(57)【要約】  ジアセレイン又はそのアナログを使用することにより、ＡＳＣの発現、ＮＬＲＰ３の発現、及び／又はＮＬＲＰ３インフラマソーム複合体の形成を阻害するための方法及び組成物が提供される。また、ジアセレイン又はそのアナログを使用することにより、ＡＳＣ及び／又はＮＬＲＰ３により、及び／又はＮＬＲＰ３インフラマソーム複合体の形成により媒介される疾患を治療及び／又は予防するための方法及び組成物も提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ジアセレイン、レイン、モノアセチルレイン、それらの塩、エステル、及びプロドラッグからなる群から選択される化合物を、ＡＳＣ発現の阻害を必要とする対象に投与することを含む、前記対象においてＡＳＣ発現を阻害する方法。
【請求項２】
対象がヒトである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ジアセレイン、レイン、モノアセチルレイン、それらの塩、エステル、及びプロドラッグからなる群から選択される化合物を、ＮＬＲＰ３発現の阻害を必要とする対象に投与することを含む、前記対象においてＮＬＲＰ３発現を阻害する方法。
【請求項４】
対象がヒトである、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
ジアセレイン、レイン、モノアセチルレイン、それらの塩、エステル、及びプロドラッグからなる群から選択される化合物を、ＮＬＲＰ３インフラマソーム複合体の形成の阻害を必要とする対象に投与することを含む、前記対象においてＮＬＲＰ３インフラマソーム複合体の形成を阻害する方法。
【請求項６】
対象がヒトである、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
ジアセレイン、レイン、モノアセチルレイン、並びにそれらの治療的に許容可能な塩、エステル、及びプロドラッグからなる群から選択される治療有効量の化合物を、ＡＳＣ及び／又はＮＬＲＰ３により媒介される疾患の治療及び／又は予防を必要とする対象に投与することを含む、前記対象においてＡＳＣ及び／又はＮＬＲＰ３により媒介される疾患を治療及び／又は予防する方法。
【請求項８】
疾患が、痛風、偽痛風、痛風発作予防、肥満により誘発されるインシュリン抵抗性、２型糖尿病、アルツハイマー病（ＡＤ）、加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）、アテローム性動脈硬化症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、関節リウマチ（ＲＡ）、癌、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、喘息、アレルギー性喘息、接触過敏症、日焼け、ＵＶＢにより誘発される皮膚損傷、本態性高血圧症、クリオピリン関連周期性症候群（ＣＡＰＳ）、マックル・ウェルズ症候群（ＭＷＳ）、家族性感冒自己炎症性症候群（ＦＣＡＳ）、新生児期発症多臓器系炎症性疾患／慢性乳児神経皮膚関節炎症候群（ＮＯＭＤ／ＣＩＮＣＡ）、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、急性心筋梗塞、心筋梗塞、アレルギー性鼻炎、鼻ポリープ、自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）、多発性硬化症（ＭＳ）、ヒト全身性硬化症における皮膚線維症（ＳＳｃ）、高ホモシステイン血症（ｈＨｃｙｓ）関連糸球体硬化、末期腎不全（ＥＳＲＤ）、アテローム性動脈硬化症、肝線維症、腎線維症、肺線維症、慢性肺線維症、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、線維性肺疾患、嚢胞性線維症（ＣＦ）、心筋線維化、膵島線維症、慢性腎疾患（ＣＫＤ）、結晶性腎症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、眼ベーチェット病、ブドウ膜炎、乾癬、石綿肺症、珪肺、マラリア、デング熱、細菌感染症、アレルギー性皮膚炎、高酸素肺障害、結膜炎、角膜炎、アトピー性皮膚炎、乾癬性関節炎、白斑、クローン病、肥満に関連するメタボリックシンドローム、炎症関連癌、過敏性皮膚炎、家族性地中海熱（ＦＭＦ）、家族性アイルランド熱（ＦＨＦ）、家族性寒冷蕁麻疹（ＦＣＵ）、化膿性無菌性関節炎、壊疽性膿皮症、アクネ（ＰＡＰＡ）、全身型若年性特発性関節炎、メバロン酸キナーゼ欠損症（ＭＫＤ）、表皮水疱症（ＥＢ）、表皮融解性魚鱗癬（ＥＩ）、及びシュニッツラー症候群（ＳＳ）からなる群から選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
疾患が、アレルギー性喘息、接触過敏症、日焼け、ＵＶＢにより誘発される皮膚損傷、本態性高血圧症、クリオピリン関連周期性症候群（ＣＡＰＳ）、マックル・ウェルズ症候群（ＭＷＳ）、家族性感冒自己炎症性症候群（ＦＣＡＳ）、新生児期発症多臓器系炎症性疾患／慢性乳児神経皮膚関節炎症候群（ＮＯＭＤ／ＣＩＮＣＡ）、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、急性心筋梗塞、心筋梗塞、アレルギー性鼻炎、鼻ポリープ、自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）、多発性硬化症（ＭＳ）、ヒト全身性硬化症における皮膚線維症（ＳＳｃ）、高ホモシステイン血症（ｈＨｃｙｓ）関連糸球体硬化、末期腎不全（ＥＳＲＤ）、アテローム性動脈硬化症、肝線維症、腎線維症、肺線維症、慢性肺線維症、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、線維性肺疾患、嚢胞性線維症（ＣＦ）、心筋線維化、膵島線維症、慢性腎疾患（ＣＫＤ）、結晶性腎症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、眼ベーチェット病、ブドウ膜炎、乾癬、石綿肺症、珪肺、マラリア、デング熱、細菌感染症、アレルギー性皮膚炎、高酸素肺障害、結膜炎、角膜炎、アトピー性皮膚炎、乾癬性関節炎、白斑、クローン病、肥満に関連するメタボリックシンドローム、炎症関連癌、過敏性皮膚炎、家族性地中海熱（ＦＭＦ）、家族性アイルランド熱（ＦＨＦ）、家族性寒冷蕁麻疹（ＦＣＵ）、化膿性無菌性関節炎、壊疽性膿皮症、アクネ（ＰＡＰＡ）、全身型若年性特発性関節炎、メバロン酸キナーゼ欠損症（ＭＫＤ）、表皮水疱症（ＥＢ）、表皮融解性魚鱗癬（ＥＩ）、及びシュニッツラー症候群（ＳＳ）からなる群から選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
投与により対象においてＡＳＣ発現及び／又はＮＬＲＰ３発現が低減する、請求項７に記載の方法。
【請求項１１】
化合物を１日当たり約５〜５００ｍｇの用量で投与する、請求項７に記載の方法。
【請求項１２】
対象がヒトである、請求項７に記載の方法。
【請求項１３】
ジアセレイン、レイン、モノアセチルレイン、並びにそれらの治療的に許容可能な塩、エステル、及びプロドラッグからなる群から選択される治療有効量の化合物を、ＮＬＲＰ３インフラマソーム複合体の形成により媒介される疾患の治療及び／又は予防を必要とする対象に投与することを含む、前記対象においてＮＬＲＰ３インフラマソーム複合体の形成により媒介される疾患を治療及び／又は予防する方法。
【請求項１４】
疾患が、痛風、偽痛風、痛風発作予防、肥満により誘発されるインシュリン抵抗性、２型糖尿病、アルツハイマー病（ＡＤ）、加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）、アテローム性動脈硬化症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、関節リウマチ（ＲＡ）、癌、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、喘息、アレルギー性喘息、接触過敏症、日焼け、ＵＶＢにより誘発される皮膚損傷、本態性高血圧症、クリオピリン関連周期性症候群（ＣＡＰＳ）、マックル・ウェルズ症候群（ＭＷＳ）、家族性感冒自己炎症性症候群（ＦＣＡＳ）、新生児期発症多臓器系炎症性疾患／慢性乳児神経皮膚関節炎症候群（ＮＯＭＤ／ＣＩＮＣＡ）、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、急性心筋梗塞、心筋梗塞、アレルギー性鼻炎、鼻ポリープ、自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）、多発性硬化症（ＭＳ）、ヒト全身性硬化症における皮膚線維症（ＳＳｃ）、高ホモシステイン血症（ｈＨｃｙｓ）関連糸球体硬化、末期腎不全（ＥＳＲＤ）、アテローム性動脈硬化症、肝線維症、腎線維症、肺線維症、慢性肺線維症、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、線維性肺疾患、嚢胞性線維症（ＣＦ）、心筋線維化、膵島線維症、慢性腎疾患（ＣＫＤ）、結晶性腎症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、眼ベーチェット病、ブドウ膜炎、乾癬、石綿肺症、珪肺、マラリア、デング熱、細菌感染症、アレルギー性皮膚炎、高酸素肺障害、結膜炎、角膜炎、アトピー性皮膚炎、乾癬性関節炎、白斑、クローン病、肥満に関連するメタボリックシンドローム、炎症関連癌、過敏性皮膚炎、家族性地中海熱（ＦＭＦ）、家族性アイルランド熱（ＦＨＦ）、家族性寒冷蕁麻疹（ＦＣＵ）、化膿性無菌性関節炎、壊疽性膿皮症、アクネ（ＰＡＰＡ）、全身型若年性特発性関節炎、メバロン酸キナーゼ欠損症（ＭＫＤ）、表皮水疱症（ＥＢ）、表皮融解性魚鱗癬（ＥＩ）、及びシュニッツラー症候群（ＳＳ）からなる群から選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
疾患が、アレルギー性喘息、接触過敏症、日焼け、ＵＶＢにより誘発される皮膚損傷、本態性高血圧症、クリオピリン関連周期性症候群（ＣＡＰＳ）、マックル・ウェルズ症候群（ＭＷＳ）、家族性感冒自己炎症性症候群（ＦＣＡＳ）、新生児期発症多臓器系炎症性疾患／慢性乳児神経皮膚関節炎症候群（ＮＯＭＤ／ＣＩＮＣＡ）、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、急性心筋梗塞、心筋梗塞、アレルギー性鼻炎、鼻ポリープ、自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）、多発性硬化症（ＭＳ）、ヒト全身性硬化症における皮膚線維症（ＳＳｃ）、高ホモシステイン血症（ｈＨｃｙｓ）関連糸球体硬化、末期腎不全（ＥＳＲＤ）、アテローム性動脈硬化症、肝線維症、腎線維症、肺線維症、慢性肺線維症、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、線維性肺疾患、嚢胞性線維症（ＣＦ）、心筋線維化、膵島線維症、慢性腎疾患（ＣＫＤ）、結晶性腎症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、眼ベーチェット病、ブドウ膜炎、乾癬、石綿肺症、珪肺、マラリア、デング熱、細菌感染症、アレルギー性皮膚炎、高酸素肺障害、結膜炎、角膜炎、アトピー性皮膚炎、乾癬性関節炎、白斑、クローン病、肥満に関連するメタボリックシンドローム、炎症関連癌、過敏性皮膚炎、家族性地中海熱（ＦＭＦ）、家族性アイルランド熱（ＦＨＦ）、家族性寒冷蕁麻疹（ＦＣＵ）、化膿性無菌性関節炎、壊疽性膿皮症、アクネ（ＰＡＰＡ）、全身型若年性特発性関節炎、メバロン酸キナーゼ欠損症（ＭＫＤ）、表皮水疱症（ＥＢ）、表皮融解性魚鱗癬（ＥＩ）、及びシュニッツラー症候群（ＳＳ）からなる群から選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
投与により対象においてＡＳＣ発現及び／又はＮＬＲＰ３発現が低減する、請求項１３に記載の方法。
【請求項１７】
化合物を１日当たり約５〜５００ｍｇの用量で投与する、請求項１３に記載の方法。
【請求項１８】
対象がヒトである、請求項１３に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＡＳＣ（アポトーシス関連スペック様タンパク質含有カスパーゼ動員ドメイン［ＣＡＲＤ］）の発現、ＮＬＲＰ３（ＮＬＲファミリー、パイリンドメイン含有３）の発現、及び／又はＮＬＲＰ３インフラマソーム複合体の形成を阻害するための方法に関する。特に、本発明は、ＡＳＣ及び／又はＮＬＲＰ３により、及び／又はＮＬＲＰ３インフラマソーム複合体の形成により媒介される疾患を、ジアセレイン又はそのアナログを用いることによって治療及び／又は予防する方法に関する。ジアセレイン又はそのアナログを含む医薬組成物も提供される。
【背景技術】
【０００２】
ヌクレオチド結合オリゴマー化ドメイン様受容体（ＮＬＲ）は、通常Ｃ−末端のロイシンに富む反復（ＬＲＲ）ドメイン及びＮ−末端のエフェクターパイリンドメイン（ＰＹＤ）又はカスパーゼ動員ドメイン（ＣＡＲＤ）を伴う共通の中央ヌクレオチド結合及びオリゴマー化（ＮＡＣＨＴ）ドメインを共有する３部構造をもつ細胞質受容体の進化的に保存されたファミリーである。病原体関連分子又はダメージ関連分子により活性化されると、ＮＬＲはオリゴマー化し、アダプタータンパク質ＡＳＣ及びシステインプロテアーゼプロカスパーゼ−１を動員し、インフラマソーム複合体を形成し、カスパーゼ−１の自己触媒作用及び活性化を引き起こす。活性なカスパーゼ−１は最終的に前駆体炎症性サイトカインｐｒｏ−ＩＬ−１β及びｐｒｏ−ＩＬ−１８をその成熟した分泌型に開裂する。
【０００３】
ＮＬＲからのインフラマソーム複合体の形成は、遺伝学的に受け継がれた自己炎症性疾患並びに慢性の病気を始めとする広範囲の疾病の発症機序への関与が示唆されている。特に、アルツハイマー病、アテローム性動脈硬化症、メタボリックシンドローム、及び加齢性黄斑変性症のような病気と関連付けられている。
【０００４】
上述の機序に基づいて、ＮＬＲ又はＡＳＣ及びインフラマソーム複合体の形成を抑制することは、これらのタンパク質により媒介される疾病を治療する可能性のある方法であると考えられている（Ｏｚａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２０１５，  ８：１５−２７）。
【０００５】
米国特許出願公開第２０１４／０１９９３２０号には、ＩＬ−１β阻害剤を始めとする数多くの阻害剤によるＩＬ−１β、ＮＬＲＰ３、ＡＳＣ、ＩＬ−１受容体タイプ１、カスパーゼ−１又はカテプシンＢの阻害によってアクネを治療する方法が開示されている。しかしながら、ＮＬＲＰ３及びＡＳＣよりはむしろＩＬ−１βの抑制に焦点を当てており、従ってどの阻害剤がＮＬＲＰ３及びＡＳＣに対して直接阻害効果を有するかについては殆ど手掛かりにならない。
【０００６】
尚、アナキンラ（組換えＩＬ−１受容体アンタゴニスト）、カナキヌマブ（ＩＬ−１β抗体）、リロナセプト（可溶性のおとりＩＬ−１受容体）、ＩＬ−１８結合性タンパク質、可溶性ＩＬ−１８受容体及び抗−ＩＬ−１８受容体モノクローナル抗体を含めて、炎症性の病気を治療するためにＩＬ−１β及びＩＬ−１８（インフラマソーム活性化の産物）を標的とする多くの試薬が開発されているが、これらの試薬はＩＬ−１β又はＩＬ−１８を抑制するが、ＮＬＲＰ３及びＡＳＣを抑制しない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】米国特許出願公開第２０１４／０１９９３２０号明細書
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｏｚａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２０１５，  ８：１５−２７
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
従って、当技術分野では、ＮＬＲ又はＡＳＣを抑制し、インフラマソーム複合体の形成を阻害することができる特定の方法及び化合物に対するニーズが未だに存在する。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明の発明者は、ジアセレイン及びそのアナログが、ＡＳＣ及びＮＬＲ（殊にＮＬＲＰ３）の発現の優れた阻害剤であり、従ってインフラマソーム複合体の形成を減少させることができることを見出した。従って、ジアセレイン及びそのアナログは、ＡＳＣ及び／又はＮＬＲにより媒介される疾患を治療及び／又は予防するのに使用することができる。
【００１１】
本発明の基本的な目的は、ジアセレイン、レイン、モノアセチルレイン、それらの塩、エステル及びプロドラッグ（以後「ジアセレイン又はそのアナログ」という）からなる群から選択される化合物と細胞を接触させることを含む、細胞内でＡＳＣ発現、ＮＬＲＰ３発現、及び／又はＮＬＲＰ３インフラマソーム複合体の形成を阻害する方法を提供することである。
【００１２】
本発明のもう１つ別の目的は、ジアセレイン又はそのアナログを、ＡＳＣ発現、ＮＬＲＰ３発現、及び／又はＮＬＲＰ３インフラマソーム複合体の形成の阻害を必要とする対象に投与することを含む、前記対象においてＡＳＣ発現、ＮＬＲＰ３発現、及び／又はＮＬＲＰ３インフラマソーム複合体の形成を阻害する方法を提供することである。
【００１３】
本発明の更に別の目的は、ジアセレイン又はそのアナログを、ＡＳＣ及び／又はＮＬＲＰ３、及び／又はＮＬＲＰ３インフラマソーム複合体の形成により媒介される疾患の治療及び／又は予防を必要とする対象に投与することを含む、前記対象においてＡＳＣ及び／又はＮＬＲＰ３、及び／又はＮＬＲＰ３インフラマソーム複合体の形成により媒介される疾患の治療及び／又は予防方法を提供することである。
【００１４】
本発明のために実施される詳細な技術及び好ましい実施形態を、添付の図面を伴って以下の段落に記載する。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】図１は、ＴＨＰ−１細胞を尿酸一ナトリウム（ＭＳＵ）で刺激し、様々な用量のレインで処理した後の蛍光共焦点顕微鏡法のＡＳＣ及びＮＬＲＰ３の画像を示す。
【図２】図２は、ＴＨＰ−１細胞をＭＳＵで刺激し、様々な用量のレインで処理した後のＡＳＣ染色領域を示す統計棒グラフである。
【図３】図３は、ＴＨＰ−１細胞をＭＳＵで刺激し、様々な用量のレインで処理した後のＮＬＲＰ３染色領域を示す統計棒グラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
用語「治療有効量」とは、本明細書で使用されるとき、病気の１以上の症状を軽減又は低減する量を意味する。
【００１７】
用語「ジアセレイン又はそのアナログ」とは、本明細書で使用されるとき、ジアセレイン、レイン、モノアセチルレイン、又はその塩若しくはエステル若しくはプロドラッグを意味する。
【００１８】
用語「プロドラッグ」とは、本明細書で使用されるとき、身体内でレインに変換することができ、レインの形態でその生理学的な機能を発揮するあらゆる化合物を意味する。
【００１９】
本明細書中他に断らない限り、本明細書（殊に後述の特許請求の範囲）で使用される用語「ａ（ａｎ）」、「ｔｈｅ」などは、単数形態及び複数形態の両方を包含するものと理解されたい。
【００２０】
化学的に、レインは、式（Ｉ）の構造を有する９，１０−ジヒドロ−４，５−ジヒドロキシ−９，１０−ジオキソ−２−アントラセンカルボン酸である。そのプロドラッグの１つ、ジアセレインは、式（ＩＩ）の構造を有する４，５−ビス（アセチルオキシ）−９，１０−ジヒドロ−４，５−ジヒドロキシ−９，１０−ジオキソ−２−アントラセンカルボン酸である。ジアセレインは、体循環に到達する前に、全体がレインに変換され、身体内でレインの形態でその生理学的な機能を発揮する。
式（Ｉ）
【００２１】
【化１】
2018523687.tif 000002
式（ＩＩ）
【００２２】
【化２】
2018523687.tif 000003
【００２３】
ジアセレインは、変形性関節症の治療に広く使用されている抗炎症剤であり、インターロイキン−１（ＩＬ−１）シグナル伝達を阻害することが立証されている。現在、ジアセレインカプセルは５０ｍｇ強度で入手可能であり、いろいろな国でＡｒｔ  ５０（Ｒ）、Ａｒｔｒｏｄａｒ（Ｒ）、などを始めとして様々な商品名で販売されている。
【００２４】
上に述べたように、本発明の発明者は、ジアセレイン又はそのアナログがＡＳＣの発現を阻害し得るということを見出した。従って、本発明は、ジアセレイン、レイン、モノアセチルレイン、それらの塩、エステル及びプロドラッグからなる群から選択される化合物と細胞を接触させることを含む、細胞においてＡＳＣ発現を阻害する方法を提供する。
【００２５】
１つの実施形態において、この方法における細胞はヒトの細胞である。
【００２６】
本発明はまた、ジアセレイン又はそのアナログを対象に投与することを含む、ＡＳＣ発現の阻害を必要とする対象においてＡＳＣ発現を阻害する方法も提供する。
【００２７】
１つの実施形態において、対象はヒトである。
【００２８】
好ましくは、ＡＳＣ発現は、ジアセレイン又はそのアナログによって、少なくとも３０％、より好ましくは少なくとも５０％阻害される。
【００２９】
ＡＳＣは様々なＮＬＲからのインフラマソーム複合体の形成に関与するので、ジアセレイン又はそのアナログはＡＳＣ発現を減少させることによってこれらのインフラマソーム複合体の形成を抑制することができ、従ってこれらの複合体により媒介される疾患を治療するのに使用することができる。
【００３０】
これまでに、５つの異なるインフラマソーム複合体、即ち、ＮＬＲＰ１、ＮＬＲＰ２、ＮＬＲＰ３、ＡＩＭ２、及びＩＰＡＦ／ＮＬＲＣ４が明確に同定されている。各々のインフラマソームはいろいろな刺激に応答して活性化される。ＮＬＲファミリーのその他のメンバー、即ちＮＬＲＰ６、ＮＬＲＰ７及びＮＬＲＰ１２も、ＡＳＣと共にインフラマソームを形成し、カスパーゼ−１活性化を引き起こすことが記載されているが、その具体的なリガンドは未だに知られていない。
【００３１】
今までのところ、ＮＬＲＰ３インフラマソーム複合体（即ち、ＮＬＲＰ３、ＡＳＣ及びプロカスパーゼ−１によって形成されるインフラマソーム）は、その特性が最もよく決定されているインフラマソームであり、慢性の疾病の発生と密接な関係を有することが示されている。
【００３２】
ジアセレイン又はそのアナログはまた、ＮＬＲＰ３発現を阻害することも判明した。従って、本発明はまた、ジアセレイン又はそのアナログと細胞を接触させることを含む、細胞においてＮＬＲＰ３発現及び／又はＮＬＲＰ３インフラマソーム複合体の形成を阻害する方法にも関する。
【００３３】
１つの実施形態において、この方法における細胞はヒトの細胞である。
【００３４】
本発明はまた、ＮＬＲＰ３発現及び／又はＮＬＲＰ３インフラマソーム複合体の形成の阻害を必要とする対象においてＮＬＲＰ３発現及び／又はＮＬＲＰ３インフラマソーム複合体の形成を阻害する方法であって、ジアセレイン又はそのアナログを前記対象に投与することを含む、方法にも関する。
【００３５】
１つの実施形態において、対象はヒトである。
【００３６】
好ましくは、ＮＬＲＰ３発現はジアセレイン又はそのアナログにより少なくとも３０％、より好ましくは少なくとも５０％阻害される。
【００３７】
本発明は、更に、対象におけるＡＳＣ及び／又はＮＬＲＰ３及び／又はＮＬＲＰ３インフラマソーム複合体の形成により媒介される疾患の治療及び／又は予防のための方法であって、かかる治療及び／又は予防を必要とする対象に治療有効量のジアセレイン又はそのアナログを投与することを含む方法を提供する。投与により、対象においてＡＳＣ発現及び／又はＮＬＲＰ３発現が低減する。
【００３８】
１つの実施形態において、対象はヒトである。
【００３９】
１つの実施形態において、ジアセレイン又はそのアナログは１日当たり約５〜５００ｍｇの用量で投与される。
【００４０】
好ましくは、この方法における疾患は、痛風、偽痛風、痛風発作（ｆｌａｒｅ）予防、肥満により誘発されるインシュリン抵抗性、２型糖尿病、アルツハイマー病（ＡＤ）、加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）、アテローム性動脈硬化症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、関節リウマチ（ＲＡ）、癌、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、喘息、アレルギー性喘息、接触過敏症、日焼け、ＵＶＢにより誘発される皮膚損傷、本態性高血圧症、クリオピリン関連周期性症候群（ＣＡＰＳ）、マックル・ウェルズ症候群（ＭＷＳ）、家族性感冒自己炎症性症候群（ＦＣＡＳ）、新生児期発症多臓器系炎症性疾患／慢性乳児神経皮膚関節炎症候群（ＮＯＭＤ／ＣＩＮＣＡ）、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、急性心筋梗塞、心筋梗塞、アレルギー性鼻炎、鼻ポリープ、自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）、多発性硬化症（ＭＳ）、ヒト全身性硬化症における皮膚線維症（ＳＳｃ）、高ホモシステイン血症（ｈＨｃｙｓ）関連糸球体硬化、末期腎不全（ＥＳＲＤ）、アテローム性動脈硬化症、肝線維症、腎線維症、肺線維症、慢性肺線維症、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、線維性肺疾患、嚢胞性線維症（ＣＦ）、心筋線維化、膵島線維症、慢性腎疾患（ＣＫＤ）、結晶性腎症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、眼ベーチェット病、ブドウ膜炎、乾癬、石綿肺症、珪肺、マラリア、デング熱、細菌感染症、アレルギー性皮膚炎、高酸素肺障害、結膜炎、角膜炎、アトピー性皮膚炎、乾癬性関節炎、白斑、クローン病、肥満に関連するメタボリックシンドローム、炎症関連癌、過敏性皮膚炎、家族性地中海熱（ＦＭＦ）、家族性アイルランド熱（ＦＨＦ）、家族性寒冷蕁麻疹（ＦＣＵ）、化膿性無菌性関節炎、壊疽性膿皮症、アクネ（ＰＡＰＡ）、全身型若年性特発性関節炎、メバロン酸キナーゼ欠損症（ＭＫＤ）、表皮水疱症（ＥＢ）、表皮融解性魚鱗癬（ＥＩ）、及びシュニッツラー症候群（ＳＳ）からなる群から選択される。
【００４１】
より好ましくは、この方法における疾患は、アレルギー性喘息、接触過敏症、日焼け、ＵＶＢにより誘発される皮膚損傷、本態性高血圧症、クリオピリン関連周期性症候群（ＣＡＰＳ）、マックル・ウェルズ症候群（ＭＷＳ）、家族性感冒自己炎症性症候群（ＦＣＡＳ）、新生児期発症多臓器系炎症性疾患／慢性乳児神経皮膚関節炎症候群（ＮＯＭＤ／ＣＩＮＣＡ）、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、急性心筋梗塞、心筋梗塞、アレルギー性鼻炎、鼻ポリープ、自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）、多発性硬化症（ＭＳ）、ヒト全身性硬化症における皮膚線維症（ＳＳｃ）、高ホモシステイン血症（ｈＨｃｙｓ）関連糸球体硬化、末期腎不全（ＥＳＲＤ）、アテローム性動脈硬化症、肝線維症、腎線維症、肺線維症、慢性肺線維症、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、線維性肺疾患、嚢胞性線維症（ＣＦ）、心筋線維化、膵島線維症、慢性腎疾患（ＣＫＤ）、結晶性腎症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、眼ベーチェット病、ブドウ膜炎、乾癬、石綿肺症、珪肺、マラリア、デング熱、細菌感染症、アレルギー性皮膚炎、高酸素肺障害、結膜炎、角膜炎、アトピー性皮膚炎、乾癬性関節炎、白斑、クローン病、肥満に関連するメタボリックシンドローム、炎症関連癌、過敏性皮膚炎、家族性地中海熱（ＦＭＦ）、家族性アイルランド熱（ＦＨＦ）、家族性寒冷蕁麻疹（ＦＣＵ）、化膿性無菌性関節炎、壊疽性膿皮症、アクネ（ＰＡＰＡ）、全身型若年性特発性関節炎、メバロン酸キナーゼ欠損症（ＭＫＤ）、表皮水疱症（ＥＢ）、表皮融解性魚鱗癬（ＥＩ）、及びシュニッツラー症候群（ＳＳ）からなる群から選択される。
【００４２】
本発明はまた、記載された機序により調節される疾患の治療のための医薬組成物も提供する。本発明の医薬組成物は、これらの組成物の投与の目的を達成するのに充分な治療有効量のジアセレイン又はそのアナログを含む。本発明の医薬組成物は、限定されることはないが錠剤、経口溶液、注射、及びその他一般に使用される剤形を含めてあらゆる適切な剤形であることができる。
【００４３】
それを必要とする対象に投与するとき、ジアセレイン又はそのアナログは医薬組成物として製造することができる。本発明の目的に対して使用することが考えられる医薬組成物は、固体、溶液、乳濁液、分散液、ミセル、リポソームなどの形態であることができる。組成物は、静脈内、局所、皮内、筋肉内、経皮、皮下、鼻腔内、非経口、髄腔内、経膣、直腸、結腸、経口、頭蓋内、眼窩後方、又は胸骨内のような当技術分野で公知の何らかの手段を用いて投与することができる。好ましくは、組成物は経口投与に適する。例えば、薬物は錠剤、カプセル、丸薬、トローチ、ロゼンジ、溶液、粉末又は顆粒、懸濁液、硬又は軟カプセル及びその他使用に適したあらゆる形態の製造に適した賦形剤と混合することができる。
【００４４】
幾つかの実施形態において、対象は、血液凝固第ＶＩＩＩ因子、血液凝固第ＩＸ因子、アセトアミノフェン、及び非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、例えばＣＯＸ−２阻害剤からなる群から選択される関連のある疾患の治療に適した１以上の追加の治療薬を同時投与される。
【００４５】
ＮＳＡＩＤの例としては、限定されることはないが、イブプロフェン、ケトロラック及びナプロキセンのような２−アリールプロピオン酸、メフェナム酸及びメクロフェナム酸のようなｎ−アリールアントラニル酸、ピロキシカム及びメロキシカムのようなオキシカム、並びにジクロフェナク、エトドラク、インドメタシン、及びスリンダクのようなアリールアルカン酸がある。ＣＯＸ−２阻害剤の例としては、限定されることはないが、セレコキシブ、エトリコキシブ、ロフェコキシブ、及びバルデコキシブがある。血液凝固第ＶＩＩＩ因子及び第ＩＸ因子の例としては、限定されることはないが、ヘリキセート（Ｈｅｌｉｘａｔｅ）、モノクレート（Ｍｏｎｏｃｌａｔｅ）−Ｐ、ベリエート（Ｂｅｒｉａｔｅ）、ベネフィクス、オルプロリクス、イデルビオン、及びリクスビスがある。
【００４６】
幾つかの実施形態において、ジアセレイン又はそのアナログは本発明の組成物中の唯一の活性剤であることができる。本発明の組成物は当技術分野で一般に使用される医薬添加剤（即ち、不活性な化合物）を含有してもよい。
【００４７】
適切な添加剤としては、酸化防止剤、ゲル化剤、ｐＨ調節剤／緩衝剤、浸透促進剤、保存料、キレート剤、保湿剤、界面活性剤、乳化剤、増粘剤、溶剤及び安定剤がある。ここで、本発明における添加剤／成分は複数の機能を有していてもよく、例えば、１つの添加剤を界面活性剤及び／又は安定剤及び／又は乳化剤、などとして使用することができる。
【００４８】
酸化防止剤の例としては、限定されることはないが、ビタミンＣ、ビタミンＡ及びアルファ−リポ酸、パルミチン酸アスコルビル、ピロ亜硫酸ナトリウム、ブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、などの１種以上がある。
【００４９】
適切なゲル化剤としては、限定されることはないが、グアー、キサンタン、及びカラギーナンガム、アニオン性、非イオン性、カチオン性及び親油性に変性されたグアーガム、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、セルロース樹脂、ポリエチレングリコール、ヒドロキシアルキルセルロース、カルボキシアルキルセルロース、ポリアルキレンアミン、などの１種以上を挙げることができる。
【００５０】
ｐＨ調節剤／緩衝剤の例としては、限定されることはないが、重炭酸ナトリウム、重炭酸カリウム、水酸化マグネシウム、乳酸マグネシウム、グルコン酸マグネシウム、水酸化アルミニウム、水酸化アルミニウム／重炭酸ナトリウム共沈物、アミノ酸、アルミニウムグリシネート、クエン酸ナトリウム、酒石酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、ポリリン酸ナトリウム、ポリリン酸カリウム、ピロリン酸ナトリウム、ピロリン酸カリウム、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素二カリウム、リン酸三ナトリウム、リン酸三カリウム、リン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、メタリン酸カリウム、酸化マグネシウム、水酸化マグネシウム、炭酸マグネシウム、ケイ酸マグネシウム、酢酸カルシウム、グリセロリン酸カルシウム、塩化カルシウム、水酸化カルシウム、乳酸カルシウム、炭酸カルシウム、重炭酸カルシウム、などの１種以上がある。
【００５１】
浸透促進剤の例としては、限定されることはないが、ジエチレングリコールモノエチルエーテル、ジメチルスルホキシド、プロピレングリコール、ミリスチン酸イソプロピル（ＩＰＭ）、カルシポトリエン（ｃａｌ−ｃｉｐｏｔｒｉｅｎｅ）、洗剤、皮膚軟化剤、エトキシジグリコール、トリアセチン、プロピレングリコール、ベンジルアルコール、ラウレス硫酸ナトリウム、ジメチルイソソルビド、ミリスチン酸イソプロピル、中鎖トリグリセリド油（ＭＣＴ  Ｏｉｌ）、メントール、パルミチン酸イソプロピル、イソステアリン酸イソプロピル、モノステアリン酸プロピレングリコール、レシチン、アジピン酸ジイソプロピル、セバシン酸ジエチル、オレイン酸、オレイン酸エチル、尿素、オレイン酸グリセリル、カプリル酸／カプリン酸トリグリセリド、ジカプリル酸／ジカプリン酸プロピレングリコール、ラウレス４、オレス−２、オレス−２０、プロピレンカーボネート、ノノキシノール−９、２−ｎ−ノニル−ｌ，３−ジオキソラン、Ｃ７〜Ｃ１４−ヒドロカルビル置換１，３−ジオキソラン、１，３−ジオキサン、又はアセタール、及びノノキシノール−１５、などの１種以上がある。
【００５２】
保存料は、例えば、安息香酸ナトリウム、ブチル化ヒドロキシトルエン、ブチル化ヒドロキシアニソール、エチレンジアミン四酢酸、パラオキシ安息香酸エステル、クロロブタノール、ベンジルアルコール、フェニルエチルアルコール、デヒドロ酢酸、ソルビン酸、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、フェノール、硝酸フェニル水銀、チメロサール、メチル−、エチル−、及び／又はプロピル−パラベンの１種以上であることができる。
【００５３】
適切な溶剤の例としては、限定されることはないが、アルコール、ひまし油、アジピン酸ジイソプロピル、エトキシ化アルコール、エチルアルコール、脂肪アルコールクエン酸エステル、グリセリン、１，２，６−ヘキサントリオール、へキシレングリコール、イソプロピルアルコール、ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、鉱油、リン酸、ポリエチレングリコール３００、ポリエチレングリコール４００、ポリエチレングリコール１４５０、ポリエチレングリコール８０００、ポリエチレングリコール１０００モノセチルエーテル、モノステアリン酸ポリエチレングリコール、モノステアリン酸ポリエチレングリコール４００、ポリエチレングリコール、ポリオキシル２０セトステアリルエーテル、ポリオキシプロピレン１５−ステアリルエーテル、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、ポリソルベート８０、ポリソルベート、プロピレンカーボネート、プロピレングリコール、精製水、ＳＤアルコール４０、飽和脂肪酸のトリグリセリド、などの１種以上がある。
【００５４】
適切な安定剤又は界面活性剤は、例えば、イオン性ポリソルベート界面活性剤、Ｔｗｅｅｎ２０、Ｔｗｅｅｎ４０、Ｔｗｅｅｎ６０、Ｔｗｅｅｎ８０、ノニルフェノールポリエチレングリコールエーテル、（アルキルフェノール−ヒドロキシポリオキシエチレン）、ポリ（オキシ−１，２−エタンジイル）、アルファ−（４−ノニルフェノール）−オメガ−ヒドロキシ−、分岐（即ち、Ｔｅｒｇｉｔｏｌ（Ｒ）ＮＰ−４０界面活性剤）、ノニルフェノールポリエチレングリコールエーテル混合物（即ち、Ｔｅｒｇｉｔｏｌ（Ｒ）ＮＰ−７０（７０％ＡＱ）界面活性剤）、フェノキシポリエトキシエタノール及びそのポリマー、例えばＴｒｉｔｏｎ（Ｒ）、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ（Ｒ）、Ｓｐａｎｓ（Ｒ）、Ｔｙｌｏｘａｐｏｌ（Ｒ）、いろいろなグレードのＢｒｉｊ、ドデシル硫酸ナトリウム、セチルアルコール、ステアリン酸、ステアリン酸ポリオキシル、などの１種以上であることができる。
【００５５】
提供される組成物のある成分が上述の関連疾患の治療以外の目的の従来技術の製剤中の活性剤であり得るとしても、その成分は、関連疾患を効果的に治療するのに充分な量で存在しなければ、やはり提供される組成物の目的からは医薬添加剤であると考えられる。
【００５６】
ジアセレイン又はそのアナログ及び追加の治療薬は、単一の製剤に含有されてもよいし、又は別々の製剤として同時投与されてもよい。
【実施例】
【００５７】
以下、実施例を参照して本発明を更に例証する。しかしながら、これらの実施例は例示の目的で挙げるのみであり、本発明の範囲を制限することはない。
【００５８】
［実施例１］
細胞培養
２０ｍｇのレイン粉末を１ｍＬの１００％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶かし、０．２２μｍ細孔のろ過膜により滅菌し、使用前−２０℃で保存した。尿酸一ナトリウム（ＭＳＵ）結晶（１０ｍｇ／ｍＬ）を滅菌したリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中で調製した。アデノシン５’−三リン酸二ナトリウム塩（ＡＴＰ）をｄｄＨ２Ｏに溶かし、０．２２μｍ細孔のろ過膜により滅菌した。ＴＨＰ−１というヒトの急性単球性白血病細胞株（ＡＴＣＣ（Ｒ）ＴＩＢ−２０２）を、１０％ウシ胎児血清及び１％抗生物質（ペニシリン−ストレプトマイシン−アムホテリシンＢ）馴化培地を補充したＲＰＭＩ−１６４０培地（ＧＩＢＣＯ、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ、ＵＳＡ）に懸濁させた。マクロファージ様分化のために、ＴＨＰ−１細胞を０．１μＭのホルボールミリスチルアセテート（ＰＭＡ）により２４時間プライミング処理した。分化したＴＨＰ−１細胞を様々な用量のレイン治療（０、５又は１０μｇ／ｍＬ）と共に１００μｇ／ｍＬのＭＳＵ刺激で６時間培養した。培養上清及び細胞溶解物を集めた。細胞生存率のために、ＰＭＡでプライミング処理したＴＨＰ−１細胞を、２４時間レインインキュベーションの存在下又は不在下でＣｅｌｌ  Ｃｏｕｎｔｉｎｇ  Ｋｉｔ−８（ＣＣＫ−８アッセイ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ  Ｌｏｕｉｓ、ＵＳＡ）によって検出した。細胞接着試験のためには、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅリアルタイム細胞分析装置システムを製造業者の説明書に従って実施した。
【００５９】
免疫蛍光染色
ＰＭＡでプライミング処理したＴＨＰ−１細胞（１×１０６細胞／ｍＬ）を０、５又は１０μｇ／ｍＬのレインと共に一晩培養した後、１００μｇ／ｍＬのＭＳＵ結晶により６時間刺激した。蛍光共焦点アッセイを実施して、処理後パラホルムアルデヒド固定したＴＨＰ−１細胞内のヒトのＡＳＣ及びＮＬＲＰ３発現を検出した。Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＦＶ１０００共焦点顕微鏡を用いて画像を獲得した。ＡＳＣ（緑色）及びＮＬＲＰ３（赤色）染色分布の染色領域を定量し、Ｍｅｔａｍｏｒｐｈ分析装置で解析した。ＤＡＰＩによる核染色との画像の結合（ｍｅｒｇｅ）は、ＡＳＣとＮＬＲＰ３（黄色）の共局在化を示す（スケールバー、１０μｍ）。染色切片をＰＭＡのみの群に対して規格化し、任意に１に設定した未処理対照に対する値との相対倍（ｒｅｌａｔｉｖｅ  ｆｏｌｄ）として示した。データは３つの領域をもつ１つの実験から得た（平均±ＳＤ）。Ｐ−値は対応のない両側ｔ−検定で決定した。
【００６０】
結果
ＮＬＲＰ３インフラマソーム活性化中、ＮＬＲＰ３及びＡＳＣドメインは細胞内で凝集する。蛍光共焦点アッセイを使用して、レイン治療と共にＭＳＵで刺激されたＴＨＰ−１細胞内のＮＬＲＰ３及びＡＳＣタンパク質レベルを測定し、染色領域を定量した。図１〜３に示されているように、免疫蛍光染色の結果は、ＭＳＵ結晶がＮＬＲＰ３及びＡＳＣタンパク質の発現をアップレギュレートしたことを示していた（それぞれ、Ｐ＝０．００２３及び０．００３２）。レイン治療の場合、ＡＳＣ切片の染色は面積／細胞の平均強度を用量依存的に約６４．０％及び７９．０％大幅に低減させた（それぞれ、Ｐ＝０．００１１及び０．００２２）。加えて、レインはＮＬＲＰ３レベルをＭＳＵで誘発された炎症における面積／細胞の平均強度で約６２．５％及び８４．１％阻害した（それぞれ、Ｐ＝０．０１４及び０．００１２）。
【００６１】
この研究は、レインが、ＡＳＣ及びＮＬＲＰ３の発現を抑制することにより、ＡＳＣスペック及びＮＬＲＰ３インフラマソーム複合体アセンブリの形成を阻害することを示した。
【００６２】
以上の開示は詳細な技術内容及びその発明的特徴に関する。当業者は、本発明の特徴から逸脱することなく、記載された本発明の開示及び示唆内容に基づいて様々な修正及び置換を行うことができよう。しかしながら、かかる修正及び置換が上記記載に完全に開示されていなくとも、それらは以下の添付の特許請求の範囲に実質的に包含される。
【図１】
2018523687.tif 000004
【図２】
2018523687.tif 000005
【図３】
2018523687.tif 000006
【国際調査報告】
2018523687.tif 000007