(57)【要約】対象において皮膚障害、例えば、ざ瘡、例えば、尋常性ざ瘡を処置するための方法が提供される。この方法は、対象の表面に、アンモニア酸化細菌、例えば、アンモニア酸化細菌を含む調製物を投与すること、例えば、適用すること、例えば、局所投与することを含む。対象においてそのような皮膚障害、例えば、ざ瘡、例えば、尋常性ざ瘡を処置するための、アンモニア酸化細菌を含む調製物もまた提供される。上記投与、例えば、適用の量および頻度は、対象の表面上の病原性細菌、例えば、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｎｅｓの量または濃度を低減するに十分であり得る。【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象の皮膚障害、例えば、ざ瘡、例えば、尋常性ざ瘡を処置する方法であって、
前記対象の表面に、アンモニア酸化細菌、例えば、アンモニア酸化細菌を含む調製物を投与すること、例えば、適用すること、例えば、局所投与すること
を含む方法。
【請求項２】
投与、例えば、適用の量および頻度が、前記対象の前記表面上の病原性細菌、例えば、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｎｅｓの量または濃度を低減するのに十分である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記量が、アンモニア酸化細菌の治療有効用量である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記皮膚障害が、ざ瘡、例えば、尋常性ざ瘡である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
投与することが、炎症性病変、例えば、丘疹、膿疱、嚢胞／結節の処置を提供する、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
投与することが、非炎症性病変、例えば、開放面皰、閉鎖面皰の処置を提供する、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
投与することが、炎症後色素沈着亢進／炎症後紅斑（ＰＩＨ／ＰＩＥ）病変の処置または改善を提供する、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
投与することが、紅斑、浮腫、落屑、刺痛感、灼熱感、およびそう痒感のうちの１つまたは複数の処置または改善を提供する、請求項５に記載の方法。
【請求項９】
投与することが、脂性の外観、毛穴の外観、つや、しみ、皮膚の色調の均一性、視覚的滑らかさ、および触覚的滑らかさのうちの１つまたは複数の処置または改善を提供する、請求項５に記載の方法。
【請求項１０】
投与することが、セブメーター測定値の処置または改善を提供する、請求項５に記載の方法。
【請求項１１】
投与することが、前記対象をアンモニア酸化細菌で前処置することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
局所投与することが、前記皮膚障害の発症前に局所投与することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
局所投与することが、前記対象に、有効用量のアンモニア酸化細菌を局所投与することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記有効用量が、約０．１×１０９、０．２×１０９、０．３×１０９、０．４×１０９、０．５×１０９、０．６×１０９、０．７×１０９、０．８×１０９、０．９×１０９、１．０×１０９、１．２×１０９、１．４×１０９、１．５×１０９、１．６×１０９、１．８×１０９、２．０×１０９、２．２×１０９、２．４×１０９、２．６×１０９、２．８×１０９、３．０×１０９、３．２×１０９、３．４×１０９、３．６×１０９、３．８×１０９、４．０×１０９、４．２×１０９、４．４×１０９、４．６×１０９、４．８×１０９、５．０×１０９、５．５×１０９、６．０×１０９、６．５×１０９、７．０×１０９、７．５×１０９、８．０×１０９、８．５×１０９、９．０×１０９、９．５×１０９、１０．０×１０９、１２×１０９、１４×１０９、１６×１０９、１８×１０９、２０×１０９、２５×１０９、３０×１０９、４０×１０９、５０×１０９ＣＦＵである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記皮膚障害が、前記対象の標的部位にあり、１種または複数の望ましくない細菌、例えば、病原性細菌を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記標的部位が、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｎｅｓを含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記対象が前記皮膚障害の処置を必要としているか否かを決定すること、例えば、前記対象がざ瘡、例えば、尋常性ざ瘡の処置を必要としているか否かを決定することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
前記皮膚障害の処置を必要とする前記対象を選択することをさらに含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記アンモニア酸化細菌、例えば、アンモニア酸化細菌を含む調製物が、エアロゾル、スプレーまたはミストであることが可能であり得る形態、すなわち、ミストの形態であり得る、請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
前記アンモニア酸化細菌、例えば、調製物が、例えば、水性媒体中のエアロゾルまたはミストとして適用される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記アンモニア酸化細菌、例えば、アンモニア酸化細菌の調製物が、緩衝溶液、例えば、水性緩衝溶液中のアンモニア酸化細菌であってもよい、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記緩衝溶液、例えば、水性緩衝溶液が、水中のリン酸二ナトリウムおよび塩化マグネシウム、例えば、５０ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４および２ｍＭ  ＭｇＣｌ２を含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記緩衝溶液、例えば、水性緩衝溶液が、水中のリン酸二ナトリウムおよび塩化マグネシウム、例えば、５０ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４および２ｍＭ  ＭｇＣｌ２から本質的になる、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
前記緩衝溶液、例えば、水性緩衝溶液が、水中のリン酸二ナトリウムおよび塩化マグネシウム、例えば、５０ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４および２ｍＭ  ＭｇＣｌ２からなる、請求項２１に記載の方法。
【請求項２５】
前記対象が、前記対象の前記表面上の病原性細菌、例えば、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｎｅｓの量または濃度の低減を必要としていることに基づいて、前記対象を選択することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２６】
前記アンモニア酸化細菌が、自己投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項２７】
前記アンモニア酸化細菌が、前記対象の顔、首、および頭皮のうちのいずれか１つまたは複数に適用される、請求項１に記載の方法。
【請求項２８】
前記調製物が、アンモニア、アンモニウム塩、および尿素のうちの少なくとも１つを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２９】
前記調製物が、制御放出性材料、例えば、遅延放出性材料を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３０】
アンモニア酸化細菌の前記調製物が、添加剤、例えば、薬学的に許容される添加剤または化粧品として許容される添加剤のうちの１つをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３１】
前記添加剤、例えば、前記薬学的に許容される添加剤および前記化粧品として許容される添加剤のうちの１つが、界面活性剤である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記調製物が、他の生物を実質的に含有しない、請求項１に記載の方法。
【請求項３３】
前記調製物が、粉末、化粧品、クリーム、スティック、エアロゾル、例えば、ミスト、膏薬、ワイプ、または包帯中に配置される、請求項１に記載の方法。
【請求項３４】
前記調製物が、粉末、化粧品、クリーム、スティック、エアロゾル、例えば、ミスト、膏薬、ワイプ、または包帯として提供される、請求項１に記載の方法。
【請求項３５】
前記調製物が、保湿剤、脱臭剤、芳香剤、着色料、昆虫忌避剤、クレンジング剤、またはＵＶブロック剤を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３６】
前記添加剤、例えば、前記薬学的に許容される添加剤または前記化粧品として許容される添加剤が、抗接着剤、結合剤、コーティング剤、崩壊剤、フィラー、香料、着色剤、滑沢剤、流動促進剤、吸着剤、保存剤、または甘味剤を含む、請求項３０に記載の方法。
【請求項３７】
アンモニア酸化細菌を含む前記調製物が、約１０８から約１０１４ＣＦＵ／Ｌのアンモニア酸化細菌を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３８】
アンモニア酸化細菌を含む前記調製物が、約１×１０９ＣＦＵ／ｍＬから約１０×１０９ＣＦＵ／ｍＬの間のアンモニア酸化細菌を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３９】
アンモニア酸化細菌を含む前記調製物が、約５０ミリグラム（ｍｇ）から約１０００ｍｇの間のアンモニア酸化細菌を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４０】
前記添加剤、例えば、前記薬学的に許容される添加剤または前記化粧品として許容される添加剤に対するアンモニア酸化細菌の質量比が、１リットル当たり約０．１グラムから約１グラムの範囲である、請求項３０に記載の方法。
【請求項４１】
前記アンモニア酸化細菌が、Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ、Ｎｉｔｒｏｓｏｃｏｃｃｕｓ、Ｎｉｔｒｏｓｏｓｐｉｒａ、Ｎｉｔｒｏｓｏｃｙｓｔｉｓ、Ｎｉｔｒｏｓｏｌｏｂｕｓ、Ｎｉｔｒｏｓｏｖｉｂｒｉｏ、およびそれらの組合せからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項４２】
前記アンモニア酸化細菌が、Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ  ｅｕｔｒｏｐｈａ（Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａ）である、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記アンモニア酸化細菌が、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１２１１５７を有するＮ．ｅｕｔｒｏｐｈａ  Ｄ２３である、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記調製物が、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒ、およびそれらの組合せからなる群から選択される生物を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４５】
化粧製品を送達するための、請求項１に記載の方法。
【請求項４６】
治療製品を送達するための、請求項１に記載の方法。
【請求項４７】
前記調製物が、容器中に提供され、前記調製物および前記容器が、約５０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１５００、または２０００グラム未満の重量を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項４８】
前記調製物が、１日当たり約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、または２４回適用される、請求項１に記載の方法。
【請求項４９】
前記調製物が、１日当たり１回適用される、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記調製物が、１日当たり２回適用される、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記調製物が、約１〜３、３〜５、５〜７、７〜９、５〜１０、１０〜１４、１２〜１８、１２〜２１、２１〜２８、２８〜３５、３５〜４２、４２〜４９、４９〜５６、４６〜６３、６３〜７０、７０〜７７、７７〜８４、または８４〜９１日間適用される、請求項１に記載の方法。
【請求項５２】
前記調製物が、約７日間適用される、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
前記調製物が、約１４日間適用される、請求項５１に記載の方法。
【請求項５４】
前記調製物が、約２１日間適用される、請求項５１に記載の方法。
【請求項５５】
前記調製物が、約２８日間適用される、請求項５１に記載の方法。
【請求項５６】
前記皮膚の表面から試料を入手することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５７】
前記試料中の細菌のＤＮＡを単離することをさらに含む、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
前記試料中の細菌のＤＮＡを配列決定することをさらに含む、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
前記細菌が、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｎｅｓである、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
前記アンモニア酸化細菌を投与することが、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｎｅｓの減少を提供する、請求項１に記載の方法。
【請求項６１】
約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、または２８日後に、前記Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｎｅｓが減少する、例えば、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｎｅｓの濃度が減少する、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
シャンプー、コンディショナー、および洗浄剤、例えば、顔用洗浄剤のうちの１つまたは複数を投与すること、例えば、自己投与することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項６３】
シャンプー、コンディショナー、および顔用洗浄剤のうちのいずれか１つまたは複数が、１日当たり１回適用される、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
使用された前記シャンプーが、ロット２９３１７８であった、請求項６２に記載の方法。
【請求項６５】
使用された前記洗浄剤が、ロット２９３１６２であった、請求項６２に記載の方法。
【請求項６６】
シャンプー、コンディショナー、および石鹸のうちの少なくとも１つが、前記アンモニア酸化細菌の投与を中止することに続いて使用された、請求項６２に記載の方法。
【請求項６７】
前記シャンプー、コンディショナー、および石鹸のうちの少なくとも１つが、アンモニア酸化細菌の前記調製物の中止に続いて使用された、請求項６２に記載の方法。
【請求項６８】
前記対象が、処置を始める前、例えば、前記アンモニア酸化細菌を投与する前に評価された、請求項１に記載の方法。
【請求項６９】
前記対象が、処置を始めてから、例えば、前記アンモニア酸化細菌を投与してから１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２日；または７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２週間；または２、３年、４、もしくは５年後に評価された、請求項１に記載の方法。
【請求項７０】
前記調製物を投与することが、以下：病変の炎症を低減すること、病変の頻度を低減すること、および病原性細菌、例えば、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｎｅｓの存在を減少させることのうちの１つまたは複数を提供する、請求項１に記載の方法。
【請求項７１】
前記調製物を投与することが、病変の炎症の低減を提供する、請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
前記調製物を投与することが、成人における病変の炎症の低減を提供する、請求項７１に記載の方法。
【請求項７３】
前記調製物を投与することが、病変の頻度の低減を提供する、請求項７０に記載の方法。
【請求項７４】
前記調製物を投与することが、病原性細菌、例えば、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｎｅｓの存在の減少を提供する、請求項７０に記載の方法。
【請求項７５】
前記調製物を投与することが、Ｓｋｉｎｄｅｘ１６生活の質調査によって測定される前記対象の疾患についての前記対象の感情的アセスメントの改善を提供する、請求項１に記載の方法。
【請求項７６】
前記調製物を投与することが、以下：前記対象における皮膚状態の痛み、前記対象における皮膚状態の持続／再発症、および前記対象における皮膚状態の外観のうちの１つまたは複数の改善を提供する、請求項１に記載の方法。
【請求項７７】
前記調製物を投与することが、臨床評定に従って、以下：視覚的および触覚的滑らかさ、ならびにしみについての評定スコアのうちの１つまたは複数の改善（減少）を提供する、請求項１に記載の方法。
【請求項７８】
前記対象が、女性である、請求項１に記載の方法。
【請求項７９】
前記対象が、男性である、請求項１に記載の方法。
【請求項８０】
前記対象が、以下の民族／人種：アジア系、黒人もしくはアフリカ系アメリカ人、ヒスパニック系もしくはラテン系、白人、または多民族系のうちの１つとして特徴付けられる、請求項１に記載の方法。
【請求項８１】
前記対象が、以下の皮膚タイプ：普通肌、脂性肌、および混合肌のうちの少なくとも１つを有すると特徴付けられる、請求項１に記載の方法。
【請求項８２】
前記対象が、以下のＦｉｔｚｐａｔｒｉｃｋ皮膚タイプ：Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖのうちの１つを有すると特徴付けられる、請求項１に記載の方法。
【請求項８３】
前記ざ瘡のタイプが、思春期ざ瘡である、請求項１に記載の方法。
【請求項８４】
前記ざ瘡のタイプが、成人ざ瘡である、請求項１に記載の方法。
【請求項８５】
前記対象の年齢が、約１２〜１５歳、１６〜１８歳、１９〜２８歳の間、または２８歳を超える、請求項１に記載の方法。
【請求項８６】
以下：
局所レチノイド、アゼライン酸、サリチル酸、局所抗微小生物薬、経口抗生物質、過酸化ベンゾイル、経口抗アンドロゲン、経口イソトレチノイン、およびそれらの組合せ
からなる群から選択されるざ瘡処置が、前記対象に投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項８７】
前記ざ瘡処置が、前記アンモニア酸化細菌の投与を開始する前にある期間投与される、請求項８６に記載の方法。
【請求項８８】
前記ざ瘡処置が、前記アンモニア酸化細菌の投与期間中を通じて継続される、請求項８６に記載の方法。
【請求項８９】
前記ざ瘡処置が、アンモニア酸化細菌の投与を開始する前にある期間投与され、前記アンモニア酸化細菌の投与の開始前に停止される、請求項８６に記載の方法。
【請求項９０】
前記ざ瘡処置が、前記アンモニア酸化細菌の前記投与中に停止される、請求項８６に記載の方法。
【請求項９１】
前記ざ瘡処置が、前記アンモニア酸化細菌の投与中を通じて継続される、請求項８６に記載の方法。
【請求項９２】
前記ざ瘡処置が、アンモニア酸化細菌の投与を停止することに続いて開始される、請求項８６に記載の方法。
【請求項９３】
投与が、前記対象が洗浄を行うまたはシャワーを浴びる３０、６０、９０、１２０、１５０、１８０分前に行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項９４】
皮膚状態、例えば、ざ瘡、例えば、尋常性ざ瘡を処置するための、請求項１から９３のいずれか一項に記載のアンモニア酸化細菌を含む調製物。
【請求項９５】
皮膚状態、例えば、ざ瘡、例えば、尋常性ざ瘡を処置するための、アンモニア酸化細菌を含む調製物。
【請求項９６】
前記アンモニア酸化細菌が、緩衝溶液、例えば、水性緩衝溶液中にある、請求項９５に記載の調製物。
【請求項９７】
前記緩衝溶液、例えば、水性緩衝溶液が、水中のリン酸二ナトリウムおよび塩化マグネシウム、例えば、５０ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４および２ｍＭ  ＭｇＣｌ２を含む、請求項９６に記載の調製物。
【請求項９８】
前記緩衝溶液、例えば、水性緩衝溶液が、水中のリン酸二ナトリウムおよび塩化マグネシウム、例えば、５０ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４および２ｍＭ  ＭｇＣｌ２から本質的になる、請求項９６に記載の調製物。
【請求項９９】
前記緩衝溶液、例えば、水性緩衝溶液が、水中のリン酸二ナトリウムおよび塩化マグネシウム、例えば、５０ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４および２ｍＭ  ＭｇＣｌ２からなる、請求項９６に記載の調製物。
【請求項１００】
アンモニア、アンモニウム塩、および尿素のうちの少なくとも１つを含む、請求項９５に記載の調製物。
【請求項１０１】
制御放出性材料、例えば、遅延放出性材料を含む、請求項９５に記載の調製物。
【請求項１０２】
アンモニア酸化細菌の前記調製物が、添加剤、例えば、薬学的に許容される添加剤または化粧品として許容される添加剤のうちの１つをさらに含む、請求項９５に記載の調製物。
【請求項１０３】
前記添加剤、例えば、前記薬学的に許容される添加剤および前記化粧品として許容される添加剤のうちの１つが、界面活性剤である、請求項１０２に記載の調製物。
【請求項１０４】
他の生物を実質的に含有しない、請求項９５に記載の調製物。
【請求項１０５】
粉末、化粧品、クリーム、スティック、エアロゾル、例えば、ミスト、膏薬、ワイプ、または包帯中に配置される、請求項９５に記載の調製物。
【請求項１０６】
粉末、化粧品、クリーム、スティック、エアロゾル、例えば、ミスト、膏薬、ワイプ、または包帯として提供される、請求項９５に記載の調製物。
【請求項１０７】
保湿剤、脱臭剤、芳香剤、着色料、昆虫忌避剤、クレンジング剤、またはＵＶブロック剤を含む、請求項９５に記載の調製物。
【請求項１０８】
前記添加剤、例えば、前記薬学的に許容される添加剤または前記化粧品として許容される添加剤が、抗接着剤、結合剤、コーティング剤、崩壊剤、フィラー、香料、着色剤、滑沢剤、流動促進剤、吸着剤、保存剤、または甘味剤を含む、請求項１０２に記載の調製物。
【請求項１０９】
アンモニア酸化細菌を含む前記調製物が、約１０８から約１０１４ＣＦＵ／Ｌのアンモニア酸化細菌を含む、請求項９５に記載の調製物。
【請求項１１０】
アンモニア酸化細菌を含む前記調製物が、約１×１０９ＣＦＵ／ｍＬから約１０×１０９ＣＦＵ／ｍＬの間のアンモニア酸化細菌を含む、請求項９５に記載の調製物。
【請求項１１１】
アンモニア酸化細菌を含む前記調製物が、約５０ミリグラム（ｍｇ）から約１０００ｍｇの間のアンモニア酸化細菌を含む、請求項９５に記載の調製物。
【請求項１１２】
前記添加剤、例えば、前記薬学的に許容される添加剤または前記化粧品として許容される添加剤に対するアンモニア酸化細菌の質量比が、１リットル当たり約０．１グラムから約１グラムの範囲である、請求項１０２に記載の調製物。
【請求項１１３】
前記アンモニア酸化細菌が、Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ、Ｎｉｔｒｏｓｏｃｏｃｃｕｓ、Ｎｉｔｒｏｓｏｓｐｉｒａ、Ｎｉｔｒｏｓｏｃｙｓｔｉｓ、Ｎｉｔｒｏｓｏｌｏｂｕｓ、Ｎｉｔｒｏｓｏｖｉｂｒｉｏ、およびそれらの組合せからなる群から選択される、請求項９５に記載の調製物。
【請求項１１４】
前記アンモニア酸化細菌が、Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ  ｅｕｔｒｏｐｈａ（Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａ）である、請求項１１３に記載の調製物。
【請求項１１５】
前記アンモニア酸化細菌が、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１２１１５７を有するＮ．ｅｕｔｒｏｐｈａ  Ｄ２３である、請求項１１４に記載の調製物。
【請求項１１６】
Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒ、およびそれらの組合せからなる群から選択される生物を含む、請求項１１５に記載の調製物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本出願は、２０１５年４月１５日に出願された国際特許出願番号第ＰＣＴ／ＵＳ２０１５／０２５９０９の一部継続出願であり、この国際特許出願は、２０１４年４月１５日に出願されたギリシャ特許出願番号第２０１４０１００２１７号、２０１４年５月２２日に出願された米国仮出願番号第６２／００２０８４号、２０１４年６月１６日に出願された米国仮出願番号第６２／０１２８１１号、２０１４年９月２２日に出願された米国仮出願番号第６２／０５３５８８号、および２０１５年３月１３日に出願されたギリシャ特許出願番号第２０１５０１００１１５号に基づく優先権を主張しており、これら出願の内容はそれらの全体が参考として本明細書中に援用される。本出願はまた、２０１５年７月２日に出願された米国仮出願番号第６２／１８８３４３号および２０１５年７月６日に出願された米国仮出願番号第６２／１８９１０５号に基づく優先権を主張している。
【背景技術】
【０００２】
背景
有益細菌は、病原性細菌の増殖を抑制するために使用することができる。細菌および他の微生物は、環境中に遍在する。病原性細菌の発見および疾患の病原菌説は、健康および疾患状態に対して多大な影響を与えている。細菌は、すべての生き物の環境の通常の一部である。腸において、これらの細菌は、通常の条件下で病原性でなく、実際には、通常の腸の内容物を、疾患を引き起こす生物にとってあまり適していないものにすることによって健康を改善する。疾患予防は、以下の多くの方式で実行される：栄養素を消費して、病原体のためにあまり残さないこと；病原体にとって適していないｐＨおよび酸素圧等の条件を生成すること；病原体に対して毒性の化合物を生成すること；これらの微生物が病原体を食物として消費すること；病原体が利用可能な状態にある物理的空間を減らすこと；ならびに特異的結合部位を占有して、病原体が利用可能なままの結合部位を少なくすること。これらの望ましい細菌の存在は、疾患状態の予防において有用と見られている。
【０００３】
例えば、皮膚状態、例えば、ざ瘡、例えば、尋常性ざ瘡の処置に関して、病原性細菌の増殖を抑制することができる改善された有益細菌が、当技術分野で必要とされている。
【０００４】
ざ瘡は、最も一般的な皮膚疾患および皮膚科医診察の報告された原因の第１位であり、米国の皮膚科医の患者数のうちの約４分の１を占める。伝統的には些細な「通常の」状態と考えられていたが、ざ瘡は、近年、慢性疾患であり、てんかん、喘息、糖尿病または関節炎を有する患者によって報告されたものと同程度の社会的、心理的および感情的機能障害により、個人の生活の質に重大な影響を及ぼし得る慢性疾患であると医学的に再定義されている。米国だけで、ほぼ４０００から５０００万人がざ瘡に罹患しており、２０〜２５％が中等度から重度のざ瘡を患っている。上位１０位の銘柄のざ瘡治療薬の米国売上高のランレートは＄３０億であり、内訳は全身レチノイドで＄１５億、経口抗生物質で＄７億、局所抗生物質で＄６億および局所レチノイドで＄２．４億である。世界的には、ざ瘡の有病率は、青年のうちのほぼ８０％および若年成人のうちの５０％である。処方薬および市販薬への相当な支出にもかかわらず、処置がわずかに有効であること（局所抗生物質、局所レチノイド、収斂剤）および／または深刻なリスクを伴うこと（経口レチノイド）により、ざ瘡は、重大な満たされていない医学的必要性を有する領域のままである。炎症性および非炎症性ざ瘡病変を予防および処置するための安全かつ有効な製品に対する必要性に加えて、過剰な皮脂産生を標的とする局所療法に対する実質的な満たされていない必要性および商機が存在する。
【表１】
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【０００５】
理想的な標的製品は、以下の特性：自己投与されること（例えば、毎日１回、例えば、毎日２回）；無臭であり、無色であり、目に見えないこと；日光に対する感受性の増加を伴わないこと；安全であり、摂取／吸入された場合に非毒性であり、皮膚、隣接する粘膜および眼における忍容性が良好であること；抗生物質耐性を助長するリスクなしに処置および維持療法の両方に適当であること；ならびに局部的に作用して、（優先度順に）：病変の頻度を低減すること（抗生物質、抗炎症薬）；病変の持続期間を低減すること（改善された治癒）；病変の炎症を低減すること（抗炎症薬）；異常な色素沈着および瘢痕を潜在的に予防または低減すること（改善された治癒）；損傷を受けた皮膚の治癒を早めること（改善された治癒）；過剰な皮脂の産生を低減すること；および病原性細菌の存在を減少させること（抗生物質）のうちの１つまたは複数を有し得る。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Global  Data;AcneAcademy、2010年
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
要旨
本開示は、対象の皮膚障害、例えば、ざ瘡、例えば、尋常性ざ瘡を処置する方法を提供する。この方法は、対象の表面に、アンモニア酸化細菌、例えば、アンモニア酸化細菌を含む調製物を投与すること、例えば、適用すること、例えば、局所投与することを含む。
【０００８】
一部の実施形態では、投与、例えば、適用の量および頻度は、対象の表面上の病原性細菌、例えば、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｎｅｓの量または濃度を低減するのに十分である。一部の事例では、この量は、アンモニア酸化細菌の治療有効用量である。一部の事例では、皮膚障害は、ざ瘡、例えば、尋常性ざ瘡である。
【０００９】
一部の実施形態では、投与することは、炎症性病変、例えば、丘疹、膿疱、嚢胞／結節の処置を提供する。一部の実施形態では、投与することは、非炎症性病変、例えば、開放面皰、閉鎖面皰の処置を提供する。一部の実施形態では、投与することは、炎症後色素沈着亢進／炎症後紅斑（ＰＩＨ／ＰＩＥ）病変の処置または改善を提供する。一部の実施形態では、投与することは、紅斑、浮腫、落屑、刺痛感、灼熱感、およびそう痒感のうちの１つまたは複数の処置または改善を提供する。一部の実施形態では、投与することは、脂性の外観、毛穴の外観、つや、しみ、皮膚の色調の均一性、視覚的滑らかさ、および触覚的滑らかさのうちの１つまたは複数の処置または改善を提供する。一部の実施形態では、投与することは、セブメーター測定値の処置または改善を提供する。
【００１０】
一部の実施形態では、投与することは、対象をアンモニア酸化細菌で前処置することを含む。一部の実施形態では、局所投与することは、皮膚障害の発症前に局所投与することを含む。一部の実施形態では、局所投与することは、対象に、有効用量のアンモニア酸化細菌を局所投与することを含む。一部の事例では、有効用量は、約０．１×１０９、０．２×１０９、０．３×１０９、０．４×１０９、０．５×１０９、０．６×１０９、０．７×１０９、０．８×１０９、０．９×１０９、１．０×１０９、１．２×１０９、１．４×１０９、１．５×１０９、１．６×１０９、１．８×１０９、２．０×１０９、２．２×１０９、２．４×１０９、２．６×１０９、２．８×１０９、３．０×１０９、３．２×１０９、３．４×１０９、３．６×１０９、３．８×１０９、４．０×１０９、４．２×１０９、４．４×１０９、４．６×１０９、４．８×１０９、５．０×１０９、５．５×１０９、６．０×１０９、６．５×１０９、７．０×１０９、７．５×１０９、８．０×１０９、８．５×１０９、９．０×１０９、９．５×１０９、１０．０×１０９、１２×１０９、１４×１０９、１６×１０９、１８×１０９、２０×１０９、２５×１０９、３０×１０９、４０×１０９、５０×１０９ＣＦＵである。
【００１１】
一部の実施形態では、皮膚障害は、対象の標的部位にあり、１種または複数の望ましくない細菌、例えば、病原性細菌を含む。一部の事例では、標的部位は、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｎｅｓを含む。
【００１２】
一部の実施形態では、方法は、対象が皮膚障害の処置を必要としているか否かを決定すること、例えば、対象がざ瘡、例えば、尋常性ざ瘡の処置を必要としているか否かを決定することをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、皮膚障害の処置を必要とする対象を選択することをさらに含む。
【００１３】
一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌、例えば、アンモニア酸化細菌を含む調製物は、エアロゾル、スプレーまたはミストであることが可能であり得る形態、すなわち、ミストの形態であってもよい。一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌、例えば、調製物は、例えば、水性媒体中のエアロゾルまたはミストとして適用されてもよい。一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌、例えば、アンモニア酸化細菌の調製物は、緩衝溶液、例えば、水性緩衝溶液中のアンモニア酸化細菌であってもよい。一部の事例では、緩衝溶液、例えば、水性緩衝溶液は、水中のリン酸二ナトリウムおよび塩化マグネシウム、例えば、５０ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４および２ｍＭ  ＭｇＣｌ２を含む。一部の事例では、緩衝溶液、例えば、水性緩衝溶液は、水中のリン酸二ナトリウムおよび塩化マグネシウム、例えば、５０ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４および２ｍＭ  ＭｇＣｌ２から本質的になる。一部の事例では、緩衝溶液、例えば、水性緩衝溶液は、水中のリン酸二ナトリウムおよび塩化マグネシウム、例えば、５０ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４および２ｍＭ  ＭｇＣｌ２からなる。
【００１４】
一部の実施形態では、方法は、対象が、対象の表面上の病原性細菌、例えば、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｎｅｓの量または濃度の低減を必要としていることに基づいて、対象を選択することをさらに含む。一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌は、自己投与される。
【００１５】
一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌は、対象の顔、首、および頭皮のうちのいずれか１つまたは複数に適用される。
【００１６】
一部の実施形態では、調製物は、アンモニア、アンモニウム塩、および尿素のうちの少なくとも１つを含む。一部の事例では、調製物は、制御放出性材料、例えば、遅延放出性材料を含む。一部の事例では、アンモニア酸化細菌の調製物は、添加剤、例えば、薬学的に許容される添加剤または化粧品として許容される添加剤のうちの１つをさらに含む。一部の事例では、添加剤、例えば、薬学的に許容される添加剤および化粧品として許容される添加剤のうちの１つは、界面活性剤である。一部の事例では、調製物は、他の生物を実質的に含有しない。一部の事例では、調製物は、粉末、化粧品、クリーム、スティック、エアロゾル、例えば、ミスト、膏薬、ワイプ、または包帯中に配置される。一部の事例では、調製物は、粉末、化粧品、クリーム、スティック、エアロゾル、例えば、ミスト、膏薬、ワイプ、または包帯として提供される。一部の事例では、調製物は、保湿剤、脱臭剤、芳香剤、着色料、昆虫忌避剤、クレンジング剤、またはＵＶブロック剤を含む。一部の事例では、添加剤、例えば、薬学的に許容される添加剤または化粧品として許容される添加剤は、抗接着剤、結合剤、コーティング剤、崩壊剤、フィラー、香料、着色剤、滑沢剤、流動促進剤、吸着剤、保存剤、または甘味剤を含む。
【００１７】
一部の事例では、アンモニア酸化細菌を含む調製物は、約１０８から約１０１４ＣＦＵ／Ｌを含む。一部の事例では、アンモニア酸化細菌を含む調製物は、約１０８から約１０１４ＣＦＵ／ｍＬを含む。一部の事例では、調製物は、約１×１０９ＣＦＵ／Ｌから約１０×１０９ＣＦＵ／Ｌの間を含む。一部の事例では、調製物は、約１×１０９ＣＦＵ／ｍＬから約１０×１０９ＣＦＵ／ｍＬの間を含む。
【００１８】
一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌を含む調製物は、約５０ミリグラム（ｍｇ）から約１０００ｍｇの間のアンモニア酸化細菌を含む。一部の事例では、添加剤、例えば、薬学的に許容される添加剤または化粧品として許容される添加剤に対するアンモニア酸化細菌の質量比は、１リットル当たり約０．１グラムから約１グラムの範囲である。
【００１９】
一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌は、Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ、Ｎｉｔｒｏｓｏｃｏｃｃｕｓ、Ｎｉｔｒｏｓｏｓｐｉｒａ、Ｎｉｔｒｏｓｏｃｙｓｔｉｓ、Ｎｉｔｒｏｓｏｌｏｂｕｓ、Ｎｉｔｒｏｓｏｖｉｂｒｉｏ、およびそれらの組合せからなる群から選択される。一部の事例では、アンモニア酸化細菌は、Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ  ｅｕｔｒｏｐｈａ（Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａ）である。一部の事例では、アンモニア酸化細菌は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１２１１５７を有するＮ．ｅｕｔｒｏｐｈａ  Ｄ２３である。
【００２０】
一部の実施形態では、調製物は、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒ、およびそれらの組合せからなる群から選択される生物を含む。
【００２１】
一部の実施形態では、化粧製品を送達するための、方法が提供される。一部の実施形態では、治療製品を送達するための、方法が提供される。
【００２２】
一部の実施形態では、調製物は、容器中に提供され、調製物および容器は、約５０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１５００、または２０００グラム未満の重量を有する。
【００２３】
一部の実施形態では、調製物は、１日当たり約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、または２４回適用される。一部の事例では、調製物は、１日当たり１回適用される。一部の事例では、調製物は、１日当たり２回適用される。
【００２４】
一部の実施形態では、調製物は、約１〜３、３〜５、５〜７、７〜９、５〜１０、１０〜１４、１２〜１８、１２〜２１、２１〜２８、２８〜３５、３５〜４２、４２〜４９、４９〜５６、４６〜６３、６３〜７０、７０〜７７、７７〜８４、または８４〜９１日間適用される。一部の事例では、調製物は、約７日間適用される。一部の事例では、調製物は、約１４日間適用される。一部の事例では、調製物は、約２１日間適用される。一部の事例では、調製物は、約２８日間適用される。
【００２５】
一部の実施形態では、方法は、皮膚の表面から試料を入手することをさらに含む。一部の事例では、方法は、試料中の細菌のＤＮＡを単離することをさらに含む。一部の事例では、方法は、試料中の細菌のＤＮＡを配列決定することをさらに含む。一部の事例では、細菌は、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｎｅｓである。
【００２６】
一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌を投与することは、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｎｅｓの減少を提供する。一部の事例では、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、または２８日後に、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｎｅｓが減少する、例えば、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｎｅｓの濃度が減少する。
【００２７】
一部の実施形態では、方法は、シャンプー、コンディショナー、および洗浄剤、例えば、顔用洗浄剤のうちの１つまたは複数を投与すること、例えば、自己投与することをさらに含む。ある特定の事例では、シャンプー、コンディショナー、および顔用洗浄剤のうちのいずれか１つまたは複数は、１日当たり１回適用される。ある特定の事例では、使用されたシャンプーは、ロット２９３１７８であった。ある特定の事例では、使用された洗浄剤は、ロット２９３１６２であった。ある特定の事例では、シャンプー、コンディショナー、および石鹸のうちの少なくとも１つが、アンモニア酸化細菌の投与を中止することに続いて使用された。ある特定の事例では、シャンプー、コンディショナー、および石鹸のうちの少なくとも１つが、アンモニア酸化細菌の調製物の中止に続いて使用された。
【００２８】
一部の実施形態では、対象は、処置を始める前、例えば、アンモニア酸化細菌を投与する前に評価された。一部の実施形態では、対象は、処置を始めてから、例えば、アンモニア酸化細菌を投与してから１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２日；または７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２週間；または２、３年、４、もしくは５年後に評価された。
【００２９】
一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌、例えば、アンモニア酸化細菌の調製物を投与することは、以下：病変の炎症を低減すること、病変の頻度を低減すること、および病原性細菌、例えば、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｎｅｓの存在を減少させることのうちの１つまたは複数を提供する。一部の事例では、調製物を投与することは、病変の炎症の低減を提供する。一部の事例では、調製物を投与することは、成人における病変の炎症の低減を提供する。一部の事例では、調製物を投与することは、病変の頻度の低減を提供する。一部の事例では、調製物を投与することは、病原性細菌、例えば、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｎｅｓの存在の減少を提供する。一部の事例では、調製物を投与することは、Ｓｋｉｎｄｅｘ１６生活の質調査によって測定される対象の疾患についての対象の感情的アセスメントの改善を提供する。一部の事例では、調製物を投与することは、以下：対象における皮膚状態の痛み、対象における皮膚状態の持続／再発症、および対象における皮膚状態の外観のうちの１つまたは複数の改善を提供する。一部の事例では、調製物を投与することは、臨床評定に従って、以下：視覚的および触覚的滑らかさ、ならびにしみについての評定スコアのうちの１つまたは複数の改善（減少）を提供する。
【００３０】
一部の実施形態では、対象は、女性である。他の実施形態では、対象は、男性である。一部の事例では、対象は、以下の民族／人種：アジア系、黒人もしくはアフリカ系アメリカ人、ヒスパニック系もしくはラテン系、白人、または多民族系のうちの１つである。一部の事例では、対象は、以下の皮膚タイプ：普通肌、脂性肌、および混合肌のうちの少なくとも１つを有すると特徴付けられる。一部の事例では、対象は、以下のＦｉｔｚｐａｔｒｉｃｋ皮膚タイプ：Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖのうちの１つを有すると特徴付けられる。一部の事例では、ざ瘡は、思春期ざ瘡として特徴付けられる。一部の事例では、ざ瘡は、成人ざ瘡として特徴付けられる。一部の事例では、対象の年齢は、約１２〜１５歳、１６〜１８歳、１９〜２８歳の間、または２８歳を超える。
【００３１】
一部の実施形態では、以下：局所レチノイド、アゼライン酸（azaelaic  acid）、サリチル酸、局所抗微小生物薬、経口抗生物質、過酸化ベンゾイル、経口抗アンドロゲン、経口イソトレチノイン、およびそれらの組合せからなる群から選択されるざ瘡処置が、対象に投与される。一部の実施形態では、ざ瘡処置は、アンモニア酸化細菌の投与を開始する前にある期間投与される。一部の実施形態では、ざ瘡処置は、アンモニア酸化細菌の投与期間中を通じて継続される。一部の実施形態では、ざ瘡処置は、アンモニア酸化細菌の投与を開始する前にある期間投与され、アンモニア酸化細菌の投与の開始前に停止される。一部の実施形態では、ざ瘡処置は、アンモニア酸化細菌の投与中に停止される。一部の実施形態では、ざ瘡処置は、アンモニア酸化細菌の投与中を通じて継続される。一部の実施形態では、ざ瘡処置は、アンモニア酸化細菌の投与を停止することに続いて開始される。
【００３２】
一部の実施形態では、投与は、対象が洗浄を行うか、またはシャワーを浴びる３０、６０、９０、１２０、１５０、１８０分前に行われる。
【００３３】
一部の実施形態では、皮膚状態、例えば、ざ瘡、例えば、尋常性ざ瘡を処置するための、上記、または本開示のいずれかの部分に記載のアンモニア酸化細菌を含む調製物が提供される。
【００３４】
本開示は、先述の態様および／または実施形態のうちのいずれか１つまたは複数のすべての組合せ、ならびに詳細な説明および実施例に記述された実施形態のうちのいずれか１つまたは複数との組合せを企図している。
【図面の簡単な説明】
【００３５】
【図１】図１は、アンモニア酸化細菌（ＡＯ＋Ｍｉｓｔ）を使用した４週目におけるＩＧＡの改善を示すグラフである。平均変化（％）は、ＡＯ＋Ｍｉｓｔおよびプラセボにおける改善の報告および悪化の報告に対してプロットされる。
【図２】図２Ａは、アンモニア酸化細菌（ＡＯ＋Ｍｉｓｔ）を使用した４週目における皮膚状態の持続の改善を示すグラフである。平均変化（％）は、ＡＯ＋Ｍｉｓｔおよびプラセボにおける改善の報告および悪化の報告に対してプロットされる。図２Ｂは、アンモニア酸化細菌（ＡＯ＋Ｍｉｓｔ）を使用した４週目における皮膚状態の外観の改善を示すグラフである。平均変化（％）は、ＡＯ＋Ｍｉｓｔおよびプラセボにおける改善の報告および悪化の報告に対してプロットされる。
【図３】図３Ａは、アンモニア酸化細菌（ＡＯ＋Ｍｉｓｔ）を使用した２、４、および６週目における皮膚状態の持続の改善を示すグラフである。ベースラインからの改善百分率（％）は、ＡＯ＋Ｍｉｓｔおよびプラセボの週に対してプロットされる。図３Ｂは、アンモニア酸化細菌（ＡＯ＋Ｍｉｓｔ）を使用した２、４、および６週目における皮膚状態の外観の改善を示すグラフである。ベースラインからの改善百分率（％）は、ＡＯ＋Ｍｉｓｔおよびプラセボの週に対してプロットされる。
【図４】図４は、炎症性病変の低減を示すグラフである。平均変化（％）は、アンモニア酸化細菌（ＡＯ＋Ｍｉｓｔ）およびプラセボに関して全ての試験対象および成人試験対象に対してプロットされる。
【発明を実施するための形態】
【００３６】
詳細な説明
本開示は、皮膚状態、例えば、ざ瘡、例えば、尋常性ざ瘡を処置する方法を提供する。方法は、対象に、アンモニア酸化細菌、例えば、アンモニア酸化細菌を含む調製物を投与することを含む。
【００３７】
皮膚状態、例えば、ざ瘡、例えば、尋常性ざ瘡の処置において使用するための、アンモニア酸化細菌を含む、それから本質的になる、またはそれからなる、例えば、非天然生成物、天然生成物、および強化天然生成物を含む、調製物、組成物、および配合物が企図される。アンモニア酸化細菌、例えば、アンモニア酸化細菌を含む調製物を含む、対象における皮膚状態、例えば、尋常性ざ瘡、例えば、ざ瘡の処置において使用するための組成物が企図される。
【００３８】
Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ属のアンモニア酸化細菌（ＡＯＢ）は、エネルギー源としてアンモニアのみから亜硝酸塩および一酸化窒素を生じさせることができる特有の能力を有するグラム陰性の偏性独立栄養細菌である。それらは、土壌および水環境中の両方に広く存在し、環境硝化プロセスの不可欠な構成成分である。血管拡張、皮膚の炎症および創傷治癒等のいくつかの生理学的機能の重要な構成成分としてのヒト皮膚上での亜硝酸塩および一酸化窒素の役割に起因して、これらの細菌は、健康なおよび免疫病理学的な皮膚状態の両方について有益な特性を有し得る。これらの細菌は、増殖が遅く、有機炭素源上で増殖することができず、石鹸および抗生物質に対して感受性であり得、かつ動物またはヒトにおけるいかなる疾患または感染にも一切関連していないことから、ヒトにおける使用に安全である。
【００３９】
アンモニア酸化細菌は、アンモニアから亜硝酸塩への変換のみからエネルギーを生じさせる特有の能力を有する遍在するグラム陰性の偏性化学合成無機独立栄養細菌である。
【００４０】
一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌は、以下の反応を触媒する。
【００４１】
中性ｐＨでは、中性ｐＨ条件付近でアンモニウムから生じるアンモニアが初期反応の基質である。アンモニアから亜硝酸塩への変換は、以下の通り、それぞれアンモニアモノオキシゲナーゼ（Ａｍｏ）およびヒドロキシルアミンオキシドレダクターゼ（Ｈａｏ）によって触媒される２つのステップで起こる：
ＮＨ３＋２Ｈ＋＋２ｅ−＋Ｏ２→ＮＨ２ＯＨ＋Ｈ２Ｏ  （Ａ）
ＮＨ２ＯＨ＋Ｈ２Ｏ→ＮＯ２−＋４ｅ−＋５Ｈ＋  （Ｂ）
【００４２】
一部の事例では、反応Ｂは、以下の通り、低ｐＨで亜硝酸（ＨＮＯ２）形成を示すと報告される：
ＮＨ２ＯＨ＋Ｈ２Ｏ→ＨＮＯ２＋４ｅ−＋４Ｈ＋
【００４３】
ある特定の実施形態では、ＮＨ４＋およびＮＨ３は、本開示を通じて交換可能に使用され得る。
【００４４】
本開示は、
・病変の炎症（例えば、成人における）を低減すること、
・病変の頻度を低減すること、および
・病原性細菌の存在を減少させること
が可能である、アンモニア酸化細菌、例えば、アンモニア酸化細菌を含む調製物を提供する。
【００４５】
アンモニア酸化細菌、例えば、アンモニア酸化細菌を含む調製物はまた、
・病変の持続期間を低減すること、
・異常な色素沈着および瘢痕を予防または低減すること、
・損傷を受けた皮膚の治癒期間を短縮すること、ならびに
・過剰な皮脂（例えば、皮脂腺の脂性分泌物）の産生を低減すること
が可能である。
【００４６】
本開示は、皮膚状態、例えば、ざ瘡、例えば、尋常性ざ瘡の処置において使用するための、アンモニア酸化細菌を含む調製物であって、以下：自己投与されること（例えば、毎日１〜２回）、無臭であること、無色であること、目に見えないこと、日光に対する感受性の増加を伴わないこと、安全であること、非毒性であること、皮膚（例えば、隣接する粘膜および眼）における忍容性が良好であること、１２歳未満の小児に適当であること、ならびに抗生物質耐性を助長するリスクなしに処置および維持療法の両方に適当であることのうちの１つまたは複数であり得る調製物を提供する。
【００４７】
アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａ、例えば、「Ｄ２３」と言及され、「Ｂ２４４」または「ＡＯＢ  Ｄ２３−１００」としても公知であるＮ．ｅｕｔｒｏｐｈａは、上記の特性のうちのいくつかを有し得る。
１．定義
【００４８】
アンモニア酸化細菌とは、アンモニアまたはアンモニウムを亜硝酸塩へとある速度、例えば、実質的速度、例えば、予め決定された速度で酸化することができる細菌を指す。速度、例えば、予め決定された速度とは、１分当たり少なくとも５０、７５、１２５、または１５０マイクロモルのＮＯ２−、例えば、約１００〜１５０、７５〜１７５、７５〜１２５、１００〜１２５、１２５〜１５０、または１２５〜１７５マイクロモル／分、例えば、１分当たり約１２５マイクロモルのＮＯ２−の速度での、アンモニウムイオン（ＮＨ４＋）（例えば、約２００ｍＭの）から亜硝酸塩（ＮＯ２−）への変換を指し得る。複数の実施形態では、速度、例えば、予め決定された速度とは、例えば、約０．５のＯＤを有する連続培養物について、１ｍｌ当たり１分当たり少なくとも５０、７５、１２５、または１５０ナノモルのＮＯ２−、例えば、約１００〜１５０、７５〜１７５、７５〜１２５、１００〜１２５、１２５〜１５０、または１２５〜１７５ナノモル／分／ｍｌ、例えば、１ｍｌ当たり１分当たり約１２５ナノモルのＮＯ２−の速度での、アンモニウムイオン（ＮＨ４＋）（例えば、約２００ｍＭの）から亜硝酸塩（ＮＯ２−）への変換を指し得る。
【００４９】
アンモニア酸化細菌の例は、Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ  ｅｕｔｒｏｐｈａ株、例えば、Ｄ２３およびＣ９１、ならびにＮｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ属、Ｎｉｔｒｏｓｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｎｉｔｒｏｓｏｓｐｉｒａ属、Ｎｉｔｒｏｓｏｃｙｓｔｉｓ属、Ｎｉｔｒｏｓｏｌｏｂｕｓ属、およびＮｉｔｒｏｓｏｖｉｂｒｉｏ属の他の細菌を含む。Ｄ２３  Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ  ｅｕｔｒｏｐｈａ株とは、ＡＯＢ  Ｄ２３−１００と指定され、２０１４年４月８日にＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）（１０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｌｖｄ．、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ、米国）に寄託され、受託番号ＰＴＡ−１２１１５７を有する株を指す。受託番号ＰＴＡ−１２１１５７の核酸配列、例えば、ゲノム配列は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。ある特定の実施形態では、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａは、２０１５年４月１５日出願のＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１５／０２５９０９号に記載された株であり、この文献は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。「ＡＯＢ  Ｄ２３−１００」はまた、本開示を通じてＤ２３またはＢ２４４と言及される場合がある。
【００５０】
２０１５年４月１５日出願のＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１５／０２５９０９号に開示されたいずれの核酸配列およびアミノ酸配列も、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。２０１５年４月１５日出願のＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１５／０２５９０９号に開示された任意のアンモニア酸化細菌は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【００５１】
最適化Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ  ｅｕｔｒｏｐｈａ（Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａ）とは、その用語が本明細書で使用されるとき、最適化増殖速度；最適化ＮＨ４＋酸化速度；または最適化ＮＨ４＋耐性を有するＮ．ｅｕｔｒｏｐｈａを指す。一実施形態では、これは、少なくとも１つのヌクレオチド、例えば、アンモニアモノオキシゲナーゼ、ヒドロキシルアミンオキシドレダクターゼ、シトクロムｃ５５４、およびシトクロムｃＭ５５２から選択される遺伝子中のヌクレオチドが、天然に存在するＮ．ｅｕｔｒｏｐｈａと相違する。この相違は、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａの自発的に発生する突然変異、誘導された突然変異、または指向された遺伝子工学の選択により発生し得る。一実施形態では、これは、自然界に一緒に存在しない対立遺伝子の集合を有するという点で、天然に存在するＮ．ｅｕｔｒｏｐｈａと相違する。これらの相違は、皮膚障害の処置または予防、低亜硝酸塩レベルと関連する疾患または状態の処置または予防、体臭の処置または予防、対象に一酸化窒素を供給する処置、および微小生物の増殖を阻害する処置のうちの１つまたは複数を提供し得る。
【００５２】
本明細書で使用されるとき、「純粋培養の」とは、他の生物を実質的に含有しない生物を含む組成物を指す。例えば、アンモニア酸化細菌の純粋培養物は、アンモニア酸化細菌以外の生物を実質的に含有しない培養物である。例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａの純粋培養物は、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａ以外の生物を実質的に含有しない培養物である。一部の実施形態では、「実質的に含有しない」とは、他の生物を検出するために使用される方法、例えば、培養物をプレーティングし、コロニー形態を検査すること、または１６Ｓ  ＲＮＡ等の保存遺伝子についてのＰＣＲによって検出不能であることを指示する。純粋培養組成物は、生物でない要素を含んでもよく、例えば、栄養素または添加剤を含んでもよい。本明細書で論じられたアンモニア酸化細菌の任意の実施形態、調製物、組成物、または配合物は、任意選択で純粋培養のアンモニア酸化細菌を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなってもよい。
【００５３】
本開示を通じて、配合物とは、組成物または調製物を指し得る。
【００５４】
本明細書で使用されるとき、「独立栄養生物」、例えば、独立栄養細菌とは、栄養素源として無機材料を使用し、エネルギー源として光合成または化学合成を使用することによって自己栄養供給可能な任意の生物である。独立栄養細菌は、二酸化炭素ならびに他の供給源、アンモニアの亜硝酸塩への酸化、硫化水素の酸化、およびＦｅ２＋のＦｅ３＋への酸化に由来するＡＴＰから有機化合物を合成し得る。本開示の独立栄養細菌は、感染を引き起こすことができない。
【００５５】
本明細書で使用される「組み合わせて」投与されるとは、対象の障害罹患の過程で、２つの（またはそれよりも多い）異なる処置が対象に送達されること、例えば、対象が障害と診断された後、かつ障害が治癒または排除される前に、２つまたはそれよりも多い処置が送達されることを意味する。一部の実施形態では、１つの処置の送達は、第２の処置の送達が始まるときに依然として行われており、その結果、重複が存在する。これは、「同時」または「併用」または「並行送達」と本明細書で言及されることがある。他の実施形態では、１つの処置の送達は、その他の処置の送達が始まる前に終了する。これは、「順次」または「逐次送達」と本明細書で言及されることがある。いずれかの場合の複数の実施形態では、処置は、組み合わせた投与のためにより有効である。例えば、第２の処置は、第２の処置を第１の処置の非存在下で投与した場合に見られるよりも大きな程度まで、より有効であり、例えば、より少ない第２の処置で同等の効果が見られるかもしくは第２の処置が、症状を低減するか、または第１の処置で類似の状況が見られる。一部の実施形態では、送達は、症状、または障害に関係する他のパラメーターの低減が、その他の処置の非存在下で送達された１つの処置で観察されるものを超えるようなものである。２つの処置の効果は、一部相加的であるか、完全に相加的であるか、または相加的を超えるもの（すなわち、相乗的）であってもよい。送達は、送達された第１の処置の効果が、第２の処置が送達されるときに依然として検出可能であるようなものであってもよい。一部の実施形態では、１つまたは複数の処置は、患者が障害と診断される前に送達されてもよい。
【００５６】
完全Ｎ．ｅｕｒｏｐａｅａ培地とは、Ensignら、「In  vitro  activation  of  ammonia  monooxygenase  from  Nitrosomonas  europaea  by  copper.」、J  Bacteriol.、１９９３年４月；１７５巻（７号）：１９７１〜８０頁に記載されたＮ．ｅｕｒｏｐａｅａ増殖培地を指す。
【００５７】
「培養する」とは、ある量の所望の細菌をその増殖を促進する、すなわち、細胞分裂を促進する条件下に置くプロセスを指す。条件は、特定された培養培地、設定された温度範囲、および／または撹拌速度を伴い得る。細菌は、液体培養でまたはプレート、例えば、寒天プレート上で培養することができる。
【００５８】
本明細書で使用される「単離された」という用語は、その元のまたは自生の環境（例えば、それが天然に存在する場合は天然環境）から取り出された材料を指す。例えば、生きている動物中に存在する天然に存在するポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、単離されていないが、ヒトの介入によって自然系における共存材料の一部またはすべてから分離された同じポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、単離されている。そのようなポリヌクレオチドは、ベクターの一部であってもよく、および／またはそのようなポリヌクレオチドもしくはポリペプチドは、組成物の一部であってもよく、そのようなベクターまたは組成物がそれが自然界に見出される環境の一部でないという点で、依然として単離されている。
【００５９】
「核酸」、「核酸配列」、「ヌクレオチド配列」、または「ポリヌクレオチド配列」、および「ポリヌクレオチド」という用語は、交換可能に使用される。それらは、任意の長さのヌクレオチド、例えば、デオキシリボヌクレオチドもしくはリボヌクレオチド、またはそれらの類似体のポリマー形態を指す。ポリヌクレオチドは、一本鎖または二本鎖のいずれであってもよく、一本鎖の場合、コード鎖であっても非コード（アンチセンス）鎖であってもよい。ポリヌクレオチドは、修飾ヌクレオチド、例えばメチル化ヌクレオチドおよびヌクレオチド類似体を含んでもよい。ヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチド構成成分で中断されていてもよい。ポリヌクレオチドは、重合後に、例えば標識用構成成分とのコンジュゲートによってさらに修飾されていてもよい。核酸は、組換えポリヌクレオチド、または自然界に存在しないかもしくは非天然編成で別のポリヌクレオチドと連結されているゲノム、ｃＤＮＡ、半合成、もしくは合成起源のポリヌクレオチドであってもよい。
【００６０】
本明細書で使用されるとき、「最適化増殖速度」という用語は、以下のうちの１つまたは複数を指す：本明細書の実施例２に記載されたバッチ条件下で培養された場合の、約４、５、６、７、８、９、もしくは１０時間未満の倍加時間；本明細書の実施例２に記載されたケモスタット条件下で増殖させた場合の、約１６、１８、２０、２２、２４、もしくは２６時間未満の倍加時間；または約１日もしくは２日にわたる約０．１５のＯＤ６００から少なくとも約０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、もしくは０．８までの増殖。一実施形態では、最適化増殖速度は、天然に存在するＮ．ｅｕｔｒｏｐｈａの倍加時間よりも少なくとも１０、２０、３０、４０、または５０％短い倍加時間を有する速度である。
【００６１】
本明細書で使用されるとき、「最適化ＮＨ４＋酸化速度」とは、１分当たり少なくとも約５０、７５、１２５、または１５０マイクロモルの、ＮＨ３またはＮＨ４＋からＮＯ２−への変換の速度を指す。例として、速度は、１分当たり少なくとも約５０、７５、１２５、または１５０マイクロモルの、ＮＨ４＋（例えば、約２００ｍＭの）からＮＯ２−への変換であってもよい。一実施形態では、最適化ＮＨ４＋酸化速度は、ＮＨ３またはＮＨ４＋が、天然に存在するＮ．ｅｕｔｒｏｐｈａで見られるよりも少なくとも１０、２０、３０、４０、または５０％急速に、ＮＯ２−へと変換される速度である。
【００６２】
本明細書におけるアミノ酸配列（例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａ  Ｄ２３によって発現されるタンパク質）に対するアミノ酸配列同一性パーセント（％）は、配列をアラインメントし、必要であればギャップを導入して最大の配列同一性パーセントを達成した後の、天然に存在するＮ．ｅｕｔｒｏｐｈａ配列またはＮ．ｅｕｔｒｏｐｈａ  Ｄ２３配列であり得る参照配列中のアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基の百分率として定義され、いかなる保存的置換も配列同一性の一部として考慮しない。アミノ酸配列同一性パーセントを決定する目的のアラインメントは、当業者の手段の範囲内にある様々な方式で、例として、公的に入手可能なコンピューターソフトウェア、例えばＢＬＡＳＴ、ＡＬＩＧＮまたはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアを使用して達成することができる。当業者は、比較される配列の全長にわたって最大限のアラインメントを達成するのに必要とされる任意のアルゴリズムを含む、アラインメントを測定するための適切なパラメーターを決定することができる。例として、ＷＵ−ＢＬＡＳＴ−２ソフトウェアを使用して、アミノ酸配列同一性を決定してもよい（Altschulら、Methods  in  Enzymology、２６６巻、４６０〜４８０頁（１９９６年）；http://blast.wustl/edu/blast/README.html）。ＷＵ−ＢＬＡＳＴ−２は、いくつかの検索パラメーターを使用し、それらのほとんどは、初期値に設定される。調整可能なパラメーターは、以下の値で設定される：オーバーラップスパン＝１、オーバーラップフラクション＝０．１２５、ワールド閾値（Ｔ）＝Ｉ１。ＨＳＰスコア（Ｓ）およびＨＳＰ  Ｓ２パラメーターは、動的値であり、特定の配列の組成に応じてプログラム自体によって確立されるが、最小値は、適宜調整してもよい。
【００６３】
アミノ酸置換は、１個のアミノ酸を類似した構造的および／または化学的特性を有する別のアミノ酸で置き換えること、例えばロイシンのセリンでの置き換え、すなわち、保存的アミノ酸置き換えの結果であり得る。典型的であるが非限定的な保存的置換は、脂肪族アミノ酸Ａｌａ、Ｖａｌ、ＬｅｕおよびＩｌｅの中の相互の置き換え；ヒドロキシ残基を含有するＳｅｒおよびＴｈｒの交換、酸性残基ＡｓｐおよびＧｌｕの交換、アミド含有残基ＡｓｎとＧｌｎとの間の交換、塩基性残基ＬｙｓおよびＡｒｇの交換、芳香族残基ＰｈｅおよびＴｙｒの交換、ならびに小型アミノ酸Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、ＭｅｔおよびＧｌｙの交換である。追加の保存的置換は、あるアミノ酸の類似した空間または立体配置を有する別のアミノ酸による置き換え、例えば、ＡｓｎとＡｓｐ、またはＧｌｎとＧｌｕの交換を含む。アミノ酸置換はまた、１個のアミノ酸を類似していない構造的および／または化学的特性を有する別のアミノ酸で置き換えること、すなわち、非保存的アミノ酸置き換えの結果であり得る。挿入または欠失は、任意選択で、１から５個のアミノ酸の範囲であってもよい。許容される変異は、配列中にアミノ酸の挿入、欠失または置換を系統的に作製し、得られた変異体を例えば、尿素またはアンモニアの代謝についてのｉｎ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイにおける活性について試験することによって決定され得る。
【００６４】
本明細書における核酸配列（例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａ  Ｄ２３ゲノムおよびその部分）に対する配列同一性パーセント（％）は、配列をアラインメントし、必要であればギャップを導入して最大の配列同一性パーセントを達成した後の、天然に存在するＮ．ｅｕｔｒｏｐｈａ配列またはＮ．ｅｕｔｒｏｐｈａ  Ｄ２３配列であり得る参照配列中のヌクレオチドと同一である候補配列中のヌクレオチドの百分率として定義される。ヌクレオチド配列同一性パーセントを決定する目的のアラインメントは、当業者の手段の範囲内にある様々な方式で、例として、公的に入手可能なコンピューターソフトウェア、例えばＢＬＡＳＴを使用して達成することができる。当業者は、比較される配列の全長にわたって最大限のアラインメントを達成するのに必要とされる任意のアルゴリズムを含む、アラインメントを測定するための適切なパラメーターを決定することができる。
【００６５】
「ポリペプチド」、「ペプチド」および「タンパク質」（一本鎖の場合）という用語は、アミノ酸ポリマーを指すために本明細書で交換可能に使用される。ポリマーは、直鎖状であっても分岐状であってもよく、修飾アミノ酸を含んでもよく、非アミノ酸で中断されていてもよい。これらの用語はまた、修飾されているアミノ酸ポリマー；例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、または他の任意のマニピュレーション、例えば標識用構成成分とのコンジュゲートを包含する。ポリペプチドは、天然源から単離されてもよく、組換え技法によって真核生物もしくは原核生物宿主から生成されてもよく、または合成手順の生成物であってもよい。
【００６６】
本明細書で使用されるとき、「最適化ＮＨ４＋耐性」とは、５０、７５、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、または３００ｍＭ超のＮＨ３またはＮＨ４＋の条件において、少なくとも約２４時間または４８時間増殖する能力を指す。一実施形態では、最適化ＮＨ４＋耐性とは、選択された濃度のＮＨ３またはＮＨ４＋の存在下で、天然に存在するＮ．ｅｕｔｒｏｐｈａが増殖できるよりも少なくとも１０、２０、３０、４０、もしくは５０％急速に、または少なくとも１０、２０、３０、４０、もしくは５０％長く増殖する能力を指す。
【００６７】
核酸またはタンパク質配列間の比較に関して本明細書で使用されるとき、「類似した」とは、相同性を有することを意味する。類似した遺伝子またはタンパク質は、例えば、置換（保存的もしくは非保存的置換等）、挿入（例えば、少なくとも１、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、３０個のアミノ酸、および例えば、最大で２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、３０、もしくは５０個のアミノ酸、またはそれらの任意の正の組合せ、または前記アミノ酸をコードするのに必要な数のヌクレオチドの）、または欠失（例えば、少なくとも１、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、３０個のアミノ酸、および例えば、最大で２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、３０、もしくは５０個のアミノ酸、またはそれらの任意の正の組合せ、または前記アミノ酸をコードするのに必要な数のヌクレオチドの）、またはそれらの任意の組合せを含んでもよい。置換、挿入、および欠失はそれぞれ、タンパク質または遺伝子のＮ末端、Ｃ末端、または中央領域に位置し得る。複数の実施形態では、保存的置換は、置換された位置における電荷および／または極性および／またはおおよそのサイズおよび／または形状を変更しない置換である。
【００６８】
本明細書で使用されるとき、「対象」とは、動物、哺乳動物、ヒト、非ヒト動物、家畜動物、または伴侶動物を含んでもよい。「対象」という用語は、ヒトおよび非ヒト動物、例えば、脊椎動物、大型動物、および霊長類を含むことを意図している。ある特定の実施形態では、対象は、哺乳動物対象であり、特定の実施形態では、対象は、ヒト対象である。ヒトでの適用は明確に予想されているが、例えば、非ヒト動物での獣医学的適用もまた、本明細書で想定されている。本開示の「非ヒト動物」という用語は、すべての脊椎動物、例えば、非哺乳動物（鳥類、例えば、ニワトリ；両生類；爬虫類等）ならびに哺乳動物、例えば非ヒト霊長類、家畜化された、および農業上有用な動物、例えば、中でもヒツジ、イヌ、ネコ、ウシ、ブタ、ラットを含む。
【００６９】
本明細書で使用されるとき、「トランスジェニック」とは、１つまたは複数の外因性ＤＮＡ部分を含むことを意味する。外因性ＤＮＡは、別の生物、例えば、別の細菌、バクテリオファージ、動物、または植物に由来する。
【００７０】
本明細書で使用されるとき、「疾患または状態の処置」とは、同様であるが無処置の患者と比較して、その疾患または状態の少なくとも１つの症状の重症度または頻度を低減することを指す。処置はまた、同様であるが無処置の患者と比較して、疾患または状態の進行を止めること、遅らせること、または逆転させることを指し得る。処置は、疾患および／または１つもしくは複数の症状の根本的原因に対処することを含んでもよい。
【００７１】
本明細書で使用されるとき、「治療有効量」とは、疾患もしくは状態の進展を予防する、もしくはその退行を引き起こすのに十分な、または疾患もしくは状態の症状を緩和することができる、または所望の結果を達成することができる用量を指す。治療有効用量は、例えば、細菌の数もしくは生存細菌の数（例えば、ＣＦＵ単位）または細菌の質量（例えば、ミリグラム、グラム、もしくはキログラム単位）、または細菌の体積（例えば、ｍｍ３単位）として測定することができる。
【００７２】
本明細書で使用されるとき、「生存度」という用語は、アンモニア、アンモニウム、または尿素を亜硝酸塩へと予め決定された速度で酸化する独立栄養細菌の、例えば、アンモニア酸化細菌の能力を指す。一部の実施形態では、速度とは、１分当たり少なくとも５０、７５、１２５、または１５０マイクロモルのＮＯ２−、例えば、約１００〜１５０、７５〜１７５、７５〜１２５、１００〜１２５、１２５〜１５０、または１２５〜１７５マイクロモル／分、例えば、１分当たり約１２５マイクロモルのＮＯ２−の速度での、アンモニウムイオン（ＮＨ４＋）（例えば、約２００ｍＭの）から亜硝酸塩（ＮＯ２−）への変換を指す。
【００７３】
本明細書で言及される「増殖培地」または「ＡＯＢ培地」は、以下の表２または表３の構成成分を含む：
【表２】
2018524351.tif 000003
【表３−１】
2018524351.tif 000004
【表３−２】
2018524351.tif 000005
各溶液をオートクレーブ処理し、室温で貯蔵する。
【００７４】
一部の実施形態では、本開示に最適な状態は、少なくとも約７．６のｐＨ、アンモニア、微量鉱物、酸素および二酸化炭素によって特徴付けられる、増殖、例えば、最大限の増殖の状態である。別の状態は、約７．４またはそれ未満のｐＨによって特徴付けられ、二酸化炭素の非存在によって特徴付けられ得る。低二酸化炭素条件下で、アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．  ｅｕｔｒｏｐｈａは、アンモニアを亜硝酸塩へと酸化し続け、ＡＴＰを生じさせるが、二酸化炭素を欠く場合、例えば、固定し、タンパク質を生じさせるための十分な二酸化炭素を欠く場合、代わりに、ポリホスフェートを生じさせ、これをエネルギー貯蔵媒体として使用する。これは、アンモニア酸化細菌が、ある期間、例えば、予め決定された期間、例えば、少なくとも１、２、３、４、５、６、７日間、１、２、３、４週間、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２か月間、１、２、３、４、または５年間「貯蔵状態」のままであることを可能とし得る。一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌は、少なくとも約６か月から約１年間貯蔵状態のままであってもよい。
【００７５】
本明細書で使用されるとき、「増殖状態」とは、少なくとも約７．６のｐＨを有し得る状態または環境、例えば、培地、例えば、培養培地、例えば、増殖培地における独立栄養細菌、例えば、アンモニア酸化細菌を指す。アンモニア、アンモニウムイオン、および尿素のうちの少なくとも１つのレベルは、約１マイクロモル濃度から１０００ミリモル濃度の間であってもよい。微量材料のレベルは、約０．０１マイクロモル濃度の鉄から２００マイクロモル濃度の鉄の間である。酸素のレベルは、約５％から１００％の間の酸素飽和度（例えば、培地の）である。二酸化炭素のレベルは、約２０ｐｐｍから１０％の間の飽和度（例えば、培地の）である。ある特定の態様では、アンモニア、アンモニウムイオン、および尿素のうちの少なくとも１つのレベルは、約１０マイクロモル濃度から１００ミリモル濃度の間であってもよい。微量材料のレベルは、約０．１マイクロモル濃度の鉄から２０マイクロモル濃度の鉄の間である。酸素のレベルは、約５％から１００％の間の酸素飽和度である。二酸化炭素のレベルは、約２００ｐｐｍから５％の間の飽和度（例えば、培地の）である。
【００７６】
本明細書で使用されるとき、「ポリホスフェート負荷状態」とは、約７．４またはそれ未満のｐＨを有し得る状態または環境、例えば、培地、例えば、培養培地、例えば、増殖培地における独立栄養細菌、例えば、アンモニア酸化細菌を指す。アンモニア、アンモニウムイオン、および尿素のうちの少なくとも１つのレベルは、約１マイクロモル濃度から２０００ミリモル濃度の間である。微量材料のレベルは、０．０１マイクロモル濃度の鉄から２００マイクロモル濃度の鉄の間である。酸素のレベルは、約０％から１００％の間のＯ２飽和度（例えば、培地の）である。二酸化炭素のレベルは、約０から４００ｐｐｍの間／それ未満であり、ホスフェートレベルは、約１マイクロモル濃度超である。ある特定の態様では、アンモニア、アンモニウムイオン、および尿素のうちの少なくとも１つのレベルは、約１０マイクロモル濃度から２００ミリモル濃度の間である。微量材料のレベルは、０．１マイクロモル濃度の鉄から２０マイクロモル濃度の鉄の間である。酸素のレベルは、約５％から１００％の間のＯ２飽和度である。二酸化炭素のレベルは、約０から２００ｐｐｍの間／それ未満であり、ホスフェートレベルは、約１０マイクロモル濃度超である。
【００７７】
ポリホスフェート負荷状態は、ある期間、例えば、予め決定された期間誘導され得る。予め決定された期間は、アンモニア酸化細菌中の十分なポリホスフェート蓄積を可能とする期間であってもよい。この予め決定された期間は、アンモニア酸化細菌が長期間貯蔵されることを可能とするように、十分なポリホスフェート負荷を提供するのに適当な期間である。予め決定された期間は、アンモニア酸化細菌の倍加時間の約０．２〜１０倍、０．３〜５倍、０．５〜３倍、０．５〜１．５倍、または０．５から１倍の期間に少なくとも一部基づいてもよい。予め決定された期間は、アンモニア酸化細菌の約１倍加時間の期間に少なくとも一部基づいてもよい。一部の実施形態では、予め決定された期間は、約８時間から１２時間の間である。一部の実施形態では、予め決定された期間は、約１０時間である。一部の実施形態では、予め決定された期間は、約２４時間である。
【００７８】
ポリホスフェート負荷状態の目的は、ＡＴＰを生成することができるように、ＡＯＢに十分なアンモニア、アンモニウムイオン、および／または尿素、ならびにＯ２を提供するが、それらがそのＡＴＰを使用してＣＯ２を固定することができず、代わりに、そのＡＴＰを使用して細菌によって貯蔵され得るポリホスフェートを生じさせるように、それらにＣＯ２およびカーボネートを与えないことであり得る。
【００７９】
本明細書で使用されるとき、「貯蔵状態」という用語は、約７．４またはそれ未満のｐＨを有する状態または環境、例えば、培地、例えば、培養培地、例えば、増殖培地における独立栄養細菌、例えば、アンモニア酸化細菌を指す（一部の実施形態では、ｐＨは、７．６またはそれ未満であってもよい）。アンモニア、アンモニウムイオン、および尿素のうちの少なくとも１つのレベルは、約１から１０００マイクロモル濃度の間である。微量材料のレベルは、約０．１から１００マイクロモル濃度の間である。酸素のレベルは、約０から１００％の間の飽和度（例えば、培地の）である。二酸化炭素のレベルは、約０から８００ｐｐｍの間である。ある特定の態様では、アンモニア、アンモニウムイオン、および尿素のうちの少なくとも１つのレベルは、約１０から１００マイクロモル濃度の間である。微量材料のレベルは、約１から１０マイクロモル濃度の間である。酸素のレベルは、約０から１００％の間の飽和度（例えば、培地の）である。二酸化炭素のレベルは、約０から４００ｐｐｍの間である。
【００８０】
ＡＯＢは、本開示の一部の実施形態に従って、増殖状態中にＡＯＢバイオマスを生じさせ、その後、ＡＯＢをポリホスフェート負荷状態に曝露し、その後、培地を除去し、ＡＯＢを緩衝液、例えば、貯蔵緩衝液に再懸濁する（すなわち、貯蔵状態）ことによって生成される。
【００８１】
アンモニア酸化細菌は、ある期間、例えば、予め決定された期間、例えば、少なくとも１、２、３、４、５、６、７日間、１、２、３、４週間、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２か月間、１、２、３、４、または５年間「貯蔵状態」のままであってもよい。一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌は、少なくとも約６か月から約１年間貯蔵状態のままであってもよい。再生時に、アンモニア酸化細菌の生存性は、貯蔵前の、例えば、増殖状態の）アンモニア酸化細菌の場合の生存性の少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％である。一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌の調製物は、選択された条件での貯蔵時に、ＮＨ４＋を酸化する能力の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、または７０％以下が失われるように調製され得る。
【００８２】
アンモニア酸化細菌を貯蔵状態（またはポリホスフェート負荷状態）から再生させるのに要する時間は、予め決定された期間であってもよい。例えば、予め決定された期間は、約７５時間未満、または約７２時間未満であってもよい。予め決定された期間は、アンモニア酸化細菌の倍加時間の約０．２〜１０倍、０．３〜５倍、０．５〜３倍、０．５〜１．５倍、または０．５から１倍の期間に少なくとも一部基づいてもよい。予め決定された期間は、アンモニア酸化細菌の約１倍加時間の期間に少なくとも一部基づいてもよい。予め決定された期間は、約８時間から１２時間の間であってもよい。予め決定された期間は、約１０時間であってもよい。予め決定された時間は、約７５時間、７２時間、７０時間、６８時間、６５時間、６０時間、５５時間、５０時間、４５時間、４０時間、３５時間、３０時間、２５時間、２０時間、１５時間、１０時間、５時間、４時間、３時間、２時間、または１時間未満であってもよい。予め決定された期間は、約５分から５時間の間であってもよい。予め決定された期間は、約５〜１０分、１０〜１５分、１５〜２０分、２０〜２５分、２５〜３０分、３０〜４５分、４５〜６０分、６０分〜１．５時間、１．５時間〜２時間、２時間〜２．５時間、２．５時間〜３時間、３時間〜３．５時間、３．５時間〜４時間、４時間〜４．５時間、４．５時間〜５時間であってもよい。一部の実施形態では、予め決定された期間は、約２時間であってもよい。予め決定された期間は、例えば、アンモニア酸化細菌の再生を達成する、例えば、貯蔵前の（例えば、増殖状態の）細菌の生存性と比較したアンモニア酸化細菌の生存性、例えば、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、または１００％の生存性を達成するのに要し得る時間であってもよい。
【００８３】
本明細書で使用される「活性化」は、独立栄養細菌、例えば、アンモニア酸化細菌に対して使用される。活性化とは、アンモニア酸化細菌を潜在的により活性な状態、例えば、増殖状態に置き得る任意の作用を指す。活性化は、アンモニア、アンモニウムイオン、および尿素のうちの少なくとも１つから亜硝酸塩、一酸化窒素、または一酸化窒素前駆体への変換を何らかの形で支援する、独立栄養細菌、例えば、アンモニア酸化細菌の刺激に関係し得る。活性化は、例えば、独立栄養細菌、例えば、アンモニア酸化細菌が他の既存細菌と競合することを可能とするように、細菌コロニーの確立を助けることに関係し得る。活性化は、独立栄養細菌、例えば、アンモニア酸化細菌の持続性および／または増殖に有利に働き得る環境を提供することに関係し得る。活性化は、環境または表面への独立栄養細菌、例えば、アンモニア酸化細菌の利用可能性を加速させることに関係し得る。「活性化」は、アンモニア酸化細菌が「活性化された」または「増殖状態」となることを提供し得る。「活性化」は、活性化剤の使用により起こり得る。アンモニア酸化細菌は、活性化剤と接触して、「活性化された」または「増殖」状態のアンモニア酸化細菌となり得る。これは、容器、送達デバイス、もしくは送達システム内もしくはその外側で、例えば、第１のチャンバー、第２のチャンバー、混合チャンバー、第３のもしくは追加のチャンバー内で、またはそれらの組合せで行われてもよい。活性化剤は、アンモニア、アンモニウムイオン、または尿素のうちの少なくとも１つであってもよい。活性化剤は、アンモニウム塩、例えば、塩化アンモニウムまたは硫酸アンモニウムであってもよい。活性化剤、例えば、アンモニウム塩、例えば、塩化アンモニウムまたは硫酸アンモニウムの濃度は、約１０マイクロモル濃度から約１００ミリモル濃度の範囲であってもよい。ある特定の態様では、活性化剤、例えば、アンモニウム塩、例えば、塩化アンモニウムまたは硫酸アンモニウムの濃度は、約０．５ｍＭから約５０ｍＭの範囲であってもよい。活性化剤は、溶液、懸濁液、粉末、例えば、結晶形態、培地、緩衝液中にあってもよく、または活性化剤を維持するための適当な担体中に配置されるかもしくはそれとして提供されてもよい。アンモニア酸化細菌は、ＡＯＢを所望の状態、例えば、貯蔵状態で維持するための任意の適当な形態、例えば、水性懸濁液、ゲル、または粉末形態であってもよい。アンモニア、アンモニウムイオン、または尿素のうちの少なくとも１つは、アンモニア酸化細菌の増殖を促進する培地または緩衝液、例えば、ＡＯＢ培地または増殖培地中にあってもよい。徐放性、または制御放出性尿素を、活性化剤として使用してもよい。
【００８４】
本明細書で使用される「動作」とは、何らかの作用が起こされていること、例えば、プロセスが開始されていることまたは何らかの物が発動されていることを意味する。一部の実施形態では、動作とは、容器のバリアを破ること、または容器の１つもしくは複数の内容物の移動、例えば、容器の１つもしくは複数の内容物の容器の外側への、例えば、表面もしくは環境への送達の始まりを指し得る。
【００８５】
本明細書で使用される「バリア」とは、例えば、容器の第１のチャンバーと第２のチャンバーとの間の通過を妨げるかまたは分離を維持するのに役立ち得る任意の構造または構成を意味し得る。バリアは、バルブ、例えば、チェックバルブ、濾過材料、フィルム、ワックス、脂質、ポリマー、または制御放出性材料、例えば、遅延放出性材料の形態であってもよい。バリアは、容器の動作時に、第１のチャンバーからの内容物の第２のチャンバーへの通過、第２のチャンバーからの内容物の第１のチャンバーへの通過、または両方を可能とし得る材料であってもよい。バリアは、動作時に、例えば、バリアを突き通す、穿刺する、突き刺す、穿孔する、貫通する、引き裂く、開放するまたはちぎることにより破壊されてもよい。バリアは、バルブ、例えば、チェックバルブ、容器の１つもしくは複数の内容物との接触時に分解しない場合がある可撓性もしくは非可撓性材料、または容器の１つもしくは複数の内容物との接触時に分解し得る可撓性もしくは非可撓性材料、濾過材料の形態であってもよい。バリアは、その目的に適当な任意の材料、例えば、通過を妨げるまたは分離を維持するのに役立ち得る材料、例えば、ポリマー材料または金属材料から作製されてもよい。
【００８６】
「マイクロバイオーム」とは、対象の表面上で、例えば、腸、口、皮膚、および／または対象中の他の場所において生存する集団、例えば、１種または複数の微生物を指す。集団は、対象の生命を支持することに関して、１つまたは複数の有益な機能および／または利益を有し得る。
【００８７】
「バイオームに無害である」とは、対象のマイクロバイオームの最小限の撹乱を可能とし得る何らかの物、例えば、製品、例えば、化粧製品、例えば、完成化粧製品を指す。例えば、バイオームに無害であるとは、対象に適用され得る製品であって、適用時点のマイクロバイオームが維持され、最小限に撹乱され、および／または製品の適用後のある期間後にそのマイクロバイオームに戻ることができることを可能とし得る、製品を指す。複数の実施形態では、バイオームに無害であるとは、製品が対象のアンモニア酸化細菌の最小限の撹乱を可能とし得るという点で、アンモニア酸化細菌に無害であることを指し得る。
【００８８】
複数の実施形態では、「バイオームに無害である」は、「バイオームに適合する」と言及される場合がある。
【００８９】
「天然生成物」とは、少なくとも一部天然由来であり得る生成物であるかまたはそれを含んでもよい。これは、生きている生物によって生成された任意の物であるかまたは任意の物を含んでもよく、生物自体を含んでもよい。天然生成物は、生物全体、および生物の一部（例えば、植物の葉）、生物由来のエキス、生物由来の有機化合物、生物由来の精製有機化合物を含んでもよい。天然生成物は、一次代謝産物（アミノ酸、炭水化物、および核酸）ならびに二次代謝産物（限られた範囲の種において見出される有機化合物、例えば、ポリケチド、脂肪酸、テルペノイド、ステロイド、フェニルプロパノイド、アルカロイド、特殊アミノ酸およびペプチド、特殊炭水化物）を含む、見出された有機物質および細胞であるかまたはそれを含んでもよい。天然生成物は、ポリマー有機材料、例えばセルロース、リグニン、およびタンパク質であるかまたはそれを含んでもよい。
【００９０】
天然生成物は、商業目的の製品であるかまたはそれを含んでもよく、天然源から生成された化粧品、栄養補助食品、および食品を指し得る。天然生成物は、例えば、疾患または状態の処置において、治療上有益であり得る薬理学的または生物学的活性を有し得る。天然生成物は、伝統薬、美容術目的のトリートメント、およびスパトリートメント中に含まれ得る。本明細書で言及される天然生成物は、１種または複数の他の構成成分、例えば、添加剤を含む調製物または配合物に組み込まれる天然生成物として記載された構成成分のうちのいずれか１種または複数を含んでもよい。天然生成物と言及される調製物または配合物は、本明細書に定義された天然生成物と、１種または複数の追加の構成成分または成分とを含んでもよい。本開示を通じて論じられた組成物、調製物、または配合物のいずれかは、１種または複数の天然生成物であるかまたはそれを含んでもよい。
【００９１】
一部の実施形態では、天然生成物または強化天然生成物は、泥、水、食物由来の生成物、植物由来の生成物、エキス、および油のうちの少なくとも１つを含んでもよい。天然生成物または強化天然生成物は、スパトリートメント（ｓｐａ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）において使用されてもよい。
【００９２】
一部の実施形態では、天然生成物または強化天然生成物は、粉末、クリーム、ローション、ラップ、スクラブ、アイマスク、フェイシャルマスク、ボディマスク、エアロゾル、例えば、ミスト、スプレー、膏薬、ワイプ、スティック、包帯、または浸液のうちの少なくとも１つに組み込まれてもよい。
【００９３】
一部の実施形態では、天然生成物または強化天然生成物は、ベビー製品、例えば、ベビーシャンプー、ベビーローション、ベビーオイル、ベビーパウダー、ベビークリーム；浴用調製物、例えば、バスオイル、タブレット、ソルト、バブルバス、バスカプセル；アイメークアップ用調製物、例えば、アイブローペンシル、アイライナー、アイシャドー、アイローション、アイメークアップリムーバー、マスカラ；香料調製物、例えば、コロン、オードトワレ、香水、パウダー（ダスティングおよびタルカム）、サシェ；毛髪用調製物、例えば、毛髪コンディショナー、ヘアスプレー、ヘアストレート剤、パーマネントウェーブ剤、リンス、シャンプー、トニック、調髪料、整髪補助剤、ウェーブセット剤；毛髪着色用調製物、例えば、毛髪染料およびヘアカラー、染毛剤、着色用ヘアリンス、着色用ヘアシャンプー、着色ヘアライトナー、ヘアブリーチ；メークアップ用調製物、例えば、フェースパウダー、ファンデーション、レッグおよびボディペイント、口紅、メークアップベース、頬紅、メークアップ定着剤；マニキュア用調製物、例えば、ベースコートおよびアンダーコート、キューティクル軟化剤、ネイルクリームおよびローション、ネイルエクステンダー、ネイルポリッシュおよびエナメル、ネイルポリッシュおよびエナメルリムーバー；口腔衛生製品、例えば、歯磨剤、マウスウォッシュおよびブレスフレッシュナー；浴用石鹸および洗剤、デオドラント、ビデ、女性用衛生デオドラント；シェービング用調製物、例えば、アフターシェーブローション、髭軟化剤、タルカム、プレシェーブローション、シェービングクリーム、シェービングソープ；スキンケア用調製物、例えば、クレンジング、脱毛剤、顔および首、身体および手、足用パウダーおよびスプレー、保湿料、夜用調製物、ペーストマスク、スキンフレッシュナー；ならびに日焼け用調製物、例えば、ジェル、クリーム、およびリキッド、および屋内タンニング用調製物のうちの少なくとも１つとして提供されてもよく、またはその中に配置されてもよい。
【００９４】
本明細書で使用されるとき、「存在」または「レベル」とは、構成成分、例えば、アンモニア酸化細菌、アンモニア、アンモニウムイオン、尿素、亜硝酸塩、または一酸化窒素のうちのいずれか１つまたは複数の定性的または定量的量を指し得る。存在またはレベルは、ゼロ値または構成成分が存在しないことを含んでもよい。
【００９５】
本明細書で使用されるとき、「界面活性剤」という用語は、２種の液体の間または液体と固体との間の表面張力、または界面張力を低下させ得る化合物を含む。界面活性剤は、洗剤、湿潤化剤、乳化剤、起泡剤、および分散剤として作用し得る。界面活性剤は、以下のうちの１種または複数を、単独で、または列記されたもの、もしくは他の界面活性剤もしくは界面活性剤様化合物と組み合わせて含んでもよい：コカミドプロピルベタイン（ＣｏｌａＴｅｒｉｃ  ＣＯＡＢ）、ポリエチレンソルビトールエステル（例えば、Ｔｗｅｅｎ  ８０）、エトキシ化ラウリルアルコール（ＲｈｏｄａＳｕｒｆ  ６  ＮＡＴ）、ラウレス硫酸ナトリウム／ラウリルグルコシド／コカミドプロピルベタイン（Ｐｌａｎｔａｐｏｎ  ６１１  Ｌ  ＵＰ）、ラウレス硫酸ナトリウム（例えば、ＲｈｏｄａＰｅｘ  ＥＳＢ  ７０  ＮＡＴ）、アルキルポリグルコシド（例えば、Ｐｌａｎｔａｒｅｎ  ２０００  Ｎ  ＵＰ）、ラウレス硫酸ナトリウム（Ｐｌａｎｔａｒｅｎ  ２００）、Ｄｒ．Ｂｒｏｎｎｅｒのカスティール石鹸、Ｄｒ．Ｂｒｏｎｎｅｒのベビー石鹸、ラウラミンオキシド（ＣｏｌａＬｕｘ  Ｌｏ）、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、ポリスルホネートアルキルポリグルコシド（ＰｏｌｙＳｕｆａｎａｔｅ  １６０  Ｐ）、ラウリル硫酸ナトリウム（Ｓｔｅｐａｎｏｌ−ＷＡ  Ｅｘｔｒａ  Ｋ）、およびそれらの組合せ。Ｄｒ．Ｂｒｏｎｎｅｒのカスティール石鹸およびベビー石鹸は、水、有機ヤシ油、水酸化カリウム、有機オリーブ油、有機フェアディールアサ油、有機ホホバ油、クエン酸、およびトコフェロールを含む。
【００９６】
界面活性剤は、ヒドロキシプロピルスルホン酸ラウリルグルコシドナトリウム（Ｓｕｇａ（登録商標）ｎａｔｅ  １６０ＮＣ）、ラウラミドプロピルベタイン（Ｃｏｌａ（登録商標）Ｔｅｒｉｃ  ＬＭＢ）；コカミドプロピルヒドロキシスルタイン（Ｃｏｌａ（登録商標）Ｔｅｒｉｃ  ＣＢＳ）；ココアンホ二酢酸二ナトリウム（Ｃｏｌａ（登録商標）Ｔｅｒｉｃ  ＣＤＣＸ−ＬＶ）；ヒドロキシプロピルリン酸ラウリルグルコシドナトリウム（Ｓｕｇａ（登録商標）Ｆａｘ  Ｄ１２）を含んでもよい。
【００９７】
界面活性剤は、ラウロイルメチルイセチオン酸ナトリウム（Ｉｓｅｌｕｘ（登録商標）ＬＱ−ＣＬＲ−ＳＢ）；ココイルメチルタウリンナトリウム（Ｐｕｒｅａｃｔ  ＷＳ  Ｃｏｎｃ．）；水（および）ラウロイルメチルイセチオン酸ナトリウム（および）コカミドプロピルベタイン（および）ココイルイセチオン酸ナトリウム（および）オレオイルメチルタウリンナトリウム（Ｉｓｅｌｕｘ（登録商標）ＳＦＳ−ＳＢ）を含んでもよい。
【００９８】
他の界面活性剤が、本開示によって企図される。
２．アンモニア酸化細菌（ＡＯＢ）、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａ株Ｄ２３および他のアンモニア酸化細菌
【００９９】
本明細書で複数のＡＯＢまたは１つのＡＯＢと呼ばれる場合がある独立栄養アンモニア酸化細菌は、Alan  B.  HooperおよびA．  Krummelらによって述べられた絶対独立栄養細菌である。Alan  B.  Hooper、Biochemical  Basis  of  Obligate  Autotrophy  in  Nitrosomonas  europaea、Journal  of  Bacteriology、１９６９年２月、７７６〜７７９頁。Antje  Krummelら、Effect  of  Organic  Matter  on  Growth  and  Cell  Yield  of  Ammonia-Oxidizing  Bacteria、Arch  Microbiol（１９８２年）１３３巻：５０〜５４頁。これらの細菌は、すべての代謝エネルギーをアンモニアから亜硝酸塩への酸化によってのみ得るが、その呼吸鎖内の中間生成物として一酸化窒素（ＮＯ）を有し、二酸化炭素を固定することによって事実上すべての炭素を得る。それらは、少数種の単純な分子以外の炭素源を利用することができない。
【０１００】
アンモニア酸化細菌（ＡＯＢ）は、環境中に広く見出され、アンモニア、酸素および微量金属の存在下で二酸化炭素を固定して繁殖する。ＡＯＢは、増殖が遅い場合があり、有毒レベルのアンモニアは、ＡＯＢが繁殖できる前に魚および他の生物を殺滅する場合があるが、アンモニアを無毒レベルに低減する。ＡＯＢの遅い増殖は、皮膚に適用された場合にＡＯＢが生成するＮＯおよび亜硝酸塩の健康上の利益を遅らせる場合もある。
【０１０１】
増殖し、その目的のために貯蔵された十分な生きたＡＯＢを、水槽（ａｑｕａｒｉｕｍ）、皮膚、またはプロセスに補充することが望ましい。ＡＯＢは胞子を形成しないので、乾燥状態で高い生存率を有して貯蔵することが困難であり、湿った状態での貯蔵は、ＡＯＢを代謝的に活性なままにする。
【０１０２】
廃水処理のためにＡＯＢを貯蔵している間の硝化能の減衰は、例えば（Munz  G、Lubello  C、Oleszkiewicz  JA.  Modeling  the  decay  of  ammonium  oxidizing  bacteria.  Water  Res.  ２０１１年１月；４５巻（２号）：５５７〜６４頁、Oi:10.1016/j.watres.2010.09.022）として研究されている。
【０１０３】
Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓの増殖、長期貯蔵、および活性回復は、Cassidyら（ＵＳ５，３１４，５４２）によって論じられており、そこで彼らは、Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓを増殖させること、有毒な老廃物を除去すること、適切な塩分の無菌水中で最大１年の期間貯蔵すること、その後緩衝液（ＣａＣＯ３）および２００ｐｐｍのアンモニウムを添加することによって復元するが、その復元は７２時間かかることを開示している。
【０１０４】
絶対独立栄養生物として、ＡＯＢは、アンモニアから亜硝酸塩への酸化によって発生したエネルギーおよび還元当量を使用してＣＯ２を固定することによってタンパク質を合成する。増殖は、アンモニア、酸素、無機質および二酸化炭素を要求する。
【０１０５】
Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓは、K.R.  TerryおよびA.  B.  Hooperによる「Polyphosphate  and  Orthophosphate  Content  of  Nitrosomonas  europaea  as  a  Function  of  Growth」、Journal  of  Bacteriology、１９７０年７月、１９９〜２０６頁、１０３巻、Ｉ号によると、いくつかの代謝状態で存在してもよい。
【０１０６】
本開示において考慮されるＡＯＢは、野生型ＡＯＢに対して突然変異を含んでもよい。これらの突然変異は、例えば自然発生する、ランダム突然変異誘発によって導入される、または標的突然変異誘発によって導入される場合がある。例として、ＡＯＢは、野生型ＡＯＢが典型的に含む１つまたは複数の遺伝子または調節ＤＮＡ配列を欠如する場合がある。ＡＯＢは、配列決定された株または野生型株に対して点突然変異、置換、挿入、欠失、および／または再編成も含んでもよい。ＡＯＢは、最適化ＡＯＢの精製調製物であってもよい。
【０１０７】
ある特定の実施形態では、ＡＯＢはトランスジェニックである。例として、野生型アンモニア酸化細菌が欠如する１つもしくは複数の遺伝子または調節ＤＮＡ配列を含んでもよい。より詳細には、アンモニア酸化細菌は、例として、レポーター遺伝子、選択マーカー、酵素をコードする遺伝子、またはプロモーター（誘導性もしくは抑制性プロモーターを含む）を含んでもよい。一部の実施形態では、付加遺伝子または調節ＤＮＡ配列は、細菌染色体に組み入れられ；一部の実施形態では、付加遺伝子または調節ＤＮＡ配列はプラスミド上に位置している。
【０１０８】
一部の実施形態では、ＡＯＢは、天然に存在する細菌と少なくとも１つのヌクレオチドが異なる。例として、ＡＯＢは、関連する経路、例えば、アンモニア代謝経路、尿素代謝経路、または一酸化窒素もしくは一酸化窒素前駆体を生成するための経路の部分である遺伝子またはタンパク質が天然に存在する細菌と異なってもよい。より詳細には、ＡＯＢは、例えば、経路のエレメントのレベルまたは活性を増加させることによってその経路の活性を上昇させる突然変異を含んでもよい。
【０１０９】
上述の突然変異は、任意の適当な技法を使用して導入することができる。所与の位置に突然変異を導入するための多数の方法が公知である。例として、部位指向性突然変異誘発、オリゴヌクレオチド指向性突然変異誘発、または部位特異的突然変異誘発を使用することができる。特異的突然変異誘発プロトコールの非限定的な例は、例えば、Mutagenesis、１３．１〜１３．１０５頁（SambrookおよびRussell編、Molecular  Cloning  A  Laboratory  Manual、３巻、第３版、２００１年）に記載されている。加えて、商業的供給業者から入手可能な十分に特徴付けられた突然変異誘発プロトコールの非限定的な例は、Ａｌｔｅｒｅｄ  Ｓｉｔｅｓ（登録商標）ＩＩ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐ．、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓ．）；Ｅｒａｓｅ−ａ−Ｂａｓｅ（登録商標）Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓ．）；ＧｅｎｅＴａｉｌｏｒ（商標）Ｓｉｔｅ−Ｄｉｒｅｃｔｅｄ  Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｉｎｃ．、Ｃａｒｌｓｂａｄ、Ｃａｌｉｆ．）；ＱｕｉｋＣｈａｎｇｅ（登録商標）ＩＩ  Ｓｉｔｅ−Ｄｉｒｅｃｔｅｄ  Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ  Ｋｉｔｓ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ、Ｌａ  Ｊｏｌｌａ、Ｃａｌｉｆ．）；およびＴｒａｎｓｆｏｒｍｅｒ（商標）Ｓｉｔｅ−Ｄｉｒｅｃｔｅｄ  Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ  Ｋｉｔ（ＢＤ−Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ、Ｃａｌｉｆ．）を含むがこれらに限定されない。
【０１１０】
本開示のある特定の実施形態では、アンモニア酸化細菌は、純粋培養であってもよい。アンモニア酸化細菌の調製物（配合物または組成物）は、純粋培養のアンモニア酸化細菌を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなってもよい。
【０１１１】
本開示のアンモニア酸化細菌は、Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ、Ｎｉｔｒｏｓｏｃｏｃｃｕｓ、Ｎｉｔｒｏｓｏｓｐｉｒａ、Ｎｉｔｒｏｓｏｃｙｓｔｉｓ、Ｎｉｔｒｏｓｏｌｏｂｕｓ、Ｎｉｔｒｏｓｏｖｉｂｒｉｏ、およびそれらの組合せからなる群から選択される属由来であってもよい。
【０１１２】
本開示は、とりわけ、対象、例えば、ヒト対象の表面上での一酸化窒素および一酸化窒素前駆体の生成を増加させることができる、アンモニア酸化細菌の特有の、例えば、最適化株であるＮ．ｅｕｔｒｏｐｈａ株Ｄ２３を提供する。本開示はまた、細菌および細菌を含む物品を使用する方法を提供する。
【０１１３】
複数の実施形態では、アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａは、天然に存在しない。例として、これは、選択の期間中に望ましい突然変異を蓄積していてもよい。他の実施形態では、望ましい突然変異は、実験者によって導入されてもよい。一部の実施形態では、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａは、精製調製物であってもよく、最適化Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａであってもよい。
【０１１４】
好ましい実施形態では、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａ株は、独立栄養であり、そのため感染を引き起こすことができない。好ましい株は、尿素およびアンモニアを利用し、その結果、細菌による吸収および利用の前に、汗中の尿素の加水分解が必要とならない。また、低ｐＨで増殖するために、細菌は、ＮＨ４＋イオンまたは尿素を吸収し得る。選択された株はまた、対象、例えば、ヒトの外表皮膚上で生存可能であり、かつそこでの条件に耐えるべきである。
【０１１５】
本開示はＮ．ｅｕｔｒｏｐｈａ株Ｄ２３に詳細に言及しているが、以下：Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａの１つまたは複数の他の株、Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓの１つまたは複数の他の種、および１種または複数の他のアンモニア酸化細菌のうちの１つまたは複数を用いた調製物、方法、組成物、処置、着用可能な物品、および衣料品が使用され得る。
【０１１６】
ある特定の実施形態では、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａは、受託番号ＰＴＡ−１２１１５７で、２０１４年４月８日にＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）に寄託され、ＡＯＢ  Ｄ２３−１００と指定される株（２５個のバイアル）である。Ｄ２３  Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ  ｅｕｔｒｏｐｈａ株とは、ＡＯＢ  Ｄ２３−１００と指定され、２０１４年４月８日にＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）（１０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｌｖｄ．、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ、米国）に寄託され、受託番号ＰＴＡ−１２１１５７を有する株を指す。受託番号ＰＴＡ−１２１１５７の核酸配列、例えば、ゲノム配列は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。ある特定の実施形態では、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａは、２０１５年４月１５日出願のＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１５／０２５９０９号に記載された株であり、この文献は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０１１７】
ある特定の実施形態では、上述の配列特徴を有する細菌は、（１）倍加時間によって測定される最適化増殖速度、（２）ＯＤ６００によって測定される最適化増殖速度、（３）最適化ＮＨ４＋酸化速度、（４）最適化ＮＨ４＋耐性、および（４）最適化ＮＯ２−耐性のうちの１つまたは複数を有する。これらの特性の詳細な部分組合せを次段落に特定する。
【０１１８】
一部の実施形態では、本明細書に記載されたアンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａは、以下：（１）倍加時間によって測定される最適化増殖速度、（２）ＯＤ６００によって測定される最適化増殖速度、（３）最適化ＮＨ４＋酸化速度、（４）最適化ＮＨ４＋耐性、および（４）最適化ＮＯ２−耐性のうちの１つまたは複数を有する。例として、細菌は、本段落の最初にある一覧から特性（１）および（２）；（２）および（３）；（３）および（４）；または（４）および（５）を有してもよい。別の例として、細菌は、本段落の最初にある一覧から特性（１）、（２）、および（３）；（１）、（２）、および（４）；（１）、（２）、および（５）；（１）、（３）、および（４）；（１）、（３）、および（５）；（１）、（４）、および（５）；（２）、（３）、および（４）；（２）、（３）、および（５）、または（３）、（４）、および（５）を有してもよい。さらなる例として、細菌は、本段落の最初にある一覧から特性（１）、（２）、（３）、および（４）；（１）、（２）、（３）、および（５）；（１）、（２）、（４）、および（５）；（１）、（３）、（４）、および（５）；または（２）、（３）、（４）、および（５）を有してもよい。一部の実施形態では、細菌は、本段落の最初にある一覧から特性（１）、（２）、（３）、（４）、および（５）を有する。
【０１１９】
本開示はまた、以下：（１）倍加時間によって測定される最適化増殖速度、（２）ＯＤ６００によって測定される最適化増殖速度、（３）最適化ＮＨ４＋酸化速度、（４）最適化ＮＨ４＋耐性、および（４）最適化ＮＯ２−耐性のうちの１つまたは複数を有するアンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａの純粋培養組成物を提供する。例として、細菌組成物は、本段落の最初にある一覧から特性（１）および（２）；（２）および（３）；（３）および（４）；または（４）および（５）を有してもよい。別の例として、細菌組成物は、本段落の最初にある一覧から特性（１）、（２）、および（３）；（１）、（２）、および（４）；（１）、（２）、および（５）；（１）、（３）、および（４）；（１）、（３）、および（５）；（１）、（４）、および（５）；（２）、（３）、および（４）；（２）、（３）、および（５）、または（３）、（４）、および（５）を有してもよい。さらなる例として、細菌組成物は、本段落の最初にある一覧から特性（１）、（２）、（３）、および（４）；（１）、（２）、（３）、および（５）；（１）、（２）、（４）、および（５）；（１）、（３）、（４）、および（５）；または（２）、（３）、（４）、および（５）を有してもよい。一部の実施形態では、細菌組成物は、本段落の最初にある一覧から特性（１）、（２）、（３）、（４）、および（５）を有する。
【０１２０】
受託番号ＰＴＡ−１２１１５７で、２０１４年４月８日に２５個のバイアルの形態でＡＴＣＣ特許寄託機関に寄託され、ＡＯＢ  Ｄ２３−１００と指定されるＮ．ｅｕｔｒｏｐｈａ株Ｄ２３は、配列番号１またはその相補体を有する環状ゲノムを含む。したがって、一部の実施形態では、本明細書に記載されたＮ．ｅｕｔｒｏｐｈａ株は、２０１５年４月１５日出願のＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１５／０２５９０９号の配列番号１、またはその相補体に類似した核酸配列、例えば、ゲノムを含む。
【０１２１】
ある特定の実施形態では、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａ株は、本明細書に記載された低ストリンジェンシー、中ストリンジェンシー、高ストリンジェンシー、もしくは非常に高いストリンジェンシー、または他のハイブリダイゼーション条件下で、２０１５年４月１５日出願のＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１５／０２５９０９号の配列番号１、または受託番号ＰＴＡ−１２１１５７で、２０１４年４月８日に２５個のバイアルの形態でＡＴＣＣ特許寄託機関に寄託され、ＡＯＢ  Ｄ２３−１００と指定されるＤ２３株のゲノム、またはそれらの相補体にハイブリダイズする核酸配列、例えば、ゲノムを含む。
【０１２２】
本明細書で使用されるとき、「低ストリンジェンシー、中ストリンジェンシー、高ストリンジェンシー、または非常に高いストリンジェンシーの条件下でハイブリダイズする」という用語は、ハイブリダイゼーションおよび洗浄の条件を説明する。ハイブリダイゼーション反応を実施するための指針は、Current  Protocols  in  Molecular  Biology、John  Wiley  &  Sons、N.Y.（１９８９年）、６．３．１〜６．３．６頁に見出すことができ、この文献は、参照により組み込まれる。水性および非水性方法がその参考文献に記載されており、いずれも使用することができる。本明細書で言及される具体的なハイブリダイゼーション条件は、以下の通りである：１）低ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件は、約４５℃で６×塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）中であり、続いて、少なくとも５０℃で０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中で２回洗浄する（低ストリンジェンシー条件については、洗浄の温度は５５℃まで高めることができる）；２）中ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件は、約４５℃で６×ＳＳＣ中であり、続いて、６０℃で０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中で１回または複数回洗浄する；３）高ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件は、約４５℃で６×ＳＳＣ中であり、続いて、６５℃で０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中で１回または複数回洗浄する；４）非常に高いストリンジェンシーのハイブリダイゼーション条件は、６５℃で０．５Ｍリン酸ナトリウム、７％ＳＤＳであり、続いて、６５℃で０．２×ＳＳＣ、１％ＳＤＳで１回または複数回洗浄する。非常に高いストリンジェンシーの条件（４）が適当な条件であり、別段の規定がない限り、使用すべき条件である。
【０１２３】
Ｄ２３株は、自然の生成物であるとは思われておらず、むしろ、実験室における長期間の培養および選択中にある特定の突然変異および特徴を獲得している。例として、Ｄ２３は、約２００または２５０ｍＭ超のＮＨ４＋の条件において、２４時間超の間増殖する能力を有する。
【０１２４】
一部の実施形態では、本明細書に開示されたＮ．ｅｕｔｒｏｐｈａは、シデロフォアの存在量において、天然に存在する細菌と相違する。例として、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａは、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａ  Ｃ９１と比較して、上昇したまたは低減したシデロフォアレベルを有してもよい。一般に、シデロフォアは、細菌がその環境から鉄を捕捉することを助ける分泌された鉄キレート化合物である。シデロフォアはペプチドである場合もあり、有機小分子である場合もある。
【０１２５】
本開示で企図されるＡＯＢ、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａは、野生型Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａおよび／または本明細書に開示されたＮ．ｅｕｔｒｏｐｈａ配列に対する突然変異を含んでもよい。これらの突然変異は、例えば、自発的に生じるか、ランダム突然変異誘発によって導入されるか、または標的突然変異誘発によって導入されてもよい。例として、アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａは、野生型Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａが典型的に含む１つまたは複数の遺伝子または調節ＤＮＡ配列を欠いていてもよい。アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａはまた、配列決定された株または野生型株に対する点突然変異、置換、挿入、欠失、および／または再編成を含んでもよい。アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａは、最適化アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａの精製調製物であってもよい。
【０１２６】
ある特定の実施形態では、アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａは、トランスジェニックである。例として、これは、野生型Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａ  Ｄ２３が欠いている１つまたは複数の遺伝子または調節ＤＮＡ配列を含んでもよい。より詳細には、アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａは、例として、レポーター遺伝子、選択マーカー、酵素をコードする遺伝子、またはプロモーター（誘導性もしくは抑制性プロモーターを含む）を含んでもよい。一部の実施形態では、追加の遺伝子または調節ＤＮＡ配列は、細菌染色体に取り込まれ、一部の実施形態では、追加の遺伝子または調節ＤＮＡ配列は、プラスミド、例として、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａ  Ｎ９１に見出されるプラスミドに関係するプラスミド上にある。
【０１２７】
一部の好ましい実施形態では、アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａは、少なくとも１つのヌクレオチドが、天然に存在する細菌と相違する。例として、アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａは、関連経路、例えば、アンモニア代謝経路、尿素代謝経路、または一酸化窒素もしくは一酸化窒素前駆体を生成するための経路の一部である遺伝子またはタンパク質が、天然に存在する細菌と異なってもよい。より詳細には、アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａは、経路の活性を、例えば、その経路の要素のレベルまたは活性を高めることによって上昇させる突然変異を含んでもよい。
【０１２８】
上記突然変異は、任意の適切な技法を使用して導入することができる。所与の位置に突然変異を導入するための多数の方法が公知である。例として、部位特異的突然変異誘発、オリゴヌクレオチド特異的突然変異誘発、または部位特異的突然変異誘発を使用することができる。特異的突然変異誘発プロトコールの非限定的な例は、例えばMutagenesis、１３．１〜１３．１０５頁（SambrookおよびRussell編、Molecular  Cloning  A  Laboratory  Manual、３巻、第３増補版、２００１年）に記載されている。加えて、販売業者から入手可能な、よく特徴付けられた突然変異誘発プロトコールの非限定的な例には、非限定的に、Ａｌｔｅｒｅｄ  Ｓｉｔｅｓ（登録商標）ＩＩ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ突然変異誘発システム（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐ．、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓ．）；Ｅｒａｓｅ−ａ−Ｂａｓｅ（登録商標）システム（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓ．）；ＧｅｎｅＴａｉｌｏｒ（商標）部位特異的突然変異誘発システム（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｉｎｃ．、Ｃａｒｌｓｂａｄ、Ｃａｌｉｆ．）；ＱｕｉｋＣｈａｎｇｅ（商標）ＩＩ部位特異的突然変異誘発キット（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ、Ｌａ  Ｊｏｌｌａ、Ｃａｌｉｆ．）；およびＴｒａｎｓｆｏｒｍｅｒ（商標）部位特異的突然変異誘発キット（ＢＤ−Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ、Ｃａｌｉｆ．）が含まれる。
【０１２９】
一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌の調製物は、状態または疾患を少なくとも部分的に処置するためのアンモニア酸化細菌の濃度または量を含んでもよい。アンモニア酸化細菌の調製物は、表面、例えば、皮膚表面の細菌の量、濃度もしくは比率または細菌の属を変化させる、例えば、低減または増加させるためのアンモニア酸化細菌の濃度または量を含んでもよい。細菌は、非病原性もしくは病原性、または潜在的に病原性であってもよい。
【０１３０】
一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌の調製物は、約１０８から約１０１４ＣＦＵ／Ｌの間を含んでもよい。調製物は、少なくとも１０８、１０９、１０１０、１０１１、２×１０１１、５×１０１１、１０１２、２×１０１２、５×１０１２、１０１３、２×１０１３、５×１０１３、もしくは１０１４、または約１０８〜１０９、１０９〜１０１０、１０１０〜１０１１、１０１１〜１０１２、１０１２〜１０１３、もしくは１０１３〜１０１４ＣＦＵ／Ｌを含んでもよい。
【０１３１】
ある特定の態様では、調製物は、約１×１０９ＣＦＵ／Ｌから約１０×１０９ＣＦＵ／Ｌの間を含んでもよい。ある特定の態様では、調製物は、約１×１０９ＣＦＵから約１０×１０９ＣＦＵの間を含んでもよい。ある特定の態様では、調製物は、約１×１０９ＣＦＵ／ｍＬから１０×１０９ＣＦＵ／ｍＬを含んでもよい。ある特定の態様では、調製物は、約１×１０９ＣＦＵ／ｍＬを含んでもよい。
【０１３２】
一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌の調製物は、約０．１ミリグラム（ｍｇ）から約１０００ｍｇの間のアンモニア酸化細菌を含んでもよい。ある特定の態様では、調製物は、約５０ｍｇから約１０００ｍｇの間のアンモニア酸化細菌を含んでもよい。調製物は、約０．１〜０．５ｍｇ、０．２〜０．７ｍｇ、０．５〜１．０ｍｇ、０．５〜２ｍｇ、０．５〜５ｍｇ、２．５〜５ｍｇ、２．５〜７．０ｍｇ、５．０〜１０ｍｇ、７．５〜１５ｍｇ、１０〜１５ｍｇ、１５〜２０ｍｇ、１５〜２５ｍｇ、２０〜３０ｍｇ、２５〜５０ｍｇ、２５〜７５ｍｇ、５０〜７５ｍｇ、５０〜１００ｍｇ、７５〜１００ｍｇ、１００〜２００ｍｇ、２００〜３００ｍｇ、３００〜４００ｍｇ、４００〜５００ｍｇ、５００〜６００ｍｇ、６００〜７００ｍｇ、７００〜８００ｍｇ、８００〜９００ｍｇ、９００〜１０００ｍｇ、１００〜２５０ｍｇ、２５０〜５００ｍｇ、１００〜５００ｍｇ、５００〜７５０ｍｇ、７５０〜１０００ｍｇ、または５００〜１０００ｍｇの間を含んでもよい。
【０１３３】
一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌の調製物は、添加剤、例えば、薬学的に許容される添加剤または化粧品として許容される添加剤に対するアンモニア酸化細菌の質量比を約０．１グラム／リットルから約１グラム／リットルの範囲で含んでもよい。調製物は、添加剤に対するアンモニア酸化細菌の質量比を約０．１〜０．２、０．２〜０．３、０．１〜０．５、０．２〜０．７、０．５〜１．０、または０．７〜１．０グラム／リットルの範囲で含んでもよい。
【０１３４】
一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌の調製物は、本明細書に記載された用量を有するアンモニア酸化細菌を、アンモニア、例えば、約０．０１ｍＭから約１００ｍＭの間のアンモニア濃度と組み合わせて含んでもよい。例えば、アンモニア濃度は、約０．０１、０．０５、０．１、０．２、０．４、０．５、０．６、０．８、１．０、１．２、１．４、１．６、１．８、２．０、２．２、２．４、２．５、２．６、２．８、３．０、３．２、３．４、３．６、３．８、４．０、４．２、４．４、４．５、４．６、４．８、５．０、５．２、５．４、５．６、５．８、６．０、６．２、６．４、６．６、６．８、７．０、７．２、７．４、７．６、７．８、８．０、８．２、８．４、８．６、８．８、１０．０、１５．０、２０．０、２５．０、３０．０、３５．０、４０．０、４５．０、５０．０、５５．０、６０．０、６５．０、７０．０、７５．０、８０．０、８５．０、９０．０、９５．０、１００．０ｍＭであってもよい。
【０１３５】
一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌の調製物は、リン酸二ナトリウムおよび塩化マグネシウム、例えば、５０ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４および２ｍＭ  ＭｇＣｌ２を含む、それから本質的になる、またはそれからなる水性緩衝溶液中のアンモニア酸化細菌を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなってもよい。ある特定の態様では、調製物は、水中の約１×１０９ＣＦＵ／ｍＬ、５０ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４、および２ｍＭ  ＭｇＣｌ２を含んでもよい。
【０１３６】
一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌の調製物は、アンモニア酸化細菌の前活性化を提供する構成成分を含んでもよい。例えば、前活性化は、アンモニア酸化細菌およびアンモニアを有する調製物を有することを伴い得る。
【０１３７】
一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌の調製物は、対象への送達時の活性化、例えば、共活性化を提供する形態であってもよい。これは、アンモニア酸化細菌の送達の前またはそれと同時に対象上に存在する利用するアンモニアへのアンモニア酸化細菌の送達を提供する。例えば、アンモニアは、対象自身のアンモニア源に由来するか、またはアンモニア酸化細菌の前もしくはそれと同時に適用されてもよい。アンモニアは、別個の容器中に提供されてもよく、または対象に自然に由来してもよい。
【０１３８】
調製物は、約０．１から約１００液量オンス、約０．２から約５０液量オンス、約０．５から約２５液量オンス、約１．０から約１０液量オンス、約２．０から約７液量オンス、約３から約５液量オンスの間の体積を含んでもよい。一部の実施形態では、調製物は、約３．４液量オンスの体積を含んでもよい。
【０１３９】
調製物は、約０．１から約１００液量オンス、約０．２から約５０液量オンス、約０．５から約２５液量オンス、約１．０から約１０液量オンス、約２．０から約７液量オンス、約３から約５液量オンスの間を含有するように構築された容器中に提供されてもよい。一部の実施形態では、調製物は、約３．４液量オンスを含有するように構築された容器である。容器は、１チャンバー式容器、または本明細書に開示された他の任意の容器であってもよい。
【０１４０】
一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌の調製物は、増殖状態であってもよい。増殖状態は、アンモニア酸化細菌を、増殖を促進できる環境に曝露することによって提供され得る。増殖状態は、状態、例えば、アンモニウムイオン（ＮＨ４＋）を亜硝酸塩（ＮＯ２−）に変換するためにアンモニア酸化細菌の即時入手を可能にする環境にあるアンモニア酸化細菌であってもよい。増殖状態は、約７．６よりも大きいｐＨを有する環境中にアンモニア酸化細菌を提供することを含んでもよい。増殖状態は、また、第１節に記載されたアンモニア、アンモニウム塩、および／または尿素、微量無機質ならびに十分な酸素および二酸化炭素を有する環境中にアンモニア酸化細菌を提供することを含んでもよい。
【０１４１】
一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌の調製物は、ポリホスフェート負荷状態であってもよく、状態または環境、例えば、培地、例えば、培養培地、例えば、増殖培地は、約７．４未満のｐＨを有してもよい。アンモニア、アンモニウムイオン、および尿素のうちの少なくとも１つのレベルは、約１０マイクロモル濃度と２００ミリモル濃度の間であってもよい。微量材料のレベルは、０．１マイクロモル濃度の鉄と２０マイクロモル濃度の鉄の間であってもよい。酸素のレベルは、約５％と１００％酸素飽和の間であってもよい。二酸化炭素のレベルが、約０と２００ｐｐｍの間／それ未満で、ホスフェートのレベルが、約１０マイクロモル濃度を超えてもよい。ポリホスフェート負荷状態の目的は、ＡＴＰを生成できるようにＡＯＢにアンモニアおよび酸素を提供するが、ＡＯＢがそのＡＴＰを使用して二酸化炭素を固定することができない代わりに、貯蔵され得るポリホスフェートを発生させるためにそのＡＴＰを使用するように、ＡＯＢに二酸化炭素および炭酸塩を与えないことである。
【０１４２】
一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌の調製物は、貯蔵状態であってもよい。貯蔵状態は、後に復元するために貯蔵することができる環境中のアンモニア酸化細菌として定義されてもよい。貯蔵状態は、状態、例えば、復元された後に、例えば、増殖状態を予め決定された期間促進する環境中に置かれた後に、アンモニア酸化細菌の入手を可能にする環境中のアンモニア酸化細菌であってもよい。
【０１４３】
貯蔵状態は、約７．４未満のｐＨを有する環境中にアンモニア酸化細菌を提供することを含んでもよい。貯蔵状態はまた、上記の第１節に記載された通り、アンモニア、アンモニア塩、および／または尿素、微量鉱物、酸素、ならびに低濃度の二酸化炭素を有する環境中にアンモニア酸化細菌を提供することを含んでもよい。
【０１４４】
貯蔵は、４℃で最大数ヶ月間貯蔵することによっても達成され得る。貯蔵緩衝液は、一部の実施形態では、５０ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４〜２ｍＭ  ＭｇＣｌ２（ｐＨ７．６）を含んでもよい。
【０１４５】
一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌は低温貯蔵されてもよい。アンモニア酸化細菌の対数増殖中期培養物１．２５ｍｌを２ｍｌ凍結チューブおよび無菌８０％グリセロール０．７５ｍｌに添加することができる。チューブを静かに振盪し、室温で１５分間インキュベートして、細胞による凍結保護剤の取込みを可能にすることができる。凍結および貯蔵のためにチューブを−８０℃冷凍庫内で直接貯蔵することができる。
【０１４６】
培養物の蘇生のために、凍結ストックを氷上で１０〜２０分間解凍し、次に８，０００×ｇにて４℃で３分間遠心分離することができる。ＡＯＢ培地２ｍｌ中で懸濁することによってペレットを洗浄し、続いて８，０００×ｇにて４℃で３分間もう一度遠心分離して、凍結保護剤の潜在的毒性を低減することができる。ペレットをＡＯＢ培地２ｍｌ中に再懸濁し、５０ｍＭ  ＮＨ４＋を含有するＡＯＢ培地５０ｍｌ中に蒔き、２００ｒｐｍで振盪することによって３０℃の暗条件でインキュベートすることができる。
【０１４７】
一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌の調製物は、貯蔵状態のアンモニア酸化細菌および／またはポリホスフェート負荷状態のアンモニア酸化細菌および／または増殖状態のアンモニア酸化細菌を含んでもよい。
【０１４８】
理論に縛られることを望むものではないが、十分な酸素およびアンモニアを有する低二酸化炭素の状態または環境にアンモニア酸化細菌を維持することによって、アンモニア酸化細菌は、ポリホスフェートを予め決定された期間、例えば、約１倍加時間の期間、例えば、約８〜１２時間、例えば、約１０時間蓄積することができる。アンモニア酸化細菌は、その貯蔵生存率、貯蔵時間を伸ばすのに十分なポリホスフェートを蓄積し、その復元を加速し得る。これは、緩衝液およびアンモニアの添加を伴ってまたは伴わずに起こり得る。
【０１４９】
十分な貯蔵ポリホスフェートの存在は、アンモニアおよび酸素の非存在下であっても代謝活性を維持し、さもなければ致死的であろう傷害から生き残るためのＡＴＰ資源をアンモニア酸化細菌に与えることができる。
【０１５０】
アンモニアがＡＴＰを発生する酸化プロセスは、２つのステップを有する。第１のステップは、アンモニアモノオキシゲナーゼ（Ａｍｏ）によるアンモニアからヒドロキシルアミンへの酸化であり、ヒドロキシルアミンオキシドレダクターゼ（Ｈａｏ）によるヒドロキシルアミンから亜硝酸塩への変換が続く。第２のステップ（ヒドロキシルアミンから亜硝酸塩への変換）からの電子は、第１のステップ（アンモニアからヒドロキシルアミンへの酸化）に動力を与えるために使用される。
【０１５１】
アンモニア酸化細菌が、Ａｍｏ用の電子を発生するためのヒドロキシルアミンを有さないならば、ヒドロキシルアミンはＨａｏにとって利用不可能である。例えば、アセチレンは、アンモニアから亜硝酸塩への酸化における第１のステップである、アンモニアからヒドロキシルアミンへの酸化に重要な酵素を不可逆的に阻害する。ＡＯＢがアセチレンに曝露された後、Ａｍｏは不可逆的に阻害されるので、ヒドロキシルアミンを発生できる前に新しい酵素が合成されなければならない。通常の共同体バイオフィルムの生息場所では、ＡＯＢはヒドロキシルアミンを他のＡＯＢ（阻害剤への異なる感受性を有するなお異なる株）と分け合い、他のＡＯＢから受領することができ、それでバイオフィルムは、個別の生物よりもアセチレンなどの阻害剤に対する耐性が大きい傾向にある。ＡＯＢは、ヒドロキシルアミンの非存在下であっても、貯蔵されたポリホスフェートを使用して新しいＡｍｏを合成することができる。
【０１５２】
本明細書で論じられるアンモニア酸化細菌の任意の実施形態、調製物、組成物、または製剤は、任意選択で、純粋培養アンモニア酸化細菌を含む、それから本質的になる、またはそれからなる場合がある。
３．アンモニア酸化細菌を含む組成物；Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａ、例えば、Ｄ２３  Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａを含む組成物
【０１５３】
本開示は、とりわけ、アンモニア酸化細菌、例えば、アンモニア酸化細菌の調製物、またはアンモニア酸化細菌の精製調製物、例えば、天然生成物、または強化天然生成物を含む組成物を提供する。
【０１５４】
本開示全体にわたる本明細書に開示された組成物は、皮膚状態、例えば、ざ瘡、例えば、尋常性ざ瘡の処置に使用するために提供され得る。
【０１５５】
アンモニア酸化細菌、例えば、アンモニア酸化細菌の調製物、またはアンモニア酸化細菌の精製調製物を含む組成物は、化粧製品または治療製品中に提供され得る。調製物は、とりわけ、アンモニア、アンモニウム塩、および尿素のうちの少なくとも１つを含んでもよい。アンモニア酸化細菌は、本明細書に開示された任意のアンモニア酸化細菌、またはアンモニア酸化細菌の組合せであってもよい。
【０１５６】
本開示は、とりわけ、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａ、例えば、最適化Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａの精製調製物を含む組成物を提供する。一部の実施形態では、組成物中のＮ．ｅｕｔｒｏｐｈａは、最適化増殖速度、最適化ＮＨ４＋酸化速度、および最適化ＮＨ４＋耐性から選択される少なくとも１つの特性を有する。
【０１５７】
一部の態様では、本開示は、規定された数の種を有する組成物を提供する。例として、本開示は、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａおよび他の１種類の生物を有し、その他の種類の生物を有さない組成物を提供する。他の例では、組成物は、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａおよび他の２、３、４、５、６、７、８、９、または１０種類の生物を有し、その他の種類の生物を有さない。この組成物中の他の種類の生物は、例として、アンモニア酸化細菌などの細菌であってもよい。この目的のための適当なアンモニア酸化細菌には、属Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ、Ｎｉｔｒｏｓｏｃｏｃｃｕｓ、Ｎｉｔｒｏｓｏｓｐｉｒａ、Ｎｉｔｒｏｓｏｃｙｓｔｉｓ、Ｎｉｔｒｏｓｏｌｏｂｕｓ、またはＮｉｔｒｏｓｏｖｉｂｒｉｏのものが含まれる。
【０１５８】
一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａを含む組成物は、アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａの生存性を支持する条件を提供する。例として、組成物は、アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａの増殖および代謝を促進する場合があり、または生きたアンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａを回収することができる休眠状態（例えば、凍結すること）を促進する場合がある。組成物が増殖または代謝を促進する場合、それは、水および／またはアンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａが消費する、例えば、アンモニウム、アンモニア、尿素、酸素、二酸化炭素、もしくは微量無機質としての栄養分を含有してもよい。
【０１５９】
一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌以外の１つまたは複数の他の生物は、アンモニア酸化細菌の調製物中に含まれ得る。例えば、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒ、およびその組合せからなる群から選択される属の生物が、アンモニア酸化細菌の調製物中に提供され得る。一部の実施形態では、調製物は、他の生物を実質的に含有しない場合がある。
【０１６０】
アンモニア酸化細菌の調製物は、約１０８から約１０１４ＣＦＵ／Ｌの間を含んでもよい。調製物は、少なくとも約１０８、１０９、１０１０、１０１１、２×１０１１、５×１０１１、１０１２、２×１０１２、５×１０１２、１０１３、２×１０１３、５×１０１３、もしくは１０１４；または約１０８〜１０９、１０９〜１０１０、１０１０〜１０１１、１０１１〜１０１２、１０１２〜１０１３、もしくは１０１３〜１０１４ＣＦＵ／Ｌを含んでもよい。他の調製物は、約２×１０９、４×１０９、または８×１０９ＣＦＵ／Ｌを含んでもよい。
【０１６１】
アンモニア酸化細菌の調製物は、約１０８から約１０１４ＣＦＵ／ｍｌの間を含んでもよい。調製物は、少なくとも約１０８、１０９、１０１０、１０１１、２×１０１１、５×１０１１、１０１２、２×１０１２、５×１０１２、１０１３、２×１０１３、５×１０１３、もしくは１０１４；または約１０８〜１０９、１０９〜１０１０，１０１０〜１０１１、１０１１〜１０１２、１０１２〜１０１３、もしくは１０１３〜１０１４ＣＦＵ／ｍｌを含んでもよい。他の調製物は、約２×１０９、４×１０９、または８×１０９ＣＦＵ／ｍＬを含んでもよい。
【０１６２】
一部の実施形態では、調製物は、約１×１０９から約１０×１０９ＣＦＵ／Ｌの間を含んでもよい。一部の実施形態では、調製物は、約３×１０１０ＣＦＵ、例えば、１日当たり３×１０１０ＣＦＵを含んでもよい。一部の実施形態では、調製物は、約１×１０９から約１０×１０９ＣＦＵ、例えば、１日当たり約１×１０９から約１０×１０９ＣＦＵを含んでもよい。
【０１６３】
一部の実施形態ではアンモニア酸化細菌の調製物は、約０．１ミリグラム（ｍｇ）と約１０００ｍｇの間のアンモニア酸化細菌を含んでもよい。ある特定の態様では、調製物は、約５０ｍｇと約１０００ｍｇの間のアンモニア酸化細菌を含んでもよい。調製物は、約０．１〜０．５ｍｇ、０．２〜０．７ｍｇ、０．５〜１．０ｍｇ、０．５〜２ｍｇ、０．５〜５ｍｇ、２．５〜５ｍｇ、２．５〜７．０ｍｇ、５．０〜１０ｍｇ、７．５〜１５ｍｇ、１０〜１５ｍｇ、１５〜２０ｍｇ、１５〜２５ｍｇ、２０〜３０ｍｇ、２５〜５０ｍｇ、２５〜７５ｍｇ、５０〜７５ｍｇ、５０〜１００ｍｇ、７５〜１００ｍｇ、１００〜２００ｍｇ、２００〜３００ｍｇ、３００〜４００ｍｇ、４００〜５００ｍｇ、５００〜６００ｍｇ、６００〜７００ｍｇ、７００〜８００ｍｇ、８００〜９００ｍｇ、９００〜１０００ｍｇ、１００〜２５０ｍｇ、２５０〜５００ｍｇ、１００〜５００ｍｇ、５００〜７５０ｍｇ、７５０〜１０００ｍｇ、または５００〜１０００ｍｇの間を含んでもよい。
【０１６４】
一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌の調製物は、添加剤、例えば、薬学的に許容される添加剤または化粧品として許容される添加剤に対するアンモニア酸化細菌の質量比を約０．１グラム／リットルから約１グラム／リットルの範囲で含んでもよい。調製物は、添加剤に対するアンモニア酸化細菌の質量比を約０．１〜０．２、０．２〜０．３、０．１〜０．５、０．２〜０．７、０．５〜１．０、または０．７〜１．０グラム／リットルの範囲で含んでもよい。
【０１６５】
一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌の調製物は、リン酸二ナトリウムおよび塩化マグネシウム、例えば、５０ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４および２ｍＭ  ＭｇＣｌ２を含む、それから本質的になる、またはそれからなる水性緩衝溶液中のアンモニア酸化細菌であってもよい。アンモニア酸化細菌は、本明細書に開示された任意の濃度、例えば、１×１０９ＣＦＵ／ｍｌであってもよい。調製物は、例えば、約０．１と約１００液量オンスの間、約０．２と約５０液量オンスの間、約０．５と約２５液量オンスの間、約１．０と約１０液量オンスの間、約２．０と約７液量オンスの間、約３と約５液量オンスの間の予め決定された体積の緩衝液中に提供され得る。一部の実施形態では、調製物は、容器中に提供され得る。調製物は、約３．４液量オンス、または本明細書に開示された任意の他の体積を含有するように構築された容器中に提供されてもよい。調製物は、エアロゾル、スプレーまたはミストにすることが可能であり得る形態、すなわちミストの形態、例えば、ＡＯ＋Ｍｉｓｔ製品の状態であってもよい。
【０１６６】
有利には、製剤は、ＡＯＢ、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａの生存性、例えば、代謝活性を促進するｐＨを有してもよい。尿素は、アンモニアに加水分解され、ｐＨを７から８に上昇させる。ＡＯＢは、このｐＨ範囲で非常に活動性であり、ＮＨ３がアンモニウムに変換し、利用不能になる約６にｐＨを低下させる。より低いｐＨレベル、例えば、約ｐＨ４も許容される。
【０１６７】
アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａは、１つまたは複数の薬学的にまたは化粧品として許容される添加剤と組み合わせることができる。一部の実施形態では、「薬学的に許容される添加剤」は、薬学的に許容される材料、組成物、またはビヒクル、例えば、液体または固体のフィラー、希釈剤、溶媒、または封入材料を指す。一部の実施形態では、各添加剤は、医薬製剤の他の成分と適合性であり、かつヒトおよび動物の組織または臓器と接触した使用に、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、免疫原性、または他の問題もしくは合併症なしに、合理的な利益／リスク比に見合って適しているという意味で「薬学的に許容される」。Remington:  The  Science  and  Practice  of  Pharmacy、２１版；Lippincott  Williams  &  Wilkins:  Philadelphia、Pa.、２００５年；Handbook  of  Pharmaceutical  Excipients、６版；Roweら編;  The  Pharmaceutical  Pressおよびthe  American  Pharmaceutical  Association：２００９年；Handbook  of  Pharmaceutical  Additives、３版；AshおよびAsh編；Gower  Publishing  Company：２００７年；Pharmaceutical  Preformulation  and  Formulation、２版；Gibson編；CRC  Press  LLC:  Boca  Raton、Fla.、２００９年を参照されたい。
【０１６８】
一部の実施形態では、化粧品として許容される添加剤は、化粧品として許容される材料、組成物、またはビヒクル、例えば、液体もしくは固体のフィラー、希釈剤、溶媒、もしくは封入材料を表す。一部の実施形態では、各添加剤は、化粧品製剤の他の成分と適合性であり、かつヒトおよび動物の組織または臓器と接触した使用に、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、免疫原性、または他の問題もしくは合併症なしに、合理的な利益／危険比に見合って適しているという意味で化粧品として許容される。
【０１６９】
活性成分、例えば、アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａが単独で投与されることが可能ではあるものの、多くの実施形態では、それは、医薬製剤もしくは組成物中に存在する。したがって、本開示は、アンモニア酸化細菌および薬学的に許容される添加剤または化粧品として許容される添加剤を含む医薬製剤（調製物もしくは組成物）または化粧品製剤（調製物もしくは組成物）を提供する。医薬組成物および化粧品組成物は、下記のような製剤の形態を採り得る。
【０１７０】
本明細書に記載された医薬製剤および化粧品製剤（例えば、調製物または組成物）には、経口（例えば、消化管内に沈着させることによる、またはそのため）、非経口（皮下、皮内、筋肉内、静脈内、および関節内を含む）、吸入（定量、加圧エアロゾル、ネブライザーまたは吹入器の様々なタイプを用いて発生し得る微粒子ダストまたはミストを含み、鼻腔内（経鼻）または経肺（肺）を含む）、腎臓および局所（皮膚、経皮、経粘膜、頬側、舌下、および眼内を含む）投与に適したものが含まれる場合があるが、とはいえ、最も適切な経路は、例えば、レシピエントの状態および障害に依存し得る。
【０１７１】
製剤（例えば、調製物または組成物）は、単位剤形として好都合に提示することができ、薬学または化粧学の技術分野において公知の方法のいずれかによって調製することができる。典型的には、方法は、活性成分（例えば、アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａ）を１つまたは複数の補助成分を含む医薬担体または化粧用担体に付随させるステップを含む。一般に、製剤は、活性成分を液体担体もしくは微粉化固体担体またはその両方に均一および密接に付随させ、次に必要ならば、製品を所望の製剤に形作ることによって調製される。
【０１７２】
製剤は、それぞれが予め決定された量の例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａを含有するカプセル剤、カシェ剤もしくは錠剤などの別個のユニットとして、粉末もしくは顆粒として；水性液体もしくは非性液体中の溶液もしくは懸濁液として；または水中油型液体エマルションもしくは油中水型液体エマルションとして提示され得る。活性成分は、ボーラス、舐剤またはペースト剤としても提示され得る。様々な薬学的に許容される担体およびその製剤は、標準的な製剤専門書、例えばE.  W.  MartinによるRemington's  Pharmaceutical  Sciencesに記載されている。Wang,  Y.  J.およびHanson,  M.  A.、Journal  of  Parenteral  Science  and  Technology、Technical  Report１０号、増補４２：２Ｓ、１９８８年も参照されたい。
【０１７３】
アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａ組成物は、例えば、即時放出または延長放出に適した形態で投与することができる。持続放出システムの適切な例には、適切なポリマー材料、例えば、成形品の形態の半透性ポリマーマトリックス、例えば、フィルム、もしくはマイクロカプセル；適切な疎水性材料、例えば、許容される油中のエマルションとして；またはイオン交換樹脂が含まれる。持続放出システムは、経口；直腸；非経口；嚢内；膣内；腹腔内；局所、例えば、粉末、軟膏、ゲル、滴剤または経皮パッチとして；頬側に；またはスプレーとして投与することができる。
【０１７４】
投与用調製物は、アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａの制御放出を与えるように適切に製剤化することができる。例えば、医薬組成物は、生分解性ポリマー、多糖ゼリー化および／もしくは生体接着性ポリマー、または両親媒性ポリマーのうちの１つまたは複数を含む粒子の形態であってもよい。これらの組成物は、活性物質の制御放出を可能にするある特定の生体適合性特徴を示す。米国特許第５，７００，４８６号を参照されたい。
【０１７５】
例示的な組成物は、例えば、かさ増しのための結晶セルロース、懸濁化剤としてのアルギン酸もしくはアルギン酸ナトリウム、粘度増強剤としてのメチルセルロース、リン酸二カルシウム、デンプン、ステアリン酸マグネシウムおよび／もしくはラクトースならびに／または他の添加剤、結合剤、増量剤、崩壊剤、希釈剤および滑沢剤、マンニトール、ラクトース、スクロースおよび／もしくはシクロデキストリンを含有し得る懸濁液を含んでもよい。そのような製剤に、セルロース（アビセル）またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの高分子量添加剤も含まれ得る。そのような製剤は、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、カルボキシメチルセルロースナトリウム（ＳＣＭＣ）、無水マレイン酸コポリマー（例えば、Ｇａｎｔｒｅｚ）などの粘膜接着を助けるための添加剤、およびポリアクリル酸コポリマー（例えば、Ｃａｒｂｏｐｏｌ  ９３４）などの放出を制御するための薬剤も含むことができる。製作および使用を容易にするために滑沢剤、流動促進剤、香料、着色剤および安定化剤が添加されてもよい。界面活性剤は、双性イオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤、または陰イオン性界面活性剤であってもよい。
【０１７６】
本開示の実施形態で使用され得る界面活性剤などの添加剤には、コカミドプロピルベタイン（ＣｏｌａＴｅｒｉｃ  ＣＯＡＢ）、ポリエチレンソルビトールエステル（例えば、Ｔｗｅｅｎ  ８０）、エトキシル化ラウリルアルコール（ＲｈｏｄａＳｕｒｆ  ６  ＮＡＴ）、ラウレス硫酸ナトリウム／ラウリルグルコシド／コカミドプロピルベタイン（Ｐｌａｎｔａｐｏｎ  ６１１  Ｌ  ＵＰ）、ラウレス硫酸ナトリウム（例えば、ＲｈｏｄａＰｅｘ  ＥＳＢ  ７０  ＮＡＴ）、アルキルポリグルコシド（例えば、Ｐｌａｎｔａｒｅｎ  ２０００  Ｎ  ＵＰ）、ラウレス硫酸ナトリウム（Ｐｌａｎｔａｒｅｎ  ２００）、Ｄｒ．Ｂｒｏｎｎｅｒのカスチール石鹸、Ｄｒ．Ｂｒｏｎｎｅｒのカスチールベビー石鹸、ラウラミンオキシド（ＣｏｌａＬｕｘ  Ｌｏ）、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、ポリスルホン酸アルキルポリグルコシド（ＰｏｌｙＳｕｆａｎａｔｅ  １６０  Ｐ）、ラウリル硫酸ナトリウム（Ｓｔｅｐａｎｏｌ−ＷＡ  Ｅｘｔｒａ  Ｋ）およびその組合せのうち１つまたは複数が含まれる場合がある。Ｄｒ．Ｂｒｏｎｎｅｒのカスチール石鹸およびＤｒ．Ｂｒｏｎｎｅｒのベビー石鹸は、水、有機ココナツ油、水酸化カリウム、有機オリーブ油、公正取引有機大麻油、有機ホホバ油、クエン酸、およびトコフェロールを含む。
【０１７７】
一部の実施形態では、界面活性剤は、亜硝酸塩生成を起こさせる量のアンモニア酸化細菌とともに使用され得る。一部の実施形態では、調製物は、約０．０００１％未満から約１０％の界面活性剤を有し得る。一部の実施形態では、調製物は、約０．１％と約１０％の間の界面活性剤を有し得る。一部の実施形態では、使用される界面活性剤の濃度は、約０．０００１％と約１０％の間であってもよい。一部の実施形態では、調製物は、界面活性剤を実質的に含有しない場合がある。
【０１７８】
一部の実施形態では、製剤、例えば、調製物は、アンモニア酸化細菌の有効性を増強するまたはアンモニア酸化細菌の生存性を維持もしくは増強する、または処置もしくは適応を増強することができる他の構成成分を含んでもよい。
【０１７９】
一部の実施形態では、キレート剤が調製物中に含まれ得る。キレート剤は、別の化合物、例えば、金属と結合し得る化合物であってもよい。キレート剤は、望まれない化合物を環境から除去する助けを提供する場合があり、または特定の化合物と環境、例えば、アンモニア酸化細菌、例えば、アンモニア酸化細菌の調製物、例えば、添加剤との接触を低減または排除するために保護様式で作用する場合がある。一部の実施形態では、調製物は、キレート剤を実質的に含有しない場合がある。
【０１８０】
製剤は、また、抗酸化剤、緩衝剤、望ましくない細菌の増殖を防ぐ静菌薬、溶質、ならびに懸濁化剤および増粘剤を含んでもよい水性および非水性無菌懸濁液を含有してもよい。製剤は、単位用量または複数回用量の容器、例えば、密封されたアンプルおよびバイアル中に提示されてもよく、使用直前に無菌液体担体、例えば、食塩水または注射用水の添加だけを要するフリーズドライ（凍結乾燥）状態で貯蔵されてもよい。即時溶液および懸濁液は、前記の種類の粉末、顆粒および錠剤から調製されてもよい。例示的な組成物は、例えば、マンニトール、１，３−ブタンジオール、水、リンゲル液、および等張塩化ナトリウム溶液などの適切な無毒の薬学的に許容される希釈剤もしくは溶媒、または合成モノグリセリドもしくはジグリセリドを含む他の適切な分散剤もしくは湿潤剤および懸濁化剤、ならびにオレイン酸、またはクレモフォール（Cremaphor）を含む脂肪酸を含有し得る溶液または懸濁剤を含む。水性担体は、例えば、ｐＨ約３．０から約８．０、ｐＨ約３．５から約７．４、例えば、３．５から６．０、例えば、３．５から約５．０の等張緩衝溶液であってもよい。有用な緩衝液には、クエン酸ナトリウム−クエン酸およびリン酸ナトリウム−リン酸、および酢酸ナトリウム／酢酸緩衝液が含まれる。一部の実施形態では、組成物は、酸化剤を含まない。
【０１８１】
含まれる可能性がある添加剤は、例として、ヒト血清アルブミンまたは血漿調製物などのタンパク質である。所望であれば、医薬組成物は、また、湿潤剤または乳化剤、保存剤、およびｐＨ緩衝剤などのような少量の無毒の補助物質、例えば、酢酸ナトリウムまたはソルビタンモノラウレートを含有してもよい。一部の実施形態では、添加剤、例えば、薬学的に許容される添加剤または化粧品として許容される添加剤は、抗接着剤、結合剤、コーティング剤、崩壊剤、フィラー、香料、着色剤、滑沢剤、流動促進剤、吸着剤、保存剤、または甘味剤を含んでもよい。一部の実施形態では、調製物は、添加剤を実質的に含有しない場合がある。
【０１８２】
一部の実施形態では、調製物は、本開示に列記された化合物または物質のうちの１つまたは複数を実質的に含有しない場合がある。
【０１８３】
エアロゾル投与のための例示的な組成物には、例えば、ベンジルアルコールもしくは他の適切な保存剤、バイオアベイラビリティーを増強するための吸収促進剤、および／または他の可溶化剤もしくは分散剤を含有し得る食塩水中の溶液が含まれる。好都合には、エアロゾル投与用の組成物において、アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａが、ポンプからのエアロゾルスプレー提示の形態で送達される。他の実施形態では、アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａのエアロゾル投与用の組成物は、適切な噴射剤、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素、窒素、または他の適切な気体を使用して加圧パックまたはネブライザーからのエアロゾルスプレー提示の形態で送達される。加圧エアロゾルの場合、投薬単位は、一定量を送達するためのバルブを提供することによって決定することができる。例えば、ゼラチンのカプセル剤およびカートリッジを、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａと適切な粉末基剤、例えば、ラクトースまたはデンプンとの粉末混合物を含有するように製剤化することができる。ある特定の実施形態では、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａは、定量バルブからアクチュエーターとしても公知のエアロゾルアダプターを経由してエアロゾルとして投与される。任意選択で、安定剤も含まれ、かつ／または肺深部送達用の多孔性粒子が含まれる（例えば、米国特許第６，４４７，７４３号参照）。組成物または調製物は、エアロゾル化、スプレー化またはミスト化することが可能であり得る形態、すなわちミストの形態であってもよい。アンモニア酸化細菌の調製物は、リン酸二ナトリウムおよび塩化マグネシウム、例えば、５０ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４および２ｍＭ  ＭｇＣｌ２を含む、それから本質的になる、またはそれからなる水性緩衝溶液中のアンモニア酸化細菌であり得、これは、本開示全体にわたりＡＯ＋Ｍｉｓｔと称され得る。ＡＯ＋Ｍｉｓｔ調製物は、５０ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４および２ｍＭ  ＭｇＣｌ２の水性緩衝溶液中にアンモニア酸化細菌を１×１０９ＣＦＵ／ｍＬの濃度で含む。
【０１８４】
製剤は、カカオ脂、合成グリセリドエステルまたはポリエチレングリコールなどの担体を用いて提示されてもよい。そのような担体は、典型的には常温で固体であるが、体温で液化および／または溶解してアンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａを放出する。
【０１８５】
例示的な局所投与用組成物は、プラスチベース（ポリエチレンでゲル化した鉱物油）などの局所用担体を含む。一部の態様では、組成物および／または添加剤は、液体、固体、またはゲルのうちの１つまたは複数の形態であってもよい。例えば、懸濁液は、非限定的に、水、食塩水、リン酸緩衝食塩水、アンモニア酸化貯蔵緩衝液、または例えば、Ｎａ２ＨＰＯ４およびＭｇＣｌ２、例えば、５０ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４および２ｍＭ  ＭｇＣｌ２を含む水性緩衝溶液を含んでもよい。
【０１８６】
ゲル製剤は、非限定的に、寒天、シリカ、ポリアクリル酸（例えば、Ｃａｒｂｏｐｏｌ（登録商標））、カルボキシメチルセルロース、デンプン、グアーガム、アルギネートまたはキトサンを含んでもよい。
【０１８７】
一部の実施形態では、製剤に、非限定的に塩化アンモニウムまたは硫酸アンモニウムを含むアンモニア源が補充されてもよい。
【０１８８】
一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌組成物、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａ組成物は、皮膚へのＮＯの浸透を改善するように製剤化される。ＫＹゼリーまたは様々なヘアジェルなどのゲル形成材料は、周囲空気へのＮＯ喪失への拡散バリアを提示するので、皮膚のＮＯ吸収を改善する。皮膚におけるＮＯレベルは、一般的に２０ｎＭ／Ｌを大きくは超えない。それは、そのレベルがＧＣを活性化し、局所血管拡張および過剰なＮＯの酸化的破壊を引き起こすからである。
【０１８９】
特に上に言及された成分に加えて、本明細書に記載された製剤は、問題となる製剤の種類に関して当技術分野において従来的な他の薬剤を含んでもよいことを理解すべきである。
【０１９０】
製剤、例えば、調製物、例えば、組成物は、容器の内容物を含むまたは含まずに約５０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１５００、または２０００グラム未満であり得る重量を有する、容器、デリバリーシステム、または送達デバイス中に提供され得る。
【０１９１】
適切な単位投薬製剤は、アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａの本明細書前記の有効用量またはその適切な画分を含有する単位投薬製剤である。
【０１９２】
アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａの治療有効量は、単一パルス用量として、ボーラス用量として、または時間をかけて投与されるパルス用量として投与され得る。したがって、パルス用量では、アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａのボーラス投与が提供され、アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａが対象に投与される期間が続き、第２のボーラス投与が続く。具体的で非限定的な例では、パルス用量は、１日のクールの間、１週間のクールの間、または１ヶ月のクールの間に投与される。
【０１９３】
アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａの治療有効量は、エアロゾルもしくはミストの形態で単回スプレーもしくはポンプとして、または多回スプレーもしくはポンプとして投与され得る。単回投与では、１つまたは複数回のスプレーまたはポンプを作動させることができる。治療有効量は、１つもしくは複数の日のクールの間、１つもしくは複数の週のクールの間、１つもしくは複数の月のクールの間、またはそれよりも長い単回投与、または多回投与の結果であり得る。
【０１９４】
治療有効量は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２週間でのざ瘡数、ＰＩＨ／ＰＩＥ病変評定、ＳｋｉｎＤｅｘ１６データ、改変グリフィス１０点尺度、忍容性評価、セブメーター測定（値）、および治験医師による包括的ざ瘡（Investigator's  Global  Acne）（ＩＧＡ）スケールのうちの任意の１つまたは複数を改善するのに十分な量であり得る。
【０１９５】
一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌の調製物、例えば、製剤、例えば、組成物は、予め決定された日数の間適用することができる。これは、例えば、少なくとも部分的に、状態または疾患の重症度、処置に対する応答、適用される投薬量および用量頻度に基づいてもよい。例えば、調製物は、約１〜３、３〜５、５〜７、７〜９、５〜１０、１０〜１４、１２〜１８、１２〜２１、２１〜２８、２８〜３５、３５〜４２、４２〜４９、４９〜５６、４６〜６３、６３〜７０、７０〜７７、７７〜８４、８４〜９１日間、約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間適用されてもよい。一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌は、不定期間、例えば、１年より長い、５年より長い、１０年より長い、１５年より長い、３０年より長い、５０年より長い、７５年より長い間投与される。ある特定の態様では、調製物は、約１６日間適用されてもよい。ある特定の態様では、調製物は、約４週間適用されてもよい。
【０１９６】
一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌の調製物、例えば、製剤、例えば、組成物は、１日当たり予め決定された回数適用されてもよい。これは、例えば、少なくとも部分的に、状態または疾患の重症度、処置に対する応答、適用される投薬量および用量頻度に基づいてもよい。例えば、調製物は、１日当たり１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４回適用されてもよい。
【０１９７】
一部の実施形態では、調製物は、１日当たり１回適用されてもよい。他の実施形態では、調製物は、１日当たり２回適用されてもよい。一部の実施形態では、調製物は、ある特定の日数の間第１の予め決定された量、およびある特定の後続の日数の間、第２の予め決定された量で適用されてもよい。一部の実施形態では、調製物は、約１６日間適用されてもよい。ある特定の局面では、調製物は、約４週間適用されてもよい。
消費者製品
【０１９８】
アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａは、多様な消費者製品に付随する場合があり、そのような製品の例は後述されるが、本開示全体にわたり開示される製剤、組成物、または調製物からなってもよい。一部の実施形態では、製品に付随するアンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａは、製品と混和され、例えば、製品全体に均一に広げられ、一部の実施形態では、製品に付随するアンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａは、製品上に積層される。
【０１９９】
一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａは粉末に付随する。粉末は、典型的には相互に付着していない小型粒子状固体であって、傾けたときに自由に流れることができる小型粒子状固体である。消費者の使用のための例示的な粉末には、タルカム粉末および一部の化粧品（例えば、パウダーファンデーション）が含まれる。
【０２００】
一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌は化粧品に付随する。化粧品は、人間の外見を変化させることを意図する、局所適用用物質、例えば、リキッドファンデーション、パウダーファンデーション、紅、または口紅であってもよく、調製物と称され得る。化粧品は、食品医薬品局の規制、例えば、連邦規則集第２１編第７２０．４条に列挙される任意の物質であってもよい。
【０２０１】
調製物、例えば、化粧品は、ベビー製品、例えば、ベビーシャンプー、ベビーローション、ベビーオイル、ベビーパウダー、ベビークリーム；浴用調製物、例えば、バスオイル、タブレット、ソルト、バブルバス、バスカプセル；アイメークアップ用調製物、例えば、アイブローペンシル、アイライナー、アイシャドー、アイローション、アイメイクリムーバー、マスカラ；香料調製物、例えば、コロン、オードトワレ、香水、パウダー（ダスティングおよびタルカム）、サシェ；毛髪用調製物、例えば、毛髪コンディショナー、ヘアスプレー、ヘアストレート剤、パーマネントウェーブ剤、リンス、シャンプー、トニック、調髪料、整髪補助剤、ウェーブセット剤；毛髪着色用調製物、例えば、毛髪染料およびヘアカラー、染毛剤、着色用ヘアリンス、着色用ヘアシャンプー、着色ヘアライトナー、ヘアブリーチ；メークアップ用調製物、例えば、フェ−スパウダー、ファンデーション、レッグおよびボディペイント、口紅、メークアップベース、頬紅、メークアップ定着剤；マニキュア用調製物、例えば、ベースコートおよびアンダーコート、キューティクル軟化剤、ネイルクリームおよびローション、ネイルエクステンダー、ネイルポリッシュおよびエナメル、ネイルポリッシュおよびエナメルリムーバー；口腔衛生製品、例えば、歯磨剤、マウスウォッシュおよびブレスフレッシュナー；浴用石鹸および洗剤、デオドラント、ビデ、女性用衛生デオドラント；シェービング用調製物、例えば、アフターシェーブローション、髭軟化剤、タルカム、プレシェーブローション、シェービングクリーム、シェービングソープ；スキンケア用調製物、例えば、クレンジング、脱毛剤、顔および首、身体および手、足用パウダーおよびスプレー、保湿料、夜用調製物、ペーストマスク、スキンフレッシュナー；ならびに日焼け用調製物、例えば、ジェル、クリーム、およびリキッド、および屋内タンニング用調製物のうちの少なくとも１つであってもよい。
【０２０２】
一部の実施形態では、本明細書に記載された製剤、組成物、または調製物は、ベビー製品、例えば、ベビーシャンプー、ベビーローション、ベビーオイル、ベビーパウダー、ベビークリーム；浴用調製物、例えば、バスオイル、タブレット、ソルト、バブルバス、バスカプセル；パウダー（ダスティングおよびタルカム）、サシェ；毛髪用調製物、例えば、毛髪コンディショナー、リンス、シャンプー、トニック、フェ−スパウダー、キューティクル軟化剤、ネイルクリームおよびローション、口腔衛生製品、マウスウォッシュ、浴用石鹸、ビデ、女性用衛生デオドラント；シェービング用調製物、例えば、アフターシェーブローション、スキンケア用調製物、例えば、クレンジング、顔および首、身体および手、足用パウダーおよびスプレー、保湿料、夜用調製物、ペーストマスク、スキンフレッシュナー；ならびに日焼け用調製物、例えば、ジェル、クリーム、およびリキッドのうちの少なくとも１つを含む、それとして提供されるか、またはその中に配置されてもよい。
【０２０３】
一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａは、化粧品に付随する。化粧品は、人間の外見を変化させることを意図する局所適用用物質、例えば、リキッドファンデーション、パウダーファンデーション、紅、または口紅であってもよい。他の構成成分は、化粧品製剤分野の当業者によって選択されるような医薬製剤、例えば、調製物、または化粧調製物例えば、水、鉱物油、着色剤、香水、アロエ、グリセリン、塩化ナトリウム、重炭酸ナトリウム、ｐＨ緩衝剤、ＵＶブロック剤、シリコーン油、天然油、ビタミンＥ、薬草濃縮物、乳酸、クエン酸、タルク、粘土、炭酸カルシウム、炭酸マグネシウム、酸化亜鉛、デンプン、尿素、およびエリソルビン酸、または本明細書に開示された添加剤を含む、当業者に公知の任意の他の添加剤などに添加されてもよい。
【０２０４】
一部の実施形態では、調製物は、粉末、化粧品、クリーム、スティック、エアロゾル、例えば、ミスト、膏薬、ワイプ、もしくは包帯中に配置されるか、またはそれとして提供されてもよい。
【０２０５】
一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａは、クリームに付随する。クリームは、増粘剤を含む流体の場合があり、一般的にそれを皮膚上に均一に広げることを可能にする稠性を有する。例示的なクリームには、保湿ローション、フェースクリーム、およびボディローションが含まれる。
【０２０６】
一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａは、スティックに付随する。スティックは、典型的には、表面と接触して置かれたときにスティックの内容物の一部を表面に移行させる固体である。例示的なスティックには、デオドラントスティック、口紅、スティック形態のリップバーム、および日焼け止めアプリケータースティックが含まれる。
【０２０７】
一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａは、エアロゾルに付随する。エアロゾルは、典型的には、空気などの気体中の微細固体粒子または微細液滴のコロイドである。エアロゾルは、加圧化のベッセル中にＮ．ｅｕｔｒｏｐｈａ（および任意選択で担体）を入れ、次にバルブを開放して内容物を放出させることによって創出することができる。容器は、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａの生存能と適合性の圧力レベルだけをかけるように設計することができる。例として、高圧は、短時間だけかけられる場合があり、かつ／または圧力は、生存能の損なわないように十分低い場合がある。消費者がエアロゾルを使用する例には、日焼け止め、デオドラント、香水、ヘアスプレー、および昆虫忌避剤が含まれる。エアロゾルはミストとも称され得る。
【０２０８】
一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａは膏薬に付随する。膏薬は、皮膚を保護するまたは治癒を促進することを意図された液体またはクリーム様稠性を有する局所適用薬剤であり得る。膏薬の例には、熱傷軟膏および皮膚モイスチャライザーが含まれる。
【０２０９】
一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａは、ワイプに付随する。ワイプは、皮膚に液体またはクリームを局所適用するために適切な柔軟材料であってもよい。ワイプは、例えば、紙ベースまたは布ベースであってもよい。例示的なワイプには、ティシューおよびウェットワイプが含まれる。
【０２１０】
アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａを含む組成物は、また、保湿剤、脱臭剤、芳香剤、着色料、昆虫忌避剤、クレンジング剤、またはＵＶブロック剤のうちの１つまたは複数を含んでもよい。
【０２１１】
例として、保湿剤は、皮膚乾燥を低減するまたは予防する薬剤であり得る。例示的な保湿剤には、保水剤（例えば、尿素、グリセリン、アルファヒドロキシ酸およびジメチコン）ならびに軟化薬（例えば、ラノリン、鉱物油およびペトロラタム）が含まれる。例えば、アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａ含有クリーム、バーム、ローション、または日焼け止め中に保湿剤が含まれる場合がある。
【０２１２】
脱臭剤は、望まれない臭気を低減する薬剤であり得る。脱臭剤は、臭気を直接中和する、発汗を防ぐ、または臭気生成細菌の増殖を防ぐことによって機能し得る。例示的な脱臭剤には、アルミニウム塩（例えば、塩化アルミニウムまたはアルミニウムクロロヒドレート）、シクロメチコン、タルク、ふくらし粉、精油、無機質塩、ホップ、およびマンサクが含まれる。脱臭剤は、典型的にはスプレーまたはスティックデオドラント中に存在し、一部の石鹸および衣類にも見られる可能性がある。
【０２１３】
昆虫忌避剤は、昆虫および他の節足動物が表面に留まるのを妨げる、表面（例えば、皮膚）に適用することができる薬剤であり得る。昆虫忌避剤には、ディート（Ｎ，Ｎ−ジエチル−ｍ−トルアミド）、ｐ−メンタン−３，８−ジオール（ＰＭＤ）、イカリジン、ネペタラクトン、シトロネラ油、ニーム油、ヤチヤナギ、ジメチルカルベート、トリシクロデセニルアリルエーテル、およびＩＲ３５３５（３−［Ｎ−ブチル−Ｎ−アセチル］−アミノプロピオン酸エチルエステル）が含まれる。
【０２１４】
クレンジング剤は、皮膚のような表面から汚損または望まれない細菌を除去する薬剤であり得る。例示的なクレンジング剤には、固形石鹸、液体石鹸、およびシャンプーが含まれる。
【０２１５】
ＵＶブロック剤は、表面が受ける紫外線の量を低減するために表面に適用することができる薬剤であり得る。ＵＶブロック剤は、ＵＶ−Ａおよび／またはＵＶ−Ｂ光線をブロックすることができる。ＵＶブロック剤は、ＵＶを吸収、反射、または散乱することによって機能することができる。例示的なＵＶブロック剤には、吸収体、例えば、ホモサレート、オクチサレート（オクチルサリチレートとも呼ばれる）、オクチノキセート（オクチルメトキシシンナメートまたはＯＭＣとも呼ばれる）、オクトクリレン、オキシベンゾン、およびアボベンゾン、ならびに反射材（例えば、二酸化チタンおよび酸化亜鉛）が含まれる。ＵＶブロック剤は、典型的には日焼け止め中に存在し、皮膚クリームおよび一部の化粧品中に見出すこともできる。
【０２１６】
一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａは、コンディショナーに付随する。コンディショナーは、一般的に、毛髪に適用してその外見、強度、または扱いやすさを改善することができる、クリーム様稠性を有する物質を表す。
【０２１７】
一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａは布に付随する。布は、一般的に衣類に仕立てるために適切な、例えば、着用者による毎日の動作に耐えるのに十分な材料強度を有する、柔軟な材料を表す。布は、繊維状、織物、またはニットであり得、天然材料または合成材料からできている可能性がある。例示的な布材料には、綿、亜麻、毛、ラミー、絹、デニム、革、ナイロン、ポリエステル、およびスパンデックス、ならびにそれらの混紡が含まれる。
【０２１８】
一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａは、糸に付随する。糸は、一般的に、ニッティングまたは製織に適切な、長く細い紡績柔軟な材料を指す。糸は、例えば、毛、綿、ポリエステル、およびそれらの混紡でできている可能性がある。
【０２１９】
一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａはスレッドに付随する。スレッドは、一般的に、縫い物に適切な、長く細い紡績柔軟な材料を表す。スレッドは、一般的に、糸よりも細い直径を有する。スレッドは、例えば、綿、ポリエステル、ナイロン、絹、およびそれらの混紡からできている可能性がある。
【０２２０】
例えば、靴、靴の中敷き、パジャマ、スニーカー、ベルト、帽子、シャツ、下着、スポーツウエア、ヘルメット、タオル、手袋、靴下、包帯および類似物などの衣料品も、アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａで処理される場合がある。シーツ、枕、枕カバー、および毛布を含む寝具もアンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａで処理される場合がある。一部の実施形態では、ある期間洗浄することができない皮膚領域も、アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａと接触される場合がある。例えば、傷害を負った手足を治癒プロセスの間に固定する整形外科用ギプスに囲まれた皮膚、および縫合された創傷などの、適正な治癒のために乾燥したままでなければならない傷害付近の領域は、アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａとの接触から利益を得る場合がある。
【０２２１】
一部の態様では、本開示は、本明細書に記載されたＮ．ｅｕｔｒｏｐｈａ株を含む装着品を提供する。装着品は、歩行を妨げない方法で使用者の身体に密接に付随することができる軽量品であってもよい。装着品の例には、腕時計、リストバンド、ヘッドバンド、ヘアゴム、ヘアネット、シャワーキャップ、帽子、ヘアピース、ならびに宝飾品が含まれる。本明細書に記載されたアンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａ株を含む装着品は、例えば、皮膚障害の処置もしくは予防、低亜硝酸塩レベルと関連する疾患もしくは状態の処置もしくは予防、体臭の処置もしくは予防、対象に一酸化窒素を供給するための処置、または微小生物の増殖を阻害するための処置のうちの１つまたは複数を提供する濃度で提供されてもよい。
【０２２２】
一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａは、毛髪と接触するように意図された製品、例えば、ブラシ、櫛、シャンプー、コンディショナー、ヘッドバンド、ヘアゴム、ヘアネット、シャワーキャップ、帽子、およびヘアピースに付随する。皮膚表面から離れて毛髪上で形成された一酸化窒素は、帽子、スカーフまたはフェイスマスクの中に捕捉され、吸入空気に方向付けられてもよい。
【０２２３】
おむつなどの、ヒト対象の表面と接触している物品には、アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａが付随する場合がある。おむつは、失禁した個体によって生成された尿および便を保持および含有するように設計されているので、尿および便中の尿素は、皮膚および糞便性細菌によって加水分解されて、刺激性でおむつかぶれを引き起こすおそれがある遊離アンモニアを形成する可能性がある。アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａなどの尿素を亜硝酸塩またはナイトレートに代謝する細菌の組込みは、遊離アンモニアの放出を回避することができ、亜硝酸塩および最終的にＮＯを放出する場合があり、ＮＯは、小児および失禁する成人の両方のための健康な皮膚の維持を助ける場合がある。おむつ内での一酸化窒素の放出は、ヒトの便中に存在する疾患起炎生物にも抗微小生物効果を有し得る。この効果は、使い捨ておむつが廃棄物として廃棄後であっても持続することができ、汚れた使い捨ておむつとの接触による疾患伝染の発生率を低減し得る。
【０２２４】
一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａを含む製品は、包装されている。包装は、製品を圧縮するまたはそれを損傷、汚損、または劣化から保護するように役立ち得る。包装は、例えば、プラスチック、紙、厚紙、または木材を含む場合がある。一部の実施形態では、包装は、細菌不透過性である。一部の実施形態では、包装は、酸素および／または二酸化炭素透過性である。
４．アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａを用いた処置方法
【０２２５】
本開示は、アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａを使用して疾患および状態を処置する様々な方法を提供する。疾患および状態を処置するために使用され得るアンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａには、すべてのアンモニア酸化細菌、例えば、本出願に記載されたＮ．ｅｕｔｒｏｐｈａ組成物、例えば、最適化アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａ、例としてＤ２３株の精製調製物が含まれる。
【０２２６】
皮膚の状態、例えば、ざ瘡、例えば、尋常性ざ瘡を処置するために投与されるアンモニア酸化細菌は、Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ、Ｎｉｔｒｏｓｏｃｏｃｃｕｓ、Ｎｉｔｒｏｓｏｓｐｉｒａ、Ｎｉｔｒｏｓｏｃｙｓｔｉｓ、Ｎｉｔｒｏｓｏｌｏｂｕｓ、Ｎｉｔｒｏｓｏｖｉｂｒｉｏ、およびその組合せからなる群から選択され得る。ある特定の態様では、アンモニア酸化細菌は、Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ  ｅｕｔｒｏｐｈａ（Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａ）であってもよい。ある特定の態様では、アンモニア酸化細菌は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１２１１５７を有するＮ．ｅｕｔｒｏｐｈａ  Ｄ２３である。
【０２２７】
方法は、治療製品または化粧製品を投与または送達するために提供され得る。
【０２２８】
アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａは、ざ瘡、酒さ、湿疹、または乾癬などの皮膚状態を処置するために使用され得る。
【０２２９】
ある特定の実施形態では、本開示は、皮膚状態または疾患を処置する（例えば、対象の皮膚上での微小生物の増殖を阻害する）ためのアンモニア酸化細菌、例えば、（１）最適化増殖速度、（２）最適化ＮＨ４＋酸化速度、（３）最適化ＮＨ３耐性、（４）最適化ＮＨ４＋耐性、および（５）最適化ＮＯ２−耐性のうちの１つまたは複数を有するＮ．ｅｕｔｒｏｐｈａの任意選択で純粋培養の組成物の使用を提供する。例として、純粋培養Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａ組成物は、この節の始めの列記から（１）および（２）；（２）および（３）；（３）および（４）；または（４）および（５）の特性を有し得る。別の例として、純粋培養Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａ組成物は、この節の始めの列記から（１）、（２）、および（３）；（１）、（２）、および（４）；（１）、（２）、および（５）；（１）、（３）、および（４）；（１）、（３）、および（５）；（１）、（４）、および（５）；（２）、（３）、および（４）；（２）、（３）、および（５）、または（３）、（４）、および（５）の特性を有し得る。さらなる例として、任意選択で純粋培養のＮ．ｅｕｔｒｏｐｈａ組成物は、この節の始めの列記から（１）、（２）、（３）、および（４）；（１）、（２）、（３）、および（５）；（１）、（２）、（４）、および（５）；（１）、（３）、（４）、および（５）；または（２）、（３）、（４）、および（５）の特性を有し得る。一部の実施形態では、純粋培養Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａ組成物は、この節の始めの列記から（１）、（２）、（３）、（４）、および（５）の特性を有する。
【０２３０】
アンモニア酸化細菌は、皮膚状態、例えば、ざ瘡、例えば、尋常性ざ瘡を処置するために使用され得る。
【０２３１】
一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａ、例えば、任意選択で純粋培養のＮ．ｅｕｔｒｏｐｈａ（例えば、Ｄ２３株）が対象を処置するために使用される。対象には、動物、哺乳動物、ヒト、非ヒト動物、家畜動物、または伴侶動物が含まれてもよい。
【０２３２】
対象は、女性または男性であってもよい。対象は、以下の民族性／人種：アジア系、黒人またはアフリカ系アメリカ人、ヒスパニックまたはラテンアメリカ系、白人、または多民族系のうちの１つであってもよい。対象は、以下の皮膚タイプ：普通肌、脂性肌、および組合せ肌のうちの少なくとも１つを有すると特徴付けることができる。対象は、以下のフィッツパトリック皮膚タイプ：Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖのうちの１つを有すると特徴付けることができる。対象のざ瘡のタイプは、思春期ざ瘡または成人ざ瘡のうちの１つであってもよい。対象の年齢は、約１２〜１５、１６〜１８、１９〜２８の間、または２８より高くてもよい。
【０２３３】
成人ざ瘡は、年齢１９歳、またはそれより高い対象のざ瘡を表す。思春期ざ瘡は、１９歳未満の対象のざ瘡を表す。
【０２３４】
一部の実施形態では、対象の皮膚障害、例えば、ざ瘡、例えば、尋常性ざ瘡を処置する方法であって、アンモニア酸化細菌、例えば、アンモニア酸化細菌を含む調製物を対象の表面に投与する、例えば、適用する、例えば、局所投与することを含む方法が提供される。
【０２３５】
投与、例えば、適用の量および／または頻度は、対象の表面での病原性細菌、例えば、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｎｅｓの量または濃度を低減するのに十分であり得る。量は、アンモニア酸化細菌の治療有効用量であってもよい。
【０２３６】
投与、例えば、投与することは、炎症性病変の処置を提供し得る。炎症性病変は、丘疹、膿疱、および嚢腫／結節のうちの任意の１つまたは複数の形態であってもよい。
【０２３７】
丘疹および膿疱は、炎症を起こした孔によって引き起こされる吹き出物と説明することができる。丘疹は、皮膚に出現する小さな隆起であって、典型的にはざらざらした手触りを有し、触ると硬い。丘疹は、毛包壁が破れて陥没すると起こり得る。膿疱は、黄色がかった液状の膿が溜まっている場合があることを除き、丘疹と類似している。白血球が丘疹の皮膚表面に上昇して膿疱を形成する。
【０２３８】
封鎖された毛穴は、より大きな炎症を起こし、より大きくなり、皮膚により深く浸透して結節および嚢腫をもたらす場合がある。嚢腫は、典型的には皮膚表面下に形成し、白血球、油分および流体の構築物が構築を開始し、嚢腫、または膿が溜まった領域の出現を引き起こす。結節は硬く、毛包の底部が破れると形成するおそれがあり、そのことで毛包が崩壊するおそれがある。これにより、結節と呼ばれる皮膚表面の痛みのある大型の隆起が生成し得る。結節は、皮膚の深層に及ぶ場合がある。
【０２３９】
投与、例えば、投与することは、非炎症性病変の処置を提供し得る。非炎症性病変は、面皰、例えば、開放面皰および／または閉鎖面皰であってもよい。
【０２４０】
閉鎖面皰または白ニキビは、小型のふさがった毛包であり、その内容物は皮膚に露出していない。開放面皰または黒ニキビは、毛包内の残骸を酸化させて黒い着色をもたらす、皮膚への開大を有する小さな毛包である。
【０２４１】
投与、例えば、投与することは、炎症後色素沈着亢進／炎症後紅斑（ＰＩＨ／ＰＩＥ）病変の処置または改善を提供し得る。色素沈着亢進は、皮膚における色素、例えば、メラニンの過剰生成によって引き起こされる皮膚領域の黒ずみによって特徴付けられる。炎症後は、任意のタイプの皮膚炎、例えば、ざ瘡関連皮膚炎に続く局所皮膚紅斑を表し、瘢痕を招き得る紅斑を含む。
【０２４２】
投与、例えば、投与することは、紅斑、浮腫、鱗屑、ピリピリ感、灼熱感、および痒みのうちの１つまたは複数の処置または改善を提供し得る。紅斑は、毛細血管の拡張を引き起こす傷害または刺激の結果としての皮膚の表在性発赤、典型的には斑状のものを表し得る。浮腫は、対象の腔または組織内に集まった過剰の水性流体によって特徴付けられる状態、例えば、腫脹を表し得る。
【０２４３】
投与、例えば、投与することは、脂性の外観、毛穴の外観、つや、しみ、皮膚の色調の均一性、視覚的滑らかさ、および触覚的滑らかさのうちの１つまたは複数の処置または改善を提供し得る。
【０２４４】
投与、例えば、投与することは、セブメーター測定値における処置または改善を提供し得る。皮脂は、脂腺からの脂性分泌物である。皮脂は、例えば、対象の任意の身体領域上に見出される場合がある。
投与は、以下：病変の炎症を低減すること、病変の頻度を低減すること、および病原性細菌、例えば、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｎｅｓの存在を減少させることのうちの１つまたは複数を提供し得る。
【０２４５】
投与は、病原性細菌、例えば、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｎｅｓの存在の減少を提供し得る。投与は、Ｓｋｉｎｄｅｘ１６生活の質調査によって測定されるような、対象による対象の疾患の感情的アセスメントの改善を提供し得る。投与は、以下：対象における皮膚状態の痛み、対象における皮膚状態の持続／再発症、および対象における皮膚状態の外観のうちの１つまたは複数の改善を提供し得る。投与は、臨床評定により、以下：視覚的および触覚的滑らかさ、ならびにしみについての評定スコアのうちの１つまたは複数において改善（減少）を提供し得る。
【０２４６】
アンモニア酸化細菌、例えば、アンモニア酸化細菌の調製物の投与、例えば、投与することは、対象をアンモニア酸化細菌で前処置することを含んでもよい。例えば、前処置することは、ざ瘡またはざ瘡関連大発生の前、例えば、ざ瘡関連症状または状態の出現前のアンモニア酸化細菌の投与を伴い得る。投与は、皮膚障害、例えば、ざ瘡、例えば、尋常性ざ瘡が起こる前に局所投与することを含んでもよい。
【０２４７】
投与、例えば、局所投与することは、対象にアンモニア酸化細菌の有効用量を局所投与することを含んでもよい。有効用量は、約０．１×１０９、０．２×１０９、０．３×１０９、０．４×１０９、０．５×１０９、０．６×１０９、０．７×１０９、０．８×１０９、０．９×１０９、１．０×１０９、１．２×１０９、１．４×１０９、１．５×１０９、１．６×１０９、１．８×１０９、２．０×１０９、２．２×１０９、２．４×１０９、２．６×１０９、２．８×１０９、３．０×１０９、３．２×１０９、３．４×１０９、３．６×１０９、３．８×１０９、４．０×１０９、４．２×１０９、４．４×１０９、４．６×１０９、４．８×１０９、５．０×１０９、５．５×１０９、６．０×１０９、６．５×１０９、７．０×１０９、７．５×１０９、８．０×１０９、８．５×１０９、９．０×１０９、９．５×１０９、１０．０×１０９、１２×１０９、１４×１０９、１６×１０９、１８×１０９、２０×１０９、２５×１０９、３０×１０９、４０×１０９、および５０×１０９ＣＦＵのうちの任意の１つまたは複数であってもよい。
【０２４８】
有効用量は、また、アンモニア、例えば、約０．０１ｍＭから約１００ｍＭの間のアンモニア濃度と組み合わせて本明細書に記載された用量を有するアンモニア酸化細菌含んでもよい。例えば、アンモニア濃度は、約０．０１、０．０５、０．１、０．２、０．４、０．５、０．６、０．８、１．０、１．２、１．４、１．６、１．８、２．０、２．２、２．４、２．５、２．６、２．８、３．０、３．２、３．４、３．６、３．８、４．０、４．２、４．４、４．５、４．６、４．８、５．０、５．２、５．４、５．６、５．８、６．０、６．２、６．４、６．６、６．８、７．０、７．２、７．４、７．６、７．８、８．０、８．２、８．４、８．６、８．８、１０．０、１５．０、２０．０、２５．０、３０．０、３５．０、４０．０、４５．０、５０．０、５５．０、６０．０、６５．０、７０．０、７５．０、８０．０、８５．０、９０．０、９５．０、または１００．０ｍＭであってもよい。
【０２４９】
皮膚障害、例えば、ざ瘡、例えば、尋常性ざ瘡は、１つまたは複数の望ましくない細菌、例えば、病原性細菌を含む場合がある対象の標的部位に存在し得る。標的部位は、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｎｅｓを含んでもよい。
【０２５０】
処置方法は、対象が皮膚障害の処置を必要としているかどうかを決定することをさらに含んでもよい。これは、対象がざ瘡、例えば、尋常性ざ瘡の処置を必要としているかどうかを決定することを伴い得る。方法は、皮膚障害の処置を必要とする対象を選択することをさらに含んでもよい。
【０２５１】
ある特定の実施形態では、方法は、対象が対象の表面の病原性細菌、例えば、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｎｅｓの量または濃度を低減する必要があることに基づき対象を選択することを含んでもよい。
【０２５２】
投与は、対象によるアンモニア酸化細菌の自己投与を含んでもよい。投与は、対象ではない者によるアンモニア酸化細菌の投与を含んでもよい。アンモニア酸化細菌は、対象の身体の任意の部分、例えば、頭、肩、腕、脚、脇、胴体、足、膝、足首、または臀部に投与される、例えば、適用される場合がある。ある特定の態様では、アンモニア酸化細菌は、対象の顔、首、および頭皮のうちの任意の１つまたは複数に適用されてもよい。
【０２５３】
一部の実施形態では、投与は、アンモニア酸化細菌、例えば、アンモニア酸化細菌の調製物を適切な回数投与、例えば、適用して、本明細書に記載された測定技法のうちの任意の１つまたは複数の改善によって説明されるような、ざ瘡の有効な処置を提供することを含んでもよい。例えば、投与は、１日当たり約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、または２４回起こり得る。投与は、アンモニア酸化細菌、例えば、アンモニア酸化細菌の調製物を１日当たり１回投与すること、例えば、適用することを含んでもよい。投与は、アンモニア酸化細菌、例えば、アンモニア酸化細菌の調製物を１日当たり２回投与すること、例えば、適用することを含んでもよい。
【０２５４】
一部の実施形態では、調製物の投与は、例えば、アンモニア酸化細菌、例えば、アンモニア酸化細菌の調製物を適切な期間投与、例えば、適用して、本明細書に記載された測定技法のうちの任意の１つまたは複数の改善によって説明されるような、ざ瘡の有効な処置を提供することを含んでもよい。調製物の投与は、アンモニア酸化細菌、例えば、アンモニア酸化細菌の調製物を、約１〜３、３〜５、５〜７、７〜９、５〜１０、１０〜１４、１２〜１８、１２〜２１、２１〜２８、２８〜３５、３５〜４２、４２〜４９、４９〜５６、４６〜６３、６３〜７０、７０〜７７、７７〜８４、または８４〜９１日間投与する、例えば、適用することを含んでもよい。例えば、調製物は、約７日間適用されてもよい。例えば、調製物は、約１４日間適用されてもよい。例えば、調製物は、約２１日間適用されてもよい。例えば、調製物は、約２８日間適用されてもよい。
【０２５５】
アンモニア酸化細菌、例えば、アンモニア酸化細菌の調製物は、エアロゾル化、スプレー化またはミスト化することが可能であり得る形態、例えば、培地、すなわちミストの形態であってもよい。アンモニア酸化細菌、例えば、アンモニア酸化細菌の調製物は、エアロゾルまたはミストとして投与する、例えば、適用する、例えば、局所適用することができる。エアロゾルまたはミストは、水性培地を含んでもよい。アンモニア酸化細菌の調製物は、アンモニア酸化細菌の生存性を維持または促進する調製物中にあってもよい。調製物は、緩衝溶液、例えば、水性緩衝溶液中にあってもよい。緩衝溶液、例えば、水性緩衝溶液。水性緩衝液は、リン酸二ナトリウムおよび塩化マグネシウムを含んでもよい。水性緩衝液は、水中の５０ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４および２ｍＭ  ＭｇＣｌ２を含んでもよい。アンモニア酸化細菌の濃度は、任意の濃度の本明細書開示のＡＯＢであってもよい。ある特定の態様では、水性緩衝液は、水中に５０ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４および２ｍＭ  ＭｇＣｌ２を含む場合があり、アンモニア酸化細菌、例えば、１×１０９ＣＦＵ／ｍＬの濃度のＤ２３  Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａをさらに含む場合がある。
【０２５６】
アンモニア酸化細菌の添加前の水性緩衝溶液は、水中のリン酸二ナトリウムおよび塩化マグネシウム、例えば、５０ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４および２ｍＭ  ＭｇＣｌ２を含む、それから本質的になる、またはそれからなってもよい。
【０２５７】
一部の実施形態では、調製物は、アンモニア、アンモニウム塩、および尿素のうちの少なくとも１つを含んでもよい。調製物は、制御放出性材料を含んでもよい。例えば、制御放出性材料は、徐放性材料であってもよい。アンモニア酸化細菌の調製物は、添加剤を含んでもよい。添加剤は、本開示全体にわたり開示されるような薬学的に許容される添加剤または化粧品として許容される添加剤であってもよい。添加剤は、界面活性剤、例えば、本開示全体にわたり開示される界面活性剤であってもよい。一部の実施形態では、添加剤、例えば、薬学的に許容される添加剤または化粧品として許容される添加剤は、抗接着剤、結合剤、コーティング剤、崩壊剤、フィラー、香料、着色剤、滑沢剤、流動促進剤、吸着剤、保存剤、または甘味剤を含む。
【０２５８】
調製物は、他の生物を実質的に含有しない場合がある。調製物は、第２の生物、例えば、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒ、およびその組合せからなる群から選択される生物を含んでもよい。
【０２５９】
一部の実施形態では、皮膚状態、例えば、ざ瘡、例えば、尋常性ざ瘡の処置用の調製物は、粉末、化粧品、クリーム、スティック、エアロゾル、例えば、ミスト、軟膏、ワイプ、または包帯中に配置されるか、またはそれとして提供されてもよい。一部の実施形態では、皮膚状態、例えば、ざ瘡、例えば、尋常性ざ瘡の処置用の調製物は、保湿剤、脱臭剤、芳香剤、着色料、昆虫忌避剤、クレンジング剤、またはＵＶ−ブロック剤を含んでもよい。
【０２６０】
一部の実施形態では、皮膚状態、例えば、ざ瘡、例えば、尋常性ざ瘡の処置用の調製物は、約１０８から約１０１４ＣＦＵ／ｍＬのアンモニア酸化細菌濃度を有するアンモニア酸化細菌を含んでもよい。ある特定の態様では、調製物は、約１×１０９ＣＦＵ／ｍＬから約１０×１０９ＣＦＵ／ｍＬの間のアンモニア酸化細菌を含んでもよい。一部の実施形態では、調製物は、アンモニア酸化細菌約５０ミリグラム（ｍｇ）と約１０００ｍｇの間のアンモニア酸化細菌を含んでもよい。一部の実施形態では、添加剤、例えば、薬学的に許容される添加剤または化粧品として許容される添加剤に対するアンモニア酸化細菌の質量比は、約０．１グラムから約１グラム／リットルの範囲である。
【０２６１】
ざ瘡を処置するために使用され得るアンモニア酸化細菌の調製物は、容器中に提供されてもよく、調製物および容器は、約５０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１５００、または２０００グラム未満の重量を有する。
【０２６２】
方法は、皮膚表面から試料を得ることをさらに含んでもよい。試料は、アンモニア酸化細菌の投与前の任意の時間、またはアンモニア酸化細菌の投与後の任意の時間に採取され得る。例えば、試料は、投与の約１分、５分、１０、１５、２０、２５、３０、４５、６０、９０、１２０分前、または投与の３時間、４、５、６、７、８、１２、１８、２４時間前、または投与の１週間、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２週間前に採取され得る。代替的または追加的に、試料は、投与の約１分、５分、１０、１５、２０、２５、３０、４５、６０、９０、１２０分後、または投与の３時間、４、５、６、７、８、１２、１８、２４時間後、または投与の１週間、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２週間後に採取され得る。
【０２６３】
方法は、試料中の細菌のＤＮＡを単離することをさらに含んでもよい。細菌は、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｎｅｓであってもよい。アンモニア酸化細菌の投与は、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｎｅｓの減少を提供する。Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｎｅｓの減少は、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、３５、４２、４９、５６、６３、７０、７７、８４、９１、９８、１０５日後、またはそれより長い日数後に起こり得る。
【０２６４】
本明細書に記載された化粧製品、例えば、マイクロバイオームに適合する化粧製品、例えば、シャンプー、コンディショナー、および洗浄剤の使用は、皮膚状態、例えば、ざ瘡、例えば、尋常性ざ瘡の処置とともに使用され得る。これらの化粧製品は、アンモニア酸化細菌の投与とともに使用され得る。例えば、アンモニア酸化細菌を対象に投与する処置期間にわたり、化粧製品が使用され得る。化粧製品は、アンモニア酸化細菌を対象に投与することによる皮膚状態の処置の開始前の期間に使用され得る。化粧製品は、アンモニア酸化細菌を対象に投与することによる皮膚状態の処置の開始後の期間に使用され得る。化粧製品は、アンモニア酸化細菌を対象に投与することによる皮膚状態の処置の中止後の期間に使用され得る。
【０２６５】
一部の実施形態では、対象は、１つまたは複数の化粧製品を適用し、アンモニア酸化細菌の投与前にある期間待機する場合がある。他の実施形態では、対象は、アンモニア酸化細菌を投与し、１つまたは複数の化粧製品を適用する前にある期間待機する場合がある。
【０２６６】
対象が待機し得る期間は、１つまたは複数の化粧製品を適用した後で、かつアンモニア酸化細菌の投与前に、約１分、５分、１０、１５、２０、２５、３０、４５、６０、９０、１２０分、または３時間、４、５、６、７、８、１２、１８、２４時間であってもよい。
【０２６７】
対象が待機し得る期間は、アンモニア酸化細菌を投与した後で、かつ１つまたは複数の化粧製品を適用する前に、約１分、５分、１０、１５、２０、２５、３０、４５、６０、９０、１２０分、または３時間、４、５、６、７、８、１２、１８、２４時間であってもよい。
【０２６８】
対象は、処置、例えば、アンモニア酸化細菌の投与を開始する前に評価され得る。対象は、処置を開始した後、例えば、第１の投与、例えば、アンモニア酸化細菌の適用の後に評価され得る。
【０２６９】
対象は、処置、例えば、アンモニア酸化細菌の投与を開始する１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２日；または７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２週間；または２、３年、４、もしくは５年前に評価され得る。
【０２７０】
対象は、処置、例えば、第１の投与、例えば、アンモニア酸化細菌の適用を開始した１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２日；または７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２週間；または２、３年、４、もしくは５年後に評価され得る。
【０２７１】
投与は、対象が洗浄を行う、入浴する、またはシャワーを浴びる前または後の期間に起こり得る。例えば、投与は、対象が洗浄を行う、入浴する、またはシャワーを浴びる３０、６０、９０、１２０、１５０、１８０分前または後の時間に起こり得る。
【０２７２】
一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａ、例えば、任意選択で純粋培養の本明細書に記載されたＮ．ｅｕｔｒｏｐｈａ（例えば、本開示全体にわたり記載されるＮ．ｅｕｔｒｏｐｈａ、例えば、Ｄ２３株）が、他の生物の増殖を阻害するために使用される。例として、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａ  Ｄ２３は、ヒト皮膚の長期定着のために十分に適合しており、一部の実施形態では、それは、皮膚上の望ましくない他の細菌を駆逐する。望ましくない皮膚細菌には、例えば、創傷感染する、疾患の危険性もしくは重症度を上げる、または臭気を生成する可能性があるものが含まれる。ある特定の望ましくない皮膚細菌には、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ、およびＡ．ｂａｕｍａｎｎｉｉが含まれる。本明細書に記載されたＮ．ｅｕｔｒｏｐｈａは、例えば、乏しい栄養分を消費する、または他の生物に有害な副生成物を発生することによって、例えば、皮膚のｐＨを望ましくない生物の増殖の助けとならないレベルに変化させることによって、他の生物を駆逐し得る。
【０２７３】
したがって、本開示は、とりわけ、対象の皮膚上での微小生物の増殖を阻害する方法であって、それを必要とするヒトに本明細書に記載されたようなアンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａ、例えば、任意選択で純粋培養の本明細書に記載されたＮ．ｅｕｔｒｏｐｈａ（例えば、Ｄ２３株）の有効用量を局所投与することを含む方法を提供する。同様に、本開示は、対象の皮膚上での微小生物の増殖を阻害することに使用するための、アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａ、例えば、任意選択で純粋培養の本明細書に記載されたＮ．ｅｕｔｒｏｐｈａを提供する。同じように、本開示は、対象の皮膚上での微小生物の増殖を阻害するための医薬の製造におけるアンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａ、例えば、任意選択で純粋培養の本明細書に記載されたＮ．ｅｕｔｒｏｐｈａの使用を提供する。
【０２７４】
したがって、本開示は、とりわけ、皮膚状態、例えば、ざ瘡、例えば、尋常性ざ瘡を処置する方法であって、それを必要とするヒトにアンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａ、例えば、任意選択で純粋培養の本明細書に記載されたＮ．ｅｕｔｒｏｐｈａ（例えば、Ｄ２３株）の有効用量を局所投与することを含む方法を提供する。同様に、本開示は、対象の皮膚上の皮膚状態、例えば、ざ瘡、例えば、尋常性ざ瘡の処置に使用するためのアンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａ、例えば、任意選択で純粋培養の本明細書に記載されたＮ．ｅｕｔｒｏｐｈａ（例えば、Ｄ２３株）を提供する。同じように、本開示は、対象の皮膚上の皮膚状態、例えば、ざ瘡、例えば、尋常性ざ瘡を処置するための医薬の製造におけるアンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａ、例えば、任意選択で純粋培養の本明細書に記載されたＮ．ｅｕｔｒｏｐｈａの使用を提供する。
【０２７５】
本開示は、一酸化窒素を対象に供給する方法であって、アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａ、例えば、任意選択で純粋培養の本明細書に記載されたＮ．ｅｕｔｒｏｐｈａ（例えば、Ｄ２３株）の有効用量を対象のすぐ近くに位置させることを含む方法も提供する。同様に、本開示は、一酸化窒素を対象に供給するのに使用するためのアンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａ、例えば、任意選択で純粋培養の本明細書に記載されたＮ．ｅｕｔｒｏｐｈａ（例えば、Ｄ２３株）を提供する。同じように、本開示は、対象のすぐ近くの位置に適切な医薬または組成物の製造におけるアンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａ、例えば、任意選択で純粋培養の本明細書に記載されたＮ．ｅｕｔｒｏｐｈａ（例えば、Ｄ２３株）の使用を提供する。
【０２７６】
本開示は、体臭を低減する方法であって、それを必要とする対象に、アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａ、例えば、任意選択で純粋培養の本明細書に記載されたＮ．ｅｕｔｒｏｐｈａ（例えば、Ｄ２３株）の有効用量を局所投与することを含む方法も提供する。同様に、本開示は、対象における体臭の低減に使用するためのアンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａ、例えば、任意選択で純粋培養の本明細書に記載されたＮ．ｅｕｔｒｏｐｈａ（例えば、Ｄ２３株）を提供する。同じように、本開示は、体臭を低減するための医薬または組成物の製造におけるアンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａ、例えば、任意選択で純粋培養の本明細書に記載されたＮ．ｅｕｔｒｏｐｈａ（例えば、Ｄ２３株）の使用を提供する。
【０２７７】
本開示は、低亜硝酸塩レベルと関連する疾患を処置または予防する方法であって、それを必要とする対象にアンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａ、例えば、任意選択で純粋培養の本明細書に記載されたＮ．ｅｕｔｒｏｐｈａ（例えば、Ｄ２３株）の治療有効用量を局所投与することを含む方法も提供する。同様に、本開示は、低亜硝酸塩レベルと関連する疾患の処置に使用するための、アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａ、例えば、任意選択で純粋培養の本明細書に記載されたＮ．ｅｕｔｒｏｐｈａ（例えば、Ｄ２３株）の局所製剤を提供する。同じように、本開示は、低亜硝酸塩レベルと関連する疾患を処置するための局所医薬の製造におけるアンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａ、例えば、任意選択で純粋培養の本明細書に記載されたＮ．ｅｕｔｒｏｐｈａ（例えば、Ｄ２３株）の使用を提供する。
【０２７８】
本開示は、皮膚障害または皮膚感染を処置または予防する方法であって、それを必要とする対象にアンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａ、例えば、任意選択で純粋培養の本明細書に記載されたＮ．ｅｕｔｒｏｐｈａ（例えば、Ｄ２３株）の治療有効用量を局所投与することを含む方法も提供する。同様に、本開示は、対象における皮膚障害の処置に使用するためのアンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａ、例えば、任意選択で純粋培養の本明細書に記載されたＮ．ｅｕｔｒｏｐｈａ（例えば、Ｄ２３株）を提供する。同じように、本開示は、皮膚障害を処置するための医薬の製造におけるアンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａ、例えば、任意選択で純粋培養の本明細書に記載されたＮ．ｅｕｔｒｏｐｈａ（例えば、Ｄ２３株）の使用を提供する。複数の実施形態では、皮膚障害は、ざ瘡、酒さ、湿疹、乾癬、または蕁麻疹であり；皮膚感染は膿痂疹である。
【０２７９】
理論に縛られることを望むものではないが、任意選択で純粋培養の本明細書に記載されたＮ．ｅｕｔｒｏｐｈａ細菌（例えば、Ｄ２３株）の治療有効用量を用いたざ瘡の処置は、ＮＯ発生による炎症の下方調節；ならびに／または尋常性ざ瘡と関連するＰｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｎｅｓの拡大および繁殖を、酸性化亜硝酸塩およびＮＯ生成により限定および／もしくは阻害することを伴い得ることが提唱されている。
【０２８０】
例として、本開示は、状態または疾患を処置する（例えば、対象の皮膚上での微小生物の増殖を阻害する）ためのアンモニア酸化細菌の組成物の使用を提供する。複数の実施形態では、アンモニア酸化細菌は、例えば、慢性的な創傷、ざ瘡、酒さ、湿疹、乾癬、蕁麻疹、または皮膚感染症を処置するために使用され得る。
【０２８１】
本開示のシステムおよび方法は、皮膚障害を処置もしくは予防する、低亜硝酸塩レベルと関連する疾患もしくは状態を処置もしくは予防する、体臭を処置もしくは予防する、対象に一酸化窒素を供給するために処置する、または微小生物の増殖を阻害するために処置するために有用であるべき内容物を提供するか、またはそれを含有してもよい。
【０２８２】
本開示のシステムおよび方法は、環境、例えば、対象の表面から望ましくない細菌の量を低減することを提供し得る。
【０２８３】
本開示のシステムおよび方法は、ざ瘡、湿疹、乾癬、蕁麻疹、酒さ、皮膚感染および創傷、例えば、感染した創傷のうちの少なくとも１つの処置に有用であるべき内容物を提供する、またはそれを含有し得る。
【０２８４】
一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌は、対象を処置するために使用され得る。対象には、動物、哺乳動物、ヒト、非ヒト動物、家畜動物、または伴侶動物が含まれ得る。
【０２８５】
一部の実施形態では、本明細書に記載されたアンモニア酸化細菌は、他の生物の増殖を阻害するように使用される。例として、アンモニア酸化細菌は、ヒト皮膚の長期定着のために十分に適合している場合があり、一部の実施形態では、それは、皮膚上の望ましくない他の細菌を駆逐する。望ましくない皮膚細菌には、例えば、創傷感染する、疾患の危険性もしくは重症度を上げる、または臭気を生成する可能性があるものが含まれる。望ましくない細菌は、病原性細菌と称され得る。ある特定の望ましくない皮膚細菌には、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）、例えば、メチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ（Ａ．ｂａｕｍａｎｎｉｉ）、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ、およびＳｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓが含まれる。本明細書に記載されたアンモニア酸化細菌は、例えば、乏しい栄養分を消費する、または他の生物に有害な副生成物を発生する、例えば、皮膚のｐＨを望ましくない生物の増殖の助けとならないレベルに変化させることによって、他の生物を駆逐し得る。
【０２８６】
したがって、本開示は、とりわけ、対象の皮膚上での微小生物の増殖を阻害する方法であって、それを必要とするヒトに本明細書に記載されたアンモニア酸化細菌の有効用量を局所投与することを含む方法を提供する。同様に、本開示は、対象の皮膚上での微小生物の増殖を阻害することに使用するための、本明細書に記載されたアンモニア酸化細菌を提供する。同じように、本開示は、対象の皮膚上での微小生物の増殖を阻害するための医薬の製造におけるアンモニア酸化細菌の使用を提供する。
【０２８７】
本開示は、とりわけ、環境、例えば、表面、例えば、対象の表面における皮膚マイクロバイオームの組成を変化させる、例えば、皮膚マイクロバイオームの組成をモジュレートする、例えば、皮膚マイクロバイオームの比率をモジュレートするまたは変化させる方法を提供する。方法は、アンモニア酸化細菌を含む調製物を、環境、例えば、表面、例えば、対象の表面に投与する、例えば、適用することを含んでもよい。一部の実施形態では、投与、例えば、適用の量および頻度は、皮膚表面での病原性細菌の比率を低減するために十分であり得る。一部の実施形態では、対象は、対象が皮膚表面での病原性細菌の比率を低減する必要があることに基づき選択され得る。
【０２８８】
本開示は、試料を皮膚表面から入手すること、および試料中の細菌のＤＮＡを単離することをさらに提供し得る。対象の試料中の細菌の量または比率を決定または監視するために、試料中の細菌のＤＮＡの配列決定を行うこともできる。
【０２８９】
本開示は、表面での非病原細菌の比率を増加させることも提供し得る。一部の実施形態では、非病原細菌は、共生非病原細菌であってもよい。一部の実施形態では、非病原細菌は、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ属であってもよい。一部の実施形態では、非病原細菌は、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓであってもよい。一部の実施形態では、比率が増加される非病原細菌は、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓを少なくとも約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％含むＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ属であってもよい。
【０２９０】
非病原細菌の比率の増加は、予め決定された期間で、例えば、１日、２日、３日、４日、５日、１週間、２週間、３週間、もしくは４週間未満で、または１〜３、３〜５、５〜７、７〜９、５〜１０、１０〜１４、１２〜１８、１２〜２１、２１〜２８、２８〜３５、３５〜４２、４２〜４９、４９〜５６、４６〜６３、６３〜７０、７０〜７７、７７〜８４、８４〜９１日未満で起こり得る。
【０２９１】
Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ細菌、例えば、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓの比率の増加は、約３週間未満、例えば、約１６日、例えば、約２週間内で観察され得る。
【０２９２】
本開示は、表面での病原性細菌、例えば、潜在的な病原性細菌、例えば、疾患関連細菌の比率を減少させることを提供し得る。一部の実施形態では、病原性細菌は、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍであってもよい。一部の実施形態では、病原性細菌は、Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓであってもよい。
【０２９３】
病原性細菌の比率の減少は、予め決定された期間で、例えば、１日、２日、３日、４日、５日、１週間、２週間、３週間、もしくは４週間未満で、または１〜３、３〜５、５〜７、７〜９、５〜１０、１０〜１４、１２〜１８、１２〜２１、２１〜２８、２８〜３５、３５〜４２、４２〜４９、４９〜５６、４６〜６３、６３〜７０、７０〜７７、７７〜８４、８４〜９１日未満で起こり得る。
【０２９４】
Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ細菌および／またはＳｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓの比率の減少は、約３週間未満、例えば、約１６日、例えば、約２週間内で観察され得る。
【０２９５】
本開示は、一酸化窒素を対象に供給する方法であって、本明細書に記載されたアンモニア酸化細菌の有効用量を対象のすぐ近くに位置させることを含む方法も提供する。同様に、本開示は、一酸化窒素を対象に供給するのに使用するための、本明細書に記載されたアンモニア酸化細菌を提供する。同じように、本開示は、対象のすぐ近くの位置に適切な医薬または組成物の製造における使用を提供する。
【０２９６】
本開示は、体臭を低減する方法であって、それを必要とする対象に本明細書に記載されたアンモニア酸化細菌の有効用量を局所投与することを含む方法も提供する。同様に、本開示は、対象における体臭の低減に使用するための本明細書に記載されたアンモニア酸化細菌を提供する。同じように、本開示は、体臭を低減するための医薬または組成物の製造における本明細書に記載されたアンモニア酸化細菌の使用を提供する。
【０２９７】
本開示は、低亜硝酸塩レベルと関連する疾患を処置または予防する方法であって、それを必要とする対象に本明細書に記載されたアンモニア酸化細菌の治療有効用量を局所投与することを含む方法も提供する。同様に、本開示は、低亜硝酸塩レベルと関連する疾患の処置に使用するための、本明細書に記載されたアンモニア酸化細菌の局所製剤を提供する。同じように、本開示は、低亜硝酸塩レベルと関連する疾患を処置するための局所医薬の製造における本明細書に記載されたアンモニア酸化細菌の使用を提供する。
【０２９８】
本開示は、皮膚障害または皮膚感染症を処置または予防する方法であって、それを必要とする対象に本明細書に記載されたアンモニア酸化細菌の治療有効用量を局所投与することを含む方法も提供する。同様に、本開示は、対象における皮膚障害の処置に使用するための本明細書に記載されたアンモニア酸化細菌を提供する。同じように、本開示は、皮膚障害を処置するための医薬の製造における本明細書に記載されたアンモニア酸化細菌の使用を提供する。複数の実施形態では、皮膚障害は、ざ瘡、酒さ、湿疹、乾癬、または蕁麻疹であり；皮膚感染症は膿痂疹である。
【０２９９】
理論に縛られることを望むものではないが、アンモニア酸化細菌、例えば、任意選択で純粋培養の本明細書に記載されたＮ．ｅｕｔｒｏｐｈａ細菌（例えば、Ｄ２３株）の治療有効用量を用いた酒さの処置が、ＮＯ発生による下方調節を伴い得ることが提唱されている。これは、ヒトカテリシジンペプチドＬＬ−３７がその前駆体であるプロペプチドｈＣＡＰ１８から形成するのを低減し得るカザール型ＫＬＫ５／ＫＬＫ７阻害剤の発現により得る。
【０３００】
理論に縛られることを望むものではないが、アンモニア酸化細菌、例えば、任意選択で純粋培養の本明細書に記載されたＮ．ｅｕｔｒｏｐｈａ細菌（例えば、Ｄ２３株）の治療有効用量を用いた湿疹および／またはアトピー性皮膚炎の処置が、ＮＯ発生により炎症を下方調節すること；ならびに／またはアトピー性皮膚炎における非常に高い定着速度および皮膚負荷量と関連することの多いＳ．ａｕｒｅｕｓおよび他の皮膚病原体の拡大および繁殖を、酸性化亜硝酸塩およびＮＯ生成により限定および／もしくは阻害すると提唱されている。
【０３０１】
理論に縛られることを望むものではないが、アンモニア酸化細菌、例えば、任意選択で純粋培養の本明細書に記載されたＮ．ｅｕｔｒｏｐｈａ細菌（例えば、Ｄ２３株）の治療有効用量を用いた乾癬の処置が、ＮＯ発生およびヒトカテリシジンペプチドＬＬ−３７の形成低減による炎症の下方調節を伴い得ることが提唱されている。
【０３０２】
理論に縛られることを望むものではないが、アンモニア酸化細菌、例えば、任意選択で純粋培養の本明細書に記載されたＮ．ｅｕｔｒｏｐｈａ細菌（例えば、Ｄ２３株）の治療有効用量を用いた乾癬の処置が、ＮＯ発生による炎症の下方調節を伴い得ることが提唱されている。
【０３０３】
理論に縛られることを望むものではないが、アンモニア酸化細菌、例えば、任意選択で純粋培養の本明細書に記載されたＮ．ｅｕｔｒｏｐｈａ細菌（例えば、Ｄ２３株）の治療有効用量を用いた膿痂疹または他の皮膚および軟組織感染症の処置が、Ｓ．ａｕｒｅｕｓおよびＳ．ｐｙｏｇｅｎｅｓの拡大および繁殖を限定および／または阻害することを伴い得ることが提唱されている。
【０３０４】
本開示は、創傷治癒を促進する方法であって、アンモニア酸化細菌、例えば、任意選択で純粋培養の本明細書に記載されたＮ．ｅｕｔｒｏｐｈａ細菌（例えば、Ｄ２３株）の有効用量を創傷に投与することを含む方法も提供する。同様に、本開示は、創傷の処置に使用するためのアンモニア酸化細菌、例えば、任意選択で純粋培養の本明細書に記載されたＮ．ｅｕｔｒｏｐｈａ（例えば、Ｄ２３株）を提供する。同じように、本開示は、創傷を処置するための医薬または組成物の製造におけるアンモニア酸化細菌、例えば、任意選択で純粋培養の本明細書に記載されたＮ．ｅｕｔｒｏｐｈａ（例えば、Ｄ２３株）の使用を提供する。
【０３０５】
アンモニア酸化細菌、例えば、任意選択で純粋培養の本明細書に記載されたＮ．ｅｕｔｒｏｐｈａ（例えば、Ｄ２３株）は、低下した治癒能を有する患者、例えば、糖尿病患者における創傷治癒を促進するために使用されてもよい。
【０３０６】
一部の実施形態では、本開示は、疾患または障害、例えば、皮膚障害を予防するためにアンモニア酸化細菌、例えば、任意選択で純粋培養の本明細書に記載されたＮ．ｅｕｔｒｏｐｈａ（例えば、Ｄ２３株）を使用する方法を提供する。ある特定の実施形態では、予防は、対象が疾患を発症する危険性を類似の未処置対象と比較して低減することを意味する。危険性をゼロに低減する必要はない。
【０３０７】
一部の実施形態では、本開示は、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａを含む包帯を創傷に適用することによって創傷を処置する方法を提供する。そのような包帯を作製する方法も提供される。包帯は、例えば、創傷近くの未損傷の皮膚に包帯を固定するための接着部分および創傷を覆うまたはそれと重ね合わせるための柔らかく柔軟な部分を含んでもよい。一部の実施形態では、包帯は、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａ以外の生物を含有しない。包帯は、包帯が創傷に適用された場合に酸素および二酸化炭素のような気体をＮ．ｅｕｔｒｏｐｈａに到達させる透過性材料からできている場合がある。ある特定の実施形態では、包帯は、アンモニウム、アンモニア、尿素、または微量無機質などの、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａ用の栄養分を含む。ある特定の実施形態では、包帯は、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａが耐性である抗生物質を含む。抗生物質耐性は、１つもしくは複数の内因性耐性遺伝子または１つもしくは複数の導入遺伝子に起因し得る。
【０３０８】
一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａは、１回の適用当たり約１０８〜１０９ＣＦＵ、１０９〜１０１０ＣＦＵ、１０１０〜１０１１ＣＦＵ、または１０１１〜１０１２ＣＦＵの用量で投与される。一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａは、用量約１０１０〜１０１１ＣＦＵ、例えば、約１×１０１０〜５×１０１０、１×１０１０〜３×１０１０、または１×１０１０〜２×１０１０ＣＦＵの用量で局所投与される。一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａは、約２×１０９、４×１０９または８×１０９ＣＦＵの用量で局所投与される。
【０３０９】
一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａは、１用量当たり約１〜２、２〜５、５〜１０、１０〜１５、１２〜１８、１５〜２０、２０〜２５、または２５〜５０ｍｌの体積で投与される。一部の実施形態では、溶液は、約１０８〜１０９、１０９〜１０１０、または１０１０〜１０１１ＣＦＵ／ｍｌの濃度である。一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａは、１日当たり１５ｍｌ用量２回として投与され、各用量は１０９ＣＦＵ／ｍｌの濃度である。一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａは、２×１０９、４×１０９または８×１０９ＣＦＵ／Ｌの濃度で投与される。一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａは、２×１０９、４×１０９または８×１０９ＣＦＵ／ｍＬの濃度で投与される。
【０３１０】
一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌の調製物は、アンモニア、例えば、約０．０１ｍＭから約１００ｍＭの間のアンモニア濃度と組み合わせて本明細書に記載された用量を有するアンモニア酸化細菌を含んでもよい。例えば、アンモニア濃度は、約０．０１、０．０５、０．１、０．２、０．４、０．５、０．６、０．８、１．０、１．２、１．４、１．６、１．８、２．０、２．２、２．４、２．５、２．６、２．８、３．０、３．２、３．４、３．６、３．８、４．０、４．２、４．４、４．５、４．６、４．８、５．０、５．２、５．４、５．６、５．８、６．０、６．２、６．４、６．６、６．８、７．０、７．２、７．４、７．６、７．８、８．０、８．２、８．４、８．６、８．８、１０．０、１５．０、２０．０、２５．０、３０．０、３５．０、４０．０、４５．０、５０．０、５５．０、６０．０、６５．０、７０．０、７５．０、８０．０、８５．０、９０．０、９５．０、または１００．０ｍＭであってもよい。
【０３１１】
一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａは、１日当たり１、２、３、または４回投与される。一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａは、１週間当たり１、２、３、４、５、または６回投与される。一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａは、入浴のすぐ後に投与される。一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａは、就寝のすぐ前に投与される。
【０３１２】
ある特定の態様では、本開示は、アンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａおよび第２の治療薬を含む組合せ療法を提供する。例として、本開示は、２つの（またはそれより多い）治療法の物理的混合を提供する。他の実施形態では、２つの（またはそれより多い）治療法は、別々の製剤として組み合わせて投与される。第２の治療法は、例えば、関連する疾患または障害を処置する医薬品薬剤、外科手術、または任意の他の医学アプローチであってもよい。以下の節に、慢性的な創傷、ざ瘡、酒さ、湿疹、および乾癬が可能な組合せ療法を記載する。
【０３１３】
慢性的な傷を処置することが可能な組合せ療法において、第２の治療法は、例えば、抗生物質（例えば、局所または全身、および殺菌または静菌的）、例えば、ペニシリン、セファロスポリン、ポリミキシン、リファマイシン、リピアルマイシン、キノロン、スルホンアミド、マクロライド、リンコサミド、テトラサイクリン、環状リポペプチド、グリシルサイクリン、オキサゾリジノン、およびリピアルマイシン；アンジオテンシン、アンジオテンシン類似体；デブリードマン；ドレナージ；創傷洗浄；陰圧創傷療法；熱適用；動脈血行再建；高圧酸素療法；抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸、グルタチオン、リポ酸、カロテン、α−トコフェロール、もしくはユビキノール；低レベルレーザー療法；腓腹筋後退術；増殖因子、例えば、血管内皮増殖因子、インスリン様増殖因子１〜２、血小板由来増殖因子、形質転換増殖因子−β、もしくは上皮増殖因子；自己血小板の適用、例えば、血管内皮増殖因子、インスリン様増殖因子１〜２、血小板由来増殖因子、形質転換増殖因子−β、もしくは上皮増殖因子などの１つもしくは複数の増殖因子を分泌するもの；培養角化細胞の移植；同種移植；コラーゲン、例としてコラーゲンを含む被覆材；またはＳＬＰＩなどのプロテアーゼ阻害剤を含んでもよい。組合せ療法は、上記処置のうちの１つまたは複数を含んでもよい。
【０３１４】
ざ瘡を処置することが可能な組合せ療法において、第２の治療法は、例えば、投薬（例えば、全身もしくは局所）、例えば、過酸化ベンゾイル、抗生物質（エリスロマイシン、クリンダマイシン、もしくはテトラサイクリンなど）、サリチル酸、ホルモン（例えば、プロゲスチン、例えば、デソゲストレル、ノルゲスチメートもしくはドロスピレノンを含む）、レチノイド、例えば、トレチノイン、アダパレン、タザロテン、またはイソトレチノインを含んでもよい。第２の治療法は、面皰抽出、コルチコステロイド注射、または外科的切開などの手技であってもよい。組合せ療法は、上記処置のうちの１つまたは複数を含んでもよい。組合せ療法は、上記表１に記載される治療法のうち１つまたは複数、例えば、局所レチノイド、アゼライン酸、サリチル酸、局所抗微小生物薬、経口抗生物質、過酸化ベンゾイル、経口抗アンドロゲン、経口イソトレチノイン、およびその組合せからなる群から選択されるざ瘡の処置を含んでもよい。
【０３１５】
例として、本開示は、２つの（またはそれより多い）治療法の物理的混合を提供する。他の実施形態では、２つの（またはそれより多い）治療法は、別々の製剤として組み合わせて投与される。これらの治療法は、「同時」または「併用」または「同時発生的送達」として投与され得る。他の実施形態では、一方の処置の送達は、他方の処置の送達が開始する前に終了する。これは、時に本明細書において「連続」または「逐次送達」と称される。処置または治療法の開始は、対象が皮膚状態または障害を有すると診断される前または後に開始し得る。アンモニア酸化細菌を用いた処置の開始は、別の処置に対して不十分な応答があった場合に開始することができる。方法は、アンモニア酸化細菌の投与を開始するとともに、他方の処置の使用を中止すること、および／または他方の処置の使用を継続することを含んでもよい。
【０３１６】
治療法、例えば、上の表１に列記された処置などのざ瘡の処置は、アンモニア酸化細菌の投与を始める前の期間に投与され得る。治療法、例えば、上の表１に列記された処置などのざ瘡の処置は、アンモニア酸化細菌の投与期間全体にわたり継続され得る。ある特定の実施形態では、治療法、例えば、上の表１に列記された処置などのざ瘡の処置は、アンモニア酸化細菌の投与の間に停止され得る。治療法、例えば、上の表１に列記された処置などのざ瘡の処置は、アンモニア酸化細菌の投与全体にわたり継続され得る。治療法、例えば、上の表１に列記された処置などのざ瘡の処置は、アンモニア酸化細菌の投与を停止することに続いて始めることができる。
【０３１７】
酒さを処置することが可能な組合せ療法では、第２の治療法は、例えば、抗生物質、例えば、経口テトラサイクリン抗生物質、例えば、テトラサイクリン、ドキシサイクリン、もしくはミノサイクリン、またはメトロニダゾールなどの局所抗生物質；アゼライン酸；アルファ−ヒドロキシ酸；イソトレチノインが処方される可能性がある；ビャクダン油；クロニジン；ナドロールおよびプロプラノロールなどのベータ−遮断薬；抗ヒスタミン薬（ロラタジンなど）；ミルタザピン；任意選択で相互に組み合わせたメチルスルホニルメタンもしくはシルマリン；皮膚科学的血管レーザーもしくはＣＯ２レーザーなどのレーザー；または高強度パルス光、低レベル光療法もしくは光若返りなどの光療法を含んでもよい。組合せ療法は、上記処置のうちの１つまたは複数を含んでもよい。
【０３１８】
湿疹を処置することが可能な組合せ療法では、第２の治療法は、例えば、ヒドロコルチゾンもしくはプロピオン酸クロベタゾールなどのコルチコステロイド注射、免疫抑制剤（局所もしくは全身）、例えば、ピメクロリムス、タクロリムス、シクロスポリン、アザチオプリンもしくはメトトレキサート、または紫外線を用いるなどの光療法を含んでもよい。組合せ療法は、上記処置のうちの１つまたは複数を含んでもよい。
【０３１９】
乾癬を処置することが可能な組合せ療法では、第２の治療法は、例えば、デスオキシメタゾンなどのコルチコステロイド注射；レチノイド；コールタール；ビタミンＤもしくはその類似体、例えば、パリカルシトールもしくはカルシポトリオール；モイスチャライザーおよび軟化薬、例えば、鉱物油、ワセリン、カルシポトリオール、デクバール（decubal）、もしくはココナツ油；ジトラノール；またはフルオシノニドを含んでもよい。組合せ療法は、上記処置のうちの１つまたは複数を含んでもよい。
【０３２０】
理論に縛られることを望むものではないが、本明細書に記載されたアンモニア酸化細菌の治療有効用量を用いた乾癬の処置が、ＮＯ発生およびヒトカテリシジンペプチドＬＬ−３７の形成における低減による炎症の下方調節を伴い得ることが提唱されている。
【０３２１】
理論に縛られることを望むものではないが、本明細書に記載されたアンモニア酸化細菌の治療有効用量を用いた乾癬の処置が、ＮＯ発生による炎症の下方調節を伴い得ることが提唱されている。
【０３２２】
理論に縛られることを望むものではないが、本明細書に記載されたアンモニア酸化細菌の治療有効用量を用いた膿痂疹または他の皮膚および軟組織感染症の処置が、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）、例えば、メチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ（Ａ．ｂａｕｍａｎｎｉｉ）、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ、およびＳｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓの拡大および繁殖を限定および／または阻害することを伴い得ることが提唱されている。
【０３２３】
本開示は、創傷治癒を促進する方法であって、本明細書に記載されたアンモニア酸化細菌の有効用量を創傷に投与することを含む方法も提供する。同様に、本開示は、創傷の処置に使用するための本明細書に記載されたアンモニア酸化細菌を提供する。同じように、本開示は、創傷を処置するための医薬または組成物の製造における本明細書に記載されたアンモニア酸化細菌の使用を提供する。
【０３２４】
一部の実施形態では、本開示は、疾患または障害、例えば、皮膚障害を予防するために本明細書に記載されたアンモニア酸化細菌を使用する方法を提供する。ある特定の実施形態では、予防は、対象が疾患を発症する危険性を類似の未処置対象と比較して低減することを意味する。危険性は、ゼロに低減する必要はない。
【０３２５】
宇宙飛行士、潜水艦乗組員、軍事行動中の軍人、僻地の民間作業員、難民、寝たきりの個体およびその他多くなどの低減した入浴頻度を有する個体は、皮膚上のアンモニア酸化細菌を維持することによって、より健康な皮膚を維持し得る。寝たきりの個体に関して、一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌は不十分な循環を強化することによって褥瘡の頻度または重症度を低減する。
【０３２６】
多くの現代の変性疾患がＮＯ種の欠如によって引き起こされ得ること、および外部皮膚上のアンモニア酸化細菌が拡散によってＮＯ種を供給できること、および皮膚へのアンモニア酸化細菌の適用が長期にわたる医学的状態を回復させることが認識されている。ある特定の実施形態では、特に、外部皮膚からアンモニア酸化細菌を除去する陰イオン洗剤を用いた現代の入浴習慣を埋め合わせるために、アンモニア酸化細菌が対象に適用される。
【０３２７】
局所適用の適切な一方法は、十分なアンモニア酸化細菌を適用し、次に発汗を誘発するために十分な衣類を着用することである。しかし、多くの人々は、アンモニア酸化細菌の恩恵を得るのと同時に、現在の入浴習慣を維持したいと思っており、その場合、細菌の培養物を、その細菌がＮＯを生成するのに十分な基質とともに適用することができる。ヒトの汗の無機組成に近い栄養溶液をこの目的のために使用することができる。ヒトの汗に近い培地に適応した細菌を使用すると、その細菌が適用された場合に適応する時間が最小限になる。汗は皮膚表面に排出された後に蒸発するので、より高いイオン強度を有する培養培地を使用することが望ましい。ヒトの汗の約２倍の濃度が適切であるが、他の状態も考慮される。アンモニア酸化細菌の栄養必要物には、典型的にはＮＨ３または尿素、Ｏ２、ＣＯ２、および無機質が入っている。一部の実施形態では、基質は、鉄、銅、亜鉛、コバルト、モリブデン、マンガン、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、塩化物、リン酸塩、硫酸塩、またはそれらの任意の組合せを含む微量無機質を含む。
【０３２８】
一部の実施形態では、本開示は、アンモニア酸化細菌を含む包帯を創傷に適用することによって創傷を処置する方法を提供する。そのような包帯を作製する方法も提供される。包帯は、例えば、創傷近くの未損傷の皮膚に包帯を固定するための接着部分および創傷を覆うまたはそれと重ね合わせるための柔らかく柔軟な部分を含んでもよい。一部の実施形態では、包帯は、アンモニア酸化細菌以外の生物を含有しない。包帯は、包帯が創傷に適用された場合に酸素および二酸化炭素のような気体をアンモニア酸化細菌に到達させる透過性材料からできている場合がある。ある特定の実施形態では、包帯は、アンモニウム、アンモニア、尿素、または微量無機質などの、アンモニア酸化細菌用の栄養分を含む。ある特定の実施形態では、包帯は、アンモニア酸化細菌が耐性である抗生物質を含む。抗生物質耐性は、１つもしくは複数の内因性耐性遺伝子または１つもしくは複数の導入遺伝子に起因し得る。
【０３２９】
一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌、例えば、アンモニア酸化細菌の調製物は、１回の適用当たりまたは１日当たり約１０８〜１０９ＣＦＵ、１０９〜１０１０ＣＦＵ、１０１０〜１０１１ＣＦＵ、または１０１１〜１０１２ＣＦＵの用量で投与される。一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌は、約１０９〜１０１０ＣＦＵ、例えば、約１×１０９〜５×１０９、１×１０９〜３×１０９、または１×１０９〜１０×１０９ＣＦＵの用量で局所投与される。
【０３３０】
一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌は、１用量当たり約１〜２、２〜５、５〜１０、１０〜１５、１２〜１８、１５〜２０、２０〜２５、または２５〜５０ｍｌの体積で投与される。一部の実施形態では、溶液は、約１０８〜１０９、１０９〜１０１０、または１０１０〜１０１１ＣＦＵ／ｍｌの濃度である。一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌は、１日当たり１５ｍｌ用量２回として投与され、各用量は１０９ＣＦＵ／ｍｌの濃度である。
【０３３１】
一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌は、１日当たり１、２、３、または４回投与される。一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌は、１週間当たり１、２、３、４、５、または６回投与される。一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌は、入浴のすぐ後に投与される。一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌は、就寝のすぐ前に投与される。
【０３３２】
一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌は、約１〜３、３〜５、５〜７、７〜９、５〜１０、１０〜１４、１２〜１８、１２〜２１、２１〜２８、２８〜３５、３５〜４２、４２〜４９、４９〜５６、４６〜６３、６３〜７０、７０〜７７、７７〜８４、８４〜９１日間、例えば、約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間投与される。一部の実施形態では、アンモニア酸化細菌は、不定期間、例えば、１年より長い、５年より長い、１０年より長い、１５年より長い、３０年より長い、５０年より長い、７５年より長い間投与される。
５．アンモニア酸化細菌の投与を伴う、マイクロバイオーム適合性化粧品、例えば、洗浄剤、シャンプー、および／またはコンディショナーの使用
【０３３３】
本開示のシステムおよび方法は、とりわけ、化粧製品、例えば、「バイオームに無害である」または「バイオームに適合する」と見なされ得る完成化粧製品を提供する。本開示のシステムおよび方法は、細菌、例えば、非病原細菌、例えば、アンモニア酸化細菌と組み合わせて使用することができる化粧製品、例えば、完成化粧製品の使用を提供する場合があり、それは、対象に適用されるべき調製物または組成物の形態で使用される場合がある。表４は、その１つまたは複数が調製物または組成物中に提供することができ、バイオームに無害なまたはバイオーム適合性の製品を提供することができる構成成分の列記を提供する。
【表４−１】
2018524351.tif 000006
【表４−２】
2018524351.tif 000007
【表４−３】
2018524351.tif 000008
【０３３４】
本開示とともに使用され得る化粧製品は、ベビー製品、例えば、ベビーシャンプー、ベビーローション、ベビーオイル、ベビーパウダー、ベビークリーム；浴用調製物、例えば、バスオイル、タブレット、ソルト、バブルバス、バスカプセル；アイメークアップ用調製物、例えば、アイブローペンシル、アイライナー、アイシャドー、アイローション、アイメークアップリムーバー、マスカラ；香料調製物、例えば、コロン、オードトワレ、香水、パウダー（ダスティングおよびタルカム）、サシェ；毛髪用調製物、例えば、毛髪コンディショナー、ヘアスプレー、ヘアストレート剤、パーマネントウェーブ剤、リンス、シャンプー、トニック、調髪料、整髪補助剤、ウェーブセット剤；毛髪着色用調製物、例えば、毛髪染料およびヘアカラー、染毛剤、着色用ヘアリンス、着色用ヘアシャンプー、着色ヘアライトナー、ヘアブリーチ；メークアップ用調製物、例えば、フェ−スパウダー、ファンデーション、レッグおよびボディペイント、口紅、メークアップベース、頬紅、メークアップ定着剤；マニキュア用調製物、例えば、ベースコートおよびアンダーコート、キューティクル軟化剤、ネイルクリームおよびローション、ネイルエクステンダー、ネイルポリッシュおよびエナメル、ネイルポリッシュおよびエナメルリムーバー；口腔衛生製品、例えば、歯磨剤、マウスウォッシュおよびブレスフレッシュナー；浴用石鹸、例えば、起泡性身体洗浄剤、および洗剤、デオドラント、ビデ、女性用衛生デオドラント；シェービング用調製物、例えば、アフターシェーブローション、髭軟化剤、タルカム、プレシェーブローション、シェービングクリーム、シェービングソープ；スキンケア用調製物、例えば、クレンジング、脱毛剤、顔および首、身体および手、足用パウダーおよびスプレー、保湿料、夜用調製物、ペーストマスク、スキンフレッシュナー；ならびに日焼け用調製物、例えば、ジェル、クリーム、リキッド、および屋内タンニング用調製物のうちの任意の１つまたは複数であるか、またはそれを含むか、またはその中に配置されてもよい。
【０３３５】
化粧製品は、本明細書に開示された成分、例えば、表４に開示された成分のうちの任意の１つまたは複数を含んでもよい。
【０３３６】
化粧製品または完成化粧製品は、下の表５に示されるような以下：
【表５】
2018524351.tif 000009
の組成を含む、それから本質的になる、またはそれからなってもよい。
【０３３７】
製品は、例えば、シャンプー用、例えば、ボディウォッシュ用の化粧製品として使用され得る。製品は、１００％にするための水を含む。一部の実施形態では、化粧製品、例えば、シャンプーは、クエン酸を含有する場合または含有しない場合があり、ｐＨ安定化が要求されるまたは望まれる場合にクエン酸が必要であり得る。
【０３３８】
化粧製品または完成化粧製品は、下の表６に示されるような以下の組成：
【表６】
2018524351.tif 000010
を含む、それから本質的になる、またはそれからなってもよい。
【０３３９】
製品は、例えば、洗浄剤用、例えば、身体、手、または顔用の化粧製品として使用され得る。製品は、１００％にするための水を含む。一部の実施形態では、化粧製品、例えば、洗浄剤は、クエン酸を含有する場合または含有しない場合があり、ｐＨ安定化が要求されるまたは望まれる場合にクエン酸が必要であり得る。
【０３４０】
他の加水分解タンパク質が使用される場合があり、それには、非限定的に、コメ、ダイズ、バオバブ、およびエンバクが含まれ得る。他の香料代替物を考慮することができる。
【０３４１】
完成化粧製品は、本明細書に記載された１つもしくは複数、またはすべての特性を有し得る。
【０３４２】
下の表７に示されるような以下：
【表７】
2018524351.tif 000011
を含む、それから本質的になる、またはそれからなってもよい毛髪および／または皮膚コンディショナーを含む他の製品が考慮される。
【０３４３】
製品は、１００％にするための水を含む。一部の実施形態では、化粧製品、例えば、コンディショナーは、クエン酸を含有する場合または含有しない場合があり、ｐＨ安定化が要求されるまたは望まれる場合にクエン酸が必要であり得る。
６．治療的利益のメカニズム
【０３４４】
理論に縛られることを望むものではないが、以下のメカニズムのうちの１つまたは複数が、本明細書において論じられる疾患および状態の処置におけるアンモニア酸化細菌、例えば、Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａの有益効果を引き起こす元となると考えられている。追加的なメカニズム上の詳細は、国際出願ＷＯ／２００５／０３０１４７に見出され、国際出願は、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。
【０３４５】
これらの細菌の有益な面を理解するために、血管新生を理解することが助けになる。数百ミクロンの外気内の体細胞を除くすべての体細胞は、すべての代謝性酸素を血液供給から受領する。酸素は、肺の中の血液によって吸収され、赤血球によって酸化ヘモグロビンとして末梢組織に運ばれ、そこで二酸化炭素と交換され、二酸化炭素が運び戻されて肺から呼出される。酸素は、赤血球から血漿を通過して、内皮を通過して、および様々な組織を通過して、酸素を消費する細胞内のミトコンドリアに到達するまで拡散しなければならない。ヒトの身体は、血液約５リットルを含有するので、循環システムの体積は身体の体積と比較して小さい。酸素は、能動輸送されない。酸素は、空気から赤血球に、赤血球から細胞に、および細胞から酸素が消費されるチトクロームオキシダーゼに濃度勾配を下って受動拡散する。消費部位での酸素濃度は、体内で最低であり、Ｏ２の流動は、拡散抵抗および濃度勾配によって決定される。すべての末梢組織への十分な酸素供給を達成することは、毛細血管のサイズおよび場所の絶妙な制御を要する。毛細血管の間隔が増加するならば、同じ流動の酸素を達成することは、より大きな濃度差、したがってチトクロームオキシダーゼでのより低いＯ２濃度を要するであろう。毛細血管の間により多くの細胞があると、Ｏ２の需要はより大きくなるであろう。毛細血管の間隔が減少するならば、臓器の代謝機能を果たす細胞に利用可能な空間は、より小さいであろう。
【０３４６】
ある特定の態様では、アンモニア酸化細菌からのＮＯは、外皮によって容易に吸収され、外皮がヘモグロビンを含有しないので、Ｓ−ニトロソチオールに変換されることが認識されている。M.  Stuckerらは、「The  cutaneous  uptake  of  atmospheric  oxygen  contributes  significantly  to  the  oxygen  supply  of  human  dermis  and  epidermis.（Journal  of  Physiology（２００２年）、５３８．３巻、９８５〜９９４頁）に、外部皮膚がその酸素のすべてを外気から受領することを示した。外部皮膚は本質的に赤血球を含有しないことを見ることができるので、このことは、難なく分かる。これらの層は生きており、ただ酸素ではない血中の他の栄養分を実際に必要とするので、これらの層を通した血漿の循環がある。形成されたＳ−ニトロソチオールは安定であり、身体にくまなく拡散することができ、真正ＮＯの大量供給源およびタンパク質のチオールをトランスニトロソ化するためのＮＯ供給源を構成する。
【０３４７】
一部の態様では、毛細血管の希薄化は、ＮＯが不十分なレベルであることの最初の徴候の１つであってもよい。F.  T.  Tarekらは、疎な毛細血管、すなわち毛細血管の希薄化が、本態性高血圧症の人々に通常見られることを示した（Structural  Skin  Capillary  Rarefaction  in  Essential  Hypertension.  Hypertension.１９９９年；３３巻：９９８〜１００１頁。
【０３４８】
非常に多数の状態が、ますます疎になりつつある毛細血管の密度と関連する。高血圧がその１つであり、研究者らは、疎な毛細血管が本態性高血圧症を有する人々の小児にも、および糖尿病の人々にも見られることを報告した。糖尿病の重大な合併症は、高血圧症、糖尿病性腎症、糖尿病性網膜症、および糖尿病性神経障害である。R.  Candidoらは、最後の２つの状態が、観察される症状の前の患部への血流低減によって特徴付けられることを見出した（Haemodynamics  in  microvascular  complications  in  type  １  diabetes.  Diabetes  Metab  Res  Rev  ２００２年；１８巻：２８６〜３０４頁）。A  Philipらが「Effect  of  Weight  Loss  on  Muscle  Fiber  Type,  Fiber  Size,  Capillarity,  and  Succinate  Dehydrogenase  Activity  in  Humans.  The  Journal  of  Clinical  Endocrinology  &  Metabolism、８４巻１１号４１８５〜４１９０頁、１９９９年に示したように、低減した毛細血管密度は、肥満と関連し、単なる体重減少が毛細血管密度を増加させる。
【０３４９】
研究者らは、原発性レイノー現象（ＰＲＰ）において、爪郭毛細血管が正常な対照よりも疎（わずかに）であり、全身硬化症（ＳＳｃ）に進行した患者よりも密であることを示した。M.  Bukhari、Increased  Nailfold  Capillary  Dimensions  In  Primary  Raynaud's  Phenomenon  And  Systemic  Sclerosis.  British  Journal  of  Rheumatology、２４巻３５号：１１２７〜１１３１頁、１９９６年。彼らは、毛細血管密度が３５ループ／ｍｍ２（正常対照）から３３（ＰＲＰ）、１７（ＳＳｃ）へと減少したことを見出した。毛細血管先端（capillary  limb）の間の平均距離は、対照、ＰＲＰおよびＳＳｃについてそれぞれ１８μ、１８μ、および３０μであった。
【０３５０】
ある特定の態様では、身体が「低酸素」を感知するために通常使用するメカニズムは、毛細血管密度を調節する身体システムに影響し得ることが認識されている。本発明のこの態様によると、「低酸素」の重大な構成成分は、Ｏ２レベルの減少ではなく、むしろＮＯレベルの増加によって感知される。ＮＯの基礎レベルの低下は、この「低酸素」の感知を妨げるので、「低酸素」によって調節される多数の身体機能に影響する。例えば、貧血は、通例、「不十分なヘモグロビン」として定義され、不十分なヘモグロビンの１つの結果が「低酸素」であり、それは「不十分な酸素」として定義される。一部の態様によると、これらの一般的な定義は、両方の状態の一酸化窒素によって仲介される態様を説明しない。
【０３５１】
急性等容量性貧血は、休息時に忍容性良好である。ヘマトクリットの２／３の低減は、静脈還流ＰｖＯ２に最小限の効果を有し、全身にわたるＯ２圧または送達のいずれの低減も示さない。Weiskopfら、Human  cardiovascular  and  metabolic  response  to  acute、severe  isovolemic  anemia.JAMA  １９９８年、２７９巻３号、２１７〜２２１頁。５０％の低減（１４０から７０ｇ  Ｈｂ／Ｌ）で、平均ＰｖＯ２（３２人を超える対象）は、約７７％（飽和）から約７４％に減少した。血液のＯ２容量の低減は、血管拡張および頻脈によって代償され、心拍は６３から８５ｂｐｍに増加する。代償が有効であることは、難なく分かるが、そのメカニズムは分からない。典型的な説明は、「低酸素」センサーが「低酸素」を検出し、血管拡張および頻脈で代償したというものである。しかし、「低酸素」を検出することはできなかった。血中ラクテート（嫌気呼吸のマーカー）に０．７７から０．６２ｍＭ／Ｌへのわずかな減少があったが、これは、より少ない嫌気呼吸およびあまり「低酸素」でないことを示している。静脈性還流ＰｖＯ２の３％低減は、高度３００メートル（典型的には頻脈を生成しない）に上ることによって得るであろう「低酸素」と同じレベルである。静脈性還流中のＯ２濃度が同じままであり、Ｏ２消費量が同じままであるので、Ｏ２濃度が低減している場所が体内のどこにもない。等容量性貧血時の代償は、Ｏ２感知が原因では起こり得ない。
【０３５２】
したがって、急性等容量性貧血において観察される血管拡張は、血管壁でのＮＯ濃度の増加が原因であり得る。ＮＯは、ずり応力および他の要因に応答した血管の拡張を媒介する。ＮＯの生成速度は不変であり、分解速度と等しくあり続けるので、ＮＯ代謝物のレベルに変化は観察されないであろう。ｍｅｔＨｂの置換で「低酸素」の代償は観察されないのは、ｍｅｔＨｂがＨｂとちょうど同じようにＮＯと結合することから、Ｈｂが取り除かれた場合に起こるようなＮＯ濃度の増加が、ｍｅｔＨｂの置換では起こらないと理解することができる。
【０３５３】
一酸化窒素は、多数の代謝経路で役割を果たす。基礎レベルのＮＯが緊張阻害応答を発揮すること、およびこの基礎レベルの低減が、それらの経路の脱阻害に繋がることが示唆されている。Zanzingerらは、ＮＯが交感神経系の基礎緊張を阻害し、興奮性反射を弱めることが示されたと報告した。（Inhibition  of  basal  and  reflex-mediated  sympathetic  activity  in  the  RVLM  by  nitric  oxide.  Am.  J.  Physiol.  ２６８巻（Regulatory  Integrative  Comp.  Physiol.  ３７巻）：Ｒ９５８〜Ｒ９６２頁、１９９５年）。
【０３５４】
一部の態様では、ＮＯの大量供給源の一構成成分は、アンモニア酸化細菌によって外部皮膚上で生成されたＮＯから赤血球不含の皮膚で生成される低分子量Ｓ−ニトロソチオールであると認識されている。これらの低分子量Ｓ−ニトロソチオールは、長期安定であり、血漿中を自由に拡散および循環することができる。様々な酵素が様々なＳ−ニトロソチオールからＮＯを切断して、酵素側にＮＯを遊離させることができる。正常な生理機能の破壊をもたらすのは、皮膚上のＡＯＢからＮＯのこの大量供給源の喪失である。毛細血管から遠く離れてＮＯを発生させるためにＳ−ニトロソチオールを使用することの身体への利点は、Ｓ−ニトロソチオールからのＮＯ生成にＯ２を要さないことである。一酸化窒素シンターゼ（ＮＯＳ）からのＮＯ生成は、実際にＯ２を要する。バックグラウンドのＳ−ニトロソチオールが十分であると、無酸素領域内であってもＮＯが発生する可能性がある。ＮＯは、システイン残基のチオールまたはヘム中の鉄などの別の分子と結び付いたときにだけ効果を発揮するので、遊離ＮＯも不必要であり、したがって、Ｓ−ニトロソチオールおよびトランスニトロソ化酵素が存在するならば、遊離ＮＯの非存在下であってもトランスニトロソ化反応によってＮＯの効果が媒介され得る。
【０３５５】
Frankらは、増加した一酸化窒素によって誘導されるＶＥＧＦ上昇によって、正常な創傷治癒を伴う血管新生が、部分的に生成することを示した。（Nitric  oxide  triggers  enhanced  induction  of  vascular  endothelial  growth  factor  expression  in  cultured  keratinocytes  (HaCaT)  and  during  cutaneous  wound  repair.  FASEB  J.  １３巻、２００２〜２０１４頁（１９９９年））。
【０３５６】
ＮＯは、発がんに役割を有するが、これは、本明細書に記載された細菌が、がんの処置および予防方法に使用され得ることを示している。ある特定の態様によると、低酸素時におけるＮＯの存在は、細胞がＤＮＡのコピーを誤る危険性がより大きい低酸素ストレス下にある間に細胞が分裂するのを防ぐことができると認識されている。関連する一細胞機能は、細胞周期の調節である。これは、細胞がＤＮＡをどのように、いつ複製し、重複した染色体に集合させ、分裂するかを制御する調節プログラムである。細胞周期の調節は極めて複雑であり、完全には理解されていない。しかし、その周期の通り道に沿って多数のポイントがあることが公知であり、細胞分裂のための条件が改善されるまで、そのポイントで細胞周期を停止し、分裂を止めることができる。ｐ５３腫瘍抑制タンパク質は、細胞周期の調節における重要なタンパク質であり、ＤＮＡ損傷を含む多様な細胞ストレスシグナルから細胞停止とアポトーシスとの両方を開始するのに役立ち、Ashcroftらが、「Stress  Signals  Utilize  Multiple  Pathways  To  Stabilize  p53.」（Molecular  And  Cellular  Biology、２０００年５月、３２２４〜３２３３頁）に報告したように、ｐ５３はヒトのがんの半数超で突然変異している。低酸素はｐ５３の蓄積を開始し、細胞周期を調節するのに低酸素が重用であるものの、低酸素単独ではｐ５３  ｍＲＮＡエフェクタータンパク質の下流の発現を誘導することができず、それで細胞周期の停止を引き起こすことができない。Godaらは、低酸素が細胞停止を誘導するには、低酸素誘導因子−１（ＨＩＦ−１α）を要すると報告した。（Hypoxia-Inducible  Factor  1α  Is  Essential  for  Cell  Cycle  Arrest  during  Hypoxia.    Molecular  And  Cellular  Biology、２００３年１月、３５９〜３６９頁）。Brittaらは、ＮＯがＨＩＦ−１αについての主要刺激の１つであると報告した。（Accumulation  of  HIF-１a  under  the  influence  of  nitric  oxide.  Blood、２００１年２月１５日、９７巻４号）。対照的に、ＮＯは転写活性なｐ５３の蓄積を実際に引き起こし、細胞周期の停止を実際に引き起こし、アポトーシスを実際に引き起こす。Wangら、  P53  Activation  By  Nitric  Oxide  Involves  Down-Regulation  Of  Mdm2.  THE  JOURNAL  OF  BIOLOGICAL  CHEMISTRY、２７７巻１８号、５月３日発行、１５６９７〜１５７０２頁、２００２年。
【０３５７】
本発明のある特定の態様では、細胞の低酸素死に繋がる毛細血管希薄化を予防することによる細胞壊死の予防が、自己免疫障害を予防し得ると認識されている。細胞が慢性的な低酸素に曝露されると、活性酸素種（ＲＯＳ）の生成が増加し、細胞の代謝機構に対する、および最終的に細胞のＤＮＡに対する損傷が増加する。代謝能の減少は、ＲＯＳが原因の、および外因性発がん物質の曝露が原因の損傷を修復する能力を減少させる。時間とともに、損傷は蓄積し、３つの事象、すなわち細胞ががん予防遺伝子の欠失を受ける、細胞ががん性になる、および細胞が壊死により死滅する、または細胞がアポトーシスにより死滅する機会が増加する。細胞が壊死またはアポトーシスのいずれかにより死滅した場合、細胞残骸がその部位から取り除かれなければならない。死滅した細胞は、樹状細胞およびマクロファージを含む免疫細胞によって貪食される。これらの細胞が身体を貪食すると、その身体は様々なタンパク質分解酵素によって消化されて抗原断片となり、次にこれらの抗原は主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ１、ＭＨＣ２）に付着し、抗原−ＭＨＣ複合体が細胞表面に移動し、そこで複合体はＴ細胞と相互作用して、Ｔ細胞を様々な方法で活性化することができる。どのような細胞傷害でも、免疫システムを様々な方法で刺激するアジュバントを放出する。一般に、壊死を受ける細胞は、アポトーシスを受ける細胞よりも大きい免疫応答を刺激する。したがって、死滅細胞および瀕死細胞への免疫細胞の慢性曝露は、自己免疫障害に繋がる可能性がある。
【０３５８】
ある特定の態様では、低い基礎ＮＯは線維性肥大症に繋がることが認識されている。死滅細胞が取り除かれた後、新しい細胞を支持するために十分なＯ２がないので、新しい細胞は容易にその代わりとなることができない。そのような新しい細胞はいずれも同じ運命に遭遇する。その間隙は空いたままになる可能性があり、その場合、臓器は萎縮し、毛細血管はより接近し、新しい細胞は、現在欠落している細胞によって以前に生成されたＶＥＧＦを今や欠乏しているので、毛細血管が切断され、低酸素帯が再び形成される（reform）。これは、患部組織の全般的な萎縮を招くおそれがある。線維症を支持する組織では、相対的に不活性なコラーゲン線維がこの間隙を埋める可能性がある。問題となる特定の臓器に関して身体の代謝要求は低減していないので、その臓器は、より大きく成長しようとする場合があるが、今や顕著な線維含量を有する。このことは、心臓および肝臓などの線維性肥大症を招くおそれがある。脳などの一部の臓器は、神経および血管の三次元結合性が重要であるので、大きくも小さくもなることができず、非対称的に萎縮している脳に連続的および同時にマッピングすることができない。間隙を何かで埋めなければならず、β−アミロイドが（それほど不活性でない）間隙充填物質であってもよい。腎臓は、腎被膜のため大きく成長することができず、それで生存細胞数がより小さくなり、それらの細胞は線維性組織に置き換わる。死滅細胞が取り除かれ、組織が萎縮し、ＮＯ／Ｏ２の比が再び下がり、毛細血管は、再びより疎になる。これは、末期腎疾患、うっ血性心不全／心肥大、原発性胆汁性肝硬変、アルツハイマー病、アテローム動脈硬化症、炎症性腸疾患、肥厚性瘢痕形成、ならびに毛細血管希薄化が同様に観察される、レイノー現象から始まり全身性硬化症および原発性シェーグレン症候群に終わる多発性結合組織病の悪循環を作るおそれがある。Ferriniらは、Ｌ−ＮＡＭＥを用いたＮＯＳの慢性阻害による基礎ＮＯレベルの低減が、心臓および腎臓の全身性線維症に繋がることを示した。（Antifibrotic  Role  of  Inducible  Nitric  Oxide  Synthase.  Nitric  Oxide:  Biology  and  Chemistry、６巻３号、２８３〜２９４頁（２００２年））。低い基礎ＮＯが線維性肥大症に繋がるおそれがある。
【０３５９】
ある特定の態様では、毛細血管希薄化は、対象がその食欲を制御する能力に影響すると認識されている。毛細血管希薄化は、高齢のヒトおよび動物の脳内に観察される。毛細血管希薄化は、インスリン様増殖因子−１を含む循環増殖因子における低下と関連する。成体の脳における神経発生は、血管新生と協調する。脳は、多数の恒常性機能を調節するので、脳のエレメントを制御するための毛細血管の間の拡散長の増加は、これらの種の不適当な血中濃度として「解釈される」おそれがある。脳内のグルコースの流動は、正常な代謝の必要度に極めて近く、その場合、グルコースの流動は、グルコースの消費よりも５０から７５％だけ大きく、血液脳関門を貫通するグルコース輸送体は、飽和性で、立体特異性であり、エネルギー勾配またはイオン勾配と無関係である。食欲の調節の大部分は、脳によって媒介され、毛細血管希薄化は、「栄養分」（または「栄養分」と比例するマーカー化合物）の十分な血中濃度を不十分と解釈させるおそれがある。これが、肥満の一原因であり得る。
【０３６０】
ある特定の態様によると、毛細血管希薄化は、非インスリン依存型糖尿病の原因であり得ると認識されている。非インスリン依存型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）は、メタボリックシンドロームまたは２型糖尿病としても公知であり、インスリン抵抗性によって特徴付けられる。インスリンに対する身体の感受性は低減し、インスリンのレベルは増加する。ＮＩＤＤＭを有する人々は、高い血中グルコース、高い血中トリグリセリドを有し、典型的には肥満、高血圧症であり、典型的には重大な内臓脂肪を有する。
【０３６１】
原因として毛細血管希薄化を指摘することができる他の症状が、ＮＩＤＤＭに付随する。ＮＩＤＤＭを有するおよび有さない、肥満（ＢＭＩ  ２９）および痩せ（ＢＭＩ  ２４（各１０人）の男性４０人の試験において、Konradらは、休息時の血中ラクテートレベルが、それぞれＮＩＤＤＭを有さない痩せた男性、ＮＩＤＤＭを有さない肥満男性、ＮＩＤＤＭを有する痩せた男性、ＮＩＤＤＭを有する肥満男性について１．７８、２．２６、２．４２、および２．７６（ｍＭ／Ｌ）であったと報告している。（A-Lipoic  acid  treatment  decreases  serum  lactate  and  pyruvate  concentrations  and  improves  glucose  effectiveness  in  lean  and  obese  patients  with  type  ２  diabetes.  Diabetes  Care  ２２巻:２８０〜２８７頁、１９９９年)。ラクテートは嫌気的解糖の尺度である。Ｏ２が酸化的リン酸化によりＡＴＰを発生するのに不十分な場合、細胞は嫌気的解糖によりＡＴＰを生成することができる。嫌気的解糖の生成物のうちの１つは、ラクテートであり、ラクテートは細胞から搬出されなければならず、さもなければｐＨが低下して機能が損なわれる。血中ラクテートは、通常、運動試験において測定され、増加は、最大酸化的作業を行うことができる作業負荷を示す。休息時のより高いラクテートレベルは、休息時に嫌気的解糖が増加していることを示し、それは、毛細血管希薄化と一致する。
【０３６２】
原発性胆汁性肝硬変は、レイノー現象、掻痒、乾燥症候群、骨粗鬆症、門脈圧亢進症、神経障害、および膵機能不全と関連し、肝臓異常は、リウマチ性疾患と関連する。上昇した肝臓酵素は、肝炎の症状であり、上昇した肝臓酵素は、「無症候性」原発性胆汁性肝硬変の初期症状として観察される。したがって、本明細書に記載された細菌は、肝炎を処置するために使用され得る。
【０３６３】
Torreらは、アルツハイマー病（ＡＤ）が、低灌流に続発性の神経変性を有する微小血管障害であり、不十分な一酸化窒素に部分的に起因すると報告した。（Review:  Evidence  that  Alzheimer's  disease  is  a  microvascular  disorder:  the  role  of  constitutive  nitric  oxide、Brain  Research  Reviews  ３４巻（２０００年）１１９〜１３６頁）。したがって、本明細書に記載された細菌は、ＡＤを処置するために使用され得る。
【０３６４】
高血圧と関連する健康上の有害作用も、低い基礎ＮＯの結果であり得る。血管拡張に対する応答減少も、低い基礎ＮＯと一致する。ＮＯは、供給源からセンサー部位に拡散する拡散性分子であり、ＮＯはセンサー部位でシグナル伝達効果を有する。低ＮＯレベルの場合、それぞれのＮＯ供給源は、ある特定の強度である特定の距離離れて同等のＮＯシグナルを発生するためにより多くのＮＯを生成しなければならない。ＮＯは三次元的に拡散し、拡散範囲内の全体積は、適当なシグナルをセンサーの場所で与えるレベルまで増大しなければならない。この結果として、供給源で、および供給源とセンサーの間で、より高いＮＯレベルが生じる可能性がある。そのとき、低すぎるＮＯバックグラウンドが原因で、供給源の近くの上昇したＮＯの有害局所作用が生じるおそれがある。このシナリオが実際に起こる何らかの証拠がある。Henningssonらは、ラット膵島において、Ｌ−ＮＡＭＥを用いたＮＯＳの阻害がｉＮＯＳの誘導により総ＮＯ生成を増加させると報告した。（Chronic  blockade  of  NO  synthase  paradoxically  increases  islet  NO  production  and  modulates  islet  hormone  release.  Am  J  Physiol  Endocrinol  Metab  ２７９巻：Ｅ９５〜Ｅ１０７、２０００年）。ＮＯＳ活性を増加させることによってＮＯを増加させることは、ある限度までだけならば、うまくいく。ＮＯＳが活性化しているが、十分なテトラヒドロビオプテリン（ＢＨ４）またはＬ−アルギニンを供給されていない場合、ＮＯＳは、「脱共役状態」になり、ＮＯの代わりにスーパーオキシド（Ｏ２−）を発生する。次に、このＯ２−はＮＯを破壊するおそれがある。ＢＨ４またはＬ−アルギニンの供給を超える速度でＮＯを生成させる試みは、それよりむしろ、ＮＯレベルを減少させ得る。これは、低ＮＯレベルがＮＯＳの刺激によって悪化され、脱共役したＮＯＳが、アテローム動脈硬化症、末期腎疾患、アルツハイマー、および糖尿病で観察されるような局所活性酸素種（ＲＯＳ）損傷を引き起こす、かなりのＯ２−を発生する正のフィードバックを招き得る。
【０３６５】
本明細書に記載された細菌は、加齢の徴候を遅らせるためにも使用され得る。カロリー制限は生涯期間を延ばし、Holloszyは、食物摂取量を自由摂取対照の７０％に制限することが、非運動ラットにおける寿命を８５８日から１，０５１日に、ほぼ２５％伸ばすと報告した（Mortality  rate  and  longevity  of  food  restricted  exercising  male  rats:  a  reevaluation.  J.  Appl.  Physiol.  ８２巻（２号）：３９９〜４０３頁、１９９７年）。カロリー制限と長い寿命の間の連鎖は十分に確立しているが、原因となるメカニズムは確立していない。Lopez-Torresらは、ラットにおける肝臓ミトコンドリア酵素の検査が、カロリー制限と関連する複合体Ｉの活性低減のせいでＨ２Ｏ２生成に低減を示すことを報告した。（Influence  Of  Aging  And  Long-Term  Caloric  Restriction  On  Oxygen  Radical  Generation  And  Oxidative  DNA  Damage  In  Rat  Liver  Mitochondria.  Free  Radical  Biology  &  Medicine３２巻９号８８２〜８８９９頁、２００２年）。Ｈ２Ｏ２は、呼吸の間にミトコンドリアによって生成される主要なＲＯＳであるＯ２−の不均化によって生成される。Ｏ２−の主供給源は、Kusharevaらおよびその他によって、スクシネート還元部位である複合体ＩＩＩからの電子の逆流によりＮＡＤ／ＮＡＤＨ酸化還元対を触媒する複合体Ｉであると示唆されている。Beckmanによって提唱された加齢のフリーラジカル理論は、フリーラジカルの細胞ＤＮＡ、抗酸化物質システムおよびＤＮＡ修復システムへの損傷が年齢とともに蓄積し、重大なシステムが修復の範囲を超えて損傷されると、死が訪れると仮定している（The  Free  Radical  Theory  of  Aging  Matures.  Physiol.  Rev.７８巻：５４７〜５８１頁、１９９８年）。
【０３６６】
追加的なメカニズムとして、Vasaらによって、ＮＯがテロメラーゼを活性化し、内皮細胞の老化を遅らせることが実証されている。（Nitric  Oxide  Activates  Telomerase  and  Delays  Endothelial  Cell  Senescence.  Circ  Res.２０００年；８７巻：５４０〜５４２頁）。低い基礎ＮＯは、チトクロームオキシダーゼの脱抑制によって基礎代謝速度を増加させる。増加した基礎代謝は、細胞のターンオーバーおよび増殖速度も増加させる。慢性低酸素を誘導することによる毛細血管希薄化は、フリーラジカル損傷を増加させる場合があり、細胞のターンオーバーも増加させる場合があり、それで両方のメカニズムによって加齢を加速させる。
【０３６７】
一部の態様では、独立栄養アンモニア酸化細菌は、アレルギーおよび自己免疫障害に対する保護的態様を生成し得ると認識されている。最も公知の自己免疫疾患は、おそらく、免疫システムによる膵臓内のインスリン生成細胞の破壊に起因する１型糖尿病である。不育症も自己免疫障害と関連し、不育症では、陽性の自己免疫抗体の数が不育の回数と正の相関関係にあった。全身性硬化症、原発性胆汁性肝硬変、自己免疫性肝炎、および様々なリウマチ障害は自己免疫障害の他の例である。ＡＯＢの適用は、ＷＯ／２００５／０３０１４７に記載されるようにアレルギー、枯草熱を低減することが観察された。
【０３６８】
ＡＯＢがアレルギーおよび自己免疫障害にその保護効果を発揮し得る一メカニズムは、一酸化窒素の生成により、主としてＮＦ−КＢの調節阻害ならびに免疫細胞の活性化および炎症反応の誘導の防止による。ＮＦ−КＢは、遺伝子発現を上方調節する転写因子であり、サイトカイン、ケモカイン、および様々な接着因子の放出を引き起こす遺伝子を含むこれらの遺伝子の多くは、炎症および免疫応答と関連する。これらの様々な免疫因子は、それらが放出された部位への免疫細胞の遊走を引き起こし、炎症応答を招く。構成性ＮＯ生成は、ＩКＢα（ＮＦ−КＢ抑制因子）の分解を防止することによってＩКＢαを安定化することによりＮＦ−КＢを阻害することが示されている。
【０３６９】
ＮＯ供与体の投与は、ラットにおける実験的アレルギー性脳脊髄炎の発症を予防することがXuらによって示されている。（SIN-１、a  Nitric  Oxide  Donor，  Ameliorates  Experimental  Allergic  Encephalomyelitis  in  Lewis  Rats  in  the  Incipient  Phase:  The  Importance  of  the  Time  Window.  The  Journal  of  Immunology、２００１年、１６６巻：５８１０〜５８１６頁）。この研究では、ＮＯ供与体を投与することが、中枢神経系へのマクロファージ浸潤を低減し、血中単核細胞の繁殖を低減し、血中単核細胞のアポトーシスを増加させたことが実証された。これらの結果のすべては、誘導される自己免疫応答の程度および重症度を低減させることが予期される。
【０３７０】
不十分な基礎一酸化窒素の結果として脳内の新しい連絡が不十分に形成されるというメカニズムにより、低い基礎ＮＯは、自閉症に繋がり得る。理論に縛られることを望むものではないが、一部の実施形態では、神経連絡の形成は、ＮＯによってモジュレートされる。これらの場合、ＮＯ拡散の範囲を低下させる任意の状態は、連絡を行うことができる脳のエレメントのボリュームサイズを減少させるおそれがある。低い基礎ＮＯレベルの状態で発達した脳は、ＮＯの有効範囲が低減しているせいで、より小さい体積のエレメントとして配列され得る。
【０３７１】
増加した音高識別、腸障害、免疫システムの機能不全、低減した脳血流、増加した脳グルコース消費、増加した血漿ラクテート、愛着障害、およびハミングを含む、自閉症の個体において現れる追加的な症状も、原因として低ＮＯを指摘することができる。これらの症状のそれぞれは、低い基礎ＮＯレベルに原因があるとすることができる。
【０３７２】
Takashi  Ohnishiらは、自閉症の個体が減少した血流を示すと報告している。Takashi  Ohnishiら、Abnormal  regional  cerebral  blood  flow  in  childhood  autism.  Brain  （２０００年）、１２３巻、１８３８〜１８４４頁。J.  M.  Rumseyらは、自閉症の個体が増加したグルコース消費を有すると報告している。Rumsey  JM、Duara  R、Grady  C、Rapoport  JL、Margolin  RA、Rapoport  SI、Cutler  NR.    Brain  metabolism  in  autism.  Resting  cerebral  glucose  utilization  rates  as  measured  with  positron  emission  tomography.    Arch  Gen  Psychiatry、１９８５年５月；４２巻（５号）：４４８〜５５頁（要約）。D.  C.  Chuganiは、自閉症の個体が、増加した血漿ラクテートレベルを有すると報告している。Chugani  DCら、Evidence  of  altered  energy  metabolism  in  autistic  children.  Prog  Neuropsychopharmacol  Biol  Psychiatry.１９９９年５月；２３巻（４号）：６３５〜４１頁。これらの作用の発生は、脳内の毛細血管希薄化の結果の場合があり、毛細血管希薄化は血流およびＯ２供給を低減するおそれがあり、その結果、脳の代謝負荷の一部が酸化的リン酸化の代わりに解糖によって生成されるおそれがある。
【０３７３】
一酸化窒素は、B.  A.  Klyachkoらによって、イオンチャネルのｃＧＭＰ修飾による過分極後に増加させることによりニューロンの興奮性を増加させることが実証されている。Vitaly  A.  Klyachkoら、cGMP-mediated  facilitation  in  nerve  terminals  by  enhancement  of  the  spike  after  hyperpolarization.    Neuron、３１巻、１０１５〜１０２５頁、２００１年９月２７日。C.  Sandieらは、ＮＯＳの阻害が驚愕を低減することを示している。Carmen  Sandiら、Decreased  spontaneous  motor  activity  and  startle  response  in  nitric  oxide  synthase  inhibitor-treated  rats.  European  journal  of  pharmacology  ２７７巻（１９９５年）８９〜９７頁。注意欠陥多動障害（ＡＤＨＤ）は、自然発症高血圧ラット（ＳＨＲ）およびナポリ高興奮性（ＮＨＥ）ラットを使用してモデル化されている。これらのモデルの両方は、Raffaele  Aspideらによって、急性ＮＯＳ阻害の期間中に増加した注意欠陥を示すことが示されている。Raffaele  Aspideら、Non-selective  attention  and  nitric  oxide  in  putative  animal  models  of  attention-deficit  hyperactivity  disorder.  Behavioral  Brain  Research  ９５巻（１９９８年）１２３〜１３３頁。したがって、本明細書における細菌は、ＡＤＨＤの処置に使用され得る。
【０３７４】
ＮＯＳの阻害は、M.  R.  Dzoljicによって睡眠を阻害することも示されている。M.  R.  Dzoljic、R.  de  Vries、R.  van  Leeuwen.  Sleep  and  nitric  oxide:  effects  of  7-nitro  indazole,  inhibitor  of  brain  nitric  oxide  synthase.  Brain  Research  ７１８巻（１９９６年）１４５〜１５０頁。G.  Zoccoliは、ＮＯＳが阻害されると、急速眼球運動および脳循環における睡眠−覚醒差を含む、睡眠中に見られるいくつかの生理作用が変化することを報告している。G.  Zoccoliら、Nitric  oxide  inhibition  abolishes  sleep-wake  differences  in  cerebral  circulation.    Am.  J.  Physiol.  Heart  Circ  Physiol  ２８０巻：Ｈ２５９８〜２６０６頁、２００１年。ＮＯ供与体は、L.  Kapasらによってノンレム睡眠を促進することが示されている、しかし、これらの増加は、ＮＯ供与体の持続よりもずっと長く持続したので、おそらくリバウンド効果を示唆している。Levente  Kapasら、Nitric  oxide  donors  SIN-１  and  SNAP  promote  nonrapid-eye-movement  sleep  in  rats.  Brain  Research  Bullitin、４１巻５号、２９３〜２９８頁、１９９６年。M.  Rosariaらによると、中枢ＮＯは、陰茎勃起およびあくびの両方を助長する。Maria  Rosaria  MelisおよびAntonio  Argiolas.    Role  of  central  nitric  oxide  in  the  control  of  penile  erection  and  yawning.  Prog  Neuro-Psychopharmacol  &  Biol.  Phychiat.  １９９７年、２１巻、８９９〜９２２頁。P.  Taniらは、アスペルガーを有する成人において不眠症が頻繁な所見であることを報告している。Pekka  Taniら、Insomnia  is  a  frequent  finding  in  adults  with  Asperger's  syndrome.  BMC  Psychiatry  ２００３年、３巻:１２頁。Y.  Hoshinoも、自閉症児における睡眠障害を観察している。Hoshino  Y、Watanabe  H、Yashima  Y、Kaneko  M、Kumashiro  H.  An  investigation  on  sleep  disturbance  of  autistic  children.    Folia  Psychiatr  Neurol  Jpn.  １９８４年；３８巻（１号）：４５〜５１頁（要約）。K.  A.  Schreckらは、睡眠障害の重症度が自閉症症状の重症度と相関関係にあることを観察している。Schreck  KAら、Sleep  problems  as  possible  predictors  of  intensified  symptoms  of  autism.  Res  Dev  Disabil.  ２００４年１〜２月；２５巻（１号）：５７〜６６頁（要約）。したがって、本明細書における細菌は、不眠症の処置に使用され得る。
【０３７５】
W.  D.  Ratnasooriyaらは、雄性ラットにおいてＮＯＳの阻害が性交前活動を低減し、性欲を低減し、受胎能を低減すると報告した。W.  D.  Ratnasooriyaら、Reduction  in  libido  and  fertility  of  male  rats  by  administration  of  the  nitric  oxide  (NO)  synthase  inhibitor  N-nitro-L-arginine  methyl  ester.  International  journal  of  andrology、２３巻：１８７〜１９１頁（２０００年）。
【０３７６】
ＡＴＰ枯渇および最終的な臓器不全によって特徴付けられるいくつかの外見的に異なる障害が、基礎一酸化窒素の全体的欠乏によって引き起こされるニトロペニア（nitropenia）によって実際に「引き起こされる」ことがあってもよい。これが心臓で起こる場合、その結果は拡張型心筋症である。これが脳で起こる場合、その結果は白質高信号域、アルツハイマー、血管性うつ状態、血管性認知症、パーキンソン病、およびレビー小体型認知症である。これが腎臓で起こる場合、その結果は末期腎疾患であり、これが肝臓で起こる場合、その結果は原発性胆汁性肝硬変である。これが筋肉で起こる場合、その成り行きは、線維筋痛症、湾岸戦争症候群、または慢性疲労症候群である。これが腸で起こる場合、その成り行きは、虚血性腸疾患である。これが膵臓で起こる場合、その成り行きは、最初の２型糖尿病、それに続く慢性膵炎、それに続く膵臓の自己免疫攻撃（または膵臓がん）、それに続く１型糖尿病である。これが結合組織で起こる場合、その成り行きは全身性硬化症である。
【０３７７】
末期腎疾患の残存腎臓モデルにおいて、腎臓の一部が（外科的にまたは毒素を用いてのいずれかで）除去され、それにより残部への代謝負荷が増加する。スーパーオキシドが発生してＮＯを減少させ、腎臓ミトコンドリアへのＯ２拡散を増加させる。慢性的な過負荷は、進行性の腎臓毛細血管希薄化および進行性の腎不全を招く。急性腎不全において、人々に透析を受けさせることで、腎臓に「休息」を与えることができ、腎臓を回復させる。横紋筋融解（血流中にミオグロビンを放出する筋肉損傷）によって誘導される急性腎不全において、腎臓損傷は、虚血性損傷によって特徴付けられる。ミオグロビンは、ちょうどヘモグロビンが行うようにＮＯを捕捉し、腎臓に血管収縮を引き起こし、虚血に繋がる。ミオグロビンは、局所ニトロペニアおよびさらなるＡＴＰ枯渇に繋がる事象のカスケードも誘導する。
【０３７８】
一部の態様では、低ＮＯレベルは、低減したミトコンドリア新生に繋がる。低減したミトコンドリア密度で同じＡＴＰを生成することは、Ｏ２消費の増加、または加速した基礎代謝速度を招く。加速した基礎代謝速度は、鎌状赤血球貧血、うっ血性心不全、糖尿病、肝硬変、クローン病、筋萎縮性側索硬化症、肥満、末期腎疾患、アルツハイマー、および慢性閉塞性肺疾患を含むいくつかの状態で観察される。
【０３７９】
いくらか増加したＯ２消費が生産的に使用され得るものの、これらの状態の多くにおいて脱共役タンパク質も上方調節される。これは、増加した代謝速度の少なくとも一部が非効率性によるものであることを示している。脱共役タンパク質が上方調節されることが公知の状態には、肥満および糖尿病が含まれる。
【０３８０】
Ｏ２を消費してより低いＯ２濃度にするミトコンドリアがより少ないと、Ｏ２勾配が推進するＯ２の拡散がより大きくなり、Ｏ２拡散の経路長が増加する可能性があり、毛細血管希薄化を招き、これは、拡張型心筋症、高血圧、２型糖尿病、および腎性高血圧で観察される。
【０３８１】
Ｃｕ２＋またはセルロプラスミン（ＣＰ）（成人血清中に０．３８ｇ／Ｌ存在し、０．３２％  Ｃｕであり、血清中の銅の９４％を含有する主要Ｃｕ含有血清タンパク質）のいずれかとしての銅は、ＮＯおよびチオール含有基（ＲＳＨ）からのＳ−ＮＯ−チオールの形成を触媒する。血漿のＣｕ含量は可変性であり、感染状態で増加する。Bergerらは、熱傷創滲出液のＣｕおよびＺｎ含量が、皮膚の１／３に熱傷を負った患者でかなりのものであり、正常な身体のＣｕ含量の２０から４０％およびＺｎ含量の５から１０％を７日で失うと報告した。（Cutaneous  copper  and  zinc  losses  in  burns.    Burns.  １９９２年１０月；１８巻（５号）：３７３〜８０頁）。患者の皮膚にＡＯＢが定着していたならば、ＡＯＢが必要とする尿素ならびにＦｅ、Ｃｕ、およびＺｎを含有する創傷滲出液はＮＯおよび亜硝酸塩に変換され、代謝的に困難に見舞われた創傷において資源（Ｏ２およびＬ−アルギニンなど）を消費することなく、ｉＮＯＳによるＮＯの局所生成を大きく補充する。創傷表面でのＡＯＢによるＮＯおよび亜硝酸塩の高い生成は、特に、破傷風、ガス壊疽、およびボツリヌス症を引き起こすＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍなどの嫌気性細菌による感染を阻害すると予期される。
【０３８２】
本発明の実施は、特に示さない限り、当業者の技能の範囲内の免疫学、分子生物学、および組換えＤＮＡ技法の従来方法を採用する場合がある。そのような技法は、文献に十分に説明されている。例えばSambrookら、Molecular  Cloning:  A  Laboratory  Manual（最新版）；およびCurrent  Protocols  in  Molecular  Biology（F.  M.Ausubelら編、最新版）を参照されたい。
７．アンモニア酸化細菌を用いた皮膚マイクロバイオームの調整
【０３８３】
本開示は、皮膚マイクロバイオーム、例えば、ヒト皮膚マイクロバイオームを変化させるためのシステムおよび方法を提供する。システムおよび方法は、例えば、皮膚に関係する感染症または状態、例えば、皮膚感染症および／または皮膚状態の処置を提供し得る。
【０３８４】
Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ属のアンモニア酸化細菌（ＡＯＢ）は、エネルギー源としてアンモニアのみから亜硝酸塩および一酸化窒素を発生する独特な能力を有するグラム陰性絶対独立栄養細菌である。ＡＯＢは、土壌および水環境の両方に広く存在し、環境硝化プロセスの不可欠な構成成分である。血管拡張、皮膚炎および創傷治癒などのいくつかの生理機能の重要な構成成分としてヒト皮膚に及ぼす亜硝酸塩および一酸化窒素の役割のせいで、これらの細菌は、健康な皮膚状態および免疫病理学的皮膚状態の両方に関して有益な特性を有し得る。これらの細菌は、低増殖性であり、有機炭素源で増殖することができず、石鹸および抗生物質に感受性であり得、動物またはヒトにおけるいかなる疾患または感染症にも関連したことがないので、ヒトにおける使用に安全であり得る。
【０３８５】
対象、例えば、ヒト対象へのアンモニア酸化細菌の局所適用は、皮膚マイクロバイオームにおける予想外の変化をもたらす可能性があり、より詳細には、それは、通常の共生非病原種の比率増加および潜在的病原生物、病原生物、または疾患起炎生物の比率低減をもたらす可能性がある。
【実施例】
【０３８６】
（実施例１）
アンモニア酸化細菌を用いたヒト皮膚に対する研究：化粧品の効果、安全性、検出、および皮膚メタゲノミクス
２４名のヒトボランティアを対象とし、ＡＯＢ対プラセボ対照を４：１に無作為化した盲検化プラセボ対照研究を実施した。対象は、Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ懸濁液（１０９ＣＦＵ／ｍｌ、１日２回、１日当たりの総量３×１０１０ＣＦＵ）を自身の顔および頭皮に１日２回で１週間塗布し、塗布後、さらに２週間追跡した。ボランティアは、ＡＯＢを塗布する１週間ならびに塗布後の週の毛髪用製品の使用を控え、次いで３週目にいつものシャンプーの使用に戻るように指示された。頭皮スワブを、ベースライン対照として０日目に、かつ１、３、８、１４、および２１日目に得、ＡＯＢの存在の有無をＰＣＲおよび１６Ｓ  ｒＲＮＡ塩基配列分析によってアセスメントした。
【０３８７】
重篤な有害事象は、１週間のＡＯＢの塗布には全く付随せず、製品は安全であると考えられた。７日の塗布期間後に記入された自己アセスメント報告書によって示されるように、ＡＯＢ使用者によって、皮膚の状態および質における明らかな改善が報告された。皮膚試料のＡＯＢ特異的ＰＣＲ分析を使用すると、塗布期間中のＡＯＢ使用者の８３〜１００％に細菌が存在することを実証できたが、プラセボ対照試料ではＡＯＢが全く検出されなかった。全ての対象は、研究開始前に得たベースラインスワブからＡＯＢが認められず、石鹸および他の市販製品に対するこれらの細菌の予測感受性と一致する。１６Ｓ  ｒＲＮＡ遺伝子を増幅し、試料の一部を塩基配列決定すると、対応する試料にＡＯＢの存在が確認され、かつＡＯＢの局所塗布によって皮膚マイクロバイオームがモジュレートされるという潜在的傾向が示唆された。要約すると、生存ＡＯＢ系製品は安全であり、かつヒト皮膚に対する、亜硝酸塩および一酸化窒素の新規の自己調節性局所送達剤として大いに有望であり得る。
【０３８８】
下記の表８に示す通り、Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ（ＡＯＢ）の割合は、０日目対８日目で比較すると増加した。他の細菌、すなわちＰｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ、およびＣｉｔｒｏｂａｃｔｅｒの割合は、０日目対８日目で比較すると減少した。表８で示されるｐ値によって、０日目と８日目との間の最も有意な変化が、Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ（ＡＯＢ）、続いてＰｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍで観察されたことが実証される。ＥｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒおよびＣｉｔｒｏｂａｃｔｅｒもまた、０日目と８日目との間に変化を示したが、それほどではない。
【表８】
2018524351.tif 000012
【０３８９】
（実施例２）
ざ瘡になりがちな対象における油性肌、顔の毛穴、他の美容的パラメーターの外観を改善する化粧製品の性能および忍容性を評価するための、プラセボ対照二重盲検無作為化多部位化粧品の試用
第２ｂ相研究：
【０３９０】
ＡＯ＋Ｍｉｓｔ（Ｄ２３  Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａ調製物）処置によって、（成人コホートの）Ｓｋｉｎｄｅｘ治験責任医師の全般的アセスメントと炎症性病変計数の両方で強力な有効性シグナルが実証された。
【０３９１】
実施例２の検定で使用されるＡＯ＋Ｍｉｓｔ調製物は、５０ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４および２ｍＭ  ＭｇＣｌ２の水性緩衝液中に１×１０９ＣＦＵ／ｍＬの濃度でアンモニア酸化細菌を含んでいる。
【０３９２】
４週間（２週間の処置、２週間のウォッシュアウト）の中で、尋常性ざ瘡を呈する成人（年齢１８＋）３６名に、Ｂ２４４（Ｄ２３  Ｎ．ｅｕｔｒｏｐｈａ）の無作為化（１：１：１：１）二重盲検化プラセボ対照用量範囲探索（２、４、８×１０９ＣＦＵ）研究を行った。研究は８０％の検出力で、２週目におけるＩＧＡ（％対象の改善）の３０％の正味の改善率を検出する（プールＢ２４４対プラセボ）。研究はまた８０％の検出力で、プール処置群とプラセボとの間における、ベースラインからの病変計数の平均変化の３０％の差（ｐ＜０．０５）を検出する。
【０３９３】
処置プロトコールの概要は以下の通りである。アンモニア酸化細菌を、対象の顔、首、および頭皮へ合計４週間投与した。４週間後、アンモニア酸化細菌の塗布を１週間中止した。バイオーム適合性シャンプーおよびコンディショナーを合計５週間使用した。臨床評価を、ベースライン（０時間目）、４週目、および５週目で実施した。
目的
【０３９４】
この４週間の多部位二重盲検無作為化プラセボ対照化粧品の試用を実施し、軽度〜中等度のざ瘡になりがちな皮膚を有する１２〜４５歳の男女によって使用したときの、ＡＯ＋Ｍｉｓｔ  ｍｉｓｔの皮膚外観に対する総合的な化粧品効果および忍容性をアセスメントした。
要約
【０３９５】
合計８３名の対象が研究を終了し、対象４２名がＡＯ＋Ｍｉｓｔ（Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ  ｅｕｔｒｏｐｈａ調製物）を、かつ対象４１名がプラセボを使用した。研究過程中、所定の無作為化に従って、対象をＡＯ＋Ｍｉｓｔ（Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ  ｅｕｔｒｏｐｈａ調製物）またはプラセボの使用に割り付けた。試験物質を、１日２回指示通りに、対象の毛髪、頭皮、および顔に塗布した。対象は、支持材として（「バイオーム適合性」）標準の石鹸およびシャンプー、すなわちシャンプー（Ｌｏｔ  ２９３１７８；表５において「好ましい濃度」のままで示される）および洗浄剤（Ｌｏｔ  ２９３１６２；表６において「好ましい濃度」のままで示される）を研究過程にわたって１日１回使用した。４週間の使用期間後、対象は試験物質の使用を中止し（同時に支持材を使用したままで）、１週間の退行期間に参加した。臨床評価を、来院１回目（ベースライン）、来院２回目（４週目）、および来院３回目（５週目）に実施した。対象は、（特に指示がない限り）各時点で以下の手順に参加した。
・ざ瘡の臨床評定
【０３９６】
熟練した臨床評定者（ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｇｒａｄｅｒ）が、研究後のざ瘡状態に関する対象のＶＩＳＩＡおよび自撮り写真をそれぞれ評価した。
・ざ瘡計数
【０３９７】
熟練した臨床評定者が、各対象の額、左頬、顎、および右頬の炎症性病変（丘疹、膿疱、および嚢胞／小結節）および非炎症性病変（開放および閉鎖面皰）を（個別に）計数した。
・治験責任医師の全般的改善アセスメント（ＩＧＩＡ）
【０３９８】
治験責任医師または被指名者が、４週目および５週目に顔の全般的ざ瘡アセスメントを行った。ＩＧＡの説明は、Ｕ．Ｓ．Ｆｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ、例えば、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｆｄａ．ｇｏｖ／ｄｏｗｎｌｏａｄｓ／Ｄｒｕｇｓ／．．．／Ｇｕｉｄａｎｃｅｓ／ＵＣＭ０７１２９２．ｐｄｆ：Ｇｕｉｄａｎｃｅ  ｆｏｒ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ；Ａｃｎｅ  Ｖｕｌｇａｒｉｓ：Ｄｅｖｅｌｐｉｎｇ  Ｄｒｕｇｓ  ｆｏｒ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ（Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ；Ｆｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ；Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｄｒｕｇ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（ＣＤＥＲ）；２００５年９月、Ｃｌｉｎｉｃａｌ／Ｍｅｄｉｃａｌで見ることができる。
・ＰＩＨ／ＰＩＥ病変評定
【０３９９】
炎症後高色素沈着／炎症後紅斑（ＰＩＨ／ＰＩＥ）病変を対象ごとに選択し、熟練した臨床評定者が、選択されたＰＩＨ／ＰＩＥ病変に色の濃さおよびサイズについて評定した。
・画像化手順
【０４００】
各対象の顔（右側面、左側面、および中央面）のデジタル画像を、Ｃａｎｏｎ  Ｍａｒｋ  ＩＩ  ５ＤデジタルＳＬＲカメラ（キャノン株式会社、東京、日本）を備えたＶＩＳＩＡ  ＣＲ  ｐｈｏｔｏ−ｓｔａｔｉｏｎ（Ｃａｎｆｉｅｌｄ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、フェアフィールド、ニュージャージー州）を使用し、標準１および２、交差偏光、平行偏光、ならびにＵＶ−ＮＦの照明条件を使用し、撮影した。交差偏光照明を使用したデジタル画像で毛穴を分析した。
・調査および自撮り写真
【０４０１】
対象は、自身のスマートフォンを使用して、標準の自撮り写真（「セルフィー」）を週に１回撮影し、質問票に記入した。
・忍容性評価
【０４０２】
熟練した臨床評定者が、客観的刺激パラメーター（紅斑、浮腫、および落屑）に関して各対象の顔全体を評価し、かつ対象が主観的刺激パラメーター（刺痛感、灼熱感、および掻痒感）の程度を報告した。
・美容的有効性パラメーターの臨床評定
【０４０３】
熟練した臨床評定者が、油性の外観（てかりおよび感触）、毛穴の外観、つや、しみ、皮膚の色合い（色）の均質性、視覚的な滑らかさ、および触覚的な滑らかさに関して各対象の顔を評価した。
・セブメーター測定
【０４０４】
セブメーター  ＳＭ  ８１５（Ｃｏｕｒａｇｅ＋Ｋｈａｚａｋａ、ドイツ）で額を３回測定し、光度測定法を使用して皮膚の皮脂量を測定した。
・マイクロバイオーム試料の収集
【０４０５】
マイクロバイオーム試料を、頸部の後ろ、右耳後ろ、および右頬から（各位置から１試料）収集した。
総合的結論
【０４０６】
この４週間の多部位二重盲検無作為化プラセボ対照化粧品の試用からの総合的な結果は、試験物質であるＡＯ＋Ｍｉｓｔ（Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ  ｅｕｔｒｏｐｈａ調製物）の使用が軽度〜中等度のざ瘡状態の対象に安全かつ効果的であると実証されたことを示す。成人における疾患の重症度および炎症性病変計数は、ＡＯ＋Ｍｉｓｔ処置で改善されたことが示された。ＡＯ＋Ｍｉｓｔ（Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ  ｅｕｔｒｏｐｈａ調製物）の使用は、対象による忍容性が非常に良好であり、ベースラインスコアと比較したときに、４週目の紅斑、落屑、浮腫、灼熱感、刺痛感、および掻痒感に関する臨床評定スコアにおいて統計的に有意な増加（悪化）を伴わなかった。
【０４０７】
研究には標準ＦＤＡ治験責任医師の全般的ざ瘡（ＩＧＡ）スケール１を使用し、完全な盲検化状態下でＶＩＳＩＡ画像を使用してざ瘡状態をアセスメントした。ＡＯ＋Ｍｉｓｔ（Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ  ｅｕｔｒｏｐｈａ調製物）を使用した対象は、ベースラインスコアと比較したときに、４週目および５週目にＩＧＡスコアにおいて統計的に有意な減少（改善）を示した。ベースラインからの変化に基づき試験物質間を比較することによって、４週目にざ瘡評定に関して、ＡＯ＋Ｍｉｓｔ（Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ  ｅｕｔｒｏｐｈａ調製物）に有利となる統計的に有意な差が示された。
【０４０８】
ＡＯ＋  Ｍｉｓｔ（Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ  ｅｕｔｒｏｐｈａ調製物）の使用に関するざ瘡計数の結果によって、ベースライン計数と比較したときに、４および５週目で丘疹および炎症性病変の計数に、かつ４週目で全般的な病変計数に統計的に有意な減少（改善）が示された。ＡＯ＋Ｍｉｓｔ（Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ  ｅｕｔｒｏｐｈａ調製物）とプラセボとの間に統計的に有意な差は観察されなかったが、図４に示す通り、データによって、ＡＯ＋Ｍｉｓｔ（Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ  ｅｕｔｒｏｐｈａ調製物）を使用した成人対象において炎症性病変計数がより大きくかつより持続的に低減することが示された。グラフに表示されるＡＯ＋Ｍｉｓｔのバーは、（左から）１番目および（左から）３番目である。グラフに表示されるプラセボのバーは、（左から）２番目および（左から）４番目である。
【０４０９】
対象によって報告されたアウトカムを、Ｓｋｉｎｄｅｘ１６クオリティーオブライフ調査を使用して測定した。ＡＯ＋Ｍｉｓｔは、自身の疾患に関する対象の感情面のアセスメントを捉えた質問群での変化（改善）と関連していた。具体的には、皮膚状態に痛みがある（２週目）、皮膚状態が持続する／再発する（４週目）、皮膚状態に関して心配がある（５週目）、および皮膚状態の外観（２、４、および５週目）に、ＡＯ＋Ｍｉｓｔ（Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ  ｅｕｔｒｏｐｈａ調製物）に有利となる統計的に有意な改善が観察された。
【０４１０】
ＡＯ＋Ｍｉｓｔ（Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ  ｅｕｔｒｏｐｈａ調製物）の使用に関する臨床評定スコアの結果によって、ベースラインスコアと比較したときに、４週目および５週目で視覚的なかつ触覚的な滑らかさに関する、かつ５週目でしみに関する臨床評定スコアに統計的に有意な減少（改善）が示された。
試験物質の説明
【０４１１】
表９および表１０は各試験物質および支持材の説明を示す。
【表９】
2018524351.tif 000013
【表１０】
2018524351.tif 000014
【０４１２】
対象の内訳および人口統計
対象の内訳情報の要約としては表１１が挙げられる。パープロトコール（ＰＰ）母集団に関する人口統計的情報を表１２示す。適用可能なパラメーターに関しては、各カテゴリーにおける対象の数を、括弧内の全対象に対する百分率とともに挙げる。
【表１１】
2018524351.tif 000015
【表１２】
2018524351.tif 000016
手順および方法
【０４１３】
研究を開始する前に、適格性基準に関するＩＲＢ認可スクリプトを使用することによって、潜在的な対象を電話でスクリーニングした。普通、油性、および混合の皮膚タイプであることを自己診断した、年齢が１２歳から４５歳の間の思春期および成人の男性および女性が、診療所での適格性スクリーニングを予定した。対象候補は、各予定来院の少なくとも３時間前に全てのメークアップを落とすように指示された。
【０４１４】
来院１回目（ベースライン）に、１８歳もしくはそれよりも年齢が高い対象候補、または１８歳未満の任意の未成年対象の親／法的保護者は、研究の性質の説明を受け、任意の治験関連の質問に回答した後に、同意説明文書を読み、署名した。未成年対象候補はアセント文書を読み、署名した。この最初の書類に署名した対象候補に、スクリーニング番号を割り付け、以下の適格性基準に関して評価した。
・Ｆｉｔｚｐａｔｒｉｃｋ皮膚分類：タイプＩ〜Ｖに認定
【０４１５】
Ｆｉｔｚｐａｔｒｉｃｋ皮膚分類は、日光曝露されない冬季後に日光曝露してから最初の３０〜４５分に対する保護されていない皮膚の反応に基づいている。皮膚タイプのカテゴリーは表１３の以下の通りである。
【表１３】
2018524351.tif 000017
・ざ瘡重症度スケールを組み合わせて軽度〜中等度のざ瘡（認定のために最低限５〜５０カ所の炎症性病変および５〜１００カ所の炎症性病変）を臨床的に決定した。
・顔に、少なくとも１か所の標的ＰＩＨ／ＰＩＥ病変
【０４１６】
対象候補は、適格性および健康に関する質問に記入した。適格性要件に合格したスクリーニング済み対象が研究に登録され、対象番号が割り付けられた。対象は、以下の手順に参加した。
・美容的有効性パラメーターの臨床評定
【０４１７】
対象の顔全体を、治療内容を知らされていない熟練した臨床評定者によって、以下の数値定義による修正Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓの１０ポイントスケール３を使用して（皮膚状態の正確な説明を必要とする場合は、ハーフポイントスコアを割り付けて）、下記の美容的有効性パラメーターへの臨床評定を行った。
０＝なし（可能な最善の状態）
１〜３＝軽度
４〜６＝中等度
７〜９＝重度（可能な最悪の状態）
【０４１８】
以下のパラメーター（表１４）に、挙げられたスケールアンカーに従って評定を行った。
【表１４】
2018524351.tif 000018
・ＰＩＨ／ＰＩＥ病変評定
【０４１９】
治療内容を知らされていない熟練した臨床評定者が、各対象の顔における炎症後高色素沈着／炎症後紅斑（ＰＩＨ／ＰＩＥ）病変を選択し、以下の評定スケールを使用して色の濃さおよびサイズに関して病変の評定を行った。
色の濃さ
１  周囲の皮膚の色合い／色よりもわずかに明るい
２  周囲の皮膚の色合い／色と等しい（ＰＩＨ／ＰＩＥは目視では認められない）
３  周囲の皮膚の色合い／色よりもわずかに濃い／赤い
４  周囲の皮膚の色合い／色よりも中等度に濃い／赤い
５  周囲の皮膚の色合い／色よりも著しく濃い／赤い
６  周囲の皮膚の色合い／色よりも極めて濃い／赤い
サイズ
０  目視では認められない
１  直径０．５ｍｍまたはそれ未満
２  直径０．５ｍｍ超〜１．５ｍｍ
３  直径１．５ｍｍ超〜２．５ｍｍ
４  直径２．５ｍｍ超
・ざ瘡計数
【０４２０】
治療内容を知らされていない熟練した臨床評定者が、各対象の額、左頬、顎、および右頬（鼻の、下顎輪郭の下の、または眉毛を含む毛髪の生え際に沿った病変を除く）の、炎症性ざ瘡病変（丘疹、膿疱、および嚢胞／小結節）および非炎症性ざ瘡病変（開放面皰および閉鎖面皰）の数を個別に計数し、記録した。
・忍容性評価
【０４２１】
各対象の顔全体（化粧品処置領域）における客観的なかつ主観的な刺激の徴候および症状をアセスメントすることによって、局所的皮膚忍容性を評価した。
以下の刺激パラメーターを評価した。
−  客観的刺激（臨床評定）：紅斑、浮腫、および落屑
−  主観的刺激（対象によってアセスメントされる）：刺痛感、灼熱感、および掻痒感
【０４２２】
刺激評価の結果を、以下のスケールを使用して（臨床状態の詳細な説明を必要とする場合は、ハーフポイントスコアを用いて）記録した。
紅斑
０＝なし  化粧品処置領域に紅斑がない
１＝軽度  化粧品処置領域にわずかではあるがはっきりとした赤みがある
２＝中等度  化粧品処置領域にはっきりとした赤みがある
３＝重度  化粧品処置領域に顕著な赤みがある
浮腫
０＝なし  化粧品処置領域に浮腫／腫脹がない
１＝軽度  化粧品処置領域にわずかではあるがはっきりとした浮腫がある
２＝中等度  化粧品処置領域にはっきりとした浮腫がある
３＝重度  化粧品処置領域に顕著な浮腫がある
落屑
０＝なし  化粧品処置領域に落屑がない
１＝軽度  化粧品処置領域の限られた領域に、かろうじて認められる微細な落屑がある
２＝中等度  化粧品処置領域の全ての領域に、全体に及ぶ微細な落屑がある
３＝重度  化粧品処置領域の全ての領域にわたり、皮膚の落屑および剥離がある
刺痛感
０＝なし  化粧品処置領域に刺痛感がない
１＝軽度  化粧品処置領域にわずかに刺痛感覚があるが、実際は気にならない
２＝中等度  化粧品処置領域にはっきりとした刺痛感があり、多少気になる
３＝重度  化粧品処置領域に顕著な刺痛感覚があり、はっきりとした不快感が生じ、日中の活動および／または睡眠が中断されることがある
灼熱感
０＝なし  化粧品処置領域に灼熱感がない
１＝軽度  化粧品処置領域にわずかに灼熱感覚があるが、実際は気にならない
２＝中等度  化粧品処置領域にはっきりとしたほてり感、灼熱感があり、多少気になる
３＝重度  化粧品処置領域に焼けるような灼熱感覚があり、はっきりとした不快感が生じ、日中の活動および／または睡眠が中断されることがある
掻痒感
０＝なし  化粧品処置領域に掻痒感がない
１＝軽度  化粧品処置領域にわずかに掻痒感覚があるが、実際は気にならない
２＝中等度  化粧品処置領域にはっきりとした掻痒感があり、多少気になる
３＝重度  化粧品処置領域に顕著な掻痒感覚があり、はっきりとした不快感が生じ、日中の活動および／または睡眠が中断されることがある
【０４２３】
対象は、周囲の温度および湿度の状態に少なくとも１５分間馴化してから、生体計測／画像化／マイクロバイオーム試料採取手順に参加した。研究過程中、適用可能な待合室／計測室を、温度６８°Ｆ〜７５°Ｆおよび相対湿度範囲３５％〜６５％で維持した。
【０４２４】
馴化した後、対象は、以下の手順に参加した。
・セブメーター測定
【０４２５】
セブメーター  ＳＭ  ８１５（Ｃｏｕｒａｇｅ＋Ｋｈａｚａｋａ、ドイツ）で、額を３回測定し、光度測定法を使用して、水分と無関係に皮膚の皮脂量を測定した。ｓｅｂｕｔａｐｅ、すなわち皮脂と接触したときに透明になる合成材料を通過した光透過度を測定する。セブメーター内のマイクロプロセッサによって、ｓｅｂｕｔａｐｅの透明度に基づいた皮膚表面の量（μｇ皮脂／ｃｍ２）が計算される。
・画像化手順
【０４２６】
画像化手順の前に、医療機関職員は、対象の顔が清潔でありメークアップされていないことおよび対象が写真撮影する領域（複数可）から装飾具を全て外したことを確認した。対象は、艶消しされた黒色または灰色のヘッドバンドが与えられ、毛髪が顔にかからないようにし、艶消しされた黒色のシャツまたは艶消しされた黒色もしくは灰色の布で対象の衣服を覆った。対象は、自身の眼を優しく閉じながら、中間的な笑顔ではない表情をとるように指示され、写真撮影ごとに慎重に位置を合わせた。
【０４２７】
Ｃａｎｏｎ  Ｍａｒｋ  ＩＩ  ５ＤデジタルＳＬＲカメラ（キャノン株式会社、東京、日本）を備えたＶＩＳＩＡ  ＣＲ  ｐｈｏｔｏ−ｓｔａｔｉｏｎ（Ｃａｎｆｉｅｌｄ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、フェアフィールド、ニュージャージー州）を使用し、標準照明１（可視）、標準照明２（可視／輝線）、交差偏光、平行偏光、およびＵＶ−ＮＦの照明条件下で、各対象の正面向き（中央面、右側面、および左側面像）の画像を撮影した。
・マイクロバイオーム手順
【０４２８】
マイクロバイオーム試料を、各対象の頸部の後ろ、右耳後ろ、および右頬から（各位置から１試料）収集した。スワブを滅菌包装から取り出し、スワブから離れた軸を持ち、約２０回強く擦り、試料採取を行う領域の３インチ部分上で回転させた。次いで、スワブを（時点が標識された）試験管に入れ、軸を切り取り、試験管が閉じたことを確実にした。皮膚スワブを収集し、−８０℃で凍結して、その後、ＤＮＡ抽出およびマイクロバイオームプロファイリングを行った。
【０４２９】
対象は、自身のスマートフォンを使用して標準の自撮り写真（「セルフィー」）を週に１回撮影する方法および質問票に記入する方法を指示された。
【０４３０】
対象を、支持材のユニットに割り振り、研究期間中はシャンプー（Ｌｏｔ２９３１７８）を１日１回毛髪および頭皮に適用し、洗浄剤を（Ｌｏｔ２９３１６２）１日１回顔に使用するように指示した。対象を、所定の無作為化に従って、予め秤量されたユニットの試験物質、すなわちＡＯ＋Ｍｉｓｔ（Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ  ｅｕｔｒｏｐｈａ調製物）またはプラセボに割り振った。
【０４３１】
対象には、以下の口頭および書面による使用説明が行われた。
使用説明
【０４３２】
試験物質は、洗浄後および就寝前に１日２回（朝夕毎に）、毛髪、頭皮、および顔に（少なくとも１回ごとに６ポンプ）塗布し、シャワーを浴びる直前に塗布しないこと。製品を塗布してから１時間はメークアップ（ファンデーション、アイシャドーなど）を一切せず、最低限の量を使用すること。
【０４３３】
対象は、書面による使用説明、研究説明、治験来院日のカレンダー、および製品を塗布した時間を記録するための日誌が与えられた。
【０４３４】
対象は２回目（４週目）の再診を受け、以下の手順に参加した。
−  医療機関職員は併用薬を記録し、対象に自身の健康状態の変化に関して質問した。該当する場合は、有害事象を記録した。
−  日誌を集め、コンプライアンスを審査し、診療所で保管した。新たな日誌を配布した。
−  試験物質ユニットを集め、目視で確認し、コンプライアンスのために秤量し、診療所で保管した。支持材を、コンプライアンスのために目視で確認し、対象に返却した。
−  対象は、ベースラインで記載されているように、以下の手順に参加した。
・美容的有効性パラメーターの臨床評定
・ＰＩＨ／ＰＩＥ病変評定
・ざ瘡計数
・忍容性評価
−  対象は、以下の手順に参加した。
・以下のスケールおよび数値定義を使用して、治験責任医師の全般的改善アセスメント（ＩＧＡ）を実施した。
１＝悪化
２＝改善しない
３＝軽度の改善
４＝中等度の改善
５＝著しい改善
−  対象は少なくとも１５分間馴化させ、次いで、ベースラインで記載されているように、以下の手順に参加した。
・セブメーター測定
・画像化手順
・マイクロバイオーム試料採取
【０４３５】
４週間のアセスメントが終了した後に、対象は１週間の退行期間に参加し、試験物質の使用を中止した（支持材は依然しとして使用した）。対象は３回目（５週目）の再診を受け、以下の手順に参加した。
−  医療機関職員は併用薬を記録し、対象に自身の健康の状態の変化に関して質問した。該当する場合は、有害事象を記録した。
−  日誌を集め、コンプライアンスを審査し、診療所で保管した。
−  支持材ユニットを集め、コンプライアンスのために目視で確認し、診療所で保管した。
−  対象は、ベースラインおよび４週目に記載されているように、以下の手順に参加した。
・美容的有効性パラメーターの臨床評定
・ＰＩＨ／ＰＩＥ病変評定
・ざ瘡計数
・治験責任医師の全般的改善アセスメント
・忍容性評価
−  対象は少なくとも１５分間馴化させ、次いで、ベースラインで記載されているように、以下の手順に参加した。
・セブメーター測定
・画像化手順
・マイクロバイオーム試料採取
５週目の研究手順が終了した後に、治療内容を知らされていない臨床評定者によって以下の手順を実施した。
・ざ瘡評定
【０４３６】
ざ瘡の臨床評定を、ベースライン、４週目、および５週目に診療所で撮影されたＶＩＳＩＡ画像で、かつベースラインならびに１、２、３、４、および５週目に撮影された対象の自撮り写真から、改良されたＧｒｉｆｆｉｔｈｓの１０ポイントスケール３（０＝ざ瘡がない、９＝重度のざ瘡）使用して実施し、対象のざ瘡そのものの任意の悪化をスクリーニングした。
【０４３７】
さらに、ＶＩＳＩＡ画像に、ＦＤＡ  ＩＧＡスケール１（０〜４）を使用し、ざ瘡に関する臨床評定を行った。
０＝きれい  炎症性または非炎症性の病変はない
１＝ほぼきれい  非炎症性病変は極めて少なく、１カ所以下の小さい炎症性病変を伴う
２＝軽度  グレード１を超え、数か所の非炎症性病変があり、２、３カ所以下の炎症性病変（丘疹／膿疱のみ、結節性病変はない）を伴う
３＝中等度  グレード２を超え、最大で多数の非炎症性病変があり、かつ数か所の炎症性病変を有し得る。ただし、１カ所以下の小さい結節性病変を有する
４＝重篤  グレード３を超え、最大で多数の非炎症性病変および炎症性病変がある。ただし、２、３カ所以下の結節性病変がある
生物統計学およびデータ管理
【０４３８】
パープロトコール（ＰＰ）母集団は、全ての統計分析検定の主要母集団であった。ＰＰ母集団は、研究への参加に適格であると考えられかつプロトコールに従って研究を終了させた全ての対象を含んだ。終了させた対象のデータのみを分析した。ＡＥ、ＳＡＥ、不遵守、または治験責任医師の裁量の場合に、対象を分析から除外された可能性がある。
【０４３９】
対象および時点ごとに３回のセブメーター測定値を平均してから、統計分析を行った。
【０４４０】
交差偏光照明条件を使用して撮影されたデジタル画像を、Ｓｔｅｐｈｅｎｓ＆Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓによって開発されたＭａｃｒｏｖｅｒｓｉｏｎ「Ｐｏｒｅ＿２０１２１２０７」を使用し、Ｉｍａｇｅ  Ｐｒｏ  Ｐｌｕｓ  ｖ７ソフトウェア（ＭｅｄｉａＣｙｂｅｒｎｅｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．、ロックビル、メリーランド州）を使用して、毛穴に関して分析した。頬の領域における目的の不揃いな形の領域を、分析用に選択した。毛穴分析によって、毛穴数（計数）、毛穴によって覆われた総面積、および毛穴の平均的深さの値が報告された。
【０４４１】
ざ瘡計数データを、以下のような評定位置ごとに、かつ合計４カ所に評定された領域（額、右頬、左頬、および顎）に関して分析した。
・丘疹、膿疱、嚢胞／小結節、開放面皰、および閉鎖面皰が別個にある
・炎症性ざ瘡病変（丘疹、膿疱、嚢胞／小結節の組合せ）および非炎症性ざ瘡病変（開放面皰および閉鎖面皰の組合せ）が別個にある
・全般的な病変（合計５タイプのざ瘡）がある
【０４４２】
美容的有効性評定データ、ざ瘡評定データ、ＰＩＨ／ＰＩＥ病変評定データ、ざ瘡計数、忍容性評価データ、セブメーター測定値、および毛穴画像分析パラメーターに関しては、観察患者数（Ｎ）、平均値、中央値、標準偏差（ＳＤ）、最小値（ＭＩＮ）および最大値（ＭＡＸ）を含む記述統計的な概要が全ての来院日で提供される。
【０４４３】
ベースラインからの変化（ベースライン後の値マイナスベースラインの値として定義される）の平均を、各適用可能なベースライン後の時点で推定した。ベースラインからの平均変化がゼロであるという帰無仮説を、４週目に推定し、美容的有効性評定パラメーター、ざ瘡評定、ざ瘡計数、毛穴数（計数）の画像分析、および忍容性評価に関してはＷｉｌｃｏｘｏｎの符号順位検定、ならびにセブメーター測定および毛穴の画像分析（毛穴によって覆われた総面積、および毛穴の平均的深さ）に関しては対応のあるｔ検定を使用して検定した。退行期間に関しては、Ｗｉｌｃｏｘｏｎの符号順位検定を使用した治験責任医師の全般的改善アセスメントの検定を含む同様の分析を、４週目からの変化に関して５週目時点に実施した。
【０４４４】
ベースライン／４週目からの百分率平均変化、および改善または悪化を示す対象の百分率を以下の式を使用して計算した。
ベースラインからの百分率平均変化＝（来院時平均スコア−ベースライン平均スコア）×１００ベースライン平均スコア
対象の改善／悪化の百分率＝（ベースラインから改善／悪化した対象の数）×１００対象の総数
【０４４５】
ベースラインからの変化に関して、処置細胞間の比較を４週目に行った。ベースラインからの平均変化が２つの処置細胞間で等しいという帰無仮説を、全てのパラメーター（治験責任医師の全般的改善アセスメントを除く）に関して、各適用可能なベースライン後時点で、美容的有効性評定パラメーター、ざ瘡評定、ざ瘡計数、毛穴数（計数）の画像分析、および忍容性評価に関してはＷｉｌｃｏｘｏｎの順位和検定、ならびにセブメーター測定および毛穴の画像分析（覆われた総面積および毛穴の平均的深さ）に関しては２標本ｔ検定を使用して検定した。
【０４４６】
退行期間に関しては、Ｗｉｌｃｏｘｏｎの順位和検定を使用した治験責任医師の全般的改善アセスメントの検定を含む同様の分析を、４週目からの変化に関して５週目に実施した。
【０４４７】
総合的な統計結果ならびに年齢（１２〜１５、１６〜１８、１９〜２８、２９およびそれを超える）、性別（男性／女性）、成人ざ瘡（１９歳およびそれを超える）および思春期ざ瘡（１９歳未満）、ならびにＦｉｔｚｐａｔｒｉｃｋ皮膚タイプ（ＩＩＩ、ＩＶ、およびＶ［標本サイズが小さいために、ＩおよびＩＩの分析は行われなかった］）によって層別された統計結果を、美容的有効性パラメーターの臨床評定、ＰＩＨ／ＰＩＥ病変評定、ざ瘡評定、ざ瘡計数、治験責任医師の全般的改善アセスメント、セブメーター測定、および毛穴サイズの画像分析に関して示す。さらに、処置による人口統計的集計を、年齢、性別、成人および思春期ざ瘡、ならびにＦｉｔｚｐａｔｒｉｃｋ皮膚タイプに関して示す。
【０４４８】
ざ瘡評定に関しては、２種類のスケール（Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓのスケール３およびＦＤＡスケール１）を使用したスコアに関するＳｐｅａｒｍａｎの順位相関係数を、適用可能な時点および処置ごとに計算した。
【０４４９】
相関係数は０に等しいという帰無仮説に関する統計的検定を行った。処置比較は行わなかった。同様の相関係数を、改良されたＧｒｉｆｆｉｔｈｓのスコアに関して、ＶＩＳＩＡおよびセルフィー画像から計算した。
【０４５０】
各対象による１６個の質問に対する、ベースライン時ならびに２、４、および５週目の回答を含むＳｋｉｎＤｅｘデータ、すなわち対象によって報告されたクオリティーオブライフをアセスメントするアウトカムを得た。計数および百分率を含む頻度表を、ＳｋｉｎＤｅｘデータに対して得た。年齢、性別、成人および思春期ざ瘡、ならびにＦｉｔｚｐａｔｒｉｃｋタイプによるデータの分析を含む臨床評定データに関しては、同様の分析を行った。
【０４５１】
Ｓｋｉｎｄｅｘに関する情報は、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｒｅｓｅａｒｃｈｇａｔｅ．ｎｅｔ／ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ／５１６４６９０７＿Ｕｓｉｎｇ＿ｔｈｅ＿Ｓｋｉｎｄｅｘ−１６＿ａｎｄ＿Ｃｏｍｍｏｎ＿Ｔｅｒｍｉｎｏｌｏｇｙ＿Ｃｒｉｔｅｒｉａ＿ｆｏｒ＿Ａｄｖｅｒｓｅ＿Ｅｖｅｎｔｓ＿ｔｏ＿ａｓｓｅｓｓ＿ｒａｓｈ＿ｓｙｍｐｔｏｍｓ＿ｒｅｓｕｌｔｓ＿ｏｆ＿ａ＿ｐｏｏｌｅｄ−ａｎａｌｙｓｉｓ＿（Ｎ０９９３）で見られる。
【０４５２】
対象によって１、２、３、４、および５週目に回答された３７個の質問に対する回答を含む調査を得た。
【０４５３】
１から１９の質問に関して、回答は０（悪化）から６（改善）にまで及んだ。残りの質問に関しては、回答は−１（いいえ／変化がない）から１（はい／好ましい変化）にまで及んだ。
【０４５４】
各回答の選択肢を選択した対象の計数および百分率を含む頻度表を、調査データに対して得た。さらに、２項（符号）検定を実施し、各時点での質問ごとに、組み合わされた所定の有利な／肯定的な回答の割合が組み合わされた所定の不利な／否定的な回答と一致するかどうかを検定した。Ｆｉｓｈｅｒの正確確率検定を使用して、処置比較を実施した。質問１番〜１９番に関しては、検定する帰無仮説は、有利な／不利な／中間の回答の割合が処置間で等しいというものである。残りの質問に関しては、検定する帰無仮説は、肯定的な／否定的な回答の割合が処置間で等しいというものである。データの分析をまた、年齢、性別、成人および思春期ざ瘡、ならびにＦｉｔｚｐａｔｒｉｃｋタイプに従って実施した。
【０４５５】
全ての統計的検定は、有意水準アルファ＝０．０５で両側であった。ｐ値は小数点第３位（０．０００）まで報告する。多重検定補正は、研究において考慮しなかった。ＳＡＳソフトウェアバージョン９．３０シリーズ（ＳＡＳ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）を使用して統計分析を実施した。
【０４５６】
臨床評定および生体計測を、Ｓｔｅｐｈｅｎｓエレクトリックデータキャプチャー（ＥＤＣ）システムを使用して記録した。ＳｔｅｐｈｅｎｓＥＤＣは、電子フォーマットで臨床データを収集するために考案されたコンピューター化システムである。ＥＤＣの３つの重要な態様は、データ入力のためのグラフィカルユーザーインタフェース、ユーザーデータをチェックするためのバリデーションコンポーネント、および収集されたデータを分析するためのレポーティングツールからなる。
結果
画像によるざ瘡の臨床評定
【０４５７】
ＡＯ＋Ｍｉｓｔ（Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ  ｅｕｔｒｏｐｈａ調製物）を使用した対象に関しては、ベースラインスコアと比較したときに、４および５週目でＦＤＡスケール１を使用し、かつ５週目でＧｒｉｆｆｉｔｈｓのスケール３を使用したところ、ＶＩＳＩＡ画像におけるざ瘡評定スコアに統計的に有意な減少（改善）があった。ざ瘡評定スコアに関するベースラインからの変化に基づき試験物質間で比較することによって、４週目のＦＤＡスケール１を使用したＶＩＳＩＡ画像によるざ瘡評定に、ＡＯ＋Ｍｉｓｔ（Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ  ｅｕｔｒｏｐｈａ調製物）に有利となる統計的に有意な差が示された。
【０４５８】
画像による評定の結果から相関係数を分析することによって、ベースライン、４週目、および５週目のＶＩＳＩＡ画像におけるざ瘡評定スコア間に統計的に有意な正の相関（相関係数は０．４９５〜０．８４７の範囲である）が示され、自撮り写真は、臨床試用中の進行の文書化ための有望な試みであり得ることが示唆された。
ざ瘡計数
全対象
【０４５９】
ＡＯ＋  Ｍｉｓｔ（Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ  ｅｕｔｒｏｐｈａ調製物）を使用した対象は、ベースライン計数と比較したときに、４および５週目の丘疹および炎症性ざ瘡に関してならびに４週目の全般的な病変に関して、合計４カ所の評定された領域（額、左頬、顎、および右頬）の計数に統計的に有意な減少（改善）を有していた。プラセボを使用した対象は、ベースライン計数と比較したときに、４および５週目の開放面皰、閉鎖面皰、非炎症性ざ瘡、および全般的な病変に関してならびに４週目の丘疹および炎症性ざ瘡に関して、合計４カ所の評定された領域の計数に統計的に有意な減少（改善）を有していた。合計４カ所の評定された領域のざ瘡計数に関するベースラインからの変化に基づき試験物質間で比較することによって、４週目の閉鎖面皰に、プラセボに有利となる統計的に有意な差が示された。
成人ざ瘡の対象
【０４６０】
ＡＯ＋Ｍｉｓｔ（Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ  ｅｕｔｒｏｐｈａ調製物）を使用した対象は、ベースライン計数と比較したときに、４および５週目の丘疹、炎症性ざ瘡、および全般的な病変に関して合計４カ所の評定された領域（額、左頬、顎、および右頬）のざ瘡計数に統計的に有意な減少（改善）を有していた。プラセボを使用した対象は、ベースライン計数と比較したときに、４および５週目の閉鎖面皰、非炎症性ざ瘡、および全般的な病変に関してならびに５週目の開放面皰に関して、合計４カ所の評定された領域のざ瘡計数に統計的に有意な減少（改善）を有していた。合計４カ所の領域のざ瘡計数に関するベースラインからの変化に基づき試験物質間で比較することによって、４週目の丘疹に、ＡＯ＋Ｍｉｓｔ（Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ  ｅｕｔｒｏｐｈａ調製物）に有利となる、かつ５週目の非炎症性ざ瘡に、プラセボに有利となる統計的に有意な差が示された。
ＰＩＨ／ＰＩＥ病変評定
全対象
【０４６１】
ＡＯ＋Ｍｉｓｔ（Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ  ｅｕｔｒｏｐｈａ調製物）またはプラセボを使用した対象は、ベースラインスコアと比較したときに、４および５週目における病変１および病変２の色の濃さおよびサイズに関するＰＩＨ／ＰＩＥ病変評定スコアに統計的に有意な減少（改善）を有していた。ＰＩＨ／ＰＩＥ病変評定スコアに関するベースラインからの変化に基づき試験物質間で比較することによって、４週目における病変１のサイズに、プラセボに有利となる統計的に有意な差が示された。
成人ざ瘡の対象
【０４６２】
ＡＯ＋Ｍｉｓｔ（Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ  ｅｕｔｒｏｐｈａ調製物）またはプラセボを使用した対象は、ベースラインスコアと比較したときに、４および５週目における病変１の色の濃さ、ならびに５週目における病変１のサイズ、ならびに４週目における病変１のサイズに関するＰＩＨ／ＰＩＥ病変評定スコアに、プラセボにとって統計的に有意な減少（改善）を有していた。ＰＩＨ／ＰＩＥ評定スコアに関するベースラインからの変化に基づき試験物質間で比較することによって、統計的に有意な差は示されなかった。
ＳｋｉｎＤｅｘ１６
【０４６３】
ＡＯ＋Ｍｉｓｔ（Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ  ｅｕｔｒｏｐｈａ調製物）を使用した対象に関するＳｋｉｎＤｅｘ１６データからの結果によって、ベースラインスコアと比較したときに、以下の問診および時点に関する回答スコアに統計的に有意な減少（改善）が示された。
−  自身の皮膚状態に関して心配がある−２週目
−  自身の皮膚状態の外観−２、４、および５週目
−  自身の皮膚状態に関して不満がある−２および４週目
−  自身の皮膚状態に関して恥ずかしく思う−２および５週目
−  自身の皮膚状態に関して悩んでいることがある−２および４週目
【０４６４】
プラセボを使用した対象に関する結果によって、ベースラインスコアと比較したときに、４週目の問診「皮膚状態が持続する／再発する」に関する回答スコアに統計的に有意な増加（悪化）が示された。このことを図２Ａに示す。グラフに表示されるＡＯ＋Ｍｉｓｔのバーは、（左から）１番目および（左から）３番目である。グラフに表示されるプラセボのバーは、（左から）２番目および（左から）４番目である。図３Ａはまた、ＡＯ＋Ｍｉｓｔの使用で、２週目、４週目、および６週目における皮膚状態の持続が改善されたことを示す。ＡＯ＋Ｍｉｓｔデータを表示するラインは、プラセボデータを表示するラインよりも上に存在する。
【０４６５】
ＳｋｉｎＤｅｘ回答スコアに関するベースラインからの変化に基づき試験物質間で比較することによって、以下の示された時点における問診に、ＡＯ＋Ｍｉｓｔ（Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ  ｅｕｔｒｏｐｈａ調製物）に有利となる統計的に有意な差が示された。
−  自身の皮膚状態に痛みがある−２週目
−  自身の皮膚状態が持続する／再発する−４週目
−  自身の皮膚状態に関して心配がある−５週目
−  自身の皮膚状態の外観−２、４、および５週目
忍容性評価
全ての対象および成人のざ瘡
【０４６６】
ＡＯ＋Ｍｉｓｔ（Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ  ｅｕｔｒｏｐｈａ調製物）またはプラセボを使用によって、ベースラインスコアと比較したときに４および５週目の、または５週目を４週目と比較したときに退行期間中の、紅斑、落屑、浮腫、灼熱感、刺痛感、および掻痒感に関する忍容性評価スコアに、任意の統計的に有意な増加（悪化）は生じなかった。
【０４６７】
忍容性評価スコアに関するベースラインからの変化に基づき試験物質間で比較することによって、４および５週目に統計的に有意な差は示されなかった。
・美容的有効性パラメーターの臨床評定
全対象
【０４６８】
試験物質であるＡＯ＋Ｍｉｓｔ（Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ  ｅｕｔｒｏｐｈａ調製物）を４週間使用した対象は、ベースラインスコアと比較したときに、５週目（退行）のしみに関するかつ４および５週目（退行）の視覚的なかつ触覚的な滑らかさに関する臨床評定スコアに、統計的に有意な減少（改善）を有していた。
【０４６９】
プラセボを使用した対象は、ベースラインスコアと比較したときに、４週目の油性の外観（てかりおよび感触）に関する臨床評定スコアに統計的に有意な減少（改善）を有していた。臨床評定スコアに関するベースラインからの変化に基づき試験物質間で比較することによって、５週目のしみに、ＡＯ＋Ｍｉｓｔ（Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ  ｅｕｔｒｏｐｈａ調製物）に有利となる統計的に有意な差が示された。
成人ざ瘡の対象
【０４７０】
ＡＯ＋Ｍｉｓｔ（Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ  ｅｕｔｒｏｐｈａ調製物）を使用した対象は、ベースラインスコアと比較したときに、５週目のしみにかつ４週目の触覚的な滑らかさに関する臨床評定スコアに統計的に有意な減少（改善）を有していた。臨床評定スコアに関するベースラインからの変化に基づき試験物質間で比較することによって、５週目のしみ、および皮膚の色合い（色）の均質性に、ＡＯ＋Ｍｉｓｔ（Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ  ｅｕｔｒｏｐｈａ調製物）に有利となる統計的に有意な差が示された。
セブメーター測定
全ての対象および成人のざ瘡
【０４７１】
表１５、１６、および１７は、セブメーター測定に関しており、ＡＯＢを塗布するとざ瘡患者の顔における皮脂レベルが低下することを示す。過剰な皮脂は、ざ瘡の一因となると考えられている。
【表１５】
2018524351.tif 000019
【表１６】
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【表１７】
2018524351.tif 000021
【０４７２】
毛穴の画像分析パラメーター
試験物質のいずれかに関するベースライン値と比較したときに、４週目の毛穴の数、毛穴によって覆われた総面積、および毛穴の平均的深さに関する画像分析データに、統計的に有意な変化はなかった。
【０４７３】
画像分析データ関するベースラインからの変化に基づき試験物質間で比較することによって、４週目の毛穴の平均的深さに、プラセボに有利となる統計的に有意な差が示された。
考察および結論
【０４７４】
この４週間の多部位二重盲検無作為化プラセボ対照化粧品の試用からの総合的な結果は、試験物質であるＡＯ＋Ｍｉｓｔ（Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ  ｅｕｔｒｏｐｈａ調製物）の使用が軽度〜中等度のざ瘡の処置に安全かつ効果的であると実証されたことを示す。疾患の重症度と、対象によって報告されたクオリティーオブライフと、炎症性病変計数の数との全てが４週間の処置の過程でＡＯ＋処置群において改善を示した。ＡＯ＋処置は、成人ざ瘡状態に特に有益な効果を有すると思われた。
【０４７５】
研究には標準ＦＤＡ治験責任医師の全般的ざ瘡（ＩＧＡ）スケール１を使用し、完全な盲検化状態下でＶＩＳＩＡ画像を使用してざ瘡状態をアセスメントした。ＶＩＳＩＡ画像のざ瘡評定からの結果によって、ＡＯ＋Ｍｉｓｔ（Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ  ｅｕｔｒｏｐｈａ調製物）を使用した対象は、ベースラインスコアと比較したときに、４および５週目でＦＤＡスケール１を使用したＩＧＡスコアに、かつ５週目でＧｒｉｆｆｉｔｈｓのスケール３を使用したスコアに、統計的に有意な減少（改善）を有していたことが示される。ベースラインからの変化に基づき試験物質間で比較することによって、４週目のＦＤＡスケール１を使用したざ瘡評定に、ＡＯ＋Ｍｉｓｔ（Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ  ｅｕｔｒｏｐｈａ調製物）に有利となる統計的に有意な差が示された。（図１を参照のこと）。
【０４７６】
ざ瘡計数の結果によって、ＡＯ＋Ｍｉｓｔ（Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ  ｅｕｔｒｏｐｈａ調製物）を使用すると、ベースライン計数と比較したときに、４および５週目の丘疹および炎症性病変の計数に、かつ４週目の全般的な病変計数に統計的に有意な減少（改善）が生じることが示された。ＡＯ＋Ｍｉｓｔ（Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ  ｅｕｔｒｏｐｈａ調製物）とプラセボとの間に統計的に有意な差は観察されなかったが、データによって、ＡＯ＋Ｍｉｓｔ（Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ  ｅｕｔｒｏｐｈａ調製物）を使用した成人対象においてざ瘡計数がより大きくかつより持続的に低減することが示された。
【０４７７】
研究の試験製品であるＡＯ＋Ｍｉｓｔは生Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ  ｅｕｔｒｏｐｈａを含み、汗中のアンモニアを酸性の亜硝酸塩および一酸化窒素に局所的に変換する。この機構は、局所的炎症を低減することによって、かつ病原性細菌の繁殖を低減することによって、ざ瘡の主な原因を潜在的に軽減することが期待される。比較的短い４週間で、丘疹および炎症性病変ならびにＶＩＳＩＡのＩＧＡ評定が低減することは、ＡＯ＋Ｍｉｓｔの予測される機構と一致する。図１は、プラセボと比較したときに、ＡＯ＋Ｍｉｓｔの使用によって４週目に改善されたＩＧＡの結果を示す。グラフに表示されるＡＯ＋Ｍｉｓｔのバーは、（左から）１番目および（左から）３番目である。グラフに表示されるプラセボのバーは、（左から）２番目および（左から）４番目である。
【０４７８】
前臨床研究では、高濃度のＮｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ  ｅｕｔｒｏｐｈａが、ざ瘡をもたらす生物であるＰｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｎｅに対して抗微小生物効果を増強すること、および皮膚の治癒を加速することが示された。対象によって報告されたアウトカムを、Ｓｋｉｎｄｅｘ１６クオリティーオブライフ調査を使用して測定した。ＡＯ＋Ｍｉｓｔは、自身の疾患に関する対象の感情面のアセスメントを捉えた質問群での変化（改善）と関連していた。具体的には、皮膚状態に痛みがある（２週目）、皮膚状態が持続する／再発する（４週目）（図２Ａを参照のこと）、皮膚状態に関して心配がある（５週目）、および皮膚状態の外観（２、４、および５週目）に、ＡＯ＋Ｍｉｓｔ（Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ  ｅｕｔｒｏｐｈａ調製物）に有利となる統計的に有意な改善が観察された。図２Ｂで認めることができるように、皮膚状態の外観は有意に改善された。グラフに表示されるＡＯ＋Ｍｉｓｔのバーは、（左から）１番目および（左から）３番目である。グラフに表示されるプラセボのバーは、（左から）２番目および（左から）４番目である。図３Ｂはまた、ＡＯ＋Ｍｉｓｔの使用で、２週目、４週目、および６週目における皮膚状態の外観が改善されたことを示す。ＡＯ＋Ｍｉｓｔデータを表示するラインは、プラセボデータを表示するラインよりも上に存在する。
【０４７９】
ＡＯ＋  Ｍｉｓｔ（Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ  ｅｕｔｒｏｐｈａ調製物）の使用に関する臨床評定の結果によって、ベースラインスコアと比較したときに、４および５週目で視覚的なかつ触覚的な滑らかさに関する、かつベースラインスコアおよびプラセボと比較したときに、５週目でしみに関する臨床評定スコアに統計的に有意な減少（改善）が示された。
【０４８０】
試験物質であるＡＯ＋Ｍｉｓｔ（Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ  ｅｕｔｒｏｐｈａ調製物）の使用は、対象による忍容性が非常に良好であり、ベースラインスコアと比較したときに、４週目の紅斑、落屑、浮腫、灼熱感、刺痛感、および掻痒感に関する臨床評定スコアにおいて統計的に有意な増加（悪化）を伴わなかった。
【０４８１】
ＡＥの発生率は約２％であり、約３，０００名のＡＯ＋Ｍｉｓｔの使用者からの自発報告による発生率と一致する。この安全性忍容性プロファイルは、女性および青年を含む多数の母集団にとって魅力的なものとなり得る。
【０４８２】
本臨床試用は、試用の過程で顔のざ瘡状態を捉えるための自撮り写真（「セルフィー」）を使用した最初の臨床試用のうちの１つである。自撮り写真が臨床的アセスメントに十分な品質のものであるかどうかを決定するために、対象によって撮影された写真と診療所で撮影されたＶＩＳＩＡ−ＣＲ画像とを、治療内容を知らされていない訓練を受けた評定者によって評価した。評定の結果による相関係数を分析することによって、４週目、および５週目の、（Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓのスケール３を使用した）ＶＩＳＩＡ画像によるざ瘡評定スコアと（Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓのスケール３を使用した）セルフィー画像によるざ瘡評定スコアとの間に統計的に有意な正の相関（相関係数は０．６９２〜０．８４７の範囲である）が示され、対象による自撮り写真は、臨床試用中の進行の文書化のための有望な試みであり得ることが示唆された。
引用文献
1.  U.S.  Food  and  Drug  Administration.  Guidance  for  industry:  acne  vulgaris:  developing  drugs  for  treatment.  September  2005.  http://www.fda.gov.
2.  Shai,  A.,  Maibach,  HI,  Baran,  R.  Baran.  Acne  in  Handbook  of  Cosmetic  skin  Care.  Publisher  Martin  Duntiz  Ltd.,  Chapter  9,  81-100,  2001.
3.  Griffiths  CE,  Wang  TS,  Hamilton  TA,  Voorhees  JJ,  Ellis  CN.  A  photonumeric  scale  for  the  assessment  of  cutaneous  photodamage.  Arch  Dermatol.  1992;128(3):347-351.
4.  Rizer,  RL,  Mills,  OH,  Trookman,  NS.  The  assessment  of  acne:  a  re-evaluation  of  grading  strategies.  Scientific  Poster,  Annual  Meeting  of  the  Am.  Acad.  Dermatol  (2001).
参照による組込み
【０４８３】
本明細書において挙げられるすべての刊行物および特許は、個々の刊行物または特許それぞれが具体的にかつ個々に示され参照によって組み込まれたように、参照によってその全体が組み込まれるものとする。
【０４８４】
本発明の特定の実施形態が考察されてきたが、上記の明細書は例示であり、制限するものではない。本発明の多くの変形は、本明細書および下記の特許請求の範囲を検討された場合に当業者には明らかになるであろう。本発明のすべての範囲は、均等物の全範囲とともに特許請求の範囲を、かつこのような変形とともに本明細書を参照することによって決定されるべきである。
【０４８５】
ある特定の実施形態は以下の特許請求の範囲内である。
【図１】
2018524351.tif 000022
【図２】
2018524351.tif 000023
【図３】
2018524351.tif 000024
【図４】
2018524351.tif 000025
【国際調査報告】
2018524351.tif 000026
2018524351.tif 000027