(57)【要約】  可溶性エポキシド加水分解酵素（ｓＥＨ）／ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマ（ＰＰＡＲγ）モジュレーターとして二重に作用し、糖尿病を含むメタボリックシンドローム（ＭｅｔＳ）クラスター疾患の治療に有用なＮ−ベンジルベンズアミド類を提供する。さらに、その製造方法、および使用方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の構造を有する化合物またはその塩。
【化１】
2018524353.tif 000017
式中、Ｘ−ＹはＣＨ＝ＣまたはＣＨ2−ＣＨであり；Ｒ1はＣＨ2ＣＨ3、ＣＨ3またはＨであり；かつＲ3はフルオロ置換アリール基である。
【請求項２】
Ｒ3のフルオロ置換アリール基が、トリフルオロメチル置換またはトリフルオロメトキシ置換フェニル基である請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
前記トリフルオロメチル置換またはトリフルオロメトキシ置換が前記フェニル基のオルト位にある請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ3が、以下のいずれかである請求項１に記載の化合物。
【化２】
2018524353.tif 000018
【請求項５】
Ｒ3が、以下である請求項１に記載の化合物。
【化３】
2018524353.tif 000019
【請求項６】
Ｘ−ＹがＣＨ2−ＣＨであり、Ｒ1がＣＨ2ＣＨ3である請求項１〜５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７】
Ｘ−ＹがＣＨ＝Ｃであり、Ｒ1がＣＨ2ＣＨ3である請求項１〜５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８】
Ｘ−ＹがＣＨ2−ＣＨであり、Ｒ1がＨである請求項１〜５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項９】
Ｘ−ＹがＣＨ＝ＣＨであり、Ｒ1がＨである請求項１〜５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１０】
対象に投与した場合の可溶性エポキシド加水分解酵素（ｓＥＨ）の５０％阻害濃度（ＩＣ50）およびペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマ（ＰＰＡＲγ）の５０％効果濃度（ＥＣ50）が１．０マイクロモル未満である請求項１に記載の化合物。
【請求項１１】
（ａ）請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物、および（ｂ）薬学的に許容される担体を含む組成物。
【請求項１２】
経口投与剤として処方される請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
対象に治療有効量の請求項１〜１０のいずれか１項記載の化合物を対象に投与することを含む、対象におけるメタボリックシンドロームを治療する方法であって、可溶性エポキシド加水分解酵素（ｓＥＨ）およびペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマ（ＰＰＡＲγ）が、前記化合物によって同時に調節されることにより前記対象のメタボリックシンドロームを治療する方法。
【請求項１４】
治療有効量の化合物が、対象において１．０マイクロモル未満のｓＥＨの５０％阻害濃度（ＩＣ50）およびＰＰＡＲγの５０％効果濃度（ＥＣ50）を提供する、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
対象においてメタボリックシンドロームを治療する医薬品の製造のための請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項１６】
対象におけるメタボリックシンドロームの治療に使用するための請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１７】
治療有効量の請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物を対象に投与することを含む、対象における糖尿病の治療方法であって、可溶性エポキシド加水分解酵素（ｓＥＨ）およびペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマ（ＰＰＡＲγ）が、前記化合物によって同時に調節されることにより前記対象の糖尿病を治療する方法。
【請求項１８】
治療有効量の化合物が、対象において１．０マイクロモル未満のｓＥＨの５０％阻害濃度（ＩＣ50）およびＰＰＡＲγの５０％効果濃度（ＥＣ50）を提供する、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
対象において糖尿病を治療する医薬品の製造のための請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項２０】
対象における糖尿病の治療に使用するための請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２１】
治療有効量の請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物を対象に投与することを含む、対象における可溶性エポキシド加水分解酵素（ｓＥＨ）およびペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマ（ＰＰＡＲγ）を同時に調節する方法であって、ｓＥＨおよびＰＰＡＲγが、前記化合物によって同時に調節される方法。
【請求項２２】
治療有効量の化合物が、対象において１．０マイクロモル未満のｓＥＨの５０％阻害濃度（ＩＣ50）およびＰＰＡＲγの５０％効果濃度（ＥＣ50）を提供する、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
対象において可溶性エポキシド加水分解酵素（ｓＥＨ）およびペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマ（ＰＰＡＲγ）を同時に調節する医薬品の製造のための請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項２４】
対象における可溶性エポキシド加水分解酵素（ｓＥＨ）およびペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマ（ＰＰＡＲγ）活性を同時に調節するための請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
この出願は、２０１５年７月２日に出願された米国特許出願第６２／１８８，０１０号の優先権を主張するものであり、前記仮出願の内容は参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
連邦政府による資金提供を受けた研究開発に関する声明
本発明は、国立衛生研究所により授与された１Ｒ０１ＤＫ１０３６１６−０Ａ１に基づく政府の支援によってなされた。政府は本発明に一定の権利を有する。
【０００３】
本発明は、概して代謝症候群（ＭｅｔＳ）および関連する状態の治療に関する。より詳細には、本発明は、二重可溶性エポキシド加水分解酵素（ｓＥＨ）／ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）モジュレーターとして作用し、糖尿病を含むＭｅｔＳクラスター疾患の治療における薬物として有用なＮ−ベンジルベンズアミド類に関する。
【背景技術】
【０００４】
メタボリックシンドローム（ＭｅｔＳ）は、冠状動脈性心疾患、脳卒中および末梢血管疾患などの動脈硬化性心血管疾患（ＡＳＣＶＤ）につながる中枢性肥満、アテローム発生性異脂肪血症、インスリン抵抗性および内皮機能不全などの危険因子群ならびに２型糖尿病の名称である（Ｔ２Ｄ）［１−４］。さらに、Ｔ２Ｄに罹患した患者は、長期の微小血管合併症を発症し、個体の３分の２が神経因性疼痛［５］に罹患し、３分の１が糖尿病性腎症を発症する［６］。ＭｅｔＳは非常に複雑な病態生理を有する。図１を参照。疫学的な証拠によると、欧米社会におけるＭｅｔＳの罹患率の上昇は、不均衡、高カロリー食摂取、座り心地の生活習慣、ストレスなど西洋の生活習慣要因によるものである［３］。一度にすべてのリスク要因をカバーすることは、体重減少、身体活動の増加、およびアテローム生産抑制遺伝子の食事を意味するライフスタイルの変化である［３，７，８］。それにもかかわらず、既に開発された内皮機能不全およびＴ２Ｄなどの個々の障害は、このアプローチによって完全に逆転することはできず、症状は進行する年齢とともに悪化する。したがって、時間とともに様々な危険因子を蓄積する患者は、各障害を別々に治療するためにかなりの数の薬物を蓄積する［９］。
【０００５】
肥満は、ＭｅｔＳにおけるいくつかの危険因子の基礎を形成し、したがって、重要な標的である。食欲調節またはカロリー吸収のいずれかを変化させる薬理学的体重制御を達成することができる。中枢神経系（ＣＮＳ）に干渉することによって変化した食欲を得ることができるが、多くの薬物は重篤な副作用のために市場から既に取り出されている［１０，１１］。オルリスタットは、カロリー吸収を直接変更する唯一の認可薬物であり、膵臓および胃のリパーゼを阻害し、ＣＮＳの外で作用する［８］。
【０００６】
ここで、３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリルコエンザイムＡ（ＨＭＧ  ＣｏＡ）レダクターゼ阻害剤（スタチン）［１２］およびＰＰＡＲαアゴニスト（フィブラート）は、現在、血漿コレステロールおよびトリグリセリドレベルを低下させるために使用されている［１３］。部分的にはアテローム発生により開始され、長期間にわたる高血圧はＭｅｔＳ患者の主要な死因である心血管疾患（ＣＶＤ）および脳卒中などの大血管イベントを引き起こす［１４］。高血圧治療は、通常、利尿薬およびベータ遮断薬などの薬物の組み合わせを含む。しかし、インスリン抵抗性と脂質異常症が治療中に悪化する可能性があるため、これはＭｅｔＳ患者の治療における選択肢ではない可能性がある［１５］。ここでは、アンジオテンシン変換酵素拮抗薬やアンジオテンシン−ＩＩ−受容体拮抗薬などの他の血圧降下剤が優先的に用いられる。
【０００７】
おそらくＭｅｔＳによって引き起こされる最も関連した障害はＴ２Ｄである。ここで、末梢インスリン抵抗性は、高インスリン血症および上昇した血糖につながる代謝機能障害によって誘導される。疾患が進行するにつれて、膵臓β島細胞機能は徐々に失われ、全体的なインスリン欠乏および高血糖を生じる［１６，１７］。進行した状態では、治療を受けていないＴ２Ｄ患者は、網膜症、痛みを伴う神経障害および腎症などの微小血管合併症の過多を呈するので、厳密な血糖コントロールと調節された血圧レベルが唯一の予防方法である［１８］。これまでのところ、Ｔ２Ｄを治療または改善するための確立された治療法は、ＭｅｔＳの他の危険因子の治療と比較して有効性が低く、または成功していない［１８］。利用可能なインスリンの増加は、筋肉および肝臓細胞における末梢インスリン抵抗性を補う一つの方法である。これは、膵臓インスリン放出を引き起こすスルホニルウレアまたはビグアナイドの適用によって、またはインスリン療法（外部注射）のいずれかによって達成することができる［１９，２０］。
【０００８】
要約すると、ＭｅｔＳの危険因子および後天性疾患の治療には多剤耐性の現象につながる莫大な量の薬物が必要である。ここで、患者の薬物動態および薬理学的状況は好ましくない複雑さに達し、予測不可能な薬物−薬物相互作用が起こり得る。さらに、医療のコンプライアンスは危険にさらされている。治療費が上昇する一方で、投薬エラーの確率は増加する［３］。このような状況では、ＭｅｔＳの２つ以上の側面を治療できる化合物に薬剤研究を集中させることが望ましい。したがって、一度に複数のリスク因子に対処するマルチターゲットリガンドは、この場合において合理的な適用を見つけることができる［２１］。
【０００９】
ＰＰＡＲ核受容体ファミリーのメンバーであるＰＰＡＲγは、長鎖脂肪酸およびエイコサノイドなどの様々な親油性化合物によって内因的に活性化される。共活性化剤の動員後、レセプターはレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）［２２］とヘテロダイマー化し、リガンド依存性および独立した種々の標的遺伝子の転写／転写抑制に影響を及ぼす。ＰＰＡＲγは脂肪生成、脂質代謝およびグルコースホメオスタシスならびに抗炎症プロセスの調節において重要な役割を果たし、従ってＴ２Ｄの治療に使用される［２３］。ロシグリタゾンおよびピオグリタゾンなどのチアゾリジンジオン（ＴＺＤｓ）による受容体の薬理学的活性化は、インスリン作用および血糖値に対する有益な効果を示す［２４］。「脂質スチール仮説」において、これらの影響は、遊離脂肪酸（ＦＦＡ）およびトリグリセリド（ＴＧ）の白色脂肪組織への取り込みに由来する。これは、ＦＡＢＰ４（ヒト脂肪細胞脂肪酸結合タンパク質４、マウスａｐ４に対応する）、ＬＰＬ（リポタンパク質リパーゼ）、脂肪酸輸送タンパク質（ＣＤ３６、脂肪酸トランスロカーゼ、ＦＡＴＰ、グリセロールトランスポーター、アクアポリン）およびＰＥＰＣＫ（ホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼ）などのいくつかのＰＰＡＲγ標的遺伝子のアップレギュレーションによって維持される［２５−３０］。さらに、ＰＰＡＲγのインスリン感受性効果は、アディポネクチンなどの生物活性アディポカインのアップレギュレーションと相関して、肝臓グルコース産出の減少およびグルコース取り込みの改善［３１−３４］および腫瘍壊死因子の抑制などのＰＰＡＲγ活性化の抗炎症特性α（ＴＮＦα）およびレジスチンは、インスリン抵抗性にマイナスの影響を与える［３５、３６］。最近の研究では、ＴＺＤが膵β細胞機能の予防効果、インスリン分泌の安定化、全血インスリン作用の抑制をもたらす可能性があることも示されている［３７−３９］。ＰＰＡＲγ活性化がＨＤＬ−Ｃリポタンパク質をアップレギュレートするために議論され、脂質異常症の治療に有用である可能性があることも興味深い［４０，４１］。
【００１０】
しかし、ＴＺＤｓの臨床使用は、過剰な体重増加、体液貯留および治療された患者の骨粗鬆症リスクの増加のために制限される［４２、４３］。臨床試験のメタアナリシスは、ロシグリタゾンが、うっ血性心不全、心筋梗塞、心血管疾患および全死亡率のリスクを高め、米国でのアクセスが厳しく制限され、欧州での市場撤退の勧告をもたらすことを意味している。トログリタゾンは肝毒性により市場から回収され、ピオグリタゾンは膀胱癌を引き起こすようである［４４］。別の欠点は、大血管イベントの発生に対するＴＺＤｓの貧弱な効果であるが、血糖値の平衡化は微小血管合併症を減少させる［４５］。この文脈において、ＴＺＤで見られる有害事象のいくつかは、癌発生および肝毒性のようなものが、クラス特異的現象の代わりに複合特性であるように見えることが言及することが重要である［４６−４８］。
【００１１】
可溶性エポキシド加水分解酵素（ｓＥＨ）は、脂肪組織において豊富に発現され、その発現および活性は肥満と共に増加する［４９］。ｓＥＨはアラキドン酸カスケードの酵素であり、シトクロムＰ４５０由来のエポキシエイコサトリエン酸（ＥＥＴｓ）の生物活性の低い対応するジオール、ジヒドロキシエポキシエイコサトリエン酸（ＤＨＥＴｓ）への加水分解を促進する［５０］。ｓＥＨ阻害を介してＥＥＴレベルが上昇する。内皮細胞由来ＥＥＴは、平滑筋細胞上でカルシウム活性化カリウムチャネルを活性化し、過分極および血管緩和をもたらす［５１，５２］。数多くの研究は、心血管疾患（ＣＶＤ）［５３］、異常脂質血症［５４］、神経障害［５５−５７］および腎症［５８］などの様々なＭｅｔＳ関連障害に対するＥＥＴ由来の効果を示す。高血圧の動物モデルにおいて、ＥＥＴｓは、内皮由来の緩和因子として作用し、心臓血管系に対して複数の保護効果を有する。最近の研究では、急性心筋梗塞を有する患者由来の内皮前駆細胞が、ｓＥＨ阻害およびそれに続くＰＰＡＲγの活性化を介してＥＥＴｓを蓄積することによる血管新生の改善を示している［５９，６０］。異脂肪血症治療におけるｓＥＨ阻害の関連性は、Ｈａｍｍｏｃｋらがすでに示した。この研究では、ＬＤＬレセプターノックアウトマウスにおけるｓＥＨ阻害は、ＡＢＣＡ１（ＡＴＰ結合カセットトランスポーターＡ１）発現、細胞からのコレステロール輸出を促進するコレステロール流出調節タンパク質およびその後の脂肪組織における新生ＨＤＬの形成を増加させた。これは循環ＨＤＬの増加を伴い、これは逆コレステロール輸送経路を増強する。さらに、ｓＥＨ阻害はＬＤＬ−Ｃレベルを低下させ、動物における確立されたアテローム硬化性プラークのサイズを減少させた［５４］。さらに、ｓＥＨ阻害は、いくつかのインビボ糖尿病性神経因性疼痛モデルにおいて鎮痛効果を示した［５６，６１，６２］。以前に記載されたように、膵島β細胞の機能障害は、Ｔ２Ｄに至る根底にある機構の１つである。ｓＥＨ阻害は糖尿病マウスにおいて高血糖症を予防し、膵島グルコース刺激インスリン分泌を増強することが示された。さらに、ｓＥＨ−ノックアウトマウスは、ＳＴＺ誘発性糖尿病において膵島細胞のアポトーシスを弱化させた［６３］。さらに、いくつかのマウスモデルは、ｓＥＨ阻害が腎保護作用を有することを示し得る［５８］。現在、ｓＥＨ阻害剤は市販されていない。したがって、追加の心臓および腎臓保護特性を有するより安全なＰＰＡＲγ調節薬のための満たされていない医学的必要性があるので、ＰＰＡＲγアゴニズムと１つの化合物におけるｓＥＨ拮抗作用との組み合わせは、ＭｅｔＳおよびＴ２Ｄの処理において実質的な利点を有する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
ここで、本発明者らは、可溶性エポキシド加水分解酵素（ｓＥＨ）およびペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマ（ＰＰＡＲγ）の同時調節に影響を及ぼす特定のＮ−ベンジルベンズアミド類の投与によって、糖尿病を含むＭｅｔＳクラスター疾患を治療するためのマルチ標的アプローチを提示する。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
したがって、本発明は、第１の態様において、以下の構造を有する特定の化合物を包含する：
【化１】
2018524353.tif 000002
Ｘ−ＹはＣＨ＝ＣまたはＣＨ2−ＣＨであり；Ｒ1はＣＨ2ＣＨ3、ＣＨ3またはＨであり；かつＲ3はフルオロ置換アリール基であり；またはその塩である。Ｒ3のフルオロ置換アリール基は、好ましくはトリフルオロメチルまたはトリフルオロメトキシ置換基を含むフェニル基であり、さらに好ましくはフェニル基のオルト位で置換されているフェニル基である。
【００１４】
本発明による特定の化合物においてＲ3は、
【化２】
2018524353.tif 000003
である。
【００１５】
本発明の好ましい化合物はＲ3が
【化３】
2018524353.tif 000004
であることを必要とする。
【００１６】
本発明の化合物は、Ｘ−ＹがＣＨ2−ＣＨであり、Ｒ1がＣＨ2ＣＨ3であり；Ｘ−ＹはＣＨ＝Ｃであり、Ｒ1はＣＨ2ＣＨ3であり；Ｘ−ＹはＣＨ2−ＣＨであり、Ｒ1はＨであり；Ｘ−ＹはＣＨ＝ＣＨであり、Ｒ1はＨである。
【００１７】
本発明による特に好ましい化合物は、Ｘ−ＹがＣＨ2ＣＨであり、Ｒ1がＨであり、Ｒ3が
【化４】
2018524353.tif 000005
であることを必要とする。
【００１８】
特に好ましい実施態様では、本発明の化合物は、対象に投与した場合の可溶性エポキシド加水分解酵素（ｓＥＨ）の５０％阻害濃度（ＩＣ50）およびペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマ（ＰＰＡＲγ）の５０％効果濃度（ＥＣ５０）が１．０マイクロモル未満である。
【００１９】
別の態様では、本発明は、（ａ）本発明のＮ−ベンジルベンズアミド化合物；（ｂ）薬学的に許容される担体、を含む組成物を提供する。好ましい実施態様では、この組成物は経口投与剤として処方される。
【００２０】
さらに別の態様では、本発明は、治療有効量の本発明のＮ−ベンジルベンズアミド化合物を対象に投与することを含む、メタボリックシンドロームを治療する方法であって、可溶性エポキシドヒドロラーゼ（ｓＥＨ）およびペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマ（ＰＰＡＲγ）は化合物によって同時に調節され、それにより対象のメタボリックシンドロームを治療する。
【００２１】
好ましい実施態様では、治療上有効な量は、対象において１．０マイクロモル未満であるｓＥＨの５０％阻害濃度（ＩＣ50）およびＰＰＡＲγの５０％効果濃度（ＥＣ50）を提供する。
【００２２】
別の実施態様では、本発明は、対象におけるＭｅｔＳを治療するための医薬の製造のための本発明のＮ−ベンジルベンズアミド化合物の使用を含む。同様に、本発明は、対象のＭｅｔＳを処理する際に使用するための本発明の化合物をさらに意図する。
【００２３】
さらに別の態様では、本発明は、治療上有効な量の本発明のＮ−ベンジルベンズアミド化合物を対象に投与することを含み、対象における糖尿病の治療方法を提供し、可溶性エポキシド加水分解酵素（ｓＥＨ）およびペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマ（ＰＰＡＲγ）は化合物によって同時に調節され、それにより対象の糖尿病を治療する。
【００２４】
好ましい実施態様では、治療有効量は、対象における可溶性エポキシド加水分解酵素（ｓＥＨ）の５０％阻害濃度（ＩＣ50）およびペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマ（ＰＰＡＲγ）の５０％効果濃度（ＥＣ50）が１．０マイクロモル未満である。
【００２５】
別の実施態様において、本発明は、対象における糖尿病を治療するための医薬の製造のための本発明のＮ−ベンジルベンズアミド化合物の使用を含む。同様に、本発明はさらに、対象における糖尿病を治療する際の使用のための本発明による化合物を意図する。
【００２６】
さらに別の態様では、本発明は、対象に可溶性エポキシド加水分解酵素（ｓＥＨ）およびペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマ（ＰＰＡＲγ）活性を同時に調節するための方法を提供し、ここで、治療有効量の本発明のＮ−ベンジルベンズアミド化合物加水分解酵素（ｓＥＨ）およびペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマ（ＰＰＡＲγ）は、対象の化合物によって同時に調節される。
【００２７】
好ましい実施態様では、治療有効量の化合物が、対象において１．０マイクロモル未満の、であるｓＥＨの５０％阻害濃度（ＩＣ50）およびＰＰＡＲγの５０％効果濃度（ＥＣ50）を提供する。
【００２８】
別の実施態様では、本発明は、対象における可溶性エポキシド加水分解酵素（ｓＥＨ）およびペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマ（ＰＰＡＲγ）活性を同時に調節するための薬剤の製造のための本発明のＮ−ベンジルベンズアミド化合物の使用を含む。同様に、本発明は、対象において可溶性エポキシド加水分解酵素（ｓＥＨ）およびペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマ（ＰＰＡＲγ）活性を同時に調節するのに使用するための本発明の化合物をさらに意図する。
【００２９】
本発明の他の目的、特徴および優位性は、明細書、特許請求の範囲および図面をレビューした後に明らかになる。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１】ＭｅｔＳクラスター病およびｓＥＨおよびＰＰＡＲγの二重調節により提案された多病原性相互作用を示す。
【図２ａ】異なる化合物の存在下で３Ｔ３−Ｌ１マウス線維芽細胞が分化したことを示す。
【図２ｂ】Ｏｉｌ−ＲｅｄまたはＰＰＡＲγ標的遺伝子発現（ＧＬＵＴ４、アディポネクチン、ＦＡＢＰ４、ＬＰＬ）で染色した細胞をｑＰＣＲ分析による測定。
【図２ｃ】Ｓｐａｒｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット肝ミクロソームとのインキュベーション後の化合物１ｃの残留濃度。
【図２ｄ】３０ｍｇ／ｋｇ  ｂｗの単回経口投与後のマウスにおける化合物１ｃの血漿濃度。
【図２ｅ】化合物１ｃ（３０ｍｇ／ｋｇ  ｂｗ；８時間；３匹の動物）の単回投与後のマウス肝臓におけるＰＰＡＲγ標的遺伝子ＣＤ３６の発現。
【図２ｆ】化合物１ｃ（３０ｍｇ／ｋｇ  ｂｗ；２つの時点あたり３匹の動物）の単回経口投与後のマウス血漿中のＥＥＴ／ＤＨＥＴ比。３つの独立した実験の平均値±ｓ．ｅ．ｍが示される。
【図３ａ】飲料水適用（３０ｍｇ／ｋｇ  ｂｗ；６匹の動物）によるマウスにおける化合物１４ｃの血漿濃度を示す。
【図３ｂ】化合物１４ｃ、３０ｍｇ／ｋｇ  ｂｗを飲料水適用において１４日間投与した後のマウス肝臓におけるＰＰＡＲγ標的遺伝子ＣＤ３６の発現。
【図４】ｓＥＨ対ＰＰＡＲγの活性値のプロットを示す。
【図５】化合物ＧＳＫ１９９７１３２Ｂと共結晶化されたＰＰＡＲγＬＢＤのＸ線構造への化合物のドッキングによってモデル化された化合物１４ｃの結合様式を示す。
【図６】新規な二重リガンドの設計のためのランドマーク構造を示す。ＧＳＫ１９９７１３２Ｂ、非酸性ＰＰＡＲγアゴニスト。インビボで活性なｓＥＨ阻害剤であるＧＳＫ２１８８９３１Ｂ。ベンジルベンズアミド部分を含有するＰＰＡＲαアゴニストであるＫＣＬ。１ｃ、ＳＡＲの最初の新規二元配位子および起源。
【図７】（ａ）ＩＢＣＦ、ＴＥＡ、乾燥ＤＣＭ、１２時間；（ｂ）ＮａＨ、ＴＨＦ、０℃、２時間；（ｃ）Ｈ2、Ｐｔ／Ｃ、ＥｔＯＨ、１２時間；（ｄ）ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ／ＴＨＦ、ＫＯＨ、ＭＷ、１００℃、３０分；（ｅ）Ｍｅ  3ＳＯ+I-、ＮａＨ、ＤＭＳＯ、６時間；（ｆ）ＫＯＨ、ＥｔＯＨ／Ｈ2Ｏ、１６時間；（ｇ）ジエチルベンジルホスホネート、ＮａＨ、ＴＨＦ、０℃、２時間（ｈ）ＤＩＰＥＡ、１６時間。
【図８】（ａ）ＥＤＣ、ＤＭＡＰ、乾燥ＤＣＭ、１２時間；（ｂ）Ｐｄ（ＡｃＯ）2、Ｋ2ＣＯ3、アセトン／Ｈ2Ｏ、６５℃、１時間；（ｃ）ＮａＮ3、ＮＨ3Ｃｌ、ＤＭＦ、１２時間。
【図９】ヒト分化した初代脂肪細胞のオイルレッドＯ染色を示す。プレ脂肪細胞は、種々の化合物の存在下で分化した。Ｇ：未処理対照；Ｈ：１０μＭＣＩＵ（ｓＥＨ阻害剤）；Ｉ：２μＭロシグリタゾン（ＰＰＡＲγアゴニスト）；Ｊ：１μＭ１ｃ；Ｋ：５μＭ１ｃ；Ｌ：１０μＭ１ｃ。３つの代表的な実験の１つが示されている。画像は１００倍に拡大した。
【図１０】異なる刺激の存在下で分化したヒト初代脂肪細胞におけるＰＰＡＲγ標的遺伝子（ＧＬＵＴ４、アディポネクチン、ＦＡＢＰ４、ＬＰＬ）のｑＰＣＲ分析を示す。ＯＦ＋ＦＣＳは、基礎培地のみにおける細胞の分化を表す。対照は、ＰＰＡＲγ刺激を伴わない実験を示す。３つの独立した実験のそれぞれの平均値±ｓ．ｅ．ｍを示す。
【図１１】マウスの１ｂ投与（３０ｍｇ／ｋｇの単回投与）後の１ｃのＰＫを示す。示されるのは平均値±ｓ．ｅ．ｍである。２つの時点あたり３匹のマウスの血漿から得た。
【図１２】マウスの１ｂ投与（３０ｍｇ／ｋｇの単回投与）後の１ｃの脳濃度を示す。示されるのは平均値±ｓ．ｅ．ｍである。時間点当たり３匹のマウスの脳組織から得た。
【図１３】ラット肝ミクロソームにおける化合物１４ｃの代謝安定性を示す。示されるのは、３つの独立した実験の平均値±ｓ．ｅ．ｍである。
【図１４】イノシトールリン酸１（ＩＰ１）測定によるＧＳＫ４０（ＦＦＡ１）に対する化合物１ｃおよび１４ｃの効果を示す。ｈＦＦＡ１を安定に発現するヒト組換えＨＥＫ２９３細胞を、示された化合物で刺激し、ＩＰ１蓄積を定量した。ＴＵＧ４８８（Ｌｉｔ）は、強力なＦＦＡ１活性化の基準として含まれていた。ｐＥＣ50：１ｃ：５．０８±０．２２；１４ｃ：４．８５±０．２５。示されるのは、３つの独立した実験の平均値±ｓ．ｅ．ｍである。
【図１５】イノシトールリン酸１（ＩＰ１）測定によるＧＳＫ４０（ｍＦＦＡ１）に対する化合物１ｃおよび１４ｃの効果を示す。ＦＦＡ１（ｍＦＦＡ１）のマウスオルソログを安定に発現するヒト組換えＨＥＫ２９３細胞を、示された化合物で刺激しＩＰ１蓄積を定量した。ＴＵＧ４８８［１］は、強力なｍＦＦＡ１活性化の基準として含まれていた。ｐＥＣ50：１ｃ：５．３１±０．３１；１４ｃ：４．６３±０．２３。示されるのは、３つの独立した実験の平均値±ｓ．ｅ．ｍ．である。
【図１６】ＲＢ３９４分析のインビトロおよびインビボデータの比較を提供する。
【図１７】ＳＨＲＯＢモデルにおけるＲＢ３９４の収縮期血圧データを示す。
【図１８】ＳＨＲＯＢモデルにおけるＲＢ３９４の体重データを示す図である。
【図１９】ＳＨＲＯＢモデルにおけるＲＢ３９４についてのアルブミン尿データを示す。
【図２０】ＳＨＲＯＢモデルにおけるＲＢ３９４の血糖データを示す。
【図２１】ＭｅｔＳラットモデルおよびＲＢ３９４アッセイ時間経過を示す。
【図２２】血中グルコースおよびグルコースＡＵＣデータを示す。
【図２３】アルブミン尿および糸球体傷害スコアを示す。
【図２４】腎臓における管状キャスト（上部パネル）を示す過ヨウ素酸シッフ染色（×２００）および線維症（下パネル）形成（矢印）を示すピクロシリウスレッド染色（×２００）を示す。＊Ｐ＜０．０５、ＷＫＹ＋ビヒクル対ＳＨＲＯＢ＋ビヒクル、＃Ｐ＜０．０５、ＳＨＲＯＢ＋ビヒクル対ＳＨＲＯＢ＋ＲＢ３９４。
【図２５】ＷＫＹおよびＳＨＲＯＢの腎臓（×２００；矢印）におけるマクロファージ浸潤を示す炎症マーカーＭＣＰ−１排泄（左上）、腎マクロファージ浸潤の半定量的スコアリング（右上）および代表的な顕微鏡写真（下）ビヒクルまたはＲＢ３９４処理の８週間後。＊Ｐ＜０．０５、ＷＫＹ＋ビヒクル対ＳＨＲＯＢ＋ビヒクル；＃Ｐ＜０．０５、ＳＨＲＯＢ＋ビヒクル対ＳＨＲＯＢ＋ＲＢ３９４。
【図２６】本発明者らによって使用された２型糖尿病ラットモデルおよび方法を示す。
【図２７】ＺＳＦ１ラットの収縮期血圧データを示す。
【図２８】ＺＳＦ１ラットの血糖データを示す。
【図２９】ＺＳＦ１ラットのタンパク尿／クレアチニン比データを示す。
【発明を実施するための形態】
【００３１】
Ｉ．全般
本発明の材料および方法が記載される前に、本発明は、記載される特定の方法論、プロトコール、材料および試薬に限定されず、これらは変更され得ることが理解される。本明細書で使用する用語は、特定の実施態様のみを説明するためのものであり、後に提出される非仮出願によってのみ限定される本発明の範囲を限定するものではないことも理解されたい。
【００３２】
本明細書および添付の特許請求の範囲で使用されるように、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」には、文脈上他に明確に指示されない限り、複数形が含まれることに留意されたい。同様に、用語「ａ」（または「ａｎ」）、「１つ以上」および「少なくとも１つの」は、本明細書では交換可能に使用することができる。用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」および「有する（ｈａｖｉｎｇ）」は、交換可能に使用することができることにも留意されたい。
【００３３】
他に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に記載されているものと類似または等価な任意の方法および材料を本発明の実施または試験に使用することができるが、好ましい方法および材料をここで説明する。本明細書中で具体的に言及される全ての刊行物および特許は、本発明に関連して使用され得る刊行物に報告される化学物質、機器、統計的分析および方法論を記述および開示することを含む、本明細書に引用された全ての参考文献は、当業者のレベルを示すものとして解釈されるべきである。本明細書中のいかなるものも、発明が先行発明によりそのような開示よりも先行する資格がないことを認めるものとして解釈されるものではない。
ＩＩ．発明
【００３４】
本発明者らは、新規なＮ−ベンジルベンズアミド類、それら化合物を含有する組成物、それら化合物の合成方法、および糖尿病を含むＭｅｔＳクラスター疾患の治療におけるそれら化合物の使用を開示する。本発明者らは、本発明による化合物が治療効果を示し、適当なげっ歯類モデルにおいて良好な耐性を有することを示した。本明細書中のいずれかの作業モード（mode of operation）を採用しないが、本発明の化合物は、本発明者らによって、ｓＥＨおよびＰＰＡＲγの二重調節物質であることが実証されている。
【００３５】
公知のＰＰＡＲγ活性化剤の主な副作用は、体重増加および浮腫をもたらす保水である。幸いにも、ｓＥＨ阻害およびＥＥＴｓはナトリウム利尿であり、水および電解質の恒常性に正の影響を与える［６４，６５］。Ｉｍｉｇらは、ｓＥＨ阻害剤（ｔ−ＡＵＣＢ）とＰＰＡＲγアゴニスト（ロシグリタゾン）の併用療法が血圧、全身グルコース、ＴＧおよびＦＦＡを低下させたことを高血圧肥満自然発症（ＳＨＲＯＢ）ラットで示した。これらの３つのバイオマーカーを用いて、彼は腎障害を軽減することによって腎保護作用も示した。注目すべきことに、単一のｓＥＨ／ＰＰＡＲγ治療と比較して、併用のさらなる正の相乗効果がここに報告された［６６］。本発明者らは現在、二重ｓＥＨ／ＰＰＡＲγ治療の可能性を調査し、その予期せぬ発見が、部分的に本発明の基礎となる。
【００３６】
本明細書中で使用される場合、「対象」は、哺乳動物および非哺乳動物を意味する。「哺乳動物」は、ヒト、ヒト以外の霊長類、例えばチンパンジーおよび他の類人猿およびサル種を含む哺乳類のクラスのメンバーを意味するが、これらに限定されない。ウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、およびブタのような家畜；ウサギ、イヌ、およびネコなどの愛玩動物（domestic animals）；ラット、マウスおよびモルモットなどのげっ歯類を含む実験動物；等が挙げられる。非哺乳動物の例としては、鳥類などが挙げられるが、これらに限定されない。「対象」という用語は、特定の年齢または性別を示すものではない。
【００３７】
本明細書で使用する「投与する」または「投与」には、本発明の化合物を体内、好ましくは全身循環中に導入するための任意の手段が含まれる。例としては、経口、バッカル、舌下、肺、経皮、経粘膜、ならびに皮下、腹腔内、静脈内および筋肉内注射が挙げられるが、これらに限定されない。
【００３８】
「治療有効量」は、疾患または状態を治療するために対象に投与されたときに、その疾患のそのような治療を行うのに十分な化合物の量を意味する。「治療有効量」は、化合物、治療される疾患状態、治療される疾患の重篤度または相対的な健康状態、投与の経路および形態、出向する医療従事者または獣医従事者の判断、および他の要因によって異なる。
【００３９】
本発明の目的のために、「治療する」または「治療」は、疾患、状態または障害に対抗する目的で対象の管理およびケアを示す。これらの用語は、予防的、すなわち、予防的および緩和的治療の両方を包含する。治療には、症状または合併症の発症を予防し、症状または合併症を緩和し、または疾患、状態または障害を排除するための本発明の化合物の投与が含まれる。
【００４０】
化合物は、治療有効量で対象に投与される。化合物は、単独で、または薬学的に許容される組成物の一部として投与することができる。さらに、化合物または組成物は、例えば、ボーラス注射によって、一連の錠剤などにより一度に投与することができ、または例えば経皮送達を用いてある期間にわたって実質的に均一に送達することができる。さらに、化合物の用量は経時的に変化させることができる。化合物は、即時放出製剤、制御放出製剤、またはそれらの組み合わせを用いて投与することができる。用語「制御放出」は、持続放出、遅延放出、およびそれらの組み合わせを含む。
【００４１】
本発明の医薬組成物は、バルクで、単一単位用量として、または複数の単一単位用量として調製、包装または販売することができる。本明細書で使用する「単位用量」は、所定量の活性成分を含む医薬組成物の別々の量である。有効成分の量は、対象に投与される有効成分の投与量またはそのような投与量の好都合な分率、例えば、そのような投与量の１／２または１／３などにほぼ等しい。
【００４２】
本発明の薬学的組成物中の活性成分、薬学的に許容される担体、および任意の追加の成分の相対量は、処理されるヒトの同一性、サイズおよび状態、さらに組成物が投与されるルートによって変化する。一例として、組成物は０．１％〜１００％（ｗ／ｗ）の活性成分を含むことができる。本発明の医薬組成物の単位用量は、一般に約１００ミリグラム〜約２グラムの活性成分を含み、好ましくは約２００ミリグラム〜約１．０グラムの活性成分を含む。
【００４３】
ヒトの好ましい投与量は、１日１回経口投与される低ｍｇ／ｋｇの範囲であろう。１日２回も受け入れられる。
【００４４】
水溶性を改善するために、好ましい化合物は、ポリエチレングリコールまたは他の極性官能基などの置換基で誘導体化された、またはリポソームに含まれるシクロデキストリンまたはシクロデキストリン誘導生成物で処方することができる。経口送達のために、化合物は親油性官能基で修飾されていてもよく、または能動的に吸収された分子に結合されていてもよい。他のアプローチは、引用により組み込まれる「Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ｔｏ  ｉｍｐｒｏｖｅ  ｏｒａｌ  ｄｒｕｇ  ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ」、Ｉｓａｂｅｌ  Ｇｏｍｅｚ−Ｏｒｅｌｌａｎａ、Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｏｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ、２００５年５月、Ｖｏｌ．２、Ｎｏ．３：Ｐａｇｅｓ  ４１９−４３３を参照されたい。
【００４５】
本発明の別の態様は、本発明の医薬組成物および教材を含むキットに関する。指示書は、本明細書に記載の目的の１つについて本発明の医薬組成物の有用性をヒトに伝達するために使用される刊行物、記録、図または他の表現媒体を含む。指示書は、例えば、本発明の医薬組成物の適切な用量を記載することもできる。本発明のキットの指示書は、例えば、本発明の医薬組成物を含有する容器に貼付することができ、または医薬組成物を含有する容器と共に輸送することができる。代替的には、指示書は、指示書と医薬組成物が受容者によって協調的に使用されることを意図して、容器から別個に輸送され得る。
【００４６】
本発明はまた、本発明の医薬組成物および組成物をヒトに送達するための送達装置を含むキットを含む。一例として、送達装置はスクイーズ可能な（squeezable）スプレーボトル、計量投与スプレーボトル、エアロゾルスプレー装置、噴霧器、乾燥粉末送達装置、自己推進溶媒（self-propelling solvent）/粉末投与装置、シリンジ、針、タンポン、または投薬量測定用容器である。キットは、本明細書に記載されている教材をさらに含むことができる。このキットはまた、別々の組成物のための容器、例えば、分割されたボトルまたは分割されたホイルパケットを含む。容器の別の例には、シリンジ、ボックス、バッグなどが含まれる。典型的には、キットは、別個の成分の投与のための指示書を含む。キット形態は、別々の成分が異なる剤形（例えば、経口および非経口）で投与され、異なる投与間隔で投与される場合、または組み合わせの個々の成分の滴定が処方する医師によって所望される場合に特に有利である。
【００４７】
キット上の飲み忘れ防止手段（memory aid）は、例えば、錠剤またはカプセルの隣にある数字の形で提供することが望ましく、その数字は、そのように特定された錠剤またはカプセルが摂取されるべきであるレジメンの日に対応する。このような、飲み忘れ防止手段の別の例は、例えば「第１週、月曜日、火曜日、・・・・第２週、月曜日、火曜日」などのように、カードに印刷されたカレンダーである。飲み忘れ防止手段の他のバリエーションは、容易に明らかにされるだろう。「１日用量」は、１日に１回の錠剤またはカプセルまたは複数の丸剤またはカプセル剤とすることができる。
【００４８】
本発明の別の実施態様では、意図された使用の順序で一度に1つずつ1日用量を分配するように設計されたディスペンサーが提供される。 好ましくは、ディスペンサーは、投薬レジメンとのコンプライアンスをさらに促進するために、記憶補助剤を備えている。このような記憶補助剤の例は、分配された1日用量の数を示す機械的計数器である。そのような記憶補助の別の例は、例えば、最後の1日用量が取られた日付を読み出す、および／または、次の線量をとる。
【００４９】
場合により他の薬学的に活性な化合物を含んでいてもよい本発明の化合物は、経口的に、直腸に、非経口的に（例えば、静脈内、筋肉内または皮下に）、静脈内、膣内、腹腔内、（例えば、散剤、軟膏またはドロップ）、または口腔または鼻スプレーとして投与することができる。意図される他の製剤には、投射されたナノ粒子、リポソーム製剤、活性成分を含む再封鎖赤血球、および免疫学的な製剤が含まれる。
【００５０】
医薬組成物の非経口投与には、ヒトの組織の物理的な破裂および組織中の破裂による医薬組成物の投与を特徴とする任意の投与経路が含まれる。したがって、非経口投与には、組成物の注射による組成物の外科的切開による適用によって、組織浸透性非外科的創傷を通して組成物を適用することによる医薬組成物の投与が含まれる。特に、非経口投与には、皮下、腹腔内、静脈内、動脈内、筋肉内、または胸骨内注射、および静脈内、動脈内または腎臓透析注入技術が含まれる。例えば、本発明の組成物は、脳（ｖＰＡＧによる）注射、くも膜下腔内注射、腹腔内注射、または血液注射によって対象に投与することができる。
【００５１】
非経口注射に適した組成物は、生理学的に許容される滅菌水性または非水性溶液、分散液、懸濁液またはエマルジョンなどの薬学的に許容される担体と組み合わせた活性成分を含むか、または滅菌注射溶液または分散液に再構成するための滅菌粉末を含み得る。適切な水性および非水性の担体、希釈剤、溶媒またはビヒクルの例としては、水、等張食塩水、エタノール、ポリオール（プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、グリセロールなど）、それらの適切な混合物、トリグリセリド、または注射可能な有機エステル、例えばオレイン酸エチルを含む。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用、分散液の場合には必要とされる粒子サイズの維持、および／または界面活性剤の使用によって維持することができる。そのような製剤は、ボーラス投与または連続投与に適した形態で調製、包装または販売することができる。注射可能な製剤は、アンプル、防腐剤を含む複数用量容器、または医師の自動注射または注射用の単回使用の装置などの単位剤形で調製、包装または販売することができる。
【００５２】
非経口投与のための製剤には、懸濁液、溶液、油性または水性ビヒクル中のエマルジョン、ペースト、および移植可能な徐放性または生分解性製剤が含まれる。このような製剤は、懸濁化剤、安定化剤または分散剤を含む１つまたは複数の追加の成分をさらに含むことができる。非経口投与のための製剤の一実施態様では、活性成分は、再構成された組成物の非経口投与の前に適切なビヒクル（例えば、滅菌発熱性物質除去蒸留水）で再構成するための乾燥（すなわち粉末または顆粒）形態で提供される。
【００５３】
医薬組成物は、滅菌注射用水性または油性懸濁液または溶液の形態で調製、包装または販売することができる。この懸濁液または溶液は、公知の技術に従って製剤化することができ、活性成分に加えて、本明細書に記載の分散剤、湿潤剤または懸濁化剤などの追加成分を含むことができる。このような滅菌注射用製剤は、例えば水または１，３−ブタンジオールのような非毒性の非経口的に許容される希釈剤または溶媒を用いて調製することができる。他の許容される希釈剤および溶媒には、リンゲル液、等張性塩化ナトリウム溶液、および合成モノグリセリドまたはジグリセリドなどの不揮発性油が含まれる。有用な他の非経口投与可能な製剤には、活性成分を微結晶形態、リポソーム製剤中、または生分解性ポリマー系の成分として含むものが含まれる。持続放出または移植のための組成物は、エマルジョン、イオン交換樹脂、難溶性ポリマーまたは難溶性塩のような薬学的に許容されるポリマーまたは疎水性材料を含むことができる。
【００５４】
本発明の化合物はまた、保存剤、湿潤剤、乳化剤、および／または分散剤（例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸などを含む）などのアジュバントを含有してもよい。また、等張剤、例えば、糖、塩化ナトリウムなどを含むことが望ましい場合もある。注射可能な医薬組成物の持続的な吸収は、吸収を遅延させることができる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよび／またはゼラチンの使用によってもたらされ得る。特に、リポソーム、マイソームおよび乳化剤は、本発明の化合物を送達のためにより可溶性にするために使用することができる。
【００５５】
投与形態は、固体または注射可能なインプラントまたはデポーを含み得る。好ましい実施態様では、インプラントは、有効量の活性剤および生分解性ポリマーを含む。好ましい実施態様では、適切な生分解性ポリマーは、ポリアスパラギン酸、ポリグルタミン酸、ポリ（Ｌ−ラクチド）、ポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド）、ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）、ポリＹ（Ｅ−カプロラクトン）、ポリ酸無水物、ポリ（ベータ−ヒドロキシ酪酸塩）、ポリ（オルトエステル）およびポリホスファゼンを含む。他の実施態様では、インプラントは有効量の活性薬剤とシラスティックポリマーとを含む。インプラントは、約１週間から数年間の長期間、活性薬剤の有効量の放出を提供する。
【００５６】
経口投与のための固体剤形には、カプセル剤、錠剤、散剤および顆粒剤が含まれる。このような固体剤形では、活性化合物は、クエン酸ナトリウムまたはリン酸二カルシウムなどの少なくとも１つの慣用される不活性な賦形剤（または担体）または（ａ）充填剤または増量剤、例えばデンプン、乳糖、マンニトール、またはケイ酸；（ｂ）結合剤、例えばカルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロース、またはアカシア；（ｃ）湿潤剤、例えばグリセロール；（ｄ）崩壊剤、例えば寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモまたはタピオカデンプン、アルギン酸、特定の複合ケイ酸塩または炭酸ナトリウム；（ｅ）溶液遅延剤、例えばパラフィン；（ｆ）吸収促進剤、例えば第四級アンモニウム化合物；（ｇ）湿潤剤、例えばセチルアルコールまたはグリセロールモノステアレート；（ｈ）吸着剤、例えばカオリンまたはベントナイト；および／または（ｉ）潤滑剤、例えばタルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、またはそれらの混合物である。カプセル剤および錠剤の場合、剤形は緩衝剤を含んでいてもよい。
【００５７】
活性成分を含む錠剤は、例えば、活性成分を場合により１つ以上の追加成分と共に圧縮または成形することによって製造することができる。圧縮錠剤は、粉末または顆粒製剤のような自由流動性形態の活性成分を、適切な装置中で、場合により１つ以上の結合剤、潤滑剤、賦形剤、界面活性剤、および分散剤を含む。成型錠剤は、活性成分、薬学的に許容される担体、および混合物を湿らせるために少なくとも十分な液体の混合物を適切な装置中で成形することによって作製することができる。
【００５８】
錠剤の製造に使用される薬学的に許容される賦形剤としては、不活性希釈剤、造粒剤および崩壊剤、結合剤および潤滑剤が挙げられる。既知の分散剤には、ジャガイモデンプンおよびデンプングリコール酸ナトリウムが含まれる。既知の界面活性剤としては、ラウリル硫酸ナトリウムが挙げられる。既知の希釈剤としては、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、乳糖、微結晶セルロース、リン酸カルシウム、リン酸水素カルシウム、およびリン酸ナトリウムが挙げられる。既知の造粒剤および崩壊剤としては、コーンスターチおよびアルギン酸が挙げられる。既知の結合剤としては、ゼラチン、アカシア、前ゼラチン化トウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドン、およびヒドロキシプロピルメチルセルロースが含まれる。公知の潤滑剤には、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、シリカおよびタルクが挙げられる。
【００５９】
錠剤は、コーティングされていなくてもよく、または、ヒトの胃腸管における遅延した崩壊を達成し、活性成分の持続放出および吸収を提供する既知の方法を用いてコーティングされてもよい。一例として、モノステアリン酸グリセリルまたはジステアリン酸グリセリルのような材料を用いて錠剤をコーティングすることができる。さらなる例として、錠剤は、米国特許第４，２５６，１０８；４，１６０，４５２；および４，２６５，８７４号に記載された、浸透圧制御放出錠剤を形成する方法を用いてコーティングすることができる。錠剤は、薬学的にエレガントで口当たりの良い調製物を提供するために、甘味剤、香味剤、着色剤、防腐剤、またはこれらのいくつかの組み合わせをさらに含むことができる。
【００６０】
錠剤は、錠剤、糖衣錠、カプセルおよび顆粒のような固体剤形が、腸溶性コーティングおよび当技術分野で周知のコーティングまたはシェルを用いて調製することができる。これらはまた、不透明化剤を含有してもよく、活性化合物を遅延して放出するような組成物であってもよい。使用可能な包埋組成物の例は、ポリマー物質およびワックスである。活性化合物はまた、必要に応じて、上記の賦形剤の１つ以上とマイクロカプセル化された形態であり得る。
【００６１】
同様のタイプの固体組成物は、ラクトースまたは乳糖、ならびに高分子量ポリエチレングリコールなどの賦形剤を用いて、軟質または硬質充填ゼラチンカプセル中の充填剤として使用することもできる。活性成分を含む硬カプセル剤は、ゼラチンなどの生理学的に分解可能な組成物を用いて製造することができる。そのような硬カプセルは有効成分を含み、例えば、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、またはカオリンのような不活性固体希釈剤を含むさらなる成分を含むことができる。活性成分を含む軟質ゼラチンカプセルは、ゼラチンのような生理学的に分解可能な組成物を用いて製造することができる。そのようなソフトカプセルは、水またはピーナッツ油、流動パラフィンまたはオリーブ油のような油媒体と混合することができる活性成分を含む。
【００６２】
経口組成物は、ヒト患者の小腸または大腸において経口投与剤を特異的に放出する公知の技術を用いて作製することができる。例えば、結腸を含む胃腸系への送達のための製剤には、例えばｐＨ６以上でしか溶解しないポリ（メタクリル酸、メチルメタクリレート）などのメタクリレートコポリマーに基づく腸溶コーティング系が含まれ、ポリマーは小腸への侵入時にのみ溶解し始める。そのようなポリマー配合物が崩壊する部位は、腸内輸送の速度および存在するポリマーの量に依存する。例えば、比較的厚いポリマーコーティングが、近位結腸に送達するために使用される（Ｈａｒｄｙら、Ａｌｉｍｅｎｔ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒａｐ．（１９８７）１：２７３−２８０）。部位特異的結腸送達を提供することができるポリマーも使用することができ、ポリマーは大腸の細菌叢に依存してポリマーコートの酵素分解をもたらし、したがって薬物の放出をもたらす。例えば、アゾポリマー（米国特許第４，６６３，３０８号）、グリコシド（フレンドら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（１９８４）２７：２６１−２６８）及び様々な天然及び修飾多糖類（ＰＣＴ出願を参照，ＰＣＴ／ＧＢ８９１００５８１）をこのような製剤に使用することができる。
【００６３】
米国特許第４，７７７，０４９号に記載されているようなパルス放出技術は、活性薬剤を胃腸管内の特定の位置に投与するために使用可能である。このようなシステムは、所定の時間に薬物送達を可能にし、必要に応じて他の添加剤と一緒に活性剤を送達して、局所的な微小環境を変えて、インビボでの放出を提供するための水の存在以外の外部条件に頼ることなく、薬剤の安定性および取り込みを促進する。
【００６４】
経口投与のための液体製剤には、薬学的に許容されるエマルジョン、溶液、懸濁液、シロップおよびエリキシルが含まれる。活性化合物に加えて、液体投与形態は、水または他の溶媒、等張性生理食塩水、可溶化剤および乳化剤、例えばエチルアルコール、イソプロピルアルコール、エチルカーボネート、エチルアルコールなどの当該分野で一般的に使用される不活性希釈剤ラッカセイ油、ココナッツ油、綿実油、落花生油、コムギ胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油、ヒマシ油、ヒマシ油、ヒマシ油、ヒマシ油、ヒマシ油、ゴマ油、ＭＩＧＬＹＯＬ（登録商標）、グリセロール、分留植物油、流動パラフィンなどの鉱油、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコール、ソルビタンの脂肪酸エステル、またはこれらの物質の混合物などが挙げられる。
【００６５】
このような不活性希釈剤に加えて、本発明の化合物はまた、湿潤剤、乳化剤および懸濁化剤、粘滑剤、保存剤、緩衝剤、塩、甘味剤、着香剤、着色剤および付香剤などのアジュバントを含むことができる。活性化合物に加えて、エトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールまたはソルビタンエステル、微結晶セルロース、硬化食用油脂、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントゴム、アラビアゴム、寒天、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メタ水酸化アルミニウム、ベントナイト、またはこれらの物質の混合物などのセルロース誘導体などが挙げられる。経口投与に適した本発明の医薬組成物の液体製剤は、液体形態または使用前に水または他の適切なビヒクルで再構成することを意図した乾燥製品の形態で調製、包装および販売することができる。
【００６６】
既知の分散剤または湿潤剤としては、レシチンなどの天然リン脂質、脂肪酸との縮合生成物、長鎖脂肪族アルコールと脂肪酸およびヘキシトールから誘導される部分エステルとの縮合生成物、または脂肪酸とヘキシトール無水物から誘導される部分エステル（例えば、ステアリン酸ポリオキシエチレン、ヘプタデカエチレンオキシセタノール、ポリオキシエチレンソルビトールモノオレエート、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートなど）、既知の乳化剤には、レシチンおよびアラビアゴムが含まれる。既知の防腐剤には、メチル、エチル、またはｎ−プロピル−パラ−ヒドロキシベンゾエート、アスコルビン酸およびソルビン酸が含まれる。既知の甘味剤には、例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ソルビトール、スクロースおよびサッカリンが含まれる。油性懸濁剤のための既知の増粘剤には、例えば、蜜蝋、硬質パラフィンおよびセチルアルコールが含まれる。
【００６７】
水性または油性溶媒中の活性成分の液体溶液は、液体懸濁液と実質的に同じ方法で調製することができ、主な違いは、活性成分が溶媒中に懸濁するのではなく溶解することである。本発明の医薬組成物の液体溶液は、液体懸濁液に関して記載された成分の各々を含むことができ、懸濁剤は必ずしも活性成分の溶媒への溶解を助長しないことが理解される。水性溶媒には、例えば、水および等張性生理食塩水が含まれる。油性溶媒には、例えば、アーモンド油、油性エステル、エチルアルコール、ラッカセイ油、オリーブ油、ゴマ油またはヤシ油などの植物油、分留植物油、および液体パラフィンなどの鉱油が含まれる。
【００６８】
直腸または膣投与のための組成物は、本発明の化合物および任意のさらなる化合物を、室温で固体であるカカオバター、ポリエチレングリコールまたは坐薬ワックスなどの適切な非刺激性賦形剤または担体と混合することによって調製することができるが、体温では液体であるため、直腸または膣腔内で融解し、活性成分を放出する。そのような組成物は、例えば、座薬、保持浣腸調製物、および直腸または結腸洗浄のための溶液の形態であり得る。坐剤製剤はさらに、酸化防止剤および防腐剤を含む様々な追加成分を含むことができる。直腸または結腸洗浄のための保持浣腸調製物または溶液は、活性成分を薬学的に許容される液体担体と組み合わせることによって調製することができる。当該技術分野で知られているように、ヒトの直腸の解剖学的構造に適合した送達装置を用いて、浣腸製剤を投与することができ、その中にパッケージすることができる。浣腸調製物は、酸化防止剤および防腐剤を含む様々な追加の成分をさらに含むことができる。
【００６９】
本発明の医薬組成物は、膣投与に適した製剤で調製、包装または販売することができる。このような組成物は、例えば、坐剤、タンポンなどの含浸されたまたはコーティングされた膣内挿入可能な材料、膣用調製物、または膣灌流用の溶液の形態であり得る。
【００７０】
本発明による化合物の局所投与のための投薬形態は、軟膏、散剤、スプレーおよび吸入剤を含む。化合物は、無菌条件下で、生理学的に許容される担体、および必要とされ得る任意の保存剤、緩衝剤および／または推進剤と混合される。局所投与に適した製剤には、リニメント剤、ローション剤、水中油型または油中水型エマルジョン、例えばクリーム、軟膏またはペースト、および溶液または懸濁液などの液体または半液体製剤が含まれる。局所的に投与可能な製剤は、例えば、約０．１％〜約１０％（ｗ／ｗ）の活性成分を含むことができるが、活性成分の濃度は溶媒中の活性成分の溶解限界と同じくらい高くてもよい。局所投与のための製剤は、本明細書に記載の１種以上の追加の成分をさらに含むことができる。
【００７１】
眼科用製剤、眼軟膏、粉末、および溶液もまた、本発明の範囲内であると考えられる。そのような製剤は、例えば、点眼剤の形態であってもよく、例えば水性または油性の液体担体中の有効成分の０．１−１．０％（ｗ／ｗ）溶液または懸濁液を含む。そのような点眼剤はさらに、緩衝剤、塩、または本明細書に記載されている追加の成分の１つまたは複数を含むことができる。他の実施態様では、眼科的に投与可能な製剤は、微晶質形態またはリポソーム製剤中に活性成分を含む。
【００７２】
肺送達のために製剤化された本発明の医薬組成物は、溶液または懸濁液の液滴の形態で活性成分を提供することができる。このような製剤は、有効成分を含む場合により滅菌された水性または希釈アルコール溶液または懸濁液として調製、包装または販売され、任意の噴霧または噴霧装置を用いて都合よく投与することができる。このような製剤は、サッカリンナトリウム、揮発性油、緩衝剤、界面活性剤、またはヒドロキシ安息香酸メチルなどの防腐剤などの香味剤を含む１つまたは複数の追加の成分をさらに含むことができる。この投与経路によって提供される液滴は、好ましくは、約０．１〜約２００ナノメートルの範囲の平均直径を有する。
【００７３】
本発明の医薬組成物は、口腔投与に適した製剤で調製、包装または販売することができる。そのような製剤は、例えば、従来の方法を用いて製造された錠剤またはロゼンジの形態であってもよく、そして例えば、０．１〜２０％（ｗ／ｗ）の活性成分を含み、残部（the balance）が経口的に溶解可能または分解可能な組成物、場合により、本明細書に記載の１種以上の追加の成分を含む。あるいは、口腔投与に適した製剤は、活性成分を含む粉末またはエアロゾル化または噴霧化された溶液または懸濁液を含むことができる。そのような粉末化、エアロゾル化または噴霧化された製剤は、分散されたとき、好ましくは約０．１〜約２００ナノメートルの範囲の平均粒子または液滴サイズを有し、さらに本明細書に記載の１つまたは複数の追加成分を含むことができる。
【００７４】
非ヒト動物における非経口投与のために、本発明の化合物は、ペーストまたはペレットの形態で調製され、インプラントとして、通常、動物の頭または耳の皮膚の下に投与され得る。ペースト調合物は、化合物または化合物を、ピーナッツ油、ゴマ油、コーン油などの薬学的に許容される油に分散させることによって調製することができる。治療有効量の化合物または化合物を含有するペレットは、化合物を希釈剤、例えばカーボワックス、カルナバワックスと混合することによって調製することができ、ペレット化工程を改善するために、ステアリン酸マグネシウムまたはカルシウムのような潤滑剤を添加することができる。所望の投与量レベルを達成するために、動物に複数のペレットを投与することができることは、もちろん認識されている。さらに、そのようなインプラントは、動物の体内に適切な活性剤レベルを維持するために、動物治療期間中に定期的に投与されてもよいことが判明している。
【００７５】
本発明の化合物およびその薬学的に許容される塩は、約０．０１〜約１，０００ｍｇ／日の範囲の投与量レベルで患者に投与することができる。約７０ｋｇの体重を有する正常な成人の場合、約０．０１〜約３００ｍｇの範囲の投薬量で十分であり、１〜１０ｍｇ／ｋｇの好ましい投薬量である。しかしながら、治療される対象の年齢および体重、意図される投与経路、投与される特定の化合物などに応じて、一般的な投与量範囲のいくつかの変動性が必要とされ得る。特定の患者に対する投薬量範囲および最適投薬量の決定は、本開示の恩恵を受ける当業者の能力の範囲内である。また、本発明の化合物は、持続放出、制御放出、および遅延放出製剤で使用することができ、その形態もまた当業者に周知であることに留意されたい。
【００７６】
本発明の化合物が、細胞に直接的に投与されるか、細胞を含む組織、細胞に接触する体液、または化合物が細胞に拡散または輸送され得る身体部位に投与されるかは重要ではない。化合物は、細胞中の脂質を動員するのに十分な量の化合物が細胞に直接的または間接的に到達する量および経路で患者に投与されれば十分である。最小量は化合物の種類によって異なる。
【００７７】
使用され得る具体的な投薬量および投薬量範囲は、患者の必要条件、処理される状態の重篤度、および投与される化合物の薬理活性を含む多くの因子に依存する。特定の患者に対する投薬量範囲および最適投薬量は、この開示を考慮して当業者の通常の技術の範囲内で決定される。当業者は、通常の熟練した医師または獣医師が、脂質貯蔵を動員し、体重減少を誘発し、または患者の食欲を抑制するための化合物の有効量を容易に決定および処方することを理解する。その過程において、医師または獣医師は、例えば、最初に比較的低用量を処方し、続いて適切な応答が得られるまで用量を増加させることができる。しかし、任意の特定のヒトの特定の投与量レベルは、使用される特定の化合物の活性、ヒトの年齢、体重、一般的な健康、性別、および食事、時間、投与経路、投与経路、排泄速度、任意の薬物の組み合わせ、および治療される任意の障害の重篤度に依存する。
【００７８】
本発明の化合物は、注射可能な担体系と組み合わせて、本明細書に記載され請求されている化合物を含む薬学的に注射可能な形態で製剤化される場合に特に有用である。ここで使用されるように、注射剤および注入剤形（すなわち、非経口剤形）には、リポソーム注射剤または活性薬物物質を封入するリン脂質を有する脂質二重層小胞が含まれるが、これらに限定されない。注射には、非経口使用を意図した滅菌調製物が含まれる。
【００７９】
ＵＳＰによって定義されるような５つの異なるクラスの注射、すなわちエマルジョン、脂質、粉末、溶液および懸濁液が存在する。エマルジョン注入には、非経口的に投与されることを意図した無菌の発熱物質を含まない調製物を含むエマルジョンが含まれる。溶液注射用の脂質複合体および粉末は、非経口使用のための溶液を形成するための再構成を意図した無菌調製物である。懸濁注射用粉末は、非経口的使用のための懸濁液を形成するための再構成を意図した滅菌調製物である。リポソーム懸濁液注入のために凍結乾燥された粉末は、脂質二重層内に活性薬物物質をカプセル化するために使用されるリン脂質を有する脂質二重層ベシクルのようなリポソームの組み込みを可能にするように処方される非経口使用のための再構成を意図した滅菌凍結乾燥製剤であり、それによって製剤が再構成時に形成されてもよい。凍結乾燥によって調製された溶液（「凍結乾燥」）を意図した剤形であり、それにより、凍結状態の生成物から極低圧力で水を除去し、その後液体を添加すると溶液が生成するあらゆる点で注射の必要条件に適合している。懸濁液注入のために凍結乾燥された粉末は、適切な流動媒体中に懸濁した固体を含有する非経口使用を意図した液体製剤であり、あらゆる点で滅菌懸濁液の要件に適合し、懸濁液を意図する医薬品は凍結乾燥によって調製される。溶液注入は、注射に適した適切な溶媒または相互に混和性のある溶媒の混合物に溶解された１つまたは複数の薬物を含む液体製剤を含む。溶液濃縮物の注入には、適切な溶媒を添加すると、注射の必要条件にすべての点で適合する溶液が得られる、非経口使用のための滅菌調製物が含まれる。懸濁液注入は、液相全体に分散された固体粒子を含む液体調製物（注射に適している）を含み、それによって粒子は不溶性であり、それによって油相は水相全体に分散するか、または分散しない。懸濁リポソーム注射剤は、活性薬物物質を（脂質二重層内または水性空間内のいずれかに）カプセル化するために使用されるリン脂質を通常含有するリポソーム（脂質二重層ビヒクル）が形成されるように、水相全体に分散された油相を有する液体製剤（注射に適している）である。懸濁超音波注入は、液相全体に分散された固体粒子を含む液体調製物（注射に適している）であり、それによって粒子は不溶性である。さらに、製品（tile product）は、気体が懸濁液を通って泡立ち、固体粒子による微小球の形成をもたらすので、超音波処理されてもよい。
【００８０】
非経口担体系は、１つまたは複数の薬学的に適切な賦形剤、例えば溶媒および共溶媒、可溶化剤、湿潤剤、懸濁剤、増粘剤、乳化剤、キレート剤、緩衝剤、ｐＨ調節剤、酸化防止剤、還元剤、抗菌防腐剤、増量剤、保護剤、等張化剤、および特別な添加剤を含む。
【００８１】
本発明者らは、可溶性エポキシド加水分解酵素（ｓＥＨ）およびペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマ（ＰＰＡＲγ）の同時調節に影響を及ぼす特定のＮ−ベンジルベンズアミド類の投与による、糖尿病を含むＭｅｔＳクラスター疾患を治療するためのマルチ標的アプローチを現在説明し、請求する。
【００８２】
したがって、本発明は、第1の態様において、以下の構造を有する特定の化合物を包含する：
【化５】
2018524353.tif 000006
Ｘ−ＹがＣＨ＝ＣまたはＣＨ2−ＣＨであり；Ｒ1はＣＨ2ＣＨ3、ＣＨ3またはＨであり；Ｒ3はフルオロ置換アリール基であり；またはその塩である。Ｒ3のフルオロ置換アリール基は、好ましくはトリフルオロメチルまたはトリフルオロメトキシ置換基を含むフェニル基であり、さらに好ましくはフェニル基のオルト位で置換されているフェニル基である。
【００８３】
本発明による特定の化合物において、Ｒ3は以下のいずれかである。
【化６】
2018524353.tif 000007
【００８４】
本発明の好ましい化合物は、Ｒ3が
【化７】
2018524353.tif 000008
であることを必要とする。
【００８５】
本発明の化合物は、Ｘ−ＹがＣＨ2−ＣＨであり、Ｒ1がＣＨ2ＣＨ3であり；Ｘ−ＹはＣＨ＝Ｃであり、Ｒ1はＣＨ2ＣＨ3であり；Ｘ−ＹはＣＨ2−ＣＨであり、Ｒ1はＨであり；Ｘ−ＹはＣＨ＝ＣＨであり、Ｒ1はＨである。
【００８６】
本発明による特に好ましい化合物は、Ｘ−ＹがＣＨ2ＣＨであり、Ｒ1がＨであり、Ｒ3が、
【化８】
2018524353.tif 000009
であることを必要とする。
【００８７】
特に好ましい実施態様では、本発明の化合物は、対象に投与した場合の可溶性エポキシド加水分解酵素（ｓＥＨ）の５０％阻害濃度（ＩＣ50）およびペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマ（ＰＰＡＲγ）の５０％効果濃度（ＥＣ50）が１．０マイクロモル未満である。
【００８８】
別の態様では、本発明は、（ａ）本発明のＮ−ベンジルベンズアミド化合物；（ｂ）薬学的に許容される担体を含む組成物を供給する。好ましい実施態様では、この組成物は経口投与量として処方される。
【００８９】
さらに別の態様では、本発明は、治療有効量の本発明のＮ−ベンジルベンズアミド化合物を対象に投与することを含む、メタボリックシンドロームを治療する方法であって、可溶性エポキシド加水分解酵素（ｓＥＨ）およびペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマ（ＰＰＡＲγ）は前記化合物によって同時に調節され、それにより対象のメタボリックシンドロームを治療する。
【００９０】
好ましい実施態様では、治療有効量は、対象において１．０マイクロモル未満であるｓＥＨの５０％阻害濃度（ＩＣ50）およびＰＰＡＲγの５０％効果濃度（ＥＣ50）を提供する。
【００９１】
別の実施態様では、本発明は、対象におけるＭｅｔＳを治療するための医薬の製造のための本発明のＮ−ベンジルベンズアミド化合物の使用を含む。同様に、本発明は、対象のＭｅｔＳを処理する際に使用するための本発明の化合物をさらに意図する。
【００９２】
さらに別の態様では、本発明は、有効量の本発明のＮ−ベンジルベンズアミド化合物を対象に投与することを含む、対象における糖尿病の治療方法であって、可溶性エポキシド加水分解酵素（ｓＥＨ）およびペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマ（ＰＰＡＲγ）が前記化合物によって同時に調節され、それにより対象の糖尿病を治療する。
【００９３】
好ましい実施態様では、治療有効量は、対象において１．０マイクロモル未満であるｓＥＨの５０％阻害濃度（ＩＣ50）およびＰＰＡＲγの５０％効果濃度（ＥＣ50）を提供する。
【００９４】
別の実施態様において、本発明は、対象における糖尿病を治療するための医薬の製造のための本発明のＮ−ベンジルベンズアミド化合物の使用を含む。同様に、本発明は、対象の糖尿病の治療に用いるための本発明の化合物をさらに意図する。
【００９５】
さらに別の態様では、本発明は、治療有効量のＮ−ベンジルベンズアミド化合物を対象に投与することを含む、対象における可溶性エポキシド加水分解酵素（ｓＥＨ）およびペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマ（ＰＰＡＲγ）活性を同時に調節するための方法であって、可溶性エポキシド加水分解酵素（ｓＥＨ）およびペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマ（ＰＰＡＲγ）が前記化合物によって同時に調節される方法を提供する。
【００９６】
好ましい実施態様では、治療有効量は、対象において１．０マイクロモル未満のｓＥＨの５０％阻害濃度（ＩＣ50）およびＰＰＡＲγの５０％効果濃度（ＥＣ50）を提供する。
【００９７】
別の実施態様において、本発明は、対象における可溶性エポキシド加水分解酵素（ｓＥＨ）およびペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマ（ＰＰＡＲγ）活性を同時に調節するための薬剤の製造のための本発明のＮ−ベンジルベンズアミド化合物の使用を含む。同様に、本発明は、対象において可溶性エポキシド加水分解酵素（ｓＥＨ）およびペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマ（ＰＰＡＲγ）活性を同時に調節するのために使用する本発明による化合物をさらに意図する。
【００９８】
本発明による組成物および方法の様々な例示的な実施態様を、以下の実施例で説明する。これらの実施態様では、アラビア数字（例えば、１，２，３など）によって識別される特定の生成物は、以下の説明、特に以下の表および添付の特許請求の範囲において特定される特定の構造を指す。
ＩＩＩ．実施例
【００９９】
以下の実施例は、説明の目的でのみ提供され、決して本発明の範囲を限定することを意図するものではない。実際には、本明細書に示され説明されたものに加えて、本発明の様々な改変が、前述の説明および以下の実施例から当業者に明らかとなり、添付の特許請求の範囲内に入る。
［実施例１］Ｎ−ベンジルベンズアミド類：経口で利用可能な二重ｓＥＨ／ＰＰＡＲγモジュレーターのための新規な融合足場
【０１００】
メタボリックシンドローム（ＭｅｔＳ）は、異常脂質血症、心臓血管疾患、２型糖尿病および肥満からなる多因子性疾患クラスターである。ＭｅｔＳにおける薬理学的介入は多数の薬物に依存するため、多剤耐性はＭｅｔＳ患者の治療における明らかな問題である。この研究は、ＭｅｔＳのより効率的な治療を達成するための二重標的アプローチに焦点を当てている。二重リガンド設計によって対処される２つの標的は、可溶性エポキシド加水分解酵素（ｓＥＨ）およびペルオキシソーム増殖因子活性化受容体型ガンマ（ＰＰＡＲγ）である。両方の標的についての構造活性関係研究を実施して、等電位性サブモル濃度（ｓＥＨ  ＩＣ50＝０．３±０．０５μＭ／ＰＰＡＲ  ＥＣ50＝０．３±０．０９μＭ）のプロピオン酸ベンジルベンズアミド誘導体を得た。インビトロおよびインビボでの評価は、ＭｅｔＳの長期動物モデルのための薬理学的ツール化合物として新規二重モジュレーターを認定する良好なＡＤＭＥ特性を示した。
【０１０１】
ヒスチジン／ＰＰＡＲγファーマコフォアの同定
【０１０２】
共通のファーマコフォアの同定は、二重モジュレーターの設計プロセスにおいて困難な課題である。グラクソスミスクラインは、血液脳関門の浸透の理由で、一般的に使用される酸性頭部基を持たないＰＰＡＲγアゴニスト（ＧＳＫ１９９７１３２Ｂ）を２０１１年に発表した（図６）。共結晶化されたリガンドの結合様式は、ベンジルアミド部分がリガンドの完全アゴニスト特性を保持しながら酸性頭部基を置換することができることを示す。ほとんどすべての報告されているｓＥＨ阻害剤は、ファーマコフォアとして尿素またはアミド構造を含むエポキシド模倣物（mimetics）である。この状況では、ベンジルアミド構造は、ｓＥＨおよびＰＰＡＲの合体ファーマコフォアを表し、これは二重リガンド設計において最良の出発点である。いくつかのベンジルアミドがｓＥＨ阻害剤として報告されており、この研究の最も進んだ化合物はＧＳＫ２１８８９３１Ｂである（図６）。報告されたＳＡＲに基づいて、化合物のｓＥＨおよび代謝安定性に対する阻害活性に重要なオルトトリフルオロメチルベンジル置換を適合させた。最後に、キョーリン製薬株式会社の研究は、古典的ＰＰＡＲ結合様式を示すが（図６）、ＰＰＡＲα活性化のために使用される置換ベンジルアミド（ＫＣＬ）を例証する。それにもかかわらず、この情報は、Ｎ−ベンジルベンズアミド部分を合併したファーマコフォアとして使用して、図６に示す分子設計に動機づけた。
【０１０３】
合成
【０１０４】
研究されたすべてのＮ−ベンジルベンズアミド誘導体を調製する合成経路を図７および８に示す。主要誘導体は、４段階で調製したα−置換Ｎ−ベンジルベンズアミドプロピオン酸（１ｃ−１９ｃ）である。各誘導体について、Ｎ−ベンジルベンズアミドシンナマート（１ａ−１９ａ）およびＮ−ベンジルベンズアミドプロパノアート（１ｂ−１９ｂ）タイプの化合物が合成経路により自動的に現れた。これらの化合物を、インビトロでＳＡＲ探索を延長するためにさらに評価した。また、Ｎ−ベンジルベンズアミドシンナマート（１ａ−１９ａ）は、対応するＮ−ベンジルベンズアミドケイ皮酸（１ｄ−１９ｄ）に加水分解され、この構造分野の多様性を完成させ、活性データのランドスケープを広げる。
【０１０５】
Ｎ−ベンジルベンズアミドプロピオン酸（１ｃ−１９ｃ）の合成（図７）は、ＤＣＭ中、イソブチルクロロホルメート（ＩＢＣＦ）を用いて４−ホルミル安息香酸または３−ホルミル安息香酸のいずれかを乾燥塩基性条件下で活性化し、種々の２−または２，４−置換ベンジルアミンを添加して化合物１−１５を製造する［７１，７２］。２−ホスホノ酪酸トリエチルを用いたＷｉｔｔｉｇ反応により、化合物１−１５を対応するＮ−ベンジルベンズアミドシンナマート誘導体（１ａ−１５ａ）に変換した［７３，７４］。ベンジルアミンフラグメントは２−トリフルオロメチル置換（１６ａ−１９ａ）で固定されたが、同じ反応タイプでは、４つの異なるアルファ置換基（水素、メチル、プロピルおよびフェニル）がＮ−ベンジルベンズアミドシンナマート骨格に導入された。すべてのα、β−不飽和カルボニル化合物（１ａ−１９ａ）を水素雰囲気下で乾燥ＥｔＯＨ中の炭素担持パラジウム触媒で還元して、Ｎ−ベンジルベンズアミドプロパノアート構造クラス（１ｂ−１９ｂ）を維持した［７４］。ケイ皮酸Ｎ−ベンジルベンズアミド（１ａ−１９ａ）またはＮ−ベンジルベンズアミドプロピオナート（１ｂ−１９ｂ）の対応する酸、Ｎ−ベンジルベンズアミドケイ皮酸（１ｄ−１９ｄ）およびＮ−ベンジルベンズアミドプロピオン酸（１ｃ−１９ｃ）への脱保護は、は、塩基性条件下、ＭｅＯＨ／Ｈ2Ｏ／ＴＨＦの溶媒混合物（比率１／２／１）を用いて同じマイクロ波反応により実施した［７５］。
【０１０６】
α、β−シクロプロパン酸誘導体（２２）を３段階で合成した（図７）［７６，７７］。化合物１とＮ−メトキシ−Ｎ−メチル（トリフェニルホスホラニリデン）とのＷｉｔｔｉｇ反応から出発して、アセトアミド化合物２０を得た。続いてＣｏｒｅｙ−Ｃｈａｙｋｏｖｓｋｙ反応により、誘導体２１を生成した。ＥｔＯＨ／Ｈ2Ｏ溶媒混合物中の塩基性脱保護の後、最終生成物（２２）を得た［７８］。
【０１０７】
非酸性ｏ−（ベンジルヒドロキシル）イミン誘導体（２３）は、図７に示す化合物１のＬｅｕｃｋａｒｔ−Ｗａｌｌａｃｈ反応［７９］およびｏ−ベンジルヒドロキシルアミン塩酸塩によって合成した。
【０１０８】
ビフェニルオルト−およびメタ−酸誘導体（２５，２６）を、図８に示す２段階経路で合成した。第１段階で、４−ヨード安息香酸をＤＭＡＰ触媒下でＥＤＣにより活性化し、２−トリフルオロメチルベンジルアミンと合わせて化合物２４とした［８０］。化合物２４と４−カルボキシならびに３−カルボキシベンゼンボロン酸とのスズキカップリングにより、所望のビフェニル酸誘導体（２５，２６）に達した［８１，８２］。
【０１０９】
テトラゾール誘導体（２８）も２段階合成で製造した（図８）。ニトリル中間体（２７）は、化合物（２４）と同じ条件下で調製した。テトラゾール合成のために、ＤＭＦ中のＮａＮ3およびＮＨ4Ｃｌを使用した［８３］。
【０１１０】
結果と考察
【０１１１】
前述の仮説に基づいて、非酸性ｓＥＨ／ＰＰＡＲ二重モジュレータ（２７）の最初のプロトタイプが設計され合成された。インビトロ阻害はｓＥＨ（ＩＣ50＝０．０６４μＭ）にのみ示され、すべてのＰＰＡＲサブタイプは影響を受けなかった（表１）。酸性頭部基の再導入および芳香族コアの延長の後、２組の異性体化合物の新しいセットを調製した（２５，２６）。ｓＥＨ阻害は、酸性頭部基をパラ位からメタ位に切り替えることによって、０．１７μＭから１μＭにほぼ１桁低下した。酸性頭部基のパラ位は、親油性のトンネル状ｓＥＨ結合ポケットに、より適切に適合しているようである［８４，８５］。１０μＭの濃度でのパラおよびメタ誘導体のＰＰＡＲ活性化は、約３０％（ピオグリタゾンと比較して）であり、酸性官能基または少なくともＨ結合アクセプターがＰＰＡＲ活性化にまだ必要であることが示された。しかしながら、活性化に関与するカルボキシル基を有する古典的なＰＰＡＲ結合様式を仮定すると、活性値は、ＰＰＡＲサブタイプαおよびγの両方でより異なるはずである［８６］。次の設計された分子（２８）において、コア断片は１つの芳香族環に還元され、カルボン酸はテトラゾールバイオイソスターによって置換された。これらの変化は、ＰＰＡＲ活性化の喪失およびマイクロモル範囲（ＩＣ50＝５μＭ）におけるｓＥＨ阻害を引き起こした（表１）。化合物２８の酸性頭部は、化合物２６と同様に、横向きに配向している。疎水性トンネル型ｓＥＨ結合ポケットに向かう極性部分のこの整列は、化合物２６および２８の１桁のマイクロモル阻害値を引き起こし得る。分子量の拡大を伴わないＰＰＡＲ活性化の明白な欠如を改善するために、しばしばうまく使用される酸性部分、α−置換プロピオン酸［７０，８７］の導入が用いられている。合成パラグラフで述べたように、プロピオン酸構造クラスの各置換パターンについて、４種類のカルボニル誘導体が生成された。第１カルテット（１ａ−ｄ）では、完全アゴニストＰＰＡＲγ特性を有する等効性サブタイプ選択的ｓＥＨ／ＰＰＡＲγ二重モジュレーターと、単一標的マイクロモル範囲の両方の標的に対する効果が見出された（１ｃ）（表２）。この構造クラスでは、主に親油性のｓＥＨ結合ポケット［８８］によって説明することができる、酸からエステル誘導体への１桁の大きさのｓＥＨ阻害が改善された。１ａを除いて、このシリーズの全ての誘導体はＰＰＡＲγ上で同様の活性化を示したが、最も顕著なのは化合物１ｂおよび１ｃの同等の効果である。エステル誘導体による完全なＰＰＡＲγ活性化は、酸性部分の軽微な影響を伴う代替のＰＰＡＲ結合様式の指標となり得る。このアッセイ系が使用されている以前のプロジェクトでエチルエステルの活性を全く観察しなかったという事実のために、ＣＯＳ−７細胞によってエステルが加水分解されることはありそうもなく、文献［７４，８６，８９−９１］にもこの事例の例を見出していない。一組の中央メタ置換異性体（１５ａ−ｄ）の生成は、活性の改善およびＰＰＡＲγ選択性の喪失を示さなかった（表２）。両方の標的での許容可能な効果、低分子量、ＰＰＡＲγサブタイプ選択性およびアッセイ条件下での妥当な水溶性により、化合物１ｃが薬理学的プロファイリングの出発点���して認定された。
【０１１２】
【表１】
2018524353.tif 000010
【０１１３】
【表２】
2018524353.tif 000011
【０１１４】
化合物１ｃは、ＷＳＴ−１アッセイによって示されるように、濃度３０μＭまでのＨｅｐＧ２細胞の細胞生存度を損なわなかった［９２］。Ｓｐａｒｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット肝臓ミクロソームでは、化合物１ｃのインビトロ代謝安定性が決定されている（図２）。１時間後、１ｃの〜９２％がそのまま残った。１ｃによるＰＰＡＲγ活性化は、脂肪細胞の分化への影響を測定することによって異なる細胞系において評価された。マウス３Ｔ３−Ｌ１線維芽細胞およびヒト初代前脂肪細胞における脂肪細胞分化を誘発する１ｃの能力を決定し、ロシグリタゾン（ＰＰＡＲγアゴニスト）［８６］およびＮ−シクロヘキシル−Ｎ’−ヨードフェニル尿素（ＣＩＵ、ｓＥＨ阻害剤）［９３］と比較した。３Ｔ３−Ｌ１線維芽細胞では、脂肪細胞分化に対する１ｃの用量依存的効果（１〜１０μＭ）が示された（図２ａ）。分化した脂肪細胞を、オイルレッドＯ染色キット染色を用いて視覚化した。１０μＭ濃度の１ｃでは、２μＭ濃度のロシグリタゾンと比較して、より少ない量の脂肪細胞が脂質を蓄積した。驚くべきことに、ＣＩＵはまた、直接ＰＰＡＲγ活性化なしに脂肪細胞分化を開始することができた。この現象に対する仮説は、その後のＥＥＴ−ＰＰＡＲγ経路を介したＰＰＡＲγ活性化である［５８，９４，６０］。ヒト脂肪細胞では、１ｃと同様の効果が観察された（図９参照）。オイルレッドＯ染色により、脂肪細胞分化に対する用量依存性（１〜１０μＭ）効果が測定され、これは２μＭロシグリタゾンと比較しても低かった。マウス３Ｔ３−Ｌ１線維芽細胞とは対照的に、ＣＩＵはヒト脂肪細胞で分化を開始することができなかった。さらに、分化したネズミおよびヒト脂肪細胞における４つのＰＰＡＲγ標的遺伝子（ＧＬＵＴ４、グルコーストランスポータータイプ４；アディポネクチン；ＦＡＢＰ４、脂肪酸結合タンパク質４、ＬＰＬ、リポタンパク質リパーゼ）の発現を、ｑＰＣＲ分析によって標的活性化の尺度として決定した［９５］。マウス３Ｔ３−Ｌ１線維芽細胞（図２ｂ〜ｅ）において、１ｃは分析された全ての標的遺伝子の用量依存的に活性化された発現を示した。１０μＭの濃度で、１ｃは、ロシグリタゾン（２μＭ）対照と比較して、４つのＰＰＡＲγ標的遺伝子の全ての発現がわずかに低かった。ヒト脂肪細胞において、ＰＰＡＲγ標的発現に対する１ｃの効果はより多様であった（図１０参照）。ここで、１μＭ濃度の１０μＭでのＧＬＵＴ４発現のアップレギュレーションは、ロシグリタゾン（２μＭ）対照と同等であった。対照的に、アディポネクチン、ＦＡＢＰ４およびＬＰＬは、１ｃ刺激によって引き起こされるアップレギュレーションにおいてわずかな効果しか示さなかった。測定されたＰＰＡＲγ標的遺伝子の発現に対する１ｃの多様な効果は、より詳細な研究が必要である。特定のＰＰＡＲγアゴニストは、他のものを倹約しながら、多くのＰＰＡＲγ標的遺伝子を選択的にトランス活性化することができることが知られている。この生理学的結果は現時点では完全には理解されておらず、現時点での集中研究の対象である［９６，９７］。このインビトロプロファイルに基づいて、２つのインビボＰＫ／ＰＤ研究をマウスで行った。プロドラッグ効果を達成するために、化合物１ｂ、１���のエチルエステル誘導体をインビボで特性決定した。９匹の（ＲｉｊＯｒｌ：ＳＷＩＳＳ／ＣＤ−１）マウス（胃管栄養）の３０ｍｇ／ｋｇ  ｂｗ１回の経口適用の後、１ｂは動物の血漿中では迅速なエステル加水分解を示す全ての時点で検出されなかった。対応する酸（１ｃ）は、０．５時間後にＣmax＝７８７ｎｇ／ｍｌ（〜２μＭ）、ＡＵＣ0→∞＝４０２６ｎｇ＊ｈ／ｍｌ、Ｃｌ／ｆ＝７．５ｌ／ｈ＊ｋｇＶｚ／ｆ＝５４．３ｌ／ｋｇであった（図１１参照）。最近、ＣＮＳにおけるＰＰＡＲγ活性化が、食物摂取およびエネルギー消費を制御することにより、市販のＰＰＡＲγ活性化因子に関連する増加した体重増加に関与することが示された［９８，９９］。したがって、１ｃの血液脳関門拡散能力を確立するために、その濃度を、処理したマウスの脳で測定した［１００，４４］。ここで、１ｃの濃度は３０ｎｇ／ｇ脳組織を超えなかった（図１２参照）。これは、１ｃが血液脳関門にほとんど浸透しないという前提につながった。残念なことに、１ｂの３０ｍｇ／ｋｇ投与後のＣmax＝７８７ｎｇ／ｍｌは、その生物学的利用能が低いことを示した。これはおそらく１ｂの水溶性が低いためであろう。したがって、３０ｍｇ／ｋｇ  ｂｗの１ｃ（１ｂの酸性誘導体）を９匹の（ＲｉｊＯｒｌ：ＳＷＩＳＳ／ＣＤ−１）マウス（胃管栄養）へ経口投与した、マウスにおける第２のＰＫ／ＰＤ試験を実施した（図２）。幸いなことに、１ｃは０．５時間後（ｔmax）に７２００ｎｇ／ｍｌ（〜２０μＭ）のマウス血漿中の最大濃度に達したが、これは１ｂのＣmaxより１桁高く、両方の標的のインビトロＥＣ50値よりもほぼ一桁高い。完全動態プロフィールも改善された（ＡＵＣ0→∞＝１５８４７ｎｇ＊ｈ／ｍｌ、Ｃｌ／ｆ＝１．９ｌ／ｈ＊ｋｇ、Ｖｚ／ｆ＝８ｌ／ｋｇ）。
【０１１５】
血漿中のＥＥＴ対ＤＨＥＴ比は、ｓＥＨ阻害の有効性に関する直接の情報を与える［５０］。マウスへの１ｃの適用の８時間後、血漿ＥＥＴ／ＤＨＥＴ比は少なくとも２倍増加した（図２ｉ）。インビボでのＰＰＡＲγ活性化の測定のために、処理したマウスの肝臓組織におけるＰＰＡＲγ標的遺伝子ＣＤ３６の発現をｑＰＣＲ分析によって定量した［９５］。発現は、非処理マウスと比較して少なくとも２倍増加した（図２ｈ）。１ｃのインビトロおよびインビボでの特徴づけは、中程度の薬理学的プロファイルをもたらし、効果およびバイオアベイラビリティーを改善する能力を有した。そこで、以下のＳＡＲ研究が実施された。
【０１１６】
【表３】
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【０１１７】
本発明者らは、代謝症候群の動物モデルにおける応用を念頭に置いたα置換ベンジルベンズアミドプロピオン酸誘導体のＳＡＲを探究した。そして、２つの主要な最適化基準を特定した。第一の目的は、長期の飲料水の適用に適合するように水溶性を改善することであった［１０１］。第２の目的は、血漿中の定常状態濃度未満の濃度範囲で十分な効果を達成することであった。第２の目的は、化合物１ｂから１ｃ（エステル対酸誘導体）への曝露の有意な差異により、カルボキシル官能基のα位での置換は、古典的ＰＰＡＲ結合様式を仮定して、ＰＰＡＲγ活性化において重要な役割を果たす［８６，９１］。その知識に基づいて、化合物の最初のバリエーションはα−エチル基の修飾であった。メチルへの還元またはα−置換基の完全な除去も、プロピルまたはフェニル置換への伸長もＰＰＡＲγ活性化に大きな影響を及ぼさなかった（表３）。我々は、このＳＡＲを別の結合モードの別の指標と解釈する。同じ置換パターンを有するａ−ｄ型誘導体に関する一般的な現象は、エステルから酸誘導体への水溶性の改善である。例えば、化合物１６ａ〜ｄ、１８ａ〜ｄおよび１９ａ〜ｄについて、その差は２桁の大きさになる（表３）。α、β−シクロプロピル誘導体が生成され、それらはいずれのターゲットに対しても強化された効果を有しなかった（２２）。合成経路は、特定の非酸性の前段階をもたらした（２１，２２；表１）。これを２つの調査した標的について評価した。予想通り、それらはｓＥＨに対して２桁のナノモル範囲の良好な阻害効果を示した。驚くべきことに、酸性部分を欠いているが、推定化合物２２と同様の足場を有する化合物２１は、ＰＰＡＲγの活性化がわずかに高いことを示した。これは、酸性頭部基の役割が軽微であり、別の結合様式が出現する可能性があることを前提としている。次の変化はベンジル環（２ａ−６ｃ）のオルト位で行った（表４−１）。−ＣＦ3基は、−Ｈ、−ＣＨ3、−Ｃｌ、−Ｂｒおよび−ＯＣＦ3で置換されており、これらはすべて効果損失につながる。−ＯＣＦ3エステル誘導体（６ｂ）のみが、限界的なｓＥＨ阻害改善を示した。オルト置換がないと、ｓＥＨ阻害はほぼ消失し、ＰＰＡＲ活性はほぼ１桁低下した。これは、オルト−ＣＦ3置換の関連性を強調している。以下の２４の誘導体（７ａ〜１１ｃ）（表４−２）において、研究はベンジル部分のパラ置換に焦点を当てた。ベンジル環のパラ位に立体的に要求の厳しい基（−ＣＦ3、−ＯＣＦ3および−Ｏ−フェニル）を導入すると、ＰＰＡＲγのサブタイプの選択性が失われ、ＰＰＡＲγの大きな改善は達成されなかった。類似の足場上のパラベンジル環位置に大きな部分を導入することによってＰＰＡＲαサブタイプを活性化することは、文献にも見られるが、ＰＰＡＲγ活性化にほとんど影響を及ぼさない［７０］。それにもかかわらず、パラ−Ｏ−フェニル酸誘導体（１２ｃ）は、この研究の化合物として唯一、すべてのＰＰＡＲサブタイプに対する活性を示した。ピオグリタゾンと比較して、ＥＣ50が０．３μＭ、ピーク活性化が１８１％と最も高いＰＰＡＲγ効果に達した。ｓＥＨ阻害は、オルト置換基を欠いている全てのパラ置換誘導体について事実上１桁の大きさに低下した。１２ｃは良好なＰＰＡＲ汎アゴニストを表すが、適切なｓＥＨ阻害効果がない。ベンジルパラ位（−Ｆ、−Ｏ−ＣＨ3、−Ｃｌ）でのより小さい置換基の使用は、標的のいずれか１つに対する効果を改善しなかったが、ＰＰＡＲγサブタイプの選択性を維持した。次の工程では、ベンジル部分のパラ置換組合せパターンが生成された（１３ａ〜１４ｄ）（表４−３）。ベンジル環のオルソ−ＣＦ3置換の影響は既に探究されている。この組み合わせのパラ置換パートナーとして、−Ｆおよび−Ｏ−ＣＨ3を選択し、以前取得したデータにおけるＰＰＡＲγに対するそれらのサブタイプの選択的活性化を参照した。−Ｏ−ＣＨ3置換基から、水溶性の増加も推測しれた。オルト−ＣＦ3、パラ−Ｆ置換パターンは、サブタイプ選択的ＰＰＡＲγ活性化を改善したが、ｓＥＨ阻害に対する増強効果はなかった。化合物１４ｃ（オルト−ＣＦ3、メタ−Ｏ−ＣＨ3）では、両方の標的に対する効果がほぼ１桁改善した（ｓＥＨ  ＩＣ50＝０．３μＭ、ＰＰＡＲγ  ＥＣ50＝０．３μＭ／１６０％）。さらに、化合物１４ｃは両方の標的に対して等効果であり、水溶性はＰＢＳ緩衝液中で１００μＭから５００μＭに増加した。１４ｃは、第２の薬理学的プロファイリングを実行する動機となった要件を満たす。化合物１４ｃは、ＷＳＴ−１アッセイによって示される濃度３０μＭまでのＨｅｐＧ２細胞の細胞生存性を損なわなかった［９２］。１４ｃをＳｐａｒｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット肝ミクロソームと１時間のインキュベーションした後、化合物の約９６％はインタクトなままであった（図１３参照）。１４ｃ（３０ｍｇ／ｋｇ  ｂｗ）の飲料水を適用した６匹のマウスにおける２週間のインビボ薬物動態試験において、９８６±３６３ｎｇ／ｍｌ（〜３μｌ）の最終血漿濃度が達成された（図３ａ）。２週間の処理後のマウス肝臓のｑＰＣＲ分析は、ＰＰＡＲγ標的遺伝子ＣＤ３６のアップレギュレーションを示した（図３ｂ）。１４ｃの血漿濃度がインビトロ値よりも１桁大きく、ＰＰＡＲγ標的遺伝子発現が改善されたので、化合物は糖尿病動物モデルのための薬理学的ツールとして適格である。
【０１１８】
【表４−１】
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【表４−２】
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【表４−３】
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【０１１９】
結論
【０１２０】
本研究では、一連の十分に特徴付けられたｓＥＨ／ＰＰＡＲγ二重モジュレーターを作製することを可能にした。ヒット（１ｃ）からリード（１４ｃ）への化合物の発展に沿って、効果およびＰＫ／ＰＤパラメーターが改善された。ｓＥＨおよびＰＰＡＲγの薬剤−標的相互作用特性に関する情報も生成されている。散布図（図４）は、生成されたインビトロデータの概要を酸性（赤色）およびエステル（青色）誘導体で分離して表示する。エステル誘導体による改善されたｓＥＨ阻害の明らかな傾向が認識され得る。この現象は、ｓＥＨ結合ポケットの特徴に関する一般的な知識に適合する［１０２−１０５］。側面に面する酸性頭部基（２６）と比較して、親油性直鎖状分子（２５）のパラ位に酸性頭部基を優先的に配置することも、以前に示されている［１０６］。オルト−ＣＦ3基の重要性は、この特定のタイプの足場でのｓＥＨ阻害のためのベンジル部分も、グラクソスミスクラインによって探究されている［６９］。ＰＰＡＲγ活性値の場合には、酸誘導体の明確な選択は認められない。この事実は、一般に酸性頭部群を含有する公開されたＰＰＡＲアゴニストの大多数に矛盾する［８６，８９］。この研究とキョーリン製薬による研究［７０，８７，１０７，１０８］とを比較すると、選択性の顕著な差異が認められるが、塩基性ベンジルベンズアミド足場は両方の研究に用いられた。キョーリン製薬の化合物はＰＰＡＲαに対して高度に選択的であるが、この研究の化合物はほぼすべてＰＰＡＲγ選択的作用薬である。ベンジル環のパラ位に立体的に要求される部分を導入することにより、活性プロフィールの方向が、キョーリン製薬のデータとより類似していた。このプロジェクトの目的を達成するための構造的変化のためのスペースは非常に狭いことが示された。図５は、グラクソスミスクラインによる共結晶化ベンジルベンズアミド誘導体（ＰＤＢ：３Ｓ９Ｓ）に基づく、ドッキング研究によって生成された化合物１４ｃの可能な代替ＰＰＡＲγリガンド結合様式を視覚化する［６８］。このシナリオでは、ベンジルベンズアミド構造がＰＰＡＲ活性化の原因となる可能性がある。
【０１２１】
想定される結合様式は、検討した両方の標的の合併ファーマコフォアとしてベンジルベンズアミドを修飾する。しかしながら、この仮定の唯一の証明は、この研究からのＰＰＡＲγ共結晶化合物であろう。構造的類似性に基づいて、遊離脂肪酸受容体１（ＦＦＡ１、以前のＧＰＲ４０）活性化に対する化合物１ｃおよび１４ｃの影響を決定した。ＦＦＡ１またはＧＰＲ４０は、膵臓β細胞インスリン分泌に関連する受容体である。サポート情報に示されている部分的アゴニスト効果（１４および１５参照）は、病原性の干渉において二次的であると推定される。それにもかかわらず、メタボリックシンドロームの研究のための興味深い特徴を有する薬理学的ツール化合物１４ｃが製造されている。糖尿病２型のｓＥＨ／ＰＰＡＲ併用療法には高い期待がある。ロシグリタゾン（ＰＰＡＲγアゴニスト）とｔ−ＡＵＣＢ（ｓＥＨインヒビター）の併用は、高血圧肥満自然発症（ＳＨＲＯＢ）ラットにおける腎障害に対する正の相乗効果をもたらすことが既に示されている［６６］。２型真性糖尿病の主要な結果の１つは糖尿病性腎症をもたらす。糖尿病性腎症に対するｓＥＨ／ＰＰＡＲ二重療法の臨床的有効性は依然として示されなければならない。２型糖尿病に罹患している患者の３分の２は神経因性疼痛を発症する。Ｈａｍｍｏｃｋらは、糖尿病インビボモデルにおける神経因性疼痛を軽減するためのｓＥＨ阻害剤の能力を検討した［５５−５７］。特定の単一のＰＰＡＲγアゴニスト、特にＴＺＤの欠点の１つは、頻繁に観察されるナトリウムおよび水の保持である。この効果は、うっ血性心不全患者には危険である可能性がある［１０９，１１０］。ｓＥＨおよびＥＥＴは、ナトリウムおよびナトリウムの恒常性を維持するためのナトリウム利尿剤および補助剤である［６４，６５］。より詳細には、ＰＰＡＲγアゴニストとｓＥＨ阻害剤との組み合わせは、有益な特徴を維持し、それらを新しいものに延長することによって、既存の副作用を克服し得る。さらに、二重リガンドアプローチは、２剤併用療法と比較して薬物動態を単純化することによって大きな利益をもたらす［１１１］。薬物組合せの複雑な薬物動態を過小評価してはならず、予測不可能な薬剤−薬物相互作用が起こり、副作用が増える。全体で８０個の合成された誘導体は、ｓＥＨ結合−ポケット特性についての知識を確認し、ＰＰＡＲγリガンド結合状況の共通の見解に議論の余地がある光をもたらした。元の骨格の２つの部分に焦点を当てることは、長期のインビボ実験のために化合物を修飾するための効果ならびにＡＤＭＥ値を改善するのに十分であった。
【０１２２】
実験セクション
【０１２３】
化学
【０１２４】
全般
すべての抽出物、試薬および溶媒は、Ａｌｆａ−Ａｅｓａｒ  ＧｍｂＨ＆Ｃｏ  ＫＧ（ドイツ、カールスルーエ）、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｅ  ＧｍｂＨ（ドイツ、ハノーバー）、Ａｐｏｌｌｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｌｔｄ（英国、マンチェスター）、ＪＲＤ  Ｆｌｕｏｒｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ｌｔｄ．（サリー、英国）から購入し、さらに精製することなく使用した。これらメーカーは９７％以上の純度を保証している。ＴＬＣは、Ｍｅｒｋ  ＫＧａＡ（ダルムシュタット、ドイツ）から購入したシリカ被覆アルミニウム箔（粒径６０μｍ）によって行った。合成化合物の精製のために、Ｖａｒｉａｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｄｅｕｔｓｃｈｌａｎｄ  ＧｍｂＨ社（ダルムシュタット、ドイツ）によるＩｎｔｅｌｌｉ  Ｆｌａｓｈ  ３１０クロマトグラフを使用した。ＳＦ２５−８０ｇとＳＦ２５−６０ｇの２種類の充填カラムが使用されているが、どちらもシリカゲル（粒径５０μｍ）が充填され、Ｖａｒｉａｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｄｅｕｔｓｃｈｌａｎｄ  ＧｍｂＨ社（ダルムシュタット、ドイツ）から購入した。Ｂｕｒｋｅｒ（カールスルーエ、ドイツ）のＤＰＸ２５０およびＡＶ４００核磁気共鳴分光計で1Ｈ（２５０／４００ＭＨｚ）および13Ｃ（６４ＭＨｚ）を測定した。Ｂｕｒｋｅｒ（カールスルーエ、ドイツ）のプログラムＴｏｐＳｐｉｎを用いて、すべてのスペクトルを分析した。内部標準としてテトラメチルシランを使用した。ＤＭＳＯ−ｄ６およびメタノール−ｄ３を溶媒として使用した。ＨＰＬＣおよび質量分析は、ＣＳ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ−Ｓｅｒｖｉｃｅ  ＧｍｂＨ（ランガーヴェーエ、ドイツ）のＭｕｌｔｏＨｉｇｈ  １００ＲＰ１８，３μ、１００×２ｍｍカラムを使用して、Ｓｈｉｍａｄｚｕ（デュースブルク、ドイツ）のＬＣＭＳ２０２０によって行った。溶離は、アセトニトリル／水の勾配２０〜７５％によって維持した。電子スプレーイオン化は陽性（＋）および陰性（−）スペクトルを生じ、ＵＶクロマトグラムは２つの波長（λ＝２５４および２８０ｎｍ）を測定した。高分解能質量分析は、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  ＭＡＬＤＩ  ＬＴＱ  ＯＲＢＩＴＲＡＰ  ＸＬにより実施した。全ての最終化合物は、ＨＰＬＣで測定し９５％以上の純度を有していた。
【０１２５】
４−ホルミル−Ｎ−（２−（トリフルオロメチル）ベンジル）ベンズアミド（１）の例を用いて化合物１−１７を調製する一般的な手順
４−ホルミル安息香酸１ｇ（６．７ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン０．９ｍｌ（６．７ｍｍｏｌ）およびイソブチルクロロホルメート１ｍｌ（７．３ｍｍｏｌ）をアルゴン雰囲気下、０℃でクロロホルム３０ｍｌに溶解した。１時間後、０．９ｍｌ（６．７ｍｍｏｌ）の２−（トリフルオロメチル）ベンジルアミンを添加した。溶液を室温に温め、１２時間撹拌した。反応混合物を２０ｍｌの２Ｍ  ＨＣｌ溶液、２０ｍｌの１Ｍ  ＮａＯＨ溶液で３回、２０ｍｌのブラインで１回洗浄した。有機層をＭｇＳＯ4で乾燥し、溶媒を減圧下で除去した。粗生成物をＥＥ／Ｈｅｘ混合物から再結晶した。白色固体が残った。
収率：１．４３ｇ（７０％）。1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ１０．１７（ｓ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨＯＨ），９．３８（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１Ｈ、Ｐｈ1−ＯＣＮＨ），９．０８〜８．１９（ｍ，４Ｈ，ＣＨＯ−Ｐｈ1）７．８３−７．５２（ｍ，４Ｈ，ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），４．７５（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2）ｐｐｍ。ＭＳ−ＥＳＩ：ｍ／ｚ３４２［Ｍ＋Ｃｌ-］。
【０１２６】
４−ホルミル−Ｎ−（ベンジル）ベンズアミド（２）
収率：０．９９ｇ（６８％）。1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ１０．１（ｓ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨＯ），９．２７（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ），８．１１−７．９９（ｍ，４Ｈ，ＣＨＯ−Ｐｈ1）７．３７−７．２３（ｍ，４Ｈ，ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），４．５２（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2）ｐｐｍ。ＭＳ−ＥＳＩ：ｍ／ｚ２４０［Ｍ＋Ｈ+］。
【０１２７】
４−ホルミル−Ｎ−（２−（メチル）ベンジル）ベンズアミド（３）
収率：１ｇ（６５％）。1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ１０．１（ｓ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨＯ），９．１４（ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ），８．１３−７．９９（ｍ，４Ｈ，ＣＨＯ−Ｐｈ1），７．３１−７．１４（ｍ，４Ｈ，ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），４．４９（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），２．３４（ｓ，３Ｈ，Ｐｈ2−ＣＨ3）ｐｐｍ。ＭＳ−ＥＳＩ：ｍ／ｚ２５４［Ｍ＋Ｈ+］。
【０１２８】
４−ホルミル−Ｎ−（２−（クロロ）ベンジル）ベンズアミド（４）
収率：１．１６ｇ（６５％）1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ１０．１４（ｓ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨＯ），９．２８（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ），８．１３−８．０２（ｍ，４Ｈ，ＣＨＯ−Ｐｈ1），７．５−７．２８（ｍ，４Ｈ，ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），４．５８（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2）ｐｐｍ。ＭＳ−ＥＳＩ：ｍ／ｚ２７４［Ｍ＋Ｈ+］。
【０１２９】
４−ホルミル−Ｎ−（２−（ブロモ）ベンジル）ベンズアミド（５）
収率：１．３３ｇ（６９％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ１０．１１（ｓ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨＯ），９．２９（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ），８．１４−８．０１（ｍ，４Ｈ，ＣＨＯ−Ｐｈ1），７．６７−７．０２（ｍ，４Ｈ，ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），４．５５（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2）ｐｐｍ。ＭＳ−ＥＳＩ：ｍ／ｚ３１９［Ｍ＋Ｈ+］。
【０１３０】
４−ホルミル−Ｎ−（２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ベンズアミド（６）
収率：１．１８ｇ（７０％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ１０．１１（ｓ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨＯ），９．２７（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ），８．１１−８．０２（ｍ，４Ｈ，ＣＨＯ−Ｐｈ1），７．５１−７．３７（ｍ，４Ｈ，ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），４．５９（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2）ｐｐｍ。ＭＳ−ＥＳＩ：ｍ／ｚ３２４［Ｍ＋Ｈ+］。
【０１３１】
４−ホルミル−Ｎ−（４−フルオロベンジル）ベンズアミド（７）
収率：０．９７ｇ（７０％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ１０．１５（ｓ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨＯ），９．３３（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ），８．１６−８．０４（ｍ，４Ｈ，ＣＨＯ−Ｐｈ1），７．４７−７．１８（ｍ，４Ｈ，ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），４．５４（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2）ｐｐｍ。ＭＳ−ＥＳＩ：ｍ／ｚ２５８［Ｍ＋Ｈ+］。
【０１３２】
４−ホルミル−Ｎ−（４−（トリフルオロメチル）ベンジル）ベンズアミド（８）
収率：１．３ｇ（７０％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ１０．１（ｓ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨＯ），９．３７（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ），８．１２−８（ｍ，４Ｈ，ＣＨＯ−Ｐｈ1），７．７４−７．５４（ｍ，４Ｈ，ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），４．６（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2）ｐｐｍ。ＭＳ−ＥＳＩ：ｍ／ｚ３０８［Ｍ＋Ｈ+］。
【０１３３】
４−ホルミル−Ｎ−（４−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ベンズアミド（９）
収率：１．３７ｇ（７０％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ１０．１５（ｓ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨＯ），９．３６（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ），８．１８−８．０４（ｍ，４Ｈ，ＣＨＯ−Ｐｈ1），７．５５−７．３６（ｍ，４Ｈ，ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），４．５８（ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2）ｐｐｍ。ＭＳ−ＥＳＩ：ｍ／ｚ３２４［Ｍ＋Ｈ+］。
【０１３４】
４−ホルミル−Ｎ−（４−（メトキシ）ベンジル）ベンズアミド（１０）
収率：１．３ｇ（７０％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ１０．１４（ｓ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨＯ），９．２４（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ），８．１５−８．０３（ｍ，４Ｈ，ＣＨＯ−Ｐｈ1），７．３４−６．９３（ｍ，４Ｈ，ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），４．４９（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2）ｐｐｍ．ＭＳ−ＥＳＩ：ｍ／ｚ２７０［Ｍ＋Ｈ+］。
【０１３５】
４−ホルミル−Ｎ−（４−クロロベンジル）ベンズアミド（１１）
収率：１．１４ｇ（６９％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ１０．１（ｓ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨＯ），９．３（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ），８．１−８．０１（ｍ，４Ｈ，ＣＨＯ−Ｐｈ1），７．４３−７．３５（ｍ，４Ｈ，ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），４．５（ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2）ｐｐｍ。ＭＳ−ＥＳＩ：ｍ／ｚ２７４［Ｍ＋Ｈ+］。
【０１３６】
４−ホルミル−Ｎ−４−（フェノキシベンジル）ベンズアミド（１２）
収率：１．３９ｇ（６９％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ１０．１（ｓ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨＯ），９．２６（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ），８．１７−７．９９（ｍ，４Ｈ，ＣＨＯ−Ｐｈ1），７．４２−６．９６（ｍ，９Ｈ，ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2＋Ｐｈ2−Ｏ−Ｐｈ3），４．５（ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2）ｐｐｍ。ＭＳ−ＥＳＩ：ｍ／ｚ３３２［Ｍ＋Ｈ+］。
【０１３７】
４−ホルミル−Ｎ−（４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）ベンジル）ベンズアミド（１３）
収率：１．３７ｇ（６７％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ１０．１１（ｓ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨＯ），９．３４（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ），８．１７−８．０１（ｍ，４Ｈ，ＣＨＯ−Ｐｈ1），７．６８−７．５１（ｍ，３Ｈ，ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），４．６６（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2）ｐｐｍ．ＭＳ−ＥＳＩ：ｍ／ｚ３２６［Ｍ＋Ｈ+］。
【０１３８】
４−ホルミル−Ｎ−（４−メトキシ−２−（トリフルオロメチル）ベンジル）ベンズアミド（１４）
収率：１．４１ｇ（７０％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ１０．０９（ｓ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨＯ），９．２３（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ），８．１−８（ｍ，４Ｈ，ＣＨＯ−Ｐｈ1），７．４８（ｄ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，１Ｈ，ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2−３Ｈ），７．２６−７．２（ｍ，２Ｈ，ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2-２，５Ｈ），４．６（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），３．８１（ｓ，１Ｈ，ＣＨ2−Ｐｈ2−４−ＯＣＨ3）ｐｐｍ．ＭＳ−ＥＳＩ：ｍ／ｚ３３８［Ｍ＋Ｈ+］。
【０１３９】
３−ホルミル−Ｎ−（２−（トリフルオロメチル）ベンジル）ベンズアミド（１５）
収率：１．３８ｇ（７０％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ１０．１１（ｓ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨＯ），９．３６（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ），８．２７−８．１（ｍ，４Ｈ，ＣＨＯ−Ｐｈ1），７．７９−７．４６（ｍ，４Ｈ，ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），４．７１（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2）ｐｐｍ．ＭＳ−ＥＳＩ：ｍ／ｚ３０８［Ｍ＋Ｈ+］。
【０１４０】
４−ヨード−Ｎ−（２−（トリフルオロメチル）ベンジル）ベンズアミド（２４）の例を用いて化合物２４および２７を調製する一般的な手順
４−ヨード安息香酸１ｇ（６．７ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ１．５ｇ（８ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ０．１６ｇ（１．３ｍｍｏｌ）を、アルゴン雰囲気下、２５ｍｌの乾燥ＤＣＭ中で混合し、０℃で１時間懸濁液として撹拌した。次に０．９ｇ（７．３ｍｍｏｌ）の２−トリフルオロメチルベンジルアミンを一度に加えた。混合物を室温に温め、さらに２４時間撹拌した。有機溶液を２Ｍ  ＨＣｌ溶液２０ｍｌで２回、ブライン２０ｍｌで１回洗浄した。有機溶媒をＭｇＳＯ4で乾燥させ、次いで減圧下で除去した。粗生成物をＥＥ／Ｈｅｘ混合物から再結晶し、白色固体を残した。
収率：０．８９ｇ（６４％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ９．３８（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ），８．１１−８（ｍ，４Ｈ，ＣＨＯ−Ｐｈ1），７．７９−７．４８（ｍ，４Ｈ，ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），４．７（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2）ｐｐｍ．ＭＳ−ＥＳＩ：ｍ／ｚ４０５［Ｍ＋Ｈ+］。
【０１４１】
４−シアノ−Ｎ−（２−（トリフルオロメチル）ベンジル）ベンズアミド（２７）
収率：０．９２ｇ（６５％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ９．３８（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ），８．１１−８（ｍ，４Ｈ，ＣＨＯ−Ｐｈ1），７．７９−７．４８（ｍ，４Ｈ，ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），４．７（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2）ｐｐｍ．ＭＳ−ＥＳＩ：ｍ／ｚ３０５［Ｍ＋Ｈ+］。
【０１４２】
エチル（Ｅ）−４−［Ｎ−（（２−（トリフルオロメチル）ベンジル）ベンズアミド］−アルファ−エチルシンナマート（１ａ）の例を用いて、化合物（１ａ〜１９ａ）の一般的な製造法
０℃のアルゴン雰囲気下、５ｍｌの乾燥ＴＨＦ中の１５６ｍｇ（６．５ｍｍｏｌ）のＮａＨの溶液に、１．２ｍｌ（４．９ｍｍｏｌ）のトリエチル２−ホスホノブチラートをゆっくり加えた。３０分後、乾燥混合物１０ｍｌ中の４−ホルミル−Ｎ−（２−（トリフルオロメチル）ベンジル）ベンズアミド（１）１ｇ（３．３ｍｍｏｌ）の溶液を反応混合物に加え、２時間撹拌した。反応を停止させるために、水２５ｍｌを使用した。得られた混合物を１０ｍｌのＥＥで希釈した。有機層をブラインで３回洗浄し、ＭｇＳＯで乾燥した。溶媒を減圧下で蒸発させた。ＥＥ／Ｈｅｘからの再結晶後、白色固体が残った。収率：０．９２ｇ（７０％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ９．２５（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｐｈ2−ＯＣＮＨ），８．０９−７．３８（ｍ，８Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），７．６７（ｓ，１Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1−ＣＨ），４．７４（ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），４．３（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ，Ｃ−ＣＯＯ−ＣＨ2），２．４（ｑ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ−Ｃ−ＣＨ2），１．３６（ｔ，Ｊ＝７．０６Ｈｚ，３Ｈ，ＣＯＯ−ＣＨ2−ＣＨ3），１．１８（ｔ，Ｊ＝７．３８Ｈｚ，３Ｈ，Ｃ−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：１６９．４，１６７．３，１３６．９，１３６．５，１３６．３，１３５．８，１３５．７，１３１．５，１２９．４，１２８．８，１２８．４，１２７．３，１２６．３，１２５．１，１２５，１２４．９，１２４．１，６０．５，４０．２，２３．７，１３．３，１０ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ４０５．１５５０（理論値：４０５．１５５１）。
【０１４３】
エチル（Ｅ）−４−［Ｎ−ベンジルベンズアミド］−アルファ−エチルシンナマート（２ａ）
収率：０．９２ｇ（６５％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ９．１２（ｔ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，１Ｈ，Ｐｈ2−ＯＣＮＨ），７．９８−７．２１（ｍ，９Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），７．３３（ｓ，１Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1−ＣＨ），４．５（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），４．２３（ｑ，Ｊ＝７Ｈｚ，２Ｈ，Ｃ−ＣＯＯ−ＣＨ2），２．４１（ｑ，Ｊ＝７Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ−Ｃ−ＣＨ2），１．３（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，３Ｈ，ＣＯＯ−ＣＨ2−ＣＨ3），１．１２（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，３Ｈ，Ｃ−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：１６７．５，１６５．７，１３７．９，１３７．５，１３７．１，１３６．１，１３５．９，１３１．５，１２９，１２８．３，１２７．５，１２７．４，１２６．７，１２５．６，１２５．５，１２４．４，６１．７，３９．８，２４．９，１４．２，１０．５ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ３３８．１７５２（理論値：３３８．１７５０）。
【０１４４】
エチル（Ｅ）−４−［Ｎ−（（２−メチル）ベンジル）ベンズアミド］−アルファ−エチルシンナマート（３ａ）
収率：０．９ｇ（６６％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ９．１（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，１Ｈ，Ｐｈ2−ＯＣＮＨ），７．７−７．２１（ｍ，８Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），７．２（ｓ，１Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1−ＣＨ），４．３（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），４．１８（ｑ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ，Ｃ−ＣＯＯ−ＣＨ2），２．３９（ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ−Ｃ−ＣＨ2），２．４１（ｓ，３Ｈ，Ｐｈ2−ＣＨ3），１．２５（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，３Ｈ，ＣＯＯ−ＣＨ2−ＣＨ3），１．１（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ，Ｃ−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：１６７．４，１６５．３，１３６．８，１３６．３，１３６．１，１３６，１３５．９，１３２．５，１２９，１２８．４，１２８．５，１２７．４，１２６．５，１２５．８，１２５．３，１２４．１，６０．７，４０．１，２３．９，１８．７，１３．２，１０．１ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ３５２．１９０７（理論値：３５２．１９０７）。エチル（Ｅ）−４−［Ｎ−（（２−クロロ）ベンジル）ベンズアミド］−アルファ−エチルシンナマート（４ａ）。収率：０．８７ｇ（６４％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ９．１５（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｐｈ2−ＯＣＮＨ），８．０２−７．２７（ｍ，８Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），７．４（ｓ，１Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1−ＣＨ），４．５７（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），４．２４（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ，Ｃ−ＣＯＯ−ＣＨ2），２．３８（ｑ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ−Ｃ−ＣＨ2），１．３（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，３Ｈ，ＣＯＯ−ＣＨ2−ＣＨ3），１．１１（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，３Ｈ，Ｃ−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：１６７．３，１６５．１，１３８．１，１３７．４，１３７．２，１３５．８，１３５．７，１３２．２，１２９．３，１２８．１，１２７．４，１２７．３，１２６．５，１２５．６，１２５．２，１２３．９，６０．５，３９．６，２４．７，１４．１，１０ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ３７２．１３６３（理論値：３７２．１３６１）。
【０１４５】
エチル（Ｅ）−４−［Ｎ−（（２−ブロモ）ベンジル）ベンズアミド］−アルファ−エチルシンナマート（５ａ）
収率：０．８５ｇ（６５％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ９．１９（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｐｈ2−ＯＣＮＨ），８．０６−７．２３（ｍ，８Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），７．２（ｓ，１Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1−ＣＨ），４．５８（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），４．２９（ｑ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ，Ｃ−ＣＯＯ−ＣＨ2），２．３７（ｑ，Ｊ＝７Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ−Ｃ−ＣＨ2），１．３５（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ，ＣＯＯ−ＣＨ2−ＣＨ3），１．１７（ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，３Ｈ，Ｃ−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：１６８．３，１６６．１，１３７．８，１３７．４，１３７．１，１３５．７，１３５．５，１３２．１，１２９．５，１２８．２，１２７．５，１２７．２，１２６．３，１２５．８，１２５．３，１２２．９，６１．５，４０．６，２５．７，１４．４，１０．５ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ４１６．０８５５（理論値：４１６．０８５６）。
【０１４６】
エチル−４−［Ｎ−（（２−トリフルオロメトキシ）ベンジル）ベンズアミド］−アルファ−エチルシンナマート（６ａ）
収率：０．８６ｇ（６６％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ９．１（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｐｈ2−ＯＣＮＨ），７．９６−７．３３（ｍ，８Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），７．４（ｓ，１Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1−ＣＨ），４．６９（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），４．３（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ，Ｃ−ＣＯＯ−ＣＨ2），２．５７（ｑ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ−Ｃ−ＣＨ2），１．３７（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，３Ｈ，ＣＯＯ−ＣＨ2−ＣＨ3），１．１８（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，３Ｈ，Ｃ−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：１７３．３，１６８．５，１６７．１，１３８．８，１３８．４，１３７．１，１３６．７，１３５．４，１３２．２，１２９．２，１２８．４，１２７．４，１２７．３，１２５．３，１２５．１，１２４．１，１２３．１，６０．５，４２．６，２４．７，１４．７，１０．１ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ４２１．１５０１（理論値：４２１．１５０３）。
【０１４７】
エチル（Ｅ）−４−［Ｎ−（（４−フルオロ）ベンジル）ベンズアミド］−アルファ−エチルシンナマート（７ａ）
収率：０．９３ｇ（６７％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ９．１８（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，１Ｈ，Ｐｈ2−ＯＣＮＨ），８．０２−７．１８（ｍ，８Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），７．６６（ｓ，１Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1−ＣＨ），４．５３（ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），４．２８（ｑ，Ｊ＝７Ｈｚ，２Ｈ，Ｃ−ＣＯＯ−ＣＨ2），２．５４（ｑ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ−Ｃ−ＣＨ2），１．３４（ｔ，Ｊ＝７．１１Ｈｚ，３Ｈ，ＣＯＯ−ＣＨ2−ＣＨ3），１．１８（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，３Ｈ，Ｃ−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：１６７．５，１６７．２，１６１．８，１３９．７，１３８．３，１３８．１，１３３．４，１３１．２，１２８．２，１２８．１，１２７．２，１２７，１２６．１，１２５．１，１２４．５，１１８．９，６１．５，４２．６，１６．７，１４．６，１４．１ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ３５６．１６５７（理論値：３５６．１６５７）。
【０１４８】
エチル（Ｅ）−４−［Ｎ−（（４−トリフルオロメチル）ベンジル）ベンズアミド］−アルファ−エチルシンナマート（８ａ）
収率：０．９２ｇ（６５％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ９．２３（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，１Ｈ，Ｐｈ2−ＯＣＮＨ），７．９９−７．５３（ｍ，８Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），７．６２（ｓ，１Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1−ＣＨ），４．５９（ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），４．２４（ｑ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ，Ｃ−ＣＯＯ−ＣＨ2），２．５（ｑ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ−Ｃ−ＣＨ2），１．３（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ，ＣＯＯ−ＣＨ2−ＣＨ3），１．１２（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，３Ｈ，Ｃ−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：１６７．４，１６７，１６４．８，１３９．３，１３７．１，１３６．７，１３１．３，１３２．４，１３０．２，１２８．６，１２８．４，１２７．４，１２７．１，１２６．１，１２４．９，１２４．３，１１７．９，６１．３，４１．６，１７．７，１４．１，１４ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ４０６．１６２６（理論値：４０６．１６２５）。
【０１４９】
エチル（Ｅ）−４−［Ｎ−（（４−トリフルオロメトキシ）ベンジル）ベンズアミド］−アルファ−エチルシンナマート（９ａ）
収率：０．８３ｇ（６５％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ９．１４（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１Ｈ，Ｐｈ2−ＯＣＮＨ），７．９９−７．２７（ｍ，８Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），７．４２（ｓ，１Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1−ＣＨ），４．５（ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），４．２１（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ，Ｃ−ＣＯＯ−ＣＨ2），２．４（ｑ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ−Ｃ−ＣＨ2），１．２７（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，３Ｈ，ＣＯＯ−ＣＨ2−ＣＨ3），１．０９（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，３Ｈ，Ｃ−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：１７３．１，１６９，１６８．３，１５５．８，１４０．３，１３６．７，１３５．１，１３１．４，１３１．２，１２８．７，１２８．３，１２７．６，１２７．１，１２５．１，１２３．９，１２２．３，１１６．９，５９．３，４０．６，１６．７，１４．５，１４．１ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ４２２．１５７４（理論値：４２２．１５７４）。
【０１５０】
エチル（Ｅ）−４−［Ｎ−（（４−メトキシ）ベンジル）ベンズアミド］−アルファ−エチルシンナマート（１０ａ）
収率：０．９１ｇ（６７％）；1ＨＮＭＲ（メタノール−ｄ3）：δ７．８−６．６（ｍ，８Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），７．５（ｓ，１Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1−ＣＨ），４．４１（ｓ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），４．１７（ｑ，Ｊ＝７Ｈｚ，２Ｈ，Ｃ−ＣＯＯ−ＣＨ2），３．６７（ｓ，Ｐｈ2−Ｏ−ＣＨ3），２．４４（ｑ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ−Ｃ−ＣＨ2），１．２４（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，３Ｈ，ＣＯＯ−ＣＨ2−ＣＨ3），１．０５（ｔ，Ｊ＝５Ｈｚ，３Ｈ，ＣＨ−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（メタノール−ｄ3）：１６７，１６６．３，１４０．４，１３８．３，１３５．７，１３５．１，１３１．７，１３０．３，１２８．７，１２８．５，１２７．３，１２７．１，１２４．２，１２３．１，１２２．１，１１５．９，５８．３，５５．１，４０．１，１６．５，１４．６，１４．１ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ３６７．１７８３（理論値：３６７．１７８４）。
【０１５１】
エチル（Ｅ）−４−［Ｎ−（（４−クロロ）ベンジル）ベンズアミド］−アルファ−エチルシンナマート（１１ａ）
収率：０．９３ｇ（６９％）；1ＨＮＭＲ（メタノール−ｄ3）：δ７．９３−７．３４（ｍ，８Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），７．３６（ｓ，１Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1−ＣＨ），４．５８（ｓ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），４．３（ｑ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ，Ｃ−ＣＯＯ−ＣＨ2），２．５６（ｑ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ−Ｃ−ＣＨ2），１．３７（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，３Ｈ，ＣＯＯ−ＣＨ2−ＣＨ3），１．１８（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ，Ｃ−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（メタノール−ｄ3）：１６６．６，１６５．３，１５４．４，１３７．４，１３６．１，１３５．５，１３１．６，１３０．２，１２９．１，１２８．６，１２６．９，１２６．８，１２５．３，１２３．１，１２２．８，１１５．９，５９．３，４０．２，１６．１，１４．６，１４．１ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ３７１．１２９６（理論値：３７１．１２９８）。
【０１５２】
エチル（Ｅ）−４−［Ｎ−（（４−フェノキシ）ベンジル）ベンズアミド］−アルファ−エチルシンナマート（１２ａ）
収率：０．８５ｇ（６９％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ９．１１（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ），７．９７−６．９８（ｍ，１２Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2＋Ｐｈ2−Ｏ−Ｐｈ3），７．４（ｓ，１Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1−ＣＨ），４．４９（ｄ，Ｊ＝６．５，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），４．２４（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ，Ｃ−ＣＯＯ−ＣＨ2），２．４５（ｑ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ−Ｃ−ＣＨ2），１．３（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，３Ｈ，ＣＯＯ−ＣＨ2−ＣＨ3），１．１２（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，３Ｈ，Ｃ−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：１６６．１，１６４．２，１５６．６，１５５．４，１３７．４，１３６．１，１３５．５，１３１．６，１３０．２，１２９．１，１２８．７，１２８．６，１２８．３，１２６．９，１２６．８，１２５．３，１２３．１，１２２．８，１２１．５，１１８．１，１１８．７，１１５．９，５９．３，４０．２，１６．２，１４．５，１４ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ４３０．２０１７（理論値：４３０．２０１３）。
【０１５３】
エチル（Ｅ）−４−［Ｎ−（（４−フルオロ（２−トリフルオロメチル））ベンジル）ベンズアミド］−アルファ−エチルシンナマート（１３ａ）
収率：０．８５ｇ（７０％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ９．１９（ｔ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，１Ｈ，Ｐｈ2−ＯＣＮＨ），８−７．５３（ｍ，８Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2＋Ｐｈ1−ＣＨ），４．６５（ｄ，Ｊ＝４．６Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），４．２４（ｑ，Ｊ＝７Ｈｚ，２Ｈ，Ｃ−ＣＯＯ−ＣＨ2），２．４８（ｑ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ−Ｃ−ＣＨ2），１．３（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ，ＣＯＯ−ＣＨ2−ＣＨ3），１．１３（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ，Ｃ−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：１７５．４，１６５．３，１４１．９，１３６．３，１３５．３，１３５．１，１３２．６，１３２．５，１２９．４，１２８．８，１２８．２，１２６．１，１２６，１２５．３，１２５．１，１２４．８，１２４．１，６０．４，４０．１，２４．６，１４．１，１１ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ４２４．１５３０（理論値：４２４．１５３０）。
【０１５４】
エチル（Ｅ）−４−［Ｎ−（（４−メトキシ（２−トリフルオロメチル））ベンジル）ベンズアミド］−アルファ−エチルシンナマート（１４ａ）
収率：０．９ｇ（７０％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ９．１（ｔ，Ｊ＝４．７Ｈｚ，１Ｈ，Ｐｈ2−ＯＣＮＨ），８．０２−７．２４（ｍ，７Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），７．４（ｓ，１Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1−ＣＨ），４．６１（ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），４．２５（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ，Ｃ−ＣＯＯ−ＣＨ2），２．４５（ｑ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ−Ｃ−ＣＨ2），１．３（ｔ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，３Ｈ，ＣＯＯ−ＣＨ2−ＣＨ3），１．１２（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ，Ｃ−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：１６８．４，１６６．３，１５８．９，１３６．４，１３６．３，１３５．９，１３５．６，１３２．５，１２９．４，１２８．８，１２８．２，１２６．３，１２６．１，１２５．３，１２５，１２４．８，１２４．１，６０．１，５５．３，４０．１，２３．６，１３，１１ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ４３６．１７２８（理論値：４３６．１７３０）。
【０１５５】
エチル（Ｅ）−３−［Ｎ−（（２−トリフルオロメチル）ベンジル）ベンズアミド］−アルファ−エチルシンナマート（１５ａ）
収率：０．９１ｇ（７０％）；1ＨＮＭＲ（メタノール−ｄ3）：δ７．８２−７．３２（ｍ，８Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），７．４８（ｓ，１Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1−ＣＨ），４．７（ｓ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），４．１８（ｑ，Ｊ＝７．２２Ｈｚ，２Ｈ，ＣＯＯ−ＣＨ2），２．４５（ｑ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ−Ｃ−ＣＨ2），１．２５（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ，ＣＯＯ−ＣＨ2−ＣＨ3），１．０７（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，３Ｈ，Ｃ−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（メタノール−ｄ3）：１６９．９，１６９．４，１３８．５，１３７．５，１３７．４，１３５．８，１３３．５，１３３．２，１３０，１２９．８，１２８．５，１２８．３，１２７．１，１２７，１２５，１２４．８，１２４．１，６２．１，４１．３，２１．７，１４．６，１４．１ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ４０５．１５５２（理論値：４０５．１５５３）。
【０１５６】
エチル（Ｅ）−４−［Ｎ−（（２−トリフルオロメチル）ベンジル）ベンズアミド］−シンナマート（１６ａ）
収率：０．７８ｇ（６７％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ９．１９（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，１Ｈ，Ｐｈ2−ＯＣＮＨ），８−７．４７（ｍ，９Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2＋Ｐｈ1−ＣＨ），６．７７（ｄ，Ｊ＝１６．２Ｈｚ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ−ＣＨ），４．６９（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），４．３３（ｑ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ−ＣＯＯ−ＣＨ2），１．２８（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ，ＣＯＯ−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：１７０．９，１６８．４，１３７．５，１３６．５，１３６．４，１３５．８，１３２．５，１３１．２，１３０，１２９．６，１２８．４，１２８．１，１２７．５，１２７．３，１２５．１，１２４．８，１２４．２，６２．３，４１．１，１４．１ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ３７８．１３１２（理論値：３７８．１３１２）。
【０１５７】
エチル（Ｅ）−４−［Ｎ−（（２−トリフルオロメチル）ベンジル）ベンズアミド］−アルファ−メチルシンナマート（１７ａ）
収率：０．８３ｇ（６５％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ９．２３（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，１Ｈ，Ｐｈ2−ＯＣＮＨ），８．０６−７．５１（ｍ，９Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2＋Ｐｈ1−ＣＨ），４．７３（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），４．２８（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ，Ｃ−ＣＯＯ−ＣＨ2），３．３７（ｄ，Ｊ＝２．１，３Ｈ，ＣＨ−Ｃ−ＣＨ3），１．３４（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，３Ｈ，ＣＯＯ−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：１６８，１６５，１３９．５，１３６．４，１３６．３，１３５．８，１２９．５，１２９．１，１２８．９，１２７．４，１２７．１，１２６．５，１２６．３，１２５．９，１２５．１，１２４．４，１２４．２，５９．９，４２．１，１３．７，１１．９ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ３９２．１４６９（理論値：３９２．１４６８）。
【０１５８】
エチル（Ｅ）−４−［Ｎ−（（２−トリフルオロメチル）ベンジル）ベンズアミド］−アルファ−プロピルシンナマート（１８ａ）
収率：０．８１ｇ（６５％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ９．１８（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，１Ｈ，Ｐｈ2−ＯＣＮＨ），８−７．３（ｍ，９Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2＋Ｐｈ1−ＣＨ），４．６７（ｄ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），４．２３（ｑ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ，Ｃ−ＣＯＯ−ＣＨ2），２．４９−２．３（ｍ，２Ｈ，ＣＨ−Ｃ−ＣＨ2），１．５６−１．４７（ｍ，２Ｈ，Ｃ−ＣＨ2−ＣＨ2），１．３４（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，３Ｈ，ＣＯＯ−ＣＨ2−ＣＨ3），０．９（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，３Ｈ，ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：１６７，１６５．５，１３８．５，１３６．３，１３６．２，１３５．７，１３０．５，１２９．１，１２８．７，１２７．１，１２７，１２６．５，１２６．２，１２６．１，１２５．７，１２５，１２４．６，６０，４２．１，２９，２０．１，１４．２，１３．７ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ４２０．１７８０（理論値：４２０．１７８１）。
【０１５９】
エチル（Ｅ）−４−［Ｎ−（（２−トリフルオロメチル）ベンジル）ベンズアミド］−アルファ−フェニルシンナマート（１９ａ）
収率：０．６２ｇ（６０％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ９．０６（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，１Ｈ，Ｐｈ2−ＯＣＮＨ），７．９８−７．１５（ｍ，１４Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2＋Ｐｈ1−ＣＨ＋Ｃ−Ｐｈ4），４．６２（ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），４．２３（ｑ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２Ｈ，Ｃ−ＣＯＯ−ＣＨ2），１．２４（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ，ＣＯＯ−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：１６６．５，１６５．３，１３６．５，１３６．３，１３６．２，１３５．７，１３４．２，１３０．５，１２９．１，１２８．８，１２８．６，１２８．５，１２８．４，１２７．７，１２７．１，１２６．６，１２６．５，１２６．６，１２６．２，１２６．１，１２５．７，１２５，１２４．６，６０，４２．１，１３．７ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ４５４．１６２２（理論値：４５４．１６２５）。
【０１６０】
エチル２−エチル３−［４−（Ｎ−（（２−トリフルオロメチル）ベンジル）ベンズアミド）］プロパノアート（１ｂ）の例を用いて化合物（１ｂ−１９ｂ）を製造するための一般的な手順
２５０ｍｇ（０．６１７ｍｍｏｌ）の１ａおよび炭素上パラジウム９．８ｍｇ（０．１ｍｍｏｌ）を乾燥エタノールに溶解し、水素雰囲気下で１２時間撹拌した。反応混合物をセライトで濾過し、溶媒を減圧下で除去した。さらに精製することなく、透明な樹脂状の油状物が生じた。
収率：０．２ｇ（９０％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ９．１（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｐｈ2−ＯＣＮＨ），７．９１−７．３４（ｍ，８Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），４．７１（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），４．１１−４．０１（ｍ，２Ｈ，ＣＨ−ＣＯＯ−ＣＨ2），２．９７−２．８３（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2），２．７３−２．６４（ｍ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ），１．６５−１．５６（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ−ＣＨ2），１．１４（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，３Ｈ，ＣＯＯ−ＣＨ2−ＣＨ3），０．９３（ｔ，Ｊ＝７．４，３Ｈ，ＣＨ−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：１７５．５，１６８．８，１４３．８，１３７，１３２．６，１３２．０４，１３１．９，１２８．２，１２７．１，１２７，１２５．７，１２５．６，１２５．５，１２５．４，１２４．９，６０，４９，３９．８，３７．７，２５．２，１３．２，１０．５ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ４０８．１７８１（理論値：４０８．１７８１）。
【０１６１】
エチル２−エチル３−［４−（Ｎ−ベンジルベンズアミド）］プロパノアート（２ｂ）
収率：０．２１ｇ（８４％）；1ＨＮＭＲ（メタノール−ｄ3）：δ７．６９−７．１１（ｍ，９Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），４．４６（ｓ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），３．９８−３．８８（ｍ，２Ｈ，ＣＨ−ＣＯＯ−ＣＨ2），２．８６−２．７２（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2），２．５８−２．４８（ｍ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ），１．６２−１．４７（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ−ＣＨ2），１．０２（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，３Ｈ，ＣＯＯ−ＣＨ2−ＣＨ3），０．８３（ｔ，Ｊ＝８，３Ｈ，ＣＨ−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（メタノール−ｄ3）：１７５．５，１６８．６，１４３．６，１３８．８，１３２．４，１２８．８，１２８．１，１２７．１，１２７，１２６．８，１２５．６，１２５．５，１２５．４，１２５．３，６０，４９．１，４３，３７．７，２５，１３．３，１０．７ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ３４０．１９１（理論値：３４０．１９０７）。
【０１６２】
エチル２−エチル３−［４−（Ｎ−（（２−メチル）ベンジル）ベンズアミド）］プロパノアート（３ｂ）
収率：０．１９ｇ（７５％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ８．８５（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ，Ｐｈ2−ＯＣＮＨ），７．８５−７．１５（ｍ，８Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），４．４６（ｄ，Ｊ＝６．２，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），４．１６−３．９６（ｍ，２Ｈ，ＣＨ−ＣＯＯ−ＣＨ2），２．９２−２．７７（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2），２．６８−２．５９（ｍ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ），２．３４（ｓ，３Ｈ，Ｐｈ2−ＣＨ3），１．６１−１．５（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ−ＣＨ2），１．０９（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，３Ｈ，ＣＯＯ−ＣＨ2−ＣＨ3），０．８８（ｔ，Ｊ＝８．１，３Ｈ，ＣＨ−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：１６７．８，１６５．４，１３７．８，１３６．２，１３６，１３５．８，１２９，１２８．２，１２８．１，１２７．４，１２５．９，１２５．８，１２５．３，１２４．２，１２４，６０．３，４０．１，３８．３，２３．９，１８．９，１３．２，１２．１ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ３５４．２０６５（理論値：３５４．２０６４）。
【０１６３】
エチル２−エチル３−［４−（Ｎ−（（２−クロロ）ベンジル）ベンズアミド）］プロパノアート（４ｂ）
収率：０．２ｇ（９０％）；1ＨＮＭＲ（メタノール−ｄ3）：δ７．８３−７．２６（ｍ，８Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），４．６１（ｓ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），４．１１−４（ｍ，２Ｈ，ＣＨ−ＣＯＯ−ＣＨ2），３−２．８４（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2），２．７１−２．６２（ｍ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ），１．７４−１．５９（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ−ＣＨ2），１．１５（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ，ＣＯＯ−ＣＨ2−ＣＨ3），０．９６（ｔ，Ｊ＝８．７，３Ｈ，ＣＨ−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：１６７．８，１６６．２，１３７．４，１３６．４，１３５．９，１３５．８，１２９．２，１２８．５，１２８．３，１２７．６，１２６．９，１２６．８，１２５．４，１２４．５，１２４，５８．３，４０，３８．６，２３．９，１８．５，１３．１，１１．７      ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ３７５．１４２３（理論値：３７５．１４２２）。
【０１６４】
エチル２−エチル３−［４−（Ｎ−（（２−ブロモ）ベンジル）ベンズアミド）］プロパノアート（５ｂ）
収率：０．１８ｇ（７０％）；1ＨＮＭＲ（メタノール−ｄ3）：δ７．８１−７．２５（ｍ，８Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），４．５９（ｓ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），４．０９−４（ｍ，２Ｈ，ＣＨ−ＣＯＯ−ＣＨ2），２．９−２．８５（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2），２．６９−２．６１（ｍ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ），１．７２−１．５８（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ−ＣＨ2），１．１４（ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，３Ｈ，ＣＯＯ−ＣＨ2−ＣＨ3），０．９５（ｔ，Ｊ＝８．１，３Ｈ，ＣＨ−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（メタノール−ｄ3）：１７６，１６７．５，１４４．９，１３０．２，１２９．５，１２８．５，１２８．４，１２８．２，１２７．２，１２７，１２６，１２５．７，１２５．６，１２５．５，６１．４，５０．４，４４．４，３９．１，２６．６，１４．５，１１．９ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ４１８．１０１３（理論値：４１８．１０１２）。
【０１６５】
エチル２−エチル３−［４−（Ｎ−（（２−トリフルオロメトキシ）ベンジル）ベンズアミド）］プロパノアート（６ｂ）
収率：０．２ｇ（９０％）；1ＨＮＭＲ（メタノール−ｄ3）：δ７．６９−７．１７（ｍ，８Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），４．５５（ｓ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），３．９７−３．８９（ｍ，２Ｈ，ＣＨ−ＣＯＯ−ＣＨ2），２．８６−２．７３（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2），２．５８−２．５１（ｍ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ），１．６１−１．４７（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ−ＣＨ2），１．０２（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，３Ｈ，ＣＯＯ−ＣＨ2−ＣＨ3），０．８４（ｔ，Ｊ＝７．６，３Ｈ，ＣＨ−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（メタノール−ｄ3）：１７７．５，１７５，１６６．５，１４５．１，１３３．５，１３２．６，１３０．４，１３０．３，１２９．９，１２８．６，１２８．４，１２７，１２５．８，１２５．６，６１．４，５０．５，４４．４，３９．１，２６．５，１４．７，１２ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ４２３．１６６７（理論値：４２３．１６６５）。
【０１６６】
エチル２−エチル３−［４−（Ｎ−（（４−フルオロ）ベンジル）ベンズアミド）］プロパノアート（７ｂ）
収率：０．２３ｇ（９１％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ８．９１（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ，ＯＣＮＨ），７．７５−７．０３（ｍ，８Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），４．３７（ｄ，Ｊ＝６，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），３．９８−３．８６（ｍ，２Ｈ，ＣＨ−ＣＯＯ−ＣＨ2），２．８４−２．６９（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2），２．６−２．４８（ｍ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ），１．５３−１．４１（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ−ＣＨ2），１．０１（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ，ＣＯＯ−ＣＨ2−ＣＨ3），０．７９（ｔ，Ｊ＝７．４，３Ｈ，ＣＨ−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：１７７．６，１６５．６，１４３．４，１３８．６，１３３．４，１３３．２，１３２．１，１２７．５，１２７．１，１２６．７，１２６．６，１２６．５，１２５．４，１２５．２，５６，４８．２，４５，３７．６，２４，１３．１，１１．７ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ３５８．１８１４（理論値：３５８．１８１３）。
【０１６７】
エチル２−エチル３−［４−（Ｎ−（（４−トリフルオロメチル）ベンジル）ベンズアミド）］プロパノアート（８ｂ）
収率：０．２３ｇ（８７％）；1ＨＮＭＲ（メタノール−ｄ3）：δ７．７−７．１７（ｍ，８Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），４．５４（ｓ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），３．９９−３．８８（ｍ，２Ｈ，ＣＨ−ＣＯＯ−ＣＨ2），２．８７−２．７２（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2），２．５９−２．４９（ｍ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ），１．６２−１．４６（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ−ＣＨ2），１．０３（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，３Ｈ，ＣＯＯ−ＣＨ2−ＣＨ3），０．８３（ｔ，Ｊ＝７．２，３Ｈ，ＣＨ−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（メタノール−ｄ3）：１７５．６，１６６．３，１４３．５，１３２．７，１３２．３，１３１．５，１３０．４，１２８．８，１２７．５，１２７．１，１２５．１，１２５．１，１２５，１２５，１２４．９，６０，４９，４２．７，３７．７，２５．１，１３．２，１０．７ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ４０８．１７８（理論値：４０８．１７８１）。
【０１６８】
エチル２−エチル３−［４−（Ｎ−（（４−トリフルオロメトキシ）ベンジル）ベンズアミド）］プロパノアート（９ｂ）
収率：０．２４ｇ（９４％）；1ＨＮＭＲ（メタノール−ｄ3）：δ７．６９−７．１２（ｍ，８Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），４．４８（ｓ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），３．９８−３．８８（ｍ，２Ｈ，ＣＨ−ＣＯＯ−ＣＨ2），２．８７−２．７１（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2），２．５８−２．４８（ｍ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ），１．６４−１．４２（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ−ＣＨ2），１．０２（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，３Ｈ，ＣＯＯ−ＣＨ2−ＣＨ3），０．８４（ｔ，Ｊ＝７．４，３Ｈ，ＣＨ−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（メタノール−ｄ3）：１７７．８，１７５．６，１６８．６，１４３．８，１３８．２，１３２．１，１３０．２，１３０．３，１２８．８，１２８．７，１２７，１２５．３，１２５．２，１２５．１，１２０．７，６０．１，４９．２，４２．５，３７．７，２５．２，１３．１，１０．６ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ４２４．１７２６（理論値：４２４．１７３０）。
【０１６９】
エチル２−エチル３−［４−（Ｎ−（（４−メトキシ）ベンジル）ベンズアミド）］プロパノアート（１０ｂ）
収率：０．２ｇ（９０％）；1ＨＮＭＲ（メタノール−ｄ3）：δ７．７８−６．８８（ｍ，８Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），４．４５（ｓ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），４．１−３．９８（ｍ，２Ｈ，ＣＨ−ＣＯＯ−ＣＨ2），３．７８（ｓ，３Ｈ，Ｐｈ2−Ｏ−ＣＨ3），２．９６−２．８３（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2），２．６８−２．６１（ｍ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ），１．７３−１．５６（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ−ＣＨ2），１．１４（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ，ＣＯＯ−ＣＨ2−ＣＨ3），０．９５（ｔ，Ｊ＝７．５，３Ｈ，ＣＨ−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（メタノール−ｄ3）：１７７．１，１６０．５，１４４．９，１３３．８，１３２．２，１３０．１，１２９．９，１２８．４，１２７．２，１２７，１２５．３，１２５．２，１２５．１，１１４．９，６１．４，５５．８，４４，３９．１，３７．７，２６．６，１４．６，１１．９ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ３７０．２０１７（理論値：３７０．２０１３）。
【０１７０】
エチル２−エチル３−［４−（Ｎ−（（４−クロロ）ベンジル）ベンズアミド）］プロパノアート（１１ｂ）
収率：０．２ｇ（９１％）；1ＨＮＭＲ（メタノール−ｄ3）：δ７．６８−７．１２（ｍ，８Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），４．４６（ｓ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），３．９８−３．８７（ｍ，２Ｈ，ＣＨ−ＣＯＯ−ＣＨ2），２．８５−２．７３（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2），２．５７−２．５（ｍ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ），１．６２−１．４５（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ−ＣＨ2），１．０２（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ，ＣＯＯ−ＣＨ2−ＣＨ3），０．８３（ｔ，Ｊ＝７．４，３Ｈ，ＣＨ−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（メタノール−ｄ3）：１７７，１６４．１，１４５，１４０．２，１３０．２，１２９．５，１２８．５，１２８．５，１２８．４，１２７，１２５．５，１２５．３，１２５．１，１１４．４，６１．４，５０．５，４４．５，３９，２６．６，１４．５，１２．１ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ３７４．１５１８（理論値：３７４．１５１８）。
【０１７１】
エチル２−エチル３−［４−（Ｎ−（（４−フェノキシ）ベンジル）ベンズアミド）］プロパノアート（１２ｂ）
収率：０．２ｇ（９０％）；1ＨＮＭＲ（メタノール−ｄ3）：δ７．６８−７．１２（ｍ，１３Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），４．４６（ｓ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），３．９８−３．８７（ｍ，２Ｈ，ＣＨ−ＣＯＯ−ＣＨ2），２．８５−２．７３（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2），２．５７−２．５（ｍ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ），１．６２−１．４５（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ−ＣＨ2），１．０２（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ，ＣＯＯ−ＣＨ2−ＣＨ3），０．８３（ｔ，Ｊ＝７．４，３Ｈ，ＣＨ−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（メタノール−ｄ3）：１７５．７，１６８．５，１５７．４，１５６．５，１４３．７，１３６．１，１３４，１３２．４，１３０．２，１２９．５，１２８．８，１２８．７，１２７，１２６．９，１２６．８，１２５．３，１２３．１，１２２，１２１．５，１１８．５，１１８．３，１１５．９，６０．１，４２．２，２５．２，１３．２，１０．５ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ３７０．２０１７（理論値：３７０．２０１３）。
【０１７２】
エチル２−エチル３−［４−（Ｎ−（４−フルオロ（２−トリフルオロメチル）ベンジル）ベンズアミド）］プロパノアート（１３ｂ）
収率：０．２ｇ（９０％）；1ＨＮＭＲ（メタノール−ｄ3）：δ７．８３−７．１８（ｍ，７Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），４．６３（ｓ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），４．０１−３．８６（ｍ，２Ｈ，ＣＨ−ＣＯＯ−ＣＨ2），２．８８−２．７２（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2），２．５９−２．４９（ｍ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ），１．６５−１．４３（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ−ＣＨ2），１．０３（ｔ，Ｊ＝７．０４Ｈｚ，３Ｈ，ＣＯＯ−ＣＨ2−ＣＨ3），０．８４（ｔ，Ｊ＝７．７，３Ｈ，ＣＨ−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（メタノール−ｄ3）：１７５．６，１６８．８，１６３，１５９．７，１４３．８，１３３．１，１３１．９，１３１，１３０．９，１２８．９，１２７．１，１１８．９，１１８．６，１１３．３，１１２．９，６０，４９．１，３９．３，３７．４，２５．２，１３，１０．６ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ４２６．１６８６（理論値：４２６．１６８７）。
【０１７３】
エチル２−エチル３−［４−（Ｎ−（４−メトキシ（２−トリフルオロメチル）ベンジル）ベンズアミド）］プロパノアート（１４ｂ）
収率：０．２ｇ（９０％）；1ＨＮＭＲ（メタノール−ｄ3）：δ７．７１−７．０２（ｍ，７Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），４．５９（ｓ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），４．０１−３．８６（ｍ，２Ｈ，ＣＨ−ＣＯＯ−ＣＨ2），３．７４（ｓ，３Ｈ，Ｐｈ2−Ｏ−ＣＨ3），２．８７−２．７２（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2），２．５９−２．４９（ｍ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ），１．６５−１．４３（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ−ＣＨ2），１．０３（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，３Ｈ，ＣＯＯ−ＣＨ2−ＣＨ3），０．８４（ｔ，Ｊ＝７．３，３Ｈ，ＣＨ−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（メタノール−ｄ3）：１７５．７，１６８．８，１５８．８，１５１．２，１４３．９，１３２．１，１３０．３，１２８．８，１２８．７，１２８．６，１２８．３，１２７．２，１１６．７，１１１．８，１１１．７，６７．９，５９．９，５５．１，３９．５，３７．９，２５．１，１３．２，１０．８ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ４３８．１８８２（理論値：４３８．１８８７）。
【０１７４】
エチル２−エチル３−［３−（Ｎ−（（２−トリフルオロメチル）ベンジル）ベンズアミド）］プロパノアート（１５ｂ）
収率：０．１４ｇ（５５％）；1ＨＮＭＲ（メタノール−ｄ3）：δ７．６５−７．２７（ｍ，８Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），４．６９（ｓ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），３．９３（ｑ，Ｊ＝７．２，２Ｈ，ＣＨ−ＣＯＯ−ＣＨ2），２．８７−２．７４（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2），２．５９−２．５１（ｍ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ），１．６４−１．４６（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ−ＣＨ2），１．０１（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ，ＣＯＯ−ＣＨ2−ＣＨ3），０．８４（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ，ＣＨ−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（メタノール−ｄ3）：１７７．１，１６８．８，１４１．６，１４０．５，１３５．４，１３３．５，１３３．５，１２９．７，１２９．１，１２８．５，１２７．１，１２６．５，１２５．５，１２５．４，１２４．９，６１．５，５０．７，３９．８，３９．２，２６．５，１４．６，１２．１ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ４０８．１７８１（理論値：４０８．１７８１）。
【０１７５】
エチル３−［４−（Ｎ−（（２−トリフルオロメチル）ベンジル）ベンズアミド）］プロパノアート（１６ｂ）
収率：０．２４ｇ（９５％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ９．１（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ，ＯＣＮＨ），７．９４−７．３５（ｍ，８Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），４．７１（ｄ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），４．１（ｑ，Ｊ＝７Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2−ＣＯＯ−ＣＨ2），２．９７（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2），２．７１（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ2），１．２１（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，３Ｈ，ＣＯＯ−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：１７７．１，１６８．８，１４１．６，１４０．５，１３５．４，１３３．５，１３３．５，１２９．７，１２９．１，１２８．５，１２７．１，１２６．５，１２５．５，１２５．４，１２４．９，６１．５，５０．７，３９．８，３９．２ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ３８０．１４６８（理論値：３８０．１４６８）。
【０１７６】
エチル２−メチル３−［４−（Ｎ−（（２−トリフルオロメチル）ベンジル）ベンズアミド）］プロパノアート（１７ｂ）
収率：０．２ｇ（９３％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ９．０４（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，１Ｈ，ＯＣＮＨ），７．８６−７．２７（ｍ，８Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），４．６５（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），４．０１（ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ−ＣＯＯ−ＣＨ2），３−２．８８（ｍ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ），２．８２−２．７（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2），１．１４−１．０５（ｍ，６Ｈ，ＣＯＯ−ＣＨ2−ＣＨ3＋ＣＨ2−ＣＨ−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：１７７．４，１６６．８，１４３．５，１４０．５，１３３．１，１３２．５，１３１．５，１２９．７，１２９．３，１２８．６，１２７．８，１２６．５，１２５．５，１２５．４，１２４．９，６０．２，５０．７，３９．８，３９．２，１７．２，１４．６ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ３９４．１６２５（理論値：３９４．１５２５）。
【０１７７】
エチル２−プロピル３−［４−（Ｎ−（（２−トリフルオロメチル）ベンジル）ベンズアミド）］プロパノアート（１８ｂ）
収率：０．１７ｇ（６６％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ９．０６（ｔ，Ｊ＝５．７５Ｈｚ，１Ｈ，ＯＣＮＨ），７．８５−７．２８（ｍ，８Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），４．６５（ｄ，Ｊ＝４．２５Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），３．９９（ｑ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ−ＣＯＯ−ＣＨ2），３．０７−２．９（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2），２．８２−２．７６（ｍ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ），１．６１−１．３９（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ−ＣＨ2），１．０７（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ，ＣＯＯ−ＣＨ2−ＣＨ3），１．３５−１．１６（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ−ＣＨ2−ＣＨ2），０．８５（ｔ，Ｊ＝７．１３Ｈｚ，３Ｈ，ＣＨ−ＣＨ2-ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：１７５，１６６．７，１４３．５，１３８．１，１３２．９，１３２．４，１３１．５，１２９．７，１２９．２，１２８．６，１２７．７，１２６．２，１２５．５，１２５．４，１２４．９，４２．７，３８．１，３４．６，３４．４，２０．３，１４．５，１４．２ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ４２２．１９３６（理論値：４２２．１９３７）。
【０１７８】
エチル２−フェニル３−［４−（Ｎ−（（２−トリフルオロメチル）ベンジル）ベンズアミド）］プロパノアート（１９ｂ）
収率：０．１ｇ（４０％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ９．０２（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，１Ｈ，ＯＣＮＨ），７．８１−７．２４（ｍ，１３Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2＋ＣＨ2−ＣＨ−Ｐｈ4），４．６３（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），４．０８−３．９２（ｍ，２Ｈ，ＣＨ−ＣＯＯ−ＣＨ2），３．４−３．３１（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2），３．１１−３．０３（ｍ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ），１．０７（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ，ＣＯＯ−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：１７３，１６６．８，１４３．１，１３９，１３８．２，１３８．１，１３３．１，１３２．５，１２９．４，１２９，１２８．６，１２８．３，１２７．７，１２７．７，１２７．７，１２６．６，１２６．５，１２６．６，１２６．２，１２６．１，１２５．７，１２５，１２４．６，６０．９，１９，１４．５ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ４５６．１７８５（理論値：４５６．１７８１）。
【０１７９】
（Ｅ）−４−［Ｎ−（（２−トリフルオロメチル）ベンジル）ベンズアミド］−アルファ−エチルケイ皮酸（１ｄ）の例を用いて、化合物（１ｄ−１９ｄおよび１ｃ−１９ｃ）を製造するための一般的な手順
１００ｍｇ（０．２ｍｍｏｌ）エチル（Ｅ）−４−［Ｎ−（（２−トリフルオロメチル）ベンジル）ベンズアミド］−アルファ−エチルシンナマート（１ａ）および６９ｍｇ（１．２ｍｍｏｌ）を２ｍｌのＴＨＦの混合物に溶解した。Ｈ2Ｏ／ＭｅＯＨを１：２：１の比率で混合し、７０℃および３５ワットで３０分間マイクロ波中で撹拌した。有機層を減圧下で除去した。水層をＨ2Ｏ１ｍｌで希釈し、１２ＭのＨＣｌ溶液で酸性化し、４℃で保存した。純粋な生成物が沈殿し、それ以上精製する必要はなかった。収率：０．０６ｇ（６０％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ１２．７１（ｓ，１Ｈ，ＣＯＯＨ），９．２４（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１Ｈ，Ｐｈ2−ＯＣＮＨ），８．０６−７．４７（ｍ，９Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2＋Ｐｈ1−ＣＨ），４．７４（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），２．５１（ｑ，Ｊ＝８Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ−Ｃ−ＣＨ2），１．１７（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，３Ｈ，Ｃ−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：１６９．８，１６８．４，１３９．３，１３７，１３６．７，１３３．５，１３２．１，１２８．９，１２８．３，１２７．９，１２７．７，１２７．３，１２７．１，１２７，１２６．９，１２５．７，１２５．６，４０，２０．４，１２．８ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ３７８．１３１２（理論値：３７８．１３１３）。
【０１８０】
（Ｅ）−４−［Ｎ−ベンジルベンズアミド］−アルファ−エチルケイ皮酸（２ｄ）
収率：０．０６ｇ（６５％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ１２．６１（ｓ，１Ｈ，ＣＯＯＨ），９．１１（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１Ｈ，Ｐｈ2−ＯＣＮＨ），７．９９−７．２２（ｍ，９Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），７．３３（ｓ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ），４．５（ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），２．４７（ｑ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ−Ｃ−ＣＨ2），１．１１（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ，Ｃ−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：１６８．９，１６５．７，１３９．７，１３８，１３６．４，１３６．３，１２８．９，１２８．３，１２７．５，１２７．２，１２６．７，１２５．２，１２５．１，１２４，１２３．５，１２３，４２．７，２０．３，１３．３ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ３１０．１４３８（理論値：３１０．１４３８）。
【０１８１】
（Ｅ）−４−［Ｎ−（（２−メチル）ベンジル）ベンズアミド］−アルファ−エチルケイ皮酸（３ｄ）
収率：０．０２ｇ（１９％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ１２．６２（ｓ，１Ｈ，ＣＯＯＨ），８．９７（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｐｈ2−ＯＣＮＨ），７．９８−７．１３（ｍ，８Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），７．１７（ｓ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ），４．４８（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），２．４８（ｑ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ−Ｃ−ＣＨ2），２．３４（ｓ，３Ｈ，Ｐｈ2−ＣＨ3），１．１２（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ，Ｃ−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：１６９．８，１６８．１，１３９．１，１３７，１３６．６，１３６，１３５．９，１３３．９，１２９．９，１２８．９，１２８．６，１２７．９，１２７．４，１２７．２，１２６．９，１２６．９，４１．４，２０．３，１８．７，１２．８ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ３２４．１５９５（理論値：３２４．１５９４）。
【０１８２】
（Ｅ）−４−［Ｎ−（（２−クロロ）ベンジル）ベンズアミド］−アルファ−エチルケイ皮酸（４ｄ）
収率：０．０６ｇ（６２％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ１２．６９（ｓ，１Ｈ，ＣＯＯＨ），９．１７（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，１Ｈ，Ｐｈ2−ＯＣＮＨ），８．０５−７．３５（ｍ，９Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2＋Ｐｈ1−ＣＨ），４．６２（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），２．５（ｑ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ−Ｃ−ＣＨ2），１．１７（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ，Ｃ−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：１６９．８，１６８．３，１３９．２，１３７，１３６．６，１３５．７，１３３．７，１３２．９，１２９．１，１２８．９，１２８．６，１２８．４，１２７．９，１２７．３，１２６．９，１２６．４，４１．２，２０．３，１２．７ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ３４４．１０５２（理論値：３４４．１０４８）。
【０１８３】
（Ｅ）−４−［Ｎ−（（２−ブロモ）ベンジル）ベンズアミド］−アルファ−エチルケイ皮酸（５ｄ）
収率：０．０６ｇ（６１％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ１２．６８（ｓ，１Ｈ，ＣＯＯＨ），９．１８（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ，Ｐｈ2−ＯＣＮＨ），８．０８−７．２６（ｍ，９Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2＋Ｐｈ1−ＣＨ），４．５８（ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），２．５（ｑ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ−Ｃ−ＣＨ2），１．１８（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，３Ｈ，Ｃ−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：１６９．８，１６８．３，１３９．２，１３７．２，１３７，１３６．６，１３３．７，１３２．４，１２８．９，１２８．６，１２７．９，１２７．４，１２７．３，１２６．９，１２５．６，１２２．７，４３．７，２０．４，１２．８ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ３８８．０５４４（理論値：３８８．０５４３）。
【０１８４】
（Ｅ）−４−［Ｎ−（（２−トリフルオロメトキシ）ベンジル）ベンズアミド］−アルファ−エチルケイ皮酸（６ｄ）
収率：０．０６ｇ（６５％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ１２．７１（ｓ，１Ｈ，ＣＯＯＨ），９．１５（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，１Ｈ，Ｐｈ2−ＯＣＮＨ），８．０３−７．４（ｍ，９Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2＋Ｐｈ1−ＣＨ），４．６２（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），２．５１（ｑ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ−Ｃ−ＣＨ2），１．１６（ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，３Ｈ，Ｃ−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：１７１．３，１６９．２，１６６．５，１６６．４，１４９．７，１４６．６，１３８．８，１３６．９，１３４．１，１３３．１，１３２．２，１２９．７，１２９．５，１２９．１，１２８．２，１２８，１２８，３７．７，２０．８，１４．１ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ３９４．１２６１（理論値：３９４．１２６１）。
【０１８５】
（Ｅ）−４−［Ｎ−（（４−フルオロ）ベンジル）ベンズアミド］−アルファ−エチルケイ皮酸（７ｄ）
収率：０．０７ｇ（７０％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ１２．６３（ｓ，１Ｈ，ＣＯＯＨ），９．１２（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，１Ｈ，Ｐｈ2−ＯＣＮＨ），７．９７−７．１２（ｍ，９Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2＋Ｐｈ1−ＣＨ），４．４８（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），２．４４（ｑ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ−Ｃ−ＣＨ2），１．１１（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，３Ｈ，Ｃ−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：１６９．８，１６８．１，１３９．１，１３７，１３６．６，１３４．９，１３３．８，１２９．１，１２９，１２８．９，１２７．９，１２７．２，１２６．８，１２５．６，１１４．９，１１４．６，４２．４，２０．３，１２．７ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ３２８．１３４５（理論値：３２８．１３４４）。
【０１８６】
（Ｅ）−４−［Ｎ−（（４−トリフルオロメチル）ベンジル）ベンズアミド］−アルファ−エチルケイ皮酸（８ｄ）
収率：０．０５ｇ（５０％）；1ＨＮＭＲ（メタノール−ｄ3）：δ８．０８−７．２９（ｍ，９Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2＋Ｐｈ1−ＣＨ），４．７（ｓ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），２．５７（ｑ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ−Ｃ−ＣＨ2），１．２２（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ，Ｃ−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（メタノール−ｄ3）：１６７．２，１６６．５，１４４．２，１３８．４，１３８．１，１３７，１３６．５，１３３．８，１３３．６，１３２．２，１２９．６，１２９．４，１２８．６，１２８．５，１２７．１，１２７，１２６．８，２９．５，１９．４，１２．６ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ３７７．１２４５（理論値：３７７．１２４６）。
【０１８７】
（Ｅ）−４−［Ｎ−（（４−トリフルオロメトキシ）ベンジル）ベンズアミド］−アルファ−エチルケイ皮酸（９ｄ）
収率：０．０７ｇ（６９％）；1ＨＮＭＲ（メタノール−ｄ3）：δ７．９６−７．２４（ｍ，９Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2＋Ｐｈ1−ＣＨ），４．６４（ｓ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），２．５６（ｑ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ−Ｃ−ＣＨ2），１．１９（ｔ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，３Ｈ，Ｃ−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（メタノール−ｄ3）：１６９．７，１６８．２，１６５．５，１４５．２，１３９．２，１３８．２，１３７，１３６．６，１３４．１，１３３．７，１３２．２，１２９．７，１２９．５，１２９．１，１２８．２，１２８，１２０．８，２８．５，２０．４，１２．７ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ３９４．１２５８（理論値：３９４．１２６１）。
【０１８８】
（Ｅ）−４−［Ｎ−（（４−メトキシ）ベンジル）ベンズアミド］−アルファ−エチルケイ皮酸（１０ｄ）
収率：０．０６ｇ（６４％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２．５１（ｓ，１Ｈ，ＣＯＯＨ），８．９３（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ，Ｐｈ2−ＯＣＮＨ），７．８７−６．７８（ｍ，９Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2＋Ｐｈ1−ＣＨ），４．３３（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），３．６４（ｓ，３Ｈ，Ｐｈ2−Ｏ−ＣＨ3），２．３６（ｑ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ−Ｃ−ＣＨ2），１．０１（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ，Ｃ−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：１６９．８，１６８，１５９，１３９，１３７，１３６．５，１３３．９，１３０．８，１２８．９，１２８．７，１２８．５，１２８．５，１２７．９，１２７．２，１２６．８，１１３．５，５４．３，４６．８，２０．３，１２．７ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ３４０．１５４４（理論値：３４０．１５４３）。
【０１８９】
（Ｅ）−４−［Ｎ−（（４−クロロ）ベンジル）ベンズアミド］−アルファ−エチルケイ皮酸（１１ｄ）
収率：０．０６ｇ（６６％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２．５４（ｓ，１Ｈ，ＣＯＯＨ），９．０３（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｐｈ2−ＯＣＮＨ），７．８７−７．２３（ｍ，９Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2＋Ｐｈ1−ＣＨ），４．３９（ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），２．３７（ｑ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ−Ｃ−ＣＨ2），１．０１（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，３Ｈ，Ｃ−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：１６８．７，１６６．１，１３７．１，１３７，１３５．６，１３３．９，１３３．６，１２９．４，１２９．２，１２８．９，１２８，１２７．６，１２６．４，１２５．４，１１４．８，１１４．６，３７．４，２１．３，１２．７ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ３４４．１０４５（理論値：３４４．１０４８）。
【０１９０】
（Ｅ）−４−［Ｎ−（（４−フェノキシ）ベンジル）ベンズアミド］−アルファ−エチルケイ皮酸（１２ｄ）
収率：０．０２ｇ（１６％）；1ＨＮＭＲ（メタノール−ｄ3）δ７．９６−６．９５（ｍ，１４Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2＋Ｐｈ1−ＣＨ＋Ｐｈ2−Ｏ−Ｐｈ3），４．６（ｓ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），２．５６（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ−Ｃ−ＣＨ2），１．２（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，３Ｈ，Ｃ−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（メタノール−ｄ3）：１６９．８，１６８．１，１５７．４，１５５．４，１３９．１，１３７，１３６．５，１３３．９，１３３．８，１３３．８，１２９．５，１２８．９，１２８．８，１２７．９，１２７．２，１２６．９，１２２．９，１２２．８，１２１．５，１１８．５，１１８．３，１１５．９，４２．８，２０．３，１２．８ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ４０２．１６９６（理論値：４０２．１６９９）。
【０１９１】
（Ｅ）−４−［Ｎ−（（４−フルオロ（２−トリフルオロメチル））ベンジル）ベンズアミド］−アルファ−エチルケイ皮酸（１３ｄ）
収率：０．０６ｇ（６０％）；1ＨＮＭＲ（メタノール−ｄ3）δ８．１１−７．３６（ｍ，８Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2＋Ｐｈ1−ＣＨ），４．７９（ｓ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），２．５７（ｑ，Ｊ＝７．４３Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ−Ｃ−ＣＨ2），１．２（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ，Ｃ−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（メタノール−ｄ3）：１６９．７，１６８．４，１４１．９，１３９．４，１３６．９，１３６．７，１３３．５，１３１．２，１３１，１２８．９，１２８．２，１２７．３，１２６，１２５．３，１２５．１，１２４．８，１２４．１，３９．４，２０．４，１２．８ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ３９６．１２１５（理論値：３９６．１２１７）。
【０１９２】
（Ｅ）−４−［Ｎ−（（４−メトキシ（２−トリフルオロメチル））ベンジル）ベンズアミド］−アルファ−エチルケイ皮酸（１４ｄ）
収率：０．０５ｇ（５５％）；1ＨＮＭＲ（メタノール−ｄ3）δ７．９７−６．６５（ｍ，８Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2＋Ｐｈ1−ＣＨ），４．７５（ｓ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），３．８７（ｓ，３Ｈ，Ｐｈ2−ＣＨ3），２．５７（ｑ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ−Ｃ−ＣＨ2），１．２（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ，Ｃ−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（メタノール−ｄ3）：１６９．７，１６８．３，１５８．９，１３９．３，１３７．１，１３６．６，１３３．６，１３０．５，１２８．９，１２８．１，１２７．９，１２７．３，１２６．９，１２６．１，１１６．７，１１２，１１１．８，５４．７，２０．３，１２．６ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ４０８．１４１５（理論値：４０８．１４１７）。
【０１９３】
（Ｅ）−３−［Ｎ−（（２−トリフルオロメチル）ベンジル）ベンズアミド］−アルファ−エチルケイ皮酸（１５ｄ）
収率：０．０５ｇ（５０％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯｌ−ｄ6）：δ１２．６６（ｓ，１Ｈ，ＣＯＯＨ），９．２２（ｔ，Ｊ＝５．８，１Ｈ，ＯＣＮＨ），８．０２−７．４７（ｍ，８Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2＋ＯＣＮＨ−Ｐｈ1−ＣＨ），４．７３（ｄ，Ｊ＝６，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），２．５４−２．４３（ｍ，２Ｈ，ＣＨ−Ｃ−ＣＨ2），１．１７（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ，Ｃ−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：１７０，１６５，１３７．５，１３７，１３６，１３５．６，１３３．４，１３３，１３０，１２９．４，１２８．３，１２８．３，１２７．２，１２７，１２４．９，１２４．８，１２４．１，３８．２，２０．１，１４．２ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ３７７．３５７１（理論値：３７７．３５７２）。
【０１９４】
（Ｅ）−４−［Ｎ−（（２−トリフルオロメチル）ベンジル）ベンズアミド］−ケイ皮酸（１６ｄ）
収率：０．０７ｇ（７２％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ１２．４（ｓ，１Ｈ，ＣＯＯＨ），９．１（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ，Ｐｈ2−ＯＣＮＨ），７．９１−７．３８（ｍ，９Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2＋Ｐｈ1−ＣＨ），６．５８（ｄ，Ｊ＝１６Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ），４．６（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：１６９．８，１６８．３，１３９．３，１３７，１３６．７，１３３．５，１３２．１，１２８．９，１２８．３，１２７．９，１２７．３，１２７．１，１２７，１２６．９，１２６．７，１２５．７，１２５．６，４０ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ３５０．１（理論値：３５０．１）。
【０１９５】
（Ｅ）−４−［Ｎ−（（２−トリフルオロメチル）ベンジル）ベンズアミド］−アルファ−メチルケイ皮酸（１７ｄ）
収率：０．０７ｇ（７１％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ１２．６２（ｓ，１Ｈ，ＣＯＯＨ），９．２３（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｐｈ2−ＯＣＮＨ），８．０６−７．５１（ｍ，９Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2＋Ｐｈ1−ＣＨ），４．７４（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），２．１２（ｄ，Ｊ＝１．４，３Ｈ，ＣＨ−Ｃ−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：１６９．１，１６６，１３８．６，１３７．５，１３６．７，１３４．９，１３３．５，１３２．７，１３０．２，１３０，１３０，１２９．６，１２８．２，１２７．５，１２７．４，１２７．３，１２６．８，４１．１，１２．３ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ３６４．１１５８（理論値：３６４．１１５５）。
【０１９６】
（Ｅ）−４−［Ｎ−（（２−トリフルオロメチル）ベンジル）ベンズアミド］−アルファ−プロピルケイ皮酸（１８ｄ）
収率：０．０２ｇ（１８％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ１２．６７（ｓ，１Ｈ，ＣＯＯＨ），９．１７（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１Ｈ，Ｐｈ2−ＯＣＮＨ），８．０５−７．４１（ｍ，９Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2＋Ｐｈ1−ＣＨ），４．６９（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），２．５５−２．３３（ｍ，２Ｈ，ＣＨ−Ｃ−ＣＨ2），１．６−１．４２（ｍ，２Ｈ，Ｃ−ＣＨ2−ＣＨ2），０．９１（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，３Ｈ，ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：１６８．９，１６６，１３８．５，１３７．５，１３７．４，１３６．８，１３５．１，１３３．８，１３３．５，１３２．７，１２９．３，１２９，１２８．５，１２８．２，１２７．６，１２７．３，１２５．９，４２．１，２９，１８．４，１４ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ３９２．１４７１（理論値：３９２．１４６８）。
【０１９７】
（Ｅ）−４−［Ｎ−（（２−トリフルオロメチル）ベンジル）ベンズアミド］−アルファ−フェニルケイ皮酸（１９ｄ）
収率：０．０２ｇ（１７％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ８．９４（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｐｈ2−ＯＣＮＨ），７．７９−６．９１（ｍ，１４Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2＋Ｐｈ1−ＣＨ＋Ｃ−Ｐｈ4），４．５４（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：１６６．２，１５５．５，１２９．６，１２９．２，１２９，１２８．９，１２８．３，１２８．２，１２８．１，１２８，１２８，１２８，１２７．５，１２７．２，１２６．９，１２６．２，１２５．８，１２５．８，１２６．１，１２６，１２５．３，１２５，１２４．６，４１ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ４２６．１３０９（理論値：４２６．１３１２）。
【０１９８】
２−エチル３−［４−（Ｎ−（（２−トリフルオロメチル）ベンジル）ベンズアミド）］プロピオン酸（１ｃ）
収率：０．０６ｇ（６０％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ１２．２（ｓ，ＣＯＯＨ），９．１（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１Ｈ，Ｐｈ2−ＯＣＮＨ），７．９３−７．３６（ｍ，８Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），４．７２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），２．９８−２．７８（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2−ＣＨ−ＣＨ2），２．５９−２．５（ｍ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ），１．６４−１．５３（ｍ，Ｐｈ1−ＣＨ2），０．９４（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，ＣＨ−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ．13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：１７７．６，１６８．９，１４４．１，１３７．１，１３２．１，１３１．９，１２８．８，１２８．１，１２７，１２７．４，１２５．７，１２５．６，１２５．５，１２５．４，１２２．８，４９，３９．８，３７．６，２４．９，１０．５ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：ｍ／ｚ３８０．１４６９（理論値：３８０．１４６８）。
【０１９９】
２−エチル３−［４−（Ｎ−ベンジルベンズアミド）］プロピオン酸（２ｃ）
収率：０．０５ｇ（５５％）；1ＨＮＭＲ（メタノール−ｄ3）：δ７．８３−６．９２（ｍ，９Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），４．４６（ｓ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），２．８９−２．６７（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2），２．５１−２．４２（ｍ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ），１．６２−１．３９（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ−ＣＨ2），０．８５（ｔ，Ｊ＝７．６，３Ｈ，ＣＨ−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（メタノール−ｄ3）：１７８．２，１６８．７，１４４．１，１３８．９，１３２．１，１２８．８，１２８．８，１２８．１，１２８．１，１２７．１，１２７．１，１２７，１２７，１２６．７，４９．５，４３．１，３７．８，２５．２，１０．７ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ３１２．１６０１（理論値：３１２．１５９４）。
【０２００】
２−エチル３−［４−（Ｎ−（（２−メチル）ベンジル）ベンズアミド）］プロピオン酸（３ｃ）
収率：０．０２ｇ（２０％）；1ＨＮＭＲ（メタノール−ｄ3）：δ８．０１−７．０３（ｍ，８Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），４．４７（ｓ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），２．９１−２．６９（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2），２．５５−２．４５（ｍ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ），２．２６（ｓ，３Ｈ，Ｐｈ2−ＣＨ3），１．６３−１．４２（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ−ＣＨ2），０．８６（ｔ，Ｊ＝７．４，３Ｈ，ＣＨ−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：１７６．１，１６７．３，１６６．１，１４５．１，１４３．２，１３７．３，１３５．６，１３２．３，１２９．８，１２９．３，１２９，１２８．７，１２７．３，１２６．６，１２５．６，４８．１，３７．２，２４．７，１８．５，１１．４ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ３２６．１７５２（理論値：３２６．１７５１）。
【０２０１】
２−エチル３−［４−（Ｎ−（（２−クロロ）ベンジル）ベンズアミド）］プロピオン酸（４ｃ）
収率：０．０５ｇ（５０％）；1ＨＮＭＲ（メタノール−ｄ3）：δ７．６８−７．１（ｍ，８Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），４．４６（ｓ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），２．８９−２．６９（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2），２．５４−２．４４（ｍ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ），１．６３−１．４１（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ−ＣＨ2），０．８６（ｔ，Ｊ＝７．６，３Ｈ，ＣＨ−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（メタノール−ｄ3）：１７７．６，１６８．７，１４３．８，１３８．９，１３２．２，１２８．８，１２８．８，１２８．１，１２８．１，１２７．１，１２７，１２６．９，１２６．８，１２６．５，４９，４３．１，３７．５，２５，１０．６ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ３４６．１２０６（理論値：３４６．１２０５）。
【０２０２】
２−エチル３−［４−（Ｎ−（（２−ブロモ）ベンジル）ベンズアミド）］プロピオン酸（５ｃ）
収率：０．０５ｇ（５１％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ１２．１２（ｓ，１Ｈ，ＣＯＯＨ），８．９６（ｔ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，１Ｈ，Ｐｈ2−ＯＣＮＨ），７．８１−７．１９（ｍ，８Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），４．４６（ｄ，Ｊ＝６．１，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），２．９−２．７１（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2），２．６−２．５（ｍ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ），１．６−１．４１（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ−ＣＨ2），０．８７（ｔ，Ｊ＝７．６，３Ｈ，ＣＨ−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：１７６．４，１６６．５，１４３．７，１４０．２，１３２．７，１２９．２，１２８．７，１２８．１，１２８．１，１２７．７，１２７．６，１２６．９，１２６．８，１２６．５，４８．５，４０．５，３９．７，２５．１，１１．９ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ３９０．０７（理論値：３９０．０６９９）。
【０２０３】
２−エチル３−［４−（Ｎ−（（２−トリフルオロメトキシ）ベンジル）ベンズアミド）］プロピオン酸（６ｃ）
収率：０．０７ｇ（６６％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ１２．１８（ｓ，１Ｈ，ＣＯＯＨ），９．０３（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，１Ｈ，Ｐｈ2−ＯＣＮＨ），７．８８−７．２６（ｍ，８Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），４．５３（ｄ，Ｊ＝６，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），２．９６−２．７６（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2），２．６３−２．５９（ｍ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ），１．６４−１．５（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ−ＣＨ2），０．９（ｔ，Ｊ＝７．６，３Ｈ，ＣＨ−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：１７７．５，１７６．４，１６６．５，１４３．７，１４０．２，１３３．１，１３２．７，１２９．２，１２９，１２８．７，１２７．７，１２７．６，１２７．１，１２６．８，１２６．５，４８．５，４０．３，３９．１，２６．５，１１．９ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ３９６．１４１７（理論値：３９６．１４１７）。
【０２０４】
２−エチル３−［４−（Ｎ−（（４−フルオロ）ベンジル）ベンズアミド）］プロピオン酸（７ｃ）
収率：０．０５ｇ（５０％）；1ＨＮＭＲ（メタノール−ｄ3）：δ７．６８−６．９１（ｍ，８Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），４．４３（ｓ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），２．８９−２．６９（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2），２．５４−２．４４（ｍ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ），１．６２−１．４１（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ−ＣＨ2），０．８６（ｔ，Ｊ＝７．４，３Ｈ，ＣＨ−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（メタノール−ｄ3）：１７７．６，１６８．７，１６３．７，１６０．５，１４３．９，１３５，１３５，１３２．１，１２９．１，１２９，１２９，１２７，１１４．９，１１４．６，４９．１，４２．４，３７．６，２５，１０．６ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ３３０．１５０３（理論値：３３０．１５）。
【０２０５】
２−エチル３−［４−（Ｎ−（（４−トリフルオロメチル）ベンジル）ベンズアミド）］プロピオン酸（８ｃ）
収率：０．０５ｇ（５３％）；1ＨＮＭＲ（メタノール−ｄ3）：δ７．７−７．１（ｍ，８Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），４．６１（ｓ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），３．０３−２．８２（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2），２．６６−２．５６（ｍ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ），１．７６−１．５３（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ−ＣＨ2），０．９９（ｔ，Ｊ＝８．３，３Ｈ，ＣＨ−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（メタノール−ｄ3）：１７７．５，１６８．８，１４４，１３２．５，１３２．２，１３２．１，１３１．１，１２９．１，１２９，１２７．５，１２７，１２５，１２５，１２４．９，１２４．６，４９，４７．４，３７．５，２５，１０．６ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ３８０．１４６７（理論値：３８０．１４６８）。
【０２０６】
２−エチル３−［４−（Ｎ−（（４−トリフルオロメトキシ）ベンジル）ベンズアミド）］プロピオン酸（９ｃ）
収率：０．０６ｇ（６０％）；1ＨＮＭＲ（メタノール−ｄ3）：δ７．８２−７．２４（ｍ，８Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），４．６１（ｓ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），３．０３−２．８２（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2），２．６６−２．５６（ｍ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ），１．７６−１．５３（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ−ＣＨ2），０．９９（ｔ，Ｊ＝８．３，３Ｈ，ＣＨ−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（メタノール−ｄ3）：１７８，１７５．６，１６８．７，１４８．１，１４４．１，１３８．３，１３２，１２８．８，１２８．７，１２８．５，１２７，１２５．３，１２５．２，１２５．１，１２０．７，４９．３，４７，３７．６，２５，１０．６ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ３９６．１４１６（理論値：３９６．１４１７）。
【０２０７】
２−エチル３−［４−（Ｎ−（（４−メトキシ）ベンジル）ベンズアミド）］プロピオン酸（１０ｃ）
収率：０．０６ｇ（６２％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ１２．１９（ｓ，１Ｈ，ＣＯＯＨ），８．９５（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，１Ｈ，Ｐｈ2−ＯＣＮＨ），７．８６−６．９１（ｍ，８Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），４．４５（ｄ，Ｊ＝５．８，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），３．７８（ｓ，３Ｈ，Ｐｈ2−Ｏ−ＣＨ3），２．９６−２．７７（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2），２．６３−２．６（ｍ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ），１．６４−１．４９（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ−ＣＨ2），０．９３（ｔ，Ｊ＝７．６，３Ｈ，ＣＨ−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：１７６．４，１６６．４，１５８．６，１４３．６，１３２．８，１３２．２，１２９．１，１２９，１２７．６，１２７，１２５．３，１２５．２，１２５．１，１１４．１，５５．５，４２．４，４０．８，３７．５，２５．１，１１．９ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ３４２．１７（理論値：３４２．１７）。
【０２０８】
２−エチル３−［４−（Ｎ−（（４−クロロ）ベンジル）ベンズアミド）］プロピオン酸（１１ｃ）
収率：０．０５ｇ（５０％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ１２．１３（ｓ，１Ｈ，ＣＯＯＨ），８．９７（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，１Ｈ，Ｐｈ2−ＯＣＮＨ），７．８３−７．２７（ｍ，８Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），４．５３（ｄ，Ｊ＝６．４，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），２．９−２．７１（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2），２．５７−２．５２（ｍ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ），１．５８−１．４３（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ−ＣＨ2），０．８８（ｔ，Ｊ＝７．１，３Ｈ，ＣＨ−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：１７６．４，１６６．７，１４６．６，１４３．９，１３２．４，１３２．４，１２９．６，１２９．２，１２９．１，１２８，１２７．７，１２５．２，１２５．１，１２１．１，４８．５，３９．４，３７．５，２５．１，１１．９ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ３４６．１２０６（理論値：３４６．１２０５）。
【０２０９】
２−エチル３−［４−（Ｎ−（（４−フェノキシ）ベンジル）ベンズアミド）］プロピオン酸（１２ｃ）
収率：０．０３ｇ（３０％）；1ＨＮＭＲ（メタノール−ｄ3）：δ７．６９−６．８２（ｍ，１３Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），４．４４（ｓ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），２．８９−２．６９（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2），２．５４−２．４４（ｍ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ），１．６２−１．４１（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ−ＣＨ2），０．８５（ｔ，Ｊ＝７．６，３Ｈ，ＣＨ−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（メタノール−ｄ3）：１７７．５，１６８．６，１５７．４，１５６．４，１３３．９，１３２．４，１３２．２，１２９．４，１２８．８，１２８．７，１２７，１２６．９，１２６．８，１２５．３，１２３．１，１２２．９，１２１．５，１１８．５，１１８．３，１１８，４７．６，４２．２，３７．５，２５，１０．６ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ４０４．１８５８（理論値：４０４．１８５６）。
【０２１０】
２−エチル３−［４−（Ｎ−（４−フルオロ（２−トリフルオロメチル）ベンジル）ベンズアミド）］プロピオン酸（１３ｃ）
収率：０．０５ｇ（５０％）；1ＨＮＭＲ（メタノール−ｄ3）：δ７．８４−７．１８（ｍ，７Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），４．６４（ｓ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），２．９１−２．７１（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2），２．５５−２．４５（ｍ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ），１．６４−１．４２（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ−ＣＨ2），０．８６（ｔ，Ｊ＝７．６，３Ｈ，ＣＨ−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（メタノール−ｄ3）：１７７．５，１６８．９，１５９．７，１４４．８，１４３．１，１３３．１，１３１．８，１３１，１３１，１２８．８，１２７．１，１１８．８，１１８．６，１１２．９，１１２．９，６０，４６．７，３７．５，２５，１０．６ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ３９８．１３７（理論値：３９８．１３７４）。
【０２１１】
２−エチル３−［４−（Ｎ−（４−メトキシ（２−トリフルオロメチル）ベンジル）ベンズアミド）］プロピオン酸（１４ｃ）
収率：０．７ｇ（７９％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ１２．１５（ｓ，ＣＨ2−ＣＨ−ＣＯＯＨ），８．９７（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ，Ｐｈ2−ＯＣＮＨ），７．８７−７．２（ｍ，８Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），４．５８（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝５．５，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），３．８１（ｓ，３Ｈ，Ｐｈ2−Ｏ−ＣＨ3），２．９４−２．７２（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2−ＣＨ−ＣＨ2），２．９−２．７２（ｍ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ），１．５７−１．４６（ｍ，Ｐｈ1−ＣＨ2），０．９（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，ＣＨ−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ．13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：１７６．８，１６６．８，１５８．５，１４４．３，１３２．４，１３０．８，１２９．６，１２９．３，１２８，１２７．８，１２７．４，１２６．５，１２２．８，１１８．２，１１２．１，５６．３，５０．５，４８．４，３７．５，２５．１，１１．８ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：ｍ／ｚ４１０．１５７２（理論値：４１０．１５７３）。
【０２１２】
２−エチル３−［３−（Ｎ−（（２−トリフルオロメチル）ベンジル）ベンズアミド）］プロピオン酸（１５ｃ）
率：０．０６ｇ（６０％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ１２．１５（ｓ，ＣＯＯＨ），９．１３（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ，Ｐｈ2−ＯＣＮＨ），７．８５−７．４３（ｍ，８Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），４．７２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），２．９９−２．７８（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2−ＣＨ−ＣＨ2），２．６６−２．６（ｍ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ），１．６６−１．５（ｍ，Ｐｈ1−ＣＨ2），０．９５（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，ＣＨ−ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ．13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：１７６．５，１６７，１４０．５，１３８．２，１３４．４，１３３．１，１３２．４，１２８．７，１２８．７，１２８．２，１２７．７，１２６．２，１２６．１，１２５．６，１２２．８，４８．７，３９．４，３７．６，２５．１，１１．９ｐｐｍ，ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ３８０．１４７３（理論値：３８０．１４６８）。
【０２１３】
３−［４−（Ｎ−（（２−トリフルオロメチル）ベンジル）ベンズアミド）］プロピオン酸（１６ｃ）
収率：０．０５ｇ（５０％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ１２．２１（ｓ，１Ｈ，ＣＯＯＨ），９．０４（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ，ＯＣＮＨ），７．８６−７．３４（ｍ，８Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），４．６５（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），２．８８（ｔ，Ｊ＝８，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2），２．５７（ｔ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ2）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：１７４，１６６．７，１４５，１３８．３，１３５．４，１３３．１，１３２．２，１２９．７，１２９．１，１２８．８，１２７．８，１２６．３，１２５．５，１２５．４，１２３．４，５０．７，３９．８，３５．５ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ３５２．１１５６（理論値：３５２．１１５５）。
【０２１４】
２−メチル３−［４−（Ｎ−（（２−トリフルオロメチル）ベンジル）ベンズアミド）］プロピオン酸（１７ｃ）
収率：０．０５ｇ（５０％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ１２．１７（ｓ，１Ｈ，ＣＯＯＨ），９．０４（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ，ＯＣＮＨ），７．８６−７．３（ｍ，８Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），４．６５（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），３−２．９（ｍ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ），２．７３−２．６４（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2），１．０５（ｄ，Ｊ＝６．４，３Ｈ，ＣＨ2−ＣＨ−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：１７７．１，１６６．７，１４３．９，１４０．５，１３３．２，１３２．４，１３１．５，１２９．４，１２９．３，１２８．６，１２７．７，１２６．５，１２５．４，１２５．４，１２４．８，５０．７，４０．８，３９．１，１７．２ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ３６６．１３１４（理論値：３６６．１３１２）。
【０２１５】
２−プロピル３−［４−（Ｎ−（（２−トリフルオロメチル）ベンジル）ベンズアミド）］プロピオン酸（１８ｃ）
収率：０．０２ｇ（２０％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ１２．４７（ｓ，１Ｈ，ＣＣＯＨ），９．０４（ｔ，Ｊ＝４．７Ｈｚ，１Ｈ，ＯＣＮＨ），７．８５−７．２９（ｍ，８Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），４．６５（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），２．９１−２．７１（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2），２．６５−２．４５（ｍ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ），１．５９−１．２（ｍ，４Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ−ＣＨ2＋ＣＨ2−ＣＨ−ＣＨ2−ＣＨ2），１．３５−０．８５（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ，ＣＨ−ＣＨ2-ＣＨ2−ＣＨ3）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：１７６．６，１６７．１，１４４，１３８．４，１３３．２，１３２．４，１３１．５，１２９．４，１２９．２，１２８．１，１２７．７，１２６．２，１２５．９，１２５．４，１２４．９，３８，３４．６，３４．１，２０．３，１４．５ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ３９４．１６２３（理論値：３９４．１６２５）。
【０２１６】
２−フェニル−３−［４−（Ｎ−（（２−トリフルオロメチル）ベンジル）ベンズアミド）］プロピオン酸（１９ｃ）
収率：０．２ｇ（１６％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ１２．４７（ｓ，１Ｈ，ＣＯＯＨ），９．０８（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１Ｈ，ＯＣＮＨ），７．８７−７．２７（ｍ，１３Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2＋ＣＨ2−ＣＨ−Ｐｈ4），４．７（ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），３．４５−３．０５（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2），４（ｔ，Ｊ＝７．８，１Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ2−ＣＨ）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：１７４．７，１６６．９，１４３．７，１３９．４，１３８．２，１３８．１，１３３．２，１３２．２，１２９．３，１２８．８，１２８．６，１２８．３，１２７．７，１２７．７，１２７．７，１２６．６，１２６．５，１２６．６，１２６．２，１２６．１，１２５．７，１２５，１２４．６，５２．７ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ４２８．１４６５（理論値：４２８．１４６８）。
【０２１７】
（Ｅ）−Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチル３−［４−（Ｎ−（（２−トリフルオロメチル）ベンジル）ベンズアミド）］ブタ−２−エナミド（２０）
アルゴン雰囲気下、クロロホルム２０ｍｌ中の４−ホルミル−Ｎ−（２−（トリフルオロメチル）ベンジル）ベンズアミド（１）１ｇ（３．３ｍｍｏｌ）の溶液に、１．３ｇ（３．６ｍｍｏｌ）のＮ−メトキシ−Ｎ−メチル（トリフェニルホスホラニリデン）アセトアミドを添加した。１６時間後、溶媒を減圧下で蒸発させた。粗生成物を、１：１の比のＥＥ／Ｈｅｘの溶媒混合物を用いるフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。白色固体は純粋な生成物のままであった。
収率：０．６ｇ（４７％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ９．２（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ），８−７．２（ｍ，１０Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2＋Ｐｈ1−ＣＨ＋Ｐｈ1−ＣＨ−ＣＨ），４．７（ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），３．７８（ｓ，３Ｈ，ＯＣＮ−Ｏ−ＣＨ3），３．２５（ｓ，３Ｈ，ＯＣＮ−ＣＨ3）ｐｐｍ．ＭＳ−ＥＳＩ：ｍ／ｚ３９３［Ｍ＋Ｈ+］。
【０２１８】
Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチル３−［４−（Ｎ−（（２−トリフルオロメチル）ベンジル）ベンズアミド］］シクロプロパンカルボキサミド（２１）
アルゴン雰囲気下、３．１５ｍｌの乾燥ＤＭＳＯ中の５６１ｍｇ（２．６ｍｍｏｌ）のトリメチルスルホニウムヨージドの溶液に９７ｍｇ（２．５５ｍｍｏｌ）のＮａＨを少量ずつ加えた。反応混合物を１時間撹拌した後、（Ｅ）−Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチル３−［４−（Ｎ−（（２−トリフルオロメチル）ベンジル）ベンズアミド）］５００ｍｇ（１．３ｍｍｏｌ）−２−エナミド（２０）を１．０５ｍｌの乾燥ＤＭＳＯに注入した。６時間後、飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液１０ｍｌで反応を停止させた。生成物を５ｍｌのＤＣＭで３回抽出した。集めた有機層を塩水４ｍｌで１回洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥した。溶媒を減圧下で除去した。純粋な生成物をＥＥ／Ｈｅｘ混合物から再結晶し、白色固体を得た。
収率：０．６２ｇ（６０％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ９．０６（ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，１Ｈ，ＯＣＮＨ），７．８８−７．３１（ｍ，８Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），４．６７（ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），３．６６（ｓ，３Ｈ，ＯＣＮ−Ｏ−ＣＨ3），３．１６（ｓ，３Ｈ，ＯＣＮ−ＣＨ3），２．５７−２．３６（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ＋Ｐｈ1−ＣＨ−ＣＨ），１．５４−１．４（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ−ＣＨ2）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：１６７．４，１４３．８，１３５．７，１３０．８，１３０．６，１２６．９，１２６．４，１２６．２，１２６．１，１２５．７，１２４．６，１２４．３，１２３，１２２．３，１２２，３８．５，３７．４，３２，２７．８，２４，２０．６ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ４０７．１５７８（理論値：４０７．１５７７）。
【０２１９】
２−［４−（Ｎ−（（２−トリフルオロメチル）ベンジル）ベンズアミド］］シクロプロパンカルボン酸（２２）
３ｍｌのＥｔＯＨ中の１００ｍｇ（０．２５ｍｍｏｌ）のＮ−メトキシ−Ｎ−メチル３−［４−（Ｎ−（（２−トリフルオロメチル）ベンジル）ベンズアミド）ベンズアミド）］シクロプロパンカルボキサミド（２１）の溶液に３ｍｌのＫＯＨ溶液（１０％）を添加した。反応混合物を２４時間還流した。ＥｔＯＨを減圧下で反応溶液から除去し、残りの水溶液をＤＥＥで３回洗浄した。水溶液のｐＨを１２ＭのＨＣｌ溶液で１に調整した。純粋な白色生成物が沈殿し、濾過によって集めた。
収率：０．０５ｇ（５５％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ１２．２７（ｓ，１Ｈ，ＣＯＯＨ），８．９９（ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，１Ｈ，ＯＣＮＨ），７．８−７．２（ｍ，８Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），４．５９（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2），２．３−２．４（ｍ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ），１．８６−１．８（ｍ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ−ＣＨ），１．４４−１．３１（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ−ＣＨ2）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：１７３．７，１６６．２，１４４．２，１３７．７，１３７．１，１３２．６，１３２．２，１３１．８，１２８．１，１２８，１２７．４，１２７．３，１２５．９，１２５．９，１２５．８，３９．７，３７．４，２５．１，２４．５ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ３６４．１１５８（理論値：３６４．１１５５）。
【０２２０】
４−［Ｎ−（２−（トリフルオロメチル）ベンジル）ベンズアミド］−（Ｅ）−４−メチル（ｏ−（ベンジルヒドロキシル）イミン）（２３）
４−ホルミル−Ｎ−（２−（トリフルオロメチル）ベンジル）ベンズアミド（１）２５０ｍｇ（０．８ｍｍｏｌ）、ｏ−ベンジルヒドロキシルアミン塩酸塩１９５ｍｇ（１．２ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ２１３μｌ（１．２ｍｍｏｌ）を４ｍｌのＭｅＯＨに溶解し、１２時間撹拌した。溶媒を減圧下で蒸発させ、粗生成物をＥＥ／Ｈｅｘ混合物から再結晶した。白色固体は純粋な生成物のままであった。
収率：０．２５ｇ（７４％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ９．１７（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ，ＯＣＮＨ），８．３７（ｓ，１Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ），７．９８−７．２９（ｍ，１３Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2＋Ｐｈ1−ＣＨ−Ｎ−Ｏ−ＣＨ2−Ｐｈ5），５．２（ｓ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＣＨ−Ｎ−Ｏ−ＣＨ2），４．６５（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：１６６，１３７．４，１３５，１３５，１３２．７，１３１．５，１２８．６，１２８．４，１２８．３，１２８．２，１２７．９，１２７．６，１２７．４，１２７．３，１２６．８，１２６．６，１２６．３，１２６．１，１２６，１２５．９，１２５．７，１２５，１２４．６，５０ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ４１３．１４７３（理論値：４１３．１４７１）。
【０２２１】
４−［Ｎ−（２−（トリフルオロメチル）ベンジル）ベンズアミド］−（１，１’−ビフェニル）−４−酸（２５）の例を用いて化合物２５および２６を調製する一般的な手順
４−カルボキシベンゼンボロン酸２５０ｍｇ（１．５ｍｍｏｌ）、４−ヨード−［Ｎ−（２−（トリフルオロメチル）ベンジル）ベンズアミド］（２４）５５５ｍｇ（１．４ｍｍｏｌ）、パラジウム（ＩＩ）アセタート９．２ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）および５６８ｍｇ（４．１ｍｍｏｌ）のＫ2ＣＯ3をアセトン／Ｈ2Ｏの１：１の混合物に溶解した。反応物を６５℃で１時間撹拌した。次いで、混合物をセライトで濾過し、アセトンを減圧下で蒸発させた。水層を１２ＭのＨＣｌ溶液で酸性化した後、生成物が沈殿した。白色固体が残っており、さらなる精製は必要なかった。
収率：０．３６ｇ（６６％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ１３．０３（ｓ，１Ｈ，ＣＯＯＨ），９．２１（ｔ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，１Ｈ，ＯＣＮＨ），８．０９−７．４８（ｍ，１２Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2＋Ｐｈ1−Ｐｈ7），４．７１（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：１６７，１６６，１６２．４，１４３．２，１４２．１，１４１．８，１３７．９，１３４．７，１３３．５，１３２．７，１３０．２，１３０，１２８．９，１２８．２，１２７．４，１２７．３，１２７．１，１２７．１，１２７，１２５．１，１２５，４８．１ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ４００．１１５６（理論値：４００．１１５５）。
【０２２２】
４−［Ｎ−（２−（トリフルオロメチル）ベンジル））ベンズアミド］−（１，１’−ビフェニル）−３−カルボン酸（２６）
収率：０．３７ｇ（６７％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ１３．０８（ｓ，１Ｈ，ＣＯＯＨ），９．１４（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ，ＯＣＮＨ），８．２−７．３９（ｍ，１２Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2＋Ｐｈ1−Ｐｈ7），４．６３（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：１６８．１，１６６，１４４，１４３．１，１４２．１，１４０．８，１３６．８，１３４．８，１３３．４，１３２．９，１３０，１３０，１２８．８，１２８．１，１２７．７，１２７．５，１２７．１，１２６．１，１２６，１２５．１，１２４，４９．１ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ４００．１１５５（理論値：４００．１１５５）。
【０２２３】
［Ｎ−（２−（トリフルオロメチル）ベンジル）ベンズアミド］−４−（１Ｈ−テトラゾール）（２８）
４−シアノ−［Ｎ−（２−（トリフルオロメチル）ベンジル）ベンズアミド］（２７）１００ｍｇ（０．３ｍｍｏｌ）、ＮａＮ3４３ｍｇ（０．７ｍｍｏｌ）およびＮＨ4Ｃｌ２３ｍｇ（０．４ｍｍｏｌ）をアルゴン雰囲気下乾燥ＤＭＦで処理し、１５０℃で１２時間撹拌した。反応混合物が室温に達した後、１ｍｌのＨ2Ｏを加えた。水層に１２ＭのＨＣｌ溶液を加え、生成物を沈殿させた。ろ過により、さらなる精製を必要としないわずかに黄色の固体を集めた。
収率：０．１１ｇ（９２％）；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ９．３５（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ，ＯＣＮＨ），８．２５−７．５４（ｍ，８Ｈ，ＯＣＮＨ−Ｐｈ1＋Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2−Ｐｈ2），４．７６（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ，Ｐｈ1−ＯＣＮＨ−ＣＨ2）ｐｐｍ；13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：１６６．６，１６０．３，１３７．９，１３６．９，１３５．５，１３２．７，１３２．３，１２９．２，１２８．６，１２８．２，１２７．７，１２７．２，１２６．７，１２５．５，１２５．１，１２５，４８．２ｐｐｍ；ＨＲＭＳ：実測値ｍ／ｚ３４８．１０６７（理論値：３４８．１０６７）。
【０２２４】
ｓＥＨ活性アッセイ
【０２２５】
化合物のＩＣ50値は、９６ウェルフォーマットの蛍光に基づくアッセイシステムによって決定した。基質として非蛍光ＰＨＯＭＥ（３−フェニル−シアノ−（６−メトキシ−２−ナフタレニル）メチルエステル−２−オキシラン−酢酸、Ｃａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ）を使用したが、これはｓＥＨによって加水分解されて蛍光６−メトキシナフチルアルデヒドになる［１１２］。生成物の形成は、ＴｅｃａｎＩｎｆｉｎｉｔ  ｅＦ２００Ｐｒｏプレートリーダーによって測定可能である（εｅｍ＝３３０ｎｍ、εｅｘ＝４６５ｎｍ）。アッセイは、文献［６７］にしたがって行われた。したがって、最終濃度０．０１％のＴｒｉｔｏｎ−Ｘ１００を含む０．１ｍｇ／ｍｌのＢＳＡを含むＢｉｓ−Ｔｒｉｓ緩衝液ｐＨ７中の組換えヒトｓＥＨ［９０］（２μｇ／ウェル）１００μｌのタンパク質を、様々な濃度の化合物（ＤＭＳＯ最終濃度１％）で３０分間、室温でインキュベートした。その後、１０μｌの基質を添加した（最終濃度５０μＭ）。加水分解した基質を３０分間測定した（毎分１ポイント）。ブランク対照（タンパク質も化合物もなし）と陽性対照（化合物なし）も同様に測定した。全ての測定は３回実施した。
【０２２６】
ＰＰＡＲ活性アッセイ［１１３］
【０２２７】
細胞培養
【０２２８】
１０％ウシ胎仔血清（ＦＣＳ）、１％ピルビン酸ナトリウム（ＳＰ）および１％ペニシリン／ストレプトマイシン（ＰＳ）を補充した高グルコースＤＭＥＭ、３７℃および５％ＣＯ2でＣＯＳ−７細胞（ＰＰＡＲ）を増殖させた。ＰＰＡＲトランスアクチベーションアッセイのために使用されたプラスミドは、補足情報の下に示されている。
【０２２９】
ＰＰＡＲトランス活性化アッセイ
【０２３０】
トランスフェクションの前日に、ＣＯＳ−７細胞を９６ウェルプレートにウェル当たり３０，０００細胞の密度で播種した。一過性トランスフェクションは、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ  ＬＴＸ試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カールスバッド、カリフォルニア州、米国）を用いて、それぞれのＰＰＡＲサブタイプのｐＦＲ−Ｌｕｃ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）、ｐＲＬ−ＳＶ４０（Ｐｒｏｍｅｇａ）およびＧａｌ４融合受容体プラスミド（ｐＦＡ−ＣＭＶ−ｈＰＰＡＲ−ＬＢＤ）を用いた製造業者のプロトコールに従って行った。トランスフェクションの５時間後、培地を、フェノールレッドおよび１％ＳＰ、１％ＰＳおよび１％Ｌ−グルタミンを補充した１０％ＦＣＳを含まないＤＭＥＭ、未処理対照として０．１％ＤＭＳＯおよびそれぞれの試験化合物または０．１％ＤＭＳＯを単独でさらに含有するＤＭＥＭに変更した。各濃度を三連のウェルで試験し、各実験を少なくとも３回独立して繰り返した。試験化合物との一晩のインキュベーションの後、細胞を、Ｄｕａｌ−ＧｌｏＴＭルシフェラーゼアッセイシステム（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて、製造業者のプロトコールに従って、ルシフェラーゼ活性についてアッセイした。ルミネセンスは、Ｉｎｆｉｎｉｔｅ  ｍ２００ルミノメーター（Ｔｅｃａｎ  Ｄｅｕｔｓｃｈｌａｎｄ  ＧｍｂＨ）を用いて測定した。各濃度の化合物を三つ組のウェルで試験した。トランスフェクション効率および細胞増殖のための標準化は、ホタルルシフェラーゼデータをウミシイタケルシフェラーゼデータで除算することによって行われ、その結果相対光単位が得られた。ＤＭＳＯ対照で割ることにより活性化因子を得た。ＥＣ50および標準偏差値は、４パラメーターロジスティック回帰を用いて、ＳｉｇｍａＰｌｏｔ  ２００１（Ｓｙｓｔａｔ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  ＧｍｂＨ、Ｅｒｋｒａｔｈ、Ｇｅｒｍａｎｙ）による少なくとも３回の測定の平均値によって計算した。全ての化合物は、達成された最大効果を参照化合物（ＰＰＡＲγについてはピオグリタゾン、ＰＰＡＲαについてはＧＷ７６４７、ＰＰＡＲδについてはＬ１６５０４１それぞれ１μＭ）と比較して評価した。データは平均±ＳＥとして表される。ｎ≧３。
【０２３１】
ＷＳＴ−細胞毒性アッセイ
【０２３２】
化合物で処理した後の細胞生存率を決定するために、ＷＳＴ−１アッセイ（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  ＧｍｂＨ、マンハイム、ドイツ）を用いた。この目的のために、ＨｅｌａおよびＨｅｐＧ２細胞を、フェノールレッドを含むＤＭＥＭ中で１ウェルあたり１×１０4の密度で、１０％ＦＣＳの存在下で、９６ウェルプレートにそれぞれ播種した。２４時間後、培地を交換した。１０％ＦＣＳを含む新鮮なＤＭＥＭを添加し、細胞を化合物で４８時間処理した。マイクロプレートリーダー（ｉｎｆｉｎｉｔｙＭ２００、Ｔｅｃａｎ  Ｇｒｏｕｐ  Ｌｔｄ．、クライルスハイム、ドイツ）を使用して、製造業者のプロトコールに従って、細胞生存率を評価した。全ての実験は、少なくとも３回実施した。
【０２３３】
水溶性近似値
【０２３４】
０．０１％ポリソルベート２０（Ｔｗｅｅｎ）を含むｐＨ７．４のＰＢＳを、９６ウェルの透明な平底マイクロタイタープレート中で、調査化合物の１％ＤＭＳＯ溶液と合わせた。化合物の沈殿をＴｅｃａｎ  Ｉｎｆｉｎｉｔｅ２００（Ｔｅｃａｎ  Ｇｒｏｕｐ  Ｌｔｄ、メンネドルフ、スイス）を用いて６５０ｎｍで測定した。
【０２３５】
ラット肝ミクロソームにおけるインビトロ薬物代謝
【０２３６】
試験化合物の溶液（１ｍＭ）を１００％ＤＭＳＯ中で調製した。５０μｌのＮＡＤＰＨ再生系（３０ｍＭグルコース−６−リン酸，４Ｕ／ｍｌグルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ，１０ｍＭ  ＮＡＤＰ，３０ｍＭ  ＭｇＣｌ2）を加えた４３２μｌのリン酸緩衝液（０．１Ｍ，ｐＨ７．４）と５μｌの対応する試験化合物を３７℃でプレインキュベートした。調査した化合物の最終濃度は１０μＭである。５分後、Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（Ｇｉｂｃｏ（登録商標）、ダルムシュタット、ドイツ；０．１Ｍリン酸緩衝液中２０ｍｇタンパク質／ｍｌ）の肝臓からの１３μｌミクロソームミックスの添加により反応を開始させた。インキュベーションは３７℃の振盪水浴中で行った。５００μｌの氷冷メタノールを０，１５，３０および６０分で添加することによって反応を停止させた。サンプルを１００００ｇで５分間４℃で遠心分離した。上清を分析し、ＨＰＬＣにより定量した。対照試料は、反応混合物中の化合物の安定性をチェックするために常に行われた。第１の対照は、ミクロソームの酵素活性に必要なＮＡＤＰＨなしで行った。第２の制御は、不活性化ミクロソーム（９０℃で２０分間インキュベートしたミクロソーム）で行った。第３の対照は、試験化合物を含まない（ベースラインを決定する）。陽性対照として、７−エトキシクマリン（１ｍＭ）の溶液を用いた。アッセイ条件下での対照化合物の最終濃度は、再び１０μＭであった。試験化合物の量を外部検量線により定量した。
【０２３７】
マウス３Ｔ３−Ｌ１細胞の分化
【０２３８】
３Ｔ３−Ｌ１細胞を、１０％新生仔ウシ血清を含有するＤＭＥＭで、加湿雰囲気中、３７℃、５％ＣＯ2で継代培養した。Ｚｅｂｉｓｃｈらの方法に従って細胞を１４日間脂肪細胞に分化させた［１１４］。簡潔には、細胞を６ウェルプレート（２．５×１０6／ウェル）に播種した。分化は、１０％ウシ胎仔血清を補充したＤＭＥＭ中に１μｇ／ｍｌのインスリン、０．２５μＭのデキサメタゾンおよび０．５ｍＭのイソブチルメチルキサンチンを添加することによって３日目に開始した。５日目に培地をインスリンのみを含む培地で交換し、さらに２日間交換した。この後、１５日目まで細胞を添加せずに基礎培地に脂質液滴の蓄積を維持した。ロシグリタゾン（２μＭ）およびＮ−シクロヘキシル−Ｎ’−（ヨードフェニル）尿素（ＣＩＵ）（１０μＭ）をＰＰＡＲγおよびｓＥＨ陽性対照としてそれぞれ使用した。３Ｔ３−Ｌ１細胞の分化は、オイルレッドＯ染色によって確認した。細胞をＰＢＳで洗浄し、続いてホルムアルデヒド溶液（ＰＢＳ中４％）で６０分間固定した。その後、細胞を６０％イソプロパノールでリンスし、オイルレッドＯ溶液（０．３％）と共に１２０分間インキュベートした。
【０２３９】
定量的ポリメラーゼ連鎖反応（ｑＰＣＲ）
【０２４０】
ＴＲＩｚｏｌ（登録商標）試薬（Ａｍｂｉｏｎ、Ｌｉｆｅ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カールスバッド、米国）を用いて３Ｔ３−Ｌ１細胞またはホモジナイズしたマウス組織を溶解し、製造業者のプロトコールに従ってｍＲＮＡを単離した。ＤＮＡｓｅ（ＤＮａｓｅＩ、ＲＮａｓｅフリーキット；Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ウォルサム、米国）を用いてＤＮＡ混入物を消化し、ｍＲＮＡ濃度をＮＡＮＯＤＲＯＰ２０００分光光度計（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ウォルサム、米国）で測定した。続いて、Ｈｉｇｈ  Ｃａｐａｃｉｔｙ  ＲＮＡ−ｔｏ−ｃＤＮＡキット（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、フォスターシティ、米国）を用いて逆転写を行った。ＳｔｅｐＯｎｅＰｌｕｓ  Ｒｅａｌ−Ｔｉｍｅ  ＰＣＲ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、フォスターシティ、米国）を用いて、ＧＬＵＴ−４、ＦＡＢＰ−４、ＬＰＬ、アディポネクチンおよびＣＤ３６（支持情報の下に示される）の特異的プライマーを用いてＰＣＲを行った。基準遺伝子として、ＮｏＮｏ（３Ｔ３−Ｌ１）およびβ−Ａｃｔｉｎ（マウス組織）を用いた。すべての試料を３回測定し、ΔΔＣＴ法を用いて分析した。
【０２４１】
両方のマウスＰＫ研究は、営利研究組織であるＰｈａｒｍａｃｅｌｓｕｓ  ＧｍｂＨ（ザールブリュッケン、ドイツ）によって実施され、サポート情報の下に記載されている。ｓＥＨ  ＰＤデータは、ＬＣ／ＭＳ−ＭＳ１１５によるエポキシエイコサトリエン酸（ＥＥＴ）およびその代謝物ジヒドロキシエポキシエイコサトリエン酸（ＤＨＥＴ）の測定によって生成された［１１５］。使用された方法および機器の詳細は、サポート情報で説明されている。
【０２４２】
略語
【０２４３】
ＡＢＣＡ１、ＡＴＰ結合カセットトランスポーター１；ＡＤＭＥ、吸収、分布、代謝、および排泄；ＡＭＩ、急性心筋梗塞；ａＰ２、ヒト脂肪細胞脂肪酸結合タンパク質；ＡＳＣＶＤ、動脈硬化性心血管疾患；ＡＴＰ、アデノシンホスファート；ＡＵＣ0→∞、血中濃度-時間曲線下面積；ビス−トリス、２−［ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノ］−２−（ヒドロキシメチル）−１，３−プロパンジオール；−Ｂｒ、臭素置換基；ＢＳＡ、ビス（トリメチルシリル）アセトアミド；Ｂｗ、体重；ＣＤ３６、脂肪酸トランスロカーゼ；−ＣＨ3、メチル置換基；ＣＩＵ、Ｎ−シクロヘキシル−Ｎ’−ヨードフェニル尿素；−Ｃｌ、塩素置換基；Ｃｌ／ｆ、全身クリアランス（バイオアベイラビリティーに対して正規化）；Ｃmax、最大濃度；ＣＮＳ、中枢神経系；ｃｏｍｐｄ、化合物；ＣＯＳ７、起源のＣＶ−１（サル）、ＳＶ４０遺伝物質を保有する；ＣＶＤ、心臓血管疾患；ＤＣＭ、ジクロロメタン；ＤＥＥ、ジエチルエーテル；ＤＨＥＴ、ジヒドロキシエポキシエイコサトリエン酸；ＤＩＰＥＡ、ジイソプロピルエチルアミン；ＤＭＡＰ、４−ジメチルアミノピリジン；ＤＭＥＭ、ダルベッコ改変培地；ＤＭＦ、ジメチルホルムアミド；ＤＭＳＯ−ｄ６、重水素化ジメチルスルホキシド；ＤＮＡ、デオキシリボ核酸；ＥＣ50、５０％効果濃度；ＥＤＣ、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド；ＥＥ、エチルアセテート；ＥＥＴ、エポキシエイコサトリエン酸；Ｅmax−％、％での最大有効化；ＥＰＣ、内皮前駆細胞；ＥＳＩ、エレクトロスプレーイオン化；ＥｔＯＨ、エタノール；−Ｆ、フッ素置換基；ＦＡＢＰ４、脂肪酸結合タンパク質４；ＦＡＴＰ、脂肪酸トランスポータータンパク質；ＦＣＳ、ウシ胎仔血清；ＦＦＡ、遊離脂肪酸；ＦＦＡ１／ＧＰＲ４０、遊離脂肪酸受容体１；ＧＬＵＴ−４、グルコーストランスポータータイプ４；ＧＳＩＳ、グルコース刺激インスリン分泌；ＧＳＫ１９９７１３２Ｂ、（Ｒ）−１−（（３，５−ジフルオロピリジン−２−イル）メチル）−２−メチル−Ｎ−（１−フェニルプロピル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−５−カルボキサミド；ＧＳＫ２１８８９３１Ｂ、（Ｎ−（｛４−ブロモ−２−［（トリフルオロメチル）オキシ］フェニル｝メチル）−１−［４−メチル−６−（メチルアミノ）−１，３，５−トリアジン−２−イル］−４−ピペリジンカルボキサミド）；ＧＷ７６４７，２−（４−（２−（１−シクロヘキサンブチル）−３−シクロヘキシルウレイド）エチル）フェニルチオ）−２−メチルプロピオン酸；−Ｈ、水素置換基；Ｈ2Ｏ、水；ＨＣｌ、塩酸；ＨＤＬ、高密度リポタンパク質；ＨＤＬ−Ｃ、高密度リポタンパク質コレステロール；ＨｅｐＧ２、肝細胞癌；Ｈｅｘ、ヘキサン；ＨＭＧ  ＣｏＡ、３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリル補酵素Ａ；ＨＰＬＣ、高速液体クロマトグラフィー；ＨＲＭＳ、高分解能質量分析；ｉ．ａ．、活性なし；ＩＢＣＦ、イソブチルクロロホルメート；ＩＣ50、５０％阻害濃度；Ｋ2ＣＯ3、炭酸カリウム；ＫＣＬ、（Ｓ）−２−（４−メトキシ−３−（（４−（トリフルオロメチル）ベンジル）カルバモイル）ベンジル）ブタン酸；ＫＯＨ、水酸化カリウム；Ｌ１６５０４１、［４−［３−（４−アセチル−３−ヒドロキシ−２−プロピルフェノキシ）プロポキシ］フェノキシ］酢酸；ＬＢＤ、リガンド結合ドメイン；ＬＣ−ＭＳ、液体クロマトグラフィー−マススペクトロメトリー；ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ、液体クロマトグラフィー−質量分析／質量分析；ＬＤＬ−Ｃ、低密度リポタンパク質コレステロール；ＬＰＬ、リポタンパク質リパーゼ；Ｍ、モル；ｍ／ｚ、質量対電荷比；ＭＡＬＤＩ、マトリックス支援レーザー脱離／イオン化；Ｍｅ3ＳＯ+Ｉ-、トリメチルスルホキソニウムヨージド；ＭｅＯＨ、メタノール；ＭｅＯＨ−ｄ３、重水素化メタノール；ＭｅｔＳ、メタボリックシンドローム；ＭｇＣｌ2、塩化マグネシウム；ＭｇＳＯ4、硫酸マグネシウム；ｍＲＮＡ、メッセンジャーリボ核酸；ＭＷ、マイクロ波；ｎ．ｔ．、試験されていない；ＮＡＤＰＨ、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドホスフェート；ＮａＨ、水素化ナトリウム；ＮａＮ3、アジ化ナトリウム；ＮａＯＨ、水酸化ナトリウム；ＮＨ4Ｃｌ、塩化アンモニウム；ＮＭＲ、核磁気共鳴分光法；−ＯＣＦ3、トリフルオロメトキシ置換基；−Ｏ−ＣＨ3、メトキシ置換基；−Ｏ−フェニル、オキソフェニル置換基；ｐ．ｏ．、経口投与；Ｐ／Ｓ、ペニシリン／ストレプトマイシン；ＰＢＳ、リン酸緩衝系；Ｐｄ（ＡｃＯ）2、酢酸パラジウム（ＩＩ）；ＰＥＰＣＫ、ホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼ；ＰＨＯＭＥ、（３−フェニル−シアノ−（６−メトキシ−２−ナフタレニル）メチルエステル−２−オキシラン−酢酸；ＰＫ／ＰＤ、薬物動態／薬力学；ＰＰＡＲ、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体；ＰＰＡＲα、ペルオキシソーム増殖因子活性化（ＰＰＡＲα、ＰＰＡＲα）；ＰＰＡＲγ、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマ；ｑＰＣＲ、リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応；ＲＣＴ、逆コレステロール輸送；ＲＰ、逆相；ＲＸＲ、レチノイドＸ受容体；ＳＡＲ、構造活性関係；ｓＥＨ、可溶性エポキシド加水分解酵素；ｓＥＨ−ＫＯ、ｓＥＨノックアウト；ＳＨＲＯＢ、高血圧肥満自然発症；ＳＰ、ピルビン酸ナトリウム；ＳＴＺ、ストレプトゾシン；Ｔ２Ｄ、２型糖尿病；ｔ−ＡＵＣＢ、トランス−４−［４−（３−アダマンタン−１−イル）−ウレイド）；ＴＮＦα、腫瘍壊死因子α；ＴＺＤ、チアゾリジンジオン；ＵＶ、紫外線；Ｖz／ｆ、分布容積（バイオアベイラビリティーに対して正規化）；ｗｓ、水溶性；ＷＡＴ、白色脂肪組織；ＷＳＴ−１、水溶性テトラゾリウム／（４−［３−（４−ヨードフェニル）−２−（４−ニトロフェニル）−２Ｈ−５−テトラゾリオ］−１，３−ベンゾイル−ジスルホナート）。
【０２４４】
追加の材料および方法
【０２４５】
ａ．ＰＰＡＲトランス活性化アッセイに使用されるプラスミド
【０２４６】
ＰＰＡＲサブタイプのそれぞれのヒンジ領域およびリガンド結合ドメイン（ＬＢＤ）を含むＧａｌ４融合受容体プラスミドｐＦＡ−ＣＭＶ−ＰＰＡＲα−ＬＢＤ、ｐＦＡ−ＣＭＶ−ＰＰＡＲδ−ＬＢＤおよびｐＦＡ−ＣＭＶ−ＰＰＡＲγ−ＬＢＤは、ヒト単球のＰＣＲ増幅から得られたｃＤＮＡ断片を、ｐＦＡ−ＣＭＶベクター（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ、ラホヤ、カリフォルニア州、米国）のＳｍａＩ／ＸｂａＩ切断部位に組み込み構築し、既に公開した。ｃＤＮＡフラグメントは、それぞれＰＰＡＲα、ＰＰＡＲδおよびＰＰＡＲγについて、ｂｐｓ  ４９９〜１４０７（ＮＭ＿００５  ０３６）、ｂｐｓ  ４１２〜１３２３（ＮＭ＿００６  ２３８）およびｂｐｓ  ６１０〜１５１８（ＮＭ＿０１５  ８６９）からなる。融合レセプターのフレームおよび配列は、配列決定によって確認した。トランスフェクション効率および細胞増殖の標準化のために、ｐＦＲ−Ｌｕｃ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）をレポータープラスミドおよびｐＲＬ−ＳＶ４０（Ｐｒｏｍｅｇａ）として使用した。
【０２４７】
ｂ．ヒト前脂肪細胞の分化、ＲＮＡ単離および分析
【０２４８】
初代ヒト前脂肪細胞の調製および分化
【０２４９】
ヒト初代前脂肪細胞は、選択的美容手術を受けている匿名のドナーからの皮下脂肪の間質血管画分から得られた。脂肪組織を、コラゲナーゼ溶液（１％ＢＳＡ／ＰＢＳ中０．３Ｕ／ｍｌ）で３７℃、４５分間、絶えず振盪しながら消化した。浮遊成熟脂肪細胞を除去し、間質血管画分を含むペレットを赤血球溶解緩衝液中に再懸濁させた。１００μｍ、７０μｍおよび４０μｍ細胞ストリンガーによる連続濾過後、前脂肪細胞を、１０％ＦＣＳ、３３μＭビオチンおよび１７μＭパントテン酸を補充したＤＭＥＭ／Ｈａｍ’ｓ  Ｆ１２（１：１）栄養混合物に播種した。翌日、培養培地をＱｕｉｃｋＤｉｆｆ培地（３３μＭのビオチン、１７μＭのパントテン酸、０．０１ｍｇ／ｍｌのトランスフェリン、２０ｎＭのインスリン、１００ｎＭのコルチゾール、２００ｐＭのＴ３、２５ｎＭのデキサメタゾン、２５０μＭのＩＢＭＸおよび２μＭのロシグリタゾンを補充したＤＭＥＭ／Ｈａｍ’ｓ  Ｆ１２）に変更した。４日後、培地を３ＦＣ培地（デキサメタゾン、ＩＢＭＸおよびロシグリタゾンを含まないＱｕｉｃｋＤｉｆｆ培地）に変更した。脂肪細胞をさらに１４日間培養した後、培地をビオチンおよびパンテトネートを含むＤＭＥＭ／Ｈａｍ’ｓ  Ｆ１２からなる基礎培地に交換した。この調査は、ヘルシンキ宣言で概説された倫理原則に準拠し、大学倫理委員会（ゲーテ大学フランクフルト・アム・マインの医学部倫理委員会）の承認を受けた。ＰｅｑＧｏｌｄ  ＲＮＡＰｕｒｅ（Ｐｅｑｌａｂ）を製造者の指示に従って用いて全ＲＮＡを単離し、Ｍａｘｉｍａ  Ｆｉｒｓｔ  Ｓｔｒａｎｄ  ｃＤＮＡ合成キット（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて製造者の指示に従ってｃＤＮＡに転写した。定量ＰＣＲは、ＣＦＸ９６（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）システムを使用してｉＱ  ＳＹＢＲ  ｇｒｅｅｎ  Ｓｕｐｅｒｍｉｘ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）で行った。発現をアクチンＲＮＡに対して標準化した。
【０２５０】
ｃ．インビボＰＫの研究
【０２５１】
ｐｏ  ＰＫマウスの研究
【０２５２】
９匹のオスＲｊＯｒ１：スイス（ＣＤ−１）マウス（２８−４２ｇ体重、Ｊａｎｖｉｅｒ  Ｌａｂｓ、フランスから購入）を本研究で使用した。動物を温度制御室（２０〜２４℃）に収容し、１２時間明／１２時間暗のサイクルで維持した。食べ物と水は自由に摂取できた。３０ｍｇ／ｋｇｂｗの化合物１ｂおよび１ｃを、２つの異なる研究において、１０ｍｌ／ｋｇの注射容量、０．５％メチルセルロースで胃管栄養法によってリンケージした。試験項目を適用してから１５分後、３０分後、１時間後、２時間後、４時間後および８時間後に血液を採取し、ビヒクル適用は８時間後だけに採取した。レトロ眼窩穿刺を介して各薬剤処理マウスを２回（０．２５および０．５時間、１時間および２時間、４時間および８時間）サンプリングした。血液をリチウムヘパリンを含むチューブに集め、氷上で保存し、続いて４℃で６０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した（Ｈｅｒａｅｕｓ  ｂｉｏｆｕｇｅ  ｆｒｅｓｃｏ）。サンプリング後４５分以内に血漿を調製し、アッセイするまで−２０℃に保った。さらなる動態および動的分析のために、各薬物処理マウスの第２の血漿サンプリングの後、組織（脳、肝臓、腹部脂肪）を投与の３０分後、２時間後および８時間後に収集した。ビヒクル群の組織は、投与の８時間後に１回のみ採取した。２０μｌのマウス血漿試料、血漿較正標準液および血漿ＱＣ試料に、内部標準（３００ｎｇ／ｍｌのジアゼパム）を含有する４０μｌのアセトニトリルの容量を加えた。サンプルを激しく振とうし、６０００ｇおよび２０℃で１０分間遠心分離した。粒子を含まない上清を水で１：１に希釈した。アリコートを２００μｌのサンプラーバイアルに移し、続いて２０μｌの注入容量でＬＣ  ＭＳに供した。脳試料を、Ｐｒｅｃｅｌｌｙ２４／Ｄｕａｌホモジナイザーを用いてＰＢＳ（１＋１、ｗ／ｖ）中でホモジナイズした。２０μｌの量の脳ホモジネートを２０μｌのマウスブランク血漿と混合した（１＋１ｖ／ｖ／）。次いで、内部標準（３００ｎｇ／ｍｌのジアゼパム）を含む８０μｌのアセトニトリルを添加した。サンプルを激しく振とうし、６０００ｇおよび２０℃で１０分間遠心分離した。粒子を含まない上清を水で１：１に希釈した。アリコートを２００μｌのサンプラーバイアルに移し、続いて２０μｌの注入容量でＬＣＭＳに供した。質量分析は、標準ソフトウェアＸｃａｌｉｂｕｒ２．０．７を実行するＰＣに接続されたエレクトロスプレー（ＥＳＩ）インターフェース（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、米国）を備えたＴＳＱ  Ｑｕａｎｔｕｍ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｍａｘトリプル四重極質量分析計で行った。ＨＰＬＣポンプ流速を６００μｌ／分に設定し、試験項目をプレカラムが付いたＫｉｎｅｔｅｘ  Ｐｈｅｎｙｌ−Ｈｅｘｙｌ、２．６μｍ、５０×２．１ｍｍ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ、ドイツ）分析カラムで分離した。水性相（Ａ）として水／０．１％ギ酸および有機相（Ｂ）としてアセトニトリル／０．１％ギ酸を用いて勾配溶出を使用した：％Ｂ（ｔ（ｍｉｎ））、５（０−０．１）−９７（０．８−１．７）−５（１．８−２．５）。
【０２５３】
２週間の飲水ＰＫマウスの研究
【０２５４】
本研究では、９匹の雄Ｃ５７ＢＬ／６ＪＲｊマウス（２３−２７ｇ体重、Ｊａｎｖｉｅｒ  Ｌａｂｓ、フランスから購入）を使用した。動物を温度制御室（２０〜２４℃）に収容し、１２時間明／１２時間暗のサイクルで維持した。食べ物と水は自由に摂取できた。１４ｃは普通の飲料水には溶解しなかった。そのため、研究の異なる期間に異なる共溶媒を使用した。エタノール９４．４６ｍｌに１４ｃ  ２８３．４ｍｇを溶解して、１４ｃの３ｍｇ／ｍｌ原液を調製した。飲料瓶中の１９０ｍｌの水道水にこのストック溶液１０ｍｌを加えて最終濃度０．１５ｍｇ／ｍｌ（推定標的用量３０ｍｇ／ｋｇ）を得た。これは１日目の午後から５日目の午後までマウスに与えられた。この混合物を５日目にケージから取り出した場合、沈殿は観察されなかった。６６．７ｍｌの１％Ｔｗｅｅｎ８０中１００ｍｇの１４ｃを混合して、１４ｃの１．５ｍｇ／ｍｌ原液を調製した。試験項目が完全に溶解していないので、混合物を３７℃で超音波処理した。誤って、得られたわずかに不透明な懸濁液１０ｍｌを、飲料用ボトル中の水道水９０ｍｌの代わりに１９０ｍｌに加え、５日目の午後から７日目の午後にマウスに提供した。これは０．０７５ｍｇ／ｍｌの最終濃度（０．０５％Ｔｗｅｅｎ８０中１５ｍｇ／ｋｇの１４ｃの推定用量）に相当する。この混合物を７日目にケージから取り出したときにわずかな沈殿物が観察された。２０．９．２０１４の１４ｃの１．５ｍｇ／ｍｌ原液を再び３７℃で超音波処理し、得られたわずかに不透明な懸濁液の１０ｍｌを飲料瓶中の水道水９０ｍｌに添加し、７日目の午後から１０日目の午後までマウスに提供した。これは、０．１５ｍｇ／ｍｌの最終濃度（０．１％Ｔｗｅｅｎ８０中の３０ｍｇ／ｋｇ  １４ｃの推定用量）に相当する。この混合物を１０日目にケージから取り出した際に、少量の沈殿物が観察された。新たな１．５ｍｇ／ｍｌの１４ｃの原液を、１９．８５ｍｌの１％Ｔｗｅｅｎ８０中に２９．７７ｍｇの１４ｃを混合して調製した。この混合物を３７℃で超音波処理した。得られたわずかに不透明な懸濁液１０ｍｌを飲料瓶中の水道水９０ｍｌに加え、１０日目の午後から１４日目の午後までマウスに提供した。これは、０．１５ｍｇ／ｍｌの最終濃度（０．１％Ｔｗｅｅｎ８０中の３０ｍｇ／ｋｇ  １４ｃの推定用量）に相当する。この混合物を１４日目にケージから取り出したところ、少量の沈殿物が観察された。試験項目は、２−４日ごとに新鮮な飲料水に溶解され、動物に合計１４日間与えられた。新鮮な溶液を提供する前に毎回ケージごとに水摂取量を記録した。新鮮な溶液を提供する前に毎回ケージごとに水摂取量を記録した。対応する最終濃度は０．１５ｍｇ／ｍｌ（０．１％Ｔｗｅｅｎ８０中の推定用量３０ｍｇ／ｋｇ  １４ｃ）であった。血液は、７日目および１０日目に採取し、短いイソフルラン麻酔下、各マウスの眼球後静脈叢から、リチウムヘパリンを含む試験管中に採取した。血液を氷上に保存し、続いて４℃、６０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した（Ｈｅｒａｅｕｓ  ｂｉｏｆｕｇｅ  ｆｒｅｓｃｏ）。サンプリング後４５分以内に血漿を調製し、アッセイするまで−２０℃に保った。１４日後、血漿および組織（完全肝、腎臓、膵臓、腹部脂肪）���さらに動的試験のために採取した。全体の血漿を上記のように採取した。組織収集のために、マウスを頸椎脱臼により犠牲にした。組織を液体窒素中で直ちに凍結し、分析するまで−８０℃で保存した。試験項目の濃度は、ＰＯ  ＰＫマウスの研究の項で説明したのと同じ方法により、血漿中でのみ決定した。
【０２５５】
ｄ．ＥＥＴ／ＤＨＥＴ比分析：ＬＣ／ＭＳ−ＭＳによるエポキシエイコサトリエン酸（ＥＥＴ）およびその代謝物ジヒドロキシエポキシエイコサトリエン酸（ＤＨＥＴ）の測定
【０２５６】
抽出された試料の５．６ＥＥＴ、８．９ＥＥＴ、１１．１２ＥＥＴ、１４．１５ＥＥＴおよびそれらのさらなるデヒドロ代謝産物含量を、液体クロマトグラフィータンデム質量分析（ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）を用いて分析した。ＬＣ／ＭＳ−ＭＳシステムは、負のＥＳＩモードで動作するＴｕｒｂｏ−Ｖソース、Ａｇｉｌｅｎｔ  １２００バイナリＨＰＬＣポンプおよび脱ガス装置（Ａｇｉｌｅｎｔ、ヴァルトブロン、ドイツ）を備えたＡＰＩ  ５５００  ＱＴｒａｐ（ＡＢ  Ｓｃｉｅｘ、ダルムシュタット、ドイツ）２５μＬのＬＥＡＰシリンジ（Ａｘｅｌ  Ｓｅｍｒａｕ  ＧｍｂＨ、シュプロックヘーフェル、ドイツ）を装着したＨＴＣ  Ｐａｌオートサンプラー（Ｃｈｒｏｍｔｅｃｈ、イトシュタイン、ドイツ）を用いて行った。質量分析計のための高純度窒素は、ＮＧＭ  ２２−ＬＣ／ＭＳ窒素発生器（ｃｍｃ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、エシュボルン、ドイツ）によって生成された。全ての物質は、Ｃａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ（アナーバー、ミシガン州、米国）から得た。２５００ｎｇ／ｍｌの全分析物を含むストック溶液をメタノール中で調製した。エポキシエイコサトリエン酸およびそれらの脱水代謝産物についてそれぞれ０．１〜２５０ｎｇ／ｍｌの濃度範囲でさらに希釈することによって作業標準を得た。試料抽出は液体−液体抽出で行った。従って、１５０μｌのマトリックスホモジネートを２０μｌの内部標準（５．６ＥＥＴ−ｄ１１，８．９ＥＥＴ−ｄ８，１１．１２ＥＥＴ−ｄ８および１４．１５ＥＥＴ−ｄ８、全てメタノール中２００ｎｇ／ｍｌの濃度）と穏やかに混合し、抽出した酢酸エチル６００μＬで２回洗浄した。標準曲線および品質管理のための試料を同様に調製し、１５０μＬのマトリックスホモジネートの代わりに１５０μＬのＰＢＳにさらにメタノール２０μＬを加え、２０μＬの作業標準および２０μＬの内部標準を加えた。穏やかな窒素気流下、４５℃の温度で有機相を除去した。残渣を５０μＬのメタノール／水／（５０：５０、ｖ／ｖ）で再構成し、１０，０００ｇで２分間遠心分離し、次いでＬＣ−ＭＳ／ＭＳシステムに注入する前にガラスバイアル（Ｍａｃｈｅｒｅｙ−Ｎａｇｅｌ、デューレン、ドイツ）に移した。クロマトグラフィー分離のために、ＧｅｍｉｎｉＮＸ  Ｃ１８カラムおよびプレカラムを使用した（１５０ｍｍ×２ｍｍ、すなわち５μｍ粒径および１１０Åポアサイズ、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ、アシャッフェンブルク、ドイツ）。線形濃度勾配を、０．５ｍｌ／分の移動相の流速で、１７．５分の全実行時間で使用した。移動相は、水／アンモニア（１００：０．０５、ｖ／ｖ）およびＢアセトニトリル／アンモニア（１００：０．０５、ｖ／ｖ）であった。濃度勾配は１２分以内に８５％Ａから１０％Ａで開始し、これを１０％Ａで１分間保持した。０．５分以内に、移動相は８５％Ａに戻ってシフトし、３．５分間保持して次のサンプルのカラムを平衡化させた。試料の注入量は２０μＬであった。内部標準法（同位体希釈質量分析法）を用いたＡｎａｌｙｓｔ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｖ１．５．１（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、ダルムシュタット、ドイツ）を用いて定量を行った。検体のピーク面積と内部標準領域の比（ｙ軸）を濃度（ｘ軸）に対してプロットし、検量線を１／濃度２の重み付き最小二乗回帰によって計算した。
【０２５７】
ｅ．ＩＰ１（イノシトールリン酸）測定法
細胞培養
【０２５８】
１０％（ｖ／ｖ）ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）、ペニシリン（１００Ｕ／ｍＬ）、ストレプトマイシン（１００Ｕ／ｍＬ）、およびストレプトマイシンを含有するダルベッコ改変イーグル培地中で、トランスフェクションしたＦｌｐ−ＩｎＴＭ  Ｔ−ＲＥｘ（１００μｇ／ｍＬ）、ハイグロマイシンＢ（１００μｇ／ｍＬ）およびブラストサイジン（１５μｇ／ｍＬ）で３７℃および５％ＣＯ2でインキュベートした。すべての実験は、製造者（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）の指示に従って、約１８時間、１μｇ／ｍＬのドキシサイクリンで受容体発現を誘導した後に行った。
【０２５９】
ＩＰ１測定
【０２６０】
Ｇｑ結合ＦＦＡ１受容体構築物に対する化合物の活性は、ＨＴＲＦ（登録商標）−ＩＰ−Ｏｎｅキット（Ｃｉｓｂｉｏ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）を用いて、製造者の指示に従ってイノシトールモノホスフェート（ＩＰ１）の細胞内レベルを測定することによって評価した。手短に述べると、１０，０００レセプター発現細胞を３８４ウェルマイクロプレートに播種し、３７℃で２０分間インキュベートした。次いで、細胞をアゴニストで３０分間刺激し、６６５ｎｍ／６２０ｎｍの発光／励起フィルターを用いて、ＨＴＲＦ−ＩＰ−ＯｎｅキットおよびＭｉｔｈｒａｓ  ＬＢ９４０マルチモードリーダー（Ｂｅｒｔｈｏｌｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いてＩＰレベルを定量した。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（登録商標）ソフトウェアｖ５．０４（Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を用いてデータ解析および非線形回帰曲線適合を実施した。
【０２６１】
参考文献：
(1)
Christiansen,E.;Due-Hansen,M.;E.Urban,C.;Grundmann,M.;Schmidt,J.Hansen,S.V.F.Hudson,B.;D.Zaibi,M.;Markussen,S.B.Hagesaether,E.Milligan,G.;Cawthorne,M.;A.Kostenis,E.;Kassack,M.;U. Ulven,T.;Discovery of a Potent and Selective Free Fatty Acid Receptor 1 Agonist with Low Lipophilicity and High Oral Bioavailability.Journal of Medicinal Chemistry 2013,56,982-992.
［実施例２］高血圧肥満自然発症ラット（ＳＨＲＯＢ）モデルにおけるインビボ研究
【０２６２】
本発明者らは、二重可溶性エポキシドインヒビターおよびＰＰＡＲｇアゴニストＲＢ３９４（他の化合物１４ｃと同定された）が、高血圧肥満自然発症ラット（ＳＨＲＯＢ）における血圧の低下、インスリン抵抗性の低下および末期器官損傷の予防のための相乗作用を提供すると仮定した。ＳＨＲＯＢをＲＢ３９４（１０ｍｇ／ｋｇ／ｄ、ｐ＝０、ｎ＝６）で８週間処理した。ＳＨＲＯＢでは血圧が上昇し、ＲＢ３９４で処理したＳＨＲＯＢでは血圧が上昇しなかった。インスリン耐糖能試験により、ＲＢ３９４処理ＳＨＲＯＢ群における改善されたインスリン感受性が明らかになった。アルブミン尿はＳＨＲＯＢにおいて増加し、ＲＢ３９４によって有意に減少した。ＲＢ３９４で処理したＳＨＲＯＢでは、心エコー検査によって評価した心機能が改善した（それぞれ図１６，１７，１８，１９および２０参照）。これらの結果は、ＲＢ３９４が心筋症候群ＳＨＲＯＢラットにおいて有益な効果を有することを示している。
【０２６３】
糖尿病、肥満、高血圧、および慢性腎疾患および心不全などの末期臓器損傷の治療のための市場には、多数の薬物が存在する。糖尿病を治療する薬物には、インスリン、メトホルミン、チアゾリジンジオン、ジペプチジル阻害剤、メガチニド、およびアルファグルコシダーゼ阻害剤が含まれる。ノルアドレナリン作動薬、フェンテルミン／トピラメートおよび選択的セロトニン受容体アゴニストであるロラセセリンは、２０１２年にＦＤＡ承認された肥満治療薬である。しかし、先天性欠損および頻脈は、フェンテルミン／トピラメートの副作用である。ロラカセリンに関連する肥満２型糖尿病患者では、弁力障害のリスクがある。高血圧薬には、レニン−アンジオテンシン系遮断薬、利尿薬、ベータ遮断薬が含まれる。慢性腎疾患の分析では、市販されている製品間の競争が弱いことが明らかにされている。中等度に有効であり、ヒトの間で治療の中断をもたらした重篤な有害副作用を伴う慢性腎疾患のための１２以上の市販製品がある。糖尿病、肥満、高血圧および慢性腎臓病の患者はまた、末梢器官の損傷および死亡を防ぐために、脂質低下薬および抗血小板薬を処方される。これらの患者集団における多剤耐性レジメンの使用にもかかわらず、最終臓器損傷の有病率は増加しており、これらの患者集団における死亡率は依然として重大な健康上の問題である。ＲＢ３９４に基づく可溶性エポキシド加水分解酵素阻害剤／ＰＰＡＲｇアゴニストは、ＲＢ３９４が、高血圧肥満自然発症ラットにおいて抗高血圧、インスリン抵抗性の低下、および末期臓器損傷の減少を示すことから、ユニークな治療アプローチである。
【０２６４】
ＲＢ３９４は、本明細書の他の箇所で化合物１４ｃとして同定されている。
【０２６５】
［実施例３］ＲＢ３９４は、インスリン抵抗性および糖尿病を改善し、血圧を低下させ、高血圧肥満自然発症（ＳＨＲＯＢ）ラットおよびＺＳＦ１（ｆａ−ｆａcp）ラットにおける腎障害を減少させる
【０２６６】
代謝症候群（ＭｅｔＳ）は、高血圧症、高血糖症、高トリグリセリド血症および肥満を含む症状のクラスターである。この症候群の複雑さに起因して、患者はしばしば多数の投薬を処方され、負の薬物相互作用のリスクが高まり、薬物費が高くなる。発明者らは、２つの調節因子（２つのファーマコフォアを組み合わせた薬物）の開発が、ＭｅｔＳの１つより多くの症状を治療し、腎障害を予防できると仮定した。可溶性エポキシドヒドロラーゼ（ｓＥＨ）阻害剤およびＰＰＡＲ−γアゴニストは、ＭｅｔＳにおいて治療可能性を有する。本発明者らは、新規二重ｓＥＨ阻害剤−ＰＰＡＲ−γアゴニスト（ｓＥＨｉ／ＰＰＡＲ−γ）、ＲＢ３９４を合成し、ＭｅｔＳのラットモデルにおいてその有効性を調べた（図２１参照）。３つの群のラット、グループ１：ウィスター京都（ＷＫＹ）＋ビヒクル（ｎ＝６）；グループ２：高血圧肥満自然発症（ＳＨＲＯＢ）＋ビヒクル（ｎ＝５）；グループ３：ＳＨＲＯＢ＋ＲＢ３９４（１０ｍｇ／ｋｇ／ｄ  ｐ．ｏ．；ｎ＝５）を使用した。ＲＢ３９４またはビヒクル処理を５６日間投与し、血圧を測定し、処理期間の終わりに尿および腎臓組織を採取した。ＳＨＲＯＢラット（１４４±４ｍｍＨｇ、Ｐ＜０．０５）では、ＳＨＲＯＢラットはＷＫＹラット（１３７±５ｍｍＨｇ、Ｐ＜０．０５）と比較して高血圧（１８７±７ｍｍＨｇ）であり、ＲＢ３９４は著しく高血圧を減少させた。アルブミン尿から腎障害を評価し、またＰｅｒｉｏｄｉｃ  Ａｃｉｄ  ＳｃｈｉｆｆおよびＰｉｃｒｏ  Ｓｉｒｉｕｓ  Ｒｅｄ染色を用いた腎管状キャスト形成、コラーゲン形成および糸球体傷害の組織病理学的分析から評価した。ＳＨＲＯＢラットは、ＷＫＹ（１．０±０．１ｍｇ／ｄ，Ｐ＜０．０５）と比較して顕著なアルブミン尿（２４３±１８ｍｇ／ｄ）を伴う腎障害を発症し、ＲＢ３９４はアルブミン尿を減少させることによって減少させた（５９±１１ｍｇ／ｄ，Ｐ＜０．０５）。ＳＨＲＯＢラットの腎臓は、タンパク質のキャストおよびコラーゲンを顕著に上昇させ、ＲＢ３９４は、キャストおよびコラーゲンの形成を４０〜５０％減少させた。糸球体傷害はＳＨＲＯＢラットにおいても顕著であり、ＲＢ３９４はそれを４５％減少させた。ＳＨＲＯＢラットはまた、腎臓に浸潤する免疫細胞による顕著な腎炎症を有し、ＲＢ３９４はそれを２０％減少させた。全体的に、本発明者らの結果は、ＳＨＲＯＢ  ＭｅｔＳラットにおける二重ｓＥＨｉ／ＰＰＡＲ−γ、ＲＢ３９４が腎障害を予防することを実証している。これらの結果は、ＭｅｔＳを有する患者をより効果的に治療する新しい方法の可能性を示唆している。
【０２６７】
材料および方法
【０２６８】
動物群
【０２６９】
研究所動物のケアと使用のための国立衛生研究所のガイドラインによるウィスコンシン医科大学動物飼育委員会はすべての動物研究を承認した。８〜９週齢のオス、ウイスター京都（ＷＫＹ）およびＳＨＲＯＢはＣｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（ウィルミントン、マサチューセッツ州、米国）から購入した。動物はウィスコンシン州立医科大学のＢｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅ  Ｃｅｎｔｅｒに１２時間の明暗周期で入れられ、ラットの飼料とともに水道水に自由にアクセスできた。ＷＫＹラット（ｎ＝６）を対照群として疾患進行の比較として使用した。ＳＨＲＯＢラットを２群に分けた。グループ１はビヒクル（ｎ＝５）を受け、グループ２はＲＢ３９４（１０ｍｇ／ｋｇ／ｄ  ｐ．ｏ．；ｎ＝５）を８週間投与した。ラットの体重を測定し、収縮期血圧をテールカフプレチスモグラフで測定した。
【０２７０】
グルコース耐性試験
【０２７１】
一晩絶食させ、グルコース（２ｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）を注射したラットにおいて、８週間の治療プロトコールの間、腹腔内グルコース耐性試験を行った。グルコース注入の前後の異なる時点で、尾静脈から血液サンプルを採取した。尾静脈血糖値は、グルココーターＬｉｆｅＳｃａｎ（ミルピタス、カリフォルニア州、米国）を用いて測定した。
【０２７２】
尿および血漿生化学分析
【０２７３】
実験期間中、ラットの尿を代謝ケージに入れたラットから２４時間収集した。尿生化学分析は、市販のＥＬＩＳＡキットを用いて行った。アルブミンおよびＥｘｏｃｅｌｌ（フィラデルフィア、ＰＡ）から入手した。ラットをイソフルランにより麻酔し、動脈から血漿を採取した。トリグリセリド、コレステロール、タンパク質およびクレアチニンアッセイキットは、Ｃａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ（アナーバー、ミシガン州、米国）から、およびＺｅｎ−Ｂｉｏ  Ｉｎｃ．（Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｔｒｉａｎｇｌｅ  Ｐａｒｋ、ノースカロライナ州）からの遊離脂肪酸から得た。グルコメーターを用いて尾静脈からの血糖値を測定した。
【０２７４】
組織病理学的分析
【０２７５】
腎臓を摘出し、１０％中性緩衝ホルマリンおよびパラフィン包埋に浸漬固定した。埋め込まれた腎臓および膵臓の切片を、組織学に使用するために４μｍの切片に切断した。ホルマリン固定パラフィン包埋組織切片を脱パラフィンし、再水和し、腎臓組織切片を、過ヨウ素酸シッフ（ＰＡＳ）およびマッソントリクロームで染色した。糸球体硬化症およびメサンギウムマトリックスの拡張は、以下の数値スケールを用いてＰＡＳ染色で染色された腎臓切片から盲検的に採点された。０＝損傷なし；＋１＝非常に軽い；＋２＝軽度；＋３＝中程度および＋４＝重度。２人の観察者がニコンＮＩＳ  Ｅｌｅｍｅｎｔｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ｎｉｋｏｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｉｎｃ．、メルビル、ニューヨーク州、米国）を用いてＸ２００の倍率で組織学的分析を行った。ニコンＮＩＳ  Ｅｌｅｍｅｎｔｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅを用いて、Ｘ２００の倍率でＰＡＳ染色した腎臓切片においても、腎臓におけるタンパク質性のキャストを測定した。蛋白質キャストの陽性面積の割合は、各動物について８つの皮質および５つの髄核の平均から計算した。腎臓の線維化は、マッソントリクローム染色された腎臓切片において倍率Ｘ２００で測定された。コラーゲンが陽性である面積の割合は、各動物の皮質８個および髄質５個の平均からの線維化面積として計算した。腎臓切片における腎臓の管状のキャストおよびコラーゲン陽性の線維化領域は、２人の盲検の観察者によって決定された。膵臓切片をヘマトキシリン染色およびエオシン染色で染色し、膵臓の肉眼的組織学的特徴を、盲検様式で異なる実験群で調べた。
【０２７６】
免疫組織化学分析
【０２７７】
ホルマリン固定パラフィン包埋腎臓切片を脱パラフィンし、再水和し、免疫組織化学に供した。腎臓におけるマクロファージ／単球の浸潤を決定するために、腎臓切片を抗ＣＤ６８（１：１００；Ｓｅｒｏｔｅｃ、ローリー、ノースカロライナ州、米国）で免疫染色した。ビオチン化ラット抗マウス二次抗体（１：２００）を、アビジン−ビオチニル化ＨＲＰ複合体での発現に使用し（Ｖｅｃｔａｓｔａｉｎ  ＡＢＣ  Ｅｌｉｔｅキット、Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、バーリンゲーム、カリフォルニア州、米国）、続いてヘマトキシリンで対比染色し、画像捕捉のためにマウントした。染色された切片を光学顕微鏡で４００Ｘ倍率で視覚化し、染色された腎臓のデジタル画像をＮｉｋｏｎ  ＮＩＳ  Ｅｌｅｍｅｎｔｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ｎｉｋｏｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｉｎｃ．、メルビル、ニューヨーク州、米国）を用いて分析に用いた。大食細胞／単球の浸潤を、経験豊富な盲検の２人の査読者によってＣＤ６８陽性細胞を点数化することによって決定した。画像あたりの陽性細胞の数を画像のメトリック面積で割って、ｍｍ2あたりの陽性細胞の数を得た。
【０２７８】
結果
【０２７９】
体重、血圧、血糖、トリグリセリド、コレステロール、および遊離脂肪酸
【０２８０】
平均体重を、ベースライン時および試験中の全実験群で測定した。体重、収縮期血圧および血中グルコースを表５に示す。８週間の試験終了時に、体重はＷＫＹと比較してＳＨＲＯＢにおいて有意に高かった。ＲＢ３９４で処理したＳＨＲＯＢの体重は、ビヒクル処理ＳＨＲＯＢより約４０ｇ多くなった。ＲＢ３９４処理群の収縮期血圧は、ビヒクル処理ＳＨＲＯＢより約４４ｍｍＨｇ低かった。ＳＨＲＯＢはＷＫＹと比較して空腹時血糖が上昇しなかった。表は、トリグリセリド、コレステロールおよび遊離脂肪酸についての血漿生化学分析の結果を示す。トリグリセリド、コレステロールおよび遊離脂肪酸レベルは、正常血圧ＷＫＹ群と比較してビヒクル処理ＳＨＲＯＢにおいて有意に増加した。ＳＨＲＯＢは、ＲＢ３９４で処理した場合、トリグリセリドの有意な改善を示した。ＲＢ３９４処理ＳＨＲＯＢ群のコレステロール値は、８週間の処理期間にわたって減少した。血漿遊離脂肪酸レベルは、ＲＢ３９４で処理したＳＨＲＯＢにおいて減少した。
【０２８１】
【表５】
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【０２８２】
インスリン抵抗性
【０２８３】
ＳＨＲＯＢラットは、ＷＫＹラットと比較してインスリン耐性であった。ＲＢ３９４は、ＳＨＲＯＢラットにおける空腹時血糖に変化をもたらさなかったが、耐糖能を改善した。ＳＨＲＯＢラットはまた、ＷＫＹラットと比較して曲線下でより高いグルコース面積でインスリン抵抗性を有し、ＲＢＲＯはＳＨＲＯＢラットにおいてインスリン抵抗性を低下した。図２２を参照。
【０２８４】
腎臓損傷
【０２８５】
尿アルブミン排泄レベルを分析して、ＳＨＲＯＢにおける腎障害の程度を評価した。アルブミン排泄はＷＫＹと比較してＳＨＲＯＢにおいて有意に増加し、ＲＢ３９４はアルブミンレベルを減少した。腎損傷は、組織学的切片からの腎臓あたり１００糸球体のサンプリングを採点することによって、半定量的にさらに評価した。糸球体傷害はＷＫＹでは最小であり、ビヒクル処理ＳＨＲＯＢは著しく高い糸球体傷害スコアを示す。ビヒクル処理ＳＨＲＯＢは、糸球体基底膜へのメサンギウム拡大および損傷を示し、アルブミン排泄率と一致した。ＲＢ３９４で処理したＳＨＲＯＢは糸球体傷害の減少を示した（図２３参照）。さらに、ＲＢ３９４は、腎臓の皮質および髄質領域における管内タンパク質性キャスト形成を有意に減少させた。これらをまとめると、ＲＢ３９４は腎障害を減少させることが示された。
【０２８６】
腎炎症
【０２８７】
図２５は、単球およびマクロファージで発現される糖タンパク質である抗ＣＤ６８で免疫染色した腎臓切片における尿中のＭＣＰ−１排泄および、マクロファージ浸潤の代表的な分析および写真を示す。ＭＣＰ−１レベルは、ＷＫＹ群と比較してＳＨＲＯＢにおいて有意に上昇した。ＲＢ３９４は、ＳＨＲＯＢにおける尿中のＭＣＰ−１排泄を減少した。ＭＣＰ−１データと一致して、ＳＨＲＯＢビヒクル群は、ＷＫＹ群と比較して腎マクロファージ浸潤の増加を示した。ＲＢ３９４で処理したＳＨＲＯＢは、マクロファージの浸潤を有意に減少した。これらのデータは、ＲＢ３９４治療がＳＨＲＯＢにおける腎炎症を減少させたことを示している。
【０２８８】
ＺＳＦ１方法論は、ＳＨＲＯＢ研究と同様である。図２６を参照。高血圧、糖尿病、腎障害は、１６週齢のＺＳＦ１肥満ラットの血圧、空腹時血糖、および尿蛋白を測定することによって確認した。１６週齢のＺＳＦ１肥満ラットにおいてＲＢ３９４処理を開始し、８週間継続した。血圧、耐糖能、尿蛋白の初期グラフを表示する。
【０２８９】
結果
【０２９０】
血圧
【０２９１】
ＺＳＦ１肥満ラットは、１６週齢から２４週齢までの収縮期血圧の上昇を示した。図２７を参照。ＲＢ３９４治療は、１６週目に開始し、８週目から２４週目まで継続した。ＲＢ３９４で８週間処理すると、ＺＳＦ１肥満ラットの収縮期血圧が低下した。
【０２９２】
血糖値
【０２９３】
図２８に示すように、ＺＳＦ１肥満ラットは、ＺＳＦ痩せ型ラットと比較して２０週（左パネル）および２４週（右パネル）で空腹時血糖上昇および耐糖能障害を有する。ＲＢ３９４治療は、１６週目に開始し、８週間から２４週間、継続した。ＲＢ３９４で４週間（左パネル）または８週間（右パネル）処理すると、空腹時血糖値が低下し、ＺＳＦ１肥満ラットの耐糖能が改善された。
【０２９４】
腎臓傷害−タンパク尿
【０２９５】
図２９に示されるように、ＺＳＦ１肥満ラットでは、ＺＳＦ１痩せ型ラットと比較して、１６週齢（０ＷＫ）で尿タンパク排泄が増加した。尿中タンパク質排泄は、未処理のＺＳＦ１肥満ラットにおいて、２０週（４ＷＫ）および２４週（８ＷＫ）の年齢でさらに増加した。１６週齢でＲＢ３９４処理を開始し、ＺＳＦ１肥満ラットにおける尿中タンパク質排泄の増加を防止した。
【０２９６】
本出願で特定された各参考文献は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。本発明の概念を特定の実施態様を参照して説明してきたが、当業者は、本発明の概念の精神から逸脱することなく、様々な置換および／または他の変更を実施できることを理解するであろう。よって、上記の説明は例示的なものであり、本発明の概念の範囲を限定するものではない。
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【図１】
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【図２ａ】
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【図２ｂ】
2018524353.tif 000022
【図２ｃ】
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【図２ｄ】
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【図２ｅ】
2018524353.tif 000025
【図２ｆ】
2018524353.tif 000026
【図３ａ】
2018524353.tif 000027
【図３ｂ】
2018524353.tif 000028
【図４】
2018524353.tif 000029
【図５】
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【図６】
2018524353.tif 000031
【図７】
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【図８】
2018524353.tif 000033
【図９】
2018524353.tif 000034
【図１０】
2018524353.tif 000035
【図１１】
2018524353.tif 000036
【図１２】
2018524353.tif 000037
【図１３】
2018524353.tif 000038
【図１４】
2018524353.tif 000039
【図１５】
2018524353.tif 000040
【図１６】
2018524353.tif 000041
【図１７】
2018524353.tif 000042
【図１８】
2018524353.tif 000043
【図１９】
2018524353.tif 000044
【図２０】
2018524353.tif 000045
【図２１】
2018524353.tif 000046
【図２２】
2018524353.tif 000047
【図２３】
2018524353.tif 000048
【図２４】
2018524353.tif 000049
【図２５】
2018524353.tif 000050
【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【国際調査報告】
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