(57)【要約】本発明は、線維症を処置または予防するための、式Iの化合物の使用法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象における線維症を処置または予防する際の、式I：
2018514568.tif 000043
の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物の使用：
式中、
X1-X2はCHR1-CH2、CH=CH、またはC(O)-CH2であり；
R1はHまたはOHであり；
Q1は
2018514568.tif 000044
であり；
2018514568.tif 000045
はCR3=N、CR4=CR4、またはC(O)-NHであり；
R3はC1〜C3アルコキシ、Fであるか、またはR3は、R2およびそれらが結合している炭素原子と共にフェニル環を形成し；
各R4は独立してC1〜C3アルコキシ、Fであるか、または2つのR4は、それらが結合している炭素原子と共に、NおよびOより選択される1つもしくは2つのヘテロ原子を含む5もしくは6員複素環を形成し；
R2は、Hであるか、またはR3およびそれらが結合している炭素原子と共にフェニル環を形成し；かつ
Q2は
2018514568.tif 000046
である。
【請求項２】
X1-X2がCHR1-CH2である、請求項1に記載の使用。
【請求項３】
R1がHである、請求項2に記載の使用。
【請求項４】
R1がOHである、請求項2に記載の使用。
【請求項５】
X1-X2がCH=CHである、請求項1に記載の使用。
【請求項６】
X1-X2がC(O)-CH2である、請求項1に記載の使用。
【請求項７】
2018514568.tif 000047
がCR3=Nである、請求項1に記載の使用。
【請求項８】
R3がメトキシ、エトキシ、またはプロポキシである、請求項7に記載の使用。
【請求項９】
R3が、R2およびそれらが結合している炭素原子と共にフェニル環を形成する、請求項7に記載の使用。
【請求項１０】
2018514568.tif 000048
がCR4=CR4である、請求項1に記載の使用。
【請求項１１】
R4の1つがメトキシ、エトキシ、またはプロポキシである、請求項10に記載の使用。
【請求項１２】
2つのR4が、それらが結合している炭素原子と共に、NおよびOより選択される1つまたは2つのヘテロ原子を含む5または6員複素環を形成する、請求項10に記載の使用。
【請求項１３】
2018514568.tif 000049
がC(O)-NHである、請求項1に記載の使用。
【請求項１４】
Q2が
2018514568.tif 000050
である、請求項1に記載の使用。
【請求項１５】
Q2が
2018514568.tif 000051
である、請求項1に記載の使用。
【請求項１６】
Q2が
2018514568.tif 000052
である、請求項1に記載の使用。
【請求項１７】
前記化合物が、
2018514568.tif 000053
より選択される、請求項1に記載の使用。
【請求項１８】
前記線維症が肝線維症、肺線維症、心臓線維症、または心臓線維症である、請求項1に記載の使用。
【請求項１９】
対象における線維症を処置または予防する際の、式I
2018514568.tif 000054
の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物の使用：
式中、
X1-X2はCHR1-CH2、CH=CH、またはC(O)-CH2であり；
R1はHまたはOHであり；
Q1は
2018514568.tif 000055
であり；
2018514568.tif 000056
はCR3=N、CR4=CR4、またはC(O)-NHであり；
R3はC1〜C3アルコキシ、Fであるか、またはR3は、R2およびそれらが結合している炭素原子と共にフェニル環を形成し；
各R4は独立してC1〜C3アルコキシ、Fであるか、または2つのR4は、それらが結合している炭素原子と共に、NおよびOより選択される1つもしくは2つのヘテロ原子を含む5もしくは6員複素環を形成し；
R2は、Hであるか、またはR3およびそれらが結合している炭素原子と共にフェニル環を形成し；かつ
Q2は
2018514568.tif 000057
である。
【請求項２０】
それを必要としている対象に、式I：
2018514568.tif 000058
の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物の治療的有効量を投与する段階を含む、線維症を処置または予防する方法：
式中、
X1-X2はCHR1-CH2、CH=CH、またはC(O)-CH2であり；
R1はHまたはOHであり；
Q1は
2018514568.tif 000059
であり；
2018514568.tif 000060
はCR3=N、CR4=CR4、またはC(O)-NHであり；
R3はC1〜C3アルコキシ、Fであるか、またはR3は、R2およびそれらが結合している炭素原子と共にフェニル環を形成し；
各R4は独立してC1〜C3アルコキシ、Fであるか、または2つのR4は、それらが結合している炭素原子と共に、NおよびOより選択される1つもしくは2つのヘテロ原子を含む5もしくは6員複素環を形成し；
R2は、Hであるか、またはR3およびそれらが結合している炭素原子と共にフェニル環を形成し；かつ
Q2は
2018514568.tif 000061
である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、2015年4月30日提出の米国特許仮出願第62/154,894号の恩典およびそれに対する優先権を主張し、その全内容はその全体が参照により本明細書に組み入れられる。
【背景技術】
【０００２】
背景
線維症は、関連する組織の細胞外マトリックスにおけるコラーゲンの過剰な蓄積が特徴である。これは、現在使用できる有効な処置がない、長年の難しい臨床上の問題である。コラーゲンの産生は高度に制御された生理的プロセスであり、その妨害は組織線維症の発生を引き起こし得る。線維組織の形成は傷害後の治癒の正常な有益プロセスの一部である。しかし、いくつかの場合に、線維性材料の異常な蓄積が患部組織の正常な機能を重度に妨害し得るか、または患部臓器の機能の完全な損失さえも引き起こし得る。インテグリンはヘテロ二量体膜貫通タンパク質であり、これを通じて細胞が細胞外マトリックスおよび他の細胞に付着して連絡する。αvインテグリンは、細胞移動および血管新生の媒介に関与する重要な受容体であり、かつ線維症を含むいくつかの疾患および状態に関与することが明らかにされている。
【０００３】
コラーゲン発現の抑制を含む、異なる作用機序による抗線維症薬として様々な化合物が同定されている。例えば、パンテチン（D-ビス-(N-パントテニル-β-アミノエチル)-ジスルフィド）は、肝線維症の阻害に有効であることが報告されている（米国特許第4,937,266号（特許文献1））。同様に、ヒドラジン誘導体であるベンゾイルヒドラジンは、強力な抗線維症薬であることが明らかにされている（米国特許第5,374,660号（特許文献2）および同第5,571,846号（特許文献3））。加えて、線維症の進行を阻害するために、アンジオテンシン阻害物質が一酸化窒素刺激剤との組み合わせで用いられる（米国特許第5,645,839号（特許文献4）および同第6,139,847号（特許文献5））。さらに、A1アデノシン受容体アンタゴニストおよび/またはP2xプリン受容体アンタゴニストが、線維症および硬化症を処置または予防するために記載されている（米国特許第6,117,445号（特許文献6））。最近、ソマトスタチンアゴニスト、肝細胞成長因子（HGF）、キマーゼ阻害物質、およびIL-13のアンタゴニストが、線維症を有効に阻害すると報告されている（米国特許第6,268,342号（特許文献7）、同第6,303,126号（特許文献8）、同第6,500,835号（特許文献9）、および同第6,664,227号（特許文献10））。
【０００４】
したがって、線維症を処置するための、安全で、有効で、かつ都合よく投与される化合物、組成物、および方法が引き続き必要とされている。本出願はこの必要性に取り組むものである。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】米国特許第4,937,266号
【特許文献２】米国特許第5,374,660号
【特許文献３】米国特許第5,571,846号
【特許文献４】米国特許第5,645,839号
【特許文献５】米国特許第6,139,847号
【特許文献６】米国特許第6,117,445号
【特許文献７】米国特許第6,268,342号
【特許文献８】米国特許第6,303,126号
【特許文献９】米国特許第6,500,835号
【特許文献１０】米国特許第6,664,227号
【発明の概要】
【０００６】
概要
本出願は、それを必要としている対象に、式I：
2018514568.tif 000002
の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物の治療的有効量を投与する段階を含む、線維症を処置または予防する方法を提供し、ここで式Iの化合物は本明細書において以下に詳細に定義する。1つの局面において、本出願は、線維症を処置することに関する。1つの局面において、本出願は、線維症を予防することに関する。
【０００７】
本出願は、対象における線維症の処置または予防のための医薬の製造における、式Iの化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物の使用も提供する。本出願は、対象における線維症を処置または予防する際の、式Iの化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物の使用も提供する。本出願は、対象における線維症を処置または予防する際に用いるための、式Iの化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物も提供する。
【０００８】
特に記載がないかぎり、本明細書において用いられるすべての技術および科学用語は、本出願が属する分野の当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。矛盾がある場合、定義を含む本明細書が支配することになる。本明細書において、単数形は、文脈が明らかにそうではないと示さないかぎり、複数も含む。本明細書に記載のものに類似または等価の方法および材料を本出願の実施または試験において使用しうるが、適切な方法および材料を以下に記載する。本明細書において言及するすべての出版物、特許出願、特許、および他の参照文献は、参照により本明細書に組み入れられる。本明細書において引用する参照文献は、本出願に対する先行技術であると自認するものではない。加えて、材料、方法、および実施例は例示にすぎず、限定を意図するものではない。
【０００９】
本出願の他の特徴および利点は、以下の詳細な説明および特許請求の範囲から明らかであろう。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
詳細な説明
本出願は、それを必要としている対象に式Iの化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物の治療的有効量を投与する段階を含む、線維症を処置または予防する方法に関する。
【００１１】
本出願は、対象における線維症の処置または予防のための医薬の製造における、式Iの化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物の使用にも関する。
【００１２】
本出願は、対象における線維症を処置または予防する際の、式Iの化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物の使用にも関する。
【００１３】
本出願は、対象における線維症を処置または予防する際に用いるための、式Iの化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物も提供する。
【００１４】
本出願の化合物は式I：
2018514568.tif 000003
の化合物であり、
式中、
X1-X2はCHR1-CH2、CH=CH、またはC(O)-CH2であり；
R1はHまたはOHであり；
Q1は
2018514568.tif 000004
であり；
2018514568.tif 000005
はCR3=N、CR4=CR4、またはC(O)-NHであり；
R3はC1〜C3アルコキシ、Fであるか、またはR3は、R2およびそれらが結合している炭素原子と共にフェニル環を形成し；
各R4は独立してC1〜C3アルコキシ、Fであるか、または2つのR4は、それらが結合している炭素原子と共に、NおよびOより選択される1つもしくは2つのヘテロ原子を含む5もしくは6員複素環を形成し；
R2は、Hであるか、またはR3およびそれらが結合している炭素原子と共にフェニル環を形成し；かつ
Q2は
2018514568.tif 000006
である。
【００１５】
1つの局面において、X1-X2はCHR1-CH2である。さらなる局面において、R1はHである。別のさらなる局面において、R1はOHである。さらなる局面において、R1は(R)-OHである。別のさらなる局面において、R1は(S)-OHである。
【００１６】
1つの局面において、X1-X2はCH=CHである。
【００１７】
1つの局面において、X1-X2はC(O)-CH2である。
【００１８】
1つの局面において、
2018514568.tif 000007
はCR3=Nである。さらなる局面において、R3はC1〜C3アルコキシ（例えば、メトキシ、エトキシ、またはプロポキシ）である。さらなる局面において、R3はメトキシである。別のさらなる局面において、R3はFである。
【００１９】
1つの局面において、
2018514568.tif 000008
はCR3=Nであり、かつR3は、R2およびそれらが結合している炭素原子と共にフェニル環を形成する。
【００２０】
1つの局面において、
2018514568.tif 000009
はCR4=CR4であり、かつ少なくとも1つのR4はC1〜C3アルコキシ（例えば、メトキシ、エトキシ、またはプロポキシ）である。さらなる局面において、少なくとも1つのR4はメトキシである。別の局面において、R4の1つはC1〜C3アルコキシ（例えば、メトキシ、エトキシ、またはプロポキシ）であり、他のR4はFである。さらなる局面において、R4の1つはエトキシであり、他のR4はFである。
【００２１】
1つの局面において、
2018514568.tif 000010
はCR4=CR4であり、かつ2つのR4は、それらが結合している炭素原子と共に、NおよびOより選択される1つまたは2つのヘテロ原子を含む5または6員複素環を形成する。さらなる局面において、2つのR4は、それらが結合している炭素原子と共に、ジヒドロフラニル、ジヒドロピラニル、テトラヒドロピラニル、ピロリジニル、またはピペリジニル環を形成する。さらなる局面において、2つのR4は、それらが結合している炭素原子と共にジヒドロフラニル環を形成する。
【００２２】
1つの局面において、
2018514568.tif 000011
はC(O)-NHである。
【００２３】
1つの局面において、R2はHである。
【００２４】
1つの局面において、R2は、R3およびそれらが結合している炭素原子と共にフェニル環を形成する。
【００２５】
1つの局面において、Q2は
2018514568.tif 000012
である。
【００２６】
1つの局面において、Q2は
2018514568.tif 000013
である。
【００２７】
1つの局面において、Q2は
2018514568.tif 000014
である。
【００２８】
X1、X2、Y、Y'、Q1、Q2、R1、R2、R3、およびR4のいずれかについて上記で例示した置換基のいずれかは、X1、X2、Y、Y'、Q1、Q2、R1、R2、R3、およびR4の残りについて上記で例示した置換基のいずれかと組み合わせることができる。
【００２９】
1つの局面において、X1-X2はCHR1-CH2であり；かつQ2は
2018514568.tif 000015
である。さらなる局面において、
2018514568.tif 000016
はCR3=Nである。さらなる局面において、R3はC1〜C3アルコキシ（例えば、メトキシ、エトキシ、またはプロポキシ）である。別のさらなる局面において、R3は、R2およびそれらが結合している炭素原子と共にフェニル環を形成する。
【００３０】
1つの局面において、本出願の化合物は式Iaの化合物である：
2018514568.tif 000017
。さらなる局面において、R3はC1〜C3アルコキシ（例えば、メトキシ、エトキシ、またはプロポキシ）であり、かつR2はHである。別のさらなる局面において、R3は、R2およびそれらが結合している炭素原子と共にフェニル環を形成する。さらなる局面において、R1はHである。別のさらなる局面において、R1はOHである。
【００３１】
1つの局面において、X1-X2はCHR1-CH2であり；かつQ2は
2018514568.tif 000018
である。さらなる局面において、
2018514568.tif 000019
はCR3=Nである。さらなる局面において、R3はC1〜C3アルコキシ（例えば、メトキシ、エトキシ、またはプロポキシ）である。
【００３２】
1つの局面において、本出願の化合物は式Ib：
2018514568.tif 000020
の化合物である。さらなる局面において、R3はC1〜C3アルコキシ（例えば、メトキシ、エトキシ、またはプロポキシ）である。さらなる局面において、R1はHである。別のさらなる局面において、R1はOHである。
【００３３】
1つの局面において、X1-X2はCHR1-CH2であり；かつQ2は
2018514568.tif 000021
である。さらなる局面において、
2018514568.tif 000022
はCR3=Nである。さらなる局面において、R3はC1〜C3アルコキシ（例えば、メトキシ、エトキシ、またはプロポキシ）である。
【００３４】
1つの局面において、本出願の化合物は式Ic：
2018514568.tif 000023
の化合物である。さらなる局面において、R3はC1〜C3アルコキシ（例えば、メトキシ、エトキシ、またはプロポキシ）である。さらなる局面において、R1はHである。別のさらなる局面において、R1はOHである。
【００３５】
1つの局面において、X1-X2はCH=CHであり；かつQ2は
2018514568.tif 000024
である。さらなる局面において、
2018514568.tif 000025
はCR3=Nである。さらなる局面において、R3はC1〜C3アルコキシ（例えば、メトキシ、エトキシ、またはプロポキシ）である。
【００３６】
1つの局面において、本出願の化合物は式Id1またはId2：
2018514568.tif 000026
の化合物である。さらなる局面において、R3はC1〜C3アルコキシ（例えば、メトキシ、エトキシ、またはプロポキシ）である。
【００３７】
1つの局面において、X1-X2はC(O)-CH2であり；かつQ2は
2018514568.tif 000027
である。さらなる局面において、
2018514568.tif 000028
はCR3=Nである。さらなる局面において、R3はC1〜C3アルコキシ（例えば、メトキシ、エトキシ、またはプロポキシ）である。
【００３８】
1つの局面において、本出願の化合物は式Ie：
2018514568.tif 000029
の化合物である。さらなる局面において、R3はC1〜C3アルコキシ（例えば、メトキシ、エトキシ、またはプロポキシ）である。
【００３９】
1つの局面において、X1-X2はCHR1-CH2であり；かつQ2は
2018514568.tif 000030
である。さらなる局面において、
2018514568.tif 000031
はCR4=CR4である。さらなる局面において、R4の1つはC1〜C3アルコキシ（例えば、メトキシ、エトキシ、またはプロポキシ）であり、他のR4はFである。さらなる局面において、2つのR4は、それらが結合している炭素原子と共に、NおよびOより選択される1つまたは2つのヘテロ原子を含む5または6員複素環を形成する。
【００４０】
1つの局面において、本出願の化合物は式If：
2018514568.tif 000032
の化合物である。さらなる局面において、R4の1つはC1〜C3アルコキシ（例えば、メトキシ、エトキシ、またはプロポキシ）であり、他のR4はFである。さらなる局面において、2つのR4は、それらが結合している炭素原子と共に、NおよびOより選択される1つまたは2つのヘテロ原子を含む5または6員複素環を形成する。さらなる局面において、R1はHである。別のさらなる局面において、R1はOHである。
【００４１】
1つの局面において、X1-X2はCHR1-CH2であり；かつQ2は
2018514568.tif 000033
である。さらなる局面において、
2018514568.tif 000034
はC(O)-NHである。
【００４２】
1つの局面において、本出願の化合物は式Ig：
2018514568.tif 000035
の化合物である。さらなる局面において、R1はHである。別のさらなる局面において、R1はOHである。
【００４３】
線維症を処置または予防する際に用いるための、本出願の代表的化合物には、以下の表1に列挙する化合物が含まれる。
【００４４】
（表１）
2018514568.tif 000036
2018514568.tif 000037
【００４５】
1つの局面において、本出願の化合物は、1つまたは複数のαvインテグリン（例えば、αvβ3、αvβ5、αvβ6、およびαvβ8）の活性を阻害する。さらなる局面において、本出願の化合物はαvβ3の活性を阻害する。別のさらなる局面において、本出願の化合物はαvβ5の活性を阻害する。別のさらなる局面において、本出願の化合物はαvβ6の活性を阻害する。別のさらなる局面において、本出願の化合物はαvβ8の活性を阻害する。さらに別のさらなる局面において、本出願の化合物はαvβ3およびαvβ5の活性を阻害する。さらに別のさらなる局面において、本出願の化合物はαvβ6およびαvβ8の活性を阻害する。さらなる局面において、本出願の化合物は、マイクロモル濃度よりも低い濃度、例えば、1μM、0.8μM、0.6μM、0.5μM、0.2μM、または0.1μM未満でαvβ3、αvβ5、αvβ6、および/またはαvβ8の活性を阻害する。
【００４６】
1つの局面において、本出願の化合物は、ヒト皮膚微小血管内皮細胞（HMVEC）アッセイ法を用いて、2.0E-07MのIC50またはIC50未満でαvインテグリン（例えば、αvβ3およびαvβ5）を介したビトロネクチンへの細胞接着を阻害する。1つの局面において、本出願の化合物は、ラット肺微小血管内皮細胞（RLMVEC）アッセイ法を用いて、2.5E-07MのIC50またはIC50未満でαvインテグリン（例えば、αvβ3およびαvβ5）を介したビトロネクチンへの細胞接着を阻害する。1つの局面において、本出願の化合物は、ウサギ大動脈内皮細胞（RAEC）アッセイ法を用いて、2.0E-08MのIC50またはIC50未満でαvインテグリン（例えば、αvβ3およびαvβ5）を介したビトロネクチンへの細胞接着を阻害する。
【００４７】
1つの局面において、本出願の化合物はマイクロモル濃度で（例えば、フィブロネクチン結合アッセイ法を用いて、1.0E-05MのIC50またはIC50未満で）αvインテグリン（例えば、αvβ6およびαvβ8）を介したフィブロネクチンへの細胞接着を阻害する。
【００４８】
1つの局面において、本出願の化合物はマイクロモル濃度で（例えば、LAP1結合アッセイ法を用いて、1.0E-05MのIC50またはIC50未満で）αvインテグリン（例えば、αvβ6およびαvβ8）を介したLAP-TGFβ1（LAP1）への細胞接着を阻害する。さらなる局面において、本出願の化合物はマイクロモル濃度よりも低い濃度で（例えば、LAP1結合アッセイ法を用いて、1.0E-06MのIC50またはIC50未満で）αvインテグリン（例えば、αvβ6およびαvβ8）を介したLAP1への細胞接着を阻害する。1つの局面において、本出願の化合物はナノモル濃度で（例えば、LAP1結合アッセイ法を用いて、2.0E-08MのIC50またはIC50未満で）αvインテグリン（例えば、αvβ6およびαvβ8）を介したLAP1への細胞接着を阻害する。さらなる局面において、本出願の化合物はナノモル濃度よりも低い濃度で（例えば、LAP1結合アッセイ法を用いて、1.0E-08MのIC50またはIC50未満で）αvインテグリン（例えば、αvβ6およびαvβ8）を介したLAP1への細胞接着を阻害する。
【００４９】
1つの局面において、本出願の化合物は、1つのαvインテグリン（例えば、αvβ3、αvβ5、αvβ6、またはαvβ8）に対して、他のαvインテグリン（例えば、αvβ3、αvβ5、αvβ6、またはαvβ8）よりも選択的である。本明細書において用いられる「選択的」は、化合物、例えば、本出願の化合物が1つのαvインテグリンを、他のαvインテグリンよりも強く阻害することを意味する。
【００５０】
「選択的αvインテグリン阻害物質」は、例えば、1つの化合物が1つのαvインテグリン活性を阻害する能力を、それが他のαvインテグリンを阻害する能力と比較することにより同定することができる。例えば、1つの化合物は、それがαvβ6活性、ならびにαvβ3、αvβ5、およびαvβ8、または他のαvインテグリンを阻害する能力について評価されてもよい。
【００５１】
ある特定の態様において、本出願の化合物は、1つのαvインテグリンに対して、他のαvインテグリンよりも（例えば、IC50で測定した場合）少なくとも1.2倍、1.5倍、2倍、3倍、5倍、10倍、25倍、50倍、または100倍の選択性を示す。様々な態様において、本出願の化合物は、1つのαvインテグリンに対して、他のαvインテグリンよりも1.2倍〜1.5倍、1.2倍〜2倍、1.2倍〜5倍、1.2倍〜10倍、1.2倍〜25倍、1.2倍〜50倍、1.2倍〜100倍、1.2倍〜500倍、1.2倍〜1000倍、1.5倍〜2倍、1.5倍〜5倍、1.5倍〜10倍、1.5倍〜25倍、1.5倍〜50倍、1.5倍〜100倍、1.5倍〜500倍、1.5倍〜1000倍、2倍〜5倍、2倍〜10倍、2倍〜25倍、2倍〜50倍、2倍〜100倍、2倍〜500倍、2倍〜1000倍、5倍〜10倍、5倍〜25倍、5倍〜50倍、5倍〜100倍、5倍〜500倍、5倍〜1000倍、10倍〜25倍、10倍〜50倍、10倍〜100倍、10倍〜500倍、または10倍〜1000倍の選択性を示す。様々な態様において、本出願の化合物は、1つのαvインテグリンに対して、他のαvインテグリンよりも1.2倍〜1.5倍、1.2倍〜2倍、1.5倍〜2倍、2倍〜5倍、5倍〜10倍、10倍〜25倍、25倍〜50倍、50倍〜100倍、または100倍〜1000倍の選択性を示す。様々な態様において、本出願の化合物は、1つのαvインテグリンに対して、他のαvインテグリンよりも1.2倍〜1.5倍、1.2倍〜2倍、1.5倍〜2倍、2倍〜5倍、5倍〜10倍、または10倍〜25倍の選択性を示す。
【００５２】
1つの態様において、本出願の化合物は、αvβ3インテグリンに対して、αvβ5、αvβ6、および/またはαvβ8インテグリンよりも（例えば、IC50で測定した場合）少なくとも1.2倍、1.5倍、2倍、3倍、5倍、10倍、25倍、50倍、または100倍の選択性を示す。様々な態様において、本出願の化合物は、αvβ3インテグリンに対して、αvβ5、αvβ6、および/またはαvβ8インテグリンよりも1.2倍〜1.5倍、1.2倍〜2倍、1.2倍〜5倍、1.2倍〜10倍、1.2倍〜25倍、1.2倍〜50倍、1.2倍〜100倍、1.2倍〜500倍、1.2倍〜1000倍、1.5倍〜2倍、1.5倍〜5倍、1.5倍〜10倍、1.5倍〜25倍、1.5倍〜50倍、1.5倍〜100倍、1.5倍〜500倍、1.5倍〜1000倍、2倍〜5倍、2倍〜10倍、2倍〜25倍、2倍〜50倍、2倍〜100倍、2倍〜500倍、2倍〜1000倍、5倍〜10倍、5倍〜25倍、5倍〜50倍、5倍〜100倍、5倍〜500倍、5倍〜1000倍、10倍〜25倍、10倍〜50倍、10倍〜100倍、10倍〜500倍、または10倍〜1000倍の選択性を示す。様々な態様において、本出願の化合物は、αvβ3インテグリンに対して、αvβ5、αvβ6、および/またはαvβ8インテグリンよりも1.2倍〜1.5倍、1.2倍〜2倍、1.5倍〜2倍、2倍〜5倍、5倍〜10倍、10倍〜25倍、25倍〜50倍、50倍〜100倍、または100倍〜1000倍の選択性を示す。様々な態様において、本出願の化合物は、αvβ3インテグリンに対して、αvβ5、αvβ6、および/またはαvβ8インテグリンよりも1.2倍〜1.5倍、1.2倍〜2倍、1.5倍〜2倍、2倍〜5倍、5倍〜10倍、または10倍〜25倍の選択性を示す。
【００５３】
別の態様において、本出願の化合物は、αvβ5インテグリンに対して、αvβ3、αvβ6、および/またはαvβ8インテグリンよりも（例えば、IC50で測定した場合）少なくとも1.2倍、1.5倍、2倍、3倍、5倍、10倍、25倍、50倍、または100倍の選択性を示す。様々な態様において、本出願の化合物は、αvβ5インテグリンに対して、αvβ3、αvβ6、および/またはαvβ8インテグリンよりも1.2倍〜1.5倍、1.2倍〜2倍、1.2倍〜5倍、1.2倍〜10倍、1.2倍〜25倍、1.2倍〜50倍、1.2倍〜100倍、1.2倍〜500倍、1.2倍〜1000倍、1.5倍〜2倍、1.5倍〜5倍、1.5倍〜10倍、1.5倍〜25倍、1.5倍〜50倍、1.5倍〜100倍、1.5倍〜500倍、1.5倍〜1000倍、2倍〜5倍、2倍〜10倍、2倍〜25倍、2倍〜50倍、2倍〜100倍、2倍〜500倍、2倍〜1000倍、5倍〜10倍、5倍〜25倍、5倍〜50倍、5倍〜100倍、5倍〜500倍、5倍〜1000倍、10倍〜25倍、10倍〜50倍、10倍〜100倍、10倍〜500倍、または10倍〜1000倍の選択性を示す。様々な態様において、本出願の化合物は、αvβ5インテグリンに対して、αvβ3、αvβ6、および/またはαvβ8インテグリンよりも1.2倍〜1.5倍、1.2倍〜2倍、1.5倍〜2倍、2倍〜5倍、5倍〜10倍、10倍〜25倍、25倍〜50倍、50倍〜100倍、または100倍〜1000倍の選択性を示す。様々な態様において、本出願の化合物は、αvβ5インテグリンに対して、αvβ3、αvβ6、および/またはαvβ8インテグリンよりも1.2倍〜1.5倍、1.2倍〜2倍、1.5倍〜2倍、2倍〜5倍、5倍〜10倍、または10倍〜25倍の選択性を示す。
【００５４】
別の態様において、本出願の化合物は、αvβ6インテグリンに対して、αvβ3、αvβ5、および/またはαvβ8インテグリンよりも（例えば、IC50で測定した場合）少なくとも1.2倍、1.5倍、2倍、3倍、5倍、10倍、25倍、50倍、または100倍の選択性を示す。様々な態様において、本出願の化合物は、αvβ6インテグリンに対して、αvβ3、αvβ5、および/またはαvβ8インテグリンよりも1.2倍〜1.5倍、1.2倍〜2倍、1.2倍〜5倍、1.2倍〜10倍、1.2倍〜25倍、1.2倍〜50倍、1.2倍〜100倍、1.2倍〜500倍、1.2倍〜1000倍、1.5倍〜2倍、1.5倍〜5倍、1.5倍〜10倍、1.5倍〜25倍、1.5倍〜50倍、1.5倍〜100倍、1.5倍〜500倍、1.5倍〜1000倍、2倍〜5倍、2倍〜10倍、2倍〜25倍、2倍〜50倍、2倍〜100倍、2倍〜500倍、2倍〜1000倍、5倍〜10倍、5倍〜25倍、5倍〜50倍、5倍〜100倍、5倍〜500倍、5倍〜1000倍、10倍〜25倍、10倍〜50倍、10倍〜100倍、10倍〜500倍、または10倍〜1000倍の選択性を示す。様々な態様において、本出願の化合物は、αvβ6インテグリンに対して、αvβ3、αvβ5、および/またはαvβ8インテグリンよりも1.2倍〜1.5倍、1.2倍〜2倍、1.5倍〜2倍、2倍〜5倍、5倍〜10倍、10倍〜25倍、25倍〜50倍、50倍〜100倍、または100倍〜1000倍の選択性を示す。様々な態様において、本出願の化合物は、αvβ6インテグリンに対して、αvβ3、αvβ5、および/またはαvβ8インテグリンよりも1.2倍〜1.5倍、1.2倍〜2倍、1.5倍〜2倍、2倍〜5倍、5倍〜10倍、または10倍〜25倍の選択性を示す。
【００５５】
別の態様において、本出願の化合物は、αvβ6インテグリンに対して、αvβ8インテグリンよりも（例えば、IC50で測定した場合）少なくとも1.2倍、1.5倍、2倍、3倍、5倍、10倍、25倍、50倍、または100倍の選択性を示す。様々な態様において、本出願の化合物は、αvβ6インテグリンに対して、αvβ8インテグリンよりも1.2倍〜1.5倍、1.2倍〜2倍、1.2倍〜5倍、1.2倍〜10倍、1.2倍〜25倍、1.2倍〜50倍、1.2倍〜100倍、1.2倍〜500倍、1.2倍〜1000倍、1.5倍〜2倍、1.5倍〜5倍、1.5倍〜10倍、1.5倍〜25倍、1.5倍〜50倍、1.5倍〜100倍、1.5倍〜500倍、1.5倍〜1000倍、2倍〜5倍、2倍〜10倍、2倍〜25倍、2倍〜50倍、2倍〜100倍、2倍〜500倍、2倍〜1000倍、5倍〜10倍、5倍〜25倍、5倍〜50倍、5倍〜100倍、5倍〜500倍、5倍〜1000倍、10倍〜25倍、10倍〜50倍、10倍〜100倍、10倍〜500倍、または10倍〜1000倍の選択性を示す。様々な態様において、本出願の化合物は、αvβ6インテグリンに対して、αvβ8インテグリンよりも1.2倍〜1.5倍、1.2倍〜2倍、1.5倍〜2倍、2倍〜5倍、5倍〜10倍、10倍〜25倍、25倍〜50倍、50倍〜100倍、または100倍〜1000倍の選択性を示す。様々な態様において、本出願の化合物は、αvβ6インテグリンに対して、αvβ8インテグリンよりも1.2倍〜1.5倍、1.2倍〜2倍、1.5倍〜2倍、2倍〜5倍、5倍〜10倍、または10倍〜25倍の選択性を示す。
【００５６】
別の態様において、本出願の化合物は、αvβ8インテグリンに対して、αvβ3、αvβ5、および/またはαvβ6インテグリンよりも（例えば、IC50で測定した場合）少なくとも1.2倍、1.5倍、2倍、3倍、5倍、10倍、25倍、50倍、または100倍の選択性を示す。様々な態様において、本出願の化合物は、αvβ8インテグリンに対して、αvβ3、αvβ5、および/またはαvβ6インテグリンよりも1.2倍〜1.5倍、1.2倍〜2倍、1.2倍〜5倍、1.2倍〜10倍、1.2倍〜25倍、1.2倍〜50倍、1.2倍〜100倍、1.2倍〜500倍、1.2倍〜1000倍、1.5倍〜2倍、1.5倍〜5倍、1.5倍〜10倍、1.5倍〜25倍、1.5倍〜50倍、1.5倍〜100倍、1.5倍〜500倍、1.5倍〜1000倍、2倍〜5倍、2倍〜10倍、2倍〜25倍、2倍〜50倍、2倍〜100倍、2倍〜500倍、2倍〜1000倍、5倍〜10倍、5倍〜25倍、5倍〜50倍、5倍〜100倍、5倍〜500倍、5倍〜1000倍、10倍〜25倍、10倍〜50倍、10倍〜100倍、10倍〜500倍、または10倍〜1000倍の選択性を示す。様々な態様において、本出願の化合物は、αvβ8インテグリンに対して、αvβ3、αvβ5、および/またはαvβ6インテグリンよりも1.2倍〜1.5倍、1.2倍〜2倍、1.5倍〜2倍、2倍〜5倍、5倍〜10倍、10倍〜25倍、25倍〜50倍、50倍〜100倍、または100倍〜1000倍の選択性を示す。様々な態様において、本出願の化合物は、αvβ8インテグリンに対して、αvβ3、αvβ5、および/またはαvβ6インテグリンよりも1.2倍〜1.5倍、1.2倍〜2倍、1.5倍〜2倍、2倍〜5倍、5倍〜10倍、または10倍〜25倍の選択性を示す。
【００５７】
別の態様において、本出願の化合物は、αvβ8インテグリンに対して、αvβ6インテグリンよりも（例えば、IC50で測定した場合）少なくとも1.2倍、1.5倍、2倍、3倍、5倍、10倍、25倍、50倍、または100倍の選択性を示す。様々な態様において、本出願の化合物は、αvβ8インテグリンに対して、αvβ6インテグリンよりも1.2倍〜1.5倍、1.2倍〜2倍、1.2倍〜5倍、1.2倍〜10倍、1.2倍〜25倍、1.2倍〜50倍、1.2倍〜100倍、1.2倍〜500倍、1.2倍〜1000倍、1.5倍〜2倍、1.5倍〜5倍、1.5倍〜10倍、1.5倍〜25倍、1.5倍〜50倍、1.5倍〜100倍、1.5倍〜500倍、1.5倍〜1000倍、2倍〜5倍、2倍〜10倍、2倍〜25倍、2倍〜50倍、2倍〜100倍、2倍〜500倍、2倍〜1000倍、5倍〜10倍、5倍〜25倍、5倍〜50倍、5倍〜100倍、5倍〜500倍、5倍〜1000倍、10倍〜25倍、10倍〜50倍、10倍〜100倍、10倍〜500倍、または10倍〜1000倍の選択性を示す。様々な態様において、本出願の化合物は、αvβ8インテグリンに対して、αvβ6インテグリンよりも1.2倍〜1.5倍、1.2倍〜2倍、1.5倍〜2倍、2倍〜5倍、5倍〜10倍、10倍〜25倍、25倍〜50倍、50倍〜100倍、または100倍〜1000倍の選択性を示す。様々な態様において、本出願の化合物は、αvβ8インテグリンに対して、αvβ6インテグリンよりも1.2倍〜1.5倍、1.2倍〜2倍、1.5倍〜2倍、2倍〜5倍、5倍〜10倍、または10倍〜25倍の選択性を示す。
【００５８】
別の態様において、本出願の化合物は、αvβ6およびαvβ8インテグリンのそれぞれに対して、αvβ3および/またはαvβ5インテグリンよりも（例えば、IC50で測定した場合）少なくとも1.2倍、1.5倍、2倍、3倍、5倍、10倍、25倍、50倍、または100倍の選択性を示す。様々な態様において、本出願の化合物は、αvβ6およびαvβ8インテグリンのそれぞれに対して、αvβ3および/またはαvβ5インテグリンよりも1.2倍〜1.5倍、1.2倍〜2倍、1.2倍〜5倍、1.2倍〜10倍、1.2倍〜25倍、1.2倍〜50倍、1.2倍〜100倍、1.2倍〜500倍、1.2倍〜1000倍、1.5倍〜2倍、1.5倍〜5倍、1.5倍〜10倍、1.5倍〜25倍、1.5倍〜50倍、1.5倍〜100倍、1.5倍〜500倍、1.5倍〜1000倍、2倍〜5倍、2倍〜10倍、2倍〜25倍、2倍〜50倍、2倍〜100倍、2倍〜500倍、2倍〜1000倍、5倍〜10倍、5倍〜25倍、5倍〜50倍、5倍〜100倍、5倍〜500倍、5倍〜1000倍、10倍〜25倍、10倍〜50倍、10倍〜100倍、10倍〜500倍、または10倍〜1000倍の選択性を示す。様々な態様において、本出願の化合物は、αvβ6およびαvβ8インテグリンのそれぞれに対して、αvβ3および/またはαvβ5インテグリンよりも1.2倍〜1.5倍、1.2倍〜2倍、1.5倍〜2倍、2倍〜5倍、5倍〜10倍、10倍〜25倍、25倍〜50倍、50倍〜100倍、または100倍〜1000倍の選択性を示す。様々な態様において、本出願の化合物は、αvβ6およびαvβ8インテグリンのそれぞれに対して、αvβ3および/またはαvβ5インテグリンよりも1.2倍〜1.5倍、1.2倍〜2倍、1.5倍〜2倍、2倍〜5倍、5倍〜10倍、または10倍〜25倍の選択性を示す。
【００５９】
別の態様において、本出願の化合物は、αvβ3およびαvβ5インテグリンのそれぞれに対して、αvβ6および/またはαvβ8インテグリンよりも（例えば、IC50で測定した場合）少なくとも1.2倍、1.5倍、2倍、3倍、5倍、10倍、25倍、50倍、または100倍の選択性を示す。様々な態様において、本出願の化合物は、αvβ3およびαvβ5インテグリンのそれぞれに対して、αvβ6および/またはαvβ8インテグリンよりも1.2倍〜1.5倍、1.2倍〜2倍、1.2倍〜5倍、1.2倍〜10倍、1.2倍〜25倍、1.2倍〜50倍、1.2倍〜100倍、1.2倍〜500倍、1.2倍〜1000倍、1.5倍〜2倍、1.5倍〜5倍、1.5倍〜10倍、1.5倍〜25倍、1.5倍〜50倍、1.5倍〜100倍、1.5倍〜500倍、1.5倍〜1000倍、2倍〜5倍、2倍〜10倍、2倍〜25倍、2倍〜50倍、2倍〜100倍、2倍〜500倍、2倍〜1000倍、5倍〜10倍、5倍〜25倍、5倍〜50倍、5倍〜100倍、5倍〜500倍、5倍〜1000倍、10倍〜25倍、10倍〜50倍、10倍〜100倍、10倍〜500倍、または10倍〜1000倍の選択性を示す。様々な態様において、本出願の化合物は、αvβ3およびαvβ5インテグリンのそれぞれに対して、αvβ6および/またはαvβ8インテグリンよりも1.2倍〜1.5倍、1.2倍〜2倍、1.5倍〜2倍、2倍〜5倍、5倍〜10倍、10倍〜25倍、25倍〜50倍、50倍〜100倍、または100倍〜1000倍の選択性を示す。様々な態様において、本出願の化合物は、αvβ3およびαvβ5インテグリンのそれぞれに対して、αvβ6および/またはαvβ8インテグリンよりも1.2倍〜1.5倍、1.2倍〜2倍、1.5倍〜2倍、2倍〜5倍、5倍〜10倍、または10倍〜25倍の選択性を示す。
【００６０】
別の態様において、本出願の化合物は、αvβ5およびαvβ6インテグリンのそれぞれに対して、αvβ3および/またはαvβ8インテグリンよりも（例えば、IC50で測定した場合）少なくとも1.2倍、1.5倍、2倍、3倍、5倍、10倍、25倍、50倍、または100倍の選択性を示す。様々な態様において、本出願の化合物は、αvβ5およびαvβ6インテグリンのそれぞれに対して、αvβ3および/またはαvβ8インテグリンよりも1.2倍〜1.5倍、1.2倍〜2倍、1.2倍〜5倍、1.2倍〜10倍、1.2倍〜25倍、1.2倍〜50倍、1.2倍〜100倍、1.2倍〜500倍、1.2倍〜1000倍、1.5倍〜2倍、1.5倍〜5倍、1.5倍〜10倍、1.5倍〜25倍、1.5倍〜50倍、1.5倍〜100倍、1.5倍〜500倍、1.5倍〜1000倍、2倍〜5倍、2倍〜10倍、2倍〜25倍、2倍〜50倍、2倍〜100倍、2倍〜500倍、2倍〜1000倍、5倍〜10倍、5倍〜25倍、5倍〜50倍、5倍〜100倍、5倍〜500倍、5倍〜1000倍、10倍〜25倍、10倍〜50倍、10倍〜100倍、10倍〜500倍、または10倍〜1000倍の選択性を示す。様々な態様において、本出願の化合物は、αvβ5およびαvβ6インテグリンのそれぞれに対して、αvβ3および/またはαvβ8インテグリンよりも1.2倍〜1.5倍、1.2倍〜2倍、1.5倍〜2倍、2倍〜5倍、5倍〜10倍、10倍〜25倍、25倍〜50倍、50倍〜100倍、または100倍〜1000倍の選択性を示す。様々な態様において、本出願の化合物は、αvβ5およびαvβ6インテグリンのそれぞれに対して、αvβ3および/またはαvβ8インテグリンよりも1.2倍〜1.5倍、1.2倍〜2倍、1.5倍〜2倍、2倍〜5倍、5倍〜10倍、または10倍〜25倍の選択性を示す。
【００６１】
別の態様において、本出願の化合物は、αvβ3およびαvβ6インテグリンのそれぞれに対して、αvβ5および/またはαvβ8インテグリンよりも（例えば、IC50で測定した場合）少なくとも1.2倍、1.5倍、2倍、3倍、5倍、10倍、25倍、50倍、または100倍の選択性を示す。様々な態様において、本出願の化合物は、αvβ3およびαvβ6インテグリンのそれぞれに対して、αvβ5および/またはαvβ8インテグリンよりも1.2倍〜1.5倍、1.2倍〜2倍、1.2倍〜5倍、1.2倍〜10倍、1.2倍〜25倍、1.2倍〜50倍、1.2倍〜100倍、1.2倍〜500倍、1.2倍〜1000倍、1.5倍〜2倍、1.5倍〜5倍、1.5倍〜10倍、1.5倍〜25倍、1.5倍〜50倍、1.5倍〜100倍、1.5倍〜500倍、1.5倍〜1000倍、2倍〜5倍、2倍〜10倍、2倍〜25倍、2倍〜50倍、2倍〜100倍、2倍〜500倍、2倍〜1000倍、5倍〜10倍、5倍〜25倍、5倍〜50倍、5倍〜100倍、5倍〜500倍、5倍〜1000倍、10倍〜25倍、10倍〜50倍、10倍〜100倍、10倍〜500倍、または10倍〜1000倍の選択性を示す。様々な態様において、本出願の化合物は、αvβ3およびαvβ6インテグリンのそれぞれに対して、αvβ5および/またはαvβ8インテグリンよりも1.2倍〜1.5倍、1.2倍〜2倍、1.5倍〜2倍、2倍〜5倍、5倍〜10倍、10倍〜25倍、25倍〜50倍、50倍〜100倍、または100倍〜1000倍の選択性を示す。様々な態様において、本出願の化合物は、αvβ3およびαvβ6インテグリンのそれぞれに対して、αvβ5および/またはαvβ8インテグリンよりも1.2倍〜1.5倍、1.2倍〜2倍、1.5倍〜2倍、2倍〜5倍、5倍〜10倍、または10倍〜25倍の選択性を示す。
【００６２】
別の態様において、本出願の化合物は、αvβ3およびαvβ8インテグリンのそれぞれに対して、αvβ5および/またはαvβ6インテグリンよりも（例えば、IC50で測定した場合）少なくとも1.2倍、1.5倍、2倍、3倍、5倍、10倍、25倍、50倍、または100倍の選択性を示す。様々な態様において、本出願の化合物は、αvβ3およびαvβ8インテグリンのそれぞれに対して、αvβ5および/またはαvβ6インテグリンよりも1.2倍〜1.5倍、1.2倍〜2倍、1.2倍〜5倍、1.2倍〜10倍、1.2倍〜25倍、1.2倍〜50倍、1.2倍〜100倍、1.2倍〜500倍、1.2倍〜1000倍、1.5倍〜2倍、1.5倍〜5倍、1.5倍〜10倍、1.5倍〜25倍、1.5倍〜50倍、1.5倍〜100倍、1.5倍〜500倍、1.5倍〜1000倍、2倍〜5倍、2倍〜10倍、2倍〜25倍、2倍〜50倍、2倍〜100倍、2倍〜500倍、2倍〜1000倍、5倍〜10倍、5倍〜25倍、5倍〜50倍、5倍〜100倍、5倍〜500倍、5倍〜1000倍、10倍〜25倍、10倍〜50倍、10倍〜100倍、10倍〜500倍、または10倍〜1000倍の選択性を示す。様々な態様において、本出願の化合物は、αvβ3およびαvβ8インテグリンのそれぞれに対して、αvβ5および/またはαvβ6インテグリンよりも1.2倍〜1.5倍、1.2倍〜2倍、1.5倍〜2倍、2倍〜5倍、5倍〜10倍、10倍〜25倍、25倍〜50倍、50倍〜100倍、または100倍〜1000倍の選択性を示す。様々な態様において、本出願の化合物は、αvβ3およびαvβ8インテグリンのそれぞれに対して、αvβ5および/またはαvβ6インテグリンよりも1.2倍〜1.5倍、1.2倍〜2倍、1.5倍〜2倍、2倍〜5倍、5倍〜10倍、または10倍〜25倍の選択性を示す。
【００６３】
別の態様において、本出願の化合物は、αvβ5およびαvβ8インテグリンのそれぞれに対して、αvβ3および/またはαvβ6インテグリンよりも（例えば、IC50で測定した場合）少なくとも1.2倍、1.5倍、2倍、3倍、5倍、10倍、25倍、50倍、または100倍の選択性を示す。様々な態様において、本出願の化合物は、αvβ5およびαvβ8インテグリンのそれぞれに対して、αvβ3および/またはαvβ6インテグリンよりも1.2倍〜1.5倍、1.2倍〜2倍、1.2倍〜5倍、1.2倍〜10倍、1.2倍〜25倍、1.2倍〜50倍、1.2倍〜100倍、1.2倍〜500倍、1.2倍〜1000倍、1.5倍〜2倍、1.5倍〜5倍、1.5倍〜10倍、1.5倍〜25倍、1.5倍〜50倍、1.5倍〜100倍、1.5倍〜500倍、1.5倍〜1000倍、2倍〜5倍、2倍〜10倍、2倍〜25倍、2倍〜50倍、2倍〜100倍、2倍〜500倍、2倍〜1000倍、5倍〜10倍、5倍〜25倍、5倍〜50倍、5倍〜100倍、5倍〜500倍、5倍〜1000倍、10倍〜25倍、10倍〜50倍、10倍〜100倍、10倍〜500倍、または10倍〜1000倍の選択性を示す。様々な態様において、本出願の化合物は、αvβ5およびαvβ8インテグリンのそれぞれに対して、αvβ3および/またはαvβ6インテグリンよりも1.2倍〜1.5倍、1.2倍〜2倍、1.5倍〜2倍、2倍〜5倍、5倍〜10倍、10倍〜25倍、25倍〜50倍、50倍〜100倍、または100倍〜1000倍の選択性を示す。様々な態様において、本出願の化合物は、αvβ5およびαvβ8インテグリンのそれぞれに対して、αvβ3および/またはαvβ6インテグリンよりも1.2倍〜1.5倍、1.2倍〜2倍、1.5倍〜2倍、2倍〜5倍、5倍〜10倍、または10倍〜25倍の選択性を示す。
【００６４】
1つの局面において、本出願の化合物は、臓器（例えば、腎臓、肺、肝臓、および心臓）における線維化組織の形成を阻害するかまたは減少させる。1つの局面において、本出願の化合物は、未処置対照のものと比べて、線維化組織の形成を90％、80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％、10％、または5％未満に減少させる。さらなる局面において、本出願の化合物は、未処置対照のものと比べて、線維化組織の形成を60％、50％、40％、30％、20％、10％、または5％未満に減少させる。さらなる局面において、本出願の化合物は、未処置対照のものと比べて、線維化組織の形成を40％、30％、20％、10％、または5％未満に減少させる。
【００６５】
本出願の化合物は、当業者であれば精通した様々な方法によって（例えば、全体が参照により本明細書に組み入れられるUS6,017,926に記載の方法に従って）都合よく調製することができる。本明細書に記載の各式の化合物は、市販の出発原料または文献の手法を用いて調製しうる出発原料から調製してもよい。
【００６６】
本出願の化合物は、1つまたは複数の不斉中心を含んでいてもよく、したがってラセミ体およびラセミ混合物、単一の鏡像異性体、ジアステレオマー混合物ならびに個々のジアステレオマーとして出現しうる。分子上の様々な置換基の性質に依存して、さらなる不斉中心が存在してもよい。そのような不斉中心はそれぞれ独立して2つの光学異性体を生じることになる。混合物および純粋または部分的に精製した化合物としての可能な光学異性体およびジアステレオマーはすべて、本出願の範囲内に含まれることが意図される。本出願は、これらの化合物のすべてのそのような異性体型を包含することが意図されている。
【００６７】
これらのジアステレオマーの独立した合成またはそれらのクロマトグラフィーによる分離は、本明細書において開示する方法論の適切な改変により、当技術分野において公知のとおり達成してもよい。それらの絶対立体化学は、結晶生成物または必要があれば公知の絶対配置の不斉中心を含む試薬により誘導される結晶中間体のX線結晶構造解析によって判定してもよい。
【００６８】
本明細書において、いくつかの場合に化合物の構造式は便宜上特定の異性体をあらわすが、本出願は幾何異性体、不斉炭素に基づく光学異性体、立体異性体、互変異性体などのすべての異性体を含む。
【００６９】
「異性」とは、同じ分子式を有するが、それらの原子の結合の順序または空間におけるそれらの原子の配置が異なる化合物を意味する。空間におけるそれらの原子の配置が異なる異性体は「立体異性体」と呼ぶ。互いに鏡像でない立体異性体は「ジアステレオマー」と呼び、重ね合わせることができない鏡像である立体異性体は「鏡像異性体」、または時には光学異性体と呼ぶ。反対のキラリティーの個々の鏡像異性体を等量含む混合物は「ラセミ混合物」と呼ぶ。
【００７０】
「キラル異性体」とは、少なくとも1つのキラル中心を有する化合物を意味する。2つ以上のキラル中心を有する化合物は、個々のジアステレオマー、または「ジアステレオマー混合物」と呼ぶジアステレオマーの混合物のいずれかとして存在してもよい。1つのキラル中心がある場合、立体異性体はそのキラル中心の絶対配置（RまたはS）が特徴であることができる。絶対配置とは、キラル中心に結合した置換基の空間における配置を意味する。考慮中のキラル中心に結合した置換基は、カーン・インゴールド・プレローグの順位則（Cahn et al, Angew. Chem. Inter. Edit. 1966, 5, 385；errata 511；Cahn et al., Angew. Chem. 1966, 78, 413；Cahn and Ingold, J. Chem. Soc. 1951 (London), 612；Cahn et al., Experientia 1956, 12, 81；Cahn, J., Chem. Educ. 1964, 41, 116）に従って順位付ける。
【００７１】
「幾何異性体」とは、その存在が二重結合のまわりの回転障害によるジアステレオマーを意味する。これらの配置はその名前の接頭辞シスおよびトランス、またはZおよびEによって区別され、これらはカーン・インゴールド・プレローグ則に従って基が分子中の二重結合の同じ側または反対側にあることを示す。
【００７２】
さらに、本出願において論じる構造および他の化合物には、そのすべてのアトロプ異性体（atropic isomer）が含まれる。「アトロプ異性体」は、2つの異性体の原子が空間において異なる配置をとる立体異性体のタイプである。アトロプ異性体は、その存在が中心結合のまわりの大きな基の回転障害によって起こされる制限された回転によるものである。そのようなアトロプ異性体は典型的には混合物として存在するが、最近のクロマトグラフィー技術の発展の結果、選択された場合には、2つのアトロプ異性体の混合物を分離することが可能となった。
【００７３】
「互変異性体」は、平衡状態で存在しかつ1つの異性体から別の異性体に容易に変換される、2つまたはそれ以上の構造異性体の1つである。この変換は、隣接する共役二重結合の交換を伴う、水素原子の形式上の移動を生じる。互変異性体は溶液中では互変異性の組の混合物として存在する。固体の形では、通常は1つの互変異性体が優勢である。互変異性化が可能な溶液中では、互変異性体の化学平衡に到達することになる。互変異性体の正確な割合は、温度、溶媒およびpHを含む、いくつかの因子に依存する。互変異性化によって相互に変換可能な互変異性体の概念は、互変異性と呼ばれる。
【００７４】
可能な互変異性の様々なタイプの中で、2つが一般に観察される。ケト-エノール互変異性において、電子と水素原子との同時シフトが起こる。環-鎖互変異性は、グルコースによって示されるとおり、糖鎖分子中のアルデヒド基（-CHO）が同一分子内のヒドロキシ基（-OH）の1つと反応して環式（環状）形態を生じた結果として起こる。一般的な互変異性の対は：ケトン-エノール、アミド-ニトリル、ラクタム-ラクチム、複素環式環（例えば、グアニン、チミンおよびシトシンなどの核酸塩基）におけるアミド-イミド酸の互変異性、アミン-エナミンおよびエナミン-エナミンである。一例では、
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は互いに互変異性体である。
【００７５】
本出願の化合物は、異なる互変異性体として表されうることが理解されるべきである。化合物が互変異性体を有する場合、すべての互変異性体は本出願の範囲内に含まれることが意図され、その化合物の命名はいかなる互変異性体も除外しないこともまた理解されるべきである。
【００７６】
望まれる場合には、化合物のラセミ混合物を、個々の鏡像異性体が単離されるように分離してもよい。分離は、化合物のラセミ混合物を鏡像異性的に純粋な化合物と接触させてジアステレオマー混合物を生成し、続いて分別結晶またはクロマトグラフィーなどの標準の方法により個々のジアステレオマーを分離するなどの、当技術分野において周知の方法によって実施することができる。ジアステレオマー混合物は、化合物のラセミ混合物を鏡像異性的に純粋な酸または塩基と接触させることによって生成されるジアステレオマー塩の混合物であることが多い。次いで、ジアステレオマー誘導体を、付加したキラル残基の切断により純粋な鏡像異性体へと変換してもよい。化合物のラセミ混合物は、当技術分野において周知のキラル固定相を用いるクロマトグラフィー法により、直接分離することもできる。
【００７７】
または、当技術分野において周知の方法により、公知の配置の光学的に純粋な出発原料または試薬を用いて化合物の任意の鏡像異性体を立体選択的合成によって得てもよい。
【００７８】
本出願の化合物のいくつかは、非溶媒和型ならびに水和物などの溶媒和型で存在してもよい。
【００７９】
「溶媒和物」とは、化学量論量または非化学量論量のいずれかの溶媒分子を含む溶媒付加型を意味する。いくつかの化合物は固定モル比の溶媒分子を結晶性固体状態で捕捉する傾向を有し、したがって溶媒和物を形成する。溶媒が水の場合、形成される溶媒和物は水和物である。溶媒がアルコールの場合、形成される溶媒和物はアルコラートである。水和物は1つまたは複数の水分子と複数の基質のうちの1つ（例えば、本出願の化合物）との組み合わせによって形成され、ここで水はH2Oとしてのその分子状態を保持しており、そのような組み合わせは1つまたは複数の水和物を形成することができる。水和物中、水分子は分子間力、特に水素結合により副原子価を通じて結合している。固体水和物はいわゆる結晶水として化学量論比で水を含み、ここで水分子はそれらの結合状態に関して等価である必要はない。水和物の例には、セスキ水和物、一水和物、脱水物、および三水和物が含まれる。等しく適切なものには本出願の化合物の塩の水和物がある。
【００８０】
薬剤における使用のために、本出願の化合物の塩は非毒性の「薬学的に許容される塩」を指す。しかし、他の塩も本出願の化合物またはその薬学的に許容される塩の調製において有用でありうる。「薬学的に許容される塩」なる用語に含まれる塩は、遊離塩基を適切な有機または無機酸と反応させることによって調製しうる、本出願の化合物の非毒性塩を指す。代表的な塩には下記が含まれる：酢酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、炭酸水素塩、流酸水素塩、酒石酸水素塩、ホウ酸塩、臭化物、カンシラート、炭酸塩、塩化物、クラブラン酸塩、クエン酸塩、二塩酸塩、エデト酸塩、エジシル酸塩、エストラート、エシラート、フマル酸塩、グルセプト酸塩、グルコン酸塩、グルタミン酸塩、グリコリルアルサニル酸塩、ヘキシルレゾルシン酸塩、ヒドラバミン、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヒドロキシナフトエ酸塩、ヨウ化物、イソチオナート、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、ラウリン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、メチル臭化物、メチル硝酸塩、メチル硫酸塩、ムチン酸塩、ナプシラート、硝酸塩、N-メチルグルカミンアンモニウム塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パモットル（pamottle）（エンボン酸塩）、パルミチン酸塩、パントテン酸塩、リン酸塩/二リン酸塩、ポリガラクツロ酸塩、サリチル酸塩、ステアリン酸塩、硫酸塩、塩基性酢酸塩、コハク酸塩、タンニン酸塩、酒石酸塩、テオクル酸塩、トシラート、トリエチオジド、および吉草酸塩。さらに、本出願の化合物が酸性部分を有する場合、その適切な薬学的に許容される塩には、アルカリ金属塩、例えば、ナトリウムまたはカリウム塩；アルカリ土類金属塩、例えば、カルシウムまたはマグネシウム塩；および適切な有機リガンドと形成した塩、例えば、アンモニアまたは、例えば、ジエチルアミン、トリエチルアミン、エチルジイソプロピルアミン、プロカイン、ジベンジルアミン、N-メチルモルホリン、ジヒドロアビエチルアミン（dihydroabietylamine）、もしくはメチルピペリジンなどの有機アミンから誘導しうる4級アンモニウム塩が含まれうる。
【００８１】
本出願はその範囲内に本出願の化合物のプロドラッグを含む。一般に、そのようなプロドラッグは、必要とされる化合物にインビボで容易に変換可能な、本出願の化合物の機能性誘導体である。したがって、本出願の処置法において、「投与すること」なる用語は、具体的に開示する化合物を用いるか、または具体的に開示しなくてもよいが患者への投与後にインビボで特定の化合物に変換する化合物を用いる、記載する様々な疾患および状態の処置を含むものとする。適切なプロドラッグ誘導体の選択および調製のための通常の手法は、例えば、''Design of Prodrugs,'' ed. H. Bundgaard, Elsevier, 1985に記載されている。これらの化合物の代謝物には、本出願の化合物の生物学的環境への導入後に生成される活性種が含まれる。
【００８２】
本出願は、本出願の化合物の代謝物の1つまたは複数も含む。
【００８３】
本出願は、水素原子が重水素原子で置き換えられている、本明細書に記載の各式の重水素標識された化合物または表1に列挙した化合物も含む。重水素標識された化合物は、重水素の天然存在比、例えば、0.015％よりも実質的に大きい重水素の存在比を有する重水素原子を含む。
【００８４】
本明細書において用いられる「重水素濃縮係数」なる用語は、重水素存在比と重水素の天然存在比との間の比を意味する。1つの局面において、本出願の化合物は、少なくとも3500（各重水素原子で52.5％の重水素取り込み）、少なくとも4000（60％の重水素取り込み）、少なくとも4500（67.5％の重水素取り込み）、少なくとも5000（75％の重水素）、少なくとも5500（82.5％の重水素取り込み）、少なくとも6000（90％の重水素取り込み）、少なくとも6333.3（95％の重水素取り込み）、少なくとも6466.7（97％の重水素取り込み）、少なくとも6600（99％の重水素取り込み）、または少なくとも6633.3（99.5％の重水素取り込み）の各重水素原子の重水素濃縮係数を有する。
【００８５】
重水素標識化合物は、様々な当技術分野において認められた技術のいずれかを用いて調製することができる。例えば、本明細書に記載の各式の重水素標識された化合物または表1に列挙した化合物は一般に、非重水素標識試薬を容易に入手可能な重水素標識試薬で置き換えることにより、本明細書に記載の手法を実施することで調製することができる。
【００８６】
前述の重水素原子を含む本出願の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物は、本出願の範囲内である。さらに、重水素、すなわち2Hによる置換は、より大きい代謝安定性、例えば、インビボでの半減期増大および/または必要な用量の減少から得られる、ある特定の治療的利点を提供することができる。
【００８７】
生物学的アッセイ法
細胞接着アッセイ法
本出願の化合物の、ビトロネクチンおよび/またはフィブロネクチンへの細胞接着を阻止する能力を、当技術分野において公知の方法または技術、例えば、以下に記載する手法を用いて試験してもよい。
【００８８】
接着プレート調製：細胞培養プレートをビトロネクチンまたはフィブロネクチンでコーティングする。
【００８９】
細胞培養およびローディング：例示的な細胞（例えば、HMVEC細胞、RLMVEC細胞、およびRAEC細胞）を化合物試験に用いる。細胞を増殖させ、次いで試験のために懸濁させる。
【００９０】
接着アッセイ法：試験化合物を細胞懸濁液に添加する。インキュベーション後、ビトロネクチンまたはフィブロネクチンでコーティングしたプレートに接着しない細胞を、緩やかに洗浄することにより除去する。残りの細胞数を測定する。IC50値を算出する。
【００９１】
αVβ6/αVβ8−LAP-TGF β1結合アッセイ法
インテグリンαVβ6/αVβ8結合ビーズをαVβ6/αVβ8リガンド（例えば、LAP TGF-β1（LAP1））で処理し、複合体を、検出のために標識（例えば、蛍光標識）することができる一次抗体（Ab）、および任意に検出のために標識（例えば、蛍光標識）することができる二次抗体と共にインキュベートする。インテグリン結合ビーズとリガンドとの間の反応を完全反応と考え、リガンドも本開示の化合物もなしの反応をブランク反応と考えた。複合体を、例えば、プレート読み取り器またはフローサイトメーターのいずれかにより分析して、本出願の化合物によるαVβ6/αVβ8とリガンド（例えば、LAP-TGF β1）との間の結合の調節を判定する。
【００９２】
αVβ3/αVβ5−LAP-TGF β1結合アッセイ法
インテグリンαVβ3/αVβ5結合ビーズをαVβ3/αVβ5リガンド（例えば、ビトロネクチン）で処理し、複合体を、検出のために標識（例えば、蛍光標識）することができる一次抗体（Ab）、および任意に検出のために標識（例えば、蛍光標識）することができる二次抗体と共にインキュベートする。インテグリン結合ビーズとリガンドとの間の反応を完全反応と考え、リガンドも本開示の化合物もなしの反応をブランク反応と考えた。複合体を、例えば、プレート読み取り器またはフローサイトメーターのいずれかにより分析して、本出願の化合物によるαVβ3/αVβ5とリガンド（例えば、ビトロネクチン）との間の結合の調節を判定する。
【００９３】
抗血管新生活性アッセイ法
本出願の化合物の抗血管新生能力を、当技術分野において公知の方法または技術、例えば、以下に記載する手法を用いて試験してもよい。
【００９４】
ニワトリ漿尿膜（CAM）に、試験化合物およびVEGFを含浸させたゼラチンスポンジを移植する。未処置CAMにはVEGFのみを与えた。
【００９５】
アルブミンを鶏卵から取り出し、インキュベートする。移植片を発生中のCAM上に設置し、さらにインキュベートする。次いで、CAMを固定し、切片とし、血管成長について撮像する。
【００９６】
本出願の化合物の血漿における分布、ならびに本出願の化合物のインビボでの安全性および有効性を、化合物の投与後の動物を用いて試験してもよい。
【００９７】
線維症は、一般には、線維症が疑われる臓器の生検における線維組織の異なる形態に基づいて認識することができる。線維症または発生中の線維症の存在を検出するための他の手段には、コンピューター体軸断層撮影（CATまたはCT）、超音波、磁気共鳴撮像法（MRI）、および線維症を示すことが公知である1つまたは複数の血清マーカー（例えば、様々な種類のコラーゲン）のレベルをモニタリングすることが含まれる。線維症を診断する正確な様式は、線維化プロセスが起こる臓器によっても変動する。例えば、生検は一般にはほとんどの臓器の線維症を診断するのに有効であるが、光ファイバー装置を伴う内視鏡検査（例えば、S状結腸鏡または結腸鏡）は、腸などのある特定の臓器の線維症を検出するための、外傷性が低い代替法であり得る。
【００９８】
線維症を検出するための生検
例えば診査手術または生検針によって所与の臓器または組織から生検材料を得るための手法は公知である。生検材料を得ると、試料は、検査されて、試料中の線維症の存在およびレベルを示すスコアが与えられる。よく用いられるスコア付けシステムには、METAVIRスコア付けシステム、改変HAI（ISHAK）スコア付けシステム、およびKnodellスコア付けシステムが含まれる。スコア付けに用いられる基準は、十分に確立されており、当業者には公知である。
【００９９】
線維症マーカー
ヒアルロン酸、ラミニン、I、II、およびIV型コラーゲンからのウンデュリン（undulin）（IV型コラーゲン）プロペプチド、リジルオキシダーゼ、プロリルヒドロキシラーゼ、リジルヒドロキシラーゼ、PIIINP、PICP、コラーゲンVI、テネイシン、コラーゲンXIV、ラミニンP1、TIMP-1、MMP-2、α2マクログロブリン、ハプトグロビン、ガンマグルタミルトランスペプチダーゼ、γグロブリン、総ビリルビン、ならびにアポリポタンパク質Alを含む、そのレベルが線維症の存在および/または重症度を示しうる多くの公知の血清マーカーが存在する。
【０１００】
動物線維症モデル
本出願の化合物の抗線維化活性は、肺線維症および肝線維症を含む線維症を評価するための様々な動物モデルで評価することができる。線維症を試験するための動物モデルは公知である（例えば、Henderson et al., Nat Med 19, 617 (2013), Pilling et al., J. Immunol. 179, 4035 (2007), Truong et al., Biomed. Res. Ther. 1, 43 (2014)参照）。例えば、動物（例えば、ラット、マウス、ウサギ、サル）を様々な肺線維症誘導剤（例えば、ブレオマイシン）で処置することができる。次いで、本出願の化合物を動物に様々な用量で投与する。化合物の効果を、線維症マーカー遺伝子の発現もしくは肺組織におけるコラーゲン形成を測定することにより、または免疫組織化学により評価することができる。他の例では、動物（例えば、ラット、マウス、ウサギ、サル）を、肝線維症を誘導するために（例えば、CCl4などの化学作用物質により、または胆管結紮により）処置することもできる。次いで、本出願の化合物を動物に様々な用量で投与し、肝組織病理学および結合組織形成を調べる。
【０１０１】
インビボブレオマイシン誘発性肺線維症モデル
実験動物を無作為かつ前向きに群に割り付ける。第0日に、ブレオマイシン誘発の前に、動物にビヒクルまたは本開示の化合物の第1用量を投与する。投与後、すべての動物を麻酔する。小径カニューレを気管に挿入し、食塩水またはブレオマイシンを肺にゆっくり注入する。第1群を未処置対照群とし、第0日に食塩水だけ（ブレオマイシンなし）を投与する。他の群には第0日にブレオマイシンを投与する。ビヒクル（例えば、メチルセルロース）、陽性対照（例えば、ピルフェニドン）、または本開示の化合物による処置を、経口強制投与（PO）により1日1回または2回投与する。すべての動物を秤量し、呼吸困難について毎日評価する。
【０１０２】
屠殺前に、動物を麻酔し、動物が非反応性であると判定されれば、浅い切開を行う。気管を単離し、気管のほぼ中間の気管軟骨輪の間で横切開を行う。気管に縫合糸で固定した切り込みを通してカニューレを挿入することにより、気管切開を実施する。カニューレ挿入後、カニューレのアダプター末端を人工呼吸器に接続する。動物を換気し、馴化期間の後、肺容量を標準化し、各動物の総呼吸インピーダンスを測定する。
【０１０３】
薬学的組成物
本出願は、活性成分として本出願の化合物を含む薬学的組成物に関する。1つの局面において、本出願は、本明細書に記載の各式の少なくとも1つの化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物と、1つまたは複数の薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む、薬学的組成物を提供する。1つの局面において、本出願は、表1より選択される少なくとも1つの化合物を含む薬学的組成物を提供する。
【０１０４】
本明細書において用いられる「組成物」なる用語は、特定の量の特定の成分を含む生成物、ならびに特定の量の特定の成分の組み合わせから、直接または間接的に生じる任意の生成物を含むことが意図される。
【０１０５】
本出願の化合物は、錠剤、カプセル剤（それぞれ持続放出または徐放性製剤を含む）、丸剤、散剤、顆粒剤、エリキシル剤、チンキ剤、懸濁剤、シロップ剤、および乳剤などの剤形での経口投与のために製剤化されることができる。本出願の化合物は、すべて薬学分野の当業者には周知の剤形を用いる、静脈内（ボーラスまたは注入）、腹腔内、局所、皮下、筋肉内または経皮（例えば、パッチ）投与のために製剤化されることもできる。
【０１０６】
局所投与のために、組成物を約0.01から約5重量パーセントの間、好ましくは約0.1から約5.0重量パーセントの間、より好ましくは約0.5から約5.0重量パーセントの間、最も好ましくは約0.8から約3.0重量パーセントの間の濃度の本出願の化合物を含む製剤として提供する。
【０１０７】
本出願の局所用製剤は、水性ビヒクルを含む水性液剤の形であってもよい。水性ビヒクル成分は、水と少なくとも1つの薬学的に許容される賦形剤とを含みうる。適切な眼科的に許容される賦形剤には、溶解度向上剤、キレート化剤、保存剤、等張化剤、粘性/懸濁化剤、緩衝剤、およびpH改変剤、ならびにそれらの混合物からなる群より選択されるものが含まれる。
【０１０８】
任意の適切な溶解度向上剤を用いることができる。溶解度向上剤の例には、ヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリン、メチル-β-シクロデキストリン、無作為メチル化-β-シクロデキストリン、エチル化-β-シクロデキストリン、トリアセチル-β-シクロデキストリン、過アセチル化-β-シクロデキストリン、カルボキシメチル-β-シクロデキストリン、ヒドロキシエチル-β-シクロデキストリン、2-ヒドロキシ-3-(トリメチルアンモニオ)プロピル-β-シクロデキストリン、グルコシル-β-シクロデキストリン、硫酸化β-シクロデキストリン（S-β-CD）、マルトシル-β-シクロデキストリン、β-シクロデキストリンスルホブチルエーテル、分枝-β-シクロデキストリン、ヒドロキシプロピル-γ-シクロデキストリン、無作為メチル化-γ-シクロデキストリン、およびトリメチル-γ-シクロデキストリン、ならびにそれらの混合物からなる群より選択されるものなどの、シクロデキストリンが含まれる。好ましくは、溶解度向上剤には、β-シクロデキストリンスルホブチルエーテル、ヒルドキシプロピル-β-シクロデキストリン、硫酸化β-シクロデキストリン（S-β-CD）、およびマルトシル-β-シクロデキストリン、ならびにそれらの混合物が含まれる。β-シクロデキストリンスルホブチルエーテルは特に好ましい溶解度向上剤である。溶解度向上剤は約1〜約20重量％、好ましくは約1〜約10重量パーセント、より好ましくは約5〜約10重量パーセントの量で添加してもよい。
【０１０９】
任意の適切なキレート化剤を用いることができる。適切なキレート化剤の例には、エチレンジアミン四酢酸およびその金属塩、エデト酸二ナトリウム、エデト酸三ナトリウム、およびエデト酸四ナトリウム、ならびにそれらの混合物からなる群より選択されるものが含まれる。エデト酸二ナトリウムは特に好ましいキレート化剤である。キレート化剤は約0.001〜約0.05重量％、好ましくは約0.001〜約0.02重量％、より好ましくは約0.002〜約0.01重量％、最も好ましくは約0.002〜約0.005重量％の量で添加してもよい。
【０１１０】
好ましくは、水性ビヒクルは保存剤を含む。好ましい保存剤には、ハロゲン化ベンザルコニウム（好ましくは塩化ベンザルコニウム）などの4級アンモニウム塩、グルコン酸クロルヘキシジン、塩化ベンゼトニウム、塩化セチルピリジニウム、臭化ベンジル、硝酸フェニル水銀、酢酸フェニル水銀、ネオデカン酸フェニル水銀、マーシオレート、メチルパラベン、プロピルパラベン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、安息香酸ナトリウム、プロピオン酸ナトリウム、p-ヒドロキシ安息香酸エチル、プロピルアミノプロピルビグアニド、およびp-ヒドロキシ安息香酸ブチル、ソルビン酸、ならびにそれらの混合物からなる群より選択されるものが含まれる。より好ましくは、保存剤はハロゲン化ベンザルコニウム（好ましくは塩化ベンザルコニウム）などの4級アンモニウム塩、グルコン酸クロルヘキシジン、塩化ベンゼトニウム、塩化セチルピリジニウム、ソルビン酸カリウム、安息香酸ナトリウム、p-ヒドロキシ安息香酸エチル、p-ヒドロキシ安息香酸ブチル、もしくはプロピルアミノプロピルビグアニド、またはそれらの混合物である。プロピルアミノプロピルビグアニドは特に好ましい保存剤である。保存剤は、約0.00001〜約0.0001重量％、好ましくは約0.00001〜約0.00008重量％、より好ましくは約0.00002〜約0.00005重量％の量で用いてもよい。
【０１１１】
水性ビヒクルは、張性（浸透圧）を調節するための等張化剤を含んでいてもよい。等張化剤は、グリコール（プロピレングリコール、ジエチレングリコール、トリエチレングリコールなどの）、グリセロール、デキストロース、グリセリン、マンニトール、塩化カリウム、および塩化ナトリウム、ならびにそれらの混合物からなる群より選択することができる。好ましくは、等張化剤は、グリセリン、マンニトール、塩化カリウム、および塩化ナトリウムからなる群より選択される。より好ましくは、マンニトールおよび/または塩化ナトリウム（最も好ましくはそれらの混合物）を用いる。等張化剤は約0.05〜約8重量％、好ましくは約0.1〜約6重量％、より好ましくは約0.1〜約4重量％、最も好ましくは約0.2〜約4重量％の量で用いてもよい。
【０１１２】
水性ビヒクルは粘性/懸濁化剤も含んでもよい。適切な粘性/懸濁化剤には、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロースなどのセルロース誘導体、ポリエチレングリコール（ポリエチレングリコール300、ポリエチレングリコール400などの）、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、およびポリアルケニルエーテルまたはジビニルグリコールと架橋したアクリル酸のポリマー（カーボポール934、カーボポール934P、カーボポール971、カーボポール974およびカーボポール974Pなどのカーボポール）などの架橋アクリル酸ポリマー（カルボマー）、ならびにそれらの混合物からなる群より選択されるものが含まれる。本出願の好ましい態様において、粘性/懸濁化剤はカルボマー、より好ましくはカーボポール974Pである。粘性/懸濁化剤は約0.05〜約2重量％、好ましくは0.1〜約1重量％、より好ましくは約0.2〜約0.8重量％、最も好ましくは約0.3〜約0.5重量％の量で存在してもよい。
【０１１３】
製剤を、許容されるpH（典型的には約5.0〜約9.0、より好ましくは約5.5〜約8.5、特に約6.0〜約8.5、約7.0〜約8.5、約7.2〜約7.7、約7.1〜約7.9、または約7.5〜約8.0のpH範囲）に調節するために、製剤はpH改変剤を含んでいてもよい。pH改変剤は典型的には、水酸化カリウム、水酸化ナトリウム、および塩酸、ならびにそれらの混合物の群より選択される鉱酸または金属水酸化物塩基であり、好ましくは水酸化ナトリウムおよび/または塩酸である。これらの酸性および/または塩基性pH改変剤を添加して、製剤を目標の許容されるpH範囲に調節する。したがって、酸および塩基の両方を必ずしも使用しなくてもよく、製剤に依存して、混合物を所望のpH範囲にするのに、酸または塩基の一方の添加で十分である場合がある。
【０１１４】
水性ビヒクルは、pHを安定化するための緩衝剤を含んでいてもよい。用いる場合は、緩衝剤は、リン酸緩衝液（リン酸二水素ナトリウムおよびリン酸水素二ナトリウムなど）、ホウ酸緩衝液（ホウ酸、または四ホウ酸二ナトリウムを含むその塩など）、クエン酸緩衝液（クエン酸、またはクエン酸ナトリウムを含むその塩など）、およびε-アミノカプロン酸、ならびにそれらの混合物からなる群より選択される。緩衝剤は、約0.05〜約5重量％、好ましくは0.1〜約5重量％、より好ましくは約0.2〜約5重量％、最も好ましくは約0.5〜約5重量％の量で存在してもよい。
【０１１５】
局所投与のための製剤は、湿潤剤をさらに含んでいてもよい。本出願の任意の態様において、湿潤剤は好ましくは非イオン性湿潤剤である。より好ましくは、湿潤剤は水溶性または膨潤性である。最も好ましくは、湿潤剤は水溶性である。「水溶性」は、''Handbook of Pharmaceutical Excipients''（Raymond C Rowe, Paul J Sheskey and Sian C Owen, Fifth Edition, Pharmaceutical Press and American Pharmacists Association 2006）などの標準の教科書において使用される様式で理解されるべきである。適切な湿潤剤のクラスには、ポリオキシプロピレン-ポリオキシエチレンブロックコポリマー（ポロキサマー）、ひまし油のポリエトキシル化エーテル、ポリオキシエチレン化ソルビタンエステル（ポリソルベート）、オキシエチル化オクチルフェノールのポリマー（チロキサポール）、ステアリン酸ポリオキシル40、脂肪酸グリコールエステル、脂肪酸グリセリルエステル、スクロース脂肪酸エステル、およびポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ならびにそれらの混合物からなる群より選択されるものが含まれる。
【０１１６】
適切な湿潤剤の具体例には、下記からなる群より選択されるものが含まれる：ポリオキシエチレン（160）ポリオキシプロピレン（30）グリコール［プルロニックF68］、ポリオキシエチレン（42）ポリオキシプロピレン（67）グリコール［プルロニックP123］、ポリオキシエチレン（54）ポリオキシプロピレン（39）グリコール［プルロニックP85］、ポリオキシエチレン（196）ポリオキシプロピレン（67）グリコール［ポロキサマー407、プルロニックF127］、ポリオキシエチレン（20）ポリオキシプロピレン（20）グリコール［プルロニックL44］などのポリオキシエチレン-ポリオキシプロピレンブロックコポリマー（ポロキサマー）、ポリ(オキシエチレン)ソルビタンモノパルミチン酸エステル（ポリソルベート40）、ポリ(オキシエチレン)ソルビタンモノステアリン酸エステル（ポリソルベート60）、ポリ(オキシエチレン)ソルビタントリステアリン酸エステル（ポリソルベート65）、ポリ(オキシエチレン)ソルビタンモノオレイン酸エステル（ポリソルベート80）、ポリ(オキシエチレン)ソルビタンモノラウリン酸エステル、ポリ(オキシエチレン)ソルビタントリオレイン酸エステルなどのポリオキシエチレン化ソルビタンエステル（ポリソルベート）、ポリオキシエチレン硬化ひまし油10、ポリオキシエチレン硬化ひまし油40、ポリオキシエチレン硬化ひまし油50およびポリオキシエチレン硬化ひまし油60などのひまし油のポリエトキシル化エーテル、ステアリン酸ポリオキシル40、スクロース脂肪酸エステル、およびポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ならびにそれらの混合物。
【０１１７】
本出願の局所投与のための特に好ましい製剤は、本出願の化合物、溶解度向上剤、キレート化剤、保存剤、等張化剤、粘性/懸濁化剤、緩衝剤、およびpH改変剤を含む。より特に好ましい製剤は、β-シクロデキストリン、ホウ酸塩、ホウ酸、塩化ナトリウム、エデト酸二ナトリウム、およびプロピルアミノプロピルビグアニドからなる。
【０１１８】
1つの局面において、本出願の製剤は、下記のうちの1つなどの液剤の形である。
2018514568.tif 000039
2018514568.tif 000040
2018514568.tif 000041
【０１１９】
本出願の局所用製剤は、ゲルもしくは半ゲルまたは両方；ゼリー；懸濁剤；乳剤；油；軟膏；クリーム；あるいは噴霧剤の形であってもよい。
【０１２０】
ゲル、半ゲル、ゼリー、懸濁剤、乳剤、油、軟膏、クリーム、または噴霧剤は、緩衝剤（例えば、リン酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、クエン酸緩衝液、酒石酸緩衝液、酢酸緩衝液、アミノ酸、酢酸ナトリウム、クエン酸ナトリウムなど）、等張化剤（例えば、ソルビトール、グルコース、およびマンニトールなどの糖類、グリセリン、濃グリセリン、PEG、およびプロピレングリコールなどの多価アルコール、塩化ナトリウムなどの塩）、保存剤または防腐剤（例えば、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンザルコニウム、p-オキシ安息香酸メチルまたはp-オキシ安息香酸エチルなどのP-オキシ安息香酸エステル、ベンジルアルコール、フェネチルアルコール、ソルビン酸またはその塩、チメロサール、クロロブタノールなど）、溶解度向上剤（例えば、シクロデキストリンおよびそれらの誘導体、ポリビニルピロリドンなどの水溶性ポリマー、チロキサポール、ポリソルベートなどの界面活性剤）、pH改変剤（例えば、塩酸、酢酸、リン酸、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウムなど）、増粘剤（例えば、HEC、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、HPMC、カルボキシメチルセルロース、およびそれらの塩）、キレート化剤（例えば、エデト酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、濃リン酸ナトリウム）などの、通常の様式で組み込んだ様々な添加物を含んでいてもよい。
【０１２１】
さらに、本出願の化合物は、マイクロエマルジョン、リポソーム、ニオソーム、ゲル、ヒドロゲル、ナノ粒子、およびナノサスペンションを含むがそれらに限定されるわけではない新規製剤中に組み込むことによって、局所投与のために製剤化されていてもよい。
【０１２２】
1. マイクロエマルジョン
マイクロエマルジョンは、界面活性剤および共界面活性剤の組み合わせにより、界面張力を低下させる様式で促進された、水および油の分散である。これらの系は通常はより高い熱力学的安定性、小さい液滴サイズ（約100nm）および透明な外観が特徴である。その透明な外観は内相の高レベルの分散によるものであり、そのサイズは100〜1000オングストロームの範囲である。
【０１２３】
2. リポソーム
リポソームは、水性コアを含む脂質小胞であり、様々な薬物物質の送達において広く活用されている。選択した脂質組成物の性質に依存して、リポソームは薬物の長期放出を提供することができる。
【０１２４】
3. ニオソーム
ニオソームは、非イオン性界面活性剤によって構成された二層構造小胞であり、親油性および親水性化合物の両方を封入することができる。これらは薬物をpHとは無関係に放出し、バイオアベイラビリティを向上させうる。ニオソームは、アルキルまたはジアキル（diakyl）ポリグリセロールエーテルクラスの非イオン性界面活性剤およびコレステロールの混合と、続く水性媒質中での水和後に形成される、微視的層状構造である。リポソームもまた二層によって構成されているという点で、構造的に、ニオソームはリポソームと類似である。しかし、ニオソームの場合の二層は、リポソームの場合のリン脂質ではなく、非イオン性界面活性剤によって構成されている。ニオソームは、その調製に用いた方法に依存して、単層または多層でありうる。これらは親水性および疎水性溶質を捕捉することができる。これらは、優れた安定性を有し、かつ高い費用およびリン脂質の純度のばらつきなどの、リポソームに関連する多くの欠点がない。ニオソームの特性およびその調製法は当技術分野において周知であり、例えば、Wagh, VD et al., J Pharm Res 2010; 3(7):1558-1563；Kaur H et al., Int J Pharm Sci Rev Res 2012; 15(1):113-120を参照されたく、これらはそれぞれ参照により本明細書に組み入れられる。
【０１２５】
4. ゲル
ゲルは、活性成分の局所送達を提供する、粘膜付着性ポリマーで構成される。そのようなポリマーは、薬物担体の特定の生物組織への付着を意味する、生物付着として公知の特性を有する。これらのポリマーは、薬物の生物組織との接触時間を延長し、それによりバイオアベイラビリティを改善することができる。ポリマーの選択は剤形からの薬物の放出動力学において重大な役割を果たす。いくつかの生物付着性ポリマーは様々な程度の粘膜付着性能で入手可能である。いくつかの例はカルボキシメチルセルロース、カーボポール、ポリカルボフィル、およびアルギン酸ナトリウムである。
【０１２６】
5. ヒドロゲル
ヒドロゲルは、大量の水または生体液を取り込むことができる、三次元の親水性ポリマーネットワークである。滞留時間はヒドロゲル製剤によって著しく延長することができる。ゲル化は温度およびpHを変えることによって行うことができる。最も広く用いられるポリマーのポロキサマーは、親水性部分に取り囲まれた中心に疎水性部分を含む。
【０１２７】
6. ナノ粒子
ナノ粒子は、様々な生物分解性または非生物分解性のポリマー、脂質、リン脂質または金属からなる、直径1μm未満の粒子と定義される。これらは、薬物がポリマー材料中に均質に分散またはコーティングされているかどうかに依存して、ナノスフェアまたはナノカプセルとして分類することができる。ナノ粒子の取り込みおよび分布はそれらのサイズに依存する。
【０１２８】
7. ナノサスペンション
ナノサスペンションは、界面活性剤によって安定化された適切な分散媒中に懸濁した水に難溶性の薬物からなるマイクロメートル未満のコロイド系と定義される。通常は、ナノサスペンションは本来不活性のポリマー樹脂のようなコロイド担体からなる。ナノサスペンションは薬物の溶解性と、したがってバイオアベイラビリティとを向上させる。マイクロエマルジョンとは異なり、ナノサスペンションは非刺激物である。ナノ粒子の表面上の電荷はそれらの角膜への付着を促進する。薬物送達におけるナノサスペンションの使用は、Rabinow, Nature Rev Drug Disc 2004; 785-796に総説が記載されており、これは参照により本明細書に組み入れられる。
【０１２９】
本出願の化合物はまた、標的指向性薬物担体としての溶解性ポリマーとカップリングしてもよい。そのようなポリマーには、ポリビニルピロリドン、ピランコポリマー、ポリヒドロキシプロピルメタクリルアミド-フェノール、ポリヒドロキシエチルアスパルトアミド-フェノール、およびパルミトイル残基で置換されたポリエチレンオキシド-ポリリジンが含まれうる。さらに、本出願の化合物は、薬物の制御放出を達成するのに有用な生物分解性ポリマーのクラス、例えば、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリ乳酸とポリグリコール酸とのコポリマー、ポリイプシロンカプロラクトン、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリアセタール、ポリジヒドロピラン、ポリシアノアクリラート、および、ヒドロゲルの架橋または両親媒性ブロックコポリマーにカップリングしてもよい。
【０１３０】
本出願は、本出願の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物と、薬学的に許容される担体または賦形剤と、さらに(a）インテグリンα5β1のアンタゴニスト、(b）細胞毒性/抗増殖剤、(c）表皮由来成長因子、線維芽細胞由来成長因子、または血小板由来成長因子の阻害物質、(d）VEGFの阻害物質、(e）Flk-1/KDR、Flt-1、Tck/Tie-2、またはTic-1の阻害物質、および(f）ホスホイノシチド3-キナーゼの阻害物質と、それらの混合物からなる群より選択される活性成分とを含む、薬学的組成物も提供する。
【０１３１】
本出願は、本出願の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物と、薬学的に許容される担体または賦形剤と、さらに(a）インテグリンα5β1のアンタゴニスト、(b）細胞毒性/抗増殖剤、(c）表皮由来成長因子、線維芽細胞由来成長因子、または血小板由来成長因子の阻害物質、(d）VEGFの阻害物質、および(e）ホスホイノシチド3-キナーゼの阻害物質と、それらの混合物からなる群より選択される活性成分とを含む、薬学的組成物をさらに提供する。
【０１３２】
インテグリンα5β1のアンタゴニストの非限定的な例は、(S)-2-((R)-2-((S)-2-((S)-2-((S)-1-アセチルピロリジン-2-カルボキサミド)-3-(1H-イミダゾル-5-イル)プロパンアミド)-3-ヒドロキシプロパンアミド)-3-メルカプトプロパンアミド)スクシンアミド、およびStragies, R. et al., J. Med. Chem. 2007, 50:3786-3794に記載のJSM6427であり、これは参照により本明細書に組み入れられる。
【０１３３】
細胞毒性/抗増殖剤の非限定的な例は、タキソール、ビンクリスチン、ビンブラスチン、およびドキソルビシンである。
【０１３４】
表皮由来成長因子、線維芽細胞由来成長因子、または血小板由来成長因子の阻害物質の非限定的な例は、パゾパニブ、およびスニチニブである。
【０１３５】
血管内皮由来成長因子（VEGF）の阻害物質の非限定的な例は、ベバシズマブおよびラニビズマブである。
【０１３６】
ホスホイノシチド3-キナーゼの阻害物質の非限定的な例は、インデラリシブ（indelalisib）および2-モルホリン-4-イル-8-フェニルクロマン-4-オンである。
【０１３７】
使用法
「線維症」は、組織または臓器における過剰の線維結合組織、例えば、瘢痕組織の発生を伴う状態を意味する。瘢痕組織のそのような生成は、感染、炎症、または疾患、外傷、化学毒性などによる臓器の損傷に反応して起こり得る。線維症は、肝臓、腎臓、腸、肺、心臓などを含む、様々な異なる組織および臓器において発生し得る。
【０１３８】
臓器または組織の線維症は、（1）腎疾患（例えば、尿細管間質性腎炎）、（2）呼吸器疾患（例えば、間質性肺炎（肺線維症））、（3）胃腸疾患（例えば、肝硬変、慢性膵炎およびスキルス胃がん）、（4）心血管疾患（心筋線維症）、（5）骨および関節疾患（例えば、骨髄線維症および関節リウマチ）、（6）皮膚疾患（例えば、術後瘢痕、熱傷瘢痕、ケロイド、肥厚性瘢痕および強皮症）、（7）産科疾患（例えば、子宮筋腫）、（8）泌尿器疾患（前立腺肥大）、（9）他の疾患（例えば、アルツハイマー病、硬化性腹膜炎、I型糖尿病および術後癒着）などの、様々な疾患または障害に関与する。したがって、組織線維症は、心臓線維症、強皮症、骨格筋線維症、肝線維症、腎線維症、肺線維症、腸線維症、または糖尿病性線維症であり得る。例えば、線維症は、先天性肝線維症（ongenital hepatic fibrosis）（CHF）；腎臓尿細管間質性線維症；自己免疫障害（例えば、関節リウマチ、狼蒼およびサルコイドーシス）に関連する肺線維症；糖尿病性心筋症に関連する間質性線維症；筋ジストロフィー（例えば、ベッカー型筋ジストロフィーおよびデュシェンヌ型筋ジストロフィー）、脱神経性萎縮、神経筋疾患（例えば、急性多発神経炎、灰白髄炎、ウェルドニッヒ/ホフマン病、筋萎縮性側索硬化症、進行性延髄性萎縮疾患）に関連する骨格筋線維症、縦隔線維症（縦隔の軟部組織）、骨髄線維症（骨髄）、後腹膜線維症（後腹膜の軟部組織）、進行性塊状線維症（肺）、腎性全身性線維症（皮膚）、クローン病（腸）、ケロイド（皮膚）、強皮症/全身性硬化症（皮膚、肺）、関節線維症（rrthrofibrosis）（膝、肩、他の関節）、ペロニー病（陰茎）、デュピュイトラン拘縮（手または手指）、いくつかの型の癒着性関節包炎（肩）であり得る。
【０１３９】
「肝線維症」または「肝臓の線維症」は、慢性肝疾患のほとんどの型で起こる、コラーゲンを含む細胞外マトリックスタンパク質の過剰な蓄積である。進行型肝線維症は硬変、肝不全、および門脈圧亢進を引き起こし、肝臓移植を必要とすることが多い。活性化肝星細胞、門脈線維芽細胞、および骨髄起源の筋線維芽細胞は、損傷肝における主なコラーゲン産生細胞として同定されている。これらの細胞は、TGF-β1、アンジオテンシンII、およびレプチンなどの線維形成サイトカインによって活性化される。先進国における肝線維症の主な原因には、慢性アルコール乱用、非アルコール性脂肪性肝炎（NASH）、鉄および銅過負荷、アルコール誘発性肝損傷、C型、B型、およびD型肝炎の慢性感染、ヘモクロマトーシス、続発性胆汁性肝硬変、NASH、ならびに自己免疫性肝炎が含まれる。
【０１４０】
「肺線維症」または「肺の線維症」は、肺組織中で瘢痕が形成される呼吸器疾患であり、重篤な呼吸問題を引き起こす。過剰の線維結合組織の蓄積は壁の肥厚をまねき、血中の酸素供給減少を引き起こす。その結果、患者は永続性の息切れを患う。肺線維症は、他の疾患の二次的影響であり得る。これらのほとんどは、間質性肺疾患に分類される。例には、自己免疫障害、ウイルス感染および結核のような細菌感染が含まれ、これらは肺上葉または下葉両方における線維化変化および肺への他の顕微鏡的損傷を引き起こしうる。特発性肺線維症は、任意の公知の原因なしに現れることもある。二次的影響として肺線維症を引き起こし得る疾患および状態には、環境的および職業的汚染物質の吸入、過敏性肺炎、喫煙、いくつかの典型的結合組織疾患（関節リウマチ、SLEおよび強皮症などの）、結合組織に関連する他の疾患（サルコイドーシスおよびウェゲナー肉芽腫症などの）、感染症、ならびにある特定の薬剤（例えば、アミオダロン、ブレオマイシン（ピンジャングマイシン（pingyangmycin））、ブスルファン、メトトレキセート、アポモルフィン、およびニトロフラントイン）が含まれる。
【０１４１】
「心臓線維症」または「心臓の線維症」は、心線維芽細胞の不適切な増殖による心臓弁の異常な肥厚を意味しうるが、より一般的には、心筋における線維芽細胞の増殖を意味する。線維化心筋はより硬く、柔軟性がより低く、心不全の進行中に見られる。線維細胞は通常はコラーゲンを分泌して、心臓の構造的支持を提供するよう機能する。過剰に活性化されると、このプロセスは弁の肥厚および線維症を引き起こし、白い組織が主に三尖弁上に増大するが、肺動脈弁上にも出現する。肥厚および柔軟性の欠乏はついには弁機能不全および右側心不全を引き起こし得る。
【０１４２】
糸球体硬化および尿細管間質性線維症が特徴である「腎線維症」または「腎臓の線維症」は、多様な慢性腎疾患（CKD）の最終の一般症状である。進行性CKDは、腎実質の完全な破壊および末期腎不全につながる広汎性組織瘢痕を引き起こすことが多い。
【０１４３】
嚢胞性線維症（CF）は、ほとんどは肺であるが膵臓、肝臓、腎臓、および腸にも影響をおよぼす、遺伝的障害である。患者は、頻繁な肺感染の結果、呼吸困難および痰の吐き出しを含む症状を経験する。CFは、タンパク質の嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子（CFTR）の遺伝子の両コピーにおける突然変異によって引き起こされる、常染色体劣性遺伝疾患である。CFTRは汗、消化液、および粘液の産生に関与する。
【０１４４】
本出願の化合物は、線維症プロセスの制御に関与する因子（例えば、コラーゲン、TGF-β1）を調節する（例えば、その活性を阻害し、その発現を減少させ、かつ/またはその分解を増大させる）。例えば、本出願の化合物は、コラーゲン合成を減少させることができる。別の例では、本出願の化合物は、線維形成サイトカイン（例えば、TGF-β1）の産生を減少させることができる。別の例では、本出願の化合物は、細胞外マトリックスタンパク質の蓄積を減少させることができる。さらに別の例では、本出願の化合物は、線維芽細胞の増殖を阻害することができる。
【０１４５】
別の例では、本出願の化合物は、αvインテグリンによって媒介されるプロセスを阻害しうる。αvβ6および/またはαvβ8の阻害および遮断は、TGF-β1およびTFG-β3の欠失の発生効果のすべてに類似する表現型をもたらし、これらのインテグリンは、線維症の発生においてこれらのTGF-βイソ型のほとんどまたはすべての重要な役割に必要であることが示唆される。インテグリンαvβ6および/またはαvβ8のアンタゴニストは、したがって、線維化（fribrotic）活動を処置および予防するために有用である。例えば、αvβ6インテグリンによるTGF-β活性化は、肺、胆道、および腎臓における線維症のモデルにおいて重要な役割を果たすことが明らかにされている（Henderson et al., Nat Med 19, 617 (2013)）。αvβ6インテグリンはさらに、膜性糸球体腎炎、真性糖尿病、IgA腎症、グッドパスチャー症候群、およびアルポート症候群腎上皮におけるヒト腎臓上皮において過剰発現されることも明らかにされている（Am. Journal of Pathology, 2007）。1つの局面において、本出願の化合物は、αvβ6および/またはαvβ8を阻害することにより線維症を処置または予防する。
【０１４６】
したがって、1つの局面において、本出願は、それを必要としている対象に、本出願の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物の治療的有効量、あるいは本出願の薬学的組成物の治療的有効量を投与する段階を含む、線維症を処置または予防する方法を提供する。1つの局面において、本出願は、線維症を処置することを提供する。1つの局面において、本出願は、線維症を予防することを提供する。
【０１４７】
別の局面において、本出願は、対象における線維症の処置または予防のための医薬の製造における、本出願の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物の使用も提供する。本出願は、対象における線維症を処置または予防する際の、本出願の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物の使用も提供する。
【０１４８】
1つの局面において、線維症は、肝臓、腎臓、腸、肺、または心臓の線維症である。さらなる局面において、線維症は、（1）腎疾患（例えば、尿細管間質性腎炎）、（2）呼吸器疾患（例えば、間質性肺炎（肺線維症））、（3）胃腸疾患（例えば、肝硬変、慢性膵炎およびスキルス胃がん）、（4）心血管疾患（心筋線維症）、（5）骨および関節疾患（例えば、骨髄線維症および関節リウマチ）、（6）皮膚疾患（例えば、術後瘢痕、熱傷瘢痕、ケロイド、肥厚性瘢痕および強皮症）、（7）産科疾患（例えば、子宮筋腫）、（8）泌尿器疾患（前立腺肥大）、（9）他の疾患（例えば、アルツハイマー病、硬化性腹膜炎、I型糖尿病および術後癒着）などの、様々な疾患または障害に関与する。
【０１４９】
本出願の化合物を使用する投与レジメンは、患者のタイプ、種、年齢、体重、性別、および医学的状態；処置する状態の重症度；ならびに用いる特定の化合物またはその塩を含む、様々な因子に応じて選択する。通常の技術を有する医師、獣医師または臨床医は、状態を予防するか、対抗するか、またはその進行を停止するのに必要な、薬物の有効量を容易に決定し、処方することができる。
【０１５０】
本出願の方法において、本明細書に詳細に記載する化合物は、活性成分を形成することができ、典型的には、意図された局所投与に関して適切に選択され、通常の薬学的実施と一貫性がある、適切な薬学的希釈剤、賦形剤、または担体（本明細書において総称して「担体」と呼ぶ）との混合物で投与する。
【０１５１】
本出願の目的のために、（特に明記されていないかぎり）以下の定義を用いる。
【０１５２】
「本出願の化合物（a compound of the application）」、「本出願の化合物（compounds of the application）」、「本出願の化合物（a compound of the present application）」、または「本出願の化合物（compounds of the present application）」とは、本明細書に開示の化合物を意味し、例えば、本出願の化合物は、式Iを含む本明細書に記載の式のいずれかの化合物ならびに/または本明細書に明白に開示する化合物を含む。本出願の文脈においてこの用語を用いる場合はいつでも、そのようなものがその状況下で可能および/または適切であることを条件として、遊離塩基および対応するその薬学的に許容される塩または溶媒和物への言及がなされていることが理解されるべきである。
【０１５３】
本明細書において形容詞として用いられる場合、「薬学的」または「薬学的に許容される」とは、レシピエントに対して実質的に非毒性でありかつ実質的に無害であることを意味する。
【０１５４】
「薬学的組成物」とは、担体、希釈剤、溶媒、賦形剤、および塩が、製剤の活性成分（例えば、本出願の化合物）と適合性でなければならないことをさらに意味する。当業者であれば、「薬学的製剤」および「薬学的組成物」なる用語は一般には交換可能であり、これらは本出願の目的のためにそのように用いられる。
【０１５５】
「液剤」とは、溶媒中または互いに混和性の溶媒の混合物中に溶解した1つまたは複数の化学物質を含む、透明で均質な液体剤形を意味する。液剤中の治療用物質の物質の分子は均一に分散しているため、剤形としての液剤の使用は一般には投与後に確実に均一の用量を提供し、液剤を希釈またはそれ以外に混合した場合に良好な精度を提供する。本明細書において開示する「液剤」は、現行の最新技術に基づく任意の変種または当業者によって達成される変種を企図する。
【０１５６】
「懸濁剤」とは、液体ビヒクル中に分散した固体粒子を含む、液体剤形を意味する。本明細書において開示する「懸濁剤」は、現行の最新技術に基づく任意の変種または当業者によって達成される変種を企図する。
【０１５７】
「賦形剤」は、治療的または生物学的に活性な化合物ではない任意の他の化合物を含むように本明細書において用いられ、本出願の化合物の1つまたは複数に含まれるかまたは組み合わされてもよい。したがって、賦形剤は、薬学的または生物学的に許容されるかまたは妥当であるべきである（例えば、賦形剤は一般には対象に対して非毒性であるべきである）。「賦形剤」は単一のそのような化合物を含み、同様に複数の賦形剤を含むことも意図される。本開示の目的のために、「賦形剤」および「担体」なる用語は、本出願の記載の全体を通して交換可能に用いられる。
【０１５８】
「治療的有効量」とは、研究者または臨床医によって探究されている、組織、系、動物、またはヒトの生物学的または医学的反応を誘発する、薬物または薬学的作用物質の量を意味する。
【０１５９】
「処置する」、「処置すること」、または「処置」とは、現在疾患または状態を有している対象における疾患または状態の症状、マーカー、および/または任意の負の効果を、任意の評価できる程度に減少させることを意味する。いくつかの態様において、処置は、疾患または状態を発生するリスクを減少させるために、疾患または状態の早期徴候しか示していない対象に投与してもよい。いくつかの態様において、「処置する」、「処置すること」、または「処置」とは、疾患または状態の1つまたは複数の症状の改善を意味する。例えば、疾患または状態の1つまたは複数の症状の改善には、疾患または状態の1つまたは複数の症状の重症度、頻度、および/または長さの低減が含まれる。
【０１６０】
「予防する」、「予防」、または「予防すること」とは、疾患または状態の1つまたは複数の症状または特徴の発現を部分的または完全に予防する、または遅延させるための任意の方法を意味する。予防は疾患または状態のいかなる徴候も示していない対象に投与してもよい。
【０１６１】
「対象」とは、ヒトまたは動物（動物の場合、より典型的には哺乳動物）を意味する。1つの局面において、対象はヒトである。いくつかの態様において、本出願における対象は、本明細書に記載の疾患の処置および/または予防を必要とする。
【０１６２】
「症状」なる用語は、疾患、病気、傷害、または体内で何かが健全でないことの指標と定義される。症状は、症状を経験している個体によって感じられるかまたは認められるが、他者には容易に認められない場合がある。他者は非医療専門家と定義される。
【０１６３】
「αvインテグリンアンタゴニスト」とは、αvβ3、αvβ5、αvβ6、もしくはαvβ8の1つもしくは複数に結合してそれらの機能を阻害もしくは妨害する化合物、αvβ3およびαvβ5の両方に結合してそれらの機能を阻害もしくは妨害する化合物（すなわち、二重αvβ3/αvβ5アンタゴニスト）、またはαvβ6およびαvβ8の両方に結合してそれらの機能を阻害もしくは妨害する化合物（すなわち、二重αvβ6/αvβ8アンタゴニスト）を意味する。化合物は受容体にアンタゴニストとして結合し、ビトロネクチンなどの天然アゴニストの結合を阻止または妨害するが、それら自体の生物学的反応は誘発しない。
【０１６４】
「アルキル」とは、指定された炭素原子数（例えば、C1〜C4アルキル）またはこの範囲内の任意の数（メチル、エチル、プロピル、i-プロピル、ブチル、i-ブチル、t-ブチルなど）の直鎖アルキルまたは分枝アルキルを意味する。
【０１６５】
「アルコキシ」とは、指定された炭素原子数（例えば、C1〜C6アルコキシ）またはこの範囲内の任意の数（メトキシ、エトキシ、プロポキシ、i-プロポキシ、ブトキシ、i-ブトキシ、t-ブトキシなど）の直鎖アルコキシドまたは分枝アルコキシドを意味する。
【０１６６】
「炭素環」とは、シクロプロピルおよびシクロブチルなどの、指定された炭素数（すなわち、C3またはC4）の飽和シクロアルキルを意味する。
【０１６７】
「複素環」とは、NおよびOより選択される1つの追加のヘテロ原子をさらに含む、指定された炭素数（すなわち、C3またはC4）の飽和複素環を意味する。
【０１６８】
「約」なる用語は、指定された値よりも15％、10％、8％、5％、3％、2％、1％、または0.5％多くてもよいかまたは少なくてもよい値の範囲を意味する。例えば、「約10％」は、8.5％〜11.5％でありうる。1つの態様において、「約」なる用語は、指定された値よりも5％多いかまたは少ない値の範囲を意味する。別の態様において、「約」なる用語は、指定された値よりも2％多いかまたは少ない値の範囲を意味する。別の態様において、「約」なる用語は、指定された値よりも1％多い、または少ない値の範囲を意味する。
【実施例】
【０１６９】
実施例1  細胞接着アッセイ法における本出願の化合物の試験
3つの一次細胞培養物であるヒト皮膚微小血管内皮（HMVEC）、ラット肺微小血管内皮（RLMVEC）、およびウサギ大動脈内皮（RAEC）細胞のビトロネクチンをコーティングしたプレートへの接着を阻止する、化合物の能力を以下の手法を用いて判定した。この試験は、細胞表面上のαvインテグリンとリガンド、ビトロネクチンとの相互作用の阻害を示す。
【０１７０】
接着プレート調製。96穴プレートをPBS、pH7.4中のビトロネクチンで、溶液（10μg/ml）50μLを室温で1.5時間または4℃で終夜インキュベートすることによりコーティングした。次いで、プレートをPBS中の1％BSAでブロックし（室温で30分間）、PBSで洗浄した。
【０１７１】
細胞培養およびローディング。HMVEC細胞（継代（p）9〜14）（Lonza, Allendale, NJから）RLMVEC細胞（p4-14）（Vec Technology, Rensselaer, NYから）およびRAEC細胞（p4-14）（CellBiologics, Chicago, ILから）を化合物試験に用いた。細胞をT175組織培養フラスコ中で増殖させ、Accutase（Life Technologies）により3分間緩やかに処理して剥離した。洗浄後、RPMI-1640（Life Technologies）懸濁液中の細胞をcalcein-AM（5μM）（Life Technologies）により37℃で30分間ローディングし、10％FBSを含むRPMI油中水型フェノールレッド培地中に再懸濁した。
【０１７２】
接着アッセイ法。細胞懸濁液をウェルに1.0×105細胞/ウェル（RLMVEC）および5.0×104（HMVECおよびRAEC）の密度で分取した。試験化合物を細胞と同時に添加した。プレートを37℃で1.5時間インキュベートした。このインキュベーション中に接着しなかった細胞を、緩やかに洗浄することにより除去した。洗浄を、上清の吸引およびあらかじめ加温した新鮮DPBS（Life Technologies）100μLの添加を2サイクル行って実施した。残りの細胞の蛍光を、マルチモードプレート読み取り器（Victor 2V、PerkinElmer）を485/535nmの励起/発光波長で用いて測定する。化合物を1μMの最大濃度で始めて、半対数希釈スケジュールで試験した。IC50値を、Prism 5（GraphPad、CA）により、曲線の底を空のウェルの蛍光のブランク値に固定して算出した。
【０１７３】
実施例2  ニワトリ漿尿膜（CAM）アッセイ法を用いた抗血管新生活性
CAM表面に、PBSに溶解した様々な濃度の化合物および50ng VEGFを含浸させたゼラチンスポンジを移植した。未処置CAMにはVEGFおよびPBSのみを与えた。誤差バーはSEM、N=5を示し、処置群のP値は未処置群との比較により算出した（*p<0.05、**p<0.01、***p<0.001）。
【０１７４】
試験物質調製：試験試料および標準をPBSに溶解し、シリンジフィルター（0.22μm）を通過させて滅菌した。hVEGF（SIGMA）50ng/μlを無菌PBS中で調製した。
【０１７５】
移植：ゼラチンスポンジ（Abogel）を約2mm3片に切断し、所望の試験物質またはPBSおよびVEGFをロードした。移植片をCAM上に設置した。
【０１７６】
卵：受精鶏卵を孵化場から調達し、洗浄し、アルコールを用いて除洗した。シリンジを用いてアルブミン1mlを取り出し、8日間インキュベートした。移植片を発生中のCAM上に設置し、第12日までさらにインキュベートした。第12日に、CAMをPBS中4％ホルムアルデヒドで固定し、精査し、画像化した。
【０１７７】
画像化：固定したCAMを、デジタルカメラ（CANON）を取り付けた立体顕微鏡により、一定の照明および倍率で画像化した。
【０１７８】
画像解析：画像サイズを一定に維持しながら、MS PowerPointで画像を解析した。移植片の周りに円を描き、サイズを一定に維持した。各試験群について、円を横切る血管を計数した。
【０１７９】
統計学的解析：データをMSExcel 2007で解析した。
【０１８０】
実施例3  ダッチベルテッド種のウサギにおける分布
ダッチベルテッド種のウサギへの投与後に、本出願の化合物のの血漿濃度を測定した。試験化合物を1.0〜2.5mg/mLの濃度で投与した。血漿試料を所定の時点で採取した。また体重も記録した。化合物の血漿試料濃度をLC-MS/MSにより測定した。
【０１８１】
動物投薬：化合物の曝露をダッチベルテッド種のウサギにおいて評価した。試験は盲検ではなかった。各化合物をn=3/時点として合計9羽のウサギに投薬した。ウサギはケージに1羽ずつ収容した。動物は絶食させず、飼料および水は自由に供給した。
【０１８２】
動物を投薬のために13IA5 IACUCプロトコールに従って麻酔した。投薬日のゼロ時点で、各ウサギに試験製剤のボーラス用量を与えた。血漿試料を所定の時点で採取した。30分および1時間の時点についての動物は試験の全期間中麻酔した。8時間の時点についての動物は、投薬後に回復させ、その後、試料採取のために安楽死させた。
【０１８３】
各時点において、約0.5mLの血液を採取し、冷却したクエン酸含有Na-ヘパリンチューブ中に入れた。血液試料を3,000gの速度で5分間遠心分離して、できるだけ速やかに血漿を得た。試料を分析まで-80℃で凍結保存した。
【０１８４】
血漿試料の分析：ウサギ血漿試料中の本出願の化合物の判定のために、LC-MS/MS法を開発した。試験前標準曲線を解析して、方法の特異性、範囲、および定量の下限を求めた。
【０１８５】
実施例4  線維症の診断
線維症は、ウイルスまたは細菌感染、炎症、自己免疫疾患、外傷、薬物毒性などによる組織損傷に反応しての病態生理学的プロセスである。このプロセス中、過剰量のコラーゲンが発現され、患部組織の細胞外間隙において線維性材料が生成する。したがって、線維症は、一般には、線維症が疑われる臓器の生検における線維組織の異なる形態に基づいて認識することができる。線維症または発生中の線維症の存在を検出するための他の手段には、コンピューターX線体軸断層撮影法（CATまたはCT）、超音波、磁気共鳴撮像法（MRI）、および線維症を示すことが公知である1つまたは複数の血清マーカー（例えば、様々な種類のコラーゲン）のレベルをモニタリングすることが含まれる。
【０１８６】
線維症を診断する正確なやり方は、線維化プロセスが起こる臓器によっても変動する。例えば、生検は一般にはほとんどの臓器の線維症を診断するのに有効であるが、光ファイバー装置を伴う内視鏡検査（例えば、S状結腸鏡または結腸鏡）は、腸などのある特定の臓器の線維症を検出するための、外傷性が低い代替法であり得る。
【０１８７】
線維症を検出するための生検
所与の臓器または組織から生検材料を得るための標準手法は確立されている。例えば、検体は診査手術中に得ることもできるが、より多くは生検針を皮膚を通して臓器または組織中に挿入することにより得る。この手法を実施する前に、対象に局所麻酔を行う。超音波またはCT走査を用いて、献体を採取する異常な領域の位置を特定してもよい。
【０１８８】
臓器または組織の生検材料を得ると、試料は、検査されて、試料中の線維症の存在およびレベルを示すスコアが与えられる。最もよく用いられるスコア付けシステムには、METAVIRまたは改変HAI（ISHAK）スコア付けシステムが含まれる。肝臓試料を分析するために、Knodellスコア付けシステムを用いることもできる。スコア付けに用いられる基準は、十分に確立されており、当業者には公知である。例えば、METAVIRシステムは5つの等級を提供する：FOは線維症がないことを示すこと；F1は隔壁を伴わない門脈線維症を示すこと；F2は門脈線維症およびいくらかの隔壁を示すこと；F3は硬変を伴わない隔壁線維症を示すこと；およびF5は硬変の存在を示すこと。
【０１８９】
生検は線維症の診断のために有用であるのみならず、医師が、当技術分野において公知の方法を用いて線維症の進行をモニタリングすることにより、本出願の線維症処置法/予防法の有効性を評価する助けにもなりうる。例えば、Poynard et al., Lancet 349:825, 1997参照。
【０１９０】
線維症マーカー
レベルが線維症の存在および/または重症度を示しうる多くの公知の血清マーカーが存在する。確立された方法による、血液検査測定マーカー、例えば、ヒアルロン酸、ラミニン、I、II、およびIV型コラーゲンからのウンデュリン（undulin）（IV型コラーゲン）プロペプチド、リジルオキシダーゼ、プロリルヒドロキシラーゼ、リジルヒドロキシラーゼ、PIIINP、PICP、コラーゲンVI、テネイシン、コラーゲンXIV、ラミニンP1、TIMP-1、MMP-2、α2マクログロブリン、ハプトグロビン、ガンマグルタミルトランスペプチダーゼ、γグロブリン、総ビリルビン、アポリポタンパク質Alなどは、したがって、線維症の診断および線維症進行のモニタリングの両方にとって有用であり得る。核酸マーカーなどの、さらなるマーカーを、線維症を検出および/またはモニタリングするために用いることができる。例えば、Wnt-4は、最近、研究室の実験において、そのmRNA発現が腎臓の線維化組織で有意に増大する腎線維症において重要な役割を果たす遺伝子として示されている（例えば、Surendran et al., Pediatr. 140:119-24, 2002参照）。この型のマーカーの遺伝子発現の定量的検出は、線維症の診断およびモニタリングにおいて有用であり得る。
【０１９１】
実施例5  線維症の動物モデル−肺線維症
肺線維症を、150gの雄Sprague-Dawleyラット（Charles River Laboratories）で100μlの10U/mlブレオマイシンの気管内注入により、または20gの雄C57BL/6マウス（The Jackson Laboratory）で60μlのブレオマイシン（3U/kg）の気管内注入により誘導する。ラットに、ブレオマイシン処置の翌日と、第3、5、7、および9日に再度、式Iの化合物の溶液もしくは懸濁液、または同量のリン酸ナトリウム緩衝液をi.p.注射する。マウスは、ブレオマイシン注射の翌日に開始して、式Iの化合物の溶液もしくは懸濁液、または同量のリン酸ナトリウム緩衝液のいずれかのi.p.注射により、毎日処置する。
【０１９２】
末梢血酸素含有量の測定
インビボで末梢血酸素含有量を評価するために、ラットを酸素飽和ヘモグロビンのパーセンテージについてモニターする（パルスオキシメトリー）。ラットを4L/分の酸素中、4％イソフルランで短時間鎮静させる。次いで、ラットを室内気中に取り出し、左後足に末梢パルスオキシメトリーセンサーを取り付ける。動物が意識を回復すれば、パルスオキシメトリー読み取りを行う。
【０１９３】
コラーゲンの定量
ラットおよびマウスを、ブレオマイシン注入後、第14または21日に安楽死させ、右心室中へのPBSの注入により肺を灌流して血液を除去する。ラットについては、全右肺を摘出し、秤量し、小片に刻み、全肺コラーゲン含有量をSircolコラーゲンアッセイ法（Biocolor）により、製造者の説明に従って評価する。マウスについては、全肺のホルマリン固定パラフィン包埋切片でコラーゲンを評価する。簡単に言うと、15μmの矢状（上から下まで縦方向の）切片を切断し、肺全体から10の切片を用いてコラーゲン含有量を定量する。切片を脱パラフィンし、次いで0.1％ファストグリーンFCFおよび0.1％シリウスレッドF3BA（Polysciences）を含む蒸留水中のピクリン酸飽和溶液と共に、室温で30分間インキュベートする。切片を蒸留水で繰り返し洗浄し、色素を0.1N NaOHおよび無水メタノールの混合物（1：1、v/v）で溶出する。分光計読み取りを540および605nm（それぞれ、シリウスレッドおよびファストグリーンの最大吸光度に対応）で行う。吸光度を用いて試料中のコラーゲンおよび非コラーゲンタンパク質の量を算出する。コラーゲン含有量を総タンパク質のパーセンテージで表す。
【０１９４】
実施例6  線維症の動物モデル−肝線維症
標準化肝線維症モデルにおいて、マウスを1.0mL/kg CCl4で1週間に3回、連続11週間処置し、血清マーカー（AST、ALT、ビリルビン、およびアルブミン）のレベル、線維症マーカー遺伝子の発現（定量的逆転写ポリメラーゼ連鎖反応［RT-PCR］を用いて）、組織病理学（ヘマトキシリンおよびエオシン染色を用いて）、および結合組織形成（マッシブトリクローム染色を用いて）を分析する。結果は、血清マーカーおよび線維症マーカー遺伝子のレベルは標準化肝線維症モデルで有意に増大していることを示す。加えて、肝線維症の標準化マウスモデルの肝組織においてフィブロネクチンおよびプロコラーゲン発現の急増、ならびに硬変の発生（線維症段階3〜5/6）が観察される。式Iの化合物を、肝線維症の予防または処置について、溶液または懸濁液を経口経管栄養法でi.p.投与することにより、このモデルで試験する。
【０１９５】
実施例7  αVインテグリン結合アッセイ法における本出願の化合物の試験
すべてのαVインテグリンは、RGDモチーフを有するタンパク質に結合することが公知である。この試験では2つのRGDリガンドを用いた：αVβ3およびαVβ5のリガンドとしてのビトロネクチン（VN）（Wayner et al., J. Cell Biol., 113 (4), 919-929, 1991）、ならびにαVβ6およびαVβ8のリガンドとしてのLAP TGF-β1（LAP1）（Rognoni et al., Nat. Med., 20(4): 350-359, 2014）。CWHM12をαVβ6およびαVβ8の陽性対照として用い（Henderson et al., Nat. Med. 19(12), 10.1038/nm.3282 2013）、シレンジタイドをαVβ3およびαVβ5の陽性対照として用いた（Kumar et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 283, 843-853, 1997）。
【０１９６】
インテグリン結合ダイナビーズを、それぞれのリガンドと相互作用させた。インテグリン-リガンド複合体を、フルオレセインイソチオシアネート（FITC）と結合した一次/二次抗体のいずれかで検出した。αVβ3およびαVβ5に対し、ビトロネクチンをリガンドとして用い、FITCと結合した一次抗体（抗VN-FITC Ab）を用いて相互作用を検出した。αVβ6およびαVβ8に対し、LAP-TGF β1をリガンドとして用い、LAP1に対する一次抗体（抗LAP1 Ab）およびFITCと結合した二次抗体を用いてαVβ6/αVβ8-LAP-TGF β1複合体を検出した。蛍光をフローサイトメトリー分析により測定した。
【０１９７】
ビーズの活性化。5mgのダイナビーズを低タンパク質結合微量遠心管（Eppendorf）（容量1.5mL）中で秤量した。ビーズを1mLのリン酸ナトリウム緩衝液に再懸濁し、高速で30秒間ボルテックスにかけた。次いで遠心管をチューブローラーに設置し、10分間傾斜回転させた。傾斜回転後、遠心管をマグナスピン（Magna Spin）に設置し、ビーズを沈降させた。上清を廃棄し、ビーズを3回洗浄した。次いでビーズを100μLのリン酸ナトリウム緩衝液に再懸濁し、20μLの洗浄ビーズを5つの低タンパク質結合エッペンドルフ管に分配した（各管にビーズ1mg）。ビーズをインテグリンの結合のために用いた。
【０１９８】
インテグリンとのダイナビーズの結合。20μL（1mg）のビーズを20μLのインテグリン（20μg）および20μLの3M硫酸アンモニウム溶液と混合して（硫酸アンモニウムの最終濃度は1Mであった）、ビーズ：タンパク質比 5mg：100μgとした。溶液を緩やかに混合し、チューブローラーに設置し、37℃で16時間インキュベートした。
【０１９９】
結合の定量。チューブを取り出し、急速スピンにかけた。チューブをマグナスピンに設置し、上清（60μL）を回収した（上清）。ビーズを、60μLのPBSに再懸濁し、10秒間ボルテックスにかけた。ビーズをマグナスピン中で沈降させ、上清を洗液1（W1）として回収して、緩く結合したタンパク質を除去した。ビーズをそれぞれ30μLのPBSでさらに3回洗浄し、上清をW2、W3、およびW4として回収した。ビーズを最後に25μLのPBSに再懸濁し、使用するまで4℃で保存した。ビーズに結合したタンパク質の量を、上清中、W1中、W2中、W3中、およびW4中に残ったタンパク質の合計をマイクロBCA法により測定して定量した。
【０２００】
マイクロBCA法。BSAを標準として用いた。BSAの濃度範囲はPBS中1μg/mL〜20μg/mLであった。96穴プレート中で10μLの上清を40μLのPBSと混合し、次いで100μLのマイクロBCA試薬と混合した。プレートを37℃で3時間振盪した。インキュベーション後、562nmのODを測定して、上清中のタンパク質の量を求めた。W1中、W2中、W3中、およびW4中のタンパク質の量を、同じ手法で求めた。
【０２０１】
上清中、W1中、W2中、W3中、およびW4中のタンパク質の量を加算し、ビーズ結合に用いたタンパク質の初期量から減じ、これはビーズに結合したタンパク質の量を提供し、タンパク質のモル濃度を算出した。
【０２０２】
αVβ6/αVβ8-LAP-TGF β1相互作用：αVβ6/αVβ8結合ビーズをリガンドLAP TGF-β1（LAP1）により、室温で3時間処理した。次いで、複合体（インテグリン＋リガンド）を一次Ab（抗LAP1 Ab）により、4℃で終夜処理した。全複合体（インテグリン＋リガンド＋一次Ab）をFITCと結合した二次Abで処理し、2時間インキュベートした。複合体をプレート読み取り器またはフローサイトメーターのいずれかで分析した。
【０２０３】
10μLのαVβ6/αVβ8結合ビーズを実験用に採用した。インテグリンの濃度は10nMであった。10μLのLAP1を採用した（αVβ6に対して10nM、αVβ8に対して20nM）。インテグリン結合ビーズとLAP1との間の反応を完全反応と考え、LAP1も本開示の化合物もなしの反応をブランク反応と考えた。試料を低タンパク質結合チューブ中、室温で3時間インキュベートした。チューブを短時間スピンさせ、マグナスピンに設置した。上清を除去した。ビーズをアッセイ緩衝液で2回洗浄して、過剰のLAP1を除去し、次いで1：200の抗LAP1 Ab（一次Ab）を含むアッセイ緩衝液150μLに再懸濁した。チューブをチューブローラーに設置し、4℃で終夜インキュベートした。短時間のスピン後、チューブをマグナスピンに設置し、上清を除去した。ビーズをアッセイ緩衝液で2回洗浄して、過剰の一次Abを除去し、次いで1：500のFITCと結合した二次Abを含むアッセイ緩衝液150μLに再懸濁した。チューブをチューブローラー中、室温で2時間インキュベートした。短時間のスピン後、チューブをマグナスピンに設置し、上清を除去した。ビーズをアッセイ緩衝液で2回と、続いてPBSで洗浄した。次いで、ビーズを300μLのPBSに再懸濁し、フローサイトメーター（BD FACSCalibur、Software-BDcell Quest Pro Version 6）で分析した。
【０２０４】
αVβ3/αVβ5-LAP-TGF β1相互作用：αVβ3/αVβ5結合ビーズをリガンドにより、室温で3時間処理した。次いで、複合体（インテグリン＋リガンド）をFITCと結合した抗ビトロネクチンAbにより、4℃で終夜処理した。複合体をプレート読み取り器またはフローサイトメーターのいずれかで分析した。
【０２０５】
10μLのαVβ3/αVβ5結合ビーズを実験用に採用した。インテグリンの濃度は10nMであった。10μLのビトロネクチンを採用した。濃度は10nMであった。インテグリン結合ビーズとビトロネクチンとの間の反応を完全反応と考え、ビトロネクチンも本開示の化合物もなしの反応をブランク反応と考えた。試料を低タンパク質結合チューブ中、室温で3時間インキュベートした。チューブを短時間スピンさせ、マグナスピンに設置した。次いで、上清を除去した。ビーズをアッセイ緩衝液で2回洗浄して、過剰のビトロネクチンを除去し、次いで1：500のFITCと結合した抗ビトロネクチンAbを含むアッセイ緩衝液150μLに再懸濁した。チューブをチューブローラーに設置し、4℃で終夜インキュベートした。短時間のスピン後、チューブをマグナスピンに設置し、上清を廃棄した。ビーズをアッセイ緩衝液で2回と、続いてPBSで洗浄した。次いで、ビーズを300μLのPBSに再懸濁し、フローサイトメーター（BD FACSCalibur、Software-BD Cell Quest Pro Version 6）によって分析した。
【０２０６】
定量：試料をBD FACSCaliburシステムを用いて獲得し、BD Cell quest pro Version 6で分析した。下記についての中央値をソフトウェアから得た：化合物ありまたはなしの完全反応（インテグリン＋リガンド）、対照：リガンドなし（LAP1/ビトロネクチン）、およびビヒクル対照：DMSOを含む完全反応。ブランク＝試験中央値−対照中央値。阻害パーセンテージ＝100−[(ブランク試験中央値/ブランクビヒクル中央値)*100]。結合のパーセンテージを、完全反応に関して算出した。値を100から減じて、阻害のパーセンテージを得た。プロットした値はすべて三つ組の平均であった。SDを各実験について求めた。IC50をGraph Pad Prismにより求めた。
【０２０７】
参照阻害物質によるインテグリン-リガンド相互作用の阻害：最適化したプロトコールを、シレンジタイド（αVβ3/αVβ5-VN相互作用）およびCWHM12（αVβ6/αVβ8-LAP1相互作用）などの、参照化合物を用いることによって検証した。完全反応（インテグリン-リガンド相互作用）を前述のとおりに最適化した。インテグリン結合ビーズを実験のために採取した。
【０２０８】
10nM/20nMのリガンド2μLを採取し、8μLの化合物（すなわち、シレンジタイドまたはCWHM12、それぞれ10mM保存溶液から希釈）と混合した。DMSO（0.08％）を含むかまたは含まない、化合物非存在下でのインテグリンとリガンドとの間の反応を完全反応と考えた。DMSO（0.08％）を含み化合物およびリガンド非存在下での反応をブランク反応と考えた。
【０２０９】
試料を低タンパク質結合チューブ中、室温で3時間インキュベートした。チューブをマグナスピンに設置し、上清を廃棄した。ビーズをアッセイ緩衝液で2回洗浄して、過剰のリガンドを除去し、次いで一次抗体（1：500の抗VN-FITCまたは1：200の抗LAP1 Ab）を含むアッセイ緩衝液150μLに再懸濁した。チューブをチューブローラーに設置し、4℃で終夜インキュベートした。短時間のスピン後、チューブをマグナスピンに設置し、上清を廃棄した。αVβ3/αVβ5-VN相互作用の場合、ビーズをアッセイ緩衝液で2回と、最後にPBSで洗浄した。次いで、ビーズを300μLのPBSに再懸濁し、フローサイトメーターで分析した。αVβ6/αVβ8-LAP1相互作用の場合、ビーズをアッセイ緩衝液で2回洗浄し、二次抗体（1：500）150μLにより室温で2時間処理し、アッセイ緩衝液で2回とPBSで洗浄し、最後に300μLのPBSに再懸濁し、フローサイトメーターで分析した。
【０２１０】
表2は本出願の化合物のインテグリン阻害活性を示す。
【０２１１】
（表２）インテグリン阻害アッセイ法結果
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【０２１２】
等価物
当業者であれば、日常の実験だけを用いて、本明細書に記載の具体的態様および方法の多くの等価物を理解または確認することができるであろう。そのような等価物は本出願の範囲に含まれることが意図される。
【０２１３】
本明細書において引用するすべての特許、特許出願、および参照文献は、参照により本明細書に明白に組み入れられる。
【国際調査報告】
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