(57)【要約】  本明細書では、ＯＸ４０モジュレーターとＴＬＲ４モジュレーターの組合せ、その医薬組成物、その使用、および癌における使用を含む、前記組合せを投与することを含んでなる処置方法が開示される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＯＸ４０に結合する抗原結合タンパク質（ＡＢＰ）と、ＴＬＲ４モジュレーターとの組合せであって、前記ＡＢＰがＯＸ４０を調節する、組合せ。
【請求項２】
ＯＸ４０に結合する前記ＡＢＰが、配列番号１および配列番号１３から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２および配列番号１４から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号３および配列番号１５から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号７および配列番号１９から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号８および配列番号２０から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる軽鎖可変領域ＣＤＲ２；ならびに配列番号９および配列番号２１から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含んでなるヒト化モノクローナル抗体である、請求項１に記載の組合せ。
【請求項３】
ＯＸ４０に結合する前記ＡＢＰが、（ａ）配列番号１で示されるアミノ酸配列を含んでなる重鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号２で示されるアミノ酸配列を含んでなる重鎖可変領域ＣＤＲ２；（ｃ）配列番号３で示されるアミノ酸配列を含んでなる重鎖可変領域ＣＤＲ３；（ｄ）配列番号７で示されるアミノ酸配列を含んでなる軽鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｅ）配列番号８で示されるアミノ酸配列を含んでなる軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および（ｆ）配列番号９で示されるアミノ酸配列を含んでなる軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含んでなるヒト化モノクローナル抗体である、請求項１または２に記載の組合せ。
【請求項４】
ＯＸ４０に結合する前記ＡＢＰが、配列番号４および配列番号５から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる重鎖可変領域を含んでなる抗体であり、前記抗体が、配列番号１０および配列番号１１から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる軽鎖可変領域をさらに含んでなる、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組合せ。
【請求項５】
ＯＸ４０に結合する前記ＡＢＰが、配列番号５で示されるアミノ酸配列を含んでなる重鎖可変領域と、配列番号１１で示されるアミノ酸配列を含んでなる軽鎖可変領域とを含んでなる抗体である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組合せ。
【請求項６】
前記ＴＬＲ４モジュレーターがＴＬＲ４アゴニストである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組合せ。
【請求項７】
前記ＴＬＲ４モジュレーターがアミノアルキルグルコサミニドホスフェート（ＡＧＰ）である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の組合せ。
【請求項８】
前記ＴＬＲ４モジュレーターが式Ｉおよび式Ｉａから選択される化合物である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組合せ。
【請求項９】
前記ＴＬＲ４モジュレーターがＣＲＸ−６０１；ＣＲＸ−５４７；ＣＲＸ−６０２；およびＣＲＸ−５２７から選択される、請求項１〜８のいずれか一項に記載の組合せ。
【請求項１０】
前記ＴＬＲ４モジュレーターが以下に示される式ＣＲＸ−６０１：
【化１】
2018525378.tif 000009
を有する、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組合せ。
【請求項１１】
癌の処置を必要とするヒト患者において癌を処置する方法であって、前記患者に請求項１〜１０のいずれか一項に記載の組合せを薬学的に許容可能な担体および薬学的に許容可能な希釈剤のうち少なくとも１つとともに投与することを含んでなる、方法。
【請求項１２】
治療上有効な量の、ヒトＯＸ４０に結合するＯＸ４０抗体を含んでなる第１の医薬組成物および治療上有効な量のＴＬＲ４アゴニストを含んでなる第２の医薬組成物。
【請求項１３】
ヒトＯＸ４０に結合する抗体が、配列番号４で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列；配列番号５で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ領域と、配列番号１０で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列；および配列番号１１で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有するＶＬとを含んでなり、ＴＬＲ４アゴニストがＣＲＸ−６０１である、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
癌の処置を必要とするヒト患者において癌を処置する方法であって、前記患者に治療上有効な量の請求項１２または１３のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与することを含んでなる、方法。
【請求項１５】
前記抗体および前記ＴＬＲ４アゴニストが前記患者に同時；任意の順序で逐次；全身；静脈内；および腫瘍内から選択される経路で投与される、請求項１４に記載の処置方法。
【請求項１６】
前記ＯＸ４０抗体が静脈投与され、前記ＴＬＲ４アゴニストが腫瘍内投与される、請求項１４または１５に記載の処置方法。
【請求項１７】
癌がメラノーマ；肺癌；非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）；腎臓癌；腎細胞癌（ＲＣＣ）乳癌；転移性乳癌；トリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）；頭頸部癌；結腸癌；結腸直腸癌（ＣＲＣ）；卵巣癌；膵臓癌；肝臓癌；肝細胞癌（ＨＣＣ）；前立腺癌；膀胱癌；胃癌；液性腫瘍；固形腫瘍；造血系腫瘍；白血病；非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）；リンパ腫；および慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）から選択される、請求項１４〜１６のいずれか一項に記載の処置方法。
【請求項１８】
ヒトが２つ以上の固形腫瘍を有し、前記ＴＬＲ４アゴニストが前記ヒトの単一の腫瘍に腫瘍内投与され、ＴＬＲ４が投与されなかった少なくとも１つの固形腫瘍の腫瘍サイズが退縮する、請求項１７に記載の処置方法。
【請求項１９】
薬剤の製造のための請求項１〜１０のいずれか一項に記載の組合せの使用。
【請求項２０】
癌の処置のための請求項１〜１０のいずれか一項に記載の組合せの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、哺乳動物において癌を処置する方法およびそのような処置に有用な組合せに関する。特に、本発明は、抗ＯＸ４０抗原結合タンパク質（ＡＢＰ：antigen binding proteins）と１以上のＴＬＲ４モジュレーターとの組合せに関する。
【背景技術】
【０００２】
癌を含む過剰増殖性障害の有効な処置は、腫瘍学の分野で継続的な目標である。一般に、癌は、細胞分裂、分化およびアポトーシス細胞死を制御する正常なプロセスの脱調節から生じ、無限成長、局部的拡大および全身転移の能力を有する悪性細胞の増殖を特徴とする。正常なプロセスの脱調節は、シグナル伝達経路の異常および正常細胞で視られるものとは異なる因子に対する応答を含む。
【０００３】
免疫療法は過剰増殖性障害を処置するための１つのアプローチである。科学者および臨床医が様々なタイプの癌免疫療法の開発で遭遇した主要なハードルは、腫瘍退縮をもたらすロバストな抗腫瘍応答を惹起するために自己抗原（癌）に対する免疫寛容を破ることであった。腫瘍を標的とする低分子および高分子薬剤の従来の開発とは異なり、癌免疫療法は、より持続的な効果を誘導し、かつ、再発を最小にするために、エフェクター細胞の記憶プールを生成する能力を有する免疫系の細胞を標的とする。
【０００４】
ＯＸ４０は、免疫系の複数のプロセスに関与する共刺激分子である。ＯＸ４０受容体に結合し、ＯＸ４０のシグナル伝達を調節する抗原結合タンパク質および抗体は当技術分野で公知であり、例えば、癌のための免疫療法として開示されている。
【０００５】
アミノアルキルグルコサミニドホスフェート（ＡＧＰ）は、Ｔｏｌｌ様受容体４（ＴＬＲ４）の合成リガンドである。ワクチンアジュバントとして、また免疫動物においてサイトカイン生産を刺激し、マクロファージを活性化し、自然免疫応答を増強し、かつ、抗体生産を促進するために有用であることが知られている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
癌治療には最近多くの進展があったにも関わらず、癌の影響を受けている個体のより有効かつ／または増強された治療の必要がなお存在する。抗腫瘍免疫を増強するために治療アプローチを組み合わせることに関する本明細書の組合せおよび方法はこの必要に取り組むものである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
発明の概要
本明細書では、抗ＯＸ４０抗原結合タンパク質（ＡＢＰ）と１以上のＴＬＲ４モジュレーターとの組合せが提供される。また、本発明の組成物でヒトにおける癌を処置する方法、および癌の療法などの療法のための前記組合せの使用が提供される。さらに、ヒトなどの癌処置を必要とする対象の免疫応答を調節するための方法であって、前記対象に有効量の前記組合せを、例えば１以上の医薬組成物で投与することを含んでなる方法が提供される。
【０００８】
一実施形態において、ＯＸ４０抗原結合タンパク質は、ＷＯ２０１２／０２７３２８（ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０４８７５２）、国際出願日２０１１年８月２３日に開示されている。別の実施形態において、抗原結合タンパク質は、ＷＯ２０１２／０２７３２８（ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０４８７５２）、国際出願日２０１１年８月２３日に開示されている抗体のＣＤＲ、または開示されているＣＤＲ配列と９０％の同一性を有するＣＤＲを含んでなる。さらなる実施形態において、抗原結合タンパク質は、ＷＯ２０１２／０２７３２８（ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０４８７５２）、２０１１年８月２３日に開示されている抗体のＶＨ、ＶＬもしくは両方、または開示されているＶＨもしくはＶＬ配列と９０％の同一性を有するＶＨもしくはＶＬを含んでなる。
【０００９】
別の実施形態において、ＯＸ４０抗原結合タンパク質は、ＷＯ２０１３／０２８２３１（ＰＣＴ／ＵＳ２０１２／０２４５７０）、国際出願日２０１２年２月９日に開示されている。別の実施形態において、抗原結合タンパク質は、ＷＯ２０１３／０２８２３１（ＰＣＴ／ＵＳ２０１２／０２４５７０）、国際出願日２０１２年２月９日に開示されている抗体のＣＤＲ、または開示されているＣＤＲ配列と９０％の同一性を有するＣＤＲを含んでなる。さらなる実施形態において、抗原結合タンパク質は、ＷＯ２０１３／０２８２３１（ＰＣＴ／ＵＳ２０１２／０２４５７０）、国際出願日２０１２年２月９日に開示されている抗体のＶＨ、ＶＬもしくは両方、または開示されているＶＨもしくはＶＬ配列と９０％の同一性を有するＶＨもしくはＶＬを含んでなる。
【００１０】
別の実施形態において、本発明の抗ＯＸ４０  ＡＢＰまたは抗体は、本明細書の図面に示されているＣＤＲまたはＶＨもしくはＶＬ配列、またはそれと９０％の同一性を有する配列のうち１以上を含んでなる。
【００１１】
一実施形態において、本発明のＡＢＰまたは抗体は、例えば本明細書の図６〜７の１０６−２２２抗体のＣＤＲ、例えば、図６に開示されているような配列番号１、２、および３で示されるようなアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３、ならびに例えばそれぞれ配列番号７、８、および９で示されるような配列を有するＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含んでなる。一実施形態において、本発明のＡＢＰまたは抗体は、ＷＯ２０１２／０２７３２８（ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０４８７５２）、国際出願日２０１１年８月２３日に開示されているような１０６−２２２、Ｈｕ１０６またはＨｕ１０６−２２２抗体のＣＤＲを含んでなる。さらなる実施形態において、抗ＯＸ４０  ＡＢＰまたは本発明の抗体は、本明細書で図６〜７に示されるような１０６−２２２抗体のＶＨおよびＶＬ領域、例えば、配列番号４で示されるようなアミノ酸配列を有するＶＨおよび配列番号１０で示されるようなアミノ酸配列を有する図７のようなＶＬを含んでなる。別の実施形態において、本発明のＡＢＰまたは抗体は、本明細書の図６に配列番号５で示されるようなアミノ酸配列を有するＶＨおよび本明細書の図７に配列番号１１で示されるようなアミノ酸配列を有するＶＬを含んでなる。さらなる実施形態において、本発明の抗ＯＸ４０  ＡＢＰまたは抗体は、ＷＯ２０１２／０２７３２８（ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０４８７５２）、国際出願日２０１１年８月２３日に開示されているようなＨｕ１０６−２２２抗体または１０６−２２２抗体またはＨｕ１０６  抗体のＶＨおよびＶＬ領域を含んでなる。さらなる実施形態において、本発明の抗ＯＸ４０  ＡＢＰまたは抗体は、例えばＷＯ２０１２／０２７３２８（ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０４８７５２）、国際出願日２０１１年８月２３日に開示されているような１０６−２２２、Ｈｕ１０６−２２２またはＨｕ１０６である。さらなる実施形態において、本発明のＡＢＰまたは抗体は、本段落の配列と９０％の同一性を有するＣＤＲまたはＶＨもしくはＶＬまたは抗体配列を含んでなる。
【００１２】
別の実施形態において、本発明の抗ＯＸ４０  ＡＢＰまたは抗体は、例えば本明細書の図１０〜１１の１１９−１２２抗体のＣＤＲ、例えば、それぞれ配列番号１３、１４、および１５で示されるようなアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含んでなる。別の実施形態において、本発明の抗ＯＸ４０  ＡＢＰまたは抗体は、ＷＯ２０１２／０２７３２８（ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０４８７５２）、国際出願日２０１１年８月２３日に開示されているような１１９−１２２またはＨｕ１１９またはＨｕ１１９−２２２抗体のＣＤＲを含んでなる。さらなる実施形態において、本発明の抗ＯＸ４０  ＡＢＰまたは抗体は、本明細書の図１０に配列番号１６で示されるようなアミノ酸配列を有するＶＨ、および本明細書の図１１に示されるような配列番号２２で示されるようなアミノ酸配列を有するＶＬを含んでなる。別の実施形態において、本発明の抗ＯＸ４０  ＡＢＰまたは抗体は、配列番号１７で示されるようなアミノ酸配列を有するＶＨおよび配列番号２３で示されるようなアミノ酸配列を有するＶＬを含んでなる。さらなる実施形態において、本発明の抗ＯＸ４０  ＡＢＰまたは抗体は、ＷＯ２０１２／０２７３２８（ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０４８７５２）、国際出願日２０１１年８月２３日に開示されているような１１９−１２２またはＨｕ１１９またはＨｕ１１９−２２２抗体のＶＨおよびＶＬ領域を含んでなる。さらなる実施形態において、本発明のＡＢＰまたは抗体は、例えばＷＯ２０１２／０２７３２８（ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０４８７５２）、国際出願日２０１１年８月２３日に開示されているような１１９−２２２またはＨｕ１１９またはＨｕ１１９−２２２抗体である。さらなる実施形態において、本発明のＡＢＰまたは抗体は、本段落の配列と９０％の同一性を有するＣＤＲまたはＶＨもしくはＶＬまたは抗体配列を含んでなる。
【００１３】
別の実施形態において、本発明の抗ＯＸ４０  ＡＢＰまたは抗体は、例えば本明細書の図１４〜１５に示されるような１１９−４３−１抗体のＣＤＲを含んでなる。別の実施形態において、本発明の抗ＯＸ４０  ＡＢＰまたは抗体は、ＷＯ２０１３／０２８２３１（ＰＣＴ／ＵＳ２０１２／０２４５７０）、国際出願日２０１２年２月９日に開示されているような１１９−４３−１抗体のＣＤＲを含んでなる。さらなる実施形態において、本発明の抗ＯＸ４０  ＡＢＰまたは抗体は、図１４〜１７に示されるような１１９−４３−１抗体のＶＨ領域の１つおよびＶＬ領域の１つを含んでなる。さらなる実施形態において、本発明の抗ＯＸ４０  ＡＢＰまたは抗体は、ＷＯ２０１３／０２８２３１（ＰＣＴ／ＵＳ２０１２／０２４５７０）、国際出願日２０１２年２月９日に開示されているような１１９−４３−１抗体のＶＨおよびＶＬ領域を含んでなる。さらなる実施形態において、本発明のＡＢＰまたは抗体は、本明細書の図１４〜１７に開示されているような１１９−４３−１または１１９−４３−１キメラである。さらなる実施形態において、本発明のＡＢＰまたは抗体は、ＷＯ２０１３／０２８２３１（ＰＣＴ／ＵＳ２０１２／０２４５７０）、国際出願日２０１２年２月９日に開示されている通りである。さらなる実施形態において、本段落に記載されるＡＢＰまたは抗体のいずれかのものはヒト化されている。さらなる実施形態において、本段落に記載されるＡＢＰまたは抗体のいずれかのものは、ヒト化抗体を作製するために操作される。さらなる実施形態において、本発明のＡＢＰまたは抗体は、本段落の配列と９０％の同一性を有するＣＤＲまたはＶＨもしくはＶＬまたは抗体配列を含んでなる。
【００１４】
別の実施形態において、本発明のいずれの抗ＯＸ４０  ＡＢＰまたは抗体のいずれのマウスまたはキメラ配列も、ヒト化抗体を作製するために操作される。
【００１５】
一実施形態において、本発明の抗ＯＸ４０  ＡＢＰまたは抗体は、（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含んでなる重鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含んでなる重鎖可変領域ＣＤＲ２；（ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を含んでなる重鎖可変領域ＣＤＲ３；（ｄ）配列番号７のアミノ酸配列を含んでなる軽鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｅ）配列番号８のアミノ酸配列を含んでなる軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および（ｆ）配列番号９のアミノ酸配列を含んでなる軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含んでなる。
【００１６】
別の実施形態において、本発明の抗ＯＸ４０  ＡＢＰまたは抗体は、（ａ）配列番号１３のアミノ酸配列を含んでなる重鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列を含んでなる重鎖可変領域ＣＤＲ２；（ｃ）配列番号１５のアミノ酸配列を含んでなる重鎖可変領域ＣＤＲ３；（ｄ）配列番号１９のアミノ酸配列を含んでなる軽鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｅ）配列番号２０のアミノ酸配列を含んでなる軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および（ｆ）配列番号２１のアミノ酸配列を含んでなる軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含んでなる。
【００１７】
別の実施形態において、本発明の抗ＯＸ４０  ＡＢＰまたは抗体は、配列番号１または１３のアミノ酸配列を含んでなる重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２または１４のアミノ酸配列を含んでなる重鎖可変領域ＣＤＲ２；および／もしくは配列番号３または１５のアミノ酸配列を含んでなる重鎖可変領域ＣＤＲ３、またはそれと９０％の同一性を有する重鎖可変領域ＣＤＲを含んでなる。
【００１８】
さらに別の実施形態において、本発明の抗ＯＸ４０  ＡＢＰまたは抗体は、配列番号７または１９のアミノ酸配列を含んでなる軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号８または２０のアミノ酸配列を含んでなる軽鎖可変領域ＣＤＲ２および／もしくは配列番号９または２１のアミノ酸配列を含んでなる軽鎖可変領域ＣＤＲ３、またはそれと９０％の同一性を有する重鎖可変領域を含んでなる。
【００１９】
さらなる実施形態において、本発明の抗ＯＸ４０  ＡＢＰまたは抗体は、配列番号１０、１１、２２もしくは２３、または配列番号１０、１１、２２もしくは２３のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列のアミノ酸配列を含んでなる軽鎖可変領域（「ＶＬ」）を含んでなる。別の実施形態において、本発明の抗ＯＸ４０  ＡＢＰまたは抗体は、配列番号４、５、１６および１７のアミノ酸配列、または配列番号４、５、１６および１７のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる重鎖可変領域（「ＶＨ」）を含んでなる。別の実施形態において、本発明の抗ＯＸ４０  ＡＢＰまたは抗体は、配列番号５の可変重鎖配列および配列番号１１の可変軽鎖配列、またはそれと９０％の同一性を有する配列を含んでなる。別の実施形態において、本発明の抗ＯＸ４０  ＡＢＰまたは抗体は、配列番号１７の可変重鎖配列および配列番号２３の可変軽鎖配列またはそれと９０％の同一性を有する配列を含んでなる。
【００２０】
別の実施形態において、本発明の抗ＯＸ４０  ＡＢＰまたは抗体は、配列番号１２もしくは２４の核酸配列、または配列番号１２もしくは２４のヌクレオチド配列と少なくとも９０％の同一性を有する核酸配列によりコードされている可変軽鎖を含んでなる。別の実施形態において、本発明の抗ＯＸ４０  ＡＢＰまたは抗体は、配列番号６もしくは１８の核酸配列または配列番号６もしくは１８のヌクレオチド配列と少なくとも９０％の同一性を有する核酸配列によりコードされている可変重鎖を含んでなる。
【００２１】
また、本明細書では、モノクローナル抗体も提供される。一実施形態において、モノクローナル抗体は、配列番号１０もしくは２２のアミノ酸配列、または配列番号１０もしくは２２のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる可変軽鎖を含んでなる。さらに、配列番号４もしくは１６のアミノ酸配列、または配列番号４もしくは１６のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる可変重鎖を含んでなるモノクローナル抗体である。
【００２２】
本発明の別の実施形態は、ＣＤＲ、ＶＨ領域、およびＶＬ領域、および抗体および以下の配列表に開示されているものと同じものをコードする核酸を含む。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１Ａ】図１Ａは、結腸癌のＣＴ−２６同系マウスモデルにおけるＴＬＲ４アゴニスト（ＣＲＸ−５２７）の用量依存的抗腫瘍活性（腫瘍成長阻害により経時的に測定）を示すグラフである。結果は１０個体の動物の平均である。
【図１Ｂ】図１Ｂは、結腸癌のＣＴ−２６同系マウスモデルにおけるラット抗マウスＯＸ４０受容体抗体（クローンＯＸ−８６）の用量依存的抗腫瘍活性（腫瘍成長阻害により経時的に測定）を示すグラフである。結果は１０個体の動物の平均であり；図１Ａの対照処置は、図１Ｂのものと同じである。
【図２】図２は、結腸癌のＣＴ−２６同系マウスモデルにおけるラット抗マウスＯＸ４０受容体抗体（クローンＯＸ−８６）の抗腫瘍活性（腫瘍成長阻害により経時的に測定）、５μｇのＴＬＲ４アゴニスト（ＣＲＸ−５２７）、および両方の組合せを示すグラフである。結果は１０個体の動物の平均である。
【図３】図３は、３８日にわたって測定した結腸癌のＣＴ−２６同系マウスモデルにおけるラット抗マウスＯＸ４０受容体抗体（クローンＯＸ−８６）、２５μｇのＴＬＲ４アゴニスト（ＣＲＸ−５２７）、および両方の組合せの用量依存的抗腫瘍活性（腫瘍成長阻害により経時的に測定）を示すグラフである。結果は１０個体の動物の平均であり；図２の対照処置は、図３のものと同一の動物を表す。
【図４】図４Ａ〜４Ｆは、４２日にわたって測定した結腸癌のＣＴ−２６同系マウスモデルのマウス群における対照抗体（ＩｇＧ）、ラット抗マウスＯＸ４０受容体抗体（クローンＯＸ−８６）、５または２５μｇのＴＬＲ４アゴニスト（ＣＲＸ−５２７）、およびＯＸ８６とＣＲＸ−５２７の組合せの個々のマウスの用量依存的抗腫瘍活性（腫瘍成長阻害により経時的に測定）を示すグラフである。図４Ａ〜４Ｆで試験に残っているマウスの平均群腫瘍体積を用いて図２〜３のプロットを作製した。
【図５】図５は、結腸癌のＣＴ−２６同系マウスモデルにおける４、２０、または１００μｇのＴＬＲ４アゴニスト（ＣＲＸ−６０１）の用量依存的抗腫瘍活性（腫瘍成長阻害により経時的に測定）を示すグラフである。
【図６】図６は、本発明のＡＢＰおよび抗体の配列、例えばＣＤＲおよびＶＨおよびＶＬ配列を示す。
【図７】図７は、本発明のＡＢＰおよび抗体の配列、例えばＣＤＲおよびＶＨおよびＶＬ配列を示す。
【図８】図８は、本発明のＡＢＰおよび抗体の配列、例えばＣＤＲおよびＶＨおよびＶＬ配列を示す。
【図９】図９は、本発明のＡＢＰおよび抗体の配列、例えばＣＤＲおよびＶＨおよびＶＬ配列を示す。
【図１０】図１０は、本発明のＡＢＰおよび抗体の配列、例えばＣＤＲおよびＶＨおよびＶＬ配列を示す。
【図１１】図１１は、本発明のＡＢＰおよび抗体の配列、例えばＣＤＲおよびＶＨおよびＶＬ配列を示す。
【図１２】図１２は、本発明のＡＢＰおよび抗体の配列、例えばＣＤＲおよびＶＨおよびＶＬ配列を示す。
【図１３】図１３は、本発明のＡＢＰおよび抗体の配列、例えばＣＤＲおよびＶＨおよびＶＬ配列を示す。
【図１４】図１４は、本発明のＡＢＰおよび抗体の配列、例えばＣＤＲおよびＶＨおよびＶＬ配列を示す。
【図１５】図１５は、本発明のＡＢＰおよび抗体の配列、例えばＣＤＲおよびＶＨおよびＶＬ配列を示す。
【図１６】図１６は、本発明のＡＢＰおよび抗体の配列、例えばＣＤＲおよびＶＨおよびＶＬ配列を示す。
【図１７】図１７は、本発明のＡＢＰおよび抗体の配列、例えばＣＤＲおよびＶＨおよびＶＬ配列を示す。
【図１８】図１８は、ＣＴ−２６同系マウス腫瘍モデルにおいて腫瘍内投与されたＴＬＲ４アゴニストＣＲＸ−６０１の用量依存的抗腫瘍活性（腫瘍成長阻害により経時的に測定）を示すグラフである。
【図１９】図１９は、ＣＴ−２６同系マウス腫瘍モデルにおいて腫瘍内投与されるＴＬＲ４アゴニストＣＲＸ−６０１で処置されたマウスの生存曲線を示すグラフである（＊ｐ値≦０．０５）。
【図２０】図２０は、ＣＴ−２６同系マウス腫瘍モデルにおけるＴＬＲ４アゴニストＣＲＸ−６０１の用量依存的抗腫瘍活性（腫瘍成長阻害により経時的に測定）を示すグラフである（＊ｐ値≦０．０５）。
【図２１】図２１は、ＣＴ−２６同系マウス腫瘍モデルにおいて静脈投与されるＴＬＲ４アゴニストＣＲＸ−６０１で処置されたマウスの生存曲線を示すグラフである（＊ｐ値≦０．０５）。
【図２２】図２２は、ＣＴ−２６同系マウスモデルにおける、２５μｇ／マウスのラット抗マウスＯＸ４０抗体クローンＯＸ−８６の抗腫瘍活性（腫瘍成長阻害により経時的に測定）、週２回、合計６用量で腹腔内注射により投与される２５μｇ／マウスのラット抗マウスＯＸ４０抗体クローンＯＸ−８６、１回／週、合計３用量で静脈投与された１０μｇまたは２５μｇ／マウスのＴＬＲ４アゴニストＣＲＸ−６０１、および両方の組合せの抗腫瘍活性（腫瘍成長阻害により経時的に測定）を示すグラフである（＊ｐ値≦０．０５）。
【図２３】図２３は、ＣＴ−２６同系マウスモデルにおける、週２回、合計６用量で腹腔内注射により投与された２５μｇ／マウスのラット抗マウスＯＸ４０受容体抗体（クローンＯＸ−８６）、１回／週、合計３用量で静脈投与された１０μｇまたは２５μｇのＴＬＲ４アゴニストＣＲＸ−６０１、および両方の組合せで処置されたマウスの生存曲線を示すグラフである（＊ｐ値≦０．０５）。
【図２４】図２４は、ＣＴ−２６同系マウスモデルにおける、週２回、合計６用量で腹腔内注射された２５μｇ／マウスのラット抗マウスＯＸ４０受容体抗体（クローンＯＸ−８６）、または１回／週、合計３用量で静脈投与された２５μｇ／マウスのＴＬＲ４アゴニストＣＲＸ−６０１、および両方の組合せの抗腫瘍活性（腫瘍成長阻害により経時的に測定）を示すグラフである（＊ｐ値≦０．０５）。
【図２５】図２５は、ＣＴ−２６同系マウスモデルにおける、週２回、合計６用量で腹腔内注射により投与される２５μｇ／マウスのラット抗マウスＯＸ４０受容体抗体（クローンＯＸ−８６）、または１回／週、合計３用量で静脈投与される２５μｇ／マウスのＴＬＲ４アゴニストＣＲＸ−６０１、および両方の組合せで処置されたマウスの生存曲線を示す（＊ｐ値≦０．０５）。
【図２６】図２６Ａ〜Ｃは、投与後８日目に測定された結腸癌のＣＴ−２６同系マウスモデルにおける、１０μｇのＴＬＲ４アゴニストＣＲＸ−６０１、２５μｇのラット抗マウスＯＸ４０受容体抗体（クローンＯＸ−８６）、および両方の組合せで処置されたマウスにおける白血球の増加および免疫活性化を示すグラフである。
【図２７】図２７Ａ〜Ｂは、投与後１日目および８日目に測定された結腸癌のＣＴ−２６同系マウスモデルにおける、１０μｇのＴＬＲ４アゴニストＣＲＸ−６０１、ラット抗マウスＯＸ４０Ｒ受容体抗体（クローンＯＸ−８６）、および両方の組合せで処置されたマウスにおける免疫活性化サイトカインＴＮＦα（Ａ）およびＩＬ−１２ｐ７０（Ｂ）の増加を示すグラフである。
【図２８】図２８は、ＣＴ−２６同系マウスモデルにおける、週２回、合計６用量で腹腔内注射により投与された２５μｇ／マウスのラット抗マウスＯＸ４０受容体抗体（クローンＯＸ−８６）、または１回／週、合計３用量で静脈投与されたＴＬＲ４アゴニストＣＲＸ−６０１の２５μｇ／マウス、および両方の組合せの抗腫瘍活性（腫瘍成長阻害により経時的に測定）を示すグラフである（ＣＲＸ−６０１に関しては０．５％グリセロール／４％デキストロースビヒクルを使用）（＊ｐ値＜０．０５）。
【図２９】図２９は、ＣＴ−２６同系マウスモデルにおける、週２回、合計６用量で腹腔内注射により投与された２５μｇ／マウスのラット抗マウスＯＸ４０受容体抗体（クローンＯＸ−８６）、または１回／週、合計３用量で腫瘍内投与された２５μｇ／マウスのＴＬＲ４アゴニストＣＲＸ−６０１、および両方の組合せの抗腫瘍活性（腫瘍成長阻害により経時的に測定）を示すグラフである（ＣＲＸ−６０１に関しては０．５％グリセロール／４％デキストロースビヒクルを使用）（＊ｐ値＜０．０５）。
【図３０】図３０は、ＣＴ−２６同系マウスモデルにおける、週２回、合計６用量で腹腔内注射により投与される２５μｇ／マウスのラット抗マウスＯＸ４０抗体（クローンＯＸ−８６）、または１回／週、合計３用量で静脈投与される２５μｇ／マウスのＴＬＲ４アゴニストＣＲＸ−６０１、および両方の組合せで処置されたマウスの生存曲線を示すグラフである（ＣＲＸ−６０１に関しては０．５％グリセロール／４％デキストロースビヒクルを使用）（＊ｐ値＜０．０５）。
【図３１】図３１は、ＣＴ−２６同系マウスモデルにおいて、週２回、合計６用量で腹腔内注射により投与される２５μｇ／マウスのラット抗マウスＯＸ４０受容体抗体（クローンＯＸ−８６）、または１回／週、合計３用量で腫瘍内投与される２５μｇ／マウスのＴＬＲ４アゴニストＣＲＸ−６０１、および両方の組合せで処置されたマウスの生存曲線を示すグラフである（ＣＲＸ−６０１に関しては０．５％グリセロール／４％デキストロースビヒクル）（＊ｐ値＜０．０５）。
【図３２】図３２は、試験６における無腫瘍マウスのＣＴ−２６腫瘍再チャレンジを示すグラフである。初回投与６８日後に、無腫瘍マウスにＣＴ−２６腫瘍細胞の再チャレンジを行った。ナイーブ対照マウスも含めた。対照ナイーブマウスでは予想通り腫瘍が成長したが、処置群では腫瘍は拒絶され、腫瘍は成長しなかった。
【図３３】図３３は、ＣＴ−２６同系マウスモデルにおいて、週２回、合計６用量で腹腔内注射により投与された２５μｇ／マウスのラット抗マウスＯＸ４０受容体抗体（クローンＯＸ−８６）、または１回／週、合計３用量で静脈投与された２５μｇ／マウスのＴＬＲ４アゴニストＣＲＸ−６０１、および両方の組合せの抗腫瘍活性（腫瘍成長阻害により経時的に測定）を示すグラフである（ＣＲＸ−６０１静脈投与に関しては０．５％グリセロール／４％デキストロースビヒクルを使用）（＊ｐ値＜０．０５）。
【図３４】図３４は、ＣＴ−２６同系マウスモデルにおいて、週２回、合計６用量で腹腔内注射により投与された２５μｇ／マウスのラット抗マウスＯＸ４０受容体抗体（クローンＯＸ−８６）、または１回／週、合計３用量で腫瘍内投与された２５μｇ／マウスのＴＬＲ４アゴニストＣＲＸ−６０１、および両方の組合せの抗腫瘍活性（腫瘍成長阻害により経時的に測定）を示すグラフである（ＣＲＸ−６０１腫瘍内投与に関してはＤＯＰＣ／ＣＨＯＬリポソーム処方物を使用）（＊ｐ値＜０．０５）。
【図３５】図３５は、ＣＴ−２６同系マウスモデルにおいて、週２回、合計６用量で腹腔内注射により投与される２５μｇ／マウスのラット抗マウスＯＸ４０受容体抗体（クローンＯＸ−８６）、または１回／週、合計３用量で静脈投与される２５μｇ／マウスのＴＬＲ４アゴニストＣＲＸ−６０１、および両方の組合せで処置されたマウスの生存曲線を示すグラフである（ＣＲＸ−６０１静脈投与に関しては０．５％グリセロール／４％デキストロースビヒクルを使用）（＊ｐ値＜０．０５）。
【図３６】図３６は、ＣＴ−２６同系マウスモデルにおいて、週２回、合計６用量で腹腔内注射により投与される２５μｇ／マウスのラット抗マウスＯＸ４０受容体抗体（クローンＯＸ−８６）、または１回／週、３用量で静脈投与される２５μｇ／マウスのＴＬＲ４アゴニストＣＲＸ−６０１、および両方の組合せで処置されたマウスの生存曲線を示すグラフである（ＣＲＸ−６０１静脈投与に関しては０．５％グリセロール／４％デキストロースビヒクルを使用）（＊ｐ値＜０．０５）。
【図３７】図３７は、試験７における無腫瘍(tunor-free)マウスのＣＴ−２６腫瘍再チャレンジを示すグラフである。初回投与８０日後に、示された数のマウスで無腫瘍マウスにＣＴ−２６腫瘍細胞の再チャレンジを行った。ナイーブ対照マウスも含めた。対照ナイーブマウスでは予想通り腫瘍が成長したが、処置群では腫瘍は拒絶され、腫瘍は成長しなかった。
【図３８】図３８は、群７の個々のマウスの腫瘍成長を示すグラフである：週１回、合計３用量で静脈投与されるＣＲＸ−６０１  ２５μｇ／マウス（０．５％グリセロール／４％デキストロース中）＋週２回、合計６用量で腹腔内投与されるＯＸ８６  ２５μｇ／マウス。
【図３９】図３９は、群８の個々のマウスの腫瘍成長を示すグラフである：週１回、左側腹部腫瘍に合計３用量で腫瘍内投与されるＣＲＸ−６０１  ２５μｇ／マウス（０．５％グリセロール／４％デキストロース中）＋週２回、合計６用量で腹腔内投与されるＯＸ８６  ２５μｇ／マウス。
【図４０】図４０は、群１２の個々のマウスの腫瘍成長を示すグラフである：週１回、左側腹部腫瘍に合計３用量で腫瘍内投与されるＣＲＸ−６０１  ２５μｇ／マウス（ＤＯＰＣ／ＣＨＯＬリポソーム中）＋週２回、合計６用量で腹腔内投与されるＯＸ８６  ２５μｇ／マウス。
【図４１】図４１Ａ〜４Ｄは、試験８における全処置群の生存曲線を示すグラフである。６０日まで試験に残ったマウスは完全に無腫瘍であった。
【図４２】図４２Ａ〜Ｃは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞培養２４時間の時点でヒトＣＤ４＋  Ｔ細胞（Ａ）、樹状細胞（Ｂ）、および単球（Ｃ）に対して一定の濃度範囲（０．０１〜１０００ｎｇ／ｍｌ）のＣＲＸ６０１処置により誘導されたＯＸ４０発現のアップレギュレーションを示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
発明の詳細な説明
組成物および組合せ
免疫系の機能の改善が癌の免疫療法の目標である。理論により縛られるものではないが、免疫系が活性化され、有効に腫瘍の退縮または排除を生じるためには、免疫系の様々なコンパートメント間ならびに腫瘍床で有効なクロストークがなければならないと考えられる。殺腫瘍効果は、所属リンパ節における、例えば、未熟樹状細胞による抗原の取り込みおよび成熟樹状細胞によるナイーブＣＤ８（細胞傷害性）およびＣＤ４（ヘルパー）リンパ球への、それぞれＭＨＣ  ＩおよびＩＩを介した処理抗原の提示などの１以上の工程に依存する。ナイーブＴ細胞は、樹状細胞などの抗原提示細胞（ＡＰＣ）上のＢ７ファミリーの補助刺激分子と係合するＣＴＬＡ−４およびＣＤ２８などの分子を発現する。免疫監視中にＴ細胞をチェック状態で維持するために、ＡＰＣ上のＢ７は、Ｔリンパ球上の阻害分子ＣＴＬＡ−４と優先的に結合する。しかしながら、ＡＰＣ上のコグネイトペプチドの提示を介してＴ細胞受容体（ＴＣＲ）とＭＨＣクラスＩまたはＩＩ受容体が係合すると、補助刺激分子がＣＴＬＡ−４から解離し、代わりにより低い親和性の刺激分子ＣＤ２８に結合し、Ｔ細胞の活性化および増殖を引き起こす。この拡大増殖したプライムＴリンパ球の集団は、遠位の腫瘍部位に移動するので、それらに提示された抗原の記憶を保持している。コグネイト抗原を保持する腫瘍細胞に遭遇すると、グランザイムＢおよびパーフォリンなどの細胞溶解性メディエーターを介して腫瘍を排除する。この明らかに単純化された一連の事象は、これらのプライムされたＴリンパ球を活性化し、腫瘍を排除し得る細胞の記憶プールへと分化させるためのいくつかのサイトカイン、補助刺激分子およびチェックポイントモジュレーターに依存するところが大きい。
【００２５】
よって、新たな免疫療法戦略は、Ｔ細胞補助刺激分子、例えば、ＯＸ４０を標的とすることである。ＯＸ４０（例えば、ｈＯＸ４０またはｈＯＸ４０Ｒ）は、数ある細胞の中でも活性化されたＣＤ４およびＣＤ８  Ｔ細胞上に発現される腫瘍壊死因子受容体ファミリーメンバーである。その機能の１つは、これらの細胞の分化および長期生存にある。ＯＸ４０のリガンド（ＯＸ４０Ｌ）は、活性化された抗原提示細胞により発現される。一実施形態において、本発明のＡＢＰおよび抗体は、ＯＸ４０を調節し、Ｔ細胞の増殖および／または分化を促進し、例えば、ＯＸ４０と「係合」することによるＸ４０Ｌのもののようなオーバーラッピング機構で記憶Ｔ細胞集団を増やす。よって、別の実施形態において、本発明のＡＢＰおよび抗体は、ＯＸ４０に結合および係合する。さらに別の実施形態において、本発明のＡＢＰおよび抗体はＯＸ４０を調節する。さらなる実施形態において、本発明のＡＢＰおよび抗体は、ＯＸ４０Ｌを模倣することによりＯＸ４０を調節する。別の実施形態において、本発明のＡＢＰおよび抗体はアゴニスト抗体である。別の実施形態において、本発明のＡＢＰおよび抗体は、ＯＸ４０を調節し、Ｔ細胞の増殖を引き起こす。さらなる実施形態において、本発明のＡＢＰおよび抗体は、ＯＸ４０を調節し、ＣＤ４  Ｔ細胞の増殖を改善、増強、促進する、または増加させる。別の実施形態において、本発明のＡＢＰおよび抗体は、ＣＤ８  Ｔ細胞の増殖を改善、増強、促進する、または増加させる。さらなる実施形態において、本発明のＡＢＰおよび抗体は、ＣＤ４およびＣＤ８  Ｔ細胞の両方の増殖を改善、増強、促進する、または増加させる。別の実施形態において、本発明のＡＢＰおよび抗体は、例えば、ＣＤ４もしくはＣＤ８  Ｔ細胞、またはＣＤ４およびＣＤ８  Ｔ細胞の両方の、Ｔ細胞機能を促進する。さらなる実施形態において、本発明のＡＢＰおよび抗体は、エフェクターＴ細胞機能を促進する。別の実施形態において、本発明のＡＢＰおよび抗体は、ＣＤ８  Ｔ細胞の長期生存を改善、増強、促進する、または増加させる。さらなる実施形態において、前記効果のうちのいずれかが腫瘍微小環境で生じる。
【００２６】
等しく重要なのは、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）ならびに腫瘍自体の両方により産生されるメディエーター（例えば、トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ−β）およびインターロイキン−１０（ＩＬ−１０））による、腫瘍部位における潜在的にロバストな免疫抑制応答の遮断である。癌の重要な免疫的病因は、腫瘍床および炎症部位に見られるＴｒｅｇの関与であり得る。一般に、Ｔｒｅｇ細胞は、本来循環中に見られ、外部病原体と遭遇してそれらを排除した後に、免疫系が警戒はしているものの鎮静した状態に戻るのを助ける。Ｔｒｅｇ細胞は、自己抗原に対する免疫寛容を維持する助けをし、機能においては本来抑制的であり、それらは表現型的にはＣＤ４＋、ＣＤ２５＋、ＦＯＸＰ３＋細胞として特徴付けられる。ある種の癌を効果的に治療するために免疫寛容を破るため、１つの治療様式は、腫瘍部位において優先的にＴｒｅｇを排除することである。Ｔｒｅｇを標的として排除して抗腫瘍応答をもたらすことは、免疫原性の低いものに比べて免疫原性の腫瘍では上手くいった。多くの腫瘍は、例えば、前駆体ＣＤ４＋２５＋細胞にＦＯＸＰ３＋表現型とＴｒｅｇのような機能を獲得させることにより免疫応答を障害し得るＴＧＦ−βなどのサイトカインを分泌する。
【００２７】
「調節する」とは、例えば、受容体または他の標的に関して本明細書で使用する場合、受容体の任意の本来のまたは既存の機能を変化させることを意味し、例えば、それは、受容体または標的に対する天然または人工リガンドの結合に影響を与えることを意味し、それは、任意の部分的もしくは完全な立体配座変化または受容体もしくは標的を介したシグナル伝達の誘導を含み、また、受容体または標的の、その天然または人工リガンドとの部分的または完全な結合の回避も含む。また、膜結合受容体または標的の場合には、その天然または変化のない状態に比べての、受容体もしくは標的が膜内の他のタンパク質もしくは分子と相互作用する方法のいずれかの変化、または膜コンパートメント内のいずれかの局在（または他の分子との同時局在）の変化も含まれる。従って、モジュレーターは、標的または受容体を調節する化合物またはリガンドまたは分子である。「調節する」は、例えば、シグナル伝達を増進すること、ならびに変化のないまたは調節されない状態で起こるシグナル伝達またはリガンドもしくは化合物もしくは分子との相互作用を打ち消すまたは遮断することを含む。よって、モジュレーターは、アゴニストまたはアンタゴニストであり得る。さらに、当業者は、総てのモジュレーターが１つの標的または受容体に対して絶対的な選択性を持つわけではないが、やはりその標的または受容体に対してあるモジュレーターが考えられることを認識し、例えば、ＴＬＲ４モジュレーターは、別のＴＬＲとも係合し得るが、やはりＴＬＲ４モジュレーターと考えられる。他のモジュレーターは、ＴＬＲ７およびＴＬＲ８の両方を調節するＴＬＲ７／８モジュレーターなどの複数の特異性を有することが知られている。このような既知の二重または多重特異性を有する分子は、その標的のそれぞれのモジュレーターと考えられ、すなわち、ＴＬＲ７／８モジュレーターは、本明細書で使用する場合、ＴＬＲ７モジュレーターであり、同様に、ＴＬＲ７／８モジュレーターは、本明細書で使用する場合、ＴＬＲ８モジュレーターである。
【００２８】
標的または受容体の「アゴニスト」は、標的または受容体と相互作用する天然リガンドまたは分子の１以上の機能を模倣する分子または化合物またはリガンドであり、受容体を介した１以上のシグナル伝達事象の誘発、天然リガンドの１以上の機能の模倣、受容体を介した既知の機能またはシグナル伝達に見られる１以上部分的または完全な立体配座変化の誘発を含む。
【００２９】
よって、一実施形態において、ＯＸ４０  ＡＢＰまたは抗体は、例えば腫瘍環境内で他のＴ細胞に対するＴｒｅｇ細胞の抑制効果を阻害する。
【００３０】
腫瘍内のＴｒｅｇｓとＴエフェクター細胞は抗腫瘍応答と相関することを示唆する証拠が蓄積している。従って、一実施形態において、本発明のＯＸ４０  ＡＢＰまたは抗体は、Ｔエフェクターの数および機能を増大させ、Ｔｒｅｇの機能を阻害するようにＯＸ４０を調節する。
【００３１】
ＯＸ４０の抗腫瘍効果を促進する、増強する、改善する、増加させるおよびそうでなければ変化させることが本発明の目的である。本明細書には、本発明の抗ＯＸ４０  ＡＢＰまたは抗体と本明細書に記載のＴＬＲモジュレーターなどの別の化合物との組合せが記載される。
【００３２】
よって、本明細書で使用する場合、用語「本発明の組合せ」は、抗ＯＸ４０  ＡＢＰまたは抗体とＡＧＰなどのＴＬＲ４モジュレーターを含んでなる組合せに関し、それらはそれぞれ本明細書に記載されるように別個にまたは同時に投与され得る。
【００３３】
本明細書で使用する場合、用語「癌」、「新生物」、および「腫瘍」は互換的に使用され、単数形であっても複数形であっても、悪性化を受けた、または異常なもしくは調節を欠いた成長または過剰増殖をもたらす細胞変化を受けた細胞を意味する。このような変化または悪性化は通常、細胞を宿主生物にとって病的なものとし、よって、病的であるかまたは病的となり得、介入を必要とするかまたは介入から利益を享受し得る前癌または前癌性細胞も含まれるものとする。原発性癌細胞（すなわち、悪性化の部位付近から得られる細胞）は、組織学的検査などの十分に確立された技術によって非癌性細胞から容易に識別することができる。癌細胞の定義には、本明細書で使用する場合、原発性癌細胞だけでなく癌細胞祖先に由来するいずれの細胞も含む。これには転移した癌細胞、ならびに癌細胞に由来するｉｎ  ｖｉｔｒｏ培養物および細胞株が含まれる。固形腫瘍として通常現れる癌のタイプについていう場合、「臨床的に検出可能な」腫瘍は、例えばＣＡＴスキャン、ＭＲイメージング、Ｘ線、超音波もしくは触診などの手法によって、腫瘍塊に基づいて検出可能なもの、および／または患者から得ることのできるサンプルにおける１以上の癌特異的抗原の発現のために検出可能であるものである。言い換えれば、この用語は、本明細書において、臨床医が前癌、癌、腫瘍、上皮内成長(in situ growths)、ならびに後期転移性成長と呼称するものを含め、いずれのステージの細胞、新生物、癌、および腫瘍も含む。腫瘍は、液性腫瘍を意味する造血系腫瘍、例えば、血液細胞などの腫瘍であり得る。このような腫瘍に基づく病態の具体例としては、慢性骨髄球性白血病または急性骨髄球性白血病などの白血病；多発性骨髄腫などの骨髄腫；およびリンパ腫などが挙げられる。
【００３４】
本明細書で使用する場合、用語「薬剤」は、組織、系、動物、哺乳動物、ヒト、または他の対象において所望の効果をもたらす物質を意味す。よって、用語「抗新生物薬」は、組織、系、動物、哺乳動物、ヒト、または他の対象において抗新生物効果をもたらす物質を意味する。用語「薬剤」は、単一の化合物であっても、または２以上の化合物の組合せもしくは組成物であってもよい。
【００３５】
用語「処置する」およびその派生語は、本明細書で使用する場合、治療的療法を意味する。特定の病態に関して処置は、（１）その病態もしくはその病態の生物学的発現の１以上を改善すること、（２）（ａ）その病態につながるもしくはその病態の原因である生物学的カスケードの１以上の点、もしくは（ｂ）その病態の生物学的発現の１以上に干渉すること、（３）その病態に関連する症状、効果もしくは副作用の１以上、またはその病態もしくはその処置に関連する症状、効果もしくは副作用の１以上を緩和すること、あるいは（４）その病態もしくはその病態の生物学的発現の１以上の進行を緩徐化することを意味する。
【００３６】
本明細書で使用する場合、「予防」は、ある病態もしくはその生物学的発現の尤度もしくは重篤度を実質的に低減するため、またはそのような病態もしくはその生物学的発現の開始を遅延させるための薬物の予防的投与を意味する。当業者は「予防」は絶対的な用語ではないことを認識するであろう。予防的療法は、例えば、対象が癌の強い家族歴を有する場合または対象が発癌物質に曝されていた場合など、対象に癌を発症する高いリスクがあると見なされる場合に適当である。
【００３７】
本明細書で使用する場合、用語「有効量」は、例えば、研究者または臨床医により求められる組織、系、動物またはヒトの生物学的または医学的応答を惹起する薬物または医薬剤の量を意味する。さらに、用語「治療上有効な量」は、そのような量を受容していない対応する対象に比べて、処置、治癒、予防の改善、または疾患、障害、もしくは副作用の改善、または疾患もしくは障害の進行速度の低下をもたらすいずれの量も意味する。この用語はまた、その範囲内に、正常な生理学的機能を増進するのに有効な量も含む。
【００３８】
本明細書で使用する場合、用語「有効量」は、例えば、研究者または臨床医により求められる組織、系、動物またはヒトの生物学的または医学的応答を惹起する薬物または医薬剤の量を意味する。さらに、用語「治療上有効な量」は、そのような量を受容していない対応する対象に比べて、処置、治癒、予防の改善、または疾患、障害、もしくは副作用の改善、または疾患もしくは障害の進行速度の低下をもたらすいずれの量も意味する。この用語はまた、その範囲内に、正常な生理学的機能を増進するのに有効な量も含む。
【００３９】
用語「組合せ」およびその文法上の変形は、本明細書で使用する場合、治療上有効な量の化合物Ａ（ＯＸ−４０  ＡＢＰ）と化合物Ｂ（ＴＬＲ４アゴニスト）またはその薬学的に許容可能な塩の同時投与または任意の様式の個別逐次投与のいずれかを意味する。さらに、それらの化合物が同じ投与形で投与されるるかどうかは問題でなく、例えば、一方の化合物を静脈投与して、他方の化合物を腫瘍内投与してもよい。
【００４０】
用語「組合せキット」は、本明細書で使用する場合、本発明に従い、化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩および化合物Ｂまたはその薬学的に許容可能な塩を投与するために使用される医薬組成物または組成物を意味する。両化合物が同時に投与される場合、組合せキットは、錠剤などの単一の医薬組成物中または別個の医薬組成物中に化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩および化合物Ｂまたはその薬学的に許容可能な塩を含有することができる。これらの化合物が同時に投与されない場合には、組合せキットは、別個の医薬組成物中に化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩および化合物Ｂまたはその薬学的に許容可能な塩を含有する。組合せキットは、単一包装の別個の医薬組成物中または別個の包装の別個の医薬組成物中に化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩および化合物Ｂまたはその薬学的に許容可能な塩を含んでなることができる。
【００４１】
一実施形態において、本発明は、成分：
薬学的に許容可能な担体を伴う化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩；および
薬学的に許容可能な担体を伴う化合物Ｂまたはその薬学的に許容可能な塩
を含んでなる組合せキットを提供する。
【００４２】
別の実施形態において、本組合せキットは、以下の成分：
薬学的に許容可能な担体を伴う化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩；および
薬学的に許容可能な担体を伴う化合物Ｂまたはその薬学的に許容可能な塩
を含んでなり、前記成分は逐次、個別および／または同時投与に好適な形態で提供される。
【００４３】
さらに別の実施形態において、組合せキットは、
薬学的に許容可能な担体とともに化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩を含んでなる第１の容器；および
薬学的に許容可能な担体とともに化合物Ｂまたはその薬学的に許容可能な塩を含んでなる第２の容器、ならびに前記第１および第２の容器を含有する容器手段
を含んでなる。
【００４４】
「組合せキット」はまた、用量および投与説明書などの説明書により提供されてもよい。このような用量および投与説明書は、例えば薬物製品ラベルにより医師に提供される種類のものであったもよく、またはそれらは患者への説明書などの医師により提供される種類にものであってもよい。
【００４５】
本明細書で使用する場合、用語「化合物Ａ２」は、ヒトＯＸ−４０に対するモノクローナル抗体またはその抗原結合部分を意味する。好適には、化合物Ａ２は、配列番号５で示されるような重鎖可変領域と配列番号１１で示されるような軽鎖可変領域を有するヒト化モノクローナル抗体を意味する。
【００４６】
本明細書で使用する場合、用語「化合物Ｂ２」は、式Ｉまたは式ＩａのＴＬＲ４アゴニストを意味する。好適には、化合物Ｂ２は、ＴＬＲ４アゴニストＣＲＸ−６０１を意味する。
【００４７】
好適には、本発明の組合せは、「指定期間」内に投与される。
【００４８】
用語「指定期間」およびその文法上の変形は、本明細書で使用する場合、化合物Ａ２および化合物Ｂ２のうち一方と化合物Ａ２および化合物Ｂ２のうち他方の投与間の時間間隔を意味する。そうではないことが定義されない限り、指定期間は、同時投与を含み得る。そうではないことが定義されない限り、指定期間は、単一日の間の化合物Ａ２および化合物Ｂ２の投与を意味する。
【００４９】
好適には、これらの化合物が「指定期間」内に投与され、かつ、同時に投与さない場合、それらの両方は互いに２４時間内に投与され、この場合、指定期間は約２４時間となり；好適には、それらの両方は互いに約１２時間内に投与され、この場合、指定期間は約１２時間となり；好適には、それらの両方は互いに約１１時間内に投与され、この場合、指定期間は約１１時間となり；好適には、それらの両方は互いに約１０時間内に投与され、この場合、指定期間は約１０時間となり；好適には、それらの両方は互いに約９時間内に投与され、この場合、指定期間は約９時間となり；好適には、それらの両方は互いに約８時間内に投与され、この場合、指定期間は約８時間となり；好適には、それらの両方は互いに約７時間内に投与され、この場合、指定期間は約７時間となり；好適には、それらの両方は互いに約６時間内に投与され、この場合、指定期間は約６時間となり；好適には、それらの両方は互いに約５時間内に投与され、この場合、指定期間は約５時間となり；好適には、それらの両方は互いに約４時間内に投与され、この場合、指定期間は約４時間となり；好適には、それらの両方は互いに約３時間内に投与され、この場合、指定期間は約３時間となり；好適には、それらは互いに約２時間内に投与され、この場合、指定期間は約２時間となり；好適には、それらの両方は互いに約１時間内に投与され、この場合、指定期間は約１時間となる。本明細書で使用する場合、約４５分未満離した化合物Ａ２および化合物Ｂ２の投与は同時投与と見なされる。
【００５０】
好適には、本発明の組合せは「指定期間」に投与される場合、これらの化合物はある「継続期間」に併用投与される。
【００５１】
用語「継続期間」およびその文法上の変形は、本明細書で使用する場合、示された連続日数の間、本発明の両化合物が投与されることを意味する。そうではないことが定義されない限り、連続日数は処置の開始で始めるまたは処置の終了で終わる必要はなく、処置コースのどこかの時点に連続日数が存在することだけが必要とされる。
【００５２】
「指定期間」の投与に関して、好適には、両化合物は、少なくとも１日間の指定期間内に投与され、この場合、継続期間は少なくとも１日となり；好適には、処置コース中、両化合物は少なくとも連続３日の指定期間内に投与され、この場合、継続期間は少なくとも３日となり；好適には、処置コース中、両化合物は少なくとも連続５日の指定期間内に投与され、この場合、継続期間は少なくとも５日となり；好適には、処置コース中、両化合物は少なくとも連続７日の指定期間内に投与され、この場合、継続期間は少なくとも７日となり；好適には、処置コース中、両化合物は少なくとも連続１４日の指定期間内に投与され、この場合、継続期間は少なくとも１４日となり；好適には、処置コース中、両化合物は少なくとも連続３０日の指定期間内に投与され、この場合、継続期間は少なくとも３０日となる。
【００５３】
好適には、これらの化合物が「指定期間」中に投与されない場合、それらは逐次に投与される。用語「逐次投与」、およびその文法的派生語は、本明細書で使用する場合、化合物Ａ２および化合物Ｂ２のうち一方が１日１回、連続２日以上投与され、次いで、化合物Ａ２および化合物Ｂ２のうち他方が１日１回、連続２日以上投与されることを意味する。また、本明細書では、化合物Ａ２および化合物Ｂ２のうち一方と化合物Ａ２および化合物Ｂ２のうち他方の逐次投与の間に用いられる休薬日も企図される。本明細書で使用する場合、休薬日は、化合物Ａ２および化合物Ｂ２のうち一方の逐次投与後で化合物Ａ２および化合物Ｂ２のうち他方の投与前の、化合物Ａ２も化合物Ｂ２も投与されない日の期間である。好適には、休薬日は、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日および１４日から選択される日の期間となる。
【００５４】
逐次投与に関して、好適には、化合物Ａ２および化合物Ｂ２のうち一方が連続１〜３０日間投与され、次いで、任意選択の休薬日の後に、化合物Ａ２および化合物Ｂ２のうち他方が連続３０日間投与される。好適には、化合物Ａ２および化合物Ｂ２のうち一方が連続１〜２１日間投与され、次いで、任意選択の休薬日の後に、化合物Ａ２および化合物Ｂ２のうち他方が連続１〜２１日間投与される。好適には、化合物Ａ２および化合物Ｂ２のうち一方が連続１〜１４日間投与され、次いで、１〜１４日の休薬日の後に、化合物Ａ２および化合物Ｂ２のうち他方が連続１〜１４日間投与される。好適には、化合物Ａ２および化合物Ｂ２のうち一方が連続１〜７日間投与され、次いで、１〜１０日の休薬日の後、化合物Ａ２および化合物Ｂ２のうち他方が連続１〜７日間投与される。
【００５５】
好適には、化合物Ｂ２がその順序の最初に投与され、次いで、任意選択の休薬日の後に、化合物Ａ２が投与される。好適には、化合物Ｂ２が連続３〜２１日間投与され、次いで、任意選択の休薬日の後に、化合物Ａ２が連続３〜２１日間投与される。好適には、化合物Ｂ２が連続３〜２１日間投与され、次いで、１〜１４日の休薬日の後に、化合物Ａ２が連続３〜２１日間投与される。好適には、化合物Ｂ２が連続３〜２１日間投与され、次いで、３〜１４日の休薬日の後に、化合物Ａ２が連続３〜２１日間投与される。好適には、化合物Ｂ２が連続２１日間投与され、次いで、任意選択の休薬日の後に、化合物Ａ２が連続１４日間投与される。好適には、化合物Ｂ２が１４日間投与され、次いで、１〜１４日の休薬日の後に、連続１４日間化合物Ａ２が投与される。好適には、化合物Ｂ２が連続７日間投与され、次いで、３〜１０日の休薬日の後に、化合物Ａ２が連続７日間投与される。好適には、化合物Ｂ２が連続３日間投与され、次いで、３〜１４日の休薬日の後に、化合物Ａ２が連続７日間投与される。好適には、化合物Ｂ２が連続３日間投与され、次いで、３〜１０日の休薬日の後に、化合物Ａ２が連続３日間投与される。
【００５６】
「指定期間」の投与および「逐次」投与に次いで反復投与を行うことができ、または次いで交互投与プロトコールを行うこともでき、休薬日を反復投与または交互投与プロトコールの前に置いてもよいと理解される。
【００５７】
本発明の方法はまた、癌処置の他の治療法と併用してもよい。
【００５８】
療法で使用するために治療上有効な量の本発明の組合せを原料化学物質として投与することが可能であるが、本組合せを医薬組成物または組成物として提供することが好ましい。よって、本発明はさらに、化合物Ａ２および／または化合物Ｂ２と１以上の薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物を提供する。本発明の組合せは上記の通りである。担体は、その処方物の他の成分と適合し、医薬処方物の能力があり、かつ、そのレシピエントに有害でないという点で許容可能でなければならない。本発明の別の態様によれば、化合物Ａ２および／または化合物Ｂ２を１以上の薬学的に許容可能な担体と混合することを含む医薬処方物の調製方法も提供される。上記に示すように、使用される医薬組合せのこのような要素は、別個の医薬組成物中に提供されてもよく、または１つの医薬処方物中に一緒に処方してもよい。
【００５９】
医薬処方物は、単位用量当たり所定量の有効成分を含有する単位投与形で提供してもよい。当業者に知られているように、用量当たりの有効成分の量は、処置される病態、投与経路、ならびに患者の齢、体重および状態によって異なる。好ましい単位投与処方物は、一日用量または分割用量またはその適当な画分の有効成分を含有するものである。さらに、このような医薬処方物は、薬学分野で周知の方法のいずれかによって調製され得る。
【００６０】
化合物Ａ２および化合物Ｂ２はいずれの適当な経路で投与してもよい。好適な経路としては、経口、直腸、鼻腔、局所（頬側および舌下を含む）、腫瘍内、膣、および非経口（皮下、筋肉内、静脈内、皮内、くも膜下腔内、および硬膜外を含む）が含まれる。好ましい経路は、例えば、本組合せのレシピエントの状態および処置される癌によって異なり得ることが認識されるであろう。また、投与される薬剤のそれぞれは同じまたは異なる経路で投与されてよいこと、および化合物Ａ２および化合物Ｂ２は医薬組成物／処方物中に一緒に混合されてもよいことも認識されるであろう。
【００６１】
本発明の組合せの治療上有効な量（またはその組合せの成分それぞれの治療上有効な量）の投与は、それらの組合せがある成分化合物の治療上有効な量の個々の投与に比べて以下の改良された特性のうち１以上をもたらすという点で、個々の成分化合物よりも有利である：ｉ）最も活性の高い単剤よりも大きい抗癌効果；ｉｉ）相乗的もしくは極めて相乗的な抗癌活性；ｉｉｉ）副作用プロフィールの軽減を伴った高い抗癌活性を提供する投与プロトコール；ｉｖ）毒性作用プロフィールの軽減；ｖ）治療域の拡大；またはｖｉ）成分化合物の一方または両方のバイオアベイラビリティの増大。
【００６２】
本発明はさらに、本明細書の成分のうち１以上と、１以上の薬学的に許容可能な担体、希釈剤または賦形剤とを含む医薬組成物を提供する。本発明の組合せは、２つの医薬組成物を含んでなってもよく、一方は本発明のＡＢＰまたは抗体を含んでなり、他方はＴＬＲ４モジュレーターを含んでなり、それらのそれぞれは同じまたは異なる担体、希釈剤または賦形剤を含み得る。担体、希釈剤または賦形剤は、その処方物の他の成分と適合し、医薬処方物の能力があり、かつ、そのレシピエントに有害でないという点で許容可能でなければならない。一実施形態において、リポソーム処方物は、ＤＯＰＣ／ＣＨＯＬリポソーム処方物であり得る。
【００６３】
本発明の組合せの成分、そのような成分を含んでなる医薬組成物は、任意の順序で、また、異なる経路で投与してもよく、本成分およびそれらを含んでなる医薬組成物は同時に投与してもよい。
【００６４】
本発明の別の態様によれば、本発明の組合せの成分と１以上の薬学的に許容可能な担体、希釈剤または賦形剤を混合することを含む、医薬組成物の製造方法も提供される。
【００６５】
本発明の成分は、いずれの適当な経路によって投与してもよい。いくつかの成分については、好適な経路としては、経口、直腸、鼻腔、局所（頬側および舌下を含む）、膣、および非経口（皮下、筋肉内、静脈内、皮内、くも膜下腔内、および硬膜外を含む）が含まれる。好ましい経路は、例えば、本組合せのレシピエントの状態および処置される癌によって異なり得る。また、投与される薬剤のそれぞれは同じまたは異なる経路で投与されてよいこと、およびそれらの成分は一緒に混合されてもまたは別個の医薬組成物であってもよい。
【００６６】
一実施形態において、本発明の組合せの１以上の成分は静脈投与される。別の実施形態において、本発明の組合せの１以上の成分は腫瘍内投与される。別の実施形態において、本発明の組合せの１以上の成分は全身投与、例えば、静脈投与され、本発明の組合せの１以上の他の成分は腫瘍内投与される。別の実施形態において、本発明の組合せの成分の総てが全身投与、例えば、静脈投与される。別の実施形態において、本発明の組合せの成分の総てが腫瘍内投与される。例えば本段落の実施形態のいずれにおいても、本発明の成分は１以上の医薬組成物として投与される。
【００６７】
ＯＸ４０に結合する抗原結合タンパク質および抗体
「抗原結合タンパク質（ＡＢＰ）」は、抗体または抗体と同様に機能する操作分子を含め、抗原に結合するタンパク質を意味する。このような別の抗体形式としては、トリアボディ、テトラボディ、ミニ抗体、およびミニボディが含まれる。また、本開示に従って任意の分子の１以上のＣＤＲが、好適な非免疫グロブリンタンパク質足場または骨格、例えば、アフィボディ、ＳｐＡ足場、ＬＤＬ受容体クラスＡドメイン、アビマー（例えば、米国特許出願公開第２００５／００５３９７３号、同第２００５／００８９９３２号、同第２００５／０１６４３０１号参照）またはＥＧＦドメイン上に配置された別の足場も含まれる。ＡＢＰはまた、このような抗体または他の分子の抗原結合フラグメントも含む。さらに、ＡＢＰは、適当な軽鎖と対合される場合、全長抗体、（Ｆａｂ’）２フラグメント、Ｆａｂフラグメント、二重特異性もしくは二重パラトープ分子またはその等価物（例えば、ｓｃＦＶ、ビ、トリまたはテトラボディ、Ｔａｎｄａｂｓなど）形式とされた本発明のＶＨ領域を含んでなってもよい。ＡＢＰは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、もしくはＩｇＧ４；またはＩｇＭ；ＩｇＡ、ＩｇＥもしくはＩｇＤまたはその修飾変異体である抗体を含んでなり得る。抗体重鎖の定常ドメインは相応に選択することができる。軽鎖定常ドメインは、κまたはλ定常ドメインであり得る。ＡＢＰはまた、抗原結合領域と非免疫グロブリン領域を含んでなるＷＯ８６／０１５３３に記載のタイプのキメラ抗体であってもよい。
【００６８】
よって、本明細書において、本発明のＡＢＰまたは抗ＯＸ４０抗原結合タンパク質は、ＯＸ４０に結合し、かつ、いくつかの実施形態では、下記のうちの１以上を行うものである：ＯＸ４０を介してシグナル伝達を調節する、ＯＸ４０の機能を調節する、ＯＸ４０のシグナル伝達を促進する、ＯＸ４０の機能を刺激する、またはＯＸ４０のシグナル伝達を補助刺激する。米国特許第９，００６，３９９号の実施例１には、ＯＸ４０結合アッセイが開示されている。当業者ならば、このような機能を立証する様々な他の周知のアッセイを容易に認識するであろう。
【００６９】
用語「抗体」は、本明細書で使用する場合、抗原結合ドメイン、場合により、免疫グロブリン様ドメインまたはそのフラグメントを有する分子を意味し、モノクローナル（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤまたはＩｇＥおよびその修飾変異体）、組換え、ポリクローナル、キメラ、ヒト化、二重パラトープ性、二重特異性およびヘテロコンジュゲート抗体、または閉鎖立体配座多重特異性抗体が含まれる。「抗体」は、異種、同種異系、同系、または他のその修飾形態を含んだ。抗体は単離または精製されてよい。抗体はまた、組換え型、すなわち、組換え手段によって生産されてもよく、例えば、参照抗体と９０％同一の抗体は、当技術分野で公知の組換え分子生物学技術を用い、特定の残基の突然変異誘発により作製することができる。よって、本発明の抗体は、天然抗体構造の形式とされてもよいし、あるいは適当な軽鎖と対合とされる場合、全長組換え抗体、（Ｆａｂ’）２フラグメント、Ｆａｂフラグメント、二重特異性もしくは二重パラトープ分子またはその等価物（例えば、ｓｃＦＶ、ビ、トリまたはテトラボディ、Ｔａｎｄａｂｓなど）の形式とされてもよい、本発明の重鎖可変領域と軽鎖可変領域を含んでなり得る。抗体はＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３，またはＩｇＧ４またはその修飾変異体であり得る。抗体重鎖の定常ドメインは相応に選択することができる。軽鎖定常ドメインは、κまたはλ定常ドメインであり得る。抗体はまた、抗原結合領域と非免疫グロブリン領域を含んでなるＷＯ８６／０１５３３に記載のタイプのキメラ抗体であってもよい。
【００７０】
当業者ならば、本発明のＡＢＰおよび抗体はＯＸ４０のエピトープに結合することを認識するであろう。ＡＢＰのエピトープは、その抗原の、ＡＢＰが結合する領域である。２つのＡＢＰは、それぞれがその抗原に対する他方の結合を競合的に阻害する（遮断する）場合には、同じまたはオーバーラップするエピトープに結合する。すなわち、競合結合アッセイで測定した場合に、競合抗体を含まない対照に比べて、１倍、５倍、１０倍、２０倍または１００倍を超える一方の抗体が、他方の結合を少なくとも５０％、７５％、９０％またはさらには９９％阻害する（例えば、Junghans et al., Cancer Res. 50:1495, 1990参照）。あるいは、一方の抗体の結合を低減または排除する抗原における本質的に総てのアミノ酸突然変異が他方の結合を低減または排除する場合には、２つの抗体は同じエピトープを有する。加えて、同じエピトープは、例えば、一方の抗体の結合を低減または排除するいくつかのアミノ酸突然変異が他方の結合を低減または排除する場合には、「オーバーラッピングエピトープ」を含み得る。
【００７１】
結合の強度は、本発明のＡＢＰまたは抗体の用量および投与に重要であり得る。一実施形態において、本発明のＡＢＰまたは抗体は、ＯＸ４０、好ましくは、ヒトＯＸ４０と高い親和性で結合する。例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）によって測定した場合、抗体はＯＸ４０、好ましくは、ヒトＯＸ４０と、１〜１０００ｎＭまたは５００ｎＭ以下の親和性、または２００ｎＭ以下の親和性、または１００ｎＭ以下の親和性、または５０ｎＭ以下の親和性、または５００ｐＭ以下の親和性、または４００ｐＭ以下の親和性、または３００ｐＭ以下で結合する。さらなる態様において、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）によって測定した場合、抗体はＯＸ４０、好ましくは、ヒトＯＸ４０と、約５０ｎＭ〜約２００ｎＭの間または約５０ｎＭ〜約１５０ｎＭの間で結合する。本発明の一態様において、抗体はＯＸ４０、好ましくは、ヒトＯＸ４０と１００ｎＭ未満の親和性で結合する。
【００７２】
さらなる実施形態において、結合はＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）により測定される。親和性は、ある分子、例えば、本発明の抗体と、別の分子、例えば、その標的抗原との、単一の結合部位における結合の強度である。抗体とその標的との結合親和性は、平衡法（例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）またはラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ））、または速度論（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析）によって決定することができる。例えば、当技術分野で公知のＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）法は、結合親和性を測定するために使用され得る。
【００７３】
アビディティーは、例えば相互作用価を考慮した、２分子の複数部位の互いの結合の合計強度である。
【００７４】
一態様において、本発明のＡＢＰまたは抗体とＯＸ４０、好ましくは、ヒトＯＸ４０の相互作用の平衡解離定数（ＫＤ）は、１００ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、２ｎＭ以下または１ｎＭ以下である。あるいは、ＫＤは、５〜１０ｎＭの間、または１〜２ｎＭの間であり得る。ＫＤは、１ｐＭ〜５００ｐＭの間、または５００ｐＭ〜１ｎＭの間であり得る。当業者ならば、ＫＤ数値が小さいほど結合が強いことを認識するであろう。ＫＤの逆数（すなわち、１／ＫＤ）は、Ｍ−１を単位とする平衡会合定数（ＫＡ）である。当業者ならば、ＫＡ数値が大きいほど結合が強いことを認識するであろう。
【００７５】
解離速度定数（ｋｄ）または「解離速度」は、一方の腕のＡＢＰまたは抗体と他方の腕のＯＸ４０、好ましくは、ヒトＯＸ４０の複合体の安定性、すなわち、毎秒に減衰する複合体画分を表す。例えば、０．０１ｓ−１のｋｄは、毎秒複合体の１％が減衰することに等しい。一実施形態において、解離速度定数（ｋｄ）は、ｌ１×１０−３ｓ−１以下、１×１０−４ｓ−１以下、１×１０−５ｓ−１以下、または１×１０−６ｓ−１以下である。ｋｄは１×１０−５ｓ−１〜１×１０−４ｓ−１の間、または１×１０−４ｓ−１〜１×１０−３ｓ−１の間であり得る。
【００７６】
例えば、ＯＸ４０、ＯＸ４０のエピトープまたはフラグメントとの結合をめぐる本発明の抗ＯＸ４０  ＡＢＰまたは抗体と参照抗体の間の競合は、競合ＥＬＩＳＡ、ＦＭＡＴまたはＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）により決定することができる。一態様において、競合アッセイはＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）により行われる。この競合にはいくつかの可能性のある理由がある：その２つのタンパク質は同じまたはオーバーラップするエピトープに結合し得るか、結合の立体阻害が存在し得るか、または第１のタンパク質の結合が第２のタンパク質の結合を回避もしくは低下させる抗原の立体配座変化を誘導し得る。
【００７７】
「結合フラグメント」は、本明細書で使用する場合、抗原結合部位を含みかつ本明細書で定義されるＯＸ４０に結合し得る、例えば、限定されるものではないが、親または全長抗体の同じエピトープに結合し得る、本発明のＡＢＰまたは抗体の部分またはフラグメントを意味する。
【００７８】
本発明のＡＢＰおよび抗体の機能的フラグメントが本明細書で企図される。
【００７９】
よって、「結合フラグメント」および「機能的フラグメント」は、無傷抗体のＦｃフラグメントを欠き、循環から急速に排除され、無傷抗体よりも非特異的組織結合が少ない可能性があるＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２フラグメント (Wahl et al., J. Nuc. Med. 24:316-325 (1983)) であり得る。また、Ｆｖフラグメント(Hochman, et al., Biochemistry 12:1130-1135 (1973); Sharon, et al.(1976) Biochemistry 15:1591-1594)も含まれる。これらの種々のフラグメントは、プロテアーゼ切断または化学切断（例えば、Rousseaux et al., Meth. Enzymol., 121:663-69 (1986)参照）などの従来の技術を用いて作製される。
【００８０】
「機能的フラグメント」は、本明細書で使用する場合、抗原結合部位を含みかつ親ＡＢＰまたは抗体と同じ標的に結合し得る、例えば、限定されるものではないが、同じエピトープに結合し得る、かつまた、本明細書に記載のまたは当技術分野で公知の１以上の調節または他の機能を保持する、本発明のＡＢＰまたは抗体の部分またはフラグメントを意味する。
【００８１】
本発明のＡＢＰおよび抗体は、天然抗体構造の形式とされ得る本発明の重鎖可変領域と軽鎖可変領域を含んでなり得るので、機能的フラグメントは、本明細書に記載の全長ＡＢＰまたは抗体の結合または１以上の機能を保持するものである。よって、本発明のＡＢＰまたは抗体の結合フラグメントは、適当な軽鎖と対合され得る場合、ＶＬまたはＶＨ領域、（Ｆａｂ’）２フラグメント、Ｆａｂフラグメント、二重特異性もしくは二重パラトープ分子またはその等価物（例えば、ｓｃＦＶ、ビ、トリまたはテトラボディ、Ｔａｎｄａｂｓなど）のフラグメントを含んでなり得る。
【００８２】
用語「ＣＤＲ」は、本明細書で使用する場合、抗原結合タンパク質の相補性決定領域アミノ酸配列を意味する。これらは、免疫グロブリン重鎖および軽鎖の超可変領域である。免疫グロブリンの可変部分には３つの重鎖ＣＤＲと３つの軽鎖ＣＤＲ（またはＣＤＲ領域）が存在する。
【００８３】
ＣＤＲ配列には様々なナンバリング規則が存在することは当業者には自明であろう；Ｃｈｏｔｈｉａ(Chothia et al. (1989) Nature 342: 877-883)、Ｋａｂａｔ(Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 4th Ed., U.S. Department of Health and Human Services, National Institutes of Health (1987))、ＡｂＭ（バース大学）およびＣｏｎｔａｃｔ（ユニヴァーシティ・カレッジ・ロンドン）。「最小結合単位」を得るためには、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭおよびＣｏｎｔａｃｔ法のうち少なくとも２つを用いて最小オーバーラッピング領域を決定することができる。最小結合単位は、ＣＤＲの一部分であり得る。抗体の構造およびタンパク質フォールディングは、他の残基がＣＤＲ配列の一部と考えられ、また、当業者によりそのように理解されるであろうことを意味し得る。ＣＤＲ定義のいくつかは使用される個々の刊行物によって異なる場合があることに留意されたい。
【００８４】
そうではないことが述べられない限り、および／または具体的に示される配列がなければ、本明細書で「ＣＤＲ」、「ＣＤＲＬ１」、「ＣＤＲＬ２」、「ＣＤＲＬ３」、「ＣＤＲＨ１」、「ＣＤＲＨ２」、「ＣＤＲＨ３」という場合には、既知の規則のいずれかに従ってナンバリングされたアミノ酸配列を意味し、あるいは、ＣＤＲは、可変軽鎖の「ＣＤＲ１」、「ＣＤＲ２」、「ＣＤＲ３」、ならびに可変重鎖の「ＣＤＲ１」、「ＣＤＲ２」、および「ＣＤＲ３」と呼称される。いくつかの実施形態において、ナンバリング規則は、Ｋａｂａｔ規則である。
【００８５】
用語「ＣＤＲ変異体」は、本明細書で使用する場合、少なくとも１つの、例えば、１、２または３個のアミノ酸置換、欠失または付加により修飾されたＣＤＲを意味し、ここで、ＣＤＲ変異体を含んでなる修飾抗原結合タンパク質は、修飾前の抗原結合タンパク質の生物学的特徴を実質的に保持する。修飾可能な各ＣＤＲは単独でまたは別のＣＤＲと組み合わせて修飾され得ることが認識されるであろう。一態様において、修飾は、置換、特に、例えば表１に示されるような保存的置換である。
【００８６】
【表１】
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【００８７】
例えば、変異体ＣＤＲにおいて、最小結合単位のアミノ酸残基は、ＫａｂａｔまたはＣｈｏｔｈｉａ定義の一部としてＣＤＲを含んでなるフランキング残基が保存的アミノ酸残基で置換されていてもよいこと以外は同じままであり得る。
【００８８】
上記のような修飾ＣＤＲまたは最小結合単位を含んでなるこのような抗原結合タンパク質は、本明細書では、「機能的ＣＤＲ変異体」または「機能的結合単位変異体」と呼称する場合がある。
【００８９】
抗体は、いずれの種のものであってもよく、または交差種に投与するために好適となるように修飾されてもよい。例えば、マウス抗体由来のＣＤＲはヒトへの投与のためにヒト化され得る。いずれの実施形態においても、抗原結合タンパク質は場合によりヒト化抗体である。
【００９０】
「ヒト化抗体」は、非ヒトドナー免疫グロブリンに由来するそのＣＤＲを有し、その分子の残りの免疫グロブリン由来部分は１つ（または複数）のヒト免疫グロブリンに由来する一種の操作抗体を意味する。加えて、フレームワーク支持残基は、結合親和性を保存するように変更されてもよい（例えば、Queen et al., Proc. Natl Acad Sci USA, 86:10029-10032 (1989), Hodgson et al., Bio/Technology, 9:421 (1991)参照）。好適なヒトアクセプター抗体は、従来のデータベース、例えば、ＫＡＢＡＴ（登録商標）データベース、Ｌｏｓ  Ａｌａｍｏｓデータベース、およびＳｗｉｓｓタンパク質データベースから、ドナー抗体のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列との相同性により選択されたものであり得る。ドナー抗体のフレームワーク領域との相同性（アミノ酸ベースでの）を特徴とするヒト抗体は、重鎖定常領域および／またはドナーＣＤＲの挿入のための重鎖可変フレームワーク領域を提供するために好適であり得る。軽鎖定常または可変フレームワーク領域を供与し得る好適なアクセプター抗体も同様に選択され得る。アクセプター抗体重鎖および軽鎖は同じアクセプター抗体に起源する必要はないことに留意されたい。従来技術はこのようなヒト化抗体を生産するいくつかの方法を記載している−例えば、ＥＰ−Ａ−０２３９４００およびＥＰ−Ａ−０５４９５１参照。
【００９１】
なおさらなる実施形態において、ヒト化抗体は、ＩｇＧであるヒト抗体定常領域である。別の実施形態において、ＩｇＧは、上記の参照文献または特許公報に開示されている配列である。
【００９２】
ヌクレオチド配列およびアミノ酸配列に関して、用語「同一の」または「同一性」は、最適にアラインされ、適当な挿入または欠失と比較された場合の２つの核酸配列または２つのアミノ酸配列の間の同一性の程度を示す。
【００９３】
２配列間の同一性パーセントは、それらの２配列の最適なアラインメントのために導入する必要のあるギャップの数、および各ギャップの長さを考慮した、それらの配列に共有される同一の位置の関数（すなわち、同一性％＝同一の位置の数／位置の総数×１００）である。２配列間の配列の比較および同一性パーセントの決定は、下記のように、数学的アルゴリズムを用いて達成することができる。
【００９４】
クエリー核酸配列とサブジェクト核酸配列の間の同一性パーセントは、ペアワイズＢＬＡＳＴＮアラインメントが実行された後にサブジェクト核酸配列がクエリー核酸配列での１００％クエリー被覆率を有する場合にＢＬＡＳＴＮアルゴリズムにより計算される、パーセンテージとして表される「同一性」である。このようなクエリー核酸配列とサブジェクト核酸配列の間のペアワイズＢＬＡＳＴＮアラインメントは、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅのウェブサイトで利用可能なＢＬＡＳＴＮアルゴリズムのデフォルト設定を用い、低複雑性領域のフィルターをオフにして行われる。重要なこととして、クエリー核酸配列は、本明細書の１以上の請求項で特定される核酸配列により記載され得る。
【００９５】
クエリーアミノ酸配列とサブジェクトアミノ酸配列の間の同一性パーセントは、ペアワイズＢＬＡＳＴＮアラインメントが実行された後にサブジェクトアミノ酸配列がクエリーアミノ酸配列での１００％クエリー被覆率を有する場合にＢＬＡＳＴＰアルゴリズムにより計算される、パーセンテージとして表される「同一性」値である。このようなクエリーアミノ酸配列とサブジェクトアミノ酸配列の間のペアワイズＢＬＡＳＴＰアラインメントは、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅのウェブサイトで利用可能なＢＬＡＳＴＰアルゴリズムのデフォルト設定を用い、低複雑性領域のフィルターをオフにして行われる。重要なこととして、クエリーアミノ酸配列は、本明細書の１以上の請求項で特定される核酸配列により記載され得る。
【００９６】
本明細書の本発明のいずれに実施形態においても、ＡＢＰまたは抗体は、示されるまたは参照される、例えば、本明細書に開示される配列番号によって定義される配列と１００、９９、９８、９７、９６、９５、９４、９３、９２、９１、または９０パーセントの同一性を有するいずれか１つまたは総てのＣＤＲ、ＶＨ、ＶＬを有し得る。
【００９７】
ヒトＯＸ４０受容体に結合するＡＢＰおよび抗体が本明細書で提供される（すなわち、抗ＯＸ４０  ＡＢＰおよび抗ヒトＯＸ４０受容体（ｈＯＸ４０Ｒ）抗体、本明細書では「抗ＯＸ４０  ＡＢＰまたは抗ＯＸ４０抗体」および／またはそれらの他の変形で呼称されることもある）。これらの抗体は、その病理にＯＸ４０シグナル伝達を含む急性または慢性疾患または病態の治療または予防に有用である。一態様において、ヒトＯＸ４０Ｒに結合し、かつ、癌処置または疾患に対する処置として有効な抗原結合タンパク質、もしくは単離されたヒト抗体またはこのようなタンパク質もしくは抗体の機能的フラグメントが、例えば、ＴＬＲ４モジュレーターまたはＴＬＲ４アゴニストなどの別の化合物と組み合わせて記載される。本明細書に開示される抗原結合タンパク質または抗ＯＸ４０抗体はいずれも薬剤として使用され得る。抗原結合タンパク質または抗ＯＸ４０抗体のうちいずれか１以上を、癌、例えば、本明細書で開示されるものを治療するために本方法または組成物に使用することができる。
【００９８】
本明細書に記載されるような単離された抗体はＯＸ４０に結合し、以下の遺伝子：ＮＣＢＩ受託番号ＮＰ＿００３３１７、Ｇｅｎｐｅｐｔ受託番号Ｐ２３５１０、またはそれらと９０パーセントの相同性または９０パーセントの同一性を有する遺伝子からコードされるＯＸ４０に結合し得る。本明細書で提供される単離された抗体はさらに、以下のＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＡＡＢ３９９４４、ＣＡＥ１１７５７、またはＡＡＩ０５０７１のうち一方を有するＯＸ４０受容体とも結合し得る。
【００９９】
受容体に結合し、かつ／またはＯＸ４０を調節する抗原結合タンパク質および抗体は当技術分野で公知である。本発明の例示的ＡＢＰおよび抗体は、例えば、国際公開第ＷＯ２０１３／０２８２３１号（ＰＣＴ／ＵＳ２０１２／０２４５７０）、国際出願日２０１２年２月９日、およびＷＯ２０１２／０２７３２８（ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０４８７５２）、国際出願日２０１１年８月２３日で開示されている。（いずれかの定義が矛盾する場合には、本出願が上位である）。一実施形態において、本発明のＯＸ４０抗体は、米国特許第９，１６３，０８５号に開示されている。
【０１００】
ＴＬＲ−４モジュレーター
本発明の組合せは、ＴＬＲ−４「モジュレーター」、すなわち、例えば、結合し、ＴＬＲ４と係合することによって立体配座変化またはシグナル伝達を誘導することによりＴＬＲ４を調節する分子を含んでなる。
【０１０１】
一実施形態において、ＴＬＲ−４モジュレーターは、アミノアルキルグルコサミニドホスフェート化合物（ＡＧＰ）である。ＴＬＲ４は、細菌ＬＰＳ（リポ多糖）を認識し、活性化された際に自然免疫応答を誘導する。ＡＧＰは、細菌ＬＰＳの脂質Ａタンパク質の単糖模倣剤であり、化合物の「アシル鎖」上のエーテルおよびエステル結合を用いて開発された。これらの化合物の製造方法は既知であり、例えばＷＯ２００６／０１６９９７、米国特許第７，２８８，６４０号および同第６，１１３，９１８号、ならびにＷＯ０１／９０１２９に開示されている。他のＡＧＰおよび関連の方法は、米国特許第７，１２９，２１９号、米国特許第６，５２５，０２８号および米国特許第６，９１１，４３４号に開示されている。本発明の組成物で使用されるアシル鎖上にエーテル結合を有するＡＧＰは既知であり、ＷＯ２００６／０１６９９７に開示されている。ＷＯ２００６／０１６９９７の段落［００１９］〜［００２１］の式（ＩＩＩ）に示され、それに従って記載されるＡＧＰ化合物は、今回特許請求される方法および組合せで使用可能である。
【０１０２】
本発明で使用されるＡＧＰ化合物は、次のように式１で示される構造を有し、
【化１】
2018525378.tif 000003
式中、
ｍは、０〜６であり；
ｎは、０〜４であり；
Ｘは、ＯまたはＳ、好ましくは、Ｏであり；
Ｙは、ＯまたはＮＨであり；
Ｚは、ＯまたはＨであり；
各Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は、Ｃ１−２０アシルおよびＣ１−２０アルキルからなる群から独立に選択され；
Ｒ４は、ＨまたはＭｅであり；
Ｒ５は、−Ｈ、−ＯＨ、−（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、−ＰＯ３Ｒ８Ｒ９、−ＯＰＯ３Ｒ８Ｒ９、−ＳＯ３Ｒ８、−ＯＳＯ３Ｒ８、−ＮＲ８Ｒ９、−ＳＲ８、−ＣＮ、−ＮＯ２、−ＣＨＯ、−ＣＯ２Ｒ８、および−ＣＯＮＲ８Ｒ９からなる群から独立に選択され、ここで、Ｒ８およびＲ９はそれぞれＨおよび（Ｃ１−Ｃ４）アルキルから独立に選択され；かつ
各Ｒ６およびＲ７は独立にＨまたはＰＯ３Ｈ２である。
【０１０３】
式１において、直鎖脂肪アシル残基（すなわち、第２級アシルオキシまたはアルコキシ残基、例えば、Ｒ１Ｏ、Ｒ２Ｏ、およびＲ３Ｏ）が結合されている３’立体中心の立体配置はＲまたはＳ、好ましくは、Ｒである（カーン・インゴルド・プレローグ順位則(Cahn-Ingold-Prelog priority rules)により設計される通り）。Ｒ４およびＲ５が結合されているアグリコン立体中心の立体配置はＲまたはＳであり得る。鏡像異性体およびジアステレオマー両方の総ての立体異性体ならびにそれらの混合物は、本発明の範囲内に入ると見なされる。
【０１０４】
ヘテロ原子Ｘとアグリコン窒素原子の間の炭素原子の数は、変数「ｎ」により決定され、０〜４の整数、または０〜２の整数であり得る。
【０１０５】
直鎖脂肪酸Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３の鎖長は、約６〜約１６炭素、または約９〜約１４炭素であり得る。鎖長は同じであっても異なっていてもよい。いくつかの実施形態には、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３が６または１０または１２または１４である鎖長が含まれる。
【０１０６】
式１は、Ｌ／Ｄ−セリル、−トレオニル、−システイニルエーテルおよびエステル脂質ＡＧＰ、アゴニストとアンタゴニストの両方およびそれらの同族体（ｎ＝１〜４）、ならびに種々のカルボン酸生物学的等価体（すなわち、Ｒ５は塩形成能のある酸性基であり；リン酸基はグルコサミン単位の４位または６位のいずれかにあり得るが、好ましくは４位にある）を包含する。
【０１０７】
式１のＡＧＰ化合物を使用する本発明の一実施形態において、ｎは０であり、Ｒ５はＣＯ２Ｈであり、Ｒ６はＰＯ３Ｈ２であり、かつ、Ｒ７はＨである。このＡＧＰ化合物は、次のように式１ａの構造として示され、
【化２】
2018525378.tif 000004
式中、ＸはＯまたはＳであり；ＹはＯまたはＮＨであり；ＺはＯまたはＨであり；各Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３はＣ１−２０アシルおよびＣ１−２０アルキルからなる群から独立に選択され；かつＲ４はＨまたはメチルである。
【０１０８】
式１ａでは、直鎖脂肪酸アシル残基（すなわち、第２級アシルオキシまたはアルコキシ残基、例えば、Ｒ１Ｏ、Ｒ２Ｏ、およびＲ３Ｏ）が結合されている３’立体中心の立体配置は、ＲまたはＳ、好ましくは、Ｒである（カーン・インゴルド・プレローグ順位則により設計される通り）。Ｒ４およびＣＯ２Ｈが結合されているアグリコン立体中心の立体配置はＲまたはＳであり得る。鏡像異性体およびジアステレオマー両方の総ての立体異性体ならびにそれらの混合物は、本発明の範囲内に入ると見なされる。
【０１０９】
式１ａは、Ｌ／Ｄ−セリル、−トレオニル、−システニルエーテルまたはエステル脂質ＡＧＰアゴニストおよびアンタゴニストの両方を包含する。
【０１１０】
式１および式１ａの両方において、Ｚは、二重結合または互いに一重結合により結合されている２個の水素原子により結合されたＯである。すなわち、本化合物は、Ｚ＝Ｙ＝Ｏの場合にはエステル結合型、Ｚ＝ＯかつＹ＝ＮＨの場合にはアミド結合型、およびＺ＝Ｈ／ＨかつＹ＝Ｏの場合にはエーテル結合型である。
【０１１１】
式１の化合物は、ＣＲＸ−６０１およびＣＲＸ−５２７と呼称される。それらの構造は次のように示される。
【化３】
2018525378.tif 000005
【０１１２】
加えて、別の好ましい実施形態は、示された構造を有するＣＲＸ−５４７を用いる。
【化４】
2018525378.tif 000006
【０１１３】
さらに他の実施形態は、より短い第二級アシルまたはアルキル鎖を有するＡＧＰに安定性の増強を与えるＣＲＸ−６０２またはＣＲＸ−５２６などのＡＧＰを含む。
【化５】
2018525378.tif 000007
【０１１４】
本発明のさらなる実施形態において、ＴＬＲ４モジュレーターはアゴニストである。さらなる実施形態において、アゴニストであるＴＬＲ４モジュレーターは、ＣＲＸ−６０１、ＣＲＸ−５４７、およびＣＲＸ−５２７からなる群から選択される。
【０１１５】
ＡＧＰバッファー
本発明の一実施形態において、ＡＧＰなどのＴＬＲ４モジュレーターを含んでなる組成物は、両性イオン性バッファーを用いて緩衝される。本発明の一実施形態において、両性イオン性バッファーはアミノアルカンスルホン酸または好適な塩である。アミノアルカンスルホン酸(amninoalkanesulfonic)バッファーの例として、限定されるものではないが、ＨＥＰＥＳ、ＨＥＰＰＳ／ＥＰＰＳ、ＭＯＰＳ、ＭＯＢＳおよびＰＩＰＥＳが挙げられる。本発明の一実施形態において、バッファーは、市販の注射製品に使用するためのものなど、ヒトでの使用に好適な薬学的に許容可能なバッファーである。本発明の一実施形態において、バッファーはＨＥＰＥＳである。
【０１１６】
処置の方法
本発明の組合せは、ＯＸ４０および／またはＴＬＲ４の係合が有益である障害に有用性を持つと考えられる。
【０１１７】
よって、本発明はまた、療法、特に、ＯＸ４０および／またはＴＬＲ４の係合が有益である障害、特に、癌の処置において使用するための本発明の組合せを提供する。
【０１１８】
一実施形態において、本発明は、ＣＲＸ−６０１などのＴＬＲ４アゴニストとヒト化モノクローナルＯＸ４０抗体の組合せで患者における癌を処置する方法を提供し、前記ヒト化ＯＸ４０抗体は静脈投与され、前記ＴＬＲ４アゴニストは腫瘍内投与され、患者の腫瘍においてアブスコパル効果を提供する。
【０１１９】
本明細書で使用する場合、用語「アブスコパル効果」は、局所処置が処置部位だけでなく遠隔の腫瘍部位にも腫瘍退縮を生じる現象を意味する。Postow, et al., N Engl J Med 366 (10): 925-31 (2012)。
【０１２０】
本発明のさらなる態様は、本発明の組合せを投与することを含んでなるＯＸ４０および／またはＴＬＲ４の係合が有益である障害の処置の方法を提供する。
【０１２１】
本発明のさらなる態様は、ＯＸ４０および／またはＴＬＲ４の係合が有益である障害の処置のための薬剤の製造における本発明の組合せの使用を提供する。いくつかの実施形態において、障害は癌である。好適には、本発明は、癌の処置のための本発明の組合せの使用を提供する。
【０１２２】
本発明の組合せによる処置に好適な癌の例としては、限定されるものではないが、原発および転移形態の頭頸部癌、乳癌、肺癌、結腸癌、卵巣癌、および前立腺癌が挙げられる。好適には、癌は、脳腫瘍（神経膠腫）、膠芽腫、星状細胞腫、多形性膠芽腫、バナヤン−ゾナナ症候群、カウデン病、レルミット−デュクロス病、乳癌、炎症性乳癌、ウィルムス腫瘍、ユーイング肉腫、横紋筋肉腫、脳室上衣細胞腫、髄芽細胞腫、結腸癌、頭頸部癌、腎臓癌、肺癌、肝臓癌、メラノーマ、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、肉腫、骨肉腫、骨の巨細胞腫瘍、甲状腺癌、リンパ芽球性Ｔ細胞白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、有毛細胞白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、ＡＭＬ、慢性好中球性白血、急性リンパ芽球性Ｔ細胞白血病、形質細胞腫、免疫芽球性大細胞白血病、マントル細胞白血病、多発性骨髄腫  巨核芽球性白血病、多発性骨髄腫、急性巨核球性白血病、前骨髄球性白血病、赤白血病、悪性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、リンパ芽球性Ｔ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、濾胞性リンパ腫、神経芽腫、膀胱癌、尿路上皮癌、肺癌、外陰癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、中皮腫、食道癌、唾液腺癌、肝細胞癌、胃癌、鼻咽頭癌、頬粘膜癌、口腔癌、ＧＩＳＴ（消化管間質腫瘍）および精巣癌から選択される。
【０１２３】
加えて、処置される癌の例としては、バレット腺癌；胆道癌；乳癌；子宮頸癌；胆管癌；膠芽腫、星状細胞腫（例えば、多形性膠芽腫）および脳室上衣細胞腫などの原発性ＣＮＳ腫瘍、ならびに続発性腫瘍（すなわち、中枢神経系の外側に起源する腫瘍の中枢神経系への転移）を含む中枢神経系腫瘍；大腸管結腸癌を含む結腸直腸癌；胃癌；頭頸部の扁平上皮癌を含む頭頸部癌；白血病およびリンパ腫、例えば、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群、慢性骨髄性白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、巨核芽球性白血病、多発性骨髄腫および赤白血病を含む血液癌；肝細胞癌；小細胞肺癌および非小細胞肺癌を含む肺癌；卵巣癌；子宮内膜癌；膵臓癌；下垂体腺腫；前立腺癌；腎臓癌；肉腫；メラノーマを含む皮膚癌；および甲状腺癌が挙げられる。
【０１２４】
好適には、本発明は、脳腫瘍（神経膠腫）、膠芽腫、星状細胞腫、多形性膠芽腫、バナヤン−ゾナナ症候群、カウデン病、レルミット−デュクロス病、乳癌、結腸癌、頭頸部癌、腎臓癌、肺癌、肝臓癌、メラノーマ、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、肉腫および甲状腺癌から選択される癌を処置するまたはその重篤度を軽減するための方法に関する。
【０１２５】
一実施形態において、本発明は、卵巣癌、乳癌、膵臓癌および前立腺癌から選択される癌を処置するまたはその重篤度を軽減するための方法に関する。
【０１２６】
別の実施形態において、本発明は、ヒトを含む哺乳動物における前癌症候群を処置するまたはその重篤度を軽減するための方法に関し、前癌症候群は、子宮頸上皮内新生物、意義不明単クローン性ガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、骨髄異形成症候群、再生不良性貧血、子宮頸病変、皮膚母斑（前メラノーマ）、前立腺上皮内（管内）新生物（ＰＩＮ）、非浸潤性乳管癌（ＤＣＩＳ）、結腸ポリープおよび重症性肝炎または肝硬変から選択される。
【０１２７】
本発明の組合せは、単独でまたは１以上の他の治療薬と組み合わせて使用してよい。よって、本発明は、さらなる態様において、本発明の組合せを１または複数のさらなる治療薬とともに含んでなるさらなる組合せ、その組合せを含んでなる組成物および薬剤、ならびに療法、特に、ＯＸ４０および／またはＴＬＲ４の係合に感受性のある疾患の処置にけるさらなる組合せ、組成物および薬剤の使用を提供する。
【０１２８】
一実施形態において、本発明の組合せは、癌処置の他の治療方法と併用可能である。特に、抗新生物療法において、上述のもの以外の他の化学療法薬、ホルモン剤、抗体薬剤ならびに手術および／または放射線処置との併用療法が想定される。よって、本発明による併用療法には、本発明の抗ＯＸ４０  ＡＢＰまたは抗体および／またはＴＬＲ４モジュレーターの投与ならびに他の抗新生物薬を含む他の治療薬の任意選択による使用が含まれる。このような薬剤の組合せは一緒にまたは別個に投与されてよく、別個に投与される場合には、これは同時に行ってもよいし、または任意の順序で、近接した時間または離れた時間の両方で逐次に行ってもよい。一実施形態において、医薬組合せは、本発明の抗ＯＸ４０  ＡＢＰまたは抗体とＴＬＲ４モジュレーター、および場合により少なくとも１種類のさらなる抗新生物薬を含む。
【０１２９】
一実施形態において、さらなる抗癌療法は、手術および／または放射線療法である。
【０１３０】
一実施形態において、さらなる抗癌療法は、少なくとも１種類のさらなる抗新生物薬である。
【０１３１】
処置される感受性腫瘍に対して活性を有するいずれの抗新生物薬も本組合せで使用可能である。有用な典型的な抗新生物薬は、限定されるものではないが、ジテルペノイドおよびビンカアルカロイドなどの微小管阻害剤；白金錯体；ナイトロジェンマスタード、オキシアザホスホリン、アルキルスルホネート、ニトロソ尿素、およびトリアゼンなどのアルキル化剤；アントラサイクリン、アクチノマイシンおよびブレオマイシンなどの抗生物薬；エピポドフィロトキシンなどのトポイソメラーゼＩＩ阻害剤；プリンおよびピリミジン類似体ならびに葉酸拮抗化合物などの代謝拮抗物質；カンプトテシンなどのトポイソメラーゼＩ阻害剤；ホルモンおよびホルモン類似体；シグナル伝達経路阻害剤；非受容体型チロシン血管新生阻害剤；免疫治療薬；アポトーシス促進薬；および細胞周期シグナル伝達阻害剤が含まれる。
【０１３２】
微小管阻害剤または有糸分裂阻害剤：微小管阻害剤または有糸分裂阻害剤は、細胞周期のＭ期、すなわち有糸分裂期の間に腫瘍細胞の微小管に対して活性である細胞周期特異的薬剤である。微小管阻害剤の例としては、限定されるものではないが、ジテルペノイドおよびビンカアルカロイドが挙げられる。
【０１３３】
ジテルペノイドは、天然源に由来し、細胞周期のＧ２／Ｍ期に作用する細胞周期特異的抗癌剤である。ジテルペノイドは、微小管のβ−チューブリンサブユニットに結合することによりこのタンパク質を安定化させると考えられている。その後タンパク質の分解が阻害され、有糸分裂が停止し、細胞死をたどると思われる。ジテルペノイドの例としては、限定されるものではないが、パクリタキセルおよびその類似体であるドセタキセルが挙げられる。
【０１３４】
パクリタキセル、５β，２０−エポキシ−１，２α，４，７β，１０β，１３α−ヘキサ−ヒドロキシタクス−１１−エン−９−オン４，１０−ジアセテート２−ベンゾエートの（２Ｒ，３Ｓ）−Ｎ−ベンゾイル−３−フェニルイソセリンとの１３−エステルは、タイヘイヨウイチイ(Taxus brevifolia)から単離された天然ジテルペン生成物であり、注射液タキソール(TAXOL)（登録商標）として市販されている。パクリタキセルは、テルペンのタキサンファミリーのメンバーである。パクリタキセルは、米国における難治性卵巣癌の治療に用(Markman, et al., Yale Journal of Biology and Medicine, 64:583 (1991); McGuire, et al., Ann. lntem, Med., 111:273 (989)および乳癌の治療(Holmes, et al., J. Nat. Cancer Inst., 83:1797 (1991))に承認されている。パクリタキセルは、皮膚における新生物(Einzig, et. al., Proc. Am. Soc. Clin. Oncol., 20:46 (2001)および頭頸部癌(Forastire, et. al., Sem. Oncol., 20:56, (1990))の治療のための潜在的候補である。またこの化合物は、多発性嚢胞腎疾患(Woo, et. al., Nature, 368:750 (1994))、肺癌、およびマラリアの治療にも可能性を示している。パクリタキセルで患者を治療すると、閾値濃度（５０ｎＭ）を超える投与期間に関連して(Kearns, et. al., Seminars in Oncology, 3(6) p.16-23 (1995))、骨髄抑制が起こる（複数の細胞系譜、Ignoff, et. al, Cancer Chemotherapy Pocket Guide, 1998）。
【０１３５】
ドセタキセル、（２Ｒ，３Ｓ）−Ｎ−カルボキシ−３−フェニルイソセリン，ドセタキセル、（２Ｒ，３Ｓ）−Ｎ−カルボキシ−３−フェニルイソセリン，Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルエステルの５β−２０−エポキシ−１，２α，４，７β，１０β，１３α−ヘキサヒドロキシタクス−１１−エン−９−オン４−アセテート２−ベンゾエートとの１３−エステルの三水和物は、注射液としてタキソテール(TAXOTERE)（登録商標）として市販されている。ドセタキセルは、乳癌の治療に指示される。ドセタキセルは、ヨーロッパイチイの針葉から抽出した天然の前駆物質１０−デアセチル−バッカチンＩＩＩを使用して製造された、パクリタキセル（前項参照）の半合成誘導体である。
【０１３６】
ビンカアルカロイドは、ニチニチソウ由来の細胞周期特異的抗新生物薬である。ビンカアルカロイドは、チューブリンと特異的に結合することによって細胞周期のＭ期（有糸分裂）に作用する。その結果、結合されたチューブリン分子は、重合して微小管になることができない。有糸分裂は中期で停止し、細胞死をたどると考えられている。ビンカアルカロイドの例としては、限定されるものではないが、ビンブラスチン、ビンクリスチン、およびビノレルビンが挙げられる。
【０１３７】
ビンブラスチン、硫酸ビンカロイコブラスチンは、注射液としてベルバン(VELBAN)（登録商標）として市販されている。ビンブラスチンは、種々の固形腫瘍の第二選択療法として指示される可能性があるが、精巣癌、ならびにホジキン病、リンパ球性および組織球性リンパ腫を含む種々のリンパ腫の治療に主として指示される。骨髄抑制がビンブラスチンの用量制限副作用である。
【０１３８】
ビンクリスチン、ビンカロイコブラスチンの２２−オキソ−硫酸塩は、注射液としてオンコビン(ONCOVIN)（登録商標）として市販されている。ビンクリスチンは、急性白血病の治療に指示されており、ホジキンおよび非ホジキン悪性リンパ腫の治療計画の中でも使用されている。脱毛および神経学的作用がビンクリスチンの最も一般的な副作用であり、程度は低いが、骨髄抑制および胃腸粘膜炎作用が生じる。
【０１３９】
酒石酸ビノレルビンの注射液（ナベルビン(NAVELBINE)（登録商標））として市販されているビノレルビン、３’，４’−ジデヒドロ−４’−デオキシ−Ｃ’−ノルビンカロイコブラスチン［Ｒ−（Ｒ＊，Ｒ＊）−２，３−ジヒドロキシブタン二酸（１：２）（塩）］は、半合成ビンカアルカロイドである。ビノレルビンは、単剤として、またはシスプラチンなどの他の化学療法薬と組み合わせて、種々の固形腫瘍、例えば、非小細胞肺癌、進行性乳癌、およびホルモン不応性前立腺癌の治療に指示される。骨髄抑制がビノレルビンの最も一般的な用量制限副作用である。
【０１４０】
白金錯体：白金配位錯体は、非細胞周期特異的抗癌剤であり、ＤＮＡと相互作用する。白金錯体は、腫瘍細胞に侵入し、アクア化を受け、ＤＮＡとの鎖内架橋および鎖間架橋を形成し、腫瘍に対して有害な生物学的作用を引き起こす。白金配位錯体の例としては、限定されるものではないが、オキサリプラチン、シスプラチンおよびカルボプラチンが挙げられる。
【０１４１】
シスプラチン、シス−ジアンミンジクロロ白金は、注射液としてプラチノール(PLATINOL)（登録商標）として市販されている。シスプラチンは、主として転移性の精巣癌および卵巣癌ならびに進行性膀胱癌の治療に指示される。
【０１４２】
カルボプラチン、ジアンミン［１，１−シクロブタン−ジカルボキシレート（２−）−Ｏ，Ｏ’］白金は、注射液としてパラプラチン(PARAPLATIN)（登録商標）として市販されている。カルボプラチンは、主として進行性卵巣癌の第一選択および第二選択治療に指示される。
【０１４３】
アルキル化剤：アルキル化剤は、非細胞周期特異的抗癌剤(non-phase anti-cancer specific agents)であり、かつ、強力な求電子試薬である。一般に、アルキル化剤は、アルキル化によって、リン酸基、アミノ基、スルフヒドリル基、ヒドロキシル基、カルボキシル基、およびイミダゾール基などのＤＮＡ分子の求核部分を介してＤＮＡと共有結合を形成する。このようなアルキル化によって核酸機能が破壊され細胞死に至る。アルキル化剤の例としては、限定されるものではないが、シクロホスファミド、メルファラン、およびクロラムブシルなどのナイトロジェンマスタード；ブスルファンなどのスルホン酸アルキル；カルムスチンなどのニトロ尿素；ならびにダカルバジンなどのトリアゼンが挙げられる。
【０１４４】
シクロホスファミド、２−［ビス（２−クロロエチル）アミノ］テトラヒドロ−２Ｈ−１，３，２−オキシアザホスホリン２−オキシド一水和物は、注射液または錠剤としてシトキサン(CYTOXAN)（登録商標）として市販されている。シクロホスファミドは、単剤として、または他の化学療法薬と組み合わせて、悪性リンパ腫、多発性骨髄腫、および白血病の治療に指示される。
【０１４５】
メルファラン、４−［ビス（２−クロロエチル）アミノ］−Ｌ−フェニルアラニンは、注射液または錠剤としてアルケラン(ALKERAN)（登録商標）として市販されている。メルファランは、多発性骨髄腫および切除不能な卵巣上皮癌の待期療法に指示される。骨髄抑制がメルファランの最も一般的な用量制限副作用である。
【０１４６】
クロラムブシル、４−［ビス（２−クロロエチル）アミノ］ベンゼンブタン酸は、ロイケラン(LEUKERAN)（登録商標）錠剤として市販されている。クロラムブシルは、慢性リンパ性白血病、ならびにリンパ肉腫、巨大濾胞性リンパ腫、およびホジキン病などの悪性リンパ腫の待期療法に指示される。
【０１４７】
ブスルファン、ジメタンスルホン酸１，４−ブタンジオールは、マイレラン(MYLERAN)（登録商標）錠剤として市販されている。ブスルファンは、慢性骨髄性白血病の待期療法に指示される。
【０１４８】
カルムスチン、１，３−［ビス（２−クロロエチル）−１−ニトロソ尿素は、ＢｉＣＮＵ（登録商標）として凍結乾燥物質の単一バイアルとして市販されている。カルムスチンは、脳腫瘍、多発性骨髄腫、ホジキン病、および非ホジキンリンパ腫用に、単剤として、または他の薬剤と組み合わせて、待期療法に指示される。
【０１４９】
ダカルバジン、５−（３，３−ジメチル−１−トリアゼノ）−イミダゾール−４−カルボキサミドは、材料の単一バイアルとしてＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（登録商標）として市販されている。ダカルバジンは、転移性悪性黒色腫の治療、および他の薬剤と組み合わせてホジキン病の第二選択治療に指示される。
【０１５０】
抗生物質系抗新生物薬：抗生物質系抗新生物薬は、非細胞周期特異的薬剤であり、ＤＮＡに結合するかまたはＤＮＡにインターカレートする。一般に、このような作用によって安定なＤＮＡ複合体かまたは鎖の切断が生じ、それにより核酸の通常機能が乱れ、細胞死に至る。抗生物質系抗新生物薬の例としては、限定されるものではないが、ダクチノマイシンなどのアクチノマイシン；ダウノルビシンおよびドキソルビシンなどのアントロサイクリン；ならびにブレオマイシンが挙げられる。
【０１５１】
ダクチノマイシンは、アクチノマイシンＤとしても知られ、注射液の形態でコスメゲン(COSMEGEN)（登録商標）として市販されている。ダクチノマイシンは、ウィルムス腫瘍および横紋筋肉腫の治療に指示される。
【０１５２】
ダウノルビシン、（８Ｓ−シス−）−８−アセチル−１０−［（３−アミノ−２，３，６−トリデオキシ−α−Ｌ−リクソ−ヘキソピラノシル）オキシ］−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６，８，１１−トリヒドロキシ−１−メトキシ−５，１２ナフタセンジオン塩酸塩は、リポソーム注射形態としてダウノキソーム(DAUNOXOME)（登録商標）として、または注射液としてセルビジン(CERUBIDINE)（登録商標）として市販されている。ダウノルビシンは、急性非リンパ球性白血病および進行性ＨＩＶ関連カポジ肉腫の治療における寛解導入に指示される。
【０１５３】
ドキソルビシン、（８Ｓ，１０Ｓ）−１０−［（３−アミノ−２，３，６−トリデオキシ−α−Ｌ−リクソ−ヘキソピラノシル）オキシ］−８−グリコロイル，７，８，９，１０−テトラヒドロ−６，８，１１−トリヒドロキシ−１−メトキシ−５，１２ナフタセンジオン塩酸塩は、注射可能な形態としてルベックス(RUBEX)（登録商標）またはアドリアマイシンＲＤＦ(ADRIAMYCIN RDF)（登録商標）として市販されている。ドキソルビシンは、主として急性リンパ芽球性白血病および急性骨髄芽球性白血病の治療に指示されるが、いくつかの固形腫瘍およびリンパ腫の治療における有用成分でもある。
【０１５４】
ブレオマイシン、ストレプトミセス・ヴェルチシルス(Streptomyces verticillus)の株から単離された細胞傷害性グリコペプチド系抗生物質の混合物は、ベレノキサン(BLENOXANE)（登録商標）として市販されている。ブレオマイシンは、単剤として、または他の薬剤と組み合わせて、扁平上皮癌、リンパ腫、および精巣癌の待期療法に指示される。
【０１５５】
トポイソメラーゼＩＩ阻害剤：トポイソメラーゼＩＩ阻害剤としては、限定されるものではないが、エピポドフィロトキシンが挙げられる。
【０１５６】
エピポドフィロトキシンは、マンドレイク植物由来の細胞周期特異的抗新生物薬である。エピポドフィロトキシンは、一般に、トポイソメラーゼＩＩとＤＮＡとの三元複合体を形成してＤＮＡ鎖の切断を引き起こすことによって、細胞周期のＳ期およびＧ２期において細胞に影響を及ぼす。この鎖切断が蓄積し、細胞死をたどる。エピポドフィロトキシンの例としては、限定されるものではないが、エトポシドおよびテニポシドが挙げられる。
【０１５７】
エトポシド、４’−デメチル−エピポドフィロトキシン９［４，６−０−（Ｒ）−エチリデン−β−Ｄ−グルコピラノシド］は、注射液またはカプセル剤としてベプシド(VePESID)（登録商標）として市販されており、一般にＶＰ−１６として知られている。エトポシドは、単剤として、または他の化学療法薬と組み合わせて、精巣癌および非小細胞肺癌の治療に指示される。
【０１５８】
テニポシド、４’−デメチル−エピポドフィロトキシン９［４，６−０−（Ｒ）−テニリデン−β−Ｄ−グルコピラノシド］は、注射液としてブモン(VUMON)（登録商標）として市販されており、一般にＶＭ−２６として知られている。テニポシドは、単剤として、または他の化学療法薬と組み合わせて、小児における急性白血病の治療に指示される。
【０１５９】
代謝拮抗性抗新生物薬：代謝拮抗性抗新生物薬は、ＤＮＡ合成を阻害すること、またはプリンもしくはピリミジン塩基の合成を阻害し、それによりＤＮＡ合成を制限することによって細胞周期のＳ期（ＤＮＡ合成）に作用する、細胞周期特異的抗新生物薬である。その結果、Ｓ期は進行せず、細胞死をたどる。代謝拮抗性抗新生物薬の例としては、限定されるものではないが、フルオロウラシル、メトトレキサート、シタラビン、メカプトプリン(mecaptopurine)、チオグアニン、およびゲムシタビンが挙げられる。
【０１６０】
５−フルオロウラシル、５−フルオロ−２，４−（１Ｈ，３Ｈ）ピリミジンジオンは、フルオロウラシルとして市販されている。５−フルオロウラシルを投与すると、チミジル酸合成が阻害され、またＲＮＡおよびＤＮＡの両方に組み込まれる。その結果は一般に細胞死である。５−フルオロウラシルは、単剤として、または他の化学療法薬と組み合わせて、乳癌、結腸癌、直腸癌、胃癌、および膵癌の治療に指示される。他のフルオロピリミジン類似体としては、５−フルオロデオキシウリジン（フロクスウリジン）および５−フルオロデオキシウリジン一リン酸が挙げられる。
【０１６１】
シタラビン、４−アミノ−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル−２（１Ｈ）−ピリミジノンは、シトサール−Ｕ(CYTOSAR-U)（登録商標）として市販されており、一般にＡｒａ−Ｃとして知られている。シタラビンは、成長中のＤＮＡ鎖へのシタラビンの末端組み込みによってＤＮＡ鎖の伸長を阻害することにより、Ｓ期で細胞期特異性を示すと考えられている。シタラビンは、単剤として、または他の化学療法薬と組み合わせて、急性白血病の治療に指示される。他のシチジン類似体としては、５−アザシチジンおよび２’，２’−ジフルオロデオキシシチジン（ゲムシタビン）が挙げられる。
【０１６２】
メルカプトプリン、１，７−ジヒドロ−６Ｈ−プリン−６−チオン一水和物は、プリントール(PURINETHOL)（登録商標）として市販されている。メルカプトプリンは、現時点でまだ特定されていないメカニズムによってＤＮＡ合成を阻害することにより、Ｓ期で細胞期特異性を示す。メルカプトプリンは、単剤として、または他の化学療法薬と組み合わせて、急性白血病の治療に指示される。有用なメルカプトプリン類似体はアザチオプリンである。
【０１６３】
チオグアニン、２−アミノ−１，７−ジヒドロ−６Ｈ−プリン−６−チオンは、タブロイド(TABLOID)（登録商標）として市販されている。チオグアニンは、現時点でまだ特定されていないメカニズムによってＤＮＡ合成を阻害することにより、Ｓ期で細胞期特異性を示す。チオグアニンは、単剤として、または他の化学療法薬と組み合わせて、急性白血病の治療に指示される。他のプリン類似体としては、ペントスタチン、エリスロヒドロキシノニルアデニン、リン酸フルダラビン、およびクラドリビンが挙げられる。
【０１６４】
ゲムシタビン、２’−デオキシ−２’，２’−ジフルオロシチジン一塩酸塩（β−異性体）は、ジェムザール(GEMZAR)（登録商標）として市販されている。ゲムシタビンは、Ｓ期にて、またＧ１／Ｓ境界を通る細胞の進行を遮断することによって、細胞期特異性を示す。ゲムシタビンは、シスプラチンと組み合わせて局所進行性非小細胞肺癌の治療に指示され、また単独で局所進行性膵癌の治療に指示される。
【０１６５】
メトトレキサート、Ｎ−［４［［（２，４−ジアミノ−６−プテリジニル）メチル］メチルアミノ］ベンゾイル］−Ｌ−グルタミン酸は、メトトレキサートナトリウムとして市販されている。メトトレキサートは、プリンヌクレオチドおよびチミジル酸の合成に必要とされるジヒドロ葉酸レダクターゼの阻害を介して、ＤＮＡの合成、修復、および／または複製を阻害することによって、特にＳ期に細胞周期作用を示す。メトトレキサートは、単剤として、または他の化学療法薬と組み合わせて、絨毛癌、髄膜白血病、非ホジキンリンパ腫、ならびに乳癌、頭部癌、頸部癌、卵巣癌、および膀胱癌の治療に指示される。
【０１６６】
トポイソメラーゼＩ阻害剤：カンプトテシンおよびカンプトテシン誘導体を含むカンプトテシン類は、トポイソメラーゼＩ阻害剤として入手可能または開発中である。カンプトテシン細胞傷害活性は、そのトポイソメラーゼＩ阻害活性に関連すると考えられている。カンプトテシンの例としては、限定されるものではないが、イリノテカン、トポテカン、および下記の７−（４−メチルピペラジノ−メチレン）−１０，１１−エチレンジオキシ−２０−カンプトテシンの種々の光学形態が挙げられる。
【０１６７】
イリノテカンＨＣｌ、（４Ｓ）−４，１１−ジエチル−４−ヒドロキシ−９−［（４−ピペリジノピペリジノ）カルボニルオキシ］−１Ｈ−ピラノ［３’，４’，６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−３，１４（４Ｈ，１２Ｈ）−ジオン塩酸塩は、注射液カンプトサール(CAMPTOSAR)（登録商標）として市販されている。イリノテカンは、その活性代謝物ＳＮ−３８とともにトポイソメラーゼＩ−ＤＮＡ複合体に結合する、カンプトテシンの誘導体である。細胞傷害性は、トポイソメラーゼＩ：ＤＮＡ：イリンテカンまたはＳＮ−３８の三元複合体と複製酵素との相互作用により引き起こされる回復不能な二本鎖切断の結果として生じると考えられている。イリノテカンは、結腸または直腸の転移性癌の治療に指示される。
【０１６８】
トポテカンＨＣｌ、（Ｓ）−１０−［（ジメチルアミノ）メチル］−４−エチル−４，９−ジヒドロキシ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’，６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−３，１４−（４Ｈ，１２Ｈ）−ジオン一塩酸塩は、注射液ハイカムチン(HYCAMTIN)（登録商標）として市販されている。トポテカンは、トポイソメラーゼＩ−ＤＮＡ複合体に結合して、ＤＮＡ分子のねじれ歪みに応答してトポイソメラーゼＩにより引き起こされる一本鎖切断の再連結を妨げるカンプトテシンの誘導体である。トポテカンは、転移性の卵巣癌および小細胞肺癌の第二選択治療に指示される。
【０１６９】
ホルモンおよびホルモン類似体：ホルモンおよびホルモン類似体は、ホルモンと癌の増殖および／または増殖の欠如との間に関係がある癌を処置するために有用な化合物である。癌処置に有用なホルモンおよびホルモン類似体の例としては、限定されるものではないが、小児の悪性リンパ腫および急性白血病の処置において有用なプレドニゾンおよびプレドニゾロンなどの副腎皮質ステロイド；副腎皮質癌およびエストロゲン受容体を含むホルモン依存性乳癌の処置において有用な、アミノグルテチミドおよびその他のアロマターゼ阻害剤、例えば、アナストロゾール、レトラゾール、ボラゾール、およびエキセメスタン；ホルモン依存性乳癌および子宮内膜癌の処置において有用な酢酸メゲストロールなどのプロゲクチン；前立腺癌および良性前立腺肥大の処置において有用なエストロゲン、アンドロゲン、および抗アンドロゲン作用薬、例えば、フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、酢酸シプロテロンおよび５α−レダクターゼ、例えば、フィナステリドおよびデュタステライド；ホルモン依存性乳癌およびその他の感受性癌の処置において有用なタモキシフェン、トレミフェン、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、ヨードキシフェンなどの抗エストロゲン作用薬、ならびに米国特許第５，６８１，８３５号、同第５，８７７，２１９号、および同第６，２０７，７１６号に記載されているものなどの選択的エストロゲン受容体調節薬（ＳＥＲＭＳ）；ならびに前立腺癌の処置のために黄体形成ホルモン（ＬＨ）および／または卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）の放出を刺激するゴナドトロピン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）およびその類似体、例えば、ＬＨＲＨアゴニストおよびアンタゴニスト、例えば、酢酸ゴセレリンおよびルプロリドが挙げられる。
【０１７０】
シグナル伝達経路阻害剤：シグナル伝達経路阻害剤は、細胞内変化を引き起こす化学プロセスを遮断または阻害する阻害剤である。本明細書で使用する場合、この変化は細胞増殖または分化である。本発明において有用なシグナル伝達阻害剤としては、限定されるものではないが、受容体チロシンキナーゼ、非受容体型チロシンキナーゼ、ＳＨ２／ＳＨ３ドメイン遮断剤、セリン／トレオニンキナーゼ、ホスファチジルイノシトール−３キナーゼ、ミオイノシトールシグナル伝達およびＲａｓ癌遺伝子の阻害剤が含まれる。
【０１７１】
いくつかのタンパク質チロシンキナーゼは、細胞増殖の調節に関与する種々のタンパク質の特定のチロシル残基のリン酸化を触媒する。このようなタンパク質チロシンキナーゼは、大きく受容体または非受容体型キナーゼとして分類することができる。
【０１７２】
受容体チロシンキナーゼは、細胞外リガンド結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびチロシンキナーゼドメインを有する膜貫通タンパク質である。受容体チロシンキナーゼは細胞増殖の調節に関与し、一般に、増殖因子受容体と呼ばれる。これらのキナーゼの多くの不適当なまたは制御を欠いた活性化、すなわち、例えば、過剰発現または突然変異による異常なキナーゼ増殖因子受容体活性は、制御を欠いた細胞増殖をもたらすことが示されている。よって、このようなキナーゼの異常な活性は悪性組織増殖に関連付けられている。結果として、このようなキナーゼの阻害剤は癌処置法を提供することができる。増殖因子受容体には、例えば、上皮細胞増殖因子受容体（ＥＧＦｒ）、血小板由来増殖因子受容体（ＰＤＧＦｒ）、ｅｒｂＢ２、ｅｒｂＢ４、ｒｅｔ、血管内皮増殖因子受容体（ＶＥＧＦｒ）、免疫グロブリン様および上皮細胞増殖因子同一性ドメインを有するチロシンキナーゼ(tyrosine kinase with immunoglobulin-like and epidermal growth factor homology domains)（ＴＩＥ−２）、インスリン増殖因子−Ｉ（ＩＧＦＩ）受容体、マクロファージコロニー刺激因子（ｃｆｍｓ）、ＢＴＫ、ｃｋｉｔ、ｃｍｅｔ、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）  受容体、Ｔｒｋ受容体（ＴｒｋＡ、ＴｒｋＢ、およびＴｒｋＣ）、エフリン（ｅｐｈ）受容体、およびＲＥＴ癌原遺伝子が挙げられる。増殖受容体のいくつかの阻害剤が開発下にあり、リガンドアンタゴニスト、抗体、チロシンキナーゼ阻害剤およびアンチセンスオリゴヌクレオチドが含まれる。増殖因子受容体および増殖因子受容体機能を阻害する薬剤は、例えば、Kath, John C., Exp. Opin. Ther. Patents (2000) 10(6):803-818; Shawver, et al DDT, Vol 2, No. 2 (February 1997);およびLofts, F. J., et al, Growth factor receptors as targets”, New Molecular Targets for Cancer Chemotherapy (Workman, Paul and Kerr, David, CRC press 1994, London)に記載されている。
【０１７３】
増殖因子受容体キナーゼでないチロシンキナーゼは、非受容体型チロシンキナーゼである。抗癌薬の標的または潜在的標的となる、本発明において有用な非受容体型チロシンキナーゼには、ｃＳｒｃ、Ｌｃｋ、Ｆｙｎ、Ｙｅｓ、Ｊａｋ、ｃＡｂｌ、ＦＡＫ（接着斑キナーゼ）、ブルトン型チロシンキナーゼ、およびＢｃｒ−Ａｂｌが含まれる。このような非受容体型キナーゼおよび非受容体型チロシンキナーゼ機能を阻害する薬剤は、Sinh, et al., Journal of Hematotherapy and Stem Cell Research, 8 (5): 465-80 (1999);およびBolen, et al., Annual review of Immunology, 15: 371-404 (1997)に記載されている。
【０１７４】
ＳＨ２／ＳＨ３ドメイン遮断剤は、ＰＩ３−Ｋ  ｐ８５サブユニット、Ｓｒｃファミリーキナーゼ、アダプター分子（Ｓｈｃ、Ｃｒｋ、Ｎｃｋ、Ｇｒｂ２）およびＲａｓ−ＧＡＰをはじめとする、様々な酵素またはアダプタータンパク質においてＳＨ２またはＳＨ３ドメイン結合を混乱させる薬剤である。抗癌薬の標的としてのＳＨ２／ＳＨ３ドメインは、Smithgall, T.E., Journal of Pharmacological and Toxicological Methods, 34(3) 125-32 (1995)に記載されている。
【０１７５】
セリン／トレオニンキナーゼの阻害剤、例えば、ＭＡＰキナーゼカスケード遮断剤、これには、Ｒａｆキナーゼ（ｒａｆｋ）、マイトジェンまたは細胞外調節キナーゼ(Mitogen or Extracellular Regulated Kinase)（ＭＥＫ）、および細胞外調節キナーゼ（ＥＲＫ）の遮断剤；およびＰＫＣ（α、β、γ、ε、μ、λ、ι、ζ）の遮断剤を含むタンパク質キナーゼＣファミリーメンバー遮断剤が含まれる。ＩｋＢキナーゼファミリー（ＩＫＫａ、ＩＫＫｂ）、ＰＫＢファミリーキナーゼ、ａｋｔキナーゼファミリーメンバー、およびＴＧＦβ受容体キナーゼ。このようなセリン／トレオニンキナーゼおよびそれらの阻害剤は、Yamamoto, et al., Journal of Biochemistry, 126 (5) 799-803 (1999) ; Brodt, et al., Biochemical Pharmacology, 60. 1101-1107 (2000); Massague, et al., Cancer Surveys, 27:41-64 (1996); Philip, et al., Cancer Treatment and Research, 78: 3-27 (1995), Lackey, et al., Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, (10) 223-226 (2000);米国特許第6,268,391号;およびMartinez-Iacaci, et al, Int. J. Cancer, 88(1), 44-52 (2000)に記載されている。
【０１７６】
ＰＩ３−キナーゼ、ＡＴＭ、ＤＮＡ−ＰＫ、およびＫの遮断剤を含むホスファチジルイノシトール(Phosphotidyl inositol)−３キナーゼファミリーメンバーの阻害剤もまた本発明において有用である。このようなキナーゼは、Abraham, R.T. (1996), Current Opinion in Immunology. 8 (3) 412-8; Canman, C.E., Lim, D.S. (1998), Oncogene 17 (25) 3301-3308; Jackson, S.P. (1997), International Journal of Biochemistry and Cell Biology. 29 (7):935-8; and Zhong, H. et al, Cancer Res, (2000) 60(6), 1541-1545に記載されている。
【０１７７】
また、ホスホリパーゼＣ遮断剤およびミオイノシトール類似体などのミオイノシトールシグナル伝達阻害剤も本発明において有用である。このようなシグナル阻害剤は、Powis, G., and Kozikowski A., (1994) New Molecular Targets for Cancer Chemotherapy ed. (Paul Workman and David Kerr, CRC press 1994, London)に記載されている。
【０１７８】
シグナル伝達経路阻害剤の別の群は、Ｒａｓ癌遺伝子の阻害剤である。このような阻害剤には、ファルネシルトランスフェラーゼ、ゲラニル−ゲラニルトランスフェラーゼ、およびＣＡＡＸプロテアーゼの阻害剤、ならびにアンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイムおよび免疫療法が含まれる。このような阻害剤は、野生型突然変異ｒａｓを含有する細胞においてｒａｓ活性化を遮断し、それにより抗増殖薬として作用することが示されている。Ｒａｓ癌遺伝子阻害は、Scharovsky, et al. (2000), Journal of Biomedical Science. 7(4) 292-8; Ashby, M.N. (1998), Current Opinion in Lipidology. 9 (2) 99-102;およびBioChim. Biophys. Acta, (1989) 1423(3):19-30で考察されている。
【０１７９】
前述のように、受容体キナーゼリガンド結合に対する抗体アンタゴニストもまたシグナル伝達阻害剤として働き得る。この群のシグナル伝達経路阻害剤には、受容体チロシンキナーゼの細胞外リガンド結合ドメインに対するヒト化抗体の使用が含まれる。例えば、Ｉｍｃｌｏｎｅ  Ｃ２２５  ＥＧＦＲ特異的抗体（Green,  et al, Monoclonal Antibody Therapy for Solid Tumors, Cancer Treat. Rev., (2000), 26(4), 269-286参照）ハーセプチン（登録商標）ｅｒｂＢ２抗体（”Tyrosine Kinase Signalling in Breast cancer:erbB Family Receptor Tyrosine Kinases”, Breast Cancer Res., 2000, 2(3), 176-183参照）；および２ＣＢ  ＶＥＧＦＲ２特異的抗体（Brekken, et al., “Selective Inhibition of VEGFR2 Activity by a monoclonal Anti-VEGF antibody blocks tumor growth in mice”, Cancer Res. (2000) 60, 5117-5124参照）。
【０１８０】
抗血管新生薬：非受容体型ＭＥＫ血管新生阻害剤(non-receptorMEKngiogenesis inhibitors)をはじめとする抗血管新生薬も有用であり得る。例えば、血管内皮細胞(vascular edothelial)増殖因子の効果を阻害するもの（例えば、抗血管内皮細胞増殖因子抗体ベバシズマブ［アバスチン（商標）］、およびその他の機構によって働く化合物（例えば、リノミド、インテグリンαｖβ３機能の阻害剤、エンドスタチンおよびアンギオスタチン）などの抗血管新生薬。
【０１８１】
免疫治療薬：免疫治療医計画に使用される薬剤もまた、式（Ｉ）の化合物との組合せにおいて有用であり得る。例えば患者の腫瘍細胞の免疫原性を高めるためのｅｘ−ｖｉｖｏおよびｉｎ−ｖｉｖｏアプローチを含む免疫療法アプローチ、例えば、インターロイキン２、インターロイキン４または顆粒球マクロファージコロニー刺激因子などのサイトカインによるトランスフェクション、Ｔ細胞アネルギーを低減するアプローチ、サイトカイントランスフェクト樹状細胞などのトランスフェクト免疫細胞を使用するアプローチ、サイトカイントランスフェクト腫瘍細胞株を使用するアプローチおよび抗イディオタイプ抗体を使用するアプローチ。
【０１８２】
アポトーシス促進薬：アポトーシス促進計画で使用される薬剤（例えば、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴヌクレオチド）も、本発明の組合せにおいて使用可能である。
【０１８３】
細胞周期シグナル伝達阻害剤：細胞周期シグナル伝達阻害剤は、細胞周期の制御に関与する分子を阻害する。サイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）と呼ばれるタンパク質キナーゼファミリーおよびそれらとサイクリンと呼ばれるタンパク質ファミリーとの相互作用が、真核細胞周期の進行を制御している。細胞周期の正常な進行には、種々のサイクリン／ＣＤＫ複合体の協調した活性化および不活化が不可欠である。細胞周期シグナル伝達のいくつかの阻害剤が開発下にある。例えば、ＣＤＫ２、ＣＤＫ４、およびＣＤＫ６をはじめとするサイクリン依存性キナーゼおよびそれらの阻害剤の例は、例えば、Rosania et al, Exp. Opin. Ther. Patents (2000) 10(2):215-230に記載されている。
【０１８４】
一実施形態において、本発明の組合せは、抗ＯＸ４０  ＡＢＰまたは抗体およびＴＬＲ４モジュレーターと、微小管阻害剤、白金錯体、アルキル化剤、抗生物質薬、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、代謝拮抗物質、トポイソメラーゼＩ阻害剤、ホルモンおよびホルモン類似体、シグナル伝達経路阻害剤、非受容体型チロシンＭＥＫ血管新生阻害剤(non-receptor tyrosine MEKngiogenesis inhibitors)、免疫治療薬、アポトーシス促進薬、および細胞周期シグナル伝達阻害剤から選択される少なくとも１種類の抗新生物薬とを含んでなる。
【０１８５】
一実施形態において、本発明の組合せは、抗ＯＸ４０  ＡＢＰまたは抗体およびＴＬＲ４モジュレーターと、ジテルペノイドおよびビンカアルカロイドから選択される微小管阻害剤である少なくとも１種類の抗新生物薬を含んでなる。
【０１８６】
さらなる実施形態において、抗新生物薬はジテルペノイドである。
【０１８７】
さらなる実施形態において、抗新生物薬はビンカアルカロイドである。
【０１８８】
一実施形態において、本発明の組合せは、抗ＯＸ４０  ＡＢＰまたは抗体およびＴＬＲ４モジュレーターと白金錯体である少なくとも１種類の抗新生物薬とを含んでなる。
【０１８９】
さらなる実施形態において、抗新生物薬は、パクリタキセル、カルボプラチン、またはビノレルビンである。
【０１９０】
一実施形態において、本発明の組合せは、抗ＯＸ４０  ＡＢＰまたは抗体およびＴＬＲ４モジュレーターとシグナル伝達経路阻害剤である少なくとも１種類の抗新生物薬とを含んでなる。
【０１９１】
さらなる実施形態において、シグナル伝達経路阻害剤は、増殖因子受容体キナーゼ、ＶＥＧＦＲ２、ＴＩＥ２、ＰＤＧＦＲ、ＢＴＫ、ｅｒｂＢ２、ＥＧＦｒ、ＩＧＦＲ−１、ＴｒｋＡ、ＴｒｋＢ、ＴｒｋＣ、またはｃ−ｆｍｓの阻害剤である。
【０１９２】
さらなる実施形態において、シグナル伝達経路阻害剤は、セリン／トレオニンキナーゼｒａｆｋ、ａｋｔ、またはＰＫＣ−ゼータの阻害剤である。
【０１９３】
さらなる実施形態において、シグナル伝達経路阻害剤は、キナーゼのｓｒｃファミリーから選択される非受容体チロシンキナーゼの阻害剤である。
【０１９４】
さらなる実施形態において、シグナル伝達経路阻害剤は、ｃ−ｓｒｃの阻害剤である。
【０１９５】
さらなる実施形態において、シグナル伝達経路阻害剤は、ファルネシルトランスフェラーゼおよびゲラニルゲラニルトランスフェラーゼの阻害剤から選択されるＲａｓ癌遺伝子の阻害剤である。
【０１９６】
さらなる実施形態において、シグナル伝達経路阻害剤は、ＰＩ３Ｋからなる群から選択されるセリン／トレオニンキナーゼの阻害剤である。
【０１９７】
さらなる実施形態において、シグナル伝達経路阻害剤は、二重ＥＧＦｒ／ｅｒｂＢ２阻害剤、例えば、Ｎ−｛３−クロロ−４−［（３−フルオロベンジル）オキシ］フェニル｝−６−［５−（｛［２−（メタンスルホニル）エチル］アミノ｝メチル）−２−フリル］−４−キナゾリンアミン（以下の構造）である。
【化６】
2018525378.tif 000008
【０１９８】
一実施形態において、本発明の組合せは、式Ｉの化合物またはその塩もしくは溶媒和物と細胞周期シグナル伝達阻害剤である少なくとも１種類の抗新生物薬とを含んでなる。
【０１９９】
さらなる実施形態において、細胞周期シグナル伝達阻害剤は、ＣＤＫ２、ＣＤＫ４またはＣＤＫ６の阻害剤である。
【０２００】
一実施形態において、本発明の方法および使用における哺乳動物は、ヒトである。
【０２０１】
示されるように、治療上有効な量の本発明の組合せ（抗ＯＸ４０  ＡＢＰまたは抗体およびＴＬＲ４モジュレーター）がヒトに投与される。一般に、投与される本発明の薬剤の治療上有効な量は、例えば、対象の齢および体重、処置を必要とする厳密な病態、病態の重篤度、処方物の性質、および投与経路を含むいくつかの因子によって異なる。最終的に、治療上有効な量は、主治医の裁量にある。
【０２０２】
以下の実施例は単に例示を意図し、本発明の範囲を何ら限定するものではない。
【実施例】
【０２０３】
実施例１：結腸癌のためのＣＴ−２６同系マウスモデルにおけるＯＸ８６単剤療法の処置
ＣＴ２６マウス結腸癌腫（ＣＴ２６．ＷＴ；ＡＴＣＣ＃ＣＲＬ−２６３８）細胞株をＡＴＣＣから入手した。それは当技術分野で公知のＮ−ニトロソ−Ｎ−メチルウレタン−（ＮＮＭＵ）により誘導された未分化結腸癌細胞株である。例えば、それはWang M, et al. Active immunotherapy of cancer with a nonreplicating recombinant fowlpox virus encoding a model tumor-associated antigen. J. Immunol. 154: 4685-4692, 1995 (PubMed: 7722321)に記載されている。ラットＩｇＧ１は、Ｂｉｏｘｃｅｌｌから入手した。ＯＸ８６（ハイブリドーマ１３４）細胞は、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｃｅｌｌ  ｃｕｌｔｕｒｅ  ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎから入手し、Ｈａｒｌａｎにより製造され；ＯＸ８６は、齧歯類で使用されるツール抗ＯＸ４０モノクローナル抗体の名称であり；それは齧歯類ＯＸ４０、例えばマウスＯＸ４０（受容体）に結合する齧歯類抗体である。
【０２０４】
ＯＸ８６およびラットＩｇＧ１は、希ＤＰＢＳに希釈した。
【０２０５】
腫瘍細胞の調製については、ＡＴＣＣ（カタログ番号ＣＲＬ−２６３８、ロット番号５９２２７０５２）からのＣＴ−２６（マウス結腸癌細胞）の凍結（−１４０℃）バイアルを解凍し、基本ＲＰＭＩ（１０％ＦＢＳ含有）培地で翌週にわたって培養した。
【０２０６】
ＣＴ−２６細胞（１２代目）をフラスコから完全培地に採取した。細胞を遠心分離し、ＲＰＭＩ（ＦＢＳ不含）に再懸濁させ、この工程を３回繰り返す。細胞密度および生存率をトリパンブルー排除により確認した。次に、細胞を所望の密度（５×１０５細胞／ｍＬ）に希釈し、氷上で維持した。
【０２０７】
漸増用量のＯＸ４０モノクローナル抗体（ｍＡｂ）ＯＸ８６を、腫瘍成長の低下におけるそれらの有効性に関して評価した。動物の体重を測定し、０日目に、マウス当たり０．５×１０５のＣＴ２６腫瘍細胞を右後四半部に接種した。３０％の失敗率（試験の開始時に大きすぎるか小さすぎる）を仮定して合計１３０個体のマウスに腫瘍細胞を接種し、目標は各群につきｎ＝１０とすることであった。腫瘍細胞接種の後、腫瘍成長および全体重を試験期間中、週に３回測定する。１０日目または１１日目に平均腫瘍体積がおよそ１００ｍｍ３になった際に無作為化を行った。無作為化日に開始し、動物に週２回、合計６用量で、ＯＸ８６  ｍＡｂまたはラットＩｇＧ１アイソタイプのｉ．ｐ．投与を行った。マウスは、腫瘍が２回の連続測定で＞２０００ｃｕ  ｍｍに達するまで、他の理由（すなわち、体重低下＞２０％、腫瘍上の潰瘍形成など）で試験から除かれるまで、または試験の終了まで試験に留めた。安楽死後、腫瘍を取り出し、フロー分析のための解離および／またはＩＨＣ分析のためのＦＦＰＥを行った。
【０２０８】
処置                    用量            マウス数
群１：０．５×１０５細胞／  ラットＩｇＧ１  ４００μｇ／マウス  １０〜１３
群２：０．５×１０５細胞／  ＯＸ８６        ４００μｇ／マウス  １０〜１３
群３：０．５×１０５細胞／  ＯＸ８６        ２００μｇ／マウス  １０〜１３
群４：０．５×１０５細胞／  ＯＸ８６        １００μｇ／マウス  １０〜１３
群５：０．５×１０５細胞／  ＯＸ８６          ５０μｇ／マウス  １０〜１３
【０２０９】
０日目：腫瘍細胞のｓｃ接種
１、４、６、８日目：動物の体重を測定し、腫瘍を確認し、存在すれば、測定した。
無作為化日（およそ１０日目）：動物を無作為化し、適当な群を表すケージに入れた。
試験終了まで週２回の投与：動物にＯＸ８６または抗ラットＩｇＧ１をｉｐ投与し、この場合、上記で示す量はマウス当たりのものであった。
試験終了まで週２回の測定：動物の体重を測定し、腫瘍を測定した。
【０２１０】
約１０個体の動物からの平均腫瘍重をとった。エラーバーはＳＥＭ分析を示す。Ｐ値は以下に基づいて計算した：Ｐ値は、生存曲線が全集団で同一であったという帰無仮説を検定した。言い換えれば、帰無仮説は、処置が生存率を変化させなかったというものである。生のｐ値をステップダウンボンフェローニ法により多重比較に向けに補正した。
【０２１１】
図１Ｂの結果を作成するために上記のプロトコールを用い、個々のマウスは図４に見出すことができる。これらの図は、ＣＴ−２６細胞を接種し、ラットＩｇＧ１で処置したマウスは予想通り衰えずに成長する腫瘍を発達させたが、ＯＸ４０モノクローナル抗体（ｍＡｂ）ＯＸ８６の投与は、ラットＩｇＧ１対照群と比較した場合に腫瘍成長の明らかな阻害をもたらし、生存率を増大させたことを示す。
【０２１２】
実施例２：ＴＬＲ４（ＣＲＸ−５２７）で処置した場合のＣＴ−２６試験の結果
ＴＬＲ４単剤療法および抗ｍＯＸ４０免疫療法とＴＬＲ４モジュレーターの組合せを検討するために、上記ＯＸ４０単剤療法処置プロトコールへのＣＲＸ−５２７などのＴＬＲ４モジュレーターの追加を用いた。
【０２１３】
処置                  用量（マウス当たり）          マウス数
群０：０．５×１０５細胞／  ビヒクル                        １０〜１３
群ａ：０．５×１０５細胞／  ＣＲＸ−５２７；４μｇ          １０〜１３
群ｂ：０．５×１０５細胞／  ＣＲＸ−５２７；２０μｇ        １０〜１３
群ｃ：０．５×１０５細胞／  ＣＲＸ−５２７；１００μｇ      １０〜１３
【０２１４】
０日目：腫瘍細胞のｓｃ接種
１、４、６、８日目：動物の体重を測定し、腫瘍を確認し、測定した。
無作為化日（およそ１０日目）：動物を無作為化し、適当な群を表すケージに入れた。
試験終了まで週２回の投与：動物に上記で示す（マウス当たり）量のＴＬＲ化合物ＣＲＸ−５２７またはビヒクルをｉｐ投与した。
試験終了まで週２回の測定：動物の体重を測定し、腫瘍を測定した。
【０２１５】
示された用量で図１Ａおよび図２〜６の結果を作成するために上記のプロトコールを用いた。ほとんど総ての場合で、０．５×１０５ＣＴ−２６結腸直腸腫瘍細胞を右後四半部に接種したＢａｌｂ／ｃマウスは腫瘍を発達させ、ビヒクル（２％グリセロール）のみをｉ．ｐ．注射した場合に予想通り進行した。ＴＬＲ４アゴニストＣＲＸ−５２７（図２〜５）およびＣＲＸ−６０１（図６）は、ビヒクル処置動物に比べて腫瘍成長を用量依存的に阻害した。用量依存は、このモデルの生存率にも見られた。
【０２１６】
実施例３：ＯＸ４０（すなわち、齧歯類ＯＸ４０受容体に対する抗体ＯＸ−８６）およびＣＲＸ−５２７での併用処置
以下の処置計画を行った：
用量               処置１        処置２          マウス数
群1:0.5×105細胞/    ラットIgG1    薬物ビヒクル     10〜13
群2:0.5×105細胞/    OX86 50μg    薬物ビヒクル     10〜13
群3:0.5×105細胞/    ラットIgG1    CRX-527 5ug      10〜13
群4:0.5×105細胞/    ラットIgG1    CRX-527 25ug     10〜13
群5:0.5×105細胞/    OX86 50μg    CRX-527 5ug      10〜13
群6:0.5×105細胞/    OX86 50μg    CRX-527 25ug     10〜13
【０２１７】
０日目：腫瘍細胞のｓｃ接種
１、４、６、８日目：動物の腫瘍を確認し、存在すれば、測定した。
試験登録日（およそ１０日目）：動物を無作為化し、処置１を施した。
登録後週２回：登録日に開始し、マウスに週２回、合計６用量でｉ.ｐ.投与を行った。
試験終了まで週２回：動物の体重を測定し、腫瘍を測定した。
【０２１８】
ＯＸ８６処置をＴＬＲ４モジュレーター処置（ＣＲＸ−５２７）と組み合わせた場合、マウスは、いずれかの処置単独よりも腫瘍量により大きな減少を示し、より長く生存した。
【０２１９】
実施例４：抗ｍＯＸ４０Ｒ抗体および式ＩのＴＬＲ４標的化分子での単剤療法および併用処置
マウスにＯＸ４０抗体；式１の化合物（式Ｉａの化合物を含む、ＣＲＸ−５２７、ＣＲＸ−５４７、およびＣＲＸ−６０１（ＴＬＲ４アゴニスト）または両方の組合せを投与した。各処置は有意な抗腫瘍活性を有する。
【０２２０】
少なくとも２つの重要な発見がある。第一に、マウスにおいて、抗ＯＸ４０Ｒまたは抗ＯＸ４０抗体とＴＬＲ４アゴニストの組合せはそれぞれ、非処置対照群に比べて確立されたＣＴ−２６腫瘍の成長を遅延させた。第二に、マウスにおいて、単剤療法処置に比べてＴＬＲ４アゴニストと抗ＯＸ４０Ｒ抗体の組合せで有意な抗腫瘍効果が見られた。
【０２２１】
実施例５：ＯＸ４０Ｒ  ＡＢＳ（すなわち、齧歯類ＯＸ４０受容体に対する抗体である抗ｍＯＸ４０受容体抗体クローンＯＸ−８６）およびＣＲＸ−６０１での併用処置
材料および方法
ｉｎ  ｖｉｖｏ抗腫瘍有効性試験
ＴＬＲ４アゴニスト（ＣＲＸ６０１）のｉｎ  ｖｉｖｏ抗腫瘍有効性を、マウスＣＴ−２６結腸癌同系固形腫瘍モデルで、単剤療法としておよびラット(rate)抗マウスＯＸ４０抗体クローンＯＸ８６と組み合わせて評価した。７〜８週齢の雌Ｂａｌｂ／ｃマウス（ＢＡＬＢ／ｃＡｎＮＣｒｌ、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ）をこれらの試験に使用した。マウスＣＴ−２６結腸癌細胞（ＡＴＣＣカタログ番号ＣＲＬ−２６３８  ロット番号５９２２７０５２）を５％ＣＯ２の加湿３７℃インキュベーター内、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を添加したＲＰＭＩ増殖培地で培養した。対数増殖として培養したＣＴ−２６細胞を組織培養フラスコから採取し、５分間、４℃にて４５０ｘｇで１０分間遠心分離して細胞をペレットとした。上清をデカントし、細胞をカルシウムおよびマグネシウム不含の氷冷リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄し、再び、５分間、４℃にて４５０ｘｇで１０分間遠心分離して細胞をペレットとした。細胞をＦＢＳ不含の無菌ＲＰＭＩ培地に再懸濁させ、５００，０００細胞／ｍｌの細胞濃度に調整した。１００μｌの細胞株を皮下注射により各Ｂａｌｂ／ｃマウスの右側腹部に移植した。７日または１１日後、平均腫瘍サイズがおよそ１００ｍｍ３に達した際に、マウスを腫瘍サイズに従って試験コホートに無作為化し、初回処置用量を与えた。ＴＬＲ４アゴニスト（ＣＲＸ−６０１）またはビヒクルを示されたように全身静注または直接腫瘍内注射脈内投与により投与した。静脈投与および腫瘍内投与に使用したＣＲＸ−６０１ビヒクルは、示されている場合０．５％であった。ＣＲＸ−６０１リポソーム腫瘍内投与の場合、ＧＳＫロット番号１７８３−１５７−Ｂにより調製したＤＯＰＣ／ＣＨＯＬリポソームを使用した。ラット抗マウスＯＸ４０受容体抗体（クローンＯＸ８６）（ラットハイブリドーマＧｒｉｔｓ  ＩＤ  ５０７７６、ＢＰ２３２  ２０１３から所内で発現させ、精製した）またはラットＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体（ＢｉｏＸＣｅｌｌカタログ番号ＢＥ００８８）を、週２回、合計６用量で与える腹腔内注射により投与した。ノギス測定を週に３回行って腫瘍成長を評価し、＜２，０００ｍｍ３の腫瘍を有するマウスを３０日からおよそ１１５日まで試験で維持した。２回の連続測定で＞２，０００ｍｍ３の腫瘍を有するマウスまたは開放潰瘍を形成した腫瘍を有するマウスは試験から除いた。腫瘍体積は、式（０．５２）×（長さ）×（幅２）を用いて計算した。試験６および７で、腫瘍不含マウスの元の接種部位とは反対の側腹部に、上記のようにＣＴ−２６腫瘍細胞で再チャレンジを行い、上記のように腫瘍成長をモニタリングした。試験は総て、実験動物の管理、福祉および処置に関するＧＳＫポリシーに従って行い、ＧＳＫの所内動物実験委員会(Institutional Animal Care and Use Committee)により審査されている。
【０２２２】
免疫表現型分類およびサイトカイン分析
初回ＣＲＸ−６０１投与後０日目、１日目および８日目にＣＴ−２６マウスから腫瘍、血液および組織を採取した。マウス白血球および解離させた腫瘍単細胞を、免疫表現型分類向けの多色フローサイトメトリー分析のために表面または細胞内染色抗体で新たに染色した。同じ試験からのマウス血漿サンプルを用いてマルチプレックスサイトカイン分析を行った。
【０２２３】
統計分析
試験１〜４に関して、腫瘍成長阻害の有意性を決定するために、初回投与後１１日目（試験１）、１５日目（試験２および３）、または１９日目（試験４）の腫瘍体積を、異なる処置群の間で比較した。分析前に、異なる処置群の不等分散性のために腫瘍体積を自然対数に変換した。次に、これらの対数変換データに対してＡＮＯＶＡの後にペアワイズ比較を行った。ＳＡＳ９．３およびＲ３．０．２分析ソフトウエアを使用した。所与の時点での異なる処置群の生存確率を評価するためにカプラン・マイヤー（ＫＭ）法を行った。生存分析のためのイベントは腫瘍体積２０００ｍｍ３または腫瘍の潰瘍化のいずれか早い方であった。打ち切り体積までの正確な時間は、対数腫瘍体積と２つの観測日（打ち切り体積を超えた最初の観測と打ち切り体積直前の一観測）の間に直線を当てはめることにより評価した。エンドポイントまでの中央時間およびその対応する９５％信頼区間を計算した。次に、ＫＭ生存曲線が任意の２群の間で統計的に異なったかどうかをログランク検定により検定した。処置群間での生存分析によるイベントまでの日数の比較および示される日数での対数変換した腫瘍体積の比較から、生のｐ値ならびに偽陽性率（ＦＤＲ）補正ｐ値を決定した。ＦＤＲ補正ｐ値≦０．０５を有するものを統計的に有意であるとした。
【０２２４】
試験６および７に関して、腫瘍成長阻害の有意性を決定するために、初回投与の１２日後の腫瘍体積を異なる処置群の間で比較した。処置を標準的ＡＮＯＶＡ法とその後の多重度に関するＦＤＲ補正により比較した。等分散性（等分散）のために応答は体積の平方根である。所与の時点で異なる処置群の生存確率を評価するためにカプラン・マイヤー（ＫＭ）法を行った。これらの生存分析について、「死亡」は、腫瘍体積打ち切り（２０００ｍｍ３）を超えることを意味する。「生存率」は、「死亡」していないマウスの割合を意味し、「生存期間」は、「死亡」までの日数を意味する。マウスが２つの測定日の間で体積打ち切りを超えた場合は、「死亡」の日を線形補間により評価した。マウスが２回以上体積打ち切りを超えた場合は、最初に超えた際を使用した。処置は２処置の標準的ログランク検定により比較した。ログランクｐ値は、ＦＤＲ（偽陽性率）法を用いて多重度に関して補正した。有意性はＦＤＲ≦０．０５と定義した。計算およびグラフは総てＲソフトウエア、バージョン３．２．３を用いて行った。
【０２２５】
結果
６つの試験（試験１〜４および試験６〜７）は、ＣＲＸ−６０１およびラット抗マウスＯＸ４０受容体抗体クローンＯＸ８６により単独および互いに組み合わせたものの両方で処置したマウスにおける腫瘍サイズおよび生存期間を評価するために行った。１つのさらなる試験（以下の試験５）は、ＣＲＸ−６０１およびラット抗マウスＯＸ４０受容体抗体クローンＯＸ８６により単独および互いに組み合わせたものの両方で処置したマウスにおけるサイトカイン放出およびＴ細胞の活性化を評価するために行った。
【０２２６】
試験１
腫瘍内投与のＣＲＸ−６０１単剤療法活性を決定するために、マウスに５×１０４のＣＴ−２６細胞を接種し、材料および方法に記載の通りに腫瘍サイズがおよそ１００ｍｍ３に達した際に、以下に挙げた１０群に無作為化した。
【０２２７】
群１：週２回、合計６用量で腫瘍内投与されるビヒクル
群２：週２回、合計６用量で腫瘍内投与されるＣＲＸ−６０１  ０．１μｇ／マウス
群３：週２回、合計６用量で腫瘍内投与されるＣＲＸ−６０１  １μｇ／マウス
群４：週２回、合計６用量で腫瘍内投与されるＣＲＸ−６０１  １０μｇ／マウス
群５：ＣＲＸ−６０１  ５０μｇ／マウスの単回投与
【０２２８】
腫瘍内投与では、ＣＴ−２６同系マウス腫瘍モデルにおけるＴＬＲ４アゴニストＣＲＸ−６０１に関して用量依存的抗腫瘍活性（腫瘍成長阻害により経時的に測定）が見られた。１０μｇおよび５０μｇを投与したマウスは初回投与後１１日目に、ビヒクルに比べて統計的に有意な（＊ｐ値≦０．０５）腫瘍成長阻害を示した。結果を図１８に示す。
【０２２９】
本試験においてＴＬＲ４アゴニストＣＲＸ−６０１で処置したマウスはまた、生存期間においても統計的に有意な増大を示した。５０μｇを投与したマウスは、試験が終了したＣＴ２６腫瘍細胞接種後４２日までに、生存にビヒクルに比べて統計的に有意な（＊ｐ値≦０．０５）増加を示した。この日において、５０μｇおよび１０μｇ  ＣＲＸ−６０１群のマウスだけが試験に残っていた。５０μｇ群の４個体のうち３個体のマウスは無腫瘍(tunor-free)であり、４個体目のマウスは８５４．１９ｍｍ３の腫瘍体積を示した。１０μｇ群で残った１個体のマウスは無腫瘍(tunor-free)であった（図１９参照）。
【０２３０】
試験２
静脈投与でのＣＲＸ−６０１単剤療法活性を決定するために、マウスに５×１０４のＣＴ−２６細胞を接種し、材料および方法に記載の通りに腫瘍サイズがおよそ１００ｍｍ３に達した際に、以下に挙げた１０群に無作為化した。
【０２３１】
群１：週２回、合計６用量で静脈投与されるビヒクル
群２：週２回、合計６用量で静脈投与されるＣＲＸ−６０１  １μｇ／マウス
群３：週２回、合計６用量で静脈投与されるＣＲＸ−６０１  １０μｇ／マウス
群４：ＣＲＸ−６０１  １００μｇ／マウスの単回投与
【０２３２】
静脈投与では、このＣＴ−２６同系マウス腫瘍モデルにおけるＴＬＲ４アゴニストＣＲＸ−６０１に関して用量依存的抗腫瘍活性（腫瘍成長阻害により経時的に測定）が見られた。１０μｇおよび１００μｇを投与したマウスは初回投与後１５日目に、ビヒクルに比べて統計的に有意な（＊ｐ値≦０．０５）腫瘍成長阻害を示した（図２０参照）。
【０２３３】
このＣＴ−２６同系マウス腫瘍モデルにおいてＴＬＲ４アゴニストＣＲＸ−６０１で処置したマウスはまた、生存においてビヒクルに比べて統計的に有意な増大を示した。１００μｇを投与したマウスは、ＣＴ−２６腫瘍細胞接種後３２日目に試験が終了した際に、生存にビヒクルに比べて統計的に有意な（＊ｐ値≦０．０５）増加を示した。この群で残っていた３個体のうち１個体のマウスは無腫瘍(tunor-free)であったが、他のマウスは１５００．４９および９６２．６１ｍｍ３の腫瘍体積を示した。１０μｇ用量群で残った１個体のマウスは１８８．０ｍｍ３の腫瘍体積を持っていた（図２１参照）。
【０２３４】
試験３
単独および抗ＯＸ４０との組合せにおけるＣＲＸ−６０１活性を決定するために、マウスに５×１０４のＣＴ−２６細胞を接種し、材料および方法に記載の通りに腫瘍サイズがおよそ１００ｍｍ３に達した際に、以下の１０群に無作為化した。
【０２３５】
群１：週１回、合計３用量で静脈投与されるビヒクル
群２：週２回、合計６用量で腹腔内投与されるラットＩｇＧ１  １０μｇ／マウス
群３：週２回、合計６用量で投与されるＯＸ８６  ２５μｇ／マウス
群４：週１回、合計３用量で静脈投与されるＣＲＸ−６０１  １０μｇ／マウス
群５：週１回、合計３用量で静脈投与されるＣＲＸ−６０１  ２５μｇ／マウス
群６：週１回、合計３用量で静脈投与されるＣＲＸ−６０１  １０μｇ／マウス＋週２回、合計６用量で腹腔内投与されるＯＸ８６  ２５μｇ／マウス
群７：週１回、合計３用量で静脈投与されるＣＲＸ−６０１  ２５μｇ／マウス＋週２回、合計６用量で腹腔内投与されるＯＸ８６  ２５μｇ／マウス
【０２３６】
このＣＴ−２６同系マウスモデルにおいて、週２回、合計６用量で静脈投与される２５μｇ／マウスのラット抗マウスＯＸ４０受容体抗体（クローンＯＸ−８６）、１回／週、合計３用量で静脈投与される１０μｇまたは２５μｇ／マウスのＴＬＲ４アゴニストＣＲＸ−６０１、および両方の組合せに関して抗腫瘍活性を評価した（腫瘍成長阻害により経時的に測定）。週１回投与される準最適単剤療法である１０μｇ／マウスまたはは２５μｇ／マウスのＣＲＸ−６０１用量は、単独で投与した場合、ビヒクルに比べて統計的に有意な腫瘍成長阻害を示さず、ラットＩｇＧ１に比べてＯＸ８６  ２５μｇ／マウスの投与も統計的に有意な腫瘍成長阻害を示さなかった。しかしながら、週２回、合計６用量で投与される２５μｇ／マウスのＯＸ８６と組み合わせて、週１回、ＣＲＸ６０１を１０μｇまたは２５μｇ／マウスの合計３用量で静脈投与した場合には、初回投与の１５日後にビヒクルおよびラットＩｇＧ１対照に比べて、また、ＣＲＸ６０１およびＯＸ８６単剤療法に比べて統計的に有意な（＊ｐ値≦０．０５）腫瘍成長阻害を示した（図２２参照）。
【０２３７】
このＣＴ−２６同系マウスモデル試験において、週２回、合計６用量で静脈投与される２５μｇ／マウスのラット抗マウスＯＸ４０受容体抗体（クローンＯＸ−８６）、１回／週、合計３用量で静脈投与される１０μｇまたは２５μｇのＴＬＲ４アゴニストＣＲＸ−６０１、および両方の組合せで処置したマウスに関する生存の優位性も判定した。試験が終了したＣＴ−２６腫瘍細胞接種後１０６日目に、１回／週、合計３用量で静脈投与されるＣＲＸ−６０１  １０μｇおよび２５μｇ／マウスを２回／週、合計６用量で投与される２５μｇ／マウスＯＸ８６と組み合わせた場合、ビヒクルおよびラットＩｇＧ１対照の両方に比べて、また、ＯＸ８６およびＣＲＸ−６０１単剤療法に比べて統計的に有意な（＊ｐ値≦０．０５）生存の増大を示した。ＣＲＸ−６０１  ２５μｇ／マウス＋ＯＸ８６群で残っていた３個体のマウスが無腫瘍(tunor-free)であり、ＣＲＸ−６０１  １０μｇ／マウス＋ＯＸ８６群の１個体のマウスが無腫瘍(tunor-free)であった（図２３参照）。
【０２３８】
試験４
試験３を、５μｇ／マウスのＣＲＸ−６０１を単独でおよび抗ＯＸ４０と組み合わせて用いて繰り返した。マウスに５×１０４のＣＴ−２６細胞を接種し、材料および方法に記載の通りに腫瘍サイズがおよそ１００ｍｍ３に達した際に、以下の１０群に無作為化した。
【０２３９】
群１：週１回、合計３用量で静脈投与されるビヒクル＋週２回、合計６用量で腹腔内投与されるラットＩｇＧ１  ２５μｇ／マウス
群２：週１回、合計３用量で静脈投与されるＣＲＸ−６０１  ２５μｇ／マウス
群３：週１回、合計３用量で静脈投与されるビヒクル＋週２回、合計６用量で腹腔内投与されるＯＸ８６  ２５μｇ／マウス
群４：週１回、合計３用量で静脈投与されるＣＲＸ−６０１  ２５μｇ／マウス    ＋週２回、合計６用量で腹腔内投与されるラットＩｇＧ１  ２５μｇ／マウス
群５：週１回、合計３用量で静脈投与されるＣＲＸ−６０１  ２５μｇ／マウス＋週２回、合計６用量で腹腔内投与されるＯＸ８６  ２５μｇ／マウス
【０２４０】
ＣＴ−２６同系マウスモデルにおいて、週２回、合計６用量で静脈投与される２５μｇ／マウスのラット抗マウスＯＸ４０受容体抗体（クローンＯＸ−８６）、または１回／週、合計３用量で静脈投与される２５μｇ／マウスのＴＬＲ４アゴニストＣＲＸ−６０１、および両方の組合せに関して抗腫瘍活性が見られた（腫瘍成長阻害により経時的に測定）。週１回、２５μｇ／マウス、合計３用量で静脈投与されるＣＲＸ６０１を週２回、合計６用量で投与される２５μｇ／マウスのＯＸ８６と組み合わせた場合、ＣＲＸ６０１およびＯＸ８６単剤療法に比べて統計的に有意な（＊ｐ値≦０．０５）腫瘍成長阻害を示した（図２４参照）。
【０２４１】
ＣＴ−２６同系マウスモデルにおいて、週２回、合計６用量で静脈投与される２５μｇ／マウスのラット抗マウスＯＸ４０受容体抗体（クローンＯＸ−８６）、または１回／週、合計３用量で静脈投与される２５μｇ／マウスのＴＬＲ４アゴニストＣＲＸ−６０１、および両方の組合せで処置したマウスに関して生存曲線を評価した。１回／、合計３用量で静脈投与されるＣＲＸ６０１  ２５μｇ／マウスを２回／週、合計６用量で投与される２５μｇ／マウスのＯＸ８６と組み合わせた場合、単剤療法に比べて統計的に有意な（ｐ値≦０．０５）生存の増大を示した。この統計分析は、残っている総てのマウスが無腫瘍（tunor-free）であった腫瘍細胞接種後６４日目に行った。これらのマウスを１１１日目の試験終了までモニタリングした。この日に、群５  ＣＲＸ−６０１  ２５μｇ／マウス＋ＯＸ８６の７個体のマウスが無腫瘍（tunor-free）のままであり、群３  ＣＲＸ−６０１  ２５μｇ／マウス＋ラットＩｇＧ１の２個体のマウスが無腫瘍のままであり、群４ビヒクル＋ＯＸ８６の１個体のマウスが無腫瘍のままであった（図２５参照）。
【０２４２】
試験５
結果はコホート当たり５個体の動物の平均である。
【０２４３】
結腸癌のＣＴ−２６同系マウスモデルにおいて１０μｇのＴＬＲ４アゴニストＣＲＸ−６０１、２５μｇのラット抗マウスＯＸ４０受容体抗体（クローンＯＸ−８６）、および両方の組合せで処置したマウスにおいて、投与後８日目に測定される白血球および免疫活性化を評価した。ＣＲＸ−６０と抗ＯＸ８６の組合せで処置したマウスにおいて腫瘍浸潤白血球の有意な増加が見られた。ＣＲＸ−６０１と抗ＯＸ８６の組合せで処置したマウスでは、循環ＣＤ４  Ｔ細胞上のＴ細胞活性化マーカーＣＤ２５の発現の相乗的増加が見られた。ＣＲＸ−６０１と抗ＯＸ８６の組合せで処置したマウスでは、循環ＣＤ４  Ｔ細胞上のＴ細胞活性化関連マーカーＣＴＬＡ４、ＰＤ１およびＩＣＯＳの相乗的増加が見られた。結果を図２６Ａ〜Ｃに示す。
【０２４４】
結腸癌のＣＴ−２６同系マウスモデルにおいて、１０μｇのＴＬＲ４アゴニストＣＲＸ−６０、ラット抗ｍＯＸ４０Ｒ抗体（ＯＸ−８６）、および両方の組合せで処置されたマウスにおいて、投与後１日目および８日目に測定した場合、免疫活性化サイトカインＴＮＦαおよびＩＬ−１２ｐ７０の増加が見られた。図２７Ｂに示されるように、ＩＬ−１２ｐ７０は投与後８日目にのみ検出可能であった。結果を図２７Ａ〜Ｂに示す。
【０２４５】
試験６
ＣＲＸ−６０１が０．５％グリセロール／４％デキストロースビヒクル中で（ＩＶ）または腫瘍内（ＩＴ）投与される場合に、ＣＲＸ−６０１活性単独と抗ＯＸ４０との組合せを比較するために、マウスに５×１０４のＣＴ−２６細胞を接種し、材料および方法に記載の通りに腫瘍サイズがおよそ１００ｍｍ３に達した際に、以下の１０群に無作為化した。
【０２４６】
群１：週１回、合計３用量で静脈投与されるビヒクル＋週２回、合計６用量で腹腔内投与されるラットＩｇＧ１  ２５μｇ／マウス
群２：週１回、合計３用量で静脈投与されるＣＲＸ−６０１  ２５μｇ／マウス＋週２回、合計６用量で腹腔内投与されるラットＩｇＧ１  ２５μｇ／マウス
群３：週２回、合計６用量で腹腔内投与されるＯＸ８６  ２５μｇ／マウス
群４：週１回、合計３用量で静脈投与されるＣＲＸ−６０１  ２５μｇ／週２回、合計６用量で腹腔内投与されるマウス＋ＯＸ８６  ２５μｇ／マウス
群５：週１回、合計３用量で腫瘍内投与されるビヒクル＋週２回、合計６用量で腹腔内投与されるラットＩｇＧ１  ２５μｇ／マウス
群６：週１回、合計３用量で腫瘍内投与されるＣＲＸ−６０１  ２５μｇ／マウス＋週２回、合計６用量で腹腔内投与されるラットＩｇＧ１  ２５μｇ／マウス
群７：週１回、合計３用量で腫瘍内投与されるＣＲＸ−６０１  ２５μｇ／週２回、合計６用量で腹腔内投与されるマウス＋ＯＸ８６  ２５μｇ／マウス
【０２４７】
処置群に関して抗腫瘍活性を評価した（腫瘍成長阻害により経時的に測定）。２５μｇ／マウスの準最適単剤療法ＣＲＸ−６０１用量は、静脈投与（群２）または腫瘍内投与（群６）された場合に、対応する対照群（それぞれ群１および群５）に比べて統計的に有意な腫瘍成長阻害を示さなかった。単剤療法ＯＸ８６  ２５μｇ／マウス投与は、対照群１および５のいずれと比べても統計的に有意な腫瘍成長阻害を示さなかった。しかしながら、ＯＸ８６  ２５μｇ／マウスＩＰ投与と組み合わせて静脈内投与されるＣＲＸ６０１  ２５μｇ／マウス投与は（群４）、初回投与１２日後に、対照群１およびＯＸ８６単剤療法群３に比べて統計的に有意な（＊ｐ値≦０．０５）腫瘍成長阻害を示した。ＯＸ８６  ２５μｇ／マウスＩＰ投与と組み合わせて腫瘍内投与されるＣＲＸ６０１  ２５μｇ／マウス投与（群７）もまた、初回投与１２日後に、対照群５およびＯＸ８６単剤療法群３に比べて統計的に有意な（＊ｐ値≦０．０５）腫瘍成長阻害を示した。ＯＸ８６  ２５μｇ／マウスＩＰと、静脈投与されるＣＲＸ６０１  ２５μｇ／マウス（群４）または腫瘍内投与（群７）との組合せは、この試験の腫瘍成長阻害に関してＣＲＸ６０１単剤療法群２または群６に比べて統計的に有意でなかった（図２８および２９参照）。
【０２４８】
このＣＴ−２６同系マウスモデルで、試験生存有意性も決定した。初回投与６８日後に、ＯＸ８６  ２５μｇ／マウスＩＰと静脈投与されるＣＲＸ６０１  ２５μｇ／マウス（群４）または腫瘍内投与（群７）との組合せは、それぞれその対照群１または群５に比べて統計的に有意な（＊ｐ値≦０．０５）生存の増大を示した。ＣＲＸ−６０１の静脈投与とＯＸ８６  ＩＰの組合せ（群４）は、１０個体のうち６個体のマウスを無腫瘍(tunor-free)とし、ＣＲＸ−６０１腫瘍内投与とＯＸ８６  ＩＰの組合せ（群７）は、１０個体のうち３個体のマウスを無腫瘍(tunor-free)とした。単剤療法群は、対照群に比べて統計的に有意な生存の増大を示さなかった（図３０および３１参照）。６８日目に、ナイーブ対照マウスおよび完全退縮無腫瘍(tunor-free)マウスにＣＴ２６腫瘍細胞の再チャレンジを行った。ナイーブ対照マウスでは予想通りＣＴ２６腫瘍が成長したが、処置群マウスでは拒絶され、腫瘍成長は見られなかった。このことは、ＣＲＸ−６０１またはＣＲＸ−６０１とＯＸ８６処置の組合せによる持続的抗腫瘍記憶免疫を示唆する（図３２参照）。６８日目のＯＸ８６単剤療法群３の２個体のマウスは２７．８６および１５７６．２７ｍｍ３の腫瘍体積を持っており、再チャレンジはしなかった。
【０２４９】
試験７
ＣＲＸ−６０１を、０．５％グリセロール／４％デキストロースビヒクルを用いて静脈（ＩＶ）投与する、またはＤＯＰＣ／ＣＨＯＬリポソーム処方物を用いて腫瘍内（ＩＴ）投与する場合の、ＣＲＸ−６０１活性単独および抗ＯＸ４０との組合せを比較する場合に、マウスに５×１０４のＣＴ−２６細胞を接種し、材料および方法に記載の通りに腫瘍サイズがおよそ１００ｍｍ３に達した際に、以下の１０群に無作為化した。
【０２５０】
群１：週１回、合計３用量で静脈投与されるビヒクル（０．５％グリセロール／４％デキストロース）＋週２回、合計６用量で腹腔内投与されるラットＩｇＧ１  ２５μｇ／マウス
群２：週１回、合計３用量で静脈投与されるＣＲＸ−６０１  ２５μｇ／マウス（０．５％グリセロール／４％デキストロース中）＋週２回、合計６用量で腹腔内投与されるラットＩｇＧ１  ２５μｇ／マウス
群３：週１回、合計３用量で静脈投与されるビヒクル（０．５％グリセロール／４％デキストロース）＋週２回、合計６用量で腹腔内投与されるＯＸ８６  ２５μｇ／マウス
群４：週１回、合計３用量で静脈投与されるＣＲＸ−６０１  ２５μｇ／マウス（０．５％グリセロール／４％デキストロース中）＋週２回、合計６用量で腹腔内投与されるＯＸ８６  ２５μｇ／マウス
群５：週１回、合計３用量で腫瘍内投与されるビヒクル（ＤＯＰＣ／ＣＨＯＬリポソーム）＋週２回、合計６用量で腹腔内投与されるラットＩｇＧ１  ２５μｇ／マウス
群６：週１回、合計３用量で腫瘍内投与されるビヒクル（ＤＯＰＣ／ＣＨＯＬリポソーム）＋週２回、合計６用量で腹腔内投与されるＯＸ８６  ２５μｇ／マウス
群７：週１回、合計３用量で腫瘍内投与されるＣＲＸ−６０１  ２５μｇ／マウス（ＤＯＰＣ／ＣＨＯＬリポソーム中）＋週２回、合計６用量で腹腔内投与されるラットＩｇＧ１  ２５μｇ／マウス
群８：週１回、合計３用量で腫瘍内投与されるＣＲＸ−６０１  ２５μｇ／マウス（ＤＯＰＣ／ＣＨＯＬリポソーム中）＋週２回、合計６用量で腹腔内投与されるＯＸ８６  ２５μｇ／マウス
【０２５１】
初回投与１２日後に処置群に関して抗腫瘍活性を評価した（腫瘍成長阻害により経時的に測定）。２５μｇ／マウスの準最適単剤療法ＣＲＸ−６０１投与は、静脈投与（群２）または腫瘍内投与（群７、リポソーム処方物）した場合、対応する対照群（それぞれ群１および群５）に比べて統計的に有意な（＊ｐ値≦０．０５）腫瘍成長阻害を示した。単剤療法ＯＸ８６  ２５μｇ／マウスＩＰ投与群３および群７も、対照群１および５に比べて統計的に有意な（＊ｐ値≦０．０５）腫瘍成長阻害を示した。ＯＸ８６  ２５μｇ／マウスＩＰ投与と組み合わせて静脈内投与されるＣＲＸ６０１  ２５μｇ／マウス投与（群４）は、対照群１およびＯＸ８６単剤療法群３に比べて統計的に有意な（＊ｐ値≦０．０５）腫瘍成長阻害を示した。ＯＸ８６  ２５μｇ／マウスＩＰ投与と組み合わせてＤＯＰＣ／ＣＨＯＬリポソーム処方物で腫瘍内投与されるＣＲＸ６０１  ２５μｇ／マウス投与（群８）も、対照群５に比べて統計的に有意な（＊ｐ値≦０．０５）腫瘍成長阻害を示した。静脈投与されるＣＲＸ６０１  ２５μｇ／マウス（群４）または腫瘍内投与（群８）とＯＸ８６  ２５μｇ／マウスＩＰとの組合せは、本試験で１２日目に腫瘍成長阻害に関して、ＣＲＸ６０１単剤療法群２または群７に比べて統計的に有意でなかった（図３３および３４参照）。
【０２５２】
このＣＴ−２６同系マウスモデル試験で、初回投与８０日後の生存の優位性も判定した。単剤療法ＩＶとして投与した（群２）、またはＯＸ８６  ＩＰと組み合わせてＩＶ投与した（群４）ＣＲＸ６０１は、対照群１に比べて統計的に有意な（＊ｐ値≦０．０５）生存の増大を示した。群２および４では、１０個体のうち５個体のマウスがそれぞれ完全な腫瘍退縮を示した（図３５参照）。単剤療法としてＤＯＰＣ／ＣＨＯＬリポソーム処方物を用いて腫瘍内投与したＣＲＸ６０１（群７）、およびリポソーム腫瘍内対照を用いたＯＸ８６単剤療法（群６）は、対照群５に比べて統計的に有意な（＊ｐ値≦０．０５）生存の増大を示した。ＯＸ８６  ＩＰと組み合わせた腫瘍内ＣＲＸ６０１  ＤＯＰＣ／ＣＨＯＬリポソーム処方物投与（群８）は、対照群５に比べて、ならびにＣＲＸ６０１腫瘍内（群７）およびＯＸ８６（群６）単剤療法対照群に比べて統計的に有意な（＊ｐ値≦０．０５）生存の増大を示した。腫瘍内単剤療法対照群６および７でのマウス３個体および２個体に比べ、ＩＰと組み合わせた腫瘍内ＣＲＸ６０１  ＤＯＰＣ／ＣＨＯＬリポソーム投与では、１０個体のうち９個体のマウスが完全に退縮し、無腫瘍(tunor-free)であった。よって、腫瘍内対照単剤療法群６および７に比べてＯＸ８６と組み合わせた腫瘍内ＣＲＸ６０１リポソーム処方物投与で相乗作用が見られた（図３６参照）。８０日目に、ナイーブ対照マウスおよび完全退縮無腫瘍(tunor-free)マウスにＣＴ２６腫瘍細胞の再チャレンジを行った。ナイーブ対照マウスではＣＴ２６腫瘍は予想通り成長したが、処置群マウスでは拒絶され、腫瘍成長は見られなかった。この結果は、持続的抗腫瘍記憶がＯＸ８６処置と組み合わせたＣＲＸ−６０１またはＣＲＸ−６０１によるものであることを示唆する（図３７参照）。この腫瘍成長の欠如は、ＯＸ８６処置と組み合わせたＣＲＸ−６０１またはＣＲＸ−６０１による持続的抗腫瘍記憶を示唆する（図３７参照）。
【０２５３】
試験８
アブスコパル効果は、局部的腫瘍処置後の遠隔腫瘍の退縮として表される。アブスコパル効果を評価するために、材料および方法に単回腫瘍接種に関して記載されている通りに、マウスの左側腹部に５×１０４のＣＴ−２６細胞を、また、右側腹部に５×１０４のＣＴ−２６細胞を接種した。よって、この試験では、各マウスは、右側腹部に１個、左側腹部に１個という２個の腫瘍を有した。マウスを、腫瘍サイズが右側腹部でおよそ１００ｍｍ３に達し、左側腹部腫瘍サイズが同等であった場合に、以下に示す１０群に無作為化した。単独および抗ＯＸ４０と組み合わせた場合のＣＲＸ−６０１活性のアブスコパル効果を決定するために、ＣＲＸ−６０１を、ＤＯＰＣ／ＣＨＯＬリポソーム処方物または０．５％グリセロール／４％デキストロース処方物を用いて、左側腹部腫瘍にのみ腫瘍内（ＩＴ）投与した。腫瘍サイズを右および左両方の側腹部腫瘍でモニタリングした。加えて、全身活性の対照として、ＣＲＸ−６０１を、０．５％グリセロール／４％デキストロースビヒクル単独および抗ＯＸ４０と組み合わせて用い、静脈投与（ＩＶ）した（群７）。
【０２５４】
群１：週１回、合計３用量で静脈投与されるビヒクル（０．５％グリセロール／４％デキストロース）＋週２回、合計６用量で腹腔内投与されるラットＩｇＧ１  ２５μｇ／マウス
群２：週１回、合計３用量で腫瘍内投与されるビヒクル（０．５％グリセロール／４％デキストロース）＋週２回、合計６用量で腹腔内投与されるラットＩｇＧ１  ２５μｇ／マウス
群３：週１回、合計３用量で静脈投与されるＣＲＸ−６０１  ２５μｇ／マウス（０．５％グリセロール／４％デキストロース中）＋週２回、合計６用量で腹腔内投与されるラットＩｇＧ１  ２５μｇ／マウス
群４：週１回、合計３用量で腫瘍内投与されるＣＲＸ−６０１  ２５μｇ／マウス（０．５％グリセロール／４％デキストロース中）＋週２回、合計６用量で腹腔内投与されるラットＩｇＧ１  ２５μｇ／マウス
群５：週１回、合計３用量で静脈投与されるビヒクル（０．５％グリセロール／４％デキストロース）＋週２回、合計６用量で腹腔内投与されるＯＸ８６  ２５μｇ／マウス
群６：週１回、合計３用量で腫瘍内投与されるビヒクル（０．５％グリセロール／４％デキストロース）＋週２回、合計６用量で腹腔内投与されるＯＸ８６  ２５μｇ／マウス
群７：週１回、合計３用量で静脈投与されるＣＲＸ−６０１  ２５μｇ／マウス（０．５％グリセロール／４％デキストロース中）＋週２回、合計６用量で腹腔内投与されるＯＸ８６  ２５μｇ／マウス
群８：週１回、合計３用量で腫瘍内投与されるＣＲＸ−６０１  ２５μｇ／マウス（０．５％グリセロール／４％デキストロース中）＋週２回、合計６用量で腹腔内投与されるＯＸ８６  ２５μｇ／マウス
群９：週１回、計３用量で腫瘍内投与されるビヒクル（ＤＯＰＣ／ＣＨＯＬリポソーム）＋週２回、合計６用量で腹腔内投与されるラットＩｇＧ１  ２５μｇ／マウス
群１０：週１回、合計３用量で腫瘍内投与されるビヒクル（ＤＯＰＣ／ＣＨＯＬリポソーム）＋週２回、合計６用量で腹腔内投与されるＯＸ８６  ２５μｇ／マウス
群１１：週１回、合計３用量で腫瘍内投与されるＣＲＸ−６０１  ２５μｇ／マウス（ＤＯＰＣ／ＣＨＯＬリポソーム中）＋週２回、合計６用量で腹腔内投与されるラットＩｇＧ１  ２５μｇ／マウス
群１２：週１回、合計３用量で腫瘍内投与されるＣＲＸ−６０１  ２５μｇ／マウス（ＤＯＰＣ／ＣＨＯＬリポソーム中）＋週２回、合計６用量で腹腔内投与されるＯＸ８６  ２５μｇ／マウス
【０２５５】
抗腫瘍活性を処置群に関して評価した（腫瘍成長阻害により経時的に測定）。いずれかまたは両方の腫瘍が２，０００ｍｍ３に達すればマウスを試験から除いた。試験によれば、初回投与の６０日後に、試験に残っていた全マウスが完全に無腫瘍であり、アブスコパル効果および生存の優位性が決定された。全身投与組合せ群７、週１回、合計３用量で静脈投与されるＣＲＸ−６０１  ２５μｇ／マウス（０．５％グリセロール／４％デキストロース中）＋週２回、合計６用量で腹腔内投与されＯＸ８６  ２５μｇ／マウスに関して、１０個体のうち７個体のマウスは右および左両方の側腹部腫瘍が無腫瘍となった（図３８）。組合せ群８、週１回、合計３用量で腫瘍内投与されるＣＲＸ−６０１  ２５μｇ／マウス（０．５％グリセロール／４％デキストロース中）＋週２回、合計６用量で腹腔内投与されるＯＸ８６  ２５μｇ／マウスに関して、１０個体のうち３個体のマウスが、左側腹部腫瘍にのみ腫瘍内注射を施したとしても、両腫瘍に関して完全な腫瘍退縮を示した（図３９）。組合せ群１２、週１回、合計３用量で腫瘍内投与されるＣＲＸ−６０１  ２５μｇ／マウス（ＤＯＰＣ／ＣＨＯＬリポソーム中）＋週２回、合計６用量で腹腔内投与されるＯＸ８６  ２５μｇ／マウスに関して、１０個体のうち５個体のマウスが、左側腹部腫瘍にのみ腫瘍内注射を施したとしても、両腫瘍に関して完全な腫瘍退縮を示した（図４０）。よって、ＯＸ８６腹腔内投与と組み合わせて腫瘍内投与されるＣＲＸ−６０１処方物は、アブスコパル効果を示した（群８および１２）。局部的左側腹部腫瘍ＩＴ注射は、遠位の右側腹部腫瘍退縮をもたらした。３つの組合せ群７、８、および１２の間に生存の優位性に統計的な差は無かった。群７は、総てのビヒクルおよびアイソタイプ対照に比べて、また総てのＣＲＸ−６０１およびＯＸ８６単剤療法群に比べて統計的に有意な生存の増大を示した（＊＊＊ｐ値≦０．００６）。群１２の組合せは、群１０のリポソーム  ビヒクルＩＴ＋ＯＸ８６に比べて統計的に有意な生存の増大を示した（＊＊ｐ値＝０．００６）が、群１１  ＣＲＸ−６０１  ２５μｇ／マウス  リポソーム処方物＋ラットＩｇＧ１（ｐ値＝０．１１９）に対しては統計的に有意ではなかった。群８の組合せは、群４  ＣＲＸ−６０１  ２５μｇ／マウス（０．５％グリセロール／４％デキストロース中）ＩＴ＋ラットＩｇＧ１に比べて統計的に有意な生存の増大を示した（＊ｐ値＝０．０１３）が、それは群６  ビヒクル（０．５％グリセロール／４％デキストロース）ＩＴ＋ＯＸ８６に対しては統計的に有意でなかった（ｐ値＝０．５）。図４１は、全群に関する生存曲線を示す。
【０２５６】
実施例６：ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞培養２４時間の時点でヒトＣＤ４＋  Ｔ細胞（Ａ）、樹状細胞（Ｂ）、および単球（Ｃ）に対するある濃度範囲（０．０１〜１０００ｎｇ／ｍｌ）のＣＲＸ６０１処置により誘導されたＯＸ４０発現
実験の記載：
ＯＸ４０発現に対するＣＲＸ６０１の効果を評価するためにｉｎ  ｖｉｔｒｏヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）アッセイを行った。新たに単離したヒトＰＢＭＣの生存率を確認し、２４ウェル非組織培養処理プレートにてＡＩＭ−Ｖ無血清培地中、２００万細胞／ウェルの密度で培養した。ＰＢＭＣを一定の用量濃度（０．０１μｇ／ｍｌ〜１，０００μｇ／ｍｌ、ビヒクルブランクを含む）のＣＲＸ−６０１で２４時間刺激した。インキュベーションの終了により、細胞をＯＸ４０発現のフローサイトメトリー評価のために回収した。Ｔ細胞、樹状細胞および単球に対するＣＲＸ６０１によるＯＸ４０受容体発現の急速なアップレギュレーションは、ＣＲＸ６０１が抗ＯＸ４０抗体の標的をアップレギュレートし、これが抗ＯＸ４０抗体の治療活性を増強し、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいてＴＬＲ４＋ＯＸ４０の組合せの相乗的抗腫瘍活性をもたらし得ることを示した。
【０２５７】
ＯＸ４０抗体配列表
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９】
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【図４０】
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【図４１】
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【図４２】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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