(57)【要約】腫瘍壊死療法関連抗原を標的化するＣＡＲ細胞が、がん処置の新たな方法として記載される。ＴＮＴ  ＣＡＲ細胞は、患者において、安全かつ有効であり、ヒト腫瘍およびがんを処置するのに使用しうることが提起されている。一局面では、（ａ）ＴＮＴ抗体の抗原結合性ドメイン；（ｂ）ヒンジドメイン；（ｃ）膜貫通ドメイン；および（ｄ）細胞内ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）が提供される。別の局面では、上記キメラ抗原受容体は、（ａ）ＴＮＴ抗体の抗原結合性ドメイン；（ｂ）ＣＤ８αヒンジドメイン；（ｃ）ＣＤ８α膜貫通ドメイン；（ｄ）ＣＤ２８共刺激性シグナル伝達領域および／または４−１ＢＢ共刺激性シグナル伝達領域；ならびに（ｅ）ＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインを含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）ＴＮＴ抗体の抗原結合性ドメイン；（ｂ）ヒンジドメイン；（ｃ）膜貫通ドメイン；および（ｄ）細胞内ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。
【請求項２】
（ａ）ＴＮＴ抗体の抗原結合性ドメイン；（ｂ）ＣＤ８αヒンジドメイン；（ｃ）ＣＤ８α膜貫通ドメイン；（ｄ）ＣＤ２８共刺激性シグナル伝達領域および／または４−１ＢＢ共刺激性シグナル伝達領域；ならびに（ｅ）ＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインを含む、請求項１に記載のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。
【請求項３】
前記ＴＮＴ抗体の前記抗原結合性ドメインが、ＴＮＴ重鎖可変領域と、ＴＮＴ軽鎖可変領域とを含む、請求項１または２に記載のＣＡＲ。
【請求項４】
前記ＴＮＴ重鎖可変領域と、前記ＴＮＴ軽鎖可変領域との間に配置されたリンカーポリペプチドをさらに含む、請求項３に記載のＣＡＲ。
【請求項５】
前記ＴＮＴ重鎖可変領域が、配列番号１〜３、９〜１１、１７〜１９、２５〜２７、またはそれらの各々の同等物のうちのいずれか１つを含むＣＤＲ領域を含む、請求項３または４に記載のＣＡＲ。
【請求項６】
前記ＴＮＴ重鎖可変領域が、配列番号７、１５、２３、３１、またはそれらの各々の同等物のうちのいずれか１つによりコードされるアミノ酸配列を含む、請求項３または４に記載のＣＡＲ。
【請求項７】
前記ＴＮＴ軽鎖可変領域が、配列番号４〜６、１２〜１４、２８〜３０、またはそれらの各々の同等物のうちのいずれか１つを含むＣＤＲ領域を含む、請求項３から６のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
【請求項８】
前記ＴＮＴ軽鎖可変領域が、配列番号８、１６、２４、３２、またはそれらの各々の同等物のうちのいずれか１つによりコードされるアミノ酸配列を含むＣＤＲ領域を含む、請求項３から６のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
【請求項９】
前記リンカーポリペプチドが、配列（グリシン−セリン）ｎ［配列中、ｎは、１〜６の整数である］（配列番号６６）を含むポリペプチドを含む、請求項４から８のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
【請求項１０】
前記ＣＡＲへと接合させた検出可能なマーカーまたは精製マーカーをさらに含む、前記請求項のいずれかに記載のＣＡＲ。
【請求項１１】
同等物が、前記ＣＡＲに対して少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するポリペプチド、または前記ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドの相補体と、高ストリンジェンシーの条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドを含み、高ストリンジェンシーの条件が、約５５℃〜約６８℃のインキュベーション温度；約１倍濃度のＳＳＣ〜約０．１倍濃度のＳＳＣの緩衝液濃度；約５５％〜約７５％のホルムアミド濃度；および約１倍濃度のＳＳＣ、０．１倍濃度のＳＳＣ、または脱イオン水の洗浄溶液を含む、請求項５から１０のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
【請求項１２】
請求項１から１０のいずれか一項に記載のＣＡＲをコードする単離核酸配列またはその相補体またはそれらの各々の同等物であって、同等物が、ポリヌクレオチドもしくはその相補体、または前記ポリヌクレオチドもしくは前記ＣＡＲをコードする前記単離核酸の相補体と、高ストリンジェンシーの条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドに対して、少なくとも８０％の配列同一性を有し、高ストリンジェンシーの条件が、約５５℃〜約６８℃のインキュベーション温度；約１倍濃度のＳＳＣ〜約０．１倍濃度のＳＳＣの緩衝液濃度；約５５％〜約７５％のホルムアミド濃度；および約１倍濃度のＳＳＣ、０．１倍濃度のＳＳＣ、または脱イオン水の洗浄溶液を含む、単離核酸配列またはその相補体またはそれらの各々の同等物。
【請求項１３】
ＴＮＴ抗体の抗原結合性ドメインをコードするポリヌクレオチドの上流に配置されたＫｏｚａｋコンセンサス配列をさらに含む、請求項１２に記載の単離核酸。
【請求項１４】
前記単離核酸が、抗生物質耐性ポリヌクレオチドをさらに含む、請求項１２または１３に記載の単離核酸配列。
【請求項１５】
請求項１２から１４のいずれか一項に記載の単離核酸配列を含むベクター。
【請求項１６】
前記ベクターが、プラスミドである、請求項１５に記載のベクター。
【請求項１７】
レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、およびアデノ随伴ウイルスベクターからなる群より選択されるウイルスベクターである、請求項１５に記載のベクター。
【請求項１８】
請求項１から１１のいずれか一項に記載のＣＡＲ；および／または請求項１２から１４のいずれか一項に記載の単離核酸；および／または請求項１５から１７のいずれか一項に記載のベクターを含む単離細胞。
【請求項１９】
免疫調節性分子をコードするポリヌクレオチドへと作動的に連結されたＮＦＡＴ調節性ポリヌクレオチドを含む単離核酸をさらに含む、請求項１８に記載の単離細胞。
【請求項２０】
前記単離核酸へとカップリングさせた、抗生物質耐性ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをさらに含む、請求項１９に記載の単離細胞。
【請求項２１】
免疫調節性分子が、Ｂ７．１、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ１３７Ｌ、ＧＩＴＲＬ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１２、ＩＬ−２、低毒性ＩＬ−２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、ＬＥＣ、およびＯＸ４０Ｌからなる群より選択される１または複数である、請求項１９または２０に記載の単離細胞。
【請求項２２】
前記免疫調節性分子が、ＩＬ−１２および／またはＧＭ−ＣＳＦを含む、請求項１９または２０に記載の単離細胞。
【請求項２３】
前記免疫調節性分子が、ＩＬ−１２、ならびに／またはＩＬ−２および低毒性ＩＬ−２のうちの１もしくは複数を含む、請求項１９または２０に記載の単離細胞。
【請求項２４】
前記免疫調節性分子が、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−１５を含む、請求項１９または２０に記載の単離細胞。
【請求項２５】
前記免疫調節性分子が、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２１を含む、請求項１９または２０に記載の単離細胞。
【請求項２６】
前記免疫調節性分子が、ＩＬ−１２および／またはＢ７．１を含む、請求項１９または２０に記載の単離細胞。
【請求項２７】
前記免疫調節性分子が、ＩＬ−１２および／またはＯＸ４０Ｌを含む、請求項１９または２０に記載の単離細胞。
【請求項２８】
前記免疫調節性分子が、ＩＬ−１２および／またはＣＤ４０Ｌを含む、請求項１９または２０に記載の単離細胞。
【請求項２９】
前記免疫調節性分子が、ＩＬ−１２および／またはＧＩＴＲＬを含む、請求項１９または２０に記載の単離細胞。
【請求項３０】
前記免疫調節性分子が、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−１８を含む、請求項１９または２０に記載の単離細胞。
【請求項３１】
前記免疫調節性分子が、ＩＬ−２および低毒性ＩＬ−２のうちの１または複数と、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、およびＬＥＣのうちの１または複数とを含む、請求項１９または２０に記載の単離細胞。
【請求項３２】
前記免疫調節性分子が、ＩＬ−１５と、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、およびＬＥＣのうちの１または複数とを含む、請求項１９または２０に記載の単離細胞。
【請求項３３】
前記免疫調節性分子が、ＩＬ−２１と、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、およびＬＥＣのうちの１または複数とを含む、請求項１９または２０に記載の単離細胞。
【請求項３４】
前記免疫調節性分子が、ＧＭ−ＣＳＦと、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、およびＬＥＣのうちの１または複数とを含む、請求項１９または２０に記載の単離細胞。
【請求項３５】
前記免疫調節性分子が、ＯＸ４０Ｌと、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、およびＬＥＣのうちの１または複数とを含む、請求項１９または２０に記載の単離細胞。
【請求項３６】
前記免疫調節性分子が、ＣＤ１３７Ｌと、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、およびＬＥＣのうちの１または複数とを含む、請求項１９または２０に記載の単離細胞。
【請求項３７】
前記免疫調節性分子が、Ｂ７．１と、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、およびＬＥＣのうちの１または複数とを含む、請求項１９または２０に記載の単離細胞。
【請求項３８】
前記免疫調節性分子が、ＣＤ４０Ｌと、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、およびＬＥＣのうちの１または複数とを含む、請求項１９または２０に記載の単離細胞。
【請求項３９】
前記免疫調節性分子が、ＧＩＴＲＬと、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、およびＬＥＣのうちの１または複数とを含む、請求項１９または２０に記載の単離細胞。
【請求項４０】
前記細胞が、原核細胞または真核細胞である、請求項１８から３９のいずれか一項に記載の単離細胞。
【請求項４１】
前記細胞が、真核細胞である、請求項１８から４０のいずれか一項に記載の単離細胞。
【請求項４２】
前記真核細胞が、動物細胞、哺乳動物細胞、ウシ細胞、ネコ科動物細胞、イヌ科動物細胞、マウス細胞、ウマ細胞、またはヒト細胞から選択される、請求項４１に記載の単離細胞。
【請求項４３】
前記真核細胞が、Ｔ細胞、Ｂ細胞、またはＮＫ細胞である、請求項４２に記載の単離細胞。
【請求項４４】
請求項１から１１のいずれか一項に記載のＣＡＲ；および／または請求項１２から１４のいずれか一項に記載の単離核酸；および／または請求項１５から１７のいずれか一項に記載のベクター；および／または請求項１８から４３のいずれか一項に記載の単離細胞を含む組成物。
【請求項４５】
免疫調節性分子をさらに含む、請求項４４に記載の組成物。
【請求項４６】
免疫調節性分子が、Ｂ７．１、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ１３７Ｌ、ＧＩＴＲＬ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１２、ＩＬ−２、低毒性ＩＬ−２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、ＬＥＣ、およびＯＸ４０Ｌからなる群より選択される１または複数である、請求項４５に記載の組成物。
【請求項４７】
前記免疫調節性分子が、ＩＬ−１２および／またはＧＭ−ＣＳＦを含む、請求項４５に記載の組成物。
【請求項４８】
前記免疫調節性分子が、ＩＬ−１２、ならびに／またはＩＬ−２および低毒性ＩＬ−２のうちの１もしくは複数を含む、請求項４５に記載の組成物。
【請求項４９】
前記免疫調節性分子が、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−１５を含む、請求項４５に記載の組成物。
【請求項５０】
前記免疫調節性分子が、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２１を含む、請求項４５に記載の組成物。
【請求項５１】
前記免疫調節性分子が、ＩＬ−１２および／またはＢ７．１を含む、請求項４５に記載の組成物。
【請求項５２】
前記免疫調節性分子が、ＩＬ−１２および／またはＯＸ４０Ｌを含む、請求項４５に記載の組成物。
【請求項５３】
前記免疫調節性分子が、ＩＬ−１２および／またはＣＤ４０Ｌを含む、請求項４５に記載の組成物。
【請求項５４】
前記免疫調節性分子が、ＩＬ−１２および／またはＧＩＴＲＬを含む、請求項４５に記載の組成物。
【請求項５５】
前記免疫調節性分子が、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−１８を含む、請求項４５に記載の組成物。
【請求項５６】
前記免疫調節性分子が、ＩＬ−２および低毒性ＩＬ−２のうちの１または複数と、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、およびＬＥＣのうちの１または複数とを含む、請求項４５に記載の組成物。
【請求項５７】
前記免疫調節性分子が、ＩＬ−１５と、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、およびＬＥＣのうちの１または複数とを含む、請求項４５に記載の組成物。
【請求項５８】
前記免疫調節性分子が、ＩＬ−２１と、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、およびＬＥＣのうちの１または複数とを含む、請求項４５に記載の組成物。
【請求項５９】
前記免疫調節性分子が、ＧＭ−ＣＳＦと、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、およびＬＥＣのうちの１または複数とを含む、請求項４５に記載の組成物。
【請求項６０】
前記免疫調節性分子が、ＯＸ４０Ｌと、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、およびＬＥＣのうちの１または複数とを含む、請求項４５に記載の組成物。
【請求項６１】
前記免疫調節性分子が、ＣＤ１３７Ｌと、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、およびＬＥＣのうちの１または複数とを含む、請求項４５に記載の組成物。
【請求項６２】
前記免疫調節性分子が、Ｂ７．１と、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、およびＬＥＣのうちの１または複数とを含む、請求項４５に記載の組成物。
【請求項６３】
前記免疫調節性分子が、ＣＤ４０Ｌと、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、およびＬＥＣのうちの１または複数とを含む、請求項４５に記載の組成物。
【請求項６４】
前記免疫調節性分子が、ＧＩＴＲＬと、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、およびＬＥＣのうちの１または複数とを含む、請求項４５に記載の組成物。
【請求項６５】
ＴＮＴ抗原を発現させる細胞に結合した、請求項１から１０のいずれか一項に記載のＣＡＲを含む単離細胞を含む単離複合体。
【請求項６６】
ＴＮＴ関連抗原またはその断片に結合した、請求項１から１１のいずれか一項に記載のＣＡＲを含む前記単離細胞を含む単離複合体。
【請求項６７】
ＴＮＴ  ＣＡＲ発現細胞を作製する方法であって、単離細胞に、請求項１２から１４のいずれか一項に記載の単離核酸配列を形質導入するステップを含む、方法。
【請求項６８】
前記細胞に、免疫調節性分子をコードするポリヌクレオチドへと作動的に連結されたＮＦＡＴ調節性ポリヌクレオチドを含む単離核酸を形質導入するステップ
をさらに含む、請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
ＴＮＴ抗体のＴＮＴ抗原結合性ドメインの発現について選択することにより、前記単離核酸を形質導入された前記細胞を選択するステップをさらに含む、請求項６７または６８に記載の方法。
【請求項７０】
免疫調節性分子が、Ｂ７．１、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ１３７Ｌ、ＧＩＴＲＬ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１２、ＩＬ−２、低毒性ＩＬ−２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、ＬＥＣ、およびＯＸ４０Ｌからなる群より選択される１または複数である、請求項６８に記載の方法。
【請求項７１】
前記免疫調節性分子が、ＩＬ−１２および／またはＧＭ−ＣＳＦを含む、請求項６８に記載の方法。
【請求項７２】
前記免疫調節性分子が、ＩＬ−１２、ならびに／またはＩＬ−２および低毒性ＩＬ−２のうちの１もしくは複数を含む、請求項６８に記載の方法。
【請求項７３】
前記免疫調節性分子が、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−１５を含む、請求項６８に記載の方法。
【請求項７４】
前記免疫調節性分子が、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２１を含む、請求項６８に記載の方法。
【請求項７５】
前記免疫調節性分子が、ＩＬ−１２および／またはＢ７．１を含む、請求項６８に記載の方法。
【請求項７６】
前記免疫調節性分子が、ＩＬ−１２および／またはＯＸ４０Ｌを含む、請求項６８に記載の方法。
【請求項７７】
前記免疫調節性分子が、ＩＬ−１２および／またはＣＤ４０Ｌを含む、請求項６８に記載の方法。
【請求項７８】
前記免疫調節性分子が、ＩＬ−１２および／またはＧＩＴＲＬを含む、請求項６８に記載の方法。
【請求項７９】
前記免疫調節性分子が、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−１８を含む、請求項６８に記載の方法。
【請求項８０】
前記免疫調節性分子が、ＩＬ−２および低毒性ＩＬ−２のうちの１または複数と、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、およびＬＥＣのうちの１または複数とを含む、請求項６８に記載の方法。
【請求項８１】
前記免疫調節性分子が、ＩＬ−１５と、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、およびＬＥＣのうちの１または複数とを含む、請求項６８に記載の方法。
【請求項８２】
前記免疫調節性分子が、ＩＬ−２１と、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、およびＬＥＣのうちの１または複数とを含む、請求項６８に記載の方法。
【請求項８３】
前記免疫調節性分子が、ＧＭ−ＣＳＦと、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、およびＬＥＣのうちの１または複数とを含む、請求項６８に記載の方法。
【請求項８４】
前記免疫調節性分子が、ＯＸ４０Ｌと、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、およびＬＥＣのうちの１または複数とを含む、請求項６８に記載の方法。
【請求項８５】
前記免疫調節性分子が、ＣＤ１３７Ｌと、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、およびＬＥＣのうちの１または複数とを含む、請求項６８に記載の方法。
【請求項８６】
前記免疫調節性分子が、Ｂ７．１と、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、およびＬＥＣのうちの１または複数とを含む、請求項６８に記載の方法。
【請求項８７】
前記免疫調節性分子が、ＣＤ４０Ｌと、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、およびＬＥＣのうちの１または複数とを含む、請求項６８に記載の方法。
【請求項８８】
前記免疫調節性分子が、ＧＩＴＲＬと、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、およびＬＥＣのうちの１または複数とを含む、請求項６８に記載の方法。
【請求項８９】
前記単離細胞が、Ｔ細胞、Ｂ細胞、およびＮＫ細胞からなる群より選択される、請求項６７から８８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９０】
ＴＮＴ関連抗原を発現させる腫瘍の増殖を阻害する方法であって、前記腫瘍を、請求項４１に記載の単離細胞と接触させるステップを含む、方法。
【請求項９１】
前記接触させるステップが、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏにおけるステップである、請求項９０に記載の方法。
【請求項９２】
前記接触させるステップが、ｉｎ  ｖｉｖｏにおけるステップであり、前記単離細胞が、処置される対象に対して自家である、請求項９１に記載の方法。
【請求項９３】
前記対象へと、有効量の細胞減少療法を投与するステップをさらに含む、請求項９２に記載の方法。
【請求項９４】
前記細胞減少療法が、化学療法、寒冷療法、および／または放射線療法を含む、請求項９３に記載の方法。
【請求項９５】
ＴＮＴ関連抗原を発現させるがんの処置を必要とする対象における、ＴＮＴ関連抗原を発現させるがんを処置する方法であって、前記対象へと、有効量の、請求項４１に記載の単離細胞を投与するステップを含む、方法。
【請求項９６】
前記単離細胞が、処置される前記対象に対して自家である、請求項９５に記載の方法。
【請求項９７】
前記対象へと、有効量の細胞減少療法を投与するステップをさらに含む、請求項９５または９６に記載の方法。
【請求項９８】
前記細胞減少療法が、化学療法、寒冷療法、および／または放射線療法を含む、請求項９７に記載の方法。
【請求項９９】
前記がんが、血液および／または骨髄に影響を及ぼすがんである、請求項９５から９８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１００】
前記対象が、ヒト患者である、請求項９５から９９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０１】
本明細書に開示される組成物と、任意選択で、使用のための指示とを含むキット。
【請求項１０２】
ＴＮＴ結合性ドメインと、任意選択で、使用のための指示とを含む、請求項１００または１０１に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、２０１５年４月３０日に出願された米国仮出願第６２／１５５，２９６号の米国特許法第１１９条（ｅ）のもとの優先権を主張し、その内容は、全体において参照によって本明細書に組み込まれる。
【０００２】
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出され、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる配列表を含有する。２０１６年４月２９日に作成された前記ＡＳＣＩＩコピーは、０６４１８９−７１８１＿ＳＬ．ｔｘｔと名付けられ、４２，８６０バイトのサイズである。
【０００３】
技術分野
本開示は一般に、ヒト免疫学の分野、具体的には、がんの免疫療法に関する。
【背景技術】
【０００４】
本発明の背景についての以下の考察は、本発明へと向けて技術を補助するためだけに提供される。
【０００５】
壊死性細胞を、モノクローナル抗体（ＭＡｂ）の選択的結合のための標的として活用する、がんのイメージングおよび治療のためのユニークな手法が、本出願人らの研究グループにより開発されている（Ｅｐｓｔｅｉｎ，  Ａ．Ｌ．ら（１９８８年）、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、４８巻：５８４２〜５８４８頁；Ｃｈｅｎ，  Ｆ．Ｍ．ら（１９９１年）、Ｊ  Ｎａｔｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．、８３巻：２００〜２０４頁；Ｅｐｓｔｅｉｎ，  Ａ．Ｌ．ら（１９９１年）、Ａｎｔｉｂｏｄｙ，  Ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊ  ＆  Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．、４巻：１５１〜１６１頁；Ｍｉｌｌｅｒ，  Ｇ．Ｋ．ら（１９９３年）、Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ、１２巻：６８９〜６９８頁；Ｈｏｒｎｉｃｋ，  Ｊ．Ｌ．ら（１９９８年）、Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｔｈｅｒ  ＆  Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ、１３巻：２５５〜２６８頁）。腫瘍壊死療法（ＴＮＴ）は、腫瘍関連細胞表面抗原に結合するＭＡｂを利用する他の方法とは根本的に異なっている。対照的なことに、ＴＮＴ  ＭＡｂは、正常または腫瘍細胞が、死滅するか、または損なわれる（例えば、低酸素症、壊死、アポトーシス、または細胞傷害性試薬および／もしくは過程により）場合に、細胞ゴーストにより顕示または保持される細胞内抗原を認識するのである。したがって、ＴＮＴ  ＭＡｂは、正常組織内に見出されない、透過性、変性細胞の存在のために、悪性腫瘍内に局在化する。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｅｐｓｔｅｉｎ，Ａ．Ｌ．ら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（１９８８年）４８巻：５８４２〜５８４８頁
【非特許文献２】Ｃｈｅｎ，Ｆ．Ｍ．ら、Ｊ  Ｎａｔｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．（１９９１年）８３巻：２００〜２０４頁
【非特許文献３】Ｅｐｓｔｅｉｎ，Ａ．Ｌ．ら、Ａｎｔｉｂｏｄｙ，Ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊ＆Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．（１９９１年）４巻：１５１〜１６１頁
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本開示の態様は、（ａ）ＴＮＴ抗体の抗原結合性ドメイン；（ｂ）ヒンジドメイン；（ｃ）膜貫通ドメイン；および（ｄ）細胞内ドメインを含むか、または代替的にこれらから本質的になるか、またはなおさらにこれらからなるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）に関する。本開示のさらなる態様は、（ａ）ＴＮＴ抗体の抗原結合性ドメイン；（ｂ）ＣＤ８αヒンジドメイン；（ｃ）ＣＤ８α膜貫通ドメイン；（ｄ）ＣＤ２８共刺激性シグナル伝達領域および／または４−１ＢＢ共刺激性シグナル伝達領域；ならびに（ｅ）ＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインを含むか、または代替的にこれらから本質的になるか、またはなおさらにこれらからなるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）に関する。
【０００８】
ある特定の実施形態では、ＴＮＴ抗体の抗原結合性ドメインは、ＴＮＴ重鎖可変領域と、ＴＮＴ軽鎖可変領域とを含むか、または代替的にこれらから本質的になるか、またはさらにこれらからなる。
【０００９】
一部の実施形態では、ＴＮＴ重鎖可変領域は、配列番号１〜３、９〜１１、１７〜１９、２５〜２７、またはそれらの各々の同等物のうちのいずれか１つを含むＣＤＲ領域を含むか、または代替的にこれから本質的になるか、またはさらにこれからなる。一部の実施形態では、ＴＮＴ重鎖可変領域は、配列番号７、１５、２３、３１、またはそれらの各々の同等物のうちのいずれか１つによりコードされるアミノ酸配列を含むか、または代替的にこれから本質的になるか、またはさらにこれからなる。
【００１０】
一部の実施形態では、ＴＮＴ軽鎖可変領域は、配列番号４〜６、１２〜１４、２８〜３０、またはそれらの各々の同等物のうちのいずれか１つを含むか、または代替的にこれから本質的になるか、またはなおさらにこれからなるＣＤＲ領域を含む。一部の実施形態では、ＴＮＴ軽鎖可変領域は、配列番号８、１６、２４、３２、またはそれらの各々の同等物のうちのいずれか１つによりコードされるアミノ酸配列を含むか、または代替的にこれから本質的になるか、またはさらにこれからなる。
【００１１】
ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、ＴＮＴ重鎖可変領域と、ＴＮＴ軽鎖可変領域との間に配置されたリンカーポリペプチドをさらに含むか、または代替的にさらにこれから本質的になるか、またはなおさらにこれからなる。ある特定の実施形態では、リンカーは、グリシン−セリンリンカーである。さらなる実施形態では、リンカーポリペプチドは、配列（グリシン−セリン）ｎ［配列中、ｎは、１〜６の整数である］（配列番号６６）を含むか、または代替的にこれから本質的になるか、またはさらにこれからなる。
【００１２】
ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＡＲへと接合させた検出可能なマーカーおよび／または精製マーカーをさらに含むか、または代替的にさらにこれらから本質的になるか、またはなおさらにこれらからなる。
【００１３】
本開示のさらなる態様は、上記で記載したＣＡＲをコードする単離核酸配列またはその相補体またはそれらの各々の同等物に関する。
【００１４】
ある特定の実施形態では、単離核酸配列は、ＴＮＴ抗体の抗原結合性ドメインをコードするポリヌクレオチドの上流に配置されたＫｏｚａｋコンセンサス配列をさらに含むか、またはさらにこれから本質的になるか、またはなおさらにこれからなる。
【００１５】
ある特定の態様では、単離核酸は、単離核酸へと作動的にカップリングさせた、抗生物質耐性ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをさらに含むか、または代替的にこれから本質的になるか、またはさらにこれからなる。
【００１６】
本開示の態様は、上記で記載した単離核酸のうちの１または複数を含むベクターに関する。ある特定の実施形態では、ベクターは、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、およびアデノ随伴ウイルスベクターの群より選択されるプラスミドまたはウイルスベクターである。単離核酸およびそれらを含有するベクターは、本明細書で記載されるＣＡＲを調製するのに有用である。
【００１７】
本開示のさらなる態様は、上記で記載した組成：ＴＮＴ  ＣＡＲ、ＣＡＲをコードする単離核酸もしくはその相補体、または単離核酸を含有するベクターのうちの１または複数を含むか、または代替的にこれらから本質的になるか、またはさらにこれらからなる単離細胞に関する。ある特定の実施形態では、単離細胞は、細菌細胞、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉなどの原核細胞の場合もあり、真核細胞の場合もある。一部の実施形態では、単離真核細胞は、動物細胞、哺乳動物細胞、ウシ細胞、ネコ科動物細胞、イヌ科動物細胞、マウス細胞、ウマ細胞、またはヒト細胞から選択される。さらなる実施形態では、単離細胞は、本明細書で開示される種のうちのいずれかに由来する、Ｔ細胞、Ｂ細胞、またはＮＫ細胞である。
【００１８】
ある特定の実施形態では、単離細胞は、免疫調節性分子をコードするポリヌクレオチドへと作動的に連結された、ＮＦＡＴ調節性ポリヌクレオチドを含むか、または代替的にこれから本質的になるか、またはなおさらにこれからなる単離核酸をさらに含むか、または代替的にこれから本質的になるか、またはなおさらにこれからなる。単離細胞の非限定的な例は、細菌細胞、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉなどの原核細胞、または真核細胞である。一部の実施形態では、単離真核細胞は、動物細胞、哺乳動物細胞、ウシ細胞、ネコ科動物細胞、イヌ科動物細胞、マウス細胞、ウマ細胞、またはヒト細胞から選択される。さらなる実施形態では、単離細胞は、本明細書で開示される種のうちのいずれかに由来する、Ｔ細胞、Ｂ細胞、またはＮＫ細胞である。
【００１９】
ある特定の実施形態では、単離核酸は、抗生物質耐性遺伝子をコードするポリヌクレオチドをさらに含むか、または代替的にこれから本質的になるか、またはなおさらにこれからなる。ある特定の実施形態では、免疫調節性分子は、Ｂ７．１、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ１３７Ｌ、ＧＩＴＲＬ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１２、ＩＬ−２、低毒性ＩＬ−２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、ＬＥＣ、およびＯＸ４０Ｌからなる群より選択される、１または複数の分子である。
【００２０】
本開示の態様は、上記で記載した組成、例えば、ＣＡＲ、単離核酸、細胞、またはベクター、および担体のうちの１または複数を含むか、または代替的にこれらから本質的になるか、またはさらにこれらからなる組成物に関する。
【００２１】
ある特定の実施形態では、組成物は、免疫調節性分子および／または免疫調節性分子をコードするポリヌクレオチドへと作動的に連結されたＮＦＡＴ調節性ポリヌクレオチドを含む単離核酸をさらに含むか、または代替的にこれらから本質的になるか、またはなおさらにこれらからなる。ある特定の実施形態では、免疫調節性分子は、Ｂ７．１、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ１３７Ｌ、ＧＩＴＲＬ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１２、ＩＬ−２、低毒性ＩＬ−２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、ＬＥＣ、およびＯＸ４０Ｌからなる群より選択される、１または複数の分子である。
【００２２】
本開示の態様は、ＴＮＴ関連抗原もしくはその断片、および／またはＴＮＴ関連抗原を発現させる細胞に結合したＣＡＲまたはＣＡＲを含む細胞を含む単離複合体に関する。一態様では、抗原結合性ドメインを、細胞の表面上で発現させる。別の態様では、ＴＮＴ関連抗原を、腫瘍内、例えば、腫瘍の壊死性組織内で発現させる。腫瘍の非限定的な例は、充実性腫瘍である。充実性腫瘍の非限定的な例は、結腸がん細胞を含む腫瘍である。本明細書では、他の充実性腫瘍を開示する。一態様では、ＴＮＴ  ＣＡＲを含有するかまたは発現させる細胞は、ＮＫ細胞、Ｂ細胞、またはＴ細胞である。腫瘍または細胞は、任意の動物細胞、例えば、ヒト細胞などの哺乳動物細胞に由来しうる。
【００２３】
本開示の一部の態様は、ＴＮＴ  ＣＡＲ発現細胞を作製する方法であって、単離細胞に、本明細書で記載されるＣＡＲをコードする核酸配列を形質導入するステップを含むか、または代替的にこれから本質的になるか、またはなおさらにこれからなる方法に関する。
【００２４】
さらなる態様では、方法は、ＣＡＲを発現させる細胞を選択および単離するステップをさらに含む。さらなる態様では、細胞は、哺乳動物細胞、例えば、ＮＫ細胞、Ｂ細胞、またはＴ細胞などのヒト細胞などの真核細胞である。細胞には、本明細書で記載されるウイルスベクターを使用して形質導入することもでき、代替的に、「Ｎｏｎｖｉｒａｌ  ＲＮＡ  ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ  ｔｏ  ｔｒａｎｓｉｅｎｔｌｙ  ｍｏｄｉｆｙ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｗｉｔｈ  ｃｈｉｍｅｒｉｃ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｆｏｒ  ａｄｏｐｔｉｖｅ  ｔｈｅｒａｐｙ」と題する、Ｒｉｅｔら（２０１３年）、Ｍｅｔｈ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．、９６９巻：１８７〜２０１頁において記載されている技術を使用して形質導入することもできる。
【００２５】
ある特定の実施形態では、方法は、細胞に、免疫調節性分子をコードするポリヌクレオチドへと作動的に連結された、ＮＦＡＴ調節性ポリヌクレオチドを含むか、または代替的にこれから本質的になるか、またはなおさらにこれからなる単離核酸を形質導入するステップをさらに含むか、または代替的にこれから本質的になるか、またはなおさらにこれからなる。細胞には、本明細書で記載されるウイルスベクターを使用して形質導入することもでき、代替的に、「Ｎｏｎｖｉｒａｌ  ＲＮＡ  ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ  ｔｏ  ｔｒａｎｓｉｅｎｔｌｙ  ｍｏｄｉｆｙ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｗｉｔｈ  ｃｈｉｍｅｒｉｃ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｆｏｒ  ａｄｏｐｔｉｖｅ  ｔｈｅｒａｐｙ」と題する、Ｒｉｅｔら（２０１３年）、Ｍｅｔｈ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．、９６９巻：１８７〜２０１頁において記載されている技術を使用して形質導入することもできる。
【００２６】
ある特定の実施形態では、免疫調節性分子は、Ｂ７．１、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ１３７Ｌ、ＧＩＴＲＬ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１２、ＩＬ−２、低毒性ＩＬ−２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、ＬＥＣ、およびＯＸ４０Ｌからなる群より選択される１または複数である。
【００２７】
ある特定の実施形態では、ＴＮＴ  ＣＡＲ発現細胞を作製する方法は、ＴＮＴ  ＣＡＲ発現細胞の集団を活性化および拡大するステップをさらに含むか、または代替的にこれから本質的になるか、またはなおさらにこれからなる。本開示のある特定の態様は、ＴＮＴ  ＣＡＲを含むか、または代替的にこれから本質的になるか、またはなおさらにこれからなる単離活性化細胞集団に関する。ある特定の実施形態では、細胞は、ＮＫ細胞、Ｂ細胞、またはＴ細胞のうちの１または複数である。
【００２８】
本開示の態様は、腫瘍を、有効量の、上記で開示した単離細胞または組成物と接触させることにより、ＴＮＴ関連抗原を発現させる腫瘍の増殖を阻害する方法に関する。接触させるステップは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおけるステップの場合もあり、ｉｎ  ｖｉｖｏにおけるステップの場合もある。接触させるステップが、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおけるステップである場合、方法を使用して、患者の腫瘍に対する個別化療法について調べることもでき、組合せ療法についてアッセイすることもできる。接触させるステップが、ｉｎ  ｖｉｖｏにおけるステップである場合、方法は、がんを患うヒト患者など、それを必要とする対象における腫瘍の増殖を阻害するのに有用であり、患者は、有効量の細胞を施される。ある特定の実施形態では、腫瘍は、充実性腫瘍である。ある特定の実施形態では、標的化されるがん／腫瘍は、充実性腫瘍、または血液および／もしくは骨髄に影響を及ぼすがんである。ある特定の実施形態では、単離細胞は、処置される対象に対して自家である。別の態様では、方法は、対象へと、有効量の細胞減少療法を投与するステップをさらに含むか、またはこれから本質的になるか、またはなおさらにこれからなる。さらなる態様では、方法は、対象へと投与される細胞を単離するステップと、細胞に、本明細書で記載されるＣＡＲをコードする、有効量の単離核酸を形質導入するステップと、ＣＡＲをコードする細胞の集団を得るように、細胞を培養し、これを、任意選択で、拡大し、活性化させるステップと、次いで、細胞を、患者へと投与するステップとをさらに含む。
【００２９】
本明細書ではまた、上記で言及した組成物のうちの１または複数と、本明細書で開示される方法における、それらの使用のための指示とを含むキットも開示される。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１】図１は、ＨＬＡ依存的なＴ細胞の活性化をバイパスするように、Ｔ細胞シナプスを、単鎖抗体構築物で置きかえるＣＡＲ  Ｔ細胞形成法を示す概略図である。リンカー配列を、配列番号６７として開示する。
【００３１】
【図２−１】図２Ａ〜２Ｄは、腫瘍の壊死性領域に結合するＴＮＴ抗体の特徴を示す。図２Ａは、全ての腫瘍に典型的な、生存索状物（ｖｉａｂｌｅ  ｃｏｒｄ）、新たな壊死性領域、および旧来の壊死を伴う、Ｈ＆Ｅ染色されたヒト腫瘍を示す。ＴＮＴが、マウスおよびヒトの両方の腫瘍に結合する能力を、図２Ｂ〜２Ｄに示す。図２Ｂは、ＢＡＬＢ／ｃマウスにおける、皮下Ｃｏｌｏｎ  ２６腫瘍内の、放射性標識されたＴＮＴ抗体の取込みを示す。図２Ｃは、右肺野および左肺野の両方における、小型の腫瘍小節からなる、気管支肺胞癌を伴う患者の肺内の、放射性標識されたｃｈＴＮＴ−３についてのイムノシンチグラフィー画像を示す。図２Ｄは、Ｉ−１３１で放射性標識されたｃｈＴＮＴ−３を注射された患者であって、肺尖後枝癌腫塊（ａｐｉｃａｌ  ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ  ｌｕｎｇ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｍａｓｓ）を伴う患者についてのイムノシンチグラフィー画像を示す。経時的に撮影された画像は、血液プールについての初期イメージングの強度が、経時的に低下することを示す一方で、腫瘍についての画像は、１０日間にわたり維持されていることから、腫瘍に対する特異性が裏付けられる。加えて、この患者は、左下腹部領域内の化膿性炎症性病変を有したが、ＰＭＮは、高度な異質染色質の核を有し、これが、ＴＮＴ抗原を遮蔽することから、ＴＮＴ抗体の結合が妨げられるという所見のために、イメージングされなかった。膀胱は、代謝されたＩ−１３１放射性標識の蓄積を示すが、これは、排泄の際に消失する。
【図２−２】図２Ａ〜２Ｄは、腫瘍の壊死性領域に結合するＴＮＴ抗体の特徴を示す。図２Ａは、全ての腫瘍に典型的な、生存索状物、新たな壊死性領域、および旧来の壊死を伴う、Ｈ＆Ｅ染色されたヒト腫瘍を示す。ＴＮＴが、マウスおよびヒトの両方の腫瘍に結合する能力を、図２Ｂ〜２Ｄに示す。図２Ｂは、ＢＡＬＢ／ｃマウスにおける、皮下Ｃｏｌｏｎ  ２６腫瘍内の、放射性標識されたＴＮＴ抗体の取込みを示す。図２Ｃは、右肺野および左肺野の両方における、小型の腫瘍小節からなる、気管支肺胞癌を伴う患者の肺内の、放射性標識されたｃｈＴＮＴ−３についてのイムノシンチグラフィー画像を示す。図２Ｄは、Ｉ−１３１で放射性標識されたｃｈＴＮＴ−３を注射された患者であって、肺尖後枝癌腫塊を伴う患者についてのイムノシンチグラフィー画像を示す。経時的に撮影された画像は、血液プールについての初期イメージングの強度が、経時的に低下することを示す一方で、腫瘍についての画像は、１０日間にわたり維持されていることから、腫瘍に対する特異性が裏付けられる。加えて、この患者は、左下腹部領域内の化膿性炎症性病変を有したが、ＰＭＮは、高度な異質染色質の核を有し、これが、ＴＮＴ抗原を遮蔽することから、ＴＮＴ抗体の結合が妨げられるという所見のために、イメージングされなかった。膀胱は、代謝されたＩ−１３１放射性標識の蓄積を示すが、これは、排泄の際に消失する。
【００３２】
【図３】図３Ａ〜３Ｂは、放射性標識されたＴＮＴ抗体の、腫瘍の壊死性領域への結合を裏付ける、オートラジオグラフィー研究を示す。図３Ａは、ヌードマウスに異種移植されたヒトＭＥ−１８０子宮頸部腫瘍についてのＨ＆Ｅ染色切片を示す。明るく染色された領域は、壊死性であり、より暗く染色された領域は、生存腫瘍である。図３Ｂは、肉眼オートラジオグラフィーにより染色された連続切片を示す。暗く染色された領域は、４８時間前に投与された、放射性標識された抗体の沈着を示す。この研究では、抗体は、壊死性領域だけを染色することが見られる。壊死性領域に結合する抗体の例を、赤色矢印で示す一方、黄色矢印は、抗体により標識されない生存帯域をマークする。
【００３３】
【図４】図４は、Ｃｏｌｏｎ  ２６マウス腫瘍モデルにおける、ＬＥＣに誘導される免疫細胞浸潤を示す。これらの研究では、腫瘍を有するマウスを、腫瘍植込みの７〜１１日目に、ｃｈＴＮＴ−３単独（対照）またはＬＥＣ／ｃｈＴＮＴ−３で処置し、３日後に屠殺した。上の３つのパネルは、対照処置マウスから採取し、下の３つのパネルは、ＬＥＣ／ｃｈＴＮＴ−３処置マウスから得た。対照と比較して、標的化されたＬＥＣは、ＰＭＮおよび樹状細胞の両方への大規模な浸潤をもたらし、右下パネルに示される、有効な免疫応答を発生させ、この場合、新たに発生した壊死性領域、ならびに併発する腫瘍血管線維症および凝血の周囲には、リンパ浸潤物が見られる。
【００３４】
【図５】図５は、ＬＥＣ／ｃｈＴＮＴ−３の走化活性を示す。ＴＨＰ−１ヒト単球性白血病細胞を、走化性チャンバー（ｃｈｅｍｏｔａｘｉｓ  ｃｈａｍｂｅｒ）において使用して、ＬＥＣ／ｃｈＴＮＴ−３、遊離ＬＥＣ、およびｃｈＴＮＴ−３（陰性対照）の生物活性を決定した。
【００３５】
【図６】図６Ａ〜６Ｂは、誘導性Ｌ−１２およびＬＥＣ遺伝子についての概略図を示す。
【００３６】
【図７】図７は、バイシストロニックの誘導性ＩＬ−１２およびＬＥＣ遺伝子についての概略図を示す。
【００３７】
【図８】図８Ａ〜８Ｂは、（図８Ａ）ＮＦＡＴタンパク質結合性モチーフおよび誘導性ＮＦＡＴ遺伝子（配列番号５７）の転写開始部位であるＴＳＳ、ならびに（図８Ｂ）バイシストロニックの誘導性ＩＬ−１２およびＬＥＣ遺伝子についての概略図を示す。
【００３８】
【図９】図９は、誘導性ＮＦＡＴ−ＺｓＧｒｅｅｎ１遺伝子を含有するレンチウイルスを用いて形質導入されたＮＫ−９２ＭＩ細胞を示す。ＺｓＧｒｅｅｎ１とは、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ、ＣＡ）により開発された修飾ＧＦＰである。形質導入された細胞を、５０ｆｍｏｌのｒｍＩＬ−１２で刺激する前に、完全ＲＰＭＩ中で、２週間にわたり培養した。１６時間にわたる刺激の後、細胞を、ＺｓＧｒｅｅｎ１の発現について評価した。
【００３９】
【図１０】図１０は、誘導性ＮＦＡＴ−ＺｓＧｒｅｅｎ１遺伝子を単独で含有するレンチウイルス、またはＣＤ１９  ＣＡＲに加えてこれを含有するレンチウイルスを用いて形質導入されたＪｕｒｋａｔ細胞についてのフローサイトメトリー結果を示す。ＣＡＲ−ＮＦＡＴ細胞を、標的のＣＤ１９＋  Ｒａｊｉ細胞と共に、１：１のＣＡＲ対標的細胞比で、一晩にわたりインキュベートした。１６時間にわたるインキュベーションの後、細胞を、フローサイトメトリーを介して、ＺｓＧｒｅｅｎ１の発現の誘導について評価した。
【００４０】
【図１１】図１１は、ＴＮＴ−ＣＡＲを単独で含有するレンチウイルス、または誘導性ＮＦＡＴ−ＬＥＣもしくはＮＦＡＴ−ＩＬ１２遺伝子を含有するレンチウイルスに加えてこれを含有するレンチウイルスを用いて形質導入されたＪｕｒｋａｔ細胞について、ＩＬ−１２分泌の誘導を示す。２４ウェルプレート上で、形質導入された細胞を、一本鎖ウシ胸腺ＤＮＡ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）またはＰＭＡ（１０ｎｇ／ｍＬ）およびイオノマイシン（５００ｎｇ／ｍＬ）でコーティングしたウェル内の、完全ＲＰＭＩ  ５００μＬ中の細胞２×１０５個でインキュベートした。１６時間にわたる刺激の後、細胞上清を採取し、ＥＬＩＳＡを介して、ｓｃｍＩＬ−１２についてアッセイした。ｓｃｍＩＬ−１２：マウス一本鎖ＩＬ−１２である。
【発明を実施するための形態】
【００４１】
本開示は、当然ながら変動しうるので、記載される特定の態様に限定されないことを理解されたい。また、本開示の範囲は、付属の特許請求の範囲だけによって限定されるので、本明細書で使用される用語法は、特定の態様について記載することだけを目的とするものであり、限定的であることを意図するものではないことも理解されたい。
【００４２】
そうでないことが規定されない限りにおいて、本明細書で使用される全ての科学技術用語は、本技術が属する技術分野の当業者により一般に理解される意味と同じ意味を有する。本技術の実施または試行では、本明細書で記載される方法および材料と類似または同等の、任意の方法および材料を使用しうるが、ここでは、好ましい方法、デバイス、および材料について記載する。本明細書で引用される全ての技術的刊行物および特許公開は、参照によりそれらの全体において本明細書に組み込まれる。本明細書のいかなる内容も、本技術が、先行発明により、このような開示に先行する権利がないことの容認とはみなされないものとする。
【００４３】
本技術の実施では、そうでないことが指し示されない限りにおいて、当技術分野の技量の範囲内にある、組織培養、免疫学、分子生物学、微生物学、細胞生物学、および組換えＤＮＡについての従来の技法を利用する。例えば、ＳａｍｂｒｏｏｋおよびＲｕｓｓｅｌｌ編（２００１年）、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、３版；Ａｕｓｕｂｅｌら編（２００７年）、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙシリーズ；Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙシリーズ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｉｎｃ．、Ｎ．Ｙ．）；ＭａｃＰｈｅｒｓｏｎら（１９９１年）、ＰＣＲ  １：  Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ内、ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ）；ＭａｃＰｈｅｒｓｏｎら（１９９５年）、ＰＣＲ  ２：  Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ編（１９９９年）、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ；Ｆｒｅｓｈｎｅｙ（２００５年）、Ｃｕｌｔｕｒｅ  ｏｆ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌｓ：  Ａ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｂａｓｉｃ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ、５版；Ｇａｉｔ編（１９８４年）、Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ；米国特許第４，６８３，１９５号；ＨａｍｅｓおよびＨｉｇｇｉｎｓ編（１９８４年）、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ；Ａｎｄｅｒｓｏｎ（１９９９年）、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ；ＨａｍｅｓおよびＨｉｇｇｉｎｓ編（１９８４年）、Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ；Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ  Ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  Ｅｎｚｙｍｅｓ（ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ（１９８６年））；Ｐｅｒｂａｌ（１９８４年）、Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ；ＭｉｌｌｅｒおよびＣａｌｏｓ編（１９８７年）、Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）；Ｍａｋｒｉｄｅｓ編（２００３年）、Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ；ＭａｙｅｒおよびＷａｌｋｅｒ編（１９８７年）、Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｌｏｎｄｏｎ）；ならびにＨｅｒｚｅｎｂｅｒｇら編（１９９６年）、Ｗｅｉｒ’ｓ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙを参照されたい。
【００４４】
範囲を含む、全ての数値表示、例えば、ｐＨ、温度、時間、濃度、および分子量は、必要に応じて、（＋）もしくは（−）１．０もしくは０．１の増分、または代替的に±１５％、または代替的に１０％、または代替的に５％、または代替的に２％の変動で変わる概数である。常に明示的に言明されているわけではないが、全ての数値表示には、「約」という用語を前置することを理解されたい。また、常に明示的に言明されているわけではないが、本明細書で記載される試薬は、単に例示的なものであり、当技術分野では、このような試薬の同等物が公知であることも理解されたい。
【００４５】
明示的な列挙を伴わないが、そうでないことが意図されない限りにおいて、本技術が、ポリペプチド、タンパク質、ポリヌクレオチド、または抗体に関する場合、このようなポリペプチド、タンパク質、ポリヌクレオチド、または抗体の、同等物または生物学的同等物が、本技術の範囲内にあることが意図されることを推察されたい。
【００４６】
定義
本明細書および特許請求の範囲で使用される場合、単数形の「ある（ａ）」、「ある（ａｎ）」、および「その」は、そうでないことが文脈により明確に指示されない限りにおいて、複数の指示対象を含む。例えば、「細胞」という用語は、それらの混合物を含む、複数の細胞を含む。
【００４７】
本明細書で使用される場合、「動物」という用語は、例えば、哺乳動物および鳥類を含む類別である、生きている多細胞性の脊椎動物を指す。「哺乳動物」という用語は、ヒトおよび非ヒト哺乳動物の両方を含む。
【００４８】
本明細書では、「対象」、「宿主」、「個体」、および「患者」という用語は、ヒトおよび獣医学的対象、例えば、ヒト、動物、非ヒト霊長動物、イヌ、ネコ、ヒツジ、マウス、ウマ、およびウシを指すように、互換的に使用される。一部の実施形態では、対象は、ヒトである。
【００４９】
本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、例を目的として、限定せずに述べると、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭ、これらの組合せと、任意の脊椎動物、例えば、ヒト、ヤギ、ウサギ、およびマウスなどの哺乳動物のほか、サメ免疫グロブリンなど、非哺乳動物種における免疫応答中に産生される同様の分子とを含む、免疫グロブリンまたは免疫グロブリン様分子をまとめて指す。そうでないことが具体的に言及されない限り、「抗体」という用語は、他の分子への結合を実質的に除外して、目的の分子（または目的の分子と酷似する分子の群）に特異的に結合する、無傷の免疫グロブリンおよび「抗体断片」または「抗原結合性断片」（例えば、目的の分子に対する結合定数が、生物学的試料中の他の分子に対する結合定数を、少なくとも１０３Ｍ−１超えるか、少なくとも１０４Ｍ−１超えるか、または少なくとも１０５Ｍ−１超える抗体および抗体断片）を含む。「抗体」という用語はまた、キメラ抗体（例えば、ヒト化マウス抗体）、ヘテロコンジュゲート抗体（二特異性抗体など）などの遺伝子操作形態も含む。また、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃａｔａｌｏｇ  ａｎｄ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ、１９９４〜１９９５年（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、Ｉｌｌ．）；Ｋｕｂｙ，  Ｊ．、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、３版、Ｗ．Ｈ．  Ｆｒｅｅｍａｎ  ＆  Ｃｏ．、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９９７年も参照されたい。
【００５０】
本明細書で使用される場合、「モノクローナル抗体」という用語は、Ｂリンパ球の単一のクローン、または単一の抗体の軽鎖遺伝子および重鎖遺伝子をトランスフェクトした細胞により産生される抗体を指す。モノクローナル抗体は、当業者に公知の方法、例えば、ハイブリッドの抗体形成細胞を、骨髄腫細胞の、脾臓免疫細胞との融合体から作ることにより作製する。モノクローナル抗体は、ヒト化モノクローナル抗体を含む。
【００５１】
抗体構造との関連で、免疫グロブリンは、ジスルフィド結合により相互接続された、重（Ｈ）鎖と軽（Ｌ）鎖とを有する。ラムダ（λ）およびカッパ（κ）という、２つの種類の軽鎖が存在する。抗体分子の機能的活性を決定する、５つの主要な重鎖クラス（またはアイソタイプ）：ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、およびＩｇＥが存在する。各重鎖および軽鎖は、定常領域および可変領域（領域は「ドメイン」としてもまた公知）を含有する。組み合わせて、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とは、抗原に特異的に結合する。軽鎖可変領域および重鎖可変領域は、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」ともまた呼ばれる、３つの超可変領域により中断される、「フレームワーク」領域を含有する。フレームワーク領域およびＣＤＲの広がりについては、規定されている（参照により本明細書に組み込まれる、Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、Ｕ．  Ｓ．  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、１９９１年を参照されたい）。今日では、Ｋａｂａｔによるデータベースは、オンラインで維持されている。異なる軽鎖または重鎖のフレームワーク領域の配列は、種内で比較的保存されている。構成要素である軽鎖および重鎖のフレームワーク領域の組合せである、抗体のフレームワーク領域は、大部分、β−シートコンフォメーションを採用し、ＣＤＲは、ループを形成し、これは、β−シート構造を接続し、場合によって、その一部を形成する。したがって、フレームワーク領域は、鎖間の非共有結合的相互作用により、ＣＤＲを、適正な配向性で位置決めする足場を形成するように作用する。
【００５２】
ＣＤＲは主に、抗原のエピトープへの結合を担う。各鎖のＣＤＲは、Ｎ末端から始めて、順に番号付けされる、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と称することが典型的であり、また、特定のＣＤＲが配置される鎖により同定される（重鎖領域を、ＣＤＨＲと表示し、軽鎖領域を、ＣＤＬＲと表示する）ことも典型的である。したがって、ＣＤＨＲ３が、それが見出される抗体の重鎖の可変ドメインに由来するＣＤＲ３であるのに対し、ＣＤＬＲ１は、それが見出される抗体の軽鎖の可変ドメインに由来するＣＤＲ１である。ＴＮＴ抗体は、ＴＮＴ関連抗原に固有な、特異的ＶＨ領域およびＶＬ領域配列を有し、したがって、特異的ＣＤＲ配列を有する。異なる特異性（すなわち、異なる抗原に対する、異なる結合性部位）を伴う抗体は、異なるＣＤＲを有する。抗体によって変動するのはＣＤＲであるが、ＣＤＲ内の限定された数のアミノ酸位置だけが抗原への結合に直接関与する。ＣＤＲ内のこれらの位置を、特異性決定残基（ＳＤＲ）と呼ぶ。
【００５３】
本明細書で使用される場合、「抗原」という用語は、抗体分子またはＴ細胞受容体など、特異的な体液性または細胞性免疫の産物が特異的に結合しうる、化合物、組成物、または物質を指す。抗原は、例えば、ハプテン、単純な中間代謝物、糖（例えば、オリゴ糖）、脂質、およびホルモンのほか、複合炭水化物（例えば、多糖）、リン脂質、およびタンパク質などの高分子を含む、任意の種類の分子でありうる。抗原の一般的な類別は、ウイルス抗原、細菌抗原、真菌抗原、原虫および他の寄生生物抗原、腫瘍抗原、自己免疫疾患、アレルギー、および移植片拒絶に関与する抗原、毒素、ならびにその他の抗原を含むがこれらに限定されない。
【００５４】
本明細書で使用される場合、「抗原結合性ドメイン」という用語は、抗原標的に特異的に結合しうる、任意のタンパク質またはポリペプチドドメインを指す。
【００５５】
本明細書で使用される「ＴＮＴ」という用語は、抗体について記載する場合、腫瘍壊死療法（ＴＮＴ）関連抗原またはその機能的な同等物を認識する抗体を指す。「腫瘍壊死療法（ＴＮＴ）関連抗原」とは、死につつある細胞では、全抗原、エピトープ、またはそれらの断片が保持されるが、正常では、細胞死の場合を除き、全抗原、エピトープ、または断片が露出されない抗原である。このようなＴＮＴ関連抗原の非限定的な例は、通例、細胞死の後に限り接近可能となるＤＮＡまたはＤＮＡ／ヒストン標的であり、例えば、ＴＮＴ−１は、ヒストンＨ１の部分に結合する。他のヒストン標的は、Ｈ２Ａ、Ｈ２Ｂ、Ｈ３、Ｈ４、Ｈ５、および／または他のヒトもしくは動物ヒストンを含むがこれらに限定されない。他のＴＮＴ関連抗原は、一本鎖ＤＮＡおよび異質染色質のＤＮＡを含むがこれらに限定されない。ＴＮＴ抗体は、ＴＮＴ−１、ＴＮＴ−２、ＴＮＴ−３、およびＮＨＳ７６を含むがこれらに限定されず、これらのＣＤＲは、下記で列挙されるか、または、米国特許第８，７９５，６７２号；米国特許第８，５４５，８３８号において記載されている通り、当技術分野で公知である。
【００５６】
本明細書で使用される場合、ＴＮＴ−１という用語は、ＣＤＲのうちのいずれか１つ、好ましくはＣＤＲ３領域のうちの少なくとも１つ、最も好ましくは下記で開示されるＣＤＲ３領域の両方と、少なくとも７０％、または代替的に少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、好ましくは９０％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を共有するＣＤＲを伴うアミノ酸配列を含む抗体を指す。
ＴＮＴ−１  ＣＤＨＲ１，  配列番号１：
ＧＦＳＬＴＤＹＧ
ＴＮＴ−１  ＣＤＨＲ２，  配列番号２：
ＩＷＧＧＧＳＴ
ＴＮＴ−１  ＣＤＨＲ３，  配列番号３：
ＡＫＥＫＲＲＧＹＹＹＡＭＤＹ
ＴＮＴ−１  ＣＤＬＲ１，  配列番号４：
ＳＳＶＳＳＳＹ
ＴＮＴ−１  ＣＤＬＲ２，  配列番号５：
ＳＴＳ
ＴＮＴ−１  ＣＤＬＲ３，  配列番号６：
ＱＱＹＳＧＹＰＬＴ
ＴＮＴ−１の重鎖可変領域配列、配列番号７：
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＡＡＧＧＡＧＴＣＡＧＧＡＣＣＴＧＧＣＣＴＧＧＴＧＧＣＧＣＣＣＴＣＡＣＡＧＡＧＣＣＴＧＴＣＣＡＴＣＡＣＡＴＧＣＡＣＴＧＴＣＴＣＡＧＧＧＴＴＣＴＣＡＴＴＡＡＣＣＧＡＣＴＡＴＧＧＴＧＴＡＡＧＧＴＧＧＡＴＴＣＧＣＣＡＧＣＣＴＣＣＡＧＧＡＡＡＧＧＧＴＣＴＧＧＡＧＴＧＧＣＴＧＧＧＡＧＴＡＡＴＡＴＧＧＧＧＴＧＧＴＧＧＡＡＧＣＡＣＡＴＡＣＴＡＴＡＡＴＴＣＡＧＣＴＣＴＣＡＡＡＴＣＣＡＧＡＣＴＧＡＧＣＡＴＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＡＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＣＡＡＧＴＴＴＴＣＴＴＡＡＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＴＣＴＧＣＡＡＡＣＴＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＣＣＡＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＴＧＣＣＡＡＡＧＡＧＡＡＡＣＧＧＡＧＧＧＧＧＴＡＴＴＡＣＴＡＴＧＣＴＡＴＧＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＴＣＡＡＧＧＡＡＣＣＴＣＡＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
ＴＮＴ−１の軽鎖可変領域配列、配列番号８：
ＧＧＡＧＡＡＡＡＴＧＴＧＣＴＣＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＧＣＡＡＴＣＡＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＣＣＡＧＧＧＧＡＡＡＡＧＧＴＣＡＣＣＡＴＧＡＣＣＴＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＣＴＣＡＡＧＴＧＴＡＡＧＴＴＣＣＡＧＴＴＡＣＴＴＧＣＡＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＧＴＣＡＧＧＴＧＣＣＴＣＣＣＣＣＡＡＡＣＴＣＴＧＧＡＴＴＴＡＴＡＧＣＡＣＡＴＣＣＡＡＣＴＴＧＧＣＴＴＣＴＧＧＡＧＴＣＣＣＴＧＣＴＣＧＣＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＧＴＣＴＧＧＧＡＣＣＴＣＴＴＡＣＴＣＴＣＴＣＡＣＡＡＴＣＡＧＣＡＧＴＧＴＧＧＡＧＧＣＴＧＡＡＧＡＴＧＣＴＧＣＣＡＣＴＴＡＴＴＡＣＴＧＣＣＡＧＣＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＴＴＡＣＣＣＡＣＴＣＡＣＧＴＴＣＧＧＡＧＧＧＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＡＡＡＡ
【００５７】
本明細書で使用される場合、ＴＮＴ−２という用語は、ＣＤＲのうちのいずれか１つ、好ましくはＣＤＲ３領域のうちの少なくとも１つ、最も好ましくは下記で開示されるＣＤＲ３領域の両方と、少なくとも７０％、または代替的に少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、好ましくは９０％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を共有するＣＤＲを伴うアミノ酸配列を含む抗体を指す。
ＴＮＴ−２  ＣＤＨＲ１，  配列番号９：
ＧＹＳＦＴＧＹＹ
ＴＮＴ−２  ＣＤＨＲ２，  配列番号１０：
ＩＮＰＹＮＧＡＴ
ＴＮＴ−２  ＣＤＨＲ３，  配列番号１１：
ＡＲＬＤＲＧＤＹ
ＴＮＴ−２  ＣＤＬＲ１，  配列番号１２：
ＥＮＶＶＴＹ
ＴＮＴ−２  ＣＤＬＲ２，  配列番号１３：
ＧＡＳ
ＴＮＴ−２  ＣＤＬＲ３，  配列番号１４：
ＧＱＧＹＳＹＰＹＴ
ＴＮＴ−２の重鎖可変領域配列、配列番号１５：
ＧＡＧＧＴＡＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＡＧＴＣＴＧＧＡＣＣＴＧＡＧＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣＣＴＧＧＧＧＣＴＴＣＡＧＴＧＡＡＧＡＴＡＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＴＴＡＣＴＣＡＴＴＣＡＣＴＧＧＣＴＡＣＴＡＣＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＧＣＡＡＡＧＣＣＡＴＧＴＡＡＡＧＡＧＣＣＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴＴＧＧＡＣＧＴＡＴＴＡＡＴＣＣＴＴＡＣＡＡＴＧＧＴＧＣＴＡＣＴＡＧＣＴＡＣＡＡＣＣＡＧＡＡＴＴＴＣＡＡＧＧＡＣＡＡＧＧＣＣＡＧＣＴＴＧＡＣＴＧＴＡＧＡＴＡＡＧＴＣＣＴＣＣＡＧＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＧＣＴＣＣＡＣＡＧＣＣＴＧＡＣＡＴＣＴＧＡＧＧＡＣＴＣＴＧＣＡＧＴＣＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＡＡＧＡＣＴＡＧＡＣＣＧＧＧＧＧＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＴＣＡＡＧＧＡＡＣＣＴＣＡＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
ＴＮＴ−２の軽鎖可変領域配列、配列番号１６：
ＡＡＣＡＴＴＧＴＡＡＴＧＡＣＣＣＡＡＴＣＴＣＣＣＡＡＡＴＣＣＡＴＧＴＣＣＡＴＧＴＣＡＧＴＡＧＧＡＧＡＧＡＧＧＧＴＣＡＣＣＴＴＧＡＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＣＡＧＴＧＡＧＡＡＴＧＴＧＧＴＴＡＣＴＴＡＴＧＴＴＴＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＡＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＡＧＣＡＧＴＣＴＣＣＴＡＡＡＣＴＧＣＴＧＡＴＡＴＡＣＧＧＧＧＣＡＴＣＣＡＡＣＣＧＧＴＡＣＡＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＣＧＡＴＣＧＣＴＴＣＡＣＡＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＣＡＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＧＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＴＧＴＧＣＡＧＧＣＴＧＡＡＧＡＣＣＴＴＧＣＡＧＡＴＴＡＴＣＡＣＴＧＴＧＧＡＣＡＧＧＧＴＴＡＣＡＧＣＴＡＴＣＣＧＴＡＣＡＣＧＴＴＣＧＧＡＧＧＧＧＧＧＡＣＡＡＡＧＴＴＧＧＡＡＡＴＡＡＡＡＣＧＴＡＣＧ
【００５８】
本明細書で使用される場合、ＴＮＴ−３という用語は、ＣＤＲのうちのいずれか１つ、好ましくはＣＤＲ３領域のうちの少なくとも１つ、最も好ましくは下記で開示されるＣＤＲ３領域の両方と、少なくとも７０％、または代替的に少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、好ましくは９０％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を共有するＣＤＲを伴うアミノ酸配列を含む抗体を指す。
ＴＮＴ−３  ＣＤＨＲ１，  配列番号１７：
ＧＹＴＦＴＲＹＷ
ＴＮＴ−３  ＣＤＨＲ２，  配列番号１８：
ＩＹＰＧＮＳＤＴ
ＴＮＴ−３  ＣＤＨＲ３，  配列番号１９：
ＡＲＧＥＥＩＧＶＲＲＷＦＡＹ
ＴＮＴ−３  ＣＤＬＲ１，  配列番号２０：
ＱＳＩＳＮＹ
ＴＮＴ−３  ＣＤＬＲ２，  配列番号２１：
ＹＡＳ
ＴＮＴ−３  ＣＤＬＲ３，  配列番号２２：
ＱＱＳＮＳＷＰＬＴ
ＴＮＴ−３の重鎖可変領域配列、配列番号２３：
ＣＡＧＧＴＣＣＡＡＣＴＧＣＡＧＣＡＧＴＣＡＧＧＡＧＣＴＧＡＡＣＴＧＧＴＣＡＡＧＡＣＴＧＧＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＡＧＡＴＧＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＣＴＡＣＡＣＣＴＴＴＡＣＣＡＧＡＴＡＣＴＧＧＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＡＡＡＡＣＡＧＡＧＧＣＣＴＧＧＡＣＡＧＧＣＴＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＴＧＧＣＧＣＴＡＴＴＴＡＴＣＣＴＧＧＡＡＡＴＡＧＴＧＡＴＡＣＴＡＧＣＴＡＣＴＡＣＣＡＧＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＧＣＡＡＧＧＣＣＡＡＡＣＴＧＡＣＴＧＣＡＧＴＣＡＣＡＴＣＴＧＣＣＡＧＣＡＣＴＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＧＣＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＣＡＴＣＴＧＡＧＧＡＣＴＣＴＧＣＣＧＴＣＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＡＡＧＡＧＧＧＧＡＧＧＡＡＡＴＡＧＧＧＧＴＡＣＧＡＣＧＣＴＧＧＴＴＴＧＣＴＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＴＣＴＧＧＴＣＡＣＴＧＴＣＴＣＴＧＣＡ
ＴＮＴ−３の軽鎖可変領域配列、配列番号２４：
ＧＡＴＡＴＴＧＴＧＣ  ＴＡＡＣＴＣＡＧＴＣ  ＴＣＣＡＧＣＣＡＣＣ  ＣＴＧＴＣＴＧＴＧＡ  ＣＴＣＣＡＧＧＡＧＡ  ＴＡＧＡＧＴＣＡＧＴ  ＣＴＴＴＣＣＴＧＣＡ  ＧＧＧＣＣＡＧＧＣＡ  ＡＡＧＴＡＴＴＡＧＣ  ＡＡＣＴＡＣＣＴＡＣ  ＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡ  ＡＣＡＡＡＡＡＴＣＡ  ＣＡＴＧＡＧＴＣＴＣ  ＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴ  ＣＡＴＣＡＡＧＴＡＴ  ＧＣＴＴＣＣＣＡＧＴ  ＣＣＡＴＣＴＣＴＧＧ  ＣＡＴＣＣＣＣＴＣＣ  ＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧ  ＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣ  ＡＧＧＧＡＣＡＧＡＴ  ＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡ  ＧＴＡＴＣＡＡＣＡＧ  ＴＧＴＧＧＡＧＡＣＴ  ＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧ  ＧＡＡＴＧＴＡＴＴＴ  ＣＴＧＴＣＡＡＣＡＧ  ＡＧＴＡＡＣＡＧＣＴ  ＧＧＣＣＧＣＴＣＡＣ  ＧＴＴＣＧＧＴＧＣＴ  ＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣ  ＴＧＧＡＡＡＴＡＡＡ  Ａ
【００５９】
本明細書で使用される場合、ＮＨＳ７６という用語は、ＣＤＲのうちのいずれか１つ、好ましくはＣＤＲ３領域のうちの少なくとも１つ、最も好ましくは下記および米国特許第６，８２７，９２５号で開示されるＣＤＲ３領域の両方と、少なくとも７０％、または代替的に少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、好ましくは９０％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を共有するＣＤＲを伴うアミノ酸配列を含む抗体を指す。
ＮＨＳ７６  ＣＤＨＲ１，  配列番号２５：
ＳＧＹＹＷＧ
ＮＨＳ７６  ＣＤＨＲ２，  配列番号２６：
ＳＩＹＨＳＧＳＴＹＹＮＰＳＬＫＳ
ＮＨＳ７６  ＣＤＨＲ３，  配列番号２７：
ＧＫＷＳＫＦＤＹ
ＮＨＳ７６  ＣＤＬＲ１，  配列番号２８：
ＱＧＤＳＬＲＳＹＹＡＳ
ＮＨＳ７６  ＣＤＬＲ２，  配列番号２９：
ＧＫＮＮＲＰＳ
ＮＨＳ７６  ＣＤＬＲ３，  配列番号３０：
ＮＳＲＤＳＳＧＮＨＶＶ
ＮＨＳ７６の重鎖可変領域配列、配列番号３１：
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣ  ＴＧＣＡＧＧＡＧＴＣ  ＣＧＧＣＣＣＡＧＧＡ  ＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣ  ＣＴＴＣＧＧＡＧＡＣ  ＣＣＴＧＴＣＣＣＴＣ  ＡＣＣＴＧＣＧＣＴＧ  ＴＣＴＣＴＧＧＴＴＡ  ＣＴＣＣＡＴＣＡＧＣ  ＡＧＴＧＧＴＴＡＣＴ  ＡＣＴＧＧＧＧＣＴＧ  ＧＡＴＴＣＧＧＣＡＧ  ＣＣＣＣＣＡＧＧＧＡ  ＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡ  ＧＴＧＧＡＴＴＧＧＧ  ＡＧＴＡＴＣＴＡＴＣ  ＡＴＡＧＴＧＧＧＡＧ  ＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣ  ＡＡＣＣＣＧＴＣＣＣ  ＴＣＡＡＧＡＧＴＣＧ  ＡＧＴＣＡＣＣＡＴＡ  ＴＣＡＧＴＡＧＡＣＡ  ＣＧＴＣＣＡＡＧＡＡ  ＣＣＡＧＴＴＣＴＣＣ  ＣＴＧＡＡＧＣＴＧＡ  ＧＣＴＣＴＧＴＧＡＣ  ＣＧＣＣＧＣＡＧＡＣ  ＡＣＧＧＣＣＧＴＧＴ  ＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣ  ＡＡＧＡＧＧＧＡＡＧ  ＴＧＧＴＣＧＡＡＧＴ  ＴＴＧＡＣＴＡＴＴＧ  ＧＧＧＣＣＡＡＧＧＣ  ＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡ  ＣＣＧＴＣＴＣＴＴＣ  Ａ
ＮＨＳ７６の軽鎖可変領域配列、配列番号３２：
ＴＣＣＴＣＴＧＡＧＣ  ＴＧＡＣＴＣＡＧＧＡ  ＣＣＣＴＧＣＴＧＴＧ  ＴＣＴＧＴＧＧＣＣＴ  ＴＧＧＧＡＣＡＧＡＣ  ＡＧＴＣＡＧＧＡＴＣ  ＡＣＡＴＧＣＣＡＡＧ  ＧＡＧＡＣＡＧＣＣＴ  ＣＡＧＡＡＧＣＴＡＴ  ＴＡＴＧＣＡＡＧＣＴ  ＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡ  ＧＡＡＧＣＣＡＧＧＡ  ＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧ  ＴＡＣＴＴＧＴＣＡＴ  ＣＴＡＴＧＧＴＡＡＡ  ＡＡＣＡＡＣＣＧＧＣ  ＣＣＴＣＡＧＧＧＡＴ  ＴＣＣＡＧＡＣＣＧＡ  ＴＴＣＴＣＴＧＧＣＴ  ＣＣＡＧＣＴＣＡＧＧ  ＡＡＡＣＡＣＡＧＣＴ  ＴＣＣＴＴＧＡＣＣＡ  ＴＣＡＣＴＧＧＧＧＣ  ＴＣＡＧＧＣＧＧＡＡ  ＧＡＴＧＡＧＧＣＴＧ  ＡＣＴＡＴＴＡＣＴＧ  ＴＡＡＣＴＣＣＣＧＧ  ＧＡＣＡＧＣＡＧＴＧ  ＧＴＡＡＣＣＡＴＧＴ  ＧＧＴＡＴＴＣＧＧＣ  ＧＧＡＧＧＧＡＣＣＡ  ＡＧＣＴＧＡＣＣＧＴ  ＣＣＴＡ
【００６０】
本明細書で使用される場合、細胞に言及して「自家」という用語は、同じ対象（レシピエントまたは宿主）から単離され、注入し戻される細胞を指す。「同種」とは、非自家細胞を指す。
【００６１】
本明細書で使用される場合、「Ｂ細胞」という用語は、獲得性免疫系の体液性免疫におけるリンパ球の種類を指す。Ｂ細胞は主に、抗体を作り、抗原提示細胞として働き、サイトカインを放出し、抗原との相互作用による活性化の後で、メモリーＢ細胞を発生させるように機能する。Ｂ細胞は、Ｔ細胞など、他のリンパ球から、細胞表面上のＢ細胞受容体の存在により識別される。Ｂ細胞は、単離することもでき、商業的に利用可能な供給源から得ることもできる。市販のＢ細胞株の非限定的な例は、細胞株である、ＡＨＨ−１（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−８１４６（商標））、ＢＣ−１（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−２２３０（商標））、ＢＣ−２（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−２２３１（商標））、ＢＣ−３（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−２２７７（商標））、ＣＡ４６（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−１６４８（商標））、ＤＧ−７５［Ｄ．Ｇ．−７５］（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−２６２５（商標））、ＤＳ−１（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−１１１０２（商標））、ＥＢ−３［ＥＢ３］（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＣＬ−８５（商標））、Ｚ−１３８（ＡＴＣＣ：＃ＣＲＬ−３００１）、ＤＢ（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−２２８９）、Ｔｏｌｅｄｏ（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−２６３１）、Ｐｆｉｆｆｅｒ（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−２６３２）、ＳＲ（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−２２６２）、ＪＭ−１（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１０４２１）、ＮＦＳ−５  Ｃ−１（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１６９３）；ＮＦＳ−７０  Ｃ１０（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１６９４）、ＮＦＳ−２５  Ｃ−３（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１６９５）、およびＳＵＰ−Ｂ１５（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１９２９）を含む。さらなる例は、未分化大細胞リンパ腫に由来する細胞株、例えば、ＤＥＬ、ＤＬ−４０、ＦＥ−ＰＤ、ＪＢ６、Ｋａｒｐａｓ  ２９９、Ｋｉ−ＪＫ、Ｍａｃ−２Ａ  Ｐｌｙ１、ＳＲ−７８６、ＳＵ−ＤＨＬ−１、ＳＵ−ＤＨＬ−２、ＳＵ−ＤＨＬ−４、ＳＵ−ＤＨＬ−５、ＳＵ−ＤＨＬ−６、ＳＵ−ＤＨＬ−７、ＳＵ−ＤＨＬ−８、ＳＵ−ＤＨＬ−９、ＳＵ−ＤＨＬ−１０、およびＳＵ−ＤＨＬ−１６、ＤＯＨＨ−２、ＮＵ−ＤＨＬ−１、Ｕ−９３７、Ｇｒａｎｄａ  ５１９、ＵＳＣ−ＤＨＬ−１、ＲＬ；ホジキンリンパ腫に由来する細胞株、例えば、ＤＥＶ、ＨＤ−７０、ＨＤＬＭ−２、ＨＤ−ＭｙＺ、ＨＫＢ−１、ＫＭ−Ｈ２、Ｌ  ４２８、Ｌ  ５４０、Ｌ１２３６、ＳＢＨ−１、ＳＵＰ−ＨＤ１、ＳＵ／ＲＨ−ＨＤ−１を含むがこれらに限定されない。このような市販の細胞株の非限定的な例示的供給源は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  ＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎすなわちＡＴＣＣ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ａｔｃｃ．ｏｒｇ／）およびＧｅｒｍａｎ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅｓ（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｄｓｍｚ．ｄｅ／）を含む。
【００６２】
「キメラ抗原受容体」（ＣＡＲ）という用語は、本明細書で使用される場合、抗原に結合することが可能な細胞外ドメインと、細胞外ドメインが由来するポリペプチドとは異なるポリペプチドに由来する膜貫通ドメインと、少なくとも１つの細胞内ドメインとを含む融合タンパク質を指す。「キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）」とは、場合によって、「キメラ受容体」、「Ｔボディー（Ｔ−ｂｏｄｙ）」、または「キメラ免疫受容体（ＣＩＲ）」と呼ばれる。「抗原に結合することが可能な細胞外ドメイン」とは、ある特定の抗原に結合しうる、任意のオリゴペプチドまたはポリペプチドを意味する。「細胞内ドメイン」または「細胞内シグナル伝達ドメイン」とは、細胞内の生物学的過程の活性化または阻害を引き起こすシグナルを伝達するドメインとして機能することが公知である、任意のオリゴペプチドまたはポリペプチドを意味する。ある特定の実施形態では、細胞内ドメインは、一次シグナル伝達ドメインに加えて、１または複数の共刺激性シグナル伝達ドメインを含みうるか、代替的にこれらから本質的になりうるか、またはなおさらにこれらを含みうる。「膜貫通ドメイン」とは、細胞膜にわたり、細胞外ドメインと、シグナル伝達ドメインとを連結するように機能しうることが公知である、任意のオリゴペプチドまたはポリペプチドを意味する。キメラ抗原受容体は、任意選択で、細胞外ドメインと、膜貫通ドメインとの間のリンカーとして働く「ヒンジドメイン」を含みうる。本明細書では、このようなドメインの非限定的な例、例えば、
ヒンジドメイン：ＩｇＧ１重鎖ヒンジ配列、配列番号５９：
ＣＴＣＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＧ
膜貫通ドメイン：ＣＤ２８膜貫通領域  配列番号６０：
ＴＴＴＴＧＧＧＴＧＣＴＧＧＴＧＧＴＧＧＴＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＣＴＧＧＣＴＴＧＣＴＡＴＡＧＣＴＴＧＣＴＡＧＴＡＡＣＡＧＴＧＧＣＣＴＴＴＡＴＴＡＴＴＴＴＣＴＧＧＧＴＧ
細胞内ドメイン：４−１ＢＢ共刺激性シグナル伝達領域、配列番号６１：
ＡＡＡＣＧＧＧＧＣＡＧＡＡＡＧＡＡＡＣＴＣＣＴＧＴＡＴＡＴＡＴＴＣＡＡＡＣＡＡＣＣＡＴＴＴＡＴＧＡＧＡＣＣＡＧＴＡＣＡＡＡＣＴＡＣＴＣＡＡＧＡＧＧＡＡＧＡＴＧＧＣＴＧＴＡＧＣＴＧＣＣＧＡＴＴＴＣＣＡＧＡＡＧＡＡＧＡＡＧＡＡＧＧＡＧＧＡＴＧＴＧＡＡＣＴＧ
細胞内ドメイン：ＣＤ２８共刺激性シグナル伝達領域、配列番号６２：
ＡＧＧＡＧＴＡＡＧＡＧＧＡＧＣＡＧＧＣＴＣＣＴＧＣＡＣＡＧＴＧＡＣＴＡＣＡＴＧＡＡＣＡＴＧＡＣＴＣＣＣＣＧＣＣＧＣＣＣＣＧＧＧＣＣＣＡＣＣＣＧＣＡＡＧＣＡＴＴＡＣＣＡＧＣＣＣＴＡＴＧＣＣＣＣＡＣＣＡＣＧＣＧＡＣＴＴＣＧＣＡＧＣＣＴＡＴＣＧＣＴＣＣ
細胞内ドメイン：ＣＤ３ゼータシグナル伝達領域、配列番号６３：
ＡＧＡＧＴＧＡＡＧＴＴＣＡＧＣＡＧＧＡＧＣＧＣＡＧＡＣＧＣＣＣＣＣＧＣＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＡＡＣＣＡＧＣＴＣＴＡＴＡＡＣＧＡＧＣＴＣＡＡＴＣＴＡＧＧＡＣＧＡＡＧＡＧＡＧＧＡＧＴＡＣＧＡＴＧＴＴＴＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＣＧＴＧＧＣＣＧＧＧＡＣＣＣＴＧＡＧＡＴＧＧＧＧＧＧＡＡＡＧＣＣＧＡＧＡＡＧＧＡＡＧＡＡＣＣＣＴＣＡＧＧＡＡＧＧＣＣＴＧＴＡＣＡＡＴＧＡＡＣＴＧＣＡＧＡＡＡＧＡＴＡＡＧＡＴＧＧＣＧＧＡＧＧＣＣＴＡＣＡＧＴＧＡＧＡＴＴＧＧＧＡＴＧＡＡＡＧＧＣＧＡＧＣＧＣＣＧＧＡＧＧＧＧＣＡＡＧＧＧＧＣＡＣＧＡＴＧＧＣＣＴＴＴＡＣＣＡＧＧＧＴＣＴＣＡＧＴＡＣＡＧＣＣＡＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＴＡＣＧＡＣＧＣＣＣＴＴＣＡＣＡＴＧＣＡＧＧＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＴＣＧＣＴＡＡ
を提示する。
【００６３】
本明細書で使用される場合、「ＣＤ８αヒンジドメイン」という用語は、この名称と関連する特異的タンパク質断片と、類似の生物学的機能を有する他の任意の分子であって、本明細書で示されるＣＤ８αヒンジドメインの配列と、少なくとも７０％、または代替的に、少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、好ましくは９０％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を共有する他の任意の分子とを指す。ヒト、マウス、および他の種のＣＤ８αヒンジドメインの配列例は、Ｐｉｎｔｏ，  Ｒ．  Ｄ．ら（２００６年）、Ｖｅｔ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．、１１０巻：１６９〜１７７頁において提示されている。ＣＤ８αヒンジドメインと関連する配列は、Ｐｉｎｔｏ，  Ｒ．  Ｄ．ら（２００６年）、Ｖｅｔ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．、１１０巻：１６９〜１７７頁において提示されている。このような配列の非限定的な例は、
ヒトＣＤ８アルファヒンジドメイン、配列番号３３：
ＰＡＫＰＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹ
マウスＣＤ８アルファヒンジドメイン、配列番号３４：
ＫＶＮＳＴＴＴＫＰＶＬＲＴＰＳＰＶＨＰＴＧＴＳＱＰＱＲＰＥＤＣＲＰＲＧＳＶＫＧＴＧＬＤＦＡＣＤＩＹ
ネコＣＤ８アルファヒンジドメイン、配列番号３５：
ＰＶＫＰＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＱＡＰＩＴＴＳＱＲＶＳＬＲＰＧＴＣＱＰＳＡＧＳＴＶＥＡＳＧＬＤＬＳＣＤＩＹ
を含む。
【００６４】
本明細書で使用される場合、「ＣＤ８α膜貫通ドメイン」という用語は、この名称と関連する特異的タンパク質断片と、類似の生物学的機能を有する他の任意の分子であって、本明細書で示されるＣＤ８α膜貫通ドメインの配列と、少なくとも７０％、または代替的に、少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、好ましくは９０％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を共有する他の任意の分子とを指す。ヒトＴ細胞表面糖タンパク質ＣＤ８アルファ鎖（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＮＰ＿００１７５９．３）のアミノ酸位置１８３〜２０３、またはマウスＴ細胞表面糖タンパク質ＣＤ８アルファ鎖（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＮＰ＿００１０７４５７９．１）のアミノ酸位置１９７〜２１７、およびラットＴ細胞表面糖タンパク質ＣＤ８アルファ鎖（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＮＰ＿１１３７２６．１）のアミノ酸位置１９０〜２１０と関連する断片配列は、ＣＤ８α膜貫通ドメインについてのさらなる配列例を提示する。列挙した受託番号の各々と関連する配列を、以下の通りに提示する：
ヒトＣＤ８アルファ膜貫通ドメイン、配列番号３６：
ＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴ
マウスＣＤ８アルファ膜貫通ドメイン、配列番号３７：ＩＷＡＰＬＡＧＩＣＶＡＬＬＬＳＬＩＩＴＬＩ
ラットＣＤ８アルファ膜貫通ドメイン、配列番号３８：ＩＷＡＰＬＡＧＩＣＡＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＩ
【００６５】
本明細書で使用される場合、「ＣＤ２８膜貫通ドメイン」という用語は、この名称と関連する特異的タンパク質断片と、類似の生物学的機能を有する他の任意の分子であって、本明細書で示されるＣＤ２８膜貫通ドメインの配列と、少なくとも７０％、または代替的に、少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、少なくとも９０％の配列同一性、または代替的に、少なくとも９５％の配列同一性を共有する他の任意の分子とを指す。ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＸＭ＿００６７１２８６２．２およびＸＭ＿００９４４４０５６．１と関連する断片配列は、ＣＤ２８膜貫通ドメインについてのさらなる非限定的配列例を提示する。列挙した受託番号の各々と関連する配列を、配列番号６０によりコードされる配列として提示する。
【００６６】
本明細書で使用される場合、「４−１ＢＢ共刺激性シグナル伝達領域」という用語は、この名称と関連する特異的タンパク質断片と、類似の生物学的機能を有する他の任意の分子であって、本明細書で示される４−１ＢＢ共刺激性シグナル伝達領域の配列と、少なくとも７０％、または代替的に、少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、好ましくは９０％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を共有する他の任意の分子とを指す。４−１ＢＢ共刺激性シグナル伝達領域の非限定的な配列例は、下記で提示される例示的な配列：
４−１ＢＢ共刺激性シグナル伝達領域、配列番号３９：
ＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬ
など、米国公開第２０１３０２６６５５１Ａ１号（米国出願第１３／８２６，２５８号として出願された）において提示されている。
【００６７】
本明細書で使用される場合、「ＣＤ２８共刺激性シグナル伝達領域」という用語は、この名称と関連する特異的タンパク質断片と、類似の生物学的機能を有する他の任意の分子であって、本明細書で示されるＣＤ２８共刺激性シグナル伝達領域の配列と、少なくとも７０％、または代替的に、少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、好ましくは９０％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を共有する他の任意の分子とを指す。ＣＤ２８共刺激性シグナル伝達ドメインの配列例は、米国特許第５，６８６，２８１号；Ｇｅｉｇｅｒ，  Ｔ．  Ｌ．ら、Ｂｌｏｏｄ、９８巻：２３６４〜２３７１頁（２００１年）；Ｈｏｍｂａｃｈ，  Ａ．ら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、１６７巻：６１２３〜６１３１頁（２００１年）；Ｍａｈｅｒ，  Ｊ．ら、Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ、２０巻：７０〜７５頁（２００２年）；Ｈａｙｎｅｓ，  Ｎ．  Ｍ．ら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、１６９巻：５７８０〜５７８６頁（２００２年）；Ｈａｙｎｅｓ，  Ｎ．  Ｍ．ら、Ｂｌｏｏｄ、１００巻：３１５５〜３１６３頁（２００２年）において提示されている。非限定的な例は、下記のＣＤ２８配列：
ＭＬＲＬＬＬＡＬＮＬ  ＦＰＳＩＱＶＴＧＮＫ  ＩＬＶＫＱＳＰＭＬＶ  ＡＹＤＮＡＶＮＬＳＣ  ＫＹＳＹＮＬＦＳＲＥ  ＦＲＡＳＬＨＫＧＬＤＳＡＶＥＶＣＶＶＹＧ  ＮＹＳＱＱＬＱＶＹＳ  ＫＴＧＦＮＣＤＧＫＬ  ＧＮＥＳＶＴＦＹＬＱ  ＮＬＹＶＮＱＴＤＩＹ  ＦＣＫＩＥＶＭＹＰＰＰＹＬＤＮＥＫＳＮＧ  ＴＩＩＨＶＫＧＫＨＬ  ＣＰＳＰＬＦＰＧＰＳ  ＫＰＦＷＶＬＶＶＶＧ  ＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶＲ  ＳＫＲＳＲＬＬＨＳＤ  ＹＭＮＭＴＰＲＲＰＧ  ＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡ  ＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳ  （配列番号４０）
の残基１１４〜２２０、およびそれらの同等物を含む。
【００６８】
本明細書で使用される場合、「ＩＣＯＳ共刺激性シグナル伝達領域」という用語は、この名称と関連する特異的タンパク質断片と、類似の生物学的機能を有する他の任意の分子であって、本明細書で示されるＩＣＯＳ共刺激性シグナル伝達領域の配列と、少なくとも７０％、または代替的に、少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、好ましくは９０％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を共有する他の任意の分子とを指す。ＩＣＯＳ共刺激性シグナル伝達領域の非限定的な配列例は、米国公開第２０１５／００１７１４１Ａ１号に提示されており、下記に提示される、例示的なポリヌクレオチド配列を含む。
ＩＣＯＳ共刺激性シグナル伝達領域、配列番号６４：
ＡＣＡＡＡＡＡＡＧＡ  ＡＧＴＡＴＴＣＡＴＣ  ＣＡＧＴＧＴＧＣＡＣ  ＧＡＣＣＣＴＡＡＣＧ  ＧＴＧＡＡＴＡＣＡＴ  ＧＴＴＣＡＴＧＡＧＡ  ＧＣＡＧＴＧＡＡＣＡ  ＣＡＧＣＣＡＡＡＡＡ  ＡＴＣＣＡＧＡＣＴＣ  ＡＣＡＧＡＴＧＴＧＡ  ＣＣＣＴＡ
【００６９】
本明細書で使用される場合、「ＯＸ４０共刺激性シグナル伝達領域」という用語は、この名称と関連する特異的タンパク質断片と、類似の生物学的機能を有する他の任意の分子であって、本明細書で示されるＯＸ４０共刺激性シグナル伝達領域の配列と、少なくとも７０％、または代替的に、少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、または代替的に、９０％の配列同一性、または代替的に、少なくとも９５％の配列同一性を共有する他の任意の分子とを指す。ＯＸ４０共刺激性シグナル伝達領域の非限定的な配列例は、米国公開第２０１２／２０１４８５５２Ａ１号に開示されており、下記に提示される、例示的な配列を含む。
ＯＸ４０共刺激性シグナル伝達領域、配列番号６５：
ＡＧＧＧＡＣＣＡＧ  ＡＧＧＣＴＧＣＣＣＣ  ＣＣＧＡＴＧＣＣＣＡ  ＣＡＡＧＣＣＣＣＣＴ  ＧＧＧＧＧＡＧＧＣＡ  ＧＴＴＴＣＣＧＧＡＣ  ＣＣＣＣＡＴＣＣＡＡ  ＧＡＧＧＡＧＣＡＧＧ  ＣＣＧＡＣＧＣＣＣＡ  ＣＴＣＣＡＣＣＣＴＧ  ＧＣＣＡＡＧＡＴＣ
【００７０】
本明細書で使用される場合、「ＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン」という用語は、この名称と関連する特異的タンパク質断片と、類似の生物学的機能を有する他の任意の分子であって、本明細書で示されるＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインの配列と、少なくとも７０％、または代替的に、少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、好ましくは９０％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を共有する他の任意の分子とを指す。ＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインの非限定的な配列例は、米国出願第１３／８２６，２５８号、例えば、
ＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ  （配列番号４１）
において提示されている。
【００７１】
「組成物」は典型的に、活性薬剤、例えば、化合物または組成物と、希釈剤、結合剤、安定化剤、緩衝剤、塩、親油性溶媒、保存剤、アジュバントなど、不活性（例えば、検出可能な薬剤または標識）または活性な、天然に存在するまたは天然に存在しない担体との組合せを意図し、薬学的に許容される担体を含む。担体はまた、タンパク質、ペプチド、アミノ酸、脂質、および炭水化物（例えば、単糖、二糖、三糖、四糖、およびオリゴ糖を含む糖；アルジトール、アルドン酸、エステル化糖などの誘導体化糖；ならびに多糖または糖ポリマー）などの医薬賦形剤および添加剤も含み、これらは単独または組合せで存在することが可能であり、単独または組合せにより、重量または容量で、１〜９９．９９％を構成する。例示的なタンパク質賦形剤は、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）などの血清アルブミン、組換えヒトアルブミン（ｒＨＡ）、ゼラチン、カゼインなどを含む。緩衝能においてもまた機能しうる、代表的なアミノ酸／抗体構成要素は、アラニン、アルギニン、グリシン、アルギニン、ベタイン、ヒスチジン、グルタミン酸、アスパラギン酸、システイン、リシン、ロイシン、イソロイシン、バリン、メチオニン、フェニルアラニン、アスパルタームなどを含む。炭水化物賦形剤もまた、本技術の範囲内において意図されており、その例は、フルクトース、マルトース、ガラクトース、グルコース、Ｄ−マンノース、ソルボースなどの単糖；ラクトース、スクロース、トレハロース、セロビオースなどの二糖；ラフィノース、メレジトース、マルトデキストリン、デキストラン、デンプンなどの多糖；ならびにマンニトール、キシリトール、マルチトール、ラクチトール、キシリトール  ソルビトール（グルシトール）、およびミオイノシトールなどのアルジトールを含むがこれらに限定されない。
【００７２】
本明細書で使用される場合、「〜を含むこと」という用語は、組成物および方法が、列挙される要素を含むが、他の要素を除外しないことを意味するように意図される。組成物および方法を規定するのに使用される場合の「〜から本質的になること」とは、意図される使用のための組合せにとって本質的に重要な他の要素を除外することを意味するものとする。例えば、本明細書で規定される通り、要素から本質的になる組成物は、単離および精製法、ならびにリン酸緩衝食塩水、保存剤など、薬学的に許容される担体から、微量の夾雑物を除外しないであろう。「〜からなること」とは、本明細書で開示される組成物を投与するための、微量を超える他の成分の要素、および実質的な方法ステップを除外することを意味するものとする。これらの移行句の各々により規定される態様は、本開示の範囲内にある。
【００７３】
本明細書で使用される「コンセンサス配列」という用語は、複数の配列のシリーズをアラインメントすることにより決定されるアミノ酸または核酸配列であり、複数の配列の各対応する位置における、アミノ酸または塩基の主要な選択肢を表す、理想的な配列を規定する、アミノ酸または核酸配列を指す。複数の配列シリーズの配列に基づき、シリーズのコンセンサス配列は、配列の各々と、ゼロ、１つ、少数、またはこれを超える置換により異なりうる。複数の配列シリーズの配列に応じてまた、シリーズの、１つを超えるコンセンサス配列を決定することができる。コンセンサス配列の生成は、精緻な数学的解析下に置かれている。多様なソフトウェアプログラムを使用して、コンセンサス配列を決定することができる。
【００７４】
「細胞減少療法」とは、本明細書で使用される場合、化学療法、寒冷療法、および放射線療法を含むがこれらに限定されない。当技術分野では、細胞の増殖を低減するように作用する薬剤が公知であり、広く使用されている。がん細胞を、それらが分裂している場合に限り死滅させる化学療法薬を、細胞周期特異的と称する。これらの薬物は、トポイソメラーゼ阻害剤および代謝拮抗物質を含む、Ｓ期において作用する薬剤を含む。
【００７５】
トポイソメラーゼ阻害剤とは、トポイソメラーゼ酵素（トポイソメラーゼＩおよびＩＩ）の作用に干渉する薬物である。化学療法の過程において、トポイソメラーゼ酵素は、複製に必要なＤＮＡの構造の操作を制御し、したがって、細胞周期特異的である。トポイソメラーゼＩ阻害剤の例は、上記で列挙したカンプトテシン（ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃａｎ）類似体である、イリノテカンおよびトポテカンを含む。トポイソメラーゼＩＩ阻害剤の例は、アムサクリン、エトポシド、エトポシドリン酸塩、およびテニポシドを含む。
【００７６】
代謝拮抗物質とは通例、染色体の複製に関与する過程に干渉することが多い正常代謝基質の類似体である。代謝拮抗物質は、周期内の極めて特異的な期にある細胞を攻撃する。代謝拮抗物質は、葉酸アンタゴニスト、例えば、メトトレキサート；ピリミジンアンタゴニスト、例えば、５−フルオロウラシル、フロクスウリジン（ｆｏｘｕｒｉｄｉｎｅ）、シタラビン、カペシタビン、およびゲムシタビン；プリンアンタゴニスト、例えば、６−メルカプトプリンおよび６−チオグアニン；アデノシンデアミナーゼ阻害剤、例えば、クラドリビン、フルダラビン、ネララビン、およびペントスタチンなどを含む。
【００７７】
植物アルカロイドは、ある特定の種類の植物に由来する。ビンカアルカロイドは、ツルニチニチソウ（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ  ｒｏｓｅａ）の植物体から作られる。タキサンは、太平洋イチイ（Ｐａｃｉｆｉｃ  Ｙｅｗ  ｔｒｅｅ）（Ｔａｘｕｓ）の樹皮から作られる。ビンカアルカロイドおよびタキサンはまた、抗微小管剤としても公知である。ポドフィロトキシンは、ポドフィルムの植物体に由来する。カンプトテシン類似体は、アジア原産の「カンレンボク（Ｈａｐｐｙ  Ｔｒｅｅ）」（Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃａ  ａｃｕｍｉｎａｔａ）に由来する。ポドフィロトキシンおよびカンプトテシン類似体はまた、トポイソメラーゼ阻害剤としても分類される。植物アルカロイドは一般に、細胞周期特異的である。
【００７８】
これらの薬剤の例は、ビンカアルカロイド、例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、およびビノレルビン；タキサン、例えば、パクリタキセルおよびドセタキセル；ポドフィロトキシン、例えば、エトポシドおよびテニポシド（ｔｅｎｉｓｏｐｉｄｅ）；ならびにカンプトテシン類似体、例えば、イリノテカンおよびトポテカンを含む。
【００７９】
寒冷療法は、温度の低下、例えば、低温治療（ｈｙｐｏｔｈｅｒｍｉｃ  ｔｈｅｒａｐｙ）を伴う療法を含むがこれらに限定されない。
【００８０】
放射線療法は、当技術分野で公知の通り、放射線、例えば、電離放射線、ＵＶ放射線への曝露を含むがこれに限定されない。例示的な投与量は、少なくとも約２Ｇｙ〜約１０Ｇｙ以下の範囲の電離放射線の線量および／または少なくとも約５Ｊ／ｍ２〜約５０Ｊ／ｍ２以下の範囲の紫外放射線の線量、通例約１０Ｊ／ｍ２を含むがこれらに限定されない。
【００８１】
本明細書で使用される場合、「検出可能なマーカー」という用語は、直接的にまたは間接的に、検出可能なシグナルを発生させることが可能な、少なくとも１つのマーカーを指す。このマーカーの非網羅的なリストは、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼなどの、例えば比色定量、蛍光、発光による検出可能なシグナルを発生させる酵素、蛍光、発光色素などの発色団、電子顕微鏡法、または伝導性、電流滴定、ボルタンメトリー、インピーダンスなど、それらの電気的特性により検出される電子密度を伴う群、例えば、それらの分子が、それらの物理的および／または化学的特性の、検出可能な修飾を誘導するのに十分なサイズである、検出可能な群を含み、このような検出は、回折、表面プラズモン共鳴、表面の変動、接触角の変化などの光学法、または原子間力分光法、トンネル効果などの物理学的方法、または３２Ｐ、３５Ｓ、もしくは１２５Ｉなどの放射性分子により達成することができる。
【００８２】
「有効（ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ）量」または「有効（ｅｆｆｉｃａｃｉｏｕｓ）量」とは、薬剤の量、または２つもしくはこれを超える薬剤の組合せ量であって、哺乳動物または他の対象を処置するために投与されると、疾患のためのこのような処置を施すのに十分である、量または組合せ量を指す。「有効（ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ）量」とは、薬剤、疾患およびその重症度、ならびに処置される対象の年齢、体重などに応じて変動するであろう。
【００８３】
核酸配列へと適用される「〜をコードする」という用語は、その天然状態にあるか、または当業者に周知の方法により操作されるときに、ポリペプチドおよび／またはその断片のｍＲＮＡを産生するように転写および／または翻訳されうる場合、ポリペプチド「をコードする」と言われるポリヌクレオチドを指す。アンチセンス鎖とは、このような核酸の相補体であり、ここから、コード配列を推定することができる。
【００８４】
本明細書で使用される場合、「エンハンサー」という用語は、発現させる核酸配列との関連における、その場所および配向性に関わらず、核酸配列の転写を増進、改良、または改善する配列エレメントを表す。エンハンサーは、単一のプロモーターからの転写を増強する場合もあり、１つを超えるプロモーターからの転写を同時に増強する場合もある。転写を改良するこの機能性が、保持されるか、または実質的に保持される（例えば、野生型活性、すなわち全長配列の活性の、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％または少なくとも９５％）限りにおいて、野生型エンハンサー配列の、任意の切断された、変異された、またはこれら以外の修飾された改変体もまた、上記の規定の範囲内にある。
【００８５】
一態様では、抗体の「同等物」または「生物学的同等物」という用語は、抗体が、そのエピトープタンパク質またはその断片に選択的に結合する能力であって、ＥＬＩＳＡまたは他の適切な方法により測定される能力を意味する。生物学的に同等な抗体は、基準抗体と同じエピトープに結合する、抗体、ペプチド、抗体断片、抗体の改変体、抗体の誘導体、および抗体の模倣体（ｍｉｍｅｔｉｃ）を含むがこれらに限定されない。
【００８６】
明示的な列挙を伴わないが、そうでないことが意図されない限りにおいて、本開示が、ポリペプチド、タンパク質、ポリヌクレオチド、または抗体に関する場合、このようなポリペプチド、タンパク質、ポリヌクレオチド、または抗体の同等物または生物学的同等物は、本開示の範囲内にあることが意図されることを推察されたい。本明細書で使用される場合、「その生物学的同等物」という用語は、基準タンパク質、抗体、ポリペプチド、または核酸に言及する場合、「その同等物」と同義であることを意図し、所望の構造または機能性をなおも維持しながら、最小限の相同性を有する、タンパク質、抗体、ポリペプチド、または核酸を意図する。本明細書で具体的に列挙されない限りにおいて、本明細書で言及される、任意のポリヌクレオチド、ポリペプチド、またはタンパク質はまた、その同等物も含むことが想定される。例えば、同等物は、少なくとも約７０％の相同性もしくは同一性、または少なくとも８０％の相同性もしくは同一性、または代替的に少なくとも約８５％、または代替的に少なくとも約９０％、または代替的に少なくとも約９５％、または代替的に９８％の相同性パーセントもしくは同一性パーセントを意図し、基準タンパク質、ポリペプチド、または核酸と実質的に同等な生体活性を呈する。代替的に、ポリヌクレオチドに言及する場合、その同等物は、ストリンジェントな条件下で、基準ポリヌクレオチドまたはその相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドである。
【００８７】
別の配列と、ある特定の百分率（例えば、８０％、８５％、９０％、または９５％）の「配列同一性」を有するポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチド領域（またはポリペプチドもしくはポリペプチド領域）とは、アラインメントし、２つの配列を比較するときに、その百分率の塩基（またはアミノ酸）が同じであることを意味する。アラインメントおよび相同性パーセントまたは配列同一性パーセントは、当技術分野で公知のソフトウェアプログラム、例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｕｓｕｂｅｌら編、１９８７年）、補遺３０巻、７．７．１８節、表７．７．１において記載されているソフトウェアプログラムを使用して決定することができる。アラインメントのためには、デフォルトのパラメータを使用することが好ましい。好ましいアラインメントプログラムは、デフォルトのパラメータを使用するＢＬＡＳＴである。特に、好ましいプログラムは、以下のデフォルトのパラメータ：遺伝子コード＝標準；フィルター＝なし；鎖＝両方；カットオフ＝６０；期待値＝１０；行列＝ＢＬＯＳＵＭ６２；記載＝５０の配列；ソート＝高スコア；データベース＝非冗長、ＧｅｎＢａｎｋ＋ＥＭＢＬ＋ＤＤＢＪ＋ＰＤＢ＋ＧｅｎＢａｎｋ  ＣＤＳ  ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎｓ＋ＳｗｉｓｓＰｒｏｔｅｉｎ＋ＳＰｕｐｄａｔｅ＋ＰＩＲを使用する、ＢＬＡＳＴＮおよびＢＬＡＳＴＰである。これらのプログラムの詳細については、以下のインターネットアドレス：ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｃｇｉ−ｂｉｎ／ＢＬＡＳＴにおいて見出すことができる。
【００８８】
本明細書で使用される場合、「発現」という用語は、ポリヌクレオチドが、ｍＲＮＡへと転写される過程および／または転写されたｍＲＮＡが、その後、ペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質へと翻訳される過程を指す。ポリヌクレオチドが、ゲノムＤＮＡに由来する場合、発現は、真核細胞内のｍＲＮＡのスプライシングを含みうる。遺伝子の発現レベルは、細胞または組織試料中のｍＲＮＡまたはタンパク質の量を測定することにより決定することができる。一態様では、１つの試料に由来する遺伝子の発現レベルを、対照または基準試料に由来する、この遺伝子の発現レベルと直接比較することができる。別の態様では、１つの試料に由来する遺伝子の発現レベルを、化合物の投与後に、同じ試料に由来する、この遺伝子の発現レベルと直接比較することができる。
【００８９】
「第１選択」または「第２選択」または「第３選択」という語句は、患者により受容される処置の順序を指す。第１選択治療レジメンは、最初に施される処置であるのに対し、第２または第３選択治療は、それぞれ、第１選択治療の後、または第２選択治療の後で施される。Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅは、第１選択治療を、「疾患または状態のための最初の処置」として規定している。がんを伴う患者では、一次処置は、手術、化学療法、放射線療法、またはこれらの治療の組合せでありうる。当業者はまた、第１選択治療を、「一次治療および一次処置」とも称する。２００８年５月１日が最後の閲覧日である、ｗｗｗ．ｃａｎｃｅｒ．ｇｏｖにおけるＮａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅのウェブサイトを参照されたい。患者が、第１選択治療に対して、ポジティブな臨床応答を示さなかったか、または不顕性の応答を示したか、または第１選択治療を停止しているために、患者には、その後の化学療法レジメンを施すのが典型的である。
【００９０】
本明細書で使用される場合、「相同性」または「同一な」、「同一性」パーセントまたは「類似性」パーセントとは、２つまたはこれを超える核酸またはポリペプチド配列の文脈で使用される場合、２つまたはこれを超える配列または部分配列であって、同じであるか、または指定された百分率の、同じヌクレオチドもしくはアミノ酸残基を有する配列または部分配列、例えば、指定された領域（例えば、本明細書で記載される抗体をコードするヌクレオチド配列または本明細書で記載される抗体のアミノ酸配列）にわたり、少なくとも６０％の同一性、好ましくは少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはこれを超える同一性を有する配列または部分配列を指す。相同性は、比較を目的としてアラインメントされうる、各配列内の位置を比較することにより決定することができる。比較される配列内の位置が、同じ塩基またはアミノ酸により占有される場合、分子は、この位置において相同である。配列間の相同性の程度は、配列により共有される、マッチする位置または相同な位置の数の関数である。アラインメントおよび相同性パーセントまたは配列同一性パーセントは、当技術分野で公知のソフトウェアプログラム、例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｕｓｕｂｅｌら編、１９８７年）、補遺３０巻、７．７．１８節、表７．７．１において記載されているソフトウェアプログラムを使用して決定することができる。アラインメントのためには、デフォルトのパラメータを使用することが好ましい。好ましいアラインメントプログラムは、デフォルトのパラメータを使用するＢＬＡＳＴである。特に、好ましいプログラムは、以下のデフォルトのパラメータ：遺伝子コード＝標準；フィルター＝なし；鎖＝両方；カットオフ＝６０；期待値＝１０；行列＝ＢＬＯＳＵＭ６２；記載＝５０の配列；ソート＝高スコア；データベース＝非冗長、ＧｅｎＢａｎｋ＋ＥＭＢＬ＋ＤＤＢＪ＋ＰＤＢ＋ＧｅｎＢａｎｋ  ＣＤＳ  ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎｓ＋ＳｗｉｓｓＰｒｏｔｅｉｎ＋ＳＰｕｐｄａｔｅ＋ＰＩＲを使用する、ＢＬＡＳＴＮおよびＢＬＡＳＴＰである。これらのプログラムの詳細については、以下のインターネットアドレス：ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｃｇｉ−ｂｉｎ／ＢＬＡＳＴにおいて見出すことができる。「相同性」または「同一な」、「同一性」パーセントまたは「類似性」パーセントという用語はまた、被験配列の相補体も指すか、またはこれに適用することもできる。用語はまた、欠失および／または付加を有する配列のほか、置換を有する配列も含む。本明細書で記載される通り、好ましいアルゴリズムは、ギャップなどに対処しうる。好ましくは、同一性は、少なくとも約２５アミノ酸もしくはヌクレオチドの長さである領域にわたり存在するか、またはより好ましくは少なくとも５０〜１００アミノ酸もしくはヌクレオチドの長さである領域にわたり存在する。「非類縁の」または「非相同な」配列は、本明細書で開示される配列のうちの１つと、４０％未満の同一性、または代替的に２５％未満の同一性を共有する。
【００９１】
「ハイブリダイゼーション」とは、１または複数のポリヌクレオチドが反応して、ヌクレオチド残基の塩基間の水素結合を介して安定化する複合体を形成する反応を指す。水素結合は、ワトソンクリック塩基対合により生じる場合もあり、フーグスティーン結合により生じる場合もあり、他の任意の配列特異的な形で生じる場合もある。複合体は、二重鎖構造を形成する２つの鎖、多重鎖複合体を形成する３つもしくはこれを超える鎖、自己ハイブリダイズする一本鎖、またはこれらの任意の組合せを含みうる。ハイブリダイゼーション反応は、ＰＣＲ反応の開始、またはリボザイムによるポリヌクレオチドの酵素的切断など、より広範な工程内のステップを構成しうる。
【００９２】
ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件の例は、約２５℃〜約３７℃のインキュベーション温度；約６倍濃度のＳＳＣ〜約１０倍濃度のＳＳＣのハイブリダイゼーション緩衝液濃度；約０％〜約２５％のホルムアミド濃度；および約４倍濃度のＳＳＣ〜約８倍濃度のＳＳＣの洗浄溶液を含む。中程度のハイブリダイゼーション条件の例は、約４０℃〜約５０℃のインキュベーション温度；約９倍濃度のＳＳＣ〜約２倍濃度のＳＳＣの緩衝液濃度；約３０％〜約５０％のホルムアミド濃度；および約５倍濃度のＳＳＣ〜約２倍濃度のＳＳＣの洗浄溶液を含む。高ストリンジェンシー条件の例は、約５５℃〜約６８℃のインキュベーション温度；約１倍濃度のＳＳＣ〜約０．１倍濃度のＳＳＣの緩衝液濃度；約５５％〜約７５％のホルムアミド濃度；および約１倍濃度のＳＳＣ、０．１倍濃度のＳＳＣ、または脱イオン水の洗浄溶液を含む。一般に、ハイブリダイゼーションインキュベーション時間は、５分間〜２４時間であり、１つ、２つ、またはこれを超える洗浄ステップを伴い、洗浄インキュベーション時間は、約１、２、または１５分間である。ＳＳＣとは、０．１５ＭのＮａＣｌおよび１５ｍＭのクエン酸緩衝液である。他の緩衝液系を使用する、ＳＳＣの同等物を利用しうることが理解される。
【００９３】
本明細書で使用される場合、「免疫調節性分子」という用語は、免疫応答を調節しうるか、またはこれに直接に影響を及ぼしうる任意の分子であって、ＣＣＬ２、ＣＣＬ５、ＣＣＬ１４、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ１３、およびＬＥＣなどのケモカイン；インターロイキン（例えば、ＩＬ−２、ＩＬ−７、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１など）、インターフェロンα、β、およびγなどのリンホカインおよびサイトカイン；細胞増殖を刺激する因子（例えば、ＧＭ−ＣＳＦ）、および他の因子（例えば、腫瘍壊死因子、ＤＣ−ＳＩＧＮ、ＭｌＰ１α、ＭｌＰ１β、ＴＧＦ−β、またはＴＮＦ）；Ｂ７分子およびＣＤ４０などのＴ細胞活性化のための共刺激性シグナルをもたらす因子；ＣＤ８３などのアクセサリー分子；ＴＡＰ１／ＴＡＰ２トランスポータータンパク質などの抗原のプロセシングおよび提示に関与するタンパク質；ＬＭＰ２およびＬＭＰ７などのプロテオソーム分子；ｇｐ９６、ＨＳＰ７０、およびＨＳＰ９０などの熱ショックタンパク質；ならびにＭＨＣまたはＨＬＡ分子；ならびにそれらの生物学的同等物を含むがこれらに限定されない任意の分子を指す場合がある。本明細書では、免疫調節性分子の非限定的な例が開示される。
【００９４】
本明細書で使用される場合、「Ｂ７．１」（Ｂ７；ＢＢ１；Ｂ７−１；ＣＤ８０；ＬＡＢ７；ＣＤ２８ＬＧ；ＣＤ２８ＬＧ１としてもまた公知である）という用語は、この名称と関連する特異的分子と、類似の生物学的機能を有する他の任意の分子であって、Ｂ７．１と、少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、好ましくは９０％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を共有する他の任意の分子とを指す。本明細書では、Ｂ７．１配列の例が提示される。加えて、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＮＭ＿００５１９１．３およびＮＰ＿００５１８２．１と関連する配列が、例示的である。
非限定的な例は、ＮＰ＿００５１８２．１、配列番号４２：
ＭＧＨＴＲＲＱＧＴＳ  ＰＳＫＣＰＹＬＮＦＦ  ＱＬＬＶＬＡＧＬＳＨ  ＦＣＳＧＶＩＨＶＴＫ  ＥＶＫＥＶＡＴＬＳＣ  ＧＨＮＶＳＶＥＥＬＡ  ＱＴＲＩＹＷＱＫＥＫ  ＫＭＶＬＴＭＭＳＧＤ  ＭＮＩＷＰＥＹＫＮＲ  ＴＩＦＤＩＴＮＮＬＳ  ＩＶＩＬＡＬＲＰＳＤ  ＥＧＴＹＥＣＶＶＬＫ  ＹＥＫＤＡＦＫＲＥＨ  ＬＡＥＶＴＬＳＶＫＡ  ＤＦＰＴＰＳＩＳＤＦ  ＥＩＰＴＳＮＩＲＲＩ  ＩＣＳＴＳＧＧＦＰＥ  ＰＨＬＳＷＬＥＮＧＥ  ＥＬＮＡＩＮＴＴＶＳ  ＱＤＰＥＴＥＬＹＡＶ  ＳＳＫＬＤＦＮＭＴＴ    ＮＨＳＦＭＣＬＩＫＹ  ＧＨＬＲＶＮＱＴＦＮ  ＷＮＴＴＫＱＥＨＦＰ  ＤＮＬＬＰＳＷＡＩＴ  ＬＩＳＶＮＧＩＦＶＩ  ＣＣＬＴＹＣＦＡＰＲ  ＣＲＥＲＲＲＮＥＲＬ  ＲＲＥＳＶＲＰＶ
を含む。
【００９５】
Ｂ７．１を組成物の一部として投与する、一部の実施形態では、Ｂ７．１を、合成することもでき、任意の利用可能な商業的供給源から購入することもできる。このような供給源は、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｏｒｉｇｅｎｅ、ならびに精製タンパク質およびそれらの修飾バージョンの他の販売元を含む。商業的供給源のリストは、Ｌｉｎｓｃｏｔｔ’ｓ  Ｄｉｒｅｃｔｏｒｙ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ＆  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｌｉｎｓｃｏｔｔｓｄｉｒｅｃｔｏｒｙ．ｃｏｍ／）において見出すことができる。
【００９６】
本明細書で使用される場合、「ＣＣＬ１９」（ＥＬＣ；ＣＫｂ１１；ＭＩＰ３Ｂ；ＭＩＰ−３ｂ；ＳＣＹＡ１９としてもまた公知である）という用語は、この名称と関連する特異的分子と、類似の生物学的機能を有する他の任意の分子であって、ＣＣＬ１９と、少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、好ましくは９０％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を共有する他の任意の分子とを指す。本明細書では、ＣＣＬ１９配列の例が提示される。加えて、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＮＣ＿０００００９．１１、ＮＣ＿０１８９２０．２、ＮＴ＿００８４１３．１９、ＮＰ＿００６２６５．１と関連する配列が、例示的である。
非限定的な例は、ＮＰ＿００６２６５．１、配列番号４３：
ＭＡＬＬＬＡＬＳＬＬ  ＶＬＷＴＳＰＡＰＴＬ  ＳＧＴＮＤＡＥＤＣＣ  ＬＳＶＴＱＫＰＩＰＧ  ＹＩＶＲＮＦＨＹＬＬ  ＩＫＤＧＣＲＶＰＡＶ  ＶＦＴＴＬＲＧＲＱＬ  ＣＡＰＰＤＱＰＷＶＥ  ＲＩＩＱＲＬＱＲＴＳ  ＡＫＭＫＲＲＳＳ
を含む。
【００９７】
ＣＣＬ１９を組成物の一部として投与する、一部の実施形態では、ＣＣＬ１９を、合成することもでき、任意の利用可能な商業的供給源から購入することもできる。このような供給源は、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｏｒｉｇｅｎｅ、ならびに精製タンパク質およびそれらの修飾バージョンの他の販売元を含む。商業的供給源のリストは、Ｌｉｎｓｃｏｔｔ’ｓ  Ｄｉｒｅｃｔｏｒｙ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ＆  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｌｉｎｓｃｏｔｔｓｄｉｒｅｃｔｏｒｙ．ｃｏｍ／）において見出すことができる。
【００９８】
本明細書で使用される場合、「ＣＣＬ２０」（ＣＫｂ４；ＬＡＲＣ；ＳＴ３８；ＭＩＰ３Ａ；Ｅｘｏｄｕｓ；ＭＩＰ−３ａ；ＳＣＹＡ２０；ＭＩＰ−３−アルファとしてもまた公知である）という用語は、この名称と関連する特異的分子と、類似の生物学的機能を有する他の任意の分子であって、ＣＣＬ２０と、少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、好ましくは９０％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を共有する他の任意の分子とを指す。本明細書では、ＣＣＬ２０配列の例が提示される。加えて、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＮＣ＿０００００２．１１、ＮＣ＿０１８９１３．２、ＮＴ＿００５４０３．１８、ＮＰ＿００１１２３５１８．１、およびＮＰ＿００４５８２．１と関連する配列が、例示的である。
例は、ＮＰ＿００４５８２．１、配列番号４４：
ＭＣＣＴＫＳＬＬＬＡ  ＡＬＭＳＶＬＬＬＨＬ  ＣＧＥＳＥＡＡＳＮＦ  ＤＣＣＬＧＹＴＤＲＩ  ＬＨＰＫＦＩＶＧＦＴ  ＲＱＬＡＮＥＧＣＤＩ  ＮＡＩＩＦＨＴＫＫＫ  ＬＳＶＣＡＮＰＫＱＴ  ＷＶＫＹＩＶＲＬＬＳ  ＫＫＶＫＮＭ
およびＮＰ＿００１１２３５１８．１、配列番号４５：
ＭＣＣＴＫＳＬＬＬＡ  ＡＬＭＳＶＬＬＬＨＬ  ＣＧＥＳＥＡＳＮＦＤ  ＣＣＬＧＹＴＤＲＩＬ  ＨＰＫＦＩＶＧＦＴＲ  ＱＬＡＮＥＧＣＤＩＮ  ＡＩＩＦＨＴＫＫＫＬ  ＳＶＣＡＮＰＫＱＴＷ  ＶＫＹＩＶＲＬＬＳＫ  ＫＶＫＮＭ
を含む。
【００９９】
ＣＣＬ２０を組成物の一部として投与する、一部の実施形態では、ＣＣＬ２０を、合成することもでき、任意の利用可能な商業的供給源から購入することもできる。このような供給源は、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｏｒｉｇｅｎｅ、ならびに精製タンパク質およびそれらの修飾バージョンの他の販売元を含む。商業的供給源のリストは、Ｌｉｎｓｃｏｔｔ’ｓ  Ｄｉｒｅｃｔｏｒｙ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ＆  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ（２０１５年４月９日に最後にアクセスした、ウェブアドレス：ｌｉｎｓｃｏｔｔｓｄｉｒｅｃｔｏｒｙ．ｃｏｍを参照されたい）において見出すことができる。
【０１００】
本明細書で使用される場合、「ＣＤ４０Ｌ」（ＩＧＭ；ＩＭＤ３；ＴＲＡＰ；ｇｐ３９；ＣＤ１５４；ＣＤ４０ＬＧ；ＨＩＧＭ１；Ｔ−ＢＡＭ；ＴＮＦＳＦ５；ｈＣＤ４０Ｌとしてもまた公知である）という用語は、この名称と関連する特異的分子と、類似の生物学的機能を有する他の任意の分子であって、ＣＤ４０Ｌと、少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、好ましくは９０％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を共有する他の任意の分子とを指す。本明細書では、ＣＤ４０Ｌ配列の例が提示される。加えて、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＮＣ＿００００２３．１０、ＮＣ＿０１８９３４．２、ＮＴ＿０１１７８６．１７、ＮＰ＿００００６５．１と関連する配列が、例示的である。
非限定的な例は、ＮＰ＿００００６５．１、配列番号４６：
ＭＩＥＴＹＮＱＴＳＰ  ＲＳＡＡＴＧＬＰＩＳ  ＭＫＩＦＭＹＬＬＴＶ  ＦＬＩＴＱＭＩＧＳＡ  ＬＦＡＶＹＬＨＲＲＬ  ＤＫＩＥＤＥＲＮＬＨ  ＥＤＦＶＦＭＫＴＩＱ  ＲＣＮＴＧＥＲＳＬＳ  ＬＬＮＣＥＥＩＫＳＱ  ＦＥＧＦＶＫＤＩＭＬ  ＮＫＥＥＴＫＫＥＮＳ  ＦＥＭＱＫＧＤＱＮＰ  ＱＩＡＡＨＶＩＳＥＡ  ＳＳＫＴＴＳＶＬＱＷ  ＡＥＫＧＹＹＴＭＳＮ  ＮＬＶＴＬＥＮＧＫＱ  ＬＴＶＫＲＱＧＬＹＹ  ＩＹＡＱＶＴＦＣＳＮ  ＲＥＡＳＳＱＡＰＦＩ  ＡＳＬＣＬＫＳＰＧＲ  ＦＥＲＩＬＬＲＡＡＮ  ＴＨＳＳＡＫＰＣＧＱ  ＱＳＩＨＬＧＧＶＦＥ  ＬＱＰＧＡＳＶＦＶＮ  ＶＴＤＰＳＱＶＳＨＧ  ＴＧＦＴＳＦＧＬＬＫ  Ｌ
を含む。
【０１０１】
ＣＤ４０Ｌを組成物の一部として投与する、一部の実施形態では、ＣＤ４０Ｌを、合成することもでき、任意の利用可能な商業的供給源から購入することもできる。このような供給源は、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｏｒｉｇｅｎｅ、ならびに精製タンパク質およびそれらの修飾バージョンの他の販売元を含む。商業的供給源のリストは、Ｌｉｎｓｃｏｔｔ’ｓ  Ｄｉｒｅｃｔｏｒｙ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ＆  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ（２０１５年４月９日に最後にアクセスした、ｌｉｎｓｃｏｔｔｓｄｉｒｅｃｔｏｒｙ．ｃｏｍのウェブアドレスを参照されたい）において見出すことができる。
【０１０２】
本明細書で使用される場合、「ＣＤ１３７Ｌ」（ＴＮＦＳＦ９；４−１ＢＢ−Ｌとしてもまた公知である）という用語は、この名称と関連する特異的分子と、類似の生物学的機能を有する他の任意の分子であって、ＣＤ１３７Ｌと、少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、好ましくは９０％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を共有する他の任意の分子とを指す。本明細書では、ＣＤ１３７Ｌ配列の例が提示される。加えて、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＮＣ＿００００１９．９、ＮＴ＿０１１２９５．１２、ＮＣ＿０１８９３０．２、およびＮＰ＿００３８０２．１と関連するタンパク質が、例示的である。
【０１０３】
非限定的な例は、ＮＰ＿００３８０２．１、配列番号４７：
ＭＥＹＡＳＤＡＳＬＤ  ＰＥＡＰＷＰＰＡＰＲ  ＡＲＡＣＲＶＬＰＷＡ  ＬＶＡＧＬＬＬＬＬＬ  ＬＡＡＡＣＡＶＦＬＡ  ＣＰＷＡＶＳＧＡＲＡ    ＳＰＧＳＡＡＳＰＲＬ  ＲＥＧＰＥＬＳＰＤＤ  ＰＡＧＬＬＤＬＲＱＧ  ＭＦＡＱＬＶＡＱＮＶ  ＬＬＩＤＧＰＬＳＷＹ  ＳＤＰＧＬＡＧＶＳＬ    ＴＧＧＬＳＹＫＥＤＴ  ＫＥＬＶＶＡＫＡＧＶ  ＹＹＶＦＦＱＬＥＬＲ  ＲＶＶＡＧＥＧＳＧＳ  ＶＳＬＡＬＨＬＱＰＬ  ＲＳＡＡＧＡＡＡＬＡ    ＬＴＶＤＬＰＰＡＳＳ  ＥＡＲＮＳＡＦＧＦＱ  ＧＲＬＬＨＬＳＡＧＱ  ＲＬＧＶＨＬＨＴＥＡ  ＲＡＲＨＡＷＱＬＴＱ  ＧＡＴＶＬＧＬＦＲＶ  ＴＰＥＩＰＡＧＬＰＳ  ＰＲＳＥ
を含む。
【０１０４】
ＣＤ１３７Ｌを組成物の一部として投与する、一部の実施形態では、ＣＤ１３７Ｌを、合成することもでき、任意の利用可能な商業的供給源から購入することもできる。このような供給源は、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｏｒｉｇｅｎｅ、ならびに精製タンパク質およびそれらの修飾バージョンの他の販売元を含む。商業的供給源のリストは、Ｌｉｎｓｃｏｔｔ’ｓ  Ｄｉｒｅｃｔｏｒｙ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ＆  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ（２０１５年４月９日に最後にアクセスした、ウェブアドレス：ｌｉｎｓｃｏｔｔｓｄｉｒｅｃｔｏｒｙ．ｃｏｍを参照されたい）において見出すことができる。
【０１０５】
本明細書で使用される場合、「ＧＩＴＲＬ」（ＴＮＦＳＦ１８；ＴＬ６；ＡＩＴＲＬ；ｈＧＩＴＲＬとしてもまた公知である）という用語は、この名称と関連する特異的分子と、類似の生物学的機能を有する他の任意の分子であって、ＧＩＴＲＬと、少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、好ましくは９０％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を共有する他の任意の分子とを指す。本明細書では、ＧＩＴＲＬ配列の例が提示される。加えて、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＮＣ＿０００００１．１０、ＮＣ＿０１８９１２．２、ＮＴ＿００４４８７．２０、およびＮＰ＿００５０８３．２と関連するタンパク質が、例示的である。
【０１０６】
非限定的な例は、ＮＰ＿００５０８３．２、配列番号４８：
ＭＴＬＨＰＳＰＩＴＣ  ＥＦＬＦＳＴＡＬＩＳ  ＰＫＭＣＬＳＨＬＥＮ  ＭＰＬＳＨＳＲＴＱＧ  ＡＱＲＳＳＷＫＬＷＬ  ＦＣＳＩＶＭＬＬＦＬ  ＣＳＦＳＷＬＩＦＩＦ  ＬＱＬＥＴＡＫＥＰＣ  ＭＡＫＦＧＰＬＰＳＫ  ＷＱＭＡＳＳＥＰＰＣ  ＶＮＫＶＳＤＷＫＬＥ  ＩＬＱＮＧＬＹＬＩＹ    ＧＱＶＡＰＮＡＮＹＮ  ＤＶＡＰＦＥＶＲＬＹ  ＫＮＫＤＭＩＱＴＬＴ  ＮＫＳＫＩＱＮＶＧＧ  ＴＹＥＬＨＶＧＤＴＩ  ＤＬＩＦＮＳＥＨＱＶ    ＬＫＮＮＴＹＷＧＩＩ  ＬＬＡＮＰＱＦＩＳ
を含む。
【０１０７】
ＧＩＴＲＬを組成物の一部として投与する、一部の実施形態では、ＧＩＴＲＬを、合成することもでき、任意の利用可能な商業的供給源から購入することもできる。このような供給源は、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｏｒｉｇｅｎｅ、ならびに精製タンパク質およびそれらの修飾バージョンの他の販売元を含む。商業的供給源のリストは、Ｌｉｎｓｃｏｔｔ’ｓ  Ｄｉｒｅｃｔｏｒｙ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ＆  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ（２０１５年４月９日に最後にアクセスした、ｌｉｎｓｃｏｔｔｓｄｉｒｅｃｔｏｒｙ．ｃｏｍのウェブアドレスを参照されたい）において見出すことができる。
【０１０８】
本明細書で使用される場合、「ＧＭ−ＣＳＦ」（顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子；ＣＳＦ２としてもまた公知である）という用語は、この名称と関連する特異的分子と、類似の生物学的機能を有する他の任意の分子であって、ＧＭ−ＣＳＦと、少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、好ましくは９０％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を共有する他の任意の分子とを指す。本明細書では、ＧＭ−ＣＳＦ配列の例が提示される。加えて、ＵｎｉＰｒｏｔ参照番号：Ｐ０４１４１−ＣＳＦ２＿ＨＵＭＡＮ：
ＭＷＬＱＳＬＬＬＬＧ  ＴＶＡＣＳＩＳＡＰＡ  ＲＳＰＳＰＳＴＱＰＷ  ＥＨＶＮＡＩＱＥＡＲ  ＲＬＬＮＬＳＲＤＴＡ  ＡＥＭＮＥＴＶＥＶＩ  ＳＥＭＦＤＬＱＥＰＴ  ＣＬＱＴＲＬＥＬＹＫ  ＱＧＬＲＧＳＬＴＫＬ  ＫＧＰＬＴＭＭＡＳＨ  
ＹＫＱＨＣＰＰＴＰＥ  ＴＳＣＡＴＱＩＩＴＦ  ＥＳＦＫＥＮＬＫＤＦ  ＬＬＶＩＰＦＤＣＷＥ  ＰＶＱＥ  （配列番号４９）
と関連するタンパク質配列が、例示的である。
【０１０９】
ＧＭ−ＣＳＦを組成物の一部として投与する、一部の実施形態では、ＧＭ−ＣＳＦを、合成することもでき、任意の利用可能な商業的供給源から購入することもできる。このような供給源は、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｏｒｉｇｅｎｅ、ならびに精製タンパク質およびそれらの修飾バージョンの他の販売元を含む。商業的供給源のリストは、Ｌｉｎｓｃｏｔｔ’ｓ  Ｄｉｒｅｃｔｏｒｙ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ＆  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｌｉｎｓｃｏｔｔｓｄｉｒｅｃｔｏｒｙ．ｃｏｍ）において見出すことができる。
【０１１０】
本明細書で使用される場合、「ＩＬ−１２」（「インターロイキン１２」としてもまた公知である）という用語は、この名称と関連する特異的分子と、類似の生物学的機能を有する他の任意の分子であって、ＩＬ−１２と、少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、好ましくは９０％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を共有する他の任意の分子とを指す。本明細書では、ＩＬ−１２配列の例を提示するが、これは、単鎖ＩＬ−１２、ＩＬ−１２Ａ（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＮＣ＿０００００３．１１、ＮＴ＿００５６１２．１７、ＮＣ＿０１８９１４．２）、およびＩＬ−１２Ｂ（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＮＣ＿０００００５．９、ＮＣ＿０１８９１６．２、ＮＴ＿０２３１３３．１４）など、成熟形態のＩＬ−１２ならびにその改変体および断片を含むがこれらに限定されない。米国特許第８，５５６，８８２号において開示されている配列と関連するタンパク質配列、例えば、配列番号５０の配列によりコードされる単鎖ＩＬ−１２は、例示的である。ＩＬ−１２を組成物の一部として投与する、一部の実施形態では、ＩＬ−１２を、合成することもでき、任意の利用可能な商業的供給源から購入することもできる。このような供給源は、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｏｒｉｇｅｎｅ、ならびに精製タンパク質およびそれらの修飾バージョンの他の販売元を含む。商業的供給源のリストは、Ｌｉｎｓｃｏｔｔ’ｓ  Ｄｉｒｅｃｔｏｒｙ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ＆  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｌｉｎｓｃｏｔｔｓｄｉｒｅｃｔｏｒｙ．ｃｏｍ）において見出すことができる。
【０１１１】
本明細書で使用される場合、「ＩＬ−２」（「インターロイキン２」としてもまた公知である）という用語は、この名称と関連する特異的分子と、類似の生物学的機能を有する他の任意の分子であって、ＩＬ−２と、少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、好ましくは９０％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を共有する他の任意の分子とを指す。非限定的な例は、天然ヒトＩＬ−２の全長配列を提示する配列番号５１：
ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴ  ＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤ  ＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮ  ＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬ  ＴＦＫＦＹＭＰＫＫＡ  ＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥ  ＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬ  ＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬ  ＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮ  ＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥ  ＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥ  ＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲ  ＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳ  ＴＬＴ
である。
【０１１２】
「低毒性ＩＬ−２」という用語は、類似の生物学的機能を呈するが、対象へと投与された場合に毒性がより低い、ＩＬ−２の修飾バージョンを指す。一部の実施形態では、低毒性ＩＬ−２は、野生型ＩＬ−２と比較して、血管透過性が低減される変異を含む。米国特許第７，３７１，３７１号は、ヒトＩＬ−２のアミノ酸位置２２〜５８の間の、野生型ＩＬ−２の透過性増強領域内の、例示的な変異について開示している。非限定的な例は、ヒト配列内の３８位における、ＲからＷへの変異を含む。米国特許第７，３７１，３７１号は、ＩＬ−２の透過性増強領域の外側の、１または複数の位置において変異を含む低毒性ＩＬ−２についてもさらに開示している。
【０１１３】
本明細書で使用される場合、「ＩＬ−１５」（「インターロイキン１５」としてもまた公知である）という用語は、この名称と関連する特異的分子と、類似の生物学的機能を有する他の任意の分子であって、ＩＬ−１５と、少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、好ましくは９０％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を共有する他の任意の分子とを指す。本明細書では、ＩＬ−１５配列の例が提示される。加えて、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＮＣ＿０００００４．１１、ＮＣ＿０１８９１５．２、ＮＴ＿０１６３５４．２０、ＮＰ＿０００５７６．１、ＮＰ＿７５１９１５．１と関連するタンパク質配列が、例示的である。非限定的な例は、配列番号５２によりコードされる成熟タンパク質を含む。Ｉｌ−１５を組成物の一部として投与する、一部の実施形態では、Ｉｌ−１５を、合成することもでき、任意の利用可能な商業的供給源から購入することもできる。このような供給源は、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｏｒｉｇｅｎｅ、ならびに精製タンパク質およびそれらの修飾バージョンの他の販売元を含む。商業的供給源のリストは、Ｌｉｎｓｃｏｔｔ’ｓ  Ｄｉｒｅｃｔｏｒｙ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ＆  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ（上記で言及したｌｉｎｓｃｏｔｔｓｄｉｒｅｃｔｏｒｙ．ｃｏｍを参照されたい）において見出すことができる。
【０１１４】
本明細書で使用される場合、「ＩＬ−１８」（「インターロイキン１８」、ＩＧＩＦ、「インターロイキン１ガンマ」、ＩＬ１Ｆ４、ＩＦＮガンマ誘導性因子、ＩＬ−１ｇとしてもまた公知である）という用語は、この名称と関連する特異的分子と、類似の生物学的機能を有する他の任意の分子であって、ＩＬ−１８と、少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、好ましくは９０％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を共有する他の任意の分子とを指す。本明細書では、ＩＬ−１８配列の例が提示される。加えて、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＮＣ＿００００１１．９、ＮＣ＿０１８９２２．２、ＮＴ＿０３３８９９．９、ＮＰ＿００１２３０１４０．１、ＮＰ＿００１５５３．１と関連するタンパク質配列が、例示的である。非限定的な例は、配列番号５３によりコードされる成熟タンパク質を含む。ＩＬ−１８を組成物の一部として投与する、一部の実施形態では、ＩＬ−１８を、合成することもでき、任意の利用可能な商業的供給源から購入することもできる。このような供給源は、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｏｒｉｇｅｎｅ、ならびに精製タンパク質およびそれらの修飾バージョンの他の販売元を含む。商業的供給源のリストは、Ｌｉｎｓｃｏｔｔ’ｓ  Ｄｉｒｅｃｔｏｒｙ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ＆  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ（上記で言及したｌｉｎｓｃｏｔｔｓｄｉｒｅｃｔｏｒｙ．ｃｏｍを参照されたい）において見出すことができる。
【０１１５】
本明細書で使用される場合、「ＩＬ−２１」（「インターロイキン２１」；Ｚａ１１；ＣＶＩＤ１１としてもまた公知である）という用語は、この名称と関連する特異的分子と、類似の生物学的機能を有する他の任意の分子であって、ＩＬ−２１と、少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、好ましくは９０％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を共有する他の任意の分子とを指す。本明細書では、ＩＬ−２１配列の例が提示される。加えて、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＮＣ＿０００００４．１１、ＮＣ＿０１８９１５．２、ＮＴ＿０１６３５４．２０と関連するタンパク質配列が、例示的である。非限定的な例は、配列番号５４によりコードされる成熟タンパク質を含む。Ｉｌ−２１を組成物の一部として投与する、一部の実施形態では、Ｉｌ−２１を、合成することもでき、任意の利用可能な商業的供給源から購入することもできる。このような供給源は、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｏｒｉｇｅｎｅ、ならびに精製タンパク質およびそれらの修飾バージョンの他の販売元を含む。商業的供給源のリストは、Ｌｉｎｓｃｏｔｔ’ｓ  Ｄｉｒｅｃｔｏｒｙ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ＆  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ（上記で言及したｌｉｎｓｃｏｔｔｓｄｉｒｅｃｔｏｒｙ．ｃｏｍを参照されたい）において見出すことができる。
【０１１６】
本明細書で使用される場合、「ＬＥＣ」（ＣＣＬ１６；ＬＭＣ；ＮＣＣ４；ＣＫｂ１２；ＨＣＣ−４；ＬＣＣ−１；Ｍｔｎ−１；ＮＣＣ−４；ＳＣＹＬ４；ＩＬＩＮＣＫ；ＳＣＹＡ１６としてもまた公知である）という用語は、この名称と関連する特異的分子と、ＬＥＣと少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、好ましくは９０％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を共有する、類似の生物学的機能を有する他の任意の分子とを指す。本明細書では、ＬＥＣ配列の例が提示される。加えて、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＮＣ＿００００１７．１０、ＮＴ＿０１０７８３．１６、ＮＴ＿１８７６１４．１、ＮＣ＿０１８９２８．２、ＮＰ＿００４５８１．１と関連するタンパク質配列が、例示的である。
【０１１７】
非限定的な例は、ＮＰ＿００４５８１．１、配列番号５５：
ＭＫＶＳＥＡＡＬＳＬ  ＬＶＬＩＬＩＩＴＳＡ  ＳＲＳＱＰＫＶＰＥＷ  ＶＮＴＰＳＴＣＣＬＫ  ＹＹＥＫＶＬＰＲＲＬ  ＶＶＧＹＲＫＡＬＮＣ  ＨＬＰＡＩＩＦＶＴＫ  ＲＮＲＥＶＣＴＮＰＮ  ＤＤＷＶＱＥＹＩＫＤ  ＰＮＬＰＬＬＰＴＲＮ  ＬＳＴＶＫＩＩＴＡＫ  ＮＧＱＰＱＬＬＮＳＱ
を含む。
【０１１８】
ＬＥＣを組成物の一部として投与する、一部の実施形態では、ＬＥＣを、合成することもでき、任意の利用可能な商業的供給源から購入することもできる。このような供給源は、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｏｒｉｇｅｎｅ、ならびに精製タンパク質およびそれらの修飾バージョンの他の販売元を含む。商業的供給源のリストは、Ｌｉｎｓｃｏｔｔ’ｓ  Ｄｉｒｅｃｔｏｒｙ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ＆  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ（上記で言及したｌｉｎｓｃｏｔｔｓｄｉｒｅｃｔｏｒｙ．ｃｏｍを参照されたい）において見出すことができる。
【０１１９】
本明細書で使用される場合、「ＯＸ４０Ｌ」（ＴＮＦＳＦ４；ＧＰ３４；ＣＤ２５２；ＴＸＧＰ１；ＣＤ１３４Ｌ；ＯＸ−４０Ｌとしてもまた公知である）という用語は、この名称と関連する特異的分子と、類似の生物学的機能を有する他の任意の分子であって、ＯＸ４０Ｌと、少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、好ましくは９０％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を共有する他の任意の分子とを指す。本明細書では、ＯＸ４０Ｌ配列の例が提示される。加えて、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＮＣ＿０００００１．１０、ＮＴ＿００４４８７．２０、ＮＣ＿０１８９１２．２、ＮＰ＿００３３１７．１と関連するタンパク質配列が、例示的である。
【０１２０】
非限定的な例は、ＮＰ＿００３３１７．１、配列番号５６：
ＭＥＲＶＱＰＬＥＥＮ  ＶＧＮＡＡＲＰＲＦＥ  ＲＮＫＬＬＬＶＡＳＶ  ＩＱＧＬＧＬＬＬＣＦ  ＴＹＩＣＬＨＦＳＡＬ  ＱＶＳＨＲＹＰＲＩＱ  ＳＩＫＶＱＦＴＥＹＫ  ＫＥＫＧＦＩＬＴＳＱ  ＫＥＤＥＩＭＫＶＱＮ  ＮＳＶＩＩＮＣＤＧＦ  ＹＬＩＳＬＫＧＹＦＳ  ＱＥＶＮＩＳＬＨＹＱ  ＫＤＥＥＰＬＦＱＬＫ  ＫＶＲＳＶＮＳＬＭＶ  ＡＳＬＴＹＫＤＫＶＹ  ＬＮＶＴＴＤＮＴＳＬ  ＤＤＦＨＶＮＧＧＥＬ  ＩＬＩＨＱＮＰＧＥＦ  ＣＶＬ  
を含む。
【０１２１】
ＯＸ４０Ｌを組成物の一部として投与する、一部の実施形態では、ＯＸ４０Ｌを、合成することもでき、任意の利用可能な商業的供給源から購入することもできる。このような供給源は、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｏｒｉｇｅｎｅ、ならびに精製タンパク質およびそれらの修飾バージョンの他の販売元を含む。商業的供給源のリストは、Ｌｉｎｓｃｏｔｔ’ｓ  Ｄｉｒｅｃｔｏｒｙ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ＆  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ（上記で言及したｌｉｎｓｃｏｔｔｓｄｉｒｅｃｔｏｒｙ．ｃｏｍを参照されたい）において見出すことができる。
【０１２２】
本明細書で使用される「単離された」という用語は、他の材料を実質的に含まない、分子または生物学的薬剤または細胞材料を指す。一態様では、「単離された」という用語は、天然の供給源中に存在する、他のＤＮＡもしくはＲＮＡ、またはタンパク質もしくはポリペプチド、または細胞もしくは細胞小器官、または組織もしくは器官のそれぞれから分離された、ＤＮＡもしくはＲＮＡなどの核酸、またはタンパク質もしくはポリペプチド（例えば、抗体またはその誘導体）、または細胞もしくは細胞小器官、または組織もしくは器官を指す。「単離された」という用語はまた、組換えＤＮＡ法により作製される場合、細胞材料、ウイルス材料、もしくは培養培地を実質的に含まない核酸もしくはペプチド、または化学合成される場合、化学的前駆体もしくは他の化学物質を実質的に含まない核酸もしくはペプチドも指す。さらに、「単離核酸」とは、断片としては天然に存在しておらず、天然の状態では見出されない核酸断片を含むことを意図する。本明細書では、「単離された」という用語はまた、他の細胞性タンパク質から単離されたポリペプチドを指すようにも使用され、精製ポリペプチドおよび組換えポリペプチドの両方を包含することを意図する。本明細書では、「単離された」という用語はまた、他の細胞または組織から単離された細胞または組織を指すようにも使用され、培養細胞または培養組織および操作細胞または操作組織の両方を包含することを意図する。
【０１２３】
本明細書で使用される場合、「単離細胞」という用語は一般に、組織の他の細胞から実質的に分離された細胞を指す。
【０１２４】
「免疫細胞」とは、例えば、骨髄中で産生される造血幹細胞（ＨＳＣ）、リンパ球（Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞）、および骨髄由来細胞（好中球、好酸球、好塩基球、単球、マクロファージ、樹状細胞）に由来する白血球（ｗｈｉｔｅ  ｂｌｏｏｄ  ｃｅｌｌ（ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ））を含む。
【０１２５】
本明細書で使用される場合、「リンカー配列」という用語は、１〜１０回、または代替的に、１〜約８回、または代替的に、１〜約６回、または代替的に、約５もしくは４回、または代替的に、３回、または代替的に、２回反復されうる、１〜１０、または代替的に、８アミノ酸、または代替的に、６アミノ酸、または代替的に、５アミノ酸を含む、任意のアミノ酸配列に関する。例えば、リンカーは、３回反復されるペンタペプチドからなる、最大で１５アミノ酸残基を含みうる。一態様では、リンカー配列は、ｇｌｙ−ｇｌｙ−ｇｌｙ−ｇｌｙ−ｓｅｒ（配列番号６８）の３つのコピーを含む、（グリシン４セリン）３の可撓性ポリペプチドリンカー（配列番号６７）である。
【０１２６】
「腫瘍組織型に対応する正常細胞」とは、腫瘍組織と同じ組織型に由来する正常細胞を指す。非限定的な例は、肺腫瘍を有する患者に由来する正常肺細胞、または結腸腫瘍を有する患者に由来する正常結腸細胞である。
【０１２７】
本明細書で使用される場合、「ＮＦＡＴ調節性ポリヌクレオチド」という用語は、転写因子の活性化Ｔ細胞核因子（「ＮＦＡＴ」）ファミリーと相互作用するポリヌクレオチドを指す。ＮＦＡＴは、大半の免疫細胞内で発現するカルシニューリン依存性転写因子のコレクションを指し、Ｔ細胞内の遺伝子転写の活性化において、重要な役割を果たす（Ｆｒｉｃ，  Ｊ．ら（２０１２年）、Ｂｌｏｏｄ、１２０巻（７号）：１３８０〜１３８９頁）。特に、ＮＦＡＴは、免疫応答中に、多数の遺伝子（最も注目すべきものとしてＩＬ−２、ＩＬ−４、ＴＮＦ−α、およびＩＦＮ−γ）の転写を制御する（Ｆｒｉｃ，  Ｊ．ら（２０１２年）、Ｂｌｏｏｄ、１２０巻（７号）：１３８０〜１３８９頁；Ｒａｏ，  Ａ．ら（１９９７年）、Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５巻：７０７〜７４７頁；Ｈｏｇａｎ，  Ｐ．Ｇ．ら（２００３年）、Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．、１７巻（１８号）：２２０５〜２２３２頁）。ＮＦＡＴと相互作用するポリヌクレオチドの例は、
ＧＧＡＧＧＡＡＡＡＡＣＴＧＴＴＴＣＡＴＡＣＡＧＡＡＧＧＣＧ    （配列番号５７）およびその同等物である。
【０１２８】
本明細書で使用される場合、「Ｔ細胞」という用語は、胸腺内で成熟するリンパ球の種類を指す。Ｔ細胞は、細胞媒介性免疫において重要な役割を果たし、Ｂ細胞など、他のリンパ球から、細胞表面上のＴ細胞受容体の存在により識別される。Ｔ細胞は、単離することもでき、商業的に利用可能な供給源から得ることもできる。「Ｔ細胞」は、ＣＤ３を発現させる、全ての種類の免疫細胞であって、ヘルパーＴ細胞（ＣＤ４＋細胞）、細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＤ８＋細胞）、ナチュラルキラーＴ細胞、調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、およびガンマ−デルタＴ細胞を含む免疫細胞を含む。「細胞傷害性細胞」は、細胞傷害応答を媒介することが可能な細胞である、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、および好中球を含む。市販のＴ細胞株の非限定的な例は、細胞株である、ＢＣＬ２（ＡＡＡ）Ｊｕｒｋａｔ（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−２９０２（商標））、ＢＣＬ２（Ｓ７０Ａ）Ｊｕｒｋａｔ（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−２９００（商標））、ＢＣＬ２（Ｓ８７Ａ）Ｊｕｒｋａｔ（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−２９０１（商標））、ＢＣＬ２  Ｊｕｒｋａｔ（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−２８９９（商標））、Ｎｅｏ  Ｊｕｒｋａｔ（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−２８９８（商標））、ＴＡＬＬ−１０４ヒト細胞傷害性Ｔ細胞株（ＡＴＣＣ  ＃ＣＲＬ−１１３８６）を含む。さらなる例は、例えば、Ｄｅｇｌｉｓ、ＥＢＴ−８、ＨＰＢ−ＭＬｐ−Ｗ、ＨＵＴ  ７８、ＨＵＴ  １０２、Ｋａｒｐａｓ  ３８４、Ｋｉ  ２２５、Ｍｙ−Ｌａ、Ｓｅ−Ａｘ、ＳＫＷ−３、ＳＭＺ−１、およびＴ３４などの成熟Ｔ細胞株；ならびに未成熟Ｔ細胞株、例えば、ＡＬＬ−ＳＩＬ、Ｂｅ１３、ＣＣＲＦ−ＣＥＭ、ＣＭＬ−Ｔ１、ＤＮＤ−４１、ＤＵ．５２８、ＥＵ−９、ＨＤ−Ｍａｒ、ＨＰＢ−ＡＬＬ、Ｈ−ＳＢ２、ＨＴ−１、ＪＫ−Ｔ１、Ｊｕｒｋａｔ、Ｋａｒｐａｓ  ４５、ＫＥ−３７、ＫＯＰＴ−Ｋ１、Ｋ−Ｔ１、Ｌ−ＫＡＷ、Ｌｏｕｃｙ、ＭＡＴ、ＭＯＬＴ−１、ＭＯＬＴ  ３、ＭＯＬＴ−４、ＭＯＬＴ  １３、ＭＯＬＴ−１６、ＭＴ−１、ＭＴ−ＡＬＬ、Ｐ１２／Ｉｃｈｉｋａｗａ、Ｐｅｅｒ、ＰＥＲ０１１７、ＰＥＲ−２５５、ＰＦ−３８２、ＰＦＩ−２８５、ＲＰＭＩ−８４０２、ＳＴ−４、ＳＵＰ−Ｔ１〜ＳＵＰ−Ｔ１４、ＴＡＬＬ−１、ＴＡＬＬ−１０１、ＴＡＬＬ−１０３／２、ＴＡＬＬ−１０４、ＴＡＬＬ−１０５、ＴＡＬＬ−１０６、ＴＡＬＬ−１０７、ＴＡＬＬ−１９７、ＴＫ−６、ＴＬＢＲ−１、ＴＬＢＲ−２、ＴＬＢＲ−３、およびＴＬＢＲ−４、ＣＣＲＦ−ＨＳＢ−２（ＣＣＬ−１２０．１）、Ｊ．ＲＴ３−Ｔ３．５（ＡＴＣＣ  ＴＩＢ−１５３）、Ｊ４５．０１（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１９９０）、Ｊ．ＣａＭ１．６（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−２０６３）、ＲＳ４；１１（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１８７３）、ＣＣＲＦ−ＣＥＭ（ＡＴＣＣ  ＣＲＭ−ＣＣＬ−１１９）；ならびに皮膚Ｔ細胞リンパ腫細胞株、例えば、ＨｕＴ７８（ＡＴＣＣ  ＣＲＭ−ＴＩＢ−１６１）、ＭＪ［Ｇ１１］（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−８２９４）、ＨｕＴ１０２（ＡＴＣＣ  ＴＩＢ−１６２）を含むがこれらに限定されない。ＲＥＨ、ＮＡＬＬ−１、ＫＭ−３、Ｌ９２−２２１を含むがこれらに限定されないヌル白血病細胞株は、Ｋ５６���赤白血病、ＴＨＰ−１単球性白血病、Ｕ９３７リンパ腫、ＨＥＬ赤白血病、ＨＬ６０白血病、ＨＭＣ−１白血病、ＫＧ−１白血病、Ｕ２６６骨髄腫などの他の白血病およびリンパ腫に由来する細胞株と同様、免疫細胞の、別の商業的に利用可能な供給源である。このような市販の細胞株の非限定的な例示的供給源は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  ＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎすなわちＡＴＣＣ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ａｔｃｃ．ｏｒｇ／）およびＧｅｒｍａｎ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅｓ（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｄｓｍｚ．ｄｅ／）を含む。
【０１２９】
本明細書で使用される場合、ナチュラルキラー細胞としてもまた公知の「ＮＫ細胞」という用語は、骨髄に由来し、生得性免疫系において極めて重要な役割を果たすリンパ球の種類を指す。ＮＫ細胞は、抗体および細胞表面上の主要組織適合性複合体の非存在下であってもなお、ウイルス感染細胞、腫瘍細胞、またはストレスを受けた他の細胞に対して、迅速な免疫応答をもたらす。ＮＫ細胞は、単離することもでき、商業的に利用可能な供給源から得ることもできる。市販のＮＫ細胞株の非限定的な例は、細胞株である、ＮＫ−９２（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−２４０７（商標））、ＮＫ−９２ＭＩ（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−２４０８（商標））を含む。さらなる例は、ＮＫ細胞株である、ＨＡＮＫ１、ＫＨＹＧ−１、ＮＫＬ、ＮＫ−ＹＳ、ＮＯＩ−９０、およびＹＴを含むがこれらに限定されない。このような市販の細胞株の非限定的な例示的供給源は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  ＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎすなわちＡＴＣＣ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ａｔｃｃ．ｏｒｇ／）およびＧｅｒｍａｎ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅｓ（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｄｓｍｚ．ｄｅ／）を含む。
【０１３０】
調節性ポリヌクレオチドに言及して本明細書で使用される場合、「作動的に連結された」という用語は、調節性ポリヌクレオチドと、それが連結されるポリヌクレオチド配列との会合であって、特異的なタンパク質が、調節性ポリヌクレオチドに結合すると、連結されたポリヌクレオチドが転写されるような会合を指す。
【０１３１】
本明細書で使用される場合、細胞、組織、または器官に関して、「〜を過剰発現させる」という用語は、タンパク質を、対照細胞、対照組織、または器官内で産生される量を超える量まで発現させることを意味する。過剰発現するタンパク質は、宿主細胞に対して内因性の場合もあり、宿主細胞に対して外因性の場合もある。
【０１３２】
「ポリヌクレオチド」および「オリゴヌクレオチド」という用語は、互換的に使用され、デオキシリボヌクレオチドもしくはリボヌクレオチドまたはそれらの類似体である、任意の長さのヌクレオチドのポリマー形態を指す。ポリヌクレオチドは、任意の三次元構造を有することが可能であり、公知または未知の任意の機能を果たしうる。以下はポリヌクレオチドの非限定的な例である：遺伝子または遺伝子断片（例えば、プローブ、プライマー、ＥＳＴまたはＳＡＧＥタグ）、エクソン、イントロン、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、転移ＲＮＡ、リボソームＲＮＡ、ＲＮＡｉ、リボザイム、ｃＤＮＡ、組換えポリヌクレオチド、分枝状ポリヌクレオチド、プラスミド、ベクター、任意の配列の単離ＤＮＡ、任意の配列の単離ＲＮＡ、核酸プローブ、およびプライマー。ポリヌクレオチドは、メチル化ヌクレオチドなどの修飾ヌクレオチドおよびヌクレオチド類似体を含みうる。存在する場合、ヌクレオチド構造に対する修飾は、ポリヌクレオチドのアセンブリーの前に付与することもでき、その後に付与することもできる。ヌクレオチドの配列は、ヌクレオチド以外の構成要素で中断させることができる。ポリヌクレオチドは、標識化構成要素とのコンジュゲーションを介するなど、重合化の後でさらに修飾することができる。用語はまた、二本鎖分子および一本鎖分子の両方を指す。そうでないことが指定または要求されない限りにおいて、ポリヌクレオチドである本技術の任意の態様は、二本鎖形態と、二本鎖形態を構成することが公知であるかまたは予測される、２つの相補的な一本鎖形態の各々との両方を包含する。
【０１３３】
本明細書で使用される場合、「核酸配列」および「ポリヌクレオチド」という用語は、リボヌクレオチドであれ、デオキシリボヌクレオチドであれ、任意の長さのヌクレオチドのポリマー形態を指すように互換的に使用される。したがって、この用語は、一本鎖、二本鎖、または多重鎖の、ＤＮＡまたはＲＮＡ、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＤＮＡ−ＲＮＡハイブリッド体、あるいはプリンおよびピリミジン塩基、または他の天然のヌクレオチド塩基、化学的もしくは生化学的に修飾されたヌクレオチド塩基、非天然のヌクレオチド塩基、または誘導体化ヌクレオチド塩基を含むポリマーを含むがこれらに限定されない。
【０１３４】
本明細書で使用される「プロモーター」という用語は、遺伝子など、コード配列の発現を調節する、任意の配列を指す。プロモーターは、例えば、構成的、誘導的、抑制的、または組織特異的でありうる。「プロモーター」とは、転写の開始および速度を制御するポリヌクレオチド配列の領域である、制御配列である。プロモーターは、ＲＮＡポリメラーゼおよび他の転写因子などの調節タンパク質および分子が結合しうる遺伝子エレメントを含有しうる。
【０１３５】
「タンパク質」、「ペプチド」、および「ポリペプチド」という用語は、２つまたはこれを超えるサブユニットのアミノ酸、アミノ酸類似体、またはペプチド模倣体の化合物を指すように、互換的に、かつ、それらの最も広い意味で使用する。サブユニットは、ペプチド結合で連結することができる。別の実施形態では、サブユニットは、他の結合、例えば、エステル、エーテルなどで連結することができる。タンパク質またはペプチドは、少なくとも２つのアミノ酸を含有しなければならないが、アミノ酸の最大数には、限定がなされず、タンパク質の配列を含む場合もあり、ペプチドの配列を含む場合もある。本明細書で使用される場合、「アミノ酸」という用語は、グリシン、ならびにＤ光学異性体およびＬ光学異性体の両方、アミノ酸類似体およびペプチド模倣体を含む、天然および／または非天然もしくは合成のアミノ酸を指す。
【０１３６】
本明細書で使用される場合、「精製された」という用語は、絶対的な純度を要求するのではなく、相対的な用語として意図されている。したがって、例えば、精製された核酸、ペプチド、タンパク質、生物学的複合体、または他の活性化合物とは、全部または一部において、タンパク質または他の夾雑物から単離された、核酸、ペプチド、タンパク質、生物学的複合体、または他の活性化合物である。一般に、本開示の範囲内の使用のための、実質的に精製されたペプチド、タンパク質、生物学的複合体、または他の活性化合物は、ペプチド、タンパク質、生物学的複合体、または他の活性化合物の、治療的投与のための完全医薬製剤中の、医薬担体、賦形剤、緩衝液、吸収増強剤、安定化剤、保存剤、アジュバントまたは他の共成分（ｃｏ−ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ）との混合または製剤化の前に、調製物中に存在する、全ての高分子種のうちの８０％超を構成する。より典型的には、ペプチド、タンパク質、生物学的複合体、または他の活性化合物は、他の製剤成分との混合の前に、精製調製物中に存在する、全ての高分子種のうちの９０％超、しばしば９５％超を表すように精製する。他の場合、精製調製物は、本質的に均質であることが可能であり、この場合、従来の技法では、他の高分子種は、検出可能でない。
【０１３７】
本明細書で使用される場合、「精製マーカー」という用語は、精製または同定に有用な、少なくとも１つのマーカーを指す。このマーカーの非網羅的なリストは、Ｈｉｓ、ｌａｃＺ、ＧＳＴ、マルトース結合性タンパク質、ＮｕｓＡ、ＢＣＣＰ、ｃ−ｍｙｃ、ＣａＭ、ＦＬＡＧ、ＧＦＰ、ＹＦＰ、ｃｈｅｒｒｙ、チオレドキシン、ｐｏｌｙ（ＮＡＮＰ）、Ｖ５、Ｓｎａｐ、ＨＡ、キチン結合性タンパク質、Ｓｏｆｔａｇ  １、Ｓｏｆｔａｇ  ３、Ｓｔｒｅｐ、またはＳタンパク質を含む。適切な直接的または間接的蛍光マーカーは、ＦＬＡＧ、ＧＦＰ、ＹＦＰ、ＲＦＰ、ｄＴｏｍａｔｏ、ｃｈｅｒｒｙ、Ｃｙ３、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、Ｃｙ７、ＤＮＰ、ＡＭＣＡ、ビオチン、ジゴキシゲニン、Ｔａｍｒａ、Ｔｅｘａｓ  Ｒｅｄ、ローダミン、Ａｌｅｘａ  ｆｌｕｏｒ、ＦＩＴＣ、ＴＲＩＴＣ、または他の任意の蛍光色素もしくはハプテンを含む。
【０１３８】
本明細書で使用される場合、「組換えタンパク質」という用語は、組換えＤＮＡ法により作製されるポリペプチドを指し、この場合、一般に、ポリペプチドをコードするＤＮＡを、適切な発現ベクターへと挿入し、次にこれを使用して、異種タンパク質を作製するように、宿主細胞を形質転換する。
【０１３９】
本明細書で使用される場合、「特異的結合」という用語は、抗体と抗原との、少なくとも１０−６Ｍの結合アフィニティーによる接触を意味する。ある特定の態様では、抗体は、少なくとも約１０−７Ｍ、好ましくは、１０−８Ｍ、１０−９Ｍ、１０−１０Ｍ、１０−１１Ｍ、または１０−１２Ｍのアフィニティーで結合する。
【０１４０】
「充実性腫瘍」とは、通例、嚢胞も液体領域も含有しない、組織の異常な塊である。充実性腫瘍は、良性の場合もあり、悪性の場合もあり、転移性の場合もあり、非転移性の場合もある。異なる種類の充実性腫瘍は、それらを形成する細胞型にちなんで名付けられている。充実性腫瘍の例は、肉腫、癌腫、およびリンパ腫を含む。
【０１４１】
キメラ抗原受容体細胞の作製に適用される場合の、「形質導入する」または「形質導入」という用語は、外来のヌクレオチド配列を、細胞へと導入する工程を指す。一部の実施形態では、この形質導入は、ベクターを介して行う。
【０１４２】
本明細書で使用される場合、対象における疾患「を処置すること」またはその「処置」とは、（１）疾患の素因があるか、もしくはその症状をいまだ提示していない対象において、症状もしくは疾患が生じることを防止すること；（２）疾患を阻害するか、もしくはその発症を停止させること；または（３）疾患もしくは疾患の症状を改善するか、もしくは退縮を引き起こすことを指す。当技術分野で理解される通り、「処置」とは、臨床結果を含む、有益なまたは所望の結果を得るための手法である。本技術の目的では、有益なまたは所望の結果は、検出可能であれ、検出不能であれ、１または複数の症状の緩和または改善、状態（疾患を含む）の広がりの減殺、状態（疾患を含む）の安定した（すなわち、増悪させない）状況、状態（疾患を含む）の進行の遅延または緩徐化、状態（疾患を含む）の改善または軽減、および寛解（部分的であれ、完全であれ）のうちの１または複数を含みうるがこれらに限定されない。開示される組成物および方法を含有する処置は、第１選択、第２選択、第３選択、第４選択、第５選択治療であることが可能であり、単独の治療として、または他の適切な療法と組み合わせて使用することを意図する。
【０１４３】
本明細書で使用される場合、「ベクター」という用語は、異なる宿主間の移入のためにデザインされた核酸構築物であって、プラスミド、ウイルス、コスミド、ファージ、ＢＡＣ、ＹＡＣなどを含むがこれらに限定されない核酸構築物を指す。一部の実施形態では、プラスミドベクターは、市販のベクターから調製することができる。他の実施形態では、ウイルスベクターは、当技術分野で公知の技法に従い、バキュロウイルス、レトロウイルス、アデノウイルス、ＡＡＶなどから作製することができる。一実施形態では、ウイルスベクターは、レンチウイルスベクターである。
【０１４４】
本明細書で使用される場合、「ＷＰＲＥ」または「ウッドチャック肝炎ウイルス（ＷＨＰ）転写後調節エレメント」という用語は、この名称と関連する特異的ヌクレオチド断片と、類似の生物学的機能を有し、本明細書で示されるＷＰＲＥ配列と、少なくとも７０％、または代替的に、少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、好ましくは９０％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を共有する他の任意の分子とを指す。例えば、ＷＰＲＥとは、ウッドチャック肝炎ウイルスゲノム配列（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：Ｊ０４５１４）内に存在する、ヒトＢ型肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＨＢＶＰＲＥ）と同様の領域を指し、このゲノムの配列のうちの、１０９３〜１６８４位の５９２ヌクレオチドが、転写後調節領域に対応することを指す（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、７２巻、５０８５〜５０９２頁、１９９８年）。レトロウイルスベクターを使用する解析は、目的の遺伝子の３’末端非翻訳領域へと挿入されたＷＰＲＥが、産生されるタンパク質の量を、５〜８倍増大させることを明らかにした。また、ＷＰＲＥの導入が、ｍＲＮＡの分解を抑制することも報告されている（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、７３巻、２８８６〜２８９２頁、１９９９年）。広い意味では、ｍＲＮＡを安定化させることにより、アミノ酸への翻訳の効率を増大させる、ＷＰＲＥなどのエレメントもまた、エンハンサーであると考えられる。
【０１４５】
上記で列挙したＧｅｎＢａｎｋ受託番号および参考文献の各々と関連する配列は、参照により本明細書に組み込まれる。
略語一覧
ＣＡＲ：キメラ抗原受容体
ＨＬＡ：組織適合性リンパ球抗原
ＩＬ：インターロイキン
Ｉｐ：腹膜内
ＩＲＥＳ：内部リボソーム侵入部位
ＬＥＣ：肝臓発現ケモカイン（ｌｉｖｅｒ−ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ）
ＭＦＩ：平均蛍光強度
ＭＯＩ：感染多重度
ＰＢＭＣ：末梢血単核細胞
ＰＢＳ：リン酸緩衝食塩水
ｓｃＦｖ：単鎖可変断片
ＴＮＴ：腫瘍壊死療法
ＷＰＲＥ：ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント
【０１４６】
本開示を実行するための様態
がん治療剤としての、免疫調節性分子の投与が追求されている。しかし、全身投与に随伴する重度の副作用（Ｇｉｏｖａｒｅｌｌｉ，  Ｍ．ら（２０００年）、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１６４巻：３２００〜３２０６頁；Ｌａｓｅｋ，  Ｗ．ら（２０１４年）、Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．、６３巻：４１９〜４３５頁）のために、有効な免疫応答を達成するために、対象となる腫瘍内で、高濃度のこれらの免疫調節性分子を得ることは困難であった。
【０１４７】
遺伝子操作されたキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞による自家処置を使用して、Ｂ細胞性リンパ腫および白血病において最近得られつつある、いまだかつてない結果（Ｍａｕｄｅ，  Ｓ．  Ｌ．ら（２０１４年）、Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．、３７１巻：１５０７〜１５１７頁；Ｐｏｒｔｅｒ，  Ｄ．  Ｌ．ら（２０１１年）、Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．、３６５巻：７２５〜７３３頁）のために、いくつかの研究室が、この手法を、卵巣がん、前立腺がん、および膵臓腫瘍を含む充実性腫瘍に適用し始めている。ＣＡＲ改変Ｔ細胞は、モノクローナル抗体の、ＨＬＡに依存しない標的化特異性を、活性化Ｔ細胞の、細胞溶解活性、増殖、およびホーミング特性と組み合わせるが、チェックポイント抑制に応答しない。抗原を発現させる標的を直接死滅させるそれらの能力のために、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、任意の抗原陽性細胞または組織に対して高度に毒性であることから、高度に腫瘍特異的な抗体を伴うＣＡＲを構築することが要件となっている。現況では、ヒト充実性腫瘍に対するＣＡＲ改変Ｔ細胞は、α−葉酸受容体、メソテリン、およびＭＵＣ−ＣＤ、ＰＳＭＡ、ならびに他の標的に対して構築されているが、大半は、正常組織内で、ある程度の抗原オフターゲット発現を示す。これらの構築物は、患者において、同じ例外的な結果を示していないことから、充実性腫瘍に対して使用しうる、新規の標的およびＣＡＲ  Ｔ細胞の構築法を同定するためのさらなる研究に対する必要が強調される。
【０１４８】
したがって、本開示は、一部の態様では、ＴＮＴ抗体の抗原結合性ドメインである、ＴＮＴ関連抗原に特異的な結合性ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、ならびにその使用および作製と関連する、方法および組成物を提示する。
【０１４９】
キメラ抗原受容体およびそれらの使用
Ｉ．構成要素
本開示は、ＴＮＴ関連抗原に結合するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内ドメインを含む細胞活性化部分を含むか、またはこれから本質的になるか、またはこれからなるＣＡＲを提示する。細胞外ドメインは、他に抗原結合性ドメインと称する、標的特異的な結合性エレメントを含む。細胞内ドメインまたは細胞質ドメインは、共刺激性シグナル伝達領域およびゼータ鎖部分を含む。ＣＡＲは、任意選択で、最大で３００アミノ酸、好ましくは１０〜１００アミノ酸、より好ましくは２５〜５０アミノ酸のスペーサードメインをさらに含みうる。
【０１５０】
抗原結合性ドメイン。ある特定の態様では、本開示は、ＴＮＴ関連抗原に特異的な抗原結合性ドメインを含むか、または代替的にこれから本質的になるか、またはなおさらにこれからなるＣＡＲを提示する。ＴＮＴとは、腫瘍壊死療法の頭字語である。「腫瘍壊死療法（ＴＮＴ）関連抗原」とは、死につつある細胞では、全抗原、エピトープ、またはそれらの断片が保持されるが、正常では、細胞死の場合を除き、全抗原、エピトープ、またはそれらの断片が露出されない抗原である。このようなＴＮＴ関連抗原の非限定的な例は、通例、細胞死の後に限り接近可能となるＤＮＡまたはＤＮＡ／ヒストン標的であり、例えば、ＴＮＴ−１は、ヒストンＨ１の部分に結合する。また、ヒストン標的でもある、他のＴＮＴ関連抗原は、Ｈ２Ａ、Ｈ２Ｂ、Ｈ３、Ｈ４、Ｈ５、および／または他のヒトもしくは動物ヒストンを含むがこれらに限定されない。他のＴＮＴ関連抗原は、一本鎖ＤＮＡおよび異質染色質のＤＮＡを含むがこれらに限定されない。抗原結合性ドメインは、抗体である、ＴＮＴ−１、ＴＮＴ−２、ＴＮＴ−３、またはＮＨＳ７６の抗原結合性ドメインを含みうるか、これらから本質的になりうるか、またはなおさらにこれらからなりうる。
【０１５１】
一部の実施形態では、抗原結合性ドメインは、ＴＮＴ抗体またはＴＮＴ関連抗原に結合する抗体の抗原結合性ドメインを含むか、または代替的にこれから本質的になるか、またはなおこれからなる。これらの抗原に特異的に結合するモノクローナル抗体は市販されており、例えば、２０１５年４月１０日に最後にアクセスしたウェブアドレス：ｂｉｏｃｏｍｐａｒｅ．ｃｏｍ／ｐｆｕ／１１０４４７／ｓｏｉｄｓ／１２３５１０／Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ／ＴＮＴを参照されたい。一態様では、抗原結合性ドメインは、ＴＮＴ抗体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。非限定的な実施形態では、ＴＮＴ抗体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域は、ＴＮＴ抗体の抗原結合性ドメインを含むか、または代替的にこれから本質的になるか、またはなおこれからなる。
【０１５２】
一部の実施形態では、重鎖可変領域は、以下の配列：（ｉ）  ＧＦＳＬＴＤＹＧ  （配列番号１），  （ｉｉ）  ＧＹＳＦＴＧＹＹ  （配列番号９），  （ｉｉｉ）  ＧＹＴＦＴＲＹＷ  （配列番号１７），  （ｉｖ）  ＳＧＹＹＷＧ  （配列番号２５）、またはそれらの各々の同等物のうちのいずれか１つで始まり、カルボキシ末端における、さらなる５０アミノ酸、または代替的に約４０アミノ酸、または代替的に約３０アミノ酸、または代替的に約２０アミノ酸、または代替的に約１０アミノ酸、または代替的に約５アミノ酸、または代替的に約４、もしくは３、もしくは２、もしくは１アミノ酸を後続させるアミノ酸配列を含むか、または代替的にこれから本質的になるか、またはなおさらにこれからなるＣＤＲＨ１配列を含む。
【０１５３】
一部の実施形態では、重鎖可変領域は、以下の配列：（ｉ）  ＩＷＧＧＧＳＴ  （配列番号２），  （ｉｉ）  ＩＮＰＹＮＧＡＴ  （配列番号１０），  （ｉｉｉ）  ＩＹＰＧＮＳＤＴ  （配列番号１８），  （ｉｖ）  ＳＩＹＨＳＧＳＴＹＹＮＰＳＬＫＳ  （配列番号２６）、またはそれらの各々の同等物のうちのいずれか１つで始まり、カルボキシ末端における、さらなる５０アミノ酸、または代替的に約４０アミノ酸、または代替的に約３０アミノ酸、または代替的に約２０アミノ酸、または代替的に約１０アミノ酸、または代替的に約５アミノ酸、または代替的に約４、もしくは３、もしくは２、もしくは１アミノ酸を後続させるアミノ酸配列を含むか、または代替的にこれから本質的になるか、またはなおさらにこれからなるＣＤＲＨ２配列を含む。
【０１５４】
一部の実施形態では、重鎖可変領域は、以下の配列：（ｉ）  ＡＫＥＫＲＲＧＹＹＹＡＭＤＹ  （配列番号３），  （ｉｉ）  ＡＲＬＤＲＧＤＹ  （配列番号１１），  （ｉｉｉ）  ＡＲＧＥＥＩＧＶＲＲＷＦＡＹ  （配列番号１９），  （ｉｖ）  ＧＫＷＳＫＦＤＹ  （配列番号２７）、またはそれらの各々の同等物のうちのいずれか１つで始まり、カルボキシ末端における、さらなる５０アミノ酸、または代替的に約４０アミノ酸、または代替的に約３０アミノ酸、または代替的に約２０アミノ酸、または代替的に約１０アミノ酸、または代替的に約５アミノ酸、または代替的に約４、もしくは３、もしくは２、もしくは１アミノ酸を後続させるアミノ酸配列を含むか、または代替的にこれから本質的になるか、またはなおさらにこれからなるＣＤＲＨ３配列を含む。
【０１５５】
一部の実施形態では、重鎖可変領域は、下記で言及されるポリヌクレオチド配列：
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＡＡＧＧＡＧＴＣＡＧＧＡＣＣＴＧＧＣＣＴＧＧＴＧＧＣＧＣＣＣＴＣＡＣＡＧＡＧＣＣＴＧＴＣＣＡＴＣＡＣＡＴＧＣＡＣＴＧＴＣＴＣＡＧＧＧＴＴＣＴＣＡＴＴＡＡＣＣＧＡＣＴＡＴＧＧＴＧＴＡＡＧＧＴＧＧＡＴＴＣＧＣＣＡＧＣＣＴＣＣＡＧＧＡＡＡＧＧＧＴＣＴＧＧＡＧＴＧＧＣＴＧＧＧＡＧＴＡＡＴＡＴＧＧＧＧＴＧＧＴＧＧＡＡＧＣＡＣＡＴＡＣＴＡＴＡＡＴＴＣＡＧＣＴＣＴＣＡＡＡＴＣＣＡＧＡＣＴＧＡＧＣＡＴＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＡＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＣＡＡＧＴＴＴＴＣＴＴＡＡＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＴＣＴＧＣＡＡＡＣＴＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＣＣＡＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＴＧＣＣＡＡＡＧＡＧＡＡＡＣＧＧＡＧＧＧＧＧＴＡＴＴＡＣＴＡＴＧＣＴＡＴＧＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＴＣＡＡＧＧＡＡＣＣＴＣＡＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ  （配列番号７）によりコードされるポリペプチドもしくはその抗原結合性断片、またはそれらの各々の同等物を含むか、または代替的にこれらから本質的になるか、またはなおさらにこれらからなる。
【０１５６】
一部の実施形態では、重鎖可変領域は、下記で言及されるポリヌクレオチド配列：
ＧＡＧＧＴＡＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＡＧＴＣＴＧＧＡＣＣＴＧＡＧＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣＣＴＧＧＧＧＣＴＴＣＡＧＴＧＡＡＧＡＴＡＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＴＴＡＣＴＣＡＴＴＣＡＣＴＧＧＣＴＡＣＴＡＣＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＧＣＡＡＡＧＣＣＡＴＧＴＡＡＡＧＡＧＣＣＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴＴＧＧＡＣＧＴＡＴＴＡＡＴＣＣＴＴＡＣＡＡＴＧＧＴＧＣＴＡＣＴＡＧＣＴＡＣＡＡＣＣＡＧＡＡＴＴＴＣＡＡＧＧＡＣＡＡＧＧＣＣＡＧＣＴＴＧＡＣＴＧＴＡＧＡＴＡＡＧＴＣＣＴＣＣＡＧＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＧＣＴＣＣＡＣＡＧＣＣＴＧＡＣＡＴＣＴＧＡＧＧＡＣＴＣＴＧＣＡＧＴＣＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＡＡＧＡＣＴＡＧＡＣＣＧＧＧＧＧＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＴＣＡＡＧＧＡＡＣＣＴＣＡＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ  （配列番号１５）によりコードされるポリペプチドもしくはその抗原結合性断片、またはそれらの各々の同等物を含むか、または代替的にこれらから本質的になるか、またはなおさらにこれらからなる。
【０１５７】
一部の実施形態では、重鎖可変領域は、下記で言及されるポリヌクレオチド配列：
ＣＡＧＧＴＣＣＡＡＣＴＧＣＡＧＣＡＧＴＣＡＧＧＡＧＣＴＧＡＡＣＴＧＧＴＣＡＡＧＡＣＴＧＧＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＡＧＡＴＧＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＣＴＡＣＡＣＣＴＴＴＡＣＣＡＧＡＴＡＣＴＧＧＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＡＡＡＡＣＡＧＡＧＧＣＣＴＧＧＡＣＡＧＧＣＴＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＴＧＧＣＧＣＴＡＴＴＴＡＴＣＣＴＧＧＡＡＡＴＡＧＴＧＡＴＡＣＴＡＧＣＴＡＣＴＡＣＣＡＧＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＧＣＡＡＧＧＣＣＡＡＡＣＴＧＡＣＴＧＣＡＧＴＣＡＣＡＴＣＴＧＣＣＡＧＣＡＣＴＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＧＣＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＣＡＴＣＴＧＡＧＧＡＣＴＣＴＧＣＣＧＴＣＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＡＡＧＡＧＧＧＧＡＧＧＡＡＡＴＡＧＧＧＧＴＡＣＧＡＣＧＣＴＧＧＴＴＴＧＣＴＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＴＣＴＧＧＴＣＡＣＴＧＴＣＴＣＴＧＣＡ  （配列番号２３）によりコードされるポリペプチドもしくはその抗原結合性断片、またはそれらの各々の同等物を含むか、または代替的にこれらから本質的になるか、またはなおさらにこれらからなる。
【０１５８】
一部の実施形態では、重鎖可変領域は、下記で言及されるポリヌクレオチド配列：
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣ  ＴＧＣＡＧＧＡＧＴＣ  ＣＧＧＣＣＣＡＧＧＡ  ＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣ  ＣＴＴＣＧＧＡＧＡＣ  ＣＣＴＧＴＣＣＣＴＣ  ＡＣＣＴＧＣＧＣＴＧ  ＴＣＴＣＴＧＧＴＴＡ  ＣＴＣＣＡＴＣＡＧＣ  ＡＧＴＧＧＴＴＡＣＴ  ＡＣＴＧＧＧＧＣＴＧ  ＧＡＴＴＣＧＧＣＡＧ  ＣＣＣＣＣＡＧＧＧＡ  ＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡ  ＧＴＧＧＡＴＴＧＧＧ  ＡＧＴＡＴＣＴＡＴＣ  ＡＴＡＧＴＧＧＧＡＧ  ＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣ  ＡＡＣＣＣＧＴＣＣＣ  ＴＣＡＡＧＡＧＴＣＧ  ＡＧＴＣＡＣＣＡＴＡ  ＴＣＡＧＴＡＧＡＣＡ  ＣＧＴＣＣＡＡＧＡＡ  ＣＣＡＧＴＴＣＴＣＣ  ＣＴＧＡＡＧＣＴＧＡ  ＧＣＴＣＴＧＴＧＡＣ  ＣＧＣＣＧＣＡＧＡＣ  ＡＣＧＧＣＣＧＴＧＴ  ＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣ  ＡＡＧＡＧＧＧＡＡＧ  ＴＧＧＴＣＧＡＡＧＴ  ＴＴＧＡＣＴＡＴＴＧ  ＧＧＧＣＣＡＡＧＧＣ  ＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡ  ＣＣＧＴＣＴＣＴＴＣ  Ａ
（配列番号３１）によりコードされるポリペプチドもしくはその抗原結合性断片、またはそれらの各々の同等物を含むか、または代替的にこれらから本質的になるか、またはなおさらにこれらからなる。
【０１５９】
一部の実施形態では、軽鎖可変領域は、以下の配列：（ｉ）  ＳＳＶＳＳＳＹ  （配列番号４），  （ｉｉ）  ＥＮＶＶＴＹ  （配列番号１２），  （ｉｉｉ）  ＱＳＩＳＮＹ  （配列番号２０），  （ｉｖ）  ＱＧＤＳＬＲＳＹＹＡＳ  （配列番号２８）、またはそれらの各々の同等物のうちのいずれか１つで始まり、カルボキシ末端における、さらなる５０アミノ酸、または代替的に約４０アミノ酸、または代替的に約３０アミノ酸、または代替的に約２０アミノ酸、または代替的に約１０アミノ酸、または代替的に約５アミノ酸、または代替的に約４、もしくは３、もしくは２、もしくは１アミノ酸を後続させるアミノ酸配列を含むか、または代替的にこれから本質的になるか、またはなおさらにこれからなるＣＤＲＬ１配列を含む。
【０１６０】
一部の実施形態では、軽鎖可変領域は、以下の配列：（ｉ）  ＳＴＳ  （配列番号５），  （ｉｉ）  ＧＡＳ  （配列番号１３），  （ｉｉｉ）  ＹＡＳ  （配列番号２１），  （ｉｖ）  ＧＫＮＮＲＰＳ  （配列番号２９）、またはそれらの各々の同等物のうちのいずれか１つで始まり、カルボキシ末端における、さらなる５０アミノ酸、または代替的に約４０アミノ酸、または代替的に約３０アミノ酸、または代替的に約２０アミノ酸、または代替的に約１０アミノ酸、または代替的に約５アミノ酸、または代替的に約４、もしくは３、もしくは２、もしくは１アミノ酸を後続させるアミノ酸配列を含むか、または代替的にこれから本質的になるか、またはなおさらにこれからなるＣＤＲＬ２配列を含む。
【０１６１】
一部の実施形態では、軽鎖可変領域は、以下の配列：（ｉ）  ＱＱＹＳＧＹＰＬＴ  （配列番号６），  （ｉｉ）  ＧＱＧＹＳＹＰＹＴ  （配列番号１４），  （ｉｉｉ）  ＱＱＳＮＳＷＰＬＴ  （配列番号２２），  （ｉｖ）  ＮＳＲＤＳＳＧＮＨＶＶ  （配列番号３０）、またはそれらの各々の同等物のうちのいずれか１つで始まり、カルボキシ末端における、さらなる５０アミノ酸、または代替的に約４０アミノ酸、または代替的に約３０アミノ酸、または代替的に約２０アミノ酸、または代替的に約１０アミノ酸、または代替的に約５アミノ酸、または代替的に約４、もしくは３、もしくは２、もしくは１アミノ酸を後続させるアミノ酸配列を含むか、または代替的にこれから本質的になるか、またはなおさらにこれからなるＣＤＲＬ３配列を含む。
【０１６２】
一部の実施形態では、軽鎖可変領域は、ポリヌクレオチド配列：
ＧＧＡＧＡＡＡＡＴＧＴＧＣＴＣＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＧＣＡＡＴＣＡＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＣＣＡＧＧＧＧＡＡＡＡＧＧＴＣＡＣＣＡＴＧＡＣＣＴＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＣＴＣＡＡＧＴＧＴＡＡＧＴＴＣＣＡＧＴＴＡＣＴＴＧＣＡＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＧＴＣＡＧＧＴＧＣＣＴＣＣＣＣＣＡＡＡＣＴＣＴＧＧＡＴＴＴＡＴＡＧＣＡＣＡＴＣＣＡＡＣＴＴＧＧＣＴＴＣＴＧＧＡＧＴＣＣＣＴＧＣＴＣＧＣＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＧＴＣＴＧＧＧＡＣＣＴＣＴＴＡＣＴＣＴＣＴＣＡＣＡＡＴＣＡＧＣＡＧＴＧＴＧＧＡＧＧＣＴＧＡＡＧＡＴＧＣＴＧＣＣＡＣＴＴＡＴＴＡＣＴＧＣＣＡＧＣＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＴＴＡＣＣＣＡＣＴＣＡＣＧＴＴＣＧＧＡＧＧＧＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＡＡＡＡ  （配列番号８）によりコードされるポリペプチドもしくはその抗原結合性断片、またはそれらの各々の同等物を含むか、または代替的にこれらから本質的になるか、またはなおさらにこれらからなる。
【０１６３】
一部の実施形態では、軽鎖可変領域は、ポリヌクレオチド配列：
ＡＡＣＡＴＴＧＴＡＡＴＧＡＣＣＣＡＡＴＣＴＣＣＣＡＡＡＴＣＣＡＴＧＴＣＣＡＴＧＴＣＡＧＴＡＧＧＡＧＡＧＡＧＧＧＴＣＡＣＣＴＴＧＡＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＣＡＧＴＧＡＧＡＡＴＧＴＧＧＴＴＡＣＴＴＡＴＧＴＴＴＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＡＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＡＧＣＡＧＴＣＴＣＣＴＡＡＡＣＴＧＣＴＧＡＴＡＴＡＣＧＧＧＧＣＡＴＣＣＡＡＣＣＧＧＴＡＣＡＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＣＧＡＴＣＧＣＴＴＣＡＣＡＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＣＡＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＧＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＴＧＴＧＣＡＧＧＣＴＧＡＡＧＡＣＣＴＴＧＣＡＧＡＴＴＡＴＣＡＣＴＧＴＧＧＡＣＡＧＧＧＴＴＡＣＡＧＣＴＡＴＣＣＧＴＡＣＡＣＧＴＴＣＧＧＡＧＧＧＧＧＧＡＣＡＡＡＧＴＴＧＧＡＡＡＴＡＡＡＡＣＧＴＡＣＧ  （配列番号１６）によりコードされるポリペプチドもしくはその抗原結合性断片、またはそれらの各々の同等物を含むか、または代替的にこれらから本質的になるか、またはなおさらにこれらからなる。
【０１６４】
一部の実施形態では、軽鎖可変領域は、ポリヌクレオチド配列：
ＧＡＴＡＴＴＧＴＧＣＴＡＡＣＴＣＡＧＴＣＴＣＣＡＧＣＣＡＣＣＣＴＧＴＣＴＧＴＧＡＣＴＣＣＡＧＧＡＧＡＴＡＧＡＧＴＣＡＧＴＣＴＴＴＣＣＴＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＧＣＡＡＡＧＴＡＴＴＡＧＣＡＡＣＴＡＣＣＴＡＣＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＡＣＡＡＡＡＡＴＣＡＣＡＴＧＡＧＴＣＴＣＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＣＡＴＣＡＡＧＴＡＴＧＣＴＴＣＣＣＡＧＴＣＣＡＴＣＴＣＴＧＧＣＡＴＣＣＣＣＴＣＣＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＡＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＧＴＡＴＣＡＡＣＡＧＴＧＴＧＧＡＧＡＣＴＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧＧＡＡＴＧＴＡＴＴＴＣＴＧＴＣＡＡＣＡＧＡＧＴＡＡＣＡＧＣＴＧＧＣＣＧＣＴＣＡＣＧＴＴＣＧＧＴＧＣＴＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＡＡＡＡ  （配列番号２４）によりコードされるポリペプチドもしくはその抗原結合性断片、またはそれらの各々の同等物を含むか、または代替的にこれらから本質的になるか、またはなおさらにこれらからなる。
【０１６５】
一部の実施形態では、軽鎖可変領域は、ポリヌクレオチド配列：
ＴＣＣＴＣＴＧＡＧＣ  ＴＧＡＣＴＣＡＧＧＡ  ＣＣＣＴＧＣＴＧＴＧ  ＴＣＴＧＴＧＧＣＣＴ  ＴＧＧＧＡＣＡＧＡＣ  ＡＧＴＣＡＧＧＡＴＣ  ＡＣＡＴＧＣＣＡＡＧ  ＧＡＧＡＣＡＧＣＣＴ  ＣＡＧＡＡＧＣＴＡＴ  ＴＡＴＧＣＡＡＧＣＴ  ＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡ  ＧＡＡＧＣＣＡＧＧＡ  ＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧ  ＴＡＣＴＴＧＴＣＡＴ  ＣＴＡＴＧＧＴＡＡＡ  ＡＡＣＡＡＣＣＧＧＣ  ＣＣＴＣＡＧＧＧＡＴ  ＴＣＣＡＧＡＣＣＧＡ  ＴＴＣＴＣＴＧＧＣＴ  ＣＣＡＧＣＴＣＡＧＧ  ＡＡＡＣＡＣＡＧＣＴ  ＴＣＣＴＴＧＡＣＣＡ  ＴＣＡＣＴＧＧＧＧＣ  ＴＣＡＧＧＣＧＧＡＡ  ＧＡＴＧＡＧＧＣＴＧ  ＡＣＴＡＴＴＡＣＴＧ  ＴＡＡＣＴＣＣＣＧＧ  ＧＡＣＡＧＣＡＧＴＧ  ＧＴＡＡＣＣＡＴＧＴ  ＧＧＴＡＴＴＣＧＧＣ  ＧＧＡＧＧＧＡＣＣＡ  ＡＧＣＴＧＡＣＣＧＴ  ＣＣＴＡ  （配列番号３２）によりコードされるポリペプチドもしくはその抗原結合性断片、またはそれらの各々の同等物を含むか、または代替的にこれらから本質的になるか、またはなおさらにこれらからなる。
【０１６６】
本開示の別の態様では、ＴＮＴ抗体の抗原結合性ドメインは、以下の特徴：
（ａ）軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列が、開示される軽鎖配列のうちのいずれかの軽鎖可変ドメインのＣＤＲと少なくとも８０％同一である、１または複数のＣＤＲを含むこと；
（ｂ）重鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列が、開示される重鎖配列のうちのいずれかの重鎖可変ドメインのＣＤＲと少なくとも８０％同一である、１または複数のＣＤＲを含むこと；
（ｃ）軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列が、開示される軽鎖配列のうちのいずれかの軽鎖可変ドメインと少なくとも８０％同一であること；
（ｄ）ＨＣ免疫グロブリン可変ドメイン配列が、開示される重鎖配列のうちのいずれかの重鎖可変ドメインと少なくとも８０％同一であること；および
（ｅ）抗体が、開示される配列のうちのいずれかが結合するエピトープと重なり合うエピトープに結合すること
のうちの１または複数を含む。
【０１６７】
同等物のさらなる例は、ペプチドに対して少なくとも８５％、もしくは代替的に少なくとも９０％、もしくは代替的に少なくとも９５％、もしくは代替的に少なくとも９７％のアミノ酸同一性を有するペプチド、または抗原結合性ドメインをコードするポリヌクレオチドの相補体と、高ストリンジェンシーの条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドを含み、この場合、高ストリンジェンシーの条件は、約５５℃〜約６８℃のインキュベーション温度；約１倍濃度のＳＳＣ〜約０．１倍濃度のＳＳＣの緩衝液濃度；約５５％〜約７５％のホルムアミド濃度；および約１倍濃度のＳＳＣ、０．１倍濃度のＳＳＣ、または脱イオン水の洗浄溶液を含む。
【０１６８】
例示的な抗原結合性ドメインは、下記で言及されるペプチドのうちの１または複数を含むことが可能であり、一態様では、特定の抗原について言及されるＨＣおよびＬＣの３つのＣＤＲの全てであって、表１および表２のそれぞれにおいて開示されるＣＤＲの全てを含みうる。
【表１】
2018518459.tif 000002
【表２】
2018518459.tif 000003
【０１６９】
一態様では、本開示は、ＴＮＴ−１、ＴＮＴ−２、ＴＮＴ−３、およびＮＨＳ７６からなる群より選択される抗体と少なくとも８０％、または代替的に８５％、または代替的に９０％、または代替的に９５％、または代替的に少なくとも９７％同一である抗体の抗原結合性ドメインを提示する。同等物のさらなる例は、抗原結合性ドメインをコードするポリヌクレオチドの相補体と、高ストリンジェンシーの条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドを含み、この場合、高ストリンジェンシーの条件は、約５５℃〜約６８℃のインキュベーション温度；約１倍濃度のＳＳＣ〜約０．１倍濃度のＳＳＣの緩衝液濃度；約５５％〜約７５％のホルムアミド濃度；および約１倍濃度のＳＳＣ、０．１倍濃度のＳＳＣ、または脱イオン水の洗浄溶液を含む。
【０１７０】
本明細書で提示される抗体についての一部の態様では、ＨＣ可変ドメイン配列は、ＴＮＴ−１の可変ドメイン配列を含み、ＬＣ可変ドメイン配列は、ＴＮＴ−１の可変ドメイン配列を含む。
【０１７１】
一態様では、本開示は、ＴＮＴ−１のＣＤＲを含む抗体の抗原結合性ドメインを提示する。一態様では、本開示は、ＴＮＴ−１のＣＤＲと少なくとも８５％、もしくは代替的に８０％、もしくは代替的に８５％、もしくは代替的に９０％、もしくは代替的に９５％、もしくは代替的に少なくとも９７％同一である抗体の抗原結合性ドメイン、またはＴＮＴのＣＤＲをコードするポリヌクレオチドの相補体と、高ストリンジェンシーの条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドを提示し、この場合、高ストリンジェンシーの条件は、約５５℃〜約６８℃のインキュベーション温度；約１倍濃度のＳＳＣ〜約０．１倍濃度のＳＳＣの緩衝液濃度；約５５％〜約７５％のホルムアミド濃度；および約１倍濃度のＳＳＣ、０．１倍濃度のＳＳＣ、または脱イオン水の洗浄溶液を含む。
【０１７２】
本明細書で提示される抗体についての一部の態様では、ＨＣ可変ドメイン配列は、ＴＮＴ−２の可変ドメイン配列を含み、ＬＣ可変ドメイン配列は、ＴＮＴ−２の可変ドメイン配列を含む。
【０１７３】
一態様では、本開示は、ＴＮＴ−２のＣＤＲを含む抗体の抗原結合性ドメインを提示する。一態様では、本開示は、ＴＮＴ−２のＣＤＲと少なくとも８５％、もしくは代替的に８０％、もしくは代替的に８５％、もしくは代替的に９０％、もしくは代替的に９５％、もしくは代替的に少なくとも９７％同一である抗体の抗原結合性ドメイン、またはＴＮＴ−２のＣＤＲをコードするポリヌクレオチドの相補体と、高ストリンジェンシーの条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドを提示し、この場合、高ストリンジェンシーの条件は、約５５℃〜約６８℃のインキュベーション温度；約１倍濃度のＳＳＣ〜約０．１倍濃度のＳＳＣの緩衝液濃度；約５５％〜約７５％のホルムアミド濃度；および約１倍濃度のＳＳＣ、０．１倍濃度のＳＳＣ、または脱イオン水の洗浄溶液を含む。
【０１７４】
本明細書で提示される抗体についての一部の態様では、ＨＣ可変ドメイン配列は、ＴＮＴ−３の可変ドメイン配列を含み、ＬＣ可変ドメイン配列は、ＴＮＴ−３の可変ドメイン配列を含む。
【０１７５】
一態様では、本開示は、ＴＮＴ−３のＣＤＲを含む抗体の抗原結合性ドメインを提示する。一態様では、本開示は、ＴＮＴ−３のＣＤＲと少なくとも８５％もしくは代替的に８５％、もしくは代替的に９０％、もしくは代替的に９５％、もしくは代替的に少なくとも９７％同一である抗体の抗原結合性ドメイン、またはＴＮＴ−３のＣＤＲをコードするポリヌクレオチドの相補体と、高ストリンジェンシーの条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドを提示し、この場合、高ストリンジェンシーの条件は、約５５℃〜約６８℃のインキュベーション温度；約１倍濃度のＳＳＣ〜約０．１倍濃度のＳＳＣの緩衝液濃度；約５５％〜約７５％のホルムアミド濃度；および約１倍濃度のＳＳＣ、０．１倍濃度のＳＳＣ、または脱イオン水の洗浄溶液を含む。
【０１７６】
本明細書で提示される抗体についての一部の態様では、ＨＣ可変ドメイン配列は、ＮＨＳ７６の可変ドメイン配列を含み、ＬＣ可変ドメイン配列は、ＮＨＳ７６の可変ドメイン配列またはそれらの各々の同等物を含む。
【０１７７】
一態様では、本開示は、ＮＨＳ７６のＣＤＲを含む抗体の抗原結合性ドメインを提示する。一態様では、本開示は、ＮＨＳ７６と少なくとも８０％同一、もしくはＮＨＳ７６のＣＤＲと少なくとも８５％、もしくは代替的に８５％、もしくは代替的に９０％、もしくは代替的に９５％、もしくは代替的に少なくとも９７％同一である抗体の抗原結合性ドメイン、またはＮＨＳ７６のＣＤＲをコードするポリヌクレオチドの相補体と、高ストリンジェンシーの条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドを提示し、この場合、高ストリンジェンシーの条件は、約５５℃〜約６８℃のインキュベーション温度；約１倍濃度のＳＳＣ〜約０．１倍濃度のＳＳＣの緩衝液濃度；約５５％〜約７５％のホルムアミド濃度；および約１倍濃度のＳＳＣ、０．１倍濃度のＳＳＣ、または脱イオン水の洗浄溶液を含む。
【０１７８】
膜貫通ドメイン。膜貫通ドメインは、天然の供給源から導出することもでき、合成の供給源から導出することもできる。供給源が、天然である場合、ドメインは、任意の膜結合タンパク質または膜貫通タンパク質に由来しうる。本開示で特に使用される膜貫通領域は、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＤ３、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤＳ、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＴＣＲに由来しうる。代替的に、膜貫通ドメインは、合成であることが可能であり、この場合、膜貫通ドメインは主に、ロイシンおよびバリンなどの疎水性残基を含むであろう。フェニルアラニン、トリプトファン、およびバリンの三残基の組（ｔｒｉｐｌｅｔ）が、合成の膜貫通ドメインの各末端において見出されることが好ましい。任意選択で、好ましくは、２〜１０アミノ酸の間の長さの、短鎖オリゴペプチドリンカーまたはポリペプチドリンカーは、ＣＡＲの膜貫通ドメインと、細胞質シグナル伝達ドメインとの連結を形成しうる。グリシン−セリンの二残基の組（ｄｏｕｂｌｅｔ）は、特に適切なリンカーをもたらす。
【０１７９】
細胞質ドメイン。ＣＡＲの細胞質ドメインまたは細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＡＲが配置された免疫細胞の、従来のエフェクター機能のうちの少なくとも１つの活性化を担う。細胞内シグナル伝達ドメインとは、エフェクター機能シグナルを伝達し、免疫細胞を、その特異的機能を果たすように導く、タンパク質の部分を指す。シグナル伝達ドメインの全体を使用することもでき、切断部分が、エフェクター機能シグナルを伝達するのに十分である限りにおいて、その切断部分を使用することもできる。ＴＣＲおよび共受容体のほか、それらの誘導体または改変体の細胞質配列は、ＣＡＲにおける使用のための細胞内シグナル伝達ドメインとして機能しうる。本開示で特に使用される細胞内シグナル伝達ドメインは、ＦｃＲ、ＴＣＲ、ＣＤ３、ＣＤＳ、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ６６ｄに由来しうる。ＴＣＲを介して発生するシグナルは、単独では、Ｔ細胞の完全な活性化には不十分であるので、二次シグナルまたは共刺激性シグナルもまた、要求されうる。したがって、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、またはＣＤ８３に特異的に結合するリガンドを含むがこれらに限定されない共刺激性シグナル伝達分子の細胞内領域もまた、ＣＡＲの細胞質ドメインに組み入れることができる。
【０１８０】
一部の実施形態では、キメラ抗原受容体の細胞活性化部分は、ＣＤ８タンパク質、ＣＤ２８タンパク質、４−１ＢＢタンパク質、およびＣＤ３−ゼータタンパク質からなる群より選択される、１もしくは複数のタンパク質またはそれらの断片を含むか、または代替的にこれらから本質的になるか、またはなおさらにこれらからなる、Ｔ細胞シグナル伝達ドメインである。
【０１８１】
具体的な実施形態では、ＣＡＲは、ＴＮＴ抗体の抗原結合性ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、共刺激性シグナル伝達領域、およびＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインを含むか、または代替的にこれらから本質的になるか、またはなおこれらからなる。さらなる実施形態では、共刺激性シグナル伝達領域は、ＣＤ２８共刺激性シグナル伝達領域および４−１ＢＢ共刺激性シグナル伝達領域の一方または両方を含む。
【０１８２】
一部の実施形態では、ＣＡＲは、検出可能なマーカーまたは精製マーカーをさらに含みうる。別の態様では、本明細書で記載されるＣＡＲは、組成物中、例えば、診断または治療のための、薬学的に許容される担体中に含有される。
【０１８３】
ＩＩ．ＴＮＴ抗体を調製するための工程
本開示における使用のための抗体は、購入することもでき、当技術分野で公知であり、本明細書で簡略に記載される方法を使用して調製することもできる。それらの製造および使用については周知であり、例えば、Ｈａｒｌｏｗ，  Ｅ．およびＬａｎｅ，  Ｄ．、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．、１９９９年において開示されている。抗体は、当技術分野で公知の標準的な方法を使用して作出することができる。抗体の例は、モノクローナル抗体、単鎖抗体、および抗体の機能的断片を含む（がこれらに限定されない）。
【０１８４】
抗体は、一連の宿主、例えば、ヤギ、ウサギ、ラット、マウス、ヒト、および他の宿主において産生させることができる。宿主は、標的抗原またはＴＮＴ関連抗原のＣ末端断片もしくは単離ポリペプチドなど、免疫原特性を有するその断片もしくはオリゴペプチドを注射することにより免疫化することができる。宿主種に応じて、多様なアジュバントを添加および使用して、免疫学的応答を増大させることができる。このようなアジュバントは、フロイントアジュバント、水酸化アルミニウムなどのミネラルゲル、ならびにリソレシチン、プルロニックポリオール、ポリアニオン、ペプチド、油エマルジョン、スカシガイヘモシアニン、およびジニトロフェノールなどの界面活性物質を含むがこれらに限定されない。ヒトにおいて使用されるアジュバントでは、ＢＣＧ（カルメット−ゲラン桿菌）およびＣｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｐａｒｖｕｍが特に有用である。本開示はまた、単離ポリペプチドおよびアジュバントも提示する。
【０１８５】
ある特定の態様では、本開示の抗体は、ポリクローナル抗体、すなわち、異なるアミノ酸配列を有する、複数種類のＴＮＴ抗体の混合物である。一態様では、ポリクローナル抗体は、異なるＣＤＲを有する、複数種類のＴＮＴ抗体の混合物を含む。したがって、異なる抗体を産生する細胞の混合物を培養し、結果として得られる培養物から精製された抗体を使用することができる（ＷＯ２００４／０６１１０４を参照されたい）。
【０１８６】
モノクローナル抗体の作製：ＴＮＴ関連抗原に対するモノクローナル抗体は、培養物中の連続的な細胞株による抗体分子の産生をもたらす任意の技法を使用して調製することができる。このような技法は、ハイブリドーマ法（例えば、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ、Ｎａｔｕｒｅ、２５６巻：４９５〜４９７頁（１９７５年）を参照されたい）；トリオーマ法；ヒトＢ細胞ハイブリドーマ法（例えば、Ｋｏｚｂｏｒら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｔｏｄａｙ、４巻：７２頁（１９８３年）を参照されたい）およびヒトモノクローナル抗体を作製するＥＢＶハイブリドーマ法（例えば、Ｃｏｌｅら、ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ  ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ  ＡＮＤ  ＣＡＮＣＥＲ  ＴＨＥＲＡＰＹ、Ａｌａｎ  Ｒ．  Ｌｉｓｓ，  Ｉｎｃ．、７７〜９６頁（１９８５年）を参照されたい）を含むがこれらに限定されない。ヒトモノクローナル抗体は、本技術の実施において活用することができ、ヒトハイブリドーマを使用すること（例えば、Ｃｏｔｅら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．、８０巻：２０２６〜２０３０頁（１９８３年）を参照されたい）により作製することもでき、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて、ヒトＢ細胞を、エプスタインバーウイルスで形質転換すること（例えば、Ｃｏｌｅら、ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ  ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ  ＡＮＤ  ＣＡＮＣＥＲ  ＴＨＥＲＡＰＹ、Ａｌａｎ  Ｒ．  Ｌｉｓｓ，  Ｉｎｃ．、７７〜９６頁（１９８５年）を参照されたい）により作製することもできる。例えば、抗体の領域をコードする核酸の集団を単離することができる。抗体の保存的領域をコードする配列に由来するプライマーを活用するＰＣＲを使用して、抗体の部分をコードする配列を、集団から増幅し、次いで、抗体または可変ドメインなど、それらの断片をコードするＤＮＡを、増幅された配列から再構築する。このような増幅された配列はまた、ファージまたは細菌上に、融合ポリペプチドを発現させ、提示するための他のタンパク質（例えば、バクテリオファージコートまたは細菌細胞表面タンパク質）をコードするＤＮＡへと融合させることもできる。次いで、増幅された配列を発現させ、例えば、発現させた抗体またはその断片の、ＴＮＴ関連抗原ポリペプチド上に存在する抗原またはエピトープに対するアフィニティーに基づき、さらに選択または単離することができる。代替的に、ＴＮＴ関連抗原のモノクローナル抗体を発現させるハイブリドーマは、対象を、例えば、ＴＮＴ関連抗原またはその断片のアミノ酸配列を含むか、または代替的にこれから本質的になるか、またはなおさらにこれからなる単離ポリペプチドで免疫化し、次いで、慣例的な方法を使用して、ハイブリドーマを、対象の脾臓から単離することにより調製することができる。例えば、Ｍｉｌｓｔｅｉｎら（ＧａｌｆｒｅおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ、７３巻：３〜４６頁（１９８１年））を参照されたい。標準的な方法を使用してハイブリドーマをスクリーニングすることにより、特異性（すなわち、異なるエピトープに対する）およびアフィニティーを変化させたモノクローナル抗体を作製する。所望の特性、例えば、ＴＮＴ関連抗原への結合を伴う選択されたモノクローナル抗体は、（ｉ）ハイブリ��ーマにより発現された形で使用することもでき、（ｉｉ）ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの分子に結合させて、その特性を変更することもでき、（ｉｉｉ）モノクローナル抗体をコードするｃＤＮＡを、単離し、配列決定し、多様な形で操作することができる。一態様では、抗ＴＮＴモノクローナル抗体は、ヒト重鎖導入遺伝子と、軽鎖導入遺伝子とを含むゲノムを有するトランスジェニックの非ヒト動物、例えば、トランスジェニックマウスから得られたＢ細胞であって、不死化細胞へと融合させたＢ細胞を含むハイブリドーマにより作製する。ハイブリドーマ法は、当技術分野で公知であり、Ｈａｒｌｏｗら、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．、３４９頁（１９８８年）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ａｎｄ  Ｔ−Ｃｅｌｌ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ、５６３〜６８１頁（１９８１年）において教示されているハイブリドーマ法を含む。
【０１８７】
ファージディスプレイ法：上記で言及した通り、本開示の抗体は、組換えＤＮＡおよびファージディスプレイ技術の適用を介して作製することができる。例えば、ＴＮＴ抗体は、当技術分野で公知の、多様なファージディスプレイ法を使用して調製することができる。ファージディスプレイ法では、機能的な抗体ドメインを、それらをコードするポリヌクレオチド配列を保有するファージ粒子の表面に提示する。所望の結合特性を伴うファージは、抗原、典型的には、固体表面またはビーズに結合させるかまたは捕捉した抗原により、直接選択することにより、レパートリーまたはコンビナトリアル抗体ライブラリー（例えば、ヒトまたはマウス）から選択する。これらの方法において使用されるファージは典型的に、ｆｄおよびＭ１３を含む糸状ファージであって、Ｆａｂ、Ｆｖ、またはジスルフィド安定化Ｆｖ抗体ドメインを、組換えにより、ファージ遺伝子ＩＩＩまたはＶＩＩＩタンパク質へと融合させた、糸状ファージである。加えて、方法を、Ｆａｂ発現ライブラリーの構築（例えば、Ｈｕｓｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４６巻：１２７５〜１２８１頁、１９８９年を参照されたい）に適応させて、ＴＮＴ関連抗原ポリペプチド、例えば、ポリペプチド、またはその誘導体、断片、類似体、もしくは相同体に所望の特異性を伴うモノクローナルＦａｂ断片の迅速かつ有効な同定を可能とすることができる。本開示の単離抗体を作製するのに使用しうるファージディスプレイ法の他の例は、Ｈｕｓｔｏｎら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．、Ｕ．Ｓ．Ａ．、８５巻：５８７９〜５８８３頁（１９８８年）；Ｃｈａｕｄｈａｒｙら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．、Ｕ．Ｓ．Ａ．、８７巻：１０６６〜１０７０頁（１９９０年）；Ｂｒｉｎｋｍａｎら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ、１８２巻：４１〜５０頁（１９９５年）；Ａｍｅｓら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ、１８４巻：１７７〜１８６頁（１９９５年）；Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈら、Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２４巻：９５２〜９５８頁（１９９４年）；Ｐｅｒｓｉｃら、Ｇｅｎｅ、１８７巻：９〜１８頁（１９９７年）；Ｂｕｒｔｏｎら、Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、５７巻：１９１〜２８０頁（１９９４年）；ＰＣＴ／ＧＢ９１／０１１３４；ＷＯ９０／０２８０９；ＷＯ９１／１０７３７；ＷＯ９２／０１０４７；ＷＯ９２／１８６１９；ＷＯ９３／１１２３６；ＷＯ９５／１５９８２；ＷＯ９５／２０４０１；ＷＯ９６／０６２１３；ＷＯ９２／０１０４７（Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｕｎｃｉｌら）；ＷＯ９７／０８３２０（Ｍｏｒｐｈｏｓｙｓ）；ＷＯ９２／０１０４７（ＣＡＴ／ＭＲＣ）；ＷＯ９１／１７２７１（Ａｆｆｙｍａｘ）；ならびに米国特許第５，６９８，４２６号、同第５，２２３，４０９号、同第５，４０３，４８４号、同第５，５８０，７１７号、同第５，４２７，９０８号、同第５，７５０，７５３号、同第５，８２１，０４７号、同第５，５７１，６９８号、同第５，４２７，９０８号、同第５，５１６，６３７号、同第５，７８０，２２５号、同第５，６５８，７２７号、および同第５，７３３，７４３号において開示され���いるファージディスプレイ法を含む。
【０１８８】
ジスルフィド結合を介してポリペプチドを接合させることにより、バクテリオファージ粒子の表面上にポリペプチドを提示するために有用な方法については、Ｌｏｈｎｉｎｇ、米国特許第６，７５３，１３６号により記載されている。上記の参考文献に記載されている通り、ファージを選択した後で、ファージに由来する抗体をコードする領域を単離し、ヒト抗体を含む全抗体、または他の任意の所望の抗原結合性断片を作出し、哺乳動物細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母、および細菌を含む、任意の所望の宿主内で発現させるのに使用することができる。例えば、ＷＯ９２／２２３２４；Ｍｕｌｌｉｎａｘら、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、１２巻：８６４〜８６９頁（１９９２年）；Ｓａｗａｉら、ＡＪＲＩ、３４巻：２６〜３４頁（１９９５年）；およびＢｅｔｔｅｒら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４０巻：１０４１〜１０４３頁（１９８８年）において開示されている方法など、当技術分野で公知の方法を使用して、組換えにより、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、およびＦ（ａｂ’）２断片を作製する技法もまた、利用することができる。
【０１８９】
一般に、抗体または抗体断片は、ファージまたはファージミド粒子の表面上に存在するため、良好な結合活性を維持する改変体を同定するために、ディスプレイベクターへとクローニングされたハイブリッド抗体またはハイブリッド抗体断片を、適切な抗原に対して選択することができる。例えば、Ｂａｒｂａｓ  ＩＩＩら、Ｐｈａｇｅ  Ｄｉｓｐｌａｙ，  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．、２００１年）を参照されたい。しかし、選択および／またはスクリーニングのために、抗体断片ライブラリーを、溶解性のファージベクター（改変Ｔ７またはラムダＺａｐ系）へとクローニングすることなど、他のベクターフォーマットをこの工程のために使用しうるであろう。
【０１９０】
抗体作製のための代替法：抗体はまた、リンパ球集団内で、ｉｎ  ｖｉｖｏにおける産生を誘導することにより作製することもでき、組換え免疫グロブリンライブラリーまたは高度に特異的な結合試薬のパネルをスクリーニングすることにより作製することもできる（Ｏｒｌａｎｄｉら、ＰＮＡＳ、８６巻：３８３３〜３８３７頁（１９８９年）；Ｗｉｎｔｅｒ，  Ｇ．ら、Ｎａｔｕｒｅ、３４９巻：２９３〜２９９頁（１９９１年））。
【０１９１】
代替的に、単鎖抗体を作製するための技法を使用することができる。単鎖抗体（ｓｃＦｖ）は、リンカーペプチド（典型的には、ほぼ５〜２５アミノ酸の長さ）により接続された、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。ｓｃＦｖにおける重鎖および軽鎖の可変領域は、同じ抗体から導出することもでき、異なる抗体から導出することもできる。ｓｃＦｖは、組換え法を使用して、例えば、ｓｃＦｖをコードするベクターの、Ｅ．ｃｏｌｉなどの宿主生物内の発現により合成することができる。ｓｃＦｖをコードするＤＮＡは、上述の抗体の重鎖または重鎖の可変領域をコードするＤＮＡと、その軽鎖または軽鎖の可変領域をコードするＤＮＡとから選択されるＤＮＡの、全アミノ酸配列または所望のアミノ酸配列をコードする部分的ＤＮＡを鋳型として使用し、その両端を規定するプライマー対を使用するＰＣＲにより増幅を実施し、リンカーの両端を、重鎖および軽鎖のそれぞれへとライゲーションするように、ポリペプチドリンカー部分をコードするＤＮＡと、その両端を規定するプライマー対とを組み合わせる増幅をさらに実施することにより得ることができる。ｓｃＦｖをコードするＤＮＡを含有する発現ベクターと、発現ベクターにより形質転換された宿主とは、当技術分野で公知の、従来の方法に従い得ることができる。
【０１９２】
また、抗原結合性断片、例えば、抗体分子のペプシン消化により作製しうるＦ（ａｂ’）２断片、およびＦ（ａｂ’）２断片のジスルフィド架橋を還元することにより作出しうるＦａｂ断片も、作出することができる。代替的に、Ｆａｂ発現ライブラリーを構築して、所望の特異性を伴うモノクローナルＦａｂ断片の、迅速かつ簡易な同定を可能とすることができる（Ｈｕｓｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２５６巻：１２７５〜１２８１頁（１９８９年））。
【０１９３】
抗体の修飾。本開示の抗体は、抗原に対するアフィニティーを増大させるように、多量体化することができる。多量体化される抗体は、１種類の抗体の場合もあり、同じ抗原の複数のエピトープを認識する、複数の抗体の場合もある。抗体の多量体化の方法としては、ＩｇＧ  ＣＨ３ドメインの、２つのｓｃＦｖ分子への結合、ストレプトアビジンへの結合、ヘリックス−ターン−ヘリックスモチーフの導入などを例示することができる。
【０１９４】
本明細書で開示される抗体組成物は、これらの抗体のうちのいずれかと、別の薬剤との間で形成される、コンジュゲートの形態（免疫コンジュゲート）でありうる。一態様では、本明細書で開示される抗体を、放射性物質へとコンジュゲートさせる。別の態様では、本明細書で開示される抗体を、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）など、多様な種類の分子に結合させることができる。
【０１９５】
抗体のスクリーニング。所望の特異性を有する抗体を同定するスクリーニングのために、多様なイムノアッセイを使用することができる。当技術分野では、特異性が確立された、ポリクローナルまたはモノクローナル抗体を使用する、競合的結合またはイムノラジオメトリックアッセイのための多数のプロトコールが周知である。このようなイムノアッセイは、ＴＮＴ関連抗原またはその任意の断片もしくはオリゴペプチドと、その特異的抗体との間の複合体の形成についての測定を伴うことが典型的である。２つの非干渉的ＴＮＴ関連抗原エピトープに特異的なモノクローナル抗体を活用する、２部位型の、モノクローナルベースのイムノアッセイを使用しうるが、競合的結合アッセイもまた、利用することができる（Ｍａｄｄｏｘら、Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．、１５８巻：１２１１〜１２１６頁（１９８３年））。
【０１９６】
抗体の精製。本明細書で開示される抗体は、均質性まで精製することができる。抗体の分離および精製は、従来のタンパク質分離および精製法を利用することにより実施することができる。
【０１９７】
例だけを目的として述べると、抗体は、クロマトグラフィーカラム、フィルター、限外濾過、塩析、透析、調製用ポリアクリルアミドゲル電気泳動、等電点電気泳動などの使用を適切に選択し、組み合わせることにより、分離および精製することができる。Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｃｏｕｒｓｅ  Ｍａｎｕａｌ、Ｄａｎｉｅｌ  Ｒ．  Ｍａｒｓｈａｋら編、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ（１９９６年）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、ＨａｒｌｏｗおよびＤａｖｉｄ  Ｌａｎｅ編、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（１９８８年）。
【０１９８】
クロマトグラフィーの例は、アフィニティークロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性クロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、および吸着クロマトグラフィーを含む。一態様では、クロマトグラフィーは、ＨＰＬＣまたはＦＰＬＣなどの液体クロマトグラフィーを利用することにより実施することができる。
【０１９９】
一態様では、アフィニティークロマトグラフィーにおいて、プロテインＡカラムまたはプロテインＧカラムを使用することができる。他の例示的なカラムは、プロテインＡカラムである、ＨｙｐｅｒＤ、ＰＯＲＯＳ、Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  Ｆ．Ｆ．（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）などを含む。
【０２００】
ＩＩＩ．ＣＡＲを調製するための単離核酸および工程
本開示の態様は、ＴＮＴ  ＣＡＲを含む単離細胞と、このような細胞を作製する方法とに関する。細胞は、原核細胞または真核細胞である。一態様では、細胞は、Ｔ細胞、Ｂ細胞またはＮＫ細胞である。真核細胞は、任意の好ましい種に由来することが可能であり、例えば、動物細胞、ヒト、ネコ科動物、またはイヌ科動物細胞などの哺乳動物細胞でありうる。
【０２０１】
具体的な実施形態では、単離細胞は、ＴＮＴ抗体の抗原結合性ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ２８共刺激性シグナル伝達領域および／または４−１ＢＢ共刺激性シグナル伝達領域、ならびにＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインを含むか、または代替的にこれらから本質的になるか、またはなおさらにこれらからなる外因性ＣＡＲを含むか、または代替的にこれから本質的になるか、またはなおさらにこれからなる。ある特定の実施形態では、単離細胞は、Ｔ細胞、例えば、動物Ｔ細胞、哺乳動物Ｔ細胞、ネコ科動物Ｔ細胞、イヌ科動物Ｔ細胞、またはヒトＴ細胞である。ある特定の実施形態では、単離細胞は、ＮＫ細胞、例えば、動物ＮＫ細胞、哺乳動物ＮＫ細胞、ネコ科動物ＮＫ細胞、イヌ科動物ＮＫ細胞、またはヒトＮＫ細胞である。
【０２０２】
ある特定の実施形態では、ＴＮＴ  ＣＡＲ発現細胞を作製する方法であって、単離細胞の集団に、ＴＮＴ  ＣＡＲをコードする核酸配列を形質導入するステップを含むか、または代替的にこれから本質的になるか、またはなおさらにこれからなる方法が開示される。さらなる態様では、前記核酸配列の形質導入に成功した細胞の部分集団を選択する。一部の実施形態では、単離細胞は、Ｔ細胞、動物Ｔ細胞、哺乳動物Ｔ細胞、ネコ科動物Ｔ細胞、イヌ科動物Ｔ細胞、またはヒトＴ細胞であり、これにより、ＴＮＴ  ＣＡＲ  Ｔ細胞を作製する。ある特定の実施形態では、単離細胞は、ＮＫ細胞、例えば、動物ＮＫ細胞、哺乳動物ＮＫ細胞、ネコ科動物ＮＫ細胞、イヌ科動物ＮＫ細胞、またはヒトＮＫ細胞であり、これにより、ＴＮＴ  ＣＡＲ  ＮＫ細胞を作製する。一部の実施形態では、単離細胞は、Ｂ細胞、動物Ｂ細胞、哺乳動物Ｂ細胞、ネコ科動物Ｂ細胞、イヌ科動物Ｂ細胞またはヒトＢ細胞であり、これにより、ＴＮＴ  ＣＡＲ  Ｂ細胞を作製する。
【０２０３】
単離細胞の供給源。本明細書で開示される細胞の拡大および遺伝子改変の前に、細胞を、対象（例えば、自家療法を伴う実施形態における）から得ることもでき、市販の培養物から得ることもできる。
【０２０４】
Ｔ細胞またはＮＫ細胞は、対象におけるいくつかの供給源であって、末梢血単核細胞、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位に由来する組織、腹水、胸水、脾臓組織、および腫瘍を含む供給源から得ることができる。
【０２０５】
当技術分野では、対象となる細胞を単離する方法が周知であり、本出願にたやすく適応させることができ；例示的な方法については、下記の実施例で記載する。本開示と関連する使用のための単離法は、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）システム；ＳＴＥＭｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ＥａｓｙＳｅｐ（商標）、ＲｏｂｏＳｅｐ（商標）、ＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐ（商標）、ＳｅｐＭａｔｅ（商標）；Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ  ＭＡＣＳ（商標）細胞分離キット、ならびに他の市販の細胞分離および単離キットを含むがこれらに限定されない。免疫細胞の特定の亜集団は、ビーズまたはこのようなキットで利用可能な他の結合剤であって、固有の細胞表面マーカーに特異的なビーズまたは結合剤を使用することにより単離することができる。例えば、ＭＡＣＳ（商標）ＣＤ４＋およびＣＤ８＋  ＭｉｃｒｏＢｅａｄｓを使用して、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞を単離することができる。
【０２０６】
代替的に、細胞は、Ｔ細胞については、細胞株である、ＢＣＬ２（ＡＡＡ）Ｊｕｒｋａｔ（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−２９０２（商標））、ＢＣＬ２（Ｓ７０Ａ）Ｊｕｒｋａｔ（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−２９００（商標））、ＢＣＬ２（Ｓ８７Ａ）Ｊｕｒｋａｔ（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−２９０１（商標））、ＢＣＬ２  Ｊｕｒｋａｔ（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−２８９９（商標））、Ｎｅｏ  Ｊｕｒｋａｔ（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−２８９８（商標））を含むがこれらに限定されず；Ｂ細胞については、細胞株である、ＡＨＨ−１（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−８１４６（商標））、ＢＣ−１（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−２２３０（商標））、ＢＣ−２（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−２２３１（商標））、ＢＣ−３（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−２２７７（商標））、ＣＡ４６（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−１６４８（商標））、ＤＧ−７５［Ｄ．Ｇ．−７５］（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−２６２５（商標））、ＤＳ−１（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−１１１０２（商標））、ＥＢ−３［ＥＢ３］（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＣＬ−８５（商標））、Ｚ−１３８（ＡＴＣＣ  ＃ＣＲＬ−３００１）、ＤＢ（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−２２８９）、Ｔｏｌｅｄｏ（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−２６３１）、Ｐｆｉｆｆｅｒ（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−２６３２）、ＳＲ（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−２２６２）、ＪＭ−１（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１０４２１）、ＮＦＳ−５  Ｃ−１（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１６９３）；ＮＦＳ−７０  Ｃ１０（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１６９４）、ＮＦＳ−２５  Ｃ−３（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１６９５）、およびＳＵＰ−Ｂ１５（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１９２９）を含むがこれらに限定されず；ＮＫ細胞については、細胞株である、ＮＫ−９２（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−２４０７（商標））、ＮＫ−９２ＭＩ（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−２４０８（商標））を含むがこれらに限定されない、市販の細胞培養物を介して得ることができる。さらなる例は、例えば、Ｄｅｇｌｉｓ、ＥＢＴ−８、ＨＰＢ−ＭＬｐ−Ｗ、ＨＵＴ  ７８、ＨＵＴ  １０２、Ｋａｒｐａｓ  ３８４、Ｋｉ  ２２５、Ｍｙ−Ｌａ、Ｓｅ−Ａｘ、ＳＫＷ−３、ＳＭＺ−１、およびＴ３４などの成熟Ｔ細胞株；未成熟Ｔ細胞株、例えば、ＡＬＬ−ＳＩＬ、Ｂｅ１３、ＣＣＲＦ−ＣＥＭ、ＣＭＬ−Ｔ１、ＤＮＤ−４１、ＤＵ．５２８、ＥＵ−９、ＨＤ−Ｍａｒ、ＨＰＢ−ＡＬＬ、Ｈ−ＳＢ２、ＨＴ−１、ＪＫ−Ｔ１、Ｊｕｒｋａｔ、Ｋａｒｐａｓ  ４５、ＫＥ−３７、ＫＯＰＴ−Ｋ１、Ｋ−Ｔ１、Ｌ−ＫＡＷ、Ｌｏｕｃｙ、ＭＡＴ、ＭＯＬＴ−１、ＭＯＬＴ  ３、ＭＯＬＴ−４、ＭＯＬＴ  １３、ＭＯＬＴ−１６、ＭＴ−１、ＭＴ−ＡＬＬ、Ｐ１２／Ｉｃｈｉｋａｗａ、Ｐｅｅｒ、ＰＥＲ０１１７、ＰＥＲ−２５５、ＰＦ−３８２、ＰＦＩ−２８５、ＲＰＭＩ−８４０２、ＳＴ−４、ＳＵＰ−Ｔ１〜ＳＵＰ−Ｔ１４、ＴＡＬＬ−１、ＴＡＬＬ−１０１、ＴＡＬＬ−１０３／２、ＴＡＬＬ−１０４、ＴＡＬＬ−１０５、ＴＡＬＬ−１０６、ＴＡＬＬ−１０７、ＴＡＬＬ−１９７、ＴＫ−６、ＴＬＢＲ−１、ＴＬＢＲ−２、ＴＬＢＲ−３、およびＴＬＢＲ−４、ＣＣＲＦ−ＨＳＢ−２（ＣＣＬ−１２０．１）、Ｊ．ＲＴ３−Ｔ３．５（ＡＴＣＣ  ＴＩＢ−１５３）、Ｊ４５．０１（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１９９０）、Ｊ．ＣａＭ１．６（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−２０６３）、ＲＳ４；１１（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１８７３）、ＣＣＲＦ−ＣＥＭ（ＡＴＣＣ  ＣＲＭ−ＣＣＬ−１１９）；皮膚Ｔ細胞リンパ腫細胞株、例えば、ＨｕＴ７８（ＡＴＣＣ  ＣＲＭ−ＴＩＢ−１６１）、ＭＪ［Ｇ１１］（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−８２９４）、ＨｕＴ１０２（ＡＴＣＣ  ＴＩＢ−１６２）；未分化大細胞リンパ腫に由来するＢ細胞株、例えば、ＤＥＬ、ＤＬ−４０、ＦＥ−ＰＤ、ＪＢ６、Ｋａｒｐａｓ  ２９９、Ｋｉ−ＪＫ、Ｍａｃ−２Ａ  Ｐｌｙ１、ＳＲ−７８６、ＳＵ−ＤＨＬ−１、ＳＵ−ＤＨＬ−２、ＳＵ−ＤＨＬ−４、ＳＵ−ＤＨＬ−５、ＳＵ−ＤＨＬ−６、ＳＵ−ＤＨＬ−７、ＳＵ−ＤＨＬ−８、ＳＵ−ＤＨＬ−９、ＳＵ−ＤＨＬ−１０、およびＳＵ−ＤＨＬ−１６、ＤＯＨＨ−２、ＮＵ−ＤＨＬ−１、Ｕ−９３７、Ｇｒａｎｄａ  ５１９、ＵＳＣ−ＤＨＬ−１、ＲＬ；ホジキンリンパ腫に由来するＢ細胞株、例えば、ＤＥＶ、ＨＤ−７０、ＨＤＬＭ−２、ＨＤ−ＭｙＺ、ＨＫＢ−１、ＫＭ−Ｈ２、Ｌ  ４２８、Ｌ  ５４０、Ｌ１２３６、ＳＢＨ−１、ＳＵＰ−ＨＤ１、およびＳＵ／ＲＨ−ＨＤ−１；ならびにＨＡＮＫ１、ＫＨＹＧ−１、ＮＫＬ、ＮＫ−ＹＳ、ＮＯＩ−９０、およびＹＴなどのＮＫ細胞株を含むがこれらに限定されない。ＲＥＨ、ＮＡＬＬ−１、ＫＭ−３、Ｌ９２−２２１を含むがこれらに限定されないヌル白血病細胞株は、Ｋ５６２赤白血病、ＴＨＰ−１単球性白血病、Ｕ９３７リンパ腫、ＨＥＬ赤白血病、ＨＬ６０白血病、ＨＭＣ−１白血病、ＫＧ−１白血病、Ｕ２６６骨髄腫などの、他の白血病およびリンパ腫に由来する細胞株と同様、免疫細胞の、別の商業的に利用可能な供給源である。このような市販の細胞株の非限定的な例示的供給源は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  ＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎすなわちＡＴＣＣ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ａｔｃｃ．ｏｒｇ／）およびＧｅｒｍａｎ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅｓ（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｄｓｍｚ．ｄｅ／）を含む。
【０２０７】
ＮＦＡＴ連結ポリヌクレオチドの構築。本開示の一部の態様は、免疫調節性分子をコードするポリヌクレオチドへと作動的に連結されたＮＦＡＴ調節性ポリヌクレオチドを含む単離核酸に関する。このような連結ポリヌクレオチドを調製するための技法は、米国特許第８，５５６，８８２号において記載されている。
【０２０８】
一部の実施形態では、ＮＦＡＴ調節性ポリヌクレオチドは、ＮＦＡＴ応答性エレメントを含むか、または代替的にこれから本質的になるか、またはなおさらにこれからなる。ＮＦＡＴ応答性エレメントの例は、ＮＦＡＴ１、ＮＦＡＴ２、ＮＦＡＴ３、ＮＦＡＴ４、および／もしくはそれらの相補体、または任意の同等物を含むがこれらに限定されない。一部の実施形態では、ＮＦＡＴ調節性ポリヌクレオチドは、ＮＦＡＴが結合しうる、１または複数の結合性モチーフを含むか、または代替的にこれらから本質的になるか、またはなおさらにこれらからなる。一部の実施形態では、ＮＦＡＴ調節性ポリヌクレオチドは、同じ結合性モチーフおよび／またはＮＦＡＴ応答性エレメントの、１回または複数回の反復を含み；一部の実施形態では、ＮＦＡＴ調節性ポリヌクレオチドは、１または複数の、異なるＮＦＡＴ結合性モチーフおよび／またはＮＦＡＴ応答性エレメントを含む。ある特定の実施形態では、ＮＦＡＴ調節性ポリヌクレオチドは、１〜１５の間、好ましくは２〜１０の間、なおより好ましくは３〜９の間、なおより好ましくは６つのＮＦＡＴ結合性モチーフおよび／またはＮＦＡＴ応答性エレメントを含むか、または代替的にこれらから本質的になるか、またはなおさらにこれらからなる。具体的な実施形態では、ＮＦＡＴ調節性ポリヌクレオチドは、同じＮＦＡＴ結合性モチーフまたはＮＦＡＴ応答性エレメントの６回リピートを含むか、または代替的にこれらから本質的になるか、またはなおさらにこれらからなる。
【０２０９】
一部の実施形態では、ＮＦＡＴ調節性ポリヌクレオチドは、配列：ＡＧＧＡＡＡＡＡＣ（配列番号５８）またはその同等物を含むか、または代替的にこれらから本質的になるか、またはなおさらにこれらからなる。
【０２１０】
一部の実施形態では、ＮＦＡＴ調節性ポリヌクレオチドは、配列：ＧＧＡＧＧＡＡＡＡＡＣＴＧＴＴＴＣＡＴＡＣＡＧＡＡＧＧＣＧ（配列番号５７）またはその同等物を含むか、または代替的にこれらから本質的になるか、またはなおさらにこれらからなる。
【０２１１】
ある特定の実施形態では、ＮＦＡＴ調節性ポリヌクレオチドは、６回反復された配列番号５７、配列番号５８、またはそれらの同等物を含むか、または代替的にこれらから本質的になるか、またはなおさらにこれらからなる。
【０２１２】
一部の実施形態では、免疫調節性分子をコードするポリヌクレオチドは、免疫調節性分子、その機能的な部分または改変体のヌクレオチド配列をコードする配列を含むか、または代替的にこれから本質的になるか、またはなおさらにこれからなる。
【０２１３】
一部の実施形態では、単離ヌクレオチドは、プロモーター配列を含むか、または代替的にこれから本質的になるか、またはさらにこれからなる。ある特定の実施形態では、プロモーター配列は、免疫調節性分子のためのプロモーター配列である。さらなる実施形態では、プロモーター配列は、免疫調節性分子をコードするポリヌクレオチドによりコードされる免疫調節性分子と同じ免疫調節性分子のプロモーター配列でありうる。代替的な実施形態では、プロモーター配列は、異なる免疫調節性分子のプロモーター配列である。
【０２１４】
ある特定の実施形態では、ＮＦＡＴ調節性ポリヌクレオチドを、３’端において、免疫調節性分子をコードするポリヌクレオチドへと作動的に連結する。ある特定の実施形態では、プロモーター配列を、２つのポリヌクレオチドの間に配置する。なおさらなる態様では、単離核酸は、形質導入された細胞の選択を支援する、検出可能な標識または遺伝子（例えば、抗生物質耐性遺伝子）をさらに含む。
【０２１５】
ベクター。ＣＡＲ細胞は、ベクターを使用して調製することができる。本開示の態様は、（ｉ）ＴＮＴ  ＣＡＲをコードする単離核酸配列、または（ｉｉ）免疫調節性分子をコードするポリヌクレオチドと、これらの核酸および／もしくは相補体、ならびに／またはそれらの各々の同等物の一方または両方を含むか、または代替的にこれらから本質的になるか、またはなおさらにこれらからなるベクターとに関する。
【０２１６】
一部の実施形態では、単離核酸配列は、ＴＮＴ抗体の抗原結合性ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ２８共刺激性シグナル伝達領域および／または４−１ＢＢ共刺激性シグナル伝達領域、ならびにＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインを含むか、または代替的にこれらから本質的になるか、またはなおさらにこれらからなるＣＡＲをコードする。具体的な実施形態では、単離核酸配列は、（ａ）ＴＮＴ抗体の抗原結合性ドメインに続き、（ｂ）ＣＤ８αヒンジドメイン、（ｃ）ＣＤ８α膜貫通ドメインに続き、（ｄ）ＣＤ２８共刺激性シグナル伝達領域および／または４−１ＢＢ共刺激性シグナル伝達領域に続き、（ｅ）ＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインをコードする配列を含むか、または代替的にこれらから本質的になるか、またはなおさらにこれらからなる。
【０２１７】
一部の実施形態では、単離核酸配列は、ＣＡＲをコードし、ＴＮＴ抗体の抗原結合性ドメインをコードする配列の上流におけるＫｏｚａｋコンセンサス配列を含むか、または代替的にこれから本質的になるか、またはなおさらにこれからなる。
【０２１８】
一部の実施形態では、単離核酸は、免疫調節性分子を含むか、または代替的にこれから本質的になるか、またはなおさらにこれからなる。さらなる実施形態では、免疫調節性分子は、Ｂ７．１、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ１３７Ｌ、ＧＩＴＲＬ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１２、ＩＬ−２、低毒性ＩＬ−２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、ＬＥＣ、およびＯＸ４０Ｌからなる群より選択される、１または複数の分子である。
【０２１９】
一部の実施形態では、単離核酸は、免疫調節性分子をコードするポリヌクレオチド配列を含むか、または代替的にこれから本質的になるか、またはなおさらにこれからなり、上記で開示した方法に従い作出されうる、免疫調節性分子をコードするポリヌクレオチドへと作動的に連結されたＮＦＴＡ調節性ポリヌクレオチドを含むか、または代替的にこれから本質的になるか、またはなおさらにこれからなる。
【０２２０】
一部の実施形態では、単離核酸は、検出可能な標識および／または抗生物質耐性を付与するポリヌクレオチドを含む。一態様では、標識またはポリヌクレオチドは、単離核酸の形質導入に成功した細胞を選択するのに有用である。
【０２２１】
一部の実施形態では、単離核酸配列は、ベクター内に含まれる。ある特定の実施形態では、ベクターは、プラスミドである。他の実施形態では、ベクターは、ウイルスベクターである。このようなベクターの非限定的な例は、限定せずに述べると、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、およびアデノ随伴ウイルスベクターを含む。具体的な実施形態では、ベクターは、レンチウイルスベクターである。
【０２２２】
例示的なベクターの調製および前記ベクターを使用するＣＡＲ発現細胞の作出については、下記の実施例で詳細に論じる。まとめると、天然または合成の、ＣＡＲまたは免疫調節性分子をコードする核酸の発現は、ＣＡＲポリペプチドまたはその部分をコードする核酸を、プロモーターへと作動可能に連結し、構築物を、発現ベクターへと組み込むことにより達成することが典型的である。同様の方法を使用して、免疫調節性分子をコードするポリヌクレオチドを含む単離核酸配列を構築することができる。ベクターは、真核細胞における複製および組込みに適しうる。当技術分野では、ベクターおよび／または外因性核酸を含む細胞を作製するための方法が周知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（２００１年、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）を参照されたい。
【０２２３】
一態様では、「ベクター」という用語は、非分裂細胞および／または緩徐に分裂する細胞に、感染および形質導入し、標的細胞のゲノムへと組み込む能力を保持する組換えベクターを意図する。いくつかの態様では、ベクターは、野生型ウイルスに由来するか、またはこれに基づく。さらなる態様では、ベクターは、野生型レンチウイルスに由来するか、またはこれに基づく。このようなベクターの例は、限定せずに述べると、ヒト免疫不全症ウイルス（ＨＩＶ）、ウマ伝染性貧血ウイルス（ＥＩＡＶ）、サル免疫不全症ウイルス（ＳＩＶ）、およびネコ免疫不全症ウイルス（ＦＩＶ）を含む。代替的に、マウス白血病ウイルス（ＭＬＶ）など、他のレトロウイルスを、ベクター骨格のためのベースとして使用しうることも想定される。本開示に従うウイルスベクターが、特定のウイルスの構成要素に必ずしも制約されないことは明らかであろう。ウイルスベクターは、２つまたはこれを超える、異なるウイルスに由来する構成要素を含むことが可能であり、また、合成の構成要素も含みうる。ベクターの構成要素を操作して、標的細胞への特異性など、所望の特徴を得ることができる。
【０２２４】
本開示の組換えベクターは、霊長動物および非霊長動物に由来する。霊長動物レンチウイルスの例は、ヒト後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）の原因作用物質である、ヒト免疫不全症ウイルス（ＨＩＶ）、およびサル免疫不全症ウイルス（ＳＩＶ）を含む。非霊長動物のレンチウイルス群は、原型的な「遅発性ウイルス」である、ビスナ／マエディウイルス（ＶＭＶ）のほか、類縁の、ヤギ関節炎脳炎ウイルス（ＣＡＥＶ）、ウマ伝染性貧血ウイルス（ＥＩＡＶ）、ならびに、より近年になって記載された、ネコ免疫不全症ウイルス（ＦＩＶ）およびウシ免疫不全症ウイルス（ＢＩＶ）を含む。当技術分野では、先行技術による組換えレンチウイルスベクターが公知であり、例えば、参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第６，９２４，１２３号；同第７，０５６，６９９号；同第７，４１９，８２９号；および同第７，４４２，５５１号を参照されたい。
【０２２５】
米国特許第６，９２４，１２３号は、ある特定のレトロウイルス配列が、標的細胞ゲノムへの組込みを容易とすることについて開示する。この特許は、各レトロウイルスゲノムがｇａｇ、ｐｏｌ、およびｅｎｖと呼ばれる遺伝子であって、ビリオンタンパク質および酵素をコードする遺伝子を含むことについて教示する。これらの遺伝子は、両方の末端において、末端反復（ＬＴＲ）と呼ばれる領域で挟まれている。ＬＴＲは、プロウイルスの組込みおよび転写を担う。ＬＴＲはまた、エンハンサー−プロモーター配列としても用いられる。言い換えると、ＬＴＲは、ウイルス遺伝子の発現を制御しうる。レトロウイルスＲＮＡによるカプシド形成は、ウイルスゲノムの５’末端に配置されたプサイ配列により生じる。ＬＴＲ自体は、Ｕ３、Ｒ、およびＵ５と呼ばれる３つのエレメントに分けうる、同一な配列である。Ｕ３は、ＲＮＡの３’末端に固有の配列に由来する。Ｒは、ＲＮＡの両方の末端において反復される配列に由来し、Ｕ５は、ＲＮＡの５’末端に固有の配列に由来する。３つのエレメントのサイズは、異なるレトロウイルスの間で大幅に変動しうる。ウイルスゲノムでは、ポリ（Ａ）付加部位（終結）は、右側のＬＴＲ内のＲとＵ５との間の境界にある。Ｕ３は、細胞性タンパク質と、場合によって、ウイルス転写活性化タンパク質とに応答性の、プロモーター配列および複数のエンハンサー配列を含む、プロウイルスの転写制御エレメントの大半を含有する。
【０２２６】
構造遺伝子である、ｇａｇ、ｐｏｌ、およびｅｎｖ自体に関しては、ｇａｇは、ウイルスの内部構造タンパク質をコードする。ｇａｇタンパク質は、タンパク質分解により、成熟タンパク質ＭＡ（マトリックス）、ＣＡ（カプシド）、およびＮＣ（ヌクレオカプシド）へとプロセシングされる。ｐｏｌ遺伝子は、ゲノムの複製を媒介するＤＮＡポリメラーゼ、関連するＲＮａｓｅ  Ｈおよびインテグラーゼ（ＩＮ）を含有する逆転写酵素（ＲＴ）をコードする。
【０２２７】
ウイルスベクター粒子を作製するためには、ベクターのＲＮＡゲノムを、宿主細胞内で、それをコードするＤＮＡ構築物から発現させる。ベクターゲノムによりコードされない粒子の構成要素は、宿主細胞内で発現する、さらなる核酸配列（通例、ｇａｇ／ｐｏｌ遺伝子およびｅｎｖ遺伝子の一方または両方を含む「パッケージング系」）により、トランスでもたらされる。ウイルスベクター粒子の作製のために要求される配列のセットは、一過性トランスフェクションにより宿主細胞へと導入することもでき、宿主細胞ゲノムへと組み込むこともでき、諸方法を組み合わせた形でもたらすこともできる。当業者には、関与する技法が公知である。
【０２２８】
本開示における使用のためのレトロウイルスベクターは、Ｌｅｎｔｉｇｅｎ  Ｃｏｒｐ．製の、ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎのｐＬｅｎｔｉシリーズ、ｖｅｒｓｉｏｎ  ４、６、および６．２の「ＶｉｒａＰｏｗｅｒ」系；Ｃｉｔｙ  ｏｆ  Ｈｏｐｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅの研究室で作出され、使用されているｐＨＩＶ−７−ＧＦＰ；Ｃｌｏｎｔｅｃｈ製の「Ｌｅｎｔｉ−Ｘ」レンチウイルスベクターである、ｐＬＶＸ；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ製のｐＬＫＯ．１−ｐｕｒｏ；Ｏｐｅｎ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ製のｐＬｅｍｉＲ；およびＣｈａｒｉｔｅ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｃｈｏｏｌ、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ（ＣＢＦ）、Ｂｅｒｌｉｎ、Ｇｅｒｍａｎｙの研究室で作出され、使用されているｐＬＶを含むがこれらに限定されない。
【０２２９】
外因性核酸を、宿主細胞へと導入するか、または、そうではなく、細胞を、本開示の阻害剤へと曝露するのに使用される方法に関わらず、宿主細胞内の組換えＤＮＡ配列の存在を確認するために、様々なアッセイを実施することができる。このようなアッセイは、例えば、サザンおよびノーザンブロット法、ＲＴ−ＰＣＲならびにＰＣＲなど、当業者に周知の「分子生物学」アッセイ；例えば、免疫学的手段（ＥＬｌＳＡおよびウェスタンブロット）または本明細書で記載されるアッセイにより、特定のペプチドの存在または非存在を検出して、本開示の範囲内に収まる薬剤を同定するアッセイなどの「生化学」アッセイを含む。
【０２３０】
パッケージングベクターおよび細胞株。単離核酸は、パッケージングベクターおよび細胞株を使用することにより、レトロウイルスパッケージング系へとパッケージングすることができる。パッケージングベクターは、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、およびアデノ随伴ウイルスベクターを含むがこれらに限定されない。パッケージングベクターは、遺伝子物質の、細胞への送達を容易とするエレメントおよび配列を含有する。例えば、レトロウイルス構築物は、複製能力のないレトロウイルスベクターをパッケージングするのに要求される全てのビリオンタンパク質をトランスでコードする、複製能力のないレトロウイルスゲノムに由来する、少なくとも１つのレトロウイルスヘルパーＤＮＡ配列を含む、パッケージングベクターであり、複製能力のあるヘルパーウイルスの産生を伴わずに、高力価で、複製能力のないレトロウイルスベクターをパッケージングすることが可能なビリオンタンパク質を作製するためのレトロウイルス構築物である。レトロウイルスＤＮＡ配列は、ウイルス５’ＬＴＲの、天然のエンハンサーおよび／またはプロモーターをコードする領域を欠き、ヘルパーゲノムをパッケージングする一因となるプサイ機能配列、および３’ＬＴＲの両方を欠くが、外来のポリアデニル化部位、例えば、ＳＶ４０ポリアデニル化部位と、ウイルスの産生が所望される細胞型内の効率的な転写を導く外来のエンハンサーおよび／またはプロモーターとをコードする。レトロウイルスは、モロニーマウス白血病ウイルス（ＭＭＬＶ）、ヒト免疫不全症ウイルス（ＨＩＶ）、またはテナガザル白血病ウイルス（ＧＡＬＶ）などの白血病ウイルスである。外来のエンハンサーおよびプロモーターは、ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）最初期（ＩＥ）エンハンサーおよびプロモーター、モロニーマウス肉腫ウイルス（ＭＭＳＶ）のエンハンサーおよびプロモーター（Ｕ３領域）、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）のＵ３領域、脾臓病巣形成ウイルス（Ｓｐｌｅｅｎ  Ｆｏｃｕｓ  Ｆｏｒｍｉｎｇ  Ｖｉｒｕｓ）（ＳＦＦＶ）のＵ３領域、または天然のモロニーマウス白血病ウイルス（ＭＭＬＶ）プロモーターへと接続されたＨＣＭＶ  ＩＥエンハンサーでありうる。レトロウイルスパッケージングベクターは、プラスミドベースの発現ベクターによりコードされる、２つのレトロウイルスヘルパーＤＮＡ配列からなることが可能であり、この場合、例えば、第１のヘルパー配列は、同種指向性（ｅｃｏｔｒｏｐｉｃ）であるＭＭＬＶまたはＧＡＬＶのｇａｇおよびｐｏｌタンパク質をコードするｃＤＮＡを含有し、第２のヘルパー配列は、ｅｎｖタンパク質をコードするｃＤＮＡを含有する。宿主範囲を決定するｅｎｖ遺伝子は、異種指向性（ｘｅｎｏｔｒｏｐｉｃ）、両種指向性（ａｍｐｈｏｔｒｏｐｉｃ）、同種指向性、多種指向性（ｐｏｌｙｔｒｏｐｉｃ）（ミンク病巣形成）、もしくは１０Ａ１マウス白血病ウイルスｅｎｖタンパク質、またはテナガザル白血病ウイルス（ＧＡＬＶ）ｅｎｖタンパク質、ヒト免疫不全症ウイルスｅｎｖ（ｇｐ１６０）タンパク質、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）Ｇタンパク質、ヒトＩ型およびＩＩ型Ｔ細胞白血病（ＨＴＬＶ）ｅｎｖ遺���子産物をコードする遺伝子、前述のｅｎｖ遺伝子のうちの１もしくは複数の組合せに由来するキメラエンベロープ遺伝子、または前述のｅｎｖ遺伝子生成物の細胞質ドメインおよび膜貫通ドメインをコードするキメラエンベロープ遺伝子、および所望の標的細胞上の特異的表面分子を指向するモノクローナル抗体に由来しうる。
【０２３１】
パッケージング工程では、パッケージングベクターと、レトロウイルスベクターとを、ヒト胎児性腎細胞、例えば、２９３細胞（ＡＴＣＣ番号：ＣＲＬ１５７３、ＡＴＣＣ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、Ｍｄ．）など、ウイルスを産生することが可能な、哺乳動物細胞の第１の集団へと一過性に共トランスフェクトして、高力価の組換えレトロウイルス含有上清を作製する。本開示の別の方法では、次いで、この、一過性にトランスフェクトされた細胞の第１の集団を、哺乳動物の標的細胞、例えば、ヒトリンパ球と共培養して、標的細胞に、外来遺伝子を、高効率で形質導入する。本発明のさらに別の方法では、上記で記載した、一過性にトランスフェクトされた細胞の第１の集団に由来する上清を、哺乳動物の標的細胞、例えば、ヒトリンパ球または造血幹細胞とインキュベートして、標的細胞に、外来遺伝子を、高効率で形質導入する。
【０２３２】
別の態様では、パッケージングベクターを、ヒト胎児性腎細胞、例えば、２９３細胞など、ウイルスを産生することが可能な、哺乳動物細胞の第１の集団内で安定的に発現させる。レトロウイルスまたはレンチウイルスベクターは、選択可能なマーカーによる共トランスフェクションまたは偽型ウイルスの感染により、細胞へと導入する。いずれの場合にも、ベクターは、組み込まれる。代替的に、ベクターは、エピソームで維持されたプラスミドに導入することができる。高力価の組換えレトロウイルス含有上清が作製される。
【０２３３】
ＣＡＲ細胞の活性化および拡大。所望のＣＡＲを発現させる細胞の遺伝子改変の前であれ、後であれ、細胞は、米国特許第６，３５２，６９４号；同第６，５３４，０５５号；同第６，９０５，６８０号；同第６，６９２，９６４号；同第５，８５８，３５８号；同第６，８８７，４６６号；同第６，９０５，６８１号；同第７，１４４，５７５号；同第７，０６７，３１８号；同第７，１７２，８６９号；同第７，２３２，５６６号；同第７，１７５，８４３号；同第５，８８３，２２３号；同第６，９０５，８７４号；同第６，７９７，５１４号；同第６，８６７，０４１号；およびＬａｐａｔｅｖａら（２０１４年）、Ｃｒｉｔ  Ｒｅｖ  Ｏｎｃｏｇ、１９巻（１〜２号）：１２１〜３２頁；Ｔａｍら（２００３年）、Ｃｙｔｏｔｈｅｒａｐｙ、５巻（３号）：２５９〜７２頁；Ｇａｒｃｉａ−Ｍａｒｑｕｅｚら（２０１４年）、Ｃｙｔｏｔｈｅｒａｐｙ、１６巻（１１号）：１５３７〜４４頁などの参考文献において記載されている方法など、一般に公知の方法を使用して、活性化させ、拡大することができる。ｅｘ  ｖｉｖｏにおけるＴＮＴ関連抗原による刺激は、選択されたＣＡＲを発現させる細胞亜集団を活性化させ、拡大することができる。代替的に、細胞は、ＴＮＴ関連抗原との相互作用により、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて活性化させることができる。
【０２３４】
ある特定の免疫細胞の場合、さらなる細胞集団、可溶性リガンドおよび／もしくはサイトカイン、または刺激剤が、細胞を活性化させ、拡大するのに要求されうる。関連する試薬は当技術分野で周知であり、公知の免疫学的原理に従い選択される。例えば、可溶性ＣＤ−４０リガンドは、ある特定のＢ細胞集団を活性化させ、拡大するときに一助となる場合があり、同様に、照射フィーダー細胞も、ＮＫ細胞の活性化および拡大のための手順において使用することができる。
【０２３５】
当技術分野では、対象となる細胞を活性化させる方法が周知であり、本出願にたやすく適応させることができ；例示的な方法については、下記の実施例で記載する。本開示と関連する使用のための単離法は、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）システム活性化および拡大キット；ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｐｈｏｓｆｌｏｗ（商標）活性化キット、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ  ＭＡＣＳ（商標）活性化／拡大キット、および対象となる細胞の活性化部分に特異的な、他の市販の細胞キットを含むがこれらに限定されない。免疫細胞の特定の亜集団は、ビーズまたはこのようなキットにおいて利用可能な他の薬剤を使用することにより活性化させるかまたは拡大することができる。例えば、α−ＣＤ３／α−ＣＤ２８  Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）を使用して、単離Ｔ細胞の集団を活性化させ、拡大することができる。
【０２３６】
ＩＶ．使用法
治療的適用。本開示の方法態様は、それを必要とする対象における腫瘍の増殖を阻害し、かつ／またはそれを必要とするがん患者を処置するための方法に関する。一部の実施形態では、腫瘍は、充実性腫瘍である。一部の実施形態では、がんは、血液および／または骨髄に影響を及ぼすがんである。一部の実施形態では、腫瘍またはがん細胞は、ＴＮＴ関連抗原を発現または過剰発現させる。ある特定の実施形態では、これらの方法は、対象または患者へと、有効量の単離細胞を投与するステップを含むか、または代替的にこれから本質的になるか、またはなおさらにこれからなる。さらなる実施形態では、この単離細胞は、ＴＮＴ  ＣＡＲを含む。なおさらなる実施形態では、単離細胞は、Ｔ細胞またはＮＫ細胞である。一部の実施形態では、単離細胞は、処置される対象または患者に対して自家である。さらなる態様では、腫瘍は、ＴＮＴ関連抗原を発現させ、対象は、本明細書で記載される診断法などの診断法により、治療のために選択されている。対象は、動物、哺乳動物、イヌ科動物、ネコ科動物、ウシ、ウマ、マウス、またはヒト患者である。
【０２３７】
本明細書で開示されるＴＮＴ  ＣＡＲ細胞は、単独で投与することもでき、希釈剤、公知の抗がん治療剤、および／またはサイトカインもしくは免疫調節性である他の細胞集団など、他の構成要素と組み合わせて投与することもできる。本明細書で開示されるＴＮＴ  ＣＡＲ細胞は、第１選択治療、第２選択治療、第３選択治療、またはさらなる治療として投与することができる。さらなる治療の非限定的な例は、放射線療法、寒冷療法、もしくは化学療法などの細胞減少療法、または生物学的薬剤を含む。さらなる非限定的な例は、非改変免疫細胞、１もしくは複数の免疫調節性分子を発現させるベクターを含む改変免疫細胞、または本明細書で開示される抗原とは異なる抗原に対して特異的なＣＡＲ細胞など、他の関連する細胞型を含む。本開示のＣＡＲ細胞についてと同様、一部の実施形態では、これらの細胞は、自家の場合もあり、同種の場合もある。適切な処置レジメンは、主治医または主治獣医が決定する。
【０２３８】
本開示の医薬組成物は、処置または防止される疾患に適切な形で投与することができる。投与の数量および頻度は、患者の状態、ならびに患者の疾患の種類および重症度などの因子により決定されるが、適切な投与量は、臨床試験により決定することができる。一態様では、本開示の医薬組成物を、直接的な注射により、直接投与するか、または静脈内注射など、全身投与する。
【０２３９】
本開示の態様は、患者が、ＴＮＴ  ＣＡＲ療法に応答する可能性が高いのか、これに応答する可能性が高くないのかを決定するための例示的な方法を提示する。方法は、患者から単離された腫瘍試料中の壊死の存在または非存在を決定するステップと、所与の腫瘍試料中に存在する壊死の量を定量化するステップとを含むか、または代替的にこれらから本質的になるか、またはさらにこれらからなり、壊死の存在は、患者が、ＴＮＴ  ＣＡＲ療法に応答する可能性が高いことを指し示し、壊死の非存在は、患者が、ＴＮＴ療法に応答する可能性が高くないことを指し示す。ある特定の実施形態では、方法は、有効量のＴＮＴ  ＣＡＲ療法を、ＴＮＴ  ＣＡＲ療法に応答する可能性が高いと決定された患者へと投与するステップをさらに含むか、または代替的にこれから本質的になるか、またはなおさらにこれからなる。ＴＮＴ  ＣＡＲ療法は、患者に対して、自家の場合もあり、同種の場合もあり、患者は、充実性腫瘍を患う対象、動物またはヒトでありうる。
【０２４０】
当技術分野では、壊死についての組織学的染色の技法が周知である。例えば、「Ｈ＆Ｅ染色」ともまた称するヘマトキシリンおよびエオシン染色は、とりわけ、腫瘍形成性またはがん性の増殖において、組織中の壊死の存在を同定するための一般的な技法である。細胞質におけるＨ＆Ｅ染色は、部分的には、細胞質におけるＲＮＡの喪失に帰せられ、部分的には、細胞質におけるタンパク質の変性に帰せられる、好酸球増加症の増大を裏付ける。壊死性組織の染色では、細胞質は、細胞質小器官の酵素消化のために、「虫食い状態」に見えることが多い。ミエリン形態、石灰化、および他の細胞への食作用の証拠もまた、組織学的染色により検出されうる、壊死性組織の特徴である。壊死性組織はまた、細胞死の結果としての核溶解、核濃縮、および核崩壊を裏付けることが多い、核染色における特定の特徴も有する。顕微鏡法と、このような壊死性特徴についての、手動式または自動式の定量化とを使用して、ＴＮＴ  ＣＡＲ療法の妥当性を決定することができる。腫瘍形成性もしくはがん性増殖または壊死性組織を検出する代替的な手段であって、バイオマーカーベースまたはイメージングベースの診断法を一般に含むがこれらに限定されない手段もまた、患者が、ＴＮＴ  ＣＡＲ療法に応答するのかどうか、したがって、使用しうるのかどうかの決定に同等に妥当である。
【０２４１】
Ｖ．担体
本開示のさらなる態様は、担体と、本明細書で開示される実施形態において記載される生成物（例えば、ＴＮＴ  ＣＡＲ、ＴＮＴ  ＣＡＲを含む単離細胞、単離核酸、ベクター、ＴＮＴ  ＣＡＲおよび免疫調節性分子を含有する単離細胞ならびに／またはそのようなものをコードする核酸）のうちの１または複数とを含む、または代替的にこれらから本質的になる、またはなおさらにこれらからなる組成物に関する。さらなる態様では、組成物は加えて、免疫調節性分子、および／またはＮＦＡＴ調節性ポリヌクレオチドと免疫調節性分子をコードするポリヌクレオチドとを含む単離核酸を含みうる。
【０２４２】
ある特定の実施形態では、免疫調節性分子は、Ｂ７．１、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ１３７Ｌ、ＧＩＴＲＬ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１２、ＩＬ−２、低毒性ＩＬ−２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、ＬＥＣ、およびＯＸ４０Ｌからなる群より選択される１または複数である。
【０２４３】
略述すると、１または複数の、薬学的または生理学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤と組み合わせた、特許請求される組成物のうちのいずれか１つを含むがこれに限定されない本開示の医薬組成物。このような組成物は、中性緩衝食塩水、リン酸緩衝食塩水などの緩衝液；グルコース、マンノース、スクロースまたはデキストラン、マンニトールなどの炭水化物；タンパク質；ポリペプチドまたはグリシンなどのアミノ酸；抗酸化剤；ＥＤＴＡまたはグルタチオンなどのキレート剤；アジュバント（例えば、水酸化アルミニウム）；および保存剤を含みうる。本開示の組成物は、経口、静脈内、局所、腸内、および／または非経口投与のために製剤化することができる。ある特定の実施形態では、本開示の組成物を、静脈内投与のために製剤化する。
【０２４４】
細胞または組成物の投与は、単回用量で行うこともでき、処置の過程を通して、持続的に行うこともでき、間欠的に行うこともできる。最も有効な投与手段および投与量を決定する方法は、当業者に公知であり、治療のために使用される組成物、治療目的、および処置される対象と共に変動するであろう。主治医が選択する用量レベルおよびパターンにより、単回投与を実行することもでき、複数回投与を実行することもできる。当技術分野では、適切な投与製剤および薬剤を投与する方法が公知である。さらなる態様では、本開示の細胞および組成物を、他の処置と組み合わせて投与することができる。
【０２４５】
当技術分野で公知であり、例えば、ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０６４１９１において記載されている方法を使用して、細胞および細胞集団を、宿主へと投与する。本開示の細胞または組成物のこの投与は、実験的アッセイおよびスクリーニングアッセイのための、所望の疾患、障害、または状態についての動物モデルを作出するために行うことができる。
【０２４６】
ＩＶ．キット
本明細書で明示される通り、本開示は、ＴＮＴ  ＣＡＲ細胞を作製し、投与するための方法を提示する。特定の一態様では、本開示は、これらの方法を実施するためのキットのほか、細胞および／もしくは組織を回収し、かつ／またはスクリーン／形質導入／その他を実施し、かつ／または結果を解析することなど、本開示の方法を実行するための指示も提示する。
【０２４７】
一態様では、キットは、本明細書で開示される単離核酸のうちのいずれか１つおよび／または前記核酸を含むベクターおよび／または単離された同種細胞、好ましくは、Ｔ細胞もしくはＮＫ細胞、および／または患者からの自家細胞の調達についての指示を含むか、または代替的にこれらから本質的になるか、またはなおさらにこれらからなる。このようなキットはまた、本明細書で開示される培地および他の試薬など、ＴＮＴ  ＣＡＲ発現細胞の形質導入および／もしくは選択ならびに／または活性化および／もしくは拡大に適切な培地および他の試薬も含みうるか、または代替的にこれらから本質的になりうるか、またはなおさらにこれらを含みうる。
【０２４８】
一態様では、キットは、単離されたＣＡＲ発現細胞またはその集団を含むか、または代替的にこれらから本質的になるか、またはなおさらにこれらからなる。一部の実施形態では、このキットの細胞は、それを必要とする対象への投与の前における活性化および／または拡大を要求しうる。さらなる実施形態では、キットは、単離されたＣＡＲ発現細胞を活性化させ、かつ／または拡大するように、本開示の上記で網羅される培地および試薬などの培地および試薬をさらに含みうるか、またはこれらから本質的になりうる。一部の実施形態では、細胞は、ＴＮＴ  ＣＡＲ療法のために使用するものとする。さらなる実施形態では、キットは、単離細胞の、ＴＮＴ  ＣＡＲ療法を必要とする患者への投与についての指示を含む。
【０２４９】
本開示のキットはまた、例えば、緩衝剤、保存剤、またはタンパク質安定化剤も含みうる。キットは、検出可能な標識を検出するために必要な構成要素、例えば、酵素または基質をさらに含みうる。キットはまた、アッセイし、被験試料と比較しうる、１つの対照試料または対照試料のシリーズも含有しうる。キットの各構成要素は、個別の容器内に封入することができ、多様な容器の全ては、キットを使用して実施されるアッセイの結果を解釈するための指示と共に、単一のパッケージ内にあってもよい。本開示のキットは、キットの容器上または容器内に書面を含有しうる。書面は、キット内に含有される試薬を、どのようにして使用するのかについて記載する。
【０２５０】
適宜、これらの示唆されるキットの構成要素は、当業者による使用に好都合なように、パッケージングすることができる。例えば、これらの示唆されるキットの構成要素は、溶液中でまたは分散液などとして提供することができる。
【０２５１】
以下の例は、本開示を実行に移す、多様な場合に使用しうる手順を例示する。
【実施例】
【０２５２】
（実施例１  ＬＥＣの生物活性）
ＬＥＣ融合タンパク質の生物活性は、製造元のプロトコール（Ｌｉ，  Ｊ．ら（２００３年）、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．、２６巻：３２０〜３３１頁；Ｌｉ，  Ｊ．ら（２００３年）、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、６３巻：８３８４〜８３９２頁）において記載されている通り、９６−Ｗｅｌｌ  Ｍｉｃｒｏｃｈｅｍｏｔａｘｉｓ  Ｃｈａｍｂｅｒ（Ｎｅｕｒｏｐｒｏｂｅ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）内の標的細胞の遊走を測定することにより、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて裏付けた。略述すると、ＬＥＣ／ｃｈＴＮＴ−３、組換えヒトＬＥＣ、または親ｃｈＴＮＴ−３を、結合培地（１％のＢＳＡおよび２５ｍｍｏｌ／ＬのＨＥＰＥＳを伴うＲＰＭＩ  １６４０）中で０．３９ｎＭ〜５０ｎＭに系列希釈し、Ｍｉｃｒｏｃｈｅｍｏｔａｘｉｓ装置の下部チャンバーに入れた。次いで、１０５個のヒトＴＨＰ−１単球性細胞を含有する１００μＬの結合培地を、上部チャンバーへと添加し、３７℃、５％ＣＯ２の加湿されたインキュベーター内で１．５時間にわたるインキュベーションの後、遊走細胞の百分率を計算して、遊走指数（ケモカインおよび融合タンパク質へと曝露された細胞の平均数を、結合培地へと曝露された細胞の平均数で除した数）を決定した。全てのアッセイは、三連で実施した。図５に示される通り、遊離ヒト組換えＬＥＣおよび融合タンパク質は、ＴＨＰ−１細胞の遊走を誘導した。融合タンパク質へと曝露されたＴＨＰ−１細胞の遊走は、用量依存的であり、１．６ｎＭという低濃度で始めて、１２．５ｎＭの濃度でピークに達した。このアッセイでは、遊離ヒト組換えＬＥＣは、約２５ｎＭのより高い濃度でピークに達した。親抗体（ｃｈＴＮＴ−３）へと曝露されたＴＨＰ−１細胞は、融合タンパク質のＬＥＣ部分の生物活性を検証する遊走を何ら示さなかった。
【０２５３】
（実施例２  分泌性ＴＮＴ  ＣＡＲ  Ｔ細胞の作出）
ＮＦＡＴエンハンサー連結型ＩＬ−１２およびＬＥＣ遺伝子の構築
ヒトＩＬ−２遺伝子の転写活性化部位の上流におけるヌクレオチド−２８６〜−２５８において見出されるＮＦＡＴモチーフを、誘導性構築物のために活用する（（ＮＦＡＴ）６と表記される）。下線を付した配列は、ＮＦＡＴ結合性部位を指し示し、斜字体の配列は、ＡＰ−１結合性部位（Ｆｉｅｒｉｎｇ，  Ｓ．ら（１９９０年）、Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．、４巻（１０号）：１８２３〜１８３４頁）を指し示す（配列番号５７）：
【化１】
2018518459.tif 000004
【０２５４】
これらのＮＦＡＴモチーフリピートには、ヌクレオチド−７０〜＋４７のＩＬ−２遺伝子プロモーターであって、そのＴＡＴＡボックス部位および転写開始部位を保持するＩＬ−２遺伝子プロモーターが後続する。この最小限のＩＬ−２プロモーター配列は、ＩＬ−１２またはＬＥＣをコードするＤＮＡ配列に直接続くように読み取られる（図６Ａおよび６Ｂ）。したがって、ＩＬ−１２またはＬＥＣは、適正なＴ細胞の活性化、およびＮＦＡＴの、最小限のＩＬ−２プロモーターへの結合の後に限り発現し、転写開始を可能とする。
【０２５５】
誘導性ＩＬ−１２遺伝子は、Ｇｅｎｅｗｉｚ  Ｇｅｎｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓのサービスにより合成する。制限酵素部位を、＋４７において付加して、ＬＥＣのサブクローニングを可能とするか、または遺伝子をこの誘導性構築物へと置換する。代替的に、二重誘導性ＩＬ−１２−ＬＥＣ遺伝子を構築するために、ＩＬ−１２およびＬＥＣ遺伝子を、最小限のＩＬ−２プロモーター配列の下流にサブクローニングし、下記の図７に示される内部リボソーム侵入部位で隔てる。
【０２５６】
ＴＮＴ−ＣＡＲおよび誘導性遺伝子の、レンチウイルスプラスミドへのサブクローニング
別に、ＮｏｖａＢｌｕｅ  Ｓｉｎｇｌｅｓ（商標）化学的コンピテントＥ．ｃｏｌｉ細胞を、ＴＮＴ−ＣＡＲおよび誘導性プラスミドｃＤＮＡで、形質転換する。形質転換されたＥ．ｃｏｌｉ細胞の増殖後、ＴＮＴ−ＣＡＲおよび誘導性プラスミドを精製し、一晩にわたるＴ４  ＤＮＡリガーゼ反応（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ；Ｉｐｓｗｉｃｈ、ＭＡ）を介して、ＨＩＶ−１  ５’および３’末端反復（ＬＴＲ）、パッケージングシグナル（Ψ）、ＥＦ１αプロモーター、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）、ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）、ならびにサルウイルス４０起点（ＳＶ４０）を含有するＨＩＶ−１ベースのレンチウイルスベクターへと挿入されるように、適切な制限酵素で消化する。次いで、ＮｏｖａＢｌｕｅ  Ｓｉｎｇｌｅｓ（商標）化学的コンピテントＥ．ｃｏｌｉ細胞を、結果として得られる、ＴＮＴ−ＣＡＲおよび誘導性遺伝子を含有するレンチウイルスプラスミドで形質転換する。
【０２５７】
レンチウイルス粒子の作製
トランスフェクションの前に、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を、１０ｍＬのｃｏｍｐｌｅｔｅ−Ｔｅｔ−ＤＭＥＭ中に、１００ｍｍの組織培養処理プレート１枚当たりの細胞４．０×１０６個で播種し、加湿された５％ＣＯ２インキュベーター内、３７℃で、一晩にわたりインキュベートする。８０〜９０％コンフルエントに達したら、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞に、ＴＮＴ−ＣＡＲまたは誘導性遺伝子のレンチウイルスベクターと、レンチウイルスのエンベロープ構成要素およびカプシド構成要素を形成するのに必要な遺伝子を含有する、レンチウイルスパッケージングベクターとを共トランスフェクトする。ＨＥＫ２９３Ｔ細胞に結合するベクター含有ナノ粒子の形成を容易とするように、特許権のある反応緩衝液およびポリマーもまた添加する。トランスフェクトされたＨＥＫ２９３Ｔ細胞培養物を、３７℃で、４時間にわたりインキュベートした後で、トランスフェクション培地を、新鮮なｃｏｍｐｌｅｔｅ  Ｔｅｔ  ＤＭＥＭ  １０ｍＬで置きかえる。次いで、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を、さらなる４８時間にわたりインキュベートし、その後、細胞上清を採取し、主要なレンチウイルスカプシドタンパク質である、ｐ２４に対するサンドイッチＥＬＩＳＡを介して、レンチウイルス粒子について調べる。レンチウイルス含有上清をアリコートに分け、標的であるＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞に形質導入するために使用するまで、−８０℃で保管する。
【０２５８】
ヒトＣＤ４＋およびＣＤ８＋末梢血Ｔ細胞の精製、活性化、および濃縮
Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ  Ｐｌｕｓ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ；Ｌｉｔｔｌｅ  Ｃｈａｌｆｏｎｔ、Ｂｕｃｋｉｎｇｈａｍｓｈｉｒｅ、ＵＫ）を伴う密度勾配遠心分離により濃縮された末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、０．５％のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）および２ｍＭのＥＤＴＡを含有するＰＢＳを伴う遠心分離により回収および洗浄する。ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞についてポジティブ選択するように、磁気的に活性化させたＬＳカラムを使用して、これらのヒトＴ細胞サブセットを単離するのに、ＭＡＣＳ  ＣＤ４＋およびＣＤ８＋  ＭｉｃｒｏＢｅａｄｓ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ；Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）キットを使用する。次いで、磁気的に結合したＴ細胞を、磁気ＭＡＣＳ分離器から取り出し、ＬＳカラムからフラッシュ洗浄し、新鮮な完全培地中で洗浄する。ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞集団の純度は、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ａｃｏｕｓｔｉｃ  Ａｔｔｕｎｅ（登録商標）Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒを使用するフローサイトメトリーにより評価し、必要な場合、ＵＳＣのフローサイトメトリーコア施設で実施される蛍光活性化細胞分取により濃縮する。１：１に混合されたＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞を、適切な細胞培養容器内で、１００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２を補充された完全培地中、１ｍＬ当たりの細胞１．０×１０６個の密度で維持し、これに、α−ＣＤ３／α−ＣＤ２８  Ｈｕｍａｎ  Ｔ−ｃｅｌｌ  Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ；Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）を添加して、培養Ｔ細胞を活性化させる。次いで、Ｔ細胞に、ＴＮＴ−ＣＡＲレンチウイルス粒子を用いて形質導入する前に、５％ＣＯ２インキュベーター内、３７℃で、２日間にわたりインキュベートする。
【０２５９】
ＣＤ４＋ＣＤ８＋Ｔ細胞のレンチウイルス形質導入
活性化Ｔ細胞を回収し、死細胞を、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ密度勾配遠心分離、またはＭＡＣＳ  Ｄｅａｄ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｍｏｖａｌ  Ｋｉｔ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ；Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）の使用により除去する。６ウェルプレートに、活性化Ｔ細胞を、完全培地１ｍＬ中の細胞１．０×１０６個の濃度で播種する。逐次的なＴＮＴ−ＣＡＲ．ＩＬ−１２−ＬＥＣ細胞の作製のために、生細胞の最大の形質導入効率をもたらす形質導入手順を選択するように、細胞に、下記の多様な方法により形質導入する。
【０２６０】
スピンフェクションを介するレンチウイルス形質導入
ＴＮＴ−ＣＡＲまたは誘導性遺伝子のレンチウイルス粒子を、レンチウイルス粒子と標的細胞表面との相互作用を容易とすることにより、形質導入の一助となるカチオン性ポリマーである、４μｇ／ｍＬのポリブレンと共に、細胞懸濁物へと添加する。細胞を、３２℃、８００×ｇで、１時間にわたり遠心分離し、その後、一晩にわたりインキュベートする。遠心分離に続き、レンチウイルス含有培地を吸引し、細胞ペレットを、１００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２を伴う、新鮮な完全培地中に再懸濁させる。細胞を、５％ＣＯ２の加湿されたインキュベーター内、３７℃で一晩にわたり静置する。翌日、枯渇培地を吸引し、レンチウイルス上清を、細胞へと再度添加する。形質導入の３日後、細胞をペレット化させ、ＩＬ−２および４００μｇ／ｍＬのジェネティシン（Ｇ４１８スルフェート）（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ；Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）を伴う、新鮮な完全培地中に再懸濁させる。
【０２６１】
ＲｅｔｒｏＮｅｃｔｉｎを介するレンチウイルス形質導入
ＰＢＳ中で一晩にわたるインキュベーションを介して、ＲｅｔｒｏＮｅｃｔｉｎを、組織培養処理されていないプレートに播種する。その後、ＴＮＴ−ＣＡＲまたは誘導性遺伝子のレンチウイルス粒子を、ＲｅｔｒｏＮｅｃｔｉｎでコーティングしたプレートへと添加する。半日間にわたるインキュベーション後、レンチウイルス上清を吸引し、１：１に混合されたＣＤ４＋ＣＤ８＋Ｔ細胞を、ＲｅｔｒｏＮｅｃｔｉｎ−レンチウイルスでコーティングしたプレートの、１００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２を伴う、新鮮な完全培地中に添加し、５％ＣＯ２の加湿されたインキュベーター内、３７℃で、３日間にわたり静置する。その後、細胞をペレット化させ、ＩＬ−２および４００μｇ／ｍＬのジェネティシンを伴う、新鮮な完全培地中に再懸濁させる。
【０２６２】
抗生物質選択を介する、ＴＮＴ−ＣＡＲ．ＩＬ−１２−ＬＥＣ細胞の選択
抗生物質を使用して、ＴＮＴ−ＣＡＲ．ＩＬ−１２−ＬＥＣ細胞について選択するため、２つの抗生物質耐性遺伝子を、ＴＮＴ−ＣＡＲレンチウイルスベクターおよび誘導性ＩＬ−１２−ＬＥＣレンチウイルスベクターへと個別に導入する。２ステップの形質導入手順において、ＣＤ４＋ＣＤ８＋Ｔ細胞に、上記で記載したスピンフェクションまたはＲｅｃｔｒｏＮｅｃｔｉｎを介して、ＴＮＴ−ＣＡＲレンチウイルスを用いて形質導入する。第１の抗生物質を伴う１週間の培養後、生細胞を精製し、スピンフェクションまたはＲｅｃｔｒｏＮｅｃｔｉｎを介して、誘導性ＩＬ−１２−ＬＥＣレンチウイルスを用いた、第２の形質導入を施す。形質導入後、細胞を、両方の抗生物質を含有する培養培地中でインキュベートして、ＴＮＴ−ＣＡＲ．ＩＬ−１２−ＬＥＣ含有細胞について選択する。
【０２６３】
ＦＡＣＳを介する、ＴＮＴ−ＣＡＲ．ＩＬ−１２−ＬＥＣ細胞の選択
略述すると、形質導入後のＴ細胞培養物を、ビオチンコンジュゲートα−イディオタイプＴＮＴ抗体で標識して、ＴＮＴ−ＣＡＲのｓｃＦｖ領域を同定する。続いて、イソチオシアン酸フルオレセインコンジュゲートストレプトアビジンを使用して、α−ＴＮＴを結合させる。細胞を、氷上に保ち、蛍光活性化細胞分取（ＦＡＣＳ）を介して、ＴＮＴ−ＣＡＲ細胞を濃縮するために、ＵＳＣのフローサイトメトリーコア施設へと移送する。細胞分取は、ＢＤ  ＦＡＣＳＡｒｉａ（商標）ＩＩ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ；Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ、ＮＪ）を使用して、コア施設の職員が実施する。誘導性ＩＬ−１２−ＬＥＣ含有細胞を濃縮するために、ＧＦＰレポーター遺伝子を、形質導入細胞のポジティブ選択のために使用する。
【０２６４】
（実施例３  ＮＦＡＴエンハンサー連結型ＩＬ−１２およびＬＥＣ遺伝子の構築）
ヒトＩＬ−２遺伝子の転写活性化部位の上流におけるヌクレオチド−２８６〜−２５８において見出されるＮＦＡＴモチーフの８回リピートを、誘導性構築物のために活用する（（ＮＦＡＴ）８と表記される）。下線を付した配列は、ＮＦＡＴ結合性部位を指し示し、斜字体の配列は、ＡＰ−１結合性部位を指し示す（配列番号５７）：
【化２】
2018518459.tif 000005
【０２６５】
これらのＮＦＡＴモチーフリピートには、ヌクレオチド−７０〜＋４７のＩＬ−２遺伝子プロモーターであって、そのＴＡＴＡボックス部位および転写開始部位を保持するＩＬ−２遺伝子プロモーターが後続する。この最小限のＩＬ−２プロモーター配列は、ＩＬ−１２またはＬＥＣをコードするＤＮＡ配列に直接続くように読み取られことになる（図８Ａ）。したがって、ＩＬ−１２またはＬＥＣは、適正なＴ細胞の活性化、およびＮＦＡＴの、最小限のＩＬ−２プロモーターへの結合の後に限り発現し、転写開始を可能とするであろう。
【０２６６】
誘導性ＩＬ−１２遺伝子は、Ｇｅｎｅｗｉｚ  Ｇｅｎｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓのサービスにより合成する。制限酵素部位を、＋４７において付加して、ＬＥＣのサブクローニングを可能とするか、または遺伝子をこの誘導性構築物へと置換する。代替的に、二重誘導性ＩＬ−１２−ＬＥＣ遺伝子を構築するために、ＩＬ−１２およびＬＥＣ遺伝子を、最小限のＩＬ−２プロモーター配列の下流にサブクローニングし、図８Ｂに示される内部リボソーム侵入部位で隔てる。
【０２６７】
ＴＮＴ−ＣＡＲおよび誘導性遺伝子の、レンチウイルスプラスミドへのサブクローニング
別に、ＮＥＢ（登録商標）５−アルファ化学的コンピテントＥ．ｃｏｌｉ細胞を、ＴＮＴ−ＣＡＲおよび誘導性プラスミドｃＤＮＡで、形質転換する（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ；Ｉｐｓｗｉｃｈ、ＭＡ）。形質転換されたＥ．ｃｏｌｉ細胞の増殖後、ＴＮＴ−ＣＡＲおよび誘導性プラスミドを精製し、一晩にわたるＴ４  ＤＮＡリガーゼ反応（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ；Ｉｐｓｗｉｃｈ、ＭＡ）を介して、ＨＩＶ−１  ５’および３’末端反復（ＬＴＲ）、パッケージングシグナル（Ψ）、ＥＦ１αプロモーター、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）、ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）、ならびにサルウイルス４０起点（ＳＶ４０）を含有するＨＩＶ−１ベースのレンチウイルスベクターへと挿入されるように、適切な制限酵素で消化する。次いで、ＮＥＢ（登録商標）５−アルファ化学的コンピテントＥ．ｃｏｌｉ細胞を、結果として得られる、ＴＮＴ−ＣＡＲおよび誘導性遺伝子を含有するレンチウイルスプラスミドで形質転換する。
【０２６８】
レンチウイルス粒子の作製
トランスフェクションの前に、２９３  ＬＴＶ細胞（優れたレンチウイルス産生性のために選択された、ＨＥＫ  ２９３  Ｔ細胞のサブクローン）を、１０％の透析ＦＣＳに、ペニシリン／ストレプトマイシンを加えて補充した、１０ｍＬの完全ＤＭＥＭ中に１５０ｃｍ２の組織培養処理プレート１つ当たりの細胞４．０×１０６個で播種し、加湿された５％ＣＯ２インキュベーター内、３７℃で、一晩にわたりインキュベートする。８０〜９０％コンフルエンシーに達したら、トランスフェクションの２時間前に、培地を、ペニシリン／ストレプトマイシンを伴わない、１０％の透析ＦＣＳを補充した、１０ｍｌのＤＭＥＭと交換する。２時間後、細胞に、ＴＮＴ−ＣＡＲおよび／または誘導性遺伝子のレンチウイルスプラスミドに加えて、レンチウイルスのカプシド構成要素およびエンベロープ構成要素を形成するのに必要なレンチウイルス遺伝子を含有する、パッケージングおよびエンベローププラスミドを共トランスフェクトする。２９３  ＬＴＶ細胞に結合するプラスミド含有ナノ粒子の形成を容易とするように、タカラバイオ株式会社／Ｃｌｏｎｔｅｃｈ（Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ、ＣＡ）により開発された、特許権のある反応緩衝液およびポリマー溶液を添加する。トランスフェクトされた２９３  ＬＴＶ細胞培養物を、３７℃で、２４時間にわたりインキュベートした後で、トランスフェクション培地を、１０％の透析ＦＣＳに、ペニシリン／ストレプトマイシンを加えて補充した、新鮮な完全ＤＭＥＭ  １０ｍＬで置きかえる。その後、レンチウイルス含有上清を、２４時間ごとに、３日間にわたり回収する。最終的な回収の後、上清を、４℃、３５０×ｇで遠心分離し、残存する細胞および破砕物を濾過により除く。次いで、レンチウイルス含有上清を、４℃、２０，０００×ｇで、２時間にわたり超遠心分離し、７％のトレハロースおよび１％ＢＳＡを含有するＰＢＳ中に再懸濁させる。レンチウイルス含有上清をアリコートに分け、標的エフェクター細胞に形質導入するために使用するまで、−８０℃で保管する。
【０２６９】
ヒトＣＤ４＋およびＣＤ８＋末梢血Ｔ細胞の精製、活性化、および濃縮
Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ  Ｐｌｕｓ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ；Ｌｉｔｔｌｅ  Ｃｈａｌｆｏｎｔ、Ｂｕｃｋｉｎｇｈａｍｓｈｉｒｅ、ＵＫ）を伴う密度勾配遠心分離により濃縮された末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、０．５％のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）および２ｍＭのＥＤＴＡを含有するＰＢＳを伴う遠心分離により回収および洗浄する。ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞について、ＰＢＭＣを磁気的に単離するのに、Ｔ細胞濃縮キット（Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用する。ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞集団の純度は、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ａｃｏｕｓｔｉｃ  Ａｔｔｕｎｅ（登録商標）Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒを使用するフローサイトメトリーにより評価し、必要な場合、ＵＳＣのフローサイトメトリーコア施設で実施される蛍光活性化細胞分取により濃縮する。１：１に混合されたＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞を、適切な細胞培養容器内で、１００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２を補充された完全な５０％のクリック培地／５０％のＲＰＭＩ−１６４０中、１ｍＬ当たりの細胞１．０×１０６個の密度で維持し、これに、α−ＣＤ３／α−ＣＤ２８  Ｈｕｍａｎ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ａｃｔｉｖａｔｏｒビーズ（Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を添加して、培養Ｔ細胞を活性化させる。次いで、Ｔ細胞を、ＴＮＴ−ＣＡＲレンチウイルス粒子を用いて形質導入する前に、５％ＣＯ２インキュベーター内、３７℃で、２日間にわたりインキュベートする。
【０２７０】
ＣＤ４＋ＣＤ８＋Ｔ細胞のレンチウイルス形質導入
活性化Ｔ細胞を回収し、死細胞を、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ密度勾配遠心分離、またはＭＡＣＳ  Ｄｅａｄ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｍｏｖａｌ  Ｋｉｔ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ；Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）の使用により除去する。６ウェルプレートに、活性化Ｔ細胞を、完全培地中、１ｍＬ当たりの細胞１．０×１０６個の濃度で播種する。細胞に、Ｌｅｎｔｉｂｌａｓｔトランスフェクション補助剤（Ｏｚ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）を使用して、レンチウイルス粒子を用いて形質導入する。形質導入するのが難しい細胞、すなわち、ＮＫ−９２ＭＩの形質導入効率を増大させるために、細胞を、ＲｅｔｒｏＮｅｃｔｉｎでコーティングしたプレート（タカラバイオ株式会社／Ｃｌｏｎｔｅｃｈ；Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ、ＣＡ）内で、３２℃、８００×ｇで、１時間にわたり遠心分離してから、一晩にわたるインキュベーションを施すことができる。形質導入の翌朝、レンチウイルス含有枯渇培地を、新鮮な完全ＲＰＭＩと交換する。形質導入された細胞を、さらなる下流のアッセイおよび解析まで培養する。
【０２７１】
抗生物質選択を介する、ＴＮＴ−ＣＡＲ．ＩＬ−１２−ＬＥＣ細胞の選択
抗生物質を使用して、ＴＮＴ−ＣＡＲ．ＩＬ−１２−ＬＥＣ細胞について選択するため、２つの抗生物質耐性遺伝子を、ＴＮＴ−ＣＡＲおよび誘導性ＩＬ−１２−ＬＥＣレンチウイルスプラスミドへと個別に導入する。２ステップの形質導入手順において、ＣＤ４＋ＣＤ８＋Ｔ細胞に、上記で記載したスピンフェクションまたはＲｅｃｔｒｏＮｅｃｔｉｎを介して、ＴＮＴ−ＣＡＲレンチウイルスを用いて形質導入する。第１の抗生物質を伴う１週間の培養後、生細胞を精製し、スピンフェクションまたはＲｅｃｔｒｏＮｅｃｔｉｎを介して、誘導性ＩＬ−１２−ＬＥＣレンチウイルスを用いた、第２の形質導入を施す。形質導入後、細胞を、両方の抗生物質を含有する培養培地中でインキュベートして、ＴＮＴ−ＣＡＲ．ＩＬ−１２−ＬＥＣ含有細胞について選択する。
【０２７２】
ＦＡＣＳを介する、ＴＮＴ−ＣＡＲ．ＩＬ−１２−ＬＥＣ細胞の選択
略述すると、形質導入後のＴ細胞培養物を、ビオチンコンジュゲートα−イディオタイプＴＮＴ抗体で標識して、ＴＮＴ−ＣＡＲのｓｃＦｖ領域を同定する。続いて、イソチオシアン酸フルオレセインコンジュゲートストレプトアビジンを使用して、α−ＴＮＴを結合させる。細胞を、氷上に保ち、蛍光活性化細胞分取（ＦＡＣＳ）を介して、ＴＮＴ−ＣＡＲ細胞を濃縮するために、ＵＳＣのフローサイトメトリーコア施設へと移送する。細胞分取は、ＢＤ  ＦＡＣＳＡｒｉａ（商標）ＩＩ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ；Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ、ＮＪ）を使用して、コア施設の職員が実施する。誘導性ＩＬ−１２−ＬＥＣ含有細胞を濃縮するために、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）レポーター遺伝子を、形質導入細胞のポジティブ選択のために使用する。
【０２７３】
誘導性遺伝子の誘導についてのアッセイ
ＣＡＲ  ＮＦＡＴ細胞の刺激
ＣＡＲ  ＮＦＡＴ細胞を、完全培地中、１ｍＬ当たりの細胞０．５〜５．０×１０５個の範囲の密度で播種する。ＮＦＡＴ遺伝子を誘導するため、以下の条件のうちの１つを実施する：標的細胞または標的抗原を、１：１のＣＡＲ−ＮＦＡＴ対標的細胞比で添加するか；細胞は、イオノマイシン（５００ｎｇ／ｍＬ）を加えた、１〜２％のＰＨＡもしくはＰＭＡ（最終濃度：１０ｎｇ／ｍＬ）で刺激するか；または細胞に、所与の希釈剤対照を施す。一晩にわたるインキュベーション後、ＣＡＲ−ＮＦＡＴ細胞または上清を、下流の解析のために採取する。
【０２７４】
フローサイトメトリー
採取された細胞を、遠心分離により、ＰＢＳ中で、２回洗浄する。その後、細胞を、ＰＢＳ  ２％  ＦＣＳ中に再懸濁させ、ＣＡＲ細胞（すなわち、抗ｓｃＦｖ、抗ＣＤ３）および標的細胞抗原（例えば、抗ＣＤ１９）に対する蛍光抗体によるその後の染色のために、ＦｃＲブロッキングを施す。４℃で１時間にわたるインキュベーションの後、細胞を、ＰＢＳ  ２％  ＦＣＳ中で洗浄し、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ａｔｔｕｎｅ（登録商標）Ａｃｏｕｓｔｉｃ  Ｆｏｃｕｓｉｎｇ  Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒを使用して、誘導された遺伝子発現について解析する。
【０２７５】
ＬＥＣおよびＩＬ−１２についてのＥＬＩＳＡ
刺激された細胞を遠心分離し、上清を、適正な捕捉抗体（下記の表を参照されたい）でコーティングされた９６ウェルプレートへと移す。４℃で一晩にわたるインキュベーションの後、ＥＬＩＳＡプレートを、ＰＢＳ／０．０５％  Ｔｗｅｅｎ−２０中で洗浄し、次いで、コンジュゲートさせた、適切なビオチン化検出抗体でプローブする。その後、プレートを、ストレプトアビジン−ＨＲＰと共にインキュベートし、ＴＭＢ基質（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ；Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）を使用して発色させる。発色性のＴＭＢ反応は、１ＭのＨ２ＳＯ４により停止させる。４５０ｎｍにおける吸光度を、ＢｉｏＴｅｋ製のＳｙｎｅｒｇｙ  ＨＴマイクロプレートリーダー（ＢｉｏＴｅｋ；Ｗｉｎｏｏｓｋｉ、ＶＴ）上で測定する。
【表３】
2018518459.tif 000006
【０２７６】
均等物
そうでないことが規定されない限りにおいて、本明細書で使用される全ての科学技術用語は、本技術が属する技術分野の当業者により一般に理解される意味と同じ意味を有する。
【０２７７】
本明細書で例示的に記載される本技術は、本明細書では具体的に開示されない、任意の１または複数の要素、１または複数の限定の非存在下で、適切に実施することができる。したがって、例えば、「〜を含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「〜を含むこと（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「〜を含有すること」などの用語は、広く、限定を伴わずに読み取られるべきものである。加えて、本明細書で利用される用語および表現は、限定的な用語ではなく、記載的な用語として使用されており、このような用語および表現の使用において、示され、記載される特徴の、任意の均等物またはそれらの部分を除外する意図は存在しないが、特許請求される本技術の範囲内では、多様な改変が可能であることが認識されている。
【０２７８】
したがって、本明細書で提示される材料、方法、および例は、好ましい態様を表すものであり、例示的なものであり、本技術の範囲に対する限定として意図されるものではないことを理解すべきである。
【０２７９】
本明細書では、本技術について、広く、かつ、一般的に記載してきた。一般的開示の中に収まるより狭い種および亜属的群分けの各々もまた、本技術の一部を形成する。これは、本技術についての一般的記載であって、排除される材料が、本明細書で具体的に列挙されるのかどうかに関わらず、任意の対象物を属から除外する条件または否定的限定を伴う記載を含む。
【０２８０】
加えて、マーカッシュ群との関係で、本技術の特徴または態様について記載する場合、当業者は、本技術が、これにより、マーカッシュ群の任意の個々のメンバーまたはメンバーの亜群との関係でもまた記載されることを認識するであろう。
【０２８１】
本明細書で言及される、全ての刊行物、特許出願、特許、および他の参考文献は、各々が参照により個別に組み込まれた場合と同じ程度に、参照によりそれらの全体において明示的に組み込まれる。矛盾する場合は、定義を含む本明細書が支配する。
【０２８２】
他の態様は、以下の特許請求の範囲において明示される。
配列表
ＴＮＴ−１  ＣＤＨＲ１、配列番号１：
ＧＦＳＬＴＤＹＧ
ＴＮＴ−１  ＣＤＨＲ２、配列番号２：
ＩＷＧＧＧＳＴ
ＴＮＴ−１  ＣＤＨＲ３、配列番号３：
ＡＫＥＫＲＲＧＹＹＹＡＭＤＹ
ＴＮＴ−１  ＣＤＬＲ１、配列番号４：
ＳＳＶＳＳＳＹ
ＴＮＴ−１  ＣＤＬＲ２、配列番号５：
ＳＴＳ
ＴＮＴ−１  ＣＤＬＲ３、配列番号６：
ＱＱＹＳＧＹＰＬＴ
ＴＮＴ−１の重鎖可変領域配列、配列番号７：
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＡＡＧＧＡＧＴＣＡＧＧＡＣＣＴＧＧＣＣＴＧＧＴＧＧＣＧＣＣＣＴＣＡＣＡＧＡＧＣＣＴＧＴＣＣＡＴＣＡＣＡＴＧＣＡＣＴＧＴＣＴＣＡＧＧＧＴＴＣＴＣＡＴＴＡＡＣＣＧＡＣＴＡＴＧＧＴＧＴＡＡＧＧＴＧＧＡＴＴＣＧＣＣＡＧＣＣＴＣＣＡＧＧＡＡＡＧＧＧＴＣＴＧＧＡＧＴＧＧＣＴＧＧＧＡＧＴＡＡＴＡＴＧＧＧＧＴＧＧＴＧＧＡＡＧＣＡＣＡＴＡＣＴＡＴＡＡＴＴＣＡＧＣＴＣＴＣＡＡＡＴＣＣＡＧＡＣＴＧＡＧＣＡＴＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＡＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＣＡＡＧＴＴＴＴＣＴＴＡＡＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＴＣＴＧＣＡＡＡＣＴＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＣＣＡＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＴＧＣＣＡＡＡＧＡＧＡＡＡＣＧＧＡＧＧＧＧＧＴＡＴＴＡＣＴＡＴＧＣＴＡＴＧＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＴＣＡＡＧＧＡＡＣＣＴＣＡＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
ＴＮＴ−１の軽鎖可変領域配列、配列番号８：
ＧＧＡＧＡＡＡＡＴＧＴＧＣＴＣＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＧＣＡＡＴＣＡＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＣＣＡＧＧＧＧＡＡＡＡＧＧＴＣＡＣＣＡＴＧＡＣＣＴＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＣＴＣＡＡＧＴＧＴＡＡＧＴＴＣＣＡＧＴＴＡＣＴＴＧＣＡＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＧＴＣＡＧＧＴＧＣＣＴＣＣＣＣＣＡＡＡＣＴＣＴＧＧＡＴＴＴＡＴＡＧＣＡＣＡＴＣＣＡＡＣＴＴＧＧＣＴＴＣＴＧＧＡＧＴＣＣＣＴＧＣＴＣＧＣＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＧＴＣＴＧＧＧＡＣＣＴＣＴＴＡＣＴＣＴＣＴＣＡＣＡＡＴＣＡＧＣＡＧＴＧＴＧＧＡＧＧＣＴＧＡＡＧＡＴＧＣＴＧＣＣＡＣＴＴＡＴＴＡＣＴＧＣＣＡＧＣＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＴＴＡＣＣＣＡＣＴＣＡＣＧＴＴＣＧＧＡＧＧＧＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＡＡＡＡ
ＴＮＴ−２  ＣＤＨＲ１、配列番号９：
ＧＹＳＦＴＧＹＹ
ＴＮＴ−２  ＣＤＨＲ２、配列番号１０：
ＩＮＰＹＮＧＡＴ
ＴＮＴ−２  ＣＤＨＲ３、配列番号１１：
ＡＲＬＤＲＧＤＹ
ＴＮＴ−２  ＣＤＬＲ１、配列番号１２：
ＥＮＶＶＴＹ
ＴＮＴ−２  ＣＤＬＲ２、配列番号１３：
ＧＡＳ
ＴＮＴ−２  ＣＤＬＲ３、配列番号１４：
ＧＱＧＹＳＹＰＹＴ
ＴＮＴ−２の重鎖可変領域配列、配列番号１５：
ＧＡＧＧＴＡＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＡＧＴＣＴＧＧＡＣＣＴＧＡＧＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣＣＴＧＧＧＧＣＴＴＣＡＧＴＧＡＡＧＡＴＡＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＴＴＡＣＴＣＡＴＴＣＡＣＴＧＧＣＴＡＣＴＡＣＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＧＣＡＡＡＧＣＣＡＴＧＴＡＡＡＧＡＧＣＣＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴＴＧＧＡＣＧＴＡＴＴＡＡＴＣＣＴＴＡＣＡＡＴＧＧＴＧＣＴＡＣＴＡＧＣＴＡＣＡＡＣＣＡＧＡＡＴＴＴＣＡＡＧＧＡＣＡＡＧＧＣＣＡＧＣＴＴＧＡＣＴＧＴＡＧＡＴＡＡＧＴＣＣＴＣＣＡＧＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＧＣＴＣＣＡＣＡＧＣＣＴＧＡＣＡＴＣＴＧＡＧＧＡＣＴＣＴＧＣＡＧＴＣＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＡＡＧＡＣＴＡＧＡＣＣＧＧＧＧＧＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＴＣＡＡＧＧＡＡＣＣＴＣＡＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
ＴＮＴ−２の軽鎖可変領域配列、配列番号１６：
ＡＡＣＡＴＴＧＴＡＡＴＧＡＣＣＣＡＡＴＣＴＣＣＣＡＡＡＴＣＣＡＴＧＴＣＣＡＴＧＴＣＡＧＴＡＧＧＡＧＡＧＡＧＧＧＴＣＡＣＣＴＴＧＡＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＣＡＧＴＧＡＧＡＡＴＧＴＧＧＴＴＡＣＴＴＡＴＧＴＴＴＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＡＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＡＧＣＡＧＴＣＴＣＣＴＡＡＡＣＴＧＣＴＧＡＴＡＴＡＣＧＧＧＧＣＡＴＣＣＡＡＣＣＧＧＴＡＣＡＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＣＧＡＴＣＧＣＴＴＣＡＣＡＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＣＡＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＧＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＴＧＴＧＣＡＧＧＣＴＧＡＡＧＡＣＣＴＴＧＣＡＧＡＴＴＡＴＣＡＣＴＧＴＧＧＡＣＡＧＧＧＴＴＡＣＡＧＣＴＡＴＣＣＧＴＡＣＡＣＧＴＴＣＧＧＡＧＧＧＧＧＧＡＣＡＡＡＧＴＴＧＧＡＡＡＴＡＡＡＡＣＧＴＡＣＧ
ＴＮＴ−３  ＣＤＨＲ１、配列番号１７：
ＧＹＴＦＴＲＹＷ
ＴＮＴ−３  ＣＤＨＲ２、配列番号１８：
ＩＹＰＧＮＳＤＴ
ＴＮＴ−３  ＣＤＨＲ３、配列番号１９：
ＡＲＧＥＥＩＧＶＲＲＷＦＡＹ
ＴＮＴ−３  ＣＤＬＲ１、配列番号２０：
ＱＳＩＳＮＹ
ＴＮＴ−３  ＣＤＬＲ２、配列番号２１：
ＹＡＳ
ＴＮＴ−３  ＣＤＬＲ３、配列番号２２：
ＱＱＳＮＳＷＰＬＴ
ＴＮＴ−３の重鎖可変領域配列、配列番号２３：
ＣＡＧＧＴＣＣＡＡＣＴＧＣＡＧＣＡＧＴＣＡＧＧＡＧＣＴＧＡＡＣＴＧＧＴＣＡＡＧＡＣＴＧＧＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＡＧＡＴＧＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＣＴＡＣＡＣＣＴＴＴＡＣＣＡＧＡＴＡＣＴＧＧＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＡＡＡＡＣＡＧＡＧＧＣＣＴＧＧＡＣＡＧＧＣＴＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＴＧＧＣＧＣＴＡＴＴＴＡＴＣＣＴＧＧＡＡＡＴＡＧＴＧＡＴＡＣＴＡＧＣＴＡＣＴＡＣＣＡＧＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＧＣＡＡＧＧＣＣＡＡＡＣＴＧＡＣＴＧＣＡＧＴＣＡＣＡＴＣＴＧＣＣＡＧＣＡＣＴＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＧＣＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＣＡＴＣＴＧＡＧＧＡＣＴＣＴＧＣＣＧＴＣＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＡＡＧＡＧＧＧＧＡＧＧＡＡＡＴＡＧＧＧＧＴＡＣＧＡＣＧＣＴＧＧＴＴＴＧＣＴＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＴＣＴＧＧＴＣＡＣＴＧＴＣＴＣＴＧＣＡ
ＴＮＴ−３の軽鎖可変領域配列、配列番号２４：
ＧＡＴＡＴＴＧＴＧＣ  ＴＡＡＣＴＣＡＧＴＣ  ＴＣＣＡＧＣＣＡＣＣ  ＣＴＧＴＣＴＧＴＧＡ  ＣＴＣＣＡＧＧＡＧＡ  ＴＡＧＡＧＴＣＡＧＴ  ＣＴＴＴＣＣＴＧＣＡ  ＧＧＧＣＣＡＧＧＣＡ  ＡＡＧＴＡＴＴＡＧＣ  ＡＡＣＴＡＣＣＴＡＣ  ＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡ  ＡＣＡＡＡＡＡＴＣＡ  ＣＡＴＧＡＧＴＣＴＣ  ＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴ  ＣＡＴＣＡＡＧＴＡＴ  ＧＣＴＴＣＣＣＡＧＴ  ＣＣＡＴＣＴＣＴＧＧ  ＣＡＴＣＣＣＣＴＣＣ  ＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧ  ＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣ  ＡＧＧＧＡＣＡＧＡＴ  ＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡ  ＧＴＡＴＣＡＡＣＡＧ  ＴＧＴＧＧＡＧＡＣＴ  ＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧ  ＧＡＡＴＧＴＡＴＴＴ  ＣＴＧＴＣＡＡＣＡＧ  ＡＧＴＡＡＣＡＧＣＴ  ＧＧＣＣＧＣＴＣＡＣ  ＧＴＴＣＧＧＴＧＣＴ  ＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣ  ＴＧＧＡＡＡＴＡＡＡ  Ａ
ＮＨＳ７６  ＣＤＨＲ１、配列番号２５：
ＳＧＹＹＷＧ
ＮＨＳ７６  ＣＤＨＲ２、配列番号２６：
ＳＩＹＨＳＧＳＴＹＹＮＰＳＬＫＳ
ＮＨＳ７６  ＣＤＨＲ３、配列番号２７：
ＧＫＷＳＫＦＤＹ
ＮＨＳ７６  ＣＤＬＲ１、配列番号２８：
ＱＧＤＳＬＲＳＹＹＡＳ
ＮＨＳ７６  ＣＤＬＲ２、配列番号２９：
ＧＫＮＮＲＰＳ
ＮＨＳ７６  ＣＤＬＲ３、配列番号３０：
ＮＳＲＤＳＳＧＮＨＶＶ
ＮＨＳ７６の重鎖可変領域配列、配列番号３１：
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣ  ＴＧＣＡＧＧＡＧＴＣ  ＣＧＧＣＣＣＡＧＧＡ  ＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣ  ＣＴＴＣＧＧＡＧＡＣ  ＣＣＴＧＴＣＣＣＴＣ  ＡＣＣＴＧＣＧＣＴＧ  ＴＣＴＣＴＧＧＴＴＡ  ＣＴＣＣＡＴＣＡＧＣ  ＡＧＴＧＧＴＴＡＣＴ  ＡＣＴＧＧＧＧＣＴＧ  ＧＡＴＴＣＧＧＣＡＧ  ＣＣＣＣＣＡＧＧＧＡ  ＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡ  ＧＴＧＧＡＴＴＧＧＧ  ＡＧＴＡＴＣＴＡＴＣ  ＡＴＡＧＴＧＧＧＡＧ  ＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣ  ＡＡＣＣＣＧＴＣＣＣ  ＴＣＡＡＧＡＧＴＣＧ  ＡＧＴＣＡＣＣＡＴＡ  ＴＣＡＧＴＡＧＡＣＡ  ＣＧＴＣＣＡＡＧＡＡ  ＣＣＡＧＴＴＣＴＣＣ  ＣＴＧＡＡＧＣＴＧＡ  ＧＣＴＣＴＧＴＧＡＣ  ＣＧＣＣＧＣＡＧＡＣ  ＡＣＧＧＣＣＧＴＧＴ  ＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣ  ＡＡＧＡＧＧＧＡＡＧ  ＴＧＧＴＣＧＡＡＧＴ  ＴＴＧＡＣＴＡＴＴＧ  ＧＧＧＣＣＡＡＧＧＣ  ＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡ  ＣＣＧＴＣＴＣＴＴＣ  Ａ
ＮＨＳ７６の軽鎖可変領域配列、配列番号３２：
ＴＣＣＴＣＴＧＡＧＣ  ＴＧＡＣＴＣＡＧＧＡ  ＣＣＣＴＧＣＴＧＴＧ  ＴＣＴＧＴＧＧＣＣＴ  ＴＧＧＧＡＣＡＧＡＣ  ＡＧＴＣＡＧＧＡＴＣ  ＡＣＡＴＧＣＣＡＡＧ  ＧＡＧＡＣＡＧＣＣＴ  ＣＡＧＡＡＧＣＴＡＴ  ＴＡＴＧＣＡＡＧＣＴ  ＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡ  ＧＡＡＧＣＣＡＧＧＡ  ＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧ  ＴＡＣＴＴＧＴＣＡＴ  ＣＴＡＴＧＧＴＡＡＡ  ＡＡＣＡＡＣＣＧＧＣ  ＣＣＴＣＡＧＧＧＡＴ  ＴＣＣＡＧＡＣＣＧＡ  ＴＴＣＴＣＴＧＧＣＴ  ＣＣＡＧＣＴＣＡＧＧ  ＡＡＡＣＡＣＡＧＣＴ  ＴＣＣＴＴＧＡＣＣＡ  ＴＣＡＣＴＧＧＧＧＣ  ＴＣＡＧＧＣＧＧＡＡ  ＧＡＴＧＡＧＧＣＴＧ  ＡＣＴＡＴＴＡＣＴＧ  ＴＡＡＣＴＣＣＣＧＧ  ＧＡＣＡＧＣＡＧＴＧ  ＧＴＡＡＣＣＡＴＧＴ  ＧＧＴＡＴＴＣＧＧＣ  ＧＧＡＧＧＧＡＣＣＡ  ＡＧＣＴＧＡＣＣＧＴ  ＣＣＴＡ
ヒトＣＤ８アルファヒンジドメイン、配列番号３３：
ＰＡＫＰＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹ
マウスＣＤ８アルファヒンジドメイン、配列番号３４：
ＫＶＮＳＴＴＴＫＰＶＬＲＴＰＳＰＶＨＰＴＧＴＳＱＰＱＲＰＥＤＣＲＰＲＧＳＶＫＧＴＧＬＤＦＡＣＤＩＹ
ネコＣＤ８アルファヒンジドメイン、配列番号３５：
ＰＶＫＰＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＱＡＰＩＴＴＳＱＲＶＳＬＲＰＧＴＣＱＰＳＡＧＳＴＶＥＡＳＧＬＤＬＳＣＤＩＹ
ヒトＣＤ８アルファ膜貫通ドメイン、配列番号３６：
ＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴ
マウスＣＤ８アルファ膜貫通ドメイン、配列番号３７：ＩＷＡＰＬＡＧＩＣＶＡＬＬＬＳＬＩＩＴＬＩ
ラットＣＤ８アルファ膜貫通ドメイン、配列番号３８：ＩＷＡＰＬＡＧＩＣＡＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＩ
４−１ＢＢ共刺激性シグナル伝達領域、配列番号３９：
ＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬ
ＣＤ２８配列（配列番号４０）：
ＭＬＲＬＬＬＡＬＮＬ  ＦＰＳＩＱＶＴＧＮＫ  ＩＬＶＫＱＳＰＭＬＶ  ＡＹＤＮＡＶＮＬＳＣ  ＫＹＳＹＮＬＦＳＲＥ  ＦＲＡＳＬＨＫＧＬＤＳＡＶＥＶＣＶＶＹＧ  ＮＹＳＱＱＬＱＶＹＳ  ＫＴＧＦＮＣＤＧＫＬ  ＧＮＥＳＶＴＦＹＬＱ  ＮＬＹＶＮＱＴＤＩＹ  ＦＣＫＩＥＶＭＹＰＰＰＹＬＤＮＥＫＳＮＧ  ＴＩＩＨＶＫＧＫＨＬ  ＣＰＳＰＬＦＰＧＰＳ  ＫＰＦＷＶＬＶＶＶＧ  ＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶＲ  ＳＫＲＳＲＬＬＨＳＤ  ＹＭＮＭＴＰＲＲＰＧ  ＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡ  ＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳ  
ＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン（配列番号４１）：
ＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ  
“Ｂ７．１”  ＮＰ＿００５１８２．１、配列番号４２：
ＭＧＨＴＲＲＱＧＴＳ  ＰＳＫＣＰＹＬＮＦＦ  ＱＬＬＶＬＡＧＬＳＨ  ＦＣＳＧＶＩＨＶＴＫ  ＥＶＫＥＶＡＴＬＳＣ  ＧＨＮＶＳＶＥＥＬＡ  ＱＴＲＩＹＷＱＫＥＫ  ＫＭＶＬＴＭＭＳＧＤ  ＭＮＩＷＰＥＹＫＮＲ  ＴＩＦＤＩＴＮＮＬＳ  ＩＶＩＬＡＬＲＰＳＤ  ＥＧＴＹＥＣＶＶＬＫ  ＹＥＫＤＡＦＫＲＥＨ  ＬＡＥＶＴＬＳＶＫＡ  ＤＦＰＴＰＳＩＳＤＦ  ＥＩＰＴＳＮＩＲＲＩ  ＩＣＳＴＳＧＧＦＰＥ  ＰＨＬＳＷＬＥＮＧＥ  ＥＬＮＡＩＮＴＴＶＳ  ＱＤＰＥＴＥＬＹＡＶ  ＳＳＫＬＤＦＮＭＴＴ    ＮＨＳＦＭＣＬＩＫＹ  ＧＨＬＲＶＮＱＴＦＮ  ＷＮＴＴＫＱＥＨＦＰ  ＤＮＬＬＰＳＷＡＩＴ  ＬＩＳＶＮＧＩＦＶＩ  ＣＣＬＴＹＣＦＡＰＲ  ＣＲＥＲＲＲＮＥＲＬ  ＲＲＥＳＶＲＰＶ
“ＣＣＬ１９”  ＮＰ＿００６２６５．１、配列番号４３：
ＭＡＬＬＬＡＬＳＬＬ  ＶＬＷＴＳＰＡＰＴＬ  ＳＧＴＮＤＡＥＤＣＣ  ＬＳＶＴＱＫＰＩＰＧ  ＹＩＶＲＮＦＨＹＬＬ  ＩＫＤＧＣＲＶＰＡＶ  ＶＦＴＴＬＲＧＲＱＬ  ＣＡＰＰＤＱＰＷＶＥ  ＲＩＩＱＲＬＱＲＴＳ  ＡＫＭＫＲＲＳＳ
“ＣＣＬ２０”  
例は、ＮＰ＿００４５８２．１、配列番号４４：
ＭＣＣＴＫＳＬＬＬＡ  ＡＬＭＳＶＬＬＬＨＬ  ＣＧＥＳＥＡＡＳＮＦ  ＤＣＣＬＧＹＴＤＲＩ  ＬＨＰＫＦＩＶＧＦＴ  ＲＱＬＡＮＥＧＣＤＩ  ＮＡＩＩＦＨＴＫＫＫ  ＬＳＶＣＡＮＰＫＱＴ  ＷＶＫＹＩＶＲＬＬＳ  ＫＫＶＫＮＭ
およびＮＰ＿００１１２３５１８．１、配列番号４５：
ＭＣＣＴＫＳＬＬＬＡ  ＡＬＭＳＶＬＬＬＨＬ  ＣＧＥＳＥＡＳＮＦＤ  ＣＣＬＧＹＴＤＲＩＬ  ＨＰＫＦＩＶＧＦＴＲ  ＱＬＡＮＥＧＣＤＩＮ  ＡＩＩＦＨＴＫＫＫＬ  ＳＶＣＡＮＰＫＱＴＷ  ＶＫＹＩＶＲＬＬＳＫ  ＫＶＫＮＭ
を含む。
“ＣＤ４０Ｌ”  ＮＰ＿００００６５．１  、配列番号４６：
ＭＩＥＴＹＮＱＴＳＰ  ＲＳＡＡＴＧＬＰＩＳ  ＭＫＩＦＭＹＬＬＴＶ  ＦＬＩＴＱＭＩＧＳＡ  ＬＦＡＶＹＬＨＲＲＬ  ＤＫＩＥＤＥＲＮＬＨ  ＥＤＦＶＦＭＫＴＩＱ  ＲＣＮＴＧＥＲＳＬＳ  ＬＬＮＣＥＥＩＫＳＱ  ＦＥＧＦＶＫＤＩＭＬ  ＮＫＥＥＴＫＫＥＮＳ  ＦＥＭＱＫＧＤＱＮＰ  ＱＩＡＡＨＶＩＳＥＡ  ＳＳＫＴＴＳＶＬＱＷ  ＡＥＫＧＹＹＴＭＳＮ  ＮＬＶＴＬＥＮＧＫＱ  ＬＴＶＫＲＱＧＬＹＹ  ＩＹＡＱＶＴＦＣＳＮ  ＲＥＡＳＳＱＡＰＦＩ  ＡＳＬＣＬＫＳＰＧＲ  ＦＥＲＩＬＬＲＡＡＮ  ＴＨＳＳＡＫＰＣＧＱ  ＱＳＩＨＬＧＧＶＦＥ  ＬＱＰＧＡＳＶＦＶＮ  ＶＴＤＰＳＱＶＳＨＧ  ＴＧＦＴＳＦＧＬＬＫ  Ｌ
“ＣＤ１３７Ｌ”  ＮＰ＿００３８０２．１、配列番号４７：
ＭＥＹＡＳＤＡＳＬＤ  ＰＥＡＰＷＰＰＡＰＲ  ＡＲＡＣＲＶＬＰＷＡ  ＬＶＡＧＬＬＬＬＬＬ  ＬＡＡＡＣＡＶＦＬＡ  ＣＰＷＡＶＳＧＡＲＡ    ＳＰＧＳＡＡＳＰＲＬ  ＲＥＧＰＥＬＳＰＤＤ  ＰＡＧＬＬＤＬＲＱＧ  ＭＦＡＱＬＶＡＱＮＶ  ＬＬＩＤＧＰＬＳＷＹ  ＳＤＰＧＬＡＧＶＳＬ    ＴＧＧＬＳＹＫＥＤＴ  ＫＥＬＶＶＡＫＡＧＶ  ＹＹＶＦＦＱＬＥＬＲ  ＲＶＶＡＧＥＧＳＧＳ  ＶＳＬＡＬＨＬＱＰＬ  ＲＳＡＡＧＡＡＡＬＡ    ＬＴＶＤＬＰＰＡＳＳ  ＥＡＲＮＳＡＦＧＦＱ  ＧＲＬＬＨＬＳＡＧＱ  ＲＬＧＶＨＬＨＴＥＡ  ＲＡＲＨＡＷＱＬＴＱ  ＧＡＴＶＬＧＬＦＲＶ  ＴＰＥＩＰＡＧＬＰＳ  ＰＲＳＥ
“ＧＩＴＲＬ”  ＮＰ＿００５０８３．２、配列番号４８：
ＭＴＬＨＰＳＰＩＴＣ  ＥＦＬＦＳＴＡＬＩＳ  ＰＫＭＣＬＳＨＬＥＮ  ＭＰＬＳＨＳＲＴＱＧ  ＡＱＲＳＳＷＫＬＷＬ  ＦＣＳＩＶＭＬＬＦＬ  ＣＳＦＳＷＬＩＦＩＦ  ＬＱＬＥＴＡＫＥＰＣ  ＭＡＫＦＧＰＬＰＳＫ  ＷＱＭＡＳＳＥＰＰＣ  ＶＮＫＶＳＤＷＫＬＥ  ＩＬＱＮＧＬＹＬＩＹ    ＧＱＶＡＰＮＡＮＹＮ  ＤＶＡＰＦＥＶＲＬＹ  ＫＮＫＤＭＩＱＴＬＴ  ＮＫＳＫＩＱＮＶＧＧ  ＴＹＥＬＨＶＧＤＴＩ  ＤＬＩＦＮＳＥＨＱＶ    ＬＫＮＮＴＹＷＧＩＩ  ＬＬＡＮＰＱＦＩＳ
「ＧＭ−ＣＳＦ」である、ＵｎｉＰｒｏｔ参照番号：Ｐ０４１４１−ＣＳＦ２＿ＨＵＭＡＮ（配列番号４９）：
ＭＷＬＱＳＬＬＬＬＧ  ＴＶＡＣＳＩＳＡＰＡ  ＲＳＰＳＰＳＴＱＰＷ  ＥＨＶＮＡＩＱＥＡＲ  ＲＬＬＮＬＳＲＤＴＡ  ＡＥＭＮＥＴＶＥＶＩ  ＳＥＭＦＤＬＱＥＰＴ  ＣＬＱＴＲＬＥＬＹＫ  ＱＧＬＲＧＳＬＴＫＬ  ＫＧＰＬＴＭＭＡＳＨ  
ＹＫＱＨＣＰＰＴＰＥ  ＴＳＣＡＴＱＩＩＴＦ  ＥＳＦＫＥＮＬＫＤＦ  ＬＬＶＩＰＦＤＣＷＥ  ＰＶＱＥ
“ＩＬ−１２”  配列番号５０：
ＣＡＴＧＧＣＣＡＴＧ  ＴＧＴＣＡＴＣＡＧＣ  ＡＧＣＴＧＧＴＣＡＴ  ＣＡＧＣＴＧＧＴＴＣ  ＡＧＣＣＴＧＧＴＧＴ  ＴＣＣＴＧＧＣＣＡＧ  ＣＣＣＣＣＴＧＧＴＧ  ＧＣＣＡＴＣＴＧＧＧ  ＡＧＣＴＧＡＡＧＡＡ  ＡＧＡＣＧＴＧＴＡＣ  ＧＴＧＧＴＧＧＡＧＣ  ＴＧＧＡＣＴＧＧＴＡ  ＴＣＣＣＧＡＣＧＣＣ  ＣＣＴＧＧＣＧＡＧＡ  ＴＧＧＴＧＧＴＧＣＴ  ＧＡＣＣＴＧＣＧＡＣ  ＡＣＣＣＣＣＧＡＡＧ  ＡＧＧＡＣＧＧＣＡＴ  ＣＡＣＣＴＧＧＡＣＣ  ＣＴＧＧＡＣＣＡＧＡ  ＧＣＡＧＣＧＡＧＧＴ  ＧＣＴＧＧＧＣＡＧＣ  ＧＧＣＡＡＧＡＣＣＣ  ＴＧＡＣＣＡＴＣＣＡ  ＧＧＴＣＡＡＡＧＡＧ  ＴＴＣＧＧＣＧＡＣＧ  ＣＣＧＧＣＣＡＧＴＡ  ＣＡＣＣＴＧＣＣＡＣ  ＡＡＧＧＧＣＧＧＣＧ  ＡＡＧＴＧＣＴＧＴＣ  ＣＣＡＣＡＧＣＣＴＧ  ＣＴＧＣＴＧＣＴＧＣ  ＡＣＡＡＧＡＡＡＧＡ  ＧＧＡＴＧＧＣＡＴＣ  ＴＧＧＴＣＣＡＣＣＧ  ＡＣＡＴＣＣＴＧＡＡ  ＧＧＡＣＣＡＧＡＡＡ  ＧＡＧＣＣＣＡＡＧＡ  ＡＣＡＡＧＡＣＣＴＴ  ＣＣＴＧＣＧＧＴＧＣ  ＧＡＧＧＣＣＡＡＧＡ  ＡＣＴＡＣＡＧＣＧＧ  ＣＣＧＧＴＴＣＡＣＣ  ＴＧＴＴＧＧＴＧＧＣ  ＴＧＡＣＣＡＣＣＡＴ  ＣＡＧＣＡＣＣＧＡＣ  ＣＴＧＡＣＣＴＴＣＡ  ＧＣＧＴＧＡＡＧＡＧ  ＣＡＧＣＣＧＧＧＧＣ  ＡＧＣＡＧＣＧＡＣＣ  ＣＴＣＡＧＧＧＣＧＴ  ＧＡＣＣＴＧＣＧＧＡ  ＧＣＣＧＣＣＡＣＣＣ  ＴＧＡＧＣＧＣＣＧＡ  ＧＡＧＡＧＴＧＣＧＧ  ＧＧＣＧＡＣＡＡＣＡ  ＡＡＧＡＧＴＡＣＧＡ  ＧＴＡＣＡＧＣＧＴＣ  ＧＡＧＴＧＣＣＡＧＧ  ＡＡＧＡＴＡＧＣＧＣ  ＣＴＧＣＣＣＴＧＣＣ  ＧＣＣＧＡＧＧＡＡＡ  ＧＣＣＴＧＣＣＣＡＴ  ＣＧＡＧＧＴＧＡＴＧ  ＧＴＧＧＡＣＧＣＣＧ  ＴＧＣＡＣＡＡＧＣＴ  ＧＡＡＧＴＡＣＧＡＧ  ＡＡＣＴＡＣＡＣＣＴ  ＣＣＡＧＣＴＴＴＴＴ  ＣＡＴＣＣＧＧＧＡＣ  ＡＴＣＡＴＣＡＡＧＣ  ＣＣＧＡＣＣＣＣＣＣ  ＣＡＡＧＡＡＣＣＴＧ  ＣＡＧＣＴＧＡＡＧＣ  ＣＣＣＴＧＡＡＧＡＡ  ＣＡＧＣＣＧＧＣＡＧ  ＧＴＧＧＡＧＧＴＧＴ  ＣＣＴＧＧＧＡＧＴＡ  ＣＣＣＴＧＡＣＡＣＣ  ＴＧＧＴＣＣＡＣＣＣ  ＣＣＣＡＣＡＧＣＴＡ  ＣＴＴＣＡＧＣＣＴＧ  ＡＣＣＴＴＣＴＧＴＧ  ＴＧＣＡＧＧＴＧＣＡ  ＧＧＧＣＡＡＧＡＧＣ  ＡＡＧＣＧＧＧＡＧＡ  ＡＧＡＡＡＧＡＣＣＧ  ＧＧＴＧＴＴＣＡＣＣ  ＧＡＣＡＡＧＡＣＣＡ  ＧＣＧＣＣＡＣＣＧＴ  ＧＡＴＣＴＧＣＣＧＧ  ＡＡＧＡＡＣＧＣＣＡ  ＧＣＡＴＣＡＧＣＧＴ  ＧＣＧＧＧＣＣＣＡＧ  ＧＡＣＣＧＧＴＡＣＴ  ＡＣＡＧＣＡＧＣＴＣ  ＣＴＧＧＴＣＣＧＡＧ  ＴＧＧＧＣＣＡＧＣＧ  ＴＧＣＣＣＴＧＣＡＧ  ＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧ  ＧＧＣＧＧＡＧＧＡＡ  ＧＣＣＧＧＡＡＣＣＴ  ＧＣＣＣＧＴＧＧＣＴ  ＡＣＣＣＣＣＧＡＣＣ  ＣＣＧＧＣＡＴＧＴＴ  ＣＣＣＣＴＧＣＣＴＧ  ＣＡＣＣＡＣＡＧＣＣ  ＡＧＡＡＣＣＴＧＣＴ  ＧＣＧＧＧＣＣＧＴＧ  ＡＧＣＡＡＣＡＴＧＣ  ＴＧＣＡＧＡＡＧＧＣ  ＣＣＧＧＣＡＧＡＣＣ  ＣＴＧＧＡＡＴＴＣＴ  ＡＣＣＣＣＴＧＣＡＣ  ＣＡＧＣＧＡＧＧＡＡ  ＡＴＣＧＡＣＣＡＣＧ  ＡＧＧＡＣＡＴＣＡＣ  ＣＡＡＧＧＡＴＡＡＧ  ＡＣＣＡＧＣＡＣＣＧ  ＴＧＧＡＧＧＣＣＴＧ  ＣＣＴＧＣＣＣＣＴＧ  ＧＡＡＣＴＧＡＣＣＡ  ＡＧＡＡＣＧＡＧＡＧ  ＣＴＧＴＣＴＧＡＡＣ  ＴＣＴＣＧＧＧＡＧＡ  ＣＡＡＧＣＴＴＣＡＴ  ＣＡＣＣＡＡＣＧＧＣ  ＴＣＴＴＧＣＣＴＧＧ  ＣＣＡＧＣＡＧＡＡＡ  ＧＡＣＣＡＧＣＴＴＣ  ＡＴＧＡＴＧＧＣＣＣ  ＴＧＴＧＣＣＴＧＡＧ  ＣＡＧＣＡＴＣＴＡＣ  ＧＡＧＧＡＣＣＴＧＡ  ＡＧＡＴＧＴＡＣＣＡ  ＧＧＴＧＧＡＧＴＴＣ  ＡＡＧＡＣＣＡＴＧＡ  ＡＣＧＣＣＡＡＧＣＴ  ＧＣＴＧＡＴＧＧＡＣ  ＣＣＣＡＡＧＣＧＧＣ  ＡＧＡＴＣＴＴＣＣＴ  ＧＧＡＴＣＡＧＡＡＣ  ＡＴＧＣＴＧＧＣＣＧ  ＴＧＡＴＣＧＡＣＧＡ  ＧＣＴＧＡＴＧＣＡＧ  ＧＣＣＣＴＧＡＡＣＴ  ＴＣＡＡＣＡＧＣＧＡ  ＧＡＣＡＧＴＧＣＣＣ  ＣＡＧＡＡＧＴＣＣＡ  ＧＣＣＴＧＧＡＡＧＡ  ＧＣＣＣＧＡＣＴＴＣ  ＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡ  ＡＧＡＴＣＡＡＧＣＴ  ＧＴＧＣＡＴＣＣＴＣ  ＣＴＧＣＡＴＧＣＣＴ  ＴＣＣＧＧＡＴＣＣＧ  ＧＧＣＣＧＴＧＡＣＣ  ＡＴＣＧＡＣＣＧＧＧ  ＴＧＡＴＧＡＧＣＴＡ  ＣＣＴＧＡＡＣＧＣＣ  ＡＧＣＴＧＡＴＧＡＧ  Ｃ
“ＩＬ−２”  配列番号５１：
ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴ  ＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤ  ＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮ  ＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬ  ＴＦＫＦＹＭＰＫＫＡ  ＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥ  ＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬ  ＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬ  ＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮ  ＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥ  ＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥ  ＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲ  ＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳ  ＴＬＴ
“ＩＬ−１５”  配列番号５２  ．
ＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＫＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ
“ＩＬ−１８”  配列番号５３  ．
ＭＡＡＥＰＶＥＤＮＣＩＮＦＶＡＭＫＦＩＤＮＴＬＹＦＩＡＥＤＤＥＮＬＥＳＤＹＦＧＫＬＥＳＫＬＳＶＩＲＮＬＮＤＱＶＬＦＩＤＱＧＮＲＰＬＦＥＤＭＴＤＳＤＣＲＤＮＡＰＲＴＩＦＩＩＳＭＹＫＤＳＱＰＲＧＭＡＶＴＩＳＶＫＣＥＫＩＳＴＬＳＣＥＮＫＩＩＳＦＫ  ＥＭＮＰＰＤＮＩＫＤＴＫＳＤＩＩＦＦＱＲＳＶＰＧＨＤＮＫＭＱＦＥＳＳＳＹＥＧＹＦＬＡＣＥＫＥＲＤＬＦＫＬＩＬＫＫＥＤＥＬ  ＧＤＲＳＩＭＦＴＶＱＮＥＤ  
“ＩＬ−２１”    配列番号５４  ．    ＱＧＱＤＲＨＭＩＲＭＲＱＬＩＤＩＶＤＱＬＫＮＹＶＮＤＬＶＰＥＦＬＰＡＰＥＤＶＥＴＮＣＥＷＳＡＦＳＣＦＱＫＡＱＬＫＳＡＮＴＧＮＮＥＲＩＩＮＶＳＩＫＫＬＫＲＫＰＰＳＴＮＡＧＲＲＱＫＨＲＬＴＣＰＳＣＤＳＹＥＫＫＰＰＫＥＦＬＥＲＦＫＳＬＬＱＫＭＩＨＱＨＬＳＳＲＴＨＧＳＥＤＳ
“ＬＥＣ”  ＮＰ＿００４５８１．１、配列番号５５：
ＭＫＶＳＥＡＡＬＳＬ  ＬＶＬＩＬＩＩＴＳＡ  ＳＲＳＱＰＫＶＰＥＷ  ＶＮＴＰＳＴＣＣＬＫ  ＹＹＥＫＶＬＰＲＲＬ  ＶＶＧＹＲＫＡＬＮＣ  ＨＬＰＡＩＩＦＶＴＫ  ＲＮＲＥＶＣＴＮＰＮ  ＤＤＷＶＱＥＹＩＫＤ  ＰＮＬＰＬＬＰＴＲＮ  ＬＳＴＶＫＩＩＴＡＫ  ＮＧＱＰＱＬＬＮＳＱ
“ＯＸ４０Ｌ”  ＮＰ＿００３３１７．１、配列番号５６：
ＭＥＲＶＱＰＬＥＥＮ  ＶＧＮＡＡＲＰＲＦＥ  ＲＮＫＬＬＬＶＡＳＶ  ＩＱＧＬＧＬＬＬＣＦ  ＴＹＩＣＬＨＦＳＡＬ  ＱＶＳＨＲＹＰＲＩＱ  ＳＩＫＶＱＦＴＥＹＫ  ＫＥＫＧＦＩＬＴＳＱ  ＫＥＤＥＩＭＫＶＱＮ  ＮＳＶＩＩＮＣＤＧＦ  ＹＬＩＳＬＫＧＹＦＳ  ＱＥＶＮＩＳＬＨＹＱ  ＫＤＥＥＰＬＦＱＬＫ  ＫＶＲＳＶＮＳＬＭＶ  ＡＳＬＴＹＫＤＫＶＹ  ＬＮＶＴＴＤＮＴＳＬ  ＤＤＦＨＶＮＧＧＥＬ  ＩＬＩＨＱＮＰＧＥＦ  ＣＶＬ
ＮＦＡＴと相互作用するポリヌクレオチドの例（配列番号５７）：
ＧＧＡＧＧＡＡＡＡＡＣＴＧＴＴＴＣＡＴＡＣＡＧＡＡＧＧＣＧ    
ＮＦＡＴと相互作用するポリヌクレオチドの例（配列番号５８）：
ＡＧＧＡＡＡＡＡＣ
ヒンジドメイン：ＩｇＧ１重鎖ヒンジ配列、配列番号５９：
ＣＴＣＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＧ
膜貫通ドメイン：ＣＤ２８膜貫通領域、配列番号６０：
ＴＴＴＴＧＧＧＴＧＣＴＧＧＴＧＧＴＧＧＴＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＣＴＧＧＣＴＴＧＣＴＡＴＡＧＣＴＴＧＣＴＡＧＴＡＡＣＡＧＴＧＧＣＣＴＴＴＡＴＴＡＴＴＴＴＣＴＧＧＧＴＧ
細胞内ドメイン：４−１ＢＢ共刺激性シグナル伝達領域、配列番号６１：
ＡＡＡＣＧＧＧＧＣＡＧＡＡＡＧＡＡＡＣＴＣＣＴＧＴＡＴＡＴＡＴＴＣＡＡＡＣＡＡＣＣＡＴＴＴＡＴＧＡＧＡＣＣＡＧＴＡＣＡＡＡＣＴＡＣＴＣＡＡＧＡＧＧＡＡＧＡＴＧＧＣＴＧＴＡＧＣＴＧＣＣＧＡＴＴＴＣＣＡＧＡＡＧＡＡＧＡＡＧＡＡＧＧＡＧＧＡＴＧＴＧＡＡＣＴＧ
細胞内ドメイン：ＣＤ２８共刺激性シグナル伝達領域、配列番号６２：
ＡＧＧＡＧＴＡＡＧＡＧＧＡＧＣＡＧＧＣＴＣＣＴＧＣＡＣＡＧＴＧＡＣＴＡＣＡＴＧＡＡＣＡＴＧＡＣＴＣＣＣＣＧＣＣＧＣＣＣＣＧＧＧＣＣＣＡＣＣＣＧＣＡＡＧＣＡＴＴＡＣＣＡＧＣＣＣＴＡＴＧＣＣＣＣＡＣＣＡＣＧＣＧＡＣＴＴＣＧＣＡＧＣＣＴＡＴＣＧＣＴＣＣ
細胞内ドメイン：ＣＤ３ゼータシグナル伝達領域、配列番号６３：
ＡＧＡＧＴＧＡＡＧＴＴＣＡＧＣＡＧＧＡＧＣＧＣＡＧＡＣＧＣＣＣＣＣＧＣＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＡＡＣＣＡＧＣＴＣＴＡＴＡＡＣＧＡＧＣＴＣＡＡＴＣＴＡＧＧＡＣＧＡＡＧＡＧＡＧＧＡＧＴＡＣＧＡＴＧＴＴＴＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＣＧＴＧＧＣＣＧＧＧＡＣＣＣＴＧＡＧＡＴＧＧＧＧＧＧＡＡＡＧＣＣＧＡＧＡＡＧＧＡＡＧＡＡＣＣＣＴＣＡＧＧＡＡＧＧＣＣＴＧＴＡＣＡＡＴＧＡＡＣＴＧＣＡＧＡＡＡＧＡＴＡＡＧＡＴＧＧＣＧＧＡＧＧＣＣＴＡＣＡＧＴＧＡＧＡＴＴＧＧＧＡＴＧＡＡＡＧＧＣＧＡＧＣＧＣＣＧＧＡＧＧＧＧＣＡＡＧＧＧＧＣＡＣＧＡＴＧＧＣＣＴＴＴＡＣＣＡＧＧＧＴＣＴＣＡＧＴＡＣＡＧＣＣＡＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＴＡＣＧＡＣＧＣＣＣＴＴＣＡＣＡＴＧＣＡＧＧＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＴＣＧＣＴＡＡ
ＩＣＯＳ共刺激性シグナル伝達領域、配列番号６４：
ＡＣＡＡＡＡＡＡＧＡ  ＡＧＴＡＴＴＣＡＴＣ  ＣＡＧＴＧＴＧＣＡＣ  ＧＡＣＣＣＴＡＡＣＧ  ＧＴＧＡＡＴＡＣＡＴ  ＧＴＴＣＡＴＧＡＧＡ  ＧＣＡＧＴＧＡＡＣＡ  ＣＡＧＣＣＡＡＡＡＡ  ＡＴＣＣＡＧＡＣＴＣ  ＡＣＡＧＡＴＧＴＧＡ  ＣＣＣＴＡ
ＯＸ４０共刺激性シグナル伝達領域、配列番号６５：
ＡＧＧＧＡＣＣＡＧ  ＡＧＧＣＴＧＣＣＣＣ  ＣＣＧＡＴＧＣＣＣＡ  ＣＡＡＧＣＣＣＣＣＴ  ＧＧＧＧＧＡＧＧＣＡ  ＧＴＴＴＣＣＧＧＡＣ  ＣＣＣＣＡＴＣＣＡＡ  ＧＡＧＧＡＧＣＡＧＧ  ＣＣＧＡＣＧＣＣＣＡ  ＣＴＣＣＡＣＣＣＴＧ  ＧＣＣＡＡＧＡＴＣ
【図１】
2018518459.tif 000007
【図２−１】
2018518459.tif 000008
【図２−２】
2018518459.tif 000009
【図３】
2018518459.tif 000010
【図４】
2018518459.tif 000011
【図５】
2018518459.tif 000012
【図６】
2018518459.tif 000013
【図７】
2018518459.tif 000014
【図８】
2018518459.tif 000015
【図９】
2018518459.tif 000016
【図１０】
2018518459.tif 000017
【図１１】
2018518459.tif 000018
【配列表】
2018518459000001.xml
【手続補正書】
【提出日】平成29年12月29日(2017.12.29)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2018518459000001.app
【国際調査報告】
2018518459.tif 000029
2018518459.tif 000030
2018518459.tif 000031