感受性の特性を持つヒドロゲルが、生物活性のタンパク質薬剤の捕捉に関与する穏やか且つ水性の条件により、薬物デポ効果を提供するのに望ましい場合がある。例えば、ＷＯ９３／１５７２２における、医薬組成物の送達のための多孔性重合体微小粒子の制御放出の記載を参照。
【０２２８】
この目的に適切な材料は、ポリラクチド（例えば、米国特許第３，７７３，９１９号を参照）、ポリ−（ａ−ヒドロキシカルボン酸）のポリマー、例えばポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸（ＥＰ１３３，９８８Ａ）、Ｌ−グルタミン酸とガンマ・エチル−Ｌ−グルタミン酸塩のコポリマー（Ｓｉｄｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ，２２：５４７−５５６（１９８３））、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリル酸塩）（Ｌａｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔｅｒ．Ｒｅｓ．，１５：１６７−２７７（１９８１），ａｎｄ  Ｌａｎｇｅｒ，Ｃｈｅｍ．Ｔｅｃｈ．，１２：  ８−１０５（１９８２））、エチレン酢酸ビニル、又はポリ−Ｄ（−）−３−ヒドロキシ酪酸を含む。他の生物分解性ポリマーは、ポリ（ラクトン）、ポリ（アセタール）、ポリ（オルトエステル）、及びポリ（オルトカーボネート）を含む。徐放性の組成物はまた、当該技術分野で既知の様々な方法の何れかによって調製され得るリポソームを含み得る（例えば、Ｅｐｐｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８２：３６８８−９２（１９８５）を参照）。担体自体、又はその分解生成物は、標的組織において無毒でなくてはならず、疾病を更に悪化させてはならない。これは、標的障害の動物モデルにおける、又は、そのようなモデルが利用不可能な場合には、通常の動物における、慣習的なスクリーニングによって判定され得る。
【０２２９】
組成物、免疫グロブリン融合タンパク質、及び追加の治療薬はマイクロカプセル化され得る。
【０２３０】
組成物、免疫グロブリン融合タンパク質、及び追加の治療薬は、非経口投与に適切であり得る。典型的な組成物、免疫グロブリン融合タンパク質、及び追加の治療薬は、関節内、皮下、静脈内、筋肉内、腹腔内、大脳内（実質内）、脳室内、筋肉内、眼内、動脈内、病巣内、血管内、髄腔内硝子体内、点滴、又は局所（ｌｏｃａｌ）、局所（ｔｏｐｉｃａｌ）、経口、又は鼻の経路など、当業者に利用可能な任意の経路による動物への注入又は点滴に適している。非経口製剤は典型的に、薬学的に許容可能な防腐剤を随意に含む、無菌の、パイロジェンフリーの、等張の水溶液である。
【０２３１】
筋肉内、皮下、腫瘍周囲、又は静脈内の注入に適切な製剤は、生理的に許容可能な無菌の水溶液又は非水溶液、分散液、懸濁液又はエマルジョン、及び無菌の注入可能な溶液又は分散液への再構成のための無菌の粉末剤を含み得る。適切な水性及び非水性の担体、希釈剤、溶媒、又はビヒクルの例は、水、エタノール、ポリオール（プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、グリセロール、クレモホール（ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ）など）、それらの適切な混合物、植物油（オリーブ油など）、及びオレイン酸エチルなどの注入可能な有機エステルを含む。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用、分散の場合に必要とされた粒径の維持、及び界面活性剤の使用によって、維持される。皮下注射に適した製剤は、防腐剤、湿潤剤、乳化剤、及び分配剤（ｄｉｓｐｅｎｓｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）などの随意の添加剤も含む。
【０２３２】
静脈注射のために、融合タンパク質及び追加の治療薬は、水溶液中で、好ましくはハンクス溶液、リンガー溶液、又は生理食塩水緩衝液などの生理的に適合可能な緩衝液中で、随意に製剤され得る。
【０２３３】
非経口注入は、ボーラス注入又は持続注入を随意に含む。注入用製剤は、追加の防腐剤と共に、単位投薬形態（例えば、アンプル）において、又は複数回用量容器において随意に提供される。本明細書に記載される医薬組成物、免疫グロブリン融合タンパク質、及び追加の治療薬は、油性又は水性のビヒクル中で無菌の懸濁液、溶液、又はエマルジョンなどの、非経口注入に適した形態であり、懸濁化剤、安定化剤、及び／又は分散剤などの調合剤（ｆｏｒｍｕｌａｔｏｒｙ  ａｇｅｎｔｓ）を含み得る。非経口投与のための医薬製剤は、水溶性形態の活性薬剤の水溶液を含む。加えて、懸濁液は、適切な油性の注入懸濁液として随意に調製される。
【０２３４】
代替的に又は付加的に、組成物、免疫グロブリン融合タンパク質、及び追加の治療薬は、本明細書に開示される免疫グロブリン融合タンパク質が吸収され又は閉じ込められる、膜、スポンジ、又は他の適切な物質の、影響を受けた領域への移植を介して局所的に投与され得る。移植デバイスが使用される場合、該デバイスは、任意の適切な組織又は臓器に移植され得、本明細書に開示される免疫グロブリン融合タンパク質、核酸、又はベクターの送達は、ボーラスを介して、又は連続投与を介して、或いは持続点液を使用するカテーテルを介して、デバイスに直接通され得る。
【０２３５】
本明細書に開示される免疫グロブリン融合タンパク質及び／又は追加の治療薬を含む医薬組成物は、例えば乾燥粉末などとして、吸入のために製剤され得る。吸入溶液も、エアロゾル送達のために液化された噴霧剤（ｐｒｏｐｅｌｌａｎｔ）において製剤され得る。また別の製剤において、溶液は霧状にされ得る。経肺投与のための付加的な医薬組成物は、例えば、化学的に修飾したタンパク質の肺送達を開示するＷＯ９４／２００６９に記載されるものを含む。肺送達のために、粒径は、遠位の肺への送達に適していなければならない。例えば、粒径は１μｍ〜５μｍであり得；しかし、例えば、各粒子が非常に多孔性である場合、より大きな粒子が使用され得る。
【０２３６】
免疫グロブリン融合タンパク質、又はインスリンなどの追加の治療薬は、インスリンポンプを使用して送達され得、それによりデバイスは、インスリンの必要性に設定される予めプログラムされたプロファイルに従って少量の治療薬を周期的に分配する。ポンプは、例えば食事中又は食後に、大量（ｂｏｌｕｓ  ａｍｏｕｎｔ）の治療薬を分配し得る。ポンプはまた、測定された血糖値への応答に従い治療薬を分配し得る。典型的なポンプは、Ｍｅｄｔｒｏｎｉｃ  （ｔｈｅ  ＭｉｎｉＭｅｄ）、Ａｎｉｍａｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｄｉｓｅｔｒｏｎｉｃ、及びＤａｎａにより市場に出されたものを含む。
【０２３７】
免疫グロブリン融合タンパク質、又はインスリンなどの追加の治療薬は、経皮パッチを使用して送達され得る。場合によっては、治療薬は、親油性エマルジョン又は緩衝化水溶液として製剤されるか、又は、ポリマー又は接着剤において溶解及び／又は分散される。そのようなパッチは、治療薬の連続送達、パルス送達、又はオンデマンド送達のために構築される。場合によっては、経皮送達はイオン導入パッチなどの手段により達成される。場合によっては、経皮パッチは、制御された送達をもたらす。吸収速度は、律速膜（ｒａｔｅ−ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ  ｍｅｍｂｒａｎｅ）を使用することにより、又は治療薬をポリマーのマトリクス或いはゲル内に捕捉することにより遅くされ得る。反対に、吸収促進剤は吸収性を高めるために使用され得る。吸収促進剤又は担体は、皮膚の通過を補助するための薬学的に許容可能な吸収性溶媒を含む。場合によっては、経皮デバイスは、バッキング部材（ｂａｃｋｉｎｇ  ｍｅｍｂｅｒ）、活性剤及び随意に担体を含有するリザーバ、長時間にわたり制御され且つ予め定められた速度で被験体の皮膚に薬剤を送達するための律速バリア、及び皮膚にデバイスを固定する接着剤を含む、包帯の形態である。
【０２３８】
本明細書に開示される免疫グロブリン融合タンパク質及び／又は追加の治療薬は、経口投与され得る。この様式で投与される製剤は、錠剤及びカプセルなどの固形剤形の配合に習慣的に使用される担体と共に、又は前記担体無しで製剤され得る。例えば、カプセルは、バイオアベイラビリティが最大限にされ且つプレシステミックな崩壊が最小限にされると、胃腸管の点において、製剤の活性部分を放出するよう設計され得る。追加の薬剤が、選択的な結合剤の吸収を促進するために含まれ得る。希釈剤、香味料、低融点ワックス、植物油、潤滑剤、懸濁化剤、錠剤崩壊剤、及び結合剤も利用され得る。
【０２３９】
別の調製は、錠剤の製造に適している無毒な賦形剤を伴う混合物中に、免疫グロブリン融合タンパク質及び／又は追加の治療薬の有効な量を含み得る。滅菌水、又は別の適切なビヒクル中で錠剤を溶解することによって、溶液は単位用量の形態で調製され得る。適切な賦形剤は、限定されないが、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム又は重炭酸ナトリウム、ラクトース、又はリン酸カルシウムなどの不活性な希釈剤；又は、デンプン、ゼラチン、或いはアカシアなどの結合剤；又は、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、或いはタルクなどの潤滑剤を含む。
【０２４０】
適切な及び／又は好ましい医薬製剤は、意図される投与経路、送達フォーマット、及び所望の投与量に依存して、本開示及び製剤技術の一般知識を考慮して決定され得る。投与方法にかかわらず、有効な用量は、患者の体重、体表面積、又は臓器の大きさに従って計算され得る。
【０２４１】
本明細書に記載される製剤の各々に関する処置に適切な投与量を決定するための計算の更なる改良が、当該技術分野で慣例的に行われ、且つ、当該技術分野で慣例的に行われるタスクの範囲内にある。適切な投与量は、適切な用量反応のデータの使用を通じて確認され得る。
【０２４２】
「薬学的に許容可能な」は、連邦政府又は州政府の規制機関によって承認されるもの或いは承認可能なもの、或いは、米国の薬局方、又はヒトを含む動物に使用するための他の一般に認識される薬局方に列挙されるものを指す場合がある。
【０２４３】
「薬学的に許容可能な塩」は、薬学的に許容可能であり、且つ親化合物の所望の薬理活性を持つ、化合物の塩を指す場合がある。
【０２４４】
「薬学的に許容可能な賦形剤、担体、又はアジュバント」は、本開示の少なくとも１つの免疫グロブリンと共に、被験体に投与してもよい賦形剤、担体、又はアジュバントを指す場合があり、それらは、その薬理活性を破壊せず、且つ、治療用の量の化合物を送達するのに十分な用量で投与された時に無毒である。
【０２４５】
「薬学的に許容可能なビヒクル」は、本開示の少なくとも１つの免疫グロブリンと共に投与される、希釈剤、アジュバント、賦形剤、又は担体を指す場合がある。
【０２４６】
治療用途
本明細書には更に、１以上の疾患、障害、及び／又は疾病を処置、軽減、阻害、及び／又は予防するための、インスリン免疫グロブリン融合タンパク質及び方法が開示される。前記方法は、本明細書に開示される１以上のインスリン免疫グロブリン融合タンパク質を含む組成物を、必要とする被験体に投与する工程を含み得る。インスリン免疫グロブリン融合タンパク質は、糖尿病などのグルコース及びインスリンの代謝障害に関連した代謝欠陥の調節又は改善のために使用され得る。場合によっては、被験体は、以下の代謝の指数の少なくとも１つの低減を必要としている：インスリン分泌、インスリン抵抗性、耐糖能異常、高インスリン血症、高血糖症、及び体脂肪蓄積。被験体は、ヒト、又は、霊長類、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ウサギ、ウマ、ニワトリ、ネコ、イヌ、マウスなどを含むがこれらに限定されない動物であり得る。
【０２４７】
幾つかの実施形態において、被験体は、肝実質細胞上で提供される又は肝細胞により発現させられる抗原に対し特異的な抗原結合ドメインを含むアミノ酸配列を含んでいる、免疫グロブリン融合タンパク質を投与され、それにより、肝臓に対して免疫グロブリン融合タンパク質を標的とする。インスリン免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０９−１４０、１５７、１５８、１６０、１６１の何れか１つに対して約５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９９％又はそれ以上のアミノ酸配列同一性を有しているアミノ酸配列を含む、インスリン治療用ペプチドを含み得る。インスリン免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９、３０、３５−５６、１６７の何れか１つに対して約５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９９％又はそれ以上のアミノ酸配列同一性を有しているアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン領域を含み得る。インスリン免疫グロブリン融合タンパク質配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８−９８の何れか１つに対して約５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９９％又はそれ以上のアミノ酸配列同一性を含み得る。インスリン免疫グロブリン融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７−７７の何れか１つに少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９９％又はそれ以上同一する、核酸配列によりコードされ得る。
【０２４８】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載される免疫グロブリン融合タンパク質は、追加の治療薬と組み合わせて投与及び／又は製剤される。２つの治療薬は、同時又は異なる時間及び／又はスケジュールで投与され得る。例えば、融合タンパク質は、１日１回、週に１回、月に１回、３か月ごとなどで投与され得、追加の治療薬は、毎日、毎週、毎月、３か月ごとなどで独立して投与され得る。２つの治療薬は、異なる手段又は同じ手段により投与され得る。限定されない例として、各治療薬は独立して又は組み合わせて、経口で、経皮で、静脈内で、経鼻で、皮下に、又は本明細書に別記される方法で投与される。
【０２４９】
薬理学的特性
本明細書には更に、治療用ペプチドの１以上の薬理学的特性を改善する方法が開示される。前記方法は、本明細書に開示される免疫グロブリン融合タンパク質を生成する工程を含み得る。薬理学的特性の例は、限定されないが、半減期、安定性、溶解度、免疫原性、毒性、バイオアベイラビリティ、吸音、遊離、分布、変形現象、及び排出を含み得る。遊離は、医薬製剤から治療用ペプチドを放出するプロセスを指し得る。吸収は、血液循環に侵入する物質のプロセスを指し得る。分布は、身体の流体及び組織を通る物体の分散又は散布を指し得る。変形現象（又は、生体内変化、或いは不活性化）は、異物が存在する生体による認識、及び、娘代謝産物への親化合物の不可逆変換を指し得る。排出は、身体からの物質の除去を指し得る。
【０２５０】
治療用ペプチドの半減期は、非融合治療用ペプチドの半減期よりも長い場合がある。治療用ペプチドの半減期は、被験体に投与された時、４時間、６時間、１２時間、２４時間、３６時間、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、又は１４日よりも長い場合がある。治療用ペプチドの半減期は、被験体に投与された時、４時間より長い場合がある。治療用ペプチドの半減期は、被験体に投与された時、６時間より長い場合がある。
【０２５１】
治療用ペプチドの半減期は、少なくとも約２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、又は２０以上に増大され得る。治療用ペプチドの半減期は少なくとも約２時間に増大され得る。治療用ペプチドの半減期は少なくとも約４時間に増大され得る。治療用ペプチドの半減期は少なくとも約６時間に増大され得る。治療用ペプチドの半減期は少なくとも約８時間に増大され得る。
【０２５２】
治療用ペプチドの半減期は、非共役治療用ペプチドの半減期よりも、少なくとも約１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、又は１０倍長い場合がある。本明細書に記載される免疫グロブリンの治療用ペプチドの半減期は、非共役治療用ペプチドの半減期よりも、少なくとも約１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、又は５０倍長い場合がある。本明細書に記載される免疫グロブリンの治療用ペプチドの半減期は、非共役治療用ペプチドの半減期よりも、少なくとも約２倍長い場合がある。本明細書に記載される免疫グロブリンの治療用ペプチドの半減期は、非共役治療用ペプチドの半減期よりも、少なくとも約５倍長い場合がある。本明細書に記載される免疫グロブリンの治療用ペプチドの半減期は、非共役治療用ペプチドの半減期よりも、少なくとも約１０倍長い場合がある。
【０２５３】
本明細書に記載される免疫グロブリンの治療用ペプチドの半減期は、非共役治療用ペプチドの半減期よりも、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９７％長い場合がある。本明細書に記載される免疫グロブリンの治療用ペプチドの半減期は、非共役治療用ペプチドの半減期よりも、少なくとも約１０％長い場合がある。本明細書に記載される免疫グロブリンの治療用ペプチドの半減期は、非共役治療用ペプチドの半減期よりも、少なくとも約２０％長い場合がある。本明細書に記載される免疫グロブリンの治療用ペプチドの半減期は、非共役治療用ペプチドの半減期よりも、少なくとも約３０％長い場合がある。本明細書に記載される免疫グロブリンの治療用ペプチドの半減期は、非共役治療用ペプチドの半減期よりも、少なくとも約４０％長い場合がある。本明細書に記載される免疫グロブリンの治療用ペプチドの半減期は、非共役治療用ペプチドの半減期よりも、少なくとも約５０％長い場合がある。
【０２５４】
キット
更に本明細書には、１以上の免疫グロブリン融合タンパク質又はその成分を含むキットが開示される。免疫グロブリン融合タンパク質は、本開示の方法を実行するためのそれらの使用を促進する方法で包装され得る。例えば、キットは、容器内に包装される、本明細書に記載される免疫グロブリン融合タンパク質を含み、該容器は、容器に付けられるラベル、又は、方法の実行における免疫グロブリン融合タンパク質の使用を説明する添付文書を含む。適切な容器は、例えば、ボトル、バイアル、シリンジなどを含む。容器は、ガラス又はプラスチックのような様々な材料から形成され得る。容器は、無菌のアクセスポートを備え得る（例えば、容器は、皮下注射針によって貫通可能な栓を有する静脈注射用溶液バッグ又はバイアルであり得る）。キットは、免疫グロブリン融合タンパク質を中に含有する容器を含み得る。キットは、（ａ）本明細書に記載されるような免疫グロブリン融合タンパク質と追加の治療薬を備えた容器を含み得る。追加の治療薬は、肝臓の標的部分を欠いたインスリン分子であり得る。キットは更に、第１及び第２の組成物が特定の疾病を処置するために使用され得ることを示す添付文書を含み得る。代替的に又は付加的に、キットは更に、薬学的に許容可能な緩衝液（例えば、制菌性の注射用水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンガー溶液、及びデキストロース溶液）を含む、第２（又は第３）の容器を含み得る。キットは更に、他の緩衝液、希釈剤、フィルタ、針、及びシリンジを含むがこれらに限定されない、商業上及びユーザの観点から望ましい他の材料を含み得る。免疫グロブリン融合タンパク質は単位剤形で包装され得る。キットは更に、特異的な投与経路に従って免疫グロブリン融合タンパク質を投与するのに適切な、又はスクリーニングアッセイを実行するのに適切なデバイスを含み得る。キットは、免疫グロブリン融合タンパク質の組成物の使用を説明するラベルを含み得る。
【０２５５】
免疫グロブリン融合タンパク質を含む組成物は、ヒト、ウシ、ネコ、イヌ、及びマウスなど哺乳動物への静脈内投与に適用される医薬組成物として、常法に従って製剤され得る。典型的に、静脈内投与用組成物は、無菌の等張の水性緩衝液中に溶液を含む。必要な場合、組成物はまた、注入の部位にて疼痛を緩和するために、リドカインなどの可溶化剤及び／又は局所麻酔を含み得る。通常、その成分は、別々に供給されるか、又は単位剤形で一緒に混合され得る。例えば、免疫グロブリン融合タンパク質は、免疫グロブリン融合タンパク質の量を示すアンプル又はサシェなどの密封容器の中に、凍結乾燥粉末又は水無しの濃縮物として供給され得る。組成物は、点滴によって投与される場合、無菌の医薬品等級の水又は食塩水を含有する点滴ボトルにより分配され得る。組成物が注入により投与される場合、滅菌注射用蒸留水又は食塩水のアンプルは、成分が投与前に混合され得るように、提供され得る。
【０２５６】
治療用ペプチドの異常な発現及び／又は活性に関連する疾患又は障害の処置、阻害、及び／又は予防に効果的である、本明細書に記載される組成物の量は、標準の臨床的技術によって決定され得る。加えて、インビトロのアッセイが随意に、最適な投与量の範囲を同定するのを助けるために利用されてもよい。製剤に利用される正確な用量も、投与経路、及び疾患又は障害の重症度に依存してもよく、且つ、医療従事者の判断及び各患者の状況によって決定されなければならない。有効な用量は、インビトロの動物モデルの試験システム又は臨床試験に由来する、用量−反応曲線から推定され得る。
【実施例】
【０２５７】
以下の実施例に提供される活性のデータは通常、実施例に定義され且つ提供されたＳＥＱ  ＩＤにより例証される、免疫グロブリン融合タンパク質を使用して獲得される。
本明細書に開示される任意の免疫グロブリン融合タンパク質の活性は、免疫グロブリン融合タンパク質配列に関連しない条件、例えば発現及び精製の条件に依存して増強され又は弱められる場合があり得ることを、理解されたい。
【０２５８】
実施例１：哺乳動物細胞の発現のためのＩｎｓ−Ｌ１−Ａｂ１Ｌ及びＩｎｓ−Ｌ１−Ａｂ１Ｈ融合タンパク質の構築
【０２５９】
マウス抗ヒトＡＳＧＰＲ抗体５Ｇ３（抗ＡＳＧＰＲ（５Ｇ３）又はＡｂ１と称する）ハイブリドーマを、ヒトＡＳＧＰＲ細胞外ドメインでのマウスの免疫化により得た。Ａｂ１重鎖可変領域（Ａｂ１  ＶＨ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）又はＡｂ１軽鎖（Ａｂ１  ＶＬ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３）可変領域の配列を、Ａｂ１ハイブリドーマｃＤＮＡを配列決定することにより得た。Ａｂ１Ｈ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）をコードする哺乳動物発現ベクターを、ｐＦｕｓｅ−ｈＩｇＧ１−Ｆｃバックボーンベクター（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ，ＣＡ）への、増幅されたＡｂ１  ＶＨ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）とヒトＩｇＧ１  ＣＨ１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）のインフレームライゲーションにより生成した。抗体Ａｂ１  ＶＬ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３）とヒトＩｇカッパＣＬ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４）をコードする遺伝子を増幅させた。Ａｂ１  ＶＬ及びヒトＩｇカッパの重複−ＰＣＲ生成物を、ｈＩｇＧ１  Ｆｃフラグメント無しでｐＦｕｓｅベクターへとクローン化して、Ａｂ１Ｌ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）をコードする哺乳動物発現ベクターを生成した。４点の突然変異とＧＧＧＰＲＲ結合ペプチド（Ｉｎｓ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９９）を備えた単鎖インスリンをコードする遺伝子配列を、Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ  ＤＮＡ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，  Ｉｎｃ．  （ＩＡ，  ＵＳＡ）により合成し、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）により増幅させた。リンカーＧＧＧＧＳ（Ｌ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４１）をコードする核酸を、Ｉｎｓ１とＡｂ１ＨのＮ末端との間にクローン化して、Ｉｎｓ１−Ｌ１−Ａｂ１Ｈ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７）を生成した。リンカーＧＧＧＧＳ（Ｌ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４１）をコードする核酸を、Ｉｎｓ１とＡｂ１ＬのＮ末端との間にクローン化して、Ｉｎｓ１−Ｌ１−Ａｂ１Ｌ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８）を生成した。結果として生じる哺乳動物の発現ベクターをＤＮＡ配列決定により確認した。
【０２６０】
実施例２：Ｉｎｓ−Ｌ１−Ａｂ１Ｌ  ＩｇＧとＩｎｓ−Ｌ１−Ａｂ１Ｈ融合タンパク質の発現と精製
【０２６１】
Ｉｎｓ１−Ｌ１−Ａｂ１Ｌ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９）とＡｂ１Ｈ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９）、総体的に、Ｉｎｓ１−Ｌ１−Ａｂ１Ｌ  ＩｇＧを、製造業者のプロトコルに従って、Ａｂ１Ｈ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）とＩｎｓ１−Ｌ１−Ａｂ１Ｌ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８）の発現ベクターでの、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ  ＨＥＫ  ２９３細胞の一時的な形質移入を介して発現させた。簡潔に、３×１０７の細胞を含む２８ｍＬのＦｒｅｅＳｔｙｌｅ  ＨＥＫ  ２９３細胞を、１２５ｍＬの振盪フラスコ中で播種した。Ｉｎｓ１−Ｌ１−Ａｂ１Ｌをコードするプラスミド１５μｇと、１ｍＬのＯｐｔｉ−ＭＥＭ培地中で希釈したＡｂ１Ｈをコードするプラスミド１５μｇを、６０μＬの２９３ｆｅｃｔｉｎ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，  Ｉｎｃ）を含む１ｍＬのＯｐｔｉ−ＭＥＭに加えた。プラスミドを３０分間、２９３ｆｅｃｔｉｎでインキュベートした後、リポプレックス混合物を細胞懸濁液に加えた。その後、細胞を３７℃で、５％のＣＯ２環境において１２５ｒｐｍで振盪させた。分泌タンパク質（Ｉｎｓ１−Ｌ１−Ａｂ１Ｌ  ＩｇＧ）を含む培養培地を、形質移入後に２回、４８時間ごとに採取した。Ｉｎｓ１−Ｌ１−Ａｂ１Ｌ  ＩｇＧを、Ｇタンパク質クロマトグラフィー（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，  ＩＬ）により精製した。図２に示されるように、精製されたタンパク質をＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分析した。Ｉｎｓ１−Ｌ１−Ａｂ１Ｈ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８）とＡｂ１Ｌ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０）、総体的に、Ｉｎｓ１−Ｌ１−Ａｂ１Ｌ  ＩｇＧを発現させ、Ｉｎｓ１−Ｌ１−Ａｂ１Ｌ  ＩｇＧについて記載されるように精製し、精製された融合タンパク質を図２のＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルにおいて示す。
【０２６２】
実施例３：ヒトＡＳＧＰＲに関するＩｎｓ１−Ｌ１−Ａｂ１Ｌ  ＩｇＧとＩｎＬ１−Ａｂ１Ｈ  ＩｇＧの融合タンパク質結合アッセイ
【０２６３】
ヒトＡＳＧＰＲに関するＩｎｓ１−Ｌ１−Ａｂ１Ｌ  ＩｇＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯＳ：７９、２９）とＩｎｓ１−Ｌ１−Ａｂ１Ｈ  ＩｇＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯＳ：７８、３０）融合タンパク質内の抗ＡＳＧＰＲの活性を、ＥＬＩＳＡアッセイによって試験した。簡潔に言えば、１００ｎｇ／ウェルのＡＳＧＰＲ抗原（ヒト、ラット、およびカニクイザル）を、夜通し４°ＣでＰＢＳ中の９６ウェルプレート上で被覆し、ウェルを１時間、室温で２％ミルク／ＰＢＳＴ（ＰＢＳ中の０．５％トゥイーン−２０）でブロックし、２時間、室温で２％ミルク／ＰＢＳＴ中の１０ｎＭ、１ｎＭ、および０．１ｎＭの濃度で抗体を加え、ウェルをＰＢＳＴで４−５回洗浄し、２％ミルク／ＰＢＳＴ中の抗軽鎖カッパ（Ｓｉｇｍａ  Ａ７１６４）を加えて、プレートを１時間室温でインキュベートし、ウェルをＰＢＳＴで４−５回洗浄し、ＱｕａｎｔａＢｌｕの蛍光発生ペルオキシダーゼ基質（Ｌｉｆｅ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、１５１６９）で反応を起こし、３２５ｎｍの励起と４２０ｎｍの放射を備えるＳｐｅｃｔｒａｍａｘ蛍光プレートリーダーを使用して定量化した。図３は、Ａｂ１（治療用融合タンパク質（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯＳ：２９、３０）のない抗ＡＳＧＰＲ抗体）、Ｉｎｓ１−Ｌ１−Ａｂ１Ｌ  ＩｇＧ、およびＩｎｓ１−Ｌ１−Ａｂ１Ｈ  ＩｇＧのヒトＡＳＧＰＲとの結合のための濃度依存性の蛍光強度の中央値を示す。図４は、ラットＡＳＧＰＲとの、Ａｂ１、Ｉｎｓ１−Ｌ１−Ａｂ１Ｌ  ＩｇＧ、およびＩｎｓ１−Ｌ１−Ａｂ１Ｈ  ＩｇＧの結合のための濃度依存性の蛍光強度を示す。図は、インスリン治療用ペプチドに縮合した抗ＡＳＧＰＲ抗体がそれらの抗原ＡＳＧＰＲのための活性を保持することを示す。
【０２６４】
実施例４：ＨｅｐＧ２細胞（Ｐｈｏｓｐｈｏ−ＡＫＴ（Ｓｅｒ４７３）アッセイ）を備えたインスリン融合タンパク質活性アッセイ
【０２６５】
ＨｅｐＧ２、ヒト肝癌細胞は、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、１００ｍＭのピルビン酸ナトリウム、および抗生物質（Ｍ１）を含む、最少必須培地（ＭＥＭ）／Ｆ１２（１：１）中で育てられた。その後、細胞を、ＨＥＰＥＳおよびＬ−グルタミン（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）ＦＢＳとフェノールレッド（Ｍ２）を含む８μＬのダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）／Ｆ１２（１：１）中の３８４のウェルプレート（１５Ｋ細胞／ウェル）に播種した。細胞を、５％のＣＯ２ガスのある状態で３７°Ｃで夜通し（〜１６時間）成長させた。翌日、リン酸化したＡＫＴ（Ｓｅｒ４７３）の活性化を、Ｍ２培地中の様々な濃度のインスリンまたはインスリン融合タンパク質で、各ウェル中において培養（１０分間、５％のＣＯ２ガスのある状態での３７°Ｃのインキュベーション）後に、評価した。リン酸化したＡＫＴ（Ｓｅｒ４７３）を、メーカーのプロトコルに従ってＰｈｏｓｐｈｏ−ＡＫＴ（Ｓｅｒ４７３）の細胞アッセイキット（Ｃｉｓｂｉｏ  Ａｓｓａｙ，  Ｃａｔ：６４ＡＫＳＰＥＧ）を使用して検出した。簡潔に言えば、細胞を、４μＬの溶解緩衝液を加えることにより、アッセイプレート中で直接溶解させた。その後、リン酸化したＡＫＴを認識し、３２０ｎｍでの励起時にリン酸化したＡＫＴの程度に比例して時間分解蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）シグナルを発する２つのモノクローナル抗体を含む４μＬの抗体溶液を各ウェルに補充した。放出は、６６５ｎｍと６１５ｎｍでＥｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダーを使用して測定された。図５は、インスリン（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３８）、ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ抗体のアミノ末端に縮合したＩｎｓ１（Ｉｎｓ１−ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ含むＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９４）、抗ＡＳＧＰＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯＳ：２９、３０）、Ｉｎｓ１−Ｌ１−Ａｂ１Ｈ  ＩｇＧ、およびＩｎＬ１−Ａｂ１Ｌ  ＩｇＧの濃度に応じて、ＨＴＲＦ（均質の時間分解蛍光）比率のプロットを用いるＨｅｐＧ２細胞に対するインスリン融合タンパク質の活性を示す。図５は、Ｉｎｓ１融合タンパク質がＨｅｐＧ２細胞において同等のまたは増強されたインスリン活性を有することを例証する。試験化合物に対するＥＣ５０値は、Ｉｎｓ１Ｌ１−Ａｂ１Ｈ  ＩｇＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯＳ：７８、３０）で１０３ｎｍ、Ｉｎｓ１Ｌ１−Ａｂ１Ｌ  ＩｇＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯＳ：７９、２９）で２０ｎｍ、Ｉｎｓ１−ハーセプチン  ＩｇＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯＳ：９４）で１１８ｎｍ、および野性型インスリン（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３８）で４０１ｎｍとして計算された。図１１、１５、１８、２０−２２は、Ｉｎｓ１、Ｉｎｓ２、Ｉｎｓ３、およびＩｎｓ４融合タンパク質がＨｅｐＧ２細胞に対する匹敵するか増強されたインスリン活性を有することを例証する。試験化合物に対するＥＣ５０値はＩｎｓ１Ｌ１−Ａｂ２  ＩｇＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯＳ：８０、３１）で４６ｎｍ、Ｉｎｓ３Ｌ２−Ａｂ３  ＩｇＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯＳ：８３、３３）＋ＰＣ２で３．８ｎｍ、Ｉｎｓ３Ｌ２−Ａｂ３  ＩｇＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯＳ：８２、３３）で４．４ｎｍ、Ｉｎｓ２Ｌ２−Ａｂ３  ＩｇＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯＳ：８１、１６７）＋ＰＣ２で５．４ｎｍ、Ｉｎｓ２−Ｌ２−Ａｂ３  ���ｇＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯＳ：８１、１６７）で２１、野性型インスリン（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３８）で２０９ｎｍとして計算され；図１１．試験化合物に対するＥＣ５０値は、Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４  ＩｇＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯＳ：８４、３４）で２３ｎｍ、Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４（Ｆａｂ）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯＳ：８４、３６）で１８７ｎｍ、および野性型インスリン（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３８）で３４５ｎｍとして計算され；図１５．試験化合物に対するＥＣ５０値は、Ｉｎｓ４−Ｌ３−Ａｂ４  ＩｇＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯＳ：８５、３４）で５３ｎｍ、Ｉｎｓ４−Ｌ３−Ａｂ２  ＩｇＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯＳ：８６、３１）で１７５ｎｍ、および野性型インスリン（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３８）で５６９ｎｍとして計算され；図１８．試験化合物に対するＥＣ５０値は、Ｉｎｓ４Ｌ６−Ａｂ４  ＩｇＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯＳ：９１、３４）で４０ｎｍ、および野性型インスリン（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３８）で３４５ｎｍとして計算され；図２０．試験化合物に対するＥＣ５０値は、Ｉｎｓ４Ｌ６−Ａｂ４（Ｆａｂ）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯＳ：９５、３６）ＩｇＧで２２３ｎｍ、Ｉｎｓ５Ｌ７−Ａｂ４  ＩｇＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯＳ：９０、３４）で＞１５８０ｎｍ、および野性型インスリン（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３８）で４２６ｎｍとして計算され；図２１．試験化合物に対するＥＣ５０値は、Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４  ＩｇＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯＳ：８４、３４）で８ｎｍ、Ｉｎｓ１Ｌ４−Ａｂ４  ＩｇＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯＳ：８７、３４）で１３ｎｍ、Ｉｎｓ１Ｌ５−Ａｂ４  ＩｇＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯＳ：８８、３４）で６ｎｍ、および野性型インスリン（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３８）で２８２ｎｍとして計算され；図２２．
【０２６６】
実施例５：ＨｅｐＧ２細胞とのインスリン融合タンパク質の結合親和性のフローサイトメトリー分析
【０２６７】
ＨｅｐＧ２細胞を収穫し、洗浄して、５×１０６細胞／ｍＬの密度でＰＢＳ／１％ＢＳＡ溶液で再懸濁された。細胞懸濁液を１時間４°Ｃでインキュベートした。様々な濃度（４０、２０、１０、５、２．５、１．２５、０．６２５、０ｎＭ）の抗体（Ａｂ１  ＩｇＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯＳ：２９、３０）、Ｉｎｓ１−Ｌ１−Ａｂ１Ｌ  ＩｇＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯＳ：７９、２９）、Ｉｎｓ１−Ｌ１−Ａｂ１Ｈ  ＩｇＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯＳ：７８、３０）、およびＩｎｓ１−ハーセプチン（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯＳ：９４）を、撹拌しながら４°Ｃでの２時間のインキュベーションのために細胞に加えた。その後、細胞をＰＢＳ／１％ＢＳＡで３回洗浄した。ＦＩＴＣ抗ヒトカッパ抗体（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，  Ｉｎｃ．）を、ＰＢＳ／１％ＢＳＡで５００倍に希釈し、その後、さらに２時間４°Ｃでのインキュベーションのために細胞に加えた。インキュベーション後に、細胞を、ＰＢＳ／１％ＢＳＡで２度洗浄し、ＰＢＳ／１％ＢＳＡ溶液で再懸濁した。結合した抗体の量を分析するためにフローサイトメトリーを行った。図６は、ＨｅｐＧ２細胞でのＩｎｓ１Ｌ１−Ａｂ１Ｌ  ＩｇＧ（パネルＡ）とＩｎｓ１−Ｌ１−Ａｂ１Ｈ  ＩｇＧ（パネルＢ）の結合を示す。平均細胞蛍光（ＦＩＴＣチャネル）は結合親和性を定量化するために使用された。図７は、試験された各抗体に関する平均蛍光強度（ＭＦＩ）対濃度のプロットを示す。
【０２６８】
実施例６：哺乳動物細胞中での発現のためのインスリンＩｇＧ融合タンパク質の構造
【０２６９】
パリビズマブ（Ａｂ２Ｈ、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３）の重鎖をコードする遺伝子を、ｐＦｕｓｅベクターへクローン化した。Ｉｎｓ１をコードする核酸、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９９（実施例１に記載されるように）が、Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ  ＤＮＡ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，  Ｉｎｃ．によって合成され、ＰＣＲによって増幅された。Ｉｎｓ１Ｌ１−Ａｂ２Ｌ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５９）をコードする哺乳動物発現ベクターは、リンカーＧＧＧＧＳ（Ｌ１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４１）をコードするヌクレオチドを用いて、Ｉｎｓ１（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９９）をコードする遺伝子とパリビズマブ（Ａｂ２Ｌ、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４）の軽鎖を、ｐＦｕｓｅベクターへクローン化することにより生成された。結果として生じる哺乳動物の発現ベクターは、ＤＮＡ塩基配列決定法によって確認された。
【０２７０】
インスリンを生成するために、抗ＡＳＧＰＲの重鎖（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１、６、８、９、１０、あるいは１５）または軽鎖（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２、５、７、１３、あるいは１６）の核酸配列をコードする遺伝子である、抗ＡＳＧＰＲ融合タンパク質をｐＦｕｓｅベクターへとクローン化した。ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯＳ：１０９−１４０から選択されたインスリンをコードする核酸は、Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ  ＤＮＡ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，  Ｉｎｃ．によって合成され、ＰＣＲによって増幅された。インスリンと抗ＡＳＧＰＲ融合タンパク質をコードする哺乳動物発現ベクターは、インスリンをコードする核酸とリンカーをｐＦｕｓｅベクターへクローン化することにより生成された。結果として生じる哺乳動物の発現ベクターは、ＤＮＡ塩基配列決定法によって確認された。
【０２７１】
実施例７：インスリンＩｇＧ融合タンパク質の発現と精製
【０２７２】
Ｉｎｓ１−Ｌ１−Ａｂ２Ｌ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５９）とＡｂ２Ｈ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３）、まとめてＩｎｓ１Ｌ１−Ａｂ２Ｌ  ＩｇＧを、メーカーのプロトコルに従って、Ａｂ２Ｈ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３）とＩｎｓ１−Ｌ１−Ａｂ２Ｌ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５９）の発現ベクターを用いて、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ  ＨＥＫ  ２９３細胞の一時的なトランスフェクションによって発現させた。簡潔に言えば、３×１０７細胞を含む２８ｍＬのＦｒｅｅＳｔｙｌｅ  ＨＥＫ  ２９３細胞を、１２５ｍＬの振盪フラスコに播種した。１ｍＬのＯｐｔｉ−ＭＥＭ培地で稀釈した、Ｉｎｓ１Ｌ１−Ａｂ１Ｌをコードする１５μｇのプラスミドとＡｂ１Ｈをコードする１５μｇのプラスミドを、６０μＬの２９３ｆｅｃｔｉｎ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｉｎｃ）を含む１ｍＬのＯｐｔｉ−ＭＥＭに加えた。プラスミドを３０分間２９３ｆｅｃｔｉｎでインキュベートした後、リポプレックス混合物を細胞懸濁液に加えた。その後、細胞を３７°Ｃの５％のＣＯ２環境下において１２５ｒｐｍで振盪させた。分泌されたタンパク質Ｉｎｓ１Ｌ１−Ａｂ２Ｌ  ＩｇＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯＳ：８０、３１）を含む培地を、遺伝子導入後に２度、４８時間ごとに収集した。Ｉｎｓ１−Ｌ１−Ａｂ２Ｌ  ＩｇＧを、Ｇタンパク質クロマトグラフィー（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＩＬ）によって精製した。図８に示されるように、精製されたタンパク質をＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分析した。
【０２７３】
インスリン融合タンパク質を精製するために、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ  ＨＥＫ  ２９３細胞を最初に、インスリン融合タンパク質をコードする哺乳動物発現ベクターで一時的にトランスフェクトした。随意に、抗ＡＳＧＰＲ融合タンパク質である、インスリンのＣペプチド内でプロテアーゼ切断部位を切断するために、ＰＣ２などのプロテアーゼをコードする哺乳動物発現ベクターを細胞に同時導入した。簡潔に言えば、３×１０７細胞を含む２８ｍＬのＦｒｅｅＳｔｙｌｅ  ＨＥＫ  ２９３細胞を、１２５ｍＬの振盪フラスコに播種した。１ｍＬのＯｐｔｉ−ＭＥＭ培地に希釈させたインスリン融合タンパク質をコードする１５μｇのプラスミドを、６０μＬの２９３ｆｅｃｔｉｎ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｉｎｃ）を含む１ｍＬのＯｐｔｉ−ＭＥＭに加えた。プラスミドを３０分間２９３ｆｅｃｔｉｎでインキュベートした後、リポプレックス混合物を細胞懸濁液に加えた。その後、細胞を３７°Ｃの５％のＣＯ２環境下において１２５ｒｐｍで振盪させた。分泌されたインスリン融合タンパク質を含む培地を、遺伝子導入後に２回、４８時間ごとに収集した。インスリン融合タンパク質を、Ｇタンパク質クロマトグラフィー（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＩＬ）によって精製した。図９、１０、１２−１４、１７、および１９で示されるように、精製されたタンパク質をＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分析した。図９は、酵素ＰＣ２によるタンパク質分解的切断を伴う、および、伴わない、精製されたＩｎｓ２Ｌ２−Ａｂ３Ｌ  ＩｇＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８１）とＡｂ３Ｈ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６７）融合タンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルを示す。図１０は、精製されたＩｎｓ３Ｌ２−Ａｂ３Ｌ  ＩｇＧ（Ｉｎｓ３−Ｌ２−Ａｂ３Ｌ、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８２；Ａｂ３Ｈ、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６７）融合タンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルを示す。図１２は、精製されたＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４Ｌ  ＩｇＧ（Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４Ｌ、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８４；Ａｂ４Ｈ、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４）融合タンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルを示す。図１３は、精製されたＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５Ｌ  ＩｇＧ（Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５Ｌ、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９６；Ａｂ５Ｈ、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３７）融合タンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルを示す。図１４は、精製されたＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４Ｌ  ＩｇＧ（Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４Ｌ、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８４；Ａｂ４Ｈ（Ｆａｂ）、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６）融合タンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルを示す。図１７は、精製されたＩｎｓ４−Ｌ３−Ａｂ４Ｌ  ＩｇＧ（Ｉｎｓ４−Ｌ３−Ａｂ４Ｌ、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８５；Ａｂ４Ｈ、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４）融合タンパク質と、Ｉｎｓ４−Ｌ３−Ａｂ２Ｌ  ＩｇＧ（Ｉｎｓ４−Ｌ３−Ａｂ２Ｌ、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８６；Ａｂ２Ｈ、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３１）融合タンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルを示す。図１９は、精製されたＩｎｓ４Ｌ６−Ａｂ４Ｌ  ＩｇＧ（Ｉｎｓ４−Ｌ６−Ａｂ４Ｌ、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９１；Ａｂ４Ｈ、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４）融合タンパク質；Ｉｎｓ４−Ｌ６−Ａｂ４Ｌ（Ｆａｂ）（Ｉｎｓ４−Ｌ６−Ａｂ４Ｌ、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９１；Ａｂ４Ｈ（Ｆａ���）、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６）融合タンパク質；および、Ｉｎｓ５−Ｌ７−Ａｂ４Ｌ  ＩｇＧ（Ｉｎｓ５−Ｌ７−Ａｂ４Ｌ、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９０；Ａｂ４Ｈ、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４）融合タンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルを示す。
【０２７４】
実施例８：哺乳動物細胞中での発現のためのＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４  Ｆａｂ、Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５  Ｆａｂ、Ｉｎｓ７−Ｌ３−Ａｂ４  Ｆａｂ、およびＩｎｓ７−Ｌ３−Ａｂ５  Ｆａｂの融合タンパク質の構造、発現、および精製
【０２７５】
マウス抗ヒトＡＳＧＰＲ抗体５Ｇ３（抗ＡＳＧＰＲ（５Ｇ３）あるいはＡｂ１と呼ばれる）は、ヒト化された抗ＡＳＧＰＲあるいはＡｂ４を得るためにヒト化した。Ａｂ５Ｈを生成するために、Ａｂ４Ｈを変異させて、アミノ酸位置５０でチロシンの代わりにアルギニンを用いた。Ｉｎｓ１（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：  ９９）あるいはＩｎｓ７（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：  １０８）をコードする遺伝子配列は、Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ  ＤＮＡ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，  Ｉｎｃ．  （ＩＡ，  ＵＳＡ）によって合成され、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって増幅された。Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４Ｌ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６３）、Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５Ｌ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７５）、Ｉｎｓ７−Ｌ３−Ａｂ４Ｌ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７６）、あるいはＩｎｓ７−Ｌ３−Ａｂ５Ｌ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７７）を生成するために、リンカーＬ３（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４３）をコードする核酸は、Ｉｎｓ１あるいはＩｎｓ７、およびＡｂ４ＬまたはＡｂ５ＬのＮ末端の間でクローン化された。結果として生じる哺乳動物の発現ベクターはＤＮＡ塩基配列決定法によって確認された。
【０２７６】
実施例２に一般に記載されるように、融合タンパク質が発現され精製された。図２３−２６に示されるように、精製されたタンパク質はＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分析された。精製されたＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４Ｌ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８４）とＡｂ４Ｈ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６）、まとめてＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４  Ｆａｂが、図２３のＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル中で示されている。精製されたＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５Ｌ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９６）とＡｂ５Ｈ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３８）、まとめてＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５  Ｆａｂが、図２４のＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル中で示されている。精製されたＩｎｓ７−Ｌ３−Ａｂ４Ｌ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９７）とＡｂ４Ｈ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６）、まとめてＩｎｓ７−Ｌ３−Ａｂ４  Ｆａｂが、図２５のＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル中で示されている。精製されたＩｎｓ７−Ｌ３−Ａｂ５Ｌ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９８）とＡｂ５Ｈ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３８）、まとめてＩｎｓ７−Ｌ３−Ａｂ５  Ｆａｂが、図２６のＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル中で示されている。
【０２７７】
ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる以下のタンパク質の精製と分析後に、Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４  Ｆａｂ、Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５  Ｆａｂ、およびＩｎｓ７−Ｌ３−Ａｂ５  Ｆａｂの融合タンパク質を、図２７−２９に示されるようなＳｕｐｅｒｄｅｘ  ２００増大サイズ排除ゲルろ過（ＧＥ  ＨｅａｌｔｈＣａｒｅ  ＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ）によってさらに精製した。図２７で示されるように、精製されたＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４Ｌ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８４）とＡｂ４Ｈ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６）、まとめて、Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４  Ｆａｂの主要なピークを８０−１００分に集めた。図２８に示されるように、精製されたＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５Ｌ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９６）とＡｂ５Ｈ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３８）、まとめて、Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５  Ｆａｂの主要なピークを８０−１００分に集めた。図２９に示されるように、精製されたＩｎｓ７−Ｌ３−Ａｂ５Ｌ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９８）とＡｂ５Ｈ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３８）、まとめて、Ｉｎｓ７−Ｌ３−Ａｂ５  Ｆａｂの主要なピークを７５−８５分に集めた。
【０２７８】
ＥＳＩ−ＭＳはプロテインＧクロマトグラフィー（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＩＬ）と図３０に示されるようなゲルろ過によって精製された、Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４  ＦａｂとＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５  Ｆａｂを特徴づけるために使用された。Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４  Ｆａｂの遵守は５６２０９であり、Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５  Ｆａｂの遵守は５６２３９であった。
【０２７９】
図３１、パネルＡ−Ｃで示されるように、Ａ４Ｆａｂ、Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４  Ｆａｂ、およびＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４  Ｆａｂのゲルろ過の主要ピークの収集物の耐熱性を決定した。１２．５μＬのＤＰＢＳ（ｐＨ７．５）中の６．２５μｇの融合タンパク質を、２．５μＬの新鮮な稀釈したサーマルシフト染料と５．０μＬのシフト緩衝液（ｓｈｉｆｔ  ｂｕｆｆｅｒ）（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｔｈｅｒｍａｌ  Ｓｈｉｆｔ（商標）  Ｄｙｅ  Ｋｉｔ，  ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，  Ｃａｔ．  ４４６１１４６）と混合した。蛍光の検出を、ＶｉｉＡ（商標）７リアルタイムＰＣＲ系を使用して、０．０５°Ｃ／ｓの加熱速度で２５°Ｃから９９°Ｃにサーマルスキャンと連動させた。融解温度（Ｔｍ）をＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ７において分析モデル「曲線下面積」によって計算した。再現性を保証するためにアッセイを２回繰り返した。図３１、パネルＡで見られるように、Ａ４  ＦａｂのＴｍは７６°Ｃであった。図３１、パネルＢで見られるように、Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４  ＦａｂのＴｍは７４．６７°Ｃであった。Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４  Ｆａｂゲルろ過主要ピーク収集物のＴｍは、７４．８°Ｃであった。
【０２８０】
実施例９：ＨｅｐＧ２、Ａ６７３、およびＳＧＢＳの細胞を用いるインスリン融合タンパク質活性アッセイ（Ｐｈｏｓｐｈｏ−ＡＫＴ（Ｓｅｒ４７３）アッセイ）
【０２８１】
ＡＫＴに対するインスリン融合タンパク質の活性は、実施例４で一般的に記載された。図３２と図３３は、Ｉｎｓ１融合タンパク質がＨｅｐＧ２細胞において同等のまたは増強されたインスリン活性を有していることを例証している。融合タンパク質のＥＣ５０値は、図３２と図３３で見られるように、Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４  Ｆａｂで３０ｎＭ、Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５  Ｆａｂで１４０ｎＭ、Ｉｎｓ７−Ｌ３−Ａｂ４  Ｆａｂで７３ｎＭ、およびＷＴインスリンで２３１ｎＭとして計算された。
【０２８２】
図３４で見られるように、Ａ６７３細胞に対するＡＫＴのインスリン融合タンパク質の活性も測定された。融合タンパク質のＥＣ５０値は、Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４  Ｆａｂで５８１ｎＭ、Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５  Ｆａｂで３５１ｎＭ、およびＷＴインスリンで３６２ｎＭとして計算された。図３４で見られるように、インスリン融合タンパク質はＡ６７３細胞において同等のまたは増強されたインスリン活性を有していた。
【０２８３】
図３５で見られるように、ＳＧＢＳ細胞におけるＡＫＴのインスリン融合タンパク質の活性も測定された。融合タンパク質のＥＣ５０値は、Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４  Ｆａｂで９４ｎＭ、Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５  Ｆａｂで２０６ｎＭ、およびＷＴインスリンで１７６ｎＭとして計算された。インスリン融合タンパク質は、図３５で見られるように、ＳＧＢＳ細胞において同等のまたは増強されたインスリン活性を有していた。
【０２８４】
実施例１０：ＨｅｐＧ２、Ａ６７３、およびＳＧＢＳ細胞を用いるインスリン融合タンパク質の結合親和性のフローサイトメトリー分析
【０２８５】
ＨｅｐＧ２を用いるインスリン融合タンパク質の結合親和性のフローサイトメトリー分析は、実施例５に一般的に記載された。簡潔に言えば、２×１０５  ＨｅｐＧ２細胞を、４°Ｃで２％ＦＢＳ、０．１％ＮａＮ３／ＰＢＳでブロックし、１時間にわたって４°Ｃで２００ｎＭの抗体または融合タンパク質と混合させた。細胞をブロッキングバッファーで３回洗浄した後、ＨｅｐＧ２細胞を３０分間４°Ｃで抗ヒトＦＡＢ−ＦＩＴＣ（１：１０００、１０９−０９５−００６、Ｉｍｍｕｎｏ  ＪａｃｋｓｏｎＲｅｓｅａｒｃｈ）でインキュベートした。ブロッキングバッファーで３回洗浄した後、ＢＤ  ＡｃｃｕｒｉＴＭ  ６フローサイトメーターによってＦＩＴＣシグナルを得た。ゲーティングを単細胞懸濁液に適用し、比較のために平均蛍光強度（ＭＦＩ）を濃度に対してプロットした。Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４  ＦａｂのＭＦＩは２１５７０として計算され、Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５  Ｆａｂでは８５２３であった。
【０２８６】
フローサイトメトリーは、Ａ６７３細胞を用いてインスリン融合タンパク質の結合親和性を決定するためにも行われた。Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４  ＦａｂのＭＦＩは７３１として計算され、Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５  Ｆａｂでは６３０であった。
【０２８７】
フローサイトメトリーは、ＳＧＢＳ細胞を用いてインスリン融合タンパク質について行われた。Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４  ＦａｂのＭＦＩは１４１１として計算され、Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５  Ｆａｂでは１０４７であった。
【０２８８】
図３６は、Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４、Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５、Ａｂ４、およびＡｂ５のＨｅｐＧ２との結合を例証する。ＨｅｐＧ２細胞（２×１０５）は、４°Ｃで２％ＦＢＳ、０．１％ＮａＮ３／ＰＢＳでブロックされ、１時間にわたって４°Ｃで３０ｐＭから１０ｎＭまでの抗体または融合タンパク質と混合された。細胞をブロッキングバッファーで３回洗浄した後、ＨｅｐＧ２細胞を３０分間４°Ｃで抗ヒトＦｃＦＩＴＣ（１：１０００、０２−１０−２０、ＫＰＬ）でインキュベートした。ブロッキングバッファーで３回洗浄した後、ＢＤ  ＡｃｃｕｒｉＴＭ  ６フローサイトメーターによってＦＩＴＣシグナルを得た。ゲーティングを単細胞懸濁液に適用し、比較のために平均蛍光強度（ＭＦＩ）を濃度に対してプロットした。図３６は、試験された各抗体または融合タンパク質に関して平均蛍光強度（ＭＦＩ）対濃度のプロットを示す。
【０２８９】
実施例１１：ヒト、ラット、およびサルのＡＳＧＰＲについてのＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４  ＦａｂとＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５  Ｆａｂの融合タンパク質結合アッセイ
【０２９０】
ヒト、ラット、およびカニクイザルのＡＳＧＰＲについてのＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４  ＦａｂとＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５  Ｆａｂの融合タンパク質の内部での抗ＡＳＧＰＲの活性は、実施例３で一般的に記載されるように、図３７−３９に示されるようなＥＬＩＳＡによって試験された。１００ｎｇ／ウェルのＡＳＧＰＲ抗原（ヒト、ラット、およびカニクイザル）を夜通し４°ＣのＰＢＳ中の９６のウェルプレート上で被覆し、１時間室温で２％ミルク／ＰＢＳＴ（ＰＢＳ中の０．５％トゥイーン−２０）でブロックし、２時間間室温で２％ミルク／ＰＢＳＴ中の４ｎＭ、２０ｎＭ、１００ｎＭ、および５００ｎＭの融合タンパク質でインキュベートした。ウェルをその後、４−５回のＰＢＳＴで洗浄し、２時間室温の２％ミルク／ＰＢＳＴ中のマウス−抗インスリン（ＭＡ５−１２０３７、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）でインキュベートし、４−５回ＰＢＳＴで洗浄し、３０分間ヤギ抗マウスＩｇＧ−ＨＲＰ（１１５−０３５−００８、Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）でインキュベートし、４−５回ＰＢＳＴで洗浄した。プレートをＱｕａｎｔａＢｌｕ蛍光発生ペルオキシダーゼ基質（Ｌｉｆｅ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，１５１６９）で展開し、３２５ｎｍの励起と４２０ｎｍの放射を備えたＳｐｅｃｔｒａｍａｘ蛍光プレートリーダーを使用して定量化した。
【０２９１】
図３７は、ヒトＡＳＰＧＲとの、Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４  ＦａｂとＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５  Ｆａｂの結合に関する濃度依存性の蛍光強度の中央値を示す。図３８は、ラットＡＳＧＰＲとの、Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４  ＦａｂとＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５  Ｆａｂの結合に関する濃度依存性の蛍光強度の中央値を示す。図３９は、カニクイザルのＡＳＰＧＲとの、Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４  ＦａｂとＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５  Ｆａｂの結合に関する濃度依存性の蛍光強度中央値を示す。これらの図は、インスリンの治療用ペプチドに縮合した抗ＡＳＧＰＲ抗体がＥＬＩＳＡアッセイによって決定されるようなその抗原ＡＳＧＰＲのための活性を保持することを示す。
【０２９２】
図１６、パネルＡ−Ｃは、ＥＬＩＳＡアッセイによって決定されるような、ヒト、ラット、あるいはカニクイザルのＡＳＧＰＲの細胞外ドメインとのインスリン免疫グロブリン融合タンパク質（Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４ＬとＡｂ４Ｈ；Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４ＬとＡｂ４Ｈ（Ｆａｂ））の結合を示すグラフである。
【０２９３】
実施例１２：ストレプトゾトチン（ＳＴＺ）を誘発されたラット中のＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４  ＦａｂとＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５  Ｆａｂの薬理学的動態学と血糖
【０２９４】
Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４  ＦａｂとＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５  Ｆａｂの薬理学的動態学は、図４０、４２、および４４で見られるようなＳＴＺを誘発されたラット中で決定された。
【０２９５】
図４０は、Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４  ＦａｂとＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５  Ｆａｂの静脈内（ＩＶ）投与後のＳＴＺを誘発されたラットにおける薬理学的動態学を例証する。生後９週のオスのウィスターラットを用いた。ＳＴＺは６５ｍｇ／ｋｇのＩＶで誘発され、糖尿病を確認するために空腹時血糖を測定して、動物を２週間モニタリングした。アッセイの日に、ＩＶによる１ｍｇ／ｋｇのインスリンと融合タンパク質の投与の前に、動物を４時間絶食させた。投薬前の動物をベースライン血糖と体重についてアッセイし、（体重と血糖に基づいて）インスリン投与の前に分類した。８時間後（１２時間の絶食）、食物を返した。標準的な食事をラットに与えた。抗ヒトＩｇＧ抗体（ａｂ９８６１６、Ａｂｃａｍ）を、９６のウェルＥＬＩＳＡプレート上で被覆し、２％ミルクでブロックし、血漿でインキュベートし、その後、マウス抗インスリン（ＭＡ５−１２０３７、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）でインキュベートした。シグナルを、ヤギ抗マウスＩｇＧ−ＨＲＰ抗体（１１５−０３５−００８、Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）によって検出した。融合タンパク質の血漿中の濃度を、図４０に示されるように時間に対してプロットした。図４０で見られるように、Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４  ＦａｂとＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５  Ｆａｂは、血漿中のインスリンの濃度の時間依存性の減少をもたらした。
【０２９６】
図４１は、Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４  ＦａｂとＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５  ＦａｂのＩＶ投与後のＳＴＺ誘発ラットにおける血糖濃度に対する効果を例証している。Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４  Ｆａｂは、０．１ｍｇ／ｋｇあるいは１ｍｇ／ｋｇの投与量のいずれかで静脈内に投与された。Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５  Ｆａｂは、０．１ｍｇ／ｋｇあるいは１ｍｇ／ｋｇの投与量のいずれかで静脈内に投与された。レベミル（Ｌｅｖｉｍｉｒ）を６Ｕ／ｋｇで皮下に投与した。図４１は、血糖濃度に対するＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４  Ｆａｂ、Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５  Ｆａｂ、Ｌｅｖｉｍｉｒ、ビヒクル、およびＮａｉｖｅ対照の経時的な効果を例証する。
【０２９７】
図４２は、Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４  ＦａｂとＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５  ＦａｂのＩＶ投与後のＳＴＺ誘発ラットにおける薬理学的動態学を例証する。生後９週のオスのウィスターラットを用いた。ＳＴＺは６５ｍｇ／ｋｇのＩＶで誘発され、糖尿病を確認するために空腹時血糖を測定して、動物を２週間モニタリングした。アッセイの日に、２０ｍｇ／ｋｇのインスリンと融合タンパク質の静脈内投与の前に４時間、動物を絶食させた。投薬前の動物をベースライン血糖と体重についてアッセイし、（体重と血糖に基づいて）インスリン投与の前に分類した。８時間後（１２時間の絶食）、食物を返した。標準的な食事をラットに与えた。抗ヒトＦａｂ抗体（１０９−００５−０９７、Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）を９６ウェルのＥＬＩＳＡプレート上で被覆し、２％ミルクでブロックし、血漿でインキュベートし、その後、マウス抗インスリン（ＭＡ５−１２０３７、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）でインキュベートした。シグナルを、ヤギ抗マウスＩｇＧ−ＨＲＰ抗体（１１５−０３５−００８、Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）によって検出した。血漿中の融合タンパク質の濃度を図４２で示されるように時間に対してプロットし、薬物動態パラメータをＷｉｎｎｏｌｉｎによって分析した。Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４  ＦａｂのためのＴ１／２は４．８時間であることが判明し、Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５  Ｆａｂについては４．２時間であるとわかった。Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４  ＦａｂのためのＣｍａｘは２５４１ｎＭであることが判明し、Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５  Ｆａｂについては５９１７ｎＭであるとわかった。Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４  ＦａｂとＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５  ＦａｂのためのＴｍａｘは、０．５時間であった。曲線下面積（ＡＵＣ）はＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４  Ｆａｂで５１４５ｈｒ・ｎＭ、および、Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５  Ｆａｂで１１８８６ｈｒ・ｎＭであると計算された。
【０２９８】
図４３は、Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４  ＦａｂとＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５  ＦａｂのＩＶ投与後のＳＴＺ誘発ラットにおける血糖濃度に対する効果を例証する。Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４  ＦａｂとＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５  Ｆａｂの２０ｍｇ／ｋｇの投与量は、ＳＴＤ誘発ラットに静脈内投与された。レベミル（Ｌｅｖｉｍｉｒ）を６Ｕ／ｋｇで皮下に投与した。図４３は、血糖濃度中のＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４  Ｆａｂ、Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５  Ｆａｂ、レベミル、ビヒクル（ＨＢＳＳ）およびＮａｉｖｅ対照の経時的な効果を例証する。
【０２９９】
図４４は、Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４  ＦａｂとＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５  Ｆａｂの皮下（ＳＣ）投与後のＳＴＺ誘発ラットにおける薬理学的動態学を例証する。この実施例において記載される方法に類似して、１０ｍｇ／ｋｇのＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４  ＦａｂまたはＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５  ＦａｂをラットにＳＣ投与した。血漿中の融合タンパク質の濃度を、図４４に示されるように時間に対してプロットした。図４４で見られるように、Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４  ＦａｂとＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５  Ｆａｂは、３０時間後に、血漿中でのインスリン濃度の時間依存性の減少を引き起こした。
【０３００】
図４５は、Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４  ＦａｂとＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５  ＦａｂのＳＣ投与後の、ＳＴＺ誘発ラットにおける血糖濃度に対する効果を例証する。Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４  ＦａｂとＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５  Ｆａｂの１０ｍｇ／ｋｇの投与量を、ＳＴＤ誘発ラットに皮下投与した。レベミル（Ｌｅｖｉｍｉｒ）を６Ｕ／ｋｇで皮下に投与した。図４５は、血糖濃度に対するＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４  Ｆａｂ、Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５  Ｆａｂ、レベミル、ビヒクル（ＨＢＳＳ）、およびＮａｉｖｅ対照の経時的な効果を例証する。
【０３０１】
実施例１３：正常なラット中のＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４  ＦａｂとＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５  Ｆａｂの体内分布
【０３０２】
図４６Ａ−４６Ｃは、正常なラット中のＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４  ＦａｂとＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５  Ｆａｂの体内分布を例証する。生後９週のオスのウィスターラットを、融合タンパク質投与（５ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ）の前に４時間絶食させた。投薬前の動物をベースライン血糖と体重についてアッセイし、（体重と血糖に基づいて）インスリン投与の前に分類した。投薬の１時間後、ラットを殺処分して、肝臓、筋肉（大腿四頭筋）、および脂肪（精巣上体の白い脂肪）組織を抽出した。抽出した組織を、１ｘプロテアーゼ阻害剤、１ｍＭのＥＤＴＡ、および０．５％トリトン−１００を含むＰＢＳ中の３００ｍｇ／ｍＬとして均質化した。抗ヒトＦａｂ抗体（１０９−００５−０９７、Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）を９６ウェルのＥＬＩＳＡプレート上で被覆し、２％ミルクでブロックし、血漿でインキュベートし、その後、マウス抗インスリン（ＭＡ５−１２０３７、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）でインキュベートした。シグナルを、ヤギ抗マウスＩｇＧ−ＨＲＰ抗体（１１５−０３５−００８、Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）によって検出した。
【０３０３】
図４６Ａで見られるように、肝臓中のＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４  ＦａｂとＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５  Ｆａｂの量は、Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４  Ｆａｂで７．９８、Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５  Ｆａｂで３．１２であった。図４６Ｂで見られるように、脂肪中のＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４  ＦａｂとＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５  Ｆａｂの量は、Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４  Ｆａｂで０．０８、Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５  Ｆａｂで０．２３であった。図４６Ｃで見られるように、筋肉中のＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４  ＦａｂとＩｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５  Ｆａｂタンパク質の量は、Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ４  Ｆａｂで０．０８、Ｉｎｓ１−Ｌ３−Ａｂ５  Ｆａｂで０．２７であった。
【０３０４】
前述の記載は単に本発明の原則を例証しているに過ぎない。当業者は、本明細書に明示的に記載されていないか、または示されていないものの、本発明の原則を具体化し、その精神と範囲内に含まれている、様々な構成を考案することができることが認識されよう。さらに、本明細書に詳述された実施例と条件付きの用語はすべて、当該技術の推進に対して発明者らが捧げてきた概念と本発明の原則を読者に理解させる一助となるように意図されたものであり、上記のようなとりわけ詳述された実施例と条件を限定するものではないと解釈される。さらに、本発明の原則、態様、および実施形態やその特定の実施例を列挙するすべての記述は、その構造的および機能的な等価物を包含するように意図されている。さらに、こうした同等物が、現在知られている同等物と、将来開発される同等物、すなわち、構造にかかわらず同じ機能を行うように開発された任意の要素を含むことが意図されている。したがって、本発明の範囲は、本明細書に示され、記載された典型的な実施形態に制限されることを意図してはいない。もっと正確に言えば、本発明の範囲と精神は添付の請求項によって具体化される。
【０３０５】
本発明の好ましい実施形態が本明細書に示され、記載されてきたが、こうした実施形態はほんの一例として与えられるに過ぎないことは当業者にとって明白である。多くの変更、変化、および置換が、本発明から逸脱することなく、当業者の心に思い浮かぶであろう。本明細書に記載される本発明の実施形態の様々な代案が、本発明の実施において利用されるかもしれないことを理解されたい。以下の請求項は本発明の範囲を定義するものであり、この請求項とその均等物の範囲内の方法、および構造体がそれによって包含されるものであるということが意図されている。
【０３０６】
本明細書で引用されるすべての文献は、全体として参照によって、および、あたかも個々の公開物あるいは特許または特許出願があらゆる目的のために引用により参照されることが具体的かつ個別に指示されているかのような程度にあらゆる目的のために参照される。
【０３０７】
【表２−１】
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【０３０８】
【表２−２】
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【０３０９】
【表２−３】
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【０３１０】
【表２−４】
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【０３１１】
【表２−５】
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【０３１２】
【表２−６】
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【０３１３】
【表２−７】
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【０３１４】
【表３−１】
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【０３１５】
【表３−２】
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【０３１６】
【表３−３】
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【０３１７】
【表４−１】
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【０３１８】
【表４−２】
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【０３１９】
【表４−３】
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【０３２０】
【表４−４】
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【０３２１】
【表４−５】
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【０３２２】
【表４−６】
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【０３２３】
【表４−７】
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【０３２４】
【表４−８】
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【０３２５】
【表４−９】
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【０３２６】
【表４−１０】
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【０３２７】
【表４−１１】
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【０３２８】
【表５−１】
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【０３２９】
【表５−２】
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【０３３０】
【表５−３】
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【０３３１】
【表５−４】
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【０３３２】
【表５−５】
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【０３３３】
【表５−６】
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【０３３４】
【表５−７】
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【０３３５】
【表６−１】
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【０３３６】
【表６−２】
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【０３３７】
【表７−１】
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【０３３８】
【表７−２】
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【０３３９】
【表７−３】
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【０３４０】
【表７−４】
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【０３４１】
【表８】
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【０３４２】
【表９】
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【０３４３】
【表１０−１】
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【０３４４】
【表１０−２】
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【０３４５】
【表１０−３】
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【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９】
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【図４０】
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【図４１】
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【図４２】
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【図４３】
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【図４４】
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【図４５】
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【図４６】
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【図４７】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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