(57)【要約】本開示は、複数の新規イソキノリジノベンゾジアゼピンを提供する。これらの化合物は、抗体-薬物結合体中に組み込むこともできる。2018510163.tif 000162
2018510163.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（I）または（II）：
2018510163.tif 000127
の構造を有する化合物：
式中、
・-C(Ra)-と-N(Rb)-との間または-C(Ra')-と-N(Rb')-との間の点線の結合は独立して一重結合または二重結合であり；
○  -C(Ra)-と-N(Rb)-との間に二重結合が存在する場合、-C(Ra)-はオレフィン性でありかつ置換基Raを有し、かつ-N(Rb)-のRbは存在せず；
○  -C(Ra)-と-N(Rb)-との間に一重結合が存在する場合、-C(Ra)-は飽和しており、かつRa置換基に加えて水素置換基も有し、かつ-N(Rb)-のRbは存在し；
○  -C(Ra')-と-N(Rb')-との間に二重結合が存在する場合、-C(Ra')-はオレフィン性でありかつ置換基Ra'を有し、かつ-N(Rb')-のRb'は存在せず；
○  -C(Ra')-と-N(Rb')-との間に一重結合が存在する場合、-C(Ra')-は飽和しており、かつRa'置換基に加えて水素置換基も有し、かつ-N(Rb')-のRb'は存在し；
・RaおよびRa'のそれぞれは独立してH、OH、または-O-Pであり、ここでPは保護基であり；
・存在する場合、RbおよびRb'のそれぞれは独立してH、L-Rx、またはL-Scであり；
・R2、R2'、R3、R3'、R4、R4'、R6'、およびR6はそれぞれ独立してH、OH、C1-C10アルキル、C2-C10アルケニル、またはC2-C10アルキニルより選択され；
・R5またはR5'のそれぞれは独立してNH2、CO2H、H、OH、C1-C10アルキル、C2-C10アルケニル、C2-C10アルキニル、-L-Rx、または-L-Scであり；
・R7およびR7'のそれぞれはHであり；
・R8は、
○  H、NH2、CO2H、-L-Rx、もしくは-L-Scであり、ここでR8が結合している炭素も水素置換基を有し；または
○  構造
2018510163.tif 000128
を有するエキソオレフィンであり、ここでR8が結合している炭素は他の環外置換基を有せず；
・Xは、
○  C1-12アルキレンであり、任意でここでアルキレン鎖が、O、S、およびNHからなる群より選択される1つもしくは複数のヘテロ原子により分断され；または
○  -(CH2)m-Q-(CH2)p-であり、ここでmおよびpがそれぞれ独立して0、1、もしくは2であり；
○  Qが式：
2018510163.tif 000129
の構造を有し；ここでR9、R10、およびR11のそれぞれがH、NH2、CO2H、-L-Rx、もしくは-L-Scであり；かつJがCHもしくはNであり；
・YおよびY'のそれぞれは独立してO、S、またはNHであり；
・ZおよびZ'のそれぞれは独立してH、R、OH、OR、SH、SR、NH2、またはNHRであり、ここで各Rは独立して無置換C1-C12アルキル、置換C1-C12アルキル、無置換C3-C20ヘテロシクリル、置換C3-C20ヘテロシクリル、無置換C6-C20アリール基、および無置換C6-C20アリール基であり；
○  -L-Rxは反応性部分Rxに結合したリンカーLであり；
○  -L-Scは物質Scに結合したリンカーLであり；
ここで、
■  Lは、結合であるか、またはC、N、O、S、もしくはハロゲンより選択される1〜200個の非水素原子を有する部分であり、かつLは、エーテル、オキソ、カルボキサミジル、ウレタニル、分枝、環式、不飽和、ヘテロ環式、芳香族、またはヘテロ芳香族部分を組み込んでもよく；
■  Rxは反応性部分であり；
■  Scはタンパク質、タンパク質の一部、ペプチド、または核酸より選択される標的結合物質であり；かつ
■  -L-Rxまたは-L-Scが式IまたはIIの化合物中に存在する場合、Rb、Rb'、R5、R5'、R8、R9、R10、およびR11の1つだけがL-Rxまたは-L-Scである。
【請求項２】
式（I）または（II）：
2018510163.tif 000130
の構造を有する化合物：
式中、
・-C(Ra)-と-N(Rb)-との間または-C(Ra')-と-N(Rb')-との間に示される点線の結合は独立して一重結合または二重結合であり；
・RaおよびRa'のそれぞれは独立してH、OH、または-O-Pであり、ここでPは保護基であり；
・RbおよびRb'のそれぞれは、存在しないか、または独立してHもしくはL-Rxであり；
・R2、R2'、R3、R3'、R4、R4'、R6'、およびR6はそれぞれ独立してH、OH、C1-C10アルキル、C2-C10アルケニル、またはC2-C10アルキニルより選択され；
・R5またはR5'のそれぞれは独立してNH2、CO2H、H、OH、C1-C10アルキル、C2-C10アルケニル、C2-C10アルキニル、または-L-Rxであり；
・R7およびR7'のそれぞれはHであり；
・R8は、
○  H、NH2、CO2H、もしくは-L-Rxであり、ここでR8が結合している炭素も水素置換基を有し；または
○  構造
2018510163.tif 000131
を有するエキソオレフィンであり、ここでR8が結合している炭素は他の置換基を有せず；
・Xは、
○  C1-12アルキレンであり、任意でここでアルキレン鎖が、O、S、およびNHからなる群より選択される1つもしくは複数のヘテロ原子により分断され；または
○  -(CH2)m-Q-(CH2)p-であり、ここでmおよびpがそれぞれ独立して0、1、もしくは2であり；
○  Qが式：
2018510163.tif 000132
の構造を有し；ここでR9、R10、およびR11のそれぞれがH、NH2、CO2H、もしくは-L-Rxであり；かつJがCHもしくはNであり；
・YおよびY'のそれぞれは独立してO、S、またはNHであり；
・ZおよびZ'のそれぞれは独立してH、R、OH、OR、SH、SR、NH2、またはNHRであり、ここで各Rは独立して無置換C1-C12アルキル、置換C1-C12アルキル、無置換C3-C20ヘテロシクリル、置換C3-C20ヘテロシクリル、無置換C6-C20アリール基、および無置換C6-C20アリール基であり；
○  -L-Rxは反応性部分Rxに結合したリンカーLであり；
ここで、
■  Lは、結合であるか、またはC、N、O、S、もしくはハロゲンより選択される1〜200個の非水素原子を有する部分であり、かつLは、エーテル、オキソ、カルボキサミジル、ウレタニル、分枝、環式、不飽和、ヘテロ環式、芳香族、またはヘテロ芳香族部分を組み込んでもよく；
■  Rxは反応性部分であり；かつ
■  -L-Rxが式IまたはIIの化合物中に存在する場合、Rb、Rb'、R5、R5'、R8、R9、R10、およびR11の1つだけがL-Rxである。
【請求項３】
YおよびY'がそれぞれOである、請求項1に記載の化合物。
【請求項４】
ZおよびZ'がそれぞれ独立してORであり、ここで各Rが独立して無置換C1-C3アルキルである、請求項1に記載の化合物。
【請求項５】
Xが-CH2-である、請求項1に記載の化合物。
【請求項６】
XがQである、請求項1に記載の化合物。
【請求項７】
JがCHである、請求項6に記載の化合物。
【請求項８】
R9、R10、またはR11の1つが-L-Rxである、請求項6または7に記載の化合物。
【請求項９】
式Iの構造を有し、かつR5またはR5'の一方が-L-Rxである、請求項1に記載の化合物。
【請求項１０】
式IIの構造を有し、かつR5またはR8の一方が-L-Rxである、請求項1に記載の化合物。
【請求項１１】
RbまたはRb'の一方が-L-Rxである、請求項1に記載の化合物。
【請求項１２】
式Iの構造を有し、かつRbまたはRb'の一方が-L-Rxである、請求項1に記載の化合物。
【請求項１３】
前記化合物が式IIの構造を有する場合、RbまたはRb'の一方が-L-Rxである、請求項1に記載の化合物。
【請求項１４】
・RaおよびRa'のそれぞれが独立してHまたはOHであり；
・存在する場合、RbおよびRb'のそれぞれが独立してHまたはL-Rxであり；
・R2、R2'、R3、R3'、R4、R4'、R5、R5'、R6'、R6、R7、およびR7'がそれぞれHであり；
・R8が、
○  Hであり；または
○  構造
2018510163.tif 000133
を有するエキソオレフィンであり、ここでR8が結合している炭素が他の置換基を有せず；
・XがC1-12アルキレンであり；
・YおよびY'のそれぞれがOであり；
・ZおよびZ'のそれぞれが独立してORであり、ここで各Rが独立して無置換C1-C3アルキルであり；
・-L-Rxが、反応性部分Rxに結合したリンカーLであり；
ここで、
○  Lが、結合であるか、またはC、N、O、S、もしくはハロゲンより選択される1〜200個の非水素原子を有する部分であり、かつLが、エーテル、オキソ、カルボキサミジル、ウレタニル、分枝、環式、不飽和、ヘテロ環式、芳香族、またはヘテロ芳香族部分を組み込んでもよく；
○  Rxが反応性部分であり；かつ
○  -L-Rxが式IまたはIIの化合物中に存在する場合、RbおよびRb'の一方だけがL-Rxである、
請求項1に記載の化合物。
【請求項１５】
式Iの化合物であり、
式中、
・RaおよびRa'のそれぞれが独立してHまたはOHであり；
・存在する場合、RbおよびRb'のそれぞれが独立してHまたはL-Rxであり；
・R2、R2'、R3、R3'、R4、R4'、R5、R5'、R6'、R6、R7、およびR7'がそれぞれHであり；
・XがC1-12アルキレンであり；
・YおよびY'のそれぞれがOであり；
・ZおよびZ'のそれぞれが独立してORであり、ここで各Rが独立して無置換C1-C3アルキルであり；
・-L-Rxが、反応性部分Rxに結合したリンカーLであり；
ここで、
○  Lが、結合であるか、またはC、N、O、S、もしくはハロゲンより選択される1〜200個の非水素原子を有する部分であり、かつLが、エーテル、オキソ、カルボキサミジル、ウレタニル、分枝、環式、不飽和、ヘテロ環式、芳香族、またはヘテロ芳香族部分を組み込んでもよく；
○  Rxが反応性部分であり；かつ
○  -L-Rxが式IまたはIIの化合物中に存在する場合、RbおよびRb'の一方だけがL-Rxである、
請求項1に記載の化合物。
【請求項１６】
式Iの化合物であり、
式中、
・RaがHであり；
・Ra'がOHであり；
・Rbが存在せず；
・Rb'がL-Rxであり；
・R2、R2'、R3、R3'、R4、R4'、R5、R5'、R6'、R6、R7、およびR7'がそれぞれHであり；
・XがC1-12アルキレンであり；
・YおよびY'のそれぞれがOであり；
・ZおよびZ'のそれぞれが独立してORであり、ここで各Rが独立して無置換C1-C3アルキルであり；
・-L-Rxが、反応性部分Rxに結合したリンカーLであり；
ここで、
○  Lが、結合であるか、またはC、N、O、S、もしくはハロゲンより選択される1〜200個の非水素原子を有する部分であり、かつLが、エーテル、オキソ、カルボキサミジル、ウレタニル、分枝、環式、不飽和、ヘテロ環式、芳香族、またはヘテロ芳香族部分を組み込んでもよく；かつ
○  Rxが反応性部分である、
請求項1に記載の化合物。
【請求項１７】
式IIの化合物であり、
式中、
・RaおよびRa'のそれぞれが独立してHまたはOHであり；
・存在する場合、RbおよびRb'のそれぞれが独立してHまたはL-Rxであり；
・R2、R2'、R3、R4、R5、R6、R7、およびR7'がそれぞれHであり；
・R8が、
○  Hであり；または
○  構造
2018510163.tif 000134
を有するエキソオレフィンであり、ここでR8が結合している炭素が他の置換基を有せず；
XがC1-12アルキレンであり；
・YおよびY'のそれぞれがOであり；
・ZおよびZ'のそれぞれが独立してORであり、ここで各Rが独立して無置換C1-C3アルキルであり；
・-L-Rxが、反応性部分Rxに結合したリンカーLであり；
ここで、
○  Lが、結合であるか、またはC、N、O、S、もしくはハロゲンより選択される1〜200個の非水素原子を有する部分であり、かつLが、エーテル、オキソ、カルボキサミジル、ウレタニル、分枝、環式、不飽和、ヘテロ環式、芳香族、またはヘテロ芳香族部分を組み込んでもよく；
○  Rxが反応性部分であり；かつ
○  -L-Rxが式IまたはIIの化合物中に存在する場合、RbおよびRb'の一方だけがL-Rxである、
請求項1に記載の化合物。
【請求項１８】
式IIの化合物であり、
式中、
・RaおよびRa'のそれぞれがHであり；
・RbおよびRb'のそれぞれが存在せず；
・R2、R2'、R3、R4、R5、R6、R7、およびR7'がそれぞれHであり；
・R8がHであり；
・XがC1-12アルキレンであり；
・YおよびY'のそれぞれがOであり；かつ
・ZおよびZ'のそれぞれが独立してORであり、ここでRが独立して無置換C1-C3アルキルである、
請求項1に記載の化合物。
【請求項１９】
以下の構造：
2018510163.tif 000135
を有する、請求項1に記載の化合物。
【請求項２０】
以下の構造：
2018510163.tif 000136
を有し、Rb'が-L-Rxである、請求項1に記載の化合物。
【請求項２１】
以下の構造：
2018510163.tif 000137
を有する、請求項1に記載の化合物。
【請求項２２】
以下の構造：
2018510163.tif 000138
を有する、請求項1に記載の化合物。
【請求項２３】
以下の構造：
2018510163.tif 000139
を有する、請求項1に記載の化合物。
【請求項２４】
式（II）の化合物が、構造：
2018510163.tif 000140
を有する、請求項1に記載の化合物。
【請求項２５】
以下の構造：
2018510163.tif 000141
を有する、請求項1に記載の化合物。
【請求項２６】
以下の構造：
2018510163.tif 000142
を有する、請求項1に記載の化合物。
【請求項２７】
以下の構造：
2018510163.tif 000143
を有する、請求項1に記載の化合物。
【請求項２８】
式（II）の化合物が、構造：
2018510163.tif 000144
を有する、請求項1に記載の化合物。
【請求項２９】
以下の構造：
2018510163.tif 000145
を有する、請求項1に記載の化合物。
【請求項３０】
以下の構造：
2018510163.tif 000146
を有する、請求項1に記載の化合物。
【請求項３１】
以下の構造：
2018510163.tif 000147
を有する、請求項1に記載の化合物。
【請求項３２】
Rb、R5、R5'、R8、R9、R10、またはR11の1つが-L-Rxであり、ここでRxが、ジスルフィドによって標的結合物質のシステイン残基に連結する部分である、請求項1に記載の化合物。
【請求項３３】
Rb、R5、R5'、R8、R9、R10、またはR11の1つが-L-Rxであり、ここでRxが、マレイミドによって標的結合物質のシステイン残基に連結する部分である、請求項1に記載の化合物。
【請求項３４】
Rb、R5、R5'、R8、R9、R10、またはR11の1つが-L-Rxであり、ここでRxが、ジスルフィド結合の還元およびシステイン残基の架橋アルキル化により標的結合物質の2つのシステイン残基を連結する部分である、請求項1に記載の化合物。
【請求項３５】
Rb、R5、R5'、R8、R9、R10、またはR11の1つが-L-Rxであり、ここでRxが、スクシンイミド連結によって標的結合物質のリジン残基に連結する部分である、請求項1に記載の化合物。
【請求項３６】
Rb、R5、R5'、R8、R9、R10、またはR11の1つが-L-Rxであり、ここでRxが、標的結合物質の非天然アミノ酸残基に連結する部分である、請求項1に記載の化合物。
【請求項３７】
Rxが、銅フリーのクリックケミストリーによってp-アジドメチルフェニルアラニン残基に連結するシクロオクチン部分であるか、またはRxが、オキシム縮合によってp-アセチルフェニルアラニン残基に連結するアミノキシ部分である、請求項36に記載の化合物。
【請求項３８】
Rb、R5、R5'、R8、R9、R10、またはR11の1つが-L-Rxであり、ここでRxが、糖鎖工学によって標的結合物質のN-グリカンに連結する部分である、請求項1に記載の化合物。
【請求項３９】
Rxが、銅フリーのクリックケミストリーによって前記標的結合物質のアジド部分に連結するシクロオクチン部分であり、ここでアジド部分が、N-グリカンへのガラクトースおよび9-アジドシアル酸の酵素転移により操作されている、請求項38に記載の化合物。
【請求項４０】
Rxが、オキシム縮合によって前記標的結合物質のアルデヒド部分に連結するアミノキシ部分であり、ここでアルデヒドが、N-グリカンへのガラクトースおよびシアル酸の酵素転移とそれに続く過ヨウ素酸酸化により操作されている、請求項38に記載の化合物。
【請求項４１】
Rb、R5、R5'、R8、R9、R10、またはR11の1つが-L-Rxであり、ここでRxが、標的結合物質の操作されたグルタミンタグに連結する部分である、請求項1に記載の化合物。
【請求項４２】
Rxが、トランスグルタミナーゼ媒介結合により抗体のFc部分のQ295位および/またはN297Q位（EU Kabat番号付け）に連結する、請求項41に記載の化合物。
【請求項４３】
Rb、R5、R5'、R8、R9、R10、またはR11の1つが-L-Rxであり、ここでRxが、ホルミルグリシンへのシステインのホルミルグリシン酵素媒介変換とそれに続くヒドラジノ・ピクテ・スペングラー（HIP）反応によって生成されるアルデヒドタグに連結する部分である、請求項1に記載の化合物。
【請求項４４】
置換基-L-Scを有し、標的結合物質に共有結合している結合体である、請求項1に記載の化合物。
【請求項４５】
前記標的結合物質がタンパク質である、請求項44に記載の結合体。
【請求項４６】
前記タンパク質が抗体である、請求項44に記載の結合体。
【請求項４７】
前記タンパク質が抗体断片である、請求項44に記載の結合体。
【請求項４８】
前記タンパク質が単鎖可変断片抗体（「scFV」）である、請求項44に記載の結合体。
【請求項４９】
前記標的結合物質が、腫瘍関連抗原、がん幹細胞関連抗原、またはウイルス抗原に結合する、請求項44に記載の結合体。
【請求項５０】
前記標的結合物質が、急性骨髄性白血病（AML M4）細胞、急性前骨髄球性白血病細胞、急性リンパ芽球性白血病細胞、急性リンパ球性白血病細胞、慢性リンパ球性白血病細胞、慢性骨髄性白血病細胞、慢性T細胞リンパ球性白血病、骨髄異形成症候群細胞、多発性骨髄腫細胞、前立腺がん細胞、腎細胞腺がん細胞、膵臓腺がん細胞、肺がん細胞もしくは胃腺がん細胞、胃腺がん細胞、乳がん細胞、結腸がん細胞、黒色腫細胞、甲状腺がん細胞、卵巣がん細胞、膀胱がん細胞、肝臓がん細胞、頭頸部がん細胞、食道がん細胞、ホジキンリンパ腫細胞、非ホジキンリンパ腫細胞、中皮腫細胞、神経芽細胞腫細胞、神経内分泌腫瘍細胞、神経線維腫症1型（NF1）細胞、神経線維腫症2型（NF2）、または骨肉腫細胞より選択される標的に結合する、請求項44に記載の結合体。
【請求項５１】
前記標的結合物質が、GPR114、CLL-1、IL1RAP、TIM-3、CD19、CD20、CD22、ROR1、メソテリン、CD33、CD123/IL3Ra、c-Met、PSMA、前立腺酸性ホスファターゼ（PAP）、CEA、CA-125、Muc-1、AFP、糖脂質F77、EGFRvIII、GD-2、NY-ESO-1 TCR、チロシナーゼ、TRPI/gp75、gp100/pmel-17、メラン-A/MART-1、Her2/neu、WT1、EphA3、テロメラーゼ、HPV E6、HPV E7、EBNA1、BAGE、GAGEおよびMAGE A3 TCRSLITRK6、ENPP3、ネクチン-4、CD27、SLC44A4、CAIX、Cripto、CD30、MUC16、GPNMB、BCMA、Trop-2、組織因子（TF）、CanAg、EGFR、αv-インテグリン、CD37、葉酸受容体、CD138、CEACAM5、CD56、CD70、CD74、GCC、5T4、CD79b、Steap1、Napi2b、ルイスY抗原、LIV、c-RET、DLL3、EFNA4、エンドシアリン（Endosialin）/CD248より選択される標的に結合する、請求項44に記載の結合体。
【請求項５２】
前記標的結合物質が二重特異性抗体/抗体断片である、請求項44に記載の結合体。
【請求項５３】
前記二重特異性抗体/抗体断片が、GPR114、CLL-1、IL1RAP、TIM-3、CD19、CD20、CD22、ROR1、メソテリン、CD33、CD123/IL3Ra、c-Met、PSMA、前立腺酸性ホスファターゼ（PAP）、CEA、CA-125、Muc-1、AFP、糖脂質F77、EGFRvIII、GD-2、NY-ESO-1 TCR、チロシナーゼ、TRPI/gp75、gp100/pmel-17、メラン-A/MART-1、Her2/neu、WT1、EphA3、テロメラーゼ、HPV E6、HPV E7、EBNA1、BAGE、GAGEおよびMAGE A3 TCRSLITRK6、ENPP3、ネクチン-4、CD27、SLC44A4、CAIX、Cripto、CD30、MUC16、GPNMB、BCMA、Trop-2、組織因子（TF）、CanAg、EGFR、αv-インテグリン、CD37、葉酸受容体、CD138、CEACAM5、CD56、CD70、CD74、GCC、5T4、CD79b、Steap1、Napi2b、ルイスY抗原、LIV、c-RET、DLL3、EFNA4、エンドシアリン/CD248より選択される1つまたは2つの標的に結合する、請求項44に記載の結合体。
【請求項５４】
前記標的結合物質がヒト化抗体/抗体断片である、請求項44に記載の結合体。
【請求項５５】
前記標的結合物質がCLL-1に結合する、請求項44に記載の結合体。
【請求項５６】
標的結合抗体/抗体断片が、非天然システイン残基を含むように改変されている、請求項43に記載の結合体。
【請求項５７】
式IまたはIIの化合物が、前記非天然システイン残基において前記標的結合抗体/抗体断片に結合している、請求項55に記載の結合体。
【請求項５８】
がん性骨髄増殖性細胞および/または白血病がん幹細胞に特異的に結合しかつ正常な造血幹細胞には結合しない抗体/抗体断片を含む、抗体-薬物結合体。
【請求項５９】
前記抗体/抗体断片がヒト化されている、請求項58に記載の抗体-薬物結合体。
【請求項６０】
前記抗体/抗体断片が、非天然システイン残基を導入するように改変されている、請求項58に記載の抗体-薬物結合体。
【請求項６１】
前記薬物が前記非天然システイン残基に結合されている、請求項60に記載の抗体-薬物結合体。
【請求項６２】
前記薬物が、請求項1に記載の化合物である、請求項58に記載の抗体-薬物結合体。
【請求項６３】
抗体/抗体断片1つあたりに結合した薬物分子の数が約1〜約10個の範囲内である、請求項58に記載の抗体-薬物結合体。
【請求項６４】
抗体/抗体断片1つあたりに結合した薬物分子の数が約1〜約3個の範囲内である、請求項63に記載の抗体-薬物結合体。
【請求項６５】
式III：
2018510163.tif 000148
の構造を有する抗体-薬物結合体：
式中、
2018510163.tif 000149
は抗体または抗体断片であり；
W-RMはWおよびRxによって形成される連結部分であり、ここでWは抗体/抗体断片の天然または非天然アミノ酸残基に結合した部分であり、かつRxが、L-IQBを該抗体に連結している反応性部分であり；
Lはリンカーであり、ここでLは、結合であるか、またはC、N、O、S、もしくはハロゲンより選択される1〜200個の非水素原子を有する部分であり、かつLは、エーテル、オキソ、カルボキサミジル、ウレタニル、分枝、環式、不飽和、ヘテロ環式、芳香族、またはヘテロ芳香族部分を組み込んでもよく；
jは1〜10までの数であり；かつ
IQBは、式（I）または（II）：
2018510163.tif 000150
の構造を有する化合物であり、
式中、
・-C(Ra)-と-N(Rb)-との間または-C(Ra')-と-N(Rb')-との間に示される点線の結合は独立して一重結合または二重結合であり；
○  -C(Ra)-と-N(Rb)-との間に二重結合が存在する場合、-C(Ra)-はオレフィン性でありかつ置換基Raを有し、かつ-N(Rb)-のRbは存在せず；
○  -C(Ra)-と-N(Rb)-との間に一重結合が存在する場合、-C(Ra)-は飽和しており、かつRa置換基に加えて水素置換基も有し、かつ-N(Rb)-のRbは存在し；
○  -C(Ra')-と-N(Rb')-との間に二重結合が存在する場合、-C(Ra')-はオレフィン性でありかつ置換基Ra'を有し、かつ-N(Rb')-のRb'は存在せず；
○  -C(Ra')-と-N(Rb')-との間に一重結合が存在する場合、-C(Ra')-は飽和しており、かつRa'置換基に加えて水素置換基も有し、かつ-N(Rb')-のRb'は存在し；
・RaおよびRa'のそれぞれは独立してH、OH、または-O-Pであり、ここでPは保護基であり；
・存在する場合、RbおよびRb'のそれぞれは独立してHまたはLであり；
・R2、R2'、R3、R3'、R4、R4'、R6'、およびR6はそれぞれ独立してH、OH、C1-C10アルキル、C2-C10アルケニル、またはC2-C10アルキニルより選択され；
・R5またはR5'のそれぞれは独立してNH2、CO2H、H、OH C1-C10アルキル、C2-C10アルケニル、C2-C10アルキニル、または-Lであり；
・R7およびR7'のそれぞれはHであり；
・R8は、
○  H、NH2、CO2H、もしくは-Lであり、ここでR8が結合している炭素も水素置換基を有し；または
○  構造
2018510163.tif 000151
を有するエキソオレフィンであり、ここでR8が結合している炭素は他の置換基を有せず；
・Xは、
○  C1-12アルキレンであり、任意でここでアルキレン鎖が、O、S、およびNHからなる群より選択される1つもしくは複数のヘテロ原子により分断され；または
○  -(CH2)m-Q-(CH2)p-であり、ここでmおよびpがそれぞれ独立して0、1、もしくは2であり；
○  Qが式：
2018510163.tif 000152
の構造を有し；ここでR9、R10、およびR11のそれぞれが、H、NH2、CO2H、-Lであり；かつJがCHもしくはNであり；
・YおよびY'のそれぞれは独立してO、S、またはNHであり；
・ZおよびZ'のそれぞれは独立してH、R、OH、OR、SH、SR、NH2、またはNHRであり、ここで各Rは独立して無置換C1-C12アルキル、置換C1-C12アルキル、無置換C3-C20ヘテロシクリル、置換C3-C20ヘテロシクリル、無置換C6-C20アリール基、および無置換C6-C20アリール基であり；かつ
ここでRb、Rb'、R5、R5'、R8、R9、R10、およびR11の1つだけが-Lである。
【請求項６６】
式III：
2018510163.tif 000153
の構造を有し、
式中、
2018510163.tif 000154
が抗体または抗体断片であり；
W-RMがWおよびRxによって形成される連結部分であり、ここでWが抗体/抗体断片の天然または非天然アミノ酸残基に結合した部分であり、かつRxが、W-RMがジスルフィド、チオール化スクシンイミジル、アミノ置換スクシンイミジル、(シクロオクチル)-1,4トリアゾリル、オキシム置換N-グリカン、オキシム、置換ビス-スルホプロピル、スルホンアミジル、アミド、またはチオカルバメート部分であるように、スクシンイミジル、マレイミジル、シロオクチニル、アミノオキシ、ビスルホニル、スルホニル、またはイソチオアネート部分であり；
Lがリンカーであり、ここでLが、結合であるか、またはC、N、O、S、もしくはハロゲンより選択される1〜200個の非水素原子を有する部分であり、かつLが、エーテル、オキソ、カルボキサミジル、ウレタニル、分枝、環式、不飽和、ヘテロ環式、芳香族、またはヘテロ芳香族部分を組み込んでもよく；
jが1〜10までの数であり；かつ
IQBが、式（I）または（II）：
2018510163.tif 000155
の構造を有する化合物であり、
式中、
・-C(Ra)-と-N(Rb)-との間または-C(Ra')-と-N(Rb')-との間に示される点線の結合が独立して一重結合または二重結合であり；
・RaおよびRa'のそれぞれが独立してH、OH、または-O-Pであり、ここでPが保護基であり；
・RbおよびRb'のそれぞれが存在せず、または、RbおよびRb'のそれぞれが独立して、H、もしくは、リンカーLに連結された結合であり；
・R2、R2'、R3、R3'、R4、R4'、R6'、およびR6がそれぞれ独立してH、OH、C1-C10アルキル、C2-C10アルケニル、またはC2-C10アルキニルより選択され；
・R5またはR5'のそれぞれが独立して、NH2、CO2H、H、OH、C1-C10アルキル、C2-C10アルケニル、C2-C10アルキニル、または、リンカーLに連結された結合であり；
・R7およびR7'のそれぞれがHであり；
・R8が、
○  H、NH2、CO2H、もしくは、リンカーLに連結された結合であり、ここでR8が結合している炭素も水素置換基を有し；または
○  構造
2018510163.tif 000156
を有するエキソオレフィンであり、ここでR8が結合している炭素が他の置換基を有せず；
・Xが、
○  C1-12アルキレンであり、任意でここでアルキレン鎖が、O、S、およびNHからなる群より選択される1つもしくは複数のヘテロ原子により分断され；または
○  -(CH2)m-Q-(CH2)p-であり、ここでmおよびpがそれぞれ独立して0、1、もしくは2であり；
○  Qが式：
2018510163.tif 000157
の構造を有し；ここでR9、R10、およびR11のそれぞれが、H、NH2、CO2H、もしくは、リンカーLに連結された結合であり；かつJがCHもしくはNであり；
・YおよびY'のそれぞれが独立してO、S、またはNHであり；
・ZおよびZ'のそれぞれが独立してH、R、OH、OR、SH、SR、NH2、またはNHRであり、ここで各Rが独立して無置換C1-C12アルキル、置換C1-C12アルキル、無置換C3-C20ヘテロシクリル、置換C3-C20ヘテロシクリル、無置換C6-C20アリール基、および無置換C6-C20アリール基であり；かつ
ここでRb、Rb'、R5、R5'、R8、R9、R10、およびR11の1つだけが、リンカーLに連結された結合である、
請求項65に記載の抗体-薬物結合体。
【請求項６７】
Wが、前記抗体/抗体断片のアミノ酸残基に直接または間接的に連結されている、請求項65に記載の抗体-薬物結合体。
【請求項６８】
Rxが、スクシンイミジル、マレイミジル、シロオクチニル、アミノオキシ、ビスルホニル、スルホニル、またはイソチオシアネート部分である、請求項65に記載の抗体-薬物結合体。
【請求項６９】
W-RMが、ジスルフィド、チオール化スクシンイミジル、アミノ置換スクシンイミジル、(シクロオクチル)-1,4トリアゾリル、オキシム置換N-グリカン、オキシム、置換ビス-スルホプロピル、スルホンアミジル、アミド、またはチオカルバメート部分である、請求項65に記載の抗体-薬物結合体。
【請求項７０】
IQBが、構造：
2018510163.tif 000158
を有する部分である、請求項65に記載の抗体-薬物結合体。
【請求項７１】
-W-RM-L-IQBが、式IV：
2018510163.tif 000159
の構造を有する部分である、請求項65に記載の抗体-薬物結合体。
【請求項７２】
前記抗体/抗体断片がヒト化されている、請求項65に記載の抗体-薬物結合体。
【請求項７３】
前記抗体/抗体断片が、非天然システイン残基を導入するように改変されている、請求項65に記載の抗体-薬物結合体。
【請求項７４】
前記抗体または前記抗体断片が抗CLL1である、請求項65に記載の抗体-薬物結合体。
【請求項７５】
前記抗体/抗体断片が抗CLL1であり、かつIQBが、構造：
2018510163.tif 000160
を有する部分である、請求項65に記載の抗体-薬物結合体。
【請求項７６】
・前記抗体または前記抗体断片が抗CLL-1であり；
・W-RMがチオール化スクシンイミジルであり；かつ
・IQBが、構造：
2018510163.tif 000161
を有する部分である、
請求項65に記載の抗体-薬物結合体。
【請求項７７】
前記薬物が非天然システイン残基に結合されている、請求項65に記載の抗体-薬物結合体。
【請求項７８】
jが1〜3である、請求項65に記載の抗体-薬物結合体。
【請求項７９】
請求項1に記載の化合物、請求項44に記載の結合体、請求項58に記載の結合体、または請求項65に記載の結合体を含む、薬学的組成物。
【請求項８０】
医薬の製造における、請求項1に記載の化合物、請求項44に記載の結合体、請求項58に記載の結合体、または請求項65に記載の結合体の使用。
【請求項８１】
がんを有する対象に、請求項1に記載の化合物、請求項44に記載の結合体、請求項58に記載の結合体、または請求項65に記載の結合体の治療的有効量を投与する段階を含む、がんを処置する方法。
【請求項８２】
処置する前記がんが、白血病、リンパ腫、または固形腫瘍である、請求項81に記載の方法。
【請求項８３】
前記結合体が、腫瘍関連抗原にまたはがん幹細胞関連抗原に特異的に結合する抗体を含む、請求項81に記載の方法。
【請求項８４】
細胞を、請求項1に記載の化合物、請求項44に記載の結合体、請求項58に記載の結合体、または請求項65に記載の結合体と接触させる段階を含む、細胞分裂を阻害する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
連邦政府が支援する研究についての言及
なし。
【０００２】
関連出願の参照
本出願は、2015年3月19日提出の米国特許出願第62/135,380号に対する優先権を主張する、2016年2月19日提出の米国特許出願第15/048,865号の継続出願であり、それらはそれぞれその全体が参照により本明細書に組み入れられる。
【０００３】
配列表の提出についての言及
機械形式IBM-PC、オペレーティングシステムMS-Windowsで2016年2月5日に作成された1,868バイトのファイル0971543_ST25.txtに記載する配列表は、参照により本明細書に組み入れられる。
【背景技術】
【０００４】
発明の背景
ベンゾジアザピンは治療薬として用いられている。ベンゾジアゼピン誘導体には、ピロロベンゾジアゼピンが含まれる。ピロロベンゾジアゼピン二量体は、例えば、DNA分子の副溝において結合することにより、DNA架橋剤として機能する。これらのいくらかはがんの処置において抗増殖剤として提唱されている。
【０００５】
米国特許第8,592,576号（特許文献1）（Howard et al.）は、増殖性疾患の処置のために主張される非対称ピロロベンゾジアゼピン二量体に言及している。
【０００６】
国際公開公報第1993/18045号（特許文献2）は、細胞毒性を有すると主張されるピロロベンゾジアゼピン誘導体に言及している。
【０００７】
国際公開公報第2004/087716号（特許文献3）（Kamal et al.）は、抗腫瘍剤として有用であると主張されるピロロ(2,1-C)(1,4)ベンゾジアゼピン二量体に言及している。
【０００８】
米国特許第2008/0090812号（特許文献4）（Pepper et al.）は、白血病の処置のために有用であると主張されるピロロベンゾジアゼピン二量体に言及している。
【０００９】
米国特許第2013/0266596号（特許文献5）（Li et al.）は、抗増殖活性を有すると主張されるベンゾジアゼピン誘導体に言及している。
【００１０】
米国特許第2014/00888089号（特許文献6）（Chari）は、抗増殖活性を有すると主張されるベンゾジアゼピン誘導体に言及している。
【００１１】
Hartley, John A.; ''The development of Pyrrolobenzodiazepines as antitumour agents'', 2011, Expert Opinion on Investigational Drugs, 20(6), 733-744（非特許文献1）は、ピロロベンゾジアゼピンに言及している。
【００１２】
Brulikova, L. et al., ''DNA interstrand cross-linking agents and their chemotherapeutic potential'', Current Medicinal Chemistry, 2012, 19(3), 364-385（非特許文献2）は、DNA鎖間架橋剤に言及している。
【００１３】
Kamal et al., ''Design, Synthesis, and Evaluation of New Noncross-Linking Pyrrolobenzodiazepine Dimers with Efficient DNA Binding Ability and Potent Antitumor Activity'' J. Med. Chem., 2002, 45 (21), pp 4679-4688（非特許文献3）は、ピロロベンゾジアゼピン化学に言及している。
【００１４】
Tercel et al., ''Unsymmetrical DNA Cross-Linking Agents: Combination of the CBI and PBD Pharmacophores'' Journal of Medicinal Chemistry (2003), 46(11), 2132-2151（非特許文献4）は、ピロロベンゾジアゼピンに言及している。
【００１５】
この発明の背景において述べていることは引用した参照文献における特徴決定を保証することを必ずしも意味するものではない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１６】
【特許文献１】米国特許第8,592,576号
【特許文献２】国際公開公報第1993/18045号
【特許文献３】国際公開公報第2004/087716号
【特許文献４】米国特許第2008/0090812号
【特許文献５】米国特許第2013/0266596号
【特許文献６】米国特許第2014/00888089号
【非特許文献】
【００１７】
【非特許文献１】Hartley, John A.; ''The development of Pyrrolobenzodiazepines as antitumour agents'', 2011, Expert Opinion on Investigational Drugs, 20(6), 733-744
【非特許文献２】Brulikova, L. et al., ''DNA interstrand cross-linking agents and their chemotherapeutic potential'', Current Medicinal Chemistry, 2012, 19(3), 364-385
【非特許文献３】Kamal et al., ''Design, Synthesis, and Evaluation of New Noncross-Linking Pyrrolobenzodiazepine Dimers with Efficient DNA Binding Ability and Potent Antitumor Activity'' J. Med. Chem., 2002, 45 (21), pp 4679-4688
【非特許文献４】Tercel et al., ''Unsymmetrical DNA Cross-Linking Agents: Combination of the CBI and PBD Pharmacophores'' Journal of Medicinal Chemistry (2003), 46(11), 2132-2151
【発明の概要】
【００１８】
1つの局面において、式（I）または（II）：
2018510163.tif 000003
の構造を有する化合物が提供され、
式中、-C(Ra)-と-N(Rb)-との間または-C(Ra')-と-N(Rb')-との間に示される点線の結合は独立して一重結合または二重結合である。-C(Ra)-と-N(Rb)-との間に二重結合が存在する場合、-C(Ra)-はオレフィン性でありかつ置換基Raを有し、かつ-N(Rb)-のRbは存在しない。-C(Ra)-と-N(Rb)-との間に一重結合が存在する場合、-C(Ra)-は飽和しておりかつRa置換基に加えて水素置換基も有し、かつ-N(Rb)-のRbは存在する。-C(Ra')-と-N(Rb')-との間に二重結合が存在する場合、-C(Ra')-はオレフィン性でありかつ置換基Ra'を有し、かつ-N(Rb')-のRb'は存在しない。-C(Ra')-と-N(Rb')-との間に一重結合が存在する場合、-C(Ra')-は飽和しておりかつRa'置換基に加えて水素置換基も有し、かつ-N(Rb')-のRb'は存在する。
【００１９】
RaおよびRa'のそれぞれは独立してH、OH、または-O-Pであり、ここでPは保護基である。存在する場合、RbおよびRb'のそれぞれは独立してH、L-Rx、またはL-Scであり；R2、R2'、R3、R3'、R4、R4'、R6'、およびR6はそれぞれ独立してH、OH、C1-C10アルキル、C2-C10アルケニル、またはC2-C10アルキニルより選択され；かつR5またはR5'のそれぞれは独立してNH2、CO2H、H、OH C1-C10アルキル、C2-C10アルケニル、C2-C10アルキニル、-L-Rx、または-L-Scであり；R7およびR7'のそれぞれはHである。
【００２０】
R8はH、NH2、CO2H、-L-Rx、もしくは-L-Scであり、ここでR8が結合している炭素も水素置換基を有し；またはR8は、構造
2018510163.tif 000004
を有するエキソオレフィンであり、ここでR8が結合している炭素は他の置換基を有しない。
【００２１】
XはC1-12アルキレンであり、任意でここでアルキレン鎖が、O、S、およびNHからなる群より選択される1つもしくは複数のヘテロ原子により分断され；またはXは-(CH2)m-Q-(CH2)p-であり、ここでmおよびpがそれぞれ独立して0、1、もしくは2である。
【００２２】
Qは式：
2018510163.tif 000005
の構造を有し；ここでR9、R10、およびR11のそれぞれはH、NH2、CO2H、-L-Rx、または-L-Scであり；かつJはCHまたはNである。
【００２３】
YおよびY'のそれぞれは独立してO、S、またはNHであり；かつZおよびZ'のそれぞれは独立してH、R、OH、OR、SH、SR、NH2、またはNHRであり、ここで各Rは独立して無置換C1-C12アルキル、置換C1-C12アルキル、無置換C3-C20ヘテロシクリル、置換C3-C20ヘテロシクリル、無置換C6-C20アリール基、および無置換C6-C20アリール基である。
【００２４】
-L-Rxは反応性部分Rxに結合したリンカーLであり、かつ-L-Scは物質Scに結合したリンカーLであり；ここでLは、結合であるか、またはC、N、O、S、もしくはハロゲンより選択される1〜200個の非水素原子を有する部分であり、かつLは、エーテル、オキソ、カルボキサミジル、ウレタニル、分枝、環式、不飽和、ヘテロ環式、芳香族、またはヘテロ芳香族部分を組み込んでもよく；Rxは反応性部分であり；Scはタンパク質、タンパク質の一部、ペプチド、または核酸より選択される標的結合物質であり；かつ-L-Rxまたは-L-Scが式IまたはIIの化合物中に存在する場合、Rb、Rb'、R5、R5'、R8、R9、R10、およびR11の1つだけがL-Rxまたは-L-Scである。
【００２５】
いくつかの態様において、YおよびY'はそれぞれOであってもよい。他の態様において、ZおよびZ'はそれぞれ独立してC1-C3アルコキシより選択されてもよい。いくつかの態様において、ZおよびZ'はそれぞれ独立してORであり、ここでRはそれぞれ独立して無置換C1-C3アルキルである。様々な態様において、Xは-CH2-であってもよい。いくつかの態様において、XはQであってもよい。いくつかの態様において、XがQである場合、JはCHであってもよい。
【００２６】
様々な態様において、R9、R10、またはR11の1つは-L-Rxまたは-L-Scであってもよい。
【００２７】
いくつかの態様において、化合物は式Iの構造を有してもよく、R5またはR5'の一方は-L-Rxまたは-L-Scであってもよい。他の態様において、化合物は式IIの構造を有してもよく、R5またはR8の一方は-L-Rxまたは-L-Scであってもよい。または、化合物は式Iの構造を有してもよく、RbまたはRb'の一方は-L-Rxまたは-L-Scであってもよい。さらに他の態様において、化合物は式IIの構造を有してもよく、RbまたはRb'の一方は-L-Rxまたは-L-Scであってもよい。
【００２８】
いくつかの態様において、化合物は式IまたはIIの化合物であり、ここでRaおよびRa'のそれぞれは独立してHまたはOHであり；存在する場合、RbおよびRb'のそれぞれは独立してHまたはL-Rxであり；R2、R2'、R3、R3'、R4、R4'、R5、R5'、R6'、R6、R7、およびR7'はそれぞれHであり；R8は、Hであり；または構造
2018510163.tif 000006
を有するエキソオレフィンであり、ここでR8が結合している炭素は他の置換基を有せず；XはC1-12アルキレンであり；YおよびY'のそれぞれはOであり；ZおよびZ'のそれぞれは独立してORであり、ここで各Rは独立して無置換C1-C3アルキルであり；-L-Rxは反応性部分Rxに結合したリンカーLであり；ここでLは、結合であるか、またはC、N、O、S、もしくはハロゲンより選択される1〜200個の非水素原子を有する部分であり、かつLは、エーテル、オキソ、カルボキサミジル、ウレタニル、分枝、環式、不飽和、ヘテロ環式、芳香族、またはヘテロ芳香族部分を組み込んでもよく；Rxは反応性部分であり；かつ-L-Rxが式IまたはIIの化合物中に存在する場合、RbおよびRb'の一方だけがL-Rxである。
【００２９】
いくつかの態様において、化合物は式IまたはIIの化合物であり、ここでRaおよびRa'のそれぞれは独立してHまたはOHであり；存在する場合、RbおよびRb'のそれぞれは独立してHまたはL-Rxであり；R2、R2'、R3、R3'、R4、R4'、R5、R5'、R6'、R6、R7、およびR7'はそれぞれHであり；XはC1-12アルキレンであり；YおよびY'のそれぞれはOであり；ZおよびZ'のそれぞれは独立してORであり、ここで各Rは独立して無置換C1-C3アルキルであり；-L-Rxは反応性部分Rxに結合したリンカーLであり；ここでLは、結合であるか、またはC、N、O、S、もしくはハロゲンより選択される1〜200個の非水素原子を有する部分であり、かつLは、エーテル、オキソ、カルボキサミジル、ウレタニル、分枝、環式、不飽和、ヘテロ環式、芳香族、またはヘテロ芳香族部分を組み込んでもよく；Rxは反応性部分であり；かつ-L-Rxが式IまたはIIの化合物中に存在する場合、RbおよびRb'の一方だけがL-Rxである。
【００３０】
いくつかの態様において、化合物は式IまたはIIの化合物であり、ここでRaはHであり；Ra'はOHであり；Rbは存在せず；Rb'はL-Rxであり；R2、R2'、R3、R3'、R4、R4'、R5、R5'、R6'、R6、R7、およびR7'はそれぞれHであり；XはC1-12アルキレンであり；YおよびY'のそれぞれはOであり；ZおよびZ'のそれぞれは独立してORであり、ここで各Rは独立して無置換C1-C3アルキルであり；-L-Rxは反応性部分Rxに結合したリンカーLであり；ここでLは、結合であるか、またはC、N、O、S、もしくはハロゲンより選択される1〜200個の非水素原子を有する部分であり、かつLは、エーテル、オキソ、カルボキサミジル、ウレタニル、分枝、環式、不飽和、ヘテロ環式、芳香族、またはヘテロ芳香族部分を組み込んでもよく；Rxは反応性部分である。
【００３１】
いくつかの態様において、化合物は式IまたはIIの化合物であり、ここでRaおよびRa'のそれぞれは独立してHまたはOHであり；存在する場合、RbおよびRb'のそれぞれは独立してH、L-Rxであり；R2、R2'、R3、R4、R5、R6、R7、およびR7'はそれぞれHであり；R8は、Hであり；または構造
2018510163.tif 000007
を有するエキソオレフィンであり、ここでR8が結合している炭素は他の置換基を有せず；XはC1-12アルキレンであり；YおよびY'のそれぞれはOであり；ZおよびZ'のそれぞれは独立してORであり、ここで各Rは独立して無置換C1-C3アルキルであり；-L-Rxは反応性部分Rxに結合したリンカーLであり；ここでLは、結合であるか、またはC、N、O、S、もしくはハロゲンより選択される1〜200個の非水素原子を有する部分であり、かつLは、エーテル、オキソ、カルボキサミジル、ウレタニル、分枝、環式、不飽和、ヘテロ環式、芳香族、またはヘテロ芳香族部分を組み込んでもよく；Rxは反応性部分であり；かつ-L-Rxが式IまたはIIの化合物中に存在する場合、RbおよびRb'の一方だけがL-Rxである。
【００３２】
いくつかの態様において、化合物は式IまたはIIの化合物であり、ここでRaおよびRa'のそれぞれはHであり；RbおよびRb'のそれぞれは存在せず；R2、R2'、R3、R4、R5、R6、R7、およびR7'はそれぞれHであり；R8はHであり；XはC1-12アルキレンであり；YおよびY'のそれぞれはOであり；かつZおよびZ'のそれぞれは独立してORであり、ここで各Rは独立して無置換C1-C3アルキルである。
【００３３】
いくつかの態様において、式IまたはIIの化合物は以下の式：
2018510163.tif 000008
2018510163.tif 000009
2018510163.tif 000010
2018510163.tif 000011
のうちの1つの構造を有する。
【００３４】
いくつかの態様において、式IまたはIIの化合物は以下の式：
2018510163.tif 000012
のうちの1つの構造を有する。
【００３５】
いくつかの態様において、式Iの化合物は以下の式：
2018510163.tif 000013
のうちの1つの構造を有する。
【００３６】
いくつかの態様において、式IIの化合物は以下の式：
2018510163.tif 000014
のうちの1つの構造を有する。
【００３７】
いくつかの態様において、Rb、R5、R5'、R8、R9、R10、またはR11の1つは-L-Rxであってもよく、ここでRxはジスルフィドによって標的結合物質のシステイン残基に連結する部分であってもよい。他の態様において、Rb、R5、R5'、R8、R9、R10、またはR11の1つは-L-Rxであり、ここでRxはマレイミドによって標的結合物質のシステイン残基に連結する部分であってもよい。さらに他の態様において、Rb、R5、R5'、R8、R9、R10、またはR11の1つは-L-Rxであり、ここでRxは、ジスルフィド結合の還元およびシステイン残基の架橋アルキル化により、例えば、ビススルホン試薬、ジチオピリジルマレイミドまたはジブロモマレイエミドを通じて連結することにより、標的結合物質の2つのシステイン残基を連結する部分であってもよい。さらに他の態様において、Rb、R5、R5'、R8、R9、R10、またはR11の1つは-L-Rxであり、ここでRxは、ジスルフィド結合の還元およびシステイン残基の架橋アルキル化により標的結合物質の2つのシステイン残基を連結する部分であってもよい。いくつかの態様において、Rb、R5、R5'、R8、R9、R10、またはR11の1つは-L-Rxであってもよく、ここでRxはスクシンイミド連結によって標的結合物質のリジン残基に連結する部分であってもよい。
【００３８】
他の態様において、Rb、R5、R5'、R8、R9、R10、またはR11の1つは-L-Rxであってもよく、ここでRxは標的結合物質の非天然アミノ酸残基に連結する部分であってもよい。いくつかの態様において、Rxが標的結合物質の非天然アミノ酸残基に連結する部分である場合、Rxは、銅フリーのクリックケミストリーによってp-アジドメチルフェニルアラニン残基に連結するシクロオクチン部分であってもよく、またはRxは、オキシム縮合によってp-アセチルフェニルアラニン残基に連結するアミノキシ部分であってもよい。
【００３９】
いくつかの態様において、Rb、R5、R5'、R8、R9、R10、またはR11の1つは-L-Rxであってもよく、ここでRxは糖鎖工学によって標的結合物質のN-グリカンに連結する部分であってもよい。いくつかの態様において、Rxが糖鎖工学によって標的結合物質のN-グリカンに連結する部分である場合、Rxは、銅フリーのクリックケミストリーによって標的結合物質のアジド部分に連結するシクロオクチン部分であってもよく、ここでアジド部分はN-グリカンへのガラクトースおよび9-アジドシアル酸の酵素転移により操作される。他の態様において、Rxが糖鎖工学によって標的結合物質のN-グリカンに連結する部分である場合、Rxは、オキシム縮合によって標的結合物質のアルデヒド部分に連結するアミノキシ部分であってもよく、ここでアルデヒドは、N-グリカンへのガラクトースおよびシアル酸の酵素転移とそれに続く過ヨウ素酸酸化により操作される。
【００４０】
いくつかの態様において、Rb、R5、R5'、R8、R9、R10、またはR11の1つは-L-Rxであってもよく、ここでRxは標的結合物質の操作されたグルタミンタグに連結する部分であってもよい。いくつかの態様において、Rxが標的結合物質の操作されたグルタミンタグに連結する部分である場合、Rxは、トランスグルタミナーゼ媒介結合により抗体のFc部分のQ295位および/またはN297Q位（EU Kabat番号付け）に連結する。
【００４１】
他の態様において、Rb、R5、R5'、R8、R9、R10、またはR11の1つは-L-Rxであってもよく、ここでRxは、ホルミルグリシンへのシステインのホルミルグリシン酵素媒介変換とそれに続くヒドラジノ・ピクテ・スペングラー（HIP）反応によって生成されるアルデヒドタグに連結する部分であってもよい。
【００４２】
様々な態様において、式IまたはIIの化合物は、置換基-L-Scを有してもよく、標的結合物質に共有結合している結合体である。いくつかの態様において、標的結合物質はタンパク質であってもよい。例えば、式（I）または（II）を有する化合物は、示された位置に置換基-L-Scを含み得、ここでScは標的結合物質である。いくつかの態様において、いくつかの態様において、標的結合物質がタンパク質である場合、タンパク質は抗体であってもよい。いくつかの態様において、標的結合物質がタンパク質である場合、タンパク質は抗体断片であってもよい。他の態様において、標的結合物質がタンパク質である場合、タンパク質は単鎖可変断片抗体（「scFV」）であってもよい。
【００４３】
いくつかの態様において、式IまたはIIの化合物が-L-Scを有する結合体である場合、標的結合物質は、腫瘍関連抗原、がん幹細胞関連抗原、またはウイルス抗原に結合してもよい。
【００４４】
他の態様において、式IまたはIIの化合物が-L-Scを有する結合体である場合、標的結合物質は、急性骨髄性白血病（AML M4）細胞、急性前骨髄球性白血病細胞、急性リンパ芽球性白血病細胞、急性リンパ球性白血病細胞白血病細胞、慢性リンパ球性白血病細胞、慢性骨髄性白血病細胞、慢性T細胞リンパ球性白血病、骨髄異形成症候群細胞、多発性骨髄腫細胞、前立腺がん細胞、腎細胞腺がん細胞、膵臓腺がん細胞、肺がん細胞もしくは胃腺がん細胞、胃腺がん細胞、乳がん細胞、結腸がん細胞、黒色腫細胞、甲状腺がん細胞、卵巣がん細胞、膀胱がん細胞、肝臓がん細胞、頭頸部がん細胞、食道がん細胞、ホジキンリンパ腫細胞、非ホジキンリンパ腫細胞、中皮腫細胞、神経芽細胞腫細胞、神経内分泌腫瘍細胞、神経線維腫症1型（NF1）細胞、神経線維腫症2型（NF2）、または骨肉腫細胞より選択される標的に結合してもよい。
【００４５】
他の態様において、式IまたはIIの化合物が-L-Scを有する結合体である場合、標的結合物質は、GPR114、CLL-1、IL1RAP、TIM-3、CD19、CD20、CD22、ROR1、メソテリン、CD33、CD123/IL3Ra、c-Met、PSMA、前立腺酸性ホスファターゼ（PAP）、CEA、CA-125、Muc-1、AFP、糖脂質F77、EGFRvIII、GD-2、NY-ESO-1 TCR、チロシナーゼ、TRPI/gp75、gp100/pmel-17、メラン-A/MART-1、Her2/neu、WT1、EphA3、テロメラーゼ、HPV E6、HPV E7、EBNA1、BAGE、GAGEおよびMAGE A3 TCRSLITRK6、ENPP3、ネクチン-4、CD27、SLC44A4、CAIX、Cripto、CD30、MUC16、GPNMB、BCMA、Trop-2、組織因子（TF）、CanAg、EGFR、αv-インテグリン、CD37、葉酸受容体、CD138、CEACAM5、CD56、CD70、CD74、GCC、5T4、CD79b、Steap1、Napi2b、ルイスY抗原、LIV c-RET、DLL3、EFNA4、エンドシアリン（Endosialin）/CD248より選択される標的に結合してもよい。
【００４６】
他の態様において、式IまたはIIの化合物が-L-Scを有する結合体である場合、標的結合物質は二重特異性抗体/抗体断片であってもよい。いくつかの態様において、標的結合物質が二重特異性抗体/抗体断片である場合、二重特異性抗体/抗体断片はGPR114、CLL-1、IL1RAP、TIM-3、CD19、CD20、CD22、ROR1、メソテリン、CD33、CD123/IL3Ra、c-Met、PSMA、前立腺酸性ホスファターゼ（PAP）、CEA、CA-125、Muc-1、AFP、糖脂質F77、EGFRvIII、GD-2、NY-ESO-1 TCR、チロシナーゼ、TRPI/gp75、gp100/pmel-17、メラン-A/MART-1、Her2/neu、WT1、EphA3、テロメラーゼ、HPV E6、HPV E7、EBNA1、BAGE、GAGEおよびMAGE A3 TCRSLITRK6、ENPP3、ネクチン-4、CD27、SLC44A4、CAIX、Cripto、CD30、MUC16、GPNMB、BCMA、Trop-2、組織因子（TF）、CanAg、EGFR、αv-インテグリン、CD37、葉酸受容体、CD138、CEACAM5、CD56、CD70、CD74、GCC、5T4、CD79b、Steap1、Napi2b、ルイスY抗原、LIV、c-RET、DLL3、EFNA4、エンドシアリン/CD248より選択される1つまたは2つの標的に結合してもよい。別の態様において、標的結合物質はヒト化抗体/抗体断片である。別の態様において、標的結合抗体/抗体断片は非天然システイン残基を含むように改変されている。別の態様において、式IまたはIIの化合物は非天然システイン残基において標的結合抗体/抗体断片に結合している。
【００４７】
別の局面において、本開示は、がん性骨髄増殖性細胞および/または白血病がん幹細胞に特異的に結合しかつ正常な造血幹細胞には結合しない抗体/抗体断片を含む、抗体-薬物結合体を提供する。1つの態様において、抗体/抗体断片はヒト化されている。別の態様において、抗体/抗体断片は非天然システイン残基を導入するように改変されている。別の態様において、薬物は非天然システイン残基に結合されている。別の態様において、薬物は本明細書における式（I）または（II）の構造を有する化合物である。別の態様において、抗体/抗体断片1つあたりに結合した薬物分子の数は、約1〜約10個の範囲内である。別の態様において、抗体/抗体断片1つあたりに結合した薬物分子の数は、約1〜約3個の範囲内である。
【００４８】
式III：
2018510163.tif 000015
の構造を有する抗体-薬物結合体：
式中、
2018510163.tif 000016
は抗体または抗体断片であり；
W-RMはWおよびRxによって形成される連結部分であり、ここでWは抗体/抗体断片の天然または非天然アミノ酸残基に結合した部分であり、かつRxはL-IQBを抗体に連結している反応性部分であり；Lはリンカーであり、ここでLは、結合であるか、またはC、N、O、S、もしくはハロゲンより選択される1〜200個の非水素原子を有する部分であり、かつLは、エーテル、オキソ、カルボキサミジル、ウレタニル、分枝、環式、不飽和、ヘテロ環式、芳香族、またはヘテロ芳香族部分を組み込んでもよく；jは1〜10までの数であり；かつIQBは、式（I）または（II）：
2018510163.tif 000017
の構造を有する化合物であり、
式中、-C(Ra)-と-N(Rb)-との間または-C(Ra')-と-N(Rb')-との間に示される点線の結合は独立して一重結合または二重結合であり；-C(Ra)-と-N(Rb)-との間に二重結合が存在する場合、-C(Ra)-はオレフィン性でありかつ置換基Raを有し、かつ-N(Rb)-のRbは存在せず；-C(Ra)-と-N(Rb)-との間に一重結合が存在する場合、-C(Ra)-は飽和しており、かつRa置換基に加えて水素置換基も有し、かつ-N(Rb)-のRbは存在し；-C(Ra')-と-N(Rb')-との間に二重結合が存在する場合、-C(Ra')-はオレフィン性でありかつ置換基Ra'を有し、かつ-N(Rb')-のRb'は存在せず；-C(Ra')-と-N(Rb')-との間に一重結合が存在する場合、-C(Ra')-は飽和しており、かつRa'置換基に加えて水素置換基も有し、かつ-N(Rb')-のRb'は存在し；RaおよびRa'のそれぞれは独立してH、OH、または-O-Pであり、ここでPは保護基であり；存在する場合、RbおよびRb'のそれぞれは独立してHまたはLであり；R2、R2'、R3、R3'、R4、R4'、R6'、およびR6はそれぞれ独立してH、OH、C1-C10アルキル、C2-C10アルケニル、またはC2-C10アルキニルより選択され；R5またはR5'のそれぞれは独立してNH2、CO2H、H、OH C1-C10アルキル、C2-C10アルケニル、C2-C10アルキニル、-Lであり；R7およびR7'のそれぞれはHであり；R8は、H、NH2、CO2H、または-Lであり、ここでR8が結合している炭素も水素置換基を有し；または、R8は構造
2018510163.tif 000018
を有するエキソオレフィンであり、ここでR8が結合している炭素は他の置換基を有せず；XはC1-12アルキレンであり、任意でここでアルキレン鎖が、O、S、およびNHからなる群より選択される1つもしくは複数のヘテロ原子により分断され；または、Xは-(CH2)m-Q-(CH2)p-であり、ここでmおよびpがそれぞれ独立して0、1、もしくは2であり；Qは式：
2018510163.tif 000019
の構造を有し；ここでR9、R10、およびR11のそれぞれがH、NH2、CO2H、-Lであり；かつJがCHまたはNであり；YおよびY'のそれぞれは独立してO、S、またはNHであり；ZおよびZ'のそれぞれは独立してH、R、OH、OR、SH、SR、NH2、またはNHRであり、ここで各Rは独立して無置換C1-C12アルキル、置換C1-C12アルキル、無置換C3-C20ヘテロシクリル、置換C3-C20ヘテロシクリル、無置換C6-C20アリール基、および無置換C6-C20アリール基であり；かつここでRb、Rb'、R5、R5'、R8、R9、R10、およびR11の1つだけが-Lである。
【００４９】
式III：
2018510163.tif 000020
の構造を有する抗体-薬物結合体：
式中、
2018510163.tif 000021
は抗体または抗体断片であり；
W-RMはWおよびRxによって形成される連結部分であり、ここでWは抗体/抗体断片の天然または非天然アミノ酸残基に結合した部分であり、かつRxは、W-RMがジスルフィド、チオール化スクシンイミジル、アミノ置換スクシンイミジル、(シクロオクチル)-1,4トリアゾリル、オキシム置換N-グリカン、オキシム、置換ビス-スルホプロピル、スルホンアミジル、アミド、またはチオカルバメート部分であるように、スクシンイミジル、マレイミジル、シロオクチニル、アミノオキシ、ビスルホニル、スルホニル、またはイソチオアネート部分であり；Lはリンカーであり、ここでLは、結合であるか、またはC、N、O、S、もしくはハロゲンより選択される1〜200個の非水素原子を有する部分であり、かつLは、エーテル、オキソ、カルボキサミジル、ウレタニル、分枝、環式、不飽和、ヘテロ環式、芳香族、またはヘテロ芳香族部分を組み込んでもよく；jは1〜10までの数であり；かつIQBは、式（I）または（II）：
2018510163.tif 000022
の構造を有する化合物であり、
式中、-C(Ra)-と-N(Rb)-との間または-C(Ra')-と-N(Rb')-との間に示される点線の結合は独立して一重結合または二重結合であり；RaおよびRa'のそれぞれは独立してH、OH、または-O-Pであり、ここでPは保護基であり；存在する場合、RbおよびRb'のそれぞれは独立して、H、または、リンカーLに連結された結合であり；R2、R2'、R3、R3'、R4、R4'、R6'、およびR6はそれぞれ独立してH、OH、C1-C10アルキル、C2-C10アルケニル、またはC2-C10アルキニルより選択され；R5またはR5'のそれぞれは独立して、NH2、CO2H、H、OH C1-C10アルキル、C2-C10アルケニル、C2-C10アルキニル、リンカーLに連結された結合であり；R7およびR7'のそれぞれはHであり；R8は、H、NH2、CO2H、または、リンカーLに連結された結合であり、ここでR8が結合している炭素も、水素置換基を有し；または、R8は構造
2018510163.tif 000023
を有するエキソオレフィンであり、ここでR8が結合している炭素は他の置換基を有せず；XはC1-12アルキレンであり、任意でここでアルキレン鎖が、O、S、およびNHからなる群より選択される1つもしくは複数のヘテロ原子により分断され；または、Xは-(CH2)m-Q-(CH2)p-であり、ここでmおよびpがそれぞれ独立して0、1、もしくは2であり；Qは式：
2018510163.tif 000024
の構造を有し；ここでR9、R10、およびR11のそれぞれが、H、NH2、CO2H、リンカーLに連結された結合であり；かつJがCHまたはNであり；YおよびY'のそれぞれは独立してO、S、またはNHであり；ZおよびZ'のそれぞれは独立してH、R、OH、OR、SH、SR、NH2、またはNHRであり、ここで各Rは独立して無置換C1-C12アルキル、置換C1-C12アルキル、無置換C3-C20ヘテロシクリル、置換C3-C20ヘテロシクリル、無置換C6-C20アリール基、および無置換C6-C20アリール基であり；かつここでRb、Rb'、R5、R5'、R8、R9、R10、およびR11の1つだけが、リンカーLに連結された結合である。
【００５０】
抗体-薬物結合体の1つの態様において、Wは抗体/抗体断片のアミノ酸残基に直接または間接的に結合している。別の態様において、Rxは、スクシンイミジル、マレイミジル、シロオクチニル、アミノオキシ、ビスルホニル、スルホニル、またはイソチオシアネート部分である。別の態様において、W-RMはジスルフィド、チオール化スクシンイミジル、アミノ置換スクシンイミジル、(シクロオクチル)-1,4トリアゾリル、オキシム置換N-グリカン、オキシム、置換ビス-スルホプロピル、スルホンアミジル、アミド、またはチオカルバメート部分である。別の態様において、-W-RM-L-IQBは、式IV：
2018510163.tif 000025
の構造を有する部分である。別の態様において、抗体/抗体断片はヒト化されている。別の態様において、抗体/抗体断片は非天然システイン残基を導入するように改変されている。別の態様において、薬物は非天然システイン残基に結合されている。jは1〜3である。
【００５１】
別の局面において、式IまたはII：
2018510163.tif 000026
の化合物を含む薬学的組成物が提供され、
式中、-C(Ra)-と-N(Rb)-との間または-C(Ra')-と-N(Rb')-との間に示される点線の結合は独立して一重結合または二重結合である。-C(Ra)-と-N(Rb)-との間に二重結合が存在する場合、-C(Ra)-はオレフィン性でありかつ置換基Raを有し、かつ-N(Rb)-のRbは存在しない。-C(Ra)-と-N(Rb)-との間に一重結合が存在する場合、-C(Ra)-は飽和しており、かつRa置換基に加えて水素置換基も有し、かつ-N(Rb)-のRbは存在する。-C(Ra')-と-N(Rb')-との間に二重結合が存在する場合、-C(Ra')-はオレフィン性でありかつ置換基Ra'を有し、かつ-N(Rb')-のRb'は存在しない。-C(Ra')-と-N(Rb')-との間に一重結合が存在する場合、-C(Ra')-は飽和しており、かつRa'置換基に加えて水素置換基も有し、かつ-N(Rb')-のRb'は存在する。
【００５２】
RaおよびRa'のそれぞれは独立してH、OH、または-O-Pであり、ここでPは保護基である。存在する場合、RbおよびRb'のそれぞれは独立してH、L-Rx、またはL-Scであり；R2、R2'、R3、R3'、R4、R4'、R6'、およびR6はそれぞれ独立してH、OH、C1-C10アルキル、C2-C10アルケニル、またはC2-C10アルキニルより選択され；かつR5またはR5'のそれぞれは独立してNH2、CO2H、H、OH C1-C10アルキル、C2-C10アルケニル、C2-C10アルキニル、-L-Rx、または-L-Scであり；R7およびR7'のそれぞれはHである。
【００５３】
R8はH、NH2、CO2H、-L-Rx、または-L-Scであり、ここでR8が結合している炭素も水素置換基を有し；またはR8は構造
2018510163.tif 000027
を有するエキソオレフィンであり、ここでR8が結合している炭素は他の置換基を有しない。
【００５４】
XはC1-12アルキレンであり、任意でここでアルキレン鎖が、O、S、およびNHからなる群より選択される1つもしくは複数のヘテロ原子により分断され；またはXは-(CH2)m-Q-(CH2)p-であり、ここでmおよびpがそれぞれ独立して0、1、もしくは2である。
【００５５】
Qは式：
2018510163.tif 000028
の構造を有し；ここでR9、R10、およびR11のそれぞれはH、NH2、CO2H、-L-Rx、または-L-Scであり；かつJはCHまたはNである。
【００５６】
YおよびY'のそれぞれは独立してO、S、またはNHであり；かつZおよびZ'のそれぞれは独立してH、R、OH、OR、SH、SR、NH2、またはNHRであり、ここで各Rは独立して無置換C1-C12アルキル、置換C1-C12アルキル、無置換C3-C20ヘテロシクリル、置換C3-C20ヘテロシクリル、無置換C6-C20アリール基、および無置換C6-C20アリール基である。
【００５７】
-L-Rxは反応性部分Rxに結合したリンカーLであり、かつ-L-Scは物質Scに結合したリンカーLであり；ここでLは、結合であるか、またはC、N、O、S、もしくはハロゲンより選択される1〜200個の非水素原子を有する部分であり、かつLは、エーテル、オキソ、カルボキサミジル、ウレタニル、分枝、環式、不飽和、ヘテロ環式、芳香族、またはヘテロ芳香族部分を組み込んでもよく；Rxは反応性部分であり；Scはタンパク質、タンパク質の一部、ペプチド、または核酸より選択される標的結合物質であり；かつ-L-Rxまたは-L-Scが式IまたはIIの化合物中に存在する場合、Rb、Rb'、R5、R5'、R8、R9、R10、およびR11の1つだけがL-Rxまたは-L-Scである。
【００５８】
さらに別の局面において、本明細書に記載の式IまたはIIの化合物を含む薬学的組成物であって、化合物が、置換基-L-Scを有し、標的結合物質に共有結合している本開示の結合体である、薬学的組成物が提供される。
【００５９】
さらなる局面において、医薬の製造における、本明細書に記載の置換基-L-Scを有する、本明細書に記載の式IもしくはIIの化合物、または式IもしくはIIの化合物を含む本開示の結合体の使用が提供される。
【００６０】
別の局面において、本明細書において提供されるのは、がん細胞を接触させ、がんを有する対象に、本明細書において提供する式（I）もしくは（II）の化合物、または本明細書において提供するその結合体の治療的有効量を投与する段階を含む、がんを処置する方法である。1つの態様において、処置するがんは白血病、リンパ腫または固形腫瘍である。別の態様において、結合体は腫瘍関連抗原にまたはがん幹細胞関連抗原に特異的に結合する抗体を含む。
【００６１】
別の局面において、本明細書において提供されるのは、細胞を、本明細書において提供する式（I）もしくは（II）の化合物、または本明細書において提供するその結合体と接触させる段階を含む、細胞分裂を阻害する方法である。
【００６２】
本開示の他の目的は、当業者には以下の明細書および特許請求の範囲を読めば明らかであろう。
【図面の簡単な説明】
【００６３】
本開示の新規特徴を、添付の特許請求の範囲における特殊性と共に示す。本開示の原理を用いる、例示的態様を示す以下の詳細な説明、および添付の図面を参照することにより、本開示の特徴および利点のより良い理解が得られるであろう。
【図１】一般式Iおよび一般式IIを示す。
【図２】リンカー部分Rb、Rb'、R5、R5'、およびXを示す。
【図３】CLT-D201の化学合成のための実験スキームを示す。
【図４】CLT-D501の化学合成のための実験スキームを示す。
【図５】CLT-D601の化学合成のための実験スキームを示す。
【図６】CLT-D501の合成における中間体の化学合成のための実験スキームを示す。
【図７Ａ】リンカー合成を含む、CLT-D202の化学合成のための実験スキームを示す。
【図７Ｂ】リンカー合成を含む、CLT-D202の化学合成のための実験スキームを示す。
【図７Ｃ】リンカー合成を含む、CLT-D202の化学合成のための実験スキームを示す。
【図８】CLT-D203の化学合成のための実験スキームを示す。
【図９Ａ】CLT-D204の化学合成のための実験スキームを示す。
【図９Ｂ】CLT-D204の化学合成のための実験スキームを示す。
【図１０】様々なIQBペイロード（IQB Payload）の白血病細胞株に対する細胞毒性を示す。
【図１１】リンパ腫細胞株CA46に対するIQBペイロードの細胞毒性を示す。
【図１２】様々なIQBペイロードの白血病およびリンパ腫細胞株に対するGI50値（pg/mL）を示す。
【図１３】様々なIQBペイロードの固形腫瘍細胞株に対する細胞毒性を示す。
【図１４】様々なIQBペイロードの固形腫瘍細胞株に対する細胞毒性を示す。
【図１５】様々なIQBペイロードの固形腫瘍細胞株に対する細胞毒性を示す。
【図１６】様々なIQBペイロードの固形腫瘍細胞株に対する細胞毒性を示す。
【図１７】様々なIQBペイロードの固形腫瘍細胞株に対する細胞毒性を示す。
【図１８】固形腫瘍細胞株に対するGI50値（pg/mL）のまとめを示す。
【図１９】CLT-D201およびPBD1のペイロード有効性の間の比較を示す。
【図２０Ａ】CLT-D202の合成スキームを示す。
【図２０Ｂ】CLT-D202の合成スキームを示す。
【図２０Ｃ】CLT-D202の合成スキームを示す。
【図２０Ｄ】CLT-D202の合成スキームを示す。
【図２１】抗CLL1-D202結合体の標的依存性細胞死滅を示す。
【図２２】図22Aおよび22Bは、MDR+ve細胞株においてCLL1-ADCが標的依存性細胞死滅を示したことを示す。
【図２３】CLL1-ADCの死滅および結合の比較を示す。
【図２４】図24Aおよび24Bは、CLL1-ADCが静止状態と増殖性の両方の細胞を死滅させることを示す。
【図２５】図25Aおよび25Bは、CLL1-ADCのインビボ試験の結果を示す。
【図２６】CLL1-ADCが原発性AML患者のがん細胞のコロニー形成を阻害することを示す。
【発明を実施するための形態】
【００６４】
発明の詳細な説明
記載する特定の方法または具体的組成物は変動し得るため、本出願はそのようなものに限定されない。本出願の範囲は添付の特許請求の範囲およびそれらの等価物によってのみ限定されるため、本明細書において用いられる用語は、特定の態様を記載する目的のためにすぎず、限定を意図するものではないことも理解されるべきである。
【００６５】
特に記載がない限り、本明細書において用いられるすべての技術および科学用語は、本開示が属する分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に記載のものと類似または等価の任意の方法および材料を本出願の実施または試験において使用し得るが、好ましい方法および材料をここに記載する。
【００６６】
I.  イソキノリジノベンゾジアゼピン
イソキノリジノベンゾジアゼピン（「IQB」）は本明細書において開示する一般式によって包含される。化合物は、それらの化学構造および/または化学名のいずれかによって同定し得る。化学構造および化学名が矛盾する場合、化学構造が化合物の同一性の決定因である。化合物は1つまたは複数のキラル中心および/または二重結合を含んでもよく、したがって、二重結合異性体（すなわち、幾何異性体）、鏡像異性体またはジアステレオマーなどの、立体異性体として存在してもよい。したがって、キラル中心での立体化学が明示されない場合、本明細書において示す化学構造は、立体異性的に純粋な形（例えば、幾何的に純粋、鏡像異性的に純粋またはジアステレオマーとして純粋）ならびに鏡像異性体および立体異性体混合物を含む、それらのキラル中心でのすべての予想される立体配置を包含する。鏡像異性体および立体異性体混合物は、当業者には周知の分離技術またはキラル合成技術を用いて、それらの構成要素鏡像異性体または立体異性体へと分割することができる。化合物は、エノール型、ケト型およびその混合物を含む、いくつかの互変異性体で存在してもよい。したがって、本明細書において示す化学構造は、例示する化合物のすべての予想される互変異性体型を含む。
【００６７】
イソキノリジノベンゾジアゼピンは、非溶媒和型ならびに水和型およびN-オキシドを含む溶媒和型で存在してもよい。一般に、水和、溶媒和、およびN-オキシド型は本開示の範囲内である。ある特定の化合物は複数の結晶または非結晶型で存在してもよい。一般に、すべての物理型は本明細書において企図される使用のために等価であり、本開示の範囲内であることが意図される。さらに、化合物の部分構造が示される場合、括弧は部分構造の分子の残りへの結合点を示すことが理解されるべきである。
【００６８】
本明細書において言及される「アルキル」は、親アルカンの1つの炭素原子から1つの水素原子を除去することにより誘導される、示された数の炭素原子を有する（すなわち、C1-C6は1〜6つの炭素原子を意味する）飽和、分枝もしくは直鎖または環式、一価炭化水素基を意味する。典型的アルキル基には、メチル；エチル；プロパン-1-イル、プロパン-2-イル、シクロプロパン-1-イルなどのプロピル；ブタン-1-イル、ブタン-2-イル、2-メチル-プロパン-1-イル、2-メチル-プロパン-2-イル、シクロブタン-1-イルなどのブチルなどが含まれるが、それらに限定されない。いくつかの態様において、「アルキル」は、親アルカンの1つの炭素原子から1つの水素原子を除去することにより誘導される、示された数の炭素原子を有する（すなわち、C1-C6は1〜6つの炭素原子を意味する）飽和、分枝または直鎖、一価炭化水素基を意味する。典型的アルキル基には、メチル；エチル；プロパン-1-イル、プロパン-2-イルなどのプロピル；ブタン-1-イル、ブタン-2-イル、2-メチル-プロパン-1-イル、2-メチル-プロパン-2-イルなどのブチルなどが含まれるが、それらに限定されない。
【００６９】
本明細書において言及される「アルケニル」は、親アルケンの1つの炭素原子から1つの水素原子を除去することにより誘導される、少なくとも1つの炭素-炭素二重結合を有する不飽和分枝、直鎖または環式アルキルを意味する。基は二重結合の周りでシスまたはトランス配座のいずれであってもよい。典型的アルケニル基には、エテニル；プロパ-1-エン-1-イル、プロパ-1-エン-2-イル、プロパ-2-エン-1-イル、プロパ-2-エン-2-イル、シクロプロパ-1-エン-1-イル；シクロプロパ-2-エン-1-イルなどのプロペニル；ブタ-1-エン-1-イル、ブタ-1-エン-2-イル、2-メチル-プロパ-1-エン-1-イル、ブタ-2-エン-1-イル、ブタ-2-エン-2-イル、ブタ-1,3-ジエン-1-イル、ブタ-1,3-ジエン-2-イル、シクロブタ-1-エン-1-イル、シクロブタ-1-エン-3-イル、シクロブタ-1,3-ジエン-1-イルなどのブテニルなどが含まれるが、それらに限定されない。本明細書において用いられる「低級アルケニル」は、(C2-C8)アルケニルを意味する。いくつかの態様において、「アルケニル」は、親アルケンの1つの炭素原子から1つの水素原子を除去することにより誘導される、少なくとも1つの炭素-炭素二重結合を有する不飽和分枝、直鎖アルキルを意味する。基は二重結合の周りでシスまたはトランス配座のいずれであってもよい。典型的アルケニル基には、エテニル；プロパ-1-エン-1-イル、プロパ-1-エン-2-イル、プロパ-2-エン-1-イル、プロパ-2-エン-2-イルなどのプロペニル；ブタ-1-エン-1-イル、ブタ-1-エン-2-イル、2-メチル-プロパ-1-エン-1-イル、ブタ-2-エン-1-イル、ブタ-2-エン-2-イル、ブタ-1,3-ジエン-1-イル、ブタ-1,3-ジエン-2-イルなどのブテニルなどが含まれるが、それらに限定されない。本明細書において用いられる「低級アルケニル」は、(C2-C8)アルケニルを意味する。
【００７０】
本明細書において言及される「アルキニル」は、親アルキンの1つの炭素原子から1つの水素原子を除去することにより誘導される、少なくとも1つの炭素-炭素三重結合を有する不飽和分枝、直鎖または環式アルキルを意味する。典型的アルキニル基には、エチニル；プロパ-1-イン-1-イル、プロパ-2-イン-1-イルなどのプロピニル；ブタ-1-イン-1-イル、ブタ-1-イン-3-イル、ブタ-3-イン-1-イルなどのブチニルなどが含まれるが、それらに限定されない。本明細書において用いられる「低級アルキニル」は、(C2-C8)アルキニルを意味する。いくつかの態様において、「アルキニル」は、親アルキンの1つの炭素原子から1つの水素原子を除去することにより誘導される、少なくとも1つの炭素-炭素三重結合を有する不飽和分枝、直鎖アルキルを意味する。典型的アルキニル基には、エチニル；プロパ-1-イン-1-イル、プロパ-2-イン-1-イルなどのプロピニル；ブタ-1-イン-1-イル、ブタ-1-イン-3-イル、ブタ-3-イン-1-イルなどのブチニルなどが含まれるが、それらに限定されない。本明細書において用いられる「低級アルキニル」は、(C2-C8)アルキニルを意味する。
【００７１】
環式アルキル、アルケニルおよびアルキニル基は、「シクロアルキル」なる用語によっても定義され、これは3〜12個の環原子、または示された数の原子を含む飽和または部分不飽和、単環式、縮合二環式または架橋多環式環集合体を意味する。シクロアルキルは、C3-6、C4-6、C5-6、C3-8、C4-8、C5-8、C6-8、C3-9、C3-10、C3-11、およびC3-12などの任意の数の炭素を含み得る。飽和単環式シクロアルキル環には、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、およびシクロオクチルが含まれる。飽和二環式および多環式シクロアルキル環には、例えば、ノルボルナン、[2.2.2]ビシクロオクタン、デカヒドロナフタレンおよびアダマンタンが含まれる。シクロアルキル基は、環内に1つまたは複数の二重または三重結合を有する、部分不飽和でもあり得る。部分不飽和である代表的シクロアルキル基には、シクロブテン、シクロペンテン、シクロヘキセン、シクロヘキサジエン（1,3-および1,4-異性体）、シクロヘプテン、シクロヘプタジエン、シクロオクテン、シクロオクタジエン（1,3-、1,4-、および1,5-異性体）、ノルボルネン、およびノルボルナジエンが含まれるが、それらに限定されない。シクロアルキルが飽和単環式C3-8シクロアルキルである場合、例示的な基には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチルおよびシクロオクチルが含まれるが、それらに限定されない。シクロアルキルが飽和単環式C3-6シクロアルキルである場合、例示的な基には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、およびシクロヘキシルが含まれるが、それらに限定されない。シクロアルキル基は置換されていても、無置換でもよい。
【００７２】
本明細書において言及される「アルキレン」は、二価アルキル部分を意味する。
【００７３】
本明細書において言及される「アルコキシ」は、アルキル基を結合点に接続する酸素原子を有するアルキル基：アルキル-O-を意味する。アルキル基に関して、アルコキシ基はC1-6などの任意の適切な数の炭素原子を有し得る。アルコキシ基には、例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、2-ブトキシ、イソブトキシ、sec-ブトキシ、tert-ブトキシ、ペントキシ、ヘキソキシなどが含まれる。アルコキシ基は、範囲内で記載される様々な置換基でさらに置換され得る。アルコキシ基は置換されていても、無置換でもよい。
【００７４】
本明細書において言及される「ハロゲン化物」は、フルオロ、クロロ、ブロモ、またはヨードを意味する。
【００７５】
本明細書において言及される「カルボキサミド」は、式-C(=O)NH2を有する一価部分を意味する。いくつかの態様において、アミド水素の一方または両方は、水素以外の置換基で置き換えられてもよい。
【００７６】
本明細書において言及される「カルボキサミジル」は、式-C(=O)N(H)-を有する二価部分を意味する。いくつかの態様において、アミド水素は他の置換基で置き換えられてもよい。
【００７７】
本明細書において言及される「オキソ」は、炭素に結合している式
2018510163.tif 000029
を有する部分を意味する。
【００７８】
本明細書において言及される「カルボキシル」は、式-C(O)OHまたは-C(O)O-を有する部分を意味する。
【００７９】
本明細書において言及される「ヘテロアルキル」は、任意の適切な長さであり1〜3つのN、O、およびSなどのヘテロ原子を有する、アルキル基を意味する。B、Al、SiおよびPを含むが、それらに限定されない、さらなるヘテロ原子も有用であり得る。ヘテロ原子は、-S(O)-および-S(O)2-などであるが、それらに限定されない、酸化型でもあり得る。例えば、ヘテロアルキルにはエーテル、チオエーテルおよびアルキル-アミンが含まれ得る。ヘテロアルキルのヘテロ原子部分は、アルキル基の水素に置き換わって、ヒドロキシ、チオまたはアミノ基を形成し得る。または、ヘテロ原子部分は接続原子であり得、または2つの炭素原子の間に挿入され得る。
【００８０】
本明細書において言及される「複素環式」または「ヘテロシクリル」は、環炭素に置き換わるヘテロ原子置換を有する、飽和または不飽和、単環式または多環式アルキル環式部分である部分を意味する。多環式複素環式部分は縮合環を有してもよい。典型的複素環式基には、テトラヒドロフラニル（例えば、テトラヒドロフラン-2-イル、テトラヒドロフラン-3-イルなど）、ピペリジニル（例えば、ピペリジン-1-イル、ピペリジン-2-イルなど）、モルホリニル（例えば、モルホリン-3-イル、モルホリン-4-イルなど）、ピペラジニル（例えば、ピペラジン-1-イル、ピペラジン-2-イルなど）などが含まれるが、それらに限定されない。
【００８１】
本明細書において言及される「芳香族」または「アリール」は、親芳香環系の1つの炭素原子から1つの水素原子を除去することにより誘導される、示された数の炭素原子を有する（すなわち、C6-C14は6〜14の炭素原子を意味する）一価芳香族炭化水素基を意味する。典型的アリール基には、アセアントリレン、アセナフチレン、アセフェナントリレン、アントラセン、アズレン、ベンゼン、クリセン、コロネン、フルオランテン、フルオレン、ヘキサセン、ヘキサフェン、ヘキシレン、as-インダセン、s-インダセン、インダン、インデン、ナフタレン、オクタセン、オクタフェン、オクタレン、オバレン、ペンタセン、ペンタレン、ペンタフェン、ペリレン、フェナレン、フェナントレン、ピセン、プレイアデン、ピレン、ピラントレン、ルビセン、トリフェニレン、トリナフタレンなどから誘導される基、ならびにその様々なヒドロ異性体が含まれるが、それらに限定されない。具体的な例示的アリールにはフェニルおよびナフチルが含まれる。
【００８２】
本明細書において言及される「ヘテロ芳香族」または「ヘテロアリール」は、環原子の1〜5つがN、O、またはSなどのヘテロ原子である、5〜16個の環原子を含む単環式または縮合二環式もしくは三環式芳香環集合体を意味する。B、Al、Si、およびPを含むが、それらに限定されない、さらなるヘテロ原子も有用であり得る。ヘテロ原子は、-S(O)-および-S(O)2-などであるが、それらに限定されない、酸化型でもあり得る。ヘテロアリール基は、3〜6、4〜6、5〜6、3〜8、4〜8、5〜8、6〜8、3〜9、3〜10、3〜11、または3〜12個の環構成員などの、任意の数の環原子を含み得る。1、2、3、4、もしくは5、または1〜2、1〜3、1〜4、1〜5、2〜3、2〜4、2〜5、3〜4、もしくは3〜5個などの、任意の適切な数のヘテロ原子がヘテロアリール基に含まれ得る。ヘテロアリール基は、5〜8個の環構成員および1〜4個のヘテロ原子、または5〜8個の環構成員および1〜3個のヘテロ原子、または5〜6個の環構成員および1〜4のヘテロ原子、または5〜6個の環構成員および1〜3個のヘテロ原子を有し得る。ヘテロアリール基は、ピロール、ピリジン、イミダゾール、ピラゾール、トリアゾール、テトラゾール、ピラジン、ピリミジン、ピリダジン、トリアジン（1,2,3-、1,2,4-および1,3,5-異性体）、チオフェン、フラン、チアゾール、イソチアゾール、オキサゾール、およびイソキサゾールなどの基を含み得る。ヘテロアリール基は、フェニル環などの芳香環系に縮合して、インドールおよびイソインドールなどのベンゾピロール、キノリンおよびイソキノリンなどのベンゾピリジン、ベンゾピラジン（キノキサリン）、ベンゾピリミジン（キナゾリン）、フタラジンおよびシンノリンなどのベンゾピリダジン、ベンゾチオフェン、ならびにベンゾフランを含むが、それらに限定されない、メンバーを形成し得る。他のヘテロアリール基には、ビピリジンなどの、結合によって連結されたヘテロアリール環が含まれる。ヘテロアリール基は置換されていても、無置換でもよい。
【００８３】
本明細書において言及される「C1-C12」は、記載する基に含まれる炭素原子の数の範囲を意味する。例えば、C1-C12アルキルは、1個の炭素から12個の炭素原子を有し、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、または12個の炭素の任意の1つであり得る。C1アルキルはメチルであり、C2アルキルはエチルであり、他も同様である。C1-C10への言及は1〜10個の炭素を意味し、C1-C3は1〜3つの炭素を意味し、他も同様である。
【００８４】
本明細書において言及される「置換」は、水素基が除去され、別の非水素置換基がそれに置き換わっている部分を意味する。化学的結合価の規則が遵守されている限り、任意の部分に複数の置換基が組み込まれてもよい。アルキル、アルケニル、アルキニル、芳香族、またはヘテロ環式基における使用に適した置換基には、-OH、-OR、-NH2、-NHR、-NR2、-CO2H、-CO2R、-C(O)NH2、-C(O)NHR、-C(O)NR2、ハロゲン化物、オキソ、およびRが含まれ、ここでRはC1-C6アルキルである。
【００８５】
本明細書において言及される「核酸」なる用語は、ヌクレオシド間連結によって結合されたヌクレオシド（デオキシリボヌクレオシド、リボヌクレオシド，またはその類縁体を含む）の直鎖ポリマーを意味する。核酸は、「ポリヌクレオチド」ならびに「オリゴヌクレオチド」なる用語を包含し得る。直鎖ポリマーは、「ATGCCTG」などの、文字の配列によって表してもよく、ここで、特に記載がない限り、ヌクレオチドは左から右へ5'から3'の順であること、および「A」はデオキシアデノシンを示し、「C」はデオキシシチジンを示し、「G」はデオキシグアノシンを示し、かつ「T」はデオキシチミジンを示すことが理解されるであろう。別の天然ヌクレオチドは「U」であり、ウリジンを示す。A、C、G、TおよびUなる文字は、当技術分野において標準である通り、塩基自体、ヌクレオシド、または塩基を含むヌクレオチドを指すために用いることができる。天然核酸において、ヌクレオシド間連結は典型的にはホスホジエステル結合であり、サブユニットは「ヌクレオチド」と呼ぶ。核酸は、ホスホロチオエート連結などの、他のヌクレオシド間連結を含んでもよい。リン酸基を含まない、そのようなヌクレオチドの類縁体も、本明細書において用いられる「ヌクレオチド」なる用語の範囲内に入ると考えられ、ホスホジエステル連結ではない1つまたは複数のヌクレオシド間連結を含む核酸もまだ、「ポリヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」などと呼ぶ。
【００８６】
「アミノ酸」なる用語は、20個の「標準」または「天然」アミノ酸、ならびに改変または合成アミノ酸や、天然アミノ酸と同様に機能するアミノ酸類縁体およびアミノ酸様物質などの、「非天然」アミノ酸とも呼ぶ「非標準」アミノ酸の両方を意味する。天然アミノ酸は、遺伝暗号によってコードされるものである。改変アミノ酸には、例えば、ヒドロキシプロリン、γ-カルボキシグルタミン酸、およびO-ホスホセリンが含まれる。アミノ酸類縁体は、天然アミノ酸と同じ基本化学構造、例えば、水素に結合したα炭素、カルボキシル基、アミノ基、およびR基を有する化合物、例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウムを意味する。そのような類縁体は改変されたR基（例えば、ノルロイシン）または改変されたペプチド骨格を有し得るが、天然アミノ酸と同じ基本化学構造を保持する。アミノ酸様物質は、アミノ酸の一般的化学構造とは異なる構造を有するが、天然アミノ酸と同様に機能する化学化合物を意味する。
【００８７】
細胞毒性化合物の化学的性質の具体的な説明
本明細書において提供するのは、式（I）または（II）：
2018510163.tif 000030
の構造を有する化合物であり、
式中、-C(Ra)-と-N(Rb)-との間または-C(Ra')-と-N(Rb')-との間の点線の結合は独立して一重結合または二重結合であり；-C(Ra)-と-N(Rb)-との間に二重結合が存在する場合、環炭素-C(Ra)-はオレフィン性でありかつ置換基Raを有し、かつ-N(Rb)-の環外Rbは存在せず；-C(Ra)-と-N(Rb)-との間に一重結合が存在する場合、環炭素-C(Ra)-は飽和しておりかつRa置換基に加えて水素環外置換基も有し、かつ-N(Rb)-のRbは存在し；かつ/または-C(Ra')-と-N(Rb')-との間に二重結合が存在する場合、環炭素-C(Ra')-はオレフィン性でありかつ置換基Ra'を有し、かつ-N(Rb')-のRb'は存在せず；-C(Ra')-と-N(Rb')-との間に一重結合が存在する場合、-環炭素C(Ra')-は飽和しておりかつRa'置換基に加えて水素置換基も有し、かつ-N(Rb')-のRb'は存在し；
RaおよびRa'のそれぞれは独立してH、OH、または-O-Pであり、ここでPは保護基であり；
RbおよびRb'のいずれかまたは両方が存在する場合、RbおよびRb'のそれぞれは独立してH、L-Rx、またはL-Scであり；
R2、R2'、R3、R3'、R4、R4'、R6'、およびR6はそれぞれ独立してH、OH、C1-C10アルキル、C2-C10アルケニル、またはC2-C10アルキニルより選択され；
R5またはR5'のそれぞれは独立してNH2、CO2H、H、OH、C1-C10アルキル、C1-C10アルケニル、C1-C10アルキニル、-L-Rx、または-L-Scであり；
R7およびR7'のそれぞれはHであり；
R8はH、NH2、CO2H、-L-Rx、もしくは-L-Scであり、ここでR8が結合している炭素も水素置換基を有し；または、R8は構造
2018510163.tif 000031
を有するエキソオレフィンであり、ここでR8が結合している環炭素がオレフィン性であり、かつ他の環外置換基を有せず；
XはC1-12アルキレンであり、任意でここでアルキレン鎖が、O、S、およびNHからなる群より選択される1つもしくは複数のヘテロ原子により分断され；または、Xは-(CH2)m-Q-(CH2)p-であり、ここでmおよびpがそれぞれ独立して0、1、もしくは2であり；
Qは式：
2018510163.tif 000032
の構造を有し；ここでR9、R10、およびR11のそれぞれはH、NH2、CO2H、-L-Rx、または-L-Scであり；かつJはCHまたはNであり；
YおよびY'のそれぞれは独立してO、S、またはNHであり；
ZおよびZ'のそれぞれは独立してH、R、OH、OR、SH、SR、NH2、またはNHRであり、ここで各Rは独立して無置換C1-C12アルキル、置換C1-C12アルキル、無置換C3-C20ヘテロシクリル、置換C3-C20ヘテロシクリル、無置換C5-C20アリール基、および無置換C5-C20アリール基であり；
-L-Rxは反応性部分Rxに結合したリンカーLであり；
-L-Scは物質Scに結合したリンカーLであり；
Lは、結合であるか、またはC、N、O、S、もしくはハロゲンより選択される1〜200個の非水素原子を有する部分であり、かつLは、エーテル、オキソ、カルボキサミジル、ウレタニル、分枝、環式、不飽和、ヘテロ環式、芳香族、またはヘテロ芳香族部分を組み込んでもよく；
Rxは反応性部分であり；
Scはタンパク質、タンパク質の一部、またはペプチドより選択される標的結合物質であり；かつ
-L-Rxまたは-L-Scが式IまたはIIの化合物中に存在する場合、Rb、Rb'、R5、R5'、R8、R9、R10、R11の1つだけがL-Rxまたは-L-Scである。
【００８８】
同様に本明細書において提供するのは、式IまたはII：
2018510163.tif 000033
の化合物であり、
式中、-C(Ra)-と-N(Rb)-との間または-C(Ra')-と-N(Rb')-との間に示される点線の結合は独立して一重結合または二重結合であり；RaおよびRa'のそれぞれは独立してH、OH、または-O-Pであり、ここでPは保護基であり；RbおよびRb'のそれぞれは存在しないか、または独立してHもしくはL-Rxであり；
R2、R2'、R3、R3'、R4、R4'、R6'、およびR6はそれぞれ独立してH、OH、C1-C10アルキル、C2-C10アルケニル、またはC2-C10アルキニルより選択され；
R5またはR5'のそれぞれは独立してNH2、CO2H、H、OH、C1-C10アルキル、C2-C10アルケニル、C2-C10アルキニル、または-L-Rxであり；
R7およびR7'のそれぞれはHであり；
R8はH、NH2、CO2H、または-L-Rxであり、ここでR8が結合している炭素も水素置換基を有し；または、R8は構造
2018510163.tif 000034
を有するエキソオレフィンであり、ここでR8が結合している炭素は他の置換基を有せず；
XはC1-12アルキレンであり、任意でここでアルキレン鎖が、O、S、およびNHからなる群より選択される1つもしくは複数のヘテロ原子により分断され；または、Xは、-(CH2)m-Q-(CH2)p-であり、ここでmおよびpがそれぞれ独立して0、1、もしくは2であり；Qは式：
2018510163.tif 000035
の構造を有し；ここでR9、R10、およびR11のそれぞれがH、NH2、CO2H、または-L-Rxであり；かつJがCHまたはNであり；
YおよびY'のそれぞれは独立してO、S、またはNHであり；
ZおよびZ'のそれぞれは独立してH、R、OH、OR、SH、SR、NH2、またはNHRであり、ここで各Rは独立して無置換C1-C12アルキル、置換C1-C12アルキル、無置換C3-C20ヘテロシクリル、置換C3-C20ヘテロシクリル、無置換C6-C20アリール基、および無置換C6-C20アリール基であり；
-L-Rxは反応性部分Rxに結合したリンカーLであり；
ここでLは、結合であるか、またはC、N、O、S、もしくはハロゲンより選択される1〜200個の非水素原子を有する部分であり、かつLは、エーテル、オキソ、カルボキサミジル、ウレタニル、分枝、環式、不飽和、ヘテロ環式、芳香族、またはヘテロ芳香族部分を組み込んでもよく；
Rxは反応性部分であり；かつ
-L-Rxが式IまたはIIの化合物中に存在する場合、Rb、Rb'、R5、R5'、R8、R9、R10、およびR11の1つだけがL-Rxである。
【００８９】
イソキノリジノベンゾジアゼピン部分の7員ラクタム環は、-C(Ra)-と-N(Rb)-（左側のIQB）、または同様に-C(Ra')-と-N(Rb')-（右側のIQB）とを接続している二重結合または一重結合のいずれかを有してもよい。式IまたはIIの化合物は独立して、各IQB環内に一重結合または二重結合のいずれかを有するIQB部分の任意の組み合わせを有するように選択されてもよい。いくつかの態様において、-C(Ra)-と-N(Rb)-との間に二重結合が存在する場合、環炭素-C(Ra)-はオレフィン性でありかつ置換基Raを有し、かつ-N(Rb)-の環外Rbは存在しない。-C(Ra)-と-N(Rb)-との間に一重結合が存在する場合の態様において、環炭素-C(Ra)-は飽和しており、かつRa置換基に加えて水素環外置換基も有し、かつ-N(Rb)-のRbは存在する。同様に、式IまたはIIの化合物は-C(Ra')-と-N(Rb')-との間に存在する二重結合を有してもよく、ここで環炭素-C(Ra')-はオレフィン性でありかつ置換基Ra'を有し、かつ-N(Rb')-のRb'は存在しない。または、式IまたはIIの化合物の-C(Ra')-と-N(Rb')-との間に一重結合が存在する場合、環炭素-C(Ra')-は飽和しており、かつRa'置換基に加えて水素置換基も有し、かつ-N(Rb')-のRb'は存在する。いくつかの態様において、式IまたはIIの化合物は、-C(Ra)-と-N(Rb)とを接続している二重結合ならびに-C(Ra')-と-N(Rb')-とを接続している二重結合を有し、かつRbまたはRb'のいずれも存在しない。他の態様において、式IまたはIIの化合物は、-C(Ra)-と-N(Rb)とを接続している二重結合ならびに-C(Ra')-と-N(Rb')-とを接続している一重結合を有し、-C(Ra')-上に存在する水素置換基およびRa'ならびに-N(Rb')-上に存在するRb'を有する化合物を生じる。さらに他の態様において、式IまたはIIの化合物は、-C(Ra)-と-N(Rb)を接続している一重結合ならびに-C(Ra')-と-N(Rb')-とを接続している二重結合を有し、-C(Ra)-上に存在する水素置換基およびRaを有する化合物を生じ、Rb'は存在しない。最後に、式IまたはIIの化合物は、-C(Ra)-と-N(Rb)とを接続している一重結合ならびに-C(Ra')-と-N(Rb')とを接続している一重結合を有してもよく、環炭素-C(Ra)-上の水素置換基およびRa、環炭素-C(Ra')-上の水素置換基およびRa'、ならびにRbおよびRb'が両方存在する化合物を生じる。オレフィン性環炭素は、炭素または窒素などの1つの環原子と二重結合を形成し、炭素または窒素などの別の環原子と一重結合を形成し、かつRaまたはRa'などの環外基と一重結合を形成している環炭素である。
【００９０】
RaおよびRa'は独立してH、OH、または-O-Pであり、ここでPは保護基である。任意の適切な保護基を選択してもよい。いくつかの態様において、保護は、トリメチルシリル（TMS）、トリブチルジメチルシリル（TBDMS、TBSとも呼ぶ）、またはトリブチルジフェニルシリル（TBDPS）などであるが、それらに限定されないシリル保護基；ベンジル保護基、メトキシメチル（MEM）などであってもよい。多様な保護基が当技術分野において公知であり、例えば、Greene's Protective Groups in Organic Synthesis, Fourth Edition, Wuts and Greene, John Wiley and Sons, Inc. 2006において見出されうる。
【００９１】
RbおよびRb'が存在する場合、RbおよびRb'のそれぞれは独立してH、L-Rx、またはL-Scであり、ただし式IまたはIIの化合物中には1つのL-RxまたはL-Scだけが存在し得る。部分-L-RxおよびL-Scは以下に定義する通りである。
【００９２】
R2、R2'、R3、R3'、R4、R4'、R6'、およびR6はそれぞれ独立してH、OH、C1-C10アルキル、C1-C10アルケニル、またはC1-C10アルキニルより選択される。いくつかの態様において、R2、R2'、R3、R3'、R4、R4'、R6'、およびR6はそれぞれ水素であってもよい。いくつかの態様において、R2、R2'、R3、R3'、R4、R4'、R6'、およびR6はそれぞれ独立してH、OH、C1-C6アルキル、C1-C6アルケニル、およびC1-C6アルキニルより選択されてもよい。さらに他の態様において、R2、R2'、R3、R3'、R4、R4'、R6'、およびR6はそれぞれ独立してH、OH、およびC1-C6アルキルより選択されてもよい。または、R2、R2'、R3、R3'、R4、R4'、R6'、およびR6はそれぞれ独立してH、OH、およびC1-C3アルキルより選択されてもよい。いくつかの態様において、R2、R2'、R3、R3'、R4、R4'、R6'、およびR6のC1-C3アルキル置換基はメチルまたはエチルであってもよい。
【００９３】
R5またはR5'は独立してNH2、CO2H、H、OH、C1-C10アルキル、C1-C10アルケニル、C1-C10アルキニル、-L-Rx、または-L-Scより選択される。いくつかの態様において、R5またはR5'は独立してH、OH、C1-C10アルキル、C1-C10アルケニル、C1-C10アルキニル、-L-Rx、または-L-Scより選択されてもよい。さらに他の態様において、R5またはR5'は独立してH、OH、C1-C6アルキル、C1-C6アルケニル、C1-C6アルキニル、-L-Rx、または-L-Scより選択されてもよい。いくつかの他の態様において、R5またはR5'は独立してH、OH、C1-C6アルキル、-L-Rx、または-L-Scより選択されてもよい。いくつかの態様において、R5またはR5'のC1-C6アルキル置換基はメチルまたはエチルであってもよい。さらなる態様において、R5またはR5'は-L-Rxまたは-L-Scであってもよく、ただし式IまたはIIの化合物中には1つの-L-Rxまたは-L-Scだけが存在する。部分-L-RxおよびL-Scは以下に定義する通りである。
【００９４】
R8はH、NH2、CO2H、-L-Rx、または-L-Scであり、ここでR8が結合している炭素も水素置換基を有し；またはR8は構造
2018510163.tif 000036
を有するエキソオレフィンであり、ここでR8が結合している環炭素がオレフィン性でありかつ他の環外置換基を有しない。いくつかの態様において、R8はH、NH2、CO2H、-L-Rx、または-L-Scであってもよく、ここでR8が結合している炭素も水素置換基を有する。さらに他の態様において、R8はH、-L-Rx、または-L-Scであってもよく、ここでR8が結合している炭素も水素置換基を有する。いくつかの態様において、R8は-L-Rx、または-L-Scであってもよく、ただし式IまたはIIの化合物は全分子中に存在する1つの-L-Rx、または-L-Scだけを有する。部分-L-RxおよびL-Scは以下に定義する通りである。さらに他の態様において、R8は構造
2018510163.tif 000037
を有するエキソオレフィンであってもよく、ここでR8が結合している環炭素はオレフィン性でありかつ他の環外置換基を有しない。
【００９５】
XはC1-12アルキレンであり、任意でここでアルキレン鎖はO、S、およびNHからなる群より選択される1つまたは複数のヘテロ原子により分断される。いくつかの態様において、Xはメチレンであってもよい。他の態様において、XはC1-C6アルキレンであってもよく、OまたはNHより選択される1つのヘテロ原子により分断されていてもよい。
【００９６】
または、Xは-(CH2)m-Q-(CH2)p-であり、ここでmおよびpはそれぞれ独立して0、1または2である。いくつかの態様において、mおよびpはいずれも0であるように選択される。
【００９７】
Qは式：
2018510163.tif 000038
の構造を有し；ここでR9、R10、およびR11のそれぞれはH、NH2、CO2H、-L-Rx、または-L-Scであり；かつJはCHまたはNである。いくつかの態様において、R9、R10、およびR11の1つだけがNH2またはCO2Hであってもよく、R9、R10、およびR11の他はHであってもよい。他の態様において、R9、R10、およびR11の1つは-L-Rxまたは-L-Scであってもよく、R9、R10、およびR11の他はHであってもよく、ただし式IまたはIIの化合物中には1つの-L-Rxまたは-L-Scだけが存在し得る。いくつかの態様において、R10はNH2またはCO2Hであってもよい。または、R10は-L-Rxまたは-L-Scであってもよく、かつR9およびR11はHであってもよい。部分-L-RxおよびL-Scは以下に定義する通りである。
【００９８】
YおよびY'は独立してO、S、またはNHである。いくつかの態様において、YおよびY'はOであってもよい。他の態様において、YおよびY'はNHであってもよい。または、YおよびY'はSであってもよい。
【００９９】
ZおよびZ'は独立してH、R、OH、OR、SH、SR、NH2、またはNHRであり、ここで各Rは独立して無置換C1-C12アルキル、置換C1-C12アルキル、無置換C3-C20ヘテロシクリル、置換C3-C20ヘテロシクリル、無置換C6-C20アリール基、および無置換C6-C20アリール基である。いくつかの態様において、ZおよびZ'は独立してH、R、OH、ORであってもよく、ここで各Rは独立して無置換C1-C12アルキルまたは置換C1-C12アルキルであってもよい。いくつかの態様において、ZおよびZ'は独立してH、R、OH、ORであってもよく、ここで各Rは独立して無置換C1-C6アルキルまたは置換C1-C6アルキルであってもよい。さらに他の態様において、ZおよびZは独立してH、CH3、CH2CH3、OH、OCH3、またはOCH2CH3であってもよい。
【０１００】
リンカーLは、結合であるか、またはC、N、O、S、もしくはハロゲンより選択される1〜200個の非水素原子を有する部分であり、かつリンカーLは、エーテル、オキソ、カルボキシル、カルボキサミド、カルボキサミジル、ウレタニル、分枝、環式、不飽和、アミノ酸、ヘテロ環式、芳香族、またはヘテロ芳香族部分を組み込んでもよい。リンカーLは非分枝または分枝、可撓性または剛性、短鎖または長鎖であってもよく、有用と考えられる部分の任意の組み合わせを組み込んでもよい。いくつかの態様において、リンカーLの少なくとも一部はポリアルキレンオキシドポリマー領域を有してもよく、これは式IまたはIIの化合物の溶解性を増強し得る。いくつかの態様において、リンカーLはエチレングリコールの反復単位を有してもよく、約1〜約25の数、またはその間の任意の数の反復エチレングリコール単位を有してもよい。いくつかの態様において、Lは約3〜約20、約4〜約15、約5〜約12、または約6〜約10個のエチレングリコール単位を含んでもよい。いくつかの態様において、リンカーLの少なくとも一部は、式IもしくはIIの化合物の溶解性増強を提供し得るか、または標的結合を増強する、標的結合物質との適合性を増強する、もしくは標的結合認識を増強するためのアミノ酸配列を提供し得る、1つまたは複数のアミノ酸部分を含んでもよい。他の態様において、リンカーLは、プロテアーゼの適切な基質モティーフを提供する1つまたは複数のアミノ酸部分を含んでもよい。選択されたプロテアーゼに特異的な基質モティーフを提供するひと組のアミノ酸部分がリンカーLに組み込まれた場合、式IまたはIIの細胞毒性薬物化合物は標的に結合した結合体から遊離されて局在的細胞毒性効果を提供し得る。そのような基質モティーフは当技術分野において公知であり、望まれるリンカーLに組み込まれて標的に結合した結合体からの選択的遊離を提供し得る。この選択性は、結合体薬物の局在的送達領域内で公知の所望のプロテアーゼの存在に基づき得る。ポリ酸、多糖、またはポリアミンなどの、他のポリマー型の部分をリンカーLに組み込んでもよい。置換芳香族、またはヘテロ芳香族部分などの、他の部分を用いて、剛性を増強してもよく、あるいは反応性部分または式IもしくはIIの化合物に連結するために、その中の置換基上の合成的に使用可能な部位を提供してもよい。
【０１０１】
例えば、リンカーLはエチレングリコール反復単位、およびアミノ酸配列を含むことができる。いくつかの態様において、リンカーLは、XAAがアミノ酸配列である、式：
-(CH2CH2O)1-50-XAA-
を含む。
【０１０２】
本発明のリンカーLにおいて、任意の適切な数のエチレングリコール単位を用いることができる。例えば、リンカーLは1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、15、16、19、20、23、24、35、36、37、48、49、またはそれよりも多くのエチレングリコール単位を含むことができる。いくつかの態様において、リンカーLは8つのエチレングリコール単位を含むことができる。8つのエチレングリコール反復単位を有する離散的（「d」）ポリエチレングリコールを有する、H2N-dPEG(登録商標)8-C(O)OHなどの、いくつかの市販のエチレングリコール基（ポリエチレングリコール、PEG）がリンカーLにおいて適切である。Advanced ChemTechなどによる他の離散的PEG単位が市販されており、当業者には公知である、いくつかの態様において、リンカーLは、式：
-HN-PEG-C(O)-XAA-
を含み、式中、PEGは1〜50個のエチレングリコール単位を有し、かつXAAはアミノ酸配列である。
【０１０３】
リンカーLのアミノ酸部分は、前述の通り、任意の適切な数のアミノ酸部分を含むことができる。例えば、アミノ酸配列XAAは、1〜100個のアミノ酸部分、または1〜10個のアミノ酸部分、または1〜5つのアミノ酸部分を含むことができる。リンカーLは、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10個、またはそれよりも多くのアミノ酸部分を含むことができる。いくつかの態様において、リンカーLは2つのアミノ酸部分を含む。いくつかの態様において、リンカーLはアミノ酸配列Val-Alaを含む。いくつかの態様において、リンカーLは、PEG8が8つのエチレングリコール単位を有する、式：
-HN-PEG8-C(O)-Val-Ala-
を含む。
【０１０４】
リンカーLは、エチレングリコール部分をアミノ酸配列に接続する、あるいはエチレングリコールもしくはアミノ酸配列を反応性部分Rx、物質Sc、または式IもしくはIIの化合物に接続する、様々な他の接続基も含むことができる。例えば、アミノ酸配列を式IまたはIIの化合物に、4-アミノベンジルカルボキシレート基を介して接続することができる。いくつかの態様において、エチレングリコール部分を反応性部分Rxまたは物質Scに直接連結することもできる。いくつかの態様において、リンカーLは式：
2018510163.tif 000039
を有する。
【０１０５】
Rxは反応性部分である。Rxは、本明細書に記載の標的結合物質であり得る物質Sc上に存在する対応する反応性部分と反応することができる限り、任意の適切な反応性部分であってもよい。様々な態様において、Scはタンパク質またはタンパク質の一部であり、下記などの使用可能な結合可能部分を有する。
【０１０６】
チオール/ジスルフィド。チオールまたはジスルフィドと反応し得る反応性部分Rxには、マレイミド、ヨードアセトアミド、アジド、チアゾールおよびピリドピリダジンが含まれる。ジスルフィドはビスルホン反応性部分を用いて標識してもよい。さらに、マレイミド反応性部分は操作されたセレノシステイン部分と反応することもできる。
【０１０７】
アミン。IQB化合物を標的結合物質Scに結合するために用い得る反応性部分Rxには、イソチオシアネート、スクシンイミジルエステル、ハロゲン化スルホニル、カルボン酸（カルボジイミドカップリング試薬存在下）、スルホスクシンイミジルエステル、4-スルホテトラフルオロフェニルエステル、テトラフルオロフェニルエステル、およびスルホジクロロフェノールエステルが含まれる。このリストは決して限定的ではなく、標的結合物質Scのアミンと反応することができる他の反応性部分Rxを用いてもよい。
【０１０８】
アルデヒド/ケトン。これらの部分を標的結合物質Sc中に導入し、続いて-L-Rxを有する式IまたはIIの化合物と反応させてもよく、ここで反応性部分Rxはヒドラジン、セミヒドラジド、カルボヒドラジド、またはヒドロキシルアミンである。このリストは決して限定的ではなく、標的結合物質Scのアルデヒドと反応することができる他の反応性部分Rxを用いてもよい。
【０１０９】
式IおよびIIの化合物において有用な他の反応性部分Rxには、シュタウディンガー反応、ピクテ・スペングラ−反応および/またはクリック型ケミストリー（銅を含有するかまたは含有しない）において用いることができる、アジド、ホスフィン、またはアルキンが含まれ、これらの反応はすべて、抗体およびそれらの断片を含む、タンパク質の選択的標識のために、現在活発に研究されている。これは、標的結合物質Scにおける操作された部位と反応するために有用な、反応性部分Rxの非限定的リストである。
【０１１０】
いくつかの態様において、Rxはマレイミド、ビス-スルホン、ヨードアセトアミド、アジド、イソチオシアネート、スクシンイミジルエステル、ハロゲン化スルホニル、カルボン酸、セミヒドラジド、カルボヒドラジド、ヒドロキシルアミン、ホスフィン、またはアルキンであってもよい。
【０１１１】
-L-Rxは反応性部分Rxに結合したリンカーLである。-L-Rxを式IまたはIIの化合物において用いて、本明細書に記載の標的結合物質であり得る物質Scに結合することができるIQB化合物を有する試薬を生成してもよい。本明細書に記載のリンカーLおよび反応性部分Rxの任意の組み合わせを式IまたはIIの化合物において用いてもよい。いくつかの例示的-L-Rxについては図2を参照されたい。
【０１１２】
化合物の抗体への結合のために、いくつかの他の化学が公知である。米国特許第7,595,292号（Brocchini et al.）は、抗体のジスルフィド結合における硫黄とチオエステルを形成するリンカーに言及している。米国特許第7,985,783号（Carico et al.）は、化合物を抗体に結合するために使用されるアルデヒド残基の抗体中への導入に言及している。
【０１１３】
Scは、タンパク質、タンパク質の一部、ペプチド、または核酸より選択される標的結合物質である。いくつかの態様において、タンパク質である標的結合物質には抗体、抗体断片、または単鎖可変断片抗体（「scFV」）が含まれ得る。標的結合物質は腫瘍関連抗原、がん幹細胞関連抗原、またはウイルス抗原に結合してもよい。
【０１１４】
様々な態様において、標的結合物質Scは、急性骨髄性白血病（AML M4）細胞、急性前骨髄球性白血病細胞、急性リンパ芽球性白血病細胞、急性リンパ球性白血病細胞、慢性リンパ球性白血病細胞、慢性骨髄性白血病細胞、慢性T細胞リンパ球性白血病、骨髄異形成症候群細胞、多発性骨髄腫細胞、前立腺がん細胞、腎細胞腺がん細胞、膵臓腺がん細胞、肺がん細胞もしくは胃腺がん細胞、胃腺がん細胞、乳がん細胞、結腸がん細胞、黒色腫細胞、甲状腺がん細胞、卵巣がん細胞、膀胱がん細胞、肝臓がん細胞、頭頸部がん細胞、食道がん細胞、ホジキンリンパ腫細胞、非ホジキンリンパ腫細胞、中皮腫細胞、神経芽細胞腫細胞、神経内分泌腫瘍細胞、神経線維腫症1型（NF1）細胞、神経線維腫症2型（NF2）、または骨肉腫細胞より選択される標的に結合してもよい。
【０１１５】
いくつかの他の態様において、標的結合物質Scは、CLL-1、IL1RAP、TIM-3、CD19、CD20、CD22、ROR1、メソテリン、CD33、CD123/IL3Ra、GPR114、c-Met、PSMA、前立腺酸性ホスファターゼ（PAP）、CEA、CA-125、Muc-1、AFP、糖脂質F77、EGFRvIII、GD-2、NY-ESO-1 TCR、チロシナーゼ、TRPI/gp75、gp100/pmel-17、メラン-A/MART-1、Her2/neu、WT1、EphA3、テロメラーゼ、HPV E6、HPV E7、EBNA1、BAGE、GAGEおよびMAGE A3 TCRSLITRK6、ENPP3、ネクチン-4、CD27、SLC44A4、CAIX、Cripto、CD30、MUC16、GPNMB、BCMA、Trop-2、組織因子（TF）、CanAg、EGFR、αv-インテグリン、CD37、葉酸受容体-α、CD138、CEACAM5、CD56、CD70、CD74、GCC、5T4、CD79b、Steap1、Napi2b、ルイスY抗原、LIV、c-RET、DLL3、EFNA4、エンドシアリン/CD248より選択される標的に結合してもよい。
【０１１６】
さらに他の態様において、標的結合物質Scは二重特異性抗体/抗体断片であってもよい。いくつかの態様において、二重特異性抗体/抗体断片は、CLL-1、IL1RAP、TIM-3、CD19、CD20、CD22、ROR1、メソテリン、CD33、CD123/IL3Ra、GPR114、c-Met、PSMA、前立腺酸性ホスファターゼ（PAP）、CEA、CA-125、Muc-1、AFP、糖脂質F77、EGFRvIII、GD-2、NY-ESO-1 TCR、チロシナーゼ、TRPI/gp75、gp100/pmel-17、メラン-A/MART-1、Her2/neu、WT1、EphA3、テロメラーゼ、HPV E6、HPV E7、EBNA1、BAGE、GAGEおよびMAGE A3 TCRSLITRK6、ENPP3、ネクチン-4、CD27、SLC44A4、CAIX、Cripto、CD30、MUC16、GPNMB、BCMA、Trop-2、組織因子（TF）、CanAg、EGFR、αv-インテグリン、CD37、葉酸受容体、CD138、CEACAM5、CD56、CD70、CD74、GCC、5T4、CD79b、Steap1、Napi2b、ルイスY抗原、LIV、c-RET、DLL3、EFNA4、エンドシアリン/CD248より選択される1つまたは2つの標的に結合する。
【０１１７】
-L-Scは物質Scに結合したリンカーLである。-L-Scを式IまたはIIの化合物において用いて、前述および本開示の全体に記載の標的結合物質であり得る物質Scに結合しているIQB化合物を有する結合種を生成してもよい。本明細書に記載のリンカーLおよび物質Scの任意の組み合わせを式IまたはIIの化合物において用いてもよい。
【０１１８】
式IまたはIIの化合物中に-L-Rxまたは-L-Scが存在する場合、Rb、Rb'、R5、R5'、R8、 R9、R10 、R11の1つだけが-L-Rxまたは-L-Scである。式IまたはIIの化合物中に反応性部分を含むリンカーまたは物質Scに結合したリンカー1つだけが存在してもよい。いくつかの態様において、-L-Rxまたは-L-Scのいずれも式IまたはIIの化合物中に存在しない。
【０１１９】
いくつかの態様において、式IまたはIIの化合物は、YおよびY'がそれぞれOであり、Rb、Rb'、R5、R5'、R8、R9、R10、R11のどれも-L-Rxまたは-L-Sではない、式を有する。
【０１２０】
いくつかの態様において、式IまたはIIの化合物は、YおよびY'がそれぞれOであり、ZおよびZ'がそれぞれ独立してHおよびC1-C3アルコキシより選択される、式を有する。
【０１２１】
他の態様において、式IまたはIIの化合物は、YおよびY'がそれぞれOであり；ZおよびZ'がそれぞれ独立してHおよびC1-C3アルコキシより選択され、かつXが-CH2-である、式を有する。
【０１２２】
いくつかの態様において、式IまたはIIの化合物は、YおよびY'がそれぞれOであり；ZおよびZ'がそれぞれ独立してHおよびC1-C3アルコキシより選択され；XがQであり、かつJがCHである、式を有する。
【０１２３】
いくつかの態様において、式IまたはIIの化合物は、YおよびY'がそれぞれOであり；ZおよびZ'がそれぞれ独立してHおよびC1-C3アルコキシより選択され；かつR9、R10、またはR11の1つが-L-Rxまたは-L-Scである、式を有する。
【０１２４】
いくつかの態様において、式IまたはIIの化合物は、YおよびY'がそれぞれOであり；ZおよびZ'がそれぞれ独立してC1-C3アルコキシより選択され；かつR5またはR5'の一方が-L-Rxまたは-L-Scである、式を有する。
【０１２５】
いくつかの態様において、式IまたはIIの化合物は、YおよびY'がそれぞれOであり；ZおよびZ'がそれぞれ独立してHおよびC1-C3アルコキシより選択され；かつRbまたはRb'が存在する場合、RbまたはRb'の一方が-L-Rxまたは-L-Scである、式を有する。
【０１２６】
いくつかの態様において、式IまたはIIの化合物は、YおよびY'がそれぞれOであり；ZおよびZ'がそれぞれ独立してC1-C3アルコキシより選択され；かつR8が-L-Rxまたは-L-Scである、式を有する。
【０１２７】
いくつかの態様において、式IおよびIIの化合物には、
2018510163.tif 000040
が含まれる。
【０１２８】
他の態様において、式IおよびIIの化合物には、
2018510163.tif 000041
が含まれる。
【０１２９】
他の態様において、式IおよびIIの化合物には、
2018510163.tif 000042
が含まれる。
【０１３０】
いくつかの他の態様において、式Iの化合物は、以下の構造：
2018510163.tif 000043
を有し、Rb'は-L-Rxである。
【０１３１】
さらに他の態様において、置換基-L-Rxを有する、式IまたはIIの化合物は以下の化合物：
2018510163.tif 000044
である。
【０１３２】
さらに他の態様において、置換基-L-Rxを有する、式IまたはIIの化合物は以下の化合物：
2018510163.tif 000045
である。
【０１３３】
他の態様において、置換基-L-Rxを有する、式IまたはIIの化合物は以下の化合物：
2018510163.tif 000046
である。
【０１３４】
他の態様において、置換基-L-Rxを有する、式IまたはIIの化合物は以下の化合物：
2018510163.tif 000047
である。
【０１３５】
他の態様において、置換基-L-Rxを有する、式IまたはIIの化合物は以下の化合物：
2018510163.tif 000048
である。
【０１３６】
他の態様において、置換基-L-Rxを有する、式IまたはIIの化合物は以下の化合物：
2018510163.tif 000049
である。
【０１３７】
他の態様において、置換基-L-Rxを有する、式IまたはIIの化合物は以下の化合物：
2018510163.tif 000050
である。
【０１３８】
他の態様において、置換基-L-Rxを有する、式IまたはIIの化合物は以下の化合物：
2018510163.tif 000051
である。
【０１３９】
他の態様において、置換基-L-Rxを有する、式IまたはIIの化合物は以下の化合物：
2018510163.tif 000052
である。
【０１４０】
A.  化合物を得る方法についての説明
IQB化合物は、多くの経路により合成することができる。CLT-D201と呼ぶIQB化合物への1つの例示的経路を、イソキノリジニル化合物7をオルト-ニトロ安息香酸8と縮合し、続いてさらに化学変換して、イソキノリジノ-ベンゾジアゼピン3を生成する段階で、図3に示す。脱保護したイソキノリジノベンゾジアゼピン3を、化合物3と同じ、または異なっていてもよい、別のベンゾジアゼピン誘導体と、アジドジカルボン酸ジエチルおよびトリフェニルホスフィンを用いての光延反応を実施することによりカップリングさせて、ジアリールエーテル連結ベンゾジアゼピン2を生成することができ、これを還元型化合物1に変換することができる。図4は、2つのベンゾジアゼピンが同じではない（前駆体4はイソキノリジノベンゾジアゼピンである一方で、前駆体3は、ベンゾジアゼピン部分を有するが、イソキノリジニル部分を有しない）同様の工程を示す。2つの異なるベンゾジアゼピン基を、ここでも光延化学を用い、図4に示す工程と同様にカップリングさせて、2つのベンゾジアゼピン基を連結するアリールエーテル架橋を段階的に導入する。図5は、さらに別のクラスのIQBを提供するための合成順序を示す。これら2つの合成順序から、多様な異なるベンゾジアゼピニル部分を式IおよびIIのIQB化合物中に組み込み得ることがわかる。
【０１４１】
加えて、連結アリールジエーテル架橋への前駆体は多くの様々な置換および付加を組み込むことができる。例えば、以下に示す化合物Aにおいて示す通り、アミノ置換ベンジル部分を組み込んでいるジオールを用いてアリールジエーテル架橋を生成することができる。多様なジオール中間体が式IまたはIIの化合物において有用であると考えられる。
【０１４２】
2018510163.tif 000053
化合物Aにおいて示す通り、アミノ部分を用いてリンカーLに結合し、さらに工夫して-L-Rxを有する式IまたはIIの化合物を生成してもよく、これを次いで標的結合物質Scと反応させて、-L-Scを有する式IまたはIIの結合体化合物を生成することができる。多くの異なるリンカー-L-およびRxを、この合成アプローチを用いて提供してもよい。一例を以下に示す：
2018510163.tif 000054
。
【０１４３】
反応性部分Rxを含むリンカーは、R5、R5'、Rb Rb'、またはXの位置で、図7A〜7C、8、9A、および9Bに示す合成スキームにより結合することができる。
【０１４４】
図7A〜7Cの合成スキームの図7Cにおいて、リンカー3の合成を示す。N-tert-ブトキシカルボン酸（Boc）-保護アミノ-ポリエチレングリコール（PEG）置換酢酸を、カルボジイミドカップリング試薬EDCおよびスクシンイミドを4-ジメチルアミノピリジン（DMAP）存在下で用いて、スクシンイミドエステルに変換する。次いで、この活性化スクシンイミドエステルを、ジペプチドであるバリニルアラニンのN-末端アミノに、ジメチルホルムアミド（DMF）中ジイソプロピルエチルアミン（DIEA）存在下でカップリングさせる。続いて、得られたBoc-アミノ-PEG-ジペプチドのカルボン酸をp-アミノベンジルアルコールのアミノ基に、N-エトキシカルボニル-2-エトキシ1,2-ジヒドロキノリン（EEDQ）を用いてのカルボジイミド触媒カップリングによりカップリングさせて、合成的に使用可能なベンジルアルコール官能基を有するリンカー3前駆体を生成する。そのベンジルアルコール部分を、DMF中DIEA存在下でのビス(4-ニトロフェニルカルボン酸エステルとの反応により、活性化パラニトロフェニルカルボン酸エステルに変換して、リンカー3を提供し、これは式IまたはIIのIQB化合物のアミノ官能基により置換され得る活性化ニトロフェニルカルボン酸エステルを有する。
【０１４５】
図7Aにおいて、前述の一般合成経路に従っての、式IまたはIIの例示的化合物の合成を示すが、具体的には、ニトロ基のビスアリールエーテル中への導入と、その後のイソキノリジニル環の導入を示す。イソキノリジニル部分のヒドロキシル基をアセチル化した後、ニトロ置換基を2段階変換でアミノ基に還元する。図7Bの最初の構造に示す通り、2つのアミノ置換基の一方だけを選択的に生成することで、ヒドロキシル基上にシリル保護基を導入した後、脱保護したアミノ置換基の位置で、1つの置換基の位置だけにリンカー3を導入することが可能となる。次いで、IQB環中核の残りを、酸化の後、環化することにより完成させる。反応性部分のマレイミドを、Boc保護基の除去、および遊離アミンにカップリングした3-マレイミジルプロピオニル部分の導入を含む、3段階の最後の段階で導入して、Rb'に-L-Rx置換基を有する式Iの化合物の一例であるCLT-D202を提供し、これは標的結合物質Scと反応するよう構成されている。
【０１４６】
図8において、リンカー3に対する記載と同様に合成するリンカー1を1-メチルアミノ-2,4,ジ-(ヒドロキシメチル)ベンゼン（化合物2）に、活性化ニトロフェニルカルボン酸エステルによってカップリングして、部分Xを生成する。これを、次いで、イソキノリジノ化合物3にビスカップリングさせて、式IのXがQである場合の部分QのR10に-L-Rxを有する式Iの化合物の別の例である生成物化合物4を提供する。化合物4は、マレイミドである反応性部分Rxを有する。
【０１４７】
図9Aおよび9Bにおいて、活性化ニトロフェニルカルボン酸エステル部分を有するリンカー2は二量体3に、式Iの5位のアミノ基を通じて結合している。二量体3の合成を図9Aに示し、前述の一般法と同様であるが、具体的にはイソキノリジニル前駆体におけるニトロ置換基の導入を示し、これをアミノ置換基に還元し、IQB環系の合成の残りを保護アミノ基として実施する。二量体3を、1当量のアミノ含有IQB部分および1当量の無置換IQB部分を用いて生成する。図9Bは、リンカー2を二量体3とカップリングさせて、R5に反応性部分Rxとしてのマレイミドを含む-L-Rxを有する式Iの化合物の一例であるCLT-D204を生成する。
【０１４８】
II.  結合体
標的結合部分を本開示のIQBに、様々な公知の架橋剤を用いて結合することができる。部分のポリペプチドへの共有または非共有結合のための方法は当技術分野において周知である。そのような方法には、化学架橋剤、光活性化架橋剤および/または二官能性架橋試薬の使用が含まれ得るが、それらに限定されない。分子を架橋する例示的方法は、米国特許第5,603,872号および米国特許第5,401,511号に開示されている。架橋試薬の非限定例には、グルタルアルデヒド、二官能性オキシラン、エチレングリコールジグリシジルエーテル、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミドまたはジシクロヘキシルカルボジイミドなどのカルボジイミド、ビスイミデート、ジニトロベンゼン、スベリン酸のN-ヒドロキシスクシンイミドエステル、酒石酸ジスクシンイミジル、ジメチル-3,3'-ジチオ-ビスプロピオンイミデート、アジドグリオキサール、-3-(2-ピリジルジチオ)プロピオン酸N-スクシンイミジル、および4-(ブロモアドミノエチル)-2-ニトロフェニルアジドが含まれる。
【０１４９】
いくつかの態様において、標的結合部分は抗体を含む。「抗体」なる用語は、抗原に特異的に結合し、認識する、免疫グロブリン遺伝子由来のフレームワーク領域を含むポリペプチド、またはその断片（「抗体断片」）を意味する。典型的には、「可変領域」は、抗体の抗原結合領域（またはその機能的等価物）を含み、結合の特異性および親和性において最も重要である。例示的な免疫グロブリン（抗体）構造単位は四量体を含む。各四量体はポリペプチド鎖の2つの同じ対からなり、各対は1つの「軽」鎖（約25kD）および1つの「重」鎖（約50〜70kD）を有する。
【０１５０】
「アイソタイプ」は、重鎖定常領域によって規定される抗体のクラスである。軽鎖はカッパまたはラムダのいずれかとして分類される。重鎖はγ、μ、α、デルタ、またはεとして分類され、これらはそれぞれアイソタイプクラス、IgG、IgM、IgA、IgD、およびIgEを規定する。抗体は完全な免疫グロブリンとして、または特異的抗体結合活性を含む、任意のいくつかの詳細に特徴決定された断片、例えば、F(ab)'2、またはFab'単量体として存在し得る。
【０１５１】
「モノクローナル抗体」は、抗原上の所与のエピトープに対する単一結合特異性および親和性を有する、抗体のクローン調製物を意味する。「ポリクローナル抗体」は、単一の抗原に対して産生されるが、異なる結合特異性および親和性を有する、抗体の調製物を意味する。「キメラ抗体」は、（a）抗原結合部位（可変領域、CDR、またはその一部）が、異なるもしくは改変されたクラス、エフェクター機能、および/もしくは化学種の定常領域に連結するように、またはキメラ抗体に新しい特性を付与する完全に異なる分子（例えば、酵素、毒素、ホルモン、成長因子、薬物など）に連結するように、定常領域またはその一部が改変されている、置き換えられている、または交換されているか；あるいは（b）可変領域またはその一部が、異なるもしくは改変された抗原特異性を有する可変領域（例えば、異なる種からのCDRおよびフレームワーク領域）で改変されている、置き換えられている、または交換されている、抗体分子である。
【０１５２】
「ヒト化抗体」は、非ヒト抗体のVHおよびVL領域から得た抗原結合ループが、すなわちCDRがヒトフレームワーク配列にグラフトされている、免疫グロブリン分子抗体を意味する。ヒト化、すなわち、非ヒトCDR配列の対応するヒト抗体の配列との置換は、例えば、米国特許第5,545,806号；同第5,569,825号；同第5,633,425号；同第5,661,016号；Riechmann et al., Nature 332:323-327 (1988)；Marks et al., Bio/Technology 10:779-783 (1992)；Morrison, Nature 368:812-13 (1994)；Fishwild et al., Nature Biotechnology 14:845-51 (1996)に記載の方法に従って行うことができる。米国特許第6,673,986号に開示されている通り、トランスジェニックマウス、または他の哺乳動物などの他の生物を用いて、ヒト化またはヒト抗体を発現してもよい。
【０１５３】
本明細書において用いられる「システイン置換抗体」なる用語は、システインで置換された、少なくとも1つの非天然定常領域免疫グロブリンアミノ酸残基を含む抗体を意味する。非天然置換は、アイソタイプではないものである。1つの態様において、置換残基は重鎖定常領域である。
【０１５４】
「抗原」、「抗体標的」などの用語は、抗体によって認識される、すなわち、抗体によって特異的に結合され得る、分子、化合物、または複合体を意味する。抗体は抗原上の「エピトープ」に結合する。
【０１５５】
「〜に特異的である」、「特異的に結合する」などの用語は、非標的化合物よりも少なくとも2倍高い親和性で、例えば、少なくとも4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、20倍、25倍、50倍、または100倍高い親和性のいずれかで、標的に結合する分子（例えば、抗体または抗体断片）を意味する。例えば、一次抗体に特異的に結合する抗体は、典型的には非一次抗体標的（例えば、異なる種由来の抗体もしくは異なるアイソタイプの抗体、または非抗体標的）よりも少なくとも2倍高い親和性で、一次抗体に結合すると考えられる。
【０１５６】
抗体標的（例えば、抗原、分析物、免疫複合体）に関する「捕捉」なる用語は、典型的には抗体が、純粋な集団中の抗体標的の大多数に結合することを示す（適切なモル比を仮定して）。例えば、所与の抗体標的に結合する抗体は、典型的には溶液中の抗体標的の少なくとも2/3（例えば、少なくとも75、80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、または100％のいずれか）に結合する。当業者であれば、結合を判定する方法および/または閾値に依存して、いくらかの変動性が生じることを理解するであろう。
【０１５７】
抗体またはその断片は、前述の-L-Rxを有する式IまたはIIの化合物による結合のために魅力的な標的であり得る官能基を有してもよい。マレイミドが反応性部分である、-L-Rxを組み込んでいる化合物は、抗体またはその断片において使用可能である場合、システイン残基のチオールまたは2つのシステイン側鎖から生成されるジスルフィドと反応してもよい。または、式IまたはIIの化合物のリンカーに結合したアジドまたはヨードアセトアミジル反応性部分も、システイン残基のチオールまたは分子内で生成されるジスルフィドと結合体を生成することができる。ジスルフィドは、反応性部分が両方の側鎖に一度に結合しうるビス-スルホンである、-L-Rxを有する式IまたはIIの化合物を用いることにより、特異的に標的とすることができる。
【０１５８】
抗体またはその断片のリジン側鎖を、反応性部分がイソチオシアネート、スクシンイミジルエステル、ハロゲン化スルホニル、カルボン酸、スルホスクシンイミジルエステル、4-スルホテトラフルオロフェニルエステル、テトラフルオロフェニルエステル、およびスルホジクロロフェノールエステルより選択されるが、それらに限定されない、-L-Rxを有する式IまたはIIの化合物と結合させることができる。カルボン酸が反応性部分である場合、リジン側鎖アミノ部分への結合反応は、カルボン酸をインサイチューで活性化する、カルボジイミドなどのカップリング試薬存在下で実施する。
【０１５９】
グルタミン側鎖は、反応性部分がアミノアルキル部分である、-L-Rxを有するIQBによって標的とされてもよい。アミノ部分は、グルタミニル結合IQBを提供するための改変トランスグルタミナーゼの基質であり得る。
【０１６０】
アルデヒドまたはケトンを、抗体またはその断片などの標的結合物質上に、多くの場合、抗体のグリカン部分の酸化処理により生成してもよい。過ヨウ素酸塩または他の酸化剤を用いて、反応性部分がヒドラジン、セミヒドラジド、カルボヒドラジド、またはヒドロキシルアミンである、-L-Rxを有する式IまたはIIの化合物によって標的とされ得る、これらのカルボニル含有部位を生成することができる。
【０１６１】
抗体またはその断片などの標的結合物質の操作された官能基も、-L-Rxを有する式IまたはIIの化合物によって結合され得る。セレノシステインを、操作された抗体断片にリボソーム性に組み込んでもよく、これはマレイミド反応性部分を有するIQBとの識別性の高い結合反応を提供し得る。
【０１６２】
アジドまたはシクロオクチン部分は標的結合物質に操作され、これは次いで銅フリーのクリックケミストリーを用いて、-L-Rxを有するIQBの反対の反応性部分、シクロオクチニルまたはアジジル反応性基を可能にし得る。
【０１６３】
リボソーム性組み込みによる非天然アミノ酸の導入は、パラアセチルフェニルアラニンを標的結合物質中に導入することができる。アセチル基を、反応性部分がアミノオキシ反応性基である、-L-Rxを有するIQBと結合させて、標的結合物質のオキシム結合生成物を提供することができる。このプロセスにより導入される別の非天然アミノ酸は、リジンのアジジル誘導体を提供することができ、これは反応性部分がシクロオクチンである、-L-Rxを有するIQBと反応することができ、銅フリーのクリックケミストリーを用いる。
【０１６４】
これらの例は決して限定的ではなく；-L-Scを有する式IおよびIIの結合体を生成するために、-L-Rxを有する式IおよびIIの化合物を用いて、抗体またはその断片などの標的結合物質の定義された結合への多くの他のアプローチが構想される。
【０１６５】
いくつかの態様において、抗体-薬物結合体は式III：
2018510163.tif 000055
の構造を有してもよく、
式中、
2018510163.tif 000056
は抗体または抗体断片であり；
W-RMはWおよびRxによって形成される連結部分であり、ここでWは抗体/抗体断片の天然または非天然アミノ酸残基に結合した部分であり、かつRxはL-IQBを抗体に連結している反応性部分であり；
Lはリンカーであり；ここでLは、結合であるか、またはC、N、O、S、もしくはハロゲンより選択される1〜200個の非水素原子を有する部分であり、かつLは、エーテル、オキソ、カルボキサミジル、ウレタニル、分枝、環式、不飽和、ヘテロ環式、芳香族、またはヘテロ芳香族部分を組み込んでもよく；
jは1〜10であり；かつ
IQBは、式（I）または（II）の構造を有する化合物である。
【０１６６】
いくつかの態様において、抗体-薬物結合体は式III：
2018510163.tif 000057
の構造を有してもよく、
式中、
2018510163.tif 000058
は抗体または抗体断片であり；
W-RMはWおよびRxによって形成される連結部分であり、ここでWは抗体/抗体断片の天然または非天然アミノ酸残基に結合した部分であり、かつRxは、W-RMがジスルフィド、チオール化スクシンイミジル、アミノ置換スクシンイミジル、(シクロオクチル)-1,4トリアゾリル、オキシム置換N-グリカン、オキシム、置換ビス-スルホプロピル、スルホンアミジル、アミド、またはチオカルバメート部分であるように、スクシンイミジル、マレイミジル、シロオクチニル、アミノオキシ、ビスルホニル、スルホニル、またはイソチオシアネート部分であり；Lはリンカーであり、ここでLは、結合であるか、またはC、N、O、S、もしくはハロゲンより選択される1〜200個の非水素原子を有する部分であり、かつLは、エーテル、オキソ、カルボキサミジル、ウレタニル、分枝、環式、不飽和、ヘテロ環式、芳香族、またはヘテロ芳香族部分を組み込んでもよく；jは1〜10までの数であり；かつIQBは、式（I）または（II）：
2018510163.tif 000059
の構造を有する化合物であり、
式中、-C(Ra)-と-N(Rb)-との間または-C(Ra')-と-N(Rb')-との間に示される点線の結合は独立して一重結合または二重結合であり；RaおよびRa'のそれぞれは独立してH、OH、または-O-Pであり、ここでPは保護基であり；存在する場合、RbおよびRb'のそれぞれは独立して、H、または、リンカーLに連結された結合であり；R2、R2'、R3、R3'、R4、R4'、R6'、およびR6はそれぞれ独立してH、OH、C1-C10アルキル、C2-C10アルケニル、またはC2-C10アルキニルより選択され；R5またはR5'のそれぞれは独立して、NH2、CO2H、H、OH C1-C10アルキル、C2-C10アルケニル、C2-C10アルキニル、リンカーLに連結された結合であり；R7およびR7'のそれぞれはHであり；R8は、H、NH2、CO2H、または、リンカーLに連結された結合であり、ここでR8が結合している炭素も水素置換基を有し；または、R8は構造
2018510163.tif 000060
を有するエキソオレフィンであり、ここでR8が結合している炭素は他の置換基を有せず；XはC1-12アルキレンであり、任意でここでアルキレン鎖が、O、S、およびNHからなる群より選択される1つもしくは複数のヘテロ原子により分断され；または、Xは-(CH2)m-Q-(CH2)p-であり、ここでmおよびpがそれぞれ独立して0、1、もしくは2であり；Qは式：
2018510163.tif 000061
の構造を有し；ここでR9、R10、およびR11のそれぞれは、H、NH2、CO2H、リンカーLに連結された結合であり；かつJはCHまたはNであり；YおよびY'のそれぞれは独立してO、S、またはNHであり；ZおよびZ'のそれぞれは独立してH、R、OH、OR、SH、SR、NH2、またはNHRであり、ここで各Rは独立して無置換C1-C12アルキル、置換C1-C12アルキル、無置換C3-C20ヘテロシクリル、置換C3-C20ヘテロシクリル、無置換C6-C20アリール基、および無置換C6-C20アリール基であり；かつここでRb、Rb'、R5、R5'、R8、R9、R10、およびR11の1つだけが、リンカーLに連結された結合である。
【０１６７】
Wは抗体のアミノ酸残基に直接または間接的に結合してもよい。いくつかの非限定例において、Wはシステイン残基のチオール、リジン残基のアミノ基、アミノ酸上で置換されたアジド基、例えば、p-アジドメチル-フェニルアラニン、またはアミノ酸上で置換されたアルデヒドもしくはケトンであってもよい。前述の任意の部分または当技術分野において公知の任意の他の適切な部分を、反応性部分Rxとの反応のために用いて、IQB化合物を導入してもよい。いくつかの他の態様において、Wは抗体のアミノ酸残基に間接的に、例えば、それに限定されないが、本明細書に記載の抗体中に操作されたN-グリカンに結合してもよい。
【０１６８】
RMは、W部分とRXとの間の反応後完了に、抗体-薬物結合体内に組み込まれたままの反応性部分Rxの一部である。Rxのいくつかの非限定例には、スクシンイミジル、マレイミジル、シロオクチニル、アミノオキシ、ビスルホンホニル、スルホニル、またはイソチオシアネート部分が含まれるが、当技術分野において公知の任意の適切なRxであってもよい。1つの非限定例において、RMはチオエーテルで置換されたスクシンイミジル部分であってもよく、これはマレイミジルRx部分をシステイン残基のチオールW部分と反応させた生成物である。RMは、本明細書に記載の任意のRxおよび適切な抗体置換基Wの生成物である任意のRM、または当技術分野において公知の任意の他のRMであってもよい。いくつかの態様において、W-RMはジスルフィド、チオール化スクシンイミジル、アミノ置換スクシンイミジル、(シクロオクチル)-1,4トリアゾリル、オキシム置換N-グリカン、オキシム、置換ビス-スルホプロピル、スルホンアミジル、アミド、またはチオカルバメート部分であってもよい。リンカーLは、本明細書に記載の構成要素の任意の組み合わせであってもよい。
【０１６９】
抗体-薬物結合体のIQBは、本明細書に記載の式IまたはIIの任意の化合物であってもよい。1つの態様において、IQB化合物は、式：
2018510163.tif 000062
の化合物である。
【０１７０】
抗体に結合した-W-RM-L-IQB部分は、抗体に直接または間接的に結合したW部分；任意の適切に交差反応性のRxのWとの反応から生じる任意のRM；RMをIQB化合物に接続している任意のリンカーL、および本明細書に記載の任意のIQBの任意の組み合わせを有してもよい。
【０１７１】
他の態様において、IQBは、構造：
2018510163.tif 000063
を有する部分である。
【０１７２】
いくつかの態様において、-W-RM-L-IQBは、式IV：
2018510163.tif 000064
の構造を有してもよい。
【０１７３】
-W-RM-L-IQB部分は、非天然システインのチオールW基に結合してもよい。抗体または抗体断片に結合した1つまたは複数の-W-RM-L-IQB部分が存在してもよい。いくつかの態様において、抗体に結合した1〜約3の-W-RM-L-IQB部分が存在してもよい。他の態様において、複数であるが、約2未満の-W-RM-L-IQB部分が存在してもよい。-W-RM-L-IQB部分の数は、-W-RM-L-IQB部分との結合体である抗体の集団は完全に反応しないこともあるか、または非天然システイン残基以外の他の部位で反応することもあるため、分数であってもよい。いくつかの態様において、抗体または抗体断片は抗CLL1である。いくつかの態様において、抗体または抗体断片は抗CLL1であり、かつIQBは、構造：
2018510163.tif 000065
を有する部分である。
【０１７４】
いくつかの態様において、抗体-薬物結合体は式IIIの化合物であり、ここで抗体または抗体断片は抗CLL1であり；W-RMはチオール化スクシンイミジルであり；かつIQBは、構造：
2018510163.tif 000066
を有する部分である。
【０１７５】
結合体の抗体は、本明細書に記載の任意の抗体または抗体断片であってもよい。抗体/抗体断片は、がん性骨髄増殖性細胞および/または白血病がん幹細胞に特異的に結合してもよく、正常な造血幹細胞には結合しなくてもよい。
【０１７６】
III.  薬学的組成物
活性成分としてイソキノリジノベンゾジアゼピンを含む剤形を有利に用いて、増殖性疾患を処置または予防してもよい。剤形を単独でまたは他の剤と組み合わせて投与または適用してもよい。イソキノリジノベンゾジアゼピンを別のイソキノリジノベンゾジアゼピンを含む別の薬学的活性物質と組み合わせて、製剤を対象に送達してもよい。
【０１７７】
ヒトの医学的使用のための、本開示の製剤は、活性成分をそのための薬学的に許容される担体および任意で他の治療成分と共に含む。担体は、製剤の他の成分と適合性であり、その受容者に対して有害でないといった意味で「許容され」なければならない。
【０１７８】
「有効量」、「有効用量」、「治療的有効量」などの用語は、前述の障害を改善するのに十分な、治療用物質の量を意味する。例えば、所与のパラメーターについて、治療的有効量は少なくとも5％、10％、15％、20％、25％、40％、50％、60％、75％、80％、90％、または少なくとも100％の治療効果の増大または低減を示す。治療的有効性は「〜倍」の増大または低減で表すこともできる。例えば、治療的有効量は、対照よりも少なくとも1.2倍、1.5倍、2倍、5倍、またはそれ以上の効果を有し得る。
【０１７９】
剤形は、対象への粘膜（例えば、鼻、舌下、膣、口腔、または直腸）、非経口（例えば、ボーラスまたは注入のいずれかでの、皮下、静脈内、筋肉内、または動脈内注射）、経口、または経皮投与のために調製することができる。剤形の例には、分散剤；坐剤；軟膏；パップ剤（湿布）；ペースト；散剤；包帯；クリーム；硬膏剤；液剤；パッチ；エアロゾル（例えば、鼻噴霧剤または吸入剤）；ゲル；懸濁剤（例えば、水性もしくは非水性液体懸濁剤、水中油乳剤、または油中水液体乳剤）、液剤、およびエリキシル剤を含む、対象への経口または粘膜投与に適した液体剤形；対象への非経口投与に適した液体剤形；ならびに、再構成して、対象への非経口投与に適した液体剤形を提供することができる、無菌固体（例えば、結晶または非晶質固体）が含まれるが、それらに限定されない。
【０１８０】
注射用（例えば、静脈内）組成物は、水性担体などの許容される担体中に懸濁された、抗体または抗体を標的とする組成物の溶液を含むことができる。任意の様々な水性担体、例えば、水、緩衝水、0.4％食塩水、0.9％等張食塩水、0.3％グリシン、5％デキストロースなどを用いることができ、安定性の増強のために、アルブミン、リポタンパク質、グロブリンなどの糖タンパク質を含んでもよい。多くの場合、生理緩衝食塩水（135〜150mM NaCl）を用いる。組成物は、生理的条件に近づけるために、pH調節および緩衝化剤、張性調節剤、湿潤剤、例えば、酢酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、モノラウリン酸ソルビタン、オレイン酸トリエタノールアミンなどの薬学的に許容される補助物質を含むことができる。いくつかの態様において、組成物は、静脈内投与のためのキットにおいて製剤化することもできる。
【０１８１】
例えば、関節内（関節の中）、静脈内、筋肉内、腫瘍内、皮内、腹腔内、および皮下経路などによる、非経口投与に適した製剤には、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、および製剤を所期の受容者の血液と等張にする溶質を含み得る、水性および非水性、等張無菌注射液剤、ならびに懸濁化剤、可溶化剤、増粘剤、安定化剤、および保存剤を含み得る、水性および非水性無菌懸濁剤が含まれる。注射液剤および懸濁剤は、無菌散剤、顆粒剤、および錠剤から調製することもできる。本発明の実施において、組成物を、例えば、静脈内注入により、局所、腹腔内、膀胱内、またはくも膜下腔内投与することができる。非経口投与および静脈内投与が好ましい投与法である。標的指向組成物の製剤は、単位用量または多用量の、アンプルおよびバイアルなどの密封容器で提供することができる。
【０１８２】
本開示の薬理活性化合物は、その有効量を腸内または非経口適用のいずれかに適した賦形剤または担体と共にまたは混合して含む、薬学的組成物の製造において有用である。好ましいのは、活性成分を下記の1つまたは複数と共に含む、錠剤およびゼラチンカプセル剤である：（a）希釈剤、例えば、ラクトース、デキストロース、スクロース、マンニトール、ソルビトール、セルロース、グリシンなど；（b）滑沢剤、例えば、シリカ、滑石、ステアリン酸、そのマグネシウムまたはカルシウム塩、ポリエチレングリコールなど；錠剤のためには下記も好ましい；（c）結合剤、例えば、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、デンプンのり、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムまたはポリビニルピロリドンなど；および、望まれる場合には、（d）崩壊剤、例えば、発泡剤混合物など；ならびに（e）吸収剤、着色剤、着香剤、および甘味料など。
【０１８３】
製剤は、単位用量剤形で都合よく提示してもよく、薬学の技術分野において周知の任意の方法によって調製してもよい。すべての方法は、活性成分を、1つまたは複数の補助的成分を構成する担体と混合する段階を含む。一般に、製剤は、活性成分を液体担体もしくは微粉化固体担体または両方と、均質かつ密接に混合し、次いで、必要があれば、生成物を所望の製剤に成形することにより調製する。
【０１８４】
前記薬学的組成物は、滅菌されていてもよく、かつ/あるいは保存剤、安定化剤、湿潤剤もしくは乳化剤、溶解促進剤、浸透圧を調節するための塩、および/または緩衝剤などの、補助剤を含んでもよい。加えて、それらは他の治療的に有用な物質を含んでもよい。前記組成物は、それぞれ通常の混合、造粒、またはコーティング法に従って調製し、約0.1〜75％、好ましくは約1〜50％の活性成分を含む。
【０１８５】
製剤中の活性物質の濃度は、かなり大きく変動し得、そして、例えば、処置する疾患または状態、活性物質の性質および活性、所望の効果、予想される有害反応、活性物質がその所期の標的に達する能力および速さ、ならびに対象および医師の特定の知識の範囲内の他の因子といった、様々な因子に依存すると考えられる。製剤は、典型的には、およそ約0.5重量％〜50重量％の活性物質、好ましくは約0.5重量％〜5重量％の活性物質、最適には約5重量％〜20重量％の活性物質を含む。
【０１８６】
IQB結合体は、複数の活性化合物、例えば、追加の化学療法剤もしくは細胞毒性剤、サイトカイン、または成長阻害剤を提供するように製剤化することもできる。活性成分は、持続放出製剤（例えば、固体疎水性ポリマーの半透性マトリックス（例えば、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ(2-ヒドロキシエチル-メタクリレート)、またはポリ(ビニルアルコール)）またはポリラクチド）として調製してもよい。抗体および免疫結合体は、コロイド薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルション、ナノ粒子およびナノカプセル）またはマクロエマルション中で、例えば、コアセルベーション技術により、または界面重合により調製したナノ粒子、例えば、それぞれヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチンマイクロカプセルおよびポリ(メチルメタクリレート)マイクロカプセル中に捕捉することもできる。
【０１８７】
本開示のIQBは、薬学的に許容される塩、例えば、薬学的に許容され、かつ親化合物の所望の薬理活性を有する化合物の塩の形をとってもよい。そのような塩には下記が含まれる：（1）塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などの無機酸と形成されるか、または酢酸、酪酸、プロピオン酸、ヘキサン酸、シクロペンタンプロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、乳酸、吉草酸、マロン酸、コハク酸、リンゴ酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、3-(4-ヒドロキシベンゾイル)安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、1,2-エタン-ジスルホン酸、2-ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、4-クロロベンゼンスルホン酸、2-ナフタレンスルホン酸、4-トルエンスルホン酸、カンファースルホン酸、4-メチルビシクロ[2.2.2]-オクタ-2-エン-1-カルボン酸、グルコヘプトン酸、3-フェニルプロピオン酸、トリメチル酢酸、第三ブチル酢酸、ラウリル硫酸、グルコン酸、グルタミン酸、ヒドロキシナフトエ酸、サリチル酸、ステアリン酸、ムコン酸などの有機酸と形成される、通常の化学的手段によって作製された酸付加塩；または（2）親化合物中に存在する酸性プロトンが金属イオン、例えば、アルカリ金属イオン、アルカリ土類イオン、もしくはアルミニウムイオンによって置き換えられる場合；またはエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、N-メチルグルカミンなどの有機塩基と配位する場合に形成される、通常の化学的手段によって作製された塩。
【０１８８】
IV.  使用法
A.  増殖性疾患の処置
本開示のイソキノリジノベンゾジアゼピンは、細胞成長（増殖）を阻害し、したがって対象、例えば、脊椎動物、例えば、哺乳動物、例えば、ヒトを処置するための薬学的組成物において有用である。IQBは、単独で、またはそれらが抗体などの細胞を標的とする作用物質に結合されている結合体として、投与することができる。
【０１８９】
「対象」、「患者」、「個体」などの用語は、交換可能に用いられ、示されている場合を除き、ヒトおよび非ヒト霊長類、ならびにウサギ、ラット、マウス、ヤギ、ブタ、ならびに他の哺乳動物種などの、哺乳動物を意味する。用語は必ずしも対象が特定の疾患と診断されていることを示すものではなく、典型的には「患者」は医学的監督下にある個体を意味する。患者は、処置、モニタリング、既存の治療法の調節または改変などを求めている個体であり得る。「がん患者」は、がんと診断されている個体、現在治療法に従っている個体、または、例えば、腫瘍を除去する手術後の、再発のリスクが高い個体を意味し得る。いくつかの態様において、がん患者は、がんと診断されており、治療の候補である。がん患者には、処置を受けたことがない個体、現在処置を受けている個体、手術を受けた個体、および処置を中止した個体が含まれ得る。
【０１９０】
「治療」、「処置」、および「改善」なる用語は、症状の重症度の任意の低減を意味する。がんを処置する場合、処置は、例えば、腫瘍サイズ、がん細胞の数、成長速度、転移活性を低減すること、非がん細胞の細胞死を低減すること、悪心および他の化学療法または放射線療法の副作用の低減などを意味し得る。炎症状態を処置する場合、処置は、例えば、炎症性サイトカインの血中レベル、疼痛、腫脹の低減、免疫細胞の動員などを低減することを意味し得る。本明細書において用いられる「処置する」および「予防する」なる用語は、絶対的用語であることを意図するものではない。処置および予防は、発症の任意の遅延、症状の改善、患者生存の改善、生存時間または生存率の増大などを意味し得る。処置および予防は、完全（検出不可能なレベルの新生物細胞）であり得るか、または本発明なしで生じた新生物細胞よりも少ない新生物細胞が患者で見出されるように部分的であり得る。処置の効果は、処置を受けていない個体もしくは個体群、または処置前もしくは処置中の異なる時点の同じ患者と比較することができる。いくつかの局面において、疾患の重症度は、例えば、投与前の個体または処置を受けていない対照個体と比べて、少なくとも10％低減される。いくつかの局面において、疾患の重症度は、少なくとも25％、50％、75％、80％、もしくは90％低減されるか、またはいくつかの場合では、標準の診断技術を用いてもはや検出不可能である。
【０１９１】
本開示の組成物は、がんなどの増殖性疾患の処置において有用である。「がん」、「腫瘍」、「形質転換」などの用語は、前がん性、新生物、形質転換、およびがん性細胞を含み、固形腫瘍、または非固形がんを意味し得る（例えば、Edge et al. AJCC Cancer Staging Manual (7th ed. 2009)；Cibas and Ducatman Cytology: Diagnostic principles and clinical correlates (3rd ed. 2009)参照）。がんには、良性および悪性新生物（異常成長）の両方が含まれる。「形質転換」は、自発性または誘導性表現型変化、例えば、細胞の不死化、形態変化、異常細胞成長、接触阻止および接着の低減、ならびに/または悪性病変を意味する（Freshney, Culture of Animal Cells a Manual of Basic Technique (3rd ed. 1994)参照）。形質転換は形質転換ウイルスによる感染および新しいゲノムDNAの組み込み、または外来性DNAの取り込みから生じ得るが、自発的または発がん物質への曝露後にも生じ得る。
【０１９２】
「がん」なる用語は、癌腫、肉腫、腺がん、リンパ腫、白血病、固形がんおよびリンパがんなどを意味し得る。異なる型のがんの例には、肺がん（例えば、非小細胞肺がん、すなわちNSCLC）、卵巣がん、前立腺がん、結腸直腸がん、肝がん（すなわち、肝細胞がん）、腎がん（すなわち、腎細胞がん）、膀胱がん、乳がん、甲状腺がん、胸膜がん、膵がん、子宮がん、子宮頚がん、精巣がん、肛門がん、膵がん、胆管がん、消化管カルチノイド腫瘍、食道がん、胆嚢がん、虫垂がん、小腸がん、胃癌（胃がん）、中枢神経系のがん、皮膚がん、絨毛がん；頭頸部がん、血液がん、骨肉腫、線維肉腫、神経芽細胞腫、神経膠腫、黒色腫、B細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、小細胞型リンパ腫、大細胞型リンパ腫、骨髄異形成症候群（MDS）、単球性白血病、骨髄性白血病、急性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病（AML）、慢性骨髄性白血病（CML）、および多発性骨髄腫が含まれるが、それらに限定されない。いくつかの態様において、本発明の組成物および方法は、がんを処置するために有用である。
【０１９３】
標的とされ得るがんには、例えば、白血病（例えば、急性リンパ芽球性白血病（ALL）、急性骨髄性白血病（AML）、慢性リンパ球性白血病（CLL）および慢性骨髄性白血病（CML））、乳がん、前立腺がん、結腸直腸がん、脳がん、食道がん、頭頚部がん、膀胱がん、婦人科がん、脂肪肉腫、ならびに多発性骨髄腫が含まれる。いくつかの態様において、開示する開示のCAR内の標的結合ドメインは、GPR114、CLL-1、IL1RAP、TIM-3、CD19、CD20、CD22、ROR1、メソテリン、CD33、CD123/IL3Ra、c-Met、PSMA、前立腺酸性ホスファターゼ（PAP）、CEA、CA-125、Muc-1、AFP、糖脂質F77、EGFRvIII、GD-2、NY-ESO-1 TCR、チロシナーゼ、TRPI/gp75、gp100/pmel-17、メラン-A/MART-1、Her2/neu、WT1、EphA3、テロメラーゼ、HPV E6、HPV E7、EBNA1、BAGE、GAGEおよびMAGE A3 TCRSLITRK6、ENPP3、ネクチン-4、CD27、SLC44A4、CAIX、Cripto、CD30、MUC16、GPNMB、BCMA、Trop-2、組織因子（TF）、CanAg、EGFR、αv-インテグリン、CD37、葉酸受容体、CD138、CEACAM5、CD56、CD70、CD74、GCC、5T4、CD79b、Steap1、Napi2b、ルイスY抗原、LIV、c-RET、DLL3、EFNA4、エンドシアリン/CD248、ならびに当業者には公知の他の標的を含むがそれらに限定されない、任意の広範な標的群に結合することができる。
【０１９４】
「がん標的」または「がんマーカー」は、がん、例えば、がん細胞上またはがん環境において、差次的に発現または処理される分子である。例示的ながん標的は、IL1RAPなどの細胞表面タンパク質（また、例えば、細胞接着分子および受容体）、細胞内受容体、ホルモン、および細胞によってがん環境中に分泌されるプロテアーゼなどの分子である。具体的ながんのマーカーは当技術分野において公知であり、例えば、結腸および結腸直腸がん上のMUC1発現、肺がんにおけるボンベシン受容体、ならびに前立腺がん上の前立腺特異的膜抗原（PSMA）である。
【０１９５】
「過剰発現された」または「上方制御された」なる用語は交換可能に、対照よりも検出可能に高いレベルで転写または翻訳されるタンパク質または核酸、一般にはバイオマーカーを意味する。この用語は、転写、転写後プロセシング、翻訳、翻訳後プロセシング、細胞局在（例えば、小器官、細胞質、核、細胞表面）、ならびにRNAおよびタンパク質安定性による過剰発現を含む。過剰発現は、mRNA（すなわち、RT-PCR、ハイブリダイゼーション）またはタンパク質（すなわち、フローサイトメトリー、画像法、ELISA、免疫組織化学的技術）のいずれであろうと、通常のバイオマーカー検出技術を用いて検出することができる。過剰発現は、正常細胞と比べて、少なくとも10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、またはそれ以上のいずれかであり得る。
【０１９６】
いくつかの態様において、がん標的は、ある特定の型のがん細胞、例えば、白血病、骨髄腫、リンパ腫、AML、CML、非小細胞肺がん細胞、前立腺がん、結腸直腸がん、乳がん、または卵巣がんに結合し得る。細胞型特異的標的は、典型的にはその細胞型において参照細胞集団よりも少なくとも2倍高いレベルで発現される。いくつかの態様において、細胞型特異的マーカーは、参照集団におけるその平均発現よりも少なくとも3、4、5、6、7、8、9、10  20、50、100、または1000倍高いレベルで存在する。したがって、標的を検出または測定して、関心対象の細胞型と他の細胞を区別することができる。
【０１９７】
がん幹細胞（CSC）は、がんの大部分を構成する細胞を生じ得る腫瘍中または血液がん中に見出される細胞である。CSCはまた、自己再生性であり得、正常な（非がん）幹細胞に類似であり得る。CSCは、したがって、個体における非腫瘍組織に移動し、「新しい」腫瘍を開始することにより、転移を媒介することができる。CSCは、がんが検出される病期に依存して、任意の所与のがんの非常にわずかなパーセンテージを構成する。例えば、AML細胞の試料中のCSCの平均出現頻度は約1：10,000と考えられる。造血CSCは、正常な造血幹細胞（HSC）に類似のCD34+として同定することができる。他のCSC関連マーカーには、CD44（乳房）、CD133（神経膠がん）、およびノッチ（例えば、骨髄腫および神経芽細胞腫）が含まれる。
【０１９８】
がん標的のために本明細書に記載のIQBを抗体-薬物結合体内に組み込みことができる、がん標的の1つの非限定例は、C型レクチン様分子1（「CLL-1」）である。CLL-1は、AML芽細胞上およびLSC上で発現されるが、正常な造血幹細胞上では発現されない。CLL-1は、骨髄および血液区画の両方における白血病細胞上で発現される。標的抗原は、すべてのAML French American British（FAB）分類および細胞遺伝学的リスクカテゴリーにわたって存在し、FLT-3状態に無関係に発現される。標的は、新たに発生した疾患状態および再発疾患状態で発現される。多剤耐性（MDR）と組み合わせたCLL-1抗原の発現は、不良な疾患予後、および再発の高い確率と関連する。
【０１９９】
AMLにおいて発現されることに加えて、CLL-1は、MDSおよび他の骨髄増殖性障害（例えば、真性多血症、本態性血小板血症、および多発性骨髄線維症）においても発現される。
【０２００】
C型レクチン様分子1（CLL-1）は、CLEC12A、DCAL-2、およびMICLとしても公知であり、II型膜タンパク質（ITIMドメイン-TMドメイン-ストークドメイン-レクチン様ドメイン）である。CLL-1の細胞外ドメインは高度にグリコシル化され、骨髄系統の細胞でのみ発現される。
【０２０１】
CLL-1のヌクレオチドおよびタンパク質の配列は多くの種について公知である。例えば、ヒト配列はGenBankアクセッション番号AF247788.1およびUniprotアクセッション番号Q5QGZ9で見出すことができる。ヒトCLL-1タンパク質について、細胞外ドメインはおよそアミノ酸65〜265を含み、膜貫通ドメインはおよそアミノ酸44〜64を含み、かつ細胞質ドメインはおよそアミノ酸1〜43を含む。ヒトCLL-1のストークドメインはアミノ酸65〜139におよび、Cレクチンドメインはアミノ酸140〜249におよぶ。当業者であれば、CLL-1多様体（例えば、種同族体、対立遺伝子多様体など）は、例えば、保存された残基およびドメインの同定のために、最適にアラインされ得ることを理解するであろう。
【０２０２】
「CLL-1特異抗体」、「抗CLL-1抗体」、「CLL-1抗体」、「CLL-1 ADC」、および「抗CLL-1」なる用語は本明細書において同義語として用いられ、CLL-1の様々にグリコシル化された形を含む、CLL-1に特異的に結合する抗体（または文脈に応じて、抗体結合体）を意味する。本明細書に記載のCLL-1抗体は、例えば、ある特定のがん細胞の表面上で発現されるがHSCでは発現されないCLL-1ポリペプチドに特異的に結合する。以下により詳細に記載する通り、本発明の抗CLL-1抗体はCLL-1発現細胞に結合し、他のAMLを標的とする抗体に比べて高いパーセンテージのAML細胞に結合し、AML細胞増殖を阻害し、かつそれらの破壊を媒介することができる。
【０２０３】
「CLL-1関連障害」（またはCLL-1関係障害、CLL-1障害、CLL-1関係状態もしくは疾患など）は、標準の対照（例えば、正常、非疾患、非がん細胞）におけるCLL-1発現に比べて、高いまたは低いCLL-1の細胞表面発現に相関する状態および疾患を意味する。CLL-1レベル上昇はがん細胞、特にAML（急性骨髄性白血病）、MDS（骨髄異形成症候群）、およびCML（慢性骨髄性白血病）などの白血病、ならびに、造血CSC（例えば、LSC）に関連している。
【０２０４】
AMLおよび関与する系統のがん幹細胞を標的とするのに有用であり得る抗体の1つの非限定例は、抗CLL-1抗体、より具体的にはヒト化抗CLL1抗体である。そのような抗体は、例えば、米国特許第2013/0295118号および米国特許仮出願第62/359,100号に記載されており、いずれも参照により本明細書に組み入れられる）。いくつかの態様において、抗CLL-1抗体は、任意でキメラ（例えば、ヒト化）抗体であり、それぞれSEQ ID NO: 1および2の軽鎖および重鎖可変領域を含む。ある特定の態様において、抗体は別の残基に代わるシステイン残基の置換を含み得る。本開示の組成物は、システイン残基を通じて抗体に結合することができる。一例において、239位のセリン残基はシステインで置換されている（S239C）。複数のIQB化合物をそのように改変された抗体中に組み込んでもよい。いくつかの態様において、抗体に結合したIQB化合物の数は、1〜約10個の範囲の任意の数、または分数を含む中間の任意の数であってもよい。いくつかの態様において、抗体に結合したIQB化合物の数は、1〜約3個の範囲内である。本明細書に記載のIQBを組み込んでいるそのような抗体は、以下に記載するインビトロおよびインビボ適用において有効であることが判明している。
【０２０５】
B.  用量
対象の増殖性障害の処置または予防において有効であると考えられるイソキノリジノベンゾジアゼピンの量は、状態の具体的性質に依存することになり、当技術分野において公知の標準の臨床技術によって決定することができる。加えて、最適な用量範囲を特定するのを助けるために、インビトロおよびインビボアッセイ法を任意で用いてもよい。任意の特定の個体に対する具体的用量レベルは、イソキノリジノベンゾジアゼピンの相対的活性、年齢、体重、全体的な身体および精神の健康、遺伝的因子、環境の影響、性別、食事、投与の時間、投与経路、排出速度、ならびに処置中の特定の問題の重症度を含む、様々な因子に依存することになる。
【０２０６】
「用量」および「投与量」なる用語は、本明細書において交換可能に用いられる。用量は、各投与時に個体に与えられる活性成分の量を意味する。本発明のために、用量は、抗体または関連する構成要素の濃度、例えば、治療用物質の量または放射性標識の線量を意味し得る。用量は、投与の頻度；個体のサイズおよび耐容性；状態の重症度；副作用のリスク；投与経路；ならびに検出可能な部分（存在する場合）の撮像様式を含む、いくつかの因子に応じて変動することになる。当業者であれば、用量は前述の因子に依存して、または治療の経過に基づいて、変更し得ることを理解するであろう。「剤形」なる用語は、薬剤の特定の形式を意味し、投与経路に依存する。例えば、剤形は液剤、例えば、注射用食塩溶液であり得る。
【０２０７】
「対照」の試料または値は、試験試料との比較のための、参照、通常は公知の参照として役立つ試料を意味する。例えば、試験試料を、例えば、試験化合物存在下の試験状態から採取し、例えば、試験化合物非存在下（陰性対照）、または公知の化合物存在下（陽性対照）の公知の状態からの試料と比較することができる。対照は、いくつかの試験または結果から集めた平均値を表すこともある。当業者であれば、対照は任意の数のパラメーターの評価のために設計しうることを理解するであろう。例えば、対照は、薬理学的データ（例えば、半減期）または治療尺度（例えば、利益および/または副作用の比較）に基づいて治療利益を比較するために考案することができる。対照は、インビトロ適用のために設計することができる。当業者であれば、所与の状況においてどの対照が役立つかを理解し、対照値との比較に基づいてデータを分析することができるであろう。対照は、データの有意性を判定するためにも役立つ。例えば、所与のパラメーターの値が対照において大きくばらつく場合、試験試料の変動は有意とは考えられない。
【０２０８】
ある特定の態様において、本開示のイソキノリジノベンゾジアゼピンは、抗体などの標的結合部分に結合すると考えられる。標的結合部分は、そのような細胞の存在によって引き起こされる状態を患っている対象を処置するために、除去するよう標的とされる細胞上の標的に特異的であり得る。標的は、標的細胞上の任意の生体分子であり得る。標的細胞はがん細胞を含み得る。したがって、標的は、例えば、がん細胞上で発現されるポリペプチド、例えば、腫瘍関連抗原を含み得る。別の態様において、標的結合部分は、腫瘍関連抗原、ウイルス抗原、もしくはウイルス関連抗原またはそのようなポリペプチドの断片の細胞外ドメイン内のアミノ酸を含む抗原決定基に結合し得る、キメラ抗原受容体（「CAR」）であり得る。
【０２０９】
経口投与に適した用量範囲は、特定のイソキノリジノベンゾジアゼピンまたはイソキノリジノベンゾジアゼピン抗体結合体の有効性に依存するが、一般には体重1kgあたり約0.001mg〜約500mg、好ましくは体重1kgあたり約0.1mg〜約200mg、より好ましくは約1〜約100mg/kg体重/日である。用量範囲は当業者には公知の方法によって容易に決定し得る。例えば、担体材料と組み合わせて単一の剤形を生成し得る活性成分の量は、処置する対象および特定の投与様式に応じて変動する。用量単位剤形は一般には約1mg〜約500mgの活性成分を含む。
【０２１０】
投与は定期的であり得る。投与経路に応じて、用量を、例えば、1、3、5、7、10、14、21、もしくは28日またはそれ以上に1回（例えば、2、3、4、または6ヶ月に1回）投与することができる。いくつかの場合には、投与はより頻繁、例えば、1日に2または3回である。当業者には理解される通り、対象をモニターして、治療の経過および任意の有害副作用に応じて投与の用量および頻度を調節することができる。
【０２１１】
したがって、いくつかの態様において、追加の投与は対象の経過に依存し、例えば、対象を投与間にモニターする。例えば、最初の投与または一連の投与の後に、対象を腫瘍成長の速度、再発（例えば、術後の対象の場合）、または虚弱、疼痛、悪心などの一般的な疾患関連症状についてモニターすることができる。
【０２１２】
C.  投与法
抗体結合体組成物を、任意の他の好都合な経路により、例えば、注入もしくはボーラス注射により、または上皮もしくは粘膜皮膚内層（例えば、口腔粘膜、直腸、および腸粘膜など）を通じた吸収により投与してもよい。投与は、全身または局所であり得る。抗体結合体組成物を投与するために用い得る、様々な送達系が公知である（例えば、リポソーム、微小粒子、マイクロカプセル、カプセルなどへの封入）。投与法には、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻内、硬膜外、鼻内、および脳内が含まれるが、それらに限定されない。
【０２１３】
対象の増殖性障害の処置または予防において有効であると考えられるイソキノリジノベンゾジアゼピン抗体結合体の量は、状態の具体的性質に依存することになり、当技術分野において公知の標準の臨床技術によって決定することができる。加えて、最適な用量範囲を特定するのを助けるために、インビトロおよびインビボアッセイ法を任意で用いてもよい。任意の特定の個体に対する具体的用量レベルは、イソキノリジノベンゾジアゼピン抗体結合体の相対的活性、年齢、体重、全体的な身体および精神の健康、遺伝的因子、環境の影響、性別、食事、投与の時間、投与経路、排出速度、ならびに処置中の特定の問題の重症度を含む、様々な因子に依存することになる。
【０２１４】
IQBまたはIQB結合体は、静脈内、皮下、筋肉内、または腹腔内経路を含むが、それらに限定されない、任意の適切な経路を通して注射または注入により投与することができる。薬学的組成物の投与の例は、組成物を4℃で注射用無菌等張食塩水溶液中10mg/mlで保存すること、およびそれを100mlまたは200mlいずれかの注射用0.9％塩化ナトリウム中で希釈した後、対象に投与することを含む。組成物を、0.2〜10mg/kgの間の用量で1時間の静脈内注入により投与する。他の態様において、組成物を、15分〜2時間の期間で静脈内注入により投与する。さらに他の態様において、投与手順は皮下ボーラス注射による。
【０２１５】
以下の実施例は、例示のために提供するものであり、限定のためではない。
【実施例】
【０２１６】
実施例1〜3において用いる一般法：1H NMRスペクトルはBruker Avance III 500 MHz NMR装置および/またはVarian Inova 300 MHz分光計で記録した。クロマトグラフィによる純度をAgilent 1100 Series LC/MS装置で、Merck Chromolith RP-18e分析用HPLCカラム（一体式、50×2mm）を用い、HPLC分析法に従って判定した：注入量5〜15μL；流速1.0mL/min；5分間かけて水中5〜95％アセトニトリル（調節剤として0.05％AcOH）；Agilentダイオードアレイ検出器、λ＝280、254および220nm；室温。すべての分析について、用いた質量分析計はAgilent 1100および/または1200 LC/MSD (SL)であった。
【０２１７】
すべての順相精製はRediSep(登録商標)Rf Goldカラム（Teledyne ISCO；Lincoln、Nebraska）をTeledyne ISCO CombiFlash Rf 200と共に用い、A→Bからなる溶媒勾配を用いて実施した。AおよびBの具体的同一性、ならびに用いた勾配は、以下の各固有の実施例について示す。
【０２１８】
すべての逆相精製はRediSep(登録商標)Rf逆相C18カラム（Teledyne ISCO）をTeledyne ISCO CombiFlash Rf 200と共に用い、A：H2O（0.05％AcOH）およびB：アセトニトリル（0.05％AcOH）からなる溶媒勾配を用いて実施した。用いたカラムの具体的サイズおよび特定の溶媒勾配は、以下の各固有の実施例について示す。
【０２１９】
以下の実施例で用いた水は、Veolia ELGA PURELAB flex精製システム（ELGA LLC；Woodridge、Illinois）で精製した超純水（18MΩ）であった。
【０２２０】
実施例1−CLT-D201の合成
2-(4-ベンジルオキシ-5-メトキシ-2-ニトロ-ベンゾイル)-1,2,3,4-テトラヒドロ-イソキノリン-3-カルボン酸メチルエステル（6）
2018510163.tif 000067
図3を参照して、テトラヒドロフラン（THF）（16mL）中の4-ベンジルオキシ-5-メトキシ-2-ニトロ-安息香酸（8）（4.00g、13.2mmol）の22℃でアルゴンパージした溶液に、塩化オキサリル（1.68mL、19.8mmol）と、続いてジメチルホルムアミド（DMF）（0.2mL）を加えた。反応混合物をAr雰囲気下、22℃で終夜撹拌した。次いで、混合物を減圧下で濃縮し、THFに再溶解し、再度濃縮して、粗製酸塩化物を得た。
【０２２１】
別のフラスコ中で、1,2,3,4-テトラヒドロ-イソキノリン-3-カルボン酸メチルエステル（7）（3.78g、19.8mmol）およびトリエチルアミン（4.60mL、33.0mmol）にArをパージし、ジクロロメタン（DCM）（20mL）に溶解し、-30℃まで冷却した。この混合物に、Ar雰囲気下、DCM（15mL）中の粗製酸塩化物を、混合物の内部温度を≦-20℃に維持しながら滴加した。次いで、冷却浴を取り除き、反応混合物を、周囲温度まで加温しながら、3時間撹拌し、この時点で反応は完了した。次いで、混合物を濃縮し、酢酸エチル（EtOAc）とH2Oとの間で分配した。反応混合物をEtOAc（3×50mL）で抽出し、次いで、合わせた有機物をH2O（50mL）で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過して濃縮した。得られた残渣をカラムクロマトグラフィ（0→10％メタノール（MeOH）/DCM）で部分精製して、不純な（3）をLC/MSにより＞85％純度の黄色泡状物（4.34g、収率69％、9.11mmol）で得た。LC/MS：保持時間3.39分。LC/MS (ES+) C26H25N2O7: [M+H]+計算値477；実測値477。
【０２２２】
2-ベンジルオキシ-3-メトキシ-11,11a-ジヒドロ-6H,13H-5a,13-ジアザ-ベンゾ[4,5]シクロヘプタ[1,2-b]ナフタレン-5,12-ジオン（5）
2018510163.tif 000068
MeOH（230mL）中の不純な2-(4-ベンジルオキシ-5-メトキシ-2-ニトロ-ベンゾイル)-1,2,3,4-テトラヒドロ-イソキノリン-3-カルボン酸メチルエステル（6）（3.3g、6.9mmol）の溶液に、ヘラ先のラネー(登録商標)Niを加えた。次いで、混合物を加熱還流し、MeOH（40mL）中のヒドラジン水和物（4.3mL、139mmol）を滴加した。ヒドラジン添加後、速やかな発泡が観察された。ヒドラジンの添加が完了すれば、ラネーNiのさらなる添加後も、それ以上の発泡は観察されなかった。次いで、反応混合物をさらに30分間還流し、反応はLC/MSにより完了と判断した。（注：反応時間が長くなると、望まれない脱ベンジル化につながる）。反応混合物を加熱からはずし、セライトを通してろ過し、MeOHで洗浄した。ろ液を減圧下で濃縮し、DCMと共沸させた。得られた固体をDCMで粉砕し、白色沈殿物を得た。残りのろ液残渣をカラムクロマトグラフィ（0→10％MeOH/DCM）で精製した。洗浄したろ過ケークはまだ生成物を含み、100mLの1：1アセトニトリル（ACN）/H2Oに懸濁し、固体を新しいセライトを通してろ過し、ろ液を凍結乾燥した。清浄な材料の3つのバッチ（粉砕沈殿物、凍結乾燥材料、およびカラムクロマトグラフィからの清浄な分画）すべてを合わせて、（4）を白色結晶性固体（2.26g、収率79％、5.44mmol）で得た。
2018510163.tif 000069
。LC/MS：保持時間2.92分。(ES+) C25H23N2O4: [M+H]+計算値415；実測値415。
【０２２３】
2-ベンジルオキシ-3-メトキシ-13-(2-トリメチルシラニル-エトキシメチル)-11,11a-ジヒドロ-6H,13H-5a,13-ジアザ-ベンゾ[4,5]シクロヘプタ[1,2-b]ナフタレン-5,12-ジオン（4）
2018510163.tif 000070
ドライアイス/ACN浴中で-40℃まで冷却した、THF（60mL）中の2-ベンジルオキシ-3-メトキシ-11,11a-ジヒドロ-6H,13H-5a,13-ジアザ-ベンゾ[4,5]シクロヘプタ[1,2-b]ナフタレン-5,12-ジオン（5）（2.26g、5.44mmol）のアルゴンパージした溶液に、n-ブチルリチウム（nBuLi）（ヘキサン中1.6M溶液4.25mL、6.80mmol）を滴加した。混合物を-40℃で1時間撹拌し、次いで20mL THF中の塩化2-トリメチルシリル)エトキシメチル（1.20mL、6.80mmol）の溶液を滴加した。得られた混合物を終夜、周囲温度までゆっくり加温した。次いで、反応混合物を減圧下で濃縮し、残渣をEtOAcとH2Oとの間で分配した。反応混合物をEtOAc（3×50mL）で抽出し、次いで合わせた有機物を食塩水（50mL）で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過して濃縮した。得られた残渣をカラムクロマトグラフィ（0→50％EtOAc/ヘキサン）で精製して、（4）を黄色泡状物（1.99g、収率67％、3.66mmol）で得た。
2018510163.tif 000071
。LC/MS：保持時間3.97分。(ES+) C31H37N2O5Si: [M+H]+計算値545；実測値545。
【０２２４】
2-ヒドロキシ-3-メトキシ-13-(2-トリメチルシラニル-エトキシメチル)-11,11a-ジヒドロ-6H,13H-5a,13-ジアザ-ベンゾ[4,5]シクロヘプタ[1,2-b]ナフタレン-5,12-ジオン（3）
2018510163.tif 000072
EtOH（40mL）中の2-ベンジルオキシ-3-メトキシ-13-(2-トリメチルシラニル-エトキシメチル)-11,11a-ジヒドロ-6H,13H-5a,13-ジアザ-ベンゾ[4,5]シクロヘプタ[1,2-b]ナフタレン-5,12-ジオン（4）（1.99g、3.66mmol）の溶液をArでパージし（3×）、次いでPd(OH)2（400mg）を加えた。混合物をAr（3×）と、次いでH2（3×）でパージした。得られた混合物をH2（1気圧）雰囲気下、周囲温度で30分間撹拌し、その時点で反応はTLCおよびLC/MSにより完了と判断した。Ar（3×）でパージした後、反応混合物をセライトを通してろ過し、MeOHで洗浄し、ろ液を減圧下で濃縮し、得られた残渣をカラムクロマトグラフィ（0→75％EtOAc/ヘキサン）で精製して、（6）を黄色固体（1.63g、収率98％、3.58mmol）で得た。
2018510163.tif 000073
。LC/MS：保持時間3.30分。(ES+) C24H29N2O5Si: [M-H]-計算値453；実測値453。
【０２２５】
ビスSEM-CLT-D201（2）
2018510163.tif 000074
THF（2.4mL）中の2-ヒドロキシ-3-メトキシ-13-(2-トリメチルシラニル-エトキシメチル)-11,11a-ジヒドロ-6H,13H-5a,13-ジアザ-ベンゾ[4,5]シクロヘプタ[1,2-b]ナフタレン-5,12-ジオン（3）（300mg、0.660mmol）のアルゴンパージした溶液に、トリフェニルホスフィン（260mg、0.990mmol）を加えた。次いで、混合物を0℃に冷却し、アゾジカルボン酸ジエチル（114μL、0.726mmol）を滴加した。得られた混合物を0℃で45分間撹拌し、次いで1,3-プロパンジオール（23μL、0.317mmol）を冷反応混合物に加え、混合物を終夜、周囲温度までゆっくり加温した。混合物を減圧下で濃縮し、得られた残渣をカラムクロマトグラフィ（0→75％EtOAc/ヘキサン）で精製して、（2）を黄色固体（103mg、収率34％、0.109mmol）で得た。
2018510163.tif 000075
。LC/MS：保持時間4.39分。(ES+) C51H65N4O10Si2: [M+H]+計算値949；実測値949。
【０２２６】
CLT-D201
2018510163.tif 000076
撹拌子を含む乾燥機で乾燥した4mLバイアルに、ビスSEM-CLT-D201（2）（50.0mg、0.526mmol）を加えた。固体をアルゴン雰囲気下に置き、次いで無水THF（1.5mL）に溶解し、得られた溶液をドライアイス/アセトン冷却浴中で-78℃まで冷却した。冷却溶液に、水素化トリエチルホウ素リチウム（110μL、0.111mmol、THF中1.0M溶液）を5分かけて滴加した。反応混合物を-78℃で90分間撹拌し、その時点で1.0mLのH2Oをシリンジで加え、溶液を冷却浴からはずし、周囲温度に到達させた。THFを減圧下で除去し、得られた水性懸濁液に1.0mLのDMSOを加えた。この溶液をあらかじめ平衡化した30gのRediSep(登録商標)Rf逆相C18カラムに向けてロードした。生成物を5〜95％アセトニトリル/水（0.05％AcOH）の勾配を用いて溶出した。純粋な分画を合わせ、凍結乾燥して、8.7mg（収率25％）の所望の生成物（1）を飛散性白色固体で得た。
2018510163.tif 000077
。LC/MS：保持時間2.77分。(ES+) C39H37N4O6: [M+H]+計算値657；実測値657。
【０２２７】
CLT-D201細胞毒性
化合物の細胞毒性を、CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay（Promega Cat# G7573）を製造者の説明書に記載の通りに用いて評価した（Arduengo, M., Cell Notes, 2003, 5:15-17）。このアッセイ法は、細胞を溶解して、細胞成長の尺度である、アデノシン三リン酸（ATP）の存在量に比例する「グロー型」発光シグナルを生成する試薬を含む。
【０２２８】
組織培養96穴平底プレートに、50μLの培地中1000細胞/ウェルで、細胞を播種した。プレートの周辺部のウェルは使用せず、周辺部のウェルには200μLの培地を加えて、インキュベーション中の蒸発を防止した。次いで、最終濃度の2倍で試験した化合物50μLをウェルに三つ組で加えた。プレートを37℃、5％CO2で、72時間インキュベートした後、100μLのCellTiter-Glo試薬を各ウェル（周辺部のウェルを除く）に加えた。次いで、プレートを振盪機において室温で10分間インキュベートした。インキュベーション後、上清100μLを白色ソリッド96穴プレートに移し、発光を分光光度計で測定した。生存率パーセントを非処置対照に基づいて算出した：生存率％＝(処置/非処置)*100。
GI50：細胞成長の50％阻害に必要な化合物の濃度。
【０２２９】
実施例2−CLT-D501の合成
2018510163.tif 000078
2-[3-(t-ブチル-ジメチル-シラニルオキシ)-プロポキシ]-3-メトキシ-13-(2-トリメチルシラニル-エトキシメチル)-11,11a-ジヒドロ-6H,13H-5a,13-ジアザ-ベンゾ[4,5]シクロヘプタ[1,2-b]ナフタレン-5,12-ジオン（5）
図4を参照して、THF（8.8mL）中の2-ヒドロキシ-3-メトキシ-13-(2-トリメチルシラニル-エトキシメチル)-11,11a-ジヒドロ-6H,13H-5a,13-ジアザ-ベンゾ[4,5]シクロヘプタ[1,2-b]ナフタレン-5,12-ジオン（6）（400mg、0.880mmol）の22℃でアルゴンパージした溶液に、トリフェニルホスフィン（462mg、1.76mmol）およびアザジカルボン酸ジ-t-ブチル（405mg、1.76mmol）を加えた。混合物を1時間撹拌し、次いで3-(t-ブチル-ジメチル-シラニルオキシ)-プロパン-1-オール（282μL、1.32mmol）を反応混合物に加えた。反応混合物をAr雰囲気下、22℃で終夜撹拌した。次いで、混合物を減圧下で濃縮し、カラムクロマトグラフィ（0→50％EtOAc/ヘキサンで精製して、（5）をオフホワイト泡状物として＞95％の収率で得た。
2018510163.tif 000079
。LC/MS：保持時間4.71分。(ES+) C33H51N2O6Si2: [M+H]+計算値627；実測値627。
【０２３０】
2018510163.tif 000080
2-(3-ヒドロキシ-プロポキシ)-3-メトキシ-13-(2-トリメチルシラニル-エトキシメチル)-11,11a-ジヒドロ-6H,13H-5a,13-ジアザ-ベンゾ[4,5]シクロヘプタ[1,2-b]ナフタレネン-5,12-ジオン（4）
THF（9.8mL）中の2-[3-(t-ブチル-ジメチル-シラニルオキシ)-プロポキシ]-3-メトキシ-13-(2-トリメチルシラニル-エトキシメチル)-11,11a-ジヒドロ-6H,13H-5a,13-ジアザ-ベンゾ[4,5]シクロヘプタ[1,2-b]ナフタレン-5,12-ジオン（5）（615mg、0.98mmol）の溶液に、フッ化テトラブチルアンモニウム（THF中1.0M溶液1.23mL、1.23mmol）をAr雰囲気下で加えた。混合物を22℃で2時間撹拌し、その時点で反応はTLCおよびLC/MSにより完了と判断した。混合物を飽和NH4Cl水溶液（20mL）上に注ぐことにより反応停止し、EtOAc（3×20mL）で抽出した。合わせた有機物を食塩水（50mL）で洗浄し、MgSO4で乾燥し、ろ過し、濃縮し、カラムクロマトグラフィ（0〜100％EtOAc/ヘキサン）で精製して、（4）を白色結晶性固体（411mg、収率82％、0.802mmol）で得た。
2018510163.tif 000081
。LC/MS：保持時間3.26分。(ES+) C27H37N2O6Si: [M+H]+計算値513；実測値513。
【０２３１】
2018510163.tif 000082
8-ヒドロキシ-7-メトキシ-10-(2-トリメチルシラニル-エトキシメチル)-1,2,3,11a-テトラヒドロ-10H-ベンゾ[e]ピロロ[1,2-a][1,4]ジアゼピン-5,11-ジオン（3）
EtOH（20mL）中のトリフルオロメタンスルホン酸8-ベンジルオキシ-7-メトキシ-5,11-ジオキソ-10-(2-トリメチルシラニル-エトキシメチル)-5,10,11,11a-テトラヒドロ-1H-ベンゾ[e]ピロロ[1,2-a][1,4]ジアゼピン-2-イルエステル（18、図6から）（650mg、1.03mmol）のAr（3×）パージした溶液に、Pd(OH)2/C（300mg）を加えた。次いで、反応混合物をAr（3×）と、次いでH2（3×）でパージし、H2（1気圧）雰囲気下、22℃で3時間撹拌し、その時点で反応はTLCおよびLC/MSにより完了と判断した。混合物をセライトを通してろ過し、これをMeOHで洗浄した。合わせた有機物を濃縮し、得られた残渣をカラムクロマトグラフィ（0〜100％EtOAc/ヘキサン）で精製して、（3）を白色固体（345mg、収率85％）で得た。
2018510163.tif 000083
。LC/MS：保持時間2.85分。(ES+) C19H29N2O5Si: [M+H]+計算値393；実測値393。
【０２３２】
2018510163.tif 000084
THF（2mL）中のトリフェニルホスフィン（171mg、0.650mmol）の22℃でArパージした溶液に、アザジカルボン酸ジ-t-ブチル（150mg、0.650mmol）を加えた。混合物を30分間撹拌し、次いでTHF（2mL）中の8-ヒドロキシ-7-メトキシ-10-(2-トリメチルシラニル-エトキシメチル)-1,2,3,11a-テトラヒドロ-10H-ベンゾ[e]ピロロ[1,2-a][1,4]ジアゼピン-5,11-ジオン（3）（107mg、0.325mmol）を生成したスラリーに加えた。得られた混合物をさらに30分間撹拌した後、THF（3mL）中の2-(3-ヒドロキシ-プロポキシ)-3-メトキシ-13-(2-トリメチルシラニル-エトキシメチル)-11,11a-ジヒドロ-6H,13H-5a,13-ジアザ-ベンゾ[4,5]シクロヘプタ[1,2-b]ナフタレネン-5,12-ジオン（4）（200mg、0.390mmol）を混合物に導入した。反応混合物をAr雰囲気下、22℃で終夜撹拌した。次いで、混合物を減圧下で濃縮し、カラムクロマトグラフィ（0→100％EtOAc/ヘキサン）で精製して、不純な（2）を得た。次いで、不純な材料を逆相C18で精製して、（2）を白色飛散性粉末（58mg、20％、0.0652mmol）で得た。
2018510163.tif 000085
。LC/MS：保持時間4.16分。(ES+) C46H63N4O10Si2: [M+H]+計算値888；実測値888。
【０２３３】
2018510163.tif 000086
撹拌子を含む乾燥機で乾燥した4mLバイアルに、ビスSEM-CLT-D501（2）（47.0mg、0.529mmol）を加えた。固体をアルゴン雰囲気下に置き、次いで無水THF（1.5mL）に溶解し、得られた溶液をドライアイス/アセトン冷却浴中で-78℃まで冷却した。冷却溶液に、スーパーヒドリド（110μL、0.110mmol、THF中1.0M溶液）を5分かけて滴加した。反応混合物を-78℃で75分間撹拌し、その時点で1.0mLのH2Oをシリンジで加え、溶液を冷却浴からはずし、周囲温度に到達させた。THFを減圧下で除去し、得られた水性懸濁液に1.0mLのDMSOを加えた。この溶液をあらかじめ平衡化した30gのRediSep(登録商標)Rf逆相C18カラムに向けてロードした。生成物を5〜95％アセトニトリル/水（0.05％AcOH）の勾配を用いて溶出した。純粋な分画を合わせ、凍結乾燥して、17.7mg（収率57％）の所望の生成物（1）を飛散性白色固体で得た。
2018510163.tif 000087
。LC/MS：保持時間2.43分。(ES+) C35H34N4O6: [M+H]+計算値595；実測値595。
【０２３４】
実施例3−CLT-D601の合成
2018510163.tif 000088
8-ベンジルオキシ-2-(tert-ブチル-ジメチル-シラニルオキシ)-7-メトキシ-1,2,3,11a-テトラヒドロ-10H-ベンゾ[e]ピロロ[1,2-a][1,4]ジアゼピン-5,11-ジオン（16）
図5を参照して、アルゴン雰囲気下、8-ベンジルオキシ-2-ヒドロキシ-7-メトキシ-1,2,3,11a-テトラヒドロ-10H-ベンゾ[e]ピロロ[1,2-a][1,4]ジアゼピン-5,11-ジオン（図5からの17）（4.00g、10.86mmol）に、DMF（100mL）と、続いてイミダゾール（8.87g、130mmol）を加えた。混合物を22℃で1時間撹拌し、次いでTBSCl（8.18g、54.3mol）を加え、得られた混合物を22℃で18時間撹拌した。次いで、反応混合物をH2O上に注ぎ、EtOAc（3×100mL）で抽出した。合わせた有機物をH2O（100mL）と、次いで食塩水（100mL）で洗浄し、MgSO4で乾燥し、ろ過して濃縮した。得られた残渣をカラムクロマトグラフィ（0〜75％EtOAc/ヘキサン）で精製して、（16）を白色固体（630mg、12％、1.30mmol）で得た。
2018510163.tif 000089
。LC/MS：保持時間3.65分。(ES+) C26H35N2O5Si: [M+H]+計算値483；実測値483。
【０２３５】
2018510163.tif 000090
8-ベンジルオキシ-2-(tert-ブチル-ジメチル-シラニルオキシ)-7-メトキシ-10-(2-トリメチルシラニル-エトキシメチル)-1,2,3,11a-テトラヒドロ-10H-ベンゾ[e]ピロロ[1,2-a][1,4]ジアゼピン-5,11-ジオン（15）
THF（15mL）中の8-ベンジルオキシ-2-(tert-ブチル-ジメチル-シラニルオキシ)-7-メトキシ-1,2,3,11a-テトラヒドロ-10H-ベンゾ[e]ピロロ[1,2-a][1,4]ジアゼピン-5,11-ジオン（16）のパージした溶液を、ドライアイス/アセトニトリル浴中で-40℃まで冷却した。次いで、n-BuLi（ヘキサン中1.6M溶液1.02mL、1.63mmol）を滴加し、得られた混合物を1時間撹拌し、その時点でTHF（5mL）中のSEMCl（288L、1.63mmol）を滴加した。得られた反応混合物を、18時間かけて22℃までゆっくり加温しながら撹拌した。次いで、混合物をEtOAcとH2Oとの間で分配した。混合物をEtOAc（3×20mL）で抽出した。合わせた有機物を食塩水（20mL）で洗浄し、MgSO4で乾燥し、ろ過して濃縮した。単離した残渣をカラムクロマトグラフィ（0〜50％EtOAc/ヘキサン）で精製して、（15）を淡黄色泡状物（774mg、97％、1.26mmol）で得た。
2018510163.tif 000091
。LC/MS：保持時間4.63分。(ES+) C32H49N2O6Si2: [M+H]+計算値613；実測値613。
【０２３６】
2018510163.tif 000092
8-ベンジルオキシ-2-ヒドロキシ-7-メトキシ-10-(2-トリメチルシラニル-エトキシメチル)-1,2,3,11a-テトラヒドロ-10H-ベンゾ[e]ピロロ[1,2-a][1,4]ジアゼピン-5,11-ジオン（14）
THF（40mL）中の8-ベンジルオキシ-2-(t-ブチル-ジメチル-シラニルオキシ)-7-メトキシ-10-(2-トリメチルシラニル-エトキシメチル)-1,2,3,11a-テトラヒドロ-10H-ベンゾ[e]ピロロ[1,2-a][1,4]ジアゼピン-5,11-ジオン（15）（1.61g、2.37mmol）の溶液に、フッ化テトラブチルアンモニウム（THF中の1.0M溶液3.28mL、3.28mmol）をAr雰囲気下で加えた。混合物を周囲温度で18時間撹拌し、その時点で反応はTLCおよびLC/MSにより完了と判断した。混合物を飽和NH4Cl水溶液（50mL）上に注ぐことにより反応停止し、EtOAc（3×50mL）で抽出した。合わせた有機物を食塩水（100mL）で洗浄し、MgSO4で乾燥し、ろ過し、濃縮し、カラムクロマトグラフィ（0〜100％EtOAc/ヘキサン）で精製して、（14）を白色結晶性固体（1.18g、収率91％、2.37mmol）で得た。
2018510163.tif 000093
。LC/MS：保持時間3.32分。(ES+) C26H35N2O6Si: [M+H]+計算値499；実測値499。
【０２３７】
2018510163.tif 000094
8-ベンジルオキシ-7-メトキシ-10-(2-トリメチルシラニル-エトキシメチル)-1,11a-ジヒドロ-10H-ベンゾ[e]ピロロ[1,2-a][1,4]ジアゼピン-2,5,11-トリオン（13）
-78℃に冷却した、DCM（1.8mL）中の塩化オキサリル（301 ]l、3.56mmol）のArパージした溶液に、DCM（20mL）中の無水DMSO（505μL、7.11mmol）を滴加した。混合物を-78℃で2時間撹拌し、次いでDCM（50mL）中の8-ベンジルオキシ-2-ヒドロキシ-7-メトキシ-10-(2-トリメチルシラニル-エトキシメチル)-1,2,3,11a-テトラヒドロ-10H-ベンゾ[e]ピロロ[1,2-a][1,4]ジアゼピン-5,11-ジオン（14）（1.18g、2.37mmol）を45分かけて滴加した。得られた混合物を45分間撹拌し、次いでEt3N（2.31mL、16.59mmol）を反応混合物に滴加した。さらに30分間撹拌した後、冷却浴を取り除き、反応混合物を約1.5時間かけて22℃までゆっくり上昇させ、その時点で反応はTLCおよびLC/MSにより完了と判断した。DCM（50mL）で希釈し、有機物を1N HCl（75mL）、飽和NaHCO3水溶液（75mL）、H2O（75mL）、および食塩水（75mL）で洗浄した。次いで、有機物をMgSO4で乾燥し、ろ過し、濃縮し、得られた残渣をカラムクロマトグラフィ（0〜100％EtOAc/ヘキサン）で精製して、（13）をオフホワイト泡状物（873mg、収率74％、1.76mmol）で得た。
2018510163.tif 000095
。LC/MS：保持時間3.57分。(ES+) C26H32N2NaO6Si: [M+Na]+計算値519；実測値519。
【０２３８】
2018510163.tif 000096
8-ヒドロキシ-7-メトキシ-10-(2-トリメチルシラニル-エトキシメチル)-1,11a-ジヒドロ-10H-ベンゾ[e]ピロロ[1,2-a][1,4]ジアゼピン-2,5,11-トリオン（12）
EtOH（20mL）中の8-ベンジルオキシ-7-メトキシ-10-(2-トリメチルシラニル-エトキシメチル)-1,11a-ジヒドロ-10H-ベンゾ[e]ピロロ[1,2-a][1,4]ジアゼピン-2,5,11-トリオン（13）（866mg、1.75mmol）のAr（3×）でパージした溶液に、Pd(OH)2/C（180mg、0.2重量％）を加えた。次いで、反応混合物をAr（3×）と、次いでH2（3×）でパージし、H2（1気圧）雰囲気下、22℃で30分間撹拌し、その時点で反応はTLCおよびLC/MSにより完了と判断した。混合物をセライトを通してろ過し、これをMeOHで洗浄した。合わせた有機物を濃縮し、得られた残渣をカラムクロマトグラフィ（0〜100％EtOAc/ヘキサン）で精製して、（12）を白色固体（642mg、収率90％、1.58mmol）で得た。
2018510163.tif 000097
。LC/MS：保持時間2.80分。(ES+) C19H25N2O6SiN: [M-H]-計算値405；実測値405。
【０２３９】
2018510163.tif 000098
8-[3-(tert-ブチル-ジメチル-シラニルオキシ)-プロポキシ]-7-メトキシ-10-(2-トリメチルシラニル-エトキシメチル)-1,11a-ジヒドロ-10H-ベンゾ[e]ピロロ[1,2-a][1,4]ジアゼピン-2,5,11-トリオン（11）
0℃に冷却したTHF（16mL）中の8-ヒドロキシ-7-メトキシ-10-(2-トリメチルシラニル-エトキシメチル)-1,11a-ジヒドロ-10H-ベンゾ[e]ピロロ[1,2-a][1,4]ジアゼピン-2,5,11-トリオン（12）（642mg、1.58mmol）のArパージした溶液に、トリフェニルホスフィン（621mg、2.37mmol）およびアザジカルボン酸ジエチル（298μL、1.89mmol）を滴加した。混合物を1時間撹拌し、次いで3-(t-ブチル-ジメチル-シラニルオキシ)-プロパン-1-オール（370μL、1.73mmol）を反応混合物に加えた。反応混合物を、Ar雰囲気下で終夜撹拌し、22℃まで加温した。次いで、混合物を、減圧下で濃縮し、カラムクロマトグラフィ（0→100％EtOAc/ヘキサン）で精製して、（11）を白色泡状物（127mg、14％、0.221mmol）で得た。
2018510163.tif 000099
。LC/MS：保持時間4.33分。(ES+) C28H46N2NaO7Si2: [M+Na]+計算値601；実測値601。
【０２４０】
2018510163.tif 000100
8-[3-(tert-ブチル-ジメチル-シラニルオキシ)-プロポキシ]-2-エチリデン-7-メトキシ-10-(2-トリメチルシラニル-エトキシメチル)-1,2,3,11a-テトラヒドロ-10H-ベンゾ[e]ピロロ[1,2-a][1,4]ジアゼピン-5,11-ジオン（10）
THF（1mL）中の臭化(エチル)-トリフェニルホスホニウム（237mg、0.639mmol）の溶液に、Ar雰囲気下、カリウムt-ブトキシド（THF中1.0M溶液0.64mL、0.64mmol）を加えた。混合物を1時間撹拌し、次いでTHF（2mL）中の8-[3-(t-ブチル-ジメチル-シラニルオキシ)-プロポキシ]-7-メトキシ-10-(2-トリメチルシラニル-エトキシメチル)-1,11a-ジヒドロ-10H-ベンゾ[e]ピロロ[1,2-a][1,4]ジアゼピン-2,5,11-トリオン（11）（185mg、0.320mmol）を反応混合物に加え、混合物を22℃で1時間撹拌し、その時点で反応はTLCおよびLC/MSにより完了と判断した。反応をH2O（2mL）で停止し、EtOAc（3×5mL）で抽出した。合わせた有機物をH2O（5mL）で洗浄し、MgSO4で乾燥し、ろ過して濃縮した。単離した残渣をカラムクロマトグラフィ（0〜50％EtOAc/ヘキサン）で精製して、（10）を約10：1 Z/E位置選択性でオフホワイト泡状物（146mg、収率89％、0.285mmol）で得た。
2018510163.tif 000101
。LC/MS：保持時間4.64分。(ES+) C30H51N2O6Si2: [M+H]+計算値591；実測値591。
【０２４１】
2018510163.tif 000102
2-エチリデン-8-(3-ヒドロキシ-プロポキシ)-7-メトキシ-10-(2-トリメチルシラニル-エトキシメチル)-1,2,3,11a-テトラヒドロ-10H-ベンゾ[e]ピロロ[1,2-a][1,4]ジアゼピン-5,11-ジオン（9）
THF（3.7mL）中の8-[3-(t-ブチル-ジメチル-シラニルオキシ)-プロポキシ]-2-エチリデン-7-メトキシ-10-(2-トリメチルシラニル-エトキシメチル)-1,2,3,11a-テトラヒドロ-10H-ベンゾ[e]ピロロ[1,2-a][1,4]ジアゼピン-5,11-ジオン（10）（220mg、0.372mmol）の溶液に、フッ化テトラブチルアンモニウム（THF中の1.0M溶液0.47mL、0.47mmol）をAr雰囲気下で加えた。混合物を22℃で75分間撹拌し、その時点で反応はTLCおよびLC/MSにより完了と判断した。混合物を飽和NH4Cl水溶液（5mL）上に注ぐことにより反応停止し、EtOAc（3×5mL）で抽出した。合わせた有機物を食塩水（10mL）で洗浄し、MgSO4で乾燥し、ろ過し、濃縮し、得られた残渣をカラムクロマトグラフィ（0〜100％EtOAc/ヘキサン）で精製して、（9）を白色結晶性固体（115mg、収率65％、0.240mmol）で得た。
2018510163.tif 000103
。LC/MS：保持時間3.09分。(ES+) C24H37N2O6Si: [M+H]+計算値477；実測値477。
【０２４２】
2018510163.tif 000104
THF（1mL）中のトリフェニルホスフィン（105mg、0.400mmol）の22℃でArパージした溶液に、アザジカルボン酸ジ-t-ブチル（92mg、0.400mmol）を加えた。混合物を30分間撹拌し、次いでTHF（1.5mL）中の2-ヒドロキシ-3-メトキシ-13-(2-トリメチルシラニル-エトキシメチル)-11,11a-ジヒドロ-6H,13H-5a,13-ジアザ-ベンゾ[4,5]シクロヘプタ[1,2-b]ナフタレン-5,12-ジオン（6）（65mg、0.200mmol）を生成したスラリーに加えた。得られた混合物をさらに30分間撹拌した後、THF（2mL）中の2-エチリデン-8-(3-ヒドロキシ-プロポキシ)-7-メトキシ-10-(2-トリメチルシラニル-エトキシメチル)-1,2,3,11a-テトラヒドロ-10H-ベンゾ[e]ピロロ[1,2-a][1,4]ジアゼピン-5,11-ジオン（9）（115mg、0.240mmol）を混合物に導入した。反応混合物をAr雰囲気下、22℃で終夜撹拌した。次いで、混合物を減圧下で濃縮し、カラムクロマトグラフィ（0→75％EtOAc/ヘキサン）で精製して、（8）を白色結晶性固体（111mg、収率61％、0.122mmol）で得た。
2018510163.tif 000105
。LC/MS：保持時間4.35分。(ES+) C48H64N4O10Si2: [M+H]+計算値913；実測値913。
【０２４３】
2018510163.tif 000106
撹拌子を含む乾燥機で乾燥した4mLバイアルに、ビスSEM-CLT-D601（8）（65.0mg、0.711mmol）を加えた。固体をアルゴン雰囲気下に置き、次いで無水THF（1.5mL）に溶解し、得られた溶液をドライアイス/アセトン冷却浴中で-78℃まで冷却した。冷却溶液に、スーパーヒドリド（146μL、0.146mmol、THF中1.0M溶液）を5分かけて滴加した。反応混合物を-78℃で75分間撹拌し、その時点で1.0mLのH2Oをシリンジで加え、溶液を冷却浴からはずし、周囲温度に到達させた。THFを減圧下で除去し、得られた水性懸濁液に1.0mLのDMSOを加えた。この溶液をあらかじめ平衡化した30gのRediSep(登録商標)Rf逆相C18カラムに向けてロードした。生成物を5〜95％アセトニトリル/水（0.05％AcOH）の勾配を用いて溶出した。純粋な分画を合わせ、凍結乾燥して、10.2mg（収率23％）の所望の生成物（7）を飛散性白色固体で得た。
2018510163.tif 000107
。LC/MS：保持時間2.64分。(ES+) C36H37N4O6: [M+H]+計算値621；実測値621。
【０２４４】
2018510163.tif 000108
トリフルオロ-メタンスルホン酸8-ベンジルオキシ-7-メトキシ-5,11-ジオキソ-10-(2-トリメチルシラニル-エトキシメチル)-5,10,11,11a-テトラヒドロ-1H-ベンゾ[e]ピロロ[1,2-a][1,4]ジアゼピン-2-イルエステル（18）
ドライアイス/アセトニトリル浴中で-45℃に冷却した、DCM（200mL）中の8-ベンジルオキシ-7-メトキシ-10-(2-トリメチルシラニル-エトキシメチル)-1,11a-ジヒドロ-10H-ベンゾ[e]ピロロ[1,2-a][1,4]ジアゼピン-2,5,11-トリオン（13）（8.3g、16.7mmol）のArパージした溶液に、2,6-ルチジン（6.0mL、51.8mmol）を加え、続いて無水トリフリン酸（8.4mL、50.1mmol）を、内部温度を＜-40℃に維持しながら滴加した。反応混合物を-45℃で1時間撹拌し、その時点で反応はTLCおよびLC/MSにより完了と判断した。冷反応混合物をDCM（200mL）で希釈し、次いでH2O（100mL）、5％クエン酸水溶液（200mL）、飽和NaHCO3水溶液（200mL）、および食塩水（100mL）で洗浄した。次いで、有機物をMgSO4で乾燥し、ろ過し、濃縮し、得られた残渣をカラムクロマトグラフィ（0〜30％EtOAc/ヘキサン）で精製して、（18）をオフホワイト泡状物（9.8g、収率93％、15.6mmol）で得た。
2018510163.tif 000109
。LC/MS：保持時間4.20分。(ES+) C27H31F3N2NaO8SSi: [M+Na]+計算値651；実測値651。
【０２４５】
実施例4−CLT-D201、CLT-D501、およびCLT-D601の細胞毒性
化合物CLT-D201、CLT-D501、CLT-D601の細胞毒性活性を様々な細胞株に対して試験した。これらの試験の結果を図10〜18に示す。
【０２４６】
実施例5−ピロロジアゼピン二量体（PBD1）と比較したCLT-D201、CLT-D501、およびCLT-D601の細胞毒性
化合物CLT-D201、CLT-D501、CLT-D601の細胞毒性活性を様々な細胞株に対して、式：
2018510163.tif 000110
を有するPBD1と名付けたピロロジアゼピン二量体（SGD-1882、Spirogen Ltd.と構造的に同等）と比較して試験した。
【０２４７】
図19は、HL-60およびPCI-AML-5細胞株に対する細胞毒性活性の曲線を示す。表1は、細胞株のより大きい群について、それぞれPBD1およびCLT-D201のIC50値を示す。結果は、CLT-D201ペイロード有効性はAML細胞株においてPBD1とほぼ同等であることを示す。
【０２４８】
（表１）成長阻害のまとめ
2018510163.tif 000111
【０２４９】
実施例6−CLT-D202の合成
CLT-D202の合成スキームを以下の通りに実施し、図20A〜Dに記載する。番号は図20A〜Dの通りである。
【０２５０】
一般法：
1H NMRスペクトルはVarian Inova 300または500 MHz NMR装置で記録した。クロマトグラフィによる純度をAgilent 1200 Seriesまたは1100 Series LC/MS装置で、Merck Chromolith RP-18e分析用HPLCカラム（一体式、50×2mm）を用い、HPLC分析法に従って判定した：注入量5μL；流速1mL/min；5→95％アセトニトリル/水/5分；Agilentダイオードアレイ検出器、λ＝254、220または195nm；室温。
【０２５１】
6.1：(4-{3-[4-(3-ヒドロキシメチル-3,4-ジヒドロ-1H-イソキノリン-2-カルボニル)-2-メトキシ-5-ニトロ-フェノキシ]-プロポキシ}-5-メトキシ-2-ニトロ-フェニル)-(3-ヒドロキシメチル-3,4-ジヒドロ-1H-イソキノリン-2-イル)-メタノン（3、図20A）の調製
DCM（134mL）中の1'-3'-ビス(4-カルボキシ-2-メトキシ-5-ニトロフェノキシル)プロパン（1）（11.63g、24.94mmol）およびDMF（1.3mL）の0℃でアルゴンパージした溶液に、塩化オキサリル（6.33mL、74.83mmol）を滴加した。最初の発泡が観察された後、冷却浴を取り除き、反応混合物を22℃で16時間撹拌した。酸塩化物への変換を、少量の反応混合物をMeOHで処理し、得られたビス-メチルエステルをLC/MSで観察することにより確認した。反応混合物を濃縮し、次いで少量の無水DCM（10mL）を加え、沈澱を冷Et2Oで粉砕した。単離した固体を減圧乾燥機中、40℃で1時間乾燥した。固体酸塩化物をDCM（100mL）中の(±)-(1,2,3,4-テトラヒドロ-イソキノリン-3-イル)-メタノール（2、図20A）（9.20g、56.4mmol）およびEt3N（8.69mL、62.4mmol）の溶液に、-40℃（ドライアイス/アセトニトリル）で25分かけて少しずつ加えた。ただちに、反応はLC/MSにより完了と判断した。混合物をDCM（500mL）で希釈し、1N HCl（300mL）、飽和NaHCO3水溶液（300mL）および食塩水（300mL）で洗浄した。次いで、混合物をMgSO4で乾燥し、ろ過し、濃縮して、（3）を黄色固体（16.4g、収率87％、22.2mmol）で得た。
2018510163.tif 000112
。LC/MS：保持時間3.07分。(ES+) C39H41N4O12: [M+H]+計算値757；実測値757。
【０２５２】
6.2：酢酸2-(4-{3-[4-(3-アセトキシメチル-3,4-ジヒドロ-1H-イソキノリン-2-カルボニル)-2-メトキシ-5-ニトロ-フェノキシ]-プロポキシ}-5-メトキシ-2-ニトロ-ベンゾイル)-1,2,3,4-テトラヒドロ-イソキノリン-3-イルメチルエステル（4、図20A）の調製
DCM（150mL）中の4-{3-[4-(3-ヒドロキシメチル-3,4-ジヒドロ-1H-イソキノリン-2-カルボニル)-2-メトキシ-5-ニトロ-フェノキシ]-プロポキシ}-5-メトキシ-2-ニトロ-フェニル)-(3-ヒドロキシメチル-3,4-ジヒドロ-1H-イソキノリン-2-イル)-メタノン（3、図20A）（8.60g、11.4mmol）のアルゴンパージした溶液に、DMAP（194mg、1.59mmol）およびEt3N（31.7mL、227mmol）を加えた。次いで、混合物を0℃まで冷却し、Ac2O（21.5mL、227mmol）を加えた。次いで、冷却浴を取り除き、反応混合物を22℃で64時間乾燥した。反応はLC/MSおよびTLCにより完了と判断し、DCM（200mL）で希釈し、飽和NH4Cl水溶液（200mL）で反応停止した。層を分離した後、水層をDCM（3×200mL）でさらに抽出した。合わせた有機物を食塩水（300mL）で洗浄し、MgSO4で乾燥し、ろ過し、濃縮し、カラムクロマトグラフィ（0→100％EtOAc/ヘキサン）で精製して、（4）を黄色泡状物（8.12g、収率86％、9.75mmol）で得た。
2018510163.tif 000113
。LC/MS：保持時間3.54分。(ES+) C43H45N4O14: [M+H]+計算値841；実測値841。
【０２５３】
6.3：(2-アミノ-4-{3-[5-アミノ-4-(3-ヒドロキシメチル-3,4-ジヒドロ-1H-イソキノリン-2-カルボニル)-2-メトキシ-フェノキシ]-プロポキシ}-5-メトキシ-フェニル)-(3-ヒドロキシメチル-3,4-ジヒドロ-1H-イソキノリン-2-イル)-メタノン（5、図20A）の調製
MeOH（20mL）中の酢酸2-(4-{3-[4-(3-アセトキシメチル-3,4-ジヒドロ-1H-イソキノリン-2-カルボニル)-2-メトキシ-5-ニトロ-フェノキシ]-プロポキシ}-5-メトキシ-2-ニトロ-ベンゾイル)-1,2,3,4-テトラヒドロ-イソキノリン-3-イルメチルエステル（4、図20A）（500mg、0.595mmol）の溶液に、小さいヘラ一杯のラネー(登録商標)Niを加えた。次いで、混合物を加熱還流し、MeOH（3.5mL）中のヒドラジン水和物（370μL、11.9mmol）を滴加した。ヒドラジン添加後、速やかな発泡が観察された。ヒドラジンの添加が完了すれば、ラネー(登録商標)Niのさらなる添加後も、それ以上の発泡は観察されなかった。次いで、反応混合物をさらに9時間還流し、反応はLC/MSにより完了と判断した。（注：ビス-ニトロ還元は容易に起こり；生成物を完全に脱アセチル化するためにさらなる反応時間が必要である）。反応混合物を加熱からはずし、セライトを通してろ過し、MeOHで洗浄した。ろ液を減圧下で濃縮し、DCMと共沸させた。粗製残渣をカラムクロマトグラフィ（0→10％MeOH/DCM）で精製して、（5）を白色結晶性固体（368mg、収率89％、0.528mmol）で得た。
2018510163.tif 000114
。LC/MS：保持時間2.75分。(ES+) C39H45N4O8: [M+H]+計算値697；実測値697。
【０２５４】
6.4：[5-{3-[5-アミノ-4-(3-ヒドロキシメチル-3,4-ジヒドロ-1H-イソキノリン-2-カルボニル)-2-メトキシ-フェノキシ]-プロポキシ}-2-(3-ヒドロキシメチル-3,4-ジヒドロ-1H-イソキノリン-2-カルボニル)-4-メトキシ-フェニル]-カルバミン酸アリルエステル（6、図20A）の調製
DCM（33mL）中の(2-アミノ-4-{3-[5-アミノ-4-(3-ヒドロキシメチル-3,4-ジヒドロ-1H-イソキノリン-2-カルボニル)-2-メトキシ-フェノキシ]-プロポキシ}-5-メトキシ-フェニル)-(3-ヒドロキシメチル-3,4-ジヒドロ-1H-イソキノリン-2-イル)-メタノン（5）（1.92g、2.75mmol）のArパージした溶液に、ピリジン（245μL、3.03mmol）を加え、得られた溶液を氷/食塩水浴中で0℃まで冷却し、次いでAllocCl（292μL、2.75mmol）を加えた。次いで、混合物を0℃で30分間撹拌した。次いで、DCMを減圧下で除去し、残渣をDMSOで希釈し、逆相カラムクロマトグラフィ（5→95％AcN/H2O、それぞれ0.05％AcOHを含む）で精製し、所望の分画を凍結乾燥して、（6）を白色結晶性固体（417mg、収率19％、0.534mmol）で得た。
2018510163.tif 000115
。LC/MS：保持時間3.01分。(ES+) C43H49N4O10: [M+H]+計算値781；実測値781。
【０２５５】
6.5：[5-{3-[5-アミノ-4-(3-ヒドロキシメチル-3,4-ジヒドロ-1H-イソキノリン-2-カルボニル)-2-メトキシ-フェノキシ]-プロポキシ}-2-(3-ヒドロキシメチル-3,4-ジヒドロ-1H-イソキノリン-2-カルボニル)-4-メトキシ-フェニル]-カルバミン酸アリルエステルのビス-(tert-ブチル-メトキシ-ジメチル-シラニルオキシ)-エーテル（7、図20A）の調製
DMF（5.3mL）中の([5-{3-[5-アミノ-4-(3-ヒドロキシメチル-3,4-ジヒドロ-1H-イソキノリン-2-カルボニル)-2-メトキシ-フェノキシ]-プロポキシ}-2-(3-ヒドロキシメチル-3,4-ジヒドロ-1H-イソキノリン-2-カルボニル)-4-メトキシ-フェニル]-カルバミン酸アリルエステル（6、図20A）（417mg、0.534mmol）のArパージした溶液に、イミダゾール（182mg、2.67mmol）を加えた。反応混合物を5分間撹拌し、続いて塩化t-ブチルジメチルシリル（TBSCl）（292μL、2.75mmol）を加えた。次いで、得られた混合物を22℃で70分間撹拌した。次いで、反応混合物を氷/H2O上に注ぎ、EtOAc（3×20mL）で抽出した。合わせた有機物をH2O（2×20mL）で洗浄し、MgSO4で乾燥し、ろ過して濃縮した。得られた残渣をカラムクロマトグラフィ（0→100％EtOAc/ヘキサン）で精製して、（7）を白色固体（425mg、79％、0.421mmol）で得た。
2018510163.tif 000116
LC/MS：保持時間5.07分、(ES+) C55H77N4O10Si2: [M+H]+計算値1009；実測値1009。
【０２５６】
6.6：t-boc-N-アミド-dPEG(登録商標)8-NHSエステル（9、図20B）の調製
DCM（20mL）中のt-boc-N-アミド-dPEG(登録商標)8-酸（8、図20B）（1.00g、1.85mmol）のArパージした溶液に、N-ヒドロキシスクシンイミド（255mg、2.22mmol）、塩酸N-(3-ジメチルアミノプロピル)-N'-エチルカルボジイミド（EDC・HCl）（531mg、2.77mmol）、およびジメチルアミノピリジン（DMAP）（10mg、0.0819mmol）を加えた。合わせた混合物を22℃で16時間撹拌した。次いで、反応をH2O（20mL）で停止し、DCM（3×30mL）で抽出した。合わせた有機物をMgSO4で乾燥し、ろ過して濃縮した。得られた残渣をカラムクロマトグラフィ（0→15％MeOH/DCM）で精製して、（9）を澄明油状物（856mg、73％、1.34mmol）で得た。
2018510163.tif 000117
。LC/MS：保持時間2.56分。(ES+) C28H50N2O14Na: [M+Na]+計算値661；実測値661。
【０２５７】
6.7：t-boc-N-アミド-dPEG(登録商標)8-Val-Ala-酸（10、図20B）の調製
DMF（6.7mL）中のt-boc-N-アミド-dPEG(登録商標)8-NHSエステル（9、図20B）（856mg、1.34mmol）のArパージした溶液に、DIEA（584μL、3.35mmol）と、続いてH2N-Val-Ala-OH（278mg、1.48mmol）を加えた。次いで、反応混合物を密封バイアル中、40℃で16時間撹拌した。次いで、得られた反応混合物を逆相カラムクロマトグラフィ（5→95％ACN/H2O、それぞれ0.05％AcOHを含む）に直接ロードして精製し、所望の分画を凍結乾燥して、（10）を澄明油状物（717mg、収率75％、1.01mmol）で得た。
2018510163.tif 000118
。LC/MS：保持時間2.41分。
(ES+) C32H62N3O14: [M+H]+計算値712；実測値712。
【０２５８】
6.7：t-boc-N-アミド-dPEG(登録商標)8-Val-Ala-4-アミノベンジル-アルコール（11、図20B）の調製
2：1のDCM/MeOH（7.45mL）中のt-boc-N-アミド-dPEG(登録商標)8-Val-Ala-酸（10、図20B）（349mg、0.490mmol）のArパージした溶液に、4-アミノベンジルアルコール（69.4mg、0.564mmol）と、続いて2-エトキシ-1-エトキシカルボニル-1,2-ジヒドロキノリン（EEDQ）（228mg、0.920mmol）を加えた。反応混合物を22℃で20時間撹拌した。次いで、反応混合物を減圧下で濃縮し、カラムクロマトグラフィ（0→15％MeOH/DCM）で精製して、（11）を白色固体（325mg、収率81％、0.397mmol）で得た。
2018510163.tif 000119
。LC/MS：保持時間2.52分。(ES+) C39H68N4O14Na: [M+Na]+計算値839；実測値839。
【０２５９】
6.7：リンカー結合し完全に保護された細胞毒性二量体薬物（13、図20C）の調製
DMF（1.7mL）中のt-boc-N-アミド-dPEG(登録商標)8-Val-Ala-4-アミノベンジル-アルコール（11、図20B）（285mg、0.348mmol）のArパージした溶液に、DMF中のジイソプロピルジエチルアミン（DIEA）（91μl（285mg、0.348mmol）(1-(ペンタフルオロフェニル)-カーボネート（204mg、0.523mmol）を加えた。次いで、反応混合物を22℃で2時間撹拌し、その時点で、得られた反応はLC/MSにより完了と判断し、活性化合物中間体化合物、12（図20B）を得た。
LC/MS：保持時間3.41分、(ES+) C46H67F5N4O16Na: [M+Na]+計算値1049；実測値1049。
【０２６０】
図20Cに示す通り、12（図20Bからの生成物）の粗製溶液を、固体[5-{3-[5-アミノ-4-(3-ヒドロキシメチル-3,4-ジヒドロ-1H-イソキノリン-2-カルボニル)-2-メトキシ-フェノキシ]-プロポキシ}-2-(3-ヒドロキシメチル-3,4-ジヒドロ-1H-イソキノリン-2-カルボニル)-4-メトキシ-フェニル]-カルバミン酸アリルエステルのビス-(tert-ブチル-メトキシ-ジメチル-シラニルオキシ)-エーテル（7、図20Aからの生成物）（176mg、0.174mmol）に加えた。次いで、フラスコを追加の300mLのDMFで洗浄して、確実に（12）を反応混合物に完全に移した。DIEA（91μlを反応混合物に。DIEA（91追加の300mLのDMFで、確実に(イドロキシメチル-3,4-ジヒドロ-1H-イソキノリン-2-カルボニル)-2-メトキシ-フェノキシ]-プロポキシ}-2-(3-ヒドロキシメチル-3,4-ジヒドロ-1H-イソキノリン-2-カルボニル)-4-メトキシ-フェニル]-caを完全に移し、ACN/H2O、それぞれ0.05％AcOHを含む）、所望の分画を凍結乾燥して、（13）を白色固体（153mg、収率47％、0.0825mmol）で得た。
LC/MS：保持時間4.99分。(ES+) C95H142N8O25Si2: 計算値1851；実測値[{(M+H)/2}+Na]+ 949。
【０２６１】
6.9：リンカー結合したビス-アルコール化合物14の調製（図20C）
氷/食塩水浴中で0℃に冷却した、THF（8.3mL）中の（13）（153mg、0.0825mmol）のArパージした溶液に、TBAF（THF中1.0M溶液173μL、0.173mmol）を加えた。次いで、反応混合物を0℃で16時間撹拌した。次いで、THFを減圧下で除去し、残渣をジメチルスルホキシド（DMSO）で希釈し、逆相カラムクロマトグラフィ（5→95％AcN/H2O、それぞれ0.05％AcOHを含む）で精製し、所望の分画を凍結乾燥して、（14）を白色結晶性固体（116mg、収率87％、0.0717mmol）で得た。
LC/MS：保持時間3.38分。(ES+) C83H114N8O25Na: [M+Na]+計算値1645；実測値1645。
【０２６２】
6.10：リンカー結合したヘミ-アミナール化合物15の調製（図20C）
3：1のDCM/ACN（1.2mL）中の（14、図20C）（108mg、0.0665mmol）のArパージした溶液に、4Åモレキュラーシーブス（5.0mg）と、次いで100μL DCM中のN-メチルモルホリン-N-オキシド（NMO）（31.2mg、0.266mmol）を加えた。反応混合物を15分間撹拌し、次いで100μL DCM中のTPAP（5.8mg、0.0166mmol）を加えた。得られた混合物を22℃で1時間撹拌し、反応はLC/MSにより完了と判断した。それぞれ100μL DCM中のNMO（10.4mg、0.0888mmol）およびTPAP（1.90mg、0.00541mmol）を反応混合物に逐次加え、反応を添加後1時間、反応が完了と判断されるまで、出発材料、所望の生成物、一酸素添加反応およびアミド生成の量をモニターして、LC/MSによりモニターし；合計5回の逐次添加を行った。次いで、溶媒を減圧下で除去し、残渣をDMSOで希釈し、逆相カラムクロマトグラフィ（5→95％ACN/H2O、それぞれ0.05％AcOHを含む）で精製し、所望の分画を凍結乾燥して、（15）を白色結晶性固体（50.7mg、収率47％、0.0313mmol）で得た。
LC/MS：保持時間3.33分。(ES+) C83H110N8O25Na: [M+Na]+計算値1641；実測値1641。
【０２６３】
6.11：リンカー結合したモノ-イミン化合物16（図20D）の調製
DCM（1.0mL）中の（15）（15.7mg、0.00969mmol）のArパージした溶液に、50μL DCM中のピロリジン（1.2μL、0.0145mmol）と、続いて50μL DCM中のPd(PPh3)4（0.56mg、0.485μmol）を加えた。次いで、反応混合物を22℃で1時間撹拌した。次いで、DCMを減圧下で除去し、残渣をDMSOで希釈し、逆相カラムクロマトグラフィ（5→95％AcN/H2O、それぞれ0.05％AcOHを含む）で精製し、所望の分画を凍結乾燥して、（16）を白色結晶性固体（8.2mg、収率56％、0.00540mmol）で得た。
LC/MS：保持時間3.23分。(ES+) C79H104N8O22Na: [M+Na]+計算値1539；実測値1539。
【０２６４】
6.12：CLT-D202（18、図20D）の調製
冷蔵庫で0℃まで30分間冷却した、DCM（0.5mL）中の（16、図20C）（3.5mg、0.00231mmol）のArパージした溶液に、TFA/DCM/H2Oの47：47：6溶液（200μl）のあらかじめ冷却した溶液を加えた。反応混合物を0℃で2時間放置した。次いで、DCMを減圧下で除去し、残渣を1：1のACN/H2Oで希釈し、凍結乾燥して、（17 図20D）を白色結晶性固体で得、これをそれ以上精製せずに用いた。
LC/MS：保持時間2.56分。(ES+) C74H97N8O20: [M+H]+計算値1417；実測値1417。
【０２６５】
DCM（0.5mL）中の粗製（17）のArパージした溶液に、200μL DCM中のDIEA（2.4μL、0.0143mmol）を加え、反応混合物のpHをチェックした；pH＞8。次いで、100μL DCM中の3-マレイミドプロピオン酸NHSエステル（1.0mg、3.57μmol）の溶液を反応混合物に加えた。反応混合物を22℃で75分間撹拌した。次いで、DCMを減圧下で除去し、残渣をDMSOで希釈し、逆相カラムクロマトグラフィ（5→95％AcN/H2O、それぞれ0.05％AcOHを含む）で精製し、所望の分画を凍結乾燥して、（18）を白色結晶性固体（1.3mg、2段階で収率36％、0.829μmol）で得た。
LC/MS：保持時間2.94分。(ES+) C81H102N9O23: [M+H]+計算値1568；実測値1568。
【０２６６】
実施例7−C6-CLT-D202（抗体-薬物結合体）の調製
2018510163.tif 000120
ヒト化され239位でcys置換した抗CLL1抗体（「C6-S239C-CYSM26」）（5.0mg、1.68mg/mL、PBS）をホウ酸緩衝液（50mM、pH8.5、1mMジエチレントリアミンペンタ酢酸（DTPA））中に、Millipore、15mL、30kDa装置を用いて分子量分画ろ過（MWCO）を2サイクル行うことにより交換した。C6-S239C-CYSMAB抗体の新しい溶液（5.0mg/mL、ホウ酸緩衝液（50mM、pH8.5、1mM DTPA））に、ジチオスレイトール（DTT）（33μL、50.0当量、50mM）を加え、得られた溶液を終夜緩やかに振盪した。
【０２６７】
抗体C6は軽鎖可変領域配列：
2018510163.tif 000121
を有する。抗体C6は重鎖可変領域配列：
2018510163.tif 000122
を有する。
【０２６８】
鎖間ジスルフィド架橋の完全な還元およびS239Cシステイン/グルタチオン付加物の除去を、以前に記載された通りrp-LCMSにより確認した（Junutula et al., 2008, Nature Biotech, 26, 925-932）。次いで、DTTを溶液から、Millipore、15mL、30kDa装置を用い、交換緩衝液としてPBSを用いて分子量分画ろ過（MWCO）を3サイクル行うことにより除去した。完全に還元したC6-S239C-CYSMAB抗体の5mg/ml溶液に、デヒドロアスコルビン酸（dhAA）（33μL、50.0当量、50mM）の溶液を加えた。得られた溶液を3時間緩やかに振盪した。再酸化をrp-LCMSでモニターした。再酸化が完了したと判断されたら、反応混合物をプロピレングリコールで50体積％まで希釈し、CLT-D202（18、図20D）をDMSO溶液（10.0当量、10mM/DMSO）として加えた。反応混合物を周囲温度で1時間撹拌した。次いで、混合物を活性炭により周囲温度で1時間処理した。次いで、活性炭をろ去した。次いで、結合体をPBS中に、Millipore、15mL、30kDa装置を用いて分子量分画ろ過（MWCO）を複数サイクル行うことにより交換した。次いで、溶液を滅菌ろ過にかけて、所望の結合体（0.974mL、2.16mg/mL）を得た。容量：0.974mL。濃度：2.16mg/mL（A280＝0.145、20倍希釈）。薬物抗体比（DAR）：1.7（rp-LCMSで判定）。ADCの単量体型はサイズ排除クロマトグラフィ（SEC）で確認する：96％。
【０２６９】
実施例8−C0-CLT-D202抗体-薬物結合体（ADC）の調製
パリビズマブを対照抗体のC0として用いた、C0抗体は非結合対照IgG1である。C0およびCLT-D202を用いたADCは、C0抗体（12.0mg、100mg/mL、PBS）をホウ酸緩衝液（50mM、pH8.5、1mM DTPA）を用いて5mg/mLに希釈した。CLT-D202を結合するために、ヒンジジスルフィドを以下の通りに還元した。C0抗体の新しい溶液（5.0mg/mLで、ホウ酸緩衝液（50mM、pH8.5、1mM DTPA））に、トリス(2-カルボキシエチル)ホスフィン（TCEP）（136μL、1.7当量、1mM）の溶液を加え、得られた溶液を37℃で1時間緩やかに振盪した。次いで、反応混合物を周囲温度まで冷却し、プロピレングリコールで50体積％まで希釈し、その時点でCLT-D202（18、図20D）をDMSO中の溶液（12.0当量、10mM/DMSO）として加えた。反応混合物を周囲温度で1時間撹拌した。次いで、混合物を活性炭により周囲温度で1時間処理した。次いで、活性炭をろ去した。次いで、結合体をPBS中に、PD-10gelろ過（GE Healthcare）により交換した。合わせた分画をMillipore、15mL、30kDa装置による分子量分画ろ過（MWCO）を用いて濃縮した。次いで、溶液を滅菌ろ過にかけて、所望の結合体（3.144mL、3.2mg/mL）を得た。容量：3.144mL。濃度：3.2mg/mL（A280＝0.237、20倍希釈）。薬物抗体比（DAR）：2.6（rp-LCMSで判定）。ADCの単量体型はSECで確認する：87％。
【０２７０】
実施例9−C6-CLT-D202 ADCの選択的細胞毒性
C6-CLT-D202 ADCの選択性を図21A〜21Bに示す。約30,000〜50,000コピー数/細胞の範囲でCLL-1を発現するHL-60細胞（ヒト前骨髄球性白血病細胞）を、様々な濃度のCLL-1選択的細胞毒性の抗体-薬物結合体、C6-CLT-D202 ADCおよび対照抗体-薬物結合体、C0-D202 ADCにより、37℃で5日間処理した。図21Aは、対照C0-CLT-D202 ADCと比較して、500倍を超えるC6-CLT-D202 ADCによる標的依存性細胞死滅を示す。図21Bは、TF1（ヒト赤白血病細胞株）などの非CLL-1発現細胞株に対して、C6-CLT-D202 ADCおよびC-CLT-D202 ADCはいずれも同様の非細胞毒性効果を有することを示し、したがってインビトロでのCLL-1を標的とするC6-CLT-D202 ADCの選択性を示す。
【０２７１】
実施例10−C6-CLT-D202 ADCの標的依存性細胞毒性
TF1は多剤耐性（MDR）陽性急性骨髄性白血病（AML）細胞株である。抗CLL1抗体を含む抗体-薬物結合体（「CLL1-ADC」または、より具体的には「C6-CLT-D202 ADC」）の有効性を示すために、CLL-1をTF1において過剰発現させた。図22Aおよび22Bにおいて示す通り、過剰発現TFI細胞株（TF1-CLL1）および標準のTF1細胞株を、それぞれ様々な濃度のC6-CLT-D202 ADCおよびC0-CLT-D202 ADCにより、37℃で処理した。図22Aにおいて、CLL-1を標的とするC6-CLT-D202 ADCは、TF1 CLL-1 MDR (+)株に対して強力に細胞毒性であるが、対照C0-CLT-D202 ADCははるかに弱い効果を有することが示された。各ADCの標準のTF1細胞株に対する活性を図22Bに示し、ここでC6-CLT-D202 ADCおよびC0-CLT-D202 ADCはいずれもより類似の効果を有することがわかる。表3に示すIC50の結果は、約103倍のIC50低下を示して、腫瘍細胞標的においてCLL-1が発現される場合、細胞死滅効果に有意差があることを示している。
【０２７２】
（表２）TF1 CLL-1細胞株およびTF1細胞株に対する選択したADCのIC50
2018510163.tif 000123
【０２７３】
実施例11−C6-CLT-D202 ADCの結合と細胞毒性との間の相関
細胞への結合と標的細胞を死滅させる能力との間の相関を調べた。表4において、最初の列の数字は、各具体的細胞株に対するC6-CLT-D202 ADCの結合の平均蛍光強度の、対照ADCであるC0-CLT-D202 ADCの結合の平均蛍光強度に対する比である。MFIの比が大きいほど、対照ADCよりも標的指向ADCの結合が増大していることを表す。第二の列は、明示した細胞株に対するC6-CLT-D202 ADCのIC50（ng/mL）を示す。図23において、各細胞株について、X軸に沿って相対平均蛍光指数（MFI）の対数およびY軸に沿ってIC50値の対数の、2つの数字をマッピングしている。図23は、相対結合と細胞死滅の良好な相関を示し、示した直線の適合度のR2は0.701である。これは、C6-CLT-D202が、AML疾患に関連する多くの細胞株で良好な標的依存性細胞毒性活性を有することを示すものである。
【０２７４】
（表３）細胞株、相対結合強度、およびIC50
2018510163.tif 000124
【０２７５】
実施例12−C6-CLT-D202 ADCは増殖性細胞および静止状態細胞の両方を標的とする
CLL-1を発現するAML-5細胞を、増殖または静止条件のいずれかで、5日間培養する。この期間中、1組の増殖性CLL-1発現細胞を、様々な濃度のC6-CLT-202 ADCで処理した。第2の組の増殖性CLL-1発現細胞をアイソタイプ対照で処理した。それぞれの組の静止性CLL-1発現細胞を、C6-CLT-D202またはアイソタイプ対照のいずれかで適宜に処理した。図24Aは、C6-CLT-D202が、IC50 0.03ug/mL（増殖性）および0.02ug/mL（静止性）細胞でCLL-1発現細胞を死滅させるのに有効であったが、アイソタイプ対照は少なくとも100倍高い濃度のIC50を有していたことを示す。静止性細胞の死滅は、インキュベーション時間の増大に伴って増大する。
【０２７６】
これに対して、図24Bに示す通り、CLL-1ノックアウト細胞を同じ条件に供した場合、C6-CLT-D202 ADCの標的依存性細胞毒性効果は消滅する。増殖性AML-5細胞および静止性AML-5細胞の両方のIC50は、2.34ug/mL（静止性）および5.54ug/mL（増殖性）の範囲において、アイソタイプ対照とほぼ同等である。
【０２７７】
実施例13−C6-CLT-D202 ADCのインビボでの有効性
C6-CLT-D202-ADCはAML異種移植モデルにおいて強固な有効性を示す。C6-CLT-D202-ADC（3mg/Kg）で処理したマウスと比較して、同所性に移植したHL60腫瘍担持マウスを、非結合C0（1mg/Kg）抗体および対照ADC（3mg/Kg）で処理した。ヒトHL60腫瘍細胞の、骨髄（左図）および末梢血（右図）におけるパーセンテージを示し、N＝4〜6のマウスについて中央値バーおよび四分位誤差バーを示す。表（下記）は、処理したマウスの骨髄中および末梢血中のヒトHL60細胞の中央値、最小、最大、および四分位パーセンテージを示す。
【０２７８】
雌の6〜8週齢のNOD/SCIDマウスを、2.5Gyで亜致死性に照射し、500万個のHL60腫瘍を照射の1日後にマウスに静脈内注射した。腫瘍細胞接種（骨髄中の約0.1〜1％移植）の6日後、マウスに3mg/KgのC6-CLT-D202 ADCまたは同じ量の対照C0-ADCを、1週間に1回、3回（q7DX3）投与した。腫瘍細胞接種の23日後、骨、脾臓、および末梢血を処理したマウスから採取し、全造血細胞を分離した。これらの組織中のヒト細胞のパーセンテージを、抗ヒトCD33およびCD45抗体を用いてフローサイトメトリーにより判定した。データをFlowjoソフトウェアにより解析し、Prismソフトウェアでプロットした。
【０２７９】
図25Aおよび25Bならびに表5に示す通り、C6-CLT-D202 ADCによる処理は強固な有効性を示した。3mg/kgレベルのADCで処理したC6-CLT-D202 ADC動物は、対照抗体単独（1mg/kgのC0 Ab）またはC0-CLT-D202 ADC（等価の3mg/kg用量）に比べて、骨髄（図25A）および血液（図25B）それぞれに存在するヒト細胞パーセントの有意な低減を示した。C6-CLT-D202 ADC処理動物において、C0-CLT-D202 ADC投与後に見られるものに比べて、骨髄中では、ヒト異種移植細胞数において9.4倍の低減が見られ、血中では、ヒト異種移植細胞数において18.3倍の低減が見られた。90％を超える腫瘍成長阻害（TGI）が、C6-CLT-D202 ADCの投与後に観察された。
【０２８０】
（表５）処理後に存在するHu細胞の濃度
2018510163.tif 000125
【０２８１】
実施例14−原発性AML患者細胞培養物に対するC6-CLT-D202 ADCの効果
図26に示す通り、0.8ug/mL〜2ug/mLの漸増濃度のC6-CLT-D202 ADCは、原発性AML患者の細胞培養物、14-AML-17におけるコロニー形成阻害の効果増大を示した。対照C0-CLT-D202 ADCは、同じ原発性細胞培養物におけるコロニー形成阻害のはるかに低い能力を示した。コロニーの数をY軸に示す。
【０２８２】
本明細書において言及するすべての出版物および特許出願は、それぞれ個々の出版物または特許出願が具体的かつ個別に参照により本明細書に組み入れられると示されるのと同じ程度に、参照により本明細書に組み入れられる。
【０２８３】
本発明の具体的な態様を例示のために本明細書に記載してきたが本発明の精神および範囲から逸脱することなく様々な改変を行い得ることが、前述のものから理解されるであろう。したがって、本発明は、添付の特許請求の範囲によるものを除いて限定的ではない。
【０２８４】
配列表
2018510163.tif 000126
【図１】
2018510163.tif 000163
【図２】
2018510163.tif 000164
【図３】
2018510163.tif 000165
【図４】
2018510163.tif 000166
【図５】
2018510163.tif 000167
【図６】
2018510163.tif 000168
【図７Ａ】
2018510163.tif 000169
【図７Ｂ】
2018510163.tif 000170
【図７Ｃ】
2018510163.tif 000171
【図８】
2018510163.tif 000172
【図９Ａ】
2018510163.tif 000173
【図９Ｂ】
2018510163.tif 000174
【図１０】
2018510163.tif 000175
【図１１】
2018510163.tif 000176
【図１２】
2018510163.tif 000177
【図１３】
2018510163.tif 000178
【図１４】
2018510163.tif 000179
【図１５】
2018510163.tif 000180
【図１６】
2018510163.tif 000181
【図１７】
2018510163.tif 000182
【図１８】
2018510163.tif 000183
【図１９】
2018510163.tif 000184
【図２０Ａ】
2018510163.tif 000185
【図２０Ｂ】
2018510163.tif 000186
【図２０Ｃ】
2018510163.tif 000187
【図２０Ｄ】
2018510163.tif 000188
【図２１】
2018510163.tif 000189
【図２２】
2018510163.tif 000190
【図２３】
2018510163.tif 000191
【図２４】
2018510163.tif 000192
【図２５】
2018510163.tif 000193
【図２６】
2018510163.tif 000194
【配列表】
2018510163000001.app
【国際調査報告】
2018510163.tif 000195
2018510163.tif 000196
2018510163.tif 000197
2018510163.tif 000198
2018510163.tif 000199