(57)【要約】  本発明は、（Ｓ）−２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−２−フルオロ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸の結晶形、その製造方法、当該結晶形を含む医薬組成物、そのような結晶形から製造される医薬組成物及び医薬としての、特にＣＲＴＨ２受容体調節剤としてのそれらの使用に関する。【選択図】    なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
粉末Ｘ線回折ダイアグラムにおける以下の屈折角２θ：１２．６°、１４．０°及び２１．１°におけるピークの存在により特徴づけられ、上記粉末Ｘ線回折ダイアグラムが、約５％、約２０％、約５０％又は約９５％の相対湿度及び約２５℃の温度にて測定される、（Ｓ）−２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−２−フルオロ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸の結晶形。
【請求項２】
ａ  粉末Ｘ線回折ダイアグラムにおいて、以下の屈折角２θ：１２．６°、１４．０°、１９．８°、２０．０°、２１．１°及び２６．４°におけるピークの存在により特徴づけられ、上記粉末Ｘ線回折ダイアグラムが、約５％の相対湿度及び約２５℃の温度にて測定され；又は、
ｂ  粉末Ｘ線回折ダイアグラムにおいて、以下の屈折角２θ：１２．６°、１４．０°、１９．７°、２１．１°及び２６．４°におけるピークの存在により特徴づけられ、上記粉末Ｘ線回折ダイアグラムが、約２０％の相対湿度及び約２５℃の温度にて測定され；又は、
ｃ  粉末Ｘ線回折ダイアグラムにおいて、以下の屈折角２θ：１２．６°、１４．０°、１９．５°、２１．１°、２１．４°及び２６．１°におけるピークの存在により特徴づけられ、上記粉末Ｘ線回折ダイアグラムが、約５０％の相対湿度及び約２５℃の温度にて測定され；又は、
ｄ  粉末Ｘ線回折ダイアグラムにおいて、以下の屈折角２θ：１２．６°、１４．０°、１９．５°、２１．１°、２１．５°及び２６．０°におけるピークの存在により特徴づけられ、上記粉末Ｘ線回折ダイアグラムが、約９５％の相対湿度及び約２５℃の温度にて測定される；
請求項１に記載の（Ｓ）−２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−２−フルオロ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸の結晶形。
【請求項３】
ａ  粉末Ｘ線回折ダイアグラムにおいて、以下の屈折角２θ：１２．６°、１４．０°、１５．６°、１９．８°、２０．０°、２１．１°、２３．７°、２６．４°、２７．５°及び２８．４°におけるピークの存在により特徴づけられ、上記粉末Ｘ線回折ダイアグラムが、約５％の相対湿度及び約２５℃の温度にて測定され；又は、
ｂ  粉末Ｘ線回折ダイアグラムにおいて、以下の屈折角２θ：１２．６°、１４．０°、１５．６°、１９．７°、２１．１°、２３．３°、２３．６°、２６．４°、２７．４°及び２８．４°におけるピークの存在により特徴づけられ、上記粉末Ｘ線回折ダイアグラムが、約２０％の相対湿度及び約２５℃の温度にて測定され；又は、
ｃ  粉末Ｘ線回折ダイアグラムにおいて、以下の屈折角２θ：１２．６°、１４．０°、１５．２°、１６．１°、１９．５°、２１．１°、２１．４°、２３．０°、２６．１°及び２７．０°におけるピークの存在により特徴づけられ、上記粉末Ｘ線回折ダイアグラムが、約５０％の相対湿度及び約２５℃の温度にて測定され；又は、
ｄ  粉末Ｘ線回折ダイアグラムにおいて、以下の屈折角２θ：１２．６°、１４．０°、１６．２°、１８．９°、１９．５°、２１．１°、２１．５°、２２．９°、２６．０°及び２７．０°におけるピークの存在により特徴づけられ、上記粉末Ｘ線回折ダイアグラムが、約９５％の相対湿度及び約２５℃の温度にて測定される；
請求項１に記載の（Ｓ）−２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−２−フルオロ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸の結晶形。
【請求項４】
ａ  図１に示す粉末Ｘ線回折パターンを本質的に示し、上記粉末Ｘ線回折ダイアグラムが
、約５％の相対湿度及び約２５℃の温度にて測定され；又は、
ｂ  図２に示す粉末Ｘ線回折パターンを本質的に示し、上記粉末Ｘ線回折ダイアグラムが、約２０％の相対湿度及び約２５℃の温度にて測定され；又は、
ｃ  図３に示す粉末Ｘ線回折パターンを本質的に示し、上記粉末Ｘ線回折ダイアグラムが、約５０％の相対湿度及び約２５℃の温度にて測定され；又は、
ｄ  図４に示す粉末Ｘ線回折パターンを本質的に示し、上記粉末Ｘ線回折ダイアグラムが、約９５％の相対湿度及び約２５℃の温度にて測定される：
請求項１に記載の（Ｓ）−２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−２−フルオロ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸の結晶形。
【請求項５】
ａ）  （Ｓ）−２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−２−フルオロ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸をＴＨＦ中に２５ｍｇ／ｍＬにて溶解した溶液を調製し；
ｂ）  ０．２ｍＬの上記溶液を４ｍＬのガラスバイアル中に入れ；
ｃ）  赤外線照射、ボルテックス及び減圧を組み合わせて、３０℃及び１００ｍｂａｒにて３０分間に設定して使用することにより蒸発させることができる装置を用いてＴＨＦを蒸発させ；
ｄ）  酢酸エチル、アセトニトリル、アセトン又はイソプロパノールから選択される溶媒０．０２ｍＬを固体残渣に添加し、封止したバイアル中で周囲温度にて３日間インキュベートし；
ｅ）  得られた固体残渣を単離する；．
ことにより得ることができる、（Ｓ）−２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−２−フルオロ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸の結晶形。
【請求項６】
粉末Ｘ線回折ダイアグラムにおいて、以下の屈折角２θ：１２．６°、１４．０°及び２１．１°におけるピークの存在により特徴づけられ、上記粉末Ｘ線回折ダイアグラムが、約５％、約２０％、約５０％又は約９５％の相対湿度及び約２５℃の温度にて測定される、請求項５に記載の（Ｓ）−２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−２−フルオロ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸の結晶形。
【請求項７】
ａ  粉末Ｘ線回折ダイアグラムにおいて、以下の屈折角２θ：１２．６°、１４．０°、１９．８°、２０．０°、２１．１°及び２６．４°におけるピークの存在により特徴づけられ、上記粉末Ｘ線回折ダイアグラムが、約５％の相対湿度及び約２５℃の温度にて測定され；又は、
ｂ  粉末Ｘ線回折ダイアグラムにおいて、以下の屈折角２θ：１２．６°、１４．０°、１９．７°、２１．１°及び２６．４°におけるピークの存在により特徴づけられ、上記粉末Ｘ線回折ダイアグラムが、約２０％の相対湿度及び約２５℃の温度にて測定され；又は、
ｃ  粉末Ｘ線回折ダイアグラムにおいて、以下の屈折角２θ：１２．６°、１４．０°、１９．５°、２１．１°、２１．４°及び２６．１°におけるピークの存在により特徴づけられ、上記粉末Ｘ線回折ダイアグラムが、約５０％の相対湿度及び約２５℃の温度にて測定され；又は、
ｄ  粉末Ｘ線回折ダイアグラムにおいて、以下の屈折角２θ：１２．６°、１４．０°、１９．５°、２１．１°、２１．５°及び２６．０°におけるピークの存在により特徴づけられ、上記粉末Ｘ線回折ダイアグラムが、約９５％の相対湿度及び約２５℃の温度にて測定される；
請求項５に記載の（Ｓ）−２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）
アミノ）−２−フルオロ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸の結晶形。
【請求項８】
示差走査熱量測定により決定した約２６０℃〜２７６℃の範囲における吸熱を示す、請求項１〜７のいずれか１項に記載の（Ｓ）−２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−２−フルオロ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸の結晶形。
【請求項９】
図５に示す重量測定蒸気吸着プロファイルを本質的に示し、上記重量測定蒸気吸着プロファイルが２５℃にて測定される、請求項１〜８のいずれか１項に記載の（Ｓ）−２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−２−フルオロ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸の結晶形。
【請求項１０】
請求項５の方法により得ることができる、請求項１〜４のいずれか１項に記載の（Ｓ）−２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−２−フルオロ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸の結晶形。
【請求項１１】
医薬として使用するための、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の（Ｓ）−２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−２−フルオロ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸の結晶形。
【請求項１２】
有効成分としての請求項１〜１０のいずれか１項に記載の（Ｓ）−２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−２−フルオロ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸の結晶形及び少なくとも１種の薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項１３】
医薬組成物の製造において使用するための請求項１〜１０のいずれか１項に記載の（Ｓ）−２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−２−フルオロ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸の結晶形であって、当該医薬組成物が、有効成分としての（Ｓ）−２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−２−フルオロ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸及び少なくとも１種の薬学的に許容される担体を含む、結晶形。
【請求項１４】
喘息、アレルギー性喘息、好酸球性喘息、重症喘息、鼻炎、アレルギー性鼻炎、血管性浮腫、昆虫毒アレルギー、薬剤アレルギー、アレルギー性副鼻腔炎、アレルギー性腎炎、アレルギー性結膜炎、アトピー性皮膚炎、気管支喘息、食物アレルギー、全身性肥満細胞症、アナフィラキシーショック、じん麻疹、湿疹、潰瘍性大腸炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、炎症性腸疾患、関節リウマチ及び鼻ポリープ等の慢性及び急性のアレルギー性／免疫性疾患／障害；チャーグ・ストラウス症候群等の小血管性血管炎、ヴェグナー肉芽腫症、顕微鏡的多発血管炎（及び後者の臓器特異的亜群）、好酸球性肺炎等の好酸球増加症候群、好酸球性食道炎、逆流性食道炎、好酸球性心内膜炎（レフラー心内膜炎）、好酸球増多筋痛症候群、好酸球性筋膜炎、好酸球性膿疱性毛包炎（大藤病）、好酸球性潰瘍、好酸球増多随伴性血管類リンパ組織増殖症（ＡＬＨＥ）、好酸球性蜂巣炎（ウェルズ症候群）、慢性好酸球性白血病、ドレス症候群（好酸球増加と全身症状を伴う薬疹）及びスティル病（全身型若年性特発性関節炎）を含む好酸球関連疾患；好塩基球性白血病及び好塩基球性白血球増加症を含む好塩基球関連疾患並びに嚢胞性線維症からなる群より選択される
疾患の予防又は治療において使用するための、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の（Ｓ）−２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−２−フルオロ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸の結晶形又は請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
喘息、アレルギー性喘息、好酸球性喘息、重症喘息、鼻炎、アレルギー性鼻炎、血管性浮腫、昆虫毒アレルギー、薬剤アレルギー、アレルギー性副鼻腔炎、アレルギー性腎炎、アレルギー性結膜炎、アトピー性皮膚炎、気管支喘息、食物アレルギー、全身性肥満細胞症、アナフィラキシーショック、じん麻疹、湿疹、潰瘍性大腸炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、炎症性腸疾患、関節リウマチ及び鼻ポリープ等の慢性及び急性のアレルギー性／免疫性疾患／障害；チャーグ・ストラウス症候群等の小血管性血管炎、ヴェグナー肉芽腫症、顕微鏡的多発血管炎（及び後者の臓器特異的亜群）、好酸球性肺炎等の好酸球増加症候群、好酸球性食道炎、逆流性食道炎、好酸球性心内膜炎（レフラー心内膜炎）、好酸球増多筋痛症候群、好酸球性筋膜炎、好酸球性膿疱性毛包炎（大藤病）、好酸球性潰瘍、好酸球増多随伴性血管類リンパ組織増殖症（ＡＬＨＥ）、好酸球性蜂巣炎（ウェルズ症候群）、慢性好酸球性白血病、ドレス症候群（好酸球増加と全身症状を伴う薬疹）及びスティル病（全身型若年性特発性関節炎）を含む好酸球関連疾患；好塩基球性白血病及び好塩基球性白血球増加症を含む好塩基球関連疾患並びに嚢胞性線維症からなる群より選択される疾患の予防又は治療のための医薬組成物の製造において使用するための、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の（Ｓ）−２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−２−フルオロ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸の結晶形。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、（Ｓ）−２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−２−フルオロ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸（以下、「化合物」とも記載する。）の新規な結晶形、その製造方法、当該結晶形を含む医薬組成物、そのような結晶形から製造される医薬組成物及び様々なプロスタグランジン介在疾患及び障害の治療におけるプロスタグランジンＤ２受容体（「ＤＰ受容体」）調節剤としての、特にＣＲＴＨ２受容体（「ＤＰ２受容体」）調節剤としてのそれらの使用に関する。特に、結晶形の「化合物」は、喘息、アレルギー性喘息、好酸球性喘息、重症喘息、鼻炎、アレルギー性鼻炎、血管性浮腫、昆虫毒アレルギー、薬剤アレルギー、アレルギー性副鼻腔炎、アレルギー性腎炎、アレルギー性結膜炎、アトピー性皮膚炎、気管支喘息、食物アレルギー、全身性肥満細胞症、アナフィラキシーショック、じん麻疹、湿疹、潰瘍性大腸炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、炎症性腸疾患、関節リウマチ及び鼻ポリープ等の慢性及び急性両方のアレルギー性／免疫性疾患／障害；チャーグ・ストラウス症候群等の小血管性血管炎、ヴェグナー肉芽腫症、顕微鏡的多発血管炎（及び後者の臓器特異的亜群）、好酸球性肺炎等の好酸球増加症候群、好酸球性食道炎、逆流性食道炎、好酸球性心内膜炎（レフラー心内膜炎）、好酸球増多筋痛症候群、好酸球性筋膜炎、好酸球性膿疱性毛包炎（大藤病）、好酸球性潰瘍、好酸球増多随伴性血管類リンパ組織増殖症（ＡＬＨＥ）、好酸球性蜂巣炎（ウェルズ症候群）、慢性好酸球性白血病、ドレス症候群（好酸球増加と全身症状を伴う薬疹）及びスティル病（全身型若年性特発性関節炎）を含む好酸球関連疾患；好塩基球性白血病及び好塩基球性白血球増加症を含む好塩基球関連疾患並びに嚢胞性線維症の治療のために、単独で又は医薬組成物中で使用してもよい。
【背景技術】
【０００２】
アレルギー状態において、アレルゲン暴露に対する応答として肥満細胞が活性化され、該細胞はヒスタミン、トロンボキサンＡ２（ＴｘＡ２）、システイニルロイコトリエン（ＣｙｓＬＴ）及びプロスタグランジンＤ２（ＰＧＤ２）のようなメディエータを放出する。これらのメディエータは、それらの対応する受容体と相互作用して、血管透過性の増大、浮腫、掻痒、鼻閉及び肺うっ血、気管支収縮、並びに粘液分泌等の生理的作用を引き起こす。増大した血管透過性により、例えば好酸性及び好塩基性白血球が組織内に過剰に浸潤し、アレルギー応答が増幅される。
【０００３】
現在のアレルギー性疾患の治療には、そのような相互作用を遮断し、又はさもなければ妨害する薬剤、例えば抗ヒスタミン剤（ヒスタミンＨ１受容体アンタゴニスト）、ロイコトリエン受容体アンタゴニスト、ベータ−アドレナリン受容体アゴニスト及びコルチコステロイドが含まれる。一般に、抗ヒスタミン剤及びロイコトリエンアンタゴニストを用いた治療は、効果が限られ、またコルチコステロイドの長期間の使用には、しばしば望ましくない副作用が伴う。
【０００４】
ＰＧＤ２は、２種のＧタンパク質共役受容体、ＰＧＤ２受容体ＤＰ１及び最近同定されたＣＲＴＨ２（Ｔｈ２細胞上に発現する化学誘引物質受容体−類似分子）受容体（「ＤＰ２受容体」とも称される。）に作用することが知られているアゴニストである。
【０００５】
上昇したＰＧＤ２レベルは、例えばアレルギー性鼻炎、アレルギー性喘息、アレルギー性結膜炎、アトピー性皮膚炎等のアレルギー性疾患に認められるような炎症作用を引き起こすと考えられる。従って、ＰＧＤ２のその受容体との相互作用を遮断することは、そのような疾患を治療するための有用な治療的方策であると考えられる。
【０００６】
ＧＢ２３８８５４０には、喘息、アレルギー性鼻炎又はアレルギー性結膜炎等のアレルギー性疾患の予防及び治療のためのラマトロバン（（３Ｒ）−３−（４−フルオロベンゼン−スルホンアミド）−１，２，３，４−テトラヒドロカルバゾール−９−プロピオン酸）、すなわち、ＣＲＴＨ２に対する追加のアンタゴニスト活性を伴うＴｘＡ２受容体（「ＴＰ受容体」とも称される。）アンタゴニストの使用が開示されている。Ｔ．Ｉｓｈｉｚｕｋａら、ＣａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒＤｒｕｇ  Ｒｅｖ．２００４、２２（２）、７１−９０には、ラマトロバンの遅延相の炎症に対する効果が記載されている。さらに、ラマトロバンの経口バイオアベイラビリティ、及びそのインビトロでのプロスタグランジンＤ２誘導好酸球遊走を阻害する作用が報告されている（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、３０５（１）、ｐ．３４７−３５２（２００３））。
【０００７】
ＣＲＴＨ２アンタゴニスト活性を有するアザインドール酢酸誘導体が、ＷＯ２０１０／０５４１１３、ＷＯ２０１０／０５４１１４及びＢ．Ａ．Ｓｔｅａｒｎｓら、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．２００９、１９、４６４７−４６５１に開示されている。
【０００８】
ＷＯ２０１１／１１７７９８及びＷＯ２０１２／１４０６１２は、ＣＲＴＨ２アンタゴニスト活性を有する（３−ヘテロアリールアミノ−１，２，３，４−テトラヒドロ−９Ｈ−カルバゾール−９−イル）−酢酸及び（７−ヘテロアリールアミノ−６，７，８，９−テトラヒドロピリド［１，２−ａ］インドール−１０−イル）酢酸誘導体をそれぞれ開示している。
【発明の概要】
【０００９】
驚くべきことに、「化合物」が、初代培養ラット肝細胞におけるインビトロ細胞毒性試験において顕著に改善された特性を有することがここに見出された。従って、「化合物」は、改善されたインビボ毒性プロファイルを有することが期待される。
【００１０】
「化合物」の特定の結晶形が、特定の条件下において見出されることがわかった。「化合物」の当該結晶形は新規であり、そして、薬学的活性成分としての「化合物」の使用可能性に関して有利な特性を有するかもしれない。そのような利点は、より良い流動特性、より小さい吸湿性、製造におけるより良い再現性（例えば、より良いろ過パラメーター、形成のより良い再現性及び／又はより良い沈降性）及び／又は制御された形態学的特性を含むかもしれない。「化合物」のそのような結晶形は、特定の医薬組成物の製造方法において特に適切であり得る。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】図１は、５％ＲＨ及び２５℃にて測定した結晶形１の「化合物」の粉末Ｘ線回折ダイアグラムを示し、粉末Ｘ線回折ダイアグラムは、Ｃｕ  Ｋα照射に対して示す。上記Ｘ線回折ダイアグラムは、示した屈折角２シータにおける、ダイアグラムにおける最も強いピークと比較して、下記のパーセンテージの相対強度を有するピークを示す（相対的ピーク強度を括弧内に記載する。）（８−３０°の範囲の２シータからの、１０％より大きな相対強度を有するピークを報告する。）：１２．６°（２７％）、１４．０（２８％）、１５．６°（１１％）、１９．８°（１４％）、２０．０°（１１％）、２１．１°（１００％）及び２６．４°（２７％）。  図１のＸ線回折ダイアグラムにおいては、屈折角２θを横軸に、測定値を縦軸にプロットする。いかなる疑義をも避けるために、上記のピークは、図１に示す粉末Ｘ線回折の実験結果を記述する。上記のピークのリストとは対照的に、本発明の各結晶形の「化合物」を完全に及び明確に特徴づけるためには、選択された特徴的なピークのみが必要であることが理解されるべきである。
【図２】図２は、２０％ＲＨ及び２５℃にて測定した結晶形１の「化合物」の粉末Ｘ線回折ダイアグラムを示し、粉末Ｘ線回折ダイアグラムは、Ｃｕ  Ｋα照射に対して示す。上記Ｘ線回折ダイアグラムは、示した屈折角２シータにおける、ダイアグラムにおける最も強いピークと比較して、下記のパーセンテージの相対強度を有するピークを示す（相対的ピーク強度を括弧内に記載する。）（８−３０°の範囲の２シータからの、１０％より大きな相対強度を有するピークを報告する。）：１２．６°（３４％）、１４．０（２３％）、１９．７°（１４％）、２１．１°（１００％）及び２６．４°（１９％）。  図２のＸ線回折ダイアグラムにおいては、屈折角２θを横軸に、測定値を縦軸にプロットする。いかなる疑義をも避けるために、上記のピークは、図２に示す粉末Ｘ線回折の実験結果を記述する。上記のピークのリストとは対照的に、本発明の各結晶形の「化合物」を完全に及び明確に特徴づけるためには、選択された特徴的なピークのみが必要であることが理解されるべきである。
【図３】図３は、５０％ＲＨ及び２５℃にて測定した結晶形１の「化合物」の粉末Ｘ線回折ダイアグラムを示し、粉末Ｘ線回折ダイアグラムは、Ｃｕ  Ｋα照射に対して示す。上記Ｘ線回折ダイアグラムは、示した屈折角２シータにおける、ダイアグラムにおける最も強いピークと比較して、下記のパーセンテージの相対強度を有するピークを示す（相対的ピーク強度を括弧内に記載する。）（８−３０°の範囲の２シータからの、１０％より大きな相対強度を有するピークを報告する。）：１２．６°（５４％）、１４．０（２７％）、１９．５°（３０％）、２１．１°（１００％）、２１．４°（１２％）、２３．０°（１１％）及び２６．１°（４３％）。  図３のＸ線回折ダイアグラムにおいては、屈折角２θを横軸に、測定値を縦軸にプロットする。いかなる疑義をも避けるために、上記のピークは、図３に示す粉末Ｘ線回折の実験結果を記述する。上記のピークのリストとは対照的に、本発明の各結晶形の「化合物」を完全に及び明確に特徴づけるためには、選択された特徴的なピークのみが必要であることが理解されるべきである。
【図４】図４は、９５％ＲＨ及び２５℃にて測定した結晶形１の「化合物」の粉末Ｘ線回折ダイアグラムを示し、粉末Ｘ線回折ダイアグラムは、Ｃｕ  Ｋα照射に対して示す。上記Ｘ線回折ダイアグラムは、示した屈折角２シータにおける、ダイアグラムにおける最も強いピークと比較して、下記のパーセンテージの相対強度を有するピークを示す（相対的ピーク強度を括弧内に記載する。）（８−３０°の範囲の２シータからの、１０％より大きな相対強度を有するピークを報告する。）：１２．６°（６２％）、１４．０（２４％）、１６．２°（１３％）、１８．９°（１１％）、１９．５°（３２％）、２１．１°（１００％）、２１．５°（１７％）、２２．９°（１８％）及び２６．０°（４７％）。  図４のＸ線回折ダイアグラムにおいては、屈折角２θを横軸に、測定値を縦軸にプロットする。いかなる疑義をも避けるために、上記のピークは、図４に示す粉末Ｘ線回折の実験結果を記述する。上記のピークのリストとは対照的に、本発明の各結晶形の「化合物」を完全に及び明確に特徴づけるためには、選択された特徴的なピークのみが必要であることが理解されるべきである。
【図５】図５は、実施例１から得られる結晶形１の「化合物」の重量測定蒸気吸着ダイアグラム（ｇｒａｖｉｍｅｔｒｉｃ  ｖａｐｏｕｒ  ｓｏｒｐｔｉｏｎ  ｄｉａｇｒａｍ）を示す。図５の重量測定蒸気吸着ダイアグラムにおいては、相対湿度（％ＲＨ）を横軸に、質量変化（％ｄｍ）を縦軸にプロットする。
【図６】図６は、結晶形１の「化合物」のＤＳＣ曲線（ＤＳＣ  ｔｒａｃｅ）を示す。図６のＤＳＣダイアグラムにおいては、温度（℃）を横軸に、熱（ｐｏｗｅｒ）（ｍＷ）を縦軸にプロットする。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明の詳細な記述
１）  本発明の第１の態様は、粉末Ｘ線回折ダイアグラムにおける以下の屈折角２θ：１２．６°、１４．０°及び２１．１°におけるピークの存在により特徴づけられる、（Ｓ）−２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−２−フルオロ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸（「化合物」）の結晶形に関し、粉末Ｘ線回折ダイアグラムは、約５％、約２０％、約５０％又は約９５％の相対湿度及び約２５℃の温度にて測定される。
【００１３】
態様１）に従う結晶形は、遊離の酸（すなわち塩の形態ではない。）の結晶形の「化合物」を含むことが理解されるべきである。さらに、当該結晶形は非配位及び／又は配位溶媒（特に、非配位及び／又は配位水）を有するかもしれない。配位溶媒（特に、配位水）は、本明細書において、結晶性溶媒和物（特に、結晶性水和物）に対する用語として使用される。疑義を避けるために、本出願において、「結晶性水和物」という用語は、不定比水和物（ｎｏｎ−ｓｔｏｉｃｈｉｏｍｅｔｒｉｃ  ｈｙｄｒａｔｅｓ）を包含する。同様に、非配位溶媒は、本明細書において、物理吸着又は物理補足溶媒に対する用語として使用される（Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ（Ｅｄ．Ｒ．Ｈｉｌｆｉｋｅｒ、ＶＣＨ、２００６）、Ｃｈａｐｔｅｒ
８：Ｕ．Ｊ．Ｇｒｉｅｓｓｅｒ：Ｔｈｅ  Ｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ  ｏｆ  Ｓｏｌｖａｔｅｓによる定義）。さらに、結晶形は、相対湿度に応じて異なる量の配位水を含み得、従って、粉末Ｘ線回折ダイアグラムは相対湿度とともに変化し得ることが理解されるべきである。疑義を避けるために、本発明は、相対湿度によって可逆的に互いに変換し、そして、具体的に記載された相対湿度及び約２５℃にて、粉末Ｘ線回折ダイアグラムにおいて具体的に記載されたピークの存在により特徴づけられる、結晶形のすべての結晶サブフォーム（ｓｕｂ−ｆｏｒｍｓ）を包含する。記載された相対湿度における及び記載された温度における測定とは、結晶形が特定の相対湿度及び温度に順応した後（すなわち、平衡化時間の後）に測定が行われることを意味するものと理解され；通常、平衡化時間は約０．５ｈ〜約２４ｈであり、特に１ｈ〜１２ｈであり、とりわけ１ｈ〜６ｈである。
【００１４】
２）  別の態様は、
ａ  粉末Ｘ線回折ダイアグラムにおいて、以下の屈折角２θ：１２．６°、１４．０°、１９．８°、２０．０°、２１．１°及び２６．４°におけるピークの存在により特徴づけられ、上記粉末Ｘ線回折ダイアグラムは、約５％の相対湿度及び約２５℃の温度にて測定され；又は、
ｂ  粉末Ｘ線回折ダイアグラムにおいて、以下の屈折角２θ：１２．６°、１４．０°、１９．７°、２１．１°及び２６．４°におけるピークの存在により特徴づけられ、上記粉末Ｘ線回折ダイアグラムは、約２０％の相対湿度及び約２５℃の温度にて測定され；又は、
ｃ  粉末Ｘ線回折ダイアグラムにおいて、以下の屈折角２θ：１２．６°、１４．０°、１９．５°、２１．１°、２１．４°及び２６．１°におけるピークの存在により特徴づけられ、上記粉末Ｘ線回折ダイアグラムは、約５０％の相対湿度及び約２５℃の温度にて測定され；又は、
ｄ  粉末Ｘ線回折ダイアグラムにおいて、以下の屈折角２θ：１２．６°、１４．０°、１９．５°、２１．１°、２１．５°及び２６．０°におけるピークの存在により特徴づけられ、上記粉末Ｘ線回折ダイアグラムは、約９５％の相対湿度及び約２５℃の温度にて測定される；
態様１）に従う「化合物」の結晶形に関する。
【００１５】
３）  別の態様は、
ａ  粉末Ｘ線回折ダイアグラムにおいて、以下の屈折角２θ：１２．６°、１４．０°、１５．６°、１９．８°、２０．０°、２１．１°、２３．７°、２６．４°、２７．５°及び２８．４°におけるピークの存在により特徴づけられ、上記粉末Ｘ線回折ダイアグ
ラムは、約５％の相対湿度及び約２５℃の温度にて測定され；又は、
ｂ  粉末Ｘ線回折ダイアグラムにおいて、以下の屈折角２θ：１２．６°、１４．０°、１５．６°、１９．７°、２１．１°、２３．３°、２３．６°、２６．４°、２７．４°及び２８．４°におけるピークの存在により特徴づけられ、上記粉末Ｘ線回折ダイアグラムは、約２０％の相対湿度及び約２５℃の温度にて測定され；又は、
ｃ  粉末Ｘ線回折ダイアグラムにおいて、以下の屈折角２θ：１２．６°、１４．０°、１５．２°、１６．１°、１９．５°、２１．１°、２１．４°、２３．０°、２６．１°及び２７．０°におけるピークの存在により特徴づけられ、上記粉末Ｘ線回折ダイアグラムは、約５０％の相対湿度及び約２５℃の温度にて測定され；又は、
ｄ  粉末Ｘ線回折ダイアグラムにおいて、以下の屈折角２θ：１２．６°、１４．０°、１６．２°、１８．９°、１９．５°、２１．１°、２１．５°、２２．９°、２６．０°及び２７．０°におけるピークの存在により特徴づけられ、上記粉末Ｘ線回折ダイアグラムは、約９５％の相対湿度及び約２５℃の温度にて測定される；
態様１）に従う「化合物」の結晶形に関する。
【００１６】
４）  別の態様は、粉末Ｘ線回折ダイアグラムにおいて、以下の屈折角２θ：１２．６°、１４．０°及び２１．１°（特に、１２．６°、１４．０°、１９．８°、２０．０°、２１．１°及び２６．４°）におけるピークの存在により特徴づけられ、上記粉末Ｘ線回折ダイアグラムは、約５％の相対湿度及び約２５℃の温度にて測定される、態様１）に従う「化合物」の結晶形に関する。
【００１７】
５）  別の態様は、粉末Ｘ線回折ダイアグラムにおいて、以下の屈折角２θ：１２．６°、１４．０°及び２１．１°（特に、１２．６°、１４．０°、１９．７°、２１．１°及び２６．４°）におけるピークの存在により特徴づけられ、上記粉末Ｘ線回折ダイアグラムは、約２０％の相対湿度及び約２５℃の温度にて測定される、態様１）に従う「化合物」の結晶形に関する。
【００１８】
６）  別の態様は、粉末Ｘ線回折ダイアグラムにおいて、以下の屈折角２θ：１２．６°、１４．０°及び２１．１°（特に、１２．６°、１４．０°、１９．５°、２１．１°、２１．４°及び２６．１°）におけるピークの存在により特徴づけられ、上記粉末Ｘ線回折ダイアグラムは、約５０％の相対湿度及び約２５℃の温度にて測定される、態様１）に従う「化合物」の結晶形に関する。
【００１９】
７）  別の態様は、粉末Ｘ線回折ダイアグラムにおいて、以下の屈折角２θ：１２．６°、１４．０°及び２１．１°（特に、１２．６°、１４．０°、１９．５°、２１．１°、２１．５°及び２６．０°）におけるピークの存在により特徴づけられ、上記粉末Ｘ線回折ダイアグラムは、約９５％の相対湿度及び約２５℃の温度にて測定される、態様１）に従う「化合物」の結晶形に関する。
【００２０】
８）  別の態様は、
ａ  図１に示す粉末Ｘ線回折パターンを本質的に示し、上記粉末Ｘ線回折ダイアグラムは、約５％の相対湿度及び約２５℃の温度にて測定され；又は、
ｂ  図２に示す粉末Ｘ線回折パターンを本質的に示し、上記粉末Ｘ線回折ダイアグラムは、約２０％の相対湿度及び約２５℃の温度にて測定され；又は、
ｃ  図３に示す粉末Ｘ線回折パターンを本質的に示し、上記粉末Ｘ線回折ダイアグラムは、約５０％の相対湿度及び約２５℃の温度にて測定され；又は、
ｄ  図４に示す粉末Ｘ線回折パターンを本質的に示し、上記粉末Ｘ線回折ダイアグラムは、約９５％の相対湿度及び約２５℃の温度にて測定される：
態様１）に従う「化合物」の結晶形に関する。
【００２１】
９）  別の態様は、図１に示す粉末Ｘ線回折パターンを本質的に示し、上記粉末Ｘ線回折ダイアグラムは、約５％の相対湿度及び約２５℃の温度にて測定される、態様１）に従う「化合物」の結晶形に関する。
【００２２】
１０）  別の態様は、図２に示す粉末Ｘ線回折パターンを本質的に示し、上記粉末Ｘ線回折ダイアグラムは、約２０％の相対湿度及び約２５℃の温度にて測定される、態様１）に従う「化合物」の結晶形に関する。
【００２３】
１１）  別の態様は、図３に示す粉末Ｘ線回折パターンを本質的に示し、上記粉末Ｘ線回折ダイアグラムは、約５０％の相対湿度及び約２５℃の温度にて測定される、態様１）に従う「化合物」の結晶形に関する。
【００２４】
１２）  別の態様は、図４に示す粉末Ｘ線回折パターンを本質的に示し、上記粉末Ｘ線回折ダイアグラムは、約９５％の相対湿度及び約２５℃の温度にて測定される、態様１）に従う「化合物」の結晶形に関する。
【００２５】
１３）  別の態様は、
ａ）  「化合物」をＴＨＦ中に２５ｍｇ／ｍＬにて溶解した溶液を調製し；
ｂ）  ０．２ｍＬの上記溶液を４ｍＬのガラスバイアル中に入れ；
ｃ）  赤外線照射、ボルテックス及び減圧（ｖａｃｕｕｍ）を組み合わせて、３０℃及び１００ｍｂａｒにて３０分間に設定して使用することにより蒸発させることができる装置（例えば、Ｈｅｔｔｉｃｈ  ＡＧ、スイスのＣｏｍｂｉｄａｎｃｅｒ）を用いてＴＨＦを蒸発させ；
ｄ）  酢酸エチル、アセトニトリル、アセトン又はイソプロパノール（特にアセトン）から選択される溶媒０．０２ｍＬを固体残渣に添加し、封止したバイアル中で周囲温度にて３日間インキュベートし；
ｅ）  得られた固体残渣を単離する；．
ことにより得ることができる、化合物、（Ｓ）−２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−２−フルオロ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸の結晶形、例えば本質的に純粋な結晶形に関する。
【００２６】
１４）  別の態様は、粉末Ｘ線回折ダイアグラムにおいて、以下の屈折角２θ：１２．６°、１４．０°及び２１．１°におけるピークの存在により特徴づけられ、上記粉末Ｘ線回折ダイアグラムは、約５％、約２０％、約５０％又は約９５％の相対湿度及び約２５℃の温度にて測定される、態様１３）に従う「化合物」の結晶形に関する。
【００２７】
１５）  別の態様は、
ａ  粉末Ｘ線回折ダイアグラムにおいて、以下の屈折角２θ：１２．６°、１４．０°、１９．８°、２０．０°、２１．１°及び２６．４°におけるピークの存在により特徴づけられ、上記粉末Ｘ線回折ダイアグラムは、約５％の相対湿度及び約２５℃の温度にて測定され；又は、
ｂ  粉末Ｘ線回折ダイアグラムにおいて、以下の屈折角２θ：１２．６°、１４．０°、１９．７°、２１．１°及び２６．４°におけるピークの存在により特徴づけられ、上記粉末Ｘ線回折ダイアグラムは、約２０％の相対湿度及び約２５℃の温度にて測定され；又は、
ｃ  粉末Ｘ線回折ダイアグラムにおいて、以下の屈折角２θ：１２．６°、１４．０°、１９．５°、２１．１°、２１．４°及び２６．１°におけるピークの存在により特徴づけられ、上記粉末Ｘ線回折ダイアグラムは、約５０％の相対湿度及び約２５℃の温度にて測定され；又は、
ｄ  粉末Ｘ線回折ダイアグラムにおいて、以下の屈折角２θ：１２．６°、１４．０°、１９．５°、２１．１°、２１．５°及び２６．０°におけるピークの存在により特徴づけられ、上記粉末Ｘ線回折ダイアグラムは、約９５％の相対湿度及び約２５℃の温度にて測定される；
態様１３）に従う「化合物」の結晶形に関する。
【００２８】
１６）  別の態様は、
ａ  粉末Ｘ線回折ダイアグラムにおいて、以下の屈折角２θ：１２．６°、１４．０°、１５．６°、１９．８°、２０．０°、２１．１°、２３．７°、２６．４°、２７．５°及び２８．４°におけるピークの存在により特徴づけられ、上記粉末Ｘ線回折ダイアグラムは、約５％の相対湿度及び約２５℃の温度にて測定され；又は、
ｂ  粉末Ｘ線回折ダイアグラムにおいて、以下の屈折角２θ：１２．６°、１４．０°、１５．６°、１９．７°、２１．１°、２３．３°、２３．６°、２６．４°、２７．４°及び２８．４°におけるピークの存在により特徴づけられ、上記粉末Ｘ線回折ダイアグラムは、約２０％の相対湿度及び約２５℃の温度にて測定され；又は、
ｃ  粉末Ｘ線回折ダイアグラムにおいて、以下の屈折角２θ：１２．６°、１４．０°、１５．２°、１６．１°、１９．５°、２１．１°、２１．４°、２３．０°、２６．１°及び２７．０°におけるピークの存在により特徴づけられ、上記粉末Ｘ線回折ダイアグラムは、約５０％の相対湿度及び約２５℃の温度にて測定され；又は、
ｄ  粉末Ｘ線回折ダイアグラムにおいて、以下の屈折角２θ：１２．６°、１４．０°、１６．２°、１８．９°、１９．５°、２１．１°、２１．５°、２２．９°、２６．０°及び２７．０°におけるピークの存在により特徴づけられ、上記粉末Ｘ線回折ダイアグラムは、約９５％の相対湿度及び約２５℃の温度にて測定される；
態様１３）に従う「化合物」の結晶形に関する。
【００２９】
１７）  別の態様は、粉末Ｘ線回折ダイアグラムにおいて、以下の屈折角２θ：１２．６°、１４．０°及び２１．１°（特に、１２．６°、１４．０°、１９．８°、２０．０°、２１．１°及び２６．４°）におけるピークの存在により特徴づけられ、上記粉末Ｘ線回折ダイアグラムは、約５％の相対湿度及び約２５℃の温度にて測定される、態様１３）に従う「化合物」の結晶形に関する。
【００３０】
１８）  別の態様は、粉末Ｘ線回折ダイアグラムにおいて、以下の屈折角２θ：１２．６°、１４．０°及び２１．１°（特に、１２．６°、１４．０°、１９．７°、２１．１°及び２６．４°）におけるピークの存在により特徴づけられ、上記粉末Ｘ線回折ダイアグラムは、約２０％の相対湿度及び約２５℃の温度にて測定される、態様１３）に従う「化合物」の結晶形に関する。
【００３１】
１９）  別の態様は、粉末Ｘ線回折ダイアグラムにおいて、以下の屈折角２θ：１２．６°、１４．０°及び２１．１°（特に、１２．６°、１４．０°、１９．５°、２１．１°、２１．４°及び２６．１°）におけるピークの存在により特徴づけられ、上記粉末Ｘ線回折ダイアグラムは、約５０％の相対湿度及び約２５℃の温度にて測定される、態様１３）に従う「化合物」の結晶形に関する。
【００３２】
２０）  別の態様は、粉末Ｘ線回折ダイアグラムにおいて、以下の屈折角２θ：１２．６°、１４．０°及び２１．１°（特に、１２．６°、１４．０°、１９．５°、２１．１°、２１．５°及び２６．０°）におけるピークの存在により特徴づけられ、上記粉末Ｘ線回折ダイアグラムは、約９５％の相対湿度及び約２５℃の温度にて測定される、態様１３）に従う「化合物」の結晶形に関する。
【００３３】
２１）  別の態様は、
ａ  図１に示す粉末Ｘ線回折パターンを本質的に示し、上記粉末Ｘ線回折ダイアグラムは、約５％の相対湿度及び約２５℃の温度にて測定され；又は、
ｂ  図２に示す粉末Ｘ線回折パターンを本質的に示し、上記粉末Ｘ線回折ダイアグラムは、約２０％の相対湿度及び約２５℃の温度にて測定され；又は、
ｃ  図３に示す粉末Ｘ線回折パターンを本質的に示し、上記粉末Ｘ線回折ダイアグラムは、約５０％の相対湿度及び約２５℃の温度にて測定され；又は、
ｄ  図４に示す粉末Ｘ線回折パターンを本質的に示し、上記粉末Ｘ線回折ダイアグラムは、約９５％の相対湿度及び約２５℃の温度にて測定される：
態様１３）に従う「化合物」の結晶形に関する。
【００３４】
２２）  別の態様は、図１に示す粉末Ｘ線回折パターンを本質的に示し、上記粉末Ｘ線回折ダイアグラムは、約５％の相対湿度及び約２５℃の温度にて測定される、態様１３）に従う「化合物」の結晶形に関する。
【００３５】
２３）  別の態様は、図２に示す粉末Ｘ線回折パターンを本質的に示し、上記粉末Ｘ線回折ダイアグラムは、約２０％の相対湿度及び約２５℃の温度にて測定される、態様１３）に従う「化合物」の結晶形に関する。
【００３６】
２４）  別の態様は、図３に示す粉末Ｘ線回折パターンを本質的に示し、上記粉末Ｘ線回折ダイアグラムは、約５０％の相対湿度及び約２５℃の温度にて測定される、態様１３）に従う「化合物」の結晶形に関する。
【００３７】
２５）  別の態様は、図４に示す粉末Ｘ線回折パターンを本質的に示し、上記粉末Ｘ線回折ダイアグラムは、約９５％の相対湿度及び約２５℃の温度にて測定される、態様１３）に従う「化合物」の結晶形に関する。
【００３８】
２６）  別の態様は、本明細書に記載の方法を用いた示差走査熱量測定により決定した約２６０℃〜２７６℃の範囲における吸熱を示す、態様１）〜２５）のいずれか１つに従う「化合物」の結晶形に関する。
【００３９】
２７）  別の態様は、図５に示す重量測定蒸気吸着プロファイルを本質的に示し、上記重量測定蒸気吸着プロファイルは２５℃にて測定される、態様１）〜２６）のいずれか１つに従う「化合物」の結晶形に関する。
【００４０】
２８）  別の態様は、態様１３）の方法により得ることができる、態様１）〜１２）のいずれか１つに従う「化合物」の結晶形に関する。
【００４１】
従って、上記に開示した異なる態様１）〜２８）の従属関係に基づいて、下記の態様が可能であり、意図されており、そして個々の形態としてここに具体的に開示される：
１、２＋１、３＋１、４＋１、５＋１、６＋１、７＋１、８＋１、９＋１、１０＋１、１１＋１、１２＋１、１３、１４＋１３、１５＋１３、１６＋１３、１７＋１３、１８＋１３、１９＋１３、２０＋１３、２１＋１３、２２＋１３、２３＋１３、２４＋１３、２５＋１３、２６＋１、２６＋２＋１、２６＋３＋１、２６＋４＋１、２６＋５＋１、２６＋６＋１、２６＋７＋１、２６＋８＋１、２６＋９＋１、２６＋１０＋１、２６＋１１＋１、２６＋１２＋１、２６＋１３、２６＋１４＋１３、２６＋１５＋１３、２６＋１６＋１３、２６＋１７＋１３、２６＋１８＋１３、２６＋１９＋１３、２６＋２０＋１３、２６＋２１＋１３、２６＋２２＋１３、２６＋２３＋１３、２６＋２４＋１３、２６＋２５＋１３、２７＋１、２７＋２＋１、２７＋３＋１、２７＋４＋１、２７＋５＋１、２７＋６＋１、２７＋７＋１、２７＋８＋１、２７＋９＋１、２７＋１０＋１、２７＋１１＋１、２７＋１２＋１、２７＋１３、２７＋１４＋１３、２７＋１５＋１３、２７＋１６＋１
３、２７＋１７＋１３、２７＋１８＋１３、２７＋１９＋１３、２７＋２０＋１３、２７＋２１＋１３、２７＋２２＋１３、２７＋２３＋１３、２７＋２４＋１３、２７＋２５＋１３、２７＋２６＋１、２７＋２６＋２、２７＋２６＋３、２８＋１、２８＋２＋１、２８＋３＋１、２８＋４＋１、２８＋５＋１、２８＋６＋１、２８＋７＋１、２８＋８＋１、２８＋９＋１、２８＋１０＋１、２８＋１１＋１、２８＋１２＋１；
上記の表中、数字は上記の番号に応じた態様を意味し、「＋」は他の態様への従属関係を表す。種々の態様は読点により個々に分けられている。換言すると、例えば「２６＋２＋１」は、態様２６）であって、態様２）に従属し、態様１）に従属することを意味し、すなわち、態様「２６＋２＋１」は、態様２）及び２６）の特徴によりさらに限定された態様１）に相当する。
【００４２】
いかなる疑義をも避けるために、上記態様の１つが、「粉末Ｘ線回折ダイアグラムにおける、以下の屈折角２θにおけるピーク」に言及する場合は常に、当該粉末Ｘ線回折ダイアグラムは、Ｋa２を除去することなく、結合Ｃｕ  Ｋα１及びＫα２照射（ｃｏｍｂｉｎｅｄ  Ｃｕ  Ｋa１  ａｎｄ  Ｋa２  ｒａｄｉａｔｉｏｎ）を用いて得られたものであり；そして本明細書で提供される２θ値の精度は＋／−０．１〜０．２°の範囲内であることが理解されるべきである。特に、本発明の態様及びクレーム中でピークに対する屈折角２シータ（２θ）を特定する場合、記載された当該２θ値は、当該値−０．２°から当該値＋０．２°（２θ＋／−０．２°）の間；そして好ましくは当該値−０．１°から当該値＋０．１°（２θ＋／−０．１°）の間と理解されるべきである。
【００４３】
化合物、固体、医薬組成物、疾患等について複数形が使用される場合は、単数の化合物、固体、医薬組成物、疾患等をも意味することが意図されている。
【００４４】
ここに記載される定義は、態様１）〜２８）のいずれか１つに定義されるような主題に対して一律に適用されるものであり、特段の定義によってより広い又はより狭い定義が与えられない限り本明細書及び請求項を通じて準用される。当然ながら、ある用語又は表現の定義又は好ましい定義が、ここに定義されるいずれか又は他のすべての用語又は表現のいずれか又は好ましい定義におけるそれぞれの用語又は表現を、独立して（及びそれらと共に）定義し置き換えるものであってよい。
【００４５】
「エナンチオマーが富化された」という用語は、本発明の文脈において、特に、「化合物」の少なくとも９０、好ましくは少なくとも９５、そして最も好ましくは少なくとも９９重量パーセントが、「化合物」の一方のエナンチオマーの形態で存在することを意味するものと理解される。「化合物」は、エナンチオマーが富化された絶対（Ｓ）−配置で存在するものと理解される。
【００４６】
「本質的に純粋な」という用語は、本発明の文脈において、特に、「化合物」の結晶の少なくとも９０、好ましくは少なくとも９５、そして最も好ましくは少なくとも９９重量パーセントが、本発明の結晶形で存在すること、を意味するものと理解される。
【００４７】
例えば、粉末Ｘ線回折ダイアグラムにおけるピークの存在を定義する場合、通常の方法は、Ｓ／Ｎ比（Ｓ＝シグナル、Ｎ＝ノイズ）の点からこれを行うことである。この定義に従えば、粉末Ｘ線回折ダイアグラムにピークが存在しなければならないと述べる場合、粉末Ｘ線回折ダイアグラムのピークは、ｘ（ｘは１より大きい数値である。）より大きい、通常は２より大きい、特に３より大きいＳ／Ｎ比（Ｓ＝シグナル、Ｎ＝ノイズ）を持つことにより定義されるものと理解されるべきである。
【００４８】
結晶形が、図１、２、３又は４のそれぞれに表される粉末Ｘ線回折パターンを本質的に示す、という記載の文脈において、「本質的に」という用語は、少なくとも当該図に表さ
れるダイアグラムの主要なピーク、すなわち、ダイアグラムにおいて最も強いピークと比べ、２０％を超える、特に１０％を超える相対強度を有するピークが存在しなければならないことを意味する。しかしながら、粉末Ｘ線回折の当業者は、粉末Ｘ線回折ダイアグラムの相対強度が、好ましい配向効果に起因する強い強度変動に付され得ることを認識しているはずである。
【００４９】
相対湿度及び温度に関して使用されていない場合には、数値「Ｘ」の前に置かれる「約」という用語は、本出願において、Ｘ−１０％ＸからＸ＋１０％Ｘの間、好ましくはＸ−５％ＸからＸ＋５％Ｘの間を表す。相対湿度の特定の場合には、相対湿度「Ｙ」の前に置かれる「約」の用語は、この出願において、相対湿度Ｙ−Ｙの３からＹ＋Ｙの３に渡る間（ａｎ  ｉｎｔｅｒｖａｌ  ｅｘｔｅｎｄｉｎｇ  ｆｒｏｍ  ｒｅｌａｔｉｖｅ  ｈｕｍｉｄｉｔｙ  Ｙ  ｍｉｎｕｓ  ３  ｏｆ  Ｙ  ｔｏ  Ｙ  ｐｌｕｓ  ３  ｏｆ  Ｙ）、好ましくはＹ−Ｙの１からＹ＋Ｙの１に渡る間（ａｎ  ｉｎｔｅｒｖａｌ  ｅｘｔｅｎｄｉｎｇ  ｆｒｏｍ  Ｙ  ｍｉｎｕｓ  １  ｏｆ  Ｙ  ｔｏ  Ｙ  ｐｌｕｓ  １  ｏｆ  Ｙ）を表し；例えば、「約５％の相対湿度」という用語は、２％から８％の間の相対湿度、好ましくは４％から６％の間の相対湿度を意味する。温度の特定の場合には、温度「Ｙ」の前に置かれる「約」の用語は、この出願において、Ｙ−５℃からＹ＋５℃に渡る間、好ましくはＹ−３℃からＹ＋３℃に渡る間を表す。室温は、約２５℃の温度を意味する。
【００５０】
数値範囲を記述するために「間」又は「から（〜）」という単語が使用される場合は常に、示された範囲の末端の点は明示的にその範囲に含まれると解される。これは、例えば、温度範囲が４０℃から８０℃の間（又は４０℃から（〜）８０℃）であると記述される場合、末端の点である４０℃と８０℃はその範囲に含まれることを意味し、あるいは、可変数が１から４の間（又は１から（〜）４）の整数であると定義される場合、可変数は整数の１、２、３又は４であることを意味する。
【００５１】
％ｗ／ｗという表現は、考慮している組成物の総重量に対する重量百分率を意味する。同様に、ｖ／ｖという表現は、考慮している２つの成分の体積比を意味する。
【００５２】
態様１）〜２８）のいずれか１つに従う「化合物」の結晶形、特に本質的に純粋な結晶形は、医薬として、例えば、（特に経口等の）経腸又は（局所的適用又は吸入を含む）非経口投与のための医薬組成物の形態で使用することができる。
【００５３】
２９）  従って、別の態様は、医薬として使用するための、態様１）〜２８）のいずれか１つに従う化合物、（Ｓ）−２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−２−フルオロ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸の結晶形に関する。
【００５４】
態様１）〜２８）のいずれか１つに従う「化合物」の結晶固体、特に本質的に純粋な結晶固体は、単一成分として、又は「化合物」の他の結晶形若しくは非晶質形態との混合物として使用してもよい。
【００５５】
医薬組成物の製造は、いずれの当業者にもよく知られた様式で（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ、Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、２１ｓｔ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（２００５）、Ｐａｒｔ  ５、「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ」［ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ  ｂｙ  Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ］を見よ。）、本発明の結晶形を、任意にその他の治療的に有益な物質と組み合わせて、適切な無毒の不活性な薬学的に許容される固体又は液体の担体材料及び必要に応じて、通常の薬学的アジュバントと共に、製剤投与形態とすることにより遂行することができる。
【００５６】
３０）  本発明のさらなる態様は、活性成分としての態様１）〜２８）のいずれか１つに従う「化合物」の結晶形及び少なくとも１種の薬学的に許容される担体材料を含む医薬組成物に関する。
【００５７】
３１）  本発明のさらなる態様は、医薬組成物の製造における使用のための、態様１）〜２８）のいずれか１つに従う「化合物」の結晶形に関し、当該医薬組成物は、活性成分としての「化合物」及び少なくとも１種の薬学的に許容される担体材料を含む。
【００５８】
３２）  本発明のさらなる態様は、喘息、アレルギー性喘息、好酸球性喘息、重症喘息、鼻炎、アレルギー性鼻炎、血管性浮腫、昆虫毒アレルギー、薬剤アレルギー、アレルギー性副鼻腔炎、アレルギー性腎炎、アレルギー性結膜炎、アトピー性皮膚炎、気管支喘息、食物アレルギー、全身性肥満細胞症、アナフィラキシーショック、じん麻疹、湿疹、潰瘍性大腸炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、炎症性腸疾患、関節リウマチ及び鼻ポリープ等の慢性及び急性のアレルギー性／免疫性疾患／障害；チャーグ・ストラウス症候群等の小血管性血管炎、ヴェグナー肉芽腫症、顕微鏡的多発血管炎（及び後者の臓器特異的亜群）、好酸球性肺炎等の好酸球増加症候群、好酸球性食道炎、逆流性食道炎、好酸球性心内膜炎（レフラー心内膜炎）、好酸球増多筋痛症候群、好酸球性筋膜炎、好酸球性膿疱性毛包炎（大藤病）、好酸球性潰瘍、好酸球増多随伴性血管類リンパ組織増殖症（ＡＬＨＥ）、好酸球性蜂巣炎（ウェルズ症候群）、慢性好酸球性白血病、ドレス症候群（好酸球増加と全身症状を伴う薬疹）及びスティル病（全身型若年性特発性関節炎）を含む好酸球関連疾患；好塩基球性白血病及び好塩基球性白血球増加症を含む好塩基球関連疾患並びに嚢胞性線維症からなる群より選択される疾患の予防又は治療において使用するための態様１）〜２８）のいずれか１つに従う「化合物」の結晶形に関する。
【００５９】
３３）  本発明の好ましい態様は、喘息、好酸球性喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、鼻ポリープ、食物アレルギー（特に、ＩｇＥ介在食物アレルギー）、じん麻疹（特に、慢性じん麻疹）、好酸球性食道炎、チャーグ・ストラウス症候群、好酸球増加症候群、好酸球性肺炎（特に、慢性好酸球性肺炎）、ドレス症候群、スティル病、ＣＯＰＤ及び嚢胞性線維症（特に、喘息、好酸球性喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、ＩｇＥ介在食物アレルギー、慢性じん麻疹、好酸球性食道炎及びチャーグ・ストラウス症候群）からなる群より選択される疾患の予防又は治療において使用するための態様１）〜２８）のいずれか１つに従う「化合物」の結晶形に関する。
【００６０】
３４）  本発明のさらなる態様は、喘息、アレルギー性喘息、好酸球性喘息、重症喘息、鼻炎、アレルギー性鼻炎、血管性浮腫、昆虫毒アレルギー、薬剤アレルギー、アレルギー性副鼻腔炎、アレルギー性腎炎、アレルギー性結膜炎、アトピー性皮膚炎、気管支喘息、食物アレルギー、全身性肥満細胞症、アナフィラキシーショック、じん麻疹、湿疹、潰瘍性大腸炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、炎症性腸疾患、関節リウマチ及び鼻ポリープを含む慢性及び急性のアレルギー性／免疫性疾患／障害；チャーグ・ストラウス症候群等の小血管性血管炎、ヴェグナー肉芽腫症、顕微鏡的多発血管炎（及び後者の臓器特異的亜群）、好酸球性肺炎等の好酸球増加症候群、好酸球性食道炎、逆流性食道炎、好酸球性心内膜炎（レフラー心内膜炎）、好酸球増多筋痛症候群、好酸球性筋膜炎、好酸球性膿疱性毛包炎（大藤病）、好酸球性潰瘍、好酸球増多随伴性血管類リンパ組織増殖症（ＡＬＨＥ）、好酸球性蜂巣炎（ウェルズ症候群）、慢性好酸球性白血病、ドレス症候群（好酸球増加と全身症状を伴う薬疹）及びスティル病（全身型若年性特発性関節炎）を含む好酸球関連疾患；好塩基球性白血病及び好塩基球性白血球増加症を含む好塩基球関連疾患並びに嚢胞性線維症からなる群より選択される疾患の予防又は治療のための医薬組成物の製造における使用のための、態様１）〜２８）のいずれか１つに従う「化合物」の結晶形に関する。
【００６１】
３５）  本発明の好ましい態様は、喘息、好酸球性喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、鼻ポリープ、食物アレルギー（特に、ＩｇＥ介在食物アレルギー）、じん麻疹（特に、慢性じん麻疹）、好酸球性食道炎、チャーグ・ストラウス症候群、好酸球増加症候群、好酸球性肺炎（特に、慢性好酸球性肺炎）、ドレス症候群、スティル病、ＣＯＰＤ及び嚢胞性線維症（特に、喘息、好酸球性喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、ＩｇＥ介在食物アレルギー、慢性じん麻疹、好酸球性食道炎及びチャーグ・ストラウス症候群）からなる群より選択される疾患の予防又は治療のための医薬組成物の製造における使用のための、態様１）〜２８）のいずれか１つに従う「化合物」の結晶形に関する。
【００６２】
３６）  本発明のさらなる態様は、喘息、アレルギー性喘息、好酸球性喘息、重症喘息、鼻炎、アレルギー性鼻炎、血管性浮腫、昆虫毒アレルギー、薬剤アレルギー、アレルギー性副鼻腔炎、アレルギー性腎炎、アレルギー性結膜炎、アトピー性皮膚炎、気管支喘息、食物アレルギー、全身性肥満細胞症、アナフィラキシーショック、じん麻疹、湿疹、潰瘍性大腸炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、炎症性腸疾患、関節リウマチ及び鼻ポリープを含む慢性及び急性のアレルギー性／免疫性疾患／障害；チャーグ・ストラウス症候群等の小血管性血管炎、ヴェグナー肉芽腫症、顕微鏡的多発血管炎（及び後者の臓器特異的亜群）、好酸球性肺炎等の好酸球増加症候群、好酸球性食道炎、逆流性食道炎、好酸球性心内膜炎（レフラー心内膜炎）、好酸球増多筋痛症候群、好酸球性筋膜炎、好酸球性膿疱性毛包炎（大藤病）、好酸球性潰瘍、好酸球増多随伴性血管類リンパ組織増殖症（ＡＬＨＥ）、好酸球性蜂巣炎（ウェルズ症候群）、慢性好酸球性白血病、ドレス症候群（好酸球増加と全身症状を伴う薬疹）及びスティル病（全身型若年性特発性関節炎）を含む好酸球関連疾患；好塩基球性白血病及び好塩基球性白血球増加症を含む好塩基球関連疾患並びに嚢胞性線維症からなる群より選択される疾患の予防又は治療において使用するための、態様３０）に従う医薬組成物に関する。
【００６３】
３７）  本発明の好ましい態様は、喘息、好酸球性喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、鼻ポリープ、食物アレルギー（特に、ＩｇＥ介在食物アレルギー）、じん麻疹（特に、慢性じん麻疹）、好酸球性食道炎、チャーグ・ストラウス症候群、好酸球増加症候群、好酸球性肺炎（特に、慢性好酸球性肺炎）、ドレス症候群、スティル病、ＣＯＰＤ及び嚢胞性線維症（特に、喘息、好酸球性喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、ＩｇＥ介在食物アレルギー、慢性じん麻疹、好酸球性食道炎及びチャーグ・ストラウス症候群）からなる群より選択される疾患の予防又は治療において使用するための、態様３０）に従う医薬組成物に関する。
【００６４】
本発明はまた、薬学的に活性な量の態様１）〜２８）のいずれか１つに従う「化合物」の結晶形又は態様３０）に従う医薬組成物を対象に投与することを含む、本明細書において言及する疾患又は障害の予防又は治療方法にも関する。
【００６５】
本発明はまた、エナンチオマーが富化された形態の「化合物」の製造方法、並びに態様１）〜２８）のいずれか１つに従う「化合物」の結晶形の製造及び同定方法にも関する。当該方法は、態様１３）並びに下記の実験の項の手順に記載されている。
【実施例】
【００６６】
実験手順
（前記の部分及びこの項において使用される）略語：
Ａｃ              アセチル（例えばＯＡｃ＝アセテート、ＡｃＯＨ＝酢酸）
ａｑ．            水溶液
Ｂｏｃ            ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル
ＢＳＡ            ウシ血清アルブミン
Ｂｕ              ブチル、例えばｎ−Ｂｕ＝ｎ−ブチル
ｃｏｎｃ．        濃縮した
ＤＣＭ            ジクロロメタン
ＤＥＡ            ジエチルアミン
ＤＩＥＡ          ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＦ            Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ          ジメチルスルフォキシド
ｄｐｍ            分当たりの壊変数
ＥＤＴＡ          エチレンジアミン四酢酸
ＥＬＳ（Ｄ）      蒸発光散乱（検出）
ｅｑ              当量
Ｅｔ              エチル
ＥｔＯＡｃ        酢酸エチル
ＥｔＯＨ          エタノール
ＦＣ              シリカゲルフラッシュクロマトグラフィー
Ｆｉｇ            図
ｈ                時間
ＨＥＰＥＳ        ４−（２−ヒドロキシエチル）−ピペラジン−１−エタンスルホン酸１Ｈ−ＮＭＲ      プロトン核磁気共鳴
ＨＰＬＣ          高速液体クロマトグラフィー
ＬＣ−ＭＳ        液体クロマトグラフィー−質量分析
Ｍ                モル濃度
Ｍ                （ＬＣ−ＭＳに対して使用するような）精密質量
Ｍｅ              メチル
ＭｅＣＮ          アセトニトリル
ＭｅＯＨ          メタノール
ＭＷ              マイクロ波
ｍＷ              ミリワット
μｌ              マイクロリットル
ｍｉｎ            分
ＭＳ              質量分析
Ｎ                規定度
ＰＢＳ            リン酸緩衝生理食塩水
Ｐｈ              フェニル
ＰＰｈ３          トリフェニルホスフィン
ｐｒｅｐ．        分取用
ＲＨ              相対湿度
ＲＴ              室温
ｓａｔ．          飽和
ＴＦＡ            トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ            テトラヒドロフラン
ｔＲ              保持時間
トリス            トリス−（ヒドロキシメチル）アミノメタン緩衝液
ＵＶ              紫外線
全ての溶媒及び試薬は、特に断らない限り、商業的供給元から得られたままで使用される。
【００６７】
温度は、摂氏温度（℃）で示す。特に断らない限り、反応は、室温（ＲＴ）で行われる。
【００６８】
混合物において、溶媒若しくは溶出液又は液体形態の試薬混合物の割合の関係は、特に断らない限り、体積関係で示す（ｖ／ｖ）。
【００６９】
化合物は、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＦＣ）又は分取用ＨＰＬＣで精製する。本発明に記載した化合物は、ＬＣ−ＭＳで特徴付ける（保持時間ｔＲはｍｉｎ．で示す；以下に記載した条件を用いて、質量分析から得られた分子量はｇ／ｍｏｌで示す。）。
【００７０】
以下の実施例で使用される分析ＬＣ−ＭＳ条件：
ＬＣ−ＭＳ分析は、Ｄｉｏｎｅｘ  Ｐ５８０バイナリポンプ、Ｄｉｏｎｅｘ  ＰＤＡ−１００  Ｐｈｏｔｏｄｉｏｄｅ  Ａｒｒａｙ  Ｄｅｔｅｃｔｏｒ及びＦｉｎｎｉｇａｎ  ＡＱＡ質量分析計を備えたＡｇｉｌｅｎｔ  １１００システム上で行う。
【００７１】
ＬＣ保持時間は、下記の溶出条件を用いて得られる：
−  Ｚｏｒｂａｘ（登録商標）  ＳＢ−ＡＱカラム（４．６×５０ｍｍ、３．５μｍ、Ａｇｉｌｅｎｔ）上の分析ＨＰＬＣ；水／０．０４％ＴＦＡ（Ａ）及びＭｅＣＮ（Ｂ）の５％から９５％Ｂの１．５ｍｉｎに渡る直線勾配；流速４．５ｍＬ／ｍｉｎ、２１０ｎｍで検出。
【００７２】
分取用ＨＰＬＣ／ＭＳ精製（塩基性条件）は、Ｇｉｌｓｏｎ２１５オートサンプラー及びフラクションコレクター、Ｄｉｏｎｅｘ  ＵＶＤ３４０Ｕ  ＤＡＤ検出器、ｐｏｌｙｍｅｒｌａｂｓ  ＰＬ−ＥＬＳ  １０００  ＥＬＳ検出器及びＴｈｅｒｍｏ  ＭＳＱ  Ｐｌｕｓ  ＭＳ検出器を備えたＧｉｌｓｏｎ  ３３３／３３４バイナリ高圧勾配ポンプシステム上で、Ｗａｔｅｒｓ  ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｃ１８カラム（１０μｍ、３０×７５ｍｍ、）を用いて、水／０．５％の２５％ＮＨ４ＯＨ（Ｂ）及びＭｅＣＮ（Ａ）の５ｍｉｎに渡る８０／２０から５／９５（Ｂ）／（Ａ）への直線勾配で行う；流速７５ｍｌ／ｍｉｎ。
【００７３】
キラル固定相上の分析用ＨＰＬＣは、Ｄａｉｃｅｌ  ＣｈｉｒａｌＰａｋ  ＡＤ−Ｈ（４．６×２５０ｍｍ、５μｍ）カラム又はＣｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＹ−Ｈ（４．６Ｘ２５０ｍｍ、５μｍ）カラム上で行う。キラルＨＰＬＣの典型的な条件は、２１０ｎｍで検出を行う、０．８ｍＬ／ｍｉｎ．の流速における、５０％ヘプタン＋０．０５％ＤＥＡ及び５０％ＥｔＯＨ＋０．０５％ＤＥＡの無勾配混合物（キラルＨＰＬＣ−１）又は２１０ｎｍで検出を行う、１．０ｍＬ／ｍｉｎ．の流速における、４０％ヘプタン及び６０％ＥｔＯＨ＋０．１％ＴＦＡの無勾配混合物（キラルＨＰＬＣ−２）である。
【００７４】
キラル固定相上の分取用ＨＰＬＣは、Ｄａｉｃｅｌ  ＣｈｉｒａｌＰａｋ  ＡＤ−Ｈ（２０×２５０ｍｍ、５μｍ）カラム上で行う。キラルＨＰＬＣの典型的な条件は、２１０ｎｍで検出を行う、３４ｍＬ／ｍｉｎ．の流速における、５０％ＥｔＯＨ＋０．０５％ＤＥＡ及び５０％ヘプタンの無勾配混合物である。
【００７５】
粉末Ｘ線回折分析（ＸＲＰＤ）
粉末Ｘ線回折パターンは、試料に関して温度及び相対湿度を設定し、制御するためのＡｎｔｏｎ−Ｐａａｒ  ＣＨＣｐｌｕｓ＋チャンバーを備えたＢｒｕｋｅｒ  Ｄ８  ＡｄｖａｎｃｅＸ線回折計上で収集した。回折計には、Ｌｙｎｘｅｙｅ検出器が装備され、平行ビーム光学系（ｐａｒａｌｌｅｌ  ｂｅａｍ  ｏｐｔｉｃｓ）を用いたＣｕ  Ｋα−照射で作動し、反射モードで作動する。典型的には、Ｘ−線チューブを４０ｋＶ／４０ｍＡで走査させた。２θにおいて３〜３５°の走査範囲に渡って、０．０２°（２θ）のステップサイズ及び９５秒のステップタイムを適用した。粉末を、標準Ａｎｔｏｎ−Ｐａａｒ  ＴＴＫサンプルホルダー内にわずかにプレスした。回折データは、Ｃｕ  Ｋα１（l＝１．５４０６０Å）を用いて表示される。これまでに測定された粉末Ｘ線回折パターンが一般
的にそうであるように、本明細書で提供される２θ値の精度は、＋／−０．１〜０．２°の範囲内である。
【００７６】
重量測定蒸気吸着（ＧＶＳ）分析
測定は、２５℃においてステッピングモードで作動するマルチサンプル装置ＳＰＳ−１００ｎ（Ｐｒｏｊｅｋｔ  Ｍｅｓｓｔｅｃｈｎｉｋ、ウルム、ドイツ）上で行った。予め既定された湿度プログラム（４０−０−９５−０−９５−４０％ＲＨ、５％のDＲＨステップを適用し、各ステップ毎に最大２４時間の平衡化時間を設けた。）を開始する前に、試料を４０％ＲＨで平衡化した。各試料を約２０〜３０ｍｇ使用した。吸湿性の分類は、ｔｈｅ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅａ  Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ（１９９９、８６頁）、例えば、わずかに吸湿性：２％未満の質量増加及びｍａｓｓ／ｍａｓｓが０．２％か、それ以上；吸湿性：１５％未満の質量増加及びｍａｓｓ／ｍａｓｓが２％か、それ以上）に従って行った。最初の吸着スキャンにおける２０％相対湿度と８０％相対湿度との間の質量変化を考慮した。
【００７７】
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）
ＤＳＣデータは、３４サンプルのオートサンプラーを備えたＭｅｔｔｌｅｒ  Ｔｏｌｅｄｏ  ＳＴＡＲｅ  Ｓｙｓｔｅｍ（ＤＳＣ８２２ｅモジュール、セラミックセンサー付きの測定用セル及びＳＴＡＲ  ソフトウェア  ｖｅｒｓｉｏｎ  １３．００）上で収集した。装置は、インジウム標品を用いてエネルギー及び温度について平衡化した。典型的には、２ｍｇの各サンプルを、自動的に削孔される４０μＬのＭｅｔｔｌｅｒアルミニウムパン内で、特に断らない限り、−２０℃から３２０℃に、１０℃  ｍｉｎ−１で加熱した。サンプル上で窒素パージを２０ｍｌ  ｍｉｎ−１で維持した。
【００７８】
Ｉ−化学
（Ｓ）−２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−２−フルオロ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸の合成
１）  ４−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）シクロヘキサノンの合成
【００７９】
【化１】
2018527411.tif 000002
市販の１，４−ジオキサスピロ［４．５］デカン−８−オン（１ｅｑ）をＤＣＭ（２０ｍｌ／１０ｍｍｏｌ）中に溶解したものに、０℃にて、順次、メチルアミン（ＥｔＯＨ中８Ｍ、１ｅｑ）及びＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（１．５ｅｑ）を添加した。反応混合物をＲＴに温まるようにし、２ｈ撹拌した。反応混合物をＮａＨＣＯ３の飽和溶液中に注ぎ、有機層を塩水（ｂｒｉｎｅ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥し、真空蒸発させて、Ｎ−メチル−１，４−ジオキサスピロ［４．５］デカン−８−アミンを得、それをさらに精製することなく次の工程で使用した。
【００８０】
Ｎ−メチル−１，４−ジオキサスピロ［４，５］デカン−８−アミン（１ｅｑ）をＤＭ
Ｆ（１０．５ｍｌ／６ｍｍｏｌ）中に溶解したものに、ＤＩＥＡ（２ｅｑ）及び２，５−ジクロロピリミジン（１．０５ｅｑ）を添加した。反応混合物を９０℃にて一晩撹拌した。ＲＴに冷却した後、酢酸イソプロピルを添加した。混合物を水及び１０％クエン酸水溶液で洗浄した。有機層を乾燥し（ＭｇＳＯ４）、真空濃縮した。粗生成物をＦＣ（ヘプタン中の０〜１５％ＥｔＯＡｃ）により精製して、所望の中間体化合物を固体として得た。
【００８１】
この中間体（１ｅｑ）を２Ｎ  ＨＣｌ（２．７ｍｌ／５ｍｍｏｌ）とＭｅＯＨ（２．７ｍｌ／５ｍｍｏｌ）の混合物中に溶解したものを、ＲＴにて一晩撹拌した。水層をＤＣＭで抽出した。有機層を乾燥し（ＭｇＳＯ４）、真空濃縮した。粗製残渣をＦＣ（ヘプタン中の０〜１７％ＥｔＯＡｃ）で精製して、表題化合物を固体として得た。ＬＣ−ＭＳ：ｔＲ＝０．７８ｍｉｎ；［Ｍ＋Ｈ］＋＝２４０．２。
【００８２】
２．１）  Ｎ−（５−クロロピリミジン−２−イル）−２−フルオロ−Ｎ−メチル−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−８−アミンの合成（方法Ａ）
【００８３】
【化２】
2018527411.tif 000003
３−アミノ−２−ブロモ−６−フルオロ−ピリジン（１ｅｑ）、４−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）シクロヘキサノン（１．２ｅｑ）、（Ｐｈ３Ｐ）４Ｐｄ（０．０５ｅｑ）及びピリジン（８．１７ｅｑ）の溶液を、バイアル中で合わせた。バイアルを、１６０℃にて１ｈ、ＭＷ照射した。（Ｐｈ３Ｐ）４Ｐｄ（０．０２５ｅｑ）を再び添加し、反応混合物を、１６０℃にて３０ｍｉｎ、再びＭＷ照射した。ＲＴに冷却した後、反応混合物を水と合わせ、ＤＣＭで２回抽出した。有機抽出物を合わせたものを乾燥し（ＭｇＳＯ４）、ろ過し、真空濃縮した。残渣をｐｒｅｐ．ＨＰＬＣ（塩基性条件）で精製して、所望の生成物を得た。ＬＣ−ＭＳ：ｔＲ＝０．８７ｍｉｎ；［Ｍ＋Ｈ］＋＝３３２．０９。
【００８４】
２．２）  Ｎ−（５−クロロピリミジン−２−イル）−２−フルオロ−Ｎ−メチル−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−８−アミンの合成（方法Ｂ）
ａ）  ジ−ｔｅｒｔ−ブチル  １−（６−フルオロピリジン−３−イル）ヒドラジン−１，２−ジカルボキシレートの合成
【００８５】
【化３】
2018527411.tif 000004
ｎ−ブチルリチウム溶液の溶液（ヘキサン中１．６Ｍ、１．１ｅｑ）を、５−ブロモ−２−フルオロ−ピリジン（１ｅｑ）をジエチルエーテル（１４．５ｅｑ）中に溶解したものに、Ｎ２雰囲気下、−４０℃にて滴下した。反応混合物を−４０℃にて２０ｍｉｎ撹拌し、次いで、ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−アゾジカルボキシレート（１．１ｅｑ）をＴＨＦ（１８．５ｅｑ）中に溶解したものを滴下した。反応混合物を−４０℃にて３０ｍｉｎ撹拌し、３０ｍｉｎに渡ってＲＴに温まるようにした。水、次いでＤＣＭを添加した。有機相を分離し、ＭｇＳＯ４上で乾燥し、ろ過し、真空濃縮した。残渣をＦＣ（ＥｔＯＡｃ／ｎ−ヘプタン：２／８）で精製して、所望の生成物を得た。ＬＣ−ＭＳ：ｔＲ＝０．８８ｍｉｎ；［Ｍ＋Ｈ］＋＝３２８．１２。
【００８６】
ｂ）  Ｎ−（５−クロロピリミジン−２−イル）−２−フルオロ−Ｎ−メチル−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−８−アミンの合成
【００８７】
【化４】
2018527411.tif 000005
ジ−ｔｅｒｔ−ブチル  １−（６−フルオロピリジン−３−イル）ヒドラジン−１，２−ジカルボキシレート（１ｅｑ）、４−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）シクロヘキサノン（１ｅｑ）を４％Ｈ２ＳＯ４水溶液（１０ｍｌ／０．０４ｍｏｌ）中に溶解したものを、１００℃にて１５０ｍｉｎ撹拌した。ＲＴに冷却した後、反応混合物をｓａｔ．ＮａＨＣＯ３と合わせ、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機抽出物を合わせたものを乾燥し（ＭｇＳＯ４）、ろ過し、真空濃縮した。残渣をｐｒｅｐ．ＨＰＬＣ（塩基性条件）で精製して、所望の生成物を得た。ＬＣ−ＭＳ：ｔＲ＝０．８７ｍｉｎ；［Ｍ＋Ｈ］＋＝３３２．０３。
【００８８】
３）  （Ｓ）−エチル  ２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−２−フルオロ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）アセテート及び（Ｒ）−エチル  ２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−２−フルオロ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）アセテートの合成
【００８９】
【化５】
2018527411.tif 000006
Ｎａ（９５％、５６．１ｍｇ、２．２２ｍｍｏｌ、１．２ｅｑ）を、Ｎ−（５−クロロピリミジン−２−イル）−２−フルオロ−Ｎ−メチル−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−８−アミン（６１４ｍｇ、１．８５ｍｍｏｌ、１ｅｑ）をＤＭＦ（６．３６ｍｌ）中に溶解した冷溶液（０℃）に注意深く添加した。反応混合物を２０ｍｉｎ撹拌した。ブロモ酢酸エチル（０．２３ｍｌ、２．０４ｍｍｏｌ、１．１ｅｑ）をゆっくりと添加し、反応混合物をＲＴに温まるようにし、２ｈ撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃ中に溶解し、ＮａＨＣＯ３の飽和溶液で洗浄した。有機抽出物をＭｇＳＯ４上で乾燥し、ろ過し、真空濃縮した。残渣をＦＣ（ｎ−ヘプタンからｎ−ヘプタン／ＥｔＯＡｃ：７／３へ）で精製して、所望の生成物をラセミ体として得た。ＬＣ−ＭＳ：ｔＲ：０．９６ｍｉｎ／［Ｍ＋Ｈ］＋：４１８．０１。
【００９０】
得られた生成物の２種のエナンチオマーをキラル固定相上の分取用ＨＰＬＣにより分離した：
（Ｓ）−エチル  ２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−２−フルオロ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）アセテート（２７１ｍｇ、３５％）：ＨＰＬＣ（キラルＨＰＬＣ−１）：ｔＲ：６．２２ｍｉｎ；
（Ｒ）−エチル  ２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−２−フルオロ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）アセテート（２７３ｍｇ、３５％）：ＨＰＬＣ（キラルＨＰＬＣ−１）：ｔＲ：７．６６ｍｉｎ。
【００９１】
４）  （Ｓ）−２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−２−フルオロ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸の合成
【００９２】
【化６】
2018527411.tif 000007
（Ｓ）−エチル  ２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−２−フルオロ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）アセテート（２７１ｍｇ、０．６４９ｍｍｏｌ、１ｅｑ）をＴＨＦ（１０ｍｌ）中に溶解したものに、ＮａＯＨ（１Ｎ、１０ｍｌ、１０ｍｍｏｌ、１５．４ｅｑ）をＲＴにて添加した。反応混合物をＲＴにて１ｈ撹拌した。反応混合物を真空濃縮して
、ＴＨＦのみを除いた。次いで、濃ＨＣｌでｐＨ〜５−６に酸性化し、ＲＴにて撹拌した。懸濁液をＥｔＯＡｃ（４ｘ）で抽出した。有機層を合わせたものをＭｇＳＯ４上で乾燥し、ろ過し、真空濃縮して、表題の化合物をベージュ色の固体（２５５ｍｇ、１００％）として得た。ＬＣ−ＭＳ：ｔＲ：０．８２ｍｉｎ／［Ｍ＋Ｈ］＋：３９０．１２。ＨＰＬＣ（キラルＨＰＬＣ−２）：ｔＲ：４．９６ｍｉｎ。
【００９３】
ＩＩ．    「化合物」の結晶形の製造
実施例１：結晶形１の「化合物」の製造及び定性分析
０．１ｇの「化合物」を４ｍＬのＴＨＦ中に溶解し、０．２ｍＬの溶液を４ｍＬの茶色のガラスバイアル中に入れる。３０℃及び１００ｍｂａｒにて３０分間に設定したＣｏｍｂｉｄａｎｃｅｒ（Ｈｅｔｔｉｃｈ  ＡＧ、スイス）を用いて、ＴＨＦをバイアルから蒸発させる。固体残渣がガラスバイアル中に残り、これは非晶質である。０．０２ｍＬのアセトンを固体残渣に添加し、バイアルを密閉し、混合物を閉じたバイアル中で周囲温度にて３日間インキュベートする。この固体残渣は結晶形１の「化合物」である。アセトンの代わりに、この手順は酢酸エチル、アセトニトリル又はイソプロパノールを用いて行うことができる。
【００９４】
【表１】
2018527411.tif 000008
ＩＩＩ．    生物学的アッセイ：
ｈＣＲＴＨ２受容体膜の調製及び放射性リガンド置換アッセイ：
まず、組み換えＨＥＫ２９３−ｈＣＲＴＨ２細胞を、ラバー・ポリスマンを用いて、培養プレートから、５ｍｌバッファーＡ／プレート（バッファーＡ：５ｍＭ  トリス、１ｍＭ
ＭｇＣｌ２−６Ｈ２Ｏ  ｐＨ＝７．４）中に剥がした。次いで細胞を遠心分離管内に移し、４００ｇにて５分間遠心した。細胞のペレットを同じバッファー中に再懸濁し、そして遠心分離管を−８０℃で凍結した。細胞を融かし、そしてＰｏｌｙｔｒｏｎホモジナイザーを用いたホモジナイゼーション（３０秒）により、膜画分を生成した。次いで、その膜画分を３０００ｇで２０分間遠心し、そしてバッファーＣ中に再懸濁した（バッファーＣ：７５ｍＭ  トリス、２５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、２５０ｍＭ  サッカロース、ｐＨ７．４）。膜画分を小分けして−２０℃にて保存した。
【００９５】
結合試験を、最終試験容積２５０μｌで行った。まず、前もって結合バッファー（結合バッファー：５０ｍＭ  トリス−塩基、１００ｍＭ  ＮａＣｌ、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．１％ＢＳＡ（プロテアーゼフリー）、０．０１％ＮａＮ３、１０ｍＭ  ＭｎＣｌ２、ｐＨ７．０）で希釈した２５μｌの試験化合物を、各ウェル内に入れた。７５μｌの結合バッファーを添加した後、５０μｌの放射性リガンド３Ｈ−ＰＧＤ２（ＡＮＡＷＡ製ＡＲＴ０６６２、２．５ｎＭにて（２２０．０００ｄｐｍ／ウェル））を各ウェルに添加した。結合試験は、１００μｌのＣＲＴＨ２膜画分の添加により開始し、最終濃度を２０μｇ／ウェルとした。非特異的結合については、反応混合物にＰＧＤ２を、最終濃度が１０ｍＭとなるように添加した。この試験混合物を室温にて９０分間インキュベートし、次いで、予め０．５％のポリエチレンイミン（ＰＥＩ）に３時間浸したＧＦ／Ｃフィルター９６−ウェルプレートでろ過した。フィルター−ウェルを氷冷結合バッファーで３回洗浄した。次いで４０μｌのＭｉｃｒｏｓｃｉｎｔ−４０（Ｐａｃｋａｒｄ）を各ウェルに添加し、そして残った放射活性をＴｏｐｃｏｕｎｔ（Ｐａｃｋａｒｄ）で定量した。
【００９６】
「化合物」のアンタゴニスト活性：ＩＣ５０＝５．６ｎＭ。
【００９７】
放射性リガンド置換試験−ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）：
ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）存在下での放射性リガンド置換試験を上記の通りに行ったが、下記の変更を行った。結合バッファー−ＨＳＡ：結合バッファー＋ヒト血清Ａ１８８７からのＳｉｇｍａ  Ａｌｂｕｍｉｎ０．５％（０．１％ＢＳＡの代わりに）。前もって結合バッファー−ＨＳＡで希釈した２５μｌの試験化合物を、各ウェル内に入れた。７５μｌの結合バッファー−ＨＳＡを添加した後、５０μｌの３Ｈ−ＰＧＤ２（ＡＮＡＷＡ製ＡＲＴ０６６２、２．５ｎＭにて（２２０．０００ｄｐｍ／ウェル））を、各ウェルに添加した。それ以外のプロトコルは上記したものと同一であった。
【００９８】
「化合物」のアンタゴニスト活性：ＩＣ５０＝５．０ｎＭ。
【００９９】
ヒト血漿を用いた好酸球形態変化試験
インフォームド・コンセントを得た後、スイス連邦、バーゼル倫理委員会により承認されたプロトコルに従って、静脈穿刺により血液サンプルを採取した。（好酸球、好塩基球及び好中球を含む）多形核白血球をＰｏｌｙｍｏｒｐｈｐｒｅｐ（登録商標）法（Ａｘｉｓ−Ｓｈｉｅｌｄ）を用いて分離した。要約すると、抗凝固剤処理した全血をＰｏｌｙｍｏｒｐｈｐｒｅｐ勾配（密度、１．１１３ｇ／ｍｌ）上に積層し、そして５００ｇで３０ｍｉｎ遠心した。多形核細胞画分をハーヴェストし、そして低張生理食塩水溶解により赤血球を枯渇させた。
【０１００】
多形核細胞を、５×１０６細胞／ｍｌにて、試験バッファー（０．１％のＢＳＡ、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ及び１０ｍＭのブドウ糖を添加した、Ｃａ２＋／Ｍｇ２＋を含む１×ＰＢＳ、ｐＨ７．４）に再懸濁し、そして抗−ＣＤ４９ｄ−ＡＰＣ（ＡＰＣ＝アロフィコシアニン）で、ＲＴにて１時間染色した。試験化合物を、種々の濃度で１０ｍｉｎ、（トロンビン阻害剤で抗凝固剤処理した）ヒト血漿中でプレインキュベートした。次いでヒト血漿を多形核細胞に添加して、４×１０６細胞／ｍｌの多形核細胞を有する最終試験体積の５０％とした。３７℃にて１０分間インキュベートした後、ＰＧＤ２を最終濃度１００ｎＭとなるように添加することにより、多形核細胞を３７℃にて５ｍｉｎ活性化した。０．５ｍｌのパラホルムアルデヒド（１％）を添加することにより、活性化を停止した。
【０１０１】
パラホルムアルデヒドで固定化した後すぐに、サンプルをＦＡＣＳＣａｎｔｏフローサイトメーター（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で分析し、そして標的細胞を、それらの前方散乱（ＦＳＣ）及び側方散乱（ＳＳＣ）特性により同定した。好酸球は、抗−ＣＤ４９ｄ−ＡＰＣシグナル及びそれらの特徴的な側方散乱（ＳＳＣ）プロファイルにより同定
した。好酸球活性化の指標である形態変化反応を、増大した前方散乱を持つ細胞の百分率として定量した。
【０１０２】
「化合物」のアンタゴニスト活性：ＩＣ５０＝３．１ｎＭ。
【０１０３】
初代培養ラット肝細胞におけるインビトロ細胞毒性
１．  方法
１．１  ラット肝細胞の単離及び培養
成体雄性ウィスター系ラットをペントバルビタールナトリウムを用いて麻酔し、標準的手順に従って、すなわちコラゲナーゼ溶液を用いた肝臓のｉｎ  ｓｉｔｕ潅流により、肝細胞を単離した。トリパンブルーｄｙｅ  ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ法で確かめた、精製肝細胞のバイアビリティー（ｖｉａｂｉｌｉｔｙ）は８５％を超えていた。単離した肝細胞を、フェノールレッドを含まず、トランスフェリン（１００μｇ／ｍｌ）、トリヨードサイロニン（ｔｒｉｉｏｄｏｔｈｙｒｏｎｉｎｅ）（１０μｇ／ｍｌ）、ゲンタマイシン（５０μｇ／ｍｌ）、ヘミコハク酸ヒドロコルチゾン（ｈｙｄｒｏｃｏｒｔｉｓｏｎ  ｈｅｍｉｓｕｃｃｉｎａｔｅ）（１３．３６μｇ／ｍｌ）、グルカゴン（５μｇ／ｍｌ）、ＨＥＰＥＳ（１０ｍＭ）、イノシン（１０μｇ／ｍｌ）、インスリン（１０μｇ／ｍｌ）、ストレプトマイシン（１００μｇ／ｍｌ）及びペニシリン（１００Ｕ／ｍｌ）及び１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加した標準Ｗｉｌｌｉａｍｓ  Ｍｅｄｉｕｍ  Ｅ（ＷＭＥ  ｓｕｐｐ．）に再懸濁した。細胞を、コラーゲン被覆２４−ウェルプレートに２ｘ１０５細胞／ウェルの初期密度で播いた。培養プレートに接着させるために４ｈ置いてから、培地を吸引し、ＦＢＳを含まず、試験化合物を含む新しいＷＭＥ  ｓｕｐｐ．で置き換え、９５％Ｏ２及び５％ＣＯ２雰囲気中で３７℃にて２４ｈインキュベートした。各実験、すなわち肝細胞の各バッチを用いた実験について、試験化合物による処理を４重に行った。各培養プレート上には４重の対照群（ベヒクルのみによる処理）も設けた。
【０１０４】
１．２  試験化合物へのインビトロ暴露
処理を開始する数時間前に、試験化合物の保存溶液をＤＭＳＯ中に調製した。最終濃度が０、３、１０、３０、１００及び３００μＭになるようにこれらの保存溶液を適宜に希釈して、処理の直前に培養培地に添加した。ベヒクルであるＤＭＳＯの最終濃度は１％（ｖ／ｖ）であった。
【０１０５】
１．３  細胞培養のバイアビリティー
１．３．１  単層形態学（ｍｏｎｏｌａｙｅｒ  ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ）のモニター
肝細胞単層の形態を、試験化合物への暴露の２４時間後に光学顕微鏡でモニターした。処理と関連する効果を下記の尺度に従って記述する：
０      対照培養と比較した場合、処理による形態学的変化が観察されない；
１−３  処理による何らかの形態学的変化、例えば、細胞内顆粒形成、空胞化（ｖａｃｕｏｌｉｚａｔｉｏｎ）又は細胞死。変化の重篤度に応じて、これらの変化を弱（１）、中（２）又は強（３）とする。
【０１０６】
Ｋ      処理により、１００％の細胞が死滅し及び／又は単層の完全な剥離が起こり、透明な無細胞のディッシュが生じる。
【０１０７】
１．３．２    乳酸脱水素酵素（ｌａｃｔａｔｅ  ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ）の放出
肝細胞培養を２４ｈ処理した後、培養培地のアリコートを注意深く集め、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ製ＬＤＨ細胞毒性検出キット（ｃａｔ  Ｎｏ．６３０１１７、Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ、ＣＡ、ＵＳＡ）を用いて、分光測色法（ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ）により、乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）活性の分析に使用した。各実験について、さらなる培養
を、処理開始時の細胞内全ＬＤＨ活性の測定のために使用した。この目的のために、処理を開始する前に、実験ごとに４ウェルの細胞培養を冷生理食塩水で洗浄し、新しい培地中で超音波処理し、ホモジネートの全ＬＤＨ活性を分析した。培養培地中の酵素活性を測定し、処理開始時に培養肝細胞中に存在する全活性の百分率として表した。
【０１０８】
２．  データ分析
２４ｈの処理後に細胞形態及びＬＤＨ放出（ＬＤＨ  ｌｅａｋａｇｅ）に基づいて、各化合物について最小細胞毒性濃度（ＬＣＣ）及び無効果濃度（ＮｏＥＣ）を示す。ＬＣＣは、試験化合物が培養ラット肝細胞に対して透明効果（ｃｌｅａｒ  ｅｆｆｅｃｔ）（形態学的尺度≧２又はＬＤＨ放出の２倍以上の増加）を引き起こす最小濃度と定義される。＞３００μＭのＬＣＣ値は、３００μＭの最大試験濃度の両末端点において効果がないことを示す。ＮｏＥＣは、化合物が培養ラット肝細胞に対して効果（形態学及びＬＤＨ放出）を示さない最大試験濃度と定義される。
【０１０９】
３．  結果：ＬＣＣ及びＮｏＥＣ値
【０１１０】
【表２】
2018527411.tif 000009
インビボ肝毒性：
式（Ｉ）の化合物の肝毒性は、３種の異なる化合物用量を用いて、ラット及び非げっ歯類種において４週までの経口処理により分析することができる。生じ得る毒性の回復性（Ｒｅｖｅｒｓｉｂｉｌｉｔｙ）は、その後の無処理期間（回復期間）において調べることができる。用量レベルは、それぞれの種における容量範囲設定試験に基づいて選択することができる。高用量は、最大耐量付近における臓器毒性を調べることを目的とする。中域及び低用量は、ヒトにおいて治療上見込まれる暴露に基づいて選択される。各用量レベルにおいて化合物の暴露が測定される。
【０１１１】
処理及び回復の終了時に、血中の（例えば、肝酵素、タンパク質、トリグリセリド又はコレステロール等の）肝臓バイオマーカーを測定する。加えて、ヘマトキシリン・エオシン染色肝臓スライスを顕微鏡で観察し、臓器の起こり得る損傷を直接評価する。肝臓に対するさらなる知見を得るためには、肝臓スライスの特殊な染色が必要になるかもしれない。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際調査報告】
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