(57)【要約】  本発明は、異常な骨ミネラル密度に関連する障害、特に骨粗鬆症の療法、予防および診断に関し；ここで、患者試料中の選択したマイクロＲＮＡのレベルを検出し、そして健康な個体のレベルに比較した、前記レベルの増加または減少が、障害の指標である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験体において骨粗鬆症を診断するか、または骨粗鬆症性骨折のリスクを決定するか、または治療を監視するｉｎ  ｖｉｔｒｏ法であって：
ａ）前記被験体由来の試料を提供し；
ｂ）ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８８−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０８、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９９ｂ−５ｐ  ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３６９−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７８ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４９５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５０２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５７６−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６４２ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｄまたはそのアイソフォームまたは変異体からなるｍｉＲＮＡのいずれかより選択される、２またはそれより多いｍｉＲＮＡのレベルを測定し、そして
ｃ）参照レベルに前記ｍｉＲＮＡのレベルを比較する、
ここで、参照レベルに比較した際の前記レベルの相違の度合いが、骨粗鬆症または骨折リスクの指標である
工程を含む、前記方法。
【請求項２】
ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８８−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１４−３ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐのすべてのレベルを測定する、請求項１記載の方法。
【請求項３】
ｈｓａ−ｍｉＲ−１８８−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−３６９−３ｐからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡ、ならびにｈｓａ−ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０８、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９９ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ−４ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７８ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４９５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５０２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５７６−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６４２ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、およびｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｄからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡを測定する、請求項１記載の方法。
【請求項４】
ｈｓａ−ｍｉＲ−１８８−３ｐを、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０８、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９９ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ−４ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７８ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４９５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５０２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５７６−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６４２ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２およびｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｄからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する、請求項１または３記載の方法。
【請求項５】
ｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐを、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８８−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０８、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９９ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ−４ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７８ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４９５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５０２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５７６−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６４２ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２およびｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｄからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する、請求項１または３記載の方法。
【請求項６】
ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ａ−３ｐを、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８８−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０８、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９９ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ−４ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７８ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４９５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５０２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５７６−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６４２ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２およびｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｄからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する、請求項１または３記載の方法。
【請求項７】
ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐを、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８８−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０８、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９９ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ−４ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７８ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４９５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５０２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５７６−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６４２ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２およびｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｄからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する、請求項１または３記載の方法。
【請求項８】
ｈｓａ−ｍｉＲ−３６９−３ｐを、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８８−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０８、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９９ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ−４ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７８ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４９５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５０２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５７６−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６４２ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２およびｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｄからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する、請求項１または３記載の方法。
【請求項９】
ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａを、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８８−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０８、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ−４ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７８ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４９５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５０２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５７６−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６４２ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２およびｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｄからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する、請求項１または３記載の方法。
【請求項１０】
被験体が、閉経後の女性、あるいは骨粗鬆症または骨減少症患者であり、骨折を患っているかまたは骨折を発展させるリスクがある、請求項１〜９のいずれか一項記載の方法。
【請求項１１】
少なくとも３、好ましくは少なくとも４、好ましくは少なくとも５、特に最大３０のｍｉＲＮＡのレベルを測定する、請求項１〜１０のいずれか一項記載の方法。
【請求項１２】
被験体において骨粗鬆症を診断するか、または骨粗鬆症性骨折のリスクを決定するか、または治療を監視するｉｎ  ｖｉｔｒｏ法であって：
ａ）前記被験体由来の試料を提供し；
ｂ）ｈｓａ−ｍｉＲ−３２−３ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｇ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４３−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６−２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ−１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２３ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４８６−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−７−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９２ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、ｈｓａ−ｍｉＲ−９６−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐ、およびｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐからなるｍｉＲＮＡのいずれかより選択される、２またはそれより多いｍｉＲＮＡのレベルを測定し、そして
ｃ）参照レベルに前記ｍｉＲＮＡのレベルを比較する、
ここで、参照レベルに比較した際の前記レベルの相違の度合いが、骨粗鬆症または骨折リスクの指標である
工程を含む、前記方法。
【請求項１３】
ｈｓａ−ｍｉＲ−３２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２３ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−９６−５ｐからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡ、ならびにｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｇ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４３−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６−２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ−１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４８６−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−７−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９２ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡを測定する、請求項１２記載の方法。
【請求項１４】
ｈｓａ−ｍｉＲ−３２−３ｐを、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｇ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４３−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６−２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ−１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４８６−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−７−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９２ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する、請求項１２または１３記載の方法。
【請求項１５】
ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−３ｐを、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｇ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４３−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６−２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ−１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４８６−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−７−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９２ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する、請求項１２または１３記載の方法。
【請求項１６】
ｈｓａ−ｍｉＲ−３２３ａ−３ｐを、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｇ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４３−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６−２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ−１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４８６−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−７−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９２ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する、請求項１２または１３記載の方法。
【請求項１７】
ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐを、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｇ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４３−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６−２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ−１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４８６−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−７−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９２ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ３８２−３ｐからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する、請求項１２または１３記載の方法。
【請求項１８】
ｈｓａ−ｍｉＲ−９６−５ｐを、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｇ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４３−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６−２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ−１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４８６−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−７−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９２ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する、請求項１２または１３記載の方法。
【請求項１９】
被験体が、２型糖尿病を患うリスクがあるか、または２型糖尿病を患っている患者である、請求項１２〜１８のいずれか一項記載の方法。
【請求項２０】
試料が血液試料である、請求項１２〜１９のいずれか一項記載の方法。
【請求項２１】
少なくとも３、好ましくは少なくとも４、好ましくは少なくとも５、特に最大２６のｍｉＲＮＡのレベルを測定する、請求項１２〜２０のいずれか一項記載の方法。
【請求項２２】
前記ｍｉＲＮＡのレベルを、健康な被験体における対応するｍｉＲＮＡの平均レベルと比較し、ここで、１標準偏差より大きい相違が、将来の骨折のリスクが増加した骨粗鬆症の指標となる、請求項１〜２１のいずれか一項記載の方法。
【請求項２３】
すべてのｍｉＲＮＡのレベルを測定する、請求項１〜２２のいずれか一項記載の方法。
【請求項２４】
１またはそれより多いさらなるｍｉＲＮＡを検出し、ここで前記ｍｉＲＮＡが
ａ）健康な個体に比較した際、骨粗鬆症個体において示差的に制御されており、そして
ｂ）骨形成分化および／または破骨細胞形成（ｏｓｔｅｏｃｌａｓｔｏｇｅｎｉｃ）活性化に関与する
請求項１〜２３記載の方法。
【請求項２５】
請求項１〜２４のいずれか一項記載の方法の、被験体を、特に骨折の予後に関して監視するための使用。
【請求項２６】
請求項１〜２４のいずれか一項記載の方法の、被験体を監視するための、特に抗骨粗鬆症治療に対する被験体の反応を測定するための使用。
【請求項２７】
ｍｉＲＮＡレベルの相違を、定量的またはデジタルＰＣＲ、配列決定、マイクロアレイ、Ｌｕｍｉｎｅｘ核酸アッセイ、または他のハイブリダイゼーションに基づく技術によって決定する、請求項１〜２５のいずれか一項記載の方法。
【請求項２８】
ａ）請求項１および／または１２のｍｉＲＮＡ由来の少なくとも２つの合成ヒトｍｉＲＮＡならびに／あるいは
ｂ）
ｉ．前記ｍｉＲＮＡのレベルを減少させ；そして／または
ｉｉ．前記ｍｉＲＮＡをコードする配列の発現を阻害するかもしくは下方制御するか、または前記ｍｉＲＮＡを分解するかもしくは切断する
請求項１および／または１２のｍｉＲＮＡの少なくとも２つのアンタゴニスト／阻害剤
を含む、骨粗鬆症または骨折を治療するかまたは防止する際に使用するための組成物。
【請求項２９】
請求項１および／または１２の少なくとも１つ、特に少なくとも２つの合成ヒトｍｉＲＮＡ、ならびに／あるいは、前記ｍｉＲＮＡのレベルを減少させ；そして／または前記ｍｉＲＮＡをコードする配列の発現を阻害するかもしくは下方制御するか、または前記ｍｉＲＮＡを分解するかもしくは切断する、請求項１および／または１２のｍｉＲＮＡの少なくとも２つのアンタゴニスト／阻害剤、を含む組成物の、薬剤を調製するための使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、異常な骨ミネラル密度に関連する障害、特に骨粗鬆症の療法、予防および診断に関する。
【背景技術】
【０００２】
骨粗鬆症は、骨脆弱性増加および骨折リスク増加を導く、骨量の全身性減少によって特徴付けられる。骨粗鬆症は、無症状疾患であり、これは、患者が開始時または進行中に明らかな症状を示さないことを意味する。その結果、骨粗鬆症の診断は、しばしば、患者が脆弱性（骨粗鬆症性）骨折を持続するようになった後に行われる。骨粗鬆症性骨折は、大腿骨頸部、臀部、脊椎または前腕で最も頻繁に起こる。骨粗鬆症性骨折は、非常に大きな社会経済的負荷を生じるため、重大な転帰である（Ｈａｒｖｅｙら、２０１０）。しかし、骨粗鬆症性骨折のリスクは、療法的治療によって減少させることも可能である。今日、治療の２つの型が治療の１〜３年の間に、最高７５％、骨折リスクを減少させることが示されてきている：ｉ）ビスホスホネートまたはＲＡＮＫＬに対するモノクローナル抗体を用いた抗吸収治療は、骨吸収を損ない、そしてしたがって骨量を安定させ、そして骨折リスクを減少させる（Ｇｒｏｎｈｏｌｚら、２００８、Ｃｕｍｍｉｎｇｓら、２００９）。ｉｉ）刺激ホルモン、例えば副甲状腺ホルモンまたはスクレロスチンに対するモノクローナル抗体を用いた同化治療は、骨量を増加させ、そして骨折のリスクを減少させることが示されてきている（Ａｕｇｕｓｔｉｎｅら、２０１３、Ｃｏｓｍａｎら、２０１６）。
【０００３】
治療のこれらの方法は、しばしば、Ｉ型閉経後骨粗鬆症、ＩＩ型骨粗鬆症、特発性または男性骨粗鬆症を含む、多様な型の骨粗鬆症において、骨折リスクと対抗するためにしばしば用いられる。さらに、原発性骨癌または骨転移は、骨代謝に影響を及ぼし、そして骨病変を生じるであろう。例は、骨肉腫、および多発性骨髄腫である。
【０００４】
早期診断および骨折リスク評価のための正確なツールは、治療が必要な患者に正しい治療法をターゲティングするために非常に重要である。
骨折リスクならびに治療反応を評価するための現在の方法には、非侵襲性画像化技術、ならびに骨代謝の臨床的パラメータおよび生化学的マーカーの分析が含まれる。最近、マイクロＲＮＡが多様な組織の細胞から血流内に分泌されることが同定されてきており、これらはおそらく、体の異なる部分における病的プロセスを示す。マイクロＲＮＡが、骨形成および骨吸収細胞、特に骨芽細胞および破骨細胞の発生および機能に重要な役割を果たす証拠がある。どちらの細胞タイプも、骨同化および異化の間のホメオスタシスを調節し、そしてしたがって、マイクロＲＮＡは、骨代謝において、中心的な生理学的役割を果たす。しかし、今日まで、骨疾患を引き起こす骨代謝の不均衡が、循環マイクロＲＮＡのレベルに反映されうるかどうかに関してはほとんど知られていない。
【０００５】
骨粗鬆症性骨折は、骨脆弱性の増加によって引き起こされ、これは、骨組織における低い骨量および微小構造変化によって引き起こされうる。こうした骨折は、米国、欧州および日本において、７５００万人以上の人々が罹患している骨粗鬆症の決定的に困難な転帰である（Ｋａｎｉｓら、２０１３）。先進国において、椎骨または非椎骨骨折に苦しむ生涯リスクは３０％〜４０％であり、骨粗鬆症は、冠動脈心疾患のものと類似の発症率を有する。さらに、前腕骨折を例外として、骨粗鬆症性骨折は、死亡率増加と関連する。大部分の骨折は、急性の疼痛を引き起こし、そして患者の入院、運動抑制およびしばしば緩慢な回復を導く。
【０００６】
さらに、骨粗鬆症症状は、全般に脆弱性骨折リスクの上昇に苦しむ、２型糖尿病患者でしばしば観察される。真性糖尿病は、被験体が高血糖を有する代謝疾患群を指す。２型糖尿病はインスリン耐性から生じ、これは、細胞がインスリンを適切に使用することができない状態であり、ときにまた、絶対インスリン不全も伴う。この型は以前、非インスリン依存性真性糖尿病（ＮＩＤＤＭ）または「成人発症糖尿病」と称された。
【０００７】
骨粗鬆症の予防、診断および管理において、骨折リスクの評価および治療反応の監視が最も重要な２つの側面である。したがって、骨ミネラル密度（ＢＭＤ）を測定することによる骨量の分析が、現在、臨床診療およびＷＨＯ  ＦＲＡＸアンケートの一部において、ルーチンに分析される、骨格の唯一の臨床パラメータである（Ｋａｎｉｓら、２０１３）。しかし、骨強度および骨代謝（Ｃｅｆａｌｕ、２００４）、年齢および部位依存性骨密度相違との相関を欠いているため、他の確立された骨折リスクの臨床スコアと組み合わされた（Ｒｕｂｉｎら、２０１３）、Ｔ−スコア（すなわち健康な３０歳のものに対する患者のＢＭＤの比較）の評価は、しばしば、骨折リスクの予測を改善しない。特に、患者が２型糖尿病に罹患している場合、ＢＭＤおよび骨折リスクの間には相関の証拠がなく、これは、骨折リスクの別のマーカーの必要性を示す。
【０００８】
骨形成、骨吸収および療法治療反応率を概算するため、いくつかの生化学的骨代謝マーカー（ＢＴＭ）が同定されてきており（Ｖａｓｉｋａｒａｎら、２０１１）、例えば血清プロコラーゲンＩ型Ｎプロペプチド（ｓ−ＰＩＮＰ）、Ｉ型コラーゲンの血清Ｃ末端テロペプチド（ｓ−ＣＴＸ）がある。これらのマーカーと骨代謝の相関は確立されているが、骨折リスク予測に関するその特異性および感度は、さらに検証される必要がある。したがって、これらの生化学マーカーの臨床診療への取り込みを推奨しているのは、ごくわずかな国のみである（Ｖａｓｉｋａｒａｎら、２０１１）。
【０００９】
骨代謝の他の潜在的なマーカーは、骨形成および吸収において主要な役割を果たすことが知られるシグナル伝達経路から得られることも可能であり、例えばＷＮＴ、ＢＭＰ−２またはＲＡＮＫＬがある。例えば、Ｄｉｃｋｋｏｐｆ−１（ＤＫＫ−１）またはスクレロスチン（ＳＯＳＴ）遺伝子由来のタンパク質は、ＷＮＴおよびＷＮＴ受容体の結合パートナーとして作用し、それによって、その活性およびそれに続いて骨形成を制御することも可能である（Ｃａｎａｌｉｓ、２０１３）。しかし、食餌、運動および概日リズムに反応した血清/血漿中のこれらのタンパク質の前分析安定性には疑問があり、そしてしたがって、これらのタンパク質が他の組織でもまた産生され、そして他の疾患に反応して制御される可能性もあるという事実のため、骨代謝に関して一般的に有意であるかも疑問である。特に、特定のタイプの癌に関しては、ＷＮＴ−シグナル伝達は疾患進行を駆動することが示されてきている（Ａｎａｓｔａｓ  ＆  Ｍｏｏｎ、２０１３）。
【００１０】
最近、骨代謝の調節において（Ｄｏｎｇ、Ｙａｎｇ、Ｇｕｏ、＆  Ｋａｎｇ、２０１２；Ｚｈａｏら、２０１３）、遺伝子発現を制御する小分子非コードＲＮＡである（Ｂａｒｔｅｌ、２００９）マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）の重要性がますます注目されてきている。いくつかのｍｉＲＮＡは、骨細胞への幹細胞分化の間、骨形成阻害剤をサイレンシングする（Ｔｒｏｍｐｅｔｅｒら、２０１３）か、ＢＭＰ２仲介性骨芽細胞増殖および分化を制御する（Ｌｉら、２００８）か、またはＷＮＴシグナル伝達の活性を組織化する（Ｋａｐｉｎａｓ、Ｋｅｓｓｌｅｒ、＆  Ｄｅｌａｎｙ、２００９）ことが示されてきている。したがって、骨再生を加速するための療法剤としてそして／または骨代謝および骨折リスクを評価するための診断ツールとしてのｍｉＲＮＡの潜在能力が、近年知られるようになってきている（ｖａｎ  Ｗｉｊｎｅｎら、２０１３）。血清および血漿においてｍｉＲＮＡは、過酷な条件に曝された後であってさえ優れて安定であり、ｍｉＲＮＡの数が限定されており（血漿／血清中に分泌されて見出されるものは＜５００）、化学組成が単純であり、転写後修飾されておらず、そして高度でそしてよく確立された高感度スクリーニング技術が利用可能であることから、ｍｉＲＮＡはバイオマーカーの優れた候補とされる。実際、血液循環ｍｉＲＮＡは、すでに、疾患（Ｋｅｌｌｅｒら、２０１１）、特に癌および心臓血管疾患、または非病的プロセス、例えば加齢（Ｗｅｉｎｅｒら、２０１３）の背景で分析されてきている。骨粗鬆症の開始および進行を調節可能であるか、またはこの病的プロセスの代理マーカーとして働きうるｍｉＲＮＡの組み合わせは、その使用が骨折リスクを予測する非侵襲性アプローチ、ならびに骨粗鬆症進行の療法的調節のためのターゲットに相当する、特異的骨粗鬆症シグネチャーである。
【００１１】
近年、５つの自由に循環するｍｉＲＮＡおよび骨組織ｍｉＲＮＡが同定され、そして骨粗鬆症性骨折に関連づけられてきている（Ｓｅｅｌｉｇｅｒら、２０１４）。
近年、ｍｉＲ−１８８−５ｐは、高齢マウスの骨において上方制御され、脂肪生成分化を誘導し、そして骨形成分化を阻害することが見出された（Ｌｉら、２０１５）
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１２】
【非特許文献１】Ｈａｒｖｅｙら、２０１０
【非特許文献２】Ｇｒｏｎｈｏｌｚら、２００８
【非特許文献３】Ｃｕｍｍｉｎｇｓら、２００９
【非特許文献４】Ａｕｇｕｓｔｉｎｅら、２０１３
【非特許文献５】Ｃｏｓｍａｎら、２０１６
【非特許文献６】Ｋａｎｉｓら、２０１３
【非特許文献７】Ｃｅｆａｌｕ、２００４
【非特許文献８】Ｒｕｂｉｎら、２０１３
【非特許文献９】Ｖａｓｉｋａｒａｎら、２０１１
【非特許文献１０】Ｃａｎａｌｉｓ、２０１３
【非特許文献１１】Ａｎａｓｔａｓ  ＆  Ｍｏｏｎ、２０１
【非特許文献１２】Ｄｏｎｇ、Ｙａｎｇ、Ｇｕｏ、＆  Ｋａｎｇ、２０１２
【非特許文献１３】Ｚｈａｏら、２０１３
【非特許文献１４】Ｂａｒｔｅｌ、２００９
【非特許文献１５】Ｔｒｏｍｐｅｔｅｒら、２０１３
【非特許文献１６】Ｌｉら、２００８
【非特許文献１７】Ｋａｐｉｎａｓ、Ｋｅｓｓｌｅｒ、＆  Ｄｅｌａｎｙ、２００９
【非特許文献１８】ｖａｎ  Ｗｉｊｎｅｎら、２０１３
【非特許文献１９】Ｋｅｌｌｅｒら、２０１１
【非特許文献２０】Ｗｅｉｎｅｒら、２０１３
【非特許文献２１】Ｓｅｅｌｉｇｅｒら、２０１４
【非特許文献２２】Ｌｉら、２０１５
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
発明の概要
本発明の目的は、骨粗鬆症または骨減少症を診断し、そして骨折を予測する際の範囲、特異性および有効性を広げ、そして骨ホメオスタシスを安定化させ、そして骨折治癒を加速することによる、骨粗鬆症療法のための新規剤を提供することである。
【００１４】
本課題は、本発明によって解決される。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本発明者らは、最近のならびに最近でない骨粗鬆症性骨折を有する患者から得た血液試料において、上方または下方制御されている特定のｍｉＲＮＡを検出した。
本発明は、特に、特異的に上方または下方制御され、そしてしたがって、価値あるバイオマーカーとして有用であり、そして広範囲の骨疾患病期および年齢群の両方に渡って適用可能な診断シグネチャーに相当する、選択されるｍｉＲＮＡセットを提供する。
【００１６】
本発明において、骨折を患っているかまたは骨折を発展させるリスクがある、限定されるわけではないが閉経後女性あるいは骨粗鬆症または骨減少症患者であってもよい被験体において、骨粗鬆症を診断するか、骨粗鬆症性骨折のリスクを決定するか、または治療成功を監視するｉｎ  ｖｉｔｒｏ法であって：
ａ）前記被験体由来の試料、特に血液試料を提供し；
ｂ）ｈｓａ−ｍｉＲ−１８８−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０８、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９９ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３５−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３６９−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７８ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４９５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５０２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５７６−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６４２ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２およびｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｄまたはそのアイソフォームまたは変異体からなるｍｉＲＮＡのいずれかより選択される、２またはそれより多いｍｉＲＮＡ、特に３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０のｍｉＲＮＡレベルを測定し、そして
ｃ）参照レベルに前記ｍｉＲＮＡのレベルを比較する、
ここで、参照レベルに比較した際の前記レベルの相違の度合いが、骨粗鬆症または骨折リスクの指標である
工程を含む、前記方法を提供する。
【００１７】
別の態様において、被験体において骨粗鬆症を診断するか、または骨粗鬆症性骨折のリスクを決定するか、または治療を監視するｉｎ  ｖｉｔｒｏ法であって：
ａ）前記被験体由来の試料を提供し；
ｂ）ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｄまたはそのアイソフォームまたは変異体からなるｍｉＲＮＡのいずれかより選択される、１、２、３、４、５、６または７のｍｉＲＮＡレベルを測定し、そして
ｃ）ｈｓａ−ｍｉＲ−１８８−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０８、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９９ｂ−５ｐ  ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３６９−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７８ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４９５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５０２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５７６−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６４２ａ−５ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−９４２またはそのアイソフォームまたは変異体からなるｍｉＲＮＡのいずれかより選択される、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、または２３のｍｉＲＮＡレベルを測定し、そして
ｄ）参照レベルに前記ｍｉＲＮＡのレベルを比較する、
ここで、参照レベルに比較した際の前記レベルの相違の度合いが、骨粗鬆症または骨折リスクの指標である
工程を含む、前記方法を提供する。
【００１８】
特定の態様において、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８８−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１４−３ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐからなる群より選択される３、４、５、６、７、８のｍｉＲＮＡのレベルを測定する。
【００１９】
特定の態様において、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８８−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１４−３ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐのすべてのレベルを測定する。
【００２０】
本発明の特定の態様において、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８８−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３５−５ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−３６９−３ｐからなる群より選択される、少なくとも１、２、３、４、５、６，７、８のｍｉＲＮＡ、ならびにｈｓａ−ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０８、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９９ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ−４ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７８ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４９５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５０２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５７６−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６４２ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、およびｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｄからなる群より選択される、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４のｍｉＲＮＡを測定する方法を提供する。
【００２１】
本発明の特定の態様において、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３５−５ｐより選択される１または２のｍｉＲＮＡ、ならびにｈｓａ−ｍｉＲ−１８８−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０８、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９９ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ−４ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３６９−３ｐ    ｈｓａ−ｍｉＲ−３７７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７８ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４９５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５０２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５７６−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６４２ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、およびｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｄからなる群より選択される、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０のｍｉＲＮＡを測定する方法を提供する。
【００２２】
さらなる態様において、薬剤の療法量が骨折を発展させるリスクを減少させるかどうか決定するための方法であって：
ａ）前記被験体由来の試料、特に血液試料を提供し；
ｂ）ｈｓａ−ｍｉＲ−１８８−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０８、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９９ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３６９−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７８ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４９５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５０２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５７６−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６４２ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐおよびｈａｓ−ｍｉＲ−１８１ｄまたはそのアイソフォームまたは変異体からなるｍｉＲＮＡいずれかより選択される２またはそれより多いｍｉＲＮＡ、特に３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０のｍｉＲＮＡのレベルを測定するか、あるいは
ｈｓａ−ｍｉＲ−３２−３ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｇ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４３−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６−２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ−１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２３ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４８６−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−７−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９２ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、ｈｓａ−ｍｉＲ−９６−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐからなるｍｉＲＮＡのいずれかより選択される２またはそれより多いｍｉＲＮＡ、特に３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６のｍｉＲＮＡのレベルを測定し、そして
ｃ）場合によって治療前に測定したｍｉＲＮＡレベルであってもよい参照レベルに、前記ｍｉＲＮＡのレベルを比較する、
ここで、参照レベルに比較した際の前記レベルの相違の度合いが、治療成功の指標である
工程を含む、前記方法もまた提供する。
【００２３】
さらなる態様において、薬剤の療法量が骨折を発展させるリスクを減少させるかどうか決定するための方法であって：
ａ）前記被験体由来の試料、特に血液試料を提供し；
ｂ）ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｄまたはそのアイソフォームまたは変異体からなるｍｉＲＮＡのいずれかより選択される１、２、３、４、５、６、または７のｍｉＲＮＡのレベルを測定し、そして
ｃ）ｈｓａ−ｍｉＲ−１８８−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０８、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９９ｂ−５ｐ  ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３６９−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７８ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４９５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５０２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５７６−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６４２ａ−５ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−９４２またはそのアイソフォームまたは変異体からなるｍｉＲＮＡのいずれかより選択される１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、または２３のｍｉＲＮＡのレベルを測定し、そして
ｄ）場合によって治療前に測定したｍｉＲＮＡレベルであってもよい参照レベルに、前記ｍｉＲＮＡのレベルを比較する、
ここで、参照レベルに比較した際の前記レベルの相違の度合いが、治療成功の指標である
工程を含む、前記方法もまた提供する。本発明のさらなる特定の態様において、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８８−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ａ−３ｐ、ｈａｓ−ｍｉＲ−２９ｂ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈａｓ−ｍｉＲ−３３５−５ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−３６９−３ｐの１、２、３、４、５、６または７を、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０８、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９９ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ−４ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ，ｈｓａ−ｍｉＲ−３４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７８ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４９５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５０２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５７６−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６４２ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、ｈｓａ−ｍｉＲ−９６−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、およびｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｄより選択される、少なくとも１つのｍｉＲＮＡ、特に２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６のｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する。
【００２４】
特定の態様において、薬剤の療法量が、骨折を発展させるリスクを減少させるかどうか決定するため、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８８−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１４−３ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐのすべて、あるいは２、３、４、５、６または７のレベルを測定する。
【００２５】
本発明の特定の態様において、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８８−３ｐを、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０８、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９９ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ−４ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７８ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４９５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５０２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５７６−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６４２ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、ｈｓａ−ｍｉＲ−９６−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、およびｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｄからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡ、特に２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７のｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する方法を提供する。
【００２６】
本発明の特定の態様において、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８８−３ｐを、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ−４ｐ、およびｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｄからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡ、特に２、３、４のｍｉＲＮＡと、そして場合によって、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０８、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９９ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７８ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４９５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５０２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５７６−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６４２ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、ｈｓａ−ｍｉＲ−９６−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐからなる群より選択される、少なくとも１つのｍｉＲＮＡ、特に２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７のｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する方法を提供する。
【００２７】
本発明の特定の態様において、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８８−３ｐを、ｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３６９−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５−５ｐｈｓａ−ｍｉＲ−１９０８、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９９ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ−４ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、  ｈｓａ−ｍｉＲ−３４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７８ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４９５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５０２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５７６−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６４２ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、ｈｓａ−ｍｉＲ−９６−５ｐ、およびｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｄからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡ、特に２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２のｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する方法を提供する。
【００２８】
本発明の特定の態様において、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８８−３ｐを、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ−４ｐ、およびｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｄからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡ、特に２、３、４、５、６、７のｍｉＲＮＡと、そして場合によって、ｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３６９−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０８、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９９ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７８ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４９５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５０２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５７６−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６４２ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、ｈｓａ−ｍｉＲ−９６−５ｐ、およびｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｄからなる群より選択される、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６のｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する方法を提供する。
【００２９】
本発明の特定の態様において、ｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐを、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８８−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０８、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９９ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ−４ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７８ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４９５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５０２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５７６−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６４２ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、ｈｓａ−ｍｉＲ−９６−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｄからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡ、特に２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８のｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する方法を提供する。
【００３０】
本発明の特定の態様において、ｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐを、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８８−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ−４ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、およびｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｄからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡ、特に２、３、４、５のｍｉＲＮＡと組み合わせて、そして場合によって、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０８、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９９ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７８ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４９５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５０２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５７６−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６４２ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、ｈｓａ−ｍｉＲ−９６−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｄからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡ、特に２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８のｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する方法を提供する。
【００３１】
本発明の特定の態様において、ｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐを、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８８−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３６９−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０８、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９９ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７８ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４９５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５０２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５７６−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６４２ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｄからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡ、特に２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９のｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する方法を提供する。
【００３２】
本発明の特定の態様において、ｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐを、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、およびｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｄからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡ、特に２、３、４、５のｍｉＲＮＡと組み合わせて、場合によって、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８８−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３６９−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０８、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９９ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７８ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４９５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５０２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５７６−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６４２ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡ、特に２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４のｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する方法を提供する。
【００３３】
本発明の特定の態様において、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ａ−３ｐを、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８８−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０８、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９９ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ−４ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７８ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４９５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５０２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５７６−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６４２ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２およびｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｄからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡ、特に２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７のｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する方法を提供する。
【００３４】
本発明の特定の態様において、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ａ−３ｐを、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ−４ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｄからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡ、特に２、３、４、５のｍｉＲＮＡと組み合わせて、そして場合によって、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８８−３ｐ  ｈｓａ−ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０８、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９９ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７８ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４９５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５０２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５７６−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６４２ａ−５ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−９４２からなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡ、特に２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１のｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する方法を提供する。
【００３５】
本発明の特定の態様において、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ａ−３ｐを、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８８−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３６９−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０８、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９９ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７８ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４９５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５０２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５７６−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６４２ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、およびｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｄからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡ、特に２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９のｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する方法を提供する。
【００３６】
本発明の特定の態様において、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ａ−３ｐを、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９９ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、およびｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｄからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡ、特に２、３、４、５、６のｍｉＲＮＡと組み合わせて、そして場合によって、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８８−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３６９−３ｐ、  ｈｓａ−ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０８、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７８ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４９５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５０２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５７６−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６４２ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２およびｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡ、特に２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３のｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する方法を提供する。
【００３７】
本発明の特定の態様において、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐを、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８８−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０８、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９９ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ−４ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７８ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４９５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５０２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５７６−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６４２ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２およびｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｄからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡ、特に２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７のｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する方法を提供する。
【００３８】
本発明の特定の態様において、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐを、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８８−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ−４ｐ、およびｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｄからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡ、特に２、３、４、５、６のｍｉＲＮＡと組み合わせて、そしてに場合によって、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０８、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９９ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７８ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４９５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５０２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５７６−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６４２ａ−５ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−９４２からなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡ、特に２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０のｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する方法を提供する。
【００３９】
本発明の特定の態様において、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐを、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐ、  ｈｓａ−ｍｉＲ−１８８−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３６９−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０８、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９９ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７８ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４９５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５０２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５７６−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６４２ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、およびｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｄからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡ、特に２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９のｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する方法を提供する。
【００４０】
本発明の特定の態様において、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐを、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３５−５ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡ、特に２、３、４のｍｉＲＮＡと組み合わせて、そして場合によって、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８８−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３６９−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０８、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９９ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７８ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４９５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５０２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５７６−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６４２ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２およびｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡ、特に２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４のｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する方法を提供する。
【００４１】
本発明の特定の態様において、ｈｓａ−ｍｉＲ−３６９−３ｐを、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８８−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０８、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９９ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ−４ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７８ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４９５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５０２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５７６−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６４２ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２およびｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｄからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡ、特に２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６のｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する。
【００４２】
本発明の特定の態様において、ｈｓａ−ｍｉＲ−３６９−３ｐを、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ−４ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｄからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡ、特に２、３、４、５のｍｉＲＮＡと組み合わせて、そして場合によって、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８８−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０８、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９９ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７８ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４９５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５０２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５７６−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６４２ａ−５ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−９４２からなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡ、特に２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１のｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する方法を提供する。
【００４３】
本発明の特定の態様において、ｈｓａ−ｍｉＲ−３６９−３ｐを、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８８−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０８、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９９ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７８ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４９５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５０２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５７６−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６４２ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、およびｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｄからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡ、特に２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９のｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する方法を提供する。
【００４４】
本発明の特定の態様において、ｈｓａ−ｍｉＲ−３６９−３ｐを、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｄからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡ、特に２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５のｍｉＲＮＡと組み合わせて、そしてｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８８−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０８、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９９ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７８ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４９５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５０２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５７６−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６４２ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２およびｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡ、特に２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９のｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する方法を提供する。
【００４５】
本発明の特定の態様において、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａを、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８８−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０８、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ−４ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７８ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４９５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５０２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５７６−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６４２ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２およびｍｉＲ−１８１ｄからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡ、特に２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３のｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する方法を提供する。
【００４６】
本発明の特定の態様において、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａを、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ−４ｐおよびｍｉＲ−１８１ｄからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡ、特に２、３、４のｍｉＲＮＡと組み合わせて、そして場合によって、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８８−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０８、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７８ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４９５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５０２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５７６−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６４２ａ−５ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−９４２からなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡ、特に２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９のｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する方法を提供する。
【００４７】
本発明の特定の態様において、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａを、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８８−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０８、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９９ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７８ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４９５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５０２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５７６−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６４２ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、およびｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｄからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡ、特に２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９のｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する方法を提供する。
【００４８】
本発明の特定の態様において、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａを、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡ、特に２、３、４のｍｉＲＮＡと組み合わせて、そして場合によって、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８８−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０８、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９９ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７８ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４９５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５０２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５７６−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６４２ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、およびｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｄからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡ、特に２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５のｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する方法を提供する。
【００４９】
本発明のさらなる態様において、被験体において骨粗鬆症を診断するか、または骨粗鬆症性骨折のリスクを決定するか、または治療を監視するｉｎ  ｖｉｔｒｏ法であって、限定されるわけではないが、患者が２型糖尿病のリスクがあるかまたは２型糖尿病を患っていてもよく：
ａ）前記被験体由来の試料、特に血液試料を提供し；
ｂ）ｈｓａ−ｍｉＲ−３２−３ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｇ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４３−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６−２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ−１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２３ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４８６−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−７−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９２ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、ｈｓａ−ｍｉＲ−９６−５ｐ  ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐ、およびｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐからなるｍｉＲＮＡのいずれかより選択される、２またはそれより多いｍｉＲＮＡ、特に２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６のｍｉＲＮＡのレベルを測定し、そして
ｃ）前記ｍｉＲＮＡのレベルを参照レベルに比較する、
ここで、参照レベルに比較した際の前記レベルの相違の度合いが、骨粗鬆症または骨折リスクの指標である
工程を含む、前記方法を提供する。
【００５０】
本発明のさらなる態様において、被験体において骨粗鬆症を診断するか、または骨粗鬆症性骨折のリスクを決定するか、または治療を監視するｉｎ  ｖｉｔｒｏ法であって：
ａ）前記被験体由来の試料を提供し；
ｂ）ｈｓａ−ｍｉＲ−４８６−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐ、およびｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐからなるｍｉＲＮＡのいずれかより選択される１、２、３、４または５のｍｉＲＮＡｓのレベルを測定し、そして
ｃ）ｈｓａ−ｍｉＲ−３２−３ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｇ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４３−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６−２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ−１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２３ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７５、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−７−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９２ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、ｈｓａ−ｍｉＲ−９６−５ｐからなるｍｉＲＮＡのいずれかより選択される１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１のｍｉＲＮＡのレベルを測定し、そして
ｄ）前記ｍｉＲＮＡのレベルを参照レベルに比較する、
ここで、参照レベルに比較した際の前記レベルの相違の度合いが、骨粗鬆症または骨折リスクの指標である
工程を含む、前記方法を提供する。
【００５１】
本発明の特定の態様において、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２３ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−９６−５ｐからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡ、ならびにｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｇ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４３−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６−２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ−１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４８６−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−７−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９２ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡ、特に２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１のｍｉＲＮＡを測定する方法を提供する。
【００５２】
本発明のさらなる特定の態様において、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２３ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−９６−５ｐの２、３、４または５を、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｇ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４３−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６−２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ−１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４８６−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−７−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９２ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐより選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡ、特に２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１のｍｉＲＮＡと組み合わせて測定してもよい。．
本発明の特定の態様において、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２−３ｐを、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｇ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４３−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６−２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ−１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４８６−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−７−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９２ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡ、特に２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１のｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する方法を提供する。
【００５３】
本発明の特定の態様において、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２−３ｐを、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐと組み合わせて、そして場合によって、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｇ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４３−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６−２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ−１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４８６−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−７−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９２ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡ、特に２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０のｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する方法を提供する。本発明の特定の態様において、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２−３ｐを、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２３ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９６−５ｐ  ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｇ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４３−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６−２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ−１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４８６−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−７−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９２ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡ、特に２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５のｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する方法を提供する。
【００５４】
本発明の特定の態様において、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２−３ｐを、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐと組み合わせて、そして場合によって、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２３ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９６−５ｐ  ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｇ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４３−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６−２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ−１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４８６−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−７−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９２ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡ、特に２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４のｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する方法を提供する。本発明の特定の態様において、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−３ｐを、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｇ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４３−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６−２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ−１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４８６−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−７−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９２ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡ、特に２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１のｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する方法を提供する。
【００５５】
本発明の特定の態様において、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−３ｐを、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐと組み合わせて、そして場合によって、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｇ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４３−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６−２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ−１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４８６−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−７−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９２ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡ、特に２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０のｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する方法を提供する。
【００５６】
本発明の特定の態様において、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−３ｐを、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２３ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９６−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｇ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４３−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６−２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ−１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４８６−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−７−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９２ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡ、特に２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４のｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する方法を提供する。
【００５７】
本発明の特定の態様において、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−３ｐを、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐと組み合わせて、そして場合によって、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２３ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９６−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｇ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４３−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６−２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ−１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４８６−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−７−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９２ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡ、特に２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３のｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する方法を提供する。
【００５８】
本発明の特定の態様において、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２３ａ−３ｐを、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｇ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４３−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６−２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ−１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４８６−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−７−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９２ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡ、特に２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１のｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する方法を提供する。
【００５９】
本発明の特定の態様において、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２３ａ−３ｐを、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐと組み合わせて、そして場合によって、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｇ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４３−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６−２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ−１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４８６−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−７−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９２ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡ、特に２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０のｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する方法を提供する。
【００６０】
本発明の特定の態様において、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２３ａ−３ｐを、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２３ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９６−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｇ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４３−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６−２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ−１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４８６−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−７−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９２ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡ、特に２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５のｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する方法を提供する。
【００６１】
本発明の特定の態様において、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２３ａ−３ｐを、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐと組み合わせて、そして場合によって、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２３ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９６−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｇ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４３−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６−２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ−１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４８６−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−７−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９２ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡ、特に２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４のｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する方法を提供する。
【００６２】
本発明の特定の態様において、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐを、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｇ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４３−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６−２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ−１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４８６−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−７−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９２ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡ、特に２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１のｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する方法を提供する。
【００６３】
本発明の特定の態様において、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐを、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐと組み合わせて、そして場合によって、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｇ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４３−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６−２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ−１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４８６−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−７−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９２ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡ、特に２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１のｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する方法を提供する。
【００６４】
本発明の特定の態様において、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐを、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２３ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９６−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｇ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４３−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６−２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ−１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４８６−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−７−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９２ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡ、特に２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２３、２４、２５のｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する方法を提供する。
【００６５】
本発明の特定の態様において、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐを、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐと組み合わせて、そして場合によって、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２３ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９６−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｇ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４３−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６−２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ−１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４８６−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−７−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９２ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡ、特に２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２３、２４のｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する方法を提供する。
【００６６】
本発明の特定の態様において、ｈｓａ−ｍｉＲ−９６−５ｐを、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｇ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４３−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６−２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ−１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４８６−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−７−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９２ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡ、特に２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１のｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する方法を提供する。
【００６７】
本発明の特定の態様において、ｈｓａ−ｍｉＲ−９６−５ｐを、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐと組み合わせて、そして場合によって、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｇ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４３−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６−２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ−１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４８６−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−７−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９２ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡ、特に２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０のｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する方法を提供する。
【００６８】
本発明の特定の態様において、ｈｓａ−ｍｉＲ−９６−５ｐを、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２３ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｇ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４３−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６−２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ−１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４８６−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−７−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９２ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡ、特に２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５のｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する方法を提供する。
【００６９】
本発明の特定の態様において、ｈｓａ−ｍｉＲ−９６−５ｐを、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐと組み合わせて、そして場合によって、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２３ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｇ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４３−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６−２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ−１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４８６−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−７−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９２ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡ、特に２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４のｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する方法を提供する。
【００７０】
本発明を被験体の治療の監視に用いる場合、治療をそれぞれ調整することも可能である。
本発明の別の態様において、前記ｍｉＲＮＡのレベルを、健康な被験体における、特に健康な被験体に由来する試料のプールにおける、対応するｍｉＲＮＡの平均レベルに比較することも可能であり、１標準偏差より大きい、特に約１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、特に約２の標準偏差またはそれより大きい相違が、将来の骨折、特に骨粗鬆症性骨折のリスクが増加した骨粗鬆症の指標となる。
【００７１】
さらなる態様において、２．５標準偏差、特に約３、特に約３．５、特に３．５標準偏差より大きい相違は、将来の骨折、特に骨粗鬆症性骨折の高いリスクを持つ骨粗鬆症の指標である。
【００７２】
したがって、本発明の態様内には、診断しようとする被験体由来のそれぞれの試料と比較するため、健康な被験体由来の単一の参照試料または健康な被験体由来の試料プールのいずれかの使用がある。前記プールは、異なる個体由来の、２、３、４、５、６、７、またはそれより多い試料、特に最大１０、１００または１００を超える試料からなることも可能である。
【００７３】
さらなる態様において、前記ｍｉＲＮＡのレベルを、健康な被験体における対応するｍｉＲＮＡの平均レベルと比較し、ここで、１標準偏差より大きい相違が、将来の骨折のリスクが増加した骨粗鬆症の指標となる。
【００７４】
特定の態様において、特に非糖尿病被験体を診断するため、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８８−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０８、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９９ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３６９−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７８ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４９５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５０２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５７６−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６４２ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｄの少なくとも３、好ましくは少なくとも４、好ましくは少なくとも５、特に最大３０のｍｉＲＮＡのレベルを測定する方法を提供する。
【００７５】
特定の態様において、特にＩＩ型糖尿病被験体を診断するための、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２３ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９６−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｇ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４３−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６−２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ−１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４８６−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−７−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９２ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐおよびｍｉＲ−３８２−３ｐの少なくとも３、好ましくは少なくとも４、好ましくは少なくとも５、特に最大２６のｍｉＲＮＡのレベルを測定する方法を提供する。
【００７６】
特定の態様において、骨折を患っているかまたは骨折を発展させるリスクがある閉経後の女性、骨粗鬆症または骨減少症患者、および２型糖尿病のリスクがあるかまたは２型糖尿病を患っている患者に関して、ｍｉＲＮＡの本発明のリストの１より多く、そして最大３０のｈｓａ−ｍｉＲＮＡを、本発明にしたがって測定する、単一診断アッセイを提供する。
【００７７】
特に、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８８−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−３６９−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２３ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−９６−５ｐの少なくとも１つを、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０８、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７８ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４９５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５０２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５７６−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６４２ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４、ｍｉＲ１８１ｄ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｇ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４３−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６−２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ−１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４８６−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−７−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９２ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐの少なくとも１つと一緒に測定する。
【００７８】
特定の態様において、特に非糖尿病および糖尿病被験体を本発明にしたがって診断可能である、診断系を提供するため、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４５、４６のｍｉＲＮＡのレベルを測定する方法を提供する。
【００７９】
特定の態様において、１またはそれより多いさらなるｍｉＲＮＡを検出する方法であって、前記ｍｉＲＮＡが
ａ）健康な個体に比較した際、骨粗鬆症の個体において示差的に制御されており、そして
ｂ）骨形成分化および／または破骨細胞形成活性化に関与する
前記方法を提供する。
【００８０】
本発明の特定の態様において、本発明の方法の、特に骨折の予後診断のための、被験体を監視するための、使用を提供する。
本発明の特定の態様において、本発明の方法の、特に抗骨粗鬆症治療に対する被験体の反応を測定するための、被験体を監視するための、使用を提供する。
【００８１】
特定の態様において、ｍｉＲＮＡレベルの相違を、定量的またはデジタルＰＣＲ、配列決定、マイクロアレイ、Ｌｕｍｉｎｅｘ核酸アッセイ、または他のハイブリダイゼーションに基づく技術によって決定する方法を提供する。
【００８２】
本発明はまた、骨粗鬆症または骨折を治療するかまたは防止する際に使用するための組成物であって
ａ）上述のようなｍｉＲＮＡ由来の少なくとも２つの合成ヒトｍｉＲＮＡ、ならびに／あるいは
ｂ）
ｉ.  前記ｍｉＲＮＡのレベルを減少させ；そして／または
ｉｉ.  前記ｍｉＲＮＡをコードする配列の発現を阻害するかまたは下方制御するか、あるいは前記ｍｉＲＮＡを分解するかまたは切断する
上述のようなｍｉＲＮＡの少なくとも２つのアンタゴニスト／阻害剤
を含む、前記組成物も提供する。
【００８３】
本発明はまた、骨粗鬆症または骨折を治療するかまたは防止する際に使用するための組成物であって
ａ）ｈｓａ−ｍｉＲ−１８８−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐより選択される少なくとも１つの合成ヒトｍｉＲＮＡ、ならびに／あるいは
ｂ）
ｉ.  前記ｍｉＲＮＡのレベルを減少させ；そして／または
ｉｉ.  前記ｍｉＲＮＡをコードする配列の発現を阻害するかまたは下方制御するか、あるいは前記ｍｉＲＮＡを分解するかまたは切断する
ｍｉＲＮＡ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８８−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐの少なくとも１つのアンタゴニスト／阻害剤
を含む、前記組成物も提供する。
【００８４】
本発明の態様において、上に明記するような少なくとも１つ、特に少なくとも２つの合成ヒトｍｉＲＮＡ、ならびに／あるいは、前記ｍｉＲＮＡのレベルを減少させ；そして／または前記ｍｉＲＮＡをコードする配列の発現を阻害するかまたは下方制御するか、あるいは前記ｍｉＲＮＡを分解するかまたは切断する、上に明記するようなｍｉＲＮＡの少なくとも２つのアンタゴニスト／阻害剤、を含む組成物の、薬剤を調製するための使用。
【００８５】
さらなる態様において、本発明は、本明細書に記載するようなｉｎ  ｖｉｔｒｏ法のいずれか１つを用いて、骨粗鬆症と診断されたかまたは骨粗鬆症性骨折のリスクがあると診断された被験体を治療するための方法であって、治療が前記被験体に薬剤を投与する工程を含み、前記薬剤が骨粗鬆症の治療または骨折の予防的治療のために、当業者に知られる薬剤である、前記方法を提供する。前記薬剤は、限定されるわけではないが、カルシウム（カルシトニン、Ｆｏｒｔｉｃａｌ（登録商標）、Ｍｉａｃａｌｃｉｎ（登録商標）、Ｃａｌｃｉｃｈｅｗ（登録商標）、Ｏｓｔｅｏｆｏｓ（登録商標）、Ｃａｌｔｒａｔｅ  Ｐｌｕｓ（登録商標））、ビタミンＤ、アレンドロネート（Ｆｏｓａｍａｘ（登録商標）、Ｒｅｃｌａｓｔ（登録商標））、エチドロネート、リセドロネート（Ａｃｔｏｎｅｌ（登録商標））、イバンドロネート（Ｂｏｎｉｖａ（登録商標））、ゾレドロン酸（Ｒｅｃｌａｓｔ）のようなビスホスホネート、ホルモン、例えばエストロゲン、および骨粗鬆症を防止しそして治療するために認可されたホルモン様薬剤、例えばエストロゲンアゴニスト／アンタゴニスト、ラロキシフェン（Ｅｖｉｓｔａ（登録商標））、ラネル酸ストロンチウム、モノクローナル抗体、例えばＲＡＮＫＬまたはスクレロスチンに対するモノクローナル抗体、例えばデノスマブ（Ｐｒｏｌｉａ（登録商標））、テリパラチド（Ｆｏｒｔｅｏ（登録商標））、酢酸バゼドキシフィン（Ｃｏｍｂｒｉｚａ（登録商標））であってもよい。
【図面の簡単な説明】
【００８６】
【図１】骨粗鬆症を有する閉経後女性の分類のための多パラメータモデル。負の対照データセット（灰色のボックスプロット）に対する、２３のマイクロＲＮＡから選択した少なくとも２から最大１０のマイクロＲＮＡ（赤いボックスプロット）の任意のありうる組み合わせを試験することによって、対照に対する骨粗鬆症症例の分類を行った。データは明らかに、少なくとも２つのマイクロＲＮＡの組み合わせが、無作為のものよりも骨折を有する閉経後女性の分類に関して、有意により優れた結果を生じることを示す。
【図２】骨粗鬆症を有する糖尿病の閉経後女性の分類のための多パラメータモデル。負の対照データセット（灰色のボックスプロット）に対する、２３のマイクロＲＮＡから選択した少なくとも２から最大１０のマイクロＲＮＡ（黒いボックスプロット）の任意のありうる組み合わせを試験することによって、対照に対する糖尿病性骨粗鬆症症例の分類を行った。データは明らかに、少なくとも２つのマイクロＲＮＡの組み合わせが、無作為のものよりも骨折を有する糖尿病の閉経後女性の分類に関して、有意により優れた結果を生じることを示す。
【図３−１】骨粗鬆症を有する糖尿病の（Ａ）および糖尿病でない（Ｂ）閉経後女性の分類に関する４パラメータモデル。データは、骨粗鬆症を有する糖尿病の（Ａ）および糖尿病でない（Ｂ）患者の分類に関する、２３のあらかじめ選択されたマイクロＲＮＡのリストから、４つのマイクロＲＮＡの任意の組み合わせを試験した結果を示す。
【図３−２】骨粗鬆症を有する糖尿病の（Ａ）および糖尿病でない（Ｂ）閉経後女性の分類に関する４パラメータモデル。データは、骨粗鬆症を有する糖尿病の（Ａ）および糖尿病でない（Ｂ）患者の分類に関する、２３のあらかじめ選択されたマイクロＲＮＡのリストから、４つのマイクロＲＮＡの任意の組み合わせを試験した結果を示す。
【図４−１】糖尿病の（Ａ）および糖尿病でない（Ｂ）骨粗鬆症症例および対照におけるマイクロＲＮＡの血清レベル。それぞれ、糖尿病の（Ａ）または糖尿病でない（Ｂ）骨粗鬆症に関する最高性能の分類モデルの一部である、定量的ＰＣＲによって決定されたマイクロＲＮＡのＣｑレベルを示す。
【図４−２】糖尿病の（Ａ）および糖尿病でない（Ｂ）骨粗鬆症症例および対照におけるマイクロＲＮＡの血清レベル。それぞれ、糖尿病の（Ａ）または糖尿病でない（Ｂ）骨粗鬆症に関する最高性能の分類モデルの一部である、定量的ＰＣＲによって決定されたマイクロＲＮＡのＣｑレベルを示す。
【図５−１】３つの選択されたマイクロＲＮＡ：ｍｉＲ−１８８−３ｐ、ｍｉＲ−３８２−３ｐ、ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐの療法効率。（Ａ）エレクトロポレーションを通じて、マイクロＲＮＡを間葉系幹細胞において過剰発現した。３つすべてのマイクロＲＮＡに関して、高レベルの過剰発現を達成した。（Ｂ）細胞増殖に対するマイクロＲＮＡ過剰発現の影響。（Ｃ）骨形成の指標となる、アルカリホスファターゼ活性に対するマイクロＲＮＡ過剰発現の影響を試験した。ｍｉＲ−１８８−３ｐおよびｍｉＲ−３８２−３ｐは、骨形成分化を有意に改善し、一方、ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐは、骨形成分化を阻害した。（Ｄ）骨形成分化を経ている幹細胞の別の重要な特徴である、カルシウム沈着に対する影響を示す。
【図５−２】３つの選択されたマイクロＲＮＡ：ｍｉＲ−１８８−３ｐ、ｍｉＲ−３８２−３ｐ、ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐの療法効率。（Ａ）エレクトロポレーションを通じて、マイクロＲＮＡを間葉系幹細胞において過剰発現した。３つすべてのマイクロＲＮＡに関して、高レベルの過剰発現を達成した。（Ｂ）細胞増殖に対するマイクロＲＮＡ過剰発現の影響。（Ｃ）骨形成の指標となる、アルカリホスファターゼ活性に対するマイクロＲＮＡ過剰発現の影響を試験した。ｍｉＲ−１８８−３ｐおよびｍｉＲ−３８２−３ｐは、骨形成分化を有意に改善し、一方、ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐは、骨形成分化を阻害した。（Ｄ）骨形成分化を経ている幹細胞の別の重要な特徴である、カルシウム沈着に対する影響を示す。
【図５−３】３つの選択されたマイクロＲＮＡ：ｍｉＲ−１８８−３ｐ、ｍｉＲ−３８２−３ｐ、ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐの療法効率。（Ａ）エレクトロポレーションを通じて、マイクロＲＮＡを間葉系幹細胞において過剰発現した。３つすべてのマイクロＲＮＡに関して、高レベルの過剰発現を達成した。（Ｂ）細胞増殖に対するマイクロＲＮＡ過剰発現の影響。（Ｃ）骨形成の指標となる、アルカリホスファターゼ活性に対するマイクロＲＮＡ過剰発現の影響を試験した。ｍｉＲ−１８８−３ｐおよびｍｉＲ−３８２−３ｐは、骨形成分化を有意に改善し、一方、ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐは、骨形成分化を阻害した。（Ｄ）骨形成分化を経ている幹細胞の別の重要な特徴である、カルシウム沈着に対する影響を示す。
【図５−４】３つの選択されたマイクロＲＮＡ：ｍｉＲ−１８８−３ｐ、ｍｉＲ−３８２−３ｐ、ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐの療法効率。（Ａ）エレクトロポレーションを通じて、マイクロＲＮＡを間葉系幹細胞において過剰発現した。３つすべてのマイクロＲＮＡに関して、高レベルの過剰発現を達成した。（Ｂ）細胞増殖に対するマイクロＲＮＡ過剰発現の影響。（Ｃ）骨形成の指標となる、アルカリホスファターゼ活性に対するマイクロＲＮＡ過剰発現の影響を試験した。ｍｉＲ−１８８−３ｐおよびｍｉＲ−３８２−３ｐは、骨形成分化を有意に改善し、一方、ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐは、骨形成分化を阻害した。（Ｄ）骨形成分化を経ている幹細胞の別の重要な特徴である、カルシウム沈着に対する影響を示す。
【発明を実施するための形態】
【００８７】
骨形成分化は、間葉系幹細胞または脂肪組織由来幹細胞が活性化されて、増殖し、そして骨芽細胞に分化する間のプロセスと定義される。このプロセスは、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）の分泌、遺伝子、例えばオステオカルシン、ＲＵＮＸ２、ＡＬＰ発現の変化、およびカルシウム取り込み上昇によって特徴付けられる。
【００８８】
破骨細胞形成は、単球（すなわちマクロファージ）が、ＲＡＮＫＬおよびＭ−ＣＳＦによって活性化されて、破骨細胞を形成する間のプロセスと定義され、これは、Ｈ＋、特定のプロテアーゼおよび他の酵素、例えば酒石酸耐性酸性ホスファターゼ（ＴＲＡＰ）、骨吸収を補助するカテプシンＫの放出によって特徴付けられる。
【００８９】
本明細書において、そして付随する請求項において、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」には、背景が明らかに別に示さない限り、複数の対象物が含まれる。
本明細書において、用語「血液試料」は、血清、血漿、全血およびその構成要素、血液由来産物または調製物を指す。血漿および血清は、実施例に示すように非常に有用である。
【００９０】
用語「試料」は、一般的に、血液試料および尿、唾液および脳脊髄液を指す。
本明細書において、用語「被験体」または「個体」または「患者」は、温血哺乳動物、特にヒトを指すものとする。
【００９１】
用語「患者」には、予防または療法的治療のいずれかを受けているか、あるいは限定されるわけではないが、骨粗鬆症または真性糖尿病のような特定の疾患と診断されている、ヒトおよび他の哺乳動物被験体が含まれる。
【００９２】
特に、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８８−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０８、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９９ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３６９−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７８ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４９５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５０２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５７６−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６４２ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐおよびｍｉＲ１８１ｄより選択されるｍｉＲＮＡのレベルを、健康な被験体におけるこれらのｍｉＲＮＡのレベルに比較した変化は、骨折を患うかまたは骨折を発展させるリスクがある、閉経後の女性あるいは骨粗鬆症または骨減少症患者における骨粗鬆症性骨折のリスクの非常によい指標となる。
【００９３】
特に、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２−３ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｇ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４３−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６−２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ−１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２３ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４８６−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−７−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９２ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、ｈｓａ−ｍｉＲ−９６−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐ、およびｍｉＲ３８２−３ｐより選択されるｍｉＲＮＡのレベルを、健康な被験体におけるこれらのｍｉＲＮＡのレベルに比較した変化は、２型糖尿病のリスクがあるかまたは２型糖尿病を患っている患者における骨粗鬆症性骨折のリスクの非常によい指標となる。
【００９４】
用語「治療」は、健康状態を改善し、望ましくない体重喪失を減少させるかまたは阻害し、そして／または個体の寿命を延長させそして／または増加させる、任意の処置に関する。前記治療は、個体における障害を排除し、個体における疾患の発展を抑止するかまたは遅延させ、個体における疾患の発展を阻害しまたは遅延させ、個体における症状の頻度または重症度を減少させ、そして／または現在障害を有するかまたは以前障害を有した個体において再発を減少させることも可能である。用語「予防的治療」または「防止的治療」は、交換可能に用いられ、そして被験体において疾患が生じることを防止するよう意図される任意の治療に関する。
【００９５】
本明細書において、疾患、障害または状態を「防止する」またはこれらの「防止」は、治療されない対照被験体に対する、治療される被験体における障害または状態の発生の減少を指し、あるいは発症を遅延させるか、あるいは治療されない対照被験体に対する、障害または状態の１またはそれより多い症状の重症度を減少させる。用語「保護」、「防止」、「予防的」、「防止的」または「保護的」は、疾患の発生および／または進行の防止および／または治療に関する。
【００９６】
用語「閉経後の」女性は、少なくとも１年の期間、月経がない女性を指す。用語「ＩＩ型糖尿病」は、経口投薬および／またはインスリンの形で少なくとも３年間抗糖尿病投薬を受けており、そして／または米国糖尿病協会の診断基準を満たす（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｄｉａｂｅｔｅｓ  ｍｅｌｌｉｔｕｓ，  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｃａｒｅ．  ２０１４；３７  Ｓｕｐｐｌ  １：Ｓ８１−９０）個体を指す。
【００９７】
本明細書において、用語「個体コホート」または「個体プール」は、健康な個体群を指すものとし、そして特に、前記個体から受け取った試料を指すことも可能である。コホートの個体数は多様であることも可能であり、すなわち、２、３、４、５、６、７、またはそれより多い個体を含むことも可能であるが、また、より大きい被験体群であることも可能であり、例えば、限定されるわけではないが、１０、５０、１００またはそれより多い個体であることも可能である。本発明の態様において、コホートはまた、５００またはそれより多い個体の巨大コホートを含むことも可能である。
【００９８】
本発明において、用語「約」は、明確に、列挙した値、ならびにそこからの小さな逸脱を含む。したがって、１０％、好ましくは５％、好ましくは１％の列挙した値からの逸脱は、用語「約」に含まれる。本発明において、平均年齢約６０歳の原発性骨粗鬆症（閉経後）を伴う被験体を評価したが、これは、約７０歳またはそれより高齢の被験体が罹患する老年性骨粗鬆症による骨喪失および骨折リスクとは対照的である。
【００９９】
用語「治療成功」は、本明細書において、骨密度を維持するかまたは骨粗鬆症プロセスを遅延させ、そして骨粗鬆症の結果として骨折する（骨粗鬆症性骨折）リスクを減少させると定義される。したがって、治療成功を予測するマーカーは、患者の臨床転帰、すなわち骨折リスクの減少に優先的に関連するはずである。中程度の治療成功は、約２５％から最大約５０％、骨折リスクを減少させる。高い治療成功は、５０％を超えるリスク減少を生じる。
【０１００】
「対照」、「対照試料」、または「参照値」は、本明細書において交換可能に使用可能な用語であり、そして実験試料との比較のために用いられる試料または標準と理解されるものとする。対照には、健康な被験体、あるいは骨折または２型糖尿病を発展させるリスクがないかまたはこれらを患っていない被験体から得た試料が含まれることも可能である。さらに、対照は、標準参照値または値の範囲であることも可能であり、すなわち、例えば試料において安定に発現されるｍｉＲＮＡ、例えば内因性対照ｃｅｌ−ｍｉＲ−３９がある。
【０１０１】
本発明は、骨粗鬆症を診断するか、骨粗鬆症病変（ｌｅａｓｏｎｓ）または骨折を発展させるリスクを決定するか、あるいは、療法、特に骨粗鬆症または糖尿病治療を受けている被験体において治療を監視するための方法において使用するための選択されたｍｉＲＮＡを提供する。
【０１０２】
ｍｉＲＮＡの前記の第一の群は、好ましくは、骨折を患うかまたは骨折を発展させるリスクがある閉経後の女性あるいは骨粗鬆症または骨減少症患者において、骨粗鬆症を診断するかまたは骨粗鬆症性骨折のリスクを決定するかまたは治療を監視するためのものであり、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８８−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０８、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９９ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３６９−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７８ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４９５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５０２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５７６−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６４２ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ１８１ｄまたはそのアイソフォームまたは変異体である。
【０１０３】
ｍｉＲＮＡの前記の第二の群は、好ましくは、２型糖尿病のリスクがあるかまたは２型糖尿病を患っている患者において、骨粗鬆症を診断するかまたは骨粗鬆症性骨折のリスクを決定するかまたは治療を監視するためのものであり、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２−３ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｇ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４３−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６−２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ−１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２３ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４８６−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−７−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９２ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、ｈｓａ−ｍｉＲ−９６−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐ、ａｎｄ  ｍｉＲ−３８２−３ｐまたはそのアイソフォームまたは変異体である。
【０１０４】
本発明の方法において、参照または対照レベルに比較した際の、体液中、特に血清または血漿中のそれぞれの循環ｍｉＲＮＡレベルの相違の度合いは、骨粗鬆症または骨折リスクの指標となる。
【０１０５】
健康な被験体におけるレベルに比較した、２またはそれより多くの前記ｍｉＲＮＡのレベルの増加または減少の検出は、例えば、被験体における骨粗鬆症または骨折のリスクを予測するために使用可能である。
【０１０６】
あるいは、読み出しとして、選択したｍｉＲＮＡを決定しようとする試料におけるｍｉＲＮＡのレベルを測定し、そして前記患者のリスクに相関させてもよく、こうしたリスクは、低リスク、中程度のリスクまたは高リスクであってもよいし、あるいは二元転帰安定または進行性疾患の間を区別するために確立された別の予測ルールであってもよい。例えば、予測ルールの能力は、ソマーズのＤ統計量を用いてＲＯＣ曲線下面積（ＡＵＣ）を計算することによって評価可能である。ＲＯＣ下面積およびソマーズのＤの間の関係は、以下の通りである：
ＡＵＣ＝（１＋ソマーズのＤ）／２。
【０１０７】
単一進行予測因子として、少なくとも０．５、好ましくは少なくとおｍ０．６、より好ましくは０．７、０．８、またはさらに少なくとも０．９のＡＵＣ値のいずれかの、本発明記載のｍｉＲＮＡマーカーを使用することが好ましい。好ましいマーカー組み合わせは、少なくとも０．６、好ましくは少なくとも０．７、０．８またはさらに少なくとも０．９、最大１．０のＡＵＣ値に到達する。
【０１０８】
健康な被験体を参照して、本発明記載の好ましい方法は、少なくとも５０％、好ましくは少なくとも６０％、より好ましくは少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも１００％、本発明記載の２またはそれより多いｍｉＲＮＡの量の増加が測定された際に、有意なリスクと認定する。
【０１０９】
骨粗鬆症の高リスクまたは骨折のリスクは、上記リストに示すような少なくとも２つのｍｉＲＮＡまたはより多くのｍｉＲＮＡの組み合わせの量が、疾患を患っていない被験体、好ましくは健康な被験体あるいは骨粗鬆症または骨折のリスク増加と相関しない異なる疾患を患っている被験体の参照値の少なくとも１．５倍増加している場合に、示される。
【０１１０】
本明細書において、用語「マイクロＲＮＡ」または「ｍｉＲＮＡ」または「ｍｉＲ」は、コーディング・メッセンジャーＲＮＡにハイブリダイズし、そしてその発現を制御する約１７〜２５ヌクレオチドの長さを有する、特に１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４または２５ヌクレオチドの長さを有する非コーディングＲＮＡ分子を示す。用語「ｍｉＲＮＡ分子」は、天然ｍｉＲＮＡ分子を含む、ｍｉＲＮＡに相当する任意の核酸分子、すなわち成熟ｍｉＲＮＡ、プレｍｉＲＮＡ、プリｍｉＲＮＡを指す。
【０１１１】
「ｍｉＲ前駆体」、「プレｍｉＲＮＡ」または「プレｍｉＲ」は、ｍｉＲＮＡを含有する、ヘアピン構造を有する非コーディングＲＮＡを示す。プレｍｉＲＮＡは、一次ｍｉＲＮＡ転写物、または「プリｍｉＲＮＡ」の、Ｄｒｏｓｈａとして知られる二本鎖ＲＮＡ特異的リボヌクレアーゼによる切断の産物である。前駆体は、それぞれのポリヌクレオチドの成熟中に生じるため、それぞれのポリヌクレオチドの形であることも可能である。特に、前記前駆体の例を、表３および４に列挙し、特にこれらは、配列番号２４〜４６、４８および７２〜９４のものである。
【０１１２】
成熟ｍｉＲＮＡおよびそれぞれの前駆体のヌクレオチド配列が当該技術分野に知られ、そしてこれらは、データベースｍｉＲＢａｓｅより、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｍｉｒｂａｓｅ．ｏｒｇ／ｉｎｄｅｘ．ｓｈｔｍｌで、またはＳａｎｇｅｒデータベースより、ｈｔｔｐ：／／ｍｉｃｒｏｒｎａ．ｓａｎｇｅｒ．ａｃ．ｕｋ／ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ／ｆｔｐ．ｓｈｔｍｌで、入手可能である。ヌクレオチド配列はまた、それぞれの遺伝子バンク寄託番号への言及を含めて、表３および４にも特に開示される。
【０１１３】
本発明の背景において、検出するかまたは阻害しようとするポリヌクレオチドの背景において，本明細書において、同一のポリヌクレオチドは、配列番号１〜２３、４７および４９〜７１のいずれか１つのヌクレオチド配列を含むかまたはこれらからなるポリヌクレオチドに、少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％または９９％の同一性を持つ核酸配列を有することも可能である。
【０１１４】
さらに、本発明の背景において、検出するかまたは阻害しようとするポリヌクレオチドの背景において，本明細書において、同一のポリヌクレオチドは、それぞれのシード配列の５’端および／または３’端で対応するプレｍｉＲＮＡ配列の１、２、３またはそれより多いヌクレオチドを含む、配列番号２４〜４６、４８および７２〜９４のいずれか１つのヌクレオチド配列を含むかまたはこれらからなるポリヌクレオチドに、少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％または９９％の同一性を持つ核酸配列を有することも可能である。
【０１１５】
本発明において用いられる明記されるｍｉＲＮＡはすべてまた、そのアイソフォームおよび変異体も含む。
本発明の目的のため、用語、参照ｍｉＲＮＡの「アイソフォームおよび変異体」（「アイソｍｉｒ」とも称されている）には、トリミング変異体（５’ダイシング部位が、参照ｍｉＲＮＡ配列から上流または下流である５’トリミング変異体；３’トリミング変異体：３’ダイシング部位が、参照ｍｉＲＮＡ配列から上流または下流である）、あるいは１またはそれより多いヌクレオチド修飾を有する変異体（参照ｍｉＲＮＡの３’端への３’ヌクレオチド付加；ｍｉＲＮＡ前駆体からのヌクレオチド変化によるヌクレオチド置換）、あるいはそのアイソフォームおよび変異体を含む相補的成熟マイクロＲＮＡ鎖（例えば所定の５’成熟マイクロＲＮＡに関しては、相補的３’成熟マイクロＲＮＡ、およびその逆）が含まれる。ヌクレオチド修飾に関して、ＲＮＡ／ＲＮＡ結合に適したヌクレオチド、すなわち５’シード領域および切断／アンカー側のヌクレオチドは、修飾からは除外される。
【０１１６】
以下において、別に言及しない限り、用語「ｍｉＲＮＡ」は、３ｐおよび５ｐ鎖、ならびにまたそのアイソフォームおよび変異体も含む。
特に、用語「ｍｉＲ−それぞれの数字−３ｐ」は、本明細書において、また、その相補的５ｐ  ｍｉＲＮＡも含み、そして逆も当てはまる。
【０１１７】
特定の態様において、関心対象のｍｉＲＮＡを、関心対象の前記ｍｉＲＮＡと、好ましくはストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチドを用いて、そしてハイブリダイゼーション・シグナルを測定して、検出する。
【０１１８】
細胞不含血液、例えば血清または血漿中の循環マイクロＲＮＡは、バイオマーカーの最小限の侵襲性または非侵襲性の供給源であり、最小限の侵襲性の検出を可能にし、そしてしたがって、クリニックおよび研究レポジトリーにおいて広い適用を可能にする。これは、生検のために容易にはアクセス可能でない組織、例えば骨に影響を及ぼす疾患には特に好適である。Ｍｉｔｃｈｅｌｌらは、同じ採血によって同じ健康な個体から収集した血清および血漿におけるｍｉＲＮＡ測定が非常に相関することを示した（Ｃｈｅｎら、２００８；Ｍｉｔｃｈｅｌｌら、２００８）。しかし、血漿試料収集のための抗凝血剤（ヘパリン、ＥＤＴＡ、クエン酸ナトリウムまたはフッ化ナトリウム／シュウ酸カリウム（ＮａＦ／ＫＯｘ））の選択が重要であり、これはヘパリンがＰＣＲに基づくアッセイにおいて酵素活性に干渉するためである（Ｂｏｅｃｋｅｌら、２０１３；Ｇａｒｃｉａら、２００２）。ヘパリン同様、クエン酸塩もまた、ｑＰＣＲに阻害性の影響を示し、そしてしたがって、どちらもｑＰＣＲによるｍｉＲＮＡ定量化には推奨されない。ヘパリンとは異なり、ＥＤＴＡはＰＣＲマスターミックスから除去可能であり、そしてしたがって、ＰＣＲに基づくｍｉＲＮＡプロファイリングに選択される抗凝血剤として考慮される（Ｚａｍｐｅｔａｋｉ  ＆  Ｍａｙｒ、２０１２）。抗凝血剤としてのＮａＦ／ＫＯｘの使用は、ｍｉＲＮＡ検出速度の増加を生じ、そして血清またはＥＤＴＡ血が入手可能でない場合、適切な代替物でありうる（Ｋｉｍら、２０１２）。遠心分離の時間ならびに遠心分離速度は、血小板由来ｍｉＲＮＡの混入に影響を及ぼすため、ＥＤＴＡ血漿試料におけるｍｉＲＮＡの検出に重大な影響を及ぼすことが示されてきている（Ｃｈｅｎｇら、２０１３）。対照的に、血清中のｍｉＲＮＡ検出は、プロセシング前変動に対してより感受性でないことが示された。当該技術分野の状況を考慮した、ｍｉＲＮＡ診断のための適切な条件の選択は、過度な負荷を伴わずに当業者によって実行可能である。
【０１１９】
好ましい態様において、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって、関心対象のｍｉＲＮＡのレベルを測定する。ＰＣＲ法は当該技術分野に周知であり、そして広く用いられ、これらには、定量的リアルタイムＰＣＲ、半定量的ＰＣＲ、多重ＰＣＲ、デジタルＰＣＲ、またはその任意の組み合わせが含まれる。特に好ましい態様において、定量的リアルタイムＰＣＲ（ｑＲＴ−ＰＣＲ）によって、ｍｉＲＮＡレベルを決定する。ｑＲＴ−ＰＣＲを用いたｍｉＲＮＡレベルの決定法が当該技術分野に知られ、そしてこれらには通常、ｍｉＲＮＡのｃＤＮＡへの逆転写が先行する。
【０１２０】
本発明において有用であるＰＣＲ法において、プライマーは通常、成熟ｍｉＲＮＡ分子に基づくが、ハイブリダイゼーションの振る舞いを最適にするため、化学的修飾が含まれることも可能である。
【０１２１】
ｑＲＴ−ＰＣＲ法は、ｍｉＲＮＡ発現の絶対レベルを決定することも可能である。あるいは、ｑＲＴ−ＰＣＲ法は、ｍｉＲＮＡの相対量を決定することも可能である。１またはそれより多い内部標準核酸配列レベルに対して、ｍｉＲＮＡのレベルを規準化することによって、ｍｉＲＮＡの相対量を決定することも可能である。一般的に、こうした内部標準核酸配列は、分析する血液または血清試料において、一定レベルを有するはずである。例えば、内部標準核酸配列は、グリセロアルデヒド−３−リン酸デヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤＨ）、ベータ−アクチン（ＡＣＴＢ）のようなｍＲＮＡ、または５Ｓおよび１８ＳリボソームＲＮＡ、ＲＮＵ４８、ＲＮＵ４４、およびＲＮＵ６などの非コーディングＲＮＡのようなｍＲＮＡなどの恒常的に転写されるＲＮＡ核酸配列であることも可能である。さらに、血清または血漿中で一定のそして高いレベルを有するｍｉＲＮＡ、例えばｍｉＲ−２３ａ−３ｐ、ｍｉＲ−２３ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−１５−５ｐまたはｍｉＲ−１６−５ｐを、相対的定量化のための参照として用いることも可能である。さらに、ＲＮＡ単離またはｃＤＮＡ合成中に等モル量で添加される合成ＲＮＡ配列を、特定のｍｉＲＮＡの相対定量化のための参照として用いることも可能である。
【０１２２】
本発明で有用なリアルタイムＰＣＲ定量化法の概要は、Ｓｃｈｍｉｔｔｇｅｎら、２００８，  Ｍｅｔｈｏｄｓ．  Ｊａｎｕａｒｙ；  ４４（１）：３１−３８に提供される。
ｍｉＲＮＡ検出用のプライマーは、例えばＥｘｉｑｏｎから、マイクロＲＮＡ  ＬＮＡＴＭ  ＰＣＲプライマーセットとして、商業的に入手可能である。
【０１２３】
ｍｉＲＮＡは比較的短い分子であるため、例えばＷＯ２０１１／１４４７６に示唆されるように、逆転写および増幅の前に、アデノシン単量体を鎖に付加することによって、これらを延長することが有用でありうる（ポリアデニル化として知られる技術）。簡潔には、適切な試薬（例えばＴｒｉｚｏｌ試薬）によって試料からＲＮＡを抽出し、ＡＴＰおよびポリ（Ａ）ポリメラーゼの存在下でポリアデニル化し、ポリ（Ｔ）アダプターおよび５’ＲＡＣＥ配列を用いてｃＤＮＡに逆転写し、そしてｍｉＲＮＡの３’端に由来する順方向プライマーおよび逆方向ＲＡＣＥプライマーを用いて増幅することも可能である。この技術の改善には、３’端のヌクレオチド（Ａ、Ｃ、またはＧで構成されるが、Ｔを含まず、したがって、ポリＡ配列上のいずれかでのプライミングを除外し、そしてｍｉＲＮＡ配列上でのプライミングを強いる）を含むＲＡＣＥプライマー、あるいは化学修飾を含むまたは含まない２、３、４、またはそれより多いヌクレオチドを用いた特定のマイクロＲＮＡの３’  ｃＤＮＡ端に係留されたＲＡＣＥプライマーの設計が含まれる。
【０１２４】
ｍｉＲＮＡの検出はまた、当該技術分野に知られる他の方法、例えばＷＯ２０１１／１４４７６に記載されるものによって、例えばディープシーケンシング法、ビーズに基づく定量化、例えばＩｌｌｕｍｉｎａビーズアレイ、ヒドロゲル粒子に基づく定量化、例えばＦｉｒｅｆｌｙＴＭによって、マイクロアレイ技術、例えばＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎより入手可能なＮｃｏｄｅＴＭヒトｍｉＲＮＡアレイ、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ、Ａｇｉｌｅｎｔより入手可能なチップアレイ、または例えばＥｘｉｑｏｎのＬＮＡ主鎖捕捉プローブを使用するマイクロアレイ（ｍｉＲＣＵＲＹ  ＬＮＡＴＭアレイ）によって、達成可能である。
【０１２５】
ｍｉＲＮＡレベルの相違はまた、化学発光に基づく多重核酸アッセイ、例えばＰａｎｏｍｉｃｓ、またはマイクロＲＮＡ相補的制御部位を含むレポータータンパク質を含有するレポータープラスミドアッセイ（「バイオセンサー」）、または当該技術分野に知られる他のハイブリダイゼーションに基づく技術を用いて、決定することも可能である。
【０１２６】
本発明の方法におけるｍｉＲＮＡの使用は、骨粗鬆症のような低骨ミネラル密度（分泌されるｍｉＲＮＡに反映される異常な骨代謝による）と関連する骨障害を診断するために、そして特に、骨粗鬆症性骨折のリスクを評価するために有用である。
【０１２７】
本発明は、特に、広範囲の骨疾患病期および年齢群の両方に渡って適用可能な診断シグネチャーに相当するｍｉＲＮＡセットを提供する。特に、ａ）Ｓｅｅｌｉｇｅｒら、上記によって補充されるものよりもより若い患者の血液または血清において示差的に制御されるｍｉＲＮＡ、ｂ）最近でない骨折を有する患者において示差的に制御されるｍｉＲＮＡ、および／またはｃ）最近でない骨折を有する２型糖尿病患者において示差的に制御されるｍｉＲＮＡの検出は、高リスクの骨折を有する患者の早期診断、長期予後、およびスクリーニングに関してより高い有意性を有する診断および予測ツールを提供する。
【０１２８】
疾患進行に関する予後値を含むバイオマーカーは、重度の骨粗鬆症性骨折の発生を最小限にするため、最も重要である。現在、骨粗鬆症性骨折の高い発症率は、大部分が、骨画像化およびルーチンの臨床パラメータ、ならびに性別、年齢、生活様式および家族歴およびＦＲＡＸＴＭスコアなどの顕性特性に基づく非特異的な診断法に起因するとされうる。しかし、これらのパラメータの評価は、骨代謝および骨芽細胞／破骨細胞活性に直接には関連しない。したがって、ＦＲＡＸＴＭおよびＢＭＤを伴う一般的な指針にもかかわらず、個々の骨折リスクにおける高い変動が依然としてあり続けている。マイクロＲＮＡを用いた早期診断は、骨代謝の読み取り値に依存し、そしてしたがって、その疾患の病理生理自体に依存する。したがって、この分析は、個々の患者に対してより特異的である。
【０１２９】
別の側面において、本発明は、骨粗鬆症のような骨折および骨障害の治療のための、または２型糖尿病の背景における、特に骨折の防止または治癒のための、療法的組成物に関する。
【０１３０】
特に組成物は、ｍｉＲＮＡ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８８−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０８、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９９ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３６９−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７８ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４９５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５０２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５７６−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６４２ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、ｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ１８１ｄ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２−３ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｇ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４３−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６−２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ−１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２３ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４８６−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−７−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９２ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐ  、ｈｓａ−ｍｉＲ−９６−５ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ３８２−３ｐまたはそのアイソフォームまたは変異体の少なくとも１つ、特に少なくとも２つの単離または合成ヒトｍｉＲＮＡを含むことも可能である。
【０１３１】
特定の態様において、組成物は、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８８、ｈｓａ−ｍｉＲ−３８２およびｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａの少なくとも１つ、特に少なくとも２つの単離または合成ヒトｍｉＲＮＡを含む。これらのｍｉＲＮＡまたはその阻害剤／アンタゴニストは、それぞれ、上記段落に列挙したｍｉＲＮＡと組み合わせて、または単一の構成要素として、またはその任意の組み合わせで使用することも可能である。
【０１３２】
ｍｉＲＮＡ自体またはその阻害剤／アンタゴニストが療法組成物中に活性成分として取り込まれるかどうかは、こうしたｍｉＲＮＡが骨粗鬆症性骨折のリスクがある患者において上方または下方制御されるかどうかだけでなく、骨形成分化または破骨細胞形成活性化におけるその特定の機能にも依存する。例えば、表１および２に示すように、あるいは特にｍｉＲ３１−５ｐに関して知られるように、骨形成分化の阻害剤として機能するｍｉＲＮＡが、骨粗鬆症において上方制御されることが見出される場合、あるいはｍｉＲ−１４８ａ−５ｐのように、破骨細胞形成の促進因子として機能する場合、こうしたｍｉＲＮＡの阻害剤／アンタゴニストが、本発明の組成物中の活性成分であろう。
【０１３３】
以下において、別に記載しない限り、用語「ｍｉＲＮＡ療法剤」は、ｍｉＲＮＡ自体およびそれぞれのｍｉＲＮＡ阻害剤／アンタゴニストの両方に関して用いられる。
ｍｉＲＮＡ療法剤は、一般的に、ターゲティングされる成熟ｍｉＲＮＡの配列に基づく。ｍｉＲＮＡ置換療法のための療法剤は、置換される成熟ｍｉＲＮＡの配列と大部分を共有する必要がある。ｍｉＲＮＡの５’シード領域には、正確な配列相同性が必要である。ｍｉＲＮＡ機能を特異的に阻害するように設計された療法剤（アンチマイクロＲＮＡオリゴヌクレオチド、ＡＭＯ）は、安定なハイブリダイゼーションそしてしたがって、ｍｉＲＮＡの隔離が達成されるように、ターゲティングされた配列に相補的である必要がある。ＡＭＯは、それぞれ、安定なＲＮＡ二重鎖形成を引き起こす化学的修飾、例えばホスホロチオエート主鎖、またはＬＮＡおよび糖残基の２’ＯＭｅ修飾を含有することも可能である。
【０１３４】
骨障害を有する被験体の血清／血漿において上方または下方制御されているｍｉＲＮＡが、骨形成におけるその機能のために、疾患原因として関連しうるかどうかは、骨形成分化に対するこれらのｍｉＲＮＡの影響を評価することによって決定可能であり：骨形成分化開始前に、間葉系幹細胞において合成マイクロＲＮＡトランスフェクションを行う。例えばｑＰＣＲ、ウェスタンブロットによって、または酵素的に、またはカルシウム沈着を決定するアッセイによって、例えばＤｅｎｇら（Ｄｅｎｇら、２０１４）に記載されるようなアリザリン染色によって、初期骨形成マーカー、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）を定量化するアッセイを用いて、骨形成に関するｍｉＲＮＡの重要性に関する結論を引き出すことも可能である。
【０１３５】
あるいは、ＭＳＣ、またはＭＳＣのモデルとして脂肪組織由来幹細胞（ＡＳＣ）を、ｍｉＲＮＡ療法剤をコードするＤＮＡ配列を含有する哺乳動物ベクター構築物でトランスフェクションし、そして上述のような骨形成分化に対する影響を決定することによって、ｍｉＲＮＡ療法剤の本発明における有用性に関してルーチンに試験することも可能である。
【０１３６】
ＭＳＣおよびＡＳＣは、例えば、Ｗｏｌｂａｎｋら、２００７（Ｔｉｓｓｕｅ  Ｅｎｇ  １３，  １１７３−１１８３）およびＷｏｌｂａｎｋら、２００９（Ｔｉｓｓｕｅ  Ｅｎｇ  Ｐａｒｔ  Ａ  １５，  １８４３−１８５４）に記載されるように、既知の方法によって得られうる。
【０１３７】
骨再生に関与することが確認され、そしてしたがって骨治癒を促進することが確認されたｍｉＲＮＡは、本発明の薬学的組成物において活性成分として有用である。
骨障害を有する被験体の血清／血漿において上方または下方制御されるｍｉＲＮＡが、骨吸収におけるその機能のために、疾患原因として関連しうるかどうかは、破骨細胞形成に対するこれらのｍｉＲＮＡの影響を評価することによって決定可能であり：ＲＡＮＫＬおよびＭ−ＣＳＦを通じた破骨細胞形成の開始前に、ＣＤ１４＋末梢血単核細胞における合成マイクロＲＮＡトランスフェクションを行う。破骨細胞マーカー、例えば酒石酸耐性酸ホスファターゼ（ＴＲＡＰ）活性、カルシトニン受容体およびＲＡＮＫ発現を定量化するアッセイを用いて、骨吸収に関するｍｉＲＮＡの重要性に関する結論を導き出すことも可能である。損なわれていない細胞または細胞溶解物を用いて、ｍｉＲ前駆体からｍｉＲＮＡを得ることも可能であるし、あるいは単離プロセシング酵素、例えば単離Ｄｒｏｓｈａ／Ｄｇｃｒ８およびダイサーを用いて、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでｍｉＲＮＡを産生することも可能である。ｍｉＲ前駆体からプロセシングすることなしに、ｍｉＲＮＡを、化学合成によって産生することもまた可能である。
【０１３８】
ｍｉＲＮＡのアンタゴニスト／阻害剤は、当該技術分野において周知であり、そしてカスタマイズされたｍｉＲＮＡ阻害剤は、商業的に入手可能である。例えば、本発明の背景のアンタゴニスト／阻害剤は、アンタゴｍｉＲ（Ｋｒｉｉｔｚｆｅｌｄｔ，  Ｎａｔｕｒｅ（２００５），  ４３８：６８５−６８９）またはホスホロチオエート結合およびコレステロールテールを有する任意の他のＴ−Ｏ−メチル−ＲＮＡオリゴヌクレオチド、ｍｉＲＣＵＲＹ  ＬＮＡＴＭマイクロＲＮＡ阻害剤（Ｅｘｉｑｏｎ）、ｉｎ  ｖｉｖｏ  ＬＮＡＴＭｍｉＲＮＡ阻害剤（Ｅｘｉｑｏｎ）、小分子ＬＮＡ（Ｏｂａｄ，  Ｎａｔ  Ｇｅｎｅｔ（２０１１），  ４３（４）：３７１−３７８）、ｍｉＲ−デコイまたはｍｉＲ−スポンジ（Ｅｂｅｒｔ，  Ｎａｔ  Ｍｅｔｈｏｄｓ（２００７），  ４：７２１−７２６；  Ｂｏｎｄ，  Ｎａｔ  Ｍｅｄ（２００８），  １４：１２７１−１２７７）等のような核酸分子であることも可能である。アンタゴニスト／阻害剤はまた、Ｃｈａｔｔｅｒｊｅｅ，  Ｎａｔｕｒｅ（２００９），  ４６１：５４６−９に記載されるようなｍｉＲＮＡ分解酵素、Ｔｅｄｅｓｃｈｉ，  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ  Ｔｏｄａｙ（２００９），  １４：７７６−７８３に記載されるようなハンマーヘッドリボザイム、またはＪａｄｈａｖ，  Ａｎｇｅｗ  Ｃｈｅｍ  Ｉｎｔ  Ｅｄ  Ｅｎｇｌ（２００９），  ４８（１４）：２５５７−２５６０に記載されるようなアンタゴｍｉｒザイム（ａｎｔｏｇｏｍｉｒｚｙｍｅ）由来であることも可能である。本発明の背景において、アンタゴｍｉＲ、ｍｉＣＵＲＹ  ＬＮＡＴＭマイクロＲＮＡ阻害剤、ｉｎ  ｖｉｖｏ  ＬＮＡＴＭｍｉＲ阻害剤、小分子ＬＮＡ、ｍｉＲデコイまたはｍｉＲスポンジである。
【０１３９】
さらなる態様において、いわゆる「個別化薬剤」の原理にしたがって、すなわちこの場合、いわゆる「コンパニオン」診断である、本発明の診断法の結果と相関して、薬学的組成物の活性成分を選択する。これは、特異的ｍｉＲＮＡを置換するかまたは阻害するかいずれかを目的とする、ｍｉＲＮＡの療法的投与に関する決定が、個体において特定のｍｉＲＮＡのレベルを分析する付随する診断法と緊密に関連することを意味する。
【０１４０】
破骨細胞特異的促進因子、例えばカルシトニン受容体（ＣａｌｃＲ）、ＲＡＮＫ（ＮＦｋＢの受容体活性化因子）、コロニー刺激因子１受容体（ｃ−Ｆｍｓ）、およびカテプシンＫ（ＣａｔｈＫ）を用いてもよい。
【０１４１】
例えば骨折後の骨治癒を加速するための、局所投与の態様において、ｍｉＲＮＡ療法剤をコードする核酸分子を、ウイルスまたは非ウイルスベクターによって、あるいは裸のＤＮＡまたはＲＮＡとして、関心対象の部位に送達することも可能である。Ｐｅｌｌｅｄら，  ２０１０（Ｔｉｓｓｕｅ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ：  Ｐａｒｔ  Ｂ，  Ｖｏｌｕｍｅ  １６，  Ｎｏ．１、１３−２０）によって概説されるように、骨折部位内の療法分子の局在は、ターゲット部位での物理的配置によって、あるいは生物学的接着剤、例えばフィブリノーゲンおよびトロンビンのポリマーを含む、損傷領域またはその近傍に移植される三次元バイオマテリアルからの遺伝子放出によって、確実にされることも可能である。有用な物理的配置法には、骨折部位への、ｍｉＲＮＡの直接注射、またはポリエチレンイミン（ＰＥＩ）療法剤などの剤で形成される脂質−マイクロＲＮＡ複合体が含まれる。好ましくは、核酸分子がｉｎ  ｓｉｔｕで細胞に浸透するために、例えばリポソームまたはＰＥＩを用いて、複合体化状態で、送達される。あるいは、ｍｉＲＮＡをウイルスによって転写することも可能である。好ましくは、Ｅｇｅｒｍａｎｎら，  ２００６（Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．  Ｍａｙ；  １７（５）：５０７−１７）によって、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）発現するために記載されるように、アデノウイルスベクターを用いる。
【０１４２】
ベクターを用いる代わりに、ｉｎ  ｖｉｖｏエレクトロポレーションまたはソノポレーションを用いて、療法剤を局所送達することも可能である。これらの方法を用いて、ｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡコードＤＮＡ分子を直接骨折に注射し、そして電気パルスまたは超音波を部位に経皮的に適用する。前記ｍｉＲＮＡまたはそのアンタゴニスト／阻害剤はまた、特に、骨修復および再生に用いられる、フィブリン組織充填材の一部であることも可能である。
【０１４３】
さらなる態様において、限定されるわけではないが、骨髄、脂肪組織、臍帯組織、尿、または胎盤を含む任意の供給源由来の間葉系幹細胞であって、療法性ｍｉＲＮＡを過剰発現するかまたは抑制するように遺伝子操作された前記細胞を、欠損部位に移植することも可能である（Ｍａｒｉｅ，  ２０１１，  Ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓ  Ｉｎｔ  ２２：２０２３−２０２６、Ｄｅｎｇら、上記）。
【０１４４】
代替態様において、例えば導入遺伝子発現による、関心対象の部位、例えば骨折部位へのｍｉＲＮＡ療法剤の局在は、まず、ｍｉＲＮＡ療法ＤＮＡまたはＲＮＡを送達系に結合させ（例えば吸着、捕捉または固定によって、あるいは共有結合によって；  Ｌｕｇｉｎｂｕｅｈｌら，  ２００４，  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｉｏｐｈａｒｍ  ５８：１９７−２０８）、そして次いで、遺伝子活性化マトリックス（ＧＡＭ）を欠損部位に、例えばＦａｎｇら、１９９６（Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９３，  ５７５３）に記載されるように移植することによって、達成される。
【０１４５】
ｍｉＲＮＡの送達のためのマトリックスに関連して、有用なマトリックス（ＧＡＭ、「遺伝子活性化マトリックス」）が記載されてきている。療法的に活性であるｍｉＲＮＡまたはその阻害剤／アンタゴニストを、そのまままたはマトリックス内に取り込んでのいずれかで局所投与する場合もまた、骨をターゲティングする分子に連結させることが好適である可能性もある。これは、骨をターゲティングする分子とｍｉＲＮＡ療法剤を複合体化するために用いられる、送達ビヒクル、例えばリポソームに連結することによって達成可能である。核酸分子を局所投与する場合、骨をターゲティングする分子の取り込みは、送達ビヒクルの表面にこれを連結することによって達成される。同じことはＣＰＰにも当てはまる。
【０１４６】
ｍｉＲＮＡ分子またはそれをコードする核酸分子のいずれかを含有する本発明の任意のｍｉＲＮＡ療法剤、またはアンチセンス阻害剤を、１またはそれより多い他の剤、例えばテリパラチド、デノスマブ、ブロソズマブ、ロモソズマブ、ビスホスホネート、例えばアレンドロネート、ゾレンドロネート、あるいは１またはそれより多い骨増殖因子またはそれぞれのコード核酸分子、例えばＢＭＰ−２および／またはＢＭＰ−７のようなＢＭＰ、あるいは例えばｍｉＲ−３１をアンタゴナイズするＲＮＡのようなＲＮＡと組み合わせることも可能である。
【０１４７】
本発明はさらに、以下の項目を含む：
１．  被験体において骨粗鬆症を診断するか、または骨粗鬆症性骨折のリスクを決定するか、または治療を監視するｉｎ  ｖｉｔｒｏ法であって：
ａ）前記被験体由来の試料を提供し；
ｂ）ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８８−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０８、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９９ｂ−５ｐ  ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３６９−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７８ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４９５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５０２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５７６−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６４２ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｄまたはそのアイソフォームまたは変異体からなるｍｉＲＮＡのいずれかより選択される、２またはそれより多いｍｉＲＮＡのレベルを測定し、そして
ｃ）参照レベルに前記ｍｉＲＮＡのレベルを比較する、
ここで、参照レベルに比較した際の前記レベルの相違の度合いが、骨粗鬆症または骨折リスクの指標である
工程を含む、前記方法。
【０１４８】
２．  ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８８−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１４−３ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐのすべてのレベルを測定する、項目１記載の方法。
【０１４９】
３．  ｈｓａ−ｍｉＲ−１８８−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−３６９−３ｐからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡ、ならびにｈｓａ−ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０８、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９９ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ−４ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７８ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４９５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５０２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５７６−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６４２ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、およびｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｄからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡを測定する、項目１記載の方法。
【０１５０】
４．  ｈｓａ−ｍｉＲ−１８８−３ｐを、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０８、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９９ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ−４ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７８ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４９５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５０２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５７６−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６４２ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２およびｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｄからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する、項目１または３記載の方法。
【０１５１】
５．  ｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐを、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８８−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０８、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９９ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ−４ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７８ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４９５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５０２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５７６−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６４２ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２およびｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｄからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する、項目１または３記載の方法。
【０１５２】
６．  ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ａ−３ｐを、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８８−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０８、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９９ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ−４ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７８ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４９５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５０２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５７６−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６４２ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２およびｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｄからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する、項目１または３記載の方法。
【０１５３】
７．  ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐを、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８８−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０８、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９９ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ−４ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７８ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４９５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５０２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５７６−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６４２ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２およびｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｄからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する、項目１または３記載の方法。
【０１５４】
８．  ｈｓａ−ｍｉＲ−３６９−３ｐを、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８８−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０８、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９９ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ−４ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７８ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４９５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５０２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５７６−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６４２ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２およびｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｄからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する、項目１または３記載の方法。
【０１５５】
９．  ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａを、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８８−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０８、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ−４ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７８ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４９５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５０２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５７６−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６４２ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２およびｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｄからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する、項目１または３記載の方法。
【０１５６】
１０．  被験体が、閉経後の女性、あるいは骨粗鬆症または骨減少症患者であり、骨折を患っているかまたは骨折を発展させるリスクがある、項目１〜９のいずれか一項記載の方法。
【０１５７】
１１．  少なくとも３、好ましくは少なくとも４、好ましくは少なくとも５、特に最大３０のｍｉＲＮＡのレベルを測定する、項目１〜１０のいずれか一項記載の方法。
１２．  被験体において骨粗鬆症を診断するか、または骨粗鬆症性骨折のリスクを決定するか、または治療を監視するｉｎ  ｖｉｔｒｏ法であって：
ａ）前記被験体由来の試料を提供し；
ｂ）ｈｓａ−ｍｉＲ−３２−３ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｇ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４３−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６−２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ−１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２３ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４８６−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−７−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９２ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、ｈｓａ−ｍｉＲ−９６−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐ、およびｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐからなるｍｉＲＮＡのいずれかより選択される、２またはそれより多いｍｉＲＮＡのレベルを測定し、そして
ｃ）参照レベルに前記ｍｉＲＮＡのレベルを比較する、
ここで、参照レベルに比較した際の前記レベルの相違の度合いが、骨粗鬆症または骨折リスクの指標である
工程を含む、前記方法。
【０１５８】
１３．  ｈｓａ−ｍｉＲ−３２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２３ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−９６−５ｐからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡ、ならびにｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｇ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４３−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６−２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ−１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４８６−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−７−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９２ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡを測定する、項目１２記載の方法。
【０１５９】
１４．  ｈｓａ−ｍｉＲ−３２−３ｐを、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｇ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４３−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６−２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ−１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４８６−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−７−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９２ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する、項目１２または１３記載の方法。
【０１６０】
１５．  ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−３ｐを、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｇ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４３−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６−２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ−１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４８６−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−７−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９２ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する、項目１２または１３記載の方法。
【０１６１】
１６．  ｈｓａ−ｍｉＲ−３２３ａ−３ｐを、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｇ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４３−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６−２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ−１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４８６−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−７−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９２ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する、項目１２または１３記載の方法。
【０１６２】
１７．  ｈｓａ−ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐを、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｇ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４３−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６−２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ−１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４８６−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−７−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９２ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ３８２−３ｐからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する、項目１２または１３記載の方法。
【０１６３】
１８．  ｈｓａ−ｍｉＲ−９６−５ｐを、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｇ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４３−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６−２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ｃ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ−１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０３ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４８６−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−７−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９２ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９４２、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３０−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４４−３ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−３８２−３ｐからなる群より選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡと組み合わせて測定する、項目１２または１３記載の方法。
【０１６４】
１９．  被験体が、２型糖尿病を患うリスクがあるか、または２型糖尿病を患っている患者である、項目１２〜１８のいずれか一項記載の方法。
２０．  試料が血液試料である、項目１２〜１９のいずれか一項記載の方法。
【０１６５】
２１．  少なくとも３、好ましくは少なくとも４、好ましくは少なくとも５、特に最大２６のｍｉＲＮＡのレベルを測定する、項目１２〜２０のいずれか一項記載の方法。
２２．  前記ｍｉＲＮＡのレベルを、健康な被験体における対応するｍｉＲＮＡの平均レベルと比較し、ここで、１標準偏差より大きい相違が、将来の骨折のリスクが増加した骨粗鬆症の指標となる、項目１〜２１のいずれか一項記載の方法。
【０１６６】
２３．  すべてのｍｉＲＮＡのレベルを測定する、項目１〜２２のいずれか一項記載の方法。
２４．  １またはそれより多いさらなるｍｉＲＮＡを検出し、ここで前記ｍｉＲＮＡが
ａ）健康な個体に比較した際、骨粗鬆症個体において示差的に制御されており、そして
ｂ）骨形成分化および／または破骨細胞形成（ｏｓｔｅｏｃｌａｓｔｏｇｅｎｉｃ）活性化に関与する
項目１〜２３記載の方法。
【０１６７】
２５．  項目１〜２４のいずれか一項記載の方法の、被験体を、特に骨折の予後に関して監視するための使用。
２６．  項目１〜２４のいずれか一項記載の方法の、被験体を監視するための、特に抗骨粗鬆症治療に対する被験体の反応を測定するための使用。
【０１６８】
２７．  ｍｉＲＮＡレベルの相違を、定量的またはデジタルＰＣＲ、配列決定、マイクロアレイ、Ｌｕｍｉｎｅｘ核酸アッセイ、または他のハイブリダイゼーションに基づく技術によって決定する、項目１〜２５のいずれか一項記載の方法。
【０１６９】
２８．  ａ）項目１および／または１２のｍｉＲＮＡ由来の少なくとも２つの合成ヒトｍｉＲＮＡならびに／あるいは
ｂ）
ｉ．前記ｍｉＲＮＡのレベルを減少させ；そして／または
ｉｉ．前記ｍｉＲＮＡをコードする配列の発現を阻害するかもしくは下方制御するか、または前記ｍｉＲＮＡを分解するかもしくは切断する
項目１および／または１２のｍｉＲＮＡの少なくとも２つのアンタゴニスト／阻害剤
を含む、骨粗鬆症または骨折を治療するかまたは防止する際に使用するための組成物。
【０１７０】
２９．  項目１および／または１２の少なくとも１つ、特に少なくとも２つの合成ヒトｍｉＲＮＡ、ならびに／あるいは、前記ｍｉＲＮＡのレベルを減少させ；そして／または前記ｍｉＲＮＡをコードする配列の発現を阻害するかもしくは下方制御するか、または前記ｍｉＲＮＡを分解するかもしくは切断する、項目１および／または１２のｍｉＲＮＡの少なくとも２つのアンタゴニスト／阻害剤、を含む組成物の、薬剤を調製するための使用。
【０１７１】
本明細書記載の実施例は、本発明の例示であり、そして限定であるとは意図されない。本発明の異なる態様が、本発明にしたがって記載されてきている。本明細書に記載し、そして例示する技術に対して、本発明の精神および範囲から逸脱することなく、多くの修飾および変動を行うことも可能である。したがって、実施例が例示のみであり、そして本発明の範囲に対して限定しないことが理解されるべきである。
【実施例】
【０１７２】
実施例１：最近の大腿骨頸部骨折に反応する循環マイクロＲＮＡ
研究設計
最近の骨折におけるｍｉＲＮＡの分析のため、Ｓｅｅｌｉｇｅｒら、２０１４、上記によって選択されるものより若い患者に焦点を置いたが、これは、初期の疾患発展中、すなわちより若い年齢で、診断が優先的に行われるためである。
【０１７３】
室温で３０分間インキュベーションした後、室温で２０００ｘｇで１５分間遠心分離することによって、１４人の被験体から血清試料を収集することに関して、アッパーオーストリア倫理委員会によって、倫理的な認可が与えられた。以前の骨粗鬆症性大腿骨折の発生に基づいて、被験体を２群（ｎ＝７）に分類した（図１ａ）。分析した特性、例えば年齢、肥満度指数（ＢＭＩ）、術後の試料採取間隔、ＢＭＤ  Ｔ−スコア、ビタミンＤおよびＰＴＨなどの分析した特性のうち、ＢＭＩのみが有意な相違を示した。
【０１７４】
ＲＮＡ単離
長期保存のため、血清試料を−８０℃で凍結させた。ＲＮＡ単離に際して、血清を３７℃で融解し、１２，０００ｘｇで５分間遠心分離して、細胞破片を除去し、そして２００μｌの血清を、３５ｆｍｏｌの合成ｃｅｌ−ｍｉＲ−３９−３ｐスパイクイン対照を含有する７５０μｌ  Ｑｉａｚｏｌ中でホモジナイズした。ＲＮＡ沈殿および精製のため、標準プロトコルから以下の逸脱を含めて、クロロホルムおよびｍｉＲＮｅａｓｙ単離キット（Ｑｉａｇｅｎ、ドイツ）を用いて、ＲＮＡ単離を行った：２００μｌ血漿を７５０μｌ  Ｑｉａｚｏｌ中にホモジナイズした。正確に５００μｌの水性相を採取し、１μｌのグリコーゲン（Ａｍｂｉｏｎ、テキサス州）を最終濃度５０μｇ／ｍｌまで添加し、そして７５０μｌの１００％エタノールで沈殿させた。カラムをＲＰＥ緩衝液で３回洗浄し、そして血漿ＲＮＡを３０μｌヌクレアーゼ不含水で１回溶出し、そして−８０℃で保存した。それぞれのＴａｑｍａｎマイクロＲＮＡアッセイキットおよびＭａｓｔｅｒｍｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて、Ｑｉａｇｅｎ  Ｒｏｔｏｒｇｅｎｅ上、４つ組で、ｃｅｌ−ｍｉＲ−３９−３ｐの定量化を行った。
【０１７５】
ｑＰＣＲ分析
血清または血漿中を循環することが繰り返し見出されてきている１７５の別個のヒトｍｉＲＮＡを含む、３８４ウェルの血清／血漿フォーカスパネルを用いて、デンマークのＥｘｉｑｏｎ  Ｉｎｃ．によって、ｍｉＲＮＡ発現のスクリーニングを行った。まず、ｍｉＲＣＵＲＹ  ＬＮＡ普遍的ＲＴ反応キットを用いて、２０μｌ反応中、４μｌの単離ＲＮＡを逆転写した。ＵｎｉＳｐ３およびＵｎｉＳｐ６は、この工程で添加され、そして続いて酵素阻害剤の存在を検出するために分析される、合成対照である。ｑＰＣＲ分析前に、ＲＴ反応を５０倍に希釈し、そしてＲｏｃｈｅ  ＬＣ４８０リアルタイムＰＣＲ系（Ｒｏｃｈｅ、ドイツ）を用いて、１０μｌ反応中、試料あたり１回、各ｍｉＲＮＡをアッセイした。
【０１７６】
データ分析
融解曲線分析を行い、そして１より多いピークを有するｍｉＲＮＡ  ＰＣＲ反応を分析から除外した。ｌｉｎｒｅｇソフトウェアパッケージに似たアルゴリズムを用いて、増幅効率を計算した。大部分のｍｉＲＮＡに関して、効率は、１．８〜２．１の間の範囲であった。＜１．６の効率を生じる個々の反応をデータセットから除外した。全血清／血漿フォーカスパネルプレート上で、「テンプレート不含」ｃＤＮＡ合成対照をアッセイすることによって、各ｍｉＲＮＡに関するバックグラウンドレベルを生じた。ｍｉＲＮＡアッセイの大部分はいかなるシグナルも生じず、そしてバックグラウンドＣｐを４２にセットした。本発明者らは、すべてのｍｉＲＮＡアッセイが、分析に含まれるバックグラウンド値よりも＞５Ｃｐ低いシグナルを示すことを必要とした。すべての１４の試料（１２４アッセイ）に渡って検出されるｍｉＲＮＡアッセイの平均Ｃｐに基づいて、Ｃｐ値の規準化を行った。Ｎｏｒｍｆｉｎｄｅｒソフトウェアを用いて、平均Ｃｐの安定性が、データセット中のいかなる個々のｍｉＲＮＡアッセイの安定性よりも高いことを確認した。以下の等式を用いて規準化した：規準化Ｃｐ（ｄＣｐ）＝平均Ｃｐ（１２４アッセイ）−アッセイＣｐ（試料）。これは、デルタＣｐ（ｄＣｐ）値を生じ、発現に関する相対ｌｏｇ２転換測定値であり、より高い値は血漿中のより高い濃度を示し、そしてより低いｄＣｐ値はより低い濃度を示す。
【０１７７】
マン・ホイットニーＵ検定を用いてノンパラメトリックｔ統計量を計算し、そして各群の平均発現値間の倍変化を計算した。総合すると、１５のｍｉＲＮＡが、最近の骨折および対照試料の間の高い相違（倍変化＞１．５）を示した。
【０１７８】
実施例２：  ２型糖尿病を伴うおよび伴わない、既往または偶発的である最近でない骨粗鬆症性骨折を有する患者における循環マイクロＲＮＡ
既往骨粗鬆症性骨折に関する研究設計
研究実行中に、７４人の閉経後女性（骨折歴を含まない１７人の対照（Ｃｏ）、脆弱性骨折歴を有する１９人の対照（Ｆｘ）、骨折を伴わない１９人の２型糖尿病女性（ＤＭ）および脆弱性骨折歴を有する１９人の２型糖尿病女性（ＤＭＦｘ））の血清試料を収集した。研究に含まれるためには、すべての女性が閉経後で、年齢５０〜７５歳であり、１８〜３７ｋｇ／ｍ２の範囲の肥満度指数でなければならなかった。すべての被験体は動くことができ、そして歩行器なしに移動可能である必要があった。糖尿病群に登録された被験体に関しては、最低限３年間の経口投薬および／またはインスリンによる２型糖尿病治療歴を必要とした。白人、アジア系およびアフリカ系アメリカ人女性が含まれた。骨折を有する被験体は、骨折が、低エネルギー外傷、例えば立位またはそれより低い位置からの転倒によって引き起こされ、そして閉経後にも持続した場合にのみ、含まれた。局所腫瘍、腫瘍様病変またはレントゲン写真上で視覚化されるような病巣脱ミネラル化などの他の起源の病的骨折を有する患者は研究から除外した。
【０１７９】
除外基準は、骨代謝に影響を及ぼしうるすべての医学的状態、例えば重度神経障害疾患、若年性または閉経前特発性骨粗鬆症、甲状腺機能亢進症、副甲状腺機能亢進症、最近の長期間（＞３ヶ月）の運動抑制歴、長期間の薬剤使用、アルコール依存、慢性胃腸疾患、重大な慢性腎機能障害（ＣＫＤ病期ＩＶおよびＶ）、重大な慢性肝機能障害、不安定な心臓血管疾患または制御されない高血圧を含んだ。さらに、最近６ヶ月に渡る、副腎またはタンパク質同化ステロイド、エストロゲン、制酸剤、抗痙攣剤、抗凝固剤、薬理学的用量のビタミンＡ、フッ化物、ビスホスホネート、カルシトニン、タモキシフェンまたは副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）でのいかなる長期治療も、除外基準と見なされた。骨量および骨構造に対する影響が証明されているため、ロシグリタゾンまたはピオグリタゾンなどの抗糖尿病剤を投与されている被験体もまた研究から除外された。
【０１８０】
研究プロトコルは、ＵＣＳＦヒト研究委員会（ＣＨＲ）によって認可され、そしてすべての患者は、参加前に書面のインフォームドコンセントを提出した。研究室の取扱注意事項にしたがって、一晩の絶食の１２時間後、８〜１１ａｍの間に、血液標本を収集した。血清試料に関しては、血液を直立状態で４０分間凝固させ、そして次いで、収集１時間以内に、２５００ｒｐｍで１５分間遠心分離した。試料のいずれも視覚検査では溶血の徴候を示さなかった。血清を続いて、１．５ｍｌプラスチックスクリューキャップバイアルに移し、そしてさらなる分析まで、−８０℃で保存した。
【０１８１】
偶発的骨粗鬆症性骨折に関する研究設計
ＡＧＥＳ−レイキャビク・コホートの６６歳を超える４４３人の閉経後女性を含む、前向き入れ子症例対照研究設計を作成した。この研究の目的は、最初の骨粗鬆症性骨折（偶発的骨折）またはさらなる骨粗鬆症性骨折の予測のための循環マイクロＲＮＡの同定であった。この目的のため、血清マイクロＲＮＡレベルに関してベースラインで血液試料を分析し、そして５．４年での最初の追跡調査後の患者転帰と相関させる。総合すると、研究設計は４群を含み：対照群は、既往骨折を含まず、そして５．４年の追跡調査中、骨折を維持しなかった１００人の健康な個体を含み、骨折群は、追跡調査中に最初の偶発的骨折を維持した１００人、およびすでに１またはそれより多い既往骨折を有した後、追跡調査期間中にさらなる骨折を維持した７２人の１７２人の患者を含み、対照糖尿病群は、２型糖尿病と診断されているが、既往骨折を伴わず、また追跡調査中に偶発的骨折を維持しなかった１００人の個体を含み、そして糖尿病性骨折群は、５．４年の追跡調査内に最初の偶発的骨折を維持した３５人、およびベースラインで既往骨折を有し、そして追跡期間中に１またはそれより多いさらなる偶発的骨折を有した３６人の患者の７１人の患者からなった。
【０１８２】
骨折群では、高エネルギー外傷およびストレス骨折を伴う患者を除外した。研究受診の１８ヶ月前以内に起こった既往骨折を除外した。３０ｍｌ／分（ｅＧＦＲ）を超える腎機能、＞２０ｋｇ／ｍ２のＢＭＩを示し、長期のまたは最近の運動抑制歴がなく、骨に影響を及ぼす薬剤を現在摂取しておらず、そして自己報告または診断書に基づく腎疾患、肝疾患、慢性胃腸疾患、副甲状腺機能亢進症、卵巣摘出術、慢性アルコール依存、または特発性骨粗鬆症の徴候がない被験体のみを含めた。
【０１８３】
ＲＮＡ単離
ＲＮＡ単離のため、２００μｌの血清を３７℃で溶解し、１２，０００ｘｇで５分間遠心分離し、そして小分子ＲＮＡ精製効率を監視するため、３つの異なる濃度で合成ＲＮＡスパイクイン対照（Ｅｘｉｑｏｎ、デンマーク）を含有する、１０００μｌ  Ｑｉａｚｏｌ中にホモジナイズした。標準プロトコルから以下の逸脱を含めて、ＲＮＡ沈殿および精製のため、クロロホルム抽出およびｍｉＲＮｅａｓｙ単離キット（Ｑｉａｇｅｎ、ドイツ）を用いて、ＲＮＡ単離を行った：抽出後、正確に６５０μｌの水性相を採取し、そして１μｌのグリコーゲン（Ａｍｂｉｏｎ、米国テキサス州）を最終濃度５０μｇ／ｍｌまで添加し、そして９７５μｌの１００％エタノールで沈殿させた。カラムをＲＰＥ緩衝液で３回洗浄し、そしてＲＮＡを３０μｌヌクレアーゼ不含水で１回溶出し、そして−８０℃で保存した。
【０１８４】
ｑＰＣＲ分析
Ｅｘｉｑｏｎによる試薬を用いて、３８４ウェルプレート中で、ｍｉＲＮＡのｑＰＣＲに基づくハイスループット定量化を行った。まず、普遍的ｃＤＮＡ合成キットＩＩを用いて、５０μｌ反応中、１０μｌの単離ＲＮＡを逆転写した。この工程中に、ＵｎｉＳｐ６およびｃｅｌ−ｍｉＲ−３９−３ｐを添加して、酵素阻害剤の存在を監視した。カスタム設計のプレコーティングＰｉｃｋ＆Ｍｉｘ３８４ウェルプレート中で、ｑＰＣＲ分析前に、ｃＤＮＡ試料を１００倍に希釈した。ｅｐＭｏｔｉｏｎ  Ｐ５０７３液体取り扱いロボット（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ、ドイツ）を用いて、１０μｌのｑＰＣＲ混合物をｑＰＣＲプレートの各ウェルに分配した。Ｒｏｃｈｅ  ＬＣ４８０リアルタイムＰＣＲ系（Ｒｏｃｈｅ、ドイツ）を用いて、１０μｌ反応中、試料あたり１回、各ｍｉＲＮＡをアッセイする。
【０１８５】
データ分析
融解曲線分析を行い、そして１より多いピークを有するｍｉＲＮＡ  ＰＣＲ反応を分析から除外した。ｌｉｎｒｅｇソフトウェアパッケージに似たアルゴリズムを用いて、増幅効率を計算した。大部分のｍｉＲＮＡに関して、効率は、１．８〜２．１の間の範囲であった。＜１．６の効率を生じる個々の反応をデータセットから除外した。全血清／血漿フォーカスパネルプレート上で、「テンプレート不含」ｃＤＮＡ合成対照をアッセイすることによって、各ｍｉＲＮＡに関するバックグラウンドレベルを生じた。ｍｉＲＮＡアッセイの大部分はいかなるシグナルも生じず、そしてバックグラウンドＣｐを４２にセットした。発現データを、以下の基準にしたがって、あらかじめフィルタリングした：ｉ）空の値を５０％より多く含むフィーチャーを除外した；ｉｉ）任意の４群間の１因子ＡＮＯＶＡ分析において、＜０．０５のｐ値を持つフィーチャーを選択した；ｉｉｉ）骨折および非骨折試料または糖尿病および非糖尿病試料間の陰性シグナルの不均等な分布を示す、カイ二乗検定ｐ値＜０．１を有するフィーチャーを選択した。この段階の目的は、任意の４群において制御に向かう傾向を有するフィーチャーのみをさらにプロセシングすることを可能にすることであった。残りの１４６フィーチャーのＣｔ値を、スパイクイン対照レベルの全体の平均に関して補正し、そして最後に、正規分布値の仮定に基づいて、空の値を帰属値（ｉｍｐｕｔｅｄ  ｖａｌｕｅ）で置き換えた。
【０１８６】
一般化最小二乗によって、クラス情報、例えば骨折対非骨折、または糖尿病性骨折対糖尿病対照を取り込む、遺伝子に関する線形モデルを用意した。クラス係数が０とは異なるかどうかの試験のｐ値を、ＢｅｎｊａｍｉｎｉおよびＨｏｃｈｂｅｒｇによって提唱される方法を用いた多重試験のために調整した。Ｂｉｏｃｏｎｄｕｃｔｏｒレポジトリーのｌｉｍｍａパッケージを用いた。基本分類装置としてサポートベクターマシンを用い、ＡＵＣ値および５倍交差検証の誤分類率によって、すべての単一モデルを評価した。最大ＡＵＣ値に近いＡＵＣ値を得る最少モデルサイズを選択した。
【０１８７】
元来のデータと同じ次元性および相関構造を取り込むが、クラス間の平均に相違を示さない、シミュレーションデータを用いて、全方法を反復した。生じた最大のＡＵＣ値を、ゼロ再現性によって特徴付けられる参照点として用いた。上述の２工程法を用いて選択したすべてのモデルは、参照ポイントに比較した際、明らかに優れた結果を生じた。
【０１８８】
結果
非糖尿病性骨折患者の分類のため、１．０のＡＵＣ値を生じる４つのマイクロＲＮＡの組み合わせ（表５）を同定した。この組み合わせは、ｍｉＲ−１８８−３ｐ、ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｍｉＲ−５８２−３ｐ、およびｍｉＲ−３８２−３ｐからなった。さらに、４つのマイクロＲＮＡのいくつかの他の組み合わせは、同様によく働いた（表５、図３Ｂ）。
【０１８９】
糖尿病性骨折患者の分類のため、０．９６１のＡＵＣ値を生じる４つのマイクロＲＮＡの組み合わせ（表６）を同定した。この組み合わせは、ｍｉＲ−５５０ａ−５ｐ、ｍｉＲ−９６−５ｐ、ｍｉＲ−３２−３ｐ、およびｍｉＲ−３７５からなった。さらに、４つのマイクロＲＮＡのいくつかの他の組み合わせが、同様によく働いた（表６、図３Ａ）。
【０１９０】
実施例３：骨形成分化の背景におけるマイクロＲＮＡ機能の分析
患者同意を得て、局所麻酔下で、外来腫脹脂肪吸引から得た皮下脂肪組織から、ヒト脂肪由来幹細胞（ＡＳＣ）を得た。以前記載されるように（Ｗｏｌｂａｎｋら、２００７ａ；Ｗｏｌｂａｎｋら、２００７ｂ；Ｗｏｌｂａｎｋら、２００９ａ）ＡＳＣを単離し、そして４ｍＭ  Ｌ−グルタミン、１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ、ＰＡＡ）および１ｎｇ／ｍＬ組換えヒト塩基性線維芽細胞増殖因子（ｒｈＦＧＦ、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を補ったＤＭＥＭ−低グルコース／ＨＡＭ  Ｆ−１２中、３７℃、５％ＣＯ２および９５％気湿で培養した。増殖率にしたがって、細胞を週１回または２回、１：２のスプリット比で継代した。
【０１９１】
ＡＳＣにおける骨形成分化の導入
２４ウェル細胞培養プレートにおいて、すべての分化プロトコルを行った。骨形成分化のため、ＡＳＣをウェルあたり２ｘ１０３細胞の密度で植え付けた。植え付け７２時間後、細胞を骨形成分化培地（ＤＭＥＭ−低グルコース、１０％ＦＣＳ、４ｍＭ  Ｌ−グルタミン、１０ｎＭデキサメタゾン、１５０μＭアスコルビン酸−２−リン酸、１０ｍＭ  β−グリセロールリン酸および１０ｎＭビタミン−Ｄ３）と最長４週間インキュベーションした。
【０１９２】
アリザリンレッドＳ染色
石灰化構造のアリザリン染色のため、細胞を７０％エタノール中、−２０℃で１時間固定した。簡単にリンスした後、細胞を４０ｍＭアリザリンレッド溶液（Ｓｉｇｍａ）で２０分間染色し、そしてＰＢＳで洗浄した。定量化のため、２００μｌ  ０．１Ｍ  ＨＣＬ／０．５％ＳＤＳ溶液を用いて、アリザリンを３０分間抽出した。抽出した色素を４２５ｎｍで測定した。
【０１９３】
トランスフェクション
ｓｉＰＯＲＴＴＭＮｅｏＦＸＴＭトランスフェクション試薬（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて、ＡＳＣをトランスフェクションした。製造者のプロトコルにしたがって、細胞を１０ｎＭ前駆体マイクロＲＮＡまたはスクランブル化ｍｉＲＮＡ対照＃２（Ａｍｂｉｏｎ）でトランスフェクションした。トランスフェクション３日後、上述のように分化を開始した。
【０１９４】
結果
生物学的３つ組（すなわち脂肪細胞由来間葉系幹細胞の３人の異なるヒトドナー）で、ｍｉＲ−１８８−３ｐ、ｍｉＲ−３８２−３ｐ、およびｍｉＲ−５５０ａ−５ｐに関してトランスフェクションを行った。過剰発現に成功し、そして３つすべてのｍｉＲＮＡに関して有意であった（図５Ａ）。トランスフェクション１週後、増殖を分析した。ｍｉＲ−１８８−３ｐに関してわずかに陽性の効果が検出可能であったが、ｍｉＲ−３８２−３ｐおよびｍｉＲ−５５０ａ−５ｐは細胞増殖に影響を及ぼさなかった（図５Ｂ）。ｍｉＲ−１８８−３ｐおよびｍｉＲ−３８２−３ｐを通じたアルカリホスファターゼ活性およびカルシウム沈着の誘導、ならびにｍｉＲ−５５０ａ−５ｐによるアルカリホスファターゼおよびカルシウム沈着の阻害によって示されるように、３つのマイクロＲＮＡはすべて、骨形成分化に有意に影響を及ぼした（図５Ｃ／Ｄ）。
【０１９５】
実施例４：特発性および閉経後骨粗鬆症ならびに脆弱性骨折を有する患者における循環マイクロＲＮＡシグネチャー
研究設計
横断設計の症例対照研究を行った。特発性骨粗鬆症を有する総数３６の成人女性および男性患者（平均年齢４６．６＋／−１３．０歳）：低外傷性骨折を伴う１０人の閉経前女性（平均年齢３９．０＋／−８．６歳）、１０人の閉経後女性（平均年齢５９．０＋／−１１．４）および１６人の男性（平均年齢４３．７＋／−１１．１）が研究に含まれた。脊椎骨折および末梢低外傷性骨折は、それぞれ患者の６１％および５０％で観察された。患者の２２パーセントが脊椎および末梢骨折の両方を維持した。総数１５２の骨折が記録された（平均骨折数４．２）。患者の３１パーセントが、１年以内に、抗異化（ビスホスホネート、デノスマブ、ｎ＝１３）または骨同化（テリパラチド、ｎ＝２）薬剤を投与されていた。ｍｉＲＮＡを、低外傷性骨折を持たない３９人の被験体（平均年齢４６．６＋／−９．４歳）：１２人の閉経前女性（平均年齢４２．５＋／−６．８歳）、１１人の閉経後女性（平均年齢５４．３＋／−７．４歳）および１６人の男性（平均年齢４４．４＋／−９．６歳）に比較した。骨粗鬆症を有する患者および健康な対照は、同様の年齢、身長、体重、そしてしたがってＢＭＩを有した。
【０１９６】
マイクロＲＮＡ  ｑＰＣＲ分析
４週間の期間に渡って、７５人の個体の全コホートにおいて、総数１８７のｍｉＲＮＡおよび５つの対照を分析した。すべてのｍｉＲＮＡは、先の研究（実施例１および２）の結果に基づいて選択された。ｍｉＲＮｅａｓｙミニキット（Ｑｉａｇｅｎ、ドイツ）を用いて、ＲＮＡ単離を行った。−８０℃の凍結血清試料を氷上で融解し、そして１２，０００ｇで５分間遠心分離した。遠心分離後、３つの合成スパイクイン対照（ＵｎｉＳｐ２、４、５）の混合物が添加されている１０００μｌ  Ｑｉａｚｏｌとボルテックスすることによって、２００μｌの血清を混合した。室温で１０分間インキュベーションした後、２００μｌのクロロホルムをホモジナイズした試料に添加し、勢いよくボルテックスし、そして３分間インキュベーションした。１２０００ｇで１５分間、４℃で遠心分離した後、上部水相を正確に６５０μｌ取り、そしてグリコーゲン（Ａｍｂｉｏｎ、米国）を最終濃度５０ｇ／ｍｌまで添加した。次いで、試料をカラムに移し、そしてＱＩＡ−Ｃｕｂｅ液体取り扱いロボットを用いてさらにプロセシングした。７５０μｌエタノールでＲＮＡを沈殿させ、ＲＰＥ緩衝液で３回洗浄した後、３０μｌのヌクレアーゼ不含水中でＲＮＡ溶出し、そして−８０℃で保存した。
【０１９７】
ｑＰＣＲ分析のため、ユニバーサルｃＤＮＡ合成キットＩＩ（Ｅｘｉｑｏｎ、デンマーク）を用いて、４μｌの単離ＲＮＡを逆転写した。酵素阻害に関する対照とするため、合成ｃｅｌ−ｍｉＲ−３９−３ｐをこの工程でスパイク処理した。反応を４２℃で６０分間インキュベーションし、そして次いで、９５℃で５分間熱不活化した。ｃＤＮＡ試料を−２０℃で保存した。カスタム３８４ウェルパネル（Ｅｘｉｑｏｎ、デンマーク）を用いて、１８７の循環ｍｉＲＮＡ（サポーティングデータ１を参照されたい）のリアルタイム定量的ＰＣＲ（ＲＴ−ｑＰＣＲ）を行った。ＲＴ−ｑＰＣＲ分析のため、ｃＤＮＡ試料を５０倍希釈し、そしてＥｘｉＬＥＮＴ  ＳＹＢＲ（登録商標）ＧｒｅｅｎマスターミックスおよびＬＮＡ増進ｍｉＲＮＡプライマーアッセイ（Ｅｘｉｑｏｎ、デンマーク）を用いて、個々の１０μｌ  ＰＣＲ反応において、５μｌを用いた。ＰＣＲ条件は、９５℃１０分間、変性（９５℃、１０秒間）およびアニーリング／伸長（６０℃、６０秒間）の４５周期、ならびにＬＣ４８０リアルタイムＰＣＲ系（Ｒｏｃｈｅ、ドイツ）上での融解曲線分析であった。二次導関数法を用いて、定量化値の周期を計算した（Ｃｑ値）。
【０１９８】
結果
３つの下位群（骨折を有する閉経後、閉経前、および男性患者）すべてにおける、低外傷性骨折を有する患者および対照の間で有意に制御された１９のｍｉＲＮＡ。１９のｍｉＲＮＡのうち３つ（１５％）は、共通して上方制御される（ｍｉＲ−１５２−５ｐ、ｍｉＲ−３３５−５ｐ、ｍｉＲ−３２０ａ）一方、１６（８５％）は下方制御された。ｍｉＲＮＡは、低外傷性骨折を有する患者および対照の間の、統計的に有意な識別因子であることが見いだされた。８つのｍｉＲＮＡ（ｍｉＲ−１４０−５ｐ、ｍｉＲ−１５２−３ｐ、ｍｉＲ−３０ｅ−５ｐ、ｍｉＲ−３２４−３ｐ、ｍｉＲ−３３５−３ｐ、ｍｉＲ−１９ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１９ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−５５０ａ−３ｐ）は、骨折患者の分類に関して、＞０．９のＡＵＣ値を有した（表７を参照されたい）。
【０１９９】
表
表１：
骨折を有する閉経後女性の血清におけるマイクロＲＮＡ制御
【０２００】
【表１】
2018537983.tif 000002
【０２０１】
表２：
骨折を有する２型糖尿病女性の血清におけるマイクロＲＮＡ制御
【０２０２】
【表２】
2018537983.tif 000003
【０２０３】
表３
【０２０４】
【表３−１】
2018537983.tif 000004
【０２０５】
【表３−２】
2018537983.tif 000005
【０２０６】
【表３−３】
2018537983.tif 000006
【０２０７】
表４
【０２０８】
【表４−１】
2018537983.tif 000007
【０２０９】
【表４−２】
2018537983.tif 000008
【０２１０】
表５
閉経後骨折：対照から骨折患者を区別するための上位１０の多パラメータモデルおよびＡＵＣ値
【０２１１】
【表５】
2018537983.tif 000009
【０２１２】
表６
糖尿病性骨折：対照から糖尿病性骨折患者を区別するための上位１０の多パラメータモデルおよびＡＵＣ値
【０２１３】
【表６】
2018537983.tif 000010
【０２１４】
表７
骨折を有する患者および対照の間の、１９マイクロＲＮＡの示差発現特性および分類性能
【０２１５】
【表７】
2018537983.tif 000011
【０２１６】
参考文献
【０２１７】
【化１−１】
2018537983.tif 000012
【０２１８】
【化１−２】
2018537983.tif 000013
【０２１９】
【化１−３】
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【図１】
2018537983.tif 000015
【図２】
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【図３−１】
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【図３−２】
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【図４−１】
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【図４−２】
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【図５−１】
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【図５−２】
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【図５−３】
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【図５−４】
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【国際調査報告】
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2018537983.tif 000026
2018537983.tif 000027
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