(57)【要約】  本発明は、ＣＤ３８を特異的に結合する抗体による免疫調節、及び固形腫瘍を有する患者の治療方法に関する。
2018527299.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
固形腫瘍を有する患者を治療する方法であって、治療的に有効な量のＣＤ３８を特異的に結合する抗体を、固形腫瘍の治療に十分な期間、それを必要とする患者に投与することを含む、方法。
【請求項２】
前記ＣＤ３８を特異的に結合する抗体が、前記患者における免疫応答を誘発する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記免疫応答がエフェクターＴ細胞（Ｔｅｆｆ）応答である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記Ｔｅｆｆ応答が、ＣＤ４＋Ｔ細胞又はＣＤ８＋Ｔ細胞によって媒介される、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記Ｔｅｆｆ応答が、前記ＣＤ８＋Ｔ細胞によって媒介される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記Ｔｅｆｆ応答が、前記ＣＤ８＋Ｔ細胞数の増加、ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖の増加、Ｔ細胞クローン増殖の増加、ＣＤ８＋メモリー細胞形成の増加、抗原依存性抗体産生の増加、サイトカイン産生の増加、ケモカイン産生の増加、又はインターロイキン産生の増加（細胞による）である、請求項３に記載の方法。
【請求項７】
前記ＣＤ３８を特異的に結合する抗体が、免疫サプレッサー細胞の機能を阻害する、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記免疫サプレッサー細胞が制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記Ｔｒｅｇが、ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍ  Ｔ細胞である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＴｒｅｇがＣＤ３８を発現する、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記Ｔｒｅｇの機能が前記Ｔｒｅｇを殺傷することによって阻害される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記Ｔｒｅｇを殺傷することが、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）によって媒介される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記免疫サプレッサー細胞が骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、請求項７に記載の方法。
【請求項１４】
前記ＭＤＳＣが、ＣＤ１１ｂ＋ＨＬＡＤＲ−ＣＤ１４−ＣＤ３３＋ＣＤ１５＋細胞である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記ＣＤ１１ｂ＋ＨＬＡＤＲ−ＣＤ１４−ＣＤ３３＋ＣＤ１５＋細胞がＣＤ３８を発現する、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記ＭＤＳＣの機能が前記ＭＤＳＣを殺傷することによって阻害される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
ＭＤＳＣの殺傷が、ＡＤＣＣによって媒介される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記免疫サプレッサー細胞が制御性Ｂ細胞（Ｂｒｅｇ）である、請求項７に記載の方法。
【請求項１９】
前記Ｂｒｅｇが、ＣＤ１９＋ＣＤ２４＋ＣＤ３８＋細胞である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記Ｂｒｅｇの機能が前記Ｂｒｅｇを殺傷することによって阻害される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記Ｂｒｅｇを殺傷することが、ＡＤＣＣによって媒介される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記免疫サプレッサー細胞が、骨髄又は末梢血中に存在する、請求項７に記載の方法。
【請求項２３】
前記固形腫瘍が、黒色腫、肺癌、扁平上皮非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、非扁平上皮ＮＳＣＬＣ、結腸直腸癌、前立腺癌、去勢抵抗性前立腺癌、胃癌（stomach cancer）、卵巣癌、胃癌（gastric cancer）、肝癌、膵臓癌、甲状腺癌、頭頸部の扁平上皮癌、食道又は胃腸管の癌腫、乳癌、卵管癌、脳癌、尿道癌、尿生殖器癌、子宮内膜症、子宮頸癌、又は前記癌の転移巣である、請求項１〜２２のいずれかに記載の方法。
【請求項２４】
前記固形腫瘍が、検出可能なＣＤ３８発現を欠いている、請求項１〜２３のいずれかに記載の方法。
【請求項２５】
前記ＣＤ３８を特異的に結合する抗体が非アゴニスト抗体である、請求項１〜２４のいずれかに記載の方法。
【請求項２６】
前記非アゴニスト抗体が、統計的に有意でない様式で、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの末梢血単核球サンプルの増殖を誘導する、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記ＣＤ３８を特異的に結合する抗体が、配列番号４の重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号５の軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体と、ＣＤ３８への結合に関して競合する、請求項１〜２６のいずれかに記載の方法。
【請求項２８】
前記ＣＤ３８を特異的に結合する抗体が、ヒトＣＤ３８（配列番号１）の少なくとも領域ＳＫＲＮＩＱＦＳＣＫＮＩＹＲ（配列番号２）、及び領域ＥＫＶＱＴＬＥＡＷＶＩＨＧＧ（配列番号３）に結合する、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記ＣＤ３８を特異的に結合する抗体が、それぞれ配列番号６、７、８、９、１０及び１１の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む、請求項１〜２８のいずれかに記載の方法。
【請求項３０】
前記ＣＤ３８を特異的に結合する抗体が、配列番号４のＶＨ及び配列番号５のＶＬを含む、請求項１〜２９のいずれかに記載の方法。
【請求項３１】
前記ＣＤ３８を特異的に結合する抗体が、
ａ）配列番号１４のＶＨ及び配列番号１５のＶＬ、
ｂ）配列番号１６のＶＨ及び配列番号１７のＶＬ、
ｃ）配列番号１８のＶＨ及び配列番号１９のＶＬ、又は
ｄ）配列番号２０のＶＨ及び配列番号２１のＶＬの、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、請求項１〜２６のいずれかに記載の方法。
【請求項３２】
前記ＣＤ３８を特異的に結合する抗体が、
ａ）配列番号１４のＶＨ及び配列番号１５のＶＬ、
ｂ）配列番号１６のＶＨ及び配列番号１７のＶＬ、
ｃ）配列番号１８のＶＨ及び配列番号１９のＶＬ、又は
ｄ）配列番号２０のＶＨ及び配列番号２１のＶＬを含む、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記ＣＤ３８を特異的に結合する抗体が、第２の治療薬と併用して投与される、請求項１〜３２のいずれかに記載の方法。
【請求項３４】
前記第２の治療薬が、化学療法薬、癌標的療法、固形腫瘍の治療用の標準治療薬、又は免疫チェックポイント阻害薬である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記免疫チェックポイント阻害薬が、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＰＤ−Ｌ２抗体、抗ＬＡＧ３抗体、抗ＴＩＭ３抗体、又は抗ＣＴＬＡ−４抗体である、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記免疫チェックポイント阻害薬が抗ＰＤ−１抗体である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記抗ＰＤ−１抗体が、
ａ）配列番号２２のＶＨ及び配列番号２３のＶＬ、
ｂ）配列番号２４のＶＨ及び配列番号２５のＶＬ、
ｃ）配列番号３２のＶＨ及び配列番号３３のＶＬ、又は
ｄ）配列番号３４のＶＨ及び配列番号３５のＶＬを含む、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記免疫チェックポイント阻害薬が抗ＰＤ−Ｌ１抗体である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３９】
前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、
ａ）配列番号２６のＶＨ及び配列番号２７のＶＬ、
ｂ）配列番号２８のＶＨ及び配列番号２９のＶＬ、又は
ｃ）配列番号３０のＶＨ及び配列番号３１のＶＬを含む、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記免疫チェックポイント阻害薬が抗ＰＤ−Ｌ２抗体である、請求項３５に記載の方法。
【請求項４１】
前記免疫チェックポイント阻害薬が抗ＬＡＧ３抗体である、請求項３５に記載の方法。
【請求項４２】
前記免疫チェックポイント阻害薬が抗ＴＩＭ−３抗体である、請求項３５に記載の方法。
【請求項４３】
前記抗ＴＩＭ−３抗体が、
ａ）配列番号３６のＶＨ及び配列番号３７のＶＬ、又は
ｂ）配列番号３８のＶＨ及び配列番号３９のＶＬを含む、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記第２の治療薬が、同時に、順次、又は別々に投与される、請求項３３〜４３のいずれかに記載の方法。
【請求項４５】
前記ＣＤ３８を特異的に結合する抗体が静脈内に投与される、請求項１〜４４のいずれかに記載の方法。
【請求項４６】
前記ＣＤ３８を特異的に結合する抗体が、前記ＣＤ３８を特異的に結合する抗体と、ヒアルロニダーゼと、を含む、医薬組成物中で、皮下に投与される、請求項１〜４４のいずれかに記載の方法。
【請求項４７】
前記ヒアルロニダーゼが配列番号４０のｒＨｕＰＨ２０である、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
前記患者が放射線療法で治療されるか、又は既に治療されている、請求項１〜４７のいずれかに記載の方法。
【請求項４９】
前記患者が手術を受けたか、又は後に受ける、請求項１〜４７のいずれかに記載の方法。
【請求項５０】
免疫サプレッサー細胞の活性を抑制する方法であって、前記免疫抑制細胞を、ＣＤ３８を特異的に結合する抗体と接触させることを含む、方法。
【請求項５１】
前記免疫サプレッサー細胞がＴｒｅｇである、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記Ｔｒｅｇが、ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍ  Ｔ細胞である、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
前記免疫サプレッサー細胞がＭＤＳＣである、請求項５０に記載の方法。
【請求項５４】
前記ＭＤＳＣが、ＣＤ１１ｂ＋ＨＬＡＤＲ−ＣＤ１４−ＣＤ３３＋ＣＤ１５＋細胞である、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記免疫サプレッサー細胞がＢｒｅｇである、請求項５０に記載の方法。
【請求項５６】
前記Ｂｒｅｇが、ＣＤ１９＋ＣＤ２４＋ＣＤ３８＋細胞である、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
前記ＣＤ３８を特異的に結合する抗体が非アゴニスト抗体である、請求項５０〜５６のいずれかに記載の方法。
【請求項５８】
前記非アゴニスト抗体が、統計的に有意でない様式で、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの末梢血単核球サンプルの増殖を誘導する、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
前記ＣＤ３８を特異的に結合する抗体が、配列番号４のＶＨ及び配列番号５のＶＬを含む抗体と、ＣＤ３８への結合に関して競合する、請求項５０〜５８のいずれかに記載の方法。
【請求項６０】
前記ＣＤ３８を特異的に結合する抗体が、ヒトＣＤ３８（配列番号１）の少なくとも領域ＳＫＲＮＩＱＦＳＣＫＮＩＹＲ（配列番号２）、及び領域ＥＫＶＱＴＬＥＡＷＶＩＨＧＧ（配列番号３）に結合する、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
前記ＣＤ３８を特異的に結合する抗体が、それぞれ配列番号６、７、８、９、１０及び１１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む、請求項５０〜６０のいずれかに記載の方法。
【請求項６２】
前記ＣＤ３８を特異的に結合する抗体が、配列番号４のＶＨ及び配列番号５のＶＬを含む、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
前記ＣＤ３８を特異的に結合する抗体が、
ａ）配列番号１４のＶＨ及び配列番号１５のＶＬ、
ｂ）配列番号１６のＶＨ及び配列番号１７のＶＬ、
ｃ）配列番号１８のＶＨ及び配列番号１９のＶＬ、又は
ｄ）配列番号２０のＶＨ及び配列番号２１のＶＬの、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、請求項５０〜５８のいずれかに記載の方法。
【請求項６４】
前記ＣＤ３８を特異的に結合する抗体が、
ａ）配列番号１４のＶＨ及び配列番号１５のＶＬ、
ｂ）配列番号１６のＶＨ及び配列番号１７のＶＬ、
ｃ）配列番号１８のＶＨ及び配列番号１９のＶＬ、又は
ｄ）配列番号２０のＶＨ及び配列番号２１のＶＬを含む、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
患者における免疫応答を増強する方法であって、ＣＤ３８を特異的に結合する抗体を前記患者に投与することを含む、方法。
【請求項６６】
前記患者が癌又はウイルス感染を有する、請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
前記ＣＤ３８を特異的に結合する抗体が非アゴニスト抗体である、請求項６５又は６６に記載の方法。
【請求項６８】
前記非アゴニスト抗体が、統計的に有意でない様式で、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの末梢血単核球サンプルの増殖を誘導する、請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
前記ＣＤ３８を特異的に結合する抗体が、配列番号４のＶＨ及び配列番号５のＶＬを含む抗体と、ＣＤ３８への結合に関して競合する、請求項６５〜６８のいずれかに記載の方法。
【請求項７０】
前記ＣＤ３８を特異的に結合する抗体が、ヒトＣＤ３８（配列番号１）の少なくとも領域ＳＫＲＮＩＱＦＳＣＩＹＲ（配列番号２）、及び領域ＥＫＶＱＴＬＥＡＷＶＩＨＧＧ（配列番号３）に結合する、請求項６５〜６９のいずれかに記載の方法。
【請求項７１】
前記ＣＤ３８を特異的に結合する抗体が、それぞれ配列番号６、７、８、９、１０及び１１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む、請求項６５〜７０のいずれかに記載の方法。
【請求項７２】
前記ＣＤ３８を特異的に結合する抗体が、配列番号４のＶＨ及び配列番号５のＶＬを含む、請求項６５〜７０のいずれかに記載の方法。
【請求項７３】
前記ＣＤ３８を特異的に結合する抗体が、
ａ）配列番号１４のＶＨ及び配列番号１５のＶＬ、
ｂ）配列番号１６のＶＨ及び配列番号１７のＶＬ、
ｃ）配列番号１８のＶＨ及び配列番号１９のＶＬ、又は
ｄ）配列番号２０のＶＨ及び配列番号２１のＶＬの、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、請求項６５〜６８のいずれかに記載の方法。
【請求項７４】
前記ＣＤ３８を特異的に結合する抗体が、
ａ）配列番号１４のＶＨ及び配列番号１５のＶＬ、
ｂ）配列番号１６のＶＨ及び配列番号１７のＶＬ、
ｃ）配列番号１８のＶＨ及び配列番号１９のＶＬ、又は
ｄ）配列番号２０のＶＨ及び配列番号２１のＶＬを含む、請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
ウイルス感染を有する患者を治療する方法であって、ＣＤ３８を特異的に結合する抗体を、前記ウイルス感染の治療に十分な期間、前記患者に投与することを含む、方法。
【請求項７６】
前記ＣＤ３８を特異的に結合する抗体が非アゴニスト抗体である、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
前記非アゴニスト抗体が、統計的に有意でない様式で、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの末梢血単核球サンプルの増殖を誘導する、請求項７５又は７６に記載の方法。
【請求項７８】
前記ＣＤ３８を特異的に結合する抗体が、配列番号４のＶＨ及び配列番号５のＶＬを含む抗体と、ＣＤ３８への結合に関して競合する、請求項７５〜７７のいずれかに記載の方法。
【請求項７９】
前記ＣＤ３８を特異的に結合する抗体が、ヒトＣＤ３８（配列番号１）の少なくとも領域ＳＫＲＮＩＱＦＳＣＩＹＲ（配列番号２）、及び領域ＥＫＶＱＴＬＥＡＷＶＩＨＧＧ（配列番号３）に結合する、請求項７５〜７８のいずれかに記載の方法。
【請求項８０】
前記ＣＤ３８を特異的に結合する抗体が、それぞれ配列番号６、７、８、９、１０及び１１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む、請求項７５〜７９のいずれかに記載の方法。
【請求項８１】
前記ＣＤ３８を特異的に結合する抗体が、配列番号４のＶＨ及び配列番号５のＶＬを含む、請求項７５〜８０のいずれかに記載の方法。
【請求項８２】
前記ＣＤ３８を特異的に結合する抗体が、
ａ）配列番号１４のＶＨ及び配列番号１５のＶＬ、
ｂ）配列番号１６のＶＨ及び配列番号１７のＶＬ、
ｃ）配列番号１８のＶＨ及び配列番号１９のＶＬ、又は
ｄ）配列番号２０のＶＨ及び配列番号２１のＶＬの、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、請求項７５〜７７のいずれかに記載の方法。
【請求項８３】
前記ＣＤ３８を特異的に結合する抗体が、
ａ）配列番号１４のＶＨ及び配列番号１５のＶＬ、
ｂ）配列番号１６のＶＨ及び配列番号１７のＶＬ、
ｃ）配列番号１８のＶＨ及び配列番号１９のＶＬ、又は
ｄ）配列番号２０のＶＨ及び配列番号２１のＶＬを含む、請求項８２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＣＤ３８を特異的に結合する抗体による免疫調節及び固形腫瘍の治療方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
免疫系は、共刺激性かつ共抑制性のリガンド及び受容体のネットワークによって厳重に管理されている。これらの分子は、Ｔ細胞活性化に対する二次シグナルを出し、正及び負のシグナルのバランスが取れているネットワークをもたらして、感染及び腫瘍に対する免疫応答を最大化する一方で、自己に対する免疫性を制限する（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，（Ｅｐｕｂ  Ｍａｒ．７，２０１１）Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  ２０８（３）：５７７〜９２、Ｌｅｐｅｎｉｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）Ｅｎｄｏｃｒ  Ｍｅｔａｂ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｄｉｓｏｒｄ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ  ８：２７９〜２８８）。
【０００３】
固形腫瘍を治療するための免疫チェックポイント療法は、抗腫瘍性免疫応答を促進するＴ細胞中の共抑制経路を標的としており、抗ＣＴＬＡ−４及び抗ＰＤ−１抗体である、ＹＥＲＶＯＹ（登録商標）（イピリムマブ）、ＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標）（ペンブロリズマブ）及びＯＰＤＩＶＯ（登録商標）（ニボルマブ）の承認によって、癌患者の臨床ケアの進歩につながっている。抗ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１抗体は、複数の固形腫瘍を有する患者における良好な臨床反応が明らかになっているが、その奏効率は依然として相当低く、予め治療を受けた患者において約１５％〜２０％である（Ｓｗａｉｋａ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１５）Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｍｏｌｉｍｍ．２０１５．０２．００９）。
【０００４】
ナチュラルキラー細胞（ＮＫ）、樹状細胞（ＤＣ）及びエフェクターＴ細胞は、強い抗腫瘍応答を引き起こすことができるが、腫瘍細胞は免疫抑制性微小環境を備えることが多く、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）又は制御性Ｂ細胞（Ｂｒｅｇ）などの免疫細胞の免疫抑制性集団の発生に都合がよいため、腫瘍免疫寛容と、癌患者及び実験的腫瘍モデルにおける免疫療法レジメンの失敗の一因となる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
したがって、腫瘍に対する適応免疫応答を誘発する、又は、免疫抑制性免疫細胞を標的とする、新たな癌免疫療法を開発する必要性が残っている。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、治療的に有効な量のＣＤ３８を特異的に結合する抗体を、それを必要とする患者に投与することを含む、固形腫瘍を有する患者を治療する方法を提供する。
【０００７】
本発明はまた、治療的に有効な量のＣＤ３８を特異的に結合する抗体を、それを必要とする患者に投与することを含む、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）介在性疾患を有する患者を治療する方法も提供する。
【０００８】
本発明はまた、治療的に有効な量のＣＤ３８を特異的に結合する抗体を、それを必要とする患者に投与することを含む、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）介在性疾患を有する患者を治療する方法も提供する。
【０００９】
本発明はまた、治療的に有効な量のＣＤ３８を特異的に結合する抗体を、それを必要とする患者に投与することを含む、制御性Ｂ細胞（Ｂｒｅｇ）介在性疾患を有する患者を治療する方法も提供する。
【００１０】
本発明はまた、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）をＣＤ３８を特異的に結合する抗体と接触させることを含む、Ｔｒｅｇの活性を抑制する方法も提供する。
【００１１】
本発明はまた、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）をＣＤ３８を特異的に結合する抗体と接触させることを含む、ＭＤＳＣの活性を抑制する方法も提供する。
【００１２】
本発明はまた、制御性Ｂ細胞（Ｂｒｅｇ）をＣＤ３８を特異的に結合する抗体と接触させることを含む、Ｂｒｅｇの活性を抑制する方法も提供する。
【００１３】
本発明はまた、ＣＤ３８を特異的に結合する抗体を患者に投与することを含む、患者における免疫応答を増強する方法も提供する。
【００１４】
本発明はまた、ＣＤ３８を特異的に結合する抗体を患者に投与することによって、患者におけるＴｒｅｇ細胞数を低下させることを含む、固形腫瘍を有する患者を治療する方法も提供する。
【００１５】
本発明はまた、ＣＤ３８を特異的に結合する抗体を患者に投与することによって、患者における骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）数を低下させることを含む、固形腫瘍を有する患者を治療する方法も提供する。
【００１６】
本発明はまた、免疫抑制細胞（immune suppressing cell）をＣＤ３８を特異的に結合する抗体と接触させることを含む、免疫サプレッサー細胞の活性を抑制する方法も提供する。
【００１７】
本発明はまた、ＣＤ３８を特異的に結合する抗体を、それを必要とする患者に投与することを含む、ウイルス感染を有する患者を治療する方法も提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】リンパ球の中央値が、８ｍｇ／ｋｇ（上側線）又は１６ｍｇ／ｋｇ（下側線）の用量でのＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）治療を受けた患者において経時的に増加しており、リンパ球数が治療終了後に基準値に戻ったことを示す。試験名：ＳＩＲＩＵＳ。Ｘ軸は、治療サイクルと各治療サイクル内の投与日で表した（Ｃ１Ｄ１：１サイクル目、１日目、Ｃ１Ｄ４：１サイクル目、４日目など）時間を示す。ＳＣＲ：基準値、ＥＯＴ：治療終了、ＷＫ：週、ＰＯＳＴ−ＷＫ：治療後の示した週、ｐｏｓｔ−ＰＤ  ＦＵ：悪化後の経過観察。灰色の陰でハイライトした領域は、レスポンダーのそれぞれの通院時のデータ点に対する、２５〜２７％四分位範囲（ＩＱＲ）を示す。
【図２】個々の患者（明灰色線）について、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）で治療した患者の末梢血中の、ＣＤ３＋Ｔ細胞の絶対数の基準値に対する変化パーセント（％）を示す。試験名：ＳＩＲＩＵＳ（ＭＭＹ２００２）。Ｘ軸は、治療サイクルと各治療サイクル内の投与日で表した（Ｃ１Ｄ１：１サイクル目、１日目、Ｃ１Ｄ４：１サイクル目、４日目など）時間を示す。ＷＫ：週、ＰＯＳＴ−ＷＫ：治療後の示した週、ＰＯＳＴ−ＰＤ  ＦＵ：悪化後の経過観察。黒色線は、全患者の変化％の中央値を示す。
【図３】個々の患者（明灰色線）について、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）で治療した患者の末梢血中の、ＣＤ４＋Ｔ細胞の絶対数の基準値に対する変化パーセント（％）を示す。試験名：ＳＩＲＩＵＳ。Ｘ軸は、治療サイクルと各治療サイクル内の投与日で表した（Ｃ１Ｄ１：１サイクル目、１日目、Ｃ１Ｄ４：１サイクル目、４日目など）時間を示す。ＷＫ：週、ＰＯＳＴ−ＴＭＴ：治療後。黒色線は、全患者の変化％の中央値を示す。
【図４】個々の患者（明灰色線）について、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）で治療した患者の末梢血中の、ＣＤ８＋Ｔ細胞の絶対数の基準値に対する変化パーセント（％）を示す。試験名：ＳＩＲＩＵＳ。Ｘ軸は、治療サイクルと各治療サイクル内の投与日で表した（Ｃ１Ｄ１：１サイクル目、１日目、Ｃ１Ｄ４：１サイクル目、４日目など）時間を示す。ＷＫ：週、Ｐｒｅ−ＰＤ  ＦＵ：悪化前の経過観察、Ｐｏｓｔ−ＰＤ  ＦＵ：悪化後の経過観察。黒色線は、全患者の変化％の中央値を示す。
【図５】骨髄穿刺液中のＣＤ４５＋ＣＤ３＋細胞数（リンパ球の割合として測定）が、８ｍｇ／ｋｇ又は１６ｍｇ／ｋｇの用量でのＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）治療中に経時的に増加したことを示す。示されるように、このグラフはレスポンダーとノンレスポンダーの両方を含む。試験名：ＳＩＲＩＵＳ。Ｘ軸は、治療サイクルと各治療サイクル内の投与日で表した（Ｃ２Ｄ２２：２サイクル目、２２日目など）時間を示す。ＳＣＲ：基準値、Ｐｏｓｔ−ＰＤ  ＦＵ１：悪化後の経過観察。灰色の陰でハイライトした領域は、それぞれ８ｍｇ／ｋｇ用量のノンレスポンダー、１６ｍｇ／ｋｇ用量のレスポンダー、又は１６ｍｇ／ｋｇ用量のノンレスポンダーのそれぞれの通院時のデータ点に対する、２５〜２７％四分位範囲（ＩＱＲ）を示す。ＮＲ：ノンレスポンダー、Ｒ：レスポンダー。
【図６】骨髄穿刺液中のＣＤ４５＋ＣＤ３＋ＣＤ８＋細胞数（リンパ球の割合として測定）が、８ｍｇ／ｋｇ又は１６ｍｇ／ｋｇの用量でのＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）治療中に経時的に増加したことを示す。示されるように、このグラフはレスポンダーとノンレスポンダーの両方を含む。試験名：ＳＩＲＩＵＳ。Ｘ軸は、治療サイクルと各治療サイクル内の投与日で表した（Ｃ２Ｄ２２：２サイクル目、２２日目など）時間を示す。ＳＣＲ：基準値、Ｐｏｓｔ−ＰＤ  ＦＵ１：悪化後の経過観察。灰色の陰でハイライトした領域は、それぞれ８ｍｇ／ｋｇ用量のノンレスポンダー、１６ｍｇ／ｋｇ用量のレスポンダー、又は１６ｍｇ／ｋｇ用量のノンレスポンダーのそれぞれの通院時のデータ点に対する、２５〜２７％四分位範囲（ＩＱＲ）を示す。ＮＲ：ノンレスポンダー、Ｒ：レスポンダー。
【図７Ａ】全治療患者の中央値として表した、末梢血中のＣＤ８＋／Ｔｒｅｇ及びＣＤ８＋／ＣＤ４＋細胞比が、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）治療中に経時的に増加したことを示す。時点：Ｃ１Ｄ１：１サイクル目、日目（cycle 1 day）；Ｃ３Ｄ１：３サイクル目、１日目；Ｃ４Ｄ１：４サイクル目、１日目。試験名：ＳＩＲＩＵＳ。ＳＣＲ：基準値。
【図７Ｂ】全治療患者の中央値として表した、骨髄穿刺液中のＣＤ８＋／Ｔｒｅｇ細胞比が、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）治療中に経時的に増加したことを示す。時点：Ｃ１Ｄ１：１サイクル目、日目；Ｃ３Ｄ１：３サイクル目、１日目；Ｃ４Ｄ１：４サイクル目、１日目。試験名：ＳＩＲＩＵＳ。
【図８Ａ】特定のクローン細胞の存在量変化（ＣＩＡ）％を用いて測定するとき、ノンレスポンダーと比較すると、レスポンダーのＣＤ８＋Ｔ細胞クローン性が増加していたことを示す。試験名：ＧＥＮ５０１、１７例の患者のサブセット。
【図８Ｂ】ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）治療前と治療後を比較した、個々の患者のＣＤ８＋Ｔ細胞クローン性の倍率変化を示す。レスポンダーは星印で示す。クローン性は、特定のクローン細胞の存在量倍率変化（ＣＩＡ）で測定した。試験名：ＧＥＮ５０１、１７例の患者のサブセット。
【図８Ｃ】ノンレスポンダー（Ｂ群）と比較すると、レスポンダー（Ａ群）では、ＣＩＡ（存在量変化）を用いて測定した、ＴＣＲレパートリーの総増殖量が大きかったことを示す。Ｐ＝０．０３７。試験名：ＧＥＮ５０１、１７例の患者のサブセット。
【図８Ｄ】それぞれの増殖したＴ細胞クローンについて、レスポンダー及びノンレスポンダーでの存在量変化（ＣＩＡ）の絶対値の合計を示す。レスポンダー（Ａ群）とノンレスポンダー（Ｂ群）との間のＰ＝０．０３５。試験名：ＧＥＮ５０１、１７例の患者のサブセット。
【図８Ｅ】レスポンダー（Ａ群）及びノンレスポンダー（Ｂ群）における、単一Ｔ細胞クローンの最大ＣＩＡを示す。試験名：ＧＥＮ５０１、１７例の患者のサブセット。
【図８Ｆ】ノンレスポンダー（Ｂ群）と比較すると、レスポンダー（Ａ群）では、最大ＣＩＡ％を用いて測定した、単一クローンの最大増殖量が大きかったことを示す。Ｐ＝０．０４７７。試験名：ＧＥＮ５０１、１７例の患者のサブセット。
【図９Ａ】基準値、又は治療２週目、４週目若しくは８週目、又は再発後における、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）に対してノンレスポンダー（ＮＲ、黒色四角）及び少なくとも最小奏功を示す患者（ＭＲ、白色四角）の末梢血中の、ＣＤ８＋ナイーブ細胞の割合（％）を示す。試験名：ＧＥＮ５０１、１７例の患者のサブセット。＊＊ｐ＝１．８２×１０−４。
【図９Ｂ】基準値、又は治療２週目、４週目若しくは８週目、又は再発後における、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）に対してノンレスポンダー（ＮＲ、黒色四角）及び少なくとも最小奏功を示す患者（ＭＲ、白色四角）の末梢血中の、ＣＤ８＋セントラルメモリー細胞（Ｔｅｍ）の割合を示す。試験名：ＧＥＮ５０１、１７例の患者のサブセット。＊ｐ＝４．８８×１０−２。
【図９Ｃ】基準値、又は治療１、４若しくは８週目、又は再発後における、末梢血中のＨＬＡクラスＩに拘束されたＣＤ８＋Ｔ細胞の増加割合を示す。試験名：ＧＥＮ５０１、１７例の患者のサブセット。
【図９Ｄ】基準値（bassline）又は治療中では、末梢血中のＣＤ８＋ナイーブＴ細胞及びＣＤ８＋セントラルメモリー細胞（Ｔｅｍ）において、ＣＤ３８が低レベルで発現していることを示す。試験名：ＧＥＮ５０１、１７例の患者のサブセット。ＭＦＩ：平均蛍光強度。
【図１０Ａ】基準値の多発性骨髄腫患者における、Ｔｒｅｇ（ＣＤ３＋ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍの頻度（上のヒストグラム、Ｐ４細胞集団）と、Ｔｒｅｇ集団内のＣＤ３８＋Ｔｒｅｇの頻度（下のヒストグラム、Ｐ５細胞集団）を示している、ＦＡＣＳ解析のヒストグラムを示す。試験名：ＧＥＮ５０１、１７例の患者のサブセット。
【図１０Ｂ】ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）治療後の多発性骨髄腫患者における、Ｔｒｅｇ（ＣＤ３＋ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍの頻度（上のヒストグラム、Ｐ４細胞集団）と、Ｔｒｅｇ集団内のＣＤ３８＋Ｔｒｅｇの頻度（下のヒストグラム、Ｐ５細胞集団）を示している、ＦＡＣＳ解析のヒストグラムを示す。ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）治療により、ＣＤ３８＋Ｔｒｅｇが枯渇した。試験名：ＧＥＮ５０１、１７例の患者のサブセット。
【図１０Ｃ】は、基準値、又は１週目、４週目、８週目、再発後、又は６ヶ月目の治療終了時（ＥＯＴ）における、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）で治療した患者のＣＤ３８ｈｉｇｈＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍ  Ｔｒｅｇの頻度を示す。ＣＤ３８ｈｉｇｈＴｒｅｇの頻度は、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）治療によって低下し、ＥＯＴ時点で基準値まで戻った。Ｙ軸：ＣＤ３８ｈｉｇｈＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍ  Ｔｒｅｇ（ＣＤ３＋Ｔ細胞由来）の％。試験名：ＧＥＮ５０１、１７例の患者のサブセット。
【図１０Ｄ】基準値、治療１週目、４週目及び８週目における、レスポンダー及びノンレスポンダーのＣＤ８＋／Ｔｒｅｇ細胞比を示す。ＣＤ８＋／Ｔｒｅｇ細胞比は、治療８週目において、レスポンダーではノンレスポンダーに対して有意に高かった（ｐ＝０．００９５５）。試験名：ＧＥＮ５０１、１７例の患者のサブセット。
【図１０Ｅ】エフェクター細胞の増殖が、ＣＤ３８＋Ｔｒｅｇの存在下において、ＣＤ３８−Ｔｒｅｇ又は陰性対照と比較して、より効果的に阻害されることを示す。エラーバーは、標準誤差を表す。アスタリスクは、有意な変化を示す。サンプルは、複数の健康なドナーから入手した。細胞増殖は、カルボキシフルオセインサクシニミジルエステル（ＣＦＳＥ）の希釈によって評価した。
【図１１】骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）が、多発性骨髄腫患者において存在し（上のグラフ、四角で囲んだ細胞）、その細胞のうち約半分がＣＤ３８を発現していた（中央のグラフ、四角で囲んだ細胞）ことを示す。ＣＤ３８ｈｉｇｈ  ＭＤＳＣ集団は、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）を１回点滴治療した患者では枯渇した（下のグラフ、四角で囲んだ細胞）。試験名：ＧＥＮ５０１、１７例の患者のサブセット。
【図１２】ＣＤ３８ｈｉｇｈ  ＭＤＳＣ（ＣＤ１１ｂ＋ＨＬＡＤＲ−ＣＤ１４−ＣＤ３３＋ＣＤ１５＋）の数が、基準値と比較して、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）による治療１週目、４週目又は８週目の患者では低下しており、治療終了後（ＥＯＴ）に基準値付近まで戻ったことを示す。再発した患者は、依然としてＣＤ３８ｈｉｇｈ  ＭＤＳＣの低下を示していた。黒色四角：ノンレスポンダー；白色四角：ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）治療に対し少なくとも最小奏功を示した患者。縦線は、各群における中央値を示す。患者２、４、１５、１６及び１７は、ＣＤ３８ｈｉｇｈ  ＭＤＳＣ集団の初期高値を示した。試験名：ＧＥＮ５０１、１７例の患者のサブセット。
【図１３】最も高いＣＤ３８ｈｉｇｈ  ＭＤＳＣを有する患者（患者２、４、１５、１６及び１７）では、無増悪生存期間（ＰＦＳ）が最も長かったことを示す。これらの患者は、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）治療に対して、部分奏功（ＰＲ）又は最小奏功（ＭＲ）のいずれかであった。ＳＤ：安定；ＰＤ：進行。Ｘ軸は、個々の番号の患者に対するＰＦＳを示す。
【図１４】ＭＤＳＣが、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）誘発性ＡＤＣＣに対して感受性があることを示す。Ｄａｕｄｉ細胞を、アッセイにおける標的細胞の陽性対照として使用した。細胞溶解％を測定した。
【図１５Ａ】ＣＤ３８＋Ｂｒｅｇが、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）によって治療された患者において、治療１週目、４週目及び８週目に枯渇したことを示す。
【図１５Ｂ】ＣＤ３８＋Ｂｒｅｇが、刺激によってＩＬ−１０を分泌することを示す。
【図１６Ａ】治療中、基準値及び示した時点においてＶＧＰＲであった、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）で治療した患者由来のＰＢＭＣ中の、ＣＭＶ、ＥＢＶ及びインフルエンザウイルス特異的（ＣＥＦ）ＩＦＮ−γ産生によって測定される、抗ウイルス応答を示す。ＯＤ：光学密度。白色バー：陰性対照；黒色バー：ＣＥＦ添加；網掛けバー：同種ＰＢＭＣのみ。アスタリスク（Asterix）は、統計的に有意な変化を示す。Ｐｒｅ  ４、８、１０＝治療４週目、８週目、又は１０週目。
【図１６Ｂ】治療中、基準値及び示した時点においてＣＲであった、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）で治療した患者由来のＰＢＭＣ中の、ＣＭＶ、ＥＢＶ及びインフルエンザウイルス特異的（ＣＥＦ）ＩＦＮ−γ産生によって測定される、抗ウイルス応答を示す。ＯＤ：光学密度。白色バー：陰性対照；黒色バー：ＣＥＦ添加；網掛けバー：同種ＰＢＭＣのみ。アスタリスクは、統計的に有意な変化を示す。Ｐｒｅ  ４、８、１０＝治療４週目、８週目、又は１０週目。
【図１６Ｃ】治療中、基準値及び示した時点においてＰＤであった、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）で治療した患者由来のＰＢＭＣ中の、ＣＭＶ、ＥＢＶ及びインフルエンザウイルス特異的（ＣＥＦ）ＩＦＮ−γ産生によって測定される、抗ウイルス応答を示す。ＯＤ：光学密度。白色バー：陰性対照；黒色バー：ＣＥＦ添加；網掛けバー：同種ＰＢＭＣのみ。Ｎｓ：有意差なし。Ｐｒｅ  ４、８＝治療４週目、又は８週目。
【図１６Ｄ】治療中、基準値及び示した時点においてＭＲであった、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）で治療した患者由来のＰＢＭＣ中の、ＣＭＶ、ＥＢＶ及びインフルエンザウイルス特異的（ＣＥＦ）ＩＦＮ−γ産生によって測定される、抗ウイルス応答を示す。ＯＤ：光学密度。白色バー：陰性対照；黒色バー：ＣＥＦ添加；網掛けバー：同種ＰＢＭＣのみ。Ｎｓ：有意差なし。Ｐｒｅ  ４、８＝治療４週目、又は８週目。
【図１６Ｅ】治療中、基準値及び示した時点においてＶＧＰＲであった、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）で治療した患者由来のＰＢＭＣ中の、増殖性ウイルス反応性Ｔ細胞の割合（％）を示す。白色バー：陰性対照；黒色バー：ＣＥＦ添加。アスタリスクは、統計的に有意な変化を示す。Ｐｒｅ  ４、８、１０＝治療４週目、８週目、又は１０週目。
【図１６Ｆ】治療中、基準値及び示した時点においてＣＲであった、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）で治療した患者由来のＰＢＭＣ中の、増殖性ウイルス反応性Ｔ細胞の割合（％）を示す。白色バー：陰性対照；黒色バー：ＣＥＦ添加。アスタリスクは、統計的に有意な変化を示す。Ｐｒｅ  ４、８、１０＝治療４週目、８週目、又は１０週目。
【図１７Ａ】健康なドナー由来のナチュラルキラー細胞（ＮＫ）、単球、Ｂ細胞及びＴ細胞における、ＣＤ３８の発現レベルを示すＦＡＣＳ解析のヒストグラムを示す。
【図１７Ｂ】多発性骨髄腫患者由来の形質細胞、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ）、単球、Ｂ細胞及びＴ細胞における、ＣＤ３８の発現レベルを示すＦＡＣＳ解析のヒストグラムを示す。
【図１７Ｃ】再発及び治療抵抗性多発性骨髄腫患者由来のＣＤ３８＋Ｔｒｅｇ、Ｂｒｅｇ、ＮＫ、Ｂ細胞及びＴ細胞における、ＣＤ３８の平均蛍光強度（ＭＦＩ）の比較を示す。ＣＤ３８は、ＣＤ３８＋Ｔｒｅｇ、Ｂｒｅｇ及びＮＫ細胞と比較すると、Ｂ細胞及びＴ細胞において低レベルで発現した。
【図１８】経時的に、ＰＤ−Ｌ１タンパク質がレスポンダー（Ｒ）由来のＰＢＭＣサンプルにおいて下方制御され、ノンレスポンダー（ＮＲ）において上方制御されることを示す。ＳＤ：安定。Ｃ１Ｄ１：１サイクル目、１日目；Ｃ３Ｄ１、３サイクル目、１日目。Ｙ軸は、ｌｏｇ２タンパク質濃度値を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
本明細書及び添付の「特許請求の範囲」において使用されるとき、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、その内容について別段の明確な指示がない限り、複数の指示対象を包含する。したがって、例えば、「細胞（a cell）」という言及には、２つ以上の細胞の組み合わせ、及びこれに類するものなどを含む。
【００２０】
「ＣＤ３８」は、ヒトＣＤ３８タンパク質（同義語：ＡＤＰリボシルシクラーゼ１、ｃＡＤＰｒヒドロラーゼ１、環状ＡＤＰリボースヒドロラーゼ１）を指す。ヒトＣＤ３８は、ＧｅｎＢａｎｋ受入れ番号ＮＰ  ００１７６６に、及び配列番号１に示されているアミノ酸配列を有する。ＣＤ３８が、細胞質ドメインを表すアミノ酸配列１〜２１と、膜貫通ドメインを表すアミノ酸配列２２〜４２と、ＣＤ３８の細胞外ドメインを表す残基４３〜３００と、を有する単一パスタイプＩＩ膜タンパク質であることは周知である。
【００２１】
配列番号１
ＭＡＮＣＥＦＳＰＶＳＧＤＫＰＣＣＲＬＳＲＲＡＱＬＣＬＧＶＳＩＬＶＬＩＬＶＶＶＬＡＶＶＶＰＲＷＲＱＱＷＳＧＰＧＴＴＫＲＦＰＥＴＶＬＡＲＣＶＫＹＴＥＩＨＰＥＭＲＨＶＤＣＱＳＶＷＤＡＦＫＧＡＦＩＳＫＨＰＣＮＩＴＥＥＤＹＱＰＬＭＫＬＧＴＱＴＶＰＣＮＫＩＬＬＷＳＲＩＫＤＬＡＨＱＦＴＱＶＱＲＤＭＦＴＬＥＤＴＬＬＧＹＬＡＤＤＬＴＷＣＧＥＦＮＴＳＫＩＮＹＱＳＣＰＤＷＲＫＤＣＳＮＮＰＶＳＶＦＷＫＴＶＳＲＲＦＡＥＡＡＣＤＶＶＨＶＭＬＮＧＳＲＳＫＩＦＤＫＮＳＴＦＧＳＶＥＶＨＮＬＱＰＥＫＶＱＴＬＥＡＷＶＩＨＧＧＲＥＤＳＲＤＬＣＱＤＰＴＩＫＥＬＥＳＩＩＳＫＲＮＩＱＦＳＣＫＮＩＹＲＰＤＫＦＬＱＣＶＫＮＰＥＤＳＳＣＴＳＥＩ
【００２２】
本明細書で使用されるとき、「抗体」は、広義が意図され、マウス、ヒト、ヒト化、及びキメラ単クローン性抗体を含む単クローン性抗体、抗体断片、二重特異性抗体又は多重特異性抗体、二量体、四量体、若しくは多量体の抗体、一本鎖抗体、ドメイン抗体、及び必要とされる特異性の抗原結合部位を含む免疫グロブリン分子のいずれの他の修飾された構成も含む、免疫グロブリン分子を含む。
【００２３】
免疫グロブリンは、重鎖定常ドメインアミノ酸配列に応じて、５つの主要なクラス、すなわちＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭに割り当てられ得る。ＩｇＡ及びＩｇＧは、アイソタイプＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４に更に下位分類される。いずれの脊椎動物種の抗体軽鎖も、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて２つの明確に異なるタイプ、すなわちカッパ（κ）及びラムダ（λ）のうちの一方に分類することができる。
【００２４】
「抗体断片」とは、重鎖及び／又は軽鎖抗原結合部位、例えば、重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１、２、及び３、軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１、２、及び３、重鎖可変領域（ＶＨ）、又は軽鎖可変領域（ＶＬ）を保持する免疫グロブリン分子の一部を指す。抗体断片は、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、及びＣＨ１ドメインからなる一価の断片であるＦａｂ断片と、ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結される２つのＦａｂ断片を含む二価の断片であるＦ（ａｂ）２断片と、ＶＨ及びＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片と、抗体の一本のアームのＶＬ及びＶＨドメインからなるＦｖ断片と、ＶＨドメインからなる、ドメイン抗体（ｄＡｂ）断片（Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４〜６，１９８９）と、を含む。ＶＨドメイン及びＶＬドメインは、操作され、合成リンカーを介して一緒に連結して様々な種類の一本鎖抗体設計を形成することができ、ここでＶＨ／ＶＬドメインは、分子内で対合するか、又はＶＨドメイン及びＶＬドメインが別々の一本鎖抗体構築物によって発現される場合には分子間で対合して、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）又はダイアボディなどの一価の抗原結合部位を形成する。これらは、例えば、国際公開第１９９８／４４００１号、同第１９８８／０１６４９号、同第１９９４／１３８０４号、及び同第１９９２／０１０４７号に記載されている。これらの抗体断片は、当業者に周知の技術を使用して得られ、これらの断片は全長抗体の場合と同一の方法で、有用性に関してスクリーニングされる。
【００２５】
「単離抗体」は、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体又は抗体断片を指す（例えば、ＣＤ３８に特異的に結合する単離された抗体は、ヒトＣＤ３８以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない）。しかし、ヒトＣＤ３８を特異的に結合する単離抗体は、Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ（カニクイザル）ＣＤ３８など、ヒトＣＤ３８のオルソログなどの他の抗原に対して交差反応性を有する可能性がある。二重特異性抗体の場合、二重特異性抗体は、２種類の目的の抗原に特異的に結合し、この２種類の目的の抗原以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない。更に、単離抗体は、他の細胞物質及び／又は化学物質を実質的に含まない場合もある。「単離抗体」は、高純度で単離された抗体、例えば純度８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％である抗体を包含する。
【００２６】
「特異的結合」又は「特異的に結合する」又は「結合する」とは、他の抗原よりも高い親和性で抗原又は抗原内のエピトープに結合する抗体を指す。典型的には、抗体は、平衡解離定数（ＫＤ）が約１×１０−８Ｍ以下、例えば約１×１０−９Ｍ以下、約１×１０−１０Ｍ以下、約１×１０−１１Ｍ以下、又は約１×１０−１２Ｍ以下で抗原又は抗原内のエピトープに結合すし、典型的にはこのＫＤは、非特異性抗原（例えば、ＢＳＡ、カゼイン）への結合に対するＫＤよりも少なくとも１００倍小さい。解離定数は標準的手法を用いて測定することができる。しかし、抗原又は抗原内のエピトープに特異的に結合する抗体は、例えばヒト又はサル、例えばＭａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ（カニクイザル、ｃｙｎｏ）、Ｐａｎ  ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ（チンパンジー、ｃｈｉｍｐ）又はＣａｌｌｉｔｈｒｉｘ  ｊａｃｃｈｕｓ（コモンマーモセット、ｍａｒｍｏｓｅｔ）などの他種由来の同じ抗原（ホモログ）に対して交差反応性を有する場合がある。単特異性抗体は、１種類の抗原又は１種類のエピトープに特異的に結合するが、二重特異性抗体は、２種類の異なる抗原又は２種類の異なるエピトープに特異的に結合する。
【００２７】
抗体可変領域は、３つの「抗原結合部位」で隔てられた「フレームワーク」領域からなる。抗原結合部位は、様々な用語を用いて定義される：ＶＨ内に３つ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）及びＶＬ内に３つ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）ある相補性決定領域（ＣＤＲ）は、配列可変性に基づく（Ｗｕ  ａｎｄ  Ｋａｂａｔ（１９７０）Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １３２：２１１〜５０；Ｋａｂａｔｅｔ  ａｌ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ、Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．，１９９１）、ＶＨ内に３つ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）及びＶＬ内に３つ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）ある、「超可変領域」、「ＨＶＲ」、又は「ＨＶ」は、Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ（Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ（１９８７）ＭｏｌＢｉｏｌ  １９６：９０１〜１７）によって定義されたような構造的に超可変である抗体可変ドメインの領域を指す。他の用語として、「ＩＭＧＴ−ＣＤＲ」（Ｌｅｆｒａｎｃ  ｅｔ  ａｌ．，（２００３）Ｄｅｖ  Ｃｏｍｐａｒａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２７：５５〜７７）及び「特異性決定残基使用」（ＳＤＲＵ）（Ａｌｍａｇｒｏ（２００４）Ｍｏｌ  Ｒｅｃｏｇｎｉｔ  １７：１３２〜４３）が挙げられる。Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）データベース（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ＿ｉｍｇｔ＿ｏｒｇ）は、抗原結合部位の標準化番号付け及び定義を提供する。ＣＤＲ、ＨＶ、及びＩＭＧＴの表記間の対応関係については、Ｌｅｆｒａｎｃｅｔ  ａｌ．，（２００３）Ｄｅｖ  Ｃｏｍｐａｒａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２７：５５〜７７に記載されている。
【００２８】
本明細書で使用されるとき、「Ｃｈｏｔｉａ残基」は、Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ（Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）Ｊ  ＭｏｌＢｉｏｌ  ２７３：９２７〜４８）に準じて番号付けされた抗体ＶＬ残基及びＶＨ残基である。
【００２９】
「フレームワーク」又は「フレームワーク配列」は、抗原結合部位として定義されたものを除く、可変領域の残りの配列である。抗原結合部位は上記のような様々な用語によって定義され得るため、フレームワークの正確なアミノ酸配列は抗原結合部位がどのように定義されるかによって決まる。
【００３０】
「ヒト化抗体」とは、抗原結合部位がヒト以外の種に由来し、可変領域フレームワークがヒト免疫グロブリン配列に由来する、抗体を指す。ヒト化抗体はフレームワーク領域内に置換を含む可能性があることから、当該フレームワークは、発現したヒト免疫グロブリン又は生殖細胞系列遺伝子配列の完全な複製物でなくてもよい。
【００３１】
「ヒト抗体」とは、フレームワーク及び抗原結合部位の両方がヒト起源の配列に由来する重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を有する抗体を指す。抗体が定常領域を含む場合、定常領域もヒト起源の配列に由来する。
【００３２】
ヒト抗体は、抗体の可変領域がヒト生殖系列免疫グロブリン又は再編成された免疫グロブリン遺伝子を使用する系から得られた場合のヒト起源の配列に「由来する」重鎖可変領域又は軽鎖可変領域を含む。そのような系は、ファージ上に提示されたヒト免疫グロブリン遺伝子ライブラリ、及びヒト免疫グロブリン遺伝子座を保有するマウスなどのトランスジェニック非ヒト動物を含む。「ヒト抗体」は、例えば天然に存在する体細胞突然変異、又はフレームワーク若しくは抗原結合部位における意図した置換の導入、又はその両方により、ヒト生殖系免疫グロブリン又は再編成された免疫グロブリン遺伝子と比較したとき、アミノ酸の相違を含み得る。典型的には、「ヒト抗体」は、ヒト生殖系免疫グロブリン又は再編成された免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列と、アミノ酸配列において少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である。一部の場合では、「ヒト抗体」は、例えばＫｎａｐｐｉｋ  ｅｔ  ａｌ．，（２０００）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２９６：５７〜８６に記載されるヒトフレームワーク配列分析から得られたコンセンサスフレームワーク配列、又は例えばＳｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１０）Ｊ  ＭｏｌＢｉｏｌ  ３９７：３８５〜９６及び国際公開第２００９／０８５４６２号に記載される、ファージ上に提示されたヒト免疫グロブリン遺伝子ライブラリに組み込まれた合成ＨＣＤＲ３を含有し得る。
【００３３】
ヒト免疫グロブリン配列に由来するヒト抗体は、ファージ提示組み込み合成ＣＤＲ及び／若しくは合成フレームワークなどの系を用いて生成され得るか、又は抗体特性を改善するためにｉｎ  ｖｉｔｒｏ突然変異誘発を受けることができ、ｉｎ  ｖｉｖｏのヒト抗体生殖系レパートリー内に天然に存在しない抗体をもたらす。
【００３４】
抗原結合部位がヒト以外の種に由来する抗体は、ヒト抗体の定義には含まれない。
【００３５】
「組換え抗体」は、ヒト免疫グロブリン遺伝子のトランスジェニック若しくは染色体導入動物（例えば、マウス若しくはラット）又はそれから調製されたハイブリドーマ（以下に詳述）から単離された抗体、抗体を発現するように形質転換された宿主細胞から単離された抗体、組換えコンビナトリアル抗体ライブラリから単離された抗体、並びにヒト免疫グロブリン遺伝子配列を他のＤＮＡ配列にスプライスすることを伴う任意の他の手段により調製、発現、作製、又は単離された抗体、あるいはＦａｂアーム交換を用いてｉｎ  ｖｉｔｒｏで生成される抗体、例えば二重特性抗体などの組換え手段により調製、発現、作製、又は単離される全ての抗体を含む。
【００３６】
「単クローン性抗体」という用語は、単一分子組成の抗体分子の調製物を指す。単クローン性抗体組成物は、特定のエピトープに対する単一の結合特異性及び親和性を示し、又は二重特異性単クローン性抗体の場合には、２つの別個のエピトープに対する二重結合特異性を示す。したがって、「単クローン性抗体」は、抗体重鎖からのＣ末端リシンの除去など、潜在的な周知の代替物を除き、それぞれの重鎖及びそれぞれの軽鎖において単一のアミノ酸組成物を伴う抗体集団を指す。単クローン性抗体は、抗体集団内に異種グリコシル化を有し得る。単クローン性抗体は、単特異性若しくは多重特異性、又は一価、二価、若しくは多価であり得る。二価抗体は、単クローン性抗体という用語に含まれる。
【００３７】
「エピトープ」は、抗体が特異的に結合する抗原の一部を意味する。エピトープは通常、アミノ酸又は多糖類側鎖のような部位の化学的に活性な（極性、非極性又は疎水性など）表面基からなり、特定の三次元構造特性及び特定の電荷特性を有し得る。エピトープは、立体配座空間単位を形成する隣接した及び／又は隣接していないアミノ酸からなり得る。隣接していないエピトープについて、抗原の直鎖配列の異なる部分からのアミノ酸は、タンパク質分子の折り畳みを通じて、三次元空間において近接する。
【００３８】
「変種」は、１つ又は２つ以上の修飾、例えば、置換、挿入、又は欠失によって、基準ポリペプチド又は基準ポリヌクレオチドとは異なる、ポリペプチド又はポリヌクレオチドを指す。
【００３９】
「〜と併用して」は、２つ又は３つ以上の治療薬が、対象に混合物の状態で一緒に、それぞれ単独の薬剤として同時に、又はそれぞれ単独の薬剤として任意の順番で順次に投与することを意味する。一般に、各薬剤は、その薬剤に対して定められた用量及び／又は予定で投与される。
【００４０】
「治療する」又は「治療」は、その目的が、望ましくない生理学的変化又は疾患の進行を遅らせる（減らす）、例えば、腫瘍又は腫瘍細胞が発生し、又は伝播するのを遅らせることであったり、あるいは、治療の間に有益な又は望ましい臨床的結果を提供することであったりする、治療的処置を指す。有益な若しくは所望の臨床結果としては、検出可能であろうと又は検出不可能であろうと、症状の緩和、疾患の程度の軽減、安定した（すなわち、悪化しない）疾患状態、疾患の進行の遅延又は鈍化、転移の欠落、疾患状態の改善又は緩和、及び寛解（部分的であろうと又は全体的であろうと）が挙げられる。「治療」はまた、対象が治療を受けていない場合に予想される生存期間と比較して、生存期間を延長させることを意味し得る。治療を必要とする対象としては、望まれない生理的変化又は疾患を既に有している対象、並びに生理的変化又は疾患を有しやすい傾向がある対象が含まれる。
【００４１】
「治療的に有効な量」は、所望の治療結果を達成するために、必要な用量及び期間で、有効な量を指す。治療的に有効な量は、個体の病態、年齢、性別、及び体重などの要因、並びに個体において所望の応答を引き出す治療薬又は治療薬の組み合わせの能力によって種々であってよい。有効な治療薬又は治療薬の組み合わせを示す指標の例としては、例えば、患者の健康状態の改善、腫瘍量の減少、腫瘍の増殖の停止若しくは鈍化、及び／又は体内の他の場所への癌細胞の転移の不在が挙げられる。
【００４２】
「増殖を阻害する」（例えば、腫瘍細胞に関して）は、治療又は治療薬の組み合わせがない場合の同じ腫瘍細胞又は腫瘍組織の増殖の低下又は遅延と比較して、治療又は治療若しくは治療薬の組み合わせと接触されるときのｉｎ  ｖｉｔｒｏ又はｉｎ  ｖｉｖｏでの腫瘍細胞又は腫瘍組織の増殖の測定可能な低下又は遅延を指す。ｉｎ  ｖｉｔｒｏ又はｉｎ  ｖｉｖｏでの腫瘍細胞又は腫瘍組織の増殖の阻害は、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９９％、又は１００％であり得る。
【００４３】
「制御性Ｔ細胞」又は「Ｔｒｅｇ」は、他のＴ細胞及び／又は他の免疫細胞の活性を、通常はその活性を抑制することによって制御するＴリンパ球を指す。Ｔｒｅｇは、ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍＴ細胞であり得る。Ｔｒｅｇはこの表現型に完全に限定されなくてもよく、Ｆｏｘｐ３を発現し得ると認識されている。
【００４４】
「エフェクターＴ細胞」又は「Ｔｅｆｆ」は、腫瘍細胞の殺傷（killing）及び／又は腫瘍細胞の体内からの排除につながり得る抗腫瘍免疫応答の活性化など、免疫応答の機能を果たすＴリンパ球を指す。Ｔｅｆｆは、ＣＤ３＋にＣＤ４＋又はＣＤ８＋を伴い得る。Ｔｅｆｆは、ＩＦＮ−γ、グランザイムＢ及びＩＣＯＳなどのマーカーを分泌、含有、又は発現し得る。Ｔｅｆｆはこれらの表現型に完全に限定されなくてもよいと認識されている。
【００４５】
「Ｔｒｅｇの機能」又は「Ｔｒｅｇ機能」は、宿主免疫応答の調節及び／又は自己免疫の予防に関するＴｒｅｇの抑制機能を指す。Ｔｒｅｇの機能は、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、
【００４６】
【数１】
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Ｂ細胞、若しくは樹状細胞（ＤＣ）によって誘発される抗腫瘍応答の抑制、又は、エフェクターＴ細胞の増殖の抑制であり得る。
【００４７】
「Ｔｒｅｇの機能の阻害」又は「Ｔｒｅｇ機能の阻害」は、動物又はヒト対象のｉｎ  ｖｉｔｒｏ又はｉｎ  ｖｉｖｏにおいて、当該技術分野において既知の従来手法で測定され得るＴｒｅｇの機能のレベルが減少していることを指す。Ｔｒｅｇの機能のレベルは、例えば、少なくとも約１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％又は１００％減少し得る。「Ｔｒｅｇの機能の阻害」には、例えば抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）などの抗体エフェクター機能を介してＴｒｅｇを殺傷することによって、Ｔｒｅｇ数を減らすことが含まれる。
【００４８】
「骨髄由来サプレッサー細胞」又は「ＭＤＳＣ」は、造血系であり、マクロファージ／単球のマーカーであるＣＤ１１ｂ、及び顆粒球のマーカーであるＧｒ−１／Ｌｙ−６Ｇを発現する、特殊化した細胞集団を指す。ＭＤＳＣの表現型は、例えばＣＤ１１ｂ＋ＨＬＡ−ＤＲ−ＣＤ１４−ＣＤ３３＋ＣＤ１５＋であり得る。ＭＤＳＣは、成熟抗原提示細胞のマーカーである、ＭＨＣクラスＩＩ及びＦ４８０の発現が低いか、検出不可能である。ＭＤＳＣは、骨髄系の未熟細胞であり、マクロファージ、好中球、樹状細胞、単球又は顆粒球などのいくつかの細胞型に更に分化できる。ＭＤＳＣは、成人及び成獣の正常な骨髄、又は脾臓などの正常な造血部位に自然に見られ得る。
【００４９】
「ＭＤＳＣの機能の阻害」又は「ＭＤＳＣ機能の阻害」は、動物又はヒト対象のｉｎ  ｖｉｔｒｏ又はｉｎ  ｖｉｖｏにおいて、当該技術分野において既知の従来手法で測定され得るＭＤＳＣの機能のレベルが減少していることを指す。ＭＤＳＣの機能のレベルは、例えば、少なくとも約１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％又は１００％減少し得る。「ＭＤＳＣの機能の阻害」には、例えばＡＤＣＣなどの抗体エフェクター機能を介してＭＤＳＣを殺傷することによって、ＭＤＳＣ数を減らすことが含まれる。ＭＤＳＣは、活性酸素種、ペルオキシナイトライトの発生、高レベルのアルギナーゼによるアルギナーゼ代謝の向上、及び、一酸化窒素合成酵素の増加などの様々なメカニズムによって、増殖、クローン増殖又はサイトカイン産生などのＴ細胞応答を抑制し得る。ＭＤＳＣは、ＩＦＮ−γ、並びにＩＬ−４及びＩＬ−１３といったいくつかのサイトカインに応答し得る。ＩＦＮ−γは、一酸化窒素合成酵素２（ＮＯＳ２）の活性を誘導するＭＤＳＣを活性化し得る。交互に、インターロイキン−４（ＩＬ−４）及びＩＬ−１３などのＴｈ２サイトカインは、アルギナーゼ−１（ＡＲＧ１）活性の誘導を引き起こし得るＭＤＳＣを活性化し得る。ＮＯＳ２又はＡＲＧ１のいずれかによるＬ−アルギニンの代謝は、Ｔ細胞増殖の阻害を引き起こす場合があり、これら両酵素の活性は共に、反応性窒素酸化物種の産生によるＴ細胞のアポトーシスを引き起こし得る。
【００５０】
「Ｔｒｅｇ関連疾患」は、Ｔ制御性細胞（Ｔｒｅｇ）と関連する疾患又は障害を指す。Ｔｒｅｇ関連疾患は、Ｔｒｅｇ機能、例えば、抗腫瘍応答の抑制、又は、エフェクターＴ細胞増殖の抑制に起因し得る。Ｔｒｅｇ介在性疾患は癌であり得る。「Ｔｒｅｇ関連疾患」及び「Ｔｒｅｇ介在性疾患」は、本明細書では互換的に使用される。
【００５１】
「エフェクターＴ細胞の応答の増強」又は「Ｔ細胞応答の増強」は、動物又はヒト対象のｉｎ  ｖｉｔｒｏ又はｉｎ  ｖｉｖｏにおいて、生体機能を維持若しくは増幅させる、又は、消耗した若しくは不活性のＴ細胞を再生若しくは再活性化させるためのエフェクターＴ細胞の増強又は刺激を指す。代表的なＴ細胞応答は、増殖、γ−インターフェロンのＣＤ８＋Ｔ細胞からの分泌、抗原応答性、又はクローン増殖である。この増強を測定する方法は、当業者には既知である。
【００５２】
「ＭＤＳＣ関連疾患」は、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）と関連する疾患又は障害を指す。ＭＤＳＣ関連疾患は、ＭＤＳＣ機能、例えば、抗腫瘍応答又はエフェクターＴ細胞増殖の抑制に起因し得る。ＭＤＳＣ介在性疾患は癌であり得る。「ＭＤＳＣ関連疾患」及び「ＭＤＳＣ介在性疾患」は、本明細書では互換的に使用される。
【００５３】
「制御性Ｂ細胞」又は「Ｂｒｅｇ」は、免疫応答を抑制するＢリンパ球を指す。Ｂｒｅｇは、ＣＤ１９＋ＣＤ２４＋ＣＤ３８＋細胞であり得、Ｂｒｅｇによって分泌されるＩＬ−１０が介在するＴ細胞増殖を阻害することによって、免疫応答を抑制し得る。別のＢｒｅｇサブセットが存在し、例えばＤｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１５）Ｈｕｍａｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ７６：６１５〜６２１に記載されていると認識されている。
【００５４】
「Ｂｒｅｇ関連疾患」は、制御性Ｂ細胞と関連する疾患又は障害を指す。Ｂｒｅｇ関連疾患は、例えば、抗腫瘍応答又はエフェクターＴ細胞増殖のＢｒｅｇ介在性抑制に起因し得る。Ｂｒｅｇ介在性疾患は癌であり得る。「Ｂｒｅｇ関連疾患」及び「Ｂｒｅｇ介在性疾患」は、本明細書では互換的に使用される。
【００５５】
「患者」は、あらゆるヒト又は非ヒト動物を含む。「非ヒト動物」は、全ての脊椎動物、例えば、非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ニワトリ、両生類、爬虫類などの哺乳類及び非哺乳類を含む。「患者」及び「対象」は、本明細書では互換的に使用される。
【００５６】
本発明は、腫瘍細胞によるＣＤ３８発現の有無にかかわらず、ＣＤ３８を特異的に結合する抗体を用いて、固形腫瘍を有する患者を治療する方法を提供する。本発明は更に、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）又は制御性Ｂ細胞（Ｂｒｅｇ）介在性疾患を有する患者を治療する方法を提供する。本発明は更に、Ｔｒｅｇ、ＭＤＳＣ又はＢｒｅｇ活性を調節し、ＣＤ３８陽性及び／又は高レベルのこれら免疫抑制性細胞と関連する固形腫瘍の治療する方法を提供する。
【００５７】
本発明は、少なくとも一部は、抗ＣＤ３８抗体であるＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）が患者において免疫調節性活性を有しており、免疫抑制性Ｔｒｅｇ、ＭＤＳＣ及びＢｒｅｇ数を減らし、ＣＤ８＋Ｔ細胞数とＣＤ８＋のＴｒｅｇに対する割合を増加させ、ＣＤ８＋セントラルメモリー細胞形成を促進して、Ｔ細胞クローン性を増加するという発見に基づいている。
【００５８】
ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）及び他の抗ＣＤ３８抗体は、ＡＤＣＣ、ＣＤＣ、ＡＣＤＰ及びアポトーシスなどの抗体エフェクター機能による抗体のＣＤ３８陽性細胞排除能によって、多発性骨髄腫などの血液悪性疾患及び形質細胞障害の治療に対する有効性が臨床で評価されているが、適応免疫応答の促進における免疫調節性活性については認められていない。他の免疫調節性抗体（抗ＰＤ１、抗ＣＴＬＡ４）は、抗腫瘍応答を抑制する免疫系の構成要素を標的とすることによって機能する。例えば、抗ＰＤ１抗体は、Ｔ細胞増殖を増加し、抗原特異的メモリー応答を刺激し、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて、エフェクターＴ細胞のＴｒｅｇ介在性抑制を部分的に開放することが証明されている（例えば、米国特許第８，７７９，１０５号参照）。黒色腫の治療に対して、２種類の抗ＰＤ−１抗体、ＯＰＤＩＶＯ（登録商標）（ニボルマブ）及びＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標）（ペンブロリズマブ）が現在承認されており、これらの抗体は、様々な固形腫瘍、例えば肺非小細胞癌、前立腺、頭頸部、胃腸、胃、前立腺、卵管、卵巣、膵臓、乳房及び脳癌、腎臓、膀胱、尿道、食道及び結腸直腸癌に対して臨床開発中である。抗ＣＴＬＡ−４抗体であるＹＥＲＶＯＹ（登録商標）（イピリムマブ）は、黒色腫の治療に対して承認されている。ＹＥＲＶＯＹ（登録商標）（イピリムマブ）及び別の抗ＣＴＬＡ−４抗体であるトレメリムマブも、前立腺、非小細胞肺癌、卵巣、胃腸、胃、結腸直腸、腎臓、食道、及び尿生殖器癌に対して開発中である。
【００５９】
いかなる特定の理論にも束縛されるものではないが、本明細書で記載されるＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）によって観察される免疫調節性効果に基づいて、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）及び他の抗ＣＤ３８抗体は、固形腫瘍の治療に効果がある可能性がある。ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）で治療された患者で見られる免疫応答の一般的な活性化によって、ＣＤ３８陰性固形腫瘍を有する患者は、抗ＣＤ３８抗体療法にも同様に応答できる。
【００６０】
本発明は、治療的に有効な量のＣＤ３８を特異的に結合する抗体を、固形腫瘍の治療に十分な期間、それを必要とする患者に投与することを含む、固形腫瘍を有する患者を治療する方法を提供する。
【００６１】
本発明はまた、治療的に有効な量のＣＤ３８を特異的に結合する抗体を、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）介在性疾患の治療に十分な期間、それを必要とする患者に投与することを含む、Ｔｒｅｇ介在性疾患を有する患者を治療する方法も提供する。
【００６２】
本発明はまた、治療的に有効な量のＣＤ３８を特異的に結合する抗体を、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）介在性疾患の治療に十分な期間、それを必要とする患者に投与することを含む、ＭＤＳＣ介在性疾患を有する患者を治療する方法も提供する。
【００６３】
本発明はまた、治療的に有効な量のＣＤ３８を特異的に結合する抗体を、制御性Ｂ細胞（Ｂｒｅｇ）介在性疾患の治療に十分な期間、それを必要とする患者に投与することを含む、Ｂｒｅｇ介在性疾患を有する患者を治療する方法も提供する。
【００６４】
本発明はまた、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）をＣＤ３８を特異的に結合する抗体と接触させることを含む、制御性Ｔ細胞の活性を抑制する方法も提供する。
【００６５】
本発明はまた、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）をＣＤ３８を特異的に結合する抗体と接触させることを含む、ＭＤＳＣの活性を抑制する方法も提供する。
【００６６】
本発明はまた、制御性Ｂ細胞（Ｂｒｅｇ）をＣＤ３８を特異的に結合する抗体と接触させることを含む、Ｂｒｅｇの活性を抑制する方法も提供する。
【００６７】
本発明はまた、ＣＤ３８を特異的に結合する抗体を患者に投与することによって、患者における制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）数を低下させることを含む、固形腫瘍を有する患者を治療する方法も提供する。
【００６８】
本発明はまた、ＣＤ３８を特異的に結合する抗体を患者に投与することによって、患者における骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）数を低下させることを含む、固形腫瘍を有する患者を治療する方法も提供する。
【００６９】
本発明はまた、ＣＤ３８を特異的に結合する抗体を患者に投与することによって、患者における制御性Ｂ細胞（Ｂｒｅｇ）数を低下させることを含む、固形腫瘍を有する患者を治療する方法も提供する。
【００７０】
本発明はまた、ＣＤ３８を特異的に結合する抗体を、免疫応答の増強に十分な期間、それを必要とする患者に投与することを含む、患者の免疫応答を増強する方法も提供する。
【００７１】
いくつかの実施形態では、患者はウイルス感染を有する。
【００７２】
本発明はまた、ＣＤ３８を特異的に結合する抗体を、ウイルス感染の治療に十分な期間、それを必要とする患者に投与することを含む、患者のウイルス感染を治療する方法も提供する。
【００７３】
いくつかの実施形態では、免疫応答は、エフェクターＴ細胞（Ｔｅｆｆ）応答である。
【００７４】
いくつかの実施形態では、Ｔｅｆｆ応答は、ＣＤ４＋Ｔ細胞又はＣＤ８＋Ｔ細胞によって媒介される。
【００７５】
いくつかの実施形態では、Ｔｅｆｆ応答は、ＣＤ４＋Ｔ細胞によって媒介される。
【００７６】
いくつかの実施形態では、Ｔｅｆｆ応答は、ＣＤ８＋Ｔ細胞によって媒介される。
【００７７】
いくつかの実施形態では、Ｔｅｆｆ応答は、ＣＤ８＋Ｔ細胞数の増加、ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖の増加、Ｔ細胞クローン増殖の増加、ＣＤ８＋メモリー細胞形成の増加、抗原依存性抗体産生の増加、又は、サイトカイン、ケモカイン若しくはインターロイキン産生の増加である。
【００７８】
Ｔ細胞の増殖は、例えば、トリチウム標識したチミジンを用いるＤＮＡ合成速度の測定、又は、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）のｉｎ  ｖｉｔｒｏ産生の測定、又は、既知の方法を用いる患者サンプル由来細胞集団中のＴ細胞の絶対数若しくは割合の測定によって評価できる。
【００７９】
クローン増殖は、例えば、既知の方法を用いるＴ細胞プール由来ＴＣＲの配列決定によって評価できる。
【００８０】
メモリー細胞形成は、例えばＦＡＣＳを用いる、ナイーブＴ細胞（ＣＤ４５ＲＯ−／ＣＤ６２Ｌ＋）のメモリーＴ細胞（ＣＤ４５ＲＯ＋／ＣＤ６２Ｌｈｉｇｈ）に対する割合を測定することによって評価できる。
【００８１】
サイトカイン、ケモカイン又はインターロイキン産生、例えば、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）、腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８及びＩＬ−２３、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β、ランテス、ＣＣＬ４の産生は、ＥＬＩＳＡ又はＥＬＬＩＳＰＯＴアッセイなどの標準法を用いて評価できる。
【００８２】
抗原特異的抗体産生は、患者由来のサンプルから、ＥＬＩＳＡ又はラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）などの標準法を用いて評価できる。
【００８３】
様々なＴｅｆｆ応答が「増加」又は「増加する」の意味は、容易に理解される。増加は、試験サンプル又は対象において、対照と比較したとき、例えば、抗ＣＤ３８抗体で治療した患者において、治療前の同一患者と比較したとき、又は、抗ＣＤ３８抗体治療反応性の患者若しくは患者群において、同一治療に非反応性の患者若しくは患者群と比較したときに、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、２５％、５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、１００％、１１０％、１２０％、１３０％、１４０％、１５０％、２００％、２５０％、３００％、３５０％、４００％又はそれ以上の増加であってよい。典型的には、この増加は統計的に有意である。
【００８４】
同様に、Ｔｒｅｇ、ＭＤＳＣ及び／又はＢｒｅｇの数が「減少」若しくは「減少する」又は「低下」若しくは「低下する」の意味は、容易に理解される。低下は、試験サンプル又は対象において、対照と比較したとき、例えば、抗ＣＤ３８抗体で治療した患者において、治療前の同一患者と比較したとき、又は、抗ＣＤ３８抗体治療反応性の患者若しくは患者群において、同一治療に非反応性の患者若しくは患者群と比較したときに、少なくとも約１０％、２５％、５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、１００％、１１０％、１２０％、１３０％、１４０％、１５０％、２００％、２５０％、３００％、３５０％、４００％又はそれ以上の低下であってよい。典型的には、この低下は統計的に有意である。
【００８５】
いくつかの実施形態では、ＣＤ３８を特異的に結合する抗体は、免疫サプレッサー細胞の機能を阻害する。
【００８６】
いくつかの実施形態では、免疫サプレッサー細胞は、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）又は制御性Ｂ細胞（Ｂｒｅｇ）である。
【００８７】
いくつかの実施形態では、Ｔｒｅｇは、ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍ  Ｔ細胞である。
【００８８】
いくつかの実施形態では、ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍ細胞は、Ｆｏｘｐ３を発現する。
【００８９】
いくつかの実施形態では、ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍ  Ｔ細胞は、ＣＤ３８を発現する。
【００９０】
Ｔｒｅｇ機能、例えばＴｅｆｆ細胞の抑制能は、例えば、Ｔｒｅｇの、混合リンパ球反応（ＭＬＲ）におけるＴｅｆｆ増殖抑制能を評価する既知の方法を用いて評価できる。
【００９１】
Ｔｒｅｇ機能は、例えば、Ｔｅｆｆと比較したＴｒｅｇの相対数（例えば、ＣＤ８＋／Ｔｒｅｇ細胞比の増加）を、Ｔｒｅｇ又はＴｒｅｇの亜集団、例えばＣＤ３８＋Ｔｒｅｇの直接殺傷により減少させることによって、阻害できる。
【００９２】
いくつかの実施形態では、Ｔｒｅｇ機能は、Ｔｒｅｇ細胞の殺傷によって阻害される。
【００９３】
いくつかの実施形態では、Ｔｒｅｇの殺傷は、ＣＤ３８を特異的に結合している抗体により誘導される、抗体誘導性の抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞貪食作用（ＡＤＣＰ）、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）又はアポトーシスによって媒介される。
【００９４】
いくつかの実施形態では、Ｔｒｅｇの殺傷は、ＡＤＣＣによって媒介される。
【００９５】
いくつかの実施形態では、ＣＤ３８＋Ｔｒｅｇが殺傷される。
【００９６】
いくつかの実施形態では、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％、４６％、４７％、４８％、４９％、５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％又は６０％のＴｒｅｇが殺傷される。
【００９７】
ＣＤ３８は、Ｔｒｅｇ及びＭＤＳＣの一部においてのみ発現されるため、固形腫瘍患者の治療によってＴｒｅｇ及びＭＤＳＣの全身的枯渇をもたらさず、安全性の向上可能性が期待される。
【００９８】
いくつかの実施形態では、ＭＤＳＣは、ＣＤ１１ｂ＋ＨＬＡ−ＤＲ−ＣＤ１４−ＣＤ３３＋ＣＤ１５＋細胞である。
【００９９】
いくつかの実施形態では、ＣＤ１１ｂ＋ＨＬＡ−ＤＲ−ＣＤ１４−ＣＤ３３＋ＣＤ１５＋ＭＤＳＣは、ＣＤ３８を発現する。
【０１００】
ＭＤＳＣ機能は、例えば、細胞の直接殺傷によってＭＤＳＣ数を低下させることによって、阻害され得る。
【０１０１】
いくつかの実施形態では、ＭＤＳＣ機能は、ＣＤ３８＋ＭＤＳＣの殺傷によって阻害される。
【０１０２】
いくつかの実施形態では、ＭＤＳＣの殺傷は、ＣＤ３８を特異的に結合する抗体により誘導される、抗体誘導性の抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞貪食作用（ＡＤＣＰ）、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）又はアポトーシスによって媒介される。
【０１０３】
いくつかの実施形態では、ＭＤＳＣの殺傷は、ＡＤＣＣによって媒介される。
【０１０４】
いくつかの実施形態では、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％、４６％、４７％、４８％、４９％、５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％又は６０％のＭＤＳＣが殺傷される。
【０１０５】
いくつかの実施形態では、Ｂｒｅｇは、ＣＤ１９＋ＣＤ２４＋ＣＤ３８＋細胞である。
【０１０６】
Ｂｒｅｇ機能は、例えば、Ｂｒｅｇの直接殺傷によってＢｒｅｇ数を低下させることによって、阻害され得る。
【０１０７】
いくつかの実施形態では、Ｂｒｅｇ機能は、ＣＤ３８＋Ｂｒｅｇの殺傷によって阻害される。
【０１０８】
いくつかの実施形態では、Ｂｒｅｇの殺傷は、ＣＤ３８を特異的に結合する抗体により誘導される、抗体誘導性の抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞貪食作用（ＡＤＣＰ）、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）又はアポトーシスによって媒介される。
【０１０９】
いくつかの実施形態では、Ｂｒｅｇの殺傷は、ＡＤＣＣによって媒介される。
【０１１０】
いくつかの実施形態では、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％、４６％、４７％、４８％、４９％、５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％又は６０％のＢｒｅｇが殺傷される。
【０１１１】
Ｔｒｅｇは、末梢性自己寛容の維持において重要な役割を果たす。自然に存在するＣＤ４＋ＣＤ２５ｈｉ  Ｔｒｅｇは、胸腺で産生され、Ｔｒｅｇ系の同一性と抑制性機能の確立及び維持に必要な転写因子である、Ｆｏｘｐ３を発現する。Ｔｒｅｇは、疾患部位（例えば、腫瘍内）に蓄積でき、そこで腫瘍抗原特異的Ｔ細胞のエフェクター機能を抑制することによって、抗腫瘍応答を不十分にする。腫瘍に浸潤しているＦｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇの密度増加は、膵臓、卵巣、及び肝細胞癌などの様々な固形腫瘍における予後不良と関連している。マウスモデルにおいて、Ｔｒｅｇの枯渇により抗腫瘍免疫及び腫瘍拒絶の向上が得られるが、自己免疫疾患の進行にもつながり得る。
【０１１２】
骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）は、分化の様々な段階にある、初期骨髄系前駆細胞、未熟顆粒球、マクロファージ、及び樹状細胞の不均一集団である。これらは、癌患者で多く蓄積され、強い免疫抑制性機能を有して、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ）及びナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫＴ）の細胞傷害活性、並びに、ＣＤ８＋Ｔ細胞によって媒介される適応免疫応答の両方を阻害する。ＮＫ細胞の阻害メカニズムは現在よくわかっていないが、アルギナーゼ１／ＡＲＧ１の産生、及び一酸化窒素合成酵素２（ＮＯＳ２）の上方制御などの複数の経路が、ＭＤＳＣ介在性Ｔ細胞抑制の原因となっている。ＡＲＧ１及びＮＯＳ２は、Ｌ−アルギニンを代謝し、共に又は別々に、Ｔ細胞ＣＤ３ζ鎖の翻訳を阻止し、Ｔ細胞増殖を阻害し、Ｔ細胞のアポトーシスを促進する。加えて、ＭＤＳＣは、免疫抑制性サイトカインを分泌し、制御性Ｔ細胞の成長を誘導する。
【０１１３】
ＭＤＳＣは、炎症性サイトカインによって誘導され、感染性及び炎症性病態において数が増えて発見される。これらは、担癌マウスの血液、骨髄、及び二次リンパ器官内に蓄積し、腫瘍微小環境中にこれらが存在すると、腫瘍関連免疫抑制の促進の原因となる役割を果たすと言われている。
【０１１４】
ＭＤＳＣは、結腸癌、黒色腫、肝細胞癌、頭頸部扁平上皮癌、非小細胞肺癌、腎細胞癌、膵臓腺癌及び乳癌の患者において説明されている（Ｍａｎｄｒｕｚｚａｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，（２００９）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １８２：６５６２〜６５６８；Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，（２００９）Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  １３６：３５〜４５；Ｋｏ  ｅｔ  ａｌ．，（２００９）Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  １５：２１４８〜２１５７；Ｍｏｒｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，（２００９）Ｅｘｐｅｒｔ  ＯｐｉｎＢｉｏｌ  Ｔｈｅｒ  ９：３３１〜３３９；Ｄｉａｚ−Ｍｏｎｔｅｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，（２００９）Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ  ５８：４９〜５９；Ｃｏｒｚｏ  ｅｔ  ａｌ．，（２００９）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １８２：５６９３〜５７０１）。癌患者において、Ｄｉａｚら（Ｄｉａｚ−Ｍｏｎｔｅｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，（２００９）Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ  ５８：４９〜５９）は、ＭＤＳＣの蓄積が、疾患の更なる進行と予後不良と相関すると提唱している。
【０１１５】
腫瘍浸潤性Ｂｒｅｇは、固形腫瘍中に確認されており、Ｂｒｅｇは、様々なメカニズム、例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞及びＮＫ細胞の抗腫瘍活性を抑制することによって、腫瘍の増殖及び転移を促進し得る（例えば、Ｄｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１５）Ｈｕｍａｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ７６：６１５〜６２に記載）。
【０１１６】
「抗体依存性細胞傷害」、「抗体依存性細胞媒介細胞傷害」、又は「ＡＤＣＣ」は、エフェクター細胞で発現されるＦｃガンマ受容体（ＦｃγＲ）を介しての、抗体被覆標的細胞の、ナチュラルキラー細胞、単球、マクロファージ、及び好中球などの溶解活性を有するエフェクター細胞との相互作用に依存する、細胞死を誘発するための機構である。例えば、ＮＫ細胞はＦｃγＲＩＩＩａを発現し、一方単球はＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩａを発現する。ＣＤ３８発現細胞などの抗体被覆標的細胞の死滅は、膜孔形成タンパク質及びプロテアーゼの分泌を通してのエフェクター細胞活性の結果として生じる。ＣＤ３８を特異的に結合する抗体のＡＤＣＣ活性を評価するために、抗体は、免疫エフェクター細胞と組み合わせて、ＣＤ３８発現細胞に添加され得るが、これらが抗原抗体複合体によって活性化されると、標的細胞の細胞溶解をもたらし得る。細胞溶解は、通常、溶解した細胞からの標識（例えば、放射性基質、蛍光染料、又は天然細胞内タンパク質）の放出によって検出される。そのようなアッセイ用のエフェクター細胞としては、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）及びＮＫ細胞が挙げられる。代表的な標的細胞として、ＣＤ３８を発現するＴｒｅｇ又はＭＤＳＣが挙げられる。例示的なアッセイにおいて、標的細胞は、２０μキュリーの５１Ｃｒによって２時間にわたり標識化され、広範囲で洗浄される。標的細胞の細胞濃度は、１×１０６細胞／ｍＬに調整され得るが、抗ＣＤ３８抗体は様々な濃度で添加される。アッセイは、４０：１のエフェクター：標的細胞で標的細胞を添加することにより開始される。３７℃で３時間インキュベーションした後、アッセイを遠心分離によって停止し、溶解した細胞からの５１Ｃｒの放出を、シンチレーション計数管内で測定する。細胞傷害性のパーセンテージは、３％の過塩素酸を標的細胞に添加することにより誘発され得る最大溶解パーセントとして計算され得る。
【０１１７】
「抗体依存性細胞貪食作用」（「ＡＤＣＰ」）とは、例えばマクロファージ又は樹状細胞のような貪食細胞による細胞内移行を通じた抗体被覆標的細胞の殺減のメカニズムを指す。ＡＤＣＰは、ＧＦＰ又はその他標識された分子を発現するように遺伝子操作を受けた標的細胞として、ＣＤ３８を発現するＴｒｅｇ又はＭＤＳＣを用いることによって評価できる。エフェクター対標的細胞の比は、例えば４：１であり得る。エフェクター細胞は、標的細胞とともに４時間にわたり、抗ＣＤ３８抗体とともに又はそれなしでインキュベートされ得る。インキュベーション後、細胞は、Ａｃｃｕｔａｓｅを用いて剥離され得る。マクロファージは、蛍光標識に結合した抗ＣＤ１１ｂ抗体及び抗ＣＤ１４抗体により識別され得るが、パーセント貪食作用は、標準的な方法を用いて、ＣＤ１１＋及びＣＤ１４＋マクロファージ中のパーセントＧＦＰ蛍光に基づいて決定され得る。
【０１１８】
「補体依存性細胞傷害」又は「ＣＤＣ」は、標的結合抗体のＦｃエフェクタードメインが補体成分Ｃ１ｑに結合してこれを活性化し、補体成分Ｃ１ｑが次に補体カスケードを活性化して、標的細胞の死滅をもたらす、細胞死を誘発するためのメカニズムを指す。補体の活性化はまた、標的細胞表面上の補体成分の沈着をもたらすことができ、これが白血球への補体受容体（例えば、ＣＲ３）の結合によって、ＡＤＣＣを容易にする。
【０１１９】
ＡＤＣＣを誘発するために単クローン性抗体が有する能力は、それらのオリゴ糖成分を遺伝子操作することによって増強させることができる。ヒトＩｇＧ１又はＩｇＧ３は、Ａｓｎ２９７において、Ｎ−グリコシル化される。ここで、グリカンの大部分は、周知の二分岐Ｇ０、Ｇ０Ｆ、Ｇ１、Ｇ１Ｆ、Ｇ２、又はＧ２Ｆの形態にある。遺伝子操作されていないＣＨＯ細胞により生成される抗体は、典型的には、少なくとも約８５％のグリカンフコース含量を有する。Ｆｃ領域に結合した二分岐の複合体型オリゴ糖からのコアフコースの除去は、抗原結合又はＣＤＣ活性を変更することなく、改善されたＦｃγＲＩＩＩａ結合を介して抗体のＡＤＣＣを増強する。このようなｍＡｂは、培地のオスモル濃度の制御（Ｋｏｎｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１２）Ｃｙｔｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ６４：２４９〜６５）、変異体ＣＨＯ系Ｌｅｃ１３の宿主細胞系としての適用（Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，（２００２）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７７：２６７３３〜２６７４０）、変異体ＣＨＯ系ＥＢ６６の宿主細胞系としての適用（Ｏｌｉｖｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１０）ＭＡｂｓ  ２（４），Ｅｐｕｂ  ａｈｅａｄ  ｏｆ  ｐｒｉｎｔ；ＰＭＩＤ：２０５６２５８２）、ラットハイブリドーマ細胞系ＹＢ２／０の宿主細胞系としての適用（Ｓｈｉｎｋａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，（２００３）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７８：３４６６〜３４７３）、α１，６−フコシルトランスフェラーゼ（ＦＵＴ８）遺伝子に対して特異的な低分子干渉ＲＮＡの導入（Ｍｏｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，（２００４）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｅｎｇ  ８８：９０１〜９０８）、又は、β−１，４−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ及びゴルジα−マンノシダーゼＩＩ若しくは強力なα−マンノシダーゼＩ阻害物質であるキフネンシンの共発現（Ｆｅｒｒａｒａ  ｅｔ  ａｌ．，（２００６）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２８１：５０３２〜５０３６；Ｆｅｒｒａｒａ  ｅｔ  ａｌ．，（２００６）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｅｎｇ  ９３：８５１〜８６１；Ｘｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｅｎｇ  ９９：６５２〜６５）などのＦｃオリゴ糖の二分岐の複合型を保有する脱フコシル化抗体の比較的高い発現をもたらすことが報告されている、様々な方法を用いて達成されてもよい。本発明の方法において、及び以下に列挙される番号付きの実施形態のうちの１つ１つのいくつかの実施形態において用いられる抗ＣＤ３８抗体によって誘発されるＡＤＣＣはまた、抗体Ｆｃにおけるある特定の置換によって増強されてもよい。例示的な置換は、例えば、米国特許第６，７３７，０５６号に記載されたように、アミノ酸位置２５６、２９０、２９８、３１２、３５６、３３０、３３３、３３４、３６０、３７８、又は４３０（ＥＵインデックスに従った残基ナンバリング）における置換である。
【０１２０】
いくつかの実施形態では、ＣＤ３８を特異的に結合する抗体は、抗体Ｆｃにおける置換を含む。
【０１２１】
いくつかの実施形態では、ＣＤ３８を特異的に結合する抗体は、抗体Ｆｃ中の２５６、２９０、２９８、３１２、３５６、３３０、３３３、３３４、３６０、３７８又は４３０番目のアミノ酸における置換を含む（残基の番号付けは、ＥＵインデックスに準じる）。
【０１２２】
いくつかの実施形態では、ＣＤ３８を特異的に結合する抗体は、フコース含量が約０％〜約１５％、例えば１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％又は０％である、二分枝グリカン構造を有する。
【０１２３】
いくつかの実施形態では、ＣＤ３８を特異的に結合する抗体は、フコース含量が約５０％、４０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％又は０％である、二分枝グリカン構造を有する。
【０１２４】
Ｆｃ中の置換及び減少したフコース含量は、ＣＤ３８を特異的に結合する抗体のＡＤＣＣ活性を増強することができる。
【０１２５】
「フコース含量」とは、Ａｓｎ２９７における糖鎖内のフコース単糖類の量を意味する。フコースの相対量は、全糖構造に対するフコース含有構造の割合である。これらの糖構造は、複数の方法、例えば、１）国際公開第２００８／０７７５４６号に記載されるように、Ｎ−グリコシダーゼＦ処理試料のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ（例えば、複合体、ハイブリッド、及びオリゴ−並びに高マンノース構造）の使用、２）Ａｓｎ２９７グリカンの酵素放出、その後の誘導体化及び蛍光検出を備えたＨＰＬＣ（ＵＰＬＣ）及び／又はＨＰＬＣ−ＭＳ（ＵＰＬＣ−ＭＳ）による検出／定量、３）第１及び第２のＧｌｃＮＡｃ単糖類間を切断し、フコースを第１のＧｌｃＮＡｃに結合させる、Ｅｎｄｏ  Ｓ又は他の酵素によるＡｓｎ２９７のグリカンの処理を伴うか又はこの処理なしでの、天然又は還元ｍＡｂのインタクトプロテイン分析、４）酵素を用いた消化（例えば、トリプシン又はエンドペプチダーゼＬｙｓ−Ｃ）による、ｍＡｂの成分ペプチドへの消化後、ＨＰＬＣ−ＭＳ（ＵＰＬＣ−ＭＣ）による分離、検出、及び定量化、又は５）Ａｓｎ２９７で、ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いた酵素による特異的脱グリコシル化を通じた、ｍＡｂオリゴ糖のｍＡｂタンパク質からの分離、により特徴付けられ、定量化され得る。放出されるオリゴ糖は、フルオロフォアで標識化され、グリカン構造の細かな特性評価を可能にする様々な補足的技術によって分離かつ特定することが可能であり、これらは、実験的質量の理論的質量との比較によるマトリックス支援レーザ脱離イオン化（ＭＡＬＤＩ）質量分析、イオン交換ＨＰＬＣ（ＧｌｙｃｏＳｅｐ  Ｃ）によるシアル化の程度の決定、順相ＨＰＬＣ（ＧｌｙｃｏＳｅｐ  Ｎ）による親水性の基準に準拠するオリゴ糖型の分離及び定量、並びに高性能キャピラリー電気泳動−レーザ誘起蛍光（ＨＰＣＥ−ＬＩＦ）によるオリゴ糖の分離及び定量による。
【０１２６】
本明細書で使用されるとき、「低フコース」又は「低フコース含量」は、抗体が約０％〜１５％のフコース含量を有することを指す。
【０１２７】
本明細書で使用されるとき、「正常なフコース」又は「正常なフコース含有量」とは、抗体が約５０％を超える、通常約６０％、７０％、８０％を超える、又は８５％を超えるフコース含有量を有することを指す。
【０１２８】
いくつかの実施形態では、ＣＤ３８を特異的に結合する抗体は、アポトーシスによって、Ｔｒｅｇ、ＭＤＳＣ及び／又はＢｒｅｇの殺傷を誘導できる。アポトーシスを評価するための方法は周知であり、例えば、標準的な方法を用いたアネキシンＩＶによる染色が挙げられる。本発明の方法で使用される抗ＣＤ３８抗体は、細胞の約２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は１００％にアポトーシスを誘導できる。
【０１２９】
いくつかの実施形態では、Ｔｅｆｆ又は免疫サプレッサー細胞は、骨髄又は末梢血中に存在する。
【０１３０】
いくつかの実施形態では、Ｔｅｆｆ又は免疫サプレッサー細胞は、骨髄中に存在する。
【０１３１】
いくつかの実施形態では、Ｔｅｆｆ又は免疫サプレッサー細胞は、末梢血中に存在する。
【０１３２】
いくつかの実施形態では、ＣＤ３８を特異的に結合する抗体は、ＣＤ８＋Ｔ細胞のＴｒｅｇに対する比を増加する。
【０１３３】
いくつかの実施形態では、ＣＤ３８を特異的に結合する抗体は、ＣＤ８＋セントラルメモリー細胞のＣＤ８＋ナイーブ細胞に対する比を増加する。ＣＤ８＋セントラルメモリー細胞は、ＣＤ４５ＲＯ＋／ＣＤ６２Ｌ＋ｈｉｇｈ細胞として同定できる。ＣＤ８＋ナイーブ細胞は、ＣＤ４５ＲＯ−／ＣＤ６２Ｌ＋細胞として同定できる。
【０１３４】
いくつかの実施形態では、ＣＤ３８を特異的に結合する抗体は、非アゴニスト抗体である。
【０１３５】
ＣＤ３８を特異的に結合する非アゴニスト抗体は、ＣＤ３８に結合するとき、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの末梢血単核球のサンプルの増殖が、アイソタイプ対照抗体又は培地のみによって誘導される増殖と比較して顕著に誘導されない抗体を指す。
【０１３６】
いくつかの実施形態では、ＣＤ３８を特異的に結合する非アゴニスト抗体は、統計的に有意でない様式で、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）の増殖を誘導する。ＰＢＭＣ増殖は、健康なドナーからＰＢＭＣを単離し、２００μＬのＲＰＭＩ中、試験抗体の存在下又は非存在下において、平底９６ウェルプレート中１×１０５細胞／ウェルで培養することによって評価できる。３７℃で４日間インキュベートした後、３０μＬの３Ｈ−チミジン（１６．７μＣｉ／ｍＬ）を加え、培養を一晩継続してよい。３Ｈ−チミジンの取り込みは、Ｐａｃｋａｒｄ  Ｃｏｂｒａガンマカウンター（Ｐａｃｋａｒｄ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（Ｍｅｒｉｄｅｎ，ＤＴ，ＵＳＡ））を取扱説明書に沿って用いて評価できる。データは、数人のドナーから得られたＰＢＭＣの平均ｃｐｍ（±ＳＥＭ）として計算できる。試験抗体の存在下又は比存在下で培養されたサンプル間の統計的有意性又は非有意性は、標準的方法を用いて計算する。
【０１３７】
本発明の方法で使用できる代表的な抗ＣＤ３８抗体は、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）である。ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）は、それぞれ配列番号４及び５に示される重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）のアミノ酸配列、それぞれ配列番号６、７及び８の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３、並びにそれぞれ配列番号９、１０及び１１の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、ダラツムマブはＩｇＧ１／κサブタイプのものであり、米国特許第７，８２９，６９３号に記載されている。ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）重鎖のアミノ酸配列は、配列番号１２に示され、軽鎖のアミノ酸最列は、配列番号１３に示されている。
【０１３８】
いくつかの実施形態では、ＣＤ３８を特異的に結合する抗体は、配列番号４の重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号５の軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体と、ＣＤ３８への結合に関して競合する。
【０１３９】
いくつかの実施形態では、ＣＤ３８を特異的に結合する抗体は、ヒトＣＤ３８（配列番号１）の領域ＳＫＲＮＩＱＦＳＣＫＮＩＹＲ（配列番号２）、及び領域ＥＫＶＱＴＬＥＡＷＶＩＨＧＧ（配列番号３）に少なくとも結合する。
【０１４０】
配列番号１
ＭＡＮＣＥＦＳＰＶＳＧＤＫＰＣＣＲＬＳＲＲＡＱＬＣＬＧＶＳＩＬＶＬＩＬＶＶＶＬＡＶＶＶＰＲＷＲＱＱＷＳＧＰＧＴＴＫＲＦＰＥＴＶＬＡＲＣＶＫＹＴＥＩＨＰＥＭＲＨＶＤＣＱＳＶＷＤＡＦＫＧＡＦＩＳＫＨＰＣＮＩＴＥＥＤＹＱＰＬＭＫＬＧＴＱＴＶＰＣＮＫＩＬＬＷＳＲＩＫＤＬＡＨＱＦＴＱＶＱＲＤＭＦＴＬＥＤＴＬＬＧＹＬＡＤＤＬＴＷＣＧＥＦＮＴＳＫＩＮＹＱＳＣＰＤＷＲＫＤＣＳＮＮＰＶＳＶＦＷＫＴＶＳＲＲＦＡＥＡＡＣＤＶＶＨＶＭＬＮＧＳＲＳＫＩＦＤＫＮＳＴＦＧＳＶＥＶＨＮＬＱＰＥＫＶＱＴＬＥＡＷＶＩＨＧＧＲＥＤＳＲＤＬＣＱＤＰＴＩＫＥＬＥＳＩＩＳＫＲＮＩＱＦＳＣＫＮＩＹＲＰＤＫＦＬＱＣＶＫＮＰＥＤＳＳＣＴＳＥＩ
【０１４１】
配列番号２
ＳＫＲＮＩＱＦＳＣＫＮＩＹＲ
【０１４２】
配列番号３
ＥＫＶＱＴＬＥＡＷＶＩＨＧＧ
【０１４３】
配列番号４
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＦＴＦＮＳＦＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＧＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＦＣＡＫＤＫＩＬＷＦＧＥＰＶＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
【０１４４】
配列番号５
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＮＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＲＳＮＷＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
【０１４５】
配列番号６
ＳＦＡＭＳ
【０１４６】
配列番号７
ＡＩＳＧＳＧＧＧＴＹＹＡＤＳＶＫＧ
【０１４７】
配列番号８
ＤＫＩＬＷＦＧＥＰＶＦＤＹ
【０１４８】
配列番号９
ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡ
【０１４９】
配列番号１０
ＤＡＳＮＲＡＴ
【０１５０】
配列番号１１
ＱＱＲＳＮＷＰＰＴＦ
【０１５１】
配列番号１２
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＦＴＦＮＳＦＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＧＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＦＣＡＫＤＫＩＬＷＦＧＥＰＶＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
【０１５２】
配列番号１３
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＮＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＲＳＮＷＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
【０１５３】
抗体は、周知のｉｎ  ｖｉｔｒｏ法を用いて、ＣＤ３８への結合に関して、配列番号４のＶＨ及び配列番号５のＶＬを有するＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）などの参照抗体との競合について評価され得る。代表的な方法では、ＣＤ３８を組換え的に発現するＣＨＯ細胞を、非標識参照抗体と４℃で１５分間インキュベートし、その後、過剰の蛍光標識された試験抗体と、４℃で４５分間インキュベートしてよい。ＰＢＳ／ＢＳＡ中での洗浄後に、標準的な方法を用いて、フローサイトメトリーによって、蛍光を測定し得る。別の代表的な方法では、ヒトＣＤ３８の細胞外部分が、ＥＬＩＳＡプレートの表面に被覆され得る。過剰の非標識参照抗体を、約１５分間添加することができ、その後ビオチン化試験抗体を添加することができる。ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ中で洗浄後、試験ビオチン化抗体の結合を、西洋わさびペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）結合ストレプトアビジンと、標準的な方法を用いて検出されたシグナルとを用いて検出し得る。競合アッセイにおいて、参照抗体が標識され、試験抗体が標識されない場合があるということは、容易に明らかである。参照抗体が試験抗体の結合を阻害する、又は試験抗体が、ＣＤ３８への参照抗体の結合を少なくとも８０％、例えば、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％、阻害するときに、試験抗体は参照抗体と競合する。試験抗体のエピトープは、例えば、ペプチドマッピングにより、又は既知の方法を用いる水素／重水素保護アッセイにより、又は結晶構造判定により、更に定義され得る。
【０１５４】
ヒトＣＤ３８（配列番号１）の領域ＳＫＲＮＩＱＦＳＣＫＮＩＹＲ（配列番号２）及び領域ＥＫＶＱＴＬＥＡＷＶＩＨＧＧ（配列番号３）に結合する抗体は、例えば、標準法及び本明細書に記載されるものを用いて、マウスを、配列番号２及び３に示したアミノ酸配列を有するペプチドで免疫化し、例えば、ＥＬＩＳＡ又は突然変異誘発研究を用いてペプチドに結合するために得た抗体を特徴付けることによって、生成することができる。
【０１５５】
本発明はまた、ヒトＣＤ３８（配列番号１）の領域ＳＫＲＮＩＱＦＳＣＫＮＩＹＲ（配列番号２）及び領域ＥＫＶＱＴＬＥＡＷＶＩＨＧＧ（配列番号３）に結合する抗ＣＤ３８抗体を、それを必要とする患者に投与することを含む、固形腫瘍を有する患者を治療する方法も提供する。本発明の方法で使用される抗体のエピトープは、配列番号２又は配列番号３に示される配列を有する残基の一部又は全部を含む。いくつかの実施形態では、抗体エピトープは、ヒトＣＤ３８（配列番号１）の領域ＳＫＲＮＩＱＦＳＣＫＮＩＹＲ（配列番号２）における少なくとも１つのアミノ酸と、領域ＥＫＶＱＴＬＥＡＷＶＩＨＧＧ（配列番号３）における少なくとも１つのアミノ酸とを含む。いくつかの実施形態では、抗体エピトープは、ヒトＣＤ３８（配列番号１）の領域ＳＫＲＮＩＱＦＳＣＫＮＩＹＲ（配列番号２）における少なくとも２つのアミノ酸と、領域ＥＫＶＱＴＬＥＡＷＶＩＨＧＧ（配列番号３）における少なくとも２つのアミノ酸とを含む。いくつかの実施形態では、抗体エピトープは、ヒトＣＤ３８（配列番号１）の領域ＳＫＲＮＩＱＦＳＣＫＮＩＹＲ（配列番号２）における少なくとも３つのアミノ酸と、領域ＥＫＶＱＴＬＥＡＷＶＩＨＧＧ（配列番号３）における少なくとも３つのアミノ酸とを含む。
【０１５６】
いくつかの実施形態では、ＣＤ３８を特異的に結合する抗体は、それぞれ配列番号６、７及び８のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む。
【０１５７】
いくつかの実施形態では、ＣＤ３８を特異的に結合する抗体は、それぞれ配列番号９、１０及び１１のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む。
【０１５８】
いくつかの実施形態では、ＣＤ３８を特異的に結合する抗体は、それぞれ配列番号６、７、８、９、１０及び１１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む。
【０１５９】
いくつかの実施形態では、ＣＤ３８を特異的に結合する抗体は、配列番号４と９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるＶＨ、及び、配列番号５と９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるＶＬを含む。
【０１６０】
いくつかの実施形態では、ＣＤ３８を特異的に結合する抗体は、配列番号４のＶＨ及び配列番号５のＶＬを含む。
【０１６１】
いくつかの実施形態では、ＣＤ３８を特異的に結合する抗体は、配列番号１２の重鎖及び配列番号１３の軽鎖を含む。
【０１６２】
本発明の任意の実施形態で使用できるその他例示的な抗ＣＤ３８抗体は次のものである。
【０１６３】
米国特許第７，８２９，６９３号に記載される、それぞれ配列番号１４及び１５のＶＨ配列及びＶＬ配列を含むｍＡｂ００３。ｍＡｂ００３のＶＨ及びＶＬは、ＩｇＧ１／κとして表現され得る。
【０１６４】
配列番号１４
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＳＳＹＡＦＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＲＶＩＰＦＬＧＩＡＮＳＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＤＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＤＩＡＡＬＧＰＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳ
【０１６５】
配列番号１５
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＳＷＬＡＷＹＱＱＫＰＥＫＡＰＫＳＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＮＳＹＰＲＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
【０１６６】
米国特許第７，８２９，６９３号に記載される、それぞれ配列番号１６及び１７のＶＨ配列及びＶＬ配列を含むｍＡｂ０２４。ｍＡｂ０２４のＶＨ及びＶＬは、ＩｇＧ１／κとして表現され得る。
【０１６７】
配列番号１６
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳＧＹＳＦＳＮＹＷＩＧＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧＩＩＹＰＨＤＳＤＡＲＹＳＰＳＦＱＧＱＶＴＦＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＡＲＨＶＧＷＧＳＲＹＷＹＦＤＬＷＧＲＧＴＬＶＴＶＳＳ
【０１６８】
配列番号１７
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＮＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰ
ＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＲＳＮＷＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ；
【０１６９】
米国特許第８，０８８，８９６号に記載される、それぞれ配列番号１８及び１９のＶＨ配列及びＶＬ配列を含むＭＯＲ−２０２（ＭＯＲ−０３０８７）。ＭＯＲ−２０２のＶＨ及びＶＬは、ＩｇＧ１／κとして表現され得る。
【０１７０】
配列番号１８
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＹＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＧＩＳＧＤＰＳＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＬＰＬＶＹＴＧＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
【０１７１】
配列番号１９
ＤＩＥＬＴＱＰＰＳＶＳＶＡＰＧＱＴＡＲＩＳＣＳＧＤＮＬＲＨＹＹＶＹＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＬＶＩＹＧＤＳＫＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＮＳＧＮＴＡＴＬＴＩＳＧＴＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＱＴＹＴＧＧＡＳＬＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧＱ
【０１７２】
米国特許第８，１５３，７６５号に記載される、それぞれ配列番号２０及び２１のＶＨ配列及びＶＬ配列を含むイサツキシマブ。イサツキシマブのＶＨ及びＶＬは、ＩｇＧ１／κとして表現され得る。
【０１７３】
配列番号２０：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＡＫＰＧＴＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＷＭＱＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＴＩＹＰＧＤＧＤＴＧＹＡＱＫＦＱＧＫＡＴＬＴＡＤＫＳＳＫＴＶＹＭＨＬＳＳＬＡＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＧＤＹＹＧＳＮＳＬＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ
【０１７４】
配列番号２１
ＤＩＶＭＴＱＳＨＬＳＭＳＴＳＬＧＤＰＶＳＩＴＣＫＡＳＱＤＶＳＴＶＶＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＲＲＬＩＹＳＡＳＹＲＹＩＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＡＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＶＱＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＱＨＹＳＰＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
【０１７５】
本発明の方法において使用することができる他の例示的な抗ＣＤ３８抗体例としては、国際公開第０５／１０３０８３号、同第０６／１２５６４０号、同第０７／０４２３０９号、同第０８／０４７２４２号、又は同第１４／１７８８２０号に記載されているものが挙げられる。
【０１７６】
本発明はまた、治療的に有効な量の配列番号４のＶＨ及び配列番号５のＶＬを含むＣＤ３８を特異的に結合する抗体を、固形腫瘍の治療に十分な期間、それを必要とする患者に投与することを含む、固形腫瘍を有する患者を治療する方法も提供する。
【０１７７】
本発明はまた、治療的に有効な量の配列番号１４のＶＨ及び配列番号１５のＶＬを含むＣＤ３８を特異的に結合する抗体を、固形腫瘍の治療に十分な期間、それを必要とする患者に投与することを含む、固形腫瘍を有する患者を治療する方法も提供する。
【０１７８】
本発明はまた、治療的に有効な量の配列番号１６のＶＨ及び配列番号１７のＶＬを含むＣＤ３８を特異的に結合する抗体を、固形腫瘍の治療に十分な期間、それを必要とする患者に投与することを含む、固形腫瘍を有する患者を治療する方法も提供する。
【０１７９】
本発明はまた、治療的に有効な量の配列番号１８のＶＨ及び配列番号１９のＶＬを含むＣＤ３８を特異的に結合する抗体を、固形腫瘍の治療に十分な期間、それを必要とする患者に投与することを含む、固形腫瘍を有する患者を治療する方法も提供する。
【０１８０】
本発明はまた、治療的に有効な量の配列番号２０のＶＨ及び配列番号２１のＶＬを含むＣＤ３８を特異的に結合する抗体を、固形腫瘍の治療に十分な期間、それを必要とする患者に投与することを含む、固形腫瘍を有する患者を治療する方法も提供する。
【０１８１】
いくつかの実施形態では、固形腫瘍は黒色腫である。
【０１８２】
いくつかの実施形態では、固形腫瘍は肺癌である。
【０１８３】
いくつかの実施形態では、固形腫瘍は非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）である。
【０１８４】
いくつかの実施形態では、固形腫瘍は非扁平上皮ＮＳＣＬＣである。
【０１８５】
いくつかの実施形態では、固形腫瘍は肺腺癌である。
【０１８６】
いくつかの実施形態では、固形腫瘍は、腎細胞癌（ＲＣＣ）（例えば、腎明細胞癌又は腎乳頭状細胞癌）、又はその転移巣である。
【０１８７】
いくつかの実施形態では、固形腫瘍は中皮腫である。
【０１８８】
いくつかの実施形態では、固形腫瘍は上咽頭癌（ＮＰＣ）である。
【０１８９】
いくつかの実施形態では、固形腫瘍は結腸直腸癌である。
【０１９０】
いくつかの実施形態では、固形腫瘍は、前立腺癌又は去勢抵抗性前立腺癌である。
【０１９１】
いくつかの実施形態では、固形腫瘍は胃癌（stomach cancer）である。
【０１９２】
いくつかの実施形態では、固形腫瘍は卵巣癌である。
【０１９３】
いくつかの実施形態では、固形腫瘍は胃癌（gastric cancer）である。
【０１９４】
いくつかの実施形態では、固形腫瘍は肝癌である。
【０１９５】
いくつかの実施形態では、固形腫瘍は膵臓癌である。
【０１９６】
いくつかの実施形態では、固形腫瘍は甲状腺癌である。
【０１９７】
いくつかの実施形態では、固形腫瘍は頭頸部の扁平上皮癌である。
【０１９８】
いくつかの実施形態では、固形腫瘍は食道又は胃腸管の癌腫である。
【０１９９】
いくつかの実施形態では、固形腫瘍は乳癌である。
【０２００】
いくつかの実施形態では、固形腫瘍は卵管癌である。
【０２０１】
いくつかの実施形態では、固形腫瘍は脳癌である。
【０２０２】
いくつかの実施形態では、固形腫瘍は尿道癌である。
【０２０３】
いくつかの実施形態では、固形腫瘍は尿生殖器癌である。
【０２０４】
いくつかの実施形態では、固形腫瘍は子宮内膜症である。
【０２０５】
いくつかの実施形態では、固形腫瘍は子宮頸癌である。
【０２０６】
いくつかの実施形態では、固形腫瘍は癌の転移巣である。
【０２０７】
いくつかの実施形態では、固形腫瘍は、検出可能なＣＤ３８発現を欠いている。
【０２０８】
周知の方法を用いる、対照と比較、例えば、抗ＣＤ３８抗体で検出される発現対アイソタイプの対照抗体で検出される発現を比較して、固形腫瘍組織中又は固形腫瘍から単離された細胞上でのＣＤ３８発現が統計的に有意でないとき、固形腫瘍は、検出可能なＣＤ３８発現を欠いている。
【０２０９】
本発明の方法で使用される抗ＣＤ３８抗体は、例えば、ファージ提示ライブラリから新たに選択されてもよく、このファージは、ヒト免疫グロブリン又はその一部（例えば、Ｆａｂ、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）、又は対をなさない若しくは対をなす抗体可変領域）を発現するよう遺伝子操作を受けている（Ｋｎａｐｐｉｋ  ｅｔ  ａｌ．，（２０００）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２９６：５７〜８６；Ｋｒｅｂｓ  ｅｔ  ａｌ．，（２００１）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈ  ２５４：６７〜８４；Ｖａｕｇｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４：３０９〜３１４；Ｓｈｅｅｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９８）ＰＩＴＡＳ（ＵＳＡ）９５：６１５７〜６１６２；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ，（１９９１）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２２７：３８１；Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２２２：５８１）。ＣＤ３８結合可変ドメインは、例えば、Ｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１０）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ３９７：３８５〜９６及び国際公開第０９／０８５４６２号に記載される、バクテリオファージｐＩＸ被覆タンパク質との融合タンパク質として抗体の重鎖及び軽鎖可変領域を発現するファージ提示ライブラリから単離され得る。抗体ライブラリをヒトＣＤ３８細胞外ドメインへの結合についてスクリーニングして、得られた陽性クローンの特徴付けを更に行い、Ｆａｂはクローンライセートから単離され、その後全長抗体としてクローンされる。ヒト抗体を単離するためのそのようなファージ提示法は、当技術分野にて確立されている。例えば、米国特許第５，２２３，４０９号、同第５，４０３，４８４号、同第５，５７１，６９８号、同第５，４２７，９０８号、同第５，５８０，７１７号、同第５，９６９，１０８号、同第６，１７２，１９７号、同第５，８８５，７９３号、同第６，５２１，４０４号、同第６，５４４，７３１号、同第６，５５５，３１３号、同第６，５８２，９１５号、及び同第６，５９３，０８１号を参照されたい。
【０２１０】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４アイソタイプである。
【０２１１】
抗体のＦｃ部分は、抗体依存性細胞媒介細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞貪食作用（ＡＤＣＰ）、又は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）などの抗体のエフェクター機能を媒介することができる。このような機能は、ＦＣエフェクタードメイン（複数可）の貪食活性若しくは溶解活性を有する免疫細胞上のＦｃ受容体への結合によって又はＦｃエフェクタードメイン（複数可）の補体系の成分への結合によって、媒介され得る。通常、Ｆｃ結合細胞又は補体成分によって媒介される作用（複数可）は、標的細胞、例えばＣＤ３８発現細胞の阻害及び／又は枯渇をもたらす。ヒトＩｇＧアイソタイプである、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４は、エフェクター機能に関して特異的な能力を呈する。ＡＤＣＣは、ＩｇＧ１及びＩｇＧ３によって媒介され、ＡＤＣＰは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４によって媒介され、ＣＤＣは、ＩｇＧ１及びＩｇＧ３によって媒介され得る。
【０２１２】
配列番号４のＶＨ及び配列番号５のＶＬを含む抗体と実質的に同一である抗体は、本発明の方法において用いられ得る。本明細書で使用されるとき、用語「実質的に同一」は、比較される２つの抗体ＶＨ又はＶＬのアミノ酸配列が同一であるか又は「ごくわずかな相違」を有することを意味する。ごくわずかな相違とは、抗体の特性に悪影響を及ぼさない抗体重鎖又は軽鎖における１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５個のアミノ酸の置換である。同一性パーセントは、例えば、Ｖｅｃｔｏｒ  ＮＴＩ  ｖ．９．０．０（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）のＡｌｉｇｎＸモジュールの初期設定を使用するペアワイズアライメントによって決定することができる。本発明のタンパク質配列を問い合わせ配列として用いて、公共又は特許データベースに対する検索を実行して、例えば、関連配列を特定してもよい。そのような検索を実行するために使用される例示的なプログラムは、初期設定を使用する、ＸＢＬＡＳＴ若しくはＢＬＡＳＴＰプログラム（ｈｔｔｐ＿／／ｗｗｗ＿ｎｃｂｉ＿ｎｌｍ／ｎｉｈ＿ｇｏｖ）、又はＧｅｎｏｍｅＱｕｅｓｔ（商標）（ＧｅｎｏｍｅＱｕｅｓｔ、Ｗｅｓｔｂｏｒｏｕｇｈ、ＭＡ）スイートである。ＣＤ３８を特異的に結合する抗体に対して行われ得る例示的な置換は、例えば、同様の電荷、疎水性、立体化学特性を有するアミノ酸を用いる保存的置換である。保存的置換はまた、例えば安定性又は親和性といった抗体の特性を向上させるために、又は抗体エフェクターの機能を改善するためにも行われ得る。１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５個のアミノ酸置換が、例えば、抗ＣＤ３８抗体の重鎖又は軽鎖に対して行われ得る。更に、アラニン・スキャニング変異導入法についてこれまでに述べられているように（ＭａｃＬｅｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｃｔａ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｓｃａｎｄ．Ｓｕｐｐｌ．６４３：５５〜６７，１９９８；Ｓａｓａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｄｖ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．３５：１〜２４，１９９８）、ＶＨ又はＶＬ内の任意の天然残基をアラニンで置換することもできる。所望のアミノ酸置換は、そのような置換が望まれる時点で当業者が決定し得る。アミノ酸置換は、例えば、ＰＣＲ突然変異誘発（米国特許第４，６８３，１９５号）によって行うことができる。変異体のライブラリは、周知の方法を用いて、例えば、ランダムコドン（ＮＮＫ）又は非ランダムコドン、例えば１１個のアミノ酸（Ａｌａ、Ｃｙｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｌｙｓ、Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ）をコードするＤＶＫコドンを用い、そして所望の特性を有する変異体を求めてのライブラリをスクリーニングすることで生成されてもよい。生成された変異体は、インビトロでのＣＤ３８へのそれらの結合、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、若しくはアポトーシスを誘発する又はＣＤ３８酵素活性を調節するそれらの能力に関して、本明細書に記載される方法を用いて試験することができる。
【０２１３】
いくつかの実施形態では、ＣＤ３８を特異的に結合する抗体は、幅広い親和性（ＫＤ）でヒトＣＤ３８を結合できる。本発明による一実施形態、及び以下に列挙される番号付けされたありとあらゆる実施形態のうちのいくつかの実施形態において、当業者により実施される表面プラズモン共鳴又はＫｉｎｅｘａ法によって決定されるように、ＣＤ３８を特異的に結合する抗体は、高い親和性で、例えば、ＫＤが約１０−７Ｍ以下、例えばこれらに限定されないが、１〜９．９（つまり、１、２、３、４、５、６、７、８、又は９などの任意の範囲又はその範囲内の値）×１０−８Ｍ、１０−９Ｍ、１０−１０Ｍ、１０−１１Ｍ、１０−１２Ｍ、１０−１３Ｍ、１０−１４Ｍ、１０−１５Ｍ、又は任意の範囲若しくはその範囲内の値でＣＤ３８に結合する。親和性の１つの例は、１×１０−８Ｍ以下である。親和性の別の１つの例は、１×１０−９Ｍ以下である。
【０２１４】
いくつかの実施形態では、ＣＤ３８を特異的に結合する抗体は二重特異性抗体である。既存の抗ＣＤ３８抗体のＶＬ及び／若しくはＶＨ領域、又は、本明細書で記載されるように新たに特定されたＶＬ及びＶＨ領域は、遺伝子操作を受けて二重特異性の全長抗体にされてもよい。このような二重特異性抗体は、米国特許第７，６９５，９３６号、国際公開第０４／１１１２３３号、米国特許出願公開第２０１０／００１５１３３号、米国特許出願公開第２００７／０２８７１７０号、国際公開第２００８／１１９３５３号、米国特許出願公開第２００９／０１８２１２７号、米国特許出願公開第２０１０／０２８６３７４号、米国特許出願公開第２０１１／０１２３５３２号、国際公開第２０１１／１３１７４６号、国際公開第２０１１／１４３５４５号、又は、米国特許出願公開第２０１２／０１４９８７６号に記載されるような技術を用いて、二重特異性抗体を形成するように、単特異性抗体重鎖間のＣＨ３相互作用を調節することによって製造され得る。本発明の抗体のＶＬ及び／又はＶＨ領域が組み込まれ得る付加的な二重特異性構造は、例えば、二重可変ドメイン免疫グロブリン（国際公開第２００９／１３４７７６号）であるか、又はロイシンジッパー若しくはコラーゲン二量化ドメインなど、特異性を有する２つの抗体アームを結合するために様々な二量化ドメインを含む構造（国際公開第２０１２／０２２８１１号、米国特許第５，９３２，４４８号、米国特許第６，８３３，４４１号）である。
【０２１５】
例えば、二重特異性抗体は、国際公開第２０１１／１３１７４６号に記載の方法に従って、セルフリー環境でのｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて、２つの単特異性ホモ二量体抗体のＣＨ３領域中に非対称な変異を導入し、ジスルフィド結合を異性化させる還元条件下において、２つの親単特異性ホモ二量体抗体から二重特異性ヘテロ二量体抗体を形成することにより生成されてもよい。この方法においては、第１の単特異性二価抗体（例えば、抗ＣＤ３８抗体）及び第２の単特異性二価抗体は、ヘテロ二量体の安定性を促進するＣＨ３ドメインにおける特定の置換を有するように遺伝子操作されるが、これらの抗体は、ヒンジ領域におけるシステインがジスルフィド結合異性化を受けるのに十分な還元条件下において共にインキュベートされ、これにより、Ｆａｂアーム交換による二重特異性抗体が生成される。インキュベーション条件は、最適には、非還元条件に戻されてもよい。使用され得る例示的な還元剤は、２−メルカプトエチルアミン（２−ＭＥＡ）、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）、ジチオエリスリトール（ＤＴＥ）、グルタチオン、トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）、Ｌ−システイン、及びベータ−メルカプトエタノール、好ましくは、２−メルカプトエチルアミン、ジチオスレイトール、及びトリス（２−カルボキシエチル）ホスフィンからなる群から選択される還元剤である。例えば、少なくとも２０℃の温度において、少なくとも２５ｍＭの２−ＭＥＡの存在下又は少なくとも０．５ｍＭのジチオスレイトールの存在下で、ｐＨ５〜８、例えば、ｐＨ７．０又はｐＨ７．４において、少なくとも９０分のインキュベーションが使用されてもよい。
【０２１６】
二重特異性抗体の第１の重鎖及び第２の重鎖に使用され得る例示的なＣＨ３の変異は、Ｋ４０９Ｒ及び／又はＦ４０５Ｌである。
【０２１７】
本発明の方法を用いて、任意の分類に属する動物被験体を治療することができる。このような動物の例としては、ヒト、齧歯類、イヌ、ネコ、及び家畜などの哺乳動物が挙げられる。
【０２１８】
投与／医薬組成物
本発明の方法において、ＣＤ３８を特異的に結合する抗体は、ＣＤ３８を特異的に結合する抗体と、医薬的に許容される担体と、を含む、好適な医薬組成物中で提供されてよい。担体は、ＣＤ３８を特異的に結合する抗体と一緒に投与される希釈剤、補助剤、賦形剤、又はビヒクルであってよい。そのようなビヒクルは、落花生油、大豆油、鉱物油、ゴマ油などの、石油、動物、植物、又は合成物起源のものを含む、水及び油などの液体であってよい。例えば、０．４％生理食塩水及び０．３％グリシンを用いてもよい。これらの溶液は滅菌され、一般には粒子状物質を含まない。これらは、通常の周知の滅菌技術（例えば、濾過）によって滅菌することができる。この組成物は、生理学的条件に近づけるために必要とされる医薬的に許容される補助物質、例えばｐＨ調整剤及び緩衝剤、安定化剤、増粘剤、潤滑剤及び着色剤などを含有することができる。そのような製剤処方中のＣＤ３８を特異的に結合する抗体の濃度は、幅広く異なってもよく、すなわち、約０．５重量％未満から、通常は少なくとも約１重量％まで、最大で１５又は２０重量％、２５重量％、３０重量％、３５重量％、４０重量％、４５重量％、又は５０重量％までであってよく、また、選択される特定の投与方法に従って、必要とされる用量、流体体積、粘度などに主に基づいて選択される。好適なビヒクル及び製剤（他のヒトタンパク質、例えばヒト血清アルブミンを含む）は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ｓｔ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｔｒｏｙ，Ｄ．Ｂ．ｅｄ．，Ｌｉｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ  ２００６，Ｐａｒｔ  ５，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ  ｐｐ  ６９１〜１０９２に記載され、特にｐｐ．９５８〜９８９を参照されたい。
【０２１９】
本発明の方法におけるＣＤ３８を特異的に結合する抗体の投与方法は、当該技術分野において周知であるように、非経口投与、例えば、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内又は皮下、肺内、経粘膜（経口、鼻腔内、膣内、直腸）若しくは当業者に理解される他の手段などの任意の好適な経路であり得る。ＣＤ３８を特異的に結合する抗体は、既知の方法を用いて、腫瘍内に局所送達するためリンパ節ドレーン部位に対して腫瘍内投与してもよい。
【０２２０】
ＣＤ３８を特異的に結合する抗体は、例えば、静脈内（ｉ．ｖ．）注入又はボーラス注射によって非経口的に、筋肉内又は皮下又は腹腔内など任意の好適な経路によって患者に投与することができる。静脈内注入は、例えば、１５、３０、６０、９０、１２０、１８０、若しくは２４０分にわたって、又は１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、若しくは１２時間にわたって実施されてもよい。
【０２２１】
患者に投与される用量は、治療される疾患を緩和するか又は少なくとも部分的に停止するのに十分（「治療的に有効な量」）であり、時には、０．００５ｍｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、例えば、約０．０５ｍｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、又は約５ｍｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇ、又は約４ｍｇ／ｋｇ、約８ｍｇ／ｋｇ、約１６ｍｇ／ｋｇ若しくは約２４ｍｇ／ｋｇ、又は例えば約１、２、３、４、５、６、７、８、９若しくは１０ｍｇ／ｋｇであってもよいが、更により高い量、例えば約１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０若しくは１００ｍｇ／ｋｇであってもよい。
【０２２２】
例えば、５０、１００、２００、５００、又は１０００ｍｇの固定単位用量が与えられるか、又は患者の表面積に基づいて例えば、５００、４００、３００、２５０、２００、若しくは１００ｍｇ／ｍ２の用量で与えられてもよい。通常、１〜８の用量（例えば、１、２、３、４、５、６、７、又は８）が投与され得るが、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、又はそれよりも高い用量を投与することが可能である。
【０２２３】
本発明の方法におけるＣＤ３８を特異的に結合する抗体の投与は、１日、２日、３日、４日、５日、６日、１週間、２週間、３週間、１ヶ月、５週間、６週間、７週間、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月以上後に繰り返すことができる。治療過程を繰り返すことも可能であり、長期にわたる投与も同様に可能である。繰り返し投与は、同一用量であるか、又は異なる用量であってよい。例えば、本発明の方法におけるＣＤ３８を特異的に結合する抗体は、静脈内注入によって、８ｍｇ／ｋｇ又は１６ｍｇ／ｋｇで１週間間隔で８週間にわたり投与され、８ｍｇ／ｋｇ又は１６ｍｇ／ｋｇで２週間毎に更に１６週間の投与が続き、その後、８ｍｇ／ｋｇ又は１６ｍｇ／ｋｇで４週間毎による投与を続けて行うことができる。
【０２２４】
本発明の方法において、ＣＤ３８を特異的に結合する抗体は、例えば、週１回を６ヶ月以上など、維持療法によって投与してもよい。
【０２２５】
例えば、本発明の方法におけるＣＤ３８を特異的に結合する抗体は、２４、１２、８、６、４、又は２時間毎の単回投与又は分割投与を用いて、若しくはこれらの併用を用いて、約０．１〜１００ｍｇ／ｋｇの量の１日用量として、例えば、１日当たり０．５、０．９、１．０、１．１、１．５、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０又は１００ｍｇ／ｋｇで、治療開始後、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、又は４０日目のうちの少なくとも１日に、あるいは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、又は２０週目のうちの少なくとも１週に、あるいはこれらの組み合わせで提供されてもよい。
【０２２６】
本発明の方法におけるＣＤ３８を特異的に結合する抗体はまた、癌の進行リスクを低下させ、癌の進行におけるイベントの発生の開始を遅延させ、かつ／又は癌が緩解した際の再発リスクを低下させるために、予防的に投与されてもよい。これは、他の生物学的要因のために、存在することが知られている腫瘍の位置を特定することが難しい患者において特に有用であり得る。
【０２２７】
本発明の方法におけるＣＤ３８を特異的に結合する抗体を、保存用に凍結乾燥し、使用前に好適な担体中で再溶解することができる。この技術は、通常のタンパク調製物に関して有効であることが示されており、周知の凍結乾燥法及び再構成技術を用いることができる。
【０２２８】
本発明の方法におけるＣＤ３８を特異的に結合する抗体は、第２の治療薬と併用して投与されてよい。
【０２２９】
本発明の方法では、ＣＤ３８を特異的に結合する抗体は、当業者には既知の化学療法薬又は他の抗癌治療法のうち、任意の１つ以上とともに投与されてよい。化学療法薬は、癌の治療に有用な化合物で、増殖阻害薬又は他の細胞傷害性薬が含まれ、アルキル化薬、代謝拮抗薬、抗微小管阻害薬、トポイソメラーゼ阻害薬、受容体型チロシンキナーゼ阻害薬、血管新生抑制薬などが挙げられる。化学療法薬の例として、チオテパ及びシクロホスファミド（cyclosphosphamide）（ＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標））などのアルキル化薬；ブスルファン、インプロスルファン及びピポスルファンなどのスルホン酸アルキル；ベンゾデパ（benzodopa）、カルボコン、メツレデパ（meturedopa）、及びウレデパ（uredopa）などのアジリジン；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド（trietylenephosphoramide）、トリエチレンチオホスホルアミド（triethylenethiophosphaoramide）及びトリメチロールメラミン（trimethylolomelamine）を含むエチレンイミン及びメチロールメラミン（methylamelamines）；クロラムブシル、クロルナファジン、クロロホスファミド（cholophosphamide）、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノブエンビキン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタードなどのナイトロジェンマスタード；カルムスチン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチンなどのニトロソウレア；アクラシノマイシン（aclacinomysins）、アクチノマイシン、アントラマイシン（authramycin）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カリチアマイシン、カルビシン（carabicin）、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポルフィロマイシン（potfiromycin）、ピューロマイシン、クエラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシンなどの抗生物質；メトトレキサート及び５−ＦＵなどの代謝拮抗薬；デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサートなどの葉酸アナログ；フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニンなどのプリンアナログ；アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジンなどのピリミジンアナログ；カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトンなどのアンドロゲン；アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンなどの抗副腎系；フォリン酸（frolinic acid）などの葉酸補充薬；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；アムサクリン；ベストラブシル；ビスアントレン；エダトレキサート（edatraxate）；デフォファミン（defofamine）；デメコルチン；ジアジクオン；エフロルニチン（elfornithine）；��酸エリプチニウム；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダミン；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダモール；ニトラクリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ポドフィリン酸；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）；ラゾキサン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２”−トリクロロトリエチルアミン；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン（gacytosine）；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標））、ドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標））及びこれらのアナログなどのタキソイド又はタキサンファミリーのもの；クロラムブシル；ゲムシタビン；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；シスプラチン及びカルボプラチンなどの白金アナログ；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；マイトマイシンＣ；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビン；ナベルビン；ノバントロン；テニポシド；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロン酸；ＣＰＴ−１１；トポイソメラーゼ阻害薬ＲＦＳ  ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸；エスペラミシン；カペシタビン；ＮＥＸＡＶＡＲ（登録商標）（ソラフェニブ）、ＳＵＴＥＮＴ（登録商標）（スニチニブ）、ＶＯＴＲＩＥＮＴ（商標）（パゾパニブ）、ＰＡＬＬＡＤＩＡ（商標）（トセラニブ）、ＺＡＣＴＩＭＡ（商標）（バンデタニブ）、ＲＥＣＥＮＴＩＮ（登録商標）（セジラニブ）、レゴラフェニブ（ＢＡＹ  ７３−４５０６）、アキシチニブ（ＡＧ０１３７３６）、レスタウルチニブ（ＣＥＰ−７０１）、ＴＡＲＣＥＶＡ（登録商標）（エルロチニブ）、ＩＲＥＳＳＡ（商標）（ゲフィチニブ）、Ｇｉｌｏｔｒｉｆ（登録商標）（アファチニブ）、ＴＹＫＥＲＢ（登録商標）（ラパチニブ）、ネラチニブを含む受容体型チロシンキナーゼ及び／又は血管新生の阻害薬など、並びに医薬的に許容される塩、酸、又は上記のうち任意のものの誘導体が挙げられる。この定義に更に含まれるものは、腫瘍においてホルモンの作用を調節又は阻害するように働く抗ホルモン薬、例えば、タモキシフェン、ラロキシフェン、アロマターゼを阻害する４（５）−イミダゾール、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ  １１７０１８、オナプリストン、及びＦＡＲＥＳＴＯＮ（登録商標）（トレミフェン）などの抗エストロゲン薬；並びに、フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、リュープロリド、及びゴセレリンなどの抗アンドロゲン薬；並びに、医薬的に許容される塩、酸、又は上記のうち任意のものの誘導体である。Ｗｉｅｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５，Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ（Ｃａｌａｂｒｅｓｉ  ｅｔ  ａＬ，ｅｄｓ．）、Ｃｈａｐｔｅｒ  １０，ＭｃＭｉｌｌａｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇに開示されるものなどのその他従来の細胞傷害性化合物も、本発明の方法に応用可能である。
【０２３０】
本発明の方法においてＣＤ３８を特異的に結合する抗体と併用して使用できる代表的な薬剤として、チロシンキナーゼ阻害薬、並びにＩＲＥＳＳＡ（商標）（ゲフィチニブ）及びＴａｒｃｅｖａ（登録商標）（エルロチニブ）などの癌標的療法、並びにその他ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＨＥＲ４又はＶＥＧＦのアンタゴニストが挙げられる。代表的なＨＥＲ２アンタゴニストとして、ＣＰ−７２４−７１４、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（商標）（トラスツズマブ）、ＯＭＮＩＴＡＲＧ（商標）（ペルツズマブ）、ＴＡＫ−１６５、ＴＹＫＥＲＢ（登録商標）（ラパチニブ）（ＥＧＦＲ及びＨＥＲ２阻害薬）、並びにＧＷ−２８２９７４が挙げられる。代表的なＨＥＲ３アンタゴニストとして、抗Ｈｅｒ３抗体（例えば、米国特許出願公開第２００４／０１９７３３２号参照）が挙げられる。代表的なＨＥＲ４アンタゴニストとして、抗ＨＥＲ４  ｓｉＲＮＡ（例えば、Ｍａａｔｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  Ｃｅｌｌ  １７：６７〜７９，２００６参照）が挙げられる。代表的なＶＥＧＦアンタゴニストは（Ａｖａｓｔｉｎ（商標）（ベバシズマブ）である。
【０２３１】
本発明の方法においてＣＤ３８を特異的に結合する抗体と併用して使用できる代表的な薬剤として、固形腫瘍の標準治療薬、又は免疫チェックポイント阻害薬が挙げられる。
【０２３２】
本発明の方法における第２の治療薬は、免疫チェックポイント阻害薬であってよい。
【０２３３】
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害薬は、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＰＤ−Ｌ２抗体、抗ＬＡＧ３抗体、抗ＴＩＭ３抗体、又は抗ＣＴＬＡ−４抗体である。
【０２３４】
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害薬は、アンタゴニスト抗ＰＤ−１抗体、アンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ１抗体、アンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ２抗体、アンタゴニスト抗ＬＡＧ３抗体、又はアンタゴニスト抗ＴＩＭ３抗体である。
【０２３５】
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害薬は抗ＰＤ−１抗体である。
【０２３６】
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害薬は抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。
【０２３７】
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害薬は抗ＰＤ−Ｌ２抗体である。
【０２３８】
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害薬は抗ＬＡＧ３抗体である。
【０２３９】
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害薬は抗ＴＩＭ３抗体である。
【０２４０】
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害薬は抗ＣＴＬＡ−４抗体である。
【０２４１】
任意のアンタゴニスト抗ＰＤ−１抗体を、本発明の方法で使用してよい。使用できる代表的な抗ＰＤ−１抗体は、ＯＰＶＩＤＯ（登録商標）（ニボルマブ）及びＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標）（ペンブロリズマブ）である。ＯＰＶＩＤＯ（登録商標）（ニボルマブ）は、例えば米国特許第８，００８，４４９号（抗体５Ｃ４）に記載されており、配列番号２４のＶＨ及び配列番号２５のＶＬを含む。ＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標）（ペンブロリズマブ）は、例えば米国特許第８，３５４，５０９号に記載されており、配列番号２２のＶＨ及び配列番号２３のＶＬを含む。ニボルマブ及びペンブロリズマブのアミノ酸配列も、ＣＡＳ登録によって入手可能である。使用できる追加のＰＤ−１抗体は、米国特許第７，３３２，５８２号、米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号、国際公開第２０１４／１７９６６号及び米国特許出願公開第２０１４／０３５６３６３号に記載されている。
【０２４２】
「アンタゴニスト」は、細胞タンパク質に結合すると、そのタンパク質の天然リガンドによって誘導される少なくとも１つの反応又は活性を抑制する分子を指す。少なくとも１つの反応若しくは活性が、アンタゴニスト非存在下（例えば、陰性対照）で抑制される少なくとも１つの反応若しくは活性よりも、少なくとも約３０％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、若しくは１００％阻害されるとき、又は、アンタゴニスト非存在下での抑制と比較してその抑制が統計的に有意であるとき、分子はアンタゴニストである。アンタゴニストは、抗体、可溶性リガンド、低分子、ＤＮＡ又は、ｓｉＲＮＡなどのＲＮＡであってよい。例えばＰＤ−１によって誘導される典型的な反応又は活性は、その受容体であるＰＤ−Ｌ１又はＰＤ−Ｌ２への結合により、抗原特異的ＣＤ４＋若しくはＣＤ８＋細胞増殖が減少し得る、又は、Ｔ細胞によるインターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）産生が減少し得ることであり、例えば腫瘍に対する免疫応答の抑制をもたらす。ＴＩＭ−３によって誘導される典型的な反応又は活性は、その受容体、例えばガレクチン−９への結合により、抗原特異的ＣＤ４＋若しくはＣＤ８＋細胞増殖が減少し得る、Ｔ細胞によるＩＦＮ−γ産生が減少し得る、又は、ＣＤ１３７の表面発現（ＣＤ４＋若しくはＣＤ８＋細胞上の）が減少し得ることであり、例えば腫瘍に対する免疫応答の抑制をもたらす。したがって、ＰＤ−１に特異的に結合するアンタゴニストＰＤ−１抗体、アンタゴニストＰＤ−Ｌ２、ＴＩＭ−３に特異的に結合するアンタゴニスト抗体は、抑制経路を阻害することによって免疫応答を誘導する。
【０２４３】
配列番号２２
ＱＶＱＬＶＱＳＧＶＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＹＭＹＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＮＰＳＮＧＧＴＮＦＮＥＫＦＫＮＲＶＴＬＴＴＤＳＳＴＴＴＡＹＭＥＬＫＳＬＱＦＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＤＹＲＦＤＭＧＦＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
【０２４４】
配列番号２３
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＫＧＶＳＴＳＧＹＳＹＬＨＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＬＡＳＹＬＥＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＨＳＲＤＬＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
【０２４５】
配列番号２４
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＤＣＫＡＳＧＩＴＦＳＮＳＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＷＹＤＧＳＫＲＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＦＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＮＤＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
【０２４６】
配列番号２５
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＮＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＳＳＮＷＰＲＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
【０２４７】
免疫応答を増強する抗ＰＤ−Ｌ１抗体を、本発明の方法で使用してよい（例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ１抗体）。使用できる代表的な抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、デュルバルマブ、アテゾリズマブ及びアベルマブ、並びに、例えば、米国特許出願公開第２００９／００５５９４４号、米国特許第８，５５２，１５４号、同第８，２１７，１４９号、及び同第８，７７９，１０８号に記載されるものである。
【０２４８】
デュルバルマブは、配列番号２６のＶＨ及び配列番号２７のＶＬを含む。
【０２４９】
アテゾリズマブは、配列番号２８のＶＨ及び配列番号２９のＶＬを含む。
【０２５０】
アベルマブは、配列番号３０のＶＨ及び配列番号３１のＶＬを含む。
【０２５１】
配列番号２６
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧ  ＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＲＹＷＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＮ  ＩＫＱＤＧＳＥＫＹＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧ  ＧＷＦＧＥＬＡＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
【０２５２】
配列番号２７
ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＲＶＳＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫ  ＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＳＲＡＴＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＹＧＳＬＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
【０２５３】
配列番号２８
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＳＷＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＷＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＨＷＰＧＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
【０２５４】
配列番号２９
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＬＹＨＰＡＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
【０２５５】
配列番号３０
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＩＭＭＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＹＰＳＧＧＩＴＦＹＡＤＴＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＩＫＬＧＴＶＴＴＶＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
【０２５６】
配列番号３１
ＱＳＡＬＴＱＰＡＳＶＳＧＳＰＧＱＳＩＴＩＳＣＴＧＴＳＳＤＶＧＧＹＮＹＶＳＷＹＱＱＨＰＧＫＡＰＫＬＭＩＹＤＶＳＮＲＰＳＧＶＳＮＲＦＳＧＳＫＳＧＮＴＡＳＬＴＩＳＧＬＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＳＳＹＴＳＳＳＴＲＶＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬ
【０２５７】
本発明はまた、治療的に有効な量の配列番号４のＶＨ及び配列番号５のＶＬを含むＣＤ３８を特異的に結合する抗体を、配列番号２４のＶＨ及び配列番号２５のＶＬを含む抗ＰＤ−１抗体と併用して、固形腫瘍の治療に十分な期間、それを必要とする患者に投与することを含む、固形腫瘍を有する患者を治療する方法も提供する。
【０２５８】
本発明はまた、治療的に有効な量の配列番号４のＶＨ及び配列番号５のＶＬを含むＣＤ３８を特異的に結合する抗体を、配列番号２２のＶＨ及び配列番号２３のＶＬを含む抗ＰＤ−１抗体と併用して、固形腫瘍の治療に十分な期間、それを必要とする患者に投与することを含む、固形腫瘍を有する患者を治療する方法も提供する。
【０２５９】
本発明はまた、治療的に有効な量の配列番号４のＶＨ及び配列番号５のＶＬを含むＣＤ３８を特異的に結合する抗体を、配列番号２６のＶＨ及び配列番号２７のＶＬを含む抗ＰＤ−Ｌ１抗体と併用して、固形腫瘍の治療に十分な期間、それを必要とする患者に投与することを含む、固形腫瘍を有する患者を治療する方法も提供する。
【０２６０】
本発明はまた、治療的に有効な量の配列番号４のＶＨ及び配列番号５のＶＬを含むＣＤ３８を特異的に結合する抗体を、配列番号２８のＶＨ及び配列番号２９のＶＬを含む抗ＰＤ−Ｌ１抗体と併用して、固形腫瘍の治療に十分な期間、それを必要とする患者に投与することを含む、固形腫瘍を有する患者を治療する方法も提供する。
【０２６１】
本発明はまた、治療的に有効な量の配列番号４のＶＨ及び配列番号５のＶＬを含むＣＤ３８を特異的に結合する抗体を、配列番号３０のＶＨ及び配列番号３１のＶＬを含む抗ＰＤ−Ｌ１抗体と併用して、固形腫瘍の治療に十分な期間、それを必要とする患者に投与することを含む、固形腫瘍を有する患者を治療する方法も提供する。
【０２６２】
本発明はまた、治療的に有効な量の配列番号４のＶＨ及び配列番号５のＶＬを含むＣＤ３８を特異的に結合する抗体を、配列番号２４のＶＨ及び配列番号２５のＶＬを含む抗ＰＤ−１抗体と併用して、免疫応答の増強に十分な期間、それを必要とする患者に投与することを含む、患者の免疫応答を増強する方法も提供する。
【０２６３】
本発明はまた、治療的に有効な量の配列番号４のＶＨ及び配列番号５のＶＬを含むＣＤ３８を特異的に結合する抗体を、配列番号２２のＶＨ及び配列番号２３のＶＬを含む抗ＰＤ−１抗体と併用して、免疫応答の増強に十分な期間、それを必要とする患者に投与することを含む、患者の免疫応答を増強する方法も提供する。
【０２６４】
本発明はまた、治療的に有効な量の配列番号４のＶＨ及び配列番号５のＶＬを含むＣＤ３８を特異的に結合する抗体を、配列番号２６のＶＨ及び配列番号２７のＶＬを含む抗ＰＤ−Ｌ１抗体と併用して、免疫応答の増強に十分な期間、それを必要とする患者に投与することを含む、患者の免疫応答を増強する方法も提供する。
【０２６５】
本発明はまた、治療的に有効な量の配列番号４のＶＨ及び配列番号５のＶＬを含むＣＤ３８を特異的に結合する抗体を、配列番号２８のＶＨ及び配列番号２９のＶＬを含む抗ＰＤ−Ｌ１抗体と併用して、免疫応答の増強に十分な期間、それを必要とする患者に投与することを含む、患者の免疫応答を増強する方法も提供する。
【０２６６】
本発明はまた、治療的に有効な量の配列番号４のＶＨ及び配列番号５のＶＬを含むＣＤ３８を特異的に結合する抗体を、配列番号３０のＶＨ及び配列番号３１のＶＬを含む抗ＰＤ−Ｌ１抗体と併用して、免疫応答の増強に十分な期間、それを必要とする患者に投与することを含む、患者の免疫応答を増強する方法も提供する。
【０２６７】
本発明はまた、治療的に有効な量のＣＤ３８を特異的に結合する抗体を、アンタゴニスト抗ＰＤ−１抗体と併用して、結腸直腸癌の治療に十分な期間、それを必要とする患者に投与することを含む、結腸直腸癌を有する患者を治療する方法も提供する。
【０２６８】
本発明はまた、治療的に有効な量のＣＤ３８を特異的に結合する抗体を、アンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ１抗体と併用して、結腸直腸癌の治療に十分な期間、それを必要とする患者に投与することを含む、結腸直腸癌を有する患者を治療する方法も提供する。
【０２６９】
本発明はまた、治療的に有効な量のＣＤ３８を特異的に結合する抗体を、アンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ２抗体と併用して、結腸直腸癌の治療に十分な期間、それを必要とする患者に投与することを含む、結腸直腸癌を有する患者を治療する方法も提供する。
【０２７０】
本発明はまた、治療的に有効な量のＣＤ３８を特異的に結合する抗体を、アンタゴニスト抗ＰＤ−１抗体と併用して、肺癌の治療に十分な期間、それを必要とする患者に投与することを含む、肺癌を有する患者を治療する方法も提供する。
【０２７１】
本発明はまた、治療的に有効な量のＣＤ３８を特異的に結合する抗体を、アンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ１抗体と併用して、肺癌の治療に十分な期間、それを必要とする患者に投与することを含む、肺癌を有する患者を治療する方法も提供する。
【０２７２】
本発明はまた、治療的に有効な量のＣＤ３８を特異的に結合する抗体を、アンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ２抗体と併用して、肺癌の治療に十分な期間、それを必要とする患者に投与することを含む、肺癌を有する患者を治療する方法も提供する。
【０２７３】
本発明はまた、治療的に有効な量のＣＤ３８を特異的に結合する抗体を、アンタゴニスト抗ＰＤ−１抗体と併用して、前立腺癌の治療に十分な期間、それを必要とする患者に投与することを含む、前立腺癌を有する患者を治療する方法も提供する。
【０２７４】
本発明はまた、治療的に有効な量のＣＤ３８を特異的に結合する抗体を、アンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ１抗体と併用して、前立腺癌の治療に十分な期間、それを必要とする患者に投与することを含む、前立腺癌を有する患者を治療する方法も提供する。
【０２７５】
本発明はまた、治療的に有効な量のＣＤ３８を特異的に結合する抗体を、アンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ２抗体と併用して、前立腺癌の治療に十分な期間、それを必要とする患者に投与することを含む、前立腺癌を有する患者を治療する方法も提供する。
【０２７６】
免疫応答を増強する抗ＬＡＧ−３抗体を、本発明の方法で使用してよい。使用できる代表的な抗ＬＡＧ−３抗体は、例えば、国際公開第２０１０／０１９５７０号に記載されるものである。
【０２７７】
免疫応答を増強する抗ＣＴＬＡ−４抗体を、本発明の方法で使用してよい。使用できる代表的な抗ＣＴＬＡ−４抗体は、イピリムマブである。
【０２７８】
本発明の方法で使用できる抗ＰＤ−１、抗ＰＤ−Ｌ１、抗ＰＤ−Ｌ２、抗ＬＡＧ３、抗ＴＩＭ３及び抗ＣＴＬＡ−４抗体は、本明細書に記載される方法を用いて新たに生成されてもよい。
【０２７９】
いくつかの実施形態では、配列番号３２のＶＨ及び配列番号３３のＶＬを含む抗ＰＤ１抗体を使用してよい。
【０２８０】
いくつかの実施形態では、配列番号３４のＶＨ及び配列番号３５のＶＬを含む抗ＰＤ１抗体を使用してよい。
【０２８１】
いくつかの実施形態では、配列番号３６のＶＨ及び配列番号３７のＶＬを含む抗ＴＩＭ−３抗体を使用してよい。
【０２８２】
いくつかの実施形態では、配列番号３８のＶＨ及び配列番号３９のＶＬを含む抗ＴＩＭ−３抗体を使用してよい。
【０２８３】
配列番号３２
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＳＳＹＡＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＩＰＩＦＤＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＰＧＬＡＡＡＹＤＴＧＳＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
【０２８４】
配列番号３３
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＲＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＮＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＲＮＹＷＰＬＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
【０２８５】
配列番号３４
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＡＦＳＲＹＤＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＳＶＡＹＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＬＤＮＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＳＰＹＬＳＹＦＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
【０２８６】
配列番号３５
ＥＩＶＭＴＱＳＰＡＴＬＳＶＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＬＳＤＹＬＨＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＫＳＡＳＱＳＩＳＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＳＥＤＦＡＶＹＹＣＱＮＧＨＳＦＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
【０２８７】
配列番号３６
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＳＰＹＡＰＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
【０２８８】
配列番号３７
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＮＤＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＮＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＧＧＨＡＰＩＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
【０２８９】
配列番号３８
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳＧＹＳＦＴＳＹＷＭＱＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧＡＩＹＰＧＤＧＤＩＲＹＴＱＮＦＫＧＱＶＴＩＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＡＲＷＥＫＳＴＴＶＶＱＲＮＹＦＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
【０２９０】
配列番号３９
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＥＮＶＧＴＦＶＳＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＧＡＳＮＲＹＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＧＱＳＹＳＹＰＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
【０２９１】
本発明はまた、治療的に有効な量の配列番号４のＶＨ及び配列番号５のＶＬを含むＣＤ３８を特異的に結合する抗体を、配列番号３２のＶＨ及び配列番号３３のＶＬを含む抗ＰＤ−１抗体と併用して、固形腫瘍の治療に十分な期間、それを必要とする患者に投与することを含む、固形腫瘍を有する患者を治療する方法も提供する。
【０２９２】
本発明はまた、治療的に有効な量の配列番号４のＶＨ及び配列番号５のＶＬを含むＣＤ３８を特異的に結合する抗体を、配列番号３４のＶＨ及び配列番号３５のＶＬを含む抗ＰＤ−１抗体と併用して、固形腫瘍の治療に十分な期間、それを必要とする患者に投与することを含む、固形腫瘍を有する患者を治療する方法も提供する。
【０２９３】
本発明はまた、治療的に有効な量の配列番号４のＶＨ及び配列番号５のＶＬを含むＣＤ３８を特異的に結合する抗体を、配列番号３６のＶＨ及び配列番号３７のＶＬを含む抗ＴＩＭ−３１抗体と併用して、固形腫瘍の治療に十分な期間、それを必要とする患者に投与することを含む、固形腫瘍を有する患者を治療する方法も提供する。
【０２９４】
本発明はまた、治療的に有効な量の配列番号４のＶＨ及び配列番号５のＶＬを含むＣＤ３８を特異的に結合する抗体を、配列番号３８のＶＨ及び配列番号３９のＶＬを含む抗ＴＩＭ−３１抗体と併用して、固形腫瘍の治療に十分な期間、それを必要とする患者に投与することを含む、固形腫瘍を有する患者を治療する方法も提供する。
【０２９５】
本発明の方法では、ＣＤ３８を特異的に結合する抗体及び第２の治療薬の併用は、任意の都合のよい時間枠で投与されてよい。例えば、ＣＤ３８を特異的に結合する抗体及び第２の治療薬は、同日に、更に同じ静脈内注入で患者に投与されてよい。ただし、ＣＤ３８を特異的に結合する抗体及び第２の治療薬はまた、隔日又は隔週又は隔月などで投与されてもよい。いくつかの実施形態では、ＣＤ３８を特異的に結合する抗体及び第２の治療薬は、それらが、治療される患者内に検出可能な濃度で同時に（例えば、血清中に）存在する時間内に十分近接して投与されてよい。いくつかの方法では、ある期間にわたる多数の投与回数からなるＣＤ３８を特異的に結合する抗体による一連の治療全体は、多数の投与回数からなる第２の治療薬による一連の治療がその後に続くか、又はそれに先立って行われる。１日、２日、若しくは数日、又は数週間の回復期間が、ＣＤ３８を特異的に結合する抗体の投与と第２の治療薬の投与との間に用いられてよい。
【０２９６】
ＣＤ３８を特異的に結合する抗体又はＣＤ３８を特異的に結合する抗体と第２の治療薬との併用は、任意の形態の放射線療法（体外照射療法、強度変調放射線療法（ＩＭＲＴ）、集束放射療法など）、及び任意の形態の放射線手術（ガンマナイフ、サイバーナイフ、Ｌｉｎａｃ、及び組織内放射線照射（例えば、放射性シードの埋め込み、Ｇｌｉａ  Ｓｉｔｅバルーン）など）、及び／又は外科手術とともに投与され得る。
【０２９７】
用いられ得る合焦放射線照射法には、定位放射線手術、分割定位放射線手術、及び強度変調放射線療法（ＩＭＲＴ）が挙げられる。定位放射線手術が、例えば、脳腫瘍のような場合、周囲の腫瘍のない正常な組織を避けつつ腫瘍のある組織に放射線を精密に送達することを伴うことは明らかである。定位放射線手術により適用される放射線の線量は異なり得るが、典型的には、１Ｇｙ〜約３０Ｇｙであり、例えば１〜５、１０、１５、２０、２５、最大３０Ｇｙを含む、線量における中間的な範囲を含み得る。非侵襲的な固定デバイスのおかげで、定位放射線は、１回の治療で送達される必要はない。治療計画は、日々、確実に複製され得、それにより、複数回用に分割した放射線量を送達するのを可能にする。放射線手術が、腫瘍を時間をかけて治療するために用いられた場合、そのような放射線治療法は、「分割定位放射線手術」又はＦＳＲと呼ばれる。対照的に、定位放射線手術とは、１回のセッションでの処置を指す。分割定位放射線手術は、高い治療率、すなわち、腫瘍細胞を高い比率で殺傷すること、及び正常な組織への低い影響を結果としてもたらし得る。腫瘍及び正常な組織は、高い放射線量を一度に照射するのと、低い放射線量を複数回照射するのに対して、それぞれ異なる反応を見せる。一度に高い放射線量を照射すると、低い放射線量を複数回照射した場合よりも、多くの正常な組織を殺傷する可能性がある。したがって、低い放射線量を複数回照射することで、正常な組織を温存しつつ、より多くの腫瘍細胞を殺傷することができる。分割定位放射線手術により適用される放射線の線量は、１Ｇｙ〜約５０Ｇｙの範囲で変化し得、例えば、１〜５、１０、１５、２０、２５、３０、４０、及び最大５０Ｇｙを含む、少分割の線量における中間的な範囲含み得る。強度変調放射線療法（ＩＭＲＴ）もまた使用され得る。ＩＭＲＴは、高精度三次元原体照射療法（３ＤＣＲＴ）のアドバンスモードであり、コンピュータ制御直線加速器を用いて、正確な放射線量を、悪性腫瘍、又は腫瘍内の特定のエリアに送達するものである。３ＤＣＲＴにおいては、それぞれの放射線ビームのプロファイルは、マルチリーフコリメータ（ＭＬＣ）を用いてビーム方向像（ＢＥＶ）から標的のプロファイルにフィットするように成形され、それにより、多くのビームを生成する。ＩＭＲＴは、放射線ビームの強度を、複数の小さな量に変調することにより、放射線量が腫瘍の三次元（３Ｄ）形状により精密に沿うものとなるのを可能にする。したがってＩＭＲＴは、周辺の正常で重要な構造への線量を最小化しつつ、より高い放射線量を腫瘍内の領域に集中させることを可能にする。ＩＭＲＴは、例えば、腫瘍が、例えば、脊髄、主要臓器、又は血管のような脆弱な構造体を包み込んでいる場合、治療容積を、窪んだ腫瘍形状に合わせる能力を改善する。
【０２９８】
ＣＤ３８を特異的に結合する抗体及びヒアルロニダーゼを含む医薬組成物の皮下投与
ＣＤ３８を特異的に結合する抗体は、ＣＤ３８を特異的に結合する抗体と、ヒアルロニダーゼと、を含む医薬組成物として皮下に投与され得る。
【０２９９】
皮下投与される医薬組成物中のＣＤ３８を特異的に結合する抗体の濃度は、約２０ｍｇ／ｍＬであってよい。
【０３００】
皮下投与される医薬組成物は、約１，２００ｍｇ〜１，８００ｍｇのＣＤ３８を特異的に結合する抗体を含んでよい。
【０３０１】
皮下投与される医薬組成物は、約１，２００ｍｇのＣＤ３８を特異的に結合する抗体を含んでよい。
【０３０２】
皮下投与される医薬組成物は、約１，６００ｍｇのＣＤ３８を特異的に結合する抗体を含んでよい。
【０３０３】
皮下投与される医薬組成物は、約１，８００ｍｇのＣＤ３８を特異的に結合する抗体を含んでよい。
【０３０４】
皮下に投与される医薬組成物は、約３０，０００Ｕ〜４５，０００Ｕのヒアルロニダーゼを含んでよい。
【０３０５】
皮下投与される医薬組成物は、約１，２００ｍｇのＣＤ３８を特異的に結合する抗体と、約３０，０００Ｕのヒアルロニダーゼと、を含んでよい。
【０３０６】
皮下投与される医薬組成物は、約１，８００ｍｇのＣＤ３８を特異的に結合する抗体と、約４５，０００Ｕのヒアルロニダーゼと、を含んでよい。
【０３０７】
皮下投与される医薬組成物は、約１，６００ｍｇのＣＤ３８を特異的に結合する抗体と、約３０，０００Ｕのヒアルロニダーゼと、を含んでよい。
【０３０８】
皮下投与される医薬組成物は、約１，６００ｍｇのＣＤ３８を特異的に結合する抗体と、約４５，０００Ｕのヒアルロニダーゼと、を含んでよい。
【０３０９】
皮下に投与される医薬組成物は、配列番号４０のアミノ酸配列を有するヒアルロニダーゼｒＨｕＰＨ２０を含んでよい。
【０３１０】
ｒＨｕＰＨ２０は、組換えヒアルロニダーゼ（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）組換え）であり、国際特許公開第２００４／０７８１４０号に記載されている。
【０３１１】
ヒアルロニダーゼは、ヒアルロン酸（ＥＣ  ３．２．１．３５）を分解し、細胞外基質内のヒアルロナンの粘度を低下させ、それによって組織の透過性を高める。
【０３１２】
配列番号４０
ＭＧＶＬＫＦＫＨＩＦＦＲＳＦＶＫＳＳＧＶＳＱＩＶＦＴＦＬＬＩＰＣＣＬＴＬＮＦＲＡＰＰＶＩＰＮＶＰＦＬＷＡＷＮＡＰＳＥＦＣＬＧＫＦＤＥＰＬＤＭＳＬＦＳＦＩＧＳＰＲＩＮＡＴＧＱＧＶＴＩＦＹＶＤＲＬＧＹＹＰＹＩＤＳＩＴＧＶＴＶＮＧＧＩＰＱＫＩＳＬＱＤＨＬＤＫＡＫＫＤＩＴＦＹＭＰＶＤＮＬＧＭＡＶＩＤＷＥＥＷＲＰＴＷＡＲＮＷＫＰＫＤＶＹＫＮＲＳＩＥＬＶＱＱＱＮＶＱＬＳＬＴＥＡＴＥＫＡＫＱＥＦＥＫＡＧＫＤＦＬＶＥＴＩＫＬＧＫＬＬＲＰＮＨＬＷＧＹＹＬＦＰＤＣＹＮＨＨＹＫＫＰＧＹＮＧＳＣＦＮＶＥＩＫＲＮＤＤＬＳＷＬＷＮＥＳＴＡＬＹＰＳＩＹＬＮＴＱＱＳＰＶＡＡＴＬＹＶＲＮＲＶＲＥＡＩＲＶＳＫＩＰＤＡＫＳＰＬＰＶＦＡＹＴＲＩＶＦＴＤＱＶＬＫＦＬＳＱＤＥＬＶＹＴＦＧＥＴＶＡＬＧＡＳＧＩＶＩＷＧＴＬＳＩＭＲＳＭＫＳＣＬＬＬＤＮＹＭＥＴＩＬＮＰＹＩＩＮＶＴＬＡＡＫＭＣＳＱＶＬＣＱＥＱＧＶＣＩＲＫＮＷＮＳＳＤＹＬＨＬＮＰＤＮＦＡＩＱＬＥＫＧＧＫＦＴＶＲＧＫＰＴＬＥＤＬＥＱＦＳＥＫＦＹＣＳＣＹＳＴＬＳＣＫＥＫＡＤＶＫＤＴＤＡＶＤＶＣＩＡＤＧＶＣＩＤＡＦＬＫＰＰＭＥＴＥＥＰＱＩＦＹＮＡＳＰＳＴＬＳＡＴＭＦＩＶＳＩＬＦＬＩＩＳＳＶＡＳＬ
【０３１３】
ＣＤ３８を特異的に結合する抗体及びヒアルロニダーゼを含む医薬組成物の投与は、１日、２日、３日、４日、５日、６日、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月以上後に繰り返すことができる。治療過程を繰り返すことも可能であり、長期にわたる投与も同様に可能である。繰り返し投与は、同一用量であるか、又は異なる用量であってよい。例えば、ＣＤ３８を特異的に結合する抗体及びヒアルロニダーゼを含む医薬組成物を、週１回を８週間、続けて２週間に１回を１６週間、続けて４週間に１回投与してよい。投与される医薬組成物は、約１，２００ｍｇのＣＤ３８を特異的に結合する抗体と、約３０，０００Ｕのヒアルロニダーゼと、を含んでよく、医薬組成物中のＣＤ３８を特異的に結合する抗体の濃度は、約２０ｍｇ／ｍＬである。投与される医薬組成物は、約１，８００ｍｇのＣＤ３８を特異的に結合する抗体と、約４５，０００Ｕのヒアルロニダーゼと、を含んでよい。投与される医薬組成物は、約１，６００ｍｇのＣＤ３８を特異的に結合する抗体と、約３０，０００Ｕのヒアルロニダーゼと、を含んでよい。投与される医薬組成物は、約１，６００ｍｇのＣＤ３８を特異的に結合する抗体と、約４５，０００Ｕのヒアルロニダーゼと、を含んでよい。
【０３１４】
ＣＤ３８を特異的に結合する抗体及びヒアルロニダーゼを含む医薬組成物は、腹部に皮下投与されてよい。
【０３１５】
ＣＤ３８を特異的に結合する抗体及びヒアルロニダーゼを含む医薬組成物は、合計量約８０ｍＬ、９０ｍＬ、１００ｍＬ、１１０ｍＬ、又は１２０ｍＬで投与されてよい。
【０３１６】
投与には、対象への混合物の投与に先立って、２５ｍＭ酢酸ナトリウム、６０ｍＭ塩化ナトリウム、１４０ｍＭ  Ｄ−マンニトール、０．０４％ポリソルベート２０、ｐＨ５．５中、２０ｍｇ／ｍＬのＣＤ３８を特異的に結合する抗体を、１０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン、１３０ｍＭ  ＮａＣｌ、１０ｍＭ  Ｌ−メチオニン、０．０２％ポリソルベート８０、ｐＨ６．５中、１．０ｍｇ／ｍＬ（７５〜１５０ｋＵ／ｍＬ）のｒＨｕＰＨ２０と混合してよい。
【０３１７】
本発明は一般論として記述されてきているが、本発明の実施形態は、特許請求の範囲を限定するように解釈されるべきではない以下の実施例で更に開示される。
【０３１８】
本発明の更なる実施形態
以下に、本明細書の他の箇所の開示に従う、本発明の更なる実施形態を列挙する。本明細書に開示される本発明に関連するものとして上述された本発明の実施形態の特徴は、これらの番号付けされた更なる実施形態のうちの１つ１つにもまた関係する。
１．固形腫瘍を有する患者の治療に用いるためのＣＤ３８を特異的に結合する抗体。
２．制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）介在性疾患を有する患者の治療に用いるためのＣＤ３８を特異的に結合する抗体。
３．治療的に有効な量のＣＤ３８を特異的に結合する抗体を対象に投与することを含む、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）介在性疾患を有する患者の治療に用いるためのＣＤ３８を特異的に結合する抗体。
４．制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を、ＣＤ３８を特異的に結合する抗体と接触させることを含む、制御性Ｔ細胞の活性の抑制に用いるためのＣＤ３８を特異的に結合する抗体。
５．骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）を、ＣＤ３８を特異的に結合する抗体と接触させることを含む、ＭＤＳＣの活性の抑制に用いるためのＣＤ３８を特異的に結合する抗体。
６．ＣＤ３８を特異的に結合する抗体を患者に投与することによって、患者における制御性Ｔ細胞数を低下させることを含む、固形腫瘍を有する患者の治療に用いるためのＣＤ３８を特異的に結合する抗体。
７．ＣＤ３８を特異的に結合する抗体を患者に投与することによって、患者における骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）細胞を低下させることを含む、固形腫瘍を有する患者の治療に用いるためのＣＤ３８を特異的に結合する抗体。
８．抗体が患者における免疫応答を誘発する、実施形態１〜７のいずれかに従って使用するためのＣＤ３８を特異的に結合する抗体。
９．免疫応答がエフェクターＴ細胞（Ｔｅｆｆ）応答である、実施形態１〜８のいずれかに従って使用するためのＣＤ３８を特異的に結合する抗体。
１０．Ｔｅｆｆ応答がＣＤ４＋Ｔ細胞又はＣＤ８＋Ｔ細胞によって媒介される、実施形態１〜９のいずれかに従って使用するためのＣＤ３８を特異的に結合する抗体。
１１．Ｔｅｆｆ応答がＣＤ８＋Ｔ細胞によって媒介される、実施形態９又は１０に従って使用するためのＣＤ３８を特異的に結合する抗体。
１２．Ｔｅｆｆ応答が、ＣＤ８＋Ｔ細胞数の増加、ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖の増加、Ｔ細胞クローン増殖の増加、ＣＤ８＋メモリー細胞形成の増加、抗原依存性抗体産生の増加、又は、サイトカイン、ケモカイン若しくはインターロイキン産生の増加である、実施形態１〜１１のいずれかに従って使用するためのＣＤ３８を特異的に結合する抗体。
１３．抗体が免疫サプレッサー細胞の機能を阻害する、実施形態１〜１３のいずれかに従って使用するためのＣＤ３８を特異的に結合する抗体。
１４．免疫サプレッサー細胞が、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）又は骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、実施形態１〜１４のいずれかに従って使用するためのＣＤ３８を特異的に結合する抗体。
１５．Ｔｒｅｇが、ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍＴ細胞である、実施形態１５に従って使用するためのＣＤ３８を特異的に結合する抗体。
１６．ＴｒｅｇがＣＤ３８を発現する、実施形態１４又は１５に従って使用するためのＣＤ３８を特異的に結合する抗体。
１７．Ｔｒｅｇの機能がＴｒｅｇの殺傷によって阻害される、実施形態１３〜１６のいずれかに従って使用するためのＣＤ３８を特異的に結合する抗体。
１８．Ｔｒｅｇの殺傷が、ＣＤ３８を特異的に結合している抗体により誘導される、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞貪食作用（ＡＤＣＰ）、細胞依存性細胞傷害（ＣＤＣ）又はアポトーシスによって媒介される、実施形態１７に従って使用するためのＣＤ３８を特異的に結合する抗体。
１９．Ｔｒｅｇの殺傷がＡＤＣＣによって媒介される、実施形態１７又は１８に従って使用するためのＣＤ３８を特異的に結合する抗体。
２０．約１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％、４６％、４７％、４８％、４９％、５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％又は６０％のＴｒｅｇが殺傷される、請求項１７〜１９に記載の方法。
２１．ＭＤＳＣが、ＣＤ１１ｂ＋ＨＬＡ−ＤＲ−ＣＤ１４−ＣＤ３３＋ＣＤ１５＋細胞である、実施形態１４に従って使用するためのＣＤ３８を特異的に結合する抗体。
２２．ＣＤ１１ｂ＋ＨＬＡ−ＤＲ−ＣＤ１４−ＣＤ３３＋ＣＤ１５＋細胞がＣＤ３８を発現する、実施形態２１に従って使用するためのＣＤ３８を特異的に結合する抗体。
２３．ＭＤＳＣの機能がＭＤＳＣの殺傷によって阻害される、実施形態２１又は２２に従って使用するためのＣＤ３８を特異的に結合する抗体。
２４．ＭＤＳＣの殺傷が、ＣＤ３８を特異的に結合している抗体により誘導される、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞貪食作用（ＡＤＣＰ）、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）又はアポトーシスによって媒介される、実施形態２３に従って使用するためのＣＤ３８を特異的に結合する抗体。
２５．ＭＤＳＣの殺傷がＡＤＣＣによって媒介される、実施形態２３又は２４に従って使用するためのＣＤ３８を特異的に結合する抗体。
２６．約１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％、４６％、４７％、４８％、４９％、５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％又は６０％のＭＤＳＣが殺傷される、実施形態２３〜２５のいずれかに従って使用するためのＣＤ３８を特異的に結合する抗体。
２７．Ｔｅｆｆ又は免疫サプレッサー細胞が骨髄又は末梢血中に存在する、実施形態１４〜２６のいずれかに従って使用するためのＣＤ３８を特異的に結合する抗体。
２８．固形腫瘍が、黒色腫、肺癌、扁平上皮非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、非扁平上皮ＮＳＣＬＣ、結腸直腸癌、前立腺癌、去勢抵抗性前立腺癌、胃癌（stomach cancer）、卵巣癌、胃癌（gastric cancer）、肝癌、膵臓癌、甲状腺癌、頭頸部の扁平上皮癌、食道又は胃腸管の癌腫、乳癌、卵管癌、脳癌、尿道癌、尿生殖器癌、子宮内膜症、子宮頸癌、又は癌の転移巣である、実施形態１４〜２７のいずれかに従って使用するためのＣＤ３８を特異的に結合する抗体。
２９．固形腫瘍がＣＤ３８発現を欠いている、実施形態１〜２８のいずれかに従って使用するためのＣＤ３８を特異的に結合する抗体。
３０．抗体が、配列番号４の重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号５の軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体と、ＣＤ３８への結合に関して競合する、実施形態１〜２９のいずれかに従って使用するためのＣＤ３８を特異的に結合する抗体。
３１．抗体が、少なくとも、ヒトＣＤ３８（配列番号１）の領域ＳＫＲＮＩＱＦＳＣＫＮＩＹＲ（配列番号２）及び領域ＥＫＶＱＴＬＥＡＷＶＩＨＧＧ（配列番号３）に結合する、実施形態１〜３０のいずれかに従って使用するためのＣＤ３８を特異的に結合する抗体。
３２．抗体が、それぞれ配列番号６、７、及び８の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１（ＨＣＤＲ１）、２（ＨＣＤＲ２）及び３（ＨＣＤＲ３）配列を含む、実施形態１〜３１のいずれかに従って使用するためのＣＤ３８を特異的に結合する抗体。
３３．抗体が、それぞれ配列番号９、１０及び１１の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１（ＬＣＤＲ１）、２（ＬＣＤＲ２）及び３（ＬＣＤＲ３）配列を含む、実施形態１〜３２のいずれかに従って使用するためのＣＤ３８を特異的に結合する抗体。
３４．抗体が、それぞれ配列番号６、７、８、９、１０及び１１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列を含む、実施形態１〜３３のいずれかに従って使用するためのＣＤ３８を特異的に結合する抗体。
３５．抗体が、配列番号４と９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるＶＨ、及び、配列番号５と９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるＶＬを含む、実施形態１〜３４のいずれかに従って使用するためのＣＤ３８を特異的に結合する抗体。
３６．抗体が、配列番号４のＶＨ及び配列番号５のＶＬを含む、実施形態１〜３１のいずれかに従って使用するためのＣＤ３８を特異的に結合する抗体。
３７．抗体が、
ａ．配列番号１４のＶＨ及び配列番号１５のＶＬ、
ｂ．配列番号１６のＶＨ及び配列番号１７のＶＬ、
ｃ．配列番号１８のＶＨ及び配列番号１９のＶＬ、又は
ｄ．配列番号２０のＶＨ及び配列番号２１のＶＬの、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、実施形態１〜２９のいずれかに従って使用するためのＣＤ３８を特異的に結合する抗体。
３８．抗ＣＤ３８抗体が、
ａ．配列番号１４のＶＨ及び配列番号１５のＶＬ、
ｂ．配列番号１６のＶＨ及び配列番号１７のＶＬ、
ｃ．配列番号１８のＶＨ及び配列番号１９のＶＬ、又は
ｄ．配列番号２０のＶＨ及び配列番号２１のＶＬを含む、実施形態３７に従って使用するためのＣＤ３８を特異的に結合する抗体。
３９．抗体が、第２の治療薬と併用して投与される、実施形態１〜３８のいずれかに従って使用するためのＣＤ３８を特異的に結合する抗体。
４０．第２の治療薬が、化学療法薬、癌標的療法（targeted anti-cancer therapy）、固形腫瘍の治療用の標準治療薬、又は免疫チェックポイント阻害薬である、実施形態３９に従って使用するためのＣＤ３８を特異的に結合する抗体。
４１．免疫チェックポイント阻害薬が、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＰＤ−Ｌ２抗体、抗ＬＡＧ３抗体、抗ＴＩＭ３抗体、又は抗ＣＴＬＡ−４抗体である、実施形態４０に従って使用するためのＣＤ３８を特異的に結合する抗体。
４２．第２の治療薬が、同時に、順次、又は別々に投与される、実施形態３９に従って使用するためのＣＤ３８を特異的に結合する抗体。
４３．患者が放射線療法によって治療される、実施形態３９〜４２のいずれかに従って使用するためのＣＤ３８を特異的に結合する抗体。
４４．固形腫瘍を有する患者の治療に使用するための配列番号４のＶＨ及び配列番号５のＶＬを含むＣＤ３８を特異的に結合する抗体。
４５．抗体が、配列番号２２のＶＨ及び配列番号２３のＶＬを含む抗ＰＤ−１抗体と併用して投与される、固形腫瘍を有する患者の治療に使用するための配列番号４のＶＨ及び配列番号５のＶＬを含むＣＤ３８を特異的に結合する抗体。
４６．抗体が、配列番号２４のＶＨ及び配列番号２５のＶＬを含む抗ＰＤ−１抗体と併用して投与される、固形腫瘍を有する患者の治療に使用するための配列番号４のＶＨ及び配列番号５のＶＬを含むＣＤ３８を特異的に結合する抗体。
４７．患者の免疫応答の増強に使用するための配列番号４のＶＨ及び配列番号５のＶＬを含むＣＤ３８を特異的に結合する抗体。
４８．抗体が、配列番号２２のＶＨ及び配列番号２３のＶＬを含む抗ＰＤ−１抗体と併用して投与される、患者の免疫応答の増強に使用するための配列番号４のＶＨ及び配列番号５のＶＬを含むＣＤ３８を特異的に結合する抗体。
４９．抗体が、配列番号２４のＶＨ及び配列番号２５のＶＬを含む抗ＰＤ−１抗体と併用して投与される、患者の免疫応答の増強に使用するための配列番号４のＶＨ及び配列番号５のＶＬを含むＣＤ３８を特異的に結合する抗体。
５０．抗体が、配列番号２６のＶＨ及び配列番号２７のＶＬを含む抗ＰＤ−Ｌ１抗体と併用して投与される、固形腫瘍を有する患者の治療に使用するための配列番号４のＶＨ及び配列番号５のＶＬを含むＣＤ３８を特異的に結合する抗体。
５１．抗体が、配列番号２８のＶＨ及び配列番号２９のＶＬを含む抗ＰＤ−Ｌ１抗体と併用して投与される、固形腫瘍を有する患者の治療に使用するための配列番号４のＶＨ及び配列番号５のＶＬを含むＣＤ３８を特異的に結合する抗体。
５２．抗体が、配列番号３０のＶＨ及び配列番号３１のＶＬを含む抗ＰＤ−Ｌ１抗体と併用して投与される、固形腫瘍を有する患者の治療に使用するための配列番号４のＶＨ及び配列番号５のＶＬを含むＣＤ３８を特異的に結合する抗体。
５３．抗体が、配列番号２６のＶＨ及び配列番号２７のＶＬを含む抗ＰＤ−Ｌ１抗体と併用して投与される、患者の免疫応答の増強に使用するための配列番号４のＶＨ及び配列番号５のＶＬを含むＣＤ３８を特異的に結合する抗体。
５４．抗体が、配列番号２８のＶＨ及び配列番号２９のＶＬを含む抗ＰＤ−Ｌ１抗体と併用して投与される、患者の免疫応答の増強に使用するための配列番号４のＶＨ及び配列番号５のＶＬを含むＣＤ３８を特異的に結合する抗体。
５５．抗体が、配列番号３０のＶＨ及び配列番号３１のＶＬを含む抗ＰＤ−Ｌ１抗体と併用して投与される、患者の免疫応答の増強に使用するための配列番号４のＶＨ及び配列番号５のＶＬを含むＣＤ３８を特異的に結合する抗体。
【実施例】
【０３１９】
実施例１．全般的な材料及び方法
サンプルの採取及び処理
末梢血及び骨髄穿刺液を、初回注入直前の基準値において、及び治療中の特定の時点でヘパリン添加管に採取した。採取２４〜４８時間後に中央検査室に到着すると、サンプルの大部分をリアルタイムフローサイトメトリーを用いて評価した。末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を全血から得て、密度勾配遠心分離によって単離し、分析まで凍結して保存した。Ｔ細胞活性化、クローン性、及びＣＤ３８＋Ｔｒｅｇ抑制アッセイには、凍結ＰＢＭＣサンプルを用いて、治療前及び後のサンプルを同時に分析した。
【０３２０】
ＮＫ、Ｔ、Ｂ、骨髄腫細胞（ＣＤ１３８＋）及びＣＤ３８発現の評価について、予め検証された免疫表現型アッセイを用いて、ＢＡＲＣ  ｇｌｏｂａｌ  ｃｅｎｔｒａｌ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙにてサンプルのフローサイトメトリー解析を行った。簡潔に言うと、血液サンプル及び骨髄サンプルを次の多蛍光色素抗体パネル、すなわち、細胞系パネル：ＰｅｒＣＰＣｙ５．５α−ＣＤ１９（ｃｌｏｎｅＨＩＢ１９；Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ［ＢＤ］）、ＡＰＣα−ＣＤ２４（ＳＮ３；ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、ＰＣ７α−ＣＤ３（ＵＣＨＴ−１；Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ）、Ｖ５００α−ＣＤ１６（３Ｇ８；ＢＤ）、及びＰＥα−ＣＤ５６（ＭＹ；ＢＤ）；制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）パネル：ＡＰＣα−ＣＤ２５（２Ａ３；ＢＤ）、ＰＥα−ＣＤ１２７（ＨＩＬ−７Ｒ−Ｍ２１；ＢＤ）、ＡＰＣ−Ｈ７α−ＨＬＡ−ＤＲ（Ｇ４６−６；ＢＤ）、及びＰｅｒＣＰα−ＣＤ４（Ｌ２００；ＢＤ）；ナイーブ／メモリーＴ細胞パネル：ＡＰＣ−Ｈ７α−ＣＤ４（ＲＰＡ−Ｔ４；ＢＤ）、ＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５α−ＣＤ８（ＲＰＡ−Ｔ４ＢＤ）、ＰＥα−ＣＤ６２Ｌ（ＳＫ１１；ＢＤ）、及びＡＰＣα−ＣＤ４５ＲＡ（ＨＩ１００；ＢＤ）で染色した。ＣＤ３８発現は、配列番号１４及び配列番号１５のＶＨ及びＶＬ配列を有する、米国特許第７，８２９，６９３号に記載のＡｌｅｘａ  ６４７標識抗体ｍＡｂ  ００３を用いて評価した。血液サンプルを、様々なＬｙｓｅ−ｗａｓｈ法を用いて調製した。骨髄穿刺液サンプルについて、膜又は細胞内染色のいずれかを様々な抗体を用いて実施した。末梢血サンプル中の赤血球の溶解にはＢｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  ＦＡＣＳＬｙｓｉｎｇ溶液を用い、骨髄穿刺液サンプルの細胞内染色にはＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎのＦｉｘ  ａｎｄ  Ｐｅｒｍ  ｃｅｌｌ  ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ試薬を用いた。ＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏ  ＩＩフローサイトメーターで染色したサンプルを得て、ＦａｃｓＤｉｖａソフトウェアを用いてデータを解析した。血液サンプル中の免疫細胞集団の絶対数と骨髄サンプル中のリンパ球の割合を、検査した全ての時点で判定した。
【０３２１】
Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の配列決定
Ｔ細胞の多様性を、ＴＣＲ再編成のディープシークエンシングによって解析し、ＰＢＭＣサンプル由来のゲノムＤＮＡを用いてＣＤ８＋Ｔ細胞のクローン性について評価した。ＴＣＲの配列決定は、Ａｄａｐｔｉｖｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓが市販しているＩｍｍｕｎｏｓｅｑ（商標）アッセイを用いて実施し、解析を、予め合格したマルチプレックスポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）アッセイ（ＴＲ２０１５ＣＲＯ−Ｖ−０１９）（可変（Ｖ）遺伝子（フォワードプライマー）及び結合（Ｊ）遺伝子（リバースプライマー）のファミリーを直接的に標的化する、フォワード及びリバースプライマーからなる）を用いて実施した。各Ｖ及びＪ遺伝子プライマーは、体細胞性に組換えられたＴＣＲを増幅するためのプライミング対として作用し、各プライマーは、特異的な普遍的ＤＮＡ配列を含んでいた。初回ＰＣＲ増幅後、各増幅産物について、ＩｌｌｕｍｉｎａによるＤＮＡ配列決定に必要な普遍的配列及びアダプター配列を含む、フォワード及びリバースプライマーを用いて２回目の増幅を行った。
【０３２２】
ウイルス抗原及び同種抗原に対するＴ細胞応答
患者のＰＢＭＣを９６ウェルプレートに播き（２×１０５細胞／ウェル）、ヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、及びインフルエンザウイルス由来の２３種類の主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）クラスＩに拘束されたウイルスペプチドカクテル（２μｇ／ｍＬ；ＣＥＦペプチドプール；ＰＡＮＡＴｅｃｓ（登録商標））、又は、同じ数の２５Ｇｙで照射した健康なドナー由来の同種ＰＢＭＣで５日間刺激した。未刺激のＰＢＭＣ、及び、抗ＣＤ３／ＣＤ２８をコーティングしたビーズで刺激したＰＢＭＣを、それぞれ陰性及び陽性対照として使用した。５日目、細胞を含まない上清のインターフェロンγ（ＩＦＮ−γ）を、サンドイッチ酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ；ヒトＩＦＮγＥＬＩＳＡ  Ｒｅａｄｙ−ＳＥＴ−Ｇｏ；ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）によって測定し、Ｔ細胞活性化の代替マーカーとして使用した。
【０３２３】
エフェクター細胞機能の制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）抑制：カルボキシフルオレセインサクシニミジル（ＣＦＳＥ）希釈アッセイ
健康なドナー由来のＰＢＭＣを、ＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５α−ＣＤ３（ＳＫ７；ＢＤ）、ＫＯα−ＣＤ４５（Ｊ３３；Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ）、Ｖ４５０α−ＣＤ４（ＳＫ３；ＢＤ）、ＰＥα−ＣＤ２５（Ｍ−Ａ２５１、ＢＤ）、ＰＥＣｙ７α−ＣＤ１２７（ＨＩＬ−７Ｒ−Ｍ２１；ＢＤ）、及びＡＰＣα−ＣＤ３８（ＨＢ−７；ＢＤ）で標識し、ＦＡＣＳ  Ａｒｉａ（ＢＤ）でソーティングした。ソーティングしたエフェクター細胞をカルボキシフルオセインサクシニミジルエステル（ＣＦＳＥ；ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）で標識し、ＲＰＭＩ＋１０％ウシ胎児血清中、ＣＤ３８＋Ｔｒｅｇ又はＣＤ３８−Ｔｒｅｇ（Ｔｒｅｇ対エフェクター細胞比１：１）の存在下又は非存在下で、抗ＣＤ３／ＣＤ２８をコーティングしたビーズを用いて刺激した。７２時間後、フローサイトメトリーを行い、ＣＦＳＥの希釈割合をＴ細胞増殖の代替として使用した。
【０３２４】
骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の表現型決定及びＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）介在性ＡＤＣＣ
３人の正常で健康なドナー由来のＰＢＭＣを、骨髄腫腫瘍細胞系（ＲＰＭＩ８２２６、Ｕ２６６、Ｈ９２９）と６日間共培養し、顆粒球性ＭＤＳＣ（Ｇ−ＭＤＳＣ）（ＣＤ１１ｂ＋ＣＤ１４−ＨＬＡ−ＤＲ−ＣＤ１５＋ＣＤ３３＋）の産生について評価した（Ｇｏｒｇｕｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １２１：２９７５〜８７，２０１３に記載）。Ｇ−ＭＤＳＣは、正常で健康なＰＢＭＣ中に存在しなかったが、３種類の骨髄腫細胞系全てとの共培養後、Ｇ−ＭＤＳＣは、総ＰＢＭＣ集団の５〜２５％として存在した（データ示さず）。Ｇ−ＭＤＳＣのフローサイトメトリーによる評価に対するゲーティング戦略は、第１ゲートっとしてＣＤ１１ｂ＋を含み、続いて、ＣＤ１４−及びＨＬＡ−ＤＲ−のゲーティング、その後、ＣＤ１５＋及びＣＤ３３＋のゲーティングが続くものであった。Ｇ−ＭＤＳＣは、ＣＤ３８発現レベルとＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）介在性ＡＤＣＣに対する感受性について、ソーティングされ、評価された細胞とした。ＭＤＳＣのＡＤＣＣ／ＣＤＣに対するＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）の影響を評価するため、補体又はアイソタイプ対照を含む血清を、ＡＤＣＣアッセイに加えた。
【０３２５】
ナイーブ及びメモリーＴ細胞分析
ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）の各注入前に、ヘパリン添加末梢血サンプルを患者から得た。末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を、フィコール・ハイパック密度勾配遠心分離によって単離し、液体窒素内の冷凍保存用培地（１０％ヒト血清及び１０％ジメチルスルホキシドを添加したＲＰＭＩ）中で保存した。ＦＡＣＳ分析では、ＰＢＭＣを解凍し、２×１０６細胞／パネルを、０．０５％アジド及び０．１％ＨＡＳを含むリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中に再懸濁した。
【０３２６】
データ解析
全てのデータ分析及び関連グラフの作成は、Ｒソフトウェア（Ｒ：Ａ  Ｌａｎｇｕａｇｅ  ａｎｄ  Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ  ｆｏｒ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ，Ｒ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ｃｏｒｅ  Ｔｅａｍ，Ｒ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ，Ｖｉｅｎｎａ，Ａｕｓｔｒｉａ，２０１１，ＩＳＢＮ  ３−９０００５１−０７−０  ｈｔｔｐ＿／／＿ｗｗｗ＿Ｒ−ｐｒｏｊｅｃｔ＿ｏｒｇ／）を独占的に使用して実行した。評価可能な応答を有する全ての治療された対象を、データ分析に含めた。一貫して、レスポンダーは、ＩＲＣによる最良効果が、ｓＣＲ、ＶＧＰＲ及びＰＲである対象として定義され、ノンレスポンダーは、ＩＲＣによる最良効果が、ＭＲ、ＳＤ及びＰＤである対象として定義される。
【０３２７】
様々な統計比較として、（ｉ）レスポンダーとノンレスポンダーとの間の基準値レベル、（ｉｉ）レスポンダー及びノンレスポンダーについて、基準値対治療中、（ｉｉｉ）レスポンダーとノンレスポンダーとの間の変化割合、（ｉｖ）基準値対治療中の変化率を含めた。各比較として、まずは、Ｓｈａｐｉｒｏ−Ｗｉｌｋ検定（Ｒｏｙｓｔｏｎ（１９９５）Ｒｅｍａｒｋ  ＡＳ  Ｒ９４：Ａ  ｒｅｍａｒｋ  ｏｎ  Ａｌｇｏｒｉｔｈｍ  ＡＳ  １８１：Ｔｈｅ  Ｗ  ｔｅｓｔ  ｆｏｒ  ｎｏｒｍａｌｉｔｙ．Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ，４４，５４７〜５５１）を用いる正規性検定が挙げられた。ほぼ例外なく、データが正規分布を有していないことがわかった。差のレベルの検定として、ノンパラメトリックなウィルコクソンの順位和検定（Ｈｏｌｌａｎｄｅｒ  ａｎｄ  Ｗｏｌｆｅ（１９７３），Ｎｏｎｐａｒａｍｅｔｒｉｃ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ．Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ．Ｐａｇｅｓ  ２７〜３３（ｏｎｅ−ｓａｍｐｌｅ），６８〜７５（ｔｗｏ−ｓａｍｐｌｅ）及びＢｏｘ−Ｃｏｘ変換後のｔ検定（Ｗｅｉｓｂｅｒｇ，Ｓ．（２０１４）Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｌｉｎｅａｒ  Ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ，Ｆｏｕｒｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｗｉｌｅｙ  Ｗｉｌｅｙ，Ｃｈａｐｔｅｒ  ７）の両方を実施することが挙げられた。Ｂｏｘ−Ｃｏｘ変換では、ゼロに等しい値に少数（１ｅ−０７）を加えた。全ての場合において、２回の検定が一致した。ウィルコクソンの順位和検定のｐ値は、別途記載のない限り、明細書全体にわたって表中に示される。レスポンダー及びノンレスポンダーについて、基準値対治療中の差について検定するとき、対象について２群の対応のある検定が行われ、他の全ての場合では、２群の独立検定が実施された。
【０３２８】
様々なリンパ球集団を分析するためのサンプルが、異なる投与スケジュールのために同一時点で採取されなかったため、集団モデリングを実施した。通院の順位について、モデル当てはめを実施した。総及び活性化ＮＫ細胞に対する集団モデリングには、折れ棒モデルへの当てはめも含めた（Ｌｕｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，「Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  ｍｏｄｅｌ  ｔｏ  ｅｓｔｉｍａｔｅ  ａ  ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ  ｄｏｓｅ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｃｏｎｆｉｄｅｎｃｅ  ｌｉｍｉｔｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｓｕｂｌｉｎｅａｒ  ｄｏｓｅ−ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ，ｅｘｅｍｐｌｉｆｉｅｄ  ｆｏｒ  ｍｕｔａｇｅｎｉｃｉｔｙ  ｄａｔａ．」Ｍｕｔａｔｉｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ／Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ  Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ  ６７８．２（２００９）：１１８〜１２２）。変量切片及び傾きを用いる線形混合効果モデルを、Ｂ細胞、Ｔ細胞亜集団、並びに、白血球、単球、好中球、及びリンパ球患者集団データに対して当てはめた（Ｂａｔｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１４）．「ｌｍｅ４：Ｌｉｎｅａｒ  ｍｉｘｅｄ−ｅｆｆｅｃｔｓ  ｍｏｄｅｌｓ  ｕｓｉｎｇ  Ｅｉｇｅｎ  ａｎｄ  Ｓ４．」ＡｒＸｉｖ  ｅ−ｐｒｉｎｔ；Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ｓｏｆｔｗａｒｅに投稿、ｈｔｔｐ：＿／／＿ａｒｘｉｖ＿ｏｒｇ／ａｂｓ／＿１４０６．５８２３）。治療開始後相対日数（ＡＤＹ）において、この線形混合モデリングを行った。対数変換した応答変数に対して、線形混合モデルの当てはめを行った。応答変数値がゼロと等しい場合は、対数尺度でのモデリングが可能になるように、全ての応答変数値に０．１を加えた。
【０３２９】
実施例２．試験５４７６７４１４ＭＭＹ２００２のデザイン（ＳＩＲＩＵＳ）
試験５４７６７４１４ＭＭＹ２００２（ＳＩＲＩＵＳ）での標的集団は、プロテアソーム阻害薬（ＰＩ）及び免疫調節薬（ＩＭｉＤ）を含む少なくとも３種類の治療歴を有する、又はＰＩ及びＩＭｉＤに対して二重治療抵抗性を有する進行多発性骨髄腫患者である。主要評価項目／最終解析の治療効果判定は、２０１１年版ＩＭＷＧガイドラインを用いた、独立審査委員会（ＩＲＣ）の評価及びコンピュータ化アルゴリズムに基づくものとした（治験総括報告書：少なくとも３種類の治療歴（プロテアソーム阻害薬及びＩＭｉＤを含む）がある、又はプロテアソーム阻害薬及びＩＭｉＤに対して二重治療抵抗性である多発性骨髄腫を有する対象における、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）の有効性及び安全性を調べる非盲検多施設第２相試験（ＥＤＭＳ−ＥＲＩ−９２３９９９２２；ｄｅ  Ｗｅｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１１）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １８６（３）：１８４０〜１８４８）。
【０３３０】
これらの評価には、全奏功率（ＯＲＲ）、奏功期間、奏功及び最良効果までの期間、臨床的有用性、無増悪期間（ＴＴＰ）、無増悪生存期間（ＰＦＳ）、及び全生存期間（ＯＳ）を含めた。
【０３３１】
この試験では、合計１２４例の対象を、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）で治療した（ｄｅ  Ｗｅｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１１）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １８６（３）：１８４０〜１８４８）。１８例の対象を８ｍｇ／ｋｇで治療し、１０６例の対象を１６ｍｇ／ｋｇで治療した。投与スケジュールは次の通りとした。
【０３３２】
Ａ群：ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）１６ｍｇ／ｋｇ：１及び２サイクル目、１、８、１５、及び２２日目（毎週）、３〜６サイクル目、１及び１５日目（隔週）、７サイクル目以降、１日目（４週毎）。それぞれのサイクルは４週間とした。
【０３３３】
Ｂ群：ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）８ｍｇ／ｋｇ：１サイクル目以降、１日目（４週毎）。
【０３３４】
この試験の主目的は、ＰＩ及びＩＭｉＤを含む少なくとも３種類の治療歴がある、又はその疾患がＰＩ及びＩＭｉＤの両方に対して二重治療抵抗性である多発性骨髄腫を有する対象において、ＯＲＲ（ＣＲ＋ＰＲ）で測定するときのＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）の２種類の治療レジメンの有効性を判定することであった（治験総括報告書：少なくとも３種類の治療歴（プロテアソーム阻害薬及びＩＭｉＤを含む）がある、又はプロテアソーム阻害薬及びＩＭｉＤに対して二重治療抵抗性である多発性骨髄腫を有する対象における、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）の有効性及び安全性を調べる非盲検多施設第２相試験。ＥＤＭＳ−ＥＲＩ−９２３９９９２２）。
【０３３５】
この試験の副次的目的は、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）の安全性及び忍容性の評価、薬物動態、免疫原性、薬力学の評価を伴う、追加の有効性評価（例えば、臨床的有用性、ＴＴＰ、ＰＦＳ、及びＯＳ）の実証、並びに、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）に対する応答を予測するバイオマーカーを探索することが挙げられた。試験に関連する更なる情報は、治験実施計画書（治験総括報告書：少なくとも３種類の治療歴（プロテアソーム阻害薬及びＩＭｉＤを含む）がある、又はプロテアソーム阻害薬及びＩＭｉＤに対して二重治療抵抗性である多発性骨髄腫を有する対象における、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）の有効性及び安全性を調べる非盲検多施設第２相試験。ＥＤＭＳ−ＥＲＩ−９２３９９９２２）から確認できる。
【０３３６】
パート１のステージ１では、８ｍｇ／ｋｇ群で１例の対象（６％）が応答し、１６ｍｇ／ｋｇ群で５例の対象（３１％）が応答した。したがって、１６ｍｇ／ｋｇ群のみをパート１のステージ２、及びパート２に展開した。
【０３３７】
１６ｍｇ／ｋｇ群では、３１例の対象でＩＲＣ評価に基づくＰＲ以上の応答を達成し、ＯＲＲは２９％であった（９５％ＣＩ：２１％、３９％）。３例の対象（３％）がｓＣＲを達成し、１３例の対象（１２％）がＶＧＰＲ以上を達成した。
【０３３８】
実施例３．５４７６７４１４ＭＭＹ２００２試験（ＳＩＲＩＵＳ）に組み入れられた患者における、Ｔ細胞の増殖及び活性に対するＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）の効果
ＣＤ３８は、様々な免疫細胞及び造血細胞で発現している。フローサイトメトリーによって幅広い免疫プロファイリングを行い、免疫細胞サブセットに対するＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）の効果と、これらの細胞の基準値レベルの臨床反応との関連性を調べた。Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋及び制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ））、Ｂ細胞（ＣＤ１９＋）、ＮＫ細胞、単球（ＣＤ１４＋）、白血球、及び好中球などの様々な細胞集団を、基準値及びＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）治療後における末梢血及び骨髄穿刺液のフローサイトメトリーによって評価し、レスポンダー及びノンレスポンダーにおけるこれらの細胞集団の変化についてモニタリングした。
【０３３９】
リンパ球、白血球、単球及び好中球
白血球、リンパ球、単球、及び好中球数を、レスポンダー及びノンレスポンダーの末梢血中で調べた。レスポンダーにおいて、８ｍｇ／ｋｇ及び１６ｍｇ／ｋｇ用量の両方のＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）治療によって総リンパ球が上昇したことがわかった（図１）。線形混合効果モデリングにより、１００日間当たり対数尺度において０．８×１０６細胞／μＬの増加が明らかとなった（ＣＩ＝０．０６、０．１１）。単球及び白血球では、それぞれ各１００日間につき、対数尺度において０．０３×１０６細胞／μＬ（ＣＩ＝０．０１、０．０４）、及び、０．０３×１０６細胞／μＬ（ＣＩ＝０．０１、０．０５）の有意な増加を伴って、わずかな増加が確認された。好中球数の中央値は基準値と一致しており、顕著に変動しなかったが、一部の患者で好中球減少症が確認された。
【０３４０】
これらの細胞集団のそれぞれの基準値レベルを、応答群間で比較した。ウィルコクソンの符号順位検定を用い、基準値レベルでは、応答群間における任意の細胞種の違いは見られなかった（表１）。
【０３４１】
【表１】
2018527299.tif 000004
【０３４２】
ＮＫ細胞
総ＮＫ細胞（ＣＤ１６＋ＣＤ５６＋）及び活性化ＮＫ細胞（ＣＤ１６＋ＣＤ５６ｄｉｍ）は、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）治療によって経時的に減少した（データ示さず）。
【０３４３】
Ｂ細胞
末梢血又は骨髄穿刺液中のＢ細胞（ＣＤ４５＋ＣＤ３−ＣＤ１９＋）の絶対数を、レスポンダー及びノンレスポンダーにおいて、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）治療中、経時的に測定した。Ｂ細胞は全血中で若干増加し、骨髄穿刺液中で維持されていた。末梢血中Ｂ細胞の線形混合モデリングによって、各１００日間につき、対数尺度において最低限の上昇である０．１×１０６細胞／μＬの増加が明らかとなった［ＣＩ＝０．０４、０．１６］（ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）治療の間）。レスポンダー又はノンレスポンダーのいずれも、ダラツムマブ治療中、骨髄穿刺液中のＢ細胞（ＣＤ４５＋ＣＤ３−ＣＤ１９＋／リンパ球）の割合は変化しなかった（それぞれ、ｐ＝０．１及び０．４）。更に、レスポンダーとノンレスポンダー間で、基準値におけるＢ細胞数の違いは見られなかった（ｐ＝０．５）。
【０３４４】
Ｔ細胞
Ｂ細胞は最低限の増加を示しただけであるものの（上記参照）、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）治療（図１）によってリンパ球の増加が確認された。更に調査するため、末梢血及び骨髄の両方において、様々なＴ細胞集団を調べた（ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋Ｔ細胞、制御性Ｔ細胞）。
【０３４５】
ＣＤ３＋、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞は、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）治療後、末梢血（絶対数／μＬ及びリンパ球の割合の両方）において増加した。図２は、全ての患者における、末梢血中ＣＤ３＋Ｔ細胞（ＣＤ４５＋ＣＤ３＋）の絶対数の、基準値からの経時的変化割合を示す。図中の黒色線は、全患者における絶対数×１０６細胞／μＬの中央値を示す。３回以上の観察結果を有する通院のみを図に含めた。図３は、全ての患者における、末梢血中ＣＤ４＋Ｔ細胞（ＣＤ４５＋ＣＤ３＋ＣＤ４＋）の絶対数の、基準値からの経時的変化％を示す。図中の黒色線は、全患者における中央値を示す。３回以上の観察結果を有する通院のみを図に含めた。図４は、全ての患者における、末梢血中ＣＤ８＋Ｔ細胞（ＣＤ４５＋ＣＤ３＋ＣＤ８＋）の絶対数の、基準値からの経時的変化％を示す。図中の黒色線は、全患者における中央値を示す。３回以上の観察結果を有する通院のみを図に含めた。末梢血中絶対数に対する線形混合モデリングにより、平均総Ｔ細胞（ＣＤ４５＋ＣＤ３＋）の、各１００日間につき、対数尺度において０．１３×１０６細胞／μＬの増加（ＣＩ＝０．１、０．１５）が明らかとなった（ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）治療後）。ＣＤ８＋Ｔ細胞は、各１００日間につき、対数尺度において０．１６×１０６細胞／μＬの有意な増加が確認された（ＣＩ＝０．１３、０．１９）。ＣＤ４＋細胞は、各１００日間につき、対数尺度において０．１１×１０６細胞／μＬの中程度の増加が確認された（ＣＩ＝０．０９、０．１３）。
【０３４６】
Ｔ細胞亜集団それぞれについて、レスポンダーはノンレスポンダーよりも、高い基準値に対する絶対数の最大変化割合を示した（ＣＤ３＋ｐ＝３．２９９３ｅ−０５；ＣＤ４＋ｐ＝３．４８６ｅ−０５；ＣＤ８＋ｐ＝２．７１７２ｅ−０５；制御性Ｔ細胞ｐ＝０．００２）。表２は、基準値に対する絶対数の変化割合について、レスポンダーとノンレスポンダーとの間の末梢血中各Ｔ細胞亜集団の比較のウィルコクソンの符号順位検定の結果を示す。
【０３４７】
【表２】
2018527299.tif 000005
【０３４８】
骨髄中でも同様に、総Ｔ細胞（ＣＤ４５＋ＣＤ３＋、リンパ球の割合として）及びＣＤ８＋Ｔ細胞（ＣＤ４５＋ＣＤ３＋ＣＤ８＋、リンパ球の割合として）は、レスポンダー及びノンレスポンダーの両方において、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）治療中に有意に増加したことがわかった（ＣＤ３＋レスポンダーｐ＝３．８１４７ｅ−０６、ノンレスポンダーｐ＝９．８２２５ｅ−０５；ＣＤ８＋レスポンダーｐ＝３．８１４７ｅ−０６、ノンレスポンダーｐ＝０．０００３）。骨髄中いずれの臨床反応群において、ＣＤ４＋Ｔ細胞の中央値は変化しなかった。表３は、骨髄中％リンパ球としての様々なＴ細胞に対する、ウィルコクソンの符号順位検定の結果を示す。図５は、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）治療中の経時的なＣＤ４５＋ＣＤ３＋細胞の割合（％）を示す（レスポンダー及びノンレスポンダーの両方をグラフに含めた）。図６は、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）治療中の経時的なＣＤ４５＋ＣＤ３＋ＣＤ８＋細胞の％を示す（レスポンダー及びノンレスポンダーの両方をグラフに含めた）。
【０３４９】
【表３】
2018527299.tif 000006
【０３５０】
レスポンダー及びノンレスポンダーの両群は、末梢血及び骨髄中のＴ細胞増加を示したが、レスポンダーは、基準値からの変化割合が最も大きかった。レスポンダー又はノンレスポンダーにおいて、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞レベルに差があるかを識別するため、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）治療に先立ち、各亜群の末梢血中基準測定値を比較した。
【０３５１】
末梢血中基準値における絶対Ｔ細胞数（表４）又は骨髄中総リンパ球からのＴ細胞割合（表５）において、レスポンダーとノンレスポンダーとの間に統計的に有意な差はなかった（ウィルコクソンの符号順位検定）。
【０３５２】
【表４】
2018527299.tif 000007
【０３５３】
【表５】
2018527299.tif 000008
【０３５４】
Ｔ制御性細胞
Ｔｒｅｇ細胞は、サンプル中のＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍ細胞集団として同定された。ＣＤ８＋Ｔ細胞のＴｒｅｇに対する比率は、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）で経時的に治療された患者の末梢血及び骨髄中で評価した。比率は、末梢及び骨髄の両方において増加した。図７Ａは、末梢血中、その時点での全ての患者のＣＤ８＋／Ｔｒｅｇ及びＣＤ８＋／ＣＤ４＋細胞比の中央値を示す。図７Ｂは、骨髄中、その時点での全ての患者のＣＤ８＋／Ｔｒｅｇ及びＣＤ８＋／ＣＤ４＋Ｔ細胞比の中央値を示す。ＣＤ８＋Ｔｒｅｇ及びＣＤ８＋／ＣＤ４＋の絶対数比の変化は、治療中経時的に末梢血（表６）及び骨髄（表７）において有意であった（ウィルコクソンの符号順位検定）。
【０３５５】
ＳＩＲＩＵＳ及びＧＥＮ５０１試験（実施例６）の総合的データ解析では、末梢血中、ＣＤ８＋／ＣＤ４＋及びＣＤ８＋／Ｔｒｅｇ細胞の比率の中央値は、８週目（ｐ＝５．１×１０−５（ＣＤ８＋／ＣＤ４＋）及びｐ＝１．８×１０−７（ＣＤ８＋／Ｔｒｅｇ）、並びに、１６週目（ｐ＝０．０００１７（ＣＤ８＋／ＣＤ４＋）及びｐ＝４．１×１０−７（ＣＤ８＋／Ｔｒｅｇ））で増加した。同様に、骨髄中では、ＣＤ８＋／ＣＤ４＋及びＣＤ８＋／Ｔｒｅｇ細胞の比率の中央値は、基準値と比較して、治療中（１２週目±１サイクル）に増加した（ｐ＝０．０００１６（ＣＤ８＋／ＣＤ４＋及びｐ＝２．８×１０−７（ＣＤ８＋／Ｔｒｅｇ））。レスポンダーとノンレスポンダーとの間に有意差は見られなかった。
【０３５６】
【表６】
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【０３５７】
【表７】
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【０３５８】
実施例４．試験デザイン（ＧＥＮ５０１）
試験ＧＥＮ５０１（ＮＣＴ００５７２４８８）は、二重治療抵抗性ＭＭ患者において、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）を単剤療法として評価した。サンプル単離、処理及び統計解析は、実施例１及び実施例２に記載されるものとした。この試験は、Ｌｏｋｈｏｒｓｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎ  Ｅｎｇ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３７３：１２０７〜１９，２００５に記載されている。
【０３５９】
簡潔に言うと、試験ＧＥＮ５０１は、ＭＭを有する対象における、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）のファーストインヒューマン臨床試験であった。これは、２つのパートに分かれた第１／２相用量漸増安全性試験である。パート１は、非盲検用量漸増試験であり、パート２は、パート１で確立した用量レベルを基準とする、複数のコホートを含む非盲検単一群試験である。
【０３６０】
パート１では、０．００５、０．０５、０．１０、０．５０、１、２、４、８、１６、及び２４ｍｇ／ｋｇの１０の用量レベルのＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）評価した。一番低い２用量のコホートには、それぞれ１（＋３）例の対象を割り当て、標準的な３（＋３）例の対象の割り当てを、残りの８用量のコホートに適用した。パート２は、２用量レベル、８ｍｇ／ｋｇ及び１６ｍｇ／ｋｇを含む、非盲検単一試験であった。パート１は３２例の対象を含め、パート２は７２例の対象を含めた。
【０３６１】
実施例５．ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）治療は、患者においてＴ細胞クローン性を誘導する
ＭＹ２００２試験において、末梢及び骨髄の両方でＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖が確認されたことを考慮し、Ｉｍｍｕｎｏｓｅｑ（商標）アッセイを用いてＴ細胞受容体（ＴＣＲ）のハイスループット次世代配列決定を行い、ＣＤ８＋Ｔ細胞の増加が、適応免疫応答を示す事実上クローン性であるか否かを判定した。ＧＥＮ５０１試験に組み入れられた対象のうち、合計１７例の患者サンプルを評価した（ｎ＝６がレスポンダー、すなわち、≧ＰＲ；ｎ＝１１がノンレスポンダー、すなわち、ＭＲ、ＳＤ、ＰＤ）。
【０３６２】
ＴＣＲの配列決定により、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）治療により、患者全体にわたってクローン性を有意に増加させることが明らかとなった。図８Ａは、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）治療前対後のＴ細胞クローン性間の相関関係を示す（ｐ＝０．００５６）。図８Ｂは、個々の患者におけるクローン性の倍率変化を示す。レスポンダーは星印を付けている。このデータは、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）治療によって確認されたＴ細胞増殖が事実上クローン性であり得ることを示唆している。
【０３６３】
ノンレスポンダーと比較すると、レスポンダーでは、ＴＣＲレパートリー（存在量変化；ＣＩＡとして測定）の総増殖量が大きかった。図８Ｃは、個々の患者のＣＩＡ％を示す。Ａ群：レスポンダー、Ｂ群：ノンレスポンダー。レスポンダーとノンレスポンダーとの間に統計的有意差が見られた（ｐ＝０．０３７）。図８Ｄは、それぞれの増殖したＴ細胞クローンについて、レスポンダー及びノンレスポンダーでの存在量変化（ＣＩＡ）の絶対値の合計を示す。図８Ｅは、個々の患者の最大ＣＩＡ％を示す。Ａ群：レスポンダー、Ｂ群：ノンレスポンダー。レスポンダーとノンレスポンダーとの間に統計的有意差が見られた（ｐ＝０．０４８）。図８Ｆは、レスポンダー（Ａ群）及びノンレスポンダー（Ｂ群）における、単一Ｔ細胞クローンの最大ＣＩＡを示す。
【０３６４】
フィッシャーの正確確率検定（ＤｅＷｉｔｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．２０１５）を用い、それぞれの増殖したクローンについて存在量変化の絶対値を合計して、２つのサンプル間のクローン存在量における有意差を同定することによってＣＩＡを得た。
【０３６５】
実施例６．ＧＥＮ５０１試験に組み入れられた患者におけるＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）の免疫調節性効果
ＧＥＮ５０１に組み入れられたレスポンダー及びノンレスポンダーにおいて、様々なＴ及びＢ細胞集団を評価した。
【０３６６】
リンパ球
ＳＩＲＩＵＳ（ＭＭＹ２００２）試験と同様に、リンパ球は、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）治療中、末梢血及び骨髄の両方において増加した。この増加は、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋細胞の両方の数が増加したことに起因していた。
【０３６７】
ＣＤ８＋セントラルメモリー細胞
ＧＥＮ５０１試験に組み入れられた１７例の患者サブセットにおいて、ＣＤ８＋Ｔ細胞表現型を、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）で治療された患者で経時的に検討した。標準的手法を用いて、患者由来のＣＤ８＋細胞を、ナイーブ（ＣＤ４５ＲＯ−／ＣＤ６２Ｌ＋）（ＴＮ）又はセントラルメモリー（ＴＣＭ）（ＣＤ４５ＲＯ＋／ＣＤ６２Ｌ＋ｈｉｇｈ）細胞として同定した。
【０３６８】
図９Ａは、ＣＤ８＋ナイーブ細胞％（ＣＤ８＋細胞％）を示し、図９Ｂは、ＣＤ８＋セントラルメモリー細胞％を示す。ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）治療により、ナイーブＣＤ８＋Ｔ細胞の量が有意に減少し（ｐ＝１．８２×１０−４、８週目時点）、ＣＤ８＋メモリーＴ細胞の量が有意に増加した（ｐ＝４．８８×１０−２、８週目時点）。これは、ナイーブな細胞傷害性Ｔ細胞から、特異的抗原に対して活性化され得るメモリーＴ細胞への変換を示唆している。白色四角は、少なくとも最小奏功（≧ＭＲ）を達成した患者を示し、黒色四角は、安定又は進行であった患者を示す。ＣＤ８＋ナイーブＴ細胞の有意に大幅な減少は、治療に応答した患者において明らかであった（データ示さず）。図９Ｃは、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）治療により、ウイルス特異的かつアロ反応性Ｔ細胞応答を部分的に促進する、ＨＬＡクラスＩに拘束されたＴ細胞の割合が増加したことを示す。図９Ｄは、低レベルのＣＤ３８を発現していたエフェクターメモリーＴ細胞が増殖していることを示す。これらのＴ細胞が、ウイルスペプチド及び同種抗原に対し、通常及び更には増加した機能活性を呈することへの留意が重要である（実施例８参照）。これらの機能的結果から、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）治療中に、ウイルス及び同種抗原に対して抗原を経験したＴ細胞の増加、又は活性の増強があると結論付けた。これらのデータは、制御性細胞サブセットとは異なり、エフェクターＴ細胞は、適切に機能し、増殖するためにＣＤ３８の発現を必要としないことを示唆している。
【０３６９】
ＣＤ３８陽性制御性Ｔ細胞
いくつかの免疫抑制性細胞サブセットがＣＤ３８を発現していることを示す最近の文献と合わせて、細胞傷害性Ｔ細胞の安定した増殖と活性増強が見られたことによって、制御性細胞集団である制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）及び制御性Ｂ細胞（Ｂｒｅｇ）に対するＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）の効果の検討が促された。
【０３７０】
制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）（ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍ）を、標準的手法を用いて単離した。Ｔｒｅｇの頻度を、フローサイトメトリーを用いて解析した。
【０３７１】
末梢性Ｔｒｅｇの亜集団（１０％±１０％）は、Ｔｒｅｇ活性化前に高レベルのＣＤ３８を発現していた。図１０Ａの上部パネルは、基準値における、ＣＤ３＋ＣＤ４＋細胞集団（Ｐ４細胞集団）中のＴｒｅｇの頻度を示す。図１０Ａの下部パネルは、高ＣＤ３８を発現しているＴｒｅｇのサブセットを示す（Ｐ５細胞集団）。これらのＣＤ３８＋Ｔｒｅｇは、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）治療に対する反応性が高く、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）の初回用量後、有意かつほぼ速やかな減少を示した（ｎ＝１７例の患者；Ｐ＝８．８８×１０−１６、基準値に対する１週目時点）。ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）治療後のＴｒｅｇの頻度を、図１０Ｂの上部パネルに示す（Ｐ４細胞集団）。図１０Ｂの下部パネルは、ＣＤ３８ｈｉｇｈ  Ｔｒｅｇ（Ｐ５細胞）が、初回のＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）注入後、最も有意に枯渇したＴｒｅｇ集団であったことを示す。これらのＣＤ３８＋Ｔｒｅｇは、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）治療中枯渇したままであった（ｐ＝８．８８×１０−１６、１．１１×１０−１５、及び１．５０×１０−１１、基準値に対するそれぞれ１、４、及び８週目時点）。図１０Ｃは、基準値、１週目、４週目、８週目、再発、及び治療終了（ＥＯＴ）後の６ヶ月目における、ＣＤ３８ｈｉｇｈ  Ｔｒｅｇ％（総ＣＤ３＋細胞より）を示す。ＣＤ３８ｈｉｇｈＴｒｅｇは、その時点では基準値まで回復していた。ＣＤ３８＋Ｔｒｅｇの変化は、治療に応答した患者と応答しなかった患者との間で類似していたが、ＣＤ８＋Ｔ細胞：Ｔｒｅｇの比率は、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）への応答を示した患者の８週目において、有意に高かった（Ｐ＝０．００９５５；図１０Ｄ）。
【０３７２】
ＣＤ３８＋Ｔｒｅｇの枯渇とＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）治療との考えられる生物学的関連性を評価するため、ＣＤ３８＋Ｔｒｅｇ対ＣＤ３８−Ｔｒｅｇで、自家ＣＤ３＋Ｔ細胞に対する抑制能を評価した。複数の健康ドナー由来のサンプルを用いて行った一連の実験において、ＣＤ３８＋Ｔｒｅｇは、ＣＤ３８−Ｔｒｅｇ（観察された細胞増殖の５３．２％）又は陰性対照（観察された細胞増殖の７４．９％）よりも強くＴ細胞増殖を抑制した（観察された細胞増殖の９．９％）（図１０Ｅ）。
【０３７３】
ＭＤＳＣは、凍結ＰＢＭＣサンプル中で容易に検出可能ではなかったため、ＣＤ３８＋顆粒球性ＭＤＳＣ（ＣＤ１１ｂ＋ＣＤ１４−ＨＬＡ−ＤＲ−ＣＤ１５＋ＣＤ３３＋）を、基準値での患者、及びＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）注入を１回受けた患者から単離したＰＢＭＣより、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで産生させた。図１１は、同定されたＭＤＳＣのフローサイトメトリーヒストグラムを示す（図１１、上のヒストグラム、四角で囲んだ細胞集団）。ＭＤＳＣの約半分がＣＤ３８を発現していた（図１１、中央のグラフ；円で囲んだＰ７細胞集団）。ＣＤ３８ｈｉｇｈＭＤＳＣは、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）で治療された患者ではほぼ枯渇した（図１１、下のグラフ；円で囲んだＰ７細胞集団）。
【０３７４】
ＣＤ３８ｈｉｇｈ系非特異的ＭＤＳＣは、ノンレスポンダー及び治療に対して少なくとも最小奏功（Minimal Repose）であった患者の両方において、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）治療により経時的に枯渇した。図１２は、ＣＤ３８ｈｉｇｈ  ＭＤＳＣの割合が、治療１週目、４週目又は８週目の患者において、ほぼ０％まで減少したことを示す。ＣＤ３８ｈｉｇｈ系非特異的ＭＤＳＣは、治療終了後に基準値まで回復した。
【０３７５】
系非特異的ＭＤＳＣ内で最も多くＣＤ３８＋集団を有する患者は、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）治療に対して最も良好で、最も持続した応答を示した。図１３は、最も高いＣＤ３８ｈｉｇｈＭＤＳＣの割合（図１１に示す）を有しており、ＰＲ又はＭＲ患者として分類された患者２、４、１５、１６及び１７が、少なくとも８ヶ月の無増悪生存期間（ＰＦＳ）を有していたことを示す。
【０３７６】
また、ＣＤ３８ｈｉｇｈ系非特異的ＭＤＳＣは、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）誘発性ＡＤＣＣに対してもｉｎ  ｖｉｔｒｏで感受性があった。ＡＤＣＣアッセイは、２人のドナー由来のＣＤ３８ｈｉｇｈ  ＭＤＳＣ、及び対照標的細胞としてのＤａｕｄｉ細胞を、エフェクター：標的細胞比を５０：１で用いて実施した。図１４は、１人のドナーの実験結果を示す。ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）は、ＭＤＳＣ細胞の溶解を誘発した。
【０３７７】
ＣＤ３８＋Ｂｒｅｇを、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）で治療した患者（ｎ＝１６）において測定したところ、ＣＤ３８＋Ｔｒｅｇと同様に、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）の初回用量後に枯渇し（ｐ＝０．００１８、基準値と比較した１週目時点；対応のあるウィルコクソンの順位検定）、患者が治療されている間低いままであった（図１５Ａ）。ＦＡＣＳでソーティングしたＢｒｅｇは、刺激すると、ＩＬ−１０を産生した（図１５Ｂ）。
【０３７８】
総じて、これらの観察結果は、免疫抑制性ＣＤ３８＋ＭＤＳＣ、Ｂｒｅｇ、及びＴｒｅｇの枯渇は、Ｔ細胞集団及びクローン性におけるＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）誘発性変化を顕著に引き起こすメカニズムであることを示唆している。
【０３７９】
実施例７．ＣＤ３８＋ＭＤＳＣ細胞は癌患者に存在する
ＭＤＳＣ（Ｌｉｎ−ＣＤ１４−ＨＬＡＤＲｌｏｗ／−）の割合及びそれらのＣＤ３８発現について、ＮＳＣＬＣ又は前立腺癌患者の末梢血を、フローサイトメトリーを用いて検討した。
【０３８０】
ＭＤＳＣの割合は、ＮＳＣＬＣ及び前立腺癌患者の分析サンプルにおいて、それぞれＰＢＭＣの約１０％〜３７％、約１０％〜２７％であった。ＣＤ３８発現は、ＮＳＣＬＣ患者のＰＢＭＣ由来のＬｉｎ−ＣＤ１４＋ＨＬＡＤＲ−／ｌｏｗ  ＭＤＳＣの８０〜１００％、及び、前立腺癌患者のＰＢＭＣ由来のＭＤＳＣの７０〜１００％で同定された。
【０３８１】
実施例８．ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）は、抗ウイルスＴ細胞応答を増強する
Ｔ細胞活性化及び機能性に対するＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）の効果を更に評価するため、ウイルス及び同種抗原に応答した末梢性Ｔ細胞からのＩＦＮ−γ産生を、様々な臨床成績を有するＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）で治療した患者（ｎ＝７）において測定した。ＰＲ以上の患者は、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）治療後、基準値と比較して治療中の少なくとも１つの時点において、ウイルス及び同種抗原に応答したＩＦＮ−γ分泌の有意な増加を示し、Ｔ細胞機能が、ＣＤ３８の低発現によって損なわれなかったことを示唆している（実施例６、図９Ｃ参照）。ＴＣＲクローン性データと同様に、この増加は、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）に応答した患者において、応答しなかった患者よりも顕著であった。図１６Ａは、１人の代表的なＶＧＰＲ患者の抗ウイルス応答を示す。図１６Ｂは、１人の代表的なＣＲ患者の抗ウイルス応答を示す。図１６Ｃは、１人の代表的なＰＤ患者の抗ウイルス応答を示す。図１６Ｄは、１人の代表的なＭＲ患者の抗ウイルス応答を示す。図において、エラーバーは２回繰り返した培養の平均値の標準誤差を示す。アスタリスクは、示された比較間の統計的に有意な変化を意味する。独立審査委員会による最良効果を示す。これらの結果と一致して、ＶＧＰＲ（図１６Ｅ）又はＣＲ（図１６Ｆ）の患者におけるウイルス反応性Ｔ細胞は、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）治療中の増殖能の増加を示した。
【０３８２】
実施例９．ＣＤ３８発現免疫細胞サブタイプのＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）に対する感受性メカニズム
ＧＥＮ５０１及びＳＩＲＩＵＳ両試験のデータから、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）療法により、ＣＤ３８を発現する一部の免疫細胞が枯渇し（ＮＫ細胞、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、制御性Ｂ細胞（Ｂｒｅｇ）、及び骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ））、一方で、ＣＤ３８を発現する別の細胞数が増加する（細胞傷害性及びヘルパーＴ細胞）ことが示された。
【０３８３】
感受性メカニズムに取り組むため、健康なドナー及びＧＥＮ５０１又はＳＩＲＩＵＳ試験に組み入れられた多発性骨髄腫患者において、様々な免疫細胞亜集団のＣＤ３８の発現レベルを評価した。図１７Ａは、健康なドナー由来の免疫細胞における、ＣＤ３８発現のヒストグラムを示し、図１７Ｂは、多発性骨髄腫患者由来の免疫細胞における、ＣＤ３８発現のヒストグラムを示す。健康なドナーでは、ＣＤ３８発現はＮＫ細胞で最も高く、続いて単球、Ｂ及びＴ細胞であった。多発性骨髄腫患者では、ＣＤ３８発現は形質細胞で最も高く、続いてＢ細胞、ＮＫ細胞、単球、Ｂ細胞及びＴ細胞のサブセットであった。図１７Ｃは、再発及び治療抵抗性骨髄腫患者由来のＮＫ細胞、Ｔｒｅｇ、Ｂｒｅｇ、Ｂ及びＴ細胞でのＣＤ３８の平均蛍光強度（ＭＦＩ）の比較を示し、形質細胞の後、ＮＫ細胞が最も高いレベルでＣＤ３８を発現し、続いて制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）及び制御性Ｂ細胞（Ｂｒｅｇ）であったことを示している。
【０３８４】
ＣＤ３８発現に加え、補体阻害性タンパク質（ＣＩＰ；ＣＤ４６、ＣＤ５５、ＣＤ５９）などの他の細胞表面タンパク質が、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）に対する感受性又は耐性に寄与している場合がある。免疫細胞亜集団に対するＣＩＰのｉｎ  ｖｉｔｒｏ評価により、ＮＫ細胞が非常に低レベルのＣＤ５９及びＣＤ５５を発現している一方で、他のＴ及びＢ細胞集団ははるかに高レベルで発現していることがわかった。このことも、免疫細胞サブタイプに対する多様なＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）感受性に寄与している可能性がある（データ示さず）。
【０３８５】
考察
この試験は、これまで知られていなかった、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）の、ＣＤ３８＋免疫抑制性細胞集団の減少と、それに付随するウイルスペプチドに応答するヘルパー及び細胞傷害性Ｔ細胞増殖、ＩＦＮ−γ産生の誘導、及び、改善された適応免疫応答を示すＴＣＲクローン性増加による免疫調節性効果を説明している。
【０３８６】
この試験は、ＭＤＳＣ及びＢｒｅｇがＣＤ３８を発現しており、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）治療に感受性であったことを示した。これらの細胞は、腫瘍微小環境に存在し、腫瘍増殖、免疫回避、血管新生、転移、及び抑制性サイトカインの産生に寄与していることが知られている。これらのＣＤ３８＋抑制性細胞サブセットに加えて、こちらも高レベルのＣＤ３８を発現し、優れた自家Ｔ細胞抑制能を呈していた、新規亜集団である制御性Ｔ細胞（ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍ）が同定された。これらの細胞も、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）感受性であり、治療を受けた患者で有意に減少した。これらのＣＤ３８＋免疫制御性細胞のＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）介在性殺滅は、骨髄腫微小環境内の局所的免疫抑制を低下させ、陽性免疫エフェクター細胞の増殖と、抗腫瘍応答への寄与を可能にできる。
【０３８７】
実際には、末梢血及び骨髄（すなわち、腫瘍）の両方において、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋の両方を含む幅広いＴ細胞集団の有意な増加が観察された。特異的ＣＤ８＋亜集団は、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）療法によって変化し、これにはナイーブＴ細胞の有意な減少と、それに付随するエフェクターメモリーＣＤ８＋Ｔ細胞の有意な増加が含まれており、抗原を経験した表現型（免疫記憶を保持し、腫瘍抗原に対して反応し得る）へのエフェクターＴ細胞の移行を示している。ＣＤ８＋：ＣＤ４＋及びＣＤ８＋：Ｔｒｅｇの比率も、治療によって有意に増加し、陰性免疫調節因子に対する陽性への移行を示している。
【０３８８】
増殖したＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞が事実上クローン性であったかどうかを評価するため、Ｔ細胞レパートリーを患者サブセットにおいて調べた。Ｔ細胞クローン性は、最良効果がＳＤ、又は進行した患者であっても、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）治療で有意に増加した。したがって、Ｔ細胞クローン性の増加は、単純に腫瘍量の減少に起因し得ない。しかしながら、Ｔ細胞クローン性の歪みは良好な臨床反応の患者で大きく、ＣＤ８＋Ｔ細胞の増加と相関していたことから、観察されたＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）治療によるＴ細胞増殖が抗原によるものであったことが示唆される。このことは、たくさんの予備治療（治療歴の中央値、５回）を受けた患者集団で顕著であり、強い抗腫瘍免疫応答を開始できることは期待できない。ＴＣＲクローン性の増加に加え、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）に応答した患者が、予め存在しているウイルス及び同種抗原に対するＴ細胞応答の増加を示したことから、免疫系が免疫抑制状態から回復したことが示唆された。
【０３８９】
ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）による治療は、免疫抑制性ＭＤＳＣ、並びに制御性Ｔ及びＢ細胞の減少を引き起こした。これらの減少は、ＣＤ４＋Ｔ−ヘルパー細胞及びＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞の増殖を伴った。ＩＦＮ−γ産生によって測定されるＴ細胞クローン性及び機能性抗ウイルス応答も、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）治療によって増加した。これらの観察結果は、Ｔ細胞が、低ＣＤ３８発現にも関わらず正しく機能し続けていたことを示し、Ｔ細胞応答の増加が、制御性細胞の枯渇に起因し得ることを示唆している。更に、これらＴ細胞増殖、活性、及びクローン性の変化は、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）に応答しなかった患者と比較して、応答した患者においてより顕著であった。ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）療法からの再発は、これらの変化の多くの回復と関連していた。このことは、臨床反応及びその有効性に寄与し得る免疫調節を介する、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）の更なる、これまでに特徴がわかっていない作用機序を示唆している。
【０３９０】
最近、癌を直接標的化することよりも、抗腫瘍免疫応答を促進する抗体の有効性が様々な分野で明らかとなっている。ＣＴＬＡ−４及びＰＤ−１を阻害する抗体は、Ｔ細胞増殖を促進し、Ｔ細胞活性化を増強することによって、進行固形腫瘍及びホジキンリンパ腫などの血液悪性疾患患者において、生存期間の延長と、疾患の再発の遅延をもたらす。抗癌免疫性を増強することによって、これらの免疫調節性抗体は、臨床反応を誘発できるだけではなく、疾患再発の予防もできる。
【０３９１】
実施例１０．５４７６７４１４ＭＭＹ２００２（ＳＩＲＩＵＳ）パート２臨床試験において、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）の単剤治療を受けた（traded with）多発性骨髄腫対象の血清プロテオミクス解析
バイオマーカーサンプルの採取及び処理
末梢血サンプルを標準的な血清分離用管に採取し（２．５ｍＬ〜５ｍＬ）、血清の一部を、多重分析物血清タンパク質プロファイリングのために凍結した状態でＳｏｍａＬｏｇｉｃ，Ｉｎｃ（Ｂｏｕｌｄｅｒ，ＣＯ）に送付した。
【０３９２】
血清タンパク質プロファイリングは、ＳＯＭＡｍｅｒという親和性ベースの分子を利用して１１２９種類のタンパク質分析物を測定する予め検証されたＳＯＭＡｓｃａｎアッセイを用いて、ＳｏｍａＬｏｇｉｃにて実施した。ＳＯＭＡｍｅｒ試薬は、一本鎖ＤＮＡ系タンパク質親和性試薬である。このアッセイは、少量の注入サンプル（１５０μＬの血漿）を用いて、タンパク質シグナルを、カスタムＤＮＡマイクロアレイによって定量されるＳＯＭＡｍｅｒシグナルに変換する。
【０３９３】
各ＳＯＭＡｍｅｒは、次の４つの機能性部分を含んでいる。
１．固有のタンパク質認識配列
２．捕捉用ビオチン
３．光切断可能なリンカー
４．検出用蛍光分子
【０３９４】
固有のタンパク質認識配列はＤＮＡを使用し、アミノ酸側鎖を模倣する化学修飾したヌクレオチドを組み込んで、標準的なアプタマーの多様性を拡大し、タンパク質−核酸相互作用の特異性及び親和性を高めている（Ｇｏｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ５：ｅ１５００４，２０１０）。アプタマーは、ＳＥＬＥＸによって選択される。ＳＯＭＡｍｅｒ試薬は、天然高次構造の状態のタンパク質を用いて選択される。このように、ＳＯＭＡｍｅｒ試薬は、未変性のタンパク質三次構造を結合に必要とする。折り畳まれていない又は変性された恐らく不活性のタンパク質は、ＳＯＭＡｍｅｒ試薬によって検出されない。
【０３９５】
ＳＯＭＡｍｅｒ試薬のマスター混合物は、サンプルタイプ及び希釈によってグループ化される。サンプルのインキュベーションに先立ち、試薬をストレプトアビジンビーズに予め結合する。サンプル中のタンパク質を、平衡化中に同種のＳＯＭＡｍｅｒに結合させ、洗浄し、ＮＨＳ−ビオチンとインキュベートし、洗浄してから、ビーズをＵＶ光に曝露して光切断可能なリンカーを切断する。溶出液は、ビオチン標識したタンパク質に結合したＳＯＭＡｍｅｒ試薬を含んでいる。ストレプトアビジン捕捉とその後の洗浄により、未結合のＳＯＭＡｍｅｒ試薬を除去する。最終溶出液中に、変性条件によって同種タンパク質からＳＯＭＡｍｅｒ分子が放出される。最終溶出液を、カスタムのＡｇｉｌｅｎｔ  ＤＮＡマイクロアレイと、ＳＯＭＡｍｅｒ分子由来のフルオロフォア（相対蛍光単位（ＲＦＵ）で定量化）にハイブリダイズさせる。ＲＦＵは、サンプル中のタンパク質量に比例する。
【０３９６】
ＭＭＹ２００２試験のサンプルは、２つの主要なバッチにおいて検査した。第１バッチである１８０のサンプルには、対応する１サイクル目１日目（Ｃ１Ｄ１、基準値）及びＣ３Ｄ１（３サイクル目１日目）の９０例の対象由来の血清サンプルを含めた。この１８０のサンプルを、３枚の別々のＳｏｍａＳｃａｎプレートで一緒に分析した。第２バッチのサンプルには、バッチ１との３５例の重複サンプルを含む、５０例Ｃ１Ｄ１サンプルが含まれる。
【０３９７】
データ解析
入力データセット及び定義
評価可能な応答を有する治療された対象を、データ分析に含めた。この報告全体で一貫して、レスポンダーは、全最良効果（ＭＭＹ２００２のＩＲＣによる）がｓＣＲ、ＶＧＰＲ、及びＰＲ、安定（ＳＤ）である対象、最小奏功（ＭＲ）又はＳＤである対象として定義され、ノンレスポンダーは、全最良効果（ＭＭＹ２００２のＩＲＣによる）が進行（ＰＤ）である対象として定義される。
【０３９８】
Ｓｏｍａｌｏｇｉｃデータの前処理
バッチの整列
ＭＭＹ２００２サンプルのバッチ１及び２を、２種類のバージョンのＳＯＭＡｓｃａｎプラットフォームで検査した。２つのバージョン間の違いはわずかであり、バージョン間で変更されている３つのＳＯＭＡｍｅｒ配列を含んでいた（ＣＴＳＥ：３５９４−６＿１→３５９４−６＿５、ＦＣＮ１：３６１３−６２＿１→３６１３−６２＿５、ＢＭＰＥＲ：３６５４−２７＿１→３６５４−２７＿４）。これらを解析から除外した。
【０３９９】
３枚のバッチ１のプレートの測定は、ＳｏｍａＬｏｇｉｃの標準的なプレート間校正の流れに従って、マスター混合物特異的包括基準値の７ヶ所のプレート内対照標準物質測定値の中央値に対する比率を計算することによって、各ＳＯＭＡｍｅｒの全プレート校正倍率を定めることにより整列させた。各ＳＯＭＡｍｅｒ試薬のプレート特異的倍率を、プレート上の各サンプルに同等に適用した。
【０４００】
バッチ１及び２の異なるＳＯＭＡｓｃａｎプラットフォームバージョンを考慮して、バッチ間の３５のサンプルの繰り返し測定を利用することによって、ＳｏｍａＬｏｇｉｃの標準的なプレート間校正の流れを改変して実行し、系統的なバッチ間変動性補正を行った。各ＳＯＭＡｍｅｒについて、バッチ１校正後測定値をバッチ２校正前測定値で割った比を、３５の繰り返しサンプルそれぞれについて計算した（ｒｉ，ｊ）。これら３５の比の中央値を用いて、バッチ２のサンプルに対する改変ＳＯＭＡｍｅｒ特異的校正倍率を定めた
【０４０１】
【数２】
2018527299.tif 000011
次に、これらの校正倍率を、標準的なＳＯＭＡｓｃａｎの手順と同じように実行した。
【０４０２】
【数３】
2018527299.tif 000012
【０４０３】
改変校正倍率を計算した後、各分析バッチにつき全ての倍率の分布をプロットし、外れ値の有無を評価した。極めて大きい又は小さい標準物質（＞０．２５及び＜３）を伴う９つのＳＯＭＡｍｅｒは、再現性が乏しいため、解析から除外した。
【０４０４】
ＭＭＹ２００２についてバッチ整列及びＳＯＭＡｍｅｒの選別の完了後、ＭＭＹ２００２の全てのタンパク質濃度値にｌｏｇ２変換を適用し、データがより正規分布と一致するようにし、パラメトリックな統計検定の実施を改善した。
【０４０５】
交絡変数補正
メタ変数（人口統計学的因子、応答クラス、及びサンプリング時点など）によって説明されるデータセット変動部分の予測、及び考えられる交絡因子の同定は、センタリング及びスケーリングしたデータセットの主成分分析によって実施した。単純な線形モデルを当てはめ、対象とする変数それぞれと有意に関連していた、最も高順位のＰＣを同定した。これらの関連性の有意性は、ワルド検定を用いて判定し、このモデルによって説明されるＰＣ変動性の割合を当てはめのＲ２によって推定した。ＭＭＹ２００２データでは、施設ＩＤがＰＣ１と相関することがわかり、データセット変動性の最大部分を説明した（≧７．３７％、ｐ値＝３．７１×１０−９）。データ内の、サンプル取得した施設関連効果の影響を減じるため、ＣｏｍＢａｔ２８を利用して施設ＩＤ効果を補正した。
【０４０６】
繰り返しサンプルの統合
ＭＭＹ２００２のバッチ１と２との間で繰り返した３５のサンプルのデータを、各タンパク質の平均値を計算することによって統合した。
【０４０７】
タンパク質濃度差解析
レスポンダー対ノンレスポンダー
ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）レスポンダー対ノンレスポンダーにおけるタンパク質濃度分布の統計比較を、次の２種類の補足法、つまり、（ｉ）個々のＳＯＭＡｍｅｒに対するウィルコクソンの順位和検定（Ｈｏｌｌａｎｄｅｒ  ａｎｄ  Ｗｏｌｆｅ，Ｎｉｎｐａｒａｍｅｔｉｒｃ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ．Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ．１９７３．２７〜３３（ｏｎｅ−ｓａｍｐｌｅ），６８〜７５（ｔｗｏ−ｓａｍｐｌｅ）、及び、（ｉｉ）全てのＳＯＭＡｍｅｒに対するＬｉｍｍａ解析（Ｒｉｔｃｈｉｅ，Ｍ．Ｅ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２０１５；２０：４３（７）：ｅ４７）を同時に使用して、基準値及び治療中の両方において実施した。全てのｐ値は、複数の仮説補正に対するＢｅｎｊａｍｉｎｉ−Ｈｏｃｈｂｅｒｇ（ＢＨ）法を用いて補正した（Ｂｅｎｊａｍｉｎｉ  ａｎｄ  Ｈｏｃｈｂｅｒｇ，（１９９５）Ｊ．Ｒ．Ｓｔａｔｉｓｔ．Ｓｏｃ．Ｂ．５７：２８９〜３００；Ｒ：Ａ  Ｌａｎｇｕａｇｅ  ａｎｄ  Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ  ｆｏｒ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ，Ｒ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ｃｏｒｅ  Ｔｅａｍ，Ｒ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ，Ｖｉｅｎｎａ，Ａｕｓｔｒｉａ．２０１１；ＩＳＢＮ  ３−９０００５１−０７−０）。差次的発現がないという帰無仮説は、補正ｐ値が＜０．０５のときに棄却した。
【０４０８】
治療中対基準値
基準値対治療中のタンパク質濃度は、３種類の別の統計手法である、（ｉ）二元配置反復測定分散分析６、（ｉｉ）ウィルコクソンの符号順位検定、及び（ｉｉｉ）フリードマン検定（Ｊｏｈｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）Ｂｉｏｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ  ８（１）：１１８〜１２７）を用いて比較した。全てのｐ値は、複数の仮説補正に対するＢＨ法を用いて、対照のＦＤＲに補正した（Ｂｅｎｊａｍｉｎｉ  ａｎｄ  Ｈｏｃｈｂｅｒｇ，Ｊ．Ｒ．Ｓｔａｔｉｓｔ．Ｓｏｃ．Ｂ．５７：２８９〜３００，１９９５）。治療の有意性に加え、二元配置反復測定分散分析（Ｃｈａｍｂｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｖａｒｉａｎｃｅ；ｄｅｓｉｇｎｅｄ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ：Ｃｈａｐｔｅｒ  ５．Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ｍｏｄｅｌｓ  ｉｎ  Ｓ，Ｅｄｉｔｏｒｓ  Ｊ．Ｍ  Ｃｈａｍｂｅｒｓ  ａｎｄ  Ｔ．Ｊ  Ｈａｓｔｉｅ．Ｗａｄｓｗｏｒｔｈ  ＆  Ｂｒｏｏｋｅｓ／Ｃｏｌｅ．１９９２）を、有意な時点：応答クラスの相互関係が各ＳＯＭＡｍｅｒについて生じたかどうかを判定するためにも適用した。レスポンダー及びノンレスポンダーが異なる治療効果を示したかどうかを特異的に判定するため、全ての対象の治療中及び基準値のタンパク質濃度値間の差を計算し、ウィルコクソンの順位和検定を行うことによる、改変したウィルコクソンの順位和検定を事後的検定として適用した。有意値をＢＨ法を用いて補正し、補正ｐ値が＜０．０５のとき、帰無仮説を棄却した。
【０４０９】
分類器訓練
ＭＭＹ２００２の基準値タンパク質濃度データを用いて、応答を予測する分類器を作り上げた。４種類の機械学習器であるサポートベクターマシン（ＳＶＭ）、ランダムフォレスト（ＲＦ）、単純ベイズ（ＮＢ）、及びｊ４８決定木を用いて、入れ子のループ層別化１０分割交差検証法を３０回繰り返した。各学習器において、訓練手順は、１０にバランスよく分割したデータセットを作ることから始めた（外側ループ）。これらの分割のうち１つをテストコホートとして保持し、一方、残りの９つを訓練コホートとして内側ループに通した。内側ループ内で、訓練コホートを再度バランスよく１０分割し、内側訓練及び内側テストセットを作成した。学習器を、これら内側訓練セットそれぞれについて学習させ、このプロセスを外側ループ内の各コホートについて３０回繰り返した。内側テストセットの予測における各内側ループ学習器の精度を用いて、特徴を選択し、モデルパラメータを最適化した。各訓練コホートについて３０回の内側ループが完了した後、各対応するテストコホートについて、外側ループの性能（最適化パラメータ及び特徴を用いて）を評価した。続いて、外側ルーピング全体を３０回繰り返して、データセット内の全サンプルに対する３０種類の応答予測が生じさせた。このルーピング手法によって得られたＡＵＣ、感受性、及び特異性の統計値は、完全なオリジナルデータセットで訓練した最終モデルが、新規試験例についてどの程度うまく実行するかについて近似していた。
【０４１０】
ＭＭＹ２００２試験からの結果
タンパク質発現の治療誘発性応答依存性変化などの様々な比較を実施した。レスポンダーにおいて経時的な発現減少を示したタンパク質の１つは、ＰＤ−Ｌ１であり、一方ＰＤ−Ｌ１タンパク質の発現は、ノンレスポンダーにおいて経時的に増加した。ＰＤ−Ｌ１のＴ細胞上への結合により、Ｔ細胞機能の低下と、Ｔｒｅｇ発生の増加につながる。図１８は、レスポンダー、ノンレスポンダー、及び安定である患者における、１サイクル目及び３サイクル目のＰＤ−Ｌ１のタンパク質発現プロファイルを示す。
【０４１１】
受容体であるＰＤ−１とのＰＤ−Ｌ１の結合により、抗腫瘍応答が抑制され、Ｔ細胞アネルギーと枯渇が引き起こされる。任意の特定の理論に束縛されるものではないが、ＣＤ３８治療によるＰＤ−Ｌ１の下方制御によっても、固形腫瘍における抗腫瘍免疫応答の改善された増強をもたらし得る。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図８Ｄ】
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【図８Ｅ】
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【図８Ｆ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図９Ｃ】
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【図９Ｄ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１０Ｃ】
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【図１０Ｄ】
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【図１０Ｅ】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１６Ａ】
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【図１６Ｂ】
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【図１６Ｃ】
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【図１６Ｄ】
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【図１６Ｅ】
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【図１６Ｆ】
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【図１７Ａ】
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【図１７Ｂ】
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【図１７Ｃ】
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【図１８】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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