(57)【要約】本発明は、ミトコンドリアの酸化的リン酸化（OXPHOS）を抑制するためのグアニジン化合物及びその使用に関する。より詳しくは、本発明は、ミトコンドリアの酸化的リン酸化を抑制し、細胞代謝をリプログラミングすることにより、OXPHOSに関連する疾患、特に癌を予防又は治療するための医薬組成物に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
化学式１を有する化合物，化学式６を有する化合物，薬学的に許容される塩，薬学的に許容される溶媒和物及びプロドラッグ誘導体からなる群から選ばれた化合物：
【化１】
2018524266.tif 000079
R1及びR2は独立的にH，C1-C6アルキル又はC1-C6ハロアルキルであり；又はそれらにNが一緒に結合して３〜８員の飽和又は不飽和のヘテロシクロアルキル基を形成し、ヘテロシクロアルキル環は少なくともN，O及びSからなる群から選ばれたヘテロ原子を任意で含んでも良く、少なくともH，ハロゲン，C1-C4アルキル，C1-C4ハロアルキル，C1-C4アルコキシ及びC1-C2アルキルアミノからなる群から選ばれた基で置換されており、
R3及びR4は独立的にH又はC1-C4アルキルであり、
nは０,１又は２であり、
R5はH，C3-C7シクロアルキル又は化学式２で表されるアリール基であり、
【化２】
2018524266.tif 000080
R6，R7，R8，R9及びR10は独立的にH，ハロゲン，C1-C4アルキル，C1-C4アルコキシ，C1-C4ハロアルキル，C1-C4ハロアルコキシ，SR11又はOR12であり、R11及びR12は独立的にC1-C3アルキル，C1-C3ハロアルキル又はC6-C10アリールであり、又は隣接する置換基に連結され、５〜６員の飽和環を形成する。
【請求項２】
請求項１に記載の化合物であって、化学式１のR3及びR4は水素であることを特徴とする化合物。
【請求項３】
請求項１に記載の化合物であって、前記化学式１を有する化合物は化学式４を有する化合物，薬学的に許容される塩，薬学的に許容される溶媒和物及びプロドラッグ誘導体からなる群から選ばれたものであり：
【化３】
2018524266.tif 000081
R1及びR2は独立的にH，C1-C6アルキル又はC1-C6ハロアルキルであり；又はそれらにNが一緒に結合して３〜８員の飽和又は不飽和のヘテロシクロアルキル基を形成し、ヘテロシクロアルキル環は少なくともN，O及びSからなる群から選ばれたヘテロ原子を任意で含んでも良く、少なくともH，ハロゲン，C1-C4アルキル，C1-C4ハロアルキル，C1-C4アルコキシ及びC1-C2アルキルアミノからなる群から選ばれた基で置換されており、
nは０,１又は２であり、
R5はH，C3-C7シクロアルキル又は化学式２で表されるアリール基であり、
【化４】
2018524266.tif 000082
R6，R7，R8，R9及びR10は独立的にH，ハロゲン，C1-C4アルキル，C1-C4アルコキシ，C1-C4ハロアルキル，C1-C4ハロアルコキシ，SR11又はOR12であり、R11及びR12は独立的にC1-C3アルキル，C1-C3ハロアルキル又はC6-C10アリールであり、又は隣接する置換基に連結され、５〜６員の飽和環を形成することを特徴とする化合物。
【請求項４】
請求項１に記載の化合物であって、化学式１においてR1及びR2はNが一緒に結合して５〜６員の飽和又は不飽和のヘテロシクロアルキル基を形成し、ハロゲンで置換され、
R3及びR4は独立的にHであり、
nは０,１又は２であり、
R5は化学式２で表されるアリール基であり、R6，R7，R8，R9及びR10は独立的にH，ハロゲン，C1-C4アルキル，C1-C4アルコキシ，C1-C4ハロアルキル，C1-C4ハロアルコキシ，SR11又はOR12であり、R11及びR12は独立的にC1-C3アルキル，C1-C3ハロアルキル又はC6-C10アリールであり、又は隣接する置換基に連結され、５〜６員の飽和環を形成することを特徴とする化合物。
【請求項５】
請求項１に記載の化合物であって、化学式１においてR1及びR2はNが一緒に結合して５〜６員の飽和又は不飽和のヘテロシクロアルキル基を形成し、ハロゲンで置換され、
R3及びR4は独立的にHであり、
nは０であり、
R5は化学式２で表されるアリール基であり、R6，R7，R8，R9及びR10は独立的にC1-C4ハロアルコキシであることを特徴とする化合物。
【請求項６】
以下の化合物，薬学的に許容される塩，薬学的に許容される溶媒和物及びプロドラッグ誘導体からなる群から選ばれた化合物：
N-(N-フェニルカルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-2-イル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(3,4-ジクロロフェニル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(2-ブロモフェニル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(3-ブロモフェニル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(4-ブロモフェニル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(4-(トリフルオロメトキシ)フェニル)カルバムイミドイル)-4-(ジメチルアミノ)ピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(4-(メチルチオ)フェニル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(4-(トリフルオロメチルチオ)フェニル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(4-イソプロピルフェニル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(3-クロロ-4-フルオロフェニル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-1-イル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(3-フェノキシフェニル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(4-(トリフルオロメチルチオ)フェニル)カルバムイミドイル)チアゾリジン-3-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(3,4,5-トリメトキシフェニル)カルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(4-(トリフルオロメトキシ)フェニル)カルバムイミドイル)-4-クロロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(4-(トリフルオロメトキシ)フェニル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(3-クロロ-4-ヨードフェニル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(4-メトキシフェニル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(3-メトキシフェニル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(4-(トリフルオロメチル)フェニル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(3-ブロモ-4-ヨードフェニル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(4-フェノキシフェニル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(4-(トリフルオロメトキシ)カルバムイミドイル)-4-エトキシピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(4-(トリフルオロメトキシ)フェニル)カルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(3,4-ジブロモフェニル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(3-フルオロ-4-(トリフルオロメトキシ)フェニル)カルバムイミドイル)-4,4-フルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(4-フェノキシフェニル)カルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(3-フェノキシフェニル)カルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(4-(トリフルオロメチル)フェニル)カルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(3-クロロ-4-ヨードフェニル)カルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(4-(トリフルオロメチルチオ)フェニル)カルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(2-クロロフェニル)カルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(2-ブロモフェニル)カルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(2,4-ジクロロフェニル)カルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(2-プロピルフェニル)カルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-3,4-ジメトキシフェニル)カルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(3-クロロ-4-(トリフルオロメトキシ)フェニル)カルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(3-ブロモ-4-(トリフルオロメトキシ)フェニル)カルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(2-ブロモベンジル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(4-(トリフルオロメトキシ)ベンジル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(3,4-ジクロロベンジル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(4-トリフルオロメチル)ベンジル)カルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(3-トリフルオロメチル)ベンジル)カルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(3,4-ジクロロ)ベンジル)カルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-フェネチルカルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(4-ブロモフェネチル)カルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(シクロプロピルメチル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-シクロプロピルカルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-シクロヘキシルカルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(シクロプロピルメチル)カルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(シクロプロピルカルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(シクロヘキシルカルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(3-ブロモベンジル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(4-ブロモベンジル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(4-(トリフルオロメトキシ)フェニル)カルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(4-(トリフルオロメトキシ)フェニル)カルバムイミドイル)チアゾリジン-3-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(4-(トリフルオロメトキシ)フェニル)カルバムイミドイル)-N-2,2-2-トリフルオロエチルアミノカルボキシイミドアミド，
N-(N-(4-(トリフルオロメトキシ)フェニル)カルバムイミドイル)-4-(トリフルオロメチル)ピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(4-(トリフルオロメトキシ)フェニル)カルバムイミドイル)-N-1-シクロプロピルメチルアミノカルボキシイミドアミド，
N-(N-(4-(トリフルオロメトキシ)フェニル)カルバムイミドイル)-3,4,4-トリフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(4-(トリフルオロメトキシ)フェニル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロ-3-メチルピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(4-(トリフルオロメトキシ)フェニル)カルバムイミドイル)-4-フルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(4-(トリフルオロメトキシ)フェニル)カルバムイミドイル)-(R)-3-フルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(4-(トリフルオロメトキシ)フェニル)カルバムイミドイル)-6-アザスピロ[2.5]オクタン-6-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(4-(トリフルオロメトキシ)フェニル)カルバムイミドイル)-3-アザビシクロ[3.1.0]ヘキサン-3-カルボキシイミドアミド，
N-カルバムイミドイル-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-カルバムイミドイル-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，及び
N-((4,4-ジフルオロピペリジン-1-イル)(イミノ)メチル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれかに記載の化合物又はその薬学的に許容される塩を有効成分として含む、ミトコンドリアの酸化的リン酸化に関連する疾患予防又は治療するための医薬組成物。
【請求項８】
請求項７に記載の医薬組成物であって、前記疾患は糖尿病，肥満，高脂血症，高コレステロール血症，脂肪肝，冠動脈疾患，骨粗しょう症，多嚢胞性卵巣症候群，メタボリック症候群，癌，筋肉痛，筋細胞の損傷及び横紋筋融解からなる群から選ばれた少なくとも１つであることを特徴とする医薬組成物。
【請求項９】
請求項８に記載の医薬組成物であって、前記糖尿病はインスリン非依存性糖尿病であることを特徴とする医薬組成物。
【請求項１０】
請求項８に記載の医薬組成物であって、前記癌は子宮頸癌，乳癌，胃癌，脳腫瘍，大腸癌，肺癌，皮膚癌，血液癌及び肝臓癌からなる群から選ばれることを特徴とする医薬組成物。
【請求項１１】
請求項８に記載の医薬組成物であって、前記癌の治療が癌の再発又は転移の抑制を含むことを特徴とする医薬組成物。
【請求項１２】
請求項７に記載の医薬組成物であって、化学療法剤，抗癌剤，抗癌抗体薬剤，放射線，免疫療法剤及びキナーゼ阻害剤からなる群から選ばれた少なくとも１つの有効成分をさらに含むことを特徴とする医薬組成物。
【請求項１３】
請求項７に記載の医薬組成物であって、錠剤、カプセル剤、丸剤、顆粒剤、散剤、注射剤又は液剤として製剤化されることを特徴とする医薬組成物。
【請求項１４】
有効成分として、請求項１〜６のいずれかに記載の化合物又はその薬学的に許容される塩を必要とする対象体に投与することを含む、ミトコンドリアの酸化的リン酸化に関連する疾患を予防又は治療する方法。
【請求項１５】
ミトコンドリアの酸化的リン酸化に関連する疾患の予防又は治療用の薬剤の製造において、請求項１〜６のいずれかに記載の化合物又はその薬学的に許容される塩の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ミトコンドリアの酸化的リン酸化（OXPHOS）を抑制するためのグアニジン化合物及びその使用に関する。より詳しくは、本発明は、ミトコンドリアの酸化的リン酸化を抑制し、細胞代謝をリプログラミングすることにより、OXPHOSに関連する疾患、特に癌を予防又は治療するための医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
細胞代謝は、ATPやバイオマスのような成長のための供給源を生成するのに必須である。ATPを生成する代謝経路は、ミトコンドリア内での解糖とOXPHOSである。1個のグルコース分子当たり38個のATP分子が生成されるので、正常細胞はミトコンドリア内でOXPHOSによりATPを生成する。しかしながら、急激に増殖する細胞は解糖によりATPを生成するので、この過程の最終代謝物が乳酸になる。酸素はOXPHOSにおいて電子を受容する分子であるため、OXPHOSへの依存は酸素の可用性により決まると長い間考えられてきた。最近の研究により、酸素はOXPHOSの決定要因ではなく、急激に増殖する細胞におけるバイオマス及びNADH/NADPHに対する細胞の要求がOXPHOSよりも解糖の使用を活発に選択していることが分かった。癌細胞は、変換された代謝や無制御の増殖の代表例である。1920年代にオットー・ワールブルク（Otto Warburg）博士は、癌細胞が主に解糖を使用し、乳酸を高生成することに注目した。癌代謝の高い糖分解の性質は、「ワールブルク効果」と現在呼ばれている。糖分解の代謝の特徴により、癌細胞が機能不全のミトコンドリアを有するとものと推測される。しかし最近の研究により、癌細胞、特に癌幹細胞様集団，遊走癌細胞，循環癌細胞の転移におけるOXPHOSの重要性が分かった。
【０００３】
メトホルミンは糖尿病の治療に用いられるビグアニドであり、臨床的に長期間使用されているOXPHOS阻害剤として知られている。いくつかの後向き疫学研究により、メトホルミンの治療を受けた糖尿病患者は癌の発生率が低いことが分かった。メトホルミンの抗癌効果は、乳癌，結腸癌，前立腺癌及び肺癌の生体外及び生体内実験により実証されてきた。メトホルミンは、カチオンの特性に起因した弱い効力及び分布により効能が制限され、細胞に流入するために有機カチオントランスポータ1（OCT1）に依存する。多くの研究者がOXPHOS阻害剤の抗癌効果を実証するために、より強力なビグアニド及び抗糖尿病剤であるフェンホルミンを使用した。フェンホルミンはメトホルミンより親油性があり、細胞に流入するのにOCT1への依存度が少ない。いくつかの研究により、フェンホルミンが腫瘍の増殖を抑制する活性を有し、さらに標的治療に対する細胞の耐性が上昇するのを防止することが分かった（YuanP、Proc Natl Acad Sci. 2013、110(45):pp18226-18231）。フェンホルミンは、薬剤耐性や疾患の再発の要因になる増殖が遅い癌細胞又はJARID1Bhigh細胞の増殖を抑制することが分かった（RoeschA、Cancer Cell、2013、23(6)、pp811-825）。
【０００４】
過去10年間の主な抗癌治療は、発癌遺伝子又はキナーゼ，成長因子受容体等のシグナル伝達タンパク質の阻害剤の開発に集中していた。ほとんどの場合、奏効率は僅かであった。最善の治療による初期反応は有望なように見えたが、患者のほとんどは、はるかに高悪性で薬剤耐性を有する癌が再発した。再発の真のメカニズムを明らかにすることは依然として必要であるが、同一のターゲットに対する二次変異や異なるシグナル伝達経路の活性化のような多数の再発メカニズムが報告されてきた。薬剤耐性を克服するためのフェンホルミンのメカニズムはまだ明らかでない。OXPHOS抑制は、標的治療との併用療法においてリプログラミングした後に、さらなるリプログラミングを防止することができるので、OXPHOSに応じて成長の遅い集団のエネルギー欠乏を生じさせたり、増殖を防止したりすることができる。
【０００５】
メトホルミンは限られた効能及び組織分布を有し、フェンホルミンは致命的な安全性の問題のために市場から撤退している。従って、糖尿病の治療に用いる従来のビグアニドは抗癌剤として制限を有する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、ミトコンドリアの酸化的リン酸化（OXPHOS）を抑制し、細胞代謝をリプログラミングする活性が改善されたグアニジン化合物又はその薬学的に許容される塩に関する。
【０００７】
本発明の別の実施態様は、ミトコンドリアの酸化的リン酸化（OXPHOS）にに関連する疾患の予防又は治療のための医薬組成物、又は本発明の化合物を必要とする個体に投与することを含む、ミトコンドリアの酸化的リン酸化（OXPHOS）に関連する疾患を予防又は治療する方法を提供することである。
【０００８】
本発明のさらに別の実施態様は、グアニジン化合物又はその薬学的に許容される塩を有効成分として含む抗癌医薬組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
上記技術的課題を達成するために、本発明の実施態様は、少量の化合物を使用する場合でも、従来の薬剤に比べて癌細胞の増殖，癌の転移及び癌の再発に優れた抑制効果を有するグアニド化合物，薬学的に許容される塩，薬学的に許容される溶媒和物及びプロドラッグ誘導体に関する。
【００１０】
本発明の実施態様は、ミトコンドリアの酸化的リン酸化（OXPHOS）を抑制又は細胞代謝をリプログラミングするためのグアニジン化合物の使用に関する。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
以下、本発明をより詳細に説明する。
【００１２】
別の様態において、本発明は、式１を有するグアニジン化合物，薬学的に許容される塩，薬学的に許容される溶媒和物及びプロドラッグ誘導体からなる群から選ばれた化合物を提供する。
【化１】
2018524266.tif 000002
化学式１において、
R1及びR2は独立的にH，C1-C6アルキル又はC1-C6ハロアルキルであり；又はそれらにNが一緒に結合して３〜８員の飽和又は不飽和のヘテロシクロアルキル基、好ましくは５〜６員の飽和又は不飽和のヘテロシクロアルキル基を形成し、ヘテロシクロアルキル環は少なくともN，O及びSからなる群から選ばれたヘテロ原子を任意で含んでも良く、少なくともH，ハロゲン，C1-C4アルキル，C1-C4ハロアルキル，C1-C4アルコキシ及びC1-C2アルキルアミノからなる群から選ばれた基で置換されており、
R3及びR4は独立的にH又はC1-C4アルキルであり、
nは０,１又は２であり、
R5はH，C3-C7シクロアルキル又は化学式２で表されるアリール基である。
【化２】
2018524266.tif 000003
R6，R7，R8，R9及びR10は独立的にH，ハロゲン，C1-C4アルキル，C1-C4アルコキシ，C1-C4ハロアルキル，C1-C4ハロアルコキシ，SR11又はOR12であり、R11及びR12は独立的にC1-C3アルキル，C1-C3ハロアルキル又はC6-C10アリールであり、又は
R6，R7，Ｒ8，R9及びR10は隣接する置換基に連結され、５〜６員の飽和環を形成する。
【００１３】
化学式１において、R3及びR4は水素であり、上記化合物は化学式３で表される：
【化３】
2018524266.tif 000004
R1，R2，R5及びnは化学式１と同様に定義される。
【００１４】
化学式１において、R3及びR4はHであり、R5は化学式３で表されるアリール基であり、上記化合物は化学式４で表される：
【化４】
2018524266.tif 000005
R1，R2，R6，R7，R8，R9，R10及びnは化学式１と同様に定義される。
【００１５】
化学式１，３及び４において、R1及びR2の定義におけるヘテロシクロアルキルは少なくともH，ハロゲン，C1-C4アルキル，C1-C4ハロアルキル，C1-C4アルコキシ及びC1-C2アルキルアミノからなる群から選ばれた基で置換された３〜８員の飽和ヘテロシクロアルキルでも良く、R3及びR4は水素であり、R5は化学式２で表されるアリール基であり、R6，R7，R8，R9及びR10は化学式１と同様に定義される。
【００１６】
化学式１で表される化合物の実施態様において、R1及びR2の置換基はNが一緒に結合して５〜６員の飽和又は不飽和のヘテロシクロアルキル基を形成し、ハロゲンで置換され、
R3及びR4は独立的にHであり、
nは０,１又は２であり、
R5は化学式２で表されるアリール基であり、R6，R7，R8，R9及びR10は上述のように化学式１と同様に定義される。
【００１７】
化学式１で表される化合物の別の実施態様において、R1及びR2の置換基はNが一緒に結合して５〜６員の飽和又は不飽和のヘテロシクロアルキル基を形成し、ハロゲンで置換され、
R3及びR4は独立的にHであり、
nは０であり、
R5は化学式２で表されるアリール基であり、R6，R7，R8，R9及びR10は独立的にC1-C4ハロアルコキシである。
【００１８】
本明細書で使用される用語「アルキル」とは、直鎖状又は分岐状の飽和炭化水素基を意味する。アルキル基の例としてはメチル，エチル，プロピル（n-プロピル、イソプロピル），tert-ブチル，シクロプロピルメチル，シクロブチルメチル，ネオペンチル等が挙げられる。アルキルは少なくともF，CI，Br又はIのようなハロゲンで置換されても良く、その基の例としてはCF3，CHF2，CH2F，CH2Cl等が挙げられる。
【００１９】
本明細書で使用される用語「ハロ」又は「ハロゲン」とはフルオロ，クロロ，ブロモ及びヨードを含む。
【００２０】
本明細書で使用される用語「アルコキシ」とは、酸素原子と結合した「アルキル」基を含む官能基を意味する。「アルキル」は上記で定義されている。本明細書で使用される用語「ハロアルコキシ」とは、酸素原子と結合した「ハロアルキル」基を含む官能基を意味する。「アルキル」は上記で定義されている。
【００２１】
本明細書で使用される用語「シクロアルキル」とは、環化アルキル，アルケニル及びアルキニル基を含む非芳香族炭素環を意味する。シクロアルキル基は、スピロ環又は架橋環を含む単環又は多環系を含むことができる。シクロアルキル基の例としてはシクロプロピル，シクロブチル，シクロペンチル，シクロヘキシル及びシクロヘプチルが挙げられる。C3-C7シクロアルキルは３〜７環炭素原子を含むシクロアルキルラジカルを意味する。シクロアルキル基の例としてはシクロプロピル，シクロブチル，シクロペンチル，シクロヘキシル，シクロヘプチル，シクロオクチル，ピネニル及びアダマンタニルのような基が挙げられる。
【００２２】
用語「ベンゾシクロアルキル」とは、シクロアルキル環と融合した１つ以上の芳香族環を有する部分を意味し、例えばシクロペンタン及びシクロヘキサンのベンゾ誘導体が挙げられる。例としては、インダン，ヒドロナフタレン及びテトラヒドロナフタレンを含む。化学式２において、R6，R7，R8，R9及びR10は隣接する置換基に連結されて５〜６員の飽和環を形成し、もって化学式２の被置換は９〜10員のベンゾシクロアルキル基である。
【００２３】
本明細書で使用される用語「ヘテロシクロアルキル」とは、１つ以上の環形成原子がO，N，又はSのようなヘテロ原子である非芳香族複素環を意味する。ヘテロシクロアルキル基はスピロ環又は架橋環を含む単環，二環又は多環系を含んでも良い。ヘテロシクロアルキル基の例としてはピロリジニル，ピロリニル，イミダゾリジニル，イミダゾリニル，ピラゾリジニル，ピラゾリニル，ピラザリニル，ピペリジル，ピペラジニル，モルホリニル，チアゾリジニル，チオモルホリニル，テトラヒドロフラニル，ジチオリル，オキサチオリル，ジオキサゾリル，オキサチアゾリル，ピラニル，オキサジニル，オキサチアジニル，オキサジアジニル，アゾスピロヘプタン，アゾスピロオクタン，アザビシクロヘキサン及びアザビシクロヘプタンが挙げられる。
【００２４】
本明細書で使用される用語「アリール」とは、６〜12環炭素原子を有する置換又は非置換の単環式又は二環式芳香族炭化水素環系を意味する。例としては、非置換又は置換のフェニル及びナフチル基を含む。
【００２５】
さらに別の態様では、本発明は化学式１を有する化合物，薬学的に許容される塩，薬学的に許容される溶媒和物及びプロドラッグ誘導体と同様に、さらに種々の化合物を提供する。本発明の具体例は以下の化合物を含んでも良い：
N-(N-フェニルカルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-2-イル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(3,4-ジクロロフェニル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(2-ブロモフェニル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(3-ブロモフェニル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(4-ブロモフェニル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(4-(トリフルオロメトキシ)フェニル)カルバムイミドイル)-4-(ジメチルアミノ)ピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(4-(メチルチオ)フェニル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(4-(トリフルオロメチルチオ)フェニル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(4-イソプロピルフェニル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(3-クロロ-4-フルオロフェニル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-1-イル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(3-フェノキシフェニル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(4-(トリフルオロメチルチオ)フェニル)カルバムイミドイル)チアゾリジン-3-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(3,4,5-トリメトキシフェニル)カルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(4-(トリフルオロメトキシ)フェニル)カルバムイミドイル)-4-クロロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(4-(トリフルオロメトキシ)フェニル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(3-クロロ-4-ヨードフェニル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(4-メトキシフェニル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(3-メトキシフェニル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(4-(トリフルオロメチル)フェニル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(3-ブロモ-4-ヨードフェニル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(4-フェノキシフェニル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(4-(トリフルオロメトキシ)カルバムイミドイル)-4-エトキシピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(4-(トリフルオロメトキシ)フェニル)カルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(3,4-ジブロモフェニル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(3-フルオロ-4-(トリフルオロメトキシ)フェニル)カルバムイミドイル)-4,4-フルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(4-フェノキシフェニル)カルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(3-フェノキシフェニル)カルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(4-(トリフルオロメチル)フェニル)カルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(3-クロロ-4-ヨードフェニル)カルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(4-(トリフルオロメチルチオ)フェニル)カルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(2-クロロフェニル)カルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(2-ブロモフェニル)カルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(2,4-ジクロロフェニル)カルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(2-プロピルフェニル)カルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-3,4-ジメトキシフェニル)カルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(3-クロロ-4-(トリフルオロメトキシ)フェニル)カルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(3-ブロモ-4-(トリフルオロメトキシ)フェニル)カルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(2-ブロモベンジル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(4-(トリフルオロメトキシ)ベンジル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(3,4-ジクロロベンジル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(4-トリフルオロメチル)ベンジル)カルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(3-トリフルオロメチル)ベンジル)カルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(3,4-ジクロロ)ベンジル)カルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-フェネチルカルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(4-ブロモフェネチル)カルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(シクロプロピルメチル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-シクロプロピルカルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-シクロヘキシルカルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(シクロプロピルメチル)カルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(シクロプロピルカルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(シクロヘキシルカルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(3-ブロモベンジル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(4-ブロモベンジル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(4-(トリフルオロメトキシ)フェニル)カルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(4-(トリフルオロメトキシ)フェニル)カルバムイミドイル)チアゾリジン-3-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(4-(トリフルオロメトキシ)フェニル)カルバムイミドイル)-N-2,2-2-トリフルオロエチルアミノカルボキシイミドアミド，
N-(N-(4-(トリフルオロメトキシ)フェニル)カルバムイミドイル)-4-(トリフルオロメチル)ピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(4-(トリフルオロメトキシ)フェニル)カルバムイミドイル)-N-1-シクロプロピルメチルアミノカルボキシイミドアミド，
N-(N-(4-(トリフルオロメトキシ)フェニル)カルバムイミドイル)-3,4,4-トリフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(4-(トリフルオロメトキシ)フェニル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロ-3-メチルピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(4-(トリフルオロメトキシ)フェニル)カルバムイミドイル)-4-フルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(4-(トリフルオロメトキシ)フェニル)カルバムイミドイル)-(R)-3-フルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(4-(トリフルオロメトキシ)フェニル)カルバムイミドイル)-6-アザスピロ[2.5]オクタン-6-カルボキシイミドアミド，
N-(N-(4-(トリフルオロメトキシ)フェニル)カルバムイミドイル)-3-アザビシクロ[3.1.0]ヘキサン-3-カルボキシイミドアミド，
N-カルバムイミドイル-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド
N-カルバムイミドイル-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド，及び
N-((4,4-ジフルオロピペリジン-1-イル)(イミノ)メチル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド。
【００２６】
化学式３で表される特定の化合物の合成を反応式(1) に示す。
【化５】
2018524266.tif 000006
【００２７】
例えば、実施例17の化合物は反応式(2) に示すように調製した。詳細な合成手順は下記の通りである。
【化６】
2018524266.tif 000007
【００２８】
30 mLのシクロヘキサノール中に4,4-ジフルオロピペリジンHCl（1.00 g，6.34 mmol）の溶液に、ナトリウムジシアナミド（0.62 g，6.98 mmol）を添加した。反応混合物を130℃で２時間還流した。混合物をEtOAc及び水で希釈した。分離した有機層を減圧下で濃縮し、黄色固体（0.89 g，75.2％）の残留物を生成し、n-ヘキサンを加えて粉砕した。20 mLのシクロヘキサノールに残留物（0.5 g，2.65 mmol）の溶液に、濃HCl溶液（0.23 mL，2.65 mmol）及び4-トリフルオロメトキシアニリン（0.35 mL，2.65 mmol）を添加した。反応混合物を130℃で１時間還流した。混合物を室温まで冷却し、１時間撹拌し、さらに沈殿物を生成した。溶液からの沈殿物を濾過し、10 mLのMeOHに再溶解した。その溶液に0.5 mLの1.5 M NaOHを添加し、沈殿物を生成した。その固体を10 mLのMeOHに溶解した。その溶液に酢酸（0.23 mL，3.98 mmol）を添加し、室温で１時間さらに撹拌した。溶媒をRotavaporにより除去し、所望の白色固体を生成し、EtOAc（0.7 g，56.3％）を加えて粉砕した。
【００２９】
本発明のグアニジン化合物はミトコンドリアの酸化的リン酸化（OXPHOS）の阻害剤として機能し得る。本明細書で使用される用語「OXPHOS阻害剤」とは、酸化的リン酸化に関与するタンパク質を直接抑制するか、又は酸化的リン酸化に関与するタンパク質の発現を抑制することにより、酸化的リン酸化（例えば、ミトコンドリア内の酸化的リン酸化）を抑制する薬剤を意味する。従来のOXPHOS阻害剤はメトホルミン，フェンホルミン及びブホルミンである。メトホルミンはミトコンドリア複合体1阻害剤であり、ミトコンドリアのOXPHOSを標的とすることができる。
【００３０】
従って、本発明は、ミトコンドリアのOXPHOSを抑制又は細胞代謝をリプログラミングするためのグアニジン化合物の使用に関する。より詳しくは、本発明はミトコンドリアのOXPHOSに関連する疾患の予防又は治療用の医薬組成物に関する。
【００３１】
上記疾患は糖尿病，肥満，高脂血症，高コレステロール血症，脂肪肝，冠動脈疾患，骨粗しょう症，多嚢胞性卵巣症候群，メタボリック症候群，癌，筋肉痛，筋細胞の損傷及び横紋筋融解からなる群から選ばれた少なくとも１つである。
【００３２】
上記糖尿病はインスリン非依存性の糖尿病である。
【００３３】
上記癌は子宮頸癌，乳癌，胃癌，脳腫瘍，大腸癌，肺癌，皮膚癌，血液癌及び肝臓癌からなる群から選ばれるが、これらに限定されない。
【００３４】
本発明のグアニジン化合物は、少量の化合物を使用する場合でも、従来の薬剤に比べて癌細胞の増殖，癌の転移及び癌の再発に優れた抑制効果を有する。
【００３５】
本発明の化合物は、低グルコース条件下で効力及び抗癌活性が改善されたグアニド化合物である。本発明のOXPHOS阻害剤の役割は、癌の成長抑制に限定されず、癌幹細胞様集団の減少、再発、及び併用による他の抗癌剤の効能を高める。
【００３６】
本発明の一様態は、本発明のグアニジン化合物を必要とする個体に投与することを含む、ミトコンドリアの酸化的リン酸化を抑制及び細胞代謝をリプログラミングすることにより、OXPHOSに関連する疾患、特に癌を予防又は治療する方法を提供する。
【００３７】
本発明の化合物は、他の薬剤又は治療方法、例えば化学療法剤，抗癌剤，抗癌抗体薬剤，放射線，免疫療法剤及びキナーゼ阻害剤と併用しても良い。併用する薬剤は複合又は分離して投与することができる。
【００３８】
本発明の化合物と併用される化学療法剤はアルキル化剤，ウラシルマスタード，クロルメチン，シクロホスファミド［Cytoxan（登録商標）］，イホスファミド，メルファラン，クロラムブシル，ピポブロマン，トリエチレンメラミン，トリエチレンチオホスホルアミン，ブスルファン，カルムスチン，ロムスチン，ストレプトゾシン，ダカルバジン，テモゾロミド，メトトレキサート，5-フルオロウラシル，フロクスウリジン，シタラビン，6-メルカプトプリン，6-チオグアニド，ゲムシタビン，ドキソルビシン，エピルビシン，イダルビシン，ara-C，パクリタキセル［Taxol（登録商標）］，ナベルベン，レトロゾール，アナストロゾール，カペシタビン，シスプラチン，カルボプラチン及びトポイソメラーゼ阻害剤を（制限なしに）含む。抗癌抗体は、トラスツズマブ（ハーセプチン）及びベバシズマブ（アバスチン）を含む。免疫療法剤は、インターフェロン，抗PD-1抗体，抗CTLA-4抗体，IDO1阻害剤及び養子T細胞又はNK細胞を含む他の免疫細胞治療剤を含む。キナーゼ阻害剤はダサチニブ，トラメチニブ，パルボシクリブ，又はエルロチニブ，ゲファチニブ等のチロシンキナーゼ阻害剤を含むが、これらに限定されない。
【００３９】
［ミトコンドリア複合体Iの阻害測定］
ミトコンドリア内の電子伝達複合体は５つの複合体で構成されている。複雑体Iは解糖及びTCAサイクルで生成されたNADHから電子を受容し、電子は複合体II，III及びIVに移動し、最終的にO2に伝達され、水分子が生成される。電子伝達の際にプロトン勾配が発生し、この化学的勾配は複合体VでATPを合成する駆動源となる。複合体Iのミトコンドリア抑制は、複合体IVでの酸素消費速度（OCR）を測定することにより間接的に評価される。ミトコンドリアのETCが抑制されると、解糖がアップレギュレートし、乳酸の生産が増加する。
乳酸が細胞外に輸送されるにつれて、細胞外の溶液が酸性（低pH）になる。OCR及び細胞外酸性化速度（ECAR）はXFアナライザー（Seahorse Biosciences）により測定される。本発明の化合物は複合体Iの抑制によりOCRを低下させ、細胞代謝から解糖にリダイレクトすることによりECARを高める。
【００４０】
［低グルコース条件下での細胞毒性アッセイ］
正常細胞は低グルコースのようなエネルギーストレス条件下で代償メカニズムを有すると想定されるため、通常のグルコース条件下では酸化的リン酸化（OXPHOS）の抑制による細胞毒性はない。しかしOXPHOS阻害剤は、グルコース欠乏条件（BirsoyK，2014）において細胞に対して毒性効果を示す。グルコース欠乏条件は、乏しい血管新生により起こり得る腫瘍微小環境で観察される。従って、OXPHOS阻害剤は、腫瘍微小環境を作り得る低グルコース条件の癌細胞に対して抗癌効果を示すことができる。
【００４１】
0.75 mMのグルコースが添加されたメラノーマであるSK-MEL-28に対する本発明の化合物の細胞毒性を評価した。細胞毒性効果をフェンホルミンによる細胞毒性と比較した。低グルコース条件での細胞毒性は、ミトコンドリア内の酸素消費の抑制と相関がある。
【００４２】
［生体内異種移植の研究］
本発明の化合物をマウスにおける異種移植ヒト癌モデルを用いて生体内で評価した。本発明の化合物を経口又は腹腔内注射で投与された。腫瘍細胞株を単層培養で生体外培養した。免疫系が破損した雌BALB/cヌードマウスを使用し、腫瘍が発達するように腫瘍細胞を各マウスの右脇腹に皮下接種した。腫瘍の大きさが約100 mm3に達したときに処理を開始した。
【００４３】
本発明の化合物の薬学的に許容される塩は、有機酸又は無機酸を用いて形成された酸付加塩でも良い。有機酸はギ酸，酢酸，プロピオン酸，乳酸，酪酸，イソ酪酸，トリフルオロ酢酸，リンゴ酸，マレイン酸，マロン酸，フマル酸，コハク酸，コハク酸モノアミド，グルタミン酸，酒石酸，シュウ酸，クエン酸，グリコール酸，グルクロン酸，アスコルビン酸、安息香酸，フタル酸，サリチル酸，アントラニル酸，ジクロロ酢酸，アミノオキシ酢酸，ベンゼンスルホン酸，4-トルエンスルホン酸及びメタンスルホン酸塩を含んでも良い。無機酸は、例えば、塩酸，臭化水素酸，硫酸，リン酸，硝酸，炭酸及びホウ酸塩を含んでもよい。前記酸付加塩は、a) 本発明の化合物と酸を直接混合する、b) 本発明の化合物又は酸を溶媒又は水性溶媒に溶解させ混合する、又はc) 本発明の化合物と酸を溶媒又は水性溶媒で混合する等の一般的な塩の製造方法により製造することができる。
【００４４】
従って、本発明の別の実施態様は、グアニド化合物又はその薬学的塩を有効成分として含む医薬組成物を提供する。本発明の薬学組成物は、優れた癌細胞増殖抑制効果を有し、もって各種癌に対する抗癌剤として使用することができる。癌の具体例としては、乳癌、肺癌、メラノーマ、膵臓癌、脳腫瘍、卵巣癌、前立腺癌、子宮頸癌、精巣癌、腎臓癌、頭頸部癌、肝臓癌、リンパ腫、白血病、子宮内膜癌、胆管癌が挙げられるが、これらに限定されない。
【００４５】
本発明の薬学組成物は、有効成分に加えて、少なくとも１つの薬学的に許容される担体を含む。本明細書に用いられる用語「薬学的に許容される担体」とは、投与するために薬学的に活性な化合物を製剤化するのに有用であり、使用条件下で実質的に毒性及び感受性のないことで知られている医薬的賦形剤を意味する。賦形剤の正確な比率は、活性化合物の溶解度，化学的性質及び投与ルートのみならず、標準的な医薬実務により決めても良い。
【００４６】
本発明の医薬組成物は、適切かつ生理的に許容される賦形剤，崩壊剤，甘味料，結合剤，被覆材，膨潤剤，潤滑剤，滑沢剤，着香料等の補助剤を用いて、所望の投与方法に好適な形状になるように製剤化しても良い。
【００４７】
医薬組成物は錠剤、カプセル剤、丸剤、顆粒剤、散剤、注射剤又は液剤の形態で製剤化することができる。医薬組成物及び薬学的に許容される担体の製剤は、当業者にとって公知の技術に基づき適宜選択できる。
【００４８】
一方、本明細書で使用される「個体」とは、特定の疾患，障害又は病気を有する哺乳動物等の温血動物を意味し、例えばヒト，オランウータン，チンパンジー，マウス，ラット，犬，牛，鶏，豚，ヤギ，ヒツジ等を含むが、これらに限定されない。
【００４９】
用語「治療」又は「治療する」とは、症状を緩和し、一時的又は恒久的に症状の原因を除去し、症状の出現及び疾患，障害及び病気の進行を予防又は遅らせることを含むが、これらに限定されない。
【００５０】
本発明の医薬組成物の有効成分の有効量は、疾患の治療を完遂するために必要な量を意味する。従って、疾患の種類，疾患の重症度，組成に含まれる有効成分及びその他の成分の種類及び量，製剤化の種類，患者の年齢，体重，一般的な健康状態，性別及び食事，投与期間，投与経路，組成の分泌速度，治療期間，併用する薬剤等を含む種々の要因に応じて調節することができる。例えば成人の場合、本発明の化合物を１日１回又は数回、合計で50〜3000 mg/kg投与しても良い。
【有利な効果】
【００５１】
本発明のグアニド誘導体は、少量でも従来の薬剤に比べて癌細胞増殖の抑制及び癌転移及び癌再発の抑制に優れた効果を有し、乳癌，肺癌，メラノーマ，膵臓癌，脳腫瘍，卵巣癌，前立腺癌，子宮頸癌，精巣癌，腎臓癌，頭頸部癌，肝臓癌，リンパ腫，白血病，子宮内膜癌，胆管癌等を含む各種癌の治療、癌細胞増殖の抑制及び癌転移の抑制に有用である。
【実施例】
【００５２】
以下、実施例及び比較例を通じて本発明をより詳細に説明する。しかし、下記実施例は単に本発明を説明するためのものであり、本発明の範囲がこれらに限定されることはない。
【００５３】
実施例１：N-(N-フェニルカルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド塩酸塩
【化７】
2018524266.tif 000008
4,4-ジフルオロピペリジン塩酸塩（1.0 g，6.34 mmol）をシクロヘキサノール（30 ml）に室温で溶解し、ナトリウムジシアナミド（0.62 g，6.98 mmol）を添加した。得られた溶液を130℃で２時間還流し、室温まで冷却した。酢酸エチル及び水を用いて水層を分離し、減圧下で乾燥し、n-ヘキサン中で晶析し、白色固体（0.89 g，75.2％）のCN中間化合物を生成した。CN中間化合物（0.3 g，1.59 mmol）をシクロヘキサノール（10 ml）に室温で溶解し、塩酸塩（0.14 ml，1.59 mmol）及びアニリン（0.15 ml，1.59 mmol）を添加した。得られた溶液を130℃で２時間還流し、室温まで冷却した。溶液を撹拌し、得られた固体を濾過し、白色固体の表題化合物を得た。
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 10.04 (s, 1H), 7.95 (s, 2H), 7.37 (d, J=7.8Hz, 2H), 7.31 (t, J=7.8Hz, 2H), 7.24 (s, 2H), 7.05 (t, J=7.2HZ, 1H), 3.60 (m, 4H), 2.08 (m, 4H) LCMS 382.1 [M+H]+
【００５４】
実施例２：N-(N-(5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-2-イル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド塩酸塩
【化８】
2018524266.tif 000009
5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-2-アミンを用いた以外は実施例１と同様の方法で白色固体の表題化合物（0.3 g，52.5％）を得た。
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 9.98 (s, 1H), 7.95 (s, 2H), 7.31 (s, 2H), 7.08 (d, J=7.8Hz, 1H), 7.01 (s, 1H), 6.99 (d, J=7.8Hz, 1H), 3.61 (m, 4H), 2.66 (m, 4H), 2.07 (m, 4H), 1.70 (m, 4H) LCMS 336.1[M+H]+
【００５５】
実施例３：N-(N-(3,4-ジクロロフェニル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド塩酸塩
【化９】
2018524266.tif 000010
3,4-ジクロロアニリンを用いた以外は実施例１と同様の方法で白色固体の表題化合物（0.36 g，58.1％）を得た。
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 10.43 (s, 1H), 8.09 (s, 2H), 7.74 (d, J=2.4Hz, 1H), 7.55 (d, J=9.0HZ, 1H), 7.34 (d, J=9.0Hz, 1H), 7.25 (s, 2H), 3.62 (m, 4H), 2.10 (m, 4H) LCMS 350.0, 352.0 [M+H]+
【００５６】
実施例４：N-(N-(2-ブロモフェニル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド塩酸塩
【化１０】
2018524266.tif 000011
2-ブロモアニリンを用いた以外は実施例１と同様の方法で白色固体の表題化合物（0.26 g，61.9％）を得た。
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 9.02 (s, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.65 (d, J=7.8Hz, 1H), 7.60 (d, J=8.4Hz, 1H), 7.39 (s, 2H), 7.35 (t, J=7.2Hz, 2H), 7.11 (t, J=7.8Hz, 1H), 3.55 (m, 4H), 2.04 (m, 4H) LCMS 360.0, 362.0[M+H]+
【００５７】
実施例５：N-(N-(3-ブロモフェニル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド塩酸塩
【化１１】
2018524266.tif 000012
3-ブロモアニリンを用いた以外は実施例１と同様の方法で白色固体の表題化合物（0.33 g，78.6％）を得た。
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 10.21 (s, 1H), 8.01 (s, 2H), 7.67 (s, 1H), 7.34 (d, J=7.8Hz, 1H), 7.24 (t, J=8.4Hz, 1H), 7.22 (s, 2H), 3.61 (m, 4H), 2.10 (m, 4H)       LCMS 360.0, 362.0 [M+H]+
【００５８】
実施例６：N-(N-(4-ブロモフェニル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド塩酸塩
【化１２】
2018524266.tif 000013
4-ブロモアニリンを用いた以外は実施例１と同様の方法で白色固体の表題化合物（0.33 g，78.6％）を得た。
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 10.35 (s, 1H), 8.08 (s, 2H), 7.48 (d, J=8.4Hz, 2H), 7.37 (d, J=8.4HZ, 2H), 7.31 (s, 4H), 3.63 (m, 4H), 2.11 (m, 4H) LCMS 360.0, 362.0 [M+H]+
【００５９】
実施例７：N-(N-(4-(トリフルオロメトキシ)フェニル)カルバムイミドイル)-4-(ジメチルアミノ)ピペリジン-1-カルボキシイミドアミド塩酸塩
【化１３】
2018524266.tif 000014
N,N-ジメチルピペリジン-4アミン及び4-トリフルオロメトキシアニリンを用いた以外は実施例１と同様の方法で白色固体の表題化合物（0.04 g，11.0％）を得た。
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 10.31 (s, 1H), 7.93 (s, 2H), 7.50 (d, J=9.6Hz, 2H)(, 7.31 (d, J=8.4Hz, 2H), 7.18 (s, 2H), 4.45 (s, 1H), 4.19 (d, J=12.6Hz, 1H), 3.43 (m, 1H), 2.97 (m, 1H), 2.68 (s, 6H), 2.15 (m, 2H), 1.72 (m, 2H) LCMS 373.1 [M+H]+
【００６０】
実施例８：N-(N-(4-(メチルチオ)フェニル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド塩酸塩
【化１４】
2018524266.tif 000015
4-メチルチオアニリンを用いた以外は実施例１と同様の方法で白色固体の表題化合物（0.39 g，67.2％）を得た。
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 9.99 (s, 1H), 7.92 (s, 2H), 7.32 (d, J=8.4Hz, 2H), 7.23 (d, J=8.4Hz, 2H), 7.20 (s, 2H), 3.60 (m, 4H), 2.44 (s, 3H), 2.08 (m, 4H) LCMS 328.3 [M+H]+
【００６１】
実施例９：N-(N-(4-(トリフルオロメチルチオ)フェニル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド塩酸塩
【化１５】
2018524266.tif 000016
4-トリフルオロメチルチオアニリンを用いた以外は実施例１と同様の方法で白色固体の表題化合物（0.38 g，56.7％）を得た。
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 10.35 (s, 1H), 8.06 (s, 2H), 7.62 (m, 2H), 7.56 (m, 2H), 7.23 (s, 2H), 3.61 (s, 4H), 2.10 (m, 4H) LCMS 382.3 [M+H]+
【００６２】
実施例10：N-(N-(4-イソプロピルフェニル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド塩酸塩
【化１６】
2018524266.tif 000017
4-イソプロピルアニリンを用いた以外は実施例１と同様の方法で白色固体の表題化合物（0.19 g，33.3％）を得た。
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 9.91 (s, 1H), 7.90 (s, 2H), 7.26 (m, 2H), 7.25 (s, 2H), 7.18 (m, 2H), 3.60 (m, 4H), 2.84 (m, 1H), 2.07 (m, 4H) 1.18 (d, J= 7.2Hz, 6H) LCMS 324.3 [M+H]+
【００６３】
実施例11：N-(N-(3-クロロ-4-フルオロフェニル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド塩酸塩
【化１７】
2018524266.tif 000018
3-クロロ-4-フルオロアニリンを用いた以外は実施例１と同様の方法で白色固体の表題化合物（0.37 g，62.7％）を得た。
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 10.30 (s, 1H), 8.05 (s, 2H)), 7.66 (m, 1H), 7.36 (s, 2H), 7.32 (m, 1H), 7.30 (s, 2H), 3.61 (m, 4H), 1.99 (m, 4H) LCMS 334.1 [M+H]+
【００６４】
実施例12：N-(N-(5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-1-イル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド塩酸塩
【化１８】
2018524266.tif 000019
5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-1-アミンを用いた以外は実施例１と同様の方法で白色固体の表題化合物（0.34 g，57.6％）を得た。
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 9.34 (s, 1H), 7.83 (s, 2H), 7.44 (s, 2H), 7.18 (d, J=7.8HZ, 1H), 7.06 (t, J=7.8Hz, 1H), 6.94 (d, J=7.8Hz, 1H), 3.36 (m, 4H), 2.71 (m, 4H), 2.03 (m, 4H), 1.69 (m, 4H) LCMS 336.4 [M+H]+
【００６５】
実施例13：N-(N-(3-フェノキシフェニル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド塩酸塩
【化１９】
2018524266.tif 000020
3-フェノキシアニリンを用いた以外は実施例１と同様の方法で白色固体の表題化合物（0.27 g，61.3％）を得た。
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 10.10 (s, 1H), 7.91 (s, 2H), 7.42 (m, 2H), 7.27 (m, 1H), 7.25 (s, 1H), 7.18 (s, 2H), 7.15 (m, 1H), 7.13 (m, 1H), 7.07 (m, 1H), 7.00 (m, 2H), 3.56 (s, 4H), 2.03 (s, 4H) LCMS 374.1 [M+H]+
【００６６】
実施例14：N-(N-(4-(トリフルオロメチルチオ)フェニル)カルバムイミドイル)チアゾリジン-3-カルボキシイミドアミド塩酸塩
【化２０】
2018524266.tif 000021
チアゾリジン及び4-トリフルオロメチルチオアニリンを用いた以外は実施例１と同様の方法で白色固体の表題化合物（0.14 g，54.0％）を得た。
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 10.23 (brs, 0.5H), 7.92 (brs, 1H), 7.63 (m, 2H), 7.19 (m, 1H), 4.50 (s, 1H), 3.68 (m, 1H), 3.14 (m, 1H), 3.55 (m, 2H) LCMS 350.0 [M+H]+
【００６７】
実施例15：N-(N-(3,4,5-トリメトキシフェニル)カルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド塩酸塩
【化２１】
2018524266.tif 000022
3,3-ジフルオロピロリジン塩酸塩及び2,3,4-トリメトキシアニリンを用いた以外は実施例１と同様の方法で白色固体の表題化合物（0.068 g，10.0％）を得た。
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 6.43 (brs, 2H), 3.76 (t, J=13.2 Hz, 2H), 3.71 (s, 3H), 3.59 (s, 3H), 3.55 (t, J=7.2 Hz, 2H), 2.44 (m, 2H), 1.76 (s, 3H)  LCMS 358.2 [M+H]+
【００６８】
実施例16：N-(N-(4-(トリフルオロメトキシ)フェニル)カルバムイミドイル)-4-クロロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド塩酸塩
【化２２】
2018524266.tif 000023
4-クロロピペリジン及び4-トリフルオロメトキシアニリンを用いた以外は実施例１と同様の方法で白色固体の表題化合物（610 mg，100％）を得た。
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 7.79 (m, 1H), 7.46 (d, J=9.0 Hz, 1H), 7.29 (m, 1H), 7.22 (m, 1H), 4.45 (m, 1H), 3.71 (m, 2H), 3.38 (m, 2H), 2.10 (m, 2H), 1.79 (m, 2H)             LCMS 364.1 [M+H]+
【００６９】
実施例17：N-(N-(4-(トリフルオロメトキシ)フェニル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド酢酸塩
【化２３】
2018524266.tif 000024
4,4-ジクロロピペリジン塩酸塩（1.0 g，6.34 mmol）をシクロヘキサノール（30 ml）に室温で溶解し、ナトリウムジシアナミド（0.62 g，6.98 mmol）を添加した。得られた溶液を130℃で２時間還流し、室温まで冷却した。酢酸エチル及び水を用いて水層を分離し、減圧下で乾燥し、n-ヘキサン中で晶析し、白色固体（0.89 g，75.2％）のCN中間化合物を生成した。CN中間化合物（0.5 g，2.65 mmol）をシクロヘキサノール（20 ml）に室温で溶解し、塩酸塩（0.23 ml，2.65mol）及び4-トリフルオロメトキシアニリン（0.35 ml，2.65 mmol）を添加した。得られた溶液を130℃で1時間還流し、室温まで冷却した。得られた固体を濾過し、メタノール（10 ml）に溶解し、1.5M NaOH（0.5 ml）を添加して１時間撹拌した。得られた固体を濾過し、メタノール（10 ml）に溶解し、酢酸溶液（0.23ml，3.98 mmol)を添加して室温で1時間撹拌した。反応溶液を真空下で蒸留し、酢酸エチル中で晶析し、白色固体の表題化合物（0.7 g，56.3％）を生成した。
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 7.31 (s, 2H), 7.22 (d, J=9.0Hz, 2H), 3.58 (m, 4H), 2.00 (m, 4H), 175 (s, 3H) LCMS 366.1 [M+H]+
【００７０】
実施例18：N-(N-(3-クロロ-4-ヨードフェニル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド酢酸塩
【化２４】
2018524266.tif 000025
3-クロロ-4-ヨードアニリンを用いた以外は実施例17と同様の方法で白色固体の表題化合物（0.10 g，19.6％）を得た。
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 10.52 (s, 1H), 8.08 (s, 2H), 7.81 (d, J=8.4Hz, 1H), 7.71 (d, J=2.4Hz, 1H), 7.29 (s, 2H), 7.10 (dd, J=8.4Hz, 2.4Hz, 1H), 3.62 (s, 4H), 1.90 (s, 4H)       LCMS 442.0 [M+H]+
【００７１】
実施例19：N-(N-(4-メトキシフェニル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド酢酸塩
【化２５】
2018524266.tif 000026
4-メトキシアニリンを用いた以外は実施例17と同様の方法で白色固体の表題化合物(0.46 g，77.9％）を得た。
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 7.17 (s, 2H), 6.81 (m, 2H), 3.54 (s, 4H), 1.98 (s, 4H), 1.71 (s, 3H) LCMS 312.2 [M+H]+
【００７２】
実施例20：N-(N-(3-メトキシフェニル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド酢酸塩
【化２６】
2018524266.tif 000027
3-メトキシアニリンを用いた以外は実施例17と同様の方法で白色固体の表題化合物（0.36 g，61.0％）を得た。
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 7.13 (t, J=8.4Hz, 1H), 6.90 (s, 1H), 6.81 (d, J=7.2Hz, 1H), 6.54 (dd, J=8.4Hz, 1H), 3.57 (m, 4H), 2.01 (m, 4H), 1.73 (s, 3H) LCMS 312.2 [M+H]+
【００７３】
実施例21：N-(N-(4-(トリフルオロメチル)フェニル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド酢酸塩.
【化２７】
2018524266.tif 000028
4-トリフルオロメチルアニリンを用いた以外は実施例17と同様の方法で白色固体の表題化合物（0.35 g，53.8％）を得た。
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 7.57 (d, J=8.4Hz, 2H), 7.49 (d, J=7.2Hz, 2H), 3.60 (m, 4H), 2.04 (m, 4H), 1.76 (s, 3H)    LCMS 350.2 [M+H]+
【００７４】
実施例22：N-(N-(3-ブロモ-4-ヨードフェニル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド酢酸塩
【化２８】
2018524266.tif 000029
3-ブロモ-4-ヨードアニリンを用いた以外は実施例17と同様の方法で白色固体の表題化合物（0.30 g，34.4％）を得た。
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 7.74 (d, J=8.4Ha, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.03 (d, J=7.2Hz, 1H), 3.59 (m, 4H), 2.50 (m, 4H), 1.76 (s, 3H) LCMS 487.0, 488.0[M+H]+
【００７５】
実施例23：N-(N-(4-フェノキシフェニル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド酢酸塩
【化２９】
2018524266.tif 000030
4-フェノキシアニリンを用いた以外は実施例17と同様の方法で白色固体の表題化合物（0.32 g，46.3％）を得た。
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 7.36 (m, 1H), 7.26 (s, 1H), 7.07 (m, 1H), 6.93 (m, 1H), 3.58 (m, 4H), 2.00 (m, 4H), 1.73 (s, 3H)     LCMS 374.2 [M+H]+
【００７６】
実施例24：N-(N-(4-(トリフルオロメトキシ)カルバムイミドイル)-4-エトキシピペリジン-1-カルボキシイミドアミド酢酸塩
【化３０】
2018524266.tif 000031
4-エトキシピペリジンを用いた以外は実施例17と同様の方法で白色固体の表題化合物（0.10 g，14.4％）を得た。
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 7.43 (m, 2H), 7.22 (m, 2H), 3.72 (m, 2H), 3.52 (q, 2H), 3.17 (m, 2H), 1.85 (m, 2H), 1.82 (s, 3H), 1.45 (m, 2H), 1.11 (t, 3H)       LCMS 374.2 [M+H]+
【００７７】
実施例25：N-(N-(4-(トリフルオロメトキシ)フェニル)カルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド酢酸塩
【化３１】
2018524266.tif 000032
3,3-ジフルオロピロリジン塩酸塩を用いた以外は実施例17と同様の方法で白色固体の表題化合物（0.25 g，36.7％）を得た。
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 7.36 (s, 2H), 7.23 (d, J=9.0Hz, 2H), 7.78 (t, J=12.6Hz, 2H), 2.57 (t, J=7.2Hz, 2H), 2.47 (m, 2H), 1.75 (s, 3H) LCMS 352.1 [M+H]+
【００７８】
実施例26：N-(N-(3,4-ジブロモフェニル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド酢酸塩
【化３２】
2018524266.tif 000033
3,4-ジブロモアニリンを用いた以外は実施例17と同様の方法で白色固体の表題化合物（0.080 g，14.0％）を得た。
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 10.42 (s, 1H), 8.06 (s, 2H), 7.86 (m, 1H), 7.65 (d, J= 8.4Hz, 1H), 7.31 (m, 1H), 7.23 (s, 2H), 3.62 (s, 4H), 2.10 (s, 4H) LCMS 440.1 [M+H]+
【００７９】
実施例27：N-(N-(3-フルオロ-4-(トリフルオロメトキシ)フェニル)カルバムイミドイル)-4,4-フルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド酢酸塩
【化３３】
2018524266.tif 000034
3-フルオロ-4-トリフルオロメトキシアニリンを用いた以外は実施例17と同様の方法で白色固体の表題化合物（0.02 g，8.2％）を得た。
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 6.73 (m, 1H), 6.40 (m, 1H), 6.37 (m, 1H), 2.91 (s, 4H), 1.28 (s, 4H), 1.14 (s, 3H)               LCMS 3842 [M+H]+
【００８０】
実施例28：N-(N-(4-フェノキシフェニル)カルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド酢酸塩
【化３４】
2018524266.tif 000035
3,3-ジフルオロピロリジン塩酸塩及び4-フェノキシアニリンを用いた以外は実施例17と同様の方法で白色固体の表題化合物（0.20 g，49.8％）を得た。
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 7.35 (m, 2H), 7.18 (m, 2H), 7.18 (brs, 2H), 7.07 (m, 2H), 6.94 (m, 2H), 3.76 (m, 2H), 3.56 (m, 2H), 2.46 (m, 2H), 1.76 (s, 3H) LCMS 360.0 [M+H]+
【００８１】
実施例29：N-(N-(3-フェノキシフェニル)カルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド酢酸塩
【化３５】
2018524266.tif 000036
3,3-ジフルオロピロリジン塩酸塩及び3-フェノキシアニリンを用いた以外は実施例17と同様の方法で白色固体の表題化合物（0.36 g，61.0％）を得た。
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 7.37 (t, J=7.8Hz, 2H), 7.12 (m, 2H), 7.01 (m, 4H), 6.57 (m, 1H), 3.70 (t, J=7.2Hz, 2H), 2.44 (m, 2H), 1.74 (s, 3H) LCMS 360.0 [M+H]+
【００８２】
実施例30：N-(N-(4-(トリフルオロメチル)フェニル)カルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド酢酸塩
【化３６】
2018524266.tif 000037
3,3-ジフルオロピロリジン塩酸塩及び4-トリフルオロメチルアニリンを用いた以外は実施例17と同様の方法で白色固体の表題化合物（0.21 g，46.3％）を得た。
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 7.55 (m, 2H), 7.55 (m, 2H), 7.44 (brs, 2H), 3.79 (t, J=12.6Hz, 2H), 3.58  (t, J=7.8 Hz, 2H), 2.48 (m, 2H), 1.77 (s, 3H) LCMS 368.0 [M+H]+
【００８３】
実施例31：N-(N-(3-クロロ-4-ヨードフェニル)カルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド酢酸塩
【化３７】
2018524266.tif 000038
3,3-ジフルオロピペリジン塩酸塩及び3-クロロ-4-ヨードアニリンを用いた以外は実施例17と同様の方法で白色固体の表題化合物（0.06 g，11.0％）を得た。
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 7.55 (m, 2H), 7.70 (m, 1H), 7.37 (brs, 1H), 6.87 (brs, 1H), 3.77 (t, J=13.2Hz, 2H), 3.56 (t, J=7.2 Hz, 2H), 2.47 (m, 2H), 1.80 (s, 3H) LCMS 427.9 [M+H]+
【００８４】
実施例32：N-(N-(4-(トリフルオロメチルチオ)フェニル)カルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド酢酸塩
【化３８】
2018524266.tif 000039
3,3-ジフルオロピペリジン塩酸塩及び3-トリフルオロメチルチオアニリンを用いた以外は実施例17と同様の方法で白色固体の表題化合物（0.04 g，8.2％）を得た。
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 7.55 (m, 2H), 7.35 (m, 2H), 3.79 (t, J=12.6Hz, 2H), 3.58  (t, J=7.8 Hz, 2H), 2.48 (m, 2H), 1.80 (s, 3H) LCMS 336.0 [M+H]+
【００８５】
実施例33：N-(N-(2-クロロフェニル)カルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド酢酸塩
【化３９】
2018524266.tif 000040
3,3-ジフルオロピペリジン塩酸塩及び2-クロロアニリンを用いた以外は実施例17と同様の方法で白色固体の表題化合物（0.09 g，22.0％）を得た。
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ   .37 (dd, J=7.2 Hz, 1H), 7.20 (m, 1H), 7.06 (brs, 1H), 6.91 (m, 1H), 3.75 (t, J=13.2 Hz, 2H), 3.54 (t, J=7.8 Hz, 2H), 2.46 (m, 2H), 1.88 (s, 3H)           LCMS 302.0 [M+H]+
【００８６】
実施例34：N-(N-(2-ブロモフェニル)カルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド酢酸塩
【化４０】
2018524266.tif 000041
3,3-ジフルオロピロリジン塩酸塩及び2-ブロモアニリンを用いた以外は実施例17と同様の方法で白色固体の表題化合物（0.11 g，24.6％）を得た。
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 7.53 (dd, J=18 Hz, 1H), 7.22 (m, 1H), 7.00 (d, J=7.2 Hz,  1H), 6.88 (m, 1H), 3.76 (t, J=13.2 Hz, 2H), 3.55 (t, J=7.2 Hz, 2H), 2.45 (m, 2H), 1.88 (s, 3H) LCMS 345.9, 347.0 [M+H]+
【００８７】
実施例35：N-(N-(2,4-ジクロロフェニル)カルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド酢酸塩
【化４１】
2018524266.tif 000042
3,3-ジフルオロピペリジン塩酸塩及び2,4-ジクロロアニリンを用いた以外は実施例17と同様の方法で白色固体の表題化合物（0.10 g，22.0％）を得た。
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 7.42 (m, 1H), 7.21 (m, 2H), 7.0 (m, 1H), 3.68 (m, 2H), 3.54 (m, 2H), 2.42 (m, 2H), 1.89 (s, 3H) LCMS 336.0, 337.9 [M+H]+
【００８８】
実施例36：N-(N-(2-プロピルフェニル)カルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド酢酸塩
【化４２】
2018524266.tif 000043
3,3-ジフルオロピロリジン塩酸塩及び2-プロピルアニリンを用いた以外は実施例17と同様の方法で白色固体の表題化合物（0.19 g，45.0％）を得た。
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 7.17 (m, 2H), 6.85 (m, 2H), 3.65 (m, 2H), 3.49  (s, 2H), 2.48 (m, 4H), 1.78 (s, 3H), 1.51 (m, 2H), 0.86 (s, 3H) LCMS 310.1 [M+H]+
【００８９】
実施例37：N-(N-3,4-ジメトキシフェニル)カルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド塩酸塩
【化４３】
2018524266.tif 000044
3,3-ジフルオロピロリジン塩酸塩及び3,4-ジメトキシアニリンを用いた以外は実施例17と同様の方法で白色固体の表題化合物（0.16 g，24.0％）を得た。
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 6.41 (brs, 2H), 6.11 (d, J=18 Hz, 2H),3.77 (t, J=12.6 Hz, 2H), 3.55 (s, 3H), 3.56 (t, J=6.6 Hz, 2H), 2.46 (m, 2H), 1.76 (s, 3H) LCMS 328.1 [M+H]+
【００９０】
実施例38：N-(N-(3-クロロ-4-(トリフルオロメトキシ)フェニル)カルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド酢酸塩
【化４４】
2018524266.tif 000045
3,3-ジフルオロピロリジン塩酸塩及び3-クロロ-4トリフルオロメトキシアニリンを用いた以外は実施例17と同様の方法で白色固体の表題化合物（0.06 g，21.0％）を得た。
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 7.36 (m, 2H), 7.19 (brs, 1H), 3.77 (t, J=13.8 Hz, 2H), 3.56 (m, 2H), 2.46 (m, 2H), 1.81 (s, 3H) LCMS 386.1 [M+H]+
【００９１】
実施例39：N-(N-(3-ブロモ-4-(トリフルオロメトキシ)フェニル)カルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド酢酸塩
【化４５】
2018524266.tif 000046
3,3-ジフルオロピロリジン塩酸塩及び3-ブロモ-4-トリフルオロメトキシアニリンを用いた以外は実施例17と同様の方法で白色固体の表題化合物（0.09 g，11.0％）を得た。
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 7.51 (brs, 1H), 7.35 (d, J=8.4 Hz, 2H), 7.20 (brs, 2H), 3.78 (t, J=13.2 Hz, 2H), 3.37 (m, 2H), 2.46 (m, 2H), 1.80 (s, 3H)  LCMS 432.0 [M+H]+
【００９２】
実施例40：N-(N-(2-ブロモベンジル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド塩酸塩
【化４６】
2018524266.tif 000047
4,4-ジクロロピペリジン塩酸塩（1.0 g,6.34 mmol）をシクロヘキサノール（30 ml）に室温で溶解し、ナトリウムジシアナミド（0.62 g,6.98 mmol）を添加した。得られた溶液を130℃で２時間還流し、室温まで冷却した。酢酸エチル及び水を用いて水層を分離し、減圧下で乾燥し、n-ヘキサン中で晶析し、白色固体（0.89 g，75.2％）のCN中間化合物を生成した。2-ブロモベンジルアミン（0.2 ml,1.06 mmol）をジクロロエタン（2 mL）に室温で溶解し、トリメチルシリルトリフルオロメタンスルホン酸（0.23 ml,1.27 mmol）を添加した。得られた溶液を室温で30分撹拌し、CN中間化合物（0.21,1.06 mmol）を添加し、80℃で15時間還流した。反応が完了した後、溶液を室温まで冷却し、12N塩酸塩（0.18 ml,2.13 mmol）を添加して１時間撹拌した。得られた固体を濾過し、ジクロロエタン（10 ml）で洗浄し、少量のメタノールに溶解し、酢酸エチル（20 ml）を添加して室温で１時間撹拌した。得られた固体を濾過し、酢酸エチル（10 ml）で洗浄し、真空下で乾燥し、白色固体の表題化合物（0.25 g，56.8％）を生成した。
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 7.69 (s, 1H), 7.62 (d, J=8.4Hz, 1H), 7.45 (d, J=6.6Hz, 1H), 7.40 (t, J=7.8Hz, 1H), 7.24 (t, J=7.2HZ, 1H), 7.11 (s, 2H), 4.40 (s, 2H), 3.54 (s, 4H), 2.09 (s, 4H) LCMS 374.1, 376.1 [M+H]+
【００９３】
実施例41：N-(N-(4-(トリフルオロメトキシ)ベンジル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド塩酸塩
【化４７】
2018524266.tif 000048
4-トリフルオロメトキシベンジルアミンを用いた以外は実施例40と同様の方法で白色固体の表題化合物（0.22 g，50.0％）を得た。
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 7.70 (s, 1H), 7.48 (s, 2H), 7.35 (d, J=7.8Hz, 2H), 7.05 (s, 2H), 4.44 (s, 2H), 3.56 (s, 4H), 1.98 (s, 4H) LCMS 380.4 [M+H]+
【００９４】
実施例42：N-(N-(3,4-ジクロロベンジル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド塩酸塩
【化４８】
2018524266.tif 000049
3,4-ジクロロベンジルアミンを用いた以外は実施例40と同様の方法で白色固体の表題化合物（0.20 g，46.5％）を得た。
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 7.62 (d, J=7.8Hz, 2H), 7.35 (s, 1H), 7.03 (s, 3H), 4.38 (s, 2H), 3.56 (s, 4H), 2.08 (s, 4H) LCMS 364.1 [M+H]+
【００９５】
実施例43：N-(N-(4-トリフルオロメチル)ベンジル)カルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド塩酸塩
【化４９】
2018524266.tif 000050
3,3-ジフルオロピロリジン塩酸塩及び4-トリフルオロメチルベンジルアミンを用いた以外は実施例40と同様の方法で白色固体の表題化合物（0.08 g，12.0％）を得た。
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 7.69 (m, 2H), 7.51(m, 2H), 4.42 (d, J=4.8Hz, 2H), 3.67 (brs, 2H), 3.50 (m, 2H), 2.45 (m, 2H) LCMS: 350.1 [M+H]+
【００９６】
実施例44：N-(N-(3-トリフルオロメチル)ベンジル)カルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド塩酸塩
【化５０】
2018524266.tif 000051
3,3-ジフルオロピロリジン塩酸塩及び3-トリフルオロメチルベンジルアミンを用いた以外は実施例40と同様の方法で白色固体の表題化合物（0.12 g，23.0％）を得た。
1H NMR (600MHz, CD3OD) δ 7.64 (m, 4H), 7.54 (m, 3H), 4.50 (s, 2H), 3.71 (brs, 2H), 3.62 (m, 2H) 2.46 (m, 2H) LCMS: 350.2 [M+H]+
【００９７】
実施例45：N-(N-(3,4-ジクロロ)ベンジル)カルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド塩酸塩
【化５１】
2018524266.tif 000052
3,3-ジフルオロピロリジン塩酸塩及び3,4-ジクロロベンジルアミンを用いた以外は実施例40と同様の方法で白色固体の表題化合物（0.06 g，10.0％）を得た。
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 8.01 (m, 1H), 7.58 (m, 2H), 7.47 (brs, 2H), 7.29 (m, 2H), 7.07 (brs, 2H), 4.33 (d, J=6.0Hz, 2H), 3.70 (brs, 2H), 3.52 (brs, 2H), 2.48 (m, 2H)  LCMS: 350.0, 352.0  [M+H]+
【００９８】
実施例46：N-(N-フェネチルカルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド塩酸塩
【化５２】
2018524266.tif 000053
3,3-ジフルオロピロリジン塩酸塩及びフェネチルアミンを用いた以外は実施例40と同様の方法で白色固体の表題化合物（0.12 g，23.0％）を得た。
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 7.33 (s, 1H), 7.25 (m, 5H), 3.75 (m, 2H), 3.57 (m, 2H), 3.34 (m, 2H), 2.78 (m, 2H), 2.49 (m, 2H)      LCMS 266.1 [M+H]+
【００９９】
実施例47：N-(N-(4-ブロモフェネチル)カルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド塩酸塩
【化５３】
2018524266.tif 000054
3,3-ジフルオロピロリジン塩酸塩及び4-ブロモフェネチルアミンを用いた以外は実施例40と同様の方法で白色固体の表題化合物（0.12 g，25.0％）を得た。
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 7.48 (m, 2H), 7.24 (m, 2H), 3.78 (m, 2H), 3.57 (m, 2H), 3.35 (m, 2H), 2.76 (m, 2H), 2.49 (m, 2H) LCMS 374.0 376.0 [M+H]+
【０１００】
実施例48：N-(N-(シクロプロピルメチル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド塩酸塩
【化５４】
2018524266.tif 000055
シクロプロピルメチルアミンを用いた以外は実施例40と同様の方法で白色固体の表題化合物（0.67 g，88.2％）を得た。
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ    8.19 (s, 1H), 7.59 (s, 2H), 6.89 (s 1H), 3.59 (s, 4H), 3.12 (s, 2H) 1.98 (s, 4H), 0.99 (s, 2H), 0.45 (s, 2H), 0.21 (s, 2H) LCMS 260.1 [M+H]+
【０１０１】
実施例49：N-(N-シクロプロピルカルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド塩酸塩
【化５５】
2018524266.tif 000056
シクロプロピルアミンを用いた以外は実施例40と同様の方法で白色固体の題化合物（0.58 g，88.0％）を得た。
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 8.10 (s, 1H), 7.59 (s, 2H), 6.83 (s 1H), 3.31 (s, 4H), 3.22 (s, 1H), 1.88 (s, 4H), 1.12 (s, 4H)       LCMS 246.1[M+H]+
【０１０２】
実施例50：N-(N-シクロヘキシルカルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド塩酸塩
【化５６】
2018524266.tif 000057
シクロヘキシルアミンを用いた以外は実施例40と同様の方法で白色固体の表題化合物（0.25 g，53.0％）を得た。
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 8.19 (s, 1H), 7.34 (s, 2H), 7.00 (s, 2H), 3.81 (m, 4H), 3.63 (m, 1H), 3.31 (m, 2H), 2.99 (m, 2H), 2.30 (m, 4H), 2.20 (m, 4H), 1.02 (m, 2H)        LCMS 288.0 [M+H]+
【０１０３】
実施例51：N-(N-(シクロプロピルメチル)カルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド塩酸塩
【化５７】
2018524266.tif 000058
3,3-ジフルオロピロリジン塩酸塩及びシクロプロピルメチルアミンを用いた以外は実施例40と同様の方法で白色固体の表題化合物（0.50 g，72.1％）を得た。
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 8.02 (s, 1H), 7.48 (s, 2H), 6.88(s 1H), 3.31 (m, 4H), 3.31 (s, 2H), 2.00 (s, 2H), 1.01 (s, 1H) 0.45 (s, 2H), 0.21 (s, 2H)  LCMS  246.0 [M+H]+
【０１０４】
実施例52：N-(N-(シクロプロピルカルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド塩酸塩
【化５８】
2018524266.tif 000059
3,3-ジフルオロピロリジン塩酸塩及びシクロプロピルアミンを用いた以外は実施例40と同様の方法で白色固体の表題化合物（0.72 g，88.0％）を得た。
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 8.12 (s, 1H), 7.58 (s, 2H), 6.78(s 1H), 3.31 (m, 4H), 3.31 (s, 1H), 2.00 (s, 2H), 089 (s, 4H) LCMS  232.0 [M+H]+
【０１０５】
実施例53：N-(N-(シクロヘキシルカルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド塩酸塩
【化５９】
2018524266.tif 000060
3,3-ジフルオロピロリジン塩酸塩及びシクロヘキシルアミンを用いた以外は実施例40と同様の方法で白色固体の表題化合物（0.25 g，55.3％）を得た。
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 8.00 (s, 1H), 7.12 (s, 2H), 6.93 (s, 2H), 3.91 (m, 4H), 3.77 (m, 1H), 3.31 (m, 4H), 2.97 (m, 2H), 232 (m, 2H), 2.19 (m, 4H), 1.05 (m, 2H)   
【０１０６】
実施例54：N-(N-(3-ブロモベンジル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド酢酸塩
【化６０】
2018524266.tif 000061
4,4-ジクロロピペリジン塩酸塩（1.0 g,6.34 mmol）をシクロヘキサノール（30 ml）に室温で溶解し、ナトリウムジシアナミド（0.62 g,6.98 mmol）を添加した。得られた溶液を130℃で２時間還流し、室温まで冷却した。酢酸エチル及び水を用いて水層を分離し、減圧下で乾燥し、n-ヘキサン中で晶析し、白色固体（0.89 g，75.2％）のCN中間化合物を生成した。3-ブロモベンジルアミン（0.13 ml,1.06 mmol）をジクロロエタン（10 mL）に室温で溶解し、トリメチルシリルトリフルオロメタンスルホン酸（0.23 ml,1.28 mmol）を添加した。得られた溶液を室温で30分撹拌し、CN中間化合物（0.20,1.06 mmol）を添加し、80℃で15時間還流した。反応が完了した後、溶液を室温まで冷却し、12N塩酸塩（0.18 ml,2.13 mmol）を添加して１時間撹拌した。得られた固体を濾過し、ジクロロエタン（10 ml）で洗浄し、少量のメタノールに溶解し、1.5M NaOH（0.5 ml）を添加して室温で１時間撹拌した。得られた固体を濾過し、メタノール溶液（10 ml）に溶解し、酢酸溶液（0.23 ml,3.98 mmol）を添加して１時間撹拌した。反応溶液を真空下で蒸留し、酢酸エチル中で晶析し、白色固体の表題化合物（0.16 g，34.7％）を生成した。
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 7.59 (s, 1H), 7.46 (d, J=7.8Hz, 1H), 7.30 (m, 1H), 4.33 (s, 2H), 3.52 (s, 4H), 3.34 (s, 3H), 1.97 (s, 4H) LCMS 374.1, 376.1 [M+H]+
【０１０７】
実施例55：N-(N-(4-ブロモベンジル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド酢酸塩
【化６１】
2018524266.tif 000062
4-ブロモベンジルアミンを用いた以外は実施例54と同様の方法で白色固体の表題化合物（0.02 g，4.3％）を得た。
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 7.54 (d, J=8.4Hz, 2H), 7.26 (d, J=7.8Hz, 2H), 4.29 (s, 2H), 3.56 (s, 4H), 3.32 (s, 3H), 1.98 (s, 4H)     LCMS 374.1, 376.1 [M+H]+
【０１０８】
実施例56：N-(N-(4-(トリフルオロメトキシ)フェニル)カルバムイミドイル)-3,3-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド塩酸塩
【化６２】
2018524266.tif 000063
4-トリフルオロメトキシアニリン（2.0 g，11.3 mmol）をシクロヘキサノール（30 ml）に室温で溶解し、ナトリウムジシアナミド（1.1 g，1.24 mmol）を添加した。得られた溶液を130℃で２時間還流し、室温まで冷却した。酢酸エチル及び水を用いて水層を分離し、減圧下で乾燥し、n-ヘキサン中で晶析し、白色固体（1.9 g，70.0％）のCN中間化合物を生成した。3,3-ジフルオロピペリジン（0.05g,0.41 mmol）をジクロロエタン（2 mL）に室温で溶解し、トリメチルシリルトリフルオロメタンスルホン酸（0.7 ml,0.41 mmol）を添加した。3,3-ジフルオロピペリジン（0.05 g，0.41 mmol）をジクロロエタン（2 mL）に室温で溶解し、トリメチルシリルトリフルオロメタンスルホン酸（0.7 ml,0.41 mmol）を添加した。得られた溶液を室温で30分撹拌し、CN中間化合物（0.20,1.06 mmol）を添加し、80℃で15時間還流した。反応が完了した後、溶液を室温まで冷却し、12N塩酸塩（0.34 ml,0.41 mmol）を添加して１時間撹拌した。得られた固体を濾過し、ジクロロエタン（10 ml）で洗浄し、少量のメタノールに溶解し、酢酸エチル（20 ml）を添加して室温で１時間撹拌した。得られた固体を濾過し、酢酸エチル（10 ml）で洗浄し、真空下で乾燥し、白色固体の表題化合物（0.068 g，41.0％）を生成した。
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 7.91 (m, 1H), 7.44 (m, 1H), 7.28 (m, 1H), 7.15 (m, 1H), 3.84 (t, J=12 Hz, 1H), 3.50 (m, 5H), 2.08 (m, 1H), 1.70 (m, 1H) LCMS 366.1 [M+H]+
【０１０９】
実施例57：N-(N-(4-(トリフルオロメトキシ)フェニル)カルバムイミドイル)チアゾリジン-3-カルボキシイミドアミド塩酸塩
【化６３】
2018524266.tif 000064
チアゾリジンを用いた以外は実施例56と同様の方法で白色固体の表題化合物（0.15 g，33.3％）を得た。
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 7.82 (m, 1H), 7.49 (m, 1H), 7.30 (d, J=18 Hz, 1H), 7.13 (m, 1H), 4.76 (brs, 2H), 4.47 (m, 1H), 3.64 (d, J=6.6 Hz, 1H), 3.12 (m, 1H), 1.70 (m, 1H)                      LCMS 334.0 [M+H]+
【０１１０】
実施例58：N-(N-(4-(トリフルオロメトキシ)フェニル)カルバムイミドイル)-N-2,2-2-トリフルオロエチルアミノカルボキシイミドアミド塩酸塩
【化６４】
2018524266.tif 000065
2,2,2-トリフルオロエタンアミンを用いた以外は実施例56と同様の方法で白色固体の表題化合物（0.16 g，34.6％）を得た。
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ  8.27 (brs, 1H), 7.51 (m, 2H), 7.44 (m, 2H), 7.28 (m, 2H), 6.00 (brs, 3H), 4.00 (m, 2H) LCMS 344.1 [M+H]+
【０１１１】
実施例59：N-(N-(4-(トリフルオロメトキシ)フェニル)カルバムイミドイル)-4-(トリフルオロメチル)ピペリジン-1-カルボキシイミドアミド塩酸塩
【化６５】
2018524266.tif 000066
4-トリフルオロメチルピペリジンを用いた以外は実施例56と同様の方法で白色固体の表題化合物（0.04 g，8.0％）を得た。
1H NMR (600MHz, CD3OD) δ 7.46 (m, 2H), 7.25 (d, J=9.0 Hz, 2H), 7.29 (m, 1H), 7.21 (d, J=12.6Hz, 1H), 3.05 (t, J=12.6Hz, 2H), 2.54 (m, 1H), 1.95 (m, 2H),1.60 (m, 2H) LCMS 398.1 [M+H]+
【０１１２】
実施例60：N-(N-(4-(トリフルオロメトキシ)フェニル)カルバムイミドイル)-N-1-シクロプロピルメチルアミノカルボキシイミドアミド塩酸塩
【化６６】
2018524266.tif 000067
シクロプロピルメチルアミンを用いた以外は実施例56と同様の方法で白色固体の表題化合物（0.07 g，29.3％）を得た。
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 9.86 (brs, 1H), 7.84 (brs, 1H), 7.47 (m, J=7.2Hz, 2H), 7.29 (m,2H), 7.15 (brs, 1H), 2.99 (d, J=5.4Hz, 2H), 1.16 (m, 1H), 0.44 (m, 2H) 0.22 (m, 2H) LCMS 316.11 [M+H]+
【０１１３】
実施例61：N-(N-(4-(トリフルオロメトキシ)フェニル)カルバムイミドイル)-3,4,4-トリフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド塩酸塩
【化６７】
2018524266.tif 000068
3,4,4-トリフルオロピペリジンを用いた以外は実施例56と同様の方法で白色固体の表題化合物（0.06 g，25.1％）を得た。
1H NMR (600MHz, CD3OD) δ 7.43 (m, 2H), 7.25 (m, 2H), 4.82 (m, 2H), 4.39 (m, 1H), 4.05 (m, 1H), 3.56 (m, 1H), 2.27 (m, 1H), 2.13 (m, 1H) LCMS 384.1 [M+H]+
【０１１４】
実施例62：N-(N-(4-(トリフルオロメトキシ)フェニル)カルバムイミドイル)-4,4-ジフルオロ-3-メチルピペリジン-1-カルボキシイミドアミド塩酸塩
【化６８】
2018524266.tif 000069
4,4-ジフルオロ-3-メチルピペリジンを用いた以外は実施例56と同様の方法で白色固体の表題化合物（0.07 g，29.0％）を得た。
1H NMR (600MHz, CD3OD) δ 7.43 (m, 2H), 7.25 (m, 2H), 3.95 (m, 2H), 3.34 (m, 1H), 3.06 (m, 1H), 2.15 (m, 1H), 1.99 (m, 1H), 1.03 (s, 3H) LCMS 380.1 [M+H]+
【０１１５】
実施例63：N-(N-(4-(トリフルオロメトキシ)フェニル)カルバムイミドイル)-4-フルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド塩酸塩
【化６９】
2018524266.tif 000070
4-フルオロピペリジンを用いた以外は実施例56と同様の方法で白色固体の表題化合物（0.01 g，4.4％）を得た。
1H NMR (600MHz, CD3OD) δ 7.44 (m, 2H), 7.23 (m, 2H), 4.93 (m, 1H), 3.62 (m, 4H), 1.89 (m, 4H) LCMS 348.1 [M+H]+
【０１１６】
実施例64：N-(N-(4-(トリフルオロメトキシ)フェニル)カルバムイミドイル)-(R)-3-フルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド塩酸塩
【化７０】
2018524266.tif 000071
(R)-3-フルオロピロリジンを用いた以外は実施例56と同様の方法で白色固体の表題化合物（0.12 g，41.0％）を得た。
1H NMR (600MHz, CD3OD) δ 7.45 (d, J=9.0Hz, 2H), 7.22 (d, J=9.0Hz, 2H), 5.24 (m, 1H), 3.63 (m, 4H), 2.59 (m, 2H) LCMS 334.1 [M+H]+
【０１１７】
実施例65：N-(N-(4-(トリフルオロメトキシ)フェニル)カルバムイミドイル)-6-アザスピロ[2.5]オクタン-6-カルボキシイミドアミド塩酸塩
【化７１】
2018524266.tif 000072
6-アザスピロ[2.5]オクタンを用いた以外は実施例56と同様の方法で白色固体の表題化合物（0.02 g，8.3％）を得た。
1H NMR (600MHz, CD3OD) δ 7.45 (d, J=9.0Hz, 2H), 7.22 (d, J=9.0Hz, 2H), 3.60 (t, J=5.4Hz,  4H), 1.47 (t, J=6.0Hz, 4H), 1.47 (m, 4H) LCMS 356.1 [M+H]+
【０１１８】
実施例66：N-(N-(4-(トリフルオロメトキシ)フェニル)カルバムイミドイル)-3-アザビシクロ[3.1.0]ヘキサン-3-カルボキシイミドアミド塩酸塩
【化７２】
2018524266.tif 000073
3-アザビシクロ[3.1.0]ヘキサンを用いた以外は実施例56と同様の方法で白色固体の表題化合物（0.16 g，34.6％）を得た。
1H NMR (600MHz, CD3OD) δ 7.45 (m, 2H), 7.22 (m, 2H), 3.69 (m, 1H), 3.54 (m, 3H), 3.31 (m, 1H), 1.74(m, 1H), 0.84 (m, 1H), 0.21 (m, 1H) LCMS 328.1 [M+H]+
【０１１９】
実施例67：N-カルバムイミドイル-3,3-ジフルオロピロリジン-1-カルボキシイミドアミド塩酸塩
【化７３】
2018524266.tif 000074
3,3-ジフルオロピロリジン（0.03 g,0.21 mmol）及びジシアンジアミド（0.019 g，0.23 mmol）を添加し、110℃で２時間撹拌した。反応が完了した後、溶液を室温まで冷却し、メタノールを添加した。溶液に酢酸エチルを添加し、固体を得た。固体を濾過し、酢酸エチルで洗浄し、真空下で乾燥し、白色固体の表題化合物（0.02 g，58.0％）を生成した。
1H NMR (600MHz, DMSO) δ 7.37 (s, 2H), 7.02 (s , 3H), 3.78 (m, 2H), 3.57 (m, 4H)         LCMS  191.1 [M+H]+
【０１２０】
実施例68：N-カルバムイミドイル-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド塩酸塩
【化７４】
2018524266.tif 000075
4,4,-ジフルオロピペリジン塩酸塩を用いた以外は実施例67と同様の方法で白色固体の表題化合物（0.02 g，60.0％）を得た。
1H NMR (600MHz, CD3OD) δ 3.69 (m, 4H), 2.06 (m, 4H) LCMS: 206.1 [M+H]+
【０１２１】
実施例69：N-((4,4-ジフルオロピペリジン-1-イル)(イミノ)メチル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシイミドアミド塩酸塩
【化７５】
2018524266.tif 000076
4,4,-ジフルオロピペリジン塩酸塩を用いた以外は実施例67と同様の方法で白色固体の表題化合物（0.03 g，40.0％）を得た。
1H NMR (600MHz, CD3OD) δ 3.65 (m, 8H), 1.99 (m, 8H) LCMS: 310.1[M+H]+
【０１２２】
試験例１：OCR抑制及びECAR向上試験
米国培養細胞系統保存機関から購入したA549細胞［CCL-185（登録商標）］を、10％ウシ胎児血清（FBS）及び抗生物質-抗真菌剤（LifetecH、CA）が添加されたRPMI 1640で培養した。A549細胞を0.5％トリプシンEDTAで分離し、3000個の細胞を１mg/mlのポリ-D-リジン（Sigma、P6407）がコーティングされたXF 96ウェル培地にプレーティングした。A549細胞を、37℃の温度及び５％CO2の条件下で24時間ウェルに付着させた。XFアナライザーのセンサーカートリッジを、透明な96ウェルプレート内の20μlの較正溶液（Seahorse、MA）に37℃で24時間浸漬させた。本発明の化合物をFBS無添加RPMI 1640で希釈し、XF 96ウェルプレート上のA549細胞に移した後、37℃及び５％CO2で23時間さらに培養した。培養後、化合物溶液を15 mMのD-グルコース（Sigma），15 mMのピルビン酸ナトリウム（Lifetechnologies、CA）及び４mMのL-グルタミン（Lifetechnologies、CA）が添加され、予熱及びpH調節（pH 7.4）を施したXFアッセイ培地（Seahorse）に交換した。本発明の化合物をXFアッセイ培地に準備し、アッセイプレートに追加した。アッセイプレートをXFアナライザーで１時間平衡化し、センサーカートリッジで判読を開始した。細胞毒性アッセイは、化合物の細胞毒性の抑制を較正するためにCyquant（Lifetechnologies、CA）を使用して行った。前記化合物を0，0.5，１，５，10及び20μMの濃度で試験し、阻害値からIC50値を得た。すなわち、化合物の各濃度におけるOCR阻害値から、プリズムの用量反応曲線フィッティングによりIC50を計算した。
【０１２３】
表１において、OCR IC50のレベルは以下のように評価する。
Aレベル：IC50 ＜ ２μM
Bレベル：IC50 ＝ ２〜４μM
Cレベル：IC50 ＞ ４μM
化合物の試験結果により、化合物をA，B及びCに分類した。試験結果を表１にまとめる。試験化合物は良好なOCR抑制効果を有し、優れたOXPHOX阻害剤であることを示した。OCR抑制活性を有する化合物のほとんどはECARが増加した。
【０１２４】
【表１】
2018524266.tif 000077
【０１２５】
試験例２：低グルコース条件における細胞毒性
ATCC（MA）から購入したメラノーマ細胞株SK-MEL-28（HTB-72）を10％FBS及び抗生物質-抗真菌剤（Lifetechnologies、CA）が添加されたRPMI 1640培地（Lifetechnologies、CA）で培養した。RPMI 1640（-グルコース）を用いて低グルコース培地を調製し、0.75 mMのグルコースにSigma社のD-(+)-グルコース溶液を添加した。SK-MEL-28細胞を0.5％トリプシン-EDTAを用いて培養プレートから分離し、1,250個の細胞を低グルコース培地を有する96ウェルプレートにプレーティングした。37℃及び５％CO2で24時間培養した後、FBSフリー培地において細胞を本発明の化合物で72時間処理した。細胞毒性をMTT（AMRESCO、OH）アッセイにより測定した。NADH依存性細胞の酸化還元酵素は、MTTを紫色の不溶性テトラゾリウムに還元させる。酵素は、細胞数又は細胞のエネルギー状態に依存する。５mg/mlのMTT溶液をアッセイプレートの各ウェルに10μl添加し、ブランクウェルは除外した。プレートを37℃及び５％CO2で２時間培養した。MTT溶液を各ウェルから除去し、DMSOを100μl添加した。プレートを550 nmの波長でビクターX3マルチラベルカウンターにより判読した。
【０１２６】
表２において、IC50のレベルは以下のように評価する。
Aレベル：IC50 ＜ ６μM
Bレベル：IC50 ＝ 6~15μM
Cレベル：IC50 ＞ 15μM
0.75 mMのグルコースにおいて化合物をSK-MEL-28細胞に処理したとき、細胞群の半分を死滅させるための化合物の濃度（IC50レベル）に応じて化合物をA、B及びCに分類した。試験結果を表１にまとめた。試験化合物は、低濃度で良好な細胞死滅効果を示し、優れた抗癌活性を示す。
【０１２７】
【表２】
2018524266.tif 000078
【０１２８】
試験例３：生体外での併用研究
A549，H1975（CRL5908、ATCC）又はU937細胞［CRL1593.2（登録商標）、ATCC］株を10％FBS及び抗生物質-抗真菌剤（Lifetechnologies、CA）が添加されたRPMI 1640培地（Lifetechnologies、CA）で培養した。ダサチニブ（Combi-Blocks、San Diego、CA）は、CMLの治療用として認可されたBcr-Abl-チロシンキナーゼ阻害剤及びSrcファミリーチロシンキナーゼ阻害剤である。GDC094（Selleckchem、Houston、TX）は、pan-PI3K阻害剤であり、種々の癌細胞に効果がある。H1975又はA549細胞を0.5％トリプシン-EDTA（Lifetechnologies、CA）を用いて培養プレートから分離し、懸濁させた。U937細胞を遠心分離法により遠心沈殿させた。96ウェルプレートにA549細胞を3,000細胞／ウェルの密度で播種し、H1975又はU937細胞を5,000細胞／ウェルの密度で播種し、37℃及び５％CO2で24時間付着させた。併用治療試験の前に、各化合物のIC50を各細胞株から得た。本発明の化合物の４つの濃度のうち、最高濃度をIC80とし、最低濃度を約IC30にした。他の抗癌剤の濃度は、IC80〜IC30の範囲にあった。96ウェルプレート内の培地を調製した化合物溶液と交換した。U937細胞以外の細胞の生存率を決めるために、72時間処理後にD-PBS（Lifetechnologies、CA）中の５mg/mlのMTTを各ウェルに10μl添加し、プレートを37℃及び５％CO2で２時間培養した。各ウェルからMTT溶液を除去した後にDMSOを100μl添加し、550 nmの波長でビクターX3マルチラベルカウンターにより判読した。併用指数をCalcusyn（Biosoft、UK）を用いて計算した。
【０１２９】
試験例４：OXPHOS阻害剤の抗癌活性生体内試験
SK-MEL-239腫瘍細胞株を、10％熱失活ウシ胎児血清，100 U/mlのペニシリン及び100μg/mlのストレプトマイシン及びL-グルタミン（２mM）を添加したRPMI 1640培地に単層として生体外の37℃及び空気中５％CO2環境下で維持した。腫瘍細胞を0.5％トリプシン-EDTA処理しながら週２回定期的に継代培養した。指数増殖期の増殖細胞を収穫し、腫瘍細胞接種のためにカウントした。
【０１３０】
体重約18〜22 gの６〜８週齢の雌BALB/cヌードマウスをVital Riverから購入した。各マウスに腫瘍が発達するように0.1 mlのPBS中のSK-MEL-239腫瘍細胞（１×107）を右脇腹に皮下接種した。腫瘍の大きさが約100 mm3に達したときに処理を開始した。
【０１３１】
100 mg/kgのフェンホルミン及び15 mg/kgのベムラフェニブを１日２回強制経口投与し、100 mg/kgのHLPO1（HL176001001）を１日１回21日間投与した。腫瘍容積をキャリパーを用いて週２回二方向測定し、容積を式：V＝0.5×a×b2を用いてmm3で表した（a及びbは、それぞれ腫瘍の長径及び短径である）。T/C値（パーセント単位）は抗腫瘍効果の指標である。T及びCは、それぞれ処理群及び対照群の平均容積である。
【国際調査報告】
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2018524266.tif 000084
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