(57)【要約】Ｌ−ＢＰＡの調製方法は、以下の工程を含む。・アミン末端保護の（Ｓ）−４−ハロフェニルアラニン、ホウ素化剤、グリニャール試薬およびビス（２−メチルアミノエチル）エーテルを反応させて反応混合物を得る工程であって、前記反応混合物は、アミン末端保護の（Ｓ）−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンを含み、前記アミン末端保護の（Ｓ）−４−ハロフェニルアラニンは下記式Ｉで示される構造を有し、前記アミン末端保護の（Ｓ）−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンは下記式ＩＩで示される構造を有し、かつ式Ｉおよび式ＩＩにおいて、Ｒ２は保護基である工程。2018525398.tif 000020・前記反応混合物から分離されて前記アミン末端保護の（Ｓ）−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンを得る工程。・前記アミン末端保護の（Ｓ）−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンを脱保護してＬ−ＢＰＡを調製する工程であって、前記Ｌ−ＢＰＡは、上記式ＩＩＩで示される構造を有する工程。
2018525398.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アミン末端保護の（Ｓ）−４−ハロフェニルアラニン、ホウ素化剤、グリニャール試薬およびビス（２−メチルアミノエチル）エーテルを反応させて反応混合物を得る工程であって、前記反応混合物は、アミン末端保護の（Ｓ）−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンを含み、前記アミン末端保護の（Ｓ）−４−ハロフェニルアラニンは下記式Ｉで示される構造を有し、前記アミン末端保護の（Ｓ）−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンは下記式ＩＩで示される構造を有し、かつ式Ｉおよび式ＩＩにおいて、Ｒ２は保護基である工程と、
【化１】
2018525398.tif 000016
前記反応混合物から分離されて前記アミン末端保護の（Ｓ）−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンを得る工程と、
前記アミン末端保護の（Ｓ）−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンを脱保護してＬ−ＢＰＡを調製する工程であって、前記Ｌ−ＢＰＡは、上記式ＩＩＩで示される構造を有する工程と、を含むことを特徴とする、
Ｌ−ＢＰＡの調製方法。
【請求項２】
式ＩにおけるＲ１はヨードまたはブロマイドであり、式Ｉおよび式ＩＩにおけるＲ２は、ｔ−ブトキシカルボニル、トリチル、３，５−ジメトキシフェニルイソプロポキシカルボニル、２−（４−ビフェニル）イソプロポキシカルボニルおよび２−ニトロフェニルスルホキシドからなるグループから選択された１つであり、ホウ素化剤は、ホウ酸トリアルキルであり、グリニャール試薬は、塩化アルキルマグネシウムまたは臭化アルキルマグネシウムまたは芳香族塩化マグネシウムまたは芳香族マグネシウムブロミドであることを特徴とする、
請求項１に記載のＬ−ＢＰＡの調製方法。
【請求項３】
アミン末端保護の（Ｓ）−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニン、ホウ素化剤、グリニャール試薬およびビス（2-メチルアミノエチル）エーテルを反応させて反応混合物を得る工程は、
０℃〜６０℃の温度で、アミン末端保護の（Ｓ）−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニン、ホウ素化剤、グリニャール試薬およびビス（2-メチルアミノエチル）エーテルを反応させて反応混合物を得る工程を含むことを特徴とする、
請求項１または２に記載のＬ−ＢＰＡの調製方法。
【請求項４】
前記アミン末端保護の（Ｓ）−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンの保護基を脱保護して（Ｓ）−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンを調製する工程は、
０℃〜６０℃の温度で、前記アミン末端保護の（Ｓ）−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンの保護基を脱保護して（Ｓ）−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンを調製する工程を含むことを特徴とする、
請求項１または２に記載のＬ−ＢＰＡの調製方法。
【請求項５】
【化２】
2018525398.tif 000017
前記ホウ素化剤は９５％以上の１０Ｂ純度を有し、かつ前記アミン末端保護の（Ｓ）−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンはアミン末端保護の（Ｓ）−４−（１０Ｂ）ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンであり、前記アミン末端保護の（Ｓ）−４−（１０Ｂ）ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンは上記式ＩＶで示される構造を有し、前記Ｌ−ＢＰＡはＬ−１０ＢＰＡであり、前記Ｌ−１０ＢＰＡは上記式Ｖで示される構造を有することを特徴とする、
請求項１または２に記載のＬ−ＢＰＡの調製方法。
【請求項６】
【化３】
2018525398.tif 000018
（Ｓ）−４−ハロフェニルアラニンのアミン末端を保護して前記アミン末端保護の（Ｓ）−４−ハロフェニルアラニンを調製し、前記（Ｓ）−４−ハロフェニルアラニンは上記式ＶＩで示される構造を有することを特徴とする、
請求項１または２に記載のＬ−ＢＰＡの調製方法。
【請求項７】
前記（Ｓ）−４−ハロフェニルアラニンのアミン末端を保護して前記アミン末端保護の（Ｓ）−４−ハロフェニルアラニンを調製する工程は、
前記（Ｓ）−４−ハロフェニルアラニン、１，４−ジオキサン、水、水酸化ナトリウムおよびジ−ｔ−ブチルジカーボネートを反応容器に添加して反応させる工程と、
ＰＨを２以下に調整し、前記アミン末端保護の（Ｓ）−４−ハロフェニルアラニンを結晶化させる工程と、
第一抽出溶媒を用いて分離し、前記アミン末端保護の（Ｓ）−４−ハロフェニルアラニンを得る工程と、を含むことを特徴とする、
請求項６に記載のＬ−ＢＰＡの調製方法。
【請求項８】
前記Ｌ−ＢＰＡの調製方法は、さらに、第一有機溶媒で、ホウ酸、硫酸およびｎ−ブタノールを反応させて前記ホウ酸トリアルキルを調製する工程を含むことを特徴とする、
請求項２に記載のＬ−ＢＰＡの調製方法。
【請求項９】
前記反応混合物から分離して前記アミン末端保護の（Ｓ）−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンを得る工程は、
前記反応混合物に第二有機溶媒および酸性溶液を添加し、ＰＨを５以下に調整し、かつ抽出して有機相を得る工程と、
前記有機相にアルカリ性溶液を添加し、ＰＨを７．１〜１４に調整する工程と、
第二抽出溶媒を使用して分離し、前記アミン末端保護の（Ｓ）−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンを得る工程と、を含むことを特徴とする、
請求項１または２に記載のＬ−ＢＰＡの調製方法。
【請求項１０】
前記アミン末端保護の（Ｓ）−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンの保護基を脱保護してＬ−ＢＰＡを調製する工程は、
前記アミン末端保護の（Ｓ）−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニン、水、酸性溶液および第三有機溶媒を反応容器に加える工程と、
ＰＨを６．１５〜６．２５に調製し、前記Ｌ−ＢＰＡを調製する工程と、を含むことを特徴とする、
請求項１または２に記載のＬ−ＢＰＡの調製方法。
【請求項１１】
アミン末端保護の（Ｓ）−４−ハロフェニルアラニン、ホウ素化剤およびグリニャール試薬を反応させて反応混合物を得る工程であって、前記反応混合物は、アミン末端保護の（Ｓ）−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンを含み、前記アミン末端保護の（Ｓ）−４−ハロフェニルアラニンは下記式Ｉで示される構造を有し、前記アミン末端保護の（Ｓ）−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンは下記式ＩＩで示される構造を有し、かつ式Ｉおよび式ＩＩにおいて、Ｒ２は保護基である工程と、
【化４】
2018525398.tif 000019
前記反応混合物から分離されて前記アミン末端保護の（Ｓ）−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンを得る工程と、
前記アミン末端保護の（Ｓ）−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンを脱保護してＬ−ＢＰＡを調製する工程であって、前記Ｌ−ＢＰＡは、式ＩＩＩで示される構造を有する工程と、を含むことを特徴とする、
Ｌ−ＢＰＡの調製方法。
【請求項１２】
式ＩにおけるＲ１はヨードまたはブロマイドであり、式Ｉおよび式ＩＩにおけるＲ２は、ｔ−ブトキシカルボニル、トリチル、３，５−ジメトキシフェニルイソプロポキシカルボニル、２−（４−ビフェニル）イソプロポキシカルボニルおよび２−ニトロフェニルスルホキシドからなるグループから選択された１つであり、ホウ素化剤は、ホウ酸トリアルキルであり、グリニャール試薬は、塩化アルキルマグネシウムまたは臭化アルキルマグネシウムまたは芳香族塩化マグネシウムまたは芳香族マグネシウムブロミドであることを特徴とする、
請求項１１に記載のＬ−ＢＰＡの調製方法。
【請求項１３】
アミン末端保護の（Ｓ）−４−ハロフェニルアラニン、ホウ素化剤およびグリニャール試薬を反応させて反応混合物を得る工程は、
０℃〜３０℃の温度で、アミン末端保護の（Ｓ）−４−ハロフェニルアラニン、ホウ素化剤およびグリニャール試薬を反応させて反応混合物を得る工程を含むことを特徴とする、
請求項１１または１２に記載のＬ−ＢＰＡの調製方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はホウ素中性子捕捉療法用のホウ素含有薬物の調製方法に関し、特にＬ−ＢＰＡの調製方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
原子科学の発展に伴い、例えば、コバルト60、線形加速器、電子ビームなどの放射線療法は、既に癌治療の主要な手段の一つとなっている。しかしながら、伝統的な光子または電子治療は、放射線自体の物理的な条件によって制限され、腫瘍細胞を殺すと共に、ビーム経路上の多くの正常組織を損傷する可能性がある。また、腫瘍細胞が放射線への感受性が異なるため、伝統的な放射線療法は耐放射線性の悪性腫瘍（例えば：多形性膠芽腫（ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ  ｍｕｌｔｉｆｏｒｍｅ）、黒色腫（ｍｅｌａｎｏｍａ）への治療効果が高くない。
【０００３】
腫瘍周囲の正常組織への放射線損傷を低減させるために、化学療法（ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ）の標的療法の概念は、放射線療法に適用される。しかし、癌細胞の高い耐放射線性の腫瘍細胞に対し、現在積極的に高い相対的生物学的効果（ｒｅｌａｔｉｖｅ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓ、ＲＢＥ）を有する放射線源が開発され、例えば、陽子治療、重粒子治療、中性子捕捉療法などである。ここで、中性子捕捉療法は上記二種類の概念を結合し、例えば、ホウ素中性子捕捉療法であり、ホウ素含有の薬物が腫瘍細胞における特定の凝集により、正確な中性子ビーム制御と共に、伝統的な放射線よりも優れた癌治療の選択肢を提供する。
【０００４】
ホウ素中性子捕捉療法（Ｂｏｒｏｎ  Ｎｅｕｔｒｏｎ  Ｃａｐｔｕｒｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ、ＢＮＣＴ）は、ホウ素含有（１０Ｂ）薬物が熱中性子に対して高い捕捉断面を有する特性を利用し、１０Ｂ（ｎ、α）７Ｌｉ中性子捕捉および核分裂反応により４Ｈｅおよび７Ｌｉという２つの重い荷電粒子を発生する。２つの荷電粒子の平均エネルギーは約２．３３ＭｅＶであり、高直線性転送（Ｌｉｎｅａｒ  Ｅｎｅｒｇｙ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ、ＬＥＴ）、短距離という特性を有し、α粒子の線形エネルギー転送および距離はそれぞれ１５０ｋｅＶ  ／μｍ、８μｍであり、７Ｌｉ重い荷電粒子は１７５ｋｅＶ／μｍ、５μｍであり、２つの粒子の合計の範囲は約１つの細胞のサイズに相当し、したがって、生物に対する放射線損傷は細胞レベルに限定され、ホウ素含有薬物が腫瘍細胞に選択的に凝集すると、適切な中性子源を結合し、正常組織にあまりにも多くの損傷を引き起こさない前提で、腫瘍細胞の局所殺傷を達成することができる。
【０００５】
ホウ素中性子捕捉療法の有効性は、腫瘍細胞の位置でのホウ素含有薬物の濃度および熱中性子の数に依存し、したがって、バイナリ放射線癌療法（ｂｉｎａｒｙ  ｃａｎｃｅｒ  ｔｈｅｒａｐｙ）とも呼ばれ、それにより、中性子源の開発に加えて、ホウ素含有薬物の開発は、ホウ素中性子捕捉療法の研究において重要な役割を果たす。
【０００６】
４−（１０Ｂ）ボロノ−Ｌ−フェニルアラニン（４−（１０Ｂ）ｂｏｒｏｎｏ−Ｌ−ｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ、Ｌ−１０ＢＰＡ）は、現在で、ホウ素中性子捕捉療法Ｂｏｒｏｎ  Ｎｅｕｔｒｏｎ  Ｃａｐｔｕｒｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ、ＢＮＣＴ）を利用して癌を治療できる既知の重要なホウ素含有薬物である。
【０００７】
したがって、現在様々なＬ−ＢＰＡの合成方法が開発されている。以下の式（Ａ）に示すとおり、従来技術のＬ−ＢＰＡの合成方法は結合（ａ）および結合（ｂ）を形成する２つの方法がある。
【０００８】
【化１】
2018525398.tif 000003
ここで、結合（ａ）の形成を利用してＬ−ＢＰＡを合成する方法はボロノ基（ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｌｂｏｒｙｌ  ｇｒｏｕｐまたはｂｏｒｏｎｏ  ｇｒｏｕｐ）含有の置換基をフェニルアラニンの骨格に導入され、これによりアミド置換基のパラ位に炭素-ホウ素結合を形成してＬ−ＢＰＡを形成する。
【０００９】
Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９９８、６３、８０１９はパラジウム触媒アミン末端保護の（Ｓ）−４−ヨードベンズアラニンを用いてジボロン化合物（ｄｉｂｏｒｏｎ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ）とクロスカップリング反応を行う方法を開示し、前記アミン末端保護の（Ｓ）−４−ヨードベンズアラニン（例えば、（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−ヨードフェニルアラニン（（Ｓ）−Ｎ−Ｂｏｃ−４−ｉｏｄｏｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ））はジボロン化合物（例えば、（ビス（ピナコラト）ジボロン））とクロスカップリング反応によって（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−ピナコラトボロノフェニルアラニン（（Ｓ）−Ｎ−Ｂｏｃ−４−ｐｉｎａｃｏｌａｔｏｂｏｒｏｎｏ  ｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ）のアミン末端保護の（Ｓ）−４−ホウ酸エステルフェニルアラニンが調製され、次に、アミン末端の保護基およびホウ素アルコール末端の置換基を除去し、Ｌ−ＢＰＡの調製を完成する。
【００１０】
しかしながら、１０Ｂリッチのビスジボロンは市販されない化合物を選択するため、この方法は、さらにホウ素化剤を調製する前処理が必要とし、その結果、プロセスの複雑性が高く、かつかかる時間が長く、それにより高収率のＬ−ＢＰＡを調製することができない。さらに、アミン末端保護の（Ｓ）−４−ヨードフェニルアラニンのカルボン酸基は置換基保護によってベンジルエステル基（ｂｅｎｚｙｌ  ｅｓｔｅｒ  ｇｒｏｕｐ）を形成することで、そのプロセス収率を８８％に増加させることができ、しかしながら、このようにＬ−ＢＰＡを製造する手順では、カルボン酸基をさらに脱保護する必要があり、事実上Ｌ−ＢＰＡのプロセスの複雑性を増加する。
【００１１】
したがって、該文献が提供する方法は、ホウ素化剤を調製する前処理に関するだけでなく、より多くのプロセス時間および合成工程を費やしてカルボン酸基の保護および脱保護を完了する必要があり、Ｌ−ＢＰＡを工業的に合成する主な方法ではない。
【００１２】
一方、結合（ｂ）の形成を使用してＬ−ＢＰＡを合成する方法は、アミノ酸をホウ素含有ベンジル断片（ｂｏｒｏｎ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｂｅｎｚｙｌ  ｆｒａｇｍｅｎｔ）またはホウ素含有ベンズアルデヒド断片（ｂｏｒｏｎ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｂｅｎｚａｌｄｅｈｙｄｅ  ｆｒａｇｍｅｎｔ）とカップリング反応させ、Ｌ−ＢＰＡを合成する。Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９９６、６０、６８３は、Ｌ−ＢＰＡのエナンチオ選択的合成方法を開示し、それはボロン酸の環状エーテル（ｃｙｃｌｉｃ  ｅｔｈｅｒｓ  ｏｆ  ｂｏｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）をＬ−バリンキラル誘導体（ｃｈｉｒａｌ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ｆｒｏｍ  Ｌ−ｖａｌｉｎｅ）とカップリング反応させ、Ｌ−ＢＰＡを調製する。しかしながら、この方法は、まず、４−ボロノベンジルブロミド（４−ｂｏｒｏｎｏｂｅｎｚｙｌｂｒｏｍｉｄｅ）からホウ酸の環状エーテル化合物を調製し、次いでＬ−バリンキラル誘導体とカップリング反応させ、かつ後段の合成工程において、アミノ酸に望ましくないラセミ化が発生しやすく、その結果、該方法は、収率が低減しやすい酵素分解工程（ｅｎｚｙｍａｔｉｃ  ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｓｔｅｐ）を経て一定の光学純度を有するＬ−ＢＰＡを得る。
【００１３】
したがって、該文献が提供する方法は、常にホウ素化剤を調製する前処理および酵素分解の後処理などの工程を含み、その結果、該方法に関するプロセスが複雑で、かつかかる時間が長く、高収率のＬ−ＢＰＡを得ることができない。
【００１４】
さらに、１０ホウ素含有のＬ−１０ＢＰＡ（４−（１０Ｂ）ｂｏｒｏｎｏ−Ｌ−ｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ、４−（１０Ｂ）ボロノ−Ｌ−フェニルアラニン）は、腫瘍細胞に蓄積する重要な因子であることが知られ、その後、腫瘍細胞に蓄積するホウ素元素を熱中性子線で照射し、捕捉反応が発生した高エネルギー粒子によって腫瘍細胞を殺し、それにより癌治療の目的を達成する。したがって、１０ホウ素は、Ｌ−１０ＢＰＡがホウ素中性子捕捉療法によって癌を治療する方法とすることができる。
【００１５】
しかしながら、天然に存在するホウ素元素は、約１９．９％の１０ホウ素および約８０．１％の１１ホウ素を含有する。したがって、多くの研究者は、Ｌ−ＢＰＡの合成、特に１０ホウ素リッチのＬ−ＢＰＡの合成に適用できる方法を積極的に開発している。
【００１６】
Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９９８、６３、８０１９は、さらに、１０ホウ素化剤を合成する方法を提供し、該方法は複数の工程を含むため、プロセス中に１０ホウ素リッチ材料の１０ホウ素含有量を大幅に低減しやすい。したがって、該文献が提供する方法は、１０ホウ素リッチのＬ−ＢＰＡの合成には適用されない。
【００１７】
Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９９６、６０、６８３に記載されているように、酵素分解工程を行わない前に、該文献が提供する方法は、一定の光学純度を有するＬ−ＢＰＡを得ることができず、かつ該方法で１０ホウ素化剤を調製するときにも複数の工程を含み、１０ホウ素リッチ材料がプロセス中に変換させる。したがって、該文献が提供する方法は、１０ホウ素リッチのＬ−ＢＰＡの合成には適用されない。
【００１８】
さらに、Ｂｕｌｌ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｊｐｎ．２０００、７３、２３１は、パラジウム触媒の４−ヨード−Ｌ−フェニルアラニンを４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン（一般名：ピナコールボラン（ｐｉｎａｃｏｌｂｏｒａｎｅ））とカップリング反応させる方法を開示する。しかしながら、該文献に、どのように該方法を使用して１０ホウ素リッチのＬ−ＢＰＡを調製する方法について言及していなく、かつ４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサン１０ホウ素ペンテンが市販されず、したがって、該文献が提供する方法は、１０ホウ素リッチのＬ−ＢＰＡの合成には適用されない。
【００１９】
さらに、Ｓｙｎｌｅｔｔ．１９９６、１６７は、ヨードフェニルボレート（ｉｏｄｏｐｈｅｎｙｌｂｏｒａｔｅ）をＬ−セリンの亜鉛誘導体（Ｌ−ｓｅｒｉｎｅ  ｚｉｎｃ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ）とカップリングさせる方法を開示し、該方法は、まずヨードフェニルボレートの調製およびＬ−セリンの亜鉛誘導体の調製などの工程を必要とし、その結果、得られたＬ−ＢＰＡの収率が低い。さらに、この方法が選択する１０ホウ素リッチのトリヨード１０ホウ素および１，３−ジフェニルプロパン−１，３−ジオールは市販されない化合物であり、したがって、該文献が提供する方法は、１０ホウ素リッチのＬ−ＢＰＡの合成には適用されない。
【発明の概要】
【００２０】
プロセスが長すぎる従来技術の欠点を鑑みて、プロセス工程が煩雑であり、かつホウ素化剤を予め調製する必要があり、本発明の一態様は、複雑な精製工程なしに環境に優しいＬ−ＢＰＡ（４−ｂｏｒｏｎｏ−Ｌ−ｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ、４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニン）の調製方法を提供することであり、これにより、時間およびコストを効果的に節約し、かつプロセス効率を向上させる。したがって、本発明の調製方法によって得られたＬ−ＢＰＡは、さらに、化学的純度が高く、光学純度が高いという利点を有する。
【００２１】
本発明の別の態様は、複雑な精製工程を経ず、かつ環境に優しいＬ−１０ＢＰＡ（４−（１０Ｂ）ｂｏｒｏｎｏ−Ｌ−ｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ、４−（１０Ｂ）ボロノ−Ｌ−フェニルアラニン）の調製方法を提供することであり、これにより、時間およびコストを効果的に節約し、かつプロセス効率を向上させる。本発明の実施例における調製方法は、化学的純度が高く、光学純度が高く、同位体純度が高いＬ−１０ＢＰＡの調製に有利である。
【００２２】
本発明の第三態様は、Ｌ−ＢＰＡおよびＬ−１０ＢＰＡの調製に適した方法を提供することであり、それは複雑な精製工程を必要とせず、かつ同時に、時間およびコストを節約し、効率が高く、環境に優しく、および利便性のあるという利点を有する。
【００２３】
前記各態様を達成するために、本発明の一実施例におけるＬ−ＢＰＡ調製方法は、以下の工程を含む：
アミン末端保護の（Ｓ）−４−ハロフェニルアラニン、ホウ素化剤、グリニャール試薬およびビス（２−メチルアミノエチル）エーテルを反応させて反応混合物を得て、そのうち、該反応混合物は、アミン末端保護の（Ｓ）−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンを含み、該アミン末端保護の（Ｓ）−４−ハロフェニルアラニンは下記式Ｉで示される構造を有し、該アミン末端保護の（Ｓ）−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンは下記式ＩＩで示される構造を有し、かつ式Ｉおよび式ＩＩにおいて、Ｒ２は保護基であり、
【００２４】
【化２】
2018525398.tif 000004
該反応混合物から分離されて該アミン末端保護の（Ｓ）−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンを得る。
【００２５】
該アミン末端保護の（Ｓ）−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンを脱保護してＬ−ＢＰＡを調製し、該Ｌ−ＢＰＡは、上記式ＩＩＩで示される構造を有する。
本発明の他の実施例におけるＬ−ＢＰＡ調製方法は、以下の工程を含む：
アミン末端保護の（Ｓ）−４−ハロフェニルアラニン、ホウ素化剤およびグリニャール試薬を反応させて反応混合物を得て、そのうち、前記反応混合物は、アミン末端保護の（Ｓ）−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンを含み、該アミン末端保護の（Ｓ）−４−ハロフェニルアラニンは下記式Ｉで示される構造を有し、該アミン末端保護の（Ｓ）−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンは下記式ＩＩで示される構造を有し、かつ式Ｉおよび式ＩＩにおいて、Ｒ２は保護基であり、
前記反応混合物から分離されて前記アミン末端保護の（Ｓ）−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンを得る。
【００２６】
前記アミン末端保護の（Ｓ）−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンを脱保護してＬ−ＢＰＡを調製し、前記Ｌ−ＢＰＡは、式ＩＩＩで示される構造を有する。
本発明によれば、“ホウ素化剤”とは、アミン末端保護の（Ｓ）−４−ハロフェニルアラニン、ホウ素化剤およびグリニャール試薬（ビス（２−メチルアミノエチル）エーテルが添加されているか否かにかかわらず）を反応させる工程を経た後に、該アミン末端保護の（Ｓ）−４−ハロフェニルアラニンのＲ１置換基（すなわち、式Ｉで示されるＲ１）をホウ素含有置換基（ボロノに限定されない）に置換できるいずれの試薬である。
【００２７】
本発明によれば、該ホウ素化剤のホウ素元素は、いずれの形態のホウ素原子であってもよく、例えば１１ホウ素、１０ホウ素またはそれらの組み合わせ（例えば、天然のホウ素元素：１０ホウ素はホウ素元素全体の含有量の約１９．９％を占める）である。当業者には周知のように、１０ホウ素の含有量は、１０ホウ素含有量９５％以上などの他の含有量であってもよく、本発明のいくつかの実施例において、１０ホウ素の含有量は限定されない。
【００２８】
好ましく、該ホウ素化剤は、ホウ酸トリアルキル（ｔｒｉａｌｋｙｌ  ｂｏｒａｔｅ）を含むが、当業者には周知のように、ここで、該ホウ素化剤の種類を限定するものではない。該ホウ酸トリアルキルは、ホウ酸トリブチル（ｔｒｉｂｕｔｙｌ  ｂｏｒａｔｅ）、ホウ酸トリエチル（ｔｒｉｅｔｈｙｌ  ｂｏｒａｔｅ）、ホウ酸トリメチル（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌ  ｂｏｒａｔｅ）、ホウ酸トリイソプロピル（ｔｒｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌ  ｂｏｒａｔｅ）、トリプロピルホウ酸塩（ｔｒｉｐｒｏｐｙｌ  ｂｏｒａｔｅ）、トリ−ｔ−ブチルホウ酸塩（ｔｒｉ−ｔ−ｂｕｔｙｌ  ｂｏｒａｔｅ）または任意の適切なトリメチルホウ酸塩を含む。好ましく、該ホウ素化剤はホウ酸トリブチルである。
【００２９】
上記技術的解決手段が開示する調製方法は多くの利点を有する。
（１）アミン末端保護の（Ｓ）−４−ハロフェニルアラニン、ホウ素化剤およびグリニャール試薬（ビス（２−メチルアミノエチル）エーテルが添加されているか否かにかかわらず）を反応させて、アミン末端保護の（Ｓ）−４−ハロフェニルアラニンのカルボン酸基を予め保護する必要がなく、アミン末端保護の（Ｓ）−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンを調製することができる。したがって、該調製方法は、後段のプロセスにおいてカルボン酸基の脱保護工程を必要とせず、調製プロセスを大幅に短縮させる。
【００３０】
（２）直接ホウ素化剤を使用して反応に参加し、ホウ素化剤を調製する前処理調製プロセスは簡単で達成しやすい。
（３）調製しやすいという利点を有し、したがって、この調製方法によって調製されたＬ−ＢＰＡは、高い化学純度、高い光学純度および優れた総収率などの利点を有することができる。したがって、時間およびコストを節約し、高効率の様々な調製方法を提供することができる。
【００３１】
（４）ホウ素化剤を製造する１つの原料はホウ酸であり、該材料は入手しやすく、かつ安価であるという利点を有し、したがって、調製されたホウ素化剤も入手しやすく、かつ安価であるという利点を有する。
【００３２】
原料（Ｓ）−４−ハロフェニルアラニンに対する処理工程は、さらに、
【００３３】
【化３】
2018525398.tif 000005
（Ｓ）−４−ハロフェニルアラニンのアミン末端を保護して該アミン末端保護の（Ｓ）−４−ハロフェニルアラニンを調製し、そのうち、該（Ｓ）−４−ハロフェニルアラニンは上記式ＶＩで示される構造を有することを含む。
【００３４】
該（Ｓ）−４−ハロフェニルアラニンのアミン末端を保護して前記アミン末端保護の（Ｓ）−４−ハロフェニルアラニンを調製する工程は、さらに、以下を含む：
該（Ｓ）−４−ハロフェニルアラニン、１，４−ジオキサン、水、水酸化ナトリウムおよびジ−ｔ−ブチルジカーボネートを反応容器に添加して反応させることと、
ＰＨを２以下に調整し、ＰＨが２であることが好ましく、これにより、該アミン末端保護の（Ｓ）−４−ハロフェニルアラニンを結晶化させることと、
第一抽出溶媒を用いて分離し、該アミン末端保護の（Ｓ）−４−ハロフェニルアラニンを得ることと、を含む。
【００３５】
原料ホウ酸に対する処理工程は、第一有機溶媒で、ホウ酸、硫酸およびｎ−ブタノールを反応させて前記ホウ酸トリアルキルを調製することを含む。
好ましく、式Ｉで示されるアミン末端保護の（Ｓ）−４−ハロフェニルアラニンにおいて、Ｒ１はヨード（ｉｏｄｉｄｅ）またはブロマイド（ｂｒｏｍｉｄｅ）であり、より好ましく、式Ｉで示されるアミン末端保護の（Ｓ）−４−ハロフェニルアラニンにおいて、Ｒ１はヨードである。
【００３６】
好ましく、式Ｉで示されるアミン末端保護の（Ｓ）−４−ハロフェニルアラニンおよび式ＩＩで示されるアミン末端保護の（Ｓ）−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンにおいて、該保護基Ｒ２は、ｔ−ブトキシカルボニル（ｔ−ｂｕｔｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ  ｇｒｏｕｐ、ｔ−ＢｏｃまたはＢｏｃ）、トリチル基（ｔｒｉｔｙｌ  ｇｒｏｕｐ、Ｔｒｔ）、３，５−ジメトキシフェニルイソプロポキシカルボニル基（３，５−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌｉｓｏｐｒｏｐｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ  ｇｒｏｕｐ、Ｄｄｚ）、２−（４−ビフェニル）イソプロポキシカルボニル基（２−（４−Ｂｉｐｈｅｎｙｌ）ｉｓｏｐｒｏｐｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ  ｇｒｏｕｐ、Ｂｐｏｃ）および２−ニトロフェニルスルホキシド（２−ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌｓｕｌｆｅｎｙｌ  ｇｒｏｕｐ、Ｎｐｓ）からなるグループから選択された１つである。より好ましく、式Ｉで示されるアミン末端保護の（Ｓ）−４−ハロフェニルアラニンおよび式ＩＩで示されるアミン末端保護の（Ｓ）−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンにおいて、該保護基は、t-ブトキシカルボニルである。
【００３７】
本発明によれば、“グリニャール試薬”とは、アミン末端保護の（Ｓ）−４−ハロフェニルアラニン、ホウ素化剤およびグリニャール試薬（ビス（２−メチルアミノエチル）エーテルが添加されているか否かにかかわらず）を反応させる工程を経た後に、該アミン末端保護の（Ｓ）−４−ハロフェニルアラニンのＲ１置換基（すなわち、式Ｉで示されるＲ１）をホウ素含有置換基（ボロノに限定されない）に置換できるいずれの試薬である。好ましく、グリニャール試薬は、塩化アルキルマグネシウムまたは臭化アルキルマグネシウムまたは芳香族塩化マグネシウムまたは臭化芳香族マグネシウムである。より好ましく、グリニャール試薬は、塩化ｔ−ブチルマグネシウムまたは塩化シクロヘキシルマグネシウムまたは塩化ｔ−アミルマグネシウムである。
【００３８】
本発明によれば、塩化ｔ−ブチルマグネシウムまたは塩化シクロヘキシルマグネシウムまたは塩化ｔ−アミルマグネシウムを該調製方法中のグリニャール試薬として以下の利点を有する：
（１）室温（０〜３０℃であり、温度は、例えば−１０℃まで下げることができ、または６０℃まで高くすることができる）で反応させ、反応条件が達成しやすく、コストが節約される。
【００３９】
（２）直接反応に参加し、調製プロセスがシンプルであり、収率が高い。
本発明によれば、t-ブトキシカルボニルを保護基として以下の利点を有する：
（１）（Ｓ）−Ｎ−ブトキシカルボニル−４−ハロフェニルアラニン（Ｎ−Ｂｏｃ−４−ｈａｌｏｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ）は固体であり、したがって、調製プロセス中に操作しやすく、
（２）（Ｓ）−Ｎ−ブトキシカルボニル−４−ハロフェニルアラニンを調製する１つの原料はジ-t-ブチルジカーボネート（Ｂｏｃ２Ｏ，ｄｉ−ｔ−ｂｕｔｙｌ  ｄｉｃａｒｂｏｎａｔｅ）であり、該原料は入手しやすく、かつ安価であるという利点を有し、したがって、調製された（Ｓ）−Ｎ−ブトキシカルボニル−４−ハロフェニルアラニンも入手しやすく、かつ安価であるという利点を有し、および
（３）（Ｓ）−Ｎ−ブトキシカルボニル−４−ボロノフェニルアラニンのブトキシカルボニルを脱保護した後に、該ブトキシカルボニルは二酸化炭素およびt-ブタノールに分解され、それらはいずれも低リスク化学物質であり、したがって、（Ｓ）−Ｎ−ブトキシカルボニル−４−ハロフェニルアラニンを用いてＬ−ＢＰＡを調製することは、さらに、安全性および低リスクという利点を有する。
【００４０】
好ましく、０℃〜６０℃の温度で、アミン末端保護の（Ｓ）−４−ハロフェニルアラニン、ホウ素化剤、グリニャール試薬およびビス（２−メチルアミノエチル）エーテルを反応させて反応混合物を得る。
【００４１】
したがって、本発明は、０℃以上の温度で関連する反応を達成することができ、低温環境を必要とせず、反応条件が優しく、設備および労力については、コストがより節約される。
【００４２】
好ましく、該反応混合物から分離して前記アミン末端保護の（Ｓ）−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンを得る工程は、
該反応混合物に第二有機溶媒および酸性溶液を添加し、ＰＨを５以下に調整し、好ましく、ＰＨが３であり、かつ抽出して有機相を得ることと、
該有機相にアルカリ性溶液を添加し、ＰＨを７．１〜１４に調整し、好ましく、ＰＨが１２．１〜１２．６であることと、を含む。
【００４３】
第二抽出溶媒を使用して分離し、該アミン末端保護の（Ｓ）−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンを得る。
したがって、本発明は、複雑な精製工程を必要せず、簡単なプロセスによって、該反応混合物から分離し、アミン末端保護の（Ｓ）−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンを得ることができる。したがって、本発明の調製方法は、大量の廃溶媒およびシリカゲルの発生を回避することができ、したがって、環境にやさしいという利点がある。
【００４４】
好ましく、３０℃〜６０℃の温度で、前記アミン末端保護の（Ｓ）−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンを脱保護し、４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンを得る。
したがって、本発明は、複雑な精製工程を必要とせず、簡単なプロセスのみによって、アミン末端保護の（Ｓ）−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンを脱保護する工程を完了することができ、かつ、これにより、高い化学純度および高い光学純度を有するＬ−ＢＰＡを得る。したがって、本発明の調製方法は、大量の廃溶媒およびシリカゲルの発生を回避することができ、したがって、環境にやさしいという利点がある。
【００４５】
好ましく、前記ホウ素化剤は９５％以上の１０ホウ素の純度を有する。
好ましく、該アミン末端保護の（Ｓ）−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンはアミン末端保護の（Ｓ）−４−（１０Ｂ）ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンである。
【００４６】
好ましく、式ＩＩで示されるアミン末端保護の（Ｓ）−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンはアミン末端保護の（Ｓ）−４−（１０Ｂ）ボロノ−Ｌ−フェニルアラニン（Ｎ−ｐｒｏｔｅｃｔｅｄ（Ｓ）−４−（１０Ｂ）ｂｏｒｏｎｏｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ）である。
【００４７】
本発明によれば、該ホウ素化剤は、１０ホウ酸トリアルキル（ｔｒｉａｌｋｙｌ１０Ｂ  ｂｏｒａｔｅ）または他のいずれの１０ホウ素純度が９８％以上の適切な試薬を含む。該１０ホウ酸トリアルキルは１０ホウ酸トリブチル（ｔｒｉｂｕｔｙｌ  ｂｏｒａｔｅ、１０Ｂ（ＯＢｕ）３）、１０ホウ酸トリメチル（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌ  ｂｏｒａｔｅ、１０Ｂ（ＯＣＨ３）３）、または他のいずれの１０ホウ素純度が９８％以上の適切なホウ酸トリアルキルを含み、しかし、当業者には周知のように、本明細書において、該ホウ素化剤の種類を限定するものではない。より好ましく、該９５％以上の１０ホウ素純度のホウ素化剤は、市販の試薬であり、例えば１０ホウ酸トリブチルである。
【００４８】
好ましく、
【００４９】
【化４】
2018525398.tif 000006
該ホウ素化剤は９５％以上の１０Ｂ純度を有し、かつ該アミン末端保護の（Ｓ）−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンはアミン末端保護の（Ｓ）−４−（１０Ｂ）ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンであり、該アミン末端保護の（Ｓ）−４−（１０Ｂ）ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンは上記式ＩＶで示される構造を有し、該Ｌ−ＢＰＡはＬ−１０ＢＰＡであり、該Ｌ−１０ＢＰＡは上記式Ｖで示される構造を有する。
【００５０】
本発明の調製方法は、ホウ素化剤を調製する複雑な前処理プロセスを必要とせずに、Ｌ−１０ＢＰＡの調製を完了することができる。また、本発明の調製方法は、プロセスが短く、かつシンプルであるなどの利点を有し、したがって、この調製方法によって調製されたＬ−１０ＢＰＡは、化学的純度が高く、光学純度が高く、同位体純度が高く、かつ総収率が優れるなどの利点を備えることができ、かつ同時に前記のように、複雑な精製工程を必要とせず、時間およびコストを節約し、高効率で環境にやさしいなどの利点を備える。
【００５１】
本発明によれば、反応溶媒は、エーテル型溶媒または任意の他の適当な有機溶媒を含み、これに限定されるものではない。本発明で使用できるエーテル型溶媒には、テトラヒドロフラン（ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｆｕｒａｎ）、２−メチルテトラヒドロフラン（２−ｍｅｔｈｙｌｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｆｕｒａｎ）、ジエチルエーテル（ｄｉｅｔｈｙｌ  ｅｔｈｅｒ）または任意の他の適切なエーテル溶媒を含む。
【００５２】
本発明によれば、これらの有機溶媒は、反応物が少なくとも部分的にそこに溶解することを可能にする有機材料であり、これらの有機溶媒は、以下を含むが、それらに限定するものではなく、アルカン（ａｌｋａｎｅｓ）、エーテル型溶媒（ｅｔｈｅｒ−ｔｙｐｅ  ｓｏｌｖｅｎｔｓ）またはトルエン（ｔｏｌｕｅｎｅ）、アセトン（Ａｃｅｔｏｎｅ）などの他の適切な有機溶媒である。前記アルカンは、ヘキサン（ｈｅｘａｎｅｓ）、ヘプタン（ｈｅｐｔａｎｅ）、シクロヘキサン（ｃｙｃｌｏｈｅｘａｎｅ）、ペンタン（ｐｅｎｔａｎｅ）、または任意の他の適切なアルカンを含み、当業者には周知のように、ここで、該有機溶媒の種類を限定するものではない。該エーテル型溶媒は、メチルt-ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、ジエチルエーテル、ジエトキシメタン（ｄｉｅｔｈｏｘｙｍｅｔｈａｎｅ）、ジブチルエーテル（ｄｉｂｕｔｙｌ  ｅｔｈｅｒ）、２−メチルテトラヒドロフラン（２−ＭｅＴＨＦ）または任意の他の適切な有機溶剤を含む。好ましく、第一有機溶媒はトルエンであり、第二有機溶媒はメチルｔ−ブチルエーテルであり、第三有機溶媒はアセトンである。
【００５３】
本発明によれば、該抽出溶媒は、水と実質的に混和しなく、または水にわずかしか溶解しない任意の溶媒を指す。該抽出溶媒は、イソブチルアルコール（ｉｓｏｂｕｔｙｌ  ａｌｃｏｈｏｌ）、トルエン（ｔｏｌｕｅｎｅ）、ｎ−ブチルアルコール（ｎ−ｂｕｔｙｌ  ａｌｃｏｈｏｌ）、酢酸イソプロピル（ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ  ａｃｅｔａｔｅ）、酢酸エチル（ｅｔｈｙｌ  ａｃｅｔａｔｅ）、または任意の他の適切な抽出溶媒を含むが、当業者には周知のように、ここで抽出溶媒の種類を限定するものではない。好ましく、第一抽出溶媒は酢酸エチルであり、第二抽出溶媒はｎ−ブタノールである。
【００５４】
本発明によれば、酸性溶液は、塩酸溶液（ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｃ  ａｃｉｄ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）または任意の他の適切な酸性溶液を含むが、当業者には周知のように、ここで酸性溶液の種類を限定するものではない。好ましく、酸性溶液は３７％のＨＣｌである。
【００５５】
本発明によれば、アルカリ性溶液は、水酸化ナトリウム溶液または任意の他の適切なアルカリ性溶液を含むが、当業者には周知のように、ここでアルカリ性溶液の種類を限定するものではない。好ましく、アルカリ溶液は水酸化ナトリウムの水溶液である。
【発明を実施するための形態】
【００５６】
当業者には周知のように、Ｌ−ＢＰＡの調製方法はＬ−１０ＢＰＡの調製方法と基本的に同じであり、違いは１０ホウ素または１１ホウ素の含有量が異なるホウ素化剤を原料とする。Ｌ−ＢＰＡの調製に採用されるホウ素化剤原料中のホウ素含有量は自然界に存在するホウ素含有量であってもよく、約１９．９％の１０ホウ素および約８０．１％の１１ホウ素を含み、または１０ホウ素の含有量が９５％以上のＬ−１０ＢＰＡ（すなわち１０ホウ素元素リッチのＬ−ＢＰＡは一般にＬ−１０ＢＰＡと呼ばれる）を採用することができる。したがって、本発明の実施例が開示するＬ−１０ＢＰＡの調製方法もＬ−ＢＰＡの調製方法に適し、本発明の実施例１は、１０ホウ素の含有量が９５％以上のホウ素化剤、ビス（２−メチルアミノエチル）エーテルおよび塩化ｔ−ブチルマグネシウムのグリニャール試薬を原料とし、Ｌ−１０ＢＰＡを調製することを例にし、１０ホウ素の含有量は他の比率であっても同様の調製方法で調製することができる。本発明の実施例２は、通常の１０ホウ素含有量のホウ素化剤、ビス（２−メチルアミノエチル）エーテルおよび塩化ｔ−ブチルマグネシウムのグリニャール試薬を原料とし、（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−ヨードフェニルアラニンから（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンを調製するステップと、（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンのアミン末端脱保護によりＬ−ＢＰＡを調製するステップとを開示する。本発明の実施例３は、通常の１０ホウ素含有量のホウ素化剤、ビス（２−メチルアミノエチル）エーテルおよび塩化ｔ−ブチルマグネシウムのグリニャール試薬を原料とし、（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−ヨードフェニルアラニンから（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンを調製するステップを開示する。本発明の実施例４は、通常の１０ホウ素含有量のホウ素化剤、ビス（２−メチルアミノエチル）エーテルおよび塩化シクロヘキシルマグネシウムのグリニャール試薬を原料とし、（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−ヨードフェニルアラニンから（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンを調製するステップを開示する。本発明の実施例５は、通常の１０ホウ素含有量のホウ素化剤、ビス（２−メチルアミノエチル）エーテルおよび塩化ｔ−アミルマグネシウムのグリニャール試薬を原料とし、（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−ヨードフェニルアラニンから（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンを調製するステップを開示する。本発明の実施例６〜７は、通常の１０ホウ素含有量のホウ素化剤、塩化ｔ−ブチルマグネシウムのグリニャール試薬を原料とし、ビス（２−メチルアミノエチル）エーテルを添加せず、（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−ヨードフェニルアラニンから（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンを調製するステップを開示する。
【００５７】
本発明の実施例２〜７において、そのＬ−ＢＰＡ調製の事前ステップは、実施例１に記載されたものについて、１０ホウ素の含有量が異なる以外に、他のものは基本的に同じであり、したがって、これらの実施例において、これらのステップを省略する。本発明の実施例３〜７において、そのＬ−ＢＰＡ調製のアミン末端脱保護のステップは、実施例２に記載されたものとは基本的に同じであり、したがって、これらの実施例において、これらのステップを省略する。
【００５８】
以下の実施例は、（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−ヨードフェニルアラニンをアミン末端保護の（Ｓ）−４−ハロフェニルアラニンの好ましい実施例とし、かつ、（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−ヨードフェニルアラニンを用いてＬ−ＢＰＡまたはＬ−１０ＢＰＡを調製し、これにより、本発明は従来技術の技術的不足のある実施形態を説明する。当業者は、本明細書の内容に従って本発明の達成可能な利点および効果を了解しやすく、かつ、本発明の精神から逸脱することなく、本発明の内容を実施または適用し、同時に、ここで列挙された実施例は本発明による特許請求の範囲を限定するものではないことが理解されたい。
【００５９】
実施例１
（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−ヨードフェニルアラニンから（Ｓ）−Ｎ−ブトキシカルボニル−４−ボロノフェニルアラニンを調製する前に、（Ｓ）−４−ヨードベンズアラニンを原料として（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−ヨードフェニルアラニンを調製する工程および１０ホウ酸から１０ホウ酸トリブチルを調製する工程を開示する必要がある。
【００６０】
一、（Ｓ）−４−ヨードベンズアラニンによる（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−ヨードフェニルアラニンの調製
以下の反応式Ｉを参照し、それは、（Ｓ）−４−ヨードベンズアラニンが１，４−ジオキサン（１，４−ｄｉｏｘａｎｅ）および水（Ｈ２Ｏ）の溶媒中に、水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ）およびジ−ｔ−ブチルジカーボネート（Ｂｏｃ２Ｏ）と反応させ、（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−ヨードフェニルアラニンを調製する化学反応式である。
【００６１】
【化５】
2018525398.tif 000007
反応式Ｉ
本調製過程において、２つの反応容器を選択して反応させる。
【００６２】
具体的な操作過程は以下のとおりである：
１．３Ｌの３つのネックがあるボトルを使用する１つの反応を配置する。
２．（Ｓ）−４−ヨード−Ｌ−フェニルアラニン（２００．００ｇ、６８７．１０ｍｍｏｌ、１．００ｅｑ）を反応系に加える。
３．それぞれ１，４−ジオキサン（１．００Ｌ）および水（１．００Ｌ）を反応系に加える。
４．水酸化ナトリウム（６８．７１ｇ、１．７２ｍｏｌ、２．５０ｅｑ）を反応系に加え、溶液を徐々に澄ませ、温度がわずかに１９℃に上昇する。
５．体系を０〜１０℃に冷却させるときに、ジ−ｔ−ブチルジカーボネート（２５４．９３ｇ、１．１７ｍｏｌ、２６８．３５ｍＬ、１．７０ｅｑ）を反応系に添加し、反応系の温度を自然に１０〜３０℃に上昇し、かつ、室温（約３０℃  ）で８時間撹拌する。
６．反応は、原料反応が完了するまで高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって検出する。
７．制御系温度を４０℃未満に制御し、反応溶液中の１，４−ジオキサンを濃縮する。
８．反応系を室温（約２５℃）まで冷却させ、水１００ｍＬを加え、塩酸（２Ｍ（すなわち、モル濃度（ｍｏｌａｒｉｔｙ、Ｍ）））でｐＨを１．８〜２に調整する。
９．酢酸エチル（２Ｌ）で３回抽出する。
１０．有機相を合わせ、飽和ブライン（１Ｌ）で２回洗浄する。
１１．有機相を硫酸ナトリウム（２００ｇ）で乾燥させ、スピン乾燥させ、やや黄色の固体粗生成物を得る。
１２．オーブン（４０〜４５℃）で乾燥させ、白色の固体（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−ヨード−Ｌ−フェニルアラニン（２５０．００ｇ、６２６．２８ｍｍｏｌ、ＨＰＬＣにより分析し、収率が９３．００％で、純度が９８％である）を得る。
【００６３】
得られた（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−ヨード−Ｌ−フェニルアラニンが、１水素核磁気共鳴分光法（１ＨＮＭＲ）による分析結果は以下のとおりである：
１ＨＮＭＲ：（４００  ＭＨｚ  ＤＭＳＯ−ｄ６）
δ７．４９（ｄ、Ｊ＝７．８Ｈｚ、２Ｈ）、６．８８（ｄ、Ｊ＝７．８Ｈｚ、  ２Ｈ）、５．８０（ｄ、Ｊ＝５．９Ｈｚ、１Ｈ）、３．６８（ｄ、Ｊ＝５．５Ｈｚ、  １Ｈ）、３．００−２．９０（ｍ、１Ｈ）、２．８７−２．７５（ｍ、１Ｈ）、１．３５−１．１５（ｍ、９Ｈ）。
【００６４】
二、１０ホウ酸による１０ホウ酸トリブチルの調製
以下の反応式ＩＩを参照し、それは、１０ホウ酸がＮ−ブタノール（ｂｕｔａｎ−１−ｏｌ）およびトルエン（ｔｏｌｕｅｎｅ）の溶媒中において、硫酸（Ｈ２ＳＯ４）と反応させ、１０ホウ酸トリブチル（１０Ｂ（ＯＢｕ）３）を調製する反応式である。
【００６５】
【化６】
2018525398.tif 000008
反応式ＩＩ
具体的な操作過程は以下のとおりである：
１．３Ｌの３つのネックがあるボトルを使用する１つの反応装置Ｒ１を配置し、装置上に水分離器を配置する。
２．室温（約２５℃）で１０ホウ酸（１５０．００ｇ、２．４６ｍｏｌ、１．００ｅｑ）を反応Ｒ１に加える。
３．室温（約２５℃）でｎ−ブタノール（１．００Ｌ）を反応Ｒ１に加え、かつ撹拌し、ほとんどのホウ酸を溶解することができない。
４．室温（約２５℃）でトルエン（１．００Ｌ）を反応Ｒ１に加え、かつ撹拌する。
５．室温（約２５℃）で濃硫酸（４．８２ｇ、４９．１６ｍｍｏｌ、２．６２ｍＬ、０．０２ｅｑ）を反応に滴下し、このとき、大量の固体が溶解されない。
６．反応系を１３０℃まで昇温させ、水を連続的に分離し、３．５時間撹拌し、水分離器（約１４０ｇ）に発生した水を除去し、全ての固体が溶され、溶液を無色から褐色になる。
７．ＴＬＣ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝５：１、Ｒｆ＝０．４３、ブロモクレゾールグリーン）で反応が完了するまで検出する。
８．大気圧でほとんどのトルエンを蒸留させる。
９．ほとんどのトルエンが蒸留された後、体系の温度を２０〜３０℃に低下させ、２つの反応の２つの反応液を合わせ、装置を変えて蒸留する。
１０．オイルバスで温度を１０８〜１１０℃になり、水ポンプを減圧蒸留し、ケルビン温度計が４５℃で、ブタノールを蒸留させる。
１１．オイルバスで温度を１０８〜１１０℃になり、オイルポンプを減圧蒸留し、残留ブタノールを蒸留し除去させる。
１２．オイルバスで温度を１１８〜１１０℃になり、オイルポンプを減圧蒸留し、ケルビン温度計が４５℃で、生成物を生成する。
１３．温度を１３５〜１４０℃に上昇させ、オイルポンプを減圧蒸留し、生成物を完全に蒸留する。
１４．得られた生成物は、無色の液体１０ホウ酸トリブチル（８３０．００ｇ、３．６２ｍｏｌ、収率７３．５８％）である。
【００６６】
得られた１０ホウ酸トリブチルが、１ＨＮＭＲによる分析結果は以下のとおりである：
１ＨＮＭＲ：（４００ＭＨｚ  ＣＤＣｌ３）
δ３．８２−３．６８（ｍ、６Ｈ）、１．５７−１．４２（ｍ、６Ｈ）、１．３４（ｑｄ、Ｊ＝７．４、１４．９Ｈｚ、６Ｈ）、０．９５−０．８０（ｍ、９Ｈ）。
【００６７】
三、（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−ヨードフェニルアラニンによる（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−１０ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンの調製
以下の反応式ＩＩＩを参照し、それは、（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−ヨードフェニルアラニンにより、１０ホウ酸トリブチル、塩化ｔ−ブチルマグネシウムおよびビス（２−メチルアミノエチル）エーテル（ＢＤＭＡＥＥ）と反応させ、（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−（１０Ｂ）ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンを調製する反応式である。
【００６８】
【化７】
2018525398.tif 000009
反応式ＩＩＩ
本調製過程において、２つの反応容器を選択して反応する。
【００６９】
具体的な操作過程は以下のとおりである：
１．３Ｌの３つのネックがあるボトルを使用する１つの反応を配置する。
２．室温（約２２℃）で１０ホウ酸トリブチル（１８７．６０ｇ、８１７．９８ｍｍｏｌ、３．２０ｅｑ）を反応系に入れる。
３．室温（約２２℃）で水素化ナトリウム（２０．４５ｇ、５１１．２４ｍｍｏｌ、純度６０％、２．００ｅｑ）を反応系に一度に加え、このとき、反応液は懸濁液であり、室温（約２２℃）で５分間撹拌する。
４．室温（約２２℃）でビス（２−メチルアミノエチル）エーテル（３２７．７３ｇ、２．０４ｍｏｌ、８．００ｅｑ）を反応に加える。
５．室温（約２２℃）でＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−ヨード−Ｌ−フェニルアラニン（１００．００ｇ、２５５．６２ｍｍｏｌ、１．００ｅｑ）を反応系に加え、多量の固体が溶解されない。
６．反応系温度を０〜５℃に低下させ、塩化ｔ−ブチルマグネシウム（１．７Ｍ、１．２０Ｌ、２．０４ｍｏｌ、８．００ｅｑ）を反応に滴下し、温度を０〜１０℃に制御し、滴下時間は約１．５時間である。
７．供給が終了した後、反応系の温度を自然に室温（２０〜３０℃）に上げ、かつ、この温度で１２時間撹拌する。
８．高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いて原料が約９．００％残るまで検出する。
９．反応系の温度を−５〜０℃に低下させたとき、そこに水５００ｍＬを滴下してクエンチする。
１０．体系の温度を0〜5℃に下げ、反応系にメチルｔ−ブチルエーテル（５００ｍＬ）を加え、かつ、３７％ＨＣｌ（約５００ｍＬ）を用いてｐＨを２．９〜３．１（ｐＨメーターを用いて）に調整し、ｐＨを調整する過程において放熱し、体系温度を０〜１５℃の間に制御する。
１１．液分離によって得られた水相をメチルｔ−ブチルエーテル（５００ｍＬ）で１回抽出し、得られた有機相を合わせ、約１．１Ｌの有機相を得る。
１２．得られた有機相に水酸化ナトリウム水溶液（１Ｍ、４００ｍＬ）をゆっくり滴下し、滴下中に放熱し、体系の温度を０〜１５℃に制御する。
１３．滴下後、体系のｐＨは約１０であり、水酸化ナトリウム水溶液（４Ｍ）でｐＨを１２．１０〜１２．６に調整する。（ｐＨメーターで測定する）
１４．液を分離する。
１５．液分離後の水相１をｎ−ブタノール（５００ｍｌ）で１回抽出し、水相２を得る。
１６．２つの反応容器中で反応させた水相２を合わせる。
１７．３７％のＨＣｌで水相ｐＨを２．９〜３．１に調整し、約４０分間撹拌し、多量の固体が沈殿される。
１８．濾過により白色固体を得て、かつ、ジクロロメタン（５０ｍＬ）で１回浸出する。
１９．２５℃で、沈殿した固体をジクロロメタン（１５０ｍＬ）でビーティングし、１０分間撹拌する。
２０．濾過により白色固体（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−（１０Ｂ）ボロノ−Ｌ−フェニルアラニン（７５．００ｇ、２４０．８２ｍｍｏｌ、ＨＰＬＣにより分析し、収率４７．１１％、純度９９％）を得る。
【００７０】
得られた（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−（１０Ｂ）ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンが１ＨＮＭＲによる分析結果は以下のとおりである：
１ＨＮＭＲ：（４００ＭＨｚ  ＤＭＳＯ−ｄ６）
δ１２．５５（ｂｒ．ｓ．、１Ｈ）、７．９１（ｓ、２Ｈ）、７．６６（ｄ、  Ｊ＝７．５Ｈｚ、２Ｈ）、７．１７（ｄ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、２Ｈ）、４．０８−４．０１（ｍ、１Ｈ）、３．６１−３．５３（ｍ、１Ｈ）、２．９８（ｄｄ、Ｊ＝４．２、１３．９Ｈｚ、１Ｈ）、２．７９（ｄｄ、Ｊ＝１０．４、１３．５Ｈｚ、１Ｈ）、１．７９−１．６７（ｍ、１Ｈ）、１．３５−１．１７（ｍ、９Ｈ）。
【００７１】
四、（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンによるＬ−１０ＢＰＡの調製
以下の反応式ＩＶを参照し、それは、（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−（１０Ｂ）ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンのアミン末端脱保護の化学反応式であり、Ｌ−１０ＢＰＡを調製する。
【００７２】
【化８】
2018525398.tif 000010
反応式ＩＶ
具体的な操作過程は以下のとおりである：
１．１Ｌの３つのネックがあるボトルを使用する１つの反応を配置する。
２．室温（２０〜３０℃）で（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−（１０Ｂ）ボロノ−Ｌ−フェニルアラニン（６７．００ｇ、２１７．３１ｍｍｏｌ、１．００ｅｑ）を反応系に加える。
３．室温（２０〜３０℃）で水（２３．７５ｍＬ）およびアセトン（アセトン、４２０．００ｍＬ）をそれぞれ反応フラスコに滴下し、（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−（１０Ｂ）ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンを撹拌する。
４．室温（２０〜３０℃）で濃塩酸（２３．９３ｇ、６５６．２８ｍｍｏｌ、２３．４６ｍＬ、３．０２ｅｑ）を反応系に滴下し、滴下後、反応系を５５〜６０℃まで上昇させて４．５時間撹拌する。
５．反応が完了するまでＨＰＬＣにより検出する。
６．温度を４０℃以下に制御し、反応系中のアセトンを濃縮する。
７．濃縮後、体系を１５℃以下に低下させ、水酸化ナトリウム溶液（４Ｍ）で体系のｐＨを１．５程度（ｐＨメーターで検出する）に調整し、４０分間撹拌した後、水酸化ナトリウム溶液（４Ｍ）を用いて体系のｐＨを６．１５〜６．２５に調整し続け、大量の白色固体が沈殿され、濾過して白色固体を得て、かつアセトン（２００ｍＬ）で浸出する。
８．白色固体Ｌ−１０ＢＰＡ（３６．００ｇ、１７１．１７ｍｍｏｌ、ＨＰＬＣにより分析し、収率７８．７７％、純度９９％）を得る。
【００７３】
得られたＬ−１０ＢＰＡが１ＨＮＭＲによる分析結果は以下のとおりである：
１ＨＮＭＲ：（４００ＭＨｚ  Ｄ２Ｏ、ＣＦ３ＣＯＯＨ）
δ７．４４  （ｄ、Ｊ＝７．９Ｈｚ、１Ｈ）、７．０３（ｄ、Ｊ＝７．９Ｈｚ、１Ｈ）、  ４．０６（ｄｄ、Ｊ＝５．７、７．５Ｈｚ、１Ｈ）、３．１１−３．０１（ｍ、１Ｈ）、２．９８−２．８７（ｍ、１Ｈ）。
【００７４】
実施例２
一、（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−ヨードフェニルアラニンによる（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンの調製
反応式ＩＩＩ’を参照し、それは、（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−ヨードフェニルアラニンにより、ホウ酸トリブチル、塩化ｔ−ブチルマグネシウム（ｔ−ＢｕＭｇＣｌ）およびビス（２−メチルアミノエチル）エーテル（ＢＤＭＡＥＥ）と反応させ、（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンを調製する反応式である。
【００７５】
【化９】
2018525398.tif 000011
反応式ＩＩＩ’
具体的な操作過程は以下のとおりである：
１．１００ｍＬの３つのネックがあるボトルを用いて１つの反応を配置する。
２．温度が２０〜３０℃ときにホウ酸トリブチル（５．６５ｇ、２４．５４ｍｍｏｌ、３．２０ｅｑ）を１００ｍＬ反応フラスコに入れる。
３．温度が２０〜３０℃ときに水素化ナトリウム（６１３．５０ｍｇ、１５．３４ｍｍｏｌ、２．００ｅｑ）を１００ｍＬ反応フラスコに加える。
４．温度が２０〜３０℃ときにビス（２−メチルアミノエチル）エーテル（９．８３ｇ、６１．３５ｍｏｌ、８．００ｅｑ）を１００ｍＬ反応フラスコに加える。
５．温度が２０〜３０℃ときに（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−ヨードフェニルアラニン（３．００ｇ、７．６７ｍｍｏｌ、１．００ｅｑ）を１００ｍＬ反応フラスコに加える。
６．窒素雰囲気下で、反応系の温度を０℃に下げ、ｔ−ブチルマグネシウムクロライド（テトラヒドロフラン中１．７Ｍ、３６ｍＬ、８．００ｅｑ）を反応に滴下し、滴下時間は約３０分間であり、温度を０℃〜１０℃の間に制御する。
７．２０〜３０℃で１６時間撹拌する。
８．原料の反応が完了しないことをＨＰＬＣにより検出し、原材料は約１３％残る。
９．０℃の温度で、反応に１．５ｍＬの水を滴下してクエンチし、完全にクエンチした後、１０分間撹拌し続ける。
１０．温度を0℃に下げ、反応にメチルｔ−ブチルエーテル（１５ｍＬ）を加え、かつ、３７％ＨＣｌ（約１５ｍＬ）を用いてｐＨを３（ｐＨメーターを用いて）に調整し、ｐＨを調整する過程において放熱し、温度を０℃〜１５℃の間に制御する。
１１．液分離によって得られた水相をメチルｔ−ブチルエーテル（１５ｍＬ）で１回抽出し、２回の有機相を合わせる。
１２．得られた有機相にＮａＯＨ水溶液（１Ｍ、１７ｍＬ）を滴下し、ｐＨを１２．１０〜１２．６の間に調整し、この過程中に放熱し、温度を０〜１５℃に制御する。
１３．液分離し、得られた水相をｎ−ブタノール（１５ｍｌ）で１回抽出し、ほとんどの不純物を除去する。
１４．液分離により得られた水相を３７％のＨＣｌを用いてｐＨを３に調整し、約３０分間撹拌し、多量の白色固体が沈殿される。
１５．濾過により白色固体を得て、かつ、ジクロロメタン（１５ｍＬ）で１回浸出する。
１６．２５℃で、沈殿した固体を８ｍＬのジクロロメタンでビーティングし、１０分間撹拌する。
１７．濾過により白色固体（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニン（１．８０ｇ、５．８２ｍｍｏｌ、ＨＰＬＣにより分析し、収率４７．１１％、純度９９％）を得る。
【００７６】
得られた（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンが１ＨＮＭＲによる分析結果は以下のとおりである：
１ＨＮＭＲ：（４００ＭＨｚ  ＤＭＳＯ−ｄ６）
δ＝７．９５（ｓ、２Ｈ）、７．６９（ｄ、Ｊ＝７．７Ｈｚ、２Ｈ）、７．１９（ｄ、Ｊ＝７．７Ｈｚ、２Ｈ）、７．０７（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、４．１４−４．０４（ｍ、１Ｈ）、３．００（ｂｒ  ｄｄ、Ｊ＝４．４、１３．７Ｈｚ、１Ｈ）、２．８２（ｂｒ  ｄｄ、Ｊ＝１０．５、１３．８Ｈｚ、１Ｈ）、１．３２（ｓ、９Ｈ）。
【００７７】
二、（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンによるＬ−ＢＰＡの調製
以下の反応式ＩＶ’を参照し、それは、（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンのアミン末端脱保護の化学反応式であり、Ｌ−ＢＰＡを調製する。
【００７８】
【化１０】
2018525398.tif 000012
反応式ＩＶ’
具体的な操作過程は以下のとおりである：
１．１００ｍＬの３つのネックがあるボトルを使用して１つの反応装置を配置する。
２．温度が（２０〜３０℃）であるときに（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニン（１．８０ｇ、５．８２ｍｍｏｌ、１．００ｅｑ）を１００ｍＬの３つのネックに加える。
３．温度が（２０〜３０℃）であるときに水（０．６３ｍＬ）およびアセトン（１１．３０ｍＬ）をそれぞれ反応フラスコに加える。
４．温度が（２０〜３０℃）であるときにＨＣｌ（１７．４６ｍｍｏｌ、１．４６ｍＬ、３．００ｅｑ）を反応に滴下し、滴下後、反応を６０℃に上昇させて４時間撹拌する。
５．反応が完了することをＨＰＬＣにより検出する。
６．４０℃であるときに、反応液を減圧濃縮し、ほとんどのアセトンをスピンアウトする。
７．０〜１５℃に冷却させ、ＮａＯＨ溶液（４Ｍ）を用いてｐＨ１．５に調整し、固体が沈殿し始める。
８．ｐＨを６．２に調整し続け、大量の白色固体が沈殿され、１５分間撹拌する。
９．濾過により白色固体を得て、かつ、アセトン（６ｍＬ）で浸出し、固体を転送スピン乾燥させる。
１０．白色固体Ｌ−ＢＰＡ（０．８５ｇ、４．０７ｍｍｏｌ、ＨＰＬＣにより分析し、収率７０．１８％、純度９８％）を得る。
【００７９】
得られたＬ−ＢＰＡが１ＨＮＭＲによる分析結果は以下のとおりである：
１ＨＮＭＲ：（４００ＭＨｚ  Ｄ２Ｏ）
δ＝７．６２（ｄ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、２Ｈ）、７．２２（ｄ、Ｊ＝７．９Ｈｚ、２Ｈ）、３．８６（ｄｄ、Ｊ＝５．５、７．５Ｈｚ、１Ｈ）、３．２０−３．１３（ｍ、１Ｈ）、３．０５−２．９７（ｍ、１Ｈ）。
【００８０】
実施例３
（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−ヨードフェニルアラニンによる（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンの調製
反応式ＩＩＩ’を参照し続け、具体的な操作過程は以下のとおりである：
１．１Ｌの３つのネックがあるボトルを用いて１つの反応装置を配置する。
２．温度が２０〜３０℃ときにホウ酸トリブチル（５６．４８ｇ、２４５．４０ｍｍｏｌ、３．２０ｅｑ）を１Ｌ反応フラスコに入れる。
３．温度が２０〜３０℃ときに水素化ナトリウム（６．１３ｍｇ、１５３．３７ｍｍｏｌ、２．００ｅｑ）を１Ｌ反応フラスコに加える。
４．温度が２０〜３０℃ときにビス（２−メチルアミノエチル）エーテル（９８．３２ｇ、６１３．５０ｍｏｌ、８．００ｅｑ）を１Ｌ反応フラスコに加える。
５．温度が２０〜３０℃ときに（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−ヨードフェニルアラニン（３．００ｇ、７６．６９ｍｍｏｌ、１．００ｅｑ）を１Ｌ反応フラスコに加える。
６．窒素保護下で、反応系の温度を０℃に下げ、ｔ−ブチルマグネシウムクロライド（テトラヒドロフラン中１．７Ｍ、３６０ｍＬ、８．００ｅｑ）を反応に滴下し、滴下時間は約１時間であり、温度を０℃〜１０℃の間に制御する。
７．２０〜３０℃で１６時間撹拌する。
８．原料の反応が完了しないことをＨＰＬＣにより検出し、原材料は約８％残る。
９．０℃の温度で、反応に１５ｍＬの水を滴下してクエンチし、完全にクエンチした後、１０分間撹拌し続ける。
１０．温度を0℃に下げ、反応にメチルｔ−ブチルエーテル（１５０ｍＬ）を加え、かつ、３７％ＨＣｌ（約１６０ｍＬ）を用いてｐＨを３（ｐＨメーターを用いて）に調整し、ｐＨを調整する過程において放熱し、温度を０℃〜１５℃の間に制御する。
１１．液分離によって得られた水相をメチルｔ−ブチルエーテル（１５０ｍＬ）で１回抽出し、２回の有機相を合わせる。
１２．得られた有機相にＮａＯＨ水溶液（１Ｍ、１９０ｍＬ）を滴下し、ｐＨを１２．１０〜１２．６の間に調整し、この過程中に放熱し、温度を０〜１５℃に制御する。
１３．液分離し、得られた水相をｎ−ブタノール（１５０ｍｌ）で１回抽出し、ほとんどの不純物を除去する。
１４．液分離により得られた水相を３７％のＨＣｌを用いてｐＨを３に調整し、約３０分間撹拌し、多量の白色固体が沈殿される。
１５．濾過により白色固体を得て、かつ、ジクロロメタン（１５０ｍＬ）で１回浸出する。
１６．２５℃で、沈殿した固体を８０ｍＬのジクロロメタンでビーティングし、１０分間撹拌する。
１７．濾過により白色固体（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニン（１５．００ｇ、４８．５２ｍｍｏｌ、ＨＰＬＣにより分析し、収率６３．２７％、純度１００％）を得る。
【００８１】
得られた（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンが１ＨＮＭＲによる分析結果は以下のとおりである：
１ＨＮＭＲ：（４００ＭＨｚ  ＤＭＳＯ−ｄ６）
δ＝７．９７（ｓ、２Ｈ）、７．６８（ｄ、Ｊ＝７．９Ｈｚ、２Ｈ）、７．２３−７．１６（ｍ、２Ｈ）、７．０８（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、４．１２−４．０４（ｍ、１Ｈ）、３．００（ｄｄ、Ｊ＝４．４、１３．７Ｈｚ、１Ｈ）、２．８１（ｄｄ、Ｊ＝１０．４、１３．７Ｈｚ、１Ｈ）、１．３４−１．２３（ｍ、９Ｈ）。
【００８２】
実施例４
（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−ヨードフェニルアラニンによる（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンの調製
以下の反応式Ｖを参照し、それは、（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−ヨードフェニルアラニンにより、ホウ酸トリブチル、塩化シクロヘキシルマグネシウム（ｃ−ＨｅｘＭｇＣｌ）およびビス（２−メチルアミノエチル）エーテル（ＢＤＭＡＥＥ）と反応させ、（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンを調製する化学反応式である。
【００８３】
【化１１】
2018525398.tif 000013
反応式Ｖ
１．１００ｍＬの３つのネックがあるボトルを用いて１つの反応装置を配置する。
２．２０〜３０℃のときに、ホウ酸トリブチル（２．８２ｇ、１２．２７ｍｍｏｌ、３．２０ｅｑ）を１００ｍＬ反応フラスコに入れる。
３．２０〜３０℃のときに、ビス（２−メチルアミノエチル）エーテル（４．９２ｇ、３０．６７ｍｏｌ、８．００ｅｑ）を１００ｍＬ反応フラスコに入れる。
４．２０〜３０℃のときに、（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−ヨード−Ｌ−フェニルアラニン（１．５０ｇ、３．８３ｍｍｏｌ、１．００ｅｑ）を１００ｍＬ反応フラスコに入れる。
５．窒素保護下で、反応系の温度を０℃に下げ、シクロヘキシルマグネシウムクロライド（エーテル中２Ｍ、１５ｍＬ、８．００ｅｑ）を反応に滴下し、滴下時間は約２０分間であり、温度を０℃〜１０℃の間に制御する。
６．２０〜３０℃で２４時間撹拌する。
７．温度を６０±５℃に上昇させる。
８．６０±５℃で２４時間撹拌する。
９．原料の反応が完了しないことをＨＰＬＣにより検出し、原材料は約８３％残る。
１０．０℃の温度で、反応に０．７５ｍＬの水を滴下してクエンチし、完全にクエンチした後、１０分間撹拌し続ける。
１１．温度を0℃に下げ、反応にメチルｔ−ブチルエーテル（７．５ｍＬ）を加え、かつ、３７％ＨＣｌ（約７．５ｍＬ）を用いてｐＨを３（ｐＨメーターを用いて）に調整し、ｐＨを調整する過程において放熱し、温度を０℃〜１５℃の間に制御する。
１２．液分離によって得られた水相をメチルｔ−ブチルエーテル（７．５ｍＬ）で１回抽出し、２回の有機相を合わせる。
１２．得られた有機相にＮａＯＨ水溶液（１Ｍ、８．５ｍＬ）を滴下し、ｐＨを１２．１０〜１２．６の間に調整し、この過程中に放熱し、温度を０〜１５℃に制御する。
１３．液分離し、得られた水相をｎ−ブタノール（７．５ｍｌ）で１回抽出し、ほとんどの不純物を除去する。
１４．液分離により得られた水相を３７％のＨＣｌを用いてｐＨを３に調整し、約３０分間撹拌し、白色固体が沈殿される。
１５．濾過により白色固体を得て、かつ、ジクロロメタン（７．５ｍＬ）で１回浸出する。
１６．２５℃で、沈殿した固体を４ｍＬのジクロロメタンでビーティングし、１０分間撹拌する。
１７．濾過により白色固体（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニン（０．２ｇ、ＨＰＬＣにより分析し、収率１４．８３％、純度９９％）を得る。
【００８４】
得られた（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンが１ＨＮＭＲによる分析結果は以下のとおりである：
１ＨＮＭＲ：（４００ＭＨｚ  ＤＭＳＯ−ｄ６）
δ＝７．９６（ｓ、２Ｈ）、７．６７（ｄ、Ｊ＝７．９Ｈｚ、２Ｈ）、７．２１（ｄ、Ｊ＝７．７Ｈｚ、２Ｈ）、７．０９（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、４．１２−４．０４（ｍ、１Ｈ）、３．００（ｂｒ  ｄｄ、Ｊ＝４．４、１３．７Ｈｚ、１Ｈ）、２．８３（ｄｄ、Ｊ＝１０．４、１３．７Ｈｚ、１Ｈ）、１．３３−１．２１（ｍ、９Ｈ）。
【００８５】
実施例５
（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−ヨードフェニルアラニンによる（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンの調製
以下の反応式ＶＩを参照し、それは、（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−ヨードフェニルアラニンにより、ホウ酸トリブチル、ｔ− アミルマグネシウムクロライド（ｔ−ＰｅｎＭｇＣｌ）およびビス（２−メチルアミノエチル）エーテル（ＢＤＭＡＥＥ）と反応させ、（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンを調製する反応式である。
【００８６】
【化１２】
2018525398.tif 000014
反応式ＶＩ
具体的な操作過程は以下のとおりである：
１．１００ｍＬの３つのネックがあるボトルを用いて１つの反応装置を配置する。
２．２０〜３０℃のときに、ホウ酸トリブチル（２．８２ｇ、１２．２７ｍｍｏｌ、３．２０ｅｑ）を１００ｍＬ反応フラスコに入れる。
３．２０〜３０℃のときに、ビス（２−メチルアミノエチル）エーテル（４．９２ｇ、３０．６７ｍｏｌ、８．００ｅｑ）を１００ｍＬ反応フラスコに入れる。
４．２０〜３０℃のときに、（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−ヨード−Ｌ−フェニルアラニン（１．５０ｇ、３．８３ｍｍｏｌ、１．００ｅｑ）を順次１００ｍＬ反応フラスコに入れる。
５．窒素保護下で、反応系の温度を０℃に下げ、ｔ−アミルマグネシウムクロライド（２−ＭｅＴＨＦ中１．０Ｍ、３１ｍＬ、８．００ｅｑ）を反応に滴下し、滴下時間は約２０分間であり、温度を０℃〜１０℃の間に制御する。
６．２０〜３０℃で２４時間撹拌する。
７．温度を６０±５℃に上昇させる。
８．６０±５℃で２４時間撹拌する。
９．原料の反応が完了しないことをＨＰＬＣにより検出し、原材料は約４７％残る。
１０．０℃の温度で、反応に０．７５ｍＬの水を滴下してクエンチし、完全にクエンチした後、１０分間撹拌し続ける。
１１．温度を0℃に下げ、反応にメチルｔ−ブチルエーテル（７．５ｍＬ）を加え、かつ、３７％ＨＣｌ（約７．５ｍＬ）を用いてｐＨを３（ｐＨメーターを用いて）に調整し、ｐＨを調整する過程において放熱し、温度を０℃〜１５℃の間に制御する。
１２．液分離によって得られた水相をメチルｔ−ブチルエーテル（７．５ｍＬ）で１回抽出し、２回の有機相を合わせる。
１２．得られた有機相にＮａＯＨ水溶液（１Ｍ、８．５ｍＬ）を滴下し、ｐＨを１２．１０〜１２．６の間に調整し、この過程中に放熱し、温度を０〜１５℃に制御する。
１３．液分離により、得られた水相をｎ−ブタノール（７．５ｍｌ）で１回抽出し、ほとんどの不純物を除去する。
１４．液分離により得られた水相を３７％のＨＣｌを用いてｐＨを３に調整し、約３０分間撹拌し、白色固体が沈殿される。
１５．濾過により白色固体を得て、かつ、ジクロロメタン（７．５ｍＬ）で１回浸出する。
１６．２５℃で、沈殿した固体を４ｍＬのジクロロメタンでビーティングし、１０分間撹拌する。
１７．濾過により白色固体（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニン（０．５ｇ、ＨＰＬＣにより分析し、収率４６．２５％、純度９８％）を得る。
【００８７】
得られた（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンが１ＨＮＭＲによる分析結果は以下のとおりである：
１ＨＮＭＲ：（４００ＭＨｚ  ＤＭＳＯ−ｄ６）
δ＝７．９８（ｓ、２Ｈ）、７．７０（ｄ、Ｊ＝７．９Ｈｚ、２Ｈ）、７．２３（ｄ、Ｊ＝７．７Ｈｚ、２Ｈ）、７．１０（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、４．１３−４．０４（ｍ、１Ｈ）、３．００（ｂｒ  ｄｄ、Ｊ＝４．４、１３．７Ｈｚ、１Ｈ）、２．８４（ｄｄ、Ｊ＝１０．４、１３．７Ｈｚ、１Ｈ）、１．３３−１．２４（ｍ、９Ｈ）。
【００８８】
実施例６
（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−ヨードフェニルアラニンによる（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンの調製
以下の反応式ＶＩＩを参照し、それは、（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−ヨードフェニルアラニンにより、ホウ酸トリブチル、塩化ｔ−ブチルマグネシウム（ｔ−ＢｕＭｇＣｌ）と反応させ、（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニンを調製する反応式である。
【００８９】
【化１３】
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反応式ＶＩＩ
具体的な操作過程は以下のとおりである：
１．２５０ｍＬの３つのネックがあるボトルを用いて１つの反応装置を配置する。
２．２０〜３０℃のときに、ホウ酸トリブチル（１７．６５ｇ、７６．６８ｍｍｏｌ、３．００ｅｑ）を２５０ｍＬ反応フラスコに入れる。
３．２０〜３０℃のときに、水素化ナトリウム（１．０２ｇ、２５．５６ｍｏｌ、１．００ｅｑ）を２５０ｍＬ反応フラスコに入れる。
４．２０〜３０℃のときに、（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−ヨード−Ｌ−フェニルアラニン（１０．００ｇ、２５．５６ｍｍｏｌ、１．００ｅｑ）を２５０ｍＬ反応フラスコに入れる。
５．窒素保護下で、反応系の温度を０℃に下げ、塩化ｔ−ブチルマグネシウム（ＴＨＦ中１．７Ｍ、１２０ｍＬ、８．００ｅｑ）を反応にゆっくりと滴下し、滴下時間は約３０分間であり、温度を０℃〜１０℃の間に制御する。
６．２０〜３０℃で２０時間撹拌する。
７．原料の反応が完了しないことをＨＰＬＣにより検出し、原材料は約０．７％残る。
８．０℃の温度で、反応に５ｍＬの水を滴下してクエンチし、完全にクエンチした後、１０分間撹拌し続ける。
９．温度を0℃に下げ、反応にメチルｔ−ブチルエーテル（５０ｍＬ）を加え、かつ、３７％ＨＣｌ（約５０ｍＬ）を用いてｐＨを３（ｐＨメーターを用いて）に調整し、ｐＨを調整する過程において放熱し、温度を０℃〜１５℃の間に制御する。
１２．液分離によって得られた水相をメチルｔ−ブチルエーテル（５０ｍＬ）で１回抽出し、２回の有機相を合わせる。
１２．得られた有機相にＮａＯＨ水溶液（１Ｍ、５５ｍＬ）を滴下し、ｐＨを１２．１０〜１２．６の間に調整し、この過程中に放熱し、温度を０〜１５℃に制御する。
１３．液分離により、得られた水相をｎ−ブタノール（５０ｍｌ）で１回抽出し、ほとんどの不純物を除去する。
１４．液分離により得られた水相を３７％のＨＣｌを用いてｐＨを３に調整し、約３０分間撹拌し、白色固体が沈殿される。
１５．濾過により白色固体を得て、かつ、ジクロロメタン（５０ｍＬ）で１回浸出する。
１６．２５℃で、沈殿した固体を２５ｍＬのジクロロメタンでビーティングし、１０分間撹拌する。
１７．濾過により白色固体（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニン（６．８ｇ、ＨＰＬＣにより分析し、収率８３．１５％、純度９８％）を得る。
【００９０】
実施例７
反応式ＶＩＩを参照し続け、具体的な操作過程は以下のとおりである：
１．２５０ｍＬの３つのネックがあるボトルを用いて１つの反応装置を配置する。
２．２０〜３０℃のときに、ホウ酸トリブチル（８．８２ｇ、３８．３４ｍｍｏｌ、３．００ｅｑ）を２５０ｍＬ反応フラスコに入れる。
３．２０〜３０℃のときに、水素化ナトリウム（５１１．２５ｇ、１２．７８ｍｏｌ、１．００ｅｑ）を２５０ｍＬ反応フラスコに入れる。
４．２０〜３０℃のときに、（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−ヨード−Ｌ−フェニルアラニン（５．００ｇ、１２．７８ｍｍｏｌ、１．００ｅｑ）を２５０ｍＬ反応フラスコに入れる。
５．窒素保護下で、反応系の温度を０℃に下げ、塩化ｔ−ブチルマグネシウム（ＴＨＦ中１．７Ｍ、６０ｍＬ、８．００ｅｑ）を反応に滴下し、滴下時間は約３０分間であり、温度を０℃〜１０℃の間に制御する。
６．２０〜３０℃で２２時間撹拌する。
７．原料の反応が完了することをＨＰＬＣにより検出する。
８．０℃の温度で、反応に２．５ｍＬの水を滴下してクエンチし、完全にクエンチした後、１０分間撹拌し続ける。
９．温度を0℃に下げ、反応にメチルｔ−ブチルエーテル（２５ｍＬ）を加え、かつ、３７％ＨＣｌ（約２５ｍＬ）を用いてｐＨを３（ｐＨメーターを用いて）に調整し、ｐＨを調整する過程において放熱し、温度を０℃〜１５℃の間に制御する。
１２．液分離によって得られた水相をメチルｔ−ブチルエーテル（２５ｍＬ）で１回抽出し、２回の有機相を合わせる。
１２．得られた有機相にＮａＯＨ水溶液（１Ｍ、３０ｍＬ）を滴下し、ｐＨを１２．１０〜１２．６の間に調整し、この過程中に放熱し、温度を０〜１５℃に制御する。
１３．液分離により、得られた水相をｎ−ブタノール（２５ｍｌ）で１回抽出し、ほとんどの不純物を除去する。
１４．液分離により得られた水相を３７％のＨＣｌを用いてｐＨを３に調整し、約３０分間撹拌し、白色固体が沈殿される。
１５．濾過により白色固体を得て、かつ、ジクロロメタン（２５ｍＬ）で１回浸出する。
１６．２５℃で、沈殿した固体を１５ｍＬのジクロロメタンでビーティングし、１０分間撹拌する。
１７．濾過により白色固体（Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−ボロノ−Ｌ−フェニルアラニン（３．４ｇ、ＨＰＬＣにより分析し、収率８５．２６％、純度９８％）を得る。
【００９１】
ビス（２−メチルアミノエチル）エーテルは、Ｍｇの錯化剤であり、反応における副反応の発生を低減することができる。実施例６および７にビス（２−メチルアミノエチル）エーテルを添加せずに反応することができ、分析により、実施例６の反応におけるヨウ素喪失不純物は約１７％であり、実施例７の反応におけるヨウ素喪失不純物は約２８％である。したがって、別の面により、ビス（２−メチルアミノエチル）エーテルを添加する反応は、反応を保護し、ヨウ素喪失を低減できることが証明される。
【００９２】
以上の実施例により得られたＢＰＡまたは１０ＢＰＡは、キラルＨＰＬＣ分析により、Ｄ型エナンチオマーに対するＬ型エナンチオマーの比は１００：０である。
本発明の開示するホウ素中性子捕捉療法用のホウ素含有薬物Ｌ−ＢＰＡは、以上の実施例に記載の内容に限定するものではない。前記実施例は、説明しやすいために例を挙げるのみであり、本発明の特許請求の範囲は、特許請求の範囲内にあるものを基準にする。
【国際調査報告】
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