(57)【要約】補体依存性細胞傷害の回復を特徴とする遺伝子改変非ヒト動物及び免疫不全非ヒト動物と、遺伝子改変免疫不全非ヒト動物において治療抗体を評価するための方法及び組成物に関する。特定の態様において、本発明は、免疫不全非肥満糖尿病(NOD)、A/J、A/He、AKR、DBA/2、NZB/B1N、B10.D2/oSn、及び他のマウス株であって、非改変免疫不全マウスでは欠如している補体依存性細胞傷害を回復するように遺伝子改変されたものに関する。他の特定の態様において、本発明は、NOD.Cg-Prkdcscid IL2rgtmlWjl/SzJ(NSG)、NOD.Cg-Rag1tm1Mom Il2rgtmlWjl/SzJ(NRG)、及びNOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Sug/JicTac(NOG)マウスであって、非改変NSG、NRG、及びNOGマウスでは欠如している補体依存性細胞傷害を回復するように遺伝子改変されたものに関する。本発明の特定の態様により、無傷の補体系を特徴とする遺伝子改変免疫不全マウスにおける治療抗体又は推定治療抗体の評価方法が提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
遺伝子改変免疫不全マウスであって、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられるように、前記マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含む、遺伝子改変免疫不全マウス。
【請求項２】
前記マウスは、重症複合免疫不全を有する、請求項1記載の遺伝子改変免疫不全マウス。
【請求項３】
前記マウスは、Ilr2g変異を有し、前記マウスは、IL2受容体ガンマ鎖(ILR2g)欠乏により特徴付けられる、請求項1又は2記載の遺伝子改変免疫不全マウス。
【請求項４】
前記マウスは、Rag1変異を有し、前記マウスは、組換え活性化遺伝子1(RAG1)欠乏により特徴付けられる、請求項1、2、又は3の何れかに記載の遺伝子改変免疫不全マウス。
【請求項５】
前記マウスは、Rag2変異を有し、前記マウスは、組換え活性化遺伝子2(RAG2)欠乏である、請求項1乃至4の何れかに記載の遺伝子改変免疫不全マウス。
【請求項６】
前記マウスは、scid変異についてホモ接合性であり、前記マウスは、重症複合免疫不全を有する、請求項1乃至5の何れかに記載の遺伝子改変免疫不全マウス。
【請求項７】
前記マウスは、Rag1tm1Mom変異を含み、RAG1欠乏を有する、請求項1乃至6の何れかに記載の遺伝子改変免疫不全マウス。
【請求項８】
前記マウスは、Rag1tm1Mom変異についてホモ接合性であり、RAG1欠乏を有する、請求項1乃至7の何れかに記載の遺伝子改変免疫不全マウス。
【請求項９】
前記マウスは、免疫不全NOD、A/J、A/He、AKR、DBA/2、NZB/B1N、又はB10.D2/oSnマウスである、請求項1乃至8の何れかに記載の遺伝子改変免疫不全マウス。
【請求項１０】
前記遺伝子改変免疫不全動物は、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系、重症複合免疫不全、及びIL2Rg欠乏により特徴付けられるように、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含む遺伝子改変NSG-Hc1マウスである、請求項1乃至9の何れかに記載の遺伝子改変免疫不全マウス。
【請求項１１】
前記遺伝子改変免疫不全動物は、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系、RAG1欠乏、及びIL2Rg欠乏により特徴付けられるように、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含む遺伝子改変NRG-Hc1マウスである、請求項1乃至9の何れかに記載の遺伝子改変免疫不全マウス。
【請求項１２】
前記遺伝子改変免疫不全動物は、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系、重症複合免疫不全、及びIL2Rg欠乏により特徴付けられるように、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含む遺伝子改変NOG-Hc1マウスである、請求項1乃至9の何れかに記載の遺伝子改変免疫不全マウス。
【請求項１３】
更に、異種移植腫瘍細胞を含む、請求項1乃至12の何れかに記載の遺伝子改変免疫不全マウス。
【請求項１４】
更に、ヒト異種移植腫瘍細胞を含む、請求項1乃至13の何れかに記載の遺伝子改変免疫不全マウス。
【請求項１５】
更に、細胞株の異種移植腫瘍細胞を含む、請求項1乃至14の何れかに記載の遺伝子改変免疫不全マウス。
【請求項１６】
抗癌治療剤の又は推定抗癌治療剤の評価用のマウスモデル系を作製する方法であって、
C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられるように、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含む、遺伝子改変免疫不全マウスを提供することと、
異種移植腫瘍細胞を前記遺伝子改変免疫不全マウスに投与することと、を含む方法。
【請求項１７】
前記マウスは、重症複合免疫不全を有する、請求項16記載の遺伝子改変免疫不全マウス。
【請求項１８】
前記マウスは、Ilr2g変異を有し、前記マウスは、IL2受容体ガンマ鎖(ILR2g)欠乏により特徴付けられる、請求項16又は17記載の遺伝子改変免疫不全マウス。
【請求項１９】
前記マウスは、Rag1変異を有し、前記マウスは、組換え活性化遺伝子1(RAG1)欠乏により特徴付けられる、請求項16、17、又は18の何れかに記載の遺伝子改変免疫不全マウス。
【請求項２０】
前記マウスは、Rag2変異を有し、前記マウスは、組換え活性化遺伝子2(RAG2)欠乏である、請求項16乃至19の何れかに記載の遺伝子改変免疫不全マウス。
【請求項２１】
前記マウスは、scid変異についてホモ接合性であり、前記マウスは、重症複合免疫不全を有する、請求項16乃至20の何れかに記載の遺伝子改変免疫不全マウス。
【請求項２２】
前記マウスは、Rag1tm1Mom変異を含み、RAG1欠乏を有する、請求項16乃至21の何れかに記載の遺伝子改変免疫不全マウス。
【請求項２３】
前記マウスは、Rag1tm1Mom変異についてホモ接合性であり、RAG1欠乏を有する、請求項16乃至22の何れかに記載の遺伝子改変免疫不全マウス。
【請求項２４】
前記マウスは、免疫不全NOD、A/J、A/He、AKR、DBA/2、NZB/B1N、又はB10.D2/oSnマウスである、請求項16乃至23の何れかに記載の遺伝子改変免疫不全マウス。
【請求項２５】
前記遺伝子改変免疫不全動物は、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系、重症複合免疫不全、及びIL2Rg欠乏により特徴付けられるように、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含む遺伝子改変NSGマウス、NSG-Hc1である、請求項16乃至24の何れかに記載の遺伝子改変免疫不全マウス。
【請求項２６】
前記遺伝子改変免疫不全動物は、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系、RAG1欠乏、及びIL2Rg欠乏により特徴付けられるように、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含む遺伝子改変NRGマウス、NRG-Hc1である、請求項16乃至24の何れかに記載の遺伝子改変免疫不全マウス。
【請求項２７】
前記遺伝子改変免疫不全動物は、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系、重症複合免疫不全、及びIL2Rg欠乏により特徴付けられるように、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含む遺伝子改変NOGマウス、NOG-Hc1である、請求項16乃至24の何れかに記載の遺伝子改変免疫不全マウス。
【請求項２８】
前記異種移植腫瘍細胞は、ヒト異種移植腫瘍細胞である、請求項16乃至27の何れかに記載の方法。
【請求項２９】
前記異種移植腫瘍細胞は、細胞株の異種移植腫瘍細胞である、請求項16乃至28の何れかに記載の方法。
【請求項３０】
抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体の効果を評価する方法であって、
C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられるように、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含む、遺伝子改変免疫不全マウスを提供することと、
異種移植腫瘍細胞を前記遺伝子改変免疫不全マウスに投与することと、
抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体を前記マウスに投与することと、
前記抗癌治療抗体に対する前記異種移植腫瘍細胞の応答をアッセイすることと、を含む方法。
【請求項３１】
前記マウスは、重症複合免疫不全を有する、請求項30記載の遺伝子改変免疫不全マウス。
【請求項３２】
前記マウスは、Ilr2g変異を有し、前記マウスは、IL2受容体ガンマ鎖(ILR2g)欠乏により特徴付けられる、請求項30又は31記載の遺伝子改変免疫不全マウス。
【請求項３３】
前記マウスは、Rag1変異を有し、前記マウスは、組換え活性化遺伝子1(RAG1)欠乏により特徴付けられる、請求項30、31、又は32の何れかに記載の遺伝子改変免疫不全マウス。
【請求項３４】
前記マウスは、Rag2変異を有し、前記マウスは、組換え活性化遺伝子2(RAG2)欠乏である、請求項30乃至33の何れかに記載の遺伝子改変免疫不全マウス。
【請求項３５】
前記マウスは、scid変異についてホモ接合性であり、前記マウスは、重症複合免疫不全を有する、請求項30乃至34の何れかに記載の遺伝子改変免疫不全マウス。
【請求項３６】
前記マウスは、Rag1tm1Mom変異を含み、RAG1欠乏を有する、請求項30乃至35の何れかに記載の遺伝子改変免疫不全マウス。
【請求項３７】
前記マウスは、Rag1tm1Mom変異についてホモ接合性であり、RAG1欠乏を有する、請求項30乃至36の何れかに記載の遺伝子改変免疫不全マウス。
【請求項３８】
前記マウスは、免疫不全NOD、A/J、A/He、AKR、DBA/2、NZB/B1N、又はB10.D2/oSnマウスである、請求項30乃至37の何れかに記載の遺伝子改変免疫不全マウス。
【請求項３９】
前記遺伝子改変免疫不全動物は、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系、重症複合免疫不全、及びIL2Rg欠乏により特徴付けられるように、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含む遺伝子改変NSGマウス、NSG-Hc1である、請求項30乃至38の何れかに記載の遺伝子改変免疫不全マウス。
【請求項４０】
前記遺伝子改変免疫不全動物は、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系、RAG1欠乏、及びIL2Rg欠乏により特徴付けられるように、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含む遺伝子改変NRGマウス、NRG-Hc1である、請求項30乃至38の何れかに記載の遺伝子改変免疫不全マウス。
【請求項４１】
前記遺伝子改変免疫不全動物は、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系、重症複合免疫不全、及びIL2Rg欠乏により特徴付けられるように、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含む遺伝子改変NOGマウス、NOG-Hc1である、請求項30乃至38の何れかに記載の遺伝子改変免疫不全マウス。
【請求項４２】
前記異種移植腫瘍細胞は、ヒト異種移植腫瘍細胞である、請求項30乃至41の何れかに記載の方法。
【請求項４３】
前記異種移植腫瘍細胞は、細胞株の異種移植腫瘍細胞である、請求項30乃至42の何れかに記載の方法。
【請求項４４】
遺伝子改変NODマウスであって、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられるように、前記マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含む、遺伝子改変NODマウス。
【請求項４５】
遺伝子改変NODマウスであって、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられるように、前記マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含む、遺伝子改変NODマウス。
【請求項４６】
実質的に本明細書に記載の抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用の非ヒト動物モデル系を作製するための方法。
【請求項４７】
実質的に本明細書に記載の非ヒト動物モデル系において抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤の効果を評価する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
[関連出願の参照]
【０００２】
本願は、出典を明記することによりその開示内容全体を共に本願明細書の一部とする2015年6月16日出願の米国仮特許出願第62/180,369号及び2016年4月25日出願の第62/326,958号に基づく優先権を主張する。
【０００３】
本発明は、概ね、補体依存性細胞傷害の回復を特徴とする遺伝子改変非ヒト動物及び免疫不全非ヒト動物と、遺伝子改変免疫不全非ヒト動物において治療抗体を評価するための方法及び組成物に関する。特定の態様において、本発明は、免疫不全非肥満糖尿病(non-obese diabetic, NOD)、A/J、A/He、AKR、DBA/2、NZB/B1N、B10.D2/oSn、及び他のマウス株であって、非改変免疫不全マウスでは欠如している補体依存性細胞傷害を回復するように遺伝子改変されたものに関する。他の特定の態様において、本発明は、NOD.Cg-Prkdcscid IL2rgtmlWjl/SzJ(NSG)、NOD.Cg-Rag1tm1Mom Il2rgtmlWjl/SzJ(NRG)、及びNOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Sug/JicTac(NOG)マウスであって、非改変NSG、NRG、及びNOGマウスでは欠如している補体依存性細胞傷害を回復するように遺伝子改変されたものに関する。本発明の特定の態様により、無傷の補体系を特徴とするNSG、NRG、及びNOGマウス等、無傷の補体系を特徴とする遺伝子改変免疫不全マウスにおける治療抗体の評価方法が提供される。
【背景技術】
【０００４】
モノクローナル抗体(mAb)は、癌の治療における主流の治療選択肢と見られている。モノクローナル抗体のFc機能は、ナチュラルキラー(NK)細胞による抗体依存性細胞傷害(antibody-dependent cellular cytotoxicity, ADCC)及び補体依存性細胞傷害(complement-dependent cytotoxicity, CDC)を介した腫瘍細胞の殺傷を媒介する上で特に重要となる。しかしながら、腫瘍細胞に対するmAb媒介性CDCに関する研究は、in vitro系に大きく依存している。NSG、NRG、NOG、及び他の免疫不全マウスは、ヒト腫瘍の生着増強をサポートする。しかしながら、NSG、NRG、及びNOGマウス等、免疫不全マウスの幾つかのタイプでは、溶血性補体(Hc)遺伝子のコード領域における2-bpの欠失により溶血性補体が欠如し、これらのマウスにおけるin vivoでのCDC活性の評価が妨げられる。
【０００５】
癌等の疾患の有効な医学的及び薬学的治療の開発を促進するために、腫瘍細胞に対するmAb媒介性CDC分析用の方法及び組成物が引き続き必要である。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
Oettinger, M.A et al., Science, 248:1517-1523, 1990
Schatz, D. G. et al., Cell, 59:1035-1048, 1989
Shultz LD et al, 2005, J. Immunol, 174:6477-89
Shultz LD et al, 2008, Clin Exp Immunol 154(2):270-84
Ito, M. et al., Blood 100, 3175-3182 (2002)
【発明の概要】
【０００７】
遺伝子改変NODマウスが、本発明により提供され、マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変NODマウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられる。
【０００８】
遺伝子改変免疫不全マウスが、本発明により提供され、遺伝子改変マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられる。
【０００９】
遺伝子改変免疫不全非肥満糖尿病(NOD)、A/J、A/He、AKR、DBA/2、NZB/B1N、又はB10.D2/oSnマウスが、本発明により提供され、遺伝子改変マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられる。
【００１０】
遺伝子改変免疫不全マウスが、本発明により提供され、遺伝子改変マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ、マウスは、重症複合免疫不全を有する。
【００１１】
遺伝子改変免疫不全マウスが、本発明により提供され、遺伝子改変マウスのゲノムは、scid変異を含み、遺伝子改変マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられる。
【００１２】
遺伝子改変免疫不全マウスが、本発明により提供され、遺伝子改変マウスのゲノムは、scid変異についてホモ接合性であり、遺伝子改変マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられる。
【００１３】
遺伝子改変免疫不全マウスが、本発明により提供され、遺伝子改変マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系とIL2受容体ガンマ鎖欠乏とにより特徴付けられる。
【００１４】
遺伝子改変免疫不全マウスが、本発明により提供され、遺伝子改変マウスのゲノムは、Il2rg変異を含み、遺伝子改変マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系とIL2受容体ガンマ鎖欠乏とにより特徴付けられる。
【００１５】
遺伝子改変免疫不全マウスが、本発明により提供され、遺伝子改変マウスのゲノムは、Il2rg変異についてホモ接合性であり、遺伝子改変マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系とIL2受容体ガンマ鎖欠乏とにより特徴付けられる。
【００１６】
遺伝子改変免疫不全マウスが、本発明により提供され、遺伝子改変マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系と組換え活性化遺伝子1欠乏とにより特徴付けられる。
【００１７】
遺伝子改変免疫不全マウスが、本発明により提供され、遺伝子改変マウスのゲノムは、Rag1変異を含み、遺伝子改変マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系とRAG1欠乏とにより特徴付けられる。
【００１８】
遺伝子改変免疫不全マウスが、本発明により提供され、遺伝子改変マウスのゲノムは、Rag1変異についてホモ接合性であり、遺伝子改変マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系とRAG1欠乏とにより特徴付けられる。
【００１９】
遺伝子改変免疫不全マウスが、本発明により提供され、遺伝子改変マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系と組換え活性化遺伝子2(RAG2)欠乏とにより特徴付けられる。
【００２０】
遺伝子改変免疫不全マウスが、本発明により提供され、遺伝子改変マウスのゲノムは、Rag2変異を含み、遺伝子改変マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系とRAG2欠乏とにより特徴付けられる。
【００２１】
遺伝子改変免疫不全マウスが、本発明により提供され、遺伝子改変マウスのゲノムは、Rag2変異についてホモ接合性であり、遺伝子改変マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系とRAG2欠乏とにより特徴付けられる。
【００２２】
遺伝子改変免疫不全マウスが、本発明により提供され、遺伝子改変マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に、無傷の補体系と、重症複合免疫不全と、IL2受容体ガンマ鎖欠乏とにより特徴付けられる。
【００２３】
遺伝子改変免疫不全マウスが、本発明により提供され、遺伝子改変マウスのゲノムは、scid変異を含み、動物は、IL2受容体ガンマ鎖欠乏を有し、遺伝子改変マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に、無傷の補体系と、重症複合免疫不全と、IL2受容体ガンマ鎖欠乏とにより特徴付けられる。
【００２４】
遺伝子改変免疫不全マウスが、本発明により提供され、遺伝子改変マウスのゲノムは、scid変異についてホモ接合性であり、動物は、IL2受容体ガンマ鎖欠乏を有し、遺伝子改変マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に、無傷の補体系と、重症複合免疫不全と、IL2受容体ガンマ鎖欠乏とにより特徴付けられる。
【００２５】
遺伝子改変免疫不全マウスが、本発明により提供され、遺伝子改変マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ、マウスは、組換え活性化遺伝子1欠乏とIL2受容体ガンマ鎖欠乏とを有する。
【００２６】
遺伝子改変免疫不全マウスが、本発明により提供され、遺伝子改変マウスのゲノムは、Rag1変異を含み、動物は、IL2受容体ガンマ鎖欠乏を有し、遺伝子改変マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に、無傷の補体系と、RAG1欠乏と、IL2受容体ガンマ鎖欠乏とにより特徴付けられる。
【００２７】
遺伝子改変免疫不全マウスが、本発明により提供され、遺伝子改変マウスのゲノムは、Rag1変異についてホモ接合性であり、動物は、IL2受容体ガンマ鎖欠乏を有し、遺伝子改変マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に、無傷の補体系と、RAG1欠乏と、IL2受容体ガンマ鎖欠乏とにより特徴付けられる。
【００２８】
遺伝子改変免疫不全マウスが、本発明により提供され、遺伝子改変マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ、マウスは、組換え活性化遺伝子2欠乏とIL2受容体ガンマ鎖欠乏とを有する。
【００２９】
遺伝子改変免疫不全マウスが、本発明により提供され、遺伝子改変マウスのゲノムは、Rag2変異を含み、動物は、IL2受容体ガンマ鎖欠乏を有し、遺伝子改変マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に、無傷の補体系と、RAG2欠乏と、IL2受容体ガンマ鎖欠乏とにより特徴付けられる。
【００３０】
遺伝子改変免疫不全マウスが、本発明により提供され、遺伝子改変マウスのゲノムは、Rag2変異についてホモ接合性であり、動物は、IL2受容体ガンマ鎖欠乏を有し、遺伝子改変マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に、無傷の補体系と、RAG2欠乏と、IL2受容体ガンマ鎖欠乏とにより特徴付けられる。
【００３１】
本発明の態様による遺伝子改変免疫不全非ヒトマウスは、免疫不全NOD、A/J、A/He、AKR、DBA/2、NZB/B1N、又はB10.D2/oSnマウスである。
【００３２】
本発明の態様による遺伝子改変免疫不全非ヒトマウスは、NODマウスである。
【００３３】
遺伝子改変免疫不全NODマウスが、本発明により提供され、遺伝子改変免疫不全NODマウスは、重症複合免疫不全を有し、遺伝子改変マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられる。
【００３４】
遺伝子改変免疫不全NODマウスが、本発明により提供され、遺伝子改変マウスのゲノムは、scid変異を含み、遺伝子改変マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられる。
【００３５】
遺伝子改変免疫不全NODマウスが、本発明により提供され、遺伝子改変免疫不全NODマウスは、scid変異についてホモ接合性であり、遺伝子改変マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられる。
【００３６】
遺伝子改変免疫不全NODマウスが、本発明により提供され、動物は、IL2受容体ガンマ鎖欠乏を有し、遺伝子改変免疫不全NODマウスは、重症複合免疫不全を有し、遺伝子改変マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられる。
【００３７】
遺伝子改変免疫不全NODマウスが、本発明により提供され、遺伝子改変NODマウスのゲノムは、Il2rg変異を含み、遺伝子改変マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系とIL2受容体ガンマ鎖欠乏とにより特徴付けられる。
【００３８】
遺伝子改変免疫不全NODマウスが、本発明により提供され、遺伝子改変NODマウスのゲノムは、Il2rg変異についてホモ接合性であり、遺伝子改変マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系とIL2受容体ガンマ鎖欠乏とにより特徴付けられる。
【００３９】
遺伝子改変免疫不全NODマウスが、本発明により提供され、動物は、RAG1欠乏を有し、遺伝子改変マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられる。
【００４０】
遺伝子改変免疫不全NODマウスが、本発明により提供され、遺伝子改変NODマウスのゲノムは、Rag1変異を含み、遺伝子改変マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系とRAG1欠乏とにより特徴付けられる。
【００４１】
遺伝子改変免疫不全NODマウスが、本発明により提供され、遺伝子改変NODマウスのゲノムは、Rag1変異についてホモ接合性であり、遺伝子改変マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系とRAG1欠乏とにより特徴付けられる。
【００４２】
遺伝子改変免疫不全NODマウスが、本発明により提供され、動物は、RAG2欠乏を有し、遺伝子改変マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系とRAG2欠乏とにより特徴付けられる。
【００４３】
遺伝子改変免疫不全NODマウスが、本発明により提供され、遺伝子改変NODマウスのゲノムは、Rag2変異を含み、遺伝子改変マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系とRAG2欠乏とにより特徴付けられる。
【００４４】
遺伝子改変免疫不全NODマウスが、本発明により提供され、遺伝子改変NODマウスのゲノムは、Rag2変異についてホモ接合性であり、遺伝子改変マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系とRAG2欠乏とにより特徴付けられる。
【００４５】
遺伝子改変免疫不全NODマウスが、本発明により提供され、遺伝子改変NODマウスのゲノムは、scid変異についてホモ接合性であり、動物は、IL2受容体ガンマ鎖欠乏を有し、遺伝子改変マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に、無傷の補体系と、重症複合免疫不全と、IL2受容体ガンマ鎖欠乏とにより特徴付けられる。
【００４６】
NOD.Cg-PrkdcscidIl2rgtmlWjlHc1/SzJ(NSG-Hc1)マウスが、本発明により提供され、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に、無傷の補体系と、重症複合免疫不全と、IL2受容体ガンマ鎖欠乏とにより特徴付けられる。
【００４７】
遺伝子改変免疫不全NODマウスが、本発明により提供され、遺伝子改変NODマウスのゲノムは、Rag1変異についてホモ接合性であり、動物は、IL2受容体ガンマ鎖欠乏を有し、遺伝子改変マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に、無傷の補体系と、RAG1欠乏と、IL2受容体ガンマ鎖欠乏とにより特徴付けられる。
【００４８】
NOD.Cg-Rag1tm1MomIl2rgtmlWjlHc1/SzJ(NRG-Hc1)マウスが、本発明により提供され、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に、無傷の補体系と、RAG1欠乏と、IL2受容体ガンマ鎖欠乏とにより特徴付けられる。
【００４９】
NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Sug Hc1/JicTac(NOG-Hc1)マウスが、本発明により提供され、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に、無傷の補体系と、重症複合免疫不全と、IL2受容体ガンマ鎖欠乏とにより特徴付けられる。
【００５０】
遺伝子改変免疫不全NODマウスが、本発明により提供され、遺伝子改変NODマウスのゲノムは、Rag2変異についてホモ接合性であり、動物は、IL2受容体ガンマ鎖欠乏を有し、遺伝子改変マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に、無傷の補体系と、RAG2欠乏と、IL2受容体ガンマ鎖欠乏とにより特徴付けられる。
【００５１】
遺伝子改変免疫不全マウスの単離細胞が、本発明により提供され、遺伝子改変マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全非ヒト動物は、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系とにより特徴付けられる。
【００５２】
NSG-Hc1マウスの単離細胞は、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系とにより特徴付けられる。
【００５３】
NRG-Hc1マウスの単離細胞は、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系とにより特徴付けられる。
【００５４】
NOG-Hc1マウスの単離細胞は、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系とにより特徴付けられる。
【００５５】
本発明の態様によれば、本発明の遺伝子改変免疫不全マウスは、更に、異種移植腫瘍細胞を含む。
【００５６】
本発明の態様によれば、本発明の遺伝子改変免疫不全マウスは、更に、ヒト異種移植腫瘍細胞を含む。
【００５７】
本発明の態様によれば、本発明の遺伝子改変免疫不全マウスは、更に、細胞株の異種移植腫瘍細胞を含む。
【００５８】
更に異種移植腫瘍細胞を含むNOD.Cg-PrkdcscidIl2rgtmlWjlHc1/SzJ(NSG-Hc1)マウスが、本発明により提供される。
【００５９】
更にヒト異種移植腫瘍細胞を含むNOD.Cg-PrkdcscidIl2rgtmlWjlHc1/SzJ(NSG-Hc1)マウスが、本発明によって提供される。
【００６０】
更に細胞株の異種移植腫瘍細胞を含むNOD.Cg-PrkdcscidIl2rgtmlWjlHc1/SzJ(NSG-Hc1)マウスは、本発明によって提供される。
【００６１】
更に異種移植腫瘍細胞を含むNOD.Cg-Rag1tm1MomIl2rgtmlWjlHc1/SzJ(NRG-Hc1)マウスが、本発明により提供される。
【００６２】
更にヒト異種移植腫瘍細胞を含むNOD.Cg-Rag1tm1MomIl2rgtmlWjlHc1/SzJ(NRG-Hc1)マウスが、本発明によって提供される。
【００６３】
更に細胞株の異種移植腫瘍細胞を含むNOD.Cg-Rag1tm1MomIl2rgtmlWjlHc1/SzJ(NRG-Hc1)マウスが、本発明により提供される。
【００６４】
更に異種移植腫瘍細胞を含むNOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Sug Hc1/JicTac(NOG-Hc1)マウスが、本発明により提供される。
【００６５】
更にヒト異種移植腫瘍細胞を含むNOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Sug Hc1/JicTac(NOG-Hc1)マウスが、本発明により提供される。
【００６６】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含む遺伝子改変免疫不全マウスであり、その修復の結果として、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられる遺伝子改変免疫不全マウスを提供することと、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全マウスに投与することとを含む。
【００６７】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含む遺伝子改変免疫不全非肥満糖尿病(NOD)、A/J、A/He、AKR、DBA/2、NZB/B1N、又はB10.D2/oSnマウスであり、その修復の結果として、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられる遺伝子改変免疫不全マウスを提供することと、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全マウスに投与することとを含む。
【００６８】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含む遺伝子改変免疫不全マウスであり、その修復の結果として、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ、重症複合免疫不全を有する遺伝子改変免疫不全マウスを提供することと、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全マウスに投与することとを含む。
【００６９】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、遺伝子改変免疫不全マウスを提供することを含み、遺伝子改変免疫不全マウスのゲノムは、scid変異を含み、遺伝子改変免疫不全マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ且つ重症複合免疫不全を有し、更に方法は、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全マウスに投与することを含む。
【００７０】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、遺伝子改変免疫不全マウスを提供することを含み、遺伝子改変免疫不全マウスのゲノムは、scid変異についてホモ接合性であり、遺伝子改変マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ且つ重症複合免疫不全を有し、更に方法は、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全マウスに投与することを含む。
【００７１】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含む遺伝子改変免疫不全マウスであり、その修復の結果として、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ、IL2受容体ガンマ鎖欠乏を有する遺伝子改変免疫不全マウスを提供することと、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全マウスに投与することとを含む。
【００７２】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、遺伝子改変免疫不全マウスを提供することを含み、遺伝子改変免疫不全マウスのゲノムは、Il2rg変異を含み、遺伝子改変マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ且つIL2受容体ガンマ鎖欠乏を有し、更に方法は、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全マウスに投与することを含む。
【００７３】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、遺伝子改変免疫不全マウスを提供することを含み、遺伝子改変マウスのゲノムは、Il2rg変異についてホモ接合性であり、遺伝子改変免疫不全マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ且つIL2受容体ガンマ鎖欠乏を有し、更に方法は、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全マウスに投与することを含む。
【００７４】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含む遺伝子改変免疫不全マウスであり、その修復の結果として、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ、組換え活性化遺伝子1欠乏を有する遺伝子改変免疫不全マウスを提供することと、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全マウスに投与することとを含む。
【００７５】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、遺伝子改変免疫不全マウスを提供することを含み、遺伝子改変免疫不全マウスのゲノムは、Rag1変異を含み、遺伝子改変免疫不全マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ且つ組換え活性化遺伝子1欠乏を有し、更に方法は、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全マウスに投与することを含む。
【００７６】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、遺伝子改変免疫不全マウスを提供することを含み、遺伝子改変免疫不全マウスのゲノムは、Rag1変異についてホモ接合性であり、遺伝子改変免疫不全マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ且つ組換え活性化遺伝子1欠乏を有し、更に方法は、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全マウスに投与することを含む。
【００７７】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含む遺伝子改変免疫不全マウスであり、その修復の結果として、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ、組換え活性化遺伝子2欠乏を有する遺伝子改変免疫不全マウスを提供することと、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全マウスに投与することとを含む。
【００７８】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、遺伝子改変免疫不全マウスを提供することを含み、遺伝子改変免疫不全マウスのゲノムは、Rag2変異を含み、遺伝子改変免疫不全マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ、更に方法は、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全マウスに投与することを含む。
【００７９】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、遺伝子改変免疫不全マウスを提供することを含み、遺伝子改変免疫不全マウスのゲノムは、Rag2変異についてホモ接合性であり、遺伝子改変マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ且つ組換え活性化遺伝子2欠乏を有し、更に方法は、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全マウスに投与することを含む。
【００８０】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含む遺伝子改変免疫不全マウスであり、その修復の結果として、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ、重症複合免疫不全及びIL2受容体ガンマ鎖欠乏を有する遺伝子改変免疫不全マウスを提供することと、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全マウスに投与することとを含む。
【００８１】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、遺伝子改変免疫不全マウスを提供することを含み、遺伝子改変免疫不全マウスのゲノムは、scid変異及びIl2rg変異を含み、遺伝子改変免疫不全マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ、遺伝子改変免疫不全マウスは、重症複合免疫不全を有し且つIL2受容体ガンマ鎖欠乏を有し、更に方法は、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全マウスに投与することを含む。
【００８２】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、遺伝子改変免疫不全マウスを提供することを含み、遺伝子改変免疫不全マウスのゲノムは、scid変異及びIl2rg変異についてホモ接合性であり、遺伝子改変免疫不全マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ、遺伝子改変免疫不全マウスは、重症複合免疫不全を有し且つIL2受容体ガンマ鎖欠乏を有し、更に方法は、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全マウスに投与することを含む。
【００８３】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含む遺伝子改変免疫不全マウスであり、その修復の結果として、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ、組換え活性化遺伝子1欠乏及びIL2受容体ガンマ鎖欠乏を有する遺伝子改変免疫不全マウスを提供することと、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全マウスに投与することとを含む。
【００８４】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、遺伝子改変免疫不全マウスを提供することを含み、遺伝子改変免疫不全マウスのゲノムは、Rag1変異及びIl2rg変異を含み、遺伝子改変免疫不全マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ遺伝子改変免疫不全マウスは、組換え活性化遺伝子1欠乏を有し且つIL2受容体ガンマ鎖欠乏を有し、更に方法は、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全マウスに投与することを含む。
【００８５】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、遺伝子改変免疫不全マウスを提供することを含み、遺伝子改変免疫不全マウスのゲノムは、Rag1変異及びIl2rg変異についてホモ接合性であり、遺伝子改変免疫不全マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ、遺伝子改変免疫不全マウスは、組換え活性化遺伝子1欠乏を有し且つIL2受容体ガンマ鎖欠乏を有し、更に方法は、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全マウスに投与することを含む。
【００８６】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含む遺伝子改変免疫不全マウスであり、その修復の結果として、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ、組換え活性化遺伝子2欠乏及びIL2受容体ガンマ鎖欠乏を有する遺伝子改変免疫不全マウスを提供することと、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全マウスに投与することとを含む。
【００８７】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、遺伝子改変免疫不全マウスを提供することを含み、遺伝子改変免疫不全マウスのゲノムは、Rag2変異及びIl2rg変異を含み、遺伝子改変免疫不全マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ、遺伝子改変免疫不全マウスは、組換え活性化遺伝子2欠乏を有し且つIL2受容体ガンマ鎖欠乏を有し、更に方法は、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全マウスに投与することを含む。
【００８８】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、遺伝子改変免疫不全マウスを提供することを含み、遺伝子改変免疫不全マウスのゲノムは、Rag2変異及びIl2rg変異についてホモ接合性であり、遺伝子改変免疫不全マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ、遺伝子改変免疫不全マウスは、組換え活性化遺伝子2欠乏を有し且つIL2受容体ガンマ鎖欠乏を有し、更に方法は、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全マウスに投与することを含む。
【００８９】
本発明の態様によれば、抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法において投与される異種移植腫瘍細胞は、ヒト異種移植腫瘍細胞である。
【００９０】
本発明の態様によれば、抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法において投与される異種移植腫瘍細胞は、細胞株の異種移植腫瘍細胞である。
【００９１】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含む遺伝子改変免疫不全NODマウスであり、その修復の結果として、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ、重症複合免疫不全を有する遺伝子改変免疫不全NODマウスを提供することと、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全NODマウスに投与することとを含む。
【００９２】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、遺伝子改変免疫不全NODマウスを提供することを含み、遺伝子改変免疫不全NODマウスのゲノムは、scid変異を含み、遺伝子改変NODマウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全NODマウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系と重症複合免疫不全とにより特徴付けられ、更に方法は、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全NODマウスに投与することを含む。
【００９３】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、遺伝子改変免疫不全NODマウスを提供することを含み、遺伝子改変免疫不全NODマウスのゲノムは、scid変異についてホモ接合性であり、遺伝子改変免疫不全NODマウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系と重症複合免疫不全とにより特徴付けられ、更に方法は、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全NODマウスに投与することを含む。
【００９４】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含む遺伝子改変免疫不全NODマウスであり、その修復の結果として、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ、IL2受容体ガンマ鎖欠乏を有するマウスを提供することと、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全NODマウスに投与することとを含む。
【００９５】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、遺伝子改変免疫不全NODマウスを提供することを含み、遺伝子改変免疫不全NODマウスのゲノムは、Il2rg変異を含み、遺伝子改変NODマウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全NODマウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系とIL2受容体ガンマ鎖欠乏とにより特徴付けられ、更に方法は、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全NODマウスに投与することを含む。
【００９６】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、遺伝子改変免疫不全NODマウスを提供することを含み、遺伝子改変NODマウスのゲノムは、Il2rg変異についてホモ接合性であり、遺伝子改変NODマウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全NODマウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系とIL2受容体ガンマ鎖欠乏とにより特徴付けられ、更に方法は、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全NODマウスに投与することを含む。
【００９７】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含む遺伝子改変免疫不全NODマウスであり、その修復の結果として、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ、組換え活性化遺伝子1欠乏を有する遺伝子改変免疫不全NODマウスを提供することと、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全NODマウスに投与することとを含む。
【００９８】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、遺伝子改変免疫不全NODマウスを提供することを含み、遺伝子改変NODマウスのゲノムは、Rag1変異を含み、遺伝子改変NODマウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全NODマウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系と組換え活性化遺伝子1欠乏とにより特徴付けられ、更に方法は、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全NODマウスに投与することを含む。
【００９９】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、遺伝子改変免疫不全NODマウスを提供することを含み、遺伝子改変免疫不全NODマウスのゲノムは、Rag1変異についてホモ接合性であり、遺伝子改変NODマウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全NODマウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系と組換え活性化遺伝子1欠乏とにより特徴付けられ、更に方法は、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変NOD免疫不全マウスに投与することを含む。
【０１００】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含む遺伝子改変免疫不全NODマウスであり、その修復の結果として、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ、組換え活性化遺伝子2欠乏を有する遺伝子改変免疫不全NODマウスを提供することと、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全NODマウスに投与することとを含む。
【０１０１】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、遺伝子改変免疫不全NODマウスを提供することを含み、遺伝子改変免疫不全NODマウスのゲノムは、Rag2変異を含み、遺伝子改変NODマウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全NODマウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系と組換え活性化遺伝子2欠乏とにより特徴付けられ、更に方法は、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全NODマウスに投与することを含む。
【０１０２】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、遺伝子改変免疫不全NODマウスを提供することを含み、遺伝子改変NODマウスのゲノムは、Rag2変異についてホモ接合性であり、遺伝子改変免疫不全NODマウスのゲノム、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全NODマウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系と組換え活性化遺伝子2欠乏とにより特徴付けられ、更に方法は、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全NODマウスに投与することを含む。
【０１０３】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含む遺伝子改変免疫不全NODマウスであり、その修復の結果として、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ、重症複合免疫不全及びIL2受容体ガンマ鎖欠乏を有する遺伝子改変免疫不全NODマウスを提供することと、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全NODマウスに投与することとを含む。
【０１０４】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、遺伝子改変免疫不全NODマウスを提供することを含み、遺伝子改変免疫不全NODマウスのゲノムは、scid変異及びIl2rg変異を含み、遺伝子改変マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全NODマウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ、遺伝子改変免疫不全NODマウスは、重症複合免疫不全を有し且つIL2受容体ガンマ鎖欠乏を有し、更に方法は、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全NODマウスに投与することを含む。
【０１０５】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、遺伝子改変免疫不全NODマウスを提供することを含み、遺伝子改変免疫不全NODマウスのゲノムは、scid変異及びIl2rg変異についてホモ接合性であり、遺伝子改変免疫不全NODマウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全NODマウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ、遺伝子改変免疫不全NODマウスは、重症複合免疫不全を有し且つIL2受容体ガンマ鎖欠乏を有し、更に方法は、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全NODマウスに投与することを含む。
【０１０６】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含む遺伝子改変免疫不全NODマウスであり、その修復の結果として、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ、組換え活性化遺伝子1欠乏及びIL2受容体ガンマ鎖欠乏を有する遺伝子改変免疫不全NODマウスを提供することと、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全NODマウスに投与することとを含む。
【０１０７】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、遺伝子改変免疫不全NODマウスを提供することを含み、遺伝子改変免疫不全NODマウスのゲノムは、Rag1変異を含み、遺伝子改変免疫不全NODマウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全NODマウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ、遺伝子改変免疫不全NODマウスは、IL2受容体ガンマ鎖欠乏及び組換え活性化遺伝子1欠乏を有し、更に方法は、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全NODマウスに投与することを含む。
【０１０８】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、遺伝子改変免疫不全NODマウスを提供することを含み、遺伝子改変免疫不全NODマウスのゲノムは、Rag1変異についてホモ接合性であり、遺伝子改変免疫不全NODマウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全NODマウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ、マウスは、IL2受容体ガンマ鎖欠乏及び組換え活性化遺伝子1欠乏を有し、更に方法は、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全NODマウスに投与することを含む。
【０１０９】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含む遺伝子改変免疫不全NODマウスであり、その修復の結果として、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ、組換え活性化遺伝子2欠乏及びIL2受容体ガンマ鎖欠乏を有する遺伝子改変免疫不全NODマウスを提供することと、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全NODマウスに投与することとを含む。
【０１１０】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、遺伝子改変免疫不全NODマウスを提供することを含み、遺伝子改変免疫不全NODマウスのゲノムは、Rag2変異を含み、遺伝子改変免疫不全NODマウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全NODマウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ、遺伝子改変免疫不全NODマウスは、IL2受容体ガンマ鎖欠乏及び組換え活性化遺伝子2欠乏を有し、更に方法は、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全NODマウスに投与することを含む。
【０１１１】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、遺伝子改変免疫不全NODマウスを提供することを含み、遺伝子改変免疫不全NODマウスのゲノムは、Rag2変異についてホモ接合性であり、遺伝子改変免疫不全NODマウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全NODマウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ、マウスは、IL2受容体ガンマ鎖欠乏及び組換え活性化遺伝子2欠乏を有し、更に方法は、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全NODマウスに投与することを含む。
【０１１２】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、NSG-Hc1マウスを提供することを含み、NSG-Hc1マウスがC5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられるように、NSG-Hc1マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、更に方法は、異種移植腫瘍細胞をNSG-Hc1マウスに投与することを含み、NSG-Hc1マウスがC5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられるように、NSG-Hc1マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含む。
【０１１３】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、NRG-Hc1マウスを提供することを含み、NRG-Hc1マウスがC5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられるように、NRG-Hc1マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、更に方法は、異種移植腫瘍細胞をNRG-Hc1マウスに投与することを含み、NRG-Hc1マウスがC5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられるように、NRG-Hc1マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含む。
【０１１４】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、NOG-Hc1マウスを提供することを含み、NOG-Hc1マウスがC5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられるように、NOG-Hc1マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、更に方法は、異種移植腫瘍細胞をNOG-Hc1マウスに投与することを含み、NOG-Hc1マウスがC5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられるように、NOG-Hc1マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含む。
【０１１５】
本発明の態様による抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤の効果を評価する方法は、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含む遺伝子改変免疫不全マウスであり、その修復の結果として、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられる遺伝子改変免疫不全マウスを提供することと、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全マウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体をマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体に対する異種移植腫瘍細胞の応答をアッセイすることと、を含む。
【０１１６】
本発明の態様による抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤の効果を評価する方法は、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含む遺伝子改変免疫不全非肥満糖尿病(NOD)、A/J、A/He、AKR、DBA/2、NZB/B1N、又はB10.D2/oSnマウスであり、その修復の結果として、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられる遺伝子改変免疫不全マウスを提供することと、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全マウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体をマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体に対する異種移植腫瘍細胞の応答をアッセイすることと、を含む。
【０１１７】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含む遺伝子改変免疫不全マウスであり、その修復の結果として、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられる遺伝子改変免疫不全マウスを提供することと、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全マウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体をマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体に対する異種移植腫瘍細胞の応答をアッセイすることと、を含む。
【０１１８】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含む遺伝子改変免疫不全マウスであり、その修復の結果として、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ、重症複合免疫不全を有する遺伝子改変免疫不全マウスを提供することと、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全マウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体をマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体に対する異種移植腫瘍細胞の応答をアッセイすることと、を含む。
【０１１９】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、遺伝子改変免疫不全マウスを提供することを含み、遺伝子改変免疫不全マウスのゲノムは、scid変異を含み、遺伝子改変免疫不全マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ且つ重症複合免疫不全を有し、更に方法は、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全マウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体をマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体に対する異種移植腫瘍細胞の応答をアッセイすることと、を含む。
【０１２０】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、遺伝子改変免疫不全マウスを提供することを含み、遺伝子改変免疫不全マウスのゲノムは、scid変異についてホモ接合性であり、遺伝子改変マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ且つ重症複合免疫不全を有し、更に方法は、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全マウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体をマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体に対する異種移植腫瘍細胞の応答をアッセイすることと、を含む。
【０１２１】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含む遺伝子改変免疫不全マウスであり、その修復の結果として、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ、IL2受容体ガンマ鎖欠乏を有する遺伝子改変免疫不全マウスを提供することと、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全マウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体をマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体に対する異種移植腫瘍細胞の応答をアッセイすることと、を含む。
【０１２２】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、遺伝子改変免疫不全マウスを提供することを含み、遺伝子改変免疫不全マウスのゲノムは、Il2rg変異を含み、遺伝子改変マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ且つIL2受容体ガンマ鎖欠乏を有し、更に方法は、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全マウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体をマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体に対する異種移植腫瘍細胞の応答をアッセイすることと、を含む。
【０１２３】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、遺伝子改変免疫不全マウスを提供することを含み、遺伝子改変マウスのゲノムは、Il2rg変異についてホモ接合性であり、遺伝子改変免疫不全マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ且つIL2受容体ガンマ鎖欠乏を有し、更に方法は、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全マウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体をマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体に対する異種移植腫瘍細胞の応答をアッセイすることと、を含む。
【０１２４】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含む遺伝子改変免疫不全マウスであり、その修復の結果として、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ、組換え活性化遺伝子1欠乏を有する遺伝子改変免疫不全マウスを提供することと、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全マウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体をマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体に対する異種移植腫瘍細胞の応答をアッセイすることと、を含む。
【０１２５】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、遺伝子改変免疫不全マウスを提供することを含み、遺伝子改変免疫不全マウスのゲノムは、Rag1変異を含み、遺伝子改変免疫不全マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ且つ組換え活性化遺伝子1欠乏を有し、更に方法は、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全マウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体をマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体に対する異種移植腫瘍細胞の応答をアッセイすることと、を含む。
【０１２６】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、遺伝子改変免疫不全マウスを提供することを含み、遺伝子改変免疫不全マウスのゲノムは、Rag1変異についてホモ接合性であり、遺伝子改変免疫不全マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ且つ組換え活性化遺伝子1欠乏を有し、更に方法は、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全マウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体をマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体に対する異種移植腫瘍細胞の応答をアッセイすることと、を含む。
【０１２７】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含む遺伝子改変免疫不全マウスであり、その修復の結果として、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ、組換え活性化遺伝子2欠乏を有する遺伝子改変免疫不全マウスを提供することと、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全マウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体をマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体に対する異種移植腫瘍細胞の応答をアッセイすることと、を含む。
【０１２８】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、遺伝子改変免疫不全マウスを提供することを含み、遺伝子改変免疫不全マウスのゲノムは、Rag2変異を含み、遺伝子改変免疫不全マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ、更に方法は、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全マウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体をマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体に対する異種移植腫瘍細胞の応答をアッセイすることと、を含む。
【０１２９】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、遺伝子改変免疫不全マウスを提供することを含み、遺伝子改変免疫不全マウスのゲノムは、Rag2変異についてホモ接合性であり、遺伝子改変マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ且つ組換え活性化遺伝子2欠乏を有し、更に方法は、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全マウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体をマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体に対する異種移植腫瘍細胞の応答をアッセイすることと、を含む。
【０１３０】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含む遺伝子改変免疫不全マウスであり、その修復の結果として、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ、重症複合免疫不全及びIL2受容体ガンマ鎖欠乏を有する遺伝子改変免疫不全マウスを提供することと、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全マウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体をマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体に対する異種移植腫瘍細胞の応答をアッセイすることと、を含む。
【０１３１】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、遺伝子改変免疫不全マウスを提供することを含み、遺伝子改変免疫不全マウスのゲノムは、scid変異及びIl2rg変異を含み、遺伝子改変免疫不全マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ、遺伝子改変免疫不全マウスは、重症複合免疫不全を有し且つIL2受容体ガンマ鎖欠乏を有し、更に方法は、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全マウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体をマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体に対する異種移植腫瘍細胞の応答をアッセイすることと、を含む。
【０１３２】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、遺伝子改変免疫不全マウスを提供することを含み、遺伝子改変免疫不全マウスのゲノムは、scid変異及びIl2rg変異についてホモ接合性であり、遺伝子改変免疫不全マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ、遺伝子改変免疫不全マウスは、重症複合免疫不全を有し且つIL2受容体ガンマ鎖欠乏を有し、更に方法は、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全マウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体をマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体に対する異種移植腫瘍細胞の応答をアッセイすることと、を含む。
【０１３３】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含む遺伝子改変免疫不全マウスであり、その修復の結果として、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ、組換え活性化遺伝子1欠乏及びIL2受容体ガンマ鎖欠乏を有する遺伝子改変免疫不全マウスを提供することと、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全マウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体をマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体に対する異種移植腫瘍細胞の応答をアッセイすることと、を含む。
【０１３４】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、遺伝子改変免疫不全マウスを提供することを含み、遺伝子改変免疫不全マウスのゲノムは、Rag1変異及びIl2rg変異を含み、遺伝子改変免疫不全マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ、遺伝子改変免疫不全マウスは、組換え活性化遺伝子1欠乏を有し且つIL2受容体ガンマ鎖欠乏を有し、更に方法は、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全マウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体をマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体に対する異種移植腫瘍細胞の応答をアッセイすることと、を含む。
【０１３５】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、遺伝子改変免疫不全マウスを提供することを含み、遺伝子改変免疫不全マウスのゲノムは、Rag1変異及びIl2rg変異についてホモ接合性であり、遺伝子改変免疫不全マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ、遺伝子改変免疫不全マウスは、組換え活性化遺伝子1欠乏を有し且つIL2受容体ガンマ鎖欠乏を有し、更に方法は、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全マウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体をマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体に対する異種移植腫瘍細胞の応答をアッセイすることと、を含む。
【０１３６】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含む遺伝子改変免疫不全マウスであり、その修復の結果として、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ、組換え活性化遺伝子2欠乏及びIL2受容体ガンマ鎖欠乏を有する遺伝子改変免疫不全マウスを提供することと、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全マウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体をマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体に対する異種移植腫瘍細胞の応答をアッセイすることと、を含む。
【０１３７】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、遺伝子改変免疫不全マウスを提供することを含み、遺伝子改変免疫不全マウスのゲノムは、Rag2変異及びIl2rg変異を含み、遺伝子改変免疫不全マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ、遺伝子改変免疫不全マウスは、組換え活性化遺伝子2欠乏を有し且つIL2受容体ガンマ鎖欠乏を有し、更に方法は、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全マウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体をマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体に対する異種移植腫瘍細胞の応答をアッセイすることと、を含む。
【０１３８】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、遺伝子改変免疫不全マウスを提供することを含み、遺伝子改変免疫不全マウスのゲノムは、Rag2変異及びIl2rg変異についてホモ接合性であり、遺伝子改変免疫不全マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ、遺伝子改変免疫不全マウスは、組換え活性化遺伝子2欠乏を有し且つIL2受容体ガンマ鎖欠乏を有し、更に方法は、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全マウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体をマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体に対する異種移植腫瘍細胞の応答をアッセイすることと、を含む。
【０１３９】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含む遺伝子改変免疫不全NODマウスであり、その修復の結果として、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ、重症複合免疫不全を有する遺伝子改変免疫不全NODマウスを提供することと、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全NODマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体をマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体に対する異種移植腫瘍細胞の応答をアッセイすることと、を含む。
【０１４０】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、遺伝子改変免疫不全NODマウスを提供することを含み、遺伝子改変免疫不全NODマウスのゲノムは、scid変異を含み、遺伝子改変NODマウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全NODマウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系と重症複合免疫不全とにより特徴付けられ、更に方法は、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全NODマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体をマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体に対する異種移植腫瘍細胞の応答をアッセイすることと、を含む。
【０１４１】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、遺伝子改変免疫不全NODマウスを提供することを含み、遺伝子改変免疫不全NODマウスのゲノムは、scid変異についてホモ接合性であり、遺伝子改変免疫不全NODマウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全マウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系と重症複合免疫不全とにより特徴付けられ、更に方法は、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全NODマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体をマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体に対する異種移植腫瘍細胞の応答をアッセイすることと、を含む。
【０１４２】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含む遺伝子改変免疫不全NODマウスであり、その修復の結果として、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ、IL2受容体ガンマ鎖欠乏を有するマウスを提供することと、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全NODマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体をマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体に対する異種移植腫瘍細胞の応答をアッセイすることと、を含む。
【０１４３】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、遺伝子改変免疫不全NODマウスを提供することを含み、遺伝子改変免疫不全NODマウスのゲノムは、Il2rg変異を含み、遺伝子改変NODマウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全NODマウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系とIL2受容体ガンマ鎖欠乏とにより特徴付けられ、更に方法は、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全NODマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体をマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体に対する異種移植腫瘍細胞の応答をアッセイすることと、を含む。
【０１４４】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、遺伝子改変免疫不全NODマウスを提供することを含み、遺伝子改変NODマウスのゲノムは、Il2rg変異についてホモ接合性であり、遺伝子改変NODマウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全NODマウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系とIL2受容体ガンマ鎖欠乏とにより特徴付けられ、更に方法は、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全NODマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体をマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体に対する異種移植腫瘍細胞の応答をアッセイすることと、を含む。
【０１４５】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含む遺伝子改変免疫不全NODマウスであり、その修復の結果として、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ、組換え活性化遺伝子1欠乏を有する遺伝子改変免疫不全NODマウスを提供することと、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全NODマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体をマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体に対する異種移植腫瘍細胞の応答をアッセイすることと、を含む。
【０１４６】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、遺伝子改変免疫不全NODマウスを提供することを含み、遺伝子改変NODマウスのゲノムは、Rag1変異を含み、遺伝子改変NODマウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全NODマウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系と組換え活性化遺伝子1欠乏とにより特徴付けられ、更に方法は、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全NODマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体をマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体に対する異種移植腫瘍細胞の応答をアッセイすることと、を含む。
【０１４７】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、遺伝子改変免疫不全NODマウスを提供することを含み、遺伝子改変免疫不全NODマウスのゲノムは、Rag1変異についてホモ接合性であり、遺伝子改変NODマウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全NODマウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系と組換え活性化遺伝子1欠乏とにより特徴付けられ、更に方法は、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全NODマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体をマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体に対する異種移植腫瘍細胞の応答をアッセイすることと、を含む。
【０１４８】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含む遺伝子改変免疫不全NODマウスであり、その修復の結果として、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ、組換え活性化遺伝子2欠乏を有する遺伝子改変免疫不全NODマウスを提供することと、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全NODマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体をマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体に対する異種移植腫瘍細胞の応答をアッセイすることと、を含む。
【０１４９】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、遺伝子改変免疫不全NODマウスを提供することを含み、遺伝子改変免疫不全NODマウスのゲノムは、Rag2変異を含み、遺伝子改変NODマウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全NODマウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系と組換え活性化遺伝子2欠乏とにより特徴付けられ、更に方法は、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全NODマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体をマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体に対する異種移植腫瘍細胞の応答をアッセイすることと、を含む。
【０１５０】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、遺伝子改変免疫不全NODマウスを提供することを含み、遺伝子改変NODマウスのゲノムは、Rag2変異についてホモ接合性であり、遺伝子改変免疫不全NODマウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全NODマウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系と組換え活性化遺伝子2欠乏とにより特徴付けられ、更に方法は、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全NODマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体をマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体に対する異種移植腫瘍細胞の応答をアッセイすることと、を含む。
【０１５１】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含む遺伝子改変免疫不全NODマウスであり、その修復の結果として、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ、重症複合免疫不全及びIL2受容体ガンマ鎖欠乏を有する遺伝子改変免疫不全NODマウスを提供することと、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全NODマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体をマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体に対する異種移植腫瘍細胞の応答をアッセイすることと、を含む。
【０１５２】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、遺伝子改変免疫不全NODマウスを提供することを含み、遺伝子改変免疫不全NODマウスのゲノムは、scid変異及びIl2rg変異を含み、遺伝子改変マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全NODマウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ、遺伝子改変免疫不全NODマウスは、重症複合免疫不全を有し且つIL2受容体ガンマ鎖欠乏を有し、更に方法は、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全NODマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体をマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体に対する異種移植腫瘍細胞の応答をアッセイすることと、を含む。
【０１５３】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、遺伝子改変免疫不全NODマウスを提供することを含み、遺伝子改変免疫不全NODマウスのゲノムは、scid変異及びIl2rg変異についてホモ接合性であり、遺伝子改変免疫不全NODマウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全NODマウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ、遺伝子改変免疫不全NODマウスは、重症複合免疫不全を有し且つIL2受容体ガンマ鎖欠乏を有し、更に方法は、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全NODマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体をマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体に対する異種移植腫瘍細胞の応答をアッセイすることと、を含む。
【０１５４】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含む遺伝子改変免疫不全NODマウスであり、その修復の結果として、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ、組換え活性化遺伝子1欠乏及びIL2受容体ガンマ鎖欠乏を有する遺伝子改変免疫不全NODマウスを提供することと、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全NODマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体をマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体に対する異種移植腫瘍細胞の応答をアッセイすることと、を含む。
【０１５５】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、遺伝子改変免疫不全NODマウスを提供することを含み、遺伝子改変免疫不全NODマウスのゲノムは、Rag1変異を含み、遺伝子改変免疫不全NODマウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全NODマウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ、遺伝子改変免疫不全NODマウスは、IL2受容体ガンマ鎖欠乏及び組換え活性化遺伝子1欠乏を有し、更に方法は、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全NODマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体をマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体に対する異種移植腫瘍細胞の応答をアッセイすることと、を含む。
【０１５６】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、遺伝子改変免疫不全NODマウスを提供することを含み、遺伝子改変免疫不全NODマウスのゲノムは、Rag1変異についてホモ接合性であり、遺伝子改変免疫不全NODマウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全NODマウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ、マウスは、IL2受容体ガンマ鎖欠乏及び組換え活性化遺伝子1欠乏を有し、更に方法は、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全NODマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体をマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体に対する異種移植腫瘍細胞の応答をアッセイすることと、を含む。
【０１５７】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含む遺伝子改変免疫不全NODマウスであり、その修復の結果として、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ、組換え活性化遺伝子2欠乏及びIL2受容体ガンマ鎖欠乏を有する遺伝子改変免疫不全NODマウスを提供することと、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全NODマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体をマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体に対する異種移植腫瘍細胞の応答をアッセイすることと、を含む。
【０１５８】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、遺伝子改変免疫不全NODマウスを提供することを含み、遺伝子改変免疫不全NODマウスのゲノムは、Rag2変異を含み、遺伝子改変免疫不全NODマウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全NODマウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ、遺伝子改変免疫不全NODマウスは、IL2受容体ガンマ鎖欠乏及び組換え活性化遺伝子2欠乏を有し、更に方法は、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全NODマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体をマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体に対する異種移植腫瘍細胞の応答をアッセイすることと、を含む。
【０１５９】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、遺伝子改変免疫不全NODマウスを提供することを含み、遺伝子改変免疫不全NODマウスのゲノムは、Rag2変異についてホモ接合性であり、遺伝子改変免疫不全NODマウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全NODマウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられ、マウスは、IL2受容体ガンマ鎖欠乏及び組換え活性化遺伝子2欠乏を有し、更に方法は、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全NODマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体をマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体に対する異種移植腫瘍細胞の応答をアッセイすることと、を含む。
【０１６０】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、NSG-Hc1マウスを提供することを含み、NSG-Hc1マウスがC5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられるように、NSG-Hc1マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、更に方法は、異種移植腫瘍細胞をNSG-Hc1マウスに投与することを含み、NSG-Hc1マウスがC5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられるように、NSG-Hc1マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、更に方法は、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体をマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体に対する異種移植腫瘍細胞の応答をアッセイすることと、を含む。
【０１６１】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、NRG-Hc1マウスを提供することを含み、NRG-Hc1マウスがC5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられるように、NRG-Hc1マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、更に方法は、異種移植腫瘍細胞をNRG-Hc1マウスに投与することを含み、NRG-Hc1マウスがC5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられるように、NRG-Hc1マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、更に方法は、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体をマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体に対する異種移植腫瘍細胞の応答をアッセイすることと、を含む。
【０１６２】
抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法が、本発明の態様により提供され、方法は、NOG-Hc1マウスを提供することを含み、NOG-Hc1マウスがC5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられるように、NOG-Hc1マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、更に方法は、異種移植腫瘍細胞をNOG-Hc1マウスに投与することを含み、NOG-Hc1マウスがC5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられるように、NOG-Hc1マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、更に方法は、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体をマウスに投与することと、抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体に対する異種移植腫瘍細胞の応答をアッセイすることと、を含む。
【０１６３】
本発明の態様によれば、抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法において投与される異種移植腫瘍細胞は、ヒト異種移植腫瘍細胞である。
【０１６４】
本発明の態様によれば、抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤評価用のマウスモデル系を作製する方法において投与される異種移植腫瘍細胞は、細胞株の異種移植腫瘍細胞である。
【図面の簡単な説明】
【０１６５】
【図１】図1Aは、NSG及びNSG-Hc1マウスのマウスC5補体成分構造タンパク質の図であり、NSGマウスにおける2塩基対の欠失は、全長機能性C5の生産をもたらすNSG-Hc1マウスにおける修復遺伝子配列と比較して、未成熟終止コドンと、機能性補体系の欠如とをもたらすことを示す。図1Bは、年齢及び性別が同一のNSG又はNSG-Hc1マウス由来の1:5希釈血清とインキュベートした際の、抗体被覆ヒツジRBC、即ち、感作細胞(EA細胞)の溶解レベルを示す代表的グラフである。BALB/cByJマウスの血清を陽性対照として用いた。データは、平均±SDとして報告している。*P<0.0001。
【図２】図2Aは、1×105のDaudi細胞を静脈注射により移植し、移植後10日にリツキシマブ又はPBS25μg/gを注射した、年齢及び性別が同一のNSG及びNSG-Hc1マウスの様々なコホートにおける経時的な体重変化の代表的グラフを示す。非移植NSGマウスを陰性対照として用いた。PBS:リン酸緩衝生理食塩水、RTX:リツキシマブ。データは、平均±SEのパーセンテージとして報告している。*P<0.05。図2Bは、1×105のDaudi細胞を静脈注射により移植し、移植後10日にリツキシマブ又はPBS25μg/gを注射した、年齢及び性別が同一のNSG及びNSG-Hc1マウスの様々なコホートにおける経時的な生存パーセントを示す代表的なカプラン・マイヤ生存プロットを示す。非移植NSGマウスを陰性対照として用いた。PBS:リン酸緩衝生理食塩水、RTX:リツキシマブ。データは、平均±SEのパーセンテージとして報告している。*P<0.05。
【図３】図3Aは、1×105のDaudi細胞を静脈注射により移植し、移植後10日にリツキシマブ又はPBS25μg/gを注射した、年齢及び性別が同一のNSG及びNSG-Hc1の様々なコホートにおける末梢血リンパ球の代表的フローサイトメトリー分析を示す。非移植NSGマウスを陰性対照として用いた。測定は、移植後38日目に行った。データは平均±SDとして報告している。PBS:リン酸緩衝生理食塩水、RTX:リツキシマブ。*P<0.05。図3Bは、1×105のDaudi細胞を静脈注射により移植し、移植後10日にリツキシマブ又はPBS25μg/gを注射した、年齢及び性別が同一のNSG及びNSG-Hc1の様々なコホートにおける骨髄の代表的なフローサイトメトリー分析を示す。非移植NSGマウスを陰性対照として用いた。測定は、移植後38日目に行った。データは、平均±SDとして報告している。PBS:リン酸緩衝生理食塩水、RTX:リツキシマブ。*P<0.05。
【図４】図4Aは、1×105のDaudi細胞を静脈注射により移植し、移植後10日にリツキシマブ又はPBS25μg/gを注射した、年齢及び性別が同一のNSG及びNSG-Hc1マウスの様々なコホートにおけるDaudi細胞生着レベルを示す卵巣の代表画像を示す。測定は、移植後38日目に行った。元の倍率×10(スケールバー=200μM)は、HE染色を示す。高倍率画像×20スケールバー=100μmは、抗ヒトCD45 IHCを示す。PBS:リン酸緩衝生理食塩水、RTX:リツキシマブ。図4Bは、1×105のDaudi細胞を静脈注射により移植し、移植後10日にリツキシマブ又はPBS25μg/gを注射した、年齢及び性別が同一のNSG及びNSG-Hc1マウスの様々なコホートにおけるDaudi細胞生着のレベルを示す腎臓の代表画像を示す、測定は、移植後38日目に行った。元の倍率×10(スケールバー=200μM)は、HE染色を示す。高倍率画像×20スケールバー=100μmは、抗ヒトCD45 IHCを示す。PBS:リン酸緩衝生理食塩水、RTX:リツキシマブ。
【発明を実施するための形態】
【０１６６】
本発明の態様による遺伝子改変非ヒト動物、方法、及び組成物は、抗体に基づく治療剤の評価を可能にする。
【０１６７】
遺伝子改変免疫不全非ヒト動物が、本発明により提供され、免疫不全非ヒト動物のゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子(溶血性補体、Hcとしても知られる)を含み、その結果、遺伝子改変免疫不全非ヒト動物は、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられる。
【０１６８】
特定の態様において、本発明は、免疫不全非肥満糖尿病(NOD)、A/J、A/He、AKR、DBA/2、NZB/B1N、又はB10.D2/oSn、及び他のマウスであって、非改変免疫不全マウスには欠如している補体依存性細胞傷害を回復させるように遺伝子改変されたものに関する。
【０１６９】
遺伝子改変免疫不全非肥満糖尿病マウス(NOD)が、本発明により提供され、NODマウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変NODマウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられる。
【０１７０】
遺伝子改変免疫不全NSGマウスが、本発明により提供され、NSGマウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変NSGマウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられる。
【０１７１】
無傷の補体系を有する遺伝子改変NSGマウスが、本発明により提供され、NSG-Hc1マウスと命名される。
【０１７２】
無傷の補体系を有し、癌細胞のような異常増殖を特徴とする細胞を移植したNSG-Hc1マウスが、本発明により提供される。
【０１７３】
遺伝子改変免疫不全NRGマウスが、本発明により提供され、NRGマウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変NRGマウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられる。
【０１７４】
無傷の補体系を有する遺伝子改変NRGマウスが、本発明により提供され、NRG-Hc1マウスと命名される。
【０１７５】
無傷の補体系を有し、癌細胞のような異常増殖を特徴とする細胞を移植したNRG-Hc1マウスが、本発明により提供される。
【０１７６】
遺伝子改変免疫不全NOGマウスが、本発明により提供され、NRGマウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変NRGマウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられる。
【０１７７】
無傷の補体系を有する遺伝子改変NOGマウスが、本発明により提供され、NOG-Hc1マウスと命名される。
【０１７８】
無傷の補体系を有し、癌細胞のような異常増殖を特徴とする細胞を移植したNOG-Hc1マウスが、本発明により提供される。
【０１７９】
本明細書に用いた科学用語及び技術用語は、当業者が通常理解する意味を有するものとする。こうした用語は、以下を例として含む様々な標準的参考文献の文中で定義及び使用されている:J. Sambrook and D.W. Russell, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press; 3rd Ed., 2001、F.M. Ausubel, Ed., Short Protocols in Molecular Biology, Current Protocols; 5th Ed., 2002、B. Alberts et al., Molecular Biology of the Cell, 4th Ed., Garland, 2002、D.L. Nelson and M.M. Cox, Lehninger Principles of Biochemistry, 4th Ed., W.H. Freeman & Company, 2004、Herdewijn, P. (Ed.), Oligonucleotide Synthesis: Methods and Applications, Methods in Molecular Biology, Humana Press, 2004、A. Nagy, M. Gertsenstein, K. Vintersten, R. Behringer (Eds) 2002, Manipulating the Mouse Embryo: A Laboratory Manual, 3rd edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, ISBN-10: 0879695919、及びK. Turksen (Ed.), Embryonic stem cells: methods and protocols in Methods Mol Biol. 2002;185, Humana Press; Current Protocols in Stem Cell Biology, ISBN: 9780470151808。
【０１８０】
単数の用語である「a」、「an」、及び「the」は、限定的ではなく、特に明記されていない限り、或いは文脈から明らかとなる場合を除き、複数の指示物を含むものとする。
【０１８１】
「免疫不全マウス」及び「免疫不全非ヒト動物」という用語は、T細胞及びB細胞等の機能免疫細胞の欠如と、DNA修復欠陥と、リンパ球上の抗原特異的受容体をコードする遺伝子の再構成における欠陥と、IgM、IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3、及びIgA等の免疫機能分子の欠如とのうち、1つ以上により特徴付けられるマウス又は他の非ヒト動物を示す。
【０１８２】
マウス等の免疫不全動物は、Rag1及びRag2等の免疫機能に関与する遺伝子における1つ以上の欠乏により特徴付けることができる(Oettinger, M.A et al., Science, 248:1517-1523, 1990; and Schatz, D. G. et al., Cell, 59:1035-1048, 1989)。
【０１８３】
「組換え活性化遺伝子1欠乏」という用語は、野生型非ヒト動物と比較したRAG1の減少を示す。RAG1は、免疫グロブリン及びT細胞受容体分子をコードする遺伝子の再構成及び組換えにおいて機能する酵素であり、欠乏は、成熟T及びB細胞の生成を減少又は消失させる。RAG1の減少は、遺伝子欠失又は突然変異に起因する場合がある。RAG1の減少は、例えば、周知の方法を用いて、RAG1遺伝子の欠失又は変異の検出、及び/又はRAG1の発現の減少の検出により、検出することができる。
【０１８４】
「組換え活性化遺伝子2欠乏」という用語は、野生型非ヒト動物と比較したRAG2の減少を示す。RAG2は、免疫グロブリン及びT細胞受容体分子をコードする遺伝子の再構成及び組換えにおいて機能する酵素であり、欠乏は、成熟T及びB細胞の生成を減少又は消失させる。RAG2の減少は、遺伝子欠失又は突然変異に起因する場合がある。RAG2の減少は、例えば、周知の方法を用いて、RAG2遺伝子の欠失又は突然変異の検出、及び/又はRAG1発現の減少の検出により、検出することができる。
【０１８５】
免疫不全マウスは、マウスに異常な免疫機能をもたらす上記又は他の欠陥の何れかを有し得る。
【０１８６】
特に有用な免疫不全マウス株は、一般にNOD scidガンマ(NSG)マウスと呼ばれるNOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ(Shultz LD et al, 2005, J. Immunol, 174:6477-89に詳述)、一般にNRGマウスと呼ばれるNOD.Cg-Rag1tm1Mom Il2rgtm1Wjl/SzJ(Shultz LD et al, 2008, Clin Exp Immunol 154(2):270-84)、及び一般にNOGマウスと呼ばれるNOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Sug/JicTac(Ito, M. et al., Blood 100, 3175-3182 (2002)に詳述)である。
【０１８７】
「重症複合免疫不全(severe combined immune deficiency, SCID)」という用語は、T細胞の不在及びB細胞機能の欠如により特徴付けられる状態を示す。
【０１８８】
SCIDの一般的な形態には、IL2RG遺伝子におけるガンマ鎖遺伝子変異及びリンパ球表現型T(-)B(+)NK(-)により特徴付けられるX連鎖SCIDと、Jak3遺伝子変異及びリンパ球表現型T(-)B(+)NK(-)、ADA遺伝子突然変異及びリンパ球表現型T(-)B(-)NK(-)、IL-7Rアルファ鎖変異及びリンパ球表現型T(-)B(+)NK(+)、CD3デルタ又はイプシロン変異及びリンパ球表現型T(-)B(+)NK(+)、RAG1/RAG2変異及びリンパ球表現型T(-)B(+)NK(+)、アルテミス遺伝子変異及びリンパ球表現型T(-)B(+)NK(+)、CD45遺伝子変異及びリンパ球表現型T(-)B(+)NK(+)により特徴付けられる常染色体劣性SCIDと、が含まれる。
【０１８９】
本発明の態様による遺伝子改変マウスは、一般にscid変異と呼ばれる重症複合免疫不全変異(Prkdcscid)を有する。scid変異は、周知であり、Bosma, et al., Immunogenetics 29:54-56, 1989に記載の通り、マウス染色体16上に位置している。scid変種についてホモ接合性のマウスは、機能的T細胞及びB細胞の欠如、低グロブリン血症、及び正常な造血微小環境により特徴付けられる。scid変異は、例えば、PCR又はフローサイトメトリー等の周知の方法を用いて、scid変異に対するマーカーを検出することにより、検出することができる。
【０１９０】
本発明の態様による遺伝子改変免疫不全マウスは、IL2受容体ガンマ鎖欠乏を有する。「IL2受容体ガンマ鎖欠乏」という用語は、IL2受容体ガンマ鎖の減少を示す。IL2受容体ガンマ鎖の減少は、遺伝子欠失又は突然変異に起因する場合がある。IL2受容体ガンマ鎖の減少は、例えば、周知の方法を用いて、IL2受容体ガンマ鎖遺伝子の欠失又は変異を検出すること、及び/又はIL2受容体ガンマ鎖の発現の減少を検出することにより、検出することができる
【０１９１】
「NOD scidガンマ」及び「NSG」という用語は、本明細書において、周知の免疫不全マウス株NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJを示すために相互に交換可能に用いられる。NSGマウスは、NOD/ShiLtJバックグラウンド、重症複合免疫不全(scid)突然変異、及びインターロイキン2受容体ガンマ鎖の完全ノックアウトからの複数の免疫欠損を併せ持つ。その結果、NSGマウスは、成熟T、B、及びNK細胞が欠如しており、サイトカインシグナル伝達が欠損している。NSGマウスは、IL2R-γ(ガンマc)発現の欠如と、検出可能な血清免疫グロブリンの不在と、溶血性補体の不在と、成熟Tリンパ球の不在と、成熟ナチュラルキラー細胞の不在とを特徴とする。
【０１９２】
「NRG」という用語は、本明細書において、周知の免疫不全マウス株NOD.Cg-Rag1tm1MomIl2rgtmlWjl/SzJを示すために用いられる。NRGマウスは、NOD/ShiLtJバックグラウンド、Rag1tm1Mom変異によるRag1の完全ノックアウト、及びインターロイキン2受容体ガンマ鎖の完全なノックアウトからの複数の免疫欠損を併せ持つ。その結果、NRGマウスでは、成熟T、B、及びNK細胞が欠如しており、サイトカインシグナル伝達が欠損している。NRGマウスは、IL2R-γ(γc)発現の欠如と、検出可能な血清免疫グロブリンの不在と、溶血性補体の不在と、成熟Tリンパ球の不在と、成熟ナチュラルキラー細胞の不在とを特徴とする。
【０１９３】
「NOG」という用語は、本明細書において、周知の免疫不全マウス株NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Sug/JicTacを示すために用いられる。NOGマウスは、NOD/Shiバックグラウンド、重症複合免疫不全(scid)変異、及びインターロイキン2受容体ガンマ鎖機能の完全ノックアウトからの複数の免疫欠損を併せ持つ。その結果、NOGマウスでは、成熟T、B、及びNK細胞が欠如しており、サイトカインシグナル伝達が欠損している。NOGマウスは、IL2R-γ(ガンマc)の切断変異であって、リガンドが依然として切断タンパク質に結合可能だが、シグナルが生成されないものと、検出可能な血清免疫グロブリンの不在と、溶血性補体の不在と、成熟Tリンパ球の不在と、成熟ナチュラルキラー細胞の不在とを特徴とする。
【０１９４】
遺伝子改変NODマウスが、本発明により提供され、マウスのゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、その結果、遺伝子改変NODマウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられる。このような遺伝子改変NODマウス、NOD-Hc1は、本明細書に記載の遺伝子改変免疫不全マウスを作製するための交配又はin vitro若しくは他のin vivo手法等により、免疫不全マウスと組み合わせるのに有用となる。
【０１９５】
C5補体成分構造遺伝子に関連する「発現する(express)」、「発現(expression)」、「発現すること(expressing)」、及び「発現する(expresses)」という用語は、対応するmRNAを生産するC5補体成分構造遺伝子の転写及び/又は機能性の対応するC5補体成分構造タンパク質を生産するmRNAの翻訳を示す。
【０１９６】
C5補体成分構造遺伝子及び対応するタンパク質は、周知である。Mus musculus C5補体成分構造タンパク質は、本明細書において配列番号1として示す。
【０１９７】
C5補体成分構造遺伝子内の2塩基対(TA)欠失は、Baxter, A.G. et al., Diabetes, 42(11):1574-8, 1993に記載の通りNODマウス(NSG、NRG、及びNOG株を含む)において、更にA/J、A/He、AKR、DBA/2、NZB/B1N、及びB10.D2/oSnマウス株において、C5タンパク質発現の欠如の原因となる。第2染色体に位置するc5遺伝子のエクソン7の5’末端に近いこの欠失は、未成熟終止コドンを生成し、C5の発現を妨げる。
【０１９８】
したがって、修復されたC5補体成分構造遺伝子は、C5補体成分構造遺伝子の発現を回復させ、その結果、C5補体成分構造タンパク質が生産され、遺伝子改変マウスは、無傷の補体系により特徴付けられる。
【０１９９】
修復されたC5補体成分構造遺伝子は、修復された遺伝子が配列番号1の野生型タンパク質配列をコードするように、欠損している2塩基対欠失を置き換えて修復されることが好ましい。
【０２００】
様々な方法の何れかを用いて、変異C5補体成分構造遺伝子を有するマウスにおいてC5補体成分構造遺伝子を修復し、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含むゲノムを有する遺伝子改変免疫不全マウスを作製することができる。C5補体成分構造遺伝子は、遺伝子改変動物のゲノムにおいて、限定では無いが、遺伝子編集方法、相同組換え、及びアンチセンスRNAのトランスジェニック発現等の遺伝子工学の標準的方法により修復する。このような手法は、当技術分野において周知であり、更に、限定では無いが、前核マイクロインジェクション及び胚性幹細胞の形質転換を含む。修復されたC5補体成分構造遺伝子を含むゲノムを有する遺伝子改変動物を生成する方法には、限定では無いが以下に記載のものが含まれる:J. P. Sundberg and T. Ichiki, Eds., Genetically Engineered Mice Handbook, CRC Press; 2006、M. H. Hofker and J. van Deursen, Eds., Transgenic Mouse Methods and Protocols, Humana Press, 2002、A. L. Joyner, Gene Targeting: A Practical Approach, Oxford University Press, 2000; Manipulating the Mouse Embryo: A Laboratory Manual, 3rd edition, CSH Press; December 15, 2002, ISBN-10: 0879695919、Kursad Turksen (Ed.), Embryonic stem cells: methods and protocols in Methods Mol Biol. 2002;185, Humana Press; Current Protocols in Stem Cell Biology, ISBN: 978047015180、Meyer et al. PNAS USA, vol. 107 (34), 15022-15026、及びCRISPR-Cas: A Laboratory Manual, Jennifer Doudna, J. and Mali, P. (Eds.), CSH Press, 2016, ISBN 978-1-621821-30-4。
【０２０１】
修復されたC5補体成分構造遺伝子を含むゲノムを有する遺伝子改変免疫不全非ヒト動物の生成は、着床前胚又は胚性幹(ES)細胞若しくは誘導多能性幹(iPS)細胞等の幹細胞への遺伝子ターゲティングベクターの導入により達成することができる。
【０２０２】
「遺伝子ターゲティングベクター」という用語は、標的遺伝子への挿入又は標的遺伝子の置換等により、特定の染色体座を組み換えて変異させるのに有効な2本鎖組換えDNA分子を示す。
【０２０３】
標的遺伝子修復のために、遺伝子ターゲティングベクターは、組換えDNA手法を用いて作製され、幹細胞内在性C5補体成分構造遺伝子に相同な5’及び3’配列を含む。遺伝子ターゲティングベクターは、任意に、ネオマイシンホスホトランスフェラーゼ、ハイグロマイシン、又はピューロマイシン等の選択マーカーを更に含むことが好ましい。当業者は、遺伝子ターゲティングベクターに含めるための配列を選択し、日常の実験の範囲で用いることができる。遺伝子ターゲティングベクターは、周知の方法論を用いて組換え的又は合成的に生成することができる。
【０２０４】
遺伝子ターゲティングベクターを着床前胚にDNA注入する方法では、非ヒト着床前胚への注入前に遺伝子ターゲティングベクターを線状化する。好ましくは、遺伝子ターゲティングベクターは、受精卵母細胞に注入する。受精卵母細胞は、交配翌日(0.5dpc)に過排卵した雌から採取し、発現構築物を注入する。注入後の卵母細胞は、一晩培養するか、又は0.5日p.c.の偽妊娠の雌の卵管に直接導入する。過排卵、卵母細胞の採取、遺伝子ターゲティングベクターの注入、及び胚移植のための方法は、当技術分野において公知であり、Manipulating the Mouse Embryo: A Laboratory Manual, 3rd edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press; December 15, 2002, ISBN-10: 0879695919に記載されている。子孫は、PCR、サザンブロット、又は配列決定等のDNA分析により、修復されたC5補体成分構造遺伝子の存在について試験することができる。修復されたC5補体成分構造遺伝子を有するマウスは、ELISA又はウェスタンブロット分析及び/又はRT-PCR等のmRNA発現を使用すること等により、C5補体成分構造タンパク質の発現について試験することができる。
【０２０５】
あるいは、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈殿、及びリポフェクション等の周知の方法を用いて、遺伝子ターゲティングベクターを幹細胞(ES細胞又はiPS細胞)にトランスフェクトし得る。
【０２０６】
マウスES細胞を、特定の株に対して最適化された培地で増殖させる。通常、ES培地は、ダルベッコ改変イーグル培地(DMEM)中に15%ウシ胎仔血清(FBS)又は合成若しくは半合成等価物、2mMグルタミン、1mMピルビン酸ナトリウム、0.1mM非必須アミノ酸、50U/mlペニシリン及びストレプトマイシン、0.1mM 2-メルカプトエタノール、及び1000U/ml LIF(一部の細胞株に対しては、分化の化学抑制剤を追加)を含む。詳細な説明は、当該技術分野において公知である(Tremml et al., 2008, Current Protocols in Stem Cell Biology, Chapter 1:Unit 1C.4)。ES細胞分化の抑制剤の説明については、Buehr, M.,et al. (2003). Genesis of embryonic stem cells. Philosophical Transactions of the Royal Society B: Biological Sciences 358, 1397-1402を参照されたい。
【０２０７】
細胞は、PCR、サザンブロット、又は配列決定等のDNA分析により、修復されたC5補体成分構造遺伝子についてスクリーニングする。C5補体成分構造遺伝子を修復する正しい相同組換え事象を有する細胞は、ELISA又はウェスタンブロット分析を用いること等によりC5補体成分構造タンパク質発現について、及び/又はRT-PCR等によりmRNA発現について、試験することができる。必要に応じて、幹細胞をCreリコンビナーゼで処理することにより、選択マーカーを除去することができる。Creリコンビナーゼ処理後、C5補体成分構造タンパク質をコードする核酸の存在について、細胞を分析する。
【０２０８】
C5補体成分構造遺伝子を修復する正しいゲノム事象を有する選択された幹細胞を、着床前胚に注入することができる。マイクロインジェクションのために、トリプシンとEDTAの混合物を用いて、ES又はiPS細胞を、単細胞とした後、ES培地に再懸濁する。細かく引き延ばしたガラス針(内径20乃至25マイクロメータ)を用いて、単細胞群を選択し、マイクロマニピュレータを装備した倒立顕微鏡を用いて、胚の透明帯を介して胚盤腔(胞胚腔)に導入する。胚盤胞注入の代わりに、幹細胞を初期段階の胚(例えば、2細胞、4細胞、8細胞、桑実胚前、又は桑実胚)に注入することができる。注入は、透明帯を穿孔するレーザ又はピエゾパルスを用いて支援し得る。胚盤胞又は8細胞期胚当たり、約9乃至10個の選択された幹細胞(ES又はiPS細胞)、4細胞期胚当たり6乃至9個の幹細胞、及び2細胞期胚当たり約6個の幹細胞が注入される。幹細胞導入後、胚は、37℃、窒素中5%CO2、5%O2で数時間回復させるか、又は一晩培養後、偽妊娠のレシピエントである雌に導入する。更に幹細胞注入の代わりとして、幹細胞は、桑実胚期の胚と凝集させることができる。これらの方法は全て確立されており、幹細胞キメラを作製するために用いることができる。更に詳細な説明については、Manipulating the Mouse Embryo: A Laboratory Manual, 3rd edition(A. Nagy, M. Gertsenstein, K. Vintersten, R. Behringer, Cold Spring Harbor Laboratory Press; December 15, 2002, ISBN-10: 0879695919、Nagy et al., 1990, Development 110, 815-821、US7576259: Method for making genetic modifications、US7659442、US 7,294,754、Kraus et al. 2010, Genesis 48, 394-399)を参照されたい。
【０２０９】
クラスタ化して規則的な配置の短い回文配列リピート(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats, CRISPR)及びCRISPR関連(CRISPR-associated, Cas)システムを用いて、マウス(例えば、NSG又はNRGマウス)を含む非ヒト動物においてC5補体成分構造遺伝子を修復することができる。3タイプ(I-III)のCRISPRシステムは、広範囲の細菌宿主及び古細菌宿主に亘って同定されており、各システム、はCRISPR関連(Cas)遺伝子のクラスタ、非コードRNA、及び反復要素の特徴的な配列(ダイレクトリピート)を含む。これらのダイレクトリピートは、プロトスペーサとして知られる外来性DNA標的に由来する短い可変配列により間隔を空けられ、共にCRISPR RNA(crRNA)アレイを構成する。DNA標的内において、プロトスペーサは、特定のCRISPRシステムに応じて変化する場合があるプロスペーサ隣接モチーフ(PAM)に関連する。
【０２１０】
例えば、II型CRISPR-Cas9システムは、様々な真核細胞における標的遺伝子の切断及び遺伝子編集を可能にする。CRISPR-Cas9システムを用いて遺伝子を容易に操作するために、自然発生のtracrRNA及びcrRNAを融合して、Cas9を実質的に任意の所望のDNA配列に方向付ける単一の合成「ガイドRNA」とする。従って、CRISPR-Cas9システムにおけるエンドヌクレアーゼ切断特異性は、RNA配列により誘導されるため、編集は、ガイドRNA配列を操作して、Casエンドヌクレアーゼと共に標的細胞に送達することにより、事実上任意のゲノム遺伝子座に方向付けすることができる。合成ガイドRNAは、Cas9により認識される特定のモチーフの直前に存在する20ヌクレオチドのDNA配列に対してハイブリダイズする。これにより、認識されたモチーフの3ヌクレオチド上流に2本鎖切断が生じる。2本鎖切断は、相同組み換え修復を開始することが可能であり、これを外因的に導入された2本鎖又は1本鎖DNA修復鋳型により利用して、C5補体構造遺伝子を修復する等、ゲノムの変異を補正することができる。当業者は、CRISPR-Cas9系などのCas系のガイドRNA配列を操作することにより、マウス(例えば、NSG又はNRGマウス)を含む非ヒト動物のC5補体構造遺伝子を標的とし、外因的に導入された2本鎖又は1本鎖DNA修復鋳型を用いて、C5補体構造遺伝子を修復することができる。
【０２１１】
偽妊娠胚レシピエントは、当該技術分野において公知の方法を用いて準備される。簡単に言うと、6乃至8週齢の繁殖可能な雌マウスを、精管切除した又は不妊の雄と交配させて、外科的に導入した胚の支持につながるホルモン状態を誘導する。交配後2.5日目(2.5dpc)に、胚盤胞を含む15個までの幹細胞を、子宮-卵管接合部に極めて近い子宮角に導入する。初期段階の胚及び桑実胚については、このような胚をin vitroで培養して胚盤胞とするか、又は胚段階に応じて0.5dpc又は1.5dpcの偽妊娠雌の卵管に移植する。移植胚からのキメラ仔は、移植時の胚齢に応じて、導入後16乃至20日で生まれる。キメラの雄を、繁殖用に選択する。子孫は、毛色及びPCR、サザンブロット、又は配列決定等、核酸分析によりES細胞ゲノムの伝達について分析することができる。更に、修復されたC5補体成分構造遺伝子の発現を、タンパク質分析、例えばイムノアッセイ、又は機能アッセイ等により、C5補体成分構造タンパク質mRNA又はタンパク質発現について分析して、C5補体成分構造遺伝子の修復を確認することができる。修復されたC5補体成分構造遺伝子を持つ子孫を交雑させ、修復されたC5補体成分構造遺伝子についてホモ接合性である非ヒト動物を作製する。トランスジェニックマウスを免疫不全マウスに交配させ、修復されたC5補体成分構造遺伝子を有するコンジェニック免疫不全株を作製する。
【０２１２】
遺伝子改変された非ヒト動物を評価して、非ヒト動物が修復されたC5補体成分構造遺伝子を発現するようにC5補体成分構造遺伝子が修復されているかを決定する方法は周知であり、核酸アッセイ、分光アッセイ、イムノアッセイ、及び機能アッセイ等の標準的手法が含まれる。
【０２１３】
1つ以上の標準を用いて、試料中のC5補体成分構造タンパク質の定量を可能にすることができる。
【０２１４】
C5補体成分構造遺伝子の修復が推定される動物において、機能修復されたC5補体成分構造遺伝子の評価のためのアッセイを行うことができる。
【０２１５】
任意に、本発明の修復されたC5補体成分構造遺伝子を特徴とする遺伝子改変免疫不全非ヒト動物は、選抜育種により作製される。第1の所望の遺伝子型を有する非ヒト動物の第1の親株は、第2の所望の遺伝子型を有する非ヒト動物の第2の親株と交配させ、第1及び第2の所望の遺伝子型を有する遺伝子改変非ヒト動物である子孫を作製し得る。例えば、免疫不全であり、変異したC5補体成分構造遺伝子を有する第1のマウスを、無傷のC5補体成分構造遺伝子を有する第2のマウスと交配させ、更に遺伝的に掛け合わせて、免疫不全であると共に修復されたC5補体成分構造遺伝子を有する子孫を作製して、C5補体成分構造遺伝子が発現され、その動物が無傷の補体系を有し、補体依存性細胞傷害を示すようにし得る。
【０２１６】
他の例では、NSG、NRG、又はNOGマウスを、無傷のC5補体成分構造遺伝子を有するマウスと交配して、免疫不全であると共に修復されたC5補体成分構造遺伝子を有する子孫を作製して、作製されたマウスが無傷の補体系を有し、補体依存性細胞傷害を示すようにする。
【０２１７】
本発明の態様は、実質的にその細胞の全てにおいて修復されたC5補体成分構造遺伝子を含む遺伝子改変動物と、全てではなく、その一部の細胞において修復されたC5補体成分構造遺伝子を含む遺伝子改変動物とを提供する。
【０２１８】
本発明の遺伝子改変免疫不全非ヒト動物は、好ましくは非ヒト哺乳動物、特にマウス、ラット、又はモルモット等の齧歯類である。
【０２１９】
本発明の態様による異種移植腫瘍細胞の応答用の非ヒト動物モデル系を作製する方法は、C5補体成分構造タンパク質を発現すると共に機能する補体系を有するように、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含む遺伝子改変免疫不全非ヒト動物を提供することと、異種移植腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全非ヒト動物に投与することとを含む。免疫不全非ヒト動物は、重症複合免疫不全、IL2受容体ガンマ鎖欠乏、又は重症複合免疫不全とIL2受容体ガンマ鎖欠乏との組み合わせを有し得る。
【０２２０】
「異種移植」という用語は、本明細書において、「異種移植」とされる物質が宿主細胞又は宿主生物のもの以外の種に由来することを示すために、宿主細胞又は宿主生物に関して用いられる。
【０２２１】
本明細書で使用される「腫瘍細胞」という用語は、癌細胞等の異常増殖細胞を示す。
【０２２２】
本発明の態様による異種腫瘍細胞の応答用のマウスモデル系を作製する方法は、修復されたC5補体成分構造遺伝子を有する遺伝子改変免疫不全マウスであり、その修復の結果として、C5補体成分構造タンパク質を発現すると共に、機能する補体系を有する遺伝子改変免疫不全マウスを提供することと、異種腫瘍細胞を遺伝子改変免疫不全マウスに投与することを含む。免疫不全マウスは、重症複合免疫不全、IL2受容体ガンマ鎖欠乏、又は重症複合免疫不全とIL2受容体ガンマ鎖欠乏との組み合わせを有し得る。
【０２２３】
修復されたC5補体成分構造遺伝子を有する遺伝子改変免疫不全動物に投与するための腫瘍細胞は、対象由来の腫瘍生検又は剖検試料又は癌細胞株から得ることができる。
【０２２４】
異種移植のための動物への腫瘍細胞の投与は、限定では無いが、腫瘍細胞若しくは腫瘍組織の皮下外科的挿入、又は腫瘍細胞若しくは腫瘍組織の皮下若しくは静脈内注射等、周知であり、例えば、Morton et al., Nature Protocols 2, 247 - 250 (2007); and Fujii et al., Pathol. Int., 2008, 58(9):559-67を参照されたい。
【０２２５】
異種移植腫瘍細胞の生着は、限定では無いが、腫瘍増殖の光学検査、腫瘍細胞が固形腫瘍形成細胞ではない場合には採血及び血液分析、及びMRI、PET、CT、又は蛍光イメージング等の動物の画像化等、様々な方法の何れかにより評価することができる。
【０２２６】
異種移植腫瘍細胞の単離、異種移植腫瘍細胞の宿主生物への投与のための方法例、及びその生着を評価するための方法は、周知である。
【０２２７】
移植されるレシピエント動物に投与する異種移植腫瘍細胞の数は、限定されず、このような細胞を1乃至10億個、例として1乃至5億個、1乃至1億個、1乃至1000万個、1乃至500万個、1乃至100万個、1乃至500,000個、1乃至100,000個、1乃至50,000個、1乃至10,000個、又は1乃至1,000個の範囲にすることができる。
【０２２８】
本発明の態様により提供される方法は、修復されたC5補体成分構造遺伝子を有する免疫不全動物内の異種移植腫瘍細胞に対する抗癌治療剤の投与と、異種移植腫瘍細胞に対する抗癌治療剤の効果の分析とを含む。
【０２２９】
C5補体成分構造遺伝子の欠損及び修復の評価のためのアッセイ
【０２３０】
結合アッセイは、C5補体成分構造遺伝子の欠損及び修復を評価するために、本発明の態様によるアッセイにおいて任意に用いられる。
【０２３１】
「結合パートナー」という用語は、標的分析物に特異的に結合可能な生体分子を示す。結合パートナーの非限定的な例には、抗体、アプタマ、受容体、リガンド、及び標的分析物の酵素作用のための基質が含まれる。結合パートナーは、核酸プローブであってもよい。当業者は、結合パートナーを日常的に同定、単離、及び/又は作製し、結合アッセイに用いることができる。このような手法は、当業者に周知である。
【０２３２】
結合アッセイは、結合パートナーに結合することにより1つ以上の標的分析物の検出を可能にする様々な方法の何れかにより実施することができる。標的分析物と結合剤との結合は、検出可能な標識の使用等により、直接的又は間接的に検出することができる。
【０２３３】
配列決定、増幅アッセイ、及び/又はハイブリダイゼーションアッセイ等の核酸アッセイを用いて、標的分析物の発現を検出することができる。核酸アッセイには、限定では無いが、RT-PCR等のポリメラーゼ連鎖反応(PCR)のような増幅反応、ドットブロット、in situハイブリダイゼーション、ノーザンブロット、及びRNase保護が含まれる。このようなアッセイの詳細は、例えば、J. Sambrook and D.W. Russell, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press; 3rd Ed., 2001; and F.M. Ausubel, Ed., Short Protocols in Molecular Biology, Current Protocols; 5th Ed., 2002に記載されている。
【０２３４】
標的分析物mRNA又はcDNAにハイブリダイズして、mRNA又はcDNAを検出及び/又は定量することが可能な核酸プローブ又はプライマーを、核酸アッセイに用いることができる。核酸プローブは、少なくとも10、15、30、50、又は100ヌクレオチド長のオリゴヌクレオチドであり、標的mRNA若しくはcDNA又はその相補的配列にストリンジェントな条件下で特異的にハイブリダイズするのに十分なものにすることができる。核酸プライマーは、少なくとも10、15、又は20ヌクレオチド長のオリゴヌクレオチドでありであり、mRNA若しくはcDNA、又はその相補的配列にストリンジェントな条件下で特異的にハイブリダイズするのに十分なものにすることができる。「特異的ハイブリダイゼーション」及び「特異的にハイブリダイズする」という用語は、試料中の標的核酸以外の核酸と実質的にハイブリダイズすることなく、特定の核酸が標的核酸とハイブリダイズすることを示す。
【０２３５】
ハイブリダイゼーション及び洗浄条件のストリンジェンシは、当業者に周知であるように、プローブ及び標的のTmとハイブリダイゼーション及び洗浄条件のイオン強度とを含む幾つかの要素により決まる。所望のハイブリダイゼーションのストリンジェンシを達成するためのハイブリダイゼーション及び条件は、例えば、Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2001、及びAusubel, F. et al., (Eds.), Short Protocols in Molecular Biology, Wiley, 2002に記載されている。
【０２３６】
非ヒト動物由来の試料は、本発明の方法によるアッセイのために任意に精製される。特定の配列のアッセイに使用するmRNAの単離及び/又はcDNAの生成のための方法は、当該技術分野において周知である。
【０２３７】
「核酸」という用語は、1本鎖、2本鎖、オリゴヌクレオチド、又はポリヌクレオチドを含む任意の形態である2個以上のヌクレオチドを有するRNA又はDNA分子を示す。「ヌクレオチド配列」という用語は、核酸の1本鎖形態におけるオリゴヌクレオチド又はポリヌクレオチド内のヌクレオチドの順序を示す。
【０２３８】
「増幅アッセイ」という用語は、鋳型核酸をコピーすることにより、鋳型核酸の全部又は一部のコピーを含む核酸を生産する方法を指す。
【０２３９】
増幅アッセイには、標的核酸に隣接する一対のプライマーを用いて核酸ポリメラーゼにより触媒される鋳型特異的プライマー伸長(template directed primer extension)を含むものが含まれ、例えばC.W. Dieffenbach et al., PCR Primer: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2003; and V. Demidov et al., DNA Amplification: Current Technologies and Applications, Taylor & Francis, 2004に記載のように、限定では無いが、ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)、逆転写PCR(RT-PCR)、ライゲーション媒介PCR(LM-PCR)、phi-29 PCR、及び他の核酸増幅法を例として含む。「プライマー」という用語は、通常約9乃至60ヌクレオチド長で、更に長くても短くてもよく、鋳型特異的DNA合成の開始点の役割を果たす1本鎖オリゴヌクレオチドを示す。
【０２４０】
in vitro核酸増幅法に適した反応条件には、限定では無いが、ポリメラーゼ及びヌクレオチド三リン酸を含む適切な反応成分の存在が含まれる。当業者は、緩衝液、ヌクレオチド、pH、Mg塩濃度、プライマー濃度、及び温度等の要素の選択を含め、本発明のプライマーを用いた日常の実験のみにより、標的核酸の増幅に適した条件を決定することができる。増幅方法の核酸産物は、限定では無いが、プライマー中には存在するが元のDNA鋳型には存在しない、非標的核酸配列、化学反応用の官能基、及び検出可能な標識等の付加的な材料を任意に含有する。PCRは、リアルタイムPCR又はキネティックPCR(KPCR)としても知られる定量的PCR(Q-PCR)として行われてもよい。Q-PCRは、標的DNA分子を増幅すると同時に定量するために用いられる。
【０２４１】
「定量的PCR」又は「Q-PCR」という用語は、ポリメラーゼ連鎖反応の結果を定量するための様々な方法を示す。Q-PCR法は、一般に、閾値サイクル(Ct)を決定する等、増幅因子を決定又は比較するか、標的及び標準鋳型の同時増幅により生成された産物の量を比較する共増幅法である。多くのQ-PCR手法には、レポータープローブ、インターカレーター色素又はその両方が含まれる。レポータープローブには、限定では無く、TaqMan(登録商標)プローブ(アプライドバイオシステムズ)、分子ビーコン、Scorpion(登録商標)プライマー、LuxTMプライマー、及びFRETプライマーが含まれる、インターカレーター色素には、限定では無く、臭化エチジウム、SYBR(登録商標) Green I(Molecular Probes)、及びPicoGreen(登録商標)(Molecular Probes)が含まれる。
【０２４２】
DNA試料中の1つ以上の特異的配列について、リアルタイムPCRでは、検出及び定量の両方が可能となる。量は、コピーの絶対数、又はDNA入力又は追加の規準化遺伝子に対して規準化された場合の相対量にすることができる。リアルタイムPCRにおいて産物を検出する2つの一般的な方法は、(1)任意の2本鎖DNAにインターカレートする非特異的蛍光色素、及び(2)プローブとその相補的DNA標的とのハイブリダイゼーション後にのみ検出が可能になる蛍光レポータで標識されたオリゴヌクレオチドからなる配列特異的DNAプローブである。例えば、TaqManプローブが使用される。TaqManプローブの原理は、相補的標的配列とのハイブリダイゼーション及びフルオロフォアに基づく検出中に二重標識プローブを切断するTaqポリメラーゼの5’-3’エキソヌクレアーゼ活性に依存している。他のリアルタイムPCR法と同様に、結果的に生じた蛍光シグナルにより、PCRの指数関数段階において産物の蓄積の定量的測定が可能となるが、しかしながら、TaqManプローブは、検出の特異性を有意に増加させる。TaqManプローブは、オリゴヌクレオチドプローブの5’末端に共有結合したフルオロフォアと3’末端のクエンチャーとからなる。幾つかの異なるフルオロフォア(例えば、6-カルボキシフルオレセイン、略称:FAM、又はテトラクロロフルオレシン、略称:TET)及びクエンチャー(例えば、テトラメチルローダミン、略称:TAMRA、又はジヒドロシクロピロロインドールトリペプチド副溝バインダ、略称:MGB)を利用することができる。クエンチャー分子は、FRET(蛍光共鳴エネルギー移動)を介してサイクラーの光源により励起された際に、フルオロフォアが放出した蛍光を消光する。フルオロフォアとクエンチャーとが近接している限り、消光は、任意の蛍光シグナルを抑制する。
【０２４３】
TaqManプローブは、プライマーの特定のセットにより増幅されたDNA領域内でアニーリングするように設計される。Taqポリメラーゼが(同様に1本鎖鋳型上だが、図示のものとは反対の方向、即ち相補鎖の3’から5’へ)プライマーを伸長し、新生ストランドを合成する際に、ポリメラーゼの5’-3’エキソヌクレアーゼ活性により、鋳型にアニールされたプローブが分解される。プローブの分解により、フルオロフォアが放出され、クエンチャーとの近接性が中断されるため、クエンチング効果を軽減され、フルオロフォアの蛍光が可能となる。したがって、リアルタイムPCRサーマルサイクラーにおいて検出される蛍光は、放出されたフルオロフォアとPCRに存在するDNA鋳型の量とに正比例する。
【０２４４】
核酸標的のハイブリダイゼーションアッセイには、限定では無いが、ドットブロット、核酸ハイブリダイゼーション、ビーズアッセイ、in situハイブリダイゼーション、ノーザンブロット、サザンブロット、及びマイクロアレイアッセイが含まれる。こうしたアッセイの詳細は、例えば、J. Sambrook and D.W. Russell, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press; 3rd Ed., 2001、及びF.M. Ausubel, Ed., Short Protocols in Molecular Biology, Current Protocols; 5th Ed., 2002に記載されている。
【０２４５】
核酸ハイブリダイゼーションアッセイは、規定されたハイブリダイゼーション及び洗浄条件下で標的核酸に特異的にハイブリダイズする核酸プローブの使用を含む。「プローブ」という用語は、通常は少なくとも約9乃至約8000ヌクレオチド長である様々な長さの核酸配列を含むが、プローブが核酸ハイブリダイゼーションアッセイ中に標的核酸に特異的にハイブリダイズすることが可能である限り、短くても長くてもよい。プローブは、1本鎖又は2本鎖であってもよく、組換え法、化学合成、天然源からの単離、又はこれらの2つ以上の組み合わせにより生成し得る。
【０２４６】
イムノアッセイ法は、標的分析物をアッセイするために使用可能であり、限定では無いが、酵素結合免疫吸着アッセイ(ELISA)、酵素結合免疫濾過アッセイ(ELIFA)、フローサイトメトリー、イムノブロット、免疫沈降、免疫組織化学、免疫細胞化学、発光イムノアッセイ(LIA)、蛍光イムノアッセイ(FIA)、ラジオイムノアッセイが含まれる。アッセイ法を用いて、定性的及び/又は定量的結果を取得し得る。試料の定性的及び定量的アッセイの両方に適したアッセイ法の具体的な詳細は、以下を例として含む標準的参考文献に記載されている:E.Harlow and D. Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1988、F. Breitling and S. Duebel, Recombinant Antibodies, John Wiley & Sons, New York, 1999、H. Zola, Monoclonal Antibodies: Preparation and Use of Monoclonal Antibodies and Engineered Antibody Derivatives, Basics: From Background to Bench, BIOS Scientific Publishers, 2000、B.K.C. Lo, Antibody Engineering: Methods and Protocols, Methods in Molecular Biology, Humana Press, 2003、F. M. Ausubel et al., Eds., Short Protocols in Molecular Biology, Current Protocols, Wiley, 2002、S. Klussman, Ed., The Aptamer Handbook: Functional Oligonucleotides and Their Applications, Wiley, 2006、Ormerod, M. G., Flow Cytometry: a practical approach, Oxford University Press, 2000、Givan, A. L., Flow Cytometry: first principles, Wiley, New York, 2001、Gorczyca, W., Flow Cytometry in Neoplastic Hematology: morphologic-immunophenotypic correlation, Taylor & Francis, 2006、Crowther, J. R., The ELISA Guidebook (Methods in Molecular Biology), Humana Press, 2000、Wild, D., The Immunoassay Handbook, 3rd Edition, Elsevier Science, 2005、及びJ. Sambrook and D.W. Russell, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 3rd Ed., 2001。
【０２４７】
抗体及び抗体の調製のための方法は、当該技術分野において周知である。「抗体」及び「抗体群」という用語は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、二重特異性抗体、多重特異性抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、ラクダ化抗体、単一ドメイン抗体、単鎖Fv(scFv)、単鎖抗体、ジスルフィド結合Fv(sdFv)、及び抗イディオタイプ(抗Id)抗体と、上記の何れかの抗原結合フラグメントとを含む。特に、抗体には、免疫グロブリン分子及び免疫グロブリン分子の免疫学的に活性なフラグメント、即ち抗原結合部位を含む分子が含まれる。免疫グロブリン分子は、任意のタイプ(例えば、IgG、IgE、IgM、IgD、IgA、及びIgY)、クラス(例えば、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1、及びIgA2)、又はサブクラスである。
【０２４８】
本明細書での使用において、「抗体フラグメント」及び「抗原結合性フラグメント」は、標的分析物に免疫特異的に結合する抗体の断片を示す。抗体フラグメントは、当業者に公知の任意の手法により生成し得る。例えば、Fab及びF(ab’)2フラグメントは、パパイン(Fab断片の作製)又はペプシン(F(ab’)2フラグメントの作製)等の酵素を用いて、免疫グロブリン分子のタンパク質切断により作製し得る。抗体フラグメントは、更に、組換えDNA手法により作製される。
【０２４９】
抗体、抗原結合性フラグメント、その生成方法、及び生成された抗体を抗原への実質的に特異的な結合についてスクリーニングする方法は、当該技術分野において公知であり、こうした抗体、抗原結合性フラグメント、及び方法は、例えば以下において更に詳細に説明されている:Antibody Engineering, Kontermann, R. and Duebel, S. (Eds.), Springer, 2001、Harlow, E. and Lane, D., Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1988、F. Breitling and S. Duebel, Recombinant Antibodies, John Wiley & Sons, New York, 1999、H. Zola, Monoclonal Antibodies: Preparation and Use of Monoclonal Antibodies and Engineered Antibody Derivatives, Basics: From Background to Bench, BIOS Scientific Publishers, 2000、Ausubel, F. et al., (Eds.), Short Protocols in Molecular Biology, Wiley, 2002、J. D. Pound (Ed.) Immunochemical Protocols, Methods in Molecular Biology, Humana Press, 2nd ed., 1998、B.K.C. Lo (Ed.), Antibody Engineering: Methods and Protocols, Methods in Molecular Biology, Humana Press, 2003、及びKohler, G. and Milstein, C., Nature, 256:495-497 (1975)。標的分析物に対する抗体は、動物において生産すること、合成すること、組換え方法により生産すること、及び/又は市販のものを入手することが可能である。
【０２５０】
アプタマを用いて、標的分析物をアッセイすることができる。「アプタマ」という用語は、特定の物質に実質的に特異的に結合するペプチド及び/又は核酸を示す。核酸アプタマの場合、アプタマは、ワトソン/クリック型塩基対形成又は第2及び/又は第3の核酸との三重螺旋結合以外の標的との結合相互作用により特徴付けられる。このような結合相互作用は、例えば、ファンデルワールス相互作用、疏水的相互作用、水素結合、及び/又は静電相互作用を含み得る。同様に、ペプチドに基づくアプタマは、アプタマが標的に対する天然型リガンドではない状態での標的との特異的結合により特徴付けられる。ペプチド及び核酸アプタマの同定及び生成の手法並びにその使用は、例えば以下に記載されている:F. M. Ausubel et al., Eds., Short Protocols in Molecular Biology, Current Protocols, Wiley, 2002、S. Klussman, Ed., The Aptamer Handbook: Functional Oligonucleotides and Their Applications, Wiley, 2006、及びJ. Sambrook and D.W. Russell, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 3rd Ed., 2001。
【０２５１】
試料中に存在する標的分析物と結合パートナーとの結合の検出は、当該技術分野において公知の様々な方法の何れかにより達成され、例として、標的分析物又は結合パートナーに直接的又は間接的に付着させた検出可能な標識の検出を含む。「検出可能な標識」という用語は、例として、分光学的、光学的、光化学的、生化学的、酵素的、電気的及び/又は免疫化学的なものを含む任意の適切な方法により検出可能な標識の存在を示すシグナルを発生可能な物質を示す。検出可能な標識の例には、蛍光部分、化学発光部分、生物発光部分、電子密度の高い粒子、磁性粒子、酵素、基質、放射性同位元素、及び発色団が例示的に含まれる。
【０２５２】
使用される特定の検出可能な標識又は標識群の素性(identity)は、使用される検出プロセスに依存する。こうした検出プロセスは、ELISA、ウェスタンブロット、免疫沈降、免疫細胞化学、免疫蛍光アッセイ、液体クロマトグラフィー、フローサイトメトリー、当該技術分野において公知の他の検出プロセス、又はそれらの組み合わせを例として含む、特定のアッセイ形式に組み込まれる。
【０２５３】
結合アッセイには、支持体に付着した結合パートナーを組み込むことができる。結合アッセイにおいて用いられる付着結合パートナーを有する支持体は、固体又は半固体にすることが可能であり、ガラス、シリコン、紙、合成若しくは天然ポリマー、例えばポリスチレン、ポリカーボネート、ポリプロピレン、PVDF、ナイロン、セルロース、アガロース、デキストラン、及びポリアクリルアミド、又は結合アッセイでの使用において結合パートナーが安定して付着可能な他の任意の材料が含まれる。
【０２５４】
使用される支持体は、カルボキシル、アミン、アミノ、カルボキシラート、ハロゲン化物、エステル、アルコール、カルバミド、アルデヒド、クロロメチル、硫黄酸化物、窒素酸化物、エポキシ、及び/又はトシル官能基を含むことができる。結合パートナーの支持体への結合は、様々な方法の何れかにより達成され、例として吸着及び化学結合を含む。一例において、1-エチル-3-[3-ジメチルアミノプロピル]カルボジイミドハイドロクロリド、EDC、又はEDAC化学を用いて、結合パートナーを粒子に付着させることができる。結合パートナーは、例えば、支持体上に配置したコーティング又はリンカへの結合を介して、支持体の材料に直接的又は間接的に結合させることができる。官能基、その修飾、及び結合パートナーの支持体への結合は、例えば、Fitch, R. M., Polymer Colloids: A Comprehensive Introduction, Academic Press, 1997に記載の通り、当該技術分野において公知である。
【０２５５】
こうした支持体は、限定では無いが、マイクロタイタープレート、マイクロタイターウェル、ピン、ファイバー、ビーズ、スライド、シリコンチップ、及びニトロセルロース又はPVDF膜等の膜を含む様々な形態及び形状の何れかにすることができる。
【０２５６】
様々な分光法の何れかを用いて、本発明の態様による標的分析物をアッセイすることが可能であり、これには限定では無いが、ガスクロマトグラフィー、液体クロマトグラフィー、イオン移動度分光法、質量分析、液体クロマトグラフィー質量分析(LC-MS又はHPLC-MS)、イオン移動度分光質量分析、タンデム質量分析、ガスクロマトグラフィー質量分析、マトリックス支援脱離イオン化飛行時間型(MALDI-TOF)質量分析、表面増強レーザ脱離イオン化(SELDI)、及び核磁気共鳴分光法が含まれ、これらはすべて当業者に周知である。
【０２５７】
任意に、分光分析を用いて、試料を標的分析物について分析する。質量の分析は、本発明の態様によるアッセイにおいて用いることができる。質量の分析は、例えば、飛行時間型(TOF)質量分析又はフーリエ変換イオンサイクロトロン共鳴質量分析を用いて行われる。質量分析手法は、当該技術分野において公知であり、タンパク質及び/又はペプチドアッセイの方法の詳細な説明の例は、以下に記載されている:Li J., et al., Clin Chem., 48(8):1296-304, 2002、Hortin, G.L., Clinical Chemistry 52: 1223-1237, 2006、A.L. Burlingame, et al. (Eds.), Mass Spectrometry in Biology and Medicine, Humana Press, 2000、及びD.M. Desiderio, Mass Spectrometry of Peptides, CRC Press, 1990。
【０２５８】
異種移植腫瘍細胞に対する抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体の効果の評価のためのアッセイ。
【０２５９】
生存研究、腫瘍サイズ及び動物の体重の測定等、異種移植腫瘍細胞に対する抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体の効果の評価のために生きた動物に対して行われるアッセイを用いることができる。
【０２６０】
腫瘍生検は、トリパンブルー又はヨウ化プロピジウムにより染色する等、当該技術分野において公知の様々なアッセイの何れかにより、異種移植細胞の増殖及び生存率について評価することができる。
【０２６１】
動物組織及び/又は血液試料の分析を行い、抗癌治療剤の毒性及び抗癌治療剤の治療効果を決定することができる。
【０２６２】
腫瘍負荷及び転移は、フローサイトメトリー及び/又は免疫組織化学等、様々な方法の何れかにより評価することができる。
【０２６３】
本明細書に記載の結合アッセイ、例えば1つ以上の腫瘍バイオマーカーを検出するアッセイを用いて、異種移植片に対する抗癌治療剤の効果を評価することができる。
【０２６４】
「抗癌治療抗体」という用語は、少なくとも1種類の癌細胞に対する補体依存性細胞傷害により少なくとも部分的に媒介される抗癌効果を有することが知られている抗体を示す。このような抗体は、当該技術分野において公知であり、例として、リツキシマブ、トラスツズマブ、アレムツズマブ、セツキシマブ、パニツムマブ、カツマキソマブ、及びオファツムマブを含む。
【０２６５】
「推定抗癌治療抗体」という用語は、少なくとも1種類の癌細胞に対する補体依存性細胞傷害により少なくとも部分的に抗癌効果が媒介され得る抗体を指す。本発明の態様により提供される抗癌治療剤の効果を評価する方法により、少なくとも1種類の癌細胞に対する補体依存性細胞傷害により少なくとも部分的に媒介され得る抗癌効果を、推定抗癌治療抗体が有するかを判定することが可能となる。
【０２６６】
抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体は、補体依存性細胞傷害により抗癌効果を媒介するのに適した任意の種類の抗体にすることが可能であり、例として、マウス、ラット、モルモット、ウサギ、ヤギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、ニワトリ、イヌ、ラクダ、ヒト、及び非ヒト霊長類等の動物の任意の種に由来する抗体を含む。抗癌治療抗体又は推定抗癌治療抗体は、補体依存性細胞傷害により抗癌効果を媒介可能な任意の種類の抗体にすることが可能であり、例えば、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、二重特異性抗体、多重特異性抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、ラクダ化抗体、単一ドメイン抗体、単鎖Fv(scFv)、単鎖抗体、ジスルフィド結合Fv(sdFv)、及び抗イディオタイプ(抗Id)抗体と、補体依存性細胞傷害により抗癌効果を媒介可能な上記のものの何れかのフラグメントにすることができる。特に、抗体には、補体依存性細胞傷害により、標的細胞の溶解、即ち、標的癌細胞に対する抗癌効果を媒介する免疫グロブリン分子及び免疫グロブリン分子の免疫学的に活性なフラグメントが含まれる。こうした抗体は、補体依存性細胞傷害により標的細胞の溶解、即ち、標的癌細胞に対する抗癌効果を媒介する任意のタイプ、例えばIgG及びIgM、クラス、例えばIgG1、IgG2、IgG3、IgG4、又はサブクラスである。
【０２６７】
標準
【０２６８】
アッセイに適した標準は、当該技術分野において周知であり、使用する標準は、任意の適切な標準にすることができる。
【０２６９】
一例において、標準は、対照動物由来の比較可能な試料中の1つ以上の腫瘍バイオマーカーのアッセイの結果である。
【０２７０】
標準は、個々の対照動物の試料又は対照動物の集団において以前に決定された1つ以上の腫瘍バイオマーカーの基準レベルであり、呼び出して、抗癌治療剤が投与された動物における1つ以上の腫瘍バイオマーカーのアッセイ結果と比較するために、印刷又は電子媒体に保存されたものにし得る。
【０２７１】
標準は、1つ以上の集団から得られた比較可能な試料における1つ以上の指標の平均レベルにすることができる。「平均レベル」は、集団の各動物から得られた比較可能な試料における1つ以上の指標のアッセイにより決定される。「比較可能な試料」という用語は、試料が同一タイプであること、即ち、比較可能な試料の各々が、例えば、血清試料であることを示すために用いられる。
【０２７２】
標準と比較して、本発明のアッセイで1つ以上の標的分析物のレベル又は発現において検出される差異は、1つ以上の標的分析物のレベル又は発現の増加又は減少とすることができる。増加又は減少の大きさは、例えば、標準レベルの少なくとも5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、又はそれ以上になる可能性がある。
【０２７３】
アッセイの結果は、パラメトリック又はノンパラメトリック検定、分散分析、共分散分析、多変量解析のロジスティック回帰、フィッシャーの正確確率検定、カイ2乗検定、スチューデントのt検定、マン・ホイットニ検定、ウィルコクソンの符号順位検定、マクネマ検定、フリードマン検定、及びペイジのL傾向検定により例示される、様々な方法の何れかによる統計分析を用いて分析することができる。上記及び他の統計的検定は、当該技術分野において周知であり、Hicks, CM, Research Methods for Clinical Therapists: Applied Project Design and Analysis, Churchill Livingstone (publisher); 5th Ed., 2009、及びFreund, RJ et al., Statistical Methods, Academic Press; 3rd Ed., 2010において詳述されている。
【０２７４】
発明の遺伝子改変非ヒト動物、組成物、及び方法の態様を、以下の実施例において説明する。これらの実施例は、説明を目的として提供されるものであり、発明の組成物及び方法の範囲に対する限定と見做されるものではない。
【実施例】
【０２７５】
実施例1
【０２７６】
十分な補体のNSGの生成
【０２７７】
NODマウスにおける溶血補体溶解活性の欠如は、C5補体成分をコードするHc遺伝子における2塩基対欠失により生じる。終止コドンUGAは、C5タンパク質発現の欠如を引き起こす欠失の4bp下流に存在する。CBA/Ls雌マウスをNOD/Lt雄マウスに異系交配することにより、NOD/Ltマウス(Hc遺伝子座Chr2)により発現された欠損Hc0対立遺伝子をCBA由来の野生型Hc1対立遺伝子に置き換え、その後、NOD/Ltに対する10回の戻し交配と、NOD/Ltマウスからの性染色体の固定とを行った。NOD-Hc1と命名したホモ接合性コンジェニックマウス株、即ち、NOD.CBALs-Hc1/Lt(ストック番号004306)は、ジャクソン研究所バイオレポジトリから得たHc1対立遺伝子を含むCBA/Lsに由来するChr2対立遺伝子を有する。雄のNOD.CBALs-Hc1/Ltマウスは、ジャクソン研究所バイオリポジトリからの雌NSGマウス(ストック番号005557)と交配させた。
【０２７８】
F1子孫マウス由来のcDNAに対して、Hc遺伝子のエクソン5上の0.21kb領域までを捕捉する標的サンガ配列決定を行った。F1マウスは、野生型Hc遺伝子について(Hc0/Hc1)、Prkdcscid変異について、及びIl2rgnull対立遺伝子についてヘテロ接合性であった。その後、これらのヘテロ接合性F1マウスを相互交配させ、Prkdcscid、IL2rgtm1Wjl、及びHc1対立遺伝子についてホモ接合性のNSGマウス、即ち、NSG-Hc1マウスを作製した(図1A)。このコロニーは、NSG-Hc1マウスの兄妹交配により維持される。
【０２７９】
NSG株に対するC5正常アレル。以下のプライマーを使用した:
プライマー:オリゴヌクレオチド947、オリゴヌクレオチド945
プライマー1配列:CAATTAAAGCTTACTATAAGAAGGATTTTACAA(配列番号2)
プライマー2配列:CAAGTTAGATCTAAGCACTAGCTACTCAAACAA(配列番号3)
産物の大きさ:0.21kb
MGIアクセッションID:MGI:6305
212bp:BALB/cJ、DBA/1J、B10.D2-H2<d>/nSnJ、C57BL/6J
210bp AKR/J、A/HeJ、B10.D2-H2<d>/oSnJ、NZB/BlNJ、SWR/J、DBA/2。
【０２８０】
サンガ配列決定及び遺伝子型決定のために、95℃、50mMのNaOH加熱工程の後、中和及び遠心分離により破片をペレット化して、4乃至6週齢のマウスの尾部の2mmスライスから全ゲノムDNAを調製した。以下のプライマーセットを用いて、Hc遺伝子のエクソン5を含む210bpの産物を増幅した:順方向:CAATTAAAGCTTACTATAAGAAGGATTTTACAA(配列番号2)及び逆方向:CAAGTTAGATCTAAGCACTAGCTACTCAAACAA(配列番号3)。対象のバンドを切り出し、QIAquick Gel Extractionキット(Qiagen)を用いてゲル抽出し、30μlの再蒸留水に溶出した。複数のバンドを分離するためにゲル抽出が必要ない場合、ExoSAP-It(USB、オハイオ州クリーブランド)を用いてPCR産物を直接洗浄した。DNA試料は、Nanodrop ND-1000 UV分光光度計(Nanodrop Technologies、デラウェア州ウィルミントン)を用いて定量した。BigDye Termination Cycle Sequencingケミストリを用いて、遺伝子特異的プライマーとのシークエンシング反応を行い、AB3703xl(Applied Biosystems Life Technologies、カリフォルニア州カールズバッド)で分解した。cDNAは、NSG及びNSG-Hc1マウスの両方の鎖から配列決定した。Sequencher4.9(Gene Codes、ミシガン州アナーバ)を用いてDNA配列を組み立てた。
【０２８１】
全てのマウスは、ジャクソン研究所の改変障壁条件下で、NIH 31M飼料及び酸性化水を自由に与え、暗期12時間/明期12時間のサイクルで飼育した。
【０２８２】
実施例2
【０２８３】
NSG-Hc1マウスにおける補体依存性細胞傷害のインビトロでの性質決定。
【０２８４】
9乃至10ヶ月齢の雄BALB/cBy、NSG及びNSG-Hc1マウスの血清を採取し、1:5希釈マウス血清が抗体被覆ヒツジRBC、即ち、感作細胞(EA細胞)を溶解する能力を調べることにより、マウス血清における補体活性レベルを決定した。ヒツジRBC(Cat#10H72)及びヒツジRBCに対するウサギ抗血清(Cat#10K945)は、Graingerから購入した。ヒツジ赤血球(SRBC)を洗浄し、HBSS培地で維持した。マウス全血を、血清分離剤入りのBecton Dickinsonマイクロティナ採血管に直接採取し、室温で15分間静置して凝固させた。血餅を遠心分離により除去し、滅菌ピペットを用いて血清を除去した。マウス血清中の補体活性は、様々な血清希釈物中での抗体被覆SRBCの溶解を測定することにより決定した。簡単に言うと、等体積のRBC(1×109細胞/ml)と1:10希釈抗ヒツジRBCウサギAbとをHBSS中で混合し、37℃で30分間インキュベートすることにより、抗SRBC抗体(EA細胞)と共にインキュベートしたSRBC細胞を調製した。補体活性は、HBSS培地中の109/mlのEA細胞25μlを、1:5希釈マウス血清175μlとV底96ウェルプレートにおいて混合することにより決定した。ACK溶解緩衝液又はHBSS培地のみでインキュベートしたEA細胞を、それぞれ陽性対照及び陰性対照として用いた。EA細胞及び血清を37℃で1時間インキュベートし、2,500×gで10分間遠心分離し、上清のOD405を測定してEA細胞の溶解を評価した。マウス血清中の補体依存性溶解パーセンテージは、ACK溶解緩衝液において溶解した細胞(100%溶解)とHBSSのみでインキュベートした細胞(0%溶解)とに対して計算した。
【０２８５】
NSG-Hc1マウス由来の血清は、野生型Hc1遺伝子を有するBALB/cByマウス由来の血清と同様のレベルのEA細胞溶解を発生させた(図1B)。しかしながら、変異Hc0対立遺伝子を有するNSGマウス由来の血清と共にインキュベートした場合には、0.1%未満のEA細胞溶解が観察された(図1B)。この結果により、NSG-Hc1マウスのコンジェニックHc1対立遺伝子が、機能性C5タンパク質を転写することが実証された。
【０２８６】
実施例3
【０２８７】
NSG-Hc1マウスにおける補体依存性細胞傷害のインビボでの性質決定。
【０２８８】
0日目に、年齢が一致する雌のNSG及びNSG-Hc1マウスを5群(各群5乃至7匹)に分け、尾静脈を介して1×105のDaudi Burkittリンパ腫生存細胞を注射した。Daudi細胞は、ATCC(CCL213)から購入した。Daudi細胞を解凍し、10%FBS、2mM L-グルタミン、100単位/mlペニシリン、及び100ug/mlストレプトマイシン(GIBCO#15140-122)を含むRPMI1640培地(GIBCO#21870)中で培養した。Daudi細胞を、5%CO2を含む加湿雰囲気において37℃でインキュベートした。RPMI増殖培地を交換し、培養物を2乃至3日毎に1:10の比率で継代した。Daudi細胞の生存率は、トリパンブルー排除により決定した。リツキシマブ(Cat#680563)は、Biogen Idecから購入した。腫瘍細胞又はリツキシマブを注射していないマウスを、追加対照として用いた。移植後10日目に、マウスのコホートにPBS200μL中のリツキシマブ(25μg/g)又はPBS200μLのみを腹腔内(IP)注射した。腫瘍移植マウスを週に3回モニタリングし、後肢麻痺又は20%を超える体重減少を示した場合に、CO2窒息と、その後の胸部穿刺とにより安楽死させた。マウスの腫瘍負荷及び腫瘍侵襲性を、フローサイトメトリー、組織学的検査、及び免疫組織化学的検査により評価した。処置群と対照群との間での生存の統計的差異を、Prism統計ソフトウェアを用いて得られたカプラン・マイヤプロットにより分析した。ログ・ランク検定を用いて統計分析を行い、P値<0.05で有意差があると見做した。
【０２８９】
体重及び後肢麻痺
【０２９０】
Daudi細胞の注射後38日に、PBS処置マウスでは、リツキシマブ処置マウスと比較して有意な体重減少と後肢麻痺とが観察された(図2A)。PBSで処置したコホートの全マウスは、20%を超える体重減少又は後肢麻痺を示し、移植後42日までに安楽死させた。リツキシマブ処置は、PBS処置したマウスコホートと比較して、体重減少の及び後肢麻痺の有意な補体非依存性遅延をもたらした(p<0.05)(図2A)。一方、リツキシマブ処置したNSG-Hc1マウスでは、調査期間全体で、即ち移植後52日間に、体重の減少は観察されず、これはリツキシマブにより処置した場合、NSG-Hc1マウスの機能補体系がヒト腫瘍細胞に対する有効なCDC活性を媒介することにより体重減少及び後肢麻痺を妨げたことを示唆している(図2A)。
【０２９１】
生存
【０２９２】
Daudi細胞の注射後38日に、PBS処置NSGマウス(生存中央値=36日)とPBS処置NSG-Hc1マウス(生存中央値=38日)との間で全生存に有意な差は見られなかった(図2B)。リツキシマブ処置は、PBS処置したマウスのコホート(p<0.05)と比較して、NSGマウス(生存中央値=46日)の全生存における有意な補体非依存性の増加をもたらした(図2B)。一方、リツキシマブ処置NSG-Hc1マウスでは、調査期間全体で、即ち移植後52日間に、100%の生存が観察され、これはリツキシマブにより処置した場合、NSG-Hc1マウスの機能補体系がヒト腫瘍細胞に対する有効なCDC活性を媒介することによりマウスの生存を有意に改善したことを示唆している(図2B)。
【０２９３】
遠隔転移
【０２９４】
フローサイトメトリー分析のために、FACS緩衝液(2%FBS及び0.01%NaN3を含有するPBS)を含むフローチューブに、後眼窩静脈叢の穿刺によりマウスから末梢血を直接採取した。その後、マウスをCO2窒息又は頚部脱臼により安楽死させた。大腿骨から骨髄をフラッシングにより採取した。脾臓細胞を機械的解離後に採取した。血液、脾臓、及び骨髄から調製した単細胞懸濁液に、ACK溶解緩衝液を用いたRBC溶解を行い、2回洗浄後、シグマアルドリッチから購入したウサギ免疫グロブリンにおいてブロックした。BD Biosciencesからの抗ヒトCD45抗体(クローンHI30)とBioLegendからの抗マウスCD45抗体(クローンA20)及び抗ヒトCD20抗体(クローン2H7)とに対する蛍光コンジュゲート抗体を用いて、ブロックしたRBC消失細胞を染色した。全ての表現型解析は、FACSCalibur(ベクトン・ディッキンソン)を用いたフローサイトメトリーにより実施し、データは、FlowJoソフトウェアで処理した。
【０２９５】
移植後38日での末梢血及び骨髄中の循環ヒトCD45+ Daudi細胞のフローサイトメトリー分析においても、リツキシマブ処置NSGマウスと比較して、リツキシマブ処置NSG-Hc1マウスの末梢血及び骨髄中のヒトCD45+ Daudi細胞数が有意に少ないことが観察されたことから、NSG-Hc1マウスでのCDC媒介抗腫瘍活性が確認された(p<0.05)(図3A及び図3B)。
【０２９６】
組織学的分析のために、マウスをCO2窒息と、その後の頚部脱臼又は胸腔穿刺とにより安楽死させた。動物の完全剖検を行い、組織を10%中性緩衝ホルマリン(NBF)溶液中で固定し、パラフィンに包埋し、3乃至5μmの切片とした。スライドは、Mayerのヘマトキシリン‐エオシン(H&E)又はDakoの抗ヒトCD45抗体(クローン2B11+PD7/26)により染色した。ヒトCD45抗原の定性的検出は、VentanaのDISCOVERY DAB Map Detection Kit(RUO)を用いて行い、写真は、顕微鏡写真機(Olympus BX41)により撮影した。
【０２９７】
更に、予想した通り、移植後38日のマウスの卵巣、腎臓、肝臓、脾臓、肺、リンパ節等を含む様々な器官の組織学的分析により、他のマウス群と比較して、リツキシマブ処置NSG-Hc1マウス由来の組織でのDaudi細胞数の減少が実証された(図4A及び図4B)。
【０２９８】
配列
【０２９９】
Mus musculus C5補体成分構造タンパク質アミノ酸配列(配列番号1):
MGLWGILCLLIFLDKTWGQEQTYVISAPKILRVGSSENVVIQVHGYTEAFDATLSLKSYPDKKVTFSSGYVNLSPENKFQNAALLTLQPNQVPREESPVSHVYLEVVSKHFSKSKKIPITYNNGILFIHTDKPVYTPDQSVKIRVYSLGDDLKPAKRETVLTFIDPEGSEVDIVEENDYTGIISFPDFKIPSNPKYGVWTIKANYKKDFTTTGTAYFEIKEYVLPRFSVSIELERTFIGYKNFKNFEITVKARYFYNKVVPDAEVYAFFGLREDIKDEEKQMMHKATQAAKLVDGVAQISFDSETAVKELSYNSLEDLNNKYLYIAVTVTESSGGFSEEAEIPGVKYVLSPYTLNLVATPLFVKPGIPFSIKAQVKDSLEQAVGGVPVTLMAQTVDVNQETSDLETKRSITHDTDGVAVFVLNLPSNVTVLKFEIRTDDPELPEENQASKEYEAVAYSSLSQSYIYIAWTENYKPMLVGEYLNIMVTPKSPYIDKITHYNYLILSKGKIVQYGTREKLFSSTYQNINIPVTQNMVPSARLLVYYIVTGEQTAELVADAVWINIEEKCGNQLQVHLSPDEYVYSPGQTVSLDMVTEADSWVALSAVDRAVYKVQGNAKRAMQRVFQALDEKSDLGCGAGGGHDNADVFHLAGLTFLTNANADDSHYRDDSCKEILRSKRNLHLLRQKIEEQAAKYKHSVPKKCCYDGARVNFYETCEERVARVTIGPLCIRAFNECCTIANKIRKESPHKPVQLGRIHIKTLLPVMKADIRSYFPESWLWEIHRVPKRKQLQVTLPDSLTTWEIQGIGISDNGICVADTLKAKVFKEVFLEMNIPYSVVRGEQIQLKGTVYNYMTSGTKFCVKMSAVEGICTSGSSAASLHTSRPSRCVFQRIEGSSSHLVTFTLLPLEIGLHSINFSLETSFGKDILVKTLRVVPEGVKRESYAGVILDPKGIRGIVNRRKEFPYRIPLDLVPKTKVERILSVKGLLVGEFLSTVLSKEGINILTHLPKGSAEAELMSIAPVFYVFHYLEAGNHWNIFYPDTLSKRQSLEKKIKQGVVSVMSYRNADYSYSMWKGASASTWLTAFALRVLGQVAKYVKQDENSICNSLLWLVEKCQLENGSFKENSQYLPIKLQGTLPAEAQEKTLYLTAFSVIGIRKAVDICPTMKIHTALDKADSFLLENTLPSKSTFTLAIVAYALSLGDRTHPRFRLIVSALRKEAFVKGDPPIYRYWRDTLKRPDSSVPSSGTAGMVETTAYALLASLKLKDMNYANPIIKWLSEEQRYGGGFYSTQDTINAIEGLTEYSLLLKQIHLDMDINVAYKHEGDFHKYKVTEKHFLGRPVEVSLNDDLVVSTGYSSGLATVYVKTVVHKISVSEEFCSFYLKIDTQDIEASSHFRLSDSGFKRIIACASYKPSKEESTSGSSHAVMDISLPTGIGANEEDLRALVEGVDQLLTDYQIKDGHVILQLNSIPSRDFLCVRFRIFELFQVGFLNPATFTVYEYHRPDKQCTMIYSISDTRLQKVCEGAACTCVEADCAQLQAEVDLAISADSRKEKACKPETAYAYKVRITSATEENVFVKYTATLLVTYKTGEAADENSEVTFIKKMSCTNANLVKGKQYLIMGKEVLQIKHNFSFKYIYPLDSSTWIEYWPTDTTCPSCQAFVENLNNFAEDLFLNSCE
【０３００】
実施例3
【０３０１】
補体アッセイ
【０３０２】
試薬
・GraingerのヒツジRBC、cat#10H72、20mLs
・Graingerのウサギ抗ヒツジRBC、Cat#10K945、2mL。2mLのH2Oで再構成し、等分し、-80で凍結。
・Graingerのモルモット補体、Cat#10H654、5mL。5mLの蒸留水で再構成し、分割し、-80℃で凍結。
・GibcoのHBSS、#14025。
【０３０３】
概要-各ウェルは、合計200μLを有する:175μLの溶解対照又は希釈血清及び25μLの抗体被覆ヒツジRBC。
【０３０４】
補体アッセイプロトコール:
HBSS中でヒツジ赤血球(2.5mL/プレート、25μL/ウェル)を洗浄。
EA(抗体感作ヒツジ赤血球)の調製
・エッペンドルフチューブに1×109のRBC(約1mL)を加え、1:10希釈の抗SRBC抗体と混合(ウェル数に合わせてスケールアップ、25μL/ウェル)
・37℃で30分間インキュベートし、次に350×gで5分間スピンダウンし、元の体積のHBSSに再懸濁
サンプルの調製
・405μLのHBSSに120μLの血清を添加。SRBCの添加後、1:5の希釈となる。これは、3連ウェルに十分な血清である。
・溶解対照:0%溶解にはHBSSを使用し、100%溶解にはACK緩衝液を使用。
【０３０５】
プレートの準備
1.対照、血清、及びブランク毎に3つのウェルが必要。
2.対照:0%用HBSS、100%用ACK、1:10希釈モルモット補体、プレートブランク用HBSS単独。
3.175μLの溶解対照又は希釈血清をV底プレートのそれぞれのウェルに添加。
4.ブランクを除く全ウェルに25μLのEA懸濁液を添加。
5.蓋用のプレートシーラで覆い、37℃で1時間インキュベートしつつ、10分毎に穏やかにタッピング/振盪。
6.プレートを1250×gで5分間遠心分離し、細胞をペレット化。
7.各ウェルから100μLの上清を96ウェルELISAプレートの対応するウェルに移し、OD540を読む。
【０３０６】
結果の計算(溶解%として表す)
・相対吸光度(RA)をRA=(試料のabs)-(0%溶解ウェルのabs)として求める
・溶解%をRBC溶解パーセント=((試料ウェルのRA)/(100%溶解のRA))* 100として求める
LDS 6564由来の血清をHBSS中で1:5に希釈し(120μLの血清+405μLのHBSS)、3連とする。
【表１】
2018518960.tif 000002
24個の試料を3連又は80個の試料を2連とするのに十分なスペース
【０３０７】
追加情報:
株名:NOD.CBALs-Hc1/LtJ
一般名: NOD.Hc1
外観:アルビノ、ピンク色の目
関連遺伝子型:A/A Tyrc/Tyrc
説明:このNOD/Ltコンジェニック株は、Hc1を含むCBA/Ls由来のChr2対立遺伝子を有する。糖尿病の発症及び発生率は、NOD/Ltと同じである。
開発:Chr2に位置するC5溶血性補体を、10世代に亘りCBA/LsからNOD/Ltに移動させ、NOD/Ltで発現された欠損Hc0対立遺伝子を置換した。T1DRは、世代N10F11においてホモ接合性NOD.CBALs-Hc1/Lt を有する。
【０３０８】
項目
【０３０９】
項目1. 遺伝子改変免疫不全非ヒト動物であって、非ヒト動物のゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられるようになる遺伝子改変免疫不全非ヒト動物。
項目2. 動物は、重症複合免疫不全を有する、項目1記載の遺伝子改変免疫不全非ヒト動物。
項目3. 動物は、IL2受容体ガンマ鎖欠乏を有する、項目1又は2記載の遺伝子改変免疫不全非ヒト動物。
項目4. 動物は、組換え活性化遺伝子1欠乏を有する、項目1、2、又は3の何れかに記載の遺伝子改変免疫不全非ヒト動物。
項目5. 動物は、組換え活性化遺伝子2欠乏を有する、項目1乃至4の何れかに記載の遺伝子改変免疫不全非ヒト動物。
項目6. 動物は、マウスである、項目1乃至5の何れかに記載の遺伝子改変免疫不全非ヒト動物。
項目7. マウスは、scid変異を含むNODマウスである、項目6記載の遺伝子改変免疫不全非ヒト動物。
項目8. NODマウスは、scid変異についてホモ接合性である、項目7記載の遺伝子改変免疫不全非ヒト動物。
項目9. マウスは、Rag1変異を含むNODマウスである、項目6、7、又は8の何れかに記載の遺伝子改変免疫不全非ヒト動物。
項目10. NODマウスは、Rag1変異についてホモ接合性である、項目6乃至9の何れかに記載の遺伝子改変免疫不全非ヒト動物。
項目11. マウスは、Rag1tm1Mom変異を含むNODマウスである、項目6乃至10の何れかに記載の遺伝子改変免疫不全非ヒト動物。
項目12. NODマウスは、Rag1tm1Mom変異についてホモ接合性である、項目6乃至11の何れかに記載の遺伝子改変免疫不全非ヒト動物。
項目13. 遺伝子改変免疫不全非ヒト動物は、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含むNSG-Hc1マウスであり、遺伝子改変NSGマウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられる、項目1記載の遺伝子改変免疫不全非ヒト動物。
項目14. 遺伝子改変免疫不全非ヒト動物は、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含むNRG-Hc1マウスであり、遺伝子改変NRGマウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられる、項目1記載の遺伝子改変免疫不全非ヒト動物。
項目15. 遺伝子改変免疫不全非ヒト動物は、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含むNOG-Hc1マウスであり、遺伝子改変NOGマウスは、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられる、項目1記載の遺伝子改変免疫不全非ヒト動物。
項目16. 更に、異種移植腫瘍細胞を含む、項目1乃至15の何れかに記載の遺伝子改変免疫不全非ヒト動物。
項目17. 更に、ヒト異種移植腫瘍細胞を含む、項目1乃至16の何れかに記載の遺伝子改変免疫不全非ヒト動物。
項目18. 更に、細胞株の異種移植腫瘍細胞を含む、項目1乃至17の何れかに記載の遺伝子改変免疫不全非ヒト動物。
項目19. 抗癌治療剤の又は推定抗癌治療剤の評価用の非ヒト動物モデル系を作製する方法であって、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含む非ヒト遺伝子改変免疫不全動物であり、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられる非ヒト遺伝子改変免疫不全動物を提供することと、異種移植腫瘍細胞を非ヒト遺伝子改変免疫不全動物に投与することと、を含む方法。
項目20. 非ヒト遺伝子改変免疫不全動物は、重症複合免疫不全を有する、項目19記載の方法。
項目21. 非ヒト遺伝子改変免疫不全動物は、IL2受容体ガンマ鎖欠乏を有する、項目19又は20記載の方法。
項目22. 非ヒト遺伝子改変免疫不全動物は、組換え活性化遺伝子1欠乏を有する、項目19、20、又は21の何れかに記載の方法。
項目23. 非ヒト遺伝子改変免疫不全動物は、組換え活性化遺伝子2欠乏を有する、項目19乃至22の何れかに記載の方法。
項目24. 非ヒト遺伝子改変免疫不全動物は、マウスである、項目19乃至23の何れかに記載の方法。
項目25. マウスは、scid変異を含み、重症複合免疫不全を有するNODマウスである、項目24記載の方法。
項目26. NODマウスは、scid変異についてホモ接合性であり、重症複合免疫不全を有する、項目25記載の方法。
項目27. マウスは、Rag1変異を含み、RAG1欠乏を有するNODマウスである、項目24、25、又は26の何れかに記載の方法。
項目28. NODマウスは、Rag1変異についてホモ接合性であり、RAG1欠乏を有する、項目24乃至27の何れかに記載の方法。
項目29. マウスは、Rag1tm1Mom変異を含み、RAG1欠乏を有するNODマウスである、項目24乃至28の何れかに記載の方法。
項目30. NODマウスは、Rag1tm1Mom変異についてホモ接合性であり、RAG1欠乏を有する、項目24乃至29の何れかに記載の方法。
項目30. マウスは、NSG-Hc1マウスである、項目24乃至26の何れかに記載の方法。
項目31. マウスは、NRG-Hc1マウスである、項目24及び27乃至30の何れかに記載の方法。
項目32. マウスは、NOG-Hc1マウスである、項目24記載の方法。
項目33. 異種移植腫瘍細胞は、ヒト異種移植腫瘍細胞である、項目19乃至32の何れかに記載の方法。
項目34. 異種移植腫瘍細胞は、細胞株の異種移植腫瘍細胞である、項目19乃至33の何れかに記載の方法。
項目35. 抗癌治療剤の又は推定抗癌治療剤の効果を評価する方法であって、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含む非ヒト遺伝子改変免疫不全動物であり、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられる非ヒト遺伝子改変免疫不全動物を提供することと、異種移植腫瘍細胞を非ヒト遺伝子改変免疫不全動物に投与することと、抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤を動物に投与することと、抗癌治療剤に対する異種移植腫瘍細胞の応答をアッセイすることと、を含む方法。
項目36. 抗癌治療剤又は推定抗癌治療剤は、抗体である、項目35記載の方法。
項目37. 非ヒト遺伝子改変免疫不全動物は、重症複合免疫不全を有する、項目35又は36記載の方法。
項目38. 非ヒト遺伝子改変免疫不全動物は、IL2受容体ガンマ鎖欠乏を有する、項目35、36、又は37記載の方法。
項目39. 非ヒト遺伝子改変免疫不全動物は、組換え活性化遺伝子1欠乏を有する、項目35乃至38の何れかに記載の方法。
項目40. 非ヒト遺伝子改変免疫不全動物は、組換え活性化遺伝子2欠乏を有する、項目35乃至39の何れかに記載の方法。
項目41. 非ヒト遺伝子改変免疫不全動物は、マウスである、項目35乃至40の何れかに記載の方法。
項目42. マウスは、scid変異を含み、重症複合免疫不全を有するNODマウスである、項目41記載の方法。
項目43. NODマウスは、scid変異についてホモ接合性であり、重症複合免疫不全を有する、項目41又は42記載の方法。
項目44. マウスは、Rag1tm1Mom変異を含み、RAG1欠乏を有するNODマウスである、項目41、42、又は43の何れかに記載の方法。
項目45. NODマウスは、Rag1tm1Mom変異についてホモ接合性であり、RAG1欠乏を有する、項目41乃至44の何れかに記載の方法。
項目46. マウスは、NSG-Hc1マウスである、項目41、42、又は43の何れかに記載の方法。
項目47. マウスは、NRG-Hc1マウスである、項目41、44、又は45の何れかに記載の方法。
項目48. 異種移植腫瘍細胞は、ヒト異種移植腫瘍細胞である、項目35乃至47の何れかに記載の方法。
項目49. 異種移植腫瘍細胞は、細胞株の異種移植腫瘍細胞である、項目35乃至48の何れかに記載の方法。
項目50. 遺伝子改変NSGマウスであって、非ヒト動物のゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、実質的に本明細書に記載したように、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられる遺伝子改変NSGマウス。
項目51. 遺伝子改変NRGマウスであって、非ヒト動物のゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、実質的に本明細書に記載したように、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられる遺伝子改変NRGマウス。
項目52. 遺伝子改変NOGマウスであって、非ヒト動物のゲノムは、修復されたC5補体成分構造遺伝子を含み、実質的に本明細書に記載したように、C5補体成分構造遺伝子を発現すると共に無傷の補体系により特徴付けられる遺伝子改変NOGマウス。
項目53. 実質的に本明細書に記載の抗癌治療剤評価用の非ヒト動物モデル系を作製する方法。
項目54. 実質的に本明細書に記載の非ヒト動物モデル系における抗癌治療剤の効果を評価する方法。
【０３１０】
本明細書にて言及した任意の特許又は公表文献は、各公表文献について明確且つ個別に出典を明記することにより本願明細書の一部とすることを示したものとして、出典を明記することにより本願明細書の一部とする。
【０３１１】
本明細書に記載の本発明の非ヒト動物、組成物、及び方法は、好適な実施形態を例示的に現時点で表すものであり、本発明の範囲を限定するものではない。それらの変更及び他の用途は、当業者に想到されるであろう。こうした変更及び他の用途は、請求者に記載の本発明の範囲を逸脱することなく実施することができる。
【符号の説明】
【０３１２】
[図1]
β-chain: β-鎖
α-chain: α-鎖
Mutation at 216aa: 216aaでの変異
SRBC lysis %: SRBC溶解%
[図2]
Body weight change %: 体重変化%
Non-engrafted NSG: 非移植NSG
Time (in days): 時間(日数)
Survival %: 生存%
[図3]
Viable cells: 生存細胞
% of viable cells: 生存細胞の%
[図4]
Ovary: 卵巣
Kidney: 腎臓
【図１】
2018518960.tif 000003
【図２】
2018518960.tif 000004
【図３Ａ】
2018518960.tif 000005
2018518960.tif 000006
2018518960.tif 000007
【図３Ｂ】
2018518960.tif 000008
【図４】
2018518960.tif 000009
【配列表】
2018518960000001.app
【国際調査報告】
2018518960.tif 000010
2018518960.tif 000011