(57)【要約】  哺乳動物において筋タンパク質合成を増進し、かつ／または筋タンパク質分解を低減することにより筋肉量および機能を保つのに適する方法および組成物が開示される。一実施形態では、哺乳動物に、必須アミノ酸、アミノ酸誘導体、および含窒素有機酸のうちの少なくとも２種を含むタンパク質増強組成物が投与される。特定の一実施形態では、タンパク質増強組成物は、ロイシン、Ｌ−カルニチン、およびクレアチンを含む。タンパク質増強組成物は、筋肉においてＴＮＦ−αを減少させ、ｍＴＯＲ発現を増加させうる。医薬組成物およびその製造方法も開示される。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物において筋タンパク質合成を増進する、かつ／または筋タンパク質分解を低減することにより筋肉量および機能を保つ方法であって、哺乳動物に、有効量のタンパク質増強組成物を投与するステップを含み、前記タンパク質増強組成物は、アミノ酸成分、含窒素有機酸もしくはその誘導体、またはアミノ酸成分および含窒素有機酸もしくはその誘導体の両方と組み合わされたアミノ酸誘導体を含み、アミノ酸誘導体は、カルニチンまたはその誘導体を含む、方法。
【請求項２】
タンパク質増強組成物が、必須アミノ酸を含むアミノ酸成分を含有する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
アミノ酸成分がロイシンを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
アミノ酸誘導体がＬ−カルニチンを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
タンパク質増強組成物が、クレアチンを含む含窒素有機酸を含有する、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
含窒素有機酸がマグネシウムキレートクレアチンを含む、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
タンパク質増強組成物がマグネシウムまたはその塩をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
タンパク質増強組成物がビタミンＤをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
タンパク質増強組成物が食品または飲料に含有される、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
タンパク質増強組成物が、少なくとも１〜３日毎に投与される、または少なくとも５０日間連続して投与される、または１日に１〜４回投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
Ｌ−カルニチンが、１用量あたり５０ミリグラム〜５，０００ミリグラムの量で哺乳動物に投与される、請求項４に記載の方法。
【請求項１２】
ロイシンが、１用量あたり５０ミリグラム〜５，０００ミリグラムの量で哺乳動物に投与される、請求項３に記載の方法。
【請求項１３】
哺乳動物がヒトである、または哺乳動物が非活動的である、または哺乳動物が身体活動的である、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
Ｌ−カルニチンが、１用量あたり１００ミリグラム〜３，０００ミリグラムの量で哺乳動物に投与される、請求項４に記載の方法。
【請求項１５】
ロイシンが、１用量あたり１００ミリグラム〜４，０００ミリグラムの量で哺乳動物に投与される、請求項３に記載の方法。
【請求項１６】
クレアチンが、１用量あたり０ミリグラム〜２０，０００ミリグラムの量で哺乳動物に投与される、請求項５に記載の方法。
【請求項１７】
タンパク質増強組成物が、哺乳動物において除脂肪筋肉量を増加させるのに十分な量で哺乳動物に投与される、またはタンパク質増強組成物が、サルコペニアを治療もしくは予防するのに十分な量で哺乳動物に投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
タンパク質増強組成物が、筋肉中のＴＮＦ−αの量を減少させるのに十分な量で哺乳動物に投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
タンパク質増強組成物が、筋肉中のｍＴＯＲ発現を増加させるのに十分な量で哺乳動物に投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
ｍＴＯＲ発現が、タンパク質増強組成物を受け取らなかった同じ哺乳動物に比べて、活動後に４０％より大きく増加する、請求項１に記載の方法。
【請求項２１】
タンパク質増強組成物を含む、筋タンパク質合成および／または機能強度を増大させるための組成物であって、前記タンパク質増強組成物は、アミノ酸成分と、アミノ酸誘導体と、クレアチンを含む含窒素有機酸とを含み、アミノ酸成分は、ロイシンを含み、アミノ酸誘導体は、Ｌ−カルニチンを含む、組成物。
【請求項２２】
Ｌ−カルニチンが、１用量あたり３０ミリグラム〜５，０００ミリグラムの量でタンパク質増強組成物中に存在し、ロイシンが、１用量あたり３０ミリグラム〜５，０００ミリグラムの量でタンパク質増強組成物中に存在し、クレアチンが、１用量あたり５０ミリグラム〜２０，０００ミリグラムの量でタンパク質増強組成物中に存在する、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２３】
タンパク質増強組成物を含む、筋タンパク質合成および／または機能強度を増大させるための組成物であって、前記タンパク質増強組成物は、クレアチンを含む有機酸とアミノ酸構成要素とを含み、アミノ酸構成要素は、
（Ａ）アミノ酸構成要素の４０質量％より多い量で存在するロイシンと、
（Ｂ）アミノ酸構成要素の１５質量％より多い量で存在するＬ−カルニチンと
を含む、組成物。
【請求項２４】
高分子結合剤および安定剤パッケージと組み合わされたタンパク質増強組成物を含む医薬組成物であって、安定剤パッケージは、酸化物粒子とカルボン酸の塩とを含む、医薬組成物。
【請求項２５】
酸化物粒子がシリカを含み、カルボン酸の塩が脂肪酸の塩を含む、請求項２４に記載の医薬組成物。
【請求項２６】
脂肪酸の塩が、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、またはこれらの混合物を含み、高分子結合剤が、デンプン、アラビアゴム、マルトデキストリン、アラビノガラクタン、ゼラチン、多糖、またはこれらの混合物を含む、請求項２５に記載の医薬組成物。
【請求項２７】
カルボン酸の塩が、脂肪酸の塩を含み、脂肪酸は、炭素鎖長が約６個の炭素原子〜約４０個の炭素原子、たとえば、約１２個の炭素原子〜約２８個の炭素原子である、請求項２４に記載の医薬組成物。
【請求項２８】
タンパク質増強組成物が、カルニチン、アミノ酸、および有機酸を含む、請求項２４に記載の医薬組成物。
【請求項２９】
脂肪を含むコーティング材料をさらに含み、コーティング材料は、水素添加パーム油を含み、コーティング材料は、パームステアリンをさらに含む、請求項２４に記載の医薬組成物。
【請求項３０】
高分子結合剤が、デンプン、アラビアゴム、マルトデキストリン、アラビノガラクタン、ゼラチン、またはこれらの混合物を含み、酸化物粒子が、シリカを含み、カルボン酸の塩が、ステアリン酸塩を含み、医薬組成物が、脂肪を含むコーティング材料をさらに含有し、シリカは、組成物中に約０．１％〜約１．５％の量で存在し、ステアリン酸塩は、組成物中に約０．５重量％〜約５重量％の量で存在し、コーティング材料は、組成物中に約５重量％〜約４０重量％の量で存在し、タンパク質増強組成物が、カルニチンを含む、請求項２４に記載の医薬組成物。
【請求項３１】
タンパク質増強組成物を、噴霧乾燥法において高分子結合剤と組み合わせるステップと、
ポリマー増強組成物および高分子結合剤を安定剤パッケージと組み合わせるステップであって、安定剤パッケージは、酸化物粒子およびカルボン酸の塩を含み、安定剤パッケージは、乾燥混合物を含む、ステップと、
場合により、タンパク質増強組成物と、高分子結合剤と、安定剤パッケージとが組み合わせられた後、コーティング材料を適用するステップと
を含む、医薬組成物を製造する方法。
【請求項３２】
タンパク質増強組成物がカルニチンを含む、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
タンパク質増強組成物が、ロイシンなどのアミノ酸をさらに含む、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
タンパク質増強組成物がクレアチンをさらに含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
医薬組成物が粒状物を含む、請求項３１に記載の方法。
【請求項３６】
医薬組成物を錠剤に形づくるステップをさらに含む、請求項３１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
[0001]本出願は、どちらも参照により本明細書に組み込まれる２０１５年１２月３１日出願の米国仮特許出願第６２／２７３，８８０号および２０１５年１２月１８日出願の米国仮特許出願第６２／２６９，５７３号に基づいており、これらに関する優先権を主張する。
【背景技術】
【０００２】
[0002]多くの哺乳動物は、中期から後期成体期に入ると、機能衰退を経験することがある。機能衰退は、摂食や歩行などの基本的な機能活動を行う能力の衰えに関係する。運動機能の障害は、ひいては、自立性の喪失および生活の質の低下につながりかねない。
【０００３】
[0003]非活動的および身体活動的な両方の哺乳動物における機能衰退の主要な一因は、筋肉量、強度、および機能の漸進的な低下を特徴とする加齢に関連した状態である、サルコペニアである。サルコペニアになると、身体は、筋タンパク質合成から筋分解への全体的な移行を経験する。
【０００４】
[0004]タンパク質原性アミノ酸分子は、必須アミノ酸および非必須アミノ酸として類別することができる。身体において合成することができる非必須アミノ酸には、アラニン、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン酸、アルギニン、システイン、グルタミン、チロシン、グリシン、プロリン、およびセリンが含まれる。ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リシン、メチオニン、フェニルアラニン、トレオニン、トリプトファン、バリンなどの必須アミノ酸は、生合成されることがなく、代わりに、食物から、または補給によって摂取しなければならない。筋タンパク質合成において、必須アミノ酸の利用能が律速である。したがって、必須アミノ酸の補給によって、タンパク質合成を増強することができる。筋タンパク質合成は、哺乳類ラパマイシン標的タンパク質（ｍＴＯＲ）経路によって活性化される。ｍＴＯＲ経路は、アミノ酸およびインスリン様成長因子（ＩＧＦ−１）などの成長因子の変化を感知し、これに反応する。詳細には、ｍＴＯＲ複合体は、リボソームタンパク質Ｓ６を次にリン酸化するリボソームタンパク質Ｓ６Ｋと、基質ｅＩＦ４Ｂおよび４ＥＢＰ１をリン酸化し、その結果として、ｍＲＮＡ翻訳およびタンパク質合成を促進する。ｍＴＯＲ経路に関与するタンパク質は、タンパク質合成のバイオマーカーとなりうる。
【０００５】
[0005]またＮＦκβ（ｐ６５／ｐ５０）炎症促進性シグナル伝達経路は、筋機能の調節との関連が示唆されている。ＮＦκβタンパク質レベルは、筋萎縮では強力に上向調節され、ＮＦκβ（ｐ６５／ｐ５０）経路の阻害によって、筋分解を防ぐことができる。
【０００６】
[0006]ユビキチン−プロテアソーム系（ＵＰＳ）は、筋分解を促進して、筋タンパク質をペプチド、次いで遊離アミノ酸へと分解しうる。ＵＰＳ経路において、ターゲット筋タンパク質は、分解シグナルでタグ付けされ、次いで、２６ｓプロテアソームによって、ペプチドに分解される。ＵＰＳ経路は、２種のＥ３ユビキチン−タンパク質リガーゼであるアトロギン１およびＭｕＲＦ−１によって、また炎症促進性シグナルを生じる、インターロイキン（ＩＬ）−６、ＩＬ−８、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）−αなどのサイトカインによって仲介される場合がある。こうした因子は、筋タンパク質分解のバイオマーカーとなりうる。タンパク質分解および機能衰退は、サルコペニアの哺乳動物、および非活動的な生活様式の老齢哺乳動物において増幅されることがある。筋タンパク質増強には、新たなタンパク質合成とタンパク質分解の防止の両方が必要である。身体活動は、軽度または中程度の量でも、筋肥大および機能の増進をもたらしうるが、筋肉を使わなければ、タンパク質合成の減少および筋肉分解の増加につながる。加えて、老齢成体ではｍＴＯＲ活性化が遅れる結果、タンパク質合成が減少する場合もある。さらに、無活動の期間が長くなると、アミノ酸補給に対するタンパク質合成応答が低下する場合もある。サルコペニアに関連した機能衰退は、筋肉減少および機能低下が身体活動の妨げとなりうるため、自己強化型ループである。今度は、身体活動の減少が、さらなる筋肉減少および機能低下へとつながる。
【０００７】
[0007]かつては、筋肉量および強度を増すために、ロイシンおよびクレアチニンが哺乳動物に投与されていた。詳細には、筋タンパク質合成を増進するために高齢哺乳動物に投与されるサプリメントの多くは、複雑で高価なアミノ酸混合物を含む。たとえば、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第７，７９０，６８８号は、必須アミノ酸、クレアチン、および低グリセミック炭水化物の複雑な配合物を含有する組成物を開示している。さらに、高齢者における筋タンパク質合成の刺激には、２０グラム以上の必須アミノ酸の摂取が必要であることが、当業界ではよく知られている。しかし、タンパク質摂取量が増加すると、一部の個体では、尿素産生が増加する場合がある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
[0008]したがって、哺乳動物において、筋タンパク質合成、除脂肪量、機能強度、および／または全般的な生活の質を、他の身体機能に対するいかなる実質的な有害作用も示すことなく増大させることができるサプリメントが求められている。また、高齢哺乳動物およびサルコペニアの哺乳動物において筋肉量および／または機能強度を向上させて、身体活動の増加をもたらしうる、より単純でそれほど高価でないサプリメントも求められている。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
[0009]本開示は、一般に、哺乳動物においてタンパク質合成および／または機能強度を増大させる方法および組成物を対象とする。本開示はまた、非活動的および身体活動的な哺乳動物において筋消耗またはサルコペニアを減速または遅延させる方法および組成物も対象とする。
【００１０】
[0010]本開示によれば、本方法は、哺乳動物に有効量のタンパク質増強組成物を投与するステップを含む。特に有利なのは、タンパク質増強組成物によって、哺乳動物における、筋タンパク質合成、除脂肪量、機能強度、身体活動、および／または全般的な生活の質が、他の身体機能に対するいかなる実質的な有害作用も示されることなく増大しうることである。
【００１１】
[0011]タンパク質増強組成物は、サプリメント、食品、または飲料を含みうる。たとえば、タンパク質増強組成物は、ミルクセーキ飲料、ジュース、シリアルバー、グミ型ビタミン剤を含めたビタミン剤、粉末、食物に混ぜることができ、またはサプリメントの形態にすることもできる。
【００１２】
[0012]一実施形態では、タンパク質増強組成物は、その予想寿命の５０％より高齢である哺乳動物に投与される場合がある。代わりの実施形態では、タンパク質増強組成物は、その予想寿命の５０％より低年齢である哺乳動物に投与される場合がある。哺乳動物は、定期的に身体活動に関係している場合もある。別の実施形態では、哺乳動物は、主にまたは専ら非活動的な行動に関係している場合もある。特定の実施形態では、哺乳動物は、ヒトである。
【００１３】
[0013]一実施形態では、タンパク質増強組成物は、いずれかの必須アミノ酸成分、アミノ酸誘導体、および／またはクレアチンなどの含窒素有機酸のうちの少なくとも２種を含む場合がある。必須アミノ酸成分は、ロイシンならびにその誘導体および／または塩を含みうる。アミノ酸誘導体は、カルニチンならびにその誘導体および／または塩を含みうる。一実施形態では、タンパク質増強組成物は、アミノ酸成分と組み合わされたアミノ酸誘導体を含む。代替実施形態では、タンパク質増強組成物は、含窒素有機酸と組み合わされたアミノ酸誘導体を含む場合がある。さらに別の実施形態では、タンパク質増強組成物は、アミノ酸誘導体、アミノ酸成分、および含窒素有機酸からなる混合物を含む場合がある。
【００１４】
[0014]一実施形態では、アミノ酸誘導体は、Ｌ−カルニチンを含む。特定の実施形態では、アミノ酸誘導体は、Ｌ−カルニチンＬ−酒石酸塩を含む。さらなる実施形態では、タンパク質増強組成物は、含窒素有機酸ならびにその誘導体および／または塩を含有する場合がある。一実施形態では、タンパク質増強組成物は、クレアチンならびにその誘導体および／または塩を含む場合がある。
【００１５】
[0015]一実施形態では、ロイシン、ならびにその塩、代謝産物、および／または誘導体が、アミノ酸成分中に、約５質量％より高い濃度で存在する場合がある。一実施形態では、β−ヒドロキシβ−メチル酪酸（ＨＭＢ）などの、ロイシンの代謝産物が、アミノ酸成分中に存在する場合がある。一実施形態では、ロイシンは、約１０質量％〜９０質量％、たとえば、約２０質量％〜８０質量％、たとえば、約３０質量％〜７０質量％の濃度で存在する。好ましい実施形態では、ロイシンは、約３５〜６５質量％の濃度で存在する。
【００１６】
[0016]一実施形態では、Ｌ−カルニチンが、アミノ酸成分中に、約５質量％より高い濃度で存在する場合がある。Ｌ−カルニチンは、実質的に純粋な結晶質形態で、またはＬ−カルニチンの塩、代謝産物、および／もしくは脂質および非脂質誘導体として存在する場合がある。一実施形態では、Ｌ−カルニチンは、約１０質量％〜９０質量％、たとえば、約２０質量％〜８０質量％、たとえば、約２５質量％〜７５質量％、たとえば、約３０質量％〜６０質量％の濃度で存在する。好ましい実施形態では、Ｌ−カルニチンは、約４０質量％〜７０質量％の濃度で存在する。
【００１７】
[0017]一実施形態では、クレアチン、ならびにその塩、代謝産物、および／または誘導体は、サプリメント組成物中に、約０．５質量％より高い、たとえば、約１質量％より高い、たとえば、約５質量％より高い、たとえば、約１０質量％より高い、たとえば、約２０質量％より高い、たとえば、約４０質量％より高い、たとえば、約６０質量％より高い、たとえば、約８０質量％より高い、たとえば、約９０質量％より高い、たとえば、約９９質量％より高い濃度で存在する場合がある。好ましい実施形態では、クレアチンは、組成物中に約３０質量％〜約４５質量％の濃度で存在する。一実施形態では、クレアチンは、クレアチン一水和物、およびマグネシウムキレートクレアチンや他の金属キレートクレアチンなどのキレートクレアチンを含みうる。タンパク質増強組成物は、哺乳動物に、定期的に、または時折投与することができる。たとえば、タンパク質増強組成物は、哺乳動物に、少なくとも１〜３日毎、たとえば毎日投与することができる。一実施形態では、１日あたりの分を、１食〜数食に分けて取ってもよい。各用量は、約５ミリグラム〜約３０，０００ミリグラム、たとえば、約５ミリグラム〜約２０，０００ミリグラム、たとえば、約５０ミリグラム〜約１０，０００ミリグラムでよい。各用量は、体重１キログラムあたり１日約１ミリグラム〜１キログラムあたり１日約１０，０００ミリグラム、たとえば、１キログラムあたり１日約５ミリグラム〜１キログラムあたり１日約５，０００ミリグラムとなりうる。タンパク質増強組成物は、経口投与することができ、食物組成物と組み合わせることができる。
【００１８】
[0018]一実施形態では、本開示の医薬組成物は、種々の性質を改善するために、種々の添加剤および原材料と組み合わせられる。たとえば、本開示のタンパク質増強組成物は、組成物の吸湿性（ｈｙｄｒｏｓｃｏｐｉｃ）の性質を低減するための安定剤パッケージと組み合わせられる場合がある。安定剤パッケージによって、特に組成物が粒状組成物を含むとき、組成物をより取り扱いやすく、かつ／またはより注ぎやすくすることもできる。
【００１９】
[0019]一実施形態では、たとえば、本開示は、高分子結合剤および安定剤パッケージと組み合わせられたタンパク質増強組成物を含む医薬組成物を対象とする。安定剤パッケージは、カルボン酸の塩と組み合わせられた、シリカなどの酸化物粒子を含むものでよい。カルボン酸の塩は、炭素鎖長が約６個の炭素原子〜約４０個の炭素原子、たとえば、約１２個の炭素原子〜約２８個の炭素原子である脂肪酸などの脂肪酸の塩を含むものでよい。一実施形態では、カルボン酸の塩は、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、これらの混合物などのステアリン酸塩を含む。一方、高分子結合剤は、多糖および／または皮膜形成ポリマーを含む場合がある。高分子結合剤は、たとえば、加工デンプンなどのデンプン、マルトデキストリン、アラビアゴム、アラビノガラクタン、ゼラチン、またはこれらの混合物を含む場合がある。
【００２０】
[0020]一実施形態では、医薬組成物は、コーティング材料をさらに含有する場合がある。コーティング材料は、脂肪を含むものでよい。コーティング材料は、医薬組成物を覆って連続または不連続コーティングを形成する場合がある。一実施形態では、コーティング材料は、パームステアリンと組み合わせられた水素添加パーム油を含む。たとえば、水素添加パーム油とパームステアリンは、約１０：１〜約１：１、たとえば、約５：１〜約３：１の重量比で組み合わされる場合がある。
【００２１】
[0021]本開示はまた、タンパク質増強組成物を含有する医薬組成物を製造する方法を対象とする。本方法は、タンパク質増強組成物を高分子結合剤および安定剤パッケージと組み合わせるステップを含む。一実施形態では、たとえば、タンパク質増強組成物は、最初に、噴霧乾燥法によって高分子結合剤と組み合わせられ、次いで、乾燥混合物（すなわち、粉末または粒状材料）を含みうる安定剤パッケージと組み合わせられる。本方法は、タンパク質増強組成物、高分子結合剤、および安定剤パッケージを含有する混合物に、コーティング材料を場合により適用するステップをさらに含む場合もある。コーティング材料は、水素添加油などの脂肪を含むものでよい。
【００２２】
[0022]一実施形態では、医薬組成物は、約０．０１重量％〜約１．５重量％の量のシリカ粒子などの酸化物粒子、約０．５重量％〜約５重量％の量のカルボン酸の塩、および約８重量％〜約４０重量％の量の高分子結合剤を含有する。存在するとき、コーティング材料は、ポリマー組成物中に、約５重量％〜約３５重量％の量で含有される場合がある。
【００２３】
[0023]本開示の他の特色および態様について、以下でより詳細に考察する。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】PP集団におけるプラセボ、Carnipure製品1、またはCarnipure製品2のいずれかを補給された参加者(N=39)についてのベースラインから8週目への絶対総除脂肪量の変化を示す。
【図２】PP集団におけるプラセボ、Carnipure製品1、またはCarnipure製品2のいずれかを補給された参加者(N=39)についてのベースラインから8週目への腕除脂肪量の変化を示す。
【図３】PP集団におけるプラセボ、Carnipure製品1、またはCarnipure製品2のいずれかを補給された参加者(N=39)についてのベースラインから8週目への脚除脂肪量の変化を示す。
【図４】PP集団におけるプラセボ、Carnipure製品1、またはCarnipure製品2のいずれかを補給された参加者(N=39)についてのベースラインから8週目への総非体幹除脂肪量の変化を示す。
【図５】PP集団におけるプラセボ、Carnipure製品1、またはCarnipure製品2のいずれかを補給された参加者(N=39)についてのベースラインから8週目への絶対平均脚強度の変化を示す。
【図６】PP集団におけるプラセボ、Carnipure製品1、またはCarnipure製品2のいずれかを補給された参加者(N=33)についてのベースラインから8週目の運動前および後へのホスホ-mTORについてのタンパク質1μgあたりのAUCを示す。
【図７】PP集団におけるプラセボ、Carnipure製品1、またはCarnipure製品2のいずれかを補給された参加者(N=33)についてのベースラインから8週目の運動前および後へのホスホ-mTORの変化を示す。
【図８】PP集団におけるプラセボ、Carnipure製品1、またはCarnipure製品2のいずれかを補給された参加者(N=33)についてのベースラインから8週目の運動前および後への総mTORについてのタンパク質1μgあたりのAUCを示す。
【図９】PP集団におけるプラセボ、Carnipure製品1、またはCarnipure製品2のいずれかを補給された参加者(N=33)についてのベースラインから8週目の運動前および後への総mTORの変化を示す。
【図１０】PP集団におけるプラセボ、Carnipure製品1、またはCarnipure製品2のいずれかを補給された参加者(N=33)についてのベースラインから8週目の運動前および後へのホスホ-S6Kについてのタンパク質1μgあたりのAUCを示す。
【図１１】PP集団におけるプラセボ、Carnipure製品1、またはCarnipure製品2のいずれかを補給された参加者(N=33)についてのベースラインから8週目の運動前および後へのホスホ-S6Kの変化を示す。
【図１２】PP集団におけるプラセボ、Carnipure製品1、またはCarnipure製品2のいずれかを補給された参加者(N=33)についてのベースラインから8週目の運動前および後への総S6Kについてのタンパク質1μgあたりのAUCを示す。
【図１３】PP集団におけるプラセボ、Carnipure製品1、またはCarnipure製品2のいずれかを補給された参加者(N=33)についてのベースラインから8週目の運動前および後への総S6Kの変化を示す。
【図１４】PP集団におけるプラセボ、Carnipure製品1、またはCarnipure製品2のいずれかを補給された参加者(N=33)についてのベースラインから8週目の運動前および後へのホスホ-4EBP1についてのタンパク質1μgあたりのAUCを示す。
【図１５】PP集団におけるプラセボ、Carnipure製品1、またはCarnipure製品2のいずれかを補給された参加者(N=33)についてのベースラインから8週目の運動前および後へのホスホ-4EBP1の変化を示す。
【図１６】PP集団におけるプラセボ、Carnipure製品1、またはCarnipure製品2のいずれかを補給された参加者(N=33)についてのベースラインから8週目の運動前および後への総4EBP1についてのタンパク質1μgあたりのAUCを示す。
【図１７】PP集団におけるプラセボ、Carnipure製品1、またはCarnipure製品2のいずれかを補給された参加者(N=33)についてのベースラインから8週目の運動前および後への総4EBP1の変化を示す。
【図１８】PP集団におけるプラセボ、Carnipure製品1、またはCarnipure製品2のいずれかを補給された参加者(N=33)についてのベースラインから8週目の運動前および後へのホスホ-P65についてのタンパク質1μgあたりのAUCを示す。
【図１９】PP集団におけるプラセボ、Carnipure製品1、またはCarnipure製品2のいずれかを補給された参加者(N=33)についてのベースラインから8週目の運動前および後へのホスホ-P65の変化を示す。
【図２０】PP集団におけるプラセボ、Carnipure製品1、またはCarnipure製品2のいずれかを補給された参加者(N=33)についてのベースラインから8週目の運動前および後への総P65についてのタンパク質1μgあたりのAUCを示す。
【図２１】PP集団におけるプラセボ、Carnipure製品1、またはCarnipure製品2のいずれかを補給された参加者(N=33)についてのベースラインから8週目の運動前および後への総P65の変化を示す。
【図２２】PP集団におけるプラセボ、Carnipure製品1、またはCarnipure製品2のいずれかを補給された参加者(N=33)についてのベースラインから8週目の運動前および後への総P50についてのタンパク質1μgあたりのAUCを示す。
【図２３】PP集団におけるプラセボ、Carnipure製品1、またはCarnipure製品2のいずれかを補給された参加者(N=33)についてのベースラインから8週目の運動前および後への総P50の変化を示す。
【図２４】PP集団におけるプラセボ、Carnipure製品1、またはCarnipure製品2のいずれかを補給された参加者(N=33)についてのベースラインから8週目への典型的な免疫ブロットを示す。
【図２５】PP集団におけるプラセボ、Carnipure製品1、またはCarnipure製品2のいずれかを補給された参加者(N=39)についてのベースラインから8週目への絶対複合スコアの変化を示す。
【００２５】
[0024]本開示の完全かつ実施可能な開示を、本明細書の残りの部分において、添付の図面への参照を含めて、より詳細に記載する。
[0025]図面は、以下に記載する実施例において得られた結果のグラフ表示である。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
定義
[0026]用語「ＭＥＴ」または「代謝当量」とは、活動時のエネルギー消費速度の、安静時のエネルギー消費速度に対する比を意味する。安静時の身体は、１ＭＥＴのエネルギー消費速度を有する。身体が２ＭＥＴの活動を行っている場合、身体は、安静時の身体が使用するエネルギーの２倍を消費している。用語「身体活動」とは、エネルギー消費速度が３ＭＥＴ以上である身体動作を意味する。「身体活動」の非限定的な例としては、自転車こぎ、性行為、出産、ジョギング、約４．８３ｋ／ｈ（３ｍｐｈ）以上の速さでの歩行、徒手体操、縄跳び、ランニング、短距離走、またはこれらのいずれかの組合せが挙げられる。
【００２７】
[0027]一実施形態では、「身体活動」は、体重減少、食事制限、加齢、妊娠、授乳など、哺乳動物における負のエネルギーバランスを意味する場合がある。
[0028]用語「身体活動的」とは、エネルギー消費速度が３ＭＥＴ以上である身体動作に定期的に関係することを意味する。
【００２８】
[0029]一実施形態では、「身体活動的」は、哺乳動物が行う身体活動の量、強度、および種類についての医学的に推奨される基準を定期的に満たすことを意味する場合がある。
[0030]用語「非活動的」または「非活動的活動」とは、エネルギー消費速度が３ＭＥＴ未満である身体動作に主にまたは専ら関係することを意味する。「非活動的」活動の非限定的な例としては、睡眠、静止、着座もしくはリクライニング、テレビ鑑賞、執筆、デスクワーク、コンピューターの使用、タイピング、約４．８３ｋ／ｈ（３ｍｐｈ）未満の速さでの歩行、またはこれらのいずれかの組合せが挙げられる。
【００２９】
[0031]一実施形態では、「非活動的」とは、哺乳動物が行う身体活動の量、強度、および種類についての医学的に推奨される基準を定期的に満たしていないことを意味する場合がある。
【００３０】
[0032]用語「Ｌ−カルニチン」は、Ｌ−カルニチンならびにその誘導体および／または塩を含みうる。Ｌ−カルニチンには、実質的に純粋な結晶質のＬ−カルニチン、そのいずれかの脂肪酸誘導体、アセチルＬ−カルニチン、バレリルＬ−カルニチン、イソバレリルＬ−カルニチン、ベンジルＬ−カルニチン、Ｌ−ロイシルＬ−カルニチン、Ｌ−バリルＬ−カルニチン、他のＬ−アミノアシルカルニチン、Ｌ−アミノアシルＬ−カルニチンの塩、Ｌ−カルニチンＨＣＬ、Ｌ−カルニチンＬ−酒石酸塩、Ｌ−カルニチンフマル酸塩、プロピオニルＬ−カルニチン、Ｌ−カルニチンリン酸塩、アセチルＬ−カルニチンＬ−アスパラギン酸塩、アセチルＬ−カルニチンクエン酸塩、アセチルＬ−カルニチンマレイン酸塩、アセチルＬ−カルニチンリン酸塩、アセチルＬ−カルニチンフマル酸塩、プロピオニルＬ−カルニチンオロト酸塩、アセチルＬ−カルニチンオロト酸塩、ブチリルＬ−カルニチンオロト酸塩、プロピオニルＬ−カルニチンフマル酸塩、Ｌ−カルニチンシュウ酸塩、Ｌ−カルニチン硫酸塩、ＧＰＬＣグリシンプロピオニルＬ−カルニチンなどを始めとする、Ｌ−カルニチン塩基またはその誘導体および／もしくは塩を含めることができる。
【００３１】
[0033]用語「哺乳動物」は、骨格筋分解または合成を経験しうるいずれの哺乳動物も含み、ヒト、イヌ、ウマ、ネコ、ウシ、ヒツジ、またはブタ哺乳動物が含まれる。
[0034]「有効量」とは、特定の状態もしくは障害または状態もしくは障害の特定の症状に対する応答を促進、改善、刺激、または助長する、化合物の量を意味する。
【００３２】
[0035]用語「サプリメント」とは、哺乳動物の通常の食事に加えられる製品を意味するが、哺乳動物の通常の食物または飲料組成物と組み合わせられる場合もある。サプリメントは、固体、液体、ゲル、カプセル、または粉末に限定されない、いずれの形態でもよい。サプリメントは、食品、飲料、ペットフード、軽食、またはおやつを含みうる食物組成物と同時に、またはその成分として投与される場合もある。一実施形態では、飲料は、スポーツ飲料（ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｄｒｉｎｋ）である場合がある。
【００３３】
[0036]用語「機能強度」とは、日常生活活動を完全かつ安全になしうる個体の能力を意味する。一実施形態では、機能強度を、エネルギー、筋力、敏捷性、柔軟性、平衡性、および傷害抵抗性と関連付ける場合がある。
【００３４】
［発明を実施するための形態］
[0037]本考察が、例としての実施形態の記述にすぎず、本開示のより広い態様を限定するものではないことは、当業者に理解される。
[0038]本開示は、哺乳動物において筋タンパク質合成および／または機能強度を増大させる方法および組成物を対象とする。以下で説明するとおり、本開示は、一般に、哺乳動物に有効量で投与したとき、筋タンパク質合成および／もしくは機能強度を増大させ、かつ／またはタンパク質分解を低減することにより、筋肉量および機能を保持または増大させるタンパク質増強組成物を対象とする。本開示はさらに、筋タンパク質合成および／または機能強度を増大させるタンパク質増強組成物を、哺乳動物に有効量投与することを一般に対象とする。
【００３５】
[0039]一実施形態では、タンパク質増強組成物は、少なくとも１種の他の成分と組み合わせられたアミノ酸誘導体を含む。たとえば、アミノ酸誘導体は、アミノ酸、有機酸、またはアミノ酸および有機酸の両方と組み合わせられる場合がある。アミノ酸誘導体は、Ｌ−カルニチンなどのカルニチンを含みうる。アミノ酸は、必須アミノ酸を含みうる。一実施形態では、アミノ酸は、ロイシンを含みうる。タンパク質増強組成物は、含窒素有機酸などの有機酸をさらに含む場合がある。有機酸は、クレアチンを含みうる。
【００３６】
[0040]本開示の発明者らは、本明細書で開示するタンパク質増強組成物の成分が、相乗的に作用し合って、筋タンパク質合成および／または機能強度を増大させることを、思いがけなく発見した。驚いたことに、Ｌ−カルニチンを含有するタンパク質増強組成物をロイシン、クレアチン、またはロイシンおよびクレアチンの両方と組み合わせたものを哺乳動物に投与することで、筋タンパク質合成および／または機能強度を増大させ、しかも筋分解を防ぎ、炎症を軽減し、上半身および下半身の強度を改善できることが発見された。一実施形態では、タンパク質増強組成物は、ビタミンＤ３も含有する場合がある。特に有利なのは、上記結果が、先行組成物において必要となる高投与量のアミノ酸を投与せずに、実現できることである。加えて、本開示のタンパク質増強組成物は、顕著な副作用を生じない。たとえば、タンパク質増強組成物は、腎機能の臨床上重要ないかなる変化も示すことなく、定期的に投与することができる。
【００３７】
[0041]本開示のタンパク質増強組成物は、丸剤、錠剤、またはカプセルの形態の栄養サプリメントにすることができる。別法として、タンパク質増強組成物は、食物または飲料に混ぜてもよい。たとえば、タンパク質増強組成物は、ミルクセーキ飲料、ジュース、シリアルバー、グミ型ビタミン剤などのビタミン剤、または粉末に混ぜられる場合がある。粉末は、摂取に適するいずれかの液体と混合してよい。
【００３８】
[0042]アミノ酸誘導体は、Ｌ−カルニチンなどの適切ないずれかのカルニチンならびにそのいずれかの誘導体および／または塩である場合がある。Ｌ−カルニチンは、リシンとメチオニンから生合成されうる第四級アミンである。Ｌ−カルニチンは、長鎖脂肪酸のベータ酸化を、長鎖脂肪酸のミトコンドリア膜を超えての移動を容易にすることによって促進することが知られている。Ｌ−カルニチンは、実質的に純粋な結晶質形態で、またはＬ−カルニチンの塩、代謝産物、および／もしくは脂質および非脂質誘導体として存在する場合がある。
【００３９】
[0043]一実施形態では、Ｌ−カルニチンは、組成物中に、約５質量％より高い、たとえば、約１０質量％より高い、たとえば、約１５質量％より高い、たとえば、約２０質量％より高い、たとえば、約２５質量％より高い、たとえば、約３０質量％より高い、たとえば、約３５質量％より高い、たとえば、約４０質量％より高い、たとえば、約４５質量％より高い、たとえば、約５０質量％より高い、たとえば、約５５質量％より高い、たとえば、約６０質量％より高い、たとえば、約６５質量％より高い、たとえば、約７０質量％より高い、たとえば、約７５質量％より高い濃度で存在する場合がある。一般に、Ｌ−カルニチンは、組成物中に、約７５質量％未満、たとえば、約７０質量％未満、たとえば、約６５質量％未満、たとえば、約６０質量％未満、たとえば、約５５質量％未満、たとえば、約５０質量％未満、たとえば、約４５質量％未満、たとえば、約４０質量％未満、たとえば、約３５質量％未満、たとえば、約３０質量％未満、たとえば、約２５質量％未満、たとえば、約２０質量％未満、たとえば、約１５質量％未満、たとえば、約１０質量％未満の濃度で存在する場合がある。
【００４０】
[0044]上で述べたとおり、組成物は、アミノ酸誘導体と組み合わされたアミノ酸を含む場合がある。アミノ酸は、ロイシン、ならびにそのいずれかの誘導体、代謝産物、および／または塩である場合がある。ロイシンは、分岐鎖α−アミノ酸である。ロイシンは、翻訳の際に真核生物翻訳開始因子と会合することにより、タンパク質合成を刺激することが知られている。一実施形態では、アミノ酸は、ＨＭＢなどの、ロイシンの代謝産物を含みうる。
【００４１】
[0045]一実施形態では、ロイシンは、アミノ酸成分中に、約１０質量％より高い、たとえば、約１５質量％より高い、たとえば、約２０質量％より高い、たとえば、約２５質量％より高い、たとえば、約３０質量％より高い、たとえば、約３５質量％より高い、たとえば、約４０質量％より高い、たとえば、約４５質量％より高い、たとえば、約５０質量％より高い、たとえば、約５５質量％より高い、たとえば、約６０質量％より高い、たとえば、約６５質量％より高い、たとえば、約７０質量％より高い、たとえば、約７５質量％より高い濃度で存在する場合がある。一般に、ロイシンは、アミノ酸成分中に、約７５質量％未満、たとえば、約７０質量％未満、たとえば、約６５質量％未満、たとえば、約６０質量％未満、たとえば、約５５質量％未満、たとえば、約５０質量％未満、たとえば、約４５質量％未満、たとえば、約４０質量％未満、たとえば、約３５質量％未満、たとえば、約３０質量％未満、たとえば、約２５質量％未満、たとえば、約２０質量％未満、たとえば、約１５質量％未満の濃度で存在する場合がある。
【００４２】
[0046]上述のとおり、タンパク質増強組成物は、アミノ酸誘導体を、アミノ酸もしくは有機酸のいずれかと組み合わされた状態で含む場合もあり、またはアミノ酸誘導体を、アミノ酸もしくは有機酸の両方と組み合わされた状態で含む場合もある。有機酸は、クレアチンならびにその誘導体および／または塩である場合がある。クレアチンは、グリシンとアルギニンから生合成されうる含窒素有機酸である。クレアチンは、ＡＴＰの生成を増加させ、リン酸化された形で、骨格筋におけるエネルギー貯蔵の働きをする。クレアチンは、高強度およびレジスタンス運動に対する生理的応答を改善しうる。
【００４３】
[0047]一実施形態では、組成物は、クレアチンならびにその誘導体および類似体および／または塩を含む場合がある。一実施形態では、組成物は、クレアチンリン酸、クレアチン一水和物、クレアチンエチルエステル、マグネシウムクレアチンキレート、クレアチンＨＣＬ、クレアチン−ＭＧ−錯体（酢酸塩）、ホスホクレアチン−Ｍｇ−錯体（酢酸塩）、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第８，５４６，３６９号に記載されているとおりのクレアチン糖アミドおよびその塩、参照により本明細書に組み込まれるＰＣＴ公開ＷＯ２０１４／０９７３３５に記載されているとおりの（Ｂｏｃ）２−クレアチンおよびその誘導体、クレアチンの他の誘導体および塩、ならびにこれらのいずれかの組合せを含む場合がある。
【００４４】
[0048]一実施形態では、クレアチンは、アミノ酸成分中に、約１５質量％より高い、たとえば、約２０質量％より高い、たとえば、約２５質量％より高い、たとえば、約３０質量％より高い、たとえば、約３５質量％より高い、たとえば、約４０質量％より高い、たとえば、約４５質量％より高い、たとえば、約５０質量％より高い、たとえば、約５５質量％より高い、たとえば、約６０質量％より高い、たとえば、約６５質量％より高い、たとえば、約７０質量％より高い、たとえば、約７５質量％より高い、たとえば、約８０質量％より高い濃度で存在する場合がある。一般に、クレアチンは、アミノ酸成分中に、約８０質量％未満、たとえば、約７５質量％未満、たとえば、約７０質量％未満、たとえば、約６５質量％未満、たとえば、約６０質量％未満、たとえば、約５５質量％未満、たとえば、約５０質量％未満、たとえば、約４５質量％未満、たとえば、約４０質量％未満、たとえば、約３５質量％未満、たとえば、約３０質量％未満、たとえば、約２５質量％未満、たとえば、約２０質量％未満、たとえば、約１５質量％未満、たとえば、約１０質量％未満の濃度で存在する場合がある。
【００４５】
[0049]一実施形態では、組成物は、１種または複数のビタミンを含む場合がある。特定の一実施形態では、組成物は、ビタミンＤ３を含む場合がある。ビタミンＤは、筋肉収縮性を調節しうる。他のビタミンとしては、限定はしないが、ビタミンＡ、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ３、ビタミンＢ６、ビタミンＢ９、ビタミンＢ１２、ビタミンＣ、ビタミンＥ、ビタミンＫ、リボフラビン、ナイアシン、葉酸、ピリドキシン、チアミン、パントテン酸、ビオチン、およびこれらのいずれかの組合せを挙げることができる。組成物は、他の無機質、ハーブ、植物、および必須脂肪酸をさらに含む場合がある。一実施形態では、タンパク質増強組成物は、マグネシウムおよび／またはその塩を含む場合がある。
【００４６】
[0050]一実施形態では、１種または複数のビタミンは、組成物中に、１用量あたり約１〜約５，０００ＩＵ、たとえば、１用量あたり約１０〜約２，５００ＩＵ、たとえば、１用量あたり約５０〜約１，５００ＩＵ、たとえば、１用量あたり約１００ＩＵ〜約１，０００ＩＵ、たとえば、１用量あたり約２５０ＩＵ〜約７５０ＩＵ、たとえば、１用量あたり約３００ＩＵ〜約６００ＩＵの量で存在する場合がある。
【００４７】
[0051]一実施形態では、アミノ酸、アミノ酸誘導体、および／または有機酸、ならびにこれらの誘導体および／または塩は、組成中に遊離型の有機化合物として含まれる場合がある。別法として、成分は、組成物中に、無処置タンパク質および／または他の巨大分子として含まれる場合もある。別の実施形態では、アミノ酸、アミノ酸誘導体、および／または有機酸、ならびにこれらの誘導体および／または塩は、組成物中に、遊離型の有機化合物と無処置タンパク質および／または他の巨大分子の組合せとして含まれる場合がある。
【００４８】
[0052]種々の成分は、特定の用途および所望の結果に応じて、タンパク質増強組成物中に様々な比で存在しうる。たとえば、アミノ酸誘導体とアミノ酸の重量比は、一般に、約１：１０〜約１０：１、たとえば、約１：３〜約３：１でよい。一実施形態では、アミノ酸誘導体とアミノ酸の重量比は、約１：１〜約１：２である場合がある。
【００４９】
[0053]一方、アミノ酸誘導体と有機酸の重量比は、一般に、約１：１０〜約５：１、たとえば、約１：１〜約１：５、たとえば、約１：１〜約１：３でよい。特定の一実施形態では、タンパク質増強組成物は、アミノ酸および有機酸と組み合わせられたアミノ酸誘導体を含有する。アミノ酸誘導体とアミノ酸の重量比は、約３：４でよく、アミノ誘導体と有機酸の重量比は、約１：２でよい。
【００５０】
[0054]本開示はまた、本明細書で開示するタンパク質増強組成物の投与方法を対象とする。ロイシンおよびクレアチンと組み合わせられた状態のＬ−カルニチンは、哺乳動物においてタンパク質合成および／または機能強度を増大させることが発見された。筋タンパク質合成および／または機能強度を増大させるために、本開示は、哺乳動物に有効量のタンパク質増強組成物を投与する方法を対象とする。上記の利点および利益は、いかなる有害な結果もなしに実現することができる。加えて、一実施形態では、哺乳動物は、腎機能の臨床上重要な違いを経験することもない。
【００５１】
[0055]一実施形態では、アミノ酸成分を含有するタンパク質増強組成物が哺乳動物に有効量投与される。アミノ酸成分は、ロイシンを含みうる。ロイシンは、１日約５〜１０，０００ミリグラム、たとえば、１日約５〜約５，０００ミリグラム、たとえば、１日約５０ミリグラム〜約３，０００ミリグラムの投与量で投与することができる。投与量は、たとえば、１日約１００ミリグラムより多い、たとえば、１日約２５０ミリグラムより多い、たとえば、１日約５００ミリグラムより多い、たとえば、１日約７５０ミリグラムより多い場合がある。身体質量を基準にすると、投与量は、体重１キログラムあたり１日約１ミリグラム〜体重１キログラムあたり１日約１，０００ミリグラムとなりうる。たとえば、投与量は、体重１キログラムあたり１日約５ミリグラム〜体重１キログラムあたり１日約７５０ミリグラムである場合がある。特定の一実施形態では、投与量は、体重１キログラムあたり１日約１０ミリグラム〜体重１キログラムあたり１日約５００ミリグラムである場合がある。特定の別の実施形態では、投与量は、体重１キログラムあたり１日約１ミリグラムより多い、体重１キログラムあたり１日約５ミリグラムより多い、体重１キログラムあたり１日約１０ミリグラムより多い、体重１キログラムあたり１日約１５ミリグラムより多い、体重１キログラムあたり１日約２０ミリグラムより多い、体重１キログラムあたり１日約２５ミリグラムより多い、体重１キログラムあたり１日約３０ミリグラムより多い、または体重１キログラムあたり１日約３５ミリグラムより多い場合がある。
【００５２】
[0056]哺乳動物に、有効量のアミノ酸誘導体も投与することができる。アミノ酸誘導体は、Ｌ−カルニチンを含みうる。Ｌ−カルニチンは、１日約５〜１０，０００ミリグラム、たとえば、１日約５〜約５，０００ミリグラム、たとえば、１日約５０ミリグラム〜約３，０００ミリグラムの投与量で投与することができる。投与量は、たとえば、１日約１００ミリグラムより多い、たとえば、１日約２５０ミリグラムより多い、たとえば、１日約５００ミリグラムより多い、たとえば、１日約７５０ミリグラムより多い場合がある。身体質量を基準にすると、投与量は、体重１キログラムあたり１日約１ミリグラム〜体重１キログラムあたり１日約１，０００ミリグラムとなりうる。たとえば、投与量は、体重１キログラムあたり１日約５ミリグラム〜体重１キログラムあたり１日約７５０ミリグラムである場合がある。特定の一実施形態では、投与量は、体重１キログラムあたり１日約１０ミリグラム〜体重１キログラムあたり１日約５００ミリグラムである場合がある。特定の別の実施形態では、投与量は、体重１キログラムあたり１日約１ミリグラムより多い、体重１キログラムあたり１日約５ミリグラムより多い、体重１キログラムあたり１日約１０ミリグラムより多い、体重１キログラムあたり１日約１５ミリグラムより多い、体重１キログラムあたり１日約２０ミリグラムより多い、体重１キログラムあたり１日約２４ミリグラムより多い、体重１キログラムあたり１日約２８ミリグラムより多い、または体重１キログラムあたり１日約３０ミリグラムより多い場合がある。
【００５３】
[0057]一実施形態では、有機酸ならびにその誘導体および／または塩を含有するタンパク質増強組成物が哺乳動物に有効量投与される。有機酸は、クレアチンを含みうる。クレアチンは、１日約５〜１５，０００ミリグラム、たとえば、１日約５〜約１０，０００ミリグラム、たとえば、１日約５０ミリグラム〜約５，０００ミリグラムの投与量で投与することができる。投与量は、たとえば、１日約１００ミリグラムより多い、たとえば、１日約５００ミリグラムより多い、たとえば、１日約１，０００ミリグラムより多い、たとえば、１日約１，２５０ミリグラムより多い場合がある。身体質量を基準にすると、投与量は、体重１キログラムあたり１日約１ミリグラム〜体重１キログラムあたり１日約１，０００ミリグラムとなりうる。たとえば、投与量は、体重１キログラムあたり１日約５ミリグラム〜体重１キログラムあたり１日約７５０ミリグラムである場合がある。特定の一実施形態では、投与量は、体重１キログラムあたり１日約１０ミリグラム〜体重１キログラムあたり１日約５００ミリグラムである場合がある。特定の別の実施形態では、投与量は、体重１キログラムあたり１日約１ミリグラムより多い、体重１キログラムあたり１日約５ミリグラムより多い、体重１キログラムあたり１日約１０ミリグラムより多い、体重１キログラムあたり１日約１５ミリグラムより多い、体重１キログラムあたり１日約２０ミリグラムより多い、体重１キログラムあたり１日約３０ミリグラムより多い、体重１キログラムあたり１日約４０ミリグラムより多い、または体重１キログラムあたり１日約５０ミリグラムより多い場合がある。
【００５４】
[0058]タンパク質増強組成物は、１週間に少なくとも２〜４回など、定期的に投与することができる。たとえば、タンパク質増強組成物は、哺乳動物に、少なくとも１〜３日毎に投与することができる。さらに、タンパク質増強組成物は、１日１回より多く投与することができる。たとえば、タンパク質増強組成物は、１日１〜４回哺乳動物に投与される場合がある。特定の一実施形態では、タンパク質増強組成物は、毎日投与される。投与量は、１日約５〜３０，０００ミリグラム、たとえば、１日約５〜約２０，０００ミリグラム、たとえば、１日約１０ミリグラム〜約１０，０００ミリグラム、たとえば、１日約２０ミリグラム〜約５，０００ミリグラム、たとえば、１日約５０ミリグラム〜約２，５００ミリグラムである場合がある。身体質量を基準にすると、投与量は、体重１キログラムあたり１日約１ミリグラム〜体重１キログラムあたり１日約１０，０００ミリグラムとなりうる。たとえば、投与量は、体重１キログラムあたり１日約５ミリグラム〜体重１キログラムあたり１日約７，５００ミリグラム、たとえば、体重１キログラムあたり１日約１０ミリグラム〜体重１キログラムあたり１日約５，０００ミリグラム、たとえば、体重１キログラムあたり１日約１５ミリグラム〜体重１キログラムあたり１日約２，５００ミリグラム、たとえば、体重１キログラムあたり１日約２０ミリグラム〜体重１キログラムあたり１日約１，０００ミリグラム、たとえば、体重１キログラムあたり１日約２５ミリグラム〜体重１キログラムあたり１日約７５０ミリグラム、たとえば、体重１キログラムあたり１日約３０ミリグラム〜体重１キログラムあたり１日約５００ミリグラム、たとえば、体重１キログラムあたり１日約３５ミリグラム〜体重１キログラムあたり１日約２５０ミリグラムである場合がある。
【００５５】
[0059]タンパク質増強組成物は、適切ないずれかの投与経路を使用して、適切ないずれかの形態で哺乳動物に投与することができる。たとえば、組成物は、単独で、食物組成物と組み合わせて、または食物組成物の一部として経口的に投与することができる。組成物は、食事サプリメントの一部または栄養補助組成物である場合もある。
【００５６】
[0060]タンパク質増強組成物は、固体、液体、懸濁液、または気体として経口的に投与することができる。組成物は、頬側または舌下投与によって投与してもよい。一実施形態では、タンパク質増強組成物は、カプセル、錠剤、カプレット、丸剤、トローチ剤、滴剤、ロゼンジ、粉末、顆粒、シロップ、茶、飲料、薄膜、種子、ペースト、ハーブ、植物などとして投与される場合がある。
【００５７】
[0061]サプリメント用量は、経口的に投与されることに加えて、鼻腔内、静脈内、筋肉内、胃内などを含めた他の経路を使用して投与することもできる。
[0062]タンパク質増強組成物が食物または飲料組成物と組み合わせられるとき、食物または飲料組成物は、哺乳動物による摂取に適するいかなる組成物も含みうる。このような組成物には、哺乳動物に必要な栄養必要量を供給することを目的とした完全な食物もしくは飲料、またはおやつや軽食などの食物サプリメントが含まれる。食物組成物は、ペレット、飲料、バー、缶入りの加工調理済み食品、ミルクセーキ飲料、ジュース、乳製品、または他のいずれかの機能性食物組成物を含みうる。食物組成物は、丸剤、軟質ゲル、フィギュアグミ（ｇｕｍｍｙ  ｆｉｇｕｒｉｎｅ）、ウエハースなど、いかなる形態のサプリメントも含みうる。
【００５８】
[0063]哺乳動物によって、タンパク質増強組成物に加えて摂取される食物組成物は、Ｌ−カルニチン、ロイシン、および／またはクレアチンも豊富である場合がある。本開示のタンパク質増強組成物は、たとえば、標準の食事に含まれる通常の量および／または身体によって産生される量に加えて、付加的なＬ−カルニチン、ロイシン、および／またはクレアチンを提供することを目的とする。
【００５９】
[0064]本開示に従って治療される哺乳動物は、適切ないかなる哺乳動物も含みうる。たとえば、哺乳動物は、ヒトまたはイヌである場合がある。タンパク質増強組成物は、哺乳動物における分娩から成体期までなど、いかなる年齢の哺乳動物に食べさせてもよい。種々の実施形態において、哺乳動物は、ヒト、イヌ、ネコ、ウマ、ブタ、ヒツジ、または雌ウシである場合がある。多くの実施形態では、哺乳動物は、早期から後期成体期にある場合がある。たとえば、活動期の哺乳動物は、その予想寿命の少なくとも１０％、たとえば、少なくとも１５％、たとえば、少なくとも２０％、たとえば、少なくとも２５％、たとえば、少なくとも３０％、たとえば、少なくとも３５％、たとえば、少なくとも４０％、たとえば、少なくとも４５％、たとえば、少なくとも５０％、たとえば、少なくとも５５％、たとえば、少なくとも６０％、たとえば、少なくとも６５％、たとえば、少なくとも７０％、たとえば、少なくとも７５％、たとえば、少なくとも８５％、たとえば、少なくとも９０％、たとえば、少なくとも９５％である年齢である場合がある。哺乳動物は、その予想寿命の約９５％未満、たとえば、約９０％未満、たとえば、約８５％未満、たとえば、約８０％未満、たとえば、約７５％未満、たとえば、約７０％未満、たとえば、約６５％未満、たとえば、約６０％未満、たとえば、約５５％未満、たとえば、約５０％未満、たとえば、約４５％未満、たとえば、約４０％未満、たとえば、約３５％未満、たとえば、約３０％未満、たとえば、約２５％未満、たとえば、約２０％未満、たとえば、約１５％未満、たとえば、約１０％未満となるような年齢である場合がある。寿命の決定は、保健統計表、計算などに基づく場合がある。
【００６０】
[0065]タンパク質増強組成物は、哺乳動物が行う身体活動の頻度、強度、または種類にかかわらず、本開示に従って哺乳動物に投与してよい。哺乳動物は、種々のＭＥＴ値の身体活動に関係している場合がある。一実施形態では、哺乳動物は、軽度から強度の身体活動に定期的に関係している場合がある。軽度の身体活動は、約３ＭＥＴ〜約６ＭＥＴのＭＥＴを有するものでよい。中程度の身体活動は、約６ＭＥＴ〜約１０ＭＥＴのＭＥＴを有するものでよい。強度の身体活動は、約１０ＭＥＴ以上のＭＥＴを有するものでよい。別の実施形態では、哺乳動物は、たまにしか身体活動に関係していない場合もある。さらに別の実施形態では、哺乳動物は、非活動的な生活様式を送っている場合もあり、哺乳動物は、滅多にまたは少しも身体活動に関係していないことがある。非活動的な生活様式では、哺乳動物は、主にまたは専ら非活動的な活動に関係している場合がある。
【００６１】
[0066]タンパク質増強組成物は、身体活動の期間前、期間中、または期間後に哺乳動物に投与される場合がある。別法として、組成物は、非活動的な活動の期間前、期間中、または期間後に哺乳動物に投与される場合もある。たとえば、組成物は、長期の床上安静期間中または他の長期の無活動期間中に哺乳動物に投与される場合がある。
【００６２】
[0067]タンパク質増強組成物は、哺乳動物が身体活動に関係する必要なく、筋タンパク質合成を増進し、機能強度を増大させ、または筋タンパク質合成と機能強度の両方を増大させるのに十分な量で投与される。
【００６３】
[0068]筋タンパク質合成は、一実施形態では、骨格筋中のバイオマーカー、すなわち、ｍＴＯＲ発現およびリン酸化ならびに経路におけるその関連した上流および下流タンパク質をモニターして明らかにすることができる。詳細には、ｍＴＯＲ発現は、活動期間の前および後に求め、記録することができる。本開示に従って治療された哺乳動物では、期間の前と後のｍＴＯＲ発現が、１０％より大きく、たとえば、２０％より大きく、たとえば、４０％より大きく、たとえば、６０％より大きく、たとえば、８０％より大きく、たとえば、１００％より大きく、たとえば、１５０％より大きく、たとえば、２００％より大きく変化する場合がある。
【００６４】
[0069]一実施形態では、本開示に従って治療された哺乳動物は、活動期間後の総ｍＴＯＲ値が、タンパク質増強組成物を投与されていない同じ哺乳動物に比べて、少なくとも１０％、たとえば、少なくとも２０％、たとえば、少なくとも３０％、たとえば、少なくとも４０％、たとえば、少なくとも５０％、たとえば、少なくとも６０％、たとえば、少なくとも１００％高くなりうる。
【００６５】
[0070]タンパク質合成は、アンドロゲン、アンドロゲン受容体、インスリン、ＩＧＦ−１、ＩＧＦ−１受容体、およびいずれかの既知のタンパク質合成刺激因子によってモニターすることができる。
【００６６】
[0071]タンパク質増強組成物は、筋タンパク質合成の増進に加えて、機能強度を増大させることもできる。特に、タンパク質増強組成物は、除脂肪筋肉量ならびに上半身および下半身強度を増大させることができる。機能強度は、強度と筋肉寸法の複合エンドポイントによって測定することができる。複合エンドポイントは、筋肉量（ｋｇ）、筋力計による上肢強度（ｋｇ）、筋力計による下肢強度（ｋｇ）、および６分間歩行試験（メートル）についての値の積としてよい。活動期間の前後に比較測定を行うことができる。
【００６７】
[0072]一実施形態では、本開示に従って治療された哺乳動物は、ある特定の期間後の複合エンドポイントが、Ｌ−カルニチンサプリメントを投与されていない同じ哺乳動物に比べて、少なくとも１０％、たとえば、少なくとも２５％、たとえば、少なくとも５０％、たとえば、少なくとも７５％、たとえば、少なくとも１００％高くなりうる。
【００６８】
[0073]本開示のタンパク質増強組成物は、炎症も軽減しうる。一実施形態では、炎症は、骨格筋中のバイオマーカー、すなわちＴＮＦ−αをモニターして明らかにすることができる。ＴＮＦ−αは、タンパク質分解に関与する炎症マーカーである。ＴＮＦ−α値の低下は、タンパク質分解および筋消耗の低減を示唆しうる。ＴＮＦ−α値は、活動期間の前および後に求め、記録することができる。本開示に従って治療された哺乳動物では、期間の前と後のＴＮＦ−α値が、０．５％より大きく、たとえば、１％より大きく、たとえば、５％より大きく、たとえば、１０％より大きく、たとえば、２０％より大きく、たとえば、４０％より大きく、たとえば、６０％より大きく、たとえば、８０％より大きく、たとえば、１００％より大きく、たとえば、１５０％より大きく、たとえば、２００％より大きく変化する場合がある。
【００６９】
[0074]一実施形態では、本開示に従って治療された哺乳動物は、活動期間後の総ＴＮＦ−α値が、タンパク質増強組成物を投与されていない同じ哺乳動物に比べて、少なくとも０．５％、たとえば、少なくとも１％、たとえば、少なくとも５％、たとえば、少なくとも１０％、たとえば、少なくとも２０％、たとえば、少なくとも３０％、たとえば、少なくとも４０％、たとえば、少なくとも５０％、たとえば、少なくとも６０％、たとえば、少なくとも１００％低くなりうる。
【００７０】
[0075]炎症の軽減は、タンパク質分解の低減をもたらしうる。
[0076]一実施形態では、本開示の組成物は、限定はしないが、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン酸、グルタミン、グリシン、プロリン、セリン、チロシン、ヒスチジン、イソロイシン、リシン、メチオニン、フェニルアラニン、トレオニン、トリプトファン、バリン、およびこれらのいずれかの組合せを含めた他のアミノ酸を含有してもよい。
【００７１】
[0077］本開示のタンパク質増強組成物は、１種または複数の賦形剤をさらに含んでもよい。非限定的な典型的な賦形剤としては、ステアリン酸マグネシウムなどの付着防止剤（ａｎｔｉａｄｈｅｒｅｎｔ）；糖、糖アルコール、ゼラチン、合成ポリマーなどの結合剤；セルロースエーテル  ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、セラック、トウモロコシタンパク質ゼイン、ゼラチン、脂肪酸、蝋などのコーティング剤；酸化チタンやアゾ色素などの着色剤；加工デンプン  デンプングリコール酸ナトリウムや、ポリビニルピロリドンおよびカルボキシメチルセルロースナトリウムを始めとする架橋ポリマーなどの崩壊剤；マルトデキストリンなどの充填剤；ハッカ、カンゾウ、アニス、バニラや、モモ、バナナ、ブドウ、イチゴ、ブルーベリー、ラズベリー、およびミックスベリーを始めとする果物フレーバーなどの着香剤；ヒュームドシリカ、タルク、炭酸マグネシウムなどの流動促進剤；タルク、シリカや、植物ステアリン、ステアリン酸マグネシウム、およびステアリン酸を始めとする脂肪などの滑沢剤；抗酸化物質、ビタミン、レチニルパルミテート、セレン、アミノ酸のシステインおよびメチオニン、クエン酸、クエン酸ナトリウム、パラベンなどの保存剤；溶媒；スクロースやスクラロースなどの甘味剤；ならびにワセリンや鉱油などの媒体が挙げられる。
【００７２】
[0078］一実施形態では、本開示のタンパク質増強組成物は、種々の添加剤、および組成物の１つまたは複数の性質を改善しうる成分と組み合わせてよい。たとえば、一実施形態では、添加剤組成物を、組成物の少なくとも１つの性質を安定化する働きをしうる安定剤パッケージと組み合わせることができる。特定の一実施形態では、たとえば、安定剤パッケージを、組成物の吸湿性の性質を低減する、および／または組成物が水分を吸収するのを防ぐのに十分な量で、組成物に加えることができる。安定剤パッケージは、組成物の取扱適性を改善するために、タンパク質増強組成物と組み合わせられる場合もある。たとえば、安定剤パッケージは、組成物が、特に粒状の形態であるとき、より良好な流動性を備えるのを可能にする場合がある。
【００７３】
[0079］一実施形態では、タンパク質増強組成物は、安定剤パッケージと併せて、高分子結合剤と組み合わせられる場合がある。加えて、組成物が高分子結合剤および安定剤パッケージと組み合わされた後、コーティング材料が、組成物に適用される場合もある。コーティング材料は、たとえば、少なくとも１種の脂肪を含有するものでよい。本開示によれば、上記成分は、本開示のタンパク質増強組成物に加えて、適切ないずれかの医薬組成物にも加えることができる。たとえば、カルニチンまたはアミノ酸を含有するいずれかの医薬組成物に、上記成分を加えてよい。
【００７４】
[0080］高分子結合剤および安定剤パッケージは、安定剤パッケージが製品中に均一に組み込まれるような形で、タンパク質増強組成物と組み合わせることができる。一実施形態では、たとえば、本開示のタンパク質増強組成物は、たとえば噴霧乾燥法によって、高分子結合剤と最初に組み合わせられ、次いで、安定剤パッケージと組み合わせられる。高分子結合剤は、薬学的に許容される適切ないずれかのポリマー、たとえば、皮膜形成ポリマーおよび／または多糖を含むものでよい。本開示に従って使用することができる高分子結合剤の詳細な例としては、デンプン、マルトデキストリン、アラビアゴム、アラビノガラクタン、ゼラチン、およびこれらの混合物が挙げられる。一実施形態では、高分子結合剤は、少なくとも約５重量％、たとえば、少なくとも約８重量％、たとえば、少なくとも約１０重量％、たとえば、少なくとも約１５重量％の量で医薬組成物に加えられる。１種または複数の高分子結合剤は、組成物中に、約５０重量％未満の量で、たとえば、約４５重量％未満の量で、たとえば、約４０重量％未満の量で、たとえば、約３５重量％未満の量で、たとえば、約３０重量％未満の量で存在する。
【００７５】
[0081］一実施形態では、高分子結合剤は、加工デンプンなどのデンプンを含みうる。デンプンは、たとえば、トウモロコシまたはモチトウモロコシ由来でよい。一実施形態では、デンプンは、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｔａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙによって販売されているＨＩ−ＣＡＰ１００デンプンを含むものでよい。
【００７６】
[0082］代替実施形態では、高分子結合剤は、アラビノガラクタンを含みうる。アラビノガラクタンは、高分子結合剤としての働きをしうるだけでなく、他の利益ももたらしうる可溶性多糖である。たとえば、アラビノガラクタンは、状況によっては、適応免疫応答を増強する場合がある。アラビノガラクタンについては、たとえば、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第８，７８４，８４４号に記載されている。
【００７７】
[0083］一実施形態では、カラマツアラビノガラクタンを高分子結合剤として使用する場合がある。カラマツアラビノガラクタンは、およそ６：１の比のガラクトース単位とアラビノース単位で構成されている、高度に分岐した多糖である。カラマツアラビノガラクタンは、大木から抽出される。この多糖は、ガラクトースおよびアラビノースの側鎖をもつガラクタン主鎖を有する。アラビノガラクタンは、Ｌｏｎｚａ  Ｌｔｄ．から市販品として入手可能である。
【００７８】
[0084］高分子結合剤を、たとえば噴霧乾燥法によってタンパク質増強組成物と組み合わせたなら、得られる混合物を、次いで安定剤パッケージと組み合わせることができる。一実施形態では、安定剤パッケージは、カルボン酸の塩と組み合わせられた酸化物粒子を含む。特定の一実施形態では、安定剤パッケージは、タンパク質増強組成物および高分子結合剤と組み合わせられる、粉末または粒状物などの乾燥物を含みうる。酸化物粒子とカルボン酸の塩の組合せは、タンパク質増強組成物と組み合わせたとき、非常に多くの利点および利益をもたらすことがわかった。たとえば、安定剤パッケージは、タンパク質増強組成物を安定させ、組成物の吸湿性を低くすることがわかった。また、組成物は、より取り扱いやすくなり、粒状の形態である場合、易流動性の生成物をもたらす。
【００７９】
[0085］医薬組成物に加えることができる酸化物粒子は、シリカを含みうる。たとえば、酸化物粒子は、沈降シリカ粒子を含みうる。シリカ粒子は、約５５ミクロン未満、たとえば、約４０ミクロン未満、たとえば、約３０ミクロン未満、たとえば、約２５ミクロン未満、たとえば、約２０ミクロン未満、たとえば、約１５ミクロン未満、たとえば、約１２ミクロン未満、たとえば、約１０ミクロン未満、たとえば、約８ミクロン未満、たとえば、約６ミクロン未満、たとえば、約４ミクロン未満、たとえば、約２ミクロン未満、たとえば、約１ミクロン未満の粒径（ｄ５０、ＩＳＯ試験１３３２０に従うレーザー回折（ｌａｓｅｒ  ｄｅｆｒａｃｔｉｏｎ））を有する場合がある。粒径は、通常、約０．５ミクロンより大きい、たとえば、約１ミクロンより大きい。粒子は、約１２０ｍ２／ｇより大きい、たとえば、約１３０ｍ２／ｇより大きい、たとえば、約１５０ｍ２／ｇより大きい、たとえば、約１７０ｍ２／ｇより大きい、たとえば、約２００ｍ２／ｇより大きい、たとえば、約２２０ｍ２／ｇより大きい比表面積（ＩＳＯ試験９２７７）を有する場合がある。比表面積は、一般に、約５００ｍ２／ｇ未満である。シリカ粒子などの酸化物粒子は、医薬組成物中に、約０．０１重量％より多い量で、たとえば、約０．０５重量％より多い量で、たとえば、約０．１重量％より多い量で存在してよい。酸化物粒子は、一般に、５重量％未満の量で、たとえば、約２重量％未満の量で、たとえば、約１．５重量％未満の量で、たとえば、０．５重量％未満の量で存在する。
【００８０】
[0086］安定剤パッケージは、酸化物粒子に加えて、カルボン酸の塩も含む場合がある。カルボン酸の塩は、脂肪酸の塩を含みうる。脂肪酸は、たとえば、約６個の炭素原子〜約４０個の炭素原子、たとえば、約１２個の炭素原子〜約２８個の炭素原子という炭素鎖長を有する場合がある。一実施形態では、カルボン酸の塩は、ステアリン酸塩を含みうる。使用することができるステアリン酸塩として、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、これらの混合物などが挙げられる。一実施形態では、カルボン酸の塩は、親水性基と疎水性基の両方を含む場合がある。カルボン酸の塩は、医薬組成物中に、約０．５重量％より多い量で、たとえば、約１重量％より多い量で、たとえば、約１．５重量％より多い量で存在する場合がある。カルボン酸の塩は、一般に、約５重量％未満の量で、たとえば、約４重量％未満の量で、たとえば、約３重量％未満の量で存在する。
【００８１】
[0087］組成物は、高分子結合剤および安定剤パッケージに加えて、他の種々の成分および原材料を含む場合もある。一実施形態では、たとえば、組成物は、クエン酸エステル、たとえば、脂肪酸のモノおよび／またはジグリセリドのクエン酸エステルを含有する場合がある。組成物は、レシチン、たとえば、ナタネ、ヒマワリなどから得られるレシチンを含有する場合もある。上記成分は、約２重量％未満、たとえば、約１．５重量％未満、たとえば、約１重量％未満などの、比較的少量で組成物中に存在してよい。上記成分は、一般に、約０．０５重量％より多い量で、たとえば、約０．１重量％より多い量で存在する。
【００８２】
[0088］上記成分を一緒に組み合わせて医薬組成物としたなら、組成物を、場合によりコーティング材料と組み合わせてもよい。一実施形態では、たとえば、医薬組成物は、脂肪を含有するコーティング材料が適用されている粒状組成物を含みうる。コーティング材料は、たとえば、水素添加パーム油などの水素添加油を含みうる。特定の一実施形態では、コーティング材料は、パームステアリンと組み合わされた水素添加パーム油を含みうる。一実施形態では、水素添加油は、医薬組成物中に、約５重量％〜約３５重量％の量で存在する場合がある。一方、パームステアリンは、医薬組成物中に、約２重量％〜約１０重量％の量で存在する場合がある。共に存在するとき、水素添加パーム油とパームステアリンの重量比は、約１０：１〜約１：１、たとえば、約６：１〜約２：１である場合がある。一実施形態では、水素添加パーム油とパームステアリンは、約４：１の重量比で存在する。
【００８３】
[0089］本開示は、以下の実施例を参照することでより深く理解することができる。
【実施例】
【００８４】
実施例１
[0090]無作為化二重盲検プラセボ対照試験を実施して、本開示に従って製剤した２種のタンパク質増強組成物が、健康な老齢成人における筋タンパク質合成、機能強度、除脂肪体重、および全般的な生活の質に与える効果を評価した。
【００８５】
[0091]試験は、サンプルサイズを４２人の健康な老齢成人として、各試験群に二重盲検方式で１４人の対象を１：１：１の比で無作為化して実施した。各対象は、表１および２に示す採用および除外基準に従って選択した。
【００８６】
【表１】
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【００８７】
【表２】
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【００８８】
[0092]３種の栄養サプリメントの組成を表３に示す。対象には、対象がサンプル１、サンプル２、またはプラセボ群のいずれに属するのかに基づき、３種のサプリメントの１種を与えた。サンプル１群には、示された組成物を１日に４グラム与えた。サンプル２群には、示された組成物を１日に８グラム与えた。プラセボ群には、示された組成物を１日に３グラム与えた。対象には、示された組成物の小袋の中身をボトル１本のオレンジジュースに空け、１分間激しく振盪し、次いで、ボトル全量を飲むように説明した。サンプル１およびサンプル２の各小袋は、２．２ｇのＬ−カルニチン酒石酸塩を含有した。対象には、無作為化の翌日（１日目）に製品の摂取を開始するように説明した。対象は、８週間製品を摂取し続けた。
【００８９】
[0093]対象には、試験の間終始、自身の現在の身体活動レベルおよび食習慣を維持するように求めた。
【００９０】
【表３】
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【００９１】
[0094]試験の０日目、２９±３日目、および５７±３日目に、評価を行った。２９日目に、対象と電話で連絡を取って、有害事象および併用薬物療法の変化をモニターすることに加えて、試験投薬計画の遵守を促した。
【００９２】
[0095]治療またはプラセボ用量の少なくとも８０％を摂取し、いかなる大きなプロトコル違反もなく、主要変数の測定と関係のあるすべての試験訪問および手順を完遂したすべての参加者からなるプロトコル群集団についてデータを分析した。３人の対象が、プロトコル違反のためにもとの４２人の対象集団から除外されたため、プロトコル群集団には、３９人の対象が含まれた。統計分析については、８週間の補給にかけての群内変化、強度テスト前後変化を、対応のあるスチューデントｔ検定またはノンパラメトリックなウィルコクソン符号順位検定によって、有意性があるか検定した。８週間の変化の群間差は、対応のないスチューデントｔ検定またはノンパラメトリックなマン−ホイットニーＵ検定によって、有意性があるか検定した。以下の表において、種々の上付き文字の付いた治療群は、有意差がある。確率値Ｐ≦０．０５が、統計的に有意である。
【００９３】
[0096]０日目および５７±３日目に、二重エネルギーＸ線吸収計（ＤＸＡ）によって、各参加者について総除脂肪量を測定した。図１および表４に示すとおり、総除脂肪量は、サンプル２群において有意に増加したが（＋１．０１ｋｇ、Ｐ＝０．０１３）、サンプル１（−０．０３ｋｇ、Ｐ＝０．９１５）またはプラセボ（０．０ｋｇ、Ｐ＝０．９８６）群では増加しなかった。
【００９４】
[0097]図２において明らかになるとおり、腕除脂肪量は、８週間の終わりまでに、サンプル１と２とで有意差が生じ（Ｐ＝０．０１２）、サンプル１は、腕質量のわずかな減少（−０．１３７ｋｇ）を示し、サンプル２は、腕質量の軽微な増加（＋０．１３５ｋｇ）を示した。
【００９５】
[0098]図３では、サンプル２を補給された参加者が、脚筋肉量の増大（＋０．３５ｋｇ、Ｐ＝０．００５）も示したことが証明され、これは、プラセボ群（−０．０３ｋｇ、Ｐ＝０．８１１）では反映されなかった。加えて、サンプル１の対象は、少なく有意でない脚除脂肪量の増加（＋０．１７ｋｇ、Ｐ＝０．２５６）を示した。
【００９６】
[0099]図４に示すとおり、総非体幹除脂肪量は、サンプル２群において、試験終盤までに有意に増加した（＋０．４８ｋｇ、Ｐ＝０．００６）。この変化は、総非体幹除脂肪量を失う傾向のあったプラセボ群（−０．１０ｋｇ、Ｐ＝０．５６０）より有意に大きかった（Ｐ＜０．０５）。サンプル１群は、試験の継続期間中、その総非体幹除脂肪量を維持した（＋０．０３ｋｇ、Ｐ＝８３７）。
【００９７】
【表４】
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【００９８】
[00100]０日目および５７±３日目に、平均脚筋力測定によって、各参加者について下腿強度を評価した。図５および表５に示すとおり、下腿強度は、サンプル２群において有意に増大した（＋１．０ｋｇ、Ｐ＝０．０２９）。脚筋力測定におけるこの増大は、脚筋肉量（ＤＸＡスキャン）の上昇と一致しており、試験の終わりまでに平均脚強度の低下（−２．８ｋｇ、Ｐ＝０．０６１）を示したプラセボ群との間で有意差があった（Ｐ＝０．０１２）。サンプル１は、プラセボ群（Ｐ＝０，０２３）との間で有意差があり、試験継続期間にかけて、その平均脚強度を維持した（−０．４ｋｇ、Ｐ＝０．７６４）。平均左手および右手ならびに平均腕強度を含めた上半身強度マーカーは、いずれの治療群についても有意に変化しなかった。
【００９９】
【表５】
2018537987.tif 000007
【０１００】
[00101]参加者は、０日目および５７±３日目に、６分間歩行試験を完遂した。表６は、プラセボを摂取する参加者において、試験の終わりに、その歩行後息切れスコアがベースラインに比べて有意に低下した（−０．４３、Ｐ＜０．０５）ことを示している。すべての治療群において、合計歩行メートル数、歩行前息切れスコア、および歩行前／後疲労スコアに顕著な変化はなかった。
【０１０１】
【表６−１】
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【０１０２】
【表６−２】
2018537987.tif 000009
【０１０３】
[00102]０日目および５７±３日目に、ＲＡＮＤ  ＳＦ−３６調査票に対する参加者の回答によって、表７に示す生活の質を明らかにした。ＳＦ−３６調査票は、ＲＡＮＤにおいて、Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｏｕｔｃｏｍｅｓ  Ｓｔｕｄｙの一環として開発された。サンプル１群は、試験終盤までに、そのエネルギー／疲労比が、ベースラインに比べて増大する傾向を示した（＋６．１、Ｐ＝０．０７３）。身体機能、役割機能（身体的または感情的）、感情的な幸福、社会機能、疼痛、および全般的な健康を含む他のすべての生活の質尺度は、いかなる介入によっても有意に変化しなかった。
【０１０４】
【表７−１】
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【０１０５】
【表７−２】
2018537987.tif 000011
【０１０６】
[00103]ｍＲＮＡ分析については、０日目および５７±３日目に、参加者（ｎ＝３８）から筋生検材料を採取して、ユビキチン−プロテアソーム経路、成長因子／タンパク質シグナル伝達、および炎症促進性シグナル伝達経路内のｍＲＮＡ発現レベルに対するサンプル１および２またはプラセボの効果を評価した。ベースライン時および試験終盤に収集された筋組織からｍＲＮＡを単離した。ｍＲＮＡから、ＲＴ−ＰＣＲ技術を使用してｃＤＮＡを合成し、分析した。同化／タンパク質合成シグナル伝達遺伝子（アンドロゲン受容体、インスリン受容体、ＩＧＦ−１およびＩＧＦ−１受容体）、異化／タンパク質分解シグナル伝達遺伝子（アトロギン１およびＭｕＦＲ１）、およびサイトカイン／サイトカイン受容体（ＩＬ−６、ＩＬ−６受容体、ＴＮＦα、ＴＮＦｒＳＦ１Ａ、ＴＮＦｒＳＦ１Ｂ）遺伝子を、内因性対照としてのＧＡＰＤＨと共に検定した。収集された筋生検材料についてのｍＲＮＡ発現は、サンプルが、同化と異化両方の経路に影響を及ぼすことを示唆している。
【０１０７】
[00104]成長因子／タンパク質シグナル伝達遺伝子については、表８から、有意な群間差は認められなかったが、しかし、両方のカルニチン群について、こうした遺伝子の転写がプラセボに比べて多くなる傾向があったことが明らかになる。
【０１０８】
[00105]表８についての対象数（Ｎ＝３８）は、０日目および５７±３日目に採取された対象の筋生検材料からのｍＲＮＡの処理および単離に反映される。この分析には、（要求されたマーカーの相対的変化を見るために）ベースラインと試験終盤の筋肉サンプルが必要であり、対象の一部は、分子分析を進めるのに必要となる量のｍＲＮＡを得るのに十分な骨格筋を有していなかった。
【０１０９】
【表８−１】
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【０１１０】
【表８−２】
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【０１１１】
[00106]参加者（ｎ＝３３）から０日目および５７±３日目に採取した筋生検材料を使用して、ｍＴＯＲ／Ｓ６Ｋ／４ＥＢＰ１タンパク質合成およびＮＦκβ（ｐ６５／ｐ５０）炎症促進性シグナル伝達経路のタンパク質発現／活性に対するサンプル１および２またはプラセボの効果を評価した。ベースライン時および試験終盤において、運動前および後の生検材料を収集したときに集められた筋組織から、タンパク質を単離した。運動後筋生検材料は、運動前生検からおよそ１時間後に取得されたものである。等濃度（４０μｇ）のタンパク質を８〜１２％のＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上で分離し、次いでこれをニトロセルロース膜に転写し、目的の各タンパク質に特異的な抗体で免疫標識して、ウエスタンブロッティングを行った。こうした抗体の検出を、増強化学発光（ＥＣＬ）を使用して行った。
【０１１２】
[00107]表９に示されるとおり、サンプル１およびサンプル２を摂取する参加者の、０週目（ベースライン）から８週目（試験終盤）への運動前の筋タンパク質レベルの変化は、顕著であった。表９では、作業間の変動性を最小限に抑えるために、タンパク質のマイクログラム数を基準として曲線下面積を標準化した。
【０１１３】
[00108]図６〜９に、各治療群におけるベースラインから８週目へのｍＴＯＲ発現の変化を示す。表９および図９において認められるとおり、サンプル２に対する参加者は、８週目の運動前において、総ｍＴＯＲ発現が、ベースラインｍＴＯＲレベルに比べて有意に群内で８１％増加した（ｐ＝０．０１７）。
【０１１４】
[00109]図１４〜１７には、各治療群におけるベースラインから８週目へのホスホ−４ＥＢＰ１および総４ＥＢＰ１の変化を示す。表９および図１５に示されるとおり、サンプル２は、８週目の運動前において、４ＥＢＰ−１タンパク質のリン酸化が、０週目に比べて２４％減少する傾向（ｐ＝０．０５７）があった。
【０１１５】
[00110]図１８〜２１には、各治療群におけるベースラインから８週目へのホスホ−Ｐ６５および総Ｐ６５の変化を示す。表９および図２２において認められるとおり、サンプル１群は、０週目を８週目の運動前と比べたとき、ＮＦ−κβ複合体のｐ６５リン酸化について３８％という有意な群間減少（ｐ＝０．０２１）を示した。図２１に示されるとおり、０週目を８週目の運動前と比べたとき、サンプル１群では、プラセボ群に比べて、総ｐ６５発現量が有意に減少している傾向があった（Ｐ＝０．０８７）。
【０１１６】
[00111]表９および図６に示されるとおり、サンプル１およびサンプル２を摂取する参加者の、０週目（ベースライン）から８週目（試験終盤）への運動後の筋タンパク質レベルの群内変化も、有意であった。図６〜９に示されるとおり、ｍＴＯＲのリン酸化は、サンプル１群では有意に４１％増加し（ｐ＝０．０１５）、サンプル２群では３５％減少した（ｐ＝０．０５１）。しかし、図９が示すとおり、総ｍＴＯＲ発現は、サンプル２群において５６％増加しており（ｐ＝０．０５８）、これはぎりぎり(borderline)有意であり、８週目の運動後に、この群についてそのリン酸化がベースラインに対して減少したのを相殺しうる。図７において認められるとおり、群間では、ホスホ−ｍＴＯＲの０週目から８週目の運動後への変化を比較したとき、サンプル１群とサンプル２群との間で有意差が存在した（Ｐ＝０．０１６）。
【０１１７】
[00112]図１０〜１３には、各治療群におけるベースラインから８週目へのホスホ−Ｓ６Ｋおよび総Ｓ６Ｋの変化を示す。図１１において認められるとおり、Ｓ６Ｋリン酸化は、０週目から８週目の運動後を比較したとき、サンプル１群において有意に３６％減少した（ｐ＝０．０１９）。一方、図１３に示されるとおり、総Ｓ６Ｋタンパク質発現は、０週目から８週目の運動後を比較したとき、サンプル１群において有意に１０１％増加し（ｐ＝０．０３８）、サンプル２群においても有意な４７％の増加へと向かった（ｐ＝０．０９８）。
【０１１８】
[00113]図１４および１５に示されるとおり、４ＥＢＰ−１のリン酸化は、０週目から８週目の運動後の群内変化を比較したとき、サンプル１群およびサンプル２群において、それぞれ、有意に５６％（ｐ＝０．０４）および３８％（ｐ＝０．０１９）減少した。
【０１１９】
[00114]図１９に示されるとおり、ＮＦ−κβのｐ６５サブユニットのリン酸化は、８週目の運動後に、サンプル１群において、ベースラインに比べて有意に．５６％減少した（ｐ＝０．０１７）。
【０１２０】
[00115]図２２および２３には、各治療群におけるベースラインから８週目への総Ｐ５０の変化を示す。図２５および２６において認められるとおり、治療群のいずれにおいても、ベースラインから８週目への総ｐ５０発現に、有意な変化はなかった。
【０１２１】
[00116]図２４には、各治療群について、表示された各タンパク質についての代表的な免疫ブロットを示す（ベースライン時対試験終盤である８週の時点）。ＧＡＰＤＨを内部負荷対照として使用した。図１４において、Ｔ＝総、Ｐ＝ホスホ抗体である。
【０１２２】
[00117]表９についての対象数（Ｎ＝３３）は、対象の筋生検材料からのタンパク質の処理および単離に反映される。この分析には、（要求されたマーカーの相対的変化を見るために）ベースラインと試験終盤の筋肉サンプルが必要であり、対象の一部は、分子分析を進めるのに必要となる量のタンパク質を得るのに十分な骨格筋を有していなかった。
【０１２３】
【表９−１】
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【０１２４】
【表９−２】
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【０１２５】
【表９−３】
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【０１２６】
[00118]０日目および５７±３日目より前に、各参加者について人体計測を行い、バイタルサインを調べた。表１０において認められるとおり、無作為化後のすべての時点について、収縮期および拡張期血圧、ならびに心拍数、体重、およびＢＭＩに、有意な群間差は存在しなかった。群内では、サンプル１群についての拡張期血圧、ならびにサンプル２群の平均心拍数において、ベースラインに比べて有意な変化が存在した。すべての血圧および心拍数値は、許容される臨床的範囲内であった。
【０１２７】
【表１０】
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【０１２８】
[00119]０日目および５７±３日目の前に各参加者について血液サンプルを採取して、血液学および臨床化学パラメーターを測定した。表１１から、参加者についての血液学および臨床化学パラメーターには、クレアチニン（Ｐ＝０．０２７）、推定糸球体濾過率（ｇｌｏｂｕｌａｒ  ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ  ｒａｔｅ）（Ｐ＝０．０２９）、およびアスパラギン酸トランスアミナーゼ（Ｐ＝０．０３４）濃度を例外として、有意な群間変化がなかったことが明らかである。しかし、こうしたマーカーは、確立されているその臨床的基準範囲内にとどまった。
【０１２９】
[00120]スクリーニングから試験終盤（８週目）への有意な群内変化を示した安全性パラメーターは、５つであった。サンプル１における対象について、白血球数（Ｐ＝０．０２１）、リンパ球数（Ｐ＝０．０２２）、およびアスパラギン酸トランスアミナーゼレベル（Ｐ＝０．０３３）が増大し、この群についての塩化物レベルが有意に低下した（Ｐ＝０．０１３）。クレアチニン濃度（Ｐ＝０．０５）は、サンプル２群について有意に増大した。サンプル２群内の対象については、推定糸球体濾過率（Ｐ＝０．０６９）が有意に変化しなかった。全般に、この集団については、すべての血液学および臨床パラメーターが、許容される臨床的範囲内であった。
【０１３０】
【表１１−１】
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【０１３１】
【表１１−２】
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【０１３２】
【表１１−３】
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【０１３３】
【表１１−４】
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【０１３４】
【表１１−５】
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【０１３５】
[00121]服薬遵守、治療群、およびこれらの相互作用を共分散として、クレアチニン濃度についてモデルを実施した。表１２から、服薬遵守がクレアチニン濃度に関係しなかったことが明らかになる。
【０１３６】
【表１２】
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【０１３７】
[00122]主要エンドポイントは、プラセボを投与された対象と比べた、サンプル２を投与された対象の、（ＤＸＡスキャンによって評価される）除脂肪体重と、（６分間歩行試験、下半身筋力測定、および上半身筋力測定によって評価される）筋肉機能強度の、ベースラインから８週目への変化という複合エンドポイントとした。複合エンドポイントは、各成分スコアの結果を掛け合わせて（除脂肪筋肉量ｋｇ×歩行したメートル×下半身抵抗ｋｇ×上半身抵抗ｋｇ）、（任意の単位で示される）複合スコアを得ることにより算出した。ベースラインと８週目の複合スコアの変化パーセントを得て、サンプル２とプラセボを比較した。
【０１３８】
【表１３】
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【０１３９】
[00123]図２５および表１１において明らかにされるとおり、サンプル２を摂取する参加者（ｎ＝４２、ＩＴＴ集団）についての主要複合エンドポイント［ＭＭ（ｋｇ）×ＵＳ（ｋｇ）×ＬＳ（ｋｇ）×６Ｗ（ｍ）］に、有意な絶対的変化（Ｐ＝０．００８）が存在した。この絶対的変化は、プラセボ群（Ｐ＝０．０１６）に比べて有意であり、サンプル１群と比べても、有意性に近づいた（Ｐ＝０．０７７）。特に、百分率として示したとき、サンプル２群についての複合エンドポイントの絶対的変化は、プラセボに対して６３．５パーセントポイントの増加に相当する。
【０１４０】
実施例２
[00124]上述のとおり、一実施形態では、本開示のタンパク質増強組成物は、組成物の１つまたは複数の性質を改善するために、安定剤パッケージと組み合わせることができる。以下の例は、例示的な製剤を示し、本発明を限定するものではない。実際に、安定剤パッケージ、および安定剤パッケージを組成物に組み込む方法は、適切ないかなる医薬組成物においても使用することができ、本開示のタンパク質増強組成物だけに限定されないことがある。
【０１４１】
[00125]一実施形態では、以下の成分を最初に混ぜ合わせることができる。成分は、高分子結合剤と組み合わせられた本開示に従うタンパク質増強組成物を含む。サンプル番号１では、高分子結合剤は、加工デンプンである。サンプル番号２では、高分子結合剤は、カラマツアラビノガラクタンである。以下の成分を噴霧乾燥して顆粒にして、粒状物とすることができる。たとえば、噴霧圧力を約２バールとし、噴霧速度を毎分約１０〜約２０グラムとすることができる。
【０１４２】
【表１４】
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【０１４３】
[00126]上記粒状物が製造された後、粒状物を安定剤パッケージと混合することができる。安定剤パッケージは、ステアリン酸カルシウムとシリカの乾燥混合物を含むものでよい。ステアリン酸カルシウムは、約２．５重量％の量で加えることができ、シリカは、約０．２重量％の量で加えることができる。安定剤パッケージは、乾燥混合物であるため、粒状混合物を含む医薬組成物が製造される。ステアリン酸塩およびシリカは、粒状粒子を安定化する働きをする。
【０１４４】
[00127]粒状混合物には、脂肪コーティング材料を適用することができる。脂肪コーティング材料は、水素添加パーム油とパームステアリンの組合せを含むものでよい。一実施形態では、水素添加パーム油は、結果として得られる医薬組成物に対して１６重量％の量で加えられ、パームステアリンは、４重量％の量で加えられる。代替実施形態では、水素添加パーム油は、医薬組成物に対して２４重量％の量で加えられ、パームステアリンは、６重量％の量で加えられる。
【０１４５】
[00128]本発明に対するこれらおよび他の変更形態および変形形態は、添付の特許請求の範囲においてより詳細に述べる本発明の真意および範囲から逸脱することなく、当業者が実施してよい。加えて、種々の実施形態の態様は、全体または一部のどちらにおいても交換がなされてよいと理解すべきである。さらに、当業者であれば、前述の記述が、単に例としてのものであり、本発明を限定するものではないため、そうした添付の特許請求の範囲においてさらに記載されることも認めるところとなる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【国際調査報告】
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