(57)【要約】  本発明は、哺乳動物における疾患または障害に関連する関心対象のタンパク質を検出するための診断デバイス、ならびにこれらのデバイスを使用する方法に関する。特に、関心対象のタンパク質は、ある特定のミスフォールドタンパク質障害を有する疑いがあるまたはリスクがある哺乳動物を含めた哺乳動物における、かかる障害に関連するミスフォールドタンパク質であり得る。
2018527587.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物の生体試料中の少なくとも１種のタンパク質を検出するための診断デバイスであって、
ａ）試料受容材料、
ｂ）検出試薬、
ｃ）トラップ、
ｄ）毛細管床
を含み、
前記試料受容材料が、生体試料を受容することが可能であり、
前記検出試薬が、前記生体試料中に存在する少なくとも１種のタンパク質に反応性であり、
前記トラップが、前記試料受容材料と接触しており、前記トラップが、前記生体試料中の前記少なくとも１種のタンパク質に結合している前記検出試薬を、前記生体試料中の前記少なくとも１種のタンパク質に結合していない前記検出試薬から分離することができ、これによって、前記生体試料中の前記少なくとも１種のタンパク質に結合している前記検出試薬が前記トラップを通って流動することができ、前記生体試料中の前記少なくとも１種のタンパク質に結合していない前記検出試薬が前記トラップによって捕捉され、
前記毛細管床が、前記トラップと接触しており、前記生体試料が前記トラップを通って流動した後に、前記毛細管床が、前記生体試料を含有するように構成され、
前記試料受容材料、前記トラップ、および前記毛細管床が、順に接触するように構成されており、
前記少なくとも１種のタンパク質が前記生体試料中に存在するならば、前記毛細管床が検出試薬を表示する、診断デバイス。
【請求項２】
前記試料受容材料が前記検出試薬を含む、請求項１に記載の診断デバイス。
【請求項３】
前記検出試薬が、前記試料受容材料上または前記試料受容材料中にある、請求項１に記載の診断デバイス。
【請求項４】
前記検出試薬が乾燥形態である、請求項３に記載の診断デバイス。
【請求項５】
前記生体試料を前記試料受容材料に適用した後に、前記試料受容材料が前記検出試薬を前記生体試料中に放出する、請求項１に記載の診断デバイス。
【請求項６】
前記試料受容材料が、前記検出試薬を前記生体試料と混合するためのマトリックスである、請求項５に記載の診断デバイス。
【請求項７】
検出試薬を生体試料と混合した後に、前記試料受容パッドが、混合した検出試薬および生体試料を、前記試料受容パッドに隣接する前記毛細管床に放出する、請求項６に記載の診断デバイス。
【請求項８】
請求項１に記載の診断デバイスを入れる、筐体またはカセット。
【請求項９】
前記検出試薬が、ミスフォールドタンパク質、タンパク質凝集体、超分子タンパク質凝集体、ミスフォールドタンパク質の断片、タンパク質凝集体の断片、超分子タンパク質凝集体の断片、これらの混合物、および前記混合物の断片からなる群から選択される少なくとも１種のタンパク質と結合する、請求項１に記載の診断デバイス。
【請求項１０】
前記ミスフォールドタンパク質が、α１アンチトリプシン（セルピンＡ１）、セルロプラスミン、重鎖ＩｇＧ、軽鎖ＩｇＧ、インターフェロン誘導タンパク質６−１６（ＩＦ１６−６、Ｇ１Ｐ３）、アルブミン、およびこれらの断片からなる群から選択される、請求項９に記載の診断デバイス。
【請求項１１】
前記少なくとも１種のタンパク質がコンゴーレッド親和性である、請求項１に記載のデバイス。
【請求項１２】
前記検出試薬が、アゾ染料、チオフラビンＴおよびアゾ染料の類似体からなる群から選択される、請求項１に記載の診断デバイス。
【請求項１３】
前記アゾ染料がコンゴーレッドである、請求項１２に記載の診断デバイス。
【請求項１４】
前記コンゴーレッドが前記試料受容材料上に予め担持されている、請求項１３に記載の診断デバイス。
【請求項１５】
前記試料受容材料が、ニトロセルロース、セルロース、ガラス繊維、綿、メッシュ織物、不織布材料、多孔性プラスチック、ポリマーおよびポリエステルからなる群から選択される材料を含む、請求項１に記載の診断デバイス。
【請求項１６】
前記ポリエステルがポリエチレンである、請求項１５に記載の診断デバイス。
【請求項１７】
前記トラップが、ニトロセルロース、セルロース、ガラス繊維、綿／ガラス繊維、メッシュ織物、不織布材料、ポリマー、およびポリスルホンからなる群から選択される材料を含む、請求項１に記載の診断デバイス。
【請求項１８】
前記トラップがセルロースである、請求項１７に記載の診断デバイス。
【請求項１９】
前記毛細管床が、ニトロセルロース、クロマトグラフィー用ペーパー、ポリスルホン、およびセルロースからなる群から選択される材料を含む、請求項１に記載の診断デバイス。
【請求項２０】
哺乳動物の生体試料中の少なくとも１種のタンパク質を検出する方法であって、
ａ）前記哺乳動物の生体試料を、請求項１に記載の前記診断デバイスの前記試料受容材料に、前記少なくとも１種のタンパク質を前記検出試薬に結合させるのに十分な時間および条件下で適用すること；および
ｂ）前記毛細管床上で検出試薬の存在を検出すること
を含み、前記毛細管床上の検出試薬の存在が、前記生体試料中に存在する前記少なくとも１種のタンパク質の存在を示す、方法。
【請求項２１】
前記哺乳動物が、タンパク質ミスフォールディング障害を有する疑いがある、またはタンパク質ミスフォールディング障害を有するリスクがある、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記少なくとも１種のタンパク質が、ミスフォールドタンパク質、凝集タンパク質、超分子凝集タンパク質、ミスフォールドタンパク質の断片、凝集タンパク質の断片、超分子凝集タンパク質の断片、これらの混合物、および前記混合物の断片からなる群から選択される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記ミスフォールドタンパク質が、α１アンチトリプシン（セルピンＡ１）、セルロプラスミン、重鎖ＩｇＧ、軽鎖ＩｇＧ、インターフェロン誘導タンパク質６−１６（ＩＦ１６−６、Ｇ１Ｐ３）、アルブミン、およびこれらの断片からなる群から選択される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記タンパク質ミスフォールディング障害が、子癇前症、アルツハイマー病、プリオン病およびパーキンソン病からなる群から選択される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２５】
前記子癇前症が、軽症の子癇前症、重症の子癇前症、非定型子癇前症、血液透析−肝酵素上昇−血小板数減少（ＨＥＬＬＰ）症候群および子癇からなる群から選択される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記生体試料が、尿、血液、唾液、組織、間質液、血清、血漿、脳脊髄液、羊水および抽出物質からなる群から選択される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２７】
前記哺乳動物が妊娠中である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２８】
前記妊娠中の哺乳動物が、ヒト、霊長類および遺伝子操作された哺乳動物からなる群から選択される、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記哺乳動物がヒトである、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記ヒトが、妊娠およそ８週から４２週である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記哺乳動物が分娩後である、請求項２１に記載の方法。
【請求項３２】
前記少なくとも１種のタンパク質が、定性的結果または半定量的結果を得るために可視化によって検出されてもよいし、または半定量的または定量的結果を得るために測定によって検出されてもよい、請求項２２に記載の方法。
【請求項３３】
請求項１に記載のデバイスを含む、キット。
【請求項３４】
標準物質または対照試薬をさらに含む、請求項３３に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
米国産科婦人科学会によると、子癇前症を含めた妊娠の高血圧障害は、世界中で妊娠のおよそ１０％を悪化させ、産婦および胎児の罹患および死亡の主要な原因である［参考文献：Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ  ｉｎ  Ｐｒｅｇｎａｎｃｙ、Ｒｅｐｏｒｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｏｂｓｔｅｔｒｉｃｉａｎｓ  ａｎｄ  Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｉｓｔｓ’Ｔａｓｋ  Ｆｏｒｃｅ  ｏｎ  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ  ｉｎ  Ｐｒｅｇｎａｎｃｙ、Ｏｂｓｔｅｔｒｉｃｓ  ａｎｄ  Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｙ  １２２  第１２２巻、第５号、２０１３年１１月（ＡＣＯＧ  ２０１３年ガイドライン）］。さらに、これらの状態は、早産および関連する周産期合併症の主要な原因である［参考文献：Ａｎａｎｔｈ  ＣＶ、Ｖｉｎｔｚｉｌｅｏｓ  ＡＭ．Ｊ  Ｍａｔｅｒｎ  Ｆｅｔａｌ  Ｎｅｏｎａｔａｌ  Ｍｅｄ．２００６年：１９（１２）：７７３−８２］。妊娠中の高血圧は、１）子癇前症−子癇、２）慢性高血圧、３）混合型子癇前症を有する慢性高血圧、または４）妊娠高血圧に分類することができる。
【０００２】
子癇前症−子癇は、産婦の死亡、早産、および出産のための医療費の上昇の主要な原因である、妊娠に関係する状態であるが、ほとんど解明されていない。世界的に、７６，０００人の妊婦の死が、子癇前症に起因する。子癇前症は、米国では妊娠に関係する死の５分の１に関与し、この状態は、発作、臓器不全および死に至ることがある。最も一般的には妊娠約２０週後に発症し、女性は産褥期を通してリスクがある。この状態は、子癇として知られる発作またはけいれんを引き起こすことがある。子癇前症は、軽症、重症、重症度が低いもの、重症度が高いものに分類するか、重症の特徴のない子癇前症、もしくは重症の特徴のある子癇前症に分類することができる。子癇前症のサブタイプであるＨＥＬＬＰ症候群は、溶血、肝酵素上昇および血小板数減少の症候を有する患者として特徴付けられる。普通ではない症候が集まって存在する子癇前症は、非定型子癇前症（ａｔｙｐｉｃａｌ  ｐｒｅｅｃｌａｍｐｓｉａ）として知られている。
【０００３】
唯一の公知の治療法は赤ん坊を分娩させることであり、その結果として、子癇前症は、医学的適応による早産の主要な原因であり、すべての早産の１７％と推定されている。米国の医療制度の費用は、子癇前症による分娩および母親および乳児の看護のために、１３０億ドルを超えると推定されている。現在、子癇前症は、その症候、すなわちほとんどの場合、高血圧および尿中タンパク質の存在によってしか特徴付けられないために、診断が依然として課題である。子癇前症の診断の改善に向けた研究は一般に、上方または下方制御される公知の血中バイオマーカーを探索してきたが、世界的に有用な診断薬をもたらした発見はほとんどなく、あったとしてもごくわずかである。
【０００４】
子癇前症の診断に起因する医学的適応による分娩（ＭＩＤＰＥ）が必要とされる、重症の子癇前症を有する女性の尿検体を利用する研究および質量分析による不偏タンパク質プロファイリング手法から、ＳＥＲＰＩＮＡ−１およびアルブミンの独特な非ランダムな切断産物が見出された。ＳＥＲＰＩＮＡ−１の断片がミスフォールドして超分子凝集体を形成する傾向があるという知見から、子癇前症はアルツハイマー病とよく似たミスフォールディング障害であり得るという提案が導かれた［米国特許第８，２６３，３４２号明細書、およびＢｕｈｉｍｓｃｈｉら、Ａｍ  Ｊ  Ｏｂｓｔｅｔ  Ｇｙｎｅｃｏｌ．２００８年１１月；１９９（５）：５５１．ｅ１−５５１．１６．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ａｊｏｇ．２００８．０７．００６を参照されたい］。
さらに、ミスフォールドタンパク質がコンゴーレッド（ＣＲ）色素に結合すること（「コンゴーレッド親和性」）に基づいて、ミスフォールドタンパク質が子癇前症を有する女性の尿から見出された。これらの（単数または複数の）ミスフォールドタンパク質または立体配座状態に依存する抗アミロイド凝集体抗体に結合した「超分子凝集体」は、子癇前症の女性由来の胎盤における高活性なアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）プロセシング経路およびアミロイド様タンパク質沈着物に関連するものであった。［Ｂｕｈｉｍｓｃｈｉら、Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．６、２４５ｒａ９２（２０１４年）を参照されたい］。ドットブロット親和性アッセイによって洗浄後に保持されたＣＲの割合（ミスフォールドタンパク質に結合することに起因する）が測定され（元のＣＲの割合（％）として）、結果はコンゴーレッド保持率（％）（ＣＲＲ）として報告された。
【０００５】
８０人の女性（４０人は医学的適応による分娩が必要とされる人であり、４０人は「対照」である健康な妊娠であった）の可能性調査において、ＣＲＲ（％）は、重症の子癇前症の尿の方が有意に高く（Ｐ＜０．００１）、感度および特異度は１００％であった。５８２人の女性の検証試験（横断的および縦断的コホート中）において、重症の子癇前症および既存の高血圧または蛋白尿に併発した子癇前症を有する女性は、すべての他の臨床的分類よりＣＲＲ（％）が高かった（Ｐ＜０．００１）。さらに、軽症の子癇前症と診断された女性の７５％、重症な子癇前症と診断された女性の８９％、および混合型子癇前症と診断された女性の９１％のＣＲＲの結果は、他のすべての群より高かった（Ｐ＜０．０５）。全体的に、ＣＲＲは単独で、ＭＩＤＰＥを必要とする子癇前症の予測において、検証コホート中で８５．９％の感度および８５．００の特異度、９５％の陽性尤度比および９５％の陰性尤度比を有していた。ＣＲＲは、子癇前症に現在使用されている臨床スクリーニング法に優っていた（米国産科婦人科学会（ＡＣＯＧ）推奨カットオフにおいて、血圧または尿中タンパク質ディップスティックと比較するとＰ＜０．００１；尿中タンパク質と組み合わせた血圧と比較するとＰ＝０．００４）（Ｂｕｈｉｍｓｃｈｉら、Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．６、２４５ｒａ９２（２０１４年）および米国特許第９，２２９，００９号明細書）。
【０００６】
コンゴーレッドがセルロースとも結合することを使用した簡単な紙ベースのアッセイが作成された。正常な尿−色素混合物を試験紙に適用すると、紙の中のセルロースに結合している色素が緊密に中央に寄った赤い点として視覚化される。対照的に、コンゴーレッド親和性の尿中タンパク質を有する女性からの尿だと、色素はタンパク質に結合しているためにもはやセルロースには結合せず、代わりに拡散するように分散し、ハローとして視覚化される。（米国特許出願公開第２０１５０２９３１１５号明細書を参照されたい。）子癇前症ではないことを確認するために陣痛および分娩トリアージセンターの診察を受けた３４６人の女性の臨床研究では、患者の尿がＣＲによる簡単な紙アッセイ（ＣＲＤ）を使用して試験された。ＣＲＤ試験は、ＡＣＯＧ  ２０１３ガイドラインによって定義される通りの子癇前症の診断に対して、７９％の感度、８９％の特異度、９１％の陰性適中率、７４％の陽性適中率であることが実証された［参考文献：Ｒｏｏｄら  ２０１６年  ＡＪＯＧ  ２１４巻、第１号、別冊、Ｓ２４−Ｓ２５頁］。ＣＲＤ試験は、尿を試験紙に適用する前に尿を色素と混合するステップが必要であり、その結果を読取って解釈することが難しいことがある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】米国特許第８，２６３，３４２号明細書
【特許文献２】米国特許第９，２２９，００９号明細書
【特許文献３】米国特許出願公開第２０１５／０２９３１１５号明細書
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ  ｉｎ  Ｐｒｅｇｎａｎｃｙ、Ｒｅｐｏｒｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｏｂｓｔｅｔｒｉｃｉａｎｓ  ａｎｄ  Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｉｓｔｓ’Ｔａｓｋ  Ｆｏｒｃｅ  ｏｎ  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ  ｉｎ  Ｐｒｅｇｎａｎｃｙ、Ｏｂｓｔｅｔｒｉｃｓ  ａｎｄ  Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｙ  １２２  第１２２巻、第５号、２０１３年１１月（ＡＣＯＧ  ２０１３年ガイドライン）
【非特許文献２】Ａｎａｎｔｈ  ＣＶ、Ｖｉｎｔｚｉｌｅｏｓ  ＡＭ．Ｊ  Ｍａｔｅｒｎ  Ｆｅｔａｌ  Ｎｅｏｎａｔａｌ  Ｍｅｄ．２００６年：１９（１２）：７７３−８２
【非特許文献３】Ｂｕｈｉｍｓｃｈｉら、Ａｍ  Ｊ  Ｏｂｓｔｅｔ  Ｇｙｎｅｃｏｌ．２００８年１１月；１９９（５）：５５１．ｅ１−５５１．１６．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ａｊｏｇ．２００８．０７．００６
【非特許文献４】Ｂｕｈｉｍｓｃｈｉら、Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．６、２４５ｒａ９２（２０１４年）
【非特許文献５】Ｒｏｏｄら  ２０１６年  ＡＪＯＧ  ２１４巻、第１号、別冊、Ｓ２４−Ｓ２５頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
上記のことを考慮すると、妊娠中の哺乳動物、とりわけヒト女性において、子癇前症の可能性を検出するためにポイントオブケアで使用可能である簡単な診断デバイスに対する、満たされていない非常に重要な要求が、依然として存在している。かかるデバイスは、女性が子癇前症のリスクを有しているまたは子癇前症を有しているのかどうか、従って直ちに治療的介入を受けるべきかどうかについて早期に情報を提供することによって、数千の妊娠中の女性だけでなく彼女らの胎児の命を救う可能性がある。
【００１０】
本明細書で言及されたすべての特許および刊行物は、これらの全体が参照により本明細書に組込まれる。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
（発明の要旨）
本発明は、哺乳動物の生体試料中の少なくとも１種のタンパク質を検出するための診断デバイスを含む。該デバイスは、ａ）試料受容材料、ｂ）検出試薬、ｃ）トラップ、ｄ）毛細管床を含み、試料受容材料は、生体試料を受容することが可能であり；検出試薬は、生体試料中に存在する少なくとも１種のタンパク質に反応性であり（すなわち結合し）；トラップは、試料受容材料と接触しており、生体試料中の少なくとも１種のタンパク質に結合している検出試薬を、生体試料中の少なくとも１種のタンパク質に結合していない検出試薬から分離することができ、これによって、生体試料中の少なくとも１種のタンパク質に結合している検出試薬がトラップを通って流動することができ、生体試料中の少なくとも１種のタンパク質に結合していない検出試薬がトラップによって捕捉され；毛細管床は、トラップと接触しており、生体試料がトラップを通って流動した後に生体試料を含有するように構成されている。毛細管床は、生体試料中に少なくとも１種のタンパク質が検出された場合、結合されている検出試薬を表示する。試料受容材料、トラップ、および毛細管床は、順に接触するように構成される。デバイスの試料受容材料は、例えば検出試薬を含んでもよい。また、検出試薬は、試料受容材料上にあっても試料受容材料内にあってもよい。
【００１２】
さらに、デバイスは、筐体またはカセット内に入れられていてもよい。筐体またはカセットは、生体試料を適用するためのウェル（または他の実体）を含んでもよく、得られた結果を読取るための窓をさらに含んでいてもよい。デバイスは、種々の臨床および非臨床の環境において、または臨床試験室において、ポイントオブケアで使用されてもよい。
【００１３】
上で述べたように、検出試薬は、生体試料中の少なくとも１種のタンパク質に結合する。この少なくとも１種のタンパク質は、例えば、ミスフォールドタンパク質、タンパク質凝集体、超分子タンパク質凝集体、ならびにこれらの混合物および各タンパク質の断片であってもよい。少なくとも１種のタンパク質は、βシート構造を含んでもよい。加えて、少なくとも１種のタンパク質は、コンゴーレッド親和性であってもよい。ミスフォールドタンパク質は、例えば、α１アンチトリプシン（ＳｅｒｐｉｎＡ１）、セルロプラスミン、重鎖ＩｇＧ、軽鎖ＩｇＧ、インターフェロン誘導性タンパク質６−１６（ＩＦ１６−６、Ｇ１Ｐ３）、アルブミン、これらの混合物もしくはこれらの断片、または各タンパク質の断片を含んでもよい。しかし、ミスフォールドタンパク質は、これらのタンパク質に限定されない。例えば、ミスフォールドタンパク質は、タンパク質ミスフォールディング障害を引き起こすかまたは該障害に関連する任意のタンパク質（またはタンパク質の組合わせ）であってもよい。
【００１４】
検出試薬は、例えば、アゾ染料、チオフラビンＴ、またはアゾ染料の類似体であってもよい。本発明に関連して利用されてもよいアゾ染料の例は、コンゴーレッド（すなわち、４−アミノ−３−［４−［４（１−アミノ−４−スルホナト−ナフタレン−２−イル）ジアゼニルフェニル］フェニル］ジアゼニル−ナフタレン−１−スルホン酸）二ナトリウムである。（コンゴーレッドの類似体も利用されてもよい。例えば、式Ｃ３２Ｈ２２Ｎ６Ｎａ２Ｏ６Ｓ２の第二級ジアゾ染料も、本発明のデバイスに関連して本明細書に記載される検出試薬として使用されてもよい。）コンゴーレッドは、上で言及した試料受容材料上に予め担持されていてもよい。
【００１５】
本発明のデバイスの試料受容材料は、例えば、ニトロセルロース、セルロース、ガラス繊維、綿、メッシュ織物、不織布材料、多孔性プラスチック、ポリマーおよび／またはポリエステルを含んでもよい。ポリエステルは、例えばポリエチレンであってもよい。
【００１６】
本発明のデバイスのトラップは、例えば、ニトロセルロース、セルロース、ガラス繊維、綿／ガラス繊維、メッシュ織物、不織布材料、ポリマー、および／またはポリスルホンを含んでもよい。
【００１７】
本発明のデバイスの毛細管床は、例えば、ニトロセルロース、クロマトグラフィー用ペーパー、ポリスルホンおよび／またはセルロースのような材料を含んでもよい。
【００１８】
本発明のデバイスは、およそ１０分以内、好ましくはおよそ５分以内、より好ましくはおよそ３分以内、最も好ましくは１分以内で試験結果を生じることに留意するべきである。さらに、定性的または半定量的な結果を可視化によって得ることができる。その上、所望であれば、少なくとも１種のタンパク質の量が測定されるような、半定量的または定量的な結果を得ることもできる。
【００１９】
本発明はまた、上で述べた通りの診断デバイスであって、生体試料中のミスフォールドタンパク質を検出するために、生体試料中の凝集タンパク質を検出するために、および／または生体試料中の超分子凝集タンパク質を検出するために利用される診断デバイスを含み、ここでは、該試料は、哺乳動物、例えば、ヒト、霊長類、または遺伝子操作された哺乳動物から得られる。ある場合では、該哺乳動物は、妊娠中であり得る。上で述べた通りのデバイスは、子癇前症を検出するために使用されてもよく、これは、検出試薬が、生体試料に含有されるミスフォールドタンパク質、凝集タンパク質および／または超分子凝集タンパク質（すなわち、妊娠中の哺乳動物における子癇前症に関連するタンパク質）に反応性である（すなわち結合する）ときに診断され得る。デバイスのトラップは、デバイスの検出試薬と競合的に結合するように構成されてもよい。デバイスは、試料受容材料、トラップおよび毛細管床を含む、ラテラルフローデバイスまたはストリップとして構成されてもよい。
【００２０】
加えて、本発明は、哺乳動物の生体試料中の少なくとも１種のタンパク質を検出する方法であって、ａ）前記哺乳動物の生体試料を、少なくとも１種のタンパク質を検出試薬に結合させるのに十分な時間および条件下で、本発明の診断デバイスの試料受容材料に適用するステップ；およびｂ）毛細管床上で検出試薬の存在を検出するステップを含み、毛細管床上の検出試薬の存在が、前記生体試料中に存在する少なくとも１種のタンパク質の存在を示す方法を包含する。
【００２１】
該方法は、タンパク質ミスフォールディング障害を有するかまたはタンパク質ミスフォールディング障害を有するリスクのある哺乳動物の生体試料中の少なくとも１種のタンパク質を検出するために使用されてもよい。この方法は、（ａ）哺乳動物の生体試料を、少なくとも１種のタンパク質を検出試薬に結合させるのに十分な時間および条件下で、上で述べた診断デバイスの試料受容材料に適用するステップ、ならびに（ｂ）結合している検出試薬の存在を毛細管床上で検出するステップを含み、毛細管床上の検出試薬の存在は、生体試料中に存在する少なくとも１種のタンパク質の存在を示し、そして、該哺乳動物がタンパク質ミスフォールディング障害を有することを示す。ここでも、少なくとも１種のタンパク質は、例えば、ミスフォールドタンパク質、凝集タンパク質、超分子凝集タンパク質、もしくはこれらの混合物、またはコンゴーレッド親和性タンパク質のような、βシート構造を有するタンパク質であってもよい。少なくとも１種のタンパク質は、コンゴーレッド親和性であってもよく、および／またはβシート構造を有していてもよい。より具体的には、ミスフォールドタンパク質は、例えば、α１アンチトリプシン（ＳｅｒｐｉｎＡ１）、セルロプラスミン、重鎖ＩｇＧ、軽鎖ＩｇＧ、インターフェロン誘導性タンパク質６−１６（ＩＦ１６−６、Ｇ１Ｐ３）、アルブミン、これらの混合物もしくは断片、または各タンパク質の断片であってもよい。タンパク質ミスフォールディング障害は、例えば、子癇前症、アルツハイマー病、プリオン病またはパーキンソン病であり得る。タンパク質ミスフォールディング障害として特徴付けられる他の疾患または状態に見出されるミスフォールドタンパク質も、本発明のデバイスを使用して検出され得る。本発明のデバイスを使用する子癇前症の診断に関して、例えば、軽症の子癇前症、重症の子癇前症、非定型子癇前症、血液透析（ｈｅｍｏｄｉａｌｙｓｉｓ）−肝酵素上昇−血小板数減少（ＨＥＬＬＰ）症候群および子癇を含めた異なる形態の子癇前症が診断されてもよい。さらに、患者は、妊娠の高血圧障害を患っていてもよい。よって、本方法は、慢性高血圧もしくは妊娠高血圧もしくは他の原因による高血圧のような高血圧状態から子癇前症を鑑別するように、または上で述べた子癇前症のタイプを鑑別するように、妊娠のある特定の高血圧障害を鑑別診断するために利用されてもよい。
【００２２】
上の方法に使用され、試料受容パッドに適用される生体試料は、例えば、尿（クリーンキャッチすなわち自然に採尿したもの）、血液、唾液、組織、間質液、血清、血漿、脳脊髄液、羊水、または抽出物質（例えば、鼻汁、耳垢、糞便物質、および組織から抽出されたもの）であってもよい。該方法は、哺乳動物、例えば、ヒト、霊長類および遺伝子操作された哺乳動物からの生体試料に関連して利用される。哺乳動物は、妊娠中であり得る。ヒトの場合、該方法は、妊娠およそ８週から４２週（すなわち在胎週齢）、好ましくは妊娠約１８から４１週、より好ましくは妊娠約２０から４１週または２０週から分娩までの妊婦に関連して利用されてもよい。しかし、本発明の方法はまた、分娩後の哺乳動物に関連して利用されてもよい。該方法によって該デバイスを使用して検出される少なくとも１種のタンパク質は、定性的または半定量的結果を得るために可視化によって検出されても、半定量的または定量的結果を得るために測定によって検出されてもよいことが留意されるべきである。可視化の後で、少なくとも１種のタンパク質は、半定量的または定量的結果を得るために測定されてもよい。
【００２３】
加えて、本発明は、上述のデバイスを含むキットを含む。このキットは、標準物質または対照試薬だけでなく、該デバイスを使用するための指示書も含んでもよい。また、該キットは、試料のアプリケーターをも含んでもよい。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】カセットまたは筐体内の本発明のデバイスの試験ストリップの写真を示す図である。図１の左側の枠は、生体試料と接触する前の筐体内のデバイスを図示しており、該デバイスは、試料ウェル、結果窓、および対照線を有する。右側の枠は、子癇前症に関連するミスフォールドタンパク質について陰性、弱陽性、および陽性であることが分かっている尿試料を試験したデバイスの結果を示している。
【図２】本発明のデバイスの試験ストリップの実施形態の例を示す図である。ストリップは、対照色素、表示ストリップ（すなわち毛細管床）、トラップ（例えば、３個の材料）、第２の試料パッド（すなわち試料受容材料）、第１の試料パッド（すなわち試料受容材料）および試料パッド上で乾燥させた色素を含む。
【図３】本発明の診断デバイスのある実施形態を示す図である。図３Ａは、試料パッド、トラップおよび表示ストリップを有する上面図である。図３Ｂは、側面から見た、図３Ａと同じ実施形態を示す図である。試料パッド、トラップおよび表示ストリップは、突き合わされていてもよい。図３Ｃは、試料パッド、トラップおよび表示ストリップが互いに重なり合っている実施形態を示す（側面図）。
【図４】試験ストリップ内の異なる材料構成を示す図である。図４Ａは、２つの試料パッド、トラップおよび表示ストリップ（毛細管床）を順に有し、各部品が隣接する部品と重なり合っている、本発明の代替実施形態を示す図である。図４Ｂは、試験ストリップ内の異なる材料構成を示す図であり、順に重なり合う、２つの試料パッド、３重トラップおよび表示ストリップを有し、各部品が隣接する部品と重なり合っている、本発明の別の代替実施形態を示す図である。
【図５】本発明の試験ストリップのディップスティック構成の例を示す図である。この実施形態は、試験ストリップの上面上にカバーテープを有するように構成される。試験ストリップの上部では、テープは不透明色であり、ストリップを把持するために使用されてもよい。中央では、テープは透明であり、結果を見るための窓となる。テープは、透明な窓が、例えば、トラップのおよそ１０ｍｍ上になるように置かれてもよい。窓部分のテープは、結果を容易に見ることができるように、ある色（例えば、白）によって囲まれていてもよい。トラップの下では、テープは、トラップを覆うために不透明色である。ストリップの最下部で、テープは、ストリップのどちらの端部を試験試料中に浸すのかを示す矢印を表示してもよく、試験ストリップを試料中に浸す最大レベルを示す線を表示してもよい。試験ストリップの下端部には、浸漬したときに試験試料の吸い上げが容易になるように、カバーテープがなくてもよい。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
本発明は、デバイス、およびこのデバイスを利用する方法である。より具体的には、該デバイスは、生体検体中の関心対象のタンパク質を検出するために幾つかの臨床および非臨床の環境において使用することができるラテラルフロークロマトグラフィー迅速試験である。該デバイスは、哺乳動物においてタンパク質ミスフォールディング障害を検出するために使用することができる。哺乳動物には、１種以上のかかる障害を有する疑いまたはリスクがあり得る。
【００２６】
該デバイスは、本明細書に記載する幾つかの異なる実施形態を有する。基本的に、これは、生体試料中の関心対象のタンパク質（１種または複数種）を検出するための試験ストリップを含む（例えば、図１を参照されたい）。検出は、連続した反応群を活用して行われる。試験ストリップは、毛細管現象を有する１本のラテラルフローアッセイまたはクロマトグラフィー用材料、およびクロマトグラフィー用溶媒の輸送が開始する第１の端部を有する。これは、クロマトグラフィー用溶媒の輸送が終了する第２の端部も有する。該ストリップは、第１の端部と第２の端部との間に配置される複数のゾーンまたは領域を含む（例えば、図２および３を参照されたい）。該ゾーンは、検出試薬、例えば色素を染み込ませる第１のゾーンを含む。この検出試薬は、生体試料中の関心対象のタンパク質（１種または複数種）と特異的に結合する。第１のゾーンはまた、生体試料を受容する。これと比較して、第１のゾーンの下流にある第２のゾーンは、生体試料中の関心対象のタンパク質（１種または複数種）と結合している検出試薬を第３のゾーンに輸送させながら、生体試料中の関心対象のタンパク質（１種または複数種）と結合していない検出試薬を保持する。試験ストリップの第３のゾーンは、第２のゾーンの下流に位置し、試料が第２のゾーンを通った後に、それを受容する。第３のゾーンは、試料中に関心対象のタンパク質が存在すれば、検出試薬を表示する。これは、生体試料中のタンパク質（１種または複数種）の測定値として検出試薬結合タンパク質を検出する手段も含む。一実施形態では、該デバイスは、患者からの生体試料中のミスフォールドタンパク質の存在を判断し、患者がタンパク質ミスフォールディング障害を有するか否かを判断することを可能にする。タンパク質（１種または複数種）の存在は、可視化によって定性的または半定量的に判定することができ、またはデバイス内に存在し得る測定実体を使用することによって半定量化または定量化してもよい。生体試料が第１のゾーンに適用された後、第１のゾーンは試料中に検出試薬を放出し、第２のゾーンは、結合していない検出試薬からタンパク質（１種または複数種）に結合している検出試薬を分離し、結合している検出試薬だけを第３ゾーンに輸送させ、次いで第３のゾーンは、結合している検出試薬を見るまたは測定するために表示する。第１のゾーンは、試料受容材料であってもよい。第２のゾーンは、トラップであってもよい。第３のゾーンは、毛細管床または表示ストリップであってもよい。
【００２７】
デバイスの具体的な要素または構成要素、およびこれらの要素の特性または性質は、以下の通りに詳細に説明される。
【００２８】
デバイスの構成要素に使用される材料
試料受容材料、トラップ、および毛細管床は、同一の材料または異なる材料から作製することができる。材料は、一般に、ラテラルフローデバイスおよびクロマトグラフィーの技術分野で公知である［参考文献：ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、ビレリカ、ＭＡから入手可能な、ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｒａｐｉｄ  Ｌａｔｅｒａｌ  Ｆｌｏｗ  Ｔｅｓｔ  Ｓｔｒｉｐｓ  Ｃｏｎｓｉｄｅｒａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔを参照されたい］。膜は、毛細管流動に影響を与え、したがって試薬の沈着およびアッセイ性能に影響を与える物理的および化学的性質に基づいて選択される。これらの材料として、例えば、ニトロセルロース、ろ紙、クロマトグラフィー用ペーパー、セルロース、可塑性ポリマー、非対称ポリスルホン膜、綿、リンターおよび／またはガラス繊維、ポリエステル、ポリエチレン、ならびにポリスルホンが挙げられるが、これらに限定されない。膜は、例えば、ニトロセルロース、ポリフッ化ビニリデン、ナイロン、およびポリエーテルスルホンを含めた、ポリマーから作製されていてもよい。パッド材料を試料受容材料として使用して、試料が制御されて一様に受容されるように、またデバイスの隣接するストリップ材料に流れやすくなるようにすることが多い。パッド材料は多孔質であり、セルロース（すなわち、ろ紙）、ガラス繊維、メッシュ織物および合成不織布材料、またはポリエステルで作製されていることが多い。特に、試料中に含有される無関係の物質をアッセイしようとする試料の部分から分離して取り出す（例えば、細胞物質を流体から分離して取り出す）ことが望ましいならば、フィルターマトリックスが試料の受容に使用されてもよい。これらのフィルターマトリックスは、例えば、セルロース、非対称ポリスルホン膜（Ｖｉｖｉｄ（商標）血漿分離膜および非対称サブミクロン（ＢＴＳ）ポリスルホン膜が挙げられるが、これらに限定されない）であってもよい。吸収パッドは、例えばデバイスのストリップの端部のウィック（ｗｉｃｋ）として、ラテラルフローストリップを通して試料を引き寄せるために使用することができ、またアッセイされる試料の量を増加させて、アッセイの感度を高めることができる。これらの吸収パッドは、セルロースまたはコットンリンターであることが多く、厚さ、圧縮率、および総容積の均一性に基づいて最適に選択される。ストリップ全体は、裏当てカード上に組立てられてもよく、該カードは、プラスチック製裏材および接着剤からなるカードであることが多い。これらの様々な材料は、本明細書に記載する通りのラテラルフローデバイスにおける特定の目的のために考えられることが多いが、各材料は、本発明の受容材料、トラップ、および表示ストリップの目的に適した性質ごとに考慮することができる。材料のさらなる考察については実施例を参照されたい。
【００２９】
試験ストリップ、具体的には表示ストリップの構成に利用される他の材料は、ラテラルフロー技術およびクロマトグラフィーの技術分野で公知である。
【００３０】
デバイスの要素または構成要素
試料受容材料（試料パッド）
デバイスの第１の要素（以降、試料受容材料または試料パッドと称する）は、スポンジとしての役割を果たし、試験しようとする過剰な試料流体を保持する。受容材料は試料を吸収するだけでなく、これを隣接する次の材料に向かって流動させるすなわち吸い上げることができる。受容材料は、典型的には、試料中に存在し得る関心対象のタンパク質だけでなく検出試薬（例えば色素）に対しても不活性であり、よってこれらと反応しないので、タンパク質および検出試薬を、該材料を通ってラテラルフローデバイス内の隣接する材料に向かって流動させるすなわち吸い上げることができる。
【００３１】
試料受容材料は、哺乳動物もしくは患者からの試料中に浸されてもよく、または代替的に、試料が、試料受容材料に間接的もしくは直接的に適用されてもよい。試料は、例えば、計量チップを有するスポイト、ピペット、ホールピペット、または患者の試料を繰り返して分注することができるピペットによって、試料受容材料に適用されてもよい。試料受容材料が生体試料中に浸されるように構成されているならば（例えば、図５を参照されたい）、試料受容材料は比較的長くてもよい（例えば、約１０ｍｍであるが、これに限定されない）。試料受容材料が、例えば、スポイトまたはピペットによって適用された試料を受容するように構成されているならば、試料受容材料は比較的短くてもよい（約５ｍｍから約１０ｍｍの間であるが、これに限定されない）。一般的には、幅は、２ｍｍから１０ｍｍであってもよく、最も一般的には、２．５から５ｍｍ（±０．５ｍｍ）であってもよい。試料受容材料の長さおよび幅の変動は可能であり、カセットまたは筐体のサイズならびに検出試薬と十分に混合する生体試料の能力のような要因に依存する。
【００３２】
特に、試料受容パッドは、生体試料と検出試薬（例えば、色素）が自由に混合し得る毛細管マトリックスとしての役割を果たす。試料パッドは、分析物（例えば、検出しようとする生体試料中の関心対象のタンパク質）と検出試薬との間の最適化された化学反応に適した、乾燥形態の検出試薬も有していてもよい。検出試薬は、試料受容材料上に予め担持されていてもよい。一実施形態では、生体試料（例えば、尿）は、試料受容パッドに添加されると検出試薬を溶解し、次いで、試料と検出試薬色素との混合物は、試料パッドを通って流動することによって、デバイスを横断してトラップなどの隣接する材料まで輸送される。
【００３３】
代替的に、試料パッドは、一連の２つ以上の試料パッドを含む（例えば、図４を参照されたい）。例えば、第１のパッドが試料を受容し、第２が検出試薬を含有してもよく、それによって、生体試料は、第１の要素（パッド）から、関心対象の分析物と検出試薬との間の最適化された化学反応に適した乾燥形式の検出試薬を含有する第２の要素（パッド）に移動する。２つ以上の試料受容材料が利用されるならば、どれか１つが検出試薬を含んでもよい。好ましくは、第１の試料受容材料が検出試薬を含み、第２の試料受容材料は含まない。
【００３４】
さらに別の実施形態では、第１の試料パッドが生体試料を受容し、試料中に存在し得る不溶性材料を分離して取り出すまたは保持するように設計される。次いで、ろ過された試料は、第１の試料パッドを通って流動し、または第２のパッドに流動し、第１または第２の試料パッドのいずれかに検出試薬が組込まれ、検出試薬と試料との適切な混合を可能にする。第２のパッドは、第１のパッドと同一の組成物を有していても、または異なる組成物を有していてもよい。
【００３５】
さらに、また別の実施形態では、第１の試料パッドは試料を受容するとともに検出試薬も含有し、第２のパッドは、ストリップ内の次の隣接する材料、例えばトラップに入る前に、検出試薬を関心対象の分析物と混合させるための追加的な時間をもたらす。
【００３６】
追加的な実施形態では、試料受容材料は検出試薬用の基材を含み、この基材は乾燥状態で保持される。検出試薬は、試料受容材料上にあっても、または試料受容材料内にあってもよい。患者の試料が添加されると、検出試薬が放出される。基材は、患者の試料と反応せず、またはこれを吸収せず、患者の試料は適用されるとマトリックスを通って隣接する材料、例えばトラップ上に移動する。
【００３７】
試料は、例えば、デバイスの試料ウェルまたは試料を受容するための他の実体を通して、カセットまたは筐体内に適用されてもよく、または入れられてもよいことが留意されるべきである。試料ウェルまたは実体は、カセットまたは筐体内にて、試料受容材料（例えば試験ストリップ）が組立てられるかまたは収容されるときに、試料受容材料の上方に配置されてもよい（図１を参照されたい）。
【００３８】
試料受容材料または試料パッドとして有用な材料は、一般に、ラテラルフローデバイスおよびクロマトグラフィーの技術分野で公知であり［参考文献：ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、ビレリカ、ＭＡから入手可能なＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｒａｐｉｄ  Ｌａｔｅｒａｌ  Ｆｌｏｗ  Ｔｅｓｔ  Ｓｔｒｉｐｓ  Ｃｏｎｓｉｄｅｒａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔを参照されたい］、試料の受容、制御された一様な毛細管流動、および試料のろ過に影響を及ぼす物理的および化学的性質に基づいて選択される。加えて、試料受容材料が検出試薬も含有するのであれば、理想的には、該材料は、検出試薬を保持するのに適したマトリックスであり、これを試験試料の添加時に最適に放出する。パッド材料は多孔質であり、セルロース（例えば、ろ紙）、ガラス繊維、メッシュ織物、合成不織布材料、または多孔性プラスチック、例えばポリエステルで作製されることが多い。試料受容材料として使用することができる他の材料は、例えば、ポリスルホン非対称膜、Ａｈｌｓｔｒｏｍ（登録商標）８９５０のような綿／ガラス繊維材料、可塑性ポリマー膜、例えばポリエチレン（例えば高密度ポリエチレン）、ポリテトラフルオロエチレン、および多孔質ガラス繊維膜（例えば、Ｐｏｒｅｘ、フェアバーン、ＧＡを参照されたい）。材料のさらなる説明については、実施例を参照されたい（すなわち、実施例２および６）。
【００３９】
本発明のデバイスに使用される試料受容材料は、検出試薬がセルロースに親和性の色素であるとき、セルロースであってもよいが、生体試料中の関心対象の変性タンパク質（１種または複数種）に結合させるのに十分な検出試薬が存在することを条件とすることに留意するべきである。より具体的には、セルロースが、生体試料中の関心対象のタンパク質、例えばミスフォールドタンパク質（１種または複数種）との結合に関して、検出試薬を「打ち負かす」ことは許容できない。その代わりに、試料受容材料が、関心対象の変性タンパク質（１種または複数種）より検出試薬との反応性が低いマトリックス中に存在するならば、セルロースが試料受容材料に使用されてもよい。（セルロースとは、本明細書での目的のために、式（Ｃ６Ｈ１０Ｏ５）ｎを有する有機化合物として定義され、特に、数百から何千ものβ（１−＞４）結合Ｄ−グルコース単位の直鎖からなる多糖である。）
【００４０】
トラップ
次に、流体（例えば、試料、または検出試薬と混合された試料）は、試料受容材料または試料パッドから、結合していない検出試薬があれば保持するように設計されたフィルター（以降、「トラップ」と称する）を通って流動する。特に、トラップは、ラテラルフローデバイス内で、遊離の検出試薬（例えば、色素）を、タンパク質に結合している検出試薬から分離する役目を果たす。具体的には、トラップ材料は、試料が中を通って次の隣接する材料に流動することを許容するが、関心対象のタンパク質（１種または複数種）が生体試料中に存在しなければ、結合していない検出試薬を保持するか、その流動を遅延させるか、またはそれと結合する。
【００４１】
トラップは、検出試薬（例えば、色素）を含有する試料パッドまたは一連の試料パッド要素と境界を接するが、好ましくはこれらと重なり合う（例えば、図３を参照されたい）。トラップは、試験試料の関心対象のタンパク質（１種または複数種）（例えば、ミスフォールドタンパク質（１種または複数種））に結合している検出試薬を試験試料のタンパク質（１種または複数種）に結合していない検出試薬から分離するように機能し、よって、結合している検出試薬が中を通って流動することを許容しながら、結合していない検出試薬を保持する。代替的に、トラップは、同一のまたは異なる材料の、１つ以上の一連のフィルターであってもよい。
【００４２】
理論に拘束されるものではないが、トラップ材料は、検出試薬用の基材を含有して、結合していない検出試薬がトラップ材料に結合し、次の材料に流動しないようにすることができる。既にタンパク質に結合している検出試薬は、トラップ中の基材に結合せず、ストリップ内の次の材料に流動する。基材は、トラップ材料（例えばセルロース）であってもよく、またはこれは、トラップ材料を化学修飾したものもしくはトラップ材料に付加したものあってもよい。代替的に、トラップ材料組成物の構造的特徴が、結合していない検出試薬を保持してもよい。
【００４３】
また、トラップは、結合されていない検出試薬の保持を最適化するために、重なり合ったまたは連続した複数個の材料から構成されていてもよい（図４を参照されたい）。複数の部品は、同一のまたは異なる材料から作製されていてもよい。フィルターマトリックス、例えば、セルロース、非対称ポリスルホン膜（Ｖｉｖｉｄ（商標）血漿分離膜、および非対称サブミクロン（ＢＴＳ）ポリスルホン膜が挙げられるが、これらに限定されない）のような熱可塑性ポリマーがトラップに使用されてもよい。トラップ材料のさらなる説明については、実施例を参照されたい（例えば、実施例２、４、５、８、１３、１４、および１６）。
【００４４】
実際に良好に機能し、デバイスを通して尿および色素に結合しているタンパク質を流動させることができる、実に多くのニトロセルロース材料があったことは、意外であり、極めて驚くべきことであった。例えば、Ｗｈａｔｍａｎ（登録商標）ＡＥ９９ニトロセルロース膜は、極めて良好に機能した。（表１を参照されたい）。適度に良好に機能したセルロース材料もあったが（例えば、Ａｈｌｓｔｒｏｍ（登録商標）６０１、３１９、２４７、Ｗｈａｔｍａｎ（登録商標）ＣＦ１、ＣＦ３、ＣＦ４；ＥＭＩ１１５１３、５４７５、５４９３）、良好に動作しなかったセルロース材料もあった（例えば、Ａｈｌｓｔｒｏｍ（登録商標）２７０）。驚くべきことに、材料のうち、タンパク質が結合しているＣＲ色素を流動させながら、結合していない色素を保持することに関して良好に動作した材料は、Ｖｉｖｉｄ（商標）血漿分離材料（Ｐａｌｌ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）および非対称サブミクロン（ＢＴＳ）ポリスルホン膜（Ｐａｌｌ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）であった。（表１および２を参照されたい。）
【００４５】
検出試薬がコンゴーレッドのような色素であるとき、トラップ材料は、例えば、ろ紙、セルロース系、および／またはＥＭＩ  １１５１３、ＥＭＩ  ５４７５、ＥＭＩ  ５４９３、１２８１、６４２、Ｓｔａｎｄａｒｄ  １７、Ｃ０４８、ＬＦ１、ＬＦ１、ＶＦ２、ＣＦ１、ＣＦ３、Ａｈｌｓｔｒｏｍ  ３１９のような材料であってもよい。トラップは、例えば、約５−１０ｍｍの長さであってもよく、またはそれぞれの長さが５−１０ｍｍである一連の部品であってもよい。
【００４６】
一実施形態では、トラップは、遊離の検出試薬（例えば、色素）を保持するが、タンパク質が結合している色素を通して流動させる。特定の実施形態では、トラップはセルロースから構成され、検出試薬はコンゴーレッドである。
【００４７】
検出試薬
検出試薬は、試料中の関心対象のタンパク質（１種または複数種）に反応性である物質である。例えば、検出試薬は、哺乳動物からの生体試料、例えば患者の試料中に存在する、ミスフォールドタンパク質（１種または複数種）（例えば、コンゴーレッド親和性のタンパク質）、凝集タンパク質、および／または超分子凝集タンパク質に反応性であるかまたは結合親和性を有する物質であってもよい。検出試薬は、試薬パッド上に予め担持されていてもよい（例えば、試薬パッド上に塗布されている、または試薬パッドが検出試薬または色素中に浸されている）。試薬パッドは、試料受容材料または試料受容パッドであってもよい。
【００４８】
一態様では、検出試薬は、生体試料中に関心対象のタンパク質のサブセットが存在すれば、これを染色する色素である。一実施形態では、検出試薬は、ミスフォールドタンパク質と反応することができる。例えば、該色素は、緩衝化されているまたは緩衝化されていない、コンゴーレッド（ＣＲ）またはこれの類似体のようなアゾ色素であってもよい。代替的に、他の色素を検出試薬として使用され得るが、これらの色素が、生体試料または患者試料中の関心対象のミスフォールドタンパク質、凝集タンパク質、および／または超分子タンパク質（１種または複数種）に親和性がある（およびそれらに結合するかまたはそれらと反応することができる）場合に限られる。かかる色素の例として、以下の文献に記載されるもののようなコンゴーレッド類似体が挙げられるが、これらに限定されない：Ｓｅｌｌａｒａｊａｈ  Ｓら、Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ａｎａｌｏｇｕｅｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｇｏ  ｒｅｄ  ａｎｄ  ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅｉｒ  ａｎｔｉ−ｐｒｉｏｎ  ａｃｔｉｖｉｔｙ、Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ．２００４年１０月２１日；４７（２２）：５５１５−３４；およびＨｅｌｅｎｅ  Ｒｕｄｙｋら、Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  Ｃｏｎｇｏ  ｒｅｄ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ａｎａｌｏｇｕｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅｉｒ  ａｂｉｌｉｔｙ  ｔｏ  ｐｒｅｖｅｎｔ  ｔｈｅ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＰｒＰ−ｒｅｓ  ｉｎ  ｓｃｒａｐｉｅ−ｉｎｆｅｃｔｅｄ  ｃｅｌｌｓ、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ（２０００年）、８１、１１５５−１１６４。ミスフォールドタンパク質（１種または複数種）を検出するための検出試薬はまた、例えば、チオフラビンＴであってもよい。
【００４９】
さらに、本発明の一態様では、検出試薬はデバイス内で乾燥形態で存在するだけでなく、他の形態で存在してもよい。検出試薬の形態は、試料が適用されたときにこれと最適に混合するのに適したものであり、また関心対象のタンパク質に結合させるのに適したものである。検出試薬の形態は、デバイスの長期間の安定性または貯蔵寿命に適したものである。一実施形態では、乾燥した検出試薬は色素である。さらに、色素はコンゴーレッドであってもよく、例えば、０．１ｕｇから８００ｕｇ、より好ましくは０．２ｕｇから４８０ｕｇ、さらにより好ましくは１ｕｇから４００ｕｇ、さらにより好ましくは２．５から１２０ｕｇの量でデバイス内に存在してもよい。
【００５０】
コンゴーレッド（ＣＲ）（例えば、緩衝化されているまたは緩衝化されていない）は、試料受容材料に予め塗布されていてもよい。例えば、キット製造中にＣＲ溶液を材料に塗布し、乾燥させた後に、組立および包装を行うことができる（図２および実施例６を参照されたい）。
【００５１】
検出試薬は検出可能であり、すなわち肉眼で見ることができ、さもなければ、例えば、目視試験および／または機械もしくは電子読取機（１種または複数種）によって検出される。
【００５２】
本発明は、例えばデバイスの製造または組立中に、試験デバイス内に組込まれる検出試薬を提供する。これは、試験に添加する前に、色素と生体試料とを混合する必要があった、以前のミスフォールドタンパク質検出用デバイスを凌ぐ改善である。好ましい実施形態では、試験ストリップは、検出試薬を含有する試料受容材料を含有する。生体試料が試験デバイスの試料受容材料中に添加されると、これは試料受容材料中で検出試薬と混合され、生体試料−検出試薬混合物がデバイスを通って流動する。
【００５３】
毛細管床（「表示ストリップ」）
タンパク質が結合している検出試薬を含むかまたは含まない試料（例えば、尿）は、トラップを通過して毛細管床（以降、「表示ストリップ」と称する）上に移動し、そこで貯留する。よって、表示ストリップは、試料を吸い上げて流動させ、検出試薬の有無を表示する。特に、表示ストリップは、試料を吸い上げて流動させ、検出試薬に結合している分析物の有無を表示する。検出試薬または結合している試薬は、次いで人間または機械的手段によって視覚化することができ（定性的結果を得るために）、および／または次いで測定することができる（すなわち、半定量的または定量的に）。表示ストリップによって、全体にわたる試料の一様な流れ、および関心対象のタンパク質が存在するときの検出試薬の比較的均一な表示が最適に得られる。ある特定の実施形態では、表示ストリップ上の検出試薬の強度または濃度が、試料中の関心対象のタンパク質の量に相当し得る。別の実施形態では、検出試薬が表示ストリップを流動して上昇する距離が、生体試料中の関心対象のタンパク質の量を示し得る。さらに、検出試薬の強度と表示ストリップを上昇した距離との両方が、試料中のタンパク質の濃度を示し得る。さらに、ミスフォールドタンパク質凝集体または超分子凝集体を検出する場合は、検出試薬の強度と表示ストリップを上昇する距離との両方が、試料中に存在するタンパク質凝集体の大きさを示し得る。毛細管床に適した材料として、例えば、ニトロセルロースまたはクロマトグラフィー用ペーパーが挙げられる。また、ポリスルホン非対称膜は、適切な表示ストリップをもたらす。他の適切な材料として、ＣｙｔｏＳｅｐ（登録商標）１６６０およびＭＮ−２６０のような、ＣｙｔｏＳｅｐ（登録商標）膜が挙げられる。ラテラルフローストリップの毛細管床は、ラテラルフローストリップのカセットまたは筐体(後述)の、結果目視窓の下の位置に合わせて配置される。材料のさらなる説明については実施例を参照されたい（例えば、実施例２、３および９）。タンパク質が結合している検出試薬が存在すれば、検出試薬は窓内で視覚化される（図１を参照されたい）。
【００５４】
ウィック
任意選択的に、デバイスはウィックを含有する。ウィックは、本発明のストリップまたはデバイス内の第３のゾーンまたは表示ストリップの後に配置されてもよい。使用時に、デバイスに適用された生体試料（例えば、流体）は、表示ストリップから移動を続け、最終的な多孔質吸収材料、すなわち「ウィック」の中に至る。ウィックは、試料貯留部としての役割を果たし、ストリップを通って試料を引き寄せる機能も果たすことができる。吸収パッドは、例えば、デバイスのストリップの端部におけるウィックとして、ラテラルフローストリップを通して試料を引き寄せるために使用することができ、アッセイされる試料の量を増加させ、アッセイの感度を高めることができる。これらの吸収パッドは、セルロースまたはコットンリンターであることが多く、厚さ、圧縮率、および総容積の均一性に基づいて最適に選択される。
【００５５】
裏当てカード
デバイスは、裏当てカードを有してもよい。ストリップ全体は、裏当てカード（例えば、Ｌｏｈｍａｎｎ、オレンジ、ＶＡから入手可能なもの）上に組立てられてもよく、該カードは、プラスチック製裏材および接着剤からなるカードであることが多い。
【００５６】
筐体／カセット
本発明の一実施形態では、診断デバイスは、筐体またはカセット内に、収容されるか、収納されるか、または封入される。デバイスは筐体またはカセットをさらに含んでもよく、これらとして、デバイスを収納する、カートリッジ、プラスチックデバイス、またはこの目的のために構成された押出しプラスチック部品が挙げられるが、これらに限定されない。幾つかの汎用的なカセット筐体が（例えば、Ｋａｎａｎｉ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ、グジャラート、インドまたはＥＡＳＥ−Ｍｅｄｔｒｅｎｄ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  ＬＴＤ、上海、中国から）市販されており、またはここでの目的のために特注製造されてもよい（例えば、米国意匠特許出願第２９／５３３，６４７号を参照されたい）。デバイスは、試料を受容するための試料ウェルを有する筐体またはカセット内に構成されてもよく、ここでは、ストリップがカセット内で組立てられるかまたはこれに収容される場合に、試料ウェルがストリップの試料受容材料の上方に配置される。さらに、デバイスは、筐体またはカセット内で立てられる場合に、表示ストリップまたはストリップの毛細管床が筐体の結果目視窓の下に配置されるように構成されてもよい。
【００５７】
一実施形態では、本発明のデバイスは、例えば、毛細管床（すなわち、結果窓）上の検出試薬（例えば、色素）の強度などの結果を定量化することができる電子読取機をも含み、そして、結果を表示するための表示スクリーン（例えば、ＬＥＤスクリーン）をさらに含んでもよい。この読取機は、筐体の一部であっても、または筐体と一体に組立てられた要素、例えば結果表示窓内の要素であってもよい。かかる読取機は、例えば、Ｖｅｎｋａｔｒａｍａｎ、Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓ  ａｎｄ  Ｂｉｏｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓ  第７４巻、２０１５年１２月１５日、１５０−１５５頁、ＰＣＴ出願ＷＯ２０１３０８３６８６Ａ１号、ＰＣＴ出願ＷＯ２００４０１０１４３Ａ２号、およびＰＣＴ出願ＷＯ２００６０１００７２Ａ２号に記載されている。
【００５８】
カバーテープ
筐体を有しているかまたは有していないデバイスは、保護用粘着テープ（例えば、Ｌｏｈｍａｎｎ、オレンジ、ＶＡから入手可能なもの）、またはデバイスを損傷から保護し、試験結果を適正に読取りを可能にする他の材料などのカバーをさらに含んでもよい。例えば、デバイスは、尿ディップスティックのようなディップスティックとして使用されるように構成されてもよい。この実施形態では、ラテラルフローストリップは、保護用粘着テープで覆われていてもよい（図５および実施例１１を参照されたい）。
【００５９】
試行対照試薬
好ましい実施形態では、デバイスが使用される前に目視窓内に見える対照試薬が毛細管床上に存在してもよい。（図１および図２、実施例１２を参照されたい。）生体試料（例えば、流体）が毛細管床を通って流れると、対照試薬が溶解し、表示ストリップに吸い上げられて対照試薬の線が拡散しそして／または対照が運び去られ、その結果、対照試薬が結果窓に見えなくなるかもしくはぼやける、または何らかの他の相違が視覚化されるかもしくは測定されてもよい。目視窓内の対照試薬の変化によって、試験試料（例えば、流体）が添加されたことおよびデバイスを通って適正に流れたことが示され、例えば、試行対照としての役目を果たす（実施例１２を参照されたい）。対照試薬は、例えば肉眼によって、視覚的に検出可能であり、さもなければ、例えば機械的試験および／または電子読取機によって検出または測定される。一実施形態では、対照試薬はタルトラジンである。試行対照試薬として使用されてもよい他の色素として、ＦＤ＆Ｃ青色１号−ブリリアントブルーＦＣＦ、Ｅ１３３（青色）、ＦＤ＆Ｃ青色２号−インジゴチン、Ｅ１３２（藍色）、ＦＤ＆Ｃ緑色３号−ファストグリーンＦＣＦ、Ｅ１４３（ターコイズ色）、ＦＤ＆Ｃ赤色３号−エリスロシン、Ｅ１２７（桃色）、ＦＤ＆Ｃ赤色４０号−アルラレッドＡＣ、Ｅ１２９（赤色）、ＦＤ＆Ｃ黄色５号−タルトラジン、Ｅ１０２（黄色）、ＦＤ＆Ｃ黄色６号−サンセットイエローＦＣＦ、Ｅ１１０（橙色）が挙げられる。
【００６０】
検出される関心対象のタンパク質
上述のように、本発明は、関心対象のタンパク質、より具体的には、ミスフォールドタンパク質、凝集タンパク質、および／または超分子タンパク質凝集体を検出するためのデバイスおよびこのデバイスを利用する方法を対象とする。αヘリックスは、機能性タンパク質の、その天然立体配座における重要な構造モチーフであることが知られている。対照的に、タンパク質の立体配座が変化すると、βシート構造モチーフ（すなわち、βシート構造）またはミスフォールドタンパク質になることがあり、これは次にタンパク質凝集および毒性を引き起こす傾向がある。したがって、ミスフォールドタンパク質は、タンパク質凝集体または超分子凝集体の形態であり得、子癇前症、アルツハイマー病、プリオン病、およびパーキンソン病のようなミスフォールドタンパク質障害と関連し得る。
【００６１】
特に、本発明のデバイスおよび方法によって検出される、子癇前症に関連するこれらのミスフォールドタンパク質、タンパク質凝集体、および／または超分子凝集体として、例えば、α１アンチトリプシン（セルピンＡ１）、セルロプラスミン、重鎖ＩｇＧ、軽鎖ＩｇＧ、インターフェロン誘導タンパク質６−１６（ＩＦ１６−６、Ｇ１Ｐ３）、アルブミン、ならびに各タンパク質の断片、これらの混合物、およびかかる混合物の断片が挙げられてもよいが、これらに限定されない。これらのタンパク質は、本発明のデバイスに利用される検出試薬（後述する）に対して結合親和性を有する。例えば、これらのミスフォールドタンパク質はコンゴーレッド親和性であり、コンゴーレッドと称される色素に対して親和性を有する。
【００６２】
本発明のデバイスはまた、子癇前症以外のタンパク質ミスフォールディング障害を検出するために使用されてもよい。例えば、該デバイスは、アルツハイマー病、脳βアミロイド血管症、緑内障における網膜神経節細胞の変性、プリオン病、パーキンソン病および他のシヌクレイン病、タウオパシー、前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）、ＦＬＴＤ−ＦＵＳ、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、ハンチントン病および他のトリプレットリピート病、認知症（家族性イギリス型およびデンマーク型）、アミロイドーシスを有する遺伝性脳出血、ＣＡＤＡＳＩＬ、アレキサンダー病、様々なアミロイドーシス、セリノパシー（Ｓｅｒｉｎｏｐａｔｈｉｅｓ）、ＩＩ型糖尿病、封入体筋炎／ミオパチー、白内障、ロドプシン変異を有する網膜色素変性、甲状腺髄様癌、プロラクチン産生下垂体腺腫、遺伝性格子状角膜ジストロフィー、マロリー小体、肺胞蛋白症、アミロイド産生性歯原性腫瘍、嚢胞性線維症、鎌状赤血球症、ならびに重症疾患ミオパチーのようなミスフォールドタンパク質障害または状態におけるミスフォールドタンパク質を検出するために利用されてもよい。
【００６３】
生体試料
検出しようとする関心対象のタンパク質（１種または複数種）は、哺乳動物からの生体試料中に見出すことができる。生体試料は、例えば、クリーンキャッチすなわち自然採尿から得られた尿、脳脊髄液、羊水、または関心対象のタンパク質（１種または複数種）を含んでいる可能性のある任意の体液試料（例えば、血液、唾液、羊水、脳脊髄液、血漿、または血清）であってもよい。試料はまた、患者からの排泄物の抽出物、例えば、鼻汁、糞便物質、もしくは耳垢からの抽出物、または適正な溶液で抽出され、デバイスに適用される組織の分析物であってもよい。関心対象のタンパク質は、例えば、妊娠中または分娩後の哺乳動物からの生体試料中に見出され得る。
【００６４】
患者
患者は、哺乳動物であり得る。さらに、哺乳動物は、妊娠中であり得、例えば、妊娠中の女性、妊娠中の霊長類、または実験室での研究に利用されるもののような、子癇前症の身体症状および徴候（例えば、高血圧および尿中タンパク質）を有するように設計された遺伝子操作された動物モデルであり得る。好ましくは、子癇前症の診断の場合、患者は、任意の妊娠中の女性であり得る。こうした妊娠中の女性は、子癇前症を有する疑いがあるかまたは子癇前症を有するリスクがある場合がある。例えば、この疑いは以下に基づいている：１）例えば、米国産科婦人科学会（ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｏｂｓｔｅｔｒｉｃｓ  ａｎｄ  Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｙ）ガイドライン（ＡＣＯＧ）（Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ  ｉｎ  Ｐｒｅｇｎａｎｃｙ、Ｒｅｐｏｒｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｏｂｓｔｅｔｒｉｃｉａｎｓ  ａｎｄ  Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｉｓｔｓ’Ｔａｓｋ  Ｆｏｒｃｅ  ｏｎ  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ  ｉｎ  Ｐｒｅｇｎａｎｃｙ、Ｏｂｓｔｅｔｒｉｃｓ  ａｎｄ  Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｙ  １２２  第１２２巻、第５号、２０１３年１１月）、具体的には、例えば表Ｅ−１（「ＡＣＯＧ  ２０１３ガイドライン」）に記述されているような、子癇前症の徴候および症候を呈すること、および／または２）子癇前症の１つ以上のリスク因子を有していること（例えば、以前の妊娠に子癇前症が関与する女性、複数の胎児を身ごもっている女性、心血管または腎臓に異常のある女性、またはループスのような自己免疫疾患を有する女性）。
【００６５】
キット
本発明はまた、試料中の関心対象のタンパク質を検出するためのキットを含む。一実施形態では、キットは、妊娠中の哺乳動物からの試料に存在する、子癇前症に関連するミスフォールドタンパク質を検出するためのデバイスを含む。キットは、上で述べた通りの本発明のデバイスを、上で述べた任意の代替実施形態で含む。キットはまた、患者の試料を試料受容材料に適用するための手段、例えば、ピペット（例えば、Ｇｅｎｅｓｅｅ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、サンディエゴ、ＣＡから入手可能な先の細いホールピペット）またはスポイト、対照、ならびに該デバイスを使用するための指示書も含んでもよい。よって、該デバイスは、独立主体として利用することができるだけでなく、ある臨床または非臨床の環境においてより有利であり得るキットの形態でも使用することができる。キットは、ホイルまたはマイラーパウチ中に包装されてもよい。キットのパウチは、１個ずつ、または複数個ずつ、例えば、１包装当たり２、５、１０、１５、２５、５０、または１００キットで、さらに包装されてもよい。
【００６６】
デバイスを使用するための環境およびデバイスを利用する方法
本発明のデバイスは、例えば、臨床試験室（病院環境内または病院環境外のいずれか）、即応医療環境、医師の個人的試験室、救急治療部（例えば、病院内）において、または患者の傍らで行う試験もしくはポイントオブケアデバイスとして、医療関係者、非医療専門家によって、または患者がヒトであるときは患者自身であっても使用することができる。さらに、該デバイスは、他の診断アッセイ（例えば、ｓＦｌｔ−１、ＰｌＧＦ、ＰＰ−Ａ、ＰＰ１３、ペントラキシン、インヒビン−Ａ、および可溶性エンドグリンのような、子癇前症に関連する他のタンパク質（すなわち、バイオマーカー）を検出するイムノアッセイなどのイムノアッセイ）、および／または子癇前症の診断に一般に利用される他の方法もしくは所見（例えば、血圧測定値、子癇前症の診断に使用される臨床検査（血小板数、血清クレアチニン濃度（ｃｏｎｃｅｒｔａｔｉｏｎ）、血清ＡＬＴ（アラニンアミノ基転移酵素（ａｌａｎｉｎｉｎｅ  ａｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ））およびＡＳＴ（アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ）を含む）、および体重増加、めまい、頭痛、かすみ目のような他の徴候または症候等）と組み合わせて使用することができる。
【００６７】
例えば、本発明は、妊娠の高血圧障害を患う患者または子癇前症を有する疑いがあり得る患者において子癇前症を診断するかまたは鑑別診断を行う方法を含み、該方法は、ａ）妊娠中の患者の血圧を判断するステップ（ここで、妊娠中の患者において１４０／９０ｍｍ／Ｈｇより高い血圧が、妊娠中の患者における子癇前症を示す可能性がある）、およびｂ）患者からの生体試料を本発明のデバイスに適用するステップを含みそれにより、少なくとも１種の関心対象のタンパク質の患者の生体試料中における検出は、患者における子癇前症の診断を提供するかもしくは支援する、または鑑別診断としての役割を果たす。
【００６８】
さらに、本発明はまた、子癇前症を患っている疑いのある妊娠中の哺乳動物を治療する方法であって、ａ）妊娠中の哺乳動物が子癇前症を有することを示す少なくとも１種のタンパク質の存在を判断するために、哺乳動物からの生体試料を本発明のデバイスに適用するステップ；およびｂ）子癇前症を治療するために、妊娠中の哺乳動物を分娩させるステップを含む方法を包含する。さらに、該デバイスはまた、患者がミスフォールドタンパク質（１種または複数種）を生体試料中に発現しているか否かを判断するために分娩後に使用されてもよい。ミスフォールドタンパク質（１種または複数種）が存在するならば、さらなる患者管理または治療的介入（例えば、硫酸マグネシウムまたは他の血圧降下剤の投与）が子癇前症を治療するために必要となる場合があり、または患者は、生体試料中にタンパク質がもはや検出できなくなる時を示すために本発明のデバイスを使用して監視されてもよい。加えて、本発明のデバイスは、治療的介入後に、治療が成功したか否かを判断するために、または生体試料中に存在する関心対象のタンパク質の量もしくは存在の変化（例えば、減少、不在、または増加）を測定するために利用されてもよい。よって、本発明のデバイスは、子癇前症もしくは他のタンパク質ミスフォールディング障害を解決するために、さらなる治療的介入が必要であるかどうかを判断するために、治療的介入が有効であったかどうかおよび／または代替形態の治療的介入もしくは増加した用量の治療薬を投与するかどうかを判断するために、患者の治療前および治療後に使用されてもよい。
【００６９】
デバイスの利点およびデバイスを利用する方法
本発明のデバイスは、少なくとも次の理由で既存のデバイスより有利である。すなわち、１）該デバイスによって、試験手順のステップが減少し、試験手順が単純化する；２）該デバイスは、標準化された試験材料を使用して、最適に製造できる；３）該デバイスによって、試験キット中の検出試薬の安定性が改善されて、貯蔵寿命が長くなる；４）結果はすべての読取りがより単純で簡単でありながら、５）相対的に低いコストを保つ；および６）ポイントオブケアでの使用または臨床試験室環境での使用に適した迅速な結果を出す。
【００７０】
特に、提供されるデバイスおよび方法は、潜在的な子癇前症を検出するための公知の紙のキット（例えば、米国特許出願公報第２０１５０２９３１１５号を参照されたい）よりも、使用者が必要とするステップが少なく、結果を読取りやすく、紙のキットより安定であり、これによって少なくとも６ヵ月、好ましくは１年、さらにより好ましくは２年、さらにより好ましくは３年、さらにより好ましくは４年、さらにより好ましくは５年の長い貯蔵寿命がもたらされるという点で、遥かに優れている。本発明のデバイスはまた、最低限の訓練しか受けていないポイントオブケアでの使用者に適した迅速な結果を生じる（すなわち、生体試料（例えば、尿）を該デバイスに適用してから３分以内、好ましくは２分以内、より好ましくは１分以内）。
【００７１】
本発明は、以下の非限定的な実施例を使用することによって例示することができる。
【実施例】
【００７２】
［実施例１]
サンプルデバイス
図１は、カセットまたは筐体内の本発明のデバイスの試験ストリップの写真を示している。図１の左側の枠は、生体試料と接触する前の筐体内のデバイスを図示している。右側の枠は、子癇前症に関連するミスフォールドタンパク質に対して、陰性、弱陽性、および陽性であることが分かっている尿試料を試験したデバイスの結果を示している。
【００７３】
図２は、本発明のデバイスの試験ストリップの実施形態の例を示している。ストリップは、対照色素、表示ストリップ、トラップ（例えば、３個の材料）、第２の試料パッド、第１の試料パッド、および試料パッド上で乾燥させた色素を含む。
【００７４】
図３Ａは、本発明の診断デバイスの一実施形態を示す。図３Ａは、上面図を示す。図Ｂは、図３Ａにおける実施形態と同じであるが、側面から見た実施形態を示す。試料パッド、トラップ、および表示ストリップは突き合わされていてもよい。図３Ｃは、試料パッド、トラップ、および表示ストリップが互いに重なり合っている実施形態を示す（側面図）。
【００７５】
図４は、試験ストリップ内の異なる材料構成を示す。図４Ａは、２つの試料パッド、トラップ、および表示ストリップ（毛細管床）を順に有する、本発明の代替実施形態を示す。各部品は隣接する部品と重なり合っている。図４Ｂは、順に重なり合う２つの試料パッド、３重トラップ、および表示ストリップを有する本発明の別の代替実施形態を示し、各部品は隣接する部品と重なり合っている。
【００７６】
図５は、本発明の試験ストリップのディップスティック構成の例を示す。この実施形態は、試験ストリップの上面上にカバーテープを有するように構成される。試験ストリップの上部では、テープは不透明色であり、ストリップを把持するために使用されてもよい。中央では、テープは透明であり、結果を見るための窓となる。テープは、透明な窓が、例えば、トラップのおよそ１０ｍｍ上になるように置かれてもよい。窓部分のテープは、結果を容易に見ることができるように、ある色（例えば、白）によって囲まれていてもよい。トラップの下では、テープは、トラップを覆うために不透明色である。ストリップの最下部で、テープは、ストリップのどちらの端部を試験試料中に浸すのかに関する矢印を表示してもよく、試験ストリップを試料中に浸す最大レベルを示す線を表示してもよい。試験ストリップの下端部には、浸漬したときに試験試料の吸い上げが容易になるように、カバーテープがなくてもよい。
【００７７】
［実施例２］
材料の試験
子癇前症を有しているまたは有していない妊娠中の女性からの尿試料を鑑別する能力について、様々な紙状材料を試験した。コンゴーレッド（ＣＲ）色素（Ｓｉｇｍａ．セントルイス、ＭＯ）を尿試料に添加し、１滴を材料に添加して、試料の受容、トラップ、および表示ストリップに適した特性を査定した。得られたスポットを約３分後に可視化し、子癇前症患者からの尿と対照である正常な妊娠からの尿との間の視覚的な相違について評価した（表１）。「優良」という結果は、材料が、子癇前症患者からのＣＲ尿と対照の妊娠患者からのＣＲ尿との間に視覚的に観察可能な相違をもたらすのに適しているため、診断試験デバイスに有用であり得ることを示す。「不良」という結果は、材料が、ＣＲ子癇前症陽性とＣＲ対照の尿の間に視覚的に観察可能な相違をもたらすのに適していなかったことを示す。最も適していない材料である「不良」という結果からの尺度から、「微妙」はわずかに良いが理想的ではなく、「許容」はさらに良く、「良好」は一層良く、「より良好」はさらに向上し、「優良」は最も適した材料である。ポリスルホン（ｐｏｌｙｓｕｆｏｎｅ）非対称材料は、最も良好な結果を生じることが判明した。ＣＦ３およびＣＦ４のようなある特定の綿材料は良く機能したが、他方で、Ａｈｌｓｔｒｏｍ  ２７０のような他の綿は良く機能しなかった。ニトロセルロースおよびガラス繊維材料は一般に、この目的には良く機能しなかった。
【００７８】
【表１】
2018527587.tif 000003
2018527587.tif 000004
【００７９】
実施例３
試験ストリップ
ＢＴＳおよびＶｉｖｉｄ（商標）は、子癇前症患者からのＣＲ尿と対照妊娠患者からのＣＲ尿との間で視覚的に観察可能な相違をもたらすことにおいて優良な結果を実証したので、試験ストリップを、Ａｈｌｓｔｒｏｍ（登録商標）８９５０（綿／ガラス繊維組成物）（「８９５０」）の試料パッド、およびＢＴＳまたはＶｉｖｉｄ（商標）の試行ストリップまたは毛細管床を使用して組立てた。コンゴーレッドを尿試料に添加し、この試料をボルテックスし、次いで試料を試験ストリップの８９５０の末端に適用した。結果を、ＢＴＳまたはＶｉｖｉｄ（商標）膜試行ストリップ上で観察した。Ｖｉｖｉｄ（商標）膜を含有するストリップに適用された子癇前症を有する女性からの尿は、極めて明白なシグナル（桃色／赤色のコンゴーレッド染色）を生じ、陰性尿はシグナルを示さなかった。シグナルは量に依存し、量が減少するとシグナルが減少した。ＢＴＳストリップは、陽性尿と陰性尿との間で相違を示さず、試料の量が多くなると両方とも陽性に染色された。試料の量を減少させながら適用すると、陽性尿および陰性尿のシグナルは等しく減少した。
【００８０】
【表２】
2018527587.tif 000005
【００８１】
これらの結果から、Ｖｉｖｉｄ（商標）材料は本発明の診断試験デバイスに適していたのに対して、ＢＴＳは良く動作しなかったことが示される。
【００８２】
実施例４
トラップ材料の評価
Ｖｉｖｉｄ（商標）およびＢＴＳ膜を、試料パッドと試行ストリップ（すなわち、毛細管床または表示ストリップ）との間に配置され、子癇前症陽性尿と結合したＣＲを通して表示ストリップまで流動させると同時に、陰性尿（すなわち、子癇前症を有していない女性由来の、関心対象のタンパク質を含有していない尿）が適用されたときにＣＲ色素の保持を補助したかどうかを判定することにより、トラップ用の材料として評価した。試験ストリップを、試験パッドとしての８９５０、およびＶｉｖｉｄ（商標）膜またはＢＴＳ膜のいずれか、それに続くＣｙｔｏＳｅｐ（登録商標）１６６０試行ストリップを含むように組立てた。ＣＲを添加した尿を８９５０に適用し、結果をＣｙｔｏＳｅｐ（登録商標）１６６０試行ストリップ上で観察した。
【００８３】
陽性尿（すなわち、子癇前症を有している女性由来の、関心対象のタンパク質を含有する尿）−コンゴーレッド色素を適用したとき、すべてのストリップ上にＣＲ染色が見られた。陰性尿−コンゴーレッドが適用されたとき、Ｖｉｖｉｄ（商標）膜のトラップで作製したストリップは陰性であったが、ＢＳＴ膜のトラップで作製したストリップは幾らか色素の染色を示した。Ｖｉｖｉｄ（商標）材料は、陽性尿を試験したときにはＣＲ色素を通過させながら、陰性尿を試験したときにはＣＲ色素を保持するのに有効なトラップであった。ＢＴＳは、それより有効性の少ないトラップであった。
【００８４】
実施例５
試験ストリップ内に予め担持される検出試薬に使用するための材料の評価
コンゴーレッド色素を試料パッド材料に塗布し、そのまま乾燥させた。陽性尿を適用し、試料パッドから放出された色素についての結果を観察した。
【００８５】
【表３】
2018527587.tif 000006
【００８６】
検出試薬（すなわち、この場合には色素）は、理想的には、生体試料、すなわち尿の適用時に試料パッド材料から放出される。ＰＯＲＥＸ（登録商標）４８９４およびＰｏｒｅｘ（登録商標）Ｘ−４８９７を含めた幾つかの材料は、色素を良好に放出させるので、診断試験デバイスに非常に適している。加えて、Ｆｕｓｉｏｎ材料（ガラスマイクロファイバー）およびＷｈａｔｍａｎ（登録商標）３３のような幾つかの材料も色素を放出させ、適している。
【００８７】
実施例６
試験ストリップ内に組込んだ、色素を有する試料パッドの評価
コンゴーレッド色素を注入したＰｏｒｅｘ（登録商標）Ｘ４８９７およびＰＯＲＥＸ（登録商標）４８９４を含む試料パッド材料を、Ｖｉｖｉｄ（商標）ｘのトラップおよびＭＮ−２６０の試行または表示ストリップを有する試験ストリップ内に組込んだ。尿を各ストリップの試料パッドに適用し、結果をＭＮ−２６０の表示ストリップ上で観察した。
【００８８】
結果：試料パッド材料は、尿が添加されたときに色素を放出した。子癇前症陽性尿を添加すると、ＭＮ２６０材料が陽性に染色された。ほとんどの場合、子癇前症陰性尿を添加してもＭＮ２６０は染色されなかった；しかし、ある場合には、ＭＮ２６０のストリップの始端で幾らかの染色があった。これらの結果から、Ｐｏｒｅｘ（登録商標）、Ｖｉｖｉｄ（商標）、ＭＮ２６０の材料の構成によって、子癇前症陽性尿を子癇前症陰性尿から鑑別する手段が得られ、それによって有用な診断試験デバイスを得ることができたことが示される。
【００８９】
実施例７
ラテラルフローアッセイカセット中での試験ストリップの評価
Ｆｕｓｉｏｎ  ５の上に載せた色素注入済みＰＯＲ−４８９９試料パッド、続いてトラップとしての役目を果たすＶｉｖｉｄ  Ｘ膜、次いでＭＮ２６０の表示ストリップから、ストリップを組立てた。ストリップを汎用的なカセットに入れ、試料パッドがカセットの試料ポートの真下になり、ＭＮ２６０がカセットの結果窓から見えるようにした。［７５ｕｌ］７５マイクロリットルの尿を試料ポート内に添加し、結果を結果窓で確認した。陽性尿を添加したときに赤色の染色が結果窓に見えたのに対して、陰性尿を添加したときには染色は観察されなかった。この構成によって、子癇前症陽性尿を子癇前症陰性尿から鑑別する有用な診断デバイスが得られた。
【００９０】
実施例８
トラップの改良
ストリップ上で試験した陰性尿が、特に時間の経過と共に、結果ストリップに吸い上げられた幾らかの色素の筋を生じることが時折あった。陰性試料に対して陽性試料をもっとよく分離できるか、また陰性尿に伴うこの筋を排除できるかを見るために、追加的なトラップ構成を評価した。ストリップを、Ｆｕｓｉｏｎ  ５の上に載せた色素注入済みＰＯＲ−４８９９試料パッド、ずらしてあるが重なり合う２つのＶｉｖｉｄ（商標）Ｘの層のトラップ、およびＭＮ２６０の結果ストリップを用いて組立てた。陰性尿を適用することによって試験したとき、二重層トラップによって色素の漏出および筋が防止され、それによって子癇前症陽性尿を子癇前症陰性尿から鑑別するための改善された診断試験デバイスが得られた。
【００９１】
実施例９
デバイスのストリップ構成
ＰＯＲ−４８９９に、Ｋｉｎｅｍａｔｉｃ分注機を使用して６μｌ／ｃｍで分注したコンゴーレッド色素溶液で線を付けた。ＰＯＲ−４５８８は、４μｌ／ｃｍで線を付けた。パッドを３７℃で１時間乾燥させ、乾燥棚内に保管した。試験ストリップを、線を付けたＰＯＲ材料、１層のＶｉｖｉｄ（商標）Ｘのトラップ、およびＭＮ２６０を使用して組立てた。ＰＯＲ−４８９９のストリップは、尿を試験したときに良く動作したが、ＰＯＲ−４５８８を含有するストリップは、陰性尿を試験したときに表示ストリップ上に色素の漏出を生じた。ＰＯＲ−４５８８を４μｌ／ｃｍで線を付けた場合についてさらに評価すると、陰性尿の流れはきれいになった。次いで、ＰＯＲ−４５８８を、６または８μｌ／ｃｍで線を付けて二重のＶｉｖｉｄ（商標）トラップと共に組立てた場合について評価した。６μｌ／ｃｍの色素の線を有するこのストリップ組立品は、陽性尿で試験したときに最良の結果を与え、陰性尿で試験したときに色素の漏出または筋の量が最小になった。さらに、３層のＶｉｖｉｄ（商標）トラップおよび８μｌ／ｃｍで線を付けたＰＯＲ−４５８８を有するストリップを評価すると、良好な結果およびより強い陽性シグナルが得られた。
【００９２】
【表４】
2018527587.tif 000007
【００９３】
８μｌ／ｃｍで塗布したコンゴーレッドを有するＰＯＲ−４５９９および二重のｖｉｖｉｄトラップで構成したデバイスは、子癇前症陰性尿を試験したときにきれいな陰性の結果を生じ、子癇前症陽性尿を試験したときは強い陽性の結果を生じたので、好ましい診断試験デバイス構成である。
【００９４】
実施例１０
ディップスティック形式の試験設計の評価
試験ストリップを、６、８、または１０μｌ／ｃｍで線を付けたＰＯＲ−４５８８および３層のＶｉｖｉｄ（商標）トラップ、ならびにＭＮ２６０を使用して組立てた。ストリップを、６０μｌの尿中に浸した。尿はストリップに成功裏に吸い上げられ、８μｌ／ｃｍで線を付けたバージョンが、きれいな陰性試験結果と共に最良の陽性試験結果を生じた。したがって、診断試験デバイスの最適なディップスティック形式はこのように構成することができ、これは診断を目的として子癇前症陽性尿を子癇前症陰性尿から鑑別するのに有用である。
【００９５】
実施例１１
診断試験デバイス構成のさらなる評価
２つのＰｏｒｅｘ（登録商標）試料パッド（１つには色素で線を付ける）、３層のＶｉｖｉｄ（商標）トラップ、およびＭＮ２６０で作製した試験ストリップを、カセット／筐体内で、および尿試験用ディップスティックとして試験した。カセット筐体によって結果が改善されたが、その理由は恐らく、試料パッド上の中心スポット上における試料の制御された流動、良好な色素の取り込み、ストリップの中央に吸い上げられる流動、および試行ストリップの結果のより均一な染色の結果である。試験した５つの陰性尿はすべて陰性であり、５つの陽性尿は、２つが弱陽性、３つが陽性の結果となった。ディップスティックとして、試験ストリップを試験管中の１００μｌの尿の中に入れた。３分の時点で、陽性尿および陰性尿の結果は両方ともすべて陰性であった。しかし、さらに時間が経つと、５分までに陽性尿の結果は、２つが弱陽性、３つが陽性となったが、陰性尿は陰性のままであった。したがって、これらの試験構成は、子癇前症診断試験デバイスに適している。
【００９６】
実施例１２
試行対照の評価
この実験の目的は、試料がいつ成功裏にストリップに吸い上げられて流れたかを示す対照、すなわち「試行対照」を調査することであった。陰性の生体試料を試験したときに表示または結果ストリップ上に何も染色が観察されなければ、これが陰性の結果なのか、または試験が正しく実行されなかったか（すなわち、試料が実際に何も添加されなかったのか、不十分な試料が添加されたのか、またはストリップの不十分な試料の吸い上げが起こったのか）を見分けるのは困難である。線状の水溶性着色剤を、試行ストリップ材料を横切るように噴霧し、筐体内に組立てられたときにこれがカセットの結果窓の上部に見えるように配置した。試料ポートを通して尿試料を試料パッドに添加し、結果窓を通して流動を観察した。試料が対照色素の線に到達したとき、この線は溶解し、試料と共に流れた。試行対照の線の消失は、試料がストリップを成功裏に流れたことを容易に視認できる指標となった。該対照は、尿の試験結果の読取りを妨げなかった。対照の線の色素の例は、タルトラジンである。試行対照として使用されてもよい他の色素として、ＦＤ＆Ｃ青色１号−ブリリアントブルーＦＣＦ、Ｅ１３３（青色）、ＦＤ＆Ｃ青色２号−インジゴチン、Ｅ１３２（藍色）、ＦＤ＆Ｃ緑色３号−ファストグリーンＦＣＦ、Ｅ１４３（ターコイズ色）、ＦＤ＆Ｃ赤色３号−エリスロシン、Ｅ１２７（桃色）、ＦＤ＆Ｃ赤色４０号−アルラレッドＡＣ、Ｅ１２９（赤色）、ＦＤ＆Ｃ黄色５号−タルトラジン、Ｅ１０２（黄色）、ＦＤ＆Ｃ黄色６号−サンセットイエローＦＣＦ、Ｅ１１０（橙色）が挙げられる。
【００９７】
実施例１３
トラップ用の代替材料の調査
試験ストリップを、２つのＰｏｒｅｘ（登録商標）試料パッド（第１の試料パッドにはコンゴーレッド（ＣＲ）色素の線を付ける）、表５に一覧表示される通りの種々の代替トラップ材料、およびＭＮ２６０の試行ストリップを用いて組立てた。陰性尿の試料を組立てた試験ストリップ上で試験し、各トラップの、１）試料中に関心対象のタンパク質が存在しないときにＣＲ色素を保持する能力、および２）ＣＲに結合しているタンパク質を保持しない能力について評価した。
【００９８】
【表５】
2018527587.tif 000008
【００９９】
結果：これらのトラップ材料のほとんどが、コンゴーレッド親和性タンパク質陽性の生体試料（コンゴーレッド親和性タンパク質陽性尿）をコンゴーレッド親和性タンパク質陰性の生体試料（コンゴーレッド親和性タンパク質陰性尿）から鑑別する見込みがあることを示した。
【０１００】
陰性試料を試験するときの検出試薬（ＣＲ）の保持をさらに改善するために、次に、表６に記載する選択トラップ材料を３層で使用して試験ストリップを作製した。
【０１０１】
【表６】
2018527587.tif 000009
【０１０２】
結果：三重層のトラップは、非結合ＣＲ検出試薬を、表示ストリップに進入させずに保持するのに有効であった。しかし、ＥＭＩ  １１５１３およびＣ０４８で作製した三重トラップ構成はまた、陽性試料を試験したときにシグナル結果の強度を低減させた。試験したこれらのトラップのうち、６４２で作製した三重トラップが、陽性試料と陰性試料の両方について最も良好な結果を生じた。
【０１０３】
実施例１４
トラップ材料のさらなる調査
本発明の診断試験デバイスにおけるトラップとして使用するのに適した材料をさらに調査するために、２つのＰｏｒｅｘ（登録商標）試料パッド（第１の試料パッドにはＣＲ色素で線を付けた（８ｕｌ／ｃｍ））、表７に記載する通りのトラップ、およびＭＮ２６０の試行ストリップを有するストリップを組立てた。各構成のストリップを、コンゴーレッド親和性陰性尿試料、２つの弱陽性コンゴーレッド親和性タンパク質試料および２つの強陽性コンゴーレッド親和性タンパク質試料を用いて試験した。
【０１０４】
【表７】
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【０１０５】
驚いたことに、５４９３の結果は、５４７５より強度が弱く、５４９３は５４７５より吸収性が約４倍高く、毛細管上昇性が２倍速かった。これらの結果は、より低い吸収性およびより遅い毛細管上昇が、強いシグナルのために好ましいことを示唆する。同様に、ＣＦ３はＣＦ１より弱く、吸収が２倍である。材料２３８は２３７よりシグナルが弱く、吸い上げ速度が２倍であり、また３１９は、この紙の線のうち最強色の結果を示し、吸い上げ速度が最も低かった。ＭＮ６１５より速く流れる物質であるＭＮ６４０は、ＭＮ６１５よりシグナルが弱い。
【０１０６】
結果から、吸収性がより少なく、毛細管上昇または吸い上げ速度がより遅い材料が、より確固たるシグナルに好ましい材料であり得ることが示される。
【０１０７】
実施例１５
診断試験デバイスの評価
Ｆｕｓｉｏｎ  ５（ＧＥによって作製される独自開発の単層マトリックス膜）の上に載せた色素注入済みＰｏｒｅｘ（登録商標）試料パッド、Ｖｉｖｉｄ（商標）膜ストリップトラップおよびＭＮ２６０の毛細管床膜を含む、完全な試験ストリップを組立てた。このストリップを汎用のＬＦＡカセットケース内に収容した。尿試料を円形の試料ウェルに添加し、３分の時点で結果を長方形の窓で確認した。
【０１０８】
結果：陰性尿では窓に色素は何も観察されず、弱陽性尿では薄い桃色が観察され、強陽性尿試料では強い桃色が観察された。これらの結果から、これは、子癇前症を診断するために試料中のコンゴーレッド親和性タンパク質を検出するための診断試験デバイスに適した構成であることが示される。
【０１０９】
実施例１６
最適なトラップ材料のさらなる評価
色素注入済みＰｏｒｅｘ（登録商標）試料パッド、第２のＰｏｒｅｘ（登録商標）パッド（色素なし）、１１５１３、５４７５、３１９、２４７、またはＣＦ１の単層または二重層トラップ、Ｗｈａｔｍａｎ  ４７０のウィックを有するＭＮ２６０膜の毛細管床を含む、完全な試験ストリップを組立てた。ＭＮ２６０は、試行対照のタルトラジン色素の線を含有していた。試験試料の色素注入済みＰｏｒｅｘ（登録商標）パッド上への添加のために最適化し、また、タルトラジン色素が試験実行前に観察できて試験実行後に観察されないように目視窓の中央がＭＮ２６０膜の上に置かれるよう最適化した、ＬＦＡ様カセット内に、試験ストリップを収納した。尿試料を円形の試料ウェルに添加し、３分の時点で結果を長方形の窓で確認した。
【０１１０】
結果
３分の時点で、陰性尿では窓に色素は何も観察されず、弱陽性尿では薄い桃色が観察され、強陽性尿試料では強い桃色／赤色が観察された。さらに、黄色のタルトラジン色素の線が、試料添加前はくっきりしていて、試料を吸い上げるにつれて移動することを観察することができ、３分の時点でほとんど見えないまたは完全に消え失せていた。これらの結果から、これは、子癇前症を診断するために試料中のコンゴーレッド親和性タンパク質を検出するための診断試験デバイスに適した構成であることが示される。
【０１１１】
実施例１７
本発明のデバイスの結果対ＣＲＤ試験の結果
本発明の試験デバイスを、子癇前症の疑いのある女性におけるコンゴーレッドドット（Ｃｏｎｇｏ  Ｒｅｄ  ｄｏｔ：ＣＲＤ）試験の研究（Ｒｏｏｄら、２０１６年  ＡＪＯＧ、２１４（１）ｓ２４−ｓ２５）からの１０５の臨床尿を試験することによって評価した。試料は、強陽性試料が２７、陰性試料が２８、弱陽性試料が５０となるように選択した。試料の陰性／陽性状態は、ＣＲＲ（％）（Ｉｒｉｎａ  Ａ．Ｂｕｈｉｍｓｃｈｉら、Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．６、２４５ｒａ９２（２０１４年））によって判断した。試料を試験デバイスに添加し、３分の時点で、結果を目視で、陰性（−または０）、弱陽性（＋または１）または強陽性（＋＋または２）のいずれかに採点した。
【０１１２】
結果から、試験デバイスの結果は、試料のうち１０３／１０５（９８％）においてＣＲＤの結果と一致していたことが示された。本発明のデバイスの試験結果は、子癇前症の宣告された診断（ＡＣＯＧガイダンス：Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ  ｉｎ  Ｐｒｅｇｎａｎｃｙ  Ｒｅｐｏｒｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｏｂｓｔｅｔｒｉｃｉａｎｓ  ａｎｄ  Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｉｓｔｓ’Ｔａｓｋ  Ｆｏｒｃｅ  ｏｎ  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ  ｉｎ  Ｐｒｅｇｎａｎｃｙ、２０１３年  Ｏｂｓｔｅｔｒｉｃｓ  ＆  Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｙ  １２２（５）：１１２２−１１３１に基づく）と比較すると、感度９１％、特異度６４％、正確度８２％と共に陽性適中率８３％および陰性適中率７９％を示した。
【０１１３】
試験試料を試験の試料ウェルに添加すると、液体の最前線がストリップを移動して上がるのが３０秒までに観察された。最前線は、約１分の時点で黄色色素の対照の線に当たり、約１．５分までに窓の端部まで移動した。液体の最前線が移動して結果窓内に入ると、３０秒以内に、強陽性の結果がはっきり現れ、それ以降も見えた。結果窓全体が１．５分以内に着色された。弱陽性の結果は、強陽性よりも決定に時間がかかるが、それは、液体の最前線が一般に陰性に見え、試料の添加後約１−３分の時点で結果窓に色が現れるためである。図１に結果の例を示す。
【０１１４】
実施例１８
尿試料対照を使用したデバイスの評価
１２０ｕｇ／デバイスの色素を注入したＰｏｒｅｘ（登録商標）４５８８試料パッド、第２のＰｏｒｅｘ（登録商標）パッド（色素なし）、Ａｈｌｓｔｒｏｍ  ３１９の二重層のトラップ、Ｗｈａｔｍａｎ  ４７０のウィックを有するＭＮ２６０膜毛細管床を含む、デバイスの試験ストリップを組立てた。ＭＮ２６０は、試行対照のタルトラジン色素の線を含有していた。試験試料が色素注入済みＰｏｒｅｘ（登録商標）パッド上に添加されるように、また目視窓の中央がＭＮ２６０膜の上方に置かれ、試験実行前にタルトラジン色素が観察でき、試験実行後に観察されないように最適化したＬＦＡ様カセット内に、試験ストリップを収容した。
【０１１５】
子癇前症であることが確認されている５人の患者からの尿分析物をプールして、陽性アッセイ対照を作成した。コンゴーレッド親和性タンパク質の存在は、コンゴーレッドドットブロット試験（Ｂｕｈｉｍｓｃｈｉ  ２０１４年）によって確認した。リン酸緩衝生理食塩水（１０ｍＭリン酸塩、ｐＨ  ７．４、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ）を、陰性対照として、および陽性アッセイ対照の希釈系列を作製するために、使用した。以下の希釈液を調製した（試料対緩衝液の総容積の比率）：希釈なし、１：４、１：８、１：１５、１：４０。この希釈系列の各尿試料を、デバイス上で二重で試験した。
【０１１６】
結果：デバイス上で各尿試料について特定の希釈でそれぞれ反復すると、同じ染色密度を呈する。試験の結果を以下の表に示す。
【０１１７】
【表８】
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【０１１８】
これらのデータから、診断デバイスがコンゴーレッド親和性タンパク質を検出することができ、この効果が滴定可能であることが実証される。これらのデータから、該デバイスが、コンゴーレッド親和性タンパク質の濃度の増大に相当する赤色の漸進的な視覚的尺度を呈することも示される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際調査報告】
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