(57)【要約】  本発明は、植物菌類病原体の１種類以上の生物学的機能を阻害することによる、特に、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）を使用して菌類のＨＸＴ１遺伝子を阻害することによる、植物菌類病原体（特に、さび病）を防除するための方法及び組成物に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ｄｓＲＮＡ分子であって、
（ｉ）菌類ＨＸＴ１遺伝子によって転写されたｍＲＮＡのヌクレオチド配列のうちの少なくとも１８の隣接するヌクレオチドと実質的に同一であるヌクレオチド配列を有している第１の部分を含んでいる第１のＲＮＡ鎖；及び
（ｉｉ）第１鎖の第１の部分のヌクレオチド配列に対して実質的に相補的であるヌクレオチド配列を有している第２の部分を含んでいる（その結果、第１の部分と第２の部分は、それらの実質的な配列相補性の範囲にわたって一緒に対形成することが可能である）第２のＲＮＡ鎖；
を含んでいる前記ｄｓＲＮＡ分子。
【請求項２】
前記菌類ＨＸＴ１遺伝子が、
（ａ）以下の配列識別番号に記載されているヌクレオチド配列を含んでいるポリヌクレオチド：１、３、５、７、及び、９；
（ｂ）以下の配列識別番号に記載されているアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド：２、４、６、８、及び、１０；
（ｃ）以下の配列識別番号に記載されているヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドと少なくとも７０％の配列同一性を有するポリヌクレオチド：１、３、５、７、及び、９；
（ｄ）以下の配列識別番号に記載されているアミノ酸配列を有するポリペプチドと少なくとも７０％の配列同一性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド：２、４、６、８、及び、１０；
（ｅ）以下の配列識別番号に記載されているヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドと緊縮条件でハイブリダイズするポリヌクレオチド：１、３、５、７、及び、９；
からなる群から選択される、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ分子。
【請求項３】
組成物であって、有効で且つ植物に対して毒性を示さない量の請求項１又は２に記載のｄｓＲＮＡ分子を少なくとも含んでいる、前記組成物。
【請求項４】
発現カセット又は遺伝子構築物であって、少なくとも、
・  作動可能に連結された、植物細胞内で機能性を有するプロモーター調節要素；
・  センス方向のヌクレオチド配列を有している第１の部分及びアンチセンス方向のヌクレオチド配列を有している第２の部分を転写の方向に含んでいるＤＮＡ分子〔ここで、センス方向の第１の部分の前記ヌクレオチド配列は、菌類ＨＸＴ１遺伝子のヌクレオチド配列の少なくとも１８の隣接するヌクレオチドと実質的に同一であるヌクレオチド配列からなり、及び、アンチセンス方向の第２の部分の前記ヌクレオチド配列は、センス方向の第１の部分のヌクレオチド配列に対して実質的に相補的であるヌクレオチド配列からなる〕；及び、
・  場合により、ターミネーター調節要素；
を含んでいる、前記発現カセット又は遺伝子構築物。
【請求項５】
トランスジェニック生物であって、少なくとも１の請求項４に記載の発現カセット又は遺伝子構築物を含んでいる、前記トランスジェニック生物。
【請求項６】
前記生物が、植物細胞若しくは植物又は種子、又は、それらの部分である、請求項５に記載のトランスジェニック生物。
【請求項７】
前記植物が、ダイズ植物、ダイズ種子又はそれらの部分である、請求項６に記載のトランスジェニック植物細胞、植物、種子又はそれらの部分。
【請求項８】
菌類ＨＸＴ１遺伝子を阻害するｄｓＲＮＡを発現することが可能なトランスジェニック植物細胞、植物、種子又はそれらの部分を作成する方法であって、植物細胞を請求項４に記載の発現カセット又は遺伝子構築物を用いて形質転換させる段階を含んでいる、前記方法。
【請求項９】
植物を処理する方法であって、有効で且つ植物に対して毒性を示さない量の請求項１若しくは２のいずれか１項に記載のｄｓＲＮＡ分子又は請求項３に記載の組成物を植物がそこで生育しているか若しくは生育することが可能な土壌、植物の葉及び／若しくは果実、又は、植物の種子に施用することを特徴とする、前記方法。
【請求項１０】
植物病原体による侵襲から植物を保護する方法であって、有効で且つ植物に対して毒性を示さない量の請求項１若しくは２のいずれか１項に記載のｄｓＲＮＡ分子又は請求項３に記載の組成物を植物がそこで生育しているか若しくは生育することが可能な土壌、植物の葉及び／若しくは果実、又は、植物の種子に施用することを特徴とする、前記方法。
【請求項１１】
前記植物病原体がサビキン目（Ｐｕｃｃｉｎｉａｌｅｓ）の真菌さび病である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記真菌さび病が、ファコプソラ・パキリジ（Ｐｈａｋｏｐｓｏｒａ  ｐａｃｈｙｒｈｉｚｉ）、ウロミセス・ファバエ（Ｕｒｏｍｙｃｅｓ  ｆａｂａｅ）、プッシニア・ストリイホルミス（Ｐｕｃｃｉｎｉａ  ｓｔｒｉｉｆｏｒｍｉｓ）、プッシニア・トリチシナ（Ｐｕｃｃｉｎｉａ  ｔｒｉｔｉｃｉｎａ）及びプッシニア・グラミニス（Ｐｕｃｃｉｎｉａ  ｇｒａｍｉｎｉｓ）からなるリストから選択される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記真菌さび病がファコプソラ・パキリジ（Ｐｈａｋｏｐｓｏｒａ  ｐａｃｈｙｒｈｉｚｉ）である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記植物がダイズ植物である、請求項９〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、植物菌類病原体（特に、さび病）を防除するための方法に関し、ここで、該方法は、該植物菌類病原体の１種類以上の生物学的機能を阻害することにより、特に、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）を使用して菌類のＨＸＴ１遺伝子を阻害することによる。
【０００２】
本発明は、菌類遺伝子（特に、さび病菌類遺伝子）に対してＲＮＡｉを使用して、上記防除を行うための方法及び組成物を提供する。本発明は、さらに、菌類病原体（特に、さび病）に対して耐性を示すトランスジェニック植物を作成する方法、並びに、トランスジェニック植物及び産生されたその種子にも関する。
【背景技術】
【０００３】
菌類、細菌類、ウイルス類を包含する植物病原体は、栽培作物の多くの種類の病害に関与し、期待される収穫量の通常２０〜４０％と見なされる重大な作物損失をもたらし得る。
【０００４】
さび病は、サビキン目（Ｐｕｃｃｉｎｉａｌｅｓ）の担子菌病原体に起因する植物病害である。それらは、農業における最も有害な植物病原体のうちの１つであると考えられる。それらは、穀類作物及び豆類作物に対して世界中で甚大な損失を引き起こす壊滅的な植物病原体の一群を構成している（Ｂｒｏｗｎ  ａｎｄ  Ｈｏｖｍｏｌｌｅｒ，  ２００２，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２９７：  ５３７−５４１）。それらの重要性は、２０１２年に強調された。その年、穀類に感染するプッシニア属種（Ｐｕｃｃｉｎｉａ  ｓｐｐ．）がトップテンの菌類病原体のうちの第３番目にノミネートされた（Ｄｅａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１２，  Ｍｏｌ．  Ｐｌａｎｔ  Ｐａｔｈ．  １３：  ４１４−４３０）。経済的に重要なさび病の例としては、以下の種の菌に起因するさび病などを挙げることができる：コムギに対するプッシニア・グラミニス（Ｐｕｃｃｉｎｉａ  ｇｒａｍｉｎｉｓ）、プッシニア・ストリイホルミス（Ｐｕｃｃｉｎｉａ  ｓｔｒｉｉｆｏｒｍｉｓ）又はプッシニア・トリチシナ（Ｐｕｃｃｉｎｉａ  ｔｒｉｔｉｃｉｎａ）、インゲンマメに対するウロミセス・ファセオリ（Ｕｒｏｍｙｃｅｓ  ｐｈａｓｅｏｌｉ）及びウロミセス・アペンジクラツス（Ｕｒｏｍｙｃｅｓ  ａｐｐｅｎｄｉｃｕｌａｔｕｓ）、又は、ダイズに対するファコプソラ・パキリジ（Ｐｈａｋｏｐｓｏｒａ  ｐａｃｈｙｒｈｉｚｉ）。
【０００５】
ダイズさび病（Ａｓｉａｎ  Ｓｏｙｂｅａｎ  Ｒｕｓｔ）は、真菌ファコプソラ・パキリジ（Ｐｈａｋｏｐｓｏｒａ  ｐａｃｈｙｒｈｉｚｉ）によってダイズに対して引き起こされる病害である。この病害は、ダイズ作物が栽培されている多くの地域において過去数年にわたって非常に蔓延し、これらの作物の深刻な損失の原因となっている（Ｈａｒｔｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１１，  Ｆｏｏｄ  Ｓｅｃｕｒｉｔｙ  ３：  ５−１７）。
【０００６】
今日現在、菌類植物病原体（特に、ダイズさび病）を防除するための最も有効な手段は、化学殺菌剤である。しかしながら、植物病原体に対する代替え的な解決策を探求することは、興味深い。
【０００７】
菌類の重要な特定の酵素の生物学的な活性を阻害すること（これは、殆どの殺菌剤の作用機序である）に加えて、菌類の増殖及び／又は病原性にとって必須である遺伝子の発現を阻害することは、興味深い代替え法であり得る。このアプローチに取り組む１つの方法では、第１に、阻害すべき適切な遺伝子を識別することが必要であり、次いで、ＲＮＡ干渉又はＲＮＡｉとして知られている生物学的なメカニズムを使用する。ＲＮＡｉは、所謂「二本鎖ＲＮＡ」又は「ｄｓＲＮＡ」を有しているか又は生成する特定のタイプの微生物（特に、ウイルス類）に対して防御するための、殆どの真核生物（これは、植物を包含する）の中に存在している自然のメカニズムである。それは、ｄｓＲＮＡを分解するのみではなく、ｄｓＲＮＡが核酸配列においてそのような侵略する微生物によって発現されるＲＮＡ（例えば、特定のタンパク質をコードするメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ））と同一である場合、そのｄｓＲＮＡの発現は、当該ＲＮＡｉ細胞機構を誘発させ、その後、当該ｍＲＮＡがタンパク質に翻訳されるのを阻害する。
【０００８】
従って、二本鎖ＲＮＡ分子（ｄｓＲＮＡ）を生成することが可能なそのような微生物の標的遺伝子と核酸配列の中で相同する配列を生物の細胞内で発現させることによって、その遺伝子の発現を極めて特異的に阻害することが可能である（Ｘｉａｏ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００３，  Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．，  ５２：９５７−６６）。
【０００９】
ｄｓＲＮＡは、そのｄｓＲＮＡと配列同一性を有する領域内における相同ＲＮＡのみの特異的な分解を誘発させる（Ｚａｍｏｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０００，  Ｃｅｌｌ．  １０１：  ２５−３３；  Ｔａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００３，  Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．  １７：  ４９−６３）。該ｄｓＲＮＡは、二本鎖ＲＮＡ分子（これは、通常は数百の塩基対（ｂｐ）からなる）を含んでいるＲＮＡ分子であり、そして、センス鎖及び相同的なアンチセンス鎖を含んでいる。一度、細胞内において、ｄｓＲＮＡは、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）と称される一般に１８〜２５のヌクレオチドからなるＲＮＡ断片に分解される。ＲＮＡｉ機構が機能するためには、生じたｓｉＲＮＡが阻害対象の標的ＲＮＡに対して極めて高度の配列同一性を示すべきである；しかしながら、ｓｉＲＮＡと標的ＲＮＡの対応する部分の間において３〜４のヌクレオチドのミスマッチが存在していても、依然として、当該システムを機能させることが可能である（Ｔａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００３，  Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．１７：  ４９−６３）。
【００１０】
ＲＮＡｉは、ｄｓＲＮＡが線虫カエノラブディティス・エレガンス（Ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ  ｅｌｅｇａｎｓ）の体内に注入された場合に有効であることが分かった（Ｆｉｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９８，  Ｎａｔｕｒｅ  ３９１：  ８０６−８１１；  Ｍｏｎｔｇｏｍｅｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９８，  ＰＮＡＳ  ９５：  １５５０２−１５５０７；  ＷＯ  ９９／３２６１９）。昆虫に昆虫標的遺伝子に対応する低分子ｄｓＲＮＡを発現する細菌を与えた場合、その昆虫標的遺伝子の発現が阻害されることについても言及されてきた（ＷＯ  ０１／３７６５４）。
【００１１】
ｄｓＲＮＡの導入は、植物において、種々の目的のために、例えば、内在性標的遺伝子のサイレンシングを誘発させるために（Ｈａｍｉｌｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９８，  Ｐｌａｎｔ  Ｊ．  １５：７３７−７４６；  ＷＯ  ９９／１５６８２）、ＲＮＡウイルス遺伝子に対して実質的に同一性を有するｄｓＲＮＡを発現する導入遺伝子を用いて該ＲＮＡウイルスに対する抵抗性を誘発させるために（Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９８，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９５：  １３９５９−１３９６４；  Ｐａｎｄｏｌｆｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００３，  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，  ２５；  ３（１）：  ７；  ＷＯ  ９８／３６０８３；  ＷＯ  ９９／１５６８２；  ＵＳ  ５，１７５，１０２）、さらには、線虫類に対する抵抗性を誘発させるために（Ｃｈｕａｎｇ  ａｎｄ  Ｍｅｙｅｒｏｗｉｔｚ，  ２０００，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９７：  ４９８５−４９９０；  ＷＯ  ０１／９６５８４）、又は、代替え的に、細菌アグロバクテリウム属各種（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐ．）に対する抵抗性を誘発させるために（ＷＯ  ００／２６３４６；  Ｅｓｃｏｂａｒ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００１，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９８（２３）：  １３４３７−１３４４２）、実施された。最近になって、菌類の増殖又はその病原性にとって不可欠である菌類遺伝子に対して実質的な配列同一性を有するｄｓＲＮＡを発現する植物も当該植物のその菌類に対する抵抗性を誘発し得るということが示された（ＷＯ  ２００５／０７１０９１）。
【００１２】
それにもかかわらず、そのとき以来、二本鎖（ｄｓＲＮＡ）分子若しくは低分子量干渉（ｓｉＲＮＡ）分子を植物体内で発現させるような、又は、二本鎖（ｄｓＲＮＡ）分子若しくは低分子量干渉（ｓｉＲＮＡ）分子を種子、植物若しくは植物の果実又は植物がそこで生育しているか若しくはそこで生育するのが望ましい土壌若しくは不活性底土に対して外用組成物の一部分として施用するような、植物病原性菌類に対するＲＮＡｉが介在する抵抗性又は耐性に対する予備的な結果は殆ど存在しておらず、商業的な例は全く存在していない。
【００１３】
とりわけ、１つの困難は、ｄｓＲＮＡ又はｓｉＲＮＡによって阻害することで、そのｄｓＲＮＡ若しくはｓｉＲＮＡを発現している植物又はそのｄｓＲＮＡ若しくはｓｉＲＮＡを含んでいる組成物が施用された植物に対して悪影響を及ぼすことなく、商業的な使用に適したレベルに至るまでの効果的なレベルの病害防除が誘発される、適切な標的遺伝子を見いだすことである。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１４】
【特許文献１】国際特許出願公開第９９／３２６１９号
【特許文献２】国際特許出願公開第０１／３７６５４号
【特許文献３】国際特許出願公開第９９／１５６８２号
【特許文献４】国際特許出願公開第９８／３６０８３号
【特許文献５】米国特許第５，１７５，１０２号
【特許文献６】国際特許出願公開第０１／９６５８４号
【特許文献７】国際特許出願公開第００／２６３４６号
【特許文献８】国際特許出願公開第２００５／０７１０９１号
【非特許文献】
【００１５】
【非特許文献１】Ｂｒｏｗｎ  ａｎｄ  Ｈｏｖｍｏｌｌｅｒ，  ２００２，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２９７：  ５３７−５４１
【非特許文献２】Ｄｅａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１２，  Ｍｏｌ．  Ｐｌａｎｔ  Ｐａｔｈ．  １３：  ４１４−４３０
【非特許文献３】Ｈａｒｔｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１１，  Ｆｏｏｄ  Ｓｅｃｕｒｉｔｙ  ３：  ５−１７
【非特許文献４】Ｘｉａｏ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００３，  Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．，  ５２：９５７−６６
【非特許文献５】Ｚａｍｏｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０００，  Ｃｅｌｌ．  １０１：  ２５−３３
【非特許文献６】Ｔａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００３，  Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．  １７：  ４９−６３
【非特許文献７】Ｆｉｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９８，  Ｎａｔｕｒｅ  ３９１：  ８０６−８１１
【非特許文献８】Ｍｏｎｔｇｏｍｅｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９８，  ＰＮＡＳ  ９５：  １５５０２−１５５０７
【非特許文献９】Ｈａｍｉｌｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９８，  Ｐｌａｎｔ  Ｊ．  １５：７３７−７４６
【非特許文献１０】Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９８，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９５：  １３９５９−１３９６４
【非特許文献１１】Ｐａｎｄｏｌｆｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００３，  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，  ２５；  ３（１）：  ７
【非特許文献１２】Ｃｈｕａｎｇ  ａｎｄ  Ｍｅｙｅｒｏｗｉｔｚ，  ２０００，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９７：  ４９８５−４９９０
【非特許文献１３】Ｅｓｃｏｂａｒ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００１，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９８（２３）：  １３４３７−１３４４２
【発明の概要】
【００１６】
本発明者らは、驚くべきことに、ＲＮＡｉ機構を用いて、特に、ｄｓＲＮＡを使用して、菌類のＨＸＴ１遺伝子の発現を阻害することで、病原性菌類の感染、増殖、発生、繁殖及び／又は病原性が低減されること（これは、最終的には、感染した植物の病害を完全に防除し得る）ということを実証した。
【００１７】
ＨＸＴ１遺伝子は、ヘキソース輸送体のタンパク質ファミリーに属する。ヘキソース輸送体は、生体栄養性の植物病原性菌類の吸器において発現される重要なタンパク質である。Ｖｏｅｇｅｌｅら（２００１，  ＰＮＡＳ  ９８：  ８１３３−８１３８）は、ＨＸＴ１タンパク質が、好ましくは、さび病菌ウロミセス・ファバエ（Ｕｒｏｍｙｃｅｓ  ｆａｂａｅ）の吸器において発現されること、及び、実際に、感染した植物から養分を摂取するための菌類の上記構造体において発現される最も豊富なタンパク質のうちの１種類であることを、示した。これらの著者は、殆ど排他的に菌類の吸器の中に存在している当該ＨＸＴ１遺伝子が、このヘキソース輸送体を宿主植物においてさび病菌ウロミセス・ファバエ（Ｕｒｏｍｙｃｅｓ  ｆａｂａｅ）が発生するための要にしているということを示唆した。
【００１８】
１０年後、Ｙｉｎら（２０１１，  ＭＰＭＩ  ２４：  ５５４−５６１）は、さび病菌プッシニア・ストリイホルミス（Ｐｕｃｃｉｎｉａ  ｓｔｒｉｉｆｏｒｍｉｓ）及びプッシニア・グラミニス（Ｐｕｃｃｉｎｉａ  ｇｒａｍｉｎｉｓ）の特定の遺伝子を標的とするｄｓＲＮＡを使用するＲＮＡｉ機構の病害を防除する潜在能力について試験した。該ｄｓＲＮＡを、ＶＩＧＳ（Ｖｉｒｕｓ−Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｇｅｎｅ  Ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ）として知られているウイルス一過性ｄｓＲＮＡ送達システム（ｖｉｒａｌ  ｔｒａｎｓｉｅｎｔ  ｄｓＲＮＡ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｓｙｓｔｅｍ）を使用して上記菌類の細胞と接触させた。試験した遺伝子のうちの１つ（ＰＳＴｈａ１２Ｏ３）は、ウロミセス・ファバエ（Ｕｒｏｍｙｃｅｓ  ｆａｂａｅ）においてＶｏｅｇｅｌｅら（２００１，  ＰＮＡＳ  ９８：  ８１３３−８１３８）によって確認されたＨＸＴ１遺伝子と相同であると報告された。Ｙｉｎら（２０１１，  ＭＰＭＩ  ２４：  ５５４−５６１）は、試験した種々の遺伝子が、それらの遺伝子のＲＮＡ転写産物の発現のレベルによって測定した場合に、さまざまなレベルのサイレンシングを示すということを報告している。しかしながら、試験した上記遺伝子の一部、特に、菌類の吸器の中で自然に豊富に発現される遺伝子は、良好なサイレンシングレベルを示し、及び、遺伝子ＰＳＴｈａ１２Ｏ３は、遺伝子発現レベルにおいて最も著しい低減を示す遺伝子であった。しかしながら、コムギ植物におけるプッシニアさび病の発生について観察したとき、これらの著者は、試験した全ての遺伝子に関して、病害の発生における低減を認めなておらず、多量の転写産物の点から見て最もサイレンシングされていることが観察されたＨＸＴ１−相同遺伝子の場合でさえ、病害の発生における低減を認めなかった。
【００１９】
以前のこれらの発見は、特定の遺伝子が菌類の増殖及び／又は病原性にとって潜在的に必須であることが確認されたとしても、それら遺伝子の効果的なサイレンシング及びその後の病害発生の低減は既定の事実ではない、ということを説明する。Ｙｉｎら（２０１１，  ＭＰＭＩ  ２４：  ５５４−５６１）は、ＲＮＡｉを用いる効果的な病害防除においては、適切な標的遺伝子よりも多くの因子が関与し得るということを示唆した。
【００２０】
本発明の発明者らは、Ｙｉｎら（２０１１，  ＭＰＭＩ  ２４：  ５５４−５６１）によって経験されたように、ＨＸＴ１遺伝子に対するＲＮＡｉが、この菌類標的遺伝子に対してデザインされたｄｓＲＮＡを使用した場合に効果的にサイレンシングされたとしても、関連するさび病病害の発生を効果的に低減させない理由について、さらに探求した。
【００２１】
その後、ＨＸＴ１遺伝子発現の阻害は病害の防除又は低減をもたらさないということを教示しているＹｉｎら（２０１１，  ＭＰＭＩ  ２４：  ５５４−５６１）の発見に対して、本発明者らは、驚くべきことに、Ｙｉｎら（２０１１，  ＭＰＭＩ  ２４：  ５５４−５６１）においてｄｓＲＮＡをデザインするために使用された２種類のプッシニア種が、それぞれ、それらのゲノムの中にＨＸＴ１への相同性を有する２つの配列を有していること、及び、これらの著者がＲＮＡｉ実験を実施するために選択した配列がＶｏｅｇｅｌｅら（２００１，  ＰＮＡＳ  ９８：  ８１３３−８１３８）において識別されたＨＸＴ１タンパク質をコードする配列に相当する配列ではないということを確認した。もちろん、この発見は、Ｙｉｎら（２０１１，  ＭＰＭＩ  ２４：  ５５４−５６１）において「ＨＸＴ１−相同体」として識別された配列が、効果的なヘキソース輸送体をコードするか否か、又は、少なくとも、効果的なＨＸＴ１−様タンパク質をコードするか否かについて、問題とする。
【００２２】
本発明の発明者らは、さらに、Ｖｏｅｇｅｌｅら（２００１，  ＰＮＡＳ  ９８：  ８１３３−８１３８）によってウロミセス・ファバエ（Ｕｒｏｍｙｃｅｓ  ｆａｂａｅ）において識別され及び２種類のプッシニア種（Ｙｉｎら（２０１１，  ＭＰＭＩ  ２４：  ５５４−５６１）によって使用されたものではない）においても識別されたＨＸＴ１配列に相当する別のさび病菌種ファコプソラ・パキリジ（Ｐｈａｋｏｐｓｏｒａ  ｐａｃｈｙｒｈｉｚｉ）からのＨＸＴ１配列を使用した場合、ダイズ植物（ファコプソラ・パキリジ（Ｐｈａｋｏｐｓｏｒａ  ｐａｃｈｙｒｈｉｚｉ）の宿主植物）においてそのような配列に対するｄｓＲＮＡを発現させるＶＩＧＳ構築物を使用することによって、対応するｍＲＮＡ転写産物の発現が低減されるのみではなく、植物における病害も効果的に低減されるということも、実証した。
【００２３】
従って、本発明は、（ｉ）菌類ＨＸＴ１遺伝子によって転写されたｍＲＮＡのヌクレオチド配列のうちの少なくとも１８の隣接するヌクレオチドと実質的に同一であるヌクレオチド配列を有している第１の部分を含んでいる第１のＲＮＡ鎖及び（ｉｉ）第１鎖の第１の部分のヌクレオチド配列に対して実質的に相補的であるヌクレオチド配列を有している第２の部分を含んでいる第２のＲＮＡ鎖を含んでいるｄｓＲＮＡ分子を提供する。従って、第１の部分と第２の部分は、実質的な配列相補性の範囲にわたって一緒に対をなしており、それによって、ｄｓＲＮＡ分子を形成している。第１のＲＮＡ鎖と第２のＲＮＡ鎖は、直接的に又は中間的なＲＮＡ配列を介して、互いに連結することができ、その結果、一本鎖ＲＮＡ分子となり、これが、実質的に相補的な部分が一緒に対となりながら自身上に折り重なることによってよって、ｄｓＲＮＡになる。
【００２４】
あるいは、本発明は、（ｉ）菌類ＨＸＴ１遺伝子によって転写されたｍＲＮＡのヌクレオチド配列のうちの少なくとも１８の隣接するヌクレオチドと実質的に同一であるヌクレオチド配列を有している第１の部分及び（ｉｉ）第１鎖の第１の部分のヌクレオチド配列に対して実質的に相補的であるヌクレオチド配列を有している第２の部分を含んでいるＲＮＡ分子も提供し得る。そのようなＲＮＡ分子は、その実質的に相補的な部分が対になることによって自身上に折り重なる可能性があり、それによって、ｄｓＲＮＡ分子を形成する。
【００２５】
本明細書中で使用される場合、「ＲＮＡｉ」又は「ＲＮＡ干渉」は、同義的に、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）が介在する配列特異的遺伝子サイレンシングの方法を意味している。本明細書中で使用される場合、「ｄｓＲＮＡ」又は「二本鎖ＲＮＡ」は、各鎖又はその特定の部分の間の隣接するヌクレオチド配列の相補性の結果として部分的に又は完全に二本鎖であるＲＮＡ分子を意味している。ＲＮＡ干渉の方法は、文献中に充分に記載されており、そして、特に、長いｄｓＲＮＡ分子をマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）及び低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）と称される約２０のヌクレオチドからなるｄｓＲＮＡのより小さな断片に切断する酵素Ｄｉｃｅｒを必要とする。これらのｍｉＲＮＡ及びｓｉＲＮＡは、対にならず、当該鎖の一方は、ＲＩＳＣ（ＲＮＡ−Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ  Ｃｏｍｐｌｅｘ）と称される酵素複合体と相互作用する。ＲＩＳＣは、「Ａｒｇｏｎａｕｔｅ」と命名された触媒性酵素を含んでおり、この酵素は、該ＲＩＳＣと関わるｓｉＲＮＡ鎖に対する相補配列を有しているｍＲＮＡ分子を切断し、それによって、当該ｍＲＮＡ分子の転写後遺伝子サイレンシングを引き起こす。二本鎖ＲＮＡは、種々の形状又は長さを有することができ、従って、文献中において、又は、当業者によって、種々の名称［例えば、小さな若しくは短い干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、短い干渉核酸（ｓｉＮＡ）、マイクロ−ＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、環状干渉ＲＮＡ（ｃｉＲＮＡ）、又は、短いヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）］を用いても言及され得る。
【００２６】
同様に、本明細書中で使用される場合、用語「核酸」及び「ポリヌクレオチド」は、直鎖の一本鎖又は二本鎖であるＲＮＡ又はＤＮＡを意味する。ｄｓＲＮＡを合成的に生成させる場合、イノシン、５−メチルシトシン、６−メチルアデニン、ヒポキサンチンなどのあまり一般的ではない塩基も、塩基対形成を向上させるために使用することができる。例えば、ウリジンとシチジンのＣ−５プロピン類似体を含んでいるポリヌクレオチドは、それらの天然の等価塩基と比較して高い親和性でＲＮＡに結合するということ、及び、遺伝子発現の効率的な阻害物質であるということが示された。リン酸ジエステル骨格、ロックド核酸又はＲＮＡのリボース糖基における２’−ヒドロキシへの修飾のような、別の修飾も実施し得る。
【００２７】
本明細書中で使用される場合、用語「実質的に同一な」又は「対応する」は、２つのポリヌクレオチドのヌクレオチド配列又は２つのポリペプチドのアミノ酸配列の間の配列同一性を示している。本発明によれば、２つのポリヌクレオチドは、少なくとも７０％のヌクレオチド配列同一性を有し、２つのポリペプチドは、少なくとも７０％のアミノ酸配列同一性を有している。７０％のヌクレオチド配列同一性又はアミノ酸配列同一性は、２つのポリヌクレオチドのヌクレオチドの７０％又は２つのポリペプチドのアミノ酸の７０％が、それぞれ、当該ポリヌクレオチド、当該ポリペプチドの考慮される長さにわたって同一であることを意味する。好ましくは、２つのポリヌクレオチド又は２つのポリペプチドは、それぞれ、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の、ヌクレオチド配列同一性、アミノ酸配列同一性を有する。
【００２８】
本明細書中で使用される場合、本発明のｄｓＲＮＡに適用された場合の用語「実質的に同一な」は、当該ｄｓＲＮＡのうちの１本の鎖のＲＮＡ配列又はその一部分が、菌類ＨＸＴ１遺伝子によって転写されたｍＲＮＡの１８以上の隣接するヌクレオチドと、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有していることを意味する。「１８以上の隣接するヌクレオチド」は、菌類ＨＸＴ１遺伝子によって転写されたｍＲＮＡの、少なくとも１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、５０、１００、２００、３００、４００、５００、１０００、１５００若しくは２０００の連続する塩基からなる部分、又は、最大で全長を意味する。従って、菌類ＨＸＴ１遺伝子と実質的に配列同一性である部分の長さは、通常、当該ｄｓＲＮＡ分子の第１の部分及び第２の部分の長さを決定する。
【００２９】
本明細書中で使用される場合、「相補的」ヌクレオチド配列は、２つの一本鎖ヌクレオチド配列において、そのヌクレオチド塩基が、標準的なワトソン−クリックの相補性規則に従ってそれらのそれぞれの配列の特定の隣接する部分（又は、実質的に隣接する部分）にわたって相補的であって、従って、それらのそれぞれの相補的な部分にわたって互いに対形成又はハイブリダイズすることが可能な、前記２つの一本鎖ヌクレオチド配列を意味する。特定的には、プリン塩基はピリミジン塩基と対形成し、より具体的には、グアニン塩基はシトシン塩基と対形成し（Ｇ：Ｃ）、アデニン塩基は、ＤＮＡの場合には、チミン塩基と対形成し（Ａ：Ｔ）、又は、ＲＮＡの場合には、ウラシル塩基と対形成する（Ａ：Ｕ）。２つのポリヌクレオチドのそれぞれが他方に対して実質的に相補的である少なくとも１の領域又は充分な数の相補的塩基を有しているという条件の下では、その２つのポリヌクレオチドが、たとえそれらが互いに完全には相補的でなくても、互いに対形成又はハイブリダイズし得るということは理解される。本発明に関連して本明細書中で使用される場合、用語「実質的に相補的」は、類似した長さの２つのポリヌクレオチドのヌクレオチド配列（又は、その一部分）がそれらのそれぞれのヌクレオチドの少なくとも８０％にわたって相補的であること、即ち、それらが、他方のヌクレオチド配列の対応する位置における相補的ヌクレオチドと対形成又はハイブリダイズすることが可能なそれらのヌクレオチドの少なくとも８０％を有していること、を意味する。好ましくは、当該２つのポリヌクレオチドは、それらのヌクレオチドの少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくはそれ以上又は全体にわたって相補的であるヌクレオチド配列を有している。あるいは、「実質的に相補的」は、２つのポリヌクレオチドが高緊縮条件下においてハイブリダイズすることが可能であることを意味する。
【００３０】
本発明によれば、ｄｓＲＮＡの第１鎖及び第２鎖、又は、それらの第１の部分及び第２の部分は、同一のサイズを有し得る。あるいは、第１鎖のサイズは、第２鎖のサイズより大きくてもよい。例として、第１鎖のサイズは第２鎖のサイズよりも約２００ヌクレオチド大きいことが可能である。本発明の別の態様では、第２鎖のサイズは第１鎖よりも大きい。
【００３１】
各ＲＮＡ鎖の相補的な部分はそのＲＮＡ鎖の全長であることができ、その場合、塩基の対形成はそのＲＮＡ鎖の全長にわたって起こり、又は、各ＲＮＡ鎖の相補的な部分はそのＲＮＡ鎖よりも短くてもよく、その場合、塩基の対形成はそのＲＮＡ鎖の配列相補性の部分にわたってのみ起こる。
【発明を実施するための形態】
【００３２】
本発明の特定の実施形態では、菌類ＨＸＴ１遺伝子は、さび病ＨＸＴ１遺伝子である。
【００３３】
従って、本発明は、
（ｉ）菌類ＨＸＴ１遺伝子によって転写されたｍＲＮＡのヌクレオチド配列のうちの少なくとも１８の隣接するヌクレオチドと実質的に同一であるヌクレオチド配列を有している第１の部分を含んでいる第１のＲＮＡ鎖；及び
（ｉｉ）第１鎖の第１の部分のヌクレオチド配列に対して実質的に相補的であるヌクレオチド配列を有している第２の部分を含んでいる第２のＲＮＡ鎖；
を含んでいるｄｓＲＮＡ分子を提供し、ここで、該菌類ＨＸＴ１遺伝子は、さび病ＨＸＴ１遺伝子である。
【００３４】
「さび病」又は「真菌さび病」は、本発明に関連して、系統学的なサビキン目（Ｐｕｃｃｉｎｉａｌｅｓ）の植物病原体を意味する。従って、「さび病ＨＸＴ１遺伝子」は、ＨＸＴ１タンパク質をコードする、系統学的なサビキン目（Ｐｕｃｃｉｎｉａｌｅｓ）の真菌種に由来する遺伝子である。系統学的なサビキン目（Ｐｕｃｃｉｎｉａｌｅｓ）の代表的な種は、ファコプソラ・パキリジ（Ｐｈａｋｏｐｓｏｒａ  ｐａｃｈｙｒｈｉｚｉ）、ウロミセス・ファバエ（Ｕｒｏｍｙｃｅｓ  ｆａｂａｅ）、プッシニア・ストリイホルミス（Ｐｕｃｃｉｎｉａ  ｓｔｒｉｉｆｏｒｍｉｓ）、プッシニア・トリチシナ（Ｐｕｃｃｉｎｉａ  ｔｒｉｔｉｃｉｎａ）及びプッシニア・グラミニス（Ｐｕｃｃｉｎｉａ  ｇｒａｍｉｎｉｓ）である。従って、さび病ＨＸＴ１遺伝子は、上記種のうちの１つに由来する（即ち、上記種のうちの１つにおいて天然に存在している）遺伝子である。本発明に従って好ましいさび病ＨＸＴ１遺伝子は、種ファコプソラ・パキリジ（Ｐｈａｋｏｐｓｏｒａ  ｐａｃｈｙｒｈｉｚｉ）のＨＸＴ１遺伝子である。
【００３５】
特定の実施形態では、本発明は、
（ｉ）真菌さび病ＨＸＴ１遺伝子によって転写されたｍＲＮＡのヌクレオチド配列のうちの少なくとも１８の隣接するヌクレオチドと実質的に同一であるヌクレオチド配列を有している第１の部分を含んでいる第１のＲＮＡ鎖；及び
（ｉｉ）第１鎖の第１の部分のヌクレオチド配列に対して実質的に相補的であるヌクレオチド配列を有している第２の部分を含んでいる第２のＲＮＡ鎖；
を含んでいるｄｓＲＮＡ分子を提供し、ここで、前記真菌さび病ＨＸＴ１遺伝子は、以下のものからなるリストから選択される：
（ａ）以下の配列識別番号に記載されている配列を含んでいるポリヌクレオチド：１、３、５、７、及び、９；
（ｂ）以下の配列識別番号に記載されている配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド：２、４、６、８、及び、１０；
（ｃ）以下の配列識別番号に記載されている配列を有するポリヌクレオチドと少なくとも７０％の配列同一性を有するポリヌクレオチド：１、３、５、７、及び、９；
（ｄ）以下の配列識別番号に記載されている配列を有するポリペプチドと少なくとも７０％の配列同一性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド：２、４、６、８、及び、１０；
（ｅ）以下の配列識別番号に記載されている配列を有するポリヌクレオチドと緊縮条件でハイブリダイズするポリヌクレオチド：１、３、５、７、及び、９。
【００３６】
本発明によれば、用語「配列同一性」は、考慮される長さのポリペプチド又はポリヌクレオチドのアミノ酸又はヌクレオチドの総数の百分率で表された、それぞれ別のポリペプチド又はポリヌクレオチドのアミノ酸又はヌクレオチドと同一である、それぞれ、ポリペプチド又はポリヌクレオチドのアミノ酸又はヌクレオチドの数として理解される。配列同一性は、好ましくは、グローバルアラインメントアルゴリズム又はローカルアラインメントアルゴリズムに基づいた適切な配列アラインメントコンピュータープログラムを使用して、本発明のポリペプチド又はポリヌクレオチドの配列を別のポリペプチド又はポリヌクレオチドと比較することによって決定する。
【００３７】
比較するポリペプチド又はポリヌクレオチドが異なる長さを有している場合、長い方の配列と共通している短い方の配列のそれぞれアミノ酸又はヌクレオチドの数が配列同一性の百分率を求めるその長さを決定するように、配列同一性の百分率を決定する。これらのコンピュータープログラムは、２つの配列をそれらの全長にわたって整列させるために、通常、「Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ」グローバルアラインメントアルゴリズムを使用して、マッチする数を最大化し、且つ、ギャップ数を最小化する。一般に、デフォルトパラメータを、ギャップ導入ペナルティー（ｇａｐ  ｃｒｅａｔｉｏｎ  ｐｅｎａｌｔｙ）＝１０及びギャップ延長ペナルティー（ｇａｐ  ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ  ｐｅｎａｌｔｙ）＝０．５（いずれも、ヌクレオチド及びタンパク質のアラインメントに対して）で使用する。好ましくは、同一性は、よく知られていて且つ一般に公開されているコンピュータープログラム「ＣｌｕｓｔａｌＷ」（Ｔｈｏｍｐｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９４，  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２２，  ４６７３−４６８０）を用いて決定する。「ＣｌｕｓｔａｌＷ」は、「ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／ｔｏｏｌｓ／ｃｌｕｓｔａｌＷ２／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ」において公に利用可能な状態にされている。本発明によるタンパク質と別のタンパク質の間の同一性を決定するためには、好ましくは、「ＣｌｕｓｔａｌＷ」コンピュータープログラムのバージョン２．１を使用する。その際、以下のパラメーターを設定しなければならない：ＫＴＵＰＬＥ＝１、ＴＯＰＤＩＡＧ＝５、ＷＩＮＤＯＷ＝５、ＰＡＩＲＧＡＰ＝３、ＧＡＰＯＰＥＮ＝１０、ＧＡＰＥＸＴＥＮＤ＝０．０５、ＧＡＰＤＩＳＴ＝８、ＭＡＸＤＩＶ＝４０、ＭＡＴＲＩＸ＝ＧＯＮＮＥＴ、ＥＮＤＧＡＰＳ（ＯＦＦ）、ＮＯＰＧＡＰ、ＮＯＨＧＡＰ。
【００３８】
例えば、本発明による核酸分子のヌクレオチド配列と別の核酸分子のヌクレオチド配列の間の同一性を決定するためには、好ましくは、「ＣｌｕｓｔａｌＷ」コンピュータープログラムのバージョン２．１を使用する。その際、以下のパラメーターを設定しなければならない：ＫＴＵＰＬＥ＝２、ＴＯＰＤＩＡＧＳ＝４、ＰＡＩＲＧＡＰ＝５、ＤＮＡＭＡＴＲＩＸ：ＩＵＢ、ＧＡＰＯＰＥＮ＝１０、ＧＡＰＥＸＴ＝５、ＭＡＸＤＩＶ＝４０、ＴＲＡＮＳＩＴＩＯＮＳ：負荷無（ｕｎｗｅｉｇｈｔｅｄ）。
【００３９】
本発明によれば、用語「緊縮条件下でハイブリダイズする」は、ポリヌクレオチドが別のポリヌクレオチドに他のポリヌクレオチドに対するよりも検出可能に大きな程度（例えば、バックグラウンドに対するよりも少なくとも２倍）でハイブリダイズ（通常は、プローブとしてデザインされている）する条件を示している。緊縮条件は、配列に依存し、そして、環境によって異なる。ハイブリダイゼーションの厳密性及び／又は洗浄条件を制御することによって、ポリヌクレオチドプローブと配列が１００％同一であるポリヌクレオチドを識別することが可能である（相同的プロービング（ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ  ｐｒｏｂｉｎｇ））。あるいは、配列同一性の程度がより低いポリヌクレオチドが検出されることを目的として、配列における多少の不整合が許容されるように緊縮条件を調節することが可能である（非相同的プロービング（ｈｅｔｅｒｏｌｏｇｏｕｓ  ｐｒｏｂｉｎｇ））。一般に、ポリヌクレオチドプローブは、長さが約１０００ヌクレオチド未満であり、好ましくは、長さが５００ヌクレオチド未満である。
【００４０】
一般に、緊縮条件は、定められたイオン強度及びｐＨにおいて特異的配列に関する熱融点（Ｔｍ）よりも約５℃低いように選択する。該「Ｔｍ」は、完全にマッチするプローブに標的配列の５０％がハイブリダイズする温度（定められたイオン強度及びｐＨにおいて）である。典型的には、塩濃度がｐＨ７において約０．０２モルであり且つ温度が少なくとも６０℃である緊縮条件を選択する。塩濃度を低下させること及び／又は温度を上昇させることは、厳密性を上昇させる。ＲＮＡ−ＤＮＡハイブリダイゼーション（ノーザンブロット（これは、例えば、１００ｎｔのプローブを使用する））に関する緊縮条件は、例えば、６３℃で２０分間、０．２×ＳＳＣでの少なくとも１回の洗浄を含んでいるような条件又はそれに等価な条件である。ＤＮＡ−ＤＮＡハイブリダイゼーション（サザンブロット（これは、例えば、１００ｎｔのプローブを使用する））に関する緊縮条件は、例えば、少なくとも５０℃の温度（通常は、約５５℃）で２０分間、０．２×ＳＳＣでの少なくとも１回（通常は、２回）の洗浄を含んでいるような条件又はそれに等価な条件である。以下のものも参照されたい：「Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８９）  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ」、及び、「Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ａｎｄ  Ｒｕｓｓｅｌｌ  （２００１）  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  Ｔｈｉｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  ＮＹ」、並びに、「Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９４）  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，  ＵＳＡ」の第１巻及び第２巻。
【００４１】
緊縮条件は、ホルムアミドのような不安定化剤を添加して達成することも可能である。代表的な低緊縮条件としては、３７℃で３０〜３５％ホルムアミド、１Ｍ  ＮａＣｌ、１％ＳＤＳ（ドデシル硫酸ナトリウム）からなる緩衝溶液を使用するハイブリダイゼーション、及び、５０〜５５℃で１×〜２×ＳＳＣ（２０×ＳＳＣ＝３．０Ｍ  ＮａＣｌ／０．３Ｍ  クエン酸三ナトリウム）の中での洗浄などがある。代表的な中緊縮条件としては、３７℃で４０〜４５％ホルムアミド、１．０Ｍ  ＮａＣｌ、１％ＳＤＳの中でのハイブリダイゼーション、及び、５５〜６０℃で０．５×〜１×ＳＳＣの中での洗浄などがある。代表的な高緊縮条件としては、３７℃で５０％＞ホルムアミド、１Ｍ  ＮａＣｌ、１％ＳＤＳの中でのハイブリダイゼーション、及び、６０〜６５℃で０．１×ＳＳＣの中での洗浄などがある。場合により、洗浄緩衝液は、約０．１％〜約１％のＳＤＳを含んでいてもよい。ハイブリダイゼーションの持続時間は、一般に、２４時間未満であり、通常は、約４〜約１２時間である。
【００４２】
ハイブリダイゼーションは、当業者にはよく知られている当技術分野において慣習的な方法に準じて実施することができる（特に、「Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００１，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  Ｔｈｉｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  ＮＹ」）。
【００４３】
本発明の特定の実施形態では、該ｄｓＲＮＡ分子は、保護対象の植物又は作物に対して、予防的な方法（即ち、さび病菌による植物の感染は未だ起こっていない）で施用し得るか、又は、治療的な方法（即ち、植物は既にさび病菌に感染している）で施用し得る。従って、本発明は、有効で且つ植物に対して毒性を示さない量の本明細書中で定義されているｄｓＲＮＡ分子を含んでいる組成物にも関する。
【００４４】
本発明によるｄｓＲＮＡ分子は、インビトロ転写を用いて古典的な化学的合成若しくは固相ＤＮＳＡ合成によって作ることができるか、又は、それらは、動物細胞、細菌、酵母菌若しくは植物のような生物の中で異種（即ち、組換え）発現によって生成させることができる（Ａａｌｔｏ  ｅｔ  ａｌ，  ２００７  ＲＮＡ  １３：  ４２２−４２９）。
【００４５】
従って、本発明は、本明細書中で定義されているｄｓＲＮＡ分子を産生するトランスジェニック生物、好ましくは、トランスジェニック微生物に関する。
【００４６】
従って、本発明は、さらにまた、少なくとも１のＤＮＡ分子を含み、さらに、５’位と、場合により３’位に、異種調節要素を含んでいる遺伝子構築物にも関し、ここで、該遺伝子構築物は、該ＤＮＡ分子が本明細書中で定義されているｄｓＲＮＡ分子を形成し得るＲＮＡ転写産物をコードすることを特徴とする。本発明は、さらにまた、クローニングベクター及び／又は発現ベクターにも関し、ここで、該クローニングベクター及び／又は発現ベクターは、少なくとも１の上記遺伝子構築物を含んでいることを特徴とする。
【００４７】
「有効で且つ植物に対して毒性を示さない量」という表現は、作物上に存在しているか又はおそらく出現するであろう病原体を防除又は駆除するのに充分で、且つ、該作物について植物毒性の感知可能などのような症状も引き起こすことのない、本発明組成物の量を意味する。そのような量は、防除対象の病原体、作物の種類、気候条件、及び、本発明の組成物に含まれている化合物に応じて、広い範囲内で変動し得る。そのような量は、当業者が実行可能な範囲内にある温室内又は圃場における体系的な試験によって決定することが可能である。
【００４８】
かくして、有効で且つ植物に対して毒性を示さない量の本明細書中で定義されているｄｓＲＮＡ分子を活性成分として含み、並びに、農業上許容される支持体、担体、増量剤及び／又は界面活性剤を含んでいる、組成物も提供される。
【００４９】
本発明によれば、用語「支持体（ｓｕｐｐｏｒｔ）」は、活性成分（即ち、ｄｓＲＮＡ）と組み合わせて又は関連させて、植物に対してより容易に施用できるようにする、天然又は合成の有機化合物又は無機化合物を意味する。このような支持体は、従って、一般に不活性であり、また、農業上許容されるものであるべきである。支持体は、固体であることができるし、又は、液体であることもできる。適切な支持体の例としては、クレー、天然又は合成のシリケート、シリカ、樹脂、蝋、固形肥料、水、アルコール（特に、ブタノール）、有機溶媒、鉱油及び植物油、並びに、それらの誘導体などがある。このような支持体の混合物を使用することもできる。
【００５０】
本発明の組成物には、さらにまた、付加的な成分、例えば、限定するものではないが、界面活性剤、保護コロイド、粘着剤、増粘剤、揺変剤、浸透剤、安定化剤、金属イオン封鎖剤などを含ませることもできる。さらに一般的には、該活性化合物は、通常の製剤技術に従う固体又は液体の任意の添加剤と組み合わせることが可能である。
【００５１】
一般に、本発明の組成物には、０．０５〜９９重量％の活性成分、好ましくは、１０〜７０重量％の活性成分を含有させることができる。
【００５２】
本発明の組成物は、エーロゾルディスペンサー、カプセル懸濁液剤、冷煙霧濃厚剤（ｃｏｌｄ  ｆｏｇｇｉｎｇ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ）、散粉性粉剤、乳剤、水中油型エマルション剤、油中水型エマルション剤、カプセル化粒剤、細粒剤、種子処理用フロアブル剤、ガス剤（加圧下）、ガス生成剤（ｇａｓ  ｇｅｎｅｒａｔｉｎｇ  ｐｒｏｄｕｃｔ）、粒剤、温煙霧濃厚剤（ｈｏｔ  ｆｏｇｇｉｎｇ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ）、大型粒剤、微粒剤、油分散性粉剤、油混和性フロアブル剤、油混和性液剤、ペースト剤、植物用棒状剤（ｐｌａｎｔ  ｒｏｄｌｅｔ）、乾燥種子処理用粉剤、農薬粉衣種子、可溶性濃厚剤（ｓｏｌｕｂｌｅ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ）、可溶性粉剤、種子処理用溶液剤、懸濁製剤（フロアブル剤）、微量散布用液剤（ｕｌｔｒａ−ｌｏｗ  ｖｏｌｕｍｅ  （ＵＬＶ）  ｌｉｑｕｉｄ）、微量散布用懸濁液剤（ｕｌｔｒａ−ｌｏｗ  ｖｏｌｕｍｅ  （ＵＬＶ）  ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ）、顆粒水和剤、水分散性錠剤、スラリー処理用水和剤、水溶性顆粒剤、水溶性錠剤、種子処理用水溶性粉剤及び水和剤などのような、さまざまな形態で使用することが可能である。これらの組成物には、処理対象の植物又は種子に対して噴霧装置又は散粉装置のような適切な装置を用いて施用される状態にある組成物のみではなく、作物に対して施用する前に希釈することが必要な商業的な濃厚組成物も包含される。
【００５３】
本発明によるｄｓＲＮＡ化合物は、さらにまた、殺菌剤、除草剤、殺虫剤、殺線虫剤、殺ダニ剤、軟体動物駆除剤、抵抗性誘発物質、薬害軽減剤、シグナル化合物、生物学的薬剤、フェロモン活性物質又は生物学的活性を有する別の化合物などのような１種類以上の別の植物保護化合物又は植物成長促進性化合物と混合させることもできる。そのようにして得られた混合物は、拡大された活性スペクトルを有する。別の殺菌剤化合物との混合物が特に有利である。
【００５４】
本発明の別の特定の実施形態によれば、ｄｓＲＮＡは、保護対象の植物体内に導入されるか、又は、保護対象の植物体内で生成される。植物体内に導入された後、該ｄｓＲＮＡは、植物細胞のＲＮＡｉ加工機構によって、所謂低分子ｄｓＲＮＡ断片（ｓｉＲＮＡ）にさらに加工されることができ、及び、その後、その植物全体に分配されることができ、それによって、植物が真菌さび病病原体による感染から保護される。該導入されたｄｓＲＮＡは、さらにまた、より長いｄｓＲＮＡを真菌細胞が摂取した後、その真菌細胞のＲＮＡｉ加工機構によって、ｓｉＲＮＡに加工されることもできる。
【００５５】
あるいは、該ｄｓＲＮＡは、組織内で、一時的な方法で、空間的な方法で又は誘発可能な方法でｄｓＲＮＡを発現させることを可能にするＤＮＡ分子又は遺伝子構築物を用いて植物細胞を安定な又は一時的な遺伝的形質転換に付すことによって、植物体内で生成され、次いで、それが、植物細胞のＲＮＡｉ加工機構によって低分子ｄｓＲＮＡ断片（ｓｉＲＮＡ）にさらに加工され得る。そのようにして生成されたｄｓＲＮＡは、さらにまた、より長いｄｓＲＮＡを真菌細胞が摂取した後、その真菌細胞のＲＮＡｉ加工機構によって、ｓｉＲＮＡに加工されることもできる。
【００５６】
一時的な遺伝的形質転換は、ウイルス誘導性遺伝子サイレンシング（ＶＩＧＳ）として知られている方法において組換え植物ウイルスを使用して、実施することができる。植物細胞内で組換えＤＮＡ分子又は組換えＲＮＡ分子の一過性発現を誘発させるために多くのＶＩＧＳベクターを利用することができる（Ｐｕｒｋａｙａｓｔｈａ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００９，  Ｐｌａｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．  ４７：  ９６７−９７６）。本発明によるｄｓＲＮＡをダイズ植物体内で発現させるための好ましいＶＩＧＳベクターは、「Ｂｅａｎ  Ｐｏｄ  Ｍｏｔｔｌｅ  Ｖｉｒｕｓ」である（ＢＰＭＶ；Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１０，  Ｐｌａｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  １５３：  ５２−６５）。
【００５７】
従って、本発明は、植物細胞の内部で本発明のｄｓＲＮＡを生成させることが可能な遺伝子構築物又はキメラ遺伝子にも関する。そのような遺伝子構築物又はキメラ遺伝子は、少なくとも１のＤＮＡ分子を含み、さらに、５’位と、場合により３’位に、植物体内で機能し得る異種調節要素を含んでおり、ここで、該遺伝子構築物又はキメラ遺伝子は、該ＤＮＡ配列が当該植物体内で一度発現された本明細書中で定義されているｄｓＲＮＡ分子を形成し得ることを特徴とする。
【００５８】
特定の実施形態では、該遺伝子構築物又はキメラ遺伝子は、
・  作動可能に連結された、植物細胞内で機能性を有するプロモーター調節要素；
・  転写されたときに、センス方向のヌクレオチド配列を有している第１の部分及びアンチセンス方向のヌクレオチド配列を有している第２の部分を転写の方向に含んでいるＲＮＡ分子〔ここで、センス方向の第１の部分の前記ヌクレオチド配列は、真菌さび病ＨＸＴ１遺伝子によって転写されたｍＲＮＡの少なくとも１８の隣接するヌクレオチドと実質的に同一であるヌクレオチド配列からなり、及び、アンチセンス方向の第２の部分の前記ヌクレオチド配列は、アンチセンス方向ではあるが、センス方向の第１の部分のヌクレオチド配列に対して実質的に相補的であるヌクレオチド配列からなり、その実質的な相補性によって該ｍＲＮＡ分子の第１の部分と第２の部分が一緒になってハイブリダイズすることが可能となり、それによって、ｄｓＲＮＡを形成することが可能である〕を生成するＤＮＡ分子；及び、
・  場合により、ターミネーター調節要素；
を含んでいる。
【００５９】
従って、該遺伝子構築物又はキメラ遺伝子は、
・  作動可能に連結された、植物細胞内で機能性を有するプロモーター調節要素；
・  センス方向のヌクレオチド配列を有している第１の部分及びアンチセンス方向のヌクレオチド配列を有している第２の部分を転写の方向に含んでいるＤＮＡ分子〔ここで、センス方向の第１の部分の前記ヌクレオチド配列は、真菌さび病ＨＸＴ１遺伝子のヌクレオチド配列の少なくとも１８の隣接するヌクレオチドと実質的に同一であるヌクレオチド配列からなり、及び、アンチセンス方向の第２の部分の前記ヌクレオチド配列は、アンチセンス方向ではあるが、センス方向の第１の部分のヌクレオチド配列に対して実質的に相補的であるヌクレオチド配列からなる〕；及び、
・  場合により、ターミネーター調節要素；
を含んでいる。
【００６０】
「センス方向」は、転写される所与のＤＮＡ分子又は所与のＲＮＡ分子に関して、そのヌクレオチド配列が５’から３’の方向に配列されているということを意味する。「アンチセンス方向」は、該ヌクレオチド配列がそのＤＮＡ分子又はＲＮＡ分子の３’から５’の方向に配列されているということを意味する。ＤＮＡ分子は、通常、二本鎖であり、そして、該ＤＮＡ分子上の転写される各部分（例えば、遺伝子のコード配列）は、そのヌクレオチド配列を該ＤＮＡ鎖の一方においてセンス方向に有しており、及び、相補的なヌクレオチド配列をもう一方の鎖においてアンチセンス方向に有している。本発明に関連して、ｄｓＲＮＡを形成するＲＮＡに転写されるようにデザインされたＤＮＡ分子は、同一鎖上に２つの実質的に相補的な部分を、一方はセンス方向に、及び、その実質的に相補的な部分はアンチセンス方向に、含んでいる。従って、前記ＤＮＡ分子から転写された前記（一本鎖）ＲＮＡは、センス方向の転写された部分とアンチセンス方向のその実質的に相補的な部分の両方を含んでいる一本鎖でできており、従って、自分自身を折りたたんで実質的に相補的な部分を対形成させることによって、ｄｓＲＮＡに変わることができる。
【００６１】
本発明による遺伝子構築物又はキメラ遺伝子のＤＮＡ配列は、数種類の異なるデザインを有し得る。
【００６２】
第１の実施形態によれば、該ＤＮＡ分子は、スペーサー又はイントロンによって隔てられた２つの核酸部分（１つは、そのヌクレオチド配列をセンス方向に有しており、１つは、そのヌクレオチド配列をアンチセンス方向に有している）を含んでいる。そのヌクレオチド配列をセンス方向に有している前記核酸部分は、真菌さび病ＨＸＴ１遺伝子のヌクレオチド配列の少なくとも１８の隣接するヌクレオチドと実質的に同一であり、そのヌクレオチド配列をアンチセンス方向に有している前記核酸部分は、そのヌクレオチド配列をセンス方向に有している前記部分と実質的に相補的であり、及び、前記スペーサー又はイントロンは、前記２つの別の核酸部分のヌクレオチド配列と配列同一性を全く示さない。植物細胞内のそのようなＤＮＡ配列の転写は、「センス／スペーサー（又は、イントロン）／アンチセンス」構築物に相当する長い一本鎖ＲＮＡ分子を生成させる。この長いＲＮＡ転写産物は、ＲＴ−ＰＣＲによって検出することが可能である。前記２つのＲＮＡ部分のセンスヌクレオチド配列とアンチセンスヌクレオチド配列の間の実質的な配列相補性に起因して、それらは、自然に互いと対形成又はハイブリダイズしてｄｓＲＮＡを形成し、それによって、このｄｓＲＮＡは折りたたまれたＲＮＡであり、そして、２つの相補的な部分を隔てているスペーサー又はイントロンのＲＮＡ配列はループを形成し、それによって、所謂「ヘアピン型」のｄｓＲＮＡが形成される。そのｄｓＲＮＡを、次いで、酵素複合体「ＤＩＣＥＲ」によって分解して低分子ｄｓＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）とする。これは、１９〜２５塩基の範囲内に含まれるサイズを有する小さな二本鎖ＲＮＡである。これらのｓｉＲＮＡを、次いで、菌類細胞内の菌類ＨＸＴ１遺伝子の転写されたｍＲＮＡと最終的に対形成させるためにＲＮＡｉ酵素的機構で加工し、それによって、それらを分解させる。しかし、その加工のどの段階で植物細胞から菌類細胞に取り込まれるのかは未だ知られておらず、従って、正確な要素（ｄｓＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ・・・）も知られていない。
【００６３】
別の実施形態によれば、前記ＤＮＡ分子は、２つの核酸部分（１つは、そのヌクレオチド配列をセンス方向に有しており、１つは、そのヌクレオチド配列をアンチセンス方向に有している）を含んでおり、ここで、その２つの配列は、直接互いに連続している（即ち、スペーサー、イントロン又は別の核酸要素で隔てられていない）。そのヌクレオチド配列をセンス方向に有している前記核酸部分は、真菌さび病ＨＸＴ１遺伝子のヌクレオチド配列の少なくとも１８の隣接するヌクレオチドと実質的に同一であり、そのヌクレオチド配列をアンチセンス方向に有している前記核酸部分は、そのヌクレオチド配列をセンス方向に有している前記部分と、部分的に又はその部分より多く、実質的に相補的であり、それら２つの核酸部分は異なる長さであり、そして、最も長い部分のうちの余分な部分はもう一方の（部分的に相補的な）部分のヌクレオチド配列とは配列相補性を全く示さないヌクレオチド配列を含んでいる。従って、センス方向内の前記部分とアンチセンス方向内の前記部分がそれらの相補的な部分に沿ってハイブリダイズすると、もう一方の部分と配列相補性を全く示さないもっとも長い前記部分の前記余分な部分によってループ構造が形成される。植物細胞内のそのようなＤＮＡ配列の転写は、「センス／アンチセンス」構築物に相当する長い一本鎖ＲＮＡ分子を生成させる。この長いＲＮＡ転写産物は、ＲＴ−ＰＣＲによって検出することが可能である。前記２つのＲＮＡ部分のセンスヌクレオチド配列とアンチセンスヌクレオチド配列の間の実質的な配列相補性に起因して、それらは、自然に互いと対形成又はハイブリダイズしてｄｓＲＮＡを形成し、それによって、このｄｓＲＮＡは折りたたまれたＲＮＡであり、そして、最も長い前記部分のうち前記余分な部分に対応するＲＮＡ部分はループを形成し、それによって、所謂「ヘアピン型」のｄｓＲＮＡが形成される。そのｄｓＲＮＡを、次いで、酵素複合体「ＤＩＣＥＲ」によって分解して低分子ｄｓＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）とする。これは、１９〜２５塩基の範囲内に含まれるサイズを有する小さな二本鎖ＲＮＡである。これらのｓｉＲＮＡを、次いで、菌類細胞内の菌類ＨＸＴ１遺伝子の転写されたｍＲＮＡと最終的に対形成させるためにＲＮＡｉ酵素的機構で加工し、それによって、それらを分解させる。しかし、その加工のどの段階で植物細胞から菌類細胞に取り込まれるのかは未だ知られておらず、従って、正確な要素（ｄｓＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ・・・）も知られていない。
【００６４】
別の実施形態によれば、該遺伝子構築物は、
・  植物細胞内で機能性を有する２つのプロモーター調節配列〔ここで、第１のプロモーター調節配列は、転写されたときにセンス方向に第１の核酸部分を少なくとも含んでいる第１のＲＮＡ分子を生成させる第１のＤＮＡ分子に作動可能に連結されており、及び、第２のプロモーター調節配列は、転写されたときにアンチセンス方向に第２の核酸部分（ここで、該第２の核酸部分は該第１の核酸部分と実質的に相補的である）を少なくとも含んでいる第２のＲＮＡ分子を生成させる第２のＤＮＡ分子に作動可能に連結されており、ここで、センス方向の該第１の核酸部分は、真菌さび病ＨＸＴ１遺伝子によって転写されたｍＲＮＡのヌクレオチド配列の少なくとも１８の隣接するヌクレオチドと実質的に同一であるヌクレオチド配列を含んでいる〕；
及び、
・  場合により、ターミネーター調節配列；
を含んでいる。
【００６５】
この特定の実施形態において、該遺伝子構築物は、２つのキメラ遺伝子を含むことができ、ここで、一方のキメラ遺伝子は、転写されたときにセンス方向に第１の核酸部分（ここで、該第１の核酸部分は、真菌さび病ＨＸＴ１遺伝子によって転写されたｍＲＮＡのヌクレオチド配列の少なくとも１８の隣接するヌクレオチドと実質的に同一である）を少なくとも含んでいる第１のＲＮＡ分子を生成させる第１のＤＮＡ分子に作動可能に連結されている第１のプロモーター調節配列と場合によりターミネーター調節配列を含んでおり、及び、第２のキメラ遺伝子は、転写されたときにアンチセンス方向に第２の核酸部分（ここで、該第２の核酸部分はセンス方向の該第１の核酸部分と実質的に相補的である）を少なくとも含んでいる第２のＲＮＡ分子を生成させる第２のＤＮＡ分子に作動可能に連結されている第２のプロモーター調節配列と場合によりターミネーター調節配列を含んでいる。
【００６６】
これらの２つのキメラ遺伝子は、該ｄｓＲＮＡを形成させるための２つの一本鎖ＲＮＡのハイブリダイゼーションを最適化するために、好ましくは、植物細胞の中に共同して導入するが、それは、必ずしも必要ではない。
【００６７】
遺伝子構築物が２つのプロモーター調節配列を用いてデザインされる場合、該第１のプロモーター調節配列と該第２のプロモーター調節配列は異なっていても又は同一でもよく、好ましくは、異なっている。
【００６８】
本発明は、さらにまた、植物を形質転換するためのクローニングベクター及び／又は発現ベクターにも関し、ここで、該クローニングベクター及び／又は発現ベクターは、本明細書中で定義されている少なくとも１のキメラ遺伝子又は遺伝子構築物を含んでいることを特徴とする。
【００６９】
本発明は、さらに、本発明によるＤＮＡ分子又は遺伝子構築物を含んでいて、従って、本明細書中で定義されている本発明のｄｓＲＮＡ分子を発現するトランスジェニック植物細胞にも関する。
【００７０】
本発明を適用し得るな植物の中で、以下のものを挙げることができる：主要農作物、例えば、トウモロコシ（Ｚｅａ  ｍａｙｓ）、ダイズ（Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ）、ワタ（Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍ  ｈｉｒｓｕｔｕｍ）、アブラナ属油料種子（Ｂｒａｓｓｉｃａ  ｏｉｌｓｅｅｄｓ）、例えば、セイヨウアブラナ（Ｂｒａｓｓｉｃａ  ｎａｐｕｓ）（例えば、カノラ）、カブ（Ｂｒａｓｓｉｃａ  ｒａｐａ）、カラシナ（Ｂ．ｊｕｎｃｅａ）（例えば、マスタード）及びアビシニアガラシ（Ｂｒａｓｓｉｃａ  ｃａｒｉｎａｔａ）、イネ（Ｏｒｙｚａ  ｓａｔｉｖａ）、コムギ（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ  ｓｓｐ．、特に、Ｔｒｉｔｉｃｕｍ  ａｅｓｔｉｖｕｍ）、テンサイ（Ｂｅｔａ  ｖｕｌｇａｒｉｓ）、サトウキビ（Ｓａｃｃｈａｒｕｍ  Ｏｆｆｉｃｉｎａｒｕｍ）、エンバク（Ａｖｅｎａ  ｓａｔｉｖａ）、ライムギ（Ｓｅｃａｌｅ  ｃｅｒｅａｌｅ）、オオムギ（Ｈｏｒｄｅｕｍ  ｖｕｌｇａｒｅ）、アワ、ライコムギ、アマ、ブドウの木、並びに、種々の植物学的分類群のさまざまな果実及び野菜、例えば、バラ科各種（Ｒｏｓａｃｅａｅ  ｓｐ．）（例えば、仁果（ｐｉｐ  ｆｒｕｉｔ）、例えば、リンゴ及びナシ、さらに、核果、例えば、アンズ、サクラ、アーモンド及びモモ、液果（ｂｅｒｒｙ  ｆｒｕｉｔｓ）、例えば、イチゴ）、リベシオイダエ科各種（Ｒｉｂｅｓｉｏｉｄａｅ  ｓｐ．）、クルミ科各種（Ｊｕｇｌａｎｄａｃｅａｅ  ｓｐ．）、カバノキ科各種（Ｂｅｔｕｌａｃｅａｅ  ｓｐ．）、ウルシ科各種（Ａｎａｃａｒｄｉａｃｅａｅ  ｓｐ．）、ブナ科各種（Ｆａｇａｃｅａｅ  ｓｐ．）、クワ科各種（Ｍｏｒａｃｅａｅ  ｓｐ．）、モクセイ科各種（Ｏｌｅａｃｅａｅ  ｓｐ．）、マタタビ科各種（Ａｃｔｉｎｉｄａｃｅａｅ  ｓｐ．）、クスノキ科各種（Ｌａｕｒａｃｅａｅ  ｓｐ．）、バショウ科各種（Ｍｕｓａｃｅａｅ  ｓｐ．）（例えば、バナナの木及びバナナ園（ｂａｎａｎａ  ｔｒｅｅｓ  ａｎｄ  ｐｌａｎｔｉｎｇｓ））、アカネ科各種（Ｒｕｂｉａｃｅａｅ  ｓｐ．）（例えば、コーヒー）、ツバキ科各種（Ｔｈｅａｃｅａｅ  ｓｐ．）、アオギリ科各種（Ｓｔｅｒｃｕｌｉｃｅａｅ  ｓｐ．）、ミカン科各種（Ｒｕｔａｃｅａｅ  ｓｐ．）（例えば、レモン、オレンジ及びグレープフルーツ）；ナス科各種（Ｓｏｌａｎａｃｅａｅ  ｓｐ．）（例えば、トマト、ジャガイモ、トウガラシ、ナス）、ユリ科各種（Ｌｉｌｉａｃｅａｅ  ｓｐ．）、キク科各種（Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉａｅ  ｓｐ．）（例えば、レタス、チョウセンアザミ及びチコリー（これは、ルートチコリー（ｒｏｏｔ  ｃｈｉｃｏｒｙ）、エンダイブ又はキクニガナを包含する））、セリ科各種（Ｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒａｅ  ｓｐ．）（例えば、ニンジン、パセリ、セロリ及びセルリアック）、ウリ科各種（Ｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｅａｅ  ｓｐ．）（例えば、キュウリ（これは、ピックルキュウリ（ｐｉｃｋｌｉｎｇ  ｃｕｃｕｍｂｅｒ）を包含する）、カボチャ、スイカ、ヒョウタン及びメロン）、ネギ科各種（Ａｌｌｉａｃｅａｅ  ｓｐ．）（例えば、タマネギ及びリーキ）、アブラナ科各種（Ｃｒｕｃｉｆｅｒａｅ  ｓｐ．）（例えば、白キャベツ、赤キャベツ、ブロッコリー、カリフラワー、芽キャベツ、タイサイ、コールラビ、ラディッ��ュ、セイヨウワサビ、コショウソウ、ハクサイ）、マメ科各種（Ｌｅｇｕｍｉｎｏｓａｅ  ｓｐ．）（例えば、ラッカセイ、エンドウ及びインゲンマメ（例えば、クライミングビーン（ｃｌｉｍｂｉｎｇ  ｂｅａｎｓ）及びソラマメ））、アカザ科各種（Ｃｈｅｎｏｐｏｄｉａｃｅａｅ  ｓｐ．）（例えば、フダンソウ（ｍａｎｇｏｌｄ）、フダンソウ（ｓｐｉｎａｃｈ  ｂｅｅｔ）、ホウレンソウ、ビートルート）、アオイ科（Ｍａｌｖａｃｅａｅ）（例えば、オクラ）、クサスギカズラ科（Ａｓｐａｒａｇａｃｅａｅ）（例えば、アスパラガス）；園芸作物及び森林作物（ｆｏｒｅｓｔ  ｃｒｏｐｓ）；観賞植物；及び、これら作物の遺伝子組み換えが行われた相同物。本発明を適用し得る正確な植物は、本明細書中で定義されている本発明によるＨＸＴ１遺伝子を含んでいる菌類（好ましくは、さび病菌）によって感染されやすい植物である。
【００７１】
本発明が適用される好ましい植物は、ダイズ植物である。従って、本発明の特定の実施形態において、該トランスジェニック植物細胞は、ダイズ植物細胞である。
【００７２】
本発明は、さらにまた、本発明によるトランスジェニック植物細胞を含んでいるトランスジェニック植物、トランスジェニック種子又はそれらの一部分にも関する。
【００７３】
本発明の特定の実施形態において、該トランスジェニック植物、トランスジェニック種子又はそれらの一部分は、ダイズ植物、ダイズ種子又はそれらの一部分である。
【００７４】
用語「キメラ遺伝子」、「遺伝子構築物］又は「発現カセット」は、一般に、遺伝子の基本低な要素、即ち、プロモーター、コード配列及びターミネーターを含んでいる人工的な遺伝子を意味することが意図されており、ここで、該要素は、自然界に見られる少なくとも２種類の遺伝子に由来し、及び／又は、少なくとも２種類の異なる生物の同じ遺伝子（即ち、同じ機能を有するタンパク質をコードする遺伝子）に由来する。典型的な「キメラ遺伝子」、「遺伝子構築物］又は「発現カセット」は、転写の方向に互いに機能的に連結されている、植物細胞内で機能するプロモーター調節配列、ＲＮＡに転写され得るＤＮＡ配列、及び、場合により、植物細胞内で機能するターミネーターを含んでいる。
【００７５】
表現「キメラ遺伝子」、「遺伝子構築物］又は「発現カセット」は、さらにまた、プロモーター調節配列に直接的には連結していないが、例えば、同じプロモーター調節配列の制御下にある幾つかのコード配列を含んでいる多シストロン性構築物の一部分である、タンパク質をコードする配列又はｍＲＮＡも包含し得る。そのような状況下では、該プロモーター調節配列の制御下にある各コード配列は、「キメラ遺伝子」又はあ「発現カセット」としてデザインされる。
【００７６】
本発明によれば、表現「互いに機能的に連結されている」は、キメラ遺伝子の遺伝要素が、それらの機能が協調されて、コード配列の発現を可能とするように、互いに連結されているということを意味する。例として、プロモーターは、それがコード配列を確実に発現させること〔即ち、ｍＲＮＡ（つまり、タンパク質をコードしている）であろうと、又は、任意の別のタイプのＲＮＡ（例えば、ｄｓＲＮＡ）であろうと、そのＲＮＡ分子への転写〕が可能である場合、そのコード配列に機能的に連結されている。本発明によるキメラ遺伝子の構築及びそれのさまざまな要素のアセンブリーは、当業者にはよく知られている技術〔特に、以下のものに記載されている技術：「Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．  （２００１，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  Ｔｈｉｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  ＮＹ）」〕を用いて実施することができる。該キメラ遺伝子を構成する調節要素の選択は、本質的に、植物に依存し、及び、その調節要素がその中で機能しなければならない細胞の種類に依存し、当業者は、所与の植物の中で機能する調節要素を選択することができる。
【００７７】
本発明によるキメラ遺伝子が含んでいることが可能なプロモーターは、構成的又は誘導性であることがき、空間的に又は時間的に調節することが可能である。
【００７８】
本発明のキメラ遺伝子の中で使用することが可能な構成的プロモーターの中で、例として、以下のものを挙げることができる：細菌プロモーター、例えば、オクトピンシンターゼ遺伝子のプロモーター又はノパリンシンターゼ遺伝子のプロモーター（Ｓａｎｄｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８７，  Ｎｕｃｌ．  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１５：  １５４３−１５４８）、ウイルスプロモーター、例えば、カリフラワーモザイクウイルスの１９Ｓ若しくは３５Ｓ  ＲＮＡの転写を制御する遺伝子のプロモーター（ＣａＭＶ；  Ｌａｗｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８７，  Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ９：  ３１５−３２４；  Ｏｄｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８５，  Ｎａｔｕｒｅ，  ３１３：  ８１０−８１２）、又は、キャッサバ葉脈モザイクウイルスのプロモーター（ＣｓＶＭＶ；特許出願ＷＯ９７／４８８１９に記載されている）。植物起源のプロモーターの中で、以下のものを挙げることができる：リブロース−ビスカルボキシラーゼ／オキシゲナーゼ（ＲｕＢｉｓＣＯ）小サブユニット遺伝子のプロモーター、特許出願ＥＰ  ０５０７６９８に記載されているヒストン遺伝子のプロモーター、又は、イネアクチン遺伝子のプロモーター（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９２，  Ｍｏｌ．  Ｃｅｌｌ．  Ｂｉｏｌ．，  １２：３  ３９９−３４０６；  ＵＳ  ５，６４１，８７６）。
【００７９】
本発明のキメラ遺伝子の中で使用することが可能な誘導性プロモーターの中で、例として、以下のものを挙げることができる：オーキシン−結合タンパク質をコードする遺伝子のプロモーター（Ｓｃｈｗｏｂ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９３，  Ｐｌａｎｔ  Ｊ．  ４：  ４２３−４３２）、ＵＤＰ−グルコースフラボノイドグリコシルトランスフェラーゼをコードする遺伝子のプロモーター（Ｒａｌｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８８，  Ｇｅｎｅｔ．，  １１９：  １８５−１９７）、ＭＩＰプロテイナーゼインヒビターをコードする遺伝子のプロモーター（Ｃｏｒｄｅｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９４，  Ｐｌａｎｔ  Ｊ．，  ６：  １４１−１５０）、又は、グリセルアルデヒド−３−ホスフェートデヒドロゲナーゼをコードする遺伝子のプロモーター（Ｍａｒｔｉｎｅｚ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８９，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．，  ２０８：  ５５１−５６５；  Ｑｕｉｇｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８９，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｅｖｏｌ．，  ２９：  ４１２−４２１；  Ｋｏｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９５，  Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．，  ２９：  １２９３−１２９８）。
【００８０】
本発明のキメラ遺伝子の中で使用することが可能な組織特異的プロモーターの中で、例として、以下のものを挙げることができる：根特異的プロモーター、例えば、特許出願ＷＯ  ００／２９５９４に記載されている根特異的プロモーター、花特異的プロモーター、例えば、特許出願ＷＯ  ９８／２２５９３、ＷＯ  ９９／１５６７９若しくはＷＯ  ９９／４３８１８に記載されている花特異的プロモーター、又は、果実特異的プロモーター、特に、種子特異的プロモーター、例えば、特許出願ＷＯ  ９１／１３９９３、ＷＯ  ９２／１７５８０、ＷＯ  ９８／４５４６０、ＷＯ  ９８／４５４６１若しくはＷＯ  ９９／１６８９０に記載されている種子特異的プロモーター。
【００８１】
用語「ターミネーター調節配列」は、植物細胞内又は植物体内で機能する任意の配列を意味することが意図されており、そして、細菌由来（例えば、アグロバクテリウム・ツメファシエンス（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）のｎｏｓターミネーター又はｏｃｓターミネーター）であっても、又は、ウイルス由来（例えば、ＣａＭＶ  ３５Ｓターミネーター）であっても、又は、植物由来（例えば、特許出願ＥＰ  ０６３３３１７に記載されているヒストンターミネーター）であっても、ポリアデニル化配列も包含する。
【００８２】
本発明による構築物を組み込んだ形質転換細胞及び／又は形質転換植物を確認するための選択段階は、本発明の構築物の中に存在している選択マーカー遺伝子又は細胞若しくは植物の形質転換に使用されたプラスミド（これは、該構築物を含んでいる）の中に存在している選択マーカー遺伝子の存在に基づいて、実施することができる。該選択マーカー遺伝子は、転写の方向に機能的に連結された以下の要素を含んでいるキメラ遺伝子の形態であり得る：植物細胞内で機能するプロモーター調節配列、選択マーカーをコードする配列、及び、植物細胞内で機能するターミネーター調節配列。
【００８３】
使用することが可能な選択マーカーの中で、抗生物質に対する抵抗性に関する遺伝子を含んでいるマーカー、例えば、ヒグロマイシンホスホトランスフェラーゼ遺伝子のマーカー（Ｇｒｉｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８３，  Ｇｅｎｅ  ２５：１７９−１８８）、カナマイシンに対する抵抗性を誘発させるネオマイシンホスホトランスフェラーゼ  ＩＩ  遺伝子のマーカー（Ｗｉｒｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８７，  ＤＮＡ，  ６：  ２４５−２５３）又はアミノグリコシド３”−アデニルトランスフェラーゼ遺伝子のマーカーなどを挙げることができるが、さらに、除草剤に対する耐性に関する遺伝子〔例えば、ビアラホスに対する耐性に関するｂａｒ遺伝子（Ｗｈｉｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９０，  Ｎｕｃｌ．  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１８：  １０６２）、グリホセートに対する耐性に関するＥＰＳＰＳ遺伝子（ＵＳ  ５，１８８，６４２）又はイソオキサゾール系に対する耐性に関するＨＰＰＤ遺伝子（ＷＯ  ９６／３８５６７）〕を含んでいるマーカーなども挙げることができる。さらにまた、容易に確認することが可能な酵素（例えば、ＧＵＳ酵素）をコードする遺伝子、ＧＦＰタンパク質をコードする遺伝子、又は、色素若しくは形質転換細胞内で色素の産生を調節する酵素をコードする遺伝子なども挙げることができる。そのようなマーカー遺伝子は、特に、以下の特許出願に記載されている：ＷＯ  ９１／０２０７１、ＷＯ  ９５／０６１２８、ＷＯ  ９６／３８５６７、及び、ＷＯ  ９７／０４１０３。
【００８４】
本発明は、さらに、真菌さび病ＨＸＴ１遺伝子の阻害を誘発させるｄｓＲＮＡを発現することが可能なトランスジェニック植物細胞又はトランスジェニック植物を生成させる方法にも関し、ここで、該方法は、植物細胞を本発明によるキメラ遺伝子又は遺伝子構築物を用いて形質転換させる段階を含んでいる。
【００８５】
該方法は、さらに、形質転換された植物細胞を選択する段階も含み得る。
【００８６】
本発明の特定の実施形態において、本発明は、本発明による本明細書中に記載されているｄｓＲＮＡを発現することが可能なトランスジェニック植物細胞又はトランスジェニック植物を生成させる方法に関し、ここで、該方法は、植物細胞を本発明によるキメラ遺伝子又は遺伝子構築物を用いて形質転換させる段階を含んでいる。好ましくは、該植物細胞は、ダイズ植物細胞であり、又は、該植物は、ダイズ植物である。
【００８７】
本発明による細胞又は植物を得るために、当業者は、多くの既知形質転換方法のうちの１つを使用することができる。
【００８８】
これらの方法のうちの１つでは、形質転換させる宿主生物の細胞又は組織をポリエチレングリコール（ＰＥＧ）及び本発明のベクターと接触させる（Ｃｈａｎｇ  ａｎｄ  Ｃｏｈｅｎ，  １９７９，  Ｍｏｌ．  Ｇｅｎ．  Ｇｅｎｅｔ．  １６８：  １１１−１１５；  Ｍｅｒｃｅｎｉｅｒ  ａｎｄ  Ｃｈａｓｓｙ，  １９８８，  Ｂｉｏｃｈｉｍｉｅ  ７０：  ５０３−５１７）。エレクトロポレーションは、もう１つの方法であり、この方法では、形質転換させる細胞又は組織及び本発明のベクターを電場に付す（Ａｎｄｒｅａｓｏｎ  ａｎｄ  Ｅｖａｎｓ，  １９８８，  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ６：  ６５０−６６０；  Ｓｈｉｇｅｋａｗａ  ａｎｄ  Ｄｏｗｅｒ，  １９８９，  Ａｕｓｔ．  Ｊ．  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  ３：  ５６−６２）。別の方法では、該ベクターをマイクロインジェクション法によって細胞又は組織に直接注入する（Ｇｏｒｄｏｎ  ａｎｄ  Ｒｕｄｄｌｅ，  １９８５，  Ｇｅｎｅ  ３３：  １２１−１３６）。有利には、「微粒子銃（ｂｉｏｌｉｓｔｉｃ）」法を使用し得る。その方法では、その表面に本発明のベクターが吸着されている微粒子で細胞又は組織を衝撃する（Ｂｒｕｃｅ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８９，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８６：  ９６９２−９６９６；  Ｋｌｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９２，  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：  ２８６−２９１；  ＵＳ  ４，９４５，０５０）。好ましくは、植物の細胞又は組織の形質転換は、アグロバクテリウム（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属の細菌を使用して実施することができ、好ましくは、当該植物の細胞又は組織にアグロバクテリウム・ツメファシエンス（Ａ．ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）を感染させることによって実施することができる（Ｋｎｏｐｆ，  １９７９，  Ｓｕｂｃｅｌｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  ６：  １４３−１７３；  Ｓｈａｗ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８３，  Ｇｅｎｅ  ２３：３１５−３３０）、又は、アグロバクテリウム・リゾゲネス（Ａ．ｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓ）を感染させることによって実施することができる（Ｂｅｖａｎ  ａｎｄ  Ｃｈｉｌｔｏｎ，  １９８２，  Ａｎｎｕ．  Ｒｅｖ．  Ｇｅｎｅｔ．  １６：  ３５７−３８４；  Ｔｅｐｆｅｒ  ａｎｄ  Ｃａｓｓｅ−Ｄｅｌｂａｒｔ，  １９８７，  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．  Ｓｃｉ．  ４：  ２４−２８）。好ましくは、アグロバクテリウム・ツメファシエンス（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）を用いた植物の細胞又は組織の形質転換は、Ｈｉｅｉら（１９９４，  Ｐｌａｎｔ  Ｊ．  ６：  ２７１−２８２）によって記載されたプロトコルに従って実施する。当業者は、形質転換させる宿主生物の種類に応じて適切な方法を選択するであろう。
【００８９】
本発明による植物は、上記で定義されている形質転換植物細胞を含んでいる。特に、該形質転換植物は、上記形質転換植物細胞を再生させることによって得ることができる。該再生は、当該植物種の種類に応じて、任意の適切な方法によって達成される。
【００９０】
本発明は、さらにまた、形質転換された植物若しくはその一部分、並びに、再生された上記植物を栽培する及び／又は交雑させることによって誘導される植物若しくはその一部分、並びに、形質転換された植物の種子にも関する。
【００９１】
本発明は、さらにまた、本発明の植物、その一部分又は種子から得られる最終生成物（例えば、粗びき粉、油又は繊維など）にも関する。
【００９２】
本発明は、さらにまた、それらの植物の部分及びそれらの植物の子孫も包含する。用語「それらの植物の一部分」は、地上部であろうと又は地下部であろうと、それらの植物の任意の器官を意味することが意図されている。地上部の器官は、茎、葉及び雄性生殖器官と雌性生殖器官を含んでいる花である。地下部の器官は、主に、根であるが、それらは、塊茎でもあり得る。用語「子孫」は、本発明による互いの植物の再生から誘導される胚を含んでいる種子を主に意味することが意図されている。拡大解釈すれば、用語「子孫」は、本発明による形質転換植物の間の交雑又は本発明による形質転換植物との交雑から誘導される新しい世代のそれぞれにおいて形成される全ての種子にも適用される。子孫及び種子は、さらにまた、当該形質転換植物の栄養繁殖によってによっても得ることができる。本発明による種子は、殺菌活性、除草活性、殺虫活性、殺線虫活性、殺細菌活性又は殺ウイルス活性から選択される活性を有する少なくとも１種類の活性製品を含んでいる農薬組成物でコーティングすることができる。
【００９３】
本発明は、さらに、植物病原体を防除する方法にも関し、ここで該方法は、当該病原体に本明細書中で定義されている本発明のｄｓＲＮＡ分子又は該ｄｓＲＮＡを含んでいる組成物を与えることを含む。好ましくは、該植物病原体は、真菌さび病である。
【００９４】
本発明に関連して、真菌さび病は、特に、分類学上のサビキン目（Ｐｕｃｃｉｎｉａｌｅｓ）の真菌であり、より特定的には、プッシニア属（Ｐｕｃｃｉｎｉａ）の真菌、好ましくは、プッシニア・グラミニス（Ｐｕｃｃｉｎｉａ  ｇｒａｍｉｎｉｓ）、プッシニア・トリチシナ（Ｐｕｃｃｉｎｉａ  ｔｒｉｔｉｃｉｎａ）若しくはプッシニア・ストリイホルミス（Ｐｕｃｃｉｎｉａ  ｓｔｒｉｉｆｏｒｍｉｓ）、又は、ウロミセス属（Ｕｒｏｍｙｃｅｓ）の真菌、好ましくは、ウロミセス・ファセオリ（Ｕｒｏｍｙｃｅｓ  ｐｈａｓｅｏｌｉ）若しくはウロミセス・アペンジクラツス（Ｕｒｏｍｙｃｅｓ  ａｐｐｅｎｄｉｃｕｌａｔｕｓ）、又は、ファコプソラ属（Ｐｈａｋｏｐｓｏｒａ）の真菌、好ましくは、ファコプソラ・パキリジ（Ｐｈａｋｏｐｓｏｒａ  ｐａｃｈｙｒｈｉｚｉ）である。
【００９５】
本発明は、さらにまた、植物（好ましくは、作物植物）を処理する方法も包含し、ここで、該方法は、有効で且つ植物に対して毒性を示さない量の本発明によるｄｓＲＮＡ分子又は本発明による組成物を植物がそこで生育しているか若しくは生育することが可能な土壌、植物の葉及び／若しくは果実、又は、植物の種子に施用することを特徴とする。
【００９６】
本発明は、さらにまた、植物、作物又は種子の病原体（好ましくは、真菌さび病）を防除する方法にも関し、ここで、該方法は、栽培学的に有効で且つ植物に対して毒性を示さない量の本発明によるｄｓＲＮＡ分子又は本発明による組成物を植物がそこで生育しているか若しくは生育することが可能な土壌、植物の葉及び／若しくは果実、又は、植物の種子に施用することを特徴とする。
【００９７】
本発明に関連して、施用は、種子、植物若しくは果実に対して、又は、植物がそこで生育しているか若しくは植物をそこで栽培するのが望ましい土壌若しくは不活性底土〔例えば、無機底土（例えば、砂、ロックウール、グラスウール；発泡鉱物、例えば、パーライト、バーミキュライト、ゼオライト又は発泡クレー）、軽石、火砕性の物質若しくは材料、合成有機底土（例えば、ポリウレタン）、有機底土（例えば、泥炭、堆肥、木製廃棄物、例えば、コイア、木材繊維若しくは木材チップ、樹皮）、又は、液体底質（例えば、浮遊水耕システム、Ｎｕｔｒｉｅｎｔ  Ｆｉｌｍ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ、Ａｅｒｏｐｏｎｉｃｓ）〕に対して、種子処理として、茎葉施用として、茎施用（ｓｔｅｍ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ）として、灌注若しくは滴下施用〔化学溶液灌水（ｃｈｅｍｉｇａｔｉｏｎ）〕として、実施することができる。
【００９８】
従って、本発明は、植物病原体（特に、真菌さび病）を防除する方法に関し、ここで、該方法は、有効で且つ植物に対して毒性を示さない量の本発明によるｄｓＲＮＡ分子又は本発明による組成物を植物がそこで生育しているか若しくは生育することが可能な土壌、植物の葉及び／若しくは果実、又は、植物の種子に施用することを特徴とする。
【００９９】
本発明の目的のためには、本発明の対象である組成物は、
・  該組成物のうちの１種類を含んでいる液体を当該植物の地上部に噴霧すること；
・  散粉すること、粒剤又は粉剤を土壌中に混和すること、当該植物の周囲に噴霧すること、及び、樹木の場合には、注入すること又は塗りつけること；
・  該組成物のうちの１種類を含んでいる植物保護混合物を用いて当該植物の種子にコーティング又はフィルムコーティングを施すこと；
などのさまざまな処理方法を用いて、植物に施用することが可能である。
【０１００】
本発明の方法は、治療方法、予防方法又は根絶する方法のいずれかであり得る。
【０１０１】
本発明による処理方法において通常施用される活性ｄｓＲＮＡ化合物の薬量は、一般に、また、有利には、
・  茎葉処理では、０．０００１〜１０，０００ｇ／ｈａ、好ましくは、０，０００１〜１０００ｇ／ｈａ、さらに好ましくは、０．００１〜３００ｇ／ｈａである；灌注又は滴下施用の場合、特に、ロックウール又はパーライトなどの不活性底土を用いる限り、該薬量は低減させることも可能である；
・  種子処理では、種子１００ｋｇ当たり０．０００１〜２００ｇ、好ましくは、種子１００ｋｇ当たり０．００１〜１５０ｇである；
・  土壌処理では、０．０００１〜１０，０００ｇ／ｈａ、好ましくは、０．００１〜５，０００ｇ／ｈａである。
【０１０２】
本明細書中に示されている薬量は、本発明の方法を例証するための例として与えられている。当業者は、特に処理対象の植物又は作物の種類に応じて、該施用薬量を適合させる方法を理解するであろう。
【０１０３】
特定の条件下、例えば、処理又は防除の対象の病原体の種類に応じて、より少ない薬量で充分な保護を提供できる場合がある。特定の気候条件、抵抗性、又は、別の要因、例えば、病原体の種類若しくは侵襲の程度（例えば、上記病原体による植物の侵襲の程度）などによって、組み合わせられた活性成分のより多い薬量が必要となる場合がある。最適な薬量は、通常、幾つかの要因、例えば、処理対象の病原体の種類、侵襲されている植物若しくは植物材料の種類若しくは成育の程度、植生の密度、又は、施用方法などに依存する。
【０１０４】
本発明のｄｓＲＮＡは、別の植物保護化合物又は植物成長促進性化合物と混合させて使用することが可能であり、ここで、該植物保護化合物又は植物成長促進性化合物は、通常施用されるそれらの薬量で使用する。
【０１０５】
そのような植物保護化合物又は植物成長促進性化合物は、殺菌剤、除草剤、殺虫剤、殺線虫剤、殺ダニ剤、軟体動物駆除剤、抵抗性誘発物質、薬害軽減剤、生物学的化合物、又は、作物保護活性を有する別の化合物であり得る。
【０１０６】
本発明による処理方法は、さらにまた、塊茎又は根茎のような繁殖器官（ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ  ｍａｔｅｒｉａｌ）を処理するのにも、さらには、種子、実生又は移植実生（ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ  ｐｒｉｃｋｉｎｇ  ｏｕｔ）及び植物又は移植植物（ｐｌａｎｔｓ  ｐｒｉｃｋｉｎｇ  ｏｕｔ）を処理するのにも、有用であり得る。この処理方法は、根を処理するのにも有用であり得る。本発明による処理方法は、関係している植物の樹幹、茎又は柄、葉、花及び果実のような植物の地上部、並びに、真菌感染（例えば、干し草のような貯蔵に起因する感染）に感染しやすい概して全ての材料物質を処理するのにも有用であり得る。
【０１０７】
本発明は、さらに、植物病原体（特に、真菌さび病、ＨＸＴ１遺伝子）の発現を阻害する方法にも関し、ここで、該方法は、以下の：
（ｉ）  植物細胞を本発明によるキメラ遺伝子を用いて形質転換させる段階；
（ｉｉ）  そのように形質転換された細胞又はその細胞から再生させた植物を該キメラ遺伝子の転写を可能とする条件下に置く段階；
（ｉｉｉ）  該細胞又は該植物が該病原体と接触することを可能にする段階；
を含んでいる。
【０１０８】
本発明に従って、全ての植物及び植物の部分を処理することができる。植物は、望ましい及び望ましくない野生植物、栽培品種並びに植物変種（植物変種又は植物育種家の権利によって保護されても又は保護されなくても）のような全ての植物及び植物群を意味する。栽培品種及び植物変種は、慣習的な繁殖方法及び育種方法（これらは、１種類以上の生物工学的方法によって、例えば、倍加半数体、プロトプラスト融合、ランダム突然変異誘発及び定方向突然変異誘発、分子標識若しくは遺伝標識又は生物工学法及び遺伝子工学法などを使用して、補助することができるか又は補うことができる）によって得られる植物であることができる。植物の部分は、植物の地上及び地下の全ての部分及び全ての器官、例えば、枝条、葉、花及び根などを意味し、ここで、例えば、葉、針状葉、茎、枝、花、子実体、果実及び種子、並びに、根、球茎及び根茎などを挙げることができる。作物並びに栄養繁殖器官及び生殖繁殖器官（ｖｅｇｅｔａｔｉｖｅ  ａｎｄ  ｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ  ｐｒｏｐａｇａｔｉｎｇ  ｍａｔｅｒｉａｌ）、例えば、挿木（ｃｕｔｔｉｎｇ）、球茎、根茎、匍匐茎及び種子なども、植物の部分に属する。
【０１０９】
本発明による処理方法は、遺伝子組換え生物（ＧＭＯ）、例えば、植物又は種子などの処理において使用することができる。遺伝子組換え植物（又は、トランスジェニック植物）は、異種遺伝子がゲノムに安定的に組み込まれている植物である。表現「異種遺伝子」は、本質的に、供給されたか又は当該植物の外部で構築された遺伝子であって、核のゲノム、葉緑体のゲノム又はミトコンドリアのゲノムの中に導入されたときに、興味深いタンパク質若しくはポリペプチドを発現することにより、又は、その植物内に存在している別の１つ若しくは複数の遺伝子をダウンレギュレート若しくはサイレンシングすることにより、当該形質転換された植物に新しい又は改善された作物学的特性又は別の特性を付与する遺伝子を意味する〔例えば、アンチセンス技術、コサプレッション技術、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）技術又はマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）技術などを使用する〕。ゲノム内に位置している異種遺伝子は、導入遺伝子とも称される。植物ゲノム内におけるその特異的な位置によって定義される導入遺伝子は、形質転換又は遺伝子導入イベントと称される。
【０１１０】
植物種又は植物品種、それらの生育場所及び生育条件（土壌、気候、生育期、養分（ｄｉｅｔ））に応じて、本発明の処理により、相加効果を超える効果（「相乗効果」）も生じ得る。かくして、例えば、本発明により使用し得る活性化合物及び組成物の施用量の低減及び／又は活性スペクトルの拡大及び／又は活性の増強、植物の生育の向上、高温又は低温に対する耐性の向上、渇水又は水中若しくは土壌中に含まれる塩分に対する耐性の向上、開花能力の向上、収穫の容易性の向上、促進された成熟、収穫量の増加、果実の大きさの増大、植物の高さの増大、葉の緑色の向上、より早い開花、収穫された生産物の品質の向上及び／又は栄養価の増加、果実内の糖度の上昇、収穫された生産物の貯蔵安定性の向上及び／又は加工性の向上などが可能であり、これらは、実際に予期された効果を超えるものである。
【０１１１】
特定の施用量において、本発明による活性化合物組合せは、植物において強化効果（ｓｔｒｅｎｇｔｈｅｎｉｎｇ  ｅｆｆｅｃｔ）も示し得る。従って、本発明による活性化合物組合せは、望ましくない微生物類による攻撃に対して植物の防御システムを動員させるのにも適している。これは、適切な場合には、本発明による組合せの例えば菌類に対する強化された活性の理由のうちの１つであり得る。本発明に関連して、植物を強化する（抵抗性を誘導する）物質は、処理された植物が、その後で望ましくない微生物類を接種されたときに、それらの微生物類に対して実質的な程度の抵抗性を示すように、植物の防御システムを刺激することができる物質又は物質の組合せを意味するものと理解される。この場合、望ましくない微生物類は、植物病原性の菌類、細菌類及びウイルス類を意味するものと理解される。従って、処理後特定の期間、上記病原体による攻撃から植物を保護するために、本発明による物質を用いることができる。保護が達成される期間は、植物が該活性化合物で処理されてから、一般に、１〜１０日間、好ましくは、１〜７日間に及ぶ。
【０１１２】
本発明に従って処理するのが好ましい植物及び植物品種は、特に有利で有益な形質を植物に付与する遺伝物質を有している全ての植物（育種によって得られたものであろうと、及び／又は、生物工学的方法によって得られたものであろうと）を包含する。
【０１１３】
本発明に従って処理するのが同様に好ましい植物及び植物品種は、１以上の生物的ストレスに対して抵抗性を示す。即ち、そのような植物は、害虫及び有害微生物に対して、例えば、線虫類、昆虫類、ダニ類、植物病原性の菌類、細菌類、ウイルス類及び／又はウイロイド類などに対して、良好な防御を示す。
【０１１４】
線虫抵抗性植物又は昆虫抵抗性植物の例は、例えば、以下のものに記載されている：米国特許出願第１１／７６５，４９１号、米国特許出願第１１／７６５，４９４号、米国特許出願第１０／９２６，８１９号、米国特許出願第１０／７８２，０２０号、米国特許出願第１２／０３２，４７９号、米国特許出願第１０／７８３，４１７号、米国特許出願第１０／７８２，０９６号、米国特許出願第１１／６５７，９６４号、米国特許出願第１２／１９２，９０４号、米国特許出願第１１／３９６，８０８号、米国特許出願第１２／１６６，２５３号、米国特許出願第１２／１６６，２３９号、米国特許出願第１２／１６６，１２４号、米国特許出願第１２／１６６，２０９号、米国特許出願第１１／７６２，８８６号、米国特許出願第１２／３６４，３３５号、米国特許出願第１１／７６３，９４７号、米国特許出願第１２／２５２，４５３号、米国特許出願第１２／２０９，３５４号、米国特許出願第１２／４９１，３９６号、米国特許出願第１２／４９７，２２１号、米国特許出願第１２／６４４，６３２号、米国特許出願第１２／６４６，００４号、米国特許出願第１２／７０１，０５８号、米国特許出願第１２／７１８，０５９号、米国特許出願第１２／７２１，５９５号、米国特許出願第１２／６３８，５９１号。
【０１１５】
本発明に従って同様に処理し得る植物及び植物品種は、１以上の非生物的ストレスに対して抵抗性を示す植物である。非生物的なストレス状態としては、例えば、渇水、低温に晒されること、熱に晒されること、浸透ストレス、湛水、土壌中の塩分濃度の上昇、より多くの鉱物に晒されること、オゾンに晒されること、強い光に晒されること、利用可能な窒素養分が限られていること、利用可能なリン養分が限られていること、日陰回避などを挙げることができる。
【０１１６】
本発明に従って同様に処理し得る植物及び植物品種は、増大した収量特性を特徴とする植物である。そのような植物における増大した収量は、例えば、改善された植物の生理機能、生長及び発育、例えば、水の利用効率、水の保持効率、改善された窒素の利用性、強化された炭素同化作用、改善された光合成、上昇した発芽効率及び促進された成熟などの結果であり得る。収量は、さらに、改善された植物の構成（ａｒｃｈｉｔｅｃｔｕｒｅ）によっても影響され得る（ストレス条件下及び非ストレス条件下）。そのような改善された植物の構成としては、限定するものではないが、早咲き、ハイブリッド種子産生のための開花制御、実生の活力、植物の寸法、節間の数及び距離、根の成長、種子の寸法、果実の寸法、莢の寸法、莢又は穂の数、１つの莢又は穂当たりの種子の数、種子の体積、強化された種子充填、低減された種子分散、低減された莢の裂開及び耐倒伏性などがある。収量についてのさらなる形質としては、種子の組成、例えば、炭水化物含有量、タンパク質含有量、油含有量及び油の組成、栄養価、抗栄養化合物の低減、改善された加工性並びに向上した貯蔵安定性などがある。
【０１１７】
本発明に従って処理し得る植物は、雑種強勢（これは、結果として、一般に、増加した収量、向上した活力、向上した健康状態並びに生物的及び非生物的ストレスに対する向上した抵抗性をもたらす）の特性を既に呈しているハイブリッド植物である。そのような植物は、典型的には、雄性不稔交配母体近交系（ｉｎｂｒｅｄ  ｍａｌｅ−ｓｔｅｒｉｌｅ  ｐａｒｅｎｔ  ｌｉｎｅ）（雌性親）を別の雄性稔性交配母体近交系（ｉｎｂｒｅｄ  ｍａｌｅ−ｆｅｒｔｉｌｅ  ｐａｒｅｎｔ  ｌｉｎｅ）（雄性親）と交雑させることによって作られる。ハイブリッド種子は、典型的には、雄性不稔植物から収穫され、そして、栽培者に販売される。雄性不稔植物は、場合により（例えば、トウモロコシにおいて）、雄穂を除去することによって〔即ち、雄性繁殖器官（又は雄花）を機械的に除去することによって〕、作ることができる。しかしながら、より典型的には、雄性不稔性は、植物ゲノム内の遺伝的決定基の結果である。その場合、及び、特に種子がハイブリッド植物から収穫される所望の生産物である場合、典型的には、該ハイブリッド植物において雄性稔性を確実に完全に回復させることは有用である。これは、雄性不稔性に関与する遺伝的決定基を含んでいるハイブリッド植物において雄性稔性を回復させることが可能な適切な稔性回復遺伝子を雄性親が有していることを確実なものとすることによって達成することができる。雄性不稔性に関する遺伝的決定基は、細胞質内に存在し得る。細胞質雄性不稔（ＣＭＳ）の例は、例えば、アブラナ属各種（Ｂｒａｓｓｉｃａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）に関して記述された（ＷＯ  ９２／０５２５１、ＷＯ  ９５／０９９１０、ＷＯ  ９８／２７８０６、ＷＯ  ０５／００２３２４、ＷＯ  ０６／０２１９７２、及び、ＵＳ  ６，２２９，０７２）。しかしながら、雄性不稔性に関する遺伝的決定基は、核ゲノム内にも存在し得る。雄性不稔性植物は、遺伝子工学などの植物バイオテクノロジー法によっても得ることができる。雄性不稔性植物を得る特に有用な方法は、ＷＯ  ８９／１０３９６に記載されており、ここでは、例えば、バルナーゼなどのリボヌクレアーゼを雄ずい内のタペータム細胞において選択的に発現させる。次いで、タペータム細胞内においてバルスターなどのリボヌクレアーゼインヒビターを発現させることによって、稔性を回復させることができる（例えば、ＷＯ  ９１／０２０６９）。
【０１１８】
本発明に従って処理し得る植物又は植物品種（遺伝子工学などの植物バイオテクノロジー法によって得られたもの）は、除草剤耐性植物、即ち、１種類以上の所与の除草剤に対して耐性にされた植物である。そのような植物は、遺伝的形質転換によって得ることができるか、又は、当該除草剤耐性を付与する突然変異を含んでいる植物を選抜することによって得ることができる。
【０１１９】
除草剤抵抗性植物は、例えば、グリホセート耐性植物、即ち、除草剤グリホセート又はその塩に対して耐性にされた植物である。植物は、種々の方法によって、グリホセートに対して耐性にすることができる。例えば、グリホセート耐性植物は、酵素５−エノールピルビルシキミ酸−３−リン酸シンターゼ（ＥＰＳＰＳ）をコードする遺伝子で植物を形質転換させることによって得ることができる。そのようなＥＰＳＰＳ遺伝子の例は、以下のものである：細菌サルモネラ・チフィムリウム（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）のＡｒｏＡ遺伝子（突然変異ＣＴ７）（Ｃｏｍａｉ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８３，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２１：  ３７０−３７１）、細菌アグロバクテリウム属各種（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐ．）のＣＰ４遺伝子（Ｂａｒｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９２，  Ｃｕｒｒ．  Ｔｏｐｉｃｓ  Ｐｌａｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  ７：  １３９−１４５）、ペチュニアのＥＰＳＰＳをコードする遺伝子（Ｓｈａｈ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８６，  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ２３３：  ４７８−４８１）、トマトのＥＰＳＰＳをコードする遺伝子（Ｇａｓｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８８，  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２６３：  ４２８０−４２８９）又はオヒシバ属（Ｅｌｅｕｓｉｎｅ）のＥＰＳＰＳをコードする遺伝子（ＷＯ  ０１／６６７０４）。それは、例えばＥＰ  ０８３７９４４、ＷＯ  ００／６６７４６、ＷＯ  ００／６６７４７又はＷＯ  ０２／２６９９５などに記述されているように、突然変異ＥＰＳＰＳであることも可能である。グリホセート耐性植物は、さらにまた、ＵＳ  ５，７７６，７６０及びＵＳ  ５，４６３，１７５に記述されているように、グリホセートオキシドレダクターゼ酵素をコードする遺伝子を発現させることによって得ることもできる。グリホセート耐性植物は、さらにまた、例えばＷＯ  ０２／０３６７８２、ＷＯ  ０３／０９２３６０、ＷＯ  ２００５／０１２５１５及びＷＯ  ２００７／０２４７８２などに記述されているように、グリホセートアセチルトランスフェラーゼ酵素をコードする遺伝子を発現させることによって得ることもできる。グリホセート耐性植物は、さらにまた、例えばＷＯ  ０１／０２４６１５又はＷＯ  ０３／０１３２２６などに記述されているように、上記遺伝子の自然発生突然変異を含んでいる植物を選抜することによって得ることもできる。グリホセート耐性を付与するＥＰＳＰＳ遺伝子を発現する植物は、例えば、米国特許出願第１１／５１７，９９１号、米国特許出願第１０／７３９，６１０号、米国特許出願第１２／１３９，４０８号、米国特許出願第１２／３５２，５３２号、米国特許出願第１１／３１２，８６６号、米国特許出願第１１／３１５，６７８号、米国特許出願第１２／４２１，２９２号、米国特許出願第１１／４００，５９８号、米国特許出願第１１／６５１，７５２号、米国特許出願第１１／６８１，２８５号、米国特許出願第１１／６０５，８２４号、米国特許出願第１２／４６８，２０５号、米国特許出願第１１／７６０，５７０号、米国特許出願第１１／７６２，５２６号、米国特許出願第１１／７６９，３２７号、米国特許出願第１１／７６９，２５５号、米国特許出願第１１／９４３８０１号又は��国特許出願第１２／３６２，７７４号などに記載されている。グリホセート耐性を付与する別の遺伝子（例えば、デカルボキシラーゼ遺伝子）を含んでいる植物は、例えば、米国特許出願第１１／５８８，８１１号、米国特許出願第１１／１８５，３４２号、米国特許出願第１２／３６４，７２４号、米国特許出願第１１／１８５，５６０号又は米国特許出願第１２／４２３，９２６号などに記載されている。
【０１２０】
別の除草剤抵抗性植物は、例えば、酵素グルタミンシンターゼを阻害する除草剤（例えば、ビアラホス、ホスフィノトリシン又はグルホシネート）に対して耐性にされている植物である。そのような植物は、当該除草剤を解毒する酵素を発現させるか、又は、阻害に対して抵抗性を示す突然変異グルタミンシンターゼ酵素を発現させることによって、得ることができる（例えば、米国特許出願第１１／７６０，６０２号に記載されている）。そのような有効な一解毒酵素は、ホスフィノトリシンアセチルトランスフェラーゼをコードする酵素である（例えば、ストレプトマイセス属各種（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐｅｃｉｅｓ）に由来するｂａｒタンパク質又はｐａｔタンパク質）。外因性のホスフィノトリシンアセチルトランスフェラーゼを発現する植物は、例えば、米国特許第５，５６１，２３６号、米国特許第５，６４８，４７７号、米国特許第５，６４６，０２４号、米国特許第５，２７３，８９４号、米国特許第５，６３７，４８９号、米国特許第５，２７６，２６８号、米国特許第５，７３９，０８２号、米国特許第５，９０８，８１０号及び米国特許第７，１１２，６６５号などに記述されている。
【０１２１】
さらなる除草剤耐性植物は、さらにまた、酵素ヒドロキシフェニルピルビン酸ジオキシゲナーゼ（ＨＰＰＤ）を阻害する除草剤に対して耐性にされている植物である。ＨＰＰＤは、パラ−ヒドロキシフェニルピルベート（ＨＰＰ）がホモゲンチセートに変換される反応を触媒する酵素である。ＨＰＰＤ阻害薬に対して耐性を示す植物は、ＷＯ  ９６／３８５６７、ＷＯ  ９９／２４５８５、ＷＯ  ９９／２４５８６、ＷＯ  ０９／１４４０７９、ＷＯ  ０２／０４６３８７又はＵＳ  ６，７６８，０４４に記述されているように、自然発生抵抗性ＨＰＰＤ酵素をコードする遺伝子を用いて、又は、突然変異ＨＰＰＤ酵素若しくはキメラＨＰＰＤ酵素をコードする遺伝子を用いて、形質転換させることができる。ＨＰＰＤ阻害薬に対する耐性は、さらにまた、ＨＰＰＤ阻害薬による天然ＨＰＰＤ酵素の阻害にもかかわらずホモゲンチセートを形成させることが可能な特定の酵素をコードする遺伝子を用いて植物を形質転換させることによっても得ることができる。そのような植物及び遺伝子は、ＷＯ  ９９／３４００８及びＷＯ  ０２／３６７８７に記述されている。ＨＰＰＤ阻害薬に対する植物の耐性は、さらにまた、ＷＯ  ０４／０２４９２８に記述されているように、ＨＰＰＤ耐性酵素をコードする遺伝子に加えてプレフェナートデヒドロゲナーゼ（ＰＤＨ）活性を有する酵素をコードする遺伝子を用いて植物を形質転換させることによって改善することもできる。さらに、植物は、ＷＯ  ２００７／１０３５６７及びＷＯ  ２００８／１５０４７３に記載されているように、そのゲノムの中にＨＰＰＤ阻害薬を代謝又は分解することが可能な酵素（例えば、ＣＹＰ４５０酵素）をコードする遺伝子を加えることによって、ＨＰＰＤ阻害薬除草剤に対してさらに耐性にすることができる。
【０１２２】
さらに別の除草剤抵抗性植物は、アセトラクテートシンターゼ（ＡＬＳ）阻害薬に対して耐性にされている植物である。既知ＡＬＳ阻害薬としては、例えば、スルホニル尿素系除草剤、イミダゾリノン系除草剤、トリアゾロピリミジン系除草剤、ピリミジニルオキシ（チオ）ベンゾエート系除草剤、及び／又は、スルホニルアミノカルボニルトリアゾリノン系除草剤などがある。ＡＬＳ酵素（「アセトヒドロキシ酸シンターゼ（ＡＨＡＳ）」としても知られている）における種々の突然変異体は、例えば「Ｔｒａｎｅｌ  ａｎｄ  Ｗｒｉｇｈｔ（２００２，  Ｗｅｅｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ５０：  ７００−７１２）」などに記述され、さらに、米国特許第５，６０５，０１１号、米国特許第５，３７８，８２４号、米国特許第５，１４１，８７０号及び米国特許第５，０１３，６５９号などにも記述されているように、種々の除草剤及び除草剤の群に対する耐性を付与することが知られている。スルホニル尿素耐性植物及びイミダゾリノン耐性植物の作製については、米国特許第５，６０５，０１１号、米国特許第５，０１３，６５９号、米国特許第５，１４１，８７０号、米国特許第５，７６７，３６１号、米国特許第５，７３１，１８０号、米国特許第５，３０４，７３２号、米国特許第４，７６１，３７３号、米国特許第５，３３１，１０７号、米国特許第５，９２８，９３７号及び米国特許第５，３７８，８２４号並びにＷＯ  ９６／３３２７０に記述されている。別のイミダゾリノン耐性植物についても、例えば、ＷＯ  ２００４／０４００１２、ＷＯ  ２００４／１０６５２９、ＷＯ  ２００５／０２０６７３、ＷＯ  ２００５／０９３０９３、ＷＯ  ２００６／００７３７３、ＷＯ  ２００６／０１５３７６、ＷＯ  ２００６／０２４３５１及びＷＯ  ２００６／０６０６３４などに記述されている。さらなるスルホニル尿素耐性植物及びイミダゾリノン耐性植物は、さらにまた、例えば、ＷＯ  ２００７／０２４７８２及び米国特許出願第６１／２８８９５８号などにも記述されている。
【０１２３】
イミダゾリノン及び／又はスルホニル尿素に対して耐性を示す別の植物は、例えば、ダイズに関してはＵＳ  ５，０８４，０８２に記述されているように、イネに関してはＷＯ  ９７／４１２１８に記述されているように、テンサイに関してはＵＳ  ５，７７３，７０２及びＷＯ  ９９／０５７９６５に記述されているように、レタスに関してはＵＳ  ５，１９８，５９９に記述されているように、又は、ヒマワリに関してはＷＯ  ０１／０６５９２２に記述されているように、誘導された突然変異誘発、当該除草剤の存在下での細胞培養における選抜又は突然変異育種によって得ることができる。
【０１２４】
本発明に従って同様に処理し得る植物又は植物品種（遺伝子工学などの植物バイオテクノロジー法によって得られたもの）は、昆虫抵抗性トランスジェニック植物、即ち、特定の標的昆虫による攻撃に対して抵抗性にされた植物である。そのような植物は、遺伝的形質転換によって得ることができるか、又は、そのような昆虫抵抗性を付与する突然変異を含んでいる植物を選抜することによって得ることができる。
【０１２５】
本明細書中で使用されている場合、「昆虫抵抗性トランスジェニック植物」には、以下のものをコードするコード配列を含んでいる少なくとも１の導入遺伝子を含んでいる任意の植物が包含される：
（１）  バシルス・ツリンギエンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）に由来する殺虫性結晶タンパク質又はその殺虫活性を示す一部分、例えば、クリックモアら「Ｃｒｉｃｋｍｏｒｅ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９８，  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ，  ６２：  ８０７−８１３」によって記載され、クリックモアら「Ｃｒｉｃｋｍｏｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ  ｔｏｘｉｎ  ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ”  （２０１４），  ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｂｔｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ．ｉｎｆｏ／」によって更新された殺虫性結晶タンパク質又はその殺虫活性を示す一部分、例えば、Ｃｒｙタンパク質類（Ｃｒｙ１Ａｂ、Ｃｒｙ１Ａｃ、Ｃｒｙ１Ｂ、Ｃｒｙ１Ｃ、Ｃｒｙ１Ｄ、Ｃｒｙ１Ｆ、Ｃｒｙ２Ａｂ、Ｃｒｙ３Ａａ、又は、Ｃｒｙ３Ｂｂ）のタンパク質若しくはその殺虫活性を示す一部分（例えば、ＥＰ−Ａ  １９９９１４１、及び、ＷＯ  ２００７／１０７３０２）、又は、例えば米国特許出願第１２／２４９，０１６に記載されている合成遺伝子によってコードされているタンパク質；又は、
（２）  バシルス・ツリンギエンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）に由来する第２の別の結晶タンパク質又はその一部分の存在下において殺虫活性を示す、バシルス・ツリンギエンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）に由来する結晶タンパク質又はその一部分、例えば、Ｃｒｙ３４結晶タンパク質とＣｒｙ３５結晶タンパク質で構成されているバイナリートキシン（Ｍｏｅｌｌｅｎｂｅｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００１，  Ｎａｔ．  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  １９：  ６６８−６７２；  Ｐｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００６，  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｅｎｖｉｒｏｎｍ．  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．  ７１：  １７６５−１７７４）、又は、Ｃｒｙ１Ａ若しくはＣｒｙ１Ｆタンパク質とＣｒｙ２Ａａ若しくはＣｒｙ２Ａｂ若しくはＣｒｙ２Ａｅタンパク質で構成されているバイナリートキシン（米国特許出願第１２／２１４，０２２号、及び、ＥＰ−Ａ  ２３００６１８）；又は、
（３）  バシルス・ツリンギエンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）に由来する種々の殺虫性結晶タンパク質の一部分を含んでいる殺虫性ハイブリッドタンパク質、例えば、上記（１）のタンパク質のハイブリッド、又は、上記（２）のタンパク質のハイブリッド、例えば、トウモロコシイベントＭＯＮ８９０３４で産生されるＣｒｙ１Ａ．１０５タンパク質（ＷＯ  ２００７／０２７７７７）；又は、
（４）  上記（１）〜（３）のいずれか１つのタンパク質において、標的昆虫種に対するさらに強い殺虫活性を得るために、及び／又は、影響を受ける標的昆虫種の範囲を拡大するために、及び／又は、クローニング若しくは形質転換に際してコード化ＤＮＡ中に導入された変化に起因して、幾つかのアミノ酸（特に、１〜１０のアミノ酸）が別のアミノ酸で置き換えられていているもの、例えば、トウモロコシイベントＭＯＮ８６３若しくはＭＯＮ８８０１７におけるＣｒｙ３Ｂｂ１タンパク質又はトウモロコシイベントＭＩＲ６０４におけるＣｒｙ３Ａタンパク質；又は、
（５）  バシルス・ツリンギエンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）又はバシルス・セレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｅｒｅｕｓ）に由来する殺虫性分泌タンパク質又はその殺虫活性を示す一部分、例えば、「ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｌｉｆｅｓｃｉ．ｓｕｓｓｅｘ．ａｃ．ｕｋ／ｈｏｍｅ／Ｎｅｉｌ＿Ｃｒｉｃｋｍｏｒｅ／Ｂｔ／ｖｉｐ．ｈｔｍｌ」において挙げられている栄養生長期殺虫性タンパク質（ｖｅｇｅｔａｔｉｖｅ  ｉｎｓｅｃｔｉｃｉｄａｌ  ｐｒｏｔｅｉｎ）（ＶＩＰ）、例えば、ＶＩＰ３Ａａタンパク質類のタンパク質；又は、
（６）  バシルス・ツリンギエンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）又はバシルス・セレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｅｒｅｕｓ）に由来する第２の分泌タンパク質の存在下において殺虫活性を示す、バシルス・ツリンギエンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）又はバシルス・セレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｅｒｅｕｓ）に由来する分泌タンパク質、例えば、ＶＩＰ１Ａタンパク質とＶＩＰ２Ａタンパク質で構成されているバイナリートキシン（ＷＯ  ９４／２１７９５）；又は、
（７）  バシルス・ツリンギエンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）又はバシルス・セレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｅｒｅｕｓ）に由来する種々の分泌タンパク質の一部分を含んでいる殺虫性ハイブリッドタンパク質、例えば、上記（１）のタンパク質のハイブリッド、又は、上記（２）のタンパク質のハイブリッド；又は、
（８）  上記（５）〜（７）のいずれか１つのタンパク質において、標的昆虫種に対するさらに強い殺虫活性を得るために、及び／又は、影響を受ける標的昆虫種の範囲を拡大するために、及び／又は、クローニング若しくは形質転換に際してコード化ＤＮＡ中に導入された変化（それでも、まだ、殺虫性タンパク質をコードしている）に起因して、幾つかのアミノ酸（特に、１〜１０のアミノ酸）が別のアミノ酸で置き換えられていているもの、例えば、ワタイベントＣＯＴ１０２におけるＶＩＰ３Ａａタンパク質；又は、
（９）  バシルス・ツリンギエンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）に由来する結晶タンパク質の存在下において殺虫活性を示す、バシルス・ツリンギエンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）又はバシルス・セレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｅｒｅｕｓ）に由来する分泌タンパク質、例えば、ＶＩＰ３とＣｒｙ１Ａ若しくはＣｒｙ１Ｆで構成されているバイナリートキシン（米国特許出願第６１／１２６０８３号、及び、米国特許出願第６１／１９５０１９号）、又は、ＶＩＰ３タンパク質とＣｒｙ２Ａａタンパク質若しくはＣｒｙ２Ａｂタンパク質若しくはＣｒｙ２Ａｅタンパク質で構成されているバイナリートキシン（米国特許出願第１２／２１４，０２２号、及び、ＥＰ−Ａ  ２３００６１８）；又は、
（１０）  上記（９）のタンパク質において、標的昆虫種に対するさらに強い殺虫活性を得るために、及び／又は、影響を受ける標的昆虫種の範囲を拡大するために、及び／又は、クローニング若しくは形質転換に際してコード化ＤＮＡ中に導入された変化（それでも、まだ、殺虫性タンパク質をコードしている）に起因して、幾つかのアミノ酸（特に、１〜１０のアミノ酸）が別のアミノ酸で置き換えられていているもの。
【０１２６】
もちろん、「昆虫抵抗性トランスジェニック植物」は、本明細書中で使用されている場合、上記クラス（１）〜（１０）のいずれか１つのタンパク質をコードする遺伝子の組合せを含んでいる任意の植物も包含する。一実施形態では、異なった標的昆虫種に対して異なったタンパク質を使用した場合に影響を受ける標的昆虫種の範囲を拡大するために、又は、同一の標的昆虫種に対して殺虫活性を示すが作用機序は異なっている（例えば、当該昆虫体内の異なった受容体結合部位に結合する）異なったタンパク質を用いることによって当該植物に対する昆虫の抵抗性の発達を遅延させるために、昆虫抵抗性植物は、上記クラス（１）〜（１０）のいずれか１つのタンパク質をコードする２つ以上の導入遺伝子を含んでいる。
【０１２７】
「昆虫抵抗性トランスジェニック植物」は、本明細書中で使用されている場合、さらに、例えばＷＯ  ２００７／０８０１２６、ＷＯ  ２００６／１２９２０４、ＷＯ  ２００７／０７４４０５、ＷＯ  ２００７／０８０１２７及びＷＯ  ２００７／０３５６５０などに記述されているような、植物の害虫に摂取されたときにその害虫の成長を阻害する二本鎖ＲＮＡを発現時に産生する配列を含んでいる少なくとも１の導入遺伝子を含んでいる任意の植物も包含する。
【０１２８】
本発明に従って同様に処理し得る植物又は植物品種（遺伝子工学などの植物バイオテクノロジー法によって得られたもの）は、非生物的ストレスに対して耐性を示す。そのような植物は、遺伝的形質転換によって得ることができるか、又は、そのようなストレス抵抗性を付与する突然変異を含んでいる植物を選抜することによって得ることができる。特に有用なストレス耐性植物としては、以下のものなどがある：
（１）  植物細胞内又は植物内におけるポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）遺伝子の発現及び／又は活性を低減させることが可能な導入遺伝子を含んでいる植物（ＷＯ  ００／０４１７３、ＷＯ  ／２００６／０４５６３３、ＥＰ−Ａ  １８０７５１９又はＥＰ−Ａ  ２０１８４３１に記述されている）；
（２）  植物又は植物細胞のＰＡＲＧコード化遺伝子の発現及び／又は活性を低減させることが可能なストレス耐性を強化する導入遺伝子を含んでいる植物（例えば、ＷＯ  ２００４／０９０１４０などに記述されている）；
（３）  ニコチンアミダーゼ、ニコチン酸ホスホリボシルトランスフェラーゼ、ニコチン酸モノヌクレオチドアデニルトランスフェラーゼ、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドシンテターゼ又はニコチンアミドホスホリボシルトランスフェラーゼを包含するニコチンアミドアデニンジヌクレオチドサルベージ合成経路の植物機能性酵素（ｐｌａｎｔ−ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｅｎｚｙｍｅ）をコードするストレス耐性を強化する導入遺伝子を含んでいる植物（例えば、ＥＰ−Ａ  １７９４３０６、ＷＯ  ２００６／１３３８２７、ＷＯ  ２００７／１０７３２６、ＥＰ−Ａ  １９９９２６３又はＷＯ  ２００７／１０７３２６などに記述されている）。
【０１２９】
本発明に従って同様に処理し得る植物又は植物品種（遺伝子工学などの植物バイオテクノロジー法によって得られたもの）は、収穫された生産物の改変された量、品質及び／若しくは貯蔵安定性、並びに／又は、収穫された生産物の特定の成分の改変された特性を示す。例えば：
（１）  野生型の植物細胞又は植物において合成された澱粉と比較して、その物理化学的特性〔特に、アミロース含有量若しくはアミロース／アミロペクチン比、枝分かれ度、平均鎖長、側鎖分布、粘性挙動、ゲル化強度（ｇｅｌｌｉｎｇ  ｓｔｒｅｎｇｔｈ）、澱粉粒径及び／又は澱粉粒子形態〕が変えられていて、特定の用途により適した変性澱粉を合成するトランスジェニック植物。変性澱粉を合成する該トランスジェニック植物は、例えば、ＥＰ−Ａ  ０５７１４２７、ＷＯ  ９５／０４８２６、ＥＰ−Ａ  ０７１９３３８、ＷＯ  ９６／１５２４８、ＷＯ  ９６／１９５８１、ＷＯ  ９６／２７６７４、ＷＯ  ９７／１１１８８、ＷＯ  ９７／２６３６２、ＷＯ  ９７／３２９８５、ＷＯ  ９７／４２３２８、ＷＯ  ９７／４４４７２、ＷＯ  ９７／４５５４５、ＷＯ  ９８／２７２１２、ＷＯ  ９８／４０５０３、ＷＯ  ９９／５８６８８、ＷＯ  ９９／５８６９０、ＷＯ  ９９／５８６５４、ＷＯ  ００／０８１８４、ＷＯ  ００／０８１８５、ＷＯ  ００／０８１７５、ＷＯ  ００／２８０５２、ＷＯ  ００／７７２２９、ＷＯ  ０１／１２７８２、ＷＯ  ０１／１２８２６、ＷＯ  ０２／１０１０５９、ＷＯ  ０３／０７１８６０、ＷＯ  ０４／０５６９９９、ＷＯ  ０５／０３０９４２、ＷＯ  ２００５／０３０９４１、ＷＯ  ２００５／０９５６３２、ＷＯ  ２００５／０９５６１７、ＷＯ  ２００５／０９５６１９、ＷＯ  ２００５／０９５６１８、ＷＯ  ２００５／１２３９２７、ＷＯ  ２００６／０１８３１９、ＷＯ  ２００６／１０３１０７、ＷＯ  ２００６／１０８７０２、ＷＯ  ２００７／００９８２３、ＷＯ  ００／２２１４０、ＷＯ  ２００６／０６３８６２、ＷＯ  ２００６／０７２６０３、ＷＯ  ０２／０３４９２３、ＷＯ  ２００８／０１７５１８、ＷＯ  ２００８／０８０６３０、ＷＯ  ２００８／０８０６３１、ＥＰ  ０７０９０００７．１、ＷＯ  ２００８／０９０００８、ＷＯ  ０１／１４５６９、ＷＯ  ０２／７９４１０、ＷＯ  ０３／３３５４０、ＷＯ  ２００４／０７８９８３、ＷＯ  ０１／１９９７５、ＷＯ  ９５／２６４０７、ＷＯ  ９６／３４９６８、ＷＯ  ９８／２０１４５、ＷＯ  ９９／１２９５０、ＷＯ  ９９／６６０５０、ＷＯ  ９９／５３０７２、ＵＳ  ６，７３４，３４１、ＷＯ  ００／１１１９２、ＷＯ  ９８／２２６０４、ＷＯ  ９８／３２３２６、ＷＯ  ０１／９８５０９、ＷＯ  ０１／９８５０９、ＷＯ  ２００５／００２３５９、ＵＳ  ５，８２４，７９０、ＵＳ  ６，０１３，８６１、ＷＯ  ９４／０４６９３、ＷＯ  ９４／０９１４４、ＷＯ  ９４／１１５２０、ＷＯ  ９５／３５０２６、ＷＯ  ９７／２０９３６、ＷＯ  ２０１０／０１２７９６、ＷＯ  ２０１０／００３７０１に開示されている；
（２）  非澱粉炭水化物ポリマーを合成するか又は遺伝子組換えがなされていない野生型植物と比較して改変された特性を有する非澱粉炭水化物ポリマーを合成するトランスジェニック植物。その例は、ポリ−フルクトース（特に、イヌリン型及びレバン型のポリ−フルクトース）を産生する植物（ＥＰ−Ａ  ０６６３９５６、ＷＯ  ９６／０１９０４、ＷＯ  ９６／２１０２３、ＷＯ  ９８／３９４６０及びＷＯ  ９９／２４５９３に開示されている）、α−１，４−グルカン類を産生する植物（ＷＯ  ９５／３１５５３、ＵＳ  ２００２０３１８２６、ＵＳ  ６，２８４，４７９、ＵＳ  ５，７１２，１０７、ＷＯ  ９７／４７８０６、ＷＯ  ９７／４７８０７、ＷＯ  ９７／４７８０８及びＷＯ  ００／１４２４９に開示されている）、α−１，６−分枝  α−１，４−グルカン類を産生する植物（ＷＯ  ００／７３４２２に開示されている）、及び、アルテルナンを産生する植物（ＷＯ  ００／４７７２７、ＷＯ  ００／７３４２２、ＥＰ  ０６０７７３０１．７、ＵＳ  ５，９０８，９７５及びＥＰ−Ａ  ０７２８２１３などに開示されている）である；
（３）  ヒアルロナンを産生するトランスジェニック植物（例えば、ＷＯ  ２００６／０３２５３８、ＷＯ  ２００７／０３９３１４、ＷＯ  ２００７／０３９３１５、ＷＯ  ２００７／０３９３１６、ＪＰ−Ａ  ２００６−３０４７７９及びＷＯ  ２００５／０１２５２９などに開示されている）。
【０１３０】
（４）  トランスジェニック植物又はハイブリッド植物、例えば、「可溶性固形物高含有量」、「低辛味」（ＬＰ）及び／又は「長期保存」（ＬＳ）などの特性を有するタマネギ（米国特許出願第１２／０２０，３６０号及び米国特許出願第６１／０５４，０２６号に記述されている）。
【０１３１】
本発明に従って同様に処理し得る植物又は植物品種（遺伝子工学などの植物バイオテクノロジー法によって得ることができるもの）は、改変された繊維特性を有する植物（例えば、ワタ植物）である。そのよう植物は、遺伝的形質転換によって得ることができるか、又は、そのような改変された繊維特性を付与する突然変異を含んでいる植物を選抜することによって得ることができる。そのような植物としては、以下のものなどがある：
（ａ）  改変された形態のセルロースシンターゼ遺伝子を含んでいる植物（例えば、ワタ植物）（ＷＯ  ９８／００５４９に記述されている）；
（ｂ）  改変された形態のｒｓｗ２相同核酸又はｒｓｗ３相同核酸を含んでいる植物（例えば、ワタ植物）（ＷＯ  ２００４／０５３２１９に記述されている）；
（ｃ）  スクロースリン酸シンターゼの発現が増大している植物（例えば、ワタ植物）（ＷＯ  ０１／１７３３３に記述されている）；
（ｄ）  スクロースシンターゼの発現が増大している植物（例えば、ワタ植物）（ＷＯ  ０２／４５４８５に記述されている）；
（ｅ）  繊維細胞に基づいた原形質連絡のゲーティングのタイミングが（例えば、繊維選択的β−１，３−グルカナーゼのダウンレギュレーションを介して）改変されている植物（例えば、ワタ植物）（ＷＯ  ２００５／０１７１５７に記述されているか、又は、ＷＯ  ２００９／１４３９９５に記述されている）；
（ｆ）  反応性が（例えば、ｎｏｄＣを包含するＮ−アセチルグルコサミントランスフェラーゼ遺伝子の発現及びキチンシンターゼ遺伝子の発現を介して）改変されている繊維を有する植物（例えば、ワタ植物）（ＷＯ  ２００６／１３６３５１に記述されている）。
【０１３２】
本発明に従って同様に処理し得る植物又は植物品種（遺伝子工学などの植物バイオテクノロジー法によって得ることができるもの）は、改変されたオイルプロフィール特性を有する植物（例えば、ナタネ植物又は関連するアブラナ属植物）である。そのよう植物は、遺伝的形質転換によって得ることができるか、又は、そのような改変されたオイルプロフィール特性を付与する突然変異を含んでいる植物を選抜することによって得ることができる。そのような植物としては、以下のものなどがある：
（ａ）  オレイン酸含有量が高いオイルを産生する植物（例えば、ナタネ植物）（例えば、ＵＳ  ５，９６９，１６９、ＵＳ  ５，８４０，９４６、ＵＳ  ６，３２３，３９２又はＵＳ  ６，０６３，９４７などに記載されている）；
（ｂ）  リノレン酸含有量が低いオイルを産生する植物（例えば、ナタネ植物）（ＵＳ  ６，２７０，８２８、ＵＳ  ６，１６９，１９０又はＵＳ  ５，９６５，７５５に記載されている）；
（ｃ）  飽和脂肪酸のレベルが低いオイルを産生する植物（例えば、ナタネ植物）（例えば、ＵＳ  ５，４３４，２８３又は米国特許出願第１２／６６８３０３号などに記載されている）。
【０１３３】
本発明に従って同様に処理し得る植物又は植物品種（遺伝子工学などの植物バイオテクノロジー法によって得ることができるもの）は、改変された種子脱粒特性を有する植物（例えば、ナタネ植物又は関連するアブラナ属植物）である。そのよう植物は、遺伝的形質転換によって得ることができるか、又は、そのような改変された種子脱粒特性を付与する突然変異を含んでいる植物を選抜することによって得ることができる。そのような植物としては、種子の脱粒が遅延されているか又は低減されている植物（例えば、ナタネ植物）などがある（米国特許出願第６１／１３５，２３０号、ＷＯ  ２００９／０６８３１３及びＷＯ  ２０１０／００６７３２に記述されている）。
【０１３４】
本発明に従って同様に処理し得る植物又は植物品種（遺伝子工学などの植物バイオテクノロジー法によって得ることができるもの）は、翻訳後タンパク質修飾パターンが改変されている植物（例えば、タバコ植物）である（例えば、ＷＯ  ２０１０／１２１８１８及びＷＯ  ２０１０／１４５８４６に記載されている）。
【０１３５】
本発明に従って処理し得る特に有用なトランスジェニック植物は、アメリカ合衆国内における規制除外（ｎｏｎ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｓｔａｔｕｓ）についてのアメリカ合衆国農務省（ＵＳＤＡ）の動植物検疫局（ＡＰＨＩＳ）に対する申請の対象である（ここで、そのような申請は、許可されているか又は審理中である）、形質転換イベント又は形質転換イベントの組合せを含んでいる植物である。いつ何時でも、この情報は、ＡＰＨＩＳ（４７００  Ｒｉｖｅｒ  Ｒｏａｄ，  Ｒｉｖｅｒｄａｌｅ，  ＭＤ  ２０７３７，ＵＳＡ）から、例えば、そのインターネットサイト（ＵＲＬ  ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ａｐｈｉｓ．ｕｓｄａ．ｇｏｖ／ｂｒｓ／ｎｏｔ＿ｒｅｇ．ｈｔｍｌ）において、容易に入手することができる。本出願の出願日においてＡＰＨＩＳが審理中であるか又はＡＰＨＩＳによって許可された規制除外に対する申請は、下記情報を含んでいる申請であった：
−  申請：  当該申請の識別番号。形質転換イベントについての技術的な記述は、ＡＰＨＩＳから（例えば、ＡＰＨＩＳのウェブサイトにおいて、該申請番号を参照することによって）入手可能な個々の申請書類の中に見いだすことができる。それらの記述は、参照によって本明細書中に組み入れる。
【０１３６】
−  申請の拡張：  拡張が請求されている、先の申請についての言及。
【０１３７】
−  会社：  当該申請を提出している事業体の名称。
【０１３８】
−  規制物：  関連する植物種。
【０１３９】
−  トランスジェニック表現型：  形質転換イベントによって植物に付与された形質。
【０１４０】
−  形質転換イベント又はライン：  規制除外が請求されている１つ又は複数のイベント（場合により、ラインとも称される）の名称。
【０１４１】
−  ＡＰＨＩＳ文書：  ＡＰＨＩＳに請求することが可能な、申請に関してＡＰＨＩＳによって刊行されている種々の文書。
【０１４２】
単一の形質転換イベント又は形質転換イベントの組合せを含んでいる特に有用なさらなる植物は、例えば、国又は地域のさまざまな規制機関によるデータベースに記載されている〔例えば、「ｈｔｔｐ：／／ｇｍｏｉｎｆｏ．ｊｒｃ．ｉｔ／ｇｍｐ＿ｂｒｏｗｓｅ．ａｓｐｘ」及び「ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ａｇｂｉｏｓ．ｃｏｍ／ｄｂａｓｅ．ｐｈｐ」を参照されたい〕。
【０１４３】
本発明に従って処理し得る特に有用なトランスジェニック植物は、下記のものを包含する、形質転換イベント又は形質転換イベントの組合せを含んでいて例えば国又は地域のさまざまな規制機関によるデータベースに記載されている植物である：イベント１１４３−１４Ａ（ワタ、昆虫防除、寄託されていない、ＷＯ２００６／１２８５６９に記載されている）；イベント１１４３−５１Ｂ（ワタ、昆虫防除、寄託されていない、ＷＯ２００６／１２８５７０に記載されている）；イベント１４４５（ワタ、除草剤耐性、寄託されていない、ＵＳ−Ａ  ２００２−１２０９６４又はＷＯ０２／０３４９４６に記載されている）；イベント１７０５３（イネ、除草剤耐性、ＰＴＡ−９８４３として寄託されている、ＷＯ２０１０／１１７７３７に記載されている）；イベント１７３１４（イネ、除草剤耐性、ＰＴＡ−９８４４として寄託されている、ＷＯ２０１０／１１７７３５に記載されている）；イベント２８１−２４−２３６（ワタ、昆虫防除−除草剤耐性、ＰＴＡ−６２３３として寄託されている、ＷＯ２００５／１０３２６６又はＵＳ−Ａ  ２００５−２１６９６９に記載されている）；イベント３００６−２１０−２３（ワタ、昆虫防除−除草剤耐性、ＰＴＡ−６２３３として寄託されている、ＵＳ−Ａ  ２００７−１４３８７６又はＷＯ２００５／１０３２６６に記載されている）；イベント３２７２（トウモロコシ、品質形質、ＰＴＡ−９９７２として寄託されている、ＷＯ２００６／０９８９５２又はＵＳ−Ａ  ２００６−２３０４７３に記載されている）；イベント４０４１６（トウモロコシ、昆虫防除−除草剤耐性、ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−１１５０８として寄託されている、ＷＯ２０１１／０７５５９３に記載されている）；イベント４３Ａ４７（トウモロコシ、昆虫防除−除草剤耐性、ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−１１５０９として寄託されている、ＷＯ２０１１／０７５５９５に記載されている）；イベント５３０７（トウモロコシ、昆虫防除、ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−９５６１として寄託されている、ＷＯ２０１０／０７７８１６に記載されている）；イベントＡＳＲ−３６８（ベントグラス、除草剤耐性、ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−４８１６として寄託されている、ＵＳ−Ａ  ２００６−１６２００７又はＷＯ２００４／０５３０６２に記載されている）；イベントＢ１６（トウモロコシ、除草剤耐性、寄託されていない、ＵＳ−Ａ  ２００３−１２６６３４に記載されている）；イベントＢＰＳ−ＣＶ１２７−９（ダイズ、除草剤耐性、ＮＣＩＭＢ  Ｎｏ．４１６０３として寄託されている、ＷＯ２０１０／０８０８２９に記載されている）；イベントＣＥ４３−６７Ｂ（ワタ、昆虫防除、ＤＳＭ  ＡＣＣ２７２４として寄託されている、ＵＳ−Ａ  ２００９−２１７４２３又はＷＯ２００６／１２８５７３に記載されている）；イベントＣＥ４４−６９Ｄ（ワタ、昆虫防除、寄託されていない、ＵＳ−Ａ  ２０１０−００２４０７７に記載されている）；イベントＣＥ４４−６９Ｄ（ワタ、昆虫防除、寄託されていない、ＷＯ２００６／１２８５７１に記載されている）；イベントＣＥ４６−０２Ａ（ワタ、昆虫防除、寄託されていない、ＷＯ２００６／１２８５７２に記載されている）；イベントＣＯＴ１０２（ワタ、昆虫防除��寄託されていない、ＵＳ−Ａ  ２００６−１３０１７５又はＷＯ２００４／０３９９８６に記載されている）；イベントＣＯＴ２０２（ワタ、昆虫防除、寄託されていない、ＵＳ−Ａ  ２００７−０６７８６８又はＷＯ２００５／０５４４７９に記載されている）；イベントＣＯＴ２０３（ワタ、昆虫防除、寄託されていない、ＷＯ２００５／０５４４８０に記載されている）；イベントＤＡＳ４０２７８（トウモロコシ、除草剤耐性、ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−１０２４４として寄託されている、ＷＯ２０１１／０２２４６９に記載されている）；イベントＤＡＳ−５９１２２−７（トウモロコシ、昆虫防除−除草剤耐性、ＡＴＣＣ  ＰＴＡ  １１３８４として寄託されている、ＵＳ−Ａ  ２００６−０７０１３９に記載されている）；イベントＤＡＳ−５９１３２（トウモロコシ、昆虫防除−除草剤耐性、寄託されていない、ＷＯ２００９／１００１８８に記載されている）；イベントＤＡＳ６８４１６（ダイズ、除草剤耐性、ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−１０４４２として寄託されている、ＷＯ２０１１／０６６３８４又はＷＯ２０１１／０６６３６０に記載されている）；イベントＤＰ−０９８１４０−６（トウモロコシ、除草剤耐性、ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−８２９６として寄託されている、ＵＳ−Ａ  ２００９−１３７３９５又はＷＯ２００８／１１２０１９に記載されている）；イベントＤＰ−３０５４２３−１（ダイズ、品質形質、寄託されていない、ＵＳ−Ａ  ２００８−３１２０８２又はＷＯ２００８／０５４７４７に記載されている）；イベントＤＰ−３２１３８−１（トウモロコシ、ハイブリダイゼーション系、ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−９１５８として寄託されている、ＵＳ−Ａ  ２００９−０２１０９７０又はＷＯ２００９／１０３０４９に記載されている）；イベントＤＰ−３５６０４３−５（ダイズ、除草剤耐性、ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−８２８７として寄託されている、ＵＳ−Ａ  ２０１０−０１８４０７９又はＷＯ２００８／００２８７２に記載されている）；イベントＥＥ−１（ナス、昆虫防除、寄託されていない、ＷＯ２００７／０９１２７７に記載されている）；イベントＦＩ１１７（トウモロコシ、除草剤耐性、ＡＴＣＣ  ２０９０３１として寄託されている、ＵＳ−Ａ  ２００６−０５９５８１又はＷＯ９８／０４４１４０に記載されている）；イベントＧＡ２１（トウモロコシ、除草剤耐性、ＡＴＣＣ  ２０９０３３として寄託されている、ＵＳ−Ａ  ２００５−０８６７１９又はＷＯ１９９８／０４４１４０に記載されている）；イベントＧＧ２５（トウモロコシ、除草剤耐性、ＡＴＣＣ  ２０９０３２として寄託されている、ＵＳ−Ａ  ２００５−１８８４３４又はＷＯ９８／０４４１４０に記載されている）；イベントＧＨＢ１１９（ワタ、昆虫防除−除草剤耐性、ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−８３９８として寄託されている、ＷＯ２００８／１５１７８０に記載されている）；イベントＧＨＢ６１４（ワタ、除草剤耐性、ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−６８７８として寄託されている、ＵＳ−Ａ  ２０１０−０５０２８２又はＷＯ２００７／０１７１８６に記載されている）；イベントＧＪ１１（トウモロコシ、除草剤耐性、ＡＴＣＣ  ２０９０３０として寄託されている、ＵＳ−Ａ  ２００５−１８８４３４又はＷＯ９８／０４４１４０に記載されている）；イベントＧＭ  ＲＺ１３（テンサイ、ウイルス抵抗性、ＮＣＩＭＢ−４１６０１として寄託されている、ＷＯ２０１０／０７６２１２に記載されている）；イベントＨ７−１（テンサイ、除草剤耐性、ＮＣＩＭＢ  ４１１５８又はＮＣＩＭＢ  ４１１５９として寄託されている、ＵＳ−Ａ  ２００４−１７２６６９又はＷＯ２００４／０７４４９２に記載されている）；イベントＪＯＰＬＩＮ１（コムギ、耐病性、寄託されていない、ＵＳ−Ａ  ２００８−０６４０３２に記載されている）；イベントＬＬ２７（ダイズ、除草剤耐性、ＮＣＩＭＢ４１６５８として寄託されている、ＷＯ２００６／１０８６７４又はＵＳ−Ａ  ２００８−３２０６１６に記載されている）；イベントＬＬ５５（ダイズ、除草剤耐性、ＮＣＩＭＢ  ４１６６０として寄託されている、ＷＯ２００６／１０８６７５又はＵＳ−Ａ  ２００８−１９６１２７に記載されている）；イベントＬＬワタ２５（ワタ、除草剤耐性、ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−３３４３として寄託されている、ＷＯ０３／０１３２２４又はＵＳ−Ａ  ２００３−０９７６８７に記載されている）；イベントＬＬＲＩＣＥ０６（イネ、除草剤耐性、ＡＴＣＣ−２３３５２として寄託されている、ＵＳ  ６，４６８，７４７又はＷＯ００／０２６３４５に記載されている）；イベントＬＬＲＩＣＥ６０１（イネ、除草剤耐性、ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−２６００として寄託されている、ＵＳ−Ａ  ２００８−２２８９０６０又はＷＯ００／０２６３５６に記載されている）；イベントＬＹ０３８（トウモロコシ、品質形質、ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−５６２３として寄託されている、ＵＳ−Ａ  ２００７−０２８３２２又はＷＯ２００５／０６１７２０に記載されている）；イベントＭＩＲ１６２（トウモロコシ、昆虫防除、ＰＴＡ−８１６６として寄託されている、ＵＳ−Ａ  ２００９−３００７８４又はＷＯ２００７／１４２８４０に記載されている）；イベントＭＩＲ６０４（トウモロコシ、昆虫防除、寄託されていない、ＵＳ−Ａ  ２００８−１６７４５６又はＷＯ２００５／１０３３０１に記載されている）；イベントＭＯＮ１５９８５（ワタ、昆虫防除、ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−２５１６として寄託されている、ＵＳ−Ａ  ２００４−２５０３１７又はＷＯ０２／１００１６３に記載されている）；イベントＭＯＮ８１０（トウモロコシ、昆虫防除、寄託されていない、ＵＳ−Ａ  ２００２−１０２５８２に記載されている）；イベントＭＯＮ８６３（トウモロコシ、昆虫防除、ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−２６０５として寄託されている、ＷＯ２００４／０１１６０１又はＵＳ−Ａ  ２００６−０９５９８６に記載されている）；イベントＭＯＮ８７４２７（トウモロコシ、授粉制御、ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−７８９９として寄託されている、ＷＯ２０１１／０６２９０４に記載されている）；イベントＭＯＮ８７４６０（トウモロコシ、ストレス耐性、ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−８９１０として寄託されている、ＷＯ２００９／１１１２６３又はＵＳ−Ａ  ２０１１−０１３８５０４に記載されている）；イベントＭＯＮ８７７０１（ダイズ、昆虫防除、ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−８１９４として寄託されている、ＵＳ−Ａ  ２００９−１３００７１又はＷＯ２００９／０６４６５２に記載されている）；イベントＭＯＮ８７７０５（ダイズ、品質形質−除草剤耐性、ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−９２４１として寄託されている、ＵＳ−Ａ  ２０１０−００８０８８７又はＷＯ２０１０／０３７０１６に記載されている）；イベントＭＯＮ８７７０８（ダイズ、除草剤耐性、ＡＴＣＣ  ＰＴＡ９６７０として寄託されている、ＷＯ２０１１／０３４７０４に記載されている）；イベントＭＯＮ８７７５４（ダイズ、品質形質、ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−９３８５として寄託されている、ＷＯ２０１０／０２４９７６に記載されている）；イベントＭＯＮ８７７６９（ダイズ、品質形質、ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−８９１１として寄託されている、ＵＳ−Ａ  ２０１１−００６７１４１又はＷＯ２００９／１０２８７３に記載されている）；イベントＭＯＮ８８０１７（トウモロコシ、昆虫防除−除草剤耐性、ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−５５８２として寄託されている、ＵＳ−Ａ  ２００８−０２８４８２又はＷＯ２００５／０５９１０３に記載されている）；イベントＭＯＮ８８９１３（ワタ、除草剤耐性、ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−４８５４として寄託されている、ＷＯ２００４／０７２２３５又はＵＳ−Ａ  ２００６−０５９５９０に記載されている）；イベントＭＯＮ８９０３４（トウモロコシ、昆虫防除、ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−７４５５として寄託されている、ＷＯ２００７／１４０２５６又はＵＳ−Ａ  ２００８−２６０９３２に記載されている）；イベントＭＯＮ８９７８８（ダイズ、除草剤耐性、ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−６７０８として寄託されている、ＵＳ−Ａ  ２００６−２８２９１５又はＷＯ２００６／１３０４３６に記載されている）；イベントＭＳ１１（ナタネ、授粉制御−除草剤耐性、ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−８５０又はＰＴＡ−２４８５として寄託されている、ＷＯ０１／０３１０４２に記載されている）；イベントＭＳ８（ナタネ、授粉制御−除草剤耐性、ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−７３０として寄託されている、ＷＯ０１／０４１５５８又はＵＳ−Ａ  ２００３−１８８３４７に記載されている）；イベントＮＫ６０３（トウモロコシ、除草剤耐性、ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−２４７８として寄託されている、ＵＳ−Ａ  ２００７−２９２８５４に記載されている）；イベントＰＥ−７（イネ、昆虫防除、寄託されていない、ＷＯ２００８／１１４２８２に記載されている）；イベントＲＦ３（ナタネ、授粉制御−除草剤耐性、ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−７３０として寄託されている
、ＷＯ０１／０４１５５８又はＵＳ−Ａ  ２００３−１８８３４７に記載されている）；イベントＲＴ７３（ナタネ、除草剤耐性、寄託されていない、ＷＯ０２／０３６８３１又はＵＳ−Ａ  ２００８−０７０２６０に記載されている）；イベントＴ２２７−１（テンサイ、除草剤耐性、寄託されていない、ＷＯ０２／４４４０７又はＵＳ−Ａ  ２００９−２６５８１７に記載されている）；イベントＴ２５（トウモロコシ、除草剤耐性、寄託されていない、ＵＳ−Ａ  ２００１−０２９０１４又はＷＯ０１／０５１６５４に記載されている）；イベントＴ３０４−４０（ワタ、昆虫防除−除草剤耐性、ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−８１７１として寄託されている、ＵＳ−Ａ  ２０１０−０７７５０１又はＷＯ２００８／１２２４０６に記載されている）；イベントＴ３４２−１４２（ワタ、昆虫防除、寄託されていない、ＷＯ２００６／１２８５６８に記載されている）；イベントＴＣ１５０７（トウモロコシ、昆虫防除−除草剤耐性、寄託されていない、ＵＳ−Ａ  ２００５−０３９２２６又はＷＯ２００４／０９９４４７に記載されている）；イベントＶＩＰ１０３４（トウモロコシ、昆虫防除−除草剤耐性、ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−３９２５として寄託されている、ＷＯ０３／０５２０７３に記載されている）、イベント３２３１６（トウモロコシ、昆虫防除−除草剤耐性、ＰＴＡ−１１５０７として寄託されている、ＷＯ２０１１／０８４６３２に記載されている）、イベント４１１４（トウモロコシ、昆虫防除−除草剤耐性、ＰＴＡ−１１５０６として寄託されている、ＷＯ２０１１／０８４６２１に記載されている）。
【０１４４】
本発明の組成物は、材木の表面又は内部で発生するであろう菌類病に対しても使用することができる。用語「材木（ｔｉｍｂｅｒ）」は、全ての種類の木材、そのような木材を建築用に加工した全てのタイプのもの、例えば、ソリッドウッド、高密度木材、積層木材及び合板などを意味する。本発明による材木の処理方法は、主に、本発明の１種類以上の化合物又は本発明の組成物を接触させることにより行う。これには、例えば、直接的な塗布、噴霧、浸漬、注入、又は、別の適切な任意の方法が包含される。
【０１４５】
配列のリスト：
配列識別番号１：  ファコプソラ・パキリジ（Ｐｈａｋｏｐｓｏｒａ  ｐａｃｈｙｒｈｉｚｉ）のＨＸＴ１タンパク質をコードする遺伝子のヌクレオチド配列
配列識別番号２：  ファコプソラ・パキリジ（Ｐｈａｋｏｐｓｏｒａ  ｐａｃｈｙｒｈｉｚｉ）のＨＸＴ１タンパク質のアミノ酸配列
配列識別番号３：  ウロミセス・ファバエ（Ｕｒｏｍｙｃｅｓ  ｆａｂａｅ）のＨＸＴ１タンパク質をコードする遺伝子のヌクレオチド配列
配列識別番号４：  ウロミセス・ファバエ（Ｕｒｏｍｙｃｅｓ  ｆａｂａｅ）のＨＸＴ１タンパク質のアミノ酸配列
配列識別番号５：  プッシニア・ストリイホルミス（Ｐｕｃｃｉｎｉａ  ｓｔｒｉｉｆｏｒｍｉｓ）のＨＸＴ１タンパク質をコードする遺伝子のヌクレオチド配列
配列識別番号６：  プッシニア・ストリイホルミス（Ｐｕｃｃｉｎｉａ  ｓｔｒｉｉｆｏｒｍｉｓ）のＨＸＴ１タンパク質のアミノ酸配列
配列識別番号７：  プッシニア・グラミニス（Ｐｕｃｃｉｎｉａ  ｇｒａｍｉｎｉｓ）のＨＸＴ１タンパク質をコードする遺伝子のヌクレオチド配列
配列識別番号８：  プッシニア・グラミニス（Ｐｕｃｃｉｎｉａ  ｇｒａｍｉｎｉｓ）のＨＸＴ１タンパク質のアミノ酸配列
配列識別番号９：  プッシニア・トリチシナ（Ｐｕｃｃｉｎｉａ  ｔｒｉｔｉｃｉｎａ）のＨＸＴ１タンパク質をコードする遺伝子のヌクレオチド配列
配列識別番号１０：  プッシニア・トリチシナ（Ｐｕｃｃｉｎｉａ  ｔｒｉｔｉｃｉｎａ）のＨＸＴ１タンパク質のアミノ酸配列
本発明のさまざまな態様は、以下の実験的な実施例を用いて、より充分に理解されるであろう。
【０１４６】
以下に記載されている全ての方法及び操作は、例として与えられており、同様の結果を達成するために利用可能なさまざまな方法の中で選択されたものに対応する。この選択は、結果の質に対して影響を及ぼすことはなく、従って、当業者は、同様の結果を達成するために、任意の適切な方法を使用することができる。特に、及び、実施例において別途明記されていない限り、使用された全ての組換えＤＮＡ技術は、「Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ａｎｄ  Ｒｕｓｓｅｌ  （２００１，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｍａｎｕａｌ，  Ｔｈｉｒｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  ＮＹ）」、「Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９４，  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｃｕｒｒｅｎｔ  ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，  ＵＳＡ，  Ｖｏｌｕｍｅｓ  １  ａｎｄ  ２）」及び「Ｂｒｏｗｎ  （１９９８，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ＬａｂＦａｘ，  Ｓｅｃｏｎｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  ＵＫ）」に記載されている標準的なプロトコルに従って実施されている。植物分子生物学に関する標準的な材料及び方法は、「Ｃｒｏｙ  Ｒ．Ｄ．Ｄ．  （１９９３，  Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ＬａｂＦａｘ，  ＢＩＯＳ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ  Ｌｔｄ  （ＵＫ）」及び「Ｃｒｏｙ  Ｒ．Ｄ．Ｄ．  Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ  （ＵＫ）」に記載されている。ＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応）に関する標準的な材料及び方法についても、「Ｄｉｅｆｆｅｎｂａｃｈ  ａｎｄ  Ｄｖｅｋｓｌｅｒ  （１９９５，  ＰＣＲ  Ｐｒｉｍｅｒ：  Ａ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｍａｎｕａｌ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  ＮＹ）」及び「ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  （２０００，  ＰＣＲ−Ｂａｓｉｃｓ：  Ｆｒｏｍ  ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ  ｔｏ  ｂｅｎｃｈ，  Ｆｉｒｓｔ  ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ，  Ｇｅｒｍａｎｙ）」に記載されている。
【実施例】
【０１４７】
実施例
実施例１：  ファコプソラ・パキリジ（Ｐｈａｋｏｐｓｏｒａ  ｐａｃｈｙｒｈｉｚｉ）のＨＸＴ１遺伝子の確認
ＨＸＴ１のファコプソラ・パキリジ（Ｐｈａｋｏｐｓｏｒａ  ｐａｃｈｙｒｈｉｚｉ）オルソログを得るために、Ｌｉｎｋら「Ｌｉｎｋ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１３，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｌａｎｔ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，  １５：  ３７９−９３）」によって生成された注釈付きの吸器トランスクリプトームをヘキソース輸送体オルソログに関して検索した。ヘキソース輸送体の１つの候補「ｃｏｎｔｉｇ＿０５３２０」は、ウロミセス・ファバエ（Ｕ．ｆａｂａｅ）ＨＸＴ１に対して相同性を示し、並びに、プッシニア・グラミニス  ｆ．ｓｐ．  トリチシ（Ｐｕｃｃｉｎｉａ  ｇｒａｍｉｎｉｓ  ｆ．ｓｐ．  Ｔｒｉｔｉｃｉ）及びメラムプソラ・ラリシ−ポプリナ（Ｍｅｌａｍｐｓｏｒａ  ｌａｒｉｃｉ−ｐｏｐｕｌｉｎａ）に由来するヘキソース輸送体の候補に対しても相同性を示した。ウロミセス・ファバエ（Ｕ．ｆａｂａｅ）のゲノムデータ（Ｌｉｎｋ  ｅｔ  ａｌ．  ２０１４，  Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｐｌａｎｔ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ２９；  ５：５８７）を使用するＲｅｃｉｐｒｏｃａｌ  ＢＬＡＳＴ検索によって、「ｃｏｎｔｉｇ＿０５３２０」がウロミセス・ファバエ（Ｕ．ｆａｂａｅ）ＨＸＴ１に最も近い相同体であることが確認された。
【０１４８】
実施例２：  ＶＩＧＳのためのベクターの構成
ＶＩＧＳを首尾よく実施するためには、宿主植物に対して充分に確立されているウイルスシステムを使用することが必要である。ダイズの場合、Ｂｅａｎ  Ｐｏｄ  Ｍｏｔｔｌｅ  Ｖｉｒｕｓ（ＢＰＭＶ）が、ＶＩＧＳ及び外来遺伝子の一過性発現の両方に対して、確立されている（Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１０，  Ｐｌａｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，  １５３：  ５２−６５）。既に確立されているベクター（ＢＳＭＶ）を使用したＰａｎｗａｒら「Ｐａｎｗａｒ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３，  Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  ８１：  ５９５−６０８）」のアプローチと同様に、本発明者らも、ＶＩＧＳに対してＢＰＭＶシステムを適合させることを選択した。
【０１４９】
本発明者らのＢＰＭＶサイレンシングプラスミドベクターは、小さなコートタンパク質をコードする配列とターミネーター配列の間にＢａｍＨＩクローニングサイトを含んでいる（図１）。サイレンシング構築物のために、ファコプソラ・パキリジ（Ｐ．ｐａｃｈｙｒｈｉｚｉ）のＨＸＴ１遺伝子に対する特異的なプライマーを用いるＲＴ−ＰＣＲを感染した植物材料から調製したＲＮＡに対して実施し、そのＰＣＲ産物をＢａｍＨＩ部位に挿入した。次いで、プラスミドを、エレクトロポレーションを使用して増幅するために、「Ｅ．ｃｏｌｉ  ＤＨ５α」に形質転換させる。ｐＢＰＭＶプラスミドへのクローニングは指向性ではないので、挿入の方向について、コロニーＰＣＲを用いて試験する。正しい構築物も、配列決定する。センス方向とアンチセンス方向に挿入断片を有している両方の構築物をサイレンシング実験に使用する。
【０１５０】
該ＢＰＭＶゲノムは、２本のプラス鎖ＲＮＡで構成され、そのうちのＲＮＡ２をクローニングに使用する。植物に接種するために、粒子衝撃を用いて、ＢＰＭＶ  ＲＮＡ１（感染を増強するためのダイズモザイクウイルス）を含んでいる３つのプラスミド及びサイレンシング構築物をダイズの初生葉に同時に送達する。
【０１５１】
粒子衝撃のために、１１日齢の実生（初生葉は完全に展開しているが、それ以上の葉は展開していない）を微粒子銃装置（ｂｉｏｌｉｓｔｉｃ  ｄｅｖｉｃｅ）の真空チャンバーの中に移し、葉を茎用のＶ字型の切り込みがあるプラスチックトレーで支える。葉を、金属網を用いてその重さによって該トレー上で平らにする。本発明者らは、１．０μｍの金粒子、１，１００−ｐｓｉの破裂板及び６ｃｍの距離を使用している。そのチャンバーを排気して−２５（Ｈｇ）とした後、粒子衝撃に付す。その後、植物を湿らせ、１００％湿度のもとで一晩維持し、その後、２２℃及び明期１６時間の標準的な温室条件に置く。
【０１５２】
重度にウイルス感染した葉を収穫し、その樹液を、さらなる植物に２回目のなすりつけ接種を施すために使用した。次いで、これらの植物の三つ葉にファコプソラ・パキリジ（Ｐ．ｐａｃｈｙｒｈｉｚｉ）の夏胞子を用いて接種した。
【０１５３】
実施例３：  ＨＸＴ１遺伝子の発現レベルの測定
サイレンシング効果を評価するために、初生葉が完全に展開したときに、その初生葉になすりつけることによって、植物にウイルスを接種する。全てのスクリーンに対して、２０個体の植物をサイレンシング構築物と一緒に使用し、５個体の植物を空ベクターと一緒に使用し、３個体の植物を非感染対照として使用する。植物は、温室の中で、無作為分布で維持する。第３の三つ葉が完全に展開したら、第２及び第３の三つ葉の小葉にファコプソラ・パキリジ（Ｐ．ｐａｃｈｙｒｈｉｚｉ）の夏胞子を用いて噴霧によって接種する。本発明者らは、２ｍｇ／ｍＬの胞子と少量の粉ミルク及び分散をよくするために加えたＴｗｅｅｎ２０からなる懸濁液を用いている。植物を湿度１００％で２４時間暗所に維持し、その後、それらを標準的な温室管理下に戻す。さび病を接種してから５日間経過した後、ＲＮＡをｑＰＣＲ用に調製する。第２又は第３の三つ葉の１枚の小葉を選択し、Ａｇｉｌｅｎｔ（Ｗａｌｄｂｒｏｎｎ）製の「Ｐｌａｎｔ  ＲＮＡ  Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ」を用いるＲＮＡの調製に１００ｍｇの葉材を使用する。ＲＮＡ濃度は、蛍光定量法を用いて測定する（Ｑｕｂｉｔ  ２．０，  Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，  Ｗａｌｔｈａｍ）。全てのサンプルに関するｑＰＣＲは、２反復で測定する。本発明者らが使用するｑＰＣＲ−化学は、「ＳｅｎｓｉＦａｓｔ  ＳＹＢＲ  ｎｏ−Ｒｏｘ  Ｋｉｔ（Ｂｉｏｌｉｎｅ  ＧｍｂＨ，  Ｌｕｃｋｅｎｗａｌｄｅ）」である。
【０１５４】
ｑＰＣＲの結果は、Ｐｐ＿ＲＰＳ１４に対して標準化する。全てのサンプルは、最初に別々に評価し、次いで、全ての植物の平均を用いて、サイレンシングが首尾よく実施されたかどうかを決定する。サイレンシング効果の有意性は、標準的なｔ検定によって決定する。ｑＰＣＲの結果に関する全ての統計分析は、ＲＥＳＴ−２００９ソフトウェア（Ｐｆａｆｆｌ  ２００１，  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，  ２９：ｅ４５）を用いて実施する。
【０１５５】
残った小葉は、症状評価に使用する。
【０１５６】
ＨＸＴ１遺伝子に関して、低減された転写産物レベル（図２Ａ）及び低減された菌類感染が観察された。感染の１０日後に実施した病害の表現型症状評価（「Ｇｏｄｏｙ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００６，  Ｆｉｔｏｐａｔｏｌｏｇｉａ  Ｂｒａｓｉｌｅｉｒａ  ３１：  ６３−６８」に記載されているファコプソラ・パキリジ（Ｐｈａｋｏｐｓｏｒａ  ｐａｃｈｙｒｈｉｚｉ）の評価の図式的な尺度に基づく）は、ＢＰＭＶ空ベクターに感染した植物が６０％に近い葉症状を示しているのに対して、ＨＸＴ１サイレンシング構築物を含んでいるＢＰＭＶベクターに感染した植物は、僅かに約５％の葉症状しか示さなかった。
【０１５７】
それに対して、ＶＩＧＳについて異なるファコプソラ・パキリジ（Ｐ．ｐａｃｈｙｒｈｉｚｉ）標的遺伝子（ＳＤＨ１）を用いてアッセイした場合、転写産物レベルは低減されたのにも関わらず、対照（空ＢＰＭＶベクター）と比較してファコプソラ・パキリジ（Ｐ．ｐａｃｈｙｒｈｉｚｉ）感染の低減は観察されなかった（図２Ｂ）。
【０１５８】
実施例４：  ＨＸＴ１タンパク質のさび病特異的群の確認
ファコプソラ・パキリジ（Ｐ．ｐａｃｈｙｒｈｉｚｉ）のＨＸＴ１タンパク質の配列に基づき、ＢＬＡＳＴ配列アラインメントツールを使用して、別の種において相同配列を確認した。
【０１５９】
これらの相同配列の間の配列同一性の割合（％）が、表１に示されている。
【０１６０】
これらの相同ＨＸＴ１タンパク質は、それら自体の間で、別のクラスのヘキソース輸送体との配列同一性の割合（％）〔これは、Ｙｉｎら「Ｙｉｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１，  ＭＰＭＩ  ２４：  ５５４−５６１）」によって確認された提案された「ＨＸＴ１−相同体」との配列同一性の割合（％）を包含する〕よりも大きな配列同一性の割合（％）を示し、それによって、これらのヘキソース輸送体が別のタイプのヘキソース輸送体とは充分に異なっている相同ＨＸＴ１タンパク質の群を形成していることを示している。さらに、これらのＨＸＴ１タンパク質は、さび病以外の菌類においては相同タンパク質を見いだせず、それによって、この群の相同ＨＸＴ１タンパク質がさび病に対して特異的であるということを示している。
【表１】
2018527022.tif 000002
【０１６１】
別の菌類に由来するヘキソース輸送体タンパク質も含んでいる配列アラインメントに基づいて、系統樹を作成した（図３）。アラインメントは、マトリックスＢｌｏｓｕｍを使用し、ギャップエクステンションを０，０５に固定し、及び、ギャップオープンペナルティを１０として、ＣｌｕｓｔａｌＷ２上で実施した。該系統樹は、デフォルトパラメータ及び１０のブートストラップを使用して、Ｐｈｙｍｌ（Ｇｕｉｎｄｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１０），  Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  ５９（３）：  ３０７−２１）で作成した。該相同ＨＸＴ１タンパク質をその系統樹の１本の枝の上にグループ分けし、それによって、さび病種の中でこれらのＨＸＴ１タンパク質の多少の特異性を確認した。
【図面の簡単な説明】
【０１６２】
【図１】図１は、ｐＢＰＭＶ発現カセット（Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１０，  Ｐｌａｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，  １５３：  ５２−６５）の概略図を示す。
【図２】図２Ａは、ＢＰＭＶ空ベクター（ＢＰＭＶ−Ｖ１／Ｒ１Ｍ）と比較したＨＸＴ１サイレンシング構築物（ＢＰＭＶ−ＨＸＴ１／Ｒ１Ｍ）に感染した植物におけるファコプソラ・パキリジ（Ｐ．ｐａｃｈｙｒｈｉｚｉ）内のＨＸＴ１の発現レベル。  図２Ｂは、ＢＰＭＶ空ベクター（ＢＰＭＶ−Ｖ１／Ｒ１Ｍ）と比較したＳＤＨ１サイレンシング構築物（ＢＰＭＶ−ＳＤＨ１／Ｒ１Ｍ）に感染した植物におけるファコプソラ・パキリジ（Ｐ．ｐａｃｈｙｒｈｉｚｉ）内のＳＤＨ１の発現レベルを示す。
【図３】図３は、別の菌類に由来するヘキソース輸送体タンパク質も含んでいる配列アラインメントに基づいて作成した系統樹を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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