(57)【要約】本明細書中に開示されるのは、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）またはそれらの遊走の減少によって、がん細胞を治療する、がん細胞の発生率を低下させる、またはがん細胞中のもしくはがん細胞の１つもしくは複数の作用を阻止する方法、がん細胞の遊走を処置するもしくはがん細胞の転移を治療する、がん細胞の遊走もしくは転移の発生率を低下させる、またはがん細胞の遊走もしくは転移を予防する方法、がんを治療する、がんの発生率を低下させる、またはがんを予防する方法、及び、例えば、運動精子ドメイン含有タンパク質２（ＭＯＳＰＤ２）の阻害物質を用いて、がん（転移性がんを含む）を治療する、がん（転移性がんを含む）の発生率を低下させる、またはがん（転移性がんを含む）を予防する方法である。さらに開示されるのは、ＭＯＳＰＤ２の阻害物質（例えば、抗ＭＯＳＰＤ２抗体またはその抗原結合断片）、及びＭＯＳＰＤ２阻害物質を含有する医薬組成物である。さらに開示されるのは、対象における、がん、がん転移、腫瘍進行、または腫瘍浸潤性の予測、診断、または予後判定のための方法である。2018527333.tif 000045
2018527333.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
その必要がある対象に、がん細胞により発現する運動精子ドメイン含有タンパク質２（ＭＯＳＰＤ２）の阻害物質の有効量を投与するステップを含む、前記がん細胞の転移を治療または予防する方法。
【請求項２】
その必要がある対象に、がん細胞により発現するＭＯＳＰＤ２の阻害物質の有効量を投与するステップを含む、前記がん細胞中のまたは前記がん細胞の１つまたは複数の作用を阻害または阻止する方法であって、前記１つまたは複数の作用が、がん細胞遊走、腫瘍成長と関連した単球遊走、ケモカインシグナル伝達経路、成長因子シグナル伝達経路、ＥＧＦ受容体リン酸化、ＥＲＫリン酸化、ＡＫＴリン酸化、及びＦＡＫリン酸化のうちの１つまたは複数である、前記方法。
【請求項３】
がん腫瘤の付近もしくは内部の腫瘍関連マクロファージ数を減少させるため、または腫瘍関連マクロファージの遊走を減少させるため、その必要がある対象に、循環単球もしくは腫瘍関連マクロファージにより発現するＭＯＳＰＤ２の阻害物質の有効量を投与するステップを含む、がんを治療または予防する方法。
【請求項４】
その必要がある対象に、がん細胞により発現するＭＯＳＰＤ２の阻害物質の治療的有効量を投与するステップを含む、がんを治療または予防する方法。
【請求項５】
治療的有効量の抗がん剤を投与するステップをさらに含む、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
その必要がある対象に、抗がん剤及び転移性がん細胞により発現するＭＯＳＰＤ２の阻害物質の治療的有効量を投与するステップを含む、転移性がんを治療または予防する方法。
【請求項７】
がん細胞を、前記がん細胞により発現するＭＯＳＰＤ２の阻害物質の有効量と接触させるステップを含む、がん細胞の転移を治療または予防する方法。
【請求項８】
がん細胞を、前記がん細胞により発現するＭＯＳＰＤ２の阻害物質の有効量と接触させるステップを含む、前記がん細胞中のまたは前記がん細胞の１つまたは複数の作用を阻害または阻止する方法であって、前記１つまたは複数の作用が、ＭＯＳＰＤ２発現、がん細胞遊走、ケモカインシグナル伝達経路、成長因子シグナル伝達経路、ＥＧＦ受容体リン酸化、ＥＲＫリン酸化、ＡＫＴリン酸化、及びＦＡＫリン酸化のうちの１つまたは複数である、前記方法。
【請求項９】
がん腫瘤の付近もしくは内部の腫瘍関連マクロファージ数を減少させるため、または腫瘍関連マクロファージの遊走を減少させるため、循環単球もしくは腫瘍関連マクロファージを、前記循環単球もしくは腫瘍関連マクロファージにより発現するＭＯＳＰＤ２の阻害物質の有効量と接触させるステップを含む、がんを治療または予防する方法。
【請求項１０】
がん細胞を、前記がん細胞により発現するＭＯＳＰＤ２の阻害物質の治療的有効量と接触させるステップを含む、がんを治療または予防する方法。
【請求項１１】
別の抗がん剤の治療的有効量を投与するステップをさらに含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記阻害物質が、ポリペプチド、ＤＮＡ、またはＲＮＡである、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記阻害物質が、（ｉ）ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドに特異的に結合する単離した結合分子であるか、（ｉｉ）ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドのリガンドに特異的に結合する単離した結合分子であるか、（ｉｉｉ）ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドに対して産生された抗血清であるか、（ｉｖ）可溶性ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドであるか、または（ｖ）ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドの細胞外ドメインを含む、本質的に前記細胞外ドメインからなる、もしくは前記細胞外ドメインからなる、可溶性ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドである、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
前記阻害物質が、ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドに特異的に結合する抗体である、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
前記阻害物質が、ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドに特異的に結合する抗体の抗原結合断片である、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
前記抗体が、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、マウス抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
前記抗原結合断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｓｄＦｖ断片、ＶＨドメイン、またはＶＬドメインである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
前記阻害物質が、
ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列にストリンジェントな条件下でハイブリダイズする、ＲＮＡｉ、ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、アンチセンスＤＮＡ、デコイ分子、デコイＤＮＡ、二本鎖ＤＮＡ、一本鎖ＤＮＡ、複合体化ＤＮＡ、カプセル化ＤＮＡ、ウイルスＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、ネイキッドＲＮＡ、カプセル化ＲＮＡ、ウイルスＲＮＡ、二本鎖ＲＮＡ、ＲＮＡ干渉を生じさせることができる分子、またはそれらの組み合わせ、あるいは
遺伝子編集システム
である、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
前記ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドが、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１〜４のいずれか１つと少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一である配列を有する、請求項１２〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
前記ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドが、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５〜８のいずれか１つと少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一である配列によりコードされる、請求項１２〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
前記ＭＯＳＰＤ２阻害物質が、式Ｉ：
2018527333.tif 000025
による構造、またはその薬学上許容される塩、水和物、もしくは溶媒和物を有する酸化リン脂質であるか、あるいはその薬学上許容される塩、水和物、もしくは溶媒和物であり、
式中、
ｎは、１〜６の整数であり、ｎが１の場合、Ｃｎ、Ｂｎ、Ｒｎ、及びＹは存在せず、かつＣ１はＲ’ｎに結合しており、
Ｂ１、Ｂ２、・・・Ｂｎ−１、及びＢｎはそれぞれ独立して、酸素、硫黄、窒素、リン、及びケイ素からなる群より選択され、前記窒素、前記リン、及び前記ケイ素はそれぞれ、アルキル、ハロ、シクロアルキル、アリール、ヒドロキシ、チオヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオアリールオキシ、チオアルコキシ、及びオキソからなる群より選択される１つの置換基で置換されてもよく、
Ａ１、Ａ２、・・・Ａｎ−１、及びＡｎはそれぞれ独立して、ＣＲ’’Ｒ’’’、Ｃ＝Ｏ、及びＣ＝Ｓからなる群より選択され、
Ｙは、水素、アシル、アルキル、アリール、シクロアルキル、カルボキシ、糖類、リン酸、ホスホリルコリン、ホスホリルエタノールアミン、ホスホリルセリン、ホスホリルカルジオリピン、ホスホリルイノシトール、エチルホスホコリン、ホスホリルメタノール、ホスホリルエタノール、ホスホリルプロパノール、ホスホリルブタノール、ホスホリルエタノールアミン−Ｎ−ラクトース、ホスホエタノールアミン−Ｎ−グルタル酸、ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（プロピレングリコール）］、ホスホイノシトール−４−ホスファート、ホスホイノシトール−４，５−ビホスホナート、ホスホイノシトール−４，５−ビスホスファート、ピロホスファート、ホスホエタノールアミン−ジエチレントリアミン−ペンタアセタート、ジニトロフェニル−ホスホエタノールアミン、ホスホグリセロール、及び、一般式：
2018527333.tif 000026
を有する部分からなる群より選択され、
式中、
Ｂ’及びＢ’’はそれぞれ独立して、硫黄及び酸素からなる群より選択され、かつ
Ｄ’及びＤ’’はそれぞれ独立して、水素、アルキル、アミノ置換アルキル、シクロアルキル、ホスホナート、及びチオホスホナートからなる群より選択され、かつ
Ｘ１、Ｘ２、・・・Ｘｎ−１はそれぞれ独立して、一般式ＩＩ：
2018527333.tif 000027
を有する飽和または不飽和の炭化水素であり、
式中、ｍは、１〜２６の整数であり、かつ
Ｚは、
2018527333.tif 000028
からなる群より選択され、ここで、Ｗは、酸素及び硫黄からなる群より選択され、
Ｘ１、Ｘ２、・・・Ｘｎ−１のうち少なくとも１つは、水素以外のＺを含み、
かつ、
Ｒ１、Ｒ’１、Ｒ２、・・・Ｒｎ−１、Ｒｎ、Ｒ’ｎのそれぞれ、Ｒ’’及びＲ’’’のそれぞれ、ならびにＲａ、Ｒ’ａ、Ｒｂ、Ｒ’ｂ、・・・Ｒｍ−１、Ｒ’ｍ−１、Ｒｍ、及びＲ’ｍのそれぞれは独立して、結合、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ハロ、トリハロメチル、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、ホスホナート、ホスファート、ホスフィニル、スルホニル、スルフィニル、スルホンアミド、アミド、カルボニル、チオカルボニル、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、Ｃ−カルバマート、Ｎ−カルバマート、Ｃ−チオカルボキシ、Ｓ−チオカルボキシ、及びアミノからなる群より選択されるか、あるいは代替的に、Ｒ１、Ｒ’１、Ｒ２、・・・Ｒｎ−１、Ｒｎ、及びＲ’ｎのうち少なくとも２つ、及び／またはＲａ、Ｒ’ａ、Ｒｂ、Ｒ’ｂ、・・・Ｒｍ−１、Ｒ’ｍ−１、Ｒｍ、及びＲ’ｍのうち少なくとも２つは、少なくとも１つの四員、五員、または六員の芳香族環、ヘテロ芳香族環、脂環式環、またはヘテロ脂環式環を形成する、
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
前記酸化リン脂質が、式ＩＩＩ：
2018527333.tif 000029
による構造、またはその薬学上許容される塩、水和物、もしくは溶媒和物を有し、
式中、ｎは、１〜４から選択される整数であり、
Ｂ１、各Ｂ２、及びＢ３は独立して、酸素、硫黄、及びＮＲ４からなる群より選択され、ここで、Ｒ４は、水素、アルキル、シクロアルキル、アリール、及びアシルから選択され、
Ａ１及び各Ａ２は独立して、ＣＲｅＲｅｅ、ＣＲｅ＝ＣＲｅｅ、Ｃ＝Ｏ、及びＣ＝Ｓからなる群より選択され、ここで、Ｒｅ及びＲｅｅは独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、及びヘテロアリールから選択され、
Ｙは、水素、アシル、アルキル、アリール、シクロアルキル、カルボキシ、糖類、リン酸、ホスホリルコリン、ホスホリルエタノールアミン、ホスホリルセリン、ホスホリルカルジオリピン、ホスホリルイノシトール、エチルホスホコリン、ホスホリルメタノール、ホスホリルエタノール、ホスホリルプロパノール、ホスホリルブタノール、ホスホリルエタノールアミン−Ｎ−ラクトース、ホスホエタノールアミン−Ｎ−グルタル酸、ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（プロピレングリコール）］、ホスホイノシトール−４−ホスファート、ホスホイノシトール−４，５−ビスホスファート、ピロホスファート、ホスホエタノールアミン−ジエチレントリアミン−ペンタアセタート、ジニトロフェニル−ホスホエタノールアミン、ホスホグリセロール、及び一般式：
2018527333.tif 000030
を有する部分からなる群より選択され、
式中、Ｂ及びＢａはそれぞれ独立して、硫黄及び酸素からなる群より選択され、かつＤ及びＤａは独立して、水素、アルキル、アミノアルキル、シクロアルキル、ホスホナート、及びチオホスホナートからなる群より選択され、
Ｘ１及び各Ｘ２は独立して、飽和または不飽和の直鎖炭化水素または分岐鎖炭化水素であり、Ｘ１及びＸ２のうち少なくとも１つは、
2018527333.tif 000031
からなる群より選択される酸化部分Ｚで置換され、ここで、Ｗは、酸素または硫黄であり、かつ、Ｒｄ及びＲｄｄは独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、及びヘテロアリールから選択され、
Ｒ１、Ｒ１ａ、各Ｒ２、Ｒ３、及びＲ３ａは独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ハロ、トリハロメチル、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、ホスホナート、ホスファート、ホスフィニル、スルホニル、スルフィニル、スルホンアミド、アミド、カルボニル、チオカルボニル、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、Ｃ−カルバマート、Ｎ−カルバマート、Ｃ−チオカルボキシ、Ｓ−チオカルボキシ、及びアミノからなる群より選択され、Ｒ１、Ｒ１ａ、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ３ａのうち少なくとも２つは、結合して四員、五員、または六員の芳香族環、ヘテロ芳香族環、脂環式環、またはヘテロ脂環式環を形成してもよい、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記酸化リン脂質が、式ＩＩＩによる構造を有し、かつ式ＩＩＩ中のＸ１及び各Ｘ２が独立して、一般式ＩＶ：
2018527333.tif 000032
を有し、
式中、ｍは、１〜２６から選択される整数であり、
Ｚは、
2018527333.tif 000033
からなる群より選択され、ここで、Ｗは、酸素または硫黄であり、かつ、Ｒｄ及びＲｄｄは独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、及びヘテロアリールから選択され、かつＸ１及びＸ２のうち少なくとも１つは、水素以外のＺを含み、かつ
Ｒａ、Ｒａａ、各Ｒｂ、各Ｒｂｂ、Ｒｃ、及びＲｃｃは独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ハロ、トリハロメチル、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、ホスホナート、ホスファート、ホスフィニル、スルホニル、スルフィニル、スルホンアミド、アミド、カルボニル、チオカルボニル、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、Ｃ−カルバマート、Ｎ−カルバマート、Ｃ−チオカルボキシ、Ｓ−チオカルボキシ、及びアミノからなる群より選択され、Ｒａ、Ｒａａ、Ｒｂ、Ｒｂｂ、Ｒｃ、及びＲｃｃのうち少なくとも２つは、結合して四員、五員、または六員の芳香族環、ヘテロ芳香族環、脂環式環、またはヘテロ脂環式環を形成してもよい、
請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
式Ｉ中のｎが３であるか、または式ＩＩＩのｎが１である、請求項２１〜２３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２５】
Ｙが、水素、アシル、アルキル、アリール、シクロアルキル、カルボキシ、糖類、リン酸、ホスホリルコリン、ホスホリルエタノールアミン、ホスホリルセリン、ホスホリルカルジオリピン、ホスホリルイノシトール、エチルホスホコリン、ホスホリルメタノール、ホスホリルエタノール、ホスホリルプロパノール、ホスホリルブタノール、ホスホリルエタノールアミン−Ｎ−ラクトース、ホスホエタノールアミン−Ｎ−グルタル酸、ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（プロピレングリコール）］、ホスホイノシトール−４−ホスファート、ホスホイノシトール−４，５−ビスホスファート、ピロホスファート、ホスホエタノールアミン−ジエチレントリアミン−ペンタアセタート、ジニトロフェニル−ホスホエタノールアミン、及びホスホグリセロールからなる群より選択される、請求項２１〜２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２６】
Ｙが、水素、ホスホリルコリン、及びホスホリルエタノールアミンからなる群より選択される、請求項２１〜２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２７】
Ｂ１、Ｂ２、及びＢ３がそれぞれ酸素である、請求項２１〜２６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２８】
Ｚが
2018527333.tif 000034
であり、ここで、Ｗが酸素である、請求項２１〜２７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２９】
前記酸化リン脂質が、式ＩＩＩａ：
2018527333.tif 000035
による構造、またはその薬学上許容される塩、水和物、もしくは溶媒和物を有し、
式中、Ｂ１、Ｂ２、及びＢ３は独立して、酸素及び硫黄から選択され、
Ａ１及びＡ２は独立して、ＣＨ２、ＣＨ＝ＣＨ、Ｃ＝Ｏ、及びＣ＝Ｓからなる群より選択され、
Ｙは、水素、アシル、アルキル、アリール、シクロアルキル、カルボキシ、糖類、リン酸、ホスホリルコリン、ホスホリルエタノールアミン、ホスホリルセリン、ホスホリルカルジオリピン、ホスホリルイノシトール、エチルホスホコリン、ホスホリルメタノール、ホスホリルエタノール、ホスホリルプロパノール、ホスホリルブタノール、ホスホリルエタノールアミン−Ｎ−ラクトース、ホスホエタノールアミン−Ｎ−グルタル酸、ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（プロピレングリコール）］、ホスホイノシトール−４−ホスファート、ホスホイノシトール−４，５−ビスホスファート、ピロホスファート、ホスホエタノールアミン−ジエチレントリアミン−ペンタアセタート、ジニトロフェニル−ホスホエタノールアミン、及びホスホグリセロールからなる群より選択され、
Ｒ１、Ｒ１ａ、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ３ａは独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ハロ、トリハロメチル、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、ホスホナート、ホスファート、ホスフィニル、スルホニル、スルフィニル、スルホンアミド、アミド、カルボニル、チオカルボニル、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、Ｃ−カルバマート、Ｎ−カルバマート、Ｃ−チオカルボキシ、Ｓ−チオカルボキシ、及びアミノからなる群より選択され、Ｒ１、Ｒ１ａ、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ３ａのうち少なくとも２つは、結合して四員、五員、または六員の芳香族環、ヘテロ芳香族環、脂環式環、またはヘテロ脂環式環を形成してもよく、
かつ、Ｘ１及びＸ２は独立して、飽和または不飽和の直鎖炭化水素または分岐鎖炭化水素であり、Ｘ１及びＸ２のうち少なくとも１つは、
2018527333.tif 000036
から選択される式を有する酸化部分Ｚで置換され、ここで、Ｗは、酸素または硫黄であり、かつＲｄ及びＲｄｄは独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、及びヘテロアリールから選択される、
請求項２１に記載の方法。
【請求項３０】
Ｒ１、Ｒ１ａ、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ３ａがそれぞれ水素である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
Ｘ１及びＸ２が独立して、式ＩＶａ：
2018527333.tif 000037
による構造を有し、
式中、ｍは、１〜２６から選択される整数であり、
Ｒａ、Ｒａａ、各Ｒｂ、各Ｒｂｂ、Ｒｃ、及びＲｃｃは独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ハロ、トリハロメチル、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、ホスホナート、ホスファート、ホスフィニル、スルホニル、スルフィニル、スルホンアミド、アミド、カルボニル、チオカルボニル、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、Ｃ−カルバマート、Ｎ−カルバマート、Ｃ−チオカルボキシ、Ｓ−チオカルボキシ、及びアミノからなる群より選択され、Ｒａ、Ｒａａ、Ｒｂ、Ｒｂｂ、Ｒｃ、及びＲｃｃのうち少なくとも２つは、結合して四員、五員、または六員の芳香族環、ヘテロ芳香族環、脂環式環、またはヘテロ脂環式環を形成してもよく、
Ｚは、
2018527333.tif 000038
からなる群より選択され、ここで、Ｗは、酸素または硫黄であり、かつ、Ｒｄ及びＲｄｄは独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、及びヘテロアリールから選択され、Ｘ１及びＸ２のうち少なくとも１つは、水素以外のＺを含む、
請求項２９または３０に記載の方法。
【請求項３２】
Ｚが
2018527333.tif 000039
であり、かつＷが酸素である、請求項２９〜３１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３３】
Ｙが、水素、ホスホリルコリン、及びホスホリルエタノールアミンからなる群より選択される、請求項２９〜３２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３４】
Ｂ１、Ｂ２、及びＢ３がそれぞれ酸素である、請求項２９〜３３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３５】
前記酸化リン脂質が、式ＶＩ：
2018527333.tif 000040
による構造を有し、
式中、Ａ１は、ＣＨ２、ＣＨ＝ＣＨ、及びＣ＝Ｏからなる群より選択され、Ａ２は、存在しないか、またはＣＨ２であり、Ｘ１は、炭素原子を１〜３０個有するアルキルであり、Ｘ２は、
2018527333.tif 000041
であり、
ここで、
Ｅは、存在しないか、または、炭素原子を１〜２４個有するアルキル鎖であり、
Ｆは、水素、ヒドロキシ、アルキル、アルコキシ、ハライド、アセトキシ、及びアリールからなる群より選択され、かつ
Ｚは、
2018527333.tif 000042
からなる群より選択され、ここで、Ｒｄは、Ｈ、アルキル、及びアリールから選択され、かつ
Ｙは、水素、アルキル、アリール、リン酸、ホスホリルコリン、ホスホリルエタノールアミン、ホスホリルセリン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルカルジオリピン、ホスファチジルイノシトール、ホスホリルカルジオリピン、ホスホリルイノシトール、エチルホスホコリン、ホスホリルメタノール、ホスホリルエタノール、ホスホリルプロパノール、ホスホリルブタノール、ホスホリルエタノールアミン−Ｎ−ラクトース、ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（プロピレングリコール）］、ホスホイノシトール−４−ホスファート、ホスホイノシトール−４，５−ビスホスファート、ピロホスファート、ホスホエタノールアミン−ジエチレントリアミン−ペンタアセタート、ジニトロフェニル−ホスホエタノールアミン、ホスホグリセロールからなる群より選択される、
請求項２１に記載の方法。
【請求項３６】
Ｘ１が、炭素原子を１０〜３０個有するアルキルである、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
Ｅが、炭素原子を１〜１０個有するアルキルである、請求項３５または３６に記載の方法。
【請求項３８】
Ｙがホスホコリンである、請求項３５〜３７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３９】
前記酸化リン脂質が、
2018527333.tif 000043
、またはその薬学上許容される塩である、請求項２１〜３８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４０】
前記酸化リン脂質が、
2018527333.tif 000044
、またはその薬学上許容される塩である、請求項２１〜３９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４１】
前記ＭＯＳＰＤ２阻害物質が、トコフェロール、トリテルペン、ビタミンＡ、またはリン脂質である、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４２】
前記がんが、膀胱がん、乳がん、結腸がん、直腸がん、腎臓がん、肝臓がん、肺がん、食道がん、胆嚢がん、卵巣がん、膵がん、胃がん、子宮頸がん、甲状腺がん、前立腺がん、皮膚がん、造血器がん、間葉系起源のがん、中枢神経系または末梢神経系のがん、子宮内膜がん、頭頸部がん、膠芽細胞腫、及び悪性腹水からなる群より選択される、請求項１〜４１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４３】
前記がんが、小細胞肺がんまたは非小細胞肺がんである、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記がんが皮膚がんであり、前記皮膚がんが、扁平上皮がん、基底細胞がん、黒色腫、隆起性皮膚線維肉腫、メルケル細胞がん、カポジ肉腫、角化棘細胞腫、紡錘細胞腫瘍、脂腺がん、微小嚢胞性付属器がん、乳房のパジェット病、異型線維黄色腫、平滑筋肉腫、及び血管肉腫からなる群より選択される、請求項４２に記載の方法。
【請求項４５】
前記がんが、リンパ系の造血器がんである、請求項４２に記載の方法。
【請求項４６】
前記リンパ系の造血器がんが、白血病、急性リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、毛様細胞リンパ腫、及びバーキットリンパ腫からなる群より選択される、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
前記がんが、骨髄系の造血器がんである、請求項４２に記載の方法。
【請求項４８】
前記骨髄系の造血器がんが、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、及び前骨髄球性白血病からなる群より選択される、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
前記がんが、線維肉腫、横紋筋肉腫、軟部組織肉腫、及び骨肉腫からなる群より選択される間葉系起源のがんである、請求項４２に記載の方法。
【請求項５０】
前記がんが、星状細胞腫、神経芽細胞腫、神経膠腫、及びシュワン細胞腫からなる群より選択される中枢神経系または末梢神経系のがんである、請求項４２に記載の方法。
【請求項５１】
前記がんが、肛門がん、骨がん、消化管間質がん、妊娠性絨毛性疾患、ホジキンリンパ腫、カポジ肉腫、角化棘細胞腫、悪性中皮腫、多中心性キャッスルマン病、多発性骨髄腫及び他の形質細胞新生物、骨髄増殖性新生物、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、骨肉腫、卵巣がん、卵管がん、または原発性腹膜がん、陰茎がん、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、精上皮腫、軟部組織肉腫、胃がん（ｓｔｏｍａｃｈ（ｇａｓｔｒｉｃ）ｃａｎｃｅｒ）、精巣がん、奇形がん腫、甲状腺濾胞性がん、膣がん、外陰部がん、ウィルムス腫瘍及び他の小児腎臓がん、ならびに色素性乾皮症からなる群より選択される、請求項１〜４１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５２】
前記がんが、膀胱がん、脳がん、乳がん、結腸がん、食道がん、肺がん、皮膚がん、舌がん、腎臓がん、及び肝がんからなる群より選択される、請求項１〜４１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５３】
ＭＯＳＰＤ２が、前記がん細胞の非がん性カウンターパートと比較して、前記がん細胞において上方制御される、請求項１〜５２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５４】
前記がん細胞の遊走が阻害される、請求項１〜５３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５５】
前記がん細胞におけるＥＲＫリン酸化が阻害される、請求項１〜５４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５６】
前記がん細胞におけるＡＫＴリン酸化が阻害される、請求項１〜５５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５７】
前記がん細胞におけるＦＡＫリン酸化が阻害される、請求項１〜５６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５８】
前記対象がヒトである、請求項１〜６及び１２〜５７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５９】
前記抗がん剤が、酢酸アビラテロン、アビトレキサート（Ａｂｉｔｒｅｘａｔｅ）（メトトレキセート）、アブラキサン（パクリタキセルのアルブミン安定化ナノ粒子製剤）、ＡＢＶＤ、ＡＢＶＥ、ＡＢＶＥ−ＰＣ、ＡＣ、ＡＣ−Ｔ、アドセトリス（ブレンツキシマブベドチン）、ＡＤＥ、Ａｄｏ−トラスツズマブエムタンシン、アドリアマイシン（ドキソルビシン塩酸塩）、アドルシル（フルオロウラシル）、ジマレイン酸アファチニブ、アフィニトール（エベロリムス）、アキンゼオ（ネツピタント及びパロノセトロン塩酸塩）、アルダラ（イミキモド）、アルデスロイキン、アレムツズマブ、アリムタ（ペメトレキセド二ナトリウム）、アロキシ（パロノセトロン塩酸塩）、アンボクロリン（Ａｍｂｏｃｈｌｏｒｉｎ）（クロラムブシル）、アンボクロリン（Ａｍｂｏｃｌｏｒｉｎ）（クロラムブシル）、アミノレブリン酸、アナストロゾール、アプレピタント、アレディア（パミドロネート二ナトリウム）、アリミデクス（アナストロゾール）、アロマシン（エキセメスタン）、アラノン（ネララビン）、三酸化ヒ素、アルゼラ（オファツムマブ）、アスパラギナーゼ黒脚病菌（Ｅｒｗｉｎｉａ  ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉ）、アバスチン（ベバシズマブ）、アキシチニブ、アザシチジン、ＢＥＡＣＯＰＰ、ベセナム（Ｂｅｃｅｎｕｍ）（カルムスチン）、ベレオダク（Ｂｅｌｅｏｄａｑ）（ベリノスタット）、ベリノスタット、ベンダムスチン塩酸塩、ＢＥＰ、ベバシズマブ、ベキサロテン、ベキサール（トシツモマブ及びＩ１３１ヨウ素トシツモマブ）、ビカルタミド、ＢｉＣＮＵ（カルムスチン）、ブレオマイシン、ブリナツモマブ、ブリンサイト（ブリナツモマブ）、ボルテゾミブ、ボシュリフ（ボスチニブ）、ボスチニブ、ブレンツキシマブベドチン、ブスルファン、ブスルフェクス（ブスルファン）、カバジタキセル、カボザンチニブ−Ｓ−リンゴ酸塩、ＣＡＦ、キャンパス（アレムツズマブ）、カンプトサール（イリノテカン塩酸塩）、カペシタビン、ＣＡＰＯＸ、カルボプラチン、カルボプラチン−タキソール、カルフィルゾミブ、カルムブリス（カルムスチン）、カルムスチン、カルムスチン留置用剤、カソデックス（ビカルタミド）、ＣｅｅＮＵ（ロムスチン）、セリチニブ、セルビジン（ダウノルビシン塩酸塩）、サーバリックス（組換えＨＰＶ二価ワクチン）、セツキシマブ、クロラムブシル、クロラムブシル−プレドニゾン、ＣＨＯＰ、シスプラチン、クラフェン（Ｃｌａｆｅｎ）（シクロホスファミド）、クロファラビン、ＣＭＦ、コメトリク（Ｃｏｍｅｔｒｉｑ）（カボザンチニブ−Ｓ−リンゴ酸塩）、ＣＯＰＰ、ＣＯＰＰ−ＡＢＶ、コスメゲン（ダクチノマイシン）、クリゾチニブ、ＣＶＰ、シクロホスファミド、シホス（Ｃｙｆｏｓ）（イホスファミド）、サイラムザ（ラムシルマブ）、シタラビン、シタラビンリポソーム製剤（Ｃｙｔａｒａｂｉｎｅ，  Ｌｉｐｏｓｏｍａｌ）、シトサール−Ｕ（シタラビン）、シトキサン（シクロホスファミド）、ダブラフェニブ、ダカルバジン、ダコゲン（Ｄａｃｏｇｅｎ）（デシタビン）、ダクチノマイシン、ダサチニブ、ダウノルビシン塩酸塩、デシタビン、デガレリクス、デニロイキンジフチトクス、デノスマブ、デポサイト（リポソームシ��ラビン）、デポフォーム（リポソームシタラビン）、デクスラゾキサン塩酸塩、ジヌツキシマブ、ドセタキセル、ドキシル（ドキソルビシン塩酸塩リポソーム）、ドキソルビシン塩酸塩、ドキソルビシン塩酸塩リポソーム、Ｄｏｘ−ＳＬ（ドキソルビシン塩酸塩リポソーム）、ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（ダカルバジン）、エフデックス（フルオロウラシル）、エリテック（Ｅｌｉｔｅｋ）（ラスブリカーゼ）、エレンス（エピルビシン塩酸塩）、エロキサチン（オキサリプラチン）、エルトロンボパグオラミン、イメンド（アプレピタント）、エンザルタミド、エピルビシン塩酸塩、ＥＰＯＣＨ、アービタックス（セツキシマブ）、メシル酸エリブリン、エリベッジ（ビスモデギブ）、エルロチニブ塩酸塩、エルウィナーゼ（アスパラギナーゼ黒脚病菌）、エトポホス（リン酸エトポシド）、エトポシド、リン酸エトポシド、エバセット（Ｅｖａｃｅｔ）（ドキソルビシン塩酸塩リポソーム）、エベロリムス、エビスタ（ラロキシフェン塩酸塩）、エキセメスタン、フェアストン（トレミフェン）、ファリーダック（パノビノスタット）、ファスロデックス（フルベストラント）、ＦＥＣ、フェマラ（レトロゾール）、フィルグラスチム、フルダラ（リン酸フルダラビン）、リン酸フルダラビン、フルオロプレックス（フルオロウラシル）、フルオロウラシル、ホレックス（Ｆｏｌｅｘ）（メトトレキセート）、ホレックスＰＦＳ（メトトレキセート）、フォルフィリ、フォルフィリ−ベバシズマブ、フォルフィリ−セツキシマブ、フォルフィリノックス、フォルフロックス（Ｆｏｌｆｌｏｘ）、フォロチン（プララトレキセート）、ＦＵ−ＬＶ、フルベストラント、ガーダシル（組換えＨＰＶ四価ワクチン）、ガーダシル９（組換えＨＰＶ九価ワクチン）、ガジバ（Ｇａｚｙｖａ）（オビヌツズマブ）、ゲフィチニブ、ゲムシタビン塩酸塩、ゲムシタビン−シスプラチン、ゲムシタビン−オキサリプラチン、ゲムツズマブオゾガマイシン、ジェムザール（ゲムシタビン塩酸塩）、ジオトリフ（ジマレイン酸アファチニブ）、グリベック（メシル酸イマチニブ）、ギリアデル（カルムスチン留置用剤）、ギリアデルウエハ（カルムスチン留置用剤）、グルカルピダーゼ、酢酸ゴセレリン、ハラベン（メシル酸エリブリン）、ハーセプチン（トラスツズマブ）、ＨＰＶ二価ワクチン、組換え、ＨＰＶ九価ワクチン、組換え、ＨＰＶ四価ワクチン、組換え、ハイカムチン（トポテカン塩酸塩）、Ｈｙｐｅｒ−ＣＶＡＤ、イブランス（パルボシクリブ）、イブリツモマブチウキセタン、イブルチニブ、ＩＣＥ、アイクルシグ（ポナチニブ塩酸塩）、イダマイシン（イダルビシン塩酸塩）、イダルビシン塩酸塩、イデラリシブ、イフェックス（イホスファミド）、イホスファミド、イホスファミダム（イホスファミド）、メシル酸イマチニブ、イムブルビカ（イブルチニブ）、イミキモド、インライタ（アキシチニブ）、イントロンＡ（組換えインターフェロンα−２ｂ）、ヨウ素１３１トシツモマブ及びトシツモマブ、イピリムマブ、イレッサ（ゲフィチニブ）、イリノテカン塩酸塩、イストダックス（ロミデプシン）、イキサベピロン、イクセンプラ（イキサベピロン）、ジャカフィ（Ｊａｋａｆｉ）（リン酸ルキソリチニブ）、ジェブタナ（カバジタキセル）、カドサイラ（Ａｄｏ−トラスツズマブエムタンシン）、ケオキシフェン（ラロキシフェン塩酸塩）、ケピバンス（パリフェルミン）、キイトルーダ（ペムブロリズマブ）、カイプロリス（カルフィルゾミブ）、酢酸ランレオチド、二トシル酸ラパチニブ、レナリドミド、メシル酸レンバチニブ、レンビマ（メシル酸レンバチニブ）、レトロゾール、ロイコボリンカルシウム、ロイケラン（クロラムブシル）、酢酸ロイプロリド、レブラン（Ｌｅｖｕｌａｎ）（アミノレブリン酸）、リンホリジン（Ｌｉｎｆｏｌｉｚｉｎ）（クロラムブシル）、リポドックス（ＬｉｐｏＤｏｘ）（ドキソルビシン塩酸塩リポソーム）、リポソームシタラビン、ロムスチン、ルプロン（酢酸ロイプロリド）、ルプロンデポ（酢酸ロイプロリド）、ルプロンデポ−Ｐｅｄ（酢酸ロイプロリド）、ルプロンデポ−３ヶ月型（酢酸ロイプロリド）、ルプロンデポ−４ヶ月型（酢酸ロイプロリド）、リンパルザ（Ｌｙｎｐａｒｚａ）（オラパリブ）、マルキボ（Ｍａｒｑｉｂｏ）（ビンクリスチンサルフェートリポソーム）、マツラン（Ｍａｔｕｌａｎｅ）（プロカルバジン塩酸塩）、メクロレタミン塩酸塩、メガス（酢酸メゲストロール）、酢酸メゲストロール、メキニスト（トラメチニブ）、メルカプトプリン、メスナ、メスネックス（Ｍｅｓｎｅｘ）（メスナ）、メタゾラストン（テモゾロミド）、メトトレキセート、メトトレキセートＬＰＦ（メトトレキセート）、メキセート（Ｍｅｘａｔｅ）（メトトレキセート）、メキセート−ＡＱ（メトトレキセート）、マイトマイシンＣ、ミトキサントロン塩酸塩、ミトザイトレックス（Ｍｉｔｏｚｙｔｒｅｘ）（マイトマイシンＣ）、ＭＯＰＰ、モゾビル（プレリキサフォル）、ムスタルゲン（メクロレタミン塩酸塩）、ムタマイシン（マイトマイシンＣ）、ミレラン（ブスルファン）、ミロサール（Ｍｙｌｏｓａｒ）（アザシチジン）、マイロターグ（ゲムツズマブオゾガマイシン）、ナノ粒子パクリタキセル（パクリタキセルのアルブミン安定化ナノ粒子製剤）、ナベルビン（酒石酸ビノレルビン）、ネララビン、ネオサール（Ｎｅｏｓａｒ）（シクロホスファミド）、ネツピタント及びパロノセトロン塩酸塩、ニューポジェン（フィルグラスチム）、ネクサバール（トシル酸ソラフェニブ）、ニロチニブ、ニボルマブ、ノルバデックス（クエン酸タモキシフェン）、Ｎプレート（Ｎｐｌａｔｅ）（ロミプロスチム）、オビヌツズマブ、ＯＥＰＡ、オファツムマブ、ＯＦＦ、オラパリブ、オマセタキシンメペサクシネート、オンキャスパー（ペグアスパルガーゼ）、オンタック（デニロイキンジフチトクス）、オプジーボ（ニボルマブ）、ＯＰＰＡ、オキサリプラチン、パクリタキセル、パクリタキセルのアルブミン安定化ナノ粒子製剤、ＰＡＤ、パルボシクリブ、パリフェルミン、パロノセトロン塩酸塩、パミドロネート二ナトリウム、パニツムマブ、パノビノスタット、パラプラット（Ｐａｒａｐｌａｔ）（カルボプラチン）、パラプラチン（カルボプラチン）、パゾパニブ塩酸塩、ペグアスパルガーゼ、ペグインターフェロンα−２ｂ、ペグイントロン（ペグインターフェロンα−２ｂ）、ペムブロリズマブ、ペメトレキセド二ナトリウム、パージェタ（ペルツズマブ）、ペルツ��マブ、プラチノール（シスプラチン）、プラチノール−ＡＱ（シスプラチン）、プレリキサフォル、ポマリドミド、ポマリスト（ポマリドミド）、ポナチニブ塩酸塩、プララトレキセート、プレドニゾン、プロカルバジン塩酸塩、プロロイキン（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ）（アルデスロイキン）、プロリア（デノスマブ）、プロマクタ（エルトロンボパグオラミン）、プロベンジ（シプロイセルＴ）、プリントール（メルカプトプリン）、プリキサン（Ｐｕｒｉｘａｎ）（メルカプトプリン）、二塩化ラジウム−２２３、ラロキシフェン塩酸塩、ラムシルマブ、ラスブリカーゼ、Ｒ−ＣＨＯＰ、Ｒ−ＣＶＰ、組換えヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）二価ワクチン、組換えヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）九価ワクチン、組換えヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）四価ワクチン、組換えインターフェロンα−２ｂ、レゴラフェニブ、Ｒ−ＥＰＯＣＨ、レブリミド（レナリドミド）、リウマトレックス（メトトレキセート）、リツキサン（リツキシマブ）、リツキシマブ、ロミデプシン、ロミプロスチム、ルビドマイシン（ダウノルビシン塩酸塩）、リン酸ルキソリチニブ、スクレロゾール（Ｓｃｌｅｒｏｓｏｌ）胸膜内エアロゾル（タルク）、シルツキシマブ、シプロイセルＴ、ソマチュリンデポ（酢酸ランレオチド）、トシル酸ソラフェニブ、スプリセル（ダサチニブ）、スタンフォードＶ、滅菌タルク粉末（タルク）、ステリタルク（タルク）、スチバーガ（レゴラフェニブ）、リンゴ酸スニチニブ、スーテント（リンゴ酸スニチニブ）、シラトロン（ペグインターフェロンα−２ｂ）、シルバント（Ｓｙｌｖａｎｔ）（シルツキシマブ）、シノビール（Ｓｙｎｏｖｉｒ）（サリドマイド）、シンリボ（Ｓｙｎｒｉｂｏ）（オマセタキシンメペサクシネート）、ＴＡＣ、タフィンラー（ダブラフェニブ）、タルク、クエン酸タモキシフェン、タラビンＰＦＳ（Ｔａｒａｂｉｎｅ  ＰＦＳ）（シタラビン）、タルセバ（エルロチニブ塩酸塩）、タルグレチン（ベキサロテン）、タシグナ（ニロチニブ）、タキソール（パクリタキセル）、タキソテール（ドセタキセル）、テモダール（テモゾロミド）、テモゾロミド、テムシロリムス、サリドマイド、サロミド（サリドマイド）、チオテパ、トポサール（Ｔｏｐｏｓａｒ）（エトポシド）、トポテカン塩酸塩、トレミフェン、トーリセル（テムシロリムス）、トシツモマブ及びＩ１３１ヨウ素トシツモマブ、トテクト（Ｔｏ
ｔｅｃｔ）（デクスラゾキサン塩酸塩）、ＴＰＦ、トラメチニブ、トラスツズマブ、トレアンダ（ベンダムスチン塩酸塩）、トリセノックス（三酸化ヒ素）、タイケルブ（二トシル酸ラパチニブ）、ユニツキシン（Ｕｎｉｔｕｘｉｎ）（ジヌツキシマブ）、バンデタニブ、ＶＡＭＰ、ベクチビックス（パニツムマブ）、ＶｅＩＰ、ベルバン（ビンブラスチンサルフェート）、ベルケイド（ボルテゾミブ）、ベルサール（Ｖｅｌｓａｒ）（ビンブラスチンサルフェート）、ベムラフェニブ、ベペシド（エトポシド）、ビアデュール（Ｖｉａｄｕｒ）（酢酸ロイプロリド）、ビダーザ（アザシチジン）、ビンブラスチンサルフェート、ビンカサールＰＦＳ（Ｖｉｎｃａｓａｒ  ＰＦＳ）（ビンクリスチンサルフェート）、ビンクリスチンサルフェート、ビンクリスチンサルフェートリポソーム、酒石酸ビノレルビン、ＶＩＰ、ビスモデギブ、ボラクサーゼ（Ｖｏｒａｘａｚｅ）（グルカルピダーゼ）、ボリノスタット、ヴォトリエント（パゾパニブ塩酸塩）、ウェルコボリン（ロイコボリンカルシウム）、ザーコリ（クリゾチニブ）、ゼローダ（カペシタビン）、ゼリイリ（ＸＥＬＩＲＩ）、ＸＥＬＯＸ、Ｘｇｅｖａ（デノスマブ）、ゾーフィゴ（二塩化ラジウム−２２３）、イクスタンジ（エンザルタミド）、ヤーボイ（イピリムマブ）、ザルトラップ（Ｚｉｖ−アフリベルセプト）、ゼルボラフ（ベムラフェニブ）、ゼバリン（イブリツモマブチウキセタン）、ザインカード（Ｚｉｎｅｃａｒｄ）（デクスラゾキサン塩酸塩）、Ｚｉｖ−アフリベルセプト、ゾラデックス（酢酸ゴセレリン）、ゾレドロン酸、ゾリンザ（ボリノスタット）、ゾメタ（ゾレドロン酸）、ザイデリグ（Ｚｙｄｅｌｉｇ）（イデラリシブ）、ジカディア（セリチニブ）、ならびにザイティガ（酢酸アビラテロン）からなる群より選択される、請求項４、５、及び１１〜５８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６０】
がん細胞により発現するＭＯＳＰＤ２を阻害する、単離したポリペプチド。
【請求項６１】
（ｉ）ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドに特異的に結合するか、（ｉｉ）ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドのリガンドに特異的に結合するか、（ｉｉｉ）ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドに対して産生された抗血清であるか、（ｉｖ）可溶性ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドであるか、または（ｖ）ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドの細胞外ドメインを含む、本質的に前記細胞外ドメインからなる、もしくは前記細胞外ドメインからなる、可溶性ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドである、請求項６０に記載の単離したポリペプチド。
【請求項６２】
ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドに特異的に結合する抗体である、請求項６１に記載の単離したポリペプチド。
【請求項６３】
ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドに特異的に結合する抗体の抗原結合断片である、請求項６１に記載の単離したポリペプチド。
【請求項６４】
前記抗体が、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、マウス抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体である、請求項６２に記載の単離したポリペプチド。
【請求項６５】
前記抗原結合断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｓｄＦｖ断片、ＶＨドメイン、またはＶＬドメインである、請求項６３に記載の単離したポリペプチド。
【請求項６６】
前記ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドが、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１〜４のいずれか１つと少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一の配列を有する、請求項６０〜６５のいずれか１項に記載の単離したポリペプチド。
【請求項６７】
前記ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドが、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５〜８のいずれか１つと少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のヌクレオチド配列によりコードされる、請求項６０〜６５のいずれか１項に記載の単離したポリペプチド。
【請求項６８】
請求項６０〜６７のいずれか１項に記載の単離したポリペプチドと、薬学上許容される担体とを含む、医薬組成物。
【請求項６９】
がん細胞により発現するＭＯＳＰＤ２を阻害する単離したポリペプチドと、薬学上許容される担体とを含む、医薬組成物。
【請求項７０】
全身投与または局所投与に適している、請求項６８または６９に記載の医薬組成物。
【請求項７１】
経鼻投与、経口投与、腹腔内投与、または腫瘍内投与に適している、請求項６８または６９に記載の医薬組成物。
【請求項７２】
静脈内投与、筋肉内投与、または皮下投与に適している、請求項６８または６９に記載の医薬組成物。
【請求項７３】
前記がんが、膀胱がん、乳がん、結腸がん、直腸がん、腎臓がん、肝臓がん、肺がん、食道がん、胆嚢がん、卵巣がん、膵がん、胃がん、子宮頸がん、甲状腺がん、前立腺がん、皮膚がん、造血器がん、間葉系起源のがん、中枢神経系または末梢神経系のがん、子宮内膜がん、頭頸部がん、膠芽細胞腫、及び悪性腹水からなる群より選択される、請求項６０〜６７のいずれか１項に記載の単離したポリペプチドまたは請求項６２〜６８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項７４】
前記がんが、小細胞肺がんまたは非小細胞肺がんである、請求項７３の単離したポリペプチドまたは医薬組成物。
【請求項７５】
前記がんが皮膚がんであり、前記皮膚がんが、扁平上皮がん、基底細胞がん、黒色腫、隆起性皮膚線維肉腫、メルケル細胞がん、カポジ肉腫、角化棘細胞腫、紡錘細胞腫瘍、脂腺がん、微小嚢胞性付属器がん、乳房のパジェット病、異型線維黄色腫、平滑筋肉腫、及び血管肉腫からなる群より選択される、請求項７３の単離したポリペプチドまたは医薬組成物。
【請求項７６】
前記がんが、リンパ系の造血器がんである、請求項７３に記載の単離したポリペプチドまたは医薬組成物。
【請求項７７】
前記リンパ系の造血器がんが、白血病、急性リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、毛様細胞リンパ腫、及びバーキットリンパ腫からなる群より選択される、請求項７６に記載の単離したポリペプチドまたは医薬組成物。
【請求項７８】
前記がんが、骨髄系の造血器がんである、請求項７３に記載の単離したポリペプチドまたは医薬組成物。
【請求項７９】
前記骨髄系の造血器がんが、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、及び前骨髄球性白血病からなる群より選択される、請求項７８に記載の単離したポリペプチドまたは医薬組成物。
【請求項８０】
前記がんが、線維肉腫、横紋筋肉腫、軟部組織肉腫、及び骨肉腫からなる群より選択される間葉系起源のがんである、請求項７３に記載の単離したポリペプチドまたは医薬組成物。
【請求項８１】
前記がんが、星状細胞腫、神経芽細胞腫、神経膠腫、及びシュワン細胞腫からなる群より選択される中枢神経系または末梢神経系のがんである、請求項７３に記載の単離したポリペプチドまたは医薬組成物。
【請求項８２】
前記がんが、肛門がん、骨がん、消化管間質がん、妊娠性絨毛性疾患、ホジキンリンパ腫、カポジ肉腫、角化棘細胞腫、悪性中皮腫、多中心性キャッスルマン病、多発性骨髄腫及び他の形質細胞新生物、骨髄増殖性新生物、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、骨肉腫、卵巣がん、卵管がん、または原発性腹膜がん、陰茎がん、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、精上皮腫、軟部組織肉腫、胃がん、精巣がん、奇形がん腫、甲状腺濾胞性がん、膣がん、外陰部がん、ウィルムス腫瘍及び他の小児腎臓がん、ならびに色素性乾皮症からなる群より選択される、請求項６０〜６７のいずれか１項に記載の単離したポリペプチドまたは請求項６８〜７２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項８３】
前記がんが、膀胱がん、脳がん、乳がん、結腸がん、食道がん、肺がん、皮膚がん、舌がん、腎臓がん、及び肝がんからなる群より選択される、請求項６０〜６７のいずれか１項に記載の単離したポリペプチドまたは請求項６８〜７２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項８４】
ＭＯＳＰＤ２に特異的に結合する、単離した抗体またはその抗原結合断片。
【請求項８５】
ＭＯＳＰＤ２に約１０−６Ｍ〜約１０−１２Ｍの平衡解離定数（ＫＤ）で結合する、単離した抗体またはその抗原結合断片。
【請求項８６】
前記ＭＯＳＰＤ２がヒトＭＯＳＰＤ２である、請求項８４または８５に記載の単離した抗体またはその抗原結合断片。
【請求項８７】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１によって付番されたヒトＭＯＳＰＤ２の以下のアミノ酸領域：約５０８位〜約５１７位、約５０１位〜約５１４位、約２３３位〜約２４１位、約５０９位〜約５１７位、約２１２位〜約２２１位、約１３位〜約２４位、約５０５位〜約５１７位、約５０５位〜約５１４位、約８９位〜約１００位、約５０６位〜約５１７位、約２３３位〜約２４５位、約５０４位〜約５１４位、約１２８位〜約１３６位、約２１８位〜約２２６位、約１５位〜約２４位、約８３位〜約９６位、約４２位〜約５０位、約４６２位〜４７４位、約３４０位〜約３５１位、約５０４位〜約５１７位、約４６２位〜約４７０位、約３２７位〜約３３７位、約２１位〜約３２位、約２１７位〜約２２６位、約５１０位〜約５１７位、約１７８位〜約１９０位、約４９７位〜約５０９位、約５０４位〜約５１６位、約６４位〜約７７位、約５０４位〜約５１５位、約１４７位〜約１５９位、約５０３位〜約５１５位、約８８位〜約９７位、約２０８位〜約２１８位、約１７８位〜約１９１位、約５０２位〜約５１５位、約５０３位〜約５１６位、約４９７位〜約５０５位、約５００位〜約５０９位、約１８９位〜約２０２位、約１８９位〜約１９７位、約５０５位〜約５１６位、約１位〜約６３位、約８２位〜約２３９位、約９３位〜約２３４位、約３２７位〜約４４５位、約３２７位〜約４３１位、及び約４９７位〜約５１７位の１つまたは複数に特異的に結合する、請求項８４〜８６のいずれか１項に記載の単離した抗体またはその抗原結合断片。
【請求項８８】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１によって付番されたヒトＭＯＳＰＤ２の以下のアミノ酸領域：約５０５位〜約５１５位、約５００位〜約５１５位、約２３０位〜約２４０位、約５１０位〜約５２０位、約２１０位〜約２２０位、約１５位〜約２５位、約５０５位〜約５２０位、約５０５位〜約５１５位、約９０位〜約１００位、約５０５位〜約５２５位、約２３０位〜約２４５位、約５０５位〜約５１０位、約１３０位〜約１４０位、約２２０位〜約２３０位、約１５位〜約３０位、約８０位〜約９５位、約４０位〜約５０位、約４６０位〜約４７５位、約３４０位〜約３５０位、約５００位〜約５１５位、約４６０位〜約４７０位、約３２５位〜約３３５位、約２０位〜約３５位、約２１５位〜約２２５位、約５１０位〜約５２０位、約１７５位〜約１９０位、約５００位〜約５１０位、約５０５位〜約５３０位、約６０位〜約７５位、約５００位〜約５２０位、約１４５位〜約１６０位、約５０２位〜約５１５位、約８５位〜約１００位、約２０５位〜約２２０位、約１７５位〜約１９０位、約５００位〜約５０５位、約５００位〜約５２５位、約４９５位〜約５０５位、約４９５位〜約５１０位、約１９０位〜約２００位、約１９０位〜約１９８位、約５０２位〜約５１５位、約１位〜約６０位、約８０位〜約２４０位、約９０位〜約２３５位、約３３０位〜約４４５位、約３３０位〜約４３０位、及び約４９５位〜約５１５位の１つまたは複数に特異的に結合する、請求項８４〜８６のいずれか１項に記載の単離した抗体またはその抗原結合断片。
【請求項８９】
前記抗体が、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＡ、またはＩｇＤ分子であるか、あるいはそれらに由来する、請求項８４〜８８のいずれか１項に記載の単離した抗体またはその抗原結合断片。
【請求項９０】
前記抗体がＦｃ領域を含む、請求項８４〜８９のいずれか１項に記載の単離した抗体またはその抗原結合断片。
【請求項８９】
請求項８４〜８８のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片と、薬学上許容される担体とを含む、医薬組成物。
【請求項９０】
その必要がある対象に、請求項８４〜８８のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片あるいは請求項８９に記載の医薬組成物の治療的有効量を投与するステップを含む、がん細胞の転移を治療または予防する方法。
【請求項９１】
その必要がある対象に、請求項８４〜８８のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片あるいは請求項８９に記載の医薬組成物の治療的有効量を投与するステップを含む、がん細胞中のまたはがん細胞の１つまたは複数の作用を阻害または阻止する方法であって、前記１つまたは複数の作用が、ＭＯＳＰＤ２発現、がん細胞遊走、腫瘍成長と関連した単球遊走、ケモカインシグナル伝達経路、成長因子シグナル伝達経路、ＥＧＦ受容体リン酸化、ＥＲＫリン酸化、ＡＫＴリン酸化、及びＦＡＫリン酸化のうちの１つまたは複数である、前記方法。
【請求項９２】
その必要がある対象に、請求項８４〜８８のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片あるいは請求項８９に記載の医薬組成物の治療的有効量を投与するステップを含む、がんを治療または予防する方法。
【請求項９３】
その必要がある対象に、請求項８４〜８８のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片あるいは請求項８９に記載の医薬組成物の治療的有効量を投与するステップを含む、転移性がんを治療または予防する方法。
【請求項９４】
対象の試料中のＭＯＳＰＤ２発現レベルを決定するステップを含む、前記対象におけるがんまたはがん転移の予測、診断、または予後判定のための方法。
【請求項９５】
対象の試料中のＭＯＳＰＤ２発現レベルを決定するステップを含む、前記対象における腫瘍進行または腫瘍浸潤性の予測、診断、または予後判定のための方法。
【請求項９６】
前記ＭＯＳＰＤ２発現レベルが、ＭＯＳＰＤ２遺伝子発現のレベルである、請求項９４または９５に記載の方法。
【請求項９７】
前記ＭＯＳＰＤ２発現レベルが、ＭＯＳＰＤ２タンパク質発現のレベルである、請求項９４または９５に記載の方法。
【請求項９８】
（ｉ）対象の試料中のＭＯＳＰＤ２発現レベルを決定または定量するステップ、及び（ｉｉ）ステップ（ｉ）で得られた前記発現レベルを、対照値または参照値と比較するステップを含む、前記対象におけるがんの予測、診断、または予後判定のためのインビトロ方法であって、前記対照値または参照値と比べて増大したＭＯＳＰＤ２発現レベルが、がん、がん発症のリスクの増大、またはがん予後不良を示す、前記インビトロ方法。
【請求項９９】
（ｉ）対象の試料中のＭＯＳＰＤ２発現レベルを決定または定量するステップ、及び（ｉｉ）ステップ（ｉ）で得られた前記発現レベルを、対照値または参照値と比較するステップを含む、前記対象におけるがん転移の予測、診断、または予後判定のためのインビトロ方法であって、前記対照値または参照値と比べて増大したＭＯＳＰＤ２発現レベルが、がん転移、がん転移のリスクの増大、またはがん転移予後不良を示す、前記インビトロ方法。
【請求項１００】
（ｉ）対象の試料中のＭＯＳＰＤ２発現レベルを決定または定量するステップ、及び（ｉｉ）ステップ（ｉ）で得られた前記発現レベルを、対照値または参照値と比較するステップを含む、前記対象における腫瘍進行または腫瘍浸潤性の予測、診断、または予後判定のためのインビトロ方法であって、前記対照値または参照値と比べて増大したＭＯＳＰＤ２発現レベルが、腫瘍進行もしくは腫瘍浸潤性、腫瘍進行もしくは腫瘍浸潤性のリスクの増大、または腫瘍進行もしくは腫瘍浸潤性の予後不良を示す、前記インビトロ方法。
【請求項１０１】
前記対象の前記試料中にＭＯＳＰＤ２発現がある場合、前記対象が、がん、がん転移、腫瘍進行または腫瘍浸潤性、がんのリスクの増大、がん転移のリスクの増大、腫瘍進行または腫瘍浸潤性のリスクの増大、がん予後不良、がん転移予後不良、あるいは腫瘍進行または腫瘍浸潤性の予後不良を有する、請求項９８〜１００のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０２】
前記対象の前記試料中に前記対照値または参照値のＭＯＳＰＤ２発現量よりも多い量でＭＯＳＰＤ２発現がある場合、前記対象が、がん、がん転移、腫瘍進行または腫瘍浸潤性、がんのリスクの増大、がん転移のリスクの増大、腫瘍進行または腫瘍浸潤性のリスクの増大、がん予後不良、がん転移予後不良、あるいは腫瘍進行または腫瘍浸潤性の予後不良を有する、請求項９８〜１００のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０３】
前記試料中のＭＯＳＰＤ２発現レベルを定量するよう検査室に指示するステップ、
検査室から前記試料中のＭＯＳＰＤ２発現レベルのレポートを入手するステップ、及び／または
ＭＯＳＰＤ２の阻害物質の治療的有効量を前記対象に投与するステップ
の１つまたは複数をさらに含む、請求項９８〜１０２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０４】
前記試料が、前記対象からの組織生検試料、腫瘍生検試料、または血液試料である、請求項９８〜１０３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０５】
前記対照値または参照値が、正常組織または正常隣接組織（ＮＡＴ）におけるＭＯＳＰＤ２発現レベルである、請求項９８〜１０４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０６】
前記対照値または参照値が、検出不能なＭＯＳＤＰ２発現量または有意でないＭＯＳＰＤ２発現量である、請求項９８〜１０４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０７】
（ｉ）対象におけるＭＯＳＰＤ２発現レベルを決定するステップ、及び、前記発現レベルが対照値または参照値の発現レベルより大きいと判定された場合、（ｉｉ）前記対象に、ＭＯＳＰＤ２の阻害物質の治療的有効量を投与するステップを含む、前記対象においてＭＯＳＰＤ２の阻害物質に反応性のがんまたはがん転移を治療するための方法。
【請求項１０８】
ＭＯＳＰＤ２の阻害物質の治療的有効量を投与するステップを含む、対象においてＭＯＳＰＤ２発現腫瘍を予防または治療するための方法。
【請求項１０９】
ＭＯＳＰＤ２の阻害物質の治療的有効量を投与するステップを含む、対象においてＭＯＳＰＤ２発現腫瘍関連マクロファージを有する腫瘍を予防または治療するための方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、運動精子ドメイン含有タンパク質２（ＭＯＳＰＤ２）を用いた、がん及び転移の治療、予防、または発生率低下に関し、例えば、がん細胞を治療する、がん細胞を予防する、またはがん細胞中のもしくはがん細胞の１つもしくは複数の作用の発生率を低下させる方法、がん細胞の遊走を処置するもしくはがん細胞の転移を治療する、がん細胞の遊走もしくは転移を予防する、またはがん細胞の遊走もしくは転移の発生率を低下させる方法、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）の遊走を調節することによってがんを治療する、がんを予防する、またはがんの発生率を低下させる方法、及び、がん（転移性がんを含む）を治療する、がん（転移性がんを含む）を予防する、またはがん（転移性がんを含む）の発生率を低下させる方法に関する。本発明は、１種または複数のＭＯＳＰＤ２阻害物質を含む医薬組成物に、及び抗体またはその抗原結合断片などのＭＯＳＰＤ２のポリペプチド阻害物質にも関する。本発明は、対象における、がん、がん転移、腫瘍進行、または腫瘍浸潤性の予測、診断、または予後判定のための方法にも関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
転移、すなわちがん細胞がその原発組織から他の臓器へと拡散することは、複数の分子が関与する多段階過程の結果である。腫瘍転移にはケモカイン及びケモカイン受容体が重要な役割を果たすことを示唆する証拠がある。ケモカインは、それらの同族受容体との相互作用を通じて、方向性細胞遊走を誘導する小分子である。ケモカインとケモカイン受容体の結合は、ＭＡＰＫ／ＥＲＫ経路及びＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ経路などのシグナル伝達経路を活性化し、それぞれ、ＥＲＫ及びＡＫＴのリン酸化をもたらす。
【０００３】
運動精子ドメイン含有タンパク質２（ＭＯＳＰＤ２）は、５１８アミノ酸長の、高度に保存されたタンパク質であり、ヒトとマウスの間で９０％の相同性がある。バイオインフォマティック解析から、ＭＯＳＰＤ２は、細胞性レチンアルデヒド結合タンパク質（ＣＲＡＬＢＰ）及びＴＲＩＯタンパク質にちなんで名付けられたＣＲＡＬ−ＴＲＩＯ領域を含有することが示されている。ＭＯＳＰＤ２は、線虫主要精子タンパク質と構造的に関連した領域及び１つの膜貫通領域も含有する。ＭＯＳＰＤ２の生体機能については、まだ説明されたことがない。本明細書中詳細に記載されるとおり、本発明者らは、ＭＯＳＰＤ２が、ある特定の細胞（例えば、単球及び様々ながん細胞）が異なるケモカイン（例えば、上皮成長因子（ＥＧＦ））に向かって遊走するために必須であることを見出した。
【発明の概要】
【０００４】
本発明は、実施形態によっては、運動精子ドメイン含有タンパク質２（ＭＯＳＰＤ２）の阻害物質を用いた、がん細胞の転移の治療、予防、または発生率低下の方法に関する。実施形態によっては、本方法は、その必要がある対象に、ＭＯＳＰＤ２の阻害物質の有効量を投与するステップを含む。実施形態によっては、本方法は、がん細胞を、有効量のＭＯＳＰＤ２阻害物質と接触させるステップを含む。他の実施形態において、ＭＯＳＰＤ２は、がん細胞により発現する。
【０００５】
他の実施形態において、本発明は、ＭＯＳＰＤ２阻害物質を用いた、がん細胞中のまたはがん細胞の１つまたは複数の作用を阻害または阻止する方法に関する。実施形態によっては、本方法は、その必要がある対象に、ＭＯＳＰＤ２の阻害物質の有効量を投与するステップを含む。実施形態によっては、本方法は、がん細胞を、有効量のＭＯＳＰＤ２阻害物質と接触させるステップを含む。実施形態によっては、ＭＯＳＰＤ２は、がん細胞により発現する。他の実施形態において、１つまたは複数の作用は、ＭＯＳＰＤ２発現、がん細胞遊走、腫瘍成長と関連した単球遊走、ケモカインシグナル伝達経路、成長因子シグナル伝達経路、上皮成長因子（ＥＧＦ）受容体リン酸化、細胞外シグナル制御キナーゼ（ＥＲＫ）リン酸化、タンパク質キナーゼＢ（ＡＫＴ）リン酸化、及び接着斑キナーゼ（ＦＡＫ）リン酸化のうちの１つまたは複数である。
【０００６】
他の実施形態において、本発明は、ＭＯＳＰＤ２阻害物質を用いて、がんを治療する、がんを予防する、またはがんの発生率を低下させる方法に関する。実施形態によっては、本方法は、その必要がある対象に、ＭＯＳＰＤ２の阻害物質の有効量を投与するステップを含む。実施形態によっては、本方法は、がん腫瘤の付近もしくは内部の腫瘍関連マクロファージ数を減少させるため、及び／または腫瘍関連マクロファージの遊走を調節するため、循環単球もしくは腫瘍関連マクロファージを、有効量のＭＯＳＰＤ２阻害物質と接触させるステップを含む。実施形態によっては、ＭＯＳＰＤ２は、循環単球または腫瘍関連マクロファージにより発現する。実施形態によっては、ＭＯＳＰＤ２阻害物質の投与は、がん腫瘤の付近もしくは内部の腫瘍関連マクロファージ数を減少させ、かつ／または腫瘍関連マクロファージの遊走を調節する。他の実施形態において、ＭＯＳＰＤ２阻害物質の投与は、腫瘍関連マクロファージの数または遊走を少なくとも１０％またはそれ以上減少させる。実施形態によっては、本方法は、がん細胞を、有効量のＭＯＳＰＤ２阻害物質と接触させるステップを含む。実施形態によっては、ＭＯＳＰＤ２は、がん細胞により発現する。
【０００７】
他の実施形態において、本発明は、ＭＯＳＰＤ２阻害物質を用いた、転移性がんを治療する、転移性がんを予防する、または転移性がんの発生率を低下させる方法に関する。実施形態によっては、本方法は、その必要がある対象に、ＭＯＳＰＤ２の阻害物質の治療的有効量を投与するステップを含む。実施形態によっては、本方法は、転移性がん細胞を、有効量のＭＯＳＰＤ２阻害物質と接触させるステップを含む。実施形態によっては、ＭＯＳＰＤ２は、転移性がん細胞により発現する。
【０００８】
他の実施形態において、本明細書中記載される、治療する、予防する、または発生率を低下させる方法は、別の抗がん剤の治療的有効量を、ＭＯＳＰＤ２阻害物質と併せて投与するステップを含む。
【０００９】
他の実施形態において、ＭＯＳＰＤ２阻害物質は、抗体またはその抗原結合断片である。実施形態によっては、抗体は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、マウス抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体である。実施形態によっては、ＭＯＳＰＤ２阻害物質は、酸化リン脂質などの小分子である。１つの好適な実施形態において、ＭＯＳＰＤ２阻害物質は、ＶＢ−２０１である。実施形態によっては、ＭＯＳＰＤ２阻害物質は、酸化リン脂質ではないＭＯＳＰＤ２阻害物質である。実施形態によっては、ＭＯＳＰＤ２阻害物質は、ＶＢ−２０１ではないＭＯＳＰＤ２阻害物質である。実施形態によっては、ＭＯＳＰＤ２阻害物質は、細胞表面（例えば、がん細胞表面）で発現したＭＯＳＰＤ２に結合する。
【００１０】
他の実施形態において、本発明は、がん細胞により発現したＭＯＳＰＤ２を阻害するポリペプチドに、及びがん細胞により発現したＭＯＳＰＤ２を阻害するポリペプチドを含有する医薬組成物にも関する。他の実施形態において、ポリペプチドは、抗体またはその抗原結合断片である。
【００１１】
実施形態によっては、本発明は、ＭＯＳＰＤ２と特異的に結合する単離した抗体またはその抗原結合断片に関する。他の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、約１０−６Ｍ〜約１０−１２Ｍの平衡解離定数（ＫＤ）でＭＯＳＰＤ２に結合する。他の実施形態において、ＭＯＳＰＤ２は、ヒトＭＯＳＰＤ２である。他の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１によって付番されたヒトＭＯＳＰＤ２の以下のアミノ酸領域：約５０８位〜約５１７位、約５０１位〜約５１４位、約２３３位〜約２４１位、約５０９位〜約５１７位、約２１２位〜約２２１位、約１３位〜約２４位、約５０５位〜約５１７位、約５０５位〜約５１４位、約８９位〜約１００位、約５０６位〜約５１７位、約２３３位〜約２４５位、約５０４位〜約５１４位、約１２８位〜約１３６位、約２１８位〜約２２６位、約１５位〜約２４位、約８３位〜約９６位、約４２位〜約５０位、約４６２位〜４７４位、約３４０位〜約３５１位、約５０４位〜約５１７位、約４６２位〜約４７０位、約３２７位〜約３３７位、約２１位〜約３２位、約２１７位〜約２２６位、約５１０位〜約５１７位、約１７８位〜約１９０位、約４９７位〜約５０９位、約５０４位〜約５１６位、約６４位〜約７７位、約５０４位〜約５１５位、約１４７位〜約１５９位、約５０３位〜約５１５位、約８８位〜約９７位、約２０８位〜約２１８位、約１７８位〜約１９１位、約５０２位〜約５１５位、約５０３位〜約５１６位、約４９７位〜約５０５位、約５００位〜約５０９位、約１８９位〜約２０２位、約１８９位〜約１９７位、約５０５位〜約５１６位、約１位〜約６３位、約８２位〜約２３９位、約９３位〜約２３４位、約３２７位〜約４４５位、約３２７位〜約４３１位、及び約４９７位〜約５１７位の１つまたは複数に特異的に結合する。
【００１２】
実施形態によっては、抗体またはその抗原結合断片は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１によって付番された、ヒトＭＯＳＰＤ２の以下のアミノ酸領域：約５０５位〜約５１５位、約５００位〜約５１５位、約２３０位〜約２４０位、約５１０位〜約５２０位、約２１０位〜約２２０位、約１５位〜約２５位、約５０５位〜約５２０位、約５０５位〜約５１５位、約９０位〜約１００位、約５０５位〜約５２５位、約２３０位〜約２４５位、約５０５位〜約５１０位、約１３０位〜約１４０位、約２２０位〜約２３０位、約１５位〜約３０位、約８０位〜約９５位、約４０位〜約５０位、約４６０位〜約４７５位、約３４０位〜約３５０位、約５００位〜約５１５位、約４６０位〜約４７０位、約３２５位〜約３３５位、約２０位〜約３５位、約２１５位〜約２２５位、約５１０位〜約５２０位、約１７５位〜約１９０位、約５００位〜約５１０位、約５０５位〜約５３０位、約６０位〜約７５位、約５００位〜約５２０位、約１４５位〜約１６０位、約５０２位〜約５１５位、約８５位〜約１００位、約２０５位〜約２２０位、約１７５位〜約１９０位、約５００位〜約５０５位、約５００位〜約５２５位、約４９５位〜約５０５位、約４９５位〜約５１０位、約１９０位〜約２００位、約１９０位〜約１９８位、約５０２位〜約５１５位、約１位〜約６０位、約８０位〜約２４０位、約９０位〜約２３５位、約３３０位〜約４４５位、約３３０位〜約４３０位、及び約４９５位〜約５１５位の１つまたは複数に特異的に結合する。
【００１３】
他の実施形態において、本発明は、抗体または抗原結合断片と、薬学上許容される担体とを含む医薬組成物に関する。
【００１４】
他の実施形態において、本発明は、がん細胞の転移を治療する、がん細胞の転移を予防する、またはがん細胞の転移の発生率を低下させる方法に関し、本方法は、その必要がある対象に、治療的有効量の抗体またはその抗原結合断片あるいは医薬組成物を投与するステップを含む。他の実施形態において、本発明は、がん細胞中のまたはがん細胞の１つまたは複数の作用を阻害または阻止する方法に関し、本方法は、その必要がある対象に、治療的有効量の抗体またはその抗原結合断片あるいは医薬組成物を投与するステップを含み、１つまたは複数の作用は、ＭＯＳＰＤ２発現、がん細胞遊走、腫瘍成長と関連した単球遊走、ケモカインシグナル伝達経路、成長因子シグナル伝達経路、ＥＧＦ受容体リン酸化、ＥＲＫリン酸化、ＡＫＴリン酸化、及びＦＡＫリン酸化のうちの１つまたは複数である。他の実施形態において、本発明は、がんを治療する、がんを予防する、またはがんの発生率を低下させる方法に関し、本方法は、その必要がある対象に、治療的有効量の抗体またはその抗原結合断片あるいは医薬組成物を投与するステップを含む。他の実施形態において、本発明は、転移性がんを治療する、転移性がんを予防する、または転移性がんの発生率を低下させる方法に関し、本方法は、その必要がある対象に、治療的有効量の抗体またはその抗原結合断片あるいは医薬組成物を投与するステップを含む。
【００１５】
他の実施形態において、本発明は、対象における、がん、がん転移、腫瘍進行、または腫瘍浸潤性の予測、診断、または予後判定のための方法に関する。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
本発明のいくつかの実施形態を、あくまでも例として、添付の図面を参照しながら本明細書中説明する。ここで詳細な図面に関して特に、強調しておきたいのは、示される事項が例示であって、本発明の実施形態を図で説明することを目的とすることである。
【図１】ｓｈ−対照またはｓｈ−ＭＯＳＰＤ２レンチウイルス粒子で形質導入されたがん細胞の、１０％ウシ胎仔血清（ＦＣＳ）及びＥＧＦ（２００ｎｇ／ｍｌ）に向かっていくトランスウェル遊走アッセイの試験結果を示す画像である。ヒトＭＤＡ−２３１乳がん細胞株及びＡ２０５８黒色腫細胞株によるＭＯＳＰＤ２発現を、ｓｈ−ＭＯＳＰＤ２レンチウイルス粒子を用いてサイレンシングした。図１のウエスタンブロットは、ｓｈ−ＭＯＳＰＤ２で形質導入されたがん細胞株のＭＯＳＰＤ２タンパク質発現が減少したことを示す。図１は、ＭＯＳＰＤ２が転移性乳がん細胞株及び黒色腫細胞株の遊走を促進することを示す。
【図２】ｓｈ−対照またはｓｈ−ＭＯＳＰＤ２レンチウイルス粒子で形質導入されたＭＤＡ−２３１乳がん細胞の細胞増殖速度を示すグラフを表す。ＭＤＡ−２３１細胞を、記載のとおりに播種し、３日間連続して、２４時間ごとに収集して計数した。結果は、３つ組の平均±標準偏差で表される。これらの結果は、ＭＯＳＰＤ２のサイレンシングが、ＭＤＡ−２３１細胞の細胞生存率または増殖に影響しなかったことを実証する。
【図３】図３Ａ〜図３Ｃは、ＭＯＳＰＤ２をサイレンシングした場合及びしなかった場合のＭＤＡ−２３１乳がん細胞の転移についてのインビボでの試験結果を示す。図３Ａでは、ｓｈ−対照またはｓｈ−ＭＯＳＰＤ２レンチウイルス粒子で形質導入されたＭＤＡ−２３１乳がん細胞を、ＳＣＩＤマウスの尾静脈に注射した（１０６）（ｎ＝１０／群）。２８日目にマウスを屠殺し、それらの肺をＨ＆Ｅ染色用に収穫し、腫瘍面積を求めた。図３Ａに示す結果は、測定された転移の大きさの平均±標準偏差で表される（＊ｐ＜０．０５）。図３Ｂ及び図３Ｃでは、ｓｈ−対照またはｓｈ−ＭＯＳＰＤ２レンチウイルス粒子で形質導入されたＭＤＡ−２３１乳がん細胞（それぞれ、ｎ＝１３及びｎ＝８）を、ＳＣＩＤマウスの乳房脂肪体に注射した（５×１０６）。５６日目にマウスを屠殺した。同側の鼠径リンパ節を切り取り（図３Ｂ）、肺をＨ＆Ｅ染色用に収穫し、腫瘍面積を求めた（図３Ｃ）。図３Ｃに示す結果は、測定された転移の大きさの平均±標準偏差で表される：ｓｈ−対照で形質導入された細胞の腫瘍面積は、１３７６．９±７５２．６（ｎ＝１３）であり、それに対してｓｈ−ＭＯＳＰＤ２で形質導入された細胞では５５０．０±３２６．２（ｎ＝８）である。図３Ａ〜図３Ｃは、ＭＯＳＰＤ２が、インビボで、ＭＤＡ−２３１乳がん細胞の転移を促進することを示す。
【図４】図４Ａ〜図４Ｅは、様々なヒトがん組織のＭＯＳＰＤ２発現レベルを、各自の対応正常組織と比較する画像を示す。様々な正常ヒト組織及びがん性ヒト組織を含有するスライドを、対照または抗ＭＯＳＰＤ２抗体を用いて染色した。ＭＯＳＰＤ２について陽性染色されたがん組織を示す。図４Ａ〜図４Ｅは、ＭＯＳＰＤ２が、様々なヒトがん組織で発現することを示す。
【図５】図５Ａ及び図５Ｂは、対照またはＭＯＳＰＤ２  ＣＲＩＳＰＲ−ＣＡＳ９レンチウイルス粒子で形質導入されたがん細胞をトランスウェル遊走アッセイで試験した結果を示し、アッセイでは、細胞を上部区画に播種し、１０％ＦＣＳ及びＥＧＦ（２００ｎｇ／ｍｌ）を補充した培地を用いて下部区画に誘引する。図５Ａに示すグラフは、蛍光標識細胞分取（ＦＡＣＳ）により求められたものであり、結果は、３つ組の平均±標準偏差で表される。図５Ｂに示す画像は、映像記録によるものである。図５Ａ及び図５Ｂでは、ＭＤＡ−２３１乳がん細胞は、対照またはＭＯＳＰＤ２  ＣＲＩＳＰＲ−ＣＡＳ９システムを含有するプラスミドを持つレンチウイルス粒子で形質導入された。ウエスタンブロットは、ＭＯＳＰＤ２タンパク質発現の減少を示す（差し込み図）。図５Ａ及び図５Ｂは、ＣＲＩＳＰＲ−ＣＡＳ９に駆動されるＭＯＳＰＤ２遺伝子編集が、乳がん細胞遊走を阻害することを示す。図５Ｃは、細胞遊走と関連したリン酸化事象に対する、ＣＲＩＳＰＲ−ＣＡＳ９に駆動される遺伝子編集によるＭＯＳＰＤ２サイレンシングの効果を示すウエスタンブロットを表す。対照またはＭＯＳＰＤ２  ＣＲＩＳＰＲ−ＣＡＳ９レンチウイルス粒子で形質導入されたＭＤＡ−２３１乳がん細胞を、１０％ＦＣＳ及びＥＧＦ（４００ｎｇ／ｍｌ）とともに１０分間インキュベートした。ＥＲＫ、ＡＫＴ、及びＦＡＫのリン酸化を、ウエスタンブロット法により測定した。ローディング対照としてＨＳＰ９０を用いた。図５Ｃは、ＣＲＩＳＰＲ−ＣＡＳ９に駆動される遺伝子編集によるＭＯＳＰＤ２サイレンシングが、細胞遊走と関連したリン酸化事象を阻害することを示す。図５Ｄは、対照またはＭＯＳＰＤ２  ＣＲＩＳＰＲ−ＣＡＳ９レンチウイルス粒子で形質導入されたＭＤＡ−２３１乳がん細胞の転移のインビボ試験結果を示す。図５Ｄでは、１０６のＣＲＩＳＰＲ−対照またはＣＲＩＳＰＲ−ＭＯＳＰＤ２レンチウイルスで形質導入されたＭＤＡ−２３１細胞を、８週齢のメスＳＣＩＤマウス（Ｃ．Ｂ−１７／ＩｃｒＨｓｄ−Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ、Ｈａｒｌａｎ  Ｉｓｒａｅｌ）の尾静脈に注射した。３週間後にマウスを屠殺し、それらの肺を切り出して、病理組織検査を行った。図５Ｄは、ＣＲＩＳＰＲ−ＣＡＳ９システムによるＭＯＳＰＤ２のサイレンシングが、９５％超（転移面積）で肺中の転移性乳がん細胞の存在を有意に阻害することを示し、ｐ値は０．００２である。
【図６】ＭＤＡ−２３１がん細胞中のＡＫＴのＥＧＦ誘導型リン酸化の阻害におけるＶＢ−２０１の効果を示すウエスタンブロットの画像を表す。図６に示すとおり、ＶＢ−２０１は、１０μｇ／ｍｌでほぼ完全にＡＫＴのＥＧＦ誘導型リン酸化を阻害し、有意な阻害は、５μｇ／ｍｌで観察された。ローディング対照としてＨＳＰ９０を用いた。
【図７】ＭＯＳＰＤ２を過剰発現する細胞との結合について一次スクリーニングした結果同定された１７の抗ＭＯＳＰＤ２  Ｆ（ａｂ’）２モノクローナル抗体クローンの一覧である。ＭＯＳＰＤ２結合について酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）を用いてクローンをさらに分析した結果、バックグラウンドの５倍超高い吸光度（Ｏ．Ｄ．）値を有する１２のクローンが同定された（図７中の＊）。
【図８】図８Ａ〜図８Ｂは、２つの代表的な抗ＭＯＳＰＤ２  Ｆ（ａｂ’）２モノクローナル抗体（ｍＡｂ）クローンと、ＭＯＳＰＤ２を過剰発現する細胞との結合を示す。
【図９】代表的な抗ＭＯＳＰＤ２  Ｆ（ａｂ’）２ｍＡｂとＭＤＡ−２３１乳がん細胞により発現したＭＯＳＰＤ２との結合を示す。
【図１０】図１０Ａ〜図１０Ｂは、抗ＭＯＳＰＤ２  Ｆ（ａｂ’）２ｍＡｂが、ＭＤＡ−２３１細胞には結合するが（図１０Ａ）、ＭＯＳＰＤ２発現抑制ＭＤＡ−２３１細胞には結合しない（図１０Ｂ）ことを示す。
【図１１】図１１Ａ〜図１１Ｂは、抗ＭＯＳＰＤ２  Ｆ（ａｂ’）２ｍＡｂがＡ２０５８黒色腫細胞株及びＨｅｐＧ２肝臓がん細胞株のＭＯＳＰＤ２に結合することを示す。
【図１２】ＭＤＡ−２３１細胞を抗ＭＯＳＰＤ２  Ｆ（ａｂ’）２ｍＡｂとともにインキュベートすると、ＥＧＦ受容体のリン酸化（ｐ−ＥＧＦ−Ｒ）、ＡＫＴのリン酸化（ｐ−ＡＫＴ）、及びＥＲＫ１／２のリン酸化（ｐ−ＥＲＫ１／２）が阻害されたことを示す。
【図１３】抗ＭＯＳＰＤ２  Ｆ（ａｂ’）２ｍＡｂが、ＭＤＡ−２３１細胞のＥＧＦ誘導型トランスウェル遊走を有意に阻害したことを示す。
【図１４】図１４Ａ〜図１４Ｄは、ＭＯＳＰＤ２の細胞発現特異性及び局在性を示す。
【図１５】図１５Ａ〜図１５Ｃは、ＭＯＳＰＤ２が、炎症組織に浸潤した単球で発現することを示す。
【図１６】図１６Ａ〜図１６Ｅは、ＭＯＳＰＤ２が、単球遊走を促進することを示す。図１６Ａは、ｓｈ−対照またはｓｈ−ＭＯＳＰＤ２レンチウイルス粒子で形質導入されたＵ９３７細胞におけるＭＯＳＰＤ２のｍＲＮＡ及びタンパク質発現を示す。少なくとも３回の実験のうち１つを示す。図１６Ｂは、ｓｈ−対照またはｓｈ−ＭＯＳＰＤ２レンチウイルス粒子で形質導入されたＵ９３７細胞の、ＲＡＮＴＥＳ（１００ｎｇ／ｍｌ）に向かう３時間のトランスウェル遊走を示す。ｓｈ−対照で形質導入された細胞の遊走に対するｓｈ−ＭＯＳＰＤ２で形質導入された細胞のパーセントを表す。３回の実験のうち１つを示す。図１６Ｃは、ｓｈ−対照またはｓｈ−ＭＯＳＰＤ２レンチウイルス粒子で形質導入されたＵ９３７細胞を、ＲＡＮＴＥＳとともに、示される時間（分）の間インキュベートし、ＥＲＫ１／２のリン酸化（ｐ−ＥＲＫ１／２）及びＡＫＴのリン酸化（ｐ−ＡＫＴ）を評価したものを示す。ローディング対照としてＨＳＰ９０を用いた。図１６Ｄは、ｓｈ−対照（ｓｈ−ｃｏｎｔ）またはｓｈ−ＭＯＳＰＤ２レンチウイルス粒子で形質導入されたＵ９３７細胞の、ＭＣＰ−３（１００ｎｇ／ｍｌ）、ＭＣＰ−１（１００ｎｇ／ｍｌ）、ＲＡＮＴＥＳ（１００ｎｇ／ｍｌ）、及びＳＤＦ−１（２５ｎｇ／ｍｌ）に向かう３時間のトランスウェル遊走を示す。ｓｈ−対照で形質導入された細胞の遊走に対するｓｈ−ＭＯＳＰＤ２で形質導入された細胞のパーセントを表す。３回の実験のうち１つを示す。図１６Ｅは、ｓｈ−対照（ｓｈ−ｃｏｎｔ）またはｓｈ−ＭＯＳＰＤ２レンチウイルス粒子で形質導入されたＵ９３７細胞を、ＭＣＰ−３（１００ｎｇ／ｍｌ）、ＭＣＰ−１（１００ｎｇ／ｍｌ）、ＲＡＮＴＥＳ（１００ｎｇ／ｍｌ）、及びＳＤＦ−１（２５ｎｇ／ｍｌ）とともに５分間インキュベートし、ＥＲＫ１／２のリン酸化（ｐ−ＥＲＫ１／２）及びＡＫＴのリン酸化（ｐ−ＡＫＴ）を評価したものを示す。ローディング対照としてチューブリンを用いた。
【図１７】図１７Ａ〜図１７Ｂは、ＭＯＳＰＤ２が、ＳＴＡＴ１のＩＦＮ−γ誘導型リン酸化（ｐ−Ｓｔａｔ１）またはＥＲＫ１／２のＰＭＡ仲介型リン酸化（ｐ−ＥＲＫ１／２）、それぞれに影響を及ぼさないことを示し、このことは、上記のＭＯＳＰＤ２作用の特異性を支持する。
【図１８】図１８Ａ〜図１８Ｆは、異なる病理学的段階由来のまたは腫瘍と隣接した正常組織（正常隣接組織、ＮＡＴ）由来のヒト乳がん試料の組織画像を示す。スライドを、抗ＭＯＳＰＤ２抗体で染色した。図１８Ａ〜図１８Ｆは、ＭＯＳＰＤ２発現が、乳がん細胞が限局性腫瘍から浸潤性及び転移性腫瘍へと移行することを関連したことを示す。
【図１９】乳がんの異なる段階由来のまたは正常隣接組織（ＮＡＴ）由来の試料におけるＭＯＳＰＤ２発現強度のスコアリングを示す（０〜３の尺度で、０は発現なし、及び３は非常に高度の発現）（＊ｐ＜０．００１）。
【図２０】図２０Ａ〜図２０Ｄは、結腸（図２０Ａ〜図２０Ｂ）または肝臓（図２０Ｃ〜図２０Ｄ）から収集した様々な正常及びがん性ヒト組織でのＭＯＳＰＤ２発現レベルを比較する画像を示す。ＭＯＳＰＤ２は、結腸腺がん試料の６７％及び肝細胞がん試料の４５％で発現したが、正常な結腸組織及び肝臓組織では、発現は検出されなかった。
【図２１】図２１Ａ〜図２１Ｅは、ヒト肝臓から収集した正常組織、ＮＡＴ、及び異なるグレードのがん性組織のＭＯＳＰＤ２発現レベルを比較する画像を示す。図２１Ｃ〜図２１Ｅは、ＭＯＳＰＤ２染色強度が、肝細胞がんの腫瘍グレードの増大に伴って増大したことを示す。
【図２２】図２２Ａ〜図２２Ｂは、肝細胞がんから収集された試料中のＭＯＳＰＤ２発現強度のＭＯＳＰＤ２スコアリングを示す。図２２Ａは、ＭＯＳＰＤ２発現が、正常試料及びＮＡＴ試料と比較して、悪性肝細胞がんから収集された試料で有意に増加した（ｐ≦０．００１）ことを示す。図２２Ｂは、ＭＯＳＰＤ２染色強度が、肝細胞がんの進行と相関して有意に増大したことを示す。
【図２３】ＶＢ−２０１がヒトＣＤ１４単球の細胞溶解液由来のＭＯＳＰＤ２に結合することを示すウエスタンブロットの画像を表す。標識化ＶＢ−２０１またはＶＢ−２２１（ＯＢ２０１またはＯＢ２２１）を細胞溶解液に加え、タンパク質を沈殿させた。試料をゲル上で泳動させ、ＴＬＲ２及びＭＯＳＰＤ２に対してブロッティングした。
【図２４】ＭＯＳＰＤ２が乳がん細胞でＥＧＦ誘導型シグナル伝達事象を促進したことを示すウエスタンブロットの画像を表す。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
発明の詳細な説明
本発明の実施形態を詳細に説明する前に、当然のことながら、本発明は、その応用において、以下の説明または実施例による例示に記載される詳細に限定されない。本発明は、他の実施形態のものであること、あるいは様々な方法で実施または実行することが可能である。同じく、当然のことながら、本明細書中使用される表現及び用語は、説明を目的とするものであって、制限するものとして見なされるべきではない。
【００１８】
一般定義
「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「有する」という用語、及びそれらの同根語は、「〜を含むが、〜に限定されない」ことを意味する。
【００１９】
「〜からなる」は、「〜を含み、〜に限定される」ことを意味する。
【００２０】
「本質的に〜からなる」という用語は、ある組成の指定された物質、またはある方法の指定されたステップ、及びその物質または方法の基本的な特徴に実質的に影響を及ぼさない追加の物質またはステップを意味する。
【００２１】
「例示」という単語は、本明細書中、「例、事例、または例図として機能すること」を意味するのに使用される。「例示」として記載される実施形態はどれでも、他の実施形態よりも好ましいまたは有利であると見なされることは必ずしもなく、及び／または他の実施形態の特徴を取り入れることを必ずしも排除しない。
【００２２】
「任意選択で」という単語は、本明細書中、「ある実施形態では提供されるが、他の実施形態では提供されないこと」を意味するのに使用される。本発明の特定の実施形態のどれでも、複数の「任意選択の」特性を、そのような特性が矛盾しない限り、含むことができる。
【００２３】
本明細書中使用される場合、単数形の「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、及び「その（ｔｈｅ）」は、文脈で特に明白に指示されない限り、複数への言及を含む。例えば、「１種類の化合物」または「少なくとも１種類の化合物」は、複数の化合物を、それらの混合物も含めて、含む場合がある。
【００２４】
本明細書中使用される場合、本発明に関連して量を修飾する「約」という用語は、定法の試験及び取り扱いを通じて、そのような試験及び取り扱いでの故意ではない誤りを通じて、本発明で使用する成分の製造、原料、または純度の差異を通じて、などにより、生じる可能性がある数量の変動を示す。「約」という用語により修飾されているか否かにかかわらず、請求項は、列挙された量の等価物を含む。１つの実施形態において、「約」という用語は、記載される数値から１０％以内にあることを意味する。別の実施形態において、「約」という用語は、記載される数値から５％以内にあることを意味する。
【００２５】
本明細書全体を通じて、本発明の様々な実施形態は、範囲形式で提示することができる。当然のことながら、範囲形式での記載は、利便性及び簡潔さのためにすぎず、本発明の範囲に対する柔軟性のない制限として見なされるべきではない。したがって、ある範囲の記載は、具体的に開示される全ての可能なサブ範囲ならびにその範囲内の個々の数値を含むと見なされるべきである。例えば、ある範囲の記載は、例えば１〜６であれば、１〜３、１〜４、１〜５、２〜４、２〜６、３〜６などのようなサブ範囲、ならびにその範囲内の個々の数値、例えば、１、２、３、４、５、及び６を具体的に開示したと見なされるべきである。これは、範囲の広さにかかわらず当てはまる。
【００２６】
本明細書中使用される場合、「方法」という用語は、所定の任務を達成するための、様式、手段、技法、及び手順を示し、化学、薬理学、生物学、生化学、及び医薬分野の当業者に既知であるか、あるいは該当業者により既知の様式、手段、技法、及び手順から容易に開発することができるかのいずれかである、様式、手段、技法、及び手順が挙げられるが、それらに限定されない。
【００２７】
本明細書中使用される場合、「治療する」という用語は、症状の進行を抑止する、実質的に阻害する、遅らせる、または逆転させる、症状の臨床徴候または美観的徴候を実質的に緩和する、あるいは症状の臨床徴候または美観的徴候の出現を実質的に阻止することを含む。
【００２８】
本明細書中使用される場合、「ＭＯＳＰＤ２」は、運動精子ドメイン含有タンパク質２として分類される任意のポリペプチドを示す。ＭＯＳＰＤ２の例として、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１〜４のポリペプチド、またはそれらの任意の変異体（例えば、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１〜４のいずれか１つと少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一の配列を有するもの）が挙げられるが、これらに限定されない。ＭＯＳＰＤ２の他の例として、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５〜８のいずれか１つのポリヌクレオチド、またはそれらの任意の変異体（例えば、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５〜８のいずれか１つと少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一のポリヌクレオチド）によりコードされるポリペプチドが挙げられるが、これらに限定されない。ＭＯＳＰＤ２をコードするポリヌクレオチド配列は、当該分野で既知の方法により、特定生命体での発現に関してコドン最適化を行うことができる。ＭＯＳＰＤ２の他の例は、当業者に既知であるもののような公的データベースを検索することにより（例えば、ＢＬＡＳＴ）同定することが可能である。
【００２９】
本明細書中記載される実施形態のいずれかにおいて、ＭＯＳＰＤ２は、がん細胞、例えば、ヒトがん細胞により発現するＭＯＳＰＤ２が可能である。同じく、本明細書中記載される実施形態のいずれかにおいて、ＭＯＳＰＤ２は、哺乳類ＭＯＳＰＤ２またはヒトＭＯＳＰＤ２が可能である。がん細胞の種類の非排他的列挙として、膀胱がん、乳がん、結腸がん、直腸がん、腎臓がん、肝臓がん、肺がん、食道がん、胆嚢がん、卵巣がん、膵がん、胃がん、子宮頸がん、甲状腺がん、前立腺がん、皮膚がん、造血器がん、間葉系起源のがん、中枢及び末梢神経系のがん、子宮内膜がん、頭頸部がん、膠芽細胞腫、及び悪性腹水の細胞が挙げられる。実施形態によっては、がんは、小細胞肺がんまたは非小細胞肺がんである。実施形態によっては、がんは、皮膚がん、例えば、扁平上皮がん、基底細胞がん、黒色腫、隆起性皮膚線維肉腫、メルケル細胞がん、カポジ肉腫、角化棘細胞腫、紡錘細胞腫瘍、脂腺がん、微小嚢胞性付属器がん、乳房のパジェット病、異型線維黄色腫、平滑筋肉腫、または血管肉腫である。実施形態によっては、がんは、リンパ系の造血器がん、例えば、白血病、急性リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、毛様細胞リンパ腫、またはバーキットリンパ腫である。実施形態によっては、がんは、骨髄系の造血器がん、例えば、線維肉腫、横紋筋肉腫、軟部組織肉腫、または骨肉腫である。実施形態によっては、がんは、中枢神経系または末梢神経系のがん、例えば、星状細胞腫、神経芽細胞腫、神経膠腫、またはシュワン細胞腫である。実施形態によっては、がんは、肛門がん、骨がん、消化管間質がん、妊娠性絨毛性疾患、ホジキンリンパ腫、カポジ肉腫、角化棘細胞腫、悪性中皮腫、多中心性キャッスルマン病、多発性骨髄腫及び他の形質細胞新生物、骨髄増殖性新生物、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、骨肉腫、卵巣がん、卵管がん、もしくは原発性腹膜がん、陰茎がん、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、精上皮腫、軟部組織肉腫、胃がん（ｓｔｏｍａｃｈ（ｇａｓｔｒｉｃ）ｃａｎｃｅｒ）、精巣がん、奇形がん腫、甲状腺濾胞性がん、膣がん、外陰部がん、ウィルムス腫瘍及び他の小児腎臓がん、ならびに色素性乾皮症である。実施形態によっては、がんは、膀胱がん、脳がん（例えば、大脳星状細胞腫）、乳がん、結腸がん（例えば、結腸腺がん）、食道がん（例えば、食道腺がん）、肺がん、皮膚がん（例えば、黒色腫）、舌がん（例えば、頭頸部（舌）細胞がん）、腎臓がん（例えば、腎明細胞がん）、または肝がん（例えば、肝細胞がん）である。
【００３０】
本明細書中使用される場合、「ＭＯＳＰＤ２の作用」または「ＭＯＳＰＤ２作用」は、運動精子ドメイン含有タンパク質２が持つ任意の既知の機能または本明細書中記載される機能を含む。そのような作用として、例えば、細胞遊走（例えば、白血球、単球、またはがん細胞の遊走）の調節、腫瘍関連マクロファージの存在、化学走性、ケモカイン誘導型白血球遊走、ケモカイン受容体シグナル伝達経路、成長因子シグナル伝達経路、ＥＧＦ受容体リン酸化、ＥＲＫリン酸化、ＡＫＴリン酸化、ＦＡＫリン酸化、または炎症が挙げられる。
【００３１】
本明細書中使用される場合、「化学走性」は、化学刺激に反応した細胞の運動を示す。化学走性として、がん細胞がケモカイン（例えば、ＥＧＦ）に向かって動くことが挙げられるが、これに限定されない。
【００３２】
本明細書中使用される場合、「ＭＯＳＰＤ２の阻害物質」及び「ＭＯＳＰＤ２阻害物質」は、ＭＯＳＰＤ２の作用を下方制御する任意の化合物を示す。阻害物質は、例えば、ポリペプチド、ＤＮＡ、またはＲＮＡが可能である。ＭＯＳＰＤ２の阻害は、例えば、感染によるＭＯＳＰＤ２の異所性過剰発現によっても生じる可能性があり、ＭＯＳＰＤ２の阻害物質またはＭＯＳＰＤ２阻害物質は、この種の阻害も包含することが意図される。阻害物質は、例えば、ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドと特異的に結合する分子、ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドのリガンドと特異的に結合する分子、ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドに対して産生された抗血清、可溶性ＭＯＳＰＤ２ポリペプチド、または、ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドの細胞外ドメインを含む、本質的に前記細胞外ドメインからなる、もしくは前記細胞外ドメインからなる、可溶性ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドであることも可能である。阻害物質は、例えば、ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドと特異的に結合する抗体またはＭＯＳＰＤ２ポリペプチドと特異的に結合する抗体の抗原結合断片であることも可能である。阻害物質は、ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列にハイブリダイズする、例えば、ＲＮＡｉ、ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、アンチセンスＤＮＡ、デコイ分子、デコイＤＮＡ、二本鎖ＤＮＡ、一本鎖ＤＮＡ、複合体化ＤＮＡ、カプセル化ＤＮＡ、ウイルスＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、ネイキッドＲＮＡ、カプセル化ＲＮＡ、ウイルスＲＮＡ、二本鎖ＲＮＡ、ＲＮＡ干渉を生じさせることができる分子、またはそれらの組み合わせであることも可能である。阻害物質は、例えば、クラスター化した規則的な配置の短い回文配列リピートであるＣＲＩＳＰＲ−ＣＡＳ９システムであることも可能である。ＣＲＩＳＰＲ−ＣＡＳ９システムは、文献に記載されており、例えば、ＣＡＳ９及びガイドＲＮＡを含むことができる。他の遺伝子編集技法も文献に記載されており、同じく使用することができる。阻害物質は、ＭＯＳＰＤ２の作用を下方制御する小分子化学物質であることも可能である。
【００３３】
「抗体」または抗体の「抗原結合断片」として、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、マウス抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体、一本鎖抗体、エピトープ結合断片、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、及びＦ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、一本鎖抗体、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、軽鎖可変領域（ＶＬ）または重鎖可変領域（ＶＨ）ドメイン、ＶＬまたはＶＨドメインいずれかを含む断片、及びＦａｂ発現ライブラリーにより産生された断片が挙げられるが、これらに限定されない。抗体または抗体の抗原結合断片は、免疫グロブリン分子の任意の種類（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、及びＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）、またはサブクラスのものが可能である。抗体の抗原結合断片を作製する方法は、既知であり、例えば、抗体の化学的またはプロテアーゼ消化が挙げられる。
【００３４】
抗体の「定常領域」は、単独または組み合わせいずれかでの抗体軽鎖の定常領域または抗体重鎖の定常領域を示す。
【００３５】
「Ｆｃ領域」という用語は、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するのに使用される。「Ｆｃ領域」は、天然型配列Ｆｃ領域の場合も変異型Ｆｃ領域の場合もある。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は変わる可能性があるものの、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、通常、Ｃｙｓ２２６、またはＰｒｏ２３０の位置のアミノ酸残基からカルボキシ末端までの一続きとして定義される。Ｆｃ領域の残基の付番は、ＫａｂａｔにあるとおりのＥＵインデックスによるものである。Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．，１９９１。免疫グロブリンのＦｃ領域は、一般に、２つの定常ドメイン、ＣＨ２及びＣＨ３を含む。
【００３６】
「特異的に結合する」により、一般に、抗体またはその断片、変異体、もしくは誘導体が、その抗原結合ドメインによりエピトープに結合すること、及びその結合が、抗原結合ドメインとエピトープとの間に何かしらの相補性を必要とすることを意味する。この定義によれば、抗体またはその断片、変異体、もしくは誘導体は、その抗原結合ドメインを介してあるエピトープと結合することが、無作為の無関係なエピトープに結合するよりも容易である場合に、そのエピトープに「特異的に結合する」と言われる。
【００３７】
本明細書中使用される場合、「エピトープ」は、抗体が特異的に結合することができる、抗原の局所領域を示す。エピトープは、例えば、ポリペプチドの近接アミノ酸であることも可能であるし（直鎖または近接エピトープ）、またはエピトープは、例えば、１つまたは複数のポリペプチドの２つ以上の非近接領域が一緒になることも可能である（立体構造、非直鎖、非連続、または非近接エピトープ）。ある特定の実施形態において、抗体が結合するエピトープは、文献及び本明細書中記載される方法、例えば、ＮＭＲ分光測定、Ｘ線回折結晶構造解析、ＥＬＩＳＡアッセイ、質量分析（例えば、ＭＡＬＤＩ質量分析）と合わせた水素／重水素交換、アレイに基づくオリゴペプチドスキャニングアッセイ、及び／または変異誘発マッピング（例えば、部位指向性変異誘発マッピング）などにより決定することができる。
【００３８】
「同一性パーセント」という用語は、当該分野で既知であるとおり、配列を比較することで決定されるとおりの２つ以上のポリペプチド配列または２つ以上のポリヌクレオチド配列間の関連性である。当該分野では、「同一性」及び「配列同一性」は、場合によっては、ポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列間のペプチドまたはヌクレオチドの並び方の一致により決定されるとおりのそのような配列間の配列関連性の程度も意味する。「同一性」及び「類似性」は、既知の方法及び公的に利用可能なリソースにより容易に計算可能であり、そのようなものとして以下が挙げられるが、それらに限定されない：（１）Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．，Ｅｄ．）Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ：ＮＹ（１９８８）、（２）Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｐｒｏｊｅｃｔｓ（Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｗ．，Ｅｄ．）Ａｃａｄｅｍｉｃ：ＮＹ（１９９３）、（３）Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄａｔａ，Ｐａｒｔ  Ｉ（Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．，ａｎｄ  Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ｈ．Ｇ．，Ｅｄｓ．）Ｈｕｍａｎｉａ：ＮＪ（１９９４）、（４）Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（ｖｏｎ  Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ．，Ｅｄ．）Ａｃａｄｅｍｉｃ（１９８７）、及び（５）Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐｒｉｍｅｒ（Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．ａｎｄ  Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．，Ｅｄｓ．）Ｓｔｏｃｋｔｏｎ：ＮＹ（１９９１）。
【００３９】
ポリヌクレオチドは、一本鎖形の核酸断片が、適切な温度及び溶液イオン強度条件下で、他の核酸断片にアニールすることができる場合に、その別のポリヌクレオチドと「ハイブリダイズする」ことができる。ハイブリダイゼーション及び洗浄条件は、周知であり、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，２ｎｄ  ｅｄ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ：Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９８９）、その中の特に第１１章及び表１１．１に例示されている（本明細書中、その全体が参照により援用される）。温度及び溶液イオン強度条件は、ハイブリダイゼーションの「ストリンジェンシー」を決定する。ストリンジェンシー条件は、中程度に類似した断片（関連性の遠い生命体由来の相同な配列など）から高度に類似した断片（関連性の近い生命体由来の機能性酵素を複製する遺伝子など）までをスクリーニングするように調節することができる。ハイブリダイゼーション後の洗浄が、ストリンジェンシー条件を決定する。ストリンジェントな条件のセットの一例は、最初に６×ＳＳＣ、０．５％ＳＤＳを室温で１５分間、次いで２×ＳＳＣ、０．５％ＳＤＳを４５℃で３０分間で繰り返し、次いで０．２×ＳＳＣ、０．５％ＳＤＳを５０℃で３０分間で２回繰り返す一連の洗浄を用いる。ストリンジェントな条件の別のセットの例は、より高温を使用するもので、洗浄は上記のものと同一であるが、ただし最後の２回の０．２×ＳＳＣ、０．５％ＳＤＳで３０分間洗浄時の温度が６０℃に上げられた。ストリンジェントな条件のこのセットは、２回の０．１×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、６５℃での最終洗浄を追加することにより「高度にストリンジェントな条件」へと変更することができる。ストリンジェントな条件のさらなるセットの例は、例えば、０．１×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、６５℃でハイブリダイゼーション、及び２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、続いて０．１×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳで洗浄を含む。
【００４０】
ハイブリダイゼーションは、２つの核酸が相補配列を含有していることを必要とするが、ハイブリダイゼーションのストリンジェンシー次第で、塩基間のミスマッチが起こり得る。核酸をハイブリダイズするのに適切なストリンジェンシーは、核酸の長さ及び相補性の程度に依存し、これらは当該分野で周知の変数である。２つのヌクレオチド配列間の類似性または相同性の度合いが高くなるほど、これらの配列を有する核酸のハイブリッドのＴｍ値も高くなる。核酸ハイブリダイゼーションの相対的安定性（Ｔｍが高いことに相当する）は、以下の順序で低下する：ＲＮＡ：ＲＮＡ、ＤＮＡ：ＲＮＡ、ＤＮＡ：ＤＮＡ。１００ヌクレオチド長を超えるハイブリッドについては、Ｔｍの計算式が導かれている（Ｓａｍｂｒｏｏｋら、９．５０〜９．５１を参照）。それより短い核酸、すなわち、オリゴヌクレオチドを用いたハイブリダイゼーションについては、ミスマッチの位置がより重要になり、オリゴヌクレオチドの長さが、その特異性を決定する（Ｓａｍｂｒｏｏｋら、上記、１１．７〜１１．８を参照）。１つの実施形態において、ハイブリダイズ可能な核酸の長さは、少なくとも約１０ヌクレオチドである。他の実施形態において、ハイブリダイズ可能な核酸の最短の長さは、少なくとも約１５ヌクレオチド、または少なくとも約２０ヌクレオチドである。
【００４１】
本明細書全体を通じて使用される場合、「アルキル」という用語は、飽和脂肪族炭化水素を示し、これには直鎖基及び分岐鎖基が含まれる。実施形態によっては、アルキル基は、１〜２０個の炭素原子を有する。本明細書中、数値範囲、例えば、「１〜２０」などが述べられる場合はいつでも、その基が、この場合はアルキル基が、１個の炭素原子、２個の炭素原子、３個の炭素原子などから上限２０個も含めて、その個数まで炭素原子を含有することができることを意味する。実施形態によっては、アルキルは、１〜１０個の炭素原子を有する中程度の大きさのアルキルである。実施形態によっては、アルキルは、１〜４個の炭素原子を有する低級アルキルである。アルキル基は、置換されている場合も非置換の場合もある。置換されている場合、置換基として、例えば、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロ脂環式、ハロ、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、スルフィニル、スルホニル、シアノ、ニトロ、アジド、スルホニル、スルフィニル、スルホンアミド、ホスホニル、ホスフィニル、オキソ、カルボニル、チオカルボニル、尿素、チオ尿素、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、Ｃ−アミド、Ｎ−アミド、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、スルホンアミド、及びアミノが可能であり、これらの用語は本明細書中定義されるとおりである。
【００４２】
「シクロアルキル」基は、全てが炭素の単環式または縮合した環（すなわち、隣接する炭素原子対を共有する環）基を示し、縮合した複数の環のうち１つは完全共役π電子系を持たない。シクロアルキル基の限定ではなく例として、シクロプロパン、シクロブタン、シクロペンタン、シクロペンテン、シクロヘキサン、シクロヘキサジエン、シクロヘプタン、シクロヘプタトリエン、及びアダマンタンがある。シクロアルキル基は、置換されている場合も非置換の場合もある。置換されている場合、置換基として、例えば、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロ脂環式、ハロ、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、スルフィニル、スルホニル、シアノ、ニトロ、アジド、スルホニル、スルフィニル、スルホンアミド、ホスホニル、ホスフィニル、オキソ、カルボニル、チオカルボニル、尿素、チオ尿素、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、Ｃ−アミド、Ｎ−アミド、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、スルホンアミド、及びアミノが可能であり、これらの用語は本明細書中定義されるとおりである。
【００４３】
「アルケニル」基は、少なくとも２個の炭素原子及び少なくとも１つの炭素炭素二重結合からなるアルキル基を示す。
【００４４】
「アルキニル」基は、少なくとも２個の炭素原子及び少なくとも１つの炭素炭素三重結合からなるアルキル基を示す。
【００４５】
「アリール」基は、完全共役π電子系を持つ、全てが炭素の単環式または縮合した環の多環式（すなわち、隣接する炭素原子対を共有する環）基を示す。アリール基の限定ではなく例として、フェニル、ナフタレニル、及びアントラセニルがある。アリール基は、置換されている場合も非置換の場合もある。置換されている場合、置換基として、例えば、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロ脂環式、ハロ、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、スルフィニル、スルホニル、シアノ、ニトロ、アジド、スルホニル、スルフィニル、スルホンアミド、ホスホニル、ホスフィニル、オキソ、カルボニル、チオカルボニル、尿素、チオ尿素、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、Ｃ−アミド、Ｎ−アミド、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、スルホンアミド、及びアミノが可能であり、これらの用語は本明細書中定義されるとおりである。
【００４６】
「ヘテロアリール」基は、環中に１個または複数の、例えば、窒素、酸素、及び硫黄などの原子を有し、さらに完全共役π電子系を持つ、単環式または縮合した環（すなわち、隣接する炭素原子対を共有する環）基を示す。ヘテロアリール基の限定ではなく例として、ピロール、フラン、チオフェン、イミダゾール、オキサゾール、チアゾール、ピラゾール、ピリジン、ピリミジン、キノリン、イソキノリン、及びプリンが挙げられる。ヘテロアリール基は、置換されている場合も非置換の場合もある。置換されている場合、置換基として、例えば、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロ脂環式、ハロ、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、スルフィニル、スルホニル、シアノ、ニトロ、アジド、スルホニル、スルフィニル、スルホンアミド、ホスホニル、ホスフィニル、オキソ、カルボニル、チオカルボニル、尿素、チオ尿素、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、Ｃ−アミド、Ｎ−アミド、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、スルホンアミド、及びアミノが可能であり、これらの用語は本明細書中定義されるとおりである。
【００４７】
「ヘテロ脂環式」基は、環中に１個または複数の、例えば、窒素、酸素、及び硫黄などの原子を有する、単環式または縮合した環の基を示す。これらの環は、１つまたは複数の二重結合も有する場合がある。しかしながら、これらの環は、完全共役π電子系を持たない。ヘテロ脂環式は、置換されている場合も非置換の場合もある。置換されている場合、置換基として、例えば、例えば、孤立電子対、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロ脂環式、ハロ、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、スルフィニル、スルホニル、シアノ、ニトロ、アジド、スルホニル、スルフィニル、スルホンアミド、ホスホニル、ホスフィニル、オキソ、カルボニル、チオカルボニル、尿素、チオ尿素、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、Ｃ−アミド、Ｎ−アミド、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、スルホンアミド、及びアミノが可能であり、これらの用語は本明細書中定義されるとおりである。代表例として、ピペリジン、ピペラジン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロピラン、モルホリノなどがある。
【００４８】
「アルコキシ」基は、本明細書中定義されるとおり、−Ｏ−アルキル及び−Ｏ−シクロアルキル基の両方を示す。
【００４９】
「アリールオキシ」基は、本明細書中定義されるとおり、−Ｏ−アリール及び−Ｏ−ヘテロアリール基の両方を示す。
【００５０】
「チオアルコキシ」基は、本明細書中定義されるとおり、−Ｓ−アルキル基及び−Ｓ−シクロアルキル基の両方を示す。
【００５１】
「チオアリールオキシ」基は、本明細書中定義されるとおり、−Ｓ−アリール及び−Ｓ−ヘテロアリール基の両方を示す。
【００５２】
「カルボニル」基は、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ基を示し、ここで、Ｒは、本明細書中定義されるとおりの、水素、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール（環炭素を通じて結合）、またはヘテロ脂環式（環炭素を通じて結合）である。
【００５３】
「アルデヒド」基は、カルボニル基を示し、ここで、Ｒは、水素である。
【００５４】
「チオカルボニル」基は、−Ｃ（＝Ｓ）−Ｒ基を示し、ここで、Ｒは、本明細書中定義されるとおりである。
【００５５】
「Ｃ−カルボキシ」基は、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ基を示し、ここで、Ｒは、本明細書中定義されるとおりである。
【００５６】
「Ｏ−カルボキシ」基は、ＲＣ（＝Ｏ）−Ｏ−基を示し、ここで、Ｒは、本明細書中定義されるとおりである。
【００５７】
「オキソ」基は、＝Ｏ基を示す。
【００５８】
「カルボン酸」基は、Ｃ−カルボキシル基を示し、ここで、Ｒは、水素である。
【００５９】
「ハロ」基は、フッ素、塩素、臭素、またはヨウ素を示す。
【００６０】
「トリハロメチル」基は、−ＣＸ３基を示し、ここで、Ｘは、本明細書中定義されるとおりのハロ基である。
【００６１】
「スルフィニル」基は、−Ｓ（＝Ｏ）−Ｒ基を示し、ここで、Ｒは、本明細書中定義されるとおりである。
【００６２】
「スルホニル」基は、−Ｓ（＝Ｏ）２−Ｒ基を示し、ここで、Ｒは、本明細書中定義されるとおりである。
【００６３】
「Ｓ−スルホンアミド」基は、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＲ２基を示し、ここで、各Ｒは、本明細書中定義されるとおりである。
【００６４】
「Ｎ−スルホンアミド」基は、ＲＳ（＝Ｏ）２−ＮＲ基を示し、ここで、各Ｒは、本明細書中定義されるとおりである。
【００６５】
「Ｏ−カルバミル」基は、−ＯＣ（＝Ｏ）−ＮＲ２基を示し、ここで、各Ｒは、本明細書中定義されるとおりである。
【００６６】
「Ｎ−カルバミル」基は、ＲＯＣ（＝Ｏ）−ＮＲ−基を示し、ここで、各Ｒは、本明細書中定義されるとおりである。
【００６７】
「Ｏ−チオカルバミル」基は、−ＯＣ（＝Ｓ）−ＮＲ２基を示し、ここで、各Ｒは、本明細書中定義されるとおりである。
【００６８】
「Ｎ−チオカルバミル」基は、ＲＯＣ（＝Ｓ）ＮＲ−基を示し、ここで、各Ｒは、本明細書中定義されるとおりである。
【００６９】
「アミノ」基は、−ＮＲ２基を示し、ここで、各Ｒは、本明細書中定義されるとおりである。
【００７０】
「Ｃ−アミド」基は、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ２基を示し、ここで、各Ｒは、本明細書中定義されるとおりである。
【００７１】
「Ｎ−アミド」基は、ＲＣ（＝Ｏ）−ＮＲ−基を示し、ここで、各Ｒは、本明細書中定義されるとおりである。
【００７２】
「尿素」基は、−ＮＲＣ（＝Ｏ）−ＮＲ２基を示し、ここで、各Ｒは、本明細書中定義されるとおりである。
【００７３】
「グアニジノ」基は、−ＲＮＣ（＝Ｎ）−ＮＲ２基を示し、ここで、各Ｒは、本明細書中定義されるとおりである。
【００７４】
「グアニル」基は、Ｒ２ＮＣ（＝Ｎ）−基を示し、ここで、各Ｒは、本明細書中定義されるとおりである。
【００７５】
「ホスホニル」または「ホスホナート」という用語は、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ）２基を示し、各Ｒは、本明細書中定義されるとおりである。
【００７６】
「ホスファート」という用語は、−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ）２基を示し、各Ｒは、本明細書中定義されるとおりである。
【００７７】
「リン酸」は、各Ｒが水素であるリン酸基である。
【００７８】
「ホスフィニル」という用語は、−ＰＲ２基を示し、各Ｒは、本明細書中定義されるとおりである。
【００７９】
「チオ尿素」という用語は、−ＮＲ−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＲ−基を示し、各Ｒは、本明細書中定義されるとおりである。
【００８０】
「糖類」という用語は、鎖式糖単位または環状糖単位（例えば、ピラノースまたはフラノース系単位）いずれかの、１つまたは複数の糖単位を示し、特に記載がない限り、任意の単糖類、二糖類、及び少糖類を包含する。
【００８１】
「塩」という用語は、内部塩及び外部塩両方を含む。実施形態によっては、塩は内部塩である、すなわち、双性イオン構造である。実施形態によっては、塩は外部塩である。実施形態によっては、外部塩は、適切な対イオンを有する薬学上許容される塩である。医薬用途に適した対イオンは、当該分野で既知である。
【００８２】
「ＶＢ−２０１」という用語は、１−ヘキサデシル−２−（４’−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリンを示す。本発明の実施形態に従って、ＶＢ−２０１は、１−ヘキサデシル−２−（４’−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリンのキラル鏡像異性体、すなわち、（Ｒ）鏡像異性体（（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（４’−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）または（Ｓ）鏡像異性体（（Ｓ）−１−ヘキサデシル−２−（４’−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）のいずれか、あるいはそれらの混合物（例えば、ラセミ体）の場合がある。例示の実施形態に従って、ＶＢ−２０１は、（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（４’−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンである。当業者には当然のことながら、ＶＢ−２０１を（Ｒ）鏡像異性体または（Ｓ）鏡像異性体と指定することは、鏡像異性体純度が１００％であることを必要とせず、そうではなくて、ＲまたはＳ異性体としていずれかの単独鏡像異性体が実質的に濃くなっていることを示す（例えば、鏡像異性体過剰率が少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、またはそれより高い）。実施形態によっては、ＶＢ−２０１は、鏡像異性体過剰率が少なくとも９０％である（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（４’−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンである。
【００８３】
「ＶＢ−２２１」という用語は、１−（２’−オクチル）ドデシル−２−（４’−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリンを示す。本発明の実施形態に従って、ＶＢ−２２１は、（１−（２’−オクチル）ドデシル−２−（４’−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリン）のキラル鏡像異性体、すなわち、（Ｒ）鏡像異性体または（Ｓ）鏡像異性体のいずれか、あるいはそれらの任意の混合物（例えば、ラセミ体）の場合がある。例示の実施形態に従って、ＶＢ−２２１は、（Ｒ）−１−（２’−オクチル）ドデシル−２−（４’−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンである。同様に、当業者には当然のことながら、ＶＢ−２２１を（Ｒ）鏡像異性体または（Ｓ）鏡像異性体と指定することは、鏡像異性体純度が１００％であることを必要とせず、そうではなくて、ＲまたはＳ異性体としていずれかの単独鏡像異性体が実質的に濃くなっていることを示す（例えば、鏡像異性体過剰率が少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、またはそれより高い）。実施形態によっては、ＶＢ−２２１は、鏡像異性体過剰率が少なくとも９０％である（Ｒ）−１−（２’−オクチル）ドデシル−２−（４’−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンである。
【００８４】
本発明のある特長は、明確にするために別々の実施形態の文脈で記載されるとしても、それらは、１つの実施形態中に組み合わせて提供される場合もあることが認識される。反対に、本発明の様々な特長は、簡潔さのため１つの実施形態の文脈で記載されるとしても、それらは、別々にまたは任意の適切な部分的組み合わせで、または本発明の任意の他の記載される実施形態で適切なように提供される場合がある。様々な実施形態の文脈で記載されるある特定の特長は、その実施形態がそれらの要素なしでは作動不能でない限り、それらの実施形態の必須の特長と見なされることはない。
【００８５】
ＭＯＳＰＤ２及びＭＯＳＰＤ２阻害物質
ＭＯＳＰＤ２の阻害は、がん細胞及び単球が、異なるケモカイン（例えば、ＥＧＦ）に向かって遊走するのを阻害し、ケモカイン受容体シグナル伝達経路の活性化を遮断することがわかっている。これらの結果は、ＭＯＳＰＤ２が、がん細胞の遊走及び転移に極めて重要であること、ならびにその作用の遮断が、例えば、がん細胞の転移の治療、予防、または発生率低下に治療効果を有することを示す。
【００８６】
本発明の実施形態は、ＭＯＳＰＤ２、例えば、がん細胞により発現したＭＯＳＰＤ２の阻害物質に、またはＭＯＳＰＤ２、例えば、がん細胞により発現したＭＯＳＰＤ２の阻害物質を含む方法及び組成物に関する。実施形態によっては、ＭＯＳＰＤ２は、哺乳類ＭＯＳＰＤ２である。他の実施形態において、ＭＯＳＰＤ２は、ヒトＭＯＳＰＤ２である。実施形態によっては、阻害物質は、ＭＯＳＰＤ２を阻害する単離した結合分子である。他の実施形態において、阻害物質は、ポリペプチド、ＤＮＡ、またはＲＮＡである。他の実施形態において、阻害物質は、ＭＯＳＰＤ２に特異的に結合するポリペプチドである。他の実施形態において、阻害物質は、ＭＯＳＰＤ２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片である。他の実施形態において、阻害物質は、ＲＮＡサイレンシング作用物質である。
【００８７】
本発明のさらなる実施形態において、ＭＯＳＰＤ２の阻害及びＭＯＳＰＤ２作用の下方制御は、転写及び／または翻訳に干渉する様々な分子［例えば、ＲＮＡサイレンシング作用物質（例えば、アンチセンス、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、マイクロＲＮＡ）、リボザイム、及びＤＮＡザイム］を用いてゲノム及び／または転写レベルで、あるいは、例えば、アンタゴニスト、ポリペプチド切断酵素、タンパク質活性に干渉する小分子（例えば、競合リガンド）などを用いてタンパク質レベルで、影響を受ける可能性がある。
【００８８】
以下に、ＭＯＳＰＤ２などの標的の発現レベル及び／または作用を下方制御することができる作用物質の例を列挙する。
【００８９】
ＭＯＳＰＤ２の阻害は、例えば、感染によるＭＯＳＰＤ２の異所性過剰発現により生じる場合もあり、ＭＯＳＰＤ２の阻害物質またはＭＯＳＰＤ２阻害物質は、この種の阻害も包含することが意図される。
【００９０】
ＭＯＳＰＤ２の下方制御は、遺伝子編集によっても達成することができる。遺伝子編集は、例えば、クラスター化した規則的な配置の短い回文配列リピートであるＣＲＩＳＰＲ−ＣＡＳ９システムを用いて行うことができる。ＣＲＩＳＰＲ−ＣＡＳ９システムは、文献に記載されており、例えば、ＣＡＳ９及びガイドＲＮＡを含むことができる。他の遺伝子編集技法も文献に記載されており、同じく使用することができる。
【００９１】
ＭＯＳＰＤ２の下方制御は、ＲＮＡサイレンシングによっても達成することができる。本明細書中使用される場合、「ＲＮＡサイレンシング」という語句は、該当するタンパク質コード遺伝子の発現の阻害すなわち「サイレンシング」をもたらすＲＮＡ分子により仲介される一群の調節機構［例えば、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）、転写遺伝子サイレンシング（ＴＧＳ）、転写後遺伝子サイレンシング（ＰＴＧＳ）、鎮圧、共抑制、及び翻訳抑制］を示す。ＲＮＡサイレンシングは、植物、動物、真菌を含む多くの種類の生命体で観察されてきている。
【００９２】
本明細書中使用される場合、「ＲＮＡサイレンシング作用物質」という用語は、標的遺伝子の発現を特異的に阻害する、すなわち「サイレンシング」することができるＲＮＡを示す。実施形態によっては、ＲＮＡサイレンシング作用物質は、転写後サイレンシング機構を通じてｍＲＮＡ分子の完全プロセシング（例えば、全翻訳及び／または発現）を防止することができる。ＲＮＡサイレンシング作用物質として、非コードＲＮＡ分子、例えば、対になった鎖を含むＲＮＡ二重鎖、ならびにそのような小非コードＲＮＡを生じさせることが可能な前駆ＲＮＡが挙げられる。ＲＮＡサイレンシング作用物質の例として、ｄｓＲＮＡ、例えば、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、及びｓｈＲＮＡが挙げられる。１つの実施形態において、ＲＮＡサイレンシング作用物質は、ＲＮＡ干渉を誘導することができる。別の実施形態において、ＲＮＡサイレンシング作用物質は、翻訳抑制を仲介することができる。
【００９３】
ＲＮＡ干渉は、動物における、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）が仲介する配列特異的転写後遺伝子サイレンシングのプロセスを示す。植物における、これに該当するプロセスは、一般に、転写後遺伝子サイレンシングまたはＲＮＡサイレンシングと称され、真菌では鎮圧とも称される。転写後遺伝子サイレンシングのプロセスは、外来遺伝子の発現を防止するのに使用される進化的に保存された細胞防御機構であると考えられ、多種多様な植物相及び動物門に一般的に共有される。そのような外来遺伝子発現からの防御は、ウイルス感染に由来する、またはトランスポゾンエレメントの宿主ゲノムへの無作為組み込みに由来する二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）の産生に反応して、相同な一本鎖ＲＮＡまたはウイルスゲノムＲＮＡを特異的に破壊する細胞反応を介して、進化してきた可能性がある。
【００９４】
本発明のいくつかの実施形態は、ｍＲＮＡからのタンパク質発現を下方制御するためのｄｓＲＮＡの使用を企図する。
【００９５】
「ｓｉＲＮＡ」という用語は、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）経路を誘導する低分子量抑制性ＲＮＡ二重鎖（一般に１８〜３０塩基対）を示す。典型的には、ｓｉＲＮＡは、中心の１９ｂｐ二重鎖領域及び末端の対称な２塩基３’−オーバーハングを持つ２１量体として化学合成されるが、２５〜３０塩基長の化学合成ＲＮＡ二重鎖が、同一位置で、２１量体に比べて１００倍にも上る高い作用強度を有する可能性があることが最近報告された。ＲＮＡｉを引き起こす上でＲＮＡが長い方が作用強度が増大したという観察結果は、生成物（２１量体）ではなくて基質（２７量体）とともにダイサーを提供することに由来すると理論付けられ、これによりｓｉＲＮＡ二重鎖をＲＩＳＣに入れる速度または効率が改善されると理論付けられる。
【００９６】
二本鎖干渉ＲＮＡ（例えば、ｓｉＲＮＡ）の鎖は、接続してヘアピンまたはステムループ構造を形成する場合がある（例えば、ｓｈＲＮＡまたはｓｈ−ＲＮＡ）。すなわち、上記のとおり、本発明のいくつかの実施形態のＲＮＡサイレンシング作用物質は、低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）の場合もある。
【００９７】
「ｓｈＲＮＡ」または「ｓｈ−ＲＮＡ」という用語は、本明細書中使用される場合、第一及び第二領域の相補配列を含むステムループ構造を有するＲＮＡ作用物質を示し、これらの領域の相補性の度合い及び方向は、これらの領域間の塩基対形成が生じるのに十分であり、第一及び第二領域はループ領域により接続されていて、ループは、ループ領域内のヌクレオチド（またはヌクレオチド類似体）間に塩基対形成がないことに由来する。ループ中のヌクレオチド数は、３〜２３、または５〜１５、または７〜１３、または４〜９、または９〜１１の間の個数であり、上限及び下限の個数を含む。ループ中のヌクレオチドのいくつかは、ループ中の他のヌクレオチドとの塩基対相互作用に関与する可能性がある。
【００９８】
本発明のいくつかの実施形態のＲＮＡサイレンシング作用物質は、ＲＮＡのみを含有する分子に限定される必要はなく、化学修飾されたヌクレオチド及び非ヌクレオチドをさらに包含することが認識されると考えられる。
【００９９】
実施形態によっては、本明細書中提供されるＲＮＡサイレンシング作用物質は、細胞透過性ペプチドと機能的に会合することができる。本明細書中使用される場合、「細胞透過性ペプチド」とは、血漿及び／または細胞の核膜を横断する膜透過性複合体の輸送と関連したエネルギー非依存性（すなわち、非エンドサイトーシス）移行性質を与える短い（約１２〜３０残基）アミノ酸配列または機能的モチーフを含むペプチドである。
【０１００】
別の実施形態に従って、ＲＮＡサイレンシング作用物質は、ｍｉＲＮＡまたはその模倣物の場合がある。
【０１０１】
「マイクロＲＮＡ」、「ｍｉＲＮＡ」、「ｍｉＲ」という用語は、同義語であり、約１９〜２８ヌクレオチド長さの非コード一本鎖ＲＮＡ分子の集団を示し、これらは遺伝子発現を調節する。ｍｉＲＮＡは、広範囲の生命体で見つかり、発生、恒常性、及び疾患の原因で役割を果たすことが示されている。
【０１０２】
「マイクロＲＮＡ模倣物」という用語は、ＲＮＡｉ経路に入って遺伝子発現を調節することができる合成非コードＲＮＡを示す。ｍｉＲＮＡ模倣物は、内因性マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）の機能を模倣するものであり、成熟二本鎖分子または模倣前駆体（例えば、またはプレｍｉＲＮＡ）として設計することができる。ｍｉＲＮＡ模倣物は、修飾または非修飾ＲＮＡ、ＤＮＡ、ＲＮＡ−ＤＮＡハイブリッド、または代替核酸化学物質（例えば、ＬＮＡまたは２’−Ｏ、４’−Ｃ−エチレン−架橋核酸（ＥＮＡ））で構成することができる。成熟二本鎖ｍｉＲＮＡ模倣物の場合、二重領域の長さは、１３〜３３、１８〜２４、または２１〜２３ヌクレオチドで変わる可能性がある。ｍｉＲＮＡは、合計で少なくとも５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、または４０ヌクレオチドを含むことも可能である。ｍｉＲＮＡの配列は、プレｍｉＲＮＡの最初の１３〜３３ヌクレオチドであることが可能である。ｍｉＲＮＡの配列は、プレｍｉＲＮＡの最後の１３〜３３ヌクレオチドであることも可能である。
【０１０３】
標的を下方制御することができる別の作用物質は、標的のｍＲＮＡ転写物またはＤＮＡ配列を特異的に切断することができるＤＮＡザイム分子である。ＤＮＡザイムは、一本鎖及び二本鎖標的配列の両方を切断することができる一本鎖ポリヌクレオチドである。（Ｂｒｅａｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １９９５；２：６５５、Ｓａｎｔｏｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １９９７；９４３：４２６２。）ＤＮＡザイムの一般モデル（「１０〜２３」モデル）が提案されてきている。「１０〜２３」ＤＮＡザイムは、１５のデオキシリボヌクレオチドからなる触媒ドメインを有し、このドメインに隣接して、２つのそれぞれ７〜９つのデオキシリボヌクレオチドからなる基質認識ドメインを有する。この種のＤＮＡザイムは、プリン：ピリミジン接続部でその基質ＲＮＡを効果的に切断することができる。（Ｓａｎｔｏｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，；Ｋｈａｃｈｉｇｉａｎ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．２００２；４：１１９−１２１。）
【０１０４】
標的の下方制御は、標的をコードするｍＲＮＡ転写物と特異的にハイブリダイズすることができるアンチセンスポリヌクレオチドを用いることによっても、変化を及ぼすことができる。
【０１０５】
標的を下方制御することができる別の作用物質は、標的をコードするｍＲＮＡ転写物を特異的に切断することができるリボザイム分子である。リボザイムは、関心対象のタンパク質をコードするｍＲＮＡを切断することにより遺伝子発現を配列特異的に阻害する目的で使用が増えつつある。（Ｗｅｌｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１９９８；９：４８６−９６。）
【０１０６】
標的を下方制御することができる別の作用物質は、標的に結合及び／または標的を切断する任意の分子である。そのような分子として、標的のアンタゴニストまたは標的の抑制性ペプチドが可能である。
【０１０７】
標的の少なくとも触媒または結合部分の非機能的類似体も、標的を下方制御する作用物質として使用することができることが認識されると考えられる。
【０１０８】
標的を下方制御するために本発明のいくつかの実施形態に併せて使用することができる別の作用物質は、標的活性化または基質結合を防止する分子である。
【０１０９】
実施形態によっては、所定のタンパク質標的の阻害物質は、タンパク質に結合することにより、タンパク質に結合する化合物（例えば、基質、調節タンパク質）に結合することにより、及び／またはタンパク質をコードするオリゴヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）に結合することにより、タンパク質を阻害する。
【０１１０】
実施形態によっては、ＭＯＳＰＤ２の阻害物質は、小分子（例えば、８００Ｄａ未満の分子量を特徴とする）である。実施形態によっては、小分子ＭＯＳＰＤ２阻害物質は、トコフェロールまたはその誘導体（例えば、α−トコフェロール、β−トコフェロール、γ−トコフェロール、δ−トコフェロール）、トリテルペン（例えば、スクアレン）、ビタミンＡまたはその誘導体（例えば、レチンアルデヒド）、ホスファチジルグリセリド（例えば、ホスファチジルイノシトール）、あるいはリン脂質（例えば、ホスファチジルコリン、酸化リン脂質）である。
【０１１１】
実施形態によっては、小分子ＭＯＳＰＤ２阻害物質は、式Ｉ：
2018527333.tif 000003
による構造、またはその薬学上許容される塩、水和物、もしくは溶媒和物を有する酸化リン脂質であるか、あるいはその薬学上許容される塩、水和物、もしくは溶媒和物であり、
式中、
ｎは、１〜６の整数であり、ｎが１の場合、Ｃｎ、Ｂｎ、Ｒｎ、及びＹは存在せず、かつＣ１はＲ’ｎに結合しており、
Ｂ１、Ｂ２、・・・Ｂｎ−１、及びＢｎはそれぞれ独立して、酸素、硫黄、窒素、リン、及びケイ素からなる群より選択され、前記窒素、前記リン、及び前記ケイ素はそれぞれ、アルキル、ハロ、シクロアルキル、アリール、ヒドロキシ、チオヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオアリールオキシ、チオアルコキシ、及びオキソからなる群より選択される１つの置換基で置換されてもよく、
Ａ１、Ａ２、・・・Ａｎ−１、及びＡｎはそれぞれ独立して、ＣＲ’’Ｒ’’’、Ｃ＝Ｏ、及びＣ＝Ｓからなる群より選択され、
Ｙは、水素、アシル、アルキル、アリール、シクロアルキル、カルボキシ、糖類、リン酸、ホスホリルコリン、ホスホリルエタノールアミン、ホスホリルセリン、ホスホリルカルジオリピン、ホスホリルイノシトール、エチルホスホコリン、ホスホリルメタノール、ホスホリルエタノール、ホスホリルプロパノール、ホスホリルブタノール、ホスホリルエタノールアミン−Ｎ−ラクトース、ホスホエタノールアミン−Ｎ−グルタル酸、ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（プロピレングリコール）］、ホスホイノシトール−４−ホスファート、ホスホイノシトール−４，５−ビホスホナート、ホスホイノシトール−４，５−ビスホスファート、ピロホスファート、ホスホエタノールアミン−ジエチレントリアミン−ペンタアセタート、ジニトロフェニル−ホスホエタノールアミン、ホスホグリセロール、及び、一般式：
2018527333.tif 000004
を有する部分からなる群より選択され、
式中、
Ｂ’及びＢ’’はそれぞれ独立して、硫黄及び酸素からなる群より選択され、かつ
Ｄ’及びＤ’’はそれぞれ独立して、水素、アルキル、アミノ置換アルキル、シクロアルキル、ホスホナート、及びチオホスホナートからなる群より選択され、かつ
Ｘ１、Ｘ２、・・・Ｘｎ−１はそれぞれ独立して、一般式ＩＩ：
2018527333.tif 000005
を有する飽和または不飽和の炭化水素であり、
式中、ｍは、１〜２６の整数であり、かつ
Ｚは、
2018527333.tif 000006
からなる群より選択され、ここで、Ｗは、酸素及び硫黄からなる群より選択され、
Ｘ１、Ｘ２、・・・Ｘｎ−１のうち少なくとも１つは、水素以外のＺを含み、
かつ、
Ｒ１、Ｒ’１、Ｒ２、・・・Ｒｎ−１、Ｒｎ、Ｒ’ｎのそれぞれ、Ｒ’’及びＲ’’’のそれぞれ、ならびにＲａ、Ｒ’ａ、Ｒｂ、Ｒ’ｂ、・・・Ｒｍ−１、Ｒ’ｍ−１、Ｒｍ、及びＲ’ｍのそれぞれは独立して、結合、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ハロ、トリハロメチル、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、ホスホナート、ホスファート、ホスフィニル、スルホニル、スルフィニル、スルホンアミド、アミド、カルボニル、チオカルボニル、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、Ｃ−カルバマート、Ｎ−カルバマート、Ｃ−チオカルボキシ、Ｓ−チオカルボキシ、及びアミノからなる群より選択されるか、あるいは代替的に、Ｒ１、Ｒ’１、Ｒ２、・・・Ｒｎ−１、Ｒｎ、及びＲ’ｎの少なくとも２つ、及び／またはＲａ、Ｒ’ａ、Ｒｂ、Ｒ’ｂ、・・・Ｒｍ−１、Ｒ’ｍ−１、Ｒｍ、及びＲ’ｍの少なくとも２つは、少なくとも１つの四員、五員、もしくは六員の芳香族環、ヘテロ芳香族環、脂肪族環、もしくはヘテロ脂環式環を形成する。本明細書中記載される実施形態のいずれかにおいて、酸化リン脂質は、任意の比の立体異性体混合物として存在することが可能であり、例えば、ＲまたはＳ異性体など１種類の鏡像異性体が実質的に濃くなったもの（例えば、鏡像異性体過剰率が少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、またはそれ以上である）、あるいは２種の鏡像異性体の混合物として（例えば、ラセミ混合物）、及び／または１種類のジアステレオマーが実質的に濃くなったもの（例えば、ジアステレオマー過剰率が少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、またはそれ以上である）として、あるいは２種以上のジアステレオマーの混合物として存在することが可能である。
【０１１２】
１つの実施形態において、本開示の方法のいずれかにおいて有用な酸化リン脂質は、式ＩＩＩ：
2018527333.tif 000007
による構造、またはその薬学上許容される塩、水和物、もしくは溶媒和物を有する。
【０１１３】
式ＩＩＩ中、ｎは、１〜４から選択される整数である。
【０１１４】
式ＩＩＩ中、Ｂ１、各Ｂ２、及びＢ３は独立して、酸素、硫黄、及びＮＲ４からなる群より選択され、ここで、Ｒ４は、水素、アルキル、シクロアルキル、アリール、及びアシルから選択される。
【０１１５】
式ＩＩＩ中、Ａ１及び各Ａ２は独立して、ＣＲｅＲｅｅ、ＣＲｅ＝ＣＲｅｅ、Ｃ＝Ｏ、及びＣ＝Ｓからなる群より選択され、ここで、Ｒｅ及びＲｅｅは独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、及びヘテロアリールから選択される。
【０１１６】
式ＩＩＩ中、Ｙは、水素、アシル、アルキル、アリール、シクロアルキル、カルボキシ、糖類、リン酸、ホスホリルコリン、ホスホリルエタノールアミン、ホスホリルセリン、ホスホリルカルジオリピン、ホスホリルイノシトール、エチルホスホコリン、ホスホリルメタノール、ホスホリルエタノール、ホスホリルプロパノール、ホスホリルブタノール、ホスホリルエタノールアミン−Ｎ−ラクトース、ホスホエタノールアミン−Ｎ−グルタル酸、ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（プロピレングリコール）］、ホスホイノシトール−４−ホスファート、ホスホイノシトール−４，５−ビスホスファート、ピロホスファート、ホスホエタノールアミン−ジエチレントリアミン−ペンタアセタート、ジニトロフェニル−ホスホエタノールアミン、ホスホグリセロール、及び、一般式：
2018527333.tif 000008
を有する部分からなる群より選択され、
ここで、
Ｂ及びＢａはそれぞれ独立して、硫黄及び酸素からなる群より選択され、かつ
Ｄ及びＤａは独立して、水素、アルキル、アミノアルキル、シクロアルキル、ホスホナート、及びチオホスホナートからなる群より選択される。
【０１１７】
式ＩＩＩ中、Ｘ１及び各Ｘ２は独立して、飽和または不飽和の直鎖炭化水素または分岐鎖炭化水素であり、Ｘ１及びＸ２のうち少なくとも１つは、
2018527333.tif 000009
からなる群より選択される酸化部分Ｚで置換され、ここで、Ｗは、酸素または硫黄であり、かつ、Ｒｄ及びＲｄｄは独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、及びヘテロアリールから選択される。
【０１１８】
式ＩＩＩの１つの実施形態において、Ｘ１及び各Ｘ２は独立して、一般式ＩＶ：
2018527333.tif 000010
を有する。
【０１１９】
式ＩＶ中、ｍは、１〜２６から選択される整数である。
【０１２０】
式ＩＶ中、Ｚは、
2018527333.tif 000011
からなる群より選択され、ここで、Ｗは、酸素または硫黄であり、かつ、Ｒｄ及びＲｄｄは独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、及びヘテロアリールから選択され、
Ｘ１及びＸ２のうち少なくとも１つは、水素以外のＺを含む。
【０１２１】
式ＩＩＩ及び式ＩＶ中、Ｒ１、Ｒ１ａ、各Ｒ２、Ｒ３、Ｒ３ａ、Ｒａ、Ｒａａ、各Ｒｂ、各Ｒｂｂ、Ｒｃ、及びＲｃｃは独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ハロ、トリハロメチル、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、ホスホナート、ホスファート、ホスフィニル、スルホニル、スルフィニル、スルホンアミド、アミド、カルボニル、チオカルボニル、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、Ｃ−カルバマート、Ｎ−カルバマート、Ｃ−チオカルボキシ、Ｓ−チオカルボキシ、及びアミノからなる群より選択され、Ｒ１、Ｒ１ａ、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ３ａのうち少なくとも２つは、結合して四員、五員、または六員の芳香族環、ヘテロ芳香族環、脂環式環、またはヘテロ脂環式環を形成してもよく、かつＲａ、Ｒａａ、Ｒｂ、Ｒｂｂ、Ｒｃ、及びＲｃｃのうち少なくとも２つは、結合して四員、五員、または六員の芳香族環、ヘテロ芳香族環、脂環式環、またはヘテロ脂環式環を形成してもよい。
【０１２２】
式ＩＩＩの１つの実施形態において、ｎは、１または２である。式ＩＩＩの別の実施形態において、ｎは、１である。
【０１２３】
式ＩＩＩの１つの実施形態において、Ｙは、水素、アシル、アルキル、アリール、シクロアルキル、カルボキシ、糖類、リン酸、ホスホリルコリン、ホスホリルエタノールアミン、ホスホリルセリン、ホスホリルカルジオリピン、ホスホリルイノシトール、エチルホスホコリン、ホスホリルメタノール、ホスホリルエタノール、ホスホリルプロパノール、ホスホリルブタノール、ホスホリルエタノールアミン−Ｎ−ラクトース、ホスホエタノールアミン−Ｎ−グルタル酸、ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（プロピレングリコール）］、ホスホイノシトール−４−ホスファート、ホスホイノシトール−４，５−ビスホスファート、ピロホスファート、ホスホエタノールアミン−ジエチレントリアミン−ペンタアセタート、ジニトロフェニル−ホスホエタノールアミン、及びホスホグリセロールからなる群より選択される。
【０１２４】
式ＩＩＩの別の実施形態において、Ｙは、水素、ホスホリルコリン、及びホスホリルエタノールアミンからなる群より選択される。
【０１２５】
式ＩＩＩの別の実施形態において、Ｙは、ホスホリルコリン、及びホスホリルエタノールアミンからなる群より選択される。
【０１２６】
式ＩＩＩの１つの実施形態において、Ｙは、ホスホリルコリンである。
【０１２７】
式ＩＩＩの１つの実施形態において、Ｚは、
2018527333.tif 000012
である。式ＩＩＩの別の実施形態において、Ｚは、カルボン酸基である。
【０１２８】
式ＩＩＩのさらなる実施形態において、ｎは１であり、かつＹはホスホリルコリンである。
【０１２９】
式ＩＩＩのさらなる実施形態において、Ｂ１、Ｂ２、及びＢ３は、それぞれ、酸素である。
【０１３０】
式ＩＩＩのさらなる実施形態において、ｎは１であり、Ｙはホスホリルコリンであり、かつＢ１、Ｂ２、及びＢ３は、それぞれ、酸素である。
【０１３１】
１つの実施形態において、本開示の方法のいずれかにおいて有用な酸化リン脂質は、式ＩＩＩａ：
2018527333.tif 000013
による構造、またはその薬学上許容される塩、水和物、もしくは溶媒和物を有する。
【０１３２】
式ＩＩＩａ中、Ｂ１、Ｂ２、及びＢ３は独立して、酸素及び硫黄から選択される。
【０１３３】
式ＩＩＩａ中、Ａ１及びＡ２は独立して、ＣＨ２、ＣＨ＝ＣＨ、Ｃ＝Ｏ、及びＣ＝Ｓからなる群より選択される。
【０１３４】
式ＩＩＩａ中、Ｙは、水素、アシル、アルキル、アリール、シクロアルキル、カルボキシ、糖類、リン酸、ホスホリルコリン、ホスホリルエタノールアミン、ホスホリルセリン、ホスホリルカルジオリピン、ホスホリルイノシトール、エチルホスホコリン、ホスホリルメタノール、ホスホリルエタノール、ホスホリルプロパノール、ホスホリルブタノール、ホスホリルエタノールアミン−Ｎ−ラクトース、ホスホエタノールアミン−Ｎ−グルタル酸、ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（プロピレングリコール）］、ホスホイノシトール−４−ホスファート、ホスホイノシトール−４，５−ビスホスファート、ピロホスファート、ホスホエタノールアミン−ジエチレントリアミン−ペンタアセタート、ジニトロフェニル−ホスホエタノールアミン、及びホスホグリセロールからなる群より選択される。
【０１３５】
式ＩＩＩａ中、Ｒ１、Ｒ１ａ、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ３ａは独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ハロ、トリハロメチル、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、ホスホナート、ホスファート、ホスフィニル、スルホニル、スルフィニル、スルホンアミド、アミド、カルボニル、チオカルボニル、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、Ｃ−カルバマート、Ｎ−カルバマート、Ｃ−チオカルボキシ、Ｓ−チオカルボキシ、及びアミノからなる群より選択され、Ｒ１、Ｒ１ａ、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ３ａのうち少なくとも２つは、結合して四員、五員、または六員の芳香族環、ヘテロ芳香族環、脂環式環、またはヘテロ脂環式環を形成してもよく、かつＲａ、Ｒａａ、Ｒｂ、Ｒｂｂ、Ｒｃ、及びＲｃｃのうち少なくとも２つは、結合して四員、五員、または六員の芳香族環、ヘテロ芳香族環、脂環式環、またはヘテロ脂環式環を形成してもよい。
【０１３６】
式ＩＩＩａ中、Ｘ１及びＸ２は独立して、飽和もしくは不飽和の直鎖炭化水素または分岐鎖炭化水素であり、Ｘ１及びＸ２のうち少なくとも１つは、
2018527333.tif 000014
から選択される式を有する酸化部分Ｚで置換され、ここで、Ｗは、酸素または硫黄であり、かつＲｄ及びＲｄｄは独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、及びヘテロアリールから選択される。
【０１３７】
式ＩＩＩａの１つの実施形態において、Ｘ１及びＸ２は独立して、式ＩＶａ：
2018527333.tif 000015
による構造を有する。
【０１３８】
式ＩＶａ中、ｍは、１〜２６から選択される整数である。
【０１３９】
式ＩＶａ中、Ｒａ、Ｒａａ、各Ｒｂ、各Ｒｂｂ、Ｒｃ、及びＲｃｃは独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ハロ、トリハロメチル、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、ホスホナート、ホスファート、ホスフィニル、スルホニル、スルフィニル、スルホンアミド、アミド、カルボニル、チオカルボニル、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、Ｃ−カルバマート、Ｎ−カルバマート、Ｃ−チオカルボキシ、Ｓ−チオカルボキシ、及びアミノからなる群より選択され、Ｒａ、Ｒａａ、Ｒｂ、Ｒｂｂ、Ｒｃ、及びＲｃｃのうち少なくとも２つは、結合して四員、五員、または六員の芳香族環、ヘテロ芳香族環、脂環式環、またはヘテロ脂環式環を形成してもよい。
【０１４０】
式ＩＶａ中、Ｚは、
2018527333.tif 000016
からなる群より選択され、ここで、Ｗは、酸素または硫黄であり、かつ、Ｒｄ及びＲｄｄは独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、及びヘテロアリールから選択され、Ｘ１及びＸ２のうち少なくとも１つは、水素以外のＺを含む。
【０１４１】
式ＩＩＩａの１つの実施形態において、Ｚは、
2018527333.tif 000017
である。式ＩＩＩａの別の実施形態において、Ｚは、カルボン酸基である。
【０１４２】
式ＩＩＩａの１つの実施形態において、Ｙは、水素、アシル、アルキル、アリール、シクロアルキル、カルボキシ、糖類、リン酸、ホスホリルコリン、ホスホリルエタノールアミン、ホスホリルセリン、ホスホリルカルジオリピン、ホスホリルイノシトール、エチルホスホコリン、ホスホリルメタノール、ホスホリルエタノール、ホスホリルプロパノール、ホスホリルブタノール、ホスホリルエタノールアミン−Ｎ−ラクトース、ホスホエタノールアミン−Ｎ−グルタル酸、ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（プロピレングリコール）］、ホスホイノシトール−４−ホスファート、ホスホイノシトール−４，５−ビスホスファート、ホスホエタノールアミン−ジエチレントリアミン−ペンタアセタート、ジニトロフェニル−ホスホエタノールアミン、及びホスホグリセロールからなる群より選択される。
【０１４３】
式ＩＩＩａの１つの実施形態において、Ｙは、水素、ホスホリルコリン、及びホスホリルエタノールアミンからなる群より選択される。
【０１４４】
式ＩＩＩａの別の実施形態において、Ｙは、ホスホリルコリン、及びホスホリルエタノールアミンからなる群より選択される。
【０１４５】
式ＩＩＩａの１つの実施形態において、Ｙは、ホスホリルコリンである。
【０１４６】
式ＩＩＩａのさらなる実施形態において、Ｂ１、Ｂ２、及びＢ３は、それぞれ、酸素である。
【０１４７】
式ＩＩＩａのさらなる実施形態において、Ｙは、ホスホリルコリンであり、Ｂ１、Ｂ２、及びＢ３は、それぞれ、酸素である。
【０１４８】
式ＩＩＩａの１つの実施形態において、酸化リン脂質は、式Ｖ：
2018527333.tif 000018
による構造を有し、
式中、Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３、Ａ１、Ａ２、Ｘ１、Ｘ２、及びＹは、式ＩＩＩａについて定義したとおりである。
【０１４９】
１つの実施形態において、式ＶのＢ１、Ｂ２、Ｂ３は、それぞれ、酸素であり、かつ酸化リン脂質は、式ＶＩ：
2018527333.tif 000019
による構造を有する。
【０１５０】
式ＶＩ中、Ａ１は、ＣＨ２、ＣＨ＝ＣＨ、及びＣ＝Ｏからなる群より選択される。１つの例において、式ＶＩのＡ１は、ＣＨ２である。
【０１５１】
式ＶＩ中、Ａ２は、存在しないか、またはＣＨ２である。
【０１５２】
式ＶＩ中、Ｘ１は、炭素原子を１〜３０個有するアルキルである。
【０１５３】
式ＶＩ中、Ｘ２は、
2018527333.tif 000020
であり、
ここで、
Ｅは、存在しないか、または、炭素原子を１〜２４個有するアルキル鎖であり、
Ｆは、水素、ヒドロキシ、アルキル、アルコキシ、ハライド、アセトキシ、及びアリールからなる群より選択され、かつ
Ｚは、
2018527333.tif 000021
からなる群より選択さ、ここで、Ｒｄは、Ｈ、アルキル、及びアリールから選択される。
【０１５４】
式ＶＩ中、Ｙは、水素、アルキル、アリール、リン酸、ホスホリルコリン、ホスホリルエタノールアミン、ホスホリルセリン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルカルジオリピン、ホスファチジルイノシトール、ホスホリルカルジオリピン、ホスホリルイノシトール、エチルホスホコリン、ホスホリルメタノール、ホスホリルエタノール、ホスホリルプロパノール、ホスホリルブタノール、ホスホリルエタノールアミン−Ｎ−ラクトース、ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（プロピレングリコール）］、ホスホイノシトール−４−ホスファート、ホスホイノシトール−４，５−ビスホスファート、ピロホスファート、ホスホエタノールアミン−ジエチレントリアミン−ペンタアセタート、ジニトロフェニル−ホスホエタノールアミン、ホスホグリセロールからなる群より選択される。
【０１５５】
式ＶＩの１つの実施形態において、Ｘ１は、炭素原子を１０〜３０個有するまたは炭素原子を８〜３０個有する、アルキルである。
【０１５６】
式ＶＩの１つの実施形態において、Ｅは、炭素原子を１〜１０個有するまたは炭素原子を１〜４個有する、アルキルである。
【０１５７】
式ＶＩの１つの実施形態において、Ｙは、ホスホリルコリンである。
【０１５８】
式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＩＩａ、Ｖ、及びＶＩの各炭素原子は、キラルまたは非キラル炭素原子であり、各キラル炭素原子は、Ｓ配置を有することもＲ配置を有することも可能である。
【０１５９】
１つの好適な実施形態において、酸化リン脂質は、１−ヘキサデシル−２−（４’−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリンである。別の好適な実施形態において、酸化リン脂質は、（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（４’−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンである。
【０１６０】
１つの好適な実施形態において、酸化リン脂質は、
2018527333.tif 000022
、またはその薬学上許容される塩である。
【０１６１】
１つの好適な実施形態において、酸化リン脂質は、
2018527333.tif 000023
、またはその薬学上許容される塩である。
【０１６２】
本明細書中記載される小分子ＭＯＳＰＤ２阻害物質は、本明細書中記載される方法のどれにおいても、単一作用物質として、単独で使用することもできるし、別の作用物質（例えば、別のＭＯＳＰＤ２阻害物質または抗がん剤）と併用して使用することもできる。
【０１６３】
ＶＢ−２０１は、インビトロでヒト単球化学走性を、及びケモカイン受容体の下流で活性化されるシグナル伝達経路を阻害する。対照的に、ＶＢ−２０１の誘導体であるＶＢ−２２１は、ケモカイン誘導型シグナル伝達及びヒト単球の遊走を阻害しない。卵白アルブミン標識化ＶＢ−２０１が、ＭＯＳＰＤ２と結合してヒトＣＤ１４単球の細胞溶解液からＭＯＳＰＤ２を沈殿させることもわかった。さらに、ヘマグルチニン（ＨＡ）タグ付ヒトＭＯＳＰＤ２を形質移入しＨＡで陽性染色されたＨＥＫ２９３細胞は、卵白アルブミン標識化ＶＢ−２０１への強い結合を示したが、卵白アルブミン標識化ＶＢ−２２１については示さなかった。これらの実験及び他のものから、１）ＶＢ−２０１は、ＭＯＳＰＤ２と結合する、２）ＶＢ−２０１は、細胞化学走性及び化学走性が仲介する下流経路を阻害する、ならびに３）ＶＢ−２０１の添加は、ＭＯＳＰＤ２のサイレンシングと同じシグナル伝達効果をもたらすことが実証される。
【０１６４】
本明細書中記載される実施形態のいずれかにおいて、有用な小分子ＭＯＳＰＤ２阻害物質として、ＶＢ−２２１と比較した場合にＭＯＳＰＤ２（例えば、単球またはがん細胞の細胞表面のヒトＭＯＳＰＤ２）のより強力な阻害物質であるもの、例えば、ＶＢ−２２１のＩＣ５０値よりも低いＩＣ５０値を有するものが挙げられる。より好ましくは、有用な小分子ＭＯＳＰＤ２阻害物質として、ＶＢ−２０１と比較した場合にＭＯＳＰＤ２（例えば、単球またはがん細胞の細胞表面のヒトＭＯＳＰＤ２）と同等またはそれより強力な阻害物質であるもの、例えば、ＶＢ−２０１よりも低いＩＣ５０値を有するものが挙げられる。当業者には当然のことながら、ＩＣ５０値は、所定の生体プロセス（またはプロセスの要素、すなわち、酵素、細胞、細胞受容体、または微生物）を半分阻害するために特定の薬物または他の物質（阻害物質）がどのくらい必要かを示す。ＩＣ５０値を求める方法は、当該分野で既知である。
【０１６５】
小分子ＭＯＳＰＤ２阻害物質（本明細書中記載されるとおり）が医薬組成物に含まれて、単一作用物質として単独で、または他の作用物質と併用で、対象に投与される場合、小分子ＭＯＳＰＤ２阻害物質（例えば、ＶＢ−２０１）は、その投与がＭＯＳＰＤ２（例えば、ヒトＭＯＳＰＤ２）の１種または複数の作用（例えば、ＭＯＳＰＤ２発現、がん細胞遊走、腫瘍成長と関連した単球遊走（例えば、腫瘍関連マクロファージの存在）、ケモカインシグナル伝達経路、成長因子シグナル伝達経路、ＥＧＦ受容体リン酸化、ＥＲＫリン酸化、ＡＫＴリン酸化、及び／またはＦＡＫリン酸化）の少なくとも１０％（例えば、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、またはそれ以上）阻害を引き起こす量で存在する。実施形態によっては、小分子ＭＯＳＰＤ２阻害物質のヒト対象への投与は、ヒトＭＯＳＰＤ２の１種または複数の作用の少なくとも１０％（例えば、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、またはそれ以上）阻害を引き起こす。１つの態様において、小分子ＭＯＳＰＤ２阻害物質の投与は、ＭＯＳＰＤ２の１種または複数の作用、例えば、がん細胞遊走の調節、腫瘍成長と関連した単球遊走、腫瘍関連マクロファージの存在、ケモカインシグナル伝達経路、成長因子シグナル伝達経路、ＥＧＦ受容体リン酸化、ＥＲＫリン酸化、ＡＫＴリン酸化、及び／またはＦＡＫリン酸化の、約１０％〜１００％、約１０％〜約９９％、約１０％〜約９５％、約１０％〜約９０％、約１０％〜約８５％、約１０％〜約８０％、約１０％〜約７０％、約２０％〜約９９％、約２０％〜約９５％、約２０％〜約９０％、約２０％〜約８５％、約２０％〜約８０％、約３０％〜約９５％、約３０％〜約９０％、約３０％〜約８５％、約３０％〜約８０％、約４０％〜約９５％、約４０％〜約９０％、約４０％〜約８５％、約４０％〜約８０％、約５０％〜約９５％、約５０％〜約９０％、約５０％〜約８５％、約５０％〜約８０％、約６０％〜約９５％、約６０％〜約９０％、約６０％〜約８５％、または約６０％〜約８０％阻害を引き起こす。好ましくは、小分子ＭＯＳＰＤ２阻害物質は、ＶＢ−２０１である。
【０１６６】
実施形態によっては、所定のタンパク質の阻害物質は、そのタンパク質に、及び／またはそのタンパク質をコードするオリゴヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）に結合することにより、そのタンパク質を阻害する。
【０１６７】
他の実施形態において、ＭＯＳＰＤ２阻害物質は、（ｉ）ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドに特異的に結合する単離した結合分子であるか、（ｉｉ）ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドのリガンドに特異的に結合する単離した結合分子であるか、（ｉｉｉ）ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドに対して産生された抗血清であるか、（ｉｖ）可溶性ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドであるか、または（ｖ）ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドの細胞外ドメインを含む、本質的に前記細胞外ドメインからなる、もしくは前記細胞外ドメインからなる、可溶性ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドである。
【０１６８】
さらに他の実施形態において、阻害物質は、ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドに特異的に結合する抗体である。他の実施形態において、阻害物質は、ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドに特異的に結合する抗体の抗原結合断片である。他の実施形態において、抗体は、ポリクローナル、モノクローナル、マウス、ヒト、ヒト化、キメラ、または一本鎖抗体である。他の実施形態において、抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｓｄＦｖ断片、ＶＨドメイン、またはＶＬドメインである。
【０１６９】
実施形態によっては、ＭＯＳＰＤ２（例えば、ヒトＭＯＳＰＤ２）に特異的に結合する本明細書中記載される抗体またはその抗原結合断片は、ＶＨ、ＶＬ、またはＶＨ及びＶＬを含む。他の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、定常領域を含む。
【０１７０】
実施形態によっては、ＶＨ、ＶＬ、またはＶＨ及びＶＬは、１つまたは複数の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。実施形態によっては、ＶＨは、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３、またはそれらの任意の組み合わせを含む。実施形態によっては、ＶＬは、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３、またはそれらの任意の組み合わせを含む。
【０１７１】
実施形態によっては、ＶＨ、ＶＬ、またはＶＨ及びＶＬは、１つまたは複数のフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。実施形態によっては、ＶＨは、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、ＦＲ４、またはそれらの任意の組み合わせを含む。実施形態によっては、ＶＬは、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、ＦＲ４、またはそれらの任意の組み合わせを含む。
【０１７２】
特定の実施形態において、ＭＯＳＰＤ２（例えば、ヒトＭＯＳＰＤ２）に特異的に結合する本明細書中記載される抗体またはその抗原結合断片は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＨ、ならびにＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１７３】
他の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、定常領域を含む。実施形態によっては、軽鎖の定常領域は、ヒトカッパ軽鎖定常領域またはヒトラムダ軽鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。実施形態によっては、重鎖の定常領域は、ヒトγ重鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。限定のないヒト定常領域配列の例が報告されてきており、例えば、米国特許第５，６９３，７８０号、及びＫａｂａｔ，ＥＡ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）を参照。実施形態によっては、定常領域アミノ酸配列は、天然ヒト配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％配列同一性があるように修飾されている（例えば、１つ、２つ、またはそれより多いアミノ酸置換）。別の態様において、本明細書中提供されるのは、ＭＯＳＰＤ２のエピトープ（例えば、ヒトＭＯＳＰＤ２のエピトープ）を認識するまたはこれに結合する抗体またはその抗原結合断片である。別の態様において、本明細書中提供されるのは、本明細書中記載される抗体（例えば、実施例１または８に記載される抗体）と同一のＭＯＳＰＤ２（例えば、ヒトＭＯＳＰＤ２）のエピトープまたはオーバーラッピングエピトープを認識するまたはこれに結合する抗体またはその抗原結合断片である。別の態様において、抗体またはその抗原結合断片は、ＭＯＳＰＤ２のエピトープを複数種（例えば、２種、３種、４種、５種、または６種のエピトープ）認識する。
【０１７４】
ある特定の実施形態において、ＭＯＳＰＤ２のエピトープは、文献に記載される１つまたは複数の方法、例えば、ＮＭＲ分光測定、Ｘ線回折結晶構造解析、ＥＬＩＳＡアッセイ、質量分析（例えば、ＭＡＬＤＩ質量分析）と合わせた水素／重水素交換、アレイに基づくオリゴペプチドスキャニングアッセイ、及び／または変異誘発マッピング（例えば、部位指向性変異誘発マッピング）などにより決定することができる。Ｘ線結晶構造解析の場合、結晶化は、文献に記載される方法を用いて達成することができる（例えば、Ｇｉｅｇｅ  Ｒ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  Ｄ  Ｂｉｏｌ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  ５０（Ｐｔ  ４）：３３９−３５０、ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ  Ａ（１９９０）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  １８９：１−２３、Ｃｈａｙｅｎ  ＮＥ（１９９７）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ５：１２６９−１２７４、ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ  Ａ（１９７６）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２５１：６３００−６３０３）。抗体：抗原結晶は、周知のＸ線回折技法を用いて調べることができ、Ｘ−ＰＬＯＲ（Ｙａｌｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，１９９２、配布はＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎｓ，Ｉｎｃ．による、例えば、Ｍｅｔｈ  Ｅｎｚｙｍｏｌ（１９８５）ｖｏｌｕｍｅｓ  １１４  ＆  １１５，ｅｄｓ  Ｗｙｃｋｏｆｆ  ＨＷ  ｅｔ  ａｌ．、米国特許出願第２００４／００１４１９４号）、及びＢＵＳＴＥＲ（Ｂｒｉｃｏｇｎｅ  Ｇ（１９９３）Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  Ｄ  Ｂｉｏｌ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  ４９（Ｐｔ  １）：３７−６０、Ｂｒｉｃｏｇｎｅ  Ｇ（１９９７）Ｍｅｔｈ  Ｅｎｚｙｍｏｌ  ２７６Ａ：３６１−４２３，ｅｄ  Ｃａｒｔｅｒ  ＣＷ、Ｒｏｖｅｒｓｉ  Ｐ  ｅｔ  ａｌ．，（２０００）Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  Ｄ  Ｂｉｏｌ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  ５６（Ｐｔ１０）：１３１６−１３２３を参照）などのコンピューターソフトウェアを用いて精緻化することができる。変異誘発マッピング試験は、文献に記載される方法を用いて達成することができる。例えば、Ｃｈａｍｐｅ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９５）上記、及びアラニンスキャニング変異誘発技法を含む変異誘発技法の説明についてＣｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ＢＣ  ＆  Ｗｅｌｌｓ  ＪＡ（１９８９）上記、を参照。特定の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片のエピトープは、アラニンスキャニング変異誘発試験を用いて決定される。抗体のエピトープ特性決定は、Ｒａｖｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２８８：１９７６０−１９７７２（２０１３）に提示される方法によっても決定されることができる。
【０１７５】
また、ＭＯＳＰＤ２（例えば、ヒトＭＯＳＰＤ２）の同一もしくは重複エピトープを認識またはそれに結合する複数抗体あるいはそれらの抗原結合断片は、免疫アッセイなどの定法技法を用いて、例えば、１つの抗体が持つ、別の抗体と標的抗原との結合を遮断する能力の表示、すなわち、競合結合アッセイにより、同定することができる。競合結合は、試験対象の免疫グロブリンが、参照抗体と共通抗原、例えばＭＯＳＰＤ２などとの特異的結合を阻害するアッセイにおいて、決定することができる。複数種類の競合結合アッセイが、記載されてきており、例えば、固相直接または間接放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）、固相直接または間接酵素免疫測定（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合アッセイ（Ｓｔａｈｌｉ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８３）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ  ９：２４２−２５３を参照）、固相直接ビオチンアビジンＥＩＡ（Ｋｉｒｋｌａｎｄ  ＴＮ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８６）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １３７：３６１４−９を参照）、固相直接標識化アッセイ、固相直接標識化サンドイッチアッセイ（Ｈａｒｌｏｗ  Ｅ  ＆  Ｌａｎｅ  Ｄ，（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓを参照）、Ｉ−１２５標識を用いる固相直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｒｅｌ  ＧＡ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２５（１）：７−１５を参照）、固相直接ビオチンアビジンＥＩＡ（Ｃｈｅｕｎｇ  ＲＣ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９０）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  １７６：５４６−５２）、及び直接標識化ＲＩＡ（Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒ  Ｇ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９０）Ｓｃａｎｄ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３２：７７−８２）がある。典型的には、そのようなアッセイは、固体表面または細胞に結合して保持されている精製抗原（例えば、ヒトＭＯＳＰＤ２などのＭＯＳＰＤ２）、未標識の試験免疫グロブリン、及び標識化参照免疫グロブリンの使用を含む。競合阻害は、試験免疫グロブリンの存在下で、固体表面または細胞と結合した標識の量を求めることにより、測定することができる。通常、試験免疫グロブリンは過剰に存在する。通常、競合抗体が過剰に存在する場合、競合抗体は、参照抗体と共通抗原との特異的結合を、少なくとも５０〜５５％、５５〜６０％、６０〜６５％、６５〜７０％、７０〜７５％、またはそれ以上阻害する。競合結合アッセイは、標識化抗原または標識化抗体いずれかを用いる多数の異なる様式で構成することができる。このアッセイの一般的形式では、抗原は９６ウェルプレートに固定される。次いで、未標識抗体が持つ標識化抗体と抗原の結合を遮断する能力を、放射性標識または酵素標識を用いて測定する。さらなる詳細について、例えば、Ｗａｇｅｎｅｒ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８３）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １３０：２３０８−２３１５、Ｗａｇｅｎｅｒ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８４）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ６８：２６９−２７４、Ｋｕｒｏｋｉ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９０）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ５０：４８７２−４８７９、Ｋｕｒｏｋｉ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９２）Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｎｖｅｓｔ  ２１：５２３−５３８、Ｋｕｒｏｋｉ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９２���Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  １１：３９１−４０７及びＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｅｄ  Ｈａｒｌｏｗ  Ｅ  ＆  Ｌａｎｅ  Ｄ  ｅｄｉｔｏｒｓ上記，ｐｐ．３８６−３８９を参照。
【０１７６】
１つの実施形態において、表面プラズモン共鳴（ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標））を用いて、例えば、Ａｂｄｉｃｈｅ  ＹＮ  ｅｔ  ａｌ．，（２００９）Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ３８６：１７２−１８０に記載されるものなどの「タンデムアプローチ」により競合アッセイを行うが、これによれば、ＭＯＳＰＤ２抗原をチップ、例えば、ＣＭ５センサーチップなどの表面に固定し、次いで抗ＭＯＳＰＤ２抗体を、チップ全体に行き渡らせる。抗体またはその抗原結合断片が、本明細書中記載される抗ＭＯＳＰＤ２抗体またはその抗原結合断片と競合するかどうかを判定するため、抗ＭＯＳＰＤ２抗体またはその抗原結合断片を最初にチップ表面全体に行き渡らせて飽和させ、次いで、競合する可能性がある抗体を加える。次いで、競合抗体の結合を、非競合対照との比較で決定して定量することができる。
【０１７７】
ある特定の態様において、競合ＥＬＩＳＡアッセイなどの競合結合アッセイにおいて２種の抗体が、同一または立体的に重複するエピトープを認識する場合、競合結合アッセイを用いて、抗体またはその抗原結合断片が、参照抗体としての別の抗体、例えば、本質的に同一エピトープすなわち重複エピトープと結合する抗体により、例えば容量依存式に、競合的に遮断されるかどうか判定することができ、アッセイは、標識化抗原または標識化抗体いずれかを用いて、あらゆる異なる様式で構成することができる。特定の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、本明細書中記載される抗体（例えば、実施例１または８のもの）、またはそのキメラもしくはＦａｂ抗体、または本明細書中記載される抗体（例えば、実施例１または８のもの）のＶＨ  ＣＤＲ及びＶＬ  ＣＤＲを含む抗体を用いる競合結合アッセイで試験することができる。
【０１７８】
したがって、ある特定の態様において、本明細書中提供されるのは、当業者に既知のまたは本明細書中記載されるアッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡ競合アッセイ、表面プラズモン共鳴、またはＳｃａｔｃｈａｒｄ分析）を用いて決定されるとおりの、ＭＯＳＰＤ２（例えば、ヒトＭＯＳＰＤ２）への結合に関して本明細書中記載される抗体（例えば、実施例１または８のもの）と競合する（例えば、容量依存式で）抗体またはその抗原結合断片である。
【０１７９】
実施形態によっては、本発明の抗ＭＯＳＰＤ２抗体またはその抗原結合断片は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１（アミノ酸残基１位〜５１８位）によって付番されたＭＯＳＰＤ２の以下のアミノ酸領域（エピトープ）：５０８位〜５１７位、５０１位〜５１４位、２３３位〜２４１位、５０９位〜５１７位、２１２位〜２２１位、１３位〜２４位、５０５位〜５１７位、５０５位〜５１４位、８９位〜１００位、５０６位〜５１７位、２３３位〜２４５位、５０４位〜５１４位、１２８位〜１３６位、２１８位〜２２６位、１５位〜２４位、８３位〜９６位、４２位〜５０位、４６２位〜４７４位、３４０位〜３５１位、５０４位〜５１７位、４６２位〜４７０位、３２７位〜３３７位、２１位〜３２位、２１７位〜２２６位、５１０位〜５１７位、１７８位〜１９０位、４９７位〜５０９位、５０４位〜５１６位、６４位〜７７位、５０４位〜５１５位、１４７位〜１５９位、５０３位〜３１５位、８８位〜９７位、２０８位〜２１８位、１７８位〜１９１位、５０２位〜５１５位、５０３位〜５１６位、４９７位〜５０５位、５００位〜５０９位、１８９位〜２０２位、１８９位〜１９７位、５０５位〜５１６位、１位〜６３位、８２位〜２３９位、９３位〜２３４位、３２７位〜４４５位、３２７位〜４３１位、及び４９７位〜５１７位の１つまたは複数に特異的に結合する。
【０１８０】
実施形態によっては、本発明の抗ＭＯＳＰＤ２抗体またはその抗原結合断片は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１（アミノ酸残基１位〜５１８位）によって付番されたＭＯＳＰＤ２の以下のアミノ酸領域（エピトープ）：約５０８位〜約５１７位、約５０１位〜約５１４位、約２３３位〜約２４１位、約５０９位〜約５１７位、約２１２位〜約２２１位、約１３位〜約２４位、約５０５位〜約５１７位、約５０５位〜約５１４位、約８９位〜約１００位、約５０６位〜約５１７位、約２３３位〜約２４５位、約５０４位〜約５１４位、約１２８位〜約１３６位、約２１８位〜約２２６位、約１５位〜約２４位、約８３位〜約９６位、約４２位〜約５０位、約４６２位〜約４７４位、約３４０位〜約３５１位、約５０４位〜約５１７位、約４６２位〜約４７０位、約３２７位〜約３３７位、約２１位〜約３２位、約２１７位〜約２２６位、約５１０位〜約５１７位、約１７８位〜約１９０位、約４９７位〜約５０９位、約５０４位〜約５１６位、約６４位〜約７７位、約５０４位〜約５１５位、約１４７位〜約１５９位、約５０３位〜約５１５位、約８８位〜約９７位、約２０８位〜約２１８位、約１７８位〜約１９１位、約５０２位〜約５１５位、約５０３位〜約５１６位、約４９７位〜約５０５位、約５００位〜約５０９位、約１８９位〜約２０２位、約１８９位〜約１９７位、約５０５位〜約５１６位、約１位〜約６３位、約８２位〜約２３９位、約９３位〜約２３４位、約３２７位〜約４４５位、約３２７位〜約４３１位、及び約４９７位〜約５１７位の１つまたは複数に特異的に結合する。
【０１８１】
実施形態によっては、本発明の抗ＭＯＳＰＤ２抗体またはその抗原結合断片は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１（アミノ酸残基１位〜５１８位）によって付番されたＭＯＳＰＤ２の以下のアミノ酸領域（エピトープ）：約５０５位〜約５１５位、約５００位〜約５１５位、約２３０位〜約２４０位、約５１０位〜約５２０位、約２１０位〜約２２０位、約１５位〜約２５位、約５０５位〜約５２０位、約５０５位〜約５１５位、約９０位〜約１００位、約５０５位〜約５２５位、約２３０位〜約２４５位、約５０５位〜約５１０位、約１３０位〜約１４０位、約２２０位〜約２３０位、約１５位〜約３０位、約８０位〜約９５位、約４０位〜約５０位、約４６０位〜約４７５位、約３４０位〜約３５０位、約５００位〜約５１５位、約４６０位〜約４７０位、約３２５位〜約３３５位、約２０位〜約３５位、約２１５位〜約２２５位、約５１０位〜約５２０位、約１７５位〜約１９０位、約５００位〜約５１０位、約５０５位〜約５３０位、約６０位〜約７５位、約５００位〜約５２０位、約１４５位〜約１６０位、約５０２位〜約５１５位、約８５位〜約１００位、約２０５位〜約２２０位、約１７５位〜約１９０位、約５００位〜約５０５位、約５００位〜約５２５位、約４９５位〜約５０５位、約４９５位〜約５１０位、約１９０位〜約２００位、約１９０位〜約１９８位、約５０２位〜約５１５位、約１位〜約６０位、約８０位〜約２４０位、約９０位〜約２３５位、約３３０位〜約４４５位、約３３０位〜約４３０位、及び約４９５位〜約５１５位の１つまたは複数に特異的に結合する。
【０１８２】
実施形態によっては、本発明の抗体またはその抗原結合断片は、約１０−６Ｍ〜約１０−１２Ｍ、またはそれらの値のうちの任意の範囲（例えば、約１０−７Ｍ〜約１０−１２、１０−８Ｍ〜約１０−１２Ｍ、約１０−９Ｍ〜約１０−１２Ｍ、約１０−１０Ｍ〜約１０−１２Ｍ、約１０−１１Ｍ〜約１０−１２Ｍ、約１０−６Ｍ〜約１０−１１Ｍ、約１０−７Ｍ〜約１０−１１Ｍ、約１０−８Ｍ〜約１０−１１Ｍ、約１０−９Ｍ〜約１０−１１Ｍ、約１０−１０Ｍ〜約１０−１１Ｍ、約１０−６Ｍ〜約１０−１０Ｍ、約１０−７Ｍ〜約１０−１０Ｍ、約１０−８Ｍ〜約１０−１０Ｍ、約１０−９Ｍ〜約１０−１０Ｍ、約１０−６Ｍ〜約１０−９Ｍ、約１０−７Ｍ〜約１０−９Ｍ、約１０−８Ｍ〜約１０−９Ｍ、約１０−６Ｍ〜約１０−８Ｍ、または約１０−７Ｍ〜約１０−８Ｍ）の抗体抗原平衡解離定数（ＫＤ）でＭＯＳＰＤ２と結合する。他の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、ＫＤが約１０−６Ｍ、約１０−７Ｍ、約１０−８Ｍ、約１０−９Ｍ、約１０−１０Ｍ、約１０−１１Ｍ、または約１０−１２Ｍである。実施形態によっては、抗体または抗原結合断片は、ＭＯＳＰＤ２上の１つまたは複数のエピトープに結合する。実施形態によっては、ＫＤは、Ｓｃａｔｃｈａｒｄ分析、表面プラズモン共鳴、または本明細書中記載される他の方法により、実施形態によっては、３７℃で求められる。
【０１８３】
実施形態によっては、本発明の抗体または抗原結合断片は、約１０３１／Ｍｓ〜約１０６１／Ｍｓ、またはそれらの値のうちの任意の範囲（例えば、約１０３１／Ｍｓ〜約１０５１／Ｍｓ、約１０４１／Ｍｓ〜約１０５１／Ｍｓ、約１０４１／Ｍｓ〜約１０６１／Ｍｓ、約１０５１／Ｍｓ〜約１０６１／Ｍｓ、または約１０３１／Ｍｓ〜約１０４１／Ｍｓ）のＫｏｎでＭＯＳＰＤ２に結合する。他の実施形態において、抗体または抗原結合断片は、Ｋｏｎが約１０３１／Ｍｓ、約１０４１／Ｍｓ、約１０５１／Ｍｓ、または約１０６１／Ｍｓである。
【０１８４】
実施形態によっては、本発明の抗体または抗原結合断片は、約１０−３１／ｓ〜約１０−６１／ｓ、またはそれらの値のうちの任意の範囲（例えば、約１０−３１／ｓ〜約１０−５１／ｓ、約１０−４１／ｓ〜約１０−５１／ｓ、約１０−４１／ｓ〜約１０−６１／ｓ、約１０−５１／ｓ〜約１０−６１／ｓ、または約１０−３１／ｓ〜約１０−４１／ｓ）のＫｏｆｆでＭＯＳＰＤ２に結合する。他の実施形態において、抗体または抗原結合断片は、Ｋｏｆｆが約１０−３１／ｓ、約１０−４１／ｓ、約１０−５１／ｓ、または約１０−６１／ｓである。
【０１８５】
さらに他の実施形態において、ＭＯＳＰＤ２の阻害物質は、ＲＮＡｉ、ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、アンチセンスＤＮＡ、デコイ分子、デコイＤＮＡ、二本鎖ＤＮＡ、一本鎖ＤＮＡ、複合体化ＤＮＡ、カプセル化ＤＮＡ、ウイルスＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、ネイキッドＲＮＡ、カプセル化ＲＮＡ、ウイルスＲＮＡ、二本鎖ＲＮＡ、ＲＮＡ干渉を生じさせることができる分子、またはそれらの組み合わせである。実施形態によっては、阻害物質は、ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列にハイブリダイズする。実施形態によっては、ハイブリダイゼーションは、ストリンジェントな条件下または高度にストリンジェントな条件下のものである。
【０１８６】
実施形態によっては、阻害物質は、クラスター化した規則的な配置の短い回文配列リピートであるＣＲＩＳＰＲ−ＣＡＳ９システムである。
【０１８７】
さらなる実施形態において、ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１〜４のいずれか１つと少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％同一の配列を有する。他の実施形態において、ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１〜４のいずれか１つと少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一の配列を有する。他の実施形態において、ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１〜４のいずれか１つと約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％同一の配列を有する。他の実施形態において、ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１〜４のいずれか１つと７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一の配列を有する。他の実施形態において、ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１〜４のいずれか１つと約７５％〜１００％同一の、またはそれらの値のうちの任意の範囲、例えば、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１〜４のいずれか１つと約８０％〜１００％同一、約８５％〜１００％同一、約９０％〜１００％同一、約９５％〜１００％同一、約９６％〜１００％同一、約９７％〜１００％同一、約９８％〜１００％同一、約９９％〜約１００％同一、約７５％〜約９９％同一、約８０％〜約９９％同一、約８５％〜約９９％同一、約９０％〜約９９％同一、約９５％〜約９９％同一、約９６％〜約９９％同一、約９７％〜約９９％同一、約９８％〜約９９％同一、約９９％〜約１００％同一、約７５％〜約９５％同一、約８０％〜約９５％同一、約８５％〜約９５％同一、または約９０％〜約９５％同一の配列を有する。
【０１８８】
本発明のさらなる実施形態において、ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５〜８のいずれか１つと少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％同一のポリヌクレオチド配列によりコードされる。他の実施形態において、ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５〜８のいずれか１つと少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一のポリヌクレオチド配列によりコードされる。他の実施形態において、ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５〜８のいずれか１つと約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％同一のポリヌクレオチド配列によりコードされる。他の実施形態において、ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１〜４のいずれか１つと７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一のポリヌクレオチド配列によりコードされる。他の実施形態において、ＭＯＳＰＤ２ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５〜８のいずれか１つと約７５％〜１００％同一の、またはそれらの値のうちの任意の範囲、例えば、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５〜８のいずれか１つと約８０％〜１００％同一性、約８５％〜１００％同一性、約９０％〜１００％同一性、約９５％〜１００％同一性、約９６％〜１００％同一性、約９７％〜１００％同一性、約９８％〜１００％同一性、約９９％〜約１００％同一性、約７５％〜約９９％同一性、約８０％〜約９９％同一性、約８５％〜約９９％同一性、約９０％〜約９９％同一性、約９５％〜約９９％同一性、約９６％〜約９９％同一性、約９７％〜約９９％同一性、約９８％〜約９９％同一性、約９９％〜約１００％同一性、約７５％〜約９５％同一性、約８０％〜約９５％同一性、約８５％〜約９５％同一性、または約９０％〜約９５％同一のポリヌクレオチド配列によりコードされる。
【０１８９】
本明細書中記載される実施形態のいずれかにおいて、ＭＯＳＰＤ２の阻害物質は、がん細胞、例えば、ヒトがん細胞により発現するＭＯＳＰＤ２の阻害物質であることが可能である。排他的ではないがん細胞の種類の例として、膀胱がん、乳がん、結腸がん、直腸がん、腎臓がん、肝臓がん、肺がん、食道がん、胆嚢がん、卵巣がん、膵がん、胃がん、子宮頸がん、甲状腺がん、前立腺がん、皮膚がん、造血器がん、間葉系起源のがん、中枢及び末梢神経系のがん、子宮内膜がん、頭頸部がん、膠芽細胞腫、及び悪性腹水の細胞が挙げられる。実施形態によっては、がんは、小細胞肺がんまたは非小細胞肺がんである。実施形態によっては、がんは、皮膚がん、例えば、扁平上皮がん、基底細胞がん、黒色腫、隆起性皮膚線維肉腫、メルケル細胞がん、カポジ肉腫、角化棘細胞腫、紡錘細胞腫瘍、脂腺がん、微小嚢胞性付属器がん、乳房のパジェット病、異型線維黄色腫、平滑筋肉腫、または血管肉腫である。実施形態によっては、がんは、リンパ系の造血器がん、例えば、白血病、急性リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、毛様細胞リンパ腫、またはバーキットリンパ腫である。実施形態によっては、がんは、骨髄系の造血器がん、例えば、線維肉腫、横紋筋肉腫、軟部組織肉腫、または骨肉腫である。実施形態によっては、がんは、中枢神経系または末梢神経系のがん、例えば、星状細胞腫、神経芽細胞腫、神経膠腫、またはシュワン細胞腫である。実施形態によっては、がんは、肛門がん、骨がん、消化管間質がん、妊娠性絨毛性疾患、ホジキンリンパ腫、カポジ肉腫、角化棘細胞腫、悪性中皮腫、多中心性キャッスルマン病、多発性骨髄腫及び他の形質細胞新生物、骨髄増殖性新生物、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、骨肉腫、卵巣がん、卵管がん、または原発性腹膜がん、陰茎がん、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、精上皮腫、軟部組織肉腫、胃がん、精巣がん、奇形がん腫、甲状腺濾胞性がん、膣がん、外陰部がん、ウィルムス腫瘍及び他の小児腎臓がん、ならびに色素性乾皮症である。実施形態によっては、がんは、膀胱がん、脳がん（例えば、大脳星状細胞腫）、乳がん、結腸がん（例えば、結腸腺がん）、食道がん（例えば、食道腺がん）、肺がん、皮膚がん（例えば、黒色腫）、舌がん（例えば、頭頸部（舌）細胞がん）、腎臓がん（例えば、腎明細胞がん）、または肝がん（例えば、肝細胞がん）である。
【０１９０】
医薬組成物
本発明の他の実施形態は、ＭＯＳＰＤ２、例えば、がん細胞により発現するＭＯＳＰＤ２の阻害物質を含む医薬組成物に関する。実施形態によっては、医薬組成物は、ＭＯＳＰＤ２、例えば、がん細胞により発現するＭＯＳＰＤ２の阻害物質と、薬学上許容される担体とを含む。他の実施形態において、医薬組成物は、ＭＯＳＰＤ２、例えば、がん細胞により発現するＭＯＳＰＤ２の阻害物質の治療的有効量を含む。ＭＯＳＰＤ２の阻害物質の例は、本明細書中記載される。がんの種類として適切なものも、明細書中記載される。
【０１９１】
他の実施形態において、ＭＯＳＰＤ２の阻害物質は、抗体または抗体の抗原結合断片であり、治療的有効量は、約１μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、またはそれらの値のうちの任意の範囲（例えば、約２μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、約３μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、約４μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、約５μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、約６μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、約７μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、約８μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、約９μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、約１μｇ／ｍｌ〜約９μｇ／ｍｌ、約２μｇ／ｍｌ〜約９μｇ／ｍｌ、約３μｇ／ｍｌ〜約９μｇ／ｍｌ、約４μｇ／ｍｌ〜約９μｇ／ｍｌ、約５μｇ／ｍｌ〜約９μｇ／ｍｌ、約６μｇ／ｍｌ〜約９μｇ／ｍｌ、約７μｇ／ｍｌ〜約９μｇ／ｍｌ、約８μｇ／ｍｌ〜約９μｇ／ｍｌ、約１μｇ／ｍｌ〜約８μｇ／ｍｌ、約２μｇ／ｍｌ〜約８μｇ／ｍｌ、約３μｇ／ｍｌ〜約８μｇ／ｍｌ、約４μｇ／ｍｌ〜約８μｇ／ｍｌ、約５μｇ／ｍｌ〜約８μｇ／ｍｌ、約６μｇ／ｍｌ〜約８μｇ／ｍｌ、約７μｇ／ｍｌ〜約８μｇ／ｍｌ、約１μｇ／ｍｌ〜約７μｇ／ｍｌ、約２μｇ／ｍｌ〜約７μｇ／ｍｌ、約３μｇ／ｍｌ〜約７μｇ／ｍｌ、約４μｇ／ｍｌ〜約７μｇ／ｍｌ、約５μｇ／ｍｌ〜約７μｇ／ｍｌ、約６μｇ／ｍｌ〜約７μｇ／ｍｌ、約１μｇ／ｍｌ〜約６μｇ／ｍｌ、約２μｇ／ｍｌ〜約６μｇ／ｍｌ、約３μｇ／ｍｌ〜約６μｇ／ｍｌ、約４μｇ／ｍｌ〜約６μｇ／ｍｌ、約５μｇ／ｍｌ〜約６μｇ／ｍｌ、約１μｇ／ｍｌ〜約５μｇ／ｍｌ、約２μｇ／ｍｌ〜約５μｇ／ｍｌ、約３μｇ／ｍｌ〜約５μｇ／ｍｌ、約４μｇ／ｍｌ〜約５μｇ／ｍｌ、約１μｇ／ｍｌ〜約４μｇ／ｍｌ、約２μｇ／ｍｌ〜約４μｇ／ｍｌ、約３μｇ／ｍｌ〜約４μｇ／ｍｌ、約１μｇ／ｍｌ〜約３μｇ／ｍｌ、約２μｇ／ｍｌ〜約３μｇ／ｍｌ、または約１μｇ／ｍｌ〜約２μｇ／ｍｌ）である。他の実施形態において、ＭＯＳＰＤ２の阻害物質は、抗体または抗体の抗原結合断片であり、治療的有効量は、約１μｇ／ｍｌ、約２μｇ／ｍｌ、約３μｇ／ｍｌ、約４μｇ／ｍｌ、約５μｇ／ｍｌ、約６μｇ／ｍｌ、約７μｇ／ｍｌ、約８μｇ／ｍｌ、約９μｇ／ｍｌ、または約１０μｇ／ｍｌである。
【０１９２】
実施形態によっては、ＭＯＳＰＤ２の阻害物質は、抗体または抗体の抗原結合断片であり、治療的有効量は、約１０ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、またはそれらの値のうちの任意の範囲（例えば、約１５ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、約３５ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ〜約３５ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ〜約３５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ〜約３５ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ〜約３５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ〜約３５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ、または約１０ｍｇ／ｋｇ〜約１５ｍｇ／ｋｇ）である。他の実施形態において、ＭＯＳＰＤ２の阻害物質は、抗体または抗体の抗原結合断片であり、治療的有効量は、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約３５ｍｇ／ｋｇ、または約４０ｍｇ／ｋｇである。
【０１９３】
実施形態によっては、ＭＯＳＰＤ２の阻害物質（例えば、抗体またはその抗原結合断片）は、ＭＯＳＰＤ２阻害物質の投与が、ＭＯＳＰＤ２（例えば、ヒトＭＯＳＰＤ２、例えば、ヒトがん細胞により発現するＭＯＳＰＤ２）の１種または複数の作用（例えば、ＭＯＳＰＤ２発現、がん細胞遊走、腫瘍成長と関連する単球遊走（例えば、腫瘍関連マクロファージの存在）、ケモカインシグナル伝達経路、成長因子シグナル伝達経路、ＥＧＦ受容体リン酸化、ＥＲＫリン酸化、ＡＫＴリン酸化、及び／またはＦＡＫリン酸化）の少なくとも１０％（例えば、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、またはそれ以上）の阻害を引き起こすような量で存在する。実施形態によっては、ヒト対象へのＭＯＳＰＤ２阻害物質の投与は、ヒトＭＯＳＰＤ２、例えば、ヒトがん細胞により発現するＭＯＳＰＤ２の１種または複数の作用の少なくとも１０％（例えば、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、またはそれ以上）の阻害を引き起こす。
【０１９４】
別の態様において、ＭＯＳＰＤ２阻害物質（例えば、抗ＭＯＳＰＤ２抗体またはその抗原結合断片）の投与は、ＭＯＳＰＤ２の１種または複数の作用、例えば、がん細胞遊走の調節、腫瘍成長と関連する単球遊走、腫瘍関連マクロファージの存在、ケモカインシグナル伝達経路、成長因子シグナル伝達経路、ＥＧＦ受容体リン酸化、ＥＲＫリン酸化、ＡＫＴリン酸化、及び／またはＦＡＫリン酸化などの、約１０％〜１００％、約１０％〜約９９％、約１０％〜約９５％、約１０％〜約９０％、約１０％〜約８５％、約１０％〜約８０％、約１０％〜約７０％、約２０％〜約９９％、約２０％〜約９５％、約２０％〜約９０％、約２０％〜約８５％、約２０％〜約８０％、約３０％〜約９５％、約３０％〜約９０％、約３０％〜約８５％、約３０％〜約８０％、約４０％〜約９５％、約４０％〜約９０％、約４０％〜約８５％、約４０％〜約８０％、約５０％〜約９５％、約５０％〜約９０％、約５０％〜約８５％、約５０％〜約８０％、約６０％〜約９５％、約６０％〜約９０％、約６０％〜約８５％、または約６０％〜約８０％阻害を引き起こす。
【０１９５】
本明細書中使用される場合、「医薬組成物」は、本明細書中記載されるとおりの１種または複数の作用物質（例えば、ＭＯＳＰＤ２阻害物質、またはＭＯＳＰＤ２阻害物質と本明細書中記載される１種または複数の他の作用物質の組み合わせ）、あるいはその生理学的に許容される塩またはプロドラッグを他の化学成分と合わせて含む調製物を示し、他の化学成分として、薬学上許容される担体、賦形剤、滑沢剤、緩衝剤、抗菌剤、増量剤（例えば、マンニトール）、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸または重亜硫酸ナトリウム）などが挙げられるが、これらに限定されない。医薬組成物の目的は、作用物質を対象に投与しやすくすることである。
【０１９６】
本明細書中使用される場合、対象に「投与」または「投与する」は、医師または他の医療専門家が、対象に本発明の医薬組成物を処方する行為を含むが、これに限定されない。投与は、局所投与、例えば、腫瘍内投与が可能である。
【０１９７】
本明細書中、「薬学上許容される担体」という語句は、対象に対して有意な刺激を引き起こさず、かつ本明細書中記載される作用物質の生物活性及び性質を抑制しない担体または希釈剤を示す。
【０１９８】
本明細書中使用される場合、「担体」という用語は、治療薬を投与するときに一緒に用いられる希釈剤、アジュバント、賦形剤、またはビヒクルを示す。
【０１９９】
本明細書中、「賦形剤」という用語は、活性成分の投与をさらに促進するために医薬組成物に添加される不活性物質を示す。
【０２００】
実施形態によっては、ＭＯＳＰＤ２阻害物質を含む医薬組成物は、さらに、１種または複数の追加活性作用物質を含む。実施形態によっては、１種または複数の追加活性作用物質は、抗がん剤である。実施形態によっては、１種または複数の追加活性作用物質は、抗増殖剤である。
【０２０１】
本明細書中記載される実施形態のいずれかにおいて、有用な抗がん剤として、当該分野で既知のもの、例えば、米国食品医薬品局（ＵＳＦＤＡ）などの監督官庁により使用が認可された抗がん剤などが挙げられる。有用な抗がん剤のいくつかを、米国国立がん研究所が、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃａｎｃｅｒ．ｇｏｖ／ａｂｏｕｔ−ｃａｎｃｅｒ／ｔｒｅａｔｍｅｎｔ／ｄｒｕｇｓに列挙している。有用な抗がん剤の例として、肛門がん、膀胱がん、骨がん、脳がん、乳がん、子宮頸がん、結腸及び直腸がん、子宮内膜がん、食道がん、消化管間質がん、妊娠性絨毛性疾患、頭頸部がん、ホジキンリンパ腫、カポジ肉腫、腎臓（腎細胞）がん、白血病、肝臓がん、肺がん、悪性中皮腫、黒色腫、多中心性キャッスルマン病、多発性骨髄腫及び他の形質細胞新生物、骨髄増殖性新生物、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、卵巣がん、卵管がん、または原発性腹膜がん、膵がん、陰茎がん、前立腺がん、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、皮膚がん、軟部組織肉腫、胃がん、精巣がん、甲状腺がん、膣がん、外陰部がん、ならびにウィルムス腫瘍及び他の小児腎臓がんについて（例えば、ＵＳＦＤＡにより）認可されたものが挙げられる。
【０２０２】
本明細書中記載される実施形態のいずれかにおいて、抗がん剤は、酢酸アビラテロン、アビトレキサート（Ａｂｉｔｒｅｘａｔｅ）（メトトレキセート）、アブラキサン（パクリタキセルのアルブミン安定化ナノ粒子製剤）、ＡＢＶＤ、ＡＢＶＥ、ＡＢＶＥ−ＰＣ、ＡＣ、ＡＣ−Ｔ、アドセトリス（ブレンツキシマブベドチン）、ＡＤＥ、Ａｄｏ−トラスツズマブエムタンシン、アドリアマイシン（ドキソルビシン塩酸塩）、アドルシル（フルオロウラシル）、ジマレイン酸アファチニブ、アフィニトール（エベロリムス）、アキンゼオ（ネツピタント及びパロノセトロン塩酸塩）、アルダラ（イミキモド）、アルデスロイキン、アレムツズマブ、アリムタ（ペメトレキセド二ナトリウム）、アロキシ（パロノセトロン塩酸塩）、アンボクロリン（Ａｍｂｏｃｈｌｏｒｉｎ）（クロラムブシル）、アンボクロリン（Ａｍｂｏｃｌｏｒｉｎ）（クロラムブシル）、アミノレブリン酸、アナストロゾール、アプレピタント、アレディア（パミドロネート二ナトリウム）、アリミデクス（アナストロゾール）、アロマシン（エキセメスタン）、アラノン（ネララビン）、三酸化ヒ素、アルゼラ（オファツムマブ）、アスパラギナーゼ黒脚病菌（Ｅｒｗｉｎｉａ  ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉ）、アバスチン（ベバシズマブ）、アキシチニブ、アザシチジン、ＢＥＡＣＯＰＰ、ベセナム（Ｂｅｃｅｎｕｍ）（カルムスチン）、ベレオダク（Ｂｅｌｅｏｄａｑ）（ベリノスタット）、ベリノスタット、ベンダムスチン塩酸塩、ＢＥＰ、ベバシズマブ、ベキサロテン、ベキサール（トシツモマブ及びＩ１３１ヨウ素トシツモマブ）、ビカルタミド、ＢｉＣＮＵ（カルムスチン）、ブレオマイシン、ブリナツモマブ、ブリンサイト（ブリナツモマブ）、ボルテゾミブ、ボシュリフ（ボスチニブ）、ボスチニブ、ブレンツキシマブベドチン、ブスルファン、ブスルフェクス（ブスルファン）、カバジタキセル、カボザンチニブ−Ｓ−リンゴ酸塩、ＣＡＦ、キャンパス（アレムツズマブ）、カンプトサール（イリノテカン塩酸塩）、カペシタビン、ＣＡＰＯＸ、カルボプラチン、カルボプラチン−タキソール、カルフィルゾミブ、カルムブリス（カルムスチン）、カルムスチン、カルムスチン留置用剤、カソデックス（ビカルタミド）、ＣｅｅＮＵ（ロムスチン）、セリチニブ、セルビジン（ダウノルビシン塩酸塩）、サーバリックス（組換えＨＰＶ二価ワクチン）、セツキシマブ、クロラムブシル、クロラムブシル−プレドニゾン、ＣＨＯＰ、シスプラチン、クラフェン（Ｃｌａｆｅｎ）（シクロホスファミド）、クロファラビン、ＣＭＦ、コメトリク（Ｃｏｍｅｔｒｉｑ）（カボザンチニブ−Ｓ−リンゴ酸塩）、ＣＯＰＰ、ＣＯＰＰ−ＡＢＶ、コスメゲン（ダクチノマイシン）、クリゾチニブ、ＣＶＰ、シクロホスファミド、シホス（Ｃｙｆｏｓ）（イホスファミド）、サイラムザ（ラムシルマブ）、シタラビン、シタラビンリポソーム製剤（Ｃｙｔａｒａｂｉｎｅ，  Ｌｉｐｏｓｏｍａｌ）、シトサール−Ｕ（シタラビン）、シトキサン（シクロホスファミド）、ダブラフェニブ、ダカルバジン、ダコゲン（Ｄａｃｏｇｅｎ）（デシタビン）、ダクチノマイシン、ダサチニブ、ダウノルビシン塩酸塩、デシタビン、デガレリクス、デニロイキンジフチ��クス、デノスマブ、デポサイト（リポソームシタラビン）、デポフォーム（リポソームシタラビン）、デクスラゾキサン塩酸塩、ジヌツキシマブ、ドセタキセル、ドキシル（ドキソルビシン塩酸塩リポソーム）、ドキソルビシン塩酸塩、ドキソルビシン塩酸塩リポソーム、Ｄｏｘ−ＳＬ（ドキソルビシン塩酸塩リポソーム）、ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（ダカルバジン）、エフデックス（フルオロウラシル）、エリテック（Ｅｌｉｔｅｋ）（ラスブリカーゼ）、エレンス（エピルビシン塩酸塩）、エロキサチン（オキサリプラチン）、エルトロンボパグオラミン、イメンド（アプレピタント）、エンザルタミド、エピルビシン塩酸塩、ＥＰＯＣＨ、アービタックス（セツキシマブ）、メシル酸エリブリン、エリベッジ（ビスモデギブ）、エルロチニブ塩酸塩、エルウィナーゼ（アスパラギナーゼ黒脚病菌）、エトポホス（リン酸エトポシド）、エトポシド、リン酸エトポシド、エバセット（Ｅｖａｃｅｔ）（ドキソルビシン塩酸塩リポソーム）、エベロリムス、エビスタ（ラロキシフェン塩酸塩）、エキセメスタン、フェアストン（トレミフェン）、ファリーダック（パノビノスタット）、ファスロデックス（フルベストラント）、ＦＥＣ、フェマラ（レトロゾール）、フィルグラスチム、フルダラ（リン酸フルダラビン）、リン酸フルダラビン、フルオロプレックス（フルオロウラシル）、フルオロウラシル、ホレックス（Ｆｏｌｅｘ）（メトトレキセート）、ホレックスＰＦＳ（メトトレキセート）、フォルフィリ、フォルフィリ−ベバシズマブ、フォルフィリ−セツキシマブ、フォルフィリノックス、フォルフロックス（Ｆｏｌｆｌｏｘ）、フォロチン（プララトレキセート）、ＦＵ−ＬＶ、フルベストラント、ガーダシル（組換えＨＰＶ四価ワクチン）、ガーダシル９（組換えＨＰＶ九価ワクチン）、ガジバ（Ｇａｚｙｖａ）（オビヌツズマブ）、ゲフィチニブ、ゲムシタビン塩酸塩、ゲムシタビン−シスプラチン、ゲムシタビン−オキサリプラチン、ゲムツズマブオゾガマイシン、ジェムザール（ゲムシタビン塩酸塩）、ジオトリフ（ジマレイン酸アファチニブ）、グリベック（メシル酸イマチニブ）、ギリアデル（カルムスチン留置用剤）、ギリアデルウエハ（カルムスチン留置用剤）、グルカルピダーゼ、酢酸ゴセレリン、ハラベン（メシル酸エリブリン）、ハーセプチン（トラスツズマブ）、ＨＰＶ二価ワクチン、組換え、ＨＰＶ九価ワクチン、組換え、ＨＰＶ四価ワクチン、組換え、ハイカムチン（トポテカン塩酸塩）、Ｈｙｐｅｒ−ＣＶＡＤ、イブランス（パルボシクリブ）、イブリツモマブチウキセタン、イブルチニブ、ＩＣＥ、アイクルシグ（ポナチニブ塩酸塩）、イダマイシン（イダルビシン塩酸塩）、イダルビシン塩酸塩、イデラリシブ、イフェックス（イホスファミド）、イホスファミド、イホスファミダム（イホスファミド）、メシル酸イマチニブ、イムブルビカ（イブルチニブ）、イミキモド、インライタ（アキシチニブ）、イントロンＡ（組換えインターフェロンα−２ｂ）、ヨウ素１３１トシツモマブ及びトシツモマブ、イピリムマブ、イレッサ（ゲフィチニブ）、イリノテカン塩酸塩、イストダックス（ロミデプシン）、イキサベピロン、イクセンプラ（イキサベピロン）、ジャカフィ（Ｊａｋａｆｉ）（リン酸ルキソリチニブ）、ジェブタナ（カバジタキセル）、カドサイラ（Ａｄｏ−トラスツズマブエムタンシン）、ケオキシフェン（ラロキシフェン塩酸塩）、ケピバンス（パリフェルミン）、キイトルーダ（ペムブロリズマブ）、カイプロリス（カルフィルゾミブ）、酢酸ランレオチド、二トシル酸ラパチニブ、レナリドミド、メシル酸レンバチニブ、レンビマ（メシル酸レンバチニブ）、レトロゾール、ロイコボリンカルシウム、ロイケラン（クロラムブシル）、酢酸ロイプロリド、レブラン（Ｌｅｖｕｌａｎ）（アミノレブリン酸）、リンホリジン（Ｌｉｎｆｏｌｉｚｉｎ）（クロラムブシル）、リポドックス（ＬｉｐｏＤｏｘ）（ドキソルビシン塩酸塩リポソーム）、リポソームシタラビン、ロムスチン、ルプロン（酢酸ロイプロリド）、ルプロンデポ（酢酸ロイプロリド）、ルプロンデポ−Ｐｅｄ（酢酸ロイプロリド）、ルプロンデポ−３ヶ月型（酢酸ロイプロリド）、ルプロンデポ−４ヶ月型（酢酸ロイプロリド）、リンパルザ（Ｌｙｎｐａｒｚａ）（オラパリブ）、マルキボ（Ｍａｒｑｉｂｏ）（ビンクリスチンサルフェートリポソーム）、マツラン（Ｍａｔｕｌａｎｅ）（プロカルバジン塩酸塩）、メクロレタミン塩酸塩、メガス（酢酸メゲストロール）、酢酸メゲストロール、メキニスト（トラメチニブ）、メルカプトプリン、メスナ、メスネックス（Ｍｅｓｎｅｘ）（メスナ）、メタゾラストン（テモゾロミド）、メトトレキセート、メトトレキセートＬＰＦ（メトトレキセート）、メキセート（Ｍｅｘａｔｅ）（メトトレキセート）、メキセート−ＡＱ（メトトレキセート）、マイトマイシンＣ、ミトキサントロン塩酸塩、ミトザイトレックス（Ｍｉｔｏｚｙｔｒｅｘ）（マイトマイシンＣ）、ＭＯＰＰ、モゾビル（プレリキサフォル）、ムスタルゲン（メクロレタミン塩酸塩）、ムタマイシン（マイトマイシンＣ）、ミレラン（ブスルファン）、ミロサール（Ｍｙｌｏｓａｒ）（アザシチジン）、マイロターグ（ゲムツズマブオゾガマイシン）、ナノ粒子パクリタキセル（パクリタキセルのアルブミン安定化ナノ粒子製剤）、ナベルビン（酒石酸ビノレルビン）、ネララビン、ネオサール（Ｎｅｏｓａｒ）（シクロホスファミド）、ネツピタント及びパロノセトロン塩酸塩、ニューポジェン（フィルグラスチム）、ネクサバール（トシル酸ソラフェニブ）、ニロチニブ、ニボルマブ、ノルバデックス（クエン酸タモキシフェン）、Ｎプレート（Ｎｐｌａｔｅ）（ロミプロスチム）、オビヌツズマブ、ＯＥＰＡ、オファツムマブ、ＯＦＦ、オラパリブ、オマセタキシンメペサクシネート、オンキャスパー（ペグアスパルガーゼ）、オンタック（デニロイキンジフチトクス）、オプジーボ（ニボルマブ）、ＯＰＰＡ、オキサリプラチン、パクリタキセル、パクリタキセルのアルブミン安定化ナノ粒子製剤、ＰＡＤ、パルボシクリブ、パリフェルミン、パロノセトロン塩酸塩、パミドロネート二ナトリウム、パニツムマブ、パノビノスタット、パラプラット（Ｐａｒａｐｌａｔ）（カルボプラチン）、パラプラチン（カルボプラチン）、パゾパニブ塩酸塩、ペグアスパルガーゼ、ペグインターフェロンα−２ｂ、ペグイントロン（ペグインターフェロンα−２ｂ）、ペムブロリズマブ、ペメトレキセド二ナ��リウム、パージェタ（ペルツズマブ）、ペルツズマブ、プラチノール（シスプラチン）、プラチノール−ＡＱ（シスプラチン）、プレリキサフォル、ポマリドミド、ポマリスト（ポマリドミド）、ポナチニブ塩酸塩、プララトレキセート、プレドニゾン、プロカルバジン塩酸塩、プロロイキン（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ）（アルデスロイキン）、プロリア（デノスマブ）、プロマクタ（エルトロンボパグオラミン）、プロベンジ（シプロイセルＴ）、プリントール（メルカプトプリン）、プリキサン（Ｐｕｒｉｘａｎ）（メルカプトプリン）、二塩化ラジウム−２２３、ラロキシフェン塩酸塩、ラムシルマブ、ラスブリカーゼ、Ｒ−ＣＨＯＰ、Ｒ−ＣＶＰ、組換えヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）二価ワクチン、組換えヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）九価ワクチン、組換えヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）四価ワクチン、組換えインターフェロンα−２ｂ、レゴラフェニブ、Ｒ−ＥＰＯＣＨ、レブリミド（レナリドミド）、リウマトレックス（メトトレキセート）、リツキサン（リツキシマブ）、リツキシマブ、ロミデプシン、ロミプロスチム、ルビドマイシン（ダウノルビシン塩酸塩）、リン酸ルキソリチニブ、スクレロゾール（Ｓｃｌｅｒｏｓｏｌ）胸膜内エアロゾル（タルク）、シルツキシマブ、シプロイセルＴ、ソマチュリンデポ（酢酸ランレオチド）、トシル酸ソラフェニブ、スプリセル（ダサチニブ）、スタンフォードＶ、滅菌タルク粉末（タルク）、ステリタルク（タルク）、スチバーガ（レゴラフェニブ）、リンゴ酸スニチニブ、スーテント（リンゴ酸スニチニブ）、シラトロン（ペグインターフェロンα−２ｂ）、シルバント（Ｓｙｌｖａｎｔ）（シルツキシマブ）、シノビール（Ｓｙｎｏｖｉｒ）（サリドマイド）、シンリボ（Ｓｙｎｒｉｂｏ）（オマセタキシンメペサクシネート）、ＴＡＣ、タフィンラー（ダブラフェニブ）、タルク、クエン酸タモキシフェン、タラビンＰＦＳ（Ｔａｒａｂｉｎｅ  ＰＦＳ）（シタラビン）、タルセバ（エルロチニブ塩酸塩）、タルグレチン（ベキサロテン）、タシグナ（ニロチニブ）、タキソール（パクリタキセル）、タキソテール（ドセタキセル）、テモダール（テモゾロミド）、テモゾロミド、テムシロリムス、サリドマイド、サロミド（サリドマイド）、チオテパ、トポサール（Ｔｏｐｏｓａｒ）（エトポシド）、トポテカン塩酸塩、トレミフェン、トーリセル（テムシロリムス）、トシツモマブ及
びＩ１３１ヨウ素トシツモマブ、トテクト（Ｔｏｔｅｃｔ）（デクスラゾキサン塩酸塩）、ＴＰＦ、トラメチニブ、トラスツズマブ、トレアンダ（ベンダムスチン塩酸塩）、トリセノックス（三酸化ヒ素）、タイケルブ（二トシル酸ラパチニブ）、ユニツキシン（Ｕｎｉｔｕｘｉｎ）（ジヌツキシマブ）、バンデタニブ、ＶＡＭＰ、ベクチビックス（パニツムマブ）、ＶｅＩＰ、ベルバン（ビンブラスチンサルフェート）、ベルケイド（ボルテゾミブ）、ベルサール（Ｖｅｌｓａｒ）（ビンブラスチンサルフェート）、ベムラフェニブ、ベペシド（エトポシド）、ビアデュール（Ｖｉａｄｕｒ）（酢酸ロイプロリド）、ビダーザ（アザシチジン）、ビンブラスチンサルフェート、ビンカサールＰＦＳ（Ｖｉｎｃａｓａｒ  ＰＦＳ）（ビンクリスチンサルフェート）、ビンクリスチンサルフェート、ビンクリスチンサルフェートリポソーム、酒石酸ビノレルビン、ＶＩＰ、ビスモデギブ、ボラクサーゼ（グルカルピダーゼ）、ボリノスタット、ヴォトリエント（パゾパニブ塩酸塩）、ウェルコボリン（ロイコボリンカルシウム）、ザーコリ（クリゾチニブ）、ゼローダ（カペシタビン）、ゼリイリ（ＸＥＬＩＲＩ）、ゼロックス（ＸＥＬＯＸ）、Ｘｇｅｖａ（デノスマブ）、ゾーフィゴ（二塩化ラジウム−２２３）、イクスタンジ（エンザルタミド）、ヤーボイ（イピリムマブ）、ザルトラップ（Ｚｉｖ−アフリベルセプト）、ゼルボラフ（ベムラフェニブ）、ゼバリン（イブリツモマブチウキセタン）、ザインカード（Ｚｉｎｅｃａｒｄ）（デクスラゾキサン塩酸塩）、Ｚｉｖ−アフリベルセプト、ゾラデックス（酢酸ゴセレリン）、ゾレドロン酸、ゾリンザ（ボリノスタット）、ゾメタ（ゾレドロン酸）、ザイデリグ（Ｚｙｄｅｌｉｇ）（イデラリシブ）、ジカディア（セリチニブ）、及びザイティガ（酢酸アビラテロン）からなる群より選択することができる。
【０２０３】
２種以上の作用物質を医薬組成物として投与する場合、各作用物質は、任意選択で、別々の組成物で投与することも、及び／または異なる投与経路を介して投与することもできる。各作用物質に可能な投与経路として、独立して、非経口投与、経粘膜投与、直腸投与、頬側投与、及び／または吸入（例えば、本明細書中記載されるとおり）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２０４】
実施形態によっては、医薬組成物は、全身投与または局所投与に適する。他の実施形態において、医薬組成物は、経鼻投与、経口投与、または腹腔内投与に適する。他の実施形態において、医薬組成物は、静脈内投与、筋肉内投与、または皮下投与に適する。他の実施形態において、医薬組成物は、腫瘍内投与に適する。
【０２０５】
がん及び転移における使用方法
実施形態によっては、本発明は、がん細胞でのＭＯＳＰＤ２発現が、その非がん性カウンターパートと比較した場合に上方制御されているという発見に関連する。実施例のセクションで示すとおり、ＭＯＳＰＤ２発現は、各種がん細胞、例えば、膀胱がん、脳がん（例えば、大脳星状細胞腫）、乳がん、結腸がん（例えば、結腸腺がん）、食道がん（例えば、食道腺がん）、肺がん、皮膚がん（例えば、黒色腫）、舌がん（例えば、頭頸部（舌）細胞がん）、腎臓がん（例えば、腎明細胞がん）、及び肝がん（例えば、肝細胞がん）などでは陽性に同定されたが、カウンターパートの正常非がん性細胞ではそうではなかった。さらに、各種がん細胞での、ＭＯＳＰＤ２発現のサイレンシングまたは抗ＭＯＳＰＤ２  Ｆ（ａｂ’）２ｍＡｂの投与によるＭＯＳＰＤ２阻害は、インビトロ及びインビボ両方でがん細胞の遊走及び転移を阻害する。
【０２０６】
本発明の実施形態は、ＭＯＳＰＤ２の阻害物質を用いた、がん細胞の転移を治療する、がん細胞の転移を予防する、またはがん細胞の転移の発生率を低下させるための方法に関する。実施形態によっては、本方法は、それを必要とする対象に、ＭＯＳＰＤ２の阻害物質の有効量を投与するステップを含む。他の実施形態において、ＭＯＳＰＤ２は、がん細胞により発現する。ＭＯＳＰＤ２阻害物質の例として、本明細書中記載されるものが挙げられる。がんの適切な種類も本明細書中記載される。実施形態によっては、がんは、膀胱がん、脳がん（例えば、大脳星状細胞腫）、乳がん、結腸がん（例えば、結腸腺がん）、食道がん（例えば、食道腺がん）、肺がん、皮膚がん（例えば、黒色腫）、舌がん（例えば、頭頸部（舌）細胞がん）、腎臓がん（例えば、腎明細胞がん）、または肝がん（例えば、肝細胞がん）である。
【０２０７】
本発明の実施形態は、ＭＯＳＰＤ２の阻害物質を用いた、がんを治療する、がんを予防する、またはがんの発生率を低下させる方法にも関する。実施形態によっては、本方法は、それを必要とする対象に、ＭＯＳＰＤ２の阻害物質の治療的有効量を投与するステップを含む。他の実施形態において、ＭＯＳＰＤ２は、がん細胞により発現する。実施形態によっては、本方法は、さらに、治療的有効量のＭＯＳＰＤ２の阻害物質及び別の抗がん剤を投与するステップを含む。ＭＯＳＰＤ２阻害物質及び抗がん剤の例として、本明細書中記載されるものが挙げられる。がんの適切な種類も本明細書中記載される。実施形態によっては、がんは、膀胱がん、脳がん（例えば、大脳星状細胞腫）、乳がん、結腸がん（例えば、結腸腺がん）、食道がん（例えば、食道腺がん）、肺がん、皮膚がん（例えば、黒色腫）、舌がん（例えば、頭頸部（舌）細胞がん）、腎臓がん（例えば、腎明細胞がん）、または肝がん（例えば、肝細胞がん）である。
【０２０８】
本発明の実施形態は、ＭＯＳＰＤ２の阻害物質を用いた、転移性がんを治療する、転移性がんを予防する、または転移性がんの発生率を低下させる方法に関する。実施形態によっては、本方法は、それを必要とする対象に、治療的有効量のＭＯＳＰＤ２の阻害物質及び別の抗がん剤を投与するステップを含む。実施形態によっては、投与は、局所的、例えば、腫瘍内投与である。実施形態によっては、ＭＯＳＰＤ２は、転移性がん細胞により発現する。ＭＯＳＰＤ２阻害物質及び抗がん剤の例として、本明細書中記載されるものが挙げられる。がんの適切な種類も本明細書中記載される。実施形態によっては、がんは、膀胱がん、脳がん（例えば、大脳星状細胞腫）、乳がん、結腸がん（例えば、結腸腺がん）、食道がん（例えば、食道腺がん）、肺がん、皮膚がん（例えば、黒色腫）、舌がん（例えば、頭頸部（舌）細胞がん）、腎臓がん（例えば、腎明細胞がん）、または肝がん（例えば、肝細胞がん）である。
【０２０９】
実施形態によっては、ＭＯＳＰＤ２の阻害物質は、本明細書中記載される抗体または抗体の抗原結合断片、例えば、抗体抗原平衡解離定数（ＫＤ）が約１０−６Ｍ〜約１０−１２Ｍ、またはそれらの値のうちの任意の範囲（例えば、約１０−７Ｍ〜約１０−１２、１０−８Ｍ〜約１０−１２Ｍ、約１０−９Ｍ〜約１０−１２Ｍ、約１０−１０Ｍ〜約１０−１２Ｍ、約１０−１１Ｍ〜約１０−１２Ｍ、約１０−６Ｍ〜約１０−１１Ｍ、約１０−７Ｍ〜約１０−１１Ｍ、約１０−８Ｍ〜約１０−１１Ｍ、約１０−９Ｍ〜約１０−１１Ｍ、約１０−１０Ｍ〜約１０−１１Ｍ、約１０−６Ｍ〜約１０−１０Ｍ、約１０−７Ｍ〜約１０−１０Ｍ、約１０−８Ｍ〜約１０−１０Ｍ、約１０−９Ｍ〜約１０−１０Ｍ、約１０−６Ｍ〜約１０−９Ｍ、約１０−７Ｍ〜約１０−９Ｍ、約１０−８Ｍ〜約１０−９Ｍ、約１０−６Ｍ〜約１０−８Ｍ、または約１０−７Ｍ〜約１０−８）であるものである。他の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、ＫＤが約１０−６Ｍ、約１０−７Ｍ、約１０−８Ｍ、約１０−９Ｍ、約１０−１０Ｍ、約１０−１１Ｍ、または約１０−１２Ｍである。実施形態によっては、抗体または抗原結合断片は、ＭＯＳＰＤ２上の１つまたは複数のエピトープに結合する。実施形態によっては、ＫＤは、Ｓｃａｔｃｈａｒｄ分析、表面プラズモン共鳴、または本明細書中記載される他の方法により、実施形態によっては、３７℃で、求められる。
【０２１０】
実施形態によっては、本発明の抗体または抗原結合断片は、約１０３１／Ｍｓ〜約１０６１／Ｍｓ、またはそれらの値のうちの任意の範囲（例えば、約１０３１／Ｍｓ〜約１０５１／Ｍｓ、約１０４１／Ｍｓ〜約１０５１／Ｍｓ、約１０４１／Ｍｓ〜約１０６１／Ｍｓ、約１０５１／Ｍｓ〜約１０６１／Ｍｓ、または約１０３１／Ｍｓ〜約１０４１／Ｍｓ）のＫｏｎでＭＯＳＰＤ２に結合する。他の実施形態において、抗体または抗原結合断片は、Ｋｏｎが約１０３１／Ｍｓ、約１０４１／Ｍｓ、約１０５１／Ｍｓ、または約１０６１／Ｍｓである。
【０２１１】
実施形態によっては、本発明の抗体または抗原結合断片は、約１０−３１／ｓ〜約１０−６１／ｓ、またはそれらの値のうちの任意の範囲（例えば、約１０−３１／ｓ〜約１０−５１／ｓ、約１０−４１／ｓ〜約１０−５１／ｓ、約１０−４１／ｓ〜約１０−６１／ｓ、約１０−５１／ｓ〜約１０−６１／ｓ、または約１０−３１／ｓ〜約１０−４１／ｓ）のＫｏｆｆでＭＯＳＰＤ２に結合する。他の実施形態において、抗体または抗原結合断片は、Ｋｏｆｆが約１０−３１／ｓ、約１０−４１／ｓ、約１０−５１／ｓ、または約１０−６１／ｓである。
【０２１２】
実施形態によっては、ＭＯＳＰＤ２の阻害物質は、抗体または抗体の抗原結合断片であり、治療的有効量は、約１μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、またはそれらの値のうちの任意の範囲（例えば、約２μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、約３μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、約４μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、約５μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、約６μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、約７μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、約８μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、約９μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、約１μｇ／ｍｌ〜約９μｇ／ｍｌ、約２μｇ／ｍｌ〜約９μｇ／ｍｌ、約３μｇ／ｍｌ〜約９μｇ／ｍｌ、約４μｇ／ｍｌ〜約９μｇ／ｍｌ、約５μｇ／ｍｌ〜約９μｇ／ｍｌ、約６μｇ／ｍｌ〜約９μｇ／ｍｌ、約７μｇ／ｍｌ〜約９μｇ／ｍｌ、約８μｇ／ｍｌ〜約９μｇ／ｍｌ、約１μｇ／ｍｌ〜約８μｇ／ｍｌ、約２μｇ／ｍｌ〜約８μｇ／ｍｌ、約３μｇ／ｍｌ〜約８μｇ／ｍｌ、約４μｇ／ｍｌ〜約８μｇ／ｍｌ、約５μｇ／ｍｌ〜約８μｇ／ｍｌ、約６μｇ／ｍｌ〜約８μｇ／ｍｌ、約７μｇ／ｍｌ〜約８μｇ／ｍｌ、約１μｇ／ｍｌ〜約７μｇ／ｍｌ、約２μｇ／ｍｌ〜約７μｇ／ｍｌ、約３μｇ／ｍｌ〜約７μｇ／ｍｌ、約４μｇ／ｍｌ〜約７μｇ／ｍｌ、約５μｇ／ｍｌ〜約７μｇ／ｍｌ、約６μｇ／ｍｌ〜約７μｇ／ｍｌ、約１μｇ／ｍｌ〜約６μｇ／ｍｌ、約２μｇ／ｍｌ〜約６μｇ／ｍｌ、約３μｇ／ｍｌ〜約６μｇ／ｍｌ、約４μｇ／ｍｌ〜約６μｇ／ｍｌ、約５μｇ／ｍｌ〜約６μｇ／ｍｌ、約１μｇ／ｍｌ〜約５μｇ／ｍｌ、約２μｇ／ｍｌ〜約５μｇ／ｍｌ、約３μｇ／ｍｌ〜約５μｇ／ｍｌ、約４μｇ／ｍｌ〜約５μｇ／ｍｌ、約１μｇ／ｍｌ〜約４μｇ／ｍｌ、約２μｇ／ｍｌ〜約４μｇ／ｍｌ、約３μｇ／ｍｌ〜約４μｇ／ｍｌ、約１μｇ／ｍｌ〜約３μｇ／ｍｌ、約２μｇ／ｍｌ〜約３μｇ／ｍｌ、または約１μｇ／ｍｌ〜約２μｇ／ｍｌ）である。他の実施形態において、ＭＯＳＰＤ２の阻害物質は、抗体または抗体の抗原結合断片であり、治療的有効量は、約１μｇ／ｍｌ、約２μｇ／ｍｌ、約３μｇ／ｍｌ、約４μｇ／ｍｌ、約５μｇ／ｍｌ、約６μｇ／ｍｌ、約７μｇ／ｍｌ、約８μｇ／ｍｌ、約９μｇ／ｍｌ、または約１０μｇ／ｍｌ。
【０２１３】
実施形態によっては、ＭＯＳＰＤ２の阻害物質は、抗体または抗体の抗原結合断片であり、治療的有効量は、約１０ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、またはそれらの値のうちの任意の範囲（例えば、約１５ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、約３５ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ〜約３５ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ〜約３５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ〜約３５ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ〜約３５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ〜約３５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ、または約１０ｍｇ／ｋｇ〜約１５ｍｇ／ｋｇ）である。他の実施形態において、ＭＯＳＰＤ２の阻害物質は、抗体または抗体の抗原結合断片であり、治療的有効量は、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約３５ｍｇ／ｋｇ、または約４０ｍｇ／ｋｇである。
【０２１４】
実施形態によっては、対象は、哺乳類またはヒトである。他の実施形態において、ＭＯＳＰＤ２は、哺乳類ＭＯＳＰＤ２またはヒトＭＯＳＰＤ２である。
【０２１５】
がん細胞中のまたはがん細胞の１種または複数の作用を阻害または阻止する方法
本発明の実施形態は、がん細胞中のまたはがん細胞の１種または複数の作用を阻害または阻止する方法にも関し、本方法は、ＭＯＳＰＤ２の阻害物質を投与するステップを含む。実施形態によっては、本方法は、それを必要とする対象に、ＭＯＳＰＤ２の阻害物質の治療的有効量を投与するステップを含む。実施形態によっては、投与は、局所的、例えば、腫瘍内投与である。ＭＯＳＰＤ２阻害物質の例として、本明細書中記載されるものが挙げられる。がんの適切な種類も本明細書中記載される。
【０２１６】
実施形態によっては、ＭＯＳＰＤ２の阻害物質は、本明細書中記載される抗体または抗体の抗原結合断片、例えば、抗体抗原平衡解離定数（ＫＤ）が約１０−６Ｍ〜約１０−１２Ｍ、またはそれらの値のうちの任意の範囲（例えば、約１０−７Ｍ〜約１０−１２、１０−８Ｍ〜約１０−１２Ｍ、約１０−９Ｍ〜約１０−１２Ｍ、約１０−１０Ｍ〜約１０−１２Ｍ、約１０−１１Ｍ〜約１０−１２Ｍ、約１０−６Ｍ〜約１０−１１Ｍ、約１０−７Ｍ〜約１０−１１Ｍ、約１０−８Ｍ〜約１０−１１Ｍ、約１０−９Ｍ〜約１０−１１Ｍ、約１０−１０Ｍ〜約１０−１１Ｍ、約１０−６Ｍ〜約１０−１０Ｍ、約１０−７Ｍ〜約１０−１０Ｍ、約１０−８Ｍ〜約１０−１０Ｍ、約１０−９Ｍ〜約１０−１０Ｍ、約１０−６Ｍ〜約１０−９Ｍ、約１０−７Ｍ〜約１０−９Ｍ、約１０−８Ｍ〜約１０−９Ｍ、約１０−６Ｍ〜約１０−８Ｍ、または約１０−７Ｍ〜約１０−８）であるものである。他の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、ＫＤが約１０−６Ｍ、約１０−７Ｍ、約１０−８Ｍ、約１０−９Ｍ、約１０−１０Ｍ、約１０−１１Ｍ、または約１０−１２Ｍである。実施形態によっては、抗体または抗原結合断片は、ＭＯＳＰＤ２上の１つまたは複数のエピトープに結合する。実施形態によっては、ＫＤは、Ｓｃａｔｃｈａｒｄ分析、表面プラズモン共鳴、または本明細書中記載される他の方法により、実施形態によっては、３７℃で、求められる。
【０２１７】
実施形態によっては、本発明の抗体または抗原結合断片は、ＭＯＳＰＤ２に、約１０３１／Ｍｓ〜約１０６１／Ｍｓ、またはそれらの値のうちの任意の範囲（例えば、約１０３１／Ｍｓ〜約１０５１／Ｍｓ、約１０４１／Ｍｓ〜約１０５１／Ｍｓ、約１０４１／Ｍｓ〜約１０６１／Ｍｓ、約１０５１／Ｍｓ〜約１０６１／Ｍｓ、または約１０３１／Ｍｓ〜約１０４１／Ｍｓ）のＫｏｎで結合する。他の実施形態において、抗体または抗原結合断片は、Ｋｏｎが約１０３１／Ｍｓ、約１０４１／Ｍｓ、約１０５１／Ｍｓ、または約１０６１／Ｍｓである。
【０２１８】
実施形態によっては、本発明の抗体または抗原結合断片は、ＭＯＳＰＤ２に、約１０−３１／ｓ〜約１０−６１／ｓ、またはそれらの値のうちの任意の範囲（例えば、約１０−３１／ｓ〜約１０−５１／ｓ、約１０−４１／ｓ〜約１０−５１／ｓ、約１０−４１／ｓ〜約１０−６１／ｓ、約１０−５１／ｓ〜約１０−６１／ｓ、または約１０−３１／ｓ〜約１０−４１／ｓ）のＫｏｆｆで結合する。他の実施形態において、抗体または抗原結合断片は、Ｋｏｆｆが約１０−３１／ｓ、約１０−４１／ｓ、約１０−５１／ｓ、または約１０−６１／ｓである。
【０２１９】
実施形態によっては、ＭＯＳＰＤ２の阻害物質は、抗体または抗体の抗原結合断片であり、治療的有効量は、約１μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、またはそれらの値のうちの任意の範囲（例えば、約２μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、約３μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、約４μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、約５μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、約６μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、約７μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、約８μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、約９μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、約１μｇ／ｍｌ〜約９μｇ／ｍｌ、約２μｇ／ｍｌ〜約９μｇ／ｍｌ、約３μｇ／ｍｌ〜約９μｇ／ｍｌ、約４μｇ／ｍｌ〜約９μｇ／ｍｌ、約５μｇ／ｍｌ〜約９μｇ／ｍｌ、約６μｇ／ｍｌ〜約９μｇ／ｍｌ、約７μｇ／ｍｌ〜約９μｇ／ｍｌ、約８μｇ／ｍｌ〜約９μｇ／ｍｌ、約１μｇ／ｍｌ〜約８μｇ／ｍｌ、約２μｇ／ｍｌ〜約８μｇ／ｍｌ、約３μｇ／ｍｌ〜約８μｇ／ｍｌ、約４μｇ／ｍｌ〜約８μｇ／ｍｌ、約５μｇ／ｍｌ〜約８μｇ／ｍｌ、約６μｇ／ｍｌ〜約８μｇ／ｍｌ、約７μｇ／ｍｌ〜約８μｇ／ｍｌ、約１μｇ／ｍｌ〜約７μｇ／ｍｌ、約２μｇ／ｍｌ〜約７μｇ／ｍｌ、約３μｇ／ｍｌ〜約７μｇ／ｍｌ、約４μｇ／ｍｌ〜約７μｇ／ｍｌ、約５μｇ／ｍｌ〜約７μｇ／ｍｌ、約６μｇ／ｍｌ〜約７μｇ／ｍｌ、約１μｇ／ｍｌ〜約６μｇ／ｍｌ、約２μｇ／ｍｌ〜約６μｇ／ｍｌ、約３μｇ／ｍｌ〜約６μｇ／ｍｌ、約４μｇ／ｍｌ〜約６μｇ／ｍｌ、約５μｇ／ｍｌ〜約６μｇ／ｍｌ、約１μｇ／ｍｌ〜約５μｇ／ｍｌ、約２μｇ／ｍｌ〜約５μｇ／ｍｌ、約３μｇ／ｍｌ〜約５μｇ／ｍｌ、約４μｇ／ｍｌ〜約５μｇ／ｍｌ、約１μｇ／ｍｌ〜約４μｇ／ｍｌ、約２μｇ／ｍｌ〜約４μｇ／ｍｌ、約３μｇ／ｍｌ〜約４μｇ／ｍｌ、約１μｇ／ｍｌ〜約３μｇ／ｍｌ、約２μｇ／ｍｌ〜約３μｇ／ｍｌ、または約１μｇ／ｍｌ〜約２μｇ／ｍｌ）である。他の実施形態において、ＭＯＳＰＤ２の阻害物質は、抗体または抗体の抗原結合断片であり、治療的有効量は、約１μｇ／ｍｌ、約２μｇ／ｍｌ、約３μｇ／ｍｌ、約４μｇ／ｍｌ、約５μｇ／ｍｌ、約６μｇ／ｍｌ、約７μｇ／ｍｌ、約８μｇ／ｍｌ、約９μｇ／ｍｌ、または約１０μｇ／ｍｌである。
【０２２０】
実施形態によっては、ＭＯＳＰＤ２の阻害物質は、抗体または抗体の抗原結合断片であり、治療的有効量は、約１０ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、またはそれらの値のうちの任意の範囲（例えば、約１５ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、約３５ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ〜約３５ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ〜約３５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ〜約３５ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ〜約３５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ〜約３５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ、または約１０ｍｇ／ｋｇ〜約１５ｍｇ／ｋｇ）である。他の実施形態において、ＭＯＳＰＤ２の阻害物質は、抗体または抗体の抗原結合断片であり、治療的有効量は、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約３５ｍｇ／ｋｇ、または約４０ｍｇ／ｋｇである。
【０２２１】
実施形態によっては、ＭＯＳＰＤ２の阻害物質（例えば、抗体またはその抗原結合断片）は、ＭＯＳＰＤ２（例えば、ヒトＭＯＳＰＤ２）の１種または複数の作用（例えば、ＭＯＳＰＤ２発現、がん細胞遊走、腫瘍成長と関連した単球遊走（例えば、腫瘍関連マクロファージの存在）、ケモカインシグナル伝達経路、成長因子シグナル伝達経路、ＥＧＦ受容体リン酸化、ＥＲＫリン酸化、ＡＫＴリン酸化、及び／またはＦＡＫリン酸化）の、少なくとも約１０％（例えば、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、またはそれ以上）の阻害を引き起こす。他の実施形態において、ＭＯＳＰＤ２阻害物質（例えば、抗体またはその抗原結合断片）の投与は、ＭＯＳＰＤ２（例えば、ヒトＭＯＳＰＤ２）の１種または複数の作用（例えば、ＭＯＳＰＤ２発現、がん細胞遊走、腫瘍成長と関連した単球遊走（例えば、腫瘍関連マクロファージの存在）、ケモカインシグナル伝達経路、成長因子シグナル伝達経路、ＥＧＦ受容体リン酸化、ＥＲＫリン酸化、ＡＫＴリン酸化、及び／またはＦＡＫリン酸化）の、約１０％〜１００％、約１０％〜約９９％、約１０％〜約９５％、約１０％〜約９０％、約１０％〜約８５％、約１０％〜約８０％、約１０％〜約７０％、約２０％〜約９９％、約２０％〜約９５％、約２０％〜約９０％、約２０％〜約８５％、約２０％〜約８０％、約３０％〜約９５％、約３０％〜約９０％、約３０％〜約８５％、約３０％〜約８０％、約４０％〜約９５％、約４０％〜約９０％、約４０％〜約８５％、約４０％〜約８０％、約５０％〜約９５％、約５０％〜約９０％、約５０％〜約８５％、約５０％〜約８０％、約６０％〜約９５％、約６０％〜約９０％、約６０％〜約８５％、または約６０％〜約８０％の阻害を引き起こす。１つの態様において、抗ＭＯＳＰＤ２抗体またはその抗原結合断片の投与は、がん細胞遊走（例えば、ＥＧＦ誘導型遊走）の約１０％〜１００％、約１０％〜約９９％、約１０％〜約９５％、約１０％〜約９０％、約１０％〜約８５％、約１０％〜約８０％、約１０％〜約７０％、約２０％〜約９９％、約２０％〜約９５％、約２０％〜約９０％、約２０％〜約８５％、約２０％〜約８０％、約３０％〜約９５％、約３０％〜約９０％、約３０％〜約８５％、約３０％〜約８０％、約４０％〜約９５％、約４０％〜約９０％、約４０％〜約８５％、約４０％〜約８０％、約５０％〜約９５％、約５０％〜約９０％、約５０％〜約８５％、約５０％〜約８０％、約６０％〜約９５％、約６０％〜約９０％、約６０％〜約８５％、または約６０％〜約８０％の阻害を引き起こす。
【０２２２】
実施形態によっては、１種または複数の作用は、ＭＯＳＰＤ２発現、がん細胞遊走、腫瘍成長と関連した単球遊走（例えば、腫瘍関連マクロファージの存在）、ケモカインシグナル伝達経路、成長因子シグナル伝達経路、ＥＧＦ受容体リン酸化、ＥＲＫリン酸化、ＡＫＴリン酸化、及び／またはＦＡＫリン酸化のうちの１種または複数である。実施形態によっては、これらの作用のうち少なくとも２種、少なくとも３種、少なくとも４種、少なくとも５種、少なくとも６種、少なくとも７種、少なくとも８種、少なくとも９種、少なくとも１０種、または全てが阻害される。
【０２２３】
実施形態によっては、少なくともがん細胞遊走及びケモカインシグナル伝達経路が阻害される。他の実施形態において、ケモカインシグナル伝達経路または成長因子シグナル伝達経路の阻害は、ＥＧＦ受容体リン酸化、ＥＲＫリン酸化、ＡＫＴリン酸化、及び／またはＦＡＫリン酸化の阻害である。他の実施形態において、がん細胞遊走または腫瘍成長と関連した単球遊走（例えば、腫瘍関連マクロファージの存在）は、１種より多いケモカインまたは成長因子（例えば、ＥＧＦ）あるいはケモカイン受容体または成長因子受容体（例えば、ＥＧＦＲ）により誘導される。
【０２２４】
実施形態によっては、対象は、哺乳類またはヒトである。他の実施形態において、ＭＯＳＰＤ２は、哺乳類ＭＯＳＰＤ２またはヒトＭＯＳＰＤ２である。
【０２２５】
腫瘍関連マクロファージまたは腫瘍関連マクロファージ遊走を減少させる方法
腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）は、がん腫瘤の近傍または内部で見つかることが多い。ＴＡＭは、腫瘍成長に重要であることが既知である。ＴＡＭは、ほとんどが、循環単球に由来し、それらの腫瘍への動員は、腫瘍由来走化因子により駆動される。ＴＡＭは、広範囲にわたる成長因子及び血管新生促進因子を分泌することにより腫瘍細胞増殖及び転移を促進する。結果として、多くの腫瘍で、ＴＡＭが多数であると、腫瘍成長率、局所的増殖、及び遠隔転移が増大する。実際、ＴＡＭ浸潤の程度は、乳がん、頭頸部がん、前立腺、及び子宮がんで逆予後予測因子として使用されてきている（Ｒ．Ｄ．Ｌｅｅｋ，Ｒ．Ｌａｎｄｅｒｓ，Ｓ．Ｂ．Ｆｏｘ，Ｆ．Ｎｇ，Ａ．Ｌ．Ｈａｒｒｉｓ，Ｃ．Ｅ．Ｌｅｗｉｓ，Ｂｒｉｔｉｓｈ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  １９９８，７７，２２４６、Ｍ．Ｒ．Ｙｏｕｎｇ，Ｍ．Ａ．Ｗｒｉｇｈｔ，Ｙ．Ｌｏｚａｎｏ，Ｍ．Ｍ．Ｐｒｅｃｈｅｌ，Ｊ．Ｂｅｎｅｆｉｅｌｄ，Ｊ．Ｐ．Ｌｅｏｎｅｔｔｉ，Ｓ．Ｌ．Ｃｏｌｌｉｎｓ，Ｇ．Ｊ．Ｐｅｔｒｕｚｚｅｌｌｉ，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  １９９７，７４，６９、Ｉ．Ｆ．Ｌｉｓｓｂｒａｎｔ，Ｐ．Ｓｔａｔｔｉｎ，Ｐ．Ｗｉｋｓｔｒｏｍ，Ｊ．Ｅ．Ｄａｍｂｅｒ，Ｌ．Ｅｇｅｖａｄ，Ａ．Ｂｅｒｇｈ，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ２０００，１７，４４５、Ｈ．Ｂ．Ｓａｌｖｅｓｅｎ，Ｌ．Ａ．Ａｋｓｌｅｎ，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  １９９９，８４，５３８）。ＴＡＭは、腫瘍組織でも顕著であり、乳がんの細胞塊の最大８０％までを占める。
【０２２６】
本発明のいくつかの実施形態は、がんを治療する、がんの発生率を低下させる、またはがんを予防するための方法に関し、本方法は、がん腫瘤の付近もしくは内部の腫瘍関連マクロファージ数を減少させるため、または腫瘍関連マクロファージの遊走を減少させるため、その必要がある対象に、ＭＯＳＰＤ２、例えば循環単球もしくは腫瘍関連マクロファージにより発現するＭＯＳＰＤ２の阻害物質の有効量を投与するステップを含む。本発明のいくつかの実施形態は、がん転移を治療する、がん転移を予防する、またはがん転移の発生率を低下させるための方法に関し、本方法は、がん腫瘤の付近もしくは内部の腫瘍関連マクロファージ数を減少させるため、または腫瘍関連マクロファージの遊走を減少させるため、その必要がある対象に、ＭＯＳＰＤ２、例えば循環単球もしくは腫瘍関連マクロファージにより発現するＭＯＳＰＤ２の阻害物質の有効量を投与するステップを含む。実施形態によっては、投与は、局所的投与、例えば、腫瘍内投与である。実施形態によっては、投与は、腫瘍関連マクロファージの個数または遊走を、ベースラインと比較した場合に、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または１００％、あるいは上記パーセンテージの間の任意の数字で減少させるのに有効である。
【０２２７】
実施形態によっては、投与は、腫瘍関連マクロファージの個数または遊走を、ベースラインと比較した場合に、約５％、約１０％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、または１００％、あるいは上記パーセンテージの間の任意の数字で減少させるのに有効である。
【０２２８】
他の実施形態において、投与は、腫瘍関連マクロファージの個数または遊走を、ベースラインと比較した場合に、約５％〜１００％、または約５％〜約９５％、約５％〜約９０％、約５％〜約８０％、約５％〜約７０％、約５％〜約６０％、約５％〜約５０％、約５％〜約４０％、約５％〜約３０％、約１０％〜１００％、約１０％〜約９５％、約１０％〜約９０％、約１０％〜約８０％、約１０％〜約７０％、約１０％〜約６０％、約１０％〜約５０％、約１０％〜約４０％、約２０％〜１００％、約２０％〜約９５％、約２０％〜約９０％、約２０％〜約８０％、約２０％〜約７０％、約２０％〜約６０％、約２０％〜約５０％、約２０％〜約４０％、あるいは本明細書中記載される値の任意の他の範囲で減少させるのに有効である。
【０２２９】
当該分野で既知の任意のアッセイ、例えばマクロファージを特異的に検出する抗体を用いた腫瘍切片の免疫組織化学染色などを用いて、腫瘍関連マクロファージ密度または個数を測定することができる。例えば、米国特許出願第２００７／０２１８１１６号及び同第２０１１／０３１１６１６号を参照。ＭＯＳＰＤ２阻害物質の例として、本明細書中記載されるものが挙げられる。がんの適切な種類も本明細書中記載される。実施形態によっては、がんは、乳がん、頭頸部がん、前立腺がん、または子宮がんである。
【０２３０】
実施形態によっては、ＭＯＳＰＤ２の阻害物質は、本明細書中記載される抗体または抗体の抗原結合断片であり、例えば、抗体抗原平衡解離定数（ＫＤ）が約１０−６Ｍ〜約１０−１２Ｍ、またはそれらの値のうちの任意の範囲（例えば、約１０−７Ｍ〜約１０−１２、１０−８Ｍ〜約１０−１２Ｍ、約１０−９Ｍ〜約１０−１２Ｍ、約１０−１０Ｍ〜約１０−１２Ｍ、約１０−１１Ｍ〜約１０−１２Ｍ、約１０−６Ｍ〜約１０−１１Ｍ、約１０−７Ｍ〜約１０−１１Ｍ、約１０−８Ｍ〜約１０−１１Ｍ、約１０−９Ｍ〜約１０−１１Ｍ、約１０−１０Ｍ〜約１０−１１Ｍ、約１０−６Ｍ〜約１０−１０Ｍ、約１０−７Ｍ〜約１０−１０Ｍ、約１０−８Ｍ〜約１０−１０Ｍ、約１０−９Ｍ〜約１０−１０Ｍ、約１０−６Ｍ〜約１０−９Ｍ、約１０−７Ｍ〜約１０−９Ｍ、約１０−８Ｍ〜約１０−９Ｍ、約１０−６Ｍ〜約１０−８Ｍ、または約１０−７Ｍ〜約１０−８Ｍ）であるものである。他の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、ＫＤが、約１０−６Ｍ、約１０−７Ｍ、約１０−８Ｍ、約１０−９Ｍ、約１０−１０Ｍ、約１０−１１Ｍ、または約１０−１２Ｍである。実施形態によっては、抗体または抗原結合断片は、ＭＯＳＰＤ２上の１つまたは複数のエピトープに結合する。実施形態によっては、ＫＤは、Ｓｃａｔｃｈａｒｄ分析、表面プラズモン共鳴、または本明細書中記載される他の方法により、実施形態によっては、３７℃で、求められる。
【０２３１】
実施形態によっては、本発明の抗体または抗原結合断片は、約１０３１／Ｍｓ〜約１０６１／Ｍｓ、またはそれらの値のうちの任意の範囲（例えば、約１０３１／Ｍｓ〜約１０５１／Ｍｓ、約１０４１／Ｍｓ〜約１０５１／Ｍｓ、約１０４１／Ｍｓ〜約１０６１／Ｍｓ、約１０５１／Ｍｓ〜約１０６１／Ｍｓ、または約１０３１／Ｍｓ〜約１０４１／Ｍｓ）のＫｏｎでＭＯＳＰＤ２に結合する。他の実施形態において、抗体または抗原結合断片は、Ｋｏｎが約１０３１／Ｍｓ、約１０４１／Ｍｓ、約１０５１／Ｍｓ、または約１０６１／Ｍｓである。
【０２３２】
実施形態によっては、本発明の抗体または抗原結合断片は、約１０−３１／ｓ〜約１０−６１／ｓ、またはそれらの値のうちの任意の範囲（例えば、約１０−３１／ｓ〜約１０−５１／ｓ、約１０−４１／ｓ〜約１０−５１／ｓ、約１０−４１／ｓ〜約１０−６１／ｓ、約１０−５１／ｓ〜約１０−６１／ｓ、または約１０−３１／ｓ〜約１０−４１／ｓ）のＫｏｆｆでＭＯＳＰＤ２と結合する。他の実施形態において、抗体または抗原結合断片は、Ｋｏｆｆが、約１０−３１／ｓ、約１０−４１／ｓ、約１０−５１／ｓ、または約１０−６１／ｓである。
【０２３３】
実施形態によっては、ＭＯＳＰＤ２の阻害物質は、抗体または抗体の抗原結合断片であり、治療的有効量は、約１μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、またはそれらの値のうちの任意の範囲（例えば、約２μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、約３μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、約４μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、約５μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、約６μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、約７μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、約８μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、約９μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、約１μｇ／ｍｌ〜約９μｇ／ｍｌ、約２μｇ／ｍｌ〜約９μｇ／ｍｌ、約３μｇ／ｍｌ〜約９μｇ／ｍｌ、約４μｇ／ｍｌ〜約９μｇ／ｍｌ、約５μｇ／ｍｌ〜約９μｇ／ｍｌ、約６μｇ／ｍｌ〜約９μｇ／ｍｌ、約７μｇ／ｍｌ〜約９μｇ／ｍｌ、約８μｇ／ｍｌ〜約９μｇ／ｍｌ、約１μｇ／ｍｌ〜約８μｇ／ｍｌ、約２μｇ／ｍｌ〜約８μｇ／ｍｌ、約３μｇ／ｍｌ〜約８μｇ／ｍｌ、約４μｇ／ｍｌ〜約８μｇ／ｍｌ、約５μｇ／ｍｌ〜約８μｇ／ｍｌ、約６μｇ／ｍｌ〜約８μｇ／ｍｌ、約７μｇ／ｍｌ〜約８μｇ／ｍｌ、約１μｇ／ｍｌ〜約７μｇ／ｍｌ、約２μｇ／ｍｌ〜約７μｇ／ｍｌ、約３μｇ／ｍｌ〜約７μｇ／ｍｌ、約４μｇ／ｍｌ〜約７μｇ／ｍｌ、約５μｇ／ｍｌ〜約７μｇ／ｍｌ、約６μｇ／ｍｌ〜約７μｇ／ｍｌ、約１μｇ／ｍｌ〜約６μｇ／ｍｌ、約２μｇ／ｍｌ〜約６μｇ／ｍｌ、約３μｇ／ｍｌ〜約６μｇ／ｍｌ、約４μｇ／ｍｌ〜約６μｇ／ｍｌ、約５μｇ／ｍｌ〜約６μｇ／ｍｌ、約１μｇ／ｍｌ〜約５μｇ／ｍｌ、約２μｇ／ｍｌ〜約５μｇ／ｍｌ、約３μｇ／ｍｌ〜約５μｇ／ｍｌ、約４μｇ／ｍｌ〜約５μｇ／ｍｌ、約１μｇ／ｍｌ〜約４μｇ／ｍｌ、約２μｇ／ｍｌ〜約４μｇ／ｍｌ、約３μｇ／ｍｌ〜約４μｇ／ｍｌ、約１μｇ／ｍｌ〜約３μｇ／ｍｌ、約２μｇ／ｍｌ〜約３μｇ／ｍｌ、または約１μｇ／ｍｌ〜約２μｇ／ｍｌ）である。他の実施形態において、ＭＯＳＰＤ２の阻害物質は、抗体または抗体の抗原結合断片であり、治療的有効量は、約１μｇ／ｍｌ、約２μｇ／ｍｌ、約３μｇ／ｍｌ、約４μｇ／ｍｌ、約５μｇ／ｍｌ、約６μｇ／ｍｌ、約７μｇ／ｍｌ、約８μｇ／ｍｌ、約９μｇ／ｍｌ、または約１０μｇ／ｍｌである。
【０２３４】
実施形態によっては、ＭＯＳＰＤ２の阻害物質は、抗体または抗体の抗原結合断片であり、治療的有効量は、約１０ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、またはそれらの値のうちの任意の範囲（例えば、約１５ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、約３５ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ〜約３５ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ〜約３５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ〜約３５ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ〜約３５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ〜約３５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ、または約１０ｍｇ／ｋｇ〜約１５ｍｇ／ｋｇ）である。他の実施形態において、ＭＯＳＰＤ２の阻害物質は、抗体または抗体の抗原結合断片であり、治療的有効量は、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約３５ｍｇ／ｋｇ、または約４０ｍｇ／ｋｇである。
【０２３５】
実施形態によっては、対象は、哺乳類またはヒトである。他の実施形態において、ＭＯＳＰＤ２は、哺乳類ＭＯＳＰＤ２またはヒトＭＯＳＰＤ２である。
【０２３６】
診断方法
本発明者らは、ＭＯＳＰＤ２が、様々な種類のがん細胞及び腫瘍、ならびに炎症組織に浸潤してきたまたは腫瘍と関連した炎症細胞の表面で発現することを発見した。本発明者らは、ＭＯＳＰＤ２発現が、様々な種類の腫瘍で、腫瘍のグレードに比例して増加することも発見した。したがって、１つの態様において、本発明は、対象におけるがんまたはがん転移（例えば、乳がん、結腸がん、肝臓がん、黒色腫、または本明細書中記載される他の種類のがん）の予測、診断、または予後判定のための方法に関し、本方法は、対象の試料中のＭＯＳＰＤ２発現レベルを決定するステップを含む。別の態様において、本発明は、対象における、腫瘍進行または腫瘍浸潤性の予測、診断、または予後判定のための方法に関し、本方法は、対象の試料中のＭＯＳＰＤ２発現レベルを決定するステップを含む。これらの方法の１つの実施形態において、ＭＯＳＰＤ２発現レベルは、ＭＯＳＰＤ２遺伝子発現のレベルである。別の実施形態において、ＭＯＳＰＤ２発現レベルは、ＭＯＳＰＤ２タンパク質発現のレベルである。
【０２３７】
１つの態様において、本発明は、対象におけるがん（例えば、乳がん、結腸がん、肝臓がん、黒色腫、または本明細書中記載される他の種類のがん）の予測、診断、または予後判定のためのインビトロ方法に関し、本方法は、対象の試料中のＭＯＳＰＤ２発現レベルを決定するまたは定量するステップを含む。別の態様において、本発明は、対象におけるがん（例えば、乳がん、結腸がん、肝臓がん、黒色腫、または本明細書中記載される他の種類のがん）の予測、診断、または予後判定のためのインビトロ方法に関し、本方法は、（ｉ）対象の試料中のＭＯＳＰＤ２発現レベルを決定または定量するステップ、及び（ｉｉ）ステップ（ｉ）で得られた発現レベルを、対照値または参照値と比較するステップを含み、対照値または参照値と比べて増大したＭＯＳＰＤ２発現レベルは、がんまたはがん発症のリスクの増大を示す。実施形態によっては、対象の試料中にＭＯＳＰＤ２発現があるならば、その対象は、がんを有するかまたはがんのリスクが増大している。他の実施形態において、対象の試料中に対照値または参照値のＭＯＳＰＤ２発現量よりも多い量でＭＯＳＰＤ２発現があるならば、その対象は、がんを有するか、またはがんのリスクが増大している。
【０２３８】
１つの態様において、本発明は、対象におけるがん転移（例えば、乳がん、結腸がん、肝臓がん、黒色腫、または本明細書中記載される他の種類のがん）の予測、診断、または予後判定のためのインビトロ方法に関し、本方法は、対象の試料中のＭＯＳＰＤ２発現レベルを決定または定量するステップを含む。別の態様において、本発明は、対象におけるがん転移（例えば、乳がん、結腸がん、肝臓がん、黒色腫、または本明細書中記載される他の種類のがん）の予測、診断、または予後判定のためのインビトロ方法に関し、本方法は、（ｉ）対象の試料中のＭＯＳＰＤ２発現レベルを決定または定量するステップ、及び（ｉｉ）ステップ（ｉ）で得られた発現レベルを、対照値または参照値と比較するステップを含み、対照値または参照値と比べて増大したＭＯＳＰＤ２発現レベルは、がん転移またはがん転移のリスクの増大を示す。実施形態によっては、対象の試料中にＭＯＳＰＤ２発現があるならば、その対象は、がん転移を有するかまたはがん転移のリスクが増大している。他の実施形態において、対象の試料中に対照値または参照値のＭＯＳＰＤ２発現量よりも多い量でＭＯＳＰＤ２発現があるならば、その対象は、がん転移を有するか、またはがん転移のリスクが増大している。
【０２３９】
１つの態様において、本発明は、対象における腫瘍進行（例えば、腫瘍グレードの増大）または腫瘍浸潤性の予測、診断、または予後判定のためのインビトロ方法に関し、本方法は、対象の試料中のＭＯＳＰＤ２発現レベルを決定または定量するステップを含む。別の態様において、本発明は、対象における腫瘍進行（例えば、腫瘍グレードの増大）または腫瘍浸潤性の予測、診断、または予後判定のためのインビトロ方法に関し、本方法は、（ｉ）対象の試料中のＭＯＳＰＤ２発現レベルを決定または定量するステップ、及び（ｉｉ）ステップ（ｉ）で得られた発現レベルを、対照値または参照値と比較するステップを含み、対照値または参照値と比べて増大したＭＯＳＰＤ２発現レベルは、腫瘍進行（例えば、腫瘍グレードの増大）または腫瘍浸潤性、あるいは腫瘍進行または腫瘍浸潤性のリスクの増大を示す。実施形態によっては、対象の試料中にＭＯＳＰＤ２発現があるならば、その対象は、腫瘍進行または腫瘍浸潤性を有するかまたは腫瘍進行または腫瘍浸潤性のリスクが増大している。他の実施形態において、対象の試料中に対照値または参照値のＭＯＳＰＤ２発現量よりも多い量でＭＯＳＰＤ２発現があるならば、その対象は、腫瘍進行もしくは腫瘍浸潤性を有するか、または腫瘍進行もしくは腫瘍浸潤性のリスクが増大している。
【０２４０】
実施形態によっては、本発明の方法は、以下の追加ステップ：試料中のＭＯＳＰＤ２発現レベルを定量するよう検査室に指示するステップ、検査室から試料中のＭＯＳＰＤ２発現レベルのレポートを入手するステップ、及び／または治療的有効量のＭＯＳＰＤ２の阻害物質（例えば、抗ＭＯＳＰＤ２抗体またはその抗原結合断片）を対象に投与するステップのうち１つまたは複数を含む。
【０２４１】
実施形態によっては、試料は、対象からの組織生検試料、腫瘍生検試料、または血液試料である。
【０２４２】
実施形態によっては、対照値または参照値は、正常組織（例えば、正常隣接組織（ＮＡＴ））中のＭＯＳＰＤ２発現レベルである。他の実施形態において、対照値または参照値は、検出不能なＭＯＳＤＰ２発現量または有意でないＭＯＳＰＤ２発現量である。
【０２４３】
ＭＯＳＰＤ２発現レベルを決定するための方法は、文献で既知であり、本明細書中記載される。
【０２４４】
実施形態によっては、本発明は、対象においてＭＯＳＰＤ２の阻害物質に対して反応性のがんまたはがん転移を治療するための方法に関し、本方法は、（ｉ）対象におけるＭＯＳＰＤ２発現レベルを決定するステップ、及び、発現レベルが対照値または参照値の発現レベルより高いと判定された場合、（ｉｉ）対象に、治療的有効量のＭＯＳＰＤ２の阻害物質（例えば、抗ＭＯＳＰＤ２抗体またはその抗原結合断片）を投与するステップを含む。
【０２４５】
実施形態によっては、本発明は、対象においｙｒＭＯＳＰＤ２発現腫瘍を治療するための方法に関し、本方法は、治療的有効量のＭＯＳＰＤ２の阻害物質（例えば、抗ＭＯＳＰＤ２抗体またはその抗原結合断片）を投与するステップを含む。他の実施形態において、本発明は、対象を治療する方法に関し、本方法は、治療的有効量のＭＯＳＰＤ２の阻害物質（例えば、抗ＭＯＳＰＤ２抗体またはその抗原結合断片）を投与するステップを含み、対象は、ＭＯＳＰＤ２を発現する腫瘍を有している。
【０２４６】
実施形態によっては、本発明は、ＭＯＳＰＤ２を発現するがん細胞または腫瘍を有する患者におけるがんまたはがん転移の治療に使用するための、ＭＯＳＰＤ２の阻害物質（例えば、抗ＭＯＳＰＤ２抗体またはその抗原結合断片）に関する。
【実施例】
【０２４７】
ここで以下の実施例を参照して、上記の説明と共に、非限定的な様式で本発明のいくつかの実施形態を例示する。
【０２４８】
材料及び方法
ＭＯＳＰＤ２サイレンシング
ヒト乳がん細胞株ＭＤＡ−ＭＢ−２３１（本明細書中以下、ＭＤＡ−２３１）（ＨＴＢ−２６）及びヒト悪性黒色腫細胞株Ａ２０５８（ＣＲＬ−１１１４７）を、アメリカ培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ）から購入した。細胞（２ｍｌ中、２×１０６個）を、１５ｍｌ試験管に入れた。対照ショートヘアピンＲＮＡ（ｓｈ−ＲＮＡ）を発現するレンチウイルス粒子（２×１０５個のウイルス粒子）またはヒトＭＯＳＰＤ２  ｓｈ−ＲＮＡを発現するレンチウイルス粒子（２×１０６個のウイルス粒子）を細胞に添加し、次いでこれらを、８μｇ／ｍｌのポリブレン（Ｓｉｇｍａ、Ｉｓｒａｅｌ）の存在下、６０分間、２０００ｒｐｍ、室温で回転させた。次いで、細胞を６ウェルプレートに播種した。７２時間後、ピューロマイシン（４μｇ／ｍｌ、Ｓｉｇｍａ、Ｉｓｒａｅｌ）を含有する新たな培地を加えて、形質導入された細胞を選択した。ＣＲＩＳＰＲ−ＣＡＳ９を介したサイレンシングのため、ＭＤＡ−２３１細胞を、上記のとおりＣＲＩＳＰＲ−ＣＡＳ９非標的対照またはＣＲＩＳＰＲ−ＣＡＳ９ヒトＭＯＳＰＤ２レンチウイルスで形質導入した。形質導入された細胞で単独細胞クローニングを行い、ＭＯＳＰＤ２タンパク質発現がサイレンシングされ、遊走が障害された細胞を単離した。
【０２４９】
ウエスタンブロット法
ｓｈ−対照またはｓｈ−ＭＯＳＰＤ２レンチウイルスで形質導入されたＡ２０５８またはＭＤＡ−２３１細胞、あるいは対照またはＭＯＳＰＤ２  ＣＲＩＳＰＲ−ＣＡＳ９レンチウイルス粒子で形質導入されたＭＤＡ−２３１細胞（１０６個）を、１：１００のジチオトレイトール（ＤＴＴ）、ホスファターゼ、及びプロテアーゼ阻害物質（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を含有する溶解緩衝液で洗浄及び再懸濁させた。試料を、プレキャストＣｒｉｔｅｒｉｏｎ  ＴＧＸゲル（Ｂｉｏ−Ｒａｄ、Ｈｅｍｅｌ  Ｈｅｍｐｓｔｅａｄ、ＵＫ）にロードし、ニトロセルロース膜に移した。ブロットを、５％乳またはウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を加えたトリス緩衝化生理食塩水及びＴｗｅｅｎ２０（ＴＢＳＴ）で１時間ブロックし、続いて一次及び二次抗体と共にインキュベーションした。ＥＣＬキット（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して、膜を現像した。免疫ブロッティングのため、以下の抗体を使用した。
【０２５０】
一次抗体：Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｇｅｎｉｃｓ  Ｌｔｄ製のウサギ抗ＭＯＳＰＤ２（１：５０００）。ホスホ細胞外制御キナーゼ（ｐ−ＥＲＫ１／２）（Ｔｈｒ１８３及びＴｙｒ１８５、１：４０００）を、Ｓｉｇｍａ（Ｉｓｒａｅｌ）から購入した。ホスホ−ＡＫＴ（Ｓｅｒ４７３、１：１０００）を、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇから購入した。ホスホ−ＦＡＫ（１：２０００）を、Ａｂｃａｍ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＵＫ）から購入した。熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）９０（１：１０００）を、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｄａｌｌａｓ、ＴＸ）から購入した。
【０２５１】
二次抗体：西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）ロバ抗ウサギ（１：５０００）抗体及びＨＲＰヤギ抗マウス（１：５０００）抗体を、Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ（Ｗｅｓｔ  Ｇｒｏｖｅ、ＰＡ）から購入した。
【０２５２】
Ｑ−ＰＣＲ
サイレンシング有効性を判定するため、ＲＮｅａｓｙミニキット（Ｑｉａｇｅｎ、ＶａｌｅｎＶＢａ、ＣＡ）を使用して、ｓｈ−対照及びｓｈ−ＭＯＳＰＤ２レンチウイルスで形質導入されたＭＤＡ−２３１細胞からＲＮＡを抽出した。ｃＤＮＡ調製のため、２μｇのＲＮＡを、ｑＳｃｒｉｐｔ反応ミックス及びｑＳｃｒｉｐｔ逆転写酵素（Ｑｕａｎｔａ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）と混合した。反応物をサーマルサイクラー（ＢｉｏＲａｄ、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、ＣＡ）に入れ、取扱説明書に従って実行プログラムを設定した。ヒトＭＯＳＰＤ２用プライマーのセット、ＲＮＡレベルを正規化するための２８Ｓ（ＢＩＯＳＥＡＲＣＨ  ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＩＥＳ、Ｐｅｔａｌｕｍａ、ＣＡ）、及びＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎ  ＰＣＲ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｗａｒｒｉｎｇｔｏｎ、ＵＫ）を用いて、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ７３００リアルタイムＰＣＲシステム（Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ、ＮＹ）でリアルタイムＰＣＲ反応を行った。
【０２５３】
免疫組織化学染色
がん組織でのＭＯＳＰＤ２発現レベルを評価するため、乳がん用（Ｔ０８８Ｂ及びＢＲ２０２８ａ）、肝臓がん用（ＢＣ０３１１６ａ）、及び複数臓器腫瘍用（ＭＣ６１６３）のＢｉｏｍａｘアレイ（ＵＳ  Ｂｉｏｍａｘ  Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、ＭＤ）を、ウサギ抗ＭＯＳＰＤ２抗体または対照ウサギＩｇＧ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓカタログ番号ＡＢ−１０５−Ｃ）とともに染色し、続いて抗ウサギＨＲＰ（カタログ番号０３９９  ＤＡＫＯ、Ｄｅｎｍａｒｋ）とともにインキュベーションした。
【０２５４】
実施例１
抗ＭＯＳＰＤ２抗体
以下の方法に従って、抗ＭＯＳＰＤ２ポリクローナル抗体を作製した。
【０２５５】
材料及び方法
ヘマグルチニン（ＨＡ）タグ付組換えヒトＭＯＳＰＤ２（ＨＡ−ｒｈＭＯＳＰＤ２）の作製及び精製
ＥｃｏＲＩ及びＸｂａＩ制限部位を用いて、全長ヒトＭＯＳＰＤ２  ｃＤＮＡを、レンチウイルスプラスミドベクターｐＬＶＸ−ＥＦ１α−ＩＲＥＳ−Ｐｕｒｏ（Ｃｌｏｎｅｔｅｃｈ、ＣＡ）に挿入した。ＥｃｏＲＩ制限部位を用いて、ＨＡタグ
2018527333.tif 000024
をコードするオリゴヌクレオチドを、ＭＯＳＰＤ２のＮ末端領域に挿入した。形質導入のため、Ａ２０５８黒色腫細胞（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１１１４７、ＶＡ）を、８μｇ／ｍｌのポリブレン（Ｓｉｇｍａ、Ｉｓｒａｅｌ）及びＨＡ−ｒｈＭＯＳＰＤ２発現ベクター含有レンチウイルス粒子の存在下、６０分間、２０００ｒｐｍで、室温で回転させた。次いで、細胞を６ウェルプレートに播種した。７２時間後、ピューロマイシン（４μｇ／ｍｌ、Ｓｉｇｍａ、Ｉｓｒａｅｌ）を含有する新たな培地を加えて、形質導入された細胞を選択した。ＨＡ−ｒｈＭＯＳＰＤ２を精製するため、Ａ２０５８形質導入細胞を、Ｍ−ＰＥＲ哺乳類タンパク質抽出試薬（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で溶解させ、抗ＨＡアガロースビーズ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に通した。グリシンまたはナトリウムチオシアナートを用いて、ビーズからＨＡ−ｒｈＭＯＳＰＤ２を溶出させ、続いてＰＢＳに対して徹底透析した。
【０２５６】
α−ＭＯＳＰＤ２ポリクローナル抗体の作製及び単離
ウサギを、ＨＡ−ｒｈＭＯＳＰＤ２の完全フロイントアジュバント乳化液約０．５ｍｇで免疫化し、続いて３週間ごとにＨＡ−ｒｈＭＯＳＰＤ２の非完全フロイントアジュバント乳化液約０．２５ｍｇを用いた追加免疫を３回行った。各追加免疫の１週間後に血清を収集して、抗体免疫原性及び力価を評価した。タンパク質Ａ／Ｇビーズ（ＳａｎｔａＣｒｕｚ、ＣＡ）を用いて、α−ＭＯＳＰＤ２抗体を血清から単離した。
【０２５７】
結果
ウサギポリクローナルα−ＭＯＳＰＤ２抗体は内因性ヒトＭＯＳＰＤ２を検出しかつ沈殿させる
単離したα−ＭＯＳＰＤ２ポリクローナル抗体を、それらの内因性ヒトＭＯＳＰＤ２を検出し沈殿させる能力について評価した。対照またはｓｈ−ＭＯＳＰＤ２レンチウイルス粒子で形質導入したＵ９３７細胞から細胞溶解液を調製した。試料を、単離したα−ＭＯＳＰＤ２抗体（１：５０００に希釈）を用いてウエスタンブロットにより分析した。ＨＳＰ９０の発現も、ローディング対照として決定した。Ｕ３９７細胞溶解液の免疫沈降も、単離したα−ＭＯＳＰＤ２抗体または対照としてウサギＩｇＧ（１０μｇ）を用いて行った。得られる沈殿物を、単離したα−ＭＯＳＰＤ２抗体を用いて免疫ブロッティングし、続いて、ヤギ抗ウサギ抗体−ＨＲＰ（１：５０００）とともにインキュベーションすることにより分析した。結果は、単離したα−ＭＯＳＰＤ２抗体が、Ｕ９３７細胞において内因性で発現されたＭＯＳＰＤ２を容易に検出及び免疫沈降させることを示した。
【０２５８】
実施例２
転移性細胞株のＭＯＳＰＤ２及び遊走
がん細胞遊走におけるＭＯＳＰＤ２の役割を評価する目的で、２種の転移性細胞株、Ａ２０５８黒色腫及びＭＤＡ−２３１乳がんにおけるＭＯＳＰＤ２発現を、ｓｈ−対照またはｓｈ−ＭＯＳＰＤ２レンチウイルス粒子を用いてサイレンシングした。
【０２５９】
詳細には、ｓｈ−対照またはｓｈ−ＭＯＳＰＤ２で形質導入されたＡ２０５８またはＭＤＡ−２３１細胞（３×１０５）を、あらかじめ３時間、０．５％ＦＢＳ／ＲＰＭＩ−１６４０中で飢餓状態に置き、それをＱＣＭ２４−ウェル、５μｍ孔、遊走アッセイプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ−Ｃｏｓｔａｒ、Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＮＹ）の上段チャンバーに播種し、続いて、下段チャンバーに１０％ＦＢＳ／ＲＰＭＩ−１６４０及びＥＧＦ（２００ｎｇ／ｍｌ、Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ  Ｉｓｒａｅｌ）が存在する状態で、２４時間インキュベーションした。続いて、下段の区画に遊走した細胞を、クリスタルバイオレットで染色してから、画像を撮影した。
【０２６０】
図１は、ｓｈ−ＭＯＳＰＤ２レンチウイルス粒子が、インビトロでタンパク質発現を大いに減少させ、がん細胞遊走を阻害することを示す。
【０２６１】
実施例３
ＭＯＳＰＤ２及び細胞増殖
ＭＯＳＰＤ２サイレンシング後の細胞遊走に対する阻害効果が、増殖などの基本的細胞機能にとって副次的であるかどうかを判定するため、ｓｈ−対照またはｓｈ−ＭＯＳＰＤ２レンチウイルス粒子で形質導入したＭＤＡ−２３１乳がん細胞を３日間の期間にわたり増殖について試験した。
【０２６２】
具体的には、ｓｈ−対照またはｓｈ−ＭＯＳＰＤ２レンチウイルスで形質導入したＭＤＡ−２３１細胞を、６ウェルプレートに播種した（１ウェルあたり１０４個）。３日間連続で、２４時間ごとに、細胞を３つ組でＦＡＣＳにより計数した。
【０２６３】
図２に示すデータは、ＭＯＳＰＤ２がこれらの細胞の増殖にとって必須ではないことを示し、このことは、ＭＯＤＰＤ２の調節的役割が遊走に特異的であることを示唆する。
【０２６４】
実施例４
ＭＯＳＰＤ２及び細胞転移
がん細胞ががんの原発部位を超えて臓器に播種する際のＭＯＳＰＤ２の役割を評価するため、ｓｈ−対照またはｓｈ−ＭＯＳＰＤ２レンチウイルス粒子で形質導入したＭＤＡ−２３１乳がん細胞で肺転移した範囲を、免疫不全マウスに養子導入した。発端部位が乳房である別のモデルでは、免疫不全マウスに対して、ｓｈ−対照またはｓｈ−ＭＯＳＰＤ２レンチウイルス粒子で形質導入したＭＤＡ−２３１乳がん細胞を乳房脂肪体に播種した。
【０２６５】
病理検査：組織診断スライドを、ヘマトキシリン／エオシン（Ｈ＆Ｅ）で染色した。ホルマリン固定組織を脱水し、パラフィンに包埋し、４μｍ厚さの切片にした。Ｈ＆Ｅ染色は、Ｌｅｉｃａ染色モジュールで較正した。スライドを、７分間９０℃に温め、次いで完全自動化プロトコールにより処理した。切片を脱ロウし、再水和させてから、スライドをギルヘマトキシリン３番（Ｓｕｒｇｉｐａｔｈ）で７分間染色し、洗浄し、酸性アルコールに浸漬し、洗浄した。７０％エタノール及び９６％エタノールに短時間浸漬した後、スライドをエオシン（Ｓｉｇｍａ）で４分間染色し、９６％エタノールに入れて脱水し、次いで１００％エタノールに入れて１分間の脱水を２回行った。自動染色の実行が完了した後、切片を１０秒間キシレンに入れて透徹し、エンテランを用いてマウントした。平均腫瘍面積は、各マウスについて測定された最大肺腫瘍面積を含む。
【０２６６】
全身性：ｓｈ−対照またはｓｈ−ＭＯＳＰＤ２レンチウイルスで形質導入したＭＤＡ−２３１細胞１０６個を、８週齢のメスＳＣＩＤマウス（Ｃ．Ｂ−１７／ＩｃｒＨｓｄ−Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ、Ｈａｒｌａｎ  Ｉｓｒａｅｌ）の尾静脈に注射した。４週間後にマウスを屠殺した。肺を切り出して、組織病理学検査を行った。図３Ａの結果は、ＭＯＳＰＤ２発現のサイレンシングが、有意に（ｐ＝０．０２３）、肺中の転移性乳がん細胞の存在を、５０％超（転移面積）阻害することを示す。
【０２６７】
同所性：ｓｈ−対照またはｓｈ−ＭＯＳＰＤ２レンチウイルスで形質導入したＭＤＡ−２３１細胞５×１０６個を、８週齢のメスＳＣＩＤマウス（Ｃ．Ｂ−１７／ＩｃｒＨｓｄ−Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ、Ｈａｒｌａｎ  Ｉｓｒａｅｌ）の乳房脂肪体に注射した。１０週間後にマウスを屠殺した。同側の鼠径リンパ節及び肺を切り出して検査した。肉眼での検査は、ｓｈ−対照細胞を導入されたマウスから切り出したリンパ節の大半が、ｓｈ−ＭＯＳＰＤ２処理細胞を導入されたマウスからのものより圧倒的に大きかったことを示した（図３Ｂ）。さらに、ｓｈ−ＭＯＳＰＤ２処理細胞を導入されたマウスの肺中の平均転移面積は、対照群と比較して、５０％超、減少した（図３Ｃ）。
【０２６８】
ｓｈ−ＭＯＳＰＤ２注入細胞でのＭＯＳＰＤ２  ｍＲＮＡサイレンシングの比は、材料及び方法で記載されるとおりのＱ−ＰＣＲにより求めた場合、約８０％であった。
【０２６９】
これらの結果は、ＭＯＳＰＤ２が、乳がん転移で主要な役割を果たすことを実証する。
【０２７０】
実施例５
様々な種類のがんにおけるＭＯＳＰＤ２発現
ＭＯＳＰＤ２発現が正常細胞からがん性細胞への形質転換と関連するかどうかを判定するため、正常組織及びがん性組織を保有するスライドを、材料及び方法で記載されるとおりに抗ＭＯＳＰＤ２抗体を用いてスクリーニングした。
【０２７１】
図４Ａは、正常及びがん性の乳房組織の代表的な染色を示す。対照ＩｇＧ抗体では正常及びがん性の乳房組織は陰性に染色されるものの、抗ＭＯＳＰＤ２抗体は、がん性組織のみを特徴的に染色した。同様に、ＭＯＳＰＤ２は、正常な膀胱、脳、結腸、食道、舌、腎臓、及び肝臓組織では発現しないが、これらの組織ががん性になると、上方制御される（図４Ｂ〜図４Ｅ）。これらの結果は、様々な組織において、ＭＯＳＰＤ２発現が正常組織からがん性組織への形質転換と関連することを示唆する。
【０２７２】
実施例６
ＭＯＳＰＤ２遺伝子ノックダウンとがん細胞遊走
インビトロ：ＭＯＳＰＤ２の持続的ノックダウンを達成するため、ＭＤＡ−２３１乳がん細胞を、材料及び方法のセクションで記載されるとおりに、ＣＲＩＳＰＲ−ＣＡＳ９遺伝子編集システムを含有するレンチウイルス粒子で形質導入した。対照またはＭＯＳＰＤ２  ＣＲＩＳＰＲ−ＣＡＳ９レンチウイルス粒子で形質導入されたＭＤＡ−２３１細胞を、実施例２で記載した方法と同様に、遊走について試験した。対照またはＭＯＳＰＤ２  ＣＲＩＳＰＲ−ＣＡＳ９レンチウイルス粒子で形質導入されたＭＤＡ−２３１細胞（３×１０５）を、上段チャンバーに播種し、続いて２〜４時間インキュベーションした。その後、下段の区画に遊走した細胞の数を、ＦＡＣＳにより求めた。
【０２７３】
図５Ａ及び図５Ｂは、ＭＤＡ−２３１がん細胞にＭＯＳＰＤ２用ＣＲＩＳＰＲ−ＣＡＳ９システムを導入すると、タンパク質発現が消失したこと及び結果的にトランスウェルアッセイで細胞の遊走を大いに阻害したことを示す。
【０２７４】
ケモカイン受容体に駆動されるシグナル伝達事象に対するＣＲＩＳＰＲ−ＣＡＳ９によるＭＯＳＰＤ２サイレンシングの効果を試験するため、ＥＲＫ、ＡＫＴ、及びＦＡＫのリン酸化レベルを、材料及び方法で記載されるとおりに調べた。遊走アッセイの結果によれば、ＣＲＩＳＰＲ−ＣＡＳ９システムによるＭＯＳＰＤ２サイレンシングは、対照と比較して、ＥＧＦに曝露させた細胞において、ＡＫＴのリン酸化を完全に防止し、ＥＲＫ及びＦＡＫのリン酸化を明確に阻害した（図５Ｃのウエスタンブロットを参照）。
【０２７５】
インビボ：ＣＲＩＳＰＲ−対照またはＣＲＩＳＰＲ−ＭＯＳＰＤ２レンチウイルスで形質導入したＭＤＡ−２３１細胞１０６個を、８週齢のメスＳＣＩＤマウス（Ｃ．Ｂ−１７／ＩｃｒＨｓｄ−Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ、Ｈａｒｌａｎ  Ｉｓｒａｅｌ）の尾静脈に注射した。３週間後にマウスを屠殺した。実施例４に記載した方法と同様にして、肺を切り出して組織病理学検査を行った。図５Ｄは、ＣＲＩＳＰＲ−ＣＡＳ９システムによるＭＯＳＰＤ２サイレンシングが、９５％超（転移面積）で、肺における転移性乳がん細胞の存在を大幅に阻害したことを示す。
【０２７６】
実施例７
ＶＢ−２０１及びＥＧＦシグナル伝達経路
インビトロ：上皮成長因子（ＥＧＦ）誘導型リン酸化に対するＶＢ−２０１の効果を試験するため、ＭＤＡ−２３１乳がん細胞（１０６個）を、０．５％ＦＣＳ培地中で３時間飢餓状態にし、続いて様々な濃度のＶＢ−２０１（１μｇ／ｍｌ、５μｇ／ｍｌ、及び１０μｇ／ｍｌ）または溶媒対照とともに２０分間インキュベーションした。次いで、ＭＤＡ−２３１細胞をＥＧＦ（２００ｎｇ／ｍｌ）で１０分間活性化させた。次いで、ＡＫＴのリン酸化をウエスタンブロットにより分析した。ローディング対照として、ＨＳＰ９０を用いた。
【０２７７】
図６に示すとおり、ＶＢ−２０１は、１０μｇ／ｍｌで、ＡＫＴのＥＧＦ誘導型リン酸化をほぼ完全に阻害し、有意な阻害は５μｇ／ｍｌで観察された。
【０２７８】
実施例８
抗ＭＯＳＰＤ２Ｆ（ａｂ’）２モノクローナル抗体の作製
抗ＭＯＳＰＤ２Ｆ（ａｂ’）２モノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、ＨｕＣＡＬ  ＰＬＡＴＩＮＵＭ（登録商標）プラットフォーム（Ｂｉｏ−Ｒａｄ  ＡｂＤ  Ｓｅｒｏｔｅｃ、ＧｍｎＨ）を用いて得た。このプラットフォームは、一揃いのファージディスプレイされたヒトＦａｂを含有する。
【０２７９】
手短に述べると、ヒトＦｃと融合したＭＯＳＰＤ２の細胞外領域の組換えタンパク質を、固体支持体に固定した。ファージ粒子上に提示されたＨｕＣＡＬ（登録商標）ライブラリーを、固定された抗原とともにインキュベートした。全面洗浄により非特異的抗体を除去し、還元剤を加えることにより特異的抗体ファージを溶出させた。抗体ＤＮＡをプールとして単離し、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）発現ベクターにサブクローン導入して、二価Ｆ（ａｂ’）２ｍＡｂを作製した。コロニーをピックアップして、マイクロタイタープレートで成長させた。培養物を溶解させて、抗体分子を放出させ、ＥＬＩＳＡ及びＦＡＣＳにより特異的抗原結合についてスクリーニングした。一段階アフィニティークロマトグラフィーを用いて特有抗体を発現させて精製し、次いで、特異性についてＥＬＩＳＡ及びＦＡＣＳにより再度試験した。
【０２８０】
図７は、ＭＯＳＰＤ２を過剰発現する細胞への結合について一次スクリーニング後に同定された１７種の抗ＭＯＳＰＤ２  Ｆ（ａｂ’）２モノクローナル抗体クローンを列挙する。ＭＯＳＰＤ２結合についてＥＬＩＳＡでクローンをさらに分析した結果、バックグラウンドの５倍超のＯ．Ｄ．値を有するクローンが１２種同定された（図７中の＊）。
【０２８１】
実施例９
抗ＭＯＳＰＤ２  Ｆ（ａｂ’）２ｍＡｂは細胞上で過剰発現したヒトＭＯＳＰＤ２と結合する
Ａ２０５８黒色腫細胞にＨＡタグ付ヒトＭＯＳＰＤ２を形質移入して、ＭＯＳＰＤ２を過剰発現する細胞を作製した。
【０２８２】
次いで、実施例８で同定された１２種の抗体クローンとＭＯＳＰＤ２との結合を、これらの細胞を用いてフローサイトメトリーにより試験した。具体的には、１０５の細胞を、１００μｌのＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ＋２％ＦＣＳ＋０．０２％アジ化ナトリウム）中、２．５μｇのＦ（ａｂ’）２ｍＡｂとともに、４℃で１時間、インキュベートした。次いで、細胞を洗浄し、ＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁させ、Ａｌｅｘａ−Ｆｌｕｏｒ６４７結合（Ｆａｂ’）２ヤギ抗ヒトＩｇＧ、Ｆ（ａｂ’）２１：２００（カタログ番号１０９−６０６−０９７、Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ、ＰＡ）を用いて、４℃で３０分間染色した。細胞を洗浄し、ＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁させ、ＦＡＣＳ−Ｃａｌｉｂｕｒ装置で分析した。
【０２８３】
全てのクローンが、細胞を陽性に染色させた。２種のクローンについて代表的な染色を図８Ａ〜図８Ｂに示す。実施例８でＥＬＩＳＡを用いて陽性クローンとして同定されなかったクローンは、陰性対照として用いた。
【０２８４】
実施例１０
抗ＭＯＳＰＤ２  Ｆ（ａｂ’）２ｍＡｂはヒト乳がん細胞上で内因性ＭＯＳＰＤ２と特異的に結合する
抗ＭＯＳＰＤ２  Ｆ（ａｂ’）２ｍＡｂを、ＭＤＡ−２３１乳がん細胞の表面で発現した内因性ＭＯＳＰＤ２への結合について試験した。細胞を、実施例９に記載したとおりに、抗ＭＯＳＰＤ２  Ｆ（ａｂ’）２ｍＡｂで染色した。２種の異なるクローンを用いた染色を、図９に示す。実施例９に記載したＥＬＩＳＡ陰性クローンは、陰性対照として用いた。図９は、抗ＭＯＳＰＤ２  Ｆ（ａｂ’）２ｍＡｂが、ヒト乳がん細胞上の内因性ＭＯＳＰＤ２と特異的に結合することを示す。
【０２８５】
抗原結合特異性をさらに実証するため、ＣＲＩＳＰ−ＣＡＳ９レンチウイルス粒子を用いてＭＤＡ−２３１細胞でのＭＯＳＰＤ２遺伝子発現をサイレンシングした。ＭＯＳＰＤ２発現抑制細胞及び非抑制細胞を、抗ＭＯＳＰＤ２（Ｆａｂ’）２ｍＡｂまたは陰性対照と一緒にして、ＦＡＣＳで分析した。図１０Ａ〜図１０Ｂは、抗ＭＯＳＰＤ２  Ｆ（ａｂ’）２ｍＡｂがＭＤＡ−２３１細胞に結合する（図１０Ａ）が、ＭＯＳＰＤ２発現抑制ＭＤＡ−２３１細胞には結合しない（図１０Ｂ）ことを示す。
【０２８６】
実施例１１
抗ＭＯＳＰＤ２  Ｆ（ａｂ’）２ｍＡｂは黒色腫細胞上及び肝臓がん細胞上の内因性ＭＯＳＰＤ２と結合する
抗ＭＯＳＰＤ２  Ｆ（ａｂ’）２ｍＡｂを、Ａ２０５８黒色腫細胞株及びＨｅｐＧ２肝臓がん細胞株の表面で発現した内因性ＭＯＳＰＤ２への結合について試験した。細胞を、実施例９及び１０に記載したとおりに、抗ＭＯＳＰＤ２  Ｆ（ａｂ’）２ｍＡｂで染色し、ＭＯＳＰＤ２への結合について試験した。図１１Ａ〜１１Ｂは、抗ＭＯＳＰＤ２  Ｆ（ａｂ’）２ｍＡｂが、黒色腫細胞及び肝臓がん細胞上の内因性ＭＯＳＰＤ２と特異的に結合することを示す。
【０２８７】
実施例１２
抗ＭＯＳＰＤ２  Ｆ（ａｂ’）２ｍＡｂはＭＤＡ−２３１がん細胞においてＥＧＦ誘導型シグナル伝達を阻害する
ＭＤＡ−２３１がん細胞でのＥＧＦ誘導型シグナル伝達に対する抗ＭＯＳＰＤ２  Ｆ（ａｂ’）２ｍＡｂの効果を、ウエスタンブロットで分析した。具体的には、ＭＤＡ−２３１細胞を０．５％ＦＣＳ含有培地で一晩飢餓状態に置き、続いて抗ＭＯＳＰＤ２（Ｆａｂ’）２ｍＡｂとともに１時間インキュベートしてから、ＥＧＦ（１００ｎｇ／ｍｌ）を５分間加えた。細胞を洗浄し、溶解緩衝液に再懸濁させ、プレキャストＣｒｉｔｅｒｉｏｎ  ＴＧＸゲル（Ｂｉｏ−Ｒａｄ、Ｈｅｍｅｌ  Ｈｅｍｐｓｔｅａｄ、ＵＫ）にロードし、ニトロセルロース膜に移した。膜を、５％乳またはＢＳＡ含有トリス緩衝化生理食塩水及びＴｗｅｅｎ２０（ＴＢＳＴ）で１時間ブロックし、次いで一次抗体及び二次抗体とともにインキュベートした。ＥＣＬキット（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して、膜を現像した。抗ＭＯＳＰＤ２  Ｆ（ａｂ’）２ｍＡｂで処理しなかった細胞（ｕｎｔ）を、陰性対照として分析した。熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）−９０タンパク質レベルを、タンパク質ローディング対照として分析した。
【０２８８】
以下の抗体を使用した。
【０２８９】
一次抗体：Ｓｉｇｍａ（Ｉｓｒａｅｌ）製ｐ−ＥＲＫ１／２（カタログ番号Ｍ８１５９、１：１０，０００）、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ製ホスホ−ＡＫＴ（カタログ番号９２７１、Ｓｅｒ４７３、１：１０００）及びホスホ−ＥＧＦ受容体（カタログ番号２２３６  １：１０００）、ならびにＳａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ、ＣＡ）製ＨＳＰ−９０（カタログ番号１３１１９、１：５００）。
【０２９０】
二次抗体：Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ（Ｗｅｓｔ  Ｇｒｏｖｅ、ＰＡ、ＵＳＡ）製ＨＲＰロバ抗ウサギ（１：５０００）抗体及びＨＲＰヤギ抗マウス（１：３０００）抗体。
【０２９１】
図１２に示すとおり、抗ＭＯＳＰＤ２（Ｆａｂ’）２ｍＡｂとともにＭＤＡ−２３１細胞をインキュベートすると、ＥＧＦ受容体のリン酸化（ｐＥＧＦ−Ｒ）、ならびに細胞遊走と関連した下流シグナル伝達経路のメディエーターであるＡＫＴ及びＥＲＫのリン酸化（それぞれ、ｐ−ＡＫＴ及びｐ−ＥＲＫ１／２）が阻害された。
【０２９２】
実施例１３
抗ＭＯＳＰＤ２  Ｆ（ａｂ’）２ｍＡｂはＭＤＡ−２３１がん細胞のＥＧＦ誘導型遊走を阻害する
ＭＤＡ−２３１がん細胞のＥＧＦ誘導型遊走に対する抗ＭＯＳＰＤ２  Ｆ（ａｂ’）２ｍＡｂの効果を、実施例２で説明したとおりにトランスウェル遊走で分析した。ＭＤＡ−２３１乳がん細胞（３×１０５）を、０．５％ＦＣＳ含有ＰＲＭＩ培地で４〜５時間飢餓状態に置き、次いで、抗ＭＯＳＰＤ２  Ｆ（ａｂ’）２ｍＡｂとともに１時間インキュベートした。ＥＧＦを溶解させて、１０％ＦＣＳを含むＰＲＭＩ培地を含有した、ＱＣＭ  ２４ウェル遊走アッセイプレート（８μｍ孔）（Ｃｏｒｎｉｎｇ−Ｃｏｓｔａｒ、Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＮＹ）の下段チャンバー（４００ｎｇ／ｍｌ）に入れた。細胞を上段チャンバーに播種し、続いて一晩インキュベートし、その後、下段の区画に遊走した細胞の数をＦＡＣＳにより求めた。
【０２９３】
図１３に示すとおり、Ｆ（ａｂ’）２ｍＡｂは、ＭＤＡ−２３１乳がん細胞のＥＧＦ誘導型トランスウェル遊走を有意に阻害した。
【０２９４】
実施例１４
ＭＯＳＰＤ２の細胞発現特異性及び局在性の解明
異なる免疫細胞サブ集団の分析から、ＭＯＳＰＤ２は、Ｔリンパ球及びＢリンパ球よりもＣＤ１４＋単球で優勢に発現することが示された（図１４Ａ）。ＭＯＳＰＤ２  ｍＲＮＡ発現レベルを決定するため、ＲＮｅａｓｙミニキット（Ｑｉａｇｅｎ、ＶａｌｅｎＶＢａ、ＣＡ）を用いて、ＲＮＡを細胞から抽出した。ｃＤＮＡ調製のため、２μｇのＲＮＡをｑＳｃｒｉｐｔ反応ミックス及びｑＳｃｒｉｐｔ逆転写酵素（Ｑｕａｎｔａ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）と混合した。反応物を、サーマルサイクラー（ＢｉｏＲａｄ、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、ＣＡ）に入れ、取扱説明書に従って操作をプログラミングした。ヒトＭＯＳＰＤ２用プライマーのセット、ＲＮＡレベルを正規化するための２８Ｓ（ＢＩＯＳＥＡＲＣＨ  ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＩＥＳ、Ｐｅｔａｌｕｍａ、ＣＡ）、及びＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎ  ＰＣＲ  Ｍａｓｔｅｒミックス（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｗａｒｒｉｎｇｔｏｎ、ＵＫ）を用いて、リアルタイムＰＣＲ反応を、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ７３００リアルタイムＰＣＲシステム（Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ、ＮＹ）で行った。
【０２９５】
ＭＯＳＰＤ２は、１つの膜貫通領域及び１残基長の細胞内テイルを持つ形質膜タンパク質であると予想される。細胞区画の分画、及びヒト単球の免疫蛍光染色、及びＨＡタグ付ＭＯＳＰＤ２を過剰発現するように形質移入されたＨＥＫ２９３細胞のフローサイトメトリー（上記の方法に従って行われる）から、ＭＯＳＰＤ２は、ヒト単球の形質膜で発現する細胞表面タンパク質であることが、明らかとなった（それぞれ、図１４Ｂ〜図１４Ｄ）。
【０２９６】
実施例１５
ＭＯＳＰＤ２は炎症組織に浸潤した単球で発現する
ホルマリン固定した組織を脱水し、パラフィンに包埋し、４μｍの切片にした。免疫染色は、Ｂｅｎｃｈｍａｒｋ  ＸＴ染色モジュール（Ｖｅｎｔａｎａ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）で完全に較正した。切片を脱ロウし再水和させた後、抗ＣＤ１６３（Ｃｅｌｌ  Ｍａｒｑｕｅ、Ｒｏｃｋｌｉｎ、ＵＳＡ、ＭＲＱ−２６）または抗ＭＯＳＰＤ２を、それぞれ１：８０及び１：１００に希釈したものを、加えて４０分間静置した。抗ＣＤ１６３染色は、ＵｌｔｒａＶｉｅｗ汎用アルカリホスファターゼ赤検出キット（Ｖｅｎｔａｎａ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、７６０−５０１）を用いて検出し、抗ＭＯＳＰＤ２染色は、ＵｌｔｒａＶｉｅｗ汎用ＤＡＢ検出キット（Ｖｅｎｔａｎａ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、７６０−５００）を用いて検出した。二重染色を適用した場合、ＭＯＳＰＤ２染色を先に行い、続いてＣＤ１６３染色を行った。スライドを、ヘマトキシリン（Ｖｅｎｔａｎａ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）で対比染色した。自動染色の実行が完了した後、スライドを７０％エタノール、９５％エタノール、及び１００％エタノールに順次入れ、各回１０秒間脱水を行った。カバーを乗せる前に、切片を１０秒間キシレンに入れて透徹し、エンテランを用いてマウントした。ＭＯＳＰＤ２及びＣＤ１６３染色したスライドをＯｌｙｍｐｕｓ  ＢＸ５１顕微鏡で観察した。画像は、Ｎｉｋｏｎ顕微鏡用デジタルカメラｄｉｇｉｔａｌ  ｓｉｇｈｔ及びＮＩＳ  Ｅｌｅｍｅｎｔｓ  Ｉｍａｇｉｎｇソフトウェアを用いて撮影した。
【０２９７】
図１５Ａ〜図１５Ｃに示すとおり、ＭＯＳＰＤ２は、様々な炎症組織に浸潤した単球で発現する。図１５Ａは、リウマチ様関節炎患者由来の滑膜を、ＣＤ１６３、ＭＯＳＰＤ２、またはＣＤ１６３及びＭＯＳＰＤ２両方について染色したものを示す。図１５Ｂは、アテローム硬化性頸動脈組織をＣＤ１６３、ＭＯＳＰＤ２、またはＣＤ１６３及びＭＯＳＰＤ２両方について染色したものを示す。図１５Ｃは、浸潤性乳管がん乳房組織をＭＯＳＰＤ２について染色したものを示す。暗い矢印は、腫瘍細胞の陽性染色を示す。明るい矢印は、浸潤性単球の染色を示す。
【０２９８】
実施例１６
ＭＯＳＰＤ２は単球遊走を促進する
Ｕ９３７単球株の細胞を、上記のとおりｓｈ−レンチ対照またはｓｈ−レンチＭＯＳＰＤ２ウイルス粒子で形質導入した。図１６Ａは、Ｑ−ＰＣＲ及びウエスタンブロットで評価した場合のｓｈ−レンチＭＯＳＰＤ２のサイレンシング効果を示す。遊走について試験したところ、ＭＯＳＰＤ２発現抑制細胞は、インビトロでＲＡＮＴＥＳ（ＣＣＬ５）に向かって遊走する能力が深刻に損なわれていた（図１６Ｂ）。単球遊走に重要であると認識されている２つの主要なシグナル伝達経路は、ＭＥＫ−ＥＲＫ経路及びＰＩ３Ｋ−ＡＫＴ経路である（Ｄｉ  Ｌｏｒｅｎｚｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００９、Ｗａｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００２）。図１６Ｃは、ＲＡＮＴＥＳの存在下でのＥＲＫ及びＡＫＴのリン酸化が、ＭＯＳＰＤ２発現抑制細胞では完全に抑制されることを示す。
【０２９９】
観察された効果が１種のケモカインにのみ限定されるかどうかを確認するため、ｓｈ−対照及びｓｈ−ＭＯＳＰＤ２発現抑制Ｕ９３７細胞を、異なるケモカイン受容体を介した遊走及びリン酸化を誘導するリガンドで活性化した。ＭＯＳＰＤ２のサイレンシングは、使用したケモカインが何であるかにかかわらず、単球遊走ならびにＥＲＫ及びＡＫＴリン酸化を損傷させた（それぞれ、図１６Ｄ及び図１６Ｅ）。
【０３００】
実施例１７
ＭＯＳＰＤ２はＩＦＮ−γ誘導型活性化にもＰＫＣ仲介型活性化にも影響を及ぼさない
ＭＯＳＰＤ２を標的とすることは、単球の遊走以外の生体機能を損ねなかった。Ｕ９３７単球株の細胞を、上記のとおりｓｈ−レンチ対照またはｓｈ−レンチＭＯＳＰＤ２ウイルス粒子で形質導入し、ＩＦＮ−γまたはＰＭＡで処理した。処理した細胞のウエスタンブロット分析は、ＭＯＳＰＤ２のサイレンシングが、下流のシグナル伝達マーカーのＩＦＮ−γまたはＰＭＡによるリン酸化を変更しなかったことを示した（それぞれ、図１７Ａ及び図１７Ｂ）。これらの結果は、ＭＯＳＰＤ２が単球遊走を特異的に促進することを示唆する。
【０３０１】
実施例１８
抗ＭＯＳＰＤ２抗体のエピトープマッピング
抗ＭＯＳＰＤ２抗体がヒトＭＯＳＰＤ２上で特異的に結合する可能性があるエピトープを決定するため、本明細書中記載されるとおり、ストレプトアビジン（ＳＡ）チップにあらかじめ固定されたＳＡを介してＮ末端ビオチン化ＭＯＳＰＤ２断片を捕捉し、ＭＯＳＰＤ２表面を横断して測定された抗ＭＯＳＰＤ２抗体の結合動態を測定することにより（ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）３０００（商標）表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）システム、Ｂｉａｃｏｒｅ、Ｉｎｃ．、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ  ＮＪ）、様々なヒトＭＯＳＰＤ２断片に対する結合親和性を測定する。ＢＩＡｃｏｒｅアッセイは、ＨＢＳ−ＥＰランニング緩衝液（１０ｍＭのＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．４、１５０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、０．００５％ｖ／ｖのポリソルベートＰ２０）中で行われる。Ｎ−ビオチン化ＭＯＳＰＤ２をＨＢＳ−ＥＰ緩衝液に希釈して濃度を０．００１ｍｇ／ｍＬ未満にし、これを、ＳＡセンサーチップにまたがって、様々な接触時間を用いて注入することにより、ＭＯＳＰＤ２表面を調製する。捕捉レベルが＜５０反応単位（ＲＵ）に相当する低容量表面を、高分解能動態試験用に用い、一方、高容量表面（約８００ＲＵのＭＯＳＰＤ２捕捉）は、濃度試験、スクリーニング、及び溶液親和性測定に用いる。
【０３０２】
抗体Ｇ１  Ｆａｂを２倍または３倍の希釈幅で系列希釈して、１μＭ〜０．１ｎＭの範囲の濃度にする（推定ＫＤの０．１〜１０倍を目的とする）ことにより、動態データを得る。試料は、典型的には、１００μＬ／分で１分間注入し、少なくとも１０分の解離時間を持たせる。各結合サイクル後に、表面を、２５ｍＭのＮａＯＨ含有２５％ｖ／ｖエタノールで再生させる。表面は、このサイクルを数百回行っても耐える。全濃度系列（ｔｉｔｒａｔｉｏｎ  ｓｅｒｉｅｓ）（典型的には２つ組で作製される）を、ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎプログラムを用いて、包括的に１：１ラングミュア結合モデルに当てはめた。この結果、各結合平衡についてそれら特有の結合解離速度定数（それぞれ、Ｋｏｎ及びＫｏｆｆ）の対が得られ、その比が平衡解離定数（ＫＤ＝Ｋｏｆｆ／Ｋｏｎ）となる。
【０３０３】
抗ＭＯＳＰＤ２抗体は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１によって付番された（アミノ酸残基１位〜５１８位）ヒトＭＯＳＰＤ２の以下のアミノ酸領域：５０８位〜５１７位、５０１位〜５１４位、２３３位〜２４１位、５０９位〜５１７位、２１２位〜２２１位、１３位〜２４位、５０５位〜５１７位、５０５位〜５１４位、８９位〜１００位、５０６位〜５１７位、２３３位〜２４５位、５０４位〜５１４位、１２８位〜１３６位、２１８位〜２２６位、１５位〜２４位、８３位〜９６位、４２位〜５０位、４６２位〜４７４位、３４０位〜３５１位、５０４位〜５１７位、４６２位〜４７０位、３２７位〜３３７位、２１位〜３２位、２１７位〜２２６位、５１０位〜５１７位、１７８位〜１９０位、４９７位〜５０９位、５０４位〜５１６位、６４位〜７７位、５０４位〜５１５位、１４７位〜１５９位、５０３位〜３１５位、８８位〜９７位、２０８位〜２１８位、１７８位〜１９１位、５０２位〜５１５位、５０３位〜５１６位、４９７位〜５０５位、５００位〜５０９位、１８９位〜２０２位、１８９位〜１９７位、５０５位〜５１６位、１位〜６３位、８２位〜２３９位、９３位〜２３４位、３２７位〜４４５位、３２７位〜４３１位、及び４９７位〜５１７位の１つまたは複数と結合する可能性がある。
【０３０４】
実施例１９
さらなる抗ＭＯＳＰＤ２抗体
実施例１（ポリクローナル抗体）または実施例８（モノクローナル抗体）に記載される方法に従って、１つまたは複数のＭＯＳＰＤ２エピトープを認識するさらなる抗ＭＯＳＰＤ２抗体を作製する。
【０３０５】
簡単に述べると、実施例１８でＭＯＳＰＤ２エピトープとして同定されたＭＯＳＰＤ２の部分を、ヒトＦｃと融合させて、固体支持体に固定する。ファージ粒子上に提示させたＨｕＣＡＬ（登録商標）ライブラリー（ＨｕＣＡＬ  ＰＬＡＴＩＮＵＭ（登録商標）Ｐｌａｔｆｏｒｍ、Ｂｉｏ−Ｒａｄ  ＡｂＤ  Ｓｅｒｏｔｅｃ、ＧｍｎＨ）を、固定された抗原とともにインキュベートする。全面洗浄により非特異的抗体を除去し、還元剤を加えて特異的抗体ファージを溶出させる。抗体ＤＮＡをプールとして単離し、大腸菌発現ベクターにサブクローン導入して、二価Ｆ（ａｂ’）２ｍＡｂを作製する。コロニーをピックアップし、マイクロタイタープレートで成長させる。培養物を溶解させて、抗体分子を放出させ、ＥＬＩＳＡ及びＦＡＣＳにより特異的抗原結合についてスクリーニングする。一段階アフィニティークロマトグラフィーを用いて特有抗体を発現させて精製し、次いで、特異性についてＥＬＩＳＡ及びＦＡＣＳにより再度試験する。
【０３０６】
実施例２０
ＭＯＳＰＤ２発現は様々な種類のがんにおいて腫瘍グレードと相関して増加する
ＭＯＳＰＤ２発現が腫瘍進行と関連するかどうかを判定するため、異なる腫瘍グレードで正常組織及びがん性組織を保有するスライドを、材料及び方法のセクションで記載したとおり、抗ＭＯＳＰＤ２抗体を用いてスクリーニングした。ＭＯＳＰＤ２存在量を、染色強度に従って、０〜３の尺度でスコア化した。単一の核内に内部異種染色が観察された場合、その範囲のスコアは、最もカバー度が高いものが割り当てられた。
【０３０７】
図１８Ａ〜図１８Ｆは、乳がん組織及び対照組織の代表的なＭＯＳＰＤ２染色を示す。正常隣接組織（ＮＡＴ）は、陰性対照として働き、高くなっていく腫瘍のステージには、非浸潤性小葉がん（ＬＣＩＳ）、非浸潤性乳管がん（ＩＤＩＳ）、浸潤性乳管がん（ＩＤＣ）、浸潤性小葉がん（ＩＬＣ）、及び転移性浸潤性乳管がん（ＭＩＤＣ）が含まれていた。代表的なＮＡＴ、ＬＣＩＳ、及びＩＤＩＳ染色は、ＭＯＳＰＤ２について陰性染色であったのに対し、ＩＤＣ、ＩＬＣ、及びＭＩＤＣの代表的な染色は、強い陽性ＭＯＳＰＤ２染色を示した。
【０３０８】
図１９は、浸潤性及び転移性乳がんでＭＯＳＰＤ２染色強度が高まることを示す。ＮＡＴ内では、試料のうち１８％パーセントのみ（２／１１）が染色強度１を示したが、一方非浸潤性細胞腫試料（ＩＤＩＳ＋ＬＣＩＳ）の２１％（４／１９）は、スコアが１または２であった。しかしながら、浸潤性及び転移性組織の分析は、ＮＡＴ及び非浸潤性細胞腫（ＩＤＩＳ＋ＬＣＩＳ）に比べて、スコア２の頻度が高くなること及びスコア３まで増大した染色強度が増加することを示した。すなわち、ＩＬＣ、ＩＤＣ、及びＭＩＤＣについてスコア２と３を合わせたパーセントは、それぞれ、６３％（１２／１９）、７７％（５０／６５）、及び８１％（２５／３１）であった。
【０３０９】
ＭＯＳＰＤ２発現は、結腸組織及び肝臓組織の正常細胞からがん性細胞への形質転換でも同じく相関した。図２０Ａ〜図２０Ｄは、試験した結腸がん試料の６７％及び肝細胞がん試料の４５％で、陽性ＭＯＳＰＤ２染色があったことを示した。試験した正常結腸組織及び肝臓組織では、ＭＯＳＰＤ２染色は検出されなかった（０％）。
【０３１０】
ＭＯＳＰＤ２発現は、悪性度とも相関する。図２１Ａ〜図２１Ｅは、腫瘍グレードとともに増大する肝細胞がんにおける強いＭＯＳＰＤ２染色を示し、一方正常及びＮＡＴ試料では、ＭＯＳＰＤ２染色が陰性であった。
【０３１１】
図２２Ａ〜図２２Ｂに、図２１Ａ〜図２１Ｅ由来の悪性肝臓組織または対照におけるＭＯＳＰＤ２染色の強度をまとめる。ＭＯＳＰＤ２染色強度は、それぞれ、正常及びＮＡＴと比較して、悪性試料で有意に３．２または４倍増大した（ｐ≦０．００１）。図２２Ｂは、異なるステージの肝細胞がんでＭＯＳＰＤ２染色強度が増大することを示す。
【０３１２】
実施例２１
ＶＢ−２０１はＭＯＳＰＤ２を阻害する
ＶＢ−２０１及びＶＢ−２２１の標識化
ＶＢ−２０１及びＶＢ−２２１を、以下のとおりビオチンで標識した。ＶＢ−２０１、ＶＢ−２２１、及び卵白アルブミン（ＯＶＡ、Ｓｉｇｍａ、Ｉｓｒａｅｌ）を、０．１ＭのＭＥＳ緩衝液（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）に溶解させ、ＥＤＣ［１−エチル−３−（ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドＨＣｌ］（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて、１００（ＶＢ−２０１／ＶＢ−２２１）：１（ＯＶＡ）：２４０（ＥＤＣ）のモル比で、室温で２〜３時間結合させた。その後、試料を１０ｋＤａ透析カセット（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に移し、ＰＢＳに対して一晩透析した。次いで、卵白アルブミンが結合したＶＢ−２０１（ＯＢ２０１）及びＶＢ−２２１（ＯＢ２２１）を、ＥＤＣを用いて、１（ＯＢ２０１／ＯＢ２２１）：１００（アミン−ＰＥＧ２−ビオチン）：７００（ＥＤＣ）のモル比で、アミン−ＰＥＧ２−ビオチンと結合させた（０．１ＭのＭＥＳ緩衝液中）。反応を、室温で２〜３時間進行させ、その後、試料を再び１０ｋＤａ透析カセットに移して、ＰＢＳに対して一晩透析した。
【０３１３】
沈殿
１：１００のプロテアーゼ阻害物質及びホスファターゼ阻害物質を含有する１％ＮＰ−４０溶解緩衝液を用いて細胞を溶解させ、続いて氷上で２０分間インキュベートし、最大速度で１５分遠心した。試料を、溶媒、ＯＢ２０１、またはＯＢ２２１とともに、ローテ―ター中４℃で一晩インキュベートした。ストレプトアビジンアガロースビーズ（Ｓｉｇｍａ、Ｉｓｒａｅｌ）を２時間加えた。ＤＴＴを含まない溶解緩衝液を用いて、室温で１０分間タンパク質の溶出を行った。試料のロード、移送、及び免疫ブロッティングを、上記のとおり行った。
【０３１４】
結果
ＶＢ−２０１は、ＭＯＳＰＤ２と結合する
ＶＢ−２０１は、インビトロ及びインビボで単球の遊走を阻害することが、既に示されていた。しかしながら、ＶＢ−２０１の誘導体であるＶＢ−２２１は、ヒト単球で、ケモカイン誘導型シグナル伝達及び遊走を阻害しなかった。標識化ＶＢ−２０１及びＶＢ−２２１を用いて、ヒト単球由来のタンパク質を沈殿させ、質量分析法により差次的表示を調べた。質量分析結果から、ＭＯＳＰＤ２は、ＶＢ−２０１に強く結合するが、ＶＢ−２２１にはそうではないことが明らかとなった。
【０３１５】
これらの結果をさらに検証するため、標識化ＶＢ−２０１及びＶＢ−２２１をヒトＣＤ１４単球由来の細胞溶解物に使用した。次いで、試料を、抗ＭＯＳＰＤ２及びＴＬＲ２でプローブ標識した。ＶＢ−２０１及びＶＢ−２２１は、同等な強度でＴＬＲ２を沈殿させたものの、ＶＢ−２０１は、ＶＢ−２２１よりも顕著に強くＭＯＳＰＤ２を沈殿させた（図２３）。これらの結果も、ＶＢ−２０１がＭＯＳＰＤ２と結合することを示す。
【０３１６】
実施例２２
ＭＯＳＰＤ２は乳がん細胞においてＥＧＦ誘導型シグナル伝達事象を促進する
ＭＤＡ−２３１乳がん細胞におけるＭＯＳＰＤ２サイレンシング
ＥＧＦとＥＧＦ受容体（ＥＧＦ−Ｒ）との連結は、受容体の下流のリン酸化を含むシグナル伝達カスケードを誘導する。本発明者らは、ＭＯＳＰＤ２がＥＧＦにより誘導されるシグナル伝達カスケードに影響を及ぼすかどうかを調べた。ヒト乳がん細胞株ＭＤＡ−ＭＢ−２３１（本明細書中以下、ＭＤＡ−２３１）（ＨＴＢ−２６）をＡＴＣＣから購入した。細胞（２ｍｌ中２×１０６個）を、１５ｍｌ試験管に入れた。ＣＲＩＳＰＲ非標的対照（ＣＲＩＳＰＲ−対照）またはＣＲＩＳＰＲヒトＭＯＳＰＤ２（ＣＲＩＳＰＲ−ＭＯＳＰＤ２）を発現するレンチウイルス粒子を、細胞に使用し、次いで、それらを、８μｇ／ｍｌポリブレン（Ｓｉｇｍａ、Ｉｓｒａｅｌ）の存在下、室温で、２０００ｒｐｍで６０分間回転させた。次いで、細胞を６ウェルプレートに播種した。７２時間後、ピューロマイシン（４μｇ／ｍｌ、Ｓｉｇｍａ、Ｉｓｒａｅｌ）を含有する新鮮な培地を加えて、形質導入された細胞を選択した。ＣＲＩＳＰＲ形質導入された細胞で単独細胞クローニングを行い、ＭＯＳＰＤ２タンパク質発現が抑制され、遊走が損なわれた細胞を単離した。
【０３１７】
ＣＲＩＳＰＲ−対照ＭＤＡ−２３１細胞をＥＧＦで活性化した場合、ＥＧＦ−Ｒ及び下流のシグナル伝達分子は、リン酸化された。しかしながら、ＣＲＩＳＰＲ−ＭＯＳＰＤ２発現抑制細胞では、ＥＧＦ−Ｒリン酸化及び下流の分子に顕著な阻害が観察された（図２４）。これらの結果は、ＭＯＳＰＤ２が、乳がん細胞でＥＧＦ誘導型シグナル伝達経路を調節することを示す。
【０３１８】
本明細書中言及される全ての文献、特許、及び特許出願は、それぞれ個々の文献、特許、または特許出願が、具体的かつ個別に本明細書中参照により援用されると示されたのと同程度まで、その全体が、本明細書に参照により援用される。また、本出願中の任意の参照についての引用及び特定は、その参照が本発明の先行技術として利用可能であることの承認であると見なしてはならない。セクションの見出しが使用される限りにおいて、それらは、必然的に限定として見なしてはならない。
【図１】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図４Ｄ】
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【図４Ｅ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図５Ｄ】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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