(57)【要約】  本発明は、がん悪液質の処置のためのミオスタチンアンタゴニスト、および化学療法処置に起因するがん悪液質に関する。特に、ミオスタチンアンタゴニストであるビマグルマブは、体重減少を低下させることによるがん悪液質の処置において有益であることが見出された。本発明は、体重減少を低下させ、維持しもしくは増加させることによってがん悪液質を処置するための、または加齢関連状態を処置する際に使用するための、ミオスタチンアンタゴニストとｍＴＯＲインヒビターの組合せ物およびその使用にも関する。
2018537447.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）ＡｃｔＲＩＩ受容体インヒビターとｂ）化学療法剤とを含む組合せ物。
【請求項２】
同時の、個別のまたは連続した使用のための、請求項１に記載の組合せ物。
【請求項３】
ａ）ＡｃｔＲＩＩ受容体インヒビター、およびｂ）化学療法剤が、個別の形態である、請求項１または２に記載の組合せ物。
【請求項４】
ａ）が抗ＡｃｔＲＩＩ受容体抗体である、請求項１から３に記載の組合せ物。
【請求項５】
前記抗ＡｃｔＲＩＩ抗体がビマグルマブである、請求項１から４に記載の組合せ物。
【請求項６】
ｂ）が白金含有抗がん剤である、請求項１から５に記載の組合せ物。
【請求項７】
医薬品としての使用のための、前記請求項のいずれかに記載の組合せ物。
【請求項８】
がん悪液質の処置における使用のための（ａ）ＡｃｔＲＩＩ受容体インヒビターおよびｂ）化学療法剤を含む、請求項１から６に記載の組合せ物。
【請求項９】
がん悪液質の処置が体重減少の低下である、請求項８に記載の使用のための組合せ物。
【請求項１０】
がん悪液質の処置に使用するためのＡｃｔＲＩＩ受容体インヒビター。
【請求項１１】
がん悪液質が、化学療法剤を用いる処置に起因する、請求項１０に記載の使用のためのＡｃｔＲＩＩ受容体インヒビター。
【請求項１２】
がん悪液質を処置することが体重減少を低下させることである、請求項１０から１１に記載の使用のためのＡｃｔＲＩＩ受容体インヒビター。
【請求項１３】
患者におけるがんの無増悪期間の遅延における、請求項１０から１２に記載の使用のためのＡｃｔＲＩＩ受容体インヒビター。
【請求項１４】
がん悪液質の無増悪期間の遅延における、請求項１０から１２に記載の使用のためのＡｃｔＲＩＩ受容体インヒビター。
【請求項１５】
がん生存の延長における、請求項１０から１２に記載の使用のためのＡｃｔＲＩＩ受容体インヒビター。
【請求項１６】
前記ＡｃｔＲＩＩ受容体インヒビターが抗ＡｃｔＲＩＩ受容体抗体である、請求項１０から１５に記載の使用のためのＡｃｔＲＩＩ受容体インヒビター。
【請求項１７】
前記抗ＡｃｔＲＩＩ受容体抗体がビマグルマブである、請求項１６に記載の使用のためのＡｃｔＲＩＩ受容体インヒビター。
【請求項１８】
前記化学療法剤が白金含有抗がん剤である、請求項１１から１７に記載の使用のためのＡｃｔＲＩＩ受容体インヒビター。
【請求項１９】
ａ）ミオスタチンアンタゴニストとｂ）ｍＴＯＲインヒビターとを含む組合せ物。
【請求項２０】
前記ミオスタチンアンタゴニストがＡｃｔＲＩＩ受容体インヒビターである、請求項１９に記載の組合せ物。
【請求項２１】
前記ＡｃｔＲＩＩ受容体インヒビターが抗ＡｃｔＲＩＩ受容体抗体である、請求項２０に記載の組合せ物。
【請求項２２】
前記抗ＡｃｔＲＩＩ受容体抗体がビマグルマブである、請求項２１に記載の組合せ物。
【請求項２３】
前記ｍＴＯＲインヒビターがエベロリムスである、請求項１９から２２に記載の組合せ物。
【請求項２４】
医薬品として使用するための、請求項１９から２３に記載の組合せ物。
【請求項２５】
がん悪液質の処置に使用するための、請求項１９から２３に記載の組合せ物。
【請求項２６】
がん悪液質を処置することが体重減少を予防することである、請求項１９から２３に記載の組合せ物。
【請求項２７】
がん悪液質を処置することが体重を維持することである、請求項１９から２３に記載の組合せ物。
【請求項２８】
がん悪液質を処置することが体重を増加させることである、請求項１９から２３に記載の組合せ物。
【請求項２９】
前記療法剤が個別の医薬組成物中に存在する、請求項１から９に記載の、または請求項１９から２８に記載の使用のための組合せ物。
【請求項３０】
加齢関連状態の処置において使用するための、請求項１９から２３のいずれか１項に記載の組合せ物。
【請求項３１】
前記加齢関連状態が、サルコペニア、皮膚萎縮症、筋消耗、脳萎縮、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化症、肺気腫、骨粗鬆症、骨関節炎、高血圧症、勃起不全、認知症、ハンチントン病、アルツハイマー病、白内障、加齢黄斑変性症、前立腺がん、脳卒中、平均寿命の減少、腎機能障害、ならびに加齢性難聴、加齢関連可動性障害（例えば、虚弱）、認知機能低下、加齢関連認知症、記憶障害、腱硬直、心臓肥大ならびに収縮不全および拡張機能障害などの心機能不全、免疫老化、がん、肥満、ならびに糖尿病からなる群から選択される、請求項３０に記載の組合せ物。
【請求項３２】
化学療法剤で処置されるがん患者の無増悪生存の改善に使用するためのミオスタチンアンタゴニスト。
【請求項３３】
前記化学療法剤が、シスプラチンもしくはカルボプラチンなどの白金含有抗がん薬、またはエベロリムスなどのｍＴＯＲインヒビターである、請求項３２に記載の使用のためのミオスタチンアンタゴニスト。
【請求項３４】
前記ミオスタチンアンタゴニストがＡｃｔＲＩＩ受容体インヒビターである、請求項３２から３３に記載の使用のためのミオスタチンアンタゴニスト。
【請求項３５】
前記ＡｃｔＲＩＩ受容体インヒビターが抗ＡｃｔＲＩＩ受容体抗体である、請求項３４に記載の使用のためのミオスタチンアンタゴニスト。
【請求項３６】
前記抗ＡｃｔＲＩＩ受容体抗体がビマグルマブである、請求項３５に記載の使用のためのミオスタチンアンタゴニスト。
【請求項３７】
がん悪液質を有する対象を処置する方法であって、前記がん悪液質に対して有効である量でＡｃｔＲＩＩ受容体インヒビターを前記対象に投与することを含む方法。
【請求項３８】
がん悪液質が、化学療法剤を用いる処置に起因する、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記化学療法剤が白金含有抗がん剤である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
がん悪液質を処置することが体重減少を低下させることである、請求項３７から３９のいずれかに記載の方法。
【請求項４１】
がんを有する対象におけるがんの無増悪期間を遅延させる方法であって、がんの無増悪期間の遅延に有効である量でＡｃｔＲＩＩ受容体インヒビターを前記対象に投与することを含む方法。
【請求項４２】
がん悪液質を有する対象におけるがんの無増悪期間を遅延させる方法であって、がん悪液質の無増悪期間の遅延に有効である量でＡｃｔＲＩＩ受容体インヒビターを前記対象に投与することを含む方法。
【請求項４３】
対象のがん生存を延長する方法であって、がん生存の延長に有効である量でＡｃｔＲＩＩ受容体インヒビターを前記対象に投与することを含む方法。
【請求項４４】
前記ＡｃｔＲＩＩ受容体インヒビターが抗ＡｃｔＲＩＩ受容体抗体である、請求項３７から４４に記載の方法。
【請求項４５】
前記抗ＡｃｔＲＩＩ受容体抗体がビマグルマブである、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
がん悪液質を有する対象を処置する方法であって、ミオスタチンアンタゴニストおよびｍＴＯＲインヒビターを前記対象に投与することを含む方法。
【請求項４７】
加齢関連状態を有する対象を処置する方法であって、ミオスタチンアンタゴニストおよびｍＴＯＲインヒビターを前記対象に投与することを含む方法。
【請求項４８】
前記ミオスタチンアンタゴニストがＡｃｔＲＩＩ受容体インヒビターである、請求項４６から４７に記載の方法。
【請求項４９】
前記ＡｃｔＲＩＩ受容体インヒビターが抗ＡｃｔＲＩＩ受容体抗体である、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記抗ＡｃｔＲＩＩ受容体抗体がビマグルマブである、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記ｍＴＯＲインヒビターがエベロリムスである、請求項４６から５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記加齢関連状態が、サルコペニア、皮膚萎縮症、筋消耗、脳萎縮、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化症、肺気腫、骨粗鬆症、骨関節炎、高血圧症、勃起不全、認知症、ハンチントン病、アルツハイマー病、白内障、加齢黄斑変性症、前立腺がん、脳卒中、平均寿命の減少、腎機能障害、ならびに加齢性難聴、加齢関連可動性障害（例えば、虚弱）、認知機能低下、加齢関連認知症、記憶障害、腱硬直、心臓肥大ならびに収縮不全および拡張機能障害などの心機能不全、免疫老化、がん、肥満、ならびに糖尿病からなる群から選択される、請求項４６から５０に記載の方法。
【請求項５３】
前記使用または組合せ物のいずれかに従う処置の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、がん悪液質の処置における、ミオスタチンまたはアクチビンアンタゴニスト、特に、アクチビンＩＩ型（ＡｃｔＲＩＩ）受容体インヒビターの使用に関する。
【０００２】
本発明は、より詳細には、がん悪液質の処置における、同時の、個別のもしくは連続した使用のための、（ａ）アクチビンＩＩ型受容体（ＡｃｔＲＩＩ）インヒビターと（ｂ）化学療法剤または薬学的に許容されるその塩とを含む組合せ物、その使用、またはそれを使用して処置する方法に関する。
【０００３】
本開示は、ミオスタチンアンタゴニストとｍＴＯＲインヒビターの組合せ物およびその使用にも関する。このような組み合わせた使用は、がん悪液質における使用および加齢関連状態のためのものである。
【背景技術】
【０００４】
悪液質は、進行がんを有する患者の大多数に影響を及ぼし、転帰不良、処置忍容性の低下、治療への応答、生活の質および生存期間に関連する。骨格筋の減少は、がん悪液質において最も重要な事象であるようであり、従来の栄養サポートでは完全に元に戻すことはできない［Fearon et al 2011, Tan et al 2009］。最近、異所性肺および結腸がんのマウスモデルにおいて、モノクローナル抗体を用いる直接的なミオスタチン阻害および可溶性ＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃを使用する間接的な阻害によって筋消耗から保護され、さらには生存が延長されることが示された［Benny Klimek et al 2010, Busquets et al 2012, Murphy et al 2011, Zhou et al 2010］。
【０００５】
ミオスタチン、アクチビンＡ、および成長分化因子１１（ＧＤＦ−１１）を含むトランスフォーミング成長因子ベータ（ＴＧＦ−β）スーパーファミリーのいくつかのメンバーは、ライフサイクルを通して、動物およびヒトの骨格筋質量をネガティブに調節することが知られている。ミオスタチンシグナル伝達の機構は、いくつかの下流経路の活性化に起因して複雑である［Elkina et al 2011］。ミオスタチン、アクチビンおよびＧＤＦ−１１は、アクチビンＩＩ型受容体（ＡｃｔＲＩＩ）に結合し、アクチビンＩ型受容体との集合を誘導する。動物およびヒトの発達におけるミオスタチンが存在しないと、筋肉線維の数および大きさの増加を伴う過剰筋肉の表現型がもたらされる［Lee and McPherron 2001, Schuelke et al 2004］。同様に、成体動物におけるミオスタチン作用の阻害によって筋質量が増加し、このことは、ミオスタチンが成体期の骨格筋質量も抑えることを示唆する［Whittemore et al 2003, Lee et al 2005, Nakatani et al 2008］。これに対して、高レベルのミオスタチンまたはアクチビンＡは、悪液質とそれに続く筋消耗を促進することが報告されている［Zimmers et al, 2002; Chen et al, 2014］。
【０００６】
国際公開第０７／０６７６１６号パンフレットは、５−フルオロウラシルで処置した正常マウスにおいて、ペプチド結合ミオスタチンなどのミオスタチン結合剤の投与によって重量減少が低下されることを示す。しかし、国際公開第０７／０６７６１６号パンフレットは、本開示により実証されるように、抗がん剤を使用する処置を用いない、または用いるかのいずれかで、ＣＴ−２６などの腫瘍担持モデルのマウスにおいて、ペプチド結合ミオスタチンが体重減少を低下させるかまたは体重を増加させるのかを示してはいない。
【０００７】
ビマグルマブは、天然リガンドであるミオスタチンとアクチビンＡよりも高い親和性でＡｃｔＲＩＩに競合的に結合するよう開発された、ヒトモノクローナル抗体である。ビマグルマブは、マウスにおいて、骨格筋肥大を誘導し、デキサメタゾンにより誘導された萎縮から保護し［Lach-Trifilieff et al 2014］、重大な有害事象を引き起こさず、孤発性封入体筋炎を患っている患者の疾患状態を改善することが示されている［Amato et al 2014］。可溶性受容体アンタゴニストを使用するＡｃｔＲＩＩ経路の薬理学的遮断によって、マウスにおいて、がんにより誘導された悪液質から保護されることが示された［Busquets et al 2012, Zhou et al 2010］が、進行がんを有する悪液質の患者は、標準治療として特異的がん型に対する抗がん剤をおそらく受けるであろうし、ＡｃｔＲＩＩ阻害が、抗がん剤と組み合わせた場合に有効なままであるか否かは未だ解明されていない。
【０００８】
本発明によれば、マウスにおいて、免疫原性のリスクを低下させ、長期プロファイリング研究を可能にする一方で、ビマグルマブの結合、選択性および効力プロファイルを保持することが示されるビマグルマブのキメラマウスバージョンの効果をＣＴ−２６マウスの結腸がん悪液質モデルで評価し、ビマグルマブと化学療法の間の相互作用を明らかにした。さらに、中和Ａｂであるビマグルマブの使用を介するアクチビンＩＩ型受容体レベルでの介入は、循環するリガンドの遮断（抗ミオスタチンＡｂまたは可溶性ＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃ）を通じて先に報告されている通り、がんにより誘導された悪液質から保護するのに有効である。
【０００９】
白金ベースの薬物、例えばシスプラチンは、非常に非特異的な方式でＤＮＡ複製を妨げ、典型的に、第一選択療法として使用される、細胞傷害性の挿入剤である。困ったことに、シスプラチンは、副作用として、体重および筋重量の減少を早めることが示されてきた。したがって、本発明者らは、まず、筋消耗に関するシスプラチンが媒介する作用に対抗する際にビマグルマブの潜在力を評価することを目的とした。次いで、フォローアップ研究では、がん悪液質に関する、ラパマイシンの哺乳動物標的（ｍＴＯＲ）を阻害する、新世代の、細胞傷害性の低い分子標的剤である、ビマグルマブおよびエベロリムスのより頻度の高い投与の影響を評価した。
【００１０】
さらに、筋質量が減少し、それに伴って体内全水分量が減少すると（悪液質の病態生理の一部として）、化学療法剤の分布体積がより少なくなる［Parsons 2012］。このことは、順に、これらの細胞傷害性薬剤が高濃度（ＣｍａｘおよびＡＵＣ）となる原因となり、悪液質のないがん患者より悪液質の患者において、より有害な事象と乏しい化学療法忍容性をもたらす［Sjoblom 2015, Arrieta 2015］。この発明から明らかになるのは、この発明によって、がん悪液質を有する患者において、抗がん処置だけを用いるよりも、より良好な化学療法忍容性、より有効な抗がん処置、およびより良好な転帰（無増悪生存および全生存を含む）をもたらすことができるということである。
【００１１】
現在、がん悪液質に対する標準処置は存在しない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
したがって、化学療法剤を用いる処置を用いても用いなくても、特に、ｍＴＯＲインヒビターを用いて、がんの文脈における体重減少を低下させるかまたは妨げる、またはさらには体重を増加させることができる薬物療法が強く望まれる。
【００１３】
さらに、ミオスタチンまたはアクチビンアンタゴニストと本開示によるｍＴＯＲインヒビターの組合せ物は、加齢関連状態を処置する潜在力も有する。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
したがって、本開示の第１の主題は、がん悪液質を処置するためのＡｃｔＲＩＩ受容体インヒビターと化学療法剤の組合せ物に関する。
【００１５】
したがって、本開示の別の主題は、ミオスタチン結合分子またはＡｃｔＲＩＩ結合分子であってもよい、がん悪液質を処置するための方法またはミオスタチンもしくはアクチビンアンタゴニストを含む組成物の使用に関する。
【００１６】
本開示によれば、マウスにおいて、免疫原性のリスクを低下させ、長期プロファイリング研究を可能にする一方で、ビマグルマブの結合、選択性および効力プロファイルを保持することが示されるビマグルマブのキメラマウスバージョンの効果をＣＴ−２６マウスの結腸がん悪液質モデルで評価し、ビマグルマブと化学療法の間の相互作用を明らかにした。さらに、中和Ａｂであるビマグルマブの使用を介するアクチビンＩＩ型受容体レベルでの介入は、循環するリガンドの遮断（抗ミオスタチンＡｂまたは可溶性ＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃ）を通じて先に報告されている通り、がんにより誘導された悪液質から保護するのに有効である。
【００１７】
白金ベースの薬物、例えばシスプラチンは、非常に非特異的な方式でＤＮＡ複製を妨げ、典型的に、第一選択療法として使用される、細胞傷害性の挿入剤である。困ったことに、シスプラチンは、副作用として、体重および筋重量の減少を早めることが示されてきた。まず、筋消耗に関するシスプラチンが媒介する作用に対抗する際にビマグルマブの潜在力を評価することを目的とした。次いで、フォローアップ研究では、がん悪液質に関する、ラパマイシンの哺乳動物標的（ｍＴＯＲ）を阻害する、新世代の、細胞傷害性の低い分子標的剤であるビマグルマブおよびエベロリムスのより頻度の高い投与の影響を評価した。
【００１８】
筋肉の調節およびＡｃｔＲＩＩ受容体
ミオスタチン、アクチビンＡ、および成長分化因子１１（ＧＤＦ１１）を含むトランスフォーミング成長因子ベータ（ＴＧＦ−β）スーパーファミリーのいくつかのメンバーは、ライフサイクルを通して、動物およびヒトの骨格筋質量をネガティブに調節する。リガンドシグナル伝達がＩＩ型アクチビン受容体を介して起こり（ＡｃｔＲＩＩＡおよびＢの両方、ならびにＳｍａｄ２／３経路）、筋肉タンパク質の合成ならびに筋細胞の分化および増殖を阻害する。動物およびヒトの発達においてこれらのリガンドのいずれも存在しなければ、筋肉線維の数および大きさの増加を伴う過剰筋肉の表現型がもたらされる。産後にミオスタチンレベルが低下すると、既存の筋線維の大きさが増加することによる骨格筋肥大が生じる（Lee et al 2005; Lee et al 2010; Trendelenburg et al 2012）。したがって、受容体レベルでこのシグナル伝達経路を撹乱することによって筋成長をモジュレートする能力は、直接的な抗ミオスタチンアプローチによって以前から認識されていたよりもかなり大きい。
【００１９】
「ミオスタチンアンタゴニスト」は、本明細書で使用する場合、ミオスタチンの機能、発現および／またはシグナル伝達を拮抗する（例えば、低下させる、阻害する、減少させる、遅延させる）ことができる分子を指す（例えば、ミオスタチンのミオスタチン受容体、すなわちＡｃｔＲＩＩＢへの結合を遮断することによる）。アンタゴニストの非限定例として、ミオスタチン結合分子およびＡｃｔＲＩＩ（ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢまたはＡｃｔＲＩＩＡ／Ｂ）受容体結合分子が挙げられる。本開示の方法、レジメン、キット、プロセス、使用および組成物の一部の実施形態では、ミオスタチンアンタゴニストが用いられる。
【００２０】
「ミオスタチン結合分子」とは、単独でまたは他の分子と会合して、ヒトミオスタチン抗原に結合することができる任意の分子を意味する。結合反応は、例えば、受容体へのミオスタチン結合の阻害を決定するための結合アッセイ、競合アッセイもしくはバイオアッセイ、または特異性は関連しないが、理想的には同じアイソタイプの抗体、例えば、抗ＣＤ２５抗体を使用する陰性対照試験を基準とする任意の種類の結合アッセイを含む標準方法（定性アッセイ）によって示されてもよい。ミオスタチン結合分子の非限定例として、Ｂ細胞またはハイブリドーマによって産生された、ミオスタチンに結合する小分子、ミオスタチン受容体デコイ、および抗体、ならびにキメラ、ＣＤＲグラフトもしくはヒト抗体またはその任意の断片、例えばＦ（ａｂ’）２およびＦａｂ断片、ならびに一本鎖または単一ドメイン抗体が挙げられる。好ましくは、ミオスタチン結合分子は、ミオスタチンの機能、発現および／またはシグナル伝達を拮抗する（例えば、低下させる、阻害する、減少させる、遅延させる）。本開示の方法、レジメン、キット、プロセス、使用および組成物の一部の実施形態では、ミオスタチン結合分子が用いられる。
【００２１】
「ＡｃｔＲＩＩ受容体インヒビター」とは、単独でまたは他の分子と会合して、ヒトＡｃｔＲＩＩ受容体（ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）に結合し、受容体のシグナル伝達を阻害することができる任意の分子を意味する。結合および阻害反応は、例えば、ミオスタチンへのＡｃｔＲＩＩ受容体結合の阻害を決定するための結合アッセイ、競合アッセイもしくはバイオアッセイ、または特異性は関連しないが、理想的には同じアイソタイプの抗体、例えば、抗ＣＤ２５抗体を使用する陰性対照試験を基準とする任意の種類の結合アッセイを含む標準方法（定性アッセイ）によって示されてもよい。ＡｃｔＲＩＩ受容体インヒビターの非限定例として、Ｂ細胞またはハイブリドーマによって産生された、ＡｃｔＲＩＩ受容体に対する小分子、ミオスタチンデコイ、および抗体、ならびにキメラ、ＣＤＲグラフトもしくはヒト抗体またはその任意の断片、例えばＦ（ａｂ’）２およびＦａｂ断片、ならびに一本鎖または単一ドメイン抗体が挙げられる。好ましくは、ＡｃｔＲＩＩ受容体結合分子は、ミオスタチン／アクチビンの機能、発現および／またはシグナル伝達を拮抗する（例えば、低下させる、阻害する、減少させる、遅延させる）。本開示の組合せ物、使用、方法および組成物の一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ受容体インヒビターが用いられる。
【００２２】
ビマグルマブ
本発明に従って使用される薬学的に活性な化合物であるビマグルマブは、筋質量の成長を制限する天然リガンド（ミオスタチンとアクチビンを含む）よりも高い親和性でアクチビン受容体ＩＩ型（ＡｃｔＲＩＩ）に競合的に結合するよう開発された完全ヒトモノクローナル抗体（改変されたＩｇＧ１、２３４−２３５−Ａｌａ−Ａｌａ、λ２）である。ビマグルマブは、ヒトおよびマウスのＡｃｔＲＩＩＡおよびＡｃｔＲＩＩＢと交差反応性であり、ヒト、カニクイザル、マウスおよびラットの骨格筋細胞に関して有効である。ビマグルマブは、極端に高い親和性（ＫＤ  １．７±０．３ｐＭ）でヒトＡｃｔＲＩＩＢと、比較的低い親和性（ＫＤ  ４３４±２５ｐＭ）でヒトＡｃｔＲＩＩＡと結合する。
【００２３】
本発明は、受容体ＡｃｔＲＩＩ（ＡｃｔＲＩＩＢおよび／またはＡｃｔＲＩＩＡ）へのミオスタチン結合を十分に遮断すると、受容体に作用する骨格筋成長を阻害するミオスタチンおよび他のリガンドの活性が顕著に低下し、一方、これらのリガンドの一部は、二次的な受容体を介して他の生理機能を実施できる（Upton et al 2009）という治療アプローチに基づいている。ミオスタチン活性を低下させる他のアプローチ、すなわち、可溶性受容体シンクをもたらす競合的可溶性ＡｃｔＲＩＩは、他の受容体において活性を有する一連のＡｃｔＲＩＩリガンドを枯渇させる可能性があり、ビマグルマブのような受容体アンタゴニスト抗体を使用するより大きな安全性リスクを生じる可能性がある。
【００２４】
他のアプローチとして、ＬＹ２４９５６５５（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）などのミオスタチンに結合する抗体の使用が挙げられ、これらは、次いで、ＡｃｔＲＩＩ受容体を介するシグナル伝達を阻害または低下させることになる。
【００２５】
ＡｃｔＲＩＩの強力なインヒビターとして、ビマグルマブは、ミオスタチン、アクチビンＡ、ＧＤＦ１１、そしておそらくは、この受容体を介して作用する他のリガンドの効果を遮断する。
【００２６】
したがって、本発明は、とりわけ、がん悪液質の処置における使用のための、ミオスタチンアンタゴニストまたはアクチビン（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢまたはアクチビンＡＢ）アンタゴニスト、好ましくはミオスタチン結合分子または抗体、より好ましくはインヒビターまたはより好ましくは抗ＡｃｔＲＩＩ受容体抗体、最も好ましくはビマグルマブを提供する。
【００２７】
以下に、添付の図面を参照して、本発明を詳細に記載する：
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１】ＣＴ−２６マウスの結腸がんにより誘導された悪液質において、体重（Ａ、Ｂ、Ｃ）、腫瘍体積（Ｄ）および重量（Ｅ）に関する、単独または組み合わせたシスプラチンとＣＤＤ８６６の効果を示すグラフである。値は、平均±ＳＥＭ（ｎ＝１０）として表す。体重のパーセント変化を０日目の処置開始と比較して算出した；＊：Ｐ＜０．０５、＊＊：Ｐ＜０．０１対非腫瘍対照；＆＆：Ｐ＜０．０１対ＣＴ−２６対照；＋＋：Ｐ＜０．０１対非腫瘍シスプラチン；＃＃：Ｐ＜０．０１対ＣＴ−２６シスプラチン（ＡＮＯＶＡ後のＳｉｄａｋ多重比較検定による）。
【図２】ＣＴ−２６マウスの結腸がんにより誘導された悪液質において、筋重量および無増悪期間に関する、単独または組み合わせたシスプラチンとＣＤＤ８６６の効果を示すグラフである。値は、平均±ＳＥＭ（ｎ＝１０）として表す。０日目の初期体重に対して正規化した筋重量のパーセント変化を非腫瘍対照（Ａ、Ｂ、Ｃ）と比較して算出した；＊：Ｐ＜０．０５、＊＊：Ｐ＜０．０１対非腫瘍対照；＆：Ｐ＜０．０５、＆＆：Ｐ＜０．０１対ＣＴ−２６対照；＋＋：Ｐ＜０．０１対非腫瘍シスプラチン；ｘｘ：Ｐ＜０．０１対非腫瘍ＣＤＤ８６６；＃＃：Ｐ＜０．０１対ＣＴ−２６シスプラチン；＄：Ｐ＜０．０５、＄＄：Ｐ＜０．０１対ＣＴ−２６ＣＤＤ８６６（ＡＮＯＶＡ後のＳｉｄａｋ多重比較検定による）。無増悪期間は、中断基準によって定義した％事象によって表し（Ｄ）；中断基準に達する前の経過日数の中央値は、最小から最大（ｎ＝１０）を有する箱ひげで表した（Ｅ）；＆：Ｐ＜０．０５、＆＆：Ｐ＜０．０１対ＣＴ−２６対照（ビヒクル１／ビヒクル２）（ＡＮＯＶＡ後のＤｕｎｎ多重比較検定による）。
【図３】ＣＴ−２６マウスの結腸がんにより誘導された悪液質において、体重（Ａ、Ｂ、Ｃ）、腫瘍体積（Ｄ）および重量（Ｅ）に関する、単独または組み合わせたエベロリムスとＣＤＤ８６６の効果を示すグラフである。値は、平均±ＳＥＭ（ｎ＝１０）として表す。体重のパーセント変化を０日目の処置開始と比較して算出した；＊：Ｐ＜０．０５、＊＊：Ｐ＜０．０１対非腫瘍対照；＆＆：Ｐ＜０．０１対ＣＴ−２６対照；＋＋：Ｐ＜０．０１対非腫瘍エベロリムス；＃＃：Ｐ＜０．０１対ＣＴ−２６エベロリムス（ＡＮＯＶＡ後のＳｉｄａｋ多重比較検定による）。
【図４】ＣＴ−２６マウスの結腸がんにより誘導された悪液質において、筋重量および無増悪期間に関する、単独または組み合わせたエベロリムスとＣＤＤ８６６の効果を示すグラフである。値は、平均±ＳＥＭ（ｎ＝１０）として表す。０日目の初期体重に対して正規化した筋重量のパーセント変化を非腫瘍対照（Ａ、Ｂ、Ｃ）と比較して算出した；＊：Ｐ＜０．０５、＊＊：Ｐ＜０．０１対非腫瘍対照；＆：Ｐ＜０．０５、＆＆：Ｐ＜０．０１対ＣＴ−２６対照；＋＋：Ｐ＜０．０１対非腫瘍エベロリムス；ｘｘ：Ｐ＜０．０１対非腫瘍ＣＤＤ８６６；＃＃：Ｐ＜０．０１対ＣＴ−２６エベロリムス；＄：Ｐ＜０．０５、＄＄：Ｐ＜０．０１対ＣＴ−２６ＣＤＤ８６６（ＡＮＯＶＡ後のＳｉｄａｋ多重比較検定による）。無増悪期間は、中断基準によって定義した％事象によって表し（Ｄ）；中断基準に達する前の経過日数の中央値は、最小から最大（ｎ＝１０）を有する箱ひげで表した（Ｅ）；＆：Ｐ＜０．０５、＆＆：Ｐ＜０．０１対ＣＴ−２６対照（ビヒクル１／ビヒクル２）（ＡＮＯＶＡ後のＤｕｎｎ多重比較検定による）。
【図５】ｍＴＯＲが老齢対若齢ラットの筋肉で過剰発現することを示す図である。１．ｍＴＯＲは老齢対若齢ラットの骨格筋で過活性である。２．老齢対若齢ラットの骨格筋において、ｍＴＯＲは絶食後に適切に下方調節されない。
【発明を実施するための形態】
【００２９】
本発明の詳細な説明
本発明は、対象のがん悪液質の処置のための、（ａ）アクチビン受容体ＩＩ型受容体インヒビターと（ｂ）化学療法剤、または薬学的に許容されるその塩とを含む組合せ物、および同時の、個別のもしくは連続した使用のためのその使用に関する。
【００３０】
本発明は、加齢関連状態を処置するための、（ａ）ミオスタチンまたはアクチビンアンタゴニストと（ｂ）ｍＴＯＲインヒビターの組合せ物にも関する。
【００３１】
この組合せ物は、固定されても固定されなくてもよく、好ましくは固定されない。
【００３２】
本明細書で使用する一般用語は、他で明確に記載されていなければ、以下の意味で定義される。
【００３３】
用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」および「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」は、他で注記されていなければ、オープンエンドかつ非限定的意味で本明細書において使用される。
【００３４】
用語「１つの（ａ）」および「１つの（ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」および類似の言及は、本発明を説明する文脈において（特に、以下の特許請求の範囲の文脈において）、本明細書において他で示されていないか、または文脈によって明確に否定されていなければ、単数および複数の両方を包含すると解釈されるべきである。複数形態が、化合物、塩などに対して使用される場合、単数の化合物、塩なども意味すると考えられる。
【００３５】
用語「組合せ物」または「併用医薬」は、１つの単位剤形の固定された組合せ物、固定されていない組合せ物、またはアクチビンＩＩ型受容体（ＡｃｔＲＩＩ）アンタゴニストもしくは遮断薬、および化学療法剤、もしくは薬学的に許容されるその塩が、その組合せパートナーが協調的な、例えば、相加的もしくは相乗的効果を示すことができる時間間隔内で、同時にもしくは個別にもしくは連続して、独立に投与されうる併用投与のためのキットオブパーツのいずれかを指すために本明細書で定義される。
【００３６】
用語「固定された組合せ物」は、活性成分または治療剤が、単一の実体または剤形の形態で、患者に同時に投与されることを意味する。
【００３７】
用語「固定されていない組合せ物」は、活性成分または治療剤が、両方、具体的な時間制限なく、同時に、併行してまたは順次のいずれかで、個別の実体または剤形として患者に投与され、このような投与が、それを必要とする対象、例えば、哺乳動物またはヒトの身体に治療有効レベルの３つの化合物をもたらすことを意味する。
【００３８】
好ましくは、本明細書において、用語「組合せ物」または「併用医薬」は固定されていない組合せ物である。
【００３９】
用語「医薬組成物」は、対象、例えば、哺乳動物またはヒトが罹患している特定の疾患または状態を処置するために、その対象に投与される少なくとも１つの治療剤を含有する混合物または溶液を指すために本明細書において定義される。
【００４０】
用語「薬学的に許容される」は、健全な医学的判断の範囲内で、対象、例えば、哺乳動物またはヒトの組織との接触に適しており、過度な毒性、刺激、アレルギー反応および他の問題となる合併症を有さず、合理的なベネフィット／リスク比に見合った、化合物、生物学的薬剤、材料、組成物および／または剤形を指すために本明細書において定義される。
【００４１】
用語「併用投与」は、本明細書で使用する場合、単一の対象、例えば、哺乳動物またはヒトへの選択された治療剤の投与を包含するために定義され、その治療剤が、同じ投与経路でまたは同時に必ずしも投与される訳ではない処置レジメンを含むことを意図する。
【００４２】
用語「処置すること」または「処置」は、本明細書で使用する場合、対象における少なくとも１つの症状を軽減する、低下させるもしくは緩和する、または疾患、状態および／もしくは障害の進行を遅延させる処置を含む。例えば、処置は、障害の１つもしくはいくつかの症状の減弱、または障害の完全な根絶でありうる。本発明の意味の中で、用語「処置する」は、発病（すなわち、疾患の臨床症状の前の期間）を阻止し、遅延させる、および／または疾患の発症もしくは悪化のリスクを低下させることも示す。
【００４３】
用語「無増悪生存」は、本明細書で使用する場合、疾患、例えば、がんを有する患者が生きているが悪化はしない、その疾患の処置中および処置後の時間の長さを含む。臨床試験では、無増悪生存を測定することは、新たな処置が上手く作用しているかを調べるための１つの方法である。無増悪生存は、ＰＦＳとも呼ばれる。
【００４４】
用語「全生存」は、本明細書で使用する場合、疾患、例えば、がんを有すると診断された患者がまだ生きている、その疾患に対する診断日または処置開始からの時間の長さを含む。臨床試験では、全生存を測定することは、新たな処置が上手く作用しているかを調べるための１つの方法である。全生存は、ＯＳとも呼ばれる。
【００４５】
治療剤の組合せ物についての用語「薬学的に有効な量」または「治療有効量」は、疾患の臨床的に観察可能な徴候および症状のベースラインに対する観察可能な改善をもたらすのに十分な量である。
【００４６】
用語「相乗的効果」は、本明細書で使用する場合、対象において、効果を生み出す、例えば、免疫応答を促進するおよび／または強化する、例えば、（ａ）、および（ｂ）、または薬学的に許容されるその塩などの２つの薬剤の作用であって、投与される各薬物の効果それ自体の単なる和より大きい作用を指す。相乗的効果は、適切な方法、例えば、Ｓｉｇｍｏｉｄ−Ｅｍａｘ式（Holford, N. H. G. and Scheiner, L. B., Clin. Pharmacokinet. 6: 429-453 (1981)）、Ｌｏｅｗｅの相加式（Loewe, S. and Muischnek, H., Arch. Exp. Pathol Pharmacol. 114: 313-326 (1926)）およびメジアン−効果式（ｔｈｅ  ｍｅｄｉａｎ−ｅｆｆｅｃｔ  ｅｑｕａｔｉｏｎ）（Chou, T. C. and Talalay, P., Adv. Enzyme Regul. 22: 27-55 (1984)）などを使用して算出することができる。上記で言及した各式を実験データに適用して、対応するグラフを作成し、薬物の組合せ物の効果を評価する助けとすることができる。上記で言及した式に関連する対応するグラフは、それぞれ、濃度−効果曲線、アイソボログラム曲線および組合せ指数曲線である。
【００４７】
用語「対象」または「患者」は、本明細書で使用する場合、免疫応答を促進および／もしくは強化し、ならびに／または加齢関連状態を有することができる動物を含む。対象の例として、哺乳動物、例えば、ヒト、イヌ、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ネコ、マウス、ウサギ、ラットおよびトランスジェニック非ヒト動物が挙げられる。好ましい実施形態では、対象は、ヒト、例えば、がん悪液質または加齢関連状態を患っている、患う危険のある、または潜在的に患う可能性のあるヒトである。
【００４８】
用語「約」または「およそ」は、所与の値または範囲の１０％以内、より好ましくは５％以内の意味を有する。
【００４９】
以降に、本発明をさらに詳細に記載し、例示する。
【００５０】
本発明は、以下の態様で提供される：
１．（ａ）ＡｃｔＲＩＩ受容体インヒビターとｂ）化学療法剤とを含む組合せ物。
【００５１】
２．同時の、個別のまたは連続した使用のための、態様１に記載の組合せ物。
【００５２】
３．ａ）ＡｃｔＲＩＩ受容体インヒビター、およびｂ）化学療法剤が、個別の形態である、態様１または２に記載の組合せ物。
【００５３】
４．ａ）が抗ＡｃｔＲＩＩ受容体抗体である、態様１〜３に記載の組合せ物。
【００５４】
５．前記抗ＡｃｔＲＩＩ抗体がビマグルマブである、態様１〜４に記載の組合せ物。
【００５５】
６．ｂ）が白金含有抗がん剤である、態様１〜５に記載の組合せ物。
【００５６】
７．医薬品としての使用のための、前記態様のいずれかに記載の組合せ物。
【００５７】
８．がん悪液質の処置における使用のための（ａ）ＡｃｔＲＩＩ受容体インヒビターおよびｂ）化学療法剤を含む、態様１〜６に記載の組合せ物。
【００５８】
９．がん悪液質の処置が体重減少の低下である、態様１〜６に記載の組合せ物。
【００５９】
１０．がん悪液質の処置に使用するためのＡｃｔＲＩＩ受容体インヒビター。
【００６０】
１１．がん悪液質が、化学療法剤を用いる処置に起因する、態様１１に記載の使用のためのＡｃｔＲＩＩ受容体インヒビター。
【００６１】
１２．がん悪液質を処置することが体重減少を低下させることである、任意の態様１０〜１２に記載の使用のためのＡｃｔＲＩＩ受容体インヒビター。
【００６２】
１３．患者におけるがんの無増悪期間の遅延における、態様１０〜１２に記載の使用のためのＡｃｔＲＩＩ受容体インヒビター。
【００６３】
１４．がん悪液質の無増悪期間の遅延における、態様１０〜１２に記載の使用のためのＡｃｔＲＩＩ受容体インヒビター。
【００６４】
１５．がん生存の延長における、態様１０〜１２に記載の使用のためのＡｃｔＲＩＩ受容体インヒビター。
【００６５】
１６．ＡｃｔＲＩＩ受容体インヒビターが抗ＡｃｔＲＩＩ受容体抗体である、態様１０〜１５に記載の使用のためのＡｃｔＲＩＩ受容体インヒビター。
【００６６】
１７．抗ＡｃｔＲＩＩ受容体抗体がビマグルマブである、態様１６に記載の使用のためのＡｃｔＲＩＩ受容体インヒビター。
【００６７】
１８．化学療法剤が白金含有抗がん剤である、態様１１〜１７に記載の使用のためのＡｃｔＲＩＩ受容体インヒビター。
【００６８】
１９．ａ）ミオスタチンアンタゴニストとｂ）ｍＴＯＲインヒビターとを含む組合せ物。
【００６９】
２０．ミオスタチンアンタゴニストがＡｃｔＲＩＩ受容体インヒビターである、態様１９に記載の組合せ物。
【００７０】
２１．ＡｃｔＲＩＩ受容体インヒビターが抗ＡｃｔＲＩＩ受容体抗体である、態様２０に記載の組合せ物。
【００７１】
２２．抗ＡｃｔＲＩＩ受容体抗体がビマグルマブである、態様２１に記載の組合せ物。
【００７２】
２３．ｍＴＯＲインヒビターがエベロリムスである、態様１９〜２２に記載の組合せ物。
【００７３】
２４．医薬品として使用するための、態様１９〜２３に記載の組合せ物。
【００７４】
２５．がん悪液質の処置に使用するための、態様１９〜２３に記載の組合せ物。
【００７５】
２６．がん悪液質を処置することが体重減少を予防することである、態様１９〜２３に記載の組合せ物。
【００７６】
２７．がん悪液質を処置することが体重を維持することである、態様１９〜２３に記載の組合せ物。
【００７７】
２８．がん悪液質を処置することが体重を増加させることである、態様１９〜２３に記載の組合せ物。
【００７８】
２９．療法剤が個別の医薬組成物中に存在する、態様１〜９に記載の組合せ物、または態様１９〜２８に記載の使用のための組合せ物。
【００７９】
３０．加齢関連状態の処置において使用するための、態様１９〜２３のいずれか１つに記載の組合せ物。
【００８０】
３１．加齢関連状態が、サルコペニア、皮膚萎縮症、筋消耗、脳萎縮、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化症、肺気腫、骨粗鬆症、骨関節炎、高血圧症、勃起不全、認知症、ハンチントン病、アルツハイマー病、白内障、加齢黄斑変性症、前立腺がん、脳卒中、平均寿命の減少、腎機能障害、ならびに加齢性難聴、加齢関連可動性障害（例えば、虚弱）、認知機能低下、加齢関連認知症、記憶障害、腱硬直、心臓肥大ならびに収縮不全および拡張機能障害などの心機能不全、免疫老化、がん、肥満、ならびに糖尿病からなる群から選択される、態様３０に記載の組合せ物。
【００８１】
３２．化学療法剤で処置される患者のがんの無増悪期間の遅延に使用するためのミオスタチンアンタゴニスト。
【００８２】
３３．前記化学療法剤が、シスプラチンもしくはカルボプラチンなどの白金含有抗がん薬、またはエベロリムスなどのｍＴＯＲインヒビターである、態様３０に記載の使用のためのミオスタチンアンタゴニスト。
【００８３】
３４．前記ミオスタチンアンタゴニストがＡｃｔＲＩＩ受容体インヒビターである、態様３２〜３３に記載の使用のためのミオスタチンアンタゴニスト。
【００８４】
３５．前記ＡｃｔＲＩＩ受容体インヒビターが抗ＡｃｔＲＩＩ受容体抗体である、態様３４に記載の使用のためのミオスタチンアンタゴニスト。
【００８５】
３６．前記抗ＡｃｔＲＩＩ受容体抗体がビマグルマブである、態様３５に記載の使用のためのミオスタチンアンタゴニスト。
【００８６】
３７．がん悪液質を有する対象を処置する方法であって、前記がん悪液質に対して有効である量でＡｃｔＲＩＩ受容体インヒビターを前記対象に投与することを含む方法。
【００８７】
３８．がん悪液質が、化学療法剤を用いる処置に起因する、態様３７に記載の方法。
【００８８】
３９．化学療法剤が白金含有抗がん剤である、態様３８に記載の方法。
【００８９】
４０．がん悪液質を処置することが体重減少を低下させることである、任意の態様３７〜３９に記載の方法。
【００９０】
４１．がんを有する対象におけるがんの無増悪期間を遅延させる方法であって、がんの無増悪期間の遅延に有効である量でＡｃｔＲＩＩ受容体インヒビターを前記対象に投与することを含む方法。
【００９１】
４２．がん悪液質を有する対象におけるがんの無増悪期間を遅延させる方法であって、がん悪液質の無増悪期間の遅延に有効である量でＡｃｔＲＩＩ受容体インヒビターを前記対象に投与することを含む方法。
【００９２】
４３．対象のがん生存を延長する方法であって、がん生存の延長に有効である量でＡｃｔＲＩＩ受容体インヒビターを前記対象に投与することを含む方法。
【００９３】
４４．ＡｃｔＲＩＩ受容体インヒビターが抗ＡｃｔＲＩＩ受容体抗体である、態様３７〜４４に記載の方法。
【００９４】
４５．抗ＡｃｔＲＩＩ受容体抗体がビマグルマブである、態様４４に記載の方法。
【００９５】
４６．がん悪液質を有する対象を処置する方法であって、ミオスタチンアンタゴニストおよびｍＴＯＲインヒビターを前記対象に投与することを含む方法。
【００９６】
４７．加齢関連状態を有する対象を処置する方法であって、ミオスタチンアンタゴニストおよびｍＴＯＲインヒビターを前記対象に投与することを含む方法。
【００９７】
４８．ミオスタチンアンタゴニストがＡｃｔＲＩＩ受容体インヒビターである、態様４６〜４７に記載の方法。
【００９８】
４９．ＡｃｔＲＩＩ受容体インヒビターが抗ＡｃｔＲＩＩ受容体抗体である、態様４８に記載の方法。
【００９９】
５０．抗ＡｃｔＲＩＩ受容体抗体がビマグルマブである、態様４９に記載の方法。
【０１００】
５１．前記ｍＴＯＲインヒビターがエベロリムスである、態様４６〜５０に記載の方法。
【０１０１】
５２．加齢関連状態が、サルコペニア、皮膚萎縮症、筋消耗、脳萎縮、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化症、肺気腫、骨粗鬆症、骨関節炎、高血圧症、勃起不全、認知症、ハンチントン病、アルツハイマー病、白内障、加齢黄斑変性症、前立腺がん、脳卒中、平均寿命の減少、腎機能障害、ならびに加齢性難聴、加齢関連可動性障害（例えば、虚弱）、認知機能低下、加齢関連認知症、記憶障害、腱硬直、心臓肥大ならびに収縮不全および拡張機能障害などの心機能不全、免疫老化、がん、肥満、ならびに糖尿病からなる群から選択される、態様４６〜５０に記載の方法。
【０１０２】
５３．前記使用または組合せ物のいずれかに従う処置の方法。
【０１０３】
好ましい組合せ物およびその使用は、ビマグルマブとシスプラチンなどの白金含有抗がん剤である。
【０１０４】
別の好ましい組合せ物およびその使用は、ビマグルマブとエベロリムスなどのｍＴＯＲインヒビターである。
【０１０５】
さらなる態様は以下を含む：
ａ）ビマグルマブなどのＡｃｔＲＩＩ受容体インヒビターと、ｂ）ＰＩ３Ｋインヒビターとを含む組合せ物。
【０１０６】
ビマグルマブなどのＡｃｔＲＩＩ受容体インヒビターと、ｂ）ＶＥＧＦ受容体インヒビターとを含む、前記態様のいずれかに記載の組合せ物。
【０１０７】
さらなる具体的態様は、無増悪生存の改善に使用するための、ａ）ビマグルマブなどのＡｃｔＲＩＩ受容体インヒビターと、ｂ）化学療法剤とを含む組合せ物である。
【０１０８】
別のさらなる具体的態様は、全生存の改善に使用するための、ａ）ビマグルマブなどのＡｃｔＲＩＩ受容体インヒビターと、ｂ）化学療法剤とを含む組合せ物である。
【０１０９】
全ての態様は、本発明の範囲内で互いに組み合わせることができる。
【０１１０】
さらなる態様では、本発明は、がん悪液質の処置において、共に治療的に有効である量を個別に含む医薬組成物、その使用、またはがん／がん悪液質の無増悪期間を遅延させるため、がん生存を延長するため、無増悪生存、もしくは全生存を改善するため、および加齢関連状態を処置するために、併行してであるが個別に投与されるか、または連続して投与される組合せパートナー（ａ）と組合せパートナー（ｂ）からなるそのような医薬組成物を使用してがん悪液質を処置する方法を提供する。
【０１１１】
ビマグルマブ
ビマグルマブの製造について、国際公開第２０１０／１２５００３号パンフレットに記載されている。
【０１１２】
ビマグルマブは、配列に、超可変領域である、配列番号１のＣＤＲ１、配列番号２のＣＤＲ２および配列番号３のＣＤＲ３を含む、少なくとも１つの免疫グロブリン重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む抗原結合部位を含む。
【０１１３】
重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３の配列のいずれかから変化した１、２または３つの残基を有する抗体の使用も本発明の範囲内に含まれる。
【０１１４】
ビマグルマブは、配列に、超可変領域である、配列番号４のＣＤＲ１、配列番号５のＣＤＲ２および配列番号６のＣＤＲ３またはそのＣＤＲ等価物を含む、少なくとも１つの免疫グロブリン軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む抗原結合部位も含む。
【０１１５】
軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３の配列のいずれかから変化した１、２または３つの残基を有する抗体の使用も本発明の範囲内に含まれる。
【０１１６】
ビマグルマブは、配列番号７または配列番号８の軽鎖および配列番号９の重鎖も含む。
【０１１７】
本発明によれば、軽鎖および／または重鎖と９５％の同一性を有する抗体の使用も含まれる。
【０１１８】
ビマグルマブの配列表
【０１１９】
【化１−１】
2018537447.tif 000003
【０１２０】
【化１−２】
2018537447.tif 000004
【０１２１】
【化１−３】
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【０１２２】
【化１−４】
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【０１２３】
【化１−５】
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【０１２４】
【化１−６】
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【０１２５】
【化１−７】
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【０１２６】
【化１−８】
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【０１２７】
【化１−９】
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【０１２８】
【化１−１０】
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【０１２９】
【化１−１１】
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【０１３０】
【化１−１２】
2018537447.tif 000014
【０１３１】
悪液質または消耗症候群は、積極的に重量を減少させようとしていない者における重量の減少、筋萎縮、疲労、衰弱、および著しい食欲減退である。悪液質の正式な定義は、罹患した患者がより多くのカロリーを食するとしても栄養的に元に戻ることができず、除脂肪体質量が失われる、体質量（体重）の減少であり、一次病理が適切であることを示す。
【０１３２】
悪液質は、がん、ＡＩＤＳ、慢性閉塞性肺疾患、多発性硬化症、うっ血性心不全、結核、家族性アミロイドポリニューロパチー、ガドリニウム中毒、水銀中毒（肢端疼痛症）およびホルモン欠乏を有する患者において見られる。
【０１３３】
悪液質は、死のポジティブ危険因子であり、つまり、患者が悪液質を有する場合、基礎となる状態から死の機会が劇的に増加する。悪液質は、種々の基礎となる障害の徴候でありうる；患者が悪液質を呈する場合、医師は、一般的に、がん、代謝性アシドーシス（タンパク質合成の減少およびタンパク異化の増加から）、ある特定の感染症（例えば、結核、ＡＩＤＳ）、慢性膵炎、およびいくつかの自己免疫障害、またはアンフェタミン依存症の可能性を考慮する。悪液質は、食欲減退、無力症、および貧血症から動けない状態まで患者を身体的に弱らせ、標準処置への応答は、通常乏しい。悪液質には、その病理の一部としてサルコペニアが含まれる。
【０１３４】
がん悪液質：
がん悪液質は、従来の栄養サポートでは完全に元に戻すことができず、進行性機能障害をもたらす、進行する骨格筋質量の減少（脂肪質量の減少を含む場合も含まない場合もある）によって定義される多因子症候群である。
【０１３５】
化学療法剤：
化学療法剤として、白金含有抗がん薬（例えば、シスプラチン、カルボプラチン）、ＰＩ３Ｋ／ｍＴＯＲインヒビター、エベロリムス、ＰＩ３ＫインヒビターおよびＶＥＧＦＲインヒビターが挙げられる。
【０１３６】
「化学療法」と言及する、より広い意味において、化学療法として、アルキル化剤（例えば、シクロホスファミド、テモゾロミド）、白金含有剤、代謝拮抗薬（例えば、５−フルオロウラシル、メトトレキサート、ヒドロキシウレア、シタラビン、ゲムシタビン）、トポイソメラーゼインヒビター（例えば、ドキソルビシン、イリノテカン）、微小管重合剤／脱重合剤（例えば、ビンブラスチン、ビンクリスチン、パクリタキセル、ドセタキセル）、内分泌剤（例えば、ビカルタミド、リュープロレリン、タモキシフェン、レトロゾール）、およびより最近の分子標的剤（例えば、キナーゼインヒビター、抗体）が挙げられる。
【０１３７】
ｍＴＯＲインヒビター：
本明細書で使用する場合、用語「ｍＴＯＲインヒビター」は、細胞のｍＴＯＲキナーゼを阻害する化合物もしくはリガンド、または薬学的に許容されるその塩を指す。一実施形態では、ｍＴＯＲインヒビターはアロステリックインヒビターである。一実施形態では、ｍＴＯＲインヒビターは触媒インヒビターである。
【０１３８】
アロステリックｍＴＯＲインヒビターとして、中性三環式化合物であるラパマイシン（シロリムス）、例えば、ラパマイシン誘導体、ラパマイシン類似体（ラパログとも称される）を含むラパマイシンに対する構造的および機能的類似性を有する化合物であるラパマイシン関連化合物、およびｍＴＯＲ活性を阻害する他のマクロライド化合物が挙げられる。
【０１３９】
ラパマイシンは、式Ａに示す構造を有する、ストレプトミセス・ヒグロスコピクス（Streptomyces hygroscopicus）によって生成される公知のマクロライド系抗生物質である。
【０１４０】
【化２】
2018537447.tif 000015
例えば、McAlpine, J.B., et al., J. Antibiotics (1991) 44: 688；Schreiber, S.L., et al., J. Am. Chem. Soc. (1991) 113: 7433；米国特許第３，９２９，９９２号明細書を参照のこと。ラパマイシンに対して提唱される種々のナンバリングスキームが存在する。混乱を避けるために、本明細書において、特定のラパマイシン類似体を命名する場合、式Ａのナンバリングスキームを使用するラパマイシンを基準として名称を与える。
【０１４１】
本発明において有用なラパマイシン類似体は、例えば、ラパマイシンのシクロヘキシル環のヒドロキシル基がＯＲ１（式中、Ｒ１は、ヒドロキシアルキル、ヒドロキシアルコキシアルキル、アシルアミノアルキル、またはアミノアルキルであり；例えば、その内容が参照により組み込まれる米国特許第５，６６５，７７２号明細書および国際公開第９４／０９０１０号パンフレットに記載されている、エベロリムスとしても知られているＲＡＤ００１がある）によって置き換えられているＯ−置換類似体である。他の適切なラパマイシン類似体として、２６または２８位で置換されているものが挙げられる。ラパマイシン類似体は、上述の類似体のエピマー、特に、４０、２８または２６位で置換された類似体のエピマーであってもよく、場合によって、例えば、その内容が参照により組み込まれる米国特許第６，０１５，８１５号明細書、国際公開第９５／１４０２３号パンフレットおよび国際公開第９９／１５５３０号パンフレットに記載されているようにさらに水素化されていてもよく、例えば、ゾタロリムスとしても知られているＡＢＴ５７８、またはその内容が参照により組み込まれる米国特許第７，０９１，２１３号明細書、国際公開第９８／０２４４１号パンフレットおよび国際公開第０１／１４３８７号パンフレットに記載されているラパマイシン類似体、例えば、リダフォロリムスとしても知られているＡＰ２３５７３であってもよい。
【０１４２】
米国特許第５，６６５，７７２号明細書からの本発明において使用するのに適切なラパマイシン類似体の例として、これらに限定されないが、４０−Ｏ−ベンジル−ラパマイシン、４０−Ｏ−（４’−ヒドロキシメチル）ベンジル−ラパマイシン、４０−Ｏ−［４’−（１，２−ジヒドロキシエチル）］ベンジル−ラパマイシン、４０−Ｏ−アリル−ラパマイシン、４０−Ｏ−［３’−（２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４（Ｓ）−イル）−プロパ−２’−エン−１’−イル］−ラパマイシン、（２’Ｅ，４’Ｓ）−４０−Ｏ−（４’，５’−ジヒドロキシペンタ−２’−エン−１’−イル）−ラパマイシン、４０−Ｏ−（２−ヒドロキシ）エトキシカルボニルメチル−ラパマイシン、４０−Ｏ−（２−ヒドロキシ）エチル−ラパマイシン、４０−Ｏ−（３−ヒドロキシ）プロピル−ラパマイシン、４０−Ｏ−（６−ヒドロキシ）ヘキシル−ラパマイシン、４０−Ｏ−［２−（２−ヒドロキシ）エトキシ］エチル−ラパマイシン、４０−Ｏ−［（３Ｓ）−２，２−ジメチルジオキソラン−３−イル］メチル−ラパマイシン、４０−Ｏ−［（２Ｓ）−２，３−ジヒドロキシプロパ−１−イル］−ラパマイシン、４０−Ｏ−（２−アセトキシ）エチル−ラパマイシン、４０−Ｏ−（２−ニコチノイルオキシ）エチル−ラパマイシン、４０−Ｏ−［２−（Ｎ−モルホリノ）アセトキシ］エチル−ラパマイシン、４０−Ｏ−（２−Ｎ−イミダゾリルアセトキシ）エチル−ラパマイシン、４０−Ｏ−［２−（Ｎ−メチル−Ｎ’−ピペラジニル）アセトキシ］エチル−ラパマイシン、３９−Ｏ−デスメチル−３９，４０−Ｏ，Ｏ−エチレン−ラパマイシン、（２６Ｒ）−２６−ジヒドロ−４０−Ｏ−（２−ヒドロキシ）エチル−ラパマイシン、４０−Ｏ−（２−アミノエチル）−ラパマイシン、４０−Ｏ−（２−アセトアミノエチル）−ラパマイシン、４０−Ｏ−（２−ニコチンアミドエチル）−ラパマイシン、４０−Ｏ−（２−（Ｎ−メチル−イミダゾ−２’−イルカルベソキサミド）エチル）−ラパマイシン、４０−Ｏ−（２−エトキシカルボニルアミノエチル）−ラパマイシン、４０−Ｏ−（２−トリルスルホンアミドエチル）−ラパマイシンおよび４０−Ｏ−［２−（４’，５’−ジカルボエトキシ−１’，２’，３’−トリアゾール−１’−イル）−エチル］−ラパマイシンが挙げられる。
【０１４３】
本発明において有用な他のラパマイシン類似体は、ラパマイシンのシクロヘキシル環のヒドロキシル基および／または２８位のヒドロキシ基が、ヒドロキシエステル基で置き換えられている類似体であり、例えば、ＵＳ  ＲＥ４４，７６８に見出されるラパマイシン類似体、例えばテムシロリムスが知られている。
【０１４４】
本発明において有用な他のラパマイシン類似体として、１６位のメトキシ基が、別の置換基、好ましくは（場合によって、ヒドロキシ置換）アルキニルオキシ、ベンジル、オルトメトキシベンジルもしくはクロロベンジルで置き換えられており、および／または３９位のメトキシ基が、３９の炭素と一緒に消失することによって、ラパマイシンのシクロヘキシル環が３９位のメトキシ基が欠如しているシクロペンチル環となるものが挙げられる；例えば、その内容が参照により組み込まれる国際公開第９５／１６６９１号パンフレットおよび国際公開第９６／４１８０７号パンフレットに記載されている通りである。類似体は、さらに修飾されて、ラパマイシンの４０位のヒドロキシがアルキル化され、および／または３２−カルボニルが還元されるようにすることもできる。
【０１４５】
国際公開第９５／１６６９１号パンフレットからのラパマイシン類似体として、これらに限定されないが、１６−デメトキシ−１６−（ペンタ−２−イニル）オキシ−ラパマイシン、１６−デメトキシ−１６−（ブタ−２−イニル）オキシ−ラパマイシン、１６−デメトキシ−１６−（プロパルギル）オキシ−ラパマイシン、１６−デメトキシ−１６−（４−ヒドロキシ−ブタ−２−イニル）オキシ−ラパマイシン、１６−デメトキシ−１６−ベンジルオキシ−４０−Ｏ−（２−ヒドロキシエチル）−ラパマイシン、１６−デメトキシ−１６−ベンジルオキシ−ラパマイシン、１６−デメトキシ−１６−オルト−メトキシベンジル−ラパマイシン、１６−デメトキシ−４０−Ｏ−（２−メトキシエチル）−１６−ペンタ−２−イニル）オキシ−ラパマイシン、３９−デメトキシ−４０−デスオキシ−３９−ホルミル−４２−ノル−ラパマイシン、３９−デメトキシ−４０−デスオキシ−３９−ヒドロキシメチル−４２−ノル−ラパマイシン、３９−デメトキシ−４０−デスオキシ−３９−カルボキシ−４２−ノル−ラパマイシン、３９−デメトキシ−４０−デスオキシ−３９−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）カルボニル−４２−ノル−ラパマイシン、３９−デメトキシ−４０−デスオキシ−３９−（モルホリン−４−イル）カルボニル−４２−ノル−ラパマイシン、３９−デメトキシ−４０−デスオキシ−３９−［Ｎ−メチル，Ｎ−（２−ピリジン−２−イル−エチル）］カルバモイル−４２−ノル−ラパマイシンおよび３９−デメトキシ−４０−デスオキシ−３９−（ｐ−トルエンスルホニルヒドラゾノメチル）−４２−ノル−ラパマイシンが挙げられる。
【０１４６】
国際公開第９６／４１８０７号パンフレットからのラパマイシン類似体として、これらに限定されないが、３２−デオキソ−ラパマイシン、１６−Ｏ−ペンタ−２−イニル−３２−デオキソ−ラパマイシン、１６−Ｏ−ペンタ−２−イニル−３２−デオキソ−４０−Ｏ−（２−ヒドロキシ−エチル）−ラパマイシン、１６−Ｏ−ペンタ−２−イニル−３２−（Ｓ）−ジヒドロ−４０−Ｏ−（２−ヒドロキシエチル）−ラパマイシン、３２（Ｓ）−ジヒドロ−４０−Ｏ−（２−メトキシ）エチル−ラパマイシンおよび３２（Ｓ）−ジヒドロ−４０−Ｏ−（２−ヒドロキシエチル）−ラパマイシンが挙げられる。
【０１４７】
別の適切なラパマイシン類似体は、その内容が参照により組み込まれる米国特許出願公開第２００５／０１０１６２４号明細書に記載されているウミロリムスである。
【０１４８】
哺乳動物細胞において、ラパマイシン（ｍＴＯＲ）キナーゼの標的は、ｍＴＯＲＣ１複合体またはｍＴＯＲＣ２複合体（栄養素およびエネルギーの入手可能性を感知し、成長因子およびストレスシグナル伝達からのインプットを統合する）として記載されている多タンパク質複合体として存在する。ｍＴＯＲＣ１複合体はラパマイシンなどのアロステリックｍＴＯＲインヒビターに感受性であり、ｍＴＯＲ、ＧβＬ、およびｍＴＯＲの調節性会合タンパク質（ｒａｐｔｏｒ）から構成され、ペプチジル−プロリルイソメラーゼＦＫＢＰ１２タンパク質（ＦＫ５０６−結合タンパク質１Ａ、１２ｋＤａ）に結合する。対照的に、ｍＴＯＲＣ２複合体は、ｍＴＯＲ、ＧβＬ、およびｍＴＯＲのラパマイシン非感受性コンパニオンタンパク質（ｒｉｃｔｏｒ）から構成され、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＦＫＢＰ１２タンパク質に結合しない。
【０１４９】
成長因子ならびに成長および増殖調節のための栄養素感受性装置として作動するｍＴＯＲＣ１複合体は、タンパク質の翻訳制御に関与していることが示されている。ｍＴＯＲＣ１は、２つの重要な下流の基質を介してタンパク質翻訳を調節する：Ｐ７０Ｓ６キナーゼは、順に、リボソームタンパク質Ｐ７０  Ｓ６をリン酸化し、真核生物の翻訳開始因子である４Ｅ結合タンパク質１（４ＥＢＰ１）は、ｅＩＦ４Ｅ調節されたキャップ依存性翻訳をモジュレートする重要な役割を果たす。ｍＴＯＲＣ１複合体は、細胞のエネルギーおよび栄養素ホメオスタシスに応答して細胞成長を調節し、ｍＴＯＲＣ１の調節解除は多種多様なヒトがんに共通するものである。ｍＴＯＲＣ２の機能は、Ａｋｔのリン酸化を介した細胞生存の調節と、アクチン細胞骨格ダイナミクスのモジュレーションとを含む。
【０１５０】
ｍＴＯＲＣ１複合体は、ＦＫＢＰ１２との細胞内複合体の形成およびｍＴＯＲのＦＫＢＰ１２−ラパマイシン結合（ＦＲＢ）ドメインへの結合を含む、主にラパマイシンの作用方式により、ラパマイシンおよび誘導体などのアロステリックｍＴＯＲインヒビターに感受性である。これは、その足場タンパク質ｒａｐｔｏｒとの相互作用を変化させ、弱め、順に、Ｐ７０  Ｓ６Ｋ１などの基質がｍＴＯＲへアクセスし、リン酸化されるのを妨害すると考えられている、ｍＴＯＲＣ１における立体配座変化をもたらす。ラパマイシンおよびラパログ、例えばＲＡＤ００１は、良性と悪性の両方の増殖障害に関連するｍＴＯＲの過剰活性化を阻害することにより臨床的関連性を得た。
【０１５１】
他に、エベロリムス（Ａｆｉｎｉｔｏｒ（登録商標））として公知であるＲＡＤ００１は、化学名（１Ｒ，９Ｓ，１２Ｓ，１５Ｒ，１６Ｅ，１８Ｒ，１９Ｒ，２１Ｒ，２３Ｓ，２４Ｅ，２６Ｅ，２８Ｅ，３０Ｓ，３２Ｓ，３５Ｒ）−１，１８−ジヒドロキシ−１２−｛（１Ｒ）−２−［（１Ｓ，３Ｒ，４Ｒ）−４−（２−ヒドロキシエトキシ）−３−メトキシシクロヘキシル］−１−メチルエチル｝−１９，３０−ジメトキシ−１５，１７，２１，２３，２９，３５−ヘキサメチル−１１，３６−ジオキサ−４−アザ−トリシクロ［３０．３．１．０４，９］ヘキサトリアコンタ−１６，２４，２６，２８−テトラエン−２，３，１０，１４，２０−ペンタオンおよび以下の化学構造を有する。
【０１５２】
【化３】
2018537447.tif 000016
【０１５３】
エベロリムスは、進行した腎臓がんの処置のためのＦＤＡ認可薬物であり、オンコロジーにおけるいくつかの他の第三相臨床試験で調査されている。前臨床研究は、エベロリムスは、おそらくラパマイシン感受性のｍＴＯＲＣ１機能の抑制を介して、ｉｎ  ｖｉｔｒｏとｉｎ  ｖｉｖｏの両方で、多種多様な腫瘍細胞株の増殖を阻害することができることを示した。ラパマイシン誘導体としてのエベロリムスは、ｍＴＯＲＣ１機能の阻害部分、すなわちＰ７０  Ｓ６キナーゼ（Ｐ７０  Ｓ６Ｋ）および下流のＰ７０  Ｓ６Ｋ基質Ｐ７０  Ｓ６において非常に強力であるアロステリックｍＴＯＲインヒビターである。エベロリムス（および他のラパマイシン類似体）のようなアロステリックｍＴＯＲインヒビターは、ｍＴＯＲＣ２経路の阻害、または結果として生じるそのＡｋｔシグナル伝達の活性化においてわずかな効果のみを有するか、またはいずれの効果も有さない。アロステリックｍＴＯＲインヒビターのさらなる例として、シロリムス（ラパマイシン、ＡＹ−２２９８９）、４０−［３−ヒドロキシ−２−（ヒドロキシメチル）−２−メチル−プロパノエート］−ラパマイシン（テムシロリムスまたはＣＣＩ−７７９とも呼ばれる）およびリダフォロリムス（ＡＰ−２３５７３／ＭＫ−８６６９）が挙げられる。アロステリックｍＴＯＲインヒビターの他の例としてゾタロリムス（ＡＢＴ５７８）およびウミロリムスが挙げられる。
【０１５４】
代わりにまたはさらに、触媒の、ＡＴＰ競合性ｍＴＯＲインヒビターは、ｍＴＯＲキナーゼドメインを直接標的とし、ｍＴＯＲＣ１とｍＴＯＲＣ２の両方を標的とすることが見出された。これらはまた、ラパマイシン抵抗性ｍＴＯＲＣ１アウトプット、例えば、４ＥＢＰ１−Ｔ３７／４６リン酸化およびキャップ依存性翻訳をモジュレートするため、ラパマイシンなどのアロステリックｍＴＯＲインヒビターよりもｍＴＯＲＣ１のさらに完全なインヒビターである。
【０１５５】
ビマグルマブとエベロリムスなどのｍＴＯＲインヒビターの組合せ物は、ビマグルマブが筋質量を増加させ、エベロリムスが筋肉の質を改善するため、加齢関連筋機能不全の処置に対して特に有効である可能性がある。ビマグルマブは、ミオスタチン／アクチビン経路を阻害することによって筋質量を改善する。エベロリムスは、老化した筋肉で過活性であるｍＴＯＲ経路を阻害することによって筋機能を改善する（本発明者らが加えることができた未公開の内部データ）。ｍＴＯＲの阻害は、ミトコンドリアの機能を強化し、炎症を低下させ、かつオートファジーを上昇させることによって筋機能を改善する場合がある。ビマグルマブとエベロリムスなどのｍＴＯＲインヒビターを組み合わせて筋質量および筋機能を改善することは、サルコペニアおよび心不全において治療利益を有する可能性がある。さらに、筋質量および筋機能を改善することは、筋肉におけるグルコースの取り込みを増加させることによって、真性糖尿病において治療利益を有する場合がある。ｍＴＯＲ活性の増加は、若年の健康な対象（１８〜４０歳）と比較して、老年の健康な対象（６０〜８４歳）から得られた筋生検で実証された（Markofski M et al., Exp Geront, 2015）。
【０１５６】
［実施例］
以下に、本発明は、より詳細に、特に実施例を参照して記載されるが、これは、本発明を限定することを意図するものではない。
【０１５７】
材料および方法
材料
ビマグルマブは、ＡｃｔＲＩＩを対象とするヒトＩｇＧ１  Ｌｅｕ２３４Ａｌａ／Ｌｅｕ２３５Ａｌａモノクローナル抗体である。ヒトの抗体のＦｃ領域がマウスのＦｃ．ＣＤＤ８６６で置き換えられた、ビマグルマブのマウス化バージョンであるＣＤＤ８６６を、Ｎｏｖａｒｔｉｓ  Ｐｈａｒｍａ  ＡＧ（Ｂａｓｅｌ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）のＣＨＯ細胞中で生成した。シスプラチン（ｃｉｓ−ジアミンジクロロ−白金（ＩＩ））をＳｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ（カタログ番号４７９３０６）から購入した。エベロリムスは、Ｎｏｖａｒｔｉｓ  Ｐｈａｒｍａ  ＡＧで合成した。
【０１５８】
動物実験
１１から１２週齢の成体、雄Ｂａｌｂ／ｃＪＲｊマウスをＪａｎｖｉｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｌｅ  Ｇｅｎｅｓｔ  Ｓｔ  Ｉｓｌｅ、Ｆｒａｎｃｅ）から購入した。マウスを設備に７日間馴化させた。動物を、５匹以下の動物の群で、２５℃で、１２：１２ｈの明暗サイクルで収容した。動物には、１８．２％のタンパク質と３．０％の脂肪を含有する標準実験食（エネルギー含有量が１５．８ＭＪ／ｋｇ）（ＮＡＦＡＧ  ３８９０、Ｋｌｉｂａ、Ｂａｓｅｌ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を与えた。食餌と水は自由に提供した。
【０１５９】
マウスの結腸がん細胞株ＣＴ−２６を、１０％の熱で不活性化したウシ胎仔血清と抗生物質−抗真菌薬溶液を補充したＲＰＭＩ  １６４０培地中で、３７℃で、５％ＣＯ２と共に培養した。ＣＴ−２６細胞を、Ａｃｃｕｔａｓｅ（登録商標）（ＰＡＡ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  ＧｍｂＨ、Ｐａｓｃｈｉｎｇ、Ａｕｓｔｒｉａ）を用いる処理によって採取し、５０％のＰＢＳとフェノールレッドを含まない５０％のＢＤ  Ｍａｔｒｉｇｅｌ（商標）Ｍａｔｒｉｘ（カタログ番号３５６２３７、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｂｅｄｆｏｒｄ、ＭＡ、ＵＳＡ）とを含有する溶液中に懸濁した。３×１０５個の細胞を含有する０．１ｍＬの細胞懸濁液を、マウスの左脇腹に皮下接種した。腫瘍を触知できた場合、許容可能な形態と大きさを有する腫瘍を担持するマウスを無作為化して、腫瘍の大きさと体重の平均および範囲についてバランスのとれた群を生成した。処置は、無作為化の日に開始した。
【０１６０】
治療介入研究を行い、単独または抗がん剤と組み合わせたＣＤＤ８６６の効果を評価した。ＣＤＤ８６６は、毎週１回または２回、５ｍＬ／ｋｇの容量で、２０ｍｇ／ｋｇ  ｓ．ｃ．で投与した。シスプラチンは、週に２回、１ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｐ．で投与した。エベロリムスは、１日１回、５ｍｇ／ｋｇ  ｐ．ｏ．で投与した。組合せ群では、シスプラチンまたはエベロリムス処置を、毎週１回または２回のＣＤＤ８６６の皮下への処置と、それぞれ組み合わせた。体重および腫瘍体積を週に２から３回測定した。実験の終わりに、マウスをＣＯ２で安楽死させ、腫瘍、前脛骨筋、腓腹筋−ヒラメ筋−足底筋複合体、四頭筋を収集して秤量した。
【０１６１】
ＣＤＤ８６６とシスプラチンまたはエベロリムスの組合せ物が、２０％に達する体重減少または１，５００ｍｍ３を超える腫瘍体積によって定義した中断基準への、がん悪液質の進行を遅らせるかどうかを評価するフォローアップとして、無増悪期間研究を実施した。処置レジメンは、治療介入研究で使用したものと同じであった。体重および腫瘍体積を、最初の２週は週に２から３回、次いで、実験が終わるまで毎日測定した。体重減少が２０％まで近づくか、または腫瘍体積が１，５００ｍｍ３を超えたら、マウスをＣＯ２で安楽死させた。
【０１６２】
タンパク質分析
１％のプロテアーゼインヒビターカクテル（ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ＃  ５３９１３１）および０．２％のＳＤＳを補充した抽出試薬（Ｐｈｏｓｐｈｏｓａｆｅ；Ｎｏｖａｇｅｎ  Ｉｎｃ．、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ、ＵＳＡ）からなる溶解緩衝液を添加した。Ｐｒｅｃｅｌｌｙｓ  Ｈｏｍｏｇｅｎａｔｅｓ（ＦａｓｔＰｒｅｐ−Ｍａｃｈｉｎｅ  ＦＰ２０）を４℃で２０分間（１４，０００ｒｐｍ）遠心分離することによって分離した。上清を回収し、タンパク質含有量を市販のタンパク質決定のためのキット（ＢＣＡ  Ｋｉｔ；Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で測定した。サンプルをＳＤＳ−ＰＡＧＥサンプル緩衝液中に希釈し、７０℃で１０分間変性させた。等量のタンパク質を４から１２％および８％のポリアクリルアミドゲル（ＮｕＰＡＧＥ  Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ  ｇｅｌ；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐ．、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ、ＵＳＡ）のレーンに対しローディングし、電気泳動によって分離し、次いで、ニトロセルロース膜に転写した。膜を、０．１％のＴｗｅｅｎと５％ｗ／ｖの無脂肪粉乳を含むＴＢＳ中でブロッキングした。一次抗体であるホスホ−ＳＭＡＤ３（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  ＃０４  １０４２  １：１０００で希釈）とα−チューブリン（Ｓｉｇｍａ  Ｔ６１９９  １：５０００で希釈）を０．１％のＴｗｅｅｎ２０と５％ｗ／ｖの無脂肪粉乳を含むＴＢＳ中で、二次抗体を０．１％のＴｗｅｅｎ２０、０．０５％のＳＤＳおよび５％の無脂肪乳を含むＴＢＳ中でインキュベートした。免疫活性をＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ  Ｗｅｓｔ  Ｆｅｍｔｏ  Ｍａｘｉｍｕｍ  Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で検出し、フィルムに曝露させるかまたはＦｕｓｉｏｎＳｐｅｃｔｒａによって獲得した。ｍＴＯＲとＩＬ−６の定量的決定は、製造業者の指示に従って、ＭｅｓｏＳｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙリーダーを使用するＭｅｓｏＳｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙからのアッセイキットを使用して実施した。
【０１６３】
統計分析
値は、平均±ＳＥＭとして表した。統計分析は、治療介入研究における、対照群（非腫瘍担持および腫瘍担持）、抗がん剤単独（シスプラチンまたはエベロリムス）またはＣＤＤ８６６単独に対して処置群を比較するための分散分析後のＳｉｄａｋ多重比較検定、および無増悪期間研究に対するＤｕｎｎ多重比較検定を使用して行った。確率値が＜０．０５である場合に差が有意であるとみなした。統計分析をＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｉｎｃ．、Ｌａ  Ｊｏｌｌａ、ＣＡ、ＵＳＡ）によって実施した。体重は、処置の開始としての０日目からの％変化として表した。立方ｍｍの腫瘍体積は、式（長さ×幅２）／２に従って算出した。筋重量は、細胞接種の日の体重（初期体重）に対して正規化し、次いで、非腫瘍対照群からの％変化として表した。
【実施例１】
【０１６４】
ビマグルマブはシスプラチンにより誘導された体重減少を妨げる
広範な体重減少は、がん関連死の重要な決定因子として明らかとなっている。したがって、長期的な体重の発育をモニタリングした（図１ＡおよびＢ）。処置開始の１０日後、単剤療法としてシスプラチンを受ける腫瘍担持動物は、初期体重の２０％を失った（図１ＢおよびＣ）。対照として、ビヒクル処置、腫瘍担持動物は、１０％の体重減少を経験したが、ＣＤＤ８６６を単独またはシスプラチンと組み合わせて処置した動物は、それぞれわずか３％と５％の穏やかな体重減少を示した（図１ＢおよびＣ）。健康な対照動物では、シスプラチンは体重に影響を与えず、ＣＤＤ８６６投与は、シスプラチンが存在しなくても存在しても、著しい体重増加を生じた（図１ＡおよびＣ）。これらのデータは、有効な抗腫瘍用量の（図１Ｅ参照）シスプラチンは、悪液質の動物において、実際に体重減少を早め、ＣＤＤ８６６は化学療法により誘導された消耗を顕著に低下させることを実証する。
【０１６５】
この研究に向けられる主要な関心は、腫瘍成長促進に関する化学療法の有効性とＣＤＤ８６６の影響を低下させる可能性のある潜在的薬物−薬物相互作用についてであった。処置の開始時に、平均腫瘍体積は≧２６０ｍｍ３であった（図１Ｄ）。ＣＤＤ８６６は、腫瘍進行を加速せず（図１ＤおよびＥ）、またシスプラチンの抗腫瘍効果も損なわなかった（図１ＤおよびＥ）。よって、ＣＤＤ８６６は、シスプラチンの抗腫瘍効果を妨げることなく、がん悪液質における化学療法が媒介する体重減少を低下させるのに有効である。
【実施例２】
【０１６６】
ビマグルマブはシスプラチンにより誘導された筋消耗を拮抗する
ＣＤＤ８６６の体重へのポジティブな効果を考慮にいれ、本発明者らは、次に、個々の骨格筋に関する種々の介入の影響を決定した。腓腹筋では、シスプラチンは、２５％の筋重量の減少を惹起した。ＣＤＤ８６６処置は、１３％まで筋重量減少を低下させる傾向があり、この保護効果はシスプラチンの存在下でも維持された（１２％）（図２Ｂ）。同様のレベルの保護が四頭筋において観察された（図２Ｃ）。前脛骨筋は、ＣＤＤ８６６処置から最も利益を受けた。前脛骨筋では、シスプラチンで処置した動物は３４％の筋消耗を経験し、ＣＤＤ８６６との同時投与では１６％まで筋肉減少を顕著に低下した（図２Ａ）。
【実施例３】
【０１６７】
シスプラチンと組み合わせたビマグルマブはがん悪液質の無増悪期間を遅延させる
広範な腫瘍成長とそれに続く体重減少は、がん患者の重要な死亡率予測因子である。したがって、本発明者らは、ＣＤＤ８６６とシスプラチンの組合せ物が生存の長さに影響を有するか否かを評価することを望んだ。倫理的な理由のために、本発明者らは、従来の生存研究を慎んだ。代わりに、各マウスは、初期体重の２０％を超える体重減少、または１，５００ｍｍ３の腫瘍体積への到達のいずれかを経験すると、個々に安楽死させ、無増悪期間として決定した。
【０１６８】
平均して、ビヒクルまたはシスプラチンを受ける動物は、それぞれ１２日後と１２日後に屠殺されなければならなかった（図２ＤおよびＥ）。ＣＤＤ８６６で処置した動物は１６日後に安楽死させなければならなかったが、これは、ＣＤＤ８６６処置が体重減少を低下させたが、腫瘍成長を促進しなかったという以前の知見を裏付けるものである。ＣＤＤ８６６とシスプラチンの組合せ物処置は、試験された他の介入のいずれよりも優れていた。実際に、組合せ処置は、無増悪期間を２１日まで延長した（図２Ｅ）。モニタリングは、定義した中断基準の１つに未だ達していなかった組合せ群の動物の３５％について、３９日後に停止した（図２Ｄ）。
【０１６９】
シスプラチンとの組合せ
実質的な腫瘍成長阻害にもかかわらず、シスプラチンは、悪液質の動物の体重減少を加速し、これは、抗がん剤の高い毒性によるものである可能性がある。ＣＤＤ８６６は、シスプラチンが媒介する体重減少を十分に妨げ、ＡｃｔＲＩＩ阻害がシスプラチンの存在下で有効なままであることを実証した。シスプラチン処置は単独でもＣＤＤ８６６と組み合わせても、ＣＴ−２６腫瘍重量を同様のレベルまで低下させ、これから、シスプラチンの抗がん作用がＣＤＤ８６６によってネガティブな影響を受けなかったことが強調される。
【０１７０】
矛盾することなく、シスプラチン処置は、ＣＴ−２６腫瘍誘導骨格筋消耗を改善しなかったが、むしろ、骨格筋減少を悪化させる傾向にあった。対照的に、単独またはシスプラチンと組み合わせたＣＤＤ８６６の投与により、シスプラチンのみを受ける動物と比較して骨格筋重量減少から保護され、これはシスプラチン処置下でＡｃｔＲＩＩ阻害が十分に有効なままであることをさらに裏付けるものである。よって、これらの結果は、シスプラチンと組み合わせたＣＤＤ８６６が、シスプラチン処置単独と比較した場合に、悪液質の動物における筋消耗に対抗することを実証する。注目すべきことに、ＣＤＤ８６６は週に１回しか投与されておらず、マウスは研究全体を通して２回しか注射を受けなかった（生存研究以外）。がん組織によるアクチビンの放出１７は、潜在的にＣＤＤ８６６によるＡｃｔＲＩＩ阻害と競合するため、ＣＤＤ８６６の投与が高用量または高頻度であることが、より顕著または最大の応答を誘発するために、がん悪液質において求められうる。実際に、より強い筋消耗の回避が、より頻度の高い投与レジメンの下、エベロリムスとの組合せ研究において、ＣＤＤ８６６単独について認められた。
【０１７１】
筋質量の低いがん患者は、化学療法由来の処置関連毒性のリスクが増加しており、全体として死亡率の増加を示す１８。矛盾することなく、ＣＤＤ８６６は、大きく筋質量を増加させることによって疾患進行を著しく遅延させる。がん悪液質の無増悪期間は、ＣＤＤ８６６とシスプラチンの同時療法によってさらに遅らされ、同時に、筋消耗に対抗し腫瘍成長を阻害した。
【実施例４】
【０１７２】
ビマグルマブとエベロリムスは相加的方法でがん悪液質を予防する
次のステップでは、ｍＴＯＲが細胞成長および増殖の中心的役割を果たすことが知られているため、ラパマイシンの哺乳動物標的（ｍＴＯＲ）に対する分子標的剤であるエベロリムスが組合せパートナーとして選択された。さらに、ＣＤＤ８６６に対する処置頻度を週に２回に増加させ、単剤として投与した場合の著しい抗悪液質作用を確保し、エベロリムスとＣＤＤ８６６の組合せ物を非腫瘍マウスおよび腫瘍担持悪液質マウスで評価した。
【０１７３】
非腫瘍担持群では、エベロリムス処置によって体重増加はあまり影響を受けなかった。対照的に、予想通り、ＣＤＤ８６６処置では体重増加が著しく増加した（図３ＡおよびＣ）。組合せ物群で体重増加は若干緩やかであったが（図３ＡおよびＣ）、エベロリムス単独とは依然として著しく異なっており、１４日目の終了までＣＤＤ８６６単独とはあまり異ならなかった。ＣＴ−２６群では、体重は、非腫瘍対照群と比較した場合、１４日目の腫瘍担持対照群で著しく減少した（図３ＢおよびＣ）。ＣＴ−２６により誘導される体重減少は、エベロリムス、ＣＤＤ８６６およびエベロリムスとＣＤＤ８６６の組合せ物によって完全に妨げられた。体重へのＣＤＤ８６６の効果は、エベロリムスの存在下で維持された。
【０１７４】
エベロリムスはＣＴ−２６腫瘍成長を遅らせ、ＣＤＤ８６６の存在下で抗腫瘍効果を維持した（図３Ｄ）。ＣＴ−２６腫瘍重量は、単独またはＣＤＤ８６６と組み合わせたエベロリムス処置で著しく低下した。ＣＴ−２６腫瘍重量に関するＣＤＤ８６６処置の著しい効果は存在しなかった。
【０１７５】
非腫瘍担持群では、前脛骨筋、腓腹筋−ヒラメ筋−足底筋複合体および四頭筋の重量は、エベロリムス処置によって影響を受けず、ＣＤＤ８６６処置によって著しく増加した（図４Ａ〜Ｃ）。筋重量に関するＣＤＤ８６６の効果は、エベロリムスの存在下で維持された。ＣＴ−２６腫瘍は、非腫瘍担持対照群と比較して、前脛骨筋、腓腹筋−ヒラメ筋−足底筋複合体および四頭筋の重量の著しい減少を誘導した（図４Ａ〜Ｃ）。ＣＴ−２６により誘導される筋重量減少は、エベロリムスまたはＣＤＤ８６６処置によって著しく低下した。興味深いことに、エベロリムスとＣＤＤ８６６の組合せ物は、相加的方法で、骨格筋重量減少を元に戻すようであり、組合せ処置の効果は、エベロリムス処置単独と著しく異なっていた。
【実施例５】
【０１７６】
エベロリムスと組み合わせたビマグルマブは、がん悪液質の無増悪期間を遅延させる
治療介入研究におけるＣＴ−２６誘導悪液質に関するエベロリムスとＣＤＤ８６６の有益な効果に加えて、がんおよび関連する悪液質の進行に関するこれらの処置の効果を、シスプラチン組合せ研究で使用したものと同じ基準を使用して評価した。ＣＴ−２６対照群では、中断基準までの経過日数の中央値（無増悪期間）は、無作為化および処置開始の１７．５日後であった（図４ＤおよびＥ）。エベロリムス処置は、主にその抗腫瘍効果によって、無増悪期間を２３日まで著しく延長したが、ＣＤＤ８６６が示した延長の傾向は２１日までで、著しいものではなかった。無増悪期間に関するＣＤＤ８６６の意義の欠如は、この処置が体重減少を妨げる点では非常に功を奏するが、第２の中断基準である腫瘍成長を阻害しなかったという事実によって説明される。重要なことに、エベロリムスとＣＤＤ８６６の組合せ物は、無増悪期間を２８．５日までさらに遅らせるようであり、この効果は、ＣＴ−２６対照群と比較して著しい。
【０１７７】
エベロリムスとの組合せ
ｍＴＯＲは細胞成長と増殖において中心的役割を果たすことが知られているため、エベロリムスによるｍＴＯＲ阻害は、ＣＤＤ８６６の非存在下および存在下の両方で、予想通り著しい抗腫瘍効果を示した。この結果は、エベロリムスの抗がん作用がＣＤＤ８６６によるＡｃｔＲＩＩ阻害によってネガティブに影響を受けないことをはっきりと示す。ＣＴ−２６腫瘍によって引き起こされる体重減少と整合することに、骨格筋重量は、ＣＴ−２６対照群で著しく低下した。エベロリムスまたはＣＤＤ８６６処置は単独で、ＣＴ−２６腫瘍によって引き起こされる骨格筋重量減少に対して腫瘍担持マウスを著しく保護した。興味深いことに、ＣＤＤ８６６によるＡｃｔＲＩＩ阻害は、エベロリムスの存在下で有効なままであるだけでなく、ｍＴＯＲが正常な筋成長に必要であるという事実にもかかわらず、骨格筋重量減少を元に戻す相加的効果の、著しくはない傾向も示した。同様に、非腫瘍担持マウスでは、エベロリムス処置による体重への効果はなかったが、ＣＤＤ８６６は体重を著しく増加させた。体重へのＣＤＤ８６６の効果は、エベロリムスの存在下でも維持され、ｍＴＯＲ阻害が体重へのＣＤＤ８６６の効果を変化させなかったことをはっきりと示した。非腫瘍担持マウスにおいて、ＣＤＤ８６６処置に際して観察された筋肉同化作用応答は著しく、腫瘍への明らかに有効な用量でのｍＴＯＲ阻害によって影響を受けなかった。
【０１７８】
エベロリムス処置は単独で、生存に対する代替としての無増悪期間を延長し、ＣＤＤ８６６も延長の傾向を示した。重要なことに、エベロリムスとＣＤＤ８６６の組合せ物は、無増悪期間をさらに遅らせるようであった。各処置は、有益な効果を発揮するように補足的に作用し、エベロリムスは腫瘍成長を阻害し、ＣＤＤ８６６は悪液質を予防した。ＣＤＤ８６６とエベロリムスの組合せ物で観察された相加的抗悪液質作用に対する傾向は、ＡｃｔＲＩＩ遮断とｍＴＯＲ阻害が、悪液質の進行の下における骨格筋にどのようにポジティブに相互作用するのかに関して、さらなる説明を必要とする。
【０１７９】
ｍＴＯＲＣ１は、除神経により誘導される骨格筋萎縮で活性化されることが報告されているが、ラパマイシン処置によるｍＴＯＲ阻害の抗萎縮効果は決定的ではなかった。ｍＴＯＲの活性化は、ｍＴＯＲ阻害が有益であると思われる加齢、肥満、インスリン抵抗性および糖尿病などの他の病理状態でも報告されている。本研究では、腫瘍担持マウスにおけるリン酸化およびｍＴＯＲの総量が著しく増加する。したがって、ＣＴ−２６結腸がん誘導悪液質におけるこのようなｍＴＯＲの異常な活性化も細胞によって引き起こされる悪液質に寄与し、これ故に、ｍＴＯＲ阻害が、ＡｃｔＲＩＩ遮断と組み合わせた場合にさらなる利益を示したのであろう。
【実施例６】
【０１８０】
加齢におけるｍＴＯＲインヒビターとミオスタチンアンタゴニストの組合せ
ビマグルマブとエベロリムスなどのｍＴＯＲインヒビターの組合せ物は、ビマグルマブが筋質量を増加させ、エベロリムスが筋肉の質を改善するため、加齢関連筋機能不全の処置に対して特に有効である可能性がある。ビマグルマブは、ミオスタチン／アクチビン経路を阻害することによって筋質量を改善する。エベロリムスは、老化した筋肉で過活性であるｍＴＯＲ経路を阻害することによって筋機能を改善する。ｍＴＯＲの阻害は、ミトコンドリアの機能を強化し、炎症を低下させ、かつオートファジーを上昇させることによって筋機能を改善する場合がある。ビマグルマブとエベロリムスなどのｍＴＯＲインヒビターを組み合わせて筋質量および筋機能を改善することは、サルコペニアおよび心不全において治療利益を有する可能性がある。さらに、筋質量および筋機能を改善することは、筋肉におけるグルコースの取り込みを増加させることによって、真性糖尿病において治療利益を有する場合がある。
【０１８１】
図５のデータは、加齢におけるｍＴＯＲインヒビターとミオスタチン／アクチビン経路のアンタゴニスト（例えば、ビマグルマブ）の有益な使用に対する理論的根拠を支持するものであり、以下のことを示す：
１．ｍＴＯＲは、若齢ラットに対し老齢ラットの骨格筋において過活性である
２．ｍＴＯＲは、若齢ラットに対して老齢ラットの骨格筋において絶食後に適切に下方調節されない。
【０１８２】
参考文献
以下の参考文献、特にそれに関連する定義および記載の内容全体が参照により本明細書に組み込まれる。
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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2018537447.tif 000023
2018537447.tif 000024
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