(57)【要約】  本発明は、腸炎症および／または線維症、炎症性腸疾患、大腸炎、急性大腸炎および慢性大腸炎を含むがこれらに限定されない種々の疾病のモデル、および、そのようなモデルを使用して、これらの疾病の治療薬を設計し、スクリーニングし、開発するための方法を提供する。本発明は、また、これらの疾病を処置するための方法、組成物およびキットを提供する。【選択図】図２
2018522533.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
疾病に対して治療的であるものとして、薬剤を識別する方法であって、該方法は：
疾病のモデルを提供する工程；
モデルに薬剤を投与する工程；
薬剤がＴＬ１Ａ活性を阻害するかどうかを測定するために、モデルにおける１以上の変化を検出する工程；および、
疾病に対して治療的であるものとして、ＴＬ１Ａ活性を阻害すると測定された薬剤を識別する工程、を含むことを特徴とする方法。
【請求項２】
疾病は腸炎症および／または繊維症、炎症性腸疾患、および／または慢性大腸炎であることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
モデルは、ＴＬ１Ａおよび／またはＤＲ３を過剰発現または構成的に発現する、ある量の細胞であることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
細胞は、ＴＬ１Ａおよび／またはＤＲ３を過剰発現または構成的に発現する導入遺伝子を有する遺伝子導入動物からプロセスによって得られる方法であって、該プロセスは；
遺伝子導入動物由来の細胞の集団を含むサンプルを得る工程；  
ＴＬ１Ａおよび／またはＤＲ３を過剰発現または構成的に発現する細胞の第１の亜集団、およびＴＬ１ＡまたはＤＲ３のいずれも過剰発現または構成的に発現しない細胞の第２の亜集団にサンプルを分類する工程；および、
第１の亜集団を第２の亜集団から分離する工程であって、それにより、ＴＬ１Ａおよび／またはＤＲ３を過剰発現するかまたは構成的に発現する細胞を単離する工程、を含むことを特徴とする、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
モデルは、ＴＬ１Ａおよび／またはＤＲ３を過剰発現または構成的に発現する、ある量の細胞を注入された動物であることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
動物は免疫不全のげっ歯類であることを特徴とする、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
モデルは、ＴＬ１Ａおよび／またはＤＲ３を過剰発現または構成的に発現する導入遺伝子を有する遺伝子導入動物であることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
ＴＬ１Ａおよび／またはＤＲ３の過剰発現または構成的発現は、細胞型に特異的であることを特徴とする、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
細胞型は骨髄性細胞であることを特徴とする、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
骨髄性細胞は抗原提示細胞（ＡＰＣ）または樹状細胞（ＤＣ）であることを特徴とする、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
細胞型はリンパ球様細胞であることを特徴とする、請求項８に記載の方法。
【請求項１２】
リンパ球様細胞はＴ細胞であることを特徴とする、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
細胞型は蛍光マーカーを発現することを特徴とする、請求項８に記載の方法。
【請求項１４】
モデルは、モデルから単離された骨髄性細胞のサンプル中の全骨髄性細胞の約３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、または９９％において、ＴＬ１Ａ、ＤＲ３および蛍光マーカーを発現することを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
モデルは、モデルから単離されたリンパ球様細胞のサンプル中の全リンパ球様細胞の約３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、または９９％において、ＴＬ１Ａ、ＤＲ３および蛍光マーカーを発現することを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
モデルは、線維性狭窄、消化（ＧＩ）管における炎症、体重減少、および／または疾患活性指数の増加を示すことを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
モデルはＤＳＳ誘導大腸炎を有することを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
モデルは養子移植によって誘導される大腸炎であることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
モデルは、ノックアウトされたＴＬ１Ａおよび／またはＤＲ３遺伝子を有する遺伝子ノックアウト動物であることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
疾病のモデルであって、モデルは、ＴＬ１Ａおよび／またはＤＲ３を過剰発現または構成的に発現する、ある量の細胞；または、ＴＬ１Ａおよび／またはＤＲ３を過剰発現または構成的に発現する、ある量の細胞を注入された動物；または、ＴＬ１Ａおよび／またはＤＲ３を過剰発現または構成的に発現する導入遺伝子を有する遺伝子導入動物；または、ノックアウトされたＴＬ１Ａおよび／またはＤＲ３遺伝子を有する遺伝子ノックアウト動物である、ことを特徴とする、疾病のモデル。
【請求項２１】
被験体における疾病を処置し、予防し、それを有する可能性を低下させ、その重症度を低下させ、および／またはその進行を遅らせる方法であって、該方法は；
ＴＬ１Ａ活性を阻害する薬剤を提供する工程；および、
被験体へ治療上有効な量の薬剤を投与する工程であって、それにより、被験体における疾病を処置し、予防し、それを有する可能性を低下させ、その重症度を低下させ、および／またはその進行を遅らせる工程、を含むことを特徴とする方法。
【請求項２２】
ＴＬ１Ａ活性を阻害する薬剤を含む組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、疾病を処置し、および疾病のための治療薬を設計し、スクリーニングし、開発するための様々なモデル、システム、組成物、方法およびキットに関する。疾病には、これに限定されないが、腸炎症および／または繊維症、炎症性腸疾患、大腸炎、急性大腸炎および慢性大腸炎が含まれる。
【背景技術】
【０００２】
それぞれの個々の刊行物、特許、特許出願、または参考文献が具体的かつ個別に参照により組み入れられると示されているのと同じ程度に、本明細書中に引用される全ての刊行物、特許、特許出願、および参考文献は、参照によりその全体として本明細書中に組み込まれる。以下の説明は、本発明の理解に有用であり得る情報を含む。本明細書で提供される情報のいずれかが先行技術であるか、または本願発明に関連していること、または具体的または暗示的に参照されている任意の出版物が先行技術であること、を認めるものではない。
【０００３】
クローン病（ＣＤ）および潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の２つの共通の形態は、胃腸管の、慢性で再発性の炎症性障害である。それぞれの発症のピーク年齢は生後２から４０年であり、ヨーロッパ人の祖先集団における有病率は、１０万人あたり平均約１００から１５０人である（Ｄ．Ｋ．  Ｐｏｄｏｌｓｋｙ，  Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３４７，  ４１７  （２００２）；  Ｅ．Ｖ．  Ｌｏｆｔｕｓ，  Ｊｒ．，  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  １２６，  １５０４  （２００４））。ＩＢＤの正確な病因は解明されてないが、広く容認された仮説としては、偏在する生腸内細菌が、遺伝的に感受性の強い個体において腸組織の損傷を媒介する不適切な過活動的かつ進行中の粘膜免疫応答を引き起こす、というものである（Ｄ．Ｋ．  Ｐｏｄｏｌｓｋｙ，  Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３４７，  ４１７  （２００２））。
【０００４】
ＩＢＤを処置するために、いくつかの薬物がＴＬ１Ａ以外の免疫の経路を標的とするために作られた。しかしながら、これらの既存の薬物が有効なのはわずか約５０％の時間に過ぎず、しばしば時間とともに効果がなくなる。ＴＬ１ＡとＤＲ３が同じシグナル伝達経路にある間、２つの異なる動物モデルにおいて、ＴＬ１Ａを遮断するが、ＤＲ３を遮断しないことは有益な効果を有することを実証した。したがって、本発明の様々な実施形態においては、既存の医薬品に反応しないか、既存の医薬品への反応を失った患者を含むがこれに限定されない、ＩＢＤ患者を処置するためにＴＬ１Ａを標的とする新たな治療アプローチを提供する。
【発明の概要】
【０００５】
次の実施形態およびその態様は、例示的かつ例証的であることを意図する、範囲を限定しないシステム、組成物および方法と共に記載され例証される。
【０００６】
本発明の様々な実施形態は、疾病のモデルを提供する。様々な実施形態では、疾病は、腸炎症および／または繊維症、炎症性腸疾患および／または慢性大腸炎である。いくつかの実施形態では、モデルは、ＴＬ１Ａおよび／またはＤＲ３を過剰発現または構成的に発現する、ある量の細胞である。いくつかの実施形態では、モデルは、ＴＬ１Ａおよび／またはＤＲ３を過剰発現または構成的に発現する、ある量の細胞を注入された動物である。いくつかの実施形態では、モデルは、ＴＬ１Ａおよび／またはＤＲ３を過剰発現または構成的に発現する導入遺伝子を有する遺伝子導入動物である。いくつかの実施形態では、モデルは、ノックアウトされたＴＬ１Ａおよび／またはＤＲ３遺伝子を有する遺伝子ノックアウト動物である。様々な実施形態では、モデルは、線維性狭窄（ｆｉｂｒｏｓｔｅｎｏｓｉｓ）、消化（ＧＩ）管における炎症、体重減少、および／または疾患活性指数の増加を示す。様々な実施形態では、モデルはＤＳＳ誘導大腸炎を有する。様々な実施形態では、モデルは養子移植によって誘導される大腸炎である。
【０００７】
本発明の様々な実施形態は、疾病に対して治療的であるものとして、薬剤を識別する方法を提供する。方法は：疾病のモデルを提供する工程；モデルへ薬剤を投与する工程；薬剤がＴＬ１Ａ活性を阻害するかどうかを測定するために、モデルにおける１以上の変化を検出する工程；および、疾病に対して治療的であるものとして、ＴＬ１Ａ活性を阻害すると測定された薬剤を識別する工程を含みうる。様々な実施形態では、疾病は、腸炎症および／または繊維症、炎症性腸疾患、および／または慢性大腸炎である。
【０００８】
本発明の様々な実施形態は、被験体における疾病を処置し、予防し、それを有する可能性を低下させ、その重症度を低下させ、および／またはその進行を遅らせる方法を提供する。方法は：ＴＬ１Ａ活性を阻害する薬剤を提供する工程；および、被験体へ治療上有効な量の薬剤を投与する工程であって、それにより、被験体における疾病を処置し、予防し、それを有する可能性を低下させ、その重症度を低下させ、および／またはその進行を遅らせる工程を含みうる。様々な実施形態では、疾病は、腸炎症および／または繊維症、炎症性腸疾患、および／または慢性大腸炎である。様々な実施形態では、薬剤は抗ＴＬ１Ａ抗体、または、その機能性フラグメントである。
【０００９】
本発明の様々な実施形態は組成物を提供する。組成物はＴＬ１Ａ活性を阻害する薬剤を含みうる。様々な実施形態では、薬剤は抗ＴＬ１Ａ抗体、または、その機能性フラグメントである。
【００１０】
本発明の様々な実施形態は、被験体における疾病を処置し、予防し、その重症度を低下させ、および／またはその進行を遅らせるキットを提供する。キットは：ＴＬ１Ａ活性を阻害する、ある量の薬剤；および、被験体における疾病を処置し、予防し、それを有する可能性を低下させ、その重症度を低下させ、および／またはその進行を遅らせるために薬剤を使用するための説明書、を含みうる。様々な実施形態では、薬剤は抗ＴＬ１Ａ抗体またはその機能性フラグメントである。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
例示的な実施形態は参照され載せられた図において例証される。本明細書に開示される実施形態および図面は、限定的ではなく例示的なものとみなされることが意図される。
【図１】図１は、本発明の様々な実施形態に従って、ＴＬ１Ａ−ＤＲ３シグナル伝達を示す。ＴＬ１ＡはＴＮＦスーパーファミリーメンバーであり、既知の唯一の受容体はＤＲ３である。ＴＬ１Ａはいくつかの自己免疫のモデルにおいて病原性であり、アポトーシス、増殖、繊維症および免疫の活性化などの多面的な効果を有する。Ｔｌ１ａまたはＤｒ３欠失のいずれかは自己免疫疾患モデルにおいて保護的である。ＴＬ１ＡまたはＤＲ３のいずれかにおける欠失は、実験上の自己免疫脳脊髄炎（ＥＡＥ）、アレルギー性肺炎症（ＡＬＩ）、および、コラーゲン／抗原誘導関節炎モデル（ＣＩＡまたはＡＩＡ）のようないくつかのモデルにおける自己免疫疾患を予防することが分かった。さらにＴｌ１ａとＤｒ３が腸のホメオスタシスおよびＩＢＤに関係するという証拠がある。ＴＬ１ＡとＤＲ３は、腸炎症において病原性である可能性がある。腸では、ＴＬ１Ａは、Ｔｈ−１、−２、−９、−１７、ＩＬＣ２およびＩＬＣ３を促進することが分かっている。遺伝学研究において、ＴＮＦＳＦ１５多形性は、ＴＬ１Ａ発現およびＩＢＤの増加に関係していることがさらに分かった。ブロッキングＴＬ１Ａ抗体が２つのマウスの大腸炎モデルを逆転させることができることがさらに示される。構成的Ｔｌ１ａ発現を有するマウスは、大腸炎モデルにおいて、自発性回腸炎、および、悪化した回腸−盲腸炎症（ｉｌｅｏ−ｃｅｃａｌ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ）を進行させる。しかしながら、大腸炎モデルにおけるＴＬ１ＡおよびＤＲ３欠失の影響は実際には研究されていない。そのため、ＴＬ１ＡおよびＤＲ３の欠失の両方が、他の非腸自己免疫疾患モデルと同様の慢性大腸炎のマウスのモデルにおいて、保護的かどうかを調査した。
【図２】図２は、本発明の種々の実施形態に従って、Ｔｌ１ａおよびＤｒ３  ＫＯマウスの生成を示す。独立してＴｌ１ａとＤｒ３のＫＯマウスを生成した。Ｔｌ１ａ  ＫＯについては、転写および翻訳部位およびエクソン１は削除される。Ｄｒ３  ＫＯについては、エクソン２〜５は削除される。回腸の組織上でｑＰＣＲを使用し、ＴＬ１Ａ  ｋｏマウスがＴＬ１Ａ発現を有しておらず、ＤＲ３  ＫＯマウスがＤＲ３発現を有していないことをここに示す。
【図３】図３は、本発明の様々な実施形態に従って、慢性ＤＳＳ誘導大腸炎セットアップを示す。腸炎症に対するＴＬ１ＡおよびＤＲ３欠失の効果を試験するために使用した最初のモデルは、慢性ＤＳＳモデルである。このモデルでは、ＷＴ、ＤＲ３  ＫＯおよびＴＬ１Ａ  ＫＯマウスは４週間にわたり、２％ＤＳＳの４回サイクルで処置された。４週目の終わりに、マウスは腸炎症および免疫機能の差について分析された。
【図４】図４は、本発明の様々な実施形態に従って、Ｄｒ３−／−ではなくＴｌ１ａ−／−が臨床ＤＳＳ誘導大腸炎を改善することを示す。疾患活性指数（Ｄｉｓｅａｓｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎｄｅｘ）（ＤＡＩ）は、体重減少、糞便血液および粘稠度測定からなる。ＤＡＩが高いほど、腸炎症は悪化している。ここで、ＴＬ１Ａ  ＫＯマウスは、ＤＲ３  ＫＯまたはＷＴと比較してＤＡＩスコアが低く、他の２つのグループと比較して臨床大腸炎が少ないことを示していることを確認する。
【図５】図５は、本発明の様々な実施形態に従って、Ｄｒ３ではなくＴｌ１ａの欠損は結腸における炎症を減少させることを示す。３つのマウスグループからの結腸組織像を検査した。ＷＴおよびＤＲ３  ＫＯ結腸は、ＴＬ１Ａ  ＫＯと比較して、炎症性浸潤、潰瘍形成および陰窩構造の喪失を増加させたことをここに示す。組織像スコアは計量され、かつ、他の２つのグループと比較して、ＴＬ１Ａ欠失は、結腸における組織学的炎症を有意に減少させることをここに示す。
【図６】図６は、本発明の様々な実施形態に従って、Ｄｒ３−／−ではなくＴｌ１ａ−／−を有する組織細胞浸潤の減少を示す。炎症のマーカーは組織中の増加した細胞浸潤である。したがって、ＭＬＮおよび結腸における細胞数を測定し、ＷＴおよびＤＲ３  ＫＯにおいてＭＬＮと結腸からの細胞回復が増加していることがわかった。次に、フローサイトメトリーによって特定の免疫細胞組成物を計量し、ＴＬ１Ａ  ＫＯマウスと比較して、ＷＴおよびＤＲ３  ＫＯ中のＭＬＮまたは結腸ＬＰＭＣのいずれかの中の全ＣＤ４Ｔ細胞、ＤＣ（樹状細胞）およびマクロファージもまた増加していることがわかった。これは、さらに、他の２つのグループと比較して、腸炎症がＴＬ１Ａ  ＫＯマウスにおいて減少することを示す。
【図７】図７は、本発明の様々な実施形態に従って、Ｔｌ１ａ−／−マウスのＭＬＮ中のＣＤ４＋Ｔ細胞を生産する、ＩＦＮγおよびＩＬ１７の減少を示す。ＴＬ１Ａ欠失またはＤＲ３欠失が炎症促進性サイトカイン発現の差につながるかどうかを調査する。他の２つのグループと比較して、ＴＬ１Ａ  ＫＯ中のＭＬＮから細胞を生産するＩＦＮγおよびＩＬ１７が減少することをここに示す。
【図８】図８は、本発明の様々な実施形態に従って、Ｄｒ３−／−ではないＴｌ１ａ−／−マウスのＬＰＭＣ中のＴ細胞活性化マーカーＣＤ４４の減少を示す。次に、ＣＤ４  Ｔ細胞の上の活性化マーカーにおいて任意の差があるかどうかを評価した。他の２つのグループと比較して、活性化マーカーＣＤ４４がＴＬ１Ａ  ＫＯマウス中の結腸において減少することをここに示す。
【図９】図９は、本発明の様々な実施形態に従って、Ｔｌ１ａ−／−マウスのＤＣおよびＭΦのＭＬＮ中の活性化マーカーＣＤ８０の減少を示す。樹状細胞およびマクロファージ上の活性化マーカーにおいて差があるかどうかを評価した。ＷＴおよびＤＲ３  ＫＯ  ＭＬＮと比較して、活性化マーカーＣＤ８０を発現するＴＬ１Ａ  ＫＯ  ＭＬＮにおいて樹状細胞およびマクロファージが有意に少ないことをここに示す。
【図１０】図１０は、本発明の様々な実施形態に従って、養子移植大腸炎モデルセットアップを示す。ＴＬ１ＡとＤＲ３は別個の表現型を有し、かつ、モデル特異的効果は有さないという発見を確認するために、次に、養子移植モデルを使用した。ＲＡＧマウスにＷＴナイーブＣＤ４  Ｔ細胞を移植し、これは正常なＴＬ１Ａ−ＤＲ３発現を有している。ＴＬ１Ａ  ＫＯ  ＲＡＧマウスにＴＬ１Ａ  ＫＯナイーブＣＤ４  Ｔ細胞を移植し、その結果、全ＴＬ１Ａ発現が不足していた。最後に、ＤＲ３  ＫＯ  ＲＡＧマウスにＤＲ３  ＫＯナイーブＣＤ４  Ｔ細胞を移植し、その結果、ＤＲ３発現が完全に不足していた。６週目の終わりに、マウスは腸炎症および免疫機能の差について分析された。
【図１１】図１１は、本発明の様々な実施形態に従って、Ｔｌ１ａ（Ｄｒ３ではない）欠失が養子移植大腸炎モデルにおける体重減少を予防することを示す。養子移植モデル全体を通じて、マウスの３つのグループの体重が追跡された。他の２つのグループと比較して、ＴＬ１Ａ  ＫＯマウスの体重減少が減ることを観察した。
【図１２】図１２は、本発明の様々な実施形態に従って、Ｄｒ３ではないＴｌ１ａの欠失が結腸における炎症を減少させることを示す。結腸炎症において差があるかどうかを判断するために、３つのマウスグループからの結腸組織像を検査した。ＷＴおよびＤＲ３    ＫＯ結腸は、ＴＬ１Ａ  ＫＯと比較して、炎症性浸潤および陰窩構造の喪失を増加させたことをここに示す。組織像スコアは計量され、かつ、他の２つのグループと比較して、ＴＬ１Ａ欠失は、結腸における組織学的炎症を有意に減少させることをここに示す。
【図１３】図１３は、本発明の様々な実施形態に従って、Ｔｌ１ａ（Ｄｒ３ではない）ＫＯマウスのＭＬＮ中のＴ細胞およびＤＣの減少を示す。ＴＬ１Ａ  ＫＯマウスと比較して、ＤＲ３  ＫＯマウスのＭＬＮ中において細胞回復が増加していることも観察した。フローサイトメトリーを使用して、ＴＬ１Ａ  ＫＯ  ＭＬＮと比較して、ＤＲ３  ＫＯ中の全ＣＤ４  Ｔ細胞およびＤＣが増加していることも示した。ＷＴとＴＬ１Ａ  ＫＯとの間のＭＬＮにおける全細胞およびマクロファージの数に差はないが、ＴＬ１Ａ  ＫＯマウスと比較して、ＷＴ由来のＭＬＮにおいてＤＣが著しく増加していることを観察した。
【図１４】図１４は、本発明の様々な実施形態に従って、Ｔｌ１ａ  ＫＯマウスのＭＬＮにおけるＩｆｎγ−、Ｉｌ１７−およびＩｌ１３−生産ＣＤ４  Ｔ細胞の減少を示す。ＭＬＮ中の炎症促進性サイトカインを発現する細胞において任意の差があるかどうかを評価した。ＤＲ３  ＫＯと比較して、ＴＬ１Ａ  ＫＯ中のＭＬＮからＣＤ４  Ｔ細胞を生産するＩＦＮγ、ＩＬ１７およびＩＬ１３が有意に減少することを観察した。
【図１５】図１５は、本発明の様々な実施形態に従って、Ｔｌ１ａ  ＫＯマウスのＭＬＮおよびＬＰＭＣ中のＣＤ４４およびＣＸＣＲ３  ＣＤ４＋Ｔ細胞の減少を示す。３つのグループの間にＣＤ４  Ｔ細胞における他の差があるかどうかを評価するために、活性化マーカーＣＤ４４および輸送マーカーＣＸＣＲ３の発現を測定した。ＣＤ４４の発現は、ＭＬＮおよびＬＰＭＣの両方におけるＷＴおよびＤＲ３  ＫＯマウスと比較して、ＴＬ１Ａ  ＫＯにおいて減少することを示す。また、他の２つのグループと比較して、ＣＸＣＲ３を発現するＴＬ１Ａ  ＫＯ  ＣＤ４  Ｔ細胞はさらに少ない。これは、ＷＴまたはＤＲ３  ＫＯマウスと比較して、ＴＬ１Ａ  ＫＯマウスの結腸中の炎症細胞浸潤の減少のための潜在的なメカニズムのうちの１つでありうる。
【図１６】図１６は、本発明の様々な実施形態に従って、Ｔｌ１ａ  ＫＯマウスのＭＬＮ中のＤＣおよびＭΦ上の活性化マーカーＣＤ８０の減少を示す。活性化マーカーの発現もＭＬＮ中の樹状細胞およびマクロファージ上で測定される。ＴＬ１Ａ  ＫＯマウスには、ＷＴおよびＤｒ３  ＫＯと比較して、ＣＤ８０を発現するＤＣおよびマクロファージがさらに少ないことを示した。
【図１７】図１７は、本発明の様々な実施形態に従って、結果の要約を示す。ＴＬ１Ａの非存在下では、炎症は腸内で抑制される。これの一部は、Ｔ細胞および抗原提示細胞の活性化の低下に起因するように思われ、これは、ＩＦＮγ、ＩＬ１７およびＩＬ１３などの炎症促進性サイトカインの減少、および、ＣＸＣＲ３などの輸送マーカーの減少をもたらす。他の組織とは対照的に、ＴＬ１ＡおよびＤＲ３シグナル伝達の調節は、腸の中で示差的効果をもたらす。そして、これは、腸内で代替的なＤＲ３リガンドまたは代替的なＴＬ１Ａ受容体を示す。さらに、これは、ＤＲ３遮断よりもむしろＴＬ１Ａ遮断が、ＩＢＤの治療的処置を設計し、スクリーニングし、および、開発する際のより良いアプローチであることを示している。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本明細書に引用される全ての参考文献は、完全に記載されているかのように、その全体が参照により組み込まれる。別段の定めのない限り、本明細書に記載される技術的かつ科学的な用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。Ａｌｌｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  ２２ｎｄ  ｅｄ．，  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ  （Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ  １５，  ２０１２）；Ｈｏｒｎｙａｋ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｎａｎｏｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｎａｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，  ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ  （２００８）；Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎ  ａｎｄ  Ｓａｉｎｓｂｕｒｙ，  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ３ｒｄ  ｅｄ．，  ｒｅｖｉｓｅｄ  ｅｄ．，  Ｊ．  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ  （Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ＮＹ  ２００６）；Ｓｍｉｔｈ，  Ｍａｒｃｈ’ｓ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ７ｔｈ  ｅｄ．，  Ｊ．  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ  （Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ＮＹ  ２０１３）；Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎ，  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  ＤＮＡ  ａｎｄ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ３ｒｄ  ｅｄ．，  Ｗｉｌｅｙ−Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  （Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  ２８，  ２０１２）；および、Ｇｒｅｅｎ  ａｎｄ  Ｓａｍｂｒｏｏｋ，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  ４ｔｈ  ｅｄ．，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ  （Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，  ＮＹ  ２０１２）は、本出願において使用される用語の多くに対する一般的なガイドを当業者に提供する。抗体を準備する方法の参照については、Ｇｒｅｅｎｆｉｅｌｄ，  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  ２ｎｄ  ｅｄ．，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ  （Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  ＮＹ，  ２０１３）；Ｋｏｈｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，  Ｄｅｒｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ  ｔｉｓｓｕｅ  ｃｕｌｔｕｒｅ  ａｎｄ  ｔｕｍｏｒ  ｌｉｎｅｓ  ｂｙ  ｃｅｌｌ  ｆｕｓｉｏｎ，  Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １９７６  Ｊｕｌ，  ６  （７）：５１１−９；  Ｑｕｅｅｎ  ａｎｄ  Ｓｅｌｉｃｋ，  Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ，  Ｕ．  Ｓ．  Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏ．  ５，５８５，０８９  （１９９６  Ｄｅｃ）；  およびＲｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｒｅｓｈａｐｉｎｇ  ｈｕｍａｎ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅｒａｐｙ，  Ｎａｔｕｒｅ  １９８８  Ｍａｒ  ２４，  ３３２（６１６２）：３２３−７．を参照されたい。
【００１３】
当業者であれば、本発明の実施に用いることができる、本明細書に記載されたものと類似または同等の多くの方法および材料を認識するであろう。本発明の他の特徴および利点は、例として、本発明の実施形態の様々な特徴を示す添付の図面と併せて、以下の詳細な説明から明らかになるであろう。確かに、本発明は記載された方法および材料に決して限定されない。便宜上、本明細書、実施例および添付の特許請求の範囲で使用されるある特定の用語がここに集められる。
【００１４】
別段の記載がない限り、または文脈から暗示されない限り、以下の用語およびフレーズは、以下に示す意味を含む。明示的に記載されていない限り、または文脈から明らかでない限り、用語およびフレーズは、その用語またはフレーズが関連する技術分野において獲得した意味を排除するものではない。別段の定めのない限り、本明細書に記載される技術的かつ科学的な用語はすべて、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。本発明は、本明細書に記載される特定の方法論、プロトコル、および試薬等に限定されず、したがって変更することができることを理解されたい。本明細書に使用される定義および術語はある特定の実施形態について記述することを援助するために提供され、発明の範囲は請求項によってのみ限定されているため、請求された発明を限定するようには意図されない。
【００１５】
本明細書中で使用されるとおり、用語「含む」（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）または「含む」（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）は、実施形態に有用であり、さらに、有用であるか否かにかかわらず、特定されていない要素の包含のためにオープンな組成物、方法およびそのそれぞれの構成要素に関して使用される。一般に、本明細書で使用される用語は、一般的に「オープンな」用語として意図されている（例えば、「含む」（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）という用語は「〜を含むがこれに限定されない」（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ  ｂｕｔ  ｎｏｔ  ｌｉｍｉｔｅｄ  ｔｏ）と解釈されるべきであり、「有する」（ｈａｖｉｎｇ）という用語は、  「少なくとも有する」（ｈａｖｉｎｇ  ａｔ  ｌｅａｓｔ）などと解釈されるべきであり、「含む」（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）という用語は「〜を含むがこれに限定されない」（ｉｎｃｌｕｄｅｓ  ｂｕｔ  ｉｓ  ｎｏｔ  ｌｉｍｉｔｅｄ  ｔｏ）と解釈されるべきである）ことが、当業者によって理解されるであろう。本明細書では、含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）、含む（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）、または有する（ｈａｖｉｎｇ）などの用語の同義語としての「含む」（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）というオープンエンドな用語は、本発明を記載および請求するために本明細書において使用されるが、本発明またはその実施形態は、「〜からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」または「本質的に〜からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」などの代替の用語を使用して代替的に記載することができる。
【００１６】
別段の定めのない限り、（特に特許請求の範囲の文脈において）出願の特定の実施形態を説明する文脈において使用される用語「ａ」および「ａｎ」および「ｔｈｅ」ならびに類似の参照は、単数形および複数形の両方を含むと解釈され得る。本明細書における値の範囲の列挙は、範囲内に納まるそれぞれの個別の値に個々に言及する簡略な方法として役立つことを意図するに過ぎない。本明細書中で他に示されない限り、本明細書で、個々の値は、個々に列挙されているかのように本明細書に組み込まれる。本明細書中に記載される全ての方法は、本明細書中で他に示されない限り、または文脈によって明らかに矛盾しない限り、任意の適切な順序で実施され得る。本明細書の特定の実施形態に関して提供される任意のおよびすべての例、または例示的な言語（例えば、「などの」（ｓｕｃｈ  ａｓ））の使用は、単にその出願をよりよく明らかにすることを意図しており、別の方法で請求される出願の範囲に限定を課さない。略語「例えば」（ｅ．ｇ．）は、ラテン語のｅｘｅｍｐｌｉ  ｇｒａｔｉａに由来し、ここでは非限定的な例を示すために使用される。従って、略語「例えば」（ｅ．ｇ．）は、「例えば」（ｆｏｒ  ｅｘａｍｐｌｅ）という用語と同義語である。明細書中の言語は、本出願の実施に不可欠な非請求要素を示すものとして構成されるべきではない。
【００１７】
本明細書に使用されるとおり、「処置する」（ｔｒｅａｔ）、「処置」（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）、「処置する」（ｔｒｅａｔｉｎｇ）または「改善」（ａｍｒｌｉｏｒａｔｉｏｎ）という用語は、疾患、障害または医学的疾病に関して使用される場合、治療的処置および予防的または防止的手段の両方を指し、その目的は、徴候または疾病の進行または重症度を予防し、逆転させ、緩和し、改善し、阻害し、軽減し、遅らせ、または止めることである。「処置する」（ｔｒｅａｔｉｎｇ）という用語は、疾病の少なくとも１つの有害な効果または徴候を軽減または緩和することを含む。１以上の徴候または臨床マーカーが軽減される場合、処置は一般に「有効である」。または、疾患、障害または医学的疾病の進行が減少するか停止する場合、処置は「有効である」。すなわち、「処置」には、徴候またはマーカーの改善のみならず、処置がない時に予想される疾病の進行または悪化を停止させることまたは少なくとも遅らせることも含まれる。さらに、「処置」とは、有益な結果を追求または獲得すること、または、処置が最終的には失敗したとしても個体がその疾病を進行させる可能性を低下させること、を意味する場合がある。治療を必要とする者には、すでに疾病を有している者、ならびに疾病を生じやすい者または疾病を予防するべき者が含まれる。
【００１８】
「有益な結果」または「所望の結果」は、疾患状態の重症度の軽減または緩和すること、疾患状態が悪化するのを防止すること、疾患状態を治癒すること、疾患状態が進行するのを防止すること、患者が疾患状態を進行させる可能性を低下させること、罹患率および死亡率を減少させること、患者の生命または平均寿命を延ばすこと、を含みうるが、これに限定されない。非限定的な例として、「有益な結果」または「所望の結果」は、１以上の疾病の緩和、欠損の程度の減弱、腸炎症および／または繊維症の安定した（つまり、悪化しない）状態、腸炎症および／または繊維症の遅滞または遅延、および、腸炎症および／または繊維症に関連する疾病の改善または緩和、である場合がある。
【００１９】
本明細書で使用されるとおり「疾患」、「疾病」および「疾患状態」は、腸炎症または腸炎症関連疾病、疾患、または障害、例えば、腸繊維症、炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、大腸炎、急性大腸炎および慢性大腸炎などの任意の形態を含みうるが、これらに限定されない。
【００２０】
本明細書に使用されるとおり、「投与する」（ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｉｎｇ）という用語は、所望の部位に薬剤を少なくとも部分的に局在化させる方法または経路によって、本明細書に開示する薬剤を被験体に配置することを指す。「投与経路」は、当該分野で公知の任意の投与経路を指してもよく、エアロゾル、経鼻、経口、経粘膜、経皮、非経口、経腸、局所または局部的な投与経路を含むが、これらに限定されない。非経口（Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ）は、頭蓋内、脳室内、髄腔内、硬膜外、硬膜内、眼窩内、注入、動脈内、嚢内、心臓内、皮内、筋肉内、腹腔内、肺内、脊髄内、胸骨内（ｉｎｔｒａｓｔｅｒｎａｌ）、髄腔内、子宮内、静脈内、蜘蛛膜下、被膜下、皮下、経粘膜、または、経気管、を含む、一般に注射に関連する投与経路を指す。非経口経路を介して、組成物は、注入用または注射用の溶液または懸濁液の形態であってもよく、または凍結乾燥粉末であってもよい。経腸経路を介して、医薬組成物は、制御放出が可能な、錠剤、ゲルカプセル剤、糖衣錠、シロップ剤、懸濁液、溶液、粉末、顆粒剤、エマルジョン、小球体またはナノ球体または脂質小胞かポリマー小胞の形態であってもよい。局所経路を介して、医薬組成物は、エアロゾル、ローション、クリーム、ゲル、軟膏、懸濁液、溶液またはエマルジョンの形態であってもよい。本発明によれば、「投与する」は自己投与であってもよい。例えば、被験体が本明細書に記載される組成物を消費することは「投与する」とみなされる。
【００２１】
本明細書で使用される「サンプル」または「生物学的サンプル」という用語は、例えば被験体由来の血液サンプルなどの生物学的有機体から採取または分離されるサンプルを示す。例示的な生物学的サンプルとしては、限定されないが、頬拭き取り検体；粘液；全血、血液、血清；血漿；尿；唾液；精液；リンパ液；糞便抽出物；喀痰；他の体液または生体流体；細胞サンプル；および／または組織サンプルなどが挙げられる。用語には、前述のサンプルの組み合わせも含まれる。「サンプル」という用語には、未処置の、または前処置された（または前処理された）生物学的サンプルも含まれる。いくつかの実施形態では、サンプルは被験体由来の１以上の細胞を含むことができる。
【００２２】
本明細書に使用されるとおり、「被験体」はヒトまたは動物を意味する。通常、動物は、霊長類、げっ歯類、飼育動物または狩猟動物などの脊椎動物である。霊長類には、チンパンジー、カニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｏｇｏｕｓ  ｍｏｎｋｅｙ）、クモザルおよびマカク、例えばアカゲザル、が含まれる。げっ歯類には、マウス、ラット、ヤマネズミ、フェレット、ウサギおよびハムスターが含まれる。飼育動物と狩猟動物には、ウシ、ウマ、ブタ、シカ、バイソン、バッファロー、ネコ科の種、例えばイエネコ、およびイヌ科の種、例えばイヌ、キツネ、オオカミ、が含まれる。「患者」、「個体」および「被験体」という用語は、本明細書では互換的に使用される。いくつかの実施形態では、被験体は哺乳類である。哺乳類は、ヒト、非ヒト霊長類、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ウマ、またはウシであり得るが、これらの例に限定されない。加えて、本明細書に記載された方法は、家畜化された動物および／またはペットを処置するために使用することができる。
【００２３】
本明細書で使用される「哺乳動物」とは、哺乳動物のクラスの任意のメンバーを指し、限定されないが、ヒトおよび非ヒトの霊長類、例えばチンパンジーおよび他の類人猿およびサル種；ウシ、ヒツジ、ブタ、ヤギおよびウマなどの家畜；イヌやネコなどの飼育哺乳動物；マウス、ラットおよびモルモットなどのげっ歯類を含む実験動物、が含まれる。用語は特定の年齢や性別を示さない。したがって、成人および新生児の被験体、ならびに胎児は、男性か女性かにかかわらず、この用語の範囲内に含まれることが意図されている。
【００２４】
被験体は、処置を必要とする疾病（例えば、腸炎症および／または繊維症、ＩＢＤ、および慢性大腸炎）、またはその疾病に関連する１以上の合併症に罹患しているかまたは有していると以前に診断されたか、または識別されたものであってもよく、かつ、随意に、その疾病に対する、またはその疾病に関する１以上の合併症に対する処置をすでに受けたものであってもよい。または、被験体は、以前に疾病、またはその疾病に関連する１以上の合併症を有すると診断されていないものであってもよい。例えば、被験体は、疾病についての、またはその疾病に関連する１以上の合併症についての１以上の危険因子を示すものであってもよく、または、危険因子を示さない被験体であってもよい。特定の疾病についての処置を「必要とする被験体」は、その疾病を有する疑いのある被験体、その疾病を有すると診断された被験体、その疾病についてすでに処置されたか処置されている被験体、その疾病について処置されていない被験体、疾病が進行する危険に瀕している被験体であってもよい。
【００２５】
「統計的に有意な」、または「有意に」という用語は、差があるという統計証拠を指す。これは、帰無仮説が実際に真である時に帰無仮説を棄却する決定を下す可能性として定義される。その決定はしばしばｐ値を使用してなされる。
【００２６】
「構成的発現」および「構成的に発現する」という用語は、遺伝子が連続的または絶え間なく発現されることを説明する。「過剰発現」および「過剰発現する」という用語は、遺伝子が正常よりも高いレベルで発現されることを説明する。
【００２７】
薬品スクリーニング方法およびシステム
本発明の様々な実施形態は、疾病のモデルを提供する。様々な実施形態では、疾病は、腸炎症および／または繊維症、炎症性腸疾患、および／または慢性大腸炎である。
【００２８】
本発明の様々な実施形態は、疾病に対して治療的であるものとして、薬剤を識別する方法を提供する。様々な実施形態では、方法は：疾病のモデルを提供する工程；モデルに薬剤を投与する工程；薬剤がＴＬ１Ａ活性を阻害するかどうかを測定するために、モデルにおける１以上の変化を検出する工程；および、疾病に対して治療的であるものとして、ＴＬ１Ａ活性を阻害すると測定された薬剤を識別する工程を含む。様々な実施形態では、疾病は、腸炎症および／または繊維症、炎症性腸疾患、および／または慢性大腸炎である。様々な実施形態では、方法はさらに、薬剤がＴＬ１Ａ活性を阻害するかどうかを測定するために、モデルにおける１以上の変化を検出する工程、および、疾病に対して治療的であるものとして、ＴＬ１Ａ活性を阻害するがＤＲ３活性は阻害しないと測定された薬剤を識別する工程を含みうる。
【００２９】
本発明の様々な実施形態は、疾病に対して治療的であるものとして、薬剤を識別するシステムもまた提供する。様々な実施形態では、システムは、疾病のモデルを含む。様々な実施形態では、システムはさらに、１以上の薬剤を含んでもよい。様々な実施形態では、システムはさらに、薬剤がＴＬ１Ａ活性を阻害するかどうかを測定するための１つ以上のアッセイを含んでもよい。様々な実施形態では、システムはさらに、薬剤がＤＲ３活性を阻害するかどうかを測定するための１つ以上のアッセイを含んでもよい。様々な実施形態では、疾病は、腸炎症および／または繊維症、炎症性腸疾患、および／または慢性大腸炎である。
【００３０】
様々な実施形態では、１以上の変化は、疾患活性指数（ＤＡＩ）における変化、結腸中の炎症、細胞浸潤（例えばＭＬＮおよびＬＰＭＣ中のＴ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、抗原提示細胞（ＡＰＣ）、樹状細胞（ＤＣ）およびマクロファージ（ＭФ））、Ｔ細胞活性化、ＡＰＣ活性化、ＤＣ活性化、ＭФ活性化、ＩＮＦγ生産ＣＤ４＋Ｔ細胞の量、ＩＬ１７生産ＣＤ４＋Ｔ細胞の量、ＩＬ１３生産ＣＤ４＋Ｔ細胞の量、ＣＤ４４活性化または発現、ＣＤ８０活性化または発現、ＣＸＣＲ３活性化または発現、体重減少または増加、またはその組み合わせ、が含まれる。
【００３１】
様々な実施形態では、モデルは細胞である。様々な実施形態では、モデルはゲノム変質のない細胞である。いくつかの実施形態では、モデルは野生型細胞である。様々な実施形態では、モデルはゲノムが変質した細胞である。本発明によれば、細胞は、動物、げっ歯類またはヒト由来であってもよい。様々な実施形態では、モデルは動物である。様々な実施形態では、モデルはゲノム変質のない動物である。いくつかの実施形態では、モデルは野生型動物である。様々な実施形態では、モデルはゲノムが変質した動物である。本発明によれば、動物はげっ歯類、マウス、ラットまたはモルモットであってもよい。
【００３２】
いくつかの実施形態では、モデルは、ＴＬ１Ａおよび／またはＤＲ３を過剰発現または構成的に発現するある量の細胞である。他の実施形態では、モデルは、ＴＬ１Ａおよび／またはＤＲ３を過剰発現または構成的に発現するある量の細胞を注入された動物である。一実施形態では、動物は免疫不全のげっ歯類である。一実施形態では、細胞は、ＴＬ１Ａおよび／またはＤＲ３を過剰発現または構成的に発現する導入遺伝子を有する遺伝子導入動物からプロセスによって得られ、該プロセスは；遺伝子導入動物由来の細胞の集団を含むサンプルを得る工程；ＴＬ１Ａおよび／またはＤＲ３を過剰発現または構成的に発現する細胞の第１の亜集団、およびＴＬ１ＡまたはＤＲ３のいずれも過剰発現または構成的に発現しない細胞の第２の亜集団にサンプルを分類する工程；および、第１の亜集団を第２の亜集団から分離する工程であって、それにより、ＴＬ１Ａおよび／またはＤＲ３を過剰発現するかまたは構成的に発現する細胞を単離する工程、を含む。
【００３３】
様々な実施形態では、モデルは、ＴＬ１Ａおよび／またはＤＲ３を過剰発現または構成的に発現する導入遺伝子を有する遺伝子導入動物である。一実施形態では、ＴＬ１Ａおよび／またはＤＲ３の過剰発現または構成的発現は、細胞型に特異的である。いくつかの実施形態では、細胞型は骨髄性細胞である。ある実施形態では、骨髄性細胞は抗原提示細胞（ＡＰＣ）または樹状細胞（ＤＣ）である。他の実施形態では、細胞型はリンパ球様細胞である。ある実施形態では、リンパ球様細胞はＴ細胞である。様々な実施形態では、細胞型は蛍光マーカーを発現する。
【００３４】
様々な実施形態では、モデルは遺伝子ノックアウト（ＫＯ）動物である。本明細書に使用されるとおり、「遺伝子ノックアウト動物」という用語は、１以上の遺伝子が不活性化、破壊、欠失、または「ノックアウト」されている、遺伝子的に改変された動物を指す。例えば、ＴＬ１Ａノックアウト動物は、そのＴＬ１Ａ遺伝子が不活性化、破壊、欠失または「ノックアウト」され、ＤＲ３ノックアウト動物はそのＤＲ３遺伝子が不活性化、破壊、欠失または「ノックアウト」されている。様々な実施形態では、モデルは、ノックアウトされたＴＬ１Ａおよび／またはＤＲ３遺伝子を有する遺伝子ノックアウト動物である。いくつかの実施形態では、モデルはＴＬ１Ａノックアウト動物である。いくつかの実施形態では、モデルはＤＲ３ノックアウト動物である。
【００３５】
様々な実施形態では、モデルは、モデルから単離された骨髄性細胞のサンプル中の全骨髄性細胞の約３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、または９９％において、ＴＬ１Ａ、ＤＲ３および蛍光マーカーを発現する。様々な実施形態では、モデルは、モデルから単離されたリンパ球様細胞のサンプル中の全リンパ球様細胞の約３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、または９９％において、ＴＬ１Ａ、ＤＲ３および蛍光マーカーを発現する。様々な実施形態では、モデルは、モデルから単離された骨髄性細胞のサンプル中の全骨髄性細胞の約３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、または９９％において、ＴＬ１Ａおよび蛍光マーカーを発現する。様々な実施形態では、モデルは、モデルから単離された骨髄性細胞のサンプル中の全骨髄性細胞の約３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、または９９％において、ＤＲ３および蛍光マーカーを発現する。様々な実施形態では、モデルは、モデルから単離されたリンパ球様細胞のサンプル中の全リンパ球様細胞の約３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、または９９％において、ＴＬ１Ａおよび蛍光マーカーを発現する。様々な実施形態では、モデルは、モデルから単離されたリンパ球様細胞のサンプル中の全リンパ球様細胞の約３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、または９９％において、ＤＲ３および蛍光マーカーを発現する。
【００３６】
様々な実施形態では、モデルは、線維性狭窄（ｆｉｂｒｏｓｔｅｎｏｓｉｓ）、消化（ＧＩ）管における炎症、体重減少、および／または疾患活性指数の増加を示す。
【００３７】
様々な実施形態では、モデルはＤＳＳ誘導大腸炎を有する。様々な実施形態では、モデルは養子移植によって誘導される大腸炎を有する。様々な実施形態では、モデルは養子移植大腸炎モデルである。
【００３８】
処置方法
本発明の様々な実施形態は、被験体における疾病を処置し、予防し、それを有する可能性を低下させ、その重症度を低下させ、および／またはその進行を遅らせる方法を提供する。様々な実施形態において、方法は、ＴＬ１Ａ活性を阻害する薬剤を提供する工程；および、被験体へ治療上有効な量の薬剤を投与する工程であって、それにより、被験体における疾病を処置し、予防し、それを有する可能性を低下させ、その重症度を低下させ、および／またはその進行を遅らせる工程を含む。様々な実施形態では、薬剤はＤＲ３活性を阻害しない。様々な実施形態では、薬剤は抗ＴＬ１Ａ抗体またはその機能性フラグメントである。いくつかの実施形態では、抗ＴＬ１Ａ抗体の機能性フラグメントは、ＴＬ１Ａに特異的に結合する抗原結合性フラグメントである。
【００３９】
様々な実施形態では、疾病は、腸炎症および／または繊維症、炎症性腸疾患、および／または慢性大腸炎である。様々な実施形態では、被験体はヒトである。様々な実施形態では、被験体は、ヒト、サル、類人猿、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ヤギ、ブタ、ウサギ、マウスおよびラットを含むが、これらに限定されない哺乳類の被験体である。
【００４０】
ＴＬ１Ａ活性を阻害する有効な量の薬剤の典型的な用量は、既知の治療用分子または化合物が使用される、製造業者に推奨される範囲内であってもよく、細胞におけるインビトロ応答、または、動物モデルにおけるインビボ応答内で、当業者に示されている範囲内であってもよい。このような用量は、典型的には、関連する生物学的活性を失うことなく、濃度または量において、最大約１桁まで減少させることができる。実際の投与量は、例えば、関連する培養細胞または組織培養した組織サンプルのインビトロ応答性、または、適切な動物モデルにおいて観察された応答に基づく、医師の判断、患者の状態、および、治療法の有効性に左右される場合がある。様々な実施形態では、薬剤は、有効な量の薬剤を被験体に投与するために、１日１回（ＳＩＤ／ＱＤ）、１日２回（ＢＩＤ）、１日３回（ＴＩＤ）、１日４回（ＱＩＤ）、またはそれより多く、投与されてもよく、有効な量は本明細書に記載の用量のいずれか１つまたはそれ以上である。
【００４１】
様々な実施形態では、薬剤は、約０．００１−０．０１、０．０１−０．１、０．１−０．５、０．５−５、５−１０、１０−２０、２０−５０、５０−１００、１００−２００、２００−３００、３００−４００、４００−５００、５００−６００、６００−７００、７００−８００、８００−９００、または９００−１０００ｍｇ／ｋｇ、または、その組み合わせで投与される。様々な実施形態では、薬剤は、約０．００１−０．０１、０．０１−０．１、０．１−０．５、０．５−５、５−１０、１０−２０、２０−５０、５０−１００、１００−２００、２００−３００、３００−４００、４００−５００、５００−６００、６００−７００、７００−８００、８００−９００、または９００−１０００ｍｇ／m２、または、その組み合わせで投与される。様々な実施形態では、薬剤は１回、２回、３回、またはそれ以上、投与される。様々な実施形態では、薬剤は１日当たり約１−３回、１週当たり１−７回、１か月当たり１−９回、または、１年当たり１−１２回投与される。様々な実施形態では、薬剤は、約１−１０日、１０−２０日、２０−３０日、３０−４０日、４０−５０日、５０−６０日、６０−７０日、７０−８０日、８０−９０日、９０−１００日、１−６か月、６−１２か月、または、１−５年の間、投与される。ここで、「ｍｇ／ｋｇ」は、被験体の体重ｋｇ当たりのｍｇを指し、かつ、「ｍｇ／m２」は、被験体の体表面積m２当たりのｍｇを指す。ある実施形態では、薬剤はヒトに投与される。様々な実施形態では、薬剤は抗ＴＬ１Ａ抗体またはその機能性フラグメントである。
【００４２】
様々な実施形態では、薬剤の有効量は、約０．００１−０．０１、０．０１−０．１、０．１−０．５、０．５−５、５−１０、１０−２０、２０−５０、５０−１００、１００−２００、２００−３００、３００−４００、４００−５００、５００−６００、６００−７００、７００−８００、８００−９００、または９００−１０００μｇ／ｋｇ／ｄａｙ、または、その組み合わせのいずれか１つまたはそれ以上である。様々な実施形態では、薬剤の有効量は、約０．００１−０．０１、０．０１−０．１、０．１−０．５、０．５−５、５−１０、１０−２０、２０−５０、５０−１００、１００−２００、２００−３００、３００−４００、４００−５００、５００−６００、６００−７００、７００−８００、８００−９００、または９００−１０００μｇ／m２／ｄａｙ、または、その組み合わせのいずれか１つまたはそれ以上である。様々な実施形態では、薬剤の有効量は、約０．００１−０．０１、０．０１−０．１、０．１−０．５、０．５−５、５−１０、１０−２０、２０−５０、５０−１００、１００−２００、２００−３００、３００−４００、４００−５００、５００−６００、６００−７００、７００−８００、８００−９００、または９００−１０００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ、または、その組み合わせのいずれか１つまたはそれ以上である。様々な実施形態では、有効な量の薬剤は、約０．００１−０．０１、０．０１−０．１、０．１−０．５、０．５−５、５−１０、１０−２０、２０−５０、５０−１００、１００−２００、２００−３００、３００−４００、４００−５００、５００−６００、６００−７００、７００−８００、８００−９００、または９００−１０００ｍｇ／m２／ｄａｙ、または、その組み合わせのいずれか１つまたはそれ以上である。ここで、「μｇ／ｋｇ／ｄａｙ」または「ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ」は、１日当たりの被験体の体重ｋｇあたりのμｇまたはｍｇを指し、かつ、「μｇ／m２／ｄａｙ」または「ｍｇ／m２／ｄａｙ」は、１日当たりの被験体の体表面積m２あたりのμｇまたはｍｇを指す。ある実施形態では、薬剤はヒトに投与される。様々な実施形態では、薬剤は抗ＴＬ１Ａ抗体またはその機能性フラグメントである。
【００４３】
いくつかの実施形態では、薬剤は、疾病を予防する段階（すなわち、被験体が疾病を進行させていないが、疾病を進行させる可能性が高い、または進行するプロセスにある時）で投与されてもよい。他の実施形態では、薬剤は、疾病の処置段階（すなわち、被験体が既に疾病を進行させた時）で投与されてもよい。
【００４４】
本発明によれば、薬剤は、投与の適切な方法、例えば、薬剤のそれぞれについて製造業者に推奨されている投与の様式、を使用して投与されてもよい。本発明によれば、様々な経路が本願方法の薬剤を投与するために利用されてもよく、これらは、限定されないが、静脈内、動脈内、筋肉内、皮下、腹腔内、エアロゾル、経鼻、経吸入、経口、経粘膜、経皮、非経口、インプラント可能なポンプまたはリザーバ、持続注入、腸内適用、局所適用、局所投与、カプセルおよび／または注射を含む。様々な実施形態では、薬剤は、局所的、血管内、静脈内、動脈内、筋肉内、皮下、腹腔内、鼻腔内、または経口で投与される。
【００４５】
医薬組成物
本発明の様々な実施形態は、さらにＴＬ１Ａ活性を阻害する薬剤を含む組成物を提供する。様々な実施形態では、薬剤はＤＲ３活性を阻害しない。本発明によれば、本明細書に記載される組成物は、被験体における疾病を処置し、予防し、それを有する可能性を低下させ、その重症度を低下させ、および／またはその進行を遅らせるために使用されてもよい。様々な実施形態では、疾病は、腸炎症および／または繊維症、炎症性腸疾患、および／または慢性大腸炎である。様々な実施形態では、被験体はヒトである。様々な実施形態では、薬剤は抗ＴＬ１Ａ抗体またはその機能性フラグメントである。いくつかの実施形態では、抗ＴＬ１Ａ抗体の機能性フラグメントは、ＴＬ１Ａに特異的に結合する抗原結合性フラグメントである。
【００４６】
様々な実施形態では、組成物中の薬剤は、被験体の体重キログラムあたりの薬剤ｍｇで提供され、例えば、約０．００１−０．０１、０．０１−０．１、０．１−０．５、０．５−５、５−１０、１０−２０、２０−５０、５０−１００、１００−２００、２００−３００、３００−４００、４００−５００、５００−６００、６００−７００、７００−８００、８００−９００または９００−１０００ｍｇ／ｋｇである。様々な実施形態では、組成物中の薬剤は被験体の体重キログラムあたりの薬剤ｍｇで提供され、例えば、約０．００１−０．０１、０．０１−０．１、０．１−０．５、０．５−５、５−１０、１０−２０、２０−５０、５０−１００、１００−２００、２００−３００、３００−４００、４００−５００、５００−６００、６００−７００、７００−８００、８００−９００または９００−１０００ｍｇ／m２である。ある実施形態では、組成物はヒトに投与される。
【００４７】
様々な実施形態では、本発明に係る医薬組成物は任意の投与経路を介して送達のために処方されてもよい。「投与経路」は、当該技術分野で公知の任意の投与経路を指してもよく、エアロゾル、経鼻、経口、経粘膜、経皮、非経口、経腸、局所または局部的な投与経路を含むが、これらに限定されない。「非経口」は、頭蓋内、脳室内、髄腔内、硬膜外、硬膜内、眼窩内、注入、動脈内、嚢内、心臓内、皮内、筋肉内、腹腔内、肺内、脊髄内、胸骨内（ｉｎｔｒａｓｔｅｒｎａｌ）、髄腔内、子宮内、静脈内、蜘蛛膜下、嚢下、皮下、経粘膜、経気管、を含む、一般に注射に関連する投与経路を指す。非経口経路を介して、組成物は、注入用または注射用の溶液または懸濁液の形態であってもよく、または凍結乾燥粉末としての形態であってもよい。経腸経路を介して、医薬組成物は、制御放出が可能な、錠剤、ゲルカプセル剤、糖衣錠、シロップ剤、懸濁液、溶液、粉末、顆粒剤、エマルジョン、小球体またはナノ球体または脂質小胞かポリマー小胞の形態であってもよい。局所経路を介して、医薬組成物は、エアロゾル、ローション、クリーム、ゲル、軟膏、懸濁液、溶液またはエマルジョンの形態であってもよい。これらの投与のための方法は、当業者には公知である。ある実施形態では、組成物は、血管内、静脈内、動脈内、筋肉内、皮下、腹腔内、鼻腔内、または経口投与で処方される。
【００４８】
好ましい組成物は、哺乳動物に投与された時、さらに最小限の毒性を示すであろう。様々な実施形態では、組成物は１日当たり１−３回、１週当たり１−７回、１か月当たり１−９回、または１年当たり１−１２回、投与される。様々な実施形態では、組成物は、約１−１０日、１０−２０日、２０−３０日、３０−４０日、４０−５０日、５０−６０日、６０−７０日、７０−８０日、８０−９０日、９０−１００日、１−６か月、６−１２か月、または、１−５年の間、投与される。様々な実施形態では、組成物は、有効な量の薬剤を被験体に投与するために、１日１回（ＳＩＤ／ＱＤ）、１日２回（ＢＩＤ）、１日３回（ＴＩＤ）、１日４回（ＱＩＤ）、またはそれより多く、投与されてもよく、有効な量は本明細書に記載の用量のいずれか１つまたはそれ以上である。
【００４９】
様々な実施形態では、本発明に係る医薬組成物は、薬学的に許容可能な賦形剤を含むことができる。「薬学的に許容可能な賦形剤」とは、一般に安全で、無毒で、望ましい医薬組成物を調製するのに役立つ賦形剤を意味し、動物への使用とヒトの製薬用途にも許容可能な賦形剤を含んでいる。このような賦形剤は、固体、液体、半固体、または、エアロゾル組成物の場合には、ガス状であってもよい。賦形剤の例としては、限定されないが、デンプン、砂糖、微結晶性セルロース、希釈材、造粒剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤、加湿剤、乳化剤、着色料、剥離剤、コーティング剤、甘味料、香料、芳香剤、保存料、酸化防止剤、可塑剤、ゲル化剤、増粘剤、硬化剤、止め薬、懸濁化剤、界面活性剤、湿潤剤、担体、安定剤、および、それらの組み合わせが含まれる。
【００５０】
様々な実施形態では、本発明に係る医薬組成物は、薬学的に許容可能な担体を含むことができる。本明細書に使用される「薬学的に許容可能な担体」とは、目的の化合物を、ある組織、器官、または身体の一部から、別の組織、器官、または体の一部に、運搬または輸送することに関与する薬学的に許容される物質、組成物、またはビヒクルを指す。例えば、担体は、液体または固体充填剤、希釈剤、賦形剤、溶媒、またはカプセル化材料、またはそれらの組み合わせであってもよい。担体の構成要素のそれぞれは、製剤の他の成分と適合しなければならないという点で「薬学的に許容可能」でなければならない。それはまた、接触する可能性がある組織、または、器官と接触して使用するのに適していなければならず、これは毒性、刺激、アレルギー反応、免疫原性、または治療上の利点を過度に上回る他の任意の合併症、の危険性を保有しないことを意味する。
【００５１】
本発明に係る医薬組成物はまた、経口投与用のエマルジョンかシロップにカプセル化、錠剤化、または、調製することができる。薬学的に許容可能な固体または液体の担体は、組成物を増強または安定化するため、または組成物の調製を容易にするために添加されてもよい。液体の担体には、シロップ、落花生油、オリーブオイル、グリセリン、生理食塩水、アルコールおよび水が含まれる。固体の担体には、デンプン、ラクトース、硫酸カルシウム、二水和物、白土、ステアリン酸マグネシウムまたはステアリン酸、タルク、ペクチン、アラビアゴム、寒天培地またはゼラチンが含まれる。担体はまた、グリセリルモノステアレートまたはグリセリルジステアレートなどの徐放性材料を、単独で、またはワックスとともに含んでもよい。
【００５２】
医薬調製物は、粉末形態については、乾燥製粉、混合、および配合；必要な時には、錠剤形態については、製粉、混合、顆粒化、および、圧縮；または、硬ゼラチンカプセル形態については製粉、混合および充填、を含む従来の薬学的技術に従って製造される。液体の担体が使用される時、調製物は、シロップ、エリキシル、エマルジョンまたは水性または非水性懸濁液の形態である。そのような液体製剤は、直接経口で投与してもよく、または軟ゼラチンカプセルに充填されてもよい。
【００５３】
本発明に係る医薬組成物は、治療上有効な量で送達されてもよい。正確な治療上有効な量は、所与の被験体における治療の有効性に関して最も効果的な結果をもたらすであろう組成物の量である。この量は、治療の化合物の特性（活性、薬物動態、薬力学、およびバイオアベイラビリティを含む）、被験体の生理学的状態（年齢、性別、疾患の種類および段階、一般的な身体状態、所与の用量に対する応答性、および投薬の種類を含む）、製剤中の薬学的に許容可能な担体または性質、および、投与経路、を含むが、これらに限定されない、様々な要因によって異なる。臨床および薬理学分野の当業者であれば、例えば化合物の投与に対する被験体の応答をモニタリングし、それに応じて用量を調整することにより、慣例的な実験を通じて治療上有効な量を決定することができるであろう。補足ガイダンスについては、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  （Ｇｅｎｎａｒｏ  ｅｄ．  ２０ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ  ＰＡ，  ＵＳＡ）  （２０００）を参照されたい。
【００５４】
患者に投与する前に、処方物を組成物に添加してもよい。液体製剤が好ましい場合がある。例えば、これらの処方物は油、ポリマー、ビタミン、炭水化物、アミノ酸、塩類、緩衝液、アルブミン、界面活性剤、充填剤、またはそれらの組み合わせを含んでもよい。
【００５５】
炭水化物処方物は、単糖類、二糖類または多糖類または水溶性グルカンなどの糖または糖アルコールを含む。糖類またはグルカンは、フルクトース、デキストロース、ラクトース、グルコース、マンノース、ソルボース、キシロース、マルトース、スクロース、デキストラン、プルラン、デキストリン、アルファおよびベータシクロデキストリン、可溶性デンプン、ヒドロキシエチルデンプンおよびカルボキシメチルセルロース、またはそれらの混合物を含むことがある。「糖アルコール」は、−ＯＨ基を有するＣ４−Ｃ８炭化水素として定義され、ガラクチトール、イノシトール、マンニトール、キシリトール、ソルビトール、グリセロールおよびアラビトールを含んでいる。上述の糖または糖アルコールは、個別に、または、組み合わせて使用してもよい。糖または糖アルコールが水性調製物において可溶性である限り、使用量には一定の制限はない。一実施形態では、糖または糖アルコール濃度は、１．０ｗ／ｖ％と７．０ｗ／ｖ％の間であり、より好ましくは、２．０と６．０ｗ／ｖ％の間である。
【００５６】
アミノ酸処方物は、カルニチン、アルギニンおよびベタインの左旋性（Ｌ）形態を含んでいるが、しかし、他のアミノ酸が添加されてもよい。
【００５７】
ポリマー処方物は、平均分子量が２，０００から３，０００のポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、または、平均分子量が３，０００から５，０００のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む。
【００５８】
凍結乾燥前または再構成後の溶液におけるｐＨ変化を最小化するために、組成物中に緩衝液を使用することもまた好ましい。クエン酸塩、リン酸塩、コハク酸塩、およびグルタミン酸塩緩衝液またはそれらの混合物を含むが、これに限定されないほとんどの生理学的緩衝液が使用されてもよい。いくつかの実施形態では、濃度は０．０１から０．３モルである。製剤に添加することができる界面活性剤は、欧州特許第２７０，７９９号および第２６８，１１０号に示されている。
【００５９】
循環半減期を増加させるための別の薬物送達システムは、リポソームである。リポソーム送達システムを調製する方法は、Ｇａｂｉｚｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  （１９８２）  ４２：４７３４；  Ｃａｆｉｓｏ，  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ  （１９８１）  ６４９：１２９；  ａｎｄ  Ｓｚｏｋａ，  Ａｎｎ  Ｒｅｖ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｅｎｇ  （１９８０）  ９：４６７において議論されている。他の薬物送達システムは当該技術分野で公知であり、例えばＰｏｚｎａｎｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．，  ＤＲＵＧ  ＤＥＬＩＶＥＲＹ  ＳＹＳＴＥＭＳ  （Ｒ．  Ｌ．  Ｊｕｌｉａｎｏ，  ｅｄ．，  Ｏｘｆｏｒｄ，  Ｎ．Ｙ．  １９８０），  ｐｐ．  ２５３−３１５；  Ｍ．  Ｌ．  Ｐｏｚｎａｎｓｋｙ，  Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｖｓ  （１９８４）  ３６：２７７に記載されている。
【００６０】
液体の医薬組成物が調製された後、分解を防ぎかつ無菌性を保護するために、凍結乾燥されてもよい。液体の組成物を凍結乾燥する方法は、当該技術分野の当業者には公知である。使用直前に、組成物は、追加の成分を含んでもよい滅菌希釈剤（例えば、リンゲル液、蒸留水、または滅菌生理食塩水）で再構成されてもよい。再構成に際して、組成物は当業者に知られている方法を使用して、被験体に投与される。
【００６１】
本発明の組成物は、従来の周知の滅菌技術によって殺菌されてもよい。結果として生じた溶液は、使用のために包装してもよく、無菌条件下で濾過し凍結乾燥してもよく、凍結乾燥した調製物を投与前に滅菌溶液と混合する。組成物は、ｐＨ調整緩衝剤、等張化剤等、例えば酢酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、安定剤（例えば１−２０％のマルトースなど）、などの、生理学的条件に接近するために求められるような薬学的に許容可能な補助物質を含んでもよい。
【００６２】
本発明に係る医薬組成物はまた、標的細胞に治療薬剤を送達するためのビーズ系（ａ  ｂｅａｄ  ｓｙｓｔｅｍ）（例えば、ペクチン／ゼインヒドロゲルビーズ系）であってもよい（Ｙａｎ  Ｆ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．  ２０１１  Ｊｕｎ；  １２１（６）：２２４２−５３）。
【００６３】
本発明のキット
様々な実施形態では、本発明は被験体における疾病を処置し、予防し、その重症度を低下させ、および／またはその進行を遅らせるキットを提供する。様々な実施形態において、キットは、ＴＬ１Ａ活性を阻害する、ある量の薬剤；および、被験体における疾病を処置し、予防し、それを有する可能性を低下させ、その重症度を低下させ、および／またはその進行を遅らせるために薬剤を使用するための説明書、を含みうる。様々な実施形態では、薬剤はＤＲ３活性を阻害しない。様々な実施形態では、薬剤は抗ＴＬ１Ａ抗体またはその機能性フラグメントである。いくつかの実施形態では、抗ＴＬ１Ａ抗体の機能性フラグメントは、ＴＬ１Ａに特異的に結合する抗原結合性フラグメントである。
【００６４】
キットは、進歩性のある組成物または構成要素の少なくとも１つを含む、材料または構成要素の集合である。したがって、いくつかの実施形態では、キットは、上に記述されるように、治療薬で合成された薬物送達分子を含む組成物を含んでいる。
【００６５】
進歩性のあるキットにおいて構成された構成要素の正確な性質は、その意図される目的に依存する。一実施形態では、キットは、特に哺乳類の被験体を処置するために構成される。別の実施形態では、キットは、特にヒトの被験体を処置するために構成される。さらなる実施形態では、キットは、限定されないが、家畜、飼育動物および実験動物などの被験体を処置する、獣医学的用途のために構成される。
【００６６】
使用のための説明書がキットに含まれうる。「使用のための説明書」は、典型的には、所望の結果に影響を及ぼすためにキットの構成要素を用いることに使われる技術を記載する明確な表現を含む。随意に、キットはまた、他の有用な構成要素、例えば、スプレーボトルまたは缶、希釈剤、緩衝液、薬学的に許容可能な担体、注射器、カテーテル、塗布具（例えばクリーム、ゲルまたはローションの塗布具など）、ピペットまたは計量ツール、包帯材料または、当業者によって容易に認識されるような他の有用な道具一式、を含む。
【００６７】
その操作性と有用性を維持するあらゆる便利で適切な方法で格納された、キットにおいて組み立てられた材料または構成要素が、医師に提供され得る。例えば、構成要素は、溶解、脱水、または、凍結乾燥された形態である場合があり、それらは、室温、冷蔵または冷凍の温度で提供することができる。構成要素は、典型的には、適切な包装材料に包含される。本明細書に使用されるように、「包装材料」というフレーズは、進歩性のある組成物などのキットの内容物を収容するために使用される、１つ以上の物理的な構造を指す。包装材料は、周知の方法によって構築され、好ましくは、無菌の、汚染物質のない環境を提供する。キット中で使用される包装材料は、アッセイおよび治療において慣習的に利用される物である。本明細書で使用されるとおり、「包装」という用語は、個々のキット構成要素を保持することができる、ガラス、プラスチック、紙、箔などの、適切な固体マトリックスまたは材料を指す。したがって、例えば、包装は、本明細書に記述されるような、適切な量の組成物を含むために使用されるガラスバイアルであってもよい。包装材料は、一般に、キットおよび／またはその構成要素の内容物および／または目的を示す外部ラベルを有する。
【００６８】
多くの変形および代替要素が本発明の実施形態に開示された。なおさらなる変形および代替要素が、当業者には明白であろう。これらの変形のなかには、限定されないが、進歩性のある組成物のための構成モジュールの選択、および、それを用いて診断、予知または治療されうる疾患および他の臨床疾病がある。本発明の様々な実施形態は、これらの変形または要素のいずれかを具体的に含むかまたは除外することができる。
【００６９】
いくつかの実施形態では、本発明のある特定の実施形態を記載および請求するために使用される、成分の量、濃度などの特性、反応条件等を表す数字は、場合によっては「約」という用語によって修正されると理解されるべきである。１つの非限定的な例として、当業者は、「約」という用語の意味において、５％を超えない値の差（増加または減少）を一般に考慮するであろう。従って、いくつかの実施形態では、記載された明細書および添付の特許請求の範囲に示された数値パラメータは、特定の実施形態によって得られることが求められる所望の特性に応じて変化し得る近似値である。いくつかの実施形態では、数値パラメータは、報告された有効数字の数に照らし、かつ、通常の丸め技術を適用することにより解釈されるべきである。本発明のいくつかの実施形態の広い範囲を示す数値範囲およびパラメータは近似値であるにもかかわらず、特定の実施例に示された数値は、実施可能な限り正確に報告される。発明のいくつかの実施例中で提示された数値は、それぞれの試験測定値に見られる標準偏差から必然的に生じるある誤差を含んでもよい。
【００７０】
本明細書で開示される本発明の代替要素または実施形態のグループ分けは、限定として解釈されるべきではない。各グループの部分は、個別に、または、本明細書に見られるグループまたは他の要素の他の部分と任意に組み合わせて、参照されかつ請求されることができる。グループの１以上の部分は、利便性および／または特許性のために、グループに含め、または、削除したりすることができる。そのような任意の包含または削除が生じる時、本明細書は、修正されたグループを含むとみなされ、したがって、添付の特許請求の範囲で使用されるすべてのマーカッシュグループの記述を満たすと認められる。
【実施例】
【００７１】
本発明は、以下の実施例によってさらに説明されるが、これは本発明の純粋な例示であることが意図されており、決して本発明を限定するものとみなすべきではない。以下の実施例は、本願発明をより良く例証するために提供され、発明の範囲を限定すると解釈されるべきではない。特定の物質が言及されている範囲内においては、それは単なる例証のためであり、本発明を限定するものではない。当業者は、発明的な能力を発揮することなく、かつ、本発明の範囲を逸脱することなしに、同等の手段または反応物を開発しうる。
【００７２】
実施例１．ＤＲ３欠失ではないＴＬ１Ａは慢性大腸炎のマウスのモデルを改善した。
ＴＬ１Ａ（ＴＮＦＳＦ１５によりコードされるタンパク質）は、適応免疫応答を調節し、慢性大腸炎のマウスモデルを悪化させることが示されたＴＮＦファミリーメンバーおよびＩＢＤ関連遺伝子である。中和抗体によってＴｌ１ａを遮断すると、慢性大腸炎のマウスのモデルを処置できる。ＤＲ３はＴＬ１Ａのための既知の唯一の受容体である。しかしながら、腸粘膜炎症におけるその役割は実際には示されていない。
【００７３】
慢性大腸炎のマウスのモデルにおけるＴｌ１ａおよびＤｒ３欠失の役割を調査した。慢性のデキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ）および養子Ｔ細胞移植モデルが使用された。腸炎症の重症度は、疾患活性指数（ＤＡＩ、体重減少、糞便血液、糞便粘稠度からなる）および組織学的分析によって評価した。フローサイトメトリーは免疫細胞浸潤および活性化を測定するために使用された。ＥＬＩＳＡはサイトカイン分析に使用された。使用されたマウスはすべて同腹子であり、異なる遺伝子型のマウスは無作為に共同収容された。
【００７４】
慢性大腸炎マウスモデルにおいて中和Ｔｌ１ａ抗体を使用する報告書と一致して、Ｔｌ１ａ−／−マウスは、慢性ＤＳＳ処置を受けたＷＴマウスと比較して、ＤＡＩ、総腸炎症スコア、および組織学的炎症を有意に減少させたことがわかった（表１）。興味深いことに、Ｄｒ３−／−マウスは、マウスのＤＳＳ誘導大腸炎を改善しない（表１）。Ｄｒ３欠失ではなくＴｌ１ａ欠失は、ＭＬＮおよびＬＰＭＣ細胞浸潤を減少させ、炎症促進性サイトカインの発現を減少させた（ＩＦＮγおよびＩＬ１７、表１）。
【００７５】
【表１】
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【００７６】
養子Ｔ細胞移植モデルを使用して、慢性ＤＳＳ誘導大腸炎モデルにおける発見を確認し、かつ、腸粘膜炎症上でＴｌ１ａ−Ｄｒ３シグナル伝達の効果を媒介する可能性のある細胞型を測定した。移植されたＴ細胞（Ｔｌ１ａ−／−からＲａｇ１−／−へ）またはレシピエントＲａｇ１−／−（ＷＴからＴｌ１ａ−／−Ｒａｇ−／−）マウスのどちらかにおけるＴｌ１ａ欠失は、Ｒａｇ１−／−レシピエントへの対照ＷＴナイーブＴ細胞と比較して、同様の大腸炎疾患活性を有する（ｐ＝ＮＳ、データは示されず）。しかしながら、養子移植されたＴ細胞およびレシピエントＲａｇ１−／−（Ｔｌ１ａ−／−からＴｌ１ａ−／−Ｒａｇ−／−）の両方におけるＴｌ１ａ欠失は、大腸炎の疾患活性を改善した（表２）。Ｔ細胞（Ｄｒ３−／−からＲＡＧ１−／−）、レシピエントＲａｇ１−／−マウス（ＷＴからＤｒ３−／−Ｒａｇ１−／−）のいずれかにおけるＤｒ３欠失、または、移植されたＴ細胞およびレシピエントＲＡＧ１マウス（Ｄｒ３−／−からＤｒ３−／−Ｒａｇ１−／−）の両方は、対照と比較して、大腸炎を改善しなかった（表２および示されないデータ、ｐ＝ＮＳ）。
【００７７】
【表２】
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【００７８】
結論として、Ｄｒ３欠失ではなくＴｌ１ａ欠失は２つの慢性のマウスの大腸炎モデルを改善した。この結果は、ＩＢＤにおける選択の治療標的として、ＤＲ３ではなくＴＬ１Ａを強調している。
【００７９】
上記の様々な方法および技術は、本出願を実行するための多くの方法を提供する。勿論、記載された全ての目的または利点が、必ずしも本明細書に記載の特定の実施形態に従って達成されるわけではないことを理解されたい。したがって、例えば、当業者は、本明細書で教示または示唆される他の目的または利点を必ずしも達成することなく、本明細書で教示される利点または利点の群を達成または最適化する方法で、該方法を実施できることを認識するであろう。様々な代替案が本明細書に記載される。いくつかの好ましい実施形態は、具体的に１つの、または別の、または、いくつかの特徴を含み、一方で他の実施形態は具体的に１つの、または別の、またはいくつかの特徴を除外し、その一方で、さらに他の実施形態は、１つ、または別の、またはいくつかの有利な特徴を含むことによって特定の特徴を軽減することが理解されるべきである。
【００８０】
更に、当業者は、異なる実施形態からの様々な特徴の適用可能性を認識するであろう。同様に、上述した様々な要素、特徴および工程、ならびにそのような要素、特徴または工程のそれぞれについての他の既知の等価物を、当業者は、様々な組み合わせで使用して、本明細書に記載の原理に従って方法を実施することができる。様々な要素、特徴、および工程のうちいくつかは、具体的に含まれるであろうし、他のものは多様な実施形態において特に除外される。
【００８１】
本出願は、特定の実施形態および実施例の文脈において開示されているが、当業者であれば、本出願の実施形態は、具体的に開示された実施形態を超えて、他の代替的な実施形態および／またはその使用ならびにその修正およびその同等物に及ぶことを理解するであろう。
【００８２】
本出願を実施するために本発明者らに知られている最良の形態を含む、本出願の好ましい実施形態が本明細書に記載される。これらの好ましい実施形態の変形は、前述の説明を読むことによって当業者には明らかになるであろう。当業者は、このような変形を適切に用いることができ、かつ、本出願は、本明細書に具体的に記載されている以外の方法で実施することができると考えられる。従って、この出願の多くの実施形態は、適用しうる法によって許可されているように、本明細書に添付の特許請求の範囲に記載された主題のすべての修正および同等物を含む。さらに、本明細書中で別段指示されない限り、または明らかに文脈と矛盾しない限り、すべての可能なその変形における上記要素の任意の組み合わせが、本出願に包含される。
【００８３】
本明細書に参照される全ての特許、特許出願、特許出願公開公報、およびその他の資料、たとえば論文、本、明細書、出版物、文書、物、および／または同種のものは、同資料に関連する手続出願履歴、本文書と一致していないかまたは矛盾している同資料のいずれか、または、本文書に関連する現在またはその後の特許請求の範囲の最も広い範囲について限定的な影響を及ぼす可能性のある同資料のいずれか、を除き、すべての目的のために全体として参照により本明細書に組み込まれる。一例として、組み込まれた資料のいずれかに関連する用語の説明、定義、および／または使用法と、本文書に関連するそれらの間に不一致または矛盾がある場合、本文書における用語の説明、定義、および／または使用法が優先する。
【００８４】
本明細書で開示される本出願の実施形態は、本出願の実施形態の原理の例証であることが理解されるべきである。使用することができる他の修正は、本出願の範囲内でありうる。それゆえ、限定しない一例として、本明細書の教示によれば、本出願の実施形態の代替の構成を利用することができる。したがって、本出願の実施形態は、正確には、示され記載されたように実施形態に限定されない。
【００８５】
本発明の様々な実施形態は、上記の詳細な説明に記載されている。これらの説明は上記の実施形態を直接記載しているが、当業者であれば、本明細書に示され記載された特定の実施形態に対する修正および／または変形が考えられうることが理解されるべきである。この説明の範囲内におさまる任意のそのような修正または変形は、同様にその中に含まれることが意図される。特に言及されない限り、明細書および特許請求の範囲の単語および語句は、当業者にとって普通の慣用的な意味を与えられることを、発明者は意図している。
【００８６】
本出願を出願する時点で出願人に知られている本発明の様々な実施形態の前述の説明が提示されており、例証および説明の目的を意図されている。本発明の説明は網羅的であることを意図せず、本発明を開示された正確な形態に限定することを意図せず、上記の教示に照らせば多くの修正および変形が可能である。記載された実施形態は、本発明の原理およびその実用的な適用を説明すること、および、他の当業者が、様々な実施形態において、考えられる特定の用途に適した様々な修正を用いて、本発明を利用できるようにすること、のように機能する。したがって、本発明は、本発明を実施するために開示された特定の実施形態に限定されないことが意図される。
【００８７】
本発明の特定の実施形態が示され記載されたが、本明細書の教示に基づいて、本発明およびそのより幅広い態様から逸脱することなく、変更および修正がなされてもよく、したがって、添付の特許請求の範囲は、本発明の真の精神および範囲内にあるような、全てのそのような変更および修正をその範囲内に包含する、ということが当業者には明白であろう。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【国際調査報告】
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