(57)【要約】  本発明は、少なくとも１つの酸性ｐＨに耐性のあるフィコシアニンを含む酸性組成物、特に、酸性食品組成物に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１つの鉱物酸または有機酸と、少なくとも１つの酸性ｐＨ耐性フィコシアニンとを含んでなる酸性組成物、特に酸性食品組成物。
【請求項２】
前記フィコシアニンが、フィコビリタンパク質であり、そのアポタンパク質が配列番号１または配列番号２のタンパク質またはその改変体を含んでなるものである、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記フィコシアニンのα−サブユニットアポタンパク質が配列番号１を含み、前記フィコシアニンのβ−サブユニットアポタンパク質が配列番号２またはその改変体を含んでなるものである、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記α−サブユニットアポタンパク質が配列番号１からなり、前記β−サブユニットアポタンパク質が配列番号またはその改変体からなる、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
前記フィコシアニンと組み合わせて、アロフィコシアニンをさらに含んでなる、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
前記アロフィコシアニンのα−サブユニットアポタンパク質が配列番号３またはその改変体を含み、前記アロフィコシアニンのβ−サブユニットアポタンパク質が配列番号４またはその改変体を含んでなる、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
前記アロフィコシアニンのα−サブユニットアポタンパク質が配列番号３またはその改変体からなり、β−サブユニットアポタンパク質が配列番号４またはその改変体からなる、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
前記フィコシアニンが、イデユコゴメ（Ｃｙａｎｉｄｉａｌｅｓ）目の藻類（または微細藻類）から抽出されたフィコシアニンである、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
フィコシアニンが、イデユコゴメ（Ｃｙａｎｉｄｉａｃｅａｅ）科またはガルディエリア（Ｇａｌｄｉｅｒｉａｃｅａｅ）科の藻類（または微細藻類）から抽出されたフィコシアニンである、請求項１〜８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
前記フィコシアニンが、シアニディオシゾン（Ｃｙａｎｉｄｉｏｓｃｈｙｚｏｎ）属、シアニジウム（Ｃｙａｎｉｄｉｕｍ）属またはガルディエリア（Ｇａｌｄｉｅｒｉａ）属の藻類（または微細藻類）から抽出されたフィコシアニンである、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１】
前記フィコシアニンが、Ｃｙａｎｉｄｉｏｓｃｈｙｚｏｎ  ｍｅｒｏｌａｅ  １０Ｄ種、Ｃｙａｎｉｄｉｏｓｃｈｙｚｏｎ  ｍｅｒｏｌａｅ  ＤＢＶ２０１種、Ｃｙａｎｉｄｉｕｍ  ｃａｌｄａｒｉｕｍ種、Ｃｙａｎｉｄｉｕｍ  ｄａｅｄａｌｕｍ種、Ｃｙａｎｉｄｉｕｍ  ｍａｘｉｍｕｍ種、Ｃｙａｎｉｄｉｕｍ  ｐａｒｔｉｔｕｍ種、Ｃｙａｎｉｄｉｕｍ  ｒｕｍｐｅｎｓ種、Ｇａｌｄｉｅｒｉａ  ｄａｅｄａｌａ種、Ｇａｌｄｉｅｒｉａ  ｍａｘｉｍａ種、Ｇａｌｄｉｅｒｉａ  ｐａｒｔｉｔａ種、Ｇａｌｄｉｅｒｉａ  ｓｕｌｐｈｕｒａｒｉａ種、優先的にはＧａｌｄｉｅｒｉａ  ｓｕｌｐｈｕｒａｒｉａ種、Ｃｙａｎｉｄｉｕｍ  ｃａｌｄａｒｉｕｍ種およびＣｙａｎｉｄｉｏｓｃｈｙｚｏｎ  ｍｅｒｏｌａｅ種の藻類（または微細藻類）から抽出されたフィコシアニンである、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２】
４以下のｐＨを有する、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
２〜４のｐＨを有する、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１４】
約２．５〜３．５のｐＨを有する、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１５】
前記フィコシアニンのα−サブユニットアポタンパク質が３未満の等電点を有する、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１６】
前記フィコシアニンのα−サブユニットアポタンパク質が２．５未満の等電点を有する、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１７】
前記フィコシアニンのα−サブユニットアポタンパク質が２．２未満の等電点を有する、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１８】
固体である、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１９】
フィコシアニン含有量が０．２５ｍｇ／ｇ〜２．５ｍｇ／ｇである、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２０】
液体である、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２１】
フィコシアニン含有量が２．５ｍｇ／Ｌ〜２，５００ｍｇ／Ｌである、請求項１５に記載の組成物。
【請求項２２】
請求項２０または２１のいずれかに記載の液体酸性組成物を含んでなる炭酸または非炭酸の飲料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、少なくとも１つの酸性ｐＨに安定なフィコシアニンを含む酸性組成物、特に、酸性食品組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
フィコシアニンは、これを添加した製品に青色を与える食品着色料である。スピルリナから抽出されたフィコシアニンは、現在のところ、米国ＦＤＡによって承認された唯一の天然青色色素である（ＦＲ  Ｄｏｃ  Ｎｏ：２０１３−１９５５０）。フィコシアニンは、食品における青色色素の用途に、液体形態または粉末形態で販売されている。
【０００３】
しかしながら、スピルリナに由来するフィコシアニンは、５未満の酸性ｐＨで不安定であり、そのため着色が失われ、沈殿し、その利用が制限されるとの課題を有している。とりわけ、ｐＨ４付近で安定性の消失が起こる（スピルリナ由来のフィコシアニンＬｉｎａｂｌｕｅ（登録商標）の技術的な仕様；ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｄｌｔ−ｓｐｌ．ｃｏ．ｊｐ／ｂｕｓｉｎｅｓｓ／ｅｎ／ｓｐｉｒｕｌｉｎａ／ｌｉｎａｂｌｕｅ．ｈｔｍｌを参照）。
【０００４】
その結果、スピルリナ由来のフィコシアニンを食品着色料として使用することができないか、あるいはその抗酸化特性ゆえに使用することができない、多くの酸性食品組成物、特に炭酸または非炭酸の飲料が存在する。
【０００５】
酸性ｐＨで安定な、特に、４未満の酸性ｐＨで安定な新規フィコシアニンを見出す必要性が存在する。本明細書において、ｐＨ耐性または安定性とは、酸性ｐＨへの最低でも１０分間の暴露後における着色の消失が１０％未満として測定されることである。ｐＨ安定性は、他の方法、例えば、酸性組成物中のフィコシアニンの時間の関数としての物理的特徴によって測定することができる。
【発明の概要】
【０００６】
したがって、本発明は、少なくとも１つの酸性ｐＨ耐性フィコシアニンを含んでなる酸性組成物、特に酸性食品組成物に関する。有利には、フィコシアニンは、アポタンパク質が配列番号１または配列番号２のタンパク質またはその改変体を少なくとも含むことができるフィコビリタンパク質であってもよい。
【０００７】
本発明によれば、フィコシアニンは、具体的には、ガルディエリア科（Ｇａｌｄｉｅｒｉａｃｅａｅ）から抽出されたフィコシアニン、さらに具体的には、ガルディエリア属（Ｇａｌｄｉｅｒｉａ）から抽出されたフィコシアニンであってもよい。
【０００８】
本発明の酸性組成物、特に酸性食品組成物は、固体またはペースト状、または液体、特に、場合により炭酸飲料であってもよい。
【０００９】
酸性組成物、特に酸性食品組成物とは、本発明によれば、ｐＨが４以下、有利にはｐＨが２〜４、さらに有利には２．５〜３．５の組成物を意味する。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
フィコシアニンおよびアロフィコシアニンは、発色団と共有結合するアポタンパク質から構成されるαサブユニットとβサブユニットとを含むフィコビリタンパク質である。異なるフィコシアニンは、α−サブユニットアポタンパク質およびβ−サブユニットアポタンパク質の配列によって本質的に区別される。
【００１１】
本発明の一つの特定の実施形態によれば、酸性組成物、特に、酸性食品組成物は、酸性ｐＨ耐性フィコシアニンを含み、そのα−サブユニットアポタンパク質が配列番号１（寄託番号ＹＰ＿００９０５１１７９．１）を含み、β−サブユニットアポタンパク質が、配列番号２（寄託番号ＹＰ＿００９０５１１８０．１）またはその改変体を含む。
【００１２】
本発明の好ましい実施形態によれば、酸性組成物、特に、酸性食品組成物は、酸性ｐＨ耐性フィコシアニンを含み、そのα−サブユニットアポタンパク質が、配列番号１（寄託番号ＹＰ＿００９０５１１７９．１）からなり、β−サブユニットアポタンパク質が、配列番号２（寄託番号ＹＰ＿００９０５１１８０．１）またはその改変体からなる。
【００１３】
本発明の別の実施形態によれば、酸性組成物、特に、酸性食品組成物は、フィコシアニンと組み合わせてアロフィコシアニンをさらに含んでいてもよい。
【００１４】
有利には、上記アロフィコシアニンのα−サブユニットアポタンパク質は、配列番号３（寄託番号ＹＰ＿００９０５１１０３．１）を含み、β−サブユニットアポタンパク質は、配列番号４（ＹＰ＿００９０５１１０４．１）またはその改変体を含む。
【００１５】
本発明の別の好ましい実施形態によれば、上記アロフィコシアニンのα−サブユニットアポタンパク質は、配列番号３（寄託番号ＹＰ＿００９０５１１０３．１）からなり、β−サブユニットアポタンパク質は、配列番号４（ＹＰ＿００９０５１１０４．１）またはその改変体からなる。
【００１６】
タンパク質のアミノ酸組成は、そのアミノ酸組成に従って、タンパク質の異なる特性を与えることができる。タンパク質の特徴は、特に、そのアミノ酸組成およびその等電点（ｐＩ）に依存する。等電点は、タンパク質が正味の電荷をもたない溶液のｐＨであり、言い換えると、分子が電気的に中性であり、タンパク質が互いに引き寄せ合い、凝集し、沈殿するｐＨである。この等電点より高いｐＨでは、タンパク質は、負に帯電し、互いに反発する傾向がある。
【００１７】
Ｐａｔｒｉｃｋｉｏｓ  ａｎｄ  Ｙａｍａｓａｋｉ（Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ  Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄ  Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｉｓｏｅｌｅｃｔｒｉｃ  Ｐｏｉｎｔ．  ＩＩ．Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｂｅｔｗｅｅｎ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ｔｈｅｏｒｙ．Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．２３１，１，１９９５：８２−９１．１９９５）に記載されるコンピュータによる手順を用いた種々のタンパク質の等電点の比較分析により、理論計算値と実験的に観察された酸性ｐＨ耐性との特定の相関関係が示される。
【００１８】
本出願人により行われた試験によって、フィコシアニンの酸性ｐＨ耐性は、当該フィコシアニンのαサブユニットのアミノ酸配列と関係があることが示されている。また、フィコシアニンのαサブユニットのアミノ酸配列において、最初の２６アミノ酸の同一性が特に重要であると考えられることに留意すべきである。このことは、具体的には、シアニディオシゾン（Ｃｙａｎｉｄｉｏｓｃｈｙｚｏｎ）属、シアニジウム（Ｃｙａｎｉｄｉｕｍ）属、またはガルディエリア（Ｇａｌｄｉｅｒｉａ）属の微細藻類の株、より具体的には、Ｇａｌｄｉｅｒｉａ  ｓｕｌｐｈｕｒａｒｉａ株、Ｃｙａｎｉｄｉｕｍ  ｃａｌｄａｒｉｕｍ株、およびＣｙａｎｉｄｉｏｓｃｈｙｚｏｎ  ｍｅｒｏｌａｅ株の培養によって得られるフィコシアニンの場合に当てはまる。
【００１９】
したがって、有利には、本発明による組成物は、その少なくとも１つのアポタンパク質、特に、αサブユニットのアポタンパク質が、酸性ｐＨで良好な安定性を可能にする低い等電点を有していてもよい少なくとも１つのフィコシアニンを含むことができる。
【００２０】
低い等電点とは、３以下、優先的には２．５以下、さらに優先的には２．２以下の等電点を意味する。
【００２１】
したがって、さらに有利には、本発明による組成物は、その少なくとも１つのアポタンパク質、特に、αサブユニットのアポタンパク質が、３以下、優先的には２．５以下、さらに優先的には２．２以下の等電点を有していてもよい少なくとも１つのフィコシアニンを含んでいてもよい。
【００２２】
したがって、本発明の一つの特定の実施形態によれば、酸性組成物、具体的には、酸性食品組成物は、そのα−サブユニットアポタンパク質が低い等電点を有していてもよい少なくとも１つのフィコシアニンを含むことができ、より具体的には、そのα−サブユニットアポタンパク質が配列番号１またはその改変体を含んでいてもよい少なくとも１つのフィコシアニンを含むことができる。
【００２３】
したがって、本発明の別の特定の実施形態によれば、酸性組成物、具体的には、酸性食品組成物は、そのα−サブユニットアポタンパク質が低い等電点を有する少なくとも１つのフィコシアニン、より具体的には、そのα−サブユニットアポタンパク質が配列番号１または改変体からなる少なくとも１つのフィコシアニンを含む。
【００２４】
改変体とは、本発明によれば、参照配列に対応するタンパク質配列、この場合において、参照配列の１つまたはそれ以上のアミノ酸の１つまたはそれ以上の置換、挿入または欠失によって改変され、当該参照配列と同じ機能特性を有する、配列番号１、配列番号２、配列番号３、または配列番号４によって表されるタンパク質を意味する。
【００２５】
有利には、本発明において改変体は、フィコシアニンのαサブユニットと少なくとも８３％の配列同一性を有し、フィコシアニンのβサブユニットと少なくとも８２％の配列同一性を有する。
【００２６】
優先的には、本発明において改変体は、α（配列番号１）サブユニットおよびβ（配列番号２）サブユニットと少なくとも９０％の同一性を有する。
【００２７】
同様に、アロフィコシアニンについて、改変体は、有利には、アロフィコシアニンのαサブユニットと少なくとも８９％の配列同一性を有し、アロフィコシアニンのβサブユニットと少なくとも９０％の配列同一性を有する。
【００２８】
当業者は、一般的な方法を自由に用いた、特にＢＬＡＳＴＰプログラムを用いた、タンパク質の配列同一性の測定方法を知っている（ｈｔｔｐ：／／ｂｌａｓｔ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／Ｂｌａｓｔ．ｃｇｉ）。
【００２９】
同様に、当業者は、上述の配列の改変体をどのように特定するか、そして、酸性ｐＨにおける簡便な安定性試験によって、例えば、試験（例えば、実施例３に示される試験）を行うことによって、これらが同様な構造特性を保持していることをどのように確認するかを知っている。
【００３０】
当業者は、その機能を実質的に変えることなく、少なくとも１つのアミノ酸の置換、挿入および／または欠失によってポリペプチドを改変することができることを知っている。
【００３１】
例えば、あるアミノ酸を、所定の位置において化学的に等価な別のアミノ酸によって置換することは、タンパク質の特性に実質的に影響を与えない配列改変の既知の例である。
【００３２】
これらの「保存的」置換は、以下のアミノ酸群の範囲内における交換として定義することができる。
−  Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ
−  Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ
−  Ｈｉｓ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ
−  Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｃｙｓ、および
−  Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ
【００３３】
したがって、本発明のフィコシアニンおよび／またはアロフィコシアニンのアポタンパク質の改変体は、得られる改変体が参照タンパク質の特性および上述したホモロジー／同一性の割合を保持している限り、対応する参照配列に関して、特に、フィコシアニンのαサブユニットおよび／またはβサブユニットに関して１〜３０アミノ酸の差異を含んでいてもよい。
【００３４】
さらに正確には、本発明によれば、
−置換、挿入および／または欠失から誘導される、本発明の酸性組成物に有用なフィコシアニンのα−サブユニットアポタンパク質改変体は、得られる改変体が参照タンパク質の特性および上述した同一性の割合を保持している限りにおいて、対応する参照配列に関し、１〜２７アミノ酸の差異を含んでいてもよい。
−置換、挿入および／または欠失から誘導される、本発明の酸性組成物に有用なフィコシアニンのβ−サブユニットアポタンパク質改変体は、得られる改変体が参照タンパク質の特性および上述した同一性の割合を保持している限りにおいて、対応する参照配列に関し、１〜３０アミノ酸の差異を含んでいてもよい。
−置換、挿入および／または欠失から誘導される、本発明の酸性組成物に有用なアロフィコシアニンのα−サブユニットアポタンパク質改変体は、得られる改変体が参照タンパク質の特性および上述した同一性の割合を保持している限りにおいて、対応する参照配列に関し、１〜２４アミノ酸の差異を含んでいてもよい。
−置換、挿入および／または欠失から誘導される、本発明の酸性組成物に有用なアロフィコシアニンのβ−サブユニットアポタンパク質改変体は、得られる改変体が参照タンパク質の特性および上述した同一性の割合を保持している限りにおいて、対応する参照配列に関し、１〜２０アミノ酸の差異を含んでいてもよい。
【００３５】
より具体的には、本発明によれば、考慮される参照配列（フィコシアニンのαおよび／またはβサブユニットおよび／またはアロフィコシアニンのαおよび／またはβサブユニット）にかかわらず、上述したサブユニットの改変体は、有利には、得られる改変体が参照タンパク質の特性および上述した同一性の割合を保持している限りにおいて、対応する参照配列に関し、１〜１５アミノ酸の差異を含んでいてもよく、好ましくは、１〜１０アミノ酸の差異、特に、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０アミノ酸の差異を含んでいてもよい。
【００３６】
本発明によれば、酸性組成物、特に、酸性食品組成物において、単独で、またはアロフィコシアニンまたはその改変体と混合して、有用なフィコシアニンまたはその改変体は、目的とするフィコシアニンまたはその改変体を天然に発現する天然生物の培養によって、あるいは、フィコシアニンまたはその改変体を産生する能力について選択された、目的とするフィコシアニンまたはその改変体を発現するように遺伝子的に形質転換された生物の培養によって得ることができる。
【００３７】
本発明の組成物において有用な目的とするフィコシアニンまたはその改変体を天然に発現する天然生物の例として、イデユコゴメ（Ｃｙａｎｉｄｉａｌｅｓ）目の藻類（または微細藻類）が挙げられる。
【００３８】
イデユコゴメ（Ｃｙａｎｉｄｉａｌｅｓ）目は、イデユコゴメ（Ｃｙａｎｉｄｉａｃｅａｅ）科とガルディエリア（Ｇａｌｄｉｅｒｉａｃｅａｅ）科を含み、これらの科自身は、シアニディオシゾン（Ｃｙａｎｉｄｉｏｓｃｈｙｚｏｎ）属、シアニジウム（Ｃｙａｎｉｄｉｕｍ）属およびガルディエリア（Ｇａｌｄｉｅｒｉａ）属に細分化され、これらのメンバーは、特に、Ｃｙａｎｉｄｉｏｓｃｈｙｚｏｎ  ｍｅｒｏｌａｅ  １０Ｄ種、Ｃｙａｎｉｄｉｏｓｃｈｙｚｏｎ  ｍｅｒｏｌａｅ  ＤＢＶ２０１種、Ｃｙａｎｉｄｉｕｍ  ｃａｌｄａｒｉｕｍ種、Ｃｙａｎｉｄｉｕｍ  ｄａｅｄａｌｕｍ種、Ｃｙａｎｉｄｉｕｍ  ｍａｘｉｍｕｍ種、Ｃｙａｎｉｄｉｕｍ  ｐａｒｔｉｔｕｍ種、Ｃｙａｎｉｄｉｕｍ  ｒｕｍｐｅｎｓ種、Ｇａｌｄｉｅｒｉａ  ｄａｅｄａｌａ種、Ｇａｌｄｉｅｒｉａ  ｍａｘｉｍａ種、Ｇａｌｄｉｅｒｉａ  ｐａｒｔｉｔａ種およびＧａｌｄｉｅｒｉａ  ｓｕｌｐｈｕｒａｒｉａ種を含む。とりわけ、Ｇａｌｄｉｅｒｉａ  ｓｕｌｐｈｕｒａｒｉａ株（Ｃｙａｎｉｄｉｕｍ  ｃａｌｄａｒｉｕｍとも呼ばれる）  ＵＴＥＸ番号２９１９が挙げられる。
【００３９】
したがって、本発明の実施形態によれば、酸性組成物、特に、酸性食品組成物は、イデユコゴメ（Ｃｙａｎｉｄｉａｌｅｓ）目の藻類または微細藻類などの天然生物、特に、イデユコゴメ（Ｃｙａｎｉｄｉａｃｅａｅ）科またはガルディエリア（Ｇａｌｄｉｅｒｉａｃｅａｅ科の藻類または微細藻類などの天然生物に由来する酸性ｐＨ耐性フィコシアニンを含む。
【００４０】
より具体的には、本発明によれば、酸性組成物、特に、酸性食品組成物は、シアニディオシゾン（Ｃｙａｎｉｄｉｏｓｃｈｙｚｏｎ）属、シアニジウム（Ｃｙａｎｉｄｉｕｍ）属およびガルディエリア（Ｇａｌｄｉｅｒｉａ）属に属する天然生物、有利には、シアニジウム（Ｃｙａｎｉｄｉｕｍ）属およびガルディエリア（Ｇａｌｄｉｅｒｉａ）属の種から選択される天然生物に由来する酸性ｐＨ耐性フィコシアニンを含む。
【００４１】
さらにより具体的には、本発明によれば、酸性組成物、特に、酸性食品組成物は、Ｃｙａｎｉｄｉｏｓｃｈｙｚｏｎ  ｍｅｒｏｌａｅ  １０Ｄ種、Ｃｙａｎｉｄｉｏｓｃｈｙｚｏｎ  ｍｅｒｏｌａｅ  ＤＢＶ２０１種、Ｃｙａｎｉｄｉｕｍ  ｃａｌｄａｒｉｕｍ種、Ｃｙａｎｉｄｉｕｍ  ｄａｅｄａｌｕｍ種、Ｃｙａｎｉｄｉｕｍ  ｍａｘｉｍｕｍ種、Ｃｙａｎｉｄｉｕｍ  ｐａｒｔｉｔｕｍ種、Ｃｙａｎｉｄｉｕｍ  ｒｕｍｐｅｎｓ種、Ｇａｌｄｉｅｒｉａ  ｄａｅｄａｌａ種、Ｇａｌｄｉｅｒｉａ  ｍａｘｉｍａ種、Ｇａｌｄｉｅｒｉａ  ｐａｒｔｉｔａ種、Ｇａｌｄｉｅｒｉａ  ｓｕｌｐｈｕｒａｒｉａ種から選択される天然生物に由来する酸性ｐＨ耐性フィコシアニンを含む。
【００４２】
本発明の酸性組成物、特に、酸性食品組成物の好ましい形態は、Ｇａｌｄｉｅｒｉａ  ｓｕｌｐｈｕｒａｒｉａ、Ｃｙａｎｉｄｉｕｍ  ｃａｌｄａｒｉｕｍまたはＣｙａｎｉｄｉｏｓｃｈｙｚｏｎ  ｍｅｒｏｌａｅなどの天然微細藻類に由来する酸性ｐＨ耐性フィコシアニンを含む。さらに優先的には、酸性ｐＨ耐性フィコシアニンは、Ｇａｌｄｉｅｒｉａ  ｓｕｌｐｈｕｒａｒｉａおよびＣｙａｎｉｄｉｕｍ  ｃａｌｄａｒｉｕｍから選択される天然微細藻類に由来する。
【００４３】
フィコシアニンまたはその改変体を産生する能力について選択された、目的とするフィコシアニンまたはその改変体を発現するように形質転換された生物の例として、配列番号１および／または配列番号２および／または配列番号３および／または配列番号４のアポタンパク質を発現するように形質転換された微生物であって、発色団の産生およびアポタンパク質に対する発色団の結合に必要な生合成経路をも含む微生物が挙げられる。本発明の食品組成物に使用されるフィコシアニンおよび／またはアロフィコシアニンを産生するように改変することができる微生物として、特に、酵母が挙げられる。
【００４４】
当業者は、本発明の組成物において有用なフィコシアニンを産生することができる天然および／または改変生物を培養するための方法の記載を従来技術から容易に見つけることができるであろう。
【００４５】
例えば、イデユコゴメ（Ｃｙａｎｉｄｉａｌｅｓ）目のイデユコゴメ科（Ｃｙａｎｉｄｉａｃｅａｅ）またはガルディエリア科（Ｇａｌｄｉｅｒｉａｃｅａｅ）の培養は、当業者によく知られており、有利には、混合栄養モードで行うことができ、色素の生合成には、通常、光が必要である。
【００４６】
このような工業的培養は、有利には、大容積（すなわち、１，０００リットル、１０，０００リットル、２０，０００リットル、１００，０００リットル）の発酵槽で行うことができる。培養は、当業者に知られている条件下で行うことができる。培養は、バッチモード、流加モードまたは連続モードで行うことができる。
【００４７】
本発明の組成物に有用なフィコシアニンは、より具体的には、４００ｎｍ〜５５０ｎｍ、有利には４２０ｎｍ〜５００ｎｍ、優先的には４３０〜４８０ｎｍ、さらに優先的には約４５５ｎｍの波長を有する光を用いた、上述の混合栄養モードで培養されたイデユコゴメ（Ｃｙａｎｉｄｉａｌｅｓ）目の藻類の培養によって得られるバイオマスから抽出することができる。光は、上述の波長の光を含む広いスペクトルを有する「白色」光であってもよい。光は、有利には、上述の波長を含む狭いスペクトルの光であってもよい。
【００４８】
混合栄養モードでイデユコゴメ目（Ｃｙａｎｉｄｉａｌｅｓ）バイオマスを工業的に調製するためのこのような方法と、そのようにして得られるバイオマスは、特に、２０１５年９月２５日に出願された特許出願ＦＲ  １５  ５９０７２号に記載され、その内容は参照することにより本明細書に組み込まれる。
【００４９】
本発明の目的は、酸性ｐＨでフィコシアニンが安定である組成物を提供することである。酸性組成物とは、本発明によれば、鉱物酸または有機酸とフィコシアニンとを含む任意の組成物を意味する。この組成物は、液体、流体、または粘状体、ペースト状体または固体であってもよく、酸性ｐＨを有し、その中に酸性ｐＨ耐性フィコシアニンが組み込まれる。
【００５０】
水性液体組成物の場合、ｐＨは、通常の方法で測定される。非水性液体組成物の場合、またはペースト状または固体の組成物の場合、ｐＨは、組成物を、鉱物酸または有機酸およびフィコシアニンを含む、当該組成物中に含まれる可溶性化合物を溶解するのに十分な量の水に溶解した後に測定される。
【００５１】
有利には、本発明の組成物は、水性液体組成物、場合により、水溶液または水を含むペースト状もしくは固体の組成物に溶解するように設計されたゲル形態、またはペースト状もしくは固体の組成物である。本発明の別の有利な実施形態によれば、酸性組成物のペースト状または固体の組成物は、湿潤環境で使用され、および／または保存されることを意図している。
【００５２】
本発明の組成物に有用な鉱物酸または有機酸は、当業者によく知られている。鉱物酸の例としては、特に、カルボン酸、リン酸、塩酸、硫酸、過塩素酸、スルホン酸および硝酸が挙げられる。有機酸の例としては、特に、クエン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、コハク酸、有利には、クエン酸が挙げられる。
【００５３】
酸性食品組成物とは、本発明によれば、ヒトまたは動物によって摂取されるように設計され、上の定義に含まれる任意の組成物を意味する。栄養補給酸性組成物は、本発明の範囲内において、酸性食品組成物の定義に含まれるものと扱われるべきである。
【００５４】
本発明の酸性食品組成物は、当業者によく知られている。本発明の酸性食品組成物は、担体を含んでいてもよく、この担体は、ヒトまたは動物に有益な、酸性食品組成物の栄養供給または健康特性のために特定される活性化合物に関連する構成成分を含んでいてもよい。本発明の酸性食品組成物は、食品添加剤、例えば、テクスチャー付与剤、香味剤、防腐剤、または当業者によく知られている任意の成分も含んでいてもよい。担体は、水、および／またはタンパク質、および／または脂肪、および／または繊維、および／または糖類を含んでいてもよい。担体の成分は、構造的特性を有するだけではなく、一般的に、栄養補給物としても知られている。
【００５５】
本発明の酸性食品組成物は、すぐに使えるものであってもよく、あるいは、食用の食品を調製するために固体、ペースト状または液体調製物に添加される食品添加物の形態であってもよい。
【００５６】
食品組成物の場合、酸は、好ましくは、食品用に認可された酸味料のリストから選択され、特に、炭酸、リン酸、クエン酸、リンゴ酸、酒石酸および乳酸、より具体的にはクエン酸から選択される。
【００５７】
本発明の非食品酸性組成物に関し、当該非食品酸性組成物は、特に、医薬品組成物、獣医薬品組成物または化粧品組成物であってもよく、また、このような組成物において既に知られ又は使用されている任意の添加剤および／または活性剤を含んでいてもよい。
【００５８】
本発明の固体、液体またはペースト状の酸性組成物において、フィコシアニンは、例えば、粉末形態で組み込むことができる。したがって、この酸性組成物、特に、酸性食品組成物は、クリーム、ゲル、フォーム、ペーストなどの任意の既知の従来の形態であってもよい。固体食品組成物の例としては、ケーキまたはビスケット、料理用の乾燥食品、可溶性粉末、ゼラチン状固体組成物（ゼリー）、フォームなどが挙げられる。
【００５９】
本発明によれば、上述の液体酸性組成物は、フィコシアニンが溶解した水性組成物であってもよい。この液体酸性組成物は、すぐに使える組成物または希釈用の液体濃縮物の形態、特に、摂取されるか、あるいは、調製または摂取のために固体食品に添加される、例えば、色を付与するためにケーキに適用される濃縮した液体「トッピング」組成物の形態であってもよい。これら濃縮した組成物の中には、シロップ、場合により、アルコールを含むシロップが含まれる。
【００６０】
本発明の液体酸性組成物は、種々の粘度を有していてもよく、場合により、添加剤、例えば、増粘剤、ゲル化剤、および当業者に知られており、液体食品組成物の調製に典型的な他の構造添加剤を含んでいてもよい。
【００６１】
本発明の特定の実施形態によれば、液体食品組成物は、場合により、炭酸酸性飲料であってもよい。特に、ソーダ、ジュース、スポーツドリンク、エナジードリンク、リカバリードリンクなどが挙げられる。これらの飲料の組成は、当業者によく知られており、特に、糖類、鉱物塩類、食品添加剤、溶存ガスなどを含んでいてもよい。本発明の飲料は、通常使用される着色料を、本発明の酸性ｐＨ耐性フィコシアニンによって完全に又は部分的に置き換えた、従来の酸性飲料である。
【００６２】
本発明によれば、本発明の組成物中のフィコシアニン含有量は、当業者の実施行為に合致させることができる。
【００６３】
例えば、フィコシアニンを使用して酸性組成物を着色する場合、この組成物中のフィコシアニン含有量は、着色に関する当業者の実施行為に合致させることができる。
【００６４】
本発明の範囲内の液体酸性組成物において、フィコシアニン含有量は、２．５ｍｇ／Ｌ〜２，５００ｍｇ／Ｌ、優先的には２５ｍｇ／Ｌ〜３００ｍｇ／Ｌであってもよい。
【００６５】
すぐに使える飲料タイプの液体組成物において、フィコシアニン含有量は、一般的に２５ｍｇ／Ｌ〜３００ｍｇ／Ｌ、優先的には５０ｍｇ／Ｌ〜１００ｍｇ／Ｌであってもよい。
【００６６】
使用前に希釈する用途の濃縮した液体組成物（例えば、シロップ）において、フィコシアニン含有量は、一般的に２５０ｍｇ／Ｌ〜２，５００ｍｇ／Ｌ、優先的には５００ｍｇ／Ｌ〜１，０００ｍｇ／Ｌであってもよい。
【００６７】
固体組成物において、フィコシアニン含有量は、一般的に０．０１ｍｇ／ｇ〜１０ｍｇ／ｇ、優先的には０．１ｍｇ／ｇ〜５．０ｍｇ／ｇ、さらに優先的には０．２５ｍｇ／ｇ〜２．５ｍｇ／ｇであってもよい。
【００６８】
本発明の利点の１つは、以下の実施例からわかるように、酸性ｐＨ耐性フィコシアニンによって付与される着色が、経時的に安定であるという事実にある。
【００６９】
本発明の他の態様および特徴は、実施例および図面を読むことで明らかとなるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００７０】
【図１】図１は、以下を含むＧａｌｄｉｅｒｉａ  ｓｕｌｐｈｕｒａｒｉａのフィコシアニンおよびアロフィコシアニンのアポタンパク質のアミノ酸配列を記載する：  配列番号１：ＹＰ＿００９０５１１７９．１：フィコシアニンのαサブユニット；  配列番号２：ＹＰ＿００９０５１１８０．１：フィコシアニンのβサブユニット；  配列番号３：ＹＰ＿００９０５１１０３．１：アロフィコシアニンのαサブユニット；  配列番号４：ＹＰ＿００９０５１１０４．１：アロフィコシアニンのβサブユニット。
【図２】図２は、スピルリナ由来のフィコシアニンＬｉｎａｂｌｕｅ（登録商標）の安定性曲線との関連で、Ｇａｌｄｉｅｒｉａ  ｓｕｌｐｈｕｒａｒｉａ（ＵＴＥＸ２９１９）およびＣｙａｎｉｄｉｏｓｃｈｙｚｏｎ  ｍｅｒｏｌａｅ（ＡＣＵＦ  １９９）から抽出されたフィコシアニン（そのアポタンパク質配列は、配列番号１または改変体からなる）のｐＨの関数としての安定性曲線を示す：  （−■−）：Ｇａｌｄｉｅｒｉａ  ｓｕｌｐｈｕｒａｒｉａ（ＵＴＥＸ番号２９１９）由来のフィコシアニン  （・・・Ｘ・・・）：Ｃｙａｎｉｄｉｏｓｃｈｙｚｏｎ  ｍｅｒｏｌａｅ（ＡＣＵＦ  １９９）由来のフィコシアニン  （−−○＊−−）：Ｌｉｎａ  Ｂｌｕｅ（登録商標）：Ｓｐｉｒｕｌｉｎａ  ｐｌａｔｅｎｓｉｓ（Ａｒｔｈｒｏｓｐｉｒａ  ｐｌａｔｅｎｓｉｓ）由来のフィコシアニン（ウェブサイトｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｄｌｔ−ｓｐｌ．ｃｏ．ｊｐ／ｂｕｓｉｎｅｓｓ／ｅｎ／ｓｐｉｒｕｌｉｎａ／ｌｉｎａｂｌｕｅ．ｈｔｍｌから得たデータ）。フィコシアニンの沈殿が現れるｐＨ値を示している。
【図３】図３は、フィコシアニンを含む酸性飲料の経時的色変化を表す。Ｗ０、Ｗ２、Ｗ４およびＷ６：０週、２週、４週および６週。
【実施例】
【００７１】
実施例１：Ｇａｌｄｉｅｒｉａ  ｓｕｌｐｈｕｒａｒｉａ  ＵＴＥＸ番号２９１９からのフィコシアニンの産生および抽出
材料および方法
株：Ｇａｌｄｉｅｒｉａ  ｓｕｌｐｈｕｒａｒｉａ（Ｃｙａｎｉｄｉｕｍ  ｃａｌｄａｒｉｕｍとも呼ばれる）  ＵＴＥＸ番号２９１９
【００７２】
培地
混合栄養：３０ｇ／Ｌのグリセロール、８ｇ／Ｌの（ＮＨ４）２ＳＯ４、１ｇ／ＬのＫＨ２ＰＯ４、７１６ｍｇ／ＬのＭｇＳＯ４、４４ｍｇ／ＬのＣａＣｌ２、３ｍＬ／ＬのＦｅ−ＥＤＴＡストック溶液（６．９ｇ／ＬのＦｅＳＯ４および９．３ｇ／ＬのＥＤＴＡ−Ｎａ２）および４ｍＬ／Ｌの微量金属溶液（３．０９ｇ／ＬのＥＤＴＡ−Ｎａ２；０．０８０ｇ／ＬのＣｕＳＯ４・５Ｈ２Ｏ；２．８６０ｇ／ＬのＨ３ＢＯ３；０．０４０ｇ／ＬのＮａＶＯ３・４Ｈ２Ｏ；１．８２０ｇ／ＬのＭｎＣｌ２；０．０４０ｇ／ＬのＣｏＣｌ２・６Ｈ２Ｏ；０．２２０ｇ／ＬのＺｎＳＯ４・７Ｈ２Ｏ；０．０１７ｇ／ＬのＮａ２ＳｅＯ３；０．０３０ｇ／Ｌの（ＮＨ４）６Ｍｏ７Ｏ２４・４Ｈ２Ｏ）。
【００７３】
培養条件：
培養は、コンピュータ制御された自動化システムを備える、有効体積が１Ｌ〜２Ｌのリアクターで行う。培養物のｐＨは、塩基（１４％アンモニア溶液（ｗＮＨ３／ｗ））および／または酸（４Ｎ硫酸溶液）を添加することによって制御する。培養温度は、３７℃に設定する。培養物は、ＷＯ２０１４／１７４１８２号公報に記載の方法と同様の方法で、白色ＬＥＤまたは青色ＬＥＤ（４５５ｎｍ）のシステムを取り付けたバッフルによって照射される。８００ｎｍでの吸光度を測定することによって、異なる時間で細胞成長の追跡を行う。乾燥質量の測定は、濾過によって行われる。
【００７４】
成長終了時の培養物の性能特徴を以下の表１にまとめる。
【表１】
2018527940.tif 000002
【００７５】
乾燥物質１グラムあたりの細胞内フィコシアニン含有量の測定は、リン酸緩衝液を水と置き換えつつ、Ｍｏｏｎおよび共同研究者らによって記載された抽出およびアッセイ方法を用いて行った［Ｍｏｏｎら、Ｋｏｒｅａｎ  Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｅｎｇ．、２０１４、１−６］。
【００７６】
実施例２：フィコシアニンの抽出
Ｇａｌｄｉｅｒｉａ  ｓｕｌｐｈｕｒａｒｉａ（ＵＴＥＸ番号２９１９）株および／またはＣｙａｎｉｄｉｏｓｃｙｉｚｏｎ  ｍｅｒｏｌａｅ（ＡＣＵＦ１９９）株を実施例１の条件下で培養した。
【００７７】
次いで、Ｍｏｏｎら、２０１４（前掲）に記載されるプロトコルの改変法に従って、フィコシアニンを抽出する。この改変は、フィコシアニンを可溶化するために使用されるリン酸緩衝液を脱イオン水と置き換えることからなる。
【００７８】
このようにして、目的のフィコシアニンに加え、他の水溶性タンパク質を含む抽出物（「フィコシアニン抽出物」または「粗抽出物」とも呼ぶ）が得られる。フィコシアニン抽出物は、使用される抽出および／または精製方法に依存して、いくつかの可能な品質を有していてもよい。例えば、粗抽出物は、精製された抽出物中にみられる量よりも多くのフィコシアニン以外の水溶性タンパク質を含有してもよい。精製された抽出物とは、フィコシアニンを保持しつつ、水溶性タンパク質の一部が、超濾過、中空繊維濾過またはイオン交換クロマトグラフィー、当業者に知られている方法によって除去された粗抽出物を意味する。
【００７９】
純度指数は、慣習的に、全タンパク質レベルの理想値を与える芳香族アミノ酸の比吸光度である２８０ｎｍでの溶液の吸光度に対する６１８ｎｍでの溶液の吸光度（フィコシアニンの比吸光度）の比率を計算することによって表される。この比が小さいほど、溶液中のフィコシアニン以外のタンパク質の量が多い。
【００８０】
粗抽出物を、Ｓｐｅｃｔｒｕｍ（登録商標）Ｌａｂｓ製のＫｒｏｓＦｌｏ（登録商標）タンジェンシャルフローフィルトレーションシステムを用いて精製した。
【表２】
2018527940.tif 000003
【００８１】
実施例３：Ｇａｌｄｉｅｒｉａ  ｓｕｌｐｈｕｒａｒｉａ（ＵＴＥＸ番号２９１９）株、Ｃｙａｎｉｄｉｏｓｃｈｙｚｏｎ  ｍｅｒｏｌａｅ（ＡＣＵＦ１９９）株、およびＳｐｉｒｕｌｉｎａ（Ａｒｔｈｒｏｓｐｉｒａ）  ｐｌａｔｅｎｓｉｓ株から抽出したフィコシアニンの、ｐＨの関数としての安定性試験
Ｇａｌｄｉｅｒｉａ  ｓｕｌｐｈｕｒａｒｉａ（ＵＴＥＸ番号２９１９）株およびＣｙａｎｉｄｉｏｓｃｈｙｚｏｎ  ｍｅｒｏｌａｅ（ＡＣＵＦ１９９）株を実施例１の条件下で培養した。
【００８２】
ＤＩＣライフテック株式会社（東京、日本）製の、Ｓｐｉｒｕｌｉｎａ（Ａｒｔｈｒｏｓｐｉｒａ）  ｐｌａｔｅｎｓｉｓから抽出されたフィコシアニンである商品ＬｉｎａＢｌｕｅ（登録商標）のデータ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｄｌｔ−ｓｐｌ．ｃｏ．ｊｐ／ｂｕｓｉｎｅｓｓ／ｅｎ／ｓｐｉｒｕｌｉｎａ／ｌｉｎａｂｌｕｅ．ｈｔｍｌ）を参照として採用することによって、試験を行う。
【００８３】
実施例２で調製した、純度指数が２．１２のフィコシアニンを用いてこれらの試験を行った。青色の測定は、ｕｌｔｒａｓｐｅｃ  ２１００  ｐｒｏ  ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ（Ａｍｅｒｓｈａｍ製）を用い、６１８ｎｍでの吸光度を測定することによって行う。色の消失率は、参照条件（ｐＨ６）下でのサンプルの吸光度測定に対して計算される。
【００８４】
酸性条件下での耐性試験のために、５％クエン酸溶液（Ｓｉｇｍａ  ２５１２７５）をフィコシアニン調製物に加えることによって、ｐＨを徐々に下げる。それぞれのｐＨ値について、フィコシアニン溶液のサンプルを集め、ｐＨを所望の値まで下げてから１０分後、６１８ｎｍでの吸光度を測定する。
【００８５】
これらの試験の結果を図２に示す。
【００８６】
Ｇａｌｄｉｅｒｉａ  ｓｕｌｐｈｕｒａｒｉａ（ＵＴＥＸ番号２９１９）から抽出したフィコシアニン［（−■−）］は、Ｓｐｉｒｕｌｉｎａから抽出したフィコシアニンと比較して、非常に良好なｐＨ耐性を示し、ｐＨ２．７５までで着色の消失は１０％未満であり（ｐＨ３で元の着色の９８．２５％、ｐＨ２．７５で９２．４％を保持している）、ｐＨ２．５では消失が増大する（ｐＨ２．５で７９％；ｐＨ２．２５で７５％；ｐＨ２で４６％）。
【００８７】
Ｃｙａｎｉｄｉｏｓｃｈｙｚｏｎ  ｍｅｒｏｌａｅ（ＡＣＵＦ  １９９）株から抽出したフィコシアニン［（・・・Ｘ・・・）］は、Ｓｐｉｒｕｌｉｎａから抽出したフィコシアニンと比較して、良好なｐＨ耐性を示し、ｐＨ３で元の着色の９０％超、ｐＨ２．７５で７０％；ｐＨ２．５で４０％；ｐＨ２．２５で２３％；ｐＨ２で２０％を保持する。
【００８８】
Ｓｐｉｒｕｌｉｎａ  ｐｌａｔｅｎｓｉｓ株から抽出したフィコシアニン［（−−○＊−−）］は、ｐＨ４で元の着色の９０％だけを示し、ｐＨ３．８で８０％；ｐＨ３．６で６０％；ｐＨ３．４で３８％を示す。Ｓｐｉｒｕｌｉｎａ  ｐｌａｔｅｎｓｉｓから抽出したフィコシアニンは、ｐＨ３．８で沈殿し始める。
【００８９】
結論として、Ｇａｌｄｉｅｒｉａ  ｓｕｌｐｈｕｒａｒｉａまたはＣｙａｎｉｄｉｏｓｃｈｙｚｏｎ  ｍｅｒｏｌａｅのフィコシアニンは、Ｓｐｉｒｕｌｉｎａから抽出したフィコシアニンよりも酸性ｐＨに対する耐性が高い。
【００９０】
実施例４−異なる微細藻類に由来するフィコシアニンおよびアロフィコシアニンのアポタンパク質配列の比較分析並びにそれらの等電点の測定
酸性ｐＨに対する耐性の増加について、可能性のある原因を特定するために、種々の微生物、とりわけ微細藻類によって産生されるフィコシアニンおよびアロフィコシアニンのαサブユニットおよびβサブユニットの配列の比較を、データベースでアクセス可能な公開された配列（寄託番号を参照）に基づき、当業者に周知のＢＬＡＳＴＰプログラムを用いて行ったこの比較は、Ｇａｌｄｉｅｒｉａ  ｓｕｌｐｈｕｒａｒｉａ株の対応するサブユニットのアポタンパク質配列に関連して行われる。
【００９１】
同時に、配列比較を行ったフィコシアニンおよびアロフィコシアニンのα−サブユニットアポタンパク質およびβ−サブユニットアポタンパク質の等電点を、ＰａｔｒｉｃｋｉｏｓおよびＹａｍａｓａｋｉ（１９９５）によって記載されるコンピュータによる手順によって決定した。
【００９２】
Ｇａｌｄｉｅｒｉａ  ｓｕｌｐｈｕｒａｒｉａ株によって産生されるフィコシアニンおよびアロフィコシアニンは、これらの試験において参照とする。
【００９３】
結果
配列比較およびｐＩ計算の結果を以下の表３および表４に示す。
【表３】
2018527940.tif 000004
【表４】
2018527940.tif 000005
【００９４】
配列および等電点の比較により、酸性ｐＨに最も耐性があるフィコシアニンのαサブユニットは、３未満の等電点、およびＧａｌｄｉｅｒｉａ  ｓｕｌｐｈｕｒａｒｉａとの高い割合の配列同一性を有することが示される。
【００９５】
実施例５：飲料における経時的安定性
ＵＴＥＸ番号２９１９株から抽出したフィコシアニンについて、フィコシアニンをレモネード飲料（ｐＨ２．９５；実施例６の飲料１に記載されるもの）に加えることによって、酸媒体中での経時的安定性試験を行った。アポタンパク質配列が配列番号１の改変体からなるフィコシアニンを０．０２５％加えた後、この飲料を、人工光を用いた昼／夜サイクル（１６時間／８時間）に室温で６週間さらした。
【００９６】
６１８ｎｍでの吸光度を測定するために、経時的に規則的なサンプルを採取する。０週（Ｗ０）、２週（Ｗ２）、４週（Ｗ４）、６週（Ｗ６）に一定量を採取し、１００％の着色点を定めるために、６１８ｎｍでの吸光度をｕｌｔｒａｓｐｅｃ  ２１００  ｐｒｏ  ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ（Ａｍｅｒｓｈａｍ製）で測定する。残った色は、初期の参照値の割合として表される。
【００９７】
この実験の結果を図３に示す。光に長期間さらすと、色が経時的に着実に消失することが確認される。一方、６週間さらした後は、６０％超の色が残っている。
【００９８】
実施例６：フィコシアニンを含む液体形態での酸性飲料の例
フィコシアニンを含有する飲料は、以下の組成を有していてもよい：
飲料１−ソーダ飲料：
−炭酸水                                  適量（１Ｌ）
−糖類                                    ７０ｇ
−クエン酸                                １．５ｇ
−天然有機フレーバー                      ４〜８ｇ
−実施例２で得られたフィコシアニン抽出物  適量  フィコシアニン１００ｍｇ
この飲料のｐＨは２．９５である。
飲料２−アスリートのための健康飲料
−天然水                                  適量（１Ｌ）
−グルコース                              ２０ｇ
−フルクトース                            １０ｇ
−クエン酸                                ２．７ｇ
−クエン酸ナトリウム                      １．８７ｇ
−クエン酸カリウム                        ０．３２７ｇ
−塩化マグネシウム                        ２．５ｍｇ
−塩化カルシウム                          ３ｍｇ
−天然有機フレーバー                      ４ｇ
−実施例２で得られたフィコシアニン抽出物  適量  フィコシアニン１５０ｍｇ
この飲料のｐＨは３．５である。
【００９９】
実施例６：フィコシアニンを含む可溶性粉末形態での酸性飲料
−糖類                                    ７０〜１００ｇ
−クエン酸                                １〜１．５ｇ
−天然有機フレーバー                      ４〜８ｇ
−実施例２で得られたフィコシアニン抽出物  適量（２５０ｍｇのフィコシアニン）
このようにして調製された粉末（７５〜１１０ｇ）を１Ｌの水に溶解し、青色の酸性飲料を得ることができる。
【０１００】
実施例７：フィコシアニンを含む固体酸性組成物：酸性甘味料
−水                                      適量（１ｋｇ）
−糖類                                    ８００ｇ
−クエン酸                                １〜２ｇ
−実施例２で得られたフィコシアニン抽出物  適量  フィコシアニン２，５００ｍｇ
【０１０１】
参考文献
-          Moon et al., Korean J. Chem. Eng., 2014, 1-6
-          Patrickios et Yamasaki, Polypeptide Amino Acid Composition and Isoelectric Point. II. Comparison between Experiment and Theory. Analytical Biochemistry. 231, 1, 1995: 82-91
-          FR Doc No: 2013-19550
-          WO 2014/174182
-          FR 15 59072 filed on 25 September 2015
-          http://www.dlt-spl.co.jp/business/en/spirulina/linablue.html
-          http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi
【図１】
2018527940.tif 000006
【図２】
2018527940.tif 000007
【図３】
2018527940.tif 000008
【配列表】
2018527940000001.app
【国際調査報告】
2018527940.tif 000009
2018527940.tif 000010
2018527940.tif 000011
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