(57)【要約】【課題】本発明は、長期保存中の薬物の薬効を安定に維持しながら、エタネルセプト副生成物の生成を効果的に低減させる、安定した液体エタネルセプト製剤を提供する。【解決手段】本発明の液体組成物は、エタネルセプトを使用する治療が必要な部位へ即時に適用するために準備された、シリンジ中に予め充填して提供する。【選択図】なし
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
約４％〜５％のエタネルセプト；約０．４５％〜０．５％のアルギニン塩酸塩；約０．１７％〜０．２１％のリン酸二ナトリウム二塩基性七水和物；約０．２％〜０．２５％リン酸ナトリウム一塩基性一水和物；約０．５％〜０．６％の塩化ナトリウム；約０．９％〜１％のスクロース；約０．１８％〜０．２％のマンニトールおよび約９２〜９３％の注射用グレードの精製水を含む、安定性が改善されたエタネルセプト組成物。
【請求項２】
５０ｍｇのエタネルセプト；５．３ｍｇのアルギニン塩酸塩；２．０３ｍｇのリン酸二ナトリウム二塩基性七水和物；２．４ｍｇのリン酸ナトリウム一塩基性一水和物；５．８４ｍｇの塩化ナトリウム；１０ｍｇのスクロース；２ｍｇのマンニトールおよび１ｍｌの注射用精製水を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
予め充填されたシリンジのための注射溶液の形態の、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
請求項１に記載の組成物を調製する方法であって、
ａ．エタネルセプト、一塩基性リン酸塩、二塩基性リン酸塩、スクロースおよび塩化ナトリウムの溶液を調製するステップと；
ｂ．ステップａ）による溶液を凍結するステップと；
ｃ．０．１Ｎ水酸化ナトリウム溶液を調製するステップと；
ｄ．タンジェンシャル濾過装置を洗浄し滅菌し、注射用溶液を作製するために、水ですすぐステップと；
ｅ．装置のフィルターの透過性試験を実施するステップと；
ｆ．前記タンジェンシャル濾過装置のカートリッジ膜の完全性を試験するステップと；
ｇ．ステップｂ）による溶液を解凍するステップと；
ｈ．解凍したエタネルセプト溶液にマンニトールを加えるステップと；
ｉ．マンニトールが最終溶液に完全に取り込まれるまで、穏やかに混合するステップと；
ｊ．この混合物を、９８〜１０２ｒｐｍの速度で、蠕動ポンプを用いて０．４５μｍのフィルターに通すステップと；
ｋ．溶液を５０ＫＤａの膜を有する前記タンジェンシャル濾過装置に通すステップと；
ｌ．前記溶液を、直列に接続した２つの０．２２μｍフィルターに通すステップと；
ｍ．ガラスシリンジに、前のステップで得た前記溶液を１〜１．０１ｍｌの容量で充填するステップと
を含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、その改善された安定性により、保存中のエタネルセプトの化学的および物理的変性を低減させる、注射用溶液の製造のためのエタネルセプトの水性製剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
エタネルセプトは、細胞表面上のＴＮＦ−アルファ受容体に結合してＴＮＦ−アルファによって媒介される免疫応答を阻害するＴＮＦ−アルファの競合阻害剤として機能する、生物学的炎症調節物質である。したがって、エタネルセプトは、関節リウマチ、乾癬および強直性脊椎炎の治療に使用される。タンパク質薬剤として、エタネルセプトは、周囲温度の変化、せん断応力、振動、凍結／解凍、ＵＶ曝露、ｐＨ変化、有機溶媒および微生物汚染に影響されやすいので、平均有効期間が短く、化学的にも物理的にも容易に変性する。化学的変性としては、エタネルセプト分子を構成する二量体の解離、酸化、脱アミノ化、異性化および重合が挙げられ、これらは抗体の種々の属性、すなわち、塩、ｐＨおよび温度による。化学的変性としてはまた、三次構造の消失、モノマー同士の共有結合／非共有結合による凝集および接着も挙げられる。エタネルセプトの物理的および化学的変性は、その生理学的活性を消失させ、変性が不可逆的プロセスなので、これによりその治療有効性が低下する。
したがって、凝集物のない生理学的有効量を含有するエタネルセプト製剤についていくつかの研究が行われてきた。安定した製剤を調製するためには、適切な安定剤が必要である。今までのところ、安定剤を組み合わせて使用すると、それらの間で競合が起こり、副作用が望ましくない影響をもたらす可能性がある。
安定した液体エタネルセプト製剤について若干の研究があるが、安定化の唯一の手順は、ｌ−アルギニンなどのアミノ酸をスクロースおよびリン酸緩衝液と組み合わせて使用することによるものである。
【０００３】
特許ＭＸ２６３，１９２は、免疫グロブリンのＦｃドメインに融合したＴＮＦ受容体ポリペプチド（ＴＮＦＲ：Ｆｃ）を含有する、長期保存に適した水性医薬組成物を保護する。この特許はまた、ｐＨ調節剤、浸透圧調節剤（ｔｏｎｉｃｉｔｙ  ｍｏｄｉｆｉｅｒ）および賦形剤をこの組成物と組み合わせる工程に加えて、Ｌ−アルギニンから単離されたＴＮＦＲ：Ｆｃを組み合わせることによって前記医薬組成物を製剤化する方法も含む。別の実施形態では、この特許は、医薬組成物を含むデバイスまたは容器を記載する。アルギニンを含まないポリペプチドを含有する組成物、および炎症または免疫応答関連障害を治療するための方法を対象とする出願ＭＸ／ａ／２０１４／００００９３において、特に、ポリペプチドはエタネルセプトである。出願ＭＸ／ａ／２０１３／０１４０２７は、エタネルセプト（遺伝子組換えｓＴＮＦＲ：Ｆｃ  ｐ７５融合タンパク質）の安定した液体製剤に関し、より詳細には、保存中のエタネルセプト副生成物の形成を低減させるのに十分な量の、メチオニン、ヒスチジンおよびそれらの薬学的に許容される塩からなる群から選択される１種または複数の安定剤を含む、液体製剤に関する。
この液体製剤は、エタネルセプト副生成物の生成を効果的に低減し、長期保存の間、その安定した薬学的有効性を維持する。したがって、投与前に復元する手順は必要とされず、無菌製剤を患者に投与して患者の安全を確保することができる。
ＷＯ２０１４／１７７５４８（Ａ１）２０１４−１１−０６は、ＴＮＦＲｉＦｃポリペプチドの保存を可能にする安定した液体製剤を提供する。これらの安定した水性組成物は、アルギニンおよびシステインを含まず、高温でも非常に安定である。これらの組成物は、生理学的体液塩濃度と同様な塩量を含む。この水性組成物は、ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域に融合したヒトｐ７５腫瘍壊死因子受容体の細胞外結合部分である単離されたポリペプチドと、８０〜１３０ｍＭ濃度の塩と、トレハロースおよびスクロースの群ならびにそれらの組み合わせから選択される賦形剤とを含み、この組成物中にアルギニンもシステインも存在しないことを特徴とする。
【０００４】
特許ＥＰ２７６８５３５（Ａ４）２０１５−０３−１１「キシリトールによって安定化されたエタネルセプト製剤」は、長期保存を支援する安定した液体エタネルセプト製剤を提供する。この安定化された水性医薬組成物は、エタネルセプトおよびエタネルセプトの不安定性、凝集、ミスフォールディングおよび／または断片化を阻害するための安定剤を含み、この安定剤は、キシリトールまたはキシリトールとメグルミンの組み合わせを含む。
ＥＰ２７６８５３３（Ａ１）２０１４−０８−２７、ＥＰ２７６８５３３（Ａ４）２０１５−０３−１１；「糖およびポリオールの組み合わせによって安定化されたエタネルセプト」において、エタネルセプト製剤は安定化され、好ましくはアルギニンを含まず、長期間の安定化が達成されている。
【０００５】
ＷＯ２０１２／１４３４１８（Ａ１）２０１２−１０−２６；「ＴＮＦＲ．Ｆｃ融合タンパク質の安定した液体製剤」は、異なる緩衝系および安定剤を含む、ＴＮＦＲ：Ｆｃ融合タンパク質の安定した医薬液体製剤に関し、特に、物理的なＴＮＦＲ：Ｆｃの安定性は、緩衝系としてクエン酸塩を、安定剤としてリジンおよび／またはプロリンを使用することによって著しく改善される。
米国特許第７５０７７４５（Ｂ２）号２００９−０３−２４「フルオロカルボン酸エステルおよび可溶性ＴＮＦ受容体融合タンパク質に基づく医薬組成物」は、ＴＮＦＲ：Ｆｃを含んでいてもよい医薬組成物を記載している。クエン酸塩緩衝液は、任意の適切なクエン酸塩緩衝液であり得る。アミノ酸は、リジンおよびプロリンの群ならびに塩酸塩などのそれらの薬学的に許容される塩から選択され、さらに、医薬組成物は、少なくとも１つの浸透圧調節剤を含んでいてもよく、好ましくは、少なくとも１つの浸透圧調節剤は、塩化ナトリウム、システイン、ヒスチジン、グリシン、塩化カリウム、スクロース、グルコースおよびマンニトールの群から選択され、好ましくは、塩化ナトリウムおよび／またはスクロースである。組成物はまた、少なくとも１つの賦形剤を含んでいてもよく、少なくとも１つの賦形剤は、ラクトース、グリセロール、キシリトール、ソルビトール、マンニトール、マルトース、イノシトール、トレハロース、グルコース、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、デキストラン、ポリビニルアセテート（ＰＶＡ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）、ゼラチン、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、ヒドロキシエチルセルロース（ＨＥＣ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール、グリセロール、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、Ｌ−セリン、グルタミン酸ナトリウム、アラニン、ソルビタンモノラウレート、ポリオキシエチレングリシン、サルコシン、γ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）、（Ｔｗｅｅｎ−２０）、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（Ｔｗｅｅｎ−８０）、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、ポリソルビン酸、ポリオキシエチレンコポリマー、リン酸カリウム、酢酸ナトリウム、硫酸アンモニウム、硫酸マグネシウム、硫酸ナトリウム、トリメチルアミンＮ−オキシド、ベタイン、亜鉛イオン、銅イオン、カルシウムイオン、マンガンイオン、マグネシウムイオン、ＣＨＡＰＳ、スクロースモノラウレートおよび２−Ｏ−ベータ−マンノグリセレートからなる群から選択されてよい。
【０００６】
現時点では、例えば、ＴＮＦＲ：Ｆｃタンパク質、エタネルセプトは、以下の組成を有し、特許ＭＸ２６３１９２により保護されているＥｎｂｒｅｌ（登録商標）の商品名で市販されている：
エタネルセプトの組成（Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標））
エタネルセプト              ５０ｍｇ／ｍｌ；０．３ｍＭ
エタネルセプト              １０ｍｇ／ｍｌ；２９ｍＭ
塩化ナトリウム              ５．８ｍｇ／ｍｌ；１００ｍＭ
Ｌ−アルギニン塩酸塩        ５．３ｍｇ／ｍｌ；２５ｍＭ
塩化ナトリウム              ２．６ｍｇ／ｍｌ；１９ｍＭ
リン酸二ナトリウム          ０．９ｍｇ／ｍｌ；６ｍＭ
精製水ｐＨ６．３±０．２    ０．５／１．０ｍｌ
しかしながら、両親媒性低分子の添加によって制御されることが意図されている抗体の凝集生成物には依然として問題がある。エタネルセプトのような融合タンパク質は、様々な分解、凝集産物を生成することがあり、これによりその後、活性が低下し、免疫原性などの副作用をもたらす可能性がある。したがって、ＴＮＦＲ：Ｆｃ融合タンパク質であるエタネルセプトの安定した液体製剤への要求が依然として存在する。このため、エタネルセプトの活性を長期間安定して維持することができ、エタネルセプトの現行組成物の安定化に有効である、新規な液体製剤を開発する必要がある。
これらの製剤は、様々な課題を実行しなければならない。例えば、この製剤は、生理学的に許容できるものでなくてはならず、かつ、好ましくは、治療有効濃度でこのバイオ医薬品の安定性を保証する環境を提供しなければならない。さらに、この製剤は、薬物の満足のいく有効期間を可能にすべきである。
【発明の概要】
【０００７】
したがって、本発明の目的は、以前の公知の製剤の代替としての役割を果たす可能性のあるＴＮＦＲ：Ｆｃのための医薬製剤を提供することである。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】本発明の主題である組成物の加速安定性試験の要約表を示す。
【図２】本発明の主題である組成物の長期安定性試験の要約表を示す。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
本発明を構成する組成物は、皮下投与のための水溶液中のエタネルセプトの平均有効期間を延長する。平均有効期間のこの延長は、少量の浸透圧調節剤の添加によって達成され、このことは、液体の恒常性の維持に著しく寄与する。浸透圧調節は、内部環境の浸透圧を調節し、体液の恒常性を維持する能動的な方法である。
したがって、エタネルセプトの水性組成物中に補助的な浸透圧調節剤を添加すると、組成物中の安定性に寄与し、エタネルセプト分子を形成する二量体の解離を減少させ、三次構造の消失、モノマー同士の共有結合的／非共有結合的凝集および接着を回避することによって、化学的変性を回避する。
一般的に、上記背景技術の章で引用された文献中で参照されている従来の組成物では、浸透圧調節剤として作用することもできる単一の安定剤を使用し、かつ、組成物に等張性を与える単一の賦形剤、例えばスクロースを使用する。Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標）製品の組成物においてさえ、単一の安定剤としてｌ−アルギニンを、単一の賦形剤としてスクロースを使用するのみである。安定剤と浸透圧調節剤との組み合わせは、都合のよいものとは考えられていない。実際に、複数の安定剤または複数の賦形剤を添加し、さらにいくつかの賦形剤または安定化剤を導入することは、一般的なベストプラクティスの下では望ましくないと一般的に考えられている。特に、明細書および特許請求の範囲において、単一の安定化剤および単一の賦形剤の使用が強調されている特許ＭＸ２６３１９２を参照されたい。これはすべて、エタネルセプトの化学的および物理的安定性に影響を及ぼす化合物の導入を避けるためである。したがって、本発明の組成物は、マンニトールのような追加の浸透圧調整剤を添加することによって改善された安定性を有する組成物を提供する。
【００１０】
組成物の有効成分は、α因子ヒト腫瘍壊死のＩＩ型受容体：ＩｇＧ  Ｆｃの、遺伝子組換え融合タンパク質（ｒｈ  ＴＮＦＲ：Ｆｃ）である、エタネルセプトである。これは、宿主細胞としてチャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ細胞）から得られ、遺伝子組換えＤＮＡ技術によって産生される、遺伝子操作タンパク質の一種であり、ＰＴ５  ＴＮＦ−αＩＩ型受容体およびヒトＦｃ  ＩｇＧ１を融合させたタンパク質である。遺伝子工学の抗体作製プロセスと同様に、この製品のための有効成分の作製プロセスは、主に２ステップ、すなわち、細胞培養および精製を含む。
投与様式は、所望される治療効果に依存するので、用量は疑いなく投与様式に最も関連する問題の１つである。この場合、主に関節リウマチおよび強直性脊椎炎などの自己免疫疾患に現れる炎症メカニズム内の腫瘍壊死因子による炎症性疾患の治療を指す。必然的に、作用部位は人体の異なる部分にあり、したがってそのバイオアベイラビリティは一般的でなければならない。周囲温度条件下ではタンパク質が不安定であるため、保存様式および温度も考慮する必要がある。これらの要因を考慮に入れて、最も適切な剤形は皮下注射溶液であることが判明した。なぜなら、それが吸収されて体循環に組み込まれる皮下レベルに、薬剤を付着させることが求められているからである。皮下注射溶液の利点は、必要な注射量がより少なく、迅速な投与経路であり、痛みが少なく、初回通過効果が回避されることである。
【００１１】
さらに、この特定の投与目的には、その剤形、製剤、製造プロセス、容器施栓系および微生物学的条件が適切である。
製造プロセスは、エタネルセプトバルク溶液２５ｍｇ／ｍｌの濃縮からなる。タンジェンシャル濾過または限外濾過プロセスにより、溶液の初期濃度は２倍になり、粒子サイズ排除機構によって初期溶液の半分の容量を得るが、ここでは、分子量５０ＫＤａ未満の粒子のみがフィルター膜を通過して、初期溶液容量の半分の、５０ｍｇ／ｍｌの最終濃度を得る。このプロセスは、より高いタンパク質濃度を得るために非常に重要であり、より高いタンパク質濃度を得ることができれば、したがってより少量の溶液でより多くのタンパク質を投与することができる。患者が投薬を施される治療では都合がよい。
最終注射溶液の組成物は、自己免疫に起因する種々の疾患を治療するために使用される有効成分である、エタネルセプトを含有する。エタネルセプトは、腫瘍壊死因子を阻害することによって作用する。腫瘍壊死因子は、免疫系細胞を産生し、炎症反応の急性期を刺激するサイトカイン群の物質である。
【００１２】
リン酸二ナトリウム二塩基性七水和物は、溶液中に添加される濃度に応じて溶液に酸または塩基をもたらす４つの異なるイオンに解離する物質であり、この特徴により、ｐＨ緩衝溶液を形成するために使用できる。
リン酸ナトリウム一塩基性一水和物もまた、溶液中に存在する量に応じて酸または塩基をもたらす４つの異なるイオンに解離するので、これもまたｐＨ緩衝溶液を形成するために使用する。
アルギニン塩酸塩は、活性分解成分を保護する抗酸化剤であるため、溶液中のタンパク質を安定化させる。
塩化ナトリウムは、溶液の浸透圧を高める塩素およびナトリウムイオンをもたらすことによって溶液の等張性を調節し、可能な限り患者の体液の浸透圧に近づけるように、最終溶液の等張性を維持する。
【００１３】
スクロースは浸透圧保護剤として作用する。換言すれば、浸透圧を上昇させてストレス条件下で膨圧および適切な水ポテンシャルを維持し、これによりタンパク質の完全性を保護する。
マンニトールは浸透圧調節剤である。浸透圧調節は、体液の恒常性を維持することによって内部媒体の浸透圧を能動的に調節することである。この意味で、マンニトールは、溶液中のオスモル数を増やし、溶媒中で溶質を増加させるものとして作用する。これにより、溶液の張性が改変して、周囲の媒体に良好な浸透勾配が加えられ、適用部位での溶液の吸収に有利になる。
量は、全組成物質量に対する、成分質量パーセント（％）またはｗ／ｗとして表される。
【００１４】
本発明に含まれる組成物は、約４％〜５％のエタネルセプト；約０．４５％〜０．５％のアルギニン塩酸塩；約０．１７％〜０．２１％のリン酸二ナトリウム二塩基性七水和物；約０．２％〜０．２５％リン酸ナトリウム一塩基性一水和物；約０．５％〜０．６％の塩化ナトリウム；約０．９％〜１％のスクロース；約０．１８％〜０．２％のマンニトールおよび約９２〜９３％の注射用グレードの精製水を含む。
特に、本発明に含まれる組成物は、約５０ｍｇのエタネルセプト；約５．３ｍｇのアルギニン塩酸塩；約２．０３ｍｇのリン酸二ナトリウム二塩基性七水和物；約２．４ｍｇのリン酸ナトリウム一塩基性一水和物；約５．８４ｍｇの塩化ナトリウム；約１０ｍｇのスクロース；約２ｍｇのマンニトールおよび約１ｍｌの注射用グレードの精製水を含む。
得られたこの組成物は、前記組成物１ｍｌが予め充填されたシリンジとして提供される。これらの予め充填されたシリンジは、エタネルセプト治療を必要とする患者に、即座に適用することができる。これらのシリンジは、制御された条件下で最大２４カ月間保存でき、これにより、即座に使用するためのエタネルセプトの投与量が、より高容量のストックの解凍を行わなくても、いつでも利用可能になる。
シリンジに約５０ｍｇ／ｍｌのエタネルセプトを予め充填するための溶液は、以下の手順によって調製される。
【００１５】
０．１Ｎ水酸化ナトリウム溶液を調製し、これを使用してタンジェンシャル濾過装置を洗浄し滅菌し、注射可能なシリンジを作製するために、タンジェンシャル濾過装置を水ですすぎ、洗浄して、水酸化ナトリウムによるｐＨを中性化する。透過性試験は最後の洗浄において実施する。タンジェンシャル濾過装置のカートリッジ膜の完全性を試験する。装置が準備完了すると、エタネルセプト、一塩基性リン酸塩、二塩基性リン酸塩、スクロースおよび塩化ナトリウムの濃縮バルク溶液を解凍する。
マンニトールをエタネルセプトのバルク解凍溶液に加え、発泡を避けるためにマニトールが最終溶液に完全に取り込まれるまで穏やかに混合する。次いで、上記混合物を、９８〜１０２ｒｐｍの速度で、蠕動ポンプを用いて０．４５μｍのフィルターに通す。次に、溶液を５０ＫＤａの膜を有するタンジェンシャル濾過装置に通して濃縮溶液を得る。
濃縮溶液は、直列に接続した２つの０．２２μｍフィルターを通過させる。最後に、ガラスシリンジに、前の工程で得られた溶液を、５０ｍｇ／ｍｌの濃度については１〜１．０１ｍｌの量で、２５ｍｇ／０．５ｍｌの濃度については０．５〜０．５１ｍｌの量で充填する。
【００１６】
安定性試験
本発明の製剤は、最大２４カ月間の長期間にわたり溶液中での保存中に、有効成分エタネルセプトの物理的および化学的同一性およびその完全性を維持する。安定性は、一般に使用されるタンパク質安定性試験によって測定することができる。また、所定の温度で所定期間、安定性を測定することができる。迅速な試験のために、製剤は、高温または高めの温度、例えば４０℃で、２週間〜１カ月間、またはより長期間保存して、この期間の長さに基づいて安定性を測定することができる。
【００１７】
表１および２は、加速安定性試験および長期安定性試験の結果を示しており、ここで、３カ月の安定性試験の間に、本発明の組成物に含まれるエタネルセプトの物理的同一性、化学的性質および完全性が維持されていることがわかる。
【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
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