(57)【要約】  本開示は、ミオシン１８Ａに対する特異性を有する抗体およびその使用に関する。特に、本開示は、ミオシン１８Ａに対する特異性を有し、ｉ）ＤＹ１２のＨ−ＣＤＲ１と少なくとも９０％の同一性を有するＨ−ＣＤＲ１、ｉｉ）ＤＹ１２のＨ−ＣＤＲ２と少なくとも９０％の同一性を有するＨ−ＣＤＲ２およびｉｉｉ）ＤＹ１２のＨ−ＣＤＲ３と少なくとも９０％の同一性を有するＨ−ＣＤＲ３を含む重鎖と、ｉ）ＤＹ１２のＬ−ＣＤＲ１と少なくとも９０％の同一性を有するＬ−ＣＤＲ１、ｉｉ）ＤＹ１２のＬ−ＣＤＲ２と少なくとも９０％の同一性を有するＬ−ＣＤＲ２およびｉｉｉ）ＤＹ１２のＬ−ＣＤＲ３と少なくとも９０％の同一性を有するＬ−ＣＤＲ３を含む軽鎖とを含む、抗体に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ミオシン１８Ａに対する特異性を有する抗体であって、
ｉ）ＤＹ１２のＨ−ＣＤＲ１と少なくとも９０％の同一性を有するＨ−ＣＤＲ１、ｉｉ）ＤＹ１２のＨ−ＣＤＲ２と少なくとも９０％の同一性を有するＨ−ＣＤＲ２およびｉｉｉ）ＤＹ１２のＨ−ＣＤＲ３と少なくとも９０％の同一性を有するＨ−ＣＤＲ３を含む、重鎖と、
ｉ）ＤＹ１２のＬ−ＣＤＲ１と少なくとも９０％の同一性を有するＬ−ＣＤＲ１、ｉｉ）ＤＹ１２のＬ−ＣＤＲ２と少なくとも９０％の同一性を有するＬ−ＣＤＲ２およびｉｉｉ）ＤＹ１２のＬ−ＣＤＲ３と少なくとも９０％の同一性を有するＬ−ＣＤＲ３を含む、軽鎖と
を含み、
前記ＤＹ１２のＨ−ＣＤＲ１が、配列番号１の３１位のアミノ酸残基から３５位のアミノ酸残基までの範囲の配列で定義され、
前記ＤＹ１２のＨ−ＣＤＲ２が、配列番号１の５０位のアミノ酸残基から６６位のアミノ酸残基までの範囲の配列で定義され、
前記ＤＹ１２のＨ−ＣＤＲ３が、配列番号１の９９位のアミノ酸残基から１０９位のアミノ酸残基までの範囲の配列で定義され、
前記ＤＹ１２のＬ−ＣＤＲ１が、配列番号２の２４位のアミノ酸残基から３４位のアミノ酸残基までの範囲の配列で定義され、
前記ＤＹ１２のＬ−ＣＤＲ２が、配列番号２の５０位のアミノ酸残基から５６位のアミノ酸残基までの範囲の配列で定義され、
前記ＤＹ１２のＬ−ＣＤＲ３が、配列番号２の８９位のアミノ酸残基から９７位のアミノ酸残基までの範囲の配列で定義される、
抗体。
【請求項２】
ｉ）前記ＤＹ１２のＨ−ＣＤＲ１と、ｉｉ）前記ＤＹ１２のＨ−ＣＤＲ２と、ｉｉｉ）前記ＤＹ１２のＨ−ＣＤＲ３とを含む重鎖を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項３】
ｉ）前記ＤＹ１２のＬ−ＣＤＲ１と、ｉｉ）前記ＤＹ１２のＬ−ＣＤＲ２と、ｉｉｉ）前記ＤＹ１２のＬ−ＣＤＲ３とを含む軽鎖を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項４】
ｉ）前記ＤＹ１２のＨ−ＣＤＲ１、ｉｉ）前記ＤＹ１２のＨ−ＣＤＲ２およびｉｉｉ）前記ＤＹ１２のＨ−ＣＤＲ３を含む、重鎖と、
ｉ）前記ＤＹ１２のＬ−ＣＤＲ１、ｉｉ）前記ＤＹ１２のＬ−ＣＤＲ２およびｉｉｉ）前記ＤＹ１２のＬ−ＣＤＲ３を含む、軽鎖と
を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項５】
配列番号１と少なくとも７０％の同一性を有する重鎖を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項６】
配列番号２と少なくとも７０の同一性を有する軽鎖を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項７】
配列番号１と少なくとも７０％の同一性を有する重鎖と、配列番号２と少なくとも７０％の同一性を有する軽鎖とを含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項８】
配列番号１と同一の重鎖を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項９】
配列番号２と同一の軽鎖を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項１０】
キメラ抗体またはヒト化抗体である、請求項１に記載の抗体。
【請求項１１】
抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導するＦｃ部分を含まない、請求項１に記載の抗体。
【請求項１２】
ＦｃガンマＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６）ポリペプチドと実質的に結合することが可能なＦｃドメインを含まない、請求項１１に記載の抗体。
【請求項１３】
Ｆｃドメインを欠くか、またはＩｇＧ２アイソタイプもしくはＩｇＧ４アイソタイプのＦｃドメインを含む、請求項１１に記載の抗体。
【請求項１４】
請求項１に記載の抗体の重鎖および／または軽鎖をコードする、核酸分子。
【請求項１５】
配列番号３または配列番号４と７０％の同一性を有する核酸配列を含む、請求項１４に記載の核酸分子。
【請求項１６】
請求項１４に記載の核酸によってトランスフェクトされている、感染している、または形質転換されている、宿主細胞。
【請求項１７】
それを必要とする対象のＮＫ細胞キラー活性を増強する方法であって、前記対象に請求項１に記載の抗体の治療有効量を投与することを含む、方法。
【請求項１８】
それを必要とする対象の癌または感染症を治療する方法であって、前記対象に請求項１に記載の抗体の治療有効量を投与することを含む、方法。
【請求項１９】
肺サーファクタントの欠陥に関連する肺疾患を治療する方法であって、前記対象に請求項１に記載の抗体の治療有効量を投与することを含む、方法。
【請求項２０】
それを必要とする対象の抗体のＮＫ細胞抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を増強する方法であって、前記対象に前記抗体を投与することと、前記対象に請求項１に記載の抗体を投与することとを含む、方法。
【請求項２１】
それを必要とする対象の癌を治療する方法であって、前記対象に癌細胞抗原に対して選択的な第一の抗体を投与することと、前記対象に請求項１に記載の抗体を投与することとを含む、方法。
【請求項２２】
請求項１に記載の抗体を含む、医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ミオシン１８Ａに対する特異性を有する抗体およびその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞は、予め刺激されなくとも自発的に腫瘍細胞を死滅させることが可能なリンパ球のサブセットとして４０年以上前に同定された（１〜４）。ＮＫ細胞は、哺乳類および鳥類のほとんどの種にみられ、抗腫瘍免疫および抗感染免疫（５、６）ならびに生殖（７）に極めて重要な役割を果たしている。ヒトのＮＫリンパ球は、神経細胞接着分子のアイソフォームであるＣＤ５６の発現およびＣＤ３の非存在を特徴とする表現型を示す（８）。ＮＫ細胞の細胞傷害性は、活性化受容体および抑制性受容体の結合によって生じるシグナル間のバランスによって厳密に制御されている（６、９）。標的細胞と接触すると、ＮＫ細胞表面のインテグリンが標的細胞上の接着分子と結合し、細胞間相互作用を安定化させる（１０）。標的細胞上でインテグリンであるリンパ球機能関連抗原１（ＬＦＡ−１）と細胞間接着分子１（ＩＣＡＭ−１）が結合すると、グアニンヌクレオチド交換因子（ＧＥＦ）ドメイン含有Ｖａｖ１およびｐ２１活性化キナーゼ（ＰＡＫ）の活性化を介してＮＫ細胞の初期シグナル伝達カスケードが惹起される（１１）。これにより、ＮＫ細胞と標的細胞の接触領域でＮＫ免疫シナプス（ＮＫＩＳ）（１３）と呼ばれる細胞骨格の再構築および活性化ＮＫ受容体（ＮＫＲ）の凝集が起こる（１２）。活性化ＮＫＲの結合によって免疫受容体チロシン活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を有するアダプタータンパク質が動員される。ＩＴＡＭの２つのチロシンはＳｒｃキナーゼファミリーのメンバーによってリン酸化され、リン酸化されたＩＴＡＭは、チロシンキナーゼのＳｒｃ相同ドメイン２（ＳＨ２）ドメインの結合部位を形成し（１４）、標的細胞の顆粒極性化、脱顆粒および細胞溶解に関与するシグナル伝達カスケードを誘起する。活性化ＮＫＲには、天然の細胞傷害性受容体ファミリー（ＣＤ２４５（１５）、ＮＫｐ４４（１６）およびＮＫｐ３０（１７）など）、Ｃ型レクチン受容体（ＮＫＧ２Ｄ）（１８）のＮＫＧ２ファミリー、キラー細胞Ｉｇ様受容体（ＫＩＲ）（１９、２０）、Ｉｇ様シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭ）ファミリー（２Ｂ４）（２１）のメンバー、およびＣＤ１６０（２２、２３）などの他の分子が含まれる。４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）はＴ細胞、Ｂ細胞およびＮＫ細胞上に発現される共刺激受容体であり（２４）、その発現は、抗体依存性細胞傷害の場合と同じように、ＮＫ細胞表面にＦｃ受容体が結合することによって誘起される（２５）。様々な癌モデルでは、ＣＤ１３７で刺激すると、セツキシマブによる、リツキシマブによるおよびトラスツズマブによるＮＫ細胞の細胞傷害性が増大する（２６〜２８）。抑制性ＮＫＲが標的細胞上の主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）クラスＩ分子と結合すると、ＮＫ細胞活性化が顕著に抑制される（２９）。ヒトでは、上記の受容体は主として、ＮＫＧ２Ａヘテロ二量体のようにＣ型レクチン受容体に属する（３０）か、またはＫＩＲ受容体スーパーファミリーに属する（１９、２０）。活性化ＫＩＲとは異なり、抑制性ＫＩＲは、免疫受容体チロシン阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）配列を有する長い細胞質尾部を有する（３１）。後者は、Ｓｒｃ相同領域２含有タンパク質チロシンホスファターゼ−１（ＳＨＰ−１）またはＳＨＰ−２のタンデムＳＨ２ドメインに対する特異的結合部位を提供する。ＮＫＩＳにＳＨＰを動員することにより、細胞溶解を引き起こすシグナル伝達カスケードの重要な段階の多くを遮断することが可能となる（３２）。ＣＤ２４５は、ヒト末梢血リンパ球の表面上の固有の表面抗原であり、モノクローナル抗体ＤＹ１２によって認識されることが既に記載されている（３３）。しかし、ＣＤ２４５の分子的特徴および機能的特徴はほとんど明らかにされていない。
【発明の概要】
【０００３】
本発明は、ミオシン１８Ａに対する特異性を有する抗体およびその使用に関する。特に、本発明は特許請求の範囲によって定められる。
【発明を実施するための形態】
【０００４】
（発明の詳細な説明）
本発明は、ミオシン１８Ａに対する特異性を有する抗体およびその使用に関する。特に、本発明はＤＹ１２抗体に由来する抗体を提供する。本発明者らは実際にＤＹ１２抗体の特徴を調べて、前記抗体がミオシン１８Ａ（すなわち、ＣＤ２４５）と結合し、ＮＫ細胞の細胞傷害性を増強することが可能であることを証明する。
【０００５】
本明細書で使用される「ミオシン１８Ａ」という用語は、非定型ミオシン１８Ａ、非定型ミオシン−ＸＶＩＩＩａまたはＭｙｏ１８Ａを意味する。例示的なヒト核酸配列はＮＣＢＩ参照番号ＮＭ＿０７８４７１．３およびＮＭ＿２０３３１８．１として記載される。例示的なヒトアミノ酸配列はＮＣＢＩ参照番号ＮＰ＿５１０８８０．２およびＮＰ＿９７６０６３．１として記載される。さらに例示的なアミノ酸配列は配列番号５（図１Ｂ）を含む。
【０００６】
本明細書で使用される「抗体」または「免疫グロブリン」という用語は、同じ意味を有し、本発明では同じように使用される。本明細書で使用される「抗体」という用語は、免疫グロブリン分子および免疫グロブリン分子の免疫学的活性部分、すなわち、抗原と免疫特異的に結合する抗原結合部位を含む分子を指す。したがって、抗体という用語は、抗体分子全体のみならず、抗体フラグメントならびに抗体および抗体フラグメントのバリアント（誘導体を含む）も包含する。天然の抗体では、２本の重鎖がジスルフィド結合によって互いに連結しており、重鎖はそれぞれジスルフィド結合によって軽鎖と連結している。軽鎖にはラムダ（ｌ）とカッパ（ｋ）の２種類がある。抗体分子の機能的活性を決定する主要な重鎖クラス（またはアイソタイプ）には、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＥの５種類がある。各鎖は異なる配列ドメインを含む。軽鎖は、１つの可変ドメイン（ＶＬ）と１つの定常ドメイン（ＣＬ）の２つのドメインを含む。重鎖は、１つの可変ドメイン（ＶＨ）と３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３、まとめてＣＨと称する）の４つのドメインを含む。軽鎖（ＶＬ）および重鎖（ＶＨ）の両方の可変領域が、抗原に対する結合の認識および特異性を決定する。定常領域ドメインは軽鎖（ＣＬ）および重鎖（ＣＨ）ともに、重要な生物学的特性、例えば抗体鎖の会合、分泌、経胎盤移行、補体結合およびＦｃ受容体（ＦｃＲ）との結合などをもたらす。Ｆｖフラグメントは免疫グロブリンのＦａｂフラグメントのＮ末端（側）部分であり、１本の軽鎖の可変部分と１本の重鎖の可変部分とからなる。抗体の特異性は、抗体結合部位と抗原決定基との間の構造的相補性に存在する。抗体結合部位は、主として超可変領域または相補性決定領域（ＣＤＲ）に由来する残基で構成される。場合によっては、非超可変領域またはフレームワーク領域（ＦＲ）の残基が抗体結合部位に関与し得るか、またはドメイン構造全体、したがって結合部位に影響を及ぼし得る。相補性決定領域、またはＣＤＲは、ネイティブ免疫グロブリン結合部位の天然のＦｖ領域の結合親和性および特異性を同時に定めるアミノ酸配列を指す。免疫グロブリンの軽鎖および重鎖はそれぞれ、Ｌ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２、Ｌ−ＣＤＲ３およびＨ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２、Ｈ−ＣＤＲ３と呼ばれる３つのＣＤＲを有する。したがって、抗原結合部位は通常、重鎖Ｖ領域および軽鎖Ｖ領域それぞれからのＣＤＲの組を含む６つのＣＤＲを含む。フレームワーク領域（ＦＲ）は、ＣＤＲの間に介在するアミノ酸配列を指す。抗体可変ドメインの残基には従来、Ｋａｂａｔらが考案したシステムに従って番号が付されている。このシステムはＫａｂａｔら（１９８７）の「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」（米国保健社会福祉省、ＮＩＨ、米国）（以降「Ｋａｂａｔら」）に記載されている。本明細書ではこの番号付けシステムを用いる。Ｋａｂａｔ残基の表示は必ずしも、配列番号を付与した配列のアミノ酸残基の直線的番号付けに直接対応するとは限らない。実際の直鎖状アミノ酸配列は、フレームワーク領域または相補性決定領域（ＣＤＲ）を問わず、��本的な可変ドメイン構造の構造成分の短縮または同成分への挿入に対応して、厳密なＫａｂａｔ番号付けよりも多くのまたはより少ないアミノ酸を含む。所定の抗体の残基の正確なＫａｂａｔ番号付けは、その抗体の配列中の相同な残基を「標準的な」Ｋａｂａｔ番号付け配列と比較することによって決定され得る。重鎖可変ドメインのＣＤＲは、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに従えば、残基３１〜３５Ｂ（Ｈ−ＣＤＲ１）、残基５０〜６５（Ｈ−ＣＤＲ２）および残基９５〜１０２（Ｈ−ＣＤＲ３）に位置する。軽鎖可変ドメインのＣＤＲは、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに従えば、残基２４〜３４（Ｌ−ＣＤＲ１）、残基５０〜５６（Ｌ−ＣＤＲ２）および残基８９〜９７（Ｌ−ＣＤＲ３）に位置する。
【０００７】
本明細書で使用される「特異性」という用語は、抗体が、ミオシン１８Ａなどの抗原上に提示されるエピトープとは検出可能に結合することができるが、ミオシン１８Ａ以外のタンパク質または構造（ＮＫ細胞または他の種類の細胞上に提示される他のタンパク質など）に対しては検出可能な反応性が相対的に小さいことを指す。特異性は、本明細書の他の箇所に記載するように、例えばＢｉａｃｏｒｅ機器を用いて、結合アッセイまたは競合結合アッセイにより相対的に求めることができる。特異性は、特異的抗原との結合と、他の無関係な分子との非特異的結合（この場合、特異的抗原はミオシン１８Ａポリペプチドである）とを比較した親和性／アビディティの比、例えば約１０：１、約２０：１、約５０：１、約１００：１、１０．０００：１またはそれ以上の比によって示すことができる。本明細書で使用される「親和性」という用語は、抗体とエピトープとの結合の強さを意味する。抗体の親和性は、［Ａｂ］×［Ａｇ］／［Ａｂ−Ａｇ］と定義される解離定数Ｋｄによって与えられ、式中、［Ａｂ−Ａｇ］は抗体−抗原複合体のモル濃度であり、［Ａｂ］は未結合抗体のモル濃度であり、［Ａｇ］は未結合抗原のモル濃度である。親和性定数Ｋａは１／Ｋｄで定義される。ｍＡｂの親和性を求める好ましい方法は、Ｈａｒｌｏｗら，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８８），Ｃｏｌｉｇａｎら編，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃ．ａｎｄ  Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎ．Ｙ．，（１９９２，１９９３）およびＭｕｌｌｅｒ，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．９２：５８９−６０１（１９８３）に見ることができ、上記の参考文献は全体が参照により本明細書に組み込まれる。ｍＡｂの親和性を求める方法として当該技術分野で周知の好ましい標準的なものの１つが、Ｂｉａｃｏｒｅ機器の使用である。
【０００８】
本発明によれば、ＤＹ１２抗体のＶＨ領域は配列番号１の配列からなる。したがって、ＤＹ１２のＨ−ＣＤＲ１は、配列番号１の３１位のアミノ酸残基から３５位のアミノ酸残基までの範囲の配列で定義される。したがって、ＤＹ１２のＨ−ＣＤＲ２は、配列番号１の５０位のアミノ酸残基から６６位のアミノ酸残基までの範囲の配列で定義される。したがって、ＤＹ１２のＨ−ＣＤＲ３は、配列番号１の９９位のアミノ酸残基から１０９位のアミノ酸残基までの範囲の配列で定義される。
【０００９】
配列番号１：ＤＹ１２抗体のＶＨ領域  ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４
ＱＶＱＬＱＱＰＧＡＥＬＶＲＰＧＡＳＶＭＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＷＩＮＷＶＲＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＮＩＹＰＳＤＳＹＴＮＹＮＱＫＦＫＤＫＡＴＬＴＶＤＮＳＳＳＴＡＹＭＱＦＳＳＰＴＳＥＤＳＡＶＹＦＣＴＲＬＴＴＶＧＡＧＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ
【００１０】
本発明によれば、ＤＹ１２抗体のＶＬ領域は配列番号２の配列からなる。したがって、ＤＹ１２のＬ−ＣＤＲ１は、配列番号２の２４位のアミノ酸残基から３４位のアミノ酸残基までの範囲の配列で定義される。したがって、ＤＹ１２のＬ−ＣＤＲ２は、配列番号２の５０位のアミノ酸残基から５６位のアミノ酸残基までの範囲の配列で定義される。したがって、ＤＹ１２のＬ−ＣＤＲ３は、配列番号２の８９位のアミノ酸残基から９７位のアミノ酸残基までの範囲の配列で定義される。
【００１１】
配列番号２：ＤＹ１２抗体のＶＬ領域  ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４
ＤＩＱＭＴＱＳＳＳＹＬＳＶＳＬＧＧＲＶＴＩＴＣＫＡＳＤＨＩＮＮＷＬＡＷＹＱＱＫＰＧＮＡＰＲＬＬＩＳＧＡＴＳＬＥＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＫＤＹＴＬＳＩＦＳＬＱＳＥＤＶＡＴＹＹＣＱＱＹＷＳＴＰＦＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＫ
【００１２】
したがって、本発明は、ＤＹ１２のＶＬ領域、ＶＨ領域または１つもしくは複数のＣＤＲの機能的バリアントを含む抗体を提供する。本発明のヒトモノクローナル抗体の状況において使用されるＶＬ、ＶＨまたはＣＤＲの機能的バリアントは、その抗体が依然として親抗体（すなわち、ＤＹ１２抗体）の親和性／アビディティおよび／または特異性／選択性の少なくとも実質的な割合（少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％またはそれ以上）を保持することを可能にし、場合によっては、本発明のそのようなヒトモノクローナル抗体は、親Ａｂよりも大きい親和性、選択性および／または特異性に関連し得る。このような機能的バリアントは通常、親Ａｂとの有意な配列同一性を保持している。ＣＤＲバリアントの配列は、大部分が保存的置換によって親抗体配列のＣＤＲの配列と異なり得て、例えば、バリアント内の置換の少なくとも約３５％、約５０％以上、約６０％以上、約７０％以上、約７５％以上、約８０％以上、約８５％以上、約９０％以上（例えば、約６５〜９５％、例えば約９２％、９３％または９４％など）が保存的アミノ酸残基置換である。ＣＤＲバリアントの配列は、大部分が保存的置換によって親抗体配列のＣＤＲの配列と異なり得て、例えば、バリアント内の置換のうち少なくとも１０個、例えば少なくとも９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個または１個などが保存的アミノ酸残基置換である。本発明の状況においては、保存的置換は以下に示すアミノ酸のクラス内での置換と定義され得る：
脂肪族残基Ｉ、Ｌ、ＶおよびＭ
シクロアルケニル結合残基Ｆ、Ｈ、ＷおよびＹ
疎水性残基Ａ、Ｃ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｒ、Ｔ、Ｖ、ＷおよびＹ
負荷電残基ＤおよびＥ
極性残基Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、ＳおよびＴ
正荷電残基Ｈ、ＫおよびＲ
小さい残基Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｇ、Ｎ、Ｐ、Ｓ、ＴおよびＶ
極めて小さい残基Ａ、ＧおよびＳ
旋回に関与する残基Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｋ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｐおよび構造に関与する残基Ｔ
柔軟な残基Ｑ、Ｔ、Ｋ、Ｓ、Ｇ、Ｐ、Ｄ、ＥおよびＲ。
【００１３】
より保存的な置換群としては、バリン−ロイシン−イソロイシン、フェニルアラニン−チロシン、リジン−アルギニン、アラニン−バリンおよびアスパラギン−グルタミンが挙げられる。バリアントＣＤＲでは、ＤＹ１２のＣＤＲと比較してハイドロパシー／親水性特性および残基の重さ／大きさに関する保存もまた実質的に保持される。タンパク質に相互作用性の生物学的機能を付与する際にはハイドロパシーアミノ酸指標が重要であることは、当該技術分野で一般に理解されている。アミノ酸の相対的なハイドロパシー特性が、得られるタンパク質の二次構造に寄与し、次いで二次構造がタンパク質と他の分子、例えば酵素、基質、受容体、ＤＮＡ、抗体、抗原などとの相互作用を定めることが認められている。各アミノ酸には、その疎水性および荷電特性に基づきハイドロパシー指数が割付されており、それらは以下の通りである：イソロイシン（＋４．５）；バリン（＋４．２）；ロイシン（＋３．８）；フェニルアラニン（＋２．８）；システイン／シスチン（＋２．５）；メチオニン（＋１．９）；アラニン（＋１．８）；グリシン（−０．４）；トレオニン（−０．７）；セリン（−０．８）；トリプトファン（−０．９）；チロシン（−１．３）；プロリン（−１．６）；ヒスチジン（−３．２）；グルタミン酸（−３．５）；グルタミン（−３．５）；アスパラギン酸（−３．５）；アスパラギン（−３．５）；リジン（−３．９）；およびアルギニン（−４．５）。類似の残基の保持は、同様にまたはあるいはＢＬＡＳＴプログラム（例えば、ＢＬＯＳＵＭ６２、Ｏｐｅｎ  Ｇａｐ＝１１およびＥｘｔｅｎｄｅｄ  Ｇａｐ＝１の標準設定を用いてＮＣＢＩを介して入手可能なＢＬＡＳＴ２．２．８）を使用して決定した類似性スコアによって測定され得る。適切なバリアントは通常、親ペプチドと少なくとも約７０％の同一性を示す。本発明によれば、第一のアミノ酸配列が第二のアミノ酸配列と少なくとも７０％の同一性を有するとは、第一の配列が第二のアミノ酸配列と７０％；７１％；７２％；７３％；７４％；７５％；７６％；７７％；７８％；７９％；８０％；８１％；８２％；８３％；８４％；８５％；８６％；８７％；８８％；８９％；９０％；９１％；９２％；９３％；９４％；９５％；９６％；９７％；９８％；９９％；または１００％の同一性を有することを意味する。本発明によれば、第一のアミノ酸配列が第二のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するとは、第一の配列が第二のアミノ酸配列と９０％；９１％；９２％；９３％；９４％；９５％；９６％；９７％；９８％；９９％；または１００％の同一性を有することを意味する。
【００１４】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、ｉ）ＤＹ１２のＨ−ＣＤＲ１と少なくとも９０％の同一性を有するＨ−ＣＤＲ１と、ｉｉ）ＤＹ１２のＨ−ＣＤＲ２と少なくとも９０％の同一性を有するＨ−ＣＤＲ２と、ｉｉｉ）ＤＹ１２のＨ−ＣＤＲ３と少なくとも９０％の同一性を有するＨ−ＣＤＲ３とを含む重鎖を含む、抗体である。
【００１５】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、ｉ）ＤＹ１２のＬ−ＣＤＲ１と少なくとも９０％の同一性を有するＬ−ＣＤＲ１と、ｉｉ）ＤＹ１２のＬ−ＣＤＲ２と少なくとも９０％の同一性を有するＬ−ＣＤＲ２と、ｉｉｉ）ＤＹ１２のＬ−ＣＤＲ３と少なくとも９０％の同一性を有するＬ−ＣＤＲ３とを含む軽鎖を含む、抗体である。
【００１６】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、ｉ）ＤＹ１２のＨ−ＣＤＲ１と少なくとも９０％の同一性を有するＨ−ＣＤＲ１、ｉｉ）ＤＹ１２のＨ−ＣＤＲ２と少なくとも９０％の同一性を有するＨ−ＣＤＲ２およびｉｉｉ）ＤＹ１２のＨ−ＣＤＲ３と少なくとも９０％の同一性を有するＨ−ＣＤＲ３を含む重鎖と、ｉ）ＤＹ１２のＬ−ＣＤＲ１と少なくとも９０％の同一性を有するＬ−ＣＤＲ１、ｉｉ）ＤＹ１２のＬ−ＣＤＲ２と少なくとも９０％の同一性を有するＬ−ＣＤＲ２およびｉｉｉ）ＤＹ１２のＬ−ＣＤＲ３と少なくとも９０％の同一性を有するＬ−ＣＤＲ３を含む軽鎖とを含む、抗体である。
【００１７】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、ｉ）ＤＹ１２のＨ−ＣＤＲ１と、ｉｉ）ＤＹ１２のＨ−ＣＤＲ２と、ｉｉｉ）ＤＹ１２のＨ−ＣＤＲ３とを含む重鎖を含む、抗体である。
【００１８】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、ｉ）ＤＹ１２のＬ−ＣＤＲ１と、ｉｉ）ＤＹ１２のＬ−ＣＤＲ２と、ｉｉｉ）ＤＹ１２のＬ−ＣＤＲ３とを含む軽鎖を含む、抗体である。
【００１９】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、ｉ）ＤＹ１２のＨ−ＣＤＲ１、ｉｉ）ＤＹ１２のＨ−ＣＤＲ２およびｉｉｉ）ＤＹ１２のＨ−ＣＤＲ３を含む重鎖と、ｉ）ＤＹ１２のＬ−ＣＤＲ１、ｉｉ）ＤＹ１２のＬ−ＣＤＲ２およびｉｉｉ）ＤＹ１２のＬ−ＣＤＲ３を含む軽鎖とを含む、抗体である。
【００２０】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号１と少なくとも７０％の同一性を有する重鎖を含む、抗体である。
【００２１】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号２と少なくとも７０の同一性を有する軽鎖を含む、抗体である。
【００２２】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号１と少なくとも７０％の同一性を有する重鎖と、配列番号２と少なくとも７０％の同一性を有する軽鎖とを含む、抗体である。
【００２３】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号１と同一の重鎖を含む抗体である。
【００２４】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号２と同一の軽鎖を含む抗体である。
【００２５】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号１と同一の重鎖と配列番号２と同一の軽鎖とを含む、抗体である。
【００２６】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体はキメラ抗体、通常、キメラマウス／ヒト抗体である。「キメラ抗体」という用語は、非ヒト動物に由来する抗体のＶＨドメインおよびＶＬドメインと、ヒト抗体のＣＨドメインおよびＣＬドメインとを含む、モノクローナル抗体を指す。非ヒト動物として、マウス、ラット、ハムスター、ウサギなどの任意の動物を用いることができる。具体的には、前記マウス／ヒトキメラ抗体は、ＤＹ１２抗体の重鎖と軽鎖を含み得る。
【００２７】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、ＤＹ１２抗体のＣＤＲを含むヒト化抗体である。本明細書で使用される「ヒト化抗体」という用語は、フレームワーク領域または「相補性決定領域」（ＣＤＲ）が、親免疫グロブリンのものとは異なる特異性のドナー免疫グロブリンのＣＤＲを含むよう改変されている抗体を指す。
【００２８】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’およびｓｃＦｖからなる群より選択される。本明細書で使用される「Ｆａｂ」という用語は、約５０，０００の分子量と抗原結合活性とを有し、ＩｇＧをプロテアーゼのパパインで処理することによって得られるフラグメントのうち、Ｈ鎖のＮ末端側の約半分およびＬ鎖全体がジスルフィド結合を介して結合している、抗体フラグメントを意味する。「Ｆ（ａｂ’）２」という用語は、約１００，０００の分子量と抗原結合活性とを有し、ＩｇＧをプロテアーゼのペプシンで処理することによって得られるフラグメントのうち、ヒンジ領域のジスルフィド結合を介して結合したＦａｂよりもわずかに大きい抗体フラグメントを指す。「Ｆａｂ’」という用語は、約５０，０００の分子量と抗原結合活性とを有し、Ｆ（ａｂ’）２のヒンジ領域のジスルフィド結合を切断することによって得られる抗体フラグメントを指す。一本鎖Ｆｖ（「ｓｃＦｖ」）ポリペプチドとは、共有結合したＶＨ：：ＶＬヘテロ二量体のことであり、通常、ペプチドをコードするリンカーによって連結したＶＨコード遺伝子とＶＬコード遺伝子を含む遺伝子融合物から発現される。本発明のヒトｓｃＦｖフラグメントは、好ましくは遺伝子組換え技術を用いることによって、適切なコンホメーションで保持されるＣＤＲを含む。
【００２９】
本発明の抗体は、当該技術分野で公知の任意の技術、例えば、特に限定されないが任意の化学的技術、生物学的技術、遺伝学的技術または酵素的技術などを単独で、または組み合わせて用いることによって作製する。通常、所望の配列のアミノ酸配列がわかっていれば、当業者は、ポリペプチドを産生する標準的な技術によって前記抗体を容易に作製することができる。例えば、周知の固相法を用いて、好ましくは市販のペプチド合成装置（カリフォルニア州フォスターシティのＡｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社が製造する装置など）を用い、製造業者の指示に従って前記抗体を合成することができる。あるいは、本発明の抗体を当該技術分野で周知の組換えＤＮＡ技術によって合成することができる。例えば、抗体をコードするＤＮＡ配列を発現ベクターに組込み、所望の抗体を発現する適切な真核宿主または原核宿主にそのようなベクターを導入してＤＮＡ発現産物として得、そこから周知の技術を用いて抗体を単離することができる。
【００３０】
したがって、本発明のさらなる目的は、本発明による抗体をコードする核酸分子に関する。より詳しくは、核酸分子は、本発明の抗体の重鎖または軽鎖をコードする。より詳しくは、核酸分子は、配列番号３または配列番号４と７０％の同一性を有する核酸配列を含む。
【００３１】
配列番号３  重鎖：ＤＮＡ配列  ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４
ＣＡＧＧＴＣＣＡＡＣＴＧＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＧＧＧＣＴＧＡＧＣＴＧＧＴＧＡＧＧＣＣＴＧＧＧＧＣＴＴＣＡＧＴＧＡＴＧＣＴＧＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＣＴＡＣＡＣＣＴＴＣＡＣＣＡＡＣＴＡＣＴＧＧＡＴＡＡＡＣＴＧＧＧＴＧＡＧＧＣＡＧＡＧＧＣＣＴＧＧＡＣＡＡＧＧＣＣＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴＣＧＧＡＡＡＴＡＴＴＴＡＴＣＣＴＴＣＴＧＡＴＡＧＴＴＡＴＡＣＣＡＡＣＴＡＣＡＡＴＣＡＡＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＡＣＡＡＧＧＣＣＡＣＴＴＴＧＡＣＴＧＴＡＧＡＣＡＡＴＴＣＡＴＣＣＡＧＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＣＡＧＴＴＣＡＧＣＡＧＣＣＣＧＡＣＡＴＣＴＧＡＧＧＡＣＴＣＴＧＣＧＧＴＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＡＣＡＡＧＧＴＴＡＡＣＴＡＣＧＧＴＧＧＧＧＧＣＴＧＧＴＧＣＴＡＴＧＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＴＣＡＡＧＧＡＡＣＣＴＣＡＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
【００３２】
配列番号４  軽鎖：ＤＮＡ配列  ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＡＣＡＡＴＣＴＴＣＡＴＣＣＴＡＣＴＴＧＴＣＴＧＴＡＴＣＴＣＴＡＧＧＡＧＧＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＴＡＣＴＴＧＣＡＡＧＧＣＡＡＧＴＧＡＣＣＡＣＡＴＴＡＡＴＡＡＴＴＧＧＴＴＡＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＡＡＡＴＧＣＴＣＣＴＡＧＧＣＴＣＴＴＡＡＴＡＴＣＴＧＧＴＧＣＡＡＣＣＡＧＴＴＴＧＧＡＡＡＣＴＧＧＧＧＴＴＣＣＴＴＣＡＡＧＡＴＴＴＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＡＡＡＧＧＡＴＴＡＣＡＣＴＣＴＣＡＧＣＡＴＴＴＴＴＡＧＴＣＴＴＣＡＧＡＧＴＧＡＡＧＡＴＧＴＴＧＣＴＡＣＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＡＣＡＧＴＡＴＴＧＧＡＧＴＡＣＴＣＣＡＴＴＣＡＣＧＴＴＣＧＧＣＴＣＧＧＧＧＡＣＡＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＡＡＡＡ
【００３３】
前記核酸は通常、任意の適切なベクター、例えばプラスミド、コスミド、エピソーム、人工染色体、ファージまたはウイルスベクターなどに含めることができるＤＮＡ分子またはＲＮＡ分子である。本明細書で使用される「ベクター」、「クローニングベクター」および「発現ベクター」という用語は、それによってＤＮＡ配列またはＲＮＡ配列（例えば、外来遺伝子）を宿主細胞内に導入して、宿主を形質転換させ、導入配列の発現（例えば、転写および翻訳）を促進することができる媒体を意味する。したがって、本発明のさらなる目的は、本発明の核酸を含むベクターに関する。このようなベクターは、対象に投与したときに前記抗体の発現を引き起こすかまたは指令する調節エレメント、例えばプロモーター、エンハンサー、ターミネーターなどを含み得る。動物細胞用の発現ベクターに使用するプロモーターおよびエンハンサーとしては、ＳＶ４０の初期プロモーターおよびエンハンサー、モロニーマウス白血病ウイルスのＬＴＲプロモーターおよびエンハンサー、免疫グロブリンＨ鎖のプロモーターおよびエンハンサーなどが挙げられる。ヒト抗体Ｃ領域をコードする遺伝子を挿入し発現させることができる限り、任意の動物細胞用の発現ベクターを用いることができる。適切なベクターの例としては、ｐＡＧＥ１０７、ｐＡＧＥ１０３、ｐＨＳＧ２７４、ｐＫＣＲ、ｐＳＧ１ベータｄ２−４などが挙げられる。プラスミドの他の例としては、複製起点を含む複製プラスミドまたは組込みプラスミド、例えばｐＵＣ、ｐｃＤＮＡ、ｐＢＲなどが挙げられる。ウイルスベクターの他の例としては、アデノウイルスベクター、レトロウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクターおよびＡＡＶベクターが挙げられる。このような組換えウイルスは、当該技術分野で公知の技術、例えばパッケージング細胞をトランスフェクトすること、またはヘルパープラスミドもしくはヘルパーウイルスによる一過性トランスフェクションなどによって作製し得る。ウイルスパッケージング細胞の典型的な例としては、ＰＡ３１７細胞、ＰｓｉＣＲＩＰ細胞、ＧＰｅｎｖ＋細胞、２９３細胞などが挙げられる。このような複製欠損組換えウイルスを作製するための詳細なプロトコルは、例えば、国際公開第９５／１４７８５号、同第９６／２２３７８号、米国特許第５，８８２，８７７号、同第６，０１３，５１６号、同第４，８６１，７１９号、同第５，２７８，０５６号および国際公開第９４／１９４７８号に見ることができる。
【００３４】
本発明のさらなる目的は、本発明による核酸および／またはベクターによってトランスフェクトされている、感染している、または形質転換されている宿主細胞に関する。本明細書で使用される「形質転換」という用語は、宿主細胞が、導入された遺伝子または配列を発現して所望の物質、通常、導入された遺伝子または配列がコードするタンパク質または酵素を産生するよう、「外来」（すなわち、外因性または細胞外）の遺伝子、ＤＮＡ配列またはＲＮＡ配列を宿主細胞内に導入することを意味する。導入されたＤＮＡまたはＲＮＡを受け入れて発現する宿主細胞は「形質転換」されている。
【００３５】
本発明の核酸を用いて適切な発現系に本発明の抗体を発現させることができる。「発現系」という用語は、例えばベクターによって運ばれて宿主細胞に導入される外来ＤＮＡによってコードされるタンパク質の発現に適した条件下にある宿主細胞と適合ベクターを意味する。一般的な発現系としては、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）宿主細胞とプラスミドベクター、昆虫宿主細胞とバキュロウイルスベクター、および哺乳動物宿主細胞とベクターが挙げられる。宿主細胞の他の例としては、特に限定されないが、原核細胞（細菌など）および真核細胞（酵母細胞、哺乳動物細胞、昆虫細胞、植物細胞など）が挙げられる。具体的例としては、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、クルイベロミセス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）もしくはサッカロミセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）酵母、哺乳動物細胞株（例えば、Ｖｅｒｏ細胞、ＣＨＯ細胞、３Ｔ３細胞、ＣＯＳ細胞など）ならびに初代培養または確立された哺乳動物細胞培養物（例えば、リンパ芽球、線維芽細胞、胚細胞、上皮細胞、神経細胞、脂肪細胞などから得られるもの）が挙げられる。例としては、マウスＳＰ２／０−Ａｇ１４細胞（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ１５８１）、マウスＰ３Ｘ６３−Ａｇ８．６５３細胞（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ１５８０）、ジヒドロ葉酸還元酵素遺伝子（以降「ＤＨＦＲ遺伝子」と称する）が欠損したＣＨＯ細胞（Ｕｒｌａｕｂ  Ｇら；１９８０）、ラットＹＢ２／３ＨＬ．Ｐ２．Ｇ１１．１６Ａｇ．２０細胞（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ１６６２、以降「ＹＢ２／０細胞」と称する）などが挙げられる。本発明はまた、本発明による抗体を発現する組換え宿主細胞を作製する方法であって、（ｉ）上記の組換え核酸またはベクターをｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏでコンピテント宿主細胞内に導入する段階と、（ｉｉ）得られた組換え宿主細胞をｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏで培養する段階と、（ｉｉｉ）任意選択で、前記抗体を発現および／または分泌する細胞を選択する段階とを含む、方法に関する。このような組換え宿主細胞を本発明の抗体の作製に使用することができる。
【００３６】
本発明の抗体は、従来の免疫グロブリン精製法、例えばプロテインＡ−セファロース、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析またはアフィニティークロマトグラフィーなどによって培養培地から適切に分離される。
【００３７】
いくつかの実施形態では、本発明のヒトキメラ抗体は、既に記載したようにＶＬドメインおよびＶＨドメインをコードする核酸配列を得ることと、ヒト抗体ＣＨおよびヒト抗体ＣＬをコードする遺伝子を有する動物細胞用の発現ベクターにその核酸配列を挿入することによってヒトキメラ抗体発現ベクターを構築することと、その発現ベクターを動物細胞内に導入することによりコード配列を発現させることによって作製し得る。ヒトキメラ抗体のＣＨドメインはヒト免疫グロブリンに属するいずれの領域であってもよいが、ＩｇＧクラスのＣＨドメインが適しており、ＩｇＧクラスに属するサブクラスのいずれか１つ、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４なども使用することができる。また、ヒトキメラ抗体のＣＬはＩｇに属するいずれの領域であってもよく、カッパクラスまたはラムダクラスのＣＬを使用することができる。キメラ抗体の作製方法は、当該技術分野で周知である従来の組換えＤＮＡおよび遺伝子トランスフェクション技術を伴う（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ＳＬ．ら（１９８４）および特許文献の米国特許第５，２０２，２３８号；および同第５，２０４，２４４号を参照されたい）。
【００３８】
本発明のヒト化抗体は、既に記載したようにＣＤＲドメインをコードする核酸配列を得ることと、（ｉ）ヒト抗体のものと同一の重鎖定常領域および（ｉｉ）ヒト抗体のものと同一の軽鎖定常領域をコードする遺伝子を有する動物細胞用の発現ベクターにその核酸配列を挿入することによってヒト化抗体発現ベクターを構築することと、その発現ベクターを動物細胞内に導入することにより遺伝子を発現させることとによって作製し得る。ヒト化抗体発現ベクターは、抗体重鎖をコードする遺伝子と抗体軽鎖をコードする遺伝子が別個のベクター上に存在するタイプのものであっても、両遺伝子が同じベクター上に存在するタイプ（タンデムタイプ）のものであってもよい。ヒト化抗体発現ベクターの構築の容易さ、動物細胞内への導入の容易さ、および動物細胞での抗体のＨ鎖とＬ鎖の発現レベルのバランスを考慮すると、タンデムタイプのヒト化抗体発現ベクターが好ましい。タンデムタイプのヒト化抗体発現ベクターの例としては、ｐＫＡＮＴＥＸ９３（国際公開第９７／１０３５４号）、ｐＥＥ１８などが挙げられる。従来の組換えＤＮＡ技術および遺伝子トランスフェクション技術に基づいてヒト化抗体を作製する方法は当該技術分野で周知である（例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  Ｌ．ら，１９８８；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ  ＭＳ．ら，１９８５を参照されたい）。抗体は、例えばＣＤＲ移植（欧州特許第２３９，４００号；ＰＣＴ国際公開第ＷＯ９１／０９９６７号；米国特許第５，２２５，５３９号；同第５，５３０，１０１号；および同第５，５８５，０８９号）、ベニアリング（ｖｅｎｅｅｒｉｎｇ）またはリサーフェシング（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）（欧州特許第５９２，１０６号；同第５１９，５９６号；Ｐａｄｌａｎ  ＥＡ（１９９１）；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ  ＧＭら（１９９４）；Ｒｏｇｕｓｋａ  ＭＡ．ら（１９９４））およびチェーンシャッフリング（ｃｈａｉｎ  ｓｈｕｆｆｌｉｎｇ）（米国特許第５，５６５，３３２号）を含む当該技術分野で公知の様々な技術を用いてヒト化することができる。このような抗体を調製するための一般的な組換えＤＮＡ技術も公知である（欧州特許出願公開第１２５０２３号および国際特許出願第９６／０２５７６号を参照されたい）。
【００３９】
本発明のＦａｂは、ＡＭＨと特異的に反応する抗体をプロテアーゼのパパインで処理することによって得ることができる。同様に、Ｆａｂは、抗体のＦａｂをコードするＤＮＡを原核細胞発現系または真核細胞発現系用のベクターに挿入すること、およびそのベクターを（必要に応じて）原核生物または真核生物に導入してＦａｂを発現させることによって作製することができる。
【００４０】
本発明のＦ（ａｂ’）２は、ＡＭＨと特異的に反応する抗体をプロテアーゼのペプシンで処理することによって得ることができる。同様に、Ｆ（ａｂ’）２は、下に記載するＦａｂ’をチオエーテル結合またはジスルフィド結合を介して結合させることによって得ることができる。
【００４１】
本発明のＦａｂ’は、ＡＭＨと特異的に反応するＦ（ａｂ’）２を還元剤のジチオスレイトールで処理することによって得ることができる。同様に、Ｆａｂ’は、抗体のＦａｂ’フラグメントをコードするＤＮＡを原核細胞用の発現ベクターまたは真核細胞用の発現ベクターに挿入すること、およびそのベクターを（必要に応じて）原核細胞または真核細胞内に導入してそれを発現させることによって作製することができる。
【００４２】
本発明のｓｃＦｖは、既に記載したように、ＶＨドメインおよびＶＬドメインをコードするｃＤＮＡを得ること、ｓｃＦｖをコードするＤＮＡを構築し、そのＤＮＡを原核細胞用の発現ベクターまたは真核細胞用の発現ベクターに挿入すること、次いで、その発現ベクターを（必要に応じて）原核生物または真核生物内に導入してｓｃＦｖを発現させることによって作製することができる。ヒト化ｓｃＦｖフラグメントの作製には、ＣＤＲ移植と呼ばれる周知の技術を用いてよく、この技術は、ドナーｓｃＦｖフラグメントから相補性決定領域（ＣＤＲ）を選択すること、およびそれを三次元構造が既知であるヒトｓｃＦｖフラグメントフレームワーク上に移植することを伴う（例えば、国際公開第９８／４５３２２号；同第８７／０２６７１号；米国特許第５，８５９，２０５号；同第５，５８５，０８９号；同第４，８１６，５６７号；欧州特許第０１７３４９４号を参照されたい）。
【００４３】
本発明の改変抗体としては、例えば抗体の特性が改善されるよう、ＶＨおよび／またはＶＬ内のフレームワーク残基に改変を施したものが挙げられる。このようなフレームワークの改変は通常、抗体の免疫原性を低下させるために施される。例えば、１つの方法は、１つまたは複数のフレームワーク残基を対応する生殖系列配列に「復帰変異」させることである。より具体的には、体細胞変異を経た抗体は、その抗体が由来する生殖系列配列とは異なるフレームワーク残基を含み得る。このような残基は、抗体のフレームワーク配列とその抗体が由来する生殖系列配列とを比較することによって特定することができる。フレームワーク領域配列をその生殖系列の立体配置に戻すには、体細胞変異を、例えば部位特異的変異誘発またはＰＣＲを介する変異誘発によって、生殖系列配列に「復帰変異させる」ことができる。このような「復帰変異」抗体も本発明に包含されると意図される。また別のタイプのフレームワーク改変では、フレームワーク領域内または場合によっては１つもしくは複数のＣＤＲ領域内の１つまたは複数の残基を変異させてＴ細胞エピトープを除去し、それにより抗体の潜在的免疫原性を低下させることを伴う。この方法は「脱免疫化」とも呼ばれ、Ｃａｒｒらによる米国特許出願公開第２００３０１５３０４３号にさらに詳細に記載されている。
【００４４】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、ヒト重鎖定常領域の配列を含むが、それが結合するＮＫ細胞を枯渇させることはなく、好ましくは抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導するＦｃ部分を含まない。本明細書でミオシン１８Ａ発現細胞に関して使用される「枯渇」という用語は、試料中または対象に存在するミオシン１８Ａ発現細胞の数に負の影響を及ぼすよう死滅させる、除去する、溶解させることができるか、そのような死滅、除去もしくは溶解を誘導することができる工程、方法または化合物を意味する。「Ｆｃドメイン」、「Ｆｃ部分」および「Ｆｃ領域」という用語は、抗体重鎖のＣ末端フラグメント、例えば、ヒトガンマ重鎖のアミノ酸（ａａ）約２３０位からａａ約４５０位まで、もしくは別の種類の抗体重鎖（例えば、ヒト抗体のα、δ、εおよびμ）の対応する配列、またはその天然に存在するアロタイプを指す。特に明記されない限り、本開示全体を通じて、一般に認められている免疫グロブリンのＫａｂａｔアミノ酸番号付けを用いる（ｓｅｅ  Ｋａｂａｔら（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、米国公衆衛生局、国立衛生研究所、ベセスダ、メリーランド州を参照されたい）。いくつかの実施形態では、本発明の抗体は直接的または間接的に、ミオシン１８Ａポリペプチドを発現するＮＫ細胞の枯渇を引き起こすことはない（例えば、ミオシン１８Ａ＋ＮＫ細胞の数の１０％、２０％、５０％、６０％またはそれ超の除去または減少を引き起こすことはない）。いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６）ポリペプチドと実質的に結合することが可能なＦｃドメインを含まない。いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、Ｆｃドメインを欠く（例えば、ＣＨ２ドメインおよび／またはＣＨ３ドメインを欠く）か、またはＩｇＧ２アイソタイプもしくはＩｇＧ４アイソタイプのＦｃドメインを含む。いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ダイアボディ、一本鎖抗体フラグメントまたは複数の異なる抗体フラグメントを含む多重特異性抗体からなるか、またはこれを含む。いくつかの実施形態では、本発明の抗体は毒性部分に連結されていない。いくつかの実施形態では、抗体のＣ２ｑ結合が変化し、および／または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）が減少するかもしくは打ち消されるように、アミノ酸残基から選択される１つまたは複数のアミノ酸を異なるアミノ酸残基に置き換えることができる。この方法については、ｌｄｕｓｏｇｉｅらによる米国特許第６，１９４，５５１号にさらに詳細に記載されている。
【００４５】
本発明が企図する本明細書の抗体の別の改変は、ＰＥＧ化である。抗体をペグ化して、例えば、抗体の生物学的（例えば、血清中）半減期を増大させることができる。抗体をペグ化するには通常、１つまたは複数のＰＥＧ基が抗体または抗体フラグメントと結合する条件下で、抗体またはそのフラグメントをポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、例えばＰＥＧの反応性エステル誘導体またはアルデヒド誘導体などと反応させる。ＰＥＧ化は、反応性ＰＥＧ分子（またはこれに類似した反応性水溶性ポリマー）とのアシル化反応またはアルキル化反応によって実施することができる。本明細書で使用される「ポリエチレングリコール」という用語は、他のタンパク質の誘導体化に用いられているあらゆる形態のＰＥＧ、例えばモノ（ＤＹ１２−ＤＹ１２０）アルコキシ−もしくはアリールオキシ−ポリエチレングリコールまたはポリエチレングリコール−マレイミドなどを包含すると意図される。ある特定の実施形態では、ペグ化する抗体は非グリコシル化抗体である。タンパク質をペグ化する方法は当該技術分野で公知であり、本発明の抗体に適用することができる。例えば、Ｎｉｓｈｉｍｕｒａらによる欧州特許第Ｏ１５４３１６号およびＩｓｈｉｋａｗａらによる欧州特許第０４０１３８４号を参照されたい。
【００４６】
したがって、本明細書の１つの目的は、それを必要とする対象のＮＫ細胞のキラー活性を増強する方法であって、対象に治療有効量の本発明の抗体を投与することを含む方法に関する。
【００４７】
本明細書で使用される「ＮＫ細胞」は、非通常免疫に関与するリンパ球の亜集団を指す。ＮＫ細胞は、特定の特徴および生物学的特性、例えばヒトＮＫ細胞のＣＤ５６および／またはＣＤ１６を含む特異的表面抗原の発現、細胞表面にアルファ／ベータＴＣＲ複合体またはガンマ／デルタＴＣＲ複合体の非存在、「自己」ＭＨＣ／ＨＬＡ抗原を発現しない細胞と結合して特異的細胞溶解機序の活性化によってこれを死滅させる能力、ＮＫ活性化受容体のリガンドを発現する腫瘍細胞または他の疾患細胞を死滅させる能力、ならびに免疫応答を刺激または抑制するサイトカインと呼ばれるタンパク質分子を放出する能力（「ＮＫ細胞のキラー活性」）などによって同定することができる。ＮＫ細胞のあらゆる亜集団もまた、ＮＫ細胞という用語に包含される。本発明の状況においては、「活性な」ＮＫ細胞は、標的細胞を溶解させる、または他の細胞の免疫機能を増強する能力を有するＮＫ細胞を含む生物学的に活性なＮＫ細胞を指す。例えば、「活性な」ＮＫ細胞は、活性化ＮＫ受容体に対するリガンドを発現する、および／またはＮＫ細胞上のＫＩＲによって認識されるＭＨＣ／ＨＬＡ抗原を発現しない細胞を死滅させることができる。
【００４８】
本発明の抗体がＮＫ細胞のキラー活性を増強する能力は、当該技術分野で周知の任意のアッセイによって決定することができる。前記アッセイは通常、ＮＫ細胞を標的細胞（例えば、ＮＫ細胞によって認識され、および／または溶解される標的細胞）と接触させるｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイである。例えば、ＮＫ細胞による特異的溶解を、本発明の抗体と接触させるＮＫ細胞またはＮＫ細胞株と同じエフェクター：標的細胞比で得られる特異的溶解の約２０％より多く増大させる能力、好ましくは少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％またはそれより多く増大させる能力に関して化合物を選択することができる。古典的な細胞傷害アッセイのプロトコルの例は、例えば、Ｐｅｓｓｉｎｏら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ，１９９８，１８８（５）：９５３−９６０；Ｓｉｖｏｒｉら，Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，１９９９．２９：１６５６−１６６６；Ｂｒａｎｄｏら，（２００５）Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．７８：３５９−３７１；Ｅｌ−Ｓｈｅｒｂｉｎｙら，（２００７）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ６７（１８）：８４４４−９；およびＮｏｌｔｅ−’ｔ  Ｈｏｅｎら，（２００７）Ｂｌｏｏｄ  １０９：６７０−６７３）に記載されている。ＮＫ細胞の細胞傷害性は通常、実施例に記載する任意のアッセイによって決定される。ＮＫ細胞の細胞傷害性は、古典的なｉｎ  ｖｉｔｒｏクロム放出細胞傷害性試験によって測定することができる。エフェクター細胞は通常、健常ドナー由来の新鮮なＰＢ−ＮＫである。標的細胞は通常、マウス肥満細胞腫Ｐ８１５細胞またはＥＢＶ感染Ｂ細胞株である。したがって、本発明の抗体が標的細胞（感染細胞、腫瘍細胞、炎症促進性細胞など）に対するＮＫ細胞の反応性もしくは細胞傷害性の増大、ＮＫ細胞の活性化の増大、ＮＫ細胞における活性化マーカー（例えば、ＣＤ１０７発現）および／もしくはＩＦＮガンマ産生の増大、ならびに／またはそのような活性化、反応性、細胞傷害性および／または活性化ＮＫ細胞のｉｎ  ｖｉｖｏでの頻度の増大を引き起こせば、その抗体が選択される。
【００４９】
いくつかの実施形態では、対象は癌または感染疾患に罹患している。したがって、本発明のさらなる目的は、それを必要とする対象の癌または感染症を治療する方法であって、対象に治療有効量の本発明の抗体を投与することを含む方法に関する。
【００５０】
本明細書で使用される「治療」または「治療すること」とは、臨床結果を含む有益な結果または所望の結果を得る方法である。本発明の目的に関して、有益な臨床結果または所望の臨床結果としては、特に限定されないが、以下のうちの１つまたは複数が挙げられる：疾患に起因する１つもしくは複数の症状の軽減、疾患の程度の軽減、疾患の安定化（例えば、疾患の悪化の予防もしくは遅延）、疾患の播種（例えば、転移）の予防もしくは遅延、疾患の再発の予防もしくは遅延、疾患の進行の遅延もしくは緩慢化、病的状態の改善、疾患の寛解（部分寛解または完全寛解）をもたらす、疾患の治療に必要な１つもしくは複数の他の薬剤の減量、疾患進行の遅延、生活の質の向上および／または生存期間の延長。「治療」にはまた、癌の病理学的結果の軽減も包含される。本発明の方法は、治療のこれらの態様のうちのいずれか１つまたは複数を企図する。
【００５１】
本明細書で使用される「癌」という用語は、当該技術分野で一般的な意味を有し、特に限定されないが、固形腫瘍および血液媒介性腫瘍がを含む。癌という用語は、皮膚、組織、器官、骨、軟骨、血液および血管の疾患を含む。「癌」という用語はさらに、原発性癌および転移性癌の両方を包含する。本発明の方法および組成物によって治療され得る癌の例としては、特に限定されないが、膀胱、血液、骨、骨髄、脳、乳房、結腸、食道、胃腸管、歯茎、頭部、腎臓、肝臓、肺、鼻咽頭、頸部、卵巣、前立腺、皮膚、胃、精巣、舌または子宮由来の癌細胞が挙げられる。さらに、癌は、具体的には以下の組織型のものであり得るが、それらに限定されるわけではない：悪性新生物；癌腫；未分化癌腫；巨細胞癌および紡錘細胞癌；小細胞癌；乳頭癌；扁平上皮癌；リンパ上皮癌；基底細胞癌；石灰化上皮癌；移行細胞癌；乳頭状移行上皮癌；腺癌；悪性ガストリノーマ；胆管細胞癌；肝細胞癌；肝細胞癌と胆管細胞癌の混合癌；索状腺癌；腺様嚢胞癌；腺腫性ポリープの腺癌；家族性大腸ポリポーシスの腺癌；固形癌腫；悪性カルチノイド腫瘍；細気管支肺胞腺癌；乳頭状腺癌；色素嫌性癌；好酸性癌；好酸性腺癌；好塩基性癌；明細胞腺癌；顆粒細胞癌；濾胞状腺癌；乳頭状および濾胞状腺癌；非被包性硬化性癌；副腎皮質癌；類内膜癌；皮膚付属器癌；アポクリン腺癌；皮脂腺癌；耳垢腺癌；粘液性類表皮癌；嚢胞腺癌；乳頭状嚢胞腺癌；乳頭状漿液性嚢胞腺癌；粘液性嚢胞腺癌；粘液性腺癌；印環細胞癌；浸潤性導管癌；髄様癌；小葉癌；炎症性癌；乳房パジェット病；腺房細胞癌；腺扁平上皮癌；扁平上皮化生を伴う腺癌；悪性胸腺腫；悪性卵巣間質腫瘍；悪性莢膜細胞腫；悪性顆粒膜細胞腫；悪性アンドロブラストーマ；セルトリ細胞癌；悪性ライディッヒ細胞腫；悪性脂質細胞腫；悪性傍神経節腫；悪性乳房外傍神経節腫；褐色細胞腫；グロムス血管肉腫；悪性メラノーマ；メラニン欠乏性黒色腫；表在拡大型黒色腫；巨大色素性母斑の悪性メラノーマ；類上皮細胞メラノーマ；悪性青色母斑；肉腫；線維肉腫；悪性線維性組織球腫；粘液肉腫；脂肪肉腫；平滑筋肉腫；横紋筋肉腫；胎児性横紋筋肉腫；胞巣状横紋筋肉腫；間質性肉腫；悪性混合腫瘍；ミュラー管混合腫瘍；腎芽腫；肝芽腫；癌肉腫；悪性間葉腫；悪性ブレンナー腫瘍；悪性葉状腫瘍；滑膜肉腫；悪性中皮腫；未分化胚細胞腫；胎児性癌；悪性奇形腫；悪性卵巣甲状腺腫；絨毛癌；悪性中腎腫；血管肉腫；悪性血管内皮腫；カポジ肉腫；悪性血管周皮腫；リンパ管肉腫；骨肉腫；傍骨性骨肉腫；軟骨肉腫；悪性軟骨芽細胞腫；間葉性軟骨肉腫；骨巨細胞腫；ユーイング肉腫；悪性歯原性腫瘍；エナメル上皮歯牙肉腫；悪性エナメル上皮腫；エナメル上皮線維肉腫；悪性松果体腫；脊索腫；悪性神経膠腫；上衣腫；星状細胞腫；原形質性星細胞腫；原線維性星細胞腫；星状芽細胞腫；膠芽腫；乏突起神経膠腫；乏突起膠芽腫；未分化神経外胚葉性腫瘍；小脳肉腫；神経節芽細胞腫；神経芽腫；網膜芽細胞腫；嗅神経原性腫瘍；悪性髄膜腫；神経線維肉腫；悪性神経鞘腫；悪性顆粒細胞腫；悪性リンパ腫；ホジキン病；ホジキンリンパ腫；傍肉芽腫；小リンパ球性悪性リンパ腫；びまん性大細胞型悪性リンパ腫；濾胞性悪性リンパ腫；菌状息肉症；他の特定の非ホジキンリンパ腫；悪性組織球症；多発性骨髄腫；肥満細胞肉腫；免疫増殖性小腸疾患；白血病；リンパ性白血病；形質細胞白血病；赤白血病；リンパ肉腫細胞性白血病；骨髄性白血病；好塩基球性白血病；好酸球性白血病；単球性白血病；肥満細胞白血病；巨核芽球性白血病；骨髄性肉腫；ならびに有毛細胞性白血病。
【００５２】
本明細書で使用される「感染症」という用語には、ウイルス、細菌、原生動物、カビまたは真菌によって引き起こされる任意の感染症が含まれる。いくつかの実施形態では、ウイルス感染症は、アレナウイルス科、アストロウイルス科、ビルナウイルス科、ブロモウイルス科、ブニヤウイルス科、カリシウイルス科、クロステロウイルス科、コモウイルス科、シストウイルス科、フラビウイルス科、フレキシウイルス科、ヘペウイルス、レビウイルス科、ルテオウイルス科、モノネガウイルス目、モザイクウイルス、ニドウイルス目、ノダウイルス科、オルトミクソウイルス科、ピコビルナウイルス、ピコルナウイルス科、ポティウイルス科、レオウイルス科、レトロウイルス科、セキウイルス科、テヌイウイルス、トガウイルス科、トンブスウイルス科、トティウイルス科、ティモウイルス科、ヘパドナウイルス科、ヘルペスウイルス科、パラミクソウイルス科またはパピローマウイルス科のウイルスからなる群より選択される１つまたは複数のウイルスによる感染症を含む。ＲＮＡウイルスの関連する分類学上の科としては、特に限定されないが、アストロウイルス科、ビルナウイルス科、ブロモウイルス科、カリシウイルス科、クロステロウイルス科、コモウイルス科、シストウイルス科、フラビウイルス科、フレキシウイルス科、ヘペウイルス、レビウイルス科、ルテオウイルス科、モノネガウイルス目、モザイクウイルス、ニドウイルス目、ノダウイルス科、オルトミクソウイルス科、ピコビルナウイルス、ピコルナウイルス科、ポティウイルス科、レオウイルス科、レトロウイルス科、セキウイルス科、テヌイウイルス、トガウイルス科、トンブスウイルス科、トティウイルス科およびティモウイルス科のウイルスが挙げられる。いくつかの実施形態では、ウイルス感染症は、アデノウイルス、ライノウイルス、肝炎ウイルス、免疫不全ウイルス、ポリオウイルス、麻疹ウイルス、エボラウイルス、コクサッキーウイルス、ライノウイルス、西ナイルウイルス、痘瘡ウイルス、脳炎ウイルス、黄熱ウイルス、デング熱ウイルス、インフルエンザウイルス（ヒト、トリおよびブタを含む）、ラッサウイルス、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス、フニンウイルス、マチュッポ（ｍａｃｈｕｐｐｏ）ウイルス、グアナリトウイルス、ハンタウイルス、リフトバレー熱ウイルス、ラクロスウイルス、カリフォルニア脳炎ウイルス、クリミア・コンゴ出血熱ウイルス、マールブルグウイルス、日本脳炎ウイルス、キャサヌール森林病ウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、東部ウマ脳炎ウイルス、西部ウマ脳炎ウイルス、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）ウイルス、パラインフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、プンタ・トロウイルス、タカリベウイルス、ピチンデウイルス、アデノウイルス、デング熱ウイルス、インフルエンザＡおよびインフルエンザＢウイルス（ヒト、トリおよびブタを含む）、フニンウイルス、麻疹ウイルス、パラインフルエンザ、ピチンデウイルス、プンタ・トロウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、ライノウイルス、リフトバレー熱、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）ウイルス、タカリベウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、西ナイルおよび黄熱病ウイルス、ダニ媒介脳炎ウイルス、日本脳炎ウイルス、セントルイス脳炎ウイルス、マレー渓谷ウイルス、ポワッサンウイルス、ロシオウイルス、跳躍病ウイルス、バンジウイルス、イルヘウスウイルス、ココベラウイルス、クンジンウイルス、アルファイウイルス、ウシ下痢ウイルスならびにキャサヌール森林病からなる群より選択される１つまたは複数のウイルスによる感染症を含む。本発明に従って治療することができる細菌感染としては、特に限定されないが、以下のものを原因とする感染症が挙げられる：スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）；化膿性連鎖球菌（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）を含むストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）；エンテロコックル（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｌ）；炭疽菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｈｒａｃｉｓ）を含むバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）およびラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）；リステリア（Ｌｉｓｔｅｒｉａ）；ジフテリア菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）；Ｇ．バギナリス（Ｇ．ｖａｇｉｎａｌｉｓ）を含むガードネレラ（Ｇａｒｄｎｅｒｅｌｌａ）；ノカルジア（Ｎｏｃａｒｄｉａ）；ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）；サーモアクチノミセス・ブルガリス（Ｔｈｅｒｍｏａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ  ｖｕｌｇａｒｉｓ）；トレポネルナ（Ｔｒｅｐｏｎｅｒｎａ）；カンプリオバクター（Ｃａｍｐｌｙｏｂａｃｔｅｒ）、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）を含むシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）；レジオネラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ）；淋菌（Ｎ．ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）および髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ）を含むナイセリア（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ）；Ｆ．メニンゴセプティカム（Ｆ．ｍｅｎｉｎｇｏｓｅｐｔｉｃｕｍ）およびＦ．オドラトゥルン（Ｆ．ｏｄｏｒａｔｕｒｎ）を含むフラボバクテリウム（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）；ブルセラ（Ｂｒｕｃｅｌｌａ）；百日咳菌（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｉｓ）およびＢ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）を含むボルデテラ（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ）；大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）を含む大腸菌類（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）；エンテロバクター（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）、Ｓ．マルセセンス（Ｓ．ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ）およびＳ．リクファシエンス（Ｓ．ｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）を含むセラチア（Ｓｅｒｒａｔｉａ）；エドワードシエラ（Ｅｄｗａｒｄｓｉｅｌｌａ）；Ｐ．ミラビリス（Ｐ．ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）およびＰ．ブルガリス（Ｐ．ｖｕｌｇａｒｉｓ）を含むプロテウス（Ｐｒｏｔｅｕｓ）；ストレプトバチルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）；Ｒ．フィケッツフィ（Ｒ．ｆｉｃｋｅｔｔｓｆｉ）を含むリケッチア科（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａｃｅａｅ）、Ｃ．シタッシ（Ｃ．ｐｓｉｔｔａｃｉ）およびＣ．トラコルナティス（Ｃ．ｔｒａｃｈｏｒｎａｔｉｓ）を含むクラミジア（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ）；結核菌（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、Ｍ．イントラセルラーレ（Ｍ．ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ）、Ｍ．フォルイトルゥン（Ｍ．ｆｏｌｌｕｉｔｕｒｎ）、Ｍ．ラプラエ（Ｍ．ｌａｐｒａｅ）、鳥型結核菌（Ｍ．ａｖｉｕｍ）、Ｍ．ボビス（Ｍ．ｂｏｖｉｓ）、Ｍ．アフリカヌム（Ｍ．ａｆｒｉｃａｎｕｍ）、Ｍ．カンサシ（Ｍ．ｋａｎｓａｓｉｉ）、Ｍ．イントラセルラーレ（Ｍ．ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ）およびＭ．レプラエルヌリウム（Ｍ．ｌｅｐｒａｅｒｎｕｒｉｕｍ）を含むマイコバクテリウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）；ならびにノカルジア（Ｎｏｃａｒｄｉａ）。本発明に従って治療し得る原生動物感染症としては、特に限定されないが、リーシュマニア、コクシジウムおよびトリパノソーマによって引き起こされる感染症が挙げられる。感染症の完全なリストは、疾病管理センター（ＣＤＣ）にある国立感染症センター（ＮＣＩＤ）のウェブサイト（ｃｄｃ．ｇｏｖ／ｎｃｉｄｏｄ／ｄｉｓｅａｓｅｓ／のワールドワイドウェブ（ｗｗｗ））に見ることができ、このリストは参照により本明細書に組み込まれる。前記疾患はいずれも、本発明による組成物を用いる治療の候補となる。
【００５３】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、特に肺サーファクタントの欠陥による肺疾患の治療に適している。例えば、肺サーファクタントに量的にも質的にも欠陥があると、新生児呼吸窮迫、成人呼吸窮迫症候群、サーファクタントタンパク質Ｂの先天的欠陥およびアレルギー性喘息に関連する。いくつかの実施形態では、肺サーファクタントの欠陥は、特に特異的免疫が不十分であるか損なわれている状況で、一部の個体の微生物チャレンジに対する感受性の増大の一因となり得る。上記の障害および肺炎のリスクの増大に関連する一部の障害（嚢胞性線維症、喘息、早産児、慢性気管支炎、びまん性肺胞傷害）はほかにも、コレクチン機能の後天的欠損または欠陥に関連し得る。いくつかの実施形態では、肺疾患は、嚢胞性線維症、肺気腫、感染症、炎症性疾患および移植拒絶からなる群より選択される。いくつかの実施形態では、肺疾患は肺感染症である。いくつかの実施形態では、肺感染症は、細菌性肺炎、ウイルス性肺炎または真菌性肺炎である。いくつかの実施形態では、肺のウイルス性疾患は、インフルエンザＡ、ライノウイルス、コロナウイルス、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、水痘、ヒトパルボウイルスＢ１９、パラインフルエンザウイルス１〜３型、サイトメガロウイルス、アデノウイルス、ハンタウイルスおよび風疹からなる群より選択される。いくつかの実施形態では、肺サーファクタントの欠陥に関連する肺疾患に罹患している対象は、免疫不全であるか、肺発達が未熟であるか、高齢であるか、または慢性肺疾患を有する。
【００５４】
本発明はまた、例えば癌を治療するために、本発明の抗体を少なくとも１つのさらなる治療剤と併用して使用する治療応用を提供する。このような投与は、同時投与、個別投与または逐次投与であり得る。同時投与には、薬剤を必要に応じて１つの組成物として、または個別の組成物として投与し得る。さらなる治療剤は通常、治療する障害に適したものである。例示的な治療剤としては、他の抗癌抗体、細胞毒性剤、化学療法剤、抗血管新生剤、抗癌免疫原、細胞周期制御／アポトーシス調節剤、ホルモン調節剤、および以下に記述される他の薬剤が挙げられる。
【００５５】
いくつかの実施形態では、第二の薬剤は、ＮＫ細胞活性化受容体の天然のリガンドまたはミオシン１８Ａ以外のＮＫ細胞活性化受容体に結合して活性化させる抗体である。いくつかの実施形態では、薬剤は、標的細胞（例えば、感染細胞または腫瘍細胞）表面のＮＫ細胞活性化受容体の天然のリガンドの存在を増大させる薬剤である。ＮＫ細胞活性化受容体としては、例えば、ＮＫＧ２Ｄまたは活性化ＫＩＲ受容体（ＫＩＲ２ＤＳ受容体、ＫＩＲ２ＤＳ２、ＫＩＲ２ＤＳ４）が挙げられる。本明細書で使用される「活性化ＮＫ受容体」という用語は、刺激されたとき、ＮＫ活性に関連するとして当該技術分野で公知の任意の特性または活性、例えばサイトカイン（例えば、ＩＦＮ−γおよびＴＮＦ−α）の産生、細胞内遊離カルシウムレベルの増大、例えば本明細書の別の箇所に記載される逆殺細胞アッセイ（ｒｅｄｉｒｅｃｔｅｄ  ｋｉｌｌｉｎｇ  ａｓｓａｙ）での細胞標的化能またはＮＫ細胞増殖刺激能などの測定可能な増大を引き起こす、ＮＫ細胞表面上の任意の分子を指す。「活性化ＮＫ受容体」という用語には、特に限定されないが、活性化型またはＫＩＲタンパク質（例えば、ＫＩＲ２ＤＳタンパク質）、ＮＫＧ２Ｄ、ＩＬ−２Ｒ、ＩＬ−１２Ｒ、ＩＬ−１５Ｒ、ＩＬ−１８ＲおよびＩＬ−２１Ｒが挙げられる。受容体活性化のアゴニストとして作用するリガンドの例としては、例えば、ＩＬ−２ポリペプチド、ＩＬ−１５ポリペプチド、ＩＬ−２１ポリペプチドが挙げられる。いくつかの実施形態では、第二の抗体はＣＤ１３７に特異的である。本明細書で使用される「ＣＤ１３７」という用語は、当該技術分野で一般的な意味を有し、Ｌｙ６３、ＩＬＡまたは４−１ＢＢとも呼ばれ得る。ＣＤ１３７は腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）受容体ファミリーのメンバーである。この受容体ファミリーのメンバーおよびこれと構造的に近縁なリガンドは、多種多様な生理学的過程の重要な調節因子であり、免疫応答の調節に重要な役割を果たしている。ＣＤ１３７は、活性化したＮＫ細胞、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球および単球／マクロファージによって発現される。その遺伝子は、細胞外ドメインに３つのシステインリッチモチーフ（この受容体ファミリーの特徴である）、膜貫通領域、および潜在的リン酸化部位を含む短いＮ末端細胞質部分を有する２５５アミノ酸のタンパク質をコードする。初代培養細胞での発現は厳密に活性化依存性である。受容体のリガンドはＴＮＦＳＦ９である。ヒトＣＤ１３７は、そのリガンドのみに結合することが報告されている。アゴニストとしては、ネイティブリガンド（ＴＮＦＳＦ９）、アプタマー（ＭｃＮａｍａｒａら（２００８）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１  １８：３７６−３８６を参照されたい）および抗体が挙げられる。
【００５６】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体を化学療法剤と併用して使用する。「化学療法剤」という用語は、腫瘍成長の阻害に有効である化合物を指す。化学療法剤の例としては、チオテパおよびシクロスホスファミド（ｃｙｃｌｏｓｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）などのアルキル化剤；ブスルファン、イムプロスルファンおよびピポスルファンなどのスルホン酸アルキル；ベンゾドパ、カルボコン、メツレドパおよびウレドパなどのアジリジン；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスファオラルニド（ｔｒｉｅｔｈｙｌｅｎｅｔｈｉｏｐｈｏｓｐｈａｏｒａｒｎｉｄｅ）およびトリメチロロメラミン（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｏｌｏｍｅｌａｍｉｎｅ）を含むエチレンイミンおよびメチラメラミン（ｍｅｔｈｙｌａｍｅｌａｍｉｎｅ）；アセトゲニン（特にブラタシンおよびブラタシノン）；カルンプトテシン（ｃａｒｎｐｔｏｔｈｅｃｉｎ）（合成アナログトポテカンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ−１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシンおよびビゼレシン合成アナログを含む）；クリプトフィシン（特にクリプトフィシン１およびクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成アナログ、ＫＷ−２１８９およびＣＢＩ−ＴＭＩを含む）；エリュテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチイン；スポンジスタチン；ナイトロジェンマスタード、例えばクロラムブシル、クロルナファジン、コロホスファミド（ｃｈｏｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、エストラルヌスチン（ｅｓｔｒａｒｎｕｓｔｉｎｅ）、イホスファミド、メクロレタミン、塩酸メクロレタミンオキシド、メルファラン、ノベムビシン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタードなど；ニトロスレア（ｎｉｔｒｏｓｕｒｅａ）、例えばカルムスチン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチンなど；抗生物質、例えばエンジイン抗生物質（例えば、カリケアマイシン、特にカリケアマイシン（１１およびカリケアマイシン２１１、例えば、Ａｇｎｅｗ  Ｃｈｅｍ  Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．３３：１８３−１８６（１９９４）を参照されたい；ジネミシンＡを含むジネミシン；エスペラマイシン；ならびにネオカルチノスタチン発色団および関連する色素タンパク質エンジインアンチオビオティッククロモモフォア（ａｎｔｉｏｂｉｏｔｉｃ  ｃｈｒｏｍｏｍｏｐｈｏｒｅ））、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オースラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン（ｃａｒａｂｉｃｉｎ）、カンニノマイシン（ｃａｎｎｉｎｏｍｙｃｉｎ）、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビシン（モルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシンおよびデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダンルビシン（ｉｄａｎｒｂｉｃｉｎ）、マルセロマイシン、マイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラルナイシン（ｎｏｇａｌａｒｎｙｃｉｎ）、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン（ｐｏｔｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）、ピューロマイシン、ケラマイシン、ロドルビシン、ストレプトムグリン（ｓｔｒｅｐｔｏｍｇｒｉｎ）、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシンなど；メトトレキサートおよび５‐フルオロウラシル（５−ＦＵ）などの抗代謝産物；デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサートなどの葉酸アナログ；フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニンなどのプリンアナログ；ピリミジンアナログ、例えばアンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン、５−ＦＵなど；アンドロゲン、例えばカルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトンなど；アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンなどの抗副腎剤；フロリン酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）などの葉酸補充剤；アセグラトン；アルドホスファルニド（ａｌｄｏｐｈｏｓｐｈａｒｎｉｄｅ）グリコシド；アミノレブリン酸；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトラキサート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）；デフォファミン；デメコルシン；ジアジクオン；エルフォルニチン（ｅｌｆｏｒｎｉｔｈｉｎｅ）；酢酸エリプチニウム；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシウレア；レンチナン；ロニダミン；マイタンシンおよびアンサマイトシンなどのマイタンシノイド；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダモール；ニトラクリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ポドフィリン酸；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲンンナニウム（ｓｐｉｒｏｇｅｎｎａｎｉｕｍ）；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２’’−トリクロロトリエチラルニン（ｔｒｉｃｈｌｏｒｏｔｒｉｅｔｈｙｌａｒｎｉｎｅ）；トリコテセン（特にＴ−２毒素、ベラキュリンＡ、ロリジンＡおよびアングイジン）；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロムトール（ｍｉｔｏｂｒｏｍｔｏｌ）；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えば、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ社、プリンストン、ニュージャージー州）およびドキセタキセル（ｄｏｘｅｔａｘｅｌ）（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）、Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ  Ｒｏｒｅｒ社、アントニー、フランス）；クロラムブシル；ゲムシタビン；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；シスプラチンおよびカルボプラチンなどの白金アナログ；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；マイトマイシンＣ；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビン；ナベルビン；ノバントロン；テニポシド；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロン酸；ＣＰＴ−１１；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチル���ルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸；カペシタビン；ならびに上記のもののいずれかの薬学的に許容される塩、酸または誘導体が挙げられる。この定義にはまた、腫瘍に対するホンノン（ｈｏｎｎｏｎｅ）作用を調節または阻害するよう作用する抗ホルモン剤、例えば、例えばタモキシフェン、ラロキシフェン、アロマターゼ阻害４（５）−イミダゾール、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストンおよびトレミフェン（Ｆａｒｅｓｔｏｎ）を含む抗エストロゲン剤；ならびにフルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリドおよびゴセレリンなどの抗アンドロゲン；ならびに上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸または誘導体などが含まれる。
【００５７】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体を標的化癌治療と併用して使用する。標的化癌治療とは、癌の成長、進行および播種に関与する特定の分子（「分子標的」）に干渉することによって癌の成長および播種を遮断する、薬物および他の物質である。標的化癌治療は、「分子標的薬」、「分子標的治療」、「精密医療」またはこれと類似した名称で呼ばれることもある。いくつかの実施形態では、標的化治療は、対象にチロシンキナーゼ阻害剤を投与することからなる。「チロシンキナーゼ阻害剤」という用語は、受容体および／または非受容体チロシンキナーゼの選択的または非選択的阻害剤として作用する様々な治療剤および薬物のいずれかを指す。チロシンキナーゼ阻害剤および関連化合物は当該技術分野で周知であり、米国特許出願公開第２００７／０２５４２９５号（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。当業者には、チロシンキナーゼ阻害剤の関連化合物がチロシンキナーゼ阻害剤の効果を再現すること、例えば、関連化合物がチロシンキナーゼシグナル伝達経路の異なるメンバーに作用して、そのチロシンキナーゼのチロシンキナーゼ阻害剤と同じ効果をもたらすことが理解されよう。本発明の実施形態の方法に使用するのに適したチロシンキナーゼ阻害剤および関連化合物の例としては、特に限定されないが、ダサチニブ（ＢＭＳ−３５４８２５）、ＰＰ２、ＢＥＺ２３５、サラカチニブ、ゲフィチニブ（Ｉｒｅｓｓａ）、スニチニブ（Ｓｕｔｅｎｔ；ＳＵ１１２４８）、エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ；ＯＳＩ−１７７４）、ラパチニブ（ＧＷ５７２０１６；ＧＷ２０１６）、カネルチニブ（ＣＩ１０３３）、セマキシニブ（ＳＵ５４１６）、バタラニブ（ＰＴＫ７８７／ＺＫ２２２５８４）、ソラフェニブ（ＢＡＹ４３−９００６）、イマチニブ（Ｇｌｅｅｖｅｃ；ＳＴＩ５７１）、レフルノミド（ＳＵ１０１）、バンデタニブ（Ｚａｃｔｉｍａ；ＺＤ６４７４）、ＭＫ−２２０６（８−［４−アミノシクロブチル）フェニル］−９−フェニル−１，２，４−トリアゾロ［３，４−ｆ］［１，６］ナフチリジン−３（２Ｈ）−オン塩酸塩）、その誘導体、アナログおよび組合せが挙げられる。本発明に使用するのに適したさらなるチロシンキナーゼ阻害剤およびその関連化合物は、例えば、米国特許出願公開第２００７／０２５４２９５号号、同第米国特許第５，６１８，８２９号、同第５，６３９，７５７号、同第５，７２８，８６８号、同第５，８０４，３９６号、同第６，１００，２５４号、同第６，１２７，３７４号、同第６，２４５，７５９号、同第６，３０６，８７４号、同第６，３１３，１３８号、同第６，３１６，４４４号、同第６，３２９，３８０号、同第６，３４４，４５９号、同第６，４２０，３８２号、同第６，４７９，５１２号、同第６，４９８，１６５号、同第６，５４４，９８８号、同第６，５６２，８１８号、同第６，５８６，４２３号、同第６，５８６，４２４号、同第６，７４０，６６５号、同第６，７９４，３９３号、同第６，８７５，７６７号、同第６，９２７，２９３号および同第６，９５８，３４０号（いずれもその全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。いくつかの実施形態では、チロシンキナーゼ阻害剤は、少なくとも１件の第１相臨床試験、より好ましくは、少なくとも１件の第２相臨床試験、さらにより好ましくは、少なくとも１件の第３相臨床試験の対象となっている、最も好ましくは、少なくとも１つの血液学的適応症または腫瘍学的適応症に対してＦＤＡによる承認を受けている、経口投与される小分子キナーゼ阻害剤である。このような阻害剤の例としては、特に限定されないが、ゲフィチニブ、エルロチニブ、ラパチニブ、カネルチニブ、ＢＭＳ−５９９６２６（ＡＣ−４８０）、ネラチニブ、ＫＲＮ−６３３、ＣＥＰ−１１９８１、イマチニブ、ニロチニブ、ダサチニブ、ＡＺＭ−４７５２７１、ＣＰ−７２４７１４、ＴＡＫ−１６５、スニチニブ、バタラニブ、ＣＰ−５４７６３２、バンデタニブ、ボスチニブ、レスタウルチニブ、タンデュチニブ、ミドスタウリン、エンザスタウリン、ＡＥＥ−７８８、パゾパニブ、アキシチニブ、モタセニブ（Ｍｏｔａｓｅｎｉｂ）、ＯＳＩ−９３０、セディラニブ、ＫＲＮ−９５１、ドビチニブ、セリシクリブ、ＳＮＳ−０３２、ＰＤ−０３３２９９１、ＭＫＣ−Ｉ（Ｒｏ−３１７４５３；Ｒ−４４０）、ソラフェニブ、ＡＢＴ−８６９、ブリバニブ（ＢＭＳ−５８２６６４）、ＳＵ−１４８１３、テラチニブ、ＳＵ−６６６８、（ＴＳＵ−６８）、Ｌ−２１６４９、ＭＬＮ−８０５４、ＡＥＷ−５４１およびＰＤ−０３２５９０１が挙げられる。
【００５８】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体を免疫療法剤と併用して使用する。本明細書で使用される「免疫療法剤」という用語は、癌細胞に対する身体の免疫応答を間接的もしくは直接的に増強し、刺激し、もしくは増大させ、および／または他の抗癌療法の副作用を軽減する化合物、組成物または治療剤を指す。したがって、免疫療法とは、癌細胞に対する免疫系の応答を直接的または間接的に刺激もしくは増強し、および／または他の抗癌剤によって引き起こされ得る副作用を軽減する治療法である。免疫療法は、当該技術分野では免疫学的療法、生物学的療法、生体応答修飾物質療法および生物療法とも呼ばれる。当該技術分野で公知の一般的な免疫療法剤の例としては、特に限定されないが、サイトカイン、癌ワクチン、モノクローナル抗体および非サイトカインアジュバントが挙げられる。あるいは、免疫療法は、ある量の免疫細胞（Ｔ細胞、ＮＫ細胞、樹状細胞、Ｂ細胞など）を対象に投与することからなり得る。免疫治療剤は、非特異的、すなわち、ヒトの身体が癌細胞の増殖および／または播種と闘うためにより有効となるよう免疫系を全般的に強化する非特異的免疫治療剤、または特異的、すなわち、癌細胞そのものを標的とする特異的免疫治療剤であってよく、免疫療法レジメンは、非特異的免疫療法剤と特異的免疫療法剤の使用を組み合わせてもよい。非特異的免疫療法剤とは、免疫系を刺激するか間接的に向上させる物質のことである。非特異的免疫療法剤は、癌治療の主治療として単独で、ならびに主治療に加えて用いられており、この場合、非特異的免疫療法剤は他の治療法（例えば、癌ワクチン）の有効性を増強するアジュバントとして機能する。この後者の状況においては、非特異的免疫療法剤は他の治療法の副作用、例えば特定の化学療法剤によって誘導される骨髄抑制を軽減するよう機能し得る。非特異的免疫療法剤は、重要な免疫系細胞に作用し、サイトカインおよび免疫グロブリンの産生の増大などの二次応答を引き起こし得る。あるいは、薬剤そのものがサイトカインを含み得る。非特異的免疫療法剤は一般に、サイトカインアジュバントまたはサイトカインアジュバントに分類される。多数のサイトカインが、免疫系を強化するよう設計された一般的な非特異的免疫療法として、または他の治療法とともに投与されるアジュバントのいずれかとして癌治療に適用されている。適切なサイトカインとしては、特に限定されないが、インターフェロン、インターロイキンおよびコロニー刺激因子が挙げられる。本発明が企図するインターフェロン（ＩＦＮ）としては、一般的な種類のＩＦＮであるＩＦＮアルファ（ＩＦＮ−α）、ＩＦＮベータ（ＩＦＮ−β）およびＩＦＮガンマ（ＩＦＮ−γ）が挙げられる。ＩＦＮは、例えば、癌の成長速度を低下させること、癌がより正常な挙動を有する細胞へと発達するのを促進すること、および／または癌の抗原産生を増大させて免疫系が癌細胞を認識し破壊しやすくすることによって、癌細胞に直接作用し得る。ＩＦＮはまた、例えば、血管新生を緩慢化すること、免疫系を強化すること、ならびに／またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｔ細胞およびマクロファージを刺激することによって、癌細胞に間接的にも作用し得る。組換えＩＦＮアルファは、Ｒｏｆｅｒｏｎ（Ｒｏｃｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ社）およびＩｎｔｒｏｎ  Ａ（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ社）として市販されている。本発明が企図するインターロイキンとしては、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−１１およびＩＬ−１２が挙げられる。市販の組換えインターロイキンの例としては、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）（ＩＬ−２；Ｃｈｉｒｏｎ社）およびＮｅｕｍｅｇａ（登録商標）（ＩＬ−１２；Ｗｙｅｔｈ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ社）が挙げられる。Ｚｙｍｏｇｅｎｅｔｉｃｓ社（シアトル、ワシントン州）は現時点で組換え型ＩＬ−２１の試験を実施しており、ＩＬ−２１も本発明の併用に使用することが企図される。本発明が企図するコロニー刺激因子（ＣＳＦ）としては、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦまたはフィルグラスチム）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦまたはサルグラモスチム）およびエリスロポエチン（エポエチンアルファ、ダルベポエチン）が挙げられる。１つまたは複数の増殖因子を用いる治療は、従来の化学療法を受けている対象の新たな血液細胞の生成を刺激するために役立ち得る。したがって、ＣＳＦを用いる治療は、化学療法による副作用の軽減に役立ち、より高用量の化学療法剤の使用を可能にし得る。様々な組換えコロニー刺激因子、例えば、Ｎｅｕｐｏｇｅｎ（登録商標）（Ｇ−ＣＳＦ；Ａｍｇｅｎ社）、Ｎｅｕｌａｓｔａ（ペルフィルグラスチム（ｐｅｌｆｉｌｇｒａｓｔｉｍ）；Ａｍｇｅｎ社）、Ｌｅｕｋｉｎｅ（ＧＭ−ＣＳＦ；Ｂｅｒｌｅｘ社）、Ｐｒｏｃｒｉｔ（エリスロポエチン；Ｏｒｔｈｏ  Ｂｉｏｔｅｃｈ社）、Ｅｐｏｇｅｎ（エリスロポエチン；Ａｍｇｅｎ社）、Ａｒｎｅｓｐ（エリトロポエチン（ｅｒｙｔｒｏｐｏｉｅｔｉｎ））が市販されている。本発明の併用組成物および併用投与法はまた、「全細胞」および「養子」免疫療法による方法を含み得る。例えば、このような方法は、免疫系細胞（例えば、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、例えばＣＣ２＋Ｔ細胞および／またはＣＤ８＋Ｔ細胞（例えば、腫瘍特異的抗原および／または遺伝子増強により増大したＴ細胞）、抗体発現Ｂ細胞、または他の抗体産生細胞もしくは抗体提示細胞、樹状細胞（例えば、ＧＭ−ＣＳＦおよび／もしくはＦｌｔ３−ＬなどのＤＣ増大物質と共に培養した樹状細胞、ならびに／または腫瘍関連抗原負荷樹状細胞）、抗腫瘍ＮＫ細胞、いわゆるハイブリッド細胞、またはそれらの組合せの注入あるいは再注入を含み得る。上記の方法および組成物には細胞溶解物も有用であり得る。このような態様に有用であり得る臨床試験中の細胞「ワクチン」としては、Ｃａｎｖａｘｉｎ（商標）、ＡＰＣ−８０１５（Ｄｅｎｄｒｅｏｎ社）、ＨＳＰＰＣ−９６（Ａｎｔｉｇｅｎｉｃｓ社）およびＭｅｌａｃｉｎｅ（登録商標）細胞溶解物が挙げられる。任意選択でミョウバンなどのアジュバントと混合した、癌細胞から排出された抗原およびその混合物（例えば、Ｂｙｓｔｒｙｎら，Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｖｏｌ．７，１８８２−１８８７，Ｊｕｌｙ  ２００１を参照されたい）もまた、上記の方法および併用組成物の成分となり得る。
【００５９】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体を放射線療法と併用して使用する。放射線療法は、患者への放射線照射または付随する放射性医薬品の投与を含み得る。放射線源は、治療する患者に対して外部または内部であり得る（放射線治療は例えば、外照射療法（ＥＢＲＴ）または近接照射療法（ＢＴ）であり得る）。このような方法を実施する際に使用し得る放射性元素としては、例えば、ラジウム、セシウム１３７、イリジウム１９２、アメリシウム２４１、金１９８、コバルト５７、銅６７、テクネチウム９９、ヨウ化物１２３、ヨウ化物１３１およびインジウム１１１が挙げられる。
【００６０】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体を共刺激分子に特異的な抗体と併用して使用する。共刺激分子に特異的な抗体の例としては、特に限定されないが、抗ＣＴＬＡ４抗体（例えば、イピリムマブ）、抗ＰＤ１抗体、抗ＰＤＬ１抗体、抗ＴＩＭＰ３抗体、抗ＬＡＧ３抗体、抗Ｂ７Ｈ３抗体、抗Ｂ７Ｈ４抗体または抗Ｂ７Ｈ６抗体が挙げられる。
【００６１】
いくつかの実施形態では、第二の薬剤は、第二の薬剤が結合する抗原を発現する細胞にＡＤＣＣを介して細胞死を誘導する薬剤である。いくつかの実施形態では、薬剤は、その作用機序が、抗体が結合する細胞に対するＡＤＣＣの誘導を伴う（例えば、ＩｇＧ１アイソタイプまたはＩｇＧ３アイソタイプの）抗体である。ＮＫ細胞はＡＤＣＣの誘導に重要な役割を担っており、そのような第二の薬剤の使用によって、増大したＮＫ細胞の反応性を標的細胞に向けることができる。いくつかの実施形態では、第二の薬剤は、細胞表面抗原、例えば膜抗原に特異的な抗体である。いくつかの実施形態では、第二の抗体は、上に記載した腫瘍抗原（例えば、腫瘍細胞が特異的に発現する分子）、例えばＣＤ２０、ＣＤ５２、ＥｒｂＢ２（またはＨＥＲ２／Ｎｅｕ）、ＣＤ３３、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＭＵＣ−１、ＣＥＡ、ＫＤＲ、αＶβ３など、特にリンパ腫抗原（例えば、ＣＤ２０）に特異的である。したがって、本発明は、腫瘍抗原（１つまたは複数）に対するモノクローナル抗体の抗腫瘍効果を増強する方法も提供する。本発明の方法では、１つまたは複数の腫瘍抗原に対する抗体と本発明の抗体の連続投与によって、ＡＤＣＣ機能が特異的に強化され、それにより標的細胞の殺細胞が増強される。
【００６２】
したがって、さらなる目的は、それを必要とする対象の抗体のＮＫ細胞抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を増強する方法であって、対象に抗体を投与することと、対象に本発明の抗体を投与することとを含む、方法に関する。
【００６３】
本発明のさらなる目的は、それを必要とする対象の癌を治療する方法であって、対象に癌細胞抗原に対して選択的な第一の抗体を投与することと、対象に本発明の抗体を投与することとを含む、方法に関するものである。
【００６４】
多数の抗体が、現時点で癌治療に関して臨床で使用されており、臨床開発の様々な段階にある他の抗体もある。本発明の方法で対象とする抗体は、ＡＤＣＣを介して作用し、通常、腫瘍細胞に対して選択的であるが、当業者には、一部の臨床的に有用な抗体が非腫瘍細胞、例えばＣＤ２０に作用することが理解されよう。Ｂ細胞悪性腫瘍の治療に関して、多数の抗原およびそれに対応するモノクローナル抗体が存在する。よく知られている標的抗原の１つが、Ｂ細胞悪性腫瘍に見られるＣＤ２０である。リツキシマブはＣＤ２０抗原に対するキメラ非コンジュゲートモノクローナル抗体である。ＣＤ２０はＢ細胞の活性化、増殖および分化に重要な機能的役割を担っている。ＣＤ５２抗原は、慢性リンパ球性白血病の治療に適応されるモノクローナル抗体、アレムツズマブの標的となる。ＣＤ２２は、多数の抗体の標的となり、最近、毒素と組み合わせると化学療法抵抗性の有毛細胞白血病に有効であることが明らかにされている。ＣＤ２０を標的とするモノクローナル抗体としてはまた、トシツモマブおよびイブリツモマブが挙げられる。本発明の方法に有用で、固形腫瘍に使用されているモノクローナル抗体としては、特に限定されないが、エドレコロマブおよびトラスツズマブ（ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ）が挙げられる。エドレコロマブは、結腸癌および直腸癌に見られる１７−１Ａ抗原を標的とし、ヨーロッパでは上記の癌を適応症として使用が承認されている。その抗腫瘍効果は、ＡＤＣＣ、ＣＤＣおよび抗イディオタイプネットワークの誘導を介する。トラスツズマブはＨＥＲ−２／ｎｅｕ抗原を標的とする。この抗原は乳癌の２５％〜３５％に見られる。トラスツズマブは、ＨＥＲ−２受容体発現のダウンレギュレーション、ＨＥＲ−２タンパク質を過剰発現するヒト腫瘍細胞の増殖抑制、ＨＥＲ−２タンパク質を発現する腫瘍細胞に対する免疫動員およびＡＤＣＣの増強、ならびに血管新生因子のダウンレギュレーションといった様々な方法で作用すると考えられている。アレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ）は慢性リンパ球性白血病、結腸癌および肺癌の治療に使用され、ゲムツズマブ（Ｍｙｌｏｔａｒｇ）は急性骨髄性白血病の治療に使用され、イブリツモマブ（Ｚｅｖａｌｉｎ）は非ホジキンリンパ腫の治療に使用され、パニツムマブ（Ｖｅｃｔｉｂｉｘ）は結腸癌の治療に使用される。このほか、セツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ）が本発明の方法に使用する対象となる。この抗体は、ＥＧＦ受容体（ＥＧＦＲ）と結合し、結腸癌および頭頸部扁平上皮癌（ＳＣＣＨＮ）を含む固形腫瘍の治療に使用されている。
【００６５】
本明細書で使用される「治療有効量」という用語は、必要な用量および期間で所望の治療結果を得るのに有効な量を指す。本発明の抗体の治療有効量は、個体の病的状態、年齢、性別および体重ならびに本発明の抗体が個体に所望の応答を誘発する能力などの要因によって異なり得る。治療有効量は、治療上有益な効果が抗体または抗体部分のあらゆる毒性作用または有害作用を上回る量でもある。本発明の抗体に関する有効な用量および投与レジメンは、治療する疾患または病態に左右され、当業者によって決定され得る。当該技術分野における通常の技術を有する医師であれば、必要とされる医薬組成物の有効量を容易に決定し処方し得る。例えば、医師は、医薬組成物に使用される本発明の抗体の用量を所望の治療効果を得るのに必要なレベルよりも低いレベル開始し、所望の効果が得られるまで用量を漸増させることができる。本発明の組成物の適切な用量は一般に、特定の投与レジメンに従って治療効果をもたらすのに有効な最低量である化合物のその量である。このような有効量は一般に、上記の要因に左右される。例えば、治療的使用の際の治療有効量は、それが疾患の進行を安定化させる能力によって測定し得る。化合物が癌を抑制する能力は通常、ヒト腫瘍での有効性を予測する動物モデルで評価し得る。あるいは、組成物のこの特性は、化合物が細胞傷害性を誘導する能力を、当業者に公知のｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイによって調べることによって評価。治療有効量の治療用化合物は、腫瘍サイズを縮小対象の症状を改善させ得る。当業者であれば、対象の大きさ、対象の症状の重症度および選択する具体的な組成物または投与経路などの要因に基づいて、そのような量を決定することが可能である。本発明の抗体の例示的で非限定的な治療有効量の範囲は、約０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ、例えば約０．１〜５０ｍｇ／ｋｇなど、例えば約０．１〜２０ｍｇ／ｋｇ、例えば約０．１〜１０ｍｇ／ｋｇなど、例えば約０．５、例えば約０．３ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇまたは約８ｍｇ／ｋｇなどである。本発明の抗体の例示的で非限定的な治療有効量は、０．０２〜１００ｍｇ／ｋｇ、例えば約０．０２〜３０ｍｇ／ｋｇなど、例えば約０．０５〜１０ｍｇ／ｋｇまたは０．１〜３ｍｇ／ｋｇなど、例えば約０．５〜２ｍｇ／ｋｇである。投与は、例えば静脈内投与、筋肉内投与、腹腔内投与または皮下投与であり得、例えば標的部位の近位に実施し得る。上記の治療法および使用法において最適な所望の応答（例えば、治療応答）が得られるよう投与レジメンを調整する。例えば、単回ボーラス投与を実施してよく、または経時的に複数の分割用量を投与してもよく、または治療状況の緊急度に応じて用量を比例的に増減させてもよい。いくつかの実施形態では、治療期間中、例えば所定の時点で、治療の有効性をモニターする。いくつかの実施形態では、疾患領域の可視化によって、または本明細書にさらに記載する他の診断方法によって、例えば、本発明の標識抗体、本発明の抗体に由来するフラグメントもしくはミニ抗体を用いて、例えばＰＥＴ−ＣＴスキャンを１回もしくは複数回実施することによって、有効性をモニターし得る。必要に応じて、有効な１日量の医���組成物を、１日を通して適切な間隔で、任意選択で単位投与剤形の形で別個に投与する２つ、３つ、４つ、５つ、６つまたはそれ以上の部分用量として投与し得る。いくつかの実施形態では、あらゆる望ましくない副作用を最小限に抑えるため、本発明のヒトモノクローナル抗体を２４時間以上などの長時間にわたる緩徐な持続注入によって投与する。有効量の本発明の抗体はまた、毎週、隔週または３週間毎の投与期間を用いて投与し得る。投与期間は、例えば、８週間、１２週間または臨床的進行が確立されるまでに制限し得る。非限定的な例として、本発明による治療は、本発明の抗体の１日量として１日当たり約０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ、例えば０．２ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．９ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、１．１ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１１ｍｇ／ｋｇ、１２ｍｇ／ｋｇ、１３ｍｇ／ｋｇ、１４ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、１６ｍｇ／ｋｇ、１７ｍｇ／ｋｇ、１８ｍｇ／ｋｇ、１９ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２１ｍｇ／ｋｇ、２２ｍｇ／ｋｇ、２３ｍｇ／ｋｇ、２４ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、２６ｍｇ／ｋｇ、２７ｍｇ／ｋｇ、２８ｍｇ／ｋｇ、２９ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、４５ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ、６０ｍｇ／ｋｇ、７０ｍｇ／ｋｇ、８０ｍｇ／ｋｇ、９０ｍｇ／ｋｇまたは１００ｍｇ／ｋｇの量で、治療開始から１日後、２日後、３日後、４日後、５日後、６日後、７日後、８日後、９日後、１０日後、１１日後、１２日後、１３日後、１４日後、１５日後、１６日後、１７日後、１８日後、１９日後、２０日後、２１日後、２２日後、２３日後、２４日後、２５日後、２６日後、２７日後、２８日後、２９日後、３０日後、３１日後、３２日後、３３日後、３４日後、３５日後、３６日後、３７日後、３８日後、３９日後もしくは４０日後のいずれか少なくとも１つ、またはあるいは、治療開始から１週間後、２週間後、３週間後、４週間後、５週間後、６週間後、７週間後、８週間後、９週間後、１０週間後、１１週間後、１２週間後、１３週間後、１４週間後、１５週間後、１６週間後、１７週間後、１８週間後、１９週間後または２０週間後のいずれか少なくとも１つ、あるいはその任意の組合せに、単回用量または２４時間毎、１２時間毎、８時間毎、６時間毎、４時間毎あるいは２時間毎の分割用量を用いて提供され得る。
【００６６】
本発明の抗体は通常、薬学的に許容される担体を含む医薬組成物の形態で対象に投与される。このような組成物に使用し得る薬学的に許容される担体としては、特に限定されないが、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、血清タンパク質、例えばヒト血清アルブミンなど、緩衝剤、例えばリン酸塩など、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物性脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩または電解質、例えば硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩など、コロイドシリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロース系物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリル酸、ロウ、ポリエチレン−ポリオキシプロピレン−ブロックポリマー、ポリエチレングリコールおよび羊毛脂が挙げられる。患者への投与に使用するにあたっては、組成物を患者に投与するために製剤化する。本発明の組成物は、経口的に、非経口的に、吸入スプレーにより、局所的に、直腸内に、経鼻的に、頬側的に、経膣的に、または埋め込みリザーバから投与し得る。本明細書で用いられる技術として、皮下、静脈内、筋肉内、関節内、滑液内、胸骨内、髄腔内、肝内、病巣内および頭蓋内への注射または注入技術が挙げられる。本発明の組成物の滅菌注射剤形は、水性懸濁液または油性懸濁液であり得る。これらの懸濁剤は、当該技術分野で公知の技術に従い、適切な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤を用いて製剤化し得る。滅菌注射用調製物はまた、非経口的に許容される無毒性の希釈剤または溶媒中の滅菌注射溶液または注射懸濁液、例えば１，３−ブタンジオールの溶液であり得る。使用し得る許容される媒体および溶媒は、水、リンガー溶液および等張塩化ナトリウム溶液である。さらに、滅菌不揮発性油は、溶媒または懸濁媒として従来通りに使用される。この目的に関して、合成のモノグリセリドまたはジグリセリドを含む任意の滅菌不揮発性油を使用し得る。注射剤の調製にはオレイン酸およびそのグリセリド誘導体などの脂肪酸が有用であり、オリーブ油またはヒマシ油などの薬学的に許容される天然油、特にそのポリオキシエチル化型も有用である。これらの油溶液または油懸濁液はまた、長鎖アルコールの希釈剤または分散剤、例えば、カルボキシメチルセルロースまたは乳剤および懸濁剤を含む薬学的に許容される剤形の製剤化に一般的に用いられる同様の分散剤などを含有し得る。他の一般的に用いられる界面活性剤、例えば、薬学的に許容される固体剤形、液体剤形、または他の投与剤形の製造に一般的に用いられるＴｗｅｅｎ、Ｓｐａｎ、および他の乳化剤またはバイオアベイラビリティ増強剤などを、製剤化の目的のために使用し得る。本発明の組成物は、特に限定されないがカプセル剤、錠剤、水性懸濁剤または液剤を含む任意の経口的に許容される剤形で経口投与し得る。経口で使用する錠剤の場合、一般的に用いられる担体としてはラクトースおよびコーンスターチが挙げられる。通常、ステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤も添加する。カプセル形態での経口投与に有用な希釈剤としては、例えばラクトースが挙げられる。経口使用に水性懸濁剤が必要な場合、有効成分を乳化剤および懸濁化剤と組み合わせる。必要に応じて、特定の甘味料、香味料または着色剤も添加してもよい。あるいは、経直腸投与する坐剤の形態で本発明の組成物を投与してもよい。坐剤は、薬剤と、室温では固体であるが直腸内温度では液体であるために直腸内で融解して薬物を放出する適切な非刺激性の補形剤とを混合することによって調製することができる。このような材料としては、カカオ脂、ミツロウおよびポリエチレングリコールが挙げられる。本発明の組成物はまた、特に治療標的が、眼球、皮膚または下部腸管の疾患を含む、局所適用によって容易に到達可能な領域または器官を含む場合、局所投与することができる。上記の領域または器官それぞれに関して適切な局所製剤が容易に調製される。局所適用の場合、組成物を、１つまたは複数の担体に懸濁または溶解させた活性成分を含有する適切な軟膏に製剤化し得る。本発明の化合物を局所投与するための担体としては、特に限定されないが、鉱油、流動ワセリン、白色ワセリン、プロピレングリコール、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン化合物、乳化ロウおよび水が挙げられる。あるいは、組成物を、１つまたは複数の薬学的に許容される担体に懸濁または溶解させた活性成分を含有する適切なローションまたはクリームに製剤化することができる。適切な担体としては、特に限定されないが、鉱油、モノステアリン酸ソルビタン、ポリソルベート６０、セチルエステルワックス、セテアリルアルコール、２−オクチルドデカノール、ベンジルアルコールおよび水が挙げられる。下部腸管への局所適用は直腸坐剤製剤（上記を参照されたい）または適切な浣腸製剤で実施することができる。貼付剤も使用してもよい。経鼻エアゾールまたは吸入によって本発明の組成物を投与してもよい。このような組成物は、医薬製剤の分野で周知の技術に従って調製され、ベンジルアルコールまたは他の適切な保存剤、バイオアベイラビリティを増強する吸収促進剤、フッ化炭素および／または他の従来の可溶化剤もしくは分散剤を用い、生理食塩水の溶液として調製し得る。例えば、本発明の医薬組成物中に存在する抗体を１０ｍｇ／ｍＬの濃度で１００ｍｇ（１０ｍＬ）または５００ｍｇ（５０ｍＬ）の使い捨てバイアルに入れて供給することができる。ＩＶ投与の場合、産物を、９．０ｍｇ／ｍＬの塩化ナトリウム、７．３５のｍｇ／ｍＬクエン酸ナトリウム二水和物、０．７ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０および滅菌注射用水を用いて用に製剤化する。ｐＨは６．５に調整する。本発明の医薬組成物中の抗体の例示的な適切な用量範囲は、約１ｍｇ／ｍ２〜５００ｍｇ／ｍ２であり得る。ただし、上記のスケジュールは例示的なものであり、臨床試験で明らかにしなければならない医薬組成物中の特定の抗体の親和性および耐容性を考慮に入れて最適なスケジュールおよびレジメンを適合させ得ることが理解されよう。注射（例えば、筋肉内注射、ｉ．ｖ．注射）用の本発明の医薬組成物は、滅菌緩衝水（例えば、筋肉内注射には１ｍｌ）と約１ｎｇ〜約１００ｍｇ、例えば約５０ｎｇ〜約３０ｍｇ、またはより好ましくは約５ｍｇ〜約２５ｍｇの本発明の抗ミオシン１８Ａ抗体とを含有するよう調製することが可能である。
【００６７】
以下の図面および実施例によって本発明をさらに説明する。ただし、これらの実施例および図面は、決して本発明の範囲を限定するものではないとして解釈されるべきである。
【図面の簡単な説明】
【００６８】
【図１】ヒトＮＫ細胞がミオシン１８Ａの長いアイソフォーム（α）と短いアイソフォーム（β）を発現することを示す図である。Ａ．ＤＹ１２は、ＹＴ２Ｃ２  ＮＫ細胞の表面で固有の２２０〜２４０ｋＤａのタンパク質を認識する。ビオチン化したＹＴ２Ｃ２白血病細胞株をＤＹ１２  ｍＡｂまたは対照ＩｇＧ１（Ｄ６２１２）抗体で免疫沈降させた。西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）コンジュゲートストレプトアビジンで発色させたところ、免疫沈降物が固有の２２０〜２４０ｋＤａの細胞表面タンパク質であることがわかった。Ｂ．ＹＴ２Ｃ２  ＮＫ細胞の表面でＤＹ１２によって認識されるタンパク質の配列は、ミオシン１８Ａの配列に対応している。質量分析（ＭＳ）法によって決定した免疫沈降物のアミノ酸配列。下線部はミオシン１８Ａの配列と共通の配列である。トリプシンペプチドの２３９種類の質量のリストのうち、５９種類がミオシン１８Ａの質量に対応し、対応する理論的質量との差が３６ｐｐｍ未満であった。Ｃ．ＤＹ１２によって認識されるタンパク質は抗ミオシン１８Ａ抗体の標的となる。ＤＹ１２  ｍＡｂまたはＩｇＧ１対照アイソタイプを用いてＹＴ２Ｃ２細胞溶解物を免疫沈降させ、ポリクローナル抗ミオシン１８Ａ抗体を用いて免疫沈降物に免疫ブロッティングを実施した。ＤＹ１２は、ミオシン１８Ａの２３０ｋＤａアイソフォーム（ミオシン１８Ａα、Ｌ−Ｍｙｏ１８Ａ）および１９０ｋＤａアイソフォーム（ミオシン１８Ａβ、Ｓ−Ｍｙｏ１８Ａ）を認識することがわかった。Ｄ．ＤＹ１２は、ヒト末梢血リンパ球の細胞表面でミオシン１８Ａの短いアイソフォームを認識する。健常対象由来の新鮮な末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を溶解させ、ＤＹ１２または対照ＩｇＧ１抗体で免疫沈降させ、抗ミオシン１８Ａポリクローナル抗体、次いでＨＲＰコンジュゲートヤギ抗マウス抗体を用いて免疫ブロッティングを実施した。全ＰＢＭＣ溶解物を陽性対照として用いた。健常対象由来ＰＢＭＣでＤＹ１２により免疫沈降したタンパク質はミオシン１８Ａの短いアイソフォーム（Ｓ−Ｍｙｏ１８Ａ）であった。Ｅ．新鮮なヒト肺溶解物では、ＤＹ１２はミオシン１８Ａの短いアイソフォームおよび長いアイソフォームを認識する。ヒト対象由来の新鮮で健常な肺組織を溶解させ、ＤＹ１２または対照ＩｇＧ１抗体で免疫沈降させ、抗ミオシン１８Ａポリクローナル抗体、次いでＨＲＰコンジュゲートヤギ抗マウス抗体を用いて免疫ブロッティングを実施した。全ＰＢＭＣ溶解物を陽性対照として用いた。ＤＹ１２により免疫沈降したタンパク質はミオシン１８Ａの短いアイソフォームおよび長いアイソフォーム（Ｓ−Ｍｙｏ１８Ａ）であった。
【図２】ミオシン１８Ａの動員によってＮＫ細胞の細胞傷害性が増大することを示す図である。Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ．Ｐ８１５肥満細胞腫細胞株に対するミオシン１８Ａ誘導性逆細胞傷害性。標準的な５１Ｃｒ放出法に従って細胞傷害性アッセイを実施した。エフェクター細胞は、健常ドナーから新たに単離したＰＢ−ＮＫ（Ａ、Ｃ、Ｅ）またはＩＬ−２で活性化した健常ドナー由来ＰＢ−ＮＫ（Ｂ、Ｄ、Ｆ）とした。標的細胞はマウス肥満細胞腫Ｐ８１５細胞とした。Ｐ８１５を、１０μｇ／ｍｌのＤＹ１２または対照ｍＡｂおよび抗ＣＤ３３５（ＮＫｐ４６）または抗ＣＤ３３７（ＮＫｐ３０）とプレインキュベートした。標的細胞１０３個に対する様々なエフェクター細胞：標的細胞（Ｅ：Ｔ）比でのアッセイを３回の反復実験で実施した。Ｇ．ミオシン１８Ａの動員によってヒトＮＫ細胞のリンホカイン活性化キラー活性が増大する。標準的な５１Ｃｒ放出法に従って細胞傷害性アッセイを実施した。エフェクター細胞は、新たにＩＬ−２で活性化した健常ドナー由来ＰＢ−ＮＫとした。標的細胞はエプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）感染Ｂ細胞株とした。標的細胞を１０μｇ／ｍｌのＤＹ１２対照Ｆ（ａｂ’）２または対照Ｆ（ａｂ’）２  Ａｂとプレインキュベートした。標的細胞１０３個に対する様々なエフェクター細胞：標的細胞（Ｅ：Ｔ）比でのアッセイを３回の反復実験で実施した。Ｈ．ミオシン１８Ａの動員によって標的腫瘍細胞の存在下でのＮＫ細胞脱顆粒が増大する。健常ドナーからＰＢ−ＮＫを新たに単離し、濃度１０μｇ／ｍｌのＤＹ１２または対照ＩｇＧ１抗体と１時間インキュベートし、次いで１０μｇ／ｍｌのウサギ抗マウスＩｇＧで架橋したものをエフェクター細胞とした。次いで、標的細胞を様々なエフェクター／標的比で最終体積が１００μｌ／ウェルになるよう加えた。ＰＥ−Ｃｙ７抗ＣＤ１０７ａ抗体の存在下、３７℃で４時間培養した後、細胞を洗浄し、フローサイトメトリーにより生存ＣＤ３−ＣＤ５６＋ＮＫ細胞のＣＤ１０７ａ発現を測定した。
【図３】ミオシン１８Ａによって誘導されるＮＫ細胞の細胞傷害性は４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）依存性である。ＣＤ１３７−ＣＤ１３７Ｌ相互作用をヒトＣＤ１３７Ｌポリクローナル抗体で遮断すると、ＲＡＪＩ細胞の存在下でのＣＤ２４５誘導性のＮＫ細胞脱顆粒が完全に抑えられる。健常ドナーからＰＢ−ＮＫを新たに単離し、濃度１０μｇ／ｍｌのＤＹ１２または対照ＩｇＧ１抗体と１時間インキュベートし、次いで１０μｇ／ｍｌのウサギ抗マウスＩｇＧで架橋したものをエフェクター細胞とした。次いで、１０μｇ／ｍｌのヒトＣＤ１３７Ｌポリクローナル抗体の存在下または非存在下で、標的細胞を様々なエフェクター／標的比で最終体積が１００μｌ／ウェルになるよう加えた。ＰＥ−Ｃｙ７抗ＣＤ１０７ａ抗体の存在下、３７℃で４時間培養した後、細胞を洗浄し、フローサイトメトリーにより生存ＣＤ３−ＣＤ５６＋ＮＫ細胞のＣＤ１０７ａ発現を測定した。
【実施例】
【００６９】
方法
細胞
健常ドナーから採取しヘパリン処置した静脈血からリンパ球分離培地（ＰＡＡ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社／ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｅｕｒｏｐｅ社、ヴェリジー＝ヴィラクブレー、フランス）での密度勾配遠心分離により末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を単離した。ＮＫ細胞単離キットを製造業者の推奨（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ社、ベルギッシュ・グラートバッハ、ドイツ）通りに用いて、磁気細胞分離（ＭＡＣＳ）により末梢血（ＰＢ−ＮＫ）細胞から新鮮なＮＫ細胞を単離した。ＰＢ−ＮＫ細胞の純度は、フローサイトメトリーによる評価で９０％を上回ることが示された。ペニシリン／ストレプトマイシン、Ｌ−グルタミンおよび１０％熱不活化ウシ胎仔血清（ＦＣＳ）（Ｐｅｒｂｉｏ  Ｓｃｉｅｎｃｅ社、ヴィルボン＝シュル＝イヴェット、フランス）を添加したＲｏｓｗｅｌｌ  Ｐａｒｋ  Ｍｅｍｏｒｉａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＲＰＭＩ）１６４０培地でＹＴ２Ｃ２  ＮＫ細胞株（米国マナサスのＡＴＣＣから購入）、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）感染Ｂ細胞株（現地で作製（３４））およびＲＡＪＩ細胞（バーキットリンパ腫Ｂ細胞株、ＡＴＣＣ）を培養した。
【００７０】
ＰＢＭＣによるＣＤ２４５発現のフローサイトメトリー解析
この試験でフローサイトメトリーアッセイに使用したヒト抗原に対するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）は以下の通りであった：抗ＣＤ３、抗ＣＤ４、抗ＣＤ８、抗ＣＤ２０、抗ＣＤ５６、抗ＣＤ２７９（プログラム細胞死（ＰＤ）−１）、抗ＣＤ１９７（Ｃ−Ｃケモカイン受容体７型（ＣＣＲ７））、抗γδ  Ｔ−細胞受容体ｍＡｂ（Ｍｉｌｔｅｎｉｙ社）および抗ＣＤ２４５  ｍＡｂ（ＤＹ１２、マウスＩｇＧ１ｋ、現地で作製）。アイソタイプをマッチさせた無関係なＡｂを陰性対照として用いた。フルオレセインイソチオシアナート（ＦＩＴＣ）、アロフィコシアニン（ＡＰＣ）またはＲ−フィコエリトリン（ＲＰＥ）をコンジュゲートしたヤギ抗マウスＩｇＧまたはＩｇＭ（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ社、ブレア、米国）を二次試薬として用いた。間接免疫蛍光法を用いて細胞の表現型を決定した。簡潔に述べれば、細胞を特異的ｍＡｂと４℃で３０分間インキュベートし、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社、カールスバッド、米国）で２回洗浄し、適切なＦＩＴＣ標識二次ＡｂまたはＲＰＥ標識二次Ａｂとさらにインキュベートした。細胞を洗浄し、ＦＣ５００分析器（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ社）でフローサイトメトリーにより解析した。一部の実験では、フローサイトメトリー解析用に細胞を標識する７２時間前、全ＰＢＭＣを１００ＩＵ／ｍｌの組換えヒトＩＬ−２（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ  Ｆｒａｎｃｅ社、ヌイイ＝シュル＝セーヌ、フランス）で刺激した。
【００７１】
免疫組織化学
ホルマリンで固定し、パラフィンに包埋した健常対象の肺生検試料および末梢血由来ＰＢ−ＮＫのＣＤ２４５発現を、標準的なペルオキシダーゼ法を用いて解析した。ＰＢ−ＮＫを１０ｎｇ／ｍｌの組換えヒトＩＬ−１５と一晩プレインキュベートしたか、またはプレインキュベートしなかった。マウス抗ヒトＣＤ２４５抗体（ＤＹ１２、現地で作製）またはモノクローナルマウス抗ヒトグランザイムＢ（クローンＧｒＢ−７、ＤＡＫＯ社）を一次抗体として用い、次いで、ペルオキシダーゼコンジュゲート抗マウス抗体を用いて、アビジン−ストレプトアビジンペルオキシダーゼ（ＬＳＡＢキット、Ｄａｋｏ社、レ・ジュリス、フランス）で発色させた。次いで、３−アミノ−９−エチルカルバゾール基質を用いてペルオキシダーゼ反応を５〜８分間進行させた。
【００７２】
細胞表面のビオチン化
スルホスクシンイミドビオチン（スルホ−ＮＨＳ−ビオチン、Ｐｉｅｒｃｅ社、ロックフォード、米国）法により細胞をビオチン化した。簡潔に述べれば、細胞をＰＢＳで３回洗浄した後、ＰＢＳおよび１ｍｇ／ｍｌのスルホ−ＮＨＳ−ビオチンに１０×１０６／ｍｌで懸濁させた。４℃で３０分間インキュベートした後、細胞を完全培地で３回洗浄した。
【００７３】
免疫沈降およびウエスタンブロット
ＹＴ２Ｃ２ビオチン化細胞を溶解し、ＤＹ１２またはＤ６２１２対照ＩｇＧ１  Ａｂ、次いでタンパク質Ｇ−セファロースビーズとインキュベートした。沈降したタンパク質を洗浄し、ＳＤＳ−８％ＰＡＧＥにより分離し、ニトロセルロース膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社、ベッドフォード、米国）上にブロットした。０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０を含むＰＢＳ溶液中の５％粉乳によって膜を１時間ブロックし、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）コンジュゲートストレプトアビジンおよび増強化学発光（ＥＣＬ）試薬（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｅｕｒｏｐｅ社）でタンパク質バンドを発色させた。
【００７４】
免疫ブロッティング
ＹＴ２Ｃ２細胞溶解物、新たに単離したヒトＮＫ細胞、または新鮮なヒト肺に、上記のようにＤＹ１２またはＤ６２１２対照Ａｂを用いて免疫沈降を実施した。免疫沈降物を８％ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）によって分離し、ニトロセルロース膜上にブロットし、ウサギポリクローナル抗ミオシン１８Ａ（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｔｅｃｈ  Ｇｒｏｕｐ社、マンチェスター、イギリス）、抗ＳＨＰ２または抗ＰＡＫ２ポリクローナルＡｂ（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社、ビバリー、米国）を用いた免疫ブロット解析に供した。ＨＲＰコンジュゲートヤギ抗ウサギＡｂ（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社、ウエストグローブ、米国）を二次Ａｂとして使用し、ＥＣＬキット（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）を用いて免疫反応性タンパク質を可視化した。全ＹＴ２Ｃ２細胞溶解物を陽性対照として用いた。
【００７５】
質量分析（ＭＳ）
ＤＹ１２  ｍＡｂによる免疫沈降の後、ニトロセルロースから解剖用メスでバンドを切り取った。次いで、既に記載されている（３５、３６）通りに、化学的処理を実施せずにブロット片をＭＳ解析用に処理した。トリプシンでバンドを消化し、ＭＡＬＤＩ  ＴＯＦ／ＴＯＦ  ＡＢＩ４８００（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社、フォスターシティ、米国）を用いてＭＳ解析を実施した。ＭＳ−ＭＡＬＤＩによって得た質量を、Ｅｘｐａｓｙのデータベースおよびソフトウェア［ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｘｐａｓｙ．ｏｒｇ］ならびにローカルなＶｉｓｕａｌ  Ｂａｓｉｃ  ｆｏｒ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ（ＶＢＡ）ソフトウェア（Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ｅｘｃｅｌ、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ社、レドモンド、米国）を用いて解析した。
【００７６】
細胞傷害性アッセイ
標準的な５１Ｃｒ放出法に従って細胞傷害性アッセイを実施した。エフェクター細胞を健常ドナー由来の新鮮なＰＢ−ＮＫとした。標的細胞をマウス肥満細胞腫Ｐ８１５細胞またはＥＢＶ感染Ｂ細胞株とした。標的細胞を、１００μＣｉのＮａ５１ＣｒＯ４で、３７℃で９０分間標識し、１０％ＦＣＳを含有するＲＰＭＩ１６４０培地で３回洗浄した。次いで、標的細胞を９６ウェルＶ底マイクロタイタープレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ  ＢｉｏＯｎｅ社、クールタブフ、フランス）に播種した。
【００７７】
Ｐ８１５細胞株に対する逆細胞傷害性アッセイ（ｒｅｄｉｒｅｃｔｅｄ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  ａｓｓａｙ）では、ＰＢ−ＮＫ細胞を組換えヒトＩＬ−２（１００国際単位（ＩＵ）／ｍｌ）の存在下で７２時間、予め活性化させたか、または活性化させなかった。次いで、Ｐ８１５を１０μｇ／ｍｌのＤＹ１２または対照ｍＡｂおよび抗ＣＤ３３５（ＮＫｐ４６）または抗ＣＤ３３７（ＮＫｐ３０）とプレインキュベートした。標的細胞１０３個に対する様々なエフェクター細胞：標的細胞（Ｅ：Ｔ）比でアッセイを３回の反復実験で実施した。
【００７８】
ＥＢＶ感染Ｂ細胞株に対するリンホカイン活性化キラーアッセイでは、ＰＢ−ＮＫを、１０ｎｇ／ｍｌの組換えヒトＩＬ−１５（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ社）の存在下で２４時間、予め活性化させたか、または活性化させなかった。次いで、ＤＹ１２  ｍＡｂまたは対照ＩｇＧ１抗体（１０μｇ／ｍｌ）の存在下、エフェクター細胞を最終体積１５０μｌ／ウェルで加えた。
【００７９】
３７℃で４時間培養した後、プレートを遠心沈殿させ、各ウェルから細胞上清１００μｌを収集した。ガンマカウンタ（Ｐａｃｋａｒｄ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ  Ｃｏｍｐａｎｙ社、メリデン、米国）を用いて５１Ｃｒ放出を定量化した。特異的溶解の割合を以下の通りに算出した：％特異的溶解＝［（試料のｃｐｍ−自然溶解対照のｃｐｍ）／溶解対照の最大ｃｐｍ−自然溶解対照のｃｐｍ）］×１００。細胞溶解の最大値の１０％超の溶解を有意と見なした。
【００８０】
ＮＫ細胞活性化受容体発現のフローサイトメトリー解析
新たに精製したＮＫ細胞株について、Ｍｙｏ１８Ａを濃度１０μｇ／ｍｌのＤＹ１２または対照ＩｇＧ１抗体で１時間、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで刺激し、洗浄し、１０μｇ／ｍｌのウサギ抗マウスＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社）で架橋した後、ＮＫ細胞活性化受容体の発現を評価した。次いで、細胞を洗浄し、Ｆｉｘａｂｌｅ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ｓｔａｉｎ  ４５０（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社、フランクリンレイクス、米国）ならびに以下のヒト細胞表面抗原に対する抗体、すなわち、ＡＰＣコンジュゲート抗ＣＤ１３７、ＰＥコンジュゲート抗ＮＫＧ２Ｄ、ＦＩＴＣコンジュゲート抗ＤＮＡＸアクセサリー分子１（ＤＮＡＭ−１、ＣＤ２２６）、ＰＥコンジュゲート抗ＣＤ１６０（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社）、ＰＥコンジュゲート抗ＮＫｐ３０（ＣＤ３３７）、抗ＮＫｐ４４（ＣＤ３３６）および抗ＮＫｐ４６（ＣＤ３３５）（Ｂｅｃｋｍａｎ−Ｃｏｕｌｔｅｒ社）で標識した。細胞を洗浄し、Ｃａｎｔｏ  ＩＩ  Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社）で解析した。
【００８１】
標的Ｂ細胞株によるＣＤ１３７Ｌ発現
ＲＡＪＩ細胞株およびＥＢＶ感染Ｂ細胞株（３４）を上記の通りに培養し、洗浄し、フローサイトメトリー解析用にＦｉｘａｂｌｅ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ｓｔａｉｎ  ４５０（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社）およびＰＥコンジュゲート抗ＣＤ１３７Ｌ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社）で染色した。
【００８２】
ＲＡＪＩ、ＥＢＶに対する細胞傷害性およびＣＤ１３７／ＣＤ１３７Ｌ相互作用の遮断
新たに単離したＰＢ−ＮＫ細胞を１０ｎｇ／ｍｌの組換えヒトＩＬ−１５（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ社）の存在下、１２時間培養して予め活性化させたか、または活性化せずに、洗浄し、濃度１０μｇ／ｍｌのＤＹ１２または対照ＩｇＧ１抗体と１時間インキュベートし、再び洗浄し、１０μｇ／ｍｌのウサギ抗マウスＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社）で架橋した。次いで、標的細胞を様々なエフェクター／標的比で最終体積１００μｌ／ウェルになるよう加えた。ＰＥ−Ｃｙ７抗ＣＤ１０７ａ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社）の存在下、３７℃で４時間培養した後、細胞を洗浄し、フローサイトメトリー解析用に調製した。一部の実験では、ヒト４−１ＢＢリガンド／ＴＮＦＳＦ９アフィニティー精製ポリクローナルＡｂ（ＲｎＤ  ｓｙｓｔｅｍｓ社、ミネアポリス、米国）を最終濃度１０μｇ／ｍｌで培養物に加えてＣＤ１３７／ＣＤ１３７Ｌ相互作用を遮断した。
【００８３】
解析
ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを用いてフローサイトメトリー解析を実施した。数値はいずれも平均値で表す。値をその平均値および標準偏差でプロットし、Ｐｒｉｓｍソフトウェア（Ｇｒａｐｈ  Ｐａｄ社）を用いて両側マン・ホイットニーＵ検定により群間で比較し、２試料群の連続変数を比較した。ｐ≦０．０５を統計学的に有意であると見なした。
【００８４】
結果
ヒトＮＫ細胞はミオシン１８Ａの長いアイソフォーム（α）と短いアイソフォーム（β）を発現する
本発明者らは既に、ＣＤ２４５がヒト造血細胞によって発現される表面抗原であり、モノクローナル抗体ＤＹ１２によって認識されることを記載している（３３）。ＣＤ２４５の分子的特徴を明らかにするため、ビオチン化ＹＴ２Ｃ２白血病細胞株をＤＹ１２  ｍＡｂまたは対照ＩｇＧ１抗体を免疫沈降させた。図１Ａに示すように、ＨＲＰコンジュゲートストレプトアビジンで発色させたところ、免疫沈降物が２２０〜２４０ｋＤａの固有の細胞表面タンパク質であることがわかった。この細胞表面タンパク質の特徴をさらに明らかにするため、ニトロセルロースから解剖用メスでバンドを切り取り、トリプシンで処理した後、既に記載されている（３６）通りに質量分析用に処理した。トリプシンペプチドの２３９種類の質量のリストのうち、５９種類がミオシン１８Ａの質量に対応し、対応する理論的質量との差は３６ｐｐｍ未満であった（図１Ｂ）。ＹＴ２Ｃ２細胞株の細胞表面に発現したＣＤ２４５が非定型ミオシン１８Ａであることを裏付けるため、ＤＹ１２  ｍＡｂまたはＩｇＧ１対照アイソタイプを用いてＹＴ２Ｃ２細胞溶解物を免疫沈降させ、ポリクローナル抗ミオシン１８Ａ抗体を用いて免疫沈降物に免疫ブロッティングを実施した。ＤＹ１２は、ミオシン１８Ａの２３０ｋＤａアイソフォーム（ミオシン１８Ａα）および１９０ｋＤａアイソフォーム（ミオシン１８Ａβ）を認識することが示された（図１Ｃ）。したがって、ヒトＹＴ２Ｃ２  ＮＫ細胞株の細胞表面に発現するＣＤ２４５は間違いなくミオシン１８Ａである。ヒト造血細胞にｉｎ  ｖｉｖｏで発現したＣＤ２４５がミオシン１８Ａであるかどうかをさらに検討するため、健常対象由来の新鮮なＰＢＭＣを溶解し、ＤＹ１２または対照ＩｇＧ１抗体で免疫沈降させ、抗ミオシン１８Ａポリクローナル抗体、次いでＨＲＰコンジュゲートヤギ抗マウス抗体を用いて免疫ブロッティングを実施した。全ＰＢＭＣ溶解物を陽性対照として用いた。健常対象由来ＰＢＭＣでＤＹ１２により免疫沈降したタンパク質はミオシン１８Ａの短いアイソフォームであった（図１Ｄ）。結論として、以上の結果は、ヒト造血細胞に発現するＣＤ２４５が非定型ミオシン１８Ａであることを裏付けるものである。ＮＫ細胞はｐ１９０アイソフォームおよびｐ２３０アイソフォームを発現した。ｐ２３０は、ＹＴ２Ｃ２細胞株のＮＫ細胞表面に発現される主要なアイソフォームであることがわかった。これとは対照的に、ヒト全ＰＢＭＣ溶解物にはｐ２３０ではなくｐ１９０が見られた。これらのデータは、ミオシン１８Ａα（ｐ２３０）とミオシン１８Ａβ（ｐ１９０）は細胞内局在が異なり、前者は小胞体およびゴルジ構造体と共局在することをマウスで明らかにしたこれまでの研究（３７）と一致している。本発明者らは、ＤＹ１２がヒト肺のミオシン１８Ａの２つのアイソフォームを認識することを明らかにして、新鮮なヒト肺溶解物に関する上記の結果を裏付けた（図１Ｅ）。
【００８５】
末梢血リンパ球の細胞表面でのミオシン１８Ａ／ＣＤ２４５発現は構成的であり活性化によって増大する
末梢血リンパ球の様々なサブセットについてＭｙｏ１８Ａ／ＣＤ２４５の発現をｉｎ  ｖｉｖｏで検討するため、健常対象由来の生存ＰＢＭＣを単離し、蛍光色素とコンジュゲートしたＤＹ１２  ｍＡｂおよび抗ＣＤ３、抗ＣＤ４、抗ＣＤ８、抗ＣＤ２０、抗ＣＤ５６、抗γδＴＣＲ（Ｔ細胞受容体）ｍＡｂを用いてフローサイトメトリー解析を実施した。末梢血リンパ球のいずれのサブセットも、様々な程度でＭｙｏ１８Ａ／ＣＤ２４５を発現した。ＣＤ３＋Ｔ細胞、γδＴ細胞、ＣＤ５６＋（すなわち、ＮＫ細胞のみならず、数のうえでは少ないがγδＴリンパ球およびＮＫＴ末梢血リンパ球サブセットにも）の大部分およびＣＤ２０＋Ｂ細胞の半数がＭｙｏ１８Ａ／ＣＤ２４５を発現した。ＣＤ２４５発現は、Ｔ細胞、Ｂ細胞およびＣＤ５６ｂｒｉｇｈｔＮＫ細胞に発現されて（３８）リンパ節ホーミングに関与する（３９）ケモカイン受容体であるＣＣＲ７の発現と、程度は少ないものの関連していた。ＣＤ５６ｂｒｉｇｈｔ細胞は、ＣＤ５６ｄｉｍ細胞よりも高レベルでＣＤ２４５を発現した。全ＰＢＭＣをＩＬ−２で活性化させたところ、ほぼすべてのリンパ球がＣＤ２４５を発現した。ＩＬ−２添加後、ＣＤ２４５の平均蛍光強度が３〜８倍に増大した。これとは対照的に、Ｓａｍｔｅｎらは、ミオシン１８Ａを検出することが既に示されているサーファクタントタンパク質Ａ受容体（ＳＰ−Ｒ）−２１０に対するポリクローナル抗体（４０）を用いて、ミオシン１８Ａが末梢血ＣＤ３＋リンパ球のごく小さい画分によって発現されることを明らかにした。ミオシン１８Ａを発現するＣＤ３＋細胞の割合は、結核菌（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）で４８時間刺激したＰＢＭＣで５〜１０倍増大した（４１）。
【００８６】
末梢血ＮＫ細胞上へのミオシン１８Ａ動員によって肥満細胞腫細胞株に対するＮＫ細胞の逆細胞傷害性が増大する
末梢血由来のヒトＮＫ細胞によるＣＤ２４５発現を裏付けるため、健常ドナーから新たに単離したＰＢ−ＮＫのＣＤ２４５発現を、ＤＹ１２  ｍＡｂを用いた免疫組織化学法により評価した。抗グランザイムＢ抗体を陽性対照として用いた。ＰＢ−ＮＫは、定常状態で細胞膜および細胞質内にミオシン１８Ａを発現した。
【００８７】
Ｍｙｏ１８ＡのリガンドであるＳＰ−Ａは、ｉｎ  ｖｉｖｏでＮＫ細胞依存性に抗腫瘍免疫を刺激することがこれまでに示されている（４２）。本発明者らは、Ｍｙｏ１８Ａを刺激することによって腫瘍細胞に対するＮＫ細胞の細胞傷害性を調節することができるかどうかを検討した。図２Ａ、２Ｂ、２Ｃ、２Ｄ、２Ｅ、２Ｆに示されるように、ＤＹ１２単独で刺激したＮＫ細胞は、不良な細胞傷害活性を示した。これとは対照的に、ＤＹ１２刺激によって、Ｐ８１５マウス肥満細胞腫細胞株に対するＮＫｐ４６誘導性細胞傷害性およびＮＫｐ３０誘導性細胞傷害性は大幅に増強された。平均すると、ＤＹ１２による刺激で、ＮＫｐ４６誘導性細胞傷害性およびＮＫｐ３０誘導性細胞傷害性は、新たに単離したＮＫ細胞でそれぞれ６９％および２８３％増大し、ＩＬ−２活性化ＮＫ細胞で７５％および３９％増大した。以上のデータから、ＣＤ２４５は、天然の細胞傷害性受容体によって誘起されるＮＫ細胞抗腫瘍活性の強力な活性化因子であると特定される。
【００８８】
Ｍｙｏ１８Ａ動員によりＩＬ−２活性化ＮＫ細胞のエプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）感染Ｂ細胞に対する細胞傷害性が増大する
（ｉ）ＮＫ細胞は抗ウイルス免疫防御に極めて重要な最前線の役割を果たしていること（５）、（ｉｉ）ヒトＮＫ細胞はミオシン１８Ａを高レベルで発現すること、（ｉｉｉ）ＮＫ細胞ではＩＬ−２によってミオシン１８Ａの細胞表面での発現が誘導されること、および（ｉｖ）ミオシン１８Ａはヒト肺のウイルスクリアランスに関与する（４３）ＳＰ−Ａの受容体である（４０）ことが明らかにされていることから、本発明者らは、Ｍｙｏ１８ＡをＮＫ細胞表面に結合させることによって、そのウイルス感染細胞に対するＩＬ−２活性化キラー活性を調節することが可能であるかどうかを検討した。ＩＬ−２で活性化させた健常対象由来ＰＢ−ＮＫの表面にＭｙｏ１８Ａを結合させたところ、そのＥＢＶ感染Ｂ細胞株に対する細胞傷害活性が平均１１０％（８３〜１５８％）増大した（図２Ｇ）。Ｍｙｏ１８Ａの動員によってＥＢＶ感染Ｂ細胞とＮＫ細胞との間のコンジュゲート形成が有意に増大することはなかった（データ不掲載）が、ＲＡＪＩ細胞存在下でのＰＢ−ＮＫ細胞の脱顆粒は、５０／１の比のときに２５％増大した（図２Ｈ）。以上のデータから、Ｍｙｏ１８ＡがヒトＮＫ細胞のリンホカイン活性化キラー細胞活性および抗ウイルス機能に何らかの役割を果たしていることが示唆される。
【００８９】
ミオシン１８Ａの動員によって誘導されるＮＫ細胞の細胞傷害性は４−１ＢＢ依存性である
ＣＤ２４５の動員がＮＫ細胞の腫瘍細胞株に対する細胞傷害性を増大させる機序に関する理解を深めるため、ＤＹ１２  ｍＡｂまたは対照アイソタイプによるＣＤ２４５結合後の活性化ＮＫ細胞受容体の発現を調べた。ＣＤ２４５動員がＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６およびＮＫＧ２Ｄの発現に有意な変化を引き起こすことはなかった。また、ＤＮＡＭ１の発現にもＣＤ１６０の発現にも有意な影響を及ぼすことはなかった（データ不掲載）。これとは対照的に、ＣＤ２４５刺激によってＣＤ１３７（４．１ＢＢ）の発現が平均９４％（５６〜１５６％）増大した。上に示したように、ＣＤ２４５刺激によってＮＫ細胞のＥＢＶ感染Ｂ細胞株（図２Ｇ）およびＲＡＪＩ  Ｂ細胞（図２Ｈ）に対する細胞傷害性が増大した。Ｂ細胞リンパ腫細胞は、ＣＤ１３７リガンドであるＣＤ１３７Ｌを発現することが既に示されている（４４）。本発明者らは、標的細胞であるＥＢＶ感染Ｂ細胞およびＲＡＪＩ細胞がＣＤ１３７Ｌを発現することを裏付けた。ヒト４−１ＢＢリガンドポリクローナルＡｂでＣＤ１３７−ＣＤ１３７Ｌ相互作用を遮断したところ、ＲＡＪＩ細胞の存在下でのＣＤ２４５誘導性のＮＫ細胞脱顆粒が完全に抑えられた（図３）。これとは対照的に、ＣＤ１３７Ｌ（４−１ＢＢＬ）を発現しないＳｅｚａｒｙ細胞の存在下では、ＤＹ１２によるＮＫ細胞脱顆粒の有意な増大は誘導されなかった（データ不掲載）。まとめると、これらのデータは、ミオシン１８Ａの動員によって誘導されるＮＫ細胞の細胞傷害性が４−１ＢＢ依存性であることを示唆している。
【００９０】
ミオシン１８ＡはＮＫ細胞の活性化および脱顆粒の２つの重要なシグナル伝達物質であるＰＡＫ−２およびＳＨＰ−２と相互作用する
既に示したように、Ｍｙｏ１８Ａの動員によってＮＫ細胞腫瘍の細胞およびウイルス感染細胞株に対する細胞傷害性が増強される。ＮＫ細胞の細胞傷害性は、最初にＮＫ免疫シナプスを生じさせ（１３）、次に細胞溶解性顆粒の極性化およびエキソサイトーシスを可能にする（４５、４６）のに細胞骨格再構築に依存する。Ｍｙｏ１８Ａは、上皮細胞株で細胞骨格再構築に何らかの役割を果たし、ＰＡＫ−２と相互作用することが示されている（４７）。ＣＤ２４５刺激がＮＫ細胞の脱顆粒および標的細胞の溶解を増大させる機序をさらに解明するため、本発明者らは、ＹＴ２Ｃ２  ＮＫ細胞株をＤＹ１２または対照ＩｇＧ１アイソタイプで免疫沈降させ、抗ＰＡＫ２抗体を用いて免疫沈降物に免疫ブロッティングを実施した。全ＹＴ２Ｃ２を陽性対照として用いた。ＰＡＫ２はＹＴ２Ｃ２細胞内のＭｙｏ１８Ａと免疫沈降した。以上のデータは、Ｍｙｏ１８ＡがＮＫ細胞内のＰＡＫ２と相互作用することを初めて示し、ＰＡＫ２キナーゼがＮＫ細胞のＭｙｏ１８Ａ誘導性細胞傷害性のシグナル伝達物質である可能性を示すものである。
【００９１】
既に明らかにされている（３３）通り、ＣＤ２４５は、ＮＫ  ＹＴ２Ｃ２細胞株において自発的なホスファターゼ活性を示すことがわかった。ＮＫ受容体からのシグナル伝達に関与する主要なホスファターゼには、自身のＳＨ２ドメインを介して他のタンパク質上のリン酸化チロシン残基と相互作用するＳｒｃ相同性ドメイン含有ホスファターゼ（ＳＨＰ）がある（３２、４８〜５０）。特にＳＨＰ−２はＮＫ細胞機能を調節する（５０）。そこで本発明者らは、Ｍｙｏ１８ＡがＳＨＰ−２を動員することができるかどうかを検討した。ＹＴ２Ｃ２細胞溶解物をＤＹ１２抗体で免疫沈降させ、さらに抗ＳＨＰ−２  Ａｂを用いて免疫ブロッティングを実施したところ、Ｍｙｏ１８ＡとホスファターゼＳＨＰ−２が会合することが明らかになった。したがって、ＳＨＰ−２はＭｙｏ１８Ａ活性化受容体からのシグナル伝達に関与し得る。
【００９２】
考察
本研究では、末梢血リンパ球に発現するヒト細胞表面抗原の１つであるＣＤ２４５が、細胞骨格の構築およびゴルジ体の出芽に関与する高度に保存されたモーター酵素である非定型ミオシン１８Ａ（Ｍｙｏ１８Ａ）（５１〜５４）であることを特定した。本発明者らは、Ｍｙｏ１８Ａ／ＣＤ２４５が、その細胞表面での発現がＩＬ−２によって誘導される、極めて重要なヒトＮＫ細胞活性化受容体であることを特定した。Ｍｙｏ１８Ａの刺激によってＮＫ細胞の脱顆粒およびウイルス感染細胞および腫瘍Ｂ細胞に対する細胞傷害性を増大させることが可能であった。Ｍｙｏ１８Ａの刺激によってＮＫ細胞表面でのＣＤ１３７発現を誘導することが可能であり、ＮＫ細胞のＭｙｏ１８Ａ誘導性細胞傷害性がＣＤ１３７／ＣＤ１３７Ｌ相互作用に依存することがわかった。最後に、Ｍｙｏ１８Ａは、ＮＫ細胞受容体のシグナル伝達に重要な役割を担うホスファターゼのＳＨＰ−２（５０）および細胞骨格構築を制御するセリン／トレオニンキナーゼのＰＡＫ−２と相互作用することが可能であった。新たに記載されたＮＫ細胞活性化受容体の分子および機能に関する上記の完全に新規のデータには、幅広い応用可能性が秘められている。
【００９３】
非定型ミオシン１８Ａ（Ｍｙｏ１８Ａ）は、モーター酵素のミオシンスーパーファミリーのメンバーである。ミオシンは一般に、ＡＴＰ加水分解を触媒し、Ｆアクチンと結合して運動性を促進する、保存された触媒頭部を含む。最初のミオシンであるＭ２は、筋肉抽出物中に発見され、従来型ミオシンと呼ばれているのに対し、クラス１８を含むそれ以外のクラスは非定型ミオシンと呼ばれている（５５）。ヒトＮＫ細胞では、細胞溶解性顆粒のエキソサイトーシスにミオシン２Ａが必要とされる（５６）。クラス１８ミオシンは、哺乳動物において、上皮細胞の移動（４７）、間質細胞の分化（５７）および腫瘍の抑制（５８〜６０）を含む基本的な組織プロセスに関与している。ヒトおよびマウスでは、ミオシン１８Ａは、α（２３０ｋＤａ）およびβ（１９０ｋＤａ）と呼ばれる２種類のスプライスバリアントとして造血細胞に発現される。ミオシン−１８Ａαは、Ｎ末端にリジンおよびグルタミン酸に富む（ＫＥリッチ）配列を含み、その後にＰＤＺドメインが続いている（３７、５７）。ミオシン−１８ＡβにはＫＥリッチ配列およびＰＤＺドメインがなく、代わりにモーターの上流に短いリーダー配列がある（３７）。両アイソフォームには予想される標準ＩＱカルモジュリン結合モチーフがあり、その後にミオシン２の尾部と類似したコイルドコイル尾部が続いている。Ｍｙｏ１８Ａの第三のアイソフォームであるｐ１１０ミオシンは、マクロファージで同定され、マクロファージコロニー刺激因子１（ＣＳＦ−１）処置によってマクロファージ分化が誘導された後、チロシン残基のリン酸化を介したＭｙｏ１８ＡαまたはＭｙｏ１８Ａβの翻訳後プロセシングにより生じ得る（６１）。細胞レベルでは、ミオシン１８Ａは、上皮細胞において、細胞骨格の構築（５１）、ゴルジ体の出芽（５２、５３）、ならびにＦアクチンおよびゴルジ体リン酸化タンパク質３（ＧＯＬＰＨ３）と会合することによってＤＮＡ損傷によるゴルジ体の分解（５４）に関与するが、ＮＫ細胞でのその具体的な役割は未だ明らかにされていない。
【００９４】
ミオシン１８Ａは、ヒトの肺（６２）、血液（６３）、腸管（６４）および皮膚（６５）に存在するコレクチンであり病原体の排除に関与する（４３）サーファクタントタンパク質Ａ（ＳＰ−Ａ）の受容体であることが報告されている（４０）。ＳＰ−Ａはまた、異種移植マウスモデルの抗腫瘍免疫を強力に刺激することも示されている（４２）。ＳＰ−Ａを形質導入した腫瘍細胞は、ベクター単独で形質導入したものよりも増殖速度が低下した。このＳＰ−Ａの抗腫瘍効果は、ｉｎ  ｖｉｖｏでＮＫ細胞に完全に依存した（４２）が、正確な機序は未だ不明である。本発明者らのデータは、ＳＰ−Ａのｉｎ  ｖｉｖｏでのこの主な抗腫瘍効果が、ＮＫ細胞上でのＳＰ−ＡとＭｙｏ１８Ａとの相互作用を介するとする仮説を裏付ける。
【００９５】
ＮＫ細胞の抗腫瘍機能を調節するモノクローナル抗体の使用は、急速に成長しつつある研究分野の１つである。一方では、癌細胞と、ＮＫ細胞上に存在するＦｃγＲＩＩＩＡ／ＣＤ１６活性化受容体との両方を標的とすることによって抗体依存性細胞傷害を誘導することが可能なモノクローナル抗体は、リンパ腫（６６〜６９）およびヒト癌（７０、７１）の管理に革命をもたらしている。他方では、すべての悪性腫瘍でドラッガブルな標的が特定されているわけではなく、標的が特定されている癌でも治療用抗体を免れるものがある。このような状況では、モノクローナル抗体の有効性を増大させることを狙った戦略が有望である。ＮＫ細胞上に存在するＣＤ１３７（４−１ＢＢ）受容体を刺激することによって、セツキシマブ（２６）、トラスツズマブ（２７）およびリツキシマブ（２８）の有効性を増大させることが可能であることが、ヒト癌のｉｎ  ｖｉｔｒｏモデルおよびｉｎ  ｖｉｖｏモデルの両方で示されている。このような状況で、ＮＫ細胞表面でのＣＤ１３７の発現を調節するモノクローナル抗体、例えば本研究で示したＤＹ１２などを使用すると興味深いであろう。結論として、ＮＫ細胞活性化受容体Ｍｙｏ１８Ａは、ヒトの癌および血液系悪性腫瘍の免疫療法の分野で極めて有望な標的であると思われる。
【００９６】
（参考文献）
本願全体を通じて、本発明に関連する最新技術を様々な参考文献によって説明している。これらの参考文献の開示は参照により本開示に組み込まれる。
１．Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ  ＥＢ，Ｈｅｒｂｅｒｍａｎ  ＲＢ，Ｌｅｖｉｎｅ  ＰＨ，Ｈａｌｔｅｒｍａｎ  ＲＨ，ＭｃＣｏｙ  ＪＬ，Ｗｕｎｄｅｒｌｉｃｈ  ＪＲ．Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｒｅａｃｔｉｏｎｓ  ｔｏ  ｌｅｕｋｅｍｉａ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ａｎｔｉｇｅｎｓ  ｉｎ  ｉｄｅｎｔｉｃａｌ  ｔｗｉｎｓ．Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｊ  Ｉｎｔ  Ｃａｎｃｅｒ．１５  ｍａｉ  １９７２；９（３）：６４８−５８．
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３．Ｋｉｅｓｓｌｉｎｇ  Ｒ，Ｋｌｅｉｎ  Ｅ，Ｐｒｏｓｓ  Ｈ，Ｗｉｇｚｅｌｌ  Ｈ．≪Ｎａｔｕｒａｌ≫  ｋｉｌｌｅｒ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｍｏｕｓｅ．ＩＩ．Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  ｃｅｌｌｓ  ｗｉｔｈ  ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ  ｆｏｒ  ｍｏｕｓｅ  Ｍｏｌｏｎｅｙ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｃｅｌｌｓ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｋｉｌｌｅｒ  ｃｅｌｌ．Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．ｆｅｖｒ  １９７５；５（２）：１１７−２１．
４．Ｔａｋａｓｕｇｉ  Ｍ，Ｍｉｃｋｅｙ  ＭＲ，Ｔｅｒａｓａｋｉ  ＰＩ．Ｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ  ｆｒｏｍ  ｎｏｒｍａｌ  ｐｅｒｓｏｎｓ  ｏｎ  ｃｕｌｔｕｒｅｄ  ｔｕｍｏｒ  ｃｅｌｌｓ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．ｎｏｖ  １９７３；３３（１１）：２８９８−９０２．
５．Ｃｅｒｗｅｎｋａ  Ａ，Ｌａｎｉｅｒ  ＬＬ．Ｎａｔｕｒａｌ  ｋｉｌｌｅｒ  ｃｅｌｌｓ，ｖｉｒｕｓｅｓ  ａｎｄ  ｃａｎｃｅｒ．Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．ｏｃｔ  ２００１；１（１）：４１−９．
６．Ｃａｌｉｇｉｕｒｉ  ＭＡ．Ｈｕｍａｎ  ｎａｔｕｒａｌ  ｋｉｌｌｅｒ  ｃｅｌｌｓ．Ｂｌｏｏｄ．１  ａｏｕｔ  ２００８；１１２（３）：４６１−９．
７．Ｍｏｆｆｅｔｔ−Ｋｉｎｇ  Ａ．Ｎａｔｕｒａｌ  ｋｉｌｌｅｒ  ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  ｐｒｅｇｎａｎｃｙ．Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．ｓｅｐｔ  ２００２；２（９）：６５６−６３．
８．Ｈｅｒｃｅｎｄ  Ｔ，Ｇｒｉｆｆｉｎ  ＪＤ，Ｂｅｎｓｕｓｓａｎ  Ａ，Ｓｃｈｍｉｄｔ  ＲＥ，Ｅｄｓｏｎ  ＭＡ，Ｂｒｅｎｎａｎ  Ａ，ｅｔ  ａｌ．Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｔｏ  ａ  ｈｕｍａｎ  ｎａｔｕｒａｌ  ｋｉｌｌｅｒ  ｃｌｏｎｅ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｗｏ  ｎａｔｕｒａｌ  ｋｉｌｌｅｒ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ａｎｔｉｇｅｎｓ，ＮＫＨ１Ａ  ａｎｄ  ＮＫＨ２，ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ｏｎ  ｓｕｂｓｅｔｓ  ｏｆ  ｌａｒｇｅ  ｇｒａｎｕｌａｒ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．ｍａｒｓ  １９８５；７５（３）：９３２−４３．
９．Ｌａｎｉｅｒ  ＬＬ．Ｕｐ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｔｉｇｈｔｒｏｐｅ：ｎａｔｕｒａｌ  ｋｉｌｌｅｒ  ｃｅｌｌ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ．Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．ｍａｉ  ２００８；９（５）：４９５−５０２．
１０．Ｍｅｌｄｅｒ  ＲＪ，Ｋｏｅｎｉｇ  ＧＣ，Ｗｉｔｗｅｒ  ＢＰ，Ｓａｆａｂａｋｈｓｈ  Ｎ，Ｍｕｎｎ  ＬＬ，Ｊａｉｎ  ＲＫ．Ｄｕｒｉｎｇ  ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ，ｖａｓｃｕｌａｒ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ａｎｄ  ｂａｓｉｃ  ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｒｅｇｕｌａｔｅ  ｎａｔｕｒａｌ  ｋｉｌｌｅｒ  ｃｅｌｌ  ａｄｈｅｓｉｏｎ  ｔｏ  ｔｕｍｏｒ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍ．Ｎａｔ  Ｍｅｄ．ｓｅｐｔ  １９９６；２（９）：９９２−７．
１１．Ｒｉｔｅａｕ  Ｂ，Ｂａｒｂｅｒ  ＤＦ，Ｌｏｎｇ  ＥＯ．Ｖａｖ１  ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ  ｉｓ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ｂｅｔａ２  ｉｎｔｅｇｒｉｎ  ｅｎｇａｇｅｍｅｎｔ  ｏｎ  ｎａｔｕｒａｌ  ｋｉｌｌｅｒ  ｃｅｌｌｓ  ｕｐｓｔｒｅａｍ  ｏｆ  ａｃｔｉｎ  ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ  ａｎｄ  ｌｉｐｉｄ  ｒａｆｔ  ｒｅｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ．Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．４  ａｏｕｔ  ２００３；１９８（３）：４６９−７４．
１２．Ｗａｔｚｌ  Ｃ，Ｌｏｎｇ  ＥＯ．Ｎａｔｕｒａｌ  ｋｉｌｌｅｒ  ｃｅｌｌ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｂｌｏｃｋ  ａｃｔｉｎ  ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｒｅｃｒｕｉｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ２Ｂ４（ＣＤ２４４）ｔｏ  ｌｉｐｉｄ  ｒａｆｔｓ．Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．６  ｊａｎｖ  ２００３；１９７（１）：７７−８５．
１３．Ｄａｖｉｓ  ＤＭ，Ｃｈｉｕ  Ｉ，Ｆａｓｓｅｔｔ  Ｍ，Ｃｏｈｅｎ  ＧＢ，Ｍａｎｄｅｌｂｏｉｍ  Ｏ，Ｓｔｒｏｍｉｎｇｅｒ  ＪＬ．Ｔｈｅ  ｈｕｍａｎ  ｎａｔｕｒａｌ  ｋｉｌｌｅｒ  ｃｅｌｌ  ｉｍｍｕｎｅ  ｓｙｎａｐｓｅ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．２１  ｄｅｃ  １９９９；９６（２６）：１５０６２−７．
１４．Ｆｕｔｔｅｒｅｒ  Ｋ，Ｗｏｎｇ  Ｊ，Ｇｒｕｃｚａ  ＲＡ，Ｃｈａｎ  ＡＣ，Ｗａｋｓｍａｎ  Ｇ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  ｂａｓｉｓ  ｆｏｒ  Ｓｙｋ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ  ｋｉｎａｓｅ  ｕｂｉｑｕｉｔｙ  ｉｎ  ｓｉｇｎａｌ  ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ  ｐａｔｈｗａｙｓ  ｒｅｖｅａｌｅｄ  ｂｙ  ｔｈｅ  ｃｒｙｓｔａｌ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  ｉｔｓ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ＳＨ２  ｄｏｍａｉｎｓ  ｂｏｕｎｄ  ｔｏ  ａ  ｄｕａｌｌｙ  ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｅｄ  ＩＴＡＭ  ｐｅｐｔｉｄｅ．Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．２１  ａｏｕｔ  １９９８；２８１（３）：５２３−３７．
１５．Ｍａｎｄｅｌｂｏｉｍ  Ｏ，Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ  Ｎ，Ｌｅｖ  Ｍ，Ｐａｕｌ  Ｌ，Ａｒｎｏｎ  ＴＩ，Ｂｕｓｈｋｉｎ  Ｙ，ｅｔ  ａｌ．Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈａｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎｓ  ｏｎ  ｖｉｒｕｓ−ｉｎｆｅｃｔｅｄ  ｃｅｌｌｓ  ｂｙ  ＮＫｐ４６  ａｃｔｉｖａｔｅｓ  ｌｙｓｉｓ  ｂｙ  ｈｕｍａｎ  ＮＫ  ｃｅｌｌｓ．Ｎａｔｕｒｅ．２２  ｆｅｖｒ  ２００１；４０９（６８２３）：１０５５−６０．
１６．Ｖｉｔａｌｅ  Ｍ，Ｂｏｔｔｉｎｏ  Ｃ，Ｓｉｖｏｒｉ  Ｓ，Ｓａｎｓｅｖｅｒｉｎｏ  Ｌ，Ｃａｓｔｒｉｃｏｎｉ  Ｒ，Ｍａｒｃｅｎａｒｏ  Ｅ，ｅｔ  ａｌ．ＮＫｐ４４，ａ  ｎｏｖｅｌ  ｔｒｉｇｇｅｒｉｎｇ  ｓｕｒｆａｃｅ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ｂｙ  ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｎａｔｕｒａｌ  ｋｉｌｌｅｒ  ｃｅｌｌｓ，ｉｓ  ｉｎｖｏｌｖｅｄ  ｉｎ  ｎｏｎ−ｍａｊｏｒ  ｈｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ  ｃｏｍｐｌｅｘ−ｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄ  ｔｕｍｏｒ  ｃｅｌｌ  ｌｙｓｉｓ．Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．１５  ｊｕｉｎ  １９９８；１８７（１２）：２０６５−７２．
１７．Ｐｅｎｄｅ  Ｄ，Ｐａｒｏｌｉｎｉ  Ｓ，Ｐｅｓｓｉｎｏ  Ａ，Ｓｉｖｏｒｉ  Ｓ，Ａｕｇｕｇｌｉａｒｏ  Ｒ，Ｍｏｒｅｌｌｉ  Ｌ，ｅｔ  ａｌ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＮＫｐ３０，ａ  ｎｏｖｅｌ  ｔｒｉｇｇｅｒｉｎｇ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｉｎｖｏｌｖｅｄ  ｉｎ  ｎａｔｕｒａｌ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｂｙ  ｈｕｍａｎ  ｎａｔｕｒａｌ  ｋｉｌｌｅｒ  ｃｅｌｌｓ．Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．１５  ｎｏｖ  １９９９；１９０（１０）：１５０５−１６．
１８．Ｂａｕｅｒ  Ｓ，Ｇｒｏｈ  Ｖ，Ｗｕ  Ｊ，Ｓｔｅｉｎｌｅ  Ａ，Ｐｈｉｌｌｉｐｓ  ＪＨ，Ｌａｎｉｅｒ  ＬＬ，ｅｔ  ａｌ．Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＮＫ  ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｂｙ  ＮＫＧ２Ｄ，ａ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｆｏｒ  ｓｔｒｅｓｓ−ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ  ＭＩＣＡ．Ｓｃｉｅｎｃｅ．３０  ｊｕｉｌｌ  １９９９；２８５（５４２８）：７２７−９．
１９．Ｍｏｒｅｔｔａ  Ａ，Ｔａｍｂｕｓｓｉ  Ｇ，Ｂｏｔｔｉｎｏ  Ｃ，Ｔｒｉｐｏｄｉ  Ｇ，Ｍｅｒｌｉ  Ａ，Ｃｉｃｃｏｎｅ  Ｅ，ｅｔ  ａｌ．Ａ  ｎｏｖｅｌ  ｓｕｒｆａｃｅ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ｂｙ  ａ  ｓｕｂｓｅｔ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ＣＤ３−ＣＤ１６＋  ｎａｔｕｒａｌ  ｋｉｌｌｅｒ  ｃｅｌｌｓ．Ｒｏｌｅ  ｉｎ  ｃｅｌｌ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｙｔｏｌｙｔｉｃ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．１  ｍａｒｓ  １９９０；１７１（３）：６９５−７１４．
２０．Ｍｏｒｅｔｔａ  Ａ，Ｂｏｔｔｉｎｏ  Ｃ，Ｐｅｎｄｅ  Ｄ，Ｔｒｉｐｏｄｉ  Ｇ，Ｔａｍｂｕｓｓｉ  Ｇ，Ｖｉａｌｅ  Ｏ，ｅｔ  ａｌ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｆｏｕｒ  ｓｕｂｓｅｔｓ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ＣＤ３−ＣＤ１６＋  ｎａｔｕｒａｌ  ｋｉｌｌｅｒ（ＮＫ）ｃｅｌｌｓ  ｂｙ  ｔｈｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｃｌｏｎａｌｌｙ  ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｅｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｓｕｒｆａｃｅ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ：ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｓｕｂｓｅｔ  ａｓｓｉｇｎｍｅｎｔ  ｏｆ  ＮＫ  ｃｌｏｎｅｓ  ａｎｄ  ａｂｉｌｉｔｙ  ｔｏ  ｍｅｄｉａｔｅ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｌｌｏａｎｔｉｇｅｎ  ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ．Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．１  ｄｅｃ  １９９０；１７２（６）：１５８９−９８．
２１．Ｂｒｏｗｎ  ＭＨ，Ｂｏｌｅｓ  Ｋ，ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｍｅｒｗｅ  ＰＡ，Ｋｕｍａｒ  Ｖ，Ｍａｔｈｅｗ  ＰＡ，Ｂａｒｃｌａｙ  ＡＮ．２Ｂ４，ｔｈｅ  ｎａｔｕｒａｌ  ｋｉｌｌｅｒ  ａｎｄ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ  ｓｕｒｆａｃｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ，ｉｓ  ａ  ｌｉｇａｎｄ  ｆｏｒ  ＣＤ４８．Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．７  ｄｅｃ  １９９８；１８８（１１）：２０８３−９０．
２２．Ｌｅ  Ｂｏｕｔｅｉｌｌｅｒ  Ｐ，Ｂａｒａｋｏｎｙｉ  Ａ，Ｇｉｕｓｔｉｎｉａｎｉ  Ｊ，Ｌｅｎｆａｎｔ  Ｆ，Ｍａｒｉｅ−Ｃａｒｄｉｎｅ  Ａ，Ａｇｕｅｒｒｅ−Ｇｉｒｒ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．Ｅｎｇａｇｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ＣＤ１６０  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｂｙ  ＨＬＡ−Ｃ  ｉｓ  ａ  ｔｒｉｇｇｅｒｉｎｇ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｕｓｅｄ  ｂｙ  ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ  ｎａｔｕｒａｌ  ｋｉｌｌｅｒ（ＮＫ）ｃｅｌｌｓ  ｔｏ  ｍｅｄｉａｔｅ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．２４  ｄｅｃ  ２００２；９９（２６）：１６９６３−８．
２３．Ｂｅｎｓｕｓｓａｎ  Ａ，Ｇｌｕｃｋｍａｎ  Ｅ，ｅｌ  Ｍａｒｓａｆｙ  Ｓ，Ｓｃｈｉａｖｏｎ  Ｖ，Ｍａｎｓｕｒ  ＩＧ，Ｄａｕｓｓｅｔ  Ｊ，ｅｔ  ａｌ．ＢＹ５５  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｄｅｌｉｎｅａｔｅｓ  ｗｉｔｈｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｃｏｒｄ  ｂｌｏｏｄ  ａｎｄ  ｂｏｎｅ  ｍａｒｒｏｗ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ  ｄｉｓｔｉｎｃｔ  ｃｅｌｌ  ｓｕｂｓｅｔｓ  ｍｅｄｉａｔｉｎｇ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  ａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．１３  ｓｅｐｔ  １９９４；９１（１９）：９１３６−４０．
２４．Ｍｅｌｅｒｏ  Ｉ，Ｊｏｈｎｓｔｏｎ  ＪＶ，Ｓｈｕｆｆｏｒｄ  ＷＷ，Ｍｉｔｔｌｅｒ  ＲＳ，Ｃｈｅｎ  Ｌ．ＮＫ１．１  ｃｅｌｌｓ  ｅｘｐｒｅｓｓ  ４−１ＢＢ（ＣＤｗ１３７）ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ａｎｄ  ａｒｅ  ｒｅｑｕｉｒｅｄ  ｆｏｒ  ｔｕｍｏｒ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ｅｌｉｃｉｔｅｄ  ｂｙ  ａｎｔｉ−４−１ＢＢ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５  ｄｅｃ  １９９８；１９０（２）：１６７−７２．
２５．Ｌｉｎ  Ｗ，Ｖｏｓｋｅｎｓ  ＣＪ，Ｚｈａｎｇ  Ｘ，Ｓｃｈｉｎｄｌｅｒ  ＤＧ，Ｗｏｏｄ  Ａ，Ｂｕｒｃｈ  Ｅ，ｅｔ  ａｌ．Ｆｃ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ＣＤ１３７  ｏｎ  ｈｕｍａｎ  ＮＫ  ｃｅｌｌｓ：ｉｎｓｉｇｈｔｓ  ｉｎｔｏ  ≪ａｇｏｎｉｓｔｉｃ≫  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ａｎｔｉ−ＣＤ１３７  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ｂｌｏｏｄ．１  ａｏｕｔ  ２００８；１１２（３）：６９９−７０７．
２６．Ｋｏｈｒｔ  ＨＥ，Ｃｏｌｅｖａｓ  ＡＤ，Ｈｏｕｏｔ  Ｒ，Ｗｅｉｓｋｏｐｆ  Ｋ，Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ  ＭＪ，Ｌｕｎｄ  Ｐ，ｅｔ  ａｌ．Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ＣＤ１３７  ｅｎｈａｎｃｅｓ  ｔｈｅ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  ｃｅｔｕｘｉｍａｂ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．２  ｊｕｉｎ  ２０１４；１２４（６）：２６６８−８２．
２７．Ｋｏｈｒｔ  ＨＥ，Ｈｏｕｏｔ  Ｒ，Ｗｅｉｓｋｏｐｆ  Ｋ，Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ  ＭＪ，Ｓｃｈｅｅｒｅｎ  Ｆ，Ｃｚｅｒｗｉｎｓｋｉ  Ｄ，ｅｔ  ａｌ．Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎａｔｕｒａｌ  ｋｉｌｌｅｒ  ｃｅｌｌｓ  ｗｉｔｈ  ａ  ＣＤ１３７−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｅｎｈａｎｃｅｓ  ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｉｎ  ｘｅｎｏｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  ｍｏｄｅｌｓ  ｏｆ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．１  ｍａｒｓ  ２０１２；１２２（３）：１０６６−７５．
２８．Ｋｏｈｒｔ  ＨＥ，Ｈｏｕｏｔ  Ｒ，Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ  ＭＪ，Ｗｅｉｓｋｏｐｆ  Ｋ，Ａｌｉｚａｄｅｈ  ＡＡ，Ｂｒｏｄｙ  Ｊ，ｅｔ  ａｌ．ＣＤ１３７  ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ  ｅｎｈａｎｃｅｓ  ｔｈｅ  ａｎｔｉｌｙｍｐｈｏｍａ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ａｎｔｉ−ＣＤ２０  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ｂｌｏｏｄ．２４  ｆｅｖｒ  ２０１１；１１７（８）：２４２３−３２．
２９．Ｂｅｎｓｏｎ  ＤＭ，Ｃａｌｉｇｉｕｒｉ  ＭＡ．Ｋｉｌｌｅｒ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ａｎｄ  ｔｕｍｏｒ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｓ．ｆｅｖｒ  ２０１４；２（２）：９９−１０４．
３０．Ｂｒａｕｄ  ＶＭ，Ａｌｌａｎ  ＤＳ，Ｏ’Ｃａｌｌａｇｈａｎ  ＣＡ，Ｓｏｄｅｒｓｔｒｏｍ  Ｋ，Ｄ’Ａｎｄｒｅａ  Ａ，Ｏｇｇ  ＧＳ，ｅｔ  ａｌ．ＨＬＡ−Ｅ  ｂｉｎｄｓ  ｔｏ  ｎａｔｕｒａｌ  ｋｉｌｌｅｒ  ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ，Ｂ  ａｎｄ  Ｃ．Ｎａｔｕｒｅ．１９  ｆｅｖｒ  １９９８；３９１（６６６９）：７９５−９．
３１．Ｃｏｌｏｎｎａ  Ｍ，Ｓａｍａｒｉｄｉｓ  Ｊ．Ｃｌｏｎｉｎｇ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ−ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ＨＬＡ−Ｃ  ａｎｄ  ＨＬＡ−Ｂ  ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ｂｙ  ｈｕｍａｎ  ｎａｔｕｒａｌ  ｋｉｌｌｅｒ  ｃｅｌｌｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ．２１  ａｖｒ  １９９５；２６８（５２０９）：４０５−８．
３２．Ｂｕｒｓｈｔｙｎ  ＤＮ，Ｓｃｈａｒｅｎｂｅｒｇ  ＡＭ，Ｗａｇｔｍａｎｎ  Ｎ，Ｒａｊａｇｏｐａｌａｎ  Ｓ，Ｂｅｒｒａｄａ  Ｋ，Ｙｉ  Ｔ，ｅｔ  ａｌ．Ｒｅｃｒｕｉｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ  ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ  ＨＣＰ  ｂｙ  ｔｈｅ  ｋｉｌｌｅｒ  ｃｅｌｌ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．ｊａｎｖ  １９９６；４（１）：７７−８５．
３３．Ｍａｓｏｎ  Ｔ，Ａｎｄｒｅ  Ｐ，Ｂｅｎｓｕｓｓａｎ  Ａ．Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｔｙｐｉｎｇ  ＶＩＩ．Ｗｈｉｔｅ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  Ａｎｔｉｇｅｎｓ．Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ．２００２．６９２−６９３  ｐ．
３４．Ｇｉｕｓｔｉｎｉａｎｉ  Ｊ，Ｍａｒｉｅ−Ｃａｒｄｉｎｅ  Ａ，Ｂｅｎｓｕｓｓａｎ  Ａ．Ａ  Ｓｏｌｕｂｌｅ  Ｆｏｒｍ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＭＨＣ  Ｃｌａｓｓ  Ｉ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ＣＤ１６０  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｉｓ  Ｒｅｌｅａｓｅｄ  ｆｒｏｍ  Ｈｕｍａｎ  Ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ＮＫ  Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ  ａｎｄ  Ｉｎｈｉｂｉｔｓ  Ｃｅｌｌ−Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２  ｊａｎｖ  ２００７；１７８（３）：１２９３−３００．
３５．Ｄｕｆｒｅｓｎｅ−Ｍａｒｔｉｎ  Ｇ，Ｌｅｍａｙ  Ｊ−Ｆ，Ｌａｖｉｇｎｅ  Ｐ，Ｋｌａｒｓｋｏｖ  Ｋ．Ｐｅｐｔｉｄｅ  ｍａｓｓ  ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｉｎｇ  ｂｙ  ｍａｔｒｉｘ−ａｓｓｉｓｔｅｄ  ｌａｓｅｒ  ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ  ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ  ｍａｓｓ  ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｄｅｔｅｃｔｅｄ  ｂｙ  ｉｍｍｕｎｏｓｔａｉｎｉｎｇ  ｏｎ  ｎｉｔｒｏｃｅｌｌｕｌｏｓｅ．Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ．ｊａｎｖ  ２００５；５（１）：５５−６６．
３６．Ｍａｎｓｕｒ  Ｉ−Ｇ，Ｓｃｈｉａｖｏｎ  Ｖ，Ｇｉｕｓｔｉｎｉａｎｉ  Ｊ，Ｂａｇｏｔ  Ｍ，Ｂｅｎｓｕｓｓａｎ  Ａ，Ｍａｒｉｅ−Ｃａｒｄｉｎｅ  Ａ．Ｅｎｇａｇｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ＩＬ−１  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｃｃｅｓｓｏｒｙ  ｐｒｏｔｅｉｎ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｗｉｔｈ  ｔｈｅ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ＡＹ１９  ｐｒｏｖｉｄｅｓ  ｃｏ−ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ  ｓｉｇｎａｌｓ  ａｎｄ  ｐｒｏｌｏｎｇｓ  ｔｈｅ  ＣＤ２−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｂｌｏｏｄ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｌｅｔｔ．３０  ｓｅｐｔ  ２０１１；１３９（１−２）：５２−７．
３７．Ｍｏｒｉ  Ｋ，Ｆｕｒｕｓａｗａ  Ｔ，Ｏｋｕｂｏ  Ｔ，Ｉｎｏｕｅ  Ｔ，Ｉｋａｗａ  Ｓ，Ｙａｎａｉ  Ｎ，ｅｔ  ａｌ．Ｇｅｎｏｍｅ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｔｗｏ  ｉｓｏｆｏｒｍｓ  ｏｆ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ＰＤＺ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｍｙｏｓｉｎ（ＭｙｓＰＤＺ）（Ｍｙｏ１８Ａ）．Ｊ  Ｂｉｏｃｈｅｍ（Ｔｏｋｙｏ）．ａｖｒ  ２００３；１３３（４）：４０５−１３．
３８．Ｙｕ  Ｊ，Ｍａｏ  ＨＣ，Ｗｅｉ  Ｍ，Ｈｕｇｈｅｓ  Ｔ，Ｚｈａｎｇ  Ｊ，Ｐａｒｋ  Ｉ，ｅｔ  ａｌ．ＣＤ９４  ｓｕｒｆａｃｅ  ｄｅｎｓｉｔｙ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓ  ａ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｒｙ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｔｈｅ  ＣＤ５６ｂｒｉｇｈｔ  ａｎｄ  ＣＤ５６ｄｉｍ  ｈｕｍａｎ  ＮＫ−ｃｅｌｌ  ｓｕｂｓｅｔｓ．Ｂｌｏｏｄ．１４  ｊａｎｖ  ２０１０；１１５（２）：２７４−８１．
３９．Ｓａｅｋｉ  Ｈ，Ｍｏｏｒｅ  ＡＭ，Ｂｒｏｗｎ  ＭＪ，Ｈｗａｎｇ  ＳＴ．Ｃｕｔｔｉｎｇ  Ｅｄｇｅ：Ｓｅｃｏｎｄａｒｙ  Ｌｙｍｐｈｏｉｄ−Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ（ＳＬＣ）ａｎｄ  ＣＣ  Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ７（ＣＣＲ７）Ｐａｒｔｉｃｉｐａｔｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｅｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｐａｔｈｗａｙ  ｏｆ  Ｍａｔｕｒｅ  Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  Ｃｅｌｌｓ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  Ｓｋｉｎ  ｔｏ  Ｒｅｇｉｏｎａｌ  Ｌｙｍｐｈ  Ｎｏｄｅｓ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．３  ｊａｎｖ  １９９９；１６２（５）：２４７２−５．
４０．Ｙａｎｇ  Ｃ−Ｈ，Ｓｚｅｌｉｇａ  Ｊ，Ｊｏｒｄａｎ  Ｊ，Ｆａｓｋｅ  Ｓ，Ｓｅｖｅｒ−Ｃｈｒｏｎｅｏｓ  Ｚ，Ｄｏｒｓｅｔｔ  Ｂ，ｅｔ  ａｌ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ２１０  ａｓ  ｔｈｅ  ｕｎｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌ  ｍｙｏｓｉｎ  １８Ａ．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．１４  ｏｃｔ  ２００５；２８０（４１）：３４４４７−５７．
４１．Ｓａｍｔｅｎ  Ｂ，Ｔｏｗｎｓｅｎｄ  ＪＣ，Ｓｅｖｅｒ−Ｃｈｒｏｎｅｏｓ  Ｚ，Ｐａｓｑｕｉｎｅｌｌｉ  Ｖ，Ｂａｒｎｅｓ  ＰＦ，Ｃｈｒｏｎｅｏｓ  ＺＣ．Ａｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ａｇａｉｎｓｔ  ｔｈｅ  ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａ（ＳＰ−Ａ）−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｄｏｍａｉｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＳＰ−Ａ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  Ｔ  ｃｅｌｌ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｔｏ  Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ．Ｊ  Ｌｅｕｋｏｃ  Ｂｉｏｌ．ｊｕｉｌｌ  ２００８；８４（１）：１１５−２３．
４２．Ｍｉｔｓｕｈａｓｈｉ  Ａ，Ｇｏｔｏ  Ｈ，Ｋｕｒａｍｏｔｏ  Ｔ，Ｔａｂａｔａ  Ｓ，Ｙｕｋｉｓｈｉｇｅ  Ｓ，Ａｂｅ  Ｓ，ｅｔ  ａｌ．Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ  ｂｙ  ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ  ｔｈｅ  ｐｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｕｍｏｒ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ．Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ．ｍａｉ  ２０１３；１８２（５）：１８４３−５３．
４３．ＭｃＮｅｅｌｙ  ＴＢ，Ｃｏｏｎｒｏｄ  ＪＤ．Ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｏｐｓｏｎｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｙｐｅ  Ａ  ｂｕｔ  ｎｏｔ  ｔｙｐｅ  Ｂ  Ｈｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ  ｂｙ  ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａ．Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．ｊｕｉｌｌ  １９９４；１１（１）：１１４−２２．
４４．Ｚｈａｏ  Ｓ，Ｚｈａｎｇ  Ｈ，Ｘｉｎｇ  Ｙ，Ｎａｔｋｕｎａｍ  Ｙ．ＣＤ１３７  ｌｉｇａｎｄ  ｉｓ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ｉｎ  ｐｒｉｍａｒｙ  ａｎｄ  ｓｅｃｏｎｄａｒｙ  ｌｙｍｐｈｏｉｄ  ｆｏｌｌｉｃｌｅｓ  ａｎｄ  ｉｎ  Ｂ−ｃｅｌｌ  ｌｙｍｐｈｏｍａｓ：ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  ａｎｄ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．Ａｍ  Ｊ  Ｓｕｒｇ  Ｐａｔｈｏｌ．ｆｅｖｒ  ２０１３；３７（２）：２５０−８．
４５．Ｒａｋ  ＧＤ，Ｍａｃｅ  ＥＭ，Ｂａｎｅｒｊｅｅ  ＰＰ，Ｓｖｉｔｋｉｎａ  Ｔ，Ｏｒａｎｇｅ  ＪＳ．Ｎａｔｕｒａｌ  ｋｉｌｌｅｒ  ｃｅｌｌ  ｌｙｔｉｃ  ｇｒａｎｕｌｅ  ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ  ｏｃｃｕｒｓ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ａ  ｐｅｒｖａｓｉｖｅ  ａｃｔｉｎ  ｎｅｔｗｏｒｋ  ａｔ  ｔｈｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ｓｙｎａｐｓｅ．ＰＬｏＳ  Ｂｉｏｌ．ｓｅｐｔ  ２０１１；９（９）：ｅ１００１１５１．
４６．Ｂｒｏｗｎ  ＡＣＮ，Ｏｄｄｏｓ  Ｓ，Ｄｏｂｂｉｅ  ＩＭ，Ａｌａｋｏｓｋｅｌａ  Ｊ−Ｍ，Ｐａｒｔｏｎ  ＲＭ，Ｅｉｓｓｍａｎｎ  Ｐ，ｅｔ  ａｌ．Ｒｅｍｏｄｅｌｌｉｎｇ  ｏｆ  ｃｏｒｔｉｃａｌ  ａｃｔｉｎ  ｗｈｅｒｅ  ｌｙｔｉｃ  ｇｒａｎｕｌｅｓ  ｄｏｃｋ  ａｔ  ｎａｔｕｒａｌ  ｋｉｌｌｅｒ  ｃｅｌｌ  ｉｍｍｕｎｅ  ｓｙｎａｐｓｅｓ  ｒｅｖｅａｌｅｄ  ｂｙ  ｓｕｐｅｒ−ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ．ＰＬｏＳ  Ｂｉｏｌ．ｓｅｐｔ  ２０１１；９（９）：ｅ１００１１５２．
４７．Ｈｓｕ  Ｒ−Ｍ，Ｔｓａｉ  Ｍ−Ｈ，Ｈｓｉｅｈ  Ｙ−Ｊ，Ｌｙｕ  Ｐ−Ｃ，Ｙｕ  Ｊ−Ｓ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＭＹＯ１８Ａ  ａｓ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ  ｐａｒｔｎｅｒ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＰＡＫ２／ｂｅｔａＰＩＸ／ＧＩＴ１  ｃｏｍｐｌｅｘ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌ  ｍｉｇｒａｔｉｏｎ．Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  Ｃｅｌｌ．１５  ｊａｎｖ  ２０１０；２１（２）：２８７−３０１．
４８．Ｓｔｅｂｂｉｎｓ  ＣＣ，Ｗａｔｚｌ  Ｃ，Ｂｉｌｌａｄｅａｕ  ＤＤ，Ｌｅｉｂｓｏｎ  ＰＪ，Ｂｕｒｓｈｔｙｎ  ＤＮ，Ｌｏｎｇ  ＥＯ．Ｖａｖ１  ｄｅｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ  ｂｙ  ｔｈｅ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ  ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ  ＳＨＰ−１  ａｓ  ａ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｆｏｒ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ．Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．ｓｅｐｔ  ２００３；２３（１７）：６２９１−９．
４９．Ｍａｈｍｏｏｄ  Ｓ，Ｋａｎｗａｒ  Ｎ，Ｔｒａｎ  Ｊ，Ｚｈａｎｇ  Ｍ−Ｌ，Ｋｕｎｇ  ＳＫＰ．ＳＨＰ−１  ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ  ｉｓ  ａ  ｃｒｉｔｉｃａｌ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒ  ｉｎ  ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ  ｎａｔｕｒａｌ  ｋｉｌｌｅｒ  ｃｅｌｌ  ｓｅｌｆ−ｋｉｌｌｉｎｇ．ＰｌｏＳ  Ｏｎｅ．２０１２；７（８）：ｅ４４２４４．
５０．Ｐｕｒｄｙ  ＡＫ，Ｃａｍｐｂｅｌｌ  ＫＳ．ＳＨＰ−２  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｎｅｇａｔｉｖｅｌｙ  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ＮＫ  ｃｅｌｌ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｂａｌｔｉｍ  Ｍｄ  １９５０．１  ｄｅｃ  ２００９；１８３（１１）：７２３４−４３．
５１．Ｔａｆｔ  ＭＨ，Ｂｅｈｒｍａｎｎ  Ｅ，Ｍｕｎｓｋｅ−Ｗｅｉｄｅｍａｎｎ  Ｌ−Ｃ，Ｔｈｉｅｌ  Ｃ，Ｒａｕｎｓｅｒ  Ｓ，Ｍａｎｓｔｅｉｎ  ＤＪ．Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｍｙｏｓｉｎ−１８Ａ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  Ｆ−ａｃｔｉｎ  ａｎｄ  ＧＯＬＰＨ３．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．１８  ｏｃｔ  ２０１３；２８８（４２）：３００２９−４１．
５２．Ｄｉｐｐｏｌｄ  ＨＣ，Ｎｇ  ＭＭ，Ｆａｒｂｅｒ−Ｋａｔｚ  ＳＥ，Ｌｅｅ  Ｓ−Ｋ，Ｋｅｒｒ  ＭＬ，Ｐｅｔｅｒｍａｎ  ＭＣ，ｅｔ  ａｌ．ＧＯＬＰＨ３  ｂｒｉｄｇｅｓ  ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ−４−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ａｎｄ  ａｃｔｏｍｙｏｓｉｎ  ｔｏ  ｓｔｒｅｔｃｈ  ａｎｄ  ｓｈａｐｅ  ｔｈｅ  Ｇｏｌｇｉ  ｔｏ  ｐｒｏｍｏｔｅ  ｂｕｄｄｉｎｇ．Ｃｅｌｌ．１６  ｏｃｔ  ２００９；１３９（２）：３３７−５１．
５３．Ｎｇ  ＭＭ，Ｄｉｐｐｏｌｄ  ＨＣ，Ｂｕｓｃｈｍａｎ  ＭＤ，Ｎｏａｋｅｓ  ＣＪ，Ｆｉｅｌｄ  ＳＪ．ＧＯＬＰＨ３Ｌ  ａｎｔａｇｏｎｉｚｅｓ  ＧＯＬＰＨ３  ｔｏ  ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ  Ｇｏｌｇｉ  ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ．Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  Ｃｅｌｌ．ｍａｒｓ  ２０１３；２４（６）：７９６−８０８．
５４．Ｆａｒｂｅｒ−Ｋａｔｚ  ＳＥ，Ｄｉｐｐｏｌｄ  ＨＣ，Ｂｕｓｃｈｍａｎ  ＭＤ，Ｐｅｔｅｒｍａｎ  ＭＣ，Ｘｉｎｇ  Ｍ，Ｎｏａｋｅｓ  ＣＪ，ｅｔ  ａｌ．ＤＮＡ  ｄａｍａｇｅ  ｔｒｉｇｇｅｒｓ  Ｇｏｌｇｉ  ｄｉｓｐｅｒｓａｌ  ｖｉａ  ＤＮＡ−ＰＫ  ａｎｄ  ＧＯＬＰＨ３．Ｃｅｌｌ．３０  ｊａｎｖ  ２０１４；１５６（３）：４１３−２７．
５５．Ｈａｒｔｍａｎ  ＭＡ，Ｓｐｕｄｉｃｈ  ＪＡ．Ｔｈｅ  ｍｙｏｓｉｎ  ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ  ａｔ  ａ  ｇｌａｎｃｅ．Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉ．１  ａｖｒ  ２０１２；１２５（Ｐｔ  ７）：１６２７−３２．
５６．Ａｎｄｚｅｌｍ  ＭＭ，Ｃｈｅｎ  Ｘ，Ｋｒｚｅｗｓｋｉ  Ｋ，Ｏｒａｎｇｅ  ＪＳ，Ｓｔｒｏｍｉｎｇｅｒ  ＪＬ．Ｍｙｏｓｉｎ  ＩＩＡ  ｉｓ  ｒｅｑｕｉｒｅｄ  ｆｏｒ  ｃｙｔｏｌｙｔｉｃ  ｇｒａｎｕｌｅ  ｅｘｏｃｙｔｏｓｉｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ＮＫ  ｃｅｌｌｓ．Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．１  ｏｃｔ  ２００７；２０４（１０）：２２８５−９１．
５７．Ｆｕｒｕｓａｗａ  Ｔ，Ｉｋａｗａ  Ｓ，Ｙａｎａｉ  Ｎ，Ｏｂｉｎａｔａ  Ｍ．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ＰＤＺ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｍｙｏｓｉｎ  ｆｒｏｍ  ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ  ｓｕｐｐｏｒｔｉｖｅ  ｂｏｎｅ  ｍａｒｒｏｗ  ｓｔｒｏｍａｌ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅｓ．Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ．２  ａｖｒ  ２０００；２７０（１）：６７−７５．
５８．Ｎａｋａｎｏ  Ｔ，Ｔａｎｉ  Ｍ，Ｎｉｓｈｉｏｋａ  Ｍ，Ｋｏｈｎｏ  Ｔ，Ｏｔｓｕｋａ  Ａ，Ｏｈｗａｄａ  Ｓ，ｅｔ  ａｌ．Ｇｅｎｅｔｉｃ  ａｎｄ  ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃ  ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃａｎｄｉｄａｔｅ  ｔｕｍｏｒ−ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ  ｇｅｎｅ  ＭＹＯ１８Ｂ，ｏｎ  ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ  ａｒｍ  ２２ｑ，ｉｎ  ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  ｃａｎｃｅｒ．Ｇｅｎｅｓ  Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｓ  Ｃａｎｃｅｒ．ｊｕｉｎ  ２００５；４３（２）：１６２−７１．
５９．Ｎｉｓｈｉｏｋａ  Ｍ，Ｋｏｈｎｏ  Ｔ，Ｔａｎｉ  Ｍ，Ｙａｎａｉｈａｒａ  Ｎ，Ｔｏｍｉｚａｗａ  Ｙ，Ｏｔｓｕｋａ  Ａ，ｅｔ  ａｌ．ＭＹＯ１８Ｂ，ａ  ｃａｎｄｉｄａｔｅ  ｔｕｍｏｒ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ  ｇｅｎｅ  ａｔ  ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ  ２２ｑ１２．１，ｄｅｌｅｔｅｄ，ｍｕｔａｔｅｄ，ａｎｄ  ｍｅｔｈｙｌａｔｅｄ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．１７  ｓｅｐｔ  ２００２；９９（１９）：１２２６９−７４．
６０．Ｙａｎａｉｈａｒａ  Ｎ，Ｎｉｓｈｉｏｋａ  Ｍ，Ｋｏｈｎｏ  Ｔ，Ｏｔｓｕｋａ  Ａ，Ｏｋａｍｏｔｏ  Ａ，Ｏｃｈｉａｉ  Ｋ，ｅｔ  ａｌ．Ｒｅｄｕｃｅｄ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ＭＹＯ１８Ｂ，ａ  ｃａｎｄｉｄａｔｅ  ｔｕｍｏｒ−ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ  ｇｅｎｅ  ｏｎ  ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ  ａｒｍ  ２２ｑ，ｉｎ  ｏｖａｒｉａｎ  ｃａｎｃｅｒ．Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｊ  Ｉｎｔ  Ｃａｎｃｅｒ．２０  ｏｃｔ  ２００４；１１２（１）：１５０−４．
６１．Ｃｒｏｓｓ  Ｍ，Ｃｓａｒ  ＸＦ，Ｗｉｌｓｏｎ  ＮＪ，Ｍａｎｅｓ  Ｇ，Ａｄｄｏｎａ  ＴＡ，Ｍａｒｋｓ  ＤＣ，ｅｔ  ａｌ．Ａ  ｎｏｖｅｌ  １１０  ｋＤａ  ｆｏｒｍ  ｏｆ  ｍｙｏｓｉｎ  ＸＶＩＩＩＡ（ＭｙｓＰＤＺ）ｉｓ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ−ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｅｄ  ａｆｔｅｒ  ｃｏｌｏｎｙ−ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ−１  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ．Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｊ．１５  ｍａｉ  ２００４；３８０（Ｐｔ  １）：２４３−５３．
６２．Ｈａａｇｓｍａｎ  ＨＰ，Ｈａｗｇｏｏｄ  Ｓ，Ｓａｒｇｅａｎｔ  Ｔ，Ｂｕｃｋｌｅｙ  Ｄ，Ｗｈｉｔｅ  ＲＴ，Ｄｒｉｃｋａｍｅｒ  Ｋ，ｅｔ  ａｌ．Ｔｈｅ  ｍａｊｏｒ  ｌｕｎｇ  ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ，ＳＰ  ２８−３６，ｉｓ  ａ  ｃａｌｃｉｕｍ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ，ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．１５  ｏｃｔ  １９８７；２６２（２９）：１３８７７−８０．
６３．Ｋｕｒｏｋｉ  Ｙ，Ｔｓｕｔａｈａｒａ  Ｓ，Ｓｈｉｊｕｂｏ  Ｎ，Ｔａｋａｈａｓｈｉ  Ｈ，Ｓｈｉｒａｔｏｒｉ  Ｍ，Ｈａｔｔｏｒｉ  Ａ，ｅｔ  ａｌ．Ｅｌｅｖａｔｅｄ  ｌｅｖｅｌｓ  ｏｆ  ｌｕｎｇ  ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａ  ｉｎ  ｓｅｒａ  ｆｒｏｍ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ａｌｖｅｏｌａｒ  ｐｒｏｔｅｉｎｏｓｉｓ．Ａｍ  Ｒｅｖ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｄｉｓ．ｍａｒｓ  １９９３；１４７（３）：７２３−９．
６４．Ｒｕｂｉｏ  Ｓ，Ｌａｃａｚｅ−Ｍａｓｍｏｎｔｅｉｌ  Ｔ，Ｃｈａｉｌｌｅｙ−Ｈｅｕ  Ｂ，Ｋａｈｎ  Ａ，Ｂｏｕｒｂｏｎ  ＪＲ，Ｄｕｃｒｏｃ  Ｒ．Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａ（ＳＰ−Ａ）ｉｓ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ｂｙ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌｓ  ｏｆ  ｓｍａｌｌ  ａｎｄ  ｌａｒｇｅ  ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．１９  ｍａｉ  １９９５；２７０（２０）：１２１６２−９．
６５．Ａｉａｄ  ＨＡＳ，Ｅｌ−Ｆａｒａｒｇｙ  ＳＭ，Ｓｏｌｉｍａｎ  ＭＭ，Ｅｌ−Ｗａｈｅｄ  Ｇａｂｅｒ  ＭＡ，Ｅｌ−Ａｚｉｚ  Ｏｔｈｍａｎ  ＳＡ．Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ｓｔａｉｎｉｎｇ  ｏｆ  ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  Ａ  ａｎｄ  Ｂ  ｉｎ  ｓｋｉｎ  ｏｆ  ｐｓｏｒｉａｔｉｃ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｂｅｆｏｒｅ  ａｎｄ  ａｆｔｅｒ  ｎａｒｒｏｗ−ｂａｎｄ  ＵＶＢ  ｐｈｏｔｏｔｈｅｒａｐｙ．Ａｍ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１  ｏｃｔ  ２０１２；１３（５）：３４１−８．
６６．Ｃｏｉｆｆｉｅｒ  Ｂ，Ｌｅｐａｇｅ  Ｅ，Ｂｒｉｅｒｅ  Ｊ，Ｈｅｒｂｒｅｃｈｔ  Ｒ，Ｔｉｌｌｙ  Ｈ，Ｂｏｕａｂｄａｌｌａｈ  Ｒ，ｅｔ  ａｌ．ＣＨＯＰ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ｐｌｕｓ  Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ  Ｃｏｍｐａｒｅｄ  ｗｉｔｈ  ＣＨＯＰ  Ａｌｏｎｅ  ｉｎ  Ｅｌｄｅｒｌｙ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ｄｉｆｆｕｓｅ  Ｌａｒｇｅ−Ｂ−Ｃｅｌｌ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ．Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ．２４  ｊａｎｖ  ２００２；３４６（４）：２３５−４２．
６７．Ｂｏｕａｚｉｚ  Ｊ−Ｄ，Ｏｒｔｏｎｎｅ  Ｎ，Ｇｉｕｓｔｉｎｉａｎｉ  Ｊ，Ｓｃｈｉａｖｏｎ  Ｖ，Ｈｕｅｔ  Ｄ，Ｂａｇｏｔ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ  ｎａｔｕｒａｌ  ｋｉｌｌｅｒ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ  ａｒｅ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  ｅｆｆｅｃｔｏｒｓ  ａｇａｉｎｓｔ  ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ  ｍａｌｉｇｎａｎｔ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｓｅｚａｒｙ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ  ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｊ  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．ｄｅｃ  ２００５；１２５（６）：１２７３−８．
６８．Ｄｅ  Ｍａｓｓｏｎ  Ａ，Ｇｕｉｔｅｒａ  Ｐ，Ｂｒｉｃｅ  Ｐ，Ｍｏｕｌｏｎｇｕｅｔ  Ｉ，Ｍｏｕｌｙ  Ｆ，Ｂｏｕａｚｉｚ  Ｊ−Ｄ，ｅｔ  ａｌ．Ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ａｎｄ  ｓａｆｅｔｙ  ｏｆ  ａｌｅｍｔｕｚｕｍａｂ  ｉｎ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｐｒｉｍａｒｙ  ｃｕｔａｎｅｏｕｓ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｌｙｍｐｈｏｍａｓ．Ｂｒ  Ｊ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．ｍａｒｓ  ２０１４；１７０（３）：７２０−４．
６９．Ｍａｒｉｅ−Ｃａｒｄｉｎｅ  Ａ，Ｖｉａｕｄ  Ｎ，Ｔｈｏｎｎａｒｔ  Ｎ，Ｊｏｌｙ  Ｒ，Ｃｈａｎｔｅｕｘ  Ｓ，Ｇａｕｔｈｉｅｒ  Ｌ，ｅｔ  ａｌ．ＩＰＨ４１０２，ａ  ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  ＫＩＲ３ＤＬ２  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｗｉｔｈ  ｐｏｔｅｎｔ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ａｇａｉｎｓｔ  ｃｕｔａｎｅｏｕｓ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｌｙｍｐｈｏｍａ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１  ｎｏｖ  ２０１４；７４（２１）：６０６０−７０．
７０．Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ  Ｄ，Ｈｕｍｂｌｅｔ  Ｙ，Ｓｉｅｎａ  Ｓ，Ｋｈａｙａｔ  Ｄ，Ｂｌｅｉｂｅｒｇ  Ｈ，Ｓａｎｔｏｒｏ  Ａ，ｅｔ  ａｌ．Ｃｅｔｕｘｉｍａｂ  Ｍｏｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ａｎｄ  Ｃｅｔｕｘｉｍａｂ  ｐｌｕｓ  Ｉｒｉｎｏｔｅｃａｎ  ｉｎ  Ｉｒｉｎｏｔｅｃａｎ−Ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ  Ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  Ｃａｎｃｅｒ．Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ．２２  ｊｕｉｌｌ  ２００４；３５１（４）：３３７−４５．
７１．Ｒｏｍｏｎｄ  ＥＨ，Ｐｅｒｅｚ  ＥＡ，Ｂｒｙａｎｔ  Ｊ，Ｓｕｍａｎ  ＶＪ，Ｇｅｙｅｒ  ＣＥ，Ｄａｖｉｄｓｏｎ  ＮＥ，ｅｔ  ａｌ．Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ  ｐｌｕｓ  Ａｄｊｕｖａｎｔ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  Ｏｐｅｒａｂｌｅ  ＨＥＲ２−Ｐｏｓｉｔｉｖｅ  Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ．Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ．２０  ｏｃｔ  ２００５；３５３（１６）：１６７３−８４．
【図１Ａ】
2018525029.tif 000002
【図１Ｂ】
2018525029.tif 000003
【図１Ｃ】
2018525029.tif 000004
【図１Ｄ】
2018525029.tif 000005
【図１Ｅ】
2018525029.tif 000006
【図２Ａ】
2018525029.tif 000007
【図２Ｂ】
2018525029.tif 000008
【図２Ｃ】
2018525029.tif 000009
【図２Ｄ】
2018525029.tif 000010
【図２Ｅ】
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【図２Ｆ】
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【図２Ｇ】
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【図２Ｈ】
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【図３】
2018525029.tif 000015
【配列表】
2018525029000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成30年3月12日(2018.3.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ミオシン１８Ａに対する特異性を有する抗体であって、
ｉ）ＤＹ１２のＨ−ＣＤＲ１と少なくとも９０％の同一性を有するＨ−ＣＤＲ１、
ｉｉ）ＤＹ１２のＨ−ＣＤＲ２と少なくとも９０％の同一性を有するＨ−ＣＤＲ２および
ｉｉｉ）ＤＹ１２のＨ−ＣＤＲ３と少なくとも９０％の同一性を有するＨ−ＣＤＲ３を含む、重鎖と、
ｉ）ＤＹ１２のＬ−ＣＤＲ１と少なくとも９０％の同一性を有するＬ−ＣＤＲ１、
ｉｉ）ＤＹ１２のＬ−ＣＤＲ２と少なくとも９０％の同一性を有するＬ−ＣＤＲ２および
ｉｉｉ）ＤＹ１２のＬ−ＣＤＲ３と少なくとも９０％の同一性を有するＬ−ＣＤＲ３を含む、軽鎖と、
を含み、
前記ＤＹ１２のＨ−ＣＤＲ１が、配列番号１の３１位のアミノ酸残基から３５位のアミノ酸残基までの範囲の配列で定義され、
前記ＤＹ１２のＨ−ＣＤＲ２が、配列番号１の５０位のアミノ酸残基から６６位のアミノ酸残基までの範囲の配列で定義され、
前記ＤＹ１２のＨ−ＣＤＲ３が、配列番号１の９９位のアミノ酸残基から１０９位のアミノ酸残基までの範囲の配列で定義され、
前記ＤＹ１２のＬ−ＣＤＲ１が、配列番号２の２４位のアミノ酸残基から３４位のアミノ酸残基までの範囲の配列で定義され、
前記ＤＹ１２のＬ−ＣＤＲ２が、配列番号２の５０位のアミノ酸残基から５６位のアミノ酸残基までの範囲の配列で定義され、
前記ＤＹ１２のＬ−ＣＤＲ３が、配列番号２の８９位のアミノ酸残基から９７位のアミノ酸残基までの範囲の配列で定義される、
抗体。
【請求項２】
ｉ）前記ＤＹ１２のＨ−ＣＤＲ１とｉｉ）前記ＤＹ１２のＨ−ＣＤＲ２とｉｉｉ）前記ＤＹ１２のＨ−ＣＤＲ３とを含む重鎖を含む、および／またはｉ）前記ＤＹ１２のＬ−ＣＤＲ１とｉｉ）前記ＤＹ１２のＬ−ＣＤＲ２とｉｉｉ）前記ＤＹ１２のＬ−ＣＤＲ３とを含む軽鎖を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項３】
ｉ）前記ＤＹ１２のＨ−ＣＤＲ１、ｉｉ）前記ＤＹ１２のＨ−ＣＤＲ２およびｉｉｉ）前記ＤＹ１２のＨ−ＣＤＲ３を含む、重鎖と、
ｉ）前記ＤＹ１２のＬ−ＣＤＲ１、ｉｉ）前記ＤＹ１２のＬ−ＣＤＲ２およびｉｉｉ）前記ＤＹ１２のＬ−ＣＤＲ３を含む、軽鎖と、
を含む、請求項１または２に記載の抗体。
【請求項４】
配列番号１と少なくとも７０％の同一性を有する重鎖および／または配列番号２と少なくとも７０の同一性を有する軽鎖を含み、好ましくは、配列番号１と同一の重鎖および／または配列番号２と同一の軽鎖を含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項５】
配列番号１と少なくとも７０％の同一性を有する重鎖と配列番号２と少なくとも７０％の同一性を有する軽鎖とを含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項６】
キメラ抗体またはヒト化抗体である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項７】
抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導するＦｃ部分を含まず、好ましくは、ＦｃガンマＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６）ポリペプチドと実質的に結合することが可能なＦｃドメインを含まないか、Ｆｃドメインを欠くか、またはＩｇＧ２アイソタイプもしくはＩｇＧ４アイソタイプのＦｃドメインを含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の抗体の重鎖および／または軽鎖をコードする、核酸分子。
【請求項９】
配列番号３または配列番号４と７０％の同一性を有する核酸配列を含む、請求項８に記載の核酸分子。
【請求項１０】
請求項９に記載の核酸によってトランスフェクトされている、感染している、または形質転換されている、宿主細胞。
【請求項１１】
それを必要とする対象においてＮＫ細胞キラー活性を増強する方法であって、前記対象に請求項１〜７のいずれか１項に記載の抗体の治療有効量を投与することを含む、方法。
【請求項１２】
それを必要とする対象における癌、感染症、または肺サーファクタントの欠陥に関連する肺疾患の治療に使用するための、請求項１〜７のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１３】
それを必要とする対象において抗体のＮＫ細胞抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を増強する方法であって、前記対象に前記抗体を投与することと、前記対象に請求項１〜７のいずれか１項に記載の抗体を投与することと、を含む方法。
【請求項１４】
それを必要とする対象における癌の治療に使用するための、癌細胞抗原に対して選択的な第一の抗体および請求項１〜７のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１５】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の抗体を含む、医薬組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
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【国際調査報告】
2018525029.tif 000016
2018525029.tif 000017