(57)【要約】  以下の式（Ｉ）を有するｐＨ感受性リンカー。式中、Ｘは（ＩＩ）であり；Ｐは−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−または−Ｃ（Ｏ）Ｏ−であり；Ｑは、−Ｒ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−、Ｒ（−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−）ｚ、または−Ｒ［−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ］Ｙであり；Ｒは結合、−Ｃ１〜１２アルキル、またはＣ１〜１０アルコキシであり；ｍは１〜１２であり；ｚは１〜４であり；Ｙは１〜１２である。本リンカーは、金属ナノ粒子および種々の分子サイズの１つまたは複数の薬剤を同時に結合させることができる。【選択図】図３
2018524389.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式（Ｉ）：
【化１】
2018524389.tif 000088
（式中、Ｘは、
【化２】
2018524389.tif 000089
、−ＳＨ、−ＮＨ２（Ｂｏｃ−ＮＨ−；Ｆｍｏｃ−ＮＨ−）、−ＣＯＯＨであり；
ｎは１〜６であり；
Ｐは−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−または−Ｃ（Ｏ）Ｏ−であり；
Ｑは、−Ｒ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−、Ｒ（−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−）ｚ、または−Ｒ［−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ］Ｙであり；
Ｒは結合、−Ｃ１〜１２アルキル、またはＣ１〜１０アルコキシであり；
ｍは１〜１２であり；
ｚは１〜４であり；
Ｙは１〜１２である）
を有するｐＨ感受性リンカー。
【請求項２】
以下の式：
【化３】
2018524389.tif 000090
（リンカーＩ−アミド）
（式中、ｍは１〜１２である）
を有する、請求項１に記載のｐＨ感受性リンカー。
【請求項３】
以下の式：
【化４】
2018524389.tif 000091
（リンカーＩ−Ｃ（Ｏ）Ｏ；リンカーＩＩＩ）
（式中、ｍは１〜１２である）
を有する、請求項１に記載のｐＨ感受性リンカー。
【請求項４】
以下の式：
【化５】
2018524389.tif 000092
（ＳＨ−Ｃ２−リンカー−Ｉ）
（式中、ｍは１〜１２である）
を有する、請求項１に記載のｐＨ感受性リンカー。
【請求項５】
以下の式：
【化６】
2018524389.tif 000093
（ＳＨ−Ｃ５−リンカー−Ｉ−アミド）
（式中、ｍは１〜１２である）
を有する、請求項１に記載のｐＨ感受性リンカー。
【請求項６】
以下の式：
【化７】
2018524389.tif 000094
（ＳＨ−Ｃ５−リンカー−Ｉ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−；ＨＳ−Ｃ５−リンカー−ＩＩＩ）
（式中、ｍは１〜１２である）
を有する、請求項１に記載のｐＨ感受性リンカー。
【請求項７】
以下の式：
【化８】
2018524389.tif 000095
（ｐｐＮＨ−Ｃ１−リンカー−Ｉ−アミド）
（式中、ｐｐは保護基（ＢｏｃまたはＦｍｏｃなど）であり；ｍは１〜１２である）
を有する、請求項１に記載のｐＨ感受性リンカー。
【請求項８】
以下の式：
【化９】
2018524389.tif 000096
（ｐｐＮＨ−Ｃ１−リンカー−Ｉ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−；ＮＨ２−Ｃ１−リンカー−ＩＩＩ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−）
（式中、ｐｐは保護基（ＢｏｃまたはＦｍｏｃなど）であり；ｍは１〜１２である）
を有する、請求項１に記載のｐＨ感受性リンカー。
【請求項９】
以下の式：
【化１０】
2018524389.tif 000097
（リンカーＩＩ−アミド）
（式中、ｚは１〜４である）
を有する、請求項１に記載のｐＨ感受性リンカー。
【請求項１０】
以下の式：
【化１１】
2018524389.tif 000098
（リンカーＩＩ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−）
（式中、ｚは１〜４である）
を有する、請求項１に記載のｐＨ感受性リンカー。
【請求項１１】
以下の式：
【化１２】
2018524389.tif 000099
（ＳＨ−Ｃ５−リンカー−ＩＩ−アミド）
（式中、ｚは１〜４である）
を有する、請求項１に記載のｐＨ感受性リンカー。
【請求項１２】
以下の式：
【化１３】
2018524389.tif 000100
（ＳＨ−Ｃ５−リンカー−ＩＩ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−）
（式中、ｚは１〜４である）
を有する、請求項１に記載のｐＨ感受性リンカー。
【請求項１３】
以下の式：
【化１４】
2018524389.tif 000101
（ｐｐＮＨ−Ｃ１−リンカー−ＩＩ−アミド）
（式中、ｐｐは保護基（ＢｏｃまたはＦｍｏｃなど）であり；
ｚは１〜４である）
を有する、請求項１に記載のｐＨ感受性リンカー。
【請求項１４】
以下の式：
【化１５】
2018524389.tif 000102
（ｐｐＮＨ−Ｃ１−リンカー−ＩＩ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−）
（式中、ｐｐは保護基（ＢｏｃまたはＦｍｏｃなど）であり；
ｚは１〜４である）
を有する、請求項１に記載のｐＨ感受性リンカー。
【請求項１５】
以下の式：
【化１６】
2018524389.tif 000103
（リンカーＩＶ−アミド）
（式中、Ｙは１〜１２である）
を有する、請求項１に記載のｐＨ感受性リンカー。
【請求項１６】
以下の式：
【化１７】
2018524389.tif 000104
（リンカーＩＶ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−）
（式中、Ｙは１〜１２である）
を有する、請求項１に記載のｐＨ感受性リンカー。
【請求項１７】
以下の式：
【化１８】
2018524389.tif 000105
（ＳＨ−Ｃ５−リンカー−ＩＶ−アミド）
（式中、Ｙは１〜１２である）
を有する、請求項１に記載のｐＨ感受性リンカー。
【請求項１８】
以下の式：
【化１９】
2018524389.tif 000106
（ＳＨ−Ｃ５−リンカー−ＩＶ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−）
（式中、Ｙは１〜１２である）
を有する、請求項１に記載のｐＨ感受性リンカー。
【請求項１９】
以下の式：
【化２０】
2018524389.tif 000107
（ｐｐＮＨ−Ｃ１−リンカー−ＩＶ−アミド）
（式中、ｐｐは保護基（ＢｏｃまたはＦｍｏｃなど）であり；Ｙは１〜１２である）
を有する、請求項１に記載のｐＨ感受性リンカー。
【請求項２０】
以下の式：
【化２１】
2018524389.tif 000108
（ｐｐＮＨ−Ｃ１−リンカー−ＩＶ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−）
（式中、ｐｐは保護基（ＢｏｃまたはＦｍｏｃなど）であり；Ｙは１〜１２である）
を有する、請求項１に記載のｐＨ感受性リンカー。
【請求項２１】
任意選択的に１つまたは複数のＰＥＧと複合体を形成した、１つまたは複数の請求項１〜２０のいずれか１項に記載のリンカーと複合体を形成した金属ナノ粒子を含む金属ナノ粒子複合体。
【請求項２２】
前記金属ナノ粒子が、金ナノ粒子、パラジウムナノ粒子、白金ナノ粒子、または銀ナノ粒子である、請求項２１に記載の金属ナノ粒子複合体。
【請求項２３】
前記複数のリンカーが同一であるか異なる、請求項２１に記載の金属ナノ粒子複合体。
【請求項２４】
前記金属ナノ粒子複合体が、異なる分子長を有する複数のリンカーを含む、請求項２１に記載の金属ナノ粒子複合体。
【請求項２５】
本発明で使用される前記ＰＥＧの分子量が約２０００〜２０，０００Ｄａの範囲である、請求項２１に記載の金属ナノ粒子複合体。
【請求項２６】
前記金属ナノ粒子のサイズが約８０ｎｍ未満である、請求項２１に記載の金属ナノ粒子複合体。
【請求項２７】
前記金属ナノ粒子複合体が、１つまたは複数の同一の異なる治療薬または診断薬とさらに連結している、請求項２１に記載の金属ナノ粒子複合体。
【請求項２８】
前記治療薬が抗腫瘍薬または抗体であり；好ましくは、前記抗体が腫瘍細胞などの特定の細胞を標的にする抗体または抗腫瘍抗体である、請求項２７に記載の金属ナノ粒子複合体。
【請求項２９】
前記抗腫瘍薬が抗癌薬である、請求項２８に記載の金属ナノ粒子複合体。
【請求項３０】
前記抗癌薬が、アルキル化剤、スルホン酸アルキル、アジリジン、プリンアナログ、ピリミジンアナログ、カンプトセシン、またはドキソルビシン、シスプラチンである、請求項２９に記載の金属ナノ粒子複合体。
【請求項３１】
前記抗癌物質の量が前記金属ナノ粒子複合体の約１％〜約５０％（重量／重量）を占める、請求項２９に記載の金属ナノ粒子複合体。
【請求項３２】
１つまたは複数の同一の異なる治療薬または診断薬および薬学的に許容され得るキャリアと連結した１つまたは複数の金属ナノ粒子複合体を含む薬学的組成物。
【請求項３３】
治療薬または診断薬を被験体に送達させる方法であって、請求項２７に記載の金属ナノ粒子複合体を前記被験体に投与する工程を含む、方法。
【請求項３４】
１つまたは複数の同一の異なる治療薬または診断薬を連結した１つまたは複数の請求項１〜２０のいずれか１項に記載の金属ナノ粒子複合体を含む薬物送達系。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、薬剤とナノ粒子を連結することができるリンカーに関する。特に、本発明のリンカーは、ｐＨ感受性であり、ナノ粒子と同種または異なる種の薬剤を同時に結合することができる。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
治療化合物および診断化合物を細胞、特にサイトゾルに特異的且つ効率的に送達させることは、多くの製薬会社の主な目的である。特異性および取り込みを増大させるために多くの異なるアプローチが利用されてきた。例えば、薬物送達および癌治療のための新規のストラテジーの開発においてナノテクノロジーが広く使用されている。薬物放出が酸性腫瘍環境によって特異的に誘発されるＰＨ感受性ナノシステムが開発されており、かかるシステムは、癌処置の効率を改善することができる。Ｆｅｎｇ  Ｗｎａｎｇらは、ポリ（エチレングリコール）空間を使用して酸不安定性連結を介してＡｕＮＰ表面上にドキソルビシンを係留することによる薬物送達系を開発している（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ，２０１１，Ｖｏｌ．５，Ｎｏ．５，ｐｐ．３６７９−３６９２）。Ｔｉａｎ−Ｍｅｎｇ  Ｓｕｎらは、ヒドラゾン結合を介して金ナノ粒子に抱合したドキソルビシンを使用したがん幹細胞治療を開示している（Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ  ３５，２０１４，ｐｐ．８３６−８４５）。米国特許出願公開第２０１３／０３３１７６４号は、癌細胞を区別するためのｐＨ感受性金属ナノ粒子に抗癌薬を結合することによって抗癌薬を癌細胞内に送達させる方法に関する。ＷＯ２０１３／１３９９４２号は、金属ナノ粒子および少なくとも１つのリンカーを含むナノ粒子を提供している。
【０００３】
しかし、より効率の高いｐＨ感受性送達系の開発が依然として必要とされている。
【発明の概要】
【０００４】
以下の式（Ｉ）
【化１】
2018524389.tif 000003
（式中、Ｘは、
【化２】
2018524389.tif 000004
、−ＳＨ、−ＮＨ２（Ｂｏｃ−ＮＨ−；Ｆｍｏｃ−ＮＨ−）、−ＣＯＯＨであり；
ｎは１〜６であり；
Ｐは−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−または−Ｃ（Ｏ）Ｏ−であり；
Ｑは、−Ｒ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−、Ｒ（−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−）ｚ、または−Ｒ［−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ］Ｙであり；
Ｒは結合、−Ｃ１〜１２アルキル、またはＣ１〜１０アルコキシであり；
ｍは１〜１２であり；
ｚは１〜４であり；
Ｙは１〜１２である）を有するｐＨ感受性リンカーを提供する。
【０００５】
いくつかの実施形態では、リンカーは、以下の式：
【化３】
2018524389.tif 000005
（リンカーＩ−アミド）；
【化４】
2018524389.tif 000006
（リンカーＩ−Ｃ（Ｏ）Ｏ；リンカーＩＩＩ）；
【化５】
2018524389.tif 000007
（ＨＳ−Ｃ２−リンカー−Ｉ）；
【化６】
2018524389.tif 000008
（ＳＨ−Ｃ５−リンカー−Ｉ−アミド）；
【化７】
2018524389.tif 000009
（ＳＨ−Ｃ５−リンカー−Ｉ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−；ＨＳ−Ｃ５−リンカー−ＩＩＩ；
【化８】
2018524389.tif 000010
（ｐｐＮＨ−Ｃ１−リンカー−Ｉ−アミド）
【化９】
2018524389.tif 000011
（ｐｐＮＨ−Ｃ１−リンカー−Ｉ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−；ＮＨ２−Ｃ１−リンカー−ＩＩＩ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−）；
【化１０】
2018524389.tif 000012
（リンカーＩＩ−アミド）；
【化１１】
2018524389.tif 000013
（リンカーＩＩ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−）；
【化１２】
2018524389.tif 000014
（ＳＨ−Ｃ５−リンカー−ＩＩ−アミド）；
【化１３】
2018524389.tif 000015
（ＳＨ−Ｃ５−リンカー−ＩＩ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−）；
【化１４】
2018524389.tif 000016
（ｐｐＮＨ−Ｃ１−リンカー−ＩＩ−アミド）；
【化１５】
2018524389.tif 000017
（ｐｐＮＨ−Ｃ１−リンカー−ＩＩ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−）；
【化１６】
2018524389.tif 000018
（リンカーＩＶ−アミド）；
【化１７】
2018524389.tif 000019
（リンカーＩＶ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−）；
【化１８】
2018524389.tif 000020
（ＳＨ−Ｃ５−リンカー−ＩＶ−アミド）；
【化１９】
2018524389.tif 000021
（ＳＨ−Ｃ５−リンカー−ＩＶ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−）；
【化２０】
2018524389.tif 000022
（ｐｐＮＨ−Ｃ１−リンカー−ＩＶ−アミド）；または
【化２１】
2018524389.tif 000023
（ｐｐＮＨ−Ｃ１−リンカー−ＩＶ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−）
を有する。
【０００６】
本発明はまた、任意選択的に１つまたは複数のＰＥＧと複合体を形成した、１つまたは複数の本発明のリンカーと複合体を形成した金属ナノ粒子を含む金属ナノ粒子複合体を提供する。１つの実施形態では、金属ナノ粒子は、金ナノ粒子、パラジウムナノ粒子、白金ナノ粒子、または銀ナノ粒子である。１つの実施形態では、リンカーは同一であるか異なる。より好ましくは、金属ナノ粒子複合体は、異なる分子長を有する複数のリンカーを含む。
【０００７】
本発明はまた、１つまたは複数の同一の異なる治療薬または診断薬および薬学的に許容され得るキャリアと連結した１つまたは複数の金属ナノ粒子複合体を含む組成物を提供する。
【０００８】
本発明はまた、１つまたは複数の同一の異なる治療薬または診断薬に連結した１つまたは複数の金属ナノ粒子複合体を含む薬物送達系を提供する。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１Ａ−Ｃ】図１（Ａ）〜（Ｃ）は、金ナノ粒子上に抱合した抗ＨＩＶ−１  ｐ２４抗体（ｍＡｂ３）（Ａｕ／ＬＫＩ−１／ｍＡｂ−ｐ２４）が依然として結合親和性を示したことを示す。（Ａ）Ａｕ／ＬＫＩ−１／ｍＡｂ−ｐ２４複合体およびＡｕの吸収スペクトル。Ａｕ／ＬＫＩ−１／ｍＡｂ−ｐ２４複合体は、プラズモンピークにおいて２ｎｍのレッドシフトを示す。（Ｂ）Ａｕ／ＬＫＩ−１／ｍＡｂ−ｐ２４複合体は、アレクサフルオル５６８二次抗体を使用して検出される蛍光を示した。（Ｃ）ＥＬＩＳＡアッセイを使用してＡｕ／ＬＫＩ−１／ｍＡｂ−ｐ２４複合体の形成を証明し、ｐ２４抗原の結合活性をｍＡｂ−ｐ２４の結合活性と比較した。
【００１０】
【図２Ａ−Ｂ】図２（Ａ）〜（Ｂ）は、金ナノ粒子上に抱合したＥＧＦＲ（上皮成長因子受容体）抗体（Ａｕ／ＬＫＩ−１／Ａｂ−ＥＧＦＲおよびＡｕ／ＬＫＩ−５／Ａｂ−ＥＧＦＲ）およびＡｕの吸収スペクトルを示す。（Ａ）Ａｕ／ＬＫＩ−１／Ａｂ−ＥＧＦＲ複合体は、プラズモンピークにおいて１ｎｍのレッドシフトを示す。（Ｂ）Ａｕ／ＬＫＩ−５／Ａｂ−ＥＧＦＲ複合体は、プラズモンピークにおいて１ｎｍのレッドシフトを示す。
【００１１】
【図３】図３は、金ナノ粒子上に抱合したトラスツズマブ（Ｔｒａｓ）抗体（Ａｕ／ＬＫＩ−１／Ｔｒａｓ）およびＡｕの吸収スペクトルを示す。Ａｕ／ＬＫＩ−１／Ｔｒａｓ複合体は、プラズモンピークにおいて８ｎｍのレッドシフトを示す。
【００１２】
【図４Ａ−Ｃ】図４（Ａ）〜（Ｃ）は、金ナノ粒子上に抱合したエタネルセプト（Ｅｔａｎｅｃｅｐｔ）（ＥＴＡ）（Ａｕ／ＬＫＩ−１／ＥＴＡ）が依然として結合親和性を示したことを示す。（Ａ）Ａｕ／ＬＫＩ−１／ＥＴＡ複合体およびＡｕの吸収スペクトル。Ａｕ／ＬＫＩ−１／ＥＴＡ複合体は、プラズモンピークにおいて２ｎｍのレッドシフトを示す。（Ｂ）Ａｕ／ＬＫＩ−１／ＥＴＡ複合体は、アレクサフルオル５６８二次抗体を使用して検出される蛍光を示した。（Ｃ）Ａｕ表面上に存在するＥＴＡへ１〜５ｎｍ金標識抗ヒトＩｇＧ二次抗体が結合したＡｕ／ＬＫＩ−１／ＥＴＡ複合体のＴＥＭ画像が認められた。
【００１３】
【図５】図５は、Ａｕ／ＬＫＩ−１／Ｄｏｘ複合体およびＡｕの吸収スペクトルを示す。ＵＶ／ｖｉｓデータ（波長）は、Ａｕ／ＬＫＩ−１／Ｄｏｘ複合体の３ｎｍのレッドシフトを示す。
【００１４】
【図６Ａ−Ｄ】図６（Ａ）〜（Ｄ）は、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１乳房腫瘍の処置を示す。（Ａ）処置中の動物体重（ｇ）の正味の変化。データから、ヌードマウス（Ｎ＝３）においてドキソルビシンおよびＡｕ／ＬＫＩ−１／Ｄｏｘにより、それぞれ２０％および３％を超える体重減少が認められた。これは、Ａｕ／ＬＫＩ−１／Ｄｏｘ複合体がドキソルビシンと比較してヌードマウスにおける毒性が非常に低かったことを意味する。（Ｂ）ＭＤＡ−ＭＤ−２３１乳房腫瘍成長の阻害（Ｎ＝３）：Ｄｏｘ＞Ａｕ／ＬＫＩ−１／Ｄｏｘ＞Ａｕ／ＰＥＧ＝ＰＢＳ。（Ｃ）Ａｕ／ＬＫＩ−１／Ｄｏｘ複合体で処置したＭＤＡ−ＭＢ−２３１乳房腫瘍細胞のＴＥＭ画像により、異種移植片モデルにおける腫瘍中のＡｕ／ＬＫＩ−１／Ｄｏｘ複合体が容易に判断された。（Ｄ）腫瘍検体の免疫組織化学。乳房腫瘍検体をマウスから採取し、パラフィンに包埋させ、ヘマトキシリンエオシンで染色した。Ａｕ／ＬＫＩ−１／Ｄｏｘ複合体で処置したマウス由来の腫瘍よりもドキソルビシンで処置したマウス由来の腫瘍においてより多くの壊死が認められた。
【発明の詳細な説明】
【００１５】
本発明は、少なくとも、金属ナノ粒子および種々の分子サイズを有する１つまたは複数の薬剤を同時に結合することができるｐＨ感受性リンカーの発見に基づく。本発明のリンカーは、薬剤が疾患過程に関与する細胞を選択的に標的にして影響を及ぼすことができるようにこれらの細胞内またはこれらの細胞付近に薬剤を送達させることができる。本発明のリンカーによってもたらさせる標的送達を、例えば、疾患の検知、画像化、薬物送達、および治療のために使用することができる。
【００１６】
別段の定めがない限り、本明細書中で使用した全ての技術用語および科学用語は、当業者が一般的に理解する意味を有する。別段の記載がない限り、本明細書中に言及された全ての特許、出願、公開出願、および他の刊行物は、その全体が本明細書中で参考として援用される。別段の記載がない限り、本明細書中の用語に複数の定義が存在する場合、本項の定義を優先する。
【００１７】
用語「抗体」を最も広い意味で使用し、用語「抗体」には、モノクローナル抗体（例えば、全長またはインタクトなモノクローナル抗体）、ポリクローナル抗体、一価抗体、多価抗体、多重特異性抗体（例えば、所望の生物学的活性を示す限り、二重特異性抗体）が含まれ、一定の抗体フラグメント（本明細書中により詳細に記載）も含まれ得る。抗体は、キメラ抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、および／または親和性成熟抗体であり得る。
【００１８】
用語「腫瘍」は、本明細書中で使用する場合、悪性や良性を問わない全ての新生物細胞の成長および増殖ならびに全ての前癌性および癌性の細胞および組織を指す。用語「癌」、「癌性」、「細胞増殖性障害」、「増殖性障害」、および「腫瘍」は、本明細書中に言及されるように、相互に排反されない。
【００１９】
用語「癌」は、本明細書中で使用する場合、典型的には無制御な細胞成長／増殖によって特徴付けられる哺乳動物における生理学的容態を指す。癌の例には、癌腫、リンパ腫（例えば、ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫）、芽腫、肉腫、および白血病、扁平上皮癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、肺扁平上皮癌、腹膜癌、肝細胞癌、消化管癌、膵臓癌、膠芽細胞腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、ヘパトーム、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌または子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌、肝臓癌、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝癌、白血病および他のリンパ球増殖性疾患、ならびに種々のタイプの頭頸部癌が含まれるが、これらに限定されない。
【００２０】
本明細書中で使用する場合、用語「処置（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」、「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」、「治療の（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ）」、または「治療」は、必ずしも疾患または容態の完全な治癒や消滅を意味しない。疾患または容態の任意の望ましくない徴候または症状のある程度までの任意の緩和を、処置および／または治療と見なすことができる。さらに、処置には、患者の全体的な幸福感または様子を悪化させ得る行動を含み得る。
【００２１】
「有効量」は、所望の治療結果または予防結果を達成するために必要な投薬量および期間で有効な量を指す。
【００２２】
本発明の物質／分子の「治療有効量」は、個体の病状、年齢、性別、および体重、ならびに物質／分子が個体に所望の応答を誘発する能力などの要因に応じて変動し得る。治療有効量はまた、物質／分子の任意の有毒作用または有害作用を治療上有益な作用が上回る量である。「予防有効量」は、所望の予防結果を達成するために必要な投薬量および期間で有効な量を指す。典型的には（しかし、必ずしもそうではない）、予防用量は疾患前または疾患のより早い段階で被験体に使用されるので、予防有効量は治療有効量未満であろう。
【００２３】
用語「薬学的に許容され得る塩」は、投与される生物に対して有意な刺激作用を生じず、且つ化合物の生物学的な活性および性質を抑止しない化合物の塩を指す。
【００２４】
１つの態様では、本発明は、以下の式（Ｉ）：
【化２２】
2018524389.tif 000024
（式中、Ｘは、
【化２３】
2018524389.tif 000025
、−ＳＨ、−ＮＨ２（Ｂｏｃ−ＮＨ−；Ｆｍｏｃ−ＮＨ−）、−ＣＯＯＨであり；
ｎは１〜６であり；
Ｐは−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−または−Ｃ（Ｏ）Ｏ−であり；
Ｑは、−Ｒ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−、Ｒ（−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−）ｚ、または−Ｒ［−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ］Ｙであり；
Ｒは結合、−Ｃ１〜１２アルキル、またはＣ１〜１０アルコキシであり；
ｍは１〜１２であり；
ｚは１〜４であり；
Ｙは１〜１２である）を有するｐＨ感受性リンカーを提供する。
【００２５】
いくつかの実施形態では、本発明のリンカーは、以下の式：
【化２４】
2018524389.tif 000026
（リンカーＩ−アミド）
（式中、ｍは１〜１２である）を有する。
リンカーＩ−アミドは、式（Ｉ）（式中、Ｘは
【化２５】
2018524389.tif 000027
であり、ｎは４であり、ＰはＣ（Ｏ）ＮＨであり、Ｒは結合であり、Ｑは−Ｒ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−である）を有する。好ましくは、ｍは１〜６の整数である。より好ましくは、ｍは整数２である。
【００２６】
本発明のリンカーＩ−アミドのリンカーを、本開示を考慮して当業者に公知の方法を使用して調製することができる。例えば、本発明の好ましいリンカーを、以下のスキームに示すように調製することができる。
【化２６】
2018524389.tif 000028
【００２７】
いくつかの実施形態では、本発明のリンカーは、以下の式：
【化２７】
2018524389.tif 000029
（リンカーＩ−Ｃ（Ｏ）Ｏ；リンカーＩＩＩ）
（式中、ｍは１〜１２である）を有する。
【００２８】
リンカーＩ−Ｃ（Ｏ）Ｏ（リンカーＩＩＩ）は、式（Ｉ）（式中、Ｘは
【化２８】
2018524389.tif 000030
であり、ｎは４であり、Ｐは−Ｃ（Ｏ）Ｏ−であり、Ｒは結合であり、Ｑは−Ｒ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−であり、ｍは１〜１２である）を有する。より好ましくは、ｍは整数２である。
【００２９】
本発明のリンカーＩ−Ｃ（Ｏ）Ｏ（リンカーＩＩＩ）のリンカーを、本開示を考慮して当業者に公知の方法を使用して調製することができる。例えば、本発明の好ましいリンカーを、以下のスキームに示すように調製することができる。
【化２９】
2018524389.tif 000031
【００３０】
いくつかの実施形態では、本発明のリンカーは、以下の式：
【化３０】
2018524389.tif 000032
（ＳＨ−Ｃ２−リンカー−Ｉ）
（式中、ｍは１〜１２である）を有する。
リンカーＳＨ−Ｃ２−リンカー−Ｉは、式（Ｉ）（式中、Ｘは−ＳＨであり、ｎは２であり、Ｐは−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−であり、Ｒは結合であり、Ｑは−Ｒ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−であり、ｍは１〜１２である）を有する。より好ましくは、ｍは整数２である。
【００３１】
本発明のＳＨ−Ｃ２−リンカー−Ｉのリンカーを、本開示を考慮して当業者に公知の方法を使用して調製することができる。例えば、本発明の好ましいリンカーを、以下のスキームに示すように調製することができる。
【化３１】
2018524389.tif 000033
【００３２】
いくつかの実施形態では、本発明のリンカーは、以下の式：
【化３２】
2018524389.tif 000034
（ＳＨ−Ｃ５−リンカー−Ｉ−アミド）
（式中、ｍは１〜１２である）を有する。
【００３３】
リンカーＳＨ−Ｃ５−リンカー−Ｉ−アミドは、式（Ｉ）（式中、Ｘは−ＳＨであり、ｎは５であり、Ｐは−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−であり、Ｒは結合であり、Ｑは−Ｒ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−であり、ｍは１〜１２である）を有する。より好ましくは、ｍは整数２である。
【００３４】
本発明のＳＨ−Ｃ５−リンカー−Ｉ−アミドのリンカーを、本開示を考慮して当業者に公知の方法を使用して調製することができる。例えば、本発明の好ましいリンカーを、以下のスキームに示すように調製することができる。
【化３３】
2018524389.tif 000035
【００３５】
いくつかの実施形態では、本発明のリンカーは、以下の式：
【化３４】
2018524389.tif 000036
（ＳＨ−Ｃ５−リンカー−Ｉ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−；ＳＨ−Ｃ５−リンカー−ＩＩＩ）
（式中、ｍは１〜１２である）を有する。
【００３６】
ＳＨ−Ｃ５−リンカー−Ｉ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−（ＳＨ−Ｃ５−リンカー−ＩＩＩ）は、式（Ｉ）（式中、Ｘは−ＳＨであり、ｎは５であり、Ｐは−Ｃ（Ｏ）Ｏ−であり、Ｒは結合であり、Ｑは−Ｒ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−であり、ｍは１〜１２である）を有する。好ましくは、ｍは１〜６の整数である。より好ましくは、ｍは整数２である。
【００３７】
本発明のＳＨ−Ｃ５−リンカー−Ｉ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−（ＳＨ−Ｃ５−リンカー−ＩＩＩ）のリンカーを、本開示を考慮して当業者に公知の方法を使用して調製することができる。例えば、本発明の好ましいリンカーを、以下のスキームに示すように調製することができる。
【化３５】
2018524389.tif 000037
【００３８】
いくつかの実施形態では、本発明のリンカーは、以下の式：
【化３６】
2018524389.tif 000038
（ｐｐＮＨ−Ｃ１−リンカー−Ｉ−アミド）
（式中、ｐｐは保護基（ＢｏｃまたはＦｍｏｃなど）であり；ｍは１〜１２である）を有する。
【００３９】
ＮＨ２−Ｃ１−リンカー−Ｉ−アミドは、式（Ｉ）（式中、Ｘはｐｐ−ＮＨ−であり；ｐｐは保護基（ＢｏｃまたはＦｍｏｃなど）であり、ｎは１であり、Ｐは−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−であり、Ｒは結合であり、Ｑは−Ｒ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−であり、ｍは１〜１２である）を有する。好ましくは、ｍは１〜６の整数である。より好ましくは、ｍは整数２である。
【００４０】
本発明のＮＨ２−Ｃ１−リンカー−Ｉ−アミドのリンカーを、本開示を考慮して当業者に公知の方法を使用して調製することができる。例えば、本発明の好ましいリンカーを、以下のスキームに示すように調製することができる。
【化３７】
2018524389.tif 000039
【００４１】
いくつかの実施形態では、本発明のリンカーは、以下の式：
【化３８】
2018524389.tif 000040
（ｐｐＮＨ−Ｃ１−リンカー−Ｉ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−；ＮＨ２−Ｃ１−リンカー−ＩＩＩ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−）
（式中、
ＰＰは保護基（ＢｏｃまたはＦｍｏｃなど）であり；
ｍは１〜１２である）を有する。
【００４２】
ｐｐＮＨ−Ｃ１−リンカー−Ｉ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−（ｐｐＮＨ−Ｃ１−リンカー−ＩＩＩ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−）は、式（Ｉ）（式中、Ｘは、ｐｐ−ＮＨ−（ｐｐは、ＢｏｃまたはＦｍｏｃなどの保護基である）であり、ｎは１であり、Ｐは−Ｃ（Ｏ）Ｏ−であり、Ｒは結合であり、Ｑは−Ｒ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−であり、ｍは１〜１２である）を有する。好ましくは、ｍは１〜６の整数である。より好ましくは、ｍは整数２である。
【００４３】
本発明のｐｐＮＨ−Ｃ１−リンカー−Ｉ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−（ｐｐＮＨ−Ｃ１−リンカー−ＩＩＩ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−）のリンカーを、本開示を考慮して当業者に公知の方法を使用して調製することができる。例えば、本発明の好ましいリンカーを、以下のスキームに示すように調製することができる。
【化３９】
2018524389.tif 000041
【００４４】
いくつかの実施形態では、本発明のリンカーは、以下の式：
【化４０】
2018524389.tif 000042
（リンカーＩＩ−アミド）
（式中、ｚは１〜４である）を有する。
【００４５】
リンカーＩＩ−アミドは、式（Ｉ）（式中、Ｘは
【化４１】
2018524389.tif 000043
であり、ｎは４であり、Ｐは−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−であり、Ｒは結合であり、ＱはＲ（−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ−）ｚであり、ｚは１〜４である）を有する。より好ましくは、ｚは整数３である。
【００４６】
本発明のリンカーＩＩ−アミドのリンカーを、本開示を考慮して当業者に公知の方法を使用して調製することができる。例えば、本発明の好ましいリンカーを、以下のスキームに示すように調製することができる。
【化４２】
2018524389.tif 000044
【００４７】
いくつかの実施形態では、本発明のリンカーは、以下の式：
【化４３】
2018524389.tif 000045
（リンカーＩＩ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−）
（式中、ｚは１〜４である）を有する。
【００４８】
リンカーＩＩ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−は、式（Ｉ）（式中、Ｘは
【化４４】
2018524389.tif 000046
であり、ｎは４であり、Ｐは−Ｃ（Ｏ）Ｏ−であり、Ｒは結合であり、ＱはＲ（−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ−）ｚであり、ｚは１〜４である）を有する。より好ましくは、ｚは整数３である。
【００４９】
本発明のリンカーＩＩ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−のリンカーを、本開示を考慮して当業者に公知の方法を使用して調製することができる。例えば、本発明の好ましいリンカーを、以下のスキームに示すように調製することができる。
【化４５】
2018524389.tif 000047
【００５０】
いくつかの実施形態では、本発明のリンカーは、以下の式：
【化４６】
2018524389.tif 000048
（ＳＨ−Ｃ５−リンカー−ＩＩ−アミド）
（式中、ｚは１〜４である）を有する。
【００５１】
ＳＨ−Ｃ５−リンカー−ＩＩ−アミドは、式（Ｉ）（式中、Ｘは−ＳＨであり、ｎは５であり、Ｐは−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−であり、Ｒは結合であり、ＱはＲ（−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ−）ｚであり、ｚは１〜４である）を有する。より好ましくは、ｚは整数３である。
【００５２】
他の実施形態では、ｎは２である。本発明のＳＨ−Ｃ２〜５−リンカー−ＩＩ−アミドのリンカーを、本開示を考慮して当業者に公知の方法を使用して調製することができる。例えば、本発明の好ましいリンカーを、以下のスキームに示すように調製することができる。
【化４７】
2018524389.tif 000049
【００５３】
いくつかの実施形態では、本発明のリンカーは、以下の式：
【化４８】
2018524389.tif 000050
（ＳＨ−Ｃ５−リンカー−ＩＩ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−）
（式中、ｚは１〜４である）を有する。
【００５４】
ＳＨ−Ｃ５−リンカー−ＩＩ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−は、式（Ｉ）（式中、ＸはＣＨ３Ｃ（Ｏ）Ｓ−であり、ｎは５であり、Ｐは−Ｃ（Ｏ）Ｏ−であり、Ｒは結合であり、ＱはＲ（−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ−）ｚであり、ｚは１〜４である）を有する。より好ましくは、ｚは整数３である。
【００５５】
他の実施形態では、ｎは２である。本発明のＳＨ−Ｃ２〜５−リンカー−ＩＩ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−のリンカーを、本開示を考慮して当業者に公知の方法を使用して調製することができる。例えば、本発明の好ましいリンカーを、以下のスキームに示すように調製することができる。
【化４９】
2018524389.tif 000051
【００５６】
いくつかの実施形態では、本発明のリンカーは、以下の式：
【化５０】
2018524389.tif 000052
（ｐｐＮＨ−Ｃ１−リンカー−ＩＩ−アミド）
（式中、ｐｐは保護基（ＢｏｃまたはＦｍｏｃなど）であり；
ｚは１〜４である）を有する。
【００５７】
ｐｐＮＨ−Ｃ１−リンカー−ＩＩ−アミドは、式（Ｉ）（式中、Ｘはｐｐ−ＮＨ−であり；ｐｐは保護基（ＢｏｃまたはＦｍｏｃなど）であり、ｎは１であり、Ｐは−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−であり、Ｒは結合であり、ＱはＲ（−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−）ｚであり、ｚは１〜４である）を有する。より好ましくは、ｚは整数３である。
【００５８】
本発明のｐｐＮＨ−Ｃ１−リンカー−ＩＩ−アミドのリンカーを、本開示を考慮して当業者に公知の方法を使用して調製することができる。例えば、本発明の好ましいリンカーを、以下のスキームに示すように調製することができる。
【化５１】
2018524389.tif 000053
【００５９】
いくつかの実施形態では、本発明のリンカーは、以下の式：
【化５２】
2018524389.tif 000054
（ｐｐＮＨ−Ｃ１−リンカー−ＩＩ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−）
（式中、ｐｐは保護基（ＢｏｃまたはＦｍｏｃなど）であり；
ｚは１〜４である）を有する。
【００６０】
ｐｐＮＨ−Ｃ１−リンカー−ＩＩ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−は、式（Ｉ）（式中、Ｘはｐｐ−ＮＨ−であり；ｐｐは保護基（ＢｏｃまたはＦｍｏｃなど）であり、ｎは１であり、Ｐは−Ｃ（Ｏ）Ｏ−であり、Ｒは結合であり、ＱはＲ（−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−）ｚであり、ｚは１〜４である）を有する。より好ましくは、ｚは整数３である。
【００６１】
本発明のｐｐＮＨ−Ｃ１−リンカー−ＩＩ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−のリンカーを、本開示を考慮して当業者に公知の方法を使用して調製することができる。例えば、本発明の好ましいリンカーを、以下のスキームに示すように調製することができる。
【化５３】
2018524389.tif 000055
【００６２】
いくつかの実施形態では、本発明のリンカーは、以下の式：
【化５４】
2018524389.tif 000056
（リンカーＩＶ−アミド）
（式中、Ｙは１〜１２である）を有する。
【００６３】
リンカーＩＶ−アミドは、式（Ｉ）（式中、Ｘは
【化５５】
2018524389.tif 000057
であり、ｎは４であり、Ｐは−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−であり、Ｒは−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−であり、Ｑは−Ｒ［−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ］Ｙであり、ｍは３であり、Ｙは１〜１２である）を有する。好ましくは、ｍは２であり、Ｙは２である。
【００６４】
他の実施形態では、ｍは１〜１２である。本発明のリンカーＩＶ−アミドのリンカーを、本開示を考慮して当業者に公知の方法を使用して調製することができる。例えば、本発明の好ましいリンカーを、以下のスキームに示すように調製することができる。
【化５６】
2018524389.tif 000058
【００６５】
いくつかの実施形態では、本発明のリンカーは、以下の式：
【化５７】
2018524389.tif 000059
（リンカーＩＶ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−）
（式中、Ｙは１〜１２である）を有する。
【００６６】
リンカーＩＶ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−は、式（Ｉ）（式中、Ｘは
【化５８】
2018524389.tif 000060
であり、ｎは４であり、Ｐは−Ｃ（Ｏ）Ｏ−であり、Ｒは−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−であり、Ｑは−Ｒ［−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ］Ｙであり、ｍは３であり、Ｙは１〜１２である）を有する。より好ましくは、Ｙは整数２である。
【００６７】
他の実施形態では、ｍは１〜１２である。本発明のリンカーＩＶ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−のリンカーを、本開示を考慮して当業者に公知の方法を使用して調製することができる。例えば、本発明の好ましいリンカーを、以下のスキームに示すように調製することができる。
【化５９】
2018524389.tif 000061
【００６８】
いくつかの実施形態では、本発明のリンカーは、以下の式：
【化６０】
2018524389.tif 000062
（ＳＨ−Ｃ５−リンカー−ＩＶ−アミド）
（式中、Ｙは１〜１２である）を有する。
【００６９】
ＳＨ−Ｃ５−リンカー−ＩＶ−アミドは、式（Ｉ）（式中、ＸはＣＨ３Ｃ（Ｏ）Ｓ−であり、ｎは５であり、Ｐは−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−であり、Ｒは−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−であり、Ｑは−Ｒ［−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ］Ｙであり、ｍは３であり、Ｙは１〜１２である）を有する。より好ましくは、Ｙは整数２である。
【００７０】
他の実施形態では、ｎは２または５であり、ｍは１〜１２である。本発明のリンカーＳＨ−Ｃ２〜５−リンカー−ＩＶ−アミドのリンカーを、本開示を考慮して当業者に公知の方法を使用して調製することができる。例えば、本発明の好ましいリンカーを、以下のスキームに示すように調製することができる。
【化６１】
2018524389.tif 000063
【００７１】
いくつかの実施形態では、本発明のリンカーは、以下の式：
【化６２】
2018524389.tif 000064
（ＳＨ−Ｃ５−リンカー−ＩＶ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−）
（式中、Ｙは１〜１２である）を有する。
【００７２】
ＳＨ−Ｃ５−リンカー−ＩＶ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−は、式（Ｉ）（式中、ＸはＣＨ３Ｃ（Ｏ）Ｓ−であり、ｎは５であり、Ｐは−Ｃ（Ｏ）Ｏ−であり、Ｒは−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−であり、Ｑは−Ｒ［−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ］Ｙであり、ｍは３であり、Ｙは１〜１２である）を有する。好ましくは、Ｙは１〜６の整数である。より好ましくは、Ｙは整数２である。
【００７３】
他の実施形態では、ｎは２または５であり、ｍは１〜１２である。本発明のＨＳ−Ｃ２〜５−リンカー−ＩＶ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−のリンカーを、本開示を考慮して当業者に公知の方法を使用して調製することができる。例えば、本発明の好ましいリンカーを、以下のスキームに示すように調製することができる。
【化６３】
2018524389.tif 000065
【００７４】
いくつかの実施形態では、本発明のリンカーは、以下の式：
【化６４】
2018524389.tif 000066
（ｐｐＮＨ−Ｃ１−リンカー−ＩＶ−アミド）
（式中、ｐｐは保護基（ＢｏｃまたはＦｍｏｃなど）であり；Ｙは１〜１２である）を有する。
【００７５】
ｐｐＮＨ−Ｃ１−リンカー−ＩＶ−アミドは、式（Ｉ）（式中、Ｘはｐｐ−ＮＨ−であり；ｐｐは保護基（ＢｏｃまたはＦｍｏｃなど）であり、ｎは１であり、Ｐは−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−であり、Ｒは−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−であり、Ｑは−Ｒ［−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ］Ｙであり、ｍは３であり、Ｙは１〜１２である）を有する。より好ましくは、Ｙは整数２である。
【００７６】
他の実施形態では、ｍは１〜１２である。本発明のｐｐＮＨ−Ｃ１−リンカー−ＩＶ−アミドのリンカーを、本開示を考慮して当業者に公知の方法を使用して調製することができる。例えば、本発明の好ましいリンカーを、以下のスキームに示すように調製することができる。
【化６５】
2018524389.tif 000067
【００７７】
いくつかの実施形態では、本発明のリンカーは、以下の式：
【化６６】
2018524389.tif 000068
（ｐｐＮＨ−Ｃ１−リンカー−ＩＶ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−）
（式中、ｐｐは保護基（ＢｏｃまたはＦｍｏｃなど）であり；Ｙは１〜１２である）を有する。
【００７８】
ｐｐＮＨ−Ｃ１−リンカー−ＩＶ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−は、式（Ｉ）（式中、Ｘはｐｐ−ＮＨ−であり；ｐｐは保護基（ＢｏｃまたはＦｍｏｃなど）であり、ｎは１であり、Ｐは−Ｃ（Ｏ）Ｏ−であり、Ｒは−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−であり、Ｑは−Ｒ［−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ］Ｙであり、ｍは３であり、Ｙは１〜１２である）を有する。より好ましくは、Ｙは整数２である。
【００７９】
他の実施形態では、ｍは１〜１２である。本発明のｐｐＮＨ−Ｃ１−リンカー−ＩＶ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−のリンカーを、本開示を考慮して当業者に公知の方法を使用して調製することができる。例えば、本発明の好ましいリンカーを、以下のスキームに示すように調製することができる。
【化６７】
2018524389.tif 000069
【００８０】
別の態様では、本発明は、任意選択的に１つまたは複数のＰＥＧと複合体を形成した、１つまたは複数の本発明のリンカーと複合体を形成した金属ナノ粒子を含む金属ナノ粒子複合体を提供する。
【００８１】
１つの実施形態では、金属ナノ粒子は、金ナノ粒子、パラジウムナノ粒子、白金ナノ粒子、または銀ナノ粒子である。
【００８２】
１つの実施形態では、リンカーは同一であるか異なる。より好ましくは、金属ナノ粒子複合体は、異なる分子長を有する複数のリンカーを含む。異なる分子長を有するリンカーは、治療または診断すべき標的細胞または標的疾患における要件に応じて異なる治療薬または診断薬に結合することができる。リンカーは、リンカー中の１，２−ジチオラン基または−ＳＨ基の硫黄原子を介して金属ナノ粒子に連結する。
【００８３】
１つの実施形態では、本発明で使用されるＰＥＧの分子量は、約２０００〜２０，０００Ｄａ；好ましくは、２０００〜５０００Ｄａの範囲である。いくつかの場合、例えば、リンカーまたはナノ粒子の表面上に、生物学的部分との相互作用からポリマーを遮断することができる親水性膜を作製することによってリンカーまたはナノ粒子と生物学的部分との間の電荷相互作用を減少させるためのＰＥＧ化も使用することができる。いくつかの場合、ポリ（エチレングリコール）反復単位の付加により、例えば、細胞による移入／取り込み効率を減少させながら食細胞系によるポリマー抱合体の取り込みを減少させることによってポリマー抱合体の血漿半減期を増加させることができる。当業者は、例えば、以下の実施例に考察するように開環重合技術（ＲＯＭＰ）などによって、ＥＤＣ（１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩）およびＮＨＳ（Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド）を使用して末端にアミンを含有するＰＥＧ基とポリマーを反応させることによってポリマーをＰＥＧ化する方法および技術を承知しているであろう。
【００８４】
別の１つの実施形態では、金属ナノ粒子のサイズは、約１００ｎｍ未満、好ましくは、８０ｎｍ未満である。
【００８５】
いくつかの実施形態では、金属ナノ粒子複合体は、１つまたは複数の同一の異なる治療薬または診断薬とさらに連結する。好ましくは、治療薬は抗腫瘍薬または抗体である。好ましくは、抗体は、腫瘍細胞などの細胞の表面での抗原特異的発現を標的にする抗体であり；より好ましくは、抗体は、腫瘍細胞を標的にし、認識する、抗腫瘍細胞抗体が含まれる。
【００８６】
いくつかの実施形態では、抗腫瘍薬は、癌処置で有用な抗癌薬または抗癌抗体である。抗癌薬の例には、アルキル化剤（チオテパおよびシクロホスファミド（ｃｙｃｌｏｓｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）など）；スルホン酸アルキル（ブスルファン、インプロスルファン、およびピポスルファンなど）；アジリジン（ベンゾドーパ、カルボコン、メツレドーパ、およびウレドーパなど）；エチレンイミンおよびメチルメラミン（ｍｅｔｈｙｌａｍｅｌａｍｉｎｅ）（アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド（ｔｒｉｅｔｙｌｅｎｅｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｅ）、トリエチレンチオホスホラミド（ｔｒｉｅｔｈｉｙｌｅｎｅｔｈｉｏｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｅ）、およびトリメチロールメラミン（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｏｌｏｍｅｌａｍｉｎｅ）が含まれる）；アセトゲニン（特に、ブタラシンおよびブタラシノン）；δ−９−テトラヒドロカンナビノール（ドロナビノール，）；β−ラパコン；ラパコール；コルヒチン；ベツリン酸；カンプトセシン（合成アナログであるトポテカン、ＣＰＴ−１１（イリノテカン）、アセチルカンプトセシン、スコポレチン（ｓｃｏｐｏｌｅｃｔｉｎ）、および９−アミノカンプトセシンが含まれる）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ−１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシン、およびビゼレシンの合成アナログが含まれる）；ポドフィロトキシン；ポドフィリン酸；テニポシド；クリプトフィシン（特に、クリプトフィシン１およびクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成アナログのＫＷ−２１８９およびＣＢ１−ＴＭ１が含まれる）；エロイテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチイン；スポンギスタチン；ナイトロジェンマスタード（クロラムブシル、クロルナファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イフォスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノブエンビキン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタードなど）；ニトロソ尿素（ｎｉｔｒｏｓｕｒｅａ）（カルムスチン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、およびラニムスチン（ｒａｎｉｍｎｕｓｔｉｎｅ）など）；抗生物質（エンジイン抗生物質（例えば、カリチアマイシン、特に、カリチアマイシンγＩＩおよびカリチアマイシンωＩＩ（例えば、Ａｇｎｅｗ，Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．，３３：１８３−１８６（１９９４）を参照のこと）など）；ジネミシン（ジネミシンＡが含まれる）；エスペラミシン；ならびにネオカルチノスタチン発色団および関連色素タンパク質エンジイン抗生物質発色団）、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、アウスラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシニス、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビシン（モルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシン、およびデオキシドキソルビシンが含まれる）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン���マイトマイシンＣなど）、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン、ピューロマイシン、クエラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシンなど）；代謝拮抗物質（メトトレキサートおよび５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）など）；葉酸アナログ（デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサートなど）；プリンアナログ（フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニンなど）；ピリミジンアナログ（アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジンなど）；アンドロゲン（カルステロン、ドロモスタノロンプロピオナート、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトンなど）；抗アドレナル（アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンなど）；葉酸補給剤（フォリン酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）など）；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトレキサート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）；デフォファミン；デメコルシン；ジアジクオン；エルフォミチン；エリプチニウムアセタート；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダイニン；マイタンシノイド（メイタンシンおよびアンサミトシンなど）；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモール；ニトラエリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ポリサッカリド複合体（ＪＨＳ  Ｎａｔｕｒａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，Ｏｒｅｇ．）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２’’−トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（特に、Ｔ−２毒素、ベラクリンＡ、ロリジンＡ、およびアングイジン）；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；チオテパ；タキソイド（例えば、パクリタキセル（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．）、パクリタキセルのクレモフォール非含有アルブミン操作ナノ粒子製剤（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐａｒｔｎｅｒｓ，Ｓｃｈａｕｍｂｅｒｇ，Ｉｌｌ．）、およびドセタキセル（ｄｏｘｅｔａｘｅｌ）（Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ  Ｒｏｒｅｒ、Ａｎｔｏｎｙ、Ｆｒａｎｃｅ））；クロラムブシル（ｃｈｌｏｒａｎｂｕｃｉｌ）；ゲムシタビン；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；白金アナログ（シスプラチンおよびカルボプラチンなど）；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ−１６）；イフォスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；オキサリプラチン；ロイコボリン（ｌｅｕｃｏｖｏｖｉｎ）；ビノレルビン；ノバントロン；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；イバンドロネート；トポイソメラーゼインヒビターＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイド（レチノイン酸など）；カペシタビン；上記のいずれかの薬学的に許容され得る塩、酸、または誘導体；ならびに上記のうちの２つまたはそれを超える物質の組み合わせＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、およびプレドニゾロンの併用療法の略語）およびＦＯＬＦＯＸ（５−ＦＵおよびロイコボリン（ｌｅｕｃｏｖｏｖｉｎ）と組み合わせたオキサリプラチンを使用した処置レジメンの略語など）が含まれる。
【００８７】
ナノ粒子中の抗癌薬の存在量は、広い範囲にわたって変動し得る。いくつかの実施形態では、ナノ粒子は、ナノ粒子に対する抗癌薬の質量比に基づいて、約１％〜約５０％（重量／重量）の範囲の量の抗癌薬を含むことができる。他の実施形態では、ナノ粒子は、ナノ粒子に対する抗癌薬の質量比に基づいて、約５％〜約４０％（重量／重量）の範囲の量の抗癌薬を含むことができる。さらに他の実施形態では、ナノ粒子は、約１０％〜約３０％（重量／重量）の範囲の量の抗癌薬を含むことができる。さらに他の実施形態では、ナノ粒子は、ナノ粒子に対する抗癌薬の質量比に基づいて、約１％〜約１０％（重量／重量）、約１％〜約５％（重量／重量）、約５％〜約１０％（重量／重量）、約１０％〜約２０％（重量／重量）、約１５％〜約３５％（重量／重量）、約３０％〜約４０％（重量／重量）などの範囲の量の抗癌薬を含むことができる。いくつかの実施形態では、ナノ粒子は、ナノ粒子に対する抗癌薬の質量比に基づいて、約２０％（重量／重量）の量の抗癌薬を含むことができる。他の実施形態では、ナノ粒子は、ナノ粒子に対する抗癌薬の質量比に基づいて、５％（重量／重量）、約１０％（重量／重量）１５％（重量／重量）、約２５％（重量／重量）、約３０％（重量／重量）などの量の抗癌薬を含むことができる。
【００８８】
本明細書中に記載のいくつかの実施形態は、１つまたは複数の同一の異なる治療薬または診断薬および薬学的に許容され得るキャリアに連結した１つまたは複数の金属ナノ粒子複合体を含むことができる組成物に関する。薬学的組成物は、１つまたは複数の同一の異なる治療薬または診断薬を連結した金属ナノ粒子複合体の生物への投与が容易である。化合物の投与技術は当該分野で複数存在し、経口投与、注射による投与、エアロゾル投与、非経口投与、および局所投与が含まれるが、これらに限定されない。
【００８９】
本明細書中に記載のいくつかの実施形態は、１つまたは複数の同一の異なる治療薬または診断薬と連結した１つまたは複数の金属ナノ粒子複合体を含む薬物送達系に関する。
【００９０】
１つまたは複数の同一の異なる治療薬または診断薬を連結した金属ナノ粒子複合体の投与技術は当該分野で複数存在し、経口送達、直腸送達、局所送達、エアロゾル送達、注射による送達、および非経口送達（筋肉内注射、皮下注射、静脈内注射、髄内注射、髄腔内注射、直接脳室内注射、腹腔内注射、鼻腔内注射、および眼内注射が含まれる）が含まれるが、これらに限定されない。
【実施例】
【００９１】
実施例１  リンカーＩ−アミドの調製
工程１。エタノールアミン（１．２８ｇ、１．０５当量）およびリポ酸（４．１３ｇ、１．０当量）を８０ｍＬ  ＤＣＭに溶解し、ＥＤＣ・ＨＣｌ（４．９８ｇ、１．３当量）、ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）（２．３０ｇ、１．０当量）、およびトリエチルアミン（６．４ｍＬ、２．３当量）をゆっくり添加した。室温で少なくとも５時間反応させ、反応をＴＬＣで追跡した。その後に、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９．８：０．２を使用したカラムで精製する。生成物は淡黄色の液体であった。収率：４．０４ｇ；８１．０％。
【００９２】
工程２。４−ニトロフェニルクロロホルマート（３．３５ｇ、１．１５当量）を二口ボトルに入れた。真空下で１時間、三方弁を窒素デバイスに回し、６０ｍＬ  ＤＣＭをシリンジで添加した。秤量した工程１の生成物１を１０〜１５ｍＬ  ＤＣＭで溶解し、シリンジで反応フラスコに注入し、次いで、トリエチルアミン（４．５ｍＬ、２．３当量）をゆっくり添加した。氷浴中で約１時間反応させ、次いで、室温に一晩戻した。反応完了後、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＥｔＯＡｃ：Ｈｅｘ：ＭｅＯＨ＝１：１：０．２を使用したカラムで精製する。生成物は淡黄色の液体であった。精製後の収率：５１．６％。
【００９３】
工程３。秤量した工程２の生成物２（３．５ｇ、１．０当量）を１２０ｍＬ  ＤＣＭに溶解し、次いで、ヒドラジン水和物（６．５ｍＬ、１０．０当量）をゆっくり添加した。室温で約２４時間反応させた。溶液は、淡黄色から橙色に変化した。反応完了後、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９．５：０．５を使用したカラムで精製した。この工程で、生成物がカラム中に固着し、ＭｅＯＨを５％まで増加させて最終生成物を溶出させることができる。生成物は淡黄色の粘着性固体であった。精製後の収率：１９．５％。
【化６８】
2018524389.tif 000070
【００９４】
リンカーＩ−１（リンカーＩ−アミド、ｍ＝２）。１Ｈ（４００ＭＨｚ）δ１．２３−１．３１（２Ｈ，ｍ），１．４０−１．５１（３Ｈ，ｍ），１．５７−１．６４（１Ｈ，ｍ），１．７８−１．８６（１Ｈ，ｍ），２．０５（２Ｈ，ｔ），２．３２−２．３９（１Ｈ，ｍ），３．０１−３．１８（４Ｈ，ｍ），３．３９（２Ｈ，ｔ），３．５２−３．５７（３Ｈ，ｍ），４．０３−４．１９（４Ｈ，ｍ），７．９４（１Ｈ，ｓ），８．１４（１Ｈ，ｓ）．１３Ｃ（１００ＭＨｚ）δ２５．９，２９．０，３４．８，３６．１，３８．９，３９．５，４０．９，５７．２，６４．７，６９．３，６９．６，１５９．５，１７４．９ｐｐｍ．Ｈ−Ｍａｓｓ（ｍ／ｚ）：（Ｍ＋Ｎａ）＝３７４．１１７１
【化６９】
2018524389.tif 000071
リンカーＩ−２（リンカーＩ−アミド、ｍ＝１）。１Ｈ（３００ＭＨｚ）δ１．３０−１．３８（２Ｈ，ｍ），１．４５−１．５７（３Ｈ，ｍ），１．６０−１．７２（１Ｈ，ｍ），１．８０−１．９２（１Ｈ，ｍ），２．０６（２Ｈ，ｓ），２．３６−２．４６（１Ｈ，ｍ），３．０７−３．２４（４Ｈ，ｍ），３．５６−３．６５（１Ｈ，ｍ），３．９５（２Ｈ，ｔ），４．０２（２Ｈ，ｓ），７．８８（１Ｈ，ｔ），８．１１（１Ｈ，ｓ）．１３Ｃ（１００ＭＨｚ）δ２５．６，２８．８，３４．６，３５．９，３８．８，３９．４，４０．７，５６．９，６３．７，１６３．８，１７４．３ｐｐｍ．Ｈ−Ｍａｓｓ（ｍ／ｚ）：（Ｍ＋Ｎａ）＝３３０．０８９４．
【化７０】
2018524389.tif 000072
【００９５】
リンカーＩ−３（リンカーＩ−アミド、ｍ＝３）。１Ｈ（３００ＭＨｚ）δ１．３０−１．３７（２Ｈ，ｍ），１．４５−１．５７（３Ｈ，ｍ），１．６０−１．７２（１Ｈ，ｍ），１．８０−１．９１（１Ｈ，ｍ），２．０６（２Ｈ，ｔ），２．３５−２．４６（１Ｈ，ｍ），３．０７−３．２３（４Ｈ，ｍ），３．３９（２Ｈ，ｔ），３．４７−３．６５（７Ｈ，ｍ），４．０２（２Ｈ，ｓ），４．０５−４．０８（２Ｈ，ｍ），７．８４（１Ｈ，ｔ），８．１８（１Ｈ，ｓ）．１３Ｃ（１００ＭＨｚ）δ２５．７，２８．９，３４．７，３５．９，３８．８，３９．４，４０．７，６０．０，６４．４，６９．４，６９．６，７０．１，７０．３，１５９．２，１７４．２ｐｐｍ．Ｈ−Ｍａｓｓ（ｍ／ｚ）：（Ｍ＋Ｎａ）＝４１８．１４６６．
【化７１】
2018524389.tif 000073
【００９６】
リンカーＩ−４（リンカーＩ−アミド、ｍ＝４）。１Ｈ（３００ＭＨｚ）δ１．３０−１．３８（２Ｈ，ｍ），１．４５−１．５７（３Ｈ，ｍ），１．６０−１．７２（１Ｈ，ｍ），１．８０−１．９１（１Ｈ，ｍ），２．０６（２Ｈ，ｔ），２．３６−２．４６（１Ｈ，ｍ），３．０７−３．２３（４Ｈ，ｍ），３．３９（２Ｈ，ｔ），３．４９−３．６５（１１Ｈ，ｍ），４．０２（２Ｈ，ｓ），４．０５−４．０８（２Ｈ，ｍ），７．８３（１Ｈ，ｔ），８．１８（１Ｈ，ｓ）．１３Ｃ（１００ＭＨｚ）δ２５．７，２８．９，３４．７，３５．９，３８．８，３９．４，４０．７，５６．９，６４．４，６９．４，６９．６，７０．２，７０．３，７０．４，１５９．２，１７４．１ｐｐｍ．Ｈ−Ｍａｓｓ（ｍ／ｚ）：（Ｍ＋Ｎａ）＝４４０．１８７５．
【化７２】
2018524389.tif 000074
【００９７】
リンカーＩ−５（リンカーＩ−アミド、ｍ＝５）。１Ｈ（３００ＭＨｚ）δ１．３０−１．３８（２Ｈ，ｍ），１．４５−１．５７（３Ｈ，ｍ），１．６０−１．６９（１Ｈ，ｍ），１．８０−１．９１（１Ｈ，ｍ），２．０６（２Ｈ，ｔ），２．３６−２．４６（１Ｈ，ｍ），３．０７−３．２３（４Ｈ，ｍ），３．３９（２Ｈ，ｔ），３．５１−３．６２（１９Ｈ，ｍ），４．０２（２Ｈ，ｓ），４．０５−４．０８（２Ｈ，ｍ），４．８３（１Ｈ，ｔ），８．１８（１Ｈ，ｓ）．１３Ｃ（１００ＭＨｚ）δ２５．９，２９．０，３４．８，３６．１，３９．０，３９．４，４０．９，５７．２，６４．８，６９．５，６９．７，７０．３，７０．４，７０．５，１５９．５，１７４．８ｐｐｍ．Ｈ−Ｍａｓｓ（ｍ／ｚ）：（Ｍ＋Ｎａ）＝５５０．２２３４
【００９８】
実施例２  リンカーＩ−Ｃ（Ｏ）Ｏの調製
工程１。エチレングリコール（１．３０ｇ、１．０５当量）およびリポ酸（４．１３ｇ、１．０当量）を８０ｍＬ  ＤＣＭに溶解し、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）（５．３６ｇ、１．３当量）、４−（ジメチルアミノ）ピリジン（ＤＭＡＰ）（０．２４ｇ、０．１当量）、およびトリエチルアミン（６．４ｍＬ、２．３当量）をゆっくり添加した。室温で少なくとも５時間反応させ、反応をＴＬＣで追跡した。その後に、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＤＣＭ：ＭＯＨ＝９．８：０．２を使用したカラムで精製する。生成物は淡黄色の液体であった。収率：４．００ｇ；８０．５％。
【００９９】
工程２。４−ニトロフェニルクロロホルマート（３．３５ｇ、１．１５当量）を二口ボトルに入れた。真空下で１時間、三方弁を窒素デバイスに回し、６０ｍＬ  ＤＣＭをシリンジで添加した。秤量した工程１の生成物１を１０〜１５ｍＬ  ＤＣＭで溶解し、シリンジで反応フラスコに注入し、次いで、トリエチルアミン（４．５ｍＬ、２．３当量）をゆっくり添加した。氷浴中で約１時間反応させ、次いで、室温に一晩戻した。反応完了後、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＥｔＯＡｃ：Ｈｅｘ：ＭｅＯＨ＝１：１：０．２を使用したカラムで精製する。生成物は淡黄色の液体であった。精製後の収率：５０．６％。
【０１００】
工程３。秤量した工程２の生成物２（３．５ｇ、１．０当量）を１２０ｍＬ  ＤＣＭに溶解し、次いで、ヒドラジン水和物（６．５ｍＬ、１０．０当量）をゆっくり添加した。室温で約２４時間反応させた。溶液は、淡黄色から橙色に変化した。反応完了後、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９．５：０．５を使用したカラムで精製した。この工程で、生成物がカラム中に固着し、ＭｅＯＨを５％まで増加させて最終生成物を溶出させることができる。生成物は淡黄色の粘着性固体であった。精製後の収率：１８．５％。
【０１０１】
実施例３  ＨＳ−Ｃ２−リンカー−Ｉ−アミドの調製
工程１。エタノールアミン（１．２８ｇ、１．０５当量）および３−（アセチルチオ）プロピオン酸（２．９６ｇ、１．０当量）を８０ｍＬ  ＤＣＭに溶解し、ＥＤＣ・ＨＣｌ（４．９８ｇ、１．３当量）、ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）（２．３０ｇ、１．０当量）、およびトリエチルアミン（６．４ｍＬ、２．３当量）をゆっくり添加した。室温で少なくとも５時間反応させ、反応をＴＬＣで追跡した。その後に、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９．８：０．２を使用したカラムで精製する。生成物は淡黄色の液体であった。収率：４．１０ｇ；７０．０％。
【０１０２】
工程２。４−ニトロフェニルクロロホルマート（３．３５ｇ、１．１５当量）を二口ボトルに入れた。真空下で１時間、三方弁を窒素デバイスに回し、６０ｍＬ  ＤＣＭをシリンジで添加した。秤量した工程１の生成物１を１０〜１５ｍＬ  ＤＣＭで溶解し、シリンジで反応フラスコに注入し、次いで、トリエチルアミン（４．５ｍＬ、２．３当量）をゆっくり添加した。氷浴中で約１時間反応させ、次いで、室温に一晩戻した。反応完了後、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＥｔＯＡｃ：Ｈｅｘ：ＭｅＯＨ＝１：１：０．２を使用したカラムで精製する。生成物は淡黄色の液体であった。精製後の収率：４８．６％。
【０１０３】
工程３。秤量した工程２の生成物２（３．５ｇ、１．０当量）を１２０ｍＬ  ＤＣＭに溶解し、次いで、ヒドラジン水和物（６．５ｍＬ、１０．０当量）をゆっくり添加した。室温で約２４時間反応させた。溶液は、淡黄色から橙色に変化した。反応完了後、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９．５：０．５を使用したカラムで精製した。この工程で、生成物がカラム中に固着し、ＭｅＯＨを５％まで増加させて最終生成物を溶出させることができる。生成物は淡黄色の粘着性固体であった。精製後の収率：１９．０％。
【０１０４】
実施例４  ＨＳ−Ｃ５−リンカー−Ｉ−アミドの調製
工程１。エタノールアミン（１．２８ｇ、１．０５当量）および６−アセチルチオヘキサン酸（３．８１ｇ、１．０当量）を８０ｍＬ  ＤＣＭに溶解し、ＥＤＣ・ＨＣｌ（４．９８ｇ、１．３当量）、ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）（２．３０ｇ、１．０当量）、およびトリエチルアミン（６．４ｍＬ、２．３当量）をゆっくり添加した。室温で少なくとも５時間反応させ、反応をＴＬＣで追跡した。その後に、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＤＣＭ：ＭＯＨ＝９．８：０．２を使用したカラムで精製する。生成物は淡黄色の液体であった。収率：３．８５ｇ；７８．０％。
【０１０５】
工程２。４−ニトロフェニルクロロホルマート（３．３５ｇ、１．１５当量）を二口ボトルに入れた。真空下で１時間、三方弁を窒素デバイスに回し、６０ｍＬ  ＤＣＭをシリンジで添加した。秤量した工程１の生成物１を１０〜１５ｍＬ  ＤＣＭで溶解し、シリンジで反応フラスコに注入し、次いで、トリエチルアミン（４．５ｍＬ、２．３当量）をゆっくり添加した。氷浴中で約１時間反応させ、次いで、室温に一晩戻した。反応完了後、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＥｔＯＡｃ：Ｈｅｘ：ＭｅＯＨ＝１：１：０．２を使用したカラムで精製する。生成物は淡黄色の液体であった。精製後の収率：４８．６％。
【０１０６】
工程３。秤量した工程２の生成物２（３．５ｇ、１．０当量）を１２０ｍＬ  ＤＣＭに溶解し、次いで、ヒドラジン水和物（６．５ｍＬ、１０．０当量）をゆっくり添加した。室温で約２４時間反応させた。溶液は、淡黄色から橙色に変化した。反応完了後、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９．５：０．５を使用したカラムで精製した。この工程で、生成物がカラム中に固着し、ＭｅＯＨを５％まで増加させて最終生成物を溶出させることができる。生成物は淡黄色の粘着性固体であった。精製後の収率：１７．０％。
【化７３】
2018524389.tif 000075
ＳＨ−Ｃ５−リンカーＩ−１（ＳＨ−Ｃ５−リンカー−１−アミド、ｍは２である）：１Ｈ（４００ＭＨｚ）δ１．２６−１．３３（２Ｈ，ｍ），１．４３−１．５５（４Ｈ，ｍ），２．０５（２Ｈ，ｔ），２．２２（１Ｈ，ｓ），２．４５（２Ｈ，ｔ），３．１５−３．１９（２Ｈ，ｍ），３．３７（２Ｈ，ｔ），３．５４（２Ｈ，ｔ），４．０３−４．０８（４Ｈ，ｍ），７．８５（１Ｈ，ｔ），８．１９（１Ｈ，ｓ）；１３Ｃ（１００ＭＨｚ）δ２３．７，２４．７，２７．４，３３．１，３５．２，３８．４，６３．３，６８．６，６９．１，１５８．３，１７２．２．Ｈ−Ｍａｓｓ（ｍ／ｚ）：（Ｍ＋Ｎａ）＝３１６．１３３６
【化７４】
2018524389.tif 000076
ＳＨ−Ｃ５−リンカーＩ−４（ＳＨ−Ｃ５−リンカー−１−アミド、ｍは４である）：１Ｈ（４００ＭＨｚ）δ１．２６−１．３４（２Ｈ，ｍ），１．４３−１．５６（４Ｈ，ｍ），２．０５（２Ｈ，ｔ），２．２２（１Ｈ，ｔ），２．４３−２．４８（２Ｈ，ｍ），３．１６−３．２０（３Ｈ，ｍ），３．３９（２Ｈ，ｔ），３．４８−３．５０（７Ｈ，ｍ），３．５６（２Ｈ，ｍ），４．０３−４．０８（４Ｈ，ｍ），７．８４（１Ｈ，ｍ），８．２０（１Ｈ，ｓ）；１３Ｃ（１００ＭＨｚ）δ２３．７，２４．８，２７．４，３３．１，３５．２，３８．５，６３．４，６８．９，６９．２，６９．６，６９．８，１５８．３，１７２．２．Ｈ−Ｍａｓｓ（ｍ／ｚ）：（Ｍ＋Ｎａ）＝４０４．１８４３
【０１０７】
実施例５  ＳＨ−Ｃ５−リンカー−Ｉ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−の調製
工程１。エチレングリコール（１．３０ｇ、１．０５当量）および６−アセチルチオヘキサン酸（３．８１ｇ、１．０当量）を８０ｍＬ  ＤＣＭに溶解し、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）（５．３６ｇ、１．３当量）、４−（ジメチルアミノ）ピリジン（ＤＭＡＰ）（０．２４ｇ、０．１当量）、およびトリエチルアミン（６．４ｍＬ、２．３当量）をゆっくり添加した。室温で少なくとも５時間反応させ、反応をＴＬＣで追跡した。その後に、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９．８：０．２を使用したカラムで精製する。生成物は淡黄色の液体であった。収率：３．８８ｇ；７９．８％。
【０１０８】
工程２。４−ニトロフェニルクロロホルマート（４−ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ  ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍａｔ）（３．３５ｇ、１．１５当量）を二口ボトルに入れた。真空下で１時間、三方弁を窒素デバイスに回し、６０ｍＬ  ＤＣＭをシリンジで添加した。秤量した工程１の生成物１を１０〜１５ｍＬ  ＤＣＭで溶解し、シリンジで反応フラスコに注入し、次いで、トリエチルアミン（４．５ｍＬ、２．３当量）をゆっくり添加した。氷浴中で約１時間反応させ、次いで、室温に一晩戻した。反応完了後、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＥＡ：Ｈｅｘ：ＭｅＯＨ＝１：１：０．２を使用したカラムで精製する。生成物は淡黄色の液体であった。精製後の収率：５１．６％。
【０１０９】
工程３。秤量した工程２の生成物２（３．５ｇ、１．０当量）を１２０ｍＬ  ＤＣＭに溶解し、次いで、ヒドラジン水和物（６．５ｍＬ、１０．０当量）をゆっくり添加した。室温で約２４時間反応させた。溶液は、淡黄色から橙色に変化した。反応完了後、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９．５：０．５を使用したカラムで精製した。この工程で、生成物がカラム中に固着し、ＭｅＯＨを５％まで増加させて最終生成物を溶出させることができる。生成物は淡黄色の粘着性固体であった。精製後の収率：１９．４％。
【０１１０】
実施例６  ＮＨ２−Ｃ１−リンカー−Ｉ−アミドの調製
工程１。エタノールアミン（１．２８ｇ、１．０５当量）およびＢｏｃ−グリシン（３．５０ｇ、１．０当量）を８０ｍＬ  ＤＣＭに溶解し、ＥＤＣ・ＨＣｌ（４．９８ｇ、１．３当量）、ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）（２．３０ｇ、１．０当量）、およびトリエチルアミン（６．４ｍＬ、２．３当量）をゆっくり添加した。室温で少なくとも５時間反応させ、反応をＴＬＣで追跡した。その後に、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９．８：０．２を使用したカラムで精製する。生成物は淡黄色の液体であった。収率：４．１０ｇ；８１．５％。
【０１１１】
工程２。４−ニトロフェニルクロロホルマート（４−ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ  ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍａｔ）（３．３５ｇ、１．１５当量）を二口ボトルに入れた。真空下で１時間、三方弁を窒素デバイスに回し、６０ｍＬ  ＤＣＭをシリンジで添加した。秤量した工程１の生成物１を１０〜１５ｍＬ  ＤＣＭで溶解し、シリンジで反応フラスコに注入し、次いで、トリエチルアミン（４．５ｍＬ、２．３当量）をゆっくり添加した。氷浴中で約１時間反応させ、次いで、室温に一晩戻した。反応完了後、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＥｔＯＡｃ：Ｈｅｘ：ＭｅＯＨ＝１：１：０．２を使用したカラムで精製する。生成物は淡黄色の液体であった。精製後の収率：５１．６％。
【０１１２】
工程３。秤量した工程２の生成物２（３．５ｇ、１．０当量）を１２０ｍＬ  ＤＣＭに溶解し、次いで、ヒドラジン水和物（６．５ｍＬ、１０．０当量）をゆっくり添加した。室温で約２４時間反応させた。溶液は、淡黄色から橙色に変化した。反応完了後、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９．５：０．５を使用したカラムで精製した。この工程で、生成物がカラム中に固着し、ＭｅＯＨを５％まで増加させて最終生成物を溶出させることができる。生成物は淡黄色の粘着性固体であった。精製後の収率：１７．９％。
【０１１３】
実施例７  ＮＨ２−Ｃ１−リンカー−Ｉ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−の調製
工程１。エチレングリコール（１．３０ｇ、１．０５当量）およびＢｏｃ−グリシン（３．５０ｇ、１．０当量）を８０ｍＬ  ＤＣＭに溶解し、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）（５．３６ｇ、１．３当量）、４−（ジメチルアミノ）ピリジン（ＤＭＡＰ）（０．２４ｇ、０．１当量）、およびトリエチルアミン（６．４ｍＬ、２．３当量）をゆっくり添加した。室温で少なくとも５時間反応させ、反応をＴＬＣで追跡した。その後に、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９．８：０．２を使用したカラムで精製する。生成物は淡黄色の液体であった。収率：３．６０ｇ；７８．０％。
【０１１４】
工程２。４−ニトロフェニルクロロホルマート（３．３５ｇ、１．１５当量）を二口ボトルに入れた。真空下で１時間、三方弁を窒素デバイスに回し、６０ｍＬ  ＤＣＭをシリンジで添加した。秤量した工程１の生成物１を１０〜１５ｍＬ  ＤＣＭで溶解し、シリンジで反応フラスコに注入し、次いで、トリエチルアミン（４．５ｍＬ、２．３当量）をゆっくり添加した。氷浴中で約１時間反応させ、次いで、室温に一晩戻した。反応完了後、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＥＡ：Ｈｅｘ：ＭｅＯＨ＝１：１：０．２を使用したカラムで精製する。生成物は淡黄色の液体であった。精製後の収率：４９．７％。
【０１１５】
工程３。秤量した工程２の生成物２（３．５ｇ、１．０当量）を１２０ｍＬ  ＤＣＭに溶解し、次いで、ヒドラジン水和物（６．５ｍＬ、１０．０当量）をゆっくり添加した。室温で約２４時間反応させた。溶液は、淡黄色から橙色に変化した。反応完了後、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９．５：０．５を使用したカラムで精製した。この工程で、生成物がカラム中に固着し、ＭｅＯＨを５％まで増加させて最終生成物を溶出させることができる。生成物は淡黄色の粘着性固体であった。精製後の収率：２０．０％。
【０１１６】
実施例８  リンカーＩＩ−アミドの調製
工程１。グリシン（２．３６ｇ、１．０５当量）およびリポ酸（６．１９ｇ、１．０当量）を８０ｍＬ  ＤＣＭに溶解し、ＥＤＣ・ＨＣｌ（７．４７ｇ、１．３当量）、ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）（３．４５ｇ、１．０当量）、およびトリエチルアミン（９．６ｍＬ、２．３当量）をゆっくり添加した。室温で少なくとも５時間反応させ、反応をＴＬＣで追跡した。その後に、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９．５：０．５を使用したカラムで精製する。生成物は淡黄色の液体であった。収率：７０．０％。
【０１１７】
工程２。工程１の生成物（５．２６ｇ、１．０当量）およびエタノールアミン（１．２８ｇ、１．０５当量）を８０ｍＬ  ＤＣＭに溶解し、ＥＤＣ・ＨＣｌ（４．９８ｇ、１．３当量）、ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）（２．３０ｇ、１．０当量）、およびトリエチルアミン（６．４ｍＬ、２．３当量）をゆっくり添加した。室温で少なくとも５時間反応させ、反応をＴＬＣで追跡した。その後に、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９．８：０．２を使用したカラムで精製する。生成物は淡黄色の液体であった。収率：８１．０％。
【０１１８】
工程３。４−ニトロフェニルクロロホルマート（４−ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ  ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍａｔ）（３．３５ｇ、１．１５当量）を二口ボトルに入れた。真空下で１時間、三方弁を窒素デバイスに回し、６０ｍＬ  ＤＣＭをシリンジで添加した。秤量した工程１の生成物１を１０〜１５ｍＬ  ＤＣＭで溶解し、シリンジで反応フラスコに注入し、次いで、トリエチルアミン（４．５ｍＬ、２．３当量）をゆっくり添加した。氷浴中で約１時間反応させ、次いで、室温に一晩戻した。反応完了後、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＥｔＯＡｃ：Ｈｅｘ：ＭｅＯＨ＝１：２：０．２を使用したカラムで精製する。生成物は淡黄色の液体であった。精製後の収率：５１．６％。
【０１１９】
工程４。秤量した工程２の生成物２（３．５ｇ、１．０当量）を１２０ｍＬ  ＤＣＭに溶解し、次いで、ヒドラジン水和物（６．５ｍＬ、１０．０当量）をゆっくり添加した。室温で約２４時間反応させた。溶液は、淡黄色から橙色に変化した。反応完了後、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９．５：０．５を使用したカラムで精製した。この工程で、生成物がカラム中に固着し、ＭｅＯＨを５％まで増加させて最終生成物を溶出させることができる。生成物は淡黄色の粘着性固体であった。精製後の収率：３０．０％。
【化７５】
2018524389.tif 000077
【０１２０】
リンカーＩＩ−１（リンカーＩＩ−アミド、ｚ＝１）。１Ｈ（４００ＭＨｚ）δ１．３２−１．３９（２Ｈ，ｍ），１．４６−１．５７（２Ｈ，ｍ），１．６３−１．６９（１Ｈ，ｍ），１．８３−１．９１（１Ｈ，ｍ），２．０８（１Ｈ，ｓ），２．１３（２Ｈ，ｔ），２．３６−２．４６（１Ｈ，ｍ），３．０７−３．１９（２Ｈ，ｍ），３．２２−３．２８（２Ｈ，ｍ），３．６２−３．６５（３Ｈ，ｍ），３．９５（３Ｈ，ｔ），７．０１（１Ｈ，ｓ），７．９１（１Ｈ，ｔ），８．０１（１Ｈ，ｔ），８．１４（１Ｈ，ｓ）．１３Ｃ（１００ＭＨｚ）δ２５．２，２８．８，３４．６，３５．４，３８．６，３８．７，３９．５，４２．４，５６．６０，６２．８５，１３５．６３，１６９．７２，１７２．８３ｐｐｍ．Ｈ−Ｍａｓｓ（ｍ／ｚ）：（Ｍ＋Ｎａ）＝３８７．１１０２
【化７６】
2018524389.tif 000078
【０１２１】
リンカーＩＩ−２（リンカーＩＩ−アミド、ｚ＝２）。１Ｈ（３００ＭＨｚ）δ１．３２−１．３９（２Ｈ，ｍ），１．４７−１．５７（３Ｈ，ｍ），１．６１−１．７３（１Ｈ，ｍ），１．８１−１．９２（１Ｈ，ｍ），２．１４（２Ｈ，ｔ），２．３５−２．４６（２Ｈ，ｍ），３．０９−３．２１（３Ｈ，ｍ），３．２３−３．３１（３Ｈ，ｍ），３．６５−３．７１（４Ｈ，ｍ），３．９７（２Ｈ，ｔ），７．７８（１Ｈ，ｔ），７．８９（１Ｈ，ｔ），８．１２（２Ｈ，ｔ）．１３Ｃ（１００ＭＨｚ）δ２５．３，２８．８，３４．６，３５．４，３８．６，３８．７，３９．５，４２．４，４２．６，５６．６，６０．２，６２．８，１６９．４，１６９．９，１７３．１ｐｐｍ．Ｈ−Ｍａｓｓ（ｍ／ｚ）：（Ｍ＋Ｎａ）＝４４４．１３４５
【化７７】
2018524389.tif 000079
【０１２２】
リンカーＩＩ−３（リンカーＩＩ−アミド、ｚ＝３）。１Ｈ（３００ＭＨｚ）δ１．２３（１Ｈ，ｓ），１．３２−１．４０（２Ｈ，ｍ），１．４６−１．５７（４Ｈ，ｍ），１．６３−１．７０（１Ｈ，ｍ），１．８０−１．９２（２Ｈ，ｔ），１．９６（１Ｈ，ｓ），２．０４（１Ｈ，ｓ），２．１４（３Ｈ，ｔ），３．０７−３．１９（３Ｈ，ｍ），３．５８−３．６６（３Ｈ，ｍ），３．７２（３Ｈ，ｔ），３．９６（１Ｈ，ｔ），４．０５（１Ｈ，ｓ），７．８６（１Ｈ，ｓ），８．１０（３Ｈ，ｓ）．１３Ｃ（１００ＭＨｚ）δ２５．３，２８．８，３４．６，３５．４，３８．６，３９．５，３９．７，４０．５，４２．４，４２．６，５６．６，６０．２，６２．８，１６９．４，１６９．６，１７０．１，１７３．１ｐｐｍ．Ｈ−Ｍａｓｓ（ｍ／ｚ）：（Ｍ＋Ｎａ）＝５０１．１６０６
【化７８】
2018524389.tif 000080
【０１２３】
リンカーＩＩ−４（リンカーＩＩ−アミド、ｚ＝４）。１Ｈ（３００ＭＨｚ）δ１．２６（３Ｈ，ｓ），１．３５−１．４２（２Ｈ，ｍ），１．４７−１．７０（４Ｈ，ｍ），１．８２−１．９４（２Ｈ，ｍ），２．０３−２．２０（８Ｈ，ｍ），２．２６−２．３３（２Ｈ，ｍ），３．６６−３．８１（７Ｈ，ｍ），３．９５−４．０１（１Ｈ，ｍ），７．８６−７．９４（１Ｈ，ｍ），８．８０−８．２２（３Ｈ，ｍ）．１３Ｃ（１００ＭＨｚ）δ２５．３，２８．８，２９．４，３１．２，３４．６，３５．４，３８．５，３８．６，４２．４，４２．６，５６．６，６６．０，１２５．８，１２８．７，１２９．４，１６９．４，１６９．８，１７０．０，１７３．１ｐｐｍ．Ｈ−Ｍａｓｓ（ｍ／ｚ）：（Ｍ＋Ｎａ）＝５５８．１７６８
【０１２４】
実施例９  リンカーＩＩ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−の調製
工程１。グリコール酸（２．４０ｇ、１．０５当量）およびリポ酸（６．１９ｇ、１．０当量）を８０ｍＬ  ＤＣＭに溶解し、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）（８．０５ｇ、１．３当量）、４−（ジメチルアミノ）ピリジン（ＤＭＡＰ）（０．３７ｇ、０．１当量）、およびトリエチルアミン（９．６ｍＬ、２．３当量）をゆっくり添加した。室温で少なくとも５時間反応させ、反応をＴＬＣで追跡した。その後に、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９．５：０．５を使用したカラムで精製する。生成物は淡黄色の液体であった。収率：８５％。
【０１２５】
工程２。工程１の生成物（５．２６ｇ、１．０当量）およびエタノールアミン（１．２８ｇ、１．０５当量）を８０ｍＬ  ＤＣＭに溶解し、ＥＤＣ・ＨＣｌ（４．９８ｇ、１．３当量）、ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）（２．３０ｇ、１．０当量）、およびトリエチルアミン（６．４ｍＬ、２．３当量）をゆっくり添加した。室温で少なくとも５時間反応させ、反応をＴＬＣで追跡した。その後に、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９．８：０．２を使用したカラムで精製する。生成物は淡黄色の液体であった。収率：８０．５％。
【０１２６】
工程３。４−ニトロフェニルクロロホルマート（３．３５ｇ、１．１５当量）を二口ボトルに入れた。真空下で１時間、三方弁を窒素デバイスに回し、６０ｍＬ  ＤＣＭをシリンジで添加した。秤量した工程１の生成物１を１０〜１５ｍＬ  ＤＣＭで溶解し、シリンジで反応フラスコに注入し、次いで、トリエチルアミン（４．５ｍＬ、２．３当量）をゆっくり添加した。氷浴中で約１時間反応させ、次いで、室温に一晩戻した。反応完了後、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＥｔＯＡｃ：Ｈｅｘ：ＭｅＯＨ＝１：２：０．２を使用したカラムで精製する。生成物は淡黄色の液体であった。精製後の収率：４７．８％。
【０１２７】
工程４。秤量した工程２の生成物２（３．５ｇ、１．０当量）を１２０ｍＬ  ＤＣＭに溶解し、次いで、ヒドラジン水和物（６．５ｍＬ、１０．０当量）をゆっくり添加した。室温で約２４時間反応させた。溶液は、淡黄色から橙色に変化した。反応完了後、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９．５：０．５を使用したカラムで精製した。この工程で、生成物がカラム中に固着し、ＭｅＯＨを５％まで増加させて最終生成物を溶出させることができる。生成物は淡黄色の粘着性固体であった。精製後の収率：１９．３％。
【０１２８】
実施例１０  リンカーＳＨ−Ｃ５−リンカー−ＩＩ−アミドの調製
工程１。６−アセチルチオヘキサン酸（５．７１ｇ、１．０当量）およびグリシン（２．３６ｇ、１．０５当量）を８０ｍＬ  ＤＣＭに溶解し、ＥＤＣ・ＨＣｌ（７．４７ｇ、１．３当量）、ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）（３．４５ｇ、１．０当量）、およびトリエチルアミン（９．６ｍＬ、２．３当量）をゆっくり添加した。室温で少なくとも５時間反応させ、反応をＴＬＣで追跡した。その後に、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９．５：０．５を使用したカラムで精製する。生成物は淡黄色の液体であった。収率：６８．８％。
【０１２９】
工程２。工程１の生成物（５．２６ｇ、１．０当量）およびエタノールアミン（１．２８ｇ、１．０５当量）を８０ｍＬ  ＤＣＭに溶解し、ＥＤＣ・ＨＣｌ（４．９８ｇ、１．３当量）、ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）（２．３０ｇ、１．０当量）、およびトリエチルアミン（６．４ｍＬ、２．３当量）をゆっくり添加した。室温で少なくとも５時間反応させ、反応をＴＬＣで追跡した。その後に、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９．８：０．２を使用したカラムで精製する。生成物は淡黄色の液体であった。収率：８０．５％。
【０１３０】
工程３。４−ニトロフェニルクロロホルマート（４−ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ  ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍａｔ）（３．３５ｇ、１．１５当量）を二口ボトルに入れた。真空下で１時間、三方弁を窒素デバイスに回し、６０ｍＬ  ＤＣＭをシリンジで添加した。秤量した工程１の生成物１を１０〜１５ｍＬ  ＤＣＭで溶解し、シリンジで反応フラスコに注入し、次いで、トリエチルアミン（４．５ｍＬ、２．３当量）をゆっくり添加した。氷浴中で約１時間反応させ、次いで、室温に一晩戻した。反応完了後、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＥｔＯＡｃ：Ｈｅｘ：ＭｅＯＨ＝１：２：０．２を使用したカラムで精製する。生成物は淡黄色の液体であった。精製後の収率：５０．６％。
【０１３１】
工程４。秤量した工程２の生成物２（３．５ｇ、１．０当量）を１２０ｍＬ  ＤＣＭに溶解し、次いで、ヒドラジン水和物（６．５ｍＬ、１０．０当量）をゆっくり添加した。室温で約２４時間反応させた。溶液は、淡黄色から橙色に変化した。反応完了後、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９．５：０．５を使用したカラムで精製した。この工程で、生成物がカラム中に固着し、ＭｅＯＨを５％まで増加させて最終生成物を溶出させることができる。生成物は淡黄色の粘着性固体であった。精製後の収率：１８．３％。
【０１３２】
実施例１１  リンカーＳＨ−Ｃ５−リンカー−ＩＩ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−の調製
工程１。６−アセチルチオヘキサン酸（５．７１ｇ、１．０当量）およびグリコール酸（２．４０ｇ，１．０５当量）を８０ｍＬ  ＤＣＭに溶解し、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）（８．０５ｇ、１．３当量）、４−（ジメチルアミノ）ピリジン（ＤＭＡＰ）（０．３７ｇ、０．１当量）、およびトリエチルアミン（９．６ｍＬ、２．３当量）をゆっくり添加した。室温で少なくとも５時間反応させ、反応をＴＬＣで追跡した。その後に、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９．５：０．５を使用したカラムで精製する。生成物は淡黄色の液体であった。収率：７８％。
【０１３３】
工程２。工程１の生成物（５．２６ｇ、１．０当量）およびエタノールアミン（１．２８ｇ、１．０５当量）を８０ｍＬ  ＤＣＭに溶解し、ＥＤＣ・ＨＣｌ（４．９８ｇ、１．３当量）、ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）（２．３０ｇ、１．０当量）、およびトリエチルアミン（６．４ｍＬ、２．３当量）をゆっくり添加した。室温で少なくとも５時間反応させ、反応をＴＬＣで追跡した。その後に、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９．８：０．２を使用したカラムで精製する。生成物は淡黄色の液体であった。収率：８０．５％。
【０１３４】
工程３。４−ニトロフェニルクロロホルマート（４−ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ  ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍａｔ）（３．３５ｇ、１．１５当量）を二口ボトルに入れた。真空下で１時間、三方弁を窒素デバイスに回し、６０ｍＬ  ＤＣＭをシリンジで添加した。秤量した工程１の生成物１を１０〜１５ｍＬ  ＤＣＭで溶解し、シリンジで反応フラスコに注入し、次いで、トリエチルアミン（４．５ｍＬ、２．３当量）をゆっくり添加した。氷浴中で約１時間反応させ、次いで、室温に一晩戻した。反応完了後、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＥｔＯＡｃ：Ｈｅｘ：ＭｅＯＨ＝１：２：０．２を使用したカラムで精製する。生成物は淡黄色の液体であった。精製後の収率：５１．６％。
【０１３５】
工程４。秤量した工程２の生成物２（３．５ｇ、１．０当量）を１２０ｍＬ  ＤＣＭに溶解し、次いで、ヒドラジン水和物（６．５ｍＬ、１０．０当量）をゆっくり添加した。室温で約２４時間反応させた。溶液は、淡黄色から橙色に変化した。反応完了後、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９．５：０．５を使用したカラムで精製した。この工程で、生成物がカラム中に固着し、ＭｅＯＨを５％まで増加させて最終生成物を溶出させることができる。生成物は淡黄色の粘着性固体であった。精製後の収率：１９．０％。
【０１３６】
実施例１２  リンカーＮＨ２−Ｃ１−リンカー−ＩＩ−アミドの調製
工程１。Ｂｏｃ−グリシン（５．２６ｇ、１．０当量）およびグリシン（２．３６ｇ、１．０５当量）を８０ｍＬ  ＤＣＭに溶解し、ＥＤＣ・ＨＣｌ（７．４７ｇ、１．３当量）、ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）（３．４５ｇ、１．０当量）、およびトリエチルアミン（９．６ｍＬ、２．３当量）をゆっくり添加した。室温で少なくとも５時間反応させ、反応をＴＬＣで追跡した。その後に、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９．５：０．５を使用したカラムで精製する。生成物は淡黄色の液体であった。収率：７０％。
【０１３７】
工程２。工程１の生成物（５．２６ｇ、１．０当量）およびエタノールアミン（１．２８ｇ、１．０５当量）を８０ｍＬ  ＤＣＭに溶解し、ＥＤＣ・ＨＣｌ（４．９８ｇ、１．３当量）、ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）（２．３０ｇ、１．０当量）、およびトリエチルアミン（６．４ｍＬ、２．３当量）をゆっくり添加した。室温で少なくとも５時間反応させ、反応をＴＬＣで追跡した。その後に、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９．８：０．２を使用したカラムで精製する。生成物は淡黄色の液体であった。収率：７７．８％。
【０１３８】
工程３。４−ニトロフェニルクロロホルマート（４−ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ  ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍａｔ）（３．３５ｇ、１．１５当量）を二口ボトルに入れた。真空下で１時間、三方弁を窒素デバイスに回し、６０ｍＬ  ＤＣＭをシリンジで添加した。秤量した工程１の生成物１を１０〜１５ｍＬ  ＤＣＭで溶解し、シリンジで反応フラスコに注入し、次いで、トリエチルアミン（４．５ｍＬ、２．３当量）をゆっくり添加した。氷浴中で約１時間反応させ、次いで、室温に一晩戻した。反応完了後、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＥｔＯＡｃ：Ｈｅｘ：ＭｅＯＨ＝１：２：０．２を使用したカラムで精製する。生成物は淡黄色の液体であった。精製後の収率：５１．６％。
【０１３９】
工程４。秤量した工程２の生成物２（３．５ｇ、１．０当量）を１２０ｍＬ  ＤＣＭに溶解し、次いで、ヒドラジン水和物（６．５ｍＬ、１０．０当量）をゆっくり添加した。室温で約２４時間反応させた。溶液は、淡黄色から橙色に変化した。反応完了後、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９．５：０．５を使用したカラムで精製した。この工程で、生成物がカラム中に固着し、ＭｅＯＨを５％まで増加させて最終生成物を溶出させることができる。生成物は淡黄色の粘着性固体であった。精製後の収率：１８．８％。
【０１４０】
実施例１３  ＮＨ２−Ｃ１−リンカー−ＩＩ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−の調製
工程１。Ｂｏｃ−グリシン（５．２６ｇ、１．０当量）およびグリコール酸（２．４０ｇ，１．０５当量）を８０ｍＬ  ＤＣＭに溶解し、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）（８．０５ｇ、１．３当量）、４−（ジメチルアミノ）ピリジン（ＤＭＡＰ）（０．３７ｇ、０．１当量）、およびトリエチルアミン（９．６ｍＬ、２．３当量）をゆっくり添加した。室温で少なくとも５時間反応させ、反応をＴＬＣで追跡した。その後に、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＤＣＭ：ＭＯＨ＝９．５：０．５を使用したカラムで精製する。生成物は淡黄色の液体であった。収率：８２．０％。
【０１４１】
工程２。工程１の生成物（５．２６ｇ、１．０当量）およびエタノールアミン（１．２８ｇ、１．０５当量）を８０ｍＬ  ＤＣＭに溶解し、ＥＤＣ・ＨＣｌ（４．９８ｇ、１．３当量）、ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）（２．３０ｇ、１．０当量）、およびトリエチルアミン（６．４ｍＬ、２．３当量）をゆっくり添加した。室温で少なくとも５時間反応させ、反応をＴＬＣで追跡した。その後に、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９．８：０．２を使用したカラムで精製する。生成物は淡黄色の液体であった。収率：７８．５％。
【０１４２】
工程３。４−ニトロフェニルクロロホルマート（３．３５ｇ、１．１５当量）を二口ボトルに入れた。真空下で１時間、三方弁を窒素デバイスに回し、６０ｍＬ  ＤＣＭをシリンジで添加した。秤量した工程１の生成物１を１０〜１５ｍＬ  ＤＣＭで溶解し、シリンジで反応フラスコに注入し、次いで、トリエチルアミン（４．５ｍＬ、２．３当量）をゆっくり添加した。氷浴中で約１時間反応させ、次いで、室温に一晩戻した。反応完了後、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＥｔＯＡｃ：Ｈｅｘ：ＭｅＯＨ＝１：２：０．２を使用したカラムで精製する。生成物は淡黄色の液体であった。精製後の収率：５１．０％。
【０１４３】
工程４。秤量した工程２の生成物（３．５ｇ、１．０当量）を１２０ｍＬ  ＤＣＭに溶解し、次いで、ヒドラジン水和物（６．５ｍＬ、１０．０当量）をゆっくり添加した。室温で約２４時間反応させた。溶液は、淡黄色から橙色に変化した。反応完了後、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９．５：０．５を使用したカラムで精製した。この工程で、生成物がカラム中に固着し、ＭｅＯＨを５％まで増加させて最終生成物を溶出させることができる。生成物は淡黄色の粘着性固体であった。精製後の収率：１９．５％。
【０１４４】
実施例１４  リンカーＩＶ−アミドの調製
【化７９】
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工程１。エタノールアミン（１．９２ｇ、１．０５当量）およびリポ酸（６．１９ｇ、１．０当量）を８０ｍＬ  ＤＣＭに溶解し、ＥＤＣ・ＨＣｌ（７．４７ｇ、１．３当量）、ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）（３．４５ｇ、１．０当量）、およびトリエチルアミン（９．６ｍＬ、２．３当量）をゆっくり添加した。室温で少なくとも５時間反応させ、反応をＴＬＣで追跡した。その後に、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９．８：０．２を使用したカラムで精製する。生成物は淡黄色の液体であった。収率：６６．０％。
【０１４５】
工程２。工程１の生成物（４．９８ｇ、１．０当量）およびコハク酸（２．４８ｇ、１．０５当量）を８０ｍＬ  ＤＣＭに溶解し、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）（５．３６ｇ、１．３当量）、４−（ジメチルアミノ）ピリジン（ＤＭＡＰ）（０．２４ｇ、０．１当量）、およびトリエチルアミン（６．４ｍＬ、２．３当量）をゆっくり添加した。室温で少なくとも５時間反応させ、反応をＴＬＣで追跡した。その後に、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９．５：０．５を使用したカラムで精製する。生成物は淡黄色の液体であった。収率：８０．７％。
【０１４６】
工程３。工程２の生成物（３．４９ｇ、１．０当量）および２−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］エタノール（１．５７ｇ、１．０５当量）を８０ｍＬ  ＤＣＭに溶解し、ＥＤＣ・ＨＣｌ（２．４９ｇ、１．３当量）、ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）（１．１５ｇ、１．０当量）、およびトリエチルアミン（３．２ｍＬ、２．３当量）をゆっくり添加した。室温で少なくとも５時間反応させ、反応をＴＬＣで追跡した。その後に、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９．８：０．２を使用したカラムで精製する。生成物は淡黄色の液体であった。収率：８１．２％。
【０１４７】
工程４。４−ニトロフェニルクロロホルマート（３．３５ｇ、１．１５当量）を二口ボトルに入れた。真空下で１時間、三方弁を窒素デバイスに回し、６０ｍＬ  ＤＣＭをシリンジで添加した。秤量した工程３の生成物を１０〜１５ｍＬ  ＤＣＭで溶解し、シリンジで反応フラスコに注入し、次いで、トリエチルアミン（４．５ｍＬ、２．３当量）をゆっくり添加した。氷浴中で約１時間反応させ、次いで、室温に一晩戻した。反応完了後、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＥｔＯＡｃ：Ｈｅｘ：ＭｅＯＨ＝１：２：０．２を使用したカラムで精製する。生成物は淡黄色の液体であった。精製後の収率：４８．６％。
【０１４８】
工程５。秤量した工程４の生成物（３．５ｇ、１．０当量）を１２０ｍＬ  ＤＣＭに溶解し、次いで、ヒドラジン水和物（６．５ｍＬ、１０．０当量）をゆっくり添加した。室温で約２４時間反応させた。溶液は、淡黄色から橙色に変化した。反応完了後、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９．５：０．５を使用したカラムで精製した。この工程で、生成物がカラム中に固着し、ＭｅＯＨを５％まで増加させて最終生成物を溶出させることができる。生成物（リンカーＩＶ−２）は淡黄色の粘着性固体であった。精製後の収率：３０．０％。
１Ｈ（３００ＭＨｚ）δ１．３０−１．３４（２Ｈ，ｍ），１．４７−１．５６（３Ｈ，ｍ），１．６０−１．６７（１Ｈ，ｍ），１．８２−１．８７（１Ｈ，ｍ），２．２３（２Ｈ，ｔ），２．５４−２．５６（４Ｈ，ｍ），２．６３−２．２．６６（４Ｈ，ｍ），３．０７−３．２５（２Ｈ，ｍ），３．３３−３．３９（３Ｈ，ｍ），３．４０−３．４３（２Ｈ，ｍ），３．４６−３．５０（５Ｈ，ｍ），３．５４−３．５８（５Ｈ，ｍ），４．０３−４．０５（２Ｈ，ｍ），４．０７−４．１０（２Ｈ，ｍ），４．１３−４．１５（２Ｈ，ｍ）
１３Ｃ（１００ＭＨｚ）δ２４．５，２４．６，２７．５，３３．７，３４．７，３８．１，４１．０，５５．７，５５．８，５９．６，５９．７，５９．８，６５．７，６５．８，６５．９，７１．５，７１．７，１７１．７，１７１．９，１７２．０，１７７．１，１７７．２，１７７．３
【０１４９】
実施例１５  リンカーＩＶ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−の調製
工程１。エチレングリコール（１．９６ｇ、１．０５当量）およびリポ酸（６．１９ｇ、１．０当量）を８０ｍＬ  ＤＣＭに溶解し、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）（８．０４ｇ、１．３当量）、４−（ジメチルアミノ）ピリジン（ＤＭＡＰ）（０．３７ｇ、０．１当量）、およびトリエチルアミン（９．６ｍＬ、２．３当量）をゆっくり添加した。室温で少なくとも５時間反応させ、反応をＴＬＣで追跡した。その後に、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９．８：０．２を使用したカラムで精製する。生成物は淡黄色の液体であった。収率：６６．０％。
【０１５０】
工程２。工程１の生成物（４．９８ｇ、１．０当量）およびコハク酸（２．４８ｇ、１．０５当量）を８０ｍＬ  ＤＣＭに溶解し、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）（５．３６ｇ、１．３当量）、４−（ジメチルアミノ）ピリジン（ＤＭＡＰ）（０．２４ｇ、０．１当量）、およびトリエチルアミン（６．４ｍＬ、２．３当量）をゆっくり添加した。室温で少なくとも５時間反応させ、反応をＴＬＣで追跡した。その後に、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９．５：０．５を使用したカラムで精製する。生成物は淡黄色の液体であった。収率：８１．２％。
【０１５１】
工程３。工程２の生成物（３．４９ｇ、１．０当量）および２−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］エタノール（１．５７ｇ、１．０５当量）を８０ｍＬ  ＤＣＭに溶解し、ＥＤＣ・ＨＣｌ（２．４９ｇ、１．３当量）、ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）（１．１５ｇ、１．０当量）、およびトリエチルアミン（３．２ｍＬ、２．３当量）をゆっくり添加した。室温で少なくとも５時間反応させ、反応をＴＬＣで追跡した。その後に、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９．８：０．２を使用したカラムで精製する。生成物は淡黄色の液体であった。収率：８０．５％。
【０１５２】
工程４。４−ニトロフェニルクロロホルマート（４−ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ  ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍａｔ）（３．３５ｇ、１．１５当量）を二口ボトルに入れた。真空下で１時間、三方弁を窒素デバイスに回し、６０ｍＬ  ＤＣＭをシリンジで添加した。秤量した工程３の生成物を１０〜１５ｍＬ  ＤＣＭで溶解し、シリンジで反応フラスコに注入し、次いで、トリエチルアミン（４．５ｍＬ、２．３当量）をゆっくり添加した。氷浴中で約１時間反応させ、次いで、室温に一晩戻した。反応完了後、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＥｔＯＡｃ：Ｈｅｘ：ＭｅＯＨ＝１：２：０．２を使用したカラムで精製する。生成物は淡黄色の液体であった。精製後の収率：５０．３％。
【０１５３】
工程５。秤量した工程４の生成物（３．５ｇ、１．０当量）を１２０ｍＬ  ＤＣＭに溶解し、次いで、ヒドラジン水和物（６．５ｍＬ、１０．０当量）をゆっくり添加した。室温で約２４時間反応させた。溶液は、淡黄色から橙色に変化した。反応完了後、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９．５：０．５を使用したカラムで精製した。この工程で、生成物がカラム中に固着し、ＭｅＯＨを５％まで増加させて最終生成物を溶出させることができる。生成物は淡黄色の粘着性固体であった。精製後の収率：３１．０％。
【０１５４】
実施例１６  ＳＨ−Ｃ５−リンカー−ＩＶ−アミドの調製
工程１。エタノールアミン（１．９２ｇ、１．０５当量）および６−アセチルチオヘキサン酸（５．７１ｇ、１．０当量）を８０ｍＬ  ＤＣＭに溶解し、ＥＤＣ・ＨＣｌ（７．４７ｇ、１．３当量）、ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）（３．４５ｇ、１．０当量）、およびトリエチルアミン（９．６ｍＬ、２．３当量）をゆっくり添加した。室温で少なくとも５時間反応させ、反応をＴＬＣで追跡した。その後に、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９．８：０．２を使用したカラムで精製する。生成物は淡黄色の液体であった。収率：７４．０％。
【０１５５】
工程２。工程１の生成物（４．９８ｇ、１．０当量）およびコハク酸（２．４８ｇ、１．０５当量）を８０ｍＬ  ＤＣＭに溶解し、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）（５．３６ｇ、１．３当量）、４−（ジメチルアミノ）ピリジン（ＤＭＡＰ）（０．２４ｇ、０．１当量）、およびトリエチルアミン（６．４ｍＬ、２．３当量）をゆっくり添加した。室温で少なくとも５時間反応させ、反応をＴＬＣで追跡した。その後に、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９．５：０．５を使用したカラムで精製する。生成物は淡黄色の液体であった。収率：８０．２％。
【０１５６】
工程３。工程２の生成物（３．４９ｇ、１．０当量）および２−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］エタノール（１．５７ｇ、１．０５当量）を８０ｍＬ  ＤＣＭに溶解し、ＥＤＣ・ＨＣｌ（２．４９ｇ、１．３当量）、ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）（１．１５ｇ、１．０当量）、およびトリエチルアミン（３．２ｍＬ、２．３当量）をゆっくり添加した。室温で少なくとも５時間反応させ、反応をＴＬＣで追跡した。その後に、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９．８：０．２を使用したカラムで精製する。生成物は淡黄色の液体であった。収率：８０．０％。
【０１５７】
工程４。４−ニトロフェニルクロロホルマート（３．３５ｇ、１．１５当量）を二口ボトルに入れた。真空下で１時間、三方弁を窒素デバイスに回し、６０ｍＬ  ＤＣＭをシリンジで添加した。秤量した工程３の生成物を１０〜１５ｍＬ  ＤＣＭで溶解し、シリンジで反応フラスコに注入し、次いで、トリエチルアミン（４．５ｍＬ、２．３当量）をゆっくり添加した。氷浴中で約１時間反応させ、次いで、室温に一晩戻した。反応完了後、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＥｔＯＡｃ：Ｈｅｘ：ＭｅＯＨ＝１：２：０．２を使用したカラムで精製する。生成物は淡黄色の液体であった。精製後の収率：５１．１％。
【０１５８】
工程５。秤量した工程４の生成物（３．５ｇ、１．０当量）を１２０ｍＬ  ＤＣＭに溶解し、次いで、ヒドラジン水和物（６．５ｍＬ、１０．０当量）をゆっくり添加した。室温で約２４時間反応させた。溶液は、淡黄色から橙色に変化した。反応完了後、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９．５：０．５を使用したカラムで精製した。この工程で、生成物がカラム中に固着し、ＭｅＯＨを５％まで増加させて最終生成物を溶出させることができる。生成物は淡黄色の粘着性固体であった。精製後の収率：２８．０％。
【０１５９】
実施例１７  ＳＨ−Ｃ５−リンカー−ＩＶ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−の調製
工程１。エチレングリコール（１．９６ｇ、１．０５当量）および６−アセチルチオヘキサン酸（５．７１ｇ、１．０当量）を８０ｍＬ  ＤＣＭに溶解し、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）（８．０４ｇ、１．３当量）、４−（ジメチルアミノ）ピリジン（ＤＭＡＰ）（０．３７ｇ、０．１当量）、およびトリエチルアミン（９．６ｍＬ、２．３当量）をゆっくり添加した。室温で少なくとも５時間反応させ、反応をＴＬＣで追跡した。その後に、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９．８：０．２を使用したカラムで精製する。生成物は淡黄色の液体であった。収率：７１．５％。
【０１６０】
工程２。工程１の生成物（４．９８ｇ、１．０当量）およびコハク酸（２．４８ｇ、１．０５当量）を８０ｍＬ  ＤＣＭに溶解し、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）（５．３６ｇ、１．３当量）、４−（ジメチルアミノ）ピリジン（ＤＭＡＰ）（０．２４ｇ、０．１当量）、およびトリエチルアミン（６．４ｍＬ、２．３当量）をゆっくり添加した。室温で少なくとも５時間反応させ、反応をＴＬＣで追跡した。その後に、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９．５：０．５を使用したカラムで精製する。生成物は淡黄色の液体であった。収率：８１．４％。
【０１６１】
工程３。工程２の生成物（３．４９ｇ、１．０当量）および２−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］エタノール（１．５７ｇ、１．０５当量）を８０ｍＬ  ＤＣＭに溶解し、ＥＤＣ・ＨＣｌ（２．４９ｇ、１．３当量）、ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）（１．１５ｇ、１．０当量）、およびトリエチルアミン（３．２ｍＬ、２．３当量）をゆっくり添加した。室温で少なくとも５時間反応させ、反応をＴＬＣで追跡した。その後に、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＤＣＭ：ＭＯＨ＝９．８：０．２を使用したカラムで精製する。生成物は淡黄色の液体であった。収率：７８．８％。
【０１６２】
工程４。４−ニトロフェニルクロロホルマート（３．３５ｇ、１．１５当量）を二口ボトルに入れた。真空下で１時間、三方弁を窒素デバイスに回し、６０ｍＬ  ＤＣＭをシリンジで添加した。秤量した工程３の生成物を１０〜１５ｍＬ  ＤＣＭで溶解し、シリンジで反応フラスコに注入し、次いで、トリエチルアミン（４．５ｍＬ、２．３当量）をゆっくり添加した。氷浴中で約１時間反応させ、次いで、室温に一晩戻した。反応完了後、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＥｔＯＡｃ：Ｈｅｘ：ＭｅＯＨ＝１：２：０．２を使用したカラムで精製する。生成物は淡黄色の液体であった。精製後の収率：５１．１％。
【０１６３】
工程５。秤量した工程４の生成物（３．５ｇ、１．０当量）を１２０ｍＬ  ＤＣＭに溶解し、次いで、ヒドラジン水和物（６．５ｍＬ、１０．０当量）をゆっくり添加した。室温で約２４時間反応させた。溶液は、淡黄色から橙色に変化した。反応完了後、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９．５：０．５を使用したカラムで精製した。この工程で、生成物がカラム中に固着し、ＭｅＯＨを５％まで増加させて最終生成物を溶出させることができる。生成物は淡黄色の粘着性固体であった。精製後の収率：２７．８％。
【０１６４】
実施例１８  ＮＨ２−Ｃ１−リンカー−ＩＶ−アミドの調製
工程１。エタノールアミン（１．９２ｇ、１．０５当量）およびＢｏｃ−グリシン（５．２６ｇ、１．０当量）を８０ｍＬ  ＤＣＭに溶解し、ＥＤＣ・ＨＣｌ（７．４７ｇ、１．３当量）、ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）（３．４５ｇ、１．０当量）、およびトリエチルアミン（９．６ｍＬ、２．３当量）をゆっくり添加した。室温で少なくとも５時間反応させ、反応をＴＬＣで追跡した。その後に、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９．８：０．２を使用したカラムで精製する。生成物は淡黄色の液体であった。収率：６２．０％。
【０１６５】
工程２。工程１の生成物（４．９８ｇ、１．０当量）およびコハク酸（２．４８ｇ、１．０５当量）を８０ｍＬ  ＤＣＭに溶解し、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）（５．３６ｇ、１．３当量）、４−（ジメチルアミノ）ピリジン（ＤＭＡＰ）（０．２４ｇ、０．１当量）、およびトリエチルアミン（６．４ｍＬ、２．３当量）をゆっくり添加した。室温で少なくとも５時間反応させ、反応をＴＬＣで追跡した。その後に、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９．５：０．５を使用したカラムで精製する。生成物は淡黄色の液体であった。収率：８０．４％。
【０１６６】
工程３。工程２の生成物（３．４９ｇ、１．０当量）および２−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］エタノール（１．５７ｇ、１．０５当量）を８０ｍＬ  ＤＣＭに溶解し、ＥＤＣ・ＨＣｌ（２．４９ｇ、１．３当量）、ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）（１．１５ｇ、１．０当量）、およびトリエチルアミン（３．２ｍＬ、２．３当量）をゆっくり添加した。室温で少なくとも５時間反応させ、反応をＴＬＣで追跡した。その後に、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９．８：０．２を使用したカラムで精製する。生成物は淡黄色の液体であった。収率：７１．０％。
【０１６７】
工程４。４−ニトロフェニルクロロホルマート（４−ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ  ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍａｔ）（３．３５ｇ、１．１５当量）を二口ボトルに入れた。真空下で１時間、三方弁を窒素デバイスに回し、６０ｍＬ  ＤＣＭをシリンジで添加した。秤量した工程３の生成物を１０〜１５ｍＬ  ＤＣＭで溶解し、シリンジで反応フラスコに注入し、次いで、トリエチルアミン（４．５ｍＬ、２．３当量）をゆっくり添加した。氷浴中で約１時間反応させ、次いで、室温に一晩戻した。反応完了後、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＥｔＯＡｃ：Ｈｅｘ：ＭｅＯＨ＝１：２：０．２を使用したカラムで精製する。生成物は淡黄色の液体であった。精製後の収率：５１．９％。
【０１６８】
工程５。秤量した工程４の生成物（３．５ｇ、１．０当量）を１２０ｍＬ  ＤＣＭに溶解し、次いで、ヒドラジン水和物（６．５ｍＬ、１０．０当量）をゆっくり添加した。室温で約２４時間反応させた。溶液は、淡黄色から橙色に変化した。反応完了後、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９．５：０．５を使用したカラムで精製した。この工程で、生成物がカラム中に固着し、ＭｅＯＨを５％まで増加させて最終生成物を溶出させることができる。生成物は淡黄色の粘着性固体であった。精製後の収率：２９．０％。
【０１６９】
実施例１９  ＮＨ２−Ｃ１−リンカー−ＩＶ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−の調製
工程１。エチレングリコール（１．９６ｇ、１．０５当量）およびＢｏｃ−グリシン（５．２６ｇ、１．０当量）を８０ｍＬ  ＤＣＭに溶解し、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）（８．０４ｇ、１．３当量）、４−（ジメチルアミノ）ピリジン（ＤＭＡＰ）（０．３７ｇ、０．１当量）、およびトリエチルアミン（９．６ｍＬ、２．３当量）をゆっくり添加した。室温で少なくとも５時間反応させ、反応をＴＬＣで追跡した。その後に、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９．８：０．２を使用したカラムで精製する。生成物は淡黄色の液体であった。収率：７５．０％。
【０１７０】
工程２。工程１の生成物（４．９８ｇ、１．０当量）およびコハク酸（２．４８ｇ、１．０５当量）を８０ｍＬ  ＤＣＭに溶解し、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）（５．３６ｇ、１．３当量）、４−（ジメチルアミノ）ピリジン（ＤＭＡＰ）（０．２４ｇ、０．１当量）、およびトリエチルアミン（６．４ｍＬ、２．３当量）をゆっくり添加した。室温で少なくとも５時間反応させ、反応をＴＬＣで追跡した。その後に、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９．５：０．５を使用したカラムで精製する。生成物は淡黄色の液体であった。収率：８０．５％。
【０１７１】
工程３。工程２の生成物（３．４９ｇ、１．０当量）および２−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］エタノール（１．５７ｇ、１．０５当量）を８０ｍＬ  ＤＣＭに溶解し、ＥＤＣ・ＨＣｌ（２．４９ｇ、１．３当量）、ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）（１．１５ｇ、１．０当量）、およびトリエチルアミン（３．２ｍＬ、２．３当量）をゆっくり添加した。室温で少なくとも５時間反応させ、反応をＴＬＣで追跡した。その後に、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９．８：０．２を使用したカラムで精製する。生成物は淡黄色の液体であった。収率：８１．０％。
【０１７２】
工程４。４−ニトロフェニルクロロホルマート（４−ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ  ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍａｔ）（３．３５ｇ、１．１５当量）を二口ボトルに入れた。真空下で１時間、三方弁を窒素デバイスに回し、６０ｍＬ  ＤＣＭをシリンジで添加した。秤量した工程３の生成物を１０〜１５ｍＬ  ＤＣＭで溶解し、シリンジで反応フラスコに注入し、次いで、トリエチルアミン（４．５ｍＬ、２．３当量）をゆっくり添加した。氷浴中で約１時間反応させ、次いで、室温に一晩戻した。反応完了後、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＥｔＯＡｃ：Ｈｅｘ：ＭｅＯＨ＝１：２：０．２を使用したカラムで精製する。生成物は淡黄色の液体であった。精製後の収率：５０．６％。
【０１７３】
工程５。秤量した工程４の生成物（３．５ｇ、１．０当量）を１２０ｍＬ  ＤＣＭに溶解し、次いで、ヒドラジン水和物（６．５ｍＬ、１０．０当量）をゆっくり添加した。室温で約２４時間反応させた。溶液は、淡黄色から橙色に変化した。反応完了後、混合物をｄｄＨ２Ｏの添加によってクエンチし、ＤＣＭで２〜３回抽出した。有機層を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ＭｇＳＯ４で濾過し、次いで、ＤＣＭを除去した。抽出物を、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９．５：０．５を使用したカラムで精製した。この工程で、生成物がカラム中に固着し、ＭｅＯＨを５％まで増加させて最終生成物を溶出させることができる。生成物は淡黄色の粘着性固体であった。精製後の収率：３１．２％。
【０１７４】
実施例２０  本発明のリンカーの細胞傷害性アッセイ
本発明者らは、９種のリンカーの細胞傷害性を試験し、各リンカーのＩＣ５０値を計算した。ヒト乳腺腺癌（ｂｒａｓｔ  ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ）ＭＣＦ７、ＭＤＡ−ＭＢ−４５３、およびＭＤＡ−ＭＢ−２３１ならびにヒト乳房上皮細胞Ｈ１８４Ｂ５Ｆ５／Ｍ１０を、細胞傷害性試験のために選択した。細胞を６ウェルプレートに播種し、リンカーＩ−１（リンカーＩ−アミド、ｍ＝２）、リンカーＩ−２（リンカーＩ−アミド、ｍ＝１）、リンカーＩ−３（リンカーＩ−アミド、ｍ＝３）、リンカーＩ−４（リンカーＩ−アミド、ｍ＝４）、リンカーＩ−５（リンカーＩ−アミド、ｍ＝５）、リンカーＩＩ−１（リンカーＩＩ−アミド、ｚ＝１）、リンカーＩＩ−２（リンカーＩＩ−アミド、ｚ＝２）、リンカーＩＩ−３（リンカーＩＩ−アミド、ｚ＝３）、およびリンカーＩＩ−４（リンカーＩＩ−アミド、ｚ＝４）で処置し、３７℃で７２時間さらにインキュベートした。写真撮影後、血球計算器を使用して細胞を計数した。成長阻害を無処置対照と比較してリンカーの５０％成長阻害濃度（ＩＣ５０）を見出した。ＩＣ５０のまとめを表１に示す。リンカーＩ−１〜リンカーＩ−５およびリンカーＩＩ−１におけるＩＣ５０値は３００〜７００μＭであった。リンカーＩＩ−２〜ＩＩ−４のＩＣ５０値は８００μＭを超える。これらのデータは、薬物送達のために薬物と金ナノ粒子を抱合するためのリンカーとしての細胞毒性が低いことを示唆している。
【表１】
2018524389.tif 000082
【０１７５】
実施例２１  金ナノ粒子、リンカー、および抗癌薬、ならびに／または抗体の複合体の調製
１．Ａｕ／ＬＫＩ−１／ｍＡｂ−ｐ２４複合体
Ａｕ／ＬＫＩ−１／ｍＡｂ−ｐ２４複合体の調製
【０１７６】
抗体を金ナノ粒子上に抱合するために、抗ＨＩＶ−１  ｐ２４（ＨＩＶ−１  ｐ２４）（ＧｅｎｅＴｅｘ，ＧＴＸ４１５９５）抗体を、１０ｋＤａ  ＭＷＣＯ遠心濾過器（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，ＵＦＣ５０１０２４）を使用して濃縮し、１００ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４（ｐＨ７．４緩衝液）に１ｍｇ／ｍＬで溶解した。次いで、５μＬの１００ｍＭ  ＮａＩＯ４水溶液を５０μＬの抗体溶液に添加し、混合物を暗所で３０分間インキュベートした。反応物を、２５０μＬの１×ＰＢＳを添加してクエンチした。この時点で、抗体のＦｃ部分上の炭水化物部分はアルデヒド基に酸化された。次いで、リンカーＩ−１（リンカーＩ−アミド、ｍ＝２）を抗体溶液に添加した。リンカーは、分子の反対側にヒドラジド基およびジチオール基を有する。ヒドラジド部分は、修飾された抗体分子のＦｃ部分のアルデヒド基と相互作用する。反応混合物を室温で２時間インキュベートし、次いで、遠心濾過器を使用してチオール化抗体を回収し、０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．４）に再懸濁した。１００マイクロリットルの濃度０．１ｍｇ／ｍｌのチオール化抗体を０．５ｍＬの金ナノ粒子と混合し、懸濁液を室温で１時間インキュベートした。その後の使用のために抗体−金ナノ粒子複合体を４℃に維持して保存した。
【０１７７】
Ａｕ／ＬＫＩ−１／ｍＡｂ−ｐ２４複合体の特徴付け
【０１７８】
Ａｕ／ＬＫＩ−１／ｍＡｂ−ｐ２４複合体の製剤を、ＵＶ−Ｖｉｓ分光光度計（Ｂｅｃｋｍａｎ，ＤＵ  ８００）で分析した。記録された表面プラズモン共鳴スペクトルは、抗体抱合金ナノ粒子のプラズモンピーク（λｍａｘ）の２ｎｍレッドシフトを示した（図１Ａ）。Ａｌｅｘ  Ｆｌｕｏｒ５６８二次抗体標識Ａｕ／ＬＫＩ−１／ｍＡｂ−ｐ２４複合体の赤色蛍光画像を、倒立顕微鏡（Ｎｉｋｏｎ、ＴＥ２０００−Ｕ）を使用して測定した。各金ナノ粒子が赤色蛍光を示したことにより、各金ナノ粒子がその表面上で抗ＨＩＶ−１  Ｐ２４抗体と抱合したことを示唆している（図１Ｂ）。さらに、本発明者らは、金ナノ粒子上の抗ＨＩＶ−１  Ｐ２４抗体の結合親和性を調査した。ＥＬＩＳＡから、本発明者らは、抗ＨＩＶ−１  Ｐ２４タンパク質へのＡｕ／ＬＫＩ−１／ｍＡｂ−ｐ２４複合体の結合親和性を確認することができた（図１Ｃ）。
【０１７９】
２．Ａｕ／ＬＫＩ−１／Ａｂ−ＥＧＦＲ複合体またはＬＫ  Ｉ−５／Ａｂ−ＥＧＦＲ複合体
Ａｕ／ＬＫＩ−１／Ａｂ−ＥＧＦＲ複合体またはＬＫＩ−５／Ａｂ−ＥＧＦＲ複合体の調製
【０１８０】
抗体を金ナノ粒子上に抱合するために、抗ヒトＥＧＦＲクローンＨ１１（Ｔｈｅｒｍｏ，ＭＡ１−１２６９３）を、１０ｋＤａ  ＭＷＣＯ遠心濾過器（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，ＵＦＣ５０１０２４）を使用して濃縮し、１００ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４（ｐＨ７．４緩衝液）に１ｍｇ／ｍＬで溶解した。次いで、５μＬの１００ｍＭ  ＮａＩＯ４水溶液を５０μＬの抗体溶液に添加し、混合物を暗所で３０分間インキュベートした。反応物を、２５０μＬの１×ＰＢＳを添加してクエンチした。この時点で、抗体のＦｃ部分上の炭水化物部分はアルデヒド基に酸化された。次いで、リンカーＩ−１（リンカーＩ−アミド、ｍ＝２）またはリンカーＩ−５（リンカーＩ−アミド、ｍ＝５）を抗体溶液に添加した。リンカーは、分子の反対側にヒドラジド基およびジチオール基を有する。ヒドラジド部分は、修飾された抗体分子のＦｃ部分のアルデヒド基と相互作用する。反応混合物を室温で２時間インキュベートし、次いで、遠心濾過器を使用してチオール化抗体を回収し、０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．４）に再懸濁した。１００マイクロリットルの濃度０．１ｍｇ／ｍｌのチオール化抗体を０．５ｍＬの金ナノ粒子と混合し、懸濁液を室温で１時間インキュベートした。その後の使用のために抗体−金ナノ粒子複合体を４℃に維持して保存した。
【０１８１】
Ａｕ／ＬＫＩ−１／Ａｂ−ＥＧＦＲ複合体またはＬＫＩ−５／Ａｂ−ＥＧＦＲ複合体の特徴付け
【０１８２】
Ａｕ／ＬＫＩ−１／Ａｂ−ＥＧＦＲ複合体またはＡｕ／ＬＫＩ−５／Ａｂ−ＥＧＦＲ複合体の製剤を、ＵＶ−Ｖｉｓ分光光度計（Ｂｅｃｋｍａｎ，ＤＵ  ８００）で分析した。記録された表面プラズモン共鳴スペクトルは、抗体抱合金ナノ粒子のプラズモンピーク（λｍａｘ）の２ｎｍレッドシフトを示した（図２）。本発明者らは、２つのリンカー（リンカーＩ−１（リンカーＩ−アミド（ｍ＝２））およびリンカーＩ−５（リンカーＩ−アミド（ｍ＝５）））を、ＥＧＦＲ抗体および金ナノ粒子の抱合について試験した。Ａｕ／ＬＫＩ−１／Ａｂ−ＥＧＦＲ複合体およびＡｕ／ＬＫＩ−５／Ａｂ−ＥＧＦＲ複合体のフローサイトメトリー分析により、ヒト乳腺腺癌ＭＣＦ−７細胞に対する標的親和性が証明された。Ａｕ／ＬＫＩ−１／Ａｂ−ＥＧＦＲ複合体およびＡｕ／ＬＫＩ−５／Ａｂ−ＥＧＦＲ複合体の両方は、ＥＧＦＲ抗体と比較して類似の標的能を示した（表２）。これらのデータは、リンカーが抗体および金ナノ粒子の抱合に適切であり、且つ抗体の結合親和性を保持していることを示唆していた。
【表２】
2018524389.tif 000083
【０１８３】
３．Ａｕ／ＬＫＩ−１／トラスツズマブ（Ｔｒａｓ）複合体
【０１８４】
Ａｕ／ＬＫＩ−１／Ｔｒａｓ複合体の調製
【０１８５】
抗体を金ナノ粒子上に抱合するために、Ｔｒａｓ（ＪＨＬ  ｂｉｏｔｅｃｈ，ＪＨＬ１１８８）抗体を、１０ｋＤａ  ＭＷＣＯ遠心濾過器（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，ＵＦＣ５０１０２４）を使用して濃縮し、１００ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４（ｐＨ７．４緩衝液）に１ｍｇ／ｍＬで溶解した。次いで、５μＬの１００ｍＭ  ＮａＩＯ４水溶液を５０μＬの抗体溶液に添加し、混合物を暗所で３０分間インキュベートした。反応物を、２５０μＬの１×ＰＢＳを添加してクエンチした。この時点で、抗体のＦｃ部分上の炭水化物部分はアルデヒド基に酸化された。次いで、リンカーＩ−１（リンカーＩ−アミド（ｍ＝２））を抗体溶液に添加した。リンカーは、分子の反対側にヒドラジド基およびジチオール基を有する。ヒドラジド部分は、修飾された抗体分子のＦｃ部分のアルデヒド基と相互作用する。反応混合物を室温で２時間インキュベートし、次いで、遠心濾過器を使用してチオール化抗体を回収し、０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．４）に再懸濁した。１００マイクロリットルの濃度０．１ｍｇ／ｍｌのチオール化抗体を０．５ｍＬの金ナノ粒子と混合し、懸濁液を室温で１時間インキュベートした。その後の使用のためにＡｕ／ＬＫＩ−１／Ｔｒａｓ複合体を４℃に維持して保存した。
【０１８６】
Ａｕ／ＬＫＩ−１／Ｔｒａｓ複合体の特徴付け
Ａｕ／ＬＫＩ−１／Ｔｒａｓ複合体の製剤を、ＵＶ−Ｖｉｓ分光光度計（Ｂｅｃｋｍａｎ，ＤＵ  ８００）で分析した。記録された表面プラズモン共鳴スペクトルは、抗体抱合金ナノ粒子のプラズモンピーク（λｍａｘ）の８ｎｍレッドシフトを示した（図３）。本発明者らは、Ａｕ／ＬＫＩ−１／Ｔｒａｓ複合体を試験した。Ａｕ／ＬＫＩ−１／Ｔｒａｓ複合体のフローサイトメトリー分析により、ヒト乳腺腺癌細胞に対する標的親和性が証明された。Ａｕ／ＬＫＩ−１／Ｔｒａｓ複合体は、トラスツズマブと比較して類似の標的能を示した（表３）。
【表３】
2018524389.tif 000084
【０１８７】
４．Ａｕ／ＬＫＩ−１／エタネルセプト（ＥＴＡ）複合体
【０１８８】
Ａｕ／ＬＫＩ−１／ＥＴＡ複合体の調製
【０１８９】
抗体を金ナノ粒子上に抱合するために、エタネルセプト（ＥＴＡ）（Ｍｙｃｅｎａｘ  ｂｉｏｔｅｃｈ，ＴｕＮＥＸ）を、１０ｋＤａ  ＭＷＣＯ遠心濾過器（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，ＵＦＣ５０１０２４）を使用して濃縮し、１００ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４（ｐＨ７．４緩衝液）に１ｍｇ／ｍＬで溶解した。次いで、５μＬの１００ｍＭ  ＮａＩＯ４水溶液を５０μＬの抗体溶液に添加し、混合物を暗所で３０分間インキュベートした。反応物を、２５０μＬの１×ＰＢＳを添加してクエンチした。この時点で、抗体のＦｃ部分上の炭水化物部分はアルデヒド基に酸化された。次いで、リンカーＩ−１を抗体溶液に添加した。リンカーは、分子の反対側にヒドラジド基およびジチオール基を有する。ヒドラジド部分は、修飾された抗体分子のＦｃ部分のアルデヒド基と相互作用する。反応混合物を室温で２時間インキュベートし、次いで、遠心濾過器を使用してチオール化抗体を回収し、０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．４）に再懸濁した。１００マイクロリットルの濃度０．１ｍｇ／ｍｌのチオール化抗体を０．５ｍＬの金ナノ粒子と混合し、懸濁液を室温で１時間インキュベートした。その後の使用のためにＡｕ／ＬＫＩ−１／ＥＴＡ複合体を４℃に維持して保存した。
【０１９０】
Ａｕ／ＬＫＩ−１／ＥＴＡ複合体の特徴付け
【０１９１】
Ａｕ／ＬＫＩ−１／ＥＴＡ複合体の製剤を、ＵＶ−Ｖｉｓ分光光度計（Ｂｅｃｋｍａｎ，ＤＵ  ８００）で分析した。記録された表面プラズモン共鳴スペクトルは、Ａｕ／ＬＫＩ−１／ＥＴＡのプラズモンピーク（λｍａｘ）の２ｎｍレッドシフトを示した（図４Ａ）。Ａｌｅｘ  Ｆｌｕｏｒ５６８二次抗体標識Ａｕ／ＬＫＩ−１／ＥＴＡ複合体の赤色蛍光画像を、倒立顕微鏡（Ｎｉｋｏｎ，ＴＥ２０００−Ｕ）を使用して測定した。各金ナノ粒子が赤色蛍光を示したことにより、各金ナノ粒子がその表面上でＥＴＡ抗体と抱合したことを示唆している（図４Ｂ）。本発明者らは、さらに、１〜５ｎｍのＡｕＮＰを抱合した二次抗体との結合によってＡｕ／ＬＫＩ−１／ＥＴＡ複合体を試験した。Ａｕ／ＬＫＩ−１／ＥＴＡ複合体のＴＥＭ画像では、１〜５ｎｍの金標識抗ヒトＩｇＧ二次抗体のＡｕＮＰ表面上に存在するＥＴＡへの結合が認められた（図４Ｃ）。本発明者らは、さらに、ＥＴＡおよびＡｕ／ＬＫＩ−１／ＥＴＡのＴＮＦα遮断能を調査した。ＭＣＦ−７細胞（５×１０５）を、１２．５ｎｇ／ｍＬのＴＮＦαと６２．５、１２５、２５０、５００ｎｇ／ｍＬのＥＴＡまたはＡｕ／ＬＫＩ−１／ＥＴＡ複合体との混合物でそれぞれ２時間処置した。処置した細胞を、３７℃で７２時間インキュベートし、次いで、細胞数を、ＭＴＳ［（３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−５−（３−カルボキシメトキシフェニル）−２−（４−スルホフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウム）］アッセイによってカウントした。ＴＮＦα遮断能は、ＥＴＡのみおよびＡｕ／ＬＫＩ−１／ＥＴＡ複合体の両方で認められた。ＥＴＡおよびＡｕ／ＬＫＩ−１／ＥＴＡ複合体を使用して、ＴＮＦα誘導性ＭＣＦ−７細胞アポトーシスの遮断能を試験した（表４）。Ａｕ／ＬＫＩ−１／ＥＴＡ複合体は、ＥＴＡと比較して類似のＴＮＦα遮断能を示した。
【表４】
2018524389.tif 000085
【０１９２】
５．Ａｕ／ＬＫＩ−１／ドキソルビシン（Ｄｏｘ）複合体
【０１９３】
Ａｕ／ＬＫＩ−１／Ｄｏｘ複合体の調製
【０１９４】
１当量のドキソルビシンおよび２当量のリンカーＩ−１（リンカーＩ−アミド（ｍ＝２）を乾燥ＭｅＯＨに添加し、室温で混合した。得られた混合物にＴＦＡ（１．３当量）を添加し、一晩反応させた。得られた混合物を濾過して透明な溶液を得た。透明な溶液を、ドロッパーによって５０ｍＬ  ＥｔＯＡｃを含むフラスコに添加し、２０分間撹拌し、濾過してＤｏｘ−リンカー−１固体を得た。得られた固体をＥｔＯＡｃで洗浄し、次いで、乾燥させた。４００μＬのＤｏｘ／ＬＫＩ−１（２０００ｐｐｍ）および２μＬのＮａＯＨを１ｍＬのＡｕＮＰｓ（５０ｐｐｍ）に添加し、次いで、２１時間混合した。混合物を１４００ｒｐｍで２０分間遠心分離した。得られた沈殿物をＤＩ水で洗浄し、得られた沈殿物をＤＩ水に再懸濁した。ＰＥＧ（２Ｋ、２０００Ｄａ）を懸濁液に添加し、一晩混合してＡｕ／ＬＫＩ−１／Ｄｏｘ複合体を得た。
【０１９５】
Ａｕ／ＬＫＩ−１／Ｄｏｘ複合体の特徴付け
【０１９６】
Ａｕ／ＬＫＩ−１／ＤＯＸ複合体を、ＵＶ−Ｖｉｓ分光光度計（Ｂｅｃｋｍａｎ，ＤＵ  ８００）で分析した。記録された表面プラズモン共鳴スペクトルは、Ａｕ／ＬＫＩ−１／Ｄｏｘ複合体のプラズモンピーク（λｍａｘ）の３ｎｍレッドシフトを示した（図５）。
【０１９７】
前述の過程にしたがって、他のリンカーＩ−２、Ｉ−３、Ｉ−４、Ｉ−５、ＩＩ−１、ＩＩ−２、ＩＩ−３、ＩＩ−４、ＩＶ−２、ＳＨＩ−１、およびＳＨＩ−４を使用してＤＯＸおよび金ナノ粒子を抱合して種々の複合体を得た。
実施例２２  Ａｕ／リンカー（ＬＫ）／Ｄｏｘ複合体の細胞傷害性アッセイ
本発明者らは、Ａｕ／ＬＫｓ／Ｄｏｘ複合体の細胞傷害性を試験し、ＩＣ５０値を計算した。ヒト乳腺腺癌（ｂｒａｓｔ  ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ）ＭＣＦ７、ＭＤＡ−ＭＢ−４５３、およびＭＤＡ−ＭＢ−２３１、ならびにヒト乳房上皮細胞Ｈ１８４Ｂ５Ｆ５／Ｍ１０を、細胞傷害性試験のために選択した。細胞を９６ウェルプレートに播種し、２μＭのドキソルビシン（Ｄｏｘ）、以下の表中に示した種々のリンカーを使用してドキソルビシンと抱合し、ＳＨ−ＰＥＧでキャップした２０〜５０ｎｍの金ナノ粒子（Ａｕ／ＬＫ／Ｄｏｘ、２μＭドキソルビシン含有）で処置し、３７℃で７２時間さらにインキュベートした。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  ９６（登録商標）ＡＱｕｅｏｕｓ  Ｏｎｅ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ細胞増殖アッセイ（ＭＴＳ）試薬をＰｒｏｍｅｇａ（Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ，ＵＳＡ）から購入し、製造者の説明書にしたがってアッセイを行なった。マイクロプレートリーダー（Ｂｉｏ−ｔｅｋ，Ｐｏｗｅｒｗａｖｅ  Ｘ３４０，Ｗｉｎｏｏｓｋｉ，ＶＴ，ＵＳＡ）を使用して４９０ｎｍの吸光度を測定した。成長阻害を無処置対照と比較してＡｕ／ＬＫｓ／Ｄｏｘ複合体の５０％成長阻害濃度（ＩＣ５０）を見出した。
【表５】
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【０１９８】
実施例２３  Ａｕ／ＬＫＩ−１／Ｄｏｘ複合体のｐＨ感受性ＬＫＩ−１放出試験
１ｍＬのＡｕ／ＬＫＩ−１／Ｄｏｘ複合体溶液を、１４０００ｒｐｍで２０分間遠心分離した。上清を破棄し、ｐＨ５．５の緩衝液またはｐＨ７．４の緩衝液を添加した。異なる時点で、複合体溶液を１４０００ｒｐｍで２０分間遠心分離し、次いで、上清を取り出して５５７．６ｎｍでの蛍光スキャン（Ｆ−４５００ＦＬ分光光度計）に供してＯＤ値を得た。複合体からのＤｏｘの放出量を、Ｄｏｘ検量線からの内挿によって得ることができる（Ｘ時間Ｄｏｘ放出量）。
【０１９９】
１ｍＬのＡｕ／ＬＫＩ−１／Ｄｏｘ複合体溶液を、１４０００ｒｐｍで２０分間遠心分離した。上清を破棄し、ｐＨ１．０の緩衝液を添加した。１時間後、複合体溶液を１４０００ｒｐｍで２０分間遠心分離し、次いで、上清を取り出して５５７．６ｎｍでの蛍光スキャン（Ｆ−４５００ＦＬ分光光度計）に供してＯＤ値を得た。Ｄｏｘ検量線からの内挿によってＤｏｘの１００％放出を得ることができる（ｐＨ＝１で１時間のインキュベーション後のＤｏｘ放出量）。Ｄｏｘ累積放出率を、以下の式にしたがって計算する。
・Ｄｏｘ累積放出率＝（Ｘ時間Ｄｏｘ放出量／ｐＨ＝１で１時間のインキュベーション後のＤｏｘ放出量）＊１００％
【表６】
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【０２００】
データは、ＬＫＩ−１がｐＨ７．４よりもｐＨ５．５でより多くのＤｏｘを放出することができることを示す。Ａｕ／ＬＫＩ−１／Ｄｏｘでは、時間依存性にさらに多くのＤｏｘが放出された。
【０２０１】
実施例２４  有効性研究デザイン
ＢＡＬＢ／ｃ−ｎｕ／ｎｕマウスを、ＢｉｏＬＡＳＣＯ  Ｔａｉｗａｎから購入した。８週齢の雄マウスに、１．０×１０７個のＭＤＡ−ＭＢ−２３１乳房腫瘍細胞を含む２００μＬの５０：５０  Ｍａｔｒｉｇｅｌ／Ｌｅｉｂｏｖｉｔｚ’ｓ（Ｌ−１５）を、皮下注射によって背側の片側に注射した。（１）ビヒクル−ＰＢＳ（ネガティブコントロール）、（２）ドキソルビシン（ポジティブコントロール）（５ｍｇ／ｋｇ）、（３）Ａｕ／ＰＥＧ、（４）Ａｕ／ＬＫＩ−１／Ｄｏｘ複合体（Ｄｏｘは５ｍｇ／ｋｇ）。臨床症状によって屠殺を必要とするまで処置を継続した。マウスの体重を最低２回／週測定し、臨床症状によって屠殺を必要とするまで腫瘍サイズをモニタリングした（図６Ａ、６Ｂを参照のこと）。異種移植片モデルにおけるＡｕ／ＬＫＩ−１／Ｄｏｘ複合体で処置したＭＤＡ−ＭＢ−２３１乳房腫瘍細胞のＴＥＭ画像。図中の矢印は、Ａｕ／ＬＫＩ−１／Ｄｏｘ複合体がＭＤＡ−ＭＢ−２３１乳房腫瘍細胞内に存在することを示す（図６Ｃを参照のこと）。異種移植片モデルにおけるＡｕ／ＬＫＩ−１／Ｄｏｘ複合体で処置したＭＤＡ−ＭＢ−２３１腫瘍細胞のＨ＆Ｅ染色（図６Ｄを参照のこと）。
【図１Ａ−Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図２Ａ−Ｂ】
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【図３】
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【図４Ａ−Ｃ】
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【図５】
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【図６Ａ−Ｂ】
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【図６Ｃ−Ｄ】
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【国際調査報告】
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