(57)【要約】本開示は概して、ＴＲＥＭ２タンパク質、例えば、哺乳動物ＴＲＥＭ２またはヒトＴＲＥＭ２と特異的に結合する抗体、例えば、モノクローナル、キメラ、ヒト化抗体、抗体フラグメントなどを含む組成物、及び予防する、そのリスクを減少させる、またはそれを治療することを、それを必要とする個体において行う際のそのような組成物の使用を対象とする。【選択図】図９Ｂ
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離抗体であって、１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を誘導する、及び前記ＴＲＥＭ２タンパク質への１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドの結合によって誘導される１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を増強する、前記単離抗体。
【請求項２】
前記単離抗体の非存在下で前記ＴＲＥＭ２タンパク質への前記１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドの結合によって誘導される１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性と比較して、前記抗体ＴＲＥＭ２タンパク質への１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドの結合によって誘導される１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を増強する、請求項１に記載の単離抗体。
【請求項３】
前記ＴＲＥＭ２タンパク質への前記１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドの結合を遮断することなく、前記１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を増強する、請求項１または請求項２に記載の単離抗体。
【請求項４】
前記ＴＲＥＭ２タンパク質への結合について、前記１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドと競合しない、請求項１または請求項２に記載の単離抗体。
【請求項５】
前記ＴＲＥＭ２タンパク質への前記１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドの結合を増強する、請求項１〜４のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項６】
ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離抗体であって、前記ＴＲＥＭ２タンパク質への１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドの結合を遮断することなく、１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を誘導する、前記単離抗体。
【請求項７】
前記ＴＲＥＭ２タンパク質への前記１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドの結合を増強する、請求項６に記載の単離抗体。
【請求項８】
前記ＴＲＥＭ２タンパク質への前記１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドの結合によって誘導される１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を増強する、請求項６〜７のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項９】
前記単離抗体の非存在下で前記ＴＲＥＭ２タンパク質への前記１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドの結合によって誘導される１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性と比較して、前記ＴＲＥＭ２タンパク質への前記１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドの結合によって誘導される１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を増強する、請求項８に記載の単離抗体。
【請求項１０】
前記１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドと相乗作用して、前記１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を増強する、請求項１〜９のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項１１】
ＴＲＥＭ２の細胞表面クラスター化の非存在下で前記１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を増強する、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項１２】
ＴＲＥＭ２の細胞表面クラスター化を誘導または保持することによって、前記１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を増強する、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項１３】
１つまたは複数の免疫細胞上に発現されるＦｃ−ガンマ受容体によってクラスター化される、請求項１２に記載の単離抗体。
【請求項１４】
前記１つまたは複数の免疫細胞がＢ細胞またはミクログリア細胞である、請求項１３に記載の単離抗体。
【請求項１５】
前記ＴＲＥＭ２タンパク質への１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドの結合によって誘導される１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性の前記増強が、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、ミクログリア、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、及びクッパー細胞からなる群から選択される初代細胞で、または細胞系で測定され、前記ＴＲＥＭ２タンパク質への１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドの結合によって誘導される１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性の前記増強が、インビトロ細胞アッセイを利用して測定される、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項１６】
可溶性ＴＲＥＭ２のレベルを上昇させる、可溶性ＴＲＥＭ２の半減期を増加させる、またはその両方である、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項１７】
可溶性ＴＲＥＭ２の前記レベルが、ＴＲＥＭ２の血清レベル、ＴＲＥＭ２の脳脊髄液（ＣＳＦ）レベル、ＴＲＥＭ２の組織レベル、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される、請求項１６に記載の単離抗体。
【請求項１８】
可溶性ＴＲＥＭ２に結合しない、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項１９】
インビボで可溶性ＴＲＥＭ２に結合しない、請求項１８に記載の単離抗体。
【請求項２０】
１つまたは複数の細胞において、ＴＲＥＭ２のレベルを低下させる、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項２１】
ＴＲＥＭ２の細胞表面レベルを低下させる、ＴＲＥＭ２の細胞内レベルを低下させる、ＴＲＥＭ２の総レベルを低下させる、またはそれらの任意の組合せである、２０に記載の単離抗体。
【請求項２２】
ＴＲＥＭ２分解、ＴＲＥＭ２切断、ＴＲＥＭ２内部移行、ＴＲＥＭ２シェディング、ＴＲＥＭ２発現の下方制御、またはそれらの任意の組合せを誘導する、２０または請求項２１に記載の単離抗体。
【請求項２３】
前記１つまたは複数の細胞におけるＴＲＥＭ２のレベルが、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、ミクログリア、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、及びクッパー細胞からなる群から選択される初代細胞で、または細胞系で測定され、前記ＴＲＥＭ２の前記細胞レベルが、インビトロ細胞アッセイを利用して測定される、請求項２０〜２２のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項２４】
前記ＴＲＥＭ２タンパク質が、哺乳動物タンパク質またはヒトタンパク質である、請求項１〜２３のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項２５】
前記ＴＲＥＭ２タンパク質が野生型タンパク質である、請求項２４に記載の単離抗体。
【請求項２６】
前記ＴＲＥＭ２タンパク質が天然に存在するバリアントである、請求項２４に記載の単離抗体。
【請求項２７】
前記ＴＲＥＭ２タンパク質が、ヒト樹状細胞、ヒトマクロファージ、ヒト単球、ヒト破骨細胞、ヒト皮膚ランゲルハンス細胞、ヒトクッパー細胞、ヒトミクログリア、またはそれらの任意の組合せの上に発現される、請求項１〜２６のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項２８】
前記１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性が、以下からなる群から選択される、請求項１〜２７のいずれか１項に記載の単離抗体：
（ａ）ＤＡＰ１２へのＴＲＥＭ２結合、
（ｂ）ＤＡＰ１２リン酸化、
（ｃ）Ｓｙｋキナーゼの活性化、
（ｄ）ＩＦＮ−β、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ＣＤ８６、ＭＣＰ−１／ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＲ２、ＣＸＣＬ−１０、Ｇａｔａ３、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＩＬ−３３、ＬＩＦ、ＩＦＮ−ガンマ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＣＳＦ−１、ＯＰＮ、ＣＤ１１ｃ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、及びＩＬ−２３からなる群から選択される１つまたは複数の炎症誘発性メディエーターの調節（任意選択で、前記調節は、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、樹状細胞、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、及びミクログリア細胞からなる群から選択される１つまたは複数の細胞で生じる）、
（ｅ）ＤＡＰ１２／ＴＲＥＭ２複合体へのＳｙｋの動員、
（ｆ）１つまたは複数のＴＲＥＭ２依存性遺伝子の活性の上昇（任意選択で、前記１つまたは複数のＴＲＥＭ２依存性遺伝子は、活性化Ｔ細胞核内因子（ＮＦＡＴ）転写因子を含む）、
（ｇ）樹状細胞、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及びＭ２ミクログリア、またはそれらの任意の組合せの生存の増加、
（ｈ）ＣＤ８３、ＣＤ８６  ＭＨＣクラスＩＩ、ＣＤ４０、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される１つまたは複数の刺激分子の発現の調節（任意選択で、前記ＣＤ４０は、樹状細胞、単球、マクロファージ、またはそれらの任意の組合せの上に発現され、任意選択で、前記樹状細胞は、骨髄由来樹状細胞を含む）、
（ｉ）記憶の増大、ならびに
（ｊ）認知障害の減少。
【請求項２９】
ＩｇＧクラス、ＩｇＭクラス、またはＩｇＡクラスのものである、請求項１〜２８のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項３０】
前記ＩｇＧクラスのものであり、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４アイソタイプを有する、請求項２９に記載の単離抗体。
【請求項３１】
ＩｇＧ２アイソタイプを有する、請求項３０に記載の単離抗体。
【請求項３２】
ヒトＩｇＧ２定常領域を含む、請求項３０または請求項３１に記載の単離抗体。
【請求項３３】
前記ヒトＩｇＧ２定常領域がＦｃ領域を含む、請求項３２に記載の単離抗体。
【請求項３４】
Ｆｃ受容体への結合とは無関係に、前記１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を増強する、請求項２９〜３３のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項３５】
阻害性Ｆｃ受容体と結合する、請求項３０〜３４のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項３６】
前記阻害性Ｆｃ受容体が、阻害性Ｆｃ−ガンマ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＩＩＢ）である、請求項３５に記載の単離抗体。
【請求項３７】
（ａ）前記単離抗体が、ヒトまたはマウスＩｇＧ１アイソタイプを有し、１つまたは複数のアミノ酸置換をＦｃ領域に、Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ、Ｄ２７０Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｌ３２８Ｅ、Ｐ２３８Ｄ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ｅ２３３Ｄ、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ、Ａ３３０Ｒ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される残基位置で含む（前記残基のナンバリングは、ＥＵナンバリングによる）、またはアミノ酸欠失をＦｃ領域に、グリシン２３６に対応する位置で含む、
（ｂ）前記単離抗体が、ＩｇＧ１アイソタイプを有し、ＩｇＧ２アイソタイプ重鎖定常ドメイン１（ＣＨ１）及びヒンジ領域を含み、任意選択で、前記ＩｇＧ２アイソタイプＣＨ１及びヒンジ領域が、ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰ  ＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥ  ＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫ  ＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳ  ＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳ  ＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴ  ＶＰＳＳＮＦＧＴＱＴ  ＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳ  ＮＴＫＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号８８６）のアミノ酸配列を含み、任意選択で、前記抗体Ｆｃ領域が、Ｓ２６７Ｅアミノ酸置換、Ｌ３２８Ｆアミノ酸置換、もしくはその両方、及び／またはＮ２９７ＡもしくはＮ２９７Ｑアミノ酸置換を含む（前記残基のナンバリングは、ＥＵナンバリングによる）、
（ｃ）前記単離抗体が、ＩｇＧ２アイソタイプを有し、１つまたは複数のアミノ酸置換をＦｃ領域に、Ｐ２３８Ｓ、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｈ２６８Ａ、Ｈ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｃ２１４Ｓ、Ｃ２３２Ｓ、Ｃ２３３Ｓ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｈ２６８Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ａ３３０Ｌ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される残基位置で含む（前記残基のナンバリングは、ＥＵナンバリングによる）、
（ｄ）前記単離抗体が、ヒトまたはマウスＩｇＧ４アイソタイプを有し、１つまたは複数のアミノ酸置換をＦｃ領域に、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３６Ｅ、Ｓ２６７Ｅ、Ｅ３１８Ａ、Ｌ３２８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ａ／Ｆ２３４Ａ、Ｓ２２８Ｐ、Ｓ２４１Ｐ、Ｌ２４８Ｅ、Ｔ３９４Ｄ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｌ２３５Ｅ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される残基位置で含む（前記残基のナンバリングは、ＥＵナンバリングによる）、または
（ｅ）前記単離抗体が、ハイブリッドＩｇＧ２／４アイソタイプを有し、任意選択で、前記抗体が、ヒトＩｇＧ２のアミノ酸１１８〜２６０及びヒトＩｇＧ４のアミノ酸２６１〜４４７を含むアミノ酸配列を含む（前記残基のナンバリングは、ＥＵナンバリングによる）、請求項３６に記載の単離抗体。
【請求項３８】
ＩｇＧ４アイソタイプを有する、請求項１〜２８のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項３９】
残基位置２２８でＳ２２８Ｐアミノ酸置換、残基位置２３４でＦ２３４Ａアミノ酸置換、及び残基位置２３５でＬ２３５Ａアミノ酸置換を含む（前記残基位置のナンバリングは、ＥＵナンバリングによる）、請求項３８に記載の単離抗体。
【請求項４０】
以下からなる群から選択されるアミノ酸残基内の１つまたは複数のアミノ酸に結合する、請求項１〜３９のいずれか１項に記載の単離抗体
ｉ．配列番号１のアミノ酸残基１９〜１７４、または配列番号１のアミノ酸残基１９〜１７４に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、
ｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基２９〜１１２、または配列番号１のアミノ酸残基２９〜１１２に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、
ｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基１１３〜１７４、または配列番号１のアミノ酸残基１１３〜１７４に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、
ｉｖ．配列番号１のアミノ酸残基３５〜４９、または配列番号１のアミノ酸残基３５〜４９に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、
ｖ．配列番号１のアミノ酸残基３５〜４９及び１４０〜１５０、または配列番号１のアミノ酸残基３５〜４９及び１４０〜１５０に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、
ｖｉ．配列番号１のアミノ酸残基３９〜４９、または配列番号１のアミノ酸残基３９〜４９に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、
ｖｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基３９〜４９及び６３〜７７、または配列番号１のアミノ酸残基３９〜４９及び６３〜７７に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、
ｖｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基５１〜６１、または配列番号１のアミノ酸残基５１〜６１に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、
ｉｘ．配列番号１のアミノ酸残基５５〜６２、または配列番号１のアミノ酸残基５５〜６２に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、
ｘ．配列番号１のアミノ酸残基５５〜６２、１０４〜１０９、及び１４８〜１５８、または配列番号１のアミノ酸残基５５〜６２、１０４〜１０９、及び１４８〜１５８に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、
ｘｉ．配列番号１のアミノ酸残基５５〜６２、１０４〜１０９、及び１６０〜１６６、または配列番号１のアミノ酸残基５５〜６２、１０４〜１０９、及び１６０〜１６６に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、
ｘｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基５５〜６５、または配列番号１のアミノ酸残基５５〜６５に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、
ｘｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基５５〜６５及び１２４〜１３４、または配列番号１のアミノ酸残基５５〜６５及び１２４〜１３４に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、
ｘｉｖ．配列番号１のアミノ酸残基６３〜７３、または配列番号１のアミノ酸残基６３〜７３に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、
ｘｖ．配列番号１のアミノ酸残基６３〜７７、または配列番号１のアミノ酸残基６３〜７７に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、
ｘｖｉ．配列番号１のアミノ酸残基１０４〜１０９、または配列番号１のアミノ酸残基１０４〜１０９に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、
ｘｖｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基１１７〜１３３、または配列番号１のアミノ酸残基１１７〜１３３に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、
ｘｖｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基１２４〜１３４、または配列番号１のアミノ酸残基１２４〜１３４に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、
ｘｉｘ．配列番号１のアミノ酸残基１３７〜１４６、または配列番号１のアミノ酸残基１３７〜１４６に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、
ｘｘ．配列番号１のアミノ酸残基１３９〜１４７、または配列番号１のアミノ酸残基１３９〜１４７に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、
ｘｘｉ．配列番号１のアミノ酸残基１３９〜１４９、または配列番号１のアミノ酸残基１３９〜１４９に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、
ｘｘｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基１４０〜１５０、または配列番号１のアミノ酸残基１４０〜１５０に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、
ｘｘｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基１４０〜１４６、または配列番号１のアミノ酸残基１４０〜１４６に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、
ｘｘｉｖ．配列番号１のアミノ酸残基１４０〜１４３、または配列番号１のアミノ酸残基１４０〜１４３に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、
ｘｘｖ．配列番号１のアミノ酸残基１４２〜１５２、または配列番号１のアミノ酸残基１４２〜１５２に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、
ｘｘｖｉ．配列番号１のアミノ酸残基１４６〜１５４、または配列番号１のアミノ酸残基１４６〜１５４に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、
ｘｘｖｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基１４８〜１５８、または配列番号１のアミノ酸残基１４８〜１５８に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、
ｘｘｖｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基１４９〜１５７、または配列番号１のアミノ酸残基１４９〜１５７に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、
ｘｘｉｘ．配列番号１のアミノ酸残基１４９及び１５０、または配列番号１のアミノ酸残基１４９及び１５０に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、
ｘｘｘ．配列番号１のアミノ酸残基１５１〜１５５、または配列番号１のアミノ酸残基１５１〜１５５に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、
ｘｘｘｉ．配列番号１のアミノ酸残基１５４〜１６１、または配列番号１のアミノ酸残基１５４〜１６１に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、
ｘｘｘｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基１５６〜１７０、または配列番号１のアミノ酸残基１５６〜１７０に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、
ｘｘｘｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基１６０〜１６６、または配列番号１のアミノ酸残基１６０〜１６６に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、ならびに
ｘｘｘｉｖ．配列番号１のアミノ酸残基１６２〜１６５、または配列番号１のアミノ酸残基１６２〜１６５に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基。
【請求項４１】
配列番号１のＫ４２、Ｈ４３、Ｗ４４、Ｇ４５、Ｈ６７、Ｒ７７、Ｔ８８、Ｈ１１４、Ｅ１１７、Ｅ１５１、Ｄ１５２、Ｈ１５４、及びＥ１５６からなる群から選択される１つもしくは複数のアミノ酸残基、または配列番号１のＫ４２、Ｈ４３、Ｗ４４、Ｇ４５、Ｈ６７、Ｒ７７、Ｔ８８、Ｈ１１４、Ｅ１１７、Ｅ１５１、Ｄ１５２、Ｈ１５４、及びＥ１５６からなる群から選択されるアミノ酸残基に対応する哺乳動物ＴＲＥＭ２タンパク質上の１つもしくは複数のアミノ酸残基に結合する、請求項１〜３９のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項４２】
ＴＲＥＭ２への結合について、３Ｂ１０、７Ｂ３、８Ｆ８、９Ｆ５、９Ｇ１、９Ｇ３、１１Ａ８、１２Ｆ９、７Ｅ９、７Ｆ６、８Ｃ３、２Ｃ５、３Ｃ５、４Ｃ１２、７Ｄ９、２Ｆ６、３Ａ７、７Ｅ５、１１Ｈ５、１Ｂ４、６Ｈ２、７Ｂ１１、１８Ｄ８、１８Ｅ４、２９Ｆ６、４０Ｄ５、４３Ｂ９、４４Ａ８、４４Ｂ４、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される１つまたは複数の抗体と競合する、請求項１〜４１のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項４３】
軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含み、前記軽鎖可変ドメイン、または前記重鎖可変ドメイン、またはその両方が、４Ｄ１１、７Ｃ５、６Ｇ１２、８Ｆ１１、８Ｅ１０、７Ｅ５、７Ｆ８、８Ｆ８、１Ｈ７、２Ｈ８、３Ａ２、３Ａ７、３Ｂ１０、４Ｆ１１、６Ｈ６、７Ａ９、７Ｂ３、８Ａ１、９Ｆ５、９Ｇ１、９Ｇ３、１０Ａ９、１１Ａ８、１２Ｄ９、１２Ｆ９、１０Ｃ１、７Ｅ９、７Ｆ６、８Ｃ３、２Ｃ５、３Ｃ５、４Ｃ１２、７Ｄ９、２Ｆ６、１１Ｈ５、Ｂ４、６Ｈ２、７Ｂ１１ｖ１、７Ｂ１１ｖ２、１８Ｄ８、１８Ｅ４ｖ１、１８Ｅ４ｖ２、２９Ｆ６ｖ１、２９Ｆ６ｖ２、４０Ｄ５ｖ１、４０Ｄ５ｖ２、４３Ｂ９、４４Ａ８ｖ１、４４Ａ８ｖ２、４４Ｂ４ｖ１、及び４４Ｂ４ｖ２からなる群から選択される抗体のＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、ＨＶＲ−Ｌ３、ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む、請求項１〜４１のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項４４】
（ａ）前記ＨＶＲ−Ｌ１が、配列番号９〜２３、５８１、６９０〜６９４、７３４〜７３８、及び８２６〜８２８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、
（ｂ）前記ＨＶＲ−Ｌ２が、配列番号２４〜３３、６９５〜６９７、及び７３９〜７４３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、
（ｃ）前記ＨＶＲ−Ｌ３が、配列番号３４〜４７、５８２、５８３、６９８〜７０２、及び７４４〜７４６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、
（ｄ）前記ＨＶＲ−Ｈ１が、配列番号４８〜６５、５８４、７０３〜７０５、７４７〜７５４、及び８２９〜８３５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、
（ｅ）前記ＨＶＲ−Ｈ２が、配列番号６６〜８４、５８５〜５８７、７０６〜７０８、７５５〜７６２、８３６〜８４２、及び８８８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、または
（ｆ）前記ＨＶＲ−Ｈ３が、配列番号８５〜１０２、５８８、５８９、７０９、７１０、及び７６３〜７７０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項４３に記載の単離抗体。
【請求項４５】
（ａ）前記ＨＶＲ−Ｌ１が、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ２が、配列番号２６のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ３が、配列番号３６のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ１が、配列番号５１のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２が、配列番号６９のアミノ酸配列を含み、かつ前記ＨＶＲ−Ｈ３が、配列番号８８のアミノ酸配列を含む、
（ｂ）前記ＨＶＲ−Ｌ１が、配列番号１４のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ２が、配列番号２８のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ３が、配列番号３９のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ１が、配列番号５３のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２が、配列番号７１のアミノ酸配列を含み、かつ前記ＨＶＲ−Ｈ３が、配列番号９０のアミノ酸配列を含む、
（ｃ）前記ＨＶＲ−Ｌ１が、配列番号１６のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ２が、配列番号２９のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ３が、配列番号３５のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ１が、配列番号５５のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２が、配列番号７３のアミノ酸配列を含み、かつ前記ＨＶＲ−Ｈ３が、配列番号９２のアミノ酸配列を含む、
（ｄ）前記ＨＶＲ−Ｈ１が、配列番号５８のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２が、配列番号７６のアミノ酸配列を含み、かつ前記ＨＶＲ−Ｈ３が、配列番号９５のアミノ酸配列を含む、
（ｅ）前記ＨＶＲ−Ｌ１が、配列番号１９のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ２が、配列番号２８のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ３が、配列番号４３のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ１が、配列番号６０のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２が、配列番号７８のアミノ酸配列を含み、かつ前記ＨＶＲ−Ｈ３が、配列番号９７のアミノ酸配列を含む、
（ｆ）前記ＨＶＲ−Ｌ１が、配列番号１９のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ２が、配列番号２８のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ３が、配列番号４３のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ１が、配列番号６０のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２が、配列番号８８８のアミノ酸配列を含み、かつ前記ＨＶＲ−Ｈ３が、配列番号９７のアミノ酸配列を含む、
（ｇ）前記ＨＶＲ−Ｌ１が、配列番号２０のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ２が、配列番号２８のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ３が、配列番号４４のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ１が、配列番号６１のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２が、配列番号７９のアミノ酸配列を含み、かつ前記ＨＶＲ−Ｈ３が、配列番号９８のアミノ酸配列を含む、
（ｈ）前記ＨＶＲ−Ｌ１が、配列番号２１のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ２が、配列番号３２のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ３が、配列番号４５のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ１が、配列番号６２のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２が、配列番号８０のアミノ酸配列を含み、かつ前記ＨＶＲ−Ｈ３が、配列番号９９のアミノ酸配列を含む、
（ｉ）前記ＨＶＲ−Ｌ１が、配列番号２２のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ２が、配列番号２９のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ３が、配列番号４６のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ１が、配列番号６３のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２が、配列番号８２のアミノ酸配列を含み、かつ前記ＨＶＲ−Ｈ３が、配列番号１００のアミノ酸配列を含む、または
（ｊ）前記ＨＶＲ−Ｌ１が、配列番号１６のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ２が、配列番号２９のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ３が、配列番号３５のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ１が、配列番号６５のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２が、配列番号８４のアミノ酸配列を含み、かつ前記ＨＶＲ−Ｈ３が、配列番号１０２のアミノ酸配列を含む、請求項４３に記載の単離抗体。
【請求項４６】
軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含み、前記軽鎖可変ドメインが、
（ａ）配列番号９〜２３、５８１、６９０〜６９４、７３４〜７３８、及び８２６〜８２８からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号９〜２３、５８１、６９０〜６９４、７３４〜７３８、及び８２６〜８２８からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
（ｂ）配列番号２４〜３３、６９５〜６９７、及び７３９〜７４３からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号２４〜３３、６９５〜６９７、及び７３９〜７４３からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、ならびに
（ｃ）配列番号３４〜４７、５８２、５８３、６９８〜７０２、及び７４４〜７４６からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号３４〜４７、５８２、５８３、６９８〜７０２、及び７４４〜７４６からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み、かつ
前記重鎖可変ドメインが、
（ａ）配列番号４８〜６５、５８４、７０３〜７０５、７４７〜７５４、及び８２９〜８３５からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号４８〜６５、５８４、７０３〜７０５、７４７〜７５４、及び８２９〜８３５からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
（ｂ）配列番号６６〜８４、５８５〜５８７、７０６〜７０８、７５５〜７６２、８３６〜８４２、及び８８８からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号６６〜８４、５８５〜５８７、７０６〜７０８、７５５〜７６２、８３６〜８４２、及び８８８と少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、ならびに
（ｃ）配列番号８５〜１０２、５８８、５８９、７０９、７１０、及び７６３〜７７０からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号８５〜１０２、５８８、５８９、７０９、７１０、及び７６３〜７７０からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む、請求項１〜４１のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項４７】
配列番号２１９〜３９８、６０２〜６３４、６７９〜６８９、７２４〜７３０、８０９〜８１６、８２１、８４３、８４４、８４９、及び８５０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、ならびに／または配列番号３９９〜５８０、６３５〜６７８、７３１〜７３３、８１７〜８２０、８２２〜８２５、及び８４５〜８４７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む、請求項１〜４１のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項４８】
以下からなる群から選択されるアミノ酸残基内の１つまたは複数のアミノ酸に結合する、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離抗体：
ｉ．配列番号１のアミノ酸残基１９〜１７４、または配列番号１のアミノ酸残基１９〜１７４に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、
ｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基２９〜１１２、または配列番号１のアミノ酸残基２９〜１１２に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、
ｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基１１３〜１７４、または配列番号１のアミノ酸残基１１３〜１７４に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、
ｉｖ．配列番号１のアミノ酸残基３５〜４９、または配列番号１のアミノ酸残基３５〜４９に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、
ｖ．配列番号１のアミノ酸残基３５〜４９及び１４０〜１５０、または配列番号１のアミノ酸残基３５〜４９及び１４０〜１５０に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、
ｖｉ．配列番号１のアミノ酸残基３９〜４９、または配列番号１のアミノ酸残基３９〜４９に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、
ｖｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基３９〜４９及び６３〜７７、または配列番号１のアミノ酸残基３９〜４９及び６３〜７７に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、
ｖｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基５１〜６１、または配列番号１のアミノ酸残基５１〜６１に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、
ｉｘ．配列番号１のアミノ酸残基５５〜６２、または配列番号１のアミノ酸残基５５〜６２に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、
ｘ．配列番号１のアミノ酸残基５５〜６２、１０４〜１０９、及び１４８〜１５８、または配列番号１のアミノ酸残基５５〜６２、１０４〜１０９、及び１４８〜１５８に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、
ｘｉ．配列番号１のアミノ酸残基５５〜６２、１０４〜１０９、及び１６０〜１６６、または配列番号１のアミノ酸残基５５〜６２、１０４〜１０９、及び１６０〜１６６に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、
ｘｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基５５〜６５、または配列番号１のアミノ酸残基５５〜６５に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、
ｘｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基５５〜６５及び１２４〜１３４、または配列番号１のアミノ酸残基５５〜６５及び１２４〜１３４に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、
ｘｉｖ．配列番号１のアミノ酸残基６３〜７３、または配列番号１のアミノ酸残基６３〜７３に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、
ｘｖ．配列番号１のアミノ酸残基６３〜７７、または配列番号１のアミノ酸残基６３〜７７に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、
ｘｖｉ．配列番号１のアミノ酸残基１０４〜１０９、または配列番号１のアミノ酸残基１０４〜１０９に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、
ｘｖｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基１１７〜１３３、または配列番号１のアミノ酸残基１１７〜１３３に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、
ｘｖｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基１２４〜１３４、または配列番号１のアミノ酸残基１２４〜１３４に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、
ｘｉｘ．配列番号１のアミノ酸残基１３７〜１４６、または配列番号１のアミノ酸残基１３７〜１４６に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、
ｘｘ．配列番号１のアミノ酸残基１３９〜１４７、または配列番号１のアミノ酸残基１３９〜１４７に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、
ｘｘｉ．配列番号１のアミノ酸残基１３９〜１４９、または配列番号１のアミノ酸残基１３９〜１４９に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、
ｘｘｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基１４０〜１５０、または配列番号１のアミノ酸残基１４０〜１５０に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、
ｘｘｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基１４０〜１４６、または配列番号１のアミノ酸残基１４０〜１４６に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、
ｘｘｉｖ．配列番号１のアミノ酸残基１４０〜１４３、または配列番号１のアミノ酸残基１４０〜１４３に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、
ｘｘｖ．配列番号１のアミノ酸残基１４２〜１５２、または配列番号１のアミノ酸残基１４２〜１５２に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、
ｘｘｖｉ．配列番号１のアミノ酸残基１４６〜１５４、または配列番号１のアミノ酸残基１４６〜１５４に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、
ｘｘｖｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基１４８〜１５８、または配列番号１のアミノ酸残基１４８〜１５８に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、
ｘｘｖｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基１４９〜１５７、または配列番号１のアミノ酸残基１４９〜１５７に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、
ｘｘｉｘ．配列番号１のアミノ酸残基１４９及び１５０、または配列番号１のアミノ酸残基１４９及び１５０に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、
ｘｘｘ．配列番号１のアミノ酸残基１５１〜１５５、または配列番号１のアミノ酸残基１５１〜１５５に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、
ｘｘｘｉ．配列番号１のアミノ酸残基１５４〜１６１、または配列番号１のアミノ酸残基１５４〜１６１に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、
ｘｘｘｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基１５６〜１７０、または配列番号１のアミノ酸残基１５６〜１７０に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、
ｘｘｘｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基１６０〜１６６、または配列番号１のアミノ酸残基１６０〜１６６に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、ならびに
ｘｘｘｉｖ．配列番号１のアミノ酸残基１６２〜１６５、または配列番号１のアミノ酸残基１６２〜１６５に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基
からなる群から選択されるアミノ酸残基内の１つまたは複数のアミノ酸に結合する、前記単離抗体。
【請求項４９】
１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を誘導する、及び前記ＴＲＥＭ２タンパク質への１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドの結合によって誘導される１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を増強する、請求項４８に記載の単離抗体。
【請求項５０】
以下からなる群から選択される１つまたは複数のアミノ酸残基にさらに結合する、請求項４８または請求項４９に記載の単離抗体：
ｉ．配列番号１のアミノ酸残基Ａｒｇ４７またはＡｓｐ８７、
ｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基４０〜４４、
ｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基６７〜７６、及び
ｉｖ．配列番号１のアミノ酸残基１１４〜１１８。
【請求項５１】
ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離抗体であって、配列番号１のＫ４２、Ｈ４３、Ｗ４４、Ｇ４５、Ｈ６７、Ｒ７７、Ｔ８８、Ｈ１１４、Ｅ１１７、Ｅ１５１、Ｄ１５２、Ｈ１５４、及びＥ１５６からなる群から選択される１つもしくは複数のアミノ酸残基、または配列番号１のＫ４２、Ｈ４３、Ｗ４４、Ｇ４５、Ｈ６７、Ｒ７７、Ｔ８８、Ｈ１１４、Ｅ１１７、Ｅ１５１、Ｄ１５２、Ｈ１５４、及びＥ１５６からなる群から選択されるアミノ酸残基に対応する哺乳動物ＴＲＥＭ２タンパク質上の１つもしくは複数のアミノ酸残基に結合する、前記単離抗体。
【請求項５２】
ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離抗体であって、ＴＲＥＭ２への結合について、１Ａ７、３Ａ２、３Ｂ１０、６Ｇ１２、６Ｈ６、７Ａ９、７Ｂ３、８Ａ１、８Ｅ１０、８Ｆ１１、８Ｆ８、９Ｆ５、９Ｇ１、９Ｇ３、１０Ａ９、１０Ｃ１、１１Ａ８、１２Ｅ２、１２Ｆ９、１２Ｇ６、２Ｃ７、２Ｆ５、３Ｃ１、４Ｄ７、４Ｄ１１、６Ｃ１１、６Ｇ１２、７Ａ３、７Ｃ５、７Ｅ９、７Ｆ６、７Ｇ１、７Ｈ１、８Ｃ３、８Ｆ１０、１２Ａ１、１Ｅ９、２Ｃ５、３Ｃ５、４Ｃ１２、４Ｆ２、５Ａ２、６Ｂ３、７Ｄ１、７Ｄ９、１１Ｄ８、８Ａ１２、１０Ｅ７、１０Ｂ１１、１０Ｄ２、７Ｄ５、２Ａ７、３Ｇ１２、６Ｈ９、８Ｇ９、９Ｂ４、１０Ａ１、１１Ａ８、１２Ｆ３、２Ｆ８、１０Ｅ３、１Ｈ７、２Ｆ６、２Ｈ８、３Ａ７、７Ｅ５、７Ｆ８、１１Ｈ５、７Ｃ５、４Ｆ１１、１２Ｄ９、１Ｂ４ｖ１、１Ｂ４ｖ２、６Ｈ２、７Ｂ１１ｖ１、７Ｂ１１ｖ２、１８Ｄ８、１８Ｅ４ｖ１、１８Ｅ４ｖ２、２９Ｆ６ｖ１、２９Ｆ６ｖ２、４０Ｄ５ｖ１、４０Ｄ５ｖ２、４３Ｂ９、４４Ａ８ｖ１、４４Ａ８ｖ２、４４Ｂ４ｖ１、４４Ｂ４ｖ２、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される１つまたは複数の抗体と競合する、前記単離抗体。
【請求項５３】
ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離抗体であって、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含み、前記軽鎖可変ドメイン、または前記重鎖可変ドメイン、またはその両方が、１Ａ７、３Ａ２、３Ｂ１０、６Ｇ１２、６Ｈ６、７Ａ９、７Ｂ３、８Ａ１、８Ｅ１０、８Ｆ１１、８Ｆ８、９Ｆ５、９Ｇ１、９Ｇ３、１０Ａ９、１０Ｃ１、１１Ａ８、１２Ｅ２、１２Ｆ９、１２Ｇ６、２Ｃ７、２Ｆ５、３Ｃ１、４Ｄ７、４Ｄ１１、６Ｃ１１、６Ｇ１２、７Ａ３、７Ｃ５、７Ｅ９、７Ｆ６、７Ｇ１、７Ｈ１、８Ｃ３、８Ｆ１０、１２Ａ１、１Ｅ９、２Ｃ５、３Ｃ５、４Ｃ１２、４Ｆ２、５Ａ２、６Ｂ３、７Ｄ１、７Ｄ９、１１Ｄ８、８Ａ１２、１０Ｅ７、１０Ｂ１１、１０Ｄ２、７Ｄ５、２Ａ７、３Ｇ１２、６Ｈ９、８Ｇ９、９Ｂ４、１０Ａ１、１１Ａ８、１２Ｆ３、２Ｆ８、１０Ｅ３、１Ｈ７、２Ｆ６、２Ｈ８、３Ａ７、７Ｅ５、７Ｆ８、１１Ｈ５、７Ｃ５、４Ｆ１１、１２Ｄ９、１Ｂ４ｖ１、１Ｂ４ｖ２、６Ｈ２、７Ｂ１１ｖ１、７Ｂ１１ｖ２、１８Ｄ８、１８Ｅ４ｖ１、１８Ｅ４ｖ２、２９Ｆ６ｖ１、２９Ｆ６ｖ２、４０Ｄ５ｖ１、４０Ｄ５ｖ２、４３Ｂ９、４４Ａ８ｖ１、４４Ａ８ｖ２、４４Ｂ４ｖ１、及び４４Ｂ４ｖ２からなる群から選択される抗体のＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、ＨＶＲ−Ｌ３、ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む、前記単離抗体。
【請求項５４】
（ａ）前記ＨＶＲ−Ｌ１が、配列番号９〜２３、５８１、６９０〜６９４、７３４〜７３８、及び８２６〜８２８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、
（ｂ）前記ＨＶＲ−Ｌ２が、配列番号２４〜３３、６９５〜６９７、及び７３９〜７４３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、
（ｃ）前記ＨＶＲ−Ｌ３が、配列番号３４〜４７、５８２、５８３、６９８〜７０２、及び７４４〜７４６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、
（ｄ）前記ＨＶＲ−Ｈ１が、配列番号４８〜６５、５８４、７０３〜７０５、７４７〜７５４、及び８２９〜８３５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、
（ｅ）前記ＨＶＲ−Ｈ２が、配列番号６６〜８４、５８５〜５８７、７０６〜７０８、７５５〜７６２、８３６〜８４２、及び８８８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、または
（ｆ）前記ＨＶＲ−Ｈ３が、配列番号８５〜１０２、５８８、５８９、７０９、７１０、及び７６３〜７７０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項５３に記載の単離抗体。
【請求項５５】
（ａ）前記ＨＶＲ−Ｌ１が、配列番号９のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ２が、配列番号２４のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ３が、配列番号３４のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ１が、配列番号４８のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２が、配列番号６６のアミノ酸配列を含み、かつ前記ＨＶＲ−Ｈ３が、配列番号８５のアミノ酸配列を含む、
（ｂ）前記ＨＶＲ−Ｌ１が、配列番号１０のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ２が、配列番号２５のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ３が、配列番号３５のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ１が、配列番号４９のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２が、配列番号６７のアミノ酸配列を含み、かつ前記ＨＶＲ−Ｈ３が、配列番号８６のアミノ酸配列を含む、
（ｃ）前記ＨＶＲ−Ｌ１が、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ２が、配列番号２６のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ３が、配列番号３７のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ１が、配列番号５０のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２が、配列番号６８のアミノ酸配列を含み、かつ前記ＨＶＲ−Ｈ３が、配列番号８７のアミノ酸配列を含む、
（ｄ）前記ＨＶＲ−Ｌ１が、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ２が、配列番号２６のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ３が、配列番号３６のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ１が、配列番号５１のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２が、配列番号６９のアミノ酸配列を含み、かつ前記ＨＶＲ−Ｈ３が、配列番号８８のアミノ酸配列を含む、
（ｅ）前記ＨＶＲ−Ｌ１が、配列番号１３のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ２が、配列番号２７のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ３が、配列番号３８のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ１が、配列番号５２のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２が、配列番号７０のアミノ酸配列を含み、かつ前記ＨＶＲ−Ｈ３が、配列番号８９のアミノ酸配列を含む、
（ｆ）前記ＨＶＲ−Ｌ１が、配列番号１４のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ２が、配列番号２８のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ３が、配列番号３９のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ１が、配列番号５３のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２が、配列番号７１のアミノ酸配列を含み、かつ前記ＨＶＲ−Ｈ３が、配列番号９０のアミノ酸配列を含む、
（ｇ）前記ＨＶＲ−Ｌ１が、配列番号１５のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ２が、配列番号２８のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ３が、配列番号４０のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ１が、配列番号５４のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２が、配列番号７２のアミノ酸配列を含み、かつ前記ＨＶＲ−Ｈ３が、配列番号９１のアミノ酸配列を含む、
（ｈ）前記ＨＶＲ−Ｌ１が、配列番号１６のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ２が、配列番号２９のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ３が、配列番号３５のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ１が、配列番号５５のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２が、配列番号７３のアミノ酸配列を含み、かつ前記ＨＶＲ−Ｈ３が、配列番号９２のアミノ酸配列を含む、
（ｉ）前記ＨＶＲ−Ｌ１が、配列番号５８１のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ２が、配列番号２９のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ３が、配列番号５８２のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ１が、配列番号５６のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２が、配列番号７４のアミノ酸配列を含み、かつ前記ＨＶＲ−Ｈ３が、配列番号９３のアミノ酸配列を含む、
（ｊ）前記ＨＶＲ−Ｌ１が、配列番号１７のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ２が、配列番号３０のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ３が、配列番号４１のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ１が、配列番号５７のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２が、配列番号７５のアミノ酸配列を含み、かつ前記ＨＶＲ−Ｈ３が、配列番号９４のアミノ酸配列を含む、
（ｋ）前記ＨＶＲ−Ｈ１が、配列番号５８のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２が、配列番号７６のアミノ酸配列を含み、かつ前記ＨＶＲ−Ｈ３が、配列番号９５のアミノ酸配列を含む、
（ｌ）前記ＨＶＲ−Ｌ１が、配列番号１８のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ２が、配列番号３１のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ３が、配列番号４２のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ１が、配列番号５９のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２が、配列番号７７のアミノ酸配列を含み、かつ前記ＨＶＲ−Ｈ３が、配列番号９６のアミノ酸配列を含む、
（ｍ）前記ＨＶＲ−Ｌ１が、配列番号１９のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ２が、配列番号２８のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ３が、配列番号４３のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ１が、配列番号６０のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２が、配列番号７８のアミノ酸配列を含み、かつ前記ＨＶＲ−Ｈ３が、配列番号９７のアミノ酸配列を含む、
（ｎ）前記ＨＶＲ−Ｌ１が、配列番号１９のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ２が、配列番号２８のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ３が、配列番号４３のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ１が、配列番号６０のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２が、配列番号８８８のアミノ酸配列を含み、かつ前記ＨＶＲ−Ｈ３が、配列番号９７のアミノ酸配列を含む、
（ｏ）前記ＨＶＲ−Ｌ１が、配列番号２０のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ２が、配列番号２８のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ３が、配列番号４４のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ１が、配列番号６１のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２が、配列番号７９のアミノ酸配列を含み、かつ前記ＨＶＲ−Ｈ３が、配列番号９８のアミノ酸配列を含む、
（ｐ）前記ＨＶＲ−Ｌ１が、配列番号２１のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ２が、配列番号３２のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ３が、配列番号４５のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ１が、配列番号６２のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２が、配列番号８０のアミノ酸配列を含み、かつ前記ＨＶＲ−Ｈ３が、配列番号９９のアミノ酸配列を含む、
（ｑ）前記ＨＶＲ−Ｌ１が、配列番号１５のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ２が、配列番号３３のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ３が、配列番号４０のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ１が、配列番号５４のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２が、配列番号８１のアミノ酸配列を含み、かつ前記ＨＶＲ−Ｈ３が、配列番号９１のアミノ酸配列を含む、
（ｒ）前記ＨＶＲ−Ｌ１が、配列番号２２のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ２が、配列番号２９のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ３が、配列番号４６のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ１が、配列番号６３のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２が、配列番号８２のアミノ酸配列を含み、及び前記ＨＶＲ−Ｈ３が、配列番号１００のアミノ酸配列を含む、
（ｓ）前記ＨＶＲ−Ｌ１が、配列番号２３のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ２が、配列番号２９のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ３が、配列番号４７のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ１が、配列番号６４のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２が、配列番号８３のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ３が、配列番号１０１のアミノ酸配列を含む、
（ｔ）前記ＨＶＲ−Ｌ１が、配列番号１６のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ２が、配列番号２９のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ３が、配列番号３５のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ１が、配列番号６５のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２が、配列番号８４のアミノ酸配列を含み、及び前記ＨＶＲ−Ｈ３が、配列番号１０２のアミノ酸配列を含む、
（ｕ）前記ＨＶＲ−Ｌ１が、配列番号５８１のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ２が、配列番号２９のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ３が、配列番号５８２のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ１が、配列番号５６のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２が、配列番号５８５のアミノ酸配列を含み、かつ前記ＨＶＲ−Ｈ３が、配列番号５８８のアミノ酸配列を含む、
（ｖ）前記ＨＶＲ−Ｌ１が、配列番号１０のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ２が、配列番号２９のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ３が、配列番号３５のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ１が、配列番号４９のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２が、配列番号５８６のアミノ酸配列を含み、かつ前記ＨＶＲ−Ｈ３が、配列番号８６のアミノ酸配列を含む、または
（ｗ）前記ＨＶＲ−Ｌ１が、配列番号１４のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ２が、配列番号２８のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ３が、配列番号５８３のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ１が、配列番号５８４のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２が、配列番号５８７のアミノ酸配列を含み、かつ前記ＨＶＲ−Ｈ３が、配列番号５８９のアミノ酸配列を含む、請求項５３または請求項５４に記載の単離抗体。
【請求項５６】
前記軽鎖可変ドメインが、
（ａ）配列番号９〜２３、５８１、６９０〜６９４、７３４〜７３８、及び８２６〜８２８からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号９〜２３、５８１、６９０〜６９４、７３４〜７３８、及び８２６〜８２８からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
（ｂ）配列番号２４〜３３、６９５〜６９７、及び７３９〜７４３からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号２４〜３３、６９５〜６９７、及び７３９〜７４３からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、ならびに
（ｃ）配列番号３４〜４７、５８２、５８３、６９８〜７０２、及び７４４〜７４６からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号３４〜４７、５８２、５８３、６９８〜７０２、及び７４４〜７４６からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み、かつ
前記重鎖可変ドメインが、
（ａ）配列番号４８〜６５、５８４、７０３〜７０５、７４７〜７５４、及び８２９〜８３５からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号４８〜６５、５８４、７０３〜７０５、７４７〜７５４、及び８２９〜８３５からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
（ｂ）配列番号６６〜８４、５８５〜５８７、７０６〜７０８、７５５〜７６２、８３６〜８４２、及び８８８からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号６６〜８４、５８５〜５８７、７０６〜７０８、７５５〜７６２、８３６〜８４２、及び８８８からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、ならびに
（ｃ）配列番号８５〜１０２、５８８、５８９、７０９、７１０、及び７６３〜７７０からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号８５〜１０２、５８８、５８９、７０９、７１０、及び７６３〜７７０からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む、請求項５３に記載の単離抗体。
【請求項５７】
配列番号２１９〜３９８、６０２〜６３４、６７９〜６８９、７２４〜７３０、８０９〜８１６、８２１、８４３、８４４、８４９、及び８５０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、ならびに／または配列番号３９９〜５８０、６３５〜６７８、７３１〜７３３、８１７〜８２０、８２２〜８２５、及び８４５〜８４７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む、請求項５３〜５６のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項５８】
ＴＲＥＭ２タンパク質への結合について、１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドと競合する、請求項４８〜５７のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項５９】
ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する不活性抗体である、請求項４８〜５８のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項６０】
ＴＲＥＭ２タンパク質に結合するアンタゴニスト抗体である、請求項４８〜５８のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項６１】
前記ＴＲＥＭ２タンパク質が、哺乳動物タンパク質またはヒトタンパク質である、請求項５９または請求項６０に記載の単離抗体。
【請求項６２】
前記ＴＲＥＭ２タンパク質が、野生型タンパク質である、請求項６１に記載の単離抗体。
【請求項６３】
前記ＴＲＥＭ２タンパク質が、天然に存在するバリアントである、請求項６１に記載の単離抗体。
【請求項６４】
前記ＴＲＥＭ２タンパク質が、疾患バリアントである、請求項６１に記載の単離抗体。
【請求項６５】
１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を阻害する、請求項６０〜６４のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項６６】
前記１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性が、以下からなる群から選択される、請求項６５に記載の単離抗体：
（ａ）ＤＡＰ１２へのＴＲＥＭ２結合、
（ｂ）ＤＡＰ１２リン酸化、
（ｃ）Ｓｙｋキナーゼの活性化、
（ｄ）ＤＡＰ１２／ＴＲＥＭ２複合体へのＳｙｋの動員、
（ｅ）１つまたは複数のＴＲＥＭ２依存性遺伝子の活性の増加（任意選択で、前記１つまたは複数のＴＲＥＭ２依存性遺伝子は、活性化Ｔ細胞核内因子（ＮＦＡＴ）転写因子を含む）、
（ｆ）腫瘍体積の増加、及び
（ｇ）腫瘍増殖速度の上昇。
【請求項６７】
ＴＲＥＭ２と１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドとの間の相互作用を阻害する、ＴＲＥＭ２シグナル伝達を阻害する、またはその両方である、請求項６０〜６６のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項６８】
Ｆｃ−ガンマ受容体（ＦｃγＲ）と結合できない、請求項６０〜６７のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項６９】
ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４アイソタイプを有する、請求項５９〜６８のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項７０】
（ａ）前記抗体が、ヒトまたはマウスＩｇＧ１アイソタイプを有し、１つまたは複数のアミノ酸置換をＦｃ領域に、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｄ２７０Ａ、Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｐ２３８Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｐ２３８Ａ、Ａ３２７Ｑ、Ａ３２７Ｇ、Ｐ３２９Ａ、Ｋ３２２Ａ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、Ｔ３９４Ｄ、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｌ３２８Ｅ、Ｐ２３８Ｄ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ｅ２３３Ｄ、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ、Ａ３３０Ｒ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される残基位置で含むか（前記残基のナンバリングは、ＥＵナンバリングによる）、またはアミノ酸欠失をＦｃ領域に、グリシン２３６に対応する位置で含む、
（ｂ）前記抗体が、ＩｇＧ２アイソタイプを有し、１つまたは複数のアミノ酸置換をＦｃ領域に、Ｐ２３８Ｓ、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｈ２６８Ａ、Ｈ２６８Ｑ、Ｈ２６８Ｅ、Ｖ３０９Ｌ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｃ２３２Ｓ、Ｃ２３３Ｓ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される残基位置で含む（前記残基のナンバリングは、ＥＵナンバリングによる）、または
（ｃ）前記抗体が、ＩｇＧ４アイソタイプを有し、１つまたは複数のアミノ酸置換をＦｃ領域に、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ａ／Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｅ３１８Ａ、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３６Ｅ、Ｓ２４１Ｐ、Ｌ２４８Ｅ、Ｔ３９４Ｄ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される残基位置で含む（前記残基のナンバリングは、ＥＵナンバリングによる）、請求項６９に記載の単離抗体。
【請求項７１】
（ａ）前記Ｆｃ領域がさらに、１つまたは複数の追加のアミノ酸置換をＡ３３０Ｌ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される位置に含む（前記残基のナンバリングは、ＥＵナンバリングによる）、
（ｂ）前記Ｆｃ領域がさらに、１つまたは複数の追加のアミノ酸置換をＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される位置に含む（前記残基のナンバリングは、ＥＵナンバリングによる）、または
（ｃ）前記Ｆｃ領域がさらに、ＥＵナンバリングによるとＳ２２８Ｐアミノ酸置換を含む、請求項７０に記載の単離抗体。
【請求項７２】
ヒトＴＲＥＭ２、ヒトＴＲＥＭ２の天然に存在するバリアント、及びヒトＴＲＥＭ２の疾患バリアントからなる群から選択される１つまたは複数のヒトタンパク質に結合する抗体フラグメントであり、任意選択で、前記抗体フラグメントが、ヒトＴＲＥＭ２、ヒトＴＲＥＭ２の天然に存在するバリアント、及びヒトＴＲＥＭ２の疾患バリアントからなる群から選択される１つまたは複数のヒトタンパク質に結合する第２の抗体フラグメントに架橋されている、請求項１〜７１のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項７３】
前記フラグメントが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、ＦｖまたはｓｃＦｖフラグメントである、請求項７２に記載の単離抗体。
【請求項７４】
前記１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドが、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞、アポトーシス細胞、核酸、陰イオン性脂質、陰イオン性脂質、ＡＰＯＥ、ＡＰＯＥ２、ＡＰＯＥ３、ＡＰＯＥ４、陰イオン性ＡＰＯＥ、陰イオン性ＡＰＯＥ２、陰イオン性ＡＰＯＥ３、陰イオン性ＡＰＯＥ４、脂質化ＡＰＯＥ、脂質化ＡＰＯＥ２、脂質化ＡＰＯＥ３、脂質化ＡＰＯＥ４、双性イオン性脂質、負の電荷をもつリン脂質、ホスファチジルセリン、スルファチド、ホスファチジルコリン、スフィンゴミエリン、膜リン脂質、脂質化タンパク質、プロテオ脂質、脂質化ペプチド、脂質化アミロイドベータペプチド、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される、請求項１〜７３のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項７５】
マウス抗体である、請求項１〜７４のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項７６】
ヒト化抗体、二重特異性抗体、多価抗体、コンジュゲート抗体、またはキメラ抗体である、請求項１〜７４のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項７７】
モノクローナル抗体である、請求項１〜７６のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項７８】
第１の抗原及び第２の抗原を認識する二重特異性抗体である、請求項１〜７７のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項７９】
前記第１の抗原が、ヒトＴＲＥＭ２またはその天然に存在するバリアントであり、前記第２の抗原が以下である、請求項７８に記載の単離抗体：
（ａ）血液脳関門を通過する輸送を促進する抗原、
（ｂ）トランスフェリン受容体（ＴＲ）、インスリン受容体（ＨＩＲ）、インスリン様成長因子受容体（ＩＧＦＲ）、低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質１及び２（ＬＰＲ−１及び２）、ジフテリア毒素受容体、ＣＲＭ１９７、ラマ単一ドメイン抗体、ＴＭＥＭ  ３０（Ａ）、タンパク質形質導入ドメイン、ＴＡＴ、Ｓｙｎ−Ｂ、ペネトラチン、ポリアルギニンペプチド、アンギオペプチド、ならびにＡＮＧ１００５からなる群から選択される、血液脳関門を通過する輸送を促進する抗原、
（ｃ）病原ペプチドもしくはタンパク質、または病原核酸からなる群から選択される病原体（前記病原核酸は、アンチセンスＧＧＣＣＣＣ（Ｇ２Ｃ４）リピート伸長ＲＮＡであり、前記病原タンパク質は、アミロイドベータ、オリゴマーアミロイドベータ、アミロイドベータ斑、アミロイド前駆体タンパク質またはそのフラグメント、Ｔａｕ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（染色体９オープンリーディングフレーム７２）、ｃ９ＲＡＮタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスチレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルソリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、リピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）リピートペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）リピートペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）リピートペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）リピートペプチド、ユビキチン、及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）リピートペプチドからなる群から選択される）、
（ｄ）免疫細胞上に発現されるリガンド及び／またはタンパク質（前記リガンド及び／またはタンパク質は、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ３、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ−３、及びホスファチジルセリンからなる群から選択される）、ならびに
（ｅ）１つまたは複数の腫瘍細胞上に発現されるタンパク質、脂質、多糖、または糖脂質。
【請求項８０】
病原ペプチド、病原タンパク質、アミロイドベータ、オリゴマーアミロイドベータ、アミロイドベータ斑、アミロイド前駆体タンパク質またはそのフラグメント、Ｔａｕ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（染色体９オープンリーディングフレーム７２）、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスチレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルソリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、リピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）リピートペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）リピートペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）リピートペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）リピートペプチド、ユビキチン、ならびにプロリン−アルギニン（ＰＲ）リピートペプチド、ならびにそれらの任意の組合せからなる群から選択される病原体に特異的に結合する１つまたは複数の抗体と、またはＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ３、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ−３、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、ＣＤ３３、Ｓｉｇｌｅｃ−５、Ｓｉｇｌｅｃ−９、Ｓｉｇｌｅｃ−１１、ホスファチジルセリン、病原核酸、アンチセンスＧＧＣＣＣＣ（Ｇ２Ｃ４）リピート伸長ＲＮＡ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される免疫調節タンパク質に結合する１つまたは複数の抗体と組み合わせて使用される、請求項１〜７９のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項８１】
個体に投与した場合に、記憶を増加させる、認知障害を減少させる、またはその両方である、先行請求項のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項８２】
ヒトＴＲＥＭ２及びマウスＴＲＥＭ２の両方に特異的に結合する、先行請求項のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項８３】
ヒトＴＲＥＭ２及びマウスＴＲＥＭ２について、約１２．８ｎＭ〜約１．２ｎＭの範囲である、または１．２ｎＭ未満である解離定数（ＫＤ）を有し、前記ＫＤが約４℃の温度で決定される、先行請求項のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項８４】
ヒトＴＲＥＭ２について、約１２．８ｎＭ〜約２．９ｎＭの範囲である、または２．９ｎＭ未満である解離定数（ＫＤ）を有し、前記ＫＤが約４℃の温度で決定される、先行請求項のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項８５】
マウスＴＲＥＭ２について、約１０．４ｎＭ〜約１．２ｎＭの範囲である、または１．２ｎＭ未満である解離定数（ＫＤ）を有し、前記ＫＤが約４℃の温度で決定される、先行請求項のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項８６】
先天免疫細胞の増殖を阻害しない、先行請求項のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項８７】
１ｎＭ未満のＫＤで初代免疫細胞に結合し、前記ＫＤが約４℃の温度で決定される、先行請求項のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項８８】
１％以上の血中抗体濃度である程度まで、脳、もしくは脳脊髄液（ＣＳＦ）、またはその両方に蓄積する、先行請求項のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項８９】
２％以上の血中抗体濃度である程度まで、脳、もしくは脳脊髄液（ＣＳＦ）、またはその両方に蓄積する、先行請求項のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項９０】
３％以上の血中抗体濃度である程度まで、脳、もしくは脳脊髄液（ＣＳＦ）、またはその両方に蓄積する、先行請求項のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項９１】
４％以上の血中抗体濃度である程度まで、脳、もしくは脳脊髄液（ＣＳＦ）、またはその両方に蓄積する、先行請求項のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項９２】
先行請求項のいずれか１項に記載の抗体をコードする核酸配列を含む、単離核酸。
【請求項９３】
請求項９２に記載の核酸を含む、ベクター。
【請求項９４】
請求項９３に記載のベクターを含む、単離宿主細胞。
【請求項９５】
ＴＲＥＭ２に結合する抗体を生産する方法であって、前記抗体が産生されるように請求項９４に記載の細胞を培養することを含む、前記方法。
【請求項９６】
前記細胞によって産生される抗体を回収することをさらに含む、請求項９５に記載の方法。
【請求項９７】
請求項９５または請求項９６に記載の方法によって生産される、ＴＲＥＭ２に結合する、単離抗体。
【請求項９８】
請求項１〜９１のいずれか１項に記載の抗体及び薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
【請求項９９】
認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、那須−ハコラ病、認知障害、記憶喪失、脊髄損傷、外傷性脳損傷、多発性硬化症、慢性大腸炎、潰瘍性大腸炎、及びがんからなる群から選択される疾患、障害、または損傷を予防する、そのリスクを減少させる、またはそれを有する個体を治療する方法であって、それを必要とする個体に、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離抗体の治療有効量を投与することを含む、前記方法。
【請求項１００】
前記単離抗体が、
（ａ）アゴニスト抗体、
（ｂ）不活性抗体、または
（ｃ）アンタゴニスト抗体
である、請求項９９に記載の方法。
【請求項１０１】
前記単離抗体が、請求項１〜９１のいずれか１項に記載の抗体である、請求項９９または請求項１００に記載の方法。
【請求項１０２】
前記疾患、障害、または損傷がアルツハイマー病である、請求項９９〜１０１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０３】
前記ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離抗体が、１つまたは複数の炎症性メディエーターの発現を増加させ、前記１つまたは複数の炎症性メディエーターが、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＹＭ−１、ＣＤ８６、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ５、ＣＣＲ２、ＣＸＣＬ１０、Ｇａｔａ３、Ｒｏｒｃ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される、請求項９９〜１０２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０４】
前記ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離抗体が、１つまたは複数の炎症性メディエーターの発現を減少させ、前記１つまたは複数の炎症性メディエーターが、ＦＬＴ１、ＯＰＮ、ＣＳＦ−１、ＣＤ１１ｃ、ＡＸＬ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される、請求項９９〜１０２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０５】
前記ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離抗体が、前記個体においてＡベータペプチドのレベルを低下させる、請求項９９〜１０４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０６】
前記ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離抗体が、前記個体の脳において、ＣＤ１１ｂ＋ミクログリア細胞の数を増加させる、請求項９９〜１０５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０７】
前記ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離抗体が、前記個体の記憶を増加させる、請求項９９〜１０６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０８】
前記ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離抗体が、前記個体において認知障害を減少させる、請求項９９〜１０７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０９】
前記ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離抗体が、前記個体において運動協調性を増加させる、請求項９９〜１０８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１０】
前記個体に、阻害チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体、及び／または別の標準もしくは調査的抗がん療法を投与することをさらに含む、請求項９９〜１０９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１１】
前記阻害チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体を、前記単離抗体と組み合わせて投与する、請求項１１０に記載の方法。
【請求項１１２】
前記阻害チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体が、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＰＤ−Ｌ２抗体、抗ＰＤ−１抗体、抗Ｂ７−Ｈ３抗体、抗Ｂ７−Ｈ４抗体、ならびに抗ＨＶＥＭ抗体、抗Ｂリンパ球及びＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）抗体、抗キラー阻害性受容体（ＫＩＲ）抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗ＴＩＭ３抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、抗ＬＡＧ−３抗体、抗ホスファチジルセリン抗体、抗ＣＤ２７抗体、ならびにそれらの任意の組合せからなる群から選択される、請求項１１０または請求項１１１に記載の方法。
【請求項１１３】
前記標準または調査的抗がん療法が、放射線療法、細胞傷害性化学療法、標的療法、ホルモン療法、イマチニブ（Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標））、トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））、ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））、オファツムマブ（Ａｒｚｅｒｒａ（登録商標））、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）、ＭａｂＴｈｅｒａ（登録商標）、Ｚｙｔｕｘ（登録商標））、冷凍療法、アブレーション、高周波アブレーション、養子細胞移入（ＡＣＴ）、キメラ抗原受容体Ｔ細胞移入（ＣＡＲ−Ｔ）、ワクチン療法、及びサイトカイン療法からなる群から選択される１つまたは複数の療法である、請求項１１０に記載の方法。
【請求項１１４】
前記個体に、阻害性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１つの抗体を投与することをさらに含む、請求項９９〜１１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１５】
前記阻害性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１つの抗体を、前記単離抗体と組み合わせて投与する、請求項１１４に記載の方法。
【請求項１１６】
前記阻害性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１つの抗体が、抗ＣＣＬ２抗体、抗ＣＳＦ−１抗体、抗ＩＬ−２抗体、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される、請求項１１４または請求項１１５に記載の方法。
【請求項１１７】
前記個体に、刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する少なくとも１つのアゴニスト抗体を投与することをさらに含む、請求項９９〜１１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１８】
前記刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する少なくとも１つのアゴニスト抗体を、前記単離抗体と組み合わせて投与する、請求項１１７に記載の方法。
【請求項１１９】
前記刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する少なくとも１つのアゴニスト抗体が、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体、アゴニスト抗ＯＸ４０抗体、アゴニスト抗ＩＣＯＳ抗体、アゴニスト抗ＣＤ２８抗体、アゴニスト抗ＣＤ１３７／４−１ＢＢ抗体、アゴニスト抗ＣＤ２７抗体、アゴニスト抗グルココルチコイド誘導性ＴＮＦＲ関連タンパク質ＧＩＴＲ抗体、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される、請求項１１７または請求項１１８に記載の方法。
【請求項１２０】
前記個体に、少なくとも１つの刺激性サイトカインを投与することをさらに含む、請求項９９〜１１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２１】
前記少なくとも１つの刺激性サイトカインを、前記単離抗体と組み合わせて投与する、請求項１２０に記載の方法。
【請求項１２２】
前記少なくとも１つの刺激性サイトカインが、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１０、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ケモカインタンパク質ファミリーのＴＧＦ−ベータメンバー、ＩＬ２０ファミリーメンバー、ＩＬ−３３、ＬＩＦ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＴＧＦ−ベータ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−８、ＩＬ−２３、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＬ−２、ＩＬ−１８、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される、請求項１２０または請求項１２１に記載の方法。
【請求項１２３】
ＴＲＥＭ２タンパク質への１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドの結合によって誘導される１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を増強することを、それを必要とする個体において行う方法であって、前記個体に、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離抗体の治療有効量を投与することを含む、前記方法。
【請求項１２４】
１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を誘導することを、それを必要とする個体において行う方法であって、前記個体に、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離抗体の治療有効量を投与することを含む、前記方法。
【請求項１２５】
１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を誘導すること、及びＴＲＥＭ２タンパク質への１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドの結合によって誘導される１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を増強することを、それを必要とする個体において行う方法であって、前記個体に、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離抗体の治療有効量を投与することを含む、前記方法。
【請求項１２６】
１つまたは複数の細胞でのＴＲＥＭ２の細胞レベルを低下させることを、それを必要とする個体において行う方法であって、前記個体に、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離抗体の治療有効量を投与することを含む、前記方法。
【請求項１２７】
前記単離抗体が、請求項１〜９１のいずれか１項に記載の単離抗体である、請求項１２３〜１２６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２８】
前記個体が、ＴＲＥＭ２のヘテロ接合型バリアントを有し、前記バリアントが、以下からなる群から選択される１つまたは複数の置換を含む、請求項９９〜１２７のいずれか１項に記載の方法：
ｉ．配列番号１のアミノ酸残基Ｇｌｕ１４をコードする核酸配列におけるグルタミン酸から終止コドンへの置換、
ｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基Ｇｌｎ３３をコードする核酸配列におけるグルタミンから終止コドンへの置換、
ｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基Ｔｒｐ４４をコードする核酸配列におけるトリプトファンから終止コドンへの置換、
ｉｖ．配列番号１のアミノ酸残基Ａｒｇ４７に対応するアミノ酸でのアルギニンからヒスチジンへのアミノ酸置換、
ｖ．配列番号１のアミノ酸残基Ｔｒｐ７８をコードする核酸配列におけるトリプトファンから終止コドンへの置換、
ｖｉ．配列番号１のアミノ酸残基Ｖａｌ１２６に対応するアミノ酸でのバリンからグリシンへのアミノ酸置換、
ｖｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基Ａｓｐ１３４に対応するアミノ酸でのアスパラギン酸からグリシンへのアミノ酸置換、及び
ｖｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基Ｌｙｓ１８６に対応するアミノ酸でのリシンからアスパラギンへのアミノ酸置換。
【請求項１２９】
前記個体が、ＴＲＥＭ２のヘテロ接合型バリアントを有し、前記バリアントが、配列番号１をコードする核酸配列のヌクレオチド残基Ｇ３１３に対応するヌクレオチドでのグアニンヌクレオチド欠失、配列番号１をコードする核酸配列のヌクレオチド残基Ｇ２６７に対応するヌクレオチドでのグアニンヌクレオチド欠失、またはその両方を含む、請求項９９〜１２８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３０】
前記個体が、ＤＡＰ１２のヘテロ接合型バリアントを有し、前記バリアントが、以下からなる群から選択される１つまたは複数のバリアントを含む、請求項９９〜１２９のいずれか１項に記載の方法：
ｉ．配列番号２のアミノ酸残基Ｍｅｔ１に対応するアミノ酸でのメチオニンからトレオニンへの置換、
ｉｉ．配列番号２のアミノ酸残基Ｇｌｙ４９に対応するアミノ酸でのグリシンからアルギニンへのアミノ酸置換、
ｉｉｉ．配列番号２をコードする核酸配列のエクソン１〜４内での欠失、
ｉｖ．配列番号２をコードする核酸配列のエクソン３での１４アミノ酸残基の挿入、及び
ｖ．配列番号２をコードする核酸配列のヌクレオチド残基Ｇ１４１に対応するヌクレオチドでのグアニンヌクレオチド欠失。
【請求項１３１】
先天免疫細胞の生存または創傷治癒を誘導または促進することを、それを必要とする個体において行う方法であって、前記個体に、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離アゴニスト抗体の治療有効量を投与することを含む、前記方法。
【請求項１３２】
前記単離抗体が、請求項１〜５８及び７２〜９１のいずれか１項に記載の抗体である、請求項１３１に記載の方法。
【請求項１３３】
記憶を増加させること、認知障害を減少させること、またはその両方を、それを必要とする個体において行う方法であって、前記個体に、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離アゴニスト抗体の治療有効量を投与することを含む、前記方法。
【請求項１３４】
運動協調性を増加させることを、それを必要とする個体において行う方法であって、前記個体に、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離アゴニスト抗体の治療有効量を投与することを含む、前記方法。
【請求項１３５】
Ａベータペプチドレベルを低下させることを、それを必要とする個体において行う方法であって、前記個体に、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離アゴニスト抗体の治療有効量を投与することを含む、前記方法。
【請求項１３６】
ＣＤ１１ｂ＋ミクログリア細胞の数を増加させることを、それを必要とする個体において行う方法であって、前記個体に、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離アゴニスト抗体の治療有効量を投与することを含む、前記方法
【請求項１３７】
ＦＬＴ１、ＯＰＮＣＳＦ１、ＣＤ１１ｃ、及びＡＸＬのうちの１つまたは複数のレベルを上昇させることを、それを必要とする個体において行う方法であって、前記個体に、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離アゴニスト抗体の治療有効量を投与することを含む、前記方法。
【請求項１３８】
脊髄損傷を治療することを、それを必要とする個体において行う方法であって、前記個体に、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離アゴニスト抗体の治療有効量を投与することを含む、前記方法。
【請求項１３９】
慢性大腸炎または潰瘍性大腸炎を治療することを、それを必要とする個体において行う方法であって、前記個体に、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離アゴニスト抗体の治療有効量を投与することを含む、前記方法。
【請求項１４０】
前記単離抗体が、請求項１〜９１のいずれか１項に記載の抗体である、請求項１３３〜１３９のいずれか１項に記載の請求項の方法。
【請求項１４１】
前記抗体が、先天免疫細胞の増殖を阻害しない、先行請求項のいずれか１項に記載の請求項の方法。
【請求項１４２】
前記抗体が、１ｎＭ未満のＫＤで初代免疫細胞に結合し、前記ＫＤが、約４℃の温度で決定される、先行請求項のいずれか１項に記載の請求項の方法。
【請求項１４３】
前記抗体が、１％以上の血中抗体濃度である程度まで、脳、もしくは脳脊髄液（ＣＳＦ）、またはその両方に蓄積する、先行請求項のいずれか１項に記載の請求項の方法。
【請求項１４４】
前記抗体が、２％以上の血中抗体濃度である程度まで、脳、もしくは脳脊髄液（ＣＳＦ）、またはその両方に蓄積する、先行請求項のいずれか１項に記載の請求項の方法。
【請求項１４５】
前記抗体が、３％以上の血中抗体濃度である程度まで、脳、もしくは脳脊髄液（ＣＳＦ）、またはその両方に蓄積する、先行請求項のいずれか１項に記載の請求項の方法。
【請求項１４６】
前記抗体が、４％以上の血中抗体濃度である程度まで、脳、もしくは脳脊髄液（ＣＳＦ）、またはその両方に蓄積する、先行請求項のいずれか１項に記載の請求項の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１５年１０月６日出願の米国特許仮出願第６２／２３８，０４４号及び２０１６年８月１日出願の米国特許仮出願第６２／３６９，６６６号の利益を主張し、そのそれぞれは、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
【０００２】
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの配列表の提出
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの次の提出物の内容は、その全体で参照によって本明細書に組み込まれる：配列表のコンピュータ可読形式（ＣＲＦ）（ファイル名：７３５０２２０００９４０ＳＥＱＬＩＳＴＩＮＧ．ＴＸＴ、記録日：２０１６年１０月６日、サイズ：６５１ＫＢ）。
【０００３】
本開示の分野
本開示は、抗ＴＲＥＭ２抗体及びそのような抗体の治療的使用に関する。
【背景技術】
【０００４】
骨髄細胞上に発現されるトリガー受容体２（Ｔｒｉｇｇｅｒｉｎｇ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ｏｎ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｃｅｌｌｓ−２、ＴＲＥＭ２）は、主に骨髄系細胞、例えば、マクロファージ、樹状細胞、単球、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、破骨細胞、及びミクログリアの上に発現される免疫グロブリン様受容体であり、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）シグナル伝達の調節、炎症性サイトカインの調節、さらに、正常な破骨細胞発生に必要とされる。ＴＲＥＭ２は、単一免疫グロブリン可変（ＩｇＶ）ドメイン受容体ファミリーに属するＴＲＥＭ膜貫通糖タンパク質のメンバーとして発見された。ヒト及びマウスＴＲＥＭをコードする遺伝子は、それぞれ、ヒト染色体６ｐ２１．１及びマウス染色体１７Ｃ３に位置する。ＴＲＥＭクラスターは、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、ＴＲＥＭ４、及びＴＲＥＭ５をコードする遺伝子、ならびにヒト及びマウスの両方におけるＴＲＥＭ様遺伝子を含む。加えて、ＴＥＲＭ３及び形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）ＴＲＥＭがマウスにおいて同定された。ＴＲＥＭ様遺伝子である、ヒトのＴＲＥＭＬ１及びＴＲＥＭＬ２、ならびにマウスのＴｒｅｍｌ１及びＴｒｅｍｌ２は、それぞれＴＬＴ−１及びＴＬＴ−２タンパク質をコードする。これらの受容体ファミリーの最も特徴がわかっている２つであるＴＲＥＭ１及びＴＲＥＭ２は、約２０％の配列相同性を、さらには、活性化ＮＫ細胞受容体などのＩｇ−ＳＦの他のメンバーと多少の相同性（ＮＫｐ４４と２０％の同一性）を示し、シグナル伝達のためにＤＡＰ１２媒介経路との連携を介して作用する。
【０００５】
ＴＲＥＭ２は元々、ＴＲＥＭ１ホモログをコードするｃＤＮＡとしてクローニングされた（Ｂｏｕｃｈｏｎ，Ａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ，２００１．１９４（８）：ｐ．１１１１−２２）。この受容体は、約４０ｋＤａの糖タンパク質であり、これはＮ−脱グリコシル化後に２６ｋＤａに減少する。ＴＲＥＭ２遺伝子は、細胞外ドメイン、細胞膜貫通領域、及び短い細胞質テイルを含む２３０アミノ酸長のタンパク質をコードする。エクソン２によってコードされる細胞外領域は、３つの潜在的なＮ−グリコシル化部位を含有する単一のＶ型Ｉｇ−ＳＦドメインからなる。推定上の細胞膜貫通領域は、荷電リシン残基を含有する。ＴＲＥＭ２の細胞質テイルにはシグナル伝達モチーフがなく、シグナル伝達アダプター分子ＤＡＰ１２／ＴＲＹＲＯＢＰを介してシグナル伝達すると考えられている。
【０００６】
シグナル伝達アダプター分子ＤＡＰ１２は、ミクログリア、マクロファージ、顆粒球、ＮＫ細胞、及び樹状細胞（ＤＣ）を含む、先天免疫応答に関与する様々な細胞の表面でホモ二量体として発現される。ＤＡＰ１２は、ヒトＴ細胞受容体（ＴＣＲ）関連ＣＤ３鎖及びＦｃ受容体（ＦｃＲ）γ鎖との相同性に基づくＩ型膜貫通型アダプタータンパク質ファミリーのメンバーである（Ｔｕｒｎｂｕｌｌ，ＩＲ  ａｎｄ  Ｃｏｌｏｎｎａ，Ｍ，Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００７．７（２）：ｐ．１５５−６１）。これらのタンパク質は、それらの細胞質ドメイン中の１つまたは複数のＩＴＡＭモチーフ、（パートナー鎖との相互作用に重要な）細胞膜貫通領域の荷電酸性残基、及びチロシンリン酸化後にＳｒｃ相同ドメイン２（ＳＨ２）含有タンパク質を動員する能力を含む多くの構造的及び機能的特徴を共有する。ＩＴＡＭモチーフは、ＺＡＰ７０またはＳｙｋチロシンキナーゼの活性化によってシグナル伝播を媒介する。両方のキナーゼはいくつかの基質をリン酸化し、それによって細胞の活性化をもたらすシグナル伝達複合体の形成を促進する。興味深いことに、いくつかのＢ細胞及びＴ細胞はまた、炎症状態下でＤＡＰ１２を発現する。ヒトにおいて、このタンパク質を発現するＣＤ４＋ＣＤ２８−Ｔ細胞、αβＴＣＲ＋ＣＤ４＋Ｔ細胞、及びＣＤ８＋Ｔ細胞のサブセットが、自己免疫性Ｔ細胞との関連で、慢性炎症性疾患に罹患している患者において記載されている（Ｓｃｈｌｅｉｎｉｔｚ，Ｎ．ｅｔ  ａｌ．，ＰＬｏＳ  ＯＮＥ，４（２００９），ｐ．ｅ６２６４）。マウス腹膜マクロファージにおける、かなりのレベルのＤＡＰ１２発現を考慮すると、このタンパク質は、骨髄中の破骨細胞、肝臓中のクッパー細胞、肺の肺胞マクロファージ、皮膚ランゲルハンス細胞、及び脳のミクログリア細胞などの他のマクロファージ関連細胞で発現されると考えられている（Ｔａｋａｋｉ，Ｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｖ，２００６．２１４：ｐ．１１８−２９）。
【０００７】
ＴＲＥＭ２は、ヒト単球由来樹状細胞の表面上に発現されるものとして、及びマウスマクロファージ細胞系ＲＡＷ２６４のｍＲＮＡ転写物として同定されている（Ｂｏｕｃｈｏｎ，Ａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ，２００１．１９４（８）：ｐ．１１１１−２２）。ヒトＴＲＥＭ２は、ＤＣの表面上に記載されている最初のＤＡＰ１２関連受容体であった。研究によって、ＴＲＥＭ２細胞表面発現が、ＤＡＰ１２欠損骨髄由来樹状細胞（ＢＭＤＣ）及びＤＡＰ１２欠損マクロファージでは、野生型細胞と比較して、減少することが実証されている（Ｉｔｏ，Ｈ  ａｎｄ  Ｈａｍｅｒｍａｎ，ＪＡ，Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．４２（１）：ｐ．１７６−８５；Ｈａｍｅｒｍａｎ，ＪＡ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００６．１７７（４）：ｐ．２０５１−５、及びＨａｍｅｒｍａｎ，ＪＡ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００５．６（６）：ｐ．５７９−８６）。これは、最大のＴＲＥＭ２表面発現には、ＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２複合体の形成が必要であることを示す。
【０００８】
最近の研究は、循環系から組織に浸潤するマクロファージ上、さらにはＩＬ−４またはＩＬ−１３によって活性化されるマクロファージ上のＴＲＥＭ２の細胞表面発現も示している（Ｔｕｒｎｂｕｌｌ，ＩＲ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００６．１７７（６）：ｐ．３５２０−４）。しかしながら、ＴＲＥＭ２発現は必ずしも、他の細胞集団、例えば、組織常在マクロファージ、循環単球、または骨髄中の対応する前駆細胞において見出されるとは限らず、ＴＲＥＭ２発現が、中枢ではなく、組織浸潤中に局所的に、またはサイトカイン媒介活性化によって誘導されることを示唆した。さらに、ＩＦＮ−γ及びＬＰＳが、ＴＲＥＭ２発現を減少させることも観察されている。さらに、ＴＲＥＭ２が、実験的自己免疫性脳脊髄炎またはアルツハイマー病の間に、中枢神経系におけるミクログリア及び浸潤性マクロファージで高度に発現されることが最近報告されている（Ｐｉｃｃｈｉｏ，Ｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００７．３７（５）：ｐ．１２９０−３０１、及びＷａｎｇ  Ｙ，Ｃｅｌｌ．２０１５  Ｍａｒ  １２；１６０（６）：１０６１−７１）。
【０００９】
ＴＲＥＭ２が、ＤＡＰ１２を介してシグナル伝達することが示されている。下流で、これは、Ｓｙｋ／Ｚａｐ７０チロシンキナーゼファミリー、ＰＩ３Ｋ、及び他の細胞内シグナルの活性化をもたらす。骨髄細胞では、ＴＬＲシグナルは、感染の応答などでの活性化に重要であるが、マクロファージ及び樹状細胞などでの病理学的炎症応答において鍵となる役割も果たす（Ｈａｍｅｒｍａｎ，ＪＡ  ｅｔ  ａｌ．，（２００６）  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １７７：２０５１−２０５５；Ｉｔｏ，Ｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ４２：１７６−１８５；Ｎｅｕｍａｎｎ，Ｈ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ  １８４：９２−９９；Ｔａｋａｈａｓｈｉ，Ｋ  ｅｔ  ａｌ．，（２００５）  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  ２０１：６４７−６５７；及びＴａｋａｈａｓｈｉ，Ｋ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）  ＰＬｏＳ  Ｍｅｄ  ４：ｅ１２４）。ＴＲＥＭ２またはＤＡＰ１２のいずれかの欠損は、炎症誘発性シグナル伝達の増加をもたらすと考えられている。インビトロでのＴＲＥＭ２欠損の影響は、ＬＰＳ、ＣｐＧ  ＤＮＡ、及びチモサンなどの典型的なＴＬＲリガンドでの刺激との関連で示されている。ＴＲＥＭ−２欠損樹状細胞は、刺激の存在下では、ＩＬ−１２ｐ７０、ＴＮＦ、ＩＬ−６、及びＩＬ−１０の放出の増加を示すが、刺激の非存在下では示さない。
【００１０】
いくつかの最近の研究は、ＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２経路の活性化によって誘導される細胞内シグナル伝達現象を探究している。例えば、ＴＲＥＭ２は、細胞生存（例えば、プロテインキナーゼＢ−Ａｋｔ）、細胞活性化及び分化（例えば、Ｓｙｋ、ＥＲＫ１／２、ＰＬＣ−γなど）、ならびにアクチン細胞骨格の制御（例えば、Ｓｙｋ、Ｖａｖなど）に関与するシグナル伝達経路を活性化すると考えられている（Ｐｅｎｇ，Ｑ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉ  Ｓｉｇｎａｌ．３（１２２）：ｐ．ｒａ３８、及びＷｈｉｔｔａｋｅｒ，ＧＣ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２８５（５）：ｐ．２９７６−８５）。ＴＲＥＭ２のライゲーションの後に、ＤＡＰ１２のＩＴＡＭチロシンは、ＳＲＣファミリーキナーゼによってリン酸化されて、Ｓｙｋキナーゼ及び／またはＺＡＰ７０キナーゼの動員及び活性化をもたらす。マウスでは、Ｓｙｋが、関与する優勢なキナーゼであり得る一方、ヒトでは、Ｓｙｋ及びＺＡＰ７０の両方が、このようなＩＴＡＭ含有サブユニットと効率的に連結して、タンデムＳＨ２ドメインを介してそれらを結合するようである。
【００１１】
ＴＲＥＭ２シグナル伝達の研究は、ＴＲＥＭ１と同様に、ＤＡＰ１２を介するＴＲＥＭ２媒介シグナル伝達も、細胞内カルシウムイオンレベル及びＥＲＫ１／２のＥＲＫ１／２リン酸化の増加をもたらすことを示している（Ｂｏｕｃｈｏｎ，Ａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ，２００１．１９４（８）：ｐ．１１１１−２２、及びＳｈａｒｉｆ，Ｏ  ａｎｄ  Ｋｎａｐｐ，Ｓ，Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ，２００８．２１３（９−１０）：ｐ．７０１−１３）。重要なことに、ＴＲＥＭ２受容体ライゲーションは、ＩｋＢ−ａの分解及びその後のＮＦ−ｋＢの核移行を誘導し得ず、これは、ＴＲＥＭ２シグナル伝達及びＴＲＥＭ１シグナル伝達の間で起こりうる差を指し示す（Ｂｏｕｃｈｏｎ，Ａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ，２００１．１９４（８）：ｐ．１１１１−２２）。未成熟樹状細胞におけるＴＲＥＭ２の受容体架橋は、ＣＤ８６、ＣＤ４０、及びＭＨＣクラスＩＩなどのＴ細胞共刺激に関与する分子の上方制御、ならびにケモカイン受容体ＣＣＲ７の上方制御を誘発する（Ｂｏｕｃｈｏｎ，Ａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ，２００１．１９４（８）：ｐ．１１１１−２２）。ＴＲＥＭ２はまた、ミクログリア上に発現され、そこで受容体架橋はＥＲＫ１／２リン酸化及びＣＣＲ７の増加をもたらすが、ＣＤ８６またはＭＨＣクラスＩＩ発現の増加はもたらさず、ＴＲＥＭ２シグナル伝達の可能な細胞型特異的差異を示唆している。加えて、ミクログリア、骨髄前駆体、ＣＨＯまたはＥＫ２９３細胞におけるＴＲＥＭ２シグナル伝達の過剰発現は、神経系におけるアポトーシスニューロン、神経及び非神経組織デブリ、疾患の原因となるタンパク質、細菌及び他の外来侵入物の食作用の増加をもたらし、これは、Ｆ−アクチンの極性化及び再編成によって、ＥＲＫ依存的に達成される（Ｔａｋａｈａｓｈｉ，Ｋ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＬｏＳ  Ｍｅｄ，２００７．４（４）：ｐ．ｅ１２４；Ｎｅｕｍａｎｎ，Ｈ  ａｎｄ  Ｔａｋａｈａｓｈｉ，Ｋ，Ｊ  Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ，２００７．１８４（１−２）：ｐ．９２−９；及びＫｌｅｉｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．、Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ．２０１４  Ｊｕｌ  ２；６（２４３）：２４３ｒａ８６）。しかしながら、肺炎球菌性肺炎などの一部の生理学的状況では、ＴＲＥＭ２は、食作用を低下させるようである。したがって、ＴＲＥＭ２欠損肺胞マクロファージは、インビボで肺からの細菌のクリアランスの増強及び細菌の食作用の増強を示す（Ｓｈａｒｉｆ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＬｏＳ  Ｐａｔｈｏｇ．２０１４  Ｊｕｎ  １２；１０（６）：ｅ１００４１６７）。
【００１２】
ｓｈＲＮＡｉディスプレイを使用してＴＲＥＭ２についてサイレンシングされている骨髄由来マクロファージ（ＢＭＤＭ）は、非特異的ｓｈＲＮＡｉで処理された対照ＢＭＤＭ細胞と比較して、ＴＬＲ２／６リガンドザイモサン及びＴＬＲ９リガンドＣｐＧに応答したＴＮＦの分泌の増加を示すことも示されており、これは、ＴＲＥＭ２がマクロファージにおいてサイトカイン合成を負に制御することを示している（Ｉｔｏ，Ｈ  ａｎｄ  Ｈａｍｅｒｍａｎ，ＪＡ，Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．４２（１）：ｐ．１７６−８５；Ｈａｍｅｒｍａｎ，ＪＡ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００６．１７７（４）：ｐ．２０５１−５；及びＨａｍｅｒｍａｎ，ＪＡ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００５．６（６）：ｐ．５７９−８６）。これらの結果は、ＴＲＥＭ２ノックアウトマウス由来のＢＭＤＭ細胞を使用して確認されており、ＴＮＦ及びＩＬ−６のレベルも、ＬＰＳに応答して、ＴＲＥＭ２−／−ＢＭＤＭ細胞では、野生型ＢＭＤＭ細胞と比較して、より高かったことをさらに示している。（Ｔｕｒｎｂｕｌｌ，ＩＲ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００６．１７７（６）：ｐ．３５２０−４、及びＴｕｒｎｂｕｌｌ，ＩＲ  ａｎｄ  Ｃｏｌｏｎｎａ，Ｍ，Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００７．７（２）：ｐ．１５５−６１）。加えて、ミクログリアにおけるＴＲＥＭ２の過剰発現は、アポトーシスニューロンと共にこれらの細胞を培養した後に、ＴＮＦ及び誘導性酸化窒素（ｉＮＯＳ）ｍＲＮＡの減少をもたらすことが実証されている一方で、ＴＲＥＭ２ノックダウンは、ＴＮＦ及びｉＮＯＳ  ｍＲＮＡレベルの中程度の増加をもたらした。このことは、サイトカイン合成の正の制御因子であるＴＲＥＭ１とは対照的に、ＴＲＥＭ２がサイトカイン合成の負の制御因子であることを示している。炎症に対するＴＲＥＭ２のこの作用は、ミクログリア細胞及びＢＭＤＭ細胞の両方で生じるので、マクロファージの種類とは無関係であると考えられた。
【００１３】
中枢神経系の常在性骨髄細胞において、ミクログリアの活性化は炎症を引き起こし得ることも示されている（Ｎｅｕｍａｎｎ，Ｈ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ  １８４：９２−９９；Ｔａｋａｈａｓｈｉ，Ｋ  ｅｔ  ａｌ．，（２００５）  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  ２０１：６４７−６５７；Ｔａｋａｈａｓｈｉ，Ｋ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）  ＰＬｏＳ  Ｍｅｄ  ４：ｅ１２４；及びＨｓｉｅｈ，ＣＬ  ｅｔ  ａｌ．，（２００９）  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ  １０９：１１４４−１１５６）。さらに、ミクログリア活性化は、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、アルツハイマー病、パーキンソン病、卒中／虚血性脳損傷、及び多発性硬化症にも関与が示されている。ＴＲＥＭ２活性化の減少は、骨髄細胞のＮＯＳ２遺伝子の転写などの特定の活性化及び炎症マーカーの増加をもたらすが、ＴＲＥＭ２活性化の増加は、ＮＯＳ２転写の減少をもたらす。瀕死のニューロンは、ＴＲＥＭ２に対する内在性リガンドを発現すると考えられている。ＨＳＰ６０は、神経芽細胞腫細胞上のＴＲＥＭ２のリガンドとして関与するとされている（Ｓｔｅｆａｎｉ，Ｌ  ｅｔ  ａｌ．，（２００９）  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ  １１０：２８４−２９４）。ＴＲＥＭ２過剰発現は、ミクログリアによる瀕死のニューロンの食作用の増加ももたらし、同様に、他の骨髄系細胞による食作用を増加させる。ＴＲＥＭ２欠損骨髄系細胞は、アルツハイマー病のためのげっ歯類モデルの脳に集合することができないので、ＴＲＥＭ２は、骨髄系細胞遊走にも関与するとされている（Ｍａｌｍ，ＴＭ  ｅｔ  ａｌ、Ｎｅｕｒｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ．２０１４  Ｎｏｖ  １８）。
【００１４】
ヒトにおいて、ＴＲＥＭ２の完全な欠如は、遅発性認知症、脱髄、及び脳萎縮を伴うまれな神経変性疾患である那須−ハコラ病を引き起こすことが示されている（Ｐａｌｏｎｅｖａ，Ｊ  ｅｔ  ａｌ．，（２００２）  Ａｍ  Ｊ  Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅｔ  ７１：６５６−６６２、及びＰａｌｏｎｅｖａ，Ｊ  ｅｔ  ａｌ．，（２００３）  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １９８：６６９−６７５）。那須−ハコラ病は、ＤＡＰ１２欠損によっても引き起こされ得る。さらに、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）提示を示す個体のエクソームシーケンシングが、ＴＲＥＭ２の同型接合型変異を同定している（Ｇｕｅｒｒｅｉｒｏ，ＲＪ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１３）ＪＡＭＡ  Ｎｅｕｒｏｌ  ７０：７８−８４；Ｇｕｅｒｒｅｉｒｏ、ＲＪ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１２）Ａｒｃｈ  Ｎｅｕｒｏｌ：１−７）。さらに最近では、ＴＲＥＭ２のヘテロ接合型変異が、アルツハイマー病のリスクを最大３倍上昇させることが見出されている（Ｇｕｅｒｒｅｉｒｏ，Ｒ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１３）Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３６８：１１７−１２７；Ｊｏｎｓｓｏｎ，Ｔ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１３）Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３６８：１０７−１１６；及びＮｅｕｍａｎｎ，Ｈ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１３）Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３６８：１８２−１８４）。アルツハイマー病ではないが、ヘテロ接合型ＴＲＥＭ２変異を持つ個体も、正常なＴＲＥＭ２対立遺伝子を２つ持つ個体と比較して、劣悪な認知を示す。これらの保因者はまた、脳体積の収縮速度の倍加を示す（Ｒａｊａｇｏｐａｌａｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１３）Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３６９；１６）。これらの変異の一部は、ＴＲＥＭ２の短縮化及びおそらく機能喪失をもたらす。一方で、他は、Ｑ３３Ｘ、Ｒ４７Ｈ、Ｔ６６Ｍ、及びＳ１１６Ｃを含む、アミノ酸の変化に関係する（Ｂｏｒｒｏｎｉ  Ｂ，ｅｔ  ａｌ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ  Ａｇｉｎｇ．２０１４  Ａｐｒ；３５（４）：９３４．ｅ７−１０）。ＴＲＥＭ２同型接合型変異を有するある特定の固体における画像分析も、脱髄の証拠を示している。さらに、最も一般的なＴＲＥＭ２変異であるＴＲＥＭ２のＲ４７Ｈバリアント（ＴＲＥＭ２の４７位でのアルギニンからヒスチジンへのアミノ酸置換）は、ＴＲＥＭ２の免疫グロブリンドメイン内に位置し、リガンド結合を減少させることが示されている。他のＴＲＥＭ２変異は、ＴＲＥＭ２の細胞表面発現を減少させることが示されたが、これは、この機能喪失がＡＤのリスクの上昇の原因であることを示している（Ｗａｎｇ  Ｙ，Ｃｅｌｌ．２０１５；１６０（６）：１０６１−７１）。
【００１５】
加えて、遅発性アルツハイマー病（ＬＯＡＤ）に関連する遺伝子発現の分子ネットワークの順位序列化組織化構造に対する、統合的ネットワークをベースとしたアプローチは、ＴＲＥＭ２のためのシグナル伝達分子としてのＴＹＲＯＢＰ／ＤＡＰ１２を、ＬＯＡＤと関連する免疫／ミクログリア遺伝子モジュールの重要な調節因子として同定した。ＴＲＥＭ２が調節する他の遺伝子の数、及び調節喪失の規模、さらには、ＬＯＡＤ脳における差次的発現に基づき順位序列化した場合に、ＴＹＲＯＢＰが、最も高いスコアの免疫／ミクログリアモジュールの原因的調節因子であることが見出された。ＴＹＲＯＢＰは、ＬＯＡＤ脳において顕著に上方制御され、多くの場合ＬＯＡＤに先行する軽度認知障害（ＭＣＩ）全体でＴＹＲＯＢＰ発現変化の進展があった（Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１３）  Ｃｅｌｌ  １５３，７０７−７２０、及びＭａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ  Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．２０１４  Ｊｕｌ  ２３）。正常な状態に戻すように、そのような原因的ネットワークを標的とすることは、疾患を処置する方法の１つであり得る。
【００１６】
ＴＲＥＭ２は、アルツハイマー病を含む病的状態の間に、中枢神経系において、ミクログリア及び浸潤性マクロファージ上に高度に発現される（Ｐｉｃｃｈｉｏ，Ｌ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，３７（５）：ｐ．１２９０−３０１；及びＷａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１５），Ｃｅｌｌ．；１６０（６）：１０６１−７１）。ＴＲＥＭ２遺伝子発現はまた、家族性アルツハイマー病に関連するアミロイド前駆体タンパク質の変異体型を発現する、アルツハイマー病モデルであるＡＰＰ２３トランスジェニックマウスにおいて増加することが示されている（Ｍｅｌｃｈｉｏｒ，Ｂ  ｅｔ  ａｌ．，ＡＳＮ  Ｎｅｕｒｏ  ２：ｅ０００３７）。アミロイド１−４２の取込みはまた、ＴＲＥＭ２を過剰発現するＢＶ−２ミクログリア細胞系で増加することが示されている。
【００１７】
ＴＲＥＭ２は、多発性硬化症のＥＡＥマウスモデルにおいて上方制御されることがさらに示されている（Ｎｅｕｍａｎｎ，Ｈ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ  １８４：９２−９９；Ｔａｋａｈａｓｈｉ，Ｋ  ｅｔ  ａｌ．，（２００５）  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  ２０１：６４７−６５７；及びＴａｋａｈａｓｈｉ，Ｋ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）  ＰＬｏＳ  Ｍｅｄ  ４：ｅ１２４）。インビトロでのＴＲＥＭ２での骨髄由来骨髄前駆細胞（ＢＭ−ＤＣ）の形質導入は、ビーズまたはニューロンフラグメントの食作用の増加をもたらす。ＬＰＳに応答して、これらの細胞は、ＩＬ−１０の増加及びＩＬ−１βの減少を示す。ＴＲＥＭ２を過剰発現する骨髄系細胞の静脈内移植は、インビボでＥＡＥを抑制することができる。逆に、ＴＲＥＭ２の欠損は、多発性硬化症を、その疾患のＣｕｐｒｉｚｏｎモデルにおいて悪化させることが示されている（Ｃａｎｔｏｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｃｔａ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ（２０１５）１２９（３）：４２９−４７；Ｌｕｉｇｉ  Ｐｏｌｉａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１５）Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．１２５（５）：２１６１−２１７０）。ＴＲＥＭ２の欠損はまた、アルツハイマー病をげっ歯類モデルにおいて悪化させることも示されたが（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１５），Ｃｅｌｌ．；１６０（６）：１０６１−７１）、げっ歯類モデルにおいてアルツハイマー病に対するＴＲＥＭ２欠損有益効果を示す逆のデータも報告されている（Ｊａｙ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１５）Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  ２１２：２８７−２９５）。ＴＲＥＭ２はまた、脳におけるミクログリアの生存に必要とされることが示された（Ｏｔｅｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，（２００９）Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．；１０：７３４−４３）。まとめると、ＴＲＥＭ２バリアントは、前頭側頭型認知症、パーキンソン病、及び筋萎縮性側索硬化症のための遺伝的危険因子として同定された（Ｂｏｒｒｏｎｉ  Ｂ，ｅｔ  ａｌ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ  Ａｇｉｎｇ．２０１４  Ａｐｒ；３５（４）：９３４．ｅ７−１０；Ｒａｙａｐｒｏｌｕ  Ｓ，ｅｔ  ａｌ．、Ｍｏｌ  Ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒ．２０１３  Ｊｕｎ  ２１；８：１９；及びＣａｄｙ  Ｊ，ｅｔ  ａｌ．，ＪＡＭＡ  Ｎｅｕｒｏｌ．２０１４  Ａｐｒ；７１（４）：４４９−５３）。この共通の遺伝的連鎖は、神経変性疾患病理の調節におけるＴＲＥＭ２のより一般的な役割を示唆している。
【００１８】
ＴＲＥＭ２抗体は、記載されてはいるが、唯一の報告されている作用は、培養細胞に対する作用であり、それらの治療上の有用性は、一部に限定される。それというのも、それらは、ＴＲＥＭ２とその天然リガンドとの間の相互作用を遮断し、溶解状態でアンタゴニストとして作用するためである。溶解状態のそのような抗体は、ＴＲＥＭ２変異の病原機能喪失表現型を模倣し、したがって、安全性及び有効性のリスクを提示するであろう。既存の抗ＴＲＥＭ２抗体の別の問題は、アゴニスト活性を誘導するために、プラスチック製プレート上にコーティングすることによって、または二次抗体によってそれらをクラスター化することが必要であることである。したがって、細胞表面上のＴＲＥＭ２と特異的に結合し、かつＴＲＥＭ２活性の低下に関連する１つまたは複数の疾患、障害、及び状態を処置するために、安全かつ有効に１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を調節する（例えば、活性化する）抗体が必要とされている。
【００１９】
いくつかの疾患は、いずれの状況下でもＴＲＥＭ２を活性化しないＴＲＥＭ２遮断抗体を必要とし得る。例えば、腫瘍微細環境は、不均一な免疫浸潤物から構成され、これは、Ｔリンパ球、マクロファージ及び骨髄／顆粒球系の細胞を含む。免疫細胞の特異的サブセットを調節する治療アプローチが、標準治療を変えている。Ｔ細胞上に発現される免疫モジュレーター分子（ＣＴＬＡ−４及びＰＤ−１など）を標的とする「チェックポイント遮断」抗体は、様々な腫瘍型にわたって、臨床活性が実証されている（Ｎａｉｄｏｏ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１４）Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  １１１、２２１４−２２１９）。
【００２０】
腫瘍関連マクロファージ（例えば、Ｍ２型マクロファージ）を標的とするがん免疫療法は、重大な研究分野である。腫瘍におけるＭ２マクロファージの存在は、予後不良と関連する。
【００２１】
したがって、がんを予防する、がんのリスクを減少させる、またはがんを治療するために、細胞表面上のＴＲＥＭ２と特異的に結合し、リガンド結合及び／または１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を調節する（例えば、阻害する、かつ／または別段に減少させる）抗体も必要とされている。
【００２２】
特許出願及び刊行物を含む、本明細書に引用される全ての参考文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
【発明の概要】
【００２３】
本開示は概して、ＴＲＥＭ２タンパク質、例えば、哺乳動物ＴＲＥＭ２（例えば、任意の非ヒト哺乳動物）またはヒトＴＲＥＭ２と特異的に結合する、抗体、例えば、モノクローナル、キメラ、ヒト化抗体、抗体フラグメントなどを含む組成物、及びそのような組成物を使用する方法を対象とする。本開示の抗体は、アゴニスト、アンタゴニスト、及び／または不活性抗体を含んでもよい。本明細書で提供する方法は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト−ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウオパチー病（ｔａｕｏｐａｔｈｙ  ｄｉｓｅａｓｅ）、那須−ハコラ病、卒中、急性外傷、慢性外傷、認知障害、記憶喪失、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満、マラリア、本態性振戦、中枢神経系狼瘡、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多発性萎縮症、シャイ−ドレーガー症候群、進行性核上麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫性障害、サルコイドーシス、加齢に伴う病気、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身性感染症、狼瘡、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨のパジェット病、固形及び血液がん、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性赤血球増加症、本態性血小板血症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化、骨髄由来腫瘍、ＴＲＥＭ２及び／またはＴＲＥＭ２リガンドを発現する腫瘍、甲状腺癌、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルージ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、Ｉ型ＨＩＶ、ならびにインフルエンザ菌を予防する、それらのリスクを減少させる、またはそれを有する個体を治療する際に使用される。本明細書で提供する方法はまた、それを必要とする個体における、１つまたは複数の免疫細胞の生存、成熟、機能、遊走、もしくは増殖を誘導または促進する際に使用される。本明細書で提供する方法はさらに、調節性Ｔ細胞、腫瘍埋没免疫抑制樹状細胞、腫瘍埋没免疫抑制マクロファージ、好中球、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、骨髄系由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）細胞、または慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）細胞の活性、機能、または生存を減少させることを、それを必要とする個体において行う際に使用される。
【００２４】
一部の実施形態では、急性骨髄芽球性白血病（ＡＭＬ）細胞などの腫瘍細胞はＴＲＥＭ２を発現する。したがって、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体はまた、がんを治療する際に使用される。一部の実施形態では、抗体依存性細胞媒介細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を提示する抗体を含む抗ＴＲＥＭ２抗体及び／またはＴＲＥＭ２抗体薬物複合体は、ＡＭＬなどのがんを標的とし、かつ阻害するために使用することができる。
【００２５】
本開示のある特定の態様は、少なくとも一部、ＴＲＥＭ２タンパク質に特異的に結合し、それを調節する単離抗体の２つの別個のクラスの同定に基づく。
【００２６】
抗体の一方のクラスは、１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を例えば、ヒト初代免疫細胞及びＴＲＥＭ２発現細胞系で誘導し、１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドと組み合わされると、ＴＲＥＭ２タンパク質への１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドの結合によって誘導される１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を増強するアゴニスト抗体に関する。有利には、そのようなアゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２タンパク質への１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドの、我々の別段の遮断性結合と競合することなく、リガンド誘導性ＴＲＥＭ２活性を増強することができる。一部の実施形態では、アゴニスト抗体は、その抗体がクラスター化されているか、または溶解状態にあるかに関わらず、１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を活性化し、及び／または増強することができる。一部の実施形態では、アゴニスト抗体は、二次抗体によって、Ｆｃ受容体によって、またはプレートへの結合によってクラスター化される必要なしに、溶解状態でＴＲＥＭ２を活性化し得る。一部の実施形態では、アゴニスト抗体は、抗体をクラスター化するための機構がインビボで治療効果部位に存在するかどうかに関わらず、ＴＲＥＭ２を活性化し得る。一部の実施形態では、アゴニスト抗体は、向上した安全性及び有効性を有し得る。一部の実施形態では、アゴニスト抗体は、ＴＲＥＭ２を発現する免疫細胞が、治療効力のためにそれらが必要とされている位置で主に作用し、それらの生理学的標的と相互作用し得ることを保証し得る。一部の実施形態では、アゴニスト抗体は、ＴＲＥＭ２活性を減少させる遺伝的変異で観察されるものと同様の疾患リスクの上昇をもたらすＴＲＥＭ２活性を遮断しない。
【００２７】
抗体の第２のクラスは、ＴＲＥＭ２に特異的に結合及び阻害し、抗体がクラスター化されているか、または溶解状態にあるかに関わらず、ＴＲＥＭ２を活性化することができないアンタゴニスト抗体に関する。一部の実施形態では、アンタゴニスト抗体は、高い安全性及び有効性を有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト抗体は、それらの配置またはクラスター化するそれらの能力に関わらず、ＴＲＥＭ２を活性化することができない。
【００２８】
したがって、本開示のある特定の態様は、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離（例えば、モノクローナル）抗体であって、１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を誘導し、ＴＲＥＭ２タンパク質への１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドの結合によって誘導される１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を増強する抗体に関する。一部の実施形態では、抗体は、単離抗体の非存在下でＴＲＥＭ２タンパク質への１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドの結合によって誘導される１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性と比較して、ＴＲＥＭ２タンパク質への１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドの結合によって誘導される１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を増強する。一部の実施形態では、抗体は、ＴＲＥＭ２タンパク質への１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドの結合を遮断することなく、１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を増強する。一部の実施形態では、抗体は、ＴＲＥＭ２タンパク質への結合について、１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドと競合しない。一部の実施形態では、抗体は、ＴＲＥＭ２タンパク質への１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドの結合を増強する。
【００２９】
本開示の他の態様は、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離（例えば、モノクローナル）抗体であって、ＴＲＥＭ２タンパク質への１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドの結合を遮断することなく、１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を誘導する抗体に関する。一部の実施形態では、抗体は、ＴＲＥＭ２タンパク質への結合について、１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドと競合しない。一部の実施形態では、抗体は、ＴＲＥＭ２タンパク質への１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドの結合を増強する。一部の実施形態では、抗体は、ＴＲＥＭ２タンパク質への１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドの結合によって誘導される１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を増強する。一部の実施形態では、抗体は、単離抗体の非存在下でＴＲＥＭ２タンパク質への１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドの結合によって誘導される１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性と比較して、ＴＲＥＭ２タンパク質への１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドの結合によって誘導される１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を増強する。
【００３０】
先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドと相乗作用して、１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を増強する。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドと相乗作用して、１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を増強する。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、ＴＲＥＭ２の細胞表面クラスター化の非存在下で１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を増強する。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、ＴＲＥＭ２の細胞表面クラスター化を誘導または保持することによって、１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を増強する。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、１つまたは複数の免疫細胞上に発現されるＦｃ−ガンマ受容体によってクラスター化する。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、１つまたは複数の免疫細胞は、Ｂ細胞またはミクログリア細胞である。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、ＴＲＥＭ２タンパク質への１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドの結合によって誘導される１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性の増強は、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、ミクログリア、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、及びクッパー細胞からなる群から選択される初代細胞で、または細胞系で測定され、ＴＲＥＭ２タンパク質への１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドの結合によって誘導される１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性の増強は、インビトロ細胞アッセイを利用して測定される。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、可溶性ＴＲＥＭ２のレベルを上昇させる、可溶性ＴＲＥＭ２の半減期を上昇させる、またはその両方である。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、可溶性ＴＲＥＭ２のレベルは、ＴＲＥＭ２の血清レベル、ＴＲＥＭ２の脳脊髄液（ＣＳＦ）レベル、ＴＲＥＭ２の組織レベル、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、可溶性ＴＲＥＭ２に結合しない。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、インビボで可溶性ＴＲＥＭ２に結合しない。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、可溶性ＴＲＥＭ２は、配列番号１のアミノ酸残基１９〜１６０、配列番号１のアミノ酸残基１９〜１５９、配列番号１のアミノ酸残基１９〜１５８、配列番号１のアミノ酸残基１９〜１５７、配列番号１のアミノ酸残基１９〜１５６、配列番号１のアミノ酸残基１９〜１５５、及び配列番号１のアミノ酸残基１９〜１５４からなる群から選択されるアミノ酸残基に対応する。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、１つまたは複数の細胞においてＴＲＥＭ２のレベルを低下させる。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、ＴＲＥＭ２の細胞表面レベルを低下させるか、ＴＲＥＭ２の細胞内レベルを低下させるか、ＴＲＥＭ２の総レベルを低下させるか、またはそれらの任意の組合せである。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、ＴＲＥＭ２分解、ＴＲＥＭ２切断、ＴＲＥＭ２内部移行、ＴＲＥＭ２シェディング、ＴＲＥＭ２発現の下方制御、またはそれらの任意の組合せを誘導する。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、１つまたは複数の細胞におけるＴＲＥＭ２のレベルは、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、ミクログリア、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、及びクッパー細胞からなる群から選択される初代細胞で、または細胞系で測定され、ＴＲＥＭ２の細胞レベルは、インビトロ細胞アッセイを利用して測定される。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、ＴＲＥＭ２タンパク質は、哺乳動物、例えば、非ヒト哺乳動物タンパク質またはヒトタンパク質である。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、ＴＲＥＭ２タンパク質は、野生型タンパク質である。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、ＴＲＥＭ２タンパク質は、天然に存在するバリアントである。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、ＴＲＥＭ２タンパク質は、ヒト樹状細胞、ヒトマクロファージ、ヒト単球、ヒト破骨細胞、ヒト皮膚ランゲルハンス細胞、ヒトクッパー細胞、ヒトミクログリア、またはそれらの任意の組合せの上に発現される。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性は、下記からなる群から選択される：（ａ）ＤＡＰ１２へのＴＲＥＭ２結合、（ｂ）ＴＲＥＭ２リン酸化、（ｃ）ＤＡＰ１２リン酸化、（ｄ）１つまたは複数のチロシンキナーゼの活性化（任意選択で、１つまたは複数のチロシンキナーゼは、Ｓｙｋキナーゼ、ＺＡＰ７０キナーゼ、またはその両方を含む）、（ｅ）ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）の活性化、（ｆ）プロテインキナーゼＢ（Ａｋｔ）の活性化、（ｇ）細胞形質膜へのホスホリパーゼＣ−ガンマ（ＰＬＣ−ガンマ）の動員、ＰＬＣ−ガンマの活性化、またはその両方、（ｈ）細胞形質膜へのＴＥＣ−ファミリーキナーゼｄＶａｖの動員、（ｉ）核因子−ｒＢ（ＮＦ−ｒＢ）の活性化、（ｊ）ＭＡＰＫシグナル伝達の阻害、（ｋ）Ｔ細胞を活性化するためのリンカー（ＬＡＴ）、Ｂ細胞を活性化するためのリンカー（ＬＡＢ）、またはその両方のリン酸化、（ｌ）ＩＬ−２誘導性チロシンキナーゼ（Ｉｔｋ）の活性化、（ｍ）ＩＦＮ−β、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ＣＤ８６、ＭＣＰ−１／ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＲ２、ＣＸＣＬ−１０、Ｇａｔａ３、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＩＬ−３３、ＬＩＦ、ＩＦＮ−ガンマ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＣＳＦ−１、ＯＰＮ、ＣＤ１１ｃ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、及びＩＬ−２３からなる群から選択される１つまたは複数の炎症誘発性メディエーターの調節（任意選択で、調節は、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活���化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、樹状細胞、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、及びミクログリア細胞からなる群から選択される１つまたは複数の細胞で生じる）、（ｎ）ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＴＧＦ−β、ＩＬ−１３、ＩＬ−３５、ＩＬ−１６、ＩＦＮ−アルファ、ＩＬ−１Ｒａ、ＶＥＧＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＹＭ、ＡＸＬ、ＦＬＴ１、及びＴＮＦまたはＩＬ−６のための可溶性受容体からなる群から選択される１つまたは複数の抗炎症性メディエーターの調節（任意選択で、調節は、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、樹状細胞、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、及びミクログリア細胞からなる群から選択される１つまたは複数の細胞で生じる）、（ｏ）発現が炎症の誘導で増加する１つまたは複数の遺伝子の調節（任意選択で、１つまたは複数の遺伝子は、Ｆａｂｐ３、Ｆａｂｐ５、及びＬＤＲからなる群から選択される）、（ｐ）細胞外シグナル調節キナーゼ（ＥＲＫ）のリン酸化、（ｑ）マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、樹状細胞、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及びＭ２ミクログリア、ならびにそれらの任意の組合せからなる群から選択される１つまたは複数の細胞におけるＣ−Ｃケモカイン受容体７（ＣＣＲ７）の発現の調節、（ｒ）ＣＣＬ１９及びＣＣＬ２１発現細胞へのミクログリア細胞走化性の誘導、（ｓ）かく乱されたＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２依存性遺伝子発現の正常化、（ｔ）ＤＡＰ１２／ＴＲＥＭ２複合体へのＳｙｋ、ＺＡＰ７０、またはその両方の動員、（ｕ）１つまたは複数のＴＲＥＭ２依存性遺伝子の活性の上昇（任意選択で、１つまたは複数のＴＲＥＭ２依存性遺伝子は、活性化Ｔ細胞核内因子（ＮＦＡＴ）転写因子を含む）、（ｖ）樹状細胞、単球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及びＭ２ミクログリア、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、またはそれらの任意の組合せの成熟の増加、（ｗ）Ｔ細胞の機能を刺激または調節する樹状細胞、単球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及びＭ２ミクログリア、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、またはそれらの任意の組合せの能力の増加（任意選択で、Ｔ細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、調節性Ｔ細胞、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される１つまたは複数の細胞である）、（ｘ）抗原特異的Ｔ細胞の機能を刺激または調節する骨髄由来樹状細胞の能力の増強、その能力の正常化、またはその両方（任意選択で、抗原特異的Ｔ細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、調節性Ｔ細胞、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される１つまたは複数の細胞である）、（ｙ）抗原特異的Ｔ細胞増殖を誘導する骨髄由来樹状細胞の能力の増強、その能力の正常化、またはその両方、（ｚ）破骨細胞産生の誘導、破骨細胞形成の速度の上昇、またはその両方、（ａａ）樹状細胞、マク��ファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及びＭ２ミクログリア、またはそれらの任意の組合せの生存の増加、（ｂｂ）樹状細胞、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及びＭ２ミクログリア、またはそれらの任意の組合せの機能の増加、（ｃｃ）樹状細胞、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、単球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及びＭ２ミクログリア、またはそれらの任意の組合せによる食作用の増加、（ｄｄ）アポトーシスニューロンのクリアランス、神経組織デブリのクリアランス、非神経組織デブリのクリアランス、細菌または他の異物のクリアランス、病原体のクリアランス、腫瘍細胞のクリアランス、またはそれらの任意の組合せからなる群から選択されるクリアランスのうちの１つまたは複数の種類の誘導（任意選択で、病原体は、アミロイドベータまたはそのフラグメント、Ｔａｕ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、
カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスチレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルソリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、及びグリシン−アラニン（ＧＡ）、グリシン−プロリン（ＧＰ）、グリシン−アルギニン（ＧＲ）、プロリン−アラニン（ＰＡ）、またはプロリン−アルギニン（ＰＲ）から構成されるジペプチドリピート（ＤＰＲペプチド）を含むリピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、アンチセンスＧＧＣＣＣＣ（Ｇ２Ｃ４）リピート伸長ＲＮＡからなる群から選択される）、（ｅｅ）アポトーシスニューロン、神経組織デブリ、非神経組織デブリ、細菌、他の異物、病原体、腫瘍細胞、またはそれらの任意の組合せの１つまたは複数の食作用の誘導（任意選択で、病原体は、アミロイドベータまたはそのフラグメント、Ｔａｕ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスチレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルソリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、及びグリシン−アラニン（ＧＡ）、グリシン−プロリン（ＧＰ）、グリシン−アルギニン（ＧＲ）、プロリン−アラニン（ＰＡ）、またはプロリン−アルギニン（ＰＲ）から構成されるジペプチドリピート（ＤＰＲペプチド）を含むリピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、アンチセンスＧＧＣＣＣＣ（Ｇ２Ｃ４）リピート伸長ＲＮＡからなる群から選択される）、（ｆｆ）ＣＤ８３、ＣＤ８６  ＭＨＣクラスＩＩ、ＣＤ４０、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される１つまたは複数の刺激分子の発現の調節（任意選択で、ＣＤ４０は、樹状細胞、単球、マクロファージ、またはそれらの任意の組合せの上に発現され、任意選択で、樹状細胞は、骨髄由来樹状細胞を含む）、（ｇｇ）ＩＦＮ−β、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＣＤ８６、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ＭＣＰ−１／ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＲ２、ＣＸＣＬ−１０、Ｇａｔａ３、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＩＬ−３３、ＬＩＦ、ＩＦＮ−ガンマ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＣＳＦ−１、ＯＰＮ、ＣＤ１１ｃ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、及びＩＬ−２３からなる群から選択される１つまたは複数の炎症誘発性メディエーターの分泌の調節（任意選択で、調節は、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、樹状細胞、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、及びミクログリア細胞からなる群から選択される１つまたは複数の細胞で生じる）、（ｈｈ）ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＴＧＦ−β、ＩＬ−１３、ＩＬ−３５、ＩＬ−１６、ＩＦＮ−アルファ、ＩＬ−１Ｒａ、ＶＥＧＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＹＭ、ＡＸＬ、ＦＬＴ１、及びＴＮＦまたはＩＬ−６のための可溶性受容体からなる群から選択される１つまたは複数の抗炎症性メディエーターの分泌の調節（任意選択で、調節は、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、樹状細胞、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、及びミクログリア細胞からなる群から選択される１つまたは複数の細胞で生じる）、（ｉｉ）Ｃ１ｑａ、Ｃ１ｑＢ、Ｃ１ｑＣ、Ｃ１ｓ、Ｃ１Ｒ、Ｃ４、Ｃ２、Ｃ３、ＩＴＧＢ２、ＨＭＯＸ１、ＬＡＴ２．ＣＡＳＰ１、ＣＳＴＡ、ＶＳＩＧ４、ＭＳ４Ａ４Ａ、Ｃ３ＡＲ１、ＧＰＸ１、ＴｙｒｏＢＰ、ＡＬＯＸ５ＡＰ、ＩＴＧＡＭ、ＳＬＣ７Ａ７、ＣＤ４、ＩＴＧＡＸ、ＰＹＣＡＲＤ、及びＶＥＧＦからなる群から選択される１つまたは複数のタンパク質の発現の調節、（ｊｊ）記憶の増大、ならびに（ｋｋ）認知障害の減少。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性は、下記からなる群から選択される：（ａ）ＤＡＰ１２へのＴＲＥＭ２結合、（ｂ）ＤＡＰ１２リン酸化、（ｃ）Ｓｙｋキナーゼの活性化、（ｄ）ＩＦＮ−β、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ＣＤ８６、ＭＣＰ−１／ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＲ２、ＣＸＣＬ−１０、Ｇａｔａ３、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＩＬ−３３、ＬＩＦ、ＩＦＮ−ガンマ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＣＳＦ−１、ＯＰＮ、ＣＤ１１ｃ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、及びＩＬ−２３からなる群から選択される１つまたは複数の炎症誘発性メディエーターの調節（任意選択で、調節は、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、樹状細胞、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、及びミクログリア細胞からなる群から選択される１つまたは複数の細胞で生じる）、（ｅ）ＤＡＰ１２／ＴＲＥＭ２複合体へのＳｙｋの動員、（ｆ）１つまたは複数のＴＲＥＭ２依存性遺伝子の活性の増加（任意選択で、１つまたは複数のＴＲＥＭ２依存性遺伝子は、活性化Ｔ細胞核内因子（ＮＦＡＴ）転写因子を含む）、（ｇ）樹状細胞、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及びＭ２ミクログリア、またはそれらの任意の組合せの生存の増加、（ｈ）ＣＤ８３、ＣＤ８６  ＭＨＣクラスＩＩ、ＣＤ４０、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される１つまたは複数の刺激分子の発現の調節（任意選択で、ＣＤ４０は、樹状細胞、単球、マクロファージ、またはそれらの任意の組合せの上に発現され、任意選択で、樹状細胞は、骨髄由来樹状細胞を含む）、（ｉ）記憶の増大、ならびに（ｊ）認知障害の減少。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、ＩｇＧクラス、ＩｇＭクラス、またはＩｇＡクラスのものである。先行実施形態のいずれかと��み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、ＩｇＧクラスのものであり、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４アイソタイプを有する。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ２アイソタイプを有する。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧ２定常領域を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ２定常領域は、Ｆｃ領域を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、Ｆｃ受容体への結合とは無関係に、１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を増強する。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、阻害性Ｆｃ受容体と結合する。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、阻害性Ｆｃ受容体は、阻害性Ｆｃ−ガンマ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＩＩＢ）である。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、（ａ）単離抗体は、ヒトまたはマウスＩｇＧ１アイソタイプを有し、１つまたは複数のアミノ酸置換をＦｃ領域に、Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ、Ｄ２７０Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｌ３２８Ｅ、Ｐ２３８Ｄ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ｅ２３３Ｄ、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ、Ａ３３０Ｒ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される残基位置で含む（残基のナンバリングは、ＥＵナンバリングによる）、またはアミノ酸欠失をＦｃ領域に、グリシン２３６に対応する位置で含む、（ｂ）単離抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプを有し、ＩｇＧ２アイソタイプ重鎖定常ドメイン１（ＣＨ１）及びヒンジ領域を含み、任意選択で、ＩｇＧ２アイソタイプＣＨ１及びヒンジ領域は、ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰ  ＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥ  ＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫ  ＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳ  ＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳ  ＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴ  ＶＰＳＳＮＦＧＴＱＴ  ＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳ  ＮＴＫＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号８８６）のアミノ酸配列を含み、任意選択で、抗体Ｆｃ領域は、
Ｓ２６７Ｅアミノ酸置換、Ｌ３２８Ｆアミノ酸置換、もしくはその両方、及び／またはＮ２９７ＡもしくはＮ２９７Ｑアミノ酸置換を含む（残基のナンバリングは、ＥＵナンバリングによる）、（ｃ）単離抗体は、ＩｇＧ２アイソタイプを有し、１つまたは複数のアミノ酸置換をＦｃ領域に、Ｐ２３８Ｓ、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｈ２６８Ａ、Ｈ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｃ２１４Ｓ、Ｃ２３２Ｓ、Ｃ２３３Ｓ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｈ２６８Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ａ３３０Ｌ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される残基位置で含む（残基のナンバリングは、ＥＵナンバリングによる）、（ｄ）単離抗体は、ヒトまたはマウスＩｇＧ４アイソタイプを有し、１つまたは複数のアミノ酸置換をＦｃ領域に、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３６Ｅ、Ｓ２６７Ｅ、Ｅ３１８Ａ、Ｌ３２８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ａ／Ｆ２３４Ａ、Ｓ２２８Ｐ、Ｓ２４１Ｐ、Ｌ２４８Ｅ、Ｔ３９４Ｄ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｌ２３５Ｅ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される残基位置で含む（残基のナンバリングは、ＥＵナンバリングによる）、または（ｅ）単離抗体は、ハイブリッドＩｇＧ２／４アイソタイプを有し、任意選択で、抗体は、ヒトＩｇＧ２のアミノ酸１１８〜２６０及びヒトＩｇＧ４のアミノ酸２６１〜４４７を含むアミノ酸配列を含む（残基のナンバリングは、ＥＵナンバリングによる）。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ４アイソタイプを有する。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、残基位置２２８でＳ２２８Ｐアミノ酸置換、残基位置２３４でＦ２３４Ａアミノ酸置換、及び残基位置２３５でＬ２３５Ａアミノ酸置換を含む（残基位置のナンバリングは、ＥＵナンバリングによる）。
【００３１】
先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、下記からなる群から選択されるアミノ酸残基内の１つまたは複数のアミノ酸に結合する：（ｉ）配列番号１のアミノ酸残基１９〜１７４、または配列番号１のアミノ酸残基１９〜１７４に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、（ｉｉ）配列番号１のアミノ酸残基２９〜１１２、または配列番号１のアミノ酸残基２９〜１１２に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、（ｉｉｉ）配列番号１のアミノ酸残基１１３〜１７４、または配列番号１のアミノ酸残基１１３〜１７４に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、（ｉｖ）配列番号１のアミノ酸残基３５〜４９、または配列番号１のアミノ酸残基３５〜４９に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、（ｖ）配列番号１のアミノ酸残基３５〜４９及び１４０〜１５０、または配列番号１のアミノ酸残基３５〜４９及び１４０〜１５０に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、（ｖｉ）配列番号１のアミノ酸残基３９〜４９、または配列番号１のアミノ酸残基３９〜４９に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、（ｖｉｉ）配列番号１のアミノ酸残基３９〜４９及び６３〜７７、または配列番号１のアミノ酸残基３９〜４９及び６３〜７７に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、（ｖｉｉｉ）配列番号１のアミノ酸残基５１〜６１、または配列番号１のアミノ酸残基５１〜６１に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、（ｉｘ）配列番号１のアミノ酸残基５５〜６２、または配列番号１のアミノ酸残基５５〜６２に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、（ｘ）配列番号１のアミノ酸残基５５〜６２、１０４〜１０９、及び１４８〜１５８、または配列番号１のアミノ酸残基５５〜６２、１０４〜１０９、及び１４８〜１５８に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、（ｘｉ）配列番号１のアミノ酸残基５５〜６２、１０４〜１０９、及び１６０〜１６６、または配列番号１のアミノ酸残基５５〜６２、１０４〜１０９、及び１６０〜１６６に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、（ｘｉｉ）配列番号１のアミノ酸残基５５〜６５、または配列番号１のアミノ酸残基５５〜６５に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、（ｘｉｉｉ）配列番号１のアミノ酸残基５５〜６５及び１２４〜１３４、または配列番号１のアミノ酸残基５５〜６５及び１２４〜１３４に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、（ｘｉｖ）配列番号１のアミノ酸残基６３〜７３、または配列番号１のアミノ酸残基６３〜７３に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、（ｘｖ）配列番号１のアミノ酸残基６３〜７７、または配列番号１のアミノ酸残基６３〜７７に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、（ｘｖｉ）配列番号１のアミノ酸残基１０４〜１０９、または配列番号１のアミノ酸残基１０４〜１０９に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、（ｘｖｉｉ）配列番号１のアミノ酸残基１１７〜１３３、または配列番号１のアミノ酸残基１１７〜１３３に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、（ｘｖｉｉｉ）配列番号１のアミノ酸残基１２４〜１３４、または配列番号１のアミノ酸残基１２４〜１３４に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、（ｘｉｘ）配列番号１のアミノ酸残基１３７〜１４６、または配列番号１のアミノ酸残基１３７〜１４６に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、（ｘｘ）配列番号１のアミノ酸残基１３９〜１４７、または配列番号１のアミノ酸残基１３９〜１４７に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、（ｘｘｉ）配列番号１のアミノ酸残基１３９〜１４９、または配列番号１のアミノ酸残基１３９〜１４９に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、（ｘｘｉｉ）配列番号１のアミノ酸残基１４０〜１５０、または配列番号１のアミノ酸残基１４０〜１５０に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、（ｘｘｉｉｉ）配列番号１のアミノ酸残基１４０〜１４６、または配列番号１のアミノ酸残基１４０〜１４６に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、（ｘｘｉｖ）配列番号１のアミノ酸残基１４０〜１４３、または配列番号１のアミノ酸残基１４０〜１４３に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、（ｘｘｖ）配列番号１のアミノ酸残基１４２〜１５２、または配列番号１のアミノ酸残基１４２〜１５２に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、（ｘｘｖｉ）配列番号１のアミノ酸残基１４６〜１５４、または配列番号１のアミノ酸残基１４６〜１５４に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、（ｘｘｖｉｉ）配列番号１のアミノ酸残基１４８〜１５８、または配列番号１のアミノ酸残基１４８〜１５８に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、（ｘｘｖｉｉｉ）配列番号１のアミノ酸残基１４９〜１５７、または配列番号１のアミノ酸残基１４９〜１５７に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、（ｘｘｉｘ）配列番号１のアミノ酸残基１４９及び１５０、または配列番号１のアミノ酸残基１４９及び１５０に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、（ｘｘｘ）配列番号１のアミノ酸残基１５１〜１５５、または配列番号１のアミノ酸残基１５１〜１５５に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、（ｘｘｘｉ）配列番号１のアミノ酸残基１５４〜１６１、または配列番号１のアミノ酸残基１５４〜１６１に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、（ｘｘｘｉｉ）配列番号１のアミノ酸残基１５６〜１７０、または配列番号１のアミノ酸残基１５６〜１７０に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、（ｘｘｘｉｉｉ）配列番号１のアミノ酸残基１６０〜１６６、または配列番号１のアミノ酸残基１６０〜１６６に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、ならびに（ｘｘｘｉｖ）配列番号１のアミノ酸残基１６２〜１６５、または配列番号１のアミノ酸残基１６２〜１６５に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、配列番号１のＫ４２、Ｈ４３、Ｗ４４、Ｇ４５、Ｈ６７、Ｒ７７、Ｔ８８、Ｈ１１４、Ｅ１１７、Ｅ１５１、Ｄ１５２、Ｈ１５４、及びＥ１５６からなる群から選択される１つもしくは複数のアミノ酸残基、または配列番号１のＫ４２、Ｈ４３、Ｗ４４、Ｇ４５、Ｈ６７、Ｒ７７、Ｔ８８、Ｈ１１４、Ｅ１１７、Ｅ１５１、Ｄ１５２、Ｈ１５４、及びＥ１５６からなる群から選択されるアミノ酸残基に対応する哺乳動物ＴＲＥＭ２タンパク質上の１つもしくは複数のアミノ酸残基に結合する。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、配列番号１のＥ１５１、Ｄ１５２、Ｈ１５４、及びＥ１５６からなる群から選択される１つもしくは複数のアミノ酸残基、または配列番号１のＥ１５１、Ｄ１５２、Ｈ１５４、及びＥ１５６からなる群から選択されるアミノ酸残基に対応する哺乳動物ＴＲＥＭ２タンパク質上の１つもしくは複数のアミノ酸残基に結合する。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、ＴＲＥＭ２への結合について、３Ｂ１０、７Ｂ３、８Ｆ８、９Ｆ５、９Ｇ１、９Ｇ３、１１Ａ８、１２Ｆ９、７Ｅ９、７Ｆ６、８Ｃ３、２Ｃ５、３Ｃ５、４Ｃ１２、７Ｄ９、２Ｆ６、３Ａ７、７Ｅ５、１１Ｈ５、１Ｂ４、６Ｈ２、７Ｂ１１、１８Ｄ８、１８Ｅ４、２９Ｆ６、４０Ｄ５、４３Ｂ９、４４Ａ８、４４Ｂ４、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される１つまたは複数の抗体と競合する。
【００３２】
先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含み、その際、軽鎖可変ドメイン、または重鎖可変ドメイン、またはその両方は、４Ｄ１１、７Ｃ５、６Ｇ１２、８Ｆ１１、８Ｅ１０、７Ｅ５、７Ｆ８、８Ｆ８、１Ｈ７、２Ｈ８、３Ａ２、３Ａ７、３Ｂ１０、４Ｆ１１、６Ｈ６、７Ａ９、７Ｂ３、８Ａ１、９Ｆ５、９Ｇ１、９Ｇ３、１０Ａ９、１１Ａ８、１２Ｄ９、１２Ｆ９、１０Ｃ１、７Ｅ９、７Ｆ６、８Ｃ３、２Ｃ５、３Ｃ５、４Ｃ１２、７Ｄ９、２Ｆ６、１１Ｈ５、Ｂ４、６Ｈ２、７Ｂ１１ｖ１、７Ｂ１１ｖ２、１８Ｄ８、１８Ｅ４ｖ１、１８Ｅ４ｖ２、２９Ｆ６ｖ１、２９Ｆ６ｖ２、４０Ｄ５ｖ１、４０Ｄ５ｖ２、４３Ｂ９、４４Ａ８ｖ１、４４Ａ８ｖ２、４４Ｂ４ｖ１、及び４４Ｂ４ｖ２からなる群から選択される抗体のＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、ＨＶＲ−Ｌ３、ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、（ａ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号９〜２３、５８１、６９０〜６９４、７３４〜７３８、及び８２６〜８２８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、（ｂ）ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号２４〜３３、６９５〜６９７、及び７３９〜７４３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、（ｃ）ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号３４〜４７、５８２、５８３、６９８〜７０２、及び７４４〜７４６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、（ｄ）ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号４８〜６５、５８４、７０３〜７０５、７４７〜７５４、及び８２９〜８３５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、（ｅ）ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号６６〜８４、５８５〜５８７、７０６〜７０８、７５５〜７６２、８３６〜８４２、及び８８８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、または（ｆ）ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号８５〜１０２、５８８、５８９、７０９、７１０、及び７６３〜７７０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、（ａ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号２６のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号３６のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号５１のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号６９のアミノ酸配列を含み、かつＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号８８のアミノ酸配列を含む、（ｂ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１４のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号２８のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号３９のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号５３のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号７１のアミノ酸配列を含み、かつＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号９０のアミノ酸配列を含む、（ｃ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号２６のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号３６のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号５１のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号６９のアミノ酸配列を含み、かつＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号８８のアミノ酸配列を含む、（ｄ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１６のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号２９のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号３５のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号５５のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号７３のアミノ酸配列を含み、かつＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号９２のアミノ酸配列を含む、（ｅ）ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号５８のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号７６のアミノ酸配列を含み、かつＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号９５のアミノ酸配列を含む、（ｆ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１９のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号２８のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号４３のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号６０のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号７８のアミノ酸配列を含み、かつＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号９７のアミノ酸配列を含む、（ｇ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号２０のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号２８のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号４４のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号６１のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号７９のアミノ酸配列を含み、かつＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号９８のアミノ酸配列を含む、（ｈ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号２１のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号３２のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号４５のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号６２のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号８０のアミノ酸配列を含み、かつＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号９９のアミノ酸配列を含む、（ｉ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号２２のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号２９のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号４６のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号６３のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号８２のアミノ酸配列を含み、かつＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号１００のアミノ酸配列を含む、または（ｊ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１６のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号２９のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号３５のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号６５のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号８４のアミノ酸配列を含み、かつＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号１０２のアミノ酸配列を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含み、その際、軽鎖可変ドメインは、（ａ）配列番号９〜２３、５８１、６９０〜６９４、７３４〜７３８、及び８２６〜８２８からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号９〜２３、５８１、６９０〜６９４、７３４〜７３８、及び８２６〜８２８からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号２４〜３３、６９５〜６９７、及び７３９〜７４３からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号２４〜３３、６９５〜６９７、及び７３９〜７４３からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、ならびに（ｃ）配列番号３４〜４７、５８２、５８３、６９８〜７０２、及び７４４〜７４６からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号３４〜４７、５８２、５８３、６９８〜７０２、及び７４４〜７４６からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み、重鎖可変ドメインは、（ａ）配列番号４８〜６５、５８４、７０３〜７０５、７４７〜７５４、及び８２９〜８３５からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号４８〜６５、５８４、７０３〜７０５、７４７〜７５４、及び８２９〜８３５からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号６６〜８４、５８５〜５８７、７０６〜７０８、７５５〜７６２、８３６〜８４２、及び８８８からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号６６〜８４、５８５〜５８７、７０６〜７０８、７５５〜７６２、８３６〜８４２、及び８８８と少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、ならびに（ｃ）配列番号８５〜１０２、５８８、５８９、７０９、７１０、及び７６３〜７７０からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号８５〜１０２、５８８、５８９、７０９、７１０、及び７６３〜７７０からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、配列番号２１９〜３９８、６０２〜６３４、６７９〜６８９、７２４〜７３０、８０９〜８１６、８２１、８４３、８４４、８４９、及び８５０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、ならびに／または配列番号３９９〜５８０、６３５〜６７８、７３１〜７３３、及び８１７〜８２０、８２２〜８２５、及び８４５〜８４７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含み、その際、（ａ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３３３のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５２１のアミノ酸配列を含む、（ｂ）軽鎖可変ドメインは、配列番号８５０のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５２１のアミノ酸配列を含む、（ｃ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３３４のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５２２のアミノ酸配列を含む、（ｄ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３３５のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５２３のアミノ酸配列を含む、（ｅ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３３６のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５２４のアミノ酸配列を含む、（ｆ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３３７のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５２５のアミノ酸配列を含む、（ｇ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３３８のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５２６のアミノ酸配列を含む、（ｈ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３３９のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５２６のアミノ酸配列を含む、（ｉ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３４０のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５２７のアミノ酸配列を含む、（ｊ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３４１のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５２８のアミノ酸配列を含む、（ｋ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３４２のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５２９のアミノ酸配列を含む、（ｌ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３４３のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５３０のアミノ酸配列を含む、（ｍ）軽鎖可変ドメインは、配列番号８４３のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号８４５のアミノ酸配列を含む、（ｎ）軽鎖可変ドメインは、配列番号８４４のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号８４６のアミノ酸配列を含む、（ｏ）軽鎖可変ドメインは、配列番号８４４のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号８４７のアミノ酸配列を含む、（ｐ）軽鎖可変ドメインは、配列番号２１９のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号３９９のアミノ酸配列を含む、（ｑ）軽鎖可変ドメインは、配列番号２３０のアミノ酸配列を含み、
かつ重鎖可変ドメインは、配列番号４０９のアミノ酸配列を含む、（ｒ）軽鎖可変ドメインは、配列番号２５２のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号４１９のアミノ酸配列を含む、（ｓ）軽鎖可変ドメインは、配列番号２４１のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号４２９のアミノ酸配列を含む、（ｔ）軽鎖可変ドメインは、配列番号８４９のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号４２９のアミノ酸配列を含む、（ｕ）軽鎖可変ドメインは、配列番号２６３のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号４３９のアミノ酸配列を含む、（ｖ）軽鎖可変ドメインは、配列番号２７４のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号４４９のアミノ酸配列を含む、（ｗ）軽鎖可変ドメインは、配列番号２８５のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号４５９のアミノ酸配列を含む、（ｘ）軽鎖可変ドメインは、配列番号２８６のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号４６０のアミノ酸配列を含む、（ｙ）軽鎖可変ドメインは、配列番号２８７のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号４６１のアミノ酸配列を含む、（ｚ）軽鎖可変ドメインは、配列番号２９８のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号４２９のアミノ酸配列を含む、（ａａ）軽鎖可変ドメインは、配列番号２９９のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号４７１のアミノ酸配列を含む、（ｂｂ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３１０のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号４６１のアミノ酸配列を含む、（ｃｃ）軽鎖可変ドメインは、配列番号６７９のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号４８１のアミノ酸配列を含む、（ｄｄ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３１１のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号４９１のアミノ酸配列を含む、（ｅｅ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３２２のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５１１のアミノ酸配列を含む、（ｆｆ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３４４のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５３１のアミノ酸配列を含む、（ｇｇ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３５５のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号６３５のアミノ酸配列を含む、（ｈｈ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３６５のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５４１のアミノ酸配列を含む、（ｉｉ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３７６のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５５１のアミノ酸配列を含む、（ｊｊ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３８７のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５６１のアミノ酸配列を含む、（ｋｋ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３９８のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５７１のアミノ酸配列を含む、（ｌｌ）軽鎖可変ドメインは、配列番号７２４のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号７３１のアミノ酸配列を含む、（ｍｍ）軽鎖可変ドメインは、配列番号８０９のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号７３１のアミノ酸配列を含む、（ｎｎ）軽鎖可変ドメインは、配列番号７２５のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号７３２のアミノ酸配列を含む、（ｏｏ）軽鎖可変ドメインは、配列番号７２６のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号７３１のアミノ酸配列を含む、（ｐｐ）軽鎖可変ドメインは、配列番号７２６のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号８１７のアミノ酸配列を含む、（ｑｑ）軽鎖可変ドメインは、配列番号７２７のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号７３１のアミノ酸配列を含む、（ｒｒ）軽鎖可変ドメインは、配列番号７２８のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号７３３のアミノ酸配列を含む、（ｓｓ）軽鎖可変ドメインは、配列番号８１０のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号８１８のアミノ酸配列を含む、（ｔｔ）軽鎖可変ドメインは、配列番号８１１のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号７３３のアミノ酸配列を含む、（ｕｕ）軽鎖可変ドメインは、配列番号７２９のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号７３１のアミノ酸配列を含む、（ｖｖ）軽鎖可変ドメインは、配列番号８１２のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号８１９のアミノ酸配列を含む、（ｗｗ）軽鎖可変ドメインは、配列番号７２９のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号８２０のアミノ酸配列を含む、（ｘｘ）軽鎖可変ドメインは、配列番号７３０のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号７３１のアミノ酸配列を含む、（ｙｙ）軽鎖可変ドメインは、配列番号８１３のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号７３１のアミノ酸配列を含む、（ｚｚ）軽鎖可変ドメインは、配列番号８１４のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号８２２のアミノ酸配列を含む、（ａａａ）軽鎖可変ドメインは、配列番号８１５のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号８２４のアミノ酸配列を含む、または（ｂｂｂ）軽鎖可変ドメインは、配列番号８１６のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号８２５のアミノ酸配列を含む。
先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、３Ｂ１０、７Ｂ３、８Ｆ８、９Ｆ５、９Ｇ１、９Ｇ３、１１Ａ８、１２Ｆ９、７Ｅ９、７Ｆ６、８Ｃ３、２Ｃ５、３Ｃ５、４Ｃ１２、７Ｄ９、２Ｆ６、３Ａ７、７Ｅ５、１１Ｈ５、１Ｂ４ｖ１、１Ｂ４ｖ２、６Ｈ２、７Ｂ１１ｖ１、７Ｂ１１ｖ２、１８Ｄ８、１８Ｅ４ｖ１、１８Ｅ４ｖ２、２９Ｆ６ｖ１、２９Ｆ６ｖ２、４０Ｄ５ｖ１、４０Ｄ５ｖ２、４３Ｂ９、４４Ａ８ｖ１、４４Ａ８ｖ２、４４Ｂ４ｖ１、及び４４Ｂ４ｖ２からなる群から選択される抗体の軽鎖可変ドメイン、ならびに／または３Ｂ１０、７Ｂ３、８Ｆ８、９Ｆ５、９Ｇ１、９Ｇ３、１１Ａ８、１２Ｆ９、７Ｅ９、７Ｆ６、８Ｃ３、２Ｃ５、３Ｃ５、４Ｃ１２、７Ｄ９、２Ｆ６、３Ａ７、７７Ｅ５、１１Ｈ５、１Ｂ４ｖ１、１Ｂ４ｖ２、６Ｈ２、７Ｂ１１ｖ１、７Ｂ１１ｖ２、１８Ｄ８、１８Ｅ４ｖ１、１８Ｅ４ｖ２、２９Ｆ６ｖ１、２９Ｆ６ｖ２、４０Ｄ５ｖ１、４０Ｄ５ｖ２、４３Ｂ９、４４Ａ８ｖ１、４４Ａ８ｖ２、４４Ｂ４ｖ１、及び４４Ｂ４ｖ２からなる群から選択される抗体の重鎖可変ドメインを含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含み、その際、軽鎖可変ドメインは、ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、ＨＶＲ−Ｌ３を含み、重鎖可変ドメインは、ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３を含み、ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号８５〜１０２、５８８、５８９、７０９、７１０、及び７６３〜７７０からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号８５〜１０２、５８８、５８９、７０９、７１０、及び７６３〜７７０からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含む。
【００３３】
本開示の他の態様は、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離（例えば、モノクローナル）抗体であって、下記からなる群から選択されるアミノ酸残基内の１つまたは複数のアミノ酸に結合する抗体に関する：（ｉ）配列番号１のアミノ酸残基１９〜１７４、または配列番号１のアミノ酸残基１９〜１７４に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、（ｉｉ）配列番号１のアミノ酸残基２９〜１１２、または配列番号１のアミノ酸残基２９〜１１２に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、（ｉｉｉ）配列番号１のアミノ酸残基１１３〜１７４、または配列番号１のアミノ酸残基１１３〜１７４に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、（ｉｖ）配列番号１のアミノ酸残基３５〜４９、または配列番号１のアミノ酸残基３５〜４９に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、（ｖ）配列番号１のアミノ酸残基３５〜４９及び１４０〜１５０、または配列番号１のアミノ酸残基３５〜４９及び１４０〜１５０に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、（ｖｉ）配列番号１のアミノ酸残基３９〜４９、または配列番号１のアミノ酸残基３９〜４９に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、（ｖｉｉ）配列番号１のアミノ酸残基３９〜４９及び６３〜７７、または配列番号１のアミノ酸残基３９〜４９及び６３〜７７に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、（ｖｉｉｉ）配列番号１のアミノ酸残基５１〜６１、または配列番号１のアミノ酸残基５１〜６１に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、（ｉｘ）配列番号１のアミノ酸残基５５〜６２、または配列番号１のアミノ酸残基５５〜６２に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、（ｘ）配列番号１のアミノ酸残基５５〜６２、１０４〜１０９、及び１４８〜１５８、または配列番号１のアミノ酸残基５５〜６２、１０４〜１０９、及び１４８〜１５８に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、（ｘｉ）配列番号１のアミノ酸残基５５〜６２、１０４〜１０９、及び１６０〜１６６、または配列番号１のアミノ酸残基５５〜６２、１０４〜１０９、及び１６０〜１６６に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、（ｘｉｉ）配列番号１のアミノ酸残基５５〜６５、または配列番号１のアミノ酸残基５５〜６５に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、（ｘｉｉｉ）配列番号１のアミノ酸残基５５〜６５及び１２４〜１３４、または配列番号１のアミノ酸残基５５〜６５及び１２４〜１３４に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、（ｘｉｖ）配列番号１のアミノ酸残基６３〜７３、または配列番号１のアミノ酸残基６３〜７３に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、（ｘｖ）配列番号１のアミノ酸残基６３〜７７、または配列番号１のアミノ酸残基６３〜７７に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、（ｘｖｉ）配列番号１のアミノ酸残基１０４〜１０９、または配列番号１のアミノ酸残基１０４〜１０９に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、（ｘｖｉｉ）配列番号１のアミノ酸残基１１７〜１３３、または配列番号１のアミノ酸残基１１７〜１３３に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、（ｘｖｉｉｉ）配列番号１のアミノ酸残基１２４〜１３４、または配列番号１のアミノ酸残基１２４〜１３４に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、（ｘｉｘ）配列番号１のアミノ酸残基１３７〜１４６、または配列番号１のアミノ酸残基１３７〜１４６に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、（ｘｘ）配列番号１のアミノ酸残基１３９〜１４７、または配列番号１のアミノ酸残基１３９〜１４７に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、（ｘｘｉ）配列番号１のアミノ酸残基１３９〜１４９、または配列番号１のアミノ酸残基１３９〜１４９に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、（ｘｘｉｉ）配列番号１のアミノ酸残基１４０〜１５０、または配列番号１のアミノ酸残基１４０〜１５０に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、（ｘｘｉｉｉ）配列番号１のアミノ酸残基１４０〜１４６、または配列番号１のアミノ酸残基１４０〜１４６に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、（ｘｘｉｖ）配列番号１のアミノ酸残基１４０〜１４３、または配列番号１のアミノ酸残基１４０〜１４３に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、（ｘｘｖ）配列番号１のアミノ酸残基１４２〜１５２、または配列番号１のアミノ酸残基１４２〜１５２に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、（ｘｘｖｉ）配列番号１のアミノ酸残基１４６〜１５４、または配列番号１のアミノ酸残基１４６〜１５４に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、（ｘｘｖｉｉ）配列番号１のアミノ酸残基１４８〜１５８、または配列番号１のアミノ酸残基１４８〜１５８に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、（ｘｘｖｉｉｉ）配列番号１のアミノ酸残基１４９〜１５７、または配列番号１のアミノ酸残基１４９〜１５７に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、（ｘｘｉｘ）配列番号１のアミノ酸残基１４９及び１５０、または配列番号１のアミノ酸残基１４９及び１５０に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、（ｘｘｘ）配列番号１のアミノ酸残基１５１〜１５５、または配列番号１のアミノ酸残基１５１〜１５５に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、（ｘｘｘｉ）配列番号１のアミノ酸残基１５４〜１６１、または配列番号１のアミノ酸残基１５４〜１６１に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、（ｘｘｘｉｉ）配列番号１のアミノ酸残基１５６〜１７０、または配列番号１のアミノ酸残基１５６〜１７０に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、（ｘｘｘｉｉｉ）配列番号１のアミノ酸残基１６０〜１６６、または配列番号１のアミノ酸残基１６０〜１６６に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、ならびに（ｘｘｘｉｖ）配列番号１のアミノ酸残基１６２〜１６５、または配列番号１のアミノ酸残基１６２〜１６５に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基。一部の実施形態では、抗体は、１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を誘導し、ＴＲＥＭ２タンパク質への１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドの結合によって誘導される１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を増強する。一部の実施形態では、抗体はさらに、下記からなる群から選択される１つまたは複数のアミノ酸残基に結合する：（ｉ）配列番号１のアミノ酸残基Ａｒｇ４７またはＡｓｐ８７、（ｉｉ）配列番号１のアミノ酸残基４０〜４４、（ｉｉｉ）配列番号１のアミノ酸残基６７〜７６、及び（ｉｖ）配列番号１のアミノ酸残基１１４〜１１８。
【００３４】
本開示の他の態様は、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離（例えば、モノクローナル）抗体であって、配列番号１のＫ４２、Ｈ４３、Ｗ４４、Ｇ４５、Ｈ６７、Ｒ７７、Ｔ８８、Ｈ１１４、Ｅ１１７、Ｅ１５１、Ｄ１５２、Ｈ１５４、及びＥ１５６からなる群から選択される１つもしくは複数のアミノ酸残基、または配列番号１のＫ４２、Ｈ４３、Ｗ４４、Ｇ４５、Ｈ６７、Ｒ７７、Ｔ８８、Ｈ１１４、Ｅ１１７、Ｅ１５１、Ｄ１５２、Ｈ１５４、及びＥ１５６からなる群から選択されるアミノ酸残基に対応する哺乳動物ＴＲＥＭ２タンパク質上の１つもしくは複数のアミノ酸残基に結合する抗体に関する。一部の実施形態では、抗体は、配列番号１のＥ１５１、Ｄ１５２、Ｈ１５４、及びＥ１５６からなる群から選択される１つもしくは複数のアミノ酸残基、または配列番号１のＥ１５１、Ｄ１５２、Ｈ１５４、及びＥ１５６からなる群から選択されるアミノ酸残基に対応する哺乳動物ＴＲＥＭ２タンパク質上の１つもしくは複数のアミノ酸残基に結合する。本開示の他の態様は、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離（例えば、モノクローナル）抗体であって、配列番号１のＥ１５１、Ｄ１５２、Ｈ１５４、及びＥ１５６からなる群から選択される１つもしくは複数のアミノ酸残基、または配列番号１のＥ１５１、Ｄ１５２、Ｈ１５４、及びＥ１５６からなる群から選択されるアミノ酸残基に対応する哺乳動物ＴＲＥＭ２タンパク質上の１つもしくは複数のアミノ酸残基に結合する抗体に関する。
【００３５】
本開示の他の態様は、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離（例えば、モノクローナル）抗体であって、ＴＲＥＭ２への結合について、１Ａ７、３Ａ２、３Ｂ１０、６Ｇ１２、６Ｈ６、７Ａ９、７Ｂ３、８Ａ１、８Ｅ１０、８Ｆ１１、８Ｆ８、９Ｆ５、９Ｇ１、９Ｇ３、１０Ａ９、１０Ｃ１、１１Ａ８、１２Ｅ２、１２Ｆ９、１２Ｇ６、２Ｃ７、２Ｆ５、３Ｃ１、４Ｄ７、４Ｄ１１、６Ｃ１１、６Ｇ１２、７Ａ３、７Ｃ５、７Ｅ９、７Ｆ６、７Ｇ１、７Ｈ１、８Ｃ３、８Ｆ１０、１２Ａ１、１Ｅ９、２Ｃ５、３Ｃ５、４Ｃ１２、４Ｆ２、５Ａ２、６Ｂ３、７Ｄ１、７Ｄ９、１１Ｄ８、８Ａ１２、１０Ｅ７、１０Ｂ１１、１０Ｄ２、７Ｄ５、２Ａ７、３Ｇ１２、６Ｈ９、８Ｇ９、９Ｂ４、１０Ａ１、１１Ａ８、１２Ｆ３、２Ｆ８、１０Ｅ３、１Ｈ７、２Ｆ６、２Ｈ８、３Ａ７、７Ｅ５、７Ｆ８、１１Ｈ５、７Ｃ５、４Ｆ１１、１２Ｄ９、１Ｂ４ｖ１、１Ｂ４ｖ２、６Ｈ２、７Ｂ１１ｖ１、７Ｂ１１ｖ２、１８Ｄ８、１８Ｅ４ｖ１、１８Ｅ４ｖ２、２９Ｆ６ｖ１、２９Ｆ６ｖ２、４０Ｄ５ｖ１、４０Ｄ５ｖ２、４３Ｂ９、４４Ａ８ｖ１、４４Ａ８ｖ２、４４Ｂ４ｖ１、４４Ｂ４ｖ２、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される１つまたは複数の抗体と競合する抗体に関する。
【００３６】
本開示の他の態様は、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離（例えば、モノクローナル）抗体であって、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含み、その際、軽鎖可変ドメイン、または重鎖可変ドメイン、またはその両方が、１Ａ７、３Ａ２、３Ｂ１０、６Ｇ１２、６Ｈ６、７Ａ９、７Ｂ３、８Ａ１、８Ｅ１０、８Ｆ１１、８Ｆ８、９Ｆ５、９Ｇ１、９Ｇ３、１０Ａ９、１０Ｃ１、１１Ａ８、１２Ｅ２、１２Ｆ９、１２Ｇ６、２Ｃ７、２Ｆ５、３Ｃ１、４Ｄ７、４Ｄ１１、６Ｃ１１、６Ｇ１２、７Ａ３、７Ｃ５、７Ｅ９、７Ｆ６、７Ｇ１、７Ｈ１、８Ｃ３、８Ｆ１０、１２Ａ１、１Ｅ９、２Ｃ５、３Ｃ５、４Ｃ１２、４Ｆ２、５Ａ２、６Ｂ３、７Ｄ１、７Ｄ９、１１Ｄ８、８Ａ１２、１０Ｅ７、１０Ｂ１１、１０Ｄ２、７Ｄ５、２Ａ７、３Ｇ１２、６Ｈ９、８Ｇ９、９Ｂ４、１０Ａ１、１１Ａ８、１２Ｆ３、２Ｆ８、１０Ｅ３、１Ｈ７、２Ｆ６、２Ｈ８、３Ａ７、７Ｅ５、７Ｆ８、１１Ｈ５、７Ｃ５、４Ｆ１１、１２Ｄ９、１Ｂ４ｖ１、１Ｂ４ｖ２、６Ｈ２、７Ｂ１１ｖ１、７Ｂ１１ｖ２、１８Ｄ８、１８Ｅ４ｖ１、１８Ｅ４ｖ２、２９Ｆ６ｖ１、２９Ｆ６ｖ２、４０Ｄ５ｖ１、４０Ｄ５ｖ２、４３Ｂ９、４４Ａ８ｖ１、４４Ａ８ｖ２、４４Ｂ４ｖ１、及び４４Ｂ４ｖ２からなる群から選択される抗体のＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、ＨＶＲ−Ｌ３、ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む抗体に関する。一部の実施形態では、（ａ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号９〜２３、５８１、６９０〜６９４、７３４〜７３８、及び８２６〜８２８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、（ｂ）ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号２４〜３３、６９５〜６９７、及び７３９〜７４３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、（ｃ）ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号３４〜４７、５８２、５８３、６９８〜７０２、及び７４４〜７４６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、（ｄ）ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号４８〜６５、５８４、７０３〜７０５、７４７〜７５４、及び８２９〜８３５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、（ｅ）ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号６６〜８４、５８５〜５８７、７０６〜７０８、７５５〜７６２、８３６〜８４２、及び８８８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、または（ｆ）ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号８５〜１０２、５８８、５８９、７０９、７１０、及び７６３〜７７０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、（ａ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号９のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号２４のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号３４のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号４８のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号６６のアミノ酸配列を含み、かつＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号８５のアミノ酸配列を含む、（ｂ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号９のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号２４のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号３４のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号４８のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号６６のアミノ酸配列を含み、かつＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号８５のアミノ酸配列を含む、（ｃ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１０のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号２５のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号３５のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号４９のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号６７のアミノ酸配列を含み、かつＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号８６のアミノ酸配列を含む、（ｄ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号２６のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号３７のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号５０のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号６８のアミノ酸配列を含み、かつＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号８７のアミノ酸配列を含む、（ｅ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号２６のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号３６のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号５１のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号６９のアミノ酸配列を含み、かつＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号８８のアミノ酸配列を含む、（ｆ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１３のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号２７のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号３８のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号５２のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号７０のアミノ酸配列を含み、かつＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号８９のアミノ酸配列を含む、（ｇ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１４のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号２８のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号３９のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号５３のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号７１のアミノ酸配列を含み、かつＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号９０のアミノ酸配列を含む、（ｈ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１３のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号２７のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号３８のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号５２のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号７０のアミノ酸配列を含み、かつＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号８９のアミノ酸配列を含む、（ｉ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１３のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号２７のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号３８のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号５２のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号７０のアミノ酸配列を含み、かつＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号８９のアミノ酸配列を含む、（ｊ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１５のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号２８のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号４０のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号５４のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号７２のアミノ酸配列を含み、かつＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号９１のアミノ酸配列を含む、（ｋ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号２６のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号３６のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号５１のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号６９のアミノ酸配列を含み、かつＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号８８のアミノ酸配列を含む、（ｌ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１６のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号２９のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号３５のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号５５のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号７３のアミノ酸配列を含み、かつＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号９２のアミノ酸配列を含む、（ｍ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１５のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号２８のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号４０のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号５４のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号７２のアミノ酸配列を含み、かつＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号９１のアミノ酸配列を含む、（ｎ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号５８１のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号２９のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号５８２のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号５６のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号７４のアミノ酸配列を含み、かつＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号９３のアミノ酸配列を含む、（ｏ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１７のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号３０のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号４１のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号５７のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号７５のアミノ酸配列を含み、かつＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号９４のアミノ酸配列を含む、（ｐ）ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号５８のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号７６のアミノ酸配列を含み、かつＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号９５のアミノ酸配列を含む、（ｑ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１８のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号３１のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号４２のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号５９のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号７７のアミノ酸配列を含み、かつＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号９６のアミノ酸配列を含む、（ｒ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１９のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号２８のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号４３のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号６０のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号７８のアミノ酸配列を含み、かつＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号９７のアミノ酸配列を含む、（ｓ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号２０のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号２８のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号４４のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号６１のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号７９のアミノ酸配列を含み、かつＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号９８のアミノ酸配列を含む、（ｔ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号２１のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号３２のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号４５のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号６２のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号８０のアミノ酸配列を含み、かつＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号９９のアミノ酸配列を含む、（ｕ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１５のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号３３のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号４０のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号５４のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号８１のアミノ酸配列を含み、かつＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号９１のアミノ酸配列を含む、（ｖ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号２２のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号２９のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号４６のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号６３のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号８２のアミノ酸配列を含み、かつＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号１００のアミノ酸配列を含む、（ｗ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号２３のアミノ酸配列を含み、
ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号２９のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号４７のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号６４のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号８３のアミノ酸配列を含み、かつＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号１０１のアミノ酸配列を含む、（ｘ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１６のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号２９のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号３５のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号６５のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号８４のアミノ酸配列を含み、かつＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号１０２のアミノ酸配列を含む、（ｙ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号５８１のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号２９のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号５８２のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号５６のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号５８５のアミノ酸配列を含み、かつＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号５８８のアミノ酸配列を含む、（ｚ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１０のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号２９のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号３５のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号４９のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号５８６のアミノ酸配列を含み、かつＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号８６のアミノ酸配列を含む、または（ａａ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１４のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号２８のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号５８３のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号５８４のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号５８７のアミノ酸配列を含み、かつＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号５８９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、軽鎖可変ドメインは、（ａ）配列番号９〜２３、５８１、６９０〜６９４、７３４〜７３８、及び８２６〜８２８からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号９〜２３、５８１、６９０〜６９４、７３４〜７３８、及び８２６〜８２８からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号２４〜３３、６９５〜６９７、及び７３９〜７４３からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号２４〜３３、６９５〜６９７、及び７３９〜７４３からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、ならびに（ｃ）配列番号３４〜４７、５８２、５８３、６９８〜７０２、及び７４４〜７４６からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号３４〜４７、５８２、５８３、６９８〜７０２、及び７４４〜７４６からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み、重鎖可変ドメインは、（ａ）配列番号４８〜６５、５８４、７０３〜７０５、７４７〜７５４、及び８２９〜８３５からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号４８〜６５、５８４、７０３〜７０５、７４７〜７５４、及び８２９〜８３５からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号６６〜８４、５８５〜５８７、７０６〜７０８、７５５〜７６２、８３６〜８４２、及び８８８からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号６６〜８４、５８５〜５８７、７０６〜７０８、７５５〜７６２、８３６〜８４２、及び８８８からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、ならびに（ｃ）配列番号８５〜１０２、５８８、５８９、７０９、７１０、及び７６３〜７７０からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号８５〜１０２、５８８、５８９、７０９、７１０、及び７６３〜７７０からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含み、その際、軽鎖可変ドメインは、ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、ＨＶＲ−Ｌ３を含み、重鎖可変ドメインは、ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３を含み、ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号８５〜１０２、５８８、５８９、７０９、７１０、及び７６３〜７７０からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号８５〜１０２、５８８、５８９、７０９、７１０、及び７６３〜７７０からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号２１９〜３９８、６０２〜６３４、６７９〜６８９、７２４〜７３０、８０９〜８１６、８２１、８４３、８４４、８４９、及び８５０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、ならびに／または配列番号３９９〜５８０、６３５〜６７８、７３１〜７３３、８１７〜８２０、８２２〜８２５、及び８４５〜８４７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、抗体は、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含み、その際、（ａ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３３３のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５２１のアミノ酸配列を含む、（ｂ）軽鎖可変ドメインは、配列番号８５０のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５２１のアミノ酸配列を含む、（ｃ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３３４のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５２２のアミノ酸配列を含む、（ｄ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３３５のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５２３のアミノ酸配列を含む、（ｅ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３３６のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５２４のアミノ酸配列を含む、（ｆ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３３７のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５２５のアミノ酸配列を含む、（ｇ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３３８のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５２６のアミノ酸配列を含む、（ｈ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３３９のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５２６のアミノ酸配列を含む、（ｉ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３４０のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５２７のアミノ酸配列を含む、（ｊ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３４１のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５２８のアミノ酸配列を含む、（ｋ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３４２のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５２９のアミノ酸配列を含む、（ｌ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３４３のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５３０のアミノ酸配列を含む、（ｍ）軽鎖可変ドメインは、配列番号８４３のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号８４５のアミノ酸配列を含む、（ｎ）軽鎖可変ドメインは、配列番号８４４のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号８４６のアミノ酸配列を含む、（ｏ）軽鎖可変ドメインは、配列番号８４４のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号８４７のアミノ酸配列を含む、（ｐ）軽鎖可変ドメインは、配列番号２１９のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号３９９のアミノ酸配列を含む、（ｑ）軽鎖可変ドメインは、配列番号２３０のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号４０９のアミノ酸配列を含む、（ｒ）軽鎖可変ドメインは、配列番号２５２のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号４１９のアミノ酸配列を含む、（ｓ）軽鎖可変ドメインは、配列番号２４１のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号４２９のアミノ酸配列を含む、（ｔ）軽鎖可変ドメインは、配列番号８４９のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号４２９のアミノ酸配列を含む、（ｕ）軽鎖可変ドメインは、配列番号２６３のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号４３９のアミノ酸配列を含む、（ｖ）軽鎖可変ドメインは、配列番号２７４のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号４４９のアミノ酸配列を含む、（ｗ）軽鎖可変ドメインは、配列番号２８５のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号４５９のアミノ酸配列を含む、（ｘ）軽鎖可変ドメインは、配列番号２８６のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号４６０のアミノ酸配列を含む、（ｙ）軽鎖可変ドメインは、配列番号２８７のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号４６１のアミノ酸配列を含む、（ｚ）軽鎖可変ドメインは、配列番号２９８のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号４２９のアミノ酸配列を含む、（ａａ）軽鎖可変ドメインは、配列番号２９９のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号４７１のアミノ酸配列を含む、（ｂｂ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３１０のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号４６１のアミノ酸配列を含む、（ｃｃ）軽鎖可変ドメインは、配列番号６７９のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号４８１のアミノ酸配列を含む、（ｄｄ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３１１のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号４９１のアミノ酸配列を含む、（ｅｅ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３２２のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５１１のアミノ酸配列を含む、（ｆｆ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３４４のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５３１のアミノ酸配列を含む、（ｇｇ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３５５のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号６３５のアミノ酸配列を含む、（ｈｈ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３６５のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５４１のアミノ酸配列を含む、（ｉｉ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３７６のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５５１のアミノ酸配列を含む、（ｊｊ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３８７のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５６１のアミノ酸配列を含む、（ｋｋ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３９８のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５７１のアミノ酸配列を含む、（ｌｌ）軽鎖可変ドメインは、配列番号７２４のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号７３１のアミノ酸配列を含む、（ｍｍ）軽鎖可変ドメインは、配列番号８０９のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号７３１のアミノ酸配列を含む、（ｎｎ）軽鎖可変ドメインは、配列番号７２５のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号７３２のアミノ酸配列を含む、（ｏｏ）軽鎖可変ドメインは、配列番号７２６のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号７３１のアミノ酸配列を含む、（ｐｐ）軽鎖可変ドメインは、配列番号７２６のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号８１７のアミノ酸配列を含む、（ｑｑ）軽鎖可変ドメインは、配列番号７２７のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号７３１のアミノ酸配列を含む、（ｒｒ）軽鎖可変ドメインは、配列番号７２８のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号７３３のアミノ酸配列を含む、（ｓｓ）軽鎖可変ドメインは、配列番号８１０のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号８１８のアミノ酸配列を含む、（ｔｔ）軽鎖可変ドメインは、配列番号８１１のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号７３３のアミノ酸配列を含む、（ｕｕ）軽鎖可変ドメインは、
配列番号７２９のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号７３１のアミノ酸配列を含む、（ｖｖ）軽鎖可変ドメインは、配列番号８１２のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号８１９のアミノ酸配列を含む、（ｗｗ）軽鎖可変ドメインは、配列番号７２９のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号８２０のアミノ酸配列を含む、（ｘｘ）軽鎖可変ドメインは、配列番号７３０のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号７３１のアミノ酸配列を含む、（ｙｙ）軽鎖可変ドメインは、配列番号８１３のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号７３１のアミノ酸配列を含む、（ｚｚ）軽鎖可変ドメインは、配列番号８１４のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号８２２のアミノ酸配列を含む、（ａａａ）軽鎖可変ドメインは、配列番号８１５のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号８２４のアミノ酸配列を含む、または（ｂｂｂ）軽鎖可変ドメインは、配列番号８１６のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号８２５のアミノ酸配列を含む。
【００３７】
本開示の他の態様は、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離（例えば、モノクローナル）抗体であって、配列番号２１９〜３９８、６０２〜６３４、６７９〜６８９、７２４〜７３０、８０９〜８１６、８２１、８４３、８４４、８４９、及び８５０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、ならびに／または配列番号３９９〜５８０、６３５〜６７８、７３１〜７３３、及び８１７〜８２０、８２２〜８２５、及び８４５〜８４７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む抗体に関する。一部の実施形態では、抗体は、配列番号８４３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン及び配列番号８４５のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号８４３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン及び配列番号８４６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号８４３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン及び配列番号８４７のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号８４４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン及び配列番号８４７のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、抗体は、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含み、その際、（ａ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３３３のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５２１のアミノ酸配列を含む、（ｂ）軽鎖可変ドメインは、配列番号８５０のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５２１のアミノ酸配列を含む、（ｃ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３３４のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５２２のアミノ酸配列を含む、（ｄ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３３５のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５２３のアミノ酸配列を含む、（ｅ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３３６のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５２４のアミノ酸配列を含む、（ｆ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３３７のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５２５のアミノ酸配列を含む、（ｇ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３３８のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５２６のアミノ酸配列を含む、（ｈ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３３９のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５２６のアミノ酸配列を含む、（ｉ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３４０のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５２７のアミノ酸配列を含む、（ｊ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３４１のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５２８のアミノ酸配列を含む、（ｋ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３４２のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５２９のアミノ酸配列を含む、（ｌ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３４３のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５３０のアミノ酸配列を含む、（ｍ）軽鎖可変ドメインは、配列番号８４３のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号８４５のアミノ酸配列を含む、（ｎ）軽鎖可変ドメインは、配列番号８４４のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号８４６のアミノ酸配列を含む、（ｏ）軽鎖可変ドメインは、配列番号８４４のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号８４７のアミノ酸配列を含む、（ｐ）軽鎖可変ドメインは、配列番号２１９のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号３９９のアミノ酸配列を含む、（ｑ）軽鎖可変ドメインは、配列番号２３０のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号４０９のアミノ酸配列を含む、（ｒ）軽鎖可変ドメインは、配列番号２５２のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号４１９のアミノ酸配列を含む、（ｓ）軽鎖可変ドメインは、配列番号２４１のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号４２９のアミノ酸配列を含む、（ｔ）軽鎖可変ドメインは、配列番号８４９のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号４２９のアミノ酸配列を含む、（ｕ）軽鎖可変ドメインは、配列番号２６３のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号４３９のアミノ酸配列を含む、（ｖ）軽鎖可変ドメインは、配列番号２７４のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号４４９のアミノ酸配列を含む、（ｗ）軽鎖可変ドメインは、配列番号２８５のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号４５９のアミノ酸配列を含む、（ｘ）軽鎖可変ドメインは、配列番号２８６のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号４６０のアミノ酸配列を含む、（ｙ）軽鎖可変ドメインは、配列番号２８７のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号４６１のアミノ酸配列を含む、（ｚ）軽鎖可変ドメインは、配列番号２９８のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号４２９のアミノ酸配列を含む、（ａａ）軽鎖可変ドメインは、配列番号２９９のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号４７１のアミノ酸配列を含む、（ｂｂ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３１０のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号４６１のアミノ酸配列を含む、（ｃｃ）軽鎖可変ドメインは、配列番号６７９のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号４８１のアミノ酸配列を含む、（ｄｄ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３１１のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号４９１のアミノ酸配列を含む、（ｅｅ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３２２のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５１１のアミノ酸配列を含む、（ｆｆ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３４４のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５３１のアミノ酸配列を含む、（ｇｇ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３５５のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号６３５のアミノ酸配列を含む、（ｈｈ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３６５のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５４１のアミノ酸配列を含む、（ｉｉ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３７６のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５５１のアミノ酸配列を含む、（ｊｊ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３８７のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５６１のアミノ酸配列を含む、（ｋｋ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３９８のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５７１のアミノ酸配列を含む、（ｌｌ）軽鎖可変ドメインは、配列番号７２４のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号７３１のアミノ酸配列を含む、（ｍｍ）軽鎖可変ドメインは、配列番号８０９のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号７３１のアミノ酸配列を含む、（ｎｎ）軽鎖可変ドメインは、配列番号７２５のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号７３２のアミノ酸配列を含む、（ｏｏ）軽鎖可変ドメインは、配列番号７２６のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号７３１のアミノ酸配列を含む、（ｐｐ）軽鎖可変ドメインは、配列番号７２６のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号８１７のアミノ酸配列を含む、（ｑｑ）軽鎖可変ドメインは、配列番号７２７のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号７３１のアミノ酸配列を含む、（ｒｒ）軽鎖可変ドメインは、配列番号７２８のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号７３３のアミノ酸配列を含む、（ｓｓ）軽鎖可変ドメインは、配列番号８１０のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号８１８のアミノ酸配列を含む、（ｔｔ）軽鎖可変ドメインは、配列番号８１１のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号７３３のアミノ酸配列を含む、（ｕｕ）軽鎖可変ドメインは、配列番号７２９のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号７３１のアミノ酸配列を含む、（ｖｖ）軽鎖可変ドメインは、配列番号８１２のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号８１９のアミノ酸配列を含む、（ｗｗ）軽鎖可変ドメインは、配列番号７２９のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号８２０のアミノ酸配列を含む、（ｘｘ）軽鎖可変ドメインは、配列番号７３０のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号７３１のアミノ酸配列を含む、（ｙｙ）軽鎖可変ドメインは、配列番号８１３のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号７３１のアミノ酸配列を含む、（ｚｚ）軽鎖可変ドメインは、配列番号８１４のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号８２２のアミノ酸配列を含む、（ａａａ）軽鎖可変ドメインは、配列番号８１５のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号８２４のアミノ酸配列を含む、または（ｂｂｂ）軽鎖可変ドメインは、配列番号８１６のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号８２５のアミノ酸配列を含む。
【００３８】
本開示の他の態様は、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離（例えば、モノクローナル）抗体であって、１Ａ７、３Ａ２、３Ｂ１０、６Ｇ１２、６Ｈ６、７Ａ９、７Ｂ３、８Ａ１、８Ｅ１０、８Ｆ１１、８Ｆ８、９Ｆ５、９Ｇ１、９Ｇ３、１０Ａ９、１０Ｃ１、１１Ａ８、１２Ｅ２、１２Ｆ９、１２Ｇ６、２Ｃ７、２Ｆ５、３Ｃ１、４Ｄ７、４Ｄ１１、６Ｃ１１、６Ｇ１２、７Ａ３、７Ｃ５、７Ｅ９、７Ｆ６、７Ｇ１、７Ｈ１、８Ｃ３、８Ｆ１０、１２Ａ１、１Ｅ９、２Ｃ５、３Ｃ５、４Ｃ１２、４Ｆ２、５Ａ２、６Ｂ３、７Ｄ１、７Ｄ９、１１Ｄ８、８Ａ１２、１０Ｅ７、１０Ｂ１１、１０Ｄ２、７Ｄ５、２Ａ７、３Ｇ１２、６Ｈ９、８Ｇ９、９Ｂ４、１０Ａ１、１１Ａ８、１２Ｆ３、２Ｆ８、１０Ｅ３、１Ｈ７、２Ｆ６、２Ｈ８、３Ａ７、７Ｅ５、７Ｆ８、１１Ｈ５、７Ｃ５、４Ｆ１１、１２Ｄ９、１Ｂ４ｖ１、１Ｂ４ｖ２、６Ｈ２、７Ｂ１１ｖ１、７Ｂ１１ｖ２、１８Ｄ８、１８Ｅ４ｖ１、１８Ｅ４ｖ２、２９Ｆ６ｖ１、２９Ｆ６ｖ２、４０Ｄ５ｖ１、４０Ｄ５ｖ２、４３Ｂ９、４４Ａ８ｖ１、４４Ａ８ｖ２、４４Ｂ４ｖ１、及び４４Ｂ４ｖ２からなる群から選択される抗体の軽鎖可変ドメイン、ならびに／または１Ａ７、３Ａ２、３Ｂ１０、６Ｇ１２、６Ｈ６、７Ａ９、７Ｂ３、８Ａ１、８Ｅ１０、８Ｆ１１、８Ｆ８、９Ｆ５、９Ｇ１、９Ｇ３、１０Ａ９、１０Ｃ１、１１Ａ８、１２Ｅ２、１２Ｆ９、１２Ｇ６、２Ｃ７、２Ｆ５、３Ｃ１、４Ｄ７、４Ｄ１１、６Ｃ１１、６Ｇ１２、７Ａ３、７Ｃ５、７Ｅ９、７Ｆ６、７Ｇ１、７Ｈ１、８Ｃ３、８Ｆ１０、１２Ａ１、１Ｅ９、２Ｃ５、３Ｃ５、４Ｃ１２、４Ｆ２、５Ａ２、６Ｂ３、７Ｄ１、７Ｄ９、１１Ｄ８、８Ａ１２、１０Ｅ７、１０Ｂ１１、１０Ｄ２、７Ｄ５、２Ａ７、３Ｇ１２、６Ｈ９、８Ｇ９、９Ｂ４、１０Ａ１、１１Ａ８、１２Ｆ３、２Ｆ８、１０Ｅ３、１Ｈ７、２Ｆ６、２Ｈ８、３Ａ７、７Ｅ５、７Ｆ８、１１Ｈ５、７Ｃ５、４Ｆ１１、１２Ｄ９、１Ｂ４ｖ１、１Ｂ４ｖ２、６Ｈ２、７Ｂ１１ｖ１、７Ｂ１１ｖ２、１８Ｄ８、１８Ｅ４ｖ１、１８Ｅ４ｖ２、２９Ｆ６ｖ１、２９Ｆ６ｖ２、４０Ｄ５ｖ１、４０Ｄ５ｖ２、４３Ｂ９、４４Ａ８ｖ１、４４Ａ８ｖ２、４４Ｂ４ｖ１、及び４４Ｂ４ｖ２からなる群から選択される抗体の重鎖可変ドメインを含む抗体に関する。
【００３９】
本開示の他の態様は、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離（例えば、モノクローナル）抗体であって、１Ａ７、３Ａ２、３Ｂ１０、６Ｇ１２、６Ｈ６、７Ａ９、７Ｂ３、８Ａ１、８Ｅ１０、８Ｆ１１、８Ｆ８、９Ｆ５、９Ｇ１、９Ｇ３、１０Ａ９、１０Ｃ１、１１Ａ８、１２Ｅ２、１２Ｆ９、１２Ｇ６、２Ｃ７、２Ｆ５、３Ｃ１、４Ｄ７、４Ｄ１１、６Ｃ１１、６Ｇ１２、７Ａ３、７Ｃ５、７Ｅ９、７Ｆ６、７Ｇ１、７Ｈ１、８Ｃ３、８Ｆ１０、１２Ａ１、１Ｅ９、２Ｃ５、３Ｃ５、４Ｃ１２、４Ｆ２、５Ａ２、６Ｂ３、７Ｄ１、７Ｄ９、１１Ｄ８、８Ａ１２、１０Ｅ７、１０Ｂ１１、１０Ｄ２、７Ｄ５、２Ａ７、３Ｇ１２、６Ｈ９、８Ｇ９、９Ｂ４、１０Ａ１、１１Ａ８、１２Ｆ３、２Ｆ８、１０Ｅ３、１Ｈ７、２Ｆ６、２Ｈ８、３Ａ７、７Ｅ５、７Ｆ８、１１Ｈ５、７Ｃ５、４Ｆ１１、１２Ｄ９、１Ｂ４ｖ１、１Ｂ４ｖ２、６Ｈ２、７Ｂ１１ｖ１、７Ｂ１１ｖ２、１８Ｄ８、１８Ｅ４ｖ１、１８Ｅ４ｖ２、２９Ｆ６ｖ１、２９Ｆ６ｖ２、４０Ｄ５ｖ１、４０Ｄ５ｖ２、４３Ｂ９、４４Ａ８ｖ１、４４Ａ８ｖ２、４４Ｂ４ｖ１、及び４４Ｂ４ｖ２からなる群から選択される抗体と本質的に同じＴＲＥＭ２エピトープに結合する抗体に関する。
【００４０】
本開示の他の態様は、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離（例えば、モノクローナル）抗体であって、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含み、その際、軽鎖可変ドメインは、（ａ）配列番号９〜２３、５８１、６９０〜６９４、７３４〜７３８、及び８２６〜８２８からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号９〜２３、５８１、６９０〜６９４、７３４〜７３８、及び８２６〜８２８からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号２４〜３３、６９５〜６９７、及び７３９〜７４３からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号２４〜３３、６９５〜６９７、及び７３９〜７４３からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、ならびに（ｃ）配列番号３４〜４７、５８２、５８３、６９８〜７０２、及び７４４〜７４６からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号３４〜４７、５８２、５８３、６９８〜７０２、及び７４４〜７４６からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み、重鎖可変ドメインは、（ａ）配列番号４８〜６５、５８４、７０３〜７０５、７４７〜７５４、及び８２９〜８３５からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号４８〜６５、５８４、７０３〜７０５、７４７〜７５４、及び８２９〜８３５からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号６６〜８４、５８５〜５８７、７０６〜７０８、７５５〜７６２、８３６〜８４２、及び８８８からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号６６〜８４、５８５〜５８７、７０６〜７０８、７５５〜７６２、８３６〜８４２、及び８８８からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、ならびに（ｃ）配列番号８５〜１０２、５８８、５８９、７０９、７１０、及び７６３〜７７０からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号８５〜１０２、５８８、５８９、７０９、７１０、及び７６３〜７７０からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む抗体に関する。本開示の他の態様は、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離（例えば、モノクローナル）抗体に関し、その際、抗ＴＲＥＭ２抗体は、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含み、その際、軽鎖可変ドメインは、ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、ＨＶＲ−Ｌ３を含み、重鎖可変ドメインは、ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３を含み、ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号８５〜１０２、５８８、５８９、７０９、７１０、及び７６３〜７７０からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号８５〜１０２、５８８、５８９、７０９、７１０、及び７６３〜７７０からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含む。
【００４１】
先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、ＴＲＥＭ２タンパク質への結合について、１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドと競合する。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、１つまたは複数のＴＲＭＥ２活性を誘導し、ＴＲＥＭ２タンパク質への１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドの結合によって誘導される１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を増強する。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、ＴＲＥＭ２タンパク質への１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドの結合を遮断することなく、１つまたは複数のＴＲＭＥ２活性を誘導する。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、ＴＲＥＭ２タンパク質への１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドの結合を遮断することなく、１つまたは複数のＴＲＭＥ２活性を誘導する。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を増強する。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、ＴＲＥＭ２タンパク質への結合について、１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドと競合しない。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、ＴＲＥＭ２タンパク質への１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドの結合を増強する。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、単離抗体の非存在下でＴＲＥＭ２タンパク質への１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドの結合によって誘導される１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性と比較して、ＴＲＥＭ２タンパク質への１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドの結合によって誘導される１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を増強する。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドと相乗作用して、１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を増強する。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、ＴＲＥＭ２の細胞表面クラスター化の非存在下で１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を増強する。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、ＴＲＥＭ２の細胞表面クラスター化を誘導または保持することによって、１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を増強する。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、１つまたは複数の免疫細胞上に発現されるＦｃ−ガンマ受容体によってクラスター化される。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、１つまたは複数の免疫細胞は、Ｂ細胞またはミクログリア細胞である。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、可溶性ＴＲＥＭ２のレベルを上昇させる、可溶性ＴＲＥＭ２の半減期を増加させる、またはその両方である。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、可溶性ＴＲＥＭ２のレベルは、ＴＲＥＭ２の血清レベル、ＴＲＥＭ２の脳脊髄液（ＣＳＦ）レベル、ＴＲＥＭ２の組織レベル、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、１つまたは複数の細胞においてＴＲＥＭ２のレベルを低下させる。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、ＴＲＥＭ２の細胞表面レベルを低下させる、ＴＲＥＭ２の細胞内レベルを低下させる、ＴＲＥＭ２の総レベルを低下させる、またはそれらの任意の組合せである。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、ＴＲＥＭ２分解、ＴＲＥＭ２切断、ＴＲＥＭ２内部移行、ＴＲＥＭ２シェディング、ＴＲＥＭ２発現の下方制御、またはそれらの任意の組合せを誘導する。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、１つまたは複数の細胞におけるＴＲＥＭ２のレベルは、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、ミクログリア、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、及びクッパー細胞からなる群から選択される初代細胞で、または細胞系で測定され、ＴＲＥＭ２の細胞レベルは、インビトロ細胞アッセイを利用して測定される。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、ＴＲＥＭ２タンパク質は、哺乳動物タンパク質またはヒトタンパク質である。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、ＴＲＥＭ２タンパク質は、野生型タンパク質である。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、ＴＲＥＭ２タンパク質は、天然に存在するバリアントである。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、ＴＲＥＭ２タンパク質は、ヒト樹状細胞、ヒトマクロファージ、ヒト単球、ヒト破骨細胞、ヒト皮膚ランゲルハンス細胞、ヒトクッパー細胞、ヒトミクログリア、またはそれらの任意の組合せの上に発現される。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性は、下記からなる群から選択される：（ａ）ＤＡＰ１２へのＴＲＥＭ２結合、（ｂ）ＴＲＥＭ２リン酸化、（ｃ）ＤＡＰ１２リン酸化、（ｄ）１つまたは複数のチロシンキナーゼの活性化（任意選択で、１つまたは複数のチロシンキナーゼは、Ｓｙｋキナーゼ、ＺＡＰ７０キナーゼ、またはその両方を含む）、（ｅ）ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）の活性化、（ｆ）プロテインキナーゼＢ（Ａｋｔ）の活性化、（ｇ）細胞形質膜へのホスホリパーゼＣ−ガンマ（ＰＬＣ−ガンマ）の動員、ＰＬＣ−ガンマの活性化、またはその両方、（ｈ）細胞形質膜へのＴＥＣ−ファミリーキナーゼｄＶａｖの動員、（ｉ）核因子−ｒＢ（ＮＦ−ｒＢ）の活性化、（ｊ）ＭＡＰＫシグナル伝達の阻害、（ｋ）Ｔ細胞を活性化するためのリンカー（ＬＡＴ）、Ｂ細胞を活性化するためのリンカー（ＬＡＢ）、またはその両方のリン酸化、（ｌ）ＩＬ−２誘導性チロシンキナーゼ（Ｉｔｋ）の活性化、（ｍ）ＩＦＮ−β、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ＣＤ８６、ＭＣＰ−１／ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＲ２、ＣＸＣＬ−１０、Ｇａｔａ３、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＩＬ−３３、ＬＩＦ、ＩＦＮ−ガンマ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＣＳＦ−１、ＯＰＮ、ＣＤ１１ｃ、ＧＭ−ＣＳＦ、���Ｌ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、及びＩＬ−２３からなる群から選択される１つまたは複数の炎症誘発性メディエーターの調節（任意選択で、調節は、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、樹状細胞、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、及びミクログリア細胞からなる群から選択される１つまたは複数の細胞で生じる）、
（ｎ）ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＴＧＦ−β、ＩＬ−１３、ＩＬ−３５、ＩＬ−１６、ＩＦＮ−α、ＩＬ−１Ｒα、ＶＥＧＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＹＭ、ＡＸＬ、ＦＬＴ１、及びＴＮＦまたはＩＬ−６のための可溶性受容体からなる群から選択される１つまたは複数の抗炎症性メディエーターの調節（任意選択で、調節は、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、樹状細胞、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、及びミクログリア細胞からなる群から選択される１つまたは複数の細胞で生じる）、（ｏ）発現が、炎症の誘導で増加する１つまたは複数の遺伝子の調節（任意選択で、１つまたは複数の遺伝子は、Ｆａｂｐ３、Ｆａｂｐ５、及びＬＤＲからなる群から選択される）、（ｐ）細胞外シグナル調節キナーゼ（ＥＲＫ）のリン酸化、（ｑ）マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、樹状細胞、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及びＭ２ミクログリア、ならびにそれらの任意の組合せからなる群から選択される１つまたは複数の細胞におけるＣ−Ｃケモカイン受容体７（ＣＣＲ７）の発現の調節、（ｒ）ＣＣＬ１９及びＣＣＬ２１発現細胞へのミクログリア細胞走化性の誘導、（ｓ）かく乱されたＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２依存性遺伝子発現の正常化、（ｔ）ＤＡＰ１２／ＴＲＥＭ２複合体へのＳｙｋ、ＺＡＰ７０、またはその両方の動員、（ｕ）１つまたは複数のＴＲＥＭ２依存性遺伝子の活性の上昇（任意選択で、１つまたは複数のＴＲＥＭ２依存性遺伝子は、活性化Ｔ細胞核内因子（ＮＦＡＴ）転写因子を含む）、（ｖ）樹状細胞、単球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及びＭ２ミクログリア、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、またはそれらの任意の組合せの成熟の増加、（ｗ）Ｔ細胞の機能を刺激または調節する樹状細胞、単球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及びＭ２ミクログリア、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、またはそれらの任意の組合せの能力の増加（任意選択で、Ｔ細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、調節性Ｔ細胞、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される１つまたは複数の細胞である）、（ｘ）抗原特異的Ｔ細胞の機能を刺激または調節する骨髄由来樹状細胞の能力の増強、その能力の正常化、またはその両方（任意選択で、抗原特異的Ｔ細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、調節性Ｔ細胞、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される１つまたは複数の細胞である）、（ｙ）破骨細胞産生の誘導、破骨細胞形成の速度の上昇、またはその両方、（ｚ）樹状細胞、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及びＭ２ミクログリア、またはそれらの任意の組合せの生存の増加、（ａａ）樹状細胞、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及びＭ２ミクログリア、またはそれらの任意の組合せの機能の増加、（ｂｂ）樹状細胞、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、単球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及びＭ２ミクログリア、またはそれらの任意の組合せによる食作用の増加、（ｃｃ）アポトーシスニューロンのクリアランス、神経組織デブリのクリアランス、非神経組織デブリのクリアランス、細菌または他の異物のクリアランス、
病原体のクリアランス、腫瘍細胞のクリアランス、またはそれらの任意の組合せからなる群から選択されるクリアランスのうちの１つまたは複数の種類の誘導（任意選択で、病原体は、アミロイドベータまたはそのフラグメント、Ｔａｕ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスチレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルソリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、及びグリシン−アラニン（ＧＡ）、グリシン−プロリン（ＧＰ）、グリシン−アルギニン（ＧＲ）、プロリン−アラニン（ＰＡ）、またはプロリン−アルギニン（ＰＲ）から構成されるジペプチドリピート（ＤＰＲペプチド）を含むリピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、アンチセンスＧＧＣＣＣＣ（Ｇ２Ｃ４）リピート伸長ＲＮＡからなる群から選択される）、（ｄｄ）アポトーシスニューロン、神経組織デブリ、非神経組織デブリ、細菌、他の異物、病原体、腫瘍細胞、またはそれらの任意の組合せの１つまたは複数の食作用の誘導（任意選択で、病原体は、アミロイドベータまたはそのフラグメント、Ｔａｕ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスチレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルソリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、及びグリシン−アラニン（ＧＡ）、グリシン−プロリン（ＧＰ）、グリシン−アルギニン（ＧＲ）、プロリン−アラニン（ＰＡ）、またはプロリン−アルギニン（ＰＲ）から構成されるジペプチドリピート（ＤＰＲペプチド）を含むリピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、アンチセンスＧＧＣＣＣＣ（Ｇ２Ｃ４）リピート伸長ＲＮＡからなる群から選択される）、（ｅｅ）ＣＤ８３、ＣＤ８６  ＭＨＣクラスＩＩ、ＣＤ４０、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される１つまたは複数の刺激分子の発現の増加（任意選択で、ＣＤ４０は、樹状細胞、単球、マクロファージ、またはそれらの任意の組合せの上に発現され、任意選択で、樹状細胞は、骨髄由来樹状細胞を含む）、（ｆｆ）ＩＦＮ−β、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＣＤ８６、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ＭＣＰ−１／ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＲ２、ＣＸＣＬ−１０、Ｇａｔａ３、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＩＬ−３３、ＬＩＦ、ＩＦＮ−ガンマ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＣＳＦ−１、ＯＰＮ、ＣＤ１１ｃ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、及びＩＬ−２３からなる群から選択される１つまたは複数の炎症誘発性メ��ィエーターの分泌の調節（任意選択で、調節は、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、樹状細胞、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、及びミクログリア細胞からなる群から選択される１つまたは複数の細胞で生じる）、（ｇｇ）ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＴＧＦ−β、ＩＬ−１３、ＩＬ−３５、ＩＬ−１６、ＩＦＮ−アルファ、ＩＬ−１Ｒａ、ＶＥＧＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＹＭ、ＡＸＬ、ＦＬＴ１、及びＴＮＦまたはＩＬ−６のための可溶性受容体からなる群から選択される１つまたは複数の抗炎症性メディエーターの分泌の調節（任意選択で、調節は、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、樹状細胞、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、及びミクログリア細胞からなる群から選択される１つまたは複数の細胞で生じる）、（ｈｈ）Ｃ１ｑａ、Ｃ１ｑＢ、Ｃ１ｑＣ、Ｃ１ｓ、Ｃ１Ｒ、Ｃ４、Ｃ２、Ｃ３、ＩＴＧＢ２、ＨＭＯＸ１、ＬＡＴ２．ＣＡＳＰ１、ＣＳＴＡ、ＶＳＩＧ４、ＭＳ４Ａ４Ａ、Ｃ３ＡＲ１、ＧＰＸ１、ＴｙｒｏＢＰ、ＡＬＯＸ５ＡＰ、ＩＴＧＡＭ、ＳＬＣ７Ａ７、ＣＤ４、ＩＴＧＡＸ、ＰＹＣＡＲＤ、及びＶＥＧＦからなる群から選択される１つまたは複数のタンパク質の発現の調節、（ｉｉ）記憶の増大、ならびに（ｊｊ）認知障害の減少。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性は、下記からなる群から選択される：（ａ）ＤＡＰ１２へのＴＲＥＭ２結合、（ｂ）ＤＡＰ１２リン酸化、（ｃ）Ｓｙｋキナーゼの活性化、（ｄ）ＩＦＮ−β、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ＣＤ８６、ＭＣＰ−１／ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＲ２、ＣＸＣＬ−１０、Ｇａｔａ３、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＩＬ−３３、ＬＩＦ、ＩＦＮ−ガンマ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＣＳＦ−１、ＯＰＮ、ＣＤ１１ｃ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、及びＩＬ−２３からなる群から選択される１つまたは複数の炎症誘発性メディエーターの調節（任意選択で、調節は、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、樹状細胞、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、及びミクログリア細胞からなる群から選択される１つまたは複数の細胞で生じる）、（ｅ）ＤＡＰ１２／ＴＲＥＭ２複合体へのＳｙｋの動員、（ｆ）１つまたは複数のＴＲＥＭ２依存性遺伝子の活性の増加（任意選択で、１つまたは複数のＴＲＥＭ２依存性遺伝子は、活性化Ｔ細胞核内因子（ＮＦＡＴ）転写因子を含む）、（ｇ）樹状細胞、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及びＭ２ミクログリア、またはそれらの任意の組合せの生存の増加、（ｈ）ＣＤ８３、ＣＤ８６  ＭＨＣクラスＩＩ、ＣＤ４０、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される１つまたは複数の刺激分子の発現の調節（任意選択で、ＣＤ４０は、��状細胞、単球、マクロファージ、またはそれらの任意の組合せの上に発現され、任意選択で、樹状細胞は、骨髄由来樹状細胞を含む）、（ｉ）記憶の増加、及び（ｊ）認知障害の減少。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、ＩｇＧクラス、ＩｇＭクラス、またはＩｇＡクラスのものである。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、ＩｇＧクラスのものであり、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４アイソタイプを有する。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ２アイソタイプを有する。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧ２定常領域を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ２定常領域は、Ｆｃ領域を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、Ｆｃ受容体への結合とは無関係に、１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を増強する。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、阻害性Ｆｃ受容体に結合する。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、阻害性Ｆｃ受容体は、阻害性Ｆｃ−ガンマ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＩＩＢ）である。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、（ａ）単離抗体は、ヒトまたはマウスＩｇＧ１アイソタイプを有し、１つまたは複数のアミノ酸置換をＦｃ領域に、Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ、Ｄ２７０Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｌ３２８Ｅ、Ｐ２３８Ｄ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ｅ２３３Ｄ、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ、Ａ３３０Ｒ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される残基位置で含むか（残基のナンバリングは、ＥＵナンバリングによる）、またはアミノ酸欠失をＦｃ領域に、グリシン２３６に対応する位置で含む、（ｂ）単離抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプを有し、ＩｇＧ２アイソタイプ重鎖定常ドメイン１（ＣＨ１）及びヒンジ領域を含み、任意選択で、ＩｇＧ２アイソタイプＣＨ１及びヒンジ領域は、ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰ  ＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥ  ＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫ  ＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳ  ＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳ  ＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴ  ＶＰＳＳＮＦＧＴＱＴ  ＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳ  ＮＴＫＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号８８６）のアミノ酸配列を含み、任意選択で、抗体Ｆｃ領域は、Ｓ２６７Ｅアミノ酸置換、Ｌ３２８Ｆアミノ酸置換、もしくはその両方、及び／またはＮ２９７ＡもしくはＮ２９７Ｑアミノ酸置換を含む（残基のナンバリングは、ＥＵナンバリングによる）、（ｃ）単離抗体は、ＩｇＧ２アイソタイプを有し、１つまたは複数のアミノ酸置換をＦｃ領域に、Ｐ２３８Ｓ、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｈ２６８Ａ、Ｈ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｃ２１４Ｓ、Ｃ２３２Ｓ、Ｃ２３３Ｓ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４��、Ｔ２５６Ｅ、Ｈ２６８Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ａ３３０Ｌ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される残基位置で含む（残基のナンバリングは、ＥＵナンバリングによる）、（ｄ）単離抗体は、ヒトまたはマウスＩｇＧ４アイソタイプを有し、１つまたは複数のアミノ酸置換をＦｃ領域に、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３６Ｅ、Ｓ２６７Ｅ、Ｅ３１８Ａ、Ｌ３２８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ａ／Ｆ２３４Ａ、Ｓ２２８Ｐ、Ｓ２４１Ｐ、Ｌ２４８Ｅ、Ｔ３９４Ｄ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｌ２３５Ｅ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される残基位置で含む（残基のナンバリングは、ＥＵナンバリングによる）、または（ｅ）単離抗体は、ハイブリッドＩｇＧ２／４アイソタイプを有し、任意選択で、抗体は、ヒトＩｇＧ２のアミノ酸１１８〜２６０及びヒトＩｇＧ４のアミノ酸２６１〜４４７を含むアミノ酸配列を含む（残基のナンバリングは、ＥＵ、またはＫａｂａｔナンバリングによる）。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する不活性抗体である。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合するアンタゴニスト抗体である。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、ＴＲＥＭ２タンパク質は、哺乳動物タンパク質またはヒトタンパク質である。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、ＴＲＥＭ２タンパク質は、野生型タンパク質である。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、ＴＲＥＭ２タンパク質は、天然に存在するバリアントである。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、ＴＲＥＭ２タンパク質は、疾患バリアントである。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を阻害する。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性は、下記からなる群から選択される：（ａ）ＤＡＰ１２へのＴＲＥＭ２結合、（ｂ）ＴＲＥＭ２リン酸化、（ｃ）ＤＡＰ１２リン酸化、（ｄ）１つまたは複数のチロシンキナーゼの活性化（任意選択で、１つまたは複数のチロシンキナーゼは、Ｓｙ
ｋキナーゼ、ＺＡＰ７０キナーゼ、またはその両方を含む）、（ｅ）ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）の活性化、（ｆ）プロテインキナーゼＢ（Ａｋｔ）の活性化、（ｇ）細胞形質膜へのホスホリパーゼＣ−ガンマ（ＰＬＣ−ガンマ）の動員、ＰＬＣ−ガンマの活性化、またはその両方、（ｈ）細胞形質膜へのＴＥＣ−ファミリーキナーゼｄＶａｖの動員、（ｉ）核因子−ｒＢ（ＮＦ−ｒＢ）の活性化、（ｊ）ＭＡＰＫシグナル伝達の阻害、（ｋ）Ｔ細胞を活性化するためのリンカー（ＬＡＴ）、Ｂ細胞を活性化するためのリンカー（ＬＡＢ）、またはその両方のリン酸化、（ｌ）ＩＬ−２誘導性チロシンキナーゼ（Ｉｔｋ）の活性化、（ｍ）ＩＦＮ−β、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ＣＤ８６、ＭＣＰ−１／ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＲ２、ＣＸＣＬ−１０、Ｇａｔａ３、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＩＬ−３３、ＬＩＦ、ＩＦＮ−ガンマ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＣＳＦ−１、ＯＰＮ、ＣＤ１１ｃ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、及びＩＬ−２３からなる群から選択される１つまたは複数の炎症誘発性メディエーターの調節（任意選択で、調節は、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、
Ｍ２マクロファージ、樹状細胞、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、及びミクログリア細胞からなる群から選択される１つまたは複数の細胞で生じる）、（ｎ）ＩＬ−４、ＩＬ−１０ＴＧＦ−β、ＩＬ−１３、ＩＬ−３５、ＩＬ−１６、ＩＦＮ−アルファ、ＩＬ−１Ｒａ、ＶＥＧＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＹＭ、ＡＸＬ、ＦＬＴ１及びＴＮＦまたはＩＬ−６のための可溶性受容体からなる群から選択される１つまたは複数の抗炎症性メディエーターの調節（任意選択で、調節は、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、樹状細胞、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、及びミクログリア細胞からなる群から選択される１つまたは複数の細胞で生じる）、（ｏ）発現が、炎症の誘導で増加する１つまたは複数の遺伝子の調節（任意選択で、１つまたは複数の遺伝子は、Ｆａｂｐ３、Ｆａｂｐ５、及びＬＤＲからなる群から選択される）、（ｐ）細胞外シグナル調節キナーゼ（ＥＲＫ）のリン酸化、（ｑ）マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、樹状細胞、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及びＭ２ミクログリア、ならびにそれらの任意の組合せからなる群から選択される１つまたは複数の細胞におけるＣ−Ｃケモカイン受容体７（ＣＣＲ７）の発現の増加、（ｒ）ＣＣＬ１９及びＣＣＬ２１発現細胞へのミクログリア細胞走化性の誘導、（ｓ）かく乱されたＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２依存性遺伝子発現の正常化、（ｔ）ＤＡＰ１２／ＴＲＥＭ２複合体へのＳｙｋ、ＺＡＰ７０、またはその両方の動員、（ｕ）１つまたは複数のＴＲＥＭ２依存性遺伝子の活性の上昇（任意選択で、１つまたは複数のＴＲＥＭ２依存性遺伝子は、活性化Ｔ細胞核内因子（ＮＦＡＴ）転写因子を含む）、（ｖ）免疫抑制樹状細胞、免疫抑制マクロファージ、免疫抑制好中球、免疫抑制ＮＫ細胞、骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ、腫瘍関連サプレッサー好中球、腫瘍関連サプレッサーＮＫ細胞、調節性Ｔ細胞、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される１つまたは複数の細胞の増殖、成熟、遊走、分化、または機能性の促進、（ｗ）免疫抑制樹状細胞、免疫抑制マクロファージ、免疫抑制好中球、免疫抑制ＮＫ細胞、骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ、腫瘍関連サプレッサー好中球、腫瘍関連サプレッサーＮＫ細胞、調節性Ｔ細胞、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される１つまたは複数の細胞の腫瘍への浸潤の増強、（ｘ）腫瘍、末梢血、リンパ臓器、またはそれらの任意の組合せにおける腫瘍促進性骨髄免疫抑制または腫瘍促進性顆粒球免疫抑制細胞の数の増大、（ｙ）骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の腫瘍促進活性の増強、（ｚ）腫瘍または末梢血における腫瘍促進性サイトカインの発現の増加（任意選択で、腫瘍促進性サイトカインは、ＴＧＦ−ベータ、ＩＬ−１０、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される）、（ａａ）腫瘍促進性ＦｏｘＰ３＋調節性Ｔリンパ球の腫瘍浸潤の増加、（ｂｂ）腫瘍死滅能を有する腫瘍特異的Ｔリンパ球の���性化の減少、（ｃｃ）腫瘍死滅能を有する腫瘍特異的Ｔリンパ球、腫瘍死滅能を有する腫瘍特異的ＮＫ細胞、免疫応答を増強する能力を有する腫瘍特異的Ｂリンパ球、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される１つまたは複数の細胞の浸潤の減少、（ｄｄ）腫瘍体積の増加、（ｅｅ）腫瘍成長速度の上昇、（ｆｆ）転移の増加、（ｇｇ）腫瘍再発率の上昇、（ｈｈ）抗腫瘍Ｔ細胞応答を調節する１つまたは複数の免疫療法の有効性の低下（任意選択で、１つまたは複数の免疫療法は、ＰＤ１／ＰＤＬ１遮断、ＣＴＬＡ−４遮断、及びがんワクチンからなる群から選択される）、（ｉｉ）ＰＬＣγ／ＰＫＣ／カルシウム可動化の阻害、ならびに（ｊｊ）ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ、Ｒａｓ／ＭＡＰＫシグナル伝達の阻害。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性は、下記からなる群から選択される：（ａ）ＤＡＰ１２へのＴＲＥＭ２結合、（ｂ）ＤＡＰ１２リン酸化、（ｃ）Ｓｙｋキナーゼの活性化、（ｄ）ＤＡＰ１２／ＴＲＥＭ２複合体へのＳｙｋの動員、（ｅ）１つまたは複数のＴＲＥＭ２依存性遺伝子の活性の増加（任意選択で、１つまたは複数のＴＲＥＭ２依存性遺伝子は、活性化Ｔ細胞核内因子（ＮＦＡＴ）転写因子を含む）、（ｆ）腫瘍体積の増加、及び（ｇ）腫瘍成長速度の上昇。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、ＴＲＥＭ２と１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドとの間の相互作用を阻害する、ＴＲＥＭ２シグナル伝達を阻害する、またはその両方である。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、Ｆｃ−ガンマ受容体（ＦｃγＲ）に結合し得る。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４アイソタイプを有する。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、（ａ）抗体は、ヒトまたはマウスＩｇＧ１アイソタイプを有し、１つまたは複数のアミノ酸置換をＦｃ領域に、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｄ２７０Ａ、Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｐ２３８Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｐ２３８Ａ、Ａ３２７Ｑ、Ａ３２７Ｇ、Ｐ３２９Ａ、Ｋ３２２Ａ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、Ｔ３９４Ｄ、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｌ３２８Ｅ、Ｐ２３８Ｄ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ｅ２３３Ｄ、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ、Ａ３３０Ｒ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される残基位置で含むか（残基のナンバリングは、ＥＵナンバリングによる）、またはアミノ酸欠失をＦｃ領域に、グリシン２３６に対応する位置で含む、（ｂ）抗体は、ＩｇＧ２アイソタイプを有し、１つまたは複数のアミノ酸置換をＦｃ領域に、Ｐ２３８Ｓ、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｈ２６８Ａ、Ｈ２６８Ｑ、Ｈ２６８Ｅ、Ｖ３０９Ｌ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｃ２３２Ｓ、Ｃ２３３Ｓ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される残基位置で含む（残基のナンバリングは、ＥＵナンバリングによる）、または（ｃ）抗体は、ＩｇＧ４アイソタイプを有し、１つまたは複数のアミノ酸置換をＦｃ領域に、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ａ／Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｅ３１８Ａ、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３６Ｅ、Ｓ２４１Ｐ、Ｌ２４８Ｅ、Ｔ３９４Ｄ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される残基位置で含む（残基のナンバリングは、ＥＵナンバリングによる）。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、（ａ）Ｆｃ領域はさらに、１つまたは複数の追加のアミノ酸置換をＡ３３０Ｌ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される位置に含む（残基のナンバリングは、ＥＵナンバリングによる）、（ｂ）Ｆｃ領域はさらに、１つまたは複数の追加のアミノ酸置換をＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ，Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される位置に含む（残基のナンバリングは、ＥＵナンバリングによる）、または（ｃ）Ｆｃ領域はさらに、ＥＵナンバリングによるとＳ２２８Ｐアミノ酸置換を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、ヒトＴＲＥＭ２、ヒトＴＲＥＭ２の天然に存在するバリアント、及びヒトＴＲＥＭ２の疾患バリアントからなる群から選択される１つまたは複数のヒトタンパク質に結合する抗体フラグメントであり、任意選択で、抗体フラグメントは、ヒトＴＲＥＭ２、ヒトＴＲＥＭ２の天然に存在するバリアント、及びヒトＴＲＥＭ２の疾患バリアントからなる群から選択される１つまたは複数のヒトタンパク質に結合する第２の抗体フラグメントに架橋されている。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、ＦｖまたはｓｃＦｖフラグメントである。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドは、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞、アポトーシス細胞、核酸、
陰イオン性脂質、陰イオン性脂質、ＡＰＯＥ、ＡＰＯＥ２、ＡＰＯＥ３、ＡＰＯＥ４、陰イオン性ＡＰＯＥ、陰イオン性ＡＰＯＥ２、陰イオン性ＡＰＯＥ３、陰イオン性ＡＰＯＥ４、脂質化ＡＰＯＥ、脂質化ＡＰＯＥ２、脂質化ＡＰＯＥ３、脂質化ＡＰＯＥ４、双性イオン性脂質、負の電荷をもつリン脂質、ホスファチジルセリン、スルファチド、ホスファチジルコリン、スフィンゴミエリン、膜リン脂質、脂質化タンパク質、プロテオ脂質、脂質化ペプチド、脂質化アミロイドベータペプチド、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、マウス抗体である。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、ヒト化抗体、二重特異性抗体、多価抗体、コンジュゲート抗体、またはキメラ抗体である。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体である。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、第１の抗原及び第２の抗原を認識する二重特異性抗体である。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、第１の抗原は、ヒトＴＲＥＭ２またはその天然に存在するバリアントであり、第２の抗原は、（ａ）血液脳関門を通過する輸送を促進する抗原、（ｂ）トランスフェリン受容体（ＴＲ）、インスリン受容体（ＨＩＲ）、インスリン様成長因子受容体（ＩＧＦＲ）、低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質１及び２（ＬＰＲ−１及び２）、ジフテリア毒素受容体、ＣＲＭ１９７、ラマ単一ドメイン抗体、ＴＭＥＭ  ３０（Ａ）、タンパク質形質導入ドメイン、ＴＡＴ、Ｓｙｎ−Ｂ、ペネトラチン、ポリアルギニンペプチド、アンジオペプチド（ａｎｇｉｏｐｅｐｔｉｄｅ）、ならびにＡＮＧ１００５からなる群から選択される血液脳関門を通過する輸送を促進する抗原、（ｃ）病原ペプチドもしくはタンパク質、または病原核酸からなる群から選択される病原体（病原核酸は、アンチセンスＧＧＣＣＣＣ（Ｇ２Ｃ４）リピート伸長ＲＮＡであり、病原タンパク質は、アミロイドベータ、オリゴマーアミロイドベータ、アミロイドベータ斑、アミロイド前駆体タンパク質またはそのフラグメント、Ｔａｕ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（染色体９オープンリーディングフレーム７２）、ｃ９ＲＡＮタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスチレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルソリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、リピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）リピートペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）リピートペプチド、グリシン−アルギ���ン（ＧＲ）リピートペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）リピートペプチド、ユビキチン、及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）リピートペプチドからなる群から選択される）、（ｄ）免疫細胞上に発現されるリガンド及び／またはタンパク質（リガンド及び／またはタンパク質は、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ３、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ−３、及びホスファチジルセリンからなる群から選択される）、ならびに（ｅ）１つまたは複数の腫瘍細胞上に発現されるタンパク質、脂質、多糖、または糖脂質。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、病原ペプチド、病原タンパク質、アミロイドベータ、オリゴマーアミロイドベータ、アミロイドベータ斑、アミロイド前駆体タンパク質またはそのフラグメント、Ｔａｕ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（染色体９オープンリーディングフレーム７２）、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスチレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルソリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、リピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）リピートペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）リピートペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）リピートペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）リピートペプチド、ユビキチン、及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）リピートペプチド、ならびにそれらの任意の組合せからなる群から選択される病原体と特異的に結合する１つまたは複数の抗体と、またはＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ３、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ−３、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、ＣＤ３３、Ｓｉｇｌｅｃ−５、Ｓｉｇｌｅｃ−９、Ｓｉｇｌｅｃ−１１、ホスファチジルセリン、病原核酸、アンチセンスＧＧＣＣＣＣ（Ｇ２Ｃ４）リピート伸長ＲＮＡ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される免疫調節タンパク質と結合する１つまたは複数の抗体と組み合わせて使用される。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、個体に投与した場合、記憶を増加させる、認知障害を減少させる、またはその両方である。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、ヒトＴＲＥＭ２及びマウスＴＲＥＭ２の両方に特異的に結合する。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態���は、抗体は、ヒトＴＲＥＭ２及びマウスＴＲＥＭ２について、約１２．８ｎＭ〜約１．２ｎＭの範囲である、または１．２ｎＭ未満である解離定数（ＫＤ）を有する。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、ヒトＴＲＥＭ２について、約１２．８ｎＭ〜約２．９ｎＭの範囲である、または２．９ｎＭ未満である解離定数（ＫＤ）を有する。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、マウスＴＲＥＭ２について、約１０．４ｎＭ〜約１．２ｎＭの範囲である、または１．２ｎＭである解離定数（ＫＤ）を有する。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、ＫＤは、約４℃の温度で決定される。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、先天免疫細胞の増殖を阻害しない。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、１ｎＭ未満のＫＤで初代免疫細胞に結合する。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、１％以上の血中抗体濃度である程度まで、脳、もしくは脳脊髄液（ＣＳＦ）、またはその両方に蓄積する。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、２％以上の血中抗体濃度である程度まで、脳、もしくは脳脊髄液（ＣＳＦ）、またはその両方に蓄積する。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、３％以上の血中抗体濃度である程度まで、脳、もしくは脳脊髄液（ＣＳＦ）、またはその両方に蓄積する。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、４％以上の血中抗体濃度である程度まで、脳、もしくは脳脊髄液（ＣＳＦ）、またはその両方に蓄積する。
【００４２】
本開示の他の態様は、先行実施形態のいずれか１つの抗体をコードする核酸配列を含む単離核酸に関する。本開示の他の態様は、先行実施形態のいずれかの核酸を含むベクターに関する。本開示の他の態様は、先行実施形態のいずれかのベクターを含む単離宿主細胞に関する。本開示の他の態様は、ＴＲＥＭ２に結合する抗体を生産する方法であって、抗体が産生されるように先行実施形態のいずれかの宿主細胞を培養することを含む方法に関する。一部の実施形態では、方法はさらに、細胞によって産生される抗体を回収することを含む。本開示の他の態様は、先行実施形態のいずれかの方法によって生産される、ＴＲＥＭ２に結合する単離（例えば、モノクローナル）抗体に関する。本開示の他の態様は、先行実施形態のいずれかの抗体及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物に関する。
【００４３】
本開示の他の態様は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト−ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウオパチー病、那須−ハコラ病、卒中、急性外傷、慢性外傷、認知障害、記憶喪失、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満、マラリア、本態性振戦、中枢神経系狼瘡、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多発性萎縮症、シャイ−ドレーガー症候群、進行性核上麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫性障害、サルコイドーシス、加齢に伴う病気、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身性感染症、狼瘡、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨のパジェット病、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性赤血球増加症、本態性血小板血症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化、骨髄由来腫瘍、甲状腺癌、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルージ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、Ｉ型ＨＩＶ、ならびにＨａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａからなる群から選択される疾患、障害、または損傷を予防する、それらのリスクを減少させる、またはそれを有する個体を治療する方法であって、それを必要とする個体に、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離（例えば、モノクローナル）抗体の治療有効量を投与することを含む方法に関する。本開示の他の態様は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト−ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウオパチー病、那須−ハコラ病、卒中、急性外傷、慢性外傷、認知障害、記憶喪失、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満、マラリア、本態性振戦、中枢神経系狼瘡、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多発性萎縮症、シャイ−ドレーガー症候群、進行性核上麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫性障害、サルコイドーシス、加齢に伴う病気、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身性感染症、狼瘡、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨のパジェット病、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホ��キンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性赤血球増加症、本態性血小板血症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化、骨髄由来腫瘍、甲状腺癌、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルージ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、Ｉ型ＨＩＶ、ならびにＨａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａからなる群から選択される疾患、障害、または損傷を予防する、それらのリスクを減少させる、またはそれを有する個体を治療する際に使用するための、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離（例えば、モノクローナル）抗体に関する。本開示の他の態様は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト−ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウオパチー病、那須−ハコラ病、卒中、急性外傷、慢性外傷、認知障害、記憶喪失、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満、マラリア、本態性振戦、中枢神経系狼瘡、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多発性萎縮症、シャイ−ドレーガー症候群、進行性核上麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫性障害、サルコイドーシス、加齢に伴う病気、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身性感染症、狼瘡、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨のパジェット病、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性赤血球増加症、本態性血小板血症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化、骨髄由来腫瘍、甲状腺癌、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルージ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、Ｉ型ＨＩＶ、ならびにＨａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａからなる群から選択される疾患、障害、または損傷を予防する、それらのリスクを減少させる、またはそれを有する個体を治療するための医薬品の製造における、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離（例えば、モノクローナル）抗体の使用に関する。本開示の他の態様は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、那須−ハコラ病、認知障害、記憶喪失、脊髄損傷、外傷性脳損傷、多発性硬化症、慢性大腸炎、潰瘍性大腸炎及びがんからなる群から選択される疾患、障害、または損傷を予防する、それらのリスクを減少させる、またはそれを有する個体を治療する方法であって、それを必要とする個体に、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離（例えば、モノクローナル）抗体の治療有効量を投与することを含む方法に関する。本開示の他の態様は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、那須−ハコラ病、認知障害、記憶喪失、脊髄損傷、外傷性脳損傷、多発性硬化症、慢性大腸炎、潰瘍性大腸炎及びがんからなる群から選択される疾患、障害、または損傷を予防する、それらのリスクを減少させる、またはそれを有する個体を治療する際に使用するための、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離（例えば、モノクローナル）抗体に関する。本開示の他の態様は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、那須−ハコラ病、認知障害、記憶喪失、脊髄損傷、外傷性脳損傷、多発性硬化症、慢性大腸炎、潰瘍性大腸炎及びがんからなる群から選択される疾患、障害、または損傷を予防する、それらのリスクを減少させる、またはそれを有する個体を治療するための医薬品の製造における、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離（例えば、モノクローナル）抗体の使用に関する。一部の実施形態では、単離抗体は、（ａ）アゴニスト抗体、（ｂ）不活性抗体、または（ｃ）アンタゴニスト抗体である。一部の実施形態では、単離抗体は、先行実施形態のいずれかの抗体である。一部の実施形態では、疾患、障害、または損傷は、アルツハイマー病である。一部の実施形態では、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離抗体は、１つまたは複数の炎症性メディエーターの発現を増加させ、その際、１つまたは複数の炎症性メディエーターは、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＹＭ−１、ＣＤ８６、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ５、ＣＣＲ２、ＣＸＣＬ１０、Ｇａｔａ３、Ｒｏｒｃ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される。一部の実施形態では、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離抗体は、１つまたは複数の炎症性メディエーターの発現を減少させ、その際、１つまたは複数の炎症性メディエーターは、ＦＬＴ１、ＯＰＮ、ＣＳＦ−１、ＣＤ１１ｃ、ＡＸＬ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される。一部の実施形態では、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離抗体は、個体においてＡベータペプチドのレベルを低下させる。一部の実施形態では、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離抗体は、個体の脳において、ＣＤ１１ｂ＋ミクログリア細胞の数を増加させる。一部の実施形態では、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離抗体は、個体の記憶を増加させる。一部の実施形態では、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離抗体は、個体において認知障害を減少させる。一部の実施形態では、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離抗体は、個体において運動協調性を増加させる。一部の実施形態では、方法はさらに、個体に、阻害チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体、及び／または別の標準もしくは調査的抗がん療法を投与することを含む。一部の実施形態では、阻害チェックポイ��ト分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体を、単離抗体と組み合わせて投与する。一部の実施形態では、阻害チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＰＤ−Ｌ２抗体、抗ＰＤ−１抗体、抗Ｂ７−Ｈ３抗体、抗Ｂ７−Ｈ４抗体、及び抗ＨＶＥＭ抗体、抗Ｂリンパ球及びＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）抗体、抗キラー阻害性受容体（ＫＩＲ）抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗ＴＩＭ３抗体、
抗Ａ２ＡＲ抗体、抗ＬＡＧ−３抗体、抗ホスファチジルセリン抗体、抗ＣＤ２７抗体、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される。一部の実施形態では、標準または調査的抗がん療法は、放射線療法、細胞傷害性化学療法、標的療法、ホルモン療法、イマチニブ（Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標））、トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））、ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））、オファツムマブ（Ａｒｚｅｒｒａ（登録商標））、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）、ＭａｂＴｈｅｒａ（登録商標）、Ｚｙｔｕｘ（登録商標））、冷凍療法、アブレーション、高周波アブレーション、養子細胞移入（ＡＣＴ）、キメラ抗原受容体Ｔ細胞移入（ＣＡＲ−Ｔ）、ワクチン療法、及びサイトカイン療法からなる群から選択される１つまたは複数の療法である。一部の実施形態では、方法はさらに、個体に、阻害性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１つの抗体を投与することを含む。一部の実施形態では、阻害性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１つの抗体を、単離抗体と組み合わせて投与する。一部の実施形態では、阻害性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１つの抗体は、抗ＣＣＬ２抗体、抗ＣＳＦ−１抗体、抗ＩＬ−２抗体、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される。一部の実施形態では、方法はさらに、個体に、刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する少なくとも１つのアゴニスト抗体を投与することを含む。一部の実施形態では、刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する少なくとも１つのアゴニスト抗体を、単離抗体と組み合わせて投与する。一部の実施形態では、刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する少なくとも１つのアゴニスト抗体は、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体、アゴニスト抗ＯＸ４０抗体、アゴニスト抗ＩＣＯＳ抗体、アゴニスト抗ＣＤ２８抗体、アゴニスト抗ＣＤ１３７／４−１ＢＢ抗体、アゴニスト抗ＣＤ２７抗体、アゴニスト抗グルココルチコイド誘導性ＴＮＦＲ関連タンパク質ＧＩＴＲ抗体、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される。一部の実施形態では、方法はさらに、個体に、少なくとも１つの刺激性サイトカインを投与することを含む。一部の実施形態では、少なくとも１つの刺激性サイトカインを、単離抗体と組み合わせて投与する。一部の実施形態では、少なくとも１つの刺激性サイトカインは、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１０、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ケモカインタンパク質ファミリーのＴＧＦ−ベータメンバー、ＩＬ２０ファミリーメンバー、ＩＬ−３３、ＬＩＦ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＴＧＦ−ベータ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−８、ＩＬ−２３、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＬ−２、ＩＬ−１８、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される。
【００４４】
本開示の他の態様は、ＴＲＥＭ２タンパク質への１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドの結合によって誘導される１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を増強することを、それを必要とする個体において行う方法であって、個体に、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離（例えば、モノクローナル）抗体の治療有効量を投与することを含む方法に関する。本開示の他の態様は、ＴＲＥＭ２タンパク質への１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドの結合によって誘導される１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を増強することを、それを必要とする個体において行う際に使用するための、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離（例えば、モノクローナル）抗体に関する。本開示の他の態様は、ＴＲＥＭ２タンパク質への１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドの結合によって誘導される１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を増強することを、それを必要とする個体において行うための医薬品の製造における、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離（例えば、モノクローナル）抗体の使用に関する。一部の実施形態では、単離抗体は、先行実施形態のいずれかの抗体である。
【００４５】
本開示の他の態様は、１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を誘導することを、それを必要とする個体において行う方法であって、個体に、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離（例えば、モノクローナル）抗体の治療有効量を投与することを含む方法に関する。本開示の他の態様は、１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を誘導することを、それを必要とする個体において行う際に使用するための、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離（例えば、モノクローナル）抗体に関する。本開示の他の態様は、１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を誘導することを、それを必要とする個体において行うための医薬品の製造における、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離（例えば、モノクローナル）抗体の使用に関する。一部の実施形態では、単離抗体は、先行実施形態のいずれかの抗体である。
【００４６】
本開示の他の態様は、１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を誘導する、及びＴＲＥＭ２タンパク質への１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドの結合によって誘導される１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を増強することを、それを必要とする個体において行う方法であって、個体に、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離（例えば、モノクローナル）抗体の治療有効量を投与することを含む方法に関する。本開示の他の態様は、１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を誘導する、及びＴＲＥＭ２タンパク質への１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドの結合によって誘導される１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を増強することを、それを必要とする個体において行う際に使用するための、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離（例えば、モノクローナル）抗体に関する。本開示の他の態様は、１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を誘導する、及びＴＲＥＭ２タンパク質への１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドの結合によって誘導される１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を増強することを、それを必要とする個体において行うための医薬品の製造における、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離（例えば、モノクローナル）抗体の使用に関する。一部の実施形態では、単離抗体は、先行実施形態のいずれかの抗体である。
【００４７】
本開示の他の態様は、１つまたは複数の細胞中のＴＲＥＭ２の細胞レベルを低下させることを、それを必要とする個体において行う方法であって、個体に、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離（例えば、モノクローナル）抗体の治療有効量を投与することを含む方法に関する。本開示の他の態様は、１つまたは複数の細胞中のＴＲＥＭ２の細胞レベルを低下させることを、それを必要とする個体において行う際に使用するための、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離（例えば、モノクローナル）抗体に関する。本開示の他の態様は、１つまたは複数の細胞中のＴＲＥＭ２の細胞レベルを低下させることを、それを必要とする個体において行うための医薬品の製造における、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離（例えば、モノクローナル）抗体の使用に関する。一部の実施形態では、単離抗体は、先行実施形態のいずれかの抗体である。
【００４８】
先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、個体は、ＴＲＥＭ２のヘテロ接合型バリアントを有し、その際、バリアントは、下記からなる群から選択される１つまたは複数の置換を含む：ｉ．配列番号１のアミノ酸残基Ｇｌｕ１４をコードする核酸配列におけるグルタミン酸から終止コドンへの置換、ｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基Ｇｌｎ３３をコードする核酸配列におけるグルタミンから終止コドンへの置換、ｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基Ｔｒｐ４４をコードする核酸配列におけるトリプトファンから終止コドンへの置換、ｉｖ．配列番号１のアミノ酸残基Ａｒｇ４７に対応するアミノ酸でのアルギニンからヒスチジンへのアミノ酸置換、ｖ．配列番号１のアミノ酸残基Ｔｒｐ７８をコードする核酸配列におけるトリプトファンから終止コドンへの置換、ｖｉ．配列番号１のアミノ酸残基Ｖａｌ１２６に対応するアミノ酸でのバリンからグリシンへのアミノ酸置換、ｖｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基Ａｓｐ１３４に対応するアミノ酸でのアスパラギン酸からグリシンへのアミノ酸置換、及びｖｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基Ｌｙｓ１８６に対応するアミノ酸でのリシンからアスパラギンへのアミノ酸置換。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、個体は、ＴＲＥＭ２のヘテロ接合型バリアントを有し、その際、バリアントは、配列番号１をコードする核酸配列のヌクレオチド残基Ｇ３１３に対応するヌクレオチドでのグアニンヌクレオチド欠失、配列番号１をコードする核酸配列のヌクレオチド残基Ｇ２６７に対応するヌクレオチドでのグアニンヌクレオチド欠失、またはその両方を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、個体は、ＤＡＰ１２のヘテロ接合型バリアントを有し、その際、バリアントは、下記からなる群から選択される１つまたは複数のバリアントを含む：ｉ．配列番号２のアミノ酸残基Ｍｅｔ１に対応するアミノ酸でのメチオニンからトレオニンへの置換、ｉｉ．配列番号２のアミノ酸残基Ｇｌｙ４９に対応するアミノ酸でのグリシンからアルギニンへのアミノ酸置換、ｉｉｉ．配列番号２をコードする核酸配列のエクソン１〜４内での欠失、ｉｖ．配列番号２をコードする核酸配列のエクソン３での１４アミノ酸残基の挿入、及びｖ．配列番号２をコードする核酸配列のヌクレオチド残基Ｇ１４１に対応するヌクレオチドでのグアニンヌクレオチド欠失。
【００４９】
本開示の他の態様は、先天免疫細胞の生存または創傷治癒を誘導または促進することを、それを必要とする個体において行う方法であって、個体に、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離アゴニスト抗体の治療有効量を投与することを含む方法に関する。本開示の他の態様は、先天免疫細胞の生存または創傷治癒を誘導または促進することを、それを必要とする個体において行う際に使用するための、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離アゴニスト抗体に関する。本開示の他の態様は、先天免疫細胞の生存または創傷治癒を誘導または促進することを、それを必要とする個体において行うための医薬品の製造における、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離アゴニスト抗体の使用に関する。一部の実施形態では、単離アゴニスト抗体は、先行実施形態のいずれかのアゴニスト抗体である。
【００５０】
本開示の他の態様は、記憶を増加させること、認知障害を減少させること、またはその両方を、それを必要とする個体において行う方法であって、個体に、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離アゴニスト抗体の治療有効量を投与することを含む方法に関する。本開示の他の態様は、記憶を増加させること、認知障害を減少させること、またはその両方を、それを必要とする個体において行う際に使用するための、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離アゴニスト抗体に関する。本開示の他の態様は、記憶を増加させること、認知障害を減少させること、またはその両方を、それを必要とする個体において行うための医薬品の製造における、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離アゴニスト抗体の使用に関する。一部の実施形態では、単離アゴニスト抗体は、先行実施形態のいずれかのアゴニスト抗体である。
【００５１】
本開示の他の態様は、運動協調性を増加させることを、それを必要とする個体において行う方法であって、個体に、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離アゴニスト抗体の治療有効量を投与することを含む方法に関する。本開示の他の態様は、運動協調性を増加させることを、それを必要とする個体において行う際に使用するための、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離アゴニスト抗体に関する。本開示の他の態様は、運動協調性を増加させることを、それを必要とする個体において行うための医薬品の製造における、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離アゴニスト抗体の使用に関する。一部の実施形態では、単離アゴニスト抗体は、先行実施形態のいずれかのアゴニスト抗体である。
【００５２】
本開示の他の態様は、Ａベータペプチドレベルを低下させることを、それを必要とする個体において行う方法であって、個体に、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離アゴニスト抗体の治療有効量を投与することを含む方法に関する。本開示の他の態様は、Ａベータペプチドレベルを低下させることを、それを必要とする個体において行う際に使用するための、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離アゴニスト抗体に関する。本開示の他の態様は、Ａベータペプチドレベルを低下させることを、それを必要とする個体において行うための医薬品の製造における、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離アゴニスト抗体の使用に関する。一部の実施形態では、単離アゴニスト抗体は、先行実施形態のいずれかのアゴニスト抗体である。
【００５３】
本開示の他の態様は、ＣＤ１１ｂ＋ミクログリア細胞の数を増加させることを、それを必要とする個体において行う方法であって、個体に、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離アゴニスト抗体の治療有効量を投与することを含む方法に関する。本開示の他の態様は、ＣＤ１１ｂ＋ミクログリア細胞の数を増加させることを、それを必要とする個体において行う際に使用するための、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離アゴニスト抗体に関する。本開示の他の態様は、ＣＤ１１ｂ＋ミクログリア細胞の数を増加させることを、それを必要とする個体において行うための医薬品の製造における、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離アゴニスト抗体の使用に関する。一部の実施形態では、単離アゴニスト抗体は、先行実施形態のいずれかのアゴニスト抗体である。
【００５４】
本開示の他の態様は、ＦＬＴ１、ＯＰＮＣＳＦ１、ＣＤ１１ｃ、及びＡＸＬのうちの１つまたは複数のレベルを上昇させることを、それを必要とする個体において行う方法であって、個体に、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離アゴニスト抗体の治療有効量を投与することを含む方法に関する。本開示の他の態様は、ＦＬＴ１、ＯＰＮＣＳＦ１、ＣＤ１１ｃ、及びＡＸＬのうちの１つまたは複数のレベルを上昇させることを、それを必要とする個体において行う際に使用するための、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離アゴニスト抗体に関する。本開示の他の態様は、ＦＬＴ１、ＯＰＮＣＳＦ１、ＣＤ１１ｃ、及びＡＸＬのうちの１つまたは複数のレベルを上昇させることを、それを必要とする個体において行うための医薬品の製造における、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離アゴニスト抗体の使用に関する。一部の実施形態では、単離アゴニスト抗体は、先行実施形態のいずれかのアゴニスト抗体である。
【００５５】
本開示の他の態様は、脊髄損傷を治療することを、それを必要とする個体において行う方法であって、個体に、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離アゴニスト抗体の治療有効量を投与することを含む方法に関する。本開示の他の態様は、脊髄損傷を治療することを、それを必要とする個体において行う際に使用するための、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離アゴニスト抗体に関する。本開示の他の態様は、脊髄損傷を治療することを、それを必要とする個体において行うための医薬品の製造における、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離アゴニスト抗体の使用に関する。一部の実施形態では、単離アゴニスト抗体は、先行実施形態のいずれかのアゴニスト抗体である。
【００５６】
本開示の他の態様は、慢性大腸炎または潰瘍性大腸炎を治療することを、それを必要とする個体において行う方法であって、個体に、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離アゴニスト抗体の治療有効量を投与することを含む方法に関する。本開示の他の態様は、慢性大腸炎または潰瘍性大腸炎を治療することを、それを必要とする個体において行う際に使用するための、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離アゴニスト抗体に関する。本開示の他の態様は、慢性大腸炎または潰瘍性大腸炎を治療することを、それを必要とする個体において行うための医薬品の製造における、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離アゴニスト抗体の使用に関する。一部の実施形態では、単離アゴニスト抗体は、先行実施形態のいずれかのアゴニスト抗体である。
【００５７】
先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、先天免疫細胞の増殖を阻害しない。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、１ｎＭ未満のＫＤで初代免疫細胞に結合する。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、ＫＤは、約４℃の温度で決定される。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、１％以上の血中抗体濃度である程度まで、脳、もしくは脳脊髄液（ＣＳＦ）、またはその両方に蓄積する。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、２％以上の血中抗体濃度である程度まで、脳、もしくは脳脊髄液（ＣＳＦ）、またはその両方に蓄積する。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、３％以上の血中抗体濃度である程度まで、脳、もしくは脳脊髄液（ＣＳＦ）、またはその両方に蓄積する。先行実施形態のいずれかと組み合わせてもよい一部の実施形態では、抗体は、４％以上の血中抗体濃度である程度まで、脳、もしくは脳脊髄液（ＣＳＦ）、またはその両方に蓄積する。
【図面の簡単な説明】
【００５８】
【図１Ａ】ヒトＴＲＥＭ２タンパク質（配列番号１）とヒトＮＣＴＲ２タンパク質（配列番号８５１）との間のアミノ酸配列アラインメントを示し、それらの２つのタンパク質間の相同性を表す。コンセンサス配列は、配列番号８５２である。
【図１Ｂ】いくつかのＴＲＥＭタンパク質とＩｇＶファミリーの他のメンバーとの間の構造ベースの配列アラインメントを示す。アミノ酸残基のナンバリングは、ヒトＴＲＥＭ１タンパク質の成熟配列と一致している。ＴＲＥＭ１の二次構造要素は、β鎖では、矢印として、αヘリックスでは、円柱として図示されている。ホモ二量体及びヘテロ二量体形成に関与するアミノ酸残基は、黒の背景上に示されている。ジスルフィド結合を形成し、Ｖ型Ｉｇフォールドのために保存されているシステイン残基は、太字で示されており、アスタリスクでマークされている。ギャップは、「−」で示されている。抗体様二量体形成モードを妨害するＭ−１残基は、（例えば、Ｒａｄａｅｖ  ｅｔ  ａｌ．，（２００３）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ．１１（１２）：１５２７−１５３５）として閉鎖三角形でマークされている。ＴＲＥＭ−１＿ヒト（配列番号８５３）、ＴＲＥＭ−２＿ヒト（配列番号８５４）、ＴＲＥＭ−１＿マウス（配列番号８５５）、ＴＲＥＭ−２＿マウス（配列番号８５６）、ＴＲＥＭ−３＿マウス（配列番号８５７）、ＮＫｐ４４（配列番号８５８）、ａＴＣＲ＿ヒト（配列番号８５９）、ｂＴＣＲ＿ヒト（配列番号８６０）、ｇＴＣＲ＿ヒト（配列番号８６１）、ｄＴＣＲ＿ヒト（配列番号８６２）、Ｖｄ＿ヒト（配列番号８６３）、ｈＩＧＧ１＿マウス（配列番号８６４）、ｌＩＧＧ１＿マウス（配列番号８６５）、ＣＤ８＿ヒト（配列番号８６６）、及びＣＴＬＡ４＿ヒト（配列番号８６７）。
【図２】ヒトＴＲＥＭ１タンパク質（配列番号８６８）とヒトＴＲＥＭ２タンパク質（配列番号１）との間のアミノ酸配列アラインメントを示し、それらの２つのタンパク質間の相同性を表す。コンセンサス配列は、配列番号８６９である。
【図３Ａ】組換えマウスＴＲＥＭ２を発現するマウス細胞系（ＢＷＺ）へのＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５及び２Ｈ８の結合を実証するＦＡＣＳヒストグラムを示す。
【図３Ｂ】野生型（ＴＲＥＭ２＋／＋）骨髄由来マウスマクロファージ（ＢＭＭａｃ）及びＴＲＥＭ２欠損（ＴＲＥＭ２−／−）ＢＭＭａｃに結合する抗体７Ｅ５及び２Ｈ８を示す。抗体ｍＩｇＧ１は、陰性アイソタイプ対照を表す。網掛けのヒストグラムは、ＴＲＥＭ２陰性細胞集団を表す。黒輪郭のヒストグラムは、ＴＲＥＭ２陽性細胞集団を表す。
【図３Ｃ】親ＢＷＺ細胞ではなく、組換えマウスＴＲＥＭ２を発現するＢＷＺ細胞へのＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５の用量依存的結合を実証する用量反応曲線を示す。抗体ｍＩｇＧ１は、陰性アイソタイプ対照を表す。
【図４Ａ】組換えヒトＴＲＥＭ２−ＤＡＰ１２融合タンパク質を発現するヒト細胞系（２９３）へのＴＲＥＭ２抗体１０Ａ９、１０Ｃ１、及び８Ｆ８の結合を実証するＦＡＣＳヒストグラムを示す。網掛けヒストグラムは、ＴＲＥＭ２陰性細胞集団を表す。黒輪郭のヒストグラムは、ＴＲＥＭ２陽性細胞集団を表す。
【図４Ｂ】初代ヒト樹状細胞（ｈＤＣ）に結合する抗体１０Ａ９、１０Ｃ１、及び８Ｆ８を示す。網掛けヒストグラムは、アイソタイプ抗体陰性対照の結合を示す。黒輪郭のヒストグラムは、ＴＲＥＭ２抗体の結合を表す。
【図４Ｃ】抗ＴＲＥＭ２抗体９Ｆ５（ｍＡｂ  Ｔ２−９Ｆ５．１）のヒト化バージョンの抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）配列を組み合わせるための図を示す。追加の変形形態が、各配列の下に列挙されている。この図は、ヒト化抗体９Ｆ５の複数のバージョンでの配列を含む。この図では、ＩＧＫＶ２−２９＊０２（配列番号８７０）、連結領域（配列番号８７１）、Ｔ２−９Ｆ５．１（配列番号８７２）、２−２９＊０２（配列番号８７３）、ｈ９Ｆ５−Ｌ１（配列番号８７４）、ｈ９Ｆ５−Ｌ２（配列番号８７５）。
【図４Ｄ】抗ＴＲＥＭ２抗体９Ｆ５（ｍＡｂ  Ｔ２−９Ｆ５．１）のヒト化バージョンの抗体重鎖可変領域（ＶＬ）配列を組み合わせるための図を示す。追加の変形形態が、各配列の下に列挙されている。この図は、ヒト化抗体９Ｆ５の複数のバージョンでの配列を含む。この図では、ＩＧＨＶ１−４６＊０１（配列番号８７６）、連結領域（配列番号８７７）、Ｔ２−９Ｆ５．１（配列番号８７８）、１−４６＊０１（配列番号８７９）、ｈ９Ｆ５−Ｈ１（配列番号８８０）、ｈ９Ｆ５−Ｈ２（配列番号８８１）、ｈ９Ｆ５−Ｈ３（配列番号８８２）。
【図４Ｅ】抗ＴＲＥＭ２抗体９Ｆ５（ＭＡｂ）の野生型ＴＲＥＭ２に対する（％ＷＴ）、さらには、抗ＴＲＥＭ２抗体Ｔ２１−９（Ｆａｂ）、Ｔ２２（Ｆａｂ）、及びＴ４５−１０（Ｆａｂ）の、表示のＴＲＥＭ２変異体に対する結合反応性をパーセンテージで示す。
【図５Ａ】ＴＲＥＭ２抗体２Ｆ６、１１Ｈ５、２Ｈ８、１Ｈ７、３Ａ７、３Ｂ１０、１０Ａ９、７Ｆ８、及び７Ｅ５と共にインキュベートした後のマウス骨髄由来マクロファージにおける、ウエスタンブロット分析によって決定した場合のＳｙｋリン酸化を示す。対照細胞は、未処理のままにされたか（ＮＴ）、またはｍＩｇＧ１と共にインキュベートされたので、アイソタイプ対照はＳｙｋリン酸化を誘導しない。
【図５Ｂ】ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５、３Ａ７、及び２Ｆ６と共にインキュベートした後のＷＴ、Ｆｃ受容体共通ガンマ鎖欠損（ＦｃｇＲ−／−）及びＴＲＥＭ２欠損（ＴＲＥＭ２−／−）骨髄由来マウスマクロファージにおける、ウエスタンブロットによって決定した場合のＳｙｋリン酸化を示す。
【図６Ａ】Ｆｃ受容体ＦｃＲ２ｂ及びＦｃＲ３を過剰発現するＰ８１５細胞系の存在下で、未処理であるか（ＮＴ）、またはＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５、３Ａ７、８Ｆ８、及び２Ｆ６で処理された野生型（ＷＴ）及びＴＲＥＭ２欠損（ＴＲＥＭ２−／−）骨髄由来マウスマクロファージにおける、ウエスタンブロットによって決定した場合のＳｙｋリン酸化を示す。抗体ＩｇＧ１は、アイソタイプ対照である。
【図６Ｂ】内因性Ｆｃ受容体ＦｃＲ２ｂを発現する初代マウスＢ細胞の存在下で、未処理であるか（ＮＴ）、またはＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５、３Ａ７、８Ｆ８、及び２Ｆ６で処理されたＷＴ骨髄由来マウスマクロファージにおける、ウエスタンブロットによって決定した場合のＳｙｋリン酸化を示す。抗体ＩｇＧ１は、アイソタイプ対照である。
【図７Ａ】ＴＲＥＭ２抗体１１Ａ２、１１Ｈ５、２Ｆ６、３Ａ７、４Ｇ３、１２Ｆ９、３Ｂ１０、及び７Ａ９と共に、または未処理のままで（ＮＴ）インキュベートした後のマウスマクロファージにおける、ウエスタンブロットによって決定した場合のＤＡＰ１２リン酸化（ｐＴｙｒ）を示す。抗体ｍＩｇＧ１は、アイソタイプ陰性対照である。
【図７Ｂ】処理されなかった（ＮＴ）、またはＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５及び２Ｆ６で処理された野生型（ＷＴ）及びＴＲＥＭ２欠損（ＴＲＥＭ２−／−）マウスマクロファージにおける、ウエスタンブロットによって決定した場合のＤＡＰ１２リン酸化を示す。
【図７Ｃ】対照抗体ＭＯＰＣ．１またはＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５で１５分間にわたって処置されたマウスからの腹膜細胞における、ウエスタンブロット免疫沈降によって決定した場合のＤＡＰ１２リン酸化を示す。
【図７Ｄ】１５分間の処置でＭＯＰＣ１処置されたマウスのＩＰ−ＴＲＥＭ２と比較した倍数変化を示す。
【図７Ｅ】対照抗体ＭＯＰＣ．１またはＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５で２４時間にわたって処置されたマウスからの腹膜細胞における、ウエスタンブロット免疫沈降によって決定した場合のＤＡＰ１２リン酸化を示す。
【図７Ｆ】２４時間の処置でＭＯＰＣ１処置されたマウスのＩＰ−ＴＲＥＭ２と比較した倍数変化を示す。
【図８Ａ】細胞ベースのアッセイでのマウスＴＲＥＭ２依存的ルシフェラーゼレポーターの誘導を示す。細胞は、未処理であった（ＮＴ）か、またはプレート結合全長抗ＴＲＥＭ２抗体１Ｈ７、２Ｆ６、２Ｈ８、３Ａ７、３Ｂ１０、７Ｅ５、７Ｆ８、８Ｆ８、及び１１Ｈ５で処理された。結果は、バックグラウンドに対する倍数として表される。バックグラウンドレベルは、点線によって示されている。
【図８Ｂ】細胞ベースのアッセイでのヒトＴＲＥＭ２依存的ルシフェラーゼレポーターの誘導を示す。細胞は、未処理であった（ＮＴ）か、またはプレート結合全長抗ＴＲＥＭ２抗体９Ｆ５、９Ｇ１、９Ｇ３、１０Ａ９、１０Ｃ１、１１Ａ８、１２Ｄ９、１２Ｅ２、１２Ｆ９、１２Ｇ６、２Ｃ７、２Ｆ５、３Ｃ１、及び４Ｄ７で処理された。結果は、バックグラウンドに対する倍数として表される。抗体ｍｓＩｇＧ１は、アイソタイプ陰性対照である。ＰＭＡ／イオノマイシン（Ｐ＋Ｉ）で処理された細胞は、陽性対照を表す。
【図８Ｃ】漸増濃度のプレート結合ホスファチジルセリン（ＰＳ）またはスフィンゴミエリン（ＳＭ）によるマウスＴＲＥＭ２依存性ルシフェラーゼレポーター遺伝子発現の誘導を示す。結果は、絶対ルミネセンス値として表される。
【図８Ｄ】漸増濃度のプレート結合ホスファチジルセリン（ＰＳ）またはスフィンゴミエリン（ＳＭ）によるヒトＴＲＥＭ２依存性ルシフェラーゼレポーター遺伝子発現の誘導を示す。結果は、絶対ルミネセンス値として表される。
【図８Ｅ】漸増濃度のアポリポタンパク質Ｅ（ＡＰＯＥ）によるヒトＴＲＥＭ２依存性ルシフェラーゼレポーター遺伝子発現の誘導を示す。ＡＰＯＥの３つの異なる対立遺伝子（ＡＰＯＥ２、ＡＰＯＥ３及びＡＰＯＥ４）が試験された。結果は、絶対ルミネセンス値として表される。
【図８Ｆ】ＥＬＩＳＡによって決定した場合の、組換えヒトＴＲＥＭ２タンパク質へのＡＰＯＥ２、ＡＰＯＥ３及びＡＰＯＥ４の結合を示す。結果は、ＯＤ４５０として表される。
【図９Ａ】細胞ベースのアッセイでのマウスＴＲＥＭ２依存性ルシフェラーゼレポーターの誘導を示す。細胞は、未処理であった（ＮＴ）か、または可溶性全長抗ＴＲＥＭ２抗体１Ｈ７、２Ｆ６、２Ｈ８、３Ａ７、３Ｂ１０、７Ｅ５、７Ｆ８、８Ｆ８、及び１１Ｈ５で処理された。抗体ｍＩｇＧ１は、アイソタイプ陰性対照である。ＰＭＡ／イオノマイシンで処理された細胞は、陽性対照を表す。結果は、バックグラウンド（点線によって表される）に対する倍数として表される。
【図９Ｂ】溶液中の全長抗ＴＲＥＭ２抗体９Ｆ５、９Ｇ１、９Ｇ３、１０Ａ９、１０Ｃ１、１１Ａ８、１２Ｄ９、１２Ｅ２、１２Ｆ９、１２Ｇ６、２Ｃ７、２Ｆ５、３Ｃ１、及び４Ｄ７によるヒトＴＲＥＭ２依存性ルシフェラーゼレポーター発現の誘導を示す。抗体ｍＩｇＧ１は、アイソタイプ陰性対照である。ＰＭＡ／イオノマイシンで処理された細胞は、陽性対照を表す。結果は、バックグラウンド（点線によって表される）に対する倍数として表される。
【図９Ｃ】細胞ベースのアッセイでのＴＲＥＭ２ルシフェラーゼレポーターの用量依存性誘導を示す。細胞は、未処理であった（ＮＴ）か、または漸増濃度の溶液中の全長抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５で処理された。結果は、絶対ルミネセンス値として表される。データを、Ｐｒｉｓｍ６ソフトウェアで解析し、ｌｏｇ（アゴニスト）対応答の４パラメーター可変スロープと当てはめた。ＥＣ５０＝１．５２ｎＭ。
【図１０Ａ】漸増濃度のプレート結合ホスファチジルセリン（ＰＳ）と共に、溶液に添加された示される量の全長抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５によるマウスＴＲＥＭ２依存性ルシフェラーゼレポーター遺伝子発現の誘導を示す。
【図１０Ｂ】漸増濃度のプレート結合ホスファチジルセリン（ＰＳ）と共に、溶液に添加された示される量の全長ＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体によるマウスＴＲＥＭ２依存性ルシフェラーゼレポーター遺伝子発現の誘導を示す。
【図１０Ｃ】漸増濃度のプレート結合スフィンゴミエリン（ＳＭ）と共に、溶液に添加された示される量の全長抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５によるマウスＴＲＥＭ２依存性ルシフェラーゼレポーター遺伝子発現の誘導を示す。
【図１０Ｄ】漸増濃度のプレート結合スフィンゴミエリン（ＳＭ）と共に、溶液に添加された示される量の全長ＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体によるマウスＴＲＥＭ２依存性ルシフェラーゼレポーター遺伝子発現の誘導を示す。
【図１０Ｅ】漸増濃度のプレート結合ホスファチジルセリン（ＰＳ）と共に、溶液に添加された全長抗ＴＲＥＭ２抗体２Ｆ６、３Ａ７、３Ｂ１０、８Ｆ８、及び１１Ｈ５、またはＩｇＧ１アイソタイプ対照によるマウスＴＲＥＭ２依存性ルシフェラーゼレポーター遺伝子発現の誘導を示す。結果は、絶対ルミネセンス値として表される。
【図１０Ｆ】漸増濃度のプレート結合スフィンゴミエリン（ＳＭ）と共に、溶液に添加された全長抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５によるマウスＴＲＥＭ２依存性ルシフェラーゼレポーター遺伝子発現の誘導を市販の抗体と比較して示す。マウスＩｇＧ１及びラットＩｇＧ２ｂ抗体がアイソタイプ対照として使用された。
【図１１Ａ】漸増濃度のプレート結合ホスファチジルセリン（ＰＳ）と共に、溶液に添加された示される量の全長抗ＴＲＥＭ２抗体９Ｆ５によるヒトＴＲＥＭ２依存性ルシフェラーゼレポーター遺伝子発現の誘導を示す。
【図１１Ｂ】漸増濃度のプレート結合ホスファチジルセリン（ＰＳ）と共に、溶液に添加された示される量の全長ＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体によるヒトＴＲＥＭ２依存性ルシフェラーゼレポーター遺伝子発現の誘導を示す。
【図１１Ｃ】漸増濃度のプレート結合ホスファチジルセリン（ＰＳ）と共に、溶液中の全長抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｂ３、９Ｇ１、９Ｇ３、９Ｆ５、及びＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体（ｍｓＩｇＧ１）によるヒトＴＲＥＭ２依存性ルシフェラーゼレポーター遺伝子発現の誘導を示す。結果は、絶対ルミネセンス値として表される。
【図１１Ｄ】漸増濃度のプレート結合ホスファチジルセリン（ＰＳ）と共に、溶液中の全長抗ＴＲＥＭ２抗体１１Ａ８、１２Ｆ９、３Ｂ１０、８Ｆ８、及びＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体（ｍｓＩｇＧ１）によるヒトＴＲＥＭ２依存性ルシフェラーゼレポーター遺伝子発現の誘導を示す。結果は、絶対ルミネセンス値として表される。
【図１１Ｅ】溶液中の５μｇ／ｍｌの全長抗ＴＲＥＭ２抗体９Ｆ５、７Ｂ３、及び９Ｇ３の存在下、ならびにＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体（ｍｓＩｇＧ１）の存在下でのＡＰＯＥ３への組換えヒトＴＲＥＭ２タンパク質の結合を示す。２つの反復試験の平均及び標準誤差が示されている。
【図１１Ｆ】溶液中の１５μｇ／ｍｌの全長抗ＴＲＥＭ２抗体９Ｆ５、７Ｂ３、及び９Ｇ３の存在下ならびにＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体（ｍｓＩｇＧ１）の存在下でのＡＰＯＥ３への組換えヒトＴＲＥＭ２タンパク質の結合を示す。２つの反復試験の平均及び標準誤差が示されている。
【図１２Ａ】１００ｎＭ可溶性全長抗ＴＲＥＭ２抗体１Ｈ７、２Ｆ６、２Ｈ８、３Ａ７、７Ｅ５、７Ｆ８、及び８Ｆ８、または市販の抗体（Ｒ＆Ｄ  Ｃａｔ＃Ｆ７Ｅ５７２９１）と共にインキュベートした後の野生型（ＷＴ）骨髄由来マウスマクロファージの生存率を示す。陰性対照として、細胞をマウスＩｇＧ１及びラットＩｇＧ２ｂアイソタイプ対照抗体とインキュベートした。結果は、生細胞％として表され、１００％は、未処理細胞の生存率であり、０％は、サイトカインＭ−ＣＳＦの非存在下で培養された細胞の生存率である。
【図１２Ｂ】２．５ｕｇ／ｍｌまたは１０ｕｇ／ｍｌのプレート結合全長抗ＴＲＥＭ２抗体２Ｆ６、３Ａ７、７Ｅ５、及び８Ｆ８と共にインキュベートした後の野生型（ＷＴ）骨髄由来マウスマクロファージの生存率を示す。陰性対照として、細胞をマウスＩｇＧ１（ｍＩｇＧ１）と共にインキュベートした。結果は、細胞生存率の尺度であるルミネセンスとして表される。点線は、細胞が未処理のままであるときの基線平均生存率を示している。
【図１２Ｃ】抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５またはアイソタイプ対照抗体（ｍＩｇＧ１）を注射されたマウスの脳において見出される、マーカーＣＤ１１ｂまたはＣＤ１１ｂ及びＧｒ１を発現する免疫細胞の数を示す。
【図１３Ａ】免疫細胞の合計数に対する、単独で、またはＬＰＳと組み合わせて腹腔に注射されたＴＲＥＭ２抗体の作用を決定するための例示的なインビボ実験の設計を示す。
【図１３Ｂ】ＬＰＳ、対照（ＣＴＲ）またはＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５を単独で、またはＣＴＲまたはＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５をＬＰＳと組み合わせて注射した後の腹腔における好中球のパーセンテージを示す。
【図１３Ｃ】ＬＰＳ、対照（ＣＴＲ）またはＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５を単独で、またはＣＴＲまたはＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５をＬＰＳと組み合わせて注射した後の腹腔における好中球細胞の数を示す。
【図１３Ｄ】ＬＰＳ、対照（ＣＴＲ）またはＴＲＥＭ２抗体８Ｆ８を単独で、またはＣＴＲまたはＴＲＥＭ２抗体８Ｆ８をＬＰＳと組み合わせて注射した後の腹腔における好中球のパーセンテージを示す。
【図１３Ｅ】ＬＰＳ、対照（ＣＴＲ）またはＴＲＥＭ２抗体８Ｆ８を単独で、またはＣＴＲまたはＴＲＥＭ２抗体８Ｆ８をＬＰＳと組み合わせて注射した後の腹腔における好中球細胞の数を示す。
【図１３Ｆ】ＬＰＳ、対照（ＣＴＲ）またはＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５を単独で、またはＣＴＲまたはＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５をＬＰＳと組み合わせて注射した後の腹腔における常在マクロファージ（ＣＤ１１ｂ＋Ｆ４／８０ｈｉｇｈ）のパーセンテージを示す。
【図１３Ｇ】ＬＰＳ、対照（ＣＴＲ）またはＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５を単独で、またはＣＴＲまたはＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５をＬＰＳと組み合わせて注射した後の腹腔における常在マクロファージ細胞（ＣＤ１１ｂ＋Ｆ４／８０ｈｉｇｈ）の数を示す。
【図１３Ｈ】ＬＰＳ、対照（ＣＴＲ）またはＴＲＥＭ２抗体８Ｆ８を単独で、またはＣＴＲまたはＴＲＥＭ２抗体８Ｆ８をＬＰＳと組み合わせて注射した後の腹腔における常在マクロファージ（ＣＤ１１ｂ＋Ｆ４／８０ｈｉｇｈ）のパーセンテージを示す。
【図１３Ｉ】ＬＰＳ、対照（ＣＴＲ）またはＴＲＥＭ２抗体８Ｆ８を単独で、またはＣＴＲまたはＴＲＥＭ２抗体８Ｆ８をＬＰＳと組み合わせて注射した後の腹腔における常在マクロファージ細胞（ＣＤ１１ｂ＋Ｆ４／８０ｈｉｇｈ）の数を示す。
【図１３Ｊ】ＬＰＳ、対照（ＣＴＲ）またはＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５を単独で、またはＣＴＲまたはＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５をＬＰＳと組み合わせて注射した後の腹腔における小型浸潤性マクロファージ（ＣＤ１１ｂ＋Ｆ４／８０ｉｎｔ）のパーセンテージを示す。
【図１３Ｋ】ＬＰＳ、対照（ＣＴＲ）またはＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５を単独で、またはＣＴＲまたはＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５をＬＰＳと組み合わせて注射した後の腹腔における小型浸潤性マクロファージ細胞（ＣＤ１１ｂ＋Ｆ４／８０ｉｎｔ）の数を示す。
【図１３Ｌ】ＬＰＳ、対照（ＣＴＲ）またはＴＲＥＭ２抗体８Ｆ８を単独で、またはＣＴＲまたはＴＲＥＭ２抗体８Ｆ８をＬＰＳと組み合わせて注射した後の腹腔における小型浸潤性マクロファージ（ＣＤ１１ｂ＋Ｆ４／８０ｉｎｔ）のパーセンテージを示す。
【図１３Ｍ】ＬＰＳ、対照（ＣＴＲ）またはＴＲＥＭ２抗体８Ｆ８を単独で、またはＣＴＲまたはＴＲＥＭ２抗体８Ｆ８をＬＰＳと組み合わせて注射した後の腹腔における小型浸潤性マクロファージ細胞（ＣＤ１１ｂ＋Ｆ４／８０ｉｎｔ）の数を示す。
【図１３Ｎ】炎症性メディエーターＣＣＬ４、ＩＬ−１β、及びＭＣＰ−１（ＣＣＬ２）の産生に対する、単独で、またはＬＰＳと組み合わせて腹腔に注射されたＴＲＥＭ２抗体の作用を決定するための例示的なインビボ実験の設計を示す。
【図１３Ｏ】対照（ＣＴＲ）またはＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５及び８Ｆ８をＬＰＳと組み合わせて注射した後の腹腔におけるＣＣＬ４の濃度をｐｇ／ｍｌで示す。
【図１３Ｐ】対照（ＣＴＲ）またはＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５及び８Ｆ８をＬＰＳと組み合わせて注射した後の腹腔におけるＩＬ−１βの濃度をｐｇ／ｍｌで示す。
【図１３Ｑ】対照（ＣＴＲ）またはＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５及び８Ｆ８をＬＰＳと組み合わせて注射した後の腹腔におけるＭＣＰ−１（ＣＣＬ２）の濃度をｐｇ／ｍｌで示す。
【図１４】３頭のマウスの腹膜への示される用量の抗体の注射後２、４、８、及び１５日目に血清で見出された７Ｅ５抗体の平均濃度（ｕｇ／ｍｌ）を示す。可溶性７Ｅ５抗体の測定を、標準ＥＬＩＳＡによって行った。データをＰｒｉｓｍ６ソフトウェアで解析し、指数関数的１フェーズ減衰曲線に当てはめて、半減期を計算した。抗体の半減期は、マウス血清では約９．５日である。
【図１５】腹膜への示される用量の抗体の注射後２、４、８、及び１５日目に血清で見出された可溶性ＴＲＥＭ２受容体（ｓＴＲＥＭ２）の濃度（ｎｇ／ｍｌ）を示す。可溶性ＴＲＥＭ２の測定をＥＬＩＳＡによって行った。
【図１６Ａ】プレート結合ホスファチジルセリン（ＰＳ）及びスフィンゴミエリン（ＳＭ）に応じた、培養におけるＴＲＥＭ２受容体の下方調節を示す。
【図１６Ｂ】漸増濃度のプレート結合ホスファチジルセリン（ＰＳ）と共に、溶液中の可溶性全長抗ＴＲＥＭ２抗体３Ａ７及び２Ｆ６に応じた、培養におけるＴＲＥＭ２受容体の下方調節を示す。
【図１７Ａ】実施例１６に記載のとおりにＩＬ−１ｂ、ＩＬ−６、ＴＮＦａ、ＩＬ−１２、ＹＭ−１、ＩＬ−１Ｒａ、ＭＲＣ１、ＩＬ−１０、ＣＤ８６、ＦＣＧＲ１Ｂ、及びＴＧＦｂのためのＴａｑＭａｎ（登録商標）遺伝子発現プローブを含むＴａｑＭａｎアッセイ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ならびにリアルタイムＰＣＲを使用して、抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５を注射されたＡＰＰ／ＰＳ１マウスの海馬における炎症誘発性及び抗炎症性遺伝子の発現の変化を示す。倍数変化は、対照マウスにおける遺伝子発現（点線）に対する。抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５での処置は、ＩＬ−１ｂ、ＩＬ−６、ＴＮＦａ、及びＣＤ８６の発現を約２倍に有意に増加させた。ＦＣＧＲ１Ｂの発現は約３倍増加し、ＩＬ−１０の発現は、約４倍増加した。対照的に、ＩＬ−１Ｒａの発現は、半分に減少した。ＩＬ−１２、ＹＭ−１、ＭＲＣ１、及びＴＧＦＢの発現は、変化しないままであった。すべての遺伝子発現データを、１８Ｓ  ｒＲＮＡ発現に対して正規化した。
【図１７Ｂ】実施例１６に記載のとおりにＩＬ−１ｂ、ＴＮＦａ、ＹＭ−１、ＩＬ−１Ｒｎ  ＣＤ８６、ＴＧＦ−β１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ５、ＣＣＲ２、ＣＸＣＬ１０、Ｇａｔａ３及びＲｏｒｃのためのＴａｑＭａｎ（登録商標）遺伝子発現プローブを含むＴａｑＭａｎアッセイ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ならびにリアルタイムＰＣＲを使用して、マウスに抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５を頭蓋内注射してから２４時間及び７２時間後の５ＸＦＡＤマウスの海馬における炎症誘発性及び抗炎症性遺伝子の発現の変化を示す。倍数変化は、アイソタイプ対照抗体で処置されたマウスにおける遺伝子発現に対する。点線は、対照抗体で処置されたマウスにおける発現のレベルを示す。抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５での処置は、注射から７２時間後に、ＩＬ−１ｂ、ＴＮＦａ、ＹＭ−１、ＣＤ８６、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＲ２、ＣＸＣＬ１０、Ｇａｔａ３及びＲｏｒｃの発現を約２倍、顕著に増加させた。ＣＣＬ５の発現は、約３倍増加された。その代わり、ＩＬ−１Ｒｎ及びＴＧＦＢの発現は、変化しないままであった。すべての遺伝子発現データを、１８Ｓ  ｒＲＮＡ発現に対して正規化した。＊＝Ｐ値＜０．０５、＊＊＝Ｐ値＜０．０１。
【図１７Ｃ】５ｍｇ／ｍｌの７Ｅ５または対照ｍｓＩｇＧ１抗体を頭蓋内注射されたＡＰＰ／ＰＳ１マウスの脳におけるＦＬＴ１の発現の変化を示す。＊Ｐ値＜０．０１、スチューデントのｔ検定。
【図１７Ｄ】図１７Ｄ〜１７Ｐは、実施例１６に記載のとおりにＣＣＬ２、ＣＸＣＬ１０、Ｒｏｒｃ、ＴＮＦα、ＡＸＬ、ＬＤＲ、ＣＸＣＲ４、Ｆａｂｐ５、Ｆａｂｐ３、ＯＰＮ、ＦＬＴ１、ＣＳＦ−１、及びＣＤ１１ｃのためのＴａｑＭａｎ（登録商標）遺伝子発現プローブを含むＴａｑＭａｎアッセイ、ならびにリアルタイムＰＣＲを使用して、マウスに５０ｍｇ／ｋｇの抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５を週１回注射してから３カ月後の５ＸＦＡＤマウスの脳におけるサイトカイン及びケモカインの発現を示す。図１７Ｄは、ＣＣＬ２での結果を示す。図１７Ｄ〜１７Ｐでは、＊Ｐ値＜０．０５、＊＊Ｐ値＜０．０１、＊＊＊Ｐ値＜０．００１、Ｔｕｋｅｙ事後検定を伴う一元配置ＡＮＯＶＡ。
【図１７Ｅ】図１７Ｄ〜１７Ｐは、実施例１６に記載のとおりにＣＣＬ２、ＣＸＣＬ１０、Ｒｏｒｃ、ＴＮＦα、ＡＸＬ、ＬＤＲ、ＣＸＣＲ４、Ｆａｂｐ５、Ｆａｂｐ３、ＯＰＮ、ＦＬＴ１、ＣＳＦ−１、及びＣＤ１１ｃのためのＴａｑＭａｎ（登録商標）遺伝子発現プローブを含むＴａｑＭａｎアッセイ、ならびにリアルタイムＰＣＲを使用して、マウスに５０ｍｇ／ｋｇの抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５を週１回注射してから３カ月後の５ＸＦＡＤマウスの脳におけるサイトカイン及びケモカインの発現を示す。図１７Ｅは、ＣＸＣＬ１０での結果を示す。図１７Ｄ〜１７Ｐでは、＊Ｐ値＜０．０５、＊＊Ｐ値＜０．０１、＊＊＊Ｐ値＜０．００１、Ｔｕｋｅｙ事後検定を伴う一元配置ＡＮＯＶＡ。
【図１７Ｆ】図１７Ｄ〜１７Ｐは、実施例１６に記載のとおりにＣＣＬ２、ＣＸＣＬ１０、Ｒｏｒｃ、ＴＮＦα、ＡＸＬ、ＬＤＲ、ＣＸＣＲ４、Ｆａｂｐ５、Ｆａｂｐ３、ＯＰＮ、ＦＬＴ１、ＣＳＦ−１、及びＣＤ１１ｃのためのＴａｑＭａｎ（登録商標）遺伝子発現プローブを含むＴａｑＭａｎアッセイ、ならびにリアルタイムＰＣＲを使用して、マウスに５０ｍｇ／ｋｇの抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５を週１回注射してから３カ月後の５ＸＦＡＤマウスの脳におけるサイトカイン及びケモカインの発現を示す。図１７Ｆは、Ｒｏｒｃでの結果を示す。図１７Ｄ〜１７Ｐでは、＊Ｐ値＜０．０５、＊＊Ｐ値＜０．０１、＊＊＊Ｐ値＜０．００１、Ｔｕｋｅｙ事後検定を伴う一元配置ＡＮＯＶＡ。
【図１７Ｇ】図１７Ｄ〜１７Ｐは、実施例１６に記載のとおりにＣＣＬ２、ＣＸＣＬ１０、Ｒｏｒｃ、ＴＮＦα、ＡＸＬ、ＬＤＲ、ＣＸＣＲ４、Ｆａｂｐ５、Ｆａｂｐ３、ＯＰＮ、ＦＬＴ１、ＣＳＦ−１、及びＣＤ１１ｃのためのＴａｑＭａｎ（登録商標）遺伝子発現プローブを含むＴａｑＭａｎアッセイ、ならびにリアルタイムＰＣＲを使用して、マウスに５０ｍｇ／ｋｇの抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５を週１回注射してから３カ月後の５ＸＦＡＤマウスの脳におけるサイトカイン及びケモカインの発現を示す。図１７Ｇは、ＴＮＦαでの結果を示す。図１７Ｄ〜１７Ｐでは、＊Ｐ値＜０．０５、＊＊Ｐ値＜０．０１、＊＊＊Ｐ値＜０．００１、Ｔｕｋｅｙ事後検定を伴う一元配置ＡＮＯＶＡ。
【図１７Ｈ】図１７Ｄ〜１７Ｐは、実施例１６に記載のとおりにＣＣＬ２、ＣＸＣＬ１０、Ｒｏｒｃ、ＴＮＦα、ＡＸＬ、ＬＤＲ、ＣＸＣＲ４、Ｆａｂｐ５、Ｆａｂｐ３、ＯＰＮ、ＦＬＴ１、ＣＳＦ−１、及びＣＤ１１ｃのためのＴａｑＭａｎ（登録商標）遺伝子発現プローブを含むＴａｑＭａｎアッセイ、ならびにリアルタイムＰＣＲを使用して、マウスに５０ｍｇ／ｋｇの抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５を週１回注射してから３カ月後の５ＸＦＡＤマウスの脳におけるサイトカイン及びケモカインの発現を示す。図１７Ｈは、ＣＳＦ−１での結果を示す。図１７Ｄ〜１７Ｐでは、＊Ｐ値＜０．０５、＊＊Ｐ値＜０．０１、＊＊＊Ｐ値＜０．００１、Ｔｕｋｅｙ事後検定を伴う一元配置ＡＮＯＶＡ。
【図１７Ｉ】図１７Ｄ〜１７Ｐは、実施例１６に記載のとおりにＣＣＬ２、ＣＸＣＬ１０、Ｒｏｒｃ、ＴＮＦα、ＡＸＬ、ＬＤＲ、ＣＸＣＲ４、Ｆａｂｐ５、Ｆａｂｐ３、ＯＰＮ、ＦＬＴ１、ＣＳＦ−１、及びＣＤ１１ｃのためのＴａｑＭａｎ（登録商標）遺伝子発現プローブを含むＴａｑＭａｎアッセイ、ならびにリアルタイムＰＣＲを使用して、マウスに５０ｍｇ／ｋｇの抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５を週１回注射してから３カ月後の５ＸＦＡＤマウスの脳におけるサイトカイン及びケモカインの発現を示す。図１７Ｉは、ＯＰＮでの結果を示す。図１７Ｄ〜１７Ｐでは、＊Ｐ値＜０．０５、＊＊Ｐ値＜０．０１、＊＊＊Ｐ値＜０．００１、Ｔｕｋｅｙ事後検定を伴う一元配置ＡＮＯＶＡ。
【図１７Ｊ】図１７Ｄ〜１７Ｐは、実施例１６に記載のとおりにＣＣＬ２、ＣＸＣＬ１０、Ｒｏｒｃ、ＴＮＦα、ＡＸＬ、ＬＤＲ、ＣＸＣＲ４、Ｆａｂｐ５、Ｆａｂｐ３、ＯＰＮ、ＦＬＴ１、ＣＳＦ−１、及びＣＤ１１ｃのためのＴａｑＭａｎ（登録商標）遺伝子発現プローブを含むＴａｑＭａｎアッセイ、ならびにリアルタイムＰＣＲを使用して、マウスに５０ｍｇ／ｋｇの抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５を週１回注射してから３カ月後の５ＸＦＡＤマウスの脳におけるサイトカイン及びケモカインの発現を示す。図１７Ｊは、ＣＤ１１ｃでの結果を示す。図１７Ｄ〜１７Ｐでは、＊Ｐ値＜０．０５、＊＊Ｐ値＜０．０１、＊＊＊Ｐ値＜０．００１、Ｔｕｋｅｙ事後検定を伴う一元配置ＡＮＯＶＡ。
【図１７Ｋ】図１７Ｄ〜１７Ｐは、実施例１６に記載のとおりにＣＣＬ２、ＣＸＣＬ１０、Ｒｏｒｃ、ＴＮＦα、ＡＸＬ、ＬＤＲ、ＣＸＣＲ４、Ｆａｂｐ５、Ｆａｂｐ３、ＯＰＮ、ＦＬＴ１、ＣＳＦ−１、及びＣＤ１１ｃのためのＴａｑＭａｎ（登録商標）遺伝子発現プローブを含むＴａｑＭａｎアッセイ、ならびにリアルタイムＰＣＲを使用して、マウスに５０ｍｇ／ｋｇの抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５を週１回注射してから３カ月後の５ＸＦＡＤマウスの脳におけるサイトカイン及びケモカインの発現を示す。図１７Ｋは、Ｆｌｔ１での結果を示す。図１７Ｄ〜１７Ｐでは、＊Ｐ値＜０．０５、＊＊Ｐ値＜０．０１、＊＊＊Ｐ値＜０．００１、Ｔｕｋｅｙ事後検定を伴う一元配置ＡＮＯＶＡ。
【図１７Ｌ】図１７Ｄ〜１７Ｐは、実施例１６に記載のとおりにＣＣＬ２、ＣＸＣＬ１０、Ｒｏｒｃ、ＴＮＦα、ＡＸＬ、ＬＤＲ、ＣＸＣＲ４、Ｆａｂｐ５、Ｆａｂｐ３、ＯＰＮ、ＦＬＴ１、ＣＳＦ−１、及びＣＤ１１ｃのためのＴａｑＭａｎ（登録商標）遺伝子発現プローブを含むＴａｑＭａｎアッセイ、ならびにリアルタイムＰＣＲを使用して、マウスに５０ｍｇ／ｋｇの抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５を週１回注射してから３カ月後の５ＸＦＡＤマウスの脳におけるサイトカイン及びケモカインの発現を示す。図１７Ｋは、Ｆｌｔ１での結果を示す。図１７Ｄ〜１７Ｐでは、＊Ｐ値＜０．０５、＊＊Ｐ値＜０．０１、＊＊＊Ｐ値＜０．００１、Ｔｕｋｅｙ事後検定を伴う一元配置ＡＮＯＶＡ。
【図１７Ｍ】図１７Ｄ〜１７Ｐは、実施例１６に記載のとおりにＣＣＬ２、ＣＸＣＬ１０、Ｒｏｒｃ、ＴＮＦα、ＡＸＬ、ＬＤＲ、ＣＸＣＲ４、Ｆａｂｐ５、Ｆａｂｐ３、ＯＰＮ、ＦＬＴ１、ＣＳＦ−１、及びＣＤ１１ｃのためのＴａｑＭａｎ（登録商標）遺伝子発現プローブを含むＴａｑＭａｎアッセイ、ならびにリアルタイムＰＣＲを使用して、マウスに５０ｍｇ／ｋｇの抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５を週１回注射してから３カ月後の５ＸＦＡＤマウスの脳におけるサイトカイン及びケモカインの発現を示す。図１７Ｍは、ＬＤＲでの結果を示す。図１７Ｄ〜１７Ｐでは、＊Ｐ値＜０．０５、＊＊Ｐ値＜０．０１、＊＊＊Ｐ値＜０．００１、Ｔｕｋｅｙ事後検定を伴う一元配置ＡＮＯＶＡ。
【図１７Ｎ】図１７Ｄ〜１７Ｐは、実施例１６に記載のとおりにＣＣＬ２、ＣＸＣＬ１０、Ｒｏｒｃ、ＴＮＦα、ＡＸＬ、ＬＤＲ、ＣＸＣＲ４、Ｆａｂｐ５、Ｆａｂｐ３、ＯＰＮ、ＦＬＴ１、ＣＳＦ−１、及びＣＤ１１ｃのためのＴａｑＭａｎ（登録商標）遺伝子発現プローブを含むＴａｑＭａｎアッセイ、ならびにリアルタイムＰＣＲを使用して、マウスに５０ｍｇ／ｋｇの抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５を週１回注射してから３カ月後の５ＸＦＡＤマウスの脳におけるサイトカイン及びケモカインの発現を示す。図１７Ｎは、ＣＸＣＲ４での結果を示す。図１７Ｄ〜１７Ｐでは、＊Ｐ値＜０．０５、＊＊Ｐ値＜０．０１、＊＊＊Ｐ値＜０．００１、Ｔｕｋｅｙ事後検定を伴う一元配置ＡＮＯＶＡ。
【図１７Ｏ】図１７Ｄ〜１７Ｐは、実施例１６に記載のとおりにＣＣＬ２、ＣＸＣＬ１０、Ｒｏｒｃ、ＴＮＦα、ＡＸＬ、ＬＤＲ、ＣＸＣＲ４、Ｆａｂｐ５、Ｆａｂｐ３、ＯＰＮ、ＦＬＴ１、ＣＳＦ−１、及びＣＤ１１ｃのためのＴａｑＭａｎ（登録商標）遺伝子発現プローブを含むＴａｑＭａｎアッセイ、ならびにリアルタイムＰＣＲを使用して、マウスに５０ｍｇ／ｋｇの抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５を週１回注射してから３カ月後の５ＸＦＡＤマウスの脳におけるサイトカイン及びケモカインの発現を示す。図１７Ｏは、Ｆａｂｐ５での結果を示す。図１７Ｄ〜１７Ｐでは、＊Ｐ値＜０．０５、＊＊Ｐ値＜０．０１、＊＊＊Ｐ値＜０．００１、Ｔｕｋｅｙ事後検定を伴う一元配置ＡＮＯＶＡ。
【図１７Ｐ】図１７Ｄ〜１７Ｐは、実施例１６に記載のとおりにＣＣＬ２、ＣＸＣＬ１０、Ｒｏｒｃ、ＴＮＦα、ＡＸＬ、ＬＤＲ、ＣＸＣＲ４、Ｆａｂｐ５、Ｆａｂｐ３、ＯＰＮ、ＦＬＴ１、ＣＳＦ−１、及びＣＤ１１ｃのためのＴａｑＭａｎ（登録商標）遺伝子発現プローブを含むＴａｑＭａｎアッセイ、ならびにリアルタイムＰＣＲを使用して、マウスに５０ｍｇ／ｋｇの抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５を週１回注射してから３カ月後の５ＸＦＡＤマウスの脳におけるサイトカイン及びケモカインの発現を示す。図１７Ｐは、Ｆａｂｐ３での結果を示す。図１７Ｄ〜１７Ｐでは、＊Ｐ値＜０．０５、＊＊Ｐ値＜０．０１、＊＊＊Ｐ値＜０．００１、Ｔｕｋｅｙ事後検定を伴う一元配置ＡＮＯＶＡ。
【図１７Ｑ】実施例１６に記載のとおり、ウサギポリクローナル抗体Ａβ１−１６（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で染色されたＡベータのための浮遊免疫組織化学を使用して、抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５またはアイソタイプ対照抗体（ｍＩｇＧ１）を頭蓋内注射されたＡＰＰ／ＰＳ１マウスの前頭皮質（ＦＣＸ）及び海馬（ＨＰＣ）におけるＡベータペプチドの定量化を示す。＊＊＝Ｐ値＜０．０１、ＦｉｓｈｅｒのＰＬＳＤ事後検定を伴う二元配置ＡＮＯＶＡ。
【図１７Ｒ】実施例１６に記載のとおり、ウサギポリクローナル抗体Ａβ１−１６（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で染色されたＡベータのための浮遊免疫組織化学を使用して、抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５またはアイソタイプ対照抗体（ｍＩｇＧ１）を長期腹腔内注射された５ｘＦＡＤマウスの前頭皮質（ＦＣＸ）及び海馬（ＨＰＣ）におけるＡベータペプチドの定量化を示す。＊＝Ｐ値＜０．０５、＊＊＝Ｐ値＜０．０１。
【図１７Ｓ】図１７Ｓ〜１７Ｕは、Ａベータ３８（Ａｂ３８）、Ａベータ４０（Ａｂ４０）、及びＡベータ４２（Ａｂ４２）を測定するＭｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ａベータキットを使用して、抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５またはアイソタイプ対照抗体（ｍＩｇＧ１）を長期腹腔内注射されている５ｘＦＡＤマウスの前頭皮質からの不溶性タンパク質の分析からの結果を示す。７Ｅ５で処置した後に、不溶性Ａベータ４２の顕著な減少がある。図１７Ｓは、Ａベータ３８（Ａｂ３８）での結果を示す。
【図１７Ｔ】図１７Ｓ〜１７Ｕは、Ａベータ３８（Ａｂ３８）、Ａベータ４０（Ａｂ４０）、及びＡベータ４２（Ａｂ４２）を測定するＭｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ａベータキットを使用して、抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５またはアイソタイプ対照抗体（ｍＩｇＧ１）を長期腹腔内注射されている５ｘＦＡＤマウスの前頭皮質からの不溶性タンパク質の分析からの結果を示す。７Ｅ５で処置した後に、不溶性Ａベータ４２の顕著な減少がある。図１７Ｔは、Ａベータ４０（Ａｂ４０）での結果を示す。
【図１７Ｕ】図１７Ｓ〜１７Ｕは、Ａベータ３８（Ａｂ３８）、Ａベータ４０（Ａｂ４０）、及びＡベータ４２（Ａｂ４２）を測定するＭｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ａベータキットを使用して、抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５またはアイソタイプ対照抗体（ｍＩｇＧ１）を長期腹腔内注射されている５ｘＦＡＤマウスの前頭皮質からの不溶性タンパク質の分析からの結果を示す。７Ｅ５で処置した後に、不溶性Ａベータ４２の顕著な減少がある。図１７Ｕは、Ａベータ４２（Ａｂ４２）での結果を示す。
【図１７Ｖ】実施例１６に記載のとおり、ラットモノクローナル抗体（Ｓｅｒｏｔｅｃ、Ｒａｌｅｉｇｈ、ＮＣ、ＵＳＡ）で染色されたＣＤ１１ｂのための浮遊免疫組織化学を使用して、抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５またはアイソタイプ対照抗体（ｍＩｇＧ１）を頭蓋内注射されたＡＰＰ／ＰＳ１マウスの前頭皮質（ＦＣＸ）及び海馬（ＨＰＣ）におけるＣＤ１１ｂ発現細胞の定量化を示す。＊＊＝Ｐ値＜０．０１。
【図１７Ｗ】実施例１６に記載のとおり、ラットモノクローナル抗体（Ｓｅｒｏｔｅｃ、Ｒａｌｅｉｇｈ、ＮＣ、ＵＳＡ）で染色されたＣＤ１１ｂのための浮遊免疫組織化学を使用して、抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５またはアイソタイプ対照抗体（ｍＩｇＧ１）を長期腹腔内注射されたマウスの前頭皮質（ＦＣＸ）及び海馬（ＨＰＣ）におけるＣＤ１１ｂ発現細胞の定量化を示す。＊＊＝Ｐ値＜０．０１。
【図１７Ｘ】実施例１６に記載のとおり、７Ｅ５または対照抗体を長期注射されたＷＴまたは５ｘＦＡＤマウスの放射状アーム水迷路試験で評価された認知機能の結果を示す。放射状アーム水迷路試験を、抗体での処置から１２週間後に行った。グラフは、課題を完了するまでに行ったエラーの平均数を表す。ブロックは、３回のトライアルの平均値である。対照抗体を与えられた５ＸＦＡＤトランスジェニックマウスは、非遺伝子導入野生型マウス（ＷＴ）と比較して有意に減退し、試験の２日目を通じて、平均して３回を超えるエラーを記録した。対照的に、正常な認知機能を有するマウスから予測されるとおり、いずれかの抗体で処置されたＷＴマウスは、ブロック８から１０において１回未満のエラーを記録した。抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５抗体で処置された５ＸＦＡＤトランスジェニックマウスは、アイソタイプ抗体で処置された対照５ＸＦＡＤトランスジェニックマウスよりも有意に良好に行い、ブロック５、９、及び１０では正常な非トランスジェニックマウスと識別不可能であり、このことは、認知機能の回復を示している。横線は、標準誤差を示し、＊＝Ｐ値＜０．０５、＊＊＝Ｐ値＜０．０５。
【図１７Ｙ】実施例１６に記載のとおり、７Ｅ５または対照抗体を長期注射されたＷＴまたは５ｘＦＡＤマウスの新規物体認識試験（ＮＯＲＴ）で評価された認知機能結果を示す。ＮＯＲＴ試験を、抗体での処置から１２週間後に行った。棒グラフは、新たな物体に費やした時間のパーセンテージを表す。対照抗体で処置された５ＸＦＡＤマウスは、新規物体を探査するのに約５０％の時間しか費やさなかったが、これは、高度に損なわれた認知機能を示している。対照的に、抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５で処置されたマウスは、新規物体を探査するのに６７％の時間を費やしたが、これは、正常な認知機能に近く、ほぼ完全な回復を示す。統計的解析のために、事後ＦｉｓｈｅｒのＰＬＳＤ試験を使用した＊＊＝Ｐ値＜０．０１。
【図１８】ナイーブマウスまたは示された腫瘍の種類を有するマウスの脾臓（ＳＰＬ）または腫瘍（Ｔｕｍ）に存在する指示免疫細胞集団でのＴＲＥＭ２発現を示す。
【図１９Ａ】ＭＣ３８腫瘍細胞の接種後８日目または２６日目に測定された、野生型（ＷＴ）またはＴＲＥＭ２欠損（ＫＯ）マウスにおける腫瘍サイズを示す。各ドットは、個々のマウスを示す。平均及び標準誤差（標準誤差）を示す。Ｍａｎｎ−ＷｈｉｔｎｅｙのＵ検定を統計的解析のために使用した。
【図１９Ｂ】野生型（ＷＴ）またはＴＲＥＭ２欠損（ＴＲＥＭ２  ＫＯ）マウスに移植されたＭＣ３８細胞の中央増殖曲線を示す。
【図２０】抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５の種々の用量で処置された、外傷性脳損傷を有するマウスにおける認知機能の用量依存性改善を示す。認知機能を、実施例２５に記載のとおりに新規物体認識試験（ＮＯＲＴ）で評価した。処置群は、１＝４０ｍｇ／Ｋｇの７Ｅ５、２＝２０ｍｇ／Ｋｇの７Ｅ５、３＝１０ｍｇ／Ｋｇの７Ｅ５、４＝５ｍｇ／Ｋｇの７Ｅ５及びＣＴＲ＝４０ｍｇ／Ｋｇのアイソタイプ対照抗体ｍＩｇＧ１である。ＮＯＲＴ試験を損傷後３２日目に行った。棒グラフは、２つの物体で費やした合計探査時間から、新規物体で費やした時間のパーセンテージを表す。「基線」棒グラフは、２つの同一の物体を探査するのに費やした時間を表し、これは、マウスが受けた処置に関わらず同様である。「試験」棒グラフは、新規物体を探査するのに費やした時間を表す。対照抗体で処置された外傷性脳損傷を有するマウスは、新規物体探査に５７．４±５．３％しか費やさなかったが、これは、高度な損なわれた認知機能を示している。対照的に、最高用量の抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５で処置されたマウスは、新規物体を探査するのに７３．９±５．４％の時間を費やしたが、これは、正常な認知機能に近く、ほぼ完全な回復を示す。事後ＦｉｓｈｅｒのＰＬＳＤ試験を統計的解析のために使用した＊＝Ｐ値＜０．０５。
【図２１Ａ】ブリューワーチオグリコレートを注射され、次いで、抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５またはアイソタイプ対照抗体（ｍＩｇＧ１）を投与されたＴＲＥＭ２野生型マウス（ＷＴ）及びＴＲＥＭ２ノックアウトマウス（ＫＯ）の腹腔で測定されたサイトカインＴＮＦａの量を示す。ＴＮＦａの濃度は、対照で処置されたマウスと比較して、抗体７Ｅ５で処置されたマウスでは、約６倍上昇した。
【図２１Ｂ】ブリューワーチオグリコレートを注射され、次いで、抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５またはアイソタイプ対照抗体（ｍＩｇＧ１）を投与されたＴＲＥＭ２野生型マウス（ＷＴ）及びＴＲＥＭ２ノックアウトマウス（ＫＯ）の腹腔で測定されたサイトカインＣＣＬ２の量を示す。ＣＣＬ２の濃度は、対照で処置されたマウスと比較して、抗体７Ｅ５で処置されたマウスでは、約２倍上昇した。ＴＲＥＭ２  ＫＯマウスでは起こらないので、これらのサイトカインの増加は特異的である。
【図２２】図２２Ａ及び２２Ｂは、０日目での脊髄損傷の誘導後に、抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５（７Ｅ５）またはアイソタイプ対照抗体（対照ＩｇＧ）で処置されたマウスにおいて後肢の動作を測定するためのＢａｓｓｏ  Ｍｏｕｓｅ  Ｓｃａｌｅ（ＢＭＳ）試験の結果を示す。図２２Ａは、ＢＭＳスコアを示す。図２２Ｂは、ＢＭＳサブスコアを示す。結果は、ＢＭＳスコアリングシステムによって測定した場合に、抗体７Ｅ５が、脊髄挫傷後の運動機能に一過性の改善をもたらすことを示す。＊ｐ＜０．０５、Ｔｕｋｅｙ事後検定を伴う２元配置反復ＡＮＯＶＡ。
【図２３】可溶性ＴＲＥＭ２抗体９Ｆ５または１０Ａ９と共にインキュベートした後のヒト単球由来樹状細胞の生存パーセント（％）を示す。抗体１０Ａ９とは対照的に、抗体９Ｆ５と共にインキュベートすると、樹状細胞の生存の有意な減少はない。「ｍＩｇＧ１」は、マウスアイソタイプ対照抗体を指し、「培地」は、培養培地のみの対照を指す。
【図２４Ａ】抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５での、長期デキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ）攻撃されたマウスの処置が、慢性大腸炎の症状を有意に減少させることを示す。抗体７Ｅ５で処置された、長期ＤＳＳ攻撃されたマウスの体重減少を示す。統計的解析を、２元配置ＡＮＯＶＡを使用して行った、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。
【図２４Ｂ】抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５での、長期デキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ）攻撃されたマウスの処置が、慢性大腸炎の症状を有意に減少させることを示す。抗体７Ｅ５で処置された、長期ＤＳＳ攻撃されたマウスの疾患活性指数を示す。統計的解析を、２元配置ＡＮＯＶＡを使用して行った、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。
【図２４Ｃ】抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５での、長期デキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ）攻撃されたマウスの処置が、慢性大腸炎の症状を有意に減少させることを示す。図２４Ｃは、抗体７Ｅ５で処置された、長期ＤＳＳ攻撃されたマウスの結腸の長さを示す。統計的解析を、不対ｔ検定を使用して行った、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。
【図２４Ｄ】抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５での、長期デキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ）攻撃されたマウスの処置が、慢性大腸炎の症状を有意に減少させることを示す。抗体７Ｅ５で処置された、長期ＤＳＳ攻撃されたマウスの結腸内視鏡スコアを示す。統計的解析を、不対ｔ検定を使用して行った、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。
【図２５Ａ】抗ＴＲＥＭ２抗体９Ｆ５が、マウスマクロファージによって発現されるヒトＴＲＥＭ２に結合し、架橋し得ることを示す。ヒト特異的ＴＲＥＭ２抗体９Ｆ５及び１０Ａ９の、ヒト化ＴＥＭ２  ＢＡＣトランスジェニックマウス（ｈｕＴＲＥＭ２  Ｔｇ）からのマクロファージ上に発現されるヒトＴＲＥＭ２への結合を実証し、野生型マウス（ＷＴ）からのマクロファージ上では結合しないことを実証する、ＦＡＣＳヒストグラムを示す。ヒト及びマウスＴＲＥＭ２（抗体２Ｆ５及びＲ＆Ｄ製の市販の抗体）の両方に結合する抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＷＴ及びｈｕＴＲＥＭ２  Ｔｇマウスの両方からのマクロファージ上に発現されるＴＲＥＭ２へのプラスの結合を示す。灰色網掛けのプロットは、アイソタイプ染色された細胞であり、黒線のヒストグラムは、抗ＴＲＥＭ２抗体で染色された細胞を示す。
【図２５Ｂ】抗ＴＲＥＭ２抗体９Ｆ５が、マウスマクロファージによって発現されるヒトＴＲＥＭ２に結合し、架橋し得ることを示す。インビトロでプレート結合９Ｆ５または対照抗体で刺激された、ヒト化ＴＥＭ２  ＢＡＣトランスジェニックマウス（Ｂａｃ−Ｔｇ）からのマクロファージによるＴＮＦαの分泌を示す。
【図２５Ｃ】抗ＴＲＥＭ２抗体９Ｆ５が、マウスマクロファージによって発現されるヒトＴＲＥＭ２に結合し、架橋し得ることを示す。ヒト化ＴＥＭ２  ＢＡＣトランスジェニックマウス（Ｂａｃ−Ｔｇ）または野生型マウス（ＷＴ）からのマクロファージ上での抗ＴＲＥＭ２抗体９Ｆ５のインビトロクラスター化後のＤａｐ１２リン酸化（ｐＴｙｒ）を示す。対照Ｉ抗体は、Ｄａｐ１２リン酸化を誘導しなかった。
【図２６Ａ】野生型マウス（ＷＴ）と比較した、ヒトＴＲＥＭ２  ＢＡＣトランスジェニックマウス（ｈｕＴＲＥＭ２  Ｔｇ）において測定された可溶性ヒトＴｒｅｍ２（ｓＴＲＥＭ２）のレベルを示す。抗ＴＲＥＭ２抗体Ｔ２１−９は、ｓＴＲＥＭ２の血漿中レベルを有意に上昇させる一方で、抗ＴＲＥＭ２抗体９Ｆ５は、上昇させない。
【図２６Ｂ】抗ＴＲＥＭ２抗体Ｔ２１−９とは対照的に、抗ＴＲＥＭ２抗体９Ｆ５が血漿サンプルにおいてｓＴＲＥＭ２に非常に弱くしか結合しないことを示す。Ｘ軸は、試験された血漿の希釈係数を示し、Ｙ軸は、光学密度の読み取りを示す。
【発明を実施するための形態】
【００５９】
一般的な技術
当業者らによる従来の方法論、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  ３ｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ（２００１）  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．；Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ  ａｌ．ｅｄｓ．，（２００３））；ｔｈｅ  ｓｅｒｉｅｓ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）：ＰＣＲ  ２：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｍ．Ｊ．ＭａｃＰｈｅｒｓｏｎ，Ｂ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ  ａｎｄ  Ｇ．Ｒ．Ｔａｙｌｏｒ  ｅｄｓ．（１９９５）），Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，ｅｄｓ．（１９８８）  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，ａｎｄ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，ｅｄ．（１９８７））；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ，ｅｄ．，１９８４）；Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ；Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｎｏｔｅｂｏｏｋ（Ｊ．Ｅ．Ｃｅｌｌｉｓ，ｅｄ．，１９９８）  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ；Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ），ｅｄ．，１９８７）；Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｊ．Ｐ．Ｍａｔｈｅｒ  ａｎｄ  Ｐ．Ｅ．Ｒｏｂｅｒｔｓ，１９９８）  Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ；Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ（Ａ．Ｄｏｙｌｅ，Ｊ．Ｂ．Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ，ａｎｄ  Ｄ．Ｇ．Ｎｅｗｅｌｌ，ｅｄｓ．，１９９３−８）  Ｊ．Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ；Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｄ．Ｍ．Ｗｅｉｒ  ａｎｄ  Ｃ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，ｅｄｓ．）；Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ（Ｊ．Ｍ．Ｍｉｌｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ，ｅｄｓ．，１９８７）；ＰＣＲ：Ｔｈｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ，（Ｍｕｌｌｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９４）；Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９１）；Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，１９９９）；Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ（Ｃ．Ａ．Ｊａｎｅｗａｙ  ａｎｄ  Ｐ．Ｔｒａｖｅｒｓ，１９９７）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｐ．Ｆｉｎｃｈ，１９９７）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｄ．Ｃａｔｔｙ．，ｅｄ．，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，１９８８−１９８９）；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐ．Ｓｈｅｐｈｅｒｄ  ａｎｄ  Ｃ．Ｄｅａｎ，ｅｄｓ．，Ｏｘｆｏｒｄ  ���ｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，２０００）；Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｅ．Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｄ．Ｌａｎｅ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，１９９９）；Ｔｈｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｍ．Ｚａｎｅｔｔｉ  ａｎｄ  Ｊ．Ｄ．Ｃａｐｒａ，ｅｄｓ．，Ｈａｒｗｏｏｄ  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，１９９５）；及びＣａｎｃｅｒ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ（Ｖ．Ｔ．ＤｅＶｉｔａ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｊ．Ｂ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９３）に記載されている、広く利用されている方法論などを使用する、本明細書に記載または参照される技術及び手順は、一般によく理解されており、一般的に用いられる。
【００６０】
定義
本明細書で使用される場合、用語「予防する」は、個体における特定の疾患、障害、または状態の発生または再発に関する予防法の提供を含む。個体は、特定の疾患、障害、もしくは状態に罹患しやすい、かかりやすい、またはそのような疾患、障害、もしくは状態を発症するリスクがあり得るが、まだ疾患、障害、もしくは状態と診断されていない。
【００６１】
本明細書で使用される場合、特定の疾患、障害、または状態を発症する「リスクがある」個体は、本明細書に記載の処置方法の前に、検出可能な疾患または疾患の症状を有してもよいし、または有しなくてもよく、かつ検出可能な疾患または疾患の症状を示してもよいし、または示さなくてもよい。「リスクがある」は、個体が、当技術分野で公知のとおり、特定の疾患、障害、または状態の発症と相関する測定可能なパラメータである１つまたは複数のリスク因子を有することを示す。これらのリスク因子の１つまたは複数を有する個体は、これらのリスク因子の１つまたは複数を有しない個体よりも、特定の疾患、障害、または状態を発症する確率が高い。
【００６２】
本明細書で使用される場合、用語「処置」は、臨床病理の経過中に処置される個体の自然経過を変更するように設計された臨床的介入を指す。望ましい治療効果には、進行速度を減少させること、病的状態を改善すること、または軽減させること、及び特定の疾患、障害、または状態の寛解または予後の改善が含まれる。個体は、例えば、特定の疾患、障害、または状態と関連する１つまたは複数の症状が緩和または排除される場合、成功裏に「処置される」。
【００６３】
「有効量」は、所望の治療または予防結果を達成するために必要な投薬量及び期間での、少なくとも有効である量を指す。有効量は、１回または複数回の投与で提供することができる。本明細書における有効量は、個体の病状、年齢、性別、及び体重などの因子、ならびに個体において治療が所望の反応を誘導する能力に応じて変化し得る。有効量はまた、処置の有毒または有害作用を、治療上の有益効果が上回るものである。予防的使用については、有益な、または所望の結果には、疾患、その合併症、及び疾患の発症の過程で見られる中間の病理学的表現型の生化学的、組織学的、及び／または行動上の症状を含めた疾患のリスクの除去もしくは低減、重症度の軽減、または発症の遅延などの結果が含まれる。治療的使用については、有益な、または所望の結果には、臨床結果、例えば、疾患に起因する１つまたは複数の症状の軽減、疾患に罹患しているものの生活の質の向上、疾患の治療に必要な他の薬物の用量の低減、例えば標的化を介した別の薬物の効果の増強、疾患の進行の遅延、及び／または生存の延長が含まれる。薬物、化合物、または医薬組成物の有効量は、直接もしくは間接的に予防的または治療的処置を達成するのに十分な量である。臨床状況で理解されるように、薬物、化合物、または医薬組成物の有効量は、別の薬物、化合物、または医薬組成物と併せて達成されてもよいし、またはされなくてもよい。したがって、「有効量」は、１つまたは複数の治療薬の投与に照らして判断され得、単一の薬剤は、１つまたは複数の他の薬剤と併せて所望の結果が達成され得るか、または達成される場合に、有効量で与えられると見なされ得る。
【００６４】
「治療有効量」は、特定の疾患、障害、または状態の測定可能な改善を生じるのに少なくとも必要とされる最小濃度である。本明細書の治療有効量は、患者の病状、年齢、性別、及び体重、ならびに個体において所望の応答を誘導する抗ＴＲＥＭ２抗体の能力などの因子に従い、変化することがある。治療有効量は、抗ＴＲＥＭ２抗体の有毒または有害な任意の作用よりも、治療上の有益な効果が上回る量でもある。
【００６５】
本明細書で使用される場合、別の化合物または組成物と「併せて」投与することには、同期投与及び／または異なる時における投与が含まれる。併せて投与することには、異なる投薬頻度または間隔のもの、及び同じ投与経路または異なる投与経路を使用するものも含まれる、共製剤としての投与または別の組成物としての投与も包含される。
【００６６】
「免疫グロブリン」（Ｉｇ）という用語は、本明細書の「抗体」と互換的に使用される。本明細書の用語「抗体」は、最も広い意味で使用され、具体的には、それらが所望の生物学的活性を示す限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、少なくとも２つのインタクトな抗体から形成される多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び抗体フラグメントを含める。
【００６７】
基本的な４本鎖の抗体単位は、２本の同一の軽（Ｌ）鎖及び２本の同一の重（Ｈ）鎖からなるヘテロ四量体の糖タンパク質である。ＶＨとＶＬが一緒に対合することで、単一の抗原結合性部位が形成される。異なるクラスの抗体の構造及び特性については、例えば、Ｂａｓｉｃ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，８ｔｈ  Ｅｄ．，Ｄａｎｉｅｌ  Ｐ．Ｓｔｉｔｅｓ，Ａｂｂａ  Ｉ．Ｔｅｒｒ  ａｎｄ  Ｔｒｉｓｔｒａｍ  Ｇ．Ｐａｒｓｌｏｗ（ｅｄｓ．），Ａｐｐｌｅｔｏｎ  ＆  Ｌａｎｇｅ，Ｎｏｒｗａｌｋ，ＣＴ，１９９４，ｐａｇｅ  ７１及びＣｈａｐｔｅｒ  ６を参照されたい。
【００６８】
任意の脊椎動物種由来のＬ鎖は、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づき、カッパ（「κ」）及びラムダ（「λ」）と呼ばれる２つの明らかに異なる種類のうちの１つに割り当てることができる。それらの重鎖定常ドメイン（ＣＨ）のアミノ酸配列に応じて、免疫グロブリンは異なるクラスまたはアイソタイプに割り当てることができる。５つのクラスの免疫グロブリン、すなわち、それぞれアルファ（「α」）、デルタ（「δ」）、イプシロン（「ε」）、ガンマ（「γ」）、及びミュー（「μ」）と指定された重鎖を有するＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭがある。γ及びαクラスは、ＣＨ配列及び機能における比較的小さな差異に基づき、さらにサブクラス（アイソタイプ）に分けられる。例えば、ヒトは以下のサブクラスを発現する：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２。サブユニット構造及び異なるクラスの免疫グロブリンの三次元形状は周知であり、例えば、Ａｂｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈ  ｅｄ．（Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ  Ｃｏ．，２０００）に一般的に記載されている。
【００６９】
「天然抗体」は通常、２つの同一の軽（Ｌ）鎖及び２つの同一の重（Ｈ）鎖から構成される、約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。各軽鎖は、１つの共有ジスルフィド結合によって、重鎖に結合されているが、ジスルフィド結合の数は、異なる免疫グロブリンアイソタイプの重鎖によって異なる。各重鎖及び軽鎖はまた、規則的間隔の鎖内ジスルフィド架橋も有している。各重鎖は、一端に、多数の定常ドメインが続く可変ドメイン（ＶＨ）を有する。各軽鎖は、一端に可変ドメイン（ＶＬ）を、その他端に定常ドメインを有し、軽鎖の定常ドメインは、重鎖の可変ドメインと整列しており、軽鎖可変ドメインは、重鎖の可変ドメインと整列している。特定のアミノ酸残基は、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインの間のインターフェースを形成すると考えられている。
【００７０】
本開示の単離抗ＴＲＥＭ２抗体などの「単離」抗体は、（例えば、天然または組換えでの）産生環境の構成成分から、同定、分離、及び／または回収されている抗体である。好ましくは、単離ポリペプチドは、産生環境からの他の全ての汚染構成成分との関連性がない。組換え遺伝子導入された細胞から生じるような、産生環境からの汚染構成成分は通常、抗体に対する研究、診断、または治療的使用に支障を来すことになる材料であり、酵素、ホルモン、及び他のタンパク質溶質または非タンパク質溶質を含むことがある。好ましい実施形態では、ポリペプチドは、（１）例えば、Ｌｏｗｒｙ法によって測定される場合、９５重量％を超えるまで、一部の実施形態では、９９重量％を超えるまで、（２）Ｎ末端の少なくとも１５残基、もしくはスピニングカップシーケンサーの使用によって内部アミノ酸配列を得るために十分な程度まで、または（３）クーマシーブルーもしくは好ましくは、銀染色を使用して、非還元もしくは還元条件下のＳＤＳ−ＰＡＧＥによって、均一になるまで精製されることになる。単離抗体は、組換えＴ細胞内のｉｎ  ｓｉｔｕ抗体を含む。それというのも、抗体の自然環境の少なくとも１つの構成成分は、存在しないからである。しかしながら、普通は、単離ポリペプチドまたは抗体は、少なくとも１つの精製段階によって調製されるであろう。
【００７１】
本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体などの抗体の「可変領域」または「可変ドメイン」は、抗体の重鎖または軽鎖のアミノ末端ドメインを指す。重鎖及び軽鎖の可変ドメインは、それぞれ、「ＶＨ」及び「ＶＬ」と称されることがある。これらのドメインは一般に、（同じクラスの他の抗体と比較して）抗体の最も可変な部分であり、抗原結合部位を含有する。
【００７２】
「可変」という用語は、可変ドメインの特定のセグメントが、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体などの抗体間の配列において広範囲にわたって異なるという事実を指す。Ｖドメインは、抗原結合を媒介し、特定の抗体の、特定の抗原に対する特異性を規定する。しかし、可変性は、可変ドメインのスパン全体にわたって均一に分布しない。その代わりに、可変性は、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインの両方の超可変領域（ＨＶＲ）と呼ばれる３つのセグメントに集中する。可変ドメインの、より高度保存された部分は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。天然の重鎖及び軽鎖の可変ドメインはそれぞれ、主にベータシート立体配置をとり、ベータシート構造を連結させるループを形成し、場合によっては、ベータシート構造の一部を形成する、３つのＨＶＲによって連結される４つのＦＲ領域を含む。各鎖のＨＶＲは、ＦＲ領域によって、共に近接して保たれ、他の鎖のＨＶＲと共に、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）を参照されたい）。定常ドメインは、抗体の抗原への結合に直接関与しないが、抗体の抗体依存性細胞毒性への関与などの種々のエフェクター機能を示す。
【００７３】
本明細書で使用される場合、「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均一な抗体の集団から得られた本開示のモノクローナル抗ＴＲＥＭ２抗体などの抗体を指し、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、少量で存在し得る可能な天然変異及び／または翻訳後修飾（例えば、異性化、アミド化など）を除いて同一である。モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、単一の抗原部位に対して向けられる。典型的には異なる決定基（エピトープ）に対して向けられる異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対して向けられる。それらの特異性に加えて、モノクローナル抗体は、他の免疫グロブリンによって汚染されていない、ハイブリドーマ培養によって合成される点で有利である。「モノクローナル」という修飾語は、実質的に均一な抗体集団から得られるような抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の生産を必要とすると解釈されるべきではない。例えば、本発明に従って使用されるべきモノクローナル抗体は、例えば、ハイブリドーマ法（例えば、Ｋｏｈｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ．，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５−９７（１９７５）；Ｈｏｎｇｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ，１４（３）：２５３−２６０（１９９５），Ｈａｒｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，２ｄ  ｅｄ．１９８８）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，ｉｎ：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｔ−Ｃｅｌｌ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ５６３−６８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８１））、組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照されたい）、ファージディスプレイ技術（例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８（１９９１）；Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９２）；Ｓｉｄｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９−３１０（２００４）；Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３−１０９３（２００４）；Ｆｅｌｌｏｕｓｅ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０１（３４）：１２４６７−４７２（２００４）；及びＬｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２８４（１−２）：１１９−１３２（２００４））、ならびにヒト免疫グロブリン遺伝子座またはヒト免疫グロブリン配列をコードする遺伝子の一部または全部を有する動物においてヒトまたはヒト様抗体を生産するための技術（例えば、ＷＯ１９９８／２４８９３；ＷＯ１９９６／３４０９６；ＷＯ１９９６／３３７３５；ＷＯ１９９１／１０７４１；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：２５５１（１９９３）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３６２：２５５−２５８（１９９３）；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｙｅａｒ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．７：３３（１９９３）；米国特許第５，５４５，８０７号；��第５，５４５，８０６号；同第５，５６９，８２５号；同第５，６２５，１２６号；同第５，６３３，４２５号；及び同第５，６６１，０１６号；Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：７７９−７８３（１９９２）；Ｌｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：８５６−８５９（１９９４）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：８１２−８１３（１９９４）；Ｆｉｓｈｗｉｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：８４５−８５１（１９９６）；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：８２６（１９９６）；ならびにＬｏｎｂｅｒｇ  ａｎｄ  Ｈｕｓｚａｒ，Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５−９３（１９９５）を参照されたい）を包含する様々な技術によって作製され得る。
【００７４】
「全長抗体」、「インタクト抗体」、または「完全抗体」という用語は、抗体フラグメントとは対照的に、実質的にインタクトな形態の、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体などの抗体を指すために互換的に使用される。具体的には、完全抗体には、Ｆｃ領域を含む、重鎖及び軽鎖を有する抗体が含まれる。定常ドメインは、天然配列定常ドメイン（例えば、ヒト天然配列定常ドメイン）またはそのアミノ酸配列多様体であってもよい。場合によっては、インタクトな抗体は、１つまたは複数のエフェクター機能を有することがある。
【００７５】
「抗体フラグメント」は、インタクト抗体の一部、好ましくは、インタクト抗体の抗原結合性領域及び／または可変領域を含む。抗体フラグメントの例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２及びＦｖフラグメント；ダイアボディ；線状抗体（米国特許第５，６４１，８７０号の実施例２；Ｚａｐａｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．８（１０）：１０５７−１０６２（１９９５）を参照されたい）；一本鎖抗体分子；ならびに抗体フラグメントから形成される多重特異性抗体が含まれる。
【００７６】
本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体などの抗体のパパイン消化は、「Ｆａｂ」フラグメントと呼ばれる２つの同一の抗原結合フラグメント、及び残りの「Ｆｃ」フラグメント（名称が容易に結晶化する能力を反映している）を生じる。Ｆａｂフラグメントは、Ｈ鎖の可変領域ドメイン（ＶＨ）と共にＬ鎖全体、及び１つの重鎖の第１定常領域（ＣＨ１）からなる。各Ｆａｂフラグメントは、抗原結合に関して一価であり、すなわち、単一の抗原結合部位を有する。抗体のペプシン処理は、異なる抗原結合活性を有する２つのジスルフィド結合されたＦａｂフラグメントにおおよそ対応し、依然として抗原を架橋できる単一の大きなＦ（ａｂ’）２フラグメントをもたらす。Ｆａｂ’フラグメントは、抗体ヒンジ領域由来の１つまたは複数のシステインを含むＣＨ１ドメインのカルボキシ末端に、いくつかのさらなる残基を有する点で、Ｆａｂフラグメントとは異なる。Ｆａｂ’−ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基（複数可）が、遊離チオール基を持つＦａｂ’のための本明細書での名称である。Ｆ（ａｂ’）２抗体フラグメントは元々、それらの間にヒンジシステインを有するＦａｂ’フラグメントのペアとして生産された。抗体フラグメントの他の化学的連結も、知られている。
【００７７】
Ｆｃフラグメントは、ジスルフィドで共に保持される両方のＨ鎖のカルボキシ末端部分を含む。抗体のエフェクター機能は、Ｆｃ領域の配列によって決定され、領域は、特定種類の細胞に見られるＦｃ受容体（ＦｃＲ）によっても認識される。
【００７８】
「Ｆｖ」は、完全な抗原認識及び抗原結合部位を含有する最小の抗体フラグメントである。このフラグメントは、緊密に非共有結合的に会合した、１つの重鎖可変領域ドメイン及び１つの軽鎖可変領域ドメインの二量体からなる。これらの２つのドメインの折りたたみから、抗原結合のためのアミノ酸残基に寄与して、抗体に抗原結合特異性を付与する６つの超可変ループ（それぞれＨ鎖及びＬ鎖から３ループ）が出ている。しかしながら、単一の可変ドメイン（または抗原に特異的な３つのＨＶＲのみを含むＦｖの半分）は、結合部位全体よりも親和性が低いが、抗原を認識して結合する能力を有する。
【００７９】
「ｓＦｖ」または「ｓｃＦｖ」とも略記される「一本鎖Ｆｖ」は、単一のポリペプチド鎖に連結されたＶＨ及びＶＬ抗体ドメインを含む抗体フラグメントである。好ましくは、ｓＦｖポリペプチドは、ｓＦｖが抗原結合のための所望の構造を形成することを可能にするＶＨドメイン及びＶＬドメインとの間に、ポリペプチドリンカーをさらに含み、このことで、ｓＦｖは、抗原結合のための所望の構造を形成することが可能となる。ｓＦｖの概説については、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ  ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ  ａｎｄ  Ｍｏｏｒｅ  ｅｄｓ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９−３１５（１９９４）を参照されたい。
【００８０】
本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体などの抗体の「機能的フラグメント」は、インタクトな抗体の抗原結合もしくは可変領域またはＦｃＲ結合能を保持する、もしくは修飾している抗体のＦ領域を一般に含むインタクトな抗体の一部を含む。抗体フラグメントの例には、線状抗体、一本鎖抗体分子、及び抗体フラグメントから形成される多重特異性抗体が含まれる。
【００８１】
「ダイアボディ」という用語は、Ｖドメインの鎖間ペアリングではなく鎖内ペアリングが達成され、それによって２価のフラグメント、すなわち、２つの抗原結合部位を有するフラグメントを生じるように、ＶＨドメイン及びＶＬドメインとの間に短いリンカー（約５〜１０残基）を有するｓＦｖフラグメント（先行段落を参照されたい）を構築することによって調製された小さな抗体フラグメントを指す。二重特異性ダイアボディは、２つの抗体のＶＨ及びＶＬドメインが異なるポリペプチド鎖上に存在する２つの「クロスオーバー」ｓＦｖフラグメントのヘテロ二量体である。ダイアボディは、例えば、欧州特許第４０４，０９７号；ＷＯ９３／１１１６１；Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４−４８（１９９３）に、より詳細に記載されている。
【００８２】
本明細書で使用される場合、「キメラ抗体」は、所望の生物学的活性を示す限り、重鎖及び／または軽鎖の一部が特定の種に由来する、または特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一または相同であるが、鎖（複数可）の残部が別の種に由来する、または別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一または相同である本開示のキメラ抗ＴＲＥＭ２抗体などの抗体（免疫グロブリン）、さらには、そのような抗体のフラグメントを指す（米国特許第４，８１６，５６７号；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１−５５（１９８４））。本明細書の目的のキメラ抗体は、抗体の抗原結合領域が、例えば、目的の抗原をマカクザルに免疫することによって生産される抗体に由来するＰＲＩＭＡＴＩＺＥＤ（登録商標）抗体を含む。本明細書で使用される場合、「ヒト化抗体」は、「キメラ抗体」のサブセットとして使用される。
【００８３】
本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体のヒト化形態などの非ヒト（例えばネズミ）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小限の配列を含有するキメラ抗体である。一実施形態では、ヒト化抗体は、レシピエントのＨＶＲ由来の残基が、所望の特異性、親和性、及び／または能力を有する、マウス、ラット、ウサギ、または非ヒト霊長類などの非ヒト種（ドナー抗体）のＨＶＲ由来の残基によって置き換えられたヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。一部の場合では、ヒト免疫グロブリンのＦＲ残基は、対応する非ヒト残基によって置き換えられる。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体またはドナー抗体に見出されない残基を含むことがある。これらの修飾は、結合親和性などの抗体性能をさらに精密化するために行われることがある。一般に、ヒト化抗体は、超可変ループの全てまたは実質的に全てが、非ヒト免疫グロブリン配列のものに対応し、ＦＲ領域の全てまたは実質的に全てが、ヒト免疫グロブリン配列のものである、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含むであろう。ただし、ＦＲ領域は、結合親和性、異性化、免疫原性などの抗体性能を改善する１つまたは複数の個々のＦＲ残基置換を含んでもよい。ＦＲのこれらのアミノ酸置換の数は典型的に、Ｈ鎖では６以下であり、Ｌ鎖では３以下である。ヒト化抗体は任意選択で、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部分、典型的に、ヒト免疫グロブリンのものを含むであろう。さらなる詳細については、例えば、Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２９（１９８８）；及びＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３−５９６（１９９２）を参照されたい。さらに、例えば、Ｖａｓｗａｎｉ  ａｎｄ  Ｈａｍｉｌｔｏｎ，Ａｎｎ．Ａｌｌｅｒｇｙ，Ａｓｔｈｍａ  ＆  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１：１０５−１１５（１９９８）；Ｈａｒｒｉｓ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ  ２３：１０３５−１０３８（１９９５）；Ｈｕｒｌｅ  ａｎｄ  Ｇｒｏｓｓ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．５：４２８−４３３（１９９４）；ならびに米国特許第６，９８２，３２１号及び同第７，０８７，４０９号を参照されたい。
【００８４】
「ヒト抗体」は、ヒトによって産生される、及び／または本明細書で開示されるとおり、ヒト抗体を作成するための技術のいずれかを使用して作製されている、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体などの抗体の配列に対応するアミノ酸配列を有する抗体である。ヒト抗体のこの定義は特に、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を特異的に排除する。ヒト抗体は、ファージディスプレイライブラリを含む、様々な当技術分野で公知の技術を使用して生産することができる。Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１（１９９１）；Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１（１９９１）。また、Ｃｏｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，ｐ．７７（１９８５）；Ｂｏｅｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７（１）：８６−９５（１９９１）に記載されている方法は、ヒトモノクローナル抗体の調製に利用可能である。ｖａｎ  Ｄｉｊｋ  ａｎｄ  ｖａｎ  ｄｅ  Ｗｉｎｋｅｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８−７４（２００１）も参照されたい。ヒト抗体は、抗原暴露に応答してこのような抗体を産生するために修飾されているが、その内因性の遺伝子座は無効化されているトランスジェニック動物に、抗原を投与することによって調製することができる（例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術に関する米国特許第６，０７５，１８１号、及び同第６，１５０，５８４号を参照されたい）。また、例えば、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術によって生成されたヒト抗体に関するＬｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０３：３５５７−３５６２（２００６）を参照されたい。
【００８５】
「超可変領域」、「ＨＶＲ」、または「ＨＶ」という用語は、本明細書で使用される場合、配列中で超可変である、及び／または構造的に規定されたループを形成する、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体のような抗体可変ドメインの領域を指す。一般に、抗体は、６つのＨＶＲ；ＶＨの３つ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）及びＶＬの３つ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）を含む。天然抗体では、Ｈ３及びＬ３は、６つのＨＶＲのほとんどの多様性を示し、Ｈ３は特に、抗体に細かい特異性を付与することにおいて、独特の役割を果たすと考えられている。例えば、Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １３：３７−４５（２０００）；Ｊｏｈｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｗｕ  ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２４８：１−２５（Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３））を参照されたい。実際に、天然に存在するラクダ抗体は、軽鎖の非存在下では機能的で安定な重鎖のみからなる。例えば、Ｈａｍｅｒｓ−Ｃａｓｔｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３６３：４４６−４４８（１９９３）及びＳｈｅｒｉｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．３：７３３−７３６（１９９６）を参照されたい。
【００８６】
複数のＨＶＲの描写が使用されており、本明細書に包含される。Ｋａｂａｔ相補性決定領域（ＣＤＲ）であるＨＶＲは、配列可変性に基づいており、最も一般的に使用されている（前出Ｋａｂａｔら）。その代わりに、Ｃｈｏｔｈｉａは、構造ループの位置を指す（Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ  Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７））。ＡｂＭ  ＨＶＲは、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ及びＣｈｏｔｈｉａ構造ループとの間の折衷案を表し、Ｏｘｆｏｒｄ  ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアによって使用される。「接触」ＨＶＲは、利用可能な複雑な結晶構造の分析に基づいている。これらのＨＶＲのそれぞれからの残基を以下に示す。
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【００８７】
ＨＶＲは、次のように「拡張ＨＶＲ」を含んでもよい：ＶＬの２４〜３６または２４〜３４（Ｌ１）、４６〜５６または５０〜５６（Ｌ２）、及び８９〜９７または８９〜９６（Ｌ３）、ならびに、ＶＨの２６〜３５（Ｈ１）、５０〜６５または４９〜６５（好ましい実施形態）（Ｈ２）、及び９３〜１０２、９４〜１０２、または９５〜１０２（Ｈ３）。可変ドメイン残基は、これらの拡張ＨＶＲの定義のそれぞれについて、前出Ｋａｂａｔらに従ってナンバリングされる。
【００８８】
「フレームワーク」または「ＦＲ」残基は、本明細書において規定するとおりのＨＶＲ残基以外の可変ドメイン残基である。
【００８９】
「Ｋａｂａｔにおいてのとおりの可変ドメイン残基ナンバリング」または「Ｋａｂａｔにおいてのとおりのアミノ酸位置ナンバリング」という表現及びその変形形態は、前出Ｋａｂａｔらにおける抗体の編集の重鎖可変ドメインまたは軽鎖可変ドメインで使用されるナンバリングシステムを指す。このナンバリングシステムを使用して、実際の線状アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＲまたはＨＶＲの短縮、または、これへの挿入に対応する、より少ないまたは追加のアミノ酸を含有してもよい。例えば、重鎖可変ドメインは、Ｈ２の残基５２の後に単一のアミノ酸インサート（Ｋａｂａｔによる残基５２ａ）、ならびに重鎖ＦＲ残基８２の後に挿入された残基（例えば、Ｋａｂａｔによる残基８２ａ、８２ｂ及び８２ｃなど）を含んでもよい。所与の抗体に対する残基のＫａｂａｔナンバリングは、抗体の配列の相同性の領域を、「標準」Ｋａｂａｔナンバリングされた配列と整列させることによって決定されてもよい。
【００９０】
Ｋａｂａｔナンバリングシステムは一般に、可変ドメインの残基（およそ軽鎖の残基１〜１０７及び重鎖の残基１〜１１３）を指す場合に使用される（例えば、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ．５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１））。「ＥＵまたはＫａｂａｔナンバリングシステム」または「ＥＵインデックス」は一般に、免疫グロブリン重鎖定常領域の残基を指す場合に使用される（例えば、前出Ｋａｂａｔらで報告されるＥＵインデックス）。「ＫａｂａｔのＥＵインデックス」は、ヒトＩｇＧ１  ＥＵ抗体の残基ナンバリングを指す。抗体の可変ドメインにおける残基番号への言及は、Ｋａｂａｔナンバリングシステムによる残基ナンバリングを意味する。抗体の定常領域における残基番号への言及は、ＥＵまたはＫａｂａｔナンバリングシステムによる残基ナンバリングを意味する（例えば、米国特許出願公開第２０１０−２８０２２７号を参照されたい）。
【００９１】
本明細書で使用される場合の「アクセプターヒトフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークに由来するＶＬまたはＶＨフレームワークのアミノ酸配列を含むフレームワークである。ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワーク「に由来する」アクセプターヒトフレームワークは、その同じアミノ酸配列を含んでいてもよく、または既存のアミノ酸配列変化を含有してもよい。一部の実施形態では、既存のアミノ酸変化の数は、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、または２以下である。既存のアミノ酸変化がＶＨに存在する場合、好ましいこれらの変化は、位置７１Ｈ、７３Ｈ、及び７８Ｈの３つ、２つ、または１つのみで生じ、例えば、これらの位置のアミノ酸残基は、７１Ａ、７３Ｔ、及び／または７８Ａであってもよい。一実施形態では、ＶＬアクセプターヒトフレームワークは、配列が、ＶＬヒト免疫グロブリンフレームワーク配列またはヒトコンセンサスフレームワーク配列と同一である。
【００９２】
「ヒトコンセンサスフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨフレームワーク配列の選択において、最も一般的に生じるアミノ酸残基を表すフレームワークである。一般に、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列のサブグループからのものである。一般に、配列のサブグループは、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）においてのとおりのサブグループである。例えば、ＶＬでは、サブグループは、前出ＫａｂａｔらのようなサブグループカッパＩ、カッパＩＩ、カッパＩＩＩ、またはカッパＩＶであってもよい。加えて、ＶＨでは、サブグループは、前出ＫａｂａｔらのようなサブグループＩ、サブグループＩＩ、またはサブグループＩＩＩであってもよい。
【００９３】
例えば、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体の、特定の位置での「アミノ酸修飾」は、特定の残基の置換もしくは欠失、または特定の残基に隣接する少なくとも１つのアミノ酸残基の挿入を指す。特定の残基に「隣接している」挿入は、その１〜２残基内の挿入を意味する。挿入は、特定の残基のＮ末端またはＣ末端であってもよい。本明細書の好ましいアミノ酸修飾は、置換である。
【００９４】
本開示の親和性成熟抗ＴＲＥＭ２抗体などの「親和性成熟」抗体は、その１つまたは複数のＨＶＲに１つまたは複数の改変を有する抗体であり、これらは、これらの改変（複数可）を有さない親抗体と比較して、抗原に対する抗体の親和性に改善をもたらす。一実施形態では、親和性成熟抗体は、標的抗原に対するナノモルまたはさらにピコモルの親和性を有する。親和性成熟抗体は、当技術分野で公知の手順によって生産される。例えば、Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：７７９−７８３（１９９２）は、ＶＨドメイン及びＶＬドメインシャッフリングによる親和性成熟について記載する。ＨＶＲ及び／またはフレームワーク残基のランダム変異導入は、例えば、Ｂａｒｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９１：３８０９−３８１３（１９９４）；Ｓｃｈｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｇｅｎｅ  １６９：１４７−１５５（１９９５）；Ｙｅｌｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５：１９９４−２００４（１９９５）；Ｊａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４（７）：３３１０−９（１９９５）；及びＨａｗｋｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２６：８８９−８９６（１９９２）によって記載されている。
【００９５】
本明細書で使用する場合、「特異的に認識する」または「特異的に結合する」という用語は、生物学的分子を含む分子の異種集団の存在下で、標的の存在を決定づける、例えば、抗ＴＲＥＭ２抗体及びＴＲＥＭ２の間などの標的及び抗体の間の引力または結合などの測定可能で再現性のある相互作用を指す。例えば、標的またはエピトープに特異的または優先的に結合する、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体などの抗体は、他の標的または標的の他のエピトープに結合するよりも、より高い親和性、抗体結合活性を有し、より容易に、及び／またはより長い期間、この標的またはエピトープに結合する抗体である。例えば、第１の標的に特異的または優先的に結合する抗体（または部分）は、第２の標的に特異的または優先的に結合することがある、または結合しないことがあることが、この定義を読むことによっても理解される。したがって、「特異的結合」または「優先的結合」は、排他的結合を（含むことができるが）必ずしも必要とはしない。標的に特異的に結合する抗体は、少なくとも約１０３Ｍ−１もしくは１０４Ｍ−１の、時によると、約１０５Ｍ−１もしくは１０６Ｍ−１、他の場合、約１０６Ｍ−１もしくは１０７Ｍ−１、約１０８Ｍ−１〜１０９Ｍ−１、または１０１０Ｍ−１〜１０１１Ｍ−１以上の結合定数を有し得る。様々なイムノアッセイフォーマットは、特定のタンパク質と特異的免疫反応性のある抗体を選択するために使用することができる。例えば、固相ＥＬＩＳＡイムノアッセイは、タンパク質と特異的免疫反応性のあるモノクローナル抗体を選択するために日常的に使用される。特異的免疫反応性を決定するために使用することができるイムノアッセイフォーマット及び条件の記載については、例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（１９８８）  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋを参照されたい。
【００９６】
本明細書で使用される場合、ＴＲＥＭ２タンパク質またはＤＡＰ１２タンパク質及び第２のタンパク質の間の「相互作用」は、限定ではないが、タンパク質−タンパク質相互作用、物理的相互作用、化学的相互作用、結合、共有結合、及びイオン結合を包含する。本明細書で使用される場合、抗体が、２つのタンパク質間の相互作用を、破壊、低減、または完全に排除するときに、抗体は、２つのタンパク質間の「相互作用を阻害する」。本開示の抗体またはそのフラグメントは、抗体またはそのフラグメントが、２つのタンパク質の１つに結合するときに、２つのタンパク質間の「相互作用を阻害する」。
【００９７】
「アゴニスト」抗体または「活性化」抗体は、抗体が抗原に結合した後に、抗原の１つまたは複数の活性または機能を誘導する（例えば、増加させる）、本開示のアゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体などの抗体である。
【００９８】
「アンタゴニスト」抗体または「遮断」抗体は、抗体が抗原に結合した後に、１つまたは複数のリガンドに結合する抗原を低減させ、または排除する（例えば、減少させる）、及び／または抗体が抗原に結合した後に、抗原の１つ以上の活性または機能を低減させる、または排除する（例えば、減少させる）、本開示のアンタゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体などの抗体である。一部の実施形態では、アンタゴニスト抗体、または遮断抗体は、１つまたは複数のリガンドへの抗原結合、及び／または抗原の１つまたは複数の活性または機能を実質的または完全に阻害する。
【００９９】
抗体「エフェクター機能」は、抗体のＦｃ領域（天然配列Ｆｃ領域またはアミノ酸配列多様体Ｆｃ領域）に起因する生物学的活性を指し、抗体アイソタイプによって異なる。
【０１００】
本明細書の用語「Ｆｃ領域」は、天然配列Ｆｃ領域及びバリアントＦｃ領域を含む免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を規定するために使用される。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は、変化することがあるが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は通常、Ｃｙｓ２２６位またはＰｒｏ２３０位のアミノ酸残基から、そのカルボキシル末端に伸びると規定される。Ｆｃ領域のＣ末端リシン（ＥＵまたはＫａｂａｔナンバリングシステムによる残基４４７）は、例えば、抗体の生産もしくは精製の間に、または抗体の重鎖をコードする核酸を組換え遺伝子操作することによって、除去されてもよい。したがって、インタクト抗体の組成物は、全てのＫ４４７残基が除去された抗体集団、Ｋ４４７残基が除去されていない抗体集団、ならびにＫ４４７残基を有する抗体及びＫ４４７残基を有しない抗体の混合物を有する抗体集団を含んでもよい。本開示の抗体で使用するために適した天然配列Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４を含む。
【０１０１】
「天然配列Ｆｃ領域」は、天然に見出されるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む。天然配列ヒトＦｃ領域は、天然配列ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域（非Ａアロタイプ及びＡアロタイプ）；天然配列ヒトＩｇＧ２  Ｆｃ領域；天然配列ヒトＩｇＧ３  Ｆｃ領域；及び天然配列ヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域、ならびにそれらの天然に存在するバリアントを含む。
【０１０２】
「バリアントＦｃ領域」は、少なくとも１つのアミノ酸修飾、好ましくは１つ以上のアミノ酸置換（複数可）のために天然配列Ｆｃ領域のものと異なるアミノ酸配列を含む。好ましくは、バリアントＦｃ領域は、天然配列Ｆｃ領域または親ポリペプチドのＦｃ領域と比較して少なくとも１つのアミノ酸置換、例えば、天然配列Ｆｃ領域または親ポリペプチドのＦｃ領域に、約１〜約１０のアミノ酸置換、好ましくは、約１〜約５のアミノ酸置換を有する。本明細書のバリアントＦｃ領域は、好ましくは、天然配列Ｆｃ領域及び／または親ポリペプチドのＦｃ領域と少なくとも約８０％の相同性、最も好ましくは、それらと少なくとも約９０％の相同性、より好ましくは、それらと少なくとも約９５％の相同性を有することになる。
【０１０３】
「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体について記載する。好ましいＦｃＲは、天然配列ヒトＦｃＲである。さらに、好ましいＦｃＲは、ＩｇＧ抗体（ガンマ受容体）に結合し、これらの受容体の対立遺伝子変異型及びオルタナティブスプライシング形態を含むＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩサブクラスの受容体を含むものであり、ＦｃγＲＩＩ受容体は、主にその細胞質ドメインが異なる類似のアミノ酸配列を有するＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）及びＦｃγＲＩＩＢ（「阻害受容体」）を含む。活性化受容体ＦｃγＲＩＩＡは、細胞質ドメインに、免疫受容体チロシン系活性化モチーフ（「ＩＴＡＭ」）を含有する。阻害受容体ＦｃγＲＩＩＢは、細胞質ドメインに、免疫受容体チロシン系阻害モチーフ（「ＩＴＩＭ」）を含有する。（例えば、Ｍ．Ｄａｅｒｏｎ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５：２０３−２３４（１９９７）を参照されたい）。ＦｃＲは、Ｒａｖｅｔｃｈ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７−９２（１９９１）；Ｃａｐｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ  ４：２５−３４（１９９４）；及びｄｅ  Ｈａａｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．１２６：３３０−４１（１９９５）で概説される。将来同定されるべきものを含む他のＦｃＲは、本明細書の用語「ＦｃＲ」に包含される。ＦｃＲはまた、抗体の血清半減期を増加させることができる。
【０１０４】
インビボでのＦｃＲｎへの結合及びヒトＦｃＲｎ高親和性結合ポリペプチドの血清半減期は、例えば、ヒトＦｃＲｎを発現するトランスジェニックマウスもしくは遺伝子導入されたヒト細胞系において、またはバリアントＦｃ領域を有するポリペプチドが投与される霊長類において、アッセイすることができる。ＷＯ２００４／４２０７２（Ｐｒｅｓｔａ）は、ＦｃＲへの結合が改善されたまたは減少する抗体バリアントについて記載する。さらに、例えば、Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．９（２）：６５９１−６６０４（２００１）を参照されたい。
【０１０５】
ペプチド、ポリペプチド、または抗体配列に関して本明細書で使用される「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」及び「相同性」は、配列を整列し、必要であればギャップを導入して最大限の配列同一性パーセントを得た後、配列同一性の一部として保存的置換を考慮せずに、特定のペプチドまたはポリペプチド配列のアミノ酸残基と同一のアミノ酸残基の候補配列における割合（％）を指す。アミノ酸配列同一性パーセントを決定する目的のためのアラインメントは、当業者が備えている技術の範囲内にある様々な方法で、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、またはＭＥＧＡＬＩＧＮ（商標）（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公開されているコンピューターソフトウェアを用いて達成することができる。当業者であれば、比較される配列の全長にわたって最大限のアラインメントを実現するのに必要な当技術分野で公知の任意のアルゴリズムを含め、アラインメントの比較のための適切なパラメーターを決めることができる。
【０１０６】
本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体などの抗体をコードする「単離」核酸分子は、同定され、それが産生された環境に普通は関連する少なくとも１つの汚染核酸分子から分離される核酸分子である。好ましくは、単離核酸は、産生環境に関連する全ての構成成分との関連がない。本明細書のポリペプチド及び抗体をコードする単離核酸分子は、天然に見出される形態または状況以外の形態である。したがって、単離核酸分子は、細胞中に天然に存在する、本明細書のポリペプチド及び抗体をコードする核酸とは区別される。
【０１０７】
本明細書で使用される場合の用語「ベクター」は、それが結合されている別の核酸を輸送することができる核酸分子を指すこととする。ベクターの１種は、「プラスミド」であり、これは、追加のＤＮＡセグメントがライゲーションされ得る環状二本鎖ＤＮＡを指す。ベクターの別の種類は、ファージベクターである。ベクターの別の種類は、追加のＤＮＡセグメントがウイルスゲノムにライゲーションされ得るウイルスベクターである。特定のベクターは、それらが導入される宿主細胞（例えば、細菌の複製起点を有する細菌ベクター及びエピソーム性哺乳動物ベクター）において自律的複製することができる。他のベクター（例えば、非エピソーム性哺乳動物ベクター）は、宿主細胞への導入時に、宿主細胞のゲノムに組み込むことができ、それによって宿主ゲノムと共に複製される。さらに、特定のベクターは、それらが作動可能に結合されている遺伝子の発現を指示することができる。そのようなベクターは、本明細書では「組換え発現ベクター」または単に「発現ベクター」と称される。一般に、組換えＤＮＡ技術において有用な発現ベクターは多くの場合に、プラスミドの形態である。本明細書では、プラスミドが最も一般的に使用されるベクターの形態であるため、「プラスミド」及び「ベクター」は、互換的に使用され得る。
【０１０８】
本明細書で互換的に使用される「ポリヌクレオチド」または「核酸」は、任意の長さのヌクレオチドのポリマーを指し、ＤＮＡ及びＲＮＡを含む。ヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、修飾されたヌクレオチドもしくは塩基、及び／またはそれらの類似体、あるいは、ＤＮＡもしくはＲＮＡポリメラーゼによって、または合成反応によって、ポリマーに取り込むことができる任意の基質である可能性がある。ポリヌクレオチドは、メチル化ヌクレオチド及びそれらの類似体などの修飾ヌクレオチドを含んでもよい。存在する場合、ヌクレオチド構造の修飾は、ポリマーの構築の前または後に付与されることがある。ヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチド構成成分によって中断されてもよい。ポリヌクレオチドは、標識へのコンジュゲートなどの、合成後に行われる修飾（複数可）を含むことがある。他の種類の修飾には、例えば、「キャップ」、類似体での、天然に存在するヌクレオチドの１つまたは複数の置換、例えば、電荷のない結合を有するもの（例えば、メチルホスホナート、ホスホトリエステル、ホスホアミデート、カルバメートなど）及び電荷を持つ結合を有するもの（例えば、ホスホロチオアート、ホスホロジチオアートなど）、例えば、タンパク質などのペンダント部分を含有するもの（例えば、ヌクレアーゼ、毒素、抗体、シグナルペプチド、ｐｌｙ−Ｌ−リシンなど）、インターカレーターを有するもの（例えば、アクリジン、ソラレンなど）、キレート化剤を含有するもの（例えば、金属、放射性金属、ホウ素、酸化金属など）、アルキル化剤を含有するもの、結合が修飾されたもの（例えば、アルファアノマー核酸など）、未修飾形態のポリヌクレオチド（複数可）などのヌクレオチド間の修飾が含まれる。さらに、糖類に通常存在するヒドロキシル基のいずれかは、例えば、ホスホナート基、ホスファート基と置き換えられ、標準的な保護基で保護され、もしくは追加のヌクレオチドへのさらなる結合を調製するために活性化されてもよく、または固体もしくは半固体の支持体にコンジュゲートされてもよい。５’末端及び３’末端ＯＨは、リン酸化することができるか、またはアミンもしくは１〜２０個の炭素原子の有機キャッピング基部分で置換することができる。他のヒドロキシルはまた、標準的な保護基に誘導体化されてもよい。ポリヌクレオチドはまた、例えば、２’−Ｏ−メチルリボース、２’−Ｏ−アリルリボース、２’−フルオロリボース、または２’−アジドリボース；炭素環式糖類似体；α−アノマー糖；アラビノース、キシロース、またはリキソースなどのエピマー糖類；ピラノース糖；フラノース糖；セドヘプツロース；非環式類似体；及びメチルリボシドなどの塩基性ヌクレオシド類似体を含む、当技術分野で一般に公知の類似の形態のリボースまたはデオキシリボース糖を含有することができる。１つまたは複数のホスホジエステル結合は、代替結合基によって置き換えられてもよい。これらの代替架橋基には、限定されないが、ホスファートが、Ｐ（Ｏ）Ｓ（「チオアート」）、Ｐ（Ｓ）Ｓ（「ジチオアート」）、（Ｏ）ＮＲ２（「アミダート」）、Ｐ（Ｏ）Ｒ、Ｐ（Ｏ）ＯＲ’、ＣＯ、またはＣＨ２（「ホルムアセタール」）によって置き���えられ、各ＲまたはＲ’が独立して、Ｈ、または、任意選択でエーテル（−Ｏ−）結合、アリール、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニルまたはアルラルジルを含有する置換もしくは非置換アルキル（１〜２０Ｃ）である、実施形態が含まれる。ポリヌクレオチド中の全ての結合が同一である必要はない。先行記載は、ＲＮＡ及びＤＮＡを含む、本明細書で言及される全てのポリヌクレオチドに適用される。
【０１０９】
「宿主細胞」は、ポリヌクレオチドインサートの取り込みのためのベクター（複数可）のレシピエントであり得る、またはそれであった個々の細胞または細胞培養物を含む。宿主細胞は、単一の宿主細胞の子孫を含み、子孫は、自然の、偶然の、または故意の変異のために元の親細胞とは必ずしも（形態学的に、またはゲノムＤＮＡ相補的に）完全に同一でないことがある。宿主細胞は、本発明のポリヌクレオチド（複数可）を、インビボで遺伝子導入された細胞を含む。
【０１１０】
本明細書で使用される場合の「担体」は、用いられる投薬量及び濃度で、それに曝露される細胞または哺乳動物に対して非毒性である薬学的に許容される担体、賦形剤、または安定剤を含む。多くの場合、生理的に許容される担体には、ｐＨ緩衝水溶液である。生理学的に許容される担体の例には、リン酸、クエン酸、及び他の有機酸などの緩衝液；アスコルビン酸を含む抗酸化剤；低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、もしくはリシンなどのアミノ酸；単糖類、二糖類、及びグルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；マンニトールもしくはソルビトールなどの糖アルコール；ナトリウムなどの塩形成対イオン；ならびに／または、ＴＷＥＥＮ（商標）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、及びＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）などの非イオン性界面活性剤が含まれる。
【０１１１】
本明細書で使用される場合の「約」という用語は、当業者に容易に知られているそれぞれの値に対する通常の誤差範囲を指す。本明細書での「約」値またはパラメーターへの言及は、その値またはパラメーターそれ自体に関する実施形態を含む（及び記載する）。
【０１１２】
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈が別途明示しない限り、複数の言及を含む。例えば、「抗体」への言及は、モル量などの１つの抗体から多くの抗体までの言及であり、当業者に公知のそれらの等価物などを含む。
【０１１３】
本明細書に記載の本開示の態様及び実施形態が、態様及び実施形態「を含む」、「からなる」、及び「から本質的になる」を含むことは理解される。
【０１１４】
概要
本開示は、１つまたは複数のアゴニストまたはアンタゴニスト活性を有する抗ＴＲＥＭ２抗体（例えば、モノクローナル抗体）、そのような抗体の製造及び使用方法、そような抗体を含有する医薬組成物、そのような抗体をコードする核酸、ならびにそのような抗体をコードする核酸を含有する宿主細胞に関する。
【０１１５】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体のアゴニスト活性は、少なくとも部分的に、ＴＲＥＭ２タンパク質への１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドの結合と競合する、または別段にそれを遮断することなく、ＴＲＥＭ２タンパク質への１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドの結合によって誘導される１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を増強する抗体の能力による。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体による１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性の増強は、抗ＴＲＥＭ２抗体の非存在下でＴＲＥＭ２タンパク質への１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドの結合によって誘導される１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性と比較される。一部の実施形態では、１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性の増強は、本明細書において開示するいくつかのいずれかによって、インビトロまたはインビボで決定または試験され得る（例えば、実施例３〜１３及び２４を参照されたい）。
【０１１６】
したがって、本開示のある特定の態様は、少なくとも部分的に、高い親和性でヒト及びマウスＴＲＥＭ２両方に結合することができる（例えば、実施例１を参照されたい）、（例えば、ＴＲＥＭ２リガンドとの相乗作用によって）ＴＲＥＭ２活性を活性化及び増強することができる（例えば、実施例３〜１３及び２４を参照されたい）抗ＴＲＥＭ２抗体の同定に基づく。有利には、本開示のアゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体は、アルツハイマー病のいくつかのマウスモデルにおいて、アルツハイマー病及びアルツハイマー病の症状を処置する際に治療上有効であることが示された（例えば、実施例１６を参照されたい）。
【０１１７】
本開示のさらなる態様は、少なくとも部分的に、本開示のＴＲＥＭ２抗体は、その抗体がＴＲＥＭ２受容体クラスター化を誘導または保持することができないように生産される、または別段にフォーマットされるときに、アンタゴニスト活性も誘導することができるという驚くべき発見に基づく。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、限定ではないが、ＴＲＥＭ２依存性遺伝子活性化の阻害を含む１つまたは複数のアンタゴニストＴＲＥＭ２活性を示す（例えば、実施例７及び８を参照されたい）。
【０１１８】
ＴＲＥＭ２タンパク質
一態様では、本開示は、本開示のＴＲＥＭ２タンパク質に結合し、細胞で発現されたＴＲＥＭ２タンパク質に結合した後に、１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を誘導する、及び／または１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を増強する抗体を提供する。
【０１１９】
本開示のＴＲＥＭ２タンパク質は、限定ではないが、ヒトＴＲＥＭ２タンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｑ９ＮＺＣ２、配列番号１）、及び非ヒト哺乳動物ＴＲＥＭ２タンパク質、例えばマウスＴＲＥＭ２タンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｑ９９ＮＨ８、配列番号２）、ラットＴＲＥＭ２タンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｄ３ＺＺ８９、配列番号３）、アカゲザルＴＲＥＭ２タンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｆ６ＱＶＦ２、配列番号４）、ウシＴＲＥＭ２タンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｑ０５Ｂ５９、配列番号５）、ウマＴＲＥＭ２タンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｆ７Ｄ６Ｌ０、配列番号６）、ブタＴＲＥＭ２タンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｈ２ＥＺＺ３、配列番号７）、及びイヌＴＲＥＭ２タンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｅ２ＲＰ４６、配列番号８）を含む。本明細書で使用される場合、「ＴＲＥＭ２タンパク質」は、野生型配列及び天然に存在するバリアント配列の両方を指す。
【０１２０】
骨髄細胞２（ＴＲＥＭ２）上に発現されるトリガー受容体は、ＴＲＥＭ−２、ＴＲＥＭ２ａ、ＴＲＥＭ２ｂ、ＴＲＥＭ２ｃ、骨髄系細胞−２ａ上に発現されるトリガー受容体、及び単球２上に発現されるトリガー受容体と様々に称される。ＴＲＥＭ２は、２３０アミノ酸の膜タンパク質である。ＴＲＥＭ２は、限定ではないが、マクロファージ、樹状細胞、単球、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、破骨細胞、及びミクログリアを含む、骨髄系細胞上に主に発現される免疫グロブリン様受容体である。一部の実施形態では、ＴＲＥＭ２は、ＤＡＰ１２との受容体シグナル伝達複合体を形成する。一部の実施形態では、ＴＲＥＭ２は、ＤＡＰ１２（ＩＴＡＭドメインアダプタータンパク質）を介して、リン酸化してシグナル伝達する。一部の実施形態では、ＴＲＥＭ２シグナル伝達は、ＰＩ３Ｋまたは他の細胞内シグナルの下流の活性化をもたらす。骨髄系細胞上で、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）シグナルは、例えば、感染応答との関連で、ＴＲＥＭ２活性の活性化に重要である。ＴＬＲ、例えば、マクロファージ及び樹状細胞で発現されるＴＬＲはまた、病的炎症応答において鍵となる役割も果たす。
【０１２１】
一部の実施形態では、ヒトＴＲＥＭ２アミノ酸配列の例は、配列番号１として以下に示される：
2018537956.tif 000004
【０１２２】
一部の実施形態では、ヒトＴＲＥＭ２は、シグナルペプチドを含むプレタンパク質である。一部の実施形態では、ヒトＴＲＥＭ２は、成熟タンパク質である。一部の実施形態では、成熟ＴＲＥＭ２タンパク質は、シグナルペプチドを含まない。一部の実施形態では、成熟ＴＲＥＭ２タンパク質は、細胞上に発現される。一部の実施形態では、ＴＲＥＭ２は、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基１〜１８に位置するシグナルペプチド、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基２９〜１１２に位置する細胞外免疫グロブリン様可変型（ＩｇＶ）ドメイン、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基１１３〜１７４に位置する追加の細胞外配列、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基１７５〜１９５に位置する膜貫通ドメイン、及びヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基１９６〜２３０に位置する細胞内ドメインを含有する。
【０１２３】
ヒトＴＲＥＭ２の膜貫通ドメインは、ＤＡＰ１２のアスパラギン酸と相互作用し得るアミノ酸残基１８６にリシンを含有し、これは、ＴＲＥＭ２、ＴＲＥＭ１、及び他の関連するＩｇＶファミリーメンバーからのシグナル伝達を変換する重要なアダプタータンパク質である。
【０１２４】
ヒトＴＲＥＭ２のホモログには、限定ではないが、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞受容体ＮＫ−ｐ４４（ＮＣＴＲ２）、多量体免疫グロブリン受容体（ｐＩｇＲ）、ＣＤ３００Ｅ、ＣＤ３００Ａ、ＣＤ３００Ｃ、及びＴＲＥＭＬ１／ＴＬＴ１を含む。一部の実施形態では、ＮＣＴＲ２は、ＩｇＶドメイン内のＴＲＥＭ２と類似性を有する。
【０１２５】
ＤＡＰ１２タンパク質
一態様では、本開示は、本開示のＤＡＰ１２タンパク質にさらに結合し、細胞で発現されたＤＡＰ１２に結合した後に、１つまたは複数のＤＡＰ１２活性を調節し得る抗体を提供する。
【０１２６】
本開示のＤＡＰ１２タンパク質は、限定ではないが、哺乳動物（例えば、非ヒト哺乳動物）ＤＡＰ１２タンパク質、ヒトＤＡＰ１２タンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｏ４３９１４）、マウスＤＡＰ１２タンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｏ５４８８５）、ラットＤＡＰ１２タンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｑ６Ｘ９Ｔ７）、アカゲザルＤＡＰ１２タンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｑ８ＷＮＱ８）、ウシＤＡＰ１２タンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｑ９５Ｊ８０）、及びブタＤＡＰ１２タンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｑ９ＴＵ４５）を含む。本明細書で使用される場合、「ＤＡＰ１２タンパク質」は、野生型配列及び天然に存在するバリアント配列の両方を指す。
【０１２７】
ＤＮＡＸ活性化タンパク質１２（ＤＡＰ１２）は、キラー活性化受容体関連タンパク質、ＫＡＲ関連タンパク質（ＫＡＲＡＰ）、ＰＬＯＳＬ、ＰＬＯ−ＳＬ、ＴＹＲＯタンパク質、及びチロシンキナーゼ結合タンパク質と様々に称される。ＤＡＰ１２は、１１３アミノ酸の膜タンパク質である。一部の実施形態では、ＤＡＰ１２は、その細胞質ドメインに免疫受容体チロシン系活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含有する膜貫通型シグナル伝達ポリペプチドとして機能する。それは、キラー細胞阻害性受容体（ＫＩＲ）ファミリーの膜糖タンパク質に会合し得、活性化シグナル伝達要素として作用し得る。他の実施形態では、ＤＡＰ１２タンパク質は、ゼータ鎖（ＴＣＲ）関連タンパク質キナーゼ７０ｋＤａ（ＺＡＰ−７０）及び脾臓チロシンキナーゼ（ＳＹＫ）と結合し、シグナル伝達、骨形成、脳ミエリン形成、及び炎症において役割を果たす。
【０１２８】
ＤＡＰ１２をコードする遺伝子内の変異は、那須−ハコラ病としても知られている硬化性白質脳症を伴う脂肪膜性多発嚢胞性骨異形成症（ＰＬＯＳＬ）と関連する。理論に束縛されることは望まないが、ＤＡＰ１２受容体は、ＰＬＯＳＬも引き起こすＴＲＥＭ２であると考えられている。別個のアイソフォームのＤＡＰ１２をコードする複数の代替転写物バリアントが同定されている。ＤＡＰ１２は、ＣＤ３００ファミリーの活性化受容体と非共有結合的に会合する。ＣＤ３００−ＴＹＲＯＢＰ／ＤＡＰ１２複合体の架橋は、インテグリンによって媒介される好中球活性化などの細胞活性化をもたらす。ＤＡＰ１２は、ホモ二量体、ジスルフィド結合タンパク質である。一部の実施形態では、ＤＡＰ１２は、類似性によって、かつＩＴＡＭドメインを介して、ＳＩＲＰＢ１、ＴＲＥＭ１、ＣＬＥＣＳＦ５、ＳＩＧＬＥＣ１４、ＣＤ３００ＬＢ、ＣＤ３００Ｅ、及びＣＤ３００Ｄと相互作用し、ＳＨ２ドメインを介して、ＳＹＫと相互作用する。他の実施形態では、ＤＡＰ１２は、好中球及びマクロファージインテグリン媒介活性化を媒介するＳＹＫを活性化する。他の実施形態では、ＤＡＰ１２は、ＫＬＲＣ２及びＫＩＲ２ＤＳ３と相互作用する。
【０１２９】
一部の実施形態では、ヒトＤＡＰ１２アミノ酸配列の例は、配列番号８８７として以下に示される。
2018537956.tif 000005
【０１３０】
一部の実施形態では、ヒトＤＡＰ１２は、シグナルペプチドを含むプレタンパク質である。一部の実施形態では、ヒトＤＡＰ１２は、成熟タンパク質である。一部の実施形態では、成熟ＤＡＰ１２タンパク質は、シグナルペプチドを含まない。一部の実施形態では、成熟ＤＡＰ１２タンパク質は、細胞上に発現される。ＤＡＰ１２は、シングルパスＩ型膜タンパク質である。これは、ヒトＤＡＰ１２（配列番号８８７）のアミノ酸残基２２〜４０に位置する細胞外ドメイン、ヒトＤＡＰ１２（配列番号８８７）のアミノ酸残基４１〜６１に位置する膜貫通ドメイン、及びヒトＤＡＰ１２（配列番号８８７）のアミノ酸残基６２〜１１３に位置する細胞内ドメインを含有する。免疫受容体チロシン系活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）ドメインは、ヒトＤＡＰ１２（配列番号８８７）のアミノ酸残基８０〜１１８に位置する。
【０１３１】
一部の実施形態では、ＤＡＰ１２のアスパラギン酸残基は、アミノ酸残基１８６にリシンを含有するヒトＴＲＥＭ２の膜貫通ドメインと相互作用し、ＴＲＥＭ２、ＴＲＥＭ１、及び他の関連するＩｇＶファミリーメンバータンパク質からのシグナル伝達を変換する。
【０１３２】
抗ＴＲＥＭ２抗体
本開示のある特定の態様は、ＴＲＥＭ２に特異的に結合する抗体（例えば、モノクローナル抗体）に関する。一部の実施形態では、本開示の抗体は、成熟ＴＲＥＭ２タンパク質と結合する。一部の実施形態では、本開示の抗体は、成熟ＴＲＥＭ２タンパク質と結合し、成熟ＴＲＥＭ２タンパク質は、細胞上に発現される。一部の実施形態では、本開示の抗体は、ヒト樹状細胞、ヒトマクロファージ、ヒト単球、ヒト破骨細胞、ヒト皮膚ランゲルハンス細胞、ヒトクッパー細胞、ヒトミクログリア、及びそれらの任意の組合せから選択される１つまたは複数のヒト細胞上に発現されるＴＲＥＭ２タンパク質と結合する。一部の実施形態では、本開示の抗体は、アゴニスト抗体である。一部の実施形態では、本開示の抗体は、不活性抗体である。一部の実施形態では、本開示の抗体は、アンタゴニスト抗体である。
【０１３３】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドと競合する、それを阻害する、またはＴＲＥＭ２タンパク質への結合からそれを別段に遮断することなく、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する。適切なＴＲＥＭ２リガンドの例には、限定ではないが、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞によって発現されるＴＲＥＭ２リガンド、アポトーシス細胞、核酸、陰イオン性脂質、ＡＰＯＥ、ＡＰＯＥ２、ＡＰＯＥ３、ＡＰＯＥ４、陰イオン性ＡＰＯＥ、陰イオン性ＡＰＯＥ２、陰イオン性ＡＰＯＥ３、陰イオン性ＡＰＯＥ４、脂質化ＡＰＯＥ、脂質化ＡＰＯＥ２、脂質化ＡＰＯＥ３、脂質化ＡＰＯＥ４、双性イオン性脂質、負の電荷をもつリン脂質、ホスファチジルセリン、スルファチド、ホスファチジルコリン、スフィンゴミエリン、膜リン脂質、脂質化タンパク質、プロテオ脂質、脂質化ペプチド、及び脂質化アミロイドベータペプチドが含まれる。したがって、ある特定の実施形態では、１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドは、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞、アポトーシス細胞、核酸、陰イオン性脂質、双性イオン性脂質、負の電荷をもつリン脂質、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、スルファチド、ホスファチジルコリン、スフィンゴミエリン（ＳＭ）、リン脂質、脂質化タンパク質、プロテオ脂質、脂質化ペプチド、及び脂質化アミロイドベータペプチドを含む。
【０１３４】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、１つまたは複数の先天免疫細胞の増殖を阻害しない。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、５０ｎＭ未満、４５ｎＭ未満、４０ｎＭ未満、３５ｎＭ未満、３０ｎＭ未満、２５ｎＭ未満、２０ｎＭ未満、１５ｎＭ未満、１０ｎＭ未満、９ｎＭ未満、８ｎＭ未満、７ｎＭ未満、６ｎＭ未満、５ｎＭ未満、４ｎＭ未満、３ｎＭ未満、２ｎＭ未満、または１ｎＭ未満のＫＤで、１つまたは複数の初代免疫細胞に結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、１％以上、２％以上、３％以上、４％以上、５％以上、６％以上、７％以上、８％以上、９％以上、１０％以上の血中抗体濃度である程度まで、脳、もしくは脳脊髄液（ＣＳＦ）、またはその両方に蓄積する。一部の実施形態では、解離定数（ＫＤ）は、約４℃の温度で決定される。一部の実施形態では、ＫＤは、一価抗体（例えば、Ｆａｂ）または一価形態の全長抗体を使用して決定される。ＴＲＥＭ２に対する特異性と相互作用する、及び／または結合する抗体を調製及び選択する方法を本明細書に記載する（例えば、実施例１を参照されたい）。
【０１３５】
アゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体
本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は一般に、細胞上に発現される１つまたは複数のＴＲＥＭ２タンパク質に結合する。抗体の１つのクラスは、アゴニスト抗体である。例えば、ＴＲＥＭ２受容体は、シグナルを伝達するために、細胞表面上でクラスター化することを必要とすると考えられる。したがって、アゴニスト抗体は、例えば、ＴＲＥＭ２受容体を刺激する独特の特徴を有し得る。例えば、それらは、受容体活性化に適合する適切なエピトープ特異性、ならびに細胞表面上で受容体クラスター化を誘導または保持する能力を有し得る。加えて、本開示のアゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体は、１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドの同時結合を遮断することなく、ＴＲＥＭ２と結合する能力を示し得る。本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体はさらに、１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドとの相加的及び／または相乗的機能的相互作用を示し得る。したがって、一部の実施形態では、本開示の１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドと組み合わせて本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体に結合した場合のＴＲＥＭ２の最大活性は、飽和濃度のリガンドに単独で、または飽和濃度の抗体に単独で曝露した場合のＴＲＥＭ２の最大活性よりも高くなり得る（例えば、増強され得る）。加えて、所与の濃度のＴＲＥＭ２リガンドでのＴＲＥＭ２の活性は、抗体の存在下で高くなり得る（例えば、増強され得る）。したがって、一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドとの相加作用を有し、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合した場合に、１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を増強する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドと相乗作用して、１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を増強する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、抗体の非存在下で１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を誘導するための１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドの効力と比較して、１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を誘導するための１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドの効力を増加させる。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２の細胞表面クラスター化の非存在下で１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を増強する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２の細胞表面クラスター化を誘導または保持することによって、１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を増強する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、限定ではないが、Ｂ細胞及びミクログリア細胞を含む１つまたは複数の免疫細胞上に発現される１つまたは複数のＦｃ−ガンマ受容体によってクラスター化される。一部の実施形態では、ＴＲＥＭ２タンパク質への１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドの結合によって誘導される１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性の増強は、限定ではないが、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、ミクログリア、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、及びクッパー細胞を包含する初代細胞で、または細胞系で測定され、ＴＲＥＭ２タンパク質への１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドの結合によって誘導される１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性の増強は、例えば、インビトロ細胞アッセイを利用して測定される。
【０１３６】
インビボで、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、複数の潜在的機序によって、受容体を活性化し得る。一部の実施形態では、本開示のアゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体は、正確なエピトープ特異性によって、プレート上に結合した二次抗体とクラスター化する、またはＦｃｇ受容体を介してクラスター化する必要なしに、溶液中のＴＲＥＭ２を活性化する能力を有する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、それらの特有の構造によって、受容体をクラスター化する、または受容体をクラスター化配置に保持し、それによって、Ｆｃ受容体に結合することなく、ＴＲＥＭ２などの受容体を活性化する固有の能力を有するＩｇＧ２などのヒト抗体のアイソタイプを有する（例えば、Ｗｈｉｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１５）Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ２７、１３８−１４８）。
【０１３７】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、隣接した細胞上のＦｃｇ受容体に結合することによって、受容体（例えば、ＴＲＥＭ２）をクラスター化する。Ｆｃｇ受容体に対する抗体の定常ＩｇＧ  Ｆｃ部分の結合は、抗体の凝集をもたらし、抗体は、次に、それらが可変領域を介して結合する受容体を凝集させる（Ｃｈｕ  ｅｔ  ａｌ（２００８）  Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ，４５：３９２６−３９３３；及びＷｉｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１１）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  １９，１０１−１１３）。ＦｃｇＲＩＩＢに結合することが、免疫の有害作用と関連していないので、サイトカイン分泌、酸化的バースト、食作用の増加、及び抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の増強を誘導しない阻害性Ｆｃｇ受容体ＦｃｇＲ（ＦｃｇＲＩＩＢ）に結合することは多くの場合に、インビボで抗体をクラスター化する好ましい手段である。本明細書に記載の任意の適切なアッセイ（例えば、実施例４を参照されたい）を、抗体クラスター化を決定するために使用し得る。
【０１３８】
他の機構も、受容体（例えば、ＴＲＥＭ２）をクラスター化するために使用し得る。例えば、一部の実施形態では、一緒に架橋される抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂフラグメント）は、上記のとおり、Ｆｃｇ受容体に結合するＦｃ領域を有する抗体に類似した仕方で受容体（例えば、ＴＲＥＭ２）をクラスター化するために使用され得る。一部の実施形態では、架橋抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂフラグメント）は、細胞表面上での受容体クラスター化を誘導し、標的上の適切なエピトープ（例えば、ＴＲＥＭ２）に結合する場合、アゴニスト抗体として機能し得る。
【０１３９】
一部の実施形態では、ＴＲＥＭ２タンパク質と結合する本開示の抗体には、それらのエピトープ特異性によって、ＴＲＥＭ２と結合し、１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を活性化するアゴニスト抗体が含まれ得る。一部の実施形態では、そのような抗体は、ＴＲＥＭ２上のリガンド結合部位に結合し、１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドの作用を模倣する、またはリガンド結合部位ではない１つまたは複数のドメインに結合することによって、シグナルを伝達するために、標的抗原を刺激し得る。一部の実施形態では、抗体は、ＴＲＥＭ２へのリガンド結合と競合しない、または別段に遮断しない。一部の実施形態では、抗体は、１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドと相加的または相乗的に作用して、１つより多いＴＲＥＭ２活性を活性化する、及び／または増強する。
【０１４０】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体及び／または本開示の１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドによって誘導及び／または増強され得るＴＲＥＭ２活性には、限定ではないが、ＤＡＰ１２へのＴＲＥＭ２結合、ＴＲＥＭ２リン酸化、ＤＡＰ１２リン酸化、１つまたは複数のチロシンキナーゼの活性化（任意選択で、１つまたは複数のチロシンキナーゼは、Ｓｙｋキナーゼ、ＺＡＰ７０キナーゼ、またはその両方を含む）、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）の活性化、プロテインキナーゼＢ（Ａｋｔ）の活性化、細胞形質膜へのホスホリパーゼＣ−ガンマ（ＰＬＣ−ガンマ）の動員、ＰＬＣ−ガンマの活性化、またはその両方、細胞形質膜へのＴＥＣ−ファミリーキナーゼｄＶａｖの動員、核因子−ｒＢ（ＮＦ−ｒＢ）の活性化、ＭＡＰＫシグナル伝達の阻害、Ｔ細胞を活性化するためのリンカー（ＬＡＴ）、Ｂ細胞を活性化するためのリンカー（ＬＡＢ）、またはその両方のリン酸化、ＩＬ−２誘導性チロシンキナーゼ（Ｉｔｋ）の活性化、ＩＦＮ−β、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＹＭ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ＣＤ８６、ＭＣＰ−１／ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＲ２、ＣＸＣＬ−１０、Ｇａｔａ３、Ｒｏｒｃ、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＩＬ−３３、ＬＩＦ、ＩＦＮ−ガンマ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＣＳＦ−１、ＭＨＣ−ＩＩ、ＯＰＮ、ＣＤ１１ｃ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、及びＩＬ−２３から選択される１つまたは複数の炎症誘発性メディエーターの調節（任意選択で、調節は、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、樹状細胞、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、及びミクログリア細胞から選択される１つまたは複数の細胞で生じる）、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＴＧＦ−β、ＩＬ−１３、ＩＬ−３５、ＩＬ−１６、ＩＦＮ−アルファ、ＩＬ−１Ｒａ、ＶＥＧＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＹＭ、ＡＸＬ、ＦＬＴ１、及びＴＮＦまたはＩＬ−６のための可溶性受容体からなる群から選択される１つまたは複数の抗炎症性メディエーターの調節（任意選択で、調節は、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、樹状細胞、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、及びミクログリア細胞から選択される１つまたは複数の細胞で生じる）、発現が炎症の誘導で増加する１つまたは複数の遺伝子の調節（任意選択で、１つまたは複数の遺伝子は、Ｆａｂｐ３、Ｆａｂｐ５、及びＬＤＲからなる群から選択される）、細胞外シグナル調節キナーゼ（ＥＲＫ）リン酸化の活性化、発現が炎症の誘導で増加する１つまたは複数の遺伝子の調節（任意選択で、１つまたは複数の遺伝子は、Ｆａｂｐ３、Ｆａｂｐ５、及びＬＤＲからなる群から選択される）、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、樹状細胞、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及びＭ２ミクログリア、ならびにそれらの任意の組合せから選択される１つまたは複数の細��におけるＣ−Ｃケモカイン受容体７（ＣＣＲ７）の発現の調節、ＣＣＬ１９及びＣＣＬ２１発現細胞へのミクログリア細胞走化性の誘導；かく乱されたＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２依存性遺伝子発現の正常化、ＤＡＰ１２／ＴＲＥＭ２複合体へのＳｙｋ、ＺＡＰ７０、またはその両方の動員、１つまたは複数のＴＲＥＭ２依存性遺伝子の活性の上昇（任意選択で、１つまたは複数のＴＲＥＭ２依存性遺伝子は、活性化Ｔ細胞核内因子（ＮＦＡＴ）転写因子を含む）、樹状細胞、単球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及びＭ２ミクログリア、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、またはそれらの任意の組合せの成熟の増加、Ｔ細胞の機能を刺激または調節する樹状細胞、単球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及びＭ２ミクログリア、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、またはそれらの任意の組合せの能力の増加（任意選択で、Ｔ細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、調節性Ｔ細胞、及びそれらの任意の組合せから選択される１つまたは複数の細胞である）、抗原特異的Ｔ細胞の機能を刺激または調節する骨髄由来樹状細胞の能力の増強、その能力の正常化、またはその両方（任意選択で、抗原特異的Ｔ細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、調節性Ｔ細胞、及びそれらの任意の組合せから選択される１つまたは複数の細胞である）、破骨細胞産生の誘導、破骨細胞形成の速度の上昇、またはその両方、樹状細胞、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及びＭ２ミクログリア、またはそれらの任意の組合せの生存の増加、樹状細胞、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及びＭ２ミクログリア、またはそれらの任意の組合せの機能の増加、樹状細胞、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、単球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及びＭ２ミクログリア、またはそれらの任意の組合せによる食作用の増加、アポトーシスニューロンのクリアランス、神経組織デブリのクリアランス、非神経組織デブリのクリアランス、細菌または他の異物のクリアランス、病原体のクリアランス、腫瘍細胞のクリアランス、またはそれらの任意の組合せから選択されるクリアランスのうちの１つまたは複数の種類の活性化（任意選択で、病原体は、アミロイドベータまたはそのフラグメント、Ｔａｕ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスチレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリ��、ゲルソリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、及びグリシン−アラニン（ＧＡ）、グリシン−プロリン（ＧＰ）、グリシン−アルギニン（ＧＲ）、プロリン−アラニン（ＰＡ）、またはプロリン−アルギニン（ＰＲ）から構成されるジペプチドリピート（ＤＰＲペプチド）を含むリピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、アンチセンスＧＧＣＣＣＣ（Ｇ２Ｃ４）リピート伸長ＲＮＡから選択される）、アポトーシスニューロン、神経組織デブリ、非神経組織デブリ、細菌、他の異物、病原体、腫瘍細胞、またはそれらの任意の組合せの１つまたは複数の食作用の誘導（任意選択で、病原体は、アミロイドベータまたはそのフラグメント、Ｔａｕ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスチレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルソリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、及びグリシン−アラニン（ＧＡ）、グリシン−プロリン（ＧＰ）、グリシン−アルギニン（ＧＲ）、プロリン−アラニン（ＰＡ）、またはプロリン−アルギニン（ＰＲ）から構成されるジペプチドリピート（ＤＰＲペプチド）を含むリピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、アンチセンスＧＧＣＣＣＣ（Ｇ２Ｃ４）リピート伸長ＲＮＡから選択される）、ＣＤ８３、ＣＤ８６  ＭＨＣクラスＩＩ、ＣＤ４０、及びそれらの任意の組合せから選択される１つまたは複数の刺激分子の発現の調節（任意選択で、ＣＤ４０は、樹状細胞、単球、マクロファージ、またはそれらの任意の組合せの上に発現され、任意選択で、樹状細胞は、骨髄由来樹状細胞を含む）、１つまたは複数の炎症誘発性メディエーターの分泌の調節（任意選択で、１つまたは複数の炎症性メディエーターは、ＩＦＮ−β、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＣＤ８６、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ＭＣＰ−１／ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＲ２、ＣＸＣＬ−１０、Ｇａｔａ３、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＩＬ−３３、ＬＩＦ、ＩＦＮ−ガンマ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＣＳＦ１、ＯＰＮ、ＣＤ１１ｃ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、及びＩＬ−２３、及びそれらの任意の組合せから選択される）、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＴＧＦ−β、ＩＬ−１３、ＩＬ−３５、ＩＬ−１６、ＩＦＮ−アルファ、ＩＬ−１Ｒａ、ＶＥＧＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＹＭ、ＡＸＬ、ＦＬＴ１、及びＴＮＦまたはＩＬ−６のための可溶性受容体からなる群から選択される１つまたは複数の抗炎症性メディエーターの調節、Ｃ１ｑａ、Ｃ１ｑＢ、Ｃ１ｑＣ、Ｃ１ｓ、Ｃ１Ｒ、Ｃ４、Ｃ２、Ｃ３、ＩＴＧＢ２、ＨＭＯＸ１、ＬＡＴ２．ＣＡＳＰ１、ＣＳＴＡ、ＶＳＩＧ４、ＭＳ４Ａ４Ａ、Ｃ３ＡＲ１、ＧＰＸ１、ＴｙｒｏＢＰ、ＡＬＯＸ５ＡＰ、ＩＴＧＡＭ、ＳＬＣ７Ａ７、ＣＤ４、ＩＴＧＡＸ、ＰＹＣＡＲＤ、及びＶＥＧＦから選��される１つまたは複数のタンパク質の発現の調節、記憶の増大、ならびに認知障害の減少が含まれる。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、個体に投与されると、記憶を増加させる、及び／または認知障害を減少させる。
【０１４１】
本明細書で使用される場合、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、抗ＴＲＥＭ２抗体の非存在下でＴＲＥＭ２タンパク質への１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドの結合によって誘導される１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性のレベルと比較して、１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性の少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍、少なくとも１１倍、少なくとも１２倍、少なくとも１３倍、少なくとも１４倍、少なくとも１５倍、少なくとも１６倍、少なくとも１７倍、少なくとも１８倍、少なくとも１９倍、少なくとも２０倍またはそれ以上の増加を誘導するならば、ＴＲＥＭ２タンパク質への１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドの結合によって誘導される１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を増強する。一部の実施形態では、１つまたは複数のＴＥＭ２活性の増加は、本明細書に記載されているか、または当技術分野で知られている任意の適切なインビトロ細胞ベースのアッセイもしくは適切なインビボモデルによって、例えば、ＴＲＥＭ２依存性遺伝子発現を測定するためのルシフェラーゼベースのレポーターアッセイを利用すること、Ｓｙｋなどの下流シグナル伝達パートナーのＴＲＥＭ２誘導性リン酸化の増加を測定するためのウエスタンブロット分析を使用することによって、またはＴＲＥＭ２活性化のマーカーの細胞表面レベルでの変化を測定するための、蛍光標識細胞分取（ＦＡＣＳ）などのフローサイトメトリーを利用することによって測定され得る。ＴＲＥＭ２と１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドとの間の相互作用（例えば、結合）を測定するために、本明細書に記載されているか、または当技術分野で公知である任意のインビトロ細胞ベースのアッセイまたは適切なインビボモデルを使用してもよい。
【０１４２】
一部の実施形態では、ＴＲＥＭ２リガンドをそのＥＣ５０濃度で使用したときに、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、約０．５ｎＭ〜約５０ｎＭの範囲、または５０ｎＭ超の濃度で使用した場合に、抗ＴＲＥＭ２抗体の非存在下でのＴＲＥＭ２タンパク質へのＴＲＥＭ２リガンドの結合によって誘導されるＴＲＥＭ２依存性遺伝子転写のレベルと比較して、リガンド誘導性ＴＲＥＭ２依存性遺伝子転写の約１倍〜約６倍、または６倍超の範囲の増加を誘導するならば、ＴＲＥＭ２タンパク質へのＴＲＥＭ２リガンドの結合によって誘導される１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を増強する。一部の実施形態では、ＴＲＥＭ２リガンドをそのＥＣ５０濃度で使用した場合に、リガンド誘導性ＴＲＥＭ２依存性遺伝子転写の増加は、約０．５ｎＭ〜約５０ｎＭの範囲、または５０ｎＭ超の濃度で使用した場合に、抗ＴＲＥＭ２抗体の非存在下でのＴＲＥＭ２タンパク質へのＴＲＥＭ２リガンドの結合によって誘導されるＴＲＥＭ２依存性遺伝子転写のレベルと比較して、少なくとも１倍、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍、少なくとも１１倍、少なくとも１２倍、少なくとも１３倍、少なくとも１４倍、少なくとも１５倍、少なくとも１６倍、少なくとも１７倍、少なくとも１８倍、少なくとも１９倍、少なくとも２０倍またはそれ以上である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、少なくとも０．５ｎＭ、少なくとも０．６ｎＭ、少なくとも０．７ｎＭ、少なくとも０．８ｎＭ、少なくとも０．９ｎＭ、少なくとも１ｎＭ、少なくとも２ｎＭ、少なくとも３ｎＭ、少なくとも４ｎＭ、少なくとも５ｎＭ、少なくとも６ｎＭ、少なくとも７ｎＭ、少なくとも８ｎＭ、少なくとも９ｎＭ、少なくとも１０ｎＭ、少なくとも１５ｎＭ、少なくとも２０ｎＭ、少なくとも２５ｎＭ、少なくとも３０ｎＭ、少なくとも３５ｎＭ、少なくとも４０ｎＭ、少なくとも４５ｎＭ、少なくとも４６ｎＭ、少なくとも４７ｎＭ、少なくとも４８ｎＭ、少なくとも４９ｎＭ、または少なくとも５０ｎＭの濃度で使用される。一部の実施形態では、ＴＲＥＭ２リガンドは、ホスファチジルセリン（ＰＳ）である。一部の実施形態では、ＴＲＥＭ２リガンドは、スフィンゴミエリン（ＳＭ）である。一部の実施形態では、１つまたは複数のＴＥＭ２活性の増加は、本明細書に記載されている、または当技術分野で知られている任意の適切なインビトロ細胞ベースのアッセイまたは適切なインビボモデルによって測定され得る。一部の実施形態では、実施例８、図１０Ａ〜１０Ｆ及び図１１Ａ〜１１Ｄに記載されているとおり、抗体の存在下、及び非存在下で、リガンド誘導性ＴＲＥＭ２依存性遺伝子発現の倍数増加を測定するために、ルシフェラーゼベースのレポーターアッセイが使用される。
【０１４３】
本明細書で使用される場合、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、それが、本明細書に記載されている、または当技術分野で知られている任意のインビトロアッセイまたは細胞ベースの培養アッセイを利用して、飽和抗体濃度で、ＴＲＥＭ２へのリガンド結合を２０％未満低下させるならば、１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドとＴＲＥＭ２との間の相互作用（例えば、結合）と競合しない、阻害しない、または別段に遮断しない。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、本明細書に記載されている、または当技術分野で知られている任意のインビトロアッセイまたは細胞ベースの培養アッセイを使用して、飽和抗体濃度で、１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドとＴＲＥＭ２との相互作用（例えば、結合）を２０％未満、１９％未満、１８％未満、１７％未満、１６％未満、１５％未満、１４％未満、１３％未満、１２％未満、１１％未満、１０％未満、９％未満、８％未満、７％未満、６％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、または１％未満阻害する。
【０１４４】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を誘導するアゴニスト抗体である。一部の実施形態では、抗体は、細胞上に発現されるＴＲＥＭ２タンパク質に結合した後に、ＴＲＥＭ２の１つまたは複数の活性を誘導する。一部の実施形態では、抗体は、細胞膜に結合しない可溶性ＴＲＥＭ２タンパク質に結合した後に、ＴＲＥＭ２の１つまたは複数の活性を誘導する。ある特定の実施形態では、ＴＲＥＭ２タンパク質は、細胞表面上に発現される。特定の実施形態では、可溶性ＴＲＥＭ２タンパク質（ｓＴＲＥＭ２）は、限定ではないが、細胞外環境中、血清中、脳脊髄液（ＣＳＦ）中、及び組織内の間質空間中で見出され得る。ある特定の実施形態では、可溶性ＴＲＥＭ２タンパク質（ｓＴＲＥＭ２）は、非細胞性である。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、可溶性ＴＲＥＭ２タンパク質（ｓＴＲＥＭ２）のレベルを上昇させる、及び／または可溶性ＴＲＥＭ２タンパク質（ｓＴＲＥＭ２）の半減期を増加させる。一部の実施形態では、本開示の可溶性ＴＲＥＭ２（ｓＴＲＥＭ２）タンパク質は、配列番号１のアミノ酸残基１９〜１６０に対応する。一部の実施形態では、本開示の可溶性ＴＲＥＭ２（ｓＴＲＥＭ２）タンパク質は、配列番号１のアミノ酸残基１９〜１５９に対応する。一部の実施形態では、本開示の可溶性ＴＲＥＭ２（ｓＴＲＥＭ２）タンパク質は、配列番号１のアミノ酸残基１９〜１５８に対応する。一部の実施形態では、本開示の可溶性ＴＲＥＭ２（ｓＴＲＥＭ２）タンパク質は、配列番号１のアミノ酸残基１９〜１５７に対応する。一部の実施形態では、本開示の可溶性ＴＲＥＭ２（ｓＴＲＥＭ２）タンパク質は、配列番号１のアミノ酸残基１９〜１５６に対応する。一部の実施形態では、本開示の可溶性ＴＲＥＭ２（ｓＴＲＥＭ２）タンパク質は、配列番号１のアミノ酸残基１９〜１５５に対応する。一部の実施形態では、本開示の可溶性ＴＲＥＭ２（ｓＴＲＥＭ２）タンパク質は、配列番号１のアミノ酸残基１９〜１５４に対応する。
【０１４５】
一部の実施形態では、本開示の可溶性ＴＲＥＭ２（ｓＴＲＥＭ２）タンパク質は、細胞ＴＲＥＭ２受容体の不活性なバリアントであってもよい。一部の実施形態では、ｓＴＲＥＭ２は、対象の血漿中などの末梢、または脳に存在することがあり、抗ＴＲＥＭ２抗体を隔絶することがある。そのような隔絶された抗体は、例えば、細胞上に存在する細胞ＴＲＥＭ２受容体に結合する、及びそれを活性化することはできないであろう。したがって、ある特定の実施形態では、本開示のアゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体などの本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、可溶性ＴＲＥＭ２に結合しない。一部の実施形態では、本開示のアゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体などの本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、インビボで可溶性ＴＲＥＭ２に結合しない。一部の実施形態では、可溶性ＴＲＥＭ２に結合しない本開示のアゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体は、例えば、ｓＴＲＥＭ２中に含有されない細胞ＴＲＥＭ２の細胞外ドメインの部分、例えば、アミノ酸残基１６１〜１７５内の１つまたは複数のアミノ酸残基を含み得る、ＴＲＥＭ２の膜貫通部分に、もしくはその付近にあり得る、またはＴＲＥＭ２の膜貫通部分を含み得るＴＲＥＭ２上のエピトープに結合し得る。一部の実施形態では、そのような抗体は、配列番号１のアミノ酸残基Ｅ１５１、Ｄ１５２、Ｈ１５４、及びＥ１５６を含むエピトープに結合し得る。一部の実施形態では、そのような抗体は、ＴＲＥＭ２の細胞外ドメインのＮ末端領域を含むエピトープに結合し得る。したがって、そのような抗ＴＲＥＭ２抗体は、可溶性ＴＲＥＭ２と結合することなく、細胞ＴＲＥＭ２と結合する。有利には、そのような抗ＴＲＥＭ２抗体は、例えば、末梢または脳に存在するｓＴＲＥＭ２によって求められず、したがって、細胞上に存在する細胞ＴＲＥＭ２受容体を活性化するために利用可能である。
【０１４６】
本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体によって誘導されるＴＲＥＭ２活性には、（ａ）１つまたは複数の抗炎症性サイトカインの発現の調節（任意選択で、１つまたは複数の抗炎症性サイトカインは、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＴＧＦ−β、ＩＬ−１３、ＩＬ−３５、ＩＬ−１６、ＩＦＮ−アルファ、ＩＬ−１Ｒａ、ＶＥＧＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＹＭ、ＡＸＬ、ＦＬＴ１及びＴＮＦまたはＩＬ−６のための可溶性受容体から選択される）  、（ｂ）マクロファージ、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、破骨細胞、及びミクログリア細胞から選択される１つまたは複数の細胞における１つまたは複数の抗炎症性サイトカインの発現の調節  、（ｃ）１つまたは複数の炎症誘発性サイトカインの発現の調節（任意選択で、１つまたは複数の炎症誘発性サイトカインは、ＩＦＮ−β、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＩＬ−３３、ＬＩＦ、ＩＦＮ−ガンマ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＣＸＣＬ１０、ＣＣＬ４、及びＭＣＰ−１から選択される）  、（ｄ）マクロファージ、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、破骨細胞、及びミクログリア細胞から選択される１つまたは複数の細胞における１つまたは複数の炎症誘発性サイトカインの発現の調節  、（ｅ）細胞外シグナル調節キナーゼ（ＥＲＫ）リン酸化の活性化  、（ｆ）複数の細胞タンパク質でのチロシンリン酸化の活性化  、（ｇ）Ｃ−Ｃケモカイン受容体７（ＣＣＲ７）の発現の調節  、（ｈ）ＣＣＬ１９及びＣＣＬ２１発現細胞へのミクログリア細胞走化性の活性化  、（ｉ）樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、Ｍ２ミクログリア、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、及びＭ２マクロファージから選択される１つまたは複数の細胞による、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞及び／または調節性Ｔ細胞などの１つまたは複数のＴ細胞の刺激及び／または調節機能の増加  、（ｊ）破骨細胞産生の活性化、破骨細胞形成の速度の上昇、またはその両方  、（ｋ）樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及びＭ２ミクログリアから選択される１つまたは複数の細胞の生存の増加  、（ｌ）樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及びＭ２ミクログリアから選択される１つまたは複数の細胞の増殖の増加  、（ｍ）樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及びＭ２ミクログリアから選択され��１つまたは複数の細胞の遊走の活性化  、（ｎ）樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及びＭ２ミクログリアから選択される１つまたは複数の細胞のうちの１つまたは複数の機能の活性化  、（ｏ）樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及びＭ２ミクログリアから選択される１つまたは複数の細胞の成熟の活性化  、（ｐ）アポトーシスニューロンのクリアランス、神経組織デブリのクリアランス、非神経組織デブリのクリアランス、細菌のクリアランス、他の異物クリアランス、病原タンパク質のクリアランス、病原ペプチドのクリアランス、及び腫瘍細胞のクリアランスから選択されるクリアランスのうちの１つまたは複数の種類の活性化（任意選択で、病原タンパク質は、アミロイドベータ、オリゴマーアミロイドベータ、アミロイドベータ斑、アミロイド前駆体タンパク質またはそのフラグメント、Ｔａｕ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（染色体９オープンリーディングフレーム７２）、ｃ９ＲＡＮタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスチレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルソリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、リピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）リピートペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）リピートペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）リピートペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）リピートペプチド、ユビキチン、及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）リピートペプチドからなる群から選択され、腫瘍細胞は、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎臓細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、及び甲状腺癌から選択されるがんからのものである）  、（ｑ）アポトーシスニューロン、神経組織デブリ、非神経組織デブリ、細菌、他の異物、病原タンパク質、病原ペプチド、病原核酸、または腫瘍細胞のうちの１つまたは複数の食作用の阻害（任意選択で、病原核酸は、アンチセンスＧＧＣＣＣＣ（Ｇ２Ｃ４）リピート伸長ＲＮＡであり、病原タンパク質は、アミロイドベータ、オリゴマーアミロイドベータ、アミロイドベータ斑、アミロイド前駆体タンパク質またはそのフラグメント、Ｔａｕ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（染色体９オープンリーディングフレーム７２）、ｃ９ＲＡＮタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスチレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルソリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、リピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）リピートペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）リピートペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）リピートペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）リピートペプチド、ユビキチン、及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）リピートペプチドから選択され、腫瘍細胞は、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎臓細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、及び甲状腺癌から選択されるがんからのものである）  、（ｒ）腫瘍細胞上のＴＲＥＭ２リガンドへの結合  、（ｓ）好中球、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、ミクログリア、及びマクロファージから選択される細胞上のＴＲＥＭ２リガンドへの結合  、（ｔ）ミクログリア、マクロファージ、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、または細胞傷害性Ｔ細胞のうちの１つまたは複数による腫瘍細胞死滅の活性化  、（ｕ）ミクログリア、マクロファージ、樹状細胞、
骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、または細胞傷害性Ｔ細胞のうちの１つまたは複数の抗腫瘍細胞増殖活性の活性化  、（ｖ）ミクログリア、マクロファージ、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、または細胞傷害性Ｔ細胞のうちの１つまたは複数の抗腫瘍細胞転移活性の活性化  、（ｗ）１つまたは複数のＩＴＡＭモチーフ含有受容体の活性化（任意選択で、１つまたは複数のＩＴＡＭモチーフ含有受容体は、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、ＦｃｇＲ、ＤＡＰ１０、及びＤＡＰ１２から選択される）  、（ｘ）１つまたは複数のパターン認識受容体（ＰＲＲ）によるシグナル伝達の活性化（任意選択で、１つまたは複数のＰＲＲは、病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）を識別する受容体、損傷関連分子パターン（ＤＡＭＰ）を識別する受容体、及びそれらの任意の組合せから選択される）  、（ｙ）モチーフＤ／Ｅｘ０−２ＹｘｘＬ／ＩＸ６−８ＹｘｘＬ／Ｉ（配列番号８８３）を含む１つまたは複数の受容体の活性化  、（ｚ）１つまたは複数のＴｏｌｌ様受容体によるシグナル伝達の活性化  、（ａａ）ＪＡＫ−ＳＴＡＴシグナル伝達経路の活性化  、（ｂｂ）活性化Ｂ細胞の核因子カッパ軽鎖エンハンサー（ＮＦκＢ）の活性化  、（ｃｃ）ＩＴＡＭモチーフ含有受容体のリン酸化  、（ｄｄ）１つまたは複数の炎症性受容体の発現の調節（任意選択で、１つまたは複数の炎症性受容体は、ＣＤ８６を含み、１つまたは複数の炎症性受容体は、ミクログリア、マクロファージ、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、または細胞傷害性Ｔ細胞のうちの１つまたは複数の上に発現される）  、（ｅｅ）１つまたは複数のＴＲＥＭ２依存性遺伝子の発現の増加  、（ｇｇ）かく乱されたＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２依存性遺伝子発現の正常化  、（ｆｆ）１つまたは複数のＩＴＡＭ依存性遺伝子の発現の増加（任意選択で、１つまたは複数のＩＴＡＭ依存性遺伝子は、活性化Ｔ細胞核内因子（ＮＦＡＴ）転写因子によって活性化される）  、（ｇｇ）免疫抑制樹状細胞、免疫抑制マクロファージ、骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ、免疫抑制好中球、及び調節性Ｔ細胞のうちの１つまたは複数の分化の阻害  、（ｈｈ）免疫抑制樹状細胞、免疫抑制マクロファージ、骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ、免疫抑制好中球、及び調節性Ｔ細胞のうちの１つまたは複数の機能性の阻害  、（ｉｉ）腫瘍への免疫抑制樹状細胞、免疫抑制マクロファージ、骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ、免疫抑制好中球、及び調節性Ｔ細胞のうちの１つまたは複数の浸潤の減少  、（ｊｊ）腫瘍、末梢血、または他のリンパ臓器における腫瘍促進性骨髄系／顆粒球系免疫抑制細胞の数の減少  、（ｋｋ）骨髄由来サプレッサー細胞の腫瘍促進活性の阻害  、（ｌｌ）腫瘍または末梢血における腫瘍促進性サイトカインの発現の減少（任意選択で、腫瘍促進性サイトカインは、ＴＧＦ−ベータまたはＩＬ−１０である）  、（ｍｍ）腫瘍促進性ＦｏｘＰ３＋調節性Ｔリンパ球の腫瘍浸潤の減少  、（ｎｎ）腫瘍死滅能を有する腫瘍特異的Ｔリンパ球の活性化の増加  、（ｏｏ）腫瘍体積の減少  、（ｐｐ）腫瘍成長速度の低下  、（ｑｑ）抗腫瘍Ｔ細胞応答を調節する１つまたは複数の免疫療法の有効性の増加（任意選択で、１つまたは複数の免疫療法は、ＰＤ１／ＰＤＬ１遮断、ＣＴＬＡ−４遮断、及びがんワクチンから選択される）  、（ｒｒ）ＰＬＣγ／ＰＫＣ／カルシウム可動化の阻害  、ならびに（ｕｕ）ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ、Ｒａｓ／ＭＡＰＫシグナル伝達の阻害  、（ｓｓ）樹状細胞、マクロファージ、単球、及び／またはミクログリアによる食作用の増加  、（ｔｔ）細胞表面上でのＴＲＥＭ２クラスター化の誘導または保持  、（ｘｘ）ＤＡＰ１２へのＴＲＥＭ２結合  、（ｕｕ）ＴＲＥＭ２リン酸化  、（ｖｖ）ＤＡＰ１２リン酸化  、（ｗｗ）ＴＲＥＭ２リン酸化  、（ｘｘ）Ｓｙｋキナーゼを包含する１つまたは複数のＳＲＣファミリーチロシンキナーゼの活性化  、（ｙｙ）記憶の増加  、ならびに（ｚｚ）認知障害の減少が含まれ得る。
【０１４７】
本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト−ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウオパチー病、那須−ハコラ病、卒中、急性外傷、慢性外傷、認知障害、記憶喪失、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満、マラリア、本態性振戦、中枢神経系狼瘡、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多発性萎縮症、シャイ−ドレーガー症候群、進行性核上麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫性障害、サルコイドーシス、加齢に伴う病気、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身性感染症、狼瘡、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨のパジェット病、固形及び血液がん、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性赤血球増加症、本態性血小板血症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化、骨髄由来腫瘍、ＴＲＥＭ２を発現する腫瘍、甲状腺癌、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルージ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、Ｉ型ＨＩＶ、ならびにインフルエンザ菌を予防する、それらのリスクを減少させる、それらを処置するために使用することができる。本明細書で提供される方法はまた、１つまたは複数の免疫細胞の生存、成熟、機能性、遊走、または増殖を誘導または促進する際に使用される。本明細書で提供される方法はさらに、調節性Ｔ細胞、腫瘍埋没免疫抑制樹状細胞、腫瘍埋没免疫抑制マクロファージ、骨髄系由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）細胞、または慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）細胞の活性、機能、または生存を減少させる際に使用される。本明細書で提供される方法はさらに、記憶を増加させる、及び／または認知障害を減少させる際に使用される。
【０１４８】
本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、高度創傷ケアにおいても使用され得る。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体である。本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、下記の１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を誘導するために試験され得る（ａ）１つまたは複数の抗炎症性サイトカインの発現の調節（任意選択で、１つまたは複数の抗炎症性サイトカインは、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＴＧＦ−β、ＩＬ−１３、ＩＬ−３５、ＩＬ−１６、ＩＦＮ−アルファ、ＩＬ−１Ｒａ、ＶＥＧＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＹＭ、ＡＸＬ、ＦＬＴ１及びＴＮＦまたはＩＬ−６のための可溶性受容体から選択される）  、（ｂ）マクロファージ、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、破骨細胞、及びミクログリア細胞から選択される１つまたは複数の細胞における１つまたは複数の抗炎症性サイトカインの発現の調節  、（ｃ）１つまたは複数の炎症誘発性サイトカインの発現の調節（任意選択で、１つまたは複数の炎症誘発性サイトカインは、ＩＦＮ−β、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＹＭ−１、ＣＤ８６、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ５、ＣＣＲ２、Ｇａｔａ３、Ｒｏｒｃ、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＩＬ−３３、ＬＩＦ、ＩＦＮ−ガンマ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＣＸＣＬ１０、ＣＣＬ４、ＦＬＴ１、ＣＳＦ−１、ＯＰＮ、ＭＨＣ−ＩＩ、ＣＤ１１ｃ、ＡＸＬ及びＭＣＰ−１から選択される）  、（ｄ）マクロファージ、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、破骨細胞、及びミクログリア細胞から選択される１つまたは複数の細胞における１つまたは複数の炎症誘発性サイトカインの発現の調節  、（ｅ）細胞外シグナル調節キナーゼ（ＥＲＫ）リン酸化の活性化  、（ｆ）複数の細胞タンパク質でのチロシンリン酸化の活性化  、（ｇ）Ｃ−Ｃケモカイン受容体７（ＣＣＲ７）の発現の調節  、（ｈ）ＣＣＬ１９及びＣＣＬ２１発現細胞へのミクログリア細胞走化性の活性化  、（ｉ）樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、Ｍ２ミクログリア、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、及びＭ２マクロファージから選択される１つまたは複数の細胞によって誘導される、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞及び／または調節性Ｔ細胞などのＴ細胞の刺激及び／または調節機能の増加  、（ｊ）破骨細胞産生の活性化、破骨細胞形成の速度の上昇、またはその両方  、（ｋ）樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及びＭ２ミクログリアから選択される１つまたは複数の細胞の生存の増加  、（ｌ）樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及びＭ２ミクログリアから選択される１つま���は複数の細胞の増殖の増加  、（ｍ）樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及びＭ２ミクログリアから選択される１つまたは複数の細胞の遊走の活性化  、（ｎ）樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及びＭ２ミクログリアから選択される１つまたは複数の細胞のうちの１つまたは複数の機能の活性化  、（ｏ）樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及びＭ２ミクログリアから選択される１つまたは複数の細胞の成熟の活性化  、（ｐ）アポトーシスニューロンのクリアランス、神経組織デブリのクリアランス、非神経組織デブリのクリアランス、細菌のクリアランス、他の異物クリアランス、病原タンパク質のクリアランス、病原ペプチドのクリアランス、及び腫瘍細胞のクリアランスから選択されるクリアランスのうちの１つまたは複数の種類の活性化  、（任意選択で、病原タンパク質は、アミロイドベータ、オリゴマーアミロイドベータ、アミロイドベータ斑、アミロイド前駆体タンパク質またはそのフラグメント、Ｔａｕ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（染色体９オープンリーディングフレーム７２）、ｃ９ＲＡＮタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、
血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスチレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルソリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、リピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）リピートペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）リピートペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）リピートペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）リピートペプチド、ユビキチン、及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）リピートペプチドから選択され、腫瘍細胞は、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎臓細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、及び甲状腺癌から選択されるがんからのものである）  、（ｕ）アポトーシスニューロン、神経組織デブリ、非神経組織デブリ、細菌、他の異物、病原タンパク質、病原ペプチド、病原核酸、または腫瘍の細胞のうちの１つまたは複数の食作用の活性化  、（任意選択で、病原核酸は、アンチセンスＧＧＣＣＣＣ（Ｇ２Ｃ４）リピート伸長ＲＮＡであり、病原タンパク質は、アミロイドベータ、オリゴマーアミロイドベータ、アミロイドベータ斑、アミロイド前駆体タンパク質またはそのフラグメント、Ｔａｕ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（染色体９オープンリーディングフレーム７２）、ｃ９ＲＡＮタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスチレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルソリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、リピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）リピートペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）リピートペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）リピートペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）リピートペプチド、ユビキチン、及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）リピートペプチドから選択され、腫瘍細胞は、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎臓細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、及び甲状腺癌から選択されるがんからのものである）  、（ｐ）腫瘍細胞上のＴＲＥＭ２リガンドへの結合  、（ｑ）好中球、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、ミクログリア、及びマクロファージから選択される細胞上のＴＲＥＭ２リガンドへの結合  、（ｒ）ミクログリア、マクロファージ、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、または細胞傷害性Ｔ細胞のうちの１つまたは複数による腫瘍細胞死滅の活性化  、（ｓ）ミクログリア、マクロファージ、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、または細胞傷害性Ｔ細胞のうちの１つまたは複数の抗腫瘍細胞増殖活性の活性化  、（ｔ）ミクログリア、マクロファージ、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、または細胞傷害性Ｔ細胞のうちの１つまたは複数の抗腫瘍細胞転移活性の活性化  、（ｙ）１つまたは複数のＩＴＡＭモチーフ含有受容体の活性化（任意選択で、１つまたは複数のＩＴＡＭモチーフ含有受容体は、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、ＦｃｇＲ、ＤＡＰ１０、及びＤＡＰ１２から選択される）  、（ｚ）１つまたは複数のパターン認識受容体（ＰＲＲ）によるシグナル伝達の活性化（任意選択で、１つまたは複数のＰＲＲは、病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）を識別する受容体、損傷関連分子パターン（ＤＡＭＰ）を識別する受容体、及びそれらの任意の組合せから選択される）  、（ａａ）モチーフＤ／Ｅｘ０−２ＹｘｘＬ／ＩＸ６−８ＹｘｘＬ／Ｉ（配列番号８８３）を含む１つまたは複数の受容体の活性化  、（ｂｂ）１つまたは複数のＴｏｌｌ様受容体によるシグナル伝達の活性化  、（ｃｃ）ＪＡＫ−ＳＴＡＴシグナル伝達経路の活性化  、（ｄｄ）活性化Ｂ細胞の核因子カッパ軽鎖エンハンサー（ＮＦκＢ）の活性化  、（ｄｄ）ＩＴＡＭモチーフ含有受容体のリン酸化  、（ｅｅ）１つまたは複数の炎症性受容体の発現の調節（任意選択で、１つまたは複数の炎症性受容体は、ＣＤ８６を含み、１つまたは複数の炎症性受容体は、ミクログリア、マクロファージ、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、または細胞傷害性Ｔ細胞のうちの１つまたは複数の上に発現される）  、（ｆｆ）１つまたは複数のＴＲＥＭ２依存性遺伝子の発現の増加  、（ｇｇ）かく乱されたＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２依存性遺伝子発現の正常化  、（ｈｈ）１つまたは複数のＩＴＡＭ依存性遺伝子の発現の増加（任意選択で、１つまたは複数のＩＴＡＭ依存性遺伝子は、活性化Ｔ細胞核内因子（ＮＦＡＴ）転写因子によって活性化される）  、（ｉｉ）免疫抑制樹状細胞、免疫抑制マクロファージ、骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ、免疫抑制好中球、及び調節性Ｔ細胞のうちの１つまたは複数の分化の阻害  、（ｊｊ）免疫抑制樹状細胞、免疫抑制マクロファージ、骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ、免疫抑制好中球、及び調節性Ｔ細胞のうちの１つまたは複数の機能性の阻害  、（ｎｎ）腫瘍への免疫抑制樹状細胞、免疫抑制マクロファージ、骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ、免疫抑制好中球、及び調節性Ｔ細胞のうちの１つまたは複数の浸潤の減少  、（ｋｋ）腫瘍、末梢血、または他のリンパ臓器における腫瘍促進性骨髄系／顆粒球系免疫抑制細胞の数の減少  、（ｌｌ）骨髄由来サプレッサー細胞の腫瘍促進活性の阻害  、（ｍｍ）腫瘍または末梢血における腫瘍促進性サイトカインの発現の減少（任意選択で、腫瘍促進性サイトカインは、ＴＧＦ−ベータまたはＩＬ−１０である）  、（ｎｎ）腫瘍促進性ＦｏｘＰ３＋調節性Ｔリンパ球の腫瘍浸潤の減少  、（ｏｏ）腫瘍死滅能を有する腫瘍特異的Ｔリンパ球の活性化の増加  、（ｐｐ）腫瘍体積の減少  、（ｑｑ）腫瘍成長速度の低下  、（ｒｒ）抗腫瘍Ｔ細胞応答を調節する１つまたは複数の免疫療法の有効性の増加（任意選択で、１つまたは複数の免疫療法は、ＰＤ１／ＰＤＬ１遮断、ＣＴＬＡ−４遮断、及びがんワクチンから選択される）  、（ｗｗ）ＰＬＣγ／ＰＫＣ／カルシウム可動化の阻害  、ならびに（ｘｘ）ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ、Ｒａｓ／ＭＡＰＫシグナル伝達の阻害  、（ｘｘ）樹状細胞、マクロファージ、単球、及び／またはミクログリアによる食作用の増加  、（ｙｙ）細胞表面上でのＴＲＥＭ２クラスター化の誘導または保持  、（ｚｚ）ＤＡＰ１２へのＴＲＥＭ２結合  、（ａａａ）ＴＲＥＭ２リン酸化  、（ｂｂｂ）ＤＡＰ１２リン酸化  、（ｃｃｃ）ＴＲＥＭ２自己リン酸化  、（ｄｄｄ）Ｓｙｋキナーゼを包含する１つまたは複数のＳＲＣファミリーチロシンキナーゼの活性化  、（ｅｅｅ）Ｃ１ｑａ、Ｃ１ｑＢ、Ｃ１ｑＣ、Ｃ１ｓ、Ｃ１Ｒ、Ｃ４、Ｃ２、Ｃ３、ＩＴＧＢ２、ＨＭＯＸ１、ＬＡＴ２．ＣＡＳＰ１、ＣＳＴＡ、ＶＳＩＧ４、ＭＳ４Ａ４Ａ、Ｃ３ＡＲ１、ＧＰＸ１、ＴｙｒｏＢＰ、ＡＬＯＸ５ＡＰ、ＩＴＧＡＭ、ＳＬＣ７Ａ７、ＣＤ４、ＩＴＧＡＸ、ＰＹＣＡＲＤ、及びＶＥＧＦからなる群から選択される１つまたは複数のタンパク質の発現の調節  、（ｆｆｆ）記憶の増加  、ならびに（ｇｇｇ）認知障害の減少。有用なアッセイには、ウエスタンブロット（例えば、チロシン−リン酸化ＤＡＰ１２もしくはトレオニン／セリン−リン酸化ＰＩ３Ｋキナーゼ基質について）、ＥＬＩＳＡ（例えば、分泌されたインターロイキンもしくはサイトカイン分泌について）、ＦＡＣＳ（例えば、ＴＲＥＭ２に結合する抗ＴＲＥＭ２について）、免疫細胞化学（例えば、チロシン−リン酸化ＤＡＰ１２もしくはトレオニン／セリン−リン酸化ＰＩ３Ｋキナーゼ基質について）、レポーター遺伝子アッセイ（例えば、ＴＬＲ活性化について）、樹状細胞、マクロファージ、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、及び／もしくはミクログリアの生存及び／もしくは機能の増加、マクロファージ、樹状細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、単球、破骨細胞、及び／もしくはミクログリア細胞による、アポトーシスニューロン、損傷シナプス、アミロイドベータもしくはそのフラグメント、Ｔａｕ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、リピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）リピートペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）リピートペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）リピートペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）リピートペプチド、及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）リピートペプチド、神経組織デブリ、非神経組織デブリ、細菌、他の異物、病原タンパク質、病原ペプチド、病原核酸、または���瘍細胞の食作用の増加、細胞骨格再構成の増加、ならびにミクログリア炎症誘発性応答の減少、または当技術分野で公知の他のアッセイが含まれ得る。
【０１４９】
標的受容体を活性化するＦｃｇＲ受容体への結合に依存する抗体は、ＦｃｇＲ結合を排除するように操作された場合、そのアゴニスト活性を失うことがある（例えば、Ｗｉｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１１）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  １９，１０１−１１３；Ａｒｍｏｕｒ  ａｔ  ａｌ．，（２００３）  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ４０（２００３）  ５８５−５９３）；及びＷｈｉｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１５）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ２７，１３８−１４８を参照されたい）。したがって、適切なエピトープ特異性を有する本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、抗体がヒトＩｇＧ２アイソタイプ（ＣＨ１及びヒンジ領域）由来のＦｃドメインもしくは阻害性ＦｃｇＲＩＩＢ受容体に優先的に結合することができる別の種類のＦｃドメインまたはそれらの変形形態を有するとき、アゴニスト抗体であり、標的抗原を最小限の有害作用で活性化することができると考えられる。
【０１５０】
例示的なアゴニスト抗体Ｆｃアイソタイプ及び修飾を、以下の表Ａに提示する。一部の実施形態では、アゴニスト抗体は、以下の表Ａに列挙されているＦｃアイソタイプを有する。
表Ａ：Ｆｃガンマ受容体に結合することができる例示的な抗ＴＲＥＭ２抗体Ｆｃアイソタイプ
2018537956.tif 000006
2018537956.tif 000007
【０１５１】
表Ａに記載されているアイソタイプに加えて、理論に束縛されることは望まないが、ヒトの活性化Ｆｃｇ受容体Ｉ、ＩＩＡ、ＩＩＣ、ＩＩＩＡ、ＩＩＩＢ、ならびに／またはマウスのＦｃｇ受容体Ｉ、ＩＩＩ、及びＩＶに結合するヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ３アイソタイプ及びそれらの変異体（例えば、Ｓｔｒｏｈｌ（２００９）  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２００９，２０：６８５−６９１）を有する抗体は、インビボでアゴニスト抗体として作用することもあるが、ＡＤＣＣと関連する有害作用と関連することもあると考えられている。しかしながら、そのようなＦｃｇ受容体は、阻害Ｆｃｇ受容体ＦｃｇＲＩＩＢと比較して、インビボでの抗体結合にはあまり利用されないようである（例えば、Ｗｈｉｔｅ，ｅｔ  ａｌ．，（２０１３）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．６２，９４１−９４８；及びＬｉ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１１）  ＩＳｃｉｅｎｃｅ  ３３３（６０４５）：１０３０−１０３４．を参照されたい）。
【０１５２】
一部の実施形態では、アゴニスト抗体は、ＩｇＧクラス、ＩｇＭクラス、またはＩｇＡクラスのものである。一部の実施形態では、アゴニスト抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４アイソタイプを有する。
【０１５３】
ある特定の実施形態では、アゴニスト抗体は、ＩｇＧ２アイソタイプを有する。一部の実施形態では、アゴニスト抗体は、ヒトＩｇＧ２定常領域を含有する。一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ２定常領域は、Ｆｃ領域を含む。一部の実施形態では、アゴニスト抗体は、Ｆｃ受容体への結合とは関係なく、１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方を誘導する。一部の実施形態では、アゴニスト抗体は、阻害性Ｆｃ受容体に結合する。特定の実施形態では、阻害性Ｆｃ受容体は、阻害性Ｆｃ−ガンマ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＲＩＩＢ）である。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、１つまたは複数の修飾を含有する。例えば、一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、（例えば、同じアイソタイプの野生型Ｆｃ領域と比較して）１つまたは複数のアミノ酸置換を含有する。一部の実施形態では、１つまたは複数のアミノ酸置換は、Ｖ２３４Ａ（Ａｌｅｇｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ５７：１５３７−１５４３．３１；Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ．，（２０００）  Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００：１６−２６）、Ｇ２３７Ａ（Ｃｏｌｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，６８：５６３−５７１）、Ｈ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ（米国特許出願公開第２００７／０１４８１６７号；Ａｒｍｏｕｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２９：２６１３−２６２４；Ａｒｍｏｕｒ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）  Ｔｈｅ  Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ  Ｊｏｕｒｎａｌ  １（Ｓｕｐｐｌ．１）：２７；Ａｒｍｏｕｒ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）  Ｔｈｅ  Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ  Ｊｏｕｒｎａｌ  １（Ｓｕｐｐｌ．１）：２７）、Ｃ２３２Ｓ、及び／もしくはＣ２３３Ｓ（Ｗｈｉｔｅ  ｅｔ  ａｌ．（２０１５）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ２７，１３８−１４８）、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ（Ｃｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）  Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，４５：３９２６−３９３３）、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、ならびに／またはＴ２５６Ｅから選択され、アミノ酸位置は、ＥＵまたはＫａｂａｔのナンバリング規則による。
【０１５４】
一部の実施形態では、アゴニスト抗体は、Ｃ１２７Ｓアミノ酸置換を含有する重鎖定常ドメインを有するＩｇＧ２アイソタイプを有し、アミノ酸位置は、ＥＵまたはＫａｂａｔのナンバリング規則による（Ｗｈｉｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１５）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ２７，１３８−１４８；Ｌｉｇｈｔｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１０）  ＰＲＯＴＥＩＮ  ＳＣＩＥＮＣＥ  １９：７５３−７６２；及びＷＯ２００８０７９２４６）。
【０１５５】
一部の実施形態では、アゴニスト抗体は、Ｃ２１４Ｓアミノ酸置換を含有するカッパ軽鎖定常ドメインを有するＩｇＧ２アイソタイプを有し、アミノ酸位置は、ＥＵまたはＫａｂａｔのナンバリング規則による（Ｗｈｉｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１５）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ２７，１３８−１４８；Ｌｉｇｈｔｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１０）  ＰＲＯＴＥＩＮ  ＳＣＩＥＮＣＥ  １９：７５３−７６２；及びＷＯ２００８０７９２４６）。
【０１５６】
特定の実施形態では、アゴニスト抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプを有する。一部の実施形態では、アゴニスト抗体は、マウスＩｇＧ１定常領域を含有する。一部の実施形態では、アゴニスト抗体は、ヒトＩｇＧ１定常領域を含有する。一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ１定常領域は、Ｆｃ領域を含む。一部の実施形態では、アゴニスト抗体は、阻害性Ｆｃ受容体に結合する。特定の実施形態では、阻害性Ｆｃ受容体は、阻害性Ｆｃ−ガンマ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＲＩＩＢ）である。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、１つまたは複数の修飾を含有する。例えば、一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、（例えば、同じアイソタイプの野生型Ｆｃ領域と比較して）１つまたは複数のアミノ酸置換を含有する。一部の実施形態では、１つまたは複数のアミノ酸置換は、Ｎ２９７Ａ（Ｂｏｌｔ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２３：４０３−４１１）、Ｄ２６５Ａ（Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）  Ｒ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６，６５９１−６６０４）、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ（Ｈｕｔｃｈｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ，９２：１１９８０−１１９８４；Ａｌｅｇｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ５７：１５３７−１５４３．３１；Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ．，（２０００）  Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００：１６−２６）、Ｇ２３７Ａ（Ａｌｅｇｒｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ５７：１５３７−１５４３．３１；Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）  Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００：１６−２６）、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ（ＭｃＥａｒｃｈｅｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）  Ｂｌｏｏｄ，１０９：１１８５−１１９２）、Ｐ３３１Ｓ（Ｓａｚｉｎｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ２００８，１０５：２０１６７−２０１７２）、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及び／またはＴ２５６Ｅから選択され、アミノ酸位置は、ＥＵまたはＫａｂａｔのナンバリング規則による。
【０１５７】
一部の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ２アイソタイプ重鎖定常ドメイン１（ＣＨ１）及びヒンジ領域を含む（Ｗｈｉｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１５）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ２７，１３８−１４８）。特定の実施形態では、ＩｇＧ２アイソタイプＣＨ１及びヒンジ領域は、ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＮＦＧＴＱＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号８８６）のアミノ酸配列を含有する。一部の実施形態では、抗体Ｆｃ領域は、Ｓ２６７Ｅアミノ酸置換、Ｌ３２８Ｆアミノ酸置換、もしくはその両方、及び／またはＮ２９７ＡもしくはＮ２９７Ｑアミノ酸置換を含有し、アミノ酸位置は、ＥＵまたはＫａｂａｔのナンバリング規則による。
【０１５８】
ある特定の実施形態では、アゴニスト抗体は、ＩｇＧ４アイソタイプを有する。一部の実施形態では、アゴニスト抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域を含有する。一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ４定常領域は、Ｆｃ領域を含む。一部の実施形態では、アゴニスト抗体は、阻害性Ｆｃ受容体に結合する。特定の実施形態では、阻害性Ｆｃ受容体は、阻害性Ｆｃ−ガンマ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＲＩＩＢ）である。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、１つ以上の修飾を含有する。例えば、一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、（例えば、同じアイソタイプの野生型Ｆｃ領域と比較して）１つまたは複数のアミノ酸置換を含有する。一部の実施形態では、１つまたは複数のアミノ酸置換は、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３６Ｅ（Ｒｅｄｄｙ  ｅｔ  ａｌ．，（２０００）  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，１６４：１９２５−１９３３）、Ｓ２６７Ｅ、Ｅ３１８Ａ、Ｌ３２８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及び／またはＴ２５６Ｅから選択され、アミノ酸位置は、ＥＵまたはＫａｂａｔのナンバリング規則による。
【０１５９】
特定の実施形態では、アゴニスト抗体は、ハイブリッドＩｇＧ２／４アイソタイプを有する。一部の実施形態では、アゴニスト抗体は、ヒトＩｇＧ２のＥＵまたはＫａｂａｔナンバリングによるアミノ酸１１８〜２６０、及びヒトＩｇＧ４のＥＵまたはＫａｂａｔのナンバリングによるアミノ酸２６１〜４４７を含有するアミノ酸配列を含む（ＷＯ１９９７／１１９７１；ＷＯ２００７／１０６５８５）。
【０１６０】
特定の実施形態では、抗体は、マウスＩｇＧ４定常領域を含有する（Ｂａｒｔｈｏｌｏｍａｅｕｓ，ｅｔ  ａｌ．（２０１４）．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９２，２０９１−２０９８）。
【０１６１】
一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＥＵまたはＫａｂａｔのナンバリングによるＡ３３０Ｌ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、及び／またはＰ３３１Ｓから選択される１つまたは複数の追加のアミノ酸置換；ならびにそれらの任意の組合せをさらに含有する。
【０１６２】
不活性抗体
本開示の抗体の別のクラスは、不活性抗体を含む。本明細書で使用される場合、「不活性」抗体は、標的抗原に特異的に結合するが、抗原機能を調節（例えば、低減／阻害または活性化／誘導）しない抗体を指す。例えば、ＴＲＥＭ２の場合、不活性抗体は、リガンド結合及び／またはＴＲＥＭ２活性を調節しない。理論に束縛されることは望まないが、細胞表面上でＴＲＥＭ２をクラスター化する能力を有しない抗体は、受容体活性化と適合するエピトープ特異性を有する場合でさえ、不活性抗体であり得ると考えられている。
【０１６３】
一部の実施形態では、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する抗体は、ＴＲＥＭ２に結合するが、エピトープ特異性のために、タンパク質機能を調節しない抗体を含んでもよい。そのような機能上の不活性抗体は、（Ｍｙｌｏｔａｒｇとして販売されている）ＣＤ３３抗体ゲムツズマブ・オゾガマイシンについて記載されているとおり、腫瘍細胞に毒素を輸送するためのカーゴとして使用することができ、これは、カリケアマイシンのクラスの細胞傷害性薬物にコンジュゲートされ、急性骨髄性白血病腫瘍を標的化及び死滅させるために使用される（Ｎａｉｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，（２０００），Ｌｅｕｋｅｍｉａ，１４，１４３６−１４４３；Ｒｉｃａｒｔ（２０１１）  Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  １７；６４１７−６４３６；Ｈａｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２００２）  Ｊｏｕｒｎａｌ：Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ，１３，４７−５８；及びＢｅｉｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，（２００１）  Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ７；１４９０−６．）。したがって、一部の実施形態では、本開示の抗体は、ＴＲＥＭ２に結合するが、１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性（例えば、本明細書に記載のＴＲＥＭ２活性）を誘導することができない不活性抗体である。
【０１６４】
例示的不活性抗体のＦｃアイソタイプ及び修飾を、以下の表Ｂに提示する。一部の実施形態では、不活性抗体は、以下の表Ｂに列挙されているＦｃアイソタイプを有する。
【０１６５】
アンタゴニスト抗体
本開示の抗体の第３のクラスは、アンタゴニスト抗体を含む。一部の実施形態では、ＴＲＥＭ２タンパク質と結合する抗体は、ＴＲＥＭ２と結合し、ＴＲＥＭ２と１つまたは複数のリガンド（複数可）との間の相互作用を防止すること、またはリガンドの存在下で、ＴＲＥＭ２の細胞外ドメインから細胞質へのシグナルの伝達を防止することのいずれかによって、１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を阻害するアンタゴニスト抗体を含んでもよい。一部の実施形態では、本開示のアンタゴニスト抗体は、本開示のアゴニスト抗体のエピトープ特異性を有するが、Ｆｃｇ受容体に結合することができず、したがって、例えば、ＴＲＥＭ２受容体をクラスター化することが不可能なＦｃドメインを有し得る。
【０１６６】
一部の実施形態では、本開示の抗体は、アンタゴニスト抗体である。一部の実施形態では、アンタゴニスト抗体は、１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を阻害する。一部の実施形態では、アンタゴニスト抗体は、１つまたは複数のＴＲＥＭ２依存性遺伝子の活性を減少させる。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、１つまたは複数の細胞においてＴＲＥＭ２のレベルを減少させる（例えば、細胞表面レベル、細胞内レベル、または総レベル）。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２の分解を誘導する。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２の切断を誘導する。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２の内部移行を誘導する。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２のシェディングを誘導する。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２発現の下方制御を誘導する。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２と１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドとの間の相互作用（例えば、結合）を阻害する。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２を一過性に活性化し、次いで、その分解を誘導する。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２を一過性に活性化し、次いで、その切断を誘導する。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２を一過性に活性化し、次いで、その内部移行を誘導する。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２を一過性に活性化し、次いで、そのシェディングを誘導する。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２を一過性に活性化し、次いで、その下方制御を誘導する。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２を一過性に活性化し、次いで、その発現の減少を誘導する。特定の実施形態では、個体は、ＴＲＥＭ２バリアント対立遺伝子を有する。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、溶解状態で作用する。
【０１６７】
一部の実施形態では、１つまたは複数のＴＲＥＭ２依存性遺伝子は、限定ではないが、１つまたは複数の活性化Ｔ細胞核内因子（ＮＦＡＴ）転写因子を含む。一部の実施形態では、アンタゴニスト抗体は、マクロファージ、ミクログリア細胞、Ｍ１マクロファージ、Ｍ１ミクログリア細胞、Ｍ２マクロファージ、Ｍ２ミクログリア細胞、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、及び／または樹状細胞の生存を減少させる。一部の実施形態では、アンタゴニスト抗体は、ＴＲＥＭ２と、１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドとの間の相互作用を阻害する。一部の実施形態では、アンタゴニスト抗体は、ＴＲＥＭ２シグナル伝達を阻害する。一部の実施形態では、アンタゴニスト抗体は、ＴＲＥＭ２と、１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドとの間の相互作用を阻害し、ＴＲＥＭ２シグナル伝達を阻害する。一部の実施形態では、アンタゴニスト抗体は、ＤＡＰ１２とのＴＲＥＭ２相互作用を阻害する。
【０１６８】
１つまたは複数の細胞におけるＴＲＥＭ２のレベル（例えば、細胞レベル）は、限定ではないが、ＴＲＥＭ２の細胞表面レベル、ＴＲＥＭ２の細胞内レベル、及びＴＲＥＭ２の総レベルを指し得る。一部の実施形態では、ＴＲＥＭ２の細胞レベルの低下は、ＴＲＥＭ２の細胞表面レベルの低下を含む。本明細書で使用される場合、ＴＲＥＭ２の細胞表面レベルは、本明細書に記載されている、または当技術分野で知られている任意のインビトロ細胞ベースのアッセイまたは適切なインビボモデルによって、例えば、ＴＲＥＭ２の細胞表面レベルを測定するための蛍光標識細胞分取（ＦＡＣＳ）などのフローサイトメトリーを利用して、測定され得る。一部の実施形態では、細胞におけるＴＲＥＭ２のレベルの低下は、ＴＲＥＭ２の細胞内レベルの低下を含む。本明細書で使用される場合、ＴＲＥＭ２の細胞内レベルは、本明細書に記載されている、または当技術分野で知られている任意のインビトロ細胞ベースのアッセイまたは適切なインビボモデル、例えば、免疫染色、ウエスタンブロット分析、同時免疫沈降、及び細胞血球計算法によって測定され得る。一部の実施形態では、ＴＲＥＭ２の細胞レベルの低下は、ＴＲＥＭ２の総レベルの低下を含む。本明細書で使用される場合、ＴＲＥＭ２の総レベルは、本明細書に記載されている、または当技術分野で知られている任意のインビトロ細胞ベースのアッセイまたは適切なインビボモデル、例えば、免疫染色、ウエスタンブロット分析、同時免疫沈降、及び細胞血球計算法によって測定され得る。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２分解、ＴＲＥＭ２切断、ＴＲＥＭ２内部移行、ＴＲＥＭ２シェディング、及び／またはＴＲＥＭ２発現の下方制御を誘導する。一部の実施形態では、１つまたは複数の細胞におけるＴＲＥＭ２のレベル（例えば、細胞レベル）は、初代細胞（例えば、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、ミクログリア、及びマクロファージ）で、または細胞系で、インビトロ細胞アッセイを利用して測定される。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、抗ＴＲＥＭ２抗体の非存在下でのＴＲＥＭ２の細胞レベルと比較して、ＴＲＥＭ２の細胞レベルを少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％，少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、またはそれ以上低下させる。本明細書に記載されている、または当技術分野で知られている任意のインビトロ細胞ベースのアッセイまたは適切なインビボモデルを、ＴＲＥＭ２と１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドとの間の相互作用（例えば、結合）の阻害を測定するために使用し得る。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、飽和抗体濃度で、本明細書に記載されている、または当技術分野で知られている任意のインビトロアッセイまたは細胞ベースの培養アッセイを利用して、ＴＲＥＭ２と１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドとの間の相互作用（例えば、結合）を少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％，少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、またはそれ以上阻害する。
【０１６９】
一部の実施形態では、抗体架橋が、アゴニスト抗体機能に必要とされる。抗体架橋は、インビトロでの二次抗体への結合を介して、またはインビボでのＦｃ受容体への結合を介して生じ得る。例えば、アンタゴニスト抗体は、ビオチン／ストレプトアビジン架橋、またはインビトロでの二次抗体結合を介して、アゴニスト抗体に転化することができる（例えば、Ｇｒａｖｅｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９６）  Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８４：６７５−６８５；Ｇｒａｖｅｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．７：５５１−５５７を参照されたい）。アゴニスト抗体は、受容体リガンドの生物活性を模倣することによって、または受容体凝集を増強することによって、それらの活性を発揮し、それによって、受容体シグナル伝達を活性化することがある。一部の実施形態では、抗体架橋の非存在は、アンタゴニスト活性に必要である。一部の実施形態では、抗体は、単量体として提供された場合にはアンタゴニストとして、二量体または多量体として提供された場合にはアゴニストとして作用することとなる。アンタゴニスト抗体は、受容体リガンド相互作用を遮断することによって、それらの活性を発揮し得る。
【０１７０】
例示的アンタゴニスト抗体Ｆｃアイソタイプ及び修飾を、以下の表Ｂに提示する。一部の実施形態では、アンタゴニスト抗体は、以下の表Ｂに列挙されているＦｃアイソタイプを有する。
【０１７１】
不活性及びアンタゴニスト抗体の例示的なＦｃアイソタイプ
一部の実施形態では、不活性及び／またはアンタゴニスト抗ＴＲＥＭ抗体は、以下の表Ｂに列挙されているＦｃアイソタイプを有する。
表Ｂ：Ｆｃガンマ受容体への結合が減少した例示的な抗ＴＲＥＭ２抗体Ｆｃアイソタイプ
2018537956.tif 000008
2018537956.tif 000009
【０１７２】
ある特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプを有する。一部の実施形態では、抗体は、マウスＩｇＧ１定常領域を含有する。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧ１定常領域を含有する。一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ１定常領域は、Ｆｃ領域を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、１つまたは複数の修飾を含有する。例えば、一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、（例えば、同じアイソタイプの野生型Ｆｃ領域と比較して）１つまたは複数のアミノ酸置換を含有する。一部の実施形態では、１つまたは複数のアミノ酸置換は、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ（Ｂｏｌｔ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２３：４０３−４１１）、Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ（ＭｃＥａｒｃｈｅｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）  Ｂｌｏｏｄ，１０９：１１８５−１１９２）、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ（ＭｃＥａｒｃｈｅｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）  Ｂｌｏｏｄ，１０９：１１８５−１１９２）、Ｐ２３８Ｓ（Ｄａｖｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）  Ｊ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ，３４：２２０４−２２１０）、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ（ＭｃＥａｒｃｈｅｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）  Ｂｌｏｏｄ，１０９：１１８５−１１９２）、Ｐ２３８Ａ、Ａ３２７Ｑ、Ａ３２７Ｇ、Ｐ３２９Ａ（Ｓｈｉｅｌｄｓ  ＲＬ．ｅｔ  ａｌ．，（２００１）  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２７６（９）：６５９１−６０４）、Ｋ３２２Ａ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ（Ｈｅｚａｒｅｈ，ｅｔ  ａｌ．，（２００１）  Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  ７５，１２１６１−１２１６８；Ｏｇａｎｅｓｙａｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）．Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｉｃａ  ６４，７００−７０４）、Ｐ３３１Ｓ（Ｏｇａｎｅｓｙａｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）  Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｉｃａ  ６４，７００−７０４）、Ｔ３９４Ｄ（Ｗｉｌｋｉｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）  ＭＡｂｓ  ５（３）：４０６−４１７）、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及び／またはＴ２５６Ｅから選択され、アミノ酸位置は、ＥＵまたはＫａｂａｔナンバリング規則による。特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＥＵまたはＫａｂａｔナンバリング規則によるグリシン２３６に対応する位置にアミノ酸欠失をさらに含む。
【０１７３】
一部の実施形態では、抗体は、ＥＵまたはＫａｂａｔナンバリング規則によるＣ２２０Ｓアミノ酸置換を含有する重鎖定常領域を有するＩｇＧ１アイソタイプを有する。
【０１７４】
一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＥＵまたはＫａｂａｔのナンバリング規則によって、Ａ３３０Ｌ、Ｌ２３４Ｆ；Ｌ２３５Ｅ、及び／またはＰ３３１Ｓから選択される１つまたは複数の追加のアミノ酸置換をさらに含有する。
【０１７５】
ある特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ２アイソタイプを有する。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧ２定常領域を含有する。一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ２定常領域は、Ｆｃ領域を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、１つまたは複数の修飾を含有する。例えば、一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、（例えば、同じアイソタイプの野生型Ｆｃ領域と比較して）１つまたは複数のアミノ酸置換を含有する。一部の実施形態では、１つまたは複数のアミノ酸置換は、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｈ２６８Ｅ、Ｖ３０９Ｌ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｃ２３２Ｓ、Ｃ２３３Ｓ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及び／またはＴ２５６Ｅから選択され、アミノ酸位置は、ＥＵまたはＫａｂａｔナンバリング規則による。
【０１７６】
ある特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ４アイソタイプを有する。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域を含有する。一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ４定常領域は、Ｆｃ領域を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、１つまたは複数の修飾を含有する。例えば、一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、（例えば、同じアイソタイプの野生型Ｆｃ領域と比較して）１つまたは複数のアミノ酸置換を含有する。一部の実施形態では、１つまたは複数のアミノ酸置換は、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｅ３１８Ａ（Ｈｕｔｃｈｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ、９２：１１９８０−１１９８４）、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３６Ｅ、Ｓ２４１Ｐ、Ｌ２４８Ｅ（Ｒｅｄｄｙ  ｅｔ  ａｌ．，（２０００）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，１６４：１９２５−１９３３；Ａｎｇａｌ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９３）Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．３０（１）：１０５−８；ＵＳ  ８６１４２９９  Ｂ２）、Ｔ３９４Ｄ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及び／またはＮ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑから選択され、アミノ酸位置は、ＥＵまたはＫａｂａｔナンバリング規則による。
【０１７７】
一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及び／またはＴ２５６Ｅから選択される１つまたは複数の追加のアミノ酸置換をさらに含有し、アミノ酸位置は、ＥＵまたはＫａｂａｔナンバリング規則による。
【０１７８】
さらなるＩｇＧ変異
一部の実施形態では、本明細書に記載のＩｇＧ１バリアントのうちの１つまたは複数は、補体活性化を排除するために、Ａ３３０Ｌ変異（Ｌａｚａｒ  ｅｔ  ａｌ．，（２００６）  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ，１０３：４００５−４０１０）、またはＬ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、及び／またはＰ３３１Ｓ変異（Ｓａｚｉｎｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ，１０５：２０１６７−２０１７２）のうちの１つまたは複数と組み合わされてもよい（アミノ酸位置は、ＥＵまたはＫａｂａｔナンバリング規則による）。一部の実施形態では、本明細書に記載のＩｇＧバリアントは、ヒト血清中での抗体半減期を増加させるために、１つまたは複数の変異と組み合わされてもよい（例えば、ＥＵまたはＫａｂａｔナンバリング規則によるＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、２５６Ｅ変異）（Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ  ｅｔ  ａｌ．，（２００６）  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ，２８１：２３５１４−２３５２４；及びＳｔｒｏｈｌ  ｅ  ａｌ．，（２００９）  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０：６８５−６９１）。
【０１７９】
一部の実施形態では、本開示のＩｇＧ４バリアントは、抗体の安定性を増強するために、ＥＵまたはＫａｂａｔナンバリング規則によるＳ２２８Ｐ変異（Ａｎｇａｌ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９３）  Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，３０：１０５−１０８）、及び／またはＰｅｔｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１２）  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．１３；２８７（２９）：２４５２５−３３に記載されている１つまたは複数の変異と組み合わされてもよい。
【０１８０】
例示的な抗ＴＲＥＭ２抗体
一部の実施形態では、本開示の単離抗ＴＲＥＭ２抗体は、単離抗体の非存在下でＴＲＥＭ２タンパク質への１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドの結合によって誘導される１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性と比較して、ＴＲＥＭ２タンパク質への１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドの結合によって誘導される１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を増強する。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２タンパク質への１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドの結合と競合することなく、または別段に遮断することなく、１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を増強する。一部の実施形態では、抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体、多価抗体、またはキメラ抗体である。そのような抗体の例示的な記載は、本開示を通じて見出される。一部の実施形態では、抗体は、第１の抗原及び第２の抗原を認識する二重特異性抗体である。
【０１８１】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、限定ではないが、哺乳動物（例えば、非ヒト哺乳動物）ＴＲＥＭ２タンパク質、マウスＴＲＥＭ２タンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｑ９９ＮＨ８）、ラットＴＲＥＭ２タンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｄ３ＺＺ８９）、アカゲザルＴＲＥＭ２タンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｆ６ＱＶＦ２）、ウシＴＲＥＭ２タンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｑ０５Ｂ５９）、ウマＴＲＥＭ２タンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｆ７Ｄ６Ｌ０）、ブタＴＲＥＭ２タンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｈ２ＥＺＺ３）、及びイヌＴＲＥＭ２タンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｅ２ＲＰ４６）を含む、ヒトＴＲＥＭ２、またはそのホモログに結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＲＥＭ２に特異的に結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、マウスＴＲＥＭ２に特異的に結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＲＥＭ２及びマウスＴＲＥＭ２の両方に特異的に結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、少なくとも１つのＴＲＥＭ２活性を調節する（例えば、誘導する、または阻害する）。一部の実施形態では、少なくとも１つのＴＲＥＭ２活性には、限定ではないが、（ａ）１つまたは複数の抗炎症性メディエーターの発現の調節（任意選択で、１つまたは複数の抗炎症性メディエーターは、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＴＧＦ−β、ＩＬ−１３、ＩＬ−３５、ＩＬ−１６、ＩＦＮ−アルファ、ＩＬ−１Ｒａ、ＶＥＧＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＹＭ、ＡＸＬ、ＦＬＴ１、及びＴＮＦまたはＩＬ−６のための可溶性受容体から選択される）、（ｂ）マクロファージ、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、破骨細胞、及びミクログリア細胞から選択される１つまたは複数の細胞における１つまたは複数の抗炎症性メディエーターの発現の調節、（ｃ）１つまたは複数の炎症誘発性メディエーターの発現の調節（任意選択で、１つまたは複数の炎症誘発性メディエーターは、ＩＦＮ−β、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ＣＤ８６、ＭＣＰ−１／ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＲ２、ＣＸＣＬ−１０、Ｇａｔａ３、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＩＬ−３３、ＬＩＦ、ＩＦＮ−ガンマ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＣＳＦ１、ＯＰＮ、ＣＤ１１ｃ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、及びＩＬ−２３から選択される）、発現が、炎症の誘導で増加する１つまたは複数の遺伝子の調節（任意選択で、１つまたは複数の遺伝子は、Ｆａｂｐ３、Ｆａｂｐ５、及びＬＤＲからなる群から選択される）、ＩＦＮ−β、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＣＤ８６、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ＭＣＰ−１／ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＲ２、ＣＸＣＬ−１０、Ｇａｔａ３、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＩＬ−３３、ＬＩＦ、ＩＦＮ−ガンマ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＣＳＦ１、ＯＰＮ、ＣＤ１１ｃ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、及びＩＬ−２３から選択される１つまたは複数の炎症誘発性メディエーターの分泌の調節（任意選択で、調節は、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、樹状細胞、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、及びミクログリア細胞から選択される１つまたは複数の細胞で生じる）、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＴＧＦ−β、ＩＬ−１３、ＩＬ−３５、ＩＬ−１６、ＩＦＮ−アルファ、ＩＬ−１Ｒａ、ＶＥＧＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＹＭ、ＡＸＬ、ＦＬＴ１、及びＴＮＦまたはＩＬ−６のための可溶性受容体から選択される１つまたは複数の抗炎症性メディエーターの分泌の調節（任意選択で、調節は、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、樹状細胞、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、及びミクログリア細胞から選択される１つまたは複数の細胞で生じる）、（ｄ）マクロファージ、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、破骨細胞、及びミクログリア細胞から選択される１つまたは複数の細胞における１つまたは複数の炎症誘発性メディエーターの発現の調節、（ｅ）細胞外シグナル調節キナーゼ（ＥＲＫ）リン酸化の活性化、（ｆ）複数の細胞タンパク質でのチロシンリン酸化の活性化、（ｇ）Ｃ−Ｃケモカイン受容体７（ＣＣＲ７）の発現の調節、（ｈ）ＣＣＬ１９及びＣＣＬ２１発現細胞へのミクログリア細胞走化性の活性化、（ｉ）樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、Ｍ２ミクログリア、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、及びＭ２マクロファージから選択される１つまたは複数の細胞によって誘導されるＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、及び／または調節性Ｔ細胞のＴ細胞刺激の増加及び／またはＴ細胞機能の調節、（ｊ）破骨細胞産生の活性化、破骨細胞形成の速度の上昇、またはその両方、（ｋ）樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及びＭ２ミクログリアから選択される１つまたは複数の細胞の生存の増加、（ｌ）樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及びＭ２ミクログリアから選択される１つまたは複数の細胞の増殖の増加、（ｍ）樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及びＭ２ミクログリアから選択される１つまたは複数の細胞の遊走の活性化、（ｎ）樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒���、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及びＭ２ミクログリアから選択される１つまたは複数の細胞のうちの１つまたは複数の機能の活性化、（ｏ）樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及びＭ２ミクログリアから選択される１つまたは複数の細胞の成熟の活性化、（ｐ）アポトーシスニューロンのクリアランス、神経組織デブリのクリアランス、非神経組織デブリのクリアランス、細菌のクリアランス、他の異物クリアランス、病原タンパク質のクリアランス、病原ペプチドのクリアランス、及び腫瘍細胞のクリアランスから選択されるクリアランスのうちの１つまたは複数の種類の活性化、（任意選択で、病原タンパク質は、アミロイドベータ、オリゴマーアミロイドベータ、アミロイドベータ斑、アミロイド前駆体タンパク質またはそのフラグメント、Ｔａｕ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（染色体９オープンリーディングフレーム７２）、ｃ９ＲＡＮタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスチレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルソリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、リピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）リピートペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）リピートペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）リピートペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）リピートペプチド、ユビキチン、及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）リピートペプチドからなる群から選択され、
腫瘍細胞は、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎臓細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、及び甲状腺癌から選択されるがんからのものである）、（ｕ）アポトーシスニューロン、神経組織デブリ、非神経組織デブリ、細菌、他の異物、病原タンパク質、病原ペプチド、病原核酸、または腫瘍細胞のうちの１つまたは複数の食作用の活性化、（任意選択で、病原核酸は、アンチセンスＧＧＣＣＣＣ（Ｇ２Ｃ４）リピート伸長ＲＮＡであり、病原タンパク質は、アミロイドベータ、オリゴマーアミロイドベータ、アミロイドベータ斑、アミロイド前駆体タンパク質またはそのフラグメント、Ｔａｕ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（染色体９オープンリーディングフレーム７２）、ｃ９ＲＡＮタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスチレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルソリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、リピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）リピートペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）リピートペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）リピートペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）リピートペプチド、ユビキチン、及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）リピートペプチドから選択され、腫瘍細胞は、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎臓細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、及び甲状腺癌から選択されるがんからのものである）、（ｐ）腫瘍細胞上のＴＲＥＭ２リガンドへの結合、（ｑ）好中球、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、ミクログリア、及びマクロファージから選択される細胞の上のＴＲＥＭ２リガンドへの結合、（ｒ）ミクログリア、マクロファージ、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、または細胞傷害性Ｔ細胞のうちの１つまたは複数による腫瘍細胞死滅の活性化、（ｓ）ミクログリア、マクロファージ、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、または細胞傷害性Ｔ細胞のうちの１つまたは複数の抗腫瘍細胞増殖活性の活性化、（ｔ）ミクログリア、マクロファージ、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、または細胞傷害性Ｔ細胞のうちの１つまたは複数の抗腫瘍細胞転移活性の活性化、（ｙ）１つまたは複数のＩＴＡＭモチーフ含有受容体の活性化（任意選択で、１つまたは複数のＩＴＡＭモチーフ含有受容体は、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、ＦｃｇＲ、ＤＡＰ１０、及びＤＡＰ１２から選択される）、（ｚ）１つまたは複数のパターン認識受容体（ＰＲＲ）によるシグナル伝達の活性化（任意選択で、１つまたは複数のＰＲＲは、１つまたは複数のＰＲＲは、病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）を識別する受容体、損傷関連分子パターン（ＤＡＭＰ）を識別する受容体、及びそれらの任意の組合せから選択される）、（ａａ）モチーフＤ／Ｅｘ０−２ＹｘｘＬ／ＩＸ６−８ＹｘｘＬ／Ｉ（配列番号８８３）を含む１つまたは複数の受容体の活性化、（ｂｂ）１つまたは複数のＴｏｌｌ様受容体によるシグナル伝達の活性化、（ｃｃ）ＪＡＫ−ＳＴＡＴシグナル伝達経路の活性化、（ｄｄ）活性化Ｂ細胞の核因子カッパ軽鎖エンハンサー（ＮＦκＢ）の活性化、（ｄｄ）ＩＴＡＭモチーフ含有受容体のリン酸化、（ｅｅ）１つまたは複数の炎症性受容体の発現の調節（任意選択で、１つまたは複数の炎症性受容体は、ＣＤ８６を含み、１つまたは複数の炎症性受容体は、ミクログリア、マクロファージ、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、または細胞傷害性Ｔ細胞のうちの１つまたは複数の上に発現される）、（ｆｆ）１つまたは複数のＴＲＥＭ２依存性遺伝子の発現の増加、（ｇｇ）かく乱されたＴＲＥＭ２依存性遺伝子発現の正常化、（ｈｈ）１つまたは複数のＩＴＡＭ依存性遺伝子の発現の増加（任意選択で、１つまたは複数のＩＴＡＭ依存性遺伝子は、活性化Ｔ細胞核内因子（ＮＦＡＴ）転写因子によって活性化される）、（ｉｉ）免疫抑制樹状細胞、免疫抑制マクロファージ、骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ、免疫抑制好中球、及び調節性Ｔ細胞のうちの１つまたは複数の分化の阻害、（ｊｊ）免疫抑制樹状細胞、免疫抑制マクロファージ、骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ、免疫抑制好中球、及び調節性Ｔ細胞のうちの１つまたは複数の機能性の阻害、（ｋｋ）腫瘍への免疫抑制樹状細胞、免疫抑制マクロファージ、骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ、免疫抑制好中球、及び調節性Ｔ細胞のうちの１つまたは複数の浸潤の減少、（ｌｌ）腫瘍、末梢血、または他のリンパ臓器における腫瘍促進性骨髄系／顆粒球系免疫抑制細胞の数の減少、（ｍｍ）骨髄由来サプレッサー細胞の腫瘍促進活性の阻害、（ｎｎ）腫瘍または末梢血における腫瘍促進性サイトカインの発現の減少（任意選択で、腫瘍促進性サイトカインは、ＴＧＦ−ベータまたはＩＬ−１０である）、（ｏｏ）腫瘍促進性ＦｏｘＰ３＋調節性Ｔリンパ球の腫瘍浸潤の減少、（ｐｐ）腫瘍死滅能を有する腫瘍特異的Ｔリンパ球の活性化の増加、（ｑｑ）腫瘍体積の減少、（ｒｒ）腫瘍成長速度の低下、（ｓｓ）抗腫瘍Ｔ細胞応答を調節する１つまたは複数の免疫療法の有効性の増加（任意選択で、１つまたは複数の免疫療法は、ＰＤ１／ＰＤＬ１遮断、ＣＴＬＡ−４遮断、及びがんワクチンから選択される）、（ｔｔ）ＰＬＣγ／ＰＫＣ／カルシウム可動化の阻害、ならびに（ｕｕ）ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ、Ｒａｓ／ＭＡＰＫシグナル伝達の阻害、（ｖｖ）樹状細胞、マクロファージ、単球、及び／またはミクログリアによる食作用の増加、（ｗｗ）細胞表面上でのＴＲＥＭ２クラスター化の誘導または保持、（ｘｘ）ＤＡＰ１２へのＴＲＥＭ２結合、（ｙｙ）ＴＲＥＭ２リン酸化、（ｚｚ）ＤＡＰ１２リン酸化、（ａａａ）Ｓｙｋキナーゼ��包含する１つまたは複数のＳＲＣファミリーチロシンキナーゼの活性化、（ｂｂｂ）ＤＡＰ１２／ＴＲＥＭ２複合体へのＳｙｋ、ＺＡＰ７０、またはその両方の動員、（ｃｃｃ）Ｃ１ｑａ、Ｃ１ｑＢ、Ｃ１ｑＣ、Ｃ１ｓ、Ｃ１Ｒ、Ｃ４、Ｃ２、Ｃ３、ＩＴＧＢ２、ＨＭＯＸ１、ＬＡＴ２．ＣＡＳＰ１、ＣＳＴＡ、ＶＳＩＧ４、ＭＳ４Ａ４Ａ、Ｃ３ＡＲ１、ＧＰＸ１、ＴｙｒｏＢＰ、ＡＬＯＸ５ＡＰ、ＩＴＧＡＭ、ＳＬＣ７Ａ７、ＣＤ４、ＩＴＧＡＸ、ＰＹＣＡＲＤ、及びＶＥＧＦから選択される１つまたは複数のタンパク質の発現の調節、（ｄｄｄ）記憶の増加、ならびに（ｅｅｅ）認知障害の減少が含まれる。
【０１８２】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、本開示のＴＲＥＭ２タンパク質及び／または天然に存在するバリアントの膜結合または可溶性形態に結合する。特定の好ましい一実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＲＥＭ２に結合する。
【０１８３】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、細胞の表面上に発現される本開示のＴＲＥＭ２タンパク質に結合するアゴニスト抗体またはアンタゴニスト抗体であり、表面発現ＴＲＥＭ２タンパク質に結合した後に、本開示の少なくとも１つのＴＲＥＭ２活性を調節する（例えば、誘導する、または阻害する）。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、不活性抗体である。
【０１８４】
抗ＴＲＥＭ２抗体結合領域
本開示のある特定の態様は、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基１９〜１７４；２９〜１１２；１１３〜１７４；３５〜４９、３５〜４９及び１４０〜１５０；３９〜４９、３９〜４９及び６３〜７７；５１〜６１；５５〜６２；５５〜６２、１０４〜１０９、及び１４８〜１５８；５５〜６２、１０４〜１０９、及び１６０〜１６６；５５〜６５、５５〜６５及び１２４〜１３４；６３〜７３；６３〜７７；１０４〜１０９；１１７〜１３３；１２４〜１３４；１３７〜１４６；１３９〜１４７；１３９〜１４９；１４０〜１５０；１４０〜１４６；１４０〜１４３；１４２〜１５２；１４６〜１５４；１４８〜１５８；１４９〜１５７；１４９及び１５０；１５１〜１５５；１５４〜１６１；１５６〜１７０；１６０〜１６６；もしくは１６２〜１６５内、または配列番号１のアミノ酸残基１９〜１７４；２９〜１１２；１１３〜１７４；３５〜４９、３５〜４９及び１４０〜１５０；３９〜４９、３９〜４９及び６３〜７７；５１〜６１；５５〜６２；５５〜６２、１０４〜１０９、及び１４８〜１５８；５５〜６２、１０４〜１０９、及び１６０〜１６６；５５〜６５、５５〜６５及び１２４〜１３４；６３〜７３；６３〜７７；１０４〜１０９；１１７〜１３３；１２４〜１３４；１３７〜１４６；１３９〜１４７；１３９〜１４９；１４０〜１５０；１４０〜１４６；１４０〜１４３；１４２〜１５２；１４６〜１５４；１４８〜１５８；１４９〜１５７；１４９及び１５０；１５１〜１５５；１５４〜１６１；１５６〜１７０；１６０〜１６６；または１６２〜１６５に対応するＴＲＥＭ２ホモログもしくはオルソログ上のアミノ酸残基内の１つまたは複数のアミノ酸に結合する抗ＴＲＥＭ２抗体を提供する。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基３５〜４９内、または配列番号１のアミノ酸残基３５〜４９に対応するＴＲＥＭ２ホモログもしくはオルソログ上のアミノ酸残基内の１つまたは複数のアミノ酸に結合する。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基３５〜４９及び１４０〜１５０内、または配列番号１のアミノ酸残基３５〜４９及び１４０〜１５０に対応するＴＲＥＭ２ホモログもしくはオルソログ上のアミノ酸残基内の１つまたは複数のアミノ酸に結合する。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基３９〜４９内、または配列番号１のアミノ酸残基３９〜４９に対応するＴＲＥＭ２ホモログもしくはオルソログ上のアミノ酸残基内の１つまたは複数のアミノ酸に結合する。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基３９〜４９及び６３〜７７内、または配列番号１のアミノ酸残基３９〜４９及び６３〜７７に対応するＴＲＥＭ２ホモログもしくはオルソログ上のアミノ酸残基内の１つまたは複数のアミノ酸に結合する。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基５１〜６１内、または配列番号１のアミノ酸残基５１〜６１に対応するＴＲＥＭ２ホモログまたはオルソログ上のアミノ酸残基内１つまたは複数のアミノ酸に結合する。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基５５〜６２内、または配列番号１のアミノ酸残基５５〜６２に対応するＴＲＥＭ２ホモログもしくはオルソログ上のアミノ酸残基内の１つまたは複数のアミノ酸に結合する。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基５５〜６２、１０４〜１０９、及び１４８〜１５８内、または配列番号１のアミノ酸残基５５〜６２、１０４〜１０９、及び１４８〜１５８に対応するＴＲＥＭ２ホモログもしくはオルソログ上のアミノ酸残基内の１つまたは複数のアミノ酸に結合する。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基５５〜６２、１０４〜１０９、及び１６０〜１６６内、または配列番号１のアミノ酸残基５５〜６２、１０４〜１０９、及び１６０〜１６６に対応するＴＲＥＭ２ホモログもしくはオルソログ上のアミノ酸残基内の１つまたは複数のアミノ酸に結合する。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基５５〜６５内、または配列番号１のアミノ酸残基５５〜６５に対応するＴＲＥＭ２ホモログもしくはオルソログ上のアミノ酸残基内の１つまたは複数のアミノ酸に結合する。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基５５〜６５及び１２４〜１３４内、または配列番号１のアミノ酸残基５５〜６５及び１２４〜１３４に対応するＴＲＥＭ２ホモログもしくはオルソログ上のアミノ酸残基内の１つまたは複数のアミノ酸に結合する。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基６３〜７３内、または配列番号１のアミノ酸残基６３〜７３に対応するＴＲＥＭ２ホモログもしくはオルソログ上のアミノ酸残基内の１つまたは複数のアミノ酸に結合する。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基６３〜７７内、または配列番号１のアミノ酸残基６３〜７７に対応するＴＲＥＭ２ホモログもしくはオルソログ上のアミノ酸残基内の１つまたは複数のアミノ酸に結合する。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基１０４〜１０９内、または配列番号１のアミノ酸残基１０４〜１０９に対応するＴＲＥＭ２ホモログもしくはオルソログ上のアミノ酸残基内の１つまたは複数のアミノ酸に結合する。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基１１７〜１３３内、または配列番号１のアミノ酸残基１１７〜１３３に対応するＴＲＥＭ２ホモログもしくはオルソログ上のアミノ酸残基内の１つまたは複数のアミノ酸に結合する。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基１２４〜１３４内、または配列番号１のアミノ酸残基１２４〜１３４に対応するＴＲＥＭ２ホモログもしくはオルソログ上のアミノ酸残基内の１つまたは複数のアミノ酸に結合する。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基１３７〜１４６内、または配列番号１のアミノ酸残基１３７〜１４６に対応するＴＲＥＭ２ホモログもしくはオルソログ上のアミノ酸残基内の１つまたは複数のアミノ酸に結合する。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基１３９〜１４７内、または配列番号１のアミノ酸残基１３９〜１４７に対応するＴＲＥＭ２ホモログもしくはオルソログ上のアミノ酸残基内の１つまたは複数のアミノ酸に結合する。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基１３９〜１４９内、または配列番号１のアミノ酸残基１３９〜１４９に対応するＴＲＥＭ２ホモログもしくはオルソログ上のアミノ酸残基内の１つまたは複数のアミノ酸に結合する。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基１４０〜１５０内、または配列番号１のアミノ酸残基１４０〜１５０に対応するＴＲＥＭ２ホモログもしくはオルソログ上のアミノ酸残基内の１つまたは複数のアミノ酸に結合する。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基１４０〜１４６内、または配列番号１のアミノ酸残基１４０〜１４６に対応するＴＲＥＭ２ホモログもしくはオルソログ上のアミノ酸残基内の１つまたは複数のアミノ酸に結合する。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基１４０〜１４３内、または配列番号１のアミノ酸残基１４０〜１４３に対応するＴＲＥＭ２ホモログもしくはオルソログ上のアミノ酸残基内の１つまたは複数のアミノ酸に結合する。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基１４２〜１５２内、または配列番号１のアミノ酸残基１４２〜１５２に対応するＴＲＥＭ２ホモログもしくはオルソログ上のアミノ酸残基内の１つまたは複数のアミノ酸に結合する。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基１４６〜１５４内、または配列番号１のアミノ酸残基１４６〜１５４に対応するＴＲＥＭ２ホモログもしくはオルソログ上のアミノ酸残基内の１つまたは複数のアミノ酸に結合する。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基１４８〜１５８内、または配列番号１のアミノ酸残基１４８〜１５８に対応するＴＲＥＭ２ホモログもしくはオルソログ上のアミノ酸残基内の１つまたは複数のアミノ酸に結合する。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基１４９〜１５７内、または配列番号１のアミノ酸残基１４９〜１５７に対応するＴＲＥＭ２ホモログもしくはオルソログ上のアミノ酸残基内の１つまたは複数のアミノ酸に結合する。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基１４９及び１５０内、または配列番号１のアミノ酸残基１４９及び１５０に対応するＴＲＥＭ２ホモログもしくはオルソログ上のアミノ酸残基内の１つまたは複数のアミノ酸に結合する。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基１５４〜１６１内、または配列番号１のアミノ酸残基１５４〜１６１に対応するＴＲＥＭ２ホモログもしくはオルソログ上のアミノ酸残基内の１つまたは複数のアミノ酸に結合する。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基１５６〜１７０内、または配列番号１のアミノ酸残基１５６〜１７０に対応するＴＲＥＭ２ホモログもしくはオルソログ上のアミノ酸残基内の１つまたは複数のアミノ酸に結合する。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基１６０〜１６６内、または配列番号１のアミノ酸残基１６０〜１６６に対応するＴＲＥＭ２ホモログもしくはオルソログ上のアミノ酸残基内の１つまたは複数のアミノ酸に結合する。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基１６２〜１６５内、または配列番号１のアミノ酸残基１６２〜１６５に対応するＴＲＥＭ２ホモログもしくはオルソログ上のアミノ酸残基内の１つまたは複数のアミノ酸に結合する。
【０１８５】
他の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基Ａｒｇ４７またはＡｓｐ８７を含むエピトープに結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基４０〜４４を包含するエピトープに結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基６７〜７６を包含するエピトープに結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基１１４〜１１８を含むエピトープに欠号する。
【０１８６】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１のＫ４２、Ｈ４３、Ｗ４４、Ｇ４５、Ｈ６７、Ｒ７７、Ｔ８８、Ｈ１１４、Ｅ１１７、Ｅ１５１、Ｄ１５２、Ｈ１５４、及びＥ１５６から選択される１つもしくは複数のアミノ酸残基、または配列番号１のＫ４２、Ｈ４３、Ｗ４４、Ｇ４５、Ｈ６７、Ｒ７７、Ｔ８８、Ｈ１１４、Ｅ１１７、Ｅ１５１、Ｄ１５２、Ｈ１５４、及びＥ１５６から選択されるアミノ酸残基に対応する哺乳動物ＴＲＥＭ２タンパク質上の１つもしくは複数のアミノ酸残基に結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１のＥ１５１、Ｄ１５２、Ｈ１５４、及びＥ１５６から選択される１つ以上、２つ以上、３つ以上、もしくは４つすべてのアミノ酸残基、または配列番号１のＥ１５１、Ｄ１５２、Ｈ１５４、及びＥ１５６から選択されるアミノ酸残基に対応する哺乳動物ＴＲＥＭ２タンパク質上の１つ以上、２つ以上、３つ以上、もしくは４つすべてのアミノ酸残基に結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１のＫ４２及びＨ１１４から選択される１つ以上、もしくは２つすべてのアミノ酸残基、または配列番号１のＫ４２及びＨ１１４から選択されるアミノ酸残基に対応する哺乳動物ＴＲＥＭ２タンパク質上の１つ以上、もしくは２つすべてのアミノ酸残基に結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１のＫ４２、Ｇ４５、及びＨ１１４から選択される１つ以上、２つ以上、もしくは３つすべてのアミノ酸残基、または配列番号１のＫ４２、Ｇ４５、及びＨ１１４から選択されるアミノ酸残基に対応する哺乳動物ＴＲＥＭ２タンパク質上の１つ以上、２つ以上、もしくは３つすべてのアミノ酸残基に結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１のアミノ酸残基Ｒ７７、または配列番号１のアミノ酸残基Ｒ７７に対応する哺乳動物ＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基に結合する。
【０１８７】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、表２Ａ、２Ｂ、３Ａ、３Ｂ、４Ａ、４Ｂ、７Ａ、及び７Ｂに列挙されている抗体のいずれかから選択される少なくとも１つの抗体の結合を競合的に阻害する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、１１Ａ７、３Ａ２、３Ｂ１０、６Ｇ１２、６Ｈ６、７Ａ９、７Ｂ３、８Ａ１、８Ｅ１０、８Ｆ１１、８Ｆ８、９Ｆ５、９Ｇ１、９Ｇ３、１０Ａ９、１０Ｃ１、１１Ａ８、１２Ｅ２、１２Ｆ９、１２Ｇ６、２Ｃ７、２Ｆ５、３Ｃ１、４Ｄ７、４Ｄ１１、６Ｃ１１、６Ｇ１２、７Ａ３、７Ｃ５、７Ｅ９、７Ｆ６、７Ｇ１、７Ｈ１、８Ｃ３、８Ｆ１０、１２Ａ１、１Ｅ９、２Ｃ５、３Ｃ５、４Ｃ１２、４Ｆ２、５Ａ２、６Ｂ３、７Ｄ１、７Ｄ９、１１Ｄ８、８Ａ１２、１０Ｅ７、１０Ｂ１１、１０Ｄ２、７Ｄ５、２Ａ７、３Ｇ１２、６Ｈ９、８Ｇ９、９Ｂ４、１０Ａ１、１１Ａ８、１２Ｆ３、２Ｆ８、１０Ｅ３、１Ｈ７、２Ｆ６、２Ｈ８、３Ａ７、７Ｅ５、７Ｆ８、１１Ｈ５、７Ｃ５、４Ｆ１１、１２Ｄ９、１Ｂ４ｖ１、１Ｂ４ｖ２、６Ｈ２、７Ｂ１１ｖ１、７Ｂ１１ｖ２、１８Ｄ８、１８Ｅ４ｖ１、１８Ｅ４ｖ２、２９Ｆ６ｖ１、２９Ｆ６ｖ２、４０Ｄ５ｖ１、４０Ｄ５ｖ２、４３Ｂ９、４４Ａ８ｖ１、４４Ａ８ｖ２、４４Ｂ４ｖ１、及び４４Ｂ４ｖ２から選択される少なくとも１つの抗体の結合を競合的に阻害する。
【０１８８】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、表２Ａ、２Ｂ、３Ａ、３Ｂ、４Ａ、４Ｂ、７Ａ、及び７Ｂに列挙されている抗体のいずれかから選択される少なくとも１つの抗体が結合するＴＲＥＭ２エピトープと同じであるか、またはそれと重複するヒトＴＲＥＭ２のエピトープに結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、１１Ａ７、３Ａ２、３Ｂ１０、６Ｇ１２、６Ｈ６、７Ａ９、７Ｂ３、８Ａ１、８Ｅ１０、８Ｆ１１、８Ｆ８、９Ｆ５、９Ｇ１、９Ｇ３、１０Ａ９、１０Ｃ１、１１Ａ８、１２Ｅ２、１２Ｆ９、１２Ｇ６、２Ｃ７、２Ｆ５、３Ｃ１、４Ｄ７、４Ｄ１１、６Ｃ１１、６Ｇ１２、７Ａ３、７Ｃ５、７Ｅ９、７Ｆ６、７Ｇ１、７Ｈ１、８Ｃ３、８Ｆ１０、１２Ａ１、１Ｅ９、２Ｃ５、３Ｃ５、４Ｃ１２、４Ｆ２、５Ａ２、６Ｂ３、７Ｄ１、７Ｄ９、１１Ｄ８、８Ａ１２、１０Ｅ７、１０Ｂ１１、１０Ｄ２、７Ｄ５、２Ａ７、３Ｇ１２、６Ｈ９、８Ｇ９、９Ｂ４、１０Ａ１、１１Ａ８、１２Ｆ３、２Ｆ８、１０Ｅ３、１Ｈ７、２Ｆ６、２Ｈ８、３Ａ７、７Ｅ５、７Ｆ８、１１Ｈ５、７Ｃ５、４Ｆ１１、１２Ｄ９、１Ｂ４ｖ１、１Ｂ４ｖ２、６Ｈ２、７Ｂ１１ｖ１、７Ｂ１１ｖ２、１８Ｄ８、１８Ｅ４ｖ１、１８Ｅ４ｖ２、２９Ｆ６ｖ１、２９Ｆ６ｖ２、４０Ｄ５ｖ１、４０Ｄ５ｖ２、４３Ｂ９、４４Ａ８ｖ１、４４Ａ８ｖ２、４４Ｂ４ｖ１、及び４４Ｂ４ｖ２から選択される少なくとも１つの抗体が結合するＴＲＥＭ２エピトープと同じであるか、またはそれと重複するヒトＴＲＥＭ２のエピトープに結合する。
【０１８９】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、表２Ａ、２Ｂ、３Ａ、３Ｂ、４Ａ、４Ｂ、７Ａ、及び７Ｂに列挙されている抗体のいずれかから選択される少なくとも１つの抗体が結合する本質的に同じＴＲＥＭ２エピトープに結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、１Ａ７、３Ａ２、３Ｂ１０、６Ｇ１２、６Ｈ６、７Ａ９、７Ｂ３、８Ａ１、８Ｅ１０、８Ｆ１１、８Ｆ８、９Ｆ５、９Ｇ１、９Ｇ３、１０Ａ９、１０Ｃ１、１１Ａ８、１２Ｅ２、１２Ｆ９、１２Ｇ６、２Ｃ７、２Ｆ５、３Ｃ１、４Ｄ７、４Ｄ１１、６Ｃ１１、６Ｇ１２、７Ａ３、７Ｃ５、７Ｅ９、７Ｆ６、７Ｇ１、７Ｈ１、８Ｃ３、８Ｆ１０、１２Ａ１、１Ｅ９、２Ｃ５、３Ｃ５、４Ｃ１２、４Ｆ２、５Ａ２、６Ｂ３、７Ｄ１、７Ｄ９、１１Ｄ８、８Ａ１２、１０Ｅ７、１０Ｂ１１、１０Ｄ２、７Ｄ５、２Ａ７、３Ｇ１２、６Ｈ９、８Ｇ９、９Ｂ４、１０Ａ１、１１Ａ８、１２Ｆ３、２Ｆ８、１０Ｅ３、１Ｈ７、２Ｆ６、２Ｈ８、３Ａ７、７Ｅ５、７Ｆ８、１１Ｈ５、７Ｃ５、４Ｆ１１、１２Ｄ９、１Ｂ４ｖ１、１Ｂ４ｖ２、６Ｈ２、７Ｂ１１ｖ１、７Ｂ１１ｖ２、１８Ｄ８、１８Ｅ４ｖ１、１８Ｅ４ｖ２、２９Ｆ６ｖ１、２９Ｆ６ｖ２、４０Ｄ５ｖ１、４０Ｄ５ｖ２、４３Ｂ９、４４Ａ８ｖ１、４４Ａ８ｖ２、４４Ｂ４ｖ１、及び４４Ｂ４ｖ２から選択される少なくとも１つの抗体が結合する本質的に同じＴＲＥＭ２エピトープに結合する。抗体が結合するエピトープをマッピングするための詳細な例示的方法は、Ｍｏｒｒｉｓ（１９９６）  “Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，”  ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｖｏｌ．６６（Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ）で提供される。
【０１９０】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２への結合について、１Ａ７、３Ａ２、３Ｂ１０、６Ｇ１２、６Ｈ６、７Ａ９、７Ｂ３、８Ａ１、８Ｅ１０、８Ｆ１１、８Ｆ８、９Ｆ５、９Ｇ１、９Ｇ３、１０Ａ９、１０Ｃ１、１１Ａ８、１２Ｅ２、１２Ｆ９、１２Ｇ６、２Ｃ７、２Ｆ５、３Ｃ１、４Ｄ７、４Ｄ１１、６Ｃ１１、６Ｇ１２、７Ａ３、７Ｃ５、７Ｅ９、７Ｆ６、７Ｇ１、７Ｈ１、８Ｃ３、８Ｆ１０、１２Ａ１、１Ｅ９、２Ｃ５、３Ｃ５、４Ｃ１２、４Ｆ２、５Ａ２、６Ｂ３、７Ｄ１、７Ｄ９、１１Ｄ８、８Ａ１２、１０Ｅ７、１０Ｂ１１、１０Ｄ２、７Ｄ５、２Ａ７、３Ｇ１２、６Ｈ９、８Ｇ９、９Ｂ４、１０Ａ１、１１Ａ８、１２Ｆ３、２Ｆ８、１０Ｅ３、１Ｈ７、２Ｆ６、２Ｈ８、３Ａ７、７Ｅ５、７Ｆ８、１１Ｈ５、７Ｃ５、４Ｆ１１、１２Ｄ９、１Ｂ４ｖ１、１Ｂ４ｖ２、６Ｈ２、７Ｂ１１ｖ１、７Ｂ１１ｖ２、１８Ｄ８、１８Ｅ４ｖ１、１８Ｅ４ｖ２、２９Ｆ６ｖ１、２９Ｆ６ｖ２、４０Ｄ５ｖ１、４０Ｄ５ｖ２、４３Ｂ９、４４Ａ８ｖ１、４４Ａ８ｖ２、４４Ｂ４ｖ１、及び４４Ｂ４ｖ２、ならびにそれらの任意の組合せから選択される１つまたは複数の抗体と競合する。
【０１９１】
例示的な競合アッセイでは、固定化ＴＲＥＭ２または細胞表面上にＴＲＥＭ２を発現する細胞は、ＴＲＥＭ２に結合する第１の標識抗体（例えば、ヒト、または非ヒト霊長類）及びＴＲＥＭ２への結合について第１の抗体と競合する能力について試験されている第２の非標識抗体を含む溶液中でインキュベートされる。第２の抗体は、ハイブリドーマ上清中に存在し得る。対照として、固定化ＴＲＥＭ２またはＴＲＥＭ２を発現する細胞は、第１の標識抗体を含むが、第２の非標識抗体を含まない溶液中でインキュベートされる。ＴＲＥＭ２への第１の抗体の結合を許容する条件下でインキュベートした後に、過剰の非結合抗体が除去され、固定化ＴＲＥＭ２またはＴＲＥＭ２を発現する細胞と会合した標識の量が測定される。固定化ＴＲＥＭ２またはＴＲＥＭ２を発現する細胞と会合した標識の量が、対照サンプルと比較して試験サンプル中で実質的に減少する場合、それは、第２の抗体が、ＴＲＥＭ２への結合について、第１の抗体と競合することを示す。Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（１９８８）  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  ｃｈ．１４（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ）を参照されたい。
【０１９２】
抗ＴＲＥＭ２抗体軽鎖及び重鎖可変領域
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、（ａ）表２Ａ、２Ｂ、３Ａ、３Ｂ、４Ａ、４Ｂ、７Ａ、及び７Ｂに列挙されている、または１Ａ７、３Ａ２、３Ｂ１０、６Ｇ１２、６Ｈ６、７Ａ９、７Ｂ３、８Ａ１、８Ｅ１０、８Ｆ１１、８Ｆ８、９Ｆ５、９Ｇ１、９Ｇ３、１０Ａ９、１０Ｃ１、１１Ａ８、１２Ｅ２、１２Ｆ９、１２Ｇ６、２Ｃ７、２Ｆ５、３Ｃ１、４Ｄ７、４Ｄ１１、６Ｃ１１、６Ｇ１２、７Ａ３、７Ｃ５、７Ｅ９、７Ｆ６、７Ｇ１、７Ｈ１、８Ｃ３、８Ｆ１０、１２Ａ１、１Ｅ９、２Ｃ５、３Ｃ５、４Ｃ１２、４Ｆ２、５Ａ２、６Ｂ３、７Ｄ１、７Ｄ９、１１Ｄ８、８Ａ１２、１０Ｅ７、１０Ｂ１１、１０Ｄ２、７Ｄ５、２Ａ７、３Ｇ１２、６Ｈ９、８Ｇ９、９Ｂ４、１０Ａ１、１１Ａ８、１２Ｆ３、２Ｆ８、１０Ｅ３、１Ｈ７、２Ｆ６、２Ｈ８、３Ａ７、７Ｅ５、７Ｆ８、１１Ｈ５、７Ｃ５、４Ｆ１１、１２Ｄ９、１Ｂ４ｖ１、１Ｂ４ｖ２、６Ｈ２、７Ｂ１１ｖ１、７Ｂ１１ｖ２、１８Ｄ８、１８Ｅ４ｖ１、１８Ｅ４ｖ２、２９Ｆ６ｖ１、２９Ｆ６ｖ２、４０Ｄ５ｖ１、４０Ｄ５ｖ２、４３Ｂ９、４４Ａ８ｖ１、４４Ａ８ｖ２、４４Ｂ４ｖ１、及び４４Ｂ４ｖ２、ならびにそれらの任意の組合せから選択される抗体のいずれか１つのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む軽鎖可変領域；及び／または（ｂ）表２Ａ、２Ｂ、３Ａ、３Ｂ、４Ａ、４Ｂ、７Ａ、及び７Ｂに列挙されている、または１Ａ７、３Ａ２、３Ｂ１０、６Ｇ１２、６Ｈ６、７Ａ９、７Ｂ３、８Ａ１、８Ｅ１０、８Ｆ１１、８Ｆ８、９Ｆ５、９Ｇ１、９Ｇ３、１０Ａ９、１０Ｃ１、１１Ａ８、１２Ｅ２、１２Ｆ９、１２Ｇ６、２Ｃ７、２Ｆ５、３Ｃ１、４Ｄ７、４Ｄ１１、６Ｃ１１、６Ｇ１２、７Ａ３、７Ｃ５、７Ｅ９、７Ｆ６、７Ｇ１、７Ｈ１、８Ｃ３、８Ｆ１０、１２Ａ１、１Ｅ９、２Ｃ５、３Ｃ５、４Ｃ１２、４Ｆ２、５Ａ２、６Ｂ３、７Ｄ１、７Ｄ９、１１Ｄ８、８Ａ１２、１０Ｅ７、１０Ｂ１１、１０Ｄ２、７Ｄ５、２Ａ７、３Ｇ１２、６Ｈ９、８Ｇ９、９Ｂ４、１０Ａ１、１１Ａ８、１２Ｆ３、２Ｆ８、１０Ｅ３、１Ｈ７、２Ｆ６、２Ｈ８、３Ａ７、７Ｅ５、７Ｆ８、１１Ｈ５、７Ｃ５、４Ｆ１１、１２Ｄ９、１Ｂ４ｖ１、１Ｂ４ｖ２、６Ｈ２、７Ｂ１１ｖ１、７Ｂ１１ｖ２、１８Ｄ８、１８Ｅ４ｖ１、１８Ｅ４ｖ２、２９Ｆ６ｖ１、２９Ｆ６ｖ２、４０Ｄ５ｖ１、４０Ｄ５ｖ２、４３Ｂ９、４４Ａ８ｖ１、４４Ａ８ｖ２、４４Ｂ４ｖ１、及び４４Ｂ４ｖ２、ならびにそれらの任意の組合せから選択される抗体のいずれか１つのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む重鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、ＨＶＲ−Ｌ３、ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３は、表２Ａ、２Ｂ、３Ａ、３Ｂ、４Ａ、４Ｂ、７Ａ、及び７Ｂで示されているとおりの、または１Ａ７、３Ａ２、３Ｂ１０、６Ｇ１２、６Ｈ６、７Ａ９、７Ｂ３、８Ａ１、８Ｅ１０、８Ｆ１１、８Ｆ８、９Ｆ５、９Ｇ１、９Ｇ３、１０Ａ９、１０Ｃ１、１１Ａ８、１２Ｅ２、１２Ｆ９、１２Ｇ６、２Ｃ７、２Ｆ５、３Ｃ１、４Ｄ７、４Ｄ１１、６Ｃ１１、６Ｇ１２、７Ａ３、７Ｃ５、７Ｅ９、７Ｆ６、７Ｇ１、７Ｈ１、８Ｃ３、８Ｆ１０、１２Ａ１、１Ｅ９、２Ｃ５、３Ｃ５、４Ｃ１２、４Ｆ２、５Ａ２、６Ｂ３、７Ｄ１、７Ｄ９、１１Ｄ８、８Ａ１２、１０Ｅ７、１０Ｂ１１、１０Ｄ２、７Ｄ５、２Ａ７、３Ｇ１２、６Ｈ９、８Ｇ９、９Ｂ４、１０Ａ１、１１Ａ８、１２Ｆ３、２Ｆ８、１０Ｅ３、１Ｈ７、２Ｆ６、２Ｈ８、３Ａ７、７Ｅ５、７Ｆ８、１１Ｈ５、７Ｃ５、４Ｆ１１、１２Ｄ９、１Ｂ４ｖ１、１Ｂ４ｖ２、６Ｈ２、７Ｂ１１ｖ１、７Ｂ１１ｖ２、１８Ｄ８、１８Ｅ４ｖ１、１８Ｅ４ｖ２、２９Ｆ６ｖ１、２９Ｆ６ｖ２、４０Ｄ５ｖ１、４０Ｄ５ｖ２、４３Ｂ９、４４Ａ８ｖ１、４４Ａ８ｖ２、４４Ｂ４ｖ１、及び４４Ｂ４ｖ２、ならびにそれらの任意の組合せから選択される抗体に由来するＥＵもしくはＫａｂａｔ  ＨＶＲ、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＨＶＲ、または接触ＨＶＲ配列を含む。
【０１９３】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、（ｉ）表２Ａ、２Ｂ、３Ａ、３Ｂ、４Ａ、４Ｂ、７Ａ、及び７Ｂに列挙されている、または１Ａ７、３Ａ２、３Ｂ１０、６Ｇ１２、６Ｈ６、７Ａ９、７Ｂ３、８Ａ１、８Ｅ１０、８Ｆ１１、８Ｆ８、９Ｆ５、９Ｇ１、９Ｇ３、１０Ａ９、１０Ｃ１、１１Ａ８、１２Ｅ２、１２Ｆ９、１２Ｇ６、２Ｃ７、２Ｆ５、３Ｃ１、４Ｄ７、４Ｄ１１、６Ｃ１１、６Ｇ１２、７Ａ３、７Ｃ５、７Ｅ９、７Ｆ６、７Ｇ１、７Ｈ１、８Ｃ３、８Ｆ１０、１２Ａ１、１Ｅ９、２Ｃ５、３Ｃ５、４Ｃ１２、４Ｆ２、５Ａ２、６Ｂ３、７Ｄ１、７Ｄ９、１１Ｄ８、８Ａ１２、１０Ｅ７、１０Ｂ１１、１０Ｄ２、７Ｄ５、２Ａ７、３Ｇ１２、６Ｈ９、８Ｇ９、９Ｂ４、１０Ａ１、１１Ａ８、１２Ｆ３、２Ｆ８、１０Ｅ３、１Ｈ７、２Ｆ６、２Ｈ８、３Ａ７、７Ｅ５、７Ｆ８、１１Ｈ５、７Ｃ５、４Ｆ１１、１２Ｄ９、１Ｂ４ｖ１、１Ｂ４ｖ２、６Ｈ２、７Ｂ１１ｖ１、７Ｂ１１ｖ２、１８Ｄ８、１８Ｅ４ｖ１、１８Ｅ４ｖ２、２９Ｆ６ｖ１、２９Ｆ６ｖ２、４０Ｄ５ｖ１、４０Ｄ５ｖ２、４３Ｂ９、４４Ａ８ｖ１、４４Ａ８ｖ２、４４Ｂ４ｖ１、及び４４Ｂ４ｖ２から選択される抗体に由来するＨＶＲ−Ｌ１配列のいずれかのアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）表２Ａ、２Ｂ、３Ａ、３Ｂ、４Ａ、４Ｂ、７Ａ、及び７Ｂに列挙されている、または１Ａ７、３Ａ２、３Ｂ１０、６Ｇ１２、６Ｈ６、７Ａ９、７Ｂ３、８Ａ１、８Ｅ１０、８Ｆ１１、８Ｆ８、９Ｆ５、９Ｇ１、９Ｇ３、１０Ａ９、１０Ｃ１、１１Ａ８、１２Ｅ２、１２Ｆ９、１２Ｇ６、２Ｃ７、２Ｆ５、３Ｃ１、４Ｄ７、４Ｄ１１、６Ｃ１１、６Ｇ１２、７Ａ３、７Ｃ５、７Ｅ９、７Ｆ６、７Ｇ１、７Ｈ１、８Ｃ３、８Ｆ１０、１２Ａ１、１Ｅ９、２Ｃ５、３Ｃ５、４Ｃ１２、４Ｆ２、５Ａ２、６Ｂ３、７Ｄ１、７Ｄ９、１１Ｄ８、８Ａ１２、１０Ｅ７、１０Ｂ１１、１０Ｄ２、７Ｄ５、２Ａ７、３Ｇ１２、６Ｈ９、８Ｇ９、９Ｂ４、１０Ａ１、１１Ａ８、１２Ｆ３、２Ｆ８、１０Ｅ３、１Ｈ７、２Ｆ６、２Ｈ８、３Ａ７、７Ｅ５、７Ｆ８、１１Ｈ５、７Ｃ５、４Ｆ１１、１２Ｄ９、１Ｂ４ｖ１、１Ｂ４ｖ２、６Ｈ２、７Ｂ１１ｖ１、７Ｂ１１ｖ２、１８Ｄ８、１８Ｅ４ｖ１、１８Ｅ４ｖ２、２９Ｆ６ｖ１、２９Ｆ６ｖ２、４０Ｄ５ｖ１、４０Ｄ５ｖ２、４３Ｂ９、４４Ａ８ｖ１、４４Ａ８ｖ２、４４Ｂ４ｖ１、及び４４Ｂ４ｖ２から選択される抗体に由来するＨＶＲ−Ｌ２配列のいずれかのアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、（ｉｉｉ）表２Ａ、２Ｂ、３Ａ、３Ｂ、４Ａ、４Ｂ、７Ａ、及び７Ｂに列挙されている、または１Ａ７、３Ａ２、３Ｂ１０、６Ｇ１２、６Ｈ６、７Ａ９、７Ｂ３、８Ａ１、８Ｅ１０、８Ｆ１１、８Ｆ８、９Ｆ５、９Ｇ１、９Ｇ３、１０Ａ９、１０Ｃ１、１１Ａ８、１２Ｅ２、１２Ｆ９、１２Ｇ６、２Ｃ７、２Ｆ５、３Ｃ１、４Ｄ７、４Ｄ１１、６Ｃ１１、６Ｇ１２、７Ａ３、７Ｃ５、７Ｅ９、７Ｆ６、７Ｇ１、７Ｈ１、８Ｃ３、８Ｆ１０、１２Ａ１、１Ｅ９、２Ｃ５、３Ｃ５、４Ｃ１２、４Ｆ２、５Ａ２、６Ｂ３、７Ｄ１、７Ｄ９、１１Ｄ８、８Ａ１２、１０Ｅ７、１０Ｂ１１、１０Ｄ２、７Ｄ５、２Ａ７、３Ｇ１２、６Ｈ９、８Ｇ９、９Ｂ４、１０Ａ１、１１Ａ８、１２Ｆ３、２Ｆ８、１０Ｅ３、１Ｈ７、２Ｆ６、２Ｈ８、３Ａ７、７Ｅ５、７Ｆ８、１１Ｈ５、７Ｃ５、４Ｆ１１、１２Ｄ９、１Ｂ４ｖ１、１Ｂ４ｖ２、６Ｈ２、７Ｂ１１ｖ１、７Ｂ１１ｖ２、１８Ｄ８、１８Ｅ４ｖ１、１８Ｅ４ｖ２、２９Ｆ６ｖ１、２９Ｆ６ｖ２、４０Ｄ５ｖ１、４０Ｄ５ｖ２、４３Ｂ９、４４Ａ８ｖ１、４４Ａ８ｖ２、４４Ｂ４ｖ１、及び４４Ｂ４ｖ２から選択される抗体に由来するＨＶＲ−Ｌ３配列のいずれかのアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、（ｉｖ）表２Ａ、２Ｂ、３Ａ、３Ｂ、４Ａ、４Ｂ、７Ａ、及び７Ｂに列挙されている、または１Ａ７、３Ａ２、３Ｂ１０、６Ｇ１２、６Ｈ６、７Ａ９、７Ｂ３、８Ａ１、８Ｅ１０、８Ｆ１１、８Ｆ８、９Ｆ５、９Ｇ１、９Ｇ３、１０Ａ９、１０Ｃ１、１１Ａ８、１２Ｅ２、１２Ｆ９、１２Ｇ６、２Ｃ７、２Ｆ５、３Ｃ１、４Ｄ７、４Ｄ１１、６Ｃ１１、６Ｇ１２、７Ａ３、７Ｃ５、７Ｅ９、７Ｆ６、７Ｇ１、７Ｈ１、８Ｃ３、８Ｆ１０、１２Ａ１、１Ｅ９、２Ｃ５、３Ｃ５、４Ｃ１２、４Ｆ２、５Ａ２、６Ｂ３、７Ｄ１、７Ｄ９、１１Ｄ８、８Ａ１２、１０Ｅ７、１０Ｂ１１、１０Ｄ２、７Ｄ５、２Ａ７、３Ｇ１２、６Ｈ９、８Ｇ９、９Ｂ４、１０Ａ１、１１Ａ８、１２Ｆ３、２Ｆ８、１０Ｅ３、１Ｈ７、２Ｆ６、２Ｈ８、３Ａ７、７Ｅ５、７Ｆ８、１１Ｈ５、７Ｃ５、４Ｆ１１、１２Ｄ９、１Ｂ４ｖ１、１Ｂ４ｖ２、６Ｈ２、７Ｂ１１ｖ１、７Ｂ１１ｖ２、１８Ｄ８、１８Ｅ４ｖ１、１８Ｅ４ｖ２、２９Ｆ６ｖ１、２９Ｆ６ｖ２、４０Ｄ５ｖ１、４０Ｄ５ｖ２、４３Ｂ９、４４Ａ８ｖ１、４４Ａ８ｖ２、４４Ｂ４ｖ１、及び４４Ｂ４ｖ２から選択される抗体に由来するＨＶＲ−Ｈ１配列のいずれかのアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｖ）表２Ａ、２Ｂ、３Ａ、３Ｂ、４Ａ、４Ｂ、７Ａ、及び７Ｂに列挙されている、１Ａ７、３Ａ２、３Ｂ１０、６Ｇ１２、６Ｈ６、７Ａ９、７Ｂ３、８Ａ１、８Ｅ１０、８Ｆ１１、８Ｆ８、９Ｆ５、９Ｇ１、９Ｇ３、１０Ａ９、１０Ｃ１、１１Ａ８、１２Ｅ２、１２Ｆ９、１２Ｇ６、２Ｃ７、２Ｆ５、３Ｃ１、４Ｄ７、４Ｄ１１、６Ｃ１１、６Ｇ１２、７Ａ３、７Ｃ５、７Ｅ９、７Ｆ６、７Ｇ１、７Ｈ１、８Ｃ３、８Ｆ１０、１２Ａ１、１Ｅ９、２Ｃ５、３Ｃ５、４Ｃ１２、４Ｆ２、５Ａ２、６Ｂ３、７Ｄ１、７Ｄ９、１１Ｄ８、８Ａ１２、１０Ｅ７、１０Ｂ１１、１０Ｄ２、７Ｄ５、２Ａ７、３Ｇ１２、６Ｈ９、８Ｇ９、９Ｂ４、１０Ａ１、１１Ａ８、１２Ｆ３、２Ｆ８、１０Ｅ３、１Ｈ７、２Ｆ６、２Ｈ８、３Ａ７、７Ｅ５、７Ｆ８、１１Ｈ５、７Ｃ５、４Ｆ１１、１２Ｄ９、１Ｂ４ｖ１、１Ｂ４ｖ２、６Ｈ２、７Ｂ１１ｖ１、７Ｂ１１ｖ２、１８Ｄ８、１８Ｅ４ｖ１、１８Ｅ４ｖ２、２９Ｆ６ｖ１、２９Ｆ６ｖ２、４０Ｄ５ｖ１、４０Ｄ５ｖ２、４３Ｂ９、４４Ａ８ｖ１、４４Ａ８ｖ２、４４Ｂ４ｖ１、及び４４Ｂ４ｖ２またはから選択される抗体に由来するＨＶＲ−Ｈ２配列のいずれかのアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、ならびに（ｖｉ）表２Ａ、２Ｂ、３Ａ、３Ｂ、４Ａ、４Ｂ、７Ａ、及び７Ｂに列挙されている、または１Ａ７、３Ａ２、３Ｂ１０、６Ｇ１２、６Ｈ６、７Ａ９、７Ｂ３、８Ａ１、８Ｅ１０、８Ｆ１１、８Ｆ８、９Ｆ５、９Ｇ１、９Ｇ３、１０Ａ９、１０Ｃ１、１１Ａ８、１２Ｅ２、１２Ｆ９、１２Ｇ６、２Ｃ７、２Ｆ５、３Ｃ１、４Ｄ７、４Ｄ１１、６Ｃ１１、６Ｇ１２、７Ａ３、７Ｃ５、７Ｅ９、７Ｆ６、７Ｇ１、７Ｈ１、８Ｃ３、８Ｆ１０、１２Ａ１、１Ｅ９、２Ｃ５、３Ｃ５、４Ｃ１２、４Ｆ２、５Ａ２、６Ｂ３、７Ｄ１、７Ｄ９、１１Ｄ８、８Ａ１２、１０Ｅ７、１０Ｂ１１、１０Ｄ２、７Ｄ５、２Ａ７、３Ｇ１２、６Ｈ９、８Ｇ９、９Ｂ４、１０Ａ１、１１Ａ８、１２Ｆ３、２Ｆ８、１０Ｅ３、１Ｈ７、２Ｆ６、２Ｈ８、３Ａ７、７Ｅ５、７Ｆ８、１１Ｈ５、７Ｃ５、４Ｆ１１、１２Ｄ９、１Ｂ４ｖ１、１Ｂ４ｖ２、６Ｈ２、７Ｂ１１ｖ１、７Ｂ１１ｖ２、１８Ｄ８、１８Ｅ４ｖ１、１８Ｅ４ｖ２、２９Ｆ６ｖ１、２９Ｆ６ｖ２、４０Ｄ５ｖ１、４０Ｄ５ｖ２、４３Ｂ９、４４Ａ８ｖ１、４４Ａ８ｖ２、４４Ｂ４ｖ１、及び４４Ｂ４ｖ２から選択される抗体に由来するＨＶＲ−Ｈ３配列のいずれかのアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含み、その際、（ａ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号９のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号２４のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号３４のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号４８のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号６６のアミノ酸配列を含み、かつＨＶＲ−Ｈ３は、
配列番号８５のアミノ酸配列を含む、（ｂ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号９のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号２４のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号３４のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号４８のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号６６のアミノ酸配列を含み、かつＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号８５のアミノ酸配列を含む、（ｃ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１０のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号２５のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号３５のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号４９のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号６７のアミノ酸配列を含み、かつＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号８６のアミノ酸配列を含む、（ｄ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号２６のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号３７のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号５０のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号６８のアミノ酸配列を含み、かつＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号８７のアミノ酸配列を含む、（ｅ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号２６のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号３６のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号５１のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号６９のアミノ酸配列を含み、かつＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号８８のアミノ酸配列を含む、（ｆ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１３のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号２７のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号３８のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号５２のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号７０のアミノ酸配列を含み、かつＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号８９のアミノ酸配列を含む、（ｇ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１４のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号２８のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号３９のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号５３のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号７１のアミノ酸配列を含み、かつＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号９０のアミノ酸配列を含む、（ｈ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１３のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号２７のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号３８のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号５２のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号７０のアミノ酸配列を含み、かつＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号８９のアミノ酸配列を含む、（ｉ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１３のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号２７のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号３８のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号５２のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号７０のアミノ酸配列を含み、かつＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号８９のアミノ酸配列を含む、（ｊ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１５のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号２８のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号４０のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号５４のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号７２のアミノ酸配列を含み、かつＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号９１のアミノ酸配列を含む、（ｋ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号２６のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号３６のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号５１のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号６９のアミノ酸配列を含み、かつＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号８８のアミノ酸配列を含む、（ｌ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１６のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号２９のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号３５のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号５５のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号７３のアミノ酸配列を含み、かつＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号９２のアミノ酸配列を含む、（ｍ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１５のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号２８のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号４０のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号５４のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号７２のアミノ酸配列を含み、かつＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号９１のアミノ酸配列を含む、（ｎ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号５８１のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号２９のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号５８２のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号５６のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号７４のアミノ酸配列を含み、かつＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号９３のアミノ酸配列を含む、（ｏ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１７のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号３０のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号４１のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号５７のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号７５のアミノ酸配列を含み、かつＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号９４のアミノ酸配列を含む、（ｐ）ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号５８のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号７６のアミノ酸配列を含み、かつＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号９５のアミノ酸配列を含む、（ｑ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１８のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号３１のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号４２のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号５９のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号７７のアミノ酸配列を含み、かつＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号９６のアミノ酸配列を含む、（ｒ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１９のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号２８のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号４３のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号６０のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号７８のアミノ酸配列を含み、かつＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号９７のアミノ酸配列を含む、（ｓ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号２０のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号２８のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号４４のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号６１のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号７９のアミノ酸配列を含み、かつＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号９８のアミノ酸配列を含む、（ｔ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号２１のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号３２のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号４５のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号６２のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号８０のアミノ酸配列を含み、かつＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号９９のアミノ酸配列を含む、（ｕ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１５のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号３３のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号４０のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号５４のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号８１のアミノ酸配列を含み、かつＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号９１のアミノ酸配列を含む、（ｖ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号２２のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号２９のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号４６のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号６３のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号８２のアミノ酸配列を含み、かつＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号１００のアミノ酸配列を含む、（ｗ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号２３のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号２９のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号４７のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号６４のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号８３のアミノ酸配列を含み、かつＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号１０１のアミノ酸配列を含む、（ｘ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１６のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号２９のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号３５のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号６５のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号８４のアミノ酸配列を含み、かつＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号１０２のアミノ酸配列を含む、（ｙ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号５８１のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号２９のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号５８２のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号５６のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号５８５のアミノ酸配列を含み、かつＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号５８８のアミノ酸配列を含む、（ｚ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１０のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号２９のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号３５のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号４９のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号５８６のアミノ酸配列を含み、かつＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号８６のアミノ酸配列を含む、または（ａａ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１４のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号２８のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号５８３のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号５８４のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号５８７のアミノ酸配列を含み、かつＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号５８９のアミノ酸配列を含む。
【０１９４】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、（ｉ）配列番号８２６−８２８から選択されるアミノ酸配列、または配列番号８２６〜８２８から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）表２Ａ、２Ｂ、３Ａ、３Ｂ、４Ａ、４Ｂ、７Ａ、及び７Ｂに列挙されている、または１Ａ７、３Ａ２、３Ｂ１０、６Ｇ１２、６Ｈ６、７Ａ９、７Ｂ３、８Ａ１、８Ｅ１０、８Ｆ１１、８Ｆ８、９Ｆ５、９Ｇ１、９Ｇ３、１０Ａ９、１０Ｃ１、１１Ａ８、１２Ｅ２、１２Ｆ９、１２Ｇ６、２Ｃ７、２Ｆ５、３Ｃ１、４Ｄ７、４Ｄ１１、６Ｃ１１、６Ｇ１２、７Ａ３、７Ｃ５、７Ｅ９、７Ｆ６、７Ｇ１、７Ｈ１、８Ｃ３、８Ｆ１０、１２Ａ１、１Ｅ９、２Ｃ５、３Ｃ５、４Ｃ１２、４Ｆ２、５Ａ２、６Ｂ３、７Ｄ１、７Ｄ９、１１Ｄ８、８Ａ１２、１０Ｅ７、１０Ｂ１１、１０Ｄ２、７Ｄ５、２Ａ７、３Ｇ１２、６Ｈ９、８Ｇ９、９Ｂ４、１０Ａ１、１１Ａ８、１２Ｆ３、２Ｆ８、１０Ｅ３、１Ｈ７、２Ｆ６、２Ｈ８、３Ａ７、７Ｅ５、７Ｆ８、１１Ｈ５、７Ｃ５、４Ｆ１１、１２Ｄ９、１Ｂ４ｖ１、１Ｂ４ｖ２、６Ｈ２、７Ｂ１１ｖ１、７Ｂ１１ｖ２、１８Ｄ８、１８Ｅ４ｖ１、１８Ｅ４ｖ２、２９Ｆ６ｖ１、２９Ｆ６ｖ２、４０Ｄ５ｖ１、４０Ｄ５ｖ２、４３Ｂ９、４４Ａ８ｖ１、４４Ａ８ｖ２、４４Ｂ４ｖ１、及び４４Ｂ４ｖ２から選択される抗体に由来するＨＶＲ−Ｌ２配列のいずれかのアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、（ｉｉｉ）表２Ａ、２Ｂ、３Ａ、３Ｂ、４Ａ、４Ｂ、７Ａ、及び７Ｂに列挙されている、または１Ａ７、３Ａ２、３Ｂ１０、６Ｇ１２、６Ｈ６、７Ａ９、７Ｂ３、８Ａ１、８Ｅ１０、８Ｆ１１、８Ｆ８、９Ｆ５、９Ｇ１、９Ｇ３、１０Ａ９、１０Ｃ１、１１Ａ８、１２Ｅ２、１２Ｆ９、１２Ｇ６、２Ｃ７、２Ｆ５、３Ｃ１、４Ｄ７、４Ｄ１１、６Ｃ１１、６Ｇ１２、７Ａ３、７Ｃ５、７Ｅ９、７Ｆ６、７Ｇ１、７Ｈ１、８Ｃ３、８Ｆ１０、１２Ａ１、１Ｅ９、２Ｃ５、３Ｃ５、４Ｃ１２、４Ｆ２、５Ａ２、６Ｂ３、７Ｄ１、７Ｄ９、１１Ｄ８、８Ａ１２、１０Ｅ７、１０Ｂ１１、１０Ｄ２、７Ｄ５、２Ａ７、３Ｇ１２、６Ｈ９、８Ｇ９、９Ｂ４、１０Ａ１、１１Ａ８、１２Ｆ３、２Ｆ８、１０Ｅ３、１Ｈ７、２Ｆ６、２Ｈ８、３Ａ７、７Ｅ５、７Ｆ８、１１Ｈ５、７Ｃ５、４Ｆ１１、１２Ｄ９、１Ｂ４ｖ１、１Ｂ４ｖ２、６Ｈ２、７Ｂ１１ｖ１、７Ｂ１１ｖ２、１８Ｄ８、１８Ｅ４ｖ１、１８Ｅ４ｖ２、２９Ｆ６ｖ１、２９Ｆ６ｖ２、４０Ｄ５ｖ１、４０Ｄ５ｖ２、４３Ｂ９、４４Ａ８ｖ１、４４Ａ８ｖ２、４４Ｂ４ｖ１、及び４４Ｂ４ｖ２から選択される抗体に由来するＨＶＲ−Ｌ３配列のいずれかのアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、（ｉｖ）配列番号８２９〜８３５から選択されるアミノ酸配列、または配列番号８２９〜８３５から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｖ）配列番号８３６〜８４２から選択されるアミノ酸配列、または配列番号８３６〜８４２から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、ならびに（ｖｉ）表２Ａ、２Ｂ、３Ａ、３Ｂ、４Ａ、４Ｂ、７Ａ、及び７Ｂに列挙されている、または１Ａ７、３Ａ２、３Ｂ１０、６Ｇ１２、６Ｈ６、７Ａ９、７Ｂ３、８Ａ１、８Ｅ１０、８Ｆ１１、８Ｆ８、９Ｆ５、９Ｇ１、９Ｇ３、１０Ａ９、１０Ｃ１、１１Ａ８、１２Ｅ２、１２Ｆ９、１２Ｇ６、２Ｃ７、２Ｆ５、３Ｃ１、４Ｄ７、４Ｄ１１、６Ｃ１１、６Ｇ１２、７Ａ３、７Ｃ５、７Ｅ９、７Ｆ６、７Ｇ１、７Ｈ１、８Ｃ３、８Ｆ１０、１２Ａ１、１Ｅ９、２Ｃ５、３Ｃ５、４Ｃ１２、４Ｆ２、５Ａ２、６Ｂ３、７Ｄ１、７Ｄ９、１１Ｄ８、８Ａ１２、１０Ｅ７、１０Ｂ１１、１０Ｄ２、７Ｄ５、２Ａ７、３Ｇ１２、６Ｈ９、８Ｇ９、９Ｂ４、１０Ａ１、１１Ａ８、１２Ｆ３、２Ｆ８、１０Ｅ３、１Ｈ７、２Ｆ６、２Ｈ８、３Ａ７、７Ｅ５、７Ｆ８、１１Ｈ５、７Ｃ５、４Ｆ１１、１２Ｄ９、１Ｂ４ｖ１、１Ｂ４ｖ２、６Ｈ２、７Ｂ１１ｖ１、７Ｂ１１ｖ２、１８Ｄ８、１８Ｅ４ｖ１、１８Ｅ４ｖ２、２９Ｆ６ｖ１、２９Ｆ６ｖ２、４０Ｄ５ｖ１、４０Ｄ５ｖ２、４３Ｂ９、４４Ａ８ｖ１、４４Ａ８ｖ２、４４Ｂ４ｖ１、及び４４Ｂ４ｖ２から選択される抗体に由来するＨＶＲ−Ｈ３配列のいずれかのアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む。
【０１９５】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含み、その際、軽鎖可変ドメインは、（ａ）配列番号９〜２３、５８１、６９０〜６９４、７３４〜７３８、及び８２６〜８２８から選択されるアミノ酸配列、または配列番号９〜２３、５８１、６９０〜６９４、７３４〜７３８、及び８２６〜８２８から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号２４〜３３、６９５〜６９７、及び７３９〜７４３から選択されるアミノ酸配列、または配列番号２４〜３３、６９５〜６９７、及び７３９〜７４３から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、ならびに（ｃ）配列番号３４〜４７、５８２、５８３、６９８〜７０２、及び７４４〜７４６から選択されるアミノ酸配列、または配列番号３４〜４７、５８２、５８３、６９８〜７０２、及び７４４〜７４６から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３のうちの１つまたは複数を含み、かつ／または重鎖可変ドメインは、（ａ）配列番号４８〜６５、５８４、７０３〜７０５、７４７〜７５４、及び８２９〜８３５から選択されるアミノ酸配列、または配列番号４８〜６５、５８４、７０３〜７０５、７４７〜７５４、及び８２９〜８３５から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号６６〜８４、５８５〜５８７、７０６〜７０８、７５５〜７６２、８３６〜８４２、及び８８８から選択されるアミノ酸配列、または配列番号６６〜８４、５８５〜５８７、７０６〜７０８、７５５〜７６２、８３６〜８４２、及び８８８から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、ならびに（ｃ）配列番号８５〜１０２、５８８、５８９、７０９、７１０、及び７６３〜７７０から選択されるアミノ酸配列、または配列番号８５〜１０２、５８８、５８９、７０９、７１０、及び７６３〜７７０から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３のうちの１つまたは複数を含む。
【０１９６】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、表２Ａ、２Ｂ、３Ａ、３Ｂ、４Ａ、４Ｂ、７Ａ、及び７Ｂに列挙されている、または１Ａ７、３Ａ２、３Ｂ１０、６Ｇ１２、６Ｈ６、７Ａ９、７Ｂ３、８Ａ１、８Ｅ１０、８Ｆ１１、８Ｆ８、９Ｆ５、９Ｆ５ｖ２、９Ｇ１、９Ｇ３、１０Ａ９、１０Ｃ１、１１Ａ８、１２Ｅ２、１２Ｆ９、１２Ｇ６、２Ｃ７、２Ｆ５、３Ｃ１、４Ｄ７、４Ｄ１１、６Ｃ１１、６Ｇ１２、７Ａ３、７Ｃ５、７Ｅ９、７Ｆ６、７Ｇ１、７Ｈ１、８Ｃ３、８Ｆ１０、１２Ａ１、１Ｅ９、２Ｃ５、３Ｃ５、４Ｃ１２、４Ｆ２、５Ａ２、６Ｂ３、７Ｄ１、７Ｄ９、１１Ｄ８、８Ａ１２、１０Ｅ７、１０Ｂ１１、１０Ｄ２、７Ｄ５、２Ａ７、３Ｇ１２、６Ｈ９、８Ｇ９、９Ｂ４、１０Ａ１、１１Ａ８、１２Ｆ３、２Ｆ８、１０Ｅ３、１Ｈ７、２Ｆ６、２Ｈ８、３Ａ７、７Ｅ５、７Ｅ５ｖ２、７Ｆ８、１１Ｈ５、７Ｃ５、４Ｆ１１、１２Ｄ９、１Ｂ４ｖ１、１Ｂ４ｖ２、６Ｈ２、７Ｂ１１ｖ１、７Ｂ１１ｖ２、１８Ｄ８、１８Ｅ４ｖ１、１８Ｅ４ｖ２、２９Ｆ６ｖ１、２９Ｆ６ｖ２、４０Ｄ５ｖ１、４０Ｄ５ｖ２、４３Ｂ９、４４Ａ８ｖ１、４４Ａ８ｖ２、４４Ｂ４ｖ１、及び４４Ｂ４ｖ２から選択される抗体のいずれか１つの軽鎖可変領域、ならびに／または表２Ａ、２Ｂ、３Ａ、３Ｂ、４Ａ、４Ｂ、７Ａ、及び７Ｂに列挙されている、または１Ａ７、３Ａ２、３Ｂ１０、６Ｇ１２、６Ｈ６、７Ａ９、７Ｂ３、８Ａ１、８Ｅ１０、８Ｆ１１、８Ｆ８、９Ｆ５、９Ｇ１、９Ｇ３、１０Ａ９、１０Ｃ１、１１Ａ８、１２Ｅ２、１２Ｆ９、１２Ｇ６、２Ｃ７、２Ｆ５、３Ｃ１、４Ｄ７、４Ｄ１１、６Ｃ１１、６Ｇ１２、７Ａ３、７Ｃ５、７Ｅ９、７Ｆ６、７Ｇ１、７Ｈ１、８Ｃ３、８Ｆ１０、１２Ａ１、１Ｅ９、２Ｃ５、３Ｃ５、４Ｃ１２、４Ｆ２、５Ａ２、６Ｂ３、７Ｄ１、７Ｄ９、１１Ｄ８、８Ａ１２、１０Ｅ７、１０Ｂ１１、１０Ｄ２、７Ｄ５、２Ａ７、３Ｇ１２、６Ｈ９、８Ｇ９、９Ｂ４、１０Ａ１、１１Ａ８、１２Ｆ３、２Ｆ８、１０Ｅ３、１Ｈ７、２Ｆ６、２Ｈ８、３Ａ７、７Ｅ５、７Ｆ８、１１Ｈ５、７Ｃ５、４Ｆ１１、１２Ｄ９、１Ｂ４ｖ１、１Ｂ４ｖ２、６Ｈ２、７Ｂ１１ｖ１、７Ｂ１１ｖ２、１８Ｄ８、１８Ｅ４ｖ１、１８Ｅ４ｖ２、２９Ｆ６ｖ１、２９Ｆ６ｖ２、４０Ｄ５ｖ１、４０Ｄ５ｖ２、４３Ｂ９、４４Ａ８ｖ１、４４Ａ８ｖ２、４４Ｂ４ｖ１、及び４４Ｂ４ｖ２から選択される抗体のいずれか１つの重鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２１９〜３９８、６０２〜６３４、６７９〜６８９、７２４〜７３０、８０９〜８１６、８２１、８４３、８４４、８４９、及び８５０のいずれかから選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、ならびに／または配列番号３９９〜５８０、６３５〜６７８、７３１〜７３３、及び８１７〜８２０、８２２〜８２５、及び８４５〜８４７のいずれかから選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号８４３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン及び配列番号８４５のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号８４３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン及び配列番号８４６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号８４３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン及び配列番号８４７のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号８４４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン及び配列番号８４５のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号８４４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン及び配列番号８４６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号８４４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン及び配列番号８４７のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、抗体は、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含み、その際、（ａ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３３３のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５２１のアミノ酸配列を含む、（ｂ）軽鎖可変ドメインは、配列番号８５０のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５２１のアミノ酸配列を含む、（ｃ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３３４のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５２２のアミノ酸配列を含む、（ｄ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３３５のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５２３のアミノ酸配列を含む、（ｅ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３３６のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５２４のアミノ酸配列を含む、（ｆ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３３７のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５２５のアミノ酸配列を含む、（ｇ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３３８のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５２６のアミノ酸配列を含む、（ｈ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３３９のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５２６のアミノ酸配列を含む、（ｉ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３４０のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５２７のアミノ酸配列を含む、（ｊ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３４１のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５２８のアミノ酸配列を含む、（ｋ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３４２のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５２９のアミノ酸配列を含む、（ｌ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３４３のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５３０のアミノ酸配列を含む、（ｍ）軽鎖可変ドメインは、配列番号８４３のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号８４５のアミノ酸配列を含む、（ｎ）軽鎖可変ドメインは、配列番号８４４のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号８４６のアミノ酸配列を含む、（ｏ）軽鎖可変ドメインは、配列番号８４４のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号８４７のアミノ酸配列を含む、（ｐ）軽鎖可変ドメインは、配列番号２１９のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号３９９のアミノ酸配列を含む、（ｑ）軽鎖可変ドメインは、配列番号２３０のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号４０９のアミノ酸配列を含む、（ｒ）軽鎖可変ドメインは、配列番号２５２のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号４１９のアミノ酸配列を含む、（ｓ）軽鎖可変ドメインは、配列番号２４１のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号４２９のアミノ酸配列を含む、（ｔ）軽鎖可変ドメインは、配列番号８４９のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号４２９のアミノ酸配列を含む、（ｕ）軽鎖可変ドメインは、配列番号２６３のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号４３９のアミノ酸配列を含む、（ｖ）軽鎖可変ドメインは、配列番号２７４のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号４４９のアミノ酸配列を含む、（ｗ）軽鎖可変ドメインは、配列番号２８５のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号４５９のアミノ酸配列を含む、（ｘ）軽鎖可変ドメインは、配列番号２８６のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号４６０のアミノ酸配列を含む、（ｙ）軽鎖可変ドメインは、配列番号２８７のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号４６１のアミノ酸配列を含む、（ｚ）軽鎖可変ドメインは、配列番号２９８のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号４２９のアミノ酸配列を含む、（ａａ）軽鎖可変ドメインは、配列番号２９９のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号４７１のアミノ酸配列を含む、（ｂｂ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３１０のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号４６１のアミノ酸配列を含む、（ｃｃ）軽鎖可変ドメインは、配列番号６７９のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号４８１のアミノ酸配列を含む、（ｄｄ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３１１のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号４９１のアミノ酸配列を含む、（ｅｅ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３２２のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５１１のアミノ酸配列を含む、（ｆｆ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３４４のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５３１のアミノ酸配列を含む、（ｇｇ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３５５のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号６３５のアミノ酸配列を含む、（ｈｈ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３６５のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５４１のアミノ酸配列を含む、（ｉｉ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３７６のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５５１のアミノ酸配列を含む、（ｊｊ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３８７のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５６１のアミノ酸配列を含む、（ｋｋ）軽鎖可変ドメインは、配列番号３９８のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号５７１のアミノ酸配列を含む、（ｌｌ）軽鎖可変ドメインは、配列番号７２４のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号７３１のアミノ酸配列を含む、（ｍｍ）軽鎖可変ドメインは、配列番号８０９のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号７３１のアミノ酸配列を含む、（ｎｎ）軽鎖可変ドメインは、配列番号７２５のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号７３２のアミノ酸配列を含む、（ｏｏ）軽鎖可変ドメインは、配列番号７２６のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号７３１のアミノ酸配列を含む、（ｐｐ）軽鎖可変ドメインは、配列番号７２６のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号８１７のアミノ酸配列を含む、（ｑｑ）軽鎖可変ドメインは、配列番号７２７のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号７３１のアミノ酸配列を含む、（ｒｒ）軽鎖可変ドメインは、配列番号７２８のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号７３３のアミノ酸配列を含む、（ｓｓ）軽鎖可変ドメインは、配列番号８１０のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号８１８のアミノ酸配列を含む、（ｔｔ）軽鎖可変ドメインは、配列番号８１１のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号７３３のアミノ酸配列を含む、（ｕｕ）軽鎖可変ドメインは、配列番号７２９のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号７３１のアミノ酸配列を含む、（ｖｖ）軽鎖可変ドメインは、配列番号８１２のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号８１９のアミノ酸配列を含む、（ｗｗ）軽鎖可変ドメインは、配列番号７２９のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号８２０のアミノ酸配列を含む、（ｘｘ）軽鎖可変ドメインは、配列番号７３０のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号７３１のアミノ酸配列を含む、（ｙｙ）軽鎖可変ドメインは、配列番号８１３のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号７３１のアミノ酸配列を含む、（ｚｚ）軽鎖可変ドメインは、配列番号８１４のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号８２２のアミノ酸配列を含む、（ａａａ）軽鎖可変ドメインは、配列番号８１５のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号８２４のアミノ酸配列を含む、または（ｂｂｂ）軽鎖可変ドメインは、配列番号８１６のアミノ酸配列を含み、かつ重鎖可変ドメインは、配列番号８２５のアミノ酸配列を含む。
【０１９７】
本開示の抗体のいずれかを、細胞系によって生産してもよい。一部の実施形態では、細胞系は、哺乳動物細胞系であってもよい。ある特定の実施形態では、細胞系は、ハイブリドーマ細胞系であってもよい。他の実施形態では、細胞系は、酵母細胞系であってもよい。抗体生産に適した当技術分野で公知の任意の細胞系を、本開示の抗体を生産するために使用してもよい。抗体生産のための例示的な細胞系は、本開示を通して記載される。
【０１９８】
一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、１Ａ７、３Ａ２、３Ｂ１０、６Ｇ１２、６Ｈ６、７Ａ９、７Ｂ３、８Ａ１、８Ｅ１０、８Ｆ１１、８Ｆ８、９Ｆ５、９Ｇ１、９Ｇ３、１０Ａ９、１０Ｃ１、１１Ａ８、１２Ｅ２、１２Ｆ９、１２Ｇ６、２Ｃ７、２Ｆ５、３Ｃ１、４Ｄ７、４Ｄ１１、６Ｃ１１、６Ｇ１２、７Ａ３、７Ｃ５、７Ｅ９、７Ｆ６、７Ｇ１、７Ｈ１、８Ｃ３、８Ｆ１０、１２Ａ１、１Ｅ９、２Ｃ５、３Ｃ５、４Ｃ１２、４Ｆ２、５Ａ２、６Ｂ３、７Ｄ１、７Ｄ９、１１Ｄ８、８Ａ１２、１０Ｅ７、１０Ｂ１１、１０Ｄ２、７Ｄ５、２Ａ７、３Ｇ１２、６Ｈ９、８Ｇ９、９Ｂ４、１０Ａ１、１１Ａ８、１２Ｆ３、２Ｆ８、１０Ｅ３、１Ｈ７、２Ｆ６、２Ｈ８、３Ａ７、７Ｅ５、７Ｆ８、１１Ｈ５、７Ｃ５、４Ｆ１１、１２Ｄ９、１Ｂ４ｖ１、１Ｂ４ｖ２、６Ｈ２、７Ｂ１１ｖ１、７Ｂ１１ｖ２、１８Ｄ８、１８Ｅ４ｖ１、１８Ｅ４ｖ２、２９Ｆ６ｖ１、２９Ｆ６ｖ２、４０Ｄ５ｖ１、４０Ｄ５ｖ２、４３Ｂ９、４４Ａ８ｖ１、４４Ａ８ｖ２、４４Ｂ４ｖ１、及び４４Ｂ４ｖ２、ならびにそれらのヒト化バリアントから選択される抗ＴＲＥＭ２モノクローナル抗体である。ある特定の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、アゴニスト抗体である。ある特定の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、不活性抗体である。ある特定の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、アンタゴニスト抗体である。
【０１９９】
一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、抗ＴＲＥＭ２モノクローナル抗体７Ｅ５である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、７Ｅ５と本質的に同じＴＲＥＭ２エピトープに結合する単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体７Ｅ５の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３を含む単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体７Ｅ５の軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体７Ｅ５の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３、ならびに軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む単離抗体である。
【０２００】
一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、抗ＴＲＥＭ２モノクローナル抗体９Ｆ５である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、９Ｆ５と本質的に同じＴＲＥＭ２エピトープに結合する単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体９Ｆ５の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３を含む単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体９Ｆ５の軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体９Ｆ５の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３、ならびに軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む単離抗体である。
【０２０１】
一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、抗ＴＲＥＭ２モノクローナル抗体３Ａ７である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、３Ａ７と本質的に同じＴＲＥＭ２エピトープに結合する単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体３Ａ７の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３を含む単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体３Ａ７の軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体３Ａ７の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３及び軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む単離抗体である。
【０２０２】
一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、抗ＴＲＥＭ２モノクローナル抗体４Ｄ１１である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、４Ｄ１１と本質的に同じＴＲＥＭ２エピトープに結合する単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体４Ｄ１１の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３を含む単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体４Ｄ１１の軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体４Ｄ１１の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３及び軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む単離抗体である。
【０２０３】
一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、抗ＴＲＥＭ２モノクローナル抗体１２Ｆ９である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、１２Ｆ９と本質的に同じＴＲＥＭ２エピトープに結合する単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体１２Ｆ９の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３を含む単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体１２Ｆ９の軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体１２Ｆ９の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３及び軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む単離抗体である。
【０２０４】
一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、抗ＴＲＥＭ２モノクローナル抗体８Ｆ８である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、８Ｆ８と本質的に同じＴＲＥＭ２エピトープに結合する単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体８Ｆ８の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３を含む単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体８Ｆ８の軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体８Ｆ８の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３及び軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む単離抗体である。
【０２０５】
一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、抗ＴＲＥＭ２モノクローナル抗体１Ｂ４である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、１Ｂ４と本質的に同じＴＲＥＭ２エピトープに結合する単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体１Ｂ４の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３を含む単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体１Ｂ４ｖ１の軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体１Ｂ４ｖ２の軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体１Ｂ４の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３、ならびにモノクローナル抗体１Ｂ４ｖ１の軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体１Ｂ４の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３、ならびにモノクローナル抗体１Ｂ４ｖ２の軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む単離抗体である。
【０２０６】
一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、抗ＴＲＥＭ２モノクローナル抗体６Ｈ２である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、６Ｈ２と本質的に同じＴＲＥＭ２エピトープに結合する単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体６Ｈ２の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３を含む単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体６Ｈ２の軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体６Ｈ２の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３、ならびに軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む単離抗体である。
【０２０７】
一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、抗ＴＲＥＭ２モノクローナル抗体７Ｂ１１である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、７Ｂ１１と本質的に同じＴＲＥＭ２エピトープに結合する単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体７Ｂ１１ｖ１の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３を含む単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体７Ｂ１１ｖ２の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３を含む単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体７Ｂ１１の軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体７Ｂ１１ｖ１の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３、ならびにモノクローナル抗体７Ｂ１１の軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体７Ｂ１１ｖ２の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３、ならびにモノクローナル抗体７Ｂ１１の軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む単離抗体である。
【０２０８】
一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、抗ＴＲＥＭ２モノクローナル抗体１８Ｄ８である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、１８Ｄ８と本質的に同じＴＲＥＭ２エピトープに結合する単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体１８Ｄ８の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３を含む単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体１８Ｄ８の軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体１８Ｄ８の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３、ならびに軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む単離抗体である。
【０２０９】
一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、抗ＴＲＥＭ２モノクローナル抗体１８Ｅ４ｖ１である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、１８Ｅ４ｖ１と本質的に同じＴＲＥＭ２エピトープに結合する単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体１８Ｅ４ｖ１の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３を含む単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体１８Ｅ４ｖ１の軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体１８Ｅ４ｖ１の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３、ならびに軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む単離抗体である。
【０２１０】
一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、抗ＴＲＥＭ２モノクローナル抗体１８Ｅ４ｖ２である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、１８Ｅ４ｖ２と本質的に同じＴＲＥＭ２エピトープに結合する単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体１８Ｅ４ｖ２の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３を含む単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体１８Ｅ４ｖ２の軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体１８Ｅ４ｖ２の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３、ならびに軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む単離抗体である。
【０２１１】
一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、抗ＴＲＥＭ２モノクローナル抗体２９Ｆ６ｖ１である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、２９Ｆ６ｖ１と本質的に同じＴＲＥＭ２エピトープに結合する単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体２９Ｆ６ｖ１の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３を含む単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体２９Ｆ６ｖ１の軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体２９Ｆ６ｖ１の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３、ならびに軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む単離抗体である。
【０２１２】
一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、抗ＴＲＥＭ２モノクローナル抗体２９Ｆ６ｖ２である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、２９Ｆ６ｖ２と本質的に同じＴＲＥＭ２エピトープに結合する単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体２９Ｆ６ｖ２の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３を含む単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体２９Ｆ６ｖ２の軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体２９Ｆ６ｖ２の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３、ならびに軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む単離抗体である。
【０２１３】
一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、抗ＴＲＥＭ２モノクローナル抗体４０Ｄ５である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、４０Ｄ５と本質的に同じＴＲＥＭ２エピトープに結合する単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体４０Ｄ５ｖ１の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３を含む単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体４０Ｄ５ｖ２の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３を含む単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体４０Ｄ５の軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体４０Ｄ５ｖ１の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３、ならびにモノクローナル抗体４０Ｄ５の軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体４０Ｄ５ｖ２の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３、ならびにモノクローナル抗体４０Ｄ５の軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む単離抗体である。
【０２１４】
一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、抗ＴＲＥＭ２モノクローナル抗体４３Ｂ９である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、４３Ｂ９と本質的に同じＴＲＥＭ２エピトープに結合する単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体４３Ｂ９の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３を含む単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体４３Ｂ９の軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体４３Ｂ９の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３、ならびに軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む単離抗体である。
【０２１５】
一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、抗ＴＲＥＭ２モノクローナル抗体４４Ａ８である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、４４Ａ８と本質的に同じＴＲＥＭ２エピトープに結合する単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体４４Ａ８の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３を含む単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体４４Ａ８ｖ１の軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体４４Ａ８ｖ２の軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体４４Ａ８の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３、ならびにモノクローナル抗体４４Ａ８ｖ１の軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体４４Ａ８の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３、ならびにモノクローナル抗体４４Ａ８ｖ２の軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む単離抗体である。
【０２１６】
一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、抗ＴＲＥＭ２モノクローナル抗体４４Ｂ４ｖ１である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、４４Ｂ４ｖ１と本質的に同じＴＲＥＭ２エピトープに結合する単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体４４Ｂ４ｖ１の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３を含む単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体４４Ｂ４ｖ１の軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体４４Ｂ４ｖ１の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３、ならびに軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む単離抗体である。
【０２１７】
一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、抗ＴＲＥＭ２モノクローナル抗体４４Ｂ４ｖ２である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、４４Ｂ４ｖ２と本質的に同じＴＲＥＭ２エピトープに結合する単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体４４Ｂ４ｖ２の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３を含む単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体４４Ｂ４ｖ２の軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体４４Ｂ４ｖ２の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３、ならびに軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む単離抗体である。
【０２１８】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２への結合について、１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドと競合しない。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２への１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドの同時結合を遮断することなく、ＴＲＥＭ２に結合することができる。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドと相加的及び／または相乗的に機能的相互作用することができる。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、飽和濃度の１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドに曝露されたＴＲＥＭ２の最大活性を上昇させる。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、任意の濃度の１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドで得られるＴＲＥＭ２の活性を上昇させる。
【０２１９】
抗ＴＲＥＭ２抗体結合親和性
ヒトＴＲＥＭ２及びマウスＴＲＥＭ２についての抗ＴＲＥＭ２抗体の解離定数（ＫＤ）は、１５ｎＭ未満、１４．５ｎＭ未満、１４ｎＭ未満、１３．５ｎＭ未満、１３ｎＭ未満、１２．９ｎＭ未満、１２．８ｎＭ未満、１２．７ｎＭ未満、１２．６ｎＭ未満、１２．５ｎＭ未満、１２．４ｎＭ未満、１２．３ｎＭ未満、１２．２ｎＭ未満、１２．１ｎＭ未満、１２ｎＭ未満、１１．５ｎＭ未満、１１ｎＭ未満、１０．９ｎＭ未満、１０．８ｎＭ未満、１０．７ｎＭ未満、１０．６ｎＭ未満、１０．５ｎＭ未満、１０．４ｎＭ未満、１０．３ｎＭ未満、１０．２ｎＭ未満、１０．１ｎＭ未満、１０ｎＭ未満、９．５ｎＭ未満、９ｎＭ未満、８．５ｎＭ未満、８ｎＭ未満、７．５ｎＭ未満、７ｎＭ未満、６．９ｎＭ未満、６．８ｎＭ未満、６．７ｎＭ未満、６．６ｎＭ未満、６．５ｎＭ未満、６．４ｎＭ未満、６．３ｎＭ未満、６．２ｎＭ未満、６．１ｎＭ未満、６ｎＭ未満、５．５ｎＭ未満、５ｎＭ未満、４．５ｎＭ未満、４ｎＭ未満、３．５ｎＭ未満、３．４ｎＭ未満、３．３ｎＭ未満、３．２ｎＭ未満、３．１ｎＭ未満、３ｎＭ未満、２．９ｎＭ未満、２．８ｎＭ未満、２．７ｎＭ未満、２．６ｎＭ未満，２．５ｎＭ未満、２．４ｎＭ未満、２．３ｎＭ未満、２．２ｎＭ未満、２．１ｎＭ未満，２ｎＭ未満、１．９ｎＭ未満、１．８ｎＭ未満、１．７ｎＭ未満、１．６ｎＭ未満、１．５ｎＭ未満、１．４ｎＭ未満、１．３ｎＭ未満、１．２ｎＭ未満、１．１ｎＭ未満、１ｎＭ未満、０．９５ｎＭ未満、または０．９ｎＭ未満であり得る。一部の実施形態では、解離定数は、約１２．８ｎＭ〜約１．２ｎＭ、または１．２ｎＭ未満の範囲である。一部の実施形態では、ヒトＴＲＥＭ２についての抗ＴＲＥＭ２抗体の解離定数は、約１２．８ｎＭ〜約２．９ｎＭ、または２．９ｎＭ未満の範囲である。一部の実施形態では、マウスＴＲＥＭ２についての抗ＴＲＥＭ２抗体の解離定数は、約１０．４ｎＭ〜約１．２ｎＭ、または１．２ｎＭ未満の範囲である。
【０２２０】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、個体に投与された場合に、記憶を増加させる、及び／または認知障害を減少させる。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、１つまたは複数の先天免疫細胞の増殖を阻害しない。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、１つまたは複数の初代免疫細胞に、５０ｎＭ未満、４５ｎＭ未満、４０ｎＭ未満、３５ｎＭ未満、３０ｎＭ未満、２５ｎＭ未満、２０ｎＭ未満、１５ｎＭ未満、１０ｎＭ未満、９ｎＭ未満、８ｎＭ未満、７ｎＭ未満、６ｎＭ未満、５ｎＭ未満、４ｎＭ未満、３ｎＭ未満、２ｎＭ未満、または１ｎＭ未満のＫＤで結合する。一部の実施形態では、解離定数（ＫＤ）は、約４℃の温度で決定される。一部の実施形態では、ＫＤは、一価抗体（例えば、Ｆａｂ）または一価形態の全長抗体を使用して決定される。特異的にＴＲＥＭ２と相互作用する、及び／またはそれと結合する抗体を調製及び選択するための方法は、本明細書に記載されている（例えば、実施例１を参照されたい）。
【０２２１】
解離定数は、ＥＬＩＳＡ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、バイオレイヤー干渉法（例えば、ＦｏｒｔｅＢｉｏによるＯｃｔｅｔ  Ｓｙｓｔｅｍを参照されたい）、等温滴定熱量測定（ＩＴＣ）、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）、円偏光二色性（ＣＤ）、ストップトフロー分析、及び比色分析または蛍光タンパク質融解分析などの任意の生化学的または生物物理学的技術を含む任意の分析技術によって決定され得る。一部の実施形態では、ＴＲＥＭ２についての解離定数（ＫＤ）は、約４℃の温度で決定される。一部の実施形態では、ＫＤは、一価抗体（例えば、Ｆａｂ）または全長抗体を使用して決定される。一部の実施形態では、ＫＤは、一価形態の全長抗体を使用して決定される。例えば、本明細書に記載の任意のアッセイを利用する（例えば、実施例１を参照されたい）。
【０２２２】
追加の抗ＴＲＥＭ２抗体、例えば、本開示のＴＲＥＭ２タンパク質に特異的に結合する抗体は、当技術分野で公知の様々なアッセイによって、それらの物理的／化学的特性及び／または生物学的活性について、同定、スクリーニング、及び／または特徴づけされ得る。
【０２２３】
二重特異性抗体
本開示の特定の態様は、本開示のＴＲＥＭ２タンパク質及び第２の抗原に結合する二重特異性抗体に関する。二重特異性抗体を生成する方法は、当技術分野で周知であり、本明細書に記載されている。一部の実施形態では、本開示の二重特異性抗体は、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）の１つもしくは複数のアミノ酸残基、または配列番号１のアミノ酸残基に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基に結合する。他の実施形態では、本開示の二重特異性抗体はまた、ヒトＤＡＰ１２（配列番号８８７）の１つもしくは複数のアミノ酸残基、または配列番号８８７のアミノ酸残基に対応するＤＡＰ１２タンパク質上のアミノ酸残基に結合する。
【０２２４】
一部の実施形態では、本開示の二重特異性抗体は、第１の抗原及び第２の抗原を認識する。一部の実施形態では、第１の抗原は、ヒトＴＲＥＭ２もしくはその天然に存在するバリアント、またはヒトＤＡＰ１２もしくはその天然に存在するバリアントである。一部の実施形態では、第２の抗原は、ａ）血液脳関門を越える輸送を促進する抗原、（ｂ）トランスフェリン受容体（ＴＲ）、インスリン受容体（ＨＩＲ）、インスリン様成長因子受容体（ＩＧＦＲ）、低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質１及び２（ＬＰＲ−１及び２）、ジフテリア毒素受容体、ＣＲＭ１９７、ラマ単一ドメイン抗体、ＴＭＥＭ３０（Ａ）、タンパク質形質導入ドメイン、ＴＡＴ、Ｓｙｎ−Ｂ、ペネトラチン、ポリ−アルギニンペプチド、アンジオペプペプチド、及びＡＮＧ１００５から選択される、血液脳関門を越える輸送を促進する抗原、（ｃ）アミロイドベータ、オリゴマーアミロイドベータ、アミロイドベータ斑、アミロイド前駆体タンパク質またはそのフラグメント、Ｔａｕ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（染色体９オープンリーディングフレーム７２）、ｃ９ＲＡＮタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスチレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルソリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、リピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）リピートペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）リピートペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）リピートペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）リピートペプチド、ユビキチン、及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）リピートペプチドから選択される病原タンパク質、ならびに（ｄ）免疫細胞上に発現されるリガンド及び／またはタンパク質（ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ３、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ−３、及びホスファチジルセリンから選択されるリガンド及び／またはタンパク質）、ならびに（ｅ）１つまたは複数の腫瘍細胞上に発現されるタンパク質、脂質、多糖、または糖脂質及びそれらの任意の組合せである。
【０２２５】
抗体フラグメント
本開示のある特定の態様は、ヒトＴＲＥＭ２、ヒトＴＲＥＭ２の天然に存在するバリアント、及びヒトＴＲＥＭ２の疾患バリアントのうちの１つまたは複数に結合する抗体フラグメントに関する。一部の実施形態では、抗体フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、ＦｖまたはｓｃＦｖフラグメントである。一部の実施形態では、抗体フラグメントを、ａ）血液脳関門を越える輸送を促進する抗原、（ｂ）トランスフェリン受容体（ＴＲ）、インスリン受容体（ＨＩＲ）、インスリン様成長因子受容体（ＩＧＦＲ）、低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質１及び２（ＬＰＲ−１及び２）、ジフテリア毒素受容体、ＣＲＭ１９７、ラマ単一ドメイン抗体、ＴＭＥＭ３０（Ａ）、タンパク質形質導入ドメイン、ＴＡＴ、Ｓｙｎ−Ｂ、ペネトラチン、ポリ−アルギニンペプチド、アンジオペプペプチド、及びＡＮＧ１００５から選択される、血液脳関門を越える輸送を促進する抗原、（ｃ）アミロイドベータ、オリゴマーアミロイドベータ、アミロイドベータ斑、アミロイド前駆体タンパク質またはそのフラグメント、Ｔａｕ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（染色体９オープンリーディングフレーム７２）、ｃ９ＲＡＮタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスチレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルソリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、リピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）リピートペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）リピートペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）リピートペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）リピートペプチド、ユビキチン、及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）リピートペプチドから選択される病原タンパク質、ならびに（ｄ）免疫細胞上に発現されるリガンド及び／またはタンパク質（ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ３、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ−３、及びホスファチジルセリンから選択されるリガンド及び／またはタンパク質）、ならびに（ｅ）１つまたは複数の腫瘍細胞上に発現されるタンパク質、脂質、多糖、または糖脂質及びそれらの任意の組合せから選択される病原タンパク質に特異的に結合する１つまたは複数の抗体と組み合わせて使用する。
【０２２６】
抗体フレームワーク
本明細書に記載の抗体のいずれかはさらに、フレームワークを含む。一部の実施形態では、フレームワークは、ヒト免疫グロブリンフレームワークである。例えば、一部の実施形態では、抗体（例えば、抗ＴＲＥＭ２抗体）は、上記実施形態のいずれかのようなＨＶＲを含み、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。ヒト免疫グロブリンフレームワークは、ヒト抗体の一部であってもよい、または非ヒト抗体は、１つまたは複数の内因性のフレームワークを、ヒトフレームワーク領域（複数可）と置き換えることによってヒト化されていてもよい。ヒト化のために使用され得るヒトフレームワーク領域には、限定されないが、「ベストフィット」法を使用して選択されるフレームワーク領域（例えば、Ｓｉｍｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）を参照されたい）、軽鎖または重鎖可変領域の特定のサブグループのヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域（例えば、Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５（１９９２）及びＰｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３（１９９３）を参照されたい）、ヒト成熟（体細胞成熟）フレームワーク領域またはヒト生殖細胞系フレームワーク領域（例えば、Ａｌｍａｇｒｏ  ａｎｄ  Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）を参照されたい）、ならびにスクリーニングＦＲライブラリに由来するフレームワーク領域（例えば、Ｂａｃａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８−１０６８４（１９９７）及びＲｏｓｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２２６１１−２２６１８（１９９６）を参照されたい）が含まれる。
【０２２７】
一部の実施形態では、抗体は、本開示のＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む軽鎖可変領域、ならび表４Ａに示されているとおりの軽鎖フレームワーク領域のうちの１つ、２つ、３つ、または４つを含む。一部の実施形態では、抗体は、本開示のＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３を含む重鎖可変領域、ならびに表４Ｂに示されているとおりの重鎖フレームワーク領域のうちの１つ、２つ、３つ、または４つを含む。一部の実施形態では、抗体は、本開示のＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む軽鎖可変領域、ならびに表４Ａに示されているとおりの軽鎖フレームワーク領域のうちの１つ、２つ、３つ、または４つを含み、さらに、本開示のＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３を含む重鎖可変領域、ならびに表４Ｂに示されているとおりの重鎖フレームワーク領域のうちの１つ、２つ、３つ、または４つを含む。
【０２２８】
ＰＩ３Ｋ活性化
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、細胞で発現されたＴＲＥＭ２タンパク質に結合した後に、ＰＩ３Ｋ活性化を誘導し得る。
【０２２９】
ＰＩ３Ｋは、ホスファチジルイノシトール（ＰｔｄＩｎｓ）のイノシトール環の３位ヒドロキシル基をリン酸化することができる関連細胞内シグナルトランスデューサーキナーゼのファミリーである。ＰＩ３Ｋファミリーは、一次構造、制御、及びインビトロ脂質基質特異性に基づき、３つの異なるクラス（クラスＩ、クラスＩＩ、及びクラスＩＩＩ）に分けられる。
【０２３０】
活性化ＰＩ３Ｋは、限定ではないが、ＰｔｄＩｎｓ３Ｐ、ＰｔｄＩｎｓ（３，４）Ｐ２、ＰｔｄＩｎｓ（３，５）Ｐ２、及びＰｔｄＩｎｓ（３，４，５）Ｐ３を含む様々な３−リン酸化ホスホイノシチドを産生する。これらの３−リン酸化ホスホイノシチドは、シグナル伝達タンパク質が様々な細胞膜に動員される機序で機能する。これらのシグナル伝達タンパク質は、限定ではないが、ＰＸドメイン、プレクストリン相同ドメイン（ＰＨドメイン）、及びＦＹＶＥドメインを含むホスホイノシチド結合ドメインを含有する。ＰＩ３Ｋ活性化を決定するための当技術分野で公知の任意の方法を使用してよい。
【０２３１】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト−ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウオパチー病、那須−ハコラ病、卒中、急性外傷、慢性外傷、認知障害、記憶喪失、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満、マラリア、本態性振戦、中枢神経系狼瘡、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多発性萎縮症、シャイ−ドレーガー症候群、進行性核上麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫性障害、サルコイドーシス、加齢に伴う病気、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身性感染症、狼瘡、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨のパジェット病、がん、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性赤血球増加症、本態性血小板血症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化、骨髄由来腫瘍、ＴＲＥＭ２を発現する腫瘍、甲状腺癌、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルージ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、Ｉ型ＨＩＶ、ならびにインフルエンザ菌を含む、ＰＩ３Ｋ活性のレベルの低下と関連する状態及び／または疾患を予防する、そのリスクを減少させる、またはそれを治療するために有益であり得、それを必要とする個体に、ＴＲＥＭ２と１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドとの相互作用を阻害しない、及び／または少なくとも１つのＴＲＥＭ２リガンドの１つまたは複数の活性を増強する薬剤の治療有効量を投与することを含む。本開示の他の態様は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト−ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウオパチー病、那須−ハコラ病、卒中、急性外傷、慢性外傷、認知障害、記憶喪失、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満、マラリア、本態性振戦、中枢神経系狼瘡、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多発性萎縮症、シャイ−ドレーガー症候群、進行性核上麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫性障害、サルコイドーシス、加齢に伴う病気、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身性感染症、狼瘡、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病���骨のパジェット病、がん、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性赤血球増加症、本態性血小板血症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化、骨髄由来腫瘍、ＴＲＥＭ２を発現する腫瘍、甲状腺癌、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルージ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、Ｉ型ＨＩＶ、ならびにインフルエンザ菌から選択される疾患、障害、または損傷を予防する、そのリスクを減少させる、またはそれを治療する際に使用するための、ＴＲＥＭ２と１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドとの相互作用を阻害しない、及び／または少なくとも１つのＴＲＥＭ２リガンドの１つまたは複数の活性を増強する薬剤に関する。
【０２３２】
抗炎症性メディエーターの発現の調節
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、細胞表面上に発現されたＴＲＥＭ２に結合した後に、脳において抗炎症性メディエーターを調節する（例えば、増加または減少させる）。本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、細胞表面でＴＲＥＭ２タンパク質に結合した後に、サイトカイン（例えば、抗炎症性メディエーター）の発現を調節する、及び／または炎症誘発性メディエーターの発現を調節する。細胞がＴＲＥＭ２シグナル伝達の不全によって死滅すると、それらは、炎症誘発性応答を誘導する。
【０２３３】
炎症は、病原体、損傷細胞、及び刺激物などの有害な刺激に対する血管組織の複雑な生物学的応答の一部である。急性炎症の典型的な徴候は、疼痛、熱、発赤、腫脹、及び機能の喪失である。炎症は、有害な刺激を除去し、治癒プロセスを開始させる生体による防御的試行である。炎症は、急性炎症または慢性炎症のいずれかに分類され得る。急性炎症は、有害な刺激に対する身体の最初の応答であり、血液から損傷組織への血漿及び白血球（特に顆粒球）の移動の増加によって達成される。生化学的イベントのカスケードは、損傷した組織内の局所血管系、免疫系、及び様々な細胞に関する炎症応答を伝播して成熟させる。慢性炎症は、炎症の部位に存在する細胞の種類に、漸進的な変化をもたらす長期炎症であり、炎症プロセスからの組織を同時に破壊及び治癒することによって特徴づけられる。
【０２３４】
本明細書で使用される場合、抗炎症性メディエーターは、炎症応答を減少させる、阻害する、または不活性化する機序において、（例えば、抗炎症性シグナル伝達経路を介して）直接または間接のいずれかで関与するタンパク質である。抗炎症性メディエーターを同定し特徴付けるための当技術分野で公知の任意の方法が使用されてもよい。抗炎症性メディエーターの例には、限定ではないが、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＴＧＦ−β、ＩＬ−１３、ＩＬ−３５、ＩＬ−１６、ＩＦＮ−アルファ、ＩＬ−１Ｒａ、ＶＥＧＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＹＭ、ＡＸＬ、ＦＬＴ１、及びＴＮＦまたはＩＬ−６のための可溶性受容体などのサイトカインが含まれる。
【０２３５】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−６、及びＩＬ−１０などのサイトカインの発現を調節し得る。ある特定の実施形態では、サイトカインの発現の調節は、マクロファージ、樹状細胞、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、及び／またはミクログリア細胞で生じる。発現の調節には、限定ではないが、遺伝子発現の調節、転写発現の調節、またはタンパク質発現の調節が含まれ得る。遺伝子、転写物（例えば、ｍＲＮＡ）、及び／またはタンパク質発現を決定するための当技術分野で公知の任意の方法を使用してよい。例えば、ノーザンブロット分析を、サイトカイン遺伝子発現レベルを決定するために使用してよく、ＲＴ−ＰＣＲを、サイトカイン転写のレベルを決定するために使用してよく、ウエスタンブロット分析を、サイトカインタンパク質レベルを決定するために使用してよい。
【０２３６】
本明細書で使用される場合、サイトカインは、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体で処置された対象の１つまたは複数の細胞におけるその発現が、抗ＴＲＥＭ２抗体で処置されていない対応する対象の１つまたは複数の細胞で発現された同じサイトカインの発現と比較して調節される場合に、発現を調節し得る（例えば、増加させている、または減少させている）。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、例えば、抗ＴＲＥＭ２抗体で処置されていない対応する対象の１つまたは複数の細胞におけるサイトカイン発現と比較して、対象の１つまたは複数の細胞におけるサイトカイン発現を少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１１０％、少なくとも１１５％、少なくとも１２０％、少なくとも１２５％、少なくとも１３０％、少なくとも１３５％、少なくとも１４０％、少なくとも１４５％、少なくとも１５０％、少なくとも１６０％、少なくとも１７０％、少なくとも１８０％、少なくとも１９０％、または少なくとも２００％調節し得る。他の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、例えば、抗ＴＲＥＭ２抗体で処置されていない対応する対象の１つまたは複数の細胞におけるサイトカイン発現と比較して、対象の１つまたは複数の細胞におけるサイトカイン発現を少なくとも１．５倍、少なくとも１．６倍、少なくとも１．７倍、少なくとも１．８倍、少なくとも１．９倍、少なくとも２．０倍、少なくとも２．１倍、少なくとも２．１５倍、少なくとも２．２倍、少なくとも２．２５倍、少なくとも２．３倍、少なくとも２．３５倍、少なくとも２．４倍、少なくとも２．４５倍、少なくとも２．５倍、少なくとも２．５５倍、少なくとも３．０倍、少なくとも３．５倍、少なくとも４．０倍、少なくとも４．５倍、少なくとも５．０倍、少なくとも５．５倍、少なくとも６．０倍、少なくとも６．５倍、少なくとも７．０倍、少なくとも７．５倍、少なくとも８．０倍、少なくとも８．５倍、少なくとも９．０倍、少なくとも９．５倍、または少なくとも１０倍調節する。
【０２３７】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト−ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウオパチー病、那須−ハコラ病、卒中、急性外傷、慢性外傷、認知障害、記憶喪失、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満、マラリア、本態性振戦、中枢神経系狼瘡、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多発性萎縮症、シャイ−ドレーガー症候群、進行性核上麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫性障害、サルコイドーシス、加齢に伴う病気、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身性感染症、狼瘡、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨のパジェット病、がん、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性赤血球増加症、本態性血小板血症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化、骨髄由来腫瘍、ＴＲＥＭ２を発現する腫瘍、甲状腺癌、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルージ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、Ｉ型ＨＩＶ、ならびにインフルエンザ菌を含む、１つまたは複数の抗炎症性メディエーターの異常なレベルと関連する状態及び／または疾患を予防する、そのリスクを減少させる、またはそれを治療するために有用であり得、それを必要とする個体に、ＴＲＥＭ２と１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドとの相互作用を阻害しない、及び／または少なくとも１つのＴＲＥＭ２リガンドの１つまたは複数の活性を増強する薬剤の治療有効量を投与することを含む。本開示の他の態様は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト−ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウオパチー病、那須−ハコラ病、卒中、急性外傷、慢性外傷、認知障害、記憶喪失、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満、マラリア、本態性振戦、中枢神経系狼瘡、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多発性萎縮症、シャイ−ドレーガー症候群、進行性核上麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫性障害、サルコイドーシス、加齢に伴う病気、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身性感染症、狼瘡、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨���鬆症、骨形成、大理石骨病、骨のパジェット病、がん、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性赤血球増加症、本態性血小板血症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化、骨髄由来腫瘍、ＴＲＥＭ２を発現する腫瘍、甲状腺癌、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルージ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、Ｉ型ＨＩＶ、ならびにインフルエンザ菌から選択される疾患、障害、または損傷を予防する、そのリスクを減少させる、またはそれを治療する際に使用するための、ＴＲＥＭ２と１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドとの相互作用を阻害しない、及び／または少なくとも１つのＴＲＥＭ２リガンドの１つまたは複数の活性を増強する薬剤に関する。
【０２３８】
炎症誘発性メディエーターの発現の調節
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、細胞表面上に発現されたＴＲＥＭ２に結合した後に、炎症誘発性メディエーターを調節し得る（例えば、増加または減少させ得る）。
【０２３９】
本明細書で使用される場合、炎症誘発性メディエーターは、免疫応答を誘導する、活性化する、促進する、または別段に増加させる機序において、（例えば、炎症誘発性シグナル伝達経路を介して）直接または間接のいずれかで関与するタンパク質である。炎症誘発性メディエーターを同定し特徴付けるための当技術分野で公知の任意の方法を使用してよい。炎症誘発性メディエーターの例には、限定ではないが、ＩＦＮ−β、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＣＤ８６、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ＭＣＰ−１／ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＲ２、ＣＸＣＬ−１０、Ｇａｔａ３、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＩＬ−３３、ＬＩＦ、ＩＦＮ−ガンマ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＣＳＦ１、ＯＰＮ、ＣＤ１１ｃ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、及びＩＬ−２３などのサイトカインが含まれる。
【０２４０】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＩＦＮ−β、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＣＤ８６、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ＭＣＰ−１／ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＲ２、ＣＸＣＬ−１０、Ｇａｔａ３、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＩＬ−３３、ＬＩＦ、ＩＦＮ−ガンマ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＣＳＦ１、ＯＰＮ、ＣＤ１１ｃ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、及びＩＬ−２３などの炎症誘発性メディエーターの機能的発現及び／または分泌を調節し得る。ある特定の実施形態では、炎症誘発性メディエーターの発現の調節は、マクロファージ、樹状細胞、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、及び／またはミクログリア細胞で生じる。発現の調節には、限定ではないが、遺伝子発現の調節、転写発現の調節、またはタンパク質発現の調節が含まれ得る。遺伝子、転写物（例えば、ｍＲＮＡ）、及び／またはタンパク質発現を決定するための当技術分野で公知の任意の方法を使用してよい。例えば、ノーザンブロット分析を、炎症誘発性メディエーター遺伝子発現レベルを決定するために使用してよく、ＲＴ−ＰＣＲを、炎症誘発性メディエーター転写のレベルを決定するために使用してよく、ウエスタンブロット分析を、炎症誘発性メディエータータンパク質レベルを決定するために使用してよい。
【０２４１】
ある特定の実施形態では、炎症誘発性メディエーターには、炎症性サイトカインが含まれる。したがって、ある特定の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、１つまたは複数の炎症性サイトカインの分泌を調節し得る。本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体によってその分泌が減少し得る炎症性サイトカインの例には、限定ではないが、ＩＦＮ−β、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＣＤ８６、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ＭＣＰ−１／ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＲ２、ＣＸＣＬ−１０、Ｇａｔａ３、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＩＬ−３３、ＬＩＦ、ＩＦＮ−ガンマ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＣＳＦ１、ＯＰＮ、ＣＤ１１ｃ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、及びＩＬ−２３が含まれる。
【０２４２】
ある特定の実施形態では、炎症誘発性メディエーターには、炎症性受容体が含まれる。したがって、ある特定の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、１つまたは複数の炎症性受容体の発現を調節し得る。本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体によって発現が減少し得る炎症性受容体の例には、限定ではないが、ＣＤ８６が含まれる。
【０２４３】
本明細書で使用される場合、炎症誘発性メディエーターは、本開示のアゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体で処置された対象の１つまたは複数の細胞におけるその発現が、アゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体で処置されていない対応する対象の１つまたは複数の細胞で発現された同じ炎症誘発性メディエーターの発現と比較して調節される（例えば、増加する、または減少する）場合に、発現を調節し得る。一部の実施形態では、本開示のアゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体は、例えば、アゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体で処置されていない対応する対象の１つまたは複数の細胞における炎症誘発性メディエーター発現と比較して、対象の１つまたは複数の細胞における炎症誘発性メディエーター発現を少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１１０％、少なくとも１１５％、少なくとも１２０％、少なくとも１２５％、少なくとも１３０％、少なくとも１３５％、少なくとも１４０％、少なくとも１４５％、少なくとも１５０％、少なくとも１６０％、少なくとも１７０％、少なくとも１８０％、少なくとも１９０％、または少なくとも２００％調節し得る。他の実施形態では、アゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体は、例えば、抗ＴＲＥＭ２抗体で処置されていない対応する対象の１つまたは複数の細胞における炎症誘発性メディエーター発現と比較して、対象の１つまたは複数の細胞における炎症誘発性メディエーター発現を少なくとも１．５倍、少なくとも１．６倍、少なくとも１．７倍、少なくとも１．８倍、少なくとも１．９倍、少なくとも２．０倍、少なくとも２．１倍、少なくとも２．１５倍、少なくとも２．２倍、少なくとも２．２５倍、少なくとも２．３倍、少なくとも２．３５倍、少なくとも２．４倍、少なくとも２．４５倍、少なくとも２．５倍、少なくとも２．５５倍、少なくとも３．０倍、少なくとも３．５倍、少なくとも４．０倍、少なくとも４．５倍、少なくとも５．０倍、少なくとも５．５倍、少なくとも６．０倍、少なくとも６．５倍、少なくとも７．０倍、少なくとも７．５倍、少なくとも８．０倍、少なくとも８．５倍、少なくとも９．０倍、少なくとも９．５倍、または少なくとも１０倍調節し得る。
【０２４４】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト−ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウオパチー病、那須−ハコラ病、卒中、急性外傷、慢性外傷、認知障害、記憶喪失、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満、マラリア、本態性振戦、中枢神経系狼瘡、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多発性萎縮症、シャイ−ドレーガー症候群、進行性核上麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫性障害、サルコイドーシス、加齢に伴う病気、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身性感染症、狼瘡、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨のパジェット病、がん、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性赤血球増加症、本態性血小板血症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化、骨髄由来腫瘍、ＴＲＥＭ２を発現する腫瘍、甲状腺癌、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルージ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、Ｉ型ＨＩＶ、ならびにインフルエンザ菌を含む、１つまたは複数の炎症誘発性メディエーターの異常なレベルと関連する状態及び／または疾患を予防する、そのリスクを減少させる、またはそれを治療するために有用であり得、それを必要とする個体に、ＴＲＥＭ２と１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドとの相互作用を阻害しない、及び／または少なくとも１つのＴＲＥＭ２リガンドの１つまたは複数の活性を増強する薬剤の治療有効量を投与することを含む。本開示の他の態様は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト−ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウオパチー病、那須−ハコラ病、卒中、急性外傷、慢性外傷、認知障害、記憶喪失、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満、マラリア、本態性振戦、中枢神経系狼瘡、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多発性萎縮症、シャイ−ドレーガー症候群、進行性核上麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫性障害、サルコイドーシス、加齢に伴う病気、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身性感染症、狼瘡、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、���粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨のパジェット病、がん、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性赤血球増加症、本態性血小板血症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化、骨髄由来腫瘍、ＴＲＥＭ２を発現する腫瘍、甲状腺癌、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルージ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、Ｉ型ＨＩＶ、ならびにインフルエンザ菌から選択される疾患、障害、または損傷を予防する、そのリスクを減少させる、またはそれを治療する際に使用するための、ＴＲＥＭ２と１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドとの相互作用を阻害しない、及び／または少なくとも１つのＴＲＥＭ２リガンドの１つまたは複数の活性を増強する薬剤に関する。
【０２４５】
ＥＲＫリン酸化
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、細胞で発現されたＴＲＥＭ２に結合した後に、細胞外シグナル調節キナーゼ（ＥＲＫ）リン酸化を誘導し得る。
【０２４６】
細胞外シグナル調節キナーゼ（ＥＲＫ）は、例えば、分化細胞における減数分裂、有糸分裂、及び有糸分裂後の機能の調節に関与する、広く発現されるプロテインキナーゼ細胞内シグナル伝達キナーゼである。成長因子、サイトカイン、ウイルス感染、ヘテロ三量体Ｇタンパク質共役受容体のリガンド、形質変換薬、及び発癌物質などの様々な刺激は、ＥＲＫ経路を活性化する。ＥＲＫのリン酸化は、それらのキナーゼ活性の活性化をもたらす。
【０２４７】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト−ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウオパチー病、那須−ハコラ病、卒中、急性外傷、慢性外傷、認知障害、記憶喪失、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満、マラリア、本態性振戦、中枢神経系狼瘡、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多発性萎縮症、シャイ−ドレーガー症候群、進行性核上麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫性障害、サルコイドーシス、加齢に伴う病気、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身性感染症、狼瘡、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨のパジェット病、がん、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性赤血球増加症、本態性血小板血症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化、骨髄由来腫瘍、ＴＲＥＭ２を発現する腫瘍、甲状腺癌、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルージ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、Ｉ型ＨＩＶ、ならびにインフルエンザ菌を含む、ＥＲＫリン酸化のレベルの低下と関連する状態及び／または疾患を予防する、そのリスクを減少させる、またはそれを治療するために有益であり得、それを必要とする個体に、ＴＲＥＭ２と１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドとの相互作用を阻害しない、及び／または少なくとも１つのＴＲＥＭ２リガンドの１つまたは複数の活性を増強する薬剤の治療有効量を投与することを含む。本開示の他の態様は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト−ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウオパチー病、那須−ハコラ病、卒中、急性外傷、慢性外傷、認知障害、記憶喪失、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満、マラリア、本態性振戦、中枢神経系狼瘡、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多発性萎縮症、シャイ−ドレーガー症候群、進行性核上麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫性障害、サルコイドーシス、加齢に伴う病気、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身性感染症、狼瘡、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨���、骨のパジェット病、がん、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性赤血球増加症、本態性血小板血症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化、骨髄由来腫瘍、ＴＲＥＭ２を発現する腫瘍、甲状腺癌、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルージ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、Ｉ型ＨＩＶ、ならびにインフルエンザ菌から選択される疾患、障害、または損傷を予防する、そのリスクを減少させる、またはそれを治療する際に使用するための、ＴＲＥＭ２と１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドとの相互作用を阻害しない、及び／または少なくとも１つのＴＲＥＭ２リガンドの１つまたは複数の活性を増強する薬剤に関する。
【０２４８】
Ｓｙｋリン酸化
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、細胞で発現されるＴＲＥＭ２タンパク質に結合した後に、脾臓チロシンキナーゼ（Ｓｙｋ）リン酸化を誘導し得る。
【０２４９】
脾臓チロシンキナーゼ（Ｓｙｋ）は、いくつかの基質をリン酸化し、それによって、細胞活性化及び炎症プロセスをもたらすシグナル伝達複合体の形成を促進することによって、ＴＲＥＭ２の下流で機能する細胞内シグナル伝達分子である。
【０２５０】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト−ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウオパチー病、那須−ハコラ病、卒中、急性外傷、慢性外傷、認知障害、記憶喪失、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満、マラリア、本態性振戦、中枢神経系狼瘡、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多発性萎縮症、シャイ−ドレーガー症候群、進行性核上麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫性障害、サルコイドーシス、加齢に伴う病気、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身性感染症、狼瘡、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨のパジェット病、がん、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性赤血球増加症、本態性血小板血症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化、骨髄由来腫瘍、ＴＲＥＭ２を発現する腫瘍、甲状腺癌、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルージ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、Ｉ型ＨＩＶ、ならびにインフルエンザ菌を含む、Ｓｙｋリン酸化のレベルの低下と関連する状態及び／または疾患を予防する、そのリスクを減少させる、またはそれを治療するために有益であり得、それを必要とする個体に、ＴＲＥＭ２と１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドとの相互作用を阻害しない、及び／または少なくとも１つのＴＲＥＭ２リガンドの１つまたは複数の活性を増強する薬剤の治療有効量を投与することを含む。本開示の他の態様は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト−ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウオパチー病、那須−ハコラ病、卒中、急性外傷、慢性外傷、認知障害、記憶喪失、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満、マラリア、本態性振戦、中枢神経系狼瘡、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多発性萎縮症、シャイ−ドレーガー症候群、進行性核上麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫性障害、サルコイドーシス、加齢に伴う病気、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身性感染症、狼瘡、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨���、骨のパジェット病、がん、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性赤血球増加症、本態性血小板血症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化、骨髄由来腫瘍、ＴＲＥＭ２を発現する腫瘍、甲状腺癌、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルージ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、Ｉ型ＨＩＶ、ならびにインフルエンザ菌から選択される疾患、障害、または損傷を予防する、そのリスクを減少させる、またはそれを治療する際に使用するための、ＴＲＥＭ２と１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドとの相互作用を阻害しない、及び／または少なくとも１つのＴＲＥＭ２リガンドの１つまたは複数の活性を増強する薬剤に関する。
【０２５１】
ＴＲＥＭ２自己リン酸化
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、細胞で発現されるＴＲＥＭ２タンパク質に結合した後に、ＴＲＥＭ２自己リン酸化を誘導し得る。
【０２５２】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト−ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウオパチー病、那須−ハコラ病、卒中、急性外傷、慢性外傷、認知障害、記憶喪失、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満、マラリア、本態性振戦、中枢神経系狼瘡、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多発性萎縮症、シャイ−ドレーガー症候群、進行性核上麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫性障害、サルコイドーシス、加齢に伴う病気、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身性感染症、狼瘡、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨のパジェット病、がん、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性赤血球増加症、本態性血小板血症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化、骨髄由来腫瘍、ＴＲＥＭ２を発現する腫瘍、甲状腺癌、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルージ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、Ｉ型ＨＩＶ、ならびにインフルエンザ菌を含む、ＴＲＥＭ２リン酸化のレベルの低下と関連する状態及び／または疾患を予防する、そのリスクを減少させる、またはそれを治療するために有益であり得、それを必要とする個体に、ＴＲＥＭ２と１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドとの相互作用を阻害しない、及び／または少なくとも１つのＴＲＥＭ２リガンドの１つまたは複数の活性を増強する薬剤の治療有効量を投与することを含む。本開示の他の態様は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト−ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウオパチー病、那須−ハコラ病、卒中、急性外傷、慢性外傷、認知障害、記憶喪失、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満、マラリア、本態性振戦、中枢神経系狼瘡、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多発性萎縮症、シャイ−ドレーガー症候群、進行性核上麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫性障害、サルコイドーシス、加齢に伴う病気、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身性感染症、狼瘡、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理���骨病、骨のパジェット病、がん、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性赤血球増加症、本態性血小板血症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化、骨髄由来腫瘍、ＴＲＥＭ２を発現する腫瘍、甲状腺癌、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルージ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、Ｉ型ＨＩＶ、ならびにインフルエンザ菌から選択される疾患、障害、または損傷を予防する、そのリスクを減少させる、またはそれを治療する際に使用するための、ＴＲＥＭ２と１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドとの相互作用を阻害しない、及び／または少なくとも１つのＴＲＥＭ２リガンドの１つまたは複数の活性を増強する薬剤に関する。
【０２５３】
ＤＡＰ１２結合及びリン酸化
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＤＡＰ１２へのＴＲＥＭ２の結合を誘導し得る。他の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、細胞上に発現されるＴＲＥＭ２タンパク質に結合した後に、ＤＡＰ１２リン酸化を誘導し得る。他の実施形態では、ＴＲＥＭ２媒介性ＤＡＰ１２リン酸化は、１つまたは複数のＳＲＣファミリーチロシンキナーゼによって誘導される。Ｓｒｃファミリーチロシンキナーゼの例には、限定ではないが、Ｓｒｃ、Ｓｙｋ、Ｙｅｓ、Ｆｙｎ、Ｆｇｒ、Ｌｃｋ、Ｈｃｋ、Ｂｌｋ、Ｌｙｎ、及びＦｒｋが含まれる。
【０２５４】
ＤＡＰ１２は、ＴＹＲＯプロテインチロシンキナーゼ結合タンパク質、ＴＹＲＯＢＰ、ＫＡＲＡＰ、及びＰＬＯＳＬと様々に称される。ＤＡＰ１２は、その細胞質ドメインに、免疫受容体チロシン系活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含有する膜貫通型シグナル伝達タンパク質である。ある特定の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、ＩＴＡＭモチーフに、ＤＡＰ１２リン酸化を誘導し得る。ＤＡＰ１２リン酸化などのタンパク質リン酸化を決定するための当技術分野で公知の任意の方法を使用してよい。
【０２５５】
一部の実施形態では、ＤＡＰ１２は、ＳＲＣファミリーキナーゼによってリン酸化されて、ＤＡＰ１２／ＴＲＥＭ２複合体へのＳｙｋキナーゼ、ＺＡＰ７０キナーゼ、またはその両方の動員及び活性化をもたらす。したがって、ある特定の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、Ｓｙｋ、ＺＡＰ７０、またはその両方を、ＤＡＰ１２／ＴＲＥＭ２複合体へと動員し得る。理論に束縛されることは望まないが、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト−ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウオパチー病、那須−ハコラ病、卒中、急性外傷、慢性外傷、認知障害、記憶喪失、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満、マラリア、本態性振戦、中枢神経系狼瘡、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多発性萎縮症、シャイ−ドレーガー症候群、進行性核上麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫性障害、サルコイドーシス、加齢に伴う病気、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身性感染症、狼瘡、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨のパジェット病、がん、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性赤血球増加症、本態性血小板血症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化、骨髄由来腫瘍、ＴＲＥＭ２を発現する腫瘍、甲状腺癌、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルージ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、Ｉ型ＨＩＶ、ならびにインフルエンザ菌を含む、ＤＡＰ１２活性、ＤＡＰ１２リン酸化、またはＤＡＰ１２／ＴＲＥＭ２複合体へのＳｙｋ、ＺＡＰ７０、もしくはその両方の動員のレベルの低下と関連する状態及び／または疾患を予防する、そのリスクを減少させる、またはそれを治療するために有用であると考えられ、それを必要とする個体に、ＴＲＥＭ２と１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドとの相互作用を阻害しない、及び／または少なくとも１つのＴＲＥＭ２リガンドの１つまたは複数の活性を増強する薬剤の治療有効量を投与することを含む。本開示の他の態様は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト−ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウオパチー病、那須−ハコラ病、卒中、急性外傷、慢性外傷、認知障害、記憶喪失、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎���性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満、マラリア、本態性振戦、中枢神経系狼瘡、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多発性萎縮症、シャイ−ドレーガー症候群、進行性核上麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫性障害、サルコイドーシス、加齢に伴う病気、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身性感染症、狼瘡、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨のパジェット病、がん、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性赤血球増加症、本態性血小板血症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化、骨髄由来腫瘍、ＴＲＥＭ２を発現する腫瘍、甲状腺癌、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルージ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、Ｉ型ＨＩＶ、ならびにインフルエンザ菌から選択される疾患、障害、または損傷を予防する、そのリスクを減少させる、またはそれを処置する際に使用するための、ＴＲＥＭ２と１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドとの相互作用を阻害しない、及び／または１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドの１つまたは複数の活性を増強する薬剤に関する。
【０２５６】
Ｃ−Ｃケモカイン受容体７の発現の調節
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、細胞で発現されたＴＲＥＭ２に結合した後に、Ｃ−Ｃケモカイン受容体７（ＣＣＲ７）の発現を調節し得る（例えば、増加させ得る、または減少させ得る）。発現の調節には、限定ではないが、遺伝子発現の調節、転写発現の調節、またはタンパク質発現の調節が含まれ得る。遺伝子、転写物（例えば、ｍＲＮＡ）、及び／またはタンパク質発現を決定するための当技術分野で公知の任意の方法を使用してよい。例えば、ノーザンブロット分析を、抗炎症性メディエーター遺伝子発現レベルを決定するために使用してよく、ＲＴ−ＰＣＲを、抗炎症性メディエーター転写のレベルを決定するために使用してよく、ウエスタンブロット分析を、抗炎症性メディエータータンパク質レベルを決定するために使用してよい。
【０２５７】
Ｃ−Ｃケモカイン受容体７（ＣＣＲ７）は、Ｇタンパク質共役受容体ファミリーのメンバーである。ＣＣＲ７は、様々なリンパ組織で発現され、Ｂ細胞及びＴ細胞を活性化することができる。一部の実施形態では、ＣＣＲ７は、リンパ節などの二次リンパ器官へのメモリーＴ細胞の遊走を調節し得る。他の実施形態では、ＣＣＲ７は、樹状細胞の成熟を刺激し得る。ＣＣＲ７は、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンドＣＣＬ１９／ＥＬＣ及びＣＣＬ２１に結合することができる受容体タンパク質である。
【０２５８】
本明細書で使用される場合、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体で処置された対象の１つまたは複数の細胞における発現が、抗ＴＲＥＭ２抗体で処置されていない対応する対象の１つまたは複数の細胞で発現されるＣＣＲ７の発現と比較して調節される場合に、ＣＣＲ７は、発現を調節され得る（例えば、増加されている、または減少されている）。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、例えば、抗ＴＲＥＭ２抗体で処置されていない対応する対象の１つまたは複数の細胞におけるＣＣＲ７発現と比較して、対象の１つまたは複数の細胞におけるＣＣＲ７発現を少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１１０％、少なくとも１１５％、少なくとも１２０％、少なくとも１２５％、少なくとも１３０％、少なくとも１３５％、少なくとも１４０％、少なくとも１４５％、少なくとも１５０％、少なくとも１６０％、少なくとも１７０％、少なくとも１８０％、少なくとも１９０％、または少なくとも２００％調節し得る。他の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、例えば、抗ＴＲＥＭ２抗体で処置されていない対応する対象の１つまたは複数の細胞におけるＣＣＲ７発現と比較して、対象の１つまたは複数の細胞におけるＣＣＲ７発現を少なくとも１．５倍、少なくとも１．６倍、少なくとも１．７倍、少なくとも１．８倍、少なくとも１．９倍、少なくとも２．０倍、少なくとも２．１倍、少なくとも２．１５倍、少なくとも２．２倍、少なくとも２．２５倍、少なくとも２．３倍、少なくとも２．３５倍、少なくとも２．４倍、少なくとも２．４５倍、少なくとも２．５倍、少なくとも２．５５倍、少なくとも３．０倍、少なくとも３．５倍、少なくとも４．０倍、少なくとも４．５倍、少なくとも５．０倍、少なくとも５．５倍、少なくとも６．０倍、少なくとも６．５倍、少なくとも７．０倍、少なくとも７．５倍、少なくとも８．０倍、少なくとも８．５倍、少なくとも９．０倍、少なくとも９．５倍、または少なくとも１０倍調節する。
【０２５９】
一部の実施形態では、ＣＣＲ７の発現の調節は、マクロファージ、樹状細胞、及び／またはミクログリア細胞で生じる。ＣＣＲ７の発現の増加は、ケモカインＣＣＬ１９及びＣＣＬ２１を発現する細胞へのミクログリア細胞走化性を誘導し得る。したがって、ある特定の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＣＣＬ１９及びＣＣＬ２１発現細胞へのミクログリア細胞走化性を誘導し得る。
【０２６０】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、那須−ハコラ病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、及びタウオパチー病を包含する、ＣＣＲ７の異常なレベルと関連する状態及び／または疾患を予防する、そのリスクを減少させる、またはそれを治療するために有用であり得る。
【０２６１】
炎症によって誘導される遺伝子の発現の調製
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、細胞で発現されるＴＲＥＭ２タンパク質に結合した後に、その発現が炎症の誘導で増加する１つまたは複数の遺伝子の発現を調節し得る（例えば、増加または減少させ得る）。そのような遺伝子の例には、限定ではないが、Ｆａｂｐ３、Ｆａｂｐ５、及びＬＤＲが含まれる。発現の調節には、限定ではないが、遺伝子発現の調節、転写発現の調節、またはタンパク質発現の調節が含まれ得る。遺伝子、転写物（例えば、ｍＲＮＡ）、及び／またはタンパク質発現を決定するための当技術分野で公知の任意の方法を使用してよい。例えば、ノーザンブロット分析を、抗炎症性メディエーター遺伝子発現レベルを決定するために使用してよく、ＲＴ−ＰＣＲを、抗炎症性メディエーター転写のレベルを決定するために使用してよく、ウエスタンブロット分析を、抗炎症性メディエータータンパク質レベルを決定するために使用してよい。
【０２６２】
本明細書で使用される場合、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体で処置された対象の１つまたは複数の細胞における発現が、抗ＴＲＥＭ２抗体で処置されていない対応する対象の１つまたは複数の細胞で発現される１つまたは複数の遺伝子の発現と比較して調節される場合に、１つまたは複数の遺伝子（例えば、Ｆａｂｐ３、Ｆａｂｐ５、及び／またはＬＤＲ）は、発現を調節され得る（例えば、増加されている、または減少されている）。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、例えば、抗ＴＲＥＭ２抗体で処置されていない対応する対象の１つまたは複数の細胞における遺伝子（例えば、Ｆａｂｐ３、Ｆａｂｐ５、及び／またはＬＤＲ）発現と比較して、対象の１つまたは複数の細胞における遺伝子（例えば、Ｆａｂｐ３、Ｆａｂｐ５、及び／またはＬＤＲ）発現を少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１１０％、少なくとも１１５％、少なくとも１２０％、少なくとも１２５％、少なくとも１３０％、少なくとも１３５％、少なくとも１４０％、少なくとも１４５％、少なくとも１５０％、少なくとも１６０％、少なくとも１７０％、少なくとも１８０％、少なくとも１９０％、または少なくとも２００％調節し得る。他の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、例えば、抗ＴＲＥＭ２抗体で処置されていない対応する対象の１つまたは複数の細胞における遺伝子（例えば、Ｆａｂｐ３、Ｆａｂｐ５、及び／またはＬＤＲ）発現と比較して、対象の１つまたは複数の細胞における遺伝子（例えば、Ｆａｂｐ３、Ｆａｂｐ５、及び／またはＬＤＲ）発現を少なくとも１．５倍、少なくとも１．６倍、少なくとも１．７倍、少なくとも１．８倍、少なくとも１．９倍、少なくとも２．０倍、少なくとも２．１倍、少なくとも２．１５倍、少なくとも２．２倍、少なくとも２．２５倍、少なくとも２．３倍、少なくとも２．３５倍、少なくとも２．４倍、少なくとも２．４５倍、少なくとも２．５倍、少なくとも２．５５倍、少なくとも３．０倍、少なくとも３．５倍、少なくとも４．０倍、少なくとも４．５倍、少なくとも５．０倍、少なくとも５．５倍、少なくとも６．０倍、少なくとも６．５倍、少なくとも７．０倍、少なくとも７．５倍、少なくとも８．０倍、少なくとも８．５倍、少なくとも９．０倍、少なくとも９．５倍、または少なくとも１０倍調節する。
【０２６３】
抗原特異的Ｔ細胞の機能を刺激または調節する骨髄由来樹状細胞の能力の増強または正常化
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、細胞で発現されるＴＲＥＭ２タンパク質に結合した後に、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、及び／または調節性Ｔ細胞を含む、抗原特異的Ｔ細胞の機能を刺激または調節する骨髄由来樹状細胞の能力を増強する、及び／または正常化し得る。
【０２６４】
一部の実施形態では、本開示のアゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体は、例えば、アゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体で処置されていない対応する対象における１つまたは複数の抗原特異的Ｔ細胞の機能を刺激または調節する骨髄由来樹状細胞の能力と比較して、対象における１つまたは複数の抗原特異的Ｔ細胞の機能を刺激または調節する骨髄由来樹状細胞の能力を少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１１０％、少なくとも１１５％、少なくとも１２０％、少なくとも１２５％、少なくとも１３０％、少なくとも１３５％、少なくとも１４０％、少なくとも１４５％、少なくとも１５０％、少なくとも１６０％、少なくとも１７０％、少なくとも１８０％、少なくとも１９０％、または少なくとも２００％増強する、及び／または正常化し得る。他の実施形態では、アゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体は、例えば、アゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体で処置されていない対応する対象における抗原特異的Ｔ細胞の機能を刺激または調節する骨髄由来樹状細胞の能力と比較して、対象における抗原特異的Ｔ細胞の機能を刺激または調節する骨髄由来樹状細胞の能力を少なくとも１．５倍、少なくとも１．６倍、少なくとも１．７倍、少なくとも１．８倍、少なくとも１．９倍、少なくとも２．０倍、少なくとも２．１倍、少なくとも２．１５倍、少なくとも２．２倍、少なくとも２．２５倍、少なくとも２．３倍、少なくとも２．３５倍、少なくとも２．４倍、少なくとも２．４５倍、少なくとも２．５倍、少なくとも２．５５倍、少なくとも３．０倍、少なくとも３．５倍、少なくとも４．０倍、少なくとも４．５倍、少なくとも５．０倍、少なくとも５．５倍、少なくとも６．０倍、少なくとも６．５倍、少なくとも７．０倍、少なくとも７．５倍、少なくとも８．０倍、少なくとも８．５倍、少なくとも９．０倍、少なくとも９．５倍、または少なくとも１０倍増強し得る、及び／または正常化し得る。
【０２６５】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト−ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウオパチー病、那須−ハコラ病、卒中、急性外傷、慢性外傷、認知障害、記憶喪失、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満、マラリア、本態性振戦、中枢神経系狼瘡、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多発性萎縮症、シャイ−ドレーガー症候群、進行性核上麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫性障害、サルコイドーシス、加齢に伴う病気、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身性感染症、狼瘡、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨のパジェット病、がん、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性赤血球増加症、本態性血小板血症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化、骨髄由来腫瘍、ＴＲＥＭ２を発現する腫瘍、甲状腺癌、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルージ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、Ｉ型ＨＩＶ、ならびにインフルエンザ菌を含む、抗原特異的Ｔ細胞の機能を刺激または調節する骨髄由来樹状細胞の能力の減少または調節解除と関連する状態及び／または疾患を予防する、そのリスクを減少させる、またはそれを治療するために有益であり得、それを必要とする個体に、ＴＲＥＭ２と１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドとの相互作用を阻害しない、及び／または１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドの１つまたは複数の活性を増強する薬剤の治療有効量を投与することを含む。本開示の他の態様は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト−ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウオパチー病、那須−ハコラ病、卒中、急性外傷、慢性外傷、認知障害、記憶喪失、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満、マラリア、本態性振戦、中枢神経系狼瘡、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多発性萎縮症、シャイ−ドレーガー症候群、進行性核上麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫性障害、サルコイドーシス、加齢に伴う病気、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身性感染症、狼瘡、関���炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨のパジェット病、がん、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性赤血球増加症、本態性血小板血症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化、骨髄由来腫瘍、ＴＲＥＭ２を発現する腫瘍、甲状腺癌、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルージ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、Ｉ型ＨＩＶ、ならびにインフルエンザ菌から選択される疾患、障害、または損傷を予防する、そのリスクを減少させる、またはそれを治療する際に使用するための、ＴＲＥＭ２と１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドとの相互作用を阻害しない、及び／または少なくとも１つのＴＲＥＭ２リガンドの１つまたは複数の活性を増強する薬剤に関する。
【０２６６】
破骨細胞産生
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、細胞で発現されたＴＲＥＭ２に結合した後に、破骨細胞産生を誘導する、及び／または破骨細胞形成速度を上昇させ得る。
【０２６７】
本明細書で使用される場合、破骨細胞は、石灰化した基質を除去し、生体骨を分解すること（例えば、骨吸収）によって、骨組織を除去することができる骨細胞の１種である。破骨細胞は、単球−マクロファージ細胞系の細胞の融合によって形成し得る。一部の実施形態では、破骨細胞は、酒石酸耐性酸性ホスファターゼ（ＴＲＡＰ）及びカテプシンＫの高発現によって特徴付けられ得る。
【０２６８】
本明細書で使用される場合、破骨細胞形成速度は、本開示のアゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体で処置された対象における破骨細胞形成速度が、アゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体で処置されていない対応する対象における破骨細胞形成速度よりも大きい場合に、増加し得る。一部の実施形態では、本開示のアゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体は、例えば、アゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体で処置されていない対応する対象における破骨細胞形成速度と比較して、対象における破骨細胞形成速度を少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１１０％、少なくとも１１５％、少なくとも１２０％、少なくとも１２５％、少なくとも１３０％、少なくとも１３５％、少なくとも１４０％、少なくとも１４５％、少なくとも１５０％、少なくとも１６０％、少なくとも１７０％、少なくとも１８０％、少なくとも１９０％、または少なくとも２００％上昇させ得る。他の実施形態では、本開示のアゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体は、例えば、アゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体で処置されていない対応する対象における破骨細胞形成速度と比較して、対象における破骨細胞形成速度を少なくとも１．５倍、少なくとも１．６倍、少なくとも１．７倍、少なくとも１．８倍、少なくとも１．９倍、少なくとも２．０倍、少なくとも２．１倍、少なくとも２．１５倍、少なくとも２．２倍、少なくとも２．２５倍、少なくとも２．３倍、少なくとも２．３５倍、少なくとも２．４倍、少なくとも２．４５倍、少なくとも２．５倍、少なくとも２．５５倍、少なくとも３．０倍、少なくとも３．５倍、少なくとも４．０倍、少なくとも４．５倍、少なくとも５．０倍、少なくとも５．５倍、少なくとも６．０倍、少なくとも６．５倍、少なくとも７．０倍、少なくとも７．５倍、少なくとも８．０倍、少なくとも８．５倍、少なくとも９．０倍、少なくとも９．５倍、または少なくとも１０倍上昇させ得る。
【０２６９】
本明細書で使用される場合、本開示のアンタゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体で処置された対象における破骨細胞形成速度が、アンタゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体で処置されていない対応する対象における破骨細胞形成速度よりも小さい場合、破骨細胞形成速度は低下し得る。一部の実施形態では、本開示のアンタゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体は、例えば、アンタゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体で処置されていない対応する対象における破骨細胞形成速度と比較して、対象における破骨細胞形成速度を少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１１０％、少なくとも１１５％、少なくとも１２０％、少なくとも１２５％、少なくとも１３０％、少なくとも１３５％、少なくとも１４０％、少なくとも１４５％、少なくとも１５０％、少なくとも１６０％、少なくとも１７０％、少なくとも１８０％、少なくとも１９０％、または少なくとも２００％低下させ得る。他の実施形態では、本開示のアンタゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体は、例えば、アンタゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体で処置されていない対応する対象における破骨細胞形成速度と比較して、対象における破骨細胞形成速度を少なくとも１．５倍、少なくとも１．６倍、少なくとも１．７倍、少なくとも１．８倍、少なくとも１．９倍、少なくとも２．０倍、少なくとも２．１倍、少なくとも２．１５倍、少なくとも２．２倍、少なくとも２．２５倍、少なくとも２．３倍、少なくとも２．３５倍、少なくとも２．４倍、少なくとも２．４５倍、少なくとも２．５倍、少なくとも２．５５倍、少なくとも３．０倍、少なくとも３．５倍、少なくとも４．０倍、少なくとも４．５倍、少なくとも５．０倍、少なくとも５．５倍、少なくとも６．０倍、少なくとも６．５倍、少なくとも７．０倍、少なくとも７．５倍、少なくとも８．０倍、少なくとも８．５倍、少なくとも９．０倍、少なくとも９．５倍、または少なくとも１０倍低下させ得る。
【０２７０】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、骨密度の病理学的減少と関連する骨粗鬆症及び骨密度の病理学的増加と関連する骨粗鬆症性疾患を含む、異常な骨形成及び維持と関連する状態及び／または疾患を予防する、そのリスクを減少させる、またはそれを治療するために有益であり得る。
【０２７１】
ＴＲＥＭ２発現細胞の増殖、生存及び機能
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、細胞で発現されるＴＲＥＭ２タンパク質に結合した後に、樹状細胞、マクロファージ、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、及びミクログリア細胞（ミクログリア）の増殖、生存、及び／または機能を増加させ得る。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、１つまたは複数の先天免疫細胞の成長（例えば、増殖及び／または生存）を阻害しない。
【０２７２】
ミクログリア細胞は、脳及び脊髄の常在マクロファージであるグリア細胞の１種であり、したがって、中枢神経系（ＣＮＳ）における最初の及び主要な形態の能動的免疫防御として作用する。ミクログリア細胞は、脳内の全グリア細胞集団の２０％を構成する。ミクログリア細胞は常に、ＣＮＳからプラーク、損傷ニューロン、及び感染性因子を取り除く。脳及び脊髄は、それらが、ほとんどの感染が易損性の神経組織に到達するのを防止する血液脳関門として知られている一連の内皮細胞によって身体の残部から分離されている「免疫特権」臓器と考えられている。感染因子が脳に直接導入される、または血液脳関門を通過する場合、ミクログリア細胞は、炎症を減少させるために迅速に反応し、感染因子が敏感な神経組織を損傷する前に、それらを破壊しなければならない。身体の残部からの抗体を利用することができない（血液脳関門を通過するのに十分に小さい抗体はほとんどない）ために、ミクログリアは、異物を認識し、それらを飲み込み、Ｔ細胞を活性化する抗原提示細胞として作用することができなければならない。このプロセスは、致命的な損傷を潜在的に防止するために、迅速に行われなければならないので、ミクログリア細胞は、ＣＮＳの小さな病理学的変化にさえ極めて感受性が高い。それらは、細胞外カリウムの小さな変化にさえ応答する独特なカリウムチャネルを有することによって、この感受性を部分的に達成する。
【０２７３】
本明細書で使用される場合、本開示のマクロファージには、限定ではないが、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、及びＭ２マクロファージが含まれる。本明細書で使用される場合、本開示のミクログリア細胞には、限定ではないが、Ｍ１ミクログリア細胞、活性化Ｍ１ミクログリア細胞、及びＭ２ミクログリア細胞が含まれる。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト−ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウオパチー病、那須−ハコラ病、卒中、急性外傷、慢性外傷、認知障害、記憶喪失、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満、マラリア、本態性振戦、中枢神経系狼瘡、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多発性萎縮症、シャイ−ドレーガー症候群、進行性核上麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫性障害、サルコイドーシス、加齢に伴う病気、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身性感染症、狼瘡、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨のパジェット病、がん、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性赤血球増加症、本態性血小板血症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化、骨髄由来腫瘍、ＴＲＥＭ２を発現する腫瘍、甲状腺癌、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルージ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、Ｉ型ＨＩＶ、ならびにインフルエンザ菌を含む、免疫細胞の増殖または生存の減少と関連する状態及び／または疾患のリスクを減少させる、またはそれを治療するために有益であり得、それを必要とする個体に、ＴＲＥＭ２と１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドとの相互作用を阻害しない、及び／または少なくとも１つのＴＲＥＭ２リガンドの１つまたは複数の活性を増強する薬剤の治療有効量を投与することを含む。本開示の他の態様は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト−ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウオパチー病、那須−ハコラ病、卒中、急性外傷、慢性外傷、認知障害、記憶喪失、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満、マラリア、本態性振戦、中枢神経系狼瘡、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多発性萎縮症、シャイ−ドレーガー症候群、進行���核上麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫性障害、サルコイドーシス、加齢に伴う病気、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身性感染症、狼瘡、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨のパジェット病、がん、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性赤血球増加症、本態性血小板血症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化、骨髄由来腫瘍、ＴＲＥＭ２を発現する腫瘍、甲状腺癌、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルージ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、Ｉ型ＨＩＶ、ならびにインフルエンザ菌から選択される疾患、障害、または損傷を予防する、そのリスクを減少させる、またはそれを処置する際に使用するための、ＴＲＥＭ２と１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドとの相互作用を阻害しない、及び／または１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドの１つまたは複数の活性を増強する薬剤に関する。
【０２７４】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、樹状細胞、単球、及び／またはマクロファージ上におけるＣＤ８３及び／またはＣＤ８６の発現を増加させ得る。
【０２７５】
本明細書で使用される場合、マクロファージ、樹状細胞、単球、及び／またはミクログリアの増殖速度、生存、及び／または機能は、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体で処置された対象の樹状細胞、マクロファージ、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、及び／またはミクログリアの増殖速度、生存、及び／または機能が、抗ＴＲＥＭ２抗体で処置されていない対応する対象の樹状細胞、マクロファージ、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、及び／またはミクログリアの増殖速度、生存、及び／または機能よりも多い場合に、発現の増加を含み得る。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、例えば、抗ＴＲＥＭ２抗体で処置されていない対応する対象の樹状細胞、マクロファージ、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、及び／またはミクログリアの増殖速度、生存、及び／または機能と比較して、対象の樹状細胞、マクロファージ、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、及び／またはミクログリアの増殖速度、生存、及び／または機能を少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１１０％、少なくとも１１５％、少なくとも１２０％、少なくとも１２５％、少なくとも１３０％、少なくとも１３５％、少なくとも１４０％、少なくとも１４５％、少なくとも１５０％、少なくとも１６０％、少なくとも１７０％、少なくとも１８０％、少なくとも１９０％、または少なくとも２００％増加させ得る。他の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、例えば、抗ＴＲＥＭ２抗体で処置されていない対応する対象の樹状細胞、マクロファージ、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、及び／またはミクログリアの増殖速度、生存、及び／または機能と比較して、対象の樹状細胞、マクロファージ、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、及び／またはミクログリアの増殖速度、生存、及び／または機能を少なくとも１．５倍、少なくとも１．６倍、少なくとも１．７倍、少なくとも１．８倍、少なくとも１．９倍、少なくとも２．０倍、少なくとも２．１倍、少なくとも２．１５倍、少なくとも２．２倍、少なくとも２．２５倍、少なくとも２．３倍、少なくとも２．３５倍、少なくとも２．４倍、少なくとも２．４５倍、少なくとも２．５倍、少なくとも２．５５倍、少なくとも３．０倍、少なくとも３．５倍、少なくとも４．０倍、少なくとも４．５倍、少なくとも５．０倍、少なくとも５．５倍、少なくとも６．０倍、少なくとも６．５倍、少なくとも７．０倍、少なくとも７．５倍、少なくとも８．０倍、少なくとも８．５倍、少なくとも９．０倍、少なくとも９．５倍、または少なくとも１０倍増加させ得る。
【０２７６】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト−ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウオパチー病、那須−ハコラ病、卒中、急性外傷、慢性外傷、認知障害、記憶喪失、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満、マラリア、本態性振戦、中枢神経系狼瘡、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多発性萎縮症、シャイ−ドレーガー症候群、進行性核上麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫性障害、サルコイドーシス、加齢に伴う病気、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身性感染症、狼瘡、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨のパジェット病、がん、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性赤血球増加症、本態性血小板血症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化、骨髄由来腫瘍、ＴＲＥＭ２を発現する腫瘍、甲状腺癌、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルージ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、Ｉ型ＨＩＶ、ならびにインフルエンザ菌を含む、樹状細胞、マクロファージ、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、及び／またはミクログリアの機能の低下と関連する状態及び／または疾患を予防する、そのリスクを減少させる、またはそれを治療するために有益であり得、それを必要とする個体に、ＴＲＥＭ２と１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドとの相互作用を阻害しない、及び／または少なくとも１つのＴＲＥＭ２リガンドの１つまたは複数の活性を増強する薬剤の治療有効量を投与することを含む。本開示の他の態様は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト−ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウオパチー病、那須−ハコラ病、卒中、急性外傷、慢性外傷、認知障害、記憶喪失、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満、マラリア、本態性振戦、中枢神経系狼瘡、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多発性萎縮症、シャイ−ドレーガー症候群、進行性核上麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫性障害、サルコイドーシス、加齢に伴う病気、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、���感染症、全身性感染症、狼瘡、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨のパジェット病、がん、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性赤血球増加症、本態性血小板血症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化、骨髄由来腫瘍、ＴＲＥＭ２を発現する腫瘍、甲状腺癌、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルージ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、Ｉ型ＨＩＶ、ならびにインフルエンザ菌から選択される疾患、障害、または損傷を予防する、そのリスクを減少させる、またはそれを治療する際に使用するための、ＴＲＥＭ２と１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドとの相互作用を阻害しない、及び／または少なくとも１つのＴＲＥＭ２リガンドの１つまたは複数の活性を増強する薬剤に関する。
【０２７７】
クリアランス及び食作用
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、細胞で発現されるＴＲＥＭ２タンパク質に結合した後に、アポトーシスニューロン、神経系の神経組織デブリ、神経系の非神経組織デブリ、細菌、他の異物、病原タンパク質、病原ペプチド、病原核酸、または腫瘍細胞のうちの１つまたは複数のクリアランス及び／または食作用を誘導し得る。ある特定の実施形態では、病原タンパク質には、限定ではないが、アミロイドベータまたはそのフラグメント、Ｔａｕ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスチレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルソリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、及びグリシン−アラニン（ＧＡ）、グリシン−プロリン（ＧＰ）、グリシン−アルギニン（ＧＲ）、プロリン−アラニン（ＰＡ）、またはプロリン−アルギニン（ＰＲ）から構成されるジペプチドリピート（ＤＰＲペプチド）を含むリピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物が含まれる。ある特定の実施形態では、病原核酸には、限定ではないが、アンチセンスＧＧＣＣＣＣ（Ｇ２Ｃ４）リピート伸長ＲＮＡが含まれる。
【０２７８】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、限定ではないが、アポトーシスニューロンのクリアランス、神経組織デブリのクリアランス、非神経組織デブリのクリアランス、細菌または他の異物のクリアランス、病原タンパク質のクリアランス、病原ペプチドのクリアランス、病原核酸のクリアランス、及び腫瘍細胞のクリアランスを含むクリアランスのうちの１つまたは複数の種類を誘導し得る。
【０２７９】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、アポトーシスニューロン、神経組織デブリ、非神経組織デブリ、細菌、他の異物、病原タンパク質、病原ペプチド、病原核酸、及び／または腫瘍細胞のうちの１つまたは複数の食作用を誘導し得る。
【０２８０】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、低レベルのマクロファージコロニー刺激因子（ＭＣＳＦ）の条件下で、マクロファージ、樹状細胞、単球、及び／またはミクログリアによる食作用を増加させ得る。別法では、一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、正常なレベルのマクロファージコロニー刺激因子（ＭＣＳＦ）の存在下で、マクロファージ、樹状細胞、単球、及び／またはミクログリアによる食作用を増加させ得る。
【０２８１】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト−ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウオパチー病、那須−ハコラ病、卒中、急性外傷、慢性外傷、認知障害、記憶喪失、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満、マラリア、本態性振戦、中枢神経系狼瘡、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多発性萎縮症、シャイ−ドレーガー症候群、進行性核上麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫性障害、サルコイドーシス、加齢に伴う病気、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身性感染症、狼瘡、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨のパジェット病、がん、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性赤血球増加症、本態性血小板血症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化、骨髄由来腫瘍、ＴＲＥＭ２を発現する腫瘍、甲状腺癌、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルージ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、Ｉ型ＨＩＶ、ならびにインフルエンザ菌を含む、アポトーシスニューロン、神経系の神経組織デブリ、神経系の非神経組織デブリ、細菌、他の異物、病原タンパク質、病原ペプチド、病原核酸、または腫瘍細胞のクリアランス及び／または食作用と関連する状態及び／または疾患を予防する、そのリスクを減少させる、またはそれを治療するために有益であり得、それを必要とする個体に、ＴＲＥＭ２と１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドとの相互作用を阻害しない、及び／または少なくとも１つのＴＲＥＭ２リガンドの１つまたは複数の活性を増強する薬剤の治療有効量を投与することを含む。本開示の他の態様は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト−ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウオパチー病、那須−ハコラ病、卒中、急性外傷、慢性外傷、認知障害、記憶喪失、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満、マラリア、本態性振戦、中枢神経系狼瘡、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多発性萎縮症、シャイ−ドレーガー症候群、進行性核上麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫性障害、サルコイドーシス、加齢に伴う病気、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変���症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身性感染症、狼瘡、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨のパジェット病、がん、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性赤血球増加症、本態性血小板血症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化、骨髄由来腫瘍、ＴＲＥＭ２を発現する腫瘍、甲状腺癌、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルージ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、Ｉ型ＨＩＶ、ならびにインフルエンザ菌から選択される疾患、障害、または損傷を予防する、そのリスクを減少させる、またはそれを治療する際に使用するための、ＴＲＥＭ２とｉとの相互作用を阻害しない薬剤に関する。
【０２８２】
ＴＲＥＭ２依存性遺伝子発現
一部の実施形態では、本開示のアゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体は、転写因子の活性化Ｔ細胞核内因子（ＮＦＡＴ）ファミリーの１つまたは複数の転写因子などのＴＲＥＭ２依存性遺伝子の活性及び／または発現を増加させ得る。別法では、本開示のアンタゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体は、転写因子のＮＦＡＴファミリーの１つまたは複数の転写因子などのＴＲＥＭ２依存性遺伝子の活性及び／または発現を阻害し得る。
【０２８３】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト−ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウオパチー病、那須−ハコラ病、卒中、急性外傷、慢性外傷、認知障害、記憶喪失、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満、マラリア、本態性振戦、中枢神経系狼瘡、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多発性萎縮症、シャイ−ドレーガー症候群、進行性核上麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫性障害、サルコイドーシス、加齢に伴う病気、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身性感染症、狼瘡、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨のパジェット病、がん、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性赤血球増加症、本態性血小板血症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化、骨髄由来腫瘍、ＴＲＥＭ２を発現する腫瘍、甲状腺癌、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルージ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、Ｉ型ＨＩＶ、ならびにインフルエンザ菌を含む、ＴＲＥＭ２依存性遺伝子のレベルの低下と関連する状態及び／または疾患を予防する、そのリスクを減少させる、またはそれを治療するために有益であり得、それを必要とする個体に、ＴＲＥＭ２と１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドとの相互作用を阻害しない、及び／または少なくとも１つのＴＲＥＭ２リガンドの１つまたは複数の活性を増強する薬剤の治療有効量を投与することを含む。本開示の他の態様は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト−ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウオパチー病、那須−ハコラ病、卒中、急性外傷、慢性外傷、認知障害、記憶喪失、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満、マラリア、本態性振戦、中枢神経系狼瘡、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多発性萎縮症、シャイ−ドレーガー症候群、進行性核上麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫性障害、サルコイドーシス、加齢に伴う病気、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身性感染症、狼瘡、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、���理石骨病、骨のパジェット病、がん、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性赤血球増加症、本態性血小板血症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化、骨髄由来腫瘍、ＴＲＥＭ２を発現する腫瘍、甲状腺癌、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルージ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、Ｉ型ＨＩＶ、ならびにインフルエンザ菌から選択される疾患、障害、または損傷を予防する、そのリスクを減少させる、またはそれを処置する際に使用するための、ＴＲＥＭ２と１つまたは複数のＣＤ３３リガンドとの相互作用を阻害しない薬剤に関する。
【０２８４】
抗体の調製
本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体には、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、ヒト化及びキメラ抗体、ヒト抗体、抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ及びＦ（ａｂ’）２）、二重特異性及び多特異性抗体、多価抗体、ライブラリ由来抗体、修飾されたエフェクター機能を有する抗体、抗体部分を含有する融合タンパク質、ならびに抗体のグリコシル化バリアント、抗体のアミノ酸配列バリアント、及び共有結合的に修飾された抗体を含む、本開示のＴＲＥＭ２のアミノ酸残基を有するエピトープなどの抗原認識部位を含む、他の任意の修飾された立体配置の免疫グロブリン分子が包含され得る。抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒト、マウス、ラット、または（キメラもしくはヒト化抗体を含む）他の任意の起源のものであってもよい。
【０２８５】
（１）ポリクローナル抗体
抗ＴＲＥＭ２ポリクローナル抗体などのポリクローナル抗体は一般に、関連抗原及びアジュバントの複数の皮下（ｓｃ）または腹腔内（ｉｐ）注射によって、動物中で生じる。二官能性または誘導体化剤、例えば、マレイミドベンゾイルスルホスクシンイミドエステル（システイン残基を介したコンジュゲーション）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（リシン残基を介する）、グルタルアルデヒド、無水コハク酸、ＳＯＣｌ２、またはＲ１Ｎ＝Ｃ＝ＮＲ（Ｒ及びＲ１は独立に、低級アルキル基である）を使用して、免疫されるべき種に免疫原性があるタンパク質、例えば、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、血清アルブミン、ウシサイロログロブリン、またはダイズトリプシン阻害薬に、関連抗原（例えば、本開示の精製または組換えＴＲＥＭ２タンパク質）をコンジュゲートすることは有用であり得る。使用され得るアジュバントの例には、フロイント完全アジュバント及びＭＰＬ−ＴＤＭアジュバント（モノホスホリル脂質Ａ、合成トレハロースジコリノミコレート（ｄｉｃｏｒｙｎｏｍｙｃｏｌａｔｅ））が含まれる。免疫化プロトコルは、過度な実験をすることなく、当業者によって選択され得る。
【０２８６】
動物は、所望の抗原、免疫原性複合体、もしくは誘導体に対して、例えば、１００μｇ（ウサギ用）または５μｇ（マウス用）のタンパク質または複合体を３体積のフロイント完全アジュバントと組み合わせ、その溶液を複数の部位に皮内注射することによって免疫化される。１ヶ月後に、動物は、ペプチドもしくは複合体のフロイント完全アジュバント溶液の元の量の１／５〜１／１０を複数の部位に皮下注射することによって追加免疫される。７〜１４日後に、動物から採血し、血清を抗体力価についてアッセイする。力価がプラトーに達するまで動物は追加免疫される。複合体は、組み換え細胞培養中で、タンパク質融合として製造することもできる。また、ミョウバンなどの凝集剤も、免疫応答を高めるために適している。
【０２８７】
（２）モノクローナル抗体
モノクローナル抗体、例えば、抗ＴＲＥＭ２モノクローナル抗体は、実質的に均質な抗体の集団、すなわち、その集団を構成する個々の抗体が、少量で存在する場合がある、起こり得る自然に生じる突然変異及び／または翻訳後修飾（例えば、異性化、アミド化）を除いて同じである集団から得られる。したがって、修飾語「モノクローナル」は、個別の抗体の混合物ではない抗体の特徴を示す。
【０２８８】
例えば、抗ＴＲＥＭ２モノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５（１９７５）によって最初に記載されたハイブリドーマ法を用いて製造されてもよいし、または組み換えＤＮＡ法（米国特許第４，８１６，５６７号）によって製造されてもよい。
【０２８９】
ハイブリドーマ法では、マウスまたは他の適切な宿主動物、例えば、ハムスターを、上記のとおりに免疫化し、免疫化に使用されたタンパク質（例えば、本開示の精製もしくは組み換えＴＲＥＭ２タンパク質）に特異的に結合する抗体を産生する、または産生することが可能なリンパ球を誘導する。別法では、リンパ球をインビトロで免疫化してもよい。次いで、リンパ球を、ポリエチレングリコールなどの適切な融剤を用いて骨髄腫細胞と融合させ、ハイブリドーマ細胞を形成する（Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，ｐｐ．５９−１０３（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９８６））。
【０２９０】
免疫剤は典型的には、抗原性タンパク質（例えば、本開示の精製もしくは組み換えＴＲＥＭ２タンパク質）またはその融合バリアントを含む。一般に、ヒト起源の細胞が望ましい場合には末梢血リンパ球（「ＰＢＬ」）が使用され、非ヒト哺乳動物起源が望ましい場合には脾臓またはリンパ節細胞が使用される。次いで、それらのリンパ球を、ポリエチレングリコールなどの適切な融剤を用いて不死化細胞系と融合させ、ハイブリドーマ細胞を形成する。Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ（１９８６），ｐｐ．５９−１０３。
【０２９１】
不死化細胞系は通常、形質転換哺乳動物細胞、とりわけ、げっ歯類、ウシ、またはヒト由来の骨髄腫細胞である。通常、ラットまたはマウス骨髄腫細胞系が用いられる。このようにして調製されたハイブリドーマ細胞を、未融合の親骨髄腫細胞の増殖または生存を阻害する１つまたは複数の物質を好ましくは含有する適切な培養培地に播種し、増殖させる。例えば、親骨髄腫細胞が酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴまたはＨＰＲＴ）を欠いている場合、そのハイブリドーマ用の培養培地は典型的には、ＨＧＰＲＴ欠損細胞の増殖を防ぐ物質であるヒポキサンチン、アミノプテリン、及びチミジンを含む（ＨＡＴ培地）。
【０２９２】
好ましい不死化骨髄腫細胞は、効率的に融合し、選択された抗体産生細胞による抗体の安定した高レベルの産生を支持し、ＨＡＴ培地などの培地に感受性であるものである。これらの中でも、マウス骨髄腫系、例えば、ＭＯＰＣ−２１及びＭＰＣ−１１マウス腫瘍に由来するもの（Ｓａｌｋ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  Ｃｅｎｔｅｒ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ  ＵＳＡ）から入手可能）、ならびにＳＰ−２細胞及びその誘導体（例えば、Ｘ６３−Ａｇ８−６５３）（ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｍａｎａｓｓａｓ、Ｖｉｒｇｉｎｉａ  ＵＳＡ）から入手可能）が好ましい。ヒト骨髄腫及びマウス−ヒトヘテロ骨髄腫細胞系も、ヒトモノクローナル抗体の生産のために記載されている（Ｋｏｚｂｏｒ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）、Ｂｒｏｄｅｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１−６３（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８７））。
【０２９３】
ハイブリドーマ細胞が増殖している培養培地を、抗原（例えば、本開示のＴＲＥＭ２タンパク質）を指向するモノクローナル抗体の産生についてアッセイする。好ましくは、ハイブリドーマ細胞によって産生されるモノクローナル抗体の結合特異性を、免疫沈降またはインビトロ結合アッセイ、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）もしくは酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によって測定する。
【０２９４】
ハイブリドーマ細胞が培養される培養培地は、所望の抗原（例えば、本開示のＴＲＥＭ２タンパク質）を指向するモノクローナル抗体の存在についてアッセイすることができる。好ましくは、モノクローナル抗体の結合親和性及び特異性は、免疫沈降またはインビトロ結合アッセイ、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）もしくは酵素結合アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によって決定することができる。そのような技術及びアッセイは、当技術分野で公知である。例えば、結合親和性は、Ｍｕｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１０７：２２０（１９８０）のスキャチャード解析によって決定され得る。
【０２９５】
所望の特異性、親和性、及び／または活性の抗体を産生するハイブリドーマ細胞を同定した後に、クローンを限界希釈手順によってサブクローニングし、標準的な方法で増殖させ得る（Ｇｏｄｉｎｇ、前出）。この目的に適した培養培地には、例えば、Ｄ−ＭＥＭまたはＲＰＭＩ−１６４０培地が含まれる。加えて、ハイブリドーマ細胞を、哺乳動物において腫瘍として、インビボで増殖させてもよい。
【０２９６】
サブクローンによって分泌されたモノクローナル抗体は、従来の免疫グロブリン精製手順、例えば、プロテインＡ−セファロースクロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、アフィニティークロマトグラフィー、及び上記のとおりの他の方法などによって、培養培地、腹水、または血清から適切に分離される。
【０２９７】
抗ＴＲＥＭ２モノクローナル抗体はまた、組み換えＤＮＡ法、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号に開示のものによって、及び上記のとおり製造してもよい。モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を用いて（例えば、マウス抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合するオリゴヌクレオチドプローブを用いることによって）容易に単離及び配列決定される。ハイブリドーマ細胞は、そのようなＤＮＡの好ましい供給源として役立つ。単離されると、ＤＮＡは発現ベクターに入れられ、これは次いで、宿主細胞、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、または他の場合には免疫グロブリンタンパク質を産生しない骨髄腫細胞に遺伝子導入され、そのような組み換え宿主細胞でモノクローナル抗体を合成する。抗体をコードするＤＮＡの細菌での組み換え発現に関する概説には、Ｓｋｅｒｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，５：２５６−２６２（１９９３）及びＰｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．１３０：１５１−１８８（１９９２）が含まれる。
【０２９８】
ある特定の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３４８：５５２−５５４（１９９０）に記載の技術を用いて生成される抗体ファージライブラリーから単離することができる。Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８（１９９１）及びＭａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１−５９７（１９９１）は、それぞれ、ファージライブラリーからのマウス及びヒト抗体の単離を記載した。その後の刊行物は、鎖シャフリングによる高親和性（ナノモル（「ｎＭ」）の範囲）ヒト抗体の産生（Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１０：７７９−７８３（１９９２））、ならびに非常に大きなファージライブラリーを構築するための戦略としてのコンビナトリアル感染及びインビボ組み換え（Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，２１：２２６５−２２６６（１９９３））を記載している。したがって、これらの技術は、所望の特異性のモノクローナル抗体（例えば、本開示のＴＲＥＭ２タンパク質に結合するもの）の単離用の従来のモノクローナル抗体ハイブリドーマ技術に代わる実行可能な手段である。
【０２９９】
抗体またはそのフラグメントをコードするＤＮＡはまた、例えば、相同マウス配列の代わりにヒト重鎖及び軽鎖定常ドメインのコード配列を置換することによって（米国特許第４，８１６，５６７号、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１（１９８４））、または非免疫グロブリンポリペプチドのコード配列のすべてもしくは一部を免疫グロブリンのコード配列に共有結合で結合することによって修飾されてもよい。典型的には、そのような非免疫グロブリンポリペプチドは、抗体の定常ドメインと置換されるか、または、抗体の１つの抗原結合部位の可変ドメインと置換され、抗原に対する特異性を有する１つの抗原結合部位及び異なる抗原に対する特異性を有する別の抗原結合部位を含むキメラ二価抗体を形成する。
【０３００】
本明細書に記載のモノクローナル抗体（例えば、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体またはそのフラグメント）は、一価でよく、その調製は当技術分野で周知である。例えば、１つの方法は、免疫グロブリン軽鎖及び修飾された重鎖の組み換え発現を含む。重鎖は、重鎖の架橋を防ぐため、一般にＦｃ領域の任意の点で切断される。別法では、関連するシステイン残基を、架橋を防ぐために別のアミノ酸残基で置換してもよいし、削除してもよい。インビトロ法もまた、一価抗体を調製するために適している。抗体のフラグメント、とりわけＦａｂフラグメントを産生するための抗体の消化は、当技術分野で公知の通常の技術を用いて達成することができる。
【０３０１】
キメラまたはハイブリッド抗ＴＲＥＭ２抗体はまた、架橋剤を含むものを含めた合成タンパク質化学において公知の方法を用いてインビトロで調製され得る。例えば、免疫毒素は、ジスルフィド交換反応を用いて、またはチオエーテル結合を形成することによって構築してもよい。この目的に適した試薬の例には、イミノチオレート及びメチル−４−メルカプトブチリミデートが含まれる。
【０３０２】
（３）ヒト化抗体
本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体またはその抗体フラグメントには、さらにヒト化もしくはヒト抗体が含まれ得る。非ヒト（例えば、マウス）抗体のヒト化形態は、最小限の非ヒト免疫グロブリン由来の配列を含むキメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、またはそのフラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ’）２、または抗体の他の抗原結合サブ配列）である。ヒト化抗体は、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）を含み、この中で、そのレシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）由来の残基が、所望の特異性、親和性、及び能力を有するマウス、ラット、またはウサギなどの非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲ由来の残基で置換されている。いくつかの例では、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク残基が、対応する非ヒト残基で置換される。ヒト化抗体はまた、レシピエント抗体にも、取り込まれたＣＤＲやフレームワーク配列にも見られない残基を含んでもよい。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、通常は２つの可変ドメインの実質的にすべてを含み、この中で、ＣＤＲ領域のすべてまたは実質的にすべてが非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ＦＲ領域のすべてまたは実質的にすべては、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである。ヒト化抗体は、最適には、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、通常はヒト免疫グロブリンのものの少なくとも一部もまた含む。Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５（１９８６）、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２９（１９８８）及びＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３−５９６（１９９２）。
【０３０３】
非ヒト抗ＴＲＥＭ２抗体のヒト化方法は当技術分野で周知である。一般に、ヒト化抗体は、その中に導入された非ヒト起源からの１つまたは複数のアミノ酸残基を有する。これら非ヒトアミノ酸残基は、しばしば「取り込み」残基と呼ばれ、これらは通常、「取り込み」可変ドメインから取り込まれる。ヒト化は、基本的に、Ｗｉｎｔｅｒ  ａｎｄ  ｃｏ−ｗｏｒｋｅｒｓ，Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５（１９８６）、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２７（１９８８）、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４−１５３６（１９８８）の方法に従って、またはげっ歯類ＣＤＲまたはＣＤＲ配列で対応するヒト抗体の配列を置換することによって行うことができる。したがって、そのような「ヒト化」抗体は、キメラ抗体（米国特許第４，８１６，５６７号）であって、ここでは、非ヒト種由来の対応する配列によって、インタクトなヒト可変ドメインに実質的に満たないものが置換されている。実際には、ヒト化抗体は通常、いくつかのＣＤＲ残基及び場合によりいくつかのＦＲ残基が、げっ歯類抗体の類似部位由来の残基で置換されているヒト抗体である。
【０３０４】
ヒト化抗体の製造に使用される軽鎖及び重鎖の両方のヒト可変領域の選択は、抗原性を低下させるために非常に重要である。いわゆる「ベストフィット」法に従って、げっ歯類抗体の可変領域の配列は、公知のヒト可変ドメイン配列のライブラリー全体に対してスクリーニングされる。次いで、げっ歯類のものに最も近いヒト配列がヒト化抗体用のヒトフレームワーク（ＦＲ）として受容される。Ｓｉｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２２９６（１９９３）、Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１（１９８７）。別の方法は、軽鎖または重鎖の特定の下位群のすべてのヒト抗体のコンセンサス配列由来の特定のフレームワークを用いる。いくつかの異なるヒト化抗体に対して、同じフレームワークを使用してもよい。Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：４２８５（１９９２）、Ｐｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２６２３（１９９３）。
【０３０５】
さらに、抗体は、抗原に対する高い親和性及び他の好適な生物学的特性を保持してヒト化されることが重要である。この目標を達成するため、好ましい方法によれば、ヒト化抗体は、親配列及びヒト化配列の３次元モデルを用いて、親配列及び様々な概念的ヒト化産物の分析過程によって調製される。３次元免疫グロブリンモデルは、一般に入手可能であり、当業者には熟知されている。選択された候補免疫グロブリン配列の推定される３次元立体配座構造を図解して示すコンピュータープログラムが利用可能である。これらの表示を検査することで、候補免疫グロブリン配列の機能において、残基の可能性のある役割の分析、すなわち、候補免疫グロブリンがその抗原と結合する能力に影響する残基の分析が可能になる。このようにして、ＦＲ残基は、標的抗原または複数の標的抗原（例えば、本開示のＴＲＥＭ２タンパク質）に対する親和性の増加などの所望の抗体特性が達成されるように、レシピエント及び取り込み配列から選択及び組み合わせることができる。一般に、ＣＤＲ残基は、抗原結合に影響を及ぼすことに直接かつ最も頻繁に関与している。
【０３０６】
様々な形態のヒト化抗ＴＲＥＭ２抗体が企図される。例えば、ヒト化抗ＴＲＥＭ２抗体は、Ｆａｂなどの抗体フラグメントでよく、これは任意選択で、１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンド、例えば、ＨＳＰ６０とコンジュゲートされる。別法では、ヒト化抗ＴＲＥＭ２抗体は、インタクトな抗体、例えば、インタクトなＩｇＧ１抗体でもよい。
【０３０７】
（４）ヒト抗体
別法では、ヒト抗ＴＲＥＭ２抗体を生成することができる。例えば、免疫化の際に、内因性の免疫グロブリン産生の非存在下でヒト抗体の全レパートリーを産生することが可能なトランスジェニック動物（例えば、マウス）を生産することが可能になった。キメラ及び生殖細胞系列変異マウスにおける抗体の重鎖結合域（ＪＨ）遺伝子のホモ接合型欠損は、内因性抗体産生の完全な阻害をもたらす。そのような生殖細胞系列変異マウスにおけるヒト生殖細胞系列免疫グロブリン遺伝子配列の転移は、抗原投与の際にヒト抗体の産生をもたらす。例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：２５５１（１９９３）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３６２：２５５−２５８（１９９３）；Ｂｒｕｇｇｅｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｙｅａｒ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，７：３３（１９９３）；米国特許第５，５９１，６６９号及びＷＯ  ９７／１７８５２を参照されたい。
【０３０８】
別法では、ファージディスプレイ技術を用いて、免疫化されていないドナー由来の免疫グロブリン可変（Ｖ）ドメイン遺伝子レパートリーから、インビトロにおいてヒト抗ＴＲＥＭ２抗体及び抗体フラグメントを産生することができる。ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５３（１９９０）、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：３８１（１９９１）。この手法によれば、抗体Ｖドメイン遺伝子は、Ｍ１３またはｆｄなどの糸状バクテリオファージのメジャーもしくはマイナーコートタンパク質遺伝子のいずれかにインフレームでクローニングされ、ファージ粒子の表面で機能的抗体フラグメントとして提示される。糸状粒子はファージゲノムの一本鎖ＤＮＡコピーを含むので、抗体の機能特性に基づく選択はまた、それらの特性を示す抗体をコードする遺伝子の選択につながる。したがって、そのファージは、Ｂ細胞のいくつかの特性を模倣する。ファージディスプレイは、例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｋｅｖｉｎ  Ｓ．ａｎｄ  Ｃｈｉｓｗｅｌｌ，Ｄａｖｉｄ  Ｊ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．３：５６４−５７１（１９９３）に概説される様々な様式で行うことができる。いくつかのＶ遺伝子フラグメント源をファージディスプレイに用いることができる。Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８（１９９１）は、免疫化マウスの脾臓由来のＶ遺伝子の小規模ランダムコンビナトリアルライブラリーから、抗オキサゾロン抗体の多様な配列を単離した。Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９１）、またはＧｒｉｆｆｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．１２：７２５−７３４（１９９３）によって記載されている技術に基本的に従って、免疫化されていないヒトドナー由来のＶ遺伝子のレパートリーを構築することができ、また、多様な一連の抗原（自己抗原を含む）に対する抗体を単離することができる。米国特許第５，５６５，３３２号及び第５，５７３，９０５号も参照されたい。加えて、酵母提示技術を用いて、インビトロでヒト抗ＴＲＥＭ２抗体及び抗体フラグメントを生産することができる（例えば、ＷＯ２００９／０３６３７９、ＷＯ２０１０／１０５２５６、ＷＯ２０１２／００９５６８、米国特許出願公開第２００９／０１８１８５５号、米国特許出願公開第２０１０／００５６３８６号、及びＦｅｌｄｈａｕｓ  ａｎｄ  Ｓｉｅｇｅｌ（２００４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２９０：６９−８０）。他の実施形態では、リボソームディスプレイ技術を用いて、インビトロでヒト抗ＴＲＥＭ２抗体及び抗体フラグメントを生産することができる（例えば、Ｒｏｂｅｒｔｓ  ａｎｄ  Ｓｚｏｓｔａｋ（１９９７）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ９４：１２２９７−１２３０２；Ｓｃｈａｆｆｉｔｚｅｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２３１：１１９−１３５；Ｌｉｐｏｖｓｅｋ  ａｎｄ  Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ（２００４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２９０：５１−６７）。
【０３０９】
Ｃｏｌｅら及びＢｏｅｒｎｅｒらの技術もまた、ヒト抗ＴＲＥＭ２モノクローナル抗体の調製に利用可能である（Ｃｏｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，ｐ．７７（１９８５）及びＢｏｅｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７（１）：８６−９５（１９９１）。同様に、ヒト抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒト免疫グロブリンの遺伝子座を、内因性免疫グロブリン遺伝子が部分的にまたは完全に不活性化されているトランスジェニック動物、例えば、マウスに導入することによって製造することができる。投与すると、ヒト抗体産生が認められ、これはあらゆる点で、遺伝子再編成、組み立て、及び抗体レパートリーを含め、ヒトで見られるものと酷似している。この手法は、例えば、米国特許第５，５４５，８０７号、同第５，５４５，８０６号、同第５，５６９，８２５号、同第５，６２５，１２６号、同第５，６３３，４２５号、同第５，６６１，０１６号、ならびに以下の科学出版物：Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：７７９−７８３（１９９２）；Ｌｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：８５６−８５９（１９９４）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：８１２−１３（１９９４），Ｆｉｓｈｗｉｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４：８４５−５１（１９９６）；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４：８２６（１９９６）及びＬｏｎｂｅｒｇ  ａｎｄ  Ｈｕｓｚａｒ，Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５−９３（１９９５）に記載されている。
【０３１０】
最後に、ヒト抗ＴＲＥＭ２抗体はまた、活性化Ｂ細胞によってインビトロで生成してもよい（米国特許第５，５６７，６１０号及び第５，２２９，２７５号を参照されたい）。
【０３１１】
（５）抗体フラグメント
ある特定の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体全体ではなく、抗ＴＲＥＭ２抗体フラグメントを用いることに利点がある。一部の実施形態では、フラグメントサイズが小さいほど、急速なクリアランス及びより良好な脳透過性が可能になる。
【０３１２】
抗体フラグメントの生産に向けて、様々な技術が開発されている。従来、これらのフラグメントは、インタクトな抗体のタンパク質分解を介して得られた（例えば、Ｍｏｒｉｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｍｅｔｈｏｄ．２４：１０７−１１７（１９９２）；及びＢｒｅｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：８１（１９８５）を参照されたい）。しかしながら、これらのフラグメントは、例えば、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体をコードする核酸を用いて、今や組み換え宿主細胞によって直接生産することができる。Ｆａｂ、Ｆｖ、及びｓｃＦｖ抗体フラグメントはすべて、Ｅ．ｃｏｌｉで発現すること及びＥ．ｃｏｌｉから分泌させることができ、ひいては、大量のこれらフラグメントの容易な生産が可能になる。抗ＴＲＥＭ２抗体フラグメントはまた、上記で論じた抗体ファージライブラリーから単離することもできる。別法では、Ｆａｂ’−ＳＨフラグメントは、Ｅ．ｃｏｌｉから直接回収することができ、化学的に結合してＦ（ａｂ’）２フラグメントを形成することができる（Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：１６３−１６７（１９９２））。別の手法によれば、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは、組み換え宿主細胞培養から直接単離することができる。インビボ半減期が延長されたＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２抗体フラグメントの生産は、米国特許第５，８６９，０４６号に記載されている。他の実施形態では、選択される抗体は、一本鎖Ｆｖフラグメント（ｓｃＦｖ）である。ＷＯ９３／１６１８５、米国特許第５，５７１，８９４号及び米国特許第５，５８７，４５８号を参照されたい。抗ＴＲＥＭ２抗体フラグメントはまた、例えば、米国特許第５，６４１，８７０号に記載の「直線状抗体」でよい。そのような直線状抗体フラグメントは、単一特異性でも二重特異性でもよい。
【０３１３】
（６）二重特異性及び多特異性抗体
二重特異性抗体（ＢｓＡｂ）は、同一または別のタンパク質（例えば、本開示の１つまたは複数のＴＲＥＭ２タンパク質）上のものを含め、少なくとも２つの異なるエピトープに対して結合特異性を有する抗体である。別法では、ＢｓＡｂの１つの部分は、標的ＴＲＥＭ２抗原に結合するアームとすることができ、もう一方は、第二のタンパク質に結合するアームと組み合わせることができる。そのような抗体は、全長抗体または抗体フラグメント（例えば、Ｆ（ａｂ’）２二重特異性抗体）に由来し得る。
【０３１４】
二重特異性抗体の製造方法は当技術分野で公知である。全長二重特異性抗体の従来の生産は、２つの免疫グロブリン重鎖／軽鎖対の共発現に基づいており、この場合、その２本の鎖は異なる特異性を有している。Ｍｉｌｌｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３０５：５３７−５３９（１９８３）。免疫グロブリン重鎖及び軽鎖のランダムな取り合わせのため、これらのハイブリドーマ（クアドローマ）は、可能性がある１０個の異なる抗体分子の混合物を産生し、そのうちの１つのみが正しい二重特異性構造を有する。通常アフィニティークロマトグラフィー段階で行われる正しい分子の精製は、かなり煩雑であり、製品収量は低い。同様の手順は、ＷＯ９３／０８８２９及びＴｒａｕｎｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．，１０：３６５５−３６５９（１９９１）に開示されている。
【０３１５】
異なる手法によれば、所望の結合特異性の抗体可変ドメイン（抗体−抗原結合部位）は、免疫グロブリン定常ドメイン配列に融合される。融合は、好ましくは、ヒンジ、ＣＨ２、及びＣＨ３領域の少なくとも一部を含む免疫グロブリン重鎖定常領域とである。軽鎖の結合に必要な部位を含む、融合の少なくとも一方に存在する第１の重鎖定常領域（ＣＨ１）を有することが好ましい。免疫グロブリン重鎖融合及び、所望の場合には、免疫グロブリン軽鎖をコードするＤＮＡが、別々の発現ベクターに挿入され、適切な宿主生物に同時に遺伝子導入される。これは、構築に用いられる３つのポリペプチド鎖の不均等な比が最適収量をもたらす場合の実施形態において、３つのポリペプチドフラグメントの相互の割合の調節において高い柔軟性を与える。しかしながら、少なくとも２本のポリペプチド鎖の等比での発現が高収量をもたらす場合、または、その比が特に重要でない場合に、２本または３本すべてのポリペプチド鎖に対するコード配列を１つの発現ベクターに挿入することは可能である。
【０３１６】
この手法の好ましい一実施形態では、二重特異性抗体は、１つのアームに第１の結合特異性を備えたハイブリッド免疫グロブリン重鎖、及び他のアームにハイブリッド免疫グロブリン重鎖−軽鎖対（第２の結合特異性を与える）からなる。この非対称構造は、二重特異性分子の半分のみの免疫グロブリン軽鎖の存在が、簡単な分離方法を与えるので、不要な免疫グロブリン鎖の組合せからの所望の二重特異性化合物の分離を容易にすることが見出された。この手法は、ＷＯ９４／０４６９０に開示されている。二重特異性抗体生成のさらなる詳細については、例えば、Ｓｕｒｅｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １２１：２１０（１９８６）及びＧａｒｂｅｒ、Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  １３、７９９−８０１（２０１４）を参照されたい。
【０３１７】
ＷＯ９６／２７０１１または米国特許第５，７３１，１６８号に記載の別の手法によれば、１対の抗体分子間の界面は、組み換え細胞培養から回収されるヘテロダイマーの割合（％）を最大にするように操作することができる。好ましい界面は、抗体定常ドメインのＣＨ３領域の少なくとも一部を含む。この方法では、第１の抗体分子の界面からの１つまたは複数の小さいアミノ酸側鎖が、より大きな側鎖（例えば、チロシンまたはトリプトファン）で置き換えられる。大きな側鎖（複数可）と同一または同様のサイズの代償的「空洞」は、大きなアミノ酸側鎖を小さなもの（例えば、アラニンまたはスレオニン）で置き換えることによって、第２の抗体分子の界面に作られる。これは、ホモダイマーなどの不要なその他の最終産物よりヘテロダイマーの収量を増加させる機序を与える。
【０３１８】
抗体フラグメントから二重特異性抗体を生成する技術は、文献に記載されている。例えば、二重特異性抗体は、化学結合を用いて調製することができる。Ｂｒｅｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：８１（１９８５）は、インタクトな抗体がタンパク質分解によって切断されてＦ（ａｂ’）２フラグメントを生成する手順を記載している。これらのフラグメントは、ジチオール錯生成剤亜ヒ酸ナトリウムの存在下で還元され、隣接ジチオールを安定化させ、分子間ジスルフィド形成を防止する。次いで、生成されたＦａｂ’フラグメントは、チオニトロベンゾエート（ＴＮＢ）誘導体に変換される。次いで、Ｆａｂ’−ＴＮＢ誘導体の１つは、Ｆａｂ’−ＴＮＢ誘導体に再変換され、二重特異性抗体を形成する。産生された二重特異性抗体は、酵素の選択的固定化のための薬剤として使用することができる。
【０３１９】
Ｆａｂ’フラグメントは、Ｅ．ｃｏｌｉから直接回収し、化学結合させて二重特異性抗体を形成してもよい。Ｓｈａｌａｂｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７５：２１７−２２５（１９９２）は、完全ヒト化二重特異性抗体Ｆ（ａｂ’）２分子の産生を記載している。各Ｆａｂ’フラグメントは、Ｅ．ｃｏｌｉから別々に分泌されインビトロで低方向化学結合に供されて二重特異性抗体を形成する。このようにして形成された二重特異性抗体は、ＥｒｂＢ２受容体を過剰発現する細胞及び正常ヒトＴ細胞に結合することができ、さらには、ヒト乳房の腫瘍標的に対するヒト細胞傷害性リンパ球の溶解活性を誘発する。
【０３２０】
組み換え細胞培養から直接二価抗体フラグメントを製造及び単離する様々な技術が記載されている。例えば、二価ヘテロダイマーがロイシンジッパーを用いて生産されている。Ｋｏｓｔｅｌｎｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８（５）：１５４７−１５５３（１９９２）。Ｆｏｓ及びＪｕｎタンパク質由来のロイシンジッパーペプチドが、遺伝子融合によって２つの異なる抗体のＦａｂ’部分に結合された。抗体ホモダイマーは、ヒンジ領域で還元されてモノマーを形成し、次いで、再び酸化されて抗体ヘテロダイマーを形成した。Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４−６４４８（１９９３）によって記載された「ダイアボディ」技術は、二重特異性／二価抗体フラグメント製造のための代替機序を提供した。そのフラグメントは、同じ鎖上の２つのドメイン間の対合を可能にするには短すぎるリンカーによって軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に連結された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。したがって、１つのフラグメントのＶＨ及びＶＬドメインは、別のフラグメントの相補的ＶＬ及びＶＨドメインと対にさせられ、それによって、２つの抗原結合部位を形成する。一本鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）ダイマーの使用による二重特異性／二価抗体フラグメント製造のための別の戦略もまた報告されている。Ｇｒｕｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：５３６８（１９９４）参照。
【０３２１】
二重特異性抗体を生成する別の方法は、指定の制御されたＦａｂアーム交換（ｃＦＡＥ）であり、これは、二重特異性ＩｇＧ１（ｂｓＩｇＧ１）を生成する使いやすい方法である。プロトコルは、以下を含む：（ｉ）ＣＨ３ドメインに単一マッチの点変異を含有する２つの親ＩｇＧ１の別々の発現、（ｉｉ）半分子の組換えを可能にするために、インビトロの許容レドックス条件下での親ＩｇＧ１の混合、（ｉｉｉ）鎖間ジスルフィド結合の再酸化を可能にするための還元剤の除去、ならびに（ｉｖ）クロマトグラフィーベースの方法または質量分析（ＭＳ）ベースの方法を使用した交換効率及び最終産生物の分析。プロトコルは、ベンチスケール（マイクログラムからミリグラム）及び大規模製造（キログラム）をモデル化するために設計されたミニバイオリアクタースケール（ミリグラムからグラム）の両方で、規則的なＩｇＧアーキテクチャ、特徴、及び品質属性を有するｂｓＡｂを生成する。良質の精製タンパク質から出発して、９５％以上の交換効率は、２〜３日以内に得ることができる（品質管理を含む）。Ｌａｂｒｉｊｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ９，２４５０−２４６３（２０１４）；及びＧａｒｂｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  １３，７９９−８０１（２０１４）を参照されたい。
【０３２２】
３価以上の抗体も検討される。例えば、三重特異性抗体が調製できる。Ｔｕｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）。
【０３２３】
例示的な二重特異性抗体は、所与の分子（例えば、本開示のＴＲＥＭ２タンパク質）上の２つの異なるエピトープに結合し得る。一部の実施形態では、二重特異性抗体は、本開示のＴＲＥＭ２またはＤＡＰ１２タンパク質などの第１の抗原、及び血液脳関門を越える輸送を促進する第２の抗原に結合する。血液脳関門を越える輸送を促進する多数の抗原は、当技術分野で公知である（例えば、Ｇａｂａｔｈｕｌｅｒ  Ｒ．，Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ  ｔｏ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｄｒｕｇｓ  ａｃｒｏｓｓ  ｔｈｅ  ｂｌｏｏｄ−ｂｒａｉｎ  ｂａｒｒｉｅｒ  ｔｏ  ｔｒｅａｔ  ｂｒａｉｎ  ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．Ｄｉｓ．３７（２０１０）  ４８−５７を参照されたい）。そのような第２の抗原には、限定ではないが、トランスフェリン受容体（ＴＲ）；インスリン受容体（ＨＩＲ）；インスリン様成長因子受容体（ＩＧＦＲ）；低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質１及び２（ＬＰＲ−１及び２）；ＣＲＭ１９７（ジフテリア毒素の無毒性変異体）を含むジフテリア毒素受容体；ＴＭＥＭ３０（Ａ）（Ｆｌｉｐｐａｓｅ）などのラマ単一ドメイン抗体；ＴＡＴ、Ｓｙｎ−Ｂ、またはペネトラチンなどのタンパク質形質導入ドメイン；ポリアルギニンまたは一般的に正電荷を有するペプチド；ＡＮＧ１００５（例えば、Ｇａｂａｔｈｕｌｅｒ、２０１０を参照されたい）などのＡｎｇｉｏｐｅｐペプチド；ならびに血液脳関門内皮細胞上に豊富にある他の細胞表面タンパク質（例えば、Ｄａｎｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ．２０１０  Ｏｃｔ  ２９；５（１０）：ｅ１３７４１を参照されたい）が含まれる。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体に対する第２の抗原には、限定ではないが、本開示のＤＡＰ１２抗原が含まれ得る。他の実施形態では、抗ＤＡＰ１２抗体に対する第２の抗原には、限定ではないが、本開示のＴＲＥＭ２抗原が含まれ得る。他の実施形態では、ＴＲＥＭ２及びＤＡＰ１２の両方に結合する二重特異性抗体は、１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を促進及び増強し得る。他の実施形態では、ＴＲＥＭ２に対する第２の抗原には、限定ではないが、Ａベータペプチド抗原；またはアルファシヌクレインタンパク質抗原；またはＴａｕタンパク質抗原；またはＴＤＰ−４３タンパク質抗原；またはプリオンタンパク質抗原；またはハンチンチンタンパク質抗原；またはＲＡＮ；グリシン−アラニン（ＧＡ）、グリシン−プロリン（ＧＰ）、グリシン−アルギニン（ＧＲ）、プロリン−アラニン（ＰＡ）、もしくはプロリン−アルギニン（ＰＲ）から構成されるジペプチドリピートを含む翻訳産物抗原（ＤＰＲペプチド）が含まれ得る。
【０３２４】
（７）多価抗体
多価抗体は、その抗体が結合する抗原を発現する細胞によって、二価抗体よりも速く内部移行（及び／または異化）され得る。本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体またはその抗体フラグメントは、３つ以上の抗原結合部位の多価抗体（ＩｇＭクラス以外）（例えば、４価抗体）であり得、これは、その抗体のポリペプチド鎖をコードする核酸の組み換え発現によって容易に生産することができる。多価抗体は、ダイマー化ドメイン及び３つ以上の抗原結合部位を含むことができる。好ましいダイマー化ドメインは、Ｆｃ領域またはヒンジ領域を含む。このシナリオでは、抗体は、Ｆｃ領域及び３つ以上の抗原結合部位をＦｃ領域に対してアミノ末端に有するであろう。本明細書の好ましい多価抗体は、３つから約８つ、好ましくは４つの抗原結合部位を含有する。多価抗体は、少なくとも１つのポリペプチド鎖（好ましくは、２つのポリペプチド鎖）を含有し、ポリペプチド鎖（複数可）は、２つ以上の可変ドメインを含む。例えば、ポリペプチド鎖（複数可）は、ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−（Ｘ２）ｎ−Ｆｃを含んでもよく、ここで、ＶＤ１は、第１の可変ドメインであり、ＶＤ２は、第２の可変ドメインであり、Ｆｃは、Ｆｃ領域の１つのポリペプチド鎖であり、Ｘ１及びＸ２は、アミノ酸またはポリペプチドを表し、ｎは、０または１である。同様に、ポリペプチド鎖（複数可）は、ＶＨ−ＣＨ１−柔軟なリンカー−ＶＨ−ＣＨ１−Ｆｃ領域鎖；またはＶＨ−ＣＨ１−ＶＨ−ＣＨ１−Ｆｃ領域鎖を含んでもよい。本明細書の多価抗体は好ましくは、少なくとも２つの（好ましくは、４つの）軽鎖可変ドメインポリペプチドをさらに含む。本明細書の多価抗体は、例えば、約２つから約８つの軽鎖可変ドメインポリペプチドを含んでもよい。本明細書で検討される軽鎖可変ドメインポリペプチドは、軽鎖可変ドメインを含み、任意選択で、ＣＬドメインをさらに含む。多価抗体は、ＴＲＥＭ２抗原、さらには限定ではないが、追加の抗原であるＡベータペプチド抗原；またはアルファシヌクレインタンパク質抗原；またはＴａｕタンパク質抗原；またはＴＤＰ−４３タンパク質抗原；またはプリオンタンパク質抗原；またはハンチンチンタンパク質抗原；またはＲＡＮ；グリシン−アラニン（ＧＡ）、グリシン−プロリン（ＧＰ）、グリシン−アルギニン（ＧＲ）、プロリン−アラニン（ＰＡ）、もしくはプロリン−アルギニン（ＰＲ）から構成されるジペプチドリピートを含む翻訳産物抗原（ＤＰＲペプチド）；インスリン受容体；インスリン様成長因子受容体を認識し得る。血液脳関門を越える抗体移動を促進する、トランスフェリン受容体または他の任意の抗原。
【０３２５】
（８）エフェクター機能の操作
エフェクター機能を修飾する、及び／または抗体の血清半減期を増加させるために、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体を修飾することがさらに望ましいことがある。例えば、定常領域上のＦｃ受容体結合部位は、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害を低減させるために、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及び／またはＦｃγＲＩＩＩなどの特定のＦｃ受容体に対する結合親和性を除去する、または低減させるように修飾され、または変異してもよい。一部の実施形態では、エフェクター機能は、抗体の（例えば、ＩｇＧのＣＨ２ドメインの）Ｆｃ領域のＮ−グリコシル化を除去することによって損なわれる。一部の実施形態では、エフェクター機能は、ＰＣＴ  ＷＯ９９／５８５７２及びＡｒｍｏｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ４０：５８５−５９３（２００３）；Ｒｅｄｄｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １６４：１９２５−１９３３（２０００）に記載されているとおり、ヒトＩｇＧの２３３〜２３６、２９７、及び／または３２７〜３３１などの領域を修飾することによって損なわれる。他の実施形態では、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害及び抗体依存性細胞貪食を含む体液性応答を活性化することなく、隣接細胞上のＴＲＥＭ２抗体のクラスター化を増加させるための、ＩＴＩＭ含有ＦｃｇＲＩＩｂ（ＣＤ３２ｂ）に対する選択性を増加させるために、エフェクター機能を修飾するように本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体を修飾することが望ましくあり得る。
【０３２６】
抗体の血清半減期を増加させるために、例えば、米国特許第５，７３９，２７７号に記載されているとおり、エピトープに結合するサルベージ受容体を、抗体（特に、抗体フラグメント）に取り込むことがある。本明細書で使用される場合、「エピトープに結合するサルベージ受容体」といいう用語は、ＩｇＧ分子のインビボ血清半減期の増加を担う、ＩｇＧ分子（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４）のＦｃ領域のエピトープを指す。
【０３２７】
（９）他のアミノ酸配列の修飾
本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体またはそれらの抗体フラグメントのアミノ酸配列修飾も企図される。例えば、抗体または抗体フラグメントの結合親和性及び／または他の生物学的特性を改善することは、望ましいことがある。抗体または抗体フラグメントのアミノ酸配列バリアントは、抗体または抗体フラグメントをコードする核酸に、適切なヌクレオチド変化を導入することによって、またはペプチド合成によって調製される。そのような修飾は、例えば、抗体のアミノ酸配列内の残基からの欠失、及び／またはそれらの挿入、及び／またはそれらの置換を含む。欠失、挿入、及び置換の任意の組み合わせが、最終構築物に到達するために行われる。ただし、最終構築物は、所望の特徴（すなわち、本開示のＴＲＥＭ２タンパク質に結合する能力またはこれと物理的に相互作用する能力）を有する。アミノ酸変化は、グリコシル化部位の数または位置を変化させることなどの抗体の翻訳後プロセスを改変し得る。
【０３２８】
変異誘発に好ましい位置の抗ＴＲＥＭ２抗体の特定の残基または領域を同定するための有用な方法は、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ａｎｄ  ＷｅｌｌｓによってＳｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１−１０８５（１９８９）に記載されているとおりの「アラニンスキャニング変異誘発」と呼ばれる。ここで、残基または標的残基のグループ（例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、及びｇｌｕなどの電荷を持つ残基）が同定され、標的抗原とのアミノ酸の相互作用に影響を与えるために、中性または負に荷電したアミノ酸（最も好ましくは、アラニンまたはポリアラニン）によって交換される。次いで、置換に対する機能的感受性を示すそれらのアミノ酸位置は、置換の部位に、またはそれらに対し、さらなるまたは他のバリアントを導入することによって精密化される。したがって、アミノ酸配列変化を導入するための部位が予め決定されているが、変異それ自体の性質を予め決定する必要はない。例えば、所与の部位での変異の性能を分析するために、アラニンスキャニングまたはランダム変異導入は、標的コドンまたは領域で行われ、発現した抗体バリアントは、所望の活性についてスクリーニングされる。
【０３２９】
アミノ酸配列挿入は、長さが１残基〜１００以上の残基を含有するポリペプチドの範囲のアミノ（「Ｎ」）末端融合及び／またはカルボキシ（「Ｃ」）末端融合、ならびに、単一または複数のアミノ酸残基の配列間挿入を含む。末端挿入の例には、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体または細胞毒性ポリペプチドに融合した抗体が含まれる。抗体分子の他の挿入バリアントには、抗体の血清半減期を増加させる酵素またはポリペプチドに対する抗体のＮ末端またはＣ末端への融合が含まれる。
【０３３０】
別の種類のバリアントは、アミノ酸置換バリアントである。これらのバリアントでは、抗体分子中の少なくとも１つのアミノ酸残基が、異なる残基によって置き換えられている。置換変異誘発にとって最重要な部位は、超可変領域を含むが、ＦＲ改変も企図される。保存的置換は、「好ましい置換」の見出しの下の以下の表Ｃに示される。このような置換が生物学的活性の変化をもたらす場合、表Ｃの「例示的置換」と呼ばれる、またはアミノ酸クラスに関して以下にさらに記載されるとおりの、より実質的な変化が導入され、産物はスクリーニングされ得る。
表Ｃ：アミノ酸置換
2018537956.tif 000010
【０３３１】
抗体の生物学的特性における実質的な修飾は、（ａ）例えば、シートもしくはヘリックスコンフォメーションとしての、置換の領域におけるポリペプチド骨格の構造、（ｂ）標的部位での分子の電荷もしくは疎水性、または（ｃ）側鎖のかさ高さ、を維持することに及ぼす影響が著しく異なる置換を選択することによって達成される。天然に存在する残基は、一般的な側鎖特性に基づき、グループに分けられる。
（１）疎水性：ノルロイシン、ｍｅｔ、ａｌａ、ｖａｌ、ｌｅｕ、ｉｌｅ；
（２）中性親水性：ｃｙｓ、ｓｅｒ、ｔｈｒ；
（３）酸性：ａｓｐ、ｇｌｕ；
（４）塩基性：ａｓｎ、ｇｌｎ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、ａｒｇ；
（５）鎖の配向に影響を与える残基：ｇｌｙ、ｐｒｏ；及び
（６）芳香族：ｔｒｐ、ｔｙｒ、ｐｈｅ。
【０３３２】
非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーを、別のクラスに置き換えることを伴う。
【０３３３】
抗体の適切なコンフォメーションを維持することに関与しない任意のシステイン残基はまた、分子の酸化安定性を改善し、異常な架橋を防止するために、一般にセリンで置換されてもよい。逆に、システイン結合（複数可）は、（特に抗体がＦｖフラグメンなどの抗体フラグメントである場合）その安定性を改善するために抗体に添加されてもよい。
【０３３４】
特に好ましい種類の置換バリアントは、親抗体（例えば、ヒト化またはヒト抗ＴＲＥＭ２抗体）の１つまたは複数の超可変領域残基を置換することを含む。一般に、さらなる開発のために選択される得られたバリアント（複数可）は、それらが生成される親抗体と比較して、改善された生物学的特性を有するであろう。そのような置換バリアントを生成するための便利な手段は、ファージディスプレイを使用した親和性成熟を含む。簡単に述べると、いくつかの超可変領域部位（例えば、６〜７部位）は、各部位で全ての可能なアミノ酸置換を生成するために変異する。そうして生成された抗体バリアントは、各粒子内にパッケージングされたＭ１３の遺伝子ＩＩＩ産物に対する融合物として、繊維状ファージ粒子から一価様式でディスプレイされる。次いで、ファージディスプレイされたバリアントは、本明細書に開示されるとおり、それらの生物学的活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングされる。修飾に対する候補超可変領域部位を同定するためには、抗原結合に有意に寄与する超可変領域残基を同定するアラニンスキャニング変異誘発を実施することができる。別法では、または加えて、抗体及び抗原（例えば、本開示のＴＲＥＭ２タンパク質）の接触点を同定するために、抗原−抗体複合体の結晶構造を分析することが有益であることがある。そのような接触残基及び隣接残基は、本明細書で詳述される技術による置換の候補である。そのようなバリアントが生成されると、バリアントのパネルは、本明細書に記載されているとおりに、スクリーニングを受け、１つまたは複数の関連するアッセイにおいて優れた特性を有する抗体が、さらなる開発のために選択され得る。
【０３３５】
抗体の別の種類のアミノ酸バリアントは、抗体の元のグリコシル化パターンを改変する。改変とは、抗体に見出される１つまたは複数の炭水化物部分を欠失させること、及び／または抗体に存在しない１つまたは複数のグリコシル化部位を付加することを意味する。
【０３３６】
抗体のグリコシル化は典型的には、Ｎ結合型またはＯ結合型のいずれかである。Ｎ結合型は、アスパラギン残基の側鎖への炭化水素部分の付加を指す。トリペプチド配列アスパラギン−Ｘ−セリン及びアスパラギン−Ｘ−トレオニン（Ｘはプロリンを除く任意のアミノ酸である）は、アスパラギン側鎖への炭水化物部分の酵素的付加のための認識配列である。したがって、ポリペプチドのこれらのトリペプチド配列のいずれかが存在すると、潜在的なグリコシル化部位が作製される。Ｏ結合型グリコシル化は、ヒドロキシアミノ酸、最も一般的にはセリンまたはトレオニンへの糖Ｎ−アセチルガラクトサミン、ガラクトース、またはキシロースのうちの１つの付加を指すが、５−ヒドロキシプロリンまたは５−ヒドロキシリシンも使用され得る。
【０３３７】
抗体へのグリコシル化部位の付加は、抗体が、（Ｎ結合型グリコシル化部位のための）上記のトリペプチド配列のうちの１つまたは複数を含有するように、アミノ酸配列を改変することによって、都合よく達成される。改変はまた、元の抗体（Ｏ結合型グリコシル化部位のための）の配列に、１つまたは複数のセリンまたはトレオニン残基を付加することによって、またはこれらによって置換することによって、行われ得る。
【０３３８】
抗ＩｇＥ抗体のアミノ酸配列バリアントをコードする核酸分子は、当技術分野で公知の様々な方法によって調製される。これらの方法には、限定されないが、天然供給源からの単離（天然に存在するアミノ酸配列バリアントの場合）またはオリゴヌクレオチド媒介性（もしくは部位特異的）変異誘発による調製、ＰＣＲ変異誘発、ならびに、先に調製されたバリアントまたは非バリアントバージョンの抗体（例えば、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体）または抗体フラグメントのカセット変異誘発が含まれる。
【０３３９】
（１０）他の抗体修飾
本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体、またはその抗体フラグメントは、当技術分野で公知であり、容易に入手可能である、追加の非タンパク質性部分を含有するように、または当技術分野で公知であり、容易に入手可能である異なる種類の薬物コンジュゲートを含有するように、さらに修飾することができる。好ましくは、抗体の誘導体化に適した部分は、水溶性ポリマーである。水溶性ポリマーの非限定例には、限定されないが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマーまたはランダムコポリマーのいずれか）、及びデキストランまたはポリ（ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、ならびにそれらの混合物が含まれる。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中でのその安定性によって、製造において利点を有することがある。ポリマーは、任意の分子量のものであってよく、分枝状または非分枝状であってもよい。抗体に付着するポリマーの数は、変化してもよく、複数のポリマーが付着する場合、それらは、同一、または異なる分子であり得る。一般に、誘導体化に使用されるポリマーの数及び／または種類は、限定されないが、改善されるべき抗体の特定の特性または機能、抗体誘導体が、規定された条件下での治療に使用されるかどうかなどを含む考察に基づき決定することができる。そのような技術及び他の適切な製剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２０ｔｈ  Ｅｄ．，Ａｌｆｏｎｓｏ  Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｅｄ．，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  ａｎｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ（２０００）に開示されている。
【０３４０】
薬物コンジュゲーションは、特定の腫瘍マーカー（例えば、理想的には、腫瘍細胞内または腫瘍細胞上にのみ見出されるべきタンパク質）を特異的に標的とする抗体への生物学的活性細胞傷害性（抗がん）ペイロードまたは薬物の連結を含む。抗体は、体内でこれらのタンパク質を追跡し、がん細胞の表面に付着する。抗体と標的タンパク質（抗原）との間の生化学反応は、腫瘍細胞でシグナルを誘発し、次いで、腫瘍細胞は、細胞毒素と一緒に抗体を吸収するまたは内部移行させる。ＡＤＣが内部移行された後に、細胞傷害性薬物が放出され、がんを死滅させる。この標的化のために、理想的には、薬物は、より低い副作用を有し、他の化学療法薬より広い治療ウインドウを与える。抗体をコンジュゲートする技術は、当技術分野で公知である（例えば、Ｊａｎｅ  ｄｅ  Ｌａｒｔｉｇｕｅ，ＯｎｃＬｉｖｅ  Ｊｕｌｙ  ５，２０１２；ＡＤＣ  Ｒｅｖｉｅｗ  ｏｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｒｕｇ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ；及びＤｕｃｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１０）．Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２１（１）：５−１３を参照されたい）。
【０３４１】
結合アッセイ及び他のアッセイ
本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、例えば、ＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロットなどの公知の方法によって、抗原結合活性について試験され得る。
【０３４２】
一部の実施形態では、競合アッセイは、ＴＲＥＭ２への結合について、表２Ａ、２Ｂ、３Ａ、３Ｂ、４Ａ、４Ｂ、７Ａ、及び７Ｂに列挙されている、１Ａ７、３Ａ２、３Ｂ１０、６Ｇ１２、６Ｈ６、７Ａ９、７Ｂ３、８Ａ１、８Ｅ１０、８Ｆ１１、８Ｆ８、９Ｆ５、９Ｇ１、９Ｇ３、１０Ａ９、１０Ｃ１、１１Ａ８、１２Ｅ２、１２Ｆ９、１２Ｇ６、２Ｃ７、２Ｆ５、３Ｃ１、４Ｄ７、４Ｄ１１、６Ｃ１１、６Ｇ１２、７Ａ３、７Ｃ５、７Ｅ９、７Ｆ６、７Ｇ１、７Ｈ１、８Ｃ３、８Ｆ１０、１２Ａ１、１Ｅ９、２Ｃ５、３Ｃ５、４Ｃ１２、４Ｆ２、５Ａ２、６Ｂ３、７Ｄ１、７Ｄ９、１１Ｄ８、８Ａ１２、１０Ｅ７、１０Ｂ１１、１０Ｄ２、７Ｄ５、２Ａ７、３Ｇ１２、６Ｈ９、８Ｇ９、９Ｂ４、１０Ａ１、１１Ａ８、１２Ｆ３、２Ｆ８、１０Ｅ３、１Ｈ７、２Ｆ６、２Ｈ８、３Ａ７、７Ｅ５、７Ｆ８、１１Ｈ５、７Ｃ５、４Ｆ１１、１２Ｄ９、１Ｂ４ｖ１、１Ｂ４ｖ２、６Ｈ２、７Ｂ１１ｖ１、７Ｂ１１ｖ２、１８Ｄ８、１８Ｅ４ｖ１、１８Ｅ４ｖ２、２９Ｆ６ｖ１、２９Ｆ６ｖ２、４０Ｄ５ｖ１、４０Ｄ５ｖ２、４３Ｂ９、４４Ａ８ｖ１、４４Ａ８ｖ２、４４Ｂ４ｖ１、及び４４Ｂ４ｖ２及びそれらのヒト化バリアント、ならびに／またはヒト化抗体Ｍ７Ｅ５７２９１から選択される抗体のいずれかと競合する抗体を同定するために使用され得る。ある特定の実施形態では、そのような競合抗体は、表１に列挙されている、４Ｄ１１、７Ｃ５、６Ｇ１２、８Ｆ１１、８Ｅ１０、７Ｅ５、７Ｆ８、８Ｆ８、１Ｈ７、２Ｈ８、３Ａ２、３Ａ７、３Ｂ１０、４Ｆ１１、６Ｈ６、７Ａ９、７Ｂ３、８Ａ１、９Ｆ５、９Ｇ１、９Ｇ３、１０Ａ９、１１Ａ８、１２Ｄ９、１２Ｆ９、１Ｂ４ｖ１、１Ｂ４ｖ２、６Ｈ２、７Ｂ１１ｖ１、７Ｂ１１ｖ２、１８Ｄ８、１８Ｅ４ｖ１、１８Ｅ４ｖ２、及びそれらのヒト化誘導体、ならびに／またはヒト及び／もしくはヒト化Ｍ７Ｅ５７２９１から選択される抗体のいずれかが結合する同じエピトープ（例えば、線状またはコンフォメーションエピトープ）に結合する。抗体が結合するエピトープをマッピングするための詳細な例示的方法は、Ｍｏｒｒｉｓ（１９９６）  “Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，”  ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｖｏｌ．６６（Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ）で提供されている。
【０３４３】
例示的な競合アッセイでは、固定化ＴＲＥＭ２または細胞表面上にＴＲＥＭ２を発現する細胞は、ＴＲＥＭ２に結合する第１の標識抗体（例えば、ヒトまたは非ヒト霊長類）及びＴＲＥＭ２への結合について第１の抗体と競合するその能力について試験されている第２の非標識抗体を含む溶液中でインキュベートされる。第２の抗体は、ハイブリドーマ上清中に存在することがある。対照として、固定化ＴＲＥＭ２またはＴＲＥＭ２を発現する細胞は、第１の標識抗体を含むが、第２の非標識抗体を含まない溶液中でインキュベートされる。ＴＲＥＭ２への第１の抗体の結合を許容する条件下でインキュベートした後に、過剰の非結合抗体が除去され、固定化ＴＲＥＭ２またはＴＲＥＭ２を発現する細胞と会合した標識の量が測定される。固定化ＴＲＥＭ２またはＴＲＥＭ２を発現する細胞と会合した標識の量が、対照サンプルと比較して試験サンプル中で実質的に低減する場合、それは、第２の抗体が、ＴＲＥＭ２への結合について、第１の抗体と競合することを示す。Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（１９８８）  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  ｃｈ．１４（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ）を参照されたい。
【０３４４】
核酸、ベクター、及び宿主細胞
本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号に記載されているとおりの組換え方法及び組成物を使用して生産され得る。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体のいずれかをコードするヌクレオチド配列を有する単離核酸が提供される。そのような核酸は、抗ＴＲＥＭ２抗体のＶＬを含有するアミノ酸配列及び／またはＶＨを含有するアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖及び／または重鎖）をコードしてもよい。一部の実施形態では、そのような核酸を含有する１つまたは複数のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。一部の実施形態では、そのような核酸を含有する宿主細胞も提供される。一部の実施形態では、宿主細胞は、（１）抗体のＶＬを含有するアミノ酸配列及び抗体のＶＨを含有するアミノ酸配列をコードする核酸を含有するベクター、または（２）抗体のＶＬを含有するアミノ酸配列をコードする核酸を含有する第１のベクター及び抗体のＶＨを含有するアミノ酸配列をコードする核酸を含有する第２のベクターを含有する（例えば、これらを形質導入されている）。一部の実施形態では、宿主細胞は、真核細胞、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞またはリンパ細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。本開示の宿主細胞にはまた、限定ではないが、単離細胞、インビトロ培養細胞、及びエクスビボ培養細胞が含まれる。
【０３４５】
本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体の作製方法が提供される。一部の実施形態では、方法は、抗ＴＲＥＭ２抗体をコードする核酸を含有する本開示の宿主細胞を、抗体の発現に好適な条件下で培養することを含む。一部の実施形態では、抗体は、その後、宿主細胞（または宿主細胞培養培地）から回収される。
【０３４６】
本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体を組み換え生産するためには、抗ＴＲＥＭ２抗体をコードする核酸を単離し、これを、宿主細胞におけるさらなるクローニング及び／または発現のために、１つまたは複数のベクター中に挿入する。そのような核酸は、従来の手順を使用して（例えば、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）、容易に単離され、配列決定され得る。
【０３４７】
本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体のいずれかをコードする核酸配列、または本明細書に記載されているそれらのフラグメントポリペプチド（抗体を含む）を含有する適切なベクターには、限定ではないが、クローニングベクター及び発現ベクターが含まれる。適切なクローニングベクターは、標準的な技術に従って構築することができる、または当技術分野で入手可能な多数のクローニングベクターから選択されてもよい。選択されたクローニングベクターは、使用されることが意図されている宿主細胞に従って変化することがあるが、有用なクローニングベクターは一般に、自己複製する能力を有し、特定の制限エンドヌクレアーゼのための単一の標的を有してもよく、及び／またはベクターを含有するクローンを選択する際に使用することができるマーカーの遺伝子を保有してもよい。適切な例には、プラスミド及び細菌ウイルス、例えば、ｐＵＣ１８、ｐＵＣ１９、Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（例えば、ｐＢＳ  ＳＫ＋）及びその誘導体、ｍｐｌ８、ｍｐｌ９、ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９、ＣｏｌＥ１、ｐＣＲ１、ＲＰ４、ファージＤＮＡ、ならびにｐＳＡ３及びｐＡＴ２８などのシャトルベクターが含まれる。これら及び他の多くのクローニングベクターは、ＢｉｏＲａｄ、Ｓｔｒａｔｅｇｅｎｅ、及びＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎなどの販売業者から入手可能である。
【０３４８】
発現ベクターは一般に、本開示の核酸を含有する複製可能なポリヌクレオチド構築物である。発現ベクターは、エピソームまたは染色体ＤＮＡの不可欠な部分のいずれかとして、宿主細胞において複製可能であることがある。適切な発現ベクターには、限定されないが、プラスミド、アデノウイルスを含むウイルスベクター、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルス、コスミド及びＰＣＴ公報ＷＯ８７／０４４６２号に開示されている発現ベクター（複数可）が含まれる。ベクター構成成分は一般に、限定されないが、シグナル配列、複製起点、１つ以上のマーカー遺伝子、適切な転写制御エレメント（例えば、プロモーター、エンハンサー、及びターミネーター）のうちの１つまたは複数を含み得る。発現（すなわち、翻訳）のために、リボソーム結合部位、翻訳開始部位、及び終止コドンなどの１つまたは複数の翻訳制御エレメントもまた通常必要とされる。
【０３４９】
目的の核酸を含有するベクターは、電気穿孔法；塩化カルシウム、塩化ルビジウム、リン酸カルシウム、ＤＥＡＥ−デキストラン、または他の物質を用いる遺伝子導入；マイクロプロジェクタイルボンバードメント；リポフェクション；及び感染（例えば、ベクターは、ワクシニアウイルスなどの感染性因子である）を含む多くの適切な手段のいずれかによって、宿主細胞内に導入することができる。ベクターまたはポリヌクレオチドを導入する選択は多くの場合に、宿主細胞の特徴に依存するであろう。一部の実施形態では、ベクターは、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体をコードする１つまたは複数のアミノ酸配列を含有する核酸を含有する。
【０３５０】
ベクターをコードする抗体のクローニングまたは発現に適した宿主細胞には、原核細胞または真核細胞が含まれる。例えば、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、特に、グリコシル化及びＦｃエフェクター機能が必要でないときには、細菌において生産されてもよい。細菌における抗体フラグメント及びペプチドの発現については、（例えば、米国特許第５，６４８，２３７号、同第５，７８９，１９９号、及び同第５，８４０，５２３号；ならびに、Ｃｈａｒｌｔｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３），ｐｐ．２４５−２５４，ｄｅｓｃｒｉｂｉｎｇ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｆｒａｇｍｅｎｔｓ  ｉｎ  Ｅ．ｃｏｌｉ．）。発現後に、抗体は、可溶性画分中の細菌細胞ペーストから単離されてもよく、さらに精製され得る。
【０３５１】
原核生物に加えて、糸状菌または酵母などの真核微生物も、グルコシル化経路が「ヒト化」されて、部分的または完全なヒトグルコシル化パターンを有する抗体の産生をもたらす真菌及び酵母株を含む抗体をコードするベクターに適したクローニングまたは発現宿主である（例えば、Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２：１４０９−１４１４（２００４）；及びＬｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４：２１０−２１５（２００６））。
【０３５２】
グリコシル化抗体の発現に適した宿主細胞はまた、多細胞生物（無脊椎動物及び脊椎動物）に由来し得る。無脊椎動物細胞の例には、植物及び昆虫細胞が含まれる。特にＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞の遺伝子導入のために、昆虫細胞と共に使用され得る多数のバキュロウイルス株が同定されている。植物細胞培養物も、宿主として利用することができる（例えば、トランスジェニック植物において抗体を産生するためのＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ（商標）技術について記載している米国特許第５，９５９，１７７号、同第６，０４０，４９８号、同第６，４２０，５４８号、同第７，１２５，９７８号、及び同第６，４１７，４２９号）。
【０３５３】
脊椎動物細胞も、宿主として使用され得る。例えば、懸濁液中で成長するように構成される哺乳動物細胞系が有用であり得る。有用な哺乳動物宿主細胞系の他の例は、ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ−７）；ヒト胎児由来腎臓系（例えば、Ｇｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ  Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７）に記載されている２９３または２９３細胞）；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）；マウスセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３−２５１（１９８０）に記載されているとおりのＴＭ４細胞）；サル腎臓細胞（ＣＶ１）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６）；ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ）；バッファローラット肝細胞（ＢＲＬ  ３Ａ）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８）；ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ  Ｇ２）；マウス乳房腫瘍（ＭＭＴ  ０６０５６２）；例えば、Ｍａｔｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ  Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４−６８（１９８２）に記載されているとおりのＴＲＩ細胞；ＭＲＣ５細胞；及びＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳動物宿主細胞系には、ＤＨＦＲ−ＣＨＯ細胞を含むチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（Ｕｒｌａｕｂ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：４２１６（１９８０））；ならびにＹ０、ＮＳ０、及びＳｐ２／０などの骨髄腫細胞系が含まれる。抗体生産に適した特定の哺乳動物宿主細胞系の概説については、例えば、Ｙａｚａｋｉ  ａｎｄ  Ｗｕ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ），ｐｐ．２５５−２６８（２００３）を参照されたい。
【０３５４】
医薬組成物
本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、抗体を適切な薬学的に許容される担体または希釈剤と組み合わせることによって、治療的投与のための様々な製剤に組み込むことができ、固体、半固体、液体または気体の形態の製剤に製剤化され得る。このような製剤の例には、限定ではないが、錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、軟膏、液剤、坐剤、注射剤、吸入剤、ゲル剤、マイクロスフェア、及びエアゾール剤が含まれる。医薬組成物は、所望の製剤に応じて、動物またはヒト投与のための医薬組成物を製剤化するために一般的に使用されるビヒクルである、薬学的に許容される非毒性担体または希釈剤を含むことができる。希釈剤は、組み合わせの生物活性に影響を与えないように選択される。そのような希釈剤の例には、限定ではないが、蒸留水、緩衝水、生理食塩水、ＰＢＳ、リンゲル液、デキストロース溶液、及びハンクス液が含まれる。本開示の医薬組成物または製剤は、他の担体、アジュバント、または非毒性、非治療的、非免疫原性安定剤、賦形剤などをさらに含むことができる。組成物はまた、ｐＨ調整剤及び緩衝剤、毒性調整剤、湿潤剤、ならびに界面活性剤など、生理学的条件に近づける追加の物質を含むことができる。
【０３５５】
本開示の医薬組成物はまた、例えば酸化防止剤などの様々な安定剤のいずれかを含むことができる。医薬組成物が、ポリペプチドを含むとき、ポリペプチドは、ポリペプチドのインビボ安定性を増強する、または別段に薬理学的性質を増強する（例えば、ポリペプチドの半減期を増加させる、その毒性を低下させる、溶解性または取り込みを増強する）様々な周知の化合物と複合体化することができる。そのような修飾または複合化剤の例には、限定ではないが、スルファート、グルコナート、シトラート、及びホスファートが含まれる。組成物のポリペプチドはまた、インビボ属性を増強する分子と複合体化することができる。そのような分子には、限定ではないが、炭化水素、ポリアミン、アミノ酸、他のペプチド、イオン（例えば、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、マンガン）及び脂質が含まれる。
【０３５６】
様々な種類の投与に適する製剤のさらなる例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ，１７ｔｈ  ｅｄ．（１９８５）に見出すことができる。薬物送達のための方法の簡単な概説については、Ｌａｎｇｅｒ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７−１５３３（１９９０）を参照されたい。
【０３５７】
経口投与では、活性成分は、カプセル剤、錠剤、及び散剤などの固体剤形、または、エリキシル剤、シロップ剤、及び懸濁剤などの液体剤形で投与することができる。活性成分（複数可）は、グルコース、ラクトース、スクロース、マンニトール、デンプン、セルロースまたはセルロース誘導体、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、ナトリウムサッカリン、タルカム、炭酸マグネシウムなどの不活性成分及び粉末化担体と一緒に、ゼラチンカプセルにカプセル化することができる。所望の色、味、安定性、緩衝能、分散、または他の公知の望ましい特徴を提供するために添加され得る追加の不活性成分の例は、ベンガラ、シリカゲル、ラウリル硫酸ナトリウム、二酸化チタン、及び食用白色インクである。類似の希釈剤は、圧縮錠剤を作製するために使用することができる。錠剤及びカプセルの両方は、数時間にわたる薬物の連続放出を提供するための持続放出製品として製造することができる。圧縮錠剤は、不快な味を隠し、錠剤を大気から保護するために、糖衣を施す、もしくはフィルムコーティングする、または胃腸管における選択的崩壊のために腸溶コーティングすることができる。経口投与のための液体剤形は、患者の容認を増加させるための着色剤及び香味剤を含有することができる。
【０３５８】
非経口投与に適した製剤には、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、及び意図されているレシピエントの血液と製剤を等張にする溶質を含有することができる水性及び非水性の等張滅菌注射溶液、ならびに、懸濁剤、可溶化剤、増粘剤、安定剤、及び防腐剤を含むことができる水性及び非水性滅菌懸濁液が含まれる。
【０３５９】
医薬組成物を製剤化するために使用される成分は、好ましくは高純度であり、潜在的に有害な汚染物質を実質的に含まない（例えば、少なくともＮａｔｉｏｎａｌ  Ｆｏｏｄ（ＮＦ）グレード、一般に少なくとも分析グレード、より典型的には少なくとも医薬品グレード）。さらに、インビボでの使用を意図される組成物は通常、無菌である。所与の化合物を使用前に合成しなければならない限り、得られる製品は典型的には、合成または精製プロセス中に存在し得る任意の潜在的な毒物、特に任意のエンドトキシンを実質的に含まない。非経口投与のための組成物はまた、無菌で、実質的に等張性があり、ＧＭＰ条件下で作製される。
【０３６０】
製剤は、脳または中枢神経系での保持及び安定化のために最適化されてもよい。薬剤が頭蓋区画に投与される場合、薬剤が区画に保持され、血液脳関門に拡散しない、または別段にこれを越えないことが望ましい。安定化技術は、分子量の増加を達成するために、架橋、多量体化、またはポリエチレングリコール、ポリアクリルアミド、中性タンパク質担体などの基への結合を含む。
【０３６１】
保持を増加させるための他の方策は、生分解性または生体分解性インプラントへの本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体などの抗体の封入を含む。治療活性な薬剤の放出速度は、ポリマーマトリックスを介した輸送及びインプラントの生分解の速度によって制御される。薬剤のポリマーバリアを介した輸送はまた、ポリマーバリアを、薬物、インプラントの形状などに対してより透過性にするために、化合物の溶解性、ポリマーの親水性、ポリマー架橋の程度、吸水時のポリマーの膨張によって影響を受けるであろう。インプラントは、移植部位として選択された領域のサイズ及び形状に相応する大きさのものである。インプラントは、粒子、シート、パッチ、プラーク、繊維、マイクロカプセルなどであってよく、選択された挿入部位に適合する任意のサイズまたは形状のものであってもよい。
【０３６２】
インプラントは、モノリシックであってもよい、すなわち、活性薬剤が、ポリマーマトリックス全体に均一に分布している、またはカプセル化されており、活性薬剤のリザーバは、ポリマーマトリックスによってカプセル化されている。用いられるべきポリマー組成物の選択は、投与部位、所望の治療期間、患者の耐性、治療されるべき疾患の性質などによって変わるであろう。ポリマーの特性は、移植部位での生分解性、目的の薬剤との適合性、カプセル化の容易さ、生理学的環境における半減期を含むであろう。
【０３６３】
用いられ得る生分解性ポリマー組成物は、分解された時に、モノマーを含む生理学的に許容される分解生成物をもたらす有機エステルまたはエーテルである。単独のまたは他のモノマーと組み合わせた無水物、アミド、オルトエステルなども使用され得る。ポリマーは、縮合ポリマーとなるであろう。ポリマーは、架橋されていても、または架橋されていなくてもよい。特に興味深いのは、ヒドロキシ脂肪族カルボン酸のポリマー、ホモポリマーまたはコポリマーのいずれか、及び多糖類である。目的のポリエステルには、Ｄ−乳酸、Ｌ−乳酸、ラセミ乳酸、グリコール酸、ポリカプロラクトン、及びそれらの組み合わせのポリマーが含まれる。Ｌ−ラクタートまたはＤ−ラクタートを用いることによって、ポリマーの遅い生物分解が達成される一方で、分解は、ラセミ体で実質的に増強される。グリコール酸及び乳酸のコポリマーは、特に重要であり、生分解速度はグリコール酸と乳酸との比によって制御される。最も急速に分解されるコポリマーは、おおよそ同量のグリコール酸及び乳酸を有し、ホモポリマーのいずれかが分解に対してより耐性がある。グリコール酸と乳酸との比はまた、インプラントの脆性に影響を与えることになり、より柔軟なインプラントが、より大きな形状にとって望ましい。目的の多糖類には、非水溶性、約５ｋＤ〜５００ｋＤの分子量などであることによって特徴づけられるアルギン酸カルシウム、及び官能化セルロース、特にカルボキシメチルセルロースエステルがある。生分解性ヒドロゲルも、本発明のインプラントに用いられてよい。ヒドロゲルは典型的には、液体を吸収する能力によって特徴づけられるコポリマー材料である。用いられ得る例示的な生分解性ヒドロゲルは、Ｈｅｌｌｅｒ  ｉｎ：Ｈｙｄｒｏｇｅｌｓ  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｎ．Ａ．Ｐｅｐｐｅｓ  ｅｄ．，Ｖｏｌ．ＩＩＩ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，Ｆｌａ．，１９８７，ｐｐ  １３７−１４９に記載されている。
【０３６４】
薬学的投薬量
本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体を含有する本開示の医薬組成物は、ボーラスとしての、または一定期間にわたる連続注入による静脈内投与、筋肉内、腹腔内、大脳脊髄内（ｉｎｔｒａｃｅｒｏｂｒｏｓｐｉｎａｌ）、頭蓋内、脊髄内、皮下、関節内、滑液嚢内、髄腔内、経口、局所、または吸入経路によるものなどの公知の方法に従い、抗ＴＲＥＭ２抗体での処置を必要とする個体、好ましくは、ヒトに投与されてもよい。
【０３６５】
本開示の医薬組成物の投薬量及び所望の薬物濃度は、想定される特定の使用に応じて変わることがある。適切な投与量または投与経路の決定は、十分に当業者の技術の範囲内である。動物実験は、ヒトの治療に有効な用量を決定するための信頼できる指針を提供する。有効な用量の種間スケーリングは、Ｍｏｒｄｅｎｔｉ，Ｊ．ａｎｄ  Ｃｈａｐｐｅｌｌ，Ｗ．“Ｔｈｅ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｓｐｅｃｉｅｓ  Ｓｃａｌｉｎｇ  ｉｎ  Ｔｏｘｉｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ，”  Ｉｎ  Ｔｏｘｉｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｎｅｗ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｙａｃｏｂｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｄｓ，Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  １９８９，ｐｐ．４２−４６に記載されている原理に従って行うことができる。
【０３６６】
本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体のいずれかのインビボ投与では、通常の投薬量は、投与の経路に応じて、１日当たり、個体の体重の１ｋｇ当たり約１０ｎｇ〜約１００ｍｇまたはそれ以上、好ましくは、約１ｍｇ／ｋｇ／日〜１０ｍｇ／ｋｇ／日で変わり得る。処置されるべき疾患、障害、または状態の重症度に応じて、数日間またはそれ以上にわたる反復投与では、処置は、症状の所望の抑制が達成されるまで持続される。
【０３６７】
例示的な投与計画は、約２ｍｇ／ｋｇの抗ＴＲＥＭ２抗体の初期用量を、続いて、約１ｍｇ／ｋｇの週１回の維持用量を、隔週で投与することを含んでもよい。他の投与計画が、医師が達成したい薬物動態減衰パターンに応じて、有用であり得る。例えば、個体に１週間に１回〜２１回投薬することが本明細書で検討される。ある特定の実施形態では、約３μｇ／ｋｇ〜約２ｍｇ／ｋｇ（例えば、約３μｇ／ｋｇ、約１０μｇ／ｋｇ、約３０μｇ／ｋｇ、約１００μｇ／ｋｇ、約３００μｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、及び約２／ｍｇ／ｋｇ）の範囲の投薬が使用されてもよい。ある特定の実施形態では、投薬頻度は１日３回、１日２回、１日１回、１日おきに１回、１週間に１回、２週間に１回、４週間に１回、５週間に１回、６週間に１回、７週間に１回、８週間に１回、９週間に１回、１０週間に１回、もしくは１ヶ月に１回、２ヶ月に１回、３ヶ月に１回、またはそれ以上である。治療の進行は、従来の技術及びアッセイによって容易に監視される。投与される抗ＴＲＥＭ２抗体を含む投与計画は、使用される用量とは関係なく、経時的に変わり得る。
【０３６８】
特定の抗ＴＲＥＭ２抗体の投薬量は、抗ＴＲＥＭ２抗体の１回または複数回の投与を与えられている個体において経験的に決定されてもよい。個体は、抗ＴＲＥＭ２抗体の徐々に増加する用量を与えられる。抗ＴＲＥＭ２抗体の有効性を評価するために、本開示の任意の疾患、障害、または状態（例えば、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、那須−ハコラ病、及び多発性硬化症）の臨床症状を監視することができる。
【０３６９】
本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体の投与は、例えば、レシピエントの生理学的状態、投与の目的が治療的または予防的であるか、及び診療医に知られている他の因子に応じて、連続的または断続的であり得る。抗ＴＲＥＭ２抗体の投与は、予め選択された期間にわたって本質的に連続的であってもよいか、または間隔を空けた一連の投薬であってもよい。
【０３７０】
特定の投薬量及び送達方法に関する指針は、文献で提供されている。例えば、米国特許第４，６５７，７６０号、同第５，２０６，３４４号、または同第５，２２５，２１２号を参照されたい。異なる製剤が、異なる処置及び異なる障害に有効であろうこと、ならびに特定の器官または組織を処置することを意図される投与が、別の器官または組織のものとは異なる手法での送達を要することがあることは、本発明の範囲内である。さらに、投薬量は、１回または複数の別々の投与によって、または連続注入によって投与されてもよい。状態に応じた数日間またはそれ以上にわたる反復投与では、処置は、疾患の症状の所望の抑制が生じるまで持続される。しかしながら、他の投与計画が有用であり得る。この治療の進行は、従来の技術及びアッセイによって容易に監視される。
【０３７１】
治療的使用
本開示のさらなる態様は、個体において１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を調節する（例えば、誘導する、または阻害する）ために、個体に本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体の治療有効量を投与することによって、ＴＲＥＭ２を調節する（例えば、活性化する、または阻害する）、ＤＡＰ１２を調節する（例えば、活性化する、または阻害する）、ＰＩ３Ｋを調節する（例えば、活性化する、または阻害する）、１つまたは複数の炎症誘発性及び抗炎症性メディエーター（例えば、ＩＦＮ−ａ４、ＩＦＮ−ｂ、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１０、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−２３、ケモカインタンパク質ファミリーのＴＧＦ−ベータメンバー、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＩＬ−３３、ＬＩＦ、ＩＦＮ−ガンマ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＴＧＦ−ベータ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＣＣＬ４、ＭＣＰ−１、ＶＥＧＦ、ＣＸＣＬ１０及びＣＲＰ）の発現を調節する（例えば、増加させる、または減少させる）、あるいは１つまたは複数のＴＲＥＭ２発現細胞の生存を調節する（例えば、増加させる、または減少させる）、あるいは１つまたは複数のＴＲＥＭ２発現細胞の機能を調節する（例えば、増加させる、または減少させる）、あるいは１つまたは複数のＴＲＥＭ２発現細胞の増殖を調節する（例えば、増加させる、または減少させる）、あるいは１つまたは複数のＴＲＥＭ２発現細胞の遊走を調節する（例えば、増加させる、または減少させる）、あるいは１つまたは複数のＴＲＥＭ２発現細胞の他の細胞との相互作用を調節する（例えば、増加させる、または減少させる）ことを、それを必要とする個体において行う方法を提供する。
【０３７２】
本明細書に開示のとおりの、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト−ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウオパチー病、那須−ハコラ病、卒中、急性外傷、慢性外傷、認知障害、記憶喪失、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満、マラリア、本態性振戦、中枢神経系狼瘡、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多発性萎縮症、シャイ−ドレーガー症候群、進行性核上麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫性障害、サルコイドーシス、加齢に伴う病気、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身性感染症、狼瘡、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨のパジェット病、がん、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性赤血球増加症、本態性血小板血症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化、骨髄由来腫瘍、ＴＲＥＭ２を発現する腫瘍、甲状腺癌、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルージ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、Ｉ型ＨＩＶ、ならびにインフルエンザ菌を予防する、そのリスクを減少させる、またはそれを治療するために使用され得る。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、アゴニスト抗体である。
【０３７３】
一部の実施形態では、本開示は、個体に、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体の治療有効量を投与することによって、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト−ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウオパチー病、那須−ハコラ病、卒中、急性外傷、慢性外傷、認知障害、記憶喪失、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満、マラリア、本態性振戦、中枢神経系狼瘡、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多発性萎縮症、シャイ−ドレーガー症候群、進行性核上麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫性障害、サルコイドーシス、加齢に伴う病気、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身性感染症、狼瘡、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨のパジェット病、がん、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性赤血球増加症、本態性血小板血症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化、骨髄由来腫瘍、ＴＲＥＭ２を発現する腫瘍、甲状腺癌、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルージ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、Ｉ型ＨＩＶ、ならびにインフルエンザ菌を予防する、そのリスクを減少させる、またはそれを有する個体を治療する方法を提供する。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、アゴニスト抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、不活性抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、アンタゴニスト抗体である。一部の実施形態では、方法はさらに、個体に、阻害性チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体を投与すること、及び／または別の標準もしくは調査的抗がん療法を含む。一部の実施形態では、阻害性チェックポイント分子に特異的に結合する抗体は、単離抗体と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、阻害チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＰＤ−Ｌ２抗体、抗ＰＤ−１抗体、抗Ｂ７−Ｈ３抗体、抗Ｂ７−Ｈ４抗体、及び抗ＨＶＥＭ抗体、抗Ｂ−及びＴ−リンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）抗体、抗キラー阻害性受容体（ＫＩＲ）抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗ＴＩＭ３抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、抗ＬＡＧ−３抗体、抗ホスファチジルセリン抗体、抗ＣＤ２７抗体、ならびにそれらの任意の組合せから選択される。一部の実施形態では、標準または調査的抗がん療法は、放射線療法、細胞傷���性化学療法、標的療法、ホルモン療法、イマチニブ（Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標））、トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））、ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））、オファツムマブ（Ａｒｚｅｒｒａ（登録商標））、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）、ＭａｂＴｈｅｒａ（登録商標）、Ｚｙｔｕｘ（登録商標））、冷凍療法、アブレーション、高周波アブレーション、養子細胞移入（ＡＣＴ）、キメラ抗原受容体Ｔ細胞移入（ＣＡＲ−Ｔ）、ワクチン療法、及びサイトカイン療法から選択される１つまたは複数の療法である。一部の実施形態では、方法はさらに、個体に、阻害性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１つの抗体を投与することを含む。一部の実施形態では、阻害性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１つの抗体は、単離抗体と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、阻害性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１つの抗体は、抗ＣＣＬ２抗体、抗ＣＳＦ−１抗体、抗ＩＬ−２抗体、及びそれらの任意の組合せから選択される。一部の実施形態では、方法はさらに、個体に、刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する少なくとも１つのアゴニスト抗体を投与することを含む。一部の実施形態では、刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する少なくとも１つのアゴニスト抗体は、単離抗体と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する少なくとも１つのアゴニスト抗体は、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体、アゴニスト抗ＯＸ４０抗体、アゴニスト抗ＩＣＯＳ抗体、アゴニスト抗ＣＤ２８抗体、アゴニスト抗ＣＤ１３７／４−１ＢＢ抗体、アゴニスト抗ＣＤ２７抗体、アゴニスト抗グルココルチコイド誘発性ＴＮＦＲ関連タンパク質ＧＩＴＲ抗体、及びそれらの任意の組合せから選択される。一部の実施形態では、方法はさらに、個体に、少なくとも１つの刺激性サイトカインを投与することを含む。一部の実施形態では、少なくとも１つの刺激性サイトカインは、単離抗体と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、少なくとも１つの刺激性サイトカインは、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１０、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ケモカインタンパク質ファミリーのＴＧＦ−ベータメンバー、ＩＬ２０ファミリーメンバー、ＩＬ−３３、ＬＩＦ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＴＧＦ−ベータ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−８、ＩＬ−２３、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＬ−２、ＩＬ−１８、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、及びそれらの任意の組合せから選択される。
【０３７４】
一部の実施形態では、本開示は、個体に、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体の治療有効量を投与することによって、アルツハイマー病を予防する、そのリスクを減少させる、またはそれを有する個体を治療する方法を提供する。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、アゴニスト抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、１つまたは複数の炎症性メディエーター、例えば、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＹＭ−１、ＣＤ８６、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ５、ＣＣＲ２、ＣＸＣＬ１０、Ｇａｔａ３、Ｒｏｒｃ、及びそれらの任意の組合せの発現を増加させる。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、１つまたは複数の炎症性メディエーター、例えば、ＦＬＴ１、ＯＰＮ、ＣＳＦ−１、ＣＤ１１ｃ、ＡＸＬ、及びそれらの任意の組合せの発現を減少させる。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、個体において（例えば、個体の脳において）Ａベータペプチドのレベルを低下させる。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、個体の脳においてＣＤ１１ｂ＋ミクログリア細胞の数を増加させる。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、個体において記憶を増加させる。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、個体において認知障害を減少させる。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、個体において運動協調性を増加させる。
【０３７５】
一部の実施形態では、本開示は、個体に、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体の治療有効量を投与することによって、記憶を増加させること、認知障害を減少させること、またはその両方を、それを必要とする個体において行う方法を提供する。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、アゴニスト抗体である。
【０３７６】
一部の実施形態では、本開示は、個体に、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体の治療有効量を投与することによって、運動協調性を増加させることを、それを必要とする個体において行う方法を提供する。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、アゴニスト抗体である。
【０３７７】
一部の実施形態では、本開示は、個体に、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体の治療有効量を投与することによって、Ａベータペプチドレベルを低下させることを、それを必要とする個体において行う方法を提供する。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、アゴニスト抗体である。
【０３７８】
一部の実施形態では、本開示は、個体に、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体の治療有効量を投与することによって、ＣＤ１１ｂ＋ミクログリア細胞の数を増加させることを、それを必要とする個体において行う方法を提供する。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、アゴニスト抗体である。
【０３７９】
一部の実施形態では、本開示は、個体に、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体の治療有効量を投与することによって、ＦＬＴ１、ＯＰＮＣＳＦ１、ＣＤ１１ｃ、及びＡＸＬのうちの１つまたは複数のレベルを上昇させることを、それを必要とする個体において行う方法を提供する。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、アゴニスト抗体である。
【０３８０】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、例えば、抗ＴＲＥＭ２抗体で処置されていない対応する個体の１つまたは複数の細胞における１つまたは複数の炎症性メディエーター、例えば、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＹＭ−１、ＣＤ８６、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ５、ＣＣＲ２、ＣＸＣＬ１０、Ｇａｔａ３、Ｒｏｒｃ、及びそれらの任意の組合せの発現と比較して、個体の１つまたは複数の細胞における１つまたは複数の炎症性メディエーター、例えば、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＹＭ−１、ＣＤ８６、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ５、ＣＣＲ２、ＣＸＣＬ１０、Ｇａｔａ３、Ｒｏｒｃ、及びそれらの任意の組合せの発現を少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１１０％、少なくとも１１５％、少なくとも１２０％、少なくとも１２５％、少なくとも１３０％、少なくとも１３５％、少なくとも１４０％、少なくとも１４５％、少なくとも１５０％、少なくとも１６０％、少なくとも１７０％、少なくとも１８０％、少なくとも１９０％、または少なくとも２００％増加させ得る。他の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、例えば、抗ＴＲＥＭ２抗体で処置されていない対応する個体の１つまたは複数の細胞における１つまたは複数の炎症性メディエーター、例えば、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＹＭ−１、ＣＤ８６、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ５、ＣＣＲ２、ＣＸＣＬ１０、Ｇａｔａ３、Ｒｏｒｃ、及びそれらの任意の組合せの発現と比較して、個体の１つまたは複数の細胞における１つまたは複数の炎症性メディエーター、例えば、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＹＭ−１、ＣＤ８６、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ５、ＣＣＲ２、ＣＸＣＬ１０、Ｇａｔａ３、Ｒｏｒｃ、及びそれらの任意の組合せの発現を少なくとも１．５倍、少なくとも１．６倍、少なくとも１．７倍、少なくとも１．８倍、少なくとも１．９倍、少なくとも２．０倍、少なくとも２．１倍、少なくとも２．１５倍、少なくとも２．２倍、少なくとも２．２５倍、少なくとも２．３倍、少なくとも２．３５倍、少なくとも２．４倍、少なくとも２．４５倍、少なくとも２．５倍、少なくとも２．５５倍、少なくとも３．０倍、少なくとも３．５倍、少なくとも４．０倍、少なくとも４．５倍、少なくとも５．０倍、少なくとも５．５倍、少なくとも６．０倍、少なくとも６．５倍、少なくとも７．０倍、少なくとも７．５倍、少なくとも８．０倍、少なくとも８．５倍、少なくとも９．０倍、少なくとも９．５倍、または少なくとも１０倍増加させる。
【０３８１】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、例えば、抗ＴＲＥＭ２抗体で処置されていない対応する個体の１つまたは複数の細胞における１つまたは複数の炎症性メディエーター、例えば、ＦＬＴ１、ＯＰＮ、ＣＳＦ−１、ＣＤ１１ｃ、ＡＸＬ、及びそれらの任意の組合せの発現と比較して、個体の１つまたは複数の細胞における１つまたは複数の炎症性メディエーター、例えば、ＦＬＴ１、ＯＰＮ、ＣＳＦ−１、ＣＤ１１ｃ、ＡＸＬ、及びそれらの任意の組合せの発現を少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１１０％、少なくとも１１５％、少なくとも１２０％、少なくとも１２５％、少なくとも１３０％、少なくとも１３５％、少なくとも１４０％、少なくとも１４５％、少なくとも１５０％、少なくとも１６０％、少なくとも１７０％、少なくとも１８０％、少なくとも１９０％、または少なくとも２００％減少させ得る。他の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、例えば、抗ＴＲＥＭ２抗体で処置されていない対応する個体の１つまたは複数の細胞における１つまたは複数の炎症性メディエーター、例えば、ＦＬＴ１、ＯＰＮ、ＣＳＦ−１、ＣＤ１１ｃ、ＡＸＬ、及びそれらの任意の組合せの発現と比較して、個体の１つまたは複数の細胞における１つまたは複数の炎症性メディエーター、例えば、ＦＬＴ１、ＯＰＮ、ＣＳＦ−１、ＣＤ１１ｃ、ＡＸＬ、及びそれらの任意の組合せの発現を少なくとも１．５倍、少なくとも１．６倍、少なくとも１．７倍、少なくとも１．８倍、少なくとも１．９倍、少なくとも２．０倍、少なくとも２．１倍、少なくとも２．１５倍、少なくとも２．２倍、少なくとも２．２５倍、少なくとも２．３倍、少なくとも２．３５倍、少なくとも２．４倍、少なくとも２．４５倍、少なくとも２．５倍、少なくとも２．５５倍、少なくとも３．０倍、少なくとも３．５倍、少なくとも４．０倍、少なくとも４．５倍、少なくとも５．０倍、少なくとも５．５倍、少なくとも６．０倍、少なくとも６．５倍、少なくとも７．０倍、少なくとも７．５倍、少なくとも８．０倍、少なくとも８．５倍、少なくとも９．０倍、少なくとも９．５倍、または少なくとも１０倍減少させる。
【０３８２】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、例えば、抗ＴＲＥＭ２抗体で処置されていない対応する個体の１つまたは複数の細胞におけるＡベータペプチドのレベルと比較して、個体の１つまたは複数の細胞におけるＡベータペプチドのレベルを少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１１０％、少なくとも１１５％、少なくとも１２０％、少なくとも１２５％、少なくとも１３０％、少なくとも１３５％、少なくとも１４０％、少なくとも１４５％、少なくとも１５０％、少なくとも１６０％、少なくとも１７０％、少なくとも１８０％、少なくとも１９０％、または少なくとも２００％低下させ得る。他の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、例えば、抗ＴＲＥＭ２抗体で処置されていない対応する個体の１つまたは複数の細胞におけるＡベータペプチドのレベルと比較して、個体の１つまたは複数の細胞におけるＡベータペプチドのレベルを少なくとも１．５倍、少なくとも１．６倍、少なくとも１．７倍、少なくとも１．８倍、少なくとも１．９倍、少なくとも２．０倍、少なくとも２．１倍、少なくとも２．１５倍、少なくとも２．２倍、少なくとも２．２５倍、少なくとも２．３倍、少なくとも２．３５倍、少なくとも２．４倍、少なくとも２．４５倍、少なくとも２．５倍、少なくとも２．５５倍、少なくとも３．０倍、少なくとも３．５倍、少なくとも４．０倍、少なくとも４．５倍、少なくとも５．０倍、少なくとも５．５倍、少なくとも６．０倍、少なくとも６．５倍、少なくとも７．０倍、少なくとも７．５倍、少なくとも８．０倍、少なくとも８．５倍、少なくとも９．０倍、少なくとも９．５倍、または少なくとも１０倍低下させる。
【０３８３】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、例えば、抗ＴＲＥＭ２抗体で処置されていない対応する個体の記憶と比較して、個体の記憶を少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１１０％、少なくとも１１５％、少なくとも１２０％、少なくとも１２５％、少なくとも１３０％、少なくとも１３５％、少なくとも１４０％、少なくとも１４５％、少なくとも１５０％、少なくとも１６０％、少なくとも１７０％、少なくとも１８０％、少なくとも１９０％、または少なくとも２００％増加させ得る。他の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、例えば、抗ＴＲＥＭ２抗体で処置されていない対応する個体の記憶と比較して、個体の記憶を少なくとも１．５倍、少なくとも１．６倍、少なくとも１．７倍、少なくとも１．８倍、少なくとも１．９倍、少なくとも２．０倍、少なくとも２．１倍、少なくとも２．１５倍、少なくとも２．２倍、少なくとも２．２５倍、少なくとも２．３倍、少なくとも２．３５倍、少なくとも２．４倍、少なくとも２．４５倍、少なくとも２．５倍、少なくとも２．５５倍、少なくとも３．０倍、少なくとも３．５倍、少なくとも４．０倍、少なくとも４．５倍、少なくとも５．０倍、少なくとも５．５倍、少なくとも６．０倍、少なくとも６．５倍、少なくとも７．０倍、少なくとも７．５倍、少なくとも８．０倍、少なくとも８．５倍、少なくとも９．０倍、少なくとも９．５倍、または少なくとも１０倍増加させる。
【０３８４】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、例えば、抗ＴＲＥＭ２抗体で処置されていない対応する個体における認知障害と比較して、個体における認知障害を少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１１０％、少なくとも１１５％、少なくとも１２０％、少なくとも１２５％、少なくとも１３０％、少なくとも１３５％、少なくとも１４０％、少なくとも１４５％、少なくとも１５０％、少なくとも１６０％、少なくとも１７０％、少なくとも１８０％、少なくとも１９０％、または少なくとも２００％減少させ得る。他の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、例えば、抗ＴＲＥＭ２抗体で処置されていない対応する個体における認知障害と比較して、個体における認知障害を少なくとも１．５倍、少なくとも１．６倍、少なくとも１．７倍、少なくとも１．８倍、少なくとも１．９倍、少なくとも２．０倍、少なくとも２．１倍、少なくとも２．１５倍、少なくとも２．２倍、少なくとも２．２５倍、少なくとも２．３倍、少なくとも２．３５倍、少なくとも２．４倍、少なくとも２．４５倍、少なくとも２．５倍、少なくとも２．５５倍、少なくとも３．０倍、少なくとも３．５倍、少なくとも４．０倍、少なくとも４．５倍、少なくとも５．０倍、少なくとも５．５倍、少なくとも６．０倍、少なくとも６．５倍、少なくとも７．０倍、少なくとも７．５倍、少なくとも８．０倍、少なくとも８．５倍、少なくとも９．０倍、少なくとも９．５倍、または少なくとも１０倍減少させる。
【０３８５】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、例えば、抗ＴＲＥＭ２抗体で処置されていない対応する個体における運動協調性と比較して、個体における運動協調性を少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１１０％、少なくとも１１５％、少なくとも１２０％、少なくとも１２５％、少なくとも１３０％、少なくとも１３５％、少なくとも１４０％、少なくとも１４５％、少なくとも１５０％、少なくとも１６０％、少なくとも１７０％、少なくとも１８０％、少なくとも１９０％、または少なくとも２００％増加させ得る。他の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、例えば、抗ＴＲＥＭ２抗体で処置されていない対応する個体における運動協調性と比較して、個体における運動協調性を少なくとも１．５倍、少なくとも１．６倍、少なくとも１．７倍、少なくとも１．８倍、少なくとも１．９倍、少なくとも２．０倍、少なくとも２．１倍、少なくとも２．１５倍、少なくとも２．２倍、少なくとも２．２５倍、少なくとも２．３倍、少なくとも２．３５倍、少なくとも２．４倍、少なくとも２．４５倍、少なくとも２．５倍、少なくとも２．５５倍、少なくとも３．０倍、少なくとも３．５倍、少なくとも４．０倍、少なくとも４．５倍、少なくとも５．０倍、少なくとも５．５倍、少なくとも６．０倍、少なくとも６．５倍、少なくとも７．０倍、少なくとも７．５倍、少なくとも８．０倍、少なくとも８．５倍、少なくとも９．０倍、少なくとも９．５倍、または少なくとも１０倍増加させる。
【０３８６】
本開示の他の態様は、個体に本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体の治療有効量を投与することによって、ＴＲＥＭ２タンパク質への１つまたは複数のＴＲＥＭ２リガンドの結合によって誘導される１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を増強することを、それを必要とする個体において行う方法に関する。本開示の他の態様は、個体に本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体の治療有効量を投与することによって、１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を誘導することを、それを必要とする個体において行う方法に関する。ＴＲＥＭ２活性を測定するための任意の適切な方法、例えば、本開示のインビトロ細胞ベースのアッセイまたはインビボモデルを使用してもよい。例示的なＴＲＥＭ２活性には、限定ではないが、ＤＡＰ１２へのＴＲＥＭ２結合、ＴＲＥＭ２リン酸化、ＤＡＰ１２リン酸化、１つまたは複数のチロシンキナーゼの活性化（任意選択で、１つまたは複数のチロシンキナーゼは、Ｓｙｋキナーゼ、ＺＡＰ７０キナーゼ、またはその両方を含む）、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）の活性化、プロテインキナーゼＢ（Ａｋｔ）の活性化、細胞形質膜へのホスホリパーゼＣ−ガンマ（ＰＬＣ−ガンマ）の動員、ＰＬＣ−ガンマの活性化、またはその両方、細胞形質膜へのＴＥＣ−ファミリーキナーゼｄＶａｖの動員、核因子−ｒＢ（ＮＦ−ｒＢ）の活性化、ＭＡＰＫシグナル伝達の阻害、Ｔ細胞を活性化するためのリンカー（ＬＡＴ）、Ｂ細胞を活性化するためのリンカー（ＬＡＢ）、またはその両方のリン酸化、ＩＬ−２−誘発性チロシンキナーゼ（Ｉｔｋ）の活性化、ＩＦＮ−ａ４、ＩＦＮ−ｂ、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１０、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ケモカインタンパク質ファミリーのＴＧＦ−ベータメンバー、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＩＬ−３３、ＬＩＦ、ＩＦＮ−ガンマ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＴＧＦ−ベータ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＣＸＣＬ１０、ＶＥＧＦ、ＣＣＬ４、及びＭＣＰ−１から選択される１つまたは複数の炎症誘発性メディエーターの一過性活性化、続く、その阻害（任意選択で、一過性活性化、続く、阻害は、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、樹状細胞、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、及びミクログリア細胞から選択される１つまたは複数の細胞で生じる）、細胞外シグナル調節キナーゼ（ＥＲＫ）のリン酸化、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、樹状細胞、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及びＭ２ミクログリア、ならびにそれらの任意の組合せから選択される１つまたは複数の細胞におけるＣ−Ｃケモカイン受容体７（ＣＣＲ７）の発現の増加、ＣＣＬ１９及びＣＣＬ２１発現細胞へのミクログリア細胞走化性の誘導、かく乱されたＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２依存性遺伝子発現の正常化、ＤＡＰ１２／ＴＲＥＭ２複合体へのＳｙｋ、ＺＡＰ７０、またはその両方の動員、１つまたは複数のＴＲＥＭ２依存性遺伝子の活性の上昇（任意選択で、１つまたは複数のＴＲＥＭ２依存性遺伝子は��活性化Ｔ細胞核内因子（ＮＦＡＴ）転写因子を含む）、樹状細胞、単球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及びＭ２ミクログリア、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、またはそれらの任意の組合せの成熟の増加、Ｔ細胞増殖を誘導する樹状細胞、単球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及びＭ２ミクログリア、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、またはそれらの任意の組合せの能力の増加、抗原特異的Ｔ細胞増殖を誘導する骨髄由来樹状細胞の能力の増強、その能力の正常化、またはその両方、破骨細胞形成の誘導、破骨細胞形成の速度上昇、またはその両方、樹状細胞、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及びＭ２ミクログリア、またはそれらの任意の組合せの生存の増加、樹状細胞、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及びＭ２ミクログリア、またはそれらの任意の組合せの機能の増加、樹状細胞、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、単球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及びＭ２ミクログリア、またはそれらの任意の組合せによる食作用の調節、アポトーシスニューロンのクリアランス、神経組織デブリのクリアランス、非神経組織デブリのクリアランス、細菌または他の異物のクリアランス、病原体のクリアランス、腫瘍細胞のクリアランス、またはそれらの任意の組合せから選択されるクリアランスのうちの１つまたは複数の種類の誘導（任意選択で、病原体は、アミロイドベータまたはそのフラグメント、Ｔａｕ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスチレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルソリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、及びグリシン−アラニン（ＧＡ）、グリシン−プロリン（ＧＰ）、グリシン−アルギニン（ＧＲ）、プロリン−アラニン（ＰＡ）、またはプロリン−アルギニン（ＰＲ）から構成されるジペプチドリピート（ＤＰＲペプチド）を含むリピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、アンチセンスＧＧＣＣＣＣ（Ｇ２Ｃ４）リピート伸長ＲＮＡから選択される）、アポトーシスニューロン、神経組織デブリ、非神経組織デブリ、細菌、他の異物、病原体、腫瘍細胞、またはそれらの任意の組合せのうちの１つまたは複数の食作用の誘導（任意選択で、病原体は、アミロイドベータまたはそのフラグメント、Ｔａｕ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、Ｔ��Ｐ−４３、ＦＵＳタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスチレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルソリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、及びグリシン−アラニン（ＧＡ）、グリシン−プロリン（ＧＰ）、グリシン−アルギニン（ＧＲ）、プロリン−アラニン（ＰＡ）、またはプロリン−アルギニン（ＰＲ）から構成されるジペプチドリピート（ＤＰＲペプチド）を含むリピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、アンチセンスＧＧＣＣＣＣ（Ｇ２Ｃ４）リピート伸長ＲＮＡから選択される）、ＣＤ８３、ＣＤ８６  ＭＨＣクラスＩＩ、ＣＤ４０、及びそれらの任意の組合せから選択される１つまたは複数の刺激分子の発現の増加（任意選択で、ＣＤ４０は、樹状細胞、単球、マクロファージ、またはそれらの任意の組合せの上に発現され、任意選択で、樹状細胞は、骨髄由来樹状細胞を含む）、１つまたは複数の炎症性メディエーターの分泌の減少（任意選択で、１つまたは複数の炎症性メディエーターは、ＣＤ８６、ＩＦＮ−ａ４、ＩＦＮ−ｂ、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１０、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ケモカインタンパク質ファミリーのＴＧＦ−ベータメンバー、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＩＬ−３３、ＬＩＦ、ＩＦＮ−ガンマ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＴＧＦ−ベータ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＣＸＣＬ１０、ＶＥＧＦ、ＣＣＬ４、及びＭＣＰ−１、ならびにそれらの任意の組合せから選択される）、記憶の増大、ならびに認知障害の減少が含まれる。
【０３８７】
本明細書に開示のとおり、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、限定ではないが、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、ミクログリア、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、及びクッパー細胞ならびに／または細胞系を含む１つまたは複数の細胞でのＴＲＥＭ２の細胞レベルを低下させるために使用され得る。一部の実施形態では、本開示は、個体に本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体の治療有効量を投与することによって、１つまたは複数の細胞でのＴＲＥＭ２の細胞レベルを低下させることを、それを必要とする個体において行う方法を提供する。一部の実施形態では、１つまたは複数の細胞は、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、ミクログリア、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、及びクッパー細胞、ならびにそれらの任意の組合せから選択される。ＴＲＥＭ２の細胞レベルは、限定ではないが、ＴＲＥＭ２の細胞表面レベル、ＴＲＥＭ２の細胞内レベル、及びＴＲＥＭ２の総レベルを指し得る。一部の実施形態では、ＴＲＥＭ２の細胞レベルの低下は、ＴＲＥＭ２の細胞表面レベルの低下を含む。本明細書で使用される場合、ＴＲＥＭ２の細胞表面レベルは、本明細書に記載されている、または当技術分野で知られている任意のインビトロ細胞ベースのアッセイまたは適切なインビボモデルによって測定され得る。一部の実施形態では、ＴＲＥＭ２の細胞レベルの低下は、ＴＲＥＭ２の細胞内レベルの低下を含む。本明細書で使用される場合、ＴＲＥＭ２の細胞内レベルは、本明細書に記載されている、または当技術分野で知られている任意のインビトロ細胞ベースのアッセイまたは適切なインビボモデルによって測定され得る。一部の実施形態では、ＴＲＥＭ２の細胞レベルの低下は、ＴＲＥＭ２の総レベルの低下を含む。本明細書で使用される場合、ＴＲＥＭ２の総レベルは、本明細書に記載されている、または当技術分野で知られている任意のインビトロ細胞ベースのアッセイまたは適切なインビボモデルによって測定され得る。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２分解、ＴＲＥＭ２切断、ＴＲＥＭ２内部移行、ＴＲＥＭ２シェディング、及び／またはＴＲＥＭ２発現の下方制御を誘導する。一部の実施形態では、ＴＲＥＭ２の細胞レベルは、初代細胞（例えば、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、ミクログリア、及びマクロファージ）で、または細胞系で、インビトロ細胞アッセイを利用して測定される。
【０３８８】
本明細書に開示のとおり、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、記憶を増加させる、及び／または認知障害を減少させるためにも使用され得る。一部の実施形態では、本開示は、個体に本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体の治療有効量を投与することによって、記憶を増加させる、及び／または認知障害を減少させることを、それを必要とする個体において行う方法を提供する。
【０３８９】
ある特定の実施形態では、個体は、ヒトＴＲＥＭ２タンパク質（配列番号１）のアミノ酸残基１４をコードする核酸配列におけるグルタミン酸から終止コドンへの置換を有するヘテロ接合型ＴＲＥＭ２バリアント対立遺伝子を有する。ある特定の実施形態では、個体は、ヒトＴＲＥＭ２タンパク質（配列番号１）のアミノ酸残基３３をコードする核酸配列におけるグルタミンから終止コドンへの置換を有するヘテロ接合型ＴＲＥＭ２バリアント対立遺伝子を有する。ある特定の実施形態では、個体は、ヒトＴＲＥＭ２タンパク質（配列番号１）のアミノ酸残基４４をコードする核酸配列におけるトリプトファンから終止コドンへの置換を有するヘテロ接合型ＴＲＥＭ２バリアント対立遺伝子を有する。ある特定の実施形態では、個体は、ヒトＴＲＥＭ２タンパク質（配列番号１）のアミノ酸残基４７に、アルギニンからヒスチジンへのアミノ酸置換を有するヘテロ接合型ＴＲＥＭ２バリアント対立遺伝子を有する。ある特定の実施形態では、個体は、ヒトＴＲＥＭ２タンパク質（配列番号１）のアミノ酸残基７８をコードする核酸配列におけるトリプトファンから終止コドンへの置換を有するヘテロ接合型ＴＲＥＭ２バリアント対立遺伝子を有する。ある特定の実施形態では、個体は、ヒトＴＲＥＭ２タンパク質（配列番号１）のアミノ酸残基１２６に対応するアミノ酸でのバリンからグリシンへのアミノ酸置換を有するヘテロ接合型ＴＲＥＭ２バリアント対立遺伝子を有する。ある特定の実施形態では、個体は、ヒトＴＲＥＭ２タンパク質（配列番号１）のアミノ酸残基１３４に対応するアミノ酸でのアスパラギン酸からグリシンへのアミノ酸置換を有するヘテロ接合型ＴＲＥＭ２バリアント対立遺伝子を有する。ある特定の実施形態では、個体は、ヒトＴＲＥＭ２タンパク質（配列番号１）のアミノ酸残基１８６に対応するアミノ酸でのリシンからアスパラギンへのアミノ酸置換を有するヘテロ接合型ＴＲＥＭ２バリアント対立遺伝子を有する。
【０３９０】
一部の実施形態では、個体は、配列番号１をコードする核酸配列のヌクレオチド残基Ｇ３１３に対応するヌクレオチドでのグアニンヌクレオチド欠失、配列番号１をコードする核酸配列のヌクレオチド残基Ｇ２６７に対応するヌクレオチドでのグアニンヌクレオチド欠失、配列番号１のアミノ酸残基Ｔｈｒ６６に対応するアミノ酸でのトレオニンからメチオニンへのアミノ酸置換、及び／または配列番号１のアミノ酸残基Ｓｅｒ１１６に対応するアミノ酸でのセリンからシステインへのアミノ酸置換を有するヘテロ接合型ＴＲＥＭ２バリアント対立遺伝子を有する。
【０３９１】
一部の実施形態では、個体は、配列番号８８７のアミノ酸残基Ｍｅｔ１に対応するアミノ酸でのメチオニンからトレオニンへの置換、配列番号８８７のアミノ酸残基Ｇｌｙ４９に対応するアミノ酸でのグリシンからアルギニンへのアミノ酸置換、配列番号８８７をコードする核酸配列のエクソン１〜４内での欠失、配列番号８８７をコードする核酸配列のエクソン３での１４アミノ酸残基の挿入、及び／または配列番号８８７をコードする核酸配列のヌクレオチド残基Ｇ１４１に対応するヌクレオチドでのグアニンヌクレオチド欠失を有するヘテロ接合型ＤＡＰ１２バリアント対立遺伝子を有する。
【０３９２】
本明細書に開示のとおり、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体はまた、先天免疫細胞の生存を誘導及び／または促進するために使用され得る。一部の実施形態では、本開示は、個体に本開示のアゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体の治療有効量を投与することによって、先天免疫細胞の生存を誘導または促進することを、それを必要とする個体において行う方法を提供する。
【０３９３】
本明細書に開示のとおり、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体はまた、損傷後などの創傷治癒を誘導及び／または促進するために使用されてもよい。一部の実施形態では、創傷治癒は、損傷後の結腸の創傷治癒であってもよい。一部の実施形態では、本開示は、個体に、本開示のアゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体の治療有効量を投与することによって、創傷治癒を誘導または促進することを、それを必要とする個体において行う方法を提供する。
【０３９４】
一部の実施形態では、本開示の方法は、抗ＴＲＥＭ２抗体、または二重特異性抗体をＴＬＲアンタゴニストと共に、またはＴＬＲアゴニストを中和する薬剤（例えば、中和サイトカインまたはインターロイキン抗体）と共に同時投与することを含んでもよい。
【０３９５】
一部の実施形態では、本開示の方法は、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体をＨＳＰ６０などのＴＲＥＭ２リガンドと併せて含む、キメラ構築物の投与を含んでもよい。
【０３９６】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、１つまたは複数の先天免疫細胞の増殖を阻害しない。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、１つまたは複数の初代免疫細胞に５０ｎＭ未満、４５ｎＭ未満、４０ｎＭ未満、３５ｎＭ未満、３０ｎＭ未満、２５ｎＭ未満、２０ｎＭ未満、１５ｎＭ未満、１０ｎＭ未満、９ｎＭ未満、８ｎＭ未満、７ｎＭ未満、６ｎＭ未満、５ｎＭ未満、４ｎＭ未満、３ｎＭ未満、２ｎＭ未満、または１ｎＭ未満のＫＤで結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、脳、もしくは脳脊髄液（ＣＳＦ）、またはその両方に、血中抗体濃度１％以上、２％以上、３％以上、４％以上、５％以上、６％以上、７％以上、８％以上、９％以上、１０％以上である規模で蓄積する。
【０３９７】
一部の実施形態では、対象または個体は、哺乳動物である。哺乳動物には、限定ではないが、家畜動物（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、及びウマ）、霊長類（例えば、ヒト及び非ヒト霊長類、例えば、サル）、ウサギ、及びげっ歯類（例えば、マウス及びラット）が含まれる。一部の実施形態では、対象または個体は、ヒトである。
【０３９８】
認知症
認知症は、正常な老化から予測され得るものを超えて、予め損なわれていないヒトの全体的な認知能力の重大な喪失として現れる非特異的な症候群（すなわち、徴候及び症状のセット）である。独特の全体的な脳損傷の結果として、認知症は、変化しないことがある。別法では、認知症は、進行性であり、身体の損傷または疾患に起因する長期的な衰退をもたらすことがある。認知症は、高齢者集団においてはるかに一般的であるが、６５歳前に発症する可能性もある。認知症の影響を受ける認知領域には、限定ではないが、記憶、注意持続、言語、及び問題解決が含まれる。一般に、症状は、個体が認知症と診断される前に、少なくとも６ヶ月間存在しなければならない。
【０３９９】
認知症の例示的形態には、限定ではないが、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、語義認知症、及びレビー小体型認知症が含まれる。
【０４００】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体を投与することによって、認知症を予防する、そのリスクを減少させる、及び／またはそれを処置することができる。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体の投与は、認知症を有する個体において１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性（例えば、ＤＡＰ１２リン酸化反応、ＰＩ３Ｋ活性化、１つもしくは複数の抗炎症性メディエーターの発現の増加、または１つもしくは複数の炎症誘発性メディエーターの発現の減少）を誘導し得る。
【０４０１】
前頭側頭型認知症
前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）は、脳の前頭葉の進行性の変性から生じる状態である。経時的に、変性は、側頭葉に進むことがある。有病率ではアルツハイマー病（ＡＤ）に次いで２番目であるが、ＦＴＤは初老期認知症症例の２０％を占める。ＦＴＤの臨床特徴には、記憶欠損、行動異常、人格変化、及び言語障害が含まれる（Ｃｒｕｔｓ，Ｍ．＆  Ｖａｎ  Ｂｒｏｅｃｋｈｏｖｅｎ，Ｃ．，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｇｅｎｅｔ．２４：１８６−１９４（２００８）；Ｎｅａｒｙ，Ｄ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ５１：１５４６−１５５４（１９９８）；Ｒａｔｎａｖａｌｌｉ，Ｅ．，Ｂｒａｙｎｅ，Ｃ．，Ｄａｗｓｏｎ，Ｋ．＆  Ｈｏｄｇｅｓ，Ｊ．Ｒ．，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ５８：１６１５−１６２１（２００２））。
【０４０２】
ＦＴＤ症例のかなりの部分は、常染色体優性様式で遺伝するが、たとえ１つのファミリーであっても、症状は、行動障害を伴うＦＴＤから原発性進行性失語症、大脳皮質基底核神経節変性症に及び得る。ＦＴＤは、大部分の神経変性疾患と同様に、罹患した脳における特定のタンパク質凝集体の病理学的存在によって特徴付けられ得る。歴史的に、ＦＴＤの最初の記載によって、神経原線維濃縮体またはピック体における高リン酸化Ｔａｕタンパク質の神経細胞内蓄積の存在が認識された。微小管関連タンパク質Ｔａｕの因果的役割は、いくつかのファミリーにおいてＴａｕタンパク質をコードする遺伝子における変異の同定によって裏付けられた（Ｈｕｔｔｏｎ，Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３９３：７０２−７０５（１９９８）。しかしながら、ＦＴＤ脳の大部分は、高リン酸化Ｔａｕの蓄積を示さないが、ユビキチン（Ｕｂ）及びＴＡＲ  ＤＮＡ結合タンパク質（ＴＤＰ４３）に対する免疫反応性を示す（Ｎｅｕｍａｎｎ，Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｃｈ．Ｎｅｕｒｏｌ．６４：１３８８−１３９４（２００７））。Ｕｂ封入体を伴うそれらのＦＴＤ症例（ＦＴＤ−Ｕ）の大部分は、プログラニュリン遺伝子に変異を保有することが示された。
【０４０３】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体を投与することによって、ＦＴＤを予防する、そのリスクを減少させる、及び／またはそれを処置することができる。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体の投与は、ＦＴＤを有する個体において１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性（例えば、ＤＡＰ１２リン酸化反応、ＰＩ３Ｋ活性化、１つもしくは複数の抗炎症性メディエーターの発現の増加、または１つもしくは複数の炎症誘発性メディエーターの発現の減少）を誘導し得る。
【０４０４】
アルツハイマー病
アルツハイマー病（ＡＤ）は、認知症の最も一般的な形態である。この疾患に対する治療法はなく、この疾患は、進行するにつれて悪化し、最終的に死をもたらす。ほとんどの場合、ＡＤは、６５歳超の人々において診断される。しかしながら、あまり一般的ではない早発性アルツハイマー病は、かなり早い時期に発症し得る。
【０４０５】
アルツハイマー病の一般的な症状には、最近の出来事を覚えることが困難であること；認知症状、混乱、過敏性及び攻撃性、気分変動、言語に伴う障害、ならびに長期記憶喪失などの行動徴候が含まれる。疾患が進行するにつれて、身体機能は失われ、最終的には死をもたらす。アルツハイマー病は、完全に明らかになる前の未知で不定の期間の間に発症し、何年もの間、診断未確定で進行し得る。
【０４０６】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体を投与することによって、アルツハイマー病を予防する、そのリスクを減少させる、及び／またはそれを処置することができる。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体の投与は、アルツハイマー病を有する個体において１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性（例えば、ＤＡＰ１２リン酸化反応、ＰＩ３Ｋ活性化、１つもしくは複数の抗炎症性メディエーターの発現の増加、または１つもしくは複数の炎症誘発性メディエーターの発現の減少）を誘導し得る。
【０４０７】
那須−ハコラ病
別段に硬化性白質脳症を伴う脂肪膜性多発嚢胞性骨異形成症（ＰＬＯＳＬ）と称されることがある那須−ハコラ病（ＮＨＤ）は、下肢及び上肢の多嚢胞性骨嚢胞に起因する再発性骨折を伴う進行性初老認知症によって特徴づけられる稀な遺伝性白質ジストロフィーである。ＮＨＤ疾患の経過は一般に、４期、すなわち潜伏期、骨症状期、初期神経症状期、及び後期神経症状期に分けられる。幼児期（潜伏期）の正常な発達の後に、ＮＨＤは、手、手首、足首、及び足に痛みを伴って青年期または若年成人期（典型的な発症年齢２０〜３０歳）に現れ始める。その後、患者は、四肢の骨の多嚢胞性骨病変及び骨粗鬆症病変（骨症状期）に起因する再発性骨折に罹患し始める。人生の３０年目または４０年目（初期神経症状期）において、患者は、前頭葉症候群に特徴的な顕著な人格変化（例えば、多幸感、集中力の欠如、判断の喪失、及び社会的抑制）を呈する。患者はまた典型的に、進行性の記憶障害にも罹患する。てんかん発作も頻繁に観察される。最終的に（後期神経症状期）、患者は、深刻な認知症に進行し、話すこと及び動くことができず、通常５０歳までに死亡する。
【０４０８】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体を投与することによって、那須−ハコラ病を予防する、そのリスクを減少させる、及び／またはそれを治療することができる。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体の投与は、ＮＨＤを有する個体において１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性（例えば、ＤＡＰ１２リン酸化反応、ＰＩ３Ｋ活性化、１つもしくは複数の抗炎症性メディエーターの発現の増加、または１つもしくは複数の炎症誘発性メディエーターの発現の減少）を誘導し得る。
【０４０９】
パーキンソン病
特発性もしくは原発性パーキンソン症候群、低運動性硬直症候群（ＨＲＳ）、または振戦麻痺と称されることもあるパーキンソン病は、運動系制御に影響を与える神経変性脳障害である。脳におけるドーパミン産生細胞の漸進的死によって、パーキンソン病の主要な症状がもたらされる。多くの場合、パーキンソン病は、５０歳以上の人々において診断される。パーキンソン病は、ほとんどの人々において特発性（公知の原因を有さない）である。しかしながら、遺伝的要因も、この疾患においては役割を果たす。
【０４１０】
パーキンソン病の症状には、限定ではないが、手、腕、脚、顎、及び顔面の振戦、四肢及び胴体の筋硬直、運動の緩慢（運動緩慢）、姿勢同様、歩行困難、神経精神障害、発語または行動の変化、うつ病、不安、疼痛、精神病、認知症、幻覚、ならびに睡眠障害が含まれる。
【０４１１】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体を投与することによって、パーキンソン病を予防する、そのリスクを減少させる、及び／またはそれを治療することができる。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体の投与は、パーキンソン病を有する個体において１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性（例えば、ＤＡＰ１２リン酸化反応、ＰＩ３Ｋ活性化、１つもしくは複数の抗炎症性メディエーターの発現の増加、または１つもしくは複数の炎症誘発性メディエーターの発現の減少）を誘導し得る。
【０４１２】
筋萎縮性側索硬化症
本明細書で使用される場合、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、または運動ニューロン疾患、またはルーゲーリック病は、互換的に使用され、急速な進行性衰弱、筋萎縮及び線維束攣縮、筋痙縮、発話困難（構音障害）、嚥下困難（嚥下障害）、ならびに呼吸困難（呼吸困難症）によって特徴づけられる様々な病因を有する消耗性疾患を指す。
【０４１３】
プログラニュリンは、ＡＬＳにおいて役割を果たし（Ｓｃｈｙｍｉｃｋ，ＪＣ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｌ  Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ．；７８：７５４−６）、ＴＤＰ−４３などのＡＬＳ原因タンパク質によって引き起こされる損傷を再び防ぐことが示されている（Ｌａｉｒｄ，ＡＳ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１０）．ＰＬｏＳ  ＯＮＥ  ５：ｅ１３３６８）。ｐｒｏ−ＮＧＦが、脊髄損傷後のオリゴデンドロサイト及び皮質脊髄ニューロンのｐ７５媒介死を誘導することも実証された（Ｂｅａｔｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｎ（２００２），３６，ｐｐ．３７５−３８６；Ｇｉｅｈｌ  ｅｔ  ａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ（２００４），１０１，ｐｐ  ６２２６−３０）。
【０４１４】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体を投与することによって、ＡＬＳを予防する、そのリスクを減少させる、及び／またはそれを処置することができる。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体の投与は、ＡＬＳを有する個体において１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性（例えば、ＤＡＰ１２リン酸化反応、ＰＩ３Ｋ活性化、１つもしくは複数の抗炎症性メディエーターの発現の増加、または１つもしくは複数の炎症誘発性メディエーターの発現の減少）を誘導し得る。
【０４１５】
ハンチントン病
ハンチントン病（ＨＤ）は、ハンチントン遺伝子（ＨＴＴ）の常染色体優性変異に起因する遺伝性の神経変性疾患である。ハンチンチン遺伝子内のサイトカイン−アデニン−グアニン（ＣＡＧ）トリプレットリピートの伸長は、その遺伝子によってコードされる変異型のハンチンチンタンパク質（Ｈｔｔ）の産生をもたらす。この変異体ハンチントンタンパク質（ｍＨｔｔ）は、毒性があり、ニューロン死の原因となる。ハンチントン病の症状は、任意の年齢で現れ得るが、３５歳及び４４歳の間で最も一般的に現れる。
【０４１６】
ハンチントン病の症状には、限定ではないが、運動制御障害、痙攣、不規則運動（舞踏病）、異常な眼球運動、平衡障害、てんかん発作、咀嚼困難、嚥下困難、認知障害、発語変化、記憶障害、思考困難、不眠症、疲労、認知症、人格変化、うつ病、不安、及び強迫行動が含まれる。
【０４１７】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体を投与することによって、ハンチントン病（ＨＤ）を予防する、そのリスクを減少させる、及び／またはそれを処置することができる。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体の投与は、ＨＤを有する個体において１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性（例えば、ＤＡＰ１２リン酸化反応、ＰＩ３Ｋ活性化、１つもしくは複数の抗炎症性メディエーターの発現の増加、または１つもしくは複数の炎症誘発性メディエーターの発現の減少）を誘導し得る。
【０４１８】
タウオパチー病
タウオパチー病またはタウ異常症は、脳内の微小管関連タンパク質Ｔａｕの凝集に起因する一群の神経変性疾患である。アルツハイマー病（ＡＤ）は、最もよく知られているタウオパチー病であり、不溶性形態での、ニューロン内のＴａｕタンパク質の蓄積を不溶性神経原線維濃縮体（ＮＦＴ）の形態で含む。他のタウオパチー病及び障害には、進行性核上性麻痺、ボクサー認知症（慢性外傷性脳症）、前頭側頭型認知症、及び１７番染色体に関連するパーキンソン症候群、リティコ−ボディグ病（グアムのパーキンソン認知症複合）、神経原線維変化型老年期認知症、神経節膠腫及び神経節細胞腫、髄膜血管腫症、亜急性硬化性全脳炎、鉛脳症、結節性脳硬化症、ハレルフォルデン・スパッツ病、リポフスチン沈着症、ピック病、大脳皮質基底核変性症、嗜銀顆粒病（ＡＧＤ）、ハンチントン病、前頭側頭型認知症、ならびに前頭側頭葉変性症が含まれる。
【０４１９】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体を投与することによって、タウオパチー病を予防する、そのリスクを減少させる、及び／またはそれを処置することができる。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体の投与は、タウオパチー病を有する個体において１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性（例えば、ＤＡＰ１２リン酸化反応、ＰＩ３Ｋ活性化、１つもしくは複数の抗炎症性メディエーターの発現の増加、または１つもしくは複数の炎症誘発性メディエーターの発現の減少）を誘導し得る。
【０４２０】
多発性硬化症
多発性硬化症（ＭＳ）は、散在性硬化症または散在性脳脊髄炎とも称され得る。ＭＳは、脳及び脊髄の軸索周囲の脂肪ミエリン鞘が損傷し、脱髄及び瘢痕化ならびに広範囲の徴候及び症状をもたらす炎症性疾患である。ＭＳは、相互に効果的に伝達する脳及び脊髄内の神経細胞の能力に影響を及ぼす。神経細胞は、ミエリンと呼ばれる絶縁物質内に含有される軸索と呼ばれる長い繊維の下に活動電位と呼ばれる電気信号を送ることによって伝達する。ＭＳでは、自分の身体の免疫系が、ミエリンを攻撃して損傷する。ミエリンが失われると、軸索は、もはや効果的にシグナルを伝導することができない。ＭＳ発症は通常、若年成人で生じ、女性においてより一般的である。
【０４２１】
ＭＳの症状には、限定ではないが、感度の低下または刺痛感などの感覚の変化、感覚減退及び感覚異常などの穿刺またはしびれ、筋力低下、クローヌス、筋痙攣、移動困難、運動失調などの協調及び平衡障害、構音障害などの発語困難または嚥下障害などの嚥下困難、眼振などの視覚障害、閃光感覚及び複視を含む視神経炎、疲労、急性または慢性疼痛、ならびに膀胱直腸障害、様々な程度の認知障害、うつ病または不安な気分の感情的な症状、通常の周囲温度よりも高い温度に曝されることに起因する現存の症状の悪化であるＵｈｔｈｏｆｆ現象、ならびに首を曲げる時に背中に走る電気的感覚であるＬｈｅｒｍｉｔｔｅ徴候が含まれる。
【０４２２】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体を投与することによって、多発性硬化症を予防する、そのリスクを減少させる、及び／またはそれを処置することができる。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体の投与は、多発性硬化症を有する個体において１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性（例えば、ＤＡＰ１２リン酸化反応、ＰＩ３Ｋ活性化、１つもしくは複数の抗炎症性メディエーターの発現の増加、及び１つもしくは複数の炎症誘発性メディエーターの発現の減少）を誘導し得る。
【０４２３】
がん
本開示のまたさらなる態様は、個体に、本開示の単離抗ＴＲＥＭ２抗体の治療有効量を投与することを含む、がんを予防する、そのリスクを減少させる、またはそれを有する個体を治療するための方法を提供する。本開示の単離抗体のいずれかは、これらの方法において使用され得る。一部の実施形態では、単離抗体は、本開示のアゴニスト抗体である。他の実施形態では、単離抗体は、本開示のアンタゴニスト抗体である。
【０４２４】
上記のとおり、腫瘍微細環境は、Ｔリンパ球、マクロファージ、及び骨髄系／顆粒球系列の細胞を含む不均一免疫浸潤物を含有することが知られている。特に、腫瘍におけるＭ２マクロファージの存在は、予後不良と関連する。ＣＳＦ−１Ｒブロック剤などの腫瘍においてこれらの細胞の数を低減させる治療は、前臨床モデル及び初期の臨床研究において有益な効果を示している。ＴＲＥＭ２は、インビトロでマクロファージの生存を促進するためにＣＳＦ−１と相乗作用すること、及びこの効果は、他の種類の食細胞と比較して、Ｍ２型マクロファージにおいて特に顕著であることが示されている。有力な前臨床試験はまた、腫瘍関連マクロファージ（例えば、ＣＳＦ−１／ＣＳＦ−１Ｒ遮断抗体）を標的とする薬物と、Ｔ細胞を標的とするチェックポイント遮断抗体との間の相乗作用を示しており、これは、両方の細胞型の操作によって、個々の治療法があまり効果的でない腫瘍モデルにおいて有効性が示されることを示している（Ｚｈｕ  Ｙ；Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２０１４  Ｓｅｐ  １５；７４（１８）：５０５７−６９）。したがって、理論に拘束されることは望まないが、腫瘍関連マクロファージにおけるＴＲＥＭ２シグナル伝達を遮断することは、腫瘍微細環境における免疫応答の抑制を阻害して、治療的抗腫瘍免疫応答をもたらし得ると考えられている。
【０４２５】
ＴＲＥＭ２とＣＳＦ１との間の相乗作用、ならびに標的化腫瘍関連マクロファージと標的化Ｔ細胞との間の相乗作用のために、一部の実施形態では、がんを予防する、そのリスクを減少させる、またはそれを有する個体を治療するための方法は、個体に、阻害性チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体を投与することをさらに含む。阻害性チェックポイント分子に特異的に結合する抗体の例には、限定ではないが、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＰＤ−Ｌ２抗体、抗ＰＤ−１抗体、抗Ｂ７−Ｈ３抗体、抗Ｂ７−Ｈ４抗体、及び抗ＨＶＥＭ抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗ＴＩＭ３抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、抗ＬＡＧ−３抗体、抗ホスファチジルセリン抗体、及びそれらの任意の組合せが含まれる。一部の実施形態では、阻害チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体を、本開示のアンタゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体と組み合わせて投与する。
【０４２６】
一部の実施形態では、本開示の方法によって予防または処置されるべきがんには、限定されないが、扁平上皮細胞癌（例えば、上皮性扁平上皮細胞癌）、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌及び肺の扁平上皮癌を含む肺癌、腹膜癌、肝細胞癌、胃腸癌及び胃腸間質癌を含む胃癌または胃癌、膵臓癌、神経膠芽細胞腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、尿路癌、肝細胞癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜または子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌または腎癌、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝癌、肛門癌、陰茎癌、黒色腫、表在拡大型黒色腫、悪性黒子型黒色腫、末端性黒子型黒色腫、結節型黒色腫、多発性骨髄腫及びＢ細胞リンパ腫；慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）；急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）；ヘアリーセル白血病；慢性骨髄芽球性白血病；及び移植後リンパ増殖性障害（ＰＴＬＤ）、さらに、母斑症と関連する異常血管増殖、浮腫（例えば、脳腫瘍に関連するもの）、メイグス症候群、脳及び頭頸部癌、ならびに関連する転移が含まれる。一部の実施形態では、がんは、結腸直腸癌である。一部の実施形態では、がんは、非小細胞肺癌、神経膠芽細胞腫、神経芽細胞腫、腎細胞癌、膀胱癌、卵巣癌、黒色腫、乳癌、胃癌、及び肝細胞癌から選択される。一部の実施形態では、がんは、三種陰性乳癌である。一部の実施形態では、がんは、初期癌または後期癌であってもよい。一部の実施形態では、がんは、原発性腫瘍であってもよい。一部の実施形態では、がんは、上記の種類のがんのいずれかに由来する第２の部位の転移性腫瘍であってもよい。
【０４２７】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、限定ではないが、膀胱癌、乳癌、結腸及び直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、及び甲状腺癌を含むがんを予防する、そのリスクを減少させる、またはそれを処置するために使用し得る。
【０４２８】
一部の実施形態では、本開示は、個体に、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体の治療有効量を投与することによって、がんを予防する、そのリスクを減少させる、またはそれを有する個体を治療する方法を提供する。
【０４２９】
一部の実施形態では、方法は、個体に、阻害性チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体、及び／または別の標準もしくは調査的抗がん療法を投与することをさらに含む。一部の実施形態では、阻害チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体は、単離抗体と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、阻害チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＰＤ−Ｌ２抗体、抗ＰＤ−１抗体、抗Ｂ７−Ｈ３抗体、抗Ｂ７−Ｈ４抗体、及び抗ＨＶＥＭ抗体、抗Ｂ及びＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）抗体、抗キラー阻害性受容体（ＫＩＲ）抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗ＴＩＭ３抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、抗ＬＡＧ−３抗体、抗ホスファチジルセリン抗体、抗ＣＤ２７抗体、ならびにそれらの任意の組合せから選択される。一部の実施形態では、標準または調査的抗がん療法は、放射線療法、細胞傷害性化学療法、標的療法、イマチニブ（Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標））、トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））、養子細胞移入（ＡＣＴ）、キメラ抗原受容体Ｔ細胞移入（ＣＡＲ−Ｔ）、ワクチン療法、ホルモン療法、ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））、オファツムマブ（Ａｒｚｅｒｒａ（登録商標））、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）、ＭａｂＴｈｅｒａ（登録商標）、Ｚｙｔｕｘ（登録商標））、冷凍療法、アブレーション、高周波アブレーション、及びサイトカイン療法から選択される１つまたは複数の療法である。
【０４３０】
一部の実施形態では、方法は、個体に、阻害性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１つの抗体を投与することをさらに含む。一部の実施形態では、阻害性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１つの抗体は、単離抗体と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、阻害性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１つの抗体は、抗ＣＣＬ２抗体、抗ＣＳＦ−１抗体、抗ＩＬ−２抗体、及びそれらの任意の組み合わせから選択される。
【０４３１】
一部の実施形態では、方法は、個体に、刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する少なくとも１つのアゴニスト抗体を投与することをさらに含む。一部の実施形態では、刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する少なくとも１つのアゴニスト抗体を、単離抗体と組み合わせて投与する。一部の実施形態では、刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する少なくとも１つのアゴニスト抗体は、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体、アゴニスト抗ＯＸ４０抗体、アゴニスト抗ＩＣＯＳ抗体、アゴニスト抗ＣＤ２８抗体、アゴニスト抗ＣＤ１３７／４−１ＢＢ抗体、アゴニスト抗ＣＤ２７抗体、アゴニスト抗グルココルチコイド誘導性ＴＮＦＲ関連タンパク質ＧＩＴＲ抗体、及びそれらの任意の組み合わせから選択される。
【０４３２】
一部の実施形態では、方法は、個体に、少なくとも１つの刺激性サイトカインを投与することをさらに含む。一部の実施形態では、少なくとも１つの刺激性サイトカインは、単離抗体と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、少なくとも１つの刺激性サイトカインは、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−１０、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ケモカインタンパク質ファミリーのＴＧＦ−ベータメンバー、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＩＬ−３３、ＬＩＦ、ＩＦＮ−ガンマ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＴＧＦ−ベータ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＬ−２、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＣＸＣＬ１０、ＣＣＬ４、ＭＣＰ−１、ＶＥＧＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、及びそれらの任意の組み合わせから選択される。
【０４３３】
キット／製品
本開示はまた、本開示の単離抗体（例えば、本明細書に記載の抗ＴＲＥＭ２もしくは抗ＤＡＰ１２抗体）またはその機能的フラグメントを含有するキットを提供する。本開示のキットは、本開示の精製された抗体を含む１つまたは複数の容器を含んでもよい。一部の実施形態では、キットは、本開示の方法に従って使用するための取扱説明書をさらに含む。一部の実施形態では、これらの取扱説明書は、本開示の任意の方法に従って、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、那須−ハコラ病、多発性硬化症、及びがんから選択される疾患、障害、または損傷を予防する、そのリスクを低減させる、またはそれを有する個体を治療するための、本開示の単離抗体（例えば、本明細書に記載の抗ＴＲＥＭ２または抗ＤＡＰ１２抗体）の投与の記載を含む。
【０４３４】
一部の実施形態では、説明書は、例えば、個体、組織サンプル、または細胞において、ＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２を検出する方法の記載を含む。キットは、その個体が疾患及び疾患の段階を有するかどうかを識別することに基づき、処置に適した個体を選択する記載をさらに含んでもよい。
【０４３５】
一部の実施形態では、キットは、本開示の別の抗体（例えば、阻害性チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体、阻害性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１つの抗体、及び／または刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する少なくとも１つのアゴニスト抗体）、及び／または少なくとも１つの刺激性サイトカインをさらに含んでもよい。一部の実施形態では、キットは、本開示の任意の方法に従って、抗体及び／もしくは刺激性サイトカインを本開示の単離抗体（例えば、本明細書に記載の抗ＴＲＥＭ２アンタゴニスト抗体）と組み合わせて使用するための取扱説明書、本開示の単離抗体を抗体及び／もしくは刺激性サイトカインと組み合わせて使用するための取扱説明書、または本開示の単離抗体及び抗体及び／もしくは刺激性サイトカインを使用するための取扱説明書をさらに含んでもよい。
【０４３６】
取扱説明書は一般に、意図された処置のための投薬量、投薬スケジュール、及び投与経路に関する情報を含む。容器は、単位用量、バルクパッケージ（例えば、複数回用量パッケージ）またはサブユニット用量であってもよい。本開示のキットで供給される取扱説明書は典型的には、ラベルまたは添付文書（例えば、キットに含まれる紙シート）に書かれた取扱説明書であるが、機械で読み取ることができる取扱説明書（例えば、磁気または光学記憶ディスク上に担持される取扱説明書）も許容される。
【０４３７】
ラベルまたは添付文書は、組成物が、例えば、本開示の疾患を処置するために使用されることを示す。取扱説明書は、本明細書に記載の方法のいずれかを実行するために提供されてもよい。
【０４３８】
本開示のキットは、適切なパッケージング内にある。適切なパッケージングには、限定されないが、バイアル、ボトル、ジャー、フレキシブルパッケージング（例えば、密封マイラーまたはプラスチックバッグ）などが含まれる。吸入器、経鼻投与デバイス（例えば、アトマイザー）、またはミニポンプなどの注入デバイスなどの特定のデバイスと組み合わせて使用するためのパッケージも企図される。キットは、滅菌アクセスポートを有してもよい（例えば、容器は、静脈内溶液バッグまたは皮下注射針によって穿刺可能な栓を有するバイアルであってもよい）。容器はまた、滅菌アクセスポートを有してもよい（例えば、容器は、静脈内溶液バッグまたは皮下注射針によって穿刺可能な栓を有するバイアルであってもよい）。組成物中の少なくとも１つの活性薬は、本開示の単離抗体（例えば、本明細書に記載の抗ＴＲＥＭ２または抗ＤＡＰ１２抗体）である。容器は、第２の薬学的に活性な薬剤をさらに含んでもよい。
【０４３９】
キットは任意選択で、緩衝剤及び説明情報などの追加の構成要素を提供してもよい。通常、キットは、容器、及び容器上の、または容器に伴うラベルまたは添付文書（複数可）を含む。
【０４４０】
診断用途
本開示の単離抗体（例えば、本明細書に記載の抗ＴＲＥＭ２または抗ＤＡＰ１２抗体）は、診断実用性も有する。したがって、本開示は、個体または個体に由来する組織サンプルでのＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２の検出などの診断目的のために、本開示の抗体またはそれらの機能的フラグメントを使用する方法を提供する。
【０４４１】
一部の実施形態では、個体は、ヒトである。一部の実施形態では、個体は、がんに罹患している、またはこれを発症するリスクのあるヒト患者である。一部の実施形態では、診断方法は、生検標本、組織、または細胞などの生体サンプルにおいてＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２を検出することを含む。本開示の単離抗体（例えば、本明細書に記載の抗ＴＲＥＭ２または抗ＤＡＰ１２抗体）が、生体サンプルと接触し、抗原結合抗体が検出される。例えば、腫瘍サンプル（例えば、生検標本）は、腫瘍関連マクロファージ（例えば、Ｍ２型マクロファージ）を検出及び／または定量化するために、本明細書に記載の抗ＴＲＥＭ２または抗ＤＡＰ１２抗体で染色されてもよい。検出方法は、抗原結合抗体の定量化を含んでもよい。生体サンプルにおける抗体検出は、免疫蛍光顕微鏡検査、免疫細胞化学、免疫組織化学、ＥＬＩＳＡ、ＦＡＣＳ解析、免疫沈降、またはマイクロ陽電子放射型断層撮影を含む当技術分野で公知の任意の方法で行われてもよい。ある特定の実施形態では、抗体は、例えば、１８Ｆで放射性標識され、続いて、マイクロ陽電子放射型断層撮影を利用して検出される。抗体結合はまた、陽電子放射型断層撮影（ＰＥＴ）、Ｘ線コンピュータ断層撮影、単光子放射型コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）、及びコンピュータ体軸断層撮影（ＣＡＴ）などの非侵襲的技術によって、患者において定量化されてもよい。
【０４４２】
他の実施形態では、本開示の単離抗体（例えば、本明細書に記載の抗ＴＲＥＭ２または抗ＤＡＰ１２抗体）は、例えば、前臨床疾患モデル（例えば、非ヒト疾患モデル）から得られる脳標本のミクログリアを検出及び／または定量化するために使用され得る。したがって、本開示の単離抗体（例えば、本明細書に記載の抗ＴＲＥＭ２または抗ＤＡＰ１２抗体）は、対照と比較して、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、那須−ハコラ病、または多発性硬化症などの神経系疾患または損傷のためのモデルにおける処置後の治療応答を評価する際に有用であり得る。
【０４４３】
本開示は、以下の実施例を参照することによって、より十分に理解されるであろう。しかしながら、これらは、本開示の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。本開示全体にわたる全ての引用は、参照によって明示的に本明細書に組み込まれる。
【実施例】
【０４４４】
実施例１：アゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体の生産、同定、及び特性評価
序文
ヒトＴＲＥＭ２プレタンパク質のアミノ酸配列を、以下で配列番号１に示す。ヒトＴＲＥＭ２は、配列番号１のアミノ残基１〜１８に位置するシグナルペプチドを含有する。ヒトＴＲＥＭ２は、配列番号１のアミノ残基２９〜１１２に位置する細胞外免疫グロブリン様可変型（ＩｇＶ）ドメイン、配列番号１のアミノ残基１１３〜１７４に位置する追加の細胞外配列、配列番号１のアミノ残基１７５〜１９５に位置する膜貫通ドメイン、及び配列番号１のアミノ残基１９６〜２３０に位置する細胞内ドメインを含有する。
【０４４５】
ＴＲＥＭ２アミノ酸配列（配列番号１）：
2018537956.tif 000011
【０４４６】
ヒトＴＲＥＭ２の公知の特徴は、膜貫通ドメインが、ＤＡＰ１２中のアスパラギン酸と相互作用することができるリシン（ａａ１８６）、ＴＲＥＭ２、ＴＲＥＭ１、及び他の関連するＩｇＶファミリーメンバーからのシグナル伝達を変換する、鍵となるアダプタータンパク質を含有することである。
【０４４７】
ヒトＴＲＥＭ２のＢＬＡＳＴ分析によって、１８の関連するホモログを同定した。これらのホモログは、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞受容体ＮＫ−ｐ４４（ＮＣＴＲ２）、多量体免疫グロブリン受容体（ｐＩｇＲ）、ＣＤ３００Ｅ、ＣＤ３００Ａ、ＣＤ３００Ｃ、及びＴＲＥＭＬ１／ＴＬＴ１を含んでいた。最も近いホモログを、ＩｇＶドメイン内のＴＲＥＭ２と類似性を有するＮＣＴＲ２と同定した（図１Ａ）。ＢＬＡＳＴ分析によって、ＴＲＥＭタンパク質を他のＩｇＶファミリータンパク質とも比較した（図１Ｂ）。
【０４４８】
ＴＲＥＭ２はまた、ＴＲＥＭ１に関連する。ＴＲＥＭ１及びＴＲＥＭ２のアミノ酸配列のアラインメントを、双方向ｂｌａｓｔによって生成した（図２）。これは、ＩｇＶドメインにも限定される。
【０４４９】
マウスハイブリドーマ技術、ファージディスプレイ技術、及び酵母ディスプレイ技術を使用して、ＴＲＥＭ２の細胞外ドメイン、特に細胞外ドメイン（配列番号１のアミノ酸残基１９〜１７４）に結合する抗体を生成する。次いで、抗体を、以下の実施例２〜４８に記載されているとおり、インビボで、ＴＲＥＭ２を発現する細胞と結合する能力ならびに、ＴＲＥＭ２シグナル伝達ならびに細胞中の及び動物全体の機能を活性化する能力についてスクリーニングする。例えば、ＩｇＶドメイン（アミノ酸残基２９〜１１２）を標的とするアゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体を生産することができる。ＩｇＶドメインは、標的に結合し、受容体の多量体化を介して、活性化をもたらす。したがって、これらのドメインは、アゴニスト抗体の合理的な標的である。それらはまた、高度に分岐している。
【０４５０】
結果
抗ＴＲＥＭ２抗体の生産
免疫化手順
迅速プライム法：４頭の５０日齢の雌のＢＡＬＢ／ｃマウスを、次の手順を使用して免疫化した。ヒトＴＲＥＭ２抗原は含有するが、アジュバントは含有しない一連の皮下水性注射剤を１９日間にわたって与えた。マウスを、Ｌａｂ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ製の排気口付きラックシステム内で飼育した。４頭すべてのマウスを、１９日目に安楽死させ、リンパ球をハイブリドーマ細胞系生成のために採取した。
【０４５１】
標準方法：４頭の５０日齢の雌のＢＡＬＢ／ｃマウス、ＮＺＢ／Ｗマウス、またはＴｒｅｍ２ｔｍ１（ＫＯＭＰ）Ｖｌｃｇマウスを、次の手順を使用して免疫化した。マウスを、Ｌａｂ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ製の排気口付きラックシステム内で飼育した。マウスに、３週間ごとに、マウス１頭当たり２５μｇのタンパク質抗原（マウス１頭当たり合計体積１２５μＬ）で、ＣｐＧ−ＯＤＮアジュバント中に混合させたヒトＴＲＥＭ２抗原を腹腔内注射した。第２の追加免疫から７日後に、伏在静脈穿刺によって、試験採血を行った。試験採血（免疫血清）を、間接ＥＬＩＳＡアッセイによって試験して、融合に最良の２頭の応答マウスを決定した。それらのマウスは、３回目及び４回目の追加免疫、ならびに融合前に力価を評価するための、追加免疫から７日後の別の試験採血を必要とすることがある。抗体力価が十分に高いときに、最良の２頭の応答マウスに、外側尾静脈から最後の静脈内追加免疫を与える。ＩＶ追加免疫から４日後に、マウスを融合のために安楽死させた。脾臓を採取し、脾臓から単離されたリンパ球を、ハイブリドーマを生産するための融合プロセスにおいて使用した。
【０４５２】
ＨＴＶ法
１０頭の雌のＴｒｅｍ２ｔｍ１（ＫＯＭＰ）Ｖｌｃｇマウスを、Ｂａｔｅｓ  ｅｔ  ａｌ．、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ２００６、４０（２）：１９９−２０８及びＨａｚｅｎ  ｅｔ  ａｌ．、Ｌａｎｄｅｓ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  ２０１４、６：１、９５−１０７に従って、次の手順を使用して免疫化した。マウスをＬａｂ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ製の排気口付きラックシステム内で飼育した。内毒素非含有組換えＤＮＡ構築物は、ＢｌｕｅＳｋｙ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓによって生産された。ヒトＴｒｅｍ２−Ｄａｐ１２融合タンパク質はｐＣＡＧＧＳ−Ｋａｎプラスミド内にサブクローニングし、ｐＵＮＯ−ｍＧＭＣＳＦ及びｐＵＮＯ−ｍＦｌｔ３ＬａプラスミドはＫｅｒａｆａｓｔから購入した。ＰＢＳ中のプラスミドＤＮＡを温リンゲル液中で、マウス体重の１０％まで希釈し、２９Ｇ針を備えた３ｍｌシリンジに移した。水圧尾静脈注射（ｈｙｄｒｏｄｙｎａｍｉｃ  ｔａｉｌ  ｖｅｉｎ  ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ；ＨＴＶ）では、ヒートパッド上で、マウスに、イソフルランで軽く麻酔をかけ、ＤＮＡを、６〜１０秒間かけて外側尾静脈にボーラス注射した。マウスをヒートパッド上で２分間にわたって回復させ、注射の後に１０分間にわたって、いずれかの急性作用について観察した。マウスを５回まで毎週、追加免疫した。Ｔｒｅｍ２抗原で間接ＥＬＩＳＡを使用して、４回目の追加免疫から５日後に、マウスから試験採血することによって、免疫応答を評価した。最良のＩｇＧ力価を示したマウスをハイブリドーマ発生のために使用することとする。
【０４５３】
ハイブリドーマ発生
リンパ球を単離し、標準Ｒｏｃｈｅプロトコルに従って、ポリ−エチレングリコール（ＰＥＧ１５００）の存在下でマウスＳＰ２／０骨髄腫細胞と融合した。単一ステップクローニング法（ＨＡＴ選択）を使用して、融合した細胞を培養した。この方法は、ハイブリドーマ選択及びクローニングを組み合わせて１ステップにするために、半固体メチルセルロースベースのＨＡＴ選択培地を使用する。単細胞由来ハイブリドーマは増殖して、半固体培地上でモノクローナルコロニーを形成する。融合事象から１０日後に、９４８の得られたハイブリドーマクローンを９６ウェル組織培養プレートに移し、中央対数増殖が達成されるまで（５日間）、ＨＴ培地内で増殖させた。
【０４５４】
ハイブリドーマスクリーニング
９４８のハイブリドーマからの組織培養上清を、スクリーニング抗原（Ｐｒｉｍａｒｙ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ）で間接ＥＬＩＳＡによって試験し、ヤギ抗ＩｇＧ／ＩｇＭ（Ｈ＆Ｌ）−ＨＲＰ二次を使用して、ＩｇＧ及びＩｇＭ抗体の両方について調べ、ＴＭＢ基質で展開した。このアッセイにおいて０．２ＯＤ超のクローンを、試験の次のラウンドに入れた。陽性培養を、分泌を確認するためにスクリーニング抗原で、及び非特異的または「粘着性」ｍＡｂを除去するために無関連抗原（ヒトトランスフェリン）で再試験し、偽陽性を排除する。抗体捕捉ＥＬＩＳＡによって、目的のすべてのクローンをアイソタイプ判別して（ｉｓｏｔｙｐｅｄ）、それらが、ＩｇＧまたはＩｇＭアイソタイプであるかを決定した。
【０４５５】
ハイブリドーマ細胞培養
目的のハイブリドーマ細胞系を、９６ウェルプレートに移した後に、３２日間にわたって２４ウェル培養プレート内で培養で維持した。これは、安定期間と称され、クローンが安定及び分泌を維持しているかを試験する。この安定期間中に、−８０℃貯蔵（６カ月生存可能）のために、一時的に凍結させる細胞系バックアップを目的のすべてのクローンから作製した。この期間中に、ハイブリドーマを、分泌及び特異性について定期的に試験した。
【０４５６】
サブクローニング
上位のハイブリドーマ細胞系（クローン）をサブクローニングして、モノクローン性を保証した。シングルステップクローニングシステムを再び使用して親クローンをプレーティングすることによって、サブクローニングを行った。２４〜９０のサブクローンを９６ウェル培養プレートに移した。間接ＥＬＩＳＡ及び抗体捕捉ＥＬＩＳＡによって、サブクローンをスクリーニングした。培養で拡大するために、各親で上位のサブクローンを採取した。＜５０％クローナルであった任意の親クローンで、サブクローニングの第２のラウンドを行った。
【０４５７】
次いで、抗体をＴＲＥＭ２結合についてスクリーニングした。ヒトＴＲＥＭ２への結合について陽性であった抗体を、リガンド結合を遮断する能力、及び多数の細胞種においてリガンド誘導ＴＲＥＭ２活性を誘導する、増強する、または別段に増加させる能力について試験した。抗体のそれぞれのアイソタイプ及びビン分類を表１に列挙する。表１では、「ＮＤ」は、ビン分類が決定されていない抗体を指す。
表１：抗ＴＲＥＭ２抗体
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【０４５８】
抗体重鎖及び軽鎖可変ドメイン配列
標準的な技術を使用して、生成した抗体の軽鎖可変及び重鎖可変ドメインをコードするアミノ酸配列を決定した。抗体のＥＵまたはＫａｂａｔ軽鎖ＨＶＲ配列を表２Ａに記載する。抗体のＥＵまたはＫａｂａｔ軽鎖ＨＶＲコンセンサス配列を表２Ｂに記載する。抗体のＥＵまたはＫａｂａｔ重鎖ＨＶＲ配列を表３Ａに記載する。抗体のＥＵまたはＫａｂａｔ重鎖ＨＶＲコンセンサス配列を表３Ｂに記載する。抗体のＥＵまたはＫａｂａｔ軽鎖フレームワーク（ＦＲ）配列を表４Ａに記載する。抗体のＥＵまたはＫａｂａｔ重鎖フレームワーク（ＦＲ）配列を表４Ｂに記載する。ＥＵまたはＫａｂａｔ重鎖ＨＶＲ
表２Ａ：ＥＵまたはＫａｂａｔ軽鎖ＨＶＲ配列
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表２Ｂ：ＥＵまたはＫａｂａｔ軽鎖ＨＶＲコンセンサス配列
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表３Ａ：ＥＵまたはＫａｂａｔ重鎖ＨＶＲ配列
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表３Ｂ：ＥＵまたはＫａｂａｔ重鎖ＨＶＲコンセンサス配列
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表４Ａ：ＥＵまたはＫａｂａｔ軽鎖フレームワーク配列
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表４Ｂ：ＥＵまたはＫａｂａｔ重鎖フレームワーク配列
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【０４５９】
ＴＲＥＭ２抗体の特徴づけ
ＴＲＥＭ２抗体の最初の特徴づけは、マクロファージ及び他の初代ヒトまたはマウス免疫細胞上に発現されるＴＲＥＭ２と結合する能力を決定することを含んだ。細胞を採取し、９６ウェルプレートに１０５／ｍｌでプレーティングし、洗浄し、氷中で１時間にわたって、１０〜５０ｕｇ／ｍｌのＭａｂ及びＦｃブロッキング試薬を含有するＰＢＳ１００ｕｌ中でインキュベートした。次いで、細胞を２回洗浄し、氷中で３０分間にわたって、５ｕｇ／ｍｌのＰＥコンジュゲート二次抗体を含有するＰＢＳ１００ｕｌ中でインキュベートした。細胞を冷ＰＢＳ中で２回洗浄し、ＢＤ  ＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏで得た。平均蛍光強度（ＭＦＩ）値または陽性細胞％のデータ分析及び計算を、ＦｌｏｗＪｏ（ＴｒｅｅＳｔａｒ）ソフトウェアバージョン１０．０．７で実施した。
【０４６０】
例えば、抗体７Ｅ５及び２Ｈ８は、ＦＡＣＳ解析によって検出された陽性ＴＲＥＭ２抗体染色が示すとおり、組換えマウスＴＲＥＭ２を発現するマウス細胞系（ＢＷＺ  Ｔ２）に結合することを実証した（黒輪郭のヒストグラム）（図３Ａ）。陰性アイソタイプ対照（抗体ｍＩｇＧ１）は、結合を示さなかった。抗体７Ｅ５及び２Ｈ８は、抗体がＷＴ（ＴＲＥＭ＋／＋）骨髄由来マウスマクロファージ（ＢＭＭａｃ、ｍＭａｃ）には結合するが、ＴＲＥＭ２欠損（ＴＲＥＭ２−／−）マウスマクロファージ（ＢＭＭａｃ、ｍＭａｃｓ）には結合しないことを示した（図３Ｂ）。図３Ｃは、親ＢＷＺ細胞ではなく、組換えマウスＴＲＥＭ２を発現するＢＷＺ細胞へのＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５の用量依存的結合を示す用量反応曲線を示す。抗体１０Ａ９、１０Ｃ１、及び８Ｆ８は、組換えヒトＴＲＥＭ２を発現するヒト細胞系（２９３）（図４Ａ）及び初代ヒト樹状細胞（ｈＤＣ）（図４Ｂ）の両方への結合を示した。
【０４６１】
ＴＲＥＭ２抗体１Ｈ７、２Ｆ６、２Ｈ８、３Ａ７、３Ｂ１０、７Ｅ５、７Ｆ８、８Ｆ８、及び１１Ｈ５が結合するマウス細胞種での平均蛍光強度（ＭＦＩ）値を表５に列挙する。結合を、親細胞系（親ＢＷＺ）及びマウスＴＲＥＭ２を過剰発現するＢＷＺ細胞（ＢＷＺｍＴ２）と比較する。表はまた、ＴＲＥＭ２欠損の初代マウスマクロファージ（ＫＯ  ＢＭＭＡＣＳ）への結合を、野生型初代マクロファージ（ＷＴ  ＢＭＭＡＣＳ）と比較して示す。表５の結果は、抗体１Ｈ７、２Ｆ６、２Ｈ８、３Ａ７、３Ｂ１０、７Ｅ５、７Ｆ８、８Ｆ８、及び１１Ｈ５が、細胞膜上にマウスＴＲＥＭ２を過剰発現する細胞系には特異的に結合するが、ＴＲＥＭ２を発現しない対照細胞系には結合しないことを示す。それらの抗体はまた、マウス初代マクロファージに結合する。ＴＲＥＭ２  ＫＯマウスに由来する初代細胞、またはアイソタイプ対照抗体ｍＩｇＧ１では検出されないので、マウス初代細胞への結合は特異的である。
【０４６２】
表５では、「ｍＩｇＧ１」は、アイソタイプ対照抗体を指し、「ＮＴ」は、非処置対照を指し、「２°抗体のみ」は、二次抗体のみ対照を指し、「ＲＤＴ２」は、市販の抗ＴＲＥＭ２抗体（Ｒ＆Ｄ  Ｃａｔ＃Ｆ７Ｅ５７２９１）を指し、「ＮＤ」は、未決定を指す。
表５：マウス細胞への抗ＴＲＥＭ２抗体の結合
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【０４６３】
ＴＲＥＭ２抗体１Ａ７、３Ａ２、３Ｂ１０、６Ｇ１２、６Ｈ６、７Ａ９、７Ｂ３、８Ａ１、８Ｅ１０、８Ｆ１１、８Ｆ８、９Ｆ５、９Ｇ１、９Ｇ３、１０Ａ９、１０Ｃ１、１１Ａ８、１２Ｄ９、１２Ｅ２、１２Ｆ９、及び１２Ｇ６が結合するヒト細胞種での平均蛍光強度（ＭＦＩ）値を表６に列挙する。結合を、親細胞系（親ＨＥＫ）及びヒトＴＲＥＭ２を過剰発現するＨＥＫ細胞（ＨＥＫｈＴ２）と比較する。表はまた、初代ヒト樹状細胞（ｈＤＣ）及びマクロファージ（ｈＭＡＣ）への結合を示す。表６の結果は、抗体１Ａ７、３Ａ２、３Ｂ１０、６Ｇ１２、６Ｈ６、７Ａ９、７Ｂ３、８Ａ１、８Ｅ１０、８Ｆ１１、８Ｆ８、９Ｆ５、９Ｇ１、９Ｇ３、１０Ａ９、１０Ｃ１、１１Ａ８、１２Ｄ９、１２Ｅ２、１２Ｆ９、及び１２Ｇ６が、細胞膜上にヒトＴＲＥＭ２を過剰発現する細胞系には特異的に結合するが、ＴＲＥＭ２を発現しない対照細胞系には結合しないことを示している。抗体はまた、ヒト初代樹状細胞及びマクロファージに結合する。アイソタイプ対照抗体ｍＩｇＧ１、ｍＩｇＧ２ａ、ｍＩｇＧ２ｂでは検出されないので、ヒト初代細胞への結合は特異的である。
【０４６４】
表６では、「培地」は、培養培地のみの対照を指し、「２°抗体のみ」は、二次抗体のみの対照を指し、「ｍＩｇＧ１」は、マウスＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体を指し、「ｍＩｇＧ２ａ」は、マウスＩｇＧ２ａアイソタイプ対照抗体を指し、「ｍＩｇＧ２ｂ」は、マウスＩｇＧ２ｂアイソタイプ対照抗体を指し、「ｍＩｇＭ」は、マウスＩｇＭアイソタイプ対照抗体を指し、「ｒＩｇＧ１」は、ラットＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体を指し、「ＲＩｇＧ２ａ」は、ラットＩｇＧ２ａアイソタイプ対照抗体を指し、「ＲＩｇＧ２ｂ」は、ラットＩｇＧ２ｂアイソタイプ対照抗体を指し、「ＮＤ」は、未決定を指す。
【０４６５】
表６：ヒト細胞への抗ＴＲＥＭ２抗体結合
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【０４６６】
抗体のヒト化
ヒト投与における免疫原性を防ぐために、抗体のヒト化を使用して、異なる種で産生された抗体を配列及び構造的関係の点でヒト抗体に最も似るように変更する。異なる種に由来する抗体は、非ヒト抗体の特異性決定領域（ＳＤＲ）をヒト抗体フレームワーク上にグラフト化することを可能にする、特徴的な配列及び構造的特徴を共有する。これにより、非ヒト抗体の特異性が保持される。ヒト化プロセスは、フレームワーク領域及びＳＤＲを含む、非ヒト抗体の配列及び特徴の特定を伴う。抗体のヒト化には、以下の基準が使用される。１）非ヒト抗体と既知のヒト抗体との間のフレームワーク領域の類似性パーセント、２）非ヒト抗体と既知のヒト抗体との間のＳＤＲの長さ類似性、３）ヒト抗体のフレームワーク領域を生成するために使用される遺伝子、及び４）ヒト抗体フレームワークのヒト化及び治療としての以前の使用。フレームワーク領域及びＳＤＲ長さの類似性は、その差が抗体の特異性を変更し得る抗体の構造的差異をもたらす場合があるので、重要である。ヒト抗体のフレームワークを生成するために使用される特定の遺伝子は、抗体の安定性または特異性にとって有益または不利になることが知られており、したがって、選択的に使用される、または回避される。最後に、ヒト治療で使用されているものを含む、これまでに成功している望ましい半減期を有する忍容性の良好なヒト化フレームワークが、将来性のあるヒト化候補である可能性が高い。
【０４６７】
表７Ａ及び７Ｂに示すとおり、抗体４Ｄ１１、７Ｃ５、６Ｇ１２、８Ｆ１１、８Ｅ１０、７Ｅ５、７Ｆ８、８Ｆ８、１Ｈ７、２Ｈ８、３Ａ２、３Ａ７、３Ｂ１０、４Ｆ１１、６Ｈ６、７Ａ９、７Ｂ３、８Ａ１、９Ｆ５、９Ｇ１、９Ｇ３、１０Ａ９、１１Ａ８、１２Ｄ９、１２Ｆ９、１０Ｃ１、７Ｅ９、及び８Ｃ１のそれぞれについて、ヒト化軽鎖及び重鎖可変領域配列を特定した。表７Ａ及び７Ｂにおいて、太字はＣＤＲ配列を示す。
表７Ａ：ヒト化軽鎖可変領域配列
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表７Ｂ：ヒト化重鎖可変領域の配列
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【０４６８】
抗体９Ｆ５のヒト化
マウス抗ＴＲＥＭ２抗体９Ｆ５（Ｔ２−９Ｆ５．１）の重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）配列を、ＮＣＢＩウェブサイト上のＩｇＢＬＡＳＴプログラムへの入力データとして使用した（Ｙｅ、Ｊ．ｅｔ  ａｌ．Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ４１：Ｗ３４−Ｗ４０（２０１３））。ＩｇＢＬＡＳＴはマウスＶＨまたはＶＬ配列を利用して、それを公知のヒト生殖細胞系配列のライブラリと比較する。使用されたデータベースは、ＩＭＧＴヒトＶＨ遺伝子（Ｆ＋ＯＲＦ、２７３生殖細胞系配列）及びＩＭＧＴヒトＶＬカッパ遺伝子（Ｆ＋ＯＲＦ、７４生殖細胞系配列）であった。２Ｆ５抗体ＶＬでは、ヒト生殖細胞系ＩＧＫＶ２−２９（対立遺伝子２）を良好なアクセプター配列として選択し、ヒト軽鎖ＩＧＫＪ２（対立遺伝子１）連結領域（Ｊ遺伝子）を、ＩＭＧＴ（登録商標）  ｔｈｅ  ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ  ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｓｙｓｔｅｍ（登録商標）にまとめられたヒト連結領域配列から選択した（図４Ｃ）。２Ｆ５抗体ＶＨでは、ヒト生殖細胞系ＩＧＨＶ１−４６（対立遺伝子１）を良好なアクセプター配列として選択し、ヒト重鎖ＩＧＨＪ４（対立遺伝子１）連結領域（Ｊ遺伝子）を、ＩＭＧＴ（登録商標）  ｔｈｅ  ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ  ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｓｙｓｔｅｍ（登録商標）にまとめられたヒト連結領域配列から選択した（図４Ｄ）。抗体ＶＬ及びＶＨの相補性決定領域（ＣＤＲ）を、ＡｂＭ定義（ＡｂＭ抗体モデリングソフトウェア）に従って定義した。
【０４６９】
ヒト化抗体の結合を最適化するために、対応する親マウス配列へのヒト生殖細胞系フレームワーク（すなわち、ＶＨ及びＶＬの非ＣＤＲ残基）位の改変が必要となることがある。各ヒト化配列で可能な変化を図４Ｃ及び４Ｄに示す。
【０４７０】
図４Ｃ及び４Ｄは、抗ＴＲＥＭ２抗体９Ｆ５のヒト化バージョンの配列を示している。抗体９Ｆ５のＶＬドメインのＣＤＲ−Ｌ１では、Ａｓｐ３０ｃ−Ｇｌｙ３０ｄは、脱アミドし、続いて、イソアスパルタートを形成する可能性が高い（図４Ｃ）。
【０４７１】
この部位での翻訳後修飾は、その標的への抗体の結合に影響を及ぼし得る。９Ｆ５を、ヒト化してよく、次いで、最終ステップで、ＮＧを、例えば、ＱＧに改変し、結合が維持されているかどうかを決定するために試験してもよい（図４Ｃ）。ＣＤＲ−Ｌ２では、Ａｓｎ５３は、配列及びコンフォメーションに基づき、脱アミドする可能性が低いが、低レベルの脱アミドを示し得、脱アミドのリスクを減少させるために変化させてよい（図４Ｃ）。上記に基づくバリアントＶＬ配列を表７Ａに列挙する。
【０４７２】
抗体９Ｆ５のＶＨドメインには、配列及びコンフォメーションに基づき、脱アミドする可能性が低く、これらの翻訳後修飾の低いレベルを示し得る２個のＡｓｎ（Ａｓｎ５８及びＡｓｎ９８）が存在する（図４Ｄ）。加えて、Ａｓｎ５８及びＡｓｎ９８を、脱アミドリスクを減少させるために変えてもよい（図４Ｄ）。ＣＤＲ−Ｈ１では、Ｔｒｐ３３は、おそらく溶媒曝露され、特にストレス条件下では、酸化する可能性を有する（図４Ｄ）。したがって、Ｔｒｐ３３を、酸化リスクを減少させるために変えてもよい。ＣＤＲ−Ｈ２では、Ａｓｐ５４−Ｇｌｙ５５は、イソアスパルタートを形成する中程度の可能性を有する（図４Ｄ）。したがって、Ａｓｐ５４−Ｇｌｙ５５での翻訳後修飾は、その標的への抗体の結合に影響を及ぼし得る。９Ｆ５をヒト化してもよく、次いで、最終ステップで、ＤＧを、例えば、ＥＧまたは他のアミノ酸に改変し、結合が維持されているかどうかを決定するために試験してもよい。上記に基づくバリアントＶＨ配列を表７Ｂに列挙する。
【０４７３】
実施例２：ＴＲＥＭ２抗体のエピトープマッピング
ＴＲＥＭ２抗体を、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）及びマウスＴＲＥＭ２（配列番号２）全体に及ぶ１５マーまたは２５マーペプチドに結合する能力について試験した。加えて、抗ＴＲＥＭ２抗体９Ｆ５（ＭＡｂ）、Ｔ２１−９（Ｆａｂ）、Ｔ２２（Ｆａｂ）、及びＴ４５−１０（Ｆａｂ）のエピトープを、ショットガン変異誘発によってマッピングした。
【０４７４】
方法論
直鎖１５マーペプチドを、１４残基の重複を有するヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）の配列に基づき合成した。加えて、直鎖２５マーペプチドを、１残基転移を有するヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）またはマウスＴＲＥＭ２（配列番号２）の配列に基づき合成した。合成されたペプチドのそれぞれへのＴＲＥＭ２抗体の結合を、ＥＬＩＳＡをベースとする方法で試験した。このアッセイでは、ペプチドアレイを、（４℃で終夜）一次抗体溶液とインキュベートした。洗浄後に、ペプチドアレイを、２５℃で１時間にわたって、抗体ペルオキシダーゼコンジュゲート（ＳＢＡ、ｃａｔ．ｎｒ．２０１０−０５）の１／１０００希釈物と共にインキュベートした。洗浄後に、ペルオキシダーゼ基質２，２’−アジノ−ジ−３−エチルベンズチアゾリンスルホナート（ＡＢＴＳ）及び２μｌ／ｍｌの３％のＨ２Ｏ２を添加した。１時間後に、発色を測定した。発色を、電荷結合素子（ＣＣＤ）カメラ及び画像処理システムで定量化した。
【０４７５】
別法では、標的分子のエピトープを再構築するために、ループ及びコンビナトリアルペプチドのライブラリを合成した。独自の親水性ポリマー配合物をグラフト化し、続いて、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）をＮ−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）と共に使用してｔ−ブチルオキシカルボニル−ヘキサメチレンジアミン（ＢｏｃＨＭＤＡ）と反応させた後に、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を使用してＢｏｃ基を切断することによって、アミノ官能化ポリプロピレン支持体を得た。このアミノ官能化固体支持体上で、特注変更したＪＡＮＵＳ液体処理ステーション（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）によって、標準的なＦｍｏｃペプチド合成を使用して、ペプチドを合成した。
【０４７６】
構造模倣体の合成は、Ｐｅｐｓｃａｎ特許権下のスカフォールド上化学的結合ペプチド（Ｃｈｅｍｉｃａｌｌｙ  Ｌｉｎｋｅｄ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ｏｎ  Ｓｃａｆｆｏｌｄｓ；ＣＬＩＰＳ）技術を使用して実施した。ＣＬＩＰＳ技術によって、ペプチドを単一ループ及び二重ループに構造化することができる。ＣＬＩＰＳテンプレートは、システイン残基に結合される。ペプチド中の複数のシステインの側鎖が１または２つのＣＬＩＰＳテンプレートに結合される。例えば、ｍＰ２  ＣＬＩＰＳ（２，６−ビス（ブロモメチル）ピリジン）の０．５ｍＭ溶液を炭酸水素アンモニウム（２０ｍＭ、ｐＨ７．８）／アセトニトリル（１：３（ｖ／ｖ））に溶解する。この溶液をペプチドアレイに加える。ＣＬＩＰＳテンプレートは、ペプチドアレイ（３μｌウェルの４５５ウェルプレート）の固相結合ペプチド中に存在する２つのシステインの側鎖に結合する。ペプチドアレイを溶液で完全に覆った状態で、溶液中、３０〜６０分間にわたって穏やかに振盪する。最後に、ペプチドアレイを過剰のＨ２Ｏで十分に洗浄し、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）中の１％ＳＤＳ／０．１％β−メルカプトエタノール含有破壊緩衝液中で、７０℃で３０分間にわたって音波処理し、続いて、Ｈ２Ｏ中でさらに４５分間にわたって音波処理する。Ｔ３  ＣＬＩＰＳ（２，４，６−トリス（ブロモメチル）ピリジン）担持ペプチドを、同様の方法で、ただし、ここでは３つのシステインを使用して作製した。
【０４７７】
ループペプチド：長さ１７の拘束ペプチド。位置２〜１６は、標的配列に由来する１５マーである。天然Ｃｙｓ残基は、アセトアミドメチル基（ＡＣＭ）で保護する。位置１及び１７は、ｍＰ２  ＣＬＩＰＳ部分が結合するＣｙｓである。コンビナトリアルペプチド（不連続模倣体）：長さ３３の拘束ペプチド。位置２〜１６及び１８〜３２は、標的配列に由来する１５マーペプチドであり、天然Ｃｙｓ残基は、ＡＣＭで保護する。位置１、１７及び３３は、Ｔ３  ＣＬＩＰＳ部分が結合するＣｙｓである。
【０４７８】
各合成ペプチドへの抗体の結合を、ＰＥＰＳＣＡＮをベースとするＥＬＩＳＡで試験する。ペプチドアレイを、実験で最適とされた濃度の試験抗体と、ブロッキング溶液（例えば、ＰＢＳ／１％Ｔｗｅｅｎ８０中４％ウマ血清、５％オボアルブミン（ｗ／ｖ））とから構成される試験抗体溶液と共にインキュベートする。ペプチドアレイを試験抗体溶液と共に４℃で一晩インキュベートする。洗浄緩衝液（１×ＰＢＳ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ８０）で十分に洗浄した後に、ペプチドアレイを適切な抗体ペルオキシダーゼ複合体の１／１０００希釈物と共に２５℃で１時間にわたってインキュベートする。洗浄緩衝液で洗浄した後に、ペルオキシダーゼ基質である２，２’−アジノ−ジ−３−エチルベンゾチアゾリンスルホナート（ＡＢＴＳ）及び２μｌ／ｍｌの３％Ｈ２Ｏ２を添加する。１時間後に、発色を測定する。発色は、電荷結合素子（ＣＣＤ）カメラ及び画像処理システムで定量化する。
【０４７９】
別法では、質量分析法を使用して、高次構造エピトープを特定する。抗ＴＲＥＭ２抗体が結合するＴＲＥＭ２タンパク質上の高次構造エピトープの重要な残基を高分解能で決定するために、抗体／抗原複合体を重水素化架橋剤と共にインキュベートし、多酵素によるタンパク質分解切断に供する。架橋したペプチドの濃縮後に、サンプルを高分解能質量分析（ｎＬＣ−Ｏｒｂｉｔｒａｐ  ＭＳ）によって分析し、生成されたデータを、ＸＱｕｅｓｔソフトウェアを使用して解析する。具体的には、ＴＲＥＭ２抗原と抗体の等モル溶液（各５μｌで４μＭ）を混合することによって、ＴＲＥＭ２  ＥＣＤ／抗体複合体を作製する。得られた混合物１μｌを、アセトニトリル／水（１：１、ｖ／ｖ）、ＴＦＡ０．１％中の再結晶化シナピン酸マトリックス（１０ｍｇ／ｍｌ）（Ｋ２００  ＭＡＬＤＩキット）から構成されるマトリックス１μｌと混合する。混合後に、各試料１μｌをＭＡＬＤＩプレート（ＳＣＯＵＴ  ３８４）上にスポットする。室温で結晶化した後に、プレートをＭＡＬＤＩ質量分析計に導入し、直ちに分析する。分析は、３回の繰り返しで行う。単量体抗体、抗原及び抗体ならびに抗原／抗体複合体を表すピークを予想分子量で検出する。
【０４８０】
次いで、高次構造結合のエピトープが、タンパク質分解によって生成された非構造化Ｃ１ｑペプチドと競合するかどうかを決定する。具体的には、ＴＲＥＭ２  ＥＣＤ／抗体複合体が線状ペプチドと競合し得るかどうかを決定するために、ＴＲＥＭ２  ＥＣＤ抗原を固定化ペプシンで消化する。濃度１０μＭの抗原２５μｌを５μＭの固定化ペプシンと混合し、室温で３０分間にわたってインキュベートする。インキュベーション時間後に、サンプルを遠心し、上清をピペットで採取する。タンパク質分解の完了は、リニアモードにおけるＨｉｇｈ−Ｍａｓｓ  ＭＡＬＤＩ質量分析によって制御される。ペプシンタンパク質分解は、１０００〜３５００Ｄａ範囲のペプチドを多量に得られるように最適化する。次に、タンパク質分解によって生成された抗原ペプチド５μｌを抗体（８μＭ）５μｌと混合し、３７℃で６時間にわたってインキュベートする。抗体とＴＲＥＭ２抗原ペプチドのインキュベーション後に、最終混合物がＴＲＥＭ２／抗体／ＴＲＥＭ２抗原ペプチドを２μＭ／２μＭ／２．５μＭで含有するように、混合物５μｌをインタクトＴＲＥＭ２抗原（４μＭ）５μｌと混合する。標準窒素レーザーを備えるＣｏｖａｌＸのＨＭ３相互作用モジュールを使用し、０〜２０００ｋＤａの異なる質量範囲に合わせて、ＭＡＬＤＩ  ＴｏＦ  ＭＳ分析を実施する。この分析には、次の質量分析計パラメータを適用する。リニア・ポジティブモード；イオン源１：２０ｋＶ；イオン源２：１７ｋＶ；パルスイオン抽出：４００ｎｓ；ＨＭ３について：ゲイン電圧：３．１４ｋＶ；ゲイン電圧：３．１４ｋＶ；加速電圧：２０ｋＶ。機器を校正するために、インスリン、ＢＳＡ及びＩｇＧのクラスターを有する外部校正器を適用する。各サンプルについて、３つのスポットを分析する（１スポットあたりレーザーショット数３００）。示されたスペクトルは、合計３００のレーザーショット数に対応する。Ｃｏｍｐｌｅｘ  Ｔｒａｃｋｅｒ解析ソフトウェアバージョン２．０（ＣｏｖａｌＸ  Ｉｎｃ）を使用してＭＳデータを解析する。抗体への結合に関する高次構造エピトープを特定するために、化学的架橋、Ｈｉｇｈ−Ｍａｓｓ  ＭＡＬＤＩ質量分析及びｎＬＣＯｒｂｉｔｒａｐ質量分析を使用して、抗原と抗体との間の相互作用界面について、以下の手順に従う。最終濃度が２μＭ／２μＭの抗体／抗原混合物を得るために、サンプル抗原（濃度４μＭ）５μｌをサンプル抗体（濃度４μＭ）５μｌと混合する。混合物を３７℃で１８０分間にわたってインキュベートする。第１のステップにおいて、スベリン酸ジスクシンイミジルＨ１２（ＤＳＳ−Ｈ１２）架橋剤１ｍｇをスベリン酸ジスクシンイミジルＤ１２（ＤＳＳ−Ｄ１２）架橋剤１ｍｇと混合する。この調製した２ｍｇを、ＤＳＳ  Ｈ１２／Ｄ１２の２ｍｇ／ｍｌ溶液を得るために、ＤＭＦ１ｍｌと混合した。先に調製した抗体／抗原混合物１０μｌを、調製した架橋剤ｄ０／ｄ１２（２ｍｇ／ｍｌ）の溶液１μｌと混合した。架橋反応を達成させるために、この溶液を室温で１８０分間インキュベートする。
【０４８１】
タンパク質分解を促進するために、タンパク質中に存在するジスルフィド結合を還元する必要がある。架橋済みサンプルを炭酸水素アンモニウム（２５ｍＭ、ｐＨ８．３）２０μｌと混合する。ＤＴＴ（５００ｍＭ）２．５μｌを混合した後に、溶液に添加する。次いで、混合物を５５℃で１時間インキュベートする。インキュベーション後に、ヨードアセトアミド（１Ｍ）２．５μｌを添加してから、暗室中、室温で１時間インキュベートする。インキュベーション後に、タンパク質分解に使用する緩衝液１２０μｌを添加することによって、溶液を１／５に希釈する。還元／アルキル化架橋済み試料１４５μｌをトリプシン（Ｓｉｇｍａ、Ｔ６５６７）２μｌと混合する。タンパク質分解混合物を３７℃で一晩インキュベートする。ａ−キモトリプシンタンパク質分解では、タンパク質分解の緩衝液は、Ｔｒｉｓ−ＨＣＬ  １００ｍＭ、ＣａＣｌ２  １０ｍＭ、ｐＨ７．８である。還元／アルキル化架橋済み複合体１４５μｌをα−キモトリプシン２００μＭ  ２μｌと混合し、３０℃で一晩インキュベートする。この分析では、ｎＬＣをオービトラップ質量分析と組み合わせて使用する。Ｘｑｕｅｓｔバージョン２．０及びｓｔａｖｒｏｘソフトウェアを使用して、架橋ペプチドを解析する。次いで、ペプチド及び架橋アミノ酸を特定する。
【０４８２】
結果
２６の抗ＴＲＥＭ２抗体について、ＴＲＥＭ２結合領域を決定した。ヒト及び／またはマウスＴＲＥＭ２内の結合領域を表８Ａ及び８Ｂに列挙する。
表８Ａ：ヒトＴＲＥＭ２へのＴＲＥＭ２抗体の結合領域
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表８Ｂ：マウスＴＲＥＭ２へのＴＲＥＭ２抗体結合領域
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【０４８３】
表８Ａに示されているとおり、抗体５Ａ２及び７Ｄ１は、ヒトＴＲＥＭ２の２つの細胞外ドメイン（ＩｇＶドメインを含む）内のペプチドについてのみ、強固な結合を示した。表８Ａに示されているとおり、抗体５Ａ２及び７Ｄ１によって認識されるペプチドは、配列番号１のアミノ酸残基３５〜４９及び１４０〜１５０に対応し、アミノ酸配列ＳＣＰＹＤＳＭＫＨＷＧＲＲＫＡ及びＤＬＷＦＰＧＥＳＥＳＦを有する。
【０４８４】
表８Ａに示されているとおり、抗体８Ｅ１０は、ヒトＴＲＥＭ２の細胞外ＩｇＶドメイン内のペプチドについてのみ、強固な結合を示した。表８Ａに示されているとおり、抗体８Ｅ１０によって認識されるペプチドは、配列番号１のアミノ酸残基３９〜４９及び６３〜７７に対応し、アミノ酸配列ＤＳＭＫＨＷＧＲＲＫＡ及びＶＶＳＴＨＮＬＷＬＬＳＦＬＲＲを有する。
【０４８５】
表８Ａ及び８Ｂに示されているとおり、抗体２Ｈ８は、ヒト及びマウスＴＲＥＭ２の細胞外ＩｇＶドメイン内のペプチドについてのみ、強固な結合を示した。表８Ａに示されているとおり、抗体２Ｈ８によって認識されるヒトＴＲＥＭ２ペプチドは、配列番号１のアミノ酸残基５１〜６１に対応し、アミノ酸配列ＣＲＱＬＧＥＫＧＰＣＱを有する。表８Ｂに示されているとおり、抗体２Ｈ８によって認識されるマウスＴＲＥＭ２ペプチドは、配列番号２のアミノ酸残基５１〜６１に対応し、アミノ酸配列ＣＲＱＬＧＥＥＧＰＣＱを有する。
【０４８６】
表８Ａに示されているとおり、抗体１８Ｅ４は、ヒトＴＲＥＭ２の細胞外ドメイン内のペプチドについてのみ、強固な結合を示した。表８Ａに示されているとおり、抗体１８Ｅ４によって認識されるペプチドは、配列番号１のアミノ酸残基５５〜６２、１０４〜１０９、及び１４８〜１５８に対応し、アミノ酸配列ＧＥＫＧＰＣＱＲ、ＤＡＧＬＹＱ、及びＥＳＦＥＤＡＨＶＥＨＳを有する。さらに、結合に関係する重要な配列は、配列番号１のアミノ酸残基１５１〜１５５に対応し、アミノ酸配列ＥＤＡＨＶを有することが決定された。
【０４８７】
表８Ａに示されているとおり、抗体４４Ａ８は、ヒトＴＲＥＭ２の細胞外ドメイン内のペプチドについてのみ、強固な結合を示した。表８Ａに示されているとおり、抗体４４Ａ８によって認識されるペプチドは、配列番号１のアミノ酸残基５５〜６２、１０４〜１０９、及び１６０〜１６６に対応し、アミノ酸配列ＧＥＫＧＰＣＱＲ、ＤＡＧＬＹＱ、及びＳＲＳＬＬＥＧを有する。さらに、結合に関係する重要な配列は、配列番号１のアミノ酸残基１６２〜１６５に対応し、アミノ酸配列ＳＬＬＥを有することが決定された。
【０４８８】
表８Ａに示されているとおり、抗体１８Ｄ８は、ヒトＴＲＥＭ２の細胞外ドメイン内のペプチドについてのみ、強固な結合を示した。表８Ａに示されているとおり、抗体１８Ｄ８によって認識されるペプチドは、配列番号１のアミノ酸残基５５〜６５及び１２４〜１３４に対応し、アミノ酸配列ＧＥＫＧＰＣＱＲＶＶＳ及びＶＬＶＥＶＬＡＤＰＬＤを有する。
【０４８９】
表８Ａに示されているとおり、抗体４９Ｅ１２及び１１Ｄ７は、ヒトＴＲＥＭ２の細胞外ドメイン内のペプチドについてのみ、強固な結合を示した。表８Ａに示されているとおり、抗体４９Ｅ１２及び１１Ｄ７によって認識されるペプチドは、配列番号１のアミノ酸残基６３〜７３及び１５６〜１７０に対応し、アミノ酸配列ＶＶＳＴＨＮＬＷＬＬＳ及びＥＨＳＩＳＲＳＬＬＥＧＥＩＰＦを有する。
【０４９０】
表８Ａに示されているとおり、抗体６Ｈ６は、ヒトＴＲＥＭ２の細胞外ドメイン内のペプチドについてのみ、強固な結合を示した。表８Ａに示されているとおり、抗体６Ｈ６によって認識されるペプチドは、配列番号１のアミノ酸残基１１７〜１３３に対応し、アミノ酸配列ＥＡＤＴＬＲＫＶＬＶＥＶＬＡＤＰＬを有する。
【０４９１】
表８Ａに示されているとおり、抗体８Ｃ３、７Ｅ９、１２Ｆ９、９Ｇ１、９Ｇ３、１１Ａ８、及び７Ｂ３は、ヒトＴＲＥＭ２の細胞外ドメイン内のペプチドについてのみ、強固な結合を示した。表８Ａに示されているとおり、抗体８Ｃ３、７Ｅ９、１２Ｆ９、９Ｇ１、９Ｇ３、１１Ａ８、及び７Ｂ３によって認識されるペプチドは、配列番号１のアミノ酸残基１３７〜１４６に対応し、アミノ酸配列ＤＡＧＤＬＷＦＰＧＥを有する。
【０４９２】
表８Ａ及び８Ｂに示されているとおり、抗体３Ｂ１０及び８Ｆ８は、ヒト及びマウスＴＲＥＭ２の細胞外ドメイン内のペプチドについてのみ、強固な結合を示した。表８Ａに示されているとおり、抗体３Ｂ１０及び８Ｆ８によって認識されるヒトＴＲＥＭ２ペプチドは、配列番号１のアミノ酸残基１３９〜１４７に対応し、アミノ酸配列ＧＤＬＷＦＰＧＥＳを有する。表８Ｂに示されているとおり、抗体３Ｂ１０及び８Ｆ８によって認識されるマウスＴＲＥＭ２ペプチドは、配列番号２のアミノ酸残基１３９〜１４７に対応し、アミノ酸配列ＧＤＬＷＶＰＥＥＳを有する。さらに、抗体３Ｂ１０及び８Ｆ８によって認識されるヒト及びマウスペプチドは、アミノ配列：ＧＤＬＷ［Ｆ／Ｖ］Ｐ［Ｇ／Ｅ］ＥＳ（配列番号８８４）を有する。
【０４９３】
表８Ａに示されているとおり、抗体１１Ｈ５、６Ｇ１２、１０Ａ９、１０Ｃ１、及び３Ａ２は、ヒトＴＲＥＭ２の細胞外ドメイン内のペプチドについてのみ、強固な結合を示した。表８Ａに示されているとおり、抗体１１Ｈ５、６Ｇ１２、１０Ａ９、１０Ｃ１、及び３Ａ２によって認識されるペプチドは、配列番号１のアミノ酸残基１３９〜１４９に対応し、アミノ酸配列ＧＤＬＷＦＰＧＥＳＥＳを有する。
【０４９４】
表８Ａ及び８Ｂに示されているとおり、抗体２Ｆ６は、ヒト及びマウスＴＲＥＭ２の細胞外ドメイン内のペプチドについてのみ、強固な結合を示した。表８Ａに示されているとおり、抗体２Ｆ６によって認識されるヒトＴＲＥＭ２ペプチドは、配列番号１のアミノ酸残基１３９〜１４９に対応し、アミノ酸配列ＧＤＬＷＦＰＧＥＳＥＳを有する。表８Ｂに示されているとおり、抗体２Ｆ６によって認識されるマウスＴＲＥＭ２ペプチドは、配列番号２のアミノ酸残基１３９〜１４７に対応し、アミノ酸配列ＧＤＬＷＶＰＥＥＳを有する。
【０４９５】
表８Ａに示されているとおり、抗体１Ｂ４、２９Ｆ６、７Ｂ１１、４０Ｄ５、４５Ｄ６、２９Ｆ７、及び２１Ｄ１０は、ヒト及びマウスＴＲＥＭ２の細胞外ドメイン内のペプチドについてのみ、強固な結合を示した。表８Ａに示されているとおり、抗体１Ｂ４、２９Ｆ６、７Ｂ１１、４０Ｄ５、４５Ｄ６、２９Ｆ７、及び２１Ｄ１０によって認識されるペプチドは、配列番号１のアミノ酸残基１４０〜１４６に対応し、アミノ酸配列ＤＬＷＦＰＧＥを有する。さらに、結合に関係する重要な配列は、配列番号１のアミノ酸残基１４０〜１４３に対応し、アミノ酸配列ＤＬＷＦを有することが決定された。
【０４９６】
表８Ａ及び８Ｂに示されているとおり、抗体３Ａ７及び７Ｅ５は、ヒト及びマウスＴＲＥＭ２の細胞外ドメイン内のペプチドについてのみ、強固な結合を示した。表８Ａに示されているとおり、抗体３Ａ７及び７Ｅ５によって認識されるヒトＴＲＥＭ２ペプチドは、配列番号１のアミノ酸残基１４２〜１５２に対応し、アミノ酸配列ＷＦＰＧＥＳＥＳＦＥＤを有する。表８Ｂに示されているとおり、抗体３Ａ７及び７Ｅ５によって認識されるマウスＴＲＥＭ２ペプチドは、配列番号１のアミノ酸残基１４２〜１５２に対応し、アミノ酸配列ＷＶＰＥＥＳＳＳＦＥＧを有する。
【０４９７】
表８Ａに示されているとおり、抗体６Ｈ２は、ヒトＴＲＥＭ２の細胞外ドメイン内のペプチドについてのみ、強固な結合を示した。表８Ａに示されているとおり、抗体６Ｈ２によって認識されるペプチドは、配列番号１のアミノ酸残基１４６〜１５４に対応し、アミノ酸配列ＥＳＥＳＦＥＤＡＨを有する。さらに、結合に関係する重要なアミノ酸残基は、配列番号１のアミノ酸残基Ｓ１４９及びＦ１５０に対応することが決定された。
【０４９８】
表８Ａに示されているとおり、抗体１２Ｇ６及び９Ｆ５は、ヒトＴＲＥＭ２の細胞外ドメイン内のペプチドについてのみ、強固な結合を示した。表８Ａに示されているとおり、抗体１２Ｇ６及び９Ｆ５によって認識されるペプチドは、配列番号１のアミノ酸残基１４９〜１５７に対応し、アミノ酸配列ＳＦＥＤＡＨＶＥＨを有する。
【０４９９】
表８Ａに示されているとおり、抗体２Ａ７及び９Ｂ４は、ヒトＴＲＥＭ２の細胞外ドメイン内のペプチドについてのみ、強固な結合を示した。表８Ａに示されているとおり、抗体２Ａ７及び９Ｂ４によって認識されるペプチドは、配列番号１のアミノ酸残基１５４〜１６１に対応し、アミノ酸配列ＨＶＥＨＳＩＳＲを有する。
【０５００】
ショットガン変異誘発エピトープマッピング
抗ＴＲＥＭ２抗体（９Ｆ５（ＭＡｂ）、Ｔ２１−９（Ｆａｂ）、Ｔ２２（Ｆａｂ）、及びＴ４５−１０（Ｆａｂ））のショットガン変異誘発エピトープマッピングを、ＴＲＥＭ２タンパク質のアラニンスキャニングライブラリを使用して行った。全長ｈＴＲＥＭ２−Ｄａｐ１２キメラをコードするＴＲＥＭ２−Ｄａｐ１２発現構築物を高速アラニンスキャニング変異誘発に供して、包括的な変異体ライブラリを作製した（Ｄａｖｉｄｓｏｎ  ａｎｄ  Ｄｏｒａｎｚ，（２０１４）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １４３：１３−２０に概説）。ＴＲＥＭ２細胞外ドメインであるＴＲＥＭ２の残基１９〜１７４のそれぞれを、ほぼアラニンに変異させた一方で、アラニンコドンはセリンに変異させた。合計で、１５４のＴＲＥＭ２変異発現構築物を作製し、配列を確認し、３８４ウェルプレートに１ウェルあたり１変異体で配置した。
【０５０１】
３８４ウェルマイクロプレートに配置されたＴＲＥＭ２変異体ライブラリクローンをＨＥＫ−２９３Ｔ細胞に個々に遺伝子導入し、２２時間にわたって発現させた。次いで、細胞を、１０％正常ヤギ血清（ＮＧＳ）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）で希釈した指示されているＭＡｂまたはＦａｂと共にインキュベートした。ライブラリースクリーニングの前に、野生型ＴＲＥＭ２を発現する細胞に対する独立した免疫蛍光滴定曲線を使用して、一次ＭＡｂ及びＦａｂ濃度を決定して、シグナルが線形検出範囲内であることを保証した。ＭＡｂは、１０％ＮＧＳ中の３．７５μｇ／ｍｌのＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８結合二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｗｅｓｔｇｒｏｖｅ，ＰＡ，Ｃａｔ．＃１１５−５４５−００３）を使用して検出した一方で、Ｆａｂは、１０％ＮＧＳ中の７．５０μｇ／ｍｌのＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８結合二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｗｅｓｔｇｒｏｖｅ，ＰＡ，Ｃａｔ．＃１０９−５４６−００６）を使用して検出した。細胞をＰＢＳ−／−で２回洗浄し、０．１％ＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を含むＣｅｌｌｓｔｒｉｐｐｅｒ（Ｃｅｌｌｇｒｏ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）中に再懸濁した。Ｉｎｔｅｌｌｉｃｙｔ  Ｈｉｇｈ  Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  Ｆｌｏｗ  Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ（ＨＴＦＣ、Ｉｎｔｅｌｌｉｃｙｔ，Ａｌｂｕｑｕｅｒｑｕｅ，ＮＭ）を使用して、平均細胞蛍光を検出した。各変異体クローンに対するＭＡｂ及びＦａｂ反応性を、偽トランスフェクト対照からのシグナルを差し引き、野生型ＴＲＥＭ２トランスフェクト対照からのシグナルに対して正規化することによって、野生型ＴＲＥＭ２タンパク質の反応性と比較して計算した。
【０５０２】
変異残基が試験ＭＡｂまたはＦａｂの反応性を維持せず、他の試験抗体の反応性を維持するのであれば、重要クローン内の変異残基を、ＭＡｂまたはＦａｂエピトープにとって重要であると特定した。このカウンタースクリーニング法によって、局所的にミスフォールディングしている、または発現欠損を有するＴＲＥＭ２変異体の排除が容易になった。
【０５０３】
図４Ｅは、スクリーニングで特定された全ての重要残基の平均結合反応性及び範囲を示す。範囲は、２回行った実験の結合値の差であった。一次重要残基は、変異が試験抗体結合に対して陰性であるが（ＦａｂＴ２１−９ではＷＴに対する結合の３０％未満、ＭＡｂ  ９Ｆ５ならびにＦａｂＴ２２及びＴ４５−１０ではＷＴに対する結合の２０％未満）、他の試験抗体に対しては陽性である（ＷＴの７０％超）残基と特定された。
【０５０４】
抗体結合に重要なアミノ酸残基を表８Ｃに列挙する。
表８Ｃ：抗ＴＲＥＭ２抗体ＭＡｂ及びＦａｂ結合に関与する残基
2018537956.tif 000070
【０５０５】
表８Ｃに示されているとおり、ＭＡｂ  ９Ｆ５による結合に関与する重要なＴＲＥＭ２残基は、配列番号１のアミノ酸残基Ｅ１５１、Ｄ１５２、Ｈ１５４、及びＥ１５６に対応する。Ｆａｂ  Ｔ２１−９による結合に関与する重要なＴＲＥＭ２残基は、配列番号１のアミノ酸残基Ｋ４２及びＨ１１４に対応する。Ｆａｂ  Ｔ２２による結合に関与する重要なＴＲＥＭ２残基は、配列番号１のアミノ酸残基Ｋ４２、Ｇ４５、及びＨ１１４に対応し；Ｆａｂ  Ｔ２２による結合に関与する二次残基は、アミノ酸残基Ｈ４３、Ｗ４４、及びＥ１１７に対応する。Ｆａｂ  Ｔ４５−１０による結合に関与する重要なＴＲＥＭ２残基は、配列番号１のアミノ酸残基Ｒ７７に対応し；Ｆａｂ  Ｔ４５−１０による結合に関与する二次残基は、アミノ酸残基Ｈ６７及びＴ８８に対応する。Ｆａｂ  Ｔ２２及びＦａｂ  Ｔ４５−１０による結合に関与する二次残基は、より低い程度で、結合の全体エネルギーに寄与する。
【０５０６】
実施例３：ＴＲＥＭ２抗体は、Ｓｙｋリン酸化を誘導する
脾臓チロシンキナーゼ（Ｓｙｋ）は、いくつかの基質をリン酸化し、それによって細胞活性化及び炎症プロセスをもたらすシグナル伝達複合体の形成を促進することによって、ＴＲＥＭ２の下流で機能する細胞内シグナル伝達分子である。マウスマクロファージを培養し、細胞抽出物中のＳｙｋタンパク質のリン酸化状態を測定することによって、Ｓｙｋ活性化を誘導するアゴニストＴＲＥＭ２抗体の能力を決定した。
【０５０７】
野生型（ＷＴ）マウス、ＴＲＥＭ２ノックアウト（ＫＯ）マウス、及び機能性Ｆｃ受容体共通ガンマ鎖遺伝子の発現が欠損したマウス（ＦｃｇＲ  ＫＯ；ＲＥＦ：Ｔａｋａｉ  Ｔ  １９９４．Ｃｅｌｌ  ７６（３）：５１９−２９）に由来する骨髄由来マクロファージ（ＢＭＤＭ）を、１％血清ＲＰＭＩ中で４時間にわたって飢餓状態にし、次いで、ＰＢＳ−ＥＤＴＡで組織培養皿から取り出し、ＰＢＳで洗浄し、計数した。氷上で１５分間にわたって、細胞を全長ＴＲＥＭ２抗体２Ｆ６、１１Ｈ５、２Ｈ８、１Ｈ７、３Ａ７、３Ｂ１０、７Ｆ８、及び７Ｅ５で、または対照抗体（１０Ａ９またはｍｓＩｇＧ１アイソタイプ対照）でコーティングした。冷ＰＢＳで洗浄した後に、ヤギ抗ヒトＩｇＧの存在下で、示された期間にわたって３７℃で、細胞をインキュベートした。刺激後に、溶解緩衝液（１％ｖ／ｖのＮＰ−４０％、５０ＭｍのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＥＤＴＡ、１．５ｍＭのＭｇＣｌ２、１０％グリセロール、＋プロテアーゼ及びホスファターゼ阻害剤）で、細胞を溶解させ、続いて、４℃で１０分間にわたって、１６，０００ｇで遠心して、不溶性物質を除去した。次いで、溶解物を、抗Ｓｙｋ抗体（ＢＭＤＭではＮ−１９、またはヒトＤＣでは４Ｄ１０、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）で免疫沈降させた。沈殿したタンパク質を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分画し、ＰＶＤＦ膜に移し、抗ホスホチロシンＡｂ（４Ｇ１０、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）でプローブした。全ての基質が十分に免疫沈降したことを確認するために、免疫ブロットを抗Ｓｙｋ抗体（Ａｂｃａｍ、ＢＭＤＭ用）または抗Ｓｙｋ（Ｎｏｖｕｓ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ、ヒトＤＣ用）で再プローブした。記載されているとおり、増強化学発光（ＥＣＬ）システム（ＧＥ  ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で、視覚化を実施した（例えば、Ｐｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１０）  Ｓｃｉ  Ｓｉｇｎａｌ．，３（１２２）：ｒａ３８）。
【０５０８】
図５Ａに示されているとおり、ＴＲＥＭ２抗体２Ｆ６、１１Ｈ５、２Ｈ８、１Ｈ７、３Ａ７、３Ｂ１０、７Ｆ８、及び７Ｅ５は、ＢＭＤＭにおいてＴＲＥＭ２媒介Ｓｙｋリン酸化を誘導した。ＴＲＥＭ２  ＫＯ  ＢＭＤＭを対照として使用した場合には、Ｓｙｋリン酸化は誘導されなかったので、抗体７Ｅ５、３Ａ７、及び２Ｆ６によって誘導されるＳｙｋリン酸化は、ＴＲＥＭ２特異的である（図５Ｂ）。ＦｃｇＲ  ＫＯ  ＢＭＤＭを対照として使用した場合には、Ｓｙｋリン酸化は誘導されなかったので、抗体７Ｅ５及び３Ａ７によって誘導されるＳｙｋリン酸化は、Ｆｃ受容体共通ガンマ鎖（ＦｃｇＲ）を必要としない（図５Ｂ）。対照抗体１０Ａ９及びｍｓＩｇＧ１は、有意な量のＳｙｋリン酸化を誘導しなかった。これらの結果に基づき、ＴＲＥＭ２抗体２Ｆ６、１１Ｈ５、２Ｈ８、１Ｈ７、３Ａ７、３Ｂ１０、７Ｆ８、及び７Ｅ５は、マクロファージにおいてＳｙｋリン酸化を誘導するアゴニスト抗体として機能する。
【０５０９】
実施例４：Ｆｃガンマ受容体を発現する隣接細胞によってクラスター化された場合、ＴＲＥＭ２抗体はＳｙｋリン酸化を誘導する
脾臓チロシンキナーゼ（Ｓｙｋ）の活性化は、抗体で２つ以上のＴＲＥＭ２受容体が架橋され、それによって、細胞活性化及び炎症プロセスをもたらすシグナル伝達複合体の形成が促進されることによって促進される。インビボ架橋は、高親和性のＦｃ受容体（ＦｃＲ）を発現する隣接細胞、例えば、Ｂ細胞及び他の白血球によって媒介される（Ｗｈｉｔｅ  ＡＬ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ（２０１３）６２：９４１−９４８；Ｗｉｌｓｏｎ  ＮＳ  ２０１１、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  １９、１０１−１１３；Ｂａｒｔｈｏｌｏｍａｅｕｓ  Ｐ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２０１４；１９２：２０９１−２０９８）。
【０５１０】
抗体クラスター化を介してＳｙｋの活性化を誘導するＦｃ受容体の能力を、Ｆｃ受容体を発現する細胞の存在下でマウスマクロファージを培養し、細胞抽出物中のＳｙｋタンパク質のリン酸化状態を測定することによって決定した。野生型（ＷＴ）マウス及びＴＲＥＭ２ノックアウト（ＫＯ）マウスに由来する骨髄由来マクロファージ（ＢＭＤＭ）を、１％血清ＲＰＭＩ中で４時間にわたって飢餓状態にし、次いで、ＰＢＳ−ＥＤＴＡで組織培養皿から取り出し、ＰＢＳで洗浄し、計数した。氷上で１５分間にわたって、細胞を全長ＴＲＥＭ２抗体２Ｆ６、１１Ｈ５、２Ｈ８、１Ｈ７、３Ａ７、３Ｂ１０、７Ｆ８、及び７Ｅ５で、または対照抗体（１０Ａ９またはｍｓＩｇＧ１アイソタイプ対照）でコーティングした。冷ＰＢＳで洗浄した後に、Ｆｃ受容体を発現し、かつ次のとおり予め調製されていたグルタルアルデヒド固定細胞と共に、３７℃で、５分間にわたって、細胞をインキュベートした。簡単に述べると、Ｆｃ受容体発現細胞は、製造者プロトコルに従ってＭＡＣＳマイクロビーズ（ＣＤ１９＋  Ｂ−ｃｅｌｌ  ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  ｋｉｔ  Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）を使用してマウス脾臓から単離されたＢ細胞、または別法では、ＦｃＲ２ｂ及びＦｃＲ３を過剰発現するＰ８１５細胞系のいずれかであった。室温で１分間にわたって、２×１０６細胞／ｍｌの細胞を０．０５％グルタルアルデヒドで固定し、反応を１μＭグリシンで停止させ、次いで、細胞をＰＢＳで十分に洗浄した。刺激後に、溶解緩衝液（１％ｖ／ｖのＮＰ−４０％、５０ＭｍのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＥＤＴＡ、１．５ｍＭのＭｇＣｌ２、１０％グリセロール、＋プロテアーゼ及びホスファターゼ阻害剤）で、細胞を溶解させ、続いて、４℃で１０分間にわたって、１６，０００ｇで遠心して、不溶性物質を除去した。次いで、溶解物を、抗Ｓｙｋ抗体（ＢＭＤＭではＮ−１９、またはヒトＤＣでは４Ｄ１０、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）で免疫沈降させた。沈殿したタンパク質を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分画し、ＰＶＤＦ膜に移し、抗ホスホチロシンＡｂ（４Ｇ１０、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）でプローブした。全ての基質が十分に免疫沈降したことを確認するために、免疫ブロットを抗Ｓｙｋ抗体（Ａｂｃａｍ、ＢＭＤＭ用）または抗Ｓｙｋ（Ｎｏｖｕｓ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ、ヒトＤＣ用）で再プローブした。記載されているとおり、増強化学発光（ＥＣＬ）システム（ＧＥ  ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で、視覚化を実施した（例えば、Ｐｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１０）  Ｓｃｉ  Ｓｉｇｎａｌ．，３（１２２）：ｒａ３８）。
【０５１１】
ＴＲＥＭ２抗体３Ａ７及び７Ｅ５は、Ｐ８１５細胞でクラスター化すると、ＢＭＤＭにおいてＴＲＥＭ−２媒介Ｓｙｋリン酸化を誘導する一方で、抗体８Ｆ８及び２Ｆ６は、アイソタイプ対照ｍｓＩｇＧ１と比較して、Ｓｙｋリン酸化を活性化しなかった（図６Ａ）。ＴＲＥＭ２  ＫＯ  ＢＭＤＭを対照として使用した場合には、Ｓｙｋリン酸化が誘導されなかったので、抗体３Ａ７及び７Ｅ５によって誘導されるＳｙｋリン酸化は、ＴＲＥＭ２特異的である（図６Ａ）。ＴＲＥＭ２抗体２Ｆ６、３Ａ７、及び７Ｅ５は、初代脾臓Ｂ細胞でクラスター化すると、ＢＭＤＭにおいてＴＲＥＭ２媒介Ｓｙｋリン酸化を誘導した一方で、抗体８Ｆ８は、アイソタイプ対照ｍｓＩｇＧ１と比較して、Ｓｙｋリン酸化を活性化しなかった（図６Ｂ）。これらの結果に基づき、ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５、３Ａ７、及び２Ｆ６は、Ｆｃガンマ受容体を発現する隣接細胞によってクラスター化されると、初代マクロファージにおいてＳｙｋリン酸化を誘導するアゴニスト抗体である。
【０５１２】
実施例５：ＴＲＥＭ２抗体はインビトロ及びインビボでＤＡＰ１２リン酸化を誘導する
マウスマクロファージにおけるＤＡＰ１２リン酸化
ＴＲＥＭ２は、ＤＡＰ１２を介してシグナル伝達し、下流でＰＩ３Ｋ及び他の細胞内シグナルの活性化をもたらす。マウスマクロファージを培養し、細胞抽出物中のＤＡＰ１２タンパク質のリン酸化状態を測定することによって、ＤＡＰ１２活性化を誘導するＴＲＥＭ２抗体の能力を決定した。抗体で刺激する前に、マウス野生型（ＷＴ）骨髄由来マクロファージ（ＢＭＤＭ）及びＴＲＥＭ２ノックアウト（ＫＯ）ＢＭＤＭを、１％血清ＲＰＭＩ中で４時間にわたって飢餓状態にした。１５×１０６の細胞を、全長ＴＲＥＭ２抗体または対照抗体と共に、１５分間にわたって氷中でインキュベートした。細胞を洗浄し、ヤギ抗ヒトＩｇＧの存在下で、示された期間にわたって３７℃でインキュベートした。刺激後に、溶解緩衝液（１％ｖ／ｖのｎ−ドデシル−β−Ｄ−マルトシド、５０ＭｍのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＥＤＴＡ、１．５ｍＭのＭｇＣｌ２、１０％グリセロール、＋プロテアーゼ及びホスファターゼ阻害剤）で、細胞を溶解させ、続いて、４℃で１０分間にわたって、１６，０００ｇで遠心して、不溶性物質を除去した。細胞溶解物を、第２のＴＲＥＭ２抗体（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）で免疫沈降させた。沈殿したタンパク質を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分画し、ＰＶＤＦ膜に移し、抗ホスホチロシン抗体（４Ｇ１０、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）でプローブした。膜を剥がし、抗ＤＡＰ１２抗体（Ｃｅｌｌｓ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、Ｄ７Ｇ１Ｘ）で再プローブした。ＴＲＥＭ２免疫沈降に使用された各細胞溶解物は、対照抗体（抗アクチン、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ）によって示されるとおり、同量のタンパク質を含有した。
【０５１３】
Ａ及び７Ｂに示されているとおり、ＤＡＰ１２は、ＴＲＥＭ２と共沈し、ＴＲＥＭ２抗体１１Ｈ５、２Ｆ６、３Ａ７、７Ｅ５、及び３Ｂ１０と共にインキュベートされたＷＴマクロファージにおいてリン酸化されたが、抗体１１Ａ２、４Ｇ３、１２Ｆ９、及び７Ａ９、またはアイソタイプ対照ｍｓＩｇＧ１と共にでは、リン酸化されなかった（図７Ａ及び７Ｂ）。対照として、抗体２Ｆ６または７Ｅ５と共にインキュベートされたＴＲＥＭ２  ＫＯ（ＴＲＥＭ２−／−）マクロファージでは、ＤＡＰ１２リン酸化は観察されなかった（図７Ｂ）。これらの結果は、ＴＲＥＭ２欠損ＢＭＤＭでは、ＤＡＰ１２リン酸化が存在しないので、ＴＲＥＭ２抗体２Ｆ６及び７Ｅ５が、ＴＲＥＭ２特異的に、ＴＲＥＭ２関連ＤＡＰ１２のリン酸化を誘導するアゴニスト抗体であることを実証している。
【０５１４】
インビボＤＡＰ１２リン酸化
ＤＡＰ１２活性化を誘導するＴＲＥＭ２抗体の能力をインビボで、Ｂｒｅｗｅｒ’ｓ  Ｔｈｉｏｇｌｙｃｏｌｌａｔｅ誘導腹膜マクロファージ、及び細胞抽出物におけるＤＡＰ１２タンパク質のリン酸化状態の測定で決定した。Ｃ５７Ｂｌ６マウスに、３％Ｂｒｅｗｅｒ’ｓ  Ｔｈｉｏｇｌｙｃｏｌｌａｔｅ３ｍｌを０日目に腹腔内（ｉ．ｐ．）注射した。３日目に、マウスに、アイソタイプ対照抗体（ＣＴＲ抗体）ｍＩｇＧ１（クローンＭＯＰＣ−２１、Ｂｉｏｘｃｅｌｌ）を、または抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５を１５分間にわたって（図７Ｃ及び７Ｄ）、または２４時間にわたって（図７Ｅ及び７Ｆ）腹腔内（ｉ．ｐ．）注射した。腹腔（ＰＥＣ）細胞を、生理食塩水４ｍＬを使用する腹膜潅注によって採取し、ＰＢＳで洗浄した。次いで、細胞を、溶解緩衝液（１％ｖ／ｖのｎ−ドデシル−β−Ｄ−マルトシド）、５０Ｍｍのトリス−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＥＤＴＡ、１．５ｍＭのＭｇＣｌ２、１０％グリセロール、＋プロテアーゼ及びホスファターゼ阻害剤）で溶解させ、続いて、１６，０００ｇで１０分間にわたって４℃で遠心して、不溶性物質を除去した。各マウスサンプルから回収された溶解産物を分割し、第２のＴＲＥＭ２抗体（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）と、またはビーズと直接コンジュゲートしたアイソタイプ対照Ｒａｔ  ＩｇＧ２ｂ抗体と共に免疫沈降させた。沈降したタンパク質をＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分画し、ＰＶＤＦ膜に移し、抗ホスホチロシンＡｂ（４Ｇ１０、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）でプローブした。膜を剥がし、抗ＤＡＰ１２抗体（Ｃｅｌｌｓ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、Ｄ７Ｇ１Ｘ）で再プローブした。ＴＲＥＭ２免疫沈降のために使用された各細胞溶解産物も、対照抗体（抗Ａｃｔｉｎ、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ）でプローブした。腹膜液は、高レベルのＴＲＥＭ２を発現する細胞、さらには、他の細胞種（例えば、好酸球）を含み、採取される細胞の数は様々であり得る。したがって、免疫沈降の後に回収される一部の溶解産物をゲルに負荷し、抗アクチンでブロットした。
【０５１５】
このブロットは、溶解した細胞（ＴＲＥＭ２＋細胞及びＴＲＥＭ２−細胞）の合計量の表示をもたらす。図７Ｄ及び７Ｆに示されているグラフは、ＣＴＲ抗体に対する、抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５刺激でインビボ刺激した場合のＴＲＥＭ２関連ＤＡＰ１２リン酸化の倍数変化（ＦＣ）を示している。リン酸化ＴＲＥＭ２関連ＤＡＰ１２を、ＤＡＰ１２関連ＴＲＥＭ２の量に基づき正常化した。
【０５１６】
抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５のインビトロ架橋（ＦｃＲを発現する細胞による）がＴＲＥＭ２のクラスター化を誘導し、かつＴＲＥＭ２関連ＤＡＰ１２リン酸化を誘導することが以前に示された。図７Ｃ〜７Ｆにおける結果は、ＤＡＰ１２がＴＲＥＭ２と共沈し、抗体７Ｅ５で処置されたマウスからの腹膜細胞においてリン酸化するが、アイソタイプ対照抗体（ｍｓＩｇＧ１）ではリン酸化しないことを示している。この結果は、対照抗体で処置されたマウスでは、ＤＡＰ１２リン酸化が存在しないので、ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５が、ＴＲＥＭ２関連ＤＡＰ１２のリン酸化をＴＲＥＭ−２特異的に誘導するアゴニスト抗体であることを実証している。
【０５１７】
実施例６：プレート結合ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２依存性ＮＦＡＴプロモーターを誘導する
マウスまたはヒトＴＲＥＭ２依存性遺伝子を活性化するプレート結合全長抗ＴＲＥＭ２抗体の能力を、ＮＦＡＴ（活性化Ｔ細胞核内因子）プロモーターの制御下で、ルシフェラーゼレポーター遺伝子を使用して評価した。マウス胸腺リンパ腫Ｔリンパ球に由来する細胞系ＢＷ５１４７．Ｇ．１．４（ＡＴＣＣ（登録商標）ＴＩＢ４８（商標））を、マウスＴＲＥＭ２及びＤＡＰ１２ならびにＣｉｇｎａｌ  Ｌｅｎｔｉ  ＮＦＡＴ−ルシフェラーゼウイルス（Ｑｉａｇｅｎ）に感染させた。別法では、ＢＷ５１４７．Ｇ．１．４細胞系を、ヒトＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２融合タンパク質、及びＣｉｇｎａｌ  Ｌｅｎｔｉ  ＮＦＡＴ−ルシフェラーゼウイルス（Ｑｉａｇｅｎ）に感染させた。シグナル伝達のための陽性対照として、ＰＭＡ（０．０５ｕｇ／ｍｌ）及びイオノマイシン（０．２５ｕＭ）を一緒に添加した。抗ＴＲＥＭ２及びアイソタイプ対照抗体をＰＢＳに溶解させ、１０ｕｇ／ｍｌの濃度で、組織培養プレート上にプレーティングし、終夜、４℃でインキュベートして、抗体をプレートに吸収させた。プレートを洗浄した後に、細胞をプレート結合抗体上にプレーティングし、６時間にわたってインキュベートした。ＯｎｅＧｌｏ  Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を各ウェルに添加し、プレートシェーカー上、室温で３分インキュベートすることによって、ルシフェラーゼ活性を測定した。ＢｉｏＴｅｋプレートリーダーを使用して、ルシフェラーゼシグナルを測定した。細胞は、内在性リガンドの存在、または自発的受容体凝集のいずれかによって、持続性のＴＲＥＭ２依存性シグナル伝達を示し、このことが、追加の刺激の非存在下で、ＴＲＥＭ２シグナル伝達をもたらす。
【０５１８】
図８Ａに示されているとおり、抗ＴＲＥＭ２抗体２Ｆ６、３Ａ７、７Ｅ５、７Ｆ８、８Ｆ８、及び１１Ｈ５は、アイソタイプ対照（ｍｓＩｇＧ１）と比較して、マウスＴＲＥＭ２を発現する細胞においてルシフェラーゼ活性を増加させており、これは、それらの抗体が、ＴＲＥＭ２依存性遺伝子転写を誘導することができたことを示している。図８Ｂに示されているとおり、抗ＴＲＥＭ２抗体９Ｆ５、９Ｇ３、１１Ａ８、１２Ｄ９、１２Ｆ９、１２Ｇ６、３Ｃ１、及び４Ｄ７は、アイソタイプ対照（ｍｓＩｇＧ１）と比較して、ヒトＴＲＥＭ２を発現する細胞においてルシフェラーゼ活性を増加させており、これは、それらの抗体が、ＴＲＥＭ２依存性遺伝子転写を誘導することができたことを示している。図８Ａ及び８Ｂにおける点線は、刺激なしでのＴＲＥＭ２活性のレベルを示している。図８Ｃ及び８Ｄは、プレート結合ホスファチジルセリン（ＰＳ）及びスフィンゴミエリン（ＳＭ）がまた、マウスＴＲＥＭ２を発現する細胞（図８Ｃ）において、及びヒトＴＲＥＭ２を発現する細胞（図８Ｄ）において、ＮＦＡＴプロモーターシグナル伝達を誘導することを示している。ＰＳ及びＳＭは、ＴＲＥＭ２の天然リガンドであると考えられている。したがって、図８Ａ〜８Ｄにおける結果は、アゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体が、ＴＲＥＭ２の天然リガンドを模倣し得ることを示している。
【０５１９】
実施例７：ＴＲＥＭ２リガンドは、ＴＲＥＭ２依存性ＮＦＡＴプロモーターを誘導する
マウスまたはヒトＴＲＥＭ２依存性遺伝子を活性化する天然ＴＲＥＭ２リガンドの能力を、実施例６に記載の細胞ベースのルシフェラーゼレポーターシステムを使用して評価した。プレートを、漸増濃度のホスファチジルセリン（ＰＳ）、スフィンゴミエリン（ＳＭ）、ならびにヒトＡＰＯＥバリアントＡＰＯＥ２、ＡＰＯＥ３、及びＡＰＯＥ４で終夜コーティングした。プレートを洗浄した後に、細胞をプレーティングし、６時間にわたって３７℃でインキュベートした。次いで、実施例６において記載したとおり、ルシフェラーゼ活性を、ＯｎｅＧｌｏ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）を添加することによって測定した。すでに記載されたとおり、ＰＳ、ＳＭ、及びＡＰＯＥバリアントは、ＴＲＥＭ２依存性シグナル伝達の活性化をもたらす。
【０５２０】
加えて、組換えヒトＴＲＥＭ２タンパク質と結合するＡＰＯバリアントＡＰＯＥ２、ＡＰＯＥ３、及びＡＰＯＥ４の能力を、ＥＬＩＳＡによって評価した。２μｇ／ｍｌのＡｐｏＥタンパク質を、高結合性ＥＬＩＳＡプレート上に終夜、４℃でコーティングした。２日目に、プレートを１×ＰＢＳ中の０．０５％Ｔｗｅｅｎで３回洗浄した。次いで、プレートを室温で１時間にわたって、３％牛乳で遮断した。プレートを２０ｎＭのＴＲＥＭ２−Ｆｃタンパク質と共にインキュベートした。次いで、プレートを室温で３回洗浄し、二次抗体ヤギ抗ヒトＦｃ  ＨＲＰと共に１時間にわたってインキュベートした。プレートを再び、室温で３回洗浄し、ＴＭＢ１００μＬを各ウェルに添加した。反応が完了した後に、１ウェル当たり２Ｎ硫酸５０μＬを添加して、反応を停止させた。プレートをプレートリーダーで、６３０及び４５０ｎｍで読み取った。
【０５２１】
図８Ｅは、プレート結合ＡＰＯＥ２、ＡＰＯＥ３、及びＡＰＯＥ４も、ヒトＴＲＥＭ２を発現する細胞においてＮＦＡＴプロモーター活性を誘導することを示している。異なるＡＰＯＥアイソフォームは、ＴＲＥＭ２の天然リガンドであると考えられている。図８Ｆは、異なるＡＰＯＥ対立遺伝子（ＡＰＯＥ２、ＡＰＯＥ３、及びＡＰＯＥ４）が、ＥＬＩＳＡアッセイにおいて組換えＴＲＥＭ２タンパク質に結合することを示している。したがって、これらの結果は、アゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体が、ＴＲＥＭ２の天然リガンドを模倣し得ることを示している。
【０５２２】
実施例８：可溶性ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２依存性遺伝子を誘導する
マウスまたはヒトＴＲＥＭ２依存性遺伝子を活性化する可溶性全長抗ＴＲＥＭ２抗体の能力を、ＮＦＡＴ（活性化Ｔ細胞核内因子）プロモーターの制御下で、ルシフェラーゼレポーター遺伝子を使用して評価した。マウス胸腺リンパ腫Ｔリンパ球由来の細胞系ＢＷ５１４７．Ｇ．１．４（ＡＴＣＣ（登録商標）ＴＩＢ４８（商標））を、マウスＴＲＥＭ２及びＤＡＰ１２ならびにＣｉｇｎａｌ  Ｌｅｎｔｉ  ＮＦＡＴ−ルシフェラーゼウイルス（Ｑｉａｇｅｎ）に感染させた。別法では、ＢＷ５１４７．Ｇ．１．４細胞系を、ヒトＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２融合タンパク質、及びＣｉｇｎａｌ  Ｌｅｎｔｉ  ＮＦＡＴ−ルシフェラーゼウイルス（Ｑｉａｇｅｎ）に感染させた。シグナル伝達のための陽性対照として、ＰＭＡ（０．０５ｕｇ／ｍｌ）及びイオノマイシン（０．２５ｕＭ）を一緒に添加した。細胞を可溶性抗ＴＲＥＭ２及びアイソタイプ対照抗体と一緒に、６時間にわたってインキュベートし、ＯｎｅＧｌｏ  Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を各ウェルに添加し、プレートシェーカー上、室温で３分インキュベートすることによって、ルシフェラーゼ活性を測定した。ＢｉｏＴｅｋプレートリーダーを使用して、ルシフェラーゼシグナルを測定した。細胞は、内在性リガンドの存在、または自発的受容体凝集のいずれかによって、持続性のＴＲＥＭ２依存性シグナル伝達を示し、このことが、ＴＲＥＭ２シグナル伝達をもたらす。
【０５２３】
図９Ａに示されているとおり、可溶性全長抗ＴＲＥＭ２抗体２Ｆ６、３Ａ７、３Ｂ１０、７Ｅ５、８Ｆ８、及び１１Ｈ５は、アイソタイプ対照（ｍｓＩｇＧ１）と比較して、マウスＴＲＥＭ２を発現する細胞においてルシフェラーゼ活性を増加させており、これは、それらの抗体が、ＴＲＥＭ２依存性遺伝子転写を誘導し得るアゴニスト抗体であることを示している。対照的に、可溶性全長抗ＴＲＥＭ２抗体１Ｈ７、２Ｈ８、及び７Ｆ８は、持続性ＴＲＥＭ２シグナル伝達を遮断するアンタゴニストとして作用するようであった。図９Ａにおける点線は、刺激なしでのＴＲＥＭ２活性のレベルを示している。
【０５２４】
図９Ｂに示されているとおり、抗ＴＲＥＭ２抗体９Ｆ５、１２Ｆ９、２Ｃ７、２Ｆ５、３Ｃ１、及び４Ｄ７は、アイソタイプ対照（ｍｓＩｇＧ１）と比較して、ヒトＴＲＥＭ２を発現する細胞においてルシフェラーゼ活性を増加させており、これは、それらの抗体が、ＴＲＥＭ２依存性遺伝子転写を誘導し得るアゴニスト抗体であることを示している。対照的に、１０Ａ９及び１０Ｃ１などの可溶性全長抗ＴＲＥＭ２抗体は、持続性ＴＲＥＭ２シグナル伝達を遮断するアンタゴニストとして作用するようであった。図９Ｂにおける点線は、刺激なしでのＴＲＥＭ２活性のレベルを示している。
【０５２５】
図９Ｃは、漸増濃度の可溶性全長抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５によって誘導されるルシフェラーゼ活性の用量反応曲線を示しており、これは、遺伝子発現に対する作用が用量依存的であること、及びＥＣ５０が約１．５２ｎＭであることを示している。
【０５２６】
図８Ｃ及び８Ｄにおける結果とまとめると、図９Ａ〜９Ｃにおける結果は、可溶性アゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体が、ＴＲＥＭ２の天然リガンドであると考えられるプレート結合ホスファチジルセリン（ＰＳ）と同程度まで、遺伝子発現を誘導し得ることを示している。
【０５２７】
実施例９：ＴＲＥＭ２の天然リガンドの活性を増強する可溶性ＴＲＥＭ２抗体の能力の分析
マウスＴＲＥＭ２またはヒトＴＲＥＭ２の天然リガンドの活性を増強する可溶性全長抗ＴＲＥＭ２抗体の能力を、遺伝子発現の活性化を測定するためにＮＦＡＴ（活性化Ｔ細胞核内因子）プロモーターの制御下でルシフェラーゼレポーター遺伝子を使用して評価した。マウス胸腺リンパ腫Ｔリンパ球に由来する細胞系ＢＷ５１４７．Ｇ．１．４（ＡＴＣＣ（登録商標）ＴＩＢ４８（商標））を、マウスＴＲＥＭ２及びＤＡＰ１２、ならびにＣｉｇｎａｌ  Ｌｅｎｔｉ  ＮＦＡＴ−ルシフェラーゼウイルス（Ｑｉａｇｅｎ）に感染させた。別法では、ＢＷ５１４７．Ｇ．１．４細胞系を、ヒトＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２融合タンパク質、及びＣｉｇｎａｌ  Ｌｅｎｔｉ  ＮＦＡＴ−ルシフェラーゼウイルス（Ｑｉａｇｅｎ）に感染させた。細胞を６時間にわたって、可溶性抗ＴＲＥＭ２及びアイソタイプ対照抗体と一緒に、漸増濃度のホスファチジルセリン（ＰＳ）またはスフィンゴミエリン（ＳＭ）で予めコーティングされたプレート上でインキュベートした。ＯｎｅＧｌｏ  Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を各ウェルに添加し、プレートシェーカー上、室温で３分インキュベートすることによって、ルシフェラーゼ活性を測定した。ＢｉｏＴｅｋプレートリーダーを使用して、ルシフェラーゼシグナルを測定した。
【０５２８】
加えて、組換えヒトＴＲＥＭ２タンパク質へのＡＰＯＥ３結合を増強する可溶性全長抗ＴＲＥＭ２抗体の能力をＥＬＩＳＡによって評価した。１μｇ／ｍｌのＡｐｏＥタンパク質を、高結合性ＥＬＩＳＡプレート上に、終夜４℃でコーティングした。２日目に、プレートを１×ＰＢＳ中の０．０５％Ｔｗｅｅｎで３回洗浄した。次いで、プレートを室温で１時間にわたって、３％牛乳で遮断した。プレートを、２０ｎＭのＴＲＥＭ２−Ｆｃタンパク質、及び１ウェル当たり１５μｇ／ｍｌまたは５μｇ／ｍｌのいずれかのＴＲＥＭ２抗体と共にインキュベートした。次いで、プレートを室温で３回洗浄し、二次抗体ヤギ抗ヒトＦｃ  ＨＲＰと共に１時間にわたってインキュベートした。プレートを再び、室温で３回洗浄し、ＴＭＢ１００μＬを各ウェルに添加した。反応が完了した後に、１ウェル当たり２Ｎ硫酸５０μＬを添加して、反応を停止させた。プレートをプレートリーダーで、６３０及び４５０ｎｍで読み取った。
【０５２９】
図１０Ａ及び１０Ｂに示されているとおり、可溶性全長抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５は、アイソタイプ対照（ｍｓＩｇＧ１）と比較して、マウスＴＲＥＭ２を発現する細胞において、ホスファチジルセリン（ＰＳ）の効力及び最大作用を増加させた。７Ｅ５はまた、アイソタイプ対照（ｍｓＩｇＧ１）と比較して、マウスＴＲＥＭ２を発現する細胞においてスフィンゴミエリン（ＳＭ）の最大作用を増加させた（図１０Ｃ及び１０Ｄ）。これらの結果は、抗体７Ｅ５が、ＴＲＥＭ２の天然リガンドであると考えられるＰＳ及びＳＭによって誘導されるＴＲＥＭ２依存性遺伝子転写を増強し得ることを示している。
【０５３０】
図１０Ｅに示されているとおり、抗ＴＲＥＭ２抗体３Ａ７、２Ｆ６、１１Ｈ５、及び８Ｆ８は、アイソタイプ対照（ｍｓＩｇＧ１）と比較して、マウスＴＲＥＭ２を発現する細胞において、ホスファチジルセリン（ＰＳ）の最大作用を増加させ、このことは、これらの抗体が、ＰＳなどの天然リガンドによって誘導されるＴＲＥＭ２依存性遺伝子転写を増強し得ることを示している。
【０５３１】
図１０Ｆは、アゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５とは対照的に、市販の抗ＴＲＥＭ２抗体（Ｒ＆Ｄ  Ｃａｔ＃Ｆ７Ｅ５７２９１）が、スフィンゴミエリン（ＳＭ）の活性を阻害することを示している。
【０５３２】
図１１Ａに示されているとおり、可溶性全長抗ＴＲＥＭ２抗体９Ｆ５は、ヒトＴＲＥＭ２を発現する細胞において、ホスファチジルセリン（ＰＳ）の最大作用を増加させた。この結果は、抗体９Ｆ５が、ＴＲＥＭ２の天然リガンドであると考えられるＰＳによって誘導されるＴＲＥＭ２依存性遺伝子転写を増強し得ることを示している。対照として、マウスＩｇＧ１アイソタイプ抗体は、作用を有さなかった（図１１Ｂ）。
【０５３３】
抗体９Ｆ５と同様に、抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｂ３、９Ｇ１、９Ｇ３、１１Ａ８、１２Ｆ９、３Ｂ１０、及び８Ｆ８も、アイソタイプ対照（ｍｓＩｇＧ１）と比較して、ヒトＴＲＥＭ２を発現する細胞において、ホスファチジルセリン（ＰＳ）の最大作用を増加させた（図１１Ｃ及び１１Ｄ）。これらの結果は、これらの抗体が、ＰＳなどの天然リガンドによって誘導されるＴＲＥＭ２依存性遺伝子転写を増強し得ることを示している。
【０５３４】
図１１Ｅ及び１１Ｆに示されているとおり、可溶性全長抗ＴＲＥＭ２抗体９Ｆ５は、ＥＬＩＳＡ結合アッセイにおいて、ＡＰＯＥ３への組換えヒトＴＲＥＭ２の結合の強度を増加させた。この結果は、抗体９Ｆ５が、ＴＲＥＭ２の天然リガンドへの結合を安定化させ得ることを示している。対照的に、抗体９Ｇ３などの他の抗体は、ＡＰＯＥ３へのＴＲＥＭ２の結合と拮抗した。対照として、マウスＩｇＧ１アイソタイプ抗体は、作用を有さなかった。
【０５３５】
図８Ａ〜８Ｆ及び図９Ａ〜９Ｃにおける結果とまとめると、これらの結果は、アゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体及びＴＲＥＭ２リガンドの組み合わせによって誘導されるＴＲＥＭ２依存性遺伝子転写のレベルの上昇が、単独の抗ＴＲＥＭ２抗体及び単独のＴＲＥＭ２リガンドによって誘導されるレベルを一緒に合わせた場合に予測されるであろうＴＲＥＭ２依存性遺伝子転写の累積レベルよりも大きいので、アゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体が、ＰＳ、ＳＭ、及びＡＰＯＥなどのＴＲＥＭ２の天然リガンドと相乗作用して、ＴＲＥＭ２依存性遺伝子転写を増強することを実証している。
【０５３６】
実施例１０：ＴＲＥＭ２抗体は、マクロファージ死滅を誘導する
可溶性非架橋抗ＴＲＥＭ２抗体のアンタゴニスト機能を、先天免疫細胞（例えば、骨髄由来マクロファージ）において評価した。
【０５３７】
Ｃ５７Ｂｌ６マウスから得られた骨髄由来マクロファージを、２０ｎｇ／ｍｌのＭ−ＣＳＦ及び１０μｇ／ｍｌの可溶性非架橋抗ＴＲＥＭ２抗体１Ｈ７、２Ｆ６、２Ｈ８、２Ａ７、７Ｅ５、７Ｆ８、８Ｆ８、Ｒ＆Ｄ（Ｒ＆Ｄ  Ｃａｔ＃Ｆ７Ｅ５７２９１）、またはアイソタイプ対照としてのマウスＩｇＧ１（ｍＩｇＧ１）もしくはラットＩｇＧ２ｂ（Ｒ  ＩｇＧ２ｂ）の存在下で、非組織培養処理９６ウェルプレートにプレーティングした。各条件を、３連でプレーティングした。細胞生存度の分析を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）キット（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して３日後に行った。プレートを、ＧＥＮ５（商標）２．０４ソフトウェアを使用するＢｉｏＴｅｋ  Ｓｙｎｅｒｇｙ（商標）  Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ  Ｒｅａｄｅｒで読み取った。
【０５３８】
図１２Ａでは、点線は、未処理マクロファージ（すなわち、抗体無添加）で得られた平均細胞生存率を示している。０％との言及は、マクロファージをＭ−ＣＳＦの非存在下で培養した場合に得られた平均細胞生存率を示している。
【０５３９】
マクロファージ細胞生存率を可溶性非架橋抗ＴＲＥＭ２抗体で評価すると、結果は、抗体１Ｈ７、２Ｈ８、及び７Ｆ８、ならびに市販の抗体Ｒ＆Ｄが、培養から３日後に、細胞生存率を約５０％低下させたことを示した。対照的に、抗体３Ａ７、７Ｅ５、２Ｆ６、及び８Ｆ８は、初代マクロファージに対して、有意な細胞毒性を有さない。
【０５４０】
実施例１１：ＴＲＥＭ２は、免疫細胞の生存を増加させる
インビトロ細胞生存
インビトロで細胞生存を増強する抗ＴＲＥＭ２抗体の能力を評価するために、ＦｃｇＲＩ、ＦｃｇＲＩＩＩ、及びＦｃｅＲＩ受容体のガンマ鎖サブユニットを欠損したマクロファージ（Ｆｃｇｒ１ＫＯ  ｍｉｃｅ，ＲＥＦ：Ｔａｋａｉ  Ｔ，Ｌｉ  Ｍ，Ｓｙｌｖｅｓｔｒｅ  Ｄ，Ｃｌｙｎｅｓ  Ｒ，Ｒａｖｅｔｃｈ  Ｊ．（１９９４）．Ｃｅｌｌ、７６：５１９−５２９）を、プレート結合抗ＴＲＥＭ２抗体の存在下で培養し、最適以下の成長条件において培養した場合の細胞生存率を決定した。
【０５４１】
ＦｃｇＲ１  ＫＯマウスに由来するマウス骨髄前駆細胞（Ｔａｃｏｎｉｃ、Ｍｏｄｅｌ  ５８４）を、脛骨及び大腿骨髄細胞を冷ＰＢＳでフラッシュすることによって得た。ＰＢＳで１回洗浄した後に、赤血球を、ＡＣＫ  Ｌｙｓｉｎｇ  Ｂｕｆｆｅｒ（Ｌｏｎｚａ）を使用して溶解させ、ＰＢＳで２回洗浄し、０．５×１０６細胞／ｍｌで、指示量のＭ−ＣＳＦ（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）を含む完全ＲＰＭＩ培地（１０％ＦＣＳ、Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ、Ｇｌｎ、ｎｅＡＡ）に懸濁させて、マクロファージを生産した。骨髄由来マクロファージの細胞生存率を分析するために、細胞を上記のとおりに調製し、２．５×１０４／２００μｌで、９６ウェルプレートに、最適以下量のＭ−ＣＳＦ（１０ｎｇ／ｍｌ）と共に、非組織培養処理プレートに２日間にわたってプレーティングした。次いで、細胞を、ＴｏｘＧｌｏ（商標）キット（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して定量化し、ルミネセンスを、細胞生存率の測定値として決定した。すべての実験を、抗ＴＲＥＭ２抗体またはアイソタイプ対照抗体の存在下、または非存在下で行った。
【０５４２】
図１２Ｂに示されているとおり、ＴＲＥＭ２受容体と、プレート結合抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５、２Ｆ６、３Ａ７、及び８Ｆ８との架橋は、最適以下の培養条件で代謝的に活性なマクロファージの数を増加させた。実際に、プレート結合抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５、２Ｆ６、３Ａ７、及び８Ｆ８とのインキュベートは、アイソタイプ対照（ｍＩｇＧ１）と比較して、かつ非処理マクロファージ（点線）と比較して、細胞生存率を約５０％上昇させた。
【０５４３】
インビボでの細胞生存
インビボで免疫細胞の数を増加させる抗ＴＲＥＭ２抗体の能力を評価するために、Ｃ５７Ｂｌ６マウスに、抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５またはマウスＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体を腹腔内（ＩＰ）注射し、次いで、脳内の免疫細胞の数をＦＡＣＳによって定量化した。
【０５４４】
１群当たり３〜４頭のマウスが、４０ｍｇ／ｋｇの抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５またはアイソタイプ対照抗体ｍＩｇＧ１（クローンＭＯＰＣ−２１、Ｂｉｏｘｃｅｌｌ）のＩＰ注射を与えられた。４８時間後に、脳全体を採取し、ＰＢＳですすぎ、３７℃で、１ｍｇ／ｍｌのコラゲナーゼを含有するＰＢＳ中でインキュベートし、細胞ストレーナーを通して処理して、単細胞懸濁液を得た。次いで、細胞を、抗ＣＤ４５−ＰｅｒＣｐ−Ｃｙ７、抗ＣＤ１１ｂ−ＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５、抗Ｇｒ１−ＦＩＴＣ抗体、及び細胞生存度色素（ｃｅｌｌ  ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  ｄｙｅ）（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｔ＃  Ｌ３４９５７）と共に３０分間にわたって氷上でインキュベートし、次いで、冷ＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄した。次いで、４％ＰＦＡ固定サンプルを、ＦＡＣＳによって分析した。データを、ＢＤ  ＦＡＣＳＣａｎｔｏ（商標）ＩＩ血球計算器（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）で取得し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアで分析した。
【０５４５】
図１２Ｃに示されているとおり、抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５での処置は、アイソタイプ対照抗体での処置と比較して、脳または脳と関連する血管においてマーカーＣＤ１１ｂ及びＧｒ１を同時発現する免疫細胞の数を増加させた。抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５のみでの処理は、アイソタイプ対照または未処理細胞（約４０００細胞）と比較して、平均で５０％多いＣＤ１１ｂ＋Ｇｒ１＋細胞（約６，０００）の動員を誘導した。単球／マクロファージ系列の細胞は、表面マーカーＣＤ１１ｂ及びＧｒ１について陽性であると定義された。
【０５４６】
実施例１２：遺伝子発現を誘導する、または天然リガンドによって、もしくは天然リガンドへの結合によって誘導される遺伝子発現を増強するＴＲＥＭ２アゴニスト抗体のまとめ
表９Ａ及び９Ｂに、上記実施例３〜１１に記載の機能性研究の結果をまとめる。ルシフェラーゼレポーター遺伝子によって、またはＴＲＥＭ２への結合の強度の調節によって測定したところ、抗ＴＲＥＭ２抗体は、溶解状態で、または抗体クラスター化の後に（すなわち、プレート結合によって）、ヒトＴＲＥＭ２（表９Ａ）またはマウスＴＲＥＭ２（表９Ｂ）を発現する細胞におけるＴＲＥＭ２依存性遺伝子発現の調節で、アゴニストまたはアンタゴニスト活性を実証した。表９Ａ及び９Ｂに示されているとおり、ＴＲＥＭ２抗体のサブセットは、プレート結合されている場合に、アゴニスト活性を示す。ＴＲＥＭ２抗体の別のサブセットは、溶解状態の場合に、アゴニスト活性を示す。ＴＲＥＭ２抗体の第３のサブセットは、可溶性非架橋抗体のアンタゴニスト作用を示す。特定の抗ＴＲＥＭ２抗体は、リガンド（例えば、ＡＰＯＥ３）への組換えＴＲＥＭ２タンパク質の結合を増加させる一方で、他の抗ＴＲＥＭ２抗体は、リガンド（例えば、ＡＰＯＥ３）への組換えＴＲＥＭ２タンパク質の結合を減少させた。
【０５４７】
表９Ａでは、「培地」は、培養培地のみの対照を指し、「ｍＩｇＧ１」は、マウスＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体を指し、「ｍＩｇＧ２ａ」は、マウスＩｇＧ２ａアイソタイプ対照抗体を指し、「ｍＩｇＧ２ｂ」は、マウスＩｇＧ２ｂアイソタイプ対照抗体を指し、「ｒＩｇＧ１」は、ラットＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体を指し、「ＲＩｇＧ２ａ」は、ラットＩｇＧ２ａアイソタイプ対照抗体を指し、「ＲＩｇＧ２ｂ」は、ラットＩｇＧ２ｂアイソタイプ対照抗体を指し、「Ｐ＋Ｉ」は、ＰＭＡ／イオノマイシン対照を指し、「ＮＤ」は、未決定を指す。
表９Ａ：ヒトＴＲＥＭ２でのＴＲＥＭ２抗体機能性試験
2018537956.tif 000071
2018537956.tif 000072
2018537956.tif 000073
【０５４８】
表９Ｂでは、「ｍＩｇＧ１」及び「ｒＩｇＧ２ｂ」は、アイソタイプ対照抗体を指し、「ＮＴ」は、未処理対照を指し、「ＲＤＴ２」は、Ｒ＆Ｄ製の市販の抗ＴＲＥＭ２抗体（Ｒ＆Ｄ  Ｃａｔ＃Ｆ７Ｅ５７２９１）を指し、「ＰＭＡ」は、ＰＭＡのみの陽性対照を指し、「ＮＤ」は、未決定を指し、「ＢＭＭＡｃ死滅溶液」は、骨髄由来マクロファージ細胞生存率の低下を指す（マクロファージ死滅の増加による）。
表９Ｂ：マウスＴＲＥＭ２でのＴＲＥＭ２抗体機能性研究
2018537956.tif 000074
【０５４９】
実施例１３：インビボでの免疫細胞の動員及び炎症誘発シグナルの誘導の増加における、ＴＲＥＭ２抗体の作用の分析
免疫細胞の動員
抗体を単独で、またはＬＰＳと組み合わせて腹腔内（ＩＰ）投与した後のＣ５７Ｂｌ６マウスの腹腔（ＰＥＣ）における炎症細胞（好中球、顆粒球、単球、及びマクロファージ）の動員を調節するＴＲＥＭ２抗体の能力を評価した。１群当たり４頭のマウスを図１３Ａにおいて記載するとおりに処置した。簡単に述べると、マウスは初めに、４０ｍｇ／ｋｇの抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５、抗体８Ｆ８、またはアイソタイプ対照抗体ｍＩｇＧ１（クローンＭＯＰＣ−２１、Ｂｉｏｘｃｅｌｌ）のＩＰ注射を与えられる。１４時間後に、マウスは、４ｍｇ／ｋｇのＬＰＳ、または対照としてＰＢＳのＩＰ注射を与えられた。ＬＰＳまたはＰＢＳ注射から６時間後に、細胞を、記載されているとおりにＰＥＣから採取し（例えば、Ｇａｗｉｓｈ  Ｒ  ｅｔ  ａｌ，２０１４  ＦＡＳＥＢ  Ｊを参照されたい）、ＦＡＣＳによって分析した。ＦＡＣＳ分析のために、ＰＥＣ細胞を、抗ＣＤ１１ｂ−Ｐａｃｉｆｉｃ  Ｂｌｕｅ、抗ＣＤ１１ｃ  ＰｅＣｙ７、抗ＭＣＨ−ＩＩ−ＡＰＣＣｙ７、抗Ｇｒ１−ＦＩＴＣ、抗Ｌｙ６Ｇ−ＰＥ及び生存度色素（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｔ＃  Ｌ３４９５７）と共に１時間にわたって氷上でインキュベートし、次いで、冷ＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄した。次いで、４％ＰＦＡ固定サンプルを取得した。データを、ＢＤ  ＦＡＣＳ  ＣＡＮＴＯ  ＩＩ血球計算器（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）で取得し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアで分析した。
【０５５０】
図１３Ｂ及び１３Ｃに示されているとおり、抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５での処理は、対照抗体での処理と比較して、ＰＥＣに動員される好中球の数を増加させた。好中球動員に対する抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５の作用は、ＬＰＳの存在下でより顕著であり、これは、抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５が、ＰＥＣへの好中球の動員においてＬＰＳと相乗作用することを示している。図１３Ｄ及び１３Ｅに示されているとおり、抗ＴＲＥＭ２抗体８Ｆ８での処置は、対照抗体での処置と比較して、ＰＥＣに動員される好中球の数を増加させなかった。好中球は、表面マーカーＬｙ６Ｇ及びＧｒ１について陽性であると定められた。
【０５５１】
図１３Ｆ、１３Ｇ、１３Ｈ、及び１３Ｉに示されているとおり、抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５または８Ｆ８での処置は、対照抗体での処置と比較して、ＰＥＣに動員される常在マクロファージの数を増加させなかった。常在マクロファージは、表面マーカーＣＤ１１ｂについて陽性、及び表面マーカーＦ４／８０について強陽性であると定められた。
【０５５２】
図１３Ｊ、１３Ｋ、１３Ｌ、及び１３Ｍに示されているとおり、抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５及び８Ｆ８での処置は、対照抗体での処理と比較して、ＰＥＣに動員される小型浸潤性マクロファージの数を増加させた。小型浸潤性マクロファージの動員に対する抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５及び８Ｆ８の作用は、ＬＰＳの存在下で増加しなかったが、これは、ＰＥＣに小型浸潤性マクロファージを動員するためには、抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５及び８Ｆ８のみで十分であることを示している。小型浸潤性マクロファージは、表面マーカーＣＤ１１ｂについて陽性であり、かつ表面マーカーＦ４／８０について中程度に陽性であると定められた。図１３Ａ〜１３Ｍの統計は、スチューデントのｔ検定を使用して計算した（＊Ｐ値＜０．０５、＊＊Ｐ値＜０．０１、＊＊＊Ｐ値＜０．００１）。
【０５５３】
前の結果は、抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５がインビボでアゴニスト活性を誘導すること、及び抗ＴＲＥＭ２抗体８Ｆ８がインビボで遮断抗体として作用することを実証している。図１３Ａ〜１３Ｍの結果は、抗体７Ｅ５がインビボで、ＬＰＳを注射されたマウスの腹膜において好中球の蓄積を誘導する一方で、抗体８Ｆ８注射は、ＬＰＳ誘発性敗血症の間に好中球（及び浸潤性マクロファージ）の蓄積を減少させることを示している。この結果によって、抗体８Ｆ８がインビボで遮断抗体であることが確認される。
【０５５４】
炎症誘発性シグナルの誘導
抗体を単独で、またはＬＰＳと組み合わせて腹腔内（ＩＰ）投与された後のＣ５７Ｂｌ６マウスの腹腔（ＰＥＣ）における炎症誘発性サイトカイン（ＣＣＬ４、ＩＬ−１β、及びＭＣＰ−１）の産生を調節するＴＲＥＭ２抗体の能力を評価した。マウスを、図１３Ｎにおいて記載されるとおりに処置した。簡単に述べると、マウスは、０日目に、４０ｍｇ／ｋｇの抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５、抗体８Ｆ８、またはアイソタイプ対照抗体ｍＩｇＧ１（クローンＭＯＰＣ−２１、Ｂｉｏｘｃｅｌｌ）のＩＰ注射を与えられた。１日目に、マウスは、４ｍｇ／ｋｇのＬＰＳ、または対照としてのＰＢＳのＩＰ注射を与えられた。ＬＰＳまたはＰＢＳ注射後１．５時間目に、マウスからの血清サンプル中のＣＣＬ４、ＩＬ−１β、及びＭＣＰ−１（ＣＣＬ２）の濃度をサイトメトリービーズアッセイ（ｃｙｔｏｍｅｔｒｉｃ  ｂｅａｄ  ａｓｓａｙ；ＣＢＡ）によって測定した。
【０５５５】
図１３Ｏ〜１３Ｑに示されているとおり、抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５は、インビボでＣＣＬ４、ＩＬ−１β、及びＭＣＰ−１の産生の増強を誘導する。しかしながら、抗ＴＲＥＭ２抗体８Ｆ８は、ＣＣＬ４、ＩＬ−１β、またはＭＣＰ−１の産生のインビボ増加を誘導しなかった（図１３Ｏ〜１３Ｑ）。
【０５５６】
実施例１４：ＴＲＥＭ２抗体は、マウスにおいて可溶性ＴＲＥＭ２のレベルを上昇させる
ＴＲＥＭ２の細胞外部分は、可溶性形態（ｓＴＲＥＭ２）にシェディングされ得て、したがって、血漿及び脳脊髄液（ＣＳＦ）において検出され得ると考えられる。アルツハイマー病または前頭側頭型認知症を有する個体では、ＣＳＦ中のｓＴＲＥＭ２の量が、健康な対照抗体と比較して減少しているとも考えられている。
【０５５７】
抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５の注射後２、４、８及び１５日目に、マウスの血清中に存在する抗ＴＲＥＭ２抗体の量を決定するために、標準的なＥＬＩＳＡ方法を利用した。簡単に述べると、ＥＬＩＳＡプレートを、炭酸コーティング緩衝液（ｐＨ９．６）中、１００ｕＬ／ウェルで、０．１ｕｇ／ウェルの組換えマウスＴＲＥＭ２タンパク質で終夜、４℃でコーティングした。次いで、プレートを洗浄し、ＰＢＳ中の３％脱脂乳粉末で１時間にわたって室温で遮断し、次いで、洗浄した。マウス血清サンプルをＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ中で用量設定し、１００ｕＬ／ウェルでプレートに添加し、振盪しながら１時間にわたって３７℃でインキュベートした。抗ＴＲＥＭ２抗体を、二次ヤギ抗マウスＩｇＧ１−ＨＲＰを使用して検出し、ＴＭＢ基質で展開した。抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５の規定量をナイーブマウスの血清中でスパイクし、較正曲線が得られるように用量設定した。結果を図１４において示すが、これは、マウスの血清における抗体７Ｅ５の半減期が約９．３日であることを示している。
【０５５８】
マウスにおけるｓＴＲＥＭ２の血清レベルに対する抗ＴＲＥＭ２抗体の作用を決定するために、マウスに由来する血液サンプル中に存在するｓＴＲＥＭ２の量を、可溶性抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５の注射後２、４、８及び１５日目に測定した。ｓＴＲＥＭ２の血清レベルを、標準的なＥＬＩＳＡ法を使用して測定した。簡単に述べると、Ｉｍｍｕｌｏｎ  ＥＬＩＳＡ  ９６ウェルプレートを、終夜、４℃で、２μｇ／ｍｌの捕捉抗ＴＲＥＭ２抗体（ＡＤＩ−９）１００μｌでコーティングした。翌朝、プレートを洗浄緩衝液（ＰＢＳ＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０）２００μｌで３回洗浄した。次いで、プレートを、１時間にわたって室温で、オービタルシェーカー上で、結合緩衝液（ＰＢＳ＋１％ＢＳＡ）３００μｌを添加することによって遮断した。その後に、血清サンプル（１：１２希釈）及び標準（組換えマウスＴＲＥＭ２、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を結合緩衝液１００μｌ中で添加し、プレートを室温で１時間にわたってインキュベートした。次いで、プレートを洗浄緩衝液２００μｌで３回洗浄した。検出用ビオチン化ラット抗ＴＲＥＭ２（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｐｉｅｒｃｅ製のｍｉｃｒｏ−ＮＨＳ−Ｐｅｇ４−Ｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｉｏｎ  ｋｉｔでビオチン化）を、結合緩衝液中で１：１０，０００で添加し、１時間にわたって室温で、オービタルシェーカー上でインキュベートした。次いで、プレートを洗浄緩衝液２００μｌで３回洗浄した。Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ−ＨＲＰ１００μｌ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を結合緩衝液中１：２００でプレートに添加し、オービタルシェーカー上で２０分間にわたってインキュベートした。次いで、プレートを洗浄緩衝液２００μｌで３回洗浄し、ＴＭＢ基質１００μｌ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｐｉｅｒｃｅ）を添加し、発色するまで、プレート振盪機上でインキュベートした。硫酸５０μｌを添加することによって、反応を停止させ、Ｂｉｏｔｅｋ  Ｓｙｎｅｒｇｙ  Ｈ１プレートリーダーを使用して、色を定量化した。
【０５５９】
図１５に示されているとおり、抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５は、マウスにおけるｓＴＲＥＭ２の血清半減期を用量依存的に増加させる。血清レベルのこの増加は、ＴＲＥＭ２抗体の生物学的活性についてのバイオマーカーとして役立ち得る。
【０５６０】
実施例１５：ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２の細胞表面レベルを低下させる
免疫細胞の表面上に発現されるある特定のＩＴＩＭ／ＩＴＡＭ受容体を標的とする抗体は、単球、マクロファージ、樹状細胞、及び／またはミクログリア上の受容体の表面レベルを減少させ得ると考えられる。
【０５６１】
マウス初代骨髄由来マクロファージ（ＢＭＤＭ）上のＴＲＥＭ２の細胞表面発現を減少させる抗ＴＲＥＭ２抗体の能力を評価した。ＢＭＤＭを、ＴＲＥＭ２の天然リガンドであると考えられる漸増濃度のホスファチジルセリン（ＰＳ）またはスフィンゴミエリン（ＳＭ）で予めコーティングされた９６ウェル組織培養プレート内で培養した。Ｓｙｋ阻害薬（Ｒ４０８）または１０ｕｇ／ｍｌの可溶性抗ＴＲＥＭ２抗体またはアイソタイプ対照抗体のいずれかを添加した。２４時間後に、ＢＭＤＭを、ＦＡＣＳによって、細胞表面上でのＴＲＥＭ２発現について分析した。ＴＲＥＭ２発現を、市販の抗ＴＲＥＭ２抗体（Ｒ＆Ｄ  Ｃａｔ＃Ｆ７Ｅ５７２９１）を使用して検出した。
【０５６２】
図１６Ａに示されているとおり、ＴＲＥＭ２リガンドのＰＳ及びＳＭは両方とも、ＴＲＥＭ２の細胞表面レベルを用量依存的に低下させることができた。ＴＲＥＭ２の細胞表面レベルは、最も有効なＰＳ用量で、約７５％低下した（図１６Ａ）。ＳＭの作用は、ＰＳよりは顕著ではなかった。ＳＭで得られたＴＲＥＭ２の細胞表面レベルの最大の低下は、約３０％であった（図１６Ａ）。
【０５６３】
図１６Ｂは、可溶性抗ＴＲＥＭ２抗体３Ａ７または２Ｆ６のみでの処理が、ＴＲＥＭ２の細胞表面レベルを５８％低下させたことを実証しており、これは、ＴＲＥＭ２リガンドで見られる低下と同様であった。Ｒ４０８は、ＳＹＫ阻害薬であり、これも、ＴＲＥＭ２細胞表面レベルを低下させる。この結果は、脂質結合によるＴＲＥＭ２シグナル伝達の活性化、及びシグナル伝達（ＳＹＫ）阻害薬によって誘導される阻害の両方が、ＴＲＥＭ２の細胞表面レベルを低下させることを示している。同様に、ＴＲＥＭ２抗体３Ａ７及び２Ｆ６も、ＴＲＥＭ２細胞表面レベルを低下させる。
【０５６４】
実施例１６：アルツハイマー病のマウスモデルにおける抗ＴＲＥＭ２抗体の作用の分析
アルツハイマー病のマウスモデル
ＡＰＰ／ＰＳ１マウスは、ＡＰＰ及びＰＳＥＮ１の両方のためのヒト導入遺伝子を含有する。ＡＰＰヒト導入遺伝子は、スウェーデン型変異（Ｋ６７０Ｎ、Ｍ６７１Ｌ）を含有し、ＰＳＥＮ１ヒト導入遺伝子は、Ｌ１６６Ｐ変異を含有する。両方の導入遺伝子は、Ｔｈｙ１プロモーターの制御下にある。
【０５６５】
５ＸＦＡＤマウスは、スウェーデン型（Ｋ６７０Ｎ、Ｍ６７１Ｌ）、フロリダ型（Ｉ７１６Ｖ）、及びロンドン型（Ｖ７１７Ｉ）家族性アルツハイマー病（ＦＡＤ）変異を有する変異型ヒトＡＰＰ（６９５）を過剰発現する。５ＸＦＡＤマウスはまた、２つのＦＡＤ変異、すなわちＭ１４６Ｌ及びＬ２８６Ｖを含むヒトＰＳ１を過剰発現する。両方の導入遺伝子は、脳における過剰発現を駆動し、かつアルツハイマー病の主要な特徴を再現するためのマウスＴｈｙ１プロモーターの制御下にある。
【０５６６】
Ｔｇ２５７６マウスは、スウェーデン型変異（ＫＭ６７０／６７１ＮＬ）を含むＡＰＰの変異体型（アイソフォーム６９５）を過剰発現する。
【０５６７】
記載されたとおり（Ｗｉｌｃｏｃｋ  ＤＭ,ｅｔ  ａｌ．，（２００３）Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  ２３：３７４５；Ｗｉｌｃｏｃｋ  ＤＭ,ｅｔ  ａｌ．，（２００４）Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ  Ｄｉｓ  １５：１１；Ｓｕｄｄｕｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１３）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ,３３,９６８４）、４カ月齢のＡＰＰ／ＰＳ１または５カ月齢の５ｘＦＡＤマウスへの頭蓋内注射では、１群当たり５頭のマウスが、抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５またはアイソタイプ対照抗体ｍＩｇＧ１（クローンＭＯＰＣ−２１、Ｂｉｏｘｃｅｌｌ）の１または５ｍｇ／ｍｌの溶液２ｕｌの注射を与えられた。外科手術の当日に、マウスの体重を量り、イソフルランで麻酔をかけ、脳定位固定装置（５１７３３Ｄデジタル双腕マニピュレータマウス脳定位固定フレーム、Ｓｔｏｅｌｔｉｎｇ）に置いた。中矢状切開を行って、頭蓋を露出させ、脳定位固定フレームに取り付けられた歯科用ドリルを用いて、前頭皮質及び海馬上に４つの穿頭孔を、次の座標で開けた：前頭皮質、前後方向に＋１．７ｍｍ、側方に±２．０ｍｍ；海馬、前後方向に−２．７ｍｍ；側方に±２．５ｍｍ（すべてブレグマから計測）。注射されるべき溶液を含有する１０ｍｌ  Ｈａｍｉｌｔｏｎシリンジ（Ｈａｍｉｌｔｏｎ）に取り付けられた２６ゲージ針を、ブレグマに対して３．０ｍｍ前方に下ろし、２μｌ注射を２分間かけて行った。切開部を清浄にし、外科用ステープルで閉鎖した。注射から３日後に、マウスを生理食塩水で潅流し、脳の右半球を前頭皮質、海馬、脳の残部に解剖し、急速冷凍させた。左半分は、新たに調製された４％パラホルムアルデヒド中で浸漬固定した。
【０５６８】
３カ月齢野生型（ＷＴ）または５ｘＦＡＤトランスジェニックマウスの全身処理では、動物に、１６週間にわたって週１回、５０ｍｇ／ｋｇの７Ｅ５抗体またはマウスＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体を腹腔内注射した。実験の終了時に、マウスを通常生理食塩水で潅流し、全脳を取り出した。左脳半球を４％パラホルムアルデヒド中で、２４時間にわたって滴下固定し、免疫組織化学を続けた。右脳半球を前頭皮質、後部皮質、海馬及び小脳に解剖し、液体窒素中で急速冷凍させた。
【０５６９】
インビボでの、脳における抗ＴＲＥＭ２抗体処置後のサイトカイン及びケモカイン発現の分析
ＡＰＰ／ＰＳ１マウス及び５ＸＦＡＤマウスの脳の種々の領域において炎症性遺伝子の発現を調節する抗ＴＲＥＭ２抗体の能力を、抗ＴＲＥＭ２抗体の頭蓋内（ＩＣ）投与の後に評価した。
【０５７０】
製造者指示に従ってＴｒｉｚｏｌ  Ｐｌｕｓ  ＲＮＡ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｍｂｉｏｎ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して、ＲＮＡを左海馬から抽出した。ＢｉｏＳｐｅｃ  Ｎａｎｏ分光光度計（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）を使用して、ＲＮＡを定量化し、製造者指示に従ってｃＤＮＡ  Ｈｉｇｈ  Ｃａｐａｃｉｔｙキット（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して、ｃＤＮＡを逆転写した。目的の遺伝子ＩＬ−１ｂ、ＩＬ−６、ＴＮＦａ、ＩＬ−１２、ＹＭ−１、ＩＬ−１Ｒａ、ＭＲＣ１、ＩＬ−１０、ＣＤ８６、ＦＣＧＲ１Ｂ、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＲ２、ＣＸＣＬ１０、Ｇａｔａ３、Ｒｏｒｃ、ＯＰＮ、ＦＬＴ１、ＣＳＦ−１、ＭＨＣ−ＩＩ、ＡＸＬ及びＴＧＦｂのためのＴａｑＭａｎ（登録商標）遺伝子発現プローブ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を含有する３８４ウェルマイクロ流体カードカスタムＴａｑＭａｎ（登録商標）アッセイを使用して、リアルタイムＰＣＲを行った。すべての遺伝子発現データを、１８Ｓ  ｒＲＮＡ発現に対して正規化した。倍数変化を、ΔＣＴ法を使用して決定した。データは、平均±標準誤差として表される。統計的解析は、ＪＭＰ統計的解析プログラム（ＳＡＳ）を使用して行われる。ｐ値が０．０５未満であった場合に、統計的有意性が与えられた。適切な場合には、処理差、及び処理群内での差を時間経過に沿って検出するために、一元配置ＡＮＯＶＡ及び二元配置ＡＮＯＶＡを使用した。
【０５７１】
図１７Ａに示されているとおり、抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５でのＡＰＰ／ＰＳ１マウスの処置は、ＩＬ−１ｂ、ＩＬ−６、ＴＮＦａ、及びＣＤ８６の発現を約２倍、有意に増加させた。ＦＣＧＲ１Ｂの発現は約３倍増加し、ＩＬ−１０の発現は約４倍増加した。対照的に、ＩＬ−１Ｒａの発現は半分に減少した。ＩＬ−１２、ＹＭ−１、ＭＲＣ１、及びＴＧＦＢの発現は変化しないままであった。
【０５７２】
図１７Ｂに示されているとおり、５ＸＦＡＤマウスへの抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５の頭蓋内注射は、注射から７２時間後に、ＩＬ−１ｂ、ＴＮＦａ、ＹＭ−１、ＣＤ８６、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＲ２、ＣＸＣＬ１０、Ｇａｔａ３及びＲｏｒｃの発現を約２倍、有意に増加させた。ＣＣＬ５の発現は、約３倍増加した。ＴＧＦ−β１の発現は変化しないままであった。図１７Ｃに示されているとおり、ＦＬＴ１レベルが、７Ｅ５注射で上昇した。抗体７Ｅ５の注射から２４及び７２時間後の５ＸＦＡＤマウスの海馬における炎症誘発性及び抗炎症性遺伝子の発現を、ＩＬ−１ｂ、ＴＮＦａ、ＹＭ−１、ＩＬ１Ｒｎ  ＣＤ８６、ＴＧＦ−β１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ５、ＣＣＲ２、ＣＸＣＬ１０、Ｇａｔａ３、ＦＬＴ１及びＲｏｒｃ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）のためのＴａｑＭａｎ（登録商標）遺伝子発現プローブを含有するＴａｑＭａｎアッセイ、ならびにリアルタイムＰＣＲを使用して測定した。
【０５７３】
５ｘＦＡＤマウスへの抗体７Ｅ５の３カ月にわたる週１回の注射は、ＣＤ１１ｃのレベルを低下させた一方で、Ｆａｂｐ３のレベルは上昇した（図１７Ｄ〜１７Ｐ）。対照的に、ＣＣＬ２、ＣＸＣＬ１０、Ｒｏｒｃ、Ｆａｂｐ５及びＴＮＦａのレベルは上昇した。この結果は、抗体７Ｅ５が炎症性シグナル伝達を調節し、それによって、治療効果を誘導し得ることを示している（図１７Ｄ〜１７Ｐ）。
【０５７４】
アミロイドベータペプチドの蓄積
上記のとおり、脳の種々の領域においてアミロイドベータ（Ａベータ）ペプチドの量を減少させる抗ＴＲＥＭ２抗体の能力を、ＡＰＰ／ＰＳ１マウスに抗ＴＲＥＭ２抗体を頭蓋内（ＩＣ）投与した後か、または５ｘＦＡＤマウスに抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５を腹腔内投与した後に評価した。Ａベータペプチドを定量化するために、パラホルムアルデヒド固定された左脳半球を、低温保護として一連の１０、２０、及び３０％スクロース溶液に通し、２５μｍ凍結水平断面を、スライディングミクロトームを使用して収集し、アジ化ナトリウムを含有するＰＢＳに浮かべて４℃で貯蔵した。推定される注射部位をまたぐ３００μｍ間隔の切片を初めにマウントし、クレシルバイオレットによって染色して、注射部位を同定した。その後のすべての組織学及び免疫組織化学では、注射部位をまたぐ１００μｍ間隔の６つの切片を選択し、分析した。Ａベータ（ウサギポリクローナル抗体Ａβ１−１６；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）についてのフリーフローティング免疫組織化学を行った。陽性染色液によって占められた面積のパーセントを、Ｎｉｋｏｎ  ｅｌｅｍｅｎｔｓ  ＢＲソフトウェアを使用して計算した。
【０５７５】
タンパク質溶解産物中のＡベータペプチドレベルを測定するために、タンパク質を、２ステップ抽出法を使用して、右前頭皮質から抽出した。初めに、脳を、完全プロテアーゼ及びホスファターゼ阻害剤（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を含有するＰＢＳ中で均質化した。これらのサンプルを１６，０００Ｘｇで、４℃で１時間にわたって遠心した。上清を除去すると、これは、「可溶性」抽出物になった。得られたペレットを、７０％ギ酸１００μｌ中で均質化し、１６，０００Ｘｇで、４℃で１時間にわたって遠心した。上清を除去し、１：２０で１Ｍトリス−ＨＣｌで中和すると、これは「不溶性」抽出物になった。可溶性及び不溶性抽出物の両方について、タンパク質濃度を、製造者指示（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に従ってビシンコニン酸タンパク質アッセイを使用して決定した。Ｍｅｓｏ−Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ  ＥＬＩＳＡシステムを使用して、Ａベータ３８（Ａβ３８）、Ａベータ４０（Ａβ４０）、及びＡベータ４２（Ａβ４２）（ＭＳＤ）を測定した。ＥＬＩＳＡキットを製造者指示に従って操作した。
【０５７６】
図１７Ｑに示されているとおり、抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５での処置は、Ａベータペプチドについて陽性に染色される脳の領域を有意に減少させた。前頭皮質では、Ａベータペプチドは、抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５で処置されたマウスにおける組織の約２％と比較して、対照抗体で処置されたマウスでは組織の約４％に及んだ。海馬では、Ａベータペプチドは、抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５で処置されたマウスにおける組織の約２％と比較して、対照抗体で処置されたマウスでは組織の約３％に及んだ。
【０５７７】
図１７Ｒに示されているとおり、５ｘＦＡＤマウスへの抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５の注射は、Ａベータペプチドについて陽性に染色される脳の領域を有意に減少させた。前頭皮質では、Ａベータペプチドは、抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５で処置されたマウスにおける組織の約１２．５％と比較して、対照抗体で処置されたマウスでは組織の約２０％に及んだ。海馬では、Ａベータペプチドは、抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５で処置されたマウスにおける組織の約７．５％と比較して、対照抗体で処置されたマウスでは組織の約１２％に及んだ。
【０５７８】
図１７Ｓ〜１７Ｕに示されているとおり、５ＸＦＡＤマウスへの抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５の注射は、不溶性タンパク質溶解産物において、Ａベータ４２ペプチドのレベルを有意に低下させたが、Ａベータ３０は低下させなかった。Ａベータ４０ペプチドの僅かな、ただし有意ではない減少が存在した。図１７Ｓは、Ａベータ３８ペプチドのレベルを示している。図１７Ｔは、Ａベータ４０ペプチドのレベルを示している。図１７Ｕは、Ａベータ４２ペプチドのレベルを示している。
【０５７９】
ミクログリア免疫染色
抗ＴＲＥＭ２抗体を頭蓋内注射されたＡＰＰ／ＰＳ１マウス、または抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５を３カ月にわたって週１回末梢注射された５ｘＦＡＤマウスにおいて、脳の種々の領域におけるミクログリアの数、形態、及び活性化状態を調節する抗ＴＲＥＭ２抗体の能力を、抗ＴＲＥＭ２抗体で処置した後に評価した。マウスを上記のとおり処置し、潅流し、脳サンプルを組織診のために処理した。注射部位をまたぐ１００μｍ間隔の６つの切片を選択し、分析した。切片を、ＤＰＢＳ中４％ヤギ血清中の一次抗ＣＤ１１ｂ抗体、１：３，０００（ラットモノクローナル、ＡｂＤ  Ｓｅｒｏｔｅｃ、Ｒａｌｅｉｇｈ、ＮＣ）中で室温のままで、次いで、終夜、４℃でインキュベートした。次いで、切片を、ビオチン化二次抗体中で２時間にわたってインキュベートした。ＧＦＡＰではヤギ抗ウサギＩｇＧを、かつＣＤ１１ｂではヤギ抗ラットを、両方とも１：３，０００で使用した（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ、ＣＡ）。二次抗体シグナルの増幅を、アビジン−ビオチン複合体（ＡＢＣ）（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ、ＣＡ）中で１時間にわたってインキュベートすることによって達成した。発色のために、製造者指示に従って、ベクタージアミノベンジジン（ＤＡＢ）ペルオキシダーゼキット（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ、ＣＡ）を使用した。切片をスライドにマウントし、終夜放置して風乾し、エタノール勾配中で脱水し、続いて、キシレンでインキュベートし、ＤＰＸ  ｍｏｕｎｔａｎｔ（Ｅｌｅｃｔｒｏｎ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｈａｔｆｉｅｌｄ、ＰＡ）を使用してカバーガラスを載せた。陽性染色液によって占められた面積パーセントを、Ｎｉｋｏｎ  ｅｌｅｍｅｎｔｓ  ＢＲソフトウェアを使用して計算した。
【０５８０】
図１７Ｖに示されているとおり、ＡＰＰＰＳ１マウスにおける抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５のＩＣ注射は、ＣＤ１１ｂについて陽性に染色された脳の面積を有意に低下させた。前頭皮質では、ＣＤ１１ｂ陽性細胞は、抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５で処置されたマウスでの約２２％と比較して、対照抗体で処置されたマウスでは組織の約１０％を占めた。海馬では、ＣＤ１１ｂ＋細胞は、抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５で処置されたマウスでの組織の約２２％と比較して、対照抗体で処置されたマウスでは組織の約１４％を占めた。
【０５８１】
図１７Ｗに示されているとおり、抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５での５ＸＦＡＤマウスの全身処置は、ＣＤ１１ｂについて陽性に染色された脳の面積を有意に増加させた。前頭皮質では、ＣＤ１１ｂ陽性細胞は、マウスが抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５で処置された場合の組織の約２３％と比較して、マウスが対照抗体で処置された場合には組織の約１２％を占めた。海馬では、ＣＤ１１ｂ＋細胞は、マウスが抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５で処置された場合の組織の約３２％と比較して、マウスが対照抗体で処置された場合には組織の約１８％を占めた。
【０５８２】
認知及び運動機能の決定
アルツハイマー病（ＡＤ）の認知障害を遅延させる、予防する、または逆転させる抗ＴＲＥＭ２抗体の能力を評価するために、５Ｘ  ＦＡＤマウスを使用した。５Ｘ  ＦＡＤマウスを、５０ｍｇ／ｋｇの抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５またはアイソタイプ対照抗体ｍＩｇＧ１（クローンＭＯＰＣ−２１、Ｂｉｏｘｃｅｌｌ）で１２週間にわたって週１回処置した。処理の終了時に、マウスを、放射状アーム水迷路及び新規物体認識試験を使用して認知障害の減少について試験した。
【０５８３】
放射状アーム水迷路
放射状アーム水迷路は、Ｗｉｌｃｏｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，（２００６）Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ、２６：５３４０において記載されているとおりの空間学習及び記憶課題である。簡単に述べると、抗体処置から１２週間後に、５Ｘ  ＦＡＤマウスを、２日間の放射状アーム水迷路パラダイムに、続いて、１日のオープンプール可視プラットフォームタスク（ｏｐｅｎ−ｐｏｏｌ  ｖｉｓｉｂｌｅ  ｐｌａｔｆｏｒｍ  ｔａｓｋ）に供した。装置は、Ｇｏｒｄｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２００１）．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ  Ａｇｉｎｇ  ２２：３７７において以前に記載されたとおりの６アーム迷路であった。放射状アーム水迷路課題を、Ｗｉｌｃｏｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，（２００４）．Ｊ  Ｎｅｕｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  １：２４において以前に記載されたとおりに実行した。１日目に、１５回の試験を、５回からなる３つのブロックで実行した。マウスをさらに、４頭のマウスからなるコホートで走らせて、各トライアル間の短時間の静止を可能にし（他の３頭のマウスを走らせるので）、４頭のマウスからなる別のコホートを走らせる場合には、ブロック間により長い休憩を可能にした。これによって、疲労させることなく、高齢マウスを迅速に試験することができた。さらに、試験の分散練習は、１０〜１４日にわたる毎日の集中試験（ｄａｉｌｙ  ｍａｓｓｅｄ  ｔｒｉａｌｓ）と比較して、習得速度を増強すると考えられる。出発アームを各トライアルで変え、目標アームは、両方の日で変えないままにした。最初の１１回の試験では、プラットフォームは交互に、見える、次いで、見えなくなり、最後の４回のトライアルでは見えないままであった。２日目に、マウスを、プラットフォームがすべてのトライアルで見えないことを除いて、１日目と全く同じ手法で走らせた。各トライアルで、１分の時間枠で、エラー（間違ったアームへの侵入）の数を測定した。不活発なマウスに起因する混乱を回避するために、１つのエラーを、２０秒ごとに、アームの選択に失敗したマウスに割り当てる。３回の連続試験での各マウスのエラーを平均して、毎日、試験から５つのブロックを生じさせた。試験ブロックを、ＳｔａｔＶｉｅｗ（ＳＡＳ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、Ｃａｒｙ、ＮＣ）を使用してＡＮＯＶＡによって統計的に分析した。放射状アーム水迷路の２日後に、マウスを、可視プラットフォームを備えたオープンプールタスクで１５回試験して、放射状アーム迷路における不十分なスコアが記憶障害ではなく感覚または動作障害に起因し得るかどうかを特定した。現行の試験では、すべてのマウスが、迷路の可視プラットフォームバージョンで十分に動作し、感覚または動作障害によって排除されたマウスはいなかった。
【０５８４】
図１７Ｘに示されているとおり、抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５での処置は、５ＸＦＡＤマウスにおいて空間学習及び記憶欠損を有意に改善した。最後のブロック（９〜１０）では、５ｘＦＡＤマウスは、抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５で処置した場合の１未満のエラーと比較して、対照抗体で処置した場合は平均して３つのエラーであった（図１７Ｘ）。
【０５８５】
新規物体認識試験
新規物体認識試験（ＮＯＲＴ）は、アルツハイマー病のマウスモデルにおいて認知異常を測定するための高感度で再現可能な試験である。５Ｘ  ＦＡＤマウスを遮音室内で、それぞれ一度、開放式ガラス製水槽様の透明箱に、１時間の順応期間にわたって入れた。翌日、それらを、箱の２つの異なる角に置かれた２つの同一の清浄な石膏製の物体と共に、そのボックスに５分間にわたって再導入して、基線活性を測定した。４時間後に、物体の１つを、同じサイズ及びテクスチャの新しいものと置き換えて、マウスをさらに５分間にわたって同じケージに再導入して、新規物体認識について試験した。物体探査にマウスが費やした時間を、異なる処理に対して盲検化されたオペレーターが手入力で記録した。物体のそれぞれで費やされた累積時間を記録した。物体の探査は、２ｃｍの距離で物体に鼻を向けること、及び／または鼻でそれに触れることと定義された。合計探査時間のうち、新たな物体を探査するために動物が費やした合計時間のパーセンテージが、認識記憶の測定値であった。基線では、マウスは、２つの物体のそれぞれでほぼ同じ時間を費やしたが、それというのも、両方とも、マウスにとって新規であるためである。試験では、認知的に健康なマウスは、新たな物体を「新しい」と特定し、元のものを覚えており、したがって、新たな物体を探査するためにより多くの時間（その時間のうちの約７０〜７５％）を費やす。
【０５８６】
５ｘＦＡＤマウスでは、アルツハイマー病が経時的に発症し、記憶障害を、したがって、（正常よりも）短いパーセントの新たな物体を探査する時間をもたらした。ＮＯＲＴについての有意性を、繰り返し測定のための二元配置ＡＮＯＶＡ及び事後Ｆｉｓｈｅｒ  ＰＬＳＤ試験を使用して試験した。データは、平均±標準誤差として表される。
【０５８７】
図１７Ｙに示されているとおり、認知機能の改善が、抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５で処置された５ＸＦＡＤマウスで観察された。対照抗体で処置された５ＸＦＡＤマウスは、新規物体の探査に、その時間のうちの約５０％しか費やさず、これは、高度に損なわれた認知機能を示している。対照的に、抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５で処置されたマウスは、新規物体の探査に、その時間のうちの６７％を費やし、これは、野生型（ＷＴ）マウスで測定された正常な認知機能に近く、ほぼ完全な回復を示している。事後Ｆｉｓｈｅｒ  ＰＬＳＤ検定を統計的解析のために使用した（＊＊＝Ｐ値＜０．０１）。
【０５８８】
Ｔｇ２５７６マウスアルツハイマー病モデル
アルツハイマー病（ＡＤ）の発症を遅延させる、予防する、または逆転させる抗ＴＲＥＭ２抗体の能力を評価するために、Ｔｇ２５７６マウスを使用する。Ｔｇ２５７６マウスは、スウェーデン型変異（ＫＭ６７０／６７１ＮＬ）を有するＡＰＰの変異体型（アイソフォーム６９５）を過剰発現する。マウスを、９８〜９９週齢から始めて、５０ｍｇ／Ｋｇの抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５で、またはアイソタイプ対照抗体ｍＩｇＧ１（クローンＭＯＰＣ−２１、Ｂｉｏｘｃｅｌｌ）で週１回処置する。マウスを、免疫組織化学で、かつ組織抽出物のＥＬＩＳＡによって、Ａベータプラーク負荷について試験する。マウスを、脳内のミクログリアの数について、及びＭｏｒｒｉｓ水迷路、空間学習及び記憶課題、放射状アーム水迷路、空間学習及び記憶課題、Ｙ型迷路（空間認知の測定値として自発的変更を定量化する）、オープンフィールドにおける新規選好、学習及び記憶を評価するためのオペラント学習、ならびに恐怖条件付けを使用して認知障害の減少についてさらに試験する（ｍｏｕｓｅｂｉｏｌｏｇｙ．ｏｒｇ  ｗｅｂｓｉｔｅ；Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１５）Ｃｅｌｌ．ｐｉｉ：Ｓ００９２−８６７４（１５）００１２７−０）。
【０５８９】
実施例１７：腫瘍微細環境におけるＴＲＥＭ２発現
３頭のＣ５７Ｂｌ６またはＢＡＬＢ／ｃマウス（雌、８週齢）からなる群を、ＰＢＳ１００ｕｌに懸濁させた１×１０６のＭＣ３８またはＣＴ２６結腸癌細胞、またはＥＭＴ−６マウス乳癌細胞で皮下攻撃した。動物に、移植の前に、イソフルランで麻酔をかける。腫瘍が７００〜１０００ｍｍ３のサイズに達したときに、腫瘍を外植して、ＦＡＣＳによって腫瘍微細環境におけるＴＲＥＭ２発現を分析した。比較として、腫瘍を有するマウスの脾臓またはナイーブマウスの対照脾臓も分析した。ＦＡＣＳによる発現分析のために、腫瘍及び脾臓を、１ｍｇ／ｍｌのコラゲナーゼを含有するＰＢＳ中でインキュベートし、次いで、細胞ストレーナーによって処理して、単細胞懸濁液を得た。次いで、細胞を抗ＣＤ４５−ＰｅｒＣｐ−Ｃｙ７、抗ＣＤ１１ｂ−ＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５、抗  ＣＤ３−ＰＣ、抗Ｇｒ１−ＦＩＴＣ、抗ＮＫ１．１−ＰＥ、抗ＴＲＥＭ２−ＡＰＣ抗体及び生存度色素（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｔ＃  Ｌ３４９５７）と共に３０分間にわたって氷上でインキュベートし、次いで、冷ＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄した。次いで、４％ＰＦＡ固定サンプルを取得した。データをＢＤ  ＦＡＣＳ  ＣＡＮＴＯ  ＩＩ血球計算器（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）で取得し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアで分析した。
【０５９０】
図１８に示されているとおり、ＴＲＥＭ２は、ＣＤ４５＋ＣＤ３−ＣＤ１１ｂ＋Ｇｒ１−骨髄系細胞（マクロファージ、単球、及び樹状細胞を含む）の約５〜２０％で、ＭＣ３８、ＣＴ２６及びＥＭＴ６腫瘍を浸潤するＣＤ４５＋ＣＤ３−ＣＤ１１ｂ＋Ｇｒ１＋骨髄系由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の約５〜２０％で、細胞表面上に発現することが見出された。ＴＲＥＭ２は、担腫瘍マウスまたはナイーブマウスの脾臓では発現しないことが見出された。これらの結果は、ＭＣ３８、ＣＴ２６、及びＥＭＴ−６腫瘍が、骨髄系細胞のサブセットにおいてＴＲＥＭ２の細胞表面発現を刺激することを示している。
【０５９１】
実施例１８：ＴＲＥＭ２欠損マウスにおける腫瘍成長の分析
ＴＲＥＭ２野生型（ＷＴ、ｎ＝１１）及びＴＲＥＭ２ノックアウト（ＫＯ、ｎ＝１４）マウス（性別及び年齢適合同腹子、１０＋／−２週齢）からなる群を、ＰＢＳ１００ｕｌ中に懸濁させた１×１０６のＭＣ３８結腸癌腫瘍細胞で皮下攻撃した。マウスに、移植の前にイソフルランで麻酔をかけた。５日目から始めて、腫瘍成長を、腫瘍成長を測定するために週２回、キャリパーで監視した。実験の終点は、２０００ｍｍ３の腫瘍体積または６０日間である。経時的な腫瘍サイズ（体積、ｍｍ３で表される）が評価項目である。
【０５９２】
図１９Ａは、平均腫瘍サイズが、腫瘍注射（８日目）後の初期の時点で、野生型（ＷＴ）マウスと比較して、ＴＲＥＭ２ノックアウト（ＫＯ）マウスでは、有意に小さい一方で、腫瘍サイズの差が、後期時点（２６日目）では、もはや統計的に有意ではなくなることを示している。中央腫瘍成長が、野生型（ＷＴ）マウスと比較して、ＴＲＥＭ２ノックアウト（ＫＯ）マウスにおいて減少した（図１９Ｂ）。これらの結果は、ＴＲＥＭ２が腫瘍成長を促進し、腫瘍進行の初期相で特に顕著であることを示唆している。
【０５９３】
実施例１９：乳癌のマウスモデルにおけるＴＲＥＭ２抗体の抗がん作用の分析
８週（＋／−２週）齢の１０頭のＢＡＬＢ／ｃマウスからなる群を、ＰＢＳ１００ｕｌ中に懸濁させた５×１０６のＥＭＴ−６腫瘍細胞で皮下攻撃する。移植の前に、動物に、イソフルランで麻酔をかける。２日目から始めて、マウスの群に、１、４、８、１５、及び２２日目に、４０ｍｇ／ｋｇの抗ＴＲＥＭ２抗体をＩＰ注射する。腫瘍成長を、４日目から始めて、腫瘍成長を測定するために週２回、キャリパーで監視する。実験の終点は、２０００ｍｍ３の腫瘍体積または６０日間である。腫瘍成長及び生存％が評価項目である。腫瘍生着及び成長速度の減少、腫瘍浸潤性免疫抑制マクロファージの数の減少、ならびに腫瘍へのエフェクターＴ細胞流入の増加は、遮断抗ＴＲＥＭ２抗体の抗がん作用を示している。
【０５９４】
実施例２０：乳癌のマウスモデルにおける、ＴＲＥＭ２抗体を、阻害性チェックポイントタンパク質または阻害性サイトカイン／ケモカイン及びそれらの受容体に対する抗体と併用する併用療法の相加的抗腫瘍作用の分析
８週（＋／−２週）齢の１０頭のＢＡＬＢ／ｃマウスからなる群を、ＰＢＳ１００ｕｌ中に懸濁させた５×１０６のＥＭＴ−６腫瘍細胞で皮下攻撃する。移植の前に、動物に、イソフルランで麻酔をかける。２日目から始めて、マウスの群に、１、４、８、１５、及び２２日目に、４０ｍｇ／ｋｇの抗ＴＲＥＭ２抗体を単独で、または８及び１１日目のチェックポイントタンパク質に対する抗体（例えば、抗ＰＤＬ１  ｍＡｂクローン１０Ｆ．９Ｇ２及び／または抗ＣＴＬＡ−４  ｍＡｂクローン９Ｈ１０）と組み合わせてＩＰ注射する。処置群には、抗ＴＲＥＭ２、抗ＣＴＬＡ−４、抗ＴＲＥＭ２＋抗ＣＴＬＡ−４及びアイソタイプ対照が含まれる。腫瘍成長を、４日目から始めて、腫瘍成長を測定するために週２回、キャリパーで監視する。実験の終点は、２０００ｍｍ３の腫瘍体積または６０日間である。腫瘍成長及び生存％が評価項目である。組合せ療法に伴う腫瘍成長の減少、生存率の上昇は、抗ＴＲＥＭ２抗体が、抗チェックポイント抗体と相加的または相乗的治療効果を有することを示している。チェックポイント分子に対するアンタゴニスト抗体には、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２、ＰＤ１、ＣＴＬＡ−４、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ３、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ−３、及びホスファチジルセリン（ＰＳ）に対する抗体が含まれる。阻害性サイトカインに対するアンタゴニスト抗体には、ＣＣＬ２、ＣＳＦ−１、及びＩＬ−２に対する抗体が含まれる。
【０５９５】
実施例２１：ＴＲＥＭ２抗体を、刺激性チェックポイントタンパク質を活性化する抗体と併用する併用療法の相加的抗腫瘍作用の分析
実施例１９に記載のとおり、８週（＋／−２週）齢の１５頭のＣ５７Ｂｌ６／ＮＴａｃマウスからなる群を、腫瘍細胞で皮下攻撃する。移植の前に、動物に、イソフルランで麻酔をかける。２日目から始めて、マウスに、３日ごとに４用量で、抗ＴＲＥＭ２抗体２００ｕｇを単独で、または３、６、及び９日目の刺激性チェックポイントタンパク質を活性化するアゴニスト抗体（例えば、ＯＸ４０またはＩＣＯＳ  ｍＡｂ）と組み合わせて腹腔内注射する。腫瘍成長を、４日目から始めて、腫瘍成長を測定するために週２回、キャリパーで監視する。実験の終点は、２０００ｍｍ３の腫瘍体積または６０日間である。腫瘍成長及び生存パーセントが評価項目である。併用療法に伴う腫瘍成長の減少及び生存パーセントの上昇は、抗ＴＲＥＭ２抗体が刺激性チェックポイント抗体と共に相加的または相乗的治療効果を有することを示している。刺激性チェックポイント抗体には、ＣＤ２８、ＩＣＯＳ、ＣＤ１３７、ＣＤ２７、ＣＤ４０、及びＧＩＴＲに対するアゴニスト／刺激性抗体が含まれる。
【０５９６】
実施例２２：ＴＲＥＭ２抗体を刺激性サイトカインと併用する併用療法の相加的抗腫瘍作用の分析
実施例１９に記載のとおり、８週（＋／−２週）齢の１５頭のＣ５７Ｂｌ６／ＮＴａｃマウスからなる群を、腫瘍細胞で皮下攻撃する。移植の前に、動物に、イソフルランで麻酔をかける。２日目から始めて、マウスに、３日ごとに４用量で、抗ＴＲＥＭ２抗体２００ｕｇを単独で、または刺激性サイトカイン（例えば、ＩＬ−１２、ＩＦＮ−ａ）と組み合わせて腹腔内注射する。腫瘍成長を、４日目から始めて、腫瘍成長を測定するために週２回、キャリパーで監視する。実験の終点は、２０００ｍｍ３の腫瘍体積または６０日間である。腫瘍成長及び生存パーセントが評価項目である。併用療法に伴う腫瘍成長の減少及び生存パーセントの上昇は、抗ＴＲＥＭ２抗体が免疫刺激性サイトカインと共に相加的または相乗的治療効果を有することを示している。刺激性サイトカインには、ＩＦＮ−ａ／ｂ、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、ＧＭ−ＣＳＦ、及びＧ−ＣＳＦが含まれる。
【０５９７】
実施例２３：炎症性疾患のモデルにおける、アゴニストＴＲＥＭ２及び／またはＴＲＥＭ２二重特異性抗体の治療的使用の特徴づけ
アゴニスト抗ＴＲＥＭ２、及び／またはＴＲＥＭ２二重特異性抗体の治療有用性を、炎症性疾患のモデルにおいて試験する。例えば、関節リウマチまたは別の炎症性疾患の確立されたモデルである（Ｍｉｚｏｇｕｃｈｉ（２０１２）Ｐｒｏｇ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｓｃｉ．，１０５：２６３−３２０；及びＡｓｑｕｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，（２００９）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．３９：２０４０−４）。
【０５９８】
実施例２４：全身動物における、ＥＡＥ及びクプリゾンからのインビボ保護
成体７〜９週齢の雌のＣ５７ＢＬ／６マウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから入手）に、尾基部で両側性に、不完全フロイントアジュバント（Ｄｉｆｃｏ）中にミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質ペプチド３５〜５５（アミノ酸ＭＥＶＧＷＹＲＳＰＦＳＲＶＶＨＬＹＲＮＧＫ（配列番号８８５）；Ｓｅｑｌａｂ）１００μｇ及びマイコバクテリウム結核Ｈ３７  Ｒａ（Ｄｉｆｃｏ）１ｍｇを含有する接種源２００μｌを注射する。百日咳毒素（２００ｎｇ；Ｌｉｓｔ  Ｂｉｏ−ｌｏｇｉｃａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を、免疫化後０日目、及び２日目に注射する。臨床的徴候を次のとおりにスコアリングする。０：臨床徴候なし、１：完全に引きずられた尾、２：完全に引きずられた尾及び異常な歩行、３：後肢１本の不全対麻痺、４：完全な後肢不全対麻痺、及び５：前肢及び後肢の麻痺または停滞。１４日目に疾患の発症（１以上の臨床スコア）を有するマウスのみを実験に使用する。アゴニスト抗ＴＲＥＭ２、及び／またはＴＲＥＭ２二重特異性抗体を、最初の臨床症状の日に、または任意の他の所望の時点で、ＥＡＥ罹患マウスに腹腔内または静脈内注射する（ＰＬｏＳ  Ｍｅｄ（２００７）４（４）：ｅ１２４）。
【０５９９】
若齢または高齢野生型（ＷＴ）マウスに、０．２％クプリゾン（ＣＰＺ）粉末化シュウ酸ビス（シクロヘキシリデンヒドラジド）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を含有する標準的な食餌（Ｈａｒｌａｎ）を４、６または１２週間にわたって給餌する。組織学的及び免疫組織化学的分析のために、脳を、４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）でマウスを潅流した後に除去し、４％ＰＦＡ中で２４時間にわたって固定し、続いて、３０％スクロース中に２４〜４８時間にわたって浸漬する。ミエリン完全性及び損傷、さらには、細胞増殖及び炎症を評価するために、切片またはマウス脳を、抗ＭＢＰ（１：１００；Ａｂｃａｍ、ａｂ７３４９）、−ｄＭＢＰ（１：２０００；Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、ａｂ５８６４）、−β  ＡＰＰ（１：１００；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、５１−２７００）、−ＳＭＩ−３１（１：１０００；Ｃｏｖａｎｃｅ、ｓｍｉ−３１Ｒ）、−Ｉｂａ１（１：６００；Ｗａｋｏ、０１９−１９７４１），−ＢｒｄＵ（１：２５０；Ａｂｃａｍ、７Ｅ５８９３）、−ＧＦＡＰ（１：２００；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，１３−０３００）、−ｉＮＯＳ（１：１００；ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ、６１０３２９）、−ＬＰＬ（１：４００、ｆｒｏｍ  Ｄｒ．Ｇ．Ｏｌｉｖｅｃｒｏｎａ）及び−ＭＨＣ  ＩＩ（１：１００；ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ、５５３５４９）で染色する。抗体の挙動作用のために、透明なポリスチレン製の囲い及びコンピュータフォトビーム機器を使用して、マウスを歩行活動について分析する。一般活動性変項（全移動、垂直方向の立ち上がり）を、費やした時間、移動距離、及び侵入を含む情動性の指標と共に分析する。一連の知覚運動性試験を行って、平衡（棚部（ｌｅｄｇｅ）及びプラットフォーム）、強度（倒立スクリーン）、協調（ポール及び傾斜スクリーン）及び移動開始（歩行開始）を評価する。運動協調及び平衡を、ロータロッドプロトコル（Ｃａｎｔｏｎｉ  ｅｔ  ａｌ．、Ａｃｔａ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ（２０１５）１２９（３）：４２９−４７）を使用して試験する。
【０６００】
実施例２５：外傷性脳損傷の確立された動物モデルにおける、アゴニストＴＲＥＭ２及び／またはＴＲＥＭ２二重特異性抗体の治療的使用の特徴づけ
アゴニスト抗ＴＲＥＭ２、及び／またはＴＲＥＭ２二重特異性抗体の治療有用性を、外傷性脳損傷の確立された動物モデルにおいて試験する（Ｔａｎａｋａ，Ｙ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  ２３１  ４９−６０）。例えば、ミクログリア及び星状細胞の活性化を誘導する外傷性脳損傷のモデルを使用する。８週または９週齢の雄のＣ５７ＢＬ／６Ｊ  ＷＴマウスまたはプログラニュリンヘテロ接合型マウスを使用する（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  ＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓまたはＪａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから購入）。マウスに、滅菌生理食塩水に溶解させた塩酸キシラジン（８ｍｇ／ｋｇ）及び抱水クロラール（３００ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内投与することによって麻酔をかけ、その後、脳定位固定装置に置く（Ｎａｒｉｓｈｉｇｅ、Ｔｏｋｙｏ、Ｊａｐａｎ）。切開を頭皮で行って、頭蓋を露出させる。頭蓋から骨膜を除去し、穴を右大脳半球上に歯科用ドリルで開け、硬膜をニードルチップで除去する。外径０．５ｍｍを有するステンレス鋼製カニューレを使用して、矢状刺創を右半球に作製する。カニューレを、正中線に対して１．３ｍｍ側方、及びブレグマに対して１ｍｍ後方に位置させ、チップが深さ２ｍｍに達するまで脳に導入する。次いで、カニューレを尾側に２ｍｍ移動させ（ブレグマから３ｍｍ）、次いで、頭側に２ｍｍ移動させて、その最初の位置に戻す。最後に、カニューレを脳から取り出し、頭皮創傷を縫合する。
【０６０１】
別法では、改良型重量落下デバイスを使用する（Ｃｈｅｎ，Ｙ．，ｅｔ  ａｌ．，（１９９６）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｔｒａｕｍａ  １３、５５７−５６８）。具体的には、イソフルラン麻酔の後に、正中線矢状切開を行い、頭蓋を露出させる。テフロンチップ付円錐体（２ｍｍ直径）を、中央冠状面（ｍｉｄｃｏｒｏｎａｌ  ｐｌａｎｅ）で正中線に対して１〜２ｍｍ側方に置く。手で、頭部を適切な位置に保ち、９５ｇ重量を、予め固定された高さから塩錐体の上に落下させて、左半球に焦点損傷を生じさせる。麻酔から回復した後に、マウスをそれらのホームケージに戻し、手術後看護を与え、食物及び水を自由に摂らせる。偽対照には、麻酔及び皮膚切開のみが与えられる。マウスを、２５０ｕｌ／マウス（１００ｕｌ／体重１０ｇｒとして計算）の体積で、４ｍｇ／ｍｌ〜０．５ｍｇ／ｍｌの範囲の抗体濃度で腹腔内注射によって送達されるＴｒｅｍ２抗体で処置する。対照ＩｇＧ抗体を、４ｍｇ／ｍｌの濃度で注射する。抗体を、外傷性脳損傷の３日前に、次いで１、７、１４、２１、２８日目に注射する。神経学的スコア（ＮＳＳ）を、ＴＢＩから１時間後に（すべての群において同様の損傷重症度を規定及び保証するために）、次いで、２４時間目、及び３、５、７日目、及びフォローアップの終了まで週に１回（４週間）評価する。新規物体認識試験を使用して、認知機能が、損傷後４、１６、３２日目に試験されている。
【０６０２】
神経学的重症度スコア（ＮＳＳ）を、記載されているとおりに行う（Ｂｅｎｉ−Ａｄａｎｉ，Ｌ．ｅｔ  ａｌ．，（２００１）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｔｒａｕｍａ  ２５、３２４−３３３；Ｔｓｅｎｔｅｒ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，（２００８）．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｔｒａｕｍａ  ２５、３２４−３３３）。具体的には、ＮＳＳは、オープンフィールド動作、ビーム歩行、平衡、及び半側不全麻痺評価を含む、１０の個別課題からなり、それらは反射運動機能、俊敏さ、及び挙動を反映する。あるタスクの実行に失敗すると、１ポイント、成功すると、０ポイントが与えられる。外傷後１時間目でのＮＳＳは、損傷の当初重症度を反映する。したがって、回復程度（デルタＮＳＳ）は、損傷後１時間目の当初ＮＳＳスコアと、任意のその後の時点との間の差として計算される。
【０６０３】
新規物体認識試験（ＮＯＲＴ）は、ＴＢＩにおいて認知異常を測定するための高感度で再現可能な試験である。マウスを遮音室内で、それぞれ一度、開放式ガラス製水槽様の透明箱に、１時間の順応期間にわたって入れる。翌日、それらを、箱の２つの異なる角に置かれた２つの同一な清浄な石膏製の物体と共に、そのボックスに５分間にわたって再導入して、基線活性を測定する。４時間後に、物体の１つを、同じサイズ及びテクスチャの新しいものと置き換えて、マウスをさらに５分間にわたって同じケージに再導入して、新規物体認識について試験した。物体探査にマウスが費やした時間を、異なる処理に対して盲検化されたオペレーターが手入力で記録した。物体のそれぞれで費やされた累積時間を記録した。物体の探査は、２ｃｍの距離で物体に鼻を向けること、及び／または鼻でそれに触れることと定義された。合計探査時間のうち、新たな物体を探査するために動物が費やした合計探査時間のパーセンテージが、認識記憶の測定値であった。基線では、マウスは、両方の物体にほぼ同じ時間を費やしたが、それというのも、両方とも、マウスにとって新規であるためである。試験では、認知的に健康なマウスは、新たな物体を「新しい」と特定し、元のものを覚えていて、したがって、新たな物体を探査するためにより多くの時間（その時間のうちの約７０〜７５％）を費やす。ＴＢＩは、記憶障害をもたらし、したがって、新たな物体を探査する時間に、（正常よりも）短いパーセントをもたらすこととなる。ＴＢＩからの多少の自発的な回復がまさに起こり、新規物体に時間の６０〜６５％を費やすＴＢＩマウスをもたらし得る。統計的分析のために、市販のコンピューターソフトウェア（ＳｉｇｍａＳｔａｔ  ２．０３、Ｓｙｓｔａｔ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ、Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ、ＣＡ、ＵＳＡ）を使用することができる。処置は、独立変数であり、ＴＢＩパラメーターの結果は、従属変数である。ＮＳＳ及びＮＯＲＴ実験シリーズについての有意性を、繰り返し測定のための二元配置ＡＮＯＶＡ及び事後Ｆｉｓｈｅｒ  ＰＬＳＤ試験を使用して試験する。データは、平均±標準誤差として表される。
【０６０４】
図２０に示されているとおり、認知機能における用量依存的改善が、種々の用量の抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５で処置された、外傷性脳損傷を有するマウスで観察された。認知機能を、ＮＯＲＴ試験で評価した。処理群には、１＝４０ｍｇ／Ｋｇ  ７Ｅ５、２＝２０ｍｇ／Ｋｇ  ７Ｅ５、３＝１０ｍｇ／Ｋｇ  ７Ｅ５、４＝５ｍｇ／Ｋｇ  ７Ｅ５及びＣＴＲ＝４０ｍｇ／Ｋｇアイソタイプ対照抗体ｍＩｇＧ１が含まれた。ＮＯＲＴ試験を、損傷後３２日目に行った。棒グラフは、新規物体の探査にマウスがかけた時間のパーセンテージを表す。「基線」棒グラフは、２つの同一の物体の探査に費やされた時間を表し、これは、マウスが受けた処置に関わらず同様である。「試験」棒グラフは、新たな物体の探査に費やされた時間を表す。事後Ｆｉｓｈｅｒ  ＰＬＳＤ試験を、統計的解析のために使用した（＊＝Ｐ値＜０．０５）。
【０６０５】
対照抗体で処置された外傷性脳損傷を有するマウスは、新規物体探査に、５７．４±５．３％しか費やさず、これは、高度に損なわれた認知機能を示している（図２０）。対照的に、最高用量の抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５で処置されたマウスは、新規物体探査に、７３．９±５．４％の時間を費やし、これは、正常な認知機能に近く、ほぼ完全な回復を示している（図２０）。
【０６０６】
実施例２６：毒素誘発損傷後の神経炎症及びニューロン損失のモデルにおけるアゴニストＴＲＥＭ２及び／またはＴＲＥＭ２二重特異性抗体の治療的使用の特徴づけ
アゴニスト抗ＴＲＥＭ２、及び／またはＴＲＥＭ２二重特異性抗体の治療有用性を、毒素誘発損傷後の神経炎症及びニューロン損失のモデルにおいて試験する（Ｍａｒｔｅｎｓ、ＬＨ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１２）Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ、１２２、３９５５）。３カ月齢のマウスを、２日間にわたる１日当たりＭＰＴＰ（１−メチル−４−フェニル−１，２，３，６−テトラヒドロピリジン）（４μｇ／体重ｇ）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）の４回の腹腔内注射またはＰＢＳで処置する。マウスを標準プロトコルに従ってアゴニスト抗ＴＲＥＭ２、及び／またはＴＲＥＭ２二重特異性抗体で処置し、次いで、立体解析学的計数を使用して分析して、記載されているとおり、黒質緻密部（ＳＮｐｃ）中のドーパミンニューロン及びミクログリアを定量化する。
【０６０７】
実施例２７：アゴニスト及び／または二重特異性ＴＲＥＭ２抗体による、抗原特異的Ｔ細胞増殖を誘導するＢＭＤＣの能力の増強
アゴニスト抗ＴＲＥＭ２、及び／またはＴＲＥＭ２二重特異性抗体は、マーカーＣＤ８３及びＣＤ８６を発現し、次いで、抗原特異的Ｔ細胞増殖を誘導する骨髄由来樹状細胞（ＢＭＤＣ）の能力を増加させ得ると考えられる。ＴＲＥＭ２抗体が樹状細胞上で細胞表面マーカーＣＤ８３及びＣＤ８６の発現を誘導するかどうかを決定するために、抗体を、終夜、４℃で、１２ウェルプレート内に、ＰＢＳ中に２または５μｇ／ｍｌでプレーティングする。翌日、ウェルをＰＢＳで３回洗浄し、５日目に、未熟ヒトＤＣを採取し、１ウェル当たり１００万細胞でプレーティングし、３７℃、５％ＣＯ２で、サイトカインの非存在下でインキュベートする。ＣＤ８６、ＣＤ８３及びＣＤ１１ｃ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）のＦＡＣＳ分析を４８時間後に、ＢＤ  ＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏ  ４８で行う。データ分析を、ＦｌｏｗＪｏ（ＴｒｅｅＳｔａｒ）ソフトウェアバージョン１０．０．７で行う。別法では、５日目に、未熟ヒト樹状細胞を、１ウェル当たり１００，０００細胞で、Ｕ底非ＴＣ処理９６ウェルプレート内で、サイトカインを含まない培地中にプレーティングする。抗体を５μｇ／ｍｌで、２０μｇ／ｍｌのＬＰＳ除去された抗ヒト二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）を伴って、または伴わずに添加する。ＣＤ８６、ＣＤ８３、及びＣＤ１１ｃ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）についてのＦＡＣＳ分析を、以前に記載されたとおり、抗体添加から４８時間後に行う。ＢＭＤＣによって誘導されるオボアルブミン（ＯＶＡ）特異的Ｔ細胞応答は、ＣＦＳＥ希釈によって決定され得る。ＢＭＤＣを、培養から６日後にＭＡＣＳによって単離し、丸底９６ウェルプレート１ウェル当たり１×１０４の細胞で、ＯＶＡ（２または０．５ｍｇ／ｍＬ）及びＣｐＧ  ＤＮＡ（１００または２５ｎＭ）と共に、ＧＭ−ＣＳＦ（１０ｎｇ／ｍＬ）の存在下で、４時間にわたってプレーティングする。ＯＴ−ＩＩトランスジェニックマウスの脾臓及びリンパ節からのＣＤ４  Ｔ細胞を、Ｄｙｎａｌ  Ｍｏｕｓｅ  ＣＤ４  Ｎｅｇａｔｉｖｅ  Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用することによって単離し、ＣＦＳＥ（最終０．８ｍＭ）で染色する。４時間のＤＣ培養の後に、１×１０５のＣＦＳＥ標識ＣＤ４  ＯＴ−ＩＩＴ細胞を各ウェルに添加し、７２時間にわたってインキュベートする。培養後に、細胞を抗ＣＤ４モノクローナル抗体で染色し、フローサイトメトリーを行って、ゲートされたＣＤ４  ＯＴ−ＩＩＴ細胞のＣＦＳＥ希釈を決定する。分裂のパーセンテージ及び分裂指数を計算するデータ分析を、Ｆｌｏｗｊｏソフトウェア（Ｔｒｅｅｓｔａｒ）によって行う（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１２．４２：１７６−１８５）。
【０６０８】
別法では、５日目の未熟樹状細胞（ＣＤ１４−ＣＤ１１ｃ＋  ＬＩＮ−）を、前日に２μｇ／ｍｌ抗体でコーティングされた１２ウェル皿にプレーティングする。プレートをＰＢＳで３回洗浄し、その後、Ｔ細胞を添加する。非自家ドナーからのＣＤ４＋Ｔ細胞を単離し、ＣＦＳＥで標識し、その後、１：１０の比でＤＣに添加した。ＣＤ３／ＣＤ２８  Ｄｙｎａｌビーズは、陽性対照として役立つ。共培養から５日後に、細胞を、ＢＤ  ＦＡＣＳＣａｎｔｏ  ＩＩでフローサイトメトリーによって、ＣＦＳＥ希釈について分析する。ＣＦＳＥｌｏ細胞と比較したＣＦＳＥｈｉパーセントを、ＦｌｏｗＪｏ（ＴｒｅｅＳｔａｒ）で、各条件について計算する。
【０６０９】
実施例２８：ＴＲＥＭ２抗体は、ヒト樹状細胞（ＤＣ）上でのＣＤ８３及びＣＤ８６の発現を誘導し、Ｔ細胞増殖を誘導する
ＣＤ８３及びＣＤ８６の発現を改変する抗ＴＲＥＭ２抗体の能力を評価するために、プレート結合抗体及び可溶性抗体の両方を、樹状細胞（ＤＣ）と共にインキュベートし、ＣＤ８３、ＣＤ８６、ＣＣＲ７、及びリン酸化ＥＲＫの発現を測定した。Ｔ細胞増殖を調節する抗ＴＲＥＭ２抗体の能力を評価するために、ＤＣを、Ｔ細胞及び抗ＴＲＥＭ２抗体と共にインキュベートし、Ｔ細胞増殖のレベルを測定する。抗体を終夜、４℃で、１２ウェルプレート内で、ＰＢＳ中２または５ｕｇ／ｍｌでプレーティングする。翌日、ウェルをＰＢＳで３回洗浄する。５日目に、未熟ヒトＤＣを採取し、１ウェル当たり１００万細胞でプレーティングし、３７℃、５％ＣＯ２で、サイトカインの非存在下でインキュベートする。ＣＤ８６、ＣＤ８３、ＣＤ１１ｃ、ＨＬＡ−ＤＲ、及びＬＩＮ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）のＦＡＣＳ分析を４８時間後に、ＢＤ  ＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏ  ４８で行う。データ分析を、ＦｌｏｗＪｏ（ＴｒｅｅＳｔａｒ）ソフトウェアバージョン１０．０．７で行う。ＣＤ８３、ＣＤ８６、及びＣＣＲ７のレベルを、ＣＤ１１ｃ＋ＨＬＡ−ＤＲ＋ＬＩＮ−細胞集団について評価する。細胞内ＥＲＫリン酸化のために、細胞を、１％ホルムアルデヒドで固定し、ｃｙｔｏｆｉｘ／ｃｙｔｏｐｅｒｍ  ｋｉｔ（ＢＤ）で透過化し、ＰＥ−ＥＲＫ抗体（ＢＤ）で染色した後に、細胞内Ｅｒｋリン酸化をフローサイトメトリーで決定する。
【０６１０】
別法では、５日目に、未熟ヒト樹状細胞を、１ウェル当たり１００，０００細胞で、Ｕ底非ＴＣ処理９６ウェルプレート内で、サイトカインを含まない培地中にプレーティングする。抗体を５ｕｇ／ｍｌで、２０ｕｇ／ｍｌのＬＰＳ除去された抗ヒト二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）を伴って、または伴わずに添加する。ＣＤ８６、ＣＤ８３、ＣＤ１１ｃ、ＨＬＡ−ＤＲ、及びＬＩＮ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）についてのＦＡＣＳ分析を、以前に記載されたとおり、抗体添加から４８時間後に行う。加えて、５日目の未熟樹状細胞（ＣＤ１４−ＣＤ１１ｃ＋  ＬＩＮ−）を、前日に２μｇ／ｍｌ抗体でコーティングされた１２ウェル皿にプレーティングする。プレートをＰＢＳで３回洗浄し、その後、Ｔ細胞を添加する。非自家ドナーからのＣＤ４＋Ｔ細胞を単離し、ＣＦＳＥで標識し、その後、１：１０、１：５０、または１：２５０の比でＤＣに添加した。ＣＤ３／ＣＤ２８  Ｄｙｎａｌビーズは、陽性対照として役立つ。共培養から５日後に、細胞を、ＢＤ  ＦＡＣＳＣａｎｔｏ  ＩＩでフローサイトメトリーによって、ＣＦＳＥ希釈について分析する。ＣＦＳＥｌｏ細胞と比較したＣＦＳＥｈｉパーセントを、ＦｌｏｗＪｏ（ＴｒｅｅＳｔａｒ）で、各条件について計算する。
【０６１１】
実施例２９：アゴニスト及び／または二重特異性ＴＲＥＭ２抗体による、マクロファージにおけるＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）応答の正常化及び増加
ＴＬＲ応答を改変する抗ＴＲＥＭ２抗体の能力を評価するために、骨髄由来マクロファージ（ＢＭＤＭ）または初代腹膜マクロファージ応答を、ＴＲＥＭ２の欠損によるＴＬＲシグナル伝達に変更する（Ｔｕｒｎｂｕｌｌ、ＩＲ  ｅｔ  ａｌ．、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００６；１７７：３５２０−３５２４）。アゴニスト抗ＴＲＥＭ２、及び／またはＴＲＥＭ２二重特異性抗体は、マクロファージにおけるＴＬＲ応答を増加または正常化し得ると考えられる。初代マクロファージを誘発するために、マウスを、腹腔内注射によって２％チオグリコール酸培地１．５ｍｌで処置し、次いで、細胞を腹膜潅注によって単離する。ＢＭＤＭを生成するために、全骨髄を、１０％子ウシ血清、５％ウマ血清、及び６ｎｇ／ｍｌの組換えヒトＣＳＦ−１（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を補充されたＤＭＥＭ中で培養する。細胞を５〜６日間にわたって培養し、接着細胞を、ＰＢＳ中の１ｍのＭＥＤＴＡで剥離する。細胞を、市販の抗体、すなわち抗ＣＤ１１ｂ、抗ＣＤ４０、抗ＧＲ１（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）、及びＦ４／８０（Ｃａｌｔａｇ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）で染色する。ＢＭＤＭを再プレーティングし、４時間にわたって３７℃で接着させ、次いで、ＴＬＲアゴニスト、例えば、ＬＰＳ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ａｂｏｒｔｕｓ  ｅｑｕｉ）、チモサン（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、及びＣｐＧ  １８２６  ＤＮＡ（例えば、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから購入）を添加する。細胞培養上清を刺激から２４時間後に収集し、培養上清中のＩＦＮ−ａ４、ＩＦＮ−ｂ、ＩＬ−６、ＩＬ−１２  ｐ７０、及びＴＮＦサイトカイン濃度のレベルを、製造者プロトコルに従ってマウスＩＦＮ−ａ４、ＩＦＮ−ｂ、ＩＬ−６、ＩＬ−１２  ｐ７０、ＴＮＦ、及びＩＬ−１０  ＥＬＩＳＡキット（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）及びＶｅｒｉＫｉｎｅ  Ｍｏｕｓｅ  ＩＦＮ−ｂ  ＥＬＩＳＡ  ｋｉｔ（ＰＢＬ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  ｓｏｕｒｃｅ）を使用して決定する。別法では、ヒトまたはマウスサイトカイン用のＣｙｔｏｍｅｔｒｉｃ  Ｂｅａｄ  Ａｒｒａｙ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、またはＶ−ＰＬＥＸ  ＨｕｍａｎまたはマウスサイトカインシステムをＭｅｓｏ  ｓｃａｌｅ  ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍと共に使用することができる。別法では、サイトカイン分泌を分析するために、指示されている遺伝子型のＢＭ由来マクロファージを５日目に採取し、９６ウェルプレート上に、１０５細胞／ウェルでプレーティングする。次いで、細胞を、指示されている濃度のＬＰＳまたはチモサンで刺激する。２４時間後に、細胞培養上清を採取し、Ｃｙｔｏｍｅｔｒｉｃ  Ｂｅａｄ  Ａｒｒａｙ  ｋｉｔ（ＢＤ、製造者指示に従う）を使用して、炎症性サイトカイン（ＩＬ−１２、ＩＬ−１０、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦａ、ＩＬ−６、ＭＣＰ−１）の存在についてＦＡＣＳによって分析する。生存度（ＤＡＰＩ）及び表面マーカー（ＣＤ１１ｂ、ＣＤ８６）の発現を評価するために、細胞をまた、ＦＡＣＳによって分析する。
【０６１２】
実施例３０：ＴＲＥＭ２は、マクロファージからの炎症性サイトカインの分泌を増加させる
ＴＲＥＭ２が欠損した場合、骨髄由来マクロファージ（ＢＭＤＭ）または初代腹膜マクロファージ応答には、ＴＬＲシグナル伝達の改変がある（Ｔｕｒｎｂｕｌｌ，ＩＲ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００６；１７７：３５２０−３５２４）。ＴＲＥＭ２抗体が炎症性サイトカイン産生の変化を誘導するかどうかを決定するために、マウス野生型（ＷＴ）及びＴＲＥＭ２ノックアウトマウス（ＫＯ）またはＴＲＥＭ２ヘテロ接合型マウス（ＨＥＴＳ）を抗体のみと共に、または非飽和レベルのＴＬＲ刺激物質と組み合わせた抗体と共に培養し、サイトカインのレベルを２４〜４８時間後に測定する。ＢＭＤＭを生成するために、野生型（ＷＴ）に由来する全骨髄を、１０％子ウシ血清、５％ウマ血清、及び５０ｎｇ／ｍｌの組換えマウスＣＳＦ−１（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を補充されたＲＰＭＩ中で培養した。細胞を５日間にわたって培養し、接着細胞をＰＢＳ中の１ｍＭ  ＥＤＴＡで剥離する。ＢＭＤＭを９６ウェルプレートで１０５細胞／ウェルでプレーティングし、４時間にわたって３７℃で接着させる。次いで、細胞を抗体のみに曝露し、０．０１〜１００ｎｇ／ｍｌ（ＬＰＳ）または０．０１〜１００μｇ／ｍｌ（チモサン）の濃度のＴＬＲアゴニストＬＰＳ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ａｂｏｒｔｕｓ  ｅｑｕｉ）またはチモサン（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）のみで刺激するか、またはＴｒｅｍ２抗体と組み合わせたＬＰＳまたはチモサンで刺激する。別法では、ＷＴ及びＫＯマウスから単離されたマクロファージを１０ｎｇ／ｍｌのサイトカインＩＬ−４または５０ｎｇ／ｍｌのＩＦＮ−ガンマの存在下で、Ｔｒｅｍ２抗体を伴って、または伴わずに培養する。細胞培養上清を刺激から２４または４８時間後に収集し、ＴＮＦａ、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、及びＭＣＰ−１サイトカインのレベルを、製造者プロトコルに従ってＣｙｔｏｍｅｔｒｉｃ  Ｂｅａｄ  Ａｒｒａｙ  Ｍｏｕｓｅ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（ＢＤ）を使用することによって測定した。
【０６１３】
実施例３１：炎症性サイトカイン産生に対する抗ＴＲＥＭ２抗体のインビボ作用
マウスマクロファージを、インビボで直接、Ｂｒｅｗｅｒ’ｓ  Ｔｈｉｏｇｌｙｃｏｌｌａｔｅ誘発腹膜マクロファージで刺激し、次いで、腹腔中のサイトカインの濃度を測定した。ＴＲＥＭ２抗体が炎症性サイトカイン産生の変化を誘導するかどうかを決定するために、野生型（ＷＴ）マウス及びＴＲＥＭ２ノックアウトマウス（ＫＯ）に、３％Ｂｒｅｗｅｒ’ｓ  Ｔｈｉｏｇｌｙｃｏｌｌａｔｅ３ｍｌを０日目に腹腔内注射した。３日目に、マウスに、抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５またはアイソタイプ対照抗体（ｍＩｇＧ１）を１５分間または２４時間にわたって腹腔内注射した。次いで、腹膜細胞を、生理食塩水４ｍｌを使用して腹膜潅注することによって採取し、ＰＢＳで洗浄した。ＴＮＦａ及びＭＣＰ−１／ＣＣＬ２サイトカインのレベルを、製造者プロトコルに従ってＣｙｔｏｍｅｔｒｉｃ  Ｂｅａｄ  Ａｒｒａｙ  Ｍｏｕｓｅ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（ＢＤ）を使用することによって測定した。
【０６１４】
図２１Ａ及び２１Ｂに示されているとおり、ＷＴマウスを７Ｅ５抗体で処置した場合、ＴＮＦａ及びＣＣＬ２のレベルが、アイソタイプ対照抗体で処置されたマウスと比較して上昇した。殊に、ＴＮＦａの濃度は、抗体７Ｅ５で処置されたマウスでは、アイソタイプ対照で処置されたマウスと比較して約６倍上昇した（図２１Ａ）。ＣＣＬ２の濃度は、抗体７Ｅ５で処置されたマウスでは、アイソタイプ対照で処置されたマウスと比較して約２倍上昇した（図２１Ｂ）。７Ｅ５抗体は、ＫＯマウスに投与した場合、作用を有さない（図２１Ａ及び２１Ｂ）。この結果は、ＴＮＦａ及びＣＣＬ２の誘導がＴＲＥＭ２に特異的であることを示している。
【０６１５】
実施例３２：アゴニスト及び／または二重特異性ＴＲＥＭ２抗体による、骨髄由来骨髄系前駆細胞における抗炎症性サイトカインＩＬ−１０の阻害
骨髄由来骨髄系前駆細胞は、アゴニスト抗ＴＲＥＭ２、及び／またはＴＲＥＭ２二重特異性抗体での処理、ならびにアポトーシス細胞との同時培養によるか、もしくは同様の刺激による１００ｎｇ／ｍｌ  ＬＰＳ（Ｓｉｇｍａ）での刺激の後に、抗炎症性サイトカインＩＬ−１０の減少を示し得ると考えられる。骨髄由来骨髄系前駆細胞の単離を次のとおりに行う。骨髄細胞を成体６〜８週齢の雌のＣ５７ＢＬ／６マウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ、Ｓｕｌｚｆｅｌｄ、Ｇｅｒｍａｎｙ）から、及びＴＲＥＭ２欠損マウス（ＫＯＭＰ  ｒｅｐｏｓｉｔｏｒｙ）から、後肢の脛骨及び大腿骨の髄腔から単離する。赤血球の除去を、低張性溶液での溶解によって行う。細胞を、１０％ウシ胎児血清（Ｐａｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）及び１０ｎｇ／ｍｌのＧＭ−ＣＳＦ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を含有するＤＭＥＭ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中で、７５ｃｍ２培養フラスコ（Ｇｒｅｉｎｅｒ  Ｂｉｏ−Ｏｎｅ）内で培養する。２４時間後に、非接着細胞を収集し、新たな７５ｃｍ２培養フラスコに再播種する。培地を５日後に変え、細胞をさらに１０〜１１日間にわたって培養する。細胞をＴｒｅｍ２抗体の存在または非存在下で培養し、上清を２４時間後に収集し、細胞から放出されたＩＬ−１０のレベルを、製造者指示に従ってＩＬ−１０  ＥＬＩＳＡ（ＱｕａｎｔｉｋｉｎｅＭ  ｍｏｕｓｅ  ＩＬ−１０、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）によって決定する（ＪＥＭ（２００５）、２０１；６４７−６５７；及びＰＬｏＳ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（２００４）、４  ｜  Ｉｓｓｕｅ  ４  ｜  ｅ１２４）。
【０６１６】
実施例３３：アゴニスト及び／または二重特異性ＴＲＥＭ２抗体による、骨髄細胞系列からの細胞における食作用の誘導
アゴニスト抗ＴＲＥＭ２及び／またはＴＲＥＭ２二重特異性抗体は、骨髄細胞系列、例えば、単球、樹状細胞マクロファージ及びミクログリアからの細胞において、アポトーシスニューロン、神経組織デブリ、非神経組織デブリ、細菌、他の異物、及び病原タンパク質、任意選択で例えば、Ａベータペプチド、アルファシヌクレインタンパク質、Ｔａｕタンパク質、ＴＤＰ−４３タンパク質、プリオンタンパク質、ハンチンチンタンパク質、ＲＡＮ、グリシン−アラニン（ＧＡ）、グリシン−プロリン（ＧＰ）、グリシン−アルギニン（ＧＲ）、プロリン−アラニン（ＰＡ）、またはプロリン−アルギニン（ＰＲ）から構成されるジペプチドリピート（ＤＰＲペプチド）を含むリピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物抗原の食作用を誘導し得ると考えられる。二重特異性抗体は、ＴＲＥＭ２抗原、及び限定ではないが、Ａベータペプチド抗原、またはアルファシヌクレインタンパク質抗原、またはＴａｕタンパク質抗原、またはＴＤＰ−４３タンパク質抗原、またはプリオンタンパク質抗原、またはハンチンチンタンパク質抗原、またはＲＡＮ、グリシン−アラニン（ＧＡ）、グリシン−プロリン（ＧＰ）、グリシン−アルギニン（ＧＲ）、プロリン−アラニン（ＰＡ）、またはプロリン−アルギニン（ＰＲ）から構成されるジペプチドリピート（ＤＰＲペプチド）を含む翻訳産物抗原を含む第２の抗原を認識する抗体であってよい。単球を、成体Ｃ５７ＢＬ／６マウスから収集される末梢血から単離する。低張性溶解緩衝液は、赤血球を除去する。細胞を、培養皿上に、１０％ウシ胎児血清（Ｐａｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）を含有するＲＰＭＩ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中でプレーティングする。細胞を、数時間にわたって、３７℃で、１０％ＣＯ２中で培養する。トリプシン処理の後に、接着細胞を収集し、食作用実験のために使用する。
【０６１７】
ミクログリア細胞を、出生後３〜５日（Ｐ３〜Ｐ５）のＣ５７ＢＬ／６マウスの脳から調製する。簡単に述べると、髄膜を機械的に除去し、細胞を摩砕によって解離し、１０％ＦＣＳ（ＰＡＮ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  ＧｍｂＨ）、１％グルコース（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）、１％Ｌ−グルタミン（ＧＩＢＣＯ  ＢＲＬ）、及び１％ペニシリン／ストレプトマイシン（ＧＩＢＣＯ  ＢＲＬ）を補充された基本培地（ＢＭＥ；ＧＩＢＣＯ  ＢＲＬ）中で、１４日間にわたって培養して、集密なグリア単層を形成する。ミクログリア細胞を収集するために、培養を回転シェーカー（２００ｒｐｍ）上で２時間にわたって振盪する。接着星状細胞を、免疫組織化学のために使用する。剥離したミクログリア細胞を通常培養皿に１時間にわたって播種し、次いで、すべての非接着細胞を除去し、廃棄する。単離ミクログリア細胞の純度は、ＣＤ１１ｂを指向する抗体（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いるフローサイトメトリー分析によって決定されるとおり、約９５％である。ミクログリア細胞を、以前に記載されたとおり（Ｈｉｃｋｍａｎ  ＳＥ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２００８  Ａｕｇ  １３；２８（３３）：８３５４−６０；及びＭｉｃｒｏｇｌｉａ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  Ｖｏｌ．１０４１）、基本培地中で培養する。乏突起神経膠芽細胞（すなわち、ニューロン）及びニューロン富化細胞を、Ｃ５７ＢＬ／６マウス胚（Ｅ１５−１６）の脳から調製する。簡単に述べると、脳組織を単離し、機械的に分散させ、０．０１ｍｇ／ｍｌのポリ−Ｌ−オルニチン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）及び１０μｇ／ｍｌのラミニン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）で予めコーティングされた培養皿に播種する。細胞を２％Ｂ−２７サプリメント（ＧＩＢＣＯ  ＢＲＬ）、１％グルコース（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）、及び１％ＦＣＳ（ＰＡＮ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  ＧｍｂＨ）を補充されたニューロン用培地（ＢＭＥ；ＧＩＢＣＯ  ＢＲＬ）中で培養する。細胞を５〜１０日間にわたって培養して、形態学的に成熟した乏突起神経膠芽細胞を得る。
【０６１８】
食作用アッセイを行うために、ミクログリア、マクロファージまたは樹状細胞を、アポトーシスニューロン、神経組織デブリ、非神経組織デブリ、細菌、他の異物、及び病原タンパク質と共に培養する。ニューロンを５〜１０日間にわたって培養し、次いで、オカダ酸を３０ｎＭの最終濃度で３時間にわたって添加して、アポトーシスを誘導する。神経細胞膜をＣｅｌｌＴｒａｃｋｅｒ  ＣＭ−ＤｉＩ膜色素（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ）で標識する。インキュベーションの後に、アポトーシスニューロンまたは食作用の他の標的を２回洗浄し、形質導入ミクログリア培養物に１：２０のエフェクター／標的比で添加する。アポトーシスニューロンの添加後１及び２４時間目に、貪食された神経細胞膜を有するミクログリアの数を、共焦点蛍光顕微鏡（Ｌｅｉｃａ）下で計数する。アポトーシス細胞を、倍率６０で、３つの異なる領域において計数する。食作用の量を、フローサイトメトリーによって確認する。さらに、アポトーシスニューロンの添加から２４、４８、または７２時間後に、細胞を収集し、サイトカインのＲＴ−ＰＣＲのために使用する。マイクロスフェアビーズまたは細菌食作用アッセイを行うために、ミクログリア、マクロファージまたは樹状細胞を、抗ＴＲＥＭ２アゴニスト抗体で処理する。２４時間後に、赤色蛍光マイクロスフェアビーズ（Ｆｌｕｏｒｅｓｂｒｉｔｅ  Ｐｏｌｙｃｈｒｏｍａｔｉｃ  Ｒｅｄ  Ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ；Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｉｎｃ．）、または蛍光標識細菌１．００μｍを１時間にわたって添加する。ミクログリアによるマイクロスフェアビーズ、または蛍光標識細菌の食作用を、蛍光顕微鏡法によって分析する。さらに、ミクログリアを培養プレートから収集し、フローサイトメトリーによって分析する。貪食されたビーズを有するミクログリアのパーセンテージを決定する。アミロイド食作用アッセイを行うために、ＨｉＬｙｔｅＦｌｕｏｒ（商標）６４７（Ａｎａｓｐｅｃ）−Ａベータ−（１−４０）を、トリス／ＥＤＴＡ（ｐＨ８．２）に２０ｍＭで再懸濁させ、次いで、暗所で３日間にわたって、３７℃でインキュベートして、凝集を促進する。ミクログリア、マクロファージまたは樹状細胞を、低血清（インスリンを補充された０．５％ＦＢＳ）、ＬＰＳ（５０ｎｇ／ｍｌ）、ＩＦＮｃ（１００単位／ｍｌ）、及び抗ＴＲＥＭ２アゴニスト抗体中で２４時間にわたって前処理し、その後、凝集した蛍光標識ａベータペプチドを添加する。アミロイド食作用及びＴＲＥＭ２の表面発現を、１００ｎＭの凝集ＨｉＬｙｔｅＦｌｕｏｒ（商標）６４７−Ａｂ−（１−４０）の添加から５時間後に、フローサイトメトリー分析によって決定する（ＡＳＮ  ＮＥＵＲＯ（２０１０）２（３）：１５７−１７０）。他の病原タンパク質の食作用を、同様の手法で行う。
【０６１９】
実施例３４：アゴニストＴＲＥＭ２、またはＴＲＥＭ２二重特異性抗体による、ミクログリア、マクロファージ、及び樹状細胞におけるＣＣＲ７、ならびにＣＣＬ１９及びＣＣＬ２１への遊走の誘導
抗ＴＲＥＭ２、及び／またはＴＲＥＭ２／二重特異性抗体は、ミクログリア細胞、マクロファージ、及び樹状細胞においてＣＣＲ７、ならびにＣＣＬ１９及びＣＣＬ２１への遊走を誘導し得ると考えられる。ミクログリアｌ、マクロファージまたは樹状細胞を、アゴニスト抗ＴＲＥＭ２及び／またはＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２二重特異性抗体と共に、または対照抗体と共に培養する。細胞を７２時間後に収集し、ＣＣＲ７特異的抗体で免疫標識し、フローサイトメトリーによって分析する。ＣＣＲ７発現の増加の任意の機能的結果を決定するために、走化性アッセイを行う。ミクログリア、マクロファージまたは樹状細胞を、アゴニスト抗ＴＲＥＭ２、及び／またはＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２二重特異性抗体で、ＴＲＥＭ２を介して刺激し、２チャンバーシステム内に入れる。ケモカインリガンドＣＣＬ１９及びＣＣＬ２１に向かって遊走するミクログリア細胞の数を定量化する（ＪＥＭ（２００５）、２０１、６４７−６５７）。走化性アッセイでは、ミクログリアｌ、マクロファージまたは樹状細胞を、アゴニスト抗ＴＲＥＭ２またはＴＲＥＭ２／二重特異性抗体に曝露し、１μｇ／ｍｌのＬＰＳで処理する。ミクログリア、マクロファージまたは樹状細胞を、下部チャンバー内に１００ｎｇ／ｍｌのＣＣＬ１９またはＣＣＬ２１（両方ともＰｅｐｒｏＴｅｃｈ製）を含む培地４５０μｌを含有する、トランスウェルシステム（３μｍ空孔フィルター；Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）の上部チャンバーに移す。１時間のインキュベーション期間の後に、下部チャンバーに移動したミクログリアマクロファージまたは樹状細胞の数を、顕微鏡法によって３つの独立した領域において計数する（ＪＥＭ（２００５）、２０１、６４７−６５７）。
【０６２０】
実施例３５：アゴニストＴＲＥＭ２、及び／またはＴＲＥＭ２二重特異性抗体による、ミクログリア、マクロファージ、及び樹状細胞におけるＦ−アクチンの誘導
アゴニスト抗ＴＲＥＭ２、またはＴＲＥＭ２二重特異性抗体は、ミクログリア細胞、マクロファージ、及び樹状細胞においてＦ−アクチンを誘導し得ると考えられる。ミクログリア、マクロファージまたは樹状細胞、及びＴＲＥＭ２を形質導入されているか、またはＴＲＥＭ２を発現する目的の他の細胞を培養プレートに添加し、次いで、アゴニスト抗ＴＲＥＭ２、及び／またはＴＲＥＭ２二重特異性抗体、または対照抗体に曝露する。細胞を固定し、遮断し、次いで、１時間後に、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ５４６コンジュゲートしたファロイジン（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ）で染色し、Ｆ−アクチンを、蛍光色素で標識する。画像を４０倍対物レンズ（Ｌｅｉｃａ）を備えた共焦点レーザー走査型顕微鏡法によって収集する（ＪＥＭ（２００５）、２０１、６４７−６５７）。
【０６２１】
実施例３６：アゴニストＴＲＥＭ２、ＤＡＰ１２、及び／またはＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２二重特異性抗体による、破骨細胞産生の誘導及び破骨細胞形成速度の上昇
アゴニスト抗ＴＲＥＭ２及び／またはＴＲＥＭ２二重特異性抗体は、破骨細胞形成を誘導し、破骨細胞形成の速度を上昇させ得ると考えられる。破骨細胞または骨髄由来単球／マクロファージ（ＢＭＭ）前駆細胞を産生するＲＡＷ２６４．７細胞を、１０％ＦＢＳ（Ａｔｌａｎｔｉｃ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ、Ａｔｌａｎｔａ、ＧＡ、ＵＳＡ）及びペニシリン−ストレプトマイシン−グルタミン（Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ）を補充されたＲＰＭＩ−１６４０培地（Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ）、または別の適切な培地中で維持する。ＦＬＡＧエピトープがＮ末端に付加されたＴＲＥＭ２Ｂ  ｃＤＮＡを、ＩＲＥＳの上流のレトロウイルスベクターｐＭＸｐｉｅに挿入し、続いて、ｅＧＦＰ  ｃＤＮＡ配列を挿入する。製造者プロトコルに従って、Ｆｕｇｅｎｅ  ６（Ｒｏｃｈｅ）を使用して、細胞にｐＭＸｐｉｅ−ＦＬＡＧ  ＴＲＥＭ２Ｂを遺伝子導入する。細胞を、２μｇ／ｍｌのピューロマイシン（Ｓｉｇｍａ）で選択する。フローサイトメトリーを使用することによって、安定なピューロマイシン耐性クローンを、抗ＦＬＡＧ  Ｍ２モノクローナル抗体（Ｓｉｇｍａ）についてスクリーニングし、次いで、サブクローニングし、ピューロマイシン選択培地で維持する。
【０６２２】
ＴＲＥＭ２Ｂを発現するＲＡＷ２６４．７細胞を、１０％ＦＢＳ、ペニシリン−ストレプトマイシン−グルタミン、５０ｎｇ／ｍｌのＲＡＮＫＬ、及び２０ｎｇ／ｍｌのＭ−ＣＳＦを補充されたアルファ−ＭＥＭ培地中で、３０００細胞／ウェルで９６ウェルプレートに播種する。培地を３日ごとに交換し、抗ＴＲＥＭ２アゴニスト抗体に曝露し、多核性（少なくとも３つの核）ＴＲＡＣＰ＋破骨細胞を、光学顕微鏡で計数してスコアリングする。複雑性及びサイズを決定するために、破骨細胞を、核の数によって計数する（１０未満または３〜１０の核）。Ｉｍａｇｅ  Ｊ  ｓｏｆｔｗａｒｅ（ＮＩＨ）を使用することによって、破骨細胞の表面積も測定する。加えて、破骨細胞遺伝子の発現レベルを決定する。ＴＲＩｚｏｌ試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して、全ＲＮＡを、異なる時点で破骨細胞形成培養物から抽出する。ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ  ＩＩＩ  ｋｉｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用する第一鎖ｃＤＮＡ合成の後に、Ｎｆａｔｃ１、Ａｃｐ５、Ｃｔｓｋ、Ｃａｌｃｒ、及びＣｃｎｄ１について、リアルタイム定量ＰＣＲ反応を実施する。標的ｍＲＮＡ発現の相対定量化を計算し、シクロフィリンの発現に対して正規化し、（標的遺伝子のｍＲＮＡ／シクロフィリンのｍＲＮＡ）３×１０６として表す（Ｊ．ＯＦ  ＢＯＮＥ  ＡＮＤ  ＭＩＮＥＲＡＬ  ＲＥＳＥＡＲＣＨ（２００６），２１，２３７−２４５；Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２０１２；１８８：２６１２−２６２１）。
【０６２３】
別法では、ＢＭＭ細胞を、プレート上に３連ウェルで播種し、ＲＡＮＫＬ、Ｍ−ＣＳＦで、かつ抗ＴＲＥＭ２、及び／またはＴＲＥＭ２二重特異性抗体、またはアイソタイプ適合対照モノクローナル抗体で処理する。大きな多核化細胞が可視になるまで、培地を３日ごとに交換する。培養物中での３〜５日後に、細胞を、ＰＢＳ中の３．７％ホルムアルデヒドで１０分間にわたって固定する。次いで、プレートをＰＢＳ中で２回洗浄し、３０秒間にわたって、５０％アセトン及び５０％エタノールの溶液中でインキュベートし、ＰＢＳで洗浄する。細胞を、酒石酸耐性酸性ホスファターゼ（ＴＲＡＰ）について、Ｓｉｇｍａ製のキット（製品４３５）を用いて染色する。次いで、記載されたとおり（例えば、Ｐｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１０）Ｓｃｉ  Ｓｉｇｎａｌ．，３（１２２）：ｒａ３８）、多核化（２つよりも多い核）ＴＲＡＰ陽性細胞を光学顕微鏡によって計数する。
【０６２４】
実施例３７：加齢、発作、脊髄損傷、網膜ジストロフィー、前頭側頭型認知症、及びアルツハイマー病の動物モデルにおける、アゴニストＴＲＥＭ２及び／またはＴＲＥＭ２二重特異性抗体の治療的使用の特徴づけ
以前に記載されたとおり（例えば、Ｂｅａｔｔｉｅ，ＭＳ  ｅｔ  ａｌ．，（２００２）  Ｎｅｕｒｏｎ  ３６，３７５−３８６；Ｖｏｌｏｓｉｎ，Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（２００６）  Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２６，７７５６−７７６６；Ｎｙｋｊａｅｒ，Ａ  ｅｔ  ａｌ．，（２００５）  Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．１５，４９−５７；Ｊａｎｓｅｎ，Ｐ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）  Ｎａｔ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１０，１４４９−１４５７；Ｖｏｌｏｓｉｎ，Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）  Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２８，９８７０−９８７９；Ｆａｈｎｅｓｔｏｃｋ，Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（２００１）  Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１８，２１０−２２０；Ｎａｋａｍｕｒａ，Ｋ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）  Ｃｅｌｌ  Ｄｅａｔｈ．Ｄｉｆｆｅｒ．１４，１５５２−１５５４；Ｙｕｎｅ，Ｔ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）  Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．１１８３，３２−４２；Ｗｅｉ，Ｙ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｌｅｔｔ．４２９，１６９−１７４；Ｐｒｏｖｅｎｚａｎｏ，ＭＪ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）  Ｌａｒｙｎｇｏｓｃｏｐｅ  １１８，８７−９３；Ｎｙｋｊａｅｒ，Ａ  ｅｔ  ａｌ．，（２００４）  Ｎａｔｕｒｅ  ４２７，８４３−８４８；Ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎ，ＡＷ  ｅｔ  ａｌ．，（２００４）  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１０１，６２２６−６２３０；Ｔｅｎｇ，ＨＫ  ｅｔ  ａｌ．，（２００５）  Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２５，５４５５−５４６３；Ｊａｎｓｅｎ，Ｐ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）  Ｎａｔ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１０，１４４９−１４５７；Ｖｏｌｏｓｉｎ，Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）  Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２８，９８７０−９８７９；Ｆａｎ，ＹＪ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）  Ｅｕｒ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２７，２３８０−２３９０；Ａｌ−Ｓｈａｗｉ，Ｒ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）  Ｅｕｒ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．  ２７，２１０３−２１１４；ａｎｄ  Ｙａｎｏ，Ｈ  ｅｔ  ａｌ．，（２００９）  Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２９，１４７９０−１４８０２）、アゴニスト抗ＴＲＥＭ２、及び／またはＴＲＥＭ２二重特異性抗体の治療有用性を、加齢、発作、脊髄損傷、網膜ジストロフィ、前頭側頭型認知症、ハンチントン病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症及びアルツハイマー病のための動物モデルにおいて試験する。
【０６２５】
実施例３８：アテローム硬化症のモデルにおける、アゴニストＴＲＥＭ２及び／またはＴＲＥＭ２二重特異性抗体の治療的使用の特徴づけ
以前に記載されたとおりに（例えば、Ｌａｎｃｅ，Ａ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１１）  Ｄｉａｂｅｔｅｓ，６０，２２８５；及びＫｊｏｌｂｙ，Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１２）  Ｃｅｌｌ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  １２，２１３−２２３）、アゴニスト抗ＴＲＥＭ２及び／またはＴＲＥＭ２二重特異性抗体の治療有用性を、アテローム硬化症のモデルにおいて試験する。
【０６２６】
実施例３９：感染のモデルにおける、アゴニストＴＲＥＭ２及び／またはＴＲＥＭ２二重特異性抗体の治療的使用の特徴づけ
アゴニスト抗ＴＲＥＭ２及び／またはＴＲＥＭ２二重特異性抗体の治療有用性を、感染のモデルにおいて試験する。以前に記載されたとおりに（例えば、Ｙｉｎ，Ｆ  ｅｔ  ａｌ．，（２００９）  Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ，２０７，１１７−１２８）、例えば、正常なマウスにおけるＬｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓまたは他の感染を使用することができる。
【０６２７】
実施例４０：ＰＩ３Ｋ経路の活性化を示すＴＲＥＭ２、ＤＡＰ１２、ＳＹｋ、ＥＲＫ、及びＡＫＴのリン酸化を誘導する抗ＴＲＥＭ２及び／またはＴＲＥＭ２二重特異性抗体についてのスクリーニング
細胞（Ｊ７７４、ＲＡＷ  ２６４．７、ＢＭＭ細胞、または破骨細胞）を、ＰＢＳ−ＥＤＴＡで組織培養皿から除去し、ＰＢＳで洗浄し、計数する。Ｊ７７４（４０×１０６）またはＲＡＷ  ２６４．７細胞（１０×１０６ＢＭＭまたは破骨細胞）を、１μｇ／１０６細胞の抗ＴＲＥＭ２及び／もしくはＴＲＥＭ２二重特異性抗体、またはアイソタイプ適合対照抗体と共に２０分間にわたって、氷上で、または他の条件下でインキュベートする。細胞を氷冷放射免疫沈降アッセイ（ＲＩＰＡ）緩衝液に２０分間にわたって溶解させ、続いて、１６，０００ｇで１０分間にわたって４℃で遠心して、不溶性物質を除去する。得られた上清を、指示抗体（ＤＡＰ１２、ＥＲＫ、またはＡＫＴ）及びプロテインＡ−またはプロテインＧ−アガロース（Ｓｉｇｍａ）との免疫沈降反応に掛ける。ビーズをＲＩＰＡ緩衝液で充分に洗浄し、タンパク質をＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）によって分離する。次いで、タンパク質を、ウエスタンブロット法によってニトロセルロース膜に移し、適切な抗体（ＤＡＰ１２、ＥＲＫ、またはＡＫＴのリン酸化形態を特異的に認識する抗体）と共にインキュベートし、記載されているとおりに（例えば、Ｐｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１０）Ｓｃｉ  Ｓｉｇｎａｌル．，３（１２２）：ｒａ３８）、増強化学発光（ＥＣＬ）システム（Ｐｉｅｒｃｅ）で可視化する。
【０６２８】
実施例４１：カルシウム流入を誘導する抗ＴＲＥＭ２、及び／またはＴＲＥＭ２二重特異性抗体についてのスクリーニング
ＢＭＭ細胞を、ＨＥＰＥＳ含有緩衝液［２０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．３）、１２０ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＣａＣｌ、１ｍＭのＭｇＣｌ、５ｍＭのＫＣｌ、グルコース（１ｍｇ／ｍｌ）、ウシ血清アルブミン（１ｍｇ／ｍｌ）］で２回洗浄し、続いて、０．０５％Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ−１２７（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）及び１μＭのＩｎｄｏ−１  ＡＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中で２０分間にわたって３７℃でインキュベートする。細胞をＨＥＰＥＳ緩衝液で２回洗浄し、次いで、抗ＴＲＥＭ２及び／またはＴＲＥＭ２二重特異性抗体（１６μｇ／ｍｌ）で、または対照抗体（１６μｇ／ｍｌ）で刺激し、分光光度計（ＰＴＬ  Ｐｈｏｔｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）によって監視する。Ｉｎｄｏ−１蛍光放出を、製造者指示に従ってカルシウム（Ｃａ２＋）に変換する（例えば、Ｐｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１０）Ｓｃｉ  シグナル．，３（１２２）：ｒａ３８）。
【０６２９】
実施例４２：破骨細胞及び／またはミクログリアの生存を促進する抗ＴＲＥＭ２及び／またはＴＲＥＭ２二重特異性抗体についてのスクリーニング
マウス骨髄前駆体を、脛骨及び大腿骨髄細胞を冷ＰＢＳでフラッシュすることによって得る。ＰＢＳで１回洗浄した後に、赤血球を、ＡＣＫ  Ｌｙｓｉｎｇ  Ｂｕｆｆｅｒ（Ｌｏｎｚａ）を使用して溶解させ、ＰＢＳで２回洗浄し、０．５×１０６細胞／ｍｌで完全ＲＰＭＩ培地（１０％ＦＣＳ、Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ、Ｇｌｎ、ｎｅＡＡ）中に、マクロファージを作製するためには指示量の５０ｎｇ／ｍｌのＭ−ＣＳＦ、または１０ｎｇ／ｍｌのＧＭ−ＣＳＦと共に懸濁させる。Ｍ２型マクロファージでは、１０ｎｇ／ｍｌ  ＩＬ−４を、培養細胞に添加する。Ｍ１型マクロファージでは、５０ｎｇ／ｍｌのＩＦＮ−γを添加する。一部の実験では、ＬＰＳまたはチモサンを、５日目に、１μｇ／ｍｌ〜０．０１ｎｇ／ｍｌの濃度で細胞培養に添加する。組換えサイトカインをＰｅｐｒｏｔｅｃｈで購入した。ＢＭ由来マクロファージの生存度を分析するために、指示遺伝子型の細胞を上記のとおりに調製し、漸変濃度のＭＣＳＦ中で培養する。細胞を、非組織培養処理されたプレート内で、１０５／２００μｌで９６ウェルプレートに（ルシフェラーゼベースのアッセイを使用する生存度分析で）、または０．５×１０６／１ｍｌで６ウェルプレートに（トリパンブルー排除細胞計数で）プレーティングする。新鮮なＭ−ＣＳＦを含有する培地を３日目に添加する。示される時点で、細胞をプレートから、３ｍＭのＥＤＴＡで穏やかに剥離し、Ｂｕｒｋｅｒチャンバーを使用して計数する。一部の実験では、細胞をまた、ＣＤ１１ｂ抗体及びＤＡＰＩを使用するＦＡＣＳ分析のために染色する。別法では、細胞をそのまま、ＴｏｘＧｌｏ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）と共にインキュベートし、ルシフェラーゼ活性を決定する。一部の実験では、ＭＣＳＦを培養培地から５日目に取り出すか、取り出さずに、細胞生存度を３６時間後に、ＦＡＣＳによって分析する。成熟破骨細胞細胞培養物を、ＲＡＮＫＬ及びＭ−ＣＳＦで、２４ウェル皿において分化させる。４日後に、完全培地を血清非含有培地に換えて、アポトーシスを誘導する。細胞を、終夜血清飢餓の間にＲＡＮＫＬ、ＰＢＳ、ならびに抗ＴＲＥＭ２及び／もしくはＴＲＥＭ２二重特異性抗体、またはアイソタイプ適合対照抗体で処理する。細胞を１％パラホルムアルデヒド中で固定し、製造者指示に従ってＴＵＮＥＬベースのキット（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）で染色する。アポトーシス核を、倍率２０倍のＮｉｋｏｎ  ＴＥ２０００−Ｅ顕微鏡で計数する。結果を、記載されたとおり（例えば、Ｐｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１０）Ｓｃｉ  Ｓｉｇｎａｌ．，３（１２２）：ｒａ３８）、２つのウェルの６つの無作為に選択された領域における細胞の合計数に対する、アポトーシス細胞のパーセンテージとして表す。同様のアッセイを初代ミクログリア細胞で行う。
【０６３０】
実施例４３：ＴＲＥＭ２は、マクロファージ及び樹状細胞の生存を増加させる
細胞生存におけるＴＲＥＭ２の役割を評価するために、野生型（ＷＴ）、ＴＲＥＭ２ノックアウト（ＫＯ）、及びＴＲＥＭ２ヘテロ接合型（Ｈｅｔ）マクロファージ及び樹状細胞を、Ｔｒｅｍ２抗体またはそのフラグメントの存在下で培養し、細胞生存度を決定する。
【０６３１】
ＴＲＥＭ２  ＷＴ、Ｈｅｔ、及びＫＯマウスからのマウス骨髄前駆細胞を、脛骨及び大腿骨骨髄細胞を冷ＰＢＳでフラッシュすることによって入手する。ＰＢＳで１回洗浄した後に、赤血球を、ＡＣＫ  Ｌｙｓｉｎｇ  Ｂｕｆｆｅｒ（Ｌｏｎｚａ）を使用して溶解させ、ＰＢＳで２回洗浄し、０．５×１０６細胞／ｍｌで、完全ＲＰＭＩ培地（１０％ＦＣＳ、Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ、Ｇｌｎ、ｎｅＡＡ）中に、指示量の５０ｎｇ／ｍｌのＭ−ＣＳＦと共に懸濁させてマクロファージを生産するか、または１０ｎｇ／ｍｌのＧＭ−ＣＳＦと共に懸濁させて樹状細胞を生産する。Ｍ２型マクロファージでは、１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−４を、培養細胞に添加する。Ｍ１型マクロファージでは、５０ｎｇ／ｍｌのＩＦＮ−ａを添加する。一部の実験では、ＬＰＳまたはチモサンを、細胞培養に５日目に、１μｇ／ｍｌ〜０．０１ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度で添加する。組換えサイトカインを、Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈから購入する。骨髄由来マクロファージの生存度を分析するために、細胞を上記のとおりに調製し、ＭＣＳＦ中で培養する。細胞を、１０５／２００μｌで９６ウェルプレートに（ルシフェラーゼベースのアッセイを使用する生存度分析で）、または０．５×１０６／１ｍｌで６ウェルプレートに（トリパンブルー排除細胞計数では）、非組織培養処理されたプレート内でプレーティングする。新鮮なＭ−ＣＳＦを含有する培地を３日目に添加する。指示時点に、細胞をプレートから、３ｍＭ  ＥＤＴＡで穏やかに剥離し、Ｂｕｒｋｅｒチャンバーを使用して計数する。生細胞のＦＡＣＳ分析では、マクロファージを、５０ｎｇ／ｍｌのＭＣＳＦ中で６日間にわたって培養するか（＋ＭＣＳＦ）、または５０ｎｇ／ｍｌのＭＣＳＦ中で４日間にわたって培養し、その後、ＭＣＳＦをさらなる３６時間にわたって除去する（−ＭＣＳＦ）。細胞を、ＣＤ１１ｂ抗体及びＤＡＰＩを使用して染色する。ルシフェラーゼ生存度アッセイでは、細胞生存度を、漸変濃度の成長因子ＧＭＣＳＦ（樹状細胞）、ＭＣＳＦ（Ｍ１マクロファージ）、またはＭＣＳＦ＋ＩＬ−４（Ｍ２マクロファージ）中での培養の５日目に測定する。細胞をそのまま、ＴｏｘＧｌｏ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）と共にインキュベートし、ルシフェラーゼ活性（ルミネセンス）を決定する。炎症性メディエーターＩＦＮ−ａ、ＬＰＳ、またはチモサンの存在下で培養された生存可能なマクロファージのＦＡＣＳ分析では、細胞を５日目に収集し、ＣＤ１１ｂ抗体及びＤＡＰＩを使用して染色する。すべての実験を、Ｔｒｅｍ２抗体もしくは対照抗体またはそのフラグメントの存在下または非存在下で行う。別法では、ＷＴマウスに、４０ｍｇ／ｋｇまたは別の用量のＴＲＥＭ２または対照抗体を腹腔内（ＩＰ）注射し、１２〜２４時間後に、２〜４ｍｇ／ｋｇのＬＰＳのＩＰ注射を続ける。細胞を、６時間後に腹腔から収集し、次のマーカーを使用するＦＡＣＳによって分析する：ＣＤ１１ｂ−ＰＢ、ＣＤ１１ｃ  Ｐｅｃｙ７、ＭＨＣ−ＩＩ  ＡＰＣｃｙ７、Ｇｒ１  ＦＩＴＣ、Ｌｙ６Ｇ  ＰＥ、Ａｍｃｙａｎ生／死細胞。
【０６３２】
実施例４４：免疫／ミクログリア調節モジュール内で遺伝子発現のＴＲＥＭ２／ＴＹＲＯＢＰ依存性変化を正常化する抗ＴＲＥＭ２及び／またはＴＲＥＭ２二重特異性抗体についてのスクリーニング
マウス胚幹細胞に由来するミクログリア細胞を、細胞内免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）モチーフの両方を欠損しているＴｙｒｏｂｐの全長または短縮化バージョンを過剰発現するように、レンチウイルスベクターによって遺伝的に修飾する。ミクログリア細胞はまた、ＴＲＥＭ２についてヘテロ接合型であるマウス胚幹細胞に由来する。ＴｙｒｏｂｐまたはＴＲＥＭ２の混乱に応じた全ゲノムでの遺伝子発現変化を評価するために、遺伝子発現データを、（１）ビヒクル、（２）全長Ｔｙｒｏｂｐ、もしくは（３）ドミナントネガティブ型短縮化Ｔｙｒｏｂｐを過剰発現する、または（４）ＴＲＥＭ２のためのノックダウン構築物、例えば、ＳｉＲＮＡを過剰発現するマウスミクログリアマクロファージまたは樹状細胞、及びＴＲＥＭ２についてヘテロ接合型である細胞のＲＮＡ配列決定から、さらには、ＴＲＥＭ２欠損マウスに由来する細胞から得る。全長Ｔｙｒｏｂｐ及び短縮化Ｔｙｒｏｂの過剰発現のための約２，６３８及び３，４１５の発現変動遺伝子（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ｇｅｎｅｓ）が、それぞれ同定されている（Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１３）Ｃｅｌｌ  １５３、７０７−７２０）。インタクトなＴｙｒｏｂｐを過剰発現するミクログリアからの発現変動遺伝子のうちの約９９％は、対照ビヒクルと比較して下方制御される。例えば、液胞／自食作用に関する６５８の遺伝子、さらには、ＲＮＡ代謝及び細胞周期有糸分裂に関係する遺伝子は、活性なＴｙｒｏｂｐによって下方制御されるが、ドミナントネガティブ型短縮化Ｔｙｒｏｂｐを発現する細胞では上方制御される。逆に、液胞／自食作用経路のための、及びミトコンドリアのためのほぼ２，８５６の遺伝子は、ドミナントネガティブ型短縮化Ｔｙｒｏｂｐを発現するミクログリアにおいては選択的に上方制御される。アゴニスト抗ＴＲＥＭ２、及び／またはＴＲＥＭ２二重特異性抗体を、正常なミクログリア細胞において、及びインタクトなＴｙｒｏｂｐを過剰発現するミクログリア細胞において、ドミナントネガティブ短縮化Ｔｙｒｏｂｐを発現する細胞において（Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１３）Ｃｅｌｌ  １５３、７０７−７２０）、ＴＲＥＭ２のためのノックダウン構築物を発現する細胞において、またはＴＲＥＭ２についてヘテロ接合型である細胞において観察されるのと同様の遺伝子発現プロファイルを誘発するそれらの能力についてスクリーニングする。遺伝子発現ネットワークを変化させることができる抗体を選択する。
【０６３３】
実施例４５：ＴＲＥＭ２抗体の抗がん作用の分析
８週（＋／−２週）齢目の１０頭のＣ５７Ｂｌ６／ＮＴａｃマウスからなる群を、ＰＢＳ１００ｕｌ中に懸濁させた腫瘍細胞（例えば、１×１０５〜１×１０６ＭＣ３８、Ｌｅｗｉｓ肺、またはＢ１６細胞）で皮下攻撃する。動物に、移植の前にイソフルランで麻酔をかける。２日目から始めて、マウスの群に、３日ごとに４回の用量で、アンタゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体、例えば、実施例３８及び４０において記載したものをそれぞれ２００ｕｇ、腹腔内注射する。４日目から始めて、腫瘍成長を、腫瘍成長を測定するために週２回、キャリパーで監視する。実験の終点は、２０００ｍｍ３の腫瘍体積または６０日間である。腫瘍成長及び生存率が評価項目である。腫瘍生着及び成長速度の減少、腫瘍浸潤性免疫抑制マクロファージの数の減少、ならびに腫瘍へのエフェクターＴ細胞流入の増加は、遮断抗ＴＲＥＭ２抗体の抗がん作用を示している。
【０６３４】
実施例４６：ＴＲＥＭ２抗体を、阻害性チェックポイントタンパク質または阻害性サイトカイン／ケモカイン及びそれらの受容体に対する抗体と併用する併用療法の相加的抗腫瘍作用の分析
８週（＋／−２週）齢目の１５頭のＣ５７Ｂｌ６／ＮＴａｃマウスからなる群を、腫瘍細胞で皮下攻撃する。動物に、移植の前にイソフルランで麻酔をかける。２日目から始めて、マウスに、３日ごとに４回の用量で、抗ＴＲＥＭ２抗体２００ｕｇを単独で、または３、６、及び９日目のチェックポイントタンパク質に対する抗体（例えば、抗ＰＤＬ１  ｍＡｂクローン１０Ｆ．９Ｇ２及び／または抗ＣＴＬＡ−４  ｍＡｂクローンＵＣ１０−４Ｆ１０−１１）と組み合わせて腹腔内注射する。処理群には、抗ＴＲＥＭ２；抗ＣＴＬＡ−４；抗ＰＤＬ１；抗ＴＲＥＭ２＋抗ＣＴＬＡ−４；抗ＴＲＥＭ２＋抗ＰＤＬ１；及びアイソタイプ対照が含まれる。４日目から始めて、腫瘍成長を、腫瘍成長を測定するために週２回、キャリパーで監視した。実験の終点は、２０００ｍｍ３の腫瘍体積または６０日間である。腫瘍成長及び生存％が評価項目である。併用療法での腫瘍成長の減少及び生存％の上昇は、抗ＴＲＥＭ２抗体が、抗チェックポイント抗体と共に相加的または相乗的治療効果を有することを示す。チェックポイント分子に対するアンタゴニスト抗体には、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２、ＰＤ１、ＣＴＬＡ−４、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ３、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ−３、及びホスファチジルセリン（ＰＳ）に対する抗体が含まれる。阻害性サイトカインに対するアンタゴニスト抗体には、ＣＣＬ２、ＣＳＦ−１、及びＩＬ−２に対する抗体が含まれる。
【０６３５】
実施例４７：ＴＲＥＭ２抗体を、刺激性チェックポイントタンパク質を活性化する抗体と併用する併用療法の相加的抗腫瘍作用の分析
８週（＋／−２週）齢目の１５頭のＣ５７Ｂｌ６／ＮＴａｃマウスからなる群を、腫瘍細胞で皮下攻撃する。動物に、移植の前にイソフルランで麻酔をかける。２日目から始めて、マウスに、３日ごとに４回の用量で、抗ＴＲＥＭ２抗体２００ｕｇを単独で、または３、６、及び９日目の刺激性チェックポイントタンパク質を活性化するアゴニスト抗体（例えば、ＯＸ４０またはＩＣＯＳ  ｍＡｂ）と組み合わせて腹腔内注射する。４日目から始めて、腫瘍成長を、腫瘍成長を測定するために週２回、キャリパーで監視した。実験の終点は、２０００ｍｍ３の腫瘍体積または６０日間である。腫瘍成長及び生存％が評価項目である。併用療法での腫瘍成長の減少及び生存％の上昇は、抗ＴＲＥＭ２抗体が、刺激性チェックポイント抗体と共に相加的または相乗的治療効果を有することを示す。刺激性チェックポイント抗体には、ＣＤ２８、ＩＣＯＳ、ＣＤ１３７、ＣＤ２７、ＣＤ４０、及びＧＩＴＲに対するアゴニスト／刺激性抗体が含まれる。
【０６３６】
実施例４８：ＴＲＥＭ２抗体の抗卒中作用の分析
ヒト卒中に酷似するモデルである中大脳動脈（ＭＣＡＯ）の一過性閉塞を使用して、マウスにおいて脳梗塞を誘導する。モノフィラメント（７０ＳＰＲｅ、Ｄｏｃｃｏｌ  Ｃｏｒｐ、ＵＳＡ）を、右共通頸動脈の切開部を介して内頸動脈に導入する。中大脳動脈を、３０分間にわたって、再灌流時間（６時間、１２時間、２４時間、２日間、７日間及び２８日間）の範囲で閉塞させる。外科手術の作用を、１２時間目及び７日目の偽動物を使用して対照する。偽動物には、中大脳動脈の閉塞を伴わずに、同じ外科手術を施す。アゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体または対照抗体で処理されたＭＣＡＯ動物を、梗塞容積測定、急性炎症応答（１２時間再灌流）、炎症誘発性サイトカインＴＮＦａ、ＩＬ−１ａ、及びＩＬ−１ｂの転写、ミクログリア活性（ＣＤ６８、Ｉｂａ１）、ケモカインＣＣＬ２（ＭＣＰ１）、ＣＣＬ３（ＭＩＰ１ａ及びケモカイン受容体ＣＸ３ＣＲ１）の転写、及びＣＤ３陽性Ｔ細胞の侵襲について試験する（Ｓｉｅｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）ＰＬｏＳ  ＯＮＥ  ８（１）：ｅ５２９８２．ｄｏｉ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．００５２９８２．）。
【０６３７】
実施例４９：抗ＴＲＥＭ２抗体の抗アルツハイマー病作用の分析
アルツハイマー病（ＡＤ）の発生を遅延させる、予防する、または逆転させる抗ＴＲＥＭ２抗体の能力を評価するために、５Ｘ  ＦＡＤマウスを使用する。５Ｘ  ＦＡＤマウスは、２つのＦＡＤ変異、すなわちＭ１４６Ｌ及びＬ２８６Ｖを有するヒトＰＳ１と共に、スウェーデン型（Ｋ６７０Ｎ、Ｍ６７１Ｌ）、フロリダ型（Ｉ７１６Ｖ）、及びロンドン型（Ｖ７１７Ｉ）家族性アルツハイマー病（ＦＡＤ）変異を有する変異型ヒトＡＰＰ（６９５）を過剰発現する。両方の導入遺伝子は、脳における過剰発現を駆動し、かつＡＤの主要な特徴を再現するためのマウスＴｈｙ１プロモーターによって調節される。アゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体または対照抗体で処理されたマウスを、免疫組織化学で、かつ組織抽出物のＥＬＩＳＡによって、Ａベータプラーク負荷について試験する。マウスをさらに、脳内のミクログリアの数について、かつＭｏｒｒｉｓ水迷路、空間学習及び記憶課題、放射状アーム水迷路、空間学習及び記憶課題、Ｙ型迷路（空間認知の測定値として自発的変更を定量する）、オープンフィールドにおける新規選好、学習及び記憶を評価するためのオペラント学習、ならびに恐怖条件付けを使用して認知障害の減少について試験する（ｍｏｕｓｅｂｉｏｌｏｇｙ．ｏｒｇ  ｗｅｂｓｉｔｅ；Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１５）Ｃｅｌｌ．ｐｉｉ：Ｓ００９２−８６７４（１５）００１２７−０）。
【０６３８】
実施例５０：呼吸器感染症におけるＴＲＥＭ２抗体の防御効果の分析
細菌性呼吸器感染症を遅延させる、予防する、または治療するためのＴＲＥＭ２抗体の能力を評価するために、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅでＣ５７Ｂｌ６マウスを攻撃することを含む前臨床マウスモデルを使用する。このモデルは、記載されているとおり、１０５ＣＦＵのＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ血清型３（ＡＴＣＣ  ６３０３）の鼻腔内（ｉ．ｎ．）投与を含む（例えば、Ｓｈａｒｉｆ  Ｏ  ｅｔ  ａｌ，２０１４  ＰＬｏＳ  Ｐａｔｈｏｇ．２０１４  Ｊｕｎ；１０（６）：ｅ１００４１６７、及びＳｃｈａｂｂａｕｅｒ  Ｇ  ｅｔ  ａｌ，２０１０  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １８５：４６８−４７６を参照されたい）。このモデルでは、約９０％のＷＴ  Ｃ５７Ｂｌ６マウスが、感染後６日以内に、感染で死亡する。１０〜１５頭のマウス／群を、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅで攻撃し、付随して、０日目から始めて、１日おきにアンタゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体で処置する。抗ＴＲＥＭ２抗体の最初の用量を、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａで攻撃する３時間前に投与する。死亡事象をチェックするために、マウスを、毎日１５日間にわたって監視する。細菌攻撃を生き延びたマウスの％を決定する。別の実験では、血液及び肺における細菌量及びサイトカイン発現の数も決定する。感染から２４または４８時間後に、血液をＥＤＴＡ含有チューブに収集し、寒天プレート上にプレーティングして、血漿中の細菌性ＣＦＵを計数する。血漿を、ＥＬＩＳＡによるサイトカイン分析のために−２０℃で保存する。細菌ＣＦＵを計数するために、肺を採取し、均質化し、寒天プレート上にプレーティングする、または溶解緩衝液中で３０分間にわたってインキュベートし、上清をサイトカイン測定のために分析する。別の実験では、肺を、細菌感染から４０時間後に収集し、１０％ホルマリン中で固定し、Ｈ＆Ｅ病理分析のためにパラフィンに包埋する。
【０６３９】
実施例５１：敗血症におけるＴＲＥＭ２抗体の防御効果の分析
敗血症を遅延させる、予防する、または治療するＴＲＥＭ２抗体の能力を評価するために、ＬＰＳでのＣ５７Ｂｌ６マウスの全身攻撃を含む前臨床マウスモデルを使用する。このモデルは、記載されているとおり、３７ｍｇ／ｍｌのＬＰＳの腹腔内（ｉ．ｐ．）投与を含む（例えば、Ｇａｗｉｓｈ  Ｒ  ｅｔ  ａｌ，２０１４  ＦＡＳＥＢ  Ｊを参照されたい）。このモデルでは、９５％超のＷＴ  Ｃ５７Ｂｌ６マウスは、ＬＰＳ感染後４０時間以内に、感染で死亡する。マウスのコホートをＬＰＳで攻撃し、付随して、０日目から始めて毎日、アンタゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体で処置する。抗ＴＲＥＭ２抗体の最初の用量を、ＬＰＳで攻撃する３時間前に投与する。死亡事象を確認するために、マウスを日中に約４時間ごとに監視する。ＬＰＳ攻撃を生き延びたマウスのパーセンテージを決定する。
【０６４０】
別の実験では、腹腔洗浄液（ＰＬＦ）を収集する。上清を、ＥＬＩＳＡによるサイトカイン分析のために−２０℃で保存し、腹腔に動員された炎症性細胞を定量化するために、ペレット化細胞を計数する。感染の他のモデルにおけるＴＲＥＭ２抗体の有効性を試験するために、同様の研究を行うことができる（例えば、Ｓｕｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１３）  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ．１７；５４（５）：３４５１−６２を参照されたい）。
【０６４１】
実施例５２：急性及び慢性大腸炎におけるＴＲＥＭ２抗体の防御効果の分析
大腸炎を遅延させる、予防する、または治療する抗ＴＲＥＭ２抗体の能力を評価するために、急性または慢性大腸炎の前臨床マウスモデルを使用する。ＤＳＳ誘発性大腸炎では、マウスは、８日間にわたって自由に飲料水中の３％ＤＳＳを与えられる。ＴＮＢＳ誘発性大腸炎では、マウスに麻酔をかけ、２０％エタノール（ｖｏｌ／ｖｏｌ）中のＴＮＢＳ３ｍｇまたは対照としてのビヒクル単独の直腸内注射で処理する。慢性大腸炎モデルでは、全てのマウスを、５日間にわたる２％ＤＳＳ、続く、１０日間の回復期間からなる３サイクルで処理する。全てのモデルで、体重減少、便の硬さ、及び便潜血の存在を毎日監視し、記載されているとおり、疾患活動指数を計算するために使用する（例えば、Ｃｏｒｒｅａｌｅ  Ｃ，２０１３，Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，Ｆｅｂｒｕａｒｙ  ２０１３，ｐｐ．３４６−３５６．ｅ３を参照されたい）。マウスのコホートを、０日目から始めて毎日、アンタゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体で処置し、ＤＳＳまたはＴＮＢＳ投与を受けさせる。マウスを、体重減少、便の硬さ、及び便潜血の存在をチェックするために毎日監視し、記載されているとおり、疾患活動指数を計算するために使用した（例えば、Ｓ．Ｖｅｔｒａｎｏ，Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，１３５（２００８），ｐｐ．１７３−１８４を参照されたい）。別の実験では、炎症性細胞浸潤及び粘膜損傷を評価するために、粘膜損傷の内視鏡画像及び組織学的画像を収集する。クローン病、炎症性腸疾患、及び潰瘍性大腸炎を含む自己免疫の他のモデルにおけるＴＲＥＭ２抗体の有益性を試験するために、同様の試験を行うことができる（例えば、Ｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１３）  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓ  Ｄｅｖｅｌ  Ｔｈｅｒ．；７：１３４１−１３５７、及びＳｏｌｌｉｄ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）  ＰＬｏＳ  Ｍｅｄ  ５（９）：ｅ１９８を参照されたい）。
【０６４２】
実施例５３：創傷治癒におけるアゴニストＴＲＥＭ２抗体の防御効果の分析
損傷後の結腸の創傷修復を増加させる抗ＴＲＥＭ２抗体の能力を評価するために、結腸における生検損傷のマウスモデルを使用する。このモデルでは、外側の手術シースを有する内視鏡を、下行結腸の中央に挿入し、粘膜を肛門直腸接合部まで調査する。次いで、粘膜及び粘膜下組織全体の単一の全層領域を、３フレンチの直径を有する柔軟な生検鉗子で除去し、筋固有層の貫入を回避する。各マウスを、結腸の背側に沿って３〜５箇所で生検損傷させる（例えば、Ｓｅｎｏ  Ｈ，２００８，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．２００９  Ｊａｎ  ６；１０６（１）：２５６−２６１を参照されたい）。生検損傷から２または３日後に、マウスのコホートを、アゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体で処置する。体重減少及び創傷治癒をチェックするために、病変の表面積を測定することによって、マウスを、１５日間にわたって毎日監視する。
【０６４３】
実施例５４：網膜変性におけるＴＲＥＭ２抗体の防御効果の分析
ＡＭＤは、網膜外縁部の変性疾患である。炎症、特に、炎症性サイトカイン及びマクロファージが、ＡＭＤ疾患進行の原因となると考えられている。ドルーゼン、ブルッフ膜、脈絡膜、及び網膜におけるＡＭＤ病変の近傍に、マクロファージの存在が記録されている。マクロファージは組織因子（ＴＦ）及び血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）を放出し、これが、脈絡膜血管新生を示す患者において、新しい血管形成の拡大を引き起こす。黄斑のある脈絡膜に存在するマクロファージの種類は、年齢と共に変化し、若年の眼と比較して、老年の眼においてＭ２マクロファージのレベルの上昇を示す。しかしながら、進行したＡＭＤの黄斑は、ほぼ同年齢の正常な剖検された眼と比較して、Ｍ１とＭ２の比がより高かった。（例えば、Ｃａｏ  Ｘ  ｅｔ  ａｌ，（２０１１），Ｐａｔｈｏｌ  Ｉｎｔ  ６１（９）：ｐｐ５２８−３５を参照されたい）。これは、晩発性ＡＭＤ進行における眼の典型的なＭ１マクロファージ活性化の間の関連を示唆する。網膜ミクログリア細胞は、通常は内網膜にも存在する組織常在マクロファージである。損傷の場合、ミクログリアが活性化し、炎症のメディエーターとして作用し得る。活性化ミクログリアは、ＡＭＤ組織サンプルにおいて検出されており、ＡＭＤ病因をもたらす炎症プロセスの１つの潜在的な要因として提案されている（Ｇｕｐｔａ  ｅｔ  ａｌ．，（２００３）  Ｅｘｐ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ．，７６（４）：４６３−７１．）。ＡＭＤを予防する、遅延させる、または逆転させるアンタゴニストＴＲＥＭ２抗体の能力を、１つまたは複数のＡＭＤモデルで試験する（例えば、Ｐｅｎｎｅｓｉ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１２）  Ｍｏｌ  Ａｓｐｅｃｔｓ  Ｍｅｄ．；３３（４）：４８７−５０９を参照されたい）。全体的な炎症性マクロファージ（Ｍ１及び／または活性化ミクログリアのいずれか）は、ＡＭＤ疾患の進行と相関し、したがって、アンタゴニストＴＲＥＭ２抗体の治療標的であることが記録されている。緑内障及び網膜色素変性症などの遺伝型または網膜変性において、同様の治療効果を達成することができる。
【０６４４】
緑内障における網膜神経節細胞変性を予防する、遅延させる、または逆転させるＴＲＥＭ２抗体の能力を、緑内障モデルにおいて試験する（例えば、Ｅｌ−Ｄａｎａｆ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１５）  ．Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１１；３５（６）：２３２９−４３を参照されたい）。同様に、遺伝的に誘導される網膜変性及び色素性網膜炎におけるＲＥＭ２の治療効果を、Ｃｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，（２００２）  Ｖｉｓｉｏｎ  Ｒｅｓ．；４２（４）：５１７−２５、及び“Ｒｅｔｉｎａｌ  Ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  Ｒａｔ  Ｍｏｄｅｌ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅ  Ａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ  ｏｆ  Ｐ２３Ｈ  ａｎｄ  Ｓ３３４ｔｅｒ  Ｍｕｔａｎｔ  Ｒｈｏｄｏｐｓｉｎ  Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  Ｒａｔｓ  ａｎｄ  ＲＣＳ  Ｉｎｂｒｅｄ  ａｎｄ  ＲＣＳ  Ｃｏｎｇｅｎｉｃ  Ｓｔｒａｉｎｓ  ｏｆ  Ｒａｔｓ，”  ＭＭ  ＬａＶａｉｌ，Ｊｕｎｅ  ３０，２０１１に記載されているとおりに試験する。
【０６４５】
実施例５５：脂質生成及び食事性肥満におけるＴＲＥＭ２抗体の防御効果の分析
脂質生成及び肥満におけるＴＲＥＭ２抗体の作用を試験するために、高脂肪食（ＨＦＤ）のマウスモデルを使用する（例えば、Ｐａｒｋ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１５）  Ｄｉａｂｅｔｅｓ．６４（１）：１１７−２７を参照されたい）。
【０６４６】
実施例５６：マラリアにおけるＴＲＥＭ２抗体の防御効果の分析
非実質性肝細胞におけるＴＲＥＭ２発現は、マラリア原虫Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｂｅｒｇｈｅｉでの肝細胞期感染に対する耐性と密接に相関する（Ｇｏｎｃａｌｖｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１３）  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ２６；１１０（４８）：１９５３１−６）。理論に拘束されることは望まないが、ＴＲＥＭ２抗体は、Ｐ．ｂｅｒｇｈｅｉによる肝細胞期感染に対する耐性を増加させると考えられている。マラリア感染に対する耐性を増加させるＴＲＥＭ２抗体の能力を、Ｇｏｎｃａｌｖｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１３）  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ２６；１１０（４８）：１９５３１−６に記載されているとおりに試験する。簡単に述べると、ＧＦＰを発現するＰ．ｂｅｒｇｈｅｉ  ＡＮＫＡスポロゾイトを、Ａｎｏｐｈｅｌｅｓ  ｓｔｅｐｈｅｎｓｉ蚊由来の感染した唾液腺を切開することによって得る。ＲＰＭＩ培地中のスポロゾイト懸濁液を、１マウス当たり１０４のスポロゾイトを含有する接種源１００μＬで、静脈内注射する。肝臓を、注射または生存の４０時間後に収集し、寄生虫血症を、２８日間にわたって追跡する。実験的な脳マラリアスコアリングのために、注射後５日目から、神経学的症状を監視する。
【０６４７】
実施例５７：骨粗鬆症におけるＴＲＥＭ２抗体の防御効果の分析
骨は、カルシウムホメオスタシス及び構造的必要性を支援するために絶えずリモデリングを行う動的な器官である。破骨細胞は、骨の有機及び無機の両成分を取り除く役割を担う細胞である。破骨細胞は、マクロファージ系統の造血前駆細胞に由来し、腫瘍壊死因子ファミリーサイトカインＮＦκＢ活性化受容体リガンドに応答して分化する。破骨細胞は、唯一の骨吸収細胞であり、骨粗鬆症及び大理石骨病の病因として重要である（Ｎｏｖａｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖ  Ｐａｔｈｏｌ．，３：４５７−８４）。骨粗鬆症は、骨量及び骨密度の減少によって特徴づけられる進行性骨疾患であり、骨折のリスクを増大させ得る。多くの場合、骨代謝回転が加速され、破骨細胞と骨芽細胞の両方の活性が増大する閉経後１年に顕在化する。しかしながら、吸収と合成のプロセスにおける不均衡によって、正味効果は骨損失であり、主に骨梁で減少する。したがって、骨粗鬆症における骨折の最も一般的な部位は、骨全体の強度にとって骨梁構造が重要である手首、大腿骨頸部及び椎体である。骨粗鬆症をもたらす破骨細胞分化の亢進及び骨吸収能力の増加は、ＴＲＥＭ２の発現を欠く動物モデルで説明されている（Ｏｔｅｒｏ  ｅｔ  ａｌ（２０１２）  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８８，２６１２−２６２１）。破骨細胞の機能の低下は、ＤＡＰ１２  ＩＴＡＭシグナル伝達アダプターを欠損している動物モデルにおいて観察されたように、骨量の増加及び骨髄空間の消失を伴う大理石骨病の原因になり、破骨細胞様細胞の分化に著しい欠如が生じる（Ｋｏｇａ，ｅｔ  ａｌ．，（２００４）Ｎａｔｕｒｅ  ４２８：７５８−７６３）。理論に束縛されることは望まないが、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体の投与は、骨粗鬆症を予防する、そのリスクを減少させる、及び／または治療することができると考えられている。一部の実施形態では、アゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体を投与することは、大理石骨病（例えば、ＤＡＰ１２リン酸化、Ｓｙｋ活性化、及び破骨細胞への分化の亢進）を有する個体において１つまたは複数のＴＲＥＭ２活性を誘導することがある（Ｐｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ（２０１０）．Ｓｃｉ  Ｓｉｇｎａｌ．２０１０  １８；３  １２２、及びＨｕｍｐｈｒｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，（２００６）  Ｊ  Ｂｏｎｅ  Ｍｉｎｅｒ  Ｒｅｓ．，２１（２）：２３７−４５）。
【０６４８】
実施例５８：脊髄損傷のマウスモデルにおける抗ＴＲＥＭ２抗体の作用の分析
合計２０頭のＣ５７／ＢＬ６マウスを、それぞれ１０頭のマウスからなる２つの群で使用した。脊髄損傷（ＳＣＩ）を、Ｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒａｉｎ  ２０１０、１３３：１０２６−４２に従って誘導した。簡単に述べると、マウスに麻酔をかけ、それらの背部を剃毛し、Ｂｅｔａｄｉｎｅ（Ｐｕｒｄｕｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ＬＰ）で清浄にした。正中線切開及びＴ９椎骨の椎弓切除の後に、５０キロダインに力が設定されたＩｎｆｉｎｉｔｅ  Ｈｏｒｉｚｏｎ  Ｉｍｐａｃｔｏｒ（ＰＳＩ、Ｌｅｘｉｎｇｔｏｎ、ＫＹ）を使用して、脊髄挫傷を誘導した。脊柱を、横突起下に挿入された硬質の鋼製クランプを備えたフレーム内で安定化させた。４００〜８００μｍの損傷転位を有するマウスのみを含めた。損傷後に、筋肉を層状に閉じ、皮膚切開を閉じ、バシトラシン亜鉛抗生物質（Ａｌｔａｎａ、Ｍｅｌｖｉｌｌｅ、ＮＹ）を切開領域に塗布した。
【０６４９】
損傷後６週まで、動物を、移動について試験した。抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５及びアイソタイプ対照抗体（対照ＩｇＧ）を、８０ｍｇ／ｋｇで、ＳＣＩ誘導の２４時間前の１回の損傷前注射を含めて、週１回腹腔内注射した。
【０６５０】
運動技能を試験するために、足踏みの際の後肢の動作、四肢の協調、及び体躯安定性を、Ｂａｓｓｏ  Ｍｏｕｓｅ  Ｓｃａｌｅ（Ｂａｓｓｏ  ｅｔ  ａｌ．、Ｊ  Ｎｅｕｒｏｔｒａｕｍａ  ２００６、２３：６３５−５９）と呼ばれる１０ポイントスケールで試験した。０〜２のＢａｓｓｏ  Ｍｏｕｓｅ  Ｓｃａｌｅ（ＢＭＳ）スコアは、後肢麻痺に、３〜４は、多少の足首の動き、５〜６は、多少の協調及び足踏みを伴う体重負荷、７〜９は、一致協調した足踏みを伴う高機能を含み、９は正常である。ＢＭＳサブスコアは、５以上（体重負荷）のスコアを有する場合に計算される。これらは、足底足踏みの頻度、四肢間協調、足踏みの間の足位置、さらには、移動中の体躯安定性及び尾の位置を含む、良好な運動技能を表す。サブスコアは、ＢＭＳが同じ場合に、群の間の相違を表すことができる。ＢＭＳを、最初の注射の前またはその２４時間後に、及びその後は毎週、再び週１回の注射から２４時間後に行った。
【０６５１】
図２２Ａ及び２２Ｂの結果は、抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５での処置が、７及び１０日目のＢＭＳスコアを有意に、ただし一過性に改善したことを示している。結果は、損傷後の組織回復に対するミクログリア機能の示差的効果により得る。
【０６５２】
実施例５９：インビトロでヒト樹状細胞の生存に影響を及ぼすＴＲＥＭ２抗体の能力の分析
製造者マニュアルに従ってＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐ（商標）ヒト単球濃縮抗体カクテル（ＳｔｅｍＣｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して、末梢血単核細胞から単球を単離した。単球を、１×１０６細胞／ｍｌで、完全ＲＰＭＩ培地（１０％ＦＣＳ、Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ、Ｌ−グルタミン、ＭＥＭ非必須アミノ酸、ピルビン酸ナトリウム、１ｍＭ  ＨＥＰＥＳ）中で、１００ｎｇ／ｍｌのｈＧＭ−ＣＳＦ及び１００ｎｇ／ｍｌのｈＩＬ−４の存在下で、７日間にわたって培養した。ヒト樹状細胞を、１ウェル当たり２５，０００の細胞で、９６ウェル非組織培養処理プレート内にプレーティングした。様々な濃度の抗ＴＲＥＭ２抗体９Ｆ５または１０μｇ／ｍｌの抗ＴＲＥＭ２抗体１０Ａ９を、２０ｎｇ／ｍｌのｈＧＭ−ＣＳＦ及び２０ｎｇ／ｍｌのｈＩＬ−４の存在下で添加した。マウスＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体及び培地のみ（添加なし）を、対照として使用した。３日後に、細胞生存度を、製造者プロトコルに従ってＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して分析した。
【０６５３】
ヒト単球由来樹状細胞を、３日間にわたって、抗ＴＲＥＭ２抗体９Ｆ５または１０Ａ９のいずれかと共にインキュベートした。１０μｇ／ｍｌの抗体１０Ａ９とのインキュベーションが細胞生存率を６０％に低下させた一方で、１０μｇ／ｍｌの抗体９Ｆ５は、細胞生存に有意な影響を及ぼさなかった（図２３）。
【０６５４】
実施例６０：ＴＲＥＭ２抗体は、１％超の末梢濃度で脳またはＣＳＦレベルを示す
野生型（ＷＴ）または５ＸＦＡＤマウスからなる群を、抗ＴＲＥＭ２抗体または対照抗体で４〜１２週間にわたって、週１回の腹腔内注射によって長期処置する。血漿を週１回収集する。試験の終了時に、無意識及び引込め反射に対する不応答まで、マウスに３〜５％イソフルラン／酸素混合物で麻酔をかける。ノーズコーンを介して送達することによる手順を通じて、イソフルラン／酸素混合物を維持する。マウスを仰向けに置き、切開を腹部及び横隔膜を通して行い、心臓を露出させる。右心房を切開して、血液を漏出させ、滅菌生理食塩水２０〜３０ｍｌをシリンジ及び２５ゲージ針によって、左心室に注射する。血液が全部除去され、肝臓が白くなるまで、生理食塩水をゆっくりとした一定のペースで送達する。次いで、脳を頭蓋から除去し、解剖顕微鏡下の滅菌ペトリ皿に入れる。小脳、中脳、及び後脳を除去し、脳を、正中線で切断することによって２つの半球に分ける。両方の海馬及び前頭皮質を収集し、スナップ凍結する。脳溶解産物を、製造者指示に従ってプロテアーゼ阻害剤を含む氷冷Ｎ−Ｐｅｒ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）を使用して調製する。溶解産物中のタンパク質濃度を、ＢＣＡアッセイ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）を使用して測定する。血漿及び脳溶解産物中の抗体レベルを、カスタムＩｇＧ  Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙアッセイを使用して測定し、ＩｇＧ濃度を使用して、抗体の脳濃度パーセントを測定する。
【０６５５】
実施例６１：ＴＲＥＭ２抗体は、慢性大腸炎のマウスモデルにおいて病態を寛解する
材料及び方法
７週齢の雌のＣ５７ＢＬ／６マウスを、次のデキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ）プロトコルに供した。実験者を盲検化し、抗ＴＲＥＭ抗体７Ｅ５または対照抗体ＭＯＰＣ−２１の抗体溶液をマウスに、第１のＤＳＳサイクルの３日前に、次いで、全実験にわたって週２回、４０ｍｇ／ｋｇの濃度で腹腔内（ＩＰ）注射した。３日後に、マウスを、それぞれ通常水のサイクル（７日間）が続く１．５％ＤＳＳ（分子質量４０ｋＤａ、ＭＰ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ、ｃａｔ  ｎ  １６０１１０、Ｌｏｔ  ｎ  Ｑ１４０８）の３回の経口サイクル（７日間）に供した。急性及び慢性大腸炎の重症度を、体重、下痢及び糞便中の血液の存在の評価に基づく疾患活性指数（ＤＡＩ）スコアを使用して週２回スコアリングした。ＤＡＩを、体重減少（０＝なし、１＝１〜５％、２＝５〜１０％、３＝１０〜２０％、４＝２０％以上）、便の硬さ（０＝正常、２＝軟便、４＝下痢）、及び直腸出血（０＝正常、２＝潜血、４＝著しい出血）の変化をスコアリングすることによって決定して、５つのグレード（０〜４）のＤＡＩを得た。
【０６５６】
生き残ったマウスを、血清収集及び結腸内視鏡検査の後、３５日目に屠殺した。加えて、結腸長さを測定した後に、組織の半分をホルマリン固定し、組織学的評価のためにパラフィンに入れた。
【０６５７】
結腸内視鏡検査によって、種々のパラメーター、例えば、粘膜の肥厚、出血、及び時には顆粒状粘膜表面、血管構造の喪失、及びフィブリンの存在で、大腸炎の重症度を評価する機会が得られる。炎症のこれらの内視鏡的徴候に基づき、実験の終了時に、炎症を、次の体系で、内視鏡検査によってもスコアリングした：結腸の肥厚（スコア０＝透明、１＝中程度、２＝顕著、３＝不透明）、血管パターンの変化（スコア０＝正常、１＝中等度、２＝顕著、３＝出血）、可視フィブリン（０＝なし、１＝少量、２＝顕著、３＝極度）、粘膜表面の顆粒性（０＝なし、１＝中等度、２＝顕著、３＝極度）。すべてのサブスコアを合計して、０〜１２の全結腸スコアを得る。
【０６５８】
結果
デキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ）実験モデルは、大腸炎の最も広く使用されているマウスモデルである。ＤＳＳは、５〜１４００ｋＤａの範囲の極めて多様な分子量を有する負の電荷をもつ水溶性の硫酸化多糖である。ＤＳＳが腸管炎症を誘導する機構は、下にある組織への炎症誘発性腸管内容物（例えば、細菌及びそれらの産物）の伝播を可能にする、大腸を覆う上皮単層に対する損傷の結果であると考えられている。この実験プロトコル後に、遠位及び直腸部分が、結腸の最も影響を受けるセグメントである。
【０６５９】
抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５で処置されたマウスは、第１のＤＳＳサイクルの後に、対照抗体で処置されたマウスと比較して、炎症の症状の有意な減少を示した。これらの結果は、第２及び第３のＤＳＳ処理後にも見られた（図２４）。抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５でし処置されたマウスは、第１のＤＳＳサイクルの後に、試験の全経過を通じて、体重減少（図２４Ａ）及び疾患活性指数（図２４Ｂ）の有意な減少を示した。実験の終了時に、マウスを屠殺し、結腸長さを測定した。抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５を注射されたマウスの結腸サンプルは、対照抗体を注射されたマウスの結腸サンプルよりも、有意に長かった（図２４Ｃ）。この結果によって、抗体７Ｅ５はＤＳＳ誘発性大腸炎から防御することがさらに確認される。加えて、抗ＴＲＥＭ２抗体７Ｅ５で処理されたマウスは、対照抗体で処理されたマウスと比較して、有意に低い内視鏡スコアを示した（図２４Ｄ）。
【０６６０】
この結果は、抗ＴＲＥＭ２抗体での処置が、慢性ＤＳＳマウスモデルにおける大腸炎の症状を有意に低下させることを実証している。さらに、これらの結果は、本開示のものなどの抗ＴＲＥＭ２抗体が、潰瘍性大腸炎を治療するための治療薬として使用され得るであろうことを示している。
【０６６１】
実施例６２：ＴＲＥＭ２抗体は、ヒト化ＴＲＥＭ２トランスジェニックマウスにおいて活性を示す
材料及び方法
骨髄細胞系列においてヒトＴＲＥＭ２を発現するマウスを得るために、ＴＲＥＭ２を他のＴＲＥＭファミリーメンバー及び十分なフランキング配列（各末端に少なくとも１０ｋｂ）と共に細菌人工染色体（ＢＡＣ）クローンを特定した。ＴＲＥＭ遺伝子遺伝子座を有するＢＡＣクローンを、ＵＣＳＣゲノムブラウザ及びＮＣＢＩのＣｌｏｎｅ  ＤＢを使用して特定した。判定基準は、適切な遺伝子発現の可能性を最大化するために、目的の遺伝子に加えて、最低１０ＫＢのフランキング５’及び３’配列を有するクローンを特定することであった。
【０６６２】
ＢＡＣクローンを、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎから細菌穿刺培養物として得た。培養物を増殖させ、ＤＮＡを、標準的な技術を使用して単離した。制限分解後のアガロースゲル電気泳動によって、ＵＣＳＣゲノムブラウザの配列との比較に基づき、挿入物のサイズ及び無損傷が確認された。加えて、ＢＡＣクローンの配列を、各ＢＡＣの末端、さらには目的の関連ヒト一塩基多型の配列を含むＮＣＢＩウェブポータルのＣｌｏｎｅ  ＤＢで照会した。
【０６６３】
上記の方策に基づき、ＢＡＣクローンＣＴＤ−３２２２Ａ２０を特定した。このクローンは、ヒトＴＲＥＭ２、ヒトＴＲＥＭＬ２、ヒトＴＲＥＭ１、ヒトＴＲＥＭＬ１、及びヒトＴＲＥＭＬ４遺伝子の全配列を含む。遺伝子のＴＲＥＭファミリーは、染色体６上のクラスター内に見出されるので、ＵＣＳＣのｈｇ３８  ｂｕｉｌｄに基づきヌクレオチド４１１０４９０１から４１２９２４１９までの１８７，５１９ヌクレオチドに及ぶ、このＢＡＣによってカバーされる連続領域は、それらの遺伝子のすべてを含んだ。
【０６６４】
標準的な前核注射技術を利用して、ＢＡＣクローンＣＴＤ−３２２２Ａ２０を有するトランスジェニックマウスを、精製ＢＡＣ  ＤＮＡをＣ５７ＢＬ６／ｊマウス受精卵に注射することによって作製した。受精卵を雌のマウスに移植した。次いで、移植されたマウスからの仔を、導入遺伝子の存在について遺伝子型決定した。次いで、これらの創始マウスを非トランスジェニックマウスと交配させ、後代を、導入遺伝子の適切な発現についてスクリーニングした。簡単に述べると、血液を４〜８週齢のマウスから得、単球を、標準的な技術を使用して単離した。次いで、導入遺伝子（すなわち、ＴＲＥＭ２、ＴＲＥＭ１、及びＴＲＥＭＬ２）のそれぞれについて特異的な抗体を使用して、単球をＦＡＣＳによって分析した。発現を、これらの遺伝子につて確認した。
【０６６５】
実験のために、野生型マウス（ＷＴ）またはヒト化ＴＲＥＭ２  ＢＡＣトランスジェニックマウス（ｈｕＴＲＥＭ２  ＴｇまたはＢａｃ−Ｔｇ）に、３％チオグリコール酸を腹腔内（ＩＰ）注射した。
【０６６６】
４日目に、腹膜細胞を、各マウスから収集した。並行して、骨髄を採取して、標準的な手順に従って骨髄由来マクロファージを生成した。チオグリコール酸誘導マクロファージの刺激でのサイトカイン産生を測定するために、細胞を、抗ＴＲＥＭ２抗体９Ｆ５または対照マウス抗体ＭＯＰＣ−２１でコーティングされたプレート上で約６０時間にわたってインキュベートした。上清中に分泌されたＴＮＦ−アルファを、サイトメトリービーズアレイ（ＣＢＡ、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）によって測定した。
【０６６７】
ＷＴ対ｈｕＴＲＥＭ２  Ｔｇマウスにおけるヒト対マウスＴＲＥＭ２の発現を検査するために、チオグリコール酸誘導マクロファージを収集し、標準的な細胞染色プロトコルを使用して、ヒトＴＲＥＭ２特異的抗体９Ｆ５または１０Ａ９で、マウスＴＲＥＭ２特異的抗体２Ｆ５で、またはヒト及びマウスＴＲＥＭ２の両方を認識する抗ＴＲＥＭ２抗体（Ｒ＆Ｄ  ｒａｔ  ａｎｔｉ−ＴＲＥＭ２）で染色した。細胞をＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏで分析し、生細胞集団を、ＣＤ１１ｂ＋及びＦ４／８０＋でゲートした。生データを、ＦｌｏｗＪｏによって分析した。
【０６６８】
ＷＴまたはｈｕＴＲＥＭ２  Ｔｇマウスからの骨髄由来マクロファージのインビトロ刺激では、１０×１０６の細胞を、未刺激のままとするか、または抗ＴＲＥＭ２抗体９Ｆ５または対照抗体ＭＯＰＣ−２１で刺激した。次いで、細胞を溶解させ、ラット抗ＴＲＥＭ２抗体（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）で免疫沈降させた。サンプルを、非還元条件下でＳＤＳゲル上に泳動させ、ウェスタン免疫ブロットを、標準的な手順を使用して抗ホスホ−チロシン（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）及び抗ＤＡＰ１２抗体（Ｃｅｌｌ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）で行った。
【０６６９】
結果
図２５Ａは、チオグリコール酸誘導マクロファージ上で、ヒト特異的抗ＴＲＥＭ２抗体９Ｆ５及び１０Ａ９の両方による陽性のＴＲＥＭ２結合が存在するが、これらの抗体は、マウスＴＲＥＭ２のみを発現するＷＴマクロファージへの結合は示さないので、ヒトＴＲＥＭ２  ＢＡＣトランスジェニックマウスがヒトＴＲＥＭ２を発現することを示している。
【０６７０】
ヒトＴＲＥＭ２  ＢＡＣトランスジェニックマウスからのチオグリコール酸誘導マクロファージを、インビトロで、プレート結合抗ＴＲＥＭ２抗体９Ｆ５で約６０時間にわたって刺激することは、ＴＮＦ−アルファ分泌の有意な増加を誘導した（図２５Ｂ）。対照的に、抗体９Ｆ５は、ＷＴマウスからのチオグリコール酸誘導マクロファージに対して作用を有さなかった。
【０６７１】
加えて、ヒトＴＲＥＭ２  ＢＡＣトランスジェニックマウスからの骨髄由来マクロファージを、インビトロで、抗ＴＲＥＭ２抗体９Ｆ５で刺激することは、Ｄａｐ１２リン酸化を誘導した一方で、この作用は、対照抗体では観察されなかった（図２５Ｃ）。
【０６７２】
図２５の結果は、抗ＴＲＥＭ２抗体９Ｆ５がヒトＴＲＥＭ２と協働し、ＴＲＥＭ２媒介性シグナル伝達を誘導し得ることを示している。
【０６７３】
実施例６３：ＴＲＥＭ２抗体は、インビボで可溶性ＴＲＥＭ２と結合しない
物質及び方法
骨髄細胞系列においてヒトＴＲＥＭ２を発現するトランスジェニックＢＡＣマウスを、実施例６２に記載したとおりに作製した。
【０６７４】
ヒトＴＲＥＭ２  ＢＡＣトランスジェニックマウス（ｈｕＴＲＥＭ２  Ｔｇ）または野生型マウス（ＷＴ）に、抗ＴＲＥＭ２抗体９Ｆ５、抗ＴＲＥＭ２抗体Ｔ２１−９、またはアイソタイプ対照マウスＩｇＧ１抗体を２０ｍｇ／ｋｇで腹腔内注射した（ｎ＝３動物／群）。標準的な手順を使用して、血漿サンプルを注射から２日後に収集した。ヒトＴＲＥＭ２を特異的に検出するカスタムＥＬＩＳＡを使用して、ＷＴまたはＴＲＥＭ２  ＢＡＣトランスジェニックマウスからの血漿中の可溶性ＴＲＥＭ２を検出した。簡単に述べると、ＰＢＳ中の２ｕｇ／ｍｌのヒトＴＲＥＭ２特異的捕捉抗体（８Ｆ１１、ｍｓＩｇＧ）１００ｕｌを、高結合型９６ウェルＥＬＩＳＡプレート上で、終夜、４℃でインキュベートした。翌日、プレートを洗浄緩衝液（ＰＢＳ＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ）３００ｕｌで３回洗浄し、結合緩衝液（ＰＢＳ＋１％ＢＳＡ）３００ｕｌを添加し、室温（ＲＴ）で少なくとも１時間にわたってインキュベートした。血漿サンプル及び標準（組換えヒトＴＲＥＭ２−ＦＣ、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を結合緩衝液中で希釈し、プレートに添加し、１時間にわたって室温でインキュベートした。次いで、プレートを再び前のとおりに洗浄し、ビオチン化検出抗体（ヤギ抗ヒトＴＲＥＭ２、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を結合緩衝液中１：２０００希釈で添加し、１時間にわたって室温でインキュベートした。プレートを再び洗浄し、ストレプトアビジン−ＨＲＰと共に、結合緩衝液中で希釈された１：２００で、２０分間にわたって室温でインキュベートした。プレートを再び洗浄し、ＴＭＢ基質を添加し、発色するまでインキュベートした。反応を、２Ｎ硫酸を添加して停止させ、プレートをＢｉｏＴｅｋ  Ｓｙｎｅｒｇｙ（商標）Ｈ１プレートリーダーで読み取った。
【０６７５】
抗ＴＲＥＭ２抗体９Ｆ５が血漿中の可溶性ＴＲＥＭ２に結合し得るかどうかを試験するために、改良型ＥＬＩＳＡ構成を試験した。プレートを、ＰＢＳ中の９Ｆ５、Ｔ２１−９または対照ＩｇＧ抗体の２ｕｇ／ｍｌ溶液１００ｕｌで、終夜、４℃でコーティングした。翌日、プレートを洗浄緩衝液（ＰＢＳ＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ）３００ｕｌで３回洗浄し、結合緩衝液（ＰＢＳ＋１％ＢＳＡ）３００ｕｌを添加し、室温（ＲＴ）で少なくとも１時間にわたってインキュベートした。未処理ＴＲＥＭ２  ＢＡＣトランスジェニックマウスからの血漿サンプルを結合緩衝液中で希釈し、プレートに添加し、１時間にわたって室温でインキュベートした。次いで、プレートを再び前のとおりに洗浄し、ビオチン化検出抗体（ヤギ抗ヒトＴＲＥＭ２、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓまたはラット抗ｈｕ／ｍｓ  ＴＲＥＭ２、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を、結合緩衝液中１：２０００（ヤギＩｇＧで）または１：１０，０００（ラットＩｇＧで）で添加し、１時間にわたって室温でインキュベートした。プレートを再び洗浄し、ストレプトアビジン−ＨＲＰと共に、結合緩衝液中で希釈された１：２００で、２０分間にわたって室温でインキュベートした。プレートを再び洗浄し、ＴＭＢ基質を添加し、発色するまでインキュベートした。反応を、２Ｎ硫酸を添加して停止させ、プレートをＢｉｏＴｅｋ  Ｓｙｎｅｒｇｙ（商標）Ｈ１プレートリーダーで読み取った。
【０６７６】
結果
ＥＬＩＳＡアッセイからの結果は、Ｔ２１−９  ＴＲＥＭ２抗体の注射は、血漿中の可溶性ヒトＴＲＥＭ２のレベルの高度に有意な上昇をもたらす一方で、抗体９Ｆ５の注射は、血漿中の可溶性ヒトＴＲＥＭ２のレベルを上昇させないことを示している（図２６Ａ）。ＥＬＩＳＡは、ヒトＴＲＥＭ２を発現しないＷＴマウスでは、いずれの可溶性ＴＲＥＭ２も検出し得ず、このＥＬＩＳＡがヒトＴＲＥＭ２に特異的であり、マウスＴＲＥＭ２を認識しないことが確認された。これらの結果は、抗体Ｔ２１−９と対照的に、抗体９Ｆ５が、インビボで可溶性ＴＲＥＭ２のレベルを上昇させることができないことを示している。
【０６７７】
可溶性ＴＲＥＭ２に結合することができないので、抗体９Ｆ５は、血漿中の可溶性ＴＲＥＭ２のレベルを上昇させることができなかったと仮定された。抗体９Ｆ５を、ＥＬＩＳＡプレートにプレーティングして、その抗体が血漿からの内在性可溶性ＴＲＥＭ２を捕捉し得るかどうかを決定した。この場合も、可溶性ＴＲＥＭ２への結合を示すＴ２１−９とは対照的に、抗体９Ｆ５は、可溶性ＴＲＥＭ２に対して弱い結合しか示さなかった（図２６Ｂ）。これらの結果は、抗体９Ｆ５が、血漿中の可溶性ＴＲＥＭ２に弱くしか結合することができないことを示しており、このことは、抗体９Ｆ５がインビボで可溶性ＴＲＥＭ２を増加させることができないことを説明している。
【０６７８】
まとめると、この結果は、抗体９Ｆ５がインビボで可溶性ＴＲＥＭ２に有意に結合できないことを示している。このことは、可溶性ＴＲＥＭ２が、ＴＲＥＭ２抗体を捕捉して、それらを細胞ＴＲＥＭ２に結合できないようにし、したがって、ＴＲＥＭ２抗体の有効性を低下させ得るＴＲＥＭ２受容体の不活性なバージョンであると考えられるので、有利であり得る。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図４Ｄ】
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【図４Ｅ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【図７Ｄ】
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【図７Ｅ】
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【図７Ｆ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図８Ｄ】
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【図８Ｅ】
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【図８Ｆ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図９Ｃ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１０Ｃ】
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【図１０Ｄ】
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【図１０Ｅ】
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【図１０Ｆ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１１Ｃ】
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【図１１Ｄ】
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【図１１Ｅ】
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【図１１Ｆ】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１２Ｃ】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１３Ｃ】
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【図１３Ｄ】
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【図１３Ｅ】
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【図１３Ｆ】
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【図１３Ｇ】
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【図１３Ｈ】
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【図１３Ｉ】
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【図１３Ｊ】
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【図１３Ｋ】
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【図１３Ｌ】
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【図１３Ｍ】
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【図１３Ｎ】
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【図１３Ｏ】
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【図１３Ｐ】
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【図１３Ｑ】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６Ａ】
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【図１６Ｂ】
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【図１７Ａ】
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【図１７Ｂ】
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【図１７Ｃ】
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【図１７Ｄ】
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【図１７Ｅ】
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【図１７Ｆ】
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【図１７Ｇ】
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【図１７Ｈ】
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【図１７Ｉ】
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【図１７Ｊ】
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【図１７Ｋ】
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【図１７Ｌ】
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【図１７Ｍ】
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【図１７Ｎ】
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【図１７Ｏ】
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【図１７Ｐ】
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【図１７Ｑ】
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【図１７Ｒ】
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【図１７Ｓ】
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【図１７Ｔ】
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【図１７Ｕ】
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【図１７Ｖ】
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【図１７Ｗ】
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【図１７Ｘ】
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【図１７Ｙ】
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【図１８】
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【図１９Ａ】
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【図１９Ｂ】
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【図２０】
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【図２１Ａ】
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【図２１Ｂ】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４Ａ】
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【図２４Ｂ】
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【図２４Ｃ】
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【図２４Ｄ】
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【図２５Ａ】
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【図２５Ｂ】
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【図２５Ｃ】
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【図２６Ａ】
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【図２６Ｂ】
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【配列表】
2018537956000001.app
【国際調査報告】
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