(57)【要約】  本発明は、Ｐ２Ｘ7阻害薬としての（Ｓ）−Ｎ−（２−（４−クロロフェニル）−２−モルホリノエチル）−２−（ピリミジン−２−イル）−４−（トリフルオロメチル）チアゾール−５−カルボキサミド、その医薬としての使用、および（Ｓ）−Ｎ−（２−（４−クロロフェニル）−２−モルホリノエチル）−２−（ピリミジン−２−イル）−４−（トリフルオロメチル）チアゾール−５−カルボキサミドを調製するための簡便な鏡像異性体合成手順を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
化合物（Ｓ）−Ｎ−（２−（４−クロロフェニル）−２−モルホリノエチル）−２−（ピリミジン−２−イル）−４−（トリフルオロメチル）チアゾール−５−カルボキサミドおよびその薬学的に許容される塩。
【請求項２】
医薬として使用するための請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
急性、慢性または炎症性疼痛の治療に使用するための請求項１に記載の化合物であって、前記疼痛は、神経因性疼痛、術後疼痛、モルヒネ耐性、線維筋痛症、神経痛、頭痛、変形性関節症、関節リウマチ、乾癬性関節炎、過敏性腸症候群または炎症性腸疾患により惹起される、化合物。
【請求項４】
急性、慢性または炎症性疼痛を治療するための医薬を調製するための請求項１に記載の化合物の使用であって、前記疼痛は、神経因性疼痛、術後疼痛、モルヒネ耐性、線維筋痛症、神経痛、頭痛、変形性関節症、関節リウマチ、乾癬性関節炎、過敏性腸症候群または炎症性腸疾患により惹起される、使用。
【請求項５】
急性、慢性または炎症性疼痛に罹患している患者を治療する方法であって、前記疼痛は、神経因性疼痛、術後疼痛、モルヒネ耐性、線維筋痛症、神経痛、頭痛、変形性関節症、関節リウマチ、乾癬性関節炎、過敏性腸症候群または炎症性腸疾患により惹起される、方法。
【請求項６】
請求項１に記載の化合物ならびに薬学的に許容される担体、希釈剤および賦形剤のうちの１種以上を含む、医薬組成物。
【請求項７】
（Ｓ）−Ｎ−（２−（４−クロロフェニル）−２−モルホリノエチル）−２−（ピリミジン−２−イル）−４−（トリフルオロメチル）チアゾール−５−カルボキサミドの製造方法であって：
ａ．２−（４−クロロフェニル）−２−モルホリノエチルアミンを（Ｓ）−２−アセトアミド−４−メチルペンタン酸の存在下に（Ｓ）−２−（４−クロロフェニル）−２−モルホリノエチルアミンに変換するステップと、
ｂ．得られた（Ｓ）−２−（４−クロロフェニル）−２−モルホリノエチルアミンを２−（ピリミジン−２−イル）−４−（トリフルオロメチル）チアゾール−５−カルボン酸と反応させることにより、（Ｓ）−Ｎ−（２−（４−クロロフェニル）−２−モルホリノエチル）−２−（ピリミジン−２−イル）−４−（トリフルオロメチル）チアゾール−５−カルボキサミドを得るステップと、
を含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｐ２Ｘ7受容体を阻害する新規な化合物に関する。本発明の他の態様は、上記化合物を含む医薬組成物および疼痛、炎症、神経障害または精神神経障害を治療するためのこの化合物の使用に関する。本発明のさらなる態様においては、（Ｓ）−Ｎ−（２−（４−クロロフェニル）−２−モルホリノエチル）−２−（ピリミジン−２−イル）−４−（トリフルオロメチル）チアゾール−５−カルボキサミドを調製するための簡便な鏡像異性体合成手順を提供する。
【背景技術】
【０００２】
プリン作動性２Ｘ７（Ｐ２Ｘ7）受容体は、細胞外ＡＴＰにより活性化されるリガンド開口型イオンチャネルであり、中枢神経系のミクログリア、ならびに炎症系および免疫系機能に関与する他の細胞を含む様々なタイプの細胞に存在する。Ｐ２Ｘ7受容体は、免疫系における細胞溶解に関与していることが示されている（Ｓｕｒｐｒｅｎａｎｔ，ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ，２７２，７３５−４１，１９９６）。Ｐ２Ｘ7受容体は、リンパ球および単球／マクロファージの活性化にも関与しており、これらの細胞からの炎症促進性サイトカイン（例えば、ＴＮＦαおよびＩＬ１β）の放出を促進する（Ｆｅｒｒａｒｉ，ｅｔ  ａｌ．Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌ，３６，１２９５−３０１，１９９７）。
【０００３】
炎症（例えば、関節リウマチおよび他の自己免疫疾患、変形性関節症、喘息、慢性閉塞性肺疾患ならびに炎症性腸疾患）または間質性線維症の状況下においてＰ２Ｘ7受容体の活性化を阻害することによって治療効果が得られることが複数の研究により示されている（ＤｉＶｉｒｇｉｌｉｏ，ｅｔ  ａｌ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖ  Ｒｅｓ，４５，２０７−１３，  １９９８）。上述の研究および他の研究から、急性、慢性および神経因性疼痛を含む疼痛の治療および予防にＰ２Ｘ7受容体アンタゴニストが利用できる可能性が示唆されている（Ｃｈｅｓｓｅｌ，ｅｔ  ａｌ，Ｐａｉｎ，１１４，３８６−９６，２００５）。
【０００４】
Ｐ２Ｘ7の活性化を阻害することは、Ｐ２Ｘ7受容体の活性化状態の延長により惹起される細胞死を縮小または低下させることもでき、神経系の損傷または変性における上記アンタゴニストによる治療的介入の可能性を示唆している（Ｓｐｅｒｌａｇｈ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｇｒｅｓｓ  ｉｎ  Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，７，３２７−３４６，２００６）。Ｖｉａｎｎａら（Ｅｐｉｌｅｐｓｉａ，４３，２７−２２９，２００２）は、てんかんの病態形成におけるＰ２Ｘ7受容体の潜在的役割も明らかにしている。興味深いことに、Ｐ２Ｘ7受容体は中枢神経系（ＣＮＳ）においてミクログリアを活性化および増殖させる役割を果たすため、脳内でＰ２Ｘ7受容体が活性化されると、神経炎症および神経変性の自己伝播サイクル（ｓｅｌｆ−ｐｒｏｐａｇａｔｉｎｇ  ｃｙｃｌｅ）が生じる（Ｍｏｎｉｆ，ｅｔ  ａｌ，Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，２９，３７８１−９１，２００９）。
【０００５】
したがって、疼痛、炎症、神経障害および神経変性障害、精神神経障害または炎症促進性サイトカインを減少させるかもしくはそれ以外の形で安定化させることが有利である他の障害を治療するための、中枢神経系における治療的介入に有用な薬剤として、Ｐ２Ｘ7受容体アンタゴニスト、特に、十分な脳内移行性を有する小分子が所望されている。既に（±）−Ｎ−（２−（４−クロロフェニル）−２−モルホリノエチル）−２−（ピリミジン−２−イル）−４−（トリフルオロメチル）チアゾール−５−カルボキサミドのラセミ体がＬｉらによる国際公開第２００９／０１２４８２号パンフレットに記載されているが、本発明においては、より強力な、先に開示されたラセミ混合物の鏡像体を提供する。
【発明の概要】
【０００６】
本発明の目的は、Ｐ２Ｘ7受容体を阻害する化合物を提供することにある。したがって本発明は、次に示す（Ｓ）−Ｎ−（２−（４−クロロフェニル）−２−モルホリノエチル）−２−（ピリミジン−２−イル）−４−（トリフルオロメチル）チアゾール−５−カルボキサミド（Ｉ）に関する。
【化１】
2018532751.tif 000002
【０００７】
本発明はまた、（Ｓ）−Ｎ−（２−（４−クロロフェニル）−２−モルホリノエチル）−２−（ピリミジン−２−イル）−４−（トリフルオロメチル）チアゾール−５−カルボキサミドまたはその薬学的に許容される塩および任意選択により薬学的に許容される担体、賦形剤もしくは希釈剤を含む医薬組成物を提供する。
【０００８】
さらに本発明は、被験体の疼痛または炎症を治療するための方法であって、疼痛または炎症を患っている被験体に治療有効量の（Ｓ）−Ｎ−（２−（４−クロロフェニル）−２−モルホリノエチル）−２−（ピリミジン−２−イル）−４−（トリフルオロメチル）チアゾール−５−カルボキサミドを投与することを含む、方法を提供する。
【０００９】
さらに本発明は、被験体の感情障害を治療するための方法であって、感情障害を患っている被験体に治療有効量の（Ｓ）−Ｎ−（２−（４−クロロフェニル）−２−モルホリノエチル）−２−（ピリミジン−２−イル）−４−（トリフルオロメチル）チアゾール−５−カルボキサミドを投与することを含む、方法を提供する。
【００１０】
さらに本発明は、被験体の神経障害または神経変性障害を治療するための方法であって、神経障害または神経変性障害を患っている被験体に治療有効量の（Ｓ）−Ｎ−（２−（４−クロロフェニル）−２−モルホリノエチル）−２−（ピリミジン−２−イル）−４−（トリフルオロメチル）チアゾール−５−カルボキサミドを投与することを含む、方法を提供する。
【００１１】
さらに本発明は、うつ、大うつ病性障害、治療抵抗性うつ、不安、強迫性障害、心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）、神経因性疼痛、変形性関節症、関節リウマチ、乾癬性関節炎，炎症性腸疾患、多発性硬化症、てんかん、パーキンソン病、ハンチントン病およびアルツハイマー病を治療するための方法であって、（Ｓ）−Ｎ−（２−（４−クロロフェニル）−２−モルホリノエチル）−２−（ピリミジン−２−イル）−４−（トリフルオロメチル）チアゾール−５−カルボキサミドを投与することを含む、方法を提供する。
【００１２】
本発明はまた、うつ、大うつ病性障害、治療抵抗性うつ、不安、強迫性障害、心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）、神経因性疼痛、変形性関節症、関節リウマチ、乾癬性関節炎、炎症性腸疾患、多発性硬化症、てんかん、パーキンソン病、ハンチントン病およびアルツハイマー病からなる群から選択される感情障害を治療するための医薬を製造するための、（Ｓ）−Ｎ−（２−（４−クロロフェニル）−２−モルホリノエチル）−２−（ピリミジン−２−イル）−４−（トリフルオロメチル）チアゾール−５−カルボキサミドの使用を提供する。
【００１３】
本発明はまた、被験体のうつ、大うつ病性障害、治療抵抗性うつ、不安、強迫性障害、心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）、神経因性疼痛、変形性関節症、関節リウマチ、乾癬性関節炎、炎症性腸疾患、多発性硬化症、てんかん、パーキンソン病、ハンチントン病およびアルツハイマー病から選択される障害を治療するための、（Ｓ）−Ｎ−（２−（４−クロロフェニル）−２−モルホリノエチル）−２−（ピリミジン−２−イル）−４−（トリフルオロメチル）チアゾール−５−カルボキサミドの使用を提供する。
【００１４】
本発明の上述および他の態様は以下に示す詳細な説明を参照することにより明らかになるであろう。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
発明の詳細な説明
本発明は、（Ｓ）−Ｎ−（２−（４−クロロフェニル）−２−モルホリノエチル）−２−（ピリミジン−２−イル）−４−（トリフルオロメチル）チアゾール−５−カルボキサミドが（Ｒ）−Ｎ−（２−（４−クロロフェニル）−２−モルホリノエチル）−２−（ピリミジン−２−イル）−４−（トリフルオロメチル）チアゾール−５−カルボキサミドおよびラセミ混合物である（±）−Ｎ−（２−（４−クロロフェニル）−２−モルホリノエチル）−２−（ピリミジン−２−イル）−４−（トリフルオロメチル）チアゾール−５−カルボキサミドと比較してはるかに強力なＰ２Ｘ7受容体の阻害薬であることを見出したことに基づく。したがって、本発明の化合物は、Ｐ２Ｘ7受容体が関与する障害の治療に特に有用である。さらに、本発明の特定の態様を以下により詳細に説明するが、この記載は、本発明を実施することができる全ての異なる方法または本発明に追加することができる全ての特徴の詳細な一覧を示すことを意図したものではない。したがって、以下に示す明細書の記載は本発明の幾つかの実施形態を例示することを意図するものであって、これらのあらゆる並べ替え、組合せおよび変形を網羅的に明記するものではない。
【００１６】
本明細書において使用される、本発明の化合物に適用される「有効量」という句は、意図された生物学的効果を惹起するのに十分な量を指すことを意図している。本発明の化合物に適用される「治療有効量」という句は、障害もしくは疾患の状態または障害もしくは疾患の症状を、改善（ａｍｅｌｉｏｒａｔｅ）、一時的軽減、安定化、回復（ｒｅｖｅｒｓｅ）、進行を緩慢化もしくは遅延させるのに十分な化合物の量を指すことを意図している。一実施形態において、本発明の方法は、化合物の組合せの投与を提供する。このような例における「有効量」とは、意図された生物学的効果を惹起するのに十分な、その組合せの量である。
【００１７】
本明細書において使用される「治療」または「治療すること」という用語は、障害もしくは疾患の進行もしくは重症度を改善するかもしくは回復させるか、またはこの種の疾患もしくは障害の１種以上の症状もしくは副作用を改善するかもしくは回復させることを意味する。本明細書において使用される「治療」または「治療すること」という用語はまた、疾患または障害の機構、状況または状態の進行を、減速、抑止、制限、障害または妨害等により阻止または遮断することを意味する。さらに本発明における「治療」または「治療すること」という用語は、有益なまたは所望の臨床結果を得るための手法を意味し、ここで「有益なまたは所望の臨床結果」には、これらに制限されるものではないが、症状の緩和、障害または疾患の範囲の縮小、疾患または障害の状態の安定化（すなわち悪化させないこと）、疾患または障害の状態の遅延または緩慢化、疾患または障害の状態の改善または一時的軽減、および疾患または障害の緩解（部分的または完全に、検出可能または検出不可能のいずれかで）が挙げられる。
【００１８】
薬学的に許容される塩
本発明は、本発明化合物の塩、通常は薬学的に許容される塩も含む。この種の塩としては、薬学的に許容される酸付加塩が挙げられる。酸付加塩としては、無機酸の塩に加えて有機酸の塩が挙げられる。
【００１９】
好適な無機酸の代表的な例としては、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、リン酸、硫酸、スルファミン酸、硝酸等が挙げられる。好適な有機酸の代表的な例としては、ギ酸、酢酸、トリクロロ酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、安息香酸、ケイ皮酸、クエン酸、フマル酸、グリコール酸、イタコン酸、乳酸、メタンスルホン酸、マレイン酸、リンゴ酸、マロン酸、マンデル酸、シュウ酸、ピクリン酸、ピルビン酸、サリチル酸、コハク酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、酒石酸、アスコルビン酸、パモ酸、ビスメチレンサリチル酸、エタンジスルホン酸、グルコン酸、シトラコン酸、アスパラギン酸、ステアリン酸、パルミチン酸、ＥＤＴＡ、グリコール酸、ｐ−アミノ安息香酸、グルタミン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、テオフィリン酢酸に加えて、８−ハロテオフィリン（例えば、８−ブロモテオフィリン等）が挙げられる。薬学的に許容される無機または有機酸付加塩のさらなる例としては、Ｓ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，１９７７，６６，２に列挙されている薬学的に許容される塩が挙げられる。
【００２０】
さらに本発明の化合物は、非溶媒和形態に加えて、水やエタノール等の薬学的に許容される溶媒との溶媒和物形態で存在することができる。
【００２１】
医薬組成物
さらに本発明は、治療有効量の（Ｓ）−Ｎ−（２−（４−クロロフェニル）−２−モルホリノエチル）−２−（ピリミジン−２−イル）−４−（トリフルオロメチル）チアゾール−５−カルボキサミドおよび薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。本発明はまた、治療有効量の実験項に開示する特定の化合物のうちの１種および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。
【００２２】
本発明の化合物は、単独でまたは薬学的に許容される担体もしくは賦形剤と組み合わせて、単回投与または複数回投与のいずれかで投与することができる。本発明による医薬組成物はまた、薬学的に許容される担体もしくは希釈剤のみならず、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ，２０１３に開示されているものなどの従来技術に従う他の任意の公知の佐剤および賦形剤と一緒に処方することができる。
【００２３】
本医薬組成物は、経口、経直腸、経鼻、経肺、局所（頬側および舌下を含む）、経皮、脳槽内、腹腔内、膣内、非経口（皮下、筋肉内、髄腔内、静脈内および皮内を含む）等の任意の好適な経路で投与するために特定的に処方することができる。この経路は、治療すべき被験体の全身状態および年齢、治療すべき状況の性質ならびに活性成分に依存することになることが理解されるであろう。
【００２４】
経口投与用医薬組成物としては、カプセル剤、錠剤、糖衣錠剤、丸剤、トローチ剤、散剤、顆粒剤等の固形剤形が挙げられる。適切であれば、この組成物は、腸溶コーティング等のコーティングを施して製剤化してもよいし、あるいは当該技術分野においてよく知られている方法に従い、活性成分が徐放（ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ｒｅｌｅａｓｅ）または持続放出（ｐｒｏｌｏｎｇｅｄ  ｒｅｌｅａｓｅ）等の形で放出制御（ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｒｅｌｅａｓｅ）されるように処方することもできる。経口投与用液体剤形としては、液剤、乳剤、懸濁剤、シロップ剤およびエリキシル剤が挙げられる。
【００２５】
本明細書において使用される「阻害（ｉｎｈｉｂｉｔ）」または「阻害（すること）（ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ）」という用語は、例えば「Ｐ２Ｘ7受容体の活性を阻害する」のように、低下、縮小、遮断または消失さえさせることを意味する。本明細書において使用される「Ｐ２Ｘ7受容体の活性を阻害する」または「Ｐ２Ｘ7活性を阻害する」とは、例えば、刺激またはアゴニストリガンドに対する応答を阻害したり、またはＩＬ１βの産生または蓄積を阻害したりするなど、Ｐ２Ｘ7受容体の細胞応答を示す能力を低下させるかまたは消失さえさせることを意味する。
【００２６】
本発明はまた、疾患または障害を治療する方法であって、疾患もしくは障害を患っている（またはその恐れがある）かまたはそれ以外の形で治療を必要としている哺乳動物に、治療有効量の本発明化合物またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む方法を提供する。本発明はまた、疼痛または炎症を治療する方法であって、治療有効量の本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩を、それを必要とする哺乳動物に投与することを含む方法を提供する。一実施形態において、本明細書に記載する化合物を用いて治療することができる急性、慢性もしくは炎症性疼痛を含む疼痛は、神経因性疼痛、術後疼痛、モルヒネ耐性、線維筋痛症、神経痛、頭痛、変形性関節症、関節リウマチ、乾癬性関節炎、過敏性腸症候群または炎症性腸疾患により惹起されるものである。
【００２７】
他の実施形態において、本明細書に記載する化合物を用いて治療することができる疾患または障害は、てんかん、多発性硬化症、パーキンソン病、ハンチントン病、またはアルツハイマー病等の神経障害または神経変性障害である。本明細書において使用される「神経障害」という用語は、これらに限定されるものではないが、上に記載した障害を含む神経系の障害を意味する。神経系の障害の公知の意味に基づけば、神経障害は、苦しんでいる哺乳動物の脳内または脊髄内で発生している可能性のある構造異常、生物化学的異常、電気的異常または細胞（神経細胞またはミクログリア）のシグナル伝達異常に起因する。本明細書において使用される「神経変性障害」という用語は、神経細胞死や神経細胞の発達低下といった神経細胞の構造または機能の対称的かつ進行性の損傷を特徴とする障害を意味する。この種の神経細胞の損傷は、運動神経系、感覚神経系または認知神経系に悪影響を与える可能性がある。そのような状況下において、本明細書に記載する化合物を使用して神経障害または神経変性障害を治療することにより、麻痺、筋力低下、協調運動不全、制御されていない動き、けいれん、錯乱、意識レベルの変化、記憶喪失、情動不安定、感覚消失、疼痛および類似の症状等の神経障害または神経変性障害の症状から改善または解放させることができる。
【００２８】
一実施形態において、疾患または障害は、感情障害等の精神神経障害である。本明細書において使用される「感情障害」とは、持続的かつ全般的な気分変調を特徴とし、思考、感情および行動に影響を与える精神障害を意味する。感情障害には、ＤＳＭ−ＩＶ−ＴＲ（登録商標）（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，２０００，Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  ａｎｄ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｍｅｎｔａｌ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ（４ｔｈ  ｅｄ．，ｔｅｘｔ  ｒｅｖ．）ｄｏｉ：１０．１１７６／ａｐｐｉ．ｂｏｏｋｓ．９７８０８９０４２３３４９（当該文献を本明細書の一部を構成するものとしてここに援用する））に記載されている気分障害が含まれる。そのような状況下において、本明細書に記載されている化合物を用いて感情障害を治療することにより、気分不安定、躁病エピソード、罪悪感または無益感、睡眠障害、不穏等の感情障害の症状を、改善、安定化もしくはそれ以外の形で縮小するか、またはこれらの症状から解放することができる。感情障害の例として、これらに限定されるものではないが、抑うつ障害、不安症、双極性障害、気分変調症および分裂情動性障害が挙げられる。不安症としては、これらに限定されるものではないが、全般不安症、パニック障害、強迫性障害、恐怖症および心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）が挙げられる。抑うつ障害としては、これらに限定されるものではないが、大うつ病性障害（ＭＤＤ）、緊張病症状を伴ううつ、メランコリアを伴ううつ、非定型うつ、精神病性うつ、産後うつ、治療抵抗性うつ、双極性うつ（双極Ｉ型および双極ＩＩ型を含む）および軽症、中等症または重症うつが挙げられる。パーソナリティ障害としては、これらに限定されるものではないが、妄想性障害、反社会性パーソナリティ障害および境界性パーソナリティ障害が挙げられる。
【００２９】
本発明の一実施形態において、本明細書に記載する化合物を用いて治療される感情障害は、うつ、大うつ病性障害（ＭＤＤ）、治療抵抗性うつ、双極性障害、全般性不安障害、パニック障害、強迫性障害もしくは心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）またはこれらの組合せである。
【００３０】
本発明は、被験体の感情障害を治療する方法であって、この種の治療を必要としている被験体に治療有効量の（Ｓ）−Ｎ−（２−（４−クロロフェニル）−２−モルホリノエチル）−２−（ピリミジン−２−イル）−４−（トリフルオロメチル）チアゾール−５−カルボキサミドを投与することを含む、方法を提供する。
【００３１】
本発明は、被験体のＰ２Ｘ7活性を阻害する方法であって、それを必要としている被験体に治療有効量の（Ｓ）−Ｎ−（２−（４−クロロフェニル）−２−モルホリノエチル）−２−（ピリミジン−２−イル）−４−（トリフルオロメチル）チアゾール−５−カルボキサミドを投与することを含む、方法を提供する。
【００３２】
本発明はまた、ＩＬ１βの産生または蓄積を阻害する方法であって、この種の治療を必要としている被験体に治療有効量の（Ｓ）−Ｎ−（２−（４−クロロフェニル）−２−モルホリノエチル）−２−（ピリミジン−２−イル）−４−（トリフルオロメチル）チアゾール−５−カルボキサミドを投与することを含む、方法も提供する。
【００３３】
一実施形態において、本発明は、感情障害を治療するための医薬を製造するための、式Ｉで表される化合物の使用を提供する。本発明はまた、Ｐ２Ｘ7活性を阻害するための医薬を製造するための、式Ｉで表される化合物の使用を提供する。さらに本発明は、ＩＬ１βの産生または蓄積を阻害するための医薬を製造するための、（Ｓ）−Ｎ−（２−（４−クロロフェニル）−２−モルホリノエチル）−２−（ピリミジン−２−イル）−４−（トリフルオロメチル）チアゾール−５−カルボキサミドの使用を提供する。
【００３４】
一実施形態において、本発明は、被験体の感情障害の治療における式Ｉで表される少なくとも１種の化合物の使用を提供する。一実施形態において、本発明は、被験体のＰ２Ｘ7活性の阻害に使用するための（Ｓ）−Ｎ−（２−（４−クロロフェニル）−２−モルホリノエチル）−２−（ピリミジン−２−イル）−４−（トリフルオロメチル）チアゾール−５−カルボキサミドを提供する。一実施形態において、本発明は、被験体のＩＬ１βの産生または蓄積の阻害に使用するための（Ｓ）−Ｎ−（２−（４−クロロフェニル）−２−モルホリノエチル）−２−（ピリミジン−２−イル）−４−（トリフルオロメチル）チアゾール−５−カルボキサミドを提供する。
【００３５】
本発明はまた、被験体の療法、例えば、感情障害の治療において使用するための（Ｓ）−Ｎ−（２−（４−クロロフェニル）−２−モルホリノエチル）−２−（ピリミジン−２−イル）−４−（トリフルオロメチル）チアゾール−５−カルボキサミドを提供する。
【実施例】
【００３６】
実験項
（±）−Ｎ−（２−（４−クロロフェニル）−２−モルホリノエチル）−２−（ピリミジン−２−イル）−４−（トリフルオロメチル）チアゾール−５−カルボキサミドのラセミ体が既にＬｉらによる国際公開第２００９／０１２４８２号パンフレットに記載されている。本明細書において、本発明者らは、（Ｓ）−Ｎ−（２−（４−クロロフェニル）−２−モルホリノエチル）−２−（ピリミジン−２−イル）−４−（トリフルオロメチル）チアゾール−５−カルボキサミドを調製するための簡便な鏡像異性体合成手順を記載する。
【００３７】
一般的方法
分析用ＬＣ−ＭＳおよびＨＰＬＣデータを以下に特定する方法のうちの１つを用いて取得した。
方法Ａ：システムコントローラ：ｓｈｉｍａｄｚｕ  ＣＢＭ−２０Ａ；ＵＶ検出器：ｓｈｉｍａｄｚｕ  ＳＰＤ−Ｍ２０Ａ；カラム：Ｃ−１８、４．６×３０ｍｍ、３．５＝μｍ  Ｓｙｍｍｅｔｒｙ；カラム温度：６０℃
移動相：グラジエント、溶媒Ａ：ＴＦＡ（０．０５％（ｖ／ｖ））添加Ｈ2Ｏ、溶媒Ｂ：ＴＦＡ（０．０５％）添加メタノール；流速：３．０ｍｌ／分。
方法Ｂ：Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ−ＭＳを使用；カラム：Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８、２．１×５０ｍｍ、１．７μｍ；カラム温度：６０℃；溶媒系：Ａ＝水／トリフルオロ酢酸（９９．９５：０．０５）、Ｂ＝アセトニトリル／水／トリフルオロ酢酸（９４．９６５：５：０．０３５）；方法：リニアグラジエント溶出、Ａ：Ｂ＝９０：１０〜０：１００（１．０分間）；流速１．２ｍＬ／分。
方法Ｃ：ＨＰＬＣカラム：Ｍｅｒｃｋ  ＬｉＣｈｒｏＣａｒｔ  ２５０−４、ＬｉＣｈｒｏＳｏｒｂ  ＲＰ−８、５μ、２５０×４．６ｍｍ
移動相：水／アセトニトリル（５０／５０）中２０ｍＭ  トリエチルアミン／リン酸緩衝液、ｐＨ＝３．０；流速：１．０ｍＬ／分；温度：３０℃。
方法Ｄ：キラルＨＰＬＣカラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＤ−Ｈ、５ｍｙ、２５０×４．６ｍｍ
溶出液：ヘプタン：エタノール：ジエチルアミン＝９０：１０：０．１；流速：１．０ｍＬ／分；温度：３０℃。
【００３８】
1Ｈ  ＮＭＲスペクトルを５００または６００ＭＨｚのＢｒｕｋｅｒ  Ａｖａｎｃｅ装置を用いて記録した。ＴＭＳを内部参照標準として使用した。化学シフトの値はｐｐｍで表示する。ＮＭＲシグナルの多重度に関しては次に示す略称を使用する：ｓ＝一重線、ｄ＝二重線、ｔ＝三重線、ｑ＝四重線、ｍ＝多重線。
【００３９】
略称は、ＡＣＳ  Ｓｔｙｌｅ  Ｇｕｉｄｅ：“Ｔｈｅ  ＡＣＳ  Ｓｔｙｌｅ  ｇｕｉｄｅ−Ａ  ｍａｎｕａｌ  ｆｏｒ  ａｕｔｈｏｒｓ  ａｎｄ  ｅｄｉｔｏｒｓ”Ｊａｎｅｔ  Ｓ．Ｄｏｄｄ，Ｅｄ．１９９７，ＩＳＢＮ：０８４１２３４６２０に準拠する。
【００４０】
（Ｓ）−Ｎ−（２−（４−クロロフェニル）−２−モルホリノエチル）−２−（ピリミジン−２−イル）−４−（トリフルオロメチル）チアゾール−５−カルボキサミドの調製
十分な量の（Ｓ）−Ｎ−（２−（４−クロロフェニル）−２−モルホリノエチル）−２−（ピリミジン−２−イル）−４−（トリフルオロメチル）チアゾール−５−カルボキサミドを合成するために、２種のカップリング相手であるチアゾールカルボン酸５およびジアミン９を得るためのスケーラブルな経路の発展を発展させた。チアゾールカルボン酸５の合成は、酸性ＤＭＦ水溶液中、対応するニトリル１からピリミジン−２−カルボチオアミド２を生成することから開始し、チオアセトアミドを硫黄源として使用し、ピリミジン−２−カルボチオアミド２を８２％の収率で得た。次いで、ハンチュのチアゾール合成を用いて、ピリミジン−２−カルボチオアミド２をＤＭＦ中１１０℃で２−クロロ−４，４，４−トリフルオロアセト酢酸エチルエステル３に曝露することにより、複素芳香族５員環系を低めの収率（ｍｏｄｅｓｔ）３２％で調製した。次いでＴＨＦ：ＭｅＯＨ：水の混合物中、水酸化リチウムに曝露して加水分解することにより、所望のカルボン酸カップリング相手５を収率９６％で生成した。
【化２】
2018532751.tif 000003
【００４１】
一方の鏡像異性体に富むジアミン９の最適化された合成は、モルホリンをニトロオレフィン６に１，４−共役付加することから開始した。対応する付加物を２Ｍの塩酸を加えることにより直接析出させた。生成した白色固体を反応混合物を濾過することにより単離し、塩酸塩７を得た。４０℃の真空オーブンで塩酸塩７の乾燥を試みたところ、モルホリンが脱離して元のニトロオレフィン６に戻ってしまったため、塩酸塩７をそのまま使用した。ニトロ部分の還元を、エタノール水溶液中で亜鉛に曝露することにより達成し、それによってジアミン８のラセミ体を収率８７％で得た。大規模なスクリーニングを行った後、アセトニトリルおよび水の混合物中、Ｌ−Ｎ−アセチル−ロイシンを使用してジアミン８をエナンチオ選択的分割に付すことにより、Ｓ体を収率３０％および＞９７％ｅｅで得ることを見出した。
【００４２】
次いでこのジアミンを、カルボン酸５の対応する酸塩化物とカップリングさせることにより、（Ｓ）−Ｎ−（２−（４−クロロフェニル）−２−モルホリノエチル）−２−（ピリミジン−２−イル）−４−（トリフルオロメチル）チアゾール−５−カルボキサミドを全収率２６％、ＵＶ純度９９％、＞９７％ｅｅで得た。
【化３】
2018532751.tif 000004
【００４３】
２  Ｓ）−Ｎ−（２−（４−クロロフェニル）−２−モルホリノエチル）−２−（ピリミジン−２−イル）−４−（トリフルオロメチル）チアゾール−５−カルボキサミドの合成を以下に示す実施例１〜７に詳述する。
【００４４】
実施例１には、カップリング相手である２−（ピリミジン−２−イル）−４−（トリフルオロメチル）チアゾール−５−カルボン酸５を調製するための簡便な合成手順を開示する。
【００４５】
実施例２〜７には、（Ｓ）−Ｎ−（２−（４−クロロフェニル）−２−モルホリノエチル）−２−（ピリミジン−２−イル）−４−（トリフルオロメチル）チアゾール−５−カルボキサミドを調製するための簡便な鏡像異性体合成手順を開示する。
【００４６】
実施例１：２−（ピリミジン−２−イル）−４−（トリフルオロメチル）チアゾール−５−カルボン酸
対応するニトリル１から、チオアセトアミドを硫黄源として使用し、酸性ＤＭＦ水溶液中で加熱することにより、ピリミジン−２−カルボチオアミド２を収率８２％で生成した。次いで、ハンチュのチアゾール合成法を用いて、ピリミジン−２−カルボチオアミド２をＤＭＦ中１１０℃で２−クロロ−４，４，４−トリフルオロアセト酢酸エチルエステル３と反応させることにより、複素芳香族５員環系４を収率３２％で得た。ＴＨＦ：ＭｅＯＨ：水の混合物中、水酸化リチウムを用いてエステル加水分解４を行うことにより、所望のチアゾールカルボン酸カップリング相手５を収率９６％で生成した。
【００４７】
実施例２：１−クロロ−４−（（Ｅ）−２−ニトロビニル）−ベンゼン
【化４】
2018532751.tif 000005
４−クロロベンズアルデヒド（２００．０ｇ、１４２３ｍｍｏｌ）を酢酸（６００．０ｍＬ、１０５５０ｍｍｏｌ）に溶解し、ニトロメタン（３０８．２ｍＬ、５６９１ｍｍｏｌ）を加え、次いで無水酢酸（２６．８５ｍＬ、２８４．６ｍｍｏｌ）および酢酸アンモニウム（１２０．６ｇ、１５６５ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を加熱して２時間還流させた。揮発性物質を蒸発により除去し、水（４００ｍＬ、２００００ｍｍｏｌ）を加えた後、酢酸エチル（４００ｍＬ、４０００ｍｍｏｌ）を加えた。固体を濾取して乾燥させ、標題化合物６を褐色固体（１７８．８ｇ）として得た。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3  ５００ＭＨｚ）：δｐｐｍ  ６．８８（ｄ，１Ｈ），６．４８（ｄ，１Ｈ），６．４７−６．３２（ｍ，４Ｈ）。ＨＰＬＣ：ｔR（分、方法Ａ）＝１．４８。
【００４８】
実施例３：４−［１−（４−クロロフェニル）−２−ニトロエチル］−モルホリン塩酸塩
【化５】
2018532751.tif 000006
１−クロロ−４−（（Ｅ）−２−ニトロビニル）−ベンゼン６（１７８．８ｇ、９７３．９ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（３８３．９ｍＬ、４７３３ｍｍｏｌ）に溶解した。モルホリン（８４．９３ｍＬ、９７３．９ｍｍｏｌ）を加えて混合物を３０分間室温で撹拌した。ジエチルエーテル（１３２９ｍＬ、１２６６０ｍｍｏｌ）を加えた後、２．０Ｍのジエチルエーテル中塩化水素（５８４．３ｍＬ）を加えた。内部温度が３６℃に上昇し、スラリーを１５分間撹拌した後、氷浴で撹拌しながら１５分間冷却した。固体を濾取してエーテルで洗浄した。得られた標題化合物７をさらに精製することなく次のステップに用いた。
【００４９】
実施例４：２−（４−クロロフェニル）−２−モルホリン−４−イル−エチルアミン
【化６】
2018532751.tif 000007
４−［１−（４−クロロフェニル）−２−ニトロエチル］−モルホリン塩酸塩７（５９．０ｇ、１９２ｍｍｏｌ）をエタノール（６８０ｍＬ、１２０００ｍｍｏｌ）中に懸濁させた後、３７％ＨＣｌ水溶液（２００ｍＬ）を加え、次いで亜鉛（４２．８ｇ、６５４ｍｍｏｌ）を４回に分けて加えた。混合物を５０分間撹拌すると、その間に混合物はほぼ無色の透明な溶液となった。揮発性物質を蒸発により除去し、水性混合物を３２％アンモニア水溶液（４００ｍＬ）中に注ぐことで反応を停止した。有機物をｉＰｒＯＡｃ（２×１００ｍＬ）で抽出した。有機相を合一して乾燥（硫酸ナトリウム）させ、濾過して真空下にＭｅＣＮ（３×１００ｍＬ）を用いて共沸（ｃｏ−ｅｖａｐｏｒａｔｅ）させることにより蒸発乾固させ、化合物８（４５．１ｇ）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3  ６００ＭＨｚ）：δｐｐｍ  ７．３１（ｄ，２Ｈ），７．２０（ｄ，２Ｈ），３．７１−３．６５（ｍ，４Ｈ），３．２６（ｔ，１Ｈ），３．０９−３．０４（ｍ，１Ｈ），２．９６−２．９１（ｍ，１Ｈ），２．４３−２．３７（ｍ，４Ｈ）。
【００５０】
実施例５：（Ｓ）−２−（４−クロロフェニル）−２−モルホリン−４−イル−エチルアミン（Ｓ）−２−アセチルアミノ−４−メチルペンタノエート
【化７】
2018532751.tif 000008
２−（４−クロロフェニル）−２−モルホリノエチルアミン８（１０６．７０ｇ、０．４４３ｍｏｌ）をアセトニトリル（３００５ｍＬ）に溶解した溶液に、（Ｓ）−２−アセトアミド−４−メチルペンタン酸（Ｎ−アセチル−Ｌ−ロイシン、７６．８０ｇ、０．４４３ｍｏｌ）を加え、混合物を加熱還流し、水（１０５ｍＬ）を加えることにより透明な溶液を得た。加熱を停止して溶液をゆっくりと室温に戻した。約４５℃で結晶化が開始し、徐々に２０℃まで冷却しながら結晶化を４時間継続させた。生成物を濾過して単離し、濾過物をアセトニトリル（２×１００ｍＬ）で洗浄し、真空乾燥させた。固体をアセトニトリル：水＝９６．５：３．５（２４０ｍＬ）中に再び懸濁させた。次いで、スラリーを徐々に加熱して１時間還流させた後、加熱を停止し、室温までゆっくりと冷却しながら撹拌を継続した。スラリーを室温で１６時間撹拌した。析出した化合物を濾過して単離し、フィルタ上でアセトニトリル：水＝９６．５／３．５（２×２０ｍＬ）およびアセトニトリル（１×３０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させた。次いで生成物を重量が一定になるまで４０℃で真空乾燥させることにより化合物８ａを白色固体として得た（５５．１ｇ）。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3  ６００ＭＨｚ）：δｐｐｍ  ７．６８（ｄ，１Ｈ），７．４４（ｄ，２Ｈ），７．２６（ｄ，２Ｈ），４．０８−４．０３（ｍ，１Ｈ），３．７１−３．６８（ｍ，１Ｈ），３．５８−３．５２（ｍ，４Ｈ），３．３８−３．３２（ｍ，１Ｈ），２．８８−２．８３（ｍ，１Ｈ），２．４０−２．３５（ｍ，２Ｈ），２．２２−２．１５（ｍ，２Ｈ），１．８１（ｓ，３Ｈ），１．６２−１．５５（ｍ，１Ｈ），１．５０−１．４５（ｍ，１Ｈ），１．４１−１．３６（ｍ，１Ｈ），０．８５（ｄ，３Ｈ），０．８１（ｄ，３Ｈ）。ＨＰＬＣ：ｔR（分、方法Ｃ）＝２．５３。
【００５１】
実施例６：（Ｓ）−２−（４−クロロフェニル）−２−モルホリノエチルアミン
【化８】
2018532751.tif 000009
２−（４−クロロフェニル）−２−モルホリノエチルアミン（Ｓ）−２−アセトアミド−４−メチルペンタノエート８ａ（５５．１ｇ）をｉＰｒＯＡｃ／Ｈ2Ｏ（４００ｍＬ）に溶解した溶液に２４％アンモニア水溶液を加えた。相を分離した後、水相を再度ｉＰｒＯＡｃ（５０ｍＬ）で抽出し、有機相を合一して水（２×５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ4上で乾燥させ、溶媒を真空下に除去した。ＮａＣｌ（約２０ｇ）を水相に溶解した後、ｉＰｒＯＡｃ（３×１００ｍＬ）で抽出した。有機相を合一して飽和食塩水（２×５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ4上で乾燥させ、蒸発により重量が一定になるまで乾燥させ、化合物９（３１．３ｇ）を得た。ＨＰＬＣ：ｔR（分、方法Ｃ）＝２．５３、キラルＨＰＬＣ：ｔR（分、方法Ｄ）＝１４．９６。
【００５２】
実施例７：（Ｓ）−Ｎ−（２−（４−クロロフェニル）−２−モルホリノエチル）−２−（ピリミジン−２−イル）−４−（トリフルオロメチル）チアゾール−５−カルボキサミド
【化９】
2018532751.tif 000010
（Ｓ）−２−（４−クロロフェニル）−２−モルホリノエチルアミン９（３１．３ｇ、１３０ｍｍｏｌ）を乾燥ＴＨＦ（７００ｍＬ）に室温で溶解させた。２−（ピリミジン−２−イル）−４−（トリフルオロメチル）チアゾール−５−カルボン酸５（３９．４ｇ、１４３ｍｍｏｌ、Ｌｉらによる国際公開第２００９／０１２４８２号パンフレットに先に記載された方法で調製）を加えた後、トリエチルアミン（５４．４ｍＬ、３９０ｍｍｏｌ）を加えた。２，４，６−トリプロピル−１，３，５，２，４，６−トリオキサトリホスフィナン２，４，６−トリオキシド（１２２ｍＬ、酢酸エチル中５０％溶液、ＴＨＦ１００ｍＬに溶解）をゆっくりと加えると、速やかに透明な溶液が生成した。反応物を室温で３時間撹拌した。この反応物にｉＰｒＯＡｃ（５００ｍＬ）を加え、有機相を０．５ＭのＮａＯＨ（２００ｍＬ）および０．１ＭのＮａＯＨ（２００ｍＬ）で洗浄した後、水（２×２００ｍＬ）で洗浄した。次いで生成物を１ＭのＨ2ＳＯ4（４×２００ｍＬ）で抽出し、水相を合一してｉＰｒＯＡｃ（２×２００ｍＬ）で洗浄し、再び２４％アンモニア水溶液で塩基性にし（強い発熱、氷で冷却）、ｉＰｒＯＡｃ（２×４００ｍＬ）で抽出した。有機相を合一して水（１×３００ｍＬ）および飽和食塩水（２×２００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ4上で乾燥させ、溶媒の一部を真空下に除去（体積約４００ｍＬ）し、ヘプタン（６００ｍＬ）を加えた。混合物をロータリーエバポレータで１６時間撹拌しながら徐々に室温まで冷却した。反応物を氷上で３０分間冷却し、生成物を濾過して単離し、ヘプタン（２×５０ｍＬ）で洗浄し、重量が一定になるまで真空乾燥させることにより標題化合物（４０ｇ）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6  ６００ＭＨｚ）：δｐｐｍ  ９．０２（ｄ，２Ｈ），８．９４（ｔ，１Ｈ），７．７１（ｔ，１Ｈ），７．４４（ｄ，２Ｈ），７．３３（ｄ，２Ｈ），３．９２−３．８６（ｍ，１Ｈ），３．６７−３．６４（ｍ，１Ｈ），３．６０−３．４８（ｍ，５Ｈ），２．４０−２．３０（ｍ，４Ｈ）。ＬＣＭＳ（ＭＨ+）：ｍ／ｚ＝４９８．３、ｔR（分、方法Ｂ）＝０．４９。ＨＰＬＣ：ｔR（分、方法Ｃ）＝５．１６。［α］20，Ｄ＝−３４．８９（ｃ＝１％（ＭｅＯＨ中））。
【００５３】
ＸＲＰＤ解析により、得られた化合物（Ｉ）が（Ｓ）−Ｎ−（２−（４−クロロフェニル）−２−モルホリノエチル）−２−（ピリミジン−２−イル）−４−（トリフルオロメチル）チアゾール−５−カルボキサミドであることを確認した。
【００５４】
Ｐ２Ｘ7  ＦＬＩＰＲアッセイ
ヒト、マウスまたはラットＰ２Ｘ7受容体のいずれかを安定発現するＨＥＫ２９３細胞を、アッセイの２４時間前に１．５％ＦＢＳ培地を用いて３８４ウェル  ポリ−Ｄ−リジンコートブラックＦＬＩＰＲプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ  Ｏｎｅ、カタログ番号７８１９４６）に播種した。ヒトＰ２Ｘ7アッセイには、スクロース緩衝液（ｐＨ７．４）を使用した（５ｍＭ塩化カリウム、９．６ｍＭ  ＮａＨ2ＰＯ4・２Ｈ2Ｏ、２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、０．５ｍＭ  ＣａＣｌ2、５ｍＭグルコース、２８０ｍＭスクロース、１．０ｍＭ  ｐｒｏｂｅｎｅｃｉｄ（Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ））。ラットＰ２Ｘ7アッセイには、ハンクス平衡塩緩衝液（ｐＨ７．４）を使用した（１×ＨＢＳＳ緩衝液に２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ＋２．５ｍＭ  ｐｒｏｂｅｎｅｃｉｄ（Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）および０．０５％ウシ血清アルブミンを添加）。培地を除去した後、プレートに３０μＬのＦｌｕｏ−４  ＮＷ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ、Ｆ３６２０６）を導入し、加湿されたチャンバー（５％ＣＯ2／９５％空気）内において３７℃で３０分間および室温で３０分間インキュベートした。異なるリガンドに応答して移動した細胞内Ｃａ+2をＦＬＩＰＲ  Ｔｅｔｒａリーダーを用いてオンラインで測定した。このアッセイにおいては、ベースラインの蛍光を１５秒間測定した後、１５μＬの４×化合物（４０μＭ）を添加し、アゴニスト活性を求めるために蛍光を３分間モニターし、１５μＬの４×ＢｚＡＴＰ（ｈＰ２Ｘ7  １×  ８μＭ、ｒＰ２Ｘ7  １×  １５μＭ）を添加し、室温で３０分間インキュベートした後、ＩＣ50を求めるために蛍光を３分間読み取った。データの解析はＰｒｉｓｍ非線形回帰曲線カーブフィッティング解析に類似したＬｕｎｄｂｅｃｋ  ＬＳＰカーブフィッティングソフトウェアを用いて行った。結果を表１に示すが、（Ｓ）−Ｎ−（２−（４−クロロフェニル）−２−モルホリノエチル）−２−（ピリミジン−２−イル）−４−（トリフルオロメチル）チアゾール−５−カルボキサミドが対応するＲ体である（（Ｒ）−Ｎ−（２−（４−クロロフェニル）−２−モルホリノエチル）−２−（ピリミジン−２−イル）−４−（トリフルオロメチル）チアゾール−５−カルボキサミド）およびラセミ混合物のどちらと比較しても、より強力なＰ２Ｘ7受容体阻害薬であることを示している。
【００５５】
【表１】
2018532751.tif 000011
【００５６】
疼痛モデルにおける（Ｓ）−Ｎ−（２−（４−クロロフェニル）−２−モルホリノエチル）−２−（ピリミジン−２−イル）−４−（トリフルオロメチル）チアゾール−５−カルボキサミドの効果の評価
（Ｓ）−Ｎ−（２−（４−クロロフェニル）−２−モルホリノエチル）−２−（ピリミジン−２−イル）−４−（トリフルオロメチル）チアゾール−５−カルボキサミドは、炎症性疼痛の完全フロインドアジュバント（ＣＦＡ）モデル、神経因性疼痛の神経枝結紮損傷（ＳＮＩ）モデルおよび完全絞扼性神経損傷（ｃｏｍｐｌｅｔｅ  ｃｏｎｓｔｒｉｃｔｉｏｎ  ｉｎｊｕｒｙ）（ＣＣＩ）モデルを含む３種のラット疼痛モデルにおいて有効性が実証された。
【００５７】
炎症性疼痛のＣＦＡモデル
ＣＦＡおよびＳＮＩ疼痛実験用動物
体重２５０〜３００ｇのＳｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙ系雄性ラット（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を当日にガバペンチンを投与して使用した（各群ｎ＝８〜１０匹）。動物をウッドチップ床材（３×１×４ｍｍ）を敷いたＭａｃｒｏｌｏｎ  ＩＩＩケージに入れ（２０×１４×１８ｃｍまたは２０×４０×１８ｃｍ；体重別に各ケージ３〜５匹に群分け）、空調管理された建物内で環境パラメータを制御した（相対湿度５５±１５％、温度２０±２℃、明期０６．００〜１９．００ｈ）。飼料および水は自由に摂取させた。行動実験に割り当てる前にラットを少なくとも１週間飼育施設に馴化させ、その後、治療群に無作為に振り分けた。全ての実験はＥｔｈｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  Ｐａｉｎ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｄａｎｉｓｈ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｆｏｒ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ  ｏｎ  Ａｎｉｍａｌｓに準拠して実施した。
【００５８】
ＣＦＡにより誘発された炎症性痛覚過敏
各ラットの後肢の足蹠面にＣＦＡを皮下注射した（生理食塩水中５０％、総量１００μｌ、Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）。その後全てのラットを即座にホームケージに戻した。発現した機械的痛覚過敏の指標を得るために、ＣＦＡ注射の前日（ＣＦＡ前ベースライン応答）と、次いでＣＦＡ注射から２４時間後にも再び（ＣＦＡ後ベースライン応答）、後肢の疼痛閾値を測定した［Ｍｕｎｒｏ，Ｇ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２０１１．６１（１−２）：ｐ．１２１−１３２参照］。この際は、研究者がラットを優しく拘束し、電子式Ｒａｎｄａｌｌ−Ｓｅｌｉｔｔｏ装置（ＩＩＴＣ，Ｕ．Ｓ．Ａ．）を使用して後肢の中央部に機械的圧を加え、圧を漸増させていった。ラットが反射により後肢を引っ込めようとした時点（幾つかの例においては、その後に鳴き声を上げた）を疼痛閾値（ｇ）として記録した。２〜３分後、２回目の測定を後肢の隣接する領域で行った。その後、ＣＦＡ炎症誘発ラットに（Ｓ）−Ｎ−（２−（４−クロロフェニル）−２−モルホリノエチル）−２−（ピリミジン−２−イル）−４−（トリフルオロメチル）チアゾール−５−カルボキサミドまたは溶媒を経口投与した。治療群は研究者に盲検化し、６０分後に再び疼痛閾値を測定した。
【００５９】
結果：ＣＦＡにより誘発された炎症性痛覚過敏
後肢にＣＦＡを注入すると、２４時間後の機械的刺激に対する疼痛閾値が低下したことから分かるように（１１３±３ｇ  ｖｓ  ３００±５ｇ（ＣＦＡ前）、Ｐ＜０．００１、スチューデントのｔ検定）、強い炎症性痛覚過敏が発生した。この機械的痛覚過敏は、（Ｓ）−Ｎ−（２−（４−クロロフェニル）−２−モルホリノエチル）−２−（ピリミジン−２−イル）−４−（トリフルオロメチル）チアゾール−５−カルボキサミドで治療することにより大幅に回復した（Ｆ（４，４９）＝３０．６９２、Ｐ＜０．００１）。注目すべきは、（Ｓ）−Ｎ−（２−（４−クロロフェニル）−２−モルホリノエチル）−２−（ピリミジン−２−イル）−４−（トリフルオロメチル）チアゾール−５−カルボキサミドを３０ｍｇ／ｋｇ投与することにより、ＮＳＡＩＤであるジクロフェナクで得られる効果に迫るほどの効果が得られたことである（それぞれ、６２％回復  ｖｓ  ８４％回復）。
【００６０】
神経因性疼痛のＳＮＩモデル
上に述べたように、ラット（外科処置時の体重１８０〜２２０ｇ）に神経枝結紮損傷（ＳＮＩ）処置を施した［Ｄｅｃｏｓｔｅｒｄ，Ｉ．ａｎｄ  Ｃ．Ｊ．Ｗｏｏｌｆ，Ｐａｉｎ，２０００．８７（２）：ｐ．１４９−５８］。麻酔を導入し、酸素（３０％）および亜酸化窒素（６８％）と一緒にして、２％のイソフルラン（Ｂａｘｔｅｒ  Ａ／Ｓ，Ａｌｌｅｒｏｅｄ，Ｄｅｎｍａｒｋ）を維持した。次いで、左外側大腿の皮膚を切開し、大腿二頭筋の頭側部および尾側部を分離して開創器で広げて固定し、坐骨神経およびその３本の終枝：腓腹神経、総腓骨神経および脛骨神経を露出させた。脛骨神経および総腓骨神経を４／０絹糸できつく結紮し、結紮部の遠位側２〜３ｍｍの神経を切除した。無処置の腓腹神経は牽引や接触を避けるようにした。その上の筋層を４／０合成吸収性縫合糸で層ごとに閉創し、皮膚を閉じて４／０絹糸で縫合した。４〜５日後、ラットの神経因性過敏の有無について定期的に試験した。この試験を行うためには、ラットをホームケージから取り出し、開放型換気式の１５×２０ｃｍの白色プレキシガラス製試験用ケージに入れ、このケージを金網が取り付けられた架台上に載せて、傷付けた後肢の足蹠面に触れることができる状態にし、そのケージの中で１５分間馴化させることを必要とした。機械的アロディニアの有無を、較正済みの一連のｖｏｎ  Ｆｒｅｙ  ｈａｉｒ（下限値＝０．０６、上限値＝１３．５ｇ、Ｓｔｏｅｌｔｉｎｇ  Ｃｏ、Ｗｏｏｄ  Ｄａｌｅ  ＩＬ）を使用して評価した。ｖｏｎ  Ｆｒｅｙ  ｈａｉｒを後肢の足蹠外側面に当て、使用した各フィラメントが丁度曲がり始めるまで押しつけた。フィラメントを１〜２秒間押し当てることを１〜２秒間隔で５回繰り返した。５回中３回、肢の引っ込め反射を誘発したフィラメントを、機械的アロディニア応答を惹起する閾値と見なした。術後１０〜３０日の間に特徴的な神経因性挙動を示した動物のみを（Ｓ）−Ｎ−（２−（４−クロロフェニル）−２−モルホリノエチル）−２−（ピリミジン−２−イル）−４−（トリフルオロメチル）チアゾール−５−カルボキサミドの効力の評価に用いた。
【００６１】
結果：神経因性疼痛のＳＮＩモデル
結果から、損傷後３〜４週目のＳＮＩラットの損傷した後肢にｖｏｎ  Ｆｒｅｙ刺激を与えたところ、損傷前のＰＷＴと比較して機械的過敏が顕著であることが分かった（３．３±０．３ｇ  ｖｓ  ８．４±０．５ｇ、Ｐ＜０．００１、スチューデントのｔ検定）。（Ｓ）−Ｎ−（２−（４−クロロフェニル）−２−モルホリノエチル）−２−（ピリミジン−２−イル）−４−（トリフルオロメチル）チアゾール−５−カルボキサミドを投与（３０および１００ｍｇ／ｋｇ）することにより機械的過敏が用量依存的に回復し（Ｆ（３，４７）＝１２．５２２、Ｐ＜０．００１）、この効力はガバペンチン１００ｍｇ／ｋｇを投与した場合に匹敵し（それぞれ１０８％回復  ｖｓ  １３２％回復）、ＰＷＴはほぼ完全にＳＮＩ前の水準に戻った。
【００６２】
神経因性疼痛の絞扼性神経損傷モデル（ＣＣＩ）疼痛モデル
絞扼性神経損傷モデル（ＣＣＩ）疼痛実験用動物
本研究には雄性Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙ系ラット（Ｈａｒｌａｎ）を使用した。入手後のラットを標準ケージに１ケージ当たり２〜３匹収容して群飼育した。外科的処置を行う前に１週間以内で馴化させた。健康状態および適合性が十分であることを確実にするために研究開始前の全てのラットに検査および体重測定を行った。この研究期間中、１２／１２明／暗サイクルを維持した。室温を２０℃〜２３℃の間に維持し、相対湿度を５０％前後に維持した。研究期間中、飼料および水は自由に摂取させた。全ての試験を動物の明期に行った。処置後のラットは個別飼育した。
【００６３】
神経因性疼痛の絞扼性神経損傷（ＣＣＩ）モデルを用いる方法
この外科的処置はＢｅｎｎｅｔｔ  ａｎｄ  Ｘｉｅ（１９８８）に準拠して実施した。具体的には、ラットをイソフルラン（酸素中２％）で麻酔した。左脇腹後方を剃毛および消毒し、ラットを滅菌された術野に側臥位で保定した。骨盤隆起部（ｐｅｌｖｉｃ  ｂｏｎｅ  ｒｉｄｇｅ）を触って確認し、脊椎の長軸に対し垂直方向に縦切開した。筋層の第１層を切開して坐骨神経を露出させた。開創器を用いて切開部を広げ、坐骨神経の結紮すべき部分が中央に来るようにした。露出した神経を筋層の第２層から慎重に剥離し、筋膜内層（ｆａｓｃｉａ  ｌｉｎｉｎｇ）を取り除いた。長さ５ｃｍの４．０クロムガット縫合糸（生理食塩水に前もって浸漬）を用いて坐骨神経の周囲を０．５ｃｍ間隔で４カ所ゆるく結紮した。縫合糸の位置は神経が分岐する手前とした。次いで４．０吸収性縫合糸を用いて切開部を層ごとに縫合し、皮膚を滅菌済みのオートクリップ（ａｕｔｏｃｌｉｐ）で閉じた。閉創部に抗生物質の軟膏を局所的に塗布した。各ラットが覚醒して回復室内で自由に動き回るまで監視した。動物は研究期間全体を通して個別飼育した。
【００６４】
機械的アロディニアの評価
後肢の足蹠面（同側および反対側）にｖｏｎ  Ｆｒｅｙフィラメントを屈曲力を増大させながら押しつけることによって、機械的刺激に対する肢の引っ込め反応を測定した。非侵害性機械的刺激に対する感受性（ｎｏｎ−ｎｏｘｉｏｕｓ  ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）に関するベースラインおよび治療後の逃避反応閾値（ｗｉｔｈｄｒａｗａｌ  ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ  ｖａｌｕｅ）を、剛性の異なる（０．４、０．７、１．２、２．０、３．６、５．５、８．５、１０、１５、２６ｇ）ｖｏｎ  Ｆｒｅｙフィラメントを用いて評価した（Ｓｅｍｍｅｓ−Ｗｅｉｎｓｔｅｉｎ  ｆｉｌａｍｅｎｔｓ、Ｓｔｏｅｌｔｉｎｇ，Ｗｏｏｄ  Ｄａｌｅ，ＩＬ，ＵＳＡ）。動物を穴の空いた金属製の台に載せ、各試験期間の前に最短で１５分間周囲環境に馴化させた。各フィラメントを足蹠に垂直に当て、僅かに座屈させるのに十分な力で肢に押しつけた後、陽性反応（肢を急激に引っ込める）が認められるまで保持した。閾値を確認するために、閾値の上および下のフィラメントで引っ込め反応を確認する試験を行った。フィラメントはそれぞれ３回ずつ押しつけた。
【００６５】
ベースラインの閾値を得るために、ラットにＣＣＩ処置を行う前にｖｏｎ  Ｆｒｅｙフィラメントを用いて試験した。逃避反応閾値（ＰＷＴ）が１２ｇ未満のラットは本研究に使用しなかった。ラットは、外科処置から約２週間後、処置後のＰＷＴに基づきバランスが取れるようにした。処置後ＰＷＴが５．５ｇを超えた動物は本研究から除外した。試験当日、ラットに溶媒、ガバペンチンまたは試験化合物を投与し、薬物投与後１２０分間のＰＷＴを評価した。
【００６６】
結果：神経因性疼痛の絞扼性神経損傷（ＣＣＩ）疼痛モデル
分散分析（ＡＮＯＶＡ）にてデータを解析した後、適切であればｐｏｓｔ−ｈｏｃ比較を行った。その効力はｐ＜０．０５の有意水準で有意差があると判断した。
【００６７】
この解析から、ガバペンチン（１００ｍｇ／ｋｇ）は溶媒処理と比較してＣＣＩ動物のＰＷＴを有意に上昇させることが示された。（Ｓ）−Ｎ−（２−（４−クロロフェニル）−２−モルホリノエチル）−２−（ピリミジン−２−イル）−４−（トリフルオロメチル）チアゾール−５−カルボキサミド（１００ｍｇ／ｋｇ）は溶媒処理したＣＣＩ動物と比較してＰＷＴを有意に上昇させた。
【国際調査報告】
2018532751.tif 000012
2018532751.tif 000013