(57)【要約】個体においてがんを処置するための方法および組成物が本明細書で提供され、上記方法は、上記個体に、少なくとも１種の免疫チェックポイントインヒビターの有効量、ならびにｐ５３および／またはＭＤＡ−７（ＩＬ２４）遺伝子治療を投与することを包含する。細胞外マトリクス分解タンパク質を投与することによる抗腫瘍効力を増強するための方法が、本明細書で提供される。メトロノミック化学療法（上記で記載される薬剤、５ＦＵ＋ＣＴＸ＋ＧＭ−ＣＳＦに関して）をｐ５３および／またはＩＬ２４遺伝子治療と併用して投与することによって、抗腫瘍効力を増強するための方法もまた、本明細書で提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験体においてがんを処置するための方法であって、該方法は、：
（ａ）ｐ５３をコードする核酸および／またはＭＤＡ−７をコードする核酸の有効量を該被験体に投与する工程；ならびに
（ｂ）少なくとも１種の免疫チェックポイントインヒビターを投与する工程
を包含する方法。
【請求項２】
前記少なくとも１種のチェックポイントインヒビターは、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＬＡＧ−３、ＢＴＬＡ、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＴＩＭ３、ＫＩＲ、またはＡ２ａＲのインヒビターから選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記少なくとも１種の免疫チェックポイントインヒビターは、ヒトプログラム細胞死１（ＰＤ−１）軸結合アンタゴニストである、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記ＰＤ−１軸結合アンタゴニストは、ＰＤ−１結合アンタゴニスト、ＰＤＬ１結合アンタゴニストおよびＰＤＬ２結合アンタゴニストからなる群より選択される、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記ＰＤ−１軸結合アンタゴニストは、ＰＤ−１結合アンタゴニストである、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
前記ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＰＤＬ１および／またはＰＤＬ２へのＰＤ−１の結合を阻害する、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記ＰＤ−１結合アンタゴニストは、モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントである、請求項４に記載に方法。
【請求項８】
前記ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピディリズマブ、ＡＭＰ−５１４、ＲＥＧＮ２８１０、ＣＴ−０１１、ＢＭＳ  ９３６５５９、ＭＰＤＬ３２８ＯＡまたはＡＭＰ−２２４である、請求項４に記載の方法。
【請求項９】
前記少なくとも１種の免疫チェックポイントインヒビターは、抗ＣＴＬＡ−４抗体である、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記抗ＣＴＬＡ−４抗体は、トレメリムマブまたはイピリムマブである、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記少なくとも１種の免疫チェックポイントインヒビターは、抗キラー細胞免疫グロブリン様レセプター（ＫＩＲ）抗体である、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記抗ＫＩＲ抗体は、リリルマブである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
１種より多くのチェックポイントインヒビターが投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記免疫チェックポイントインヒビターは、全身投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
細胞外マトリクス分解タンパク質を提供する工程をさらに包含する、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
提供する工程は、前記細胞外マトリクス分解タンパク質をコードする発現カセットを投与する工程を包含する、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記細胞外マトリクス分解タンパク質は、リラキシン、ヒアルロニダーゼまたはデコリンである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
前記発現カセットは、ウイルスベクター中にある、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
前記ウイルスベクターは、アデノウイルスベクター、レトロウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、水疱性口炎ウイルスベクター、またはポリオーマウイルスベクターである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記細胞外マトリクス分解タンパク質は、工程（ａ）の前に提供される、請求項１５に記載の方法。
【請求項２１】
前記細胞外マトリクス分解タンパク質をコードする発現カセットは、腫瘍内に、動脈内に、静脈内に、血管内に、胸腔内に、腹腔内に、気管内に、髄腔内に、筋肉内に、内視鏡的に、病変内に、経皮的に、皮下に、局部的に、立体戦略的に、または直接注射もしくは灌流によって投与される、請求項１６に記載の方法。
【請求項２２】
前記細胞外マトリクス分解タンパク質をコードする発現カセットは、腫瘍内に投与される、請求項１６に記載の方法。
【請求項２３】
前記がんは、黒色腫、非小細胞肺がん、小細胞肺がん、肺がん、肝細胞がん、網膜芽腫、星状細胞腫、膠芽腫、白血病、神経芽腫、頭部がん、頚部がん、乳がん、膵臓がん、前立腺がん、腎臓がん、骨がん、精巣がん、卵巣がん、中皮腫、子宮頚がん、消化管がん、泌尿生殖器がん、呼吸路のがん、造血細胞のがん、筋骨格系のがん、神経内分泌のがん、癌腫、肉腫、中枢神経系のがん、末梢神経系のがん、リンパ腫、脳のがん、結腸がんまたは膀胱がんである、請求項１に記載の方法。
【請求項２４】
前記がんは、転移性である、請求項１に記載の方法。
【請求項２５】
前記ｐ５３をコードする核酸および／または前記ＭＤＡ−７をコードする核酸は、発現カセット中にある、請求項１に記載の方法。
【請求項２６】
発現カセットは、ウイルスベクター中にある、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記ウイルスベクターは、アデノウイルスベクター、レトロウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、水疱性口炎ウイルスベクター、またはポリオーマウイルスベクターである、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記ウイルスベクターは、アデノウイルスベクターである、請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
前記ウイルスベクターは、約１０３〜約１０１３の間のウイルス粒子で投与される、請求項２６に記載の方法。
【請求項３０】
前記アデノウイルスベクターは、静脈内に、動脈内に、血管内に、胸腔内に、腹腔内に、気管内に、腫瘍内に、髄腔内に、筋肉内に、内視鏡的に、病変内に、経皮的に、皮下に、局部的に、立体戦略的に、または直接注射もしくは灌流によって前記被験体に投与される、請求項２６に記載の方法。
【請求項３１】
前記アデノウイルスベクターは、腫瘍内に前記被験体へと投与される、請求項２６に記載の方法。
【請求項３２】
前記ｐ５３をコードする核酸および／または前記ＭＤＡ−７をコードする核酸、ならびに少なくとも１種の免疫チェックポイントインヒビターは、遠達効果を誘導する、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記被験体は、前記アデノウイルスベクターを１回より多く投与される、請求項２６に記載の方法。
【請求項３４】
前記被験体は、前記少なくとも１種の免疫チェックポイントインヒビターの前、同時、または後に、前記ｐ５３をコードする核酸および／または前記ＭＤＡ−７をコードする核酸を投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項３５】
前記被験体は、前記ｐ５３をコードする核酸を投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項３６】
前記被験体は、前記ＭＤＡ−７をコードする核酸を投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項３７】
前記被験体は、前記ｐ５３をコードする核酸および前記ＭＤＡ−７をコードする核酸を投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項３８】
ｐ５３およびＭＤＡ−７は、単一のプロモーターの制御下にある、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記プロモーターは、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、ＳＶ４０、またはＰＧＫである、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記核酸は、リポプレックスにおいて前記被験体に投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項４１】
前記リポプレックスは、ＤＯＴＡＰおよび少なくとも１種のコレステロール、コレステロール誘導体、またはコレステロール混合物を含む、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
投与する工程は、局所注射または局部注射を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４３】
投与する工程は、連続注入、腫瘍内注射、または静脈内注射を介する、請求項１に記載の方法。
【請求項４４】
前記被験体は、ヒトである、請求項１に記載の方法。
【請求項４５】
少なくとも１種のさらなる抗がん処置を投与する工程をさらに包含する、請求項１に記載の方法。
【請求項４６】
前記少なくとも１種のさらなる抗がん処置は、外科的療法、化学療法、放射線療法、ホルモン療法、免疫療法、低分子療法、レセプターキナーゼインヒビター療法、抗血管新生療法、サイトカイン療法、凍結療法または生物学的療法である、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
前記生物学的療法は、モノクローナル抗体、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイムまたは遺伝子治療である、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
前記少なくとも１種のさらなる抗がん処置は、腫瘍溶解性ウイルスである、請求項４５に記載の方法。
【請求項４９】
前記腫瘍溶解性ウイルスは、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルス、レンチウイルス、ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、ワクシニアウイルス、小胞性口炎ウイルス、ポリオウイルス、ニューカッスル病ウイルス、エプスタインバーウイルス、インフルエンザウイルスまたはレオウイルスである、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記腫瘍溶解性ウイルスは、単純ヘルペスウイルスである、請求項４８に記載の方法。
【請求項５１】
前記腫瘍溶解性ウイルスは、サイトカインを発現するように操作される、請求項４８に記載の方法。
【請求項５２】
前記サイトカインは、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）である、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
前記腫瘍溶解性ウイルスは、ｔａｌｉｍｏｇｅｎｅ  ｌａｈｅｒｐａｒｅｐｖｅｃ（Ｔ−ＶＥＣ）としてさらに定義される、請求項４８に記載の方法。
【請求項５４】
前記少なくとも１種のさらなる抗がん処置は、プロテインキナーゼまたは増殖因子のシグナル伝達経路インヒビターである、請求項４５に記載の方法。
【請求項５５】
前記プロテインキナーゼまたは増殖因子のシグナル伝達経路インヒビターは、アファチニブ、アキシチニブ、ベバシズマブ、ボスチニブ、セツキシマブ、クリゾチニブ、ダサチニブ、エルロチニブ、ホスタマチニブ、ゲフィチニブ、イマチニブ、ラパチニブ、レンバチニブ、ムブリチニブ、ニロチニブ、パニツムマブ、パゾパニブ、ペガプタニブ、ラニビズマブ、ルキソリチニブ、サラカチニブ、ソラフェニブ、スニチニブ、トラスツズマブ、バンデタニブ、ＡＰ２３４５１、ベムラフェニブ、ＣＡＬ１０１、ＰＸ−８６６、ＬＹ２９４００２、ラパマイシン、テムシロリムス、エベロリムス、リダホロリムス、アルボシジブ、ゲニステイン、セルメチニブ、ＡＺＤ−６２４４、バタラニブ、Ｐ１４４６Ａ−０５、ＡＧ−０２４３２２、ＺＤ１８３９、Ｐ２７６−００またはＧＷ５７２０１６である、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
前記プロテインキナーゼインヒビターは、ＰＩ３Ｋインヒビターである、請求項５４に記載の方法。
【請求項５７】
前記ＰＩ３Ｋインヒビターは、ＰＩ３Ｋδインヒビターである、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
前記免疫療法は、サイトカインを含む、請求項４６に記載の方法。
【請求項５９】
前記サイトカインは、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）である、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
前記サイトカインは、インターロイキンおよび／またはインターフェロンである、請求項５８に記載の方法。
【請求項６１】
前記インターロイキンは、ＩＬ−２である、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
前記インターフェロンは、ＩＦＮαである、請求項６０に記載の方法。
【請求項６３】
前記免疫療法は、共刺激レセプターアゴニスト、先天性免疫細胞の刺激因子、または先天性免疫の活性化因子を含む、請求項４６に記載の方法。
【請求項６４】
前記共刺激レセプターアゴニストは、抗ＯＸ４０抗体、抗ＧＩＴＲ抗体、抗ＣＤ１３７抗体、抗ＣＤ４０抗体、または抗ＣＤ２７抗体である、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
前記免疫細胞の刺激因子は、細胞傷害性阻害レセプターのインヒビターまたは免疫刺激ｔｏｌｌ様レセプター（ＴＬＲ）のアゴニストである、請求項６３に記載の方法。
【請求項６６】
前記細胞傷害性阻害レセプターは、ＮＫＧ２Ａ／ＣＤ９４またはＣＤ９６  ＴＡＣＴＩＬＥのインヒビターである、請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
前記ＴＬＲアゴニストは、ＴＬＲ７アゴニスト、ＴＬＲ８アゴニスト、またはＴＬＲ９アゴニストである、請求項６５に記載の方法。
【請求項６８】
前記免疫療法は、ＰＤ−Ｌ１インヒビター、４−１ＢＢアゴニスト、およびＯＸ４０アゴニストの組み合わせを含む、請求項４６に記載の方法。
【請求項６９】
前記免疫療法は、インターフェロン遺伝子の刺激因子（ＳＴＩＮＧ）アゴニストを含む、請求項４６に記載の方法。
【請求項７０】
前記先天性免疫の活性化因子は、ＩＤＯインヒビター、ＴＧＦβインヒビター、またはＩＬ−１０インヒビターである、請求項６３に記載の方法。
【請求項７１】
前記化学療法は、ＤＮＡ損傷因子を含む、請求項４６に記載の方法。
【請求項７２】
前記ＤＮＡ損傷因子は、γ線照射、Ｘ線、ＵＶ照射、マイクロ波、電子放出、アドリアマイシン、５−フルオロウラシル（５ＦＵ）、カペシタビン、エトポシド（ＶＰ−１６）、カンプトテシン、アクチノマイシンＤ，  マイトマイシンＣ、シスプラチン（ＣＤＤＰ）、または過酸化水素である、請求項７０に記載の方法。
【請求項７３】
前記ＤＮＡ損傷因子は、５ＦＵまたはカペシタビンである、請求項７０に記載の方法。
【請求項７４】
前記化学療法は、シスプラチン（ＣＤＤＰ）、カルボプラチン、プロカルバジン、メクロレタミン、シクロホスファミド、カンプトテシン、イホスファミド、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファン、ニトロソウレア、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ブレオマイシン、プリカマイシン、マイトマイシン、エトポシド（ＶＰ１６）、タモキシフェン、タキソテール、タキソール、トランス白金、５−フルオロウラシル、ビンクリスチン、ビンブラスチン、メトトレキサート、またはこれらの任意のアナログもしくは派生改変体を含む、請求項４６に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０１５年１１月７日に出願された米国仮出願番号第６２／２５２，４５３号、２０１６年１月８日に出願された同第６２／２７６，６１５号、２０１６年５月９日に出願された同第６２／３３３，８１７号、２０１６年６月３日に出願された同第６２／３４５，０９４号、および２０１６年１０月１７日に出願された同第６２／４０８，８７９号の優先権の利益を主張しており、各々の出願の全体の内容は、参考として本明細書によって援用される。
【０００２】
配列表の援用
３ＫＢ（Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ｗｉｎｄｏｗｓ（登録商標）で測定される場合）であり、２０１６年１１月７日作成のファイル名「ＳＯＢＬＰ０１４３ＷＯ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」に含まれる配列表は、電子提出によって本明細書とともに出願され、かつ本明細書に参考として援用される。
【０００３】
発明の背景
１．発明の分野
本発明は、一般に、生物学および医療の分野に関する。より具体的には、本発明は、免疫チェックポイントインヒビターの有効性および腫瘍抑制遺伝子の発現を併用する方法および組成物に関する。
【背景技術】
【０００４】
２．関連技術の説明
悪性細胞は、頻繁に、ＤＮＡ損傷因子（例えば、化学療法および放射線誘導性のプログラムされた細胞死またはアポトーシス）に抵抗性である。このような抵抗性は一般に、ある特定のがん遺伝子の異常発現またはアポトーシスの制御における腫瘍抑制遺伝子の発現の喪失の結果である。欠損している腫瘍抑制遺伝子に置き換わる、およびアポトーシス誘導遺伝子の発現を押し進めるように設計されたストラテジーは、腫瘍細胞における細胞死のこの様式を回復させるために有望である。
【０００５】
おそらく、最も研究された腫瘍抑制遺伝子のうちの１つは、細胞周期調節およびアポトーシスの制御を含むいくつかのプロセスにおいて極めて重要な役割を果たすｐ５３である（Ｈａｒｔｗｅｌｌら，  １９９４）。ｐ５３変異は、腫瘍細胞において頻繁であり、がんの進行、ならびに化学療法および放射線療法の両方への抵抗性の発生と関連付けられた（Ｓｐｉｔｚら，  １９９６）。インビトロおよびインビボの両方での前臨床研究は、野生型（ｗｔ）ｐ５３機能の回復が、がん細胞においてアポトーシスを誘導し得ることを示した。レトロウイルスまたはアデノウイルスｗｔ−ｐ５３構築物の動物モデルにおける腫瘍内注射は、種々の異なる腫瘍組織学（非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、白血病、膠芽腫、および乳がん、肝臓がん、卵巣がん、結腸がんおよび腎臓がんが挙げられる）に対して腫瘍退縮を生じる（Ｆｕｊｉｗａｒａら，  １９９４）。有望な前臨床および臨床データは、卵巣がんを有する患者の第１選択処置に関するｐ５３遺伝子治療治験うちの国際無作為化フェーズＩＩ／ＩＩＩ治験の開始をもたらした（Ｂｕｌｌｅｒら，  ２００２）。しかし、その研究は、最初の中間分析の後に打ち切られた。なぜなら妥当な治療上の利益が示されなかったからである（Ｚｅｉｍｅｔ  ａｎｄ  Ｍａｒｔｈ，  ２００３）。
【０００６】
従って、腫瘍抑制遺伝子治療に伴う顕著な進歩にも拘わらず、非特異的発現、低効率の送達およびバイオセーフティーを含むいくつかのハードルがなお診療所において成功を制限している。さらに、がんにおいて複数の遺伝子変化および遺伝子の異常なサイレンシングをもたらす後生的な調節不全が存在する；従って、単一遺伝子治療は、がんの処置のための適切なストラテジーではない可能性がある。従って、他の抗がん剤と併用して複数の腫瘍抑制因子を標的化する方法は、増強された抗腫瘍活性および遺伝子治療の効率的な送達のために必要とされる。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
（発明の要旨）
一実施形態において、本発明は、被験体においてがんを処置するための方法および組成物を提供し、上記方法は、（ａ）上記被験体に、ｐ５３をコードする核酸および／またはＭＤＡ−７をコードする核酸の有効量を投与する工程；ならびに（ｂ）少なくとも１種の免疫チェックポイントインヒビターを投与する工程を包含する。ある特定の局面において、１種より多くのチェックポイントインヒビターが投与される。特定の局面において、上記被験体はヒトである。
【０００８】
ある特定の局面において、上記少なくとも１種のチェックポイントインヒビターは、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＬＡＧ−３、ＢＴＬＡ、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＴＩＭ３、ＫＩＲ、またはＡ２ａＲのインヒビターから選択される。いくつかの局面において、上記少なくとも１種の免疫チェックポイントインヒビターは、抗ＣＴＬＡ−４抗体である。いくつかの局面において、上記抗ＣＴＬＡ−４抗体は、トレメリムマブまたはイピリムマブである。ある特定の局面において、上記少なくとも１種の免疫チェックポイントインヒビターは、抗キラー細胞免疫グロブリン様レセプター（ＫＩＲ）抗体である。いくつかの実施形態において、上記抗ＫＩＲ抗体は、リリルマブである。いくつかの局面において、上記ＰＤ−Ｌ１のインヒビターは、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、またはアベルマブである。いくつかの局面において、上記ＰＤ−Ｌ２のインヒビターは、ｒＨＩｇＭ１２Ｂ７である。いくつかの局面において、上記ＬＡＧ３インヒビターは、ＩＭＰ３２１またはＢＭＳ−９８６０１６である。いくつかの局面において、上記Ａ２ａＲのインヒビターは、ＰＢＦ−５０９である。
【０００９】
いくつかの局面において、上記少なくとも１種の免疫チェックポイントインヒビターは、ヒトプログラム細胞死１（ＰＤ−１）軸結合アンタゴニストである。ある特定の局面において、上記ＰＤ−１軸結合アンタゴニストは、ＰＤ−１結合アンタゴニスト、ＰＤＬ１結合アンタゴニストおよびＰＤＬ２結合アンタゴニストからなる群より選択される。いくつかの局面において、上記ＰＤ−１軸結合アンタゴニストは、ＰＤ−１結合アンタゴニストである。ある特定の局面において、上記ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＰＤＬ１および／またはＰＤＬ２へのＰＤ−１の結合を阻害する。特に、上記ＰＤ−１結合アンタゴニストは、モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントである。いくつかの実施形態において、上記ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピディリズマブ、ＡＭＰ−５１４、ＲＥＧＮ２８１０、ＣＴ−０１１、ＢＭＳ  ９３６５５９、ＭＰＤＬ３２８ＯＡまたはＡＭＰ−２２４である。
【００１０】
ある特定の局面において、上記方法は、細胞外マトリクス分解タンパク質を提供する工程をさらに包含する。いくつかの局面において、提供する工程は、細胞外マトリクス分解タンパク質をコードする発現カセットを投与する工程を包含する。いくつかの実施形態において、上記細胞外マトリクス分解タンパク質は、リラキシン、ヒアルロニダーゼまたはデコリンである。特定の局面において、上記細胞外マトリクス分解タンパク質は、リラキシンである。いくつかの局面において、上記発現カセットは、ウイルスベクター中にある。ある特定の局面において、上記ウイルスベクターは、アデノウイルスベクター、レトロウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、水疱性口炎ウイルスベクター、またはポリオーマウイルスベクターである。特定の局面において、上記細胞外マトリクス分解タンパク質は、工程（ａ）の前に提供される。
【００１１】
いくつかの局面において、上記細胞外マトリクス分解タンパク質をコードする発現カセットは、腫瘍内に、動脈内に、静脈内に、血管内に、胸腔内に、腹腔内に、気管内に、髄腔内に、筋肉内に、内視鏡的に、病変内に、経皮的に、皮下に、局部的に、立体戦略的に、または直接注射もしくは灌流によって投与される。ある特定の局面において、上記被験体は、上記少なくとも１種の免疫チェックポイントインヒビターの後に上記ｐ５３をコードする核酸および／または上記ＭＤＡ−７をコードする核酸を投与される。ある特定の局面において、上記被験体は、上記少なくとも１種の免疫チェックポイントインヒビターの前に、上記ｐ５３をコードする核酸および／または上記ＭＤＡ−７をコードする核酸を投与される。ある特定の局面において、上記被験体は、上記少なくとも１種の免疫チェックポイントインヒビターと同時に、上記ｐ５３をコードする核酸および／または上記ＭＤＡ−７をコードする核酸を投与される。特定の局面において、上記アデノウイルスベクターは、上記被験体に、腫瘍内に投与される。いくつかの局面において、上記ｐ５３をコードする核酸および／または上記ＭＤＡ−７をコードする核酸、ならびに少なくとも１種の免疫チェックポイントインヒビターは、処置されていない遠隔腫瘍に対して遠達効果を誘導する。
【００１２】
ある特定の局面において、上記がんは、黒色腫、非小細胞肺がん、小細胞肺がん、肺がん、肝細胞がん、網膜芽腫、星状細胞腫、膠芽腫、白血病、神経芽腫、頭部のがん、頸部のがん、乳がん、膵臓がん、前立腺がん、腎臓がん、骨がん、精巣がん、卵巣がん、中皮腫、子宮頚がん、消化管がん、泌尿生殖器がん、呼吸路のがん、造血細胞のがん、筋骨格系のがん、神経内分泌のがん、癌腫、肉腫、中枢神経系のがん、末梢神経系のがん、リンパ腫、脳のがん、脳のがんまたは膀胱がんである。いくつかの局面において、上記がんは、転移性である。
【００１３】
いくつかの局面において、上記ｐ５３をコードする核酸および／または上記ＭＤＡ−７をコードする核酸は、発現カセット中にある。ある特定の局面において、発現カセットは、ウイルスベクター中にある。いくつかの実施形態において、上記ウイルスベクターは、アデノウイルスベクター、レトロウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、水疱性口炎ウイルスベクター、またはポリオーマウイルスベクターである。特定の局面において、上記ウイルスベクターは、アデノウイルスベクターである。
【００１４】
ある特定の局面において、上記ウイルスベクターは、約１０３〜約１０１３の間のウイルス粒子で投与される。いくつかの局面において、上記アデノウイルスベクターは、静脈内に、動脈内に、血管内に、胸腔内に、腹腔内に、気管内に、腫瘍内に、髄腔内に、筋肉内に、内視鏡的に、病変内に、経皮的に、皮下に、局部的に、立体戦略的に、または直接注射もしくは灌流によって上記被験体に投与される。ある特定の局面において、上記被験体は、上記アデノウイルスベクターを１回より多く投与される。
【００１５】
いくつかの局面において、上記被験体は、上記ｐ５３をコードする核酸を投与される。他の局面において、上記被験体は、上記ＭＤＡ−７をコードする核酸を投与される。ある特定の局面において、上記被験体は、上記ｐ５３をコードする核酸および上記ＭＤＡ−７をコードする核酸を投与される。いくつかの局面において、ｐ５３およびＭＤＡ−７は、単一のプロモーターの制御下にある。いくつかの実施形態において、上記プロモーターは、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、ＳＶ４０、またはＰＧＫである。
【００１６】
いくつかの局面において、上記核酸は、リポプレックスにおいて上記被験体に投与される。ある特定の局面において、上記リポプレックスは、ＤＯＴＡＰおよび少なくとも１種のコレステロール、コレステロール誘導体、またはコレステロール混合物を含む。
【００１７】
ある特定の局面において、投与する工程は、局所注射または局部注射を含む。他の局面において、投与する工程は、連続注入、腫瘍内注射、または静脈内注射を介するものである。
【００１８】
いくつかの局面において、上記方法は、少なくとも１種のさらなる抗がん処置を投与する工程をさらに包含する。ある特定の局面において、上記少なくとも１種のさらなる抗がん処置は、外科的療法、化学療法（例えば、プロテインキナーゼインヒビターまたはＥＧＦＲ標的化治療の投与）、塞栓療法、化学塞栓療法、放射線療法、凍結療法、温熱療法、光線療法、ラジオ波焼灼療法、ホルモン療法、免疫療法、低分子療法、レセプターキナーゼインヒビター療法、抗血管新生療法、サイトカイン療法または生物学的療法（例えば、モノクローナル抗体、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイムまたは遺伝子治療）である。
【００１９】
いくつかの局面において、上記免疫療法は、サイトカインを含む。特定の局面において、上記サイトカインは、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、インターロイキン（例えば、ＩＬ−２）、および／またはインターフェロン（例えば、ＩＦＮ−α）である。腫瘍標的化免疫応答を高めるさらなるアプローチとしては、さらなる免疫チェックポイント阻害が挙げられる。いくつかの局面において、上記免疫チェックポイント阻害としては、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＰＤ−Ｌ２抗体、抗ＴＩＭ−３抗体、抗ＬＡＧ−３抗体、抗Ａ２ａＲ抗体、または抗ＫＩＲ抗体が挙げられる。いくつかの局面において、上記免疫療法は、共刺激レセプターアゴニスト（例えば、抗ＯＸ４０抗体、抗ＧＩＴＲ抗体、抗ＣＤ１３７抗体、抗ＣＤ４０抗体、および抗ＣＤ２７抗体）を含む。ある特定の局面において、上記免疫療法は、調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、骨髄由来免疫抑制細胞（ＭＤＳＣ）およびがん関連線維芽細胞（ＣＡＦ）の抑制を含む。さらなる局面において、上記免疫療法は、先天性免疫細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、および樹状細胞）の刺激を含む。さらなる免疫刺激処置としては、ＩＤＯインヒビター、ＴＧＦ−βインヒビター、ＩＬ−１０インヒビター、インターフェロン遺伝子の刺激因子（ＳＴＩＮＧ）アゴニスト、ｔｏｌｌ様レセプター（ＴＬＲ）アゴニスト（例えば、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、またはＴＬＲ９）、腫瘍ワクチン（例えば、腫瘍全細胞ワクチン、ペプチド、および組換え腫瘍関連抗原ワクチン）、および養子細胞療法（ａｄｏｐｔｉｖｅ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ）（ＡＣＴ）（例えば、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、ＴＩＬ、およびＬＡＫ細胞）が挙げられ得る。ある特定の局面において、これらの薬剤の併用が使用され得る（例えば、免疫チェックポイントインヒビター、チェックポイント阻害＋Ｔ細胞共刺激レセプターのアゴニズム、およびチェックポイント阻害＋ＴＩＬ  ＡＣＴを併用する）。ある特定の局面において、さらなる抗がん処置は、抗ＰＤ−Ｌ１免疫チェックポイントインヒビター（例えば、アベルマブ）、４−１ＢＢ（ＣＤ−１３７）アゴニスト（例えば、ウトミルマブ）、およびＯＸ４０（ＴＮＦＲＳ４）アゴニストの併用を含む。
【００２０】
いくつかの局面において、上記化学療法は、ＤＮＡ損傷因子を含む。いくつかの実施形態において、上記ＤＮＡ損傷因子は、γ線照射、Ｘ線、ＵＶ照射、マイクロ波、電子放出、アドリアマイシン、５−フルオロウラシル（５ＦＵ）、カペシタビン、エトポシド（ＶＰ−１６）、カンプトテシン、アクチノマイシンＤ、マイトマイシンＣ、シスプラチン（ＣＤＤＰ）、または過酸化水素である。特定の局面において、上記ＤＮＡ損傷因子は、５ＦＵまたはカペシタビンである。いくつかの局面において、上記化学療法は、シスプラチン（ＣＤＤＰ）、カルボプラチン、プロカルバジン、メクロレタミン、シクロホスファミド、カンプトテシン、イホスファミド、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファン、ニトロソウレア、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ブレオマイシン、プリカマイシン、マイトマイシン、エトポシド（ＶＰ１６）、タモキシフェン、タキソテール、タキソール、トランス白金、５−フルオロウラシル、ビンクリスチン、ビンブラスチン、メトトレキサート、ＨＤＡＣインヒビターまたはその任意のアナログもしくは派生改変体を含む。
【００２１】
いくつかの局面において、上記少なくとも１種のさらなる抗がん処置は、腫瘍溶解性ウイルスである。ある特定の局面において、上記腫瘍溶解性ウイルスは、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルス、レンチウイルス、ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、ワクシニアウイルス、小胞性口炎ウイルス、ポリオウイルス、ニューカッスル病ウイルス、エプスタインバーウイルス、インフルエンザウイルス、またはレオウイルスである。特定の局面において、上記腫瘍溶解性ウイルスは、単純ヘルペスウイルスである。いくつかの局面において、上記腫瘍溶解性ウイルスは、導入遺伝子（例えば、サイトカイン）を発現するように操作される。いくつかの実施形態において、上記サイトカインは、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）である。いくつかの実施形態において、上記腫瘍溶解性ウイルスは、ｔａｌｉｍｏｇｅｎｅ  ｌａｈｅｒｐａｒｅｐｖｅｃ（Ｔ−ＶＥＣ）（例えば、ＩＭＬＹＧＩＣＴＭ）としてさらに規定される。いくつかの実施形態において、上記腫瘍溶解性ウイルスは、上記ｐ５３および／またはＭＤＡ−７核酸ならびに免疫チェックポイントインヒビターの前、同時、または後に投与される。
【００２２】
いくつかの局面において、上記少なくとも１種のさらなるがん処置は、プロテインキナーゼインヒビターまたはプロテインキナーゼもしくは増殖因子シグナル伝達経路に関与するレセプターを阻害するモノクローナル抗体である。例えば、上記プロテインキナーゼまたはレセプターインヒビターは、ＥＧＦＲ、ＶＥＧＦＲ、ＡＫＴ、Ｅｒｂ１、Ｅｒｂ２、ＥｒｂＢ、Ｓｙｋ、Ｂｃｒ−Ａｂｌ、ＪＡＫ、Ｓｒｃ、ＧＳＫ−３、ＰＩ３Ｋ、Ｒａｓ、Ｒａｆ、ＭＡＰＫ、ＭＡＰＫＫ、ｍＴＯＲ、ｃ−Ｋｉｔ、ｅｐｈレセプターまたはＢＲＡＦインヒビターであり得る。特定の局面において、上記プロテインキナーゼインヒビターは、ＰＩ３Ｋインヒビターである。いくつかの実施形態において、上記ＰＩ３Ｋインヒビターは、ＰＩ３Ｋδインヒビターである。例えば、上記プロテインキナーゼまたはレセプターインヒビターは、アファチニブ、アキシチニブ、ベバシズマブ、ボスチニブ、セツキシマブ、クリゾチニブ、ダサチニブ、エルロチニブ、ホスタマチニブ、ゲフィチニブ、イマチニブ、ラパチニブ、レンバチニブ、ムブリチニブ、ニロチニブ、パニツムマブ、パゾパニブ、ペガプタニブ、ラニビズマブ、ルキソリチニブ、サラカチニブ、ソラフェニブ、スニチニブ、トラスツズマブ、バンデタニブ、ＡＰ２３４５１、ベムラフェニブ、ＣＡＬ１０１、ＰＸ−８６６、ＬＹ２９４００２、ラパマイシン、テムシロリムス、エベロリムス、リダホロリムス、アルボシジブ、ゲニステイン、セルメチニブ、ＡＺＤ−６２４４、バタラニブ、Ｐ１４４６Ａ−０５、ＡＧ−０２４３２２、ＺＤ１８３９、Ｐ２７６−００、ＧＷ５７２０１６、またはこれらの混合物であり得る。ある特定の局面において、上記プロテインキナーゼインヒビターは、ＡＫＴインヒビター（例えば、ＭＫ−２２０６、ＧＳＫ６９０６９３、Ａ−４４３６５４、ＶＱＤ−００２、ミルテホシンまたはペリホシン）である。ある特定の局面において、実施形態に従う使用のためのＥＧＦＲ標的化療法としては、ＥＧＦＲ／ＥｒｂＢ１／ＨＥＲ、ＥｒｂＢ２／Ｎｅｕ／ＨＥＲ２、ＥｒｂＢ３／ＨＥＲ３、および／またはＥｒｂＢ４／ＨＥＲ４のインヒビターが挙げられるが、これらに限定されない。このようなインヒビターの広い範囲は、公知であり、レセプターおよびＥＧＦＲ結合抗体またはアプタマーに対して活性なチロシンキナーゼインヒビターを含むが、これに限定されない。例えば、上記ＥＧＦＲインヒビターは、ゲフィチニブ、エルロチニブ、セツキシマブ、マツズマブ、パニツムマブ、ＡＥＥ７８８；ＣＩ−１０３３、ＨＫＩ−２７２、ＨＫＩ−３５７、またはＥＫＢ−５６９であり得る。上記プロテインキナーゼインヒビターは、ＢＲＡＦインヒビター（例えば、ダブラフェニブ）、またはＭＥＫインヒビター（例えば、トラメチニブ）であり得る。
【００２３】
本発明の他の目的、特徴および利点は、以下の詳細な説明から明らかになる。しかし、詳細な説明および具体例は、本発明の好ましい実施形態を示すと同時に、例証によって与えられるに過ぎないことは理解されるべきである。なぜなら本発明の趣旨および範囲内での種々の変更および改変が、この詳細な説明から当業者に明らかになるからである。
【００２４】
以下の図面は、本明細書の一部を形成し、本発明のある特定の局面をさらに示すために含められる。本発明は、本明細書で示される具体的実施形態の詳細な説明と組み合わせて、これら図面のうちの１もしくはこれより多くを参照することによって、より良好に理解され得る。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】図１：  Ａｄ−ｐ５３＋抗ＰＤ−１効力：腫瘍容積。    リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）コントロール、抗ＰＤ−１、Ａｄ−ｐ５３、またはＡｄ−ｐ５３＋抗ＰＤ−１の併用のいずれかを受けた齧歯類における腫瘍容積を経時的に示すグラフ。抗ＰＤ−１治療の間の重篤な腫瘍進行とともに、Ａｄ−ｐ５３治療によって誘導される抗ＰＤ−１抵抗性の改善（ｒｅｖｅｒｓａｌ）が存在した。抗ＰＤ−１治療またはＡｄ−ｐ５３治療のいずれか単独と比較して、Ａｄ−ｐ５３＋抗ＰＤ−１処置の増強された効力が存在した。２２日目までに、Ａｄ−ｐ５３＋抗ＰＤ−１での併用処置は、抗ＰＤ−１治療またはＡｄ−ｐ５３治療のいずれか単独と比較して、腫瘍容積の大きな低下を誘導した。各処置に関する腫瘍容積の統計的分散分析（ＡＮＯＶＡ）比較は、Ａｄ−ｐ５３＋抗ＰＤ１の抗腫瘍効果が２２日目程度の早さで相乗効果的であり（ｐ値  ０．０００１）、２９日目での評価を経て継続する（ｐ値  ０．０１３）ことを決定した。
【００２６】
【図２】図２：  Ａｄ−ｐ５３＋抗ＰＤ−１効力：反対側の腫瘍容積。    原発性腫瘍が抗ＰＤ−１、Ａｄ−ｐ５３またはＡｄ−ｐ５３＋抗ＰＤ−１処置の併用のいずれかを受けた齧歯類における経時的な反対側の腫瘍容積。原発性腫瘍増殖の抑制において観察された相乗効果と一致して、本発明者らはまた、腫瘍抑制因子療法を受けなかった反対側の（第２の）腫瘍における低下した増殖とともに、統計的に有意な遠達効果を観察した。これらの知見は、併用処置（Ａｄ−ｐ５３＋抗ＰＤ１）が、遠達効果を媒介する全身性免疫を誘導したことを暗示する。原発性腫瘍がＡｄ−ｐ５３単独で処置された動物における反対側の腫瘍は、抗ＰＤ−１単独で処置された原発性腫瘍の増殖速度と比較して、有意に遅延した腫瘍増殖を示した（ｐ＝０．０４６）。反対側の腫瘍増殖に対するさらにより大きな遠達効果（ｐ＝０．０２４３）は、原発性腫瘍をＡｄ−ｐ５３＋抗ＰＤ−１の併用で処置されたマウスにおいて観察された。
【００２７】
【図３】図３：  Ａｄ−ｐ５３＋抗ＰＤ１効力：生存。    ＰＢＳ、抗ＰＤ−１、Ａｄ−ｐ５３またはこれらの薬剤の併用のいずれかで処置されたマウスに関するカプラン・マイアー生存曲線。結果は、ＰＢＳまたは抗ＰＤ−１で処置された動物の生存において有意差を示さず、Ａｄ−ｐ５３で処置された動物における増大した生存を示し、およびＡｄ−ｐ５３（ｐ＝０．０１６７）または抗ＰＤ−１（ｐ＜０．００１）いずれかの単剤療法で処置されたマウスにおいて観察されたものを超える、Ａｄ−ｐ５３＋抗ＰＤ−１の併用で処置された動物における生存の有意な増強を示す。
【００２８】
【図４】図４：  Ａｄ−ＩＬ２４＋抗ＰＤ−１効力：腫瘍容積。    ＰＢＳコントロール、抗ＰＤ−１、Ａｄ−ＩＬ２４、またはＡｄ−ＩＬ２４＋抗ＰＤ−１の併用のいずれかを受けた齧歯類における腫瘍容積を経時的に示すグラフ。抗ＰＤ−１治療の間の重篤な腫瘍進行とともに、Ａｄ−ＩＬ２４治療との併用による抗ＰＤ−１抵抗性の改善が存在した。抗ＰＤ−１治療またはＡｄ−ＩＬ２４治療いずれか単独と比較して、Ａｄ−ＩＬ２４＋抗ＰＤ−１処置の増強された効力が存在した。各処置に関する腫瘍容積の統計的分散分析（ＡＮＯＶＡ）比較は、Ａｄ−ＩＬ２４および抗ＰＤ−１処置の併用効果が処置の１４日目まで相乗効果的であることを決定した（ｐ値＝０．００２）。
【００２９】
【図５】図５：  Ａｄ−ＩＬ２４＋抗ＰＤ−１効力：反対側の腫瘍容積。    原発性腫瘍が抗ＰＤ−１、Ａｄ−ＩＬ２４またはＡｄ−ＩＬ２４＋抗ＰＤ−１処置の併用のいずれかを受けた齧歯類における経時的な反対側の腫瘍容積。Ａｄ−ＩＬ２４および抗ＰＤ−１併用処置によって原発性腫瘍増殖の抑制において観察された、増大した効果と一致して、本発明者らはまた、腫瘍抑制因子療法を注射されなかった反対側の（第２の）腫瘍における低下した増殖とともに、統計的に有意な遠達効果を観察した。これらの知見は、併用処置Ａｄ−ＩＬ２４＋抗ＰＤ−１も（Ａｄ−ｐ５３＋抗ＰＤ−１治療と同様に）遠達効果を媒介する全身性免疫を誘導したことを暗示する。原発性病変がＡｄ−ＩＬ２４および抗ＰＤ−１の併用で処置された動物における反対側の腫瘍は、腫瘍増殖において最大の低下を示した。Ａｄ−ＩＬ２４単独（Ｐ＝０．００２１）およびＡｄ−ＩＬ２４＋抗ＰＤ−１（Ｐ＜０．０００１）処置群はともに、抗ＰＤ−１単独で処置された原発性腫瘍の増殖速度と比較して、統計的に有意な低下した遠達腫瘍増殖を示した。
【００３０】
【図６】図６：  ＡＤ−ＩＬ２４＋抗ＰＤ−１効力：生存。    ＰＢＳ、抗ＰＤ−１、Ａｄ−ＩＬ２４またはこれらの薬剤の併用のいずれかで処置されたマウスに関するカプラン・マイアー生存曲線。結果は、ＰＢＳまたは抗ＰＤ−１で処置された動物の生存において有意差を示さず、Ａｄ−ＩＬ２４で処置された動物における増大した生存を示し、およびＡｄ−ＩＬ２４（ｐ＝０．００１１）または抗ＰＤ−１（ｐ＜０．００１）いずれかの単剤療法で処置されたマウスにおいて観察されたものを超える、Ａｄ−ＩＬ２４＋抗ＰＤ−１の併用で処置された動物における生存の有意な増強を示す。
【００３１】
【図７】図７：  Ａｄ−ｐ５３＋Ａｄ−ＩＬ２４＋抗ＰＤ−１効力：腫瘍容積。    リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）コントロール、抗ＰＤ−１、Ａｄ−ｐ５３＋Ａｄ−ＩＬ２４、またはＡｄ−ｐ５３＋Ａｄ−ＩＬ２４＋抗ＰＤ−１の併用のいずれかを受けた齧歯類における腫瘍容積を経時的に示すグラフ。抗ＰＤ−１治療の間の重篤な腫瘍進行とともに、Ａｄ−ｐ５３＋Ａｄ−ＩＬ２４治療によって誘導される抗ＰＤ−１抵抗性の改善が存在した。抗ＰＤ−１またはＡｄ−ｐ５３＋Ａｄ−ＩＬ２４治療いずれか単独と比較して、Ａｄ−ｐ５３＋Ａｄ−ＩＬ２４＋抗ＰＤ−１処置の増強された効力が存在した。各処置に関する腫瘍容積の統計的分散分析（ＡＮＯＶＡ）比較は、Ａｄ−ｐ５３＋Ａｄ−ＩＬ２４＋抗ＰＤ−１処置の併用効果が、処置の１４日目まで相乗効果的であることを決定した（ｐ値＝０．０３５）。
【００３２】
【図８】図８：  ５ＦＵ＋ＣＴＸ＋ＧＭ−ＣＳＦ＋抗ＰＤ−１効力：腫瘍容積。    ＰＢＳコントロール、抗ＰＤ−１、５ＦＵ＋ＣＴＸ＋ＧＭ−ＣＳＦまたは５ＦＵ＋ＣＴＸ＋ＧＭ−ＣＳＦ＋抗ＰＤ−１処置の併用のいずれかを受けた齧歯類における腫瘍容積を経時的に示すグラフ。抗ＰＤ−１または５ＦＵ＋ＣＴＸ＋ＧＭ−ＣＳＦでの処置後の重篤な腫瘍進行とともに、５ＦＵ＋ＣＴＸ＋ＧＭ−ＣＳＦ＋抗ＰＤ−１の併用で処置されたマウスにおける抗ＰＤ−１抵抗性の改善が存在した。各処置に関する腫瘍容積の統計的分散分析（ＡＮＯＶＡ）比較は、５−ＦＵ＋ＣＴＸ＋ＧＭ−ＣＳＦおよび抗ＰＤ−１処置の併用効果が処置の１４日目まで相乗効果的であることを決定した（ｐ値＝Ｐ＝０．０２８）。
【００３３】
【図９】図９：  Ａｄ−ＩＬ２４＋５ＦＵ＋ＣＴＸ＋ＧＭ−ＣＳＦ＋抗ＰＤ−１効力：腫瘍容積。    ＰＢＳコントロール、Ａｄ−ＩＬ２４、５ＦＵ＋ＣＴＸ＋ＧＭ−ＣＳＦ＋抗ＰＤ−１またはＡｄ−ＩＬ２４＋５ＦＵ＋ＣＴＸ＋ＧＭ−ＣＳＦ＋抗ＰＤ−１処置の併用のいずれかを受けた齧歯類における腫瘍容積を経時的に示すグラフ。ＰＢＳ、Ａｄ−ＩＬ−２４または５ＦＵ＋ＣＴＸ＋ＧＭ−ＣＳＦ＋抗ＰＤ−１での処置後の重篤な腫瘍進行とともに、Ａｄ−ＩＬ２４＋５ＦＵ＋ＣＴＸ＋ＧＭ−ＣＳＦ＋抗ＰＤ−１の併用で処置されたマウスにおける抗ＰＤ−１抵抗性の改善が存在した。各処置に関する腫瘍容積の統計的分散分析（ＡＮＯＶＡ）比較は、５−ＦＵ＋ＣＴＸ＋ＧＭ−ＣＳＦ＋抗ＰＤ−１およびＡｄ−ＩＬ２４処置の併用効果が、処置の１４日目まで相乗効果的であることを決定した（ｐ値＝０．０１０）。
【００３４】
【図１０】図１０：  Ａｄ−リラキシン＋Ａｄ−ＩＬ２４＋抗ＰＤ１効力：    ＰＢＳコントロール、抗ＰＤ−１、Ａｄ−リラキシン＋Ａｄ−ＩＬ２４、またはＡｄ−リラキシン＋Ａｄ−ＩＬ２４＋抗ＰＤ−１の併用のいずれかを受けた齧歯類における腫瘍容積を経時的に示すグラフ。抗ＰＤ−１治療の間の重篤な腫瘍進行とともに、Ａｄ−リラキシン＋Ａｄ−ＩＬ２４治療との併用による抗ＰＤ−１抵抗性の改善が存在した。抗ＰＤ−１またはＰＢＳいずれかの処置単独と比較して、Ａｄ−リラキシン＋Ａｄ−ＩＬ２４＋抗ＰＤ−１処置の増強された効力が存在した。１１日目での腫瘍容積の複数比較に関する統計的分散分析（ＡＮＯＶＡ）を、処置効果を比較するために行った。ＰＢＳ  対  抗ＰＤ−１処置（Ｐ＝０．８３４３）の間には統計的有意差が存在しなかった一方で、ＰＢＳ  対  Ａｄ−ＲＬＸ＋Ａｄ−ＩＬ２４（Ｐ＝０．０４１６）およびＰＢＳ  対  Ａｄ−ＲＬＸ＋Ａｄ−ＩＬ２４＋抗ＰＤ−１（Ｐ＝０．００３９）は両方ともに、ＰＢＳコントロールと比較して、腫瘍サイズにおいて統計的に有意な低下を示した。抗ＰＤ−１  対  Ａｄ−ＲＬＸ＋Ａｄ−ＩＬ２４処置（Ｐ＝０．０９２９）の間には統計的有意差が存在しなかった一方で、抗ＰＤ−１  対  Ａｄ−ＲＬＸ＋Ａｄ−ＩＬ２４＋抗ＰＤ−１群の間の差異は統計的に有意であった（Ｐ＝０．００４９）。これは、Ａｄ−ＲＬＸ＋Ａｄ−ＩＬ２４＋抗ＰＤ−１併用の優れた効力を示す。
【００３５】
【図１１】図１１：  Ａｄ−ＩＬ２４／ＣＴＶ−ＩＬ２４＋抗ＰＤ１＋抗ＬＡＧ−３効力：生存。    ＰＢＳ、抗ＰＤ−１＋抗ＬＡＧ−３、Ａｄ−ＩＬ２４／ＣＴＶ−ＩＬ２４、またはＡｄ−ＩＬ２４／ＣＴＶ−ＩＬ２４と抗ＰＤ−１＋抗ＬＡＧ−３との併用のいずれかで処置されたマウスに関するカプラン・マイアー生存曲線。結果は、ＰＢＳまたは抗ＰＤ−１＋抗ＬＡＧ−３で処置された動物の生存において有意差を示さず、Ａｄ−ＩＬ−２４／ＣＴＶ−ＩＬ２４で処置された動物において増大した生存（ｐ＜０．０００１）を示し、Ａｄ−ＩＬ−２４／ＣＴＶ−ＩＬ２４＋抗ＰＤ−１＋抗ＬＡＧ−３の併用で処置された動物において生存の有意な増強（ｐ＝０．００１１）を示す。
【００３６】
【図１２】図１２：  ＴＡＶ−Ａｄ−ｐ５３／抗ＰＤＬ１効力：腫瘍容積。    ＰＢＳ緩衝液コントロール、抗ＰＤ−１、ＴＡＶ−Ａｄ−ｐ５３、またはＴＡＶ−Ａｄ−ｐ５３＋抗ＰＤ−１の併用のいずれかを受けた齧歯類における腫瘍容積を経時的に示すグラフ。抗ＰＤ−１治療の間の重篤な腫瘍進行とともに、ＴＡＶ−Ａｄ−ｐ５３治療との併用による抗ＰＤ−１抵抗性の改善が存在した。ＴＡＶ  Ａｄ−ｐ５３単独およびＴＡＶ  Ａｄ−ｐ５３＋抗ＰＤ−Ｌ１の腫瘍容積は、腹腔内抗ＰＤＬ１での腫瘍内緩衝液と比較して、ＴＡＶ  Ａｄ−ｐ５３＋抗ＰＤ−Ｌ１で処置されたマウスにおいて有意により小さかった（ｐ＜０．０５）。
【発明を実施するための形態】
【００３７】
例示的実施形態の説明
腫瘍がその始まりおよび進行の間に進化して、免疫系による破壊から逃れることは周知である。この抵抗性を改善するために免疫チェックポイントインヒビターを近年使用することで、ある種の成功が示された一方で、患者の大部分は、これらの処置に応答しない。本発明は、腫瘍の微小環境を変化させて、抵抗性を克服するおよび抗腫瘍免疫応答を増強するための方法および組成物を提供することによって、現在の技術と関連する難題を克服する。一実施形態において、ｐ５３および／またはＭＤＡ−７を、少なくとも１種の免疫チェックポイントインヒビターと組み合わせて発現することによる、がんの処置のための方法が提供される。特に、腫瘍抑制遺伝子は、複製不能アデノウイルスとして投与される。一方法において、ｐ５３遺伝子治療は、適応抗腫瘍免疫応答を誘導するために、免疫チェックポイントインヒビター（例えば、抗ＰＤ−１抗体）と併用してＭＤＡ−７遺伝子治療を投与する前に、先天性抗腫瘍免疫を増強するために、免疫チェックポイントインヒビター（例えば、抗ＰＤ１抗体または抗ＫＩＲ抗体）と併用して投与される。あるいは、ｐ５３およびＭＤＡ−７は、免疫チェックポイントインヒビターと同時に投与され得る。
【００３８】
さらに、本発明者らは、腫瘍細胞の細胞外マトリクスを分解するためにさらなる治療を投与することで、腫瘍抑制遺伝子治療および免疫チェックポイントインヒビターの併用療法の腫瘍浸透が増強され得ることを決定した。特に、細胞外マトリクス分解療法は、併用療法の前に投与される。一方法において、細胞外マトリクス分解療法は、リラキシン遺伝子治療（例えば、アデノウイルスリラキシン）である。特に、アデノウイルスリラキシンは、腫瘍内にまたは動脈内に投与される。
【００３９】
さらに、処置方法は、本明細書で提供される併用療法の抗腫瘍効果を増強するために、さらなる抗がん治療（例えば、サイトカインまたは化学療法剤）を含み得る。例えば、サイトカインは、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）であり得、化学療法は、５−フルオロウラシル（５ＦＵ）またはカペシタビンまたはシクロホスファミドまたはＰＩ３Ｋインヒビターであり得る。本研究において、局所領域腫瘍抑制因子処置は、全身性の免疫チェックポイントインヒビター治療に対する抵抗性を改善し、免疫チェックポイントインヒビター処置との予測外の相乗効果を示し、その併用療法は、腫瘍抑制因子療法で処置されていない遠隔の腫瘍に対して優れた遠達効果を誘導した。これらの予測外の全身性の処置効果は、腫瘍微小環境の細胞外マトリクスを変化させるさらなる治療（リラキシン）と併用された場合に、ならびに化学療法、サイトカイン療法と骨髄由来免疫抑制細胞（ＭＤＳＣ）、Ｔ−Ｒｅｇおよび樹状細胞を調節することが公知の薬剤とを併用して、増強されることが見出された。従って、本発明は、先天性および適応抗腫瘍免疫応答を増強する、ならびに免疫チェックポイント治療への抵抗性を克服するおよび遠達全身処置効果を誘導することによって、がんを処置するための方法を提供する。
【００４０】
Ｉ．  定義
本明細書で使用される場合、特定された構成要素に関して「本質的に含まない（ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｆｒｅｅ）」とは、その特定された構成要素が組成物へと故意に製剤化されていない、および／または汚染物質としてもしくは微量においてのみ存在することを意味するために、本明細書で使用される。組成物の何らかの意図されない汚染から生じるその特定された構成要素の総量は、従って、０．０５％を十分に下回り、好ましくは０．０１％を下回る。最も好ましいのは、その特定された構成要素の量が標準的分析法で全く検出できない組成物である。
【００４１】
本明細書で使用される場合、明細書の中で「１つの、ある（ａ）」または「１つの、ある（ａｎ）」は、１もしくはこれより多いを意味し得る。本明細書で使用される場合、請求項の中で、文言「含む、包含する（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」とともに使用されるとき、文言「１つの、ある（ａ）」または「１つの、ある（ａｎ）」は、１もしくは１より多いを意味し得る。
【００４２】
請求項の中での用語「または（ｏｒ）」の使用は、選択肢に言及するに過ぎないことが明示的に示されていなければ、または選択肢が相互に排他的でなければ、「および／または（ａｎｄ／ｏｒ）」を意味するために使用されるが、本開示は、選択肢のみに言及する定義、そして「および／または」を支持する。本明細書で使用される場合、「別の、もう１つの（ａｎｏｔｈｅｒ）」は、少なくとも第２のもしくはこれより多いを意味し得る。
【００４３】
本出願全体を通じて、用語「約（ａｂｏｕｔ）」は、値が、デバイスの誤差の固有の変動、その値を決定するために使用されている方法、または研究被験体の間に存在する変動を含むことを示すために使用される。
【００４４】
本明細書で使用される場合、「野生型（ｗｉｌｄ−ｔｙｐｅ）」とは、生物のゲノムの遺伝子座において核酸の天然に存在する配列、およびそのような核酸から転写または翻訳される配列に言及する。従って、用語「野生型」は、その核酸によってコードされるアミノ酸配列にも言及し得る。遺伝子座は、個体の集団の中で１より多くの配列または対立遺伝子を有し得るので、用語「野生型」は、全てのこのような天然に存在する対立遺伝子を包含する。本明細書で使用される場合、用語「多型の（ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ）」とは、集団の個体における遺伝子座において、バリエーションが存在する（すなわち、２もしくはこれより多くの対立遺伝子が存在する）ことを意味する。本明細書で使用される場合、「変異の、変異体（ｍｕｔａｎｔ）」とは、核酸またはそのコードされたタンパク質、ポリペプチド、または組換えＤＮＡ技術の結果であるペプチドの配列における変化に言及する。
【００４５】
用語「外因性の（ｅｘｏｇｅｎｏｕｓ）」とは、細胞または生物中のタンパク質、遺伝子、核酸またはポリヌクレオチドに関連して使用される場合、人工的手段または天然の手段によって、細胞または生物へと導入されているタンパク質、遺伝子、核酸、またはポリヌクレオチドに言及する；あるいは細胞に関連して、その用語は、人工的手段または天然の手段によって、単離されて他の細胞または生物にその後導入された細胞に言及する。外因性の核酸は、種々の生物もしくは細胞に由来し得るか、またはその生物もしくは細胞内に天然に存在する核酸の１もしくはこれより多くのさらなるコピーであり得る。外因性の細胞は、異なる生物に由来してもよいし、同じ生物に由来してもよい。非限定的な例によれば、外因性の核酸は、天然の細胞にある場合とは異なる染色体位置にある核酸であるか、またはさもなければ、天然において見出される異なる核酸配列が隣接している核酸である。
【００４６】
「発現構築物（ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｃｏｎｓｔｒｕｃｔ）」または「発現カセット（ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｃａｓｓｅｔｔｅ）」とは、転写を指向し得る核酸分子を意味する。発現構築物は、１もしくはこれより多くの望ましい細胞タイプ、組織または生物において遺伝子発現を指向する、少なくとも、１もしくはこれより多くの転写制御エレメント（例えば、プロモーター、エンハンサーまたはその機能的に等価な構造）を含む。さらなるエレメント（例えば、転写終結シグナル）もまた含まれ得る。
【００４７】
「ベクター（ｖｅｃｔｏｒ）」または「構築物（ｃｏｎｓｔｒｕｃｔ）」（ときおり、遺伝子送達系または遺伝子移入「ビヒクル（ｖｅｈｉｃｌｅ）」といわれる）とは、宿主細胞に、インビトロもしくはインビボのいずれかで送達されるべきポリヌクレオチドを含む分子の高分子または複合体に言及する。
【００４８】
「プラスミド（ｐｌａｓｍｉｄ）」は、ベクターの一般的なタイプであり、染色体ＤＮＡとは独立して複製し得る染色体ＤＮＡとは別個の染色体外ＤＮＡ分子である。ある特定の場合には、それは環状および２本鎖である。
【００４９】
「複製起点（ｏｒｉｇｉｎ  ｏｆ  ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ）」（「ｏｒｉ」）または「複製起点（ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｒｉｇｉｎ）」とは、例えば、リンパ向性ヘルペスウイルスにおける、細胞においてプラスミド中に存在する場合に、そのプラスミドおよび／またはＤＮＡ合成が開始する部位もしくはその部位付近の中で連結された配列を維持し得るＤＮＡ配列である。例としては、ＥＢＶのｏｒｉは、ＦＲ配列（３０ｂｐ反復の２０の不完全コピー）、および好ましくはＤＳ配列を含む；しかし、ＥＢＶにおける他の部位は、ＥＢＮＡ−１を結合し、例えば、Ｒｅｐ＊配列は、複製起点としてＤＳの代わりに使用され得る（Ｋｉｒｓｈｍａｉｅｒ  ａｎｄ  Ｓｕｇｄｅｎ，  １９９８）。従って、ＥＢＶの複製起点は、ＦＲ、ＤＳもしくはＲｅｐ＊配列または核酸改変を介する任意の機能的に等価な配列、またはこれらに由来する人工的組み合わせを含む。例えば、本発明はまた、Ｌｉｎｄｎｅｒら，  ２００８において具体的に記載されるように、ＥＢＶの遺伝子操作された複製起点（例えば、個々のエレメントの挿入もしくは変異によって）を使用し得る。
【００５０】
特定のタンパク質を「コードする（ｅｎｃｏｄｅｓ）」「遺伝子（ｇｅｎｅ）」、「ポリヌクレオチド（ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ）」、「コード領域（ｃｏｄｉｎｇ  ｒｅｇｉｏｎ）」、「配列（ｓｅｑｕｅｎｃｅ）」、「セグメント（ｓｅｇｍｅｎｔ）」、「フラグメント（ｆｒａｇｍｅｎｔ）」または「導入遺伝子（ｔｒａｎｓｇｅｎｅ）」は、適切な調節配列の制御下に置かれる場合に、遺伝子生成物（例えば、ポリペプチド）へとインビトロまたはインビボで転写され、そして必要に応じて翻訳もされる核酸分子である。そのコード領域は、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、またはＲＮＡ形態のいずれかで存在し得る。ＤＮＡ形態で存在する場合、その核酸分子は、１本鎖（すなわち、センス鎖）または２本鎖であり得る。コード領域の境界は、５’（アミノ）末端の開始コドンおよび３’（カルボキシ）末端の翻訳終止コドンによって決定される。遺伝子としては、原核生物または真核生物のｍＲＮＡに由来するｃＤＮＡ、原核生物または真核生物のＤＮＡに由来するゲノムＤＮＡ配列、ならびに合成ＤＮＡ配列が挙げられ得るが、これらに限定されない。転写終結配列は通常、遺伝子配列に対して３’側に位置する。
【００５１】
用語「制御エレメント（ｃｏｎｔｒｏｌ  ｅｌｅｍｅｎｔ）」とは、プロモーター領域、ポリアデニル化シグナル、転写終結配列、上流調節ドメイン、複製起点、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）、エンハンサー、スプライスジャンクションなどにまとめて言及し、これらは、レシピエント細胞において複製、転写、転写後プロセシング、およびコード配列の翻訳をまとめて提供する。選択されたコード配列が適切な宿主細胞において複製、転写、および翻訳され得る限りにおいて、これらの制御エレメントの必ずしも全てが存在する必要があるわけではない。
【００５２】
用語「プロモーター（ｐｒｏｍｏｔｅｒ）」とは、ＤＮＡ調節配列を含むヌクレオチド領域をいうためにその通常の意味において本明細書で使用され、ここでその調節配列は、ＲＮＡポリメラーゼを結合し得かつ下流（３’方向）のコード配列の転写を開始し得る遺伝子に由来する。それは、核酸配列の特異的転写を開始するために、調節タンパク質および分子が結合し得る遺伝的エレメント（例えば、ＲＮＡポリメラーゼおよび他の転写因子）を含み得る。語句「作動可能に配置される（ｏｐｅｒａｔｉｖｅｌｙ  ｐｏｓｉｔｉｏｎｅｄ）」、「作動可能に連結される（ｏｐｅｒａｔｉｖｅｌｙ  ｌｉｎｋｅｄ）」、「制御下にある（ｕｎｄｅｒ  ｃｏｎｔｒｏｌ）」および「転写制御下にある（ｕｎｄｅｒ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ  ｃｏｎｔｒｏｌ）」とは、プロモーターが正確な機能的位置ならびに／またはその配列の転写開始および／もしくは発現を制御するために核酸配列に関連する配向にあることを意味する。
【００５３】
「エンハンサー（ｅｎｈａｎｃｅｒ）」とは、プロモーターに近接して位置づけられた場合に、そのエンハンサードメインの非存在下でプロモーターから生じる転写活性と比較して増大した転写活性を付与する核酸配列を意味する。
【００５４】
核酸分子に言及して「作動可能に連結される（ｏｐｅｒａｂｌｙ  ｌｉｎｋｅｄ）」または「共発現される」（「ｃｏ−ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ）」とは、２もしくはこれより多くの核酸分子（例えば、転写されるべき核酸分子、プロモーター、およびエンハンサーエレメント）が、その核酸分子の転写を可能にするような方法で接続されることを意味する。ペプチドおよび／またはポリペプチド分子に言及して「必要に応じて連結される」または「共発現される」とは、２もしくはこれより多くのペプチドおよび／またはポリペプチド分子が、融合物のうちの各ペプチドおよび／またはポリペプチド構成要素の少なくとも１つの特性を有する単一のポリペプチド鎖（すなわち、融合ポリペプチド）を生じるような様式で接続されることを意味する。その融合ポリペプチドは、好ましくは、キメラであり、すなわち、異種分子から構成される。
【００５５】
「相同性（ｈｏｍｏｌｏｇｙ）」とは、２つのポリヌクレオチド間または２つのポリペプチド間の同一性のパーセントに言及する。１つの配列と別の配列との間の対応は、当該分野で公知の技術によって決定され得る。例えば、相同性は、  配列情報を整列させ、容易に入手可能なコンピュータープログラムを使用することによって、２つのポリペプチド分子の間の配列情報の直接比較によって決定され得る。あるいは、相同性は、相同な領域の間での安定な二重鎖の形成を促進する条件化でのポリヌクレオチドのハイブリダイゼーション、続いて、１本鎖特異的ヌクレアーゼでの消化、およびその消化されたフラグメントのサイズ決定によって決定され得る。２つのＤＮＡ配列、または２つのポリペプチド配列は、そのヌクレオチドまたはアミノ酸のうちの少なくとも約８０％、好ましくは少なくとも約９０％、および最も好ましくは少なくとも約９５％が、上記の方法を使用して決定される場合に、その分子の規定された長さにわたってそれぞれマッチする場合に、他衛外に「実質的に相同（ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌｌｙ  ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ）」である。
【００５６】
用語「核酸（ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄ）」とは、一般に、少なくとも１種の核塩基（例えば、ＤＮＡにおいて見出される天然に存在するプリンもしくはピリミジン塩基（例えば、アデニン「Ａ」、グアニン「Ｇ」、チミン「Ｔ」、およびシトシン「Ｃ」）またはＲＮＡにおいて見出される天然に存在するプリンもしくはピリミジン塩基（例えば、Ａ、Ｇ、ウラシル「Ｕ」、およびＣ）のような）を含むＤＮＡ、ＲＮＡまたはその誘導体もしくは模倣物のうちの少なくとも１種の分子または鎖に言及する。用語「核酸」は、用語「オリゴヌクレオチド（ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ）」および「ポリヌクレオチド（ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ）」を包含する。用語「オリゴヌクレオチド」とは、長さが約３〜約１００核塩基の間の少なくとも１種の分子をいう。用語「ポリヌクレオチド」とは、長さが約１００核塩基より大きい少なくとも１種の分子をいう。これらの定義は一般に、少なくとも１種の１本鎖分子に言及するが、具体的実施形態では、少なくとも１種の１本鎖に部分的に、実質的にまたは完全に相補的である少なくとも１種のさらなる鎖をも包含する。従って、核酸は、その分子の鎖を含む特定の配列の１もしくはこれより多くの相補鎖または「相補体（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ）」を含む少なくとも１種の２本鎖分子または少なくとも１種の３本鎖分子を包含し得る。
【００５７】
本出願全体を通じて使用される用語「治療上の利益」とは、患者のがんの医療的処置に関して、彼の安寧を促進するかまたは高める何らかのものをいう。この中の非網羅的例の列挙としては、任意の期間、患者の寿命を延ばすこと；疾患の新生物発生の低下もしくは遅延；過剰増殖の低下；腫瘍増殖の低下；転移の遅延；がん細胞または腫瘍細胞の増殖速度の低減；任意の処置された細胞における、または処置された細胞によって影響を及ぼされる任意の細胞におけるアポトーシスの誘導；および患者の状態に起因し得る患者への疼痛の低下が挙げられる。
【００５８】
「有効量（ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ａｍｏｕｎｔ）」とは、特定の障害の測定可能な改善または防止をもたらすために必要とされる少なくとも最小量である。本明細書中の有効量は、患者の疾患状態、年齢、性別、および体重、ならびに抗体が個体において所望の応答を誘起する能力のような要因に従って変動し得る。有効量はまた、処置の任意の毒性のまたは有害な効果を、治療上有益な効果が上回る量である。予防的使用に関しては、有益なまたは所望の結果としては、疾患（疾患の生化学的、組織学的および／もしくは行動上の症状、その合併症および疾患の発生の間に現れる病理学上の中間型表現型を含む）のリスクを排除または低減する、重篤度を低減する、または、開始を遅らせる、のような結果が挙げられる。治療的使用に関しては、有益なまたは所望の結果としては、疾患から生じる１もしくはこれより多くの症状を低減させる、疾患に罹患している者のクオリティー・オブ・ライフを増大させる、疾患を処置するために必要とされる他の薬物療法の用量を低減させる、標的化を介するような別の薬物療法の効果を増強する、疾患の進行を遅らせる、および／または生存を長期化させる、のような臨床上の結果が挙げられる。がんまたは腫瘍の場合に、薬物の有効量は、がん細胞の数を低減する；腫瘍サイズを縮小する；周辺の器官へのがん細胞浸潤を阻害する（すなわち、ある程度遅らせるか、または望ましくは停止させる）；腫瘍転移を阻害する（すなわち、ある程度遅らせるか、または望ましくは停止させる）；腫瘍増殖をある程度阻害する；および／または障害と関連する症状のうちの１もしくはこれより多くをある程度軽減することにおいて効果を有し得る。有効量は、１回もしくはこれより多くの投与において投与され得る。本発明の目的のために、薬物、化合物、または薬学的組成物の有効量は、直接的または間接的のいずれかで予防的処置または治療的処置を達成するために十分な量である。臨床上の状況において理解されるように、薬物、化合物、または薬学的組成物の有効量は、別の薬物、化合物、または薬学的組成物とともに達成されてもよいし、そうでなくてもよい。従って、「有効量」は、１もしくはこれより多くの治療剤を投与する状況において考慮され得、単一の薬剤は、１もしくはこれより多くの他の薬剤とともに、所望の結果が達成され得るかまたは達成される場合、有効量で与えられると考えられ得る。
【００５９】
本明細書で使用される場合、「キャリア（ｃａｒｒｉｅｒ）」とは、任意のおよび全ての溶媒、分散媒、ビヒクル、被覆、希釈剤、抗細菌剤および抗真菌剤、等張性薬剤および吸収遅延剤、緩衝化剤、キャリア溶液、懸濁物、コロイドなどを含む。薬学的活性物質のためのこのような媒体および薬剤の使用は、当該分野で周知である。任意の従来の媒体または薬剤が活性成分と不適合である限りを除いて、治療的組成物におけるその使用は、企図される。補助的な活性成分はまた、その組成物へと組みこまれ得る。
【００６０】
用語「薬学的製剤（ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ）」とは、活性成分の生物学的活性が有効であることを可能にするようにこのような形態にあり、かつその製剤が投与される被験体に許容不能に毒性であるさらなる構成要素を含まない調製物に言及する。このような製剤は、無菌である。「薬学的に受容可能な（ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｌｙ  ａｃｃｅｐｔａｂｌｅ）」賦形剤（ビヒクル、添加剤）は、使用される活性成分の有効用量を提供するために被験体哺乳動物に合理的に投与され得るものである。
【００６１】
本明細書で使用される場合、用語「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」とは、臨床上の病状の経過の間に、処置されている個体または細胞の天然の経過を変化させるように設計された臨床介入をいう。処置の所望の効果としては、疾患進行の速度を低減する、疾患状態を改善するまたは軽くする、および退縮または改善された予後が挙げられる。例えば、個体は、がんと関連する１もしくはこれより多くの症状が緩和または排除される（がんのような細胞の増殖を低減する（または破壊する）、疾患から生じる症状を低減する、疾患に罹患している者のクオリティー・オブ・ライフを増大させる、疾患を処置するために必要とされる他の薬物療法の用量を低減する、および／または個体の生存を長期化させる、が挙げられるが、これらに限定されない）場合に、成功裡に「処置（ｔｒｅａｔｅｄ）」される。
【００６２】
「抗がん（ａｎｔｉ−ｃａｎｃｅｒ）」剤は、例えば、がん細胞の死滅を促進する、がん細胞においてアポトーシスを誘導する、がん細胞の増殖速度を低減する、転移の発生率または数を低減する、腫瘍サイズを縮小する、腫瘍増殖を阻害する、腫瘍またはがん細胞への血液供給を低減する、がん細胞または腫瘍に対する免疫応答を促進する、がんの進行を防止または阻害する、あるいはがんを有する被験体の寿命を増大させることによって、被験体においてがん細胞／腫瘍に負の影響を及ぼし得る。
【００６３】
本明細書中の用語「抗体（ａｎｔｉｂｏｄｙ）」とは、その最も広い意味で使用され、具体的には、モノクローナル抗体（全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、多重特異的抗体（例えば、二重特異的抗体）、および所望の生物学的活性を示す限りにおいて抗体フラグメントを網羅する。
【００６４】
用語「モノクローナル抗体（ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）」とは、本明細書で使用される場合、実質的に均質な抗体の集団から得られる抗体に言及する。例えば、その集団を構成する個々の抗体は、微量で存在し得る考えられる変異（例えば、天然に存在する変異）を除いて同一である。従って、修飾語「モノクローナル（ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ）」とは、別個の抗体の混合物ではないとして抗体の特徴を示す。ある特定の実施形態において、このようなモノクローナル抗体は、代表的には、標的を結合するポリペプチド配列を含む抗体を包含し、ここでその標的結合ポリペプチド配列は、複数のポリペプチド配列からの単一の標的結合ポリペプチド配列の選択を含むプロセスによって得られた。例えば、その選択プロセスは、複数のクローン（例えば、ハイブリドーマクローン、ファージクローン、または組換えＤＮＡクローンのプール）からのただ１つのクローンの選択であり得る。選択された標的結合配列が、例えば、標的に対する親和性を改善する、標的結合配列をヒト化する、細胞培養物中でのその生成を改善する、インビボでのその免疫原性を低減する、多重特異的抗体を作り出すなどのために、さらに変化させられ得ること、およびその変化させた標的結合配列を含む抗体がまた、本発明のモノクローナル抗体であることは、理解されるべきである。ポリクローナル抗体調製物（これは、代表的には、種々の決定基（エピトープ）に対して指向される種々の抗体を含む）とは対照的に、モノクローナル抗体調製物の中の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対して指向される。それらの特異性に加えて、モノクローナル抗体調製物は、これらが他の免疫グロブリンによって汚染されていないという点で有利である。
【００６５】
用語「免疫チェックポイント（ｉｍｍｕｎｅ  ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ）」とは、免疫反応のバランスをとるために阻害性シグナルをその構成要素に提供する、免疫系におけるタンパク質のような分子に言及する。公知の免疫チェックポイントタンパク質は、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−ｌならびにそのリガンドであるＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２、そしてさらにＬＡＧ−３、ＢＴＬＡ、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＴＩＭ３、ＫＩＲを含む。ＬＡＧ３、ＢＴＬＡ、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＴＩＭ３、およびＫＩＲが関わる経路は、ＣＴＬＡ−４およびＰＤ−１依存性経路に類似の免疫チェックポイント経路を構成することが当該分野で認識されている（例えば、Ｐａｒｄｏｌｌ，  ２０１２．  Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖ  Ｃａｎｃｅｒ  １２：２５２−２６４；  Ｍｅｌｌｍａｎら，  ２０１１．  Ｎａｔｕｒｅ  ４８０：４８０−４８９を参照のこと）。
【００６６】
用語「ＰＤ−１軸結合アンタゴニスト（ＰＤ−１  ａｘｉｓ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ）」とは、ＰＤ−１シグナル伝達軸に対するシグナル伝達から生じるＴ細胞機能不全を除去するために、ＰＤ−１軸結合パートナーとその結合パートナーのうちのいずれか１もしくはこれより多くとの相互作用を阻害する分子に言及する（結果は、Ｔ細胞機能（例えば、増殖、サイトカイン生成、標的細胞死滅）を回復または増強することである）。本明細書で使用される場合、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストは、ＰＤ−１結合アンタゴニスト、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストおよびＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストを含む。
【００６７】
用語「ＰＤ−１結合アンタゴニスト（ＰＤ−１  ｂｉｎｄｉｎｇ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ）」とは、ＰＤ−１とその結合パートナーのうちの１もしくはこれより多く（例えば、ＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−Ｌ２）との相互作用から生じるシグナル伝達を低減する、遮断する、阻害する、排除するまたは干渉する分子に言及する。いくつかの実施形態において、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＰＤ−１の、その結合パートナーのうちの１もしくはこれより多くへの結合を阻害する分子である。具体的局面において、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−Ｌ２へのＰＤ−１の結合を阻害する。例えば、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−Ｌ２との相互作用から生じるシグナル伝達を低減する、遮断する、阻害する、排除するまたは干渉する、抗ＰＤ−１抗体、その抗原結合フラグメント、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチドおよび他の分子を含む。一実施形態において、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＰＤ−１を介するＴリンパ球媒介性シグナル伝達で発現される細胞表面タンパク質によって、またはその細胞表面タンパク質を介して媒介される負の共刺激シグナルを低減し、機能不全のＴ細胞を機能不全の程度を小さくする（例えば、抗原認識に対するエフェクター応答を増強する）。いくつかの実施形態において、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、抗ＰＤ−１抗体である。具体的局面において、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＭＤＸ−１１０６（ニボルマブ）である。別の具体的局面において、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＭＫ−３４７５（ペンブロリズマブ）である。別の具体的局面において、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＣＴ−０１１（ピディリズマブ）である。別の具体的局面において、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＡＭＰ−２２４である。
【００６８】
用語「ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニスト（ＰＤ−Ｌ１  ｂｉｎｄｉｎｇ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ）」とは、ＰＤ−Ｌ１とその結合パートナーのうちのいずれか１もしくはこれより多く（例えば、ＰＤ−１またはＢ７−１）との相互作用から生じるシグナル伝達を低減する、遮断する、阻害する、排除するまたは干渉する分子に言及する。いくつかの実施形態において、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ１の、その結合パートナーへの結合を阻害する分子である。具体的局面において、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ１の、ＰＤ−１および／またはＢ７−１への結合を阻害する。いくつかの実施形態において、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ１とその結合パートナーのうちのいずれか１もしくはこれより多く（例えば、ＰＤ−１またはＢ７−１）との相互作用から生じるシグナル伝達を低減する、遮断する、阻害する、排除するまたは干渉する、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、その抗原結合フラグメント、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチドおよび他の分子を含む。一実施形態において、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ１を介するＴリンパ球媒介性シグナル伝達で発現される細胞表面タンパク質によって、またはその細胞表面タンパク質を介して媒介される負の共刺激シグナルを低減し、機能不全のＴ細胞を機能不全の程度を小さくする（例えば、抗原認識に対するエフェクター応答を増強する）。いくつかの実施形態において、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。具体的局面において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０である。別の具体的局面において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＭＤＸ−１１０５である。さらに別の具体的局面において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＭＰＤＬ３２８０Ａである。さらに別の具体的局面において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＭＥＤＩ４７３６である。
【００６９】
用語「ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニスト（ＰＤ−Ｌ２  ｂｉｎｄｉｎｇ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ）」とは、ＰＤ−Ｌ２とその結合パートナーのうちのいずれか１もしくはこれより多く（例えば、ＰＤ−１）との相互作用から生じるシグナル伝達を低減する、遮断する、阻害する、排除するまたは干渉する分子に言及する。いくつかの実施形態において、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ２の、その結合パートナーのうちの１もしくはこれより多くへの結合を阻害する分子である。具体的局面において、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ２の、ＰＤ−１への結合を阻害する。いくつかの実施形態において、ＰＤ−Ｌ２アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ２とその結合パートナーのうちのいずれか１もしくはこれより多く（例えば、ＰＤ−１）との相互作用から生じるシグナル伝達を低減する、遮断する、阻害する、排除するまたは干渉する、抗ＰＤ−Ｌ２抗体、その抗原結合フラグメント、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチドおよび他の分子を含む。一実施形態において、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ２を介するＴリンパ球媒介性シグナル伝達で発現される細胞表面タンパク質によって、またはその細胞表面タンパク質を介して媒介される負の共刺激シグナルを低減し、機能不全のＴ細胞を機能不全の程度を小さくする（例えば、抗原認識に対するエフェクター応答を増強する）。いくつかの実施形態において、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、イムノアドヘシンである。
【００７０】
「免疫チェックポイントインヒビター（ｉｍｍｕｎｅ  ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）」とは、免疫チェックポイントタンパク質の機能を阻害する任意の化合物に言及する。阻害は、機能の低減および完全な遮断を含む。特に、免疫チェックポイントタンパク質は、ヒト免疫チェックポイントタンパク質である。従って、免疫チェックポイントタンパク質インヒビターは特に、ヒト免疫チェックポイントタンパク質のインヒビターである。
【００７１】
「細胞外マトリクス分解性タンパク質（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｍａｔｒｉｘ  ｄｅｇｒａｄａｔｉｖｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ）」または「細胞外マトリクス分解タンパク質（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｍａｔｒｉｘ−ｄｅｇｒａｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ）」とは、細胞マトリクスの完全性に対して作用する、特に、上記マトリクスの成分のうちの少なくとも１種に対する、またはこれらの種々の成分を一体にする結合（ｂｏｎｄ）に対する完全なまたは部分的な分解作用または不安定化作用を発揮する任意のタンパク質に言及する。
【００７２】
「遠達効果（ａｂｓｃｏｐａｌ  ｅｆｆｅｃｔ）は、腫瘍の局所的処置の範囲の外側にある腫瘍の収縮として本明細書で言及される。例えば、免疫チェックポイント治療での全身性の処置との併用でのｐ５３および／またはＩＬ−２４での局所的処置は、遠隔の非処置腫瘍において遠達効果を生じ得る。
【００７３】
ＩＩ．  腫瘍抑制因子
Ａ．  ｐ５３
本発明は、がんの処置のための併用療法を提供する。本明細書で提供される併用療法のうちのいくつかは、野生型ｐ５３遺伝子を被験体に投与する工程を包含する、ｐ５３遺伝子治療を含む。野生型ｐ５３は、多くの細胞タイプにおいて重要な増殖調節因子として認識される。ｐ５３遺伝子は、宿主タンパク質（例えば、ラージＴ抗原およびＥ１Ｂ）と複合体を形成し得る３７５アミノ酸のリンタンパク質をコードする。そのタンパク質は、正常な組織および細胞において見出されるが、その濃度は、形質転換された細胞または腫瘍組織と比較するとわずかである。
【００７４】
ミスセンス変異は、ｐ５３遺伝子にとって一般的であり、かつがん遺伝子の形質転換能力に必須である。点変異によって刺激される単一の遺伝子変化は、発癌性ｐ５３を作りだし得る。しかし、他のがん遺伝子とは異なり、ｐ５３点変異は、少なくとも３０の別個のコドンにおいて起こることが公知であり、しばしば、ホモ接合性に対する低下なしに、細胞表現型におけるシフトを生じる優性対立遺伝子を作り出す。さらに、これらのドミナントネガティブ対立遺伝子のうちの多くは、生物において許容されかつ生殖系列において引き継がれるようである。種々の変異対立遺伝子が、最小限に機能不全から強く浸透性までのドミナントネガティブ対立遺伝子の範囲に及ぶようである（Ｗｅｉｎｂｅｒｇ，  １９９１）。高レベルの変異ｐ５３は、化学的発がん、紫外線照射、およびいくつかのウイルスによって形質転換された多くの細胞において見出された。
【００７５】
Ｂ．  ＭＤＡ−７
本明細書で提供される併用療法はまた、全長または短縮化ＭＤＡ−７遺伝子を投与する工程を包含するＭＤＡ−７遺伝子治療をさらに含み得る。ｍｄａ−７遺伝子のタンパク質生成物、インターロイキン（ＩＬ）−２４は、サイトカインのＩＬ−１０ファミリーに属するサイトカインであり、腫瘍抑制因子でもある。ＭＤＡ−７タンパク質をコードするｃＤＮＡは、Ｊｉａｎｇら，  １９９５（ＷＯ１９９５０１１９８６）によって記載されている。ＭＤＡ−７  ｃＤＮＡは、推定サイズ２３．８ｋＤａを有する２０６アミノ酸の進化の過程で保存されたタンパク質をコードする。
【００７６】
本明細書で提供されるＭＤＡ−７をコードする核酸は、全長または短縮化ヒトＩＬ−２４タンパク質またはポリペプチドをコードし得る。ＭＤＡ−７の短縮化バージョンは、全長配列の連続アミノ酸領域の一部を含むが、配列全体を含まない。その短縮化バージョンは、ポリペプチド中の任意の部位で連続アミノ酸の任意の数だけ短縮化され得る。例えば、ＭＤＡ−７の短縮化バージョンは、配列番号１の約４９〜約２０６；約７５〜約２０６；約１００〜約２０６；約１２５〜約２０６；約１５０〜約２０６；約１７５〜約２０６；または約１８２〜約２０６のアミノ酸をコードし得る。配列番号１の少なくとも約８５％、９０％、および９５％を含むＭＤＡ−７ポリペプチドが本発明の範囲内にあることもまた、企図される。
【００７７】
ＩＩＩ．  細胞外マトリクス分解
腫瘍抑制遺伝子治療および／または免疫チェックポイントインヒビターの抗腫瘍効果を増強するための方法がまた、本明細書で提供される。一局面において、遺伝子治療の送達（例えば、ウイルス分配）および腫瘍浸透は、腫瘍細胞細胞外マトリクス（ＥＣＭ）またはその構成要素を分解するタンパク質または薬剤によって増強される。
【００７８】
細胞外マトリクス（ＥＣＭ）は、構造的かつ生化学的支持を周りの細胞に提供する細胞によって分泌される細胞外分子の集まりである。多細胞性は、種々の多細胞系統において独立して進化したので、ＥＣＭの組成は、多細胞構造の間で変動する；しかし、細胞接着、細胞間連絡よび分化は、ＥＣＭの共通する機能である。細胞外マトリクス分解性タンパク質によって標的化され得るＥＣＭの構成要素としては、コラーゲン、エラスチン、ヒアルロン酸、フィブロネクチンおよびラミニンが挙げられる。
【００７９】
Ａ．  リラキシン
本明細書で提供される方法において使用され得る１つの細胞外マトリクス分解タンパク質は、リラキシンである。リラキシンは、インスリンおよびインスリン様増殖因子に構造的に関連する６ｋＤａのペプチドホルモンである。リラキシンは、黄体および子宮内膜において主に生成され、その血清レベルは、妊娠中に大きく増大する（Ｓｈｅｒｗｏｏｄら，  １９８４）。リラキシンは、コラーゲンが過剰発現される場合に、コラーゲン発現の強力なインヒビターであるが、他のコラーゲンとは対照的に、コラーゲン発現の基底レベルを顕著に変化させない。それは、種々のＭＭＰ（例えば、ＭＭＰ２、ＭＭＰ３、およびＭＭＰ９）の発現を促進して、コラーゲンを分解するので、結合組織および基底膜は、産道の細胞外マトリクスの破壊をもたらすように分解される。このことに加えて、リラキシンによるＭＭＰ  １およびＭＭＰ  ３発現の促進はまた、リラキシンがインヒビターとして役割を果たしてコラーゲンの過剰発現を防止する場所である肺、心臓、皮膚、腸、乳腺、血管および精管において観察される。（Ｑｉｎ，  Ｘ．，ら，  １９９７ａ；  Ｑｉｎ，  Ｘ．，ら，  １９９７ｂ）。
【００８０】
リラキシンタンパク質またはリラキシンタンパク質をコードする核酸の投与は、腫瘍細胞を取り囲む細胞外マトリクスの主要な構成要素であるコラーゲンの分解を誘導して、結合組織および基底膜を破壊し、それによって、細胞外マトリクスの分解を生じ得る。特に、結合組織によってしっかりと囲まれた腫瘍組織へと投与される場合、リラキシンとの併用での腫瘍抑制遺伝子治療の投与は、改善された抗腫瘍効力を示す。
【００８１】
リラキシンタンパク質は、全長リラキシンまたは米国特許第５，０２３，３２１号に記載されるとおりの生物学的活性を保持する分子リラキシン分子の一部であり得る。特に、リラキシンは、組換えヒトリラキシン（Ｈ２）またはリラキシン様活性を有する他の活性薬剤（例えば、結合したリラキシンをレセプターから競合的に外す薬剤）である。リラキシンは、好ましくは米国特許第４，８３５，２５１に記載されるように、当業者に公知の任意の方法によって作製され得る。リラキシンアナログまたはその誘導体は、ＵＳ５８１１３９５に記載され、ペプチド合成は、米国特許公開番号ＵＳ２０１１００３９７７８に記載される。
【００８２】
本明細書で提供される方法において使用され得る例示的なアデノウイルスリラキシンは、Ｋｉｍら  （２００６）によって記載される。簡潔には、リラキシン発現複製可能（Ａｄ−ΔＥ１Ｂ−ＲＬＸ）アデノウイルスは、リラキシン遺伝子をＥ３アデノウイルス領域の中に挿入することによって生成される。
【００８３】
Ｂ．  ヒアルロニダーゼ
いくつかの実施形態において、細胞外マトリクスの中に一般に存在するポリサッカリド（例えば、ヒアルロン酸）を加水分解し得る任意の物質が、投与され得る。特に、本発明において使用される細胞外マトリクス分解タンパク質は、ヒアルロニダーゼであり得る。ヒアルロナン（またはヒアルロン酸）は、脊椎動物細胞外マトリクスの遍在する成分である。この直線状のポリサッカリドは、グルクロン酸およびグルコサミン［Ｄ−グルクロン酸  １−β−３）Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン（１−ｂ−４）］に基づき、非常に粘性の溶液を形成するその特性によって、マトリクスの物理化学的特徴に対して影響を発揮し得る。ヒアルロン酸はまた、細胞の表面に位置する種々のレセプターおよび結合タンパク質と相互作用する。ヒアルロン酸は、非常に多くの生物学的プロセス（例えば、受精、胚発生、細胞移動および分化、創傷治癒、炎症、腫瘍増殖および転移の形成）に関与する。
【００８４】
ヒアルロン酸は、ヒアルロニダーゼによって加水分解され、その加水分解は、細胞外マトリクスの無秩序をもたらす。従って、ヒアルロニダーゼ活性を有する任意の物質が、本発明の方法における使用に適していることは、企図される（例えば、Ｋｒｅｉｌ（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉ．，  １９９５，  ４：１６６６−１６６９）に記載されるとおりのヒアルロニダーゼ）。ヒアルロニダーゼは、哺乳動物に由来するヒアルロニダーゼ、爬虫類または膜翅類昆虫のヒアルロネートグリカノヒドロラーゼ、ヒルの唾液腺に由来するヒアルロネートグリカノヒドロラーゼ、または細菌、特に、連鎖球菌、肺炎双球菌およびクロストリジウム属のヒアルロネートリアーゼであり得る。ヒアルロニダーゼの酵素活性は、従来技術（例えば、Ｈｙｎｅｓ  ａｎｄ  Ｆｅｒｒｅｔｔｉ（Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．，  １９９４，  ２３５：  ６０６−６１６）またはＢａｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｌｅｖｉｎｅ（Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｂｉｏｍｅｄ．  Ａｎａｌ．，  １９９３，  １１：  ２８５−２９２）．に記載されるもの）によって評価され得る。
【００８５】
Ｃ．  デコリン
デコリン（小さなロイシンリッチプロテオグリカン）は、細胞外マトリクスの遍在する構成要素であり、コラーゲン原線維（ｃｏｌｌａｇｅｎ  ｆｉｂｒｉｌ）に関連して優先的に見出される。デコリンは、コラーゲン原線維に結合し、個々の３本鎖らせんのコラーゲン分子の側方アセンブリ（ｌａｔｅｒａｌ  ａｓｓｅｍｂｌｙ）を遅らせ、原線維の直径の低下を生じる。さらに、デコリンは、細胞外マトリクス構成要素（例えば、フィブロネクチンおよびトロンボスポンディン）の、細胞との相互作用を調節し得る。さらに、デコリンは、マトリクスメタロプロテイナーゼであるコラゲナーゼの誘導によって細胞外マトリクスリモデリングに影響を及ぼし得る。これらの観察は、デコリンが、細胞外マトリクスの生成およびアセンブリをいくつかのレベルで調節するので、Ｃｈｏｉら（Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ，  １７：  １９０−２０１，  ２０１０）およびＸｕら  （Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ，  ２２（３）  ：  ３１−４０，  ２０１５）によって記載されるように結合組織をリモデリングするにあたって顕著な役割を有することを示唆する。
【００８６】
本明細書で提供される方法において使用され得る例示的なアデノウイルスデコリンは、Ｃｈｏｉら（Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ，  １７：  １９０−２０１，  ２０１０）によって記載される。簡潔には、デコリン発現複製可能（Ａｄ−ΔＥ１Ｂ−ＤＣＮＧ）アデノウイルスは、デコリン遺伝子をＥ３アデノウイルス領域の中に挿入することによって生成される。本明細書で提供される方法において使用され得る別の例示的なアデノウイルスデコリンは、Ｘｕら（Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ，  ２２（３）：  ３１−４０，  ２０１５）によって記載される。同様に、デコリン発現複製可能（Ａｄ．ｄｃｎ）アデノウイルスは、デコリン遺伝子をＥ３アデノウイルス領域の中へと挿入することによって生成される。
【００８７】
ＩＶ．  核酸
核酸は、当業者に公知の任意の技術によって作製され得る。合成核酸、特に、合成オリゴヌクレオチドの非限定的な例としては、ホスホトリエステル、ホスファイトまたはホスホルアミダイト化学および固相技術（例えば、ＥＰ  ２６６，０３２に記載されるとおり）を使用するか、またはＦｒｏｅｈｌｅｒら，  １９８６、および米国特許第５，７０５，６２９号に記載されるようにデオキシヌクレオシドＨ−ホスホネート中間体を介してインビトロ化学合成によって作製される核酸が挙げられる。酵素によって生成される核酸の非限定的な例としては、ＰＣＲＴＭ（例えば、米国特許第４，６８３，２０２号および米国特許第４，６８２，１９５号を参照のこと）のような増幅反応における酵素によって、または米国特許第５，６４５，８９７号に記載されるオリゴヌクレオチドの合成によって生成されるものが挙げられる。生物学的に生成される核酸の非限定的な例としては、生細胞における組換え核酸生成（例えば、細菌中での組換えＤＮＡベクター生成（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら  １９８９を参照のこと）が挙げられる。
【００８８】
核酸は、配列自体の長さに拘わらず、１もしくはこれより多くの核酸構築物を作り出すために、他の核酸配列（プロモーター、エンハンサー、ポリアデニル化シグナル、制限酵素部位、マルチクローニング部位、コードセグメントなどが挙げられるが、これらに限定されない）と合わされ得る。全体的な長さは、核酸構築物間でかなり変動し得る。従って、ほぼ任意の長さの核酸セグメントが使用され得、全長は、好ましくは、調製の容易さまたはその意図された組換え核酸プロトコルにおける使用によって制限される。
【００８９】
Ａ．  発現ベクターによる核酸送達
本明細書で提供されるベクターは主に、調節された真核生物プロモーター（すなわち、構成性、誘導性、抑制性、組織特異的）の制御下で治療用腫瘍抑制遺伝子（例えば、ｐ５３および／またはＭＤＡ−７）および／または細胞外マトリクス分解性遺伝子（例えば、リラキシン）を発現するように設計される。いくつかの局面において、ｐ５３およびＭＤＡ−７は、ベクターにおいて共発現され得る。別の局面において、ｐ５３および／またはＭＤＡ−７は、細胞外マトリクス分解性遺伝子と共発現され得る。また、そのベクターは、他の理由がなくても、インビトロでのそれらの取り扱いを容易にするために、選択マーカーを含み得る。
【００９０】
当業者は、標準的組み換え技術（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら，  ２００１およびＡｕｓｕｂｅｌら，  １９９６（ともに本明細書に参考として援用される）を参照のこと）を通じてベクターを構築することを十分に身につけている。ベクターとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：プラスミド、コスミド、ウイルス（バクテリオファージ、動物ウイルス、および植物ウイルス）、および人工染色体（例えば、ＹＡＣ）、例えば、レトロウイルスベクター（例えば、モロニーマウス白血病ウイルスベクター（ＭｏＭＬＶ）、ＭＳＣＶ、ＳＦＦＶ、ＭＰＳＶ、ＳＮＶなどに由来する）、レンチウイルスベクター（例えば、ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２、ＳＩＶ、ＢＩＶ、ＦＩＶなどに由来する）、複製可能形態、複製欠損形態およびその力のない形態（ｇｕｔｌｅｓｓ  ｆｏｒｍ）を含むアデノウイルス（Ａｄ）ベクター、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、シミアンウイルス４０（ＳＶ−４０）ベクター、ウシパピローマウイルスベクター、エプスタインバーウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、ハーベイマウス肉腫ウイルスベクター、マウス乳腺腫瘍ウイルスバクタ−、ラウス肉腫ウイルスベクター。
【００９１】
１．  ウイルスベクター
腫瘍抑制因子および／または細胞外マトリクス分解性遺伝子をコードするウイルスベクターは、本発明のある特定の局面において提供され得る。組換えウイルスベクターを生成するにあたって、非必須遺伝子は、代表的には、異種（または非天然）タンパク質の遺伝子またはコード配列で置き換えられる。ウイルスベクターは、ウイルス配列を利用して、核酸およびおそらくタンパク質を細胞に導入するある種の発現構築物である。ある特定のウイルスが細胞に感染するかまたはレセプター媒介性エンドサイトーシスを介して細胞に侵入し、宿主細胞ゲノムへと組み込まれ、ウイルス遺伝子を安定してかつ効率的に発現する能力は、そのウイルスを、外来核酸を細胞（例えば、哺乳動物細胞）へと移入するための魅力的な候補にしている。本発明のある特定の局面の核酸を送達するために使用され得るウイルスベクターの非限定的な例は、以下に記載される。
【００９２】
レンチウイルスは、複雑なレトロウイルスであり、これは、共通するレトロウイルス遺伝子ｇａｇ、ｐｏｌ、およびｅｎｖに加えて、調節機能または構造的機能を有する他の遺伝子を含む。レンチウイルスベクターは、当該分野で周知である（例えば、Ｎａｌｄｉｎｉら，  １９９６；  Ｚｕｆｆｅｒｅｙら，  １９９７；  Ｂｌｏｍｅｒら，  １９９７；  米国特許第６，０１３，５１６号および同第５，９９４，１３６号を参照のこと）。
【００９３】
組換えレンチウイルスベクターは、分裂していない細胞に関連し得、インビボおよびエキソビボの両方の遺伝子移入、ならびに核酸配列の発現のために使用され得る。例えば、分裂していない細胞に感染し得る組換えレンチウイルス（ここで適切な宿主細胞は、パッケージング機能（すなわち、ｇａｇ、ｐｏｌおよびｅｎｖ、ならびにｒｅｖおよびｔａｔ）を有する２もしくはこれより多くのベクターでトランスフェクトされる）は、米国特許第５，９９４，１３６号（本明細書に参考として援用される）に記載される。
【００９４】
ａ．  アデノウイルスベクター
腫瘍抑制因子および／または細胞外マトリクス分解性遺伝子の送達のための１方法は、アデノウイルス発現ベクターの使用を要する。アデノウイルスベクターは、ゲノムＤＮＡの組み込みのためには低い収容力を有することが公知であるが、この特徴は、これらのベクターによって提供される遺伝子移入の高い効率で相殺される。アデノウイルス発現ベクターは、（ａ）構築物のパッケージングを支援する、および（ｂ）その中にクローニングされた組換え遺伝子構築物を最終的に発現させる、ために十分なアデノウイルス配列を含む構築物を含む。
【００９５】
アデノウイルス増殖および操作は、当業者に公知であり、インビトロおよびインビボで広い宿主範囲を示す。ウイルスのこの群は、高力価、例えば、１０９〜１０１１  プラーク形成単位／ｍｌにおいて得られ得、そしてそれらは高度に感染性である。アデノウイルスの生活環は、宿主細胞ゲノムへの組み込みを必要としない。アデノウイルスベクターによって送達される外来遺伝子は、エピソーム性であるので、宿主細胞への低い遺伝毒性を有する。野生型アデノウイルスでのワクチン接種の研究においても副作用は報告されていない（Ｃｏｕｃｈら，  １９６３；  Ｔｏｐら，  １９７１）。これは、インビボ遺伝子移入ベクターとしてのそれらの安全性および治療可能性を示す。
【００９６】
アデノウイルス（３６ｋｂの直線状の２本鎖ＤＮＡウイルス）の遺伝的構成の知識は、アデノウイルスＤＮＡの大部分を７ｋｂまでの外来配列で置き換えることを可能にする（Ｇｒｕｎｈａｕｓ  ａｎｄ  Ｈｏｒｗｉｔｚ，  １９９２）。レトロウイルスとは対照的に、宿主細胞のアデノウイルス感染は、染色体組み込みを生じない。なぜならアデノウイルスＤＮＡは、潜在的な遺伝毒性なしにエピソーム様式で複製し得るからである。また、アデノウイルスは、構造的に安定であり、ゲノム再編成が、大規模な増幅の後に検出されていない。
【００９７】
アデノウイルスは、その中間サイズのゲノム、操作の容易さ、高力価、広い標的細胞範囲および高感染性が原因で、遺伝子移入ベクターとしての使用に特に適している。ウイルスゲノムの両方の末端は、１００〜２００塩基対の逆方向反復（ＩＴＲ）を含み、これらは、ウイルスＤＮＡ複製およびパッケージングに必須のシスエレメントである。ゲノムの初期（Ｅ）領域および後期（Ｌ）領域は、ウイルスＤＮＡ複製の開始によって分けられる異なる転写ユニットを含む。Ｅ１領域（Ｅ１ＡおよびＥ１Ｂ）は、ウイルスゲノムおよびいくつかの細胞遺伝子の転写の調節を担うタンパク質をコードする。Ｅ２領域（Ｅ２ＡおよびＥ２Ｂ）の発現は、ウイルスＤＮＡ複製のためのタンパク質の合成を生じる。これらタンパク質は、ＤＮＡ複製、後期遺伝子発現および宿主細胞シャットオフに関与する（Ｒｅｎａｎ，  １９９０）。後期遺伝子の生成物（ウイルスキャプシドタンパク質の大部分を含む）は、主要後期プロモーター（ＭＬＰ）によって生じる単一の一次転写産物の顕著なプロセシングの後にのみ発現される。ＭＬＰ（１６．８ｍ．ｕ．に位置する）は、後期感染相の間に特に有効であり、このプロモーターから生じたｍＲＮＡ全てが、これらを翻訳のための特定のｍＲＮＡにする５’−トリパタイトリーダー（ｔｒｉｐａｒｔｉｔｅ  ｌｅａｄｅｒ）（ＴＰＬ）配列を有する。
【００９８】
本明細書で提供される組換えアデノウイルスは、シャトルベクターとプロウイルスベクターとの間の相同組換えから生成され得る。２つのプロウイルスベクター間の考えられる組換えに起因して、野生型アデノウイルスは、このプロセスから生成され得る。従って、ウイルスの単一のクローンは、個々のプラークから単離され、そのゲノム構造が調べられる。
【００９９】
アデノウイルスベクターは、複製可能、複製欠損、または条件付きで欠損性であり得、そのアデノウイルスベクターの性質は、本発明の成功裡の実施にとって非常に重要であるとは考えられていない。アデノウイルスは、４２の種々の公知の血清タイプまたはサブグループＡ〜Ｆのうちのいずれかのものであり得る。サブグループＣのアデノウイルスタイプ５は、本発明における使用のための条件付きの複製欠損アデノウイルスベクターを得るための、特定の出発物質である。これは、アデノウイルスタイプ５が、ヒトアデノウイルスであることが理由である。ヒトアデノウイルスについては、非常に多くの生化学的情報および遺伝的情報が公知であり、かつベクターとしてアデノウイルスを使用する大部分の構築に関して歴史的に使用されてきた。
【０１００】
核酸は、コード配列が除去されている位置としてアデノウイルスベクターに導入され得る。例えば、複製欠損アデノウイルスベクターは、Ｅ１コード配列が除去されていてもよい。目的の遺伝子をコードするポリヌクレオチドはまた、Ｋａｒｌｓｓｏｎら（１９８６）によって記載されるとおりのＥ３置換ベクター中の欠失されたＥ３領域の代わりに、またはＥ４領域（この場所でヘルパー細胞株もしくはヘルパーウイルスがＥ４欠損を補完する）の中に挿入され得る。
【０１０１】
複製欠損アデノウイルスベクターの生成および増殖は、ヘルパー細胞株とともに行われ得る。１つの特有のヘルパー細胞株（２９３と称される）を、ヒト胚性腎臓細胞からＡｄ５  ＤＮＡフラグメントによって形質転換したところ、Ｅ１タンパク質を構成的に発現する（Ｇｒａｈａｍら，  １９７７）。Ｅ３領域はアデノウイルスゲノムに重要ではないので（Ｊｏｎｅｓ  ａｎｄ  Ｓｈｅｎｋ，  １９７８）、アデノウイルスベクターは、２９３細胞の助けを借りて、Ｅ１領域、Ｅ３領域、または両方の領域のいずれかの中に外来ＤＮＡを有する（Ｇｒａｈａｍ  ａｎｄ  Ｐｒｅｖｅｃ，  １９９１）。
【０１０２】
ヘルパー細胞株は、ヒト胚性腎臓細胞、筋細胞、造血細胞または他のヒト胚性間葉性細胞もしくは上皮細胞のようなヒト細胞から由来し得る。あるいは、ヘルパー細胞は、ヒトアデノウイルスを許容する他の哺乳動物種の細胞に由来し得る。このような細胞としては、例えば、Ｖｅｒｏ細胞または他のサル胚性間葉性もしくは上皮細胞が挙げられる。上述のように、特定のヘルパー細胞株は、２９３である。
【０１０３】
組換えアデノウイルスを生成するための方法は、当該分野で公知である（例えば、米国特許第６７４０３２０号（本明細書に参考として援用される））。また、Ｒａｃｈｅｒら（１９９５）は、２９３細胞を培養し、アデノウイルスを増殖させるための改善された方法を開示している。１つの形式において、天然の細胞凝集物は、個々の細胞を、１００〜２００ｍｌの培地を含む１リットルのシリコーン処理したスピナーフラスコ（Ｔｅｃｈｎｅ，  Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，  ＵＫ）の中へと接種することによって増殖される。４０ｒｐｍで撹拌した後に、細胞生存性をトリパンブルーで概算する。別の形式では、Ｆｉｂｒａ−Ｃｅｌマイクロキャリア（Ｂｉｂｂｙ  Ｓｔｅｒｌｉｎ，  Ｓｔｏｎｅ，  ＵＫ）（５ｇ／ｌ）を、以下のように使用する。細胞接種物（５ｍｌの培地中に再懸濁）を、２５０ｍｌ  エルレンマイヤーフラスコ中のキャリア（５０ｍｌ）に添加し、ときどき撹拌して、１〜４時間、静置したままにする。次いで、培地を５０ｍｌの新鮮な培地と交換し、振盪を開始する。ウイルス生成のために、細胞を、約８０％  コンフルエンスになるまで増殖させ、その後、培地を（最終容積の２５％へと）交換し、アデノウイルスを、０．０５のＭＯＩで添加する。培養物を一晩静置し、その後、容積を１００％へと増大させ、さらに７２時間の振盪を開始する。
【０１０４】
ｂ．レトロウイルスベクター
さらに、腫瘍抑制因子および／または細胞外マトリクス分解性遺伝子は、レトロウイルスベクターによってコードされ得る。レトロウイルスは、それらのＲＮＡを、逆転写プロセスによって感染細胞において２本鎖ＤＮＡへと変換する能力によって特徴付けられる１本鎖ＲＮＡウイルスの群である（Ｃｏｆｆｉｎ，  １９９０）。得られたＤＮＡは、次いで、プロウイルスとして細胞染色体へと安定して組み込まれ、ウイルスタンパク質の合成を指向する。その組み込みは、レシピエント細胞およびその子孫においてウイルス遺伝子配列の保持を生じる。レトロウイルスゲノムは、キャプシドタンパク質、ポリメラーゼ酵素、およびエンベロープ構成要素をそれぞれコードする、３種の遺伝子、ｇａｇ、ｐｏｌ、およびｅｎｖを含む。ｇａｇ遺伝子から上流で見出された配列は、ゲノムをビリオンへとパッケージングするためのシグナルを含む。２つの長末端反復（ＬＴＲ）配列は、ウイルスゲノムの５’末端および３’末端に存在する。これらは、強力なプロモーターおよびエンハンサー配列を含み、宿主細胞ゲノムにおける組み込みにも必要とされる（Ｃｏｆｆｉｎ，  １９９０）。
【０１０５】
レトロウイルスベクターを構築するために、目的の遺伝子をコードする核酸は、複製欠損であるウイルスを生成するために、ある特定のウイルス配列の代わりにウイルスゲノムへと挿入される。ビリオンを生成するために、ｇａｇ、ｐｏｌ、およびｅｎｖ遺伝子を含むが、ＬＴＲおよびパッケージング構成要素は含まないパッケージング細胞株を、構築する（Ｍａｎｎら，  １９８３）。ｃＤＮＡを、レトロウイルスＬＴＲおよびパッケージング配列とともに含む組換えプラスミドを、この細胞株へと（例えば、リン酸カルシウム沈殿によって）導入する場合、そのパッケージング配列は、その組換えプラスミドのＲＮＡ転写物がウイルス粒子へとパッケージされることを可能にし、そのウイルス粒子は、次いで、培養培地へと分泌される（Ｎｉｃｏｌａｓ  ａｎｄ  Ｒｕｂｅｎｓｔｅｉｎ，  １９８８；  Ｔｅｍｉｎ，  １９８６；  Ｍａｎｎら，  １９８３）。次いで、その組換えレトロウイルスを含む培地を集め、必要に応じて濃縮し、遺伝子移入に使用する。レトロウイルスベクターは、広く種々の細胞タイプに感染し得る。しかし、組み込みおよび安定な発現は、宿主細胞の分裂を必要とする（Ｐａｓｋｉｎｄら，  １９７５）。
【０１０６】
欠損性レトロウイルスベクターの使用に伴う懸念は、パッケージング細胞における野生型複製可能ウイルスの潜在的な出現である。これは、組換えウイルスに由来する無傷の配列を、宿主細胞ゲノムの中に組み込まれるｇａｇ、ｐｏｌ、ｅｎｖ配列から上流に挿入する組換え事象から生じる。しかし、パッケージング細胞株は、入手可能であり、組換えの可能性を大きく低減しているはずである（Ｍａｒｋｏｗｉｔｚら，  １９８８；  Ｈｅｒｓｄｏｒｆｆｅｒら，  １９９０）。
【０１０７】
ｃ．  アデノ随伴ウイルスベクター
アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）は、本開示における使用に魅力的なベクター系である。なぜならそれは、高い組み込み頻度を有しかつ分裂していない細胞に感染し得るので、このことがアデノ随伴ウイルスベクターを哺乳動物細胞への遺伝子の送達に有用にするからである（Ｍｕｚｙｃｚｋａ，  １９９２）。ＡＡＶは、感染性に関して広い宿主範囲を有する（Ｔｒａｔｓｃｈｉｎ，ら，  １９８４；  Ｌａｕｇｈｌｉｎ，ら，  １９８６；  Ｌｅｂｋｏｗｓｋｉ，ら，  １９８８；  ＭｃＬａｕｇｈｌｉｎ，ら，  １９８８）。このことは、本発明での使用に適用可能であることを意味する。ｒＡＡＶベクターの生成および使用に関する詳細は、米国特許第５，１３９，９４１号および米国特許第４，７９７，３６８号に記載される。
【０１０８】
ＡＡＶは、培養された細胞において生産性の感染を受けるために、別のウイルス（アデノウイルスまたはヘルペスウイルスファミリーのメンバーのいずれか）との共感染を必要とするという点で、依存性のパルボウイルスである（Ｍｕｚｙｃｚｋａ，  １９９２）。ヘルパーウイルスとの共感染の非存在下では、野生型ＡＡＶゲノムは、その末端を介してヒト第１９染色体へと組み込まれ、この場所でプロウイルスとして潜伏状態で住み着く（Ｋｏｔｉｎら，  １９９０；  Ｓａｍｕｌｓｋｉら，  １９９１）。しかし、ｒＡＡＶは、ＡＡＶ  Ｒｅｐタンパク質も発現されなければ、組み込みに関して第１９染色体に制限されない（Ｓｈｅｌｌｉｎｇ  ａｎｄ  Ｓｍｉｔｈ，  １９９４）。ＡＡＶプロウイルスを有する細胞が、ヘルパーウイルスと重複感染される場合、そのＡＡＶゲノムは、染色体からまたは組換えプラスミドから「レスキュー」され、通常の生産性の感染が確立される（Ｓａｍｕｌｓｋｉら，  １９８９；  ＭｃＬａｕｇｈｌｉｎら，  １９８８；  Ｋｏｔｉｎら，  １９９０；  Ｍｕｚｙｃｚｋａ，  １９９２）。
【０１０９】
代表的には、組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）ウイルスは、２つのＡＡＶ末端反復が隣接した目的の遺伝子を含むプラスミド（ＭｃＬａｕｇｈｌｉｎら，  １９８８；  Ｓａｍｕｌｓｋｉら，  １９８９；各々、本明細書に参考として援用される）および末端反復なしの野生型ＡＡＶコード配列を含む発現プラスミド（例えば、ｐＩＭ４５（ＭｃＣａｒｔｙら，  １９９１））を共トランスフェクトすることによって作製される。その細胞はまた、アデノウイルスまたはＡＡＶヘルパー機能に必要とされるアデノウイルス遺伝子を有するプラスミドで感染またはトランスフェクトされる。このような様式で作製されたｒＡＡＶウイルスストックは、ｒＡＡＶ粒子から（例えば、塩化セシウム密度勾配によって）物理的に分離されなければならないアデノウイルスで汚染される。あるいは、ＡＡＶコード領域を含むアデノウイルスベクターまたはＡＡＶコード領域およびアデノウイルスヘルパー遺伝子のうちのいくつかもしくは全てを含む細胞株が、使用され得る（Ｙａｎｇら，  １９９４；  Ｃｌａｒｋら，  １９９５）。組み込まれたプロウイルスとしてｒＡＡＶ  ＤＮＡを有する細胞株がまた、使用され得る（Ｆｌｏｔｔｅら，  １９９５）。
【０１１０】
ｄ．  他のウイルスベクター
他のウイルスベクターは、本開示において構築物として使用され得る。ワクシニアウイルス（Ｒｉｄｇｅｗａｙ，  １９８８；  Ｂａｉｃｈｗａｌ  ａｎｄ  Ｓｕｇｄｅｎ，  １９８６；  Ｃｏｕｐａｒら，  １９８８）およびヘルペスウイルスのようなウイルスに由来するベクターが使用され得る。それらは、種々の哺乳動物細胞にとって魅力的ないくつかの特徴を提供する（Ｆｒｉｅｄｍａｎｎ，  １９８９；  Ｒｉｄｇｅｗａｙ，  １９８８；  Ｂａｉｃｈｗａｌ  ａｎｄ  Ｓｕｇｄｅｎ，  １９８６；  Ｃｏｕｐａｒら，  １９８８；  Ｈｏｒｗｉｃｈら，  １９９０）。
【０１１１】
ベネズエラウマ脳炎（ＶＥＥ）ウイルスの分子クローニング株は、異種ウイルスタンパク質の発現のための複製可能ワクチンベクターとして遺伝的に詳細に論じられている（Ｄａｖｉｓら，  １９９６）。研究によれば、ＶＥＥ感染が強力なＣＴＬ応答を刺激することが示されており、ＶＥＥが免疫するために極めて有用なベクターであり得ることが示唆されている（Ｃａｌｅｙら，  １９９７）。
【０１１２】
さらなる実施形態において、キメラＣＤ１５４をコードする核酸は、特異的結合リガンドを発現するように操作された感染性ウイルス内に収容される。そのウイルス粒子は、従って、標的細胞のコグネイトレセプターに特異的に結合し、その細胞へと内容物を送達する。レトロウイルスベクターの特異的標的化を可能にするように設計された新規アプローチが、ウイルスエンベロープにラクトース残基を化学的に付加することによるレトロウイルスの化学的改変に基づいて、近年開発された。この改変は、シアロ糖タンパク質レセプターを介する肝細胞の特異的感染を可能にし得る。
【０１１３】
例えば、組換えレトロウイルスの標的化が、設計され、ここでは、レトロウイルスエンベロープタンパク質に対するビオチン化抗体および特異的細胞レセプターに対するビオチン化抗体が使用された。その抗体は、ストレプトアビジンを使用することによってビオチン構成要素を介して連結された（Ｒｏｕｘら，  １９８９）。主要組織適合遺伝子複合体クラスＩおよびクラスＩＩ抗原に対する抗体を使用して、彼らは、エコトロピックウイルス（ｅｃｏｔｒｏｐｉｃ  ｖｉｒｕｓ）でそれらの表面抗原にインビトロで孔を開ける、種々のヒト細胞の感染を示した（Ｒｏｕｘら，  １９８９）．
【０１１４】
２．  調節エレメント
本開示において有用なベクターに含まれる発現カセットは、特に、（５’から３’方向に）真核生物転写プロモーター、（これに作動可能に連結された）タンパク質コード配列、介在配列を含むスプライスシグナル、および転写終結／ポリアデニル化配列を含む。真核生物においてタンパク質コード遺伝子の転写を制御するプロモーターおよびエンハンサーは、複数の遺伝的エレメントから構成される。その細胞機構は、各エレメントによって伝えられる調節情報を集めかつ統合し得、種々の遺伝子が、転写調節の別個の、しばしば複雑なパターンを進化させることを可能にし得る。本発明の状況で使用されるプロモーターは、構成性、誘導性、および組織特異的なプロモーターを含む。
【０１１５】
ａ．  プロモーター／エンハンサー
本明細書で提供される発現構築物は、腫瘍抑制因子および／または細胞外マトリクス分解性遺伝子の発現を駆動するプロモーターを含む。プロモーターは、一般に、ＲＮＡ合成のための出発部位を配置するように機能する配列を含む。このもっともよく知られた例は、ＴＡＴＡボックスであるが、ＴＡＴＡボックスを欠くいくつかのプロモーター（例えば、哺乳動物末端デオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ遺伝子のためのプロモーターおよびＳＶ４０後期遺伝子のためのプロモーターのような）では、その開始部位自体に重なる別個のエレメントが、開始の場所を固定するために役立つ。さらなるプロモーターエレメントは、転写開始の頻度を調節する。代表的には、これらは、開始部位の３０〜１１０ｂｐ上流の領域に位置するが、多くのプロモーターは、開始部位の下流にある機能的エレメントを含むことも示された。コード配列をプロモーター「の制御下に」置くために、その選択されたプロモーターの「下流」に（すなわち、３’側に）にある転写リーディングフレームの転写開始部位の５’末端に配置される。「上流」プロモーターは、ＤＮＡの転写を刺激し、そのコードされたＲＮＡの発現を促進する。
【０１１６】
エレメントが互いに対して逆方向にされるかまたは動かされる場合に、プロモーター機能が保存されるように、プロモーターエレメント間の間隔はしばしば、融通が利く。ｔｋプロモーターでは、プロモーターエレメント間の間隔は、活性が低下し始める前に、５０ｂｐ離れるように増大され得る。プロモーターに依存して、個々のエレメントは、転写を活性化するために協同してまたは独立してのいずれかで機能し得るようである。プロモーターは、「エンハンサー」とともに使用されてもよいし、そうでなくてもよい。エンハンサーとは、核酸配列の転写活性化に関与するシス作用調節配列をいう。
【０１１７】
プロモーターは、コードセグメントおよび／またはエキソンの上流に位置する５’非コード配列を単離することによって得られ得るので、核酸配列と天然には関連付けられ得る。このようなプロモーターは、「内因性」といわれ得る。同様に、エンハンサーは、核酸配列と天然に関連付けられ、その配列の下流または上流のいずれかに位置したものであり得る。あるいは、ある特定の利点は、組換えまたは異種プロモーターの制御下にコード核酸セグメントを配置することによって獲得される。組換えまたは異種プロモーターとは、その天然の環境において核酸配列と通常は関連付けられていないプロモーターをいう。組換えまたは異種エンハンサーもまた、その天然の環境において核酸配列と通常は関連付けられていないエンハンサーをいう。このようなプロモーターもしくはエンハンサーは、他の遺伝子のプロモーターもしくはエンハンサー、および任意の他のウイルス、または原核生物細胞もしくは真核生物細胞から単離されたプロモーターもしくはエンハンサー、および「天然に存在しない」（すなわち、異なる転写調節領域の異なるエレメント、および／または発現を変化させる変異を含む）プロモーターもしくはエンハンサーを含み得る。例えば、組換えＤＮＡ構築において最も一般に使用されるプロモーターは、β−ラクタマーゼ（ペニシリナーゼ）、ラクトースおよびトリプトファン（ｔｒｐ）プロモーター系を含む。プロモーターおよびエンハンサーの核酸配列を合成して生成することに加えて、配列は、本明細書で開示される組成物と関連して、組換えクローニングおよび／または核酸増幅技術（ＰＣＲＴＭを含む）を使用して生成され得る（米国特許第４，６８３，２０２号および同第５，９２８，９０６号（各々、本明細書に参考として援用される）を参照のこと）。さらに、ミトコンドリア、クロロプラストなどのような非核オルガネラ内の配列の転写および／または発現を指向する制御配列が同様に使用され得ることは、企図される。
【０１１８】
当然のことながら、発現のために選択されたオルガネラ、細胞タイプ、組織、器官、または生物においてＤＮＡセグメントの発現を効果的に指向するプロモーターおよび／またはエンハンサーを使用することは、重要である。分子生物学の当業者は、一般に、タンパク質発現のためのプロモーター、エンハンサー、および細胞タイプの組み合わせの使用を認識している（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら  １９８９（本明細書に参考として援用される）を参照のこと）。使用されるプロモーターは、構成性、組織特異的、誘導性、および／または導入されるＤＮＡセグメントの高レベル発現を指向するために適切な条件下で有用であり得、例えば、組換えタンパク質および／またはペプチドの大規模生成において有利である。そのプロモーターは、異種であっても内因性であってもよい。
【０１１９】
さらに、任意のプロモーター／エンハンサーの組み合わせ（例えば、ワールドワイドウェブを通じて、ｅｐｄ．ｉｓｂ−ｓｉｂ．ｃｈ／にあるＥｕｋａｒｙｏｔｉｃ  Ｐｒｏｍｏｔｅｒ  Ｄａｔａ  Ｂａｓｅ  ＥＰＤＢに従って）はまた、発現を駆動するために使用され得る。Ｔ３、Ｔ７またはＳＰ６細胞質発現系の使用は、別の考えられる実施形態である。真核生物細胞は、適切な細菌ポリメラーゼが提供される場合、送達複合体の一部として、またはさらなる遺伝子発現構築物としてのいずれかで、ある特定の細菌プロモーターからの細胞質転写を支援し得る。
【０１２０】
プロモーターの非限定的な例としては、初期または後期のウイルスプロモーター（例えば、ＳＶ４０初期または後期プロモーター、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）最初期プロモーター、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）初期プロモーター；真核生物細胞プロモーター（例えば、βアクチンプロモーター（Ｎｇ，  １９８９；  Ｑｕｉｔｓｃｈｅら，  １９８９）、ＧＡＤＰＨプロモーター（Ａｌｅｘａｎｄｅｒら，  １９８８，  Ｅｒｃｏｌａｎｉら，  １９８８）、メタロチオネインプロモーター（Ｋａｒｉｎら，  １９８９；  Ｒｉｃｈａｒｄｓら，  １９８４）；および連鎖応答エレメント（ｃｏｎｃａｔｅｎａｔｅｄ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｅｌｅｍｅｎｔ）プロモーター（例えば、サイクリックＡＭＰ応答エレメントプロモーター（ｃｒｅ）、血清応答エレメント（ｓｒｅ）、ホルボールエステルプロモーター（ＴＰＡ）および最小のＴＡＴＡボックスの近くにある応答エレメントプロモーター（ｔｒｅ）のような）が挙げられる。ヒト成長ホルモンプロモーター配列（例えば、Ｇｅｎｂａｎｋ、アクセッション番号Ｘ０５２４４、ヌクレオチド２８３〜３４１に記載されるヒト成長ホルモン最小プロモーター）またはマウス乳腺腫瘍プロモーター（ＡＴＣＣ、カタログ番号ＡＴＣＣ  ４５００７から入手可能）を使用することも可能である。ある特定の実施形態において、プロモーターは、ＣＭＶ  ＩＥ、デクチン−１、デクチン−２、ヒトＣＤ１１ｃ、Ｆ４／８０、ＳＭ２２、ＲＳＶ、ＳＶ４０、Ａｄ  ＭＬＰ、β−アクチン、ＭＨＣクラスＩまたはＭＨＣクラスＩＩプロモーターであるが、ｐ５３、ＭＤＡ−７および／またはリラキシン遺伝子の発現を駆動するために有用である任意の他のプロモーターが、本発明の実施に適用可能である。
【０１２１】
ある特定の局面において、本開示の方法はまた、エンハンサー配列、すなわち、プロモーターの活性を増大させかつシスで、そしてそれらの配向に拘わらず、比較的長距離離れていても（標的プロモーターから数キロベースまで離れている）作用する可能性を有する核酸配列に関する。しかし、エンハンサー機能は、これらが所定のプロモーターにごく近接して機能し得るので、そのような長距離に必ずしも制限されない。
【０１２２】
ｂ．  開始シグナルおよび連鎖発現
特異的開始シグナルはまた、コード配列の効率的翻訳のために本開示で提供される発現構築物において使用され得る。これらのシグナルは、ＡＴＧ開始コドンまたは隣接する配列を含む。外因性の翻訳制御シグナル（ＡＴＧ開始コドンを含む）は、提供される必要があり得る。当業者は容易に、これを決定しかつ必要なシグナルを提供し得る。挿入物全体の翻訳を担保するために、開始コドンが所望のコード配列のリーディングフレームと「インフレーム」でなければならないことは周知である。外因性の翻訳制御シグナルおよび開始コドンは、天然または合成のいずれかであり得る。発現効率は、適切な転写エンハンサーエレメントを含めることによって増強され得る。
【０１２３】
ある特定の実施形態において、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）エレメントの使用は、多遺伝子、またはポリシストロン性のメッセージを作り出すために使用される。ＩＲＥＳエレメントは、５’メチル化キャップ依存性翻訳のリボソームスキャニング（ｒｉｂｏｓｏｍｅ  ｓｃａｎｎｉｎｇ）モデルを迂回し内部部位で翻訳を開始することができる（Ｐｅｌｌｅｔｉｅｒ  ａｎｄ  Ｓｏｎｅｎｂｅｒｇ，  １９８８）。ピコルナウイルスファミリーの２つのメンバー（ポリオおよび脳心筋炎）に由来するＩＲＥＳエレメントは記載されており（Ｐｅｌｌｅｔｉｅｒ  ａｎｄ  Ｓｏｎｅｎｂｅｒｇ，  １９８８）、哺乳動物メッセージに由来するＩＲＥＳ（Ｍａｃｅｊａｋ  ａｎｄ  Ｓａｒｎｏｗ，  １９９１）も同様に記載されている。ＩＲＥＳエレメントは、異種オープンリーディングフレームに連結され得る。複数のオープンリーディングフレームが、一緒に転写され得、各々はＩＲＥＳによって分離されており、ポリシストロン性のメッセージを作り出す。ＩＲＥＳエレメントのおかげで、各オープンリーディングフレームは、効率的な翻訳のためにリボソームに接近可能である。複数の遺伝子は、単一のメッセージを転写するために、単一のプロモーター／エンハンサーを使用して効率的に発現され得る（米国特許第５，９２５，５６５号および同第５，９３５，８１９号（各々、本明細書に参考として援用される）を参照のこと）。
【０１２４】
さらに、ある特定の２Ａ配列エレメントは、本開示において提供される構築物において遺伝子の連鎖発現または共発現を引き起こすために使用され得る。例えば、切断配列は、オープンリーディングフレームを連結して、単一のシストロンを形成することによって遺伝子を共発現するために使用され得る。例示的な切断配列は、Ｆ２Ａ（口蹄疫ウイルス２Ａ）または「２Ａ様」配列（例えば、Ｔｈｏｓｅａ  ａｓｉｇｎａウイルス２Ａ；Ｔ２Ａ）である（Ｍｉｎｓｋａｉａ  ａｎｄ  Ｒｙａｎ，  ２０１３）。
【０１２５】
ｃ．  複製起点
宿主細胞においてベクターを増殖させるために、ベクターは、１もしくはこれより多くの複製起点部位（しばしば「ｏｒｉ」といわれる）、例えば、上記で記載されるとおりのＥＢＶのｏｒｉＰまたは遺伝子操作された、プログラミングにおいて類似もしくは高められた機能を有するｏｒｉＰに相当する核酸配列を含み得る。この配列は、複製が開始される特異的核酸配列である。あるいは、上記に記載されるとおりの他の染色体外複製ウイルスの複製起点または自律複製配列（ＡＲＳ）が使用され得る。
【０１２６】
３．  選択およびスクリーニングマーカー
いくつかの実施形態において、本開示の構築物を含む細胞は、発現ベクターの中にマーカーを含めることによって、インビトロまたはインビボで同定され得る。このようなマーカーは、同定可能な変化を細胞に付与し、発現ベクターを含む細胞の容易な同定を可能にする。一般に、選択マーカーは、選択を可能にする特性を付与するものである。陽性選択マーカーは、マーカーの存在がその選択を可能にするものである一方で、陰性選択マーカーは、その存在がその選択を防止するものである。陽性選択マーカーの例は、薬物耐性マーカーである。
【０１２７】
通常は、薬物選択マーカーを含めると、クローニングおよび形質転換体の同定が補助され、例えば、ネオマイシン、ピューロマイシン、ハイグロマイシン、ＤＨＦＲ、ＧＰＴ、ゼオシンおよびヒスチジノールに対する耐性を付与する遺伝子は、有用な選択マーカーである。条件の実行に基づいて形質転換体の区別を可能にする表現型を付与するマーカーに加えて、ＧＦＰのような、基本が比色分析であるスクリーニングマーカーを含む他のタイプのマーカーもまた、企図される。あるいは、陰性選択マーカーとしてのスクリーニング酵素（例えば、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（ｔｋ）またはクロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ））が利用され得る。当業者はまた、免疫学的マーカーを、おそらく、ＦＡＣＳ分析とともにどのように使用するかを認識している。使用されるマーカーは、遺伝子生成物をコードする核酸と同時に発現され得る限りにおいて、重要であると考えられてはいない。選択およびスクリーニングマーカーのさらなる例は、当業者に周知である。
【０１２８】
Ｂ．  他の核酸送達方法
腫瘍抑制因子および／または細胞外マトリクス分解性遺伝子をコードする核酸のウイルス送達に加えて、以下は、所定の宿主細胞への組換え遺伝子送達のさらなる方法であるので、本開示において考慮される。
【０１２９】
ＤＮＡまたはＲＮＡのような核酸の導入は、本明細書で記載されるように、または当業者に公知であるように、細胞を形質転換するための核酸送達のための任意の適切な方法を使用し得る。このような方法としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：エキソビボトランスフェクション（Ｗｉｌｓｏｎら，  １９８９，  Ｎａｂｅｌら，  １９８９）による、マイクロインジェクション（Ｈａｒｌａｎｄ  ａｎｄ  Ｗｅｉｎｔｒａｕｂ，  １９８５；米国特許第５，７８９，２１５（本明細書に参考として援用される））を含む注射による（米国特許第５，９９４，６２４号、同第５，９８１，２７４号、同第５，９４５，１００号、同第５，７８０，４４８号、同第５，７３６，５２４号、同第５，７０２，９３２号、同第５，６５６，６１０号、同第５，５８９，４６６号、および同第５，５８０，８５９号（各々、本明細書に参考として援用される））；エレクトロポレーション（米国特許第５，３８４，２５３号（本明細書に参考として援用される）；Ｔｕｒ−Ｋａｓｐａら，  １９８６；  Ｐｏｔｔｅｒら，  １９８４）による；リン酸カルシウム沈澱法（Ｇｒａｈａｍ  ａｎｄ  Ｖａｎ  Ｄｅｒ  Ｅｂ，  １９７３；  Ｃｈｅｎ  ａｎｄ  Ｏｋａｙａｍａ，  １９８７；  Ｒｉｐｐｅら，１９９０）による；ＤＥＡＥ−デキストラン、続いて、ポリエチレングリコールを使用すること（Ｇｏｐａｌ，  １９８５）による；直接超音波負荷（Ｆｅｃｈｈｅｉｍｅｒら， １９８７）による；リポソーム媒介性トランスフェクション（Ｎｉｃｏｌａｕ  ａｎｄ  Ｓｅｎｅ，  １９８２；  Ｆｒａｌｅｙら， １９７９；  Ｎｉｃｏｌａｕら， １９８７；  Ｗｏｎｇら，  １９８０；  Ｋａｎｅｄａら， １９８９；  Ｋａｔｏら， １９９１）およびレセプター媒介性トランスフェクション（Ｗｕ  ａｎｄ  Ｗｕ，  １９８７；  Ｗｕ  ａｎｄ  Ｗｕ，  １９８８）による；マイクロプロジェクタイルボンバードメント（ＰＣＴ出願番号ＷＯ  ９４／０９６９９および９５／０６１２８；米国特許第５，６１０，０４２号；同第５，３２２，７８３号、同第５，５６３，０５５号、同第５，５５０，３１８号、同第５，５３８，８７７号および同第５，５３８，８８０号（各々、本明細書に参考として援用される））による；炭化ケイ素線維との撹拌（Ｋａｅｐｐｌｅｒら， １９９０；  米国特許第５，３０２，５２３号および同第５，４６４，７６５号（各々、本明細書に参考として援用される））による；Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ媒介性形質転換（米国特許第５，５９１，６１６号および同第５，５６３，０５５号（各々、本明細書に参考として援用される））による；乾燥／阻害媒介性ＤＮＡ取り込み（Ｐｏｔｒｙｋｕｓら， １９８５）による、ならびにこのような方法の任意の組み合わせのようなＤＮＡの直接送達。これらのような技術の適用を通じて、オルガネラ、細胞、組織または生物は、安定してまたは一過性に形質転換され得る。
【０１３０】
１．  エレクトロポレーション
本開示のある特定の具体的実施形態において、遺伝子構築物は、エレクトロポレーションを介して標的の過剰増殖性細胞へと導入される。エレクトロポレーションは、細胞（または組織）およびＤＮＡ（またはＤＮＡ複合体）を高電圧放電へと曝すことを要する。
【０１３１】
エレクトロポレーションを使用する真核生物細胞のトランスフェクションは、極めて成功した。マウスプレＢリンパ球を、ヒトκ−免疫グロブリン遺伝子でトランスフェクトし（Ｐｏｔｔｅｒら，  １９８４）、ラット肝細胞を、この様式においてクロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ遺伝子でトランスフェクトした（Ｔｕｒ−Ｋａｓｐａら，  １９８６）。
【０１３２】
種々の供給源に由来する過剰増殖性細胞のためのエレクトロポレーション条件が最適化され得ることは、企図される。電圧、キャパシタンス、時間およびエレクトロポレーション媒体組成のようなパラメーターを最適化することは、特に望ましいことであり得る。他の慣用的な調節の実行は、当業者に周知である。例えば、Ｈｏｆｆｍａｎ，  １９９９；  Ｈｅｌｌｅｒら，  １９９６を参照のこと。
【０１３３】
２．  脂質媒介性形質転換
さらなる実施形態において、腫瘍抑制因子および／または細胞外マトリクス分解性遺伝子は、リポソームまたは脂質製剤中に捕捉され得る。リポソームは、リン脂質二重層膜および内側の水性媒体によって特徴付けられる小胞構造である。マルチラメラリポソームは、水性媒体によって分離された複数の脂質層を有する。それらは、リン脂質が過剰の水性溶液中で懸濁される場合に自発的に形成する。脂質構成要素は、閉じた構造を形成する前に自己再編成を受け、水および溶解した溶質を脂質二重層の間に捕捉する（Ｇｈｏｓｈ  ａｎｄ  Ｂａｃｈｈａｗａｔ，  １９９１）。Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ）と複合体化した遺伝子構築物も企図される。
【０１３４】
脂質媒介性核酸送達および外来ＤＮＡのインビトロでの発現は、非常に成功した（Ｎｉｃｏｌａｕ  ａｎｄ  Ｓｅｎｅ，  １９８２；  Ｆｒａｌｅｙら，  １９７９；  Ｎｉｃｏｌａｕら，  １９８７）。Ｗｏｎｇら（１９８０）は、培養したニワトリ胚、ＨｅＬａ細胞および肝がん細胞における脂質媒介性送達および外来ＤＮＡの発現の可能性を示した。
【０１３５】
脂質ベースの非ウイルス製剤は、アデノウイルス遺伝子治療の代替を提供する。多くの細胞培養研究が脂質ベースの非ウイルス遺伝子移入を示してきたが、脂質ベースの製剤を介する全身性の遺伝子送達は、制限されてきた。非ウイルス性脂質ベースの遺伝子送達の大きな制限は、非ウイルス性送達ビヒクルを含むカチオン性脂質の毒性である。リポソームのインビボ毒性は、インビトロとインビボでの遺伝子移入結果の間の矛盾を部分的に説明する。この矛盾するデータに寄与する別の要因は、血清タンパク質の存在下および非存在下での脂質ビヒクル安定性の差である。脂質ビヒクルと血清タンパク質との間の相互作用は、脂質ビヒクルの安定性特徴に対して劇的な影響を有する（Ｙａｎｇ  ａｎｄ  Ｈｕａｎｇ，  １９９７）。カチオン性脂質は、負に荷電した血清タンパク質を引きつけかつ結合する。血清タンパク質と会合した脂質ビヒクルは、溶解されるかまたはマクロファージによって取り込まれるかのいずれかであり、循環からのそれらの除去をもたらす。現在のインビボでの脂質送達法は、循環中でのカチオン性脂質と関連した毒性および安定性の問題を回避するために、皮下注射、皮内注射、腫瘍内注射または頭蓋内注射を使用する。脂質ビヒクルと血漿タンパク質との相互作用は、インビトロでの遺伝子移入（Ｆｅｌｇｎｅｒら，  １９８７）とインビボでの遺伝子移入（Ｚｈｕら，  １９９３；  Ｐｈｉｌｉｐら，  １９９３；  Ｓｏｌｏｄｉｎら，  １９９５；  Ｌｉｕら，  １９９５；  Ｔｈｉｅｒｒｙら，  １９９５；  Ｔｓｕｋａｍｏｔｏら，  １９９５；  Ａｋｓｅｎｔｉｊｅｖｉｃｈら，  １９９６）の効率との間での不釣り合いの原因である。
【０１３６】
脂質製剤の進歩は、インビボでの遺伝子移入の効率を改善した（Ｔｅｍｐｌｅｔｏｎら  １９９７；  ＷＯ  ９８／０７４０８）。１，２−ビス（オレオイルオキシ）−３−（トリメチルアンモニオ）プロパン（ＤＯＴＡＰ）およびコレステロールの等モル比から構成される新規な脂質製剤は、全身性のインビボ遺伝子移入をおよそ１５０倍、顕著に増強する。ＤＯＴＡＰ：コレステロール脂質製剤は、「サンドイッチリポソーム」といわれる特有の構造を形成する。この製剤は、陥入した二層構造または「花瓶」構造の間にＤＮＡを「サンドイッチ」すると報告される。これら脂質構造の有益な特徴としては、正のρ、コレステロールによるコロイド安定化、二次元ＤＮＡパッケージングおよび増大した血清安定性が挙げられる。特許出願番号６０／１３５，８１８および同第６０／１３３，１１６号は、本発明とともに使用され得る製剤を考察する。
【０１３７】
脂質製剤の生成はしばしば、（Ｉ）逆相エバポレーション、（ＩＩ）脱水−再水和、（ＩＩＩ）界面活性剤透析および（ＩＶ）薄膜水和後のリポソーム混合物の超音波処理または連続押し出し（ｓｅｒｉａｌ  ｅｘｔｒｕｓｉｏｎ）によって達成される。一旦製造されると、脂質構造は、循環中にある場合に毒性である（化学療法剤）かまたは不安定である（核酸）化合物を被包するために使用され得る。脂質被包化は、このような化合物のより低い毒性およびより長い血清半減期を生じた（Ｇａｂｉｚｏｎら，  １９９０）。多くの疾患処置は、従来の治療を高めるために、または新規な治療、特に、過剰増殖性疾患を処置するための治療を確立するために、脂質ベースの遺伝子移入ストラテジーを使用しつつある。
【０１３８】
Ｖ．  免疫チェックポイントインヒビター
本開示は、免疫チェックポイントの遮断と腫瘍抑制遺伝子治療（例えば、ｐ５３および／またはＭＤＡ−７遺伝子治療）とを併用する方法を提供する。免疫チェックポインは、シグナル（例えば、共刺激分子）を上昇させるかまたはシグナルを低下させるかのいずれかである免疫系の分子である。免疫チェックポイント遮断によって標的化され得る阻害性チェックポイント分子としては、アデノシンＡ２Ａレセプター（Ａ２ＡＲ）、Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６としても公知）、ＢおよびＴリンパ球減衰因子（Ｂ  ａｎｄ  Ｔ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ａｔｔｅｎｕａｔｏｒ）（ＢＴＬＡ）、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ−４、ＣＤ１５２としても公知）、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、キラー細胞免疫グロブリン（ＫＩＲ）、リンパ球活性化遺伝子−３（ＬＡＧ３）、プログラム細胞死１（ＰＤ−１）、Ｔ細胞免疫グロブリンドメインおよびムチンドメイン３（ＴＩＭ−３）、ならびにＴ細胞活性化のＶドメインＩｇ抑制因子（ＶＩＳＴＡ）が挙げられる。特に、上記免疫チェックポイントインヒビターは、ＰＤ−１軸および／またはＣＴＬＡ−４を標的とする。
【０１３９】
免疫チェックポイントインヒビターは、低分子、リガンドもしくはレセプターの組換え形態のような薬物であり得るか、または特に、ヒト抗体（例えば、国際特許公開ＷＯ２０１５０１６７１８；  Ｐａｒｄｏｌｌ，  Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃａｎｃｅｒ，  １２（４）：  ２５２−６４，  ２０１２；ともに本明細書に参考として援用される）のような抗体である。免疫チェックポイントタンパク質またはそのアナログの公知のインヒビターが使用され得、特に、抗体のキメラ形態、ヒト化形態またはヒト形態が使用され得る。当業者が認識しているように、もう１つのおよび／または同等の名称が、本開示において言及されたある特定の抗体のために使用され得る。このようなもう１つのおよび／または同等の名称は、本発明の状況では交換可能であり得る。例えば、ランブロリズマブがもう１つのおよび同等の名称であるＭＫ−３４７５およびペンブロリズマブの下でも公知であることは、認識される。
【０１４０】
免疫応答を刺激することが当該分野で公知である免疫チェックポイントインヒビターのうちのいずれかが使用され得ることは、企図される。これは、抗原特異的Ｔリンパ球を直接的または間接的に刺激または増強するインヒビターを含む。これらの免疫チェックポイントインヒビターとしては、ＰＤ−Ｌ２、ＬＡＧ３、ＢＴＬＡ、Ｂ７Ｈ４およびＴＩＭ３が関わる免疫チェックポイントタンパク質および経路を標的化する薬剤が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、当該分野で公知のＬＡＧ３インヒビターとしては、可溶性ＬＡＧ３（ＩＭＰ３２１、またはＷＯ２００９０４４２７３で開示されるＬＡＧ３−Ｉｇ）、ならびにヒトＬＡＧ３を遮断するマウスもしくはヒト化抗体（例えば、ＷＯ２００８１３２６０１で開示されるＩＭＰ７０１）、またはヒトＬＡＧ３を遮断する完全ヒト抗体（例えば、ＥＰ  ２３２０９４０で開示される）が挙げられる。別の例は、ＢＴＬＡに対する遮断薬剤の使用によって提供される（ヒトＢＴＬＡのそのリガンドとの相互作用を遮断する抗体（例えば、ＷＯ２０１１０１４４３８で開示される４Ｃ７）が挙げられるが、これに限定されない）。さらに別の例は、Ｂ７Ｈ４を中和する薬剤の使用によって提供される（ヒトＢ７Ｈ４に対する抗体（ＷＯ  ２０１３０２５７７９、およびＷＯ２０１３０６７４９２で開示される）またはＢ７Ｈ４の可溶性組換え形態（例えば、ＵＳ２０１２０１７７６４５で開示される）が挙げられるが、これらに限定されない）。さらに別の例は、Ｂ７−Ｈ３を中和する薬剤によって提供される（ヒトＢ７−Ｈ３を中和する抗体（例えば、ＵＳ  ２０１２０２９４７９６においてＢＲＣＡ８４Ｄおよび誘導体として開示されるＭＧＡ２７１）が挙げられるが、これらに限定されない）。さらに別の例は、ＴＩＭ３を標的とする薬剤によって提供される（ヒトＴＩＭ３を標的とする抗体（例えば、ＷＯ  ２０１３００６４９０  Ａ２において開示されるとおり、または抗ヒトＴＩＭ３、Ｊｏｎｅｓら，  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．  ２００８；  ２０５（１２）：２７６３−７９によって開示される遮断抗体Ｆ３８−２Ｅ２）が挙げられるが、これらに限定されない）。
【０１４１】
さらに、１より多くの免疫チェックポイントインヒビター（例えば、抗ＰＤ−１抗体および抗ＣＴＬＡ−４抗体）は、腫瘍抑制遺伝子治療と併用され得る。例えば、ｐ５３遺伝子治療および免疫チェックポイントインヒビター（例えば、抗ＫＩＲ抗体および／または抗ＰＤ−１抗体）は、先天性抗腫瘍免疫を増強するために投与され得、続いて、ＩＬ２４遺伝子治療および免疫チェックポイントインヒビター（例えば、抗ＰＤ−１抗体）が投与されて、適応抗腫瘍免疫応答を誘導し得る。
【０１４２】
Ａ．  ＰＤ−１軸アンタゴニスト
Ｔ細胞機能不全またはアネルギーは、阻害性レセプター、プログラム細胞死１ポリペプチド（ＰＤ−１）の、誘導されかつ持続された発現と同時に起こる。従って、ＰＤ−１およびＰＤ−１との相互作用を通じてシグナル伝達する他の分子（例えば、プログラム細胞死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）およびプログラム細胞死リガンド２（ＰＤ−Ｌ２））の治療的標的化が、本明細書で提供される。ＰＤ−Ｌ１は、多くのがんにおいて過剰発現され、しばしば予後不良と関連する（Ｏｋａｚａｋｉ  Ｔら，  Ｉｎｔｅｒｎ．  Ｉｍｍｕｎ．  ２００７  １９（７）：８１３）。従って、ｐ５３および／またはＭＤＡ−７遺伝子治療との併用でのＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−１相互作用の阻害は、例えば、腫瘍のＣＤ８＋  Ｔ細胞媒介性死滅を増強するために本明細書で提供される。
【０１４３】
本明細書で提供されるのは、個体においてがんを処置するかまたはがんの進行を遅らせるための方法であり、上記方法は、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストの有効量を、ｐ５３および／またはＭＤＡ−７遺伝子治療と併用して上記個体に投与する工程を包含する。本明細書で提供されるのはまた、必要性のある個体において免疫機能を増強するための方法であり、上記方法は、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストの有効量、ならびにｐ５３および／またはＭＤＡ−７遺伝子治療を上記個体に投与する工程を包含する。
【０１４４】
例えば、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストは、ＰＤ−１結合アンタゴニスト、ＰＤＬ１結合アンタゴニストおよびＰＤＬ２結合アンタゴニストを含む。「ＰＤ−１」のもう１つの名称としては、ＣＤ２７９およびＳＬＥＢ２が挙げられる。「ＰＤＬ１」のもう１つの名称としては、Ｂ７−Ｈ１、Ｂ７−４、ＣＤ２７４、およびＢ７−Ｈ．が挙げられる。「ＰＤＬ２」のもう１つの名称としては、Ｂ７−ＤＣ、Ｂｔｄｃ、およびＣＤ２７３が挙げられる。いくつかの実施形態において、ＰＤ−１、ＰＤＬ１、およびＰＤＬ２は、ヒトＰＤ−１、ＰＤＬ１およびＰＤＬ２である。
【０１４５】
いくつかの実施形態において、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＰＤ−１の、そのリガンド結合パートナーへの結合を阻害する分子である。具体的局面において、ＰＤ−１リガンド結合パートナーは、ＰＤＬ１および／またはＰＤＬ２である。別の実施形態において、ＰＤＬ１結合アンタゴニストは、ＰＤＬ１の、その結合パートナーへの結合を阻害する分子である。具体的局面において、ＰＤＬ１結合パートナーは、ＰＤ−１および／またはＢ７−１である。別の実施形態において、ＰＤＬ２結合アンタゴニストは、ＰＤＬ２の、その結合パートナーへの結合を阻害する分子である。具体的局面において、ＰＤＬ２結合パートナーは、ＰＤ−１である。そのアンタゴニストは、抗体、その抗原結合フラグメント、イムノアドヘシン（ｉｍｍｕｎｏａｄｈｅｓｉｏｎ）、融合タンパク質、またはオリゴペプチドであり得る。例示的な抗体は、米国特許第８７３５５５３号、同第８３５４５０９号、および同第８００８４４９号（全て本明細書に参考として援用される）に記載される。本明細書で提供される方法における使用のための他のＰＤ−１軸アンタゴニストは、当該分野で公知である（例えば、米国特許出願番号ＵＳ２０１４０２９４８９８、ＵＳ２０１４０２２０２１、およびＵＳ２０１１０００８３６９（全て本明細書に参考として援用される）に記載される）。
【０１４６】
いくつかの実施形態において、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、抗ＰＤ−１抗体（例えば、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体）である。いくつかの実施形態において、抗ＰＤ−１抗体は、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、およびＣＴ−０１１からなる群より選択される。いくつかの実施形態において、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、イムノアドヘシン（例えば、定常領域（例えば、免疫グロブリン配列のＦｃ領域）に融合されたＰＤＬ１またはＰＤＬ２の細胞外部分またはＰＤ−１結合部分を含むイムノアドヘシン）である。いくつかの実施形態において、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＡＭＰ−２２４である。ニボルマブ（ＭＤＸ−１１０６−０４、ＭＤＸ−１１０６、ＯＮＯ−４５３８、ＢＭＳ−９３６５５８、およびオプジーボ（登録商標）としても公知）は、ＷＯ２００６／１２１１６８で記載される抗ＰＤ−１抗体である。ペンブロリズマブ（ＭＫ−３４７５、Ｍｅｒｃｋ  ３４７５、ランブロリズマブ、キートルーダ（登録商標）、およびＳＣＨ−９００４７５としても公知）は、ＷＯ２００９／１１４３３５に記載される抗ＰＤ−１抗体である。ＣＴ−０１１（ｈＢＡＴまたはｈＢＡＴ−１としても公知）は、ＷＯ２００９／１０１６１１に記載される抗ＰＤ−１抗体である。ＡＭＰ−２２４（Ｂ７−ＤＣＩｇとしても公知）は、ＷＯ２０１０／０２７８２７およびＷＯ２０１１／０６６３４２に記載されるＰＤＬ２−Ｆｃ融合可溶性レセプターである。さらなるＰＤ−１結合アンタゴニストとしては、ピディリズマブ（ＣＴ−０１１としても公知）、ＭＥＤＩ０６８０（ＡＭＰ−５１４としても公知）、およびＲＥＧＮ２８１０が挙げられる。
【０１４７】
いくつかの局面において、免疫チェックポイントインヒビターは、ＰＤ−Ｌ１アンタゴニスト、例えば、デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６としても公知）、アテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３２８０Ａとしても公知）、またはアベルマブ（ＭＳＢ０００１０１１８Ｃとしても公知）である。ある特定の局面において、免疫チェックポイントインヒビターは、ＰＤ−Ｌ２アンタゴニスト（例えば、ｒＨＩｇＭ１２Ｂ７）である。いくつかの局面において、免疫チェックポイントインヒビターは、ＬＡＧ−３アンタゴニスト（例えば、ＩＭＰ３２１、およびＢＭＳ−９８６０１６が挙げられるが、これらに限定されない）である。免疫チェックポイントインヒビターは、アデノシンＡ２ａレセプター（Ａ２ａＲ）アンタゴニスト（例えば、ＰＢＦ−５０９）であり得る。
【０１４８】
いくつかの局面において、本明細書で記載される抗体（例えば、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤＬ１抗体、または抗ＰＤＬ２抗体）は、ヒトまたはマウスの定常領域をさらに含む。なおさらなる局面において、ヒト定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４からなる群より選択される。なおさらなる具体的局面において、ヒト定常領域は、ＩｇＧ１である。なおさらなる局面において、マウス定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２Ａ、ＩｇＧ２Ｂ、ＩｇＧ３からなる群より選択される。なおさらなる具体的局面において、抗体は、低下したまたは最小のエフェクター機能を有する。なおさらなる具体的局面において、最小のエフェクター機能は、原核生物細胞での生成から生じる。なおさらなる具体的局面において、最小のエフェクター機能は、「エフェクターなしＦｃ変異」または無グリコシル化（ａｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ）から生じる。
【０１４９】
よって、本明細書で使用される抗体は、無グリコシル化され得る。抗体のグリコシル化は、代表的には、Ｎ結合型またはＯ結合型のいずれかであり得る。Ｎ結合型とは、アスパラギン残基の側鎖への炭水化物部分の結合に言及する。３ペプチド配列、アスパラギン−Ｘ−セリンおよびアスパラギン−Ｘ−スレオニン（ここでＸは、プロリンを除く任意のアミノ酸である）は、アスパラギン側鎖への炭水化物部分の酵素による結合のための認識配列である。従って、ポリペプチドの中にこれらトリペプチド配列のうちのいずれかが存在することで、潜在的なグリコシル化部位が作られる。Ｏ結合型グリコシル化とは、ヒドロキシアミノ酸、最も一般的には、セリンまたはスレオニンへの、糖Ｎ−アセチルガラクトサミン（Ｎ−ａｃｅｙｌｇａｌａｃｔｏｓａｍｉｎｅ）、ガラクトース、またはキシロースのうちの１つの結合に言及するが、５−ヒドロキシプロリンまたは５−ヒドロキシリジンもまた、使用され得る。抗体からグリコシル化部位を除去することは、上記のトリペプチド配列（Ｎ結合型グリコシル化部位に関しては）のうちの１つが除去されるように、アミノ酸配列を変化させることによって便宜上達成される。その変化は、グリコシル化部位内のアスパラギン、セリンまたはスレオニン残基を、別のアミノ酸残基（例えば、グリシン、アラニンまたは保存的置換）で置換することによって行われ得る。
【０１５０】
抗体またはその抗原結合フラグメントは、当該分野で公知の方法を使用して、例えば、先に記載された抗ＰＤＬ１、抗ＰＤ−１、もしくは抗ＰＤＬ２抗体または抗原結合フラグメントのうちのいずれかをコードする核酸を発現に適した形態で含む宿主細胞を、このような抗体またはフラグメントを生成するために適した条件下で培養する工程、およびその抗体またはフラグメントを回収する工程を包含するプロセスによって、作製され得る。
【０１５１】
Ｂ．  ＣＴＬＡ−４
本明細書で提供される方法において標的化され得る別の免疫チェックポイントは、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ−４）（ＣＤ１５２としても公知）である。ヒトＣＴＬＡ−４の完全ｃＤＮＡ配列は、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号Ｌ１５００６を有する。ＣＴＬＡ−４は、Ｔ細胞の表面上で見出され、抗原提示細胞の表面上のＣＤ８０またはＣＤ８６に結合した場合に、「オフ」スイッチとして作用する。ＣＴＬＡ４は、ヘルパーＴ細胞の表面上で発現されかつ阻害性シグナルをＴ細胞へと伝える、免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーである。ＣＴＬＡ４は、Ｔ細胞共刺激タンパク質、ＣＤ２８に類似であり、その両方の分子は、抗原提示細胞上のＣＤ８０およびＣＤ８６（それぞれ、Ｂ７−１およびＢ７−２とも称される）に結合する。ＣＴＬＡ４は、阻害性シグナルをＴ細胞へと伝えるのに対して、ＣＤ２８は、刺激シグナルを伝える。細胞内ＣＴＬＡ４はまた、調節性Ｔ細胞において見出され、それらの機能にとって重要であり得る。Ｔ細胞レセプターおよびＣＤ２８を通じてのＴ細胞活性化は、ＣＴＬＡ−４（Ｂ７分子の阻害性レセプター）の増大した発現をもたらす。
【０１５２】
いくつかの実施形態において、免疫チェックポイントインヒビターは、抗ＣＴＬＡ−４抗体（例えば、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体）、その抗原結合フラグメント、イムノアドヘシン、融合タンパク質、またはオリゴペプチドである。
【０１５３】
本発明の方法における使用に適した抗ヒトＣＴＬＡ−４抗体（またはこれに由来するＶＨおよび／もしくはＶＬドメイン）は、当該分野で周知の方法を使用して生成され得る。あるいは、当該分野で認識される抗ＣＴＬＡ−４抗体が使用され得る。例えば、以下で開示される抗ＣＴＬＡ−４抗体：米国特許第８，１１９，１２９号、ＷＯ  ０１／１４４２４、ＷＯ  ９８／４２７５２；ＷＯ  ００／３７５０４（ＣＰ６７５，２０６、トレメリムマブとしても公知；以前はチシリムマブ）、米国特許第６，２０７，１５６号；Ｈｕｒｗｉｔｚら（１９９８）  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９５（１７）：  １００６７−１００７１；  Ｃａｍａｃｈｏら  （２００４）  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ２２（１４５）：  Ａｂｓｔｒａｃｔ  Ｎｏ．  ２５０５（抗体ＣＰ−６７５２０６）；およびＭｏｋｙｒら  （１９９８）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ５８：５３０１−５３０４は、本明細書で開示される方法において使用され得る。前述の刊行物のうちの各々の教示は、参考として援用される。ＣＴＬＡ−４に結合するためのこれらの当該分野で認識される抗体のうちのいずれかと競合する抗体もまた、使用され得る。例えば、ヒト化ＣＴＬＡ−４抗体は、国際特許出願番号ＷＯ２００１０１４４２４、ＷＯ２００００３７５０４、および米国特許第８０１７１１４号（全て本明細書に参考として援用される）に記載される。
【０１５４】
例示的な抗ＣＴＬＡ−４抗体は、イピリムマブ（１０Ｄ１、ＭＤＸ−０１０、ＭＤＸ−１０１、およびＹｅｒｖｏｙ（登録商標）としても公知）またはその抗原結合フラグメントおよび改変体（例えば、ＷＯＯ  １／１４４２４を参照のこと）である。他の実施形態において、抗体は、イピリムマブの重鎖および軽鎖のＣＤＲまたはＶＲを含む。よって、一実施形態において、抗体は、イピリムマブのＶＨ領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ドメイン、ならびにイピリムマブのＶＬ領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインを含む。別の実施形態において、抗体は、上述の抗体と、ＣＴＬＡ−４上の同じエピトープとの結合に関して競合する／その同じエピトープに結合する。別の実施形態において、抗体は、上述の抗体と少なくとも約９０％の可変領域アミノ酸配列同一性（例えば、イピリムマブと少なくとも約９０％、９５％、または９９％の可変領域同一性）を有する。
【０１５５】
ＣＴＬＡ−４を調節するための他の分子としては、ＣＴＬＡ−４リガンドおよびレセプター（例えば、米国特許第５８４４９０５号、同第５８８５７９６号および国際特許出願番号ＷＯ１９９５００１９９４およびＷＯ１９９８０４２７５２（全て本明細書に参考として援用される）に記載される）、ならびにイムノアドヘシン（例えば、米国特許第８３２９８６７号（本明細書に参考として援用される）に記載される）が挙げられる。
【０１５６】
Ｃ．  キラー免疫グロブリン様レセプター（ＫＩＲ）
本発明における使用のための別の免疫チェックポイントインヒビターは、抗ＫＩＲ抗体である。本発明における使用に適した抗ヒトＫＩＲ抗体（またはこれに由来するＶＨ／ＶＬドメイン）は、当該分野で周知の方法を使用して生成され得る。
【０１５７】
あるいは、当該分野で認識される抗ＫＩＲ抗体が使用され得る。抗ＫＩＲ抗体は、複数の阻害性ＫＩＲレセプターと交叉反応性であり得、これらのレセプターのうちの１もしくはこれより多くを有するＮＫ細胞の細胞傷害性を増強する。例えば、抗ＫＩＲ抗体は、ＫＩＲ２Ｄ２ＤＬ１、ＫＩＲ２ＤＬ２、およびＫＩＲ２ＤＬ３のうちの各々に結合し得、これらＫＩＲのうちのいずれかもしくは全てによって媒介されるＮＫ細胞細胞傷害性の阻害を低減する、中和するおよび／または改善することによって、ＮＫ細胞活性を増強し得る。いくつかの局面において、抗ＫＩＲ抗体は、ＫＩＲ２ＤＳ４および／またはＫＩＲ２ＤＳ３を結合しない。例えば、モノクローナル抗体１−７Ｆ９（ＩＰＨ２１０１としても公知）、１４Ｆ１、１−６Ｆ１および１−６Ｆ５（ＷＯ  ２００６／００３１７９に記載される）（これらの教示は、参考として援用される）が使用され得る。ＫＩＲへの結合に関してこれらの当該分野で認識される抗体のうちのいずれかと競合する抗体もまた、使用され得る。使用され得る、さらなる当該分野で認識される抗ＫＩＲ抗体としては、例えば、ＷＯ  ２００５／００３１６８、ＷＯ  ２００５／００９４６５、ＷＯ  ２００６／０７２６２５、ＷＯ  ２００６／０７２６２６、ＷＯ  ２００７／０４２５７３、ＷＯ  ２００８／０８４１０６、ＷＯ  ２０１０／０６５９３９、ＷＯ  ２０１２／０７１４１１およびＷＯ／２０１２／１６０４４８で開示されるものが挙げられる。
【０１５８】
例示的な抗ＫＩＲ抗体は、リリルマブ（ＢＭＳ−９８６０１５またはＩＰＨ２１０２ともいわれる）である。他の実施形態において、抗ＫＩＲ抗体は、リリルマブの重鎖および軽鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）または可変領域（ＶＲ）を含む。よって、一実施形態において、抗体は、リリルマブの重鎖可変（ＶＨ）領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ドメイン、ならびにリリルマブの軽鎖可変（ＶＬ）領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインを含む。別の実施形態において、抗体は、リリルマブと少なくとも約９０％の可変領域アミノ酸配列同一性を有する。
【０１５９】
ＶＩ．  処置方法
本明細書で提供されるのは、個体においてがんを処置するかまたはがんの進行を遅らせるための方法であり、上記方法は、少なくとも１種の免疫チェックポイントインヒビター（例えば、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストおよび／またはＣＴＬＡ−４抗体）の有効量および少なくとも１種の腫瘍抑制遺伝子治療（例えば、ｐ５３および／またはＭＤＡ−７遺伝子治療）を上記個体に投与する工程を包含する。
【０１６０】
いくつかの実施形態において、処置は、その処置の中止後に個体において持続した応答を生じる。本明細書で記載される方法は、増強された免疫原性が所望される（例えば、がんの処置のために腫瘍免疫原性を増大させる）処置条件における使用が見出される。本明細書で提供されるのはまた、がんを有する個体におけるような免疫機能を増強するための方法であり、上記方法は、免疫チェックポイントインヒビター（例えば、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストおよび／またはＣＴＬＡ−４抗体）の有効量ならびにｐ５３および／またはＭＤＡ−７遺伝子治療を上記個体に投与する工程を包含する。いくつかの実施形態において、上記個体は、ヒトである。
【０１６１】
処置が企図されるがんの例としては、肺がん、頭頚部がん、乳がん、膵臓がん、前立腺がん、腎臓がん、骨がん、精巣がん、子宮頚がん、消化管がん、リンパ腫、肺における新生物発生前の病変、結腸がん、黒色腫、および膀胱がんが挙げられる。
【０１６２】
いくつかの実施形態において、個体は、１もしくはこれより多くの抗がん治療に抵抗性である（抵抗性であることが示された）がんを有する。いくつかの実施形態において、抗がん治療への抵抗性は、がんの再発または難治性がんを含む。再発とは、処置の後に、元々の部位または新たな部位において、がんが再出現することをいい得る。いくつかの実施形態において、抗がん治療への抵抗性としては、抗がん治療での処置の間のがんの進行が挙げられる。いくつかの実施形態において、がんは、初期ステージまたは後期ステージにある。
【０１６３】
個体は、ＰＤ−Ｌ１生体マーカーを発現する（例えば、診断試験において発現することが示された）がんを有し得る。いくつかの実施形態において、患者のがんは、低いＰＤ−Ｌ１生体マーカーを発現する。いくつかの実施形態において、患者のがんは、高いＰＤ−Ｌ１生体マーカーを発現する。ＰＤ−Ｌ１生体マーカーは、ＦＡＣＳ、ウェスタンブロット、ＥＬＩＳＡ、免疫沈降、免疫組織化学、免疫蛍光、ラジオイムノアッセイ、ドットブロット、免疫検出法、ＨＰＬＣ、表面プラズモン共鳴、光学分光法、質量分析法、ＨＰＬＣ、ｑＰＣＲ、ＲＴ−ｑＰＣＲ、多重ｑＰＣＲまたはＲＴ−ｑＰＣＲ、ＲＮＡ−ｓｅｑ、マイクロアレイ分析、ＳＡＧＥ、ＭａｓｓＡＲＲＡＹ技術、およびＦＩＳＨ、ならびにこれらの組み合わせからなる群より選択される方法を使用して、サンプル中で検出され得る。
【０１６４】
本明細書で記載される方法（例えば、併用処置は、少なくとも１種の免疫チェックポイントインヒビターおよびｐ５３および／またはＭＤＡ−７遺伝子治療の併用の有効量を投与する工程を包含する）のうちのいずれかの効力は、当該分野で公知の種々の方法（例えば、臨床モデルまたは前臨床モデル）において試験され得る。適切な前臨床モデルは、本明細書で例示され、ＩＤ８卵巣がん、ＧＥＭモデル、Ｂ１６黒色腫、ＲＥＮＣＡ腎細胞がん、ＣＴ２６結腸直腸がん、ＭＣ３８結腸直腸がん、およびがんのＣｌｏｕｄｍａｎ黒色腫モデルがさらに挙げられ得るが、これらに限定されない。
【０１６５】
本開示の方法のいくつかの実施形態において、がんは、Ｔ細胞浸潤の低レベルを有する。いくつかの実施形態において、がんは、検出可能なＴ細胞浸潤を有しない。いくつかの実施形態において、がんは、非免疫原性がん（例えば、非免疫原性結腸直腸がんおよび／または卵巣がん）である。理論によって拘束されないが、併用処置は、その併用を投与する前と比較して、Ｔ細胞（例えば、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、記憶Ｔ細胞）のプライミング、活性化および／または増殖を増大させ得る。
【０１６６】
本開示の方法のいくつかの実施形態において、個体における活性化ＣＤ４および／またはＣＤ８  Ｔ細胞は、γ−ＩＦＮを生成するＣＤ４および／またはＣＤ８  Ｔ細胞、ならびに／あるいはその併用を投与する前と比較して増強された細胞溶解活性によって特徴付けられる。γ−ＩＦＮは、例えば、細胞固定、透過化、およびγ−ＩＦＮに対する抗体での染色を含む細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）を含む、当該分野で公知の任意の手段によって測定され得る。細胞溶解活性は、当該分野で公知の任意の手段によって（例えば、混合されたエフェクターおよび標的細胞での細胞死滅アッセイを使用して）測定され得る。
【０１６７】
本開示は、免疫系の標的として、または外来標的への免疫系の応答の一部としてのいずれかで免疫反応に関与する任意のヒト細胞に有用である。その方法は、エキソビボ方法、インビボ方法、およびポリヌクレオチドまたはベクターを宿主細胞へと注射することを含む種々の他の方法を包含する。その方法はまた、腫瘍または腫瘍床への直接の、および腫瘍に対して局所または局部的な注射を含む。
【０１６８】
Ａ．  投与
本明細書で提供される併用療法は、免疫チェックポイントインヒビター（例えば、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストおよび／またはＣＴＬＡ−４抗体）ならびにｐ５３および／またはＭＤＡ−７遺伝子治療の投与を含む。その併用療法は、当該分野で公知の任意の適切な様式で投与され得る。例えば、免疫チェックポイントインヒビター（例えば、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストおよび／またはＣＴＬＡ−４抗体）ならびにｐ５３および／またはＭＤＡ−７遺伝子治療は、逐次的に（異なる時間で）または同時に（同じ時間に）投与され得る。いくつかの実施形態において、１もしくはこれより多くの免疫チェックポイントインヒビターは、ｐ５３および／またはＭＤＡ−７遺伝子治療あるいはその発現構築物として別個に組成物中にある。いくつかの実施形態において、免疫チェックポイントインヒビターは、ｐ５３および／またはＭＤＡ−７遺伝子治療と同じ組成物中にある。ある特定の局面において、被験体は、少なくとも１種の免疫チェックポイントインヒビターの前、同時、または後に、ｐ５３をコードする核酸および／またはＭＤＡ−７をコードする核酸を投与される。
【０１６９】
１もしくはこれより多くの免疫チェックポイントインヒビターならびにｐ５３および／またはＭＤＡ−７遺伝子治療は、同じ投与経路または異なる投与経路によって投与され得る。いくつかの実施形態において、免疫チェックポイントインヒビターは、静脈内に、筋肉内に、皮下に、局所的に、経口的に、経皮的に、腹腔内に、眼窩内に、埋め込みによって、吸入によって、髄腔内に、脳室内に、または鼻内に投与される。いくつかの実施形態において、ｐ５３および／またはＭＤＡ−７遺伝子治療は、静脈内に、筋肉内に、皮下に、局所的に、経口的に、経皮的に、腹腔内に、眼窩内に、埋め込みによって、吸入によって、髄腔内に、脳室内に、または鼻内に投与される。免疫チェックポイントインヒビターの有効量ならびにｐ５３および／またはＭＤＡ−７遺伝子治療は、疾患の防止または処置のために投与され得る。免疫チェックポイントインヒビターの適切な投与量ならびに／あるいはｐ５３および／またはＭＤＡ−７遺伝子治療は、処置されるべき疾患のタイプ、疾患の重篤度および経過、個体の臨床状態、個体の病歴および処置への応答、ならびに主治医の裁量に基づいて決定され得る。いくつかの実施形態において、少なくとも１種の免疫チェックポイントインヒビター（例えば、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストおよび／またはＣＴＬＡ−４抗体）ならびにｐ５３および／またはＭＤＡ−７遺伝子治療での併用処置は、相乗効果的であり、それによって、併用でのｐ５３および／またはＭＤＡ−７遺伝子治療の効果的な用量は、単一薬剤としての少なくとも１種の免疫チェックポイントインヒビター（例えば、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストおよび／またはＣＴＬＡ−４抗体）の効果的な用量と比較して低減される。
【０１７０】
例えば、免疫チェックポイントインヒビター（例えば、抗体）の治療上有効な量、ならびに／あるいはヒトに投与されるｐ５３および／またはＭＤＡ−７コード核酸またはその発現構築物は、１もしくはこれより多くの投与によるか否かに拘わらず、患者の体重の約０．０１〜約５０ｍｇ／ｋｇの範囲にある。いくつかの実施形態において、使用される抗体は、約０．０１〜約４５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約４０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約３５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約２５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約２０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約１５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約５ｍｇ／ｋｇ、または約０．０１〜約１ｍｇ／ｋｇが、例えば毎日投与される。いくつかの実施形態において、抗体は、１５ｍｇ／ｋｇで投与される。しかし、他の投与レジメンも有用であり得る。一実施形態において、本明細書で記載される抗ＰＤＬ１抗体は、２１日周期のうちの１日目に、約１００ｍｇ、約２００ｍｇ、約３００ｍｇ、約４００ｍｇ、約５００ｍｇ、約６００ｍｇ、約７００ｍｇ、約８００ｍｇ、約９００ｍｇ、約１０００ｍｇ、約１１００ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１３００ｍｇまたは約１４００ｍｇの用量でヒトに投与される。その用量は、単一用量として、または複数用量（例えば、２または３用量）として（例えば、注入）投与され得る。この治療の進歩は、従来技術によって容易にモニターされる。
【０１７１】
腫瘍内注射、または腫瘍血管系への注射は、分離した固形の接近可能な腫瘍に関して具体的に企図される。局所的、局部的または全身性の投与はまた、適切であり得る。＞４ｃｍの腫瘍に関して、投与されるべき容積は、約４〜１０ｍｌ（特に、１０ｍｌ）である一方で、＜４ｃｍの腫瘍に関して、約１〜３ｍｌの容積が使用される（特に、３ｍｌ）。単一用量として送達される複数回の注射は、約０．１〜約０．５ｍｌ容積を含む。例えば、アデノウイルス粒子は、有利なことには、腫瘍への複数回の注射を投与することによって収縮され得る。
【０１７２】
処置レジメンは、同様に変動し得、しばしば腫瘍タイプ、腫瘍位置、疾患の進行、ならびに患者の健康状態および年齢に依存し得る。明らかなことに、腫瘍のある特定のタイプは、より集中的な処置を要する一方で、同時にある特定の患者は、より負担の重いプロトコル耐えることができない。臨床医は、治療製剤の既知の効力および毒性（あれば）に基づいてこのような決定を行うために最もよく適している。
【０１７３】
ある特定の実施形態において、処置されている腫瘍は、少なくとも最初に、切除可能でない可能性がある。治療用ウイルス構築物での処置は、マージンでの収縮に起因して、またはある特定の特に侵襲性の部分の排除によって、腫瘍の切除可能性を増大させ得る。処置後に、切除が可能になり得る。切除の後のさらなる処置は、腫瘍部位での微小の残余疾患を排除するように働く。
【０１７４】
処置は、種々の「単位用量」を含み得る。単位用量は、治療用組成物の所定の量を含むとして定義される。その投与されるべき量、ならびに特定の経路および製剤は、臨床分野の当業者の技術範囲内である。単位用量は、単一注射として投与される必要はないが、設定された期間にわたる連続注入を含み得る。本発明の単位用量は、便宜上、ウイルス構築物のプラーク形成単位（ｐｆｕ）に関して記載され得る。単位用量は、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１０１０、１０１１、１０１２、１０１３ｐｆｕおよびこれより高い範囲に及ぶ。あるいは、ウイルスの種類および達成可能な力価に依存して、１〜１００、１０〜５０、１００〜１０００、または約１×１０４、１×１０５、１×１０６、１×１０７、１×１０８、１×１０９、１×１０１０、１×１０１１、１×１０１２、１×１０１３、１×１０１４、もしくは１×１０１５までまたはこれより高い感染性ウイルス粒子（ｖｐ）が、患者にまたは患者の細胞に送達される。
【０１７５】
Ｂ．  注射用組成物および製剤
ヒトｐ５３およびＭＤＡ−７タンパク質をコードする１もしくはこれより多くの発現構築物、ならびに／または免疫チェックポイントインヒビターを、本発明において過剰増殖性細胞に送達するための１つの方法は、腫瘍内注射を介するものである。しかし、本明細書で開示される薬学的組成物は、代わりに、米国特許第５，５４３，１５８号、同第５，６４１，５１５号および同第５，３９９，３６３号（全て本明細書に参考として援用される）に記載されるように、非経口的に、静脈内に、皮内に、筋肉内に、経皮的に、またはさらに腹腔内に投与され得る。
【０１７６】
核酸構築物の注射は、発現構築物が注射に必要とされる針の特定のゲージを通過し得る限りにおいて、シリンジまたは液剤の注射のために使用される任意の他の方法によって送達され得る。新規なニードルレス注射システムは、記載されており（米国特許第５，８４６，２３３号）、このシステムは、液剤を保持するためのアンプルチャンバを規定するノズルおよび送達部位にノズルから液剤を押し出すためのエネルギーデバイスを有する。シリンジ系はまた、液剤の所定の量の複数回の注射を任意の深さにおいて正確に可能にする遺伝子治療における使用に関して記載されている（米国特許第５，８４６，２２５号）。
【０１７７】
遊離塩基または薬理学的に受容可能な塩としての活性化合物の液剤は、界面活性剤（例えば、ヒドロキシプロピルセルロース）と適切に混合された水の中に調製され得る。分散物もまた、グリセロール、液体ポリエチレングリコール、およびこれらの混合物ならびに油中に調製され得る。貯蔵および使用の通常の条件下では、これらの調製物は、微生物の増殖を防止するために保存剤を含む。注射用途に適した薬学的形態としては、滅菌水性液剤または懸濁物、および滅菌注射用液剤または分散物の即座の調製のための滅菌散剤が挙げられる（米国特許第５，４６６，４６８号）。全ての場合に、その形態は滅菌でなければならず、容易なシリンジ操作性が存在する程度まで流動性でなければならない。それは、製造および貯蔵の条件下で安定でなければならず、微生物（例えば、細菌および真菌）の汚染作用に対して保存されなければならない。キャリアは、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）、これらの適切な混合物、および／または植物性油を含む、溶媒または分散媒であり得る。適切な流動性は、例えば、被覆（例えば、レシチン）の使用によって、分散物の場合には必要とされる粒度を維持することによって、および界面活性剤の使用によって、維持され得る。微生物の作用の防止は、種々の抗微生物剤および抗真菌剤（例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールなど）によってもたらされ得る。多くの場合、等張性薬剤（例えば、糖または塩化ナトリウム）を含めることは好ましい。注射用組成物の長期間の吸収は、吸収を遅らせる薬剤（例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチン）の組成物中での使用によってもたらされ得る。
【０１７８】
例えば、水性液剤の非経口投与に関しては、その液剤は、必要な場合には適切に緩衝化されるべきであり、その液体希釈物は、十分な塩類またはグルコースでまず等張性にされるべきである。これらの特定の水性液剤は、特に、静脈内、筋肉内、皮下、腫瘍内および腹腔内投与に適している。これに関連して、使用され得る滅菌水性媒体は、本開示に鑑みて、当業者に公知である。例えば、１投与量は、等張性ＮａＣｌ溶液１ｍｌに溶解され得、皮下注入流体１０００ｍｌに添加されるか、または提唱される注入部位において注射されるかのいずれかであり得る（例えば、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」第２２版を参照のこと）。投与量におけるいくつかのバリエーションは、処置されている被験体の状態に依存して必然的に起こる。投与に責任のある個人は、いずれにしても、個々の被験体に適切な用量を決定する。さらに、ヒト投与に関しては、調製物は、バイオ医薬品に関してＦＤＡ当局によって要求される滅菌性、発熱性、一般的な安全性および純度標準を満たすべきである。
【０１７９】
滅菌注射用液剤は、適切な溶媒中に必要とされる量の活性化合物を、必要な場合に、種々の上記で列挙した他の成分とともに組み込み、続いて、濾過滅菌することによって調製される。一般に、分散物は、種々の滅菌活性成分を、基本的な分散媒および上記で列挙したものからの必要とされる他の成分を含む滅菌ビヒクルの中に組み込むことによって調製される。滅菌注射用液剤の調製のための滅菌散剤の場合には、好ましい調製法は、予め滅菌濾過したその液剤から活性成分と任意のさらなる所望の成分の散剤を生じる、真空乾燥および凍結乾燥技術である。
【０１８０】
本明細書で開示される組成物は、中性形態または塩形態で製剤化され得る。薬学的に受容可能な塩は、酸付加塩（タンパク質の遊離アミノ基と形成される）および無機酸（例えば、塩酸もしくはリン酸のような）、または酢酸、シュウ酸、酒石酸、マンデル酸などのような有機酸と形成されるものを含む。遊離カルボキシル基と形成される塩はまた、無機塩基（例えば、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、または水酸化鉄（ＩＩＩ）のような）およびイソプロピルアミン、トリメチルアミン、ヒスチジン、プロカインなどのような有機塩基から得られ得る。製剤化の際に、液剤は、投与製剤と適合性の様式でかつ治療上有効であるような量で投与される。その製剤は、種々の剤形で容易に投与される（例えば、注射用液剤、薬物放出カプセル剤など）。
【０１８１】
Ｃ．  さらなる抗がん治療
ｐ５３および／またはＭＤＡ−７核酸、ならびに少なくとも１種の免疫チェックポイントインヒビターの有効性を増大させるために、それらは、がんの処置において有効な少なくとも１種のさらなる薬剤と併用され得る。より一般には、これらの他の組成物は、細胞を死滅させるかまたは細胞の増殖を阻害するために有効な併用量で提供される。このプロセスは、細胞と発現構築物および薬剤または複数の因子とを同時に接触させる工程を包含し得る。これは、細胞と、単一組成物もしくは両方の薬剤を含む薬理学的製剤とを接触させることによって、または細胞と２種の別個の組成物もしくは製剤とを同時に接触させる（ここで一方の組成物は、発現構築物を含み、他方の組成物は、第２の薬剤を含む）ことによって達成され得る。あるいは、発現構築物は、増殖しつつある細胞と接触させ得、さらなる治療が、抗腫瘍免疫応答および治療効力を増強するための免疫系または腫瘍微小環境の他の細胞に影響を及ぼし得る。その少なくとも１種のさらなる抗がん治療は、外科的療法、化学療法（例えば、プロテインキナーゼインヒビターまたはＥＧＦＲ標的化治療の投与）、放射線療法、凍結療法、温熱療法、光線療法、ラジオ波焼灼療法、ホルモン療法、免疫療法、低分子療法、レセプターキナーゼインヒビター療法、抗血管新生療法、サイトカイン療法または生物学的療法（例えば、モノクローナル抗体、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイムまたは遺伝子治療）であり得るが、これらに限定されない。限定されないが、その生物学的療法は、遺伝子治療（例えば、腫瘍抑制遺伝子治療）、細胞死タンパク質遺伝子治療、細胞周期調節因子遺伝子治療、サイトカイン遺伝子治療、毒素遺伝子治療、免疫遺伝子治療、自殺遺伝子治療、プロドラッグ遺伝子治療、抗細胞増殖遺伝子治療、酵素遺伝子治療、または抗血管新生因子遺伝子治療であり得る。
【０１８２】
遺伝子治療は、数分間から数週間の範囲に及ぶ間隔によって他の薬剤処置の先に行われ得るか、または後に行われ得る。他の薬剤および発現構築物が別個に細胞に適用される実施形態において、その薬剤および発現構築物が細胞に対して有利な併用効果を発揮することがなおできるように、各送達の時間の間は、顕著な期間は経過してしまわなかったことが一般に担保される。このような状況では、細胞と両方のモダリティーとが互いに約１２〜２４時間以内に、およびより好ましくは互いに約６〜１２時間以内に接触され得ることが企図される。状況によっては、処置の期間を顕著に延ばすことが望ましいことであり得るが、その場合、数日間（例えば、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、または７日間）から数週間（例えば、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間または８週間）がそれぞれの投与間で経過する。
【０１８３】
種々の組み合わせが使用され得、遺伝子治療および免疫チェックポイントインヒビターは、「Ａ」であり、第２の薬剤、すなわち、化学療法は、「Ｂ」である：
Ａ／Ｂ／Ａ  Ｂ／Ａ／Ｂ  Ｂ／Ｂ／Ａ  Ａ／Ａ／Ｂ  Ａ／Ｂ／Ｂ  Ｂ／Ａ／Ａ  Ａ／Ｂ／Ｂ／Ｂ  Ｂ／Ａ／Ｂ／Ｂ
Ｂ／Ｂ／Ｂ／Ａ  Ｂ／Ｂ／Ａ／Ｂ  Ａ／Ａ／Ｂ／Ｂ  Ａ／Ｂ／Ａ／Ｂ  Ａ／Ｂ／Ｂ／Ａ  Ｂ／Ｂ／Ａ／Ａ
Ｂ／Ａ／Ｂ／Ａ  Ｂ／Ａ／Ａ／Ｂ  Ａ／Ａ／Ａ／Ｂ  Ｂ／Ａ／Ａ／Ａ  Ａ／Ｂ／Ａ／Ａ  Ａ／Ａ／Ｂ／Ａ。
【０１８４】
１．  化学療法
がん治療は一般に、化学的および放射線ベースの処置の両方との種々の併用療法も含み得る。併用化学療法剤としては、例えば、以下が挙げられる：シスプラチン（ＣＤＤＰ）、カルボプラチン、プロカルバジン、メクロレタミン、シクロホスファミド、カンプトテシン、イホスファミド、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファン、ニトロソウレア、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ブレオマイシン、プリカマイシン、マイトマイシン、エトポシド（ＶＰ１６）、タモキシフェン、ラロキシフェン、エストロゲンレセプター結合剤、タキソール、ゲムシタビン（ｇｅｍｃｉｔａｂｉｅｎ）、ナベルビン、ファルネシルプロテイントランスフェラーゼインヒビター（ｆａｍｅｓｙｌ−ｐｒｏｔｅｉｎ  ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）、トランス白金、５−フルオロウラシル、ビンクリスチン、ビンブラスチンおよびメトトレキサート、テモゾロミド（ＤＴＩＣの水性形態）、または前述のうちのいずれかのアナログもしくは派生改変体。化学療法と生物学的療法との併用は、バイオ化学療法として公知である。その化学療法はまた、メトロノミック化学療法として公知である低い連続用量で投与され得る。
【０１８５】
なおさらなる併用化学療法剤としては、例えば、以下が挙げられる：アルキル化剤（例えば、チオテパおよびシクロホスファミド）；アルキルスルホネート（例えば、ブスルファン、インプロスルファンおよびピポスルファン）；アジリジン（例えば、ベンゾドパ、カルボコン、メツレドパ、およびウレドパ）；エチレンイミンおよびメチルメラミン（ｍｅｔｈｙｌａｍｅｌａｍｉｎｅｓ）（アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド（ｔｒｉｅｔｙｌｅｎｅｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｅ）、トリエチレンチオホスホルアミド（ｔｒｉｅｔｈｉｙｌｅｎｅｔｈｉｏｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｅ）およびトリメチロールメラミン（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｏｌｏｍｅｌａｍｉｎｅ）が挙げられる）；アセトゲニン（特に、ブラタシンおよびブラタシノン）；カンプトテシン（合成アナログであるトポテカンが挙げられる）；ブリオスタチン；カリスタチン（ｃａｌｌｙｓｔａｔｉｎ）；ＣＣ−１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシンおよびビゼレシン合成アナログが挙げられる）；クリプトフィシン（特に、クリプトフィシン１およびクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成アナログ、ＫＷ−２１８９およびＣＢ１−ＴＭ１が挙げられる）；エリュテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチイン；スポンジスタチン；ナイトロジェンマスタード（例えば、クロラムブシル、クロルナファジン、コロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシドヒドロクロリド、メルファラン、ノブエンビキン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード）；ニトロソウレア（例えば、カルムスチン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、およびラニムスチン）；抗生物質（例えば、エンジイン抗生物質（例えば、カリケアマイシン、特に、カリケアマイシンγ１ｌ（ｃａｌｉｃｈｅａｍｉｃｉｎ  ｇａｍｍａｌＩ）およびカリケアマイシンω１ｌ（ｃａｌｉｃｈｅａｍｉｃｉｎ  ｏｍｅｇａＩ１））；ジネマイシン（ジネマイシンＡが挙げられる）；ビスホスホネート（例えば、クロドロネート）；エスペラミシン；ならびにネオカルジノスタチンクロモフォアおよび関連クロモプロテインエンジイン抗生物質クロモフォア、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、アントラマイシン（ａｕｔｈｒａｒｎｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビシン（モルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシンおよびデオキシドキソルビシンが挙げられる）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン（例えば、マイトマイシンＣ）、ミコフェノール酸、ノガラマイシン（ｎｏｇａｌａｒｎｙｃｉｎ）、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン、ピューロマイシン、ケラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン���ゾルビシン；代謝拮抗物質（例えば、メトトレキサートおよび５−フルオロウラシル（５−ＦＵ））；葉酸アナログ（例えば、デノプテリン、プテロプテリン、トリメトレキサート）；プリンアナログ（例えば、フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン）；ピリミジンアナログ（例えば、アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン）；アンドロゲン（例えば、カルステロン、ドロモスタノロンプロピオン酸、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン）；抗副腎薬剤（例えば、ミトータン、トリロスタン）；葉酸補充因子（例えば、フォリン酸）；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトレキサート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）；デフォファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）；デメコルシン；ジアジコン；エルフォルミチン（ｅｌｆｏｒｍｉｔｈｉｎｅ）；酢酸エリプチニウム（ｅｌｌｉｐｔｉｎｉｕｍ  ａｃｅｔａｔｅ）；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシウレア；レンチナン；ロニダイニン（ｌｏｎｉｄａｉｎｉｎｅ）；メイタンシノイド（例えば、メイタンシンおよびアンサマイトシン）；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモール（ｍｏｐｉｄａｎｍｏｌ）；ニトラエリン（ｎｉｔｒａｅｒｉｎｅ）；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；ポドフィリン酸（ｐｏｄｏｐｈｙｌｌｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫポリサッカリド複合体；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２”−トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（特に、Ｔ−２トキシン、ベルカリンＡ（ｖｅｒｒａｃｕｒｉｎ  Ａ）、ロリジンＡ（ｒｏｒｉｄｉｎ  Ａ）およびアングイジン）；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；シクロホスファミド；タキソイド（例えば、パクリタキセルおよびドセタキセルゲムシタビン）；６−チオグアニン；メルカプトプリン；白金配位錯体（例えば、シスプラチン、オキサリプラチンおよびカルボプラチン）；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビン；ノバントロン；テニポシド；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロネート；イリノテカン（例えば、ＣＰＴ−１１）；トポイソメラーゼインヒビターＲＦＳ  ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイド（例えば、レチノイン酸）；カペシタビン；カルボプラチン、プロカルバジン、プリカマイシン、ゲムシタビン、ナベルビン、ファルネシルプロテイントランスフェラーゼインヒビター、トランス白金；ならびに上記のうちのいずれかの薬学的に受容可能な塩、酸または誘導体。ある特定の実施形態において、本明細書で提供される組成物は、ヒストンデアセチラーゼインヒビターと併用され得る。ある特定の実施形態において、本明細書で提供される組成物は、ゲフィチニブと併用され得る。他の実施形態において、本実施形態は、グリベックと組み合わせて実施され得る（例えば、約４００〜約８００ｍｇ／日のグリベックが患者に投与され得る）。ある特定の実施形態において、１もしくはこれより多くの化学療法剤が、本明細書で提供される組成物と併用され得る。
【０１８６】
２．  放射線療法
ＤＮＡ損傷を引き起こしかつ広範に使用されている他の因子としては、γ線（ｙ−ｒａｙｓ）、Ｘ線、および／または腫瘍細胞への放射性同位体の指向された送達として一般に公知のものが挙げられる。ＤＮＡ損傷因子の他の形態はまた、公知である（例えば、マイクロ波およびＵＶ照射）。これらの因子全てが、ＤＮＡに対して、ＤＮＡの前駆物質に対して、ＤＮＡの複製および修復に対して、ならびに染色体のアセンブリおよび維持に対して広い範囲の損傷をもたらす可能性は極めて高い。Ｘ線に関する線量範囲は、長期間（３〜４週間）に関しては５０〜２００レントゲンの１日線量から２０００〜６０００レントゲンの単一線量までの範囲に及ぶ。放射線同位体に関する線量範囲は、広く変動し、同位体の半減期、放射される放射線の強度およびタイプ、ならびに新生物細胞による取り込みに依存する。
【０１８７】
３．  免疫療法
免疫療法剤は、一般に、がん細胞を標的化しかつ破壊するために、免疫エフェクター細胞および分子の使用に依拠する。免疫エフェクターは、例えば、腫瘍細胞の表面上のある種のマーカーに特異的な抗体であり得る。抗体単独は、治療のエフェクターとして働き得るか、または細胞死滅を実際にもたらすために他の細胞を動員し得る。抗体はまた、薬物または毒素（化学療法剤、放射性核種、リシンＡ鎖、コレラ毒素、百日咳毒素など）に結合体化され得、標的化薬剤としてのみ働き得る。あるいは、エフェクターは、腫瘍細胞標的と、直接的または間接的のいずれかで相互作用する表面分子を有するリンパ球であり得る。種々のエフェクター細胞としては、細胞傷害性Ｔ細胞およびＮＫ細胞、ならびにキメラ抗原レセプターを発現するように改変されたこれら細胞タイプの遺伝子操作された改変体が挙げられる。腫瘍細胞へのＭｄａ−７遺伝子移入は、腫瘍細胞死およびアポトーシスを引き起こす。アポトーシス腫瘍細胞は、樹状細胞およびマクロファージを含む細網内皮細胞によって取り除かれ、抗腫瘍免疫を生成するために免疫系へと提示される（Ｒｏｖｅｒｅら，  １９９９；  Ｓｔｅｉｎｍａｎら，  １９９９）。
【０１８８】
他の補完的免疫療法が、それらの効力をさらに増強するために上記のレジメンに追加され得ることは、がん免疫療法の当業者によって認識される（骨髄由来の先天性免疫系細胞の数を増大させるＧＭ−ＣＳＦ、先天性免疫および適応免疫を阻害する調節性Ｔ細胞を排除する低用量シクロホスファミドまたはＰＩ３Ｋインヒビター（例えば、ＰＩ３Ｋδインヒビター）、ならびに５ＦＵ（例えば、カペシタビン）、阻害性骨髄由来免疫抑制細胞を除去するＰＩ３Ｋインヒビターまたはヒストンデアセチラーゼインヒビターが挙げられるが、これらに限定されない）。例えば、ＰＩ３Ｋインヒビターとしては、ＬＹ２９４００２、ペリホシン、ＢＫＭ１２０、Ｄｕｖｅｌｉｓｉｂ、ＰＸ−８６６、ＢＡＹ  ８０−６９４６、ＢＥＺ２３５、ＳＦ１１２６、ＧＤＣ−０９４１、ＸＬ１４７、ＸＬ７６５、Ｐａｌｏｍｉｄ  ５２９、ＧＳＫ１０５９６１５、ＰＷＴ３３５９７、ＩＣ８７１１４、ＴＧ１００−１５、ＣＡＬ２６３、ＰＩ−１０３、ＧＮＥ−４７７、ＣＵＤＣ−９０７、およびＡＥＺＳ−１３６が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの局面において、ＰＩ３Ｋインヒビターは、ＰＩ３Ｋδインヒビター（例えば、イデラリシブ、ＲＰ６５３０、ＴＧＲ１２０２、およびＲＰ６５０３が挙げられるが、これらに限定されない）である。さらなるＰＩ３Ｋインヒビターは、米国特許出願番号ＵＳ２０１５０２９１５９５、ＵＳ２０１１０１９０３１９、および国際特許出願番号ＷＯ２０１２１４６６６７、ＷＯ２０１４１６４９４２、ＷＯ２０１２０６２７４８、およびＷＯ２０１５０８２３７６で開示される。免疫療法はまた、インターロイキン（例えば、ＩＬ−２）、またはインターフェロン（例えば、ＩＮＦα）の投与を含み得る。
【０１８９】
ｐ５３および／またはＭＤＡ−７遺伝子治療ならびに免疫チェックポイントインヒビターと併用され得る免疫療法の例は、免疫アジュバント（例えば、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｏｖｉｓ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ、ジニトロクロロベンゼンおよび芳香族化合物）（米国特許第５，８０１，００５号；米国特許第５，７３９，１６９号；Ｈｕｉ  ａｎｄ  Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ，  １９９８；Ｃｈｒｉｓｔｏｄｏｕｌｉｄｅｓら，  １９９８）、サイトカイン療法（例えば、インターフェロンα、βおよびγ；インターロイキン（ＩＬ−１、ＩＬ−２）、ＧＭ−ＣＳＦおよびＴＮＦ）（Ｂｕｋｏｗｓｋｉら，  １９９８；  Ｄａｖｉｄｓｏｎら，  １９９８；  Ｈｅｌｌｓｔｒａｎｄら，  １９９８）、遺伝子治療（例えば、ＴＮＦ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ｐ５３）（Ｑｉｎら，  １９９８；  Ａｕｓｔｉｎ−Ｗａｒｄ  ａｎｄ  Ｖｉｌｌａｓｅｃａ，  １９９８；米国特許第５，８３０，８８０号および米国特許第５，８４６，９４５号）ならびにモノクローナル抗体（例えば、抗ガングリオシドＧＭ２、抗ＨＥＲ−２、抗ｐ１８５）（Ｐｉｅｔｒａｓら，  １９９８；  Ｈａｎｉｂｕｃｈｉら，  １９９８；  米国特許第５，８２４，３１１号）である。ハーセプチン（トラスツズマブ）は、ＨＥＲ２−ｎｅｕレセプターを遮断するキメラ（マウス−ヒト）モノクローナル抗体である。それは、抗腫瘍活性を有し、悪性腫瘍の処置における使用に関して承認されている（Ｄｉｌｌｍａｎ，  １９９９）。ハーセプチンおよび化学療法でのがんの併用療法は、個々の治療より有効であることが示された。従って、１もしくはこれより多くの抗がん治療が、本明細書で記載されるＡｄ−ｍｄａ７治療とともに使用され得ることは企図される。
【０１９０】
ｐ５３および／またはＭＤＡ−７遺伝子治療ならびに免疫チェックポイントインヒビターと併用され得るさらなる免疫療法としては、共刺激レセプターアゴニスト、先天性免疫細胞の刺激因子、または先天性免疫の活性化因子が挙げられる。共刺激レセプターアゴニストは、抗ＯＸ４０抗体（例えば、ＭＥＤＩ６４６９、ＭＥＤＩ６３８３、ＭＥＤＩ０５６２、およびＭＯＸＲ０９１６）、抗ＧＩＴＲ抗体（例えば、ＴＲＸ５１８、およびＭＫ−４１６６）、抗ＣＤ１３７抗体（例えば、Ｕｒｅｌｕｍａｂ、およびＰＦ−０５０８２５６６）、抗ＣＤ４０抗体（例えば、ＣＰ−８７０，８９３、およびＣｈｉ  Ｌｏｂ  ７／４）、または抗ＣＤ２７抗体（例えば、Ｖａｒｌｉｌｕｍａｂ、ＣＤＸ−１１２７としても公知）であり得る。先天性免疫細胞の刺激因子としては、ＫＩＲモノクローナル抗体（例えば、リリルマブ）、細胞傷害性阻害レセプターのインヒビター（例えば、ＮＫＧ２Ａ、ＫＬＲＣとしておよびＣＤ９４としても公知）（例えば、モノクローナル抗体モナリズマブ、および抗ＣＤ９６（ＴＡＣＴＩＬＥとしても公知））、ならびにｔｏｌｌ様レセプター（ＴＬＲ）アゴニストが挙げられるが、これらに限定されない。ＴＬＲアゴニストは、ＢＣＧ、ＴＬＲ７アゴニスト（例えば、ｐｏｌｙ０ＩＣＬＣ、およびイミキモド）、ＴＬＲ８アゴニスト（例えば、レシキモド）、またはＴＬＲ９アゴニスト（例えば、ＣＰＧ  ７９０９）であり得る。先天性免疫細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、および樹状細胞）の活性化因子としては、ＩＤＯインヒビター、ＴＧＦβインヒビター、ＩＬ−１０インヒビターが挙げられる。例示的な先天性免疫の活性化因子は、Ｉｎｄｏｘｉｍｏｄである。いくつかの局面において、免疫療法は、インターフェロン遺伝子の刺激因子（ＳＴＩＮＧ）アゴニストである（Ｃｏｒｒａｌｅｓら，  ２０１５）。
【０１９１】
本開示の方法における使用に関して企図される他の免疫療法としては、Ｔｃｈｅｋｍｅｄｙｉａｎら，  ２０１５（本明細書に参考として援用される）によって記載されるものが挙げられる。免疫療法は、調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、骨髄由来免疫抑制細胞（ＭＤＳＣ）およびがん関連線維芽細胞（ＣＡＦ）の抑制を含み得る。いくつかの実施形態において、免疫療法は、腫瘍ワクチン（例えば、全腫瘍細胞ワクチン、ペプチド、および組換え腫瘍関連抗原ワクチン）、または養子細胞療法（ＡＣＴ）（例えば、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、ＴＩＬ、およびＬＡＫ細胞）である。Ｔ細胞は、特異的腫瘍抗原に対するキメラ抗原レセプター（ＣＡＲ）またはＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）で操作され得る。本明細書で使用される場合、キメラ抗原レセプター（またはＣＡＲ）とは、Ｔ細胞において発現される場合、Ｔ細胞上にＣＡＲの特異性を付与する、目的の抗原に対して特異的な任意の操作されたレセプターに言及し得る。標準的な分子技術を使用して一旦作成されると、キメラ抗原レセプターを発現するＴ細胞は、養子細胞移入のような技術と同様に、患者に導入され得る。いくつかの局面において、Ｔ細胞は、γ−ＩＦＮ「生成」ＣＤ４および／またはＣＤ８  Ｔ細胞、ならびに／あるいはその併用の投与前と比較して増強された細胞溶解活性によって特徴付けられる個体における活性化ＣＤ４および／またはＣＤ８  Ｔ細胞である。そのＣＤ４および／またはＣＤ８  Ｔ細胞は、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−αおよびインターロイキンからなる群より選択されるサイトカインの増大された放出を示し得る。そのＣＤ４および／またはＣＤ８  Ｔ細胞は、エフェクター記憶Ｔ細胞であり得る。ある特定の実施形態において、そのＣＤ４および／またはＣＤ８エフェクター記憶Ｔ細胞は、ＣＤ４４ｈｌｇｈ  ＣＤ６２Ｌｌｏｗの発現を有することによって特徴付けられる。
【０１９２】
ある特定の局面において、２もしくはこれより多くの免疫療法が、Ｔ細胞共刺激レセプターのアゴニストとの併用でのまたはＴＩＬ  ＡＣＴとの併用でのさらなる免疫チェックポイントインヒビターを含め、ｐ５３および／またはＭＤＡ−７遺伝子治療ならびに免疫チェックポイントインヒビターと併用され得る。他の併用としては、Ｔ細胞チェックポイント遮断＋共刺激レセプターアゴニスト、先天性免疫細胞機能を改善するＴ細胞チェックポイント遮断、チェックポイント遮断＋ＩＤＯ阻害、またはチェックポイント遮断＋適応Ｔ細胞移入が挙げられる。ある特定の局面において、免疫療法は、抗ＰＤ−Ｌ１免疫チェックポイントインヒビター（例えば、アベルマブ）、４−１ＢＢ（ＣＤ−１３７）アゴニスト（例えば、ウトミルマブ）、およびＯＸ４０（ＴＮＦＲＳ４）アゴニストの組み合わせを含む。免疫療法は、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）インヒビター（例えば、５−アザシチジンおよびエンチノスタット）と組み合わされ得る。
【０１９３】
免疫療法は、１もしくはこれより多くのがん抗原（特に、タンパク質またはその免疫原性フラグメント）、上記がん抗原（特に、タンパク質またはその免疫原性フラグメント）をコードするＤＮＡまたはＲＮＡ、がん細胞溶解物、および／または腫瘍細胞に由来するタンパク質調製物を含むがんワクチンであり得る。本明細書で使用される場合、がん抗原は、がん細胞に存在する抗原性物質である。原則として、変異に起因して異常な構造を有するがん細胞において生成される任意のタンパク質は、がん抗原として作用し得る。原則として、がん抗原は、変異したがん遺伝子および腫瘍抑制遺伝子の生成物、他の変異した遺伝子の生成物、過剰発現されたかまたは異所性に発現された細胞タンパク質、発癌性ウイルスによって生成されるがん抗原、がん胎児抗原、変化した細胞表面糖脂質および糖タンパク質、または細胞タイプ特異的分化抗原であり得る。がん抗原の例としては、ｒａｓおよびｐ５３遺伝子の異常な生成物が挙げられる。他の例としては、組織分化抗原、変異タンパク質抗原、発癌性ウイルス抗原、がん−精巣抗原および血管または間質特異的抗原が挙げられる。組織分化抗原は、組織のある特定のタイプに特異的なものである。変異タンパク質抗原は、がん細胞にはるかにより特異的であるようである。なぜなら正常な細胞は、これらタンパク質を含むはずがないからである。正常な細胞は、正常なタンパク質抗原をそれらのＭＨＣ分子上に示すのに対して、がん細胞は、その変異バージョンを示す。いくつかのウイルスタンパク質は、癌の形成に影響を与え、いくつかのウイルス抗原は、がん抗原でもある。がん−精巣抗原は、精巣の生殖細胞において主に発現される抗原であるが、胎児卵巣および栄養膜においても発現される抗原である。いくつかのがん細胞は、これらのタンパク質を異所性に発現するので、これらの抗原を示し、これらの抗原に特異的なＴ細胞による攻撃を可能にする。このタイプの例示的な抗原は、ＣＴＡＧ１  ＢおよびＭＡＧＥＡ１、ならびにＲｉｎｄｏｐｅｐｉｍｕｔ（上皮増殖因子レセプター（ＥＧＦＲ）  ｖｌｌｌ改変体に対して標的化される１４マーの皮内注射用ペプチドワクチン）である。Ｒｉｎｄｏｐｅｐｉｍｕｔは、本明細書で記載されるとおりのＣＤ９５／ＣＤ９５Ｌシグナル伝達系のインヒビターと併用される場合、膠芽腫を処置するために特に適している。また、非常に少量で通常は生成されるが、その生成ががん細胞においては劇的に増大されるタンパク質は、免疫応答の引き金となり得る。このようなタンパク質の例は、酵素チロシナーゼであり、これは、メラニン生成に必要とされる。通常は、チロシナーゼは、微量に生成されるが、そのレベルは、黒色腫細胞においては遙かに上昇している。がん胎児抗原は、がん抗原の別の重要なクラスである。例は、αフェトプロテイン（ＡＦＰ）および癌胎児性抗原（ＣＥＡ）である。これらのタンパク質は、通常、胚発生の初期ステージで生成され、免疫系が完全に発達されるときまでに消失する。従って、自己寛容は、これらの抗原に対して発生しない。異常なタンパク質はまた、腫瘍ウイルス（例えば、ＥＢＶおよびＨＰＶ）に感染した細胞によって生成される。これらのウイルスが感染した細胞は、転写される潜伏ウイルスＤＮＡを含み、生じたタンパク質が免疫応答を生成する。がんワクチンは、ペプチドがんワクチンを含み得、これは、いくつかの実施形態において、個別化ペプチドワクチンである。いくつかの実施形態において、そのペプチドがんワクチンは、多価の長いペプチドワクチン、マルチペプチドワクチン、ペプチドカクテルワクチン、ハイブリッドペプチドワクチン、またはペプチドパルス樹状細胞ワクチンである。
【０１９４】
免疫療法は、抗体（例えば、ポリクローナル抗体調製物の一部）であってもよいし、モノクローナル抗体であってもよい。その抗体は、ヒト化抗体、キメラ抗体、抗体フラグメント、二重特異的抗体または単鎖抗体であってもよい。本明細書で開示されるとおりの抗体は、抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）２、Ｆｄ、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、単鎖抗体、ジスルフィド連結Ｆｖ（ｓｄｆｖ）およびＶＬまたはＶＨドメインのいずれかを含むフラグメントが挙げられるが、これらに限定されない）を含む。いくつかの局面において、抗体またはそのフラグメントは、上皮増殖因子レセプター（ＥＧＦＲ１、Ｅｒｂ−Ｂ１）、ＨＥＲ２／ｎｅｕ（Ｅｒｂ−Ｂ２）、ＣＤ２０、血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）、インスリン様増殖因子レセプター（ＩＧＦ−１Ｒ）、ＴＲＡＩＬ−レセプター、上皮細胞接着分子、癌胎児性抗原、前立腺特異的膜抗原、Ｍｕｃｉｎ−１、ＣＤ３０、ＣＤ３３、またはＣＤ４０を特異的に結合する。
【０１９５】
本明細書で提供される組成物と併用され得るモノクローナル抗体の例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：トラスツズマブ（抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体）；ペルツズマブ（抗ＨＥＲ２  ｍＡｂ）；セツキシマブ（上皮増殖因子レセプターＥＧＦＲに対するキメラモノクローナル抗体）；パニツムマブ（抗ＥＧＦＲ抗体）；ニモツズマブ（抗ＥＧＦＲ抗体）；ザルツムマブ（抗ＥＧＦＲ  ｍＡｂ）；ネシツムマブ（抗ＥＧＦＲ  ｍＡｂ）；ＭＤＸ−２１０（ヒト化抗ＨＥＲ−２二重特異的抗体）；ＭＤＸ−２１０（ヒト化抗ＨＥＲ−２二重特異的抗体）；ＭＤＸ−４４７（ヒト化抗ＥＧＦレセプター二重特異的抗体）；リツキシマブ（キメラマウス／ヒト抗ＣＤ２０  ｍＡｂ）；オビヌツズマブ（抗ＣＤ２０  ｍＡｂ）；オファツムマブ（抗ＣＤ２０  ｍＡｂ）；トシツモマブ（Ｔｏｓｉｔｕｍｕｍａｂ）−Ｉ１３１（抗ＣＤ２０  ｍＡｂ）；イブリツモマブチウキセタン（抗ＣＤ２０  ｍＡｂ）；ベバシズマブ（抗ＶＥＧＦ  ｍＡｂ）；ラムシルマブ（抗ＶＥＧＦＲ２  ｍＡｂ）；ラニビズマブ（抗ＶＥＧＦ  ｍＡｂ）；アフリベルセプト（ＩｇＧ１  Ｆｃに融合されたＶＥＧＦＲ１およびＶＥＧＦＲ２の細胞外ドメイン）；ＡＭＧ３８６（ＩｇＧ１  Ｆｃに融合されたアンジオポエチン−１および−２結合ペプチド）；ダロツズマブ（抗ＩＧＦ−１Ｒ  ｍＡｂ）；ゲムツズマブオゾガマイシン（抗ＣＤ３３  ｍＡｂ）；アレムツズマブ（抗Ｃａｍｐａｔｈ−１／ＣＤ５２  ｍＡｂ）；ブレンツキシマブベドチン（抗ＣＤ３０  ｍＡｂ）；カツマキソマブ（上皮細胞接着分子およびＣＤ３を標的化する二重特異的ｍＡｂ）；ナプツモマブ（抗５Ｔ４  ｍＡｂ）；ギレンツキシマブ（抗炭酸脱水素酵素ｉｘ）；またはファルレツズマブ（抗葉酸レセプター）。他の例としては、以下のような抗体が挙げられる：ＰａｎｏｒｅｘＴＭ（１７−１Ａ）（マウスモノクローナル抗体）；Ｐａｎｏｒｅｘ（＠（１７−１Ａ）（キメラマウスモノクローナル抗体）；ＢＥＣ２（抗イディオタイプ（ａｍｉ−ｉｄｉｏｔｙｐｉｃ）ｍＡｂ、ＧＤエピトープを模倣）（ＢＣＧと）；Ｏｎｃｏｌｙｍ（Ｌｙｍ−１モノクローナル抗体）；ＳＭＡＲＴ  Ｍ１９５  Ａｂ、ヒト化１３’  １  ＬＹＭ−１（Ｏｎｃｏｌｙｍ）、Ｏｖａｒｅｘ（Ｂ４３．１３，  抗イディオタイプマウスｍＡｂ）；腺がん上のＥＧＰ４０（１７−１Ａ）汎がん腫抗原（ｐａｎｃａｒｃｉｎｏｍａ  ａｎｔｉｇｅｎ）に結合する３６２２Ｗ９４  ｍＡｂ；Ｚｅｎａｐａｘ（ＳＭＡＲＴ抗Ｔａｃ（ＩＬ−２レセプター）；ＳＭＡＲＴ  Ｍ１９５  Ａｂ、ヒト化Ａｂ、ヒト化）；ＮｏｖｏＭＡｂ−Ｇ２（汎がん腫特異的Ａｂ）；ＴＮＴ（ヒストン抗原に対するキメラｍＡｂ）；ＴＮＴ（ヒストン抗原に対するキメラｍＡｂ）；Ｇｌｉｏｍａｂ−Ｈ（モノクローナルーヒト化Ａｂｓ）；ＧＮＩ−２５０  Ｍａｂ；ＥＭＤ−７２０００（キメラ−ＥＧＦアンタゴニスト）；ＬｙｍｐｈｏＣｉｄｅ（ヒト化ＩＬ．Ｌ．２抗体）；およびＭＤＸ−２６０二重特異的、ＧＤ−２を標的化、ＡＮＡ  Ａｂ、ＳＭＡＲＴ  ＩＤＩＯ  Ａｂ、ＳＭＡＲＴ  ＡＢＬ  ３６４  ＡｂまたはＩｍｍｕＲＡＩＴ−ＣＥＡ。抗体の例としては、米国特許第５，７３６，１６７号、米国特許第７，０６０，８０８号、および���国特許第５，８２１，３３７号に開示されるものが挙げられる。
【０１９６】
抗体のさらなる例としては、以下が挙げられる：ザノリムマブ（Ｚａｎｕｌｉｍｕｍａｂ）（抗ＣＤ４  ｍＡｂ）、ケリキシマブ（抗ＣＤ４  ｍＡｂ）；イピリムマブ（ＭＤＸ−１０１；  抗ＣＴＬＡ−４  ｍＡｂ）；トレメリムマブ（Ｔｒｅｍｉｌｉｍｕｍａｂ）（抗ＣＴＬＡ−４  ｍＡｂ）；（ダクリズマブ（抗ＣＤ２５／ＩＬ−２Ｒ  ｍＡｂ）；バシリキシマブ（抗ＣＤ２５／ＩＬ−２Ｒ  ｍＡｂ）；ＭＤＸ−１１０６（抗ＰＤ１  ｍＡｂ）；ＧＩＴＲに対する抗体；ＧＣ１００８（抗ＴＧＦ−β抗体）；メテリムマブ（ｍｅｔｅｌｉｍｕｍａｂ）／ＣＡＴ−１９２（抗ＴＧＦ−β抗体）；レルデリムマブ（ｌｅｒｄｅｌｉｍｕｍａｂ）／ＣＡＴ−１５２（抗ＴＧＦ−β抗体）；ＩＤ１１（抗ＴＧＦ−β抗体）；デノスマブ（抗ＲＡＮＫＬ  ｍＡｂ）；ＢＭＳ−６６３５１３（ヒト化抗４−１ＢＢ  ｍＡｂ）；ＳＧＮ−４０（ヒト化抗ＣＤ４０  ｍＡｂ）；ＣＰ８７０，８９３（ヒト抗ＣＤ４０  ｍＡｂ）；インフリキシマブ（キメラ抗ＴＮＦ  ｍＡｂ）；アダリムマブ（ヒト抗ＴＮＦ  ｍＡｂ）；セルトリズマブ（ヒト化Ｆａｂ  抗ＴＮＦ）；ゴリムマブ（抗ＴＮＦ）；エタネルセプト（ＩｇＧ１  Ｆｃに融合されたＴＮＦＲの細胞外ドメイン）；ベラタセプト（Ｆｃに融合されたＣＴＬＡ−４の細胞外ドメイン）；アバタセプト（Ｆｃに融合されたＣＴＬＡ−４の細胞外ドメイン）；ベリムマブ（抗Ｂリンパ球刺激因子）；ムロモナブ−ＣＤ３（抗ＣＤ３  ｍＡｂ）；オテリキシズマブ（抗ＣＤ３  ｍＡｂ）；テプリズマブ（抗ＣＤ３  ｍＡｂ）；トシリズマブ（抗ＩＬ６Ｒ  ｍＡｂ）；ＲＥＧＮ８８（抗ＩＬ６Ｒ  ｍＡｂ）；ウステキヌマブ（抗ＩＬ−１２／２３  ｍＡｂ）；ブリアキヌマブ（抗ＩＬ−１２／２３  ｍＡｂ）；ナタリズマブ（抗α４インテグリン）；ベドリズマブ（抗α４  β７インテグリンｍＡｂ）；Ｔ１  ｈ（抗ＣＤ６  ｍＡｂ）；エプラツズマブ（抗ＣＤ２２  ｍＡｂ）；エファリズマブ（抗ＣＤ１１ａ  ｍＡｂ）；およびアタシセプト（Ｆｃと融合された膜貫通アクチベーターの細胞外ドメインおよびカルシウム調節リガンド相互作用因子）。
【０１９７】
ａ．  受動免疫療法
がんの受動免疫療法に関しては、多くの異なるアプローチが存在する。それらは、以下へと大まかに分類され得る：抗体のみの注射；毒素または化学療法剤と対にした抗体の注射；放射活性同位体と対にした抗体の注射；抗イディオタイプ抗体の注射；ならびに最後に、骨髄における腫瘍細胞のパージ。
【０１９８】
好ましくは、ヒトモノクローナル抗体は、受動免疫療法において使用される。なぜならモノクローナル抗体は、患者においてほとんどまたは全く副作用を生じないからである。ガングリオシド抗原に対するヒトモノクローナル抗体は、皮膚の再発性黒色腫に罹患している患者へと、病変内に投与された（Ｉｒｉｅ  ＆  Ｍｏｒｔｏｎ，  １９８６）。１日に１回または１週間に１回の病変内注射の後に、１０名の患者のうちの６名において退縮が観察された。別の研究では、中程度の成功が、２種のヒトモノクローナル抗体の病変内注射から達成された（Ｉｒｉｅら，  １９８９）。
【０１９９】
２種の異なる抗原に対して指向される１より多くのモノクローナル抗体またはさらに複数の抗原特異性を有する抗体を投与することは、好都合であり得る。処置プロトコルはまた、Ｂａｊｏｒｉｎら（１９８８）によって記載されるように、リンホカインまたは他の免疫エンハンサーの投与を包含し得る。ヒトモノクローナル抗体の開発は、明細書の他の箇所にさらに詳細に記載される。
【０２００】
ｂ．  能動免疫療法
能動免疫療法において、抗原性ペプチド、ポリペプチドもしくはタンパク質、または自己由来もしくは同種異系腫瘍細胞の組成物または「ワクチン」は、一般に、別個の細菌アジュバントとともに投与される（Ｒａｖｉｎｄｒａｎａｔｈ  ＆  Ｍｏｒｔｏｎ，  １９９１；  Ｍｏｒｔｏｎ  ＆  Ｒａｖｉｎｄｒａｎａｔｈ，  １９９６；  Ｍｏｒｔｏｎら，  １９９２；  Ｍｉｔｃｈｅｌｌら，  １９９０；  Ｍｉｔｃｈｅｌｌら，  １９９３）。黒色腫免疫療法において、高いＩｇＭ応答を誘起するそれらの患者はしばしば、全く誘起しないもしくは低いＩｇＭ抗体を誘起する患者より良好に生存する（Ｍｏｒｔｏｎら，  １９９２）。ＩｇＭ抗体はしばしば、一過性の抗体であり、規則に対する例外は、抗ガングリオシドまたは抗炭水化物抗体であるようである。
【０２０１】
ｃ．  養子免疫療法
養子免疫療法において、患者の循環リンパ球、または腫瘍浸潤リンパ球は、インビトロで単離され、リンホカイン（例えば、ＩＬ−２）によって活性化されるか、または腫瘍壊死に関する遺伝子で形質導入され、再投与される（Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇら，  １９８８；  １９８９）。これを達成するために、動物、またはヒト患者に、本明細書で記載されるとおりのアジュバントを組み込んだ抗原性ペプチド組成物と併用して、活性化リンパ球の免疫学上有効な量が投与される。活性化リンパ球は、最も好ましくは、血液または腫瘍サンプルから先に単離され、そしてインビトロで活性化された（または「拡大された」）その患者自身の細胞である。免疫療法のこの形態は、黒色腫および腎臓がんの退縮のいくつかの症例を生じたが、応答者のパーセンテージは、応答しなかった者と比較して小さかった。より近年になって、このような養子免疫細胞治療が、キメラ抗原レセプター（ＣＡＲ）を発現する遺伝子操作されたＴ細胞を組み込んだ（ＣＡＲ  Ｔ細胞治療といわれる）場合に、より高い応答率が観察された。同様に、ナチュラルキラー細胞が、自己由来および同種異系ともに単離され、拡大され、レセプターまたはリガンドを発現して、腫瘍細胞のそれらの結合および死滅を促進するように遺伝子改変されている。
【０２０２】
４．  他の薬剤
他の薬剤が、処置の治療効力を改善するために、本明細書で提供される組成物と併用され得ることは企図される。これらのさらなる薬剤としては、免疫調節性薬剤、細胞表面レセプターおよびＧＡＰ結合のアップレギュレーションに影響を及ぼす薬剤、細胞増殖抑制剤および分化因子、細胞接着のインヒビター、またはアポトーシス誘導因子に対する過剰増殖性細胞の感受性を増大させる薬剤が挙げられる。免疫調節性薬剤としては、以下が挙げられる：腫瘍壊死因子；インターフェロンα、β、およびγ；ＩＬ−２および他のサイトカイン；Ｆ４２Ｋおよび他のサイトカインアナログ；またはＭＩＰ−１、ＭＩＰ−１β、ＭＣＰ−１、ＲＡＮＴＥＳ、ならびに他のケモカイン。細胞表面レセプターまたはそれらのリガンド（例えば、Ｆａｓ／Ｆａｓリガンド、ＤＲ４またはＤＲ５／ＴＲＡＩＬ）のアップレギュレーションは、過剰増殖性細胞に対する自己分泌または傍分泌効果の確立によって、本明細書で提供される組成物のアポトーシス誘導能力を強化することは、さらに企図される。ＧＡＰ結合の数を上昇させることによって、細胞内シグナル伝達が増大すると、隣接する過剰増殖性細胞集団に対する抗過剰増殖効果が増大する。他の実施形態において、細胞増殖抑制剤または分化因子は、処置の抗過剰増殖性効力を改善するために、本明細書で提供される組成物と併用され得る。細胞接着のインヒビターは、本発明の効力を改善することが企図される。細胞接着インヒビターの例は、接着斑キナーゼ（ｆｏｃａｌ  ａｄｈｅｓｉｏｎ  ｋｉｎａｓｅ）（ＦＡＫ）インヒビターおよびロバスタチンである。アポトーシスに対する過剰増殖性細胞の感受性を増大させる他の薬剤（例えば、抗体ｃ２２５）が、処置効力を改善するために、本明細書で提供される組成物と併用され得ることは、さらに企図される。
【０２０３】
さらなる実施形態において、他の薬剤は、１もしくはこれより多くの腫瘍溶解性ウイルス（例えば、ｐ５３および／またはＩＬ２４以外の遺伝子（例えば、サイトカイン）を発現するように操作された腫瘍溶解性ウイルス）であり得る。腫瘍溶解性ウイルスの例としては、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルス、レンチウイルス、ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、ワクシニアウイルス、小胞性口炎ウイルス、ポリオウイルス、ニューカッスル病ウイルス、エプスタインバーウイルス、インフルエンザウイルスおよびレオウイルスが挙げられる。特定の実施形態において、他の薬剤は、ＧＭ−ＣＳＦを発現するように遺伝子操作された腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルスであるｔａｌｉｍｏｇｅｎｅ  ｌａｈｅｒｐａｒｅｐｖｅｃ（Ｔ−ＶＥＣ）である。Ｔａｌｉｍｏｇｅｎｅ  ｌａｈｅｒｐａｒｅｐｖｅｃ、ＨＳＶ−１［ＪＳ１株］ＩＣＰ３４．５−／ＩＣＰ４７−／ｈＧＭ−ＣＳＦ（以前はＯｎｃｏＶＥＸＧＭ  ＣＳＦとして公知）は、固形腫瘍において選択的に複製する免疫増強性ＨＳＶ−１を含む、腫瘍内に送達される腫瘍溶解性免疫療法である（Ｌｕｉら，  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ，  １０：２９２−３０３，  ２００３；米国特許第７，２２３，５９３号および米国特許第７，５３７，９２４号；本明細書に参考として援用される）。２０１５年１０月に、米国ＦＤＡは、手術不能の腫瘍を有する患者における黒色腫の処置に関して商標名ＩＭＬＹＧＩＣＴＭの下でＴ−ＶＥＣを承認した。Ｔ−ＶＥＣの特徴および投与法は、例えば、ＩＭＬＹＧＩＣＴＭパッケージ挿入物（Ａｍｇｅｎ，  ２０１５）および米国特許公報番号ＵＳ２０１５／０２０２２９０（ともに本明細書に参考として援用される）に記載される。例えば、ｔａｌｉｍｏｇｅｎｅ  ｌａｈｅｒｐａｒｅｐｖｅｃは、代表的には、注射可能な皮膚の、皮下の、および結節の腫瘍へと、１週間目の１日目に１０６  プラーク形成単位／ｍＬ（ＰＦＵ／ｍＬ）を４．０ｍｌまでの用量で、続いて、４週間目の１日目に１０８  ＰＦＵ／ｍＬを４．０ｍｌまでの用量で、およびその後は２週間（±３日間）ごとに、腫瘍内注射によって投与される。腫瘍へと注射されるべきｔａｌｉｍｏｇｅｎｅ  ｌａｈｅｒｐａｒｅｐｖｅｃの推奨容積は、腫瘍のサイズに依存し、注射容積ガイドラインに従って決定されるべきである。Ｔ−ＶＥＣは、黒色腫患者において臨床活性が示された一方で、多くのがん患者は、Ｔ−ＶＥＣ処置に応答しないかまたは応答をしなくなるかのいずれかである。一実施形態において、ｐ５３および／またはＭＤＡ−７核酸ならびに少なくとも１種の免疫チェックポイントインヒビターは、例えば、処置抵抗性を改善するために、Ｔ−ＶＥＣ治療の後、間または前に投与され得る。例示的な腫瘍溶解性ウイルスとしては、Ａｄ５−ｙＣＤ／ｍｕｔＴＫＳＲ３９ｒｅｐ−ｈＩＬ１２、ＣａｖａｔａｋＴＭ、ＣＧ００７０、ＤＮＸ−２４０１、Ｇ２０７、ＨＦ１０、ＩＭＬＹＧＩＣＴＭ、ＪＸ−５９４、ＭＧ１−ＭＡ３、ＭＶ−ＮＩＳ、ＯＢＰ−３０１、Ｒｅｏｌｙｓｉｎ（登録商標）、Ｔｏｃａ  ５１１、Ｏｎｃｏｒｉｎｅ、およびＲＩＧＶＩＲが挙げられるが、これらに限定されない。他の例示的な腫瘍溶解性ウイルスは、例��ば、国際特許出願公開番号ＷＯ２０１５／０２７１６３、ＷＯ２０１４／１３８３１４、ＷＯ２０１４／０４７３５０、およびＷＯ２０１６／００９０１７（全て本明細書に参考として援用される）に記載される。
【０２０４】
ある特定の実施形態において、ホルモン療法はまた、本実施形態とともに使用され得るか、または先に記載される任意の他のがん治療と併用され得る。ホルモンの使用は、テストステロンまたはエストロゲンのようなある特定のホルモンのレベルを低下させるかまたはその効果を遮断するために、乳がん、前立腺がん、卵巣がん、または子宮頚がんのようなある特定のがんの処置において使用され得る。この処置はしばしば、処置選択肢としてまたは転移のリスクを低減するために、少なくとも１種の他のがん治療と併用される。
【０２０５】
いくつかの局面において、さらなる抗がん剤は、プロテインキナーゼまたは増殖因子のシグナル伝達経路に関与するレセプター（例えば、ＥＧＦＲ、ＶＥＧＦＲ、ＡＫＴ、Ｅｒｂ１、Ｅｒｂ２、ＥｒｂＢ、Ｓｙｋ、Ｂｃｒ−Ａｂｌ、ＪＡＫ、Ｓｒｃ、ＧＳＫ−３、ＰＩ３Ｋ、Ｒａｓ、Ｒａｆ、ＭＡＰＫ、ＭＡＰＫＫ、ｍＴＯＲ、ｃ−Ｋｉｔ、ｅｐｈレセプターまたはＢＲＡＦインヒビター）を阻害するプロテインキナーゼインヒビターまたはモノクローナル抗体である。プロテインキナーゼまたは増殖因子のシグナル伝達経路インヒビターの非限定的な例としては、以下が挙げられる：アファチニブ、アキシチニブ、ベバシズマブ、ボスチニブ、セツキシマブ、クリゾチニブ、ダサチニブ、エルロチニブ、ホスタマチニブ、ゲフィチニブ、イマチニブ、ラパチニブ、レンバチニブ、ムブリチニブ、ニロチニブ、パニツムマブ、パゾパニブ、ペガプタニブ、ラニビズマブ、ルキソリチニブ、サラカチニブ、ソラフェニブ、スニチニブ、トラスツズマブ、バンデタニブ、ＡＰ２３４５１、ベムラフェニブ、ＭＫ−２２０６、ＧＳＫ６９０６９３、Ａ−４４３６５４、ＶＱＤ−００２、ミルテホシン、ペリホシン、ＣＡＬ１０１、ＰＸ−８６６、ＬＹ２９４００２、ラパマイシン、テムシロリムス、エベロリムス、リダホロリムス、アルボシジブ、ゲニステイン、セルメチニブ、ＡＺＤ−６２４４、バタラニブ、Ｐ１４４６Ａ−０５、ＡＧ−０２４３２２、ＺＤ１８３９、Ｐ２７６−００、ＧＷ５７２０１６またはこれらの混合物。
【０２０６】
いくつかの局面において、ＰＩ３Ｋインヒビターは、以下からなるＰＩ３Ｋインヒビターの群から選択される：ブパルリシブ、イデラリシブ、ＢＹＬ−７１９、ダクトリシブ、ＰＦ−０５２１２３８４、ピクチリシブ、コパンリシブ、コパンリシブジヒドロクロリド、ＺＳＴＫ−４７４、ＧＳＫ−２６３６７７１、デュベリシブ（ｄｕｖｅｌｉｓｉｂ）、ＧＳ−９８２０、ＰＦ−０４６９１５０２、ＳＡＲ−２４５４０８、ＳＡＲ−２４５４０９、ソノリシブ（ｓｏｎｏｌｉｓｉｂ）、Ａｒｃｈｅｘｉｎ、ＧＤＣ−００３２、ＧＤＣ−０９８０、アピトリシブ、ピララリシブ（ｐｉｌａｒａｌｉｓｉｂ）、ＤＬＢＳ  １４２５、ＰＸ−８６６、ボクスタリシブ（ｖｏｘｔａｌｉｓｉｂ）、ＡＺＤ−８１８６、ＢＧＴ−２２６、ＤＳ−７４２３、ＧＤＣ−００８４、ＧＳＫ−２１  ２６４５８、ＩＮＫ−１  １  １７、ＳＡＲ−２６０３０１、ＳＦ−１  １  ２６、ＡＭＧ−３１９、ＢＡＹ−１０８２４３９、ＣＨ−５１  ３２７９９、ＧＳＫ−２２６９５５７、Ｐ−７１  ７０、ＰＷＴ−３３５９７、ＣＡＬ−２６３、ＲＧ−７６０３、ＬＹ−３０２３４１４、ＲＰ−５２６４、ＲＶ−１７２９、タセリシブ（ｔａｓｅｌｉｓｉｂ）、ＴＧＲ−１  ２０２、ＧＳＫ−４１８、ＩＮＣＢ−０４００９３、パヌリシブ（Ｐａｎｕｌｉｓｉｂ）、ＧＳＫ−１０５９６１  ５、ＣＮＸ−１３５１、ＡＭＧ−５１  １、ＰＱＲ−３０９、１７β−ヒドロキシウォルトマンニン、ＡＥＺＳ−１２９、ＡＥＺＳ−１３６、ＨＭ−５０１６６９９、ＩＰＩ−４４３、ＯＮＣ−２０１、ＰＦ−４９８９２１６、ＲＰ−６５０３、ＳＦ−２６２６、Ｘ−３３９、ＸＬ−４９９、ＰＱＲ−４０１、ＡＥＺＳ−１３２、ＣＺＣ−２４８３２、ＫＡＲ−４１４１、ＰＱＲ−３１  １、ＰＱＲ−３１６、ＲＰ−５０９０、ＶＳ−５５８４、Ｘ−４８０、ＡＥＺＳ−１２６、ＡＳ−６０４８５０、ＢＡＧ−９５６、ＣＡＬ−１３０、ＣＺＣ−２４７５８、ＥＴＰ−４６３２１、ＥＴＰ−４７１  ８７、ＧＮＥ−３１７、ＧＳ−５４８２０２、ＨＭ−０３２、ＫＡＲ−１  １３９、ＬＹ−２９４００２、ＰＦ−０４９７９０６４、ＰＩ−６２０、ＰＫＩ−４０２、ＰＷＴ−１４３、ＲＰ−６５３０、３−ＨＯＩ−ＢＡ−０１、ＡＥＺＳ−１３４、ＡＳ−０４１  １６４、ＡＳ−２５２４２４、ＡＳ−６０５２４０、ＡＳ−６０５８５８、ＡＳ−６０６８３９、ＢＣＣＡ−６２１  Ｃ、ＣＡＹ−１０５０５、ＣＨ−５０３３８５５、ＣＨ−５１  ０８１３４、ＣＵＤＣ−９０８、ＣＺＣ−１  ９９４５、Ｄ−１０６６６９、Ｄ−８７５０３、ＤＰＴ−ＮＸ７、ＥＴＰ−４６４４４、ＥＴＰ−４６９９２、ＧＥ−２１、ＧＮＥ−１２３、ＧＮＥ−１５１、ＧＮＥ−２９３、ＧＮＥ−３８０、ＧＮＥ−３９０、ＧＮＥ−４７７、ＧＮＥ−４９０、ＧＮＥ−４９３、ＧＮＥ−６１４、ＨＭＰＬ−５１  ８、ＨＳ−１０４、ＨＳ−１  ０６、ＨＳ−１  １６、ＨＳ−１７３、ＨＳ−１９６、ＩＣ−４８６０６８、ＩＮＫ−０５５、ＫＡＲ  １  １４１、ＫＹ−１  ２４２０、Ｗｏｒｔｍａｎｎｉｎ、Ｌｉｎ−０５、ＮＰＴ−５２０−３４、ＰＦ−０４６９１５０３、ＰＦ−０６４６５６０３、ＰＧＮＸ−０１、ＰＧＮＸ−０２、ＰＩ  ６２０、ＰＩ−１０３、ＰＩ−５０９、ＰＩ−５１６、ＰＩ−５��０、ＰＩＫ−７５、ＰＷＴ−４５８、ＲＯ−２４９２、ＲＰ−５１５２、ＲＰ−５２３７、ＳＢ−２０１  ５、ＳＢ−２３１２、ＳＢ−２３４３、ＳＨＢＭ−１００９、ＳＮ  ３２９７６、ＳＲ−１３１７９、ＳＲＸ−２５２３、ＳＲＸ−２５５８、ＳＲＸ−２６２６、ＳＲＸ−３６３６、ＳＲＸ−５０００、ＴＧＲ−５２３７、ＴＧＸ−２２１、ＵＣＢ−５８５７、ＷＡＹ−２６６１７５、ＷＡＹ−２６６１７６、ＥＩ−２０１、ＡＥＺＳ−１３１、ＡＱＸ−ＭＮ１００、ＫＣＣ−ＴＧＸ、ＯＸＹ−１  １  １  Ａ、ＰＩ−７０８、ＰＸ−２０００、およびＷＪＤ−００８。
【０２０７】
さらなるがん治療は、例えば、以下を標的とする抗体、ペプチド、ポリペプチド、低分子インヒビター、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡまたは遺伝子治療を含み得ることは、企図される：上皮増殖因子レセプター（ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲ１、ＥｒｂＢ−１、ＨＥＲ１）、ＥｒｂＢ−２（ＨＥＲ２／ｎｅｕ）、ＥｒｂＢ−３／ＨＥＲ３、ＥｒｂＢ−４／ＨＥＲ４、ＥＧＦＲリガンドファミリー；インスリン様増殖因子レセプター（ＩＧＦＲ）ファミリー、ＩＧＦ結合タンパク質（ＩＧＦＢＰ）、ＩＧＦＲリガンドファミリー（ＩＧＦ−１Ｒ）；血小板由来増殖因子レセプター（ＰＤＧＦＲ）ファミリー、ＰＤＧＦＲリガンドファミリー；線維芽細胞増殖因子レセプター（ＦＧＦＲ）ファミリー、ＦＧＦＲリガンドファミリー、血管内皮細胞増殖因子レセプター（ＶＥＧＦＲ）ファミリー、ＶＥＧＦファミリー；ＨＧＦレセプターファミリー：ＴＲＫレセプターファミリー；エフリン（ＥＰＨ）レセプターファミリー；ＡＸＬレセプターファミリー；白血球チロシンキナーゼ（ＬＴＫ）レセプターファミリー；ＴＩＥレセプターファミリー、アンジオポエチン１、２；レセプターチロシンキナーゼ様オーファンレセプター（ＲＯＲ）レセプターファミリー；ディスコイジンドメインレセプター（ＤＤＲ）ファミリー；ＲＥＴレセプターファミリー；ＫＬＧレセプターファミリー；ＲＹＫレセプターファミリー；ＭｕＳＫレセプターファミリー；トランスフォーミング増殖因子−α（ＴＧＦ−α）、ＴＧＦ−αレセプター；トランスフォーミング増殖因子−β（ＴＧＦ−β）、ＴＧＦ−βレセプター；インターロイキン１３レセプターα２鎖（１Ｌ１３Ｒａｌｐｈａ２）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、１Ｌ−６レセプター、インターロイキン−４、ＩＬ−４レセプター、サイトカインレセプター、クラスＩ（ヘマトポエチンファミリー）およびクラスＩＩ（インターフェロン／１Ｌ−１０ファミリー）レセプター、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）ファミリー、ＴＮＦ−α、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）レセプタースーパーファミリー（ＴＮＴＲＳＦ）、細胞死レセプターファミリー、ＴＲＡＩＬレセプター；がん−精巣（ＣＴ）抗原、系統特異的抗原、分化抗原、α−アクチン−４、ＡＲＴＣ１、ｂｒｅａｋｐｏｉｎｔ  ｃｌｕｓｔｅｒ  ｒｅｇｉｏｎ−Ａｂｅｌｓｏｎ（Ｂｃｒ−ａｂｌ）融合生成物、Ｂ−ＲＡＦ、カスパーゼ−５（ＣＡＳＰ−５）、カスパーゼ−８（ＣＡＳＰ−８）、β−カテニン（ＣＴＮＮＢ１）、細胞分裂周期２７（ＣＤＣ２７）、サイクリン依存性キナーゼ４（ＣＤＫ４）、ＣＤＫＮ２Ａ、ＣＯＡ−１、ｄｅｋ−ｃａｎ融合タンパク質、ＥＦＴＵＤ−２、伸長因子２（ＥＬＦ２）、Ｅｔｓ改変遺伝子６／急性骨髄性白血病１遺伝子ＥＴＳ（ＥＴＣ６−ＡＭＬ１）融合タンパク質、フィブロネクチン（ＦＮ）、ＧＰＮＭＢ、低密度脂質レセプター／ＧＤＰ−Ｌフコース：β−Ｄガラクトース２−α−Ｌフコシルトランスフェラーゼ（ＬＤＬＲ／ＦＵＴ）融合タンパク質、ＨＬＡ−Ａ２、ＨＬＡ−Ａ２遺伝子におけるα２ドメインのαヘリックスの残基１７０でのアルギニンからイソロイシンへの交換（ＨＬＡ−Ａ＊２０１−Ｒ１７０Ｉ）、ＭＬＡ−Ａ１１、熱ショックタンパク質７０−２変異（ＨＳＰ７０−２Ｍ）、ＫＩＡＡ０２０５、Ｍ���ＲＴ２、黒色腫遍在性変異１、２、３（ＭＵＭ−１、２、３）、前立腺酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）、ｎｅｏ−ＰＡＰ、ミオシンクラス１、ＮＦＹＣ、ＯＧＴ、ＯＳ−９、ｐｍｌ−ＲＡＲα融合タンパク質、ＰＲＤＸ５、ＰＴＰＲＫ、Ｋ−ｒａｓ（ＫＲＡＳ２）、Ｎ−ｒａｓ（ＮＲＡＳ）、ＨＲＡＳ、ＲＢＡＦ６００、ＳＩＲＴ２、ＳＮＲＰＤ１、ＳＹＴ−ＳＳＸ１または−ＳＳＸ２  融合タンパク質、トリオースホスフェートイソメラーゼ、ＢＡＧＥ、ＢＡＧＥ−１、ＢＡＧＥ−２、３、４、５、ＧＡＧＥ−１、２、３、４、５、６、７、８、ＧｎＴ−Ｖ（異所性Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＶ、ＭＧＡＴ５）、ＨＥＲＶ−Ｋ−ＭＥＬ、ＫＫ−ＬＣ、ＫＭ−ＨＮ−１、ＬＡＧＥ、ＬＡＧＥ−１、黒色腫上のＣＴＬ認識抗原（ＣＡＭＥＬ）、ＭＡＧＥ−Ａ１（ＭＡＧＥ−１）、ＭＡＧＥ−Ａ２、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ４、ＭＡＧＥ−ＡＳ、ＭＡＧＥ−Ａ６、ＭＡＧＥ−Ａ８、ＭＡＧＥ−Ａ９、ＭＡＧＥ−Ａ１０、ＭＡＧＥ−Ａ１１、ＭＡＧＥ−Ａ１２、ＭＡＧＥ−３、ＭＡＧＥ−Ｂ１、ＭＡＧＥ−Ｂ２、ＭＡＧＥ−Ｂ５、ＭＡＧＥ−Ｂ６、ＭＡＧＥ−Ｃ１、ＭＡＧＥ−Ｃ２、ムチン１（ＭＵＣ１）、ＭＡＲＴ−１／Ｍｅｌａｎ−Ａ（ＭＬＡＮＡ）、ｇｐ１００、ｇｐ１００／Ｐｍｅ１１７（Ｓ１ＬＶ）、チロシナーゼ（ＴＹＲ）、ＴＲＰ−１、ＨＡＧＥ、ＮＡ−８８、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＮＹ−ＥＳＯ−１／ＬＡＧＥ−２、ＳＡＧＥ、Ｓｐ１７、ＳＳＸ−１，２，３，４、ＴＲＰ２−１ＮＴ２、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、カリクレイン４（Ｋａｌｌｉｋｆｅｉｎ  ４）、マンマグロビン−Ａ（ｍａｍｍａｇｌｏｂｍ−Ａ）、ＯＡ１、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、前立腺特異的膜抗原、ＴＲＰ−１／ｇｐ７５、ＴＲＰ−２、アディポフィリン（ａｄｉｐｏｐｈｉｌｉｎ）、インターフェロン誘導性タンパク質であるａｂｓｅｎｔ  ｉｎ  ｍｅｌａｎｏｍａ  ２（ａｂｓｅｎｔ  ｉｎ  ｎｉｅｌａｎｏｒｎａ  ２）（ＡＩＭ−２）、ＢＩＮＧ−４、ＣＰＳＦ、サイクリンＤ１、上皮細胞接着分子（Ｅｐ−ＣＡＭ）、ＥｐｂＡ３、線維芽細胞増殖因子−５（ＦＧＦ−５）、糖タンパク質２５０（ｇｐ２５０腸カルボキシルエステラーゼ（ｉＣＥ）、α−フェトプロテイン（ＡＦＰ）、Ｍ−ＣＳＦ、ｍｄｍ−２、ＭＵＣＩ、ｐ５３  （ＴＰ５３）、ＰＢＦ、ＦＲＡＭＥ、ＰＳＭＡ、ＲＡＧＥ−１、ＲＮＦ４３、ＲＵ２ＡＳ、ＳＯＸ１０、ＳＴＥＡＰ１、サバイビン（ＢＩＲＣＳ）、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）、テロメラーゼ、ウィルムス腫瘍遺伝子（ＷＴ１）、ＳＹＣＰ１、ＢＲＤＴ、ＳＰＡＮＸ、ＸＡＧＥ、ＡＤＡＭ２、ＰＡＧＥ−５、ＬＩＰ１、ＣＴＡＧＥ−１、ＣＳＡＧＥ、ＭＭＡ１、ＣＡＧＥ、ＢＯＲＩＳ、ＨＯＭ−ＴＥＳ−８５、ＡＦ１５ｑ１４、ＨＣＡ６６Ｉ、ＬＤＨＣ、ＭＯＲＣ、ＳＧＹ−１、ＳＰＯ１１、ＴＰＸ１、ＮＹ−ＳＡＲ−３５、ＦＴＨＬＩ７、ＮＸＦ２  ＴＤＲＤ１、ＴＥＸ  １５、ＦＡＴＥ、ＴＰＴＥ、免疫グロブリンイディオタイプ、ベンス・ジョーンズ・タンパク質、エストロゲンレセプター（ＥＲ）、アンドロゲンレセプター（ＡＲ）、ＣＤ４０、ＣＤ３０、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ３３、ＣＤ４、ＣＤ２５、ＣＤ３、がん抗原７２−４（ＣＡ  ７２−４）、がん抗原１５−３（ＣＡ  １５−３）、がん抗原２７−２９（ＣＡ  ２７−２９）、がん抗原１２５（ＣＡ  １２５）、がん抗原１９−９（ＣＡ  １９−９）、β−ヒト絨毛性ゴナドトロピン、１−２ミクログロブリン、扁平上皮がん抗原、ニューロン特異的エノラーゼ（ｎｅｕｒｏｎ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｅｎｏＪａｓｅ）、熱ショックタンパク質ｇｐ９６、ＧＭ２、サルグラモスチム、ＣＴＬＡ−４、７０７アラニンプロリン（７０７−ＡＰ）、Ｔ細胞によって認識される腺がんタンパク質４（ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ  ｂｙ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ４）（ＡＲＴ−４）、癌胎児性抗原ペプチド−１（ＣＡＰ−１）、カルシウム活性化クロリドチャネル−２（ＣＬＣＡ２）、シクロフィリンＢ（Ｃｙｐ−Ｂ）、ヒト印環細胞腫瘍−２（ＨＳＴ−２）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）タンパク質（ＨＰＶ−Ｅ６、ＨＰＶ−Ｅ７、主要キャプシドタンパク質またはマイナーキャプシドタンパク質、他）、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）タンパク質（ＥＢＶ潜伏膜タンパク質ーＬＭＰ１、ＬＭＰ２；他）、Ｂ型肝炎ウイルスタンパク質またはＣ型肝炎ウイルスタンパク質、ならびにＨＩＶタンパク質。
【０２０８】
ＶＩＩ．  製造物品またはキット
少なくとも１種の免疫チェックポイントインヒビター（例えば、抗ＰＤ−１抗体および／または抗ＣＴＬＡ−４抗体）ならびにｐ５３をコードする核酸および／またはＭＤＡ−７をコードする核酸（例えば、ａｄ−ｐ５３および／またはａｄ−ＭＤＡ−７）を含む製造物品またはキットもまた、本明細書で提供される。製造物品またはキットは、少なくとも１種のチェックポイントインヒビターを腫瘍抑制遺伝子治療と併用して、個体においてがんを処置するかもしくはその進行を遅らせる、またはがんを有する個体の免疫機能を増強するための説明書を含むパッケージ挿入物をさらに含み得る。本明細書に記載される、免疫チェックポイントインヒビターならびにｐ５３をコードする核酸および／またはＭＤＡ−７をコードする核酸のうちのいずれかは、製造物品またはキットの中に含まれ得る。キットは、細胞外マトリクス分解タンパク質または細胞外マトリクス分解タンパク質をコードする発現構築物をさらに含み得る。
【０２０９】
いくつかの実施形態において、少なくとも１種の免疫チェックポイントインヒビター（例えば、抗ＰＤ−１抗体および／または抗ＣＴＬＡ−４抗体）ならびにｐ５３をコードする核酸および／またはＭＤＡ−７をコードする核酸は、同じ容器または別個の容器の中にある。適切な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、バッグおよびシリンジが挙げられる。容器は、種々の材料（例えば、ガラス、プラスチック（例えば、ポリビニルクロリドもしくはポリオレフィン）、または金属合金（例えば、ステンレス鋼もしくはハステロイ））から形成され得る。いくつかの実施形態において、容器は、製剤およびラベルをその上にまたは関連付けられて保持し、その容器は、使用のための指示を示し得る。製造物品またはキットは、商業的観点またはユーザー観点から望ましい他の材料（他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、シリンジ、および使用のための指示を伴うパッケージ挿入物を含む）をさらに含み得る。いくつかの実施形態において、製造物品は、別の薬剤（例えば、化学療法剤および抗新生物薬剤）のうちの１もしくはこれより多くをさらに含む。１もしくはこれより多くの薬剤に適切な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、バッグおよびシリンジが挙げられる。
【実施例】
【０２１０】
ＶＩＩＩ．  実施例
以下の実施例は、本発明の好ましい実施形態を示すために含まれる。以下の実施例の中で開示される技術は、本発明の実施において十分に機能するように本発明者らによって発見された技術を表し、従って、その実施の好ましい態様を構成すると考えられ得ることは、当業者によって認識されるはずである。しかし、当業者は、本開示に鑑みて、多くの変更が開示される具体的実施形態において行われ得、本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく同様のまたは類似の結果をなお得ることができることを認識するはずである。
【０２１１】
実施例１−  遠達効果の誘導および以前の免疫療法に対する抵抗性の改善のためのＡｄ−ｐ５３またはＡｄ−ＩＬ２４腫瘍抑制因子免疫遺伝子治療
【０２１２】
以前の免疫療法に抵抗性の腫瘍に対して遠達効果の誘導のための腫瘍抑制因子免疫遺伝子治療の効力を、免疫適格動物腫瘍モデルにおいて示した。以下の処置法、用量およびスケジュールを利用した：
動物、腫瘍接種および測定：  Ｃ５７ＢＬ／６（Ｂ６）マウス（６〜８週齢）を利用した。動物に、Ｂ１６Ｆ１０黒色腫細胞（ＡＴＣＣ、５×１０５  細胞／マウス）を右側腹部へと皮下注射して、「原発性腫瘍」を形成した。処置を、腫瘍がおよそ５０ｍｍ３のサイズに達したときに開始し、これを、処置１日目と称した。腫瘍増殖を、腫瘍の長さ（Ｌ）および幅（ｗ）を測定することによってモニターし、腫瘍容積を、以下の式を使用して計算した：容積＝０．５２３Ｌ（ｗ）２。動物を、６０日間までモニターし、腫瘍がおよそ２０００ｍｍ３に達したときに屠殺した。
【０２１３】
ウイルスベクター：  ｐ５３またはＩＬ２４いずれかの腫瘍抑制遺伝子の発現をコードする複製欠損ヒトタイプ５アデノウイルス（Ａｄ５）を、これらの実験に使用した。ベクターの構築、特性および精製は、Ａｄ５／ＣＭＶ  ｐ５３およびＩＬ２４ベクターの両方に関して他の箇所で報告されている（Ｚｈａｎｇ  １９９４；  Ｍｈａｓｈｉｌｋａｒら，  ２００１）。そのウイルスベクターの４用量を、４８時間間隔で腫瘍内に投与した。各ウイルス用量は、５０μｌの容積中に５×１０１０  ウイルス粒子を含んだ。
【０２１４】
免疫チェックポイントインヒビター：  免疫チェックポイントインヒビター治療の間の腫瘍進行の一般的臨床状態を模倣するために、抗ＰＤ１処置（１０ｍｇ／ｋｇの用量で）を、１日目に腹腔内に開始し、３１日目まで３日ごとに投与した。いくつかの実験では、以前の免疫療法に対する腫瘍抵抗性において腫瘍抑制因子療法の効果を評価するために、腫瘍抑制因子処置を、抗ＰＤ−１治療に際して腫瘍進行後に開始し、最初の腫瘍抑制因子療法の用量を、抗ＰＤ−１処置の開始の２〜３日後に開始した。他の実験では、腫瘍抑制因子療法を、最初の処置としての免疫チェックポイントインヒビターと同時に開始した。これらの研究を、免疫チェックポイントインヒビター治療に高度に抵抗性であることが既知の腫瘍において行った。Ｂ１６Ｆ１０およびＢ１６黒色腫モデルは、免疫療法に対して高度に抵抗性であることが公知である。これらのモデルでは、腫瘍は、リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）でのコントロール処置に類似して、免疫チェックポイントインヒビター治療に際して進行する。同様に、マウス肺腫瘍モデルＡＤＳ  １２もまた、免疫チェックポイントインヒビター処置に対して高度に抵抗性である。インビボでの使用に対して特異的に生成された抗マウスＰＤ−１抗体（ＣＤ２７９）を、抗ＰＤ−Ｌ１および免疫調節因子抗ＬＡＧ−３に対する抗体と同様に、ＢｉｏＸｃｅｌｌ（カタログ番号ＢＥ０１４６）から購入した。驚くべきことに、局所領域腫瘍抑制因子処置は、全身性免疫チェックポイントインヒビター治療に対する抵抗性を改善し、免疫チェックポイントインヒビター処置との予測外の相乗効果を示し、その併用療法は、腫瘍抑制因子療法で処置されなかった遠隔腫瘍に対して優れた遠達効果を誘導した。これらの予測外の処置効果は、腫瘍微小環境の細胞外マトリクスを変化させるさらなる治療（リラキシン）と併用した場合に、そして化学療法、サイトカイン療法ならびに骨髄由来免疫抑制細胞（ＭＤＳＣ）、Ｔ−Ｒｅｇおよび樹状細胞を調節することが公知の薬剤と併用して、増強されることが見出された。
【０２１５】
以前の免疫療法に際して進行している腫瘍におけるＡｄ−ｐ５３＋チェックポイントインヒビター：  抗ＰＤ−１との併用でのＡｄ−ｐ５３の処置効力を、腫瘍容積（原発性腫瘍および反対側の腫瘍において）、および生存によって評価した。原発性腫瘍容積（図１）に関して、抗ＰＤ−１単剤療法で処置した動物において重篤な腫瘍進行が存在し、ＰＢＳ処置コントロールにおいて観察された増殖とほとんど差異がなかった。対照的に、抗ＰＤ−１抵抗性の改善は、動物を併用療法（Ａｄ−ｐ５３＋抗ＰＤ−１）で処置した場合に観察された。２２日目までに、Ａｄ−ｐ５３＋抗ＰＤ−１での併用処置は、抗ＰＤ−１またはＡｄ−ｐ５３治療いずれか単独と比較して、腫瘍容積において大きな低下を誘導した。各処置に関する腫瘍容積の統計的分散分析（ＡＮＯＶＡ）比較は、Ａｄ−ｐ５３＋抗ＰＤ１の抗腫瘍効果が、２２日目程度の早さで相乗効果的であり（ｐ値  ０．０００１）、２９日目での評価までずっと継続する（ｐ値  ０．０１３）ことを決定した。原発性腫瘍増殖の抑制において観察された相乗効果と一致して、統計的に有意な遠達効果が、腫瘍抑制因子療法を受けていない反対側の（二次的な）腫瘍における増殖の低下とともに観察された。これらの知見は、併用処置（Ａｄ−ｐ５３＋抗ＰＤ１）が遠達効果を媒介する全身性免疫を誘導したことを暗示する。図２に示されるように、原発性腫瘍をＡｄ−ｐ５３単独で処置した動物における反対側の腫瘍は、抗ＰＤ−１単独で処置した腫瘍の増殖速度と比較して、有意に遅延した腫瘍増殖を示した（ｐ＝０．０４６）。反対側の腫瘍増殖に関するさらに大きな遠達効果（ｐ＝０．０２４３）が、原発性腫瘍をＡｄ−ｐ５３＋抗ＰＤ−１併用で処置したマウスにおいて観察された（図２）。反対側の腫瘍は、いかなる治療剤も注射されなかったことを指摘することは、重要である。まとめると、これらの結果は、局所領域腫瘍抑制因子処置と免疫チェックポイントインヒビター治療との併用が、全身性免疫チェックポイントインヒビターに対する抵抗性を改善し、免疫チェックポイントインヒビター処置との予測外の相乗効果を示し、そしてその併用療法が、腫瘍抑制因子療法で処置されなかった遠隔腫瘍に対して優れた遠達効果を誘導したことを示す。
【０２１６】
生存に関しては、Ａｄ−ｐ５３および抗ＰＤ−１併用治療は、Ａｄ−ｐ５３治療単独（ｐ＝０．０１６７）および抗ＰＤ−１治療単独（ｐ＜０．００１）と比較して、生存において統計的に有意な増大を示した（図３）。腫瘍増殖に対する相乗効果と一致して、Ａｄ−ｐ５３および抗ＰＤ−１併用群に関するメジアン生存の増大は、Ａｄ−ｐ５３および抗ＰＤ−１処置の効果と比較して相加的なものより大きかった。
【０２１７】
以前の免疫療法に際して進行している腫瘍におけるＡｄ−ＩＬ２４＋チェックポイントインヒビター：  抗ＰＤ−１との併用でのＡｄ−ＩＬ２４の処置効力を、腫瘍容積（原発性腫瘍および反対側の腫瘍において）、および生存によって評価した。腫瘍容積（図４）に関しては、抗ＰＤ−１単剤療法で処置した動物において重篤な腫瘍進行が存在し、Ａｄ−ＩＬ２４単独で処置した動物に関しては中程度の低減であり、併用療法（Ａｄ−ＩＬ２４＋抗ＰＤ−１）で処置した動物では、抗ＰＤ−１抵抗性が改善した。この併用処置は、抗ＰＤ−１治療またはＡｄ−ＩＬ２４治療いずれか単独と比較して、腫瘍増殖において大きな低減を誘導した。各処置に関する腫瘍容積の統計的分散分析（ＡＮＯＶＡ）比較は、Ａｄ−ＩＬ２４および抗ＰＤ−１処置の併用効果が、処置の１４日目まで相乗効果的であることを決定した（ｐ値＝０．００２）。さらに、腫瘍増殖の速度の評価（反復測定ＡＮＯＶＡ統計分析を使用）はまた、単剤療法として使用されるいずれの薬剤も超える併用処置の相乗効果を確認した（ｐ＜０．０００１）。
【０２１８】
Ａｄ−ＩＬ２４および抗ＰＤ−１併用処置による原発性腫瘍増殖の抑制において観察される増大された効果と一致して、統計的に有意な遠達効果と低減した増殖とが、腫瘍抑制因子療法で注射されていない反対側の（二次的な）腫瘍において観察された。これらの知見は、併用処置Ａｄ−ＩＬ２４＋抗ＰＤ−１がまた（Ａｄ−ｐ５３＋抗ＰＤ−１治療と同様に）、遠達効果を媒介する全身性免疫を誘導したことを暗示する。図５で示されるように、原発性の病変をＡｄ−ＩＬ２４および抗ＰＤ−１併用で処置した動物における反対側の腫瘍は、腫瘍増殖において最大の低減を示した。Ａｄ−ＩＬ２４単独（Ｐ＝０．００２１）およびＡｄ−ＩＬ２４＋抗ＰＤ−１（Ｐ＜０．０００１）処置群はともに、抗ＰＤ−１単独で処置した腫瘍の増殖速度と比較して、統計的に有意に低減した遠達腫瘍増殖を示した。
【０２１９】
生存に関しては、Ａｄ−ＩＬ２４および抗ＰＤ−１併用療法は、Ａｄ−ＩＬ２４治療単独（ｐ＝０．０１６７）および抗ＰＤ−１治療単独（ｐ＜０．００１）と比較して、生存において統計的に有意な増大を示した（図６）。腫瘍増殖に関する相乗効果と一致して、Ａｄ−ＩＬ２４および抗ＰＤ−１併用群に関するメジアン生存の増大は、Ａｄ−ＩＬ２４および抗ＰＤ−１処置の効果と比較して、相加的なものより大きかった。
【０２２０】
実施例２−  以前の免疫療法に対する腫瘍抵抗性のためのＡｄ−ｐ５３およびＡｄ−ＩＬ２４腫瘍抑制因子免疫遺伝子治療の併用
腫瘍抑制因子の併用によって誘導される抗腫瘍効果を決定するために、Ａｄ−ｐ５３およびＡｄ−ＩＬ２４を併用し、最終処置調製物中で各ベクターの元々の用量のうちの５０％を使用して、上記で記載されるように投与した。動物を、原発性腫瘍容積に関して評価した。（図７）に示されるように、抗ＰＤ−１単剤療法で処置した動物において重篤な腫瘍進行が存在したのに対して、Ａｄ−ｐ５３＋Ａｄ−ＩＬ２４の併用は、低減した腫瘍増殖を示した。抗ＰＤ−１抵抗性の改善は、Ａｄ−ｐ５３＋Ａｄ−ＩＬ２４＋抗ＰＤ１の併用で処置した動物において観察され、その併用は、抗ＰＤ１またはＡｄ−ｐ５３＋Ａｄ−ＩＬ２４治療いずれか単独と比較して、原発性腫瘍容積において最大の低減を誘導した。各処置に関する腫瘍容積の統計的分散分析（ＡＮＯＶＡ）比較は、Ａｄ−ｐ５３＋Ａｄ−ＩＬ２４＋抗ＰＤ−１処置の併用効果が、処置の１４日目までに相乗効果的であることを決定した（ｐ値＝０．０３５）。さらに、腫瘍増殖の速度の評価（反復測定ＡＮＯＶＡ統計分析を使用）はまた、単剤療法として使用されるいずれの薬剤も超える併用処置の相乗効果を確認した（ｐ＝０．０１）。
【０２２１】
実施例３−  以前の免疫療法に対して抵抗性の腫瘍のための化学療法およびサイトカイン療法との併用における腫瘍抑制因子免疫遺伝子治療
動物、腫瘍接種および測定、Ａｄ−ＩＬ２４ベクター処置および抗体処置を、実施例１に記載されるように利用した。
【０２２２】
化学療法およびサイトカイン処置：  化学療法処置（５ＦＵおよびシクロホスファミド、ＣＴＸ）を、３日目に開始し、１ｍＬシリンジを使用して、薬物（５ＦＵおよびＣＴＸ）の単一注射（ｉ．ｐ．）からなった。５ＦＵに関して、投与は、５０ｍｇ／ｋｇ  体重であった；シクロホスファミドに関して、投与は、８０ｍｇ／ｋｇ  体重であった。ＧＭ−ＣＳＦサイトカイン療法を、使用直前に滅菌ｄｄＨ２Ｏ中に溶解しかつ１×ＰＢＳに調節した組換えマウスＧＭ−ＣＳＦとして提供した。動物をｉ．ｐ．で処置し、投与した用量は、０．５μｇ／マウスであった。処置を、研究の３日目から１３日目までに１日２回行った。
【０２２３】
抗ＰＤ−１およびＡｄ−ＩＬ２４との併用での５−ＦＵ＋ＣＴＸ＋ＧＭ−ＣＳＦの処置効力を、腫瘍容積によって評価した。図８に示されるように、抗ＰＤ−１単剤療法で処置した動物において重篤な腫瘍進行が存在し、５−ＦＵ＋ＣＴＸ＋ＧＭ−ＣＳＦで処置した動物に関する進行に類似であり、併用療法（５−ＦＵ＋ＣＴＸ＋ＧＭ−ＣＳＦ＋抗ＰＤ−１）で処置した動物における抗ＰＤ−１抵抗性を中程度であるが、統計的に有意に改善した。この併用処置は、抗ＰＤ−１または５−ＦＵ＋ＣＴＸ＋ＧＭ−ＣＳＦいずれかの治療単独と比較して、腫瘍増殖における低減を誘導した。各処置に関する腫瘍容積の統計的分散分析（ＡＮＯＶＡ）比較は、５−ＦＵ＋ＣＴＸ＋ＧＭ−ＣＳＦおよび抗ＰＤ−１処置の併用効果が、処置の１４日目まで相乗効果的であることを決定した（ｐ値＝Ｐ＝０．０２８）。Ａｄ−ＩＬ２４を、併用５−ＦＵ＋ＣＴＸ＋ＧＭ−ＣＳＦ＋抗ＰＤ−１に付加した場合（図９）、それは抗ＰＤ−１抵抗性の改善を増幅した。図９に示されるように、各処置に関する腫瘍容積の統計的分散分析（ＡＮＯＶＡ）比較は、５−ＦＵ＋ＣＴＸ＋ＧＭ−ＣＳＦ＋抗ＰＤ−１およびＡｄ−ＩＬ２４処置の併用効果が、処置の１４日目まで相乗効果的であることを決定した（ｐ値＝０．０１０）。
【０２２４】
実施例４−  以前の免疫療法に対して抵抗性の腫瘍のためのＡｄ−ＩＬ２４腫瘍抑制因子免疫遺伝子治療を改善するＡｄ−リラキシンによる腫瘍微小環境の変更
腫瘍抑制因子免疫遺伝子治療の抗腫瘍効果が、腫瘍微小環境の変更によって増強され得るか否かを決定するために、Ａｄ−Ｌ２４処置を、細胞外マトリクスを分解するリラキシンを発現する複製可能アデノウイルスベクターと併用した。Ａｄ−リラキシン（Ａｄ−ＲＬＸ）およびＡｄ−ＩＬ２４を併用し、最終処置調製物中で３×１０１０  −ｖｐと併用したＡｄ−ＲＬＸの２×１０１０  ｖｐの併用用量を使用して、上記の実施例２に記載されるように、抗ＰＤ−１とともに投与した。動物を、原発性腫瘍容積に関して評価した。（図１０）に示されるように、抗ＰＤ−１単剤療法で処置した動物において重篤な腫瘍進行が存在したのに対して、Ａｄ−ＲＬＸ＋Ａｄ−ＩＬ２４の併用は、低減した腫瘍増殖を示した。抗ＰＤ−１抵抗性の改善は、Ａｄ−ＲＬＸ＋Ａｄ−ＩＬ２４＋抗ＰＤ１の併用で処置した動物において観察され、その併用は、抗ＰＤ１またはＡｄ−ＲＬＸ＋Ａｄ−ＩＬ２４治療いずれかと比較して、原発性腫瘍容積において最大の低減を誘導した。１１日目での腫瘍容積の多重比較のための統計的分散分析（ＡＮＯＶＡ）を行って、処置効果を比較した。ＰＢＳ  対  抗ＰＤ−１処置の間には統計的有意差はなかった（Ｐ＝０．８３４３）一方で、ＰＢＳ  対  Ａｄ−ＲＬＸ＋Ａｄ−ＩＬ２４（Ｐ＝０．０４１６）およびＰＢＳ  対  Ａｄ−ＲＬＸ＋Ａｄ−ＩＬ２４＋抗ＰＤ−１（Ｐ＝０．００３９）は両方ともに、ＰＢＳコントロールと比較して、腫瘍サイズにおいて統計的に有意な低減を示した。抗ＰＤ−１  対  Ａｄ−ＲＬＸ＋Ａｄ−ＩＬ２４処置の間には統計的有意差がなかった（Ｐ＝０．０９２９）一方で、抗ＰＤ−１  対  Ａｄ−ＲＬＸ＋Ａｄ−ＩＬ２４＋抗ＰＤ−１群の間の差は、統計的に有意であり（Ｐ＝０．００４９）、Ａｄ−ＲＬＸ＋Ａｄ−ＩＬ２４＋抗ＰＤ−１併用の優れた効力を示した。
【０２２５】
実施例５−  免疫療法抵抗性を改善するための最初の処置としてのＡｄ−ｐ５３またはＡｄ−ＩＬ２４腫瘍抑制因子免疫遺伝子治療
これらの研究を、腫瘍抑制因子治療を１日目に免疫チェックポイントインヒビター処置と同時に開始したことを除いて、実施例１において上記で記載される実験と類似の様式で行った。実験における他の差異は、以下の説明の中で注記される。
【０２２６】
免疫療法に対して抵抗性の腫瘍における最初の処置としてのＡｄ−ＩＬ２４＋チェックポイントインヒビター：  複製不能Ａｄ−ＩＬ２４および複製可能Ａｄ−ＩＬ２４（ＣＴＶ−ＩＬ２４）の処置効力を、抗ＰＤ−１＋抗ＬＡＧ３処置効力の効果に対して完全に抵抗性であることが公知のＢ１６黒色腫腫瘍モデルにおいて、抗ＰＤ−１＋抗ＬＡＧ−３免疫療法と併用して、動物の生存によって評価した。
【０２２７】
抗ＰＤ−１＋抗ＬＡＧ−３治療と併用した場合の複製不能Ａｄ−ＩＬ２４および複製可能ＣＴＶ−ＩＬ２４は、両方共に、抗ＰＤ−１＋抗ＬＡＧ−３治療単独と比較して、統計的に有意に増大した生存を示した。抗ＰＤ−１＋抗ＬＡＧ−３治療は、ＰＢＳ処置と比較して、生存に対して効果を有しなかった。抗ＰＤ−１＋抗ＬＡＧ−３治療と併用した場合のＡｄ−ＩＬ２４またはＣＴＶ−ＩＬ２４処置の間で、生存において統計的有意差はなかったので、Ａｄ−ＩＬ２４処置群およびＣＴＶ−ＩＬ２４処置群を、図１１に示される生存分析のために合わせた。免疫療法に際して進行している以前に処置した腫瘍において観察された相乗効果と一致して、抗ＰＤ−１＋抗ＬＡＧ−３治療と併用したＡｄ−ＩＬ２４／ＣＴＶ−ＩＬ２４治療は、Ａｄ−ＩＬ２４／ＣＴＶ−ＩＬ２４治療単独（ｐ＝０．００１１）および抗ＰＤ−１＋抗ＬＡＧ−３治療単独（ｐ＜０．０００１）と比較して、生存において統計的に有意な増大を示した（図１１を参照のこと）。Ａｄ−ＩＬ２４／ＣＴＶ−ＩＬ２４および抗ＰＤ−１＋抗ＬＡＧ−３併用療法群に関する生存の増大は、Ａｄ−ＩＬ２４／ＣＴＶ−ＩＬ２４および抗ＰＤ−１＋抗ＬＡＧ−３治療処置の効果と比較して相加的なものより大きかった（図１１）。
【０２２８】
免疫療法に抵抗性の腫瘍における最初の処置としてのＡｄ−ｐ５３＋チェックポイントインヒビター：Ｚｈａｎｇら，  ２０１５によって記載されるとおりのＡＤＳ−１２（マウス肺癌腫）細胞株腫瘍モデルを使用して、研究を６〜１２週齢の１２９Ｓ４マウスにおいて行った。
【０２２９】
この研究において、ｐ５３腫瘍抑制因子処置を、上記の実施例１で記載されるとおりのＡｄ−ｐ５３単独として、およびＡｄ−ｐ５３と複製可能アデノウイルスベクターＴＡＶ  ２５５との混合物を表すＴＡＶ  Ａｄ−ｐ５３と称される二重ウイルス組成物において、投与した。ＴＡＶ  ２５５の特徴は、Ｚｈａｎｇらに記載される。これらの処置を、最初の治療として抗ＰＤ−Ｌ１抗体と併用した。ＡＤＳ−１２腫瘍モデルが、抗ＰＤ−Ｌ１治療に対して高度に抵抗性であることは公知であった。この研究を、ＴＡＶ  Ａｄ−ｐ５３が抗ＰＤ−Ｌ１治療に対する抵抗性を改善し得るか否かを決定するために設計した。
【０２３０】
マウスに、リン酸緩衝化生理食塩水中に懸濁した１０６  ＡＤＳ−１２細胞を右側腹部へと皮下注射して、「原発性腫瘍」を形成した。処置の開始時の目標腫瘍容積は、５０〜７５ｍｍ３であった。目標腫瘍容積に達したときに、腫瘍内注射での処置を同日に開始した。
【０２３１】
腫瘍内ウイルスまたはビヒクル注射：  腫瘍容積が５０〜７５ｍｍ３に達した後、そのマウスを、表１に記載される６つの処置群のうちの１つへと無作為化した（５匹の雄性マウスおよび５匹の雌性マウスを各群に無作為化）。全てのマウスを、腫瘍容積が５０〜７５ｍｍ３に達したときに開始して、試験ウイルスまたはビヒクルの腫瘍内注射で処置し、１日目、５日目、および９日目に投与した。群１および２には、ビヒクルを与え、群３、４、５、および６には、ウイルスを与えた。
【０２３２】
腹腔内抗ＰＤ−Ｌ１またはリン酸緩衝化生理食塩水注射：  全てのマウスを、ウイルスまたはビヒクルの腫瘍内注射での処置を開始した後の日に開始して、次いで、４日ごとに３０日間（すなわち、２日目、６日目、１０日目、１４日目、１８日目、２２日目、２６日目、３０日目）にわたって、２００μｇ  抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはリン酸緩衝化生理食塩水の腹腔内注射で処置した。群１、３、４、および５には、リン酸緩衝化生理食塩水を与え、群２および６には、抗ＰＤ−Ｌ１抗体を与えた。
【０２３３】
【表１】
2018532810.tif 000002
【０２３４】
以下の試験物品を、この実験において使用した：
【表２】
2018532810.tif 000003
【０２３５】
研究エンドポイントのモニタリング：  腫瘍増殖を、腫瘍の長さ（Ｌ）および幅（ｗ）を測定することによってモニターした。腫瘍容積を以下の式を使用して計算した：容積＝０．５２３Ｌ（ｗ）２。
【０２３６】
統計分析：  原発性腫瘍容積を、群間の不等分散を仮定して、両側Ｔ検定を使用して処置の１２日目（全てのマウスに関してデータが利用可能な最後の時点）に群間で比較した。
【０２３７】
結果：  平均±ＳＥＭ  原発性腫瘍容積を、図１２に示す。コントロール腫瘍内緩衝液、抗ＰＤＬ−１抗体単独、ＴＡＶ  Ａｄ−ｐ５３単独およびＴＡＶ  Ａｄ−ｐ５３＋抗ＰＤ−Ｌ１で処置したマウス間の四元配置比較において、腫瘍容積は、腫瘍内緩衝液とともに腹腔内抗ＰＤＬ１と比較して、ＴＡＶ  Ａｄ−ｐ５３＋抗ＰＤ−Ｌ１で処置したマウスにおいて有意により小さかった（ｐ＜０．０５）。ＴＡＶ  Ａｄ−ｐ５３の非存在下では、抗ＰＤＬ１抗体は、有意な活性を有しなかった（ｐ＝０．３７９）。抗ＰＤ−Ｌ１抗体の非存在下では、併用ウイルス治療は、統計的有意性を満たすことなく、より小さな腫瘍容積に向かう傾向をもたらした（ｐ＝０．０６２７）。
【０２３８】
抗ＰＤＬ１抗体の非存在下でのウイルス治療レジメン間の比較：  腫瘍容積は、緩衝液と比較して、ＴＡＶで有意により小さかった（ｐ＜０．０５）。二重ウイルス治療  対  緩衝液の間の差異（ｐ＝０．０６２７）およびＡｄ−ｐ５３  対  緩衝液の間の差異（ｐ＝０．１５６）は、統計的有意性に達することなく、都合の良いウイルス治療に向かう傾向にあった。
【０２３９】
データは、抗ＰＤＬ１抗体および二重ＴＡＶ  Ａｄ−ｐ５３ウイルス治療での処置から最強の活性を示す一方で、抗ＰＤＬ１抗体単独は、有意な活性を示さなかった。ＴＡＶ  Ａｄ−ｐ５３ウイルス治療ありまたはなしのいずれかでの抗ＰＤＬ１で処置した群間の比較は、ＴＡＶ  Ａｄ−ｐ５３ウイルス治療の付加が、抗ＰＤＬ１抗体治療の活性を有意に改善することを示す。
【０２４０】
この治療アプローチの別の実施形態において、腫瘍溶解性アデノウイルスＶＲＸ−００７を、ＴＡＶ  ２５５の代わりに使用する。ＶＲＸ−００７は、Ｅ３領域の大部分を欠いておりかつＥ３−１１．６Ｋアデノウイルス死滅タンパク質（ＡＤＰ）を過剰発現することを除いて、Ａｄ５と同一の腫瘍溶解性アデノウイルスベクターである。ＶＲＸ−００７の構築物は、以前に記載されている（Ｄｏｒｏｎｉｎ  ２００３；  Ｔｏｌｌｅｆｓｏｎ  １９９６；  Ｌｉｃｈｔｅｎｓｔｅｉｎ  ２００４）。ＶＲＸ−００７はまた、腫瘍抑制因子および他の治療遺伝子を発現するように改変され得る。
【０２４１】
実施例６−  放射線療法および化学放射線療法との併用での腫瘍抑制因子免疫療法
腫瘍抑制因子免疫療法の局所領域効力および遠達効力は、放射線療法および化学放射線療法とのその併用によってさらに増強され得る。ｐ５３、ＩＬ２４およびリラキシンウイルスベクター、化学療法、サイトカイン療法、免疫チェックポイントインヒビター処置の動物モデルおよび処置スケジュール、ならびにそれらの最も有効な併用は、実施例１〜５において上記で記載されるものと同じである。腫瘍がおよそ５０ｍｍ３に達したときに、動物を処置群へと無作為化する。上記処置群は、コントロール（生理食塩水またはＰＢＳ注射）、放射線単独（６日目に、一度に５グレイ）、および放射線（６日目に、一度に５グレイ）を与えるか与えない、上記の実施例１〜５に記載される処置群を含む。各処置群は、最低でも５〜１０匹の動物を含む。腫瘍サイズおよび動物の生存を測定し、データを、上記の実施例１〜５に記載されるとおりに分析する。これは、放射線との併用処置の増大した効力を示す。
【０２４２】
実施例７−  腫瘍溶解性ヘルペスウイルスベクター治療
この治療アプローチの別の実施形態において、新規な腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルスベクター（ｒＲｐ４５０と称される）をさらなる治療用ウイルスとして使用して、上記の実施例１〜６で記載されるアプローチの効力を増強する。このｒＲｐ４５０ベクターを、複製し、腫瘍細胞を選択的に死滅させるように操作する；その構造および改変は、（Ａｇｈｉら  １９９９）にさらに記載される。簡潔には、そのｒＲｐ４５０ベクターは、ＩＣＰ６（ＲＲ３活性を提供し、静止している細胞におけるウイルス複製および溶解に必須である（Ｃｈａｓｅら，  １９９８）ペプチド）をコードする遺伝子が欠失した単純ヘルペスウイルスタイプ１に基づく。そのベクターはまた、シクロホスファミド（ＣＰＡ）感受性ラットシトクロムｐ４５０  ２Ｂ１の発現、およびガンシクロビル（ＧＣＶ）感受性単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（ＨＳＶ−ＴＫ）導入遺伝子の発現をコードする。
【０２４３】
上記の実施例１〜６に記載されるアプローチを評価することに加えて、そのｒＲｐ４５０ベクターを、免疫チェックポイントインヒビターおよびシクロホスファミド（ＣＰＡ）およびガンシクロビル（ＧＣＶ）治療と併用する。簡潔には、無血清培地中に懸濁した腫瘍細胞（例えば：９Ｌ神経膠腫細胞）を６週齢のＣ５７ＢＬ／６雌性マウスの側腹部へと注射することによって、皮下腫瘍を確立する。注射される腫瘍細胞数は、腫瘍タイプに依存して変動する（９Ｌ神経膠腫細胞に関しては、１０６）。腫瘍がおよそ５０〜７０ｍｍ３に達したときに、動物を以下の処置群へと分ける：コントロールビヒクル、ｒＲｐ４５０、ＣＰＡ、ＧＣＶ、抗ＰＤ１、ＣＰＡ＋ＧＣＶ、ｒＲｐ４５０＋ＣＰＡ＋ＧＣＶ。処置用量およびスケジュールは、以下のとおりである：ｒＲｐ４５０（６０μＬの総容積中で２．５×１０８  ｐｆｕ）またはＣＰＡ（６０μＬの総容積中で１００ｍｇ／ｋｇ  体重）、処置１日目に投与、３日目、５日目および７日目に反復。ウイルスで処置した動物に、合計１０９ｐｆｕを与える；ウイルスの拡がりを担保するために、針の腫瘍内操作を必要とする。ＧＣＶで処置した動物に、２００μＬの０．９％  ＮａＣｌ中に溶解した、体重１ｋｇあたり３０ｍｇのＧＣＶを、１１日目から２１日目まで１日に１回、ｉ．ｐ．注射で与える。抗ＰＤ１（１０ｍｇ／ｋｇ  体重、ｉ．ｐ．）で処置した動物に、実施例５で記載されるように、１日目に開始して、以降３日ごとに処置を与える。
【０２４４】
腫瘍サイズおよび動物の生存を測定し、データを上記の実施例１〜５に記載されるように分析する。これは、放射線との併用処置の増大した効力を示す。
【０２４５】
実施例８−  ヘルペスベクター
ＴＶＥＣ（以前は、ＯｎｃｏＶｅｘＧＭ−ＣＳＦ）は、欠失させたＩＣＰ３４．５遺伝子（腫瘍細胞ではウイルス複製を付与するが、正常な細胞では付与しない）および欠失させたＩＣＰ４７遺伝子（そのウイルスに対する免疫応答の抑制を生じる）の代わりにヒトＧＭ−ＣＳＦ導入遺伝子を含む複製欠損ＨＳＶベクターである。ＴＶＥＣは、実験株ではなく、ウイルス感染したヒトから採取された単純ヘルペスウイルス１（ＨＳＶ−１）の株を遺伝子操作することによって作製された（Ｌｉｕら，  ２００３）。
【０２４６】
最初の研究を、より前の世代のベクター、ｄｖ−ＧＭ（温度感受性ＩＣＰ４変異体をコードしかつマウスＧＭ−ＣＳＦベクターをコードする実験株１７  ＨＳＶに由来する）で行った。Ｈａｒｄｉｎｇ−Ｐａｓｓｅｙ（マウス黒色腫）、Ｍ３（マウス黒色腫）、ＣＴ２６（マウス結腸腺がん）、ＭＣＡ３８（マウス結腸腺がん）、ＭＣＡ２０７（マウス線維肉腫）、およびＧＬ２６１（マウス脳腫瘍）細胞へのｄｖ−ＧＭの感染は、９５ｐｇのマウスＧＭ−ＣＳＦ／１０５  腫瘍細胞／４８時間までの分泌を生じた（Ｔｏｄａら，  ２０００）。Ｂ１６マウス黒色腫細胞は、ＨＳＶのレセプターを欠いているので、この薬剤に適したモデルではなく、よって、ＢＬ６マウスにおけるＨａｒｄｉｎｇ−Ｐａｓｓｅｙモデルを代わりに使用する。このモデルは、高度に腫瘍形成性であり、腫瘍退縮は、自発的には起こらない。１×１０６  黒色腫腫瘍細胞を各側腹部の皮下に移植することによって、両側の腫瘍をＢＬ／６マウスにおいて確立する。一方の側腹部への処置を、腫瘍が５ｍｍ直径（およそ６０ｍｍ３）に達したときに、２×１０５ｐｆｕを使用して開始したところ、接種した腫瘍および接種していない反対側の腫瘍の両方において、腫瘍増殖の有意な阻害を生じた。より低いウイルス用量（２×１０３〜２×１０４ｐｆｕ／注射）は、有意ではない腫瘍増殖の軽度の低減を示し、腫瘍を有するマウスの改善された生存を生じなかった。従って、ＴＶＥＣは、ＴＶＥＣで以前処置したか、または腫瘍が以前のＴＶＥＣ治療に際して進行してしまった動物において増大した治療効果を示すために、抗ＰＤ−１との併用での腫瘍抑制因子免疫療法（例えば、Ａｄ−ｐ５３またはＡｄ−ＩＬ２４）と併用される。
【０２４７】
ＴＶＥＣ動物モデルは、Ａ２０リンパ腫モデルを含む（このモデルでは、２×１０６  腫瘍細胞をＢａｌｂ／ｃマウスの各側腹部へと皮下注射した（Ｌｉｕら，  ２００３））。右側の腫瘍を、腫瘍がおよそ６０ｍｍ３に達したときに、２日に１回注射して、合計３回の注射で１×１０６、１×１０７および１×１０８ｐｆｕの用量を使用して処置した。３種の用量は全て、原発性腫瘍において抗腫瘍効果を示したが、最高用量１×１０８ｐｆｕのみが、反対側の腫瘍の退縮を示した。
【０２４８】
臨床研究は、ＴＶＥＣが生存を改善せず、転移の退縮も誘導しないことを示した。患者は、ＴＶＥＣによって引き起こされる免疫細胞活性化に抵抗性を発生させるようである。この効果を模倣するために、ＴＶＥＣに対する抵抗性を獲得したかまたは生来の抵抗性を有する動物モデルを、生成する（本発明者らが上記で示すように、マウスＢ１６Ｆ１０モデルは、抗ＰＤ−１治療に生来の抵抗性を有する）。例えば、Ａ２０リンパ腫細胞は、ＴＶＥＣに対して生来的に感受性である。ＴＶＥＣを生存している細胞に反復投与することによって、ＴＶＥＣ抵抗性Ａ２０細胞株が生成され得る。この株をＢａｌｂ／ｃマウスに移植し、腫瘍をＴＶＥＣで処置する（抵抗性を確認するために）。そのＴＶＥＣ抵抗性腫瘍を、抗ＰＤ−１と併用して腫瘍抑制因子療法（例えば、Ａｄ−ｐ５３またはＡｄ−ＩＬ２４）で処置して、ＴＶＥＣで以前処置されたかまたは腫瘍が以前のＴＶＥＣ治療に際して進行してしまった動物において治療効果を示す。
【０２４９】
実施例９−  局所領域および全身性の投与の両方に関する、Ｎ１Ｌ欠失、ＩＬ１２発現で操作されたワクシニアベクターでの、またはＰＩ３Ｋδ／γインヒビターとの併用での適用
この治療アプローチの別の実施形態において、新規な腫瘍溶解性ワクシニアウイルス（ＶＶＬ  １５−Ｎ１Ｌ−ＩＬ１２と称される）を、さらなる治療用ウイルスとして使用して、上記の実施例１〜９に記載されるアプローチの効力を増強する。数株の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスが報告されている（例えば、Ｗｅｓｔｅｒｎ  Ｒｅｓｅｒｖｅ、ＷｙｅｔｈおよびＬｉｓｔｅｒ株）。これらの株の各々の種々の欠失変異体が作り出されている。Ｗａｎｇら（特許ＷＯ２０１５／１５０８０９Ａ１）は、増強された選択性および抗腫瘍効力を示す不活性化Ｎ１Ｌ遺伝子を有するＴＫ欠損ワクシニアウイルス株を開発した。Ｎ１Ｌは、感染した細胞のアポトーシスおよびＮＦ−ｋＢ活性化を阻害すると考えられる。Ｎ１Ｌ遺伝子欠失は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞応答を調節することに加えて、ＮＦ−ｋＢによって制御される炎症促進性抗ウイルスサイトカインの増大をもたらすことが示された。Ｎ１Ｌ欠失誘導体は、Ｗａｎｇら，  ２０１５（特許ＷＯ２０１５／１５０８０９Ａ１）に記載される。ＶＶＬ  １５Ｎ１Ｌの抗腫瘍効力を増強するために、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１２、ＩＬ−２１、腫瘍抑制因子および他の治療用遺伝子を、ＶＶＬ  １５Ｎ１ＬベクターのＮ１Ｌ領域に挿入する。これらの治療「武装した（ａｒｍｅｄ）」ＶＶＬ  １５Ｎ１Ｌベクターを、処置の局所効果および遠達効果を増強するために、上記の実施例１〜８に記載されるとおりに使用する。
【０２５０】
上記の実施例１〜８に記載されるアプローチを評価することに加えて、そのＶＶＬ  １５Ｎ１Ｌベクターをまた、免疫チェックポイントインヒビターおよびＰＩ３Ｋインヒビターと併用する。ＰＩ３ＫδまたはＰＩ３Ｋγ／δインヒビターを組み込む例は、ウイルスベクターの静脈内投与を増強するために記載される。動物に、ＩＣ８７１１４（ＰＩ３Ｋδインヒビター）を７５ｍｇ  ｋｇ−１の濃度で与え、次いで、３時間後に、静脈内ＶＶＬ  １５Ｎ１Ｌベクターを、１００μｌのＰＢＳ中に１×１０８  ＰＦＵ／マウスで、尾静脈を介して与える。この処置を、少なくとも３回、０日目、３日目および５日目に与える。これらの処置を、実施例１〜８に記載されるのと同じ治療と併用する。腫瘍サイズおよび動物の生存を測定し、データを、上記の実施例１〜８に記載されるように分析する。これは、ＶＶＬ  １５Ｎ１Ｌベクター、免疫チェックポイントインヒビターおよびＰＩ３Ｋインヒビターと併用される処置の増大した効力を示す。
【０２５１】
実施例１０−  アデノウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、およびＨＳＶウイルスベクターの併用
実施例１〜９に記載されるウイルスおよび治療の併用は、この実施例に記載されるように、治療効力をさらに増強し得る。３×１０６  ＨＰＤ−１ＮＲシリアン・ハムスター膵臓がん細胞を、５〜６週齢のシリアン・ハムスターの一方の側腹部に皮下移植する。腫瘍異種移植片が約８ｍｍ直径（およそ３００〜３５０ｍｍ３）に増殖したとき、種々のウイルスおよびビヒクル緩衝液を、以下の表中に列挙した群において腫瘍内注射する。
【０２５２】
【表３】
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【０２５３】
これらの処置を、実施例１〜９に記載されるのと同じ治療と併用する。腫瘍サイズおよび動物の生存を測定し、データを、上記の実施例１〜９に記載されるように分析する。これは、免疫チェックポイントインヒビターと併用される処置の増大した効力を示す。
【０２５４】
上記の実施例１〜１０における知見に基づいて、腫瘍抑制因子免疫遺伝子治療の臨床適用を、以下の実施例１１および実施例１２により十分に記載する。実施例１１および実施例１２のいくつかの実施形態において、処置を、最初のがん処置として適用するか、または他の治療（ＴＶＥＣのような免疫療法もしくは免疫チェックポイントインヒビター治療、またはサイトカインもしくはインターロイキンまたは放射線療法もしくは化学療法または低分子療法を含む）に対する抵抗性の発生の後に投与する。
【０２５５】
実施例１１−  免疫療法を含む以前の処置に際して進行している患者における動脈内Ａｄ−ｐ５３およびカペシタビンおよび抗ＰＤ−１処置での併用療法
フェーズ１安全性ステージを設計して、Ａｄ−ｐ５３＋メトロノミックカペシタビンおよび抗ＰＤ−１の最大耐量（ＭＴＤ）を決定する。フェーズ１ステージの完了および至適Ａｄ−ｐ５３用量の選択の後に、無作為コントロールフェース２治験を行う。フェーズ２治験は、フェーズ１治験において規定されたＡｄ−ｐ５３  ＭＴＤを使用する。フェーズ２研究を、Ａｄ−ｐ５３＋カペシタビン＋免疫チェックポイントインヒビター治療が、カペシタビン＋免疫チェックポイントインヒビター処置単独より優れているか否かを決定するために適切かつ十分にコントロールされた治験であるように設計する。
【０２５６】
そのＡｄ−ｐ５３を、２ｍＬ容積／バイアルで供給する；各ｍＬは、１×１０１２  ウイルス粒子（ｖｐ）を含む。それを、安定化剤として１０％（ｖ／ｖ）  グリセロールを含むリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）中の滅菌ウイルス調製物として提供する。Ａｄ−ｐ５３を、投与する前に、記載される手順に従って希釈および濾過する。この研究における全ての患者に、１００ｍｌ容積において２０分間の継続時間の肝臓内動脈（ＩＨＡ）Ａｄ−ｐ５３注入を与える。Ａｄ−ｐ５３を、少なくとも１もしくはこれより多くのサイクルにわたって、各８週間サイクルのうちの最後の６週間（１５日目に開始）の間に、１週間に２回（月曜日および木曜日）投与する。
【０２５７】
カペシタビン（ゼローダ（登録商標））を、６２５ｍｇ／ｍ２  ｂｉｄとして、８週間サイクルにわたって（２サイクルまでで）連続して、１日１回経口投与する。ゼローダを、各サイクルにおいてＡｄ−ｐ５３の２週間前に開始して、サイクルの間にわたって、投与する。抗ＰＤ−１治療を、ＦＤＡ承認のパッケージ挿入物の指示に従って投与する。
【０２５８】
フェーズＩ研究。  ３（＋３）名の患者を、各８週間サイクルのうちの最後の６週間（１５日目に開始）にわたって、１日１回の経口カペシタビンと併用して、１週間に２回（月曜日および木曜日）、２．０×１０１２  ｖｐの用量で開始してＩＨＡ  Ａｄ−ｐ５３で処置する。経口カペシタビン処置を、６２５ｍｇ／ｍ２の用量で１日に２回（ＢＩＤ）、連続して（メトロノミック）毎日、各８週間サイクルにわたって１日目に開始して（Ａｄ−ｐ５３処置の開始前の２週間）、投与する。患者を、進行性の疾患（ＰＤ）、ＤＬＴまたは中止の同意がない場合に、２回の８週間サイクルまでで処置する。表５は、フェーズ１治験において評価されるべき用量レベルの説明を示す。Ａｄ−ｐ５３は、ＩＨＡを介して、１週間に２回（月曜日および木曜日）、各サイクルの最後の６週間にわたって投与される。
【０２５９】
【表５】
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【０２６０】
慣らしのフェーズ１ステージの分析集団は、治験薬の少なくとも１用量を受容する全ての被験体からなる。人口学的特徴、ベースライン特徴、および併用薬を、記述統計を使用してまとめる。連続変数は、サンプルサイズ（ｎ）、平均、標準偏差（ＳＤ）、最小（ｍｉｎ）、メジアン、および最大（ｍａｘ）によってまとめられる。カテゴリー変数は、頻度およびパーセントによってまとめられる。人口学的特徴、ベースライン特徴、および併用薬は、用量レベルによって別個にまとめられる。形式的統計比較は行わない。
【０２６１】
全ての分析は、記述的であり、形式的統計的検定（ｆｏｒｍａｌ  ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  ｔｅｓｔ）は行わない。有害事象（ＡＥ）およびそれらの重篤度を、国立がん研究所（ＮＣＩ；米国）有害事象共通用語規準（ＣＴＣＡＥ）バージョン４．０を使用して分類する。事象の数、患者あたりの事象の数、および少なくとも１種の事象を有する患者数をまとめる。これらの事象のまとめは、治療下で発現したＡＥ（ＴＥＡＥ）に焦点を当て、投与後に開始したそれらＡＥおよび研究の間に悪化した任意の既存の状態として定義される。記述的統計（例えば、計数およびパーセント）は、用量レベルによってＡＥおよびＤＬＴをまとめるために使用される。実験データを、ＣＴＣＡＥバージョン４．０に従ってグレード分けし、ベースラインで、および用量レベルによるベースライン後の時点で、記述的にまとめる。
【０２６２】
記述的統計を、用量レベルによって効力エンドポイントをまとめるために使用する。患者を、２サイクルまでの治療で処置する。奏功率（ＣＲ＋ＰＲ）を達成する用量レベルによる患者の割合とともに、その相当する両側の９５％信頼区間を報告する。この分析において、何らかの理由で応答に関して評価不能である患者を、応答を達成しないと見做す。
【０２６３】
効力評価。  全生存期間（ＯＳ）を、処置の開始から何らかの原因での死亡までに経過した時間として定義する。無増悪生存（ＰＦＳ）（ＲＥＣＩＳＴ  １．１）を、処置の開始から疾患進行または死亡までで計算する。奏功率（ＣＲまたはＰＲ）を、ＣＴまたはＭＲＩを使用して、最もよく確認された応答ＣＲまたはＰＲを有する患者のパーセントとして定義し、ＲＥＣＩＳＴ  １．１に従って中心的な読影者によって決定する。その応答は、４週間より長くまたは４週間に等しい間隔を空けたその後の決定によって確認されなければならない。いくつかの部位では、ＰＥＴが使用される。評価および測定を、スクリーニング時、次いで、最初の処置から開始してＰＤまでまたは別のもしくはさらなる抗腫瘍治療の開始まで（どちらが先に起こっても）８週間間隔を空けて行う。さらに、スキャンを、各長期間の追跡通院時に、進行するまで行う。ｐ５３は抗腫瘍免疫応答を誘導することが公知であるので、完全奏効（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）、病状安定化（ＳＤ）および疾患進行（ＰＤ）の規準を、免疫関連応答評価基準（Ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  Ｃｒｉｔｅｒｉａ）（ｉｒＲＣ）およびＲＥＣＩＳＴ  １．１の両方を利用して評価する。ＣＲまたはＰＲの場合には、通院時に記録し、別の腫瘍評価を、応答の確認のために４週間以降に行うべきである。ＳＤは、最初の観察の６〜８週間後に家訓されなければならない。応答の確認後に、腫瘍評価のためのスキャンを、計画どおりに行う。
【０２６４】
実施例１２−  Ａｄ−ＭＤＡ７（ＩＬ２４）および抗ＰＤ１抗体での併用療法
抗ＰＤ−１処置は、進行して切除不能な疾患を有する黒色腫患者に関して承認された治療となった。抗ＰＤ−１は、多くの患者に利益をもたらす画期的処置を代表する一方で、複数の研究からの臨床データは、患者のうちの大部分が、この治療に応答しないことを示す。
【０２６５】
この研究は、Ａｄ−ＭＤＡ−７（Ａｄ−ＭＤＡ−７＝Ａｄ−ＩＬ２４に注意のこと）および抗ＰＤ−１抗体での処置によって進行した黒色腫患者の予後を改善するために設計される。その併用療法の臨床効力は、総合効果率［ＯＲＲ＝部分奏効（ＰＲ）＋完全奏効（ＣＲ）］、完全奏功率（ｃｏｍｐｌｅｔｅ  ｒｅｍｉｓｓｉｏｎ  ｒａｔｅ）（ＣＲＲ）、奏効期間（ｄｕｒａｂｌｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｒａｔｅ）（ＤＲＲ＝少なくとも６ヶ月間維持されるＰＲ＋ＣＲ）；内臓転移率および内臓転移までの時間；無増悪生存（ＰＦＳ）および全生存（ＯＳ）の評価を含む。以下に対する治験薬の効果：リンパ球表現型および血清サイトカイン、疾患関連生体マーカー、選択された抗原への抗体応答、ならびに腫瘍抗原への液性応答および細胞性応答もまた、評価する。
【０２６６】
さらに、腫瘍サンプルを、臨床活性の病的相関現象（炎症性浸潤物（例えば、ＣＤ８およびＣＤ４細胞、ならびにリンパ球および腫瘍細胞上でのそれぞれ、プログラム細胞死−１（ＰＤ−１）およびプログラム細胞死−リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）の発現）の量および特徴が挙げられる（が、これらに限定されない））に関して試験する。
【０２６７】
患者を、１２ヶ月間まで、または彼らがそのときに応答している最中であれば１８ヶ月間まで、処置する。１２ヶ月の時点で応答している最中の患者（ＣＲまたはＰＲ）は、１８ヶ月間までまたは臨床的に関連する進行性の疾患（ＰＤｒ）まで、どちらが先に来ようが、処置を継続するべきである。
【０２６８】
免疫療法は、腫瘍応答の開始の遅れを引き起こし得、腫瘍進行と誤解される腫瘍炎症と関連付けられ得るので、このプロトコルにおいて３タイプのＰＤが定義される。臨床的に直接関連しない進行性疾患（ＰＤｎ）は、パフォーマンスステータスの低下を被らないおよび／または治験責任医師の判断において代替治療を要しない患者におけるＰＤとして定義される。ＰＤｎを示す患者は、研究処置を継続することを許容される。臨床的に直接関連する進行性疾患（ＰＤｒ）は、パフォーマンスステータスの低下と関連付けられるおよび／または治験責任医師の判断において患者が代替治療を要するＰＤとして定義される。ＰＤｒを有する患者は、治験責任医師の判断において、他の処置が保証されなければ、治療の２４週間までに研究に留まることが許容される。ＣＮＳ進行性疾患（ＰＤｃｎｓ）は、中枢神経系（脳）における進行として定義される。
【０２６９】
研究処置であるＡｄ−ＩＬ２４は、生理食塩水および１０％  グリセロールを含む中性緩衝液中、濃度１×１０１２  ｖｐ／ｍＬにおいて、凍結ウイルス懸濁物（２．０ｍＬ／バイアル）として提供される。注射にふさわしいとされるべき腫瘍塊に関する最小サイズはない。皮膚病変は、皮膚の抗原提示細胞によって媒介される治療の免疫効果を増強するために処置されるべき腫瘍の第１の群の中に含まれるべきである。
【０２７０】
個々の患者は、２０個までの病変（最長の直径が５ｃｍより大きい単一の病変がない）を有し得る。その意図は、最終的には、Ａｄ−ＩＬ２４治療（３週間にわたって１週間に２回の腫瘍内注射）の少なくとも１サイクルで全ての病変を処置することである。各患者の病変を、腫瘍直径および用量漸増コホートによって規定される各処置群において病変数でＡｄ−ＩＬ２４処置群へと分けられる。その結果、各処置日に送達されるＡｄ−ＩＬ２４は、表３において特定される用量漸増概要において特定される各処置日に対して許容される総容積用量を超えない。腫瘍に送達される総用量（容積）は、表３に特定される容積を超えず、処置群内の各個々の腫瘍へと注射される量は、腫瘤（ｔｕｍｏｒ  ｎｏｄｕｌｅ）のサイズに依存し、以下のアルゴリズムに従って決定される：
・０．５ｃｍまでの最長直径の腫瘍に関しては、０．１ｍＬまで。
・０．５〜１．５ｃｍの最長直径の腫瘍に関しては、０．５ｍＬまで。
・１．５〜２．５ｃｍの最長直径の腫瘍に関しては、１．０ｍＬまで。
・２．５〜５ｃｍの最長直径の腫瘍に関しては、２．０ｍＬまで。
【０２７１】
任意の個々の病変に注射される最大容積は、２ｍＬである。任意の１処置日の最大用量は、表２において特定される処置用量漸増コホートに依存して、２ｍＬ、４ｍＬまたは６ｍＬのいずれかである。
【０２７２】
【表６】
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【０２７３】
【表７】
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【０２７４】
画像化の結果（コンピューター断層撮影法／磁気共鳴画像化法［胸部、腹部、骨盤、および脳］および病変部の写真）を使用して、効力を評価し、処置決定を、ＲＥＣＩＳＴ  １．１応答評価基準およびｉｒＲＣを使用して、ＥＤＡＣ、治験責任医師および治験依頼者によって行う。ＥＤＡＣおよび治験責任医師の評価に加えて、治験依頼者の裁量で、スキャンおよび測定を、研究後の日にまたは研究の間の任意のときに、ＲＥＣＩＳＴ  １．１および／またはｉｒＲＣを使用して独立した放射線医が再検討し得る。
【０２７５】
まとめ：  実施例において記載される動物研究は、チェックポイントインヒビター治療に抵抗性であることが公知の高度に攻撃的ながんのモデルを使用する。驚くべきことに、局所領域の腫瘍抑制因子処置は、全身性の免疫チェックポイントインヒビター治療への抵抗性を改善し、免疫チェックポイントインヒビター処置との予測外の相乗効果を示し、併用療法は、腫瘍抑制因子療法で処置していない遠隔腫瘍に対して優れた遠達効果を誘導した。これらの予測外の全身性の処置効果は、腫瘍微小環境の細胞外マトリクスを変化させるさらなる治療（リラキシン）と併用した場合に、そして化学療法、サイトカイン療法ならびに骨髄由来免疫抑制細胞（ＭＤＳＣ）（５ＦＵ）、Ｔ−Ｒｅｇｓ（ＣＴＸ）および樹状細胞（抗ＰＤ−１および抗ＬＡＧ−３）を調節することが公知の薬剤と併用して、増強されることが見出された。
【０２７６】
本明細書で開示されかつ特許請求される全ての方法は、本開示を考慮して、過度な実験なしに行われ得、達成され得る。本発明の組成物および方法は、好ましい実施形態に関連して記載されてきた一方で、本発明の概念、趣旨および範囲から逸脱することなく、本明細書で記載される方法に、工程において、または工程の順序においてバリエーションが適用され得ることは、当業者に明らかである。より具体的には、化学的におよび生理学的に両方に関連するある種の薬剤が、本明細書で記載される薬剤の代わりに使用され得る一方で、その同じまたは類似の結果が達成されることは、明らかである。当業者に明らかな全てのこのような類似の代用および改変は、添付の特許請求の範囲によって定義されるとして、本発明の趣旨、範囲および概念の範囲内であると見做される。
【０２７７】
参考文献
以下の参考文献は、これらが本明細書で示されるものを補足する例示的な手順または他の詳細を提供する程度まで、具体的に本明細書に参考として援用される。
【化１】
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【化２】
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【化３】
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【化４】
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【化５】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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