(57)【要約】本願は、式（Ａ）の化合物：またはその塩、溶媒和物、エステル、互変異性体、アミノ酸抱合体または代謝産物に関する。式Ａの化合物は、代謝疾患、炎症性疾患、自己免疫疾患、心疾患、腎臓病、癌および胃腸疾患を含む様々な疾患の処置に有用なＴＧＲ５修飾物質である。2018518537.tif 000048
2018518537.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ａの化合物：
【化１】
2018518537.tif 000042
または薬学的に許容可能なその塩、溶媒和物、エステル、互変異性体、アミノ酸抱合体または代謝産物（式中、
Ａは、
【化２】
2018518537.tif 000043
、オキサジアゾロニルまたはイソオキサゾロニルであり、「＊」でマークされた炭素原子は、Ａが結合される炭素原子に結合され；
ｎは０、１または２であり；
Ｒ１はＨまたはＯＨであり；
Ｒ２はＨまたはＯＨであり；
Ｒ３は、ＣＲ１１Ｒ１２Ｃ（Ｏ）ＯＨ、Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ３１、テトラゾリル、オキサジアゾリル、オキサジアゾロニルまたは、ＮＨＳ（Ｏ）２−（Ｃ１−Ｃ３）アルキルで任意選択により置換されるチアゾリジン−ジオニルであり；
Ｒ１１およびＲ１２はそれぞれ独立に、Ｈ、Ｆ、ＯＨ、ＣＨ２ＯＨまたはＣＨ２Ｆであり、ただし、Ｒ１１およびＲ１２は両方ともＨではなく；
Ｒ３１は、ＯＨ、（ＣＨ２）ｐＯＨまたは（ＣＨ２）ｐＯＳＯ３Ｈであり；
ｐは１または２である）。
【請求項２】
Ａがオキサジアゾロニルまたはイソオキサゾロニルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ａが
【化３】
2018518537.tif 000044
である、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ１およびＲ２がそれぞれＨである、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ１がＨであり、Ｒ２がＯＨである、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ２がＨであり、Ｒ１がＯＨである、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ１およびＲ２がそれぞれＯＨである、請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ３がＣＲ１１Ｒ１２Ｃ（Ｏ）ＯＨである、請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ１１がＨであり、Ｒ１２がＦ、ＯＨ、ＣＨ２ＯＨまたはＣＨ２Ｆである、請求項８に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ１１がＦであり、Ｒ１２がＦ、ＣＨ２ＯＨまたはＣＨ２Ｆである、請求項８に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ１１がＦであり、Ｒ１２がＦである、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ１１がＯＨであり、Ｒ１２がＣＨ２ＯＨまたはＣＨ２Ｆである、請求項８に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ１１がＣＨ２ＯＨであり、Ｒ１２がＣＨ２ＯＨまたはＣＨ２Ｆである、請求項８に記載の化合物。
【請求項１４】
Ｒ１１がＣＨ２Ｆであり、Ｒ１２がＣＨ２Ｆである、請求項８に記載の化合物。
【請求項１５】
ｎが１である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１６】
Ｒ３が、テトラゾリル、オキサジアゾリル、オキサジアゾロニルまたは、ＮＨＳ（Ｏ）２−（Ｃ１−Ｃ３）アルキルで任意選択により置換されるチアゾリジン−ジオニルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１７】
Ｒ３がＣ（Ｏ）ＮＨＲ３１である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１８】
Ｒ３１がＯＨである、請求項１７に記載の化合物。
【請求項１９】
Ｒ３１が（ＣＨ２）ｐＯＨである、請求項１７に記載の化合物。
【請求項２０】
Ｒ３１が（ＣＨ２）ｐＯＳＯ３Ｈである、請求項１７に記載の化合物。
【請求項２１】
式Ｉの化合物：
【化４】
2018518537.tif 000045
または薬学的に許容可能なその塩、溶媒和物、エステル、互変異性体、アミノ酸抱合体または代謝産物（式中、
Ｒ１１およびＲ１２はそれぞれ独立に、Ｈ、Ｆ、ＯＨ、ＣＨ２ＯＨまたはＣＨ２Ｆであり、ただし、Ｒ１１およびＲ１２は両方ともＨではなく；
Ｒ１３はＨまたはＯＨである）である、請求項１に記載の化合物。
【請求項２２】
式ＩＩの化合物：
【化５】
2018518537.tif 000046
または薬学的に許容可能なその塩、溶媒和物、エステル、互変異性体、アミノ酸抱合体または代謝産物（式中：
ｑは０、１または２であり；
Ｒ２１およびＲ２２はそれぞれ独立に、ＨまたはＯＨであり；
Ｒ２３は、テトラゾリル、オキサジアゾリル、オキサジアゾロニルまたは、ＮＨＳ（Ｏ）２−（Ｃ１−Ｃ３）アルキルで任意選択により置換されるチアゾリジン−ジオニルである）である、請求項１に記載の化合物。
【請求項２３】
式ＩＩＩの化合物：
【化６】
2018518537.tif 000047
または薬学的に許容可能なその塩、溶媒和物、エステル、互変異性体、アミノ酸抱合体または代謝産物（式中：
Ｒ３１はＯＨ、（ＣＨ２）ｐＯＨまたは（ＣＨ２）ｐＯＳＯ３Ｈであり；
ｐは１または２である）
である、請求項１に記載の化合物。
【請求項２４】
請求項１に記載の化合物と少なくとも１つの薬学的に許容可能な賦形剤と、を含む、医薬組成物。
【請求項２５】
ＴＧＲ５介在性疾患を処置または予防する方法であって、ＴＧＲ５介在性疾患の処置または予防を必要とする対象に治療的有効量の請求項１に記載の化合物を投与することを含む、方法。
【請求項２６】
代謝疾患を処置または予防する方法であって、代謝疾患の処置または予防を必要とする対象に治療的有効量の請求項１に記載の化合物を投与することを含む、方法。
【請求項２７】
ＩＩ型糖尿病を処置または予防する方法であって、ＩＩ型糖尿病の処置または予防を必要とする対象に治療的有効量の請求項１に記載の化合物を投与することを含む、方法。
【請求項２８】
ＴＧＲ５介在性疾患を処置または予防することにおける、請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項２９】
代謝疾患を処置または予防することにおける、請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項３０】
ＩＩ型糖尿病を処置または予防することにおける、請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項３１】
ＴＧＲ５介在性疾患の処置または予防のための薬剤の製造における、請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項３２】
代謝疾患の処置または予防のための薬剤の製造における、請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項３３】
ＩＩ型糖尿病の処置のための薬剤の製造における、請求項１に記載の化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、ＴＧＲ５を調整する化合物および様々な疾患の処置および／または予防のための方法において有用な組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＴＧＲ５は、胆汁酸（ＢＡ）に応答するＧ−タンパク質カップリング細胞表面受容体である。ＴＧＲ５の一次構造およびその胆汁酸への応答性は、ヒト、ウシ、ウサギ、ラットおよびマウスにおいて保存性が高いことが分かっており、したがってＴＧＲ５が重要な生理学的機能を有することが示唆される。ＴＧＲ５は、リンパ系組織だけでなく他の組織でも広く分布する。高レベルのＴＧＲ５  ｍＲＮＡが胎盤、脾臓および単球／マクロファージで検出されている。胆汁酸は、細胞膜から細胞質へのＴＧＲ５融合タンパク質内在化を誘導することが示されている（Ｋａｗａｍａｔａら、２００３，Ｊ．Ｂｉｏ．Ｃｈｅｍ．２７８，９４３５）。ＴＧＲ５は、ｈＧＰＣＲ１９と同一であることが分かっている（Ｔａｋｅｄａら、２００２，ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．５２０，９７）。
【０００３】
ＴＧＲ５は、多様な細胞タイプで幅広く発現されるｃＡＭＰの細胞内蓄積と関連がある。マクロファージでのその活性化により炎症誘発性サイトカイン産生が低下する一方で（Ｋａｗａｍａｔａら、２００３，Ｊ．Ｂｉｏ．Ｃｈｅｍ．２７８，９４３５）、脂肪細胞および筋肉細胞におけるＢＡによるＴＧＲ５の刺激は、エネルギー消費を促進する（Ｗａｔａｎａｂｅら、２００６，Ｎａｔｕｒｅ  ４３９，４８４）。この後者の影響は、２型ヨードチロニン脱ヨード素酵素（Ｄ２）のｃＡＭＰ依存性誘導を含み、これは局所的にＴ４をＴ３に変換することによって甲状腺ホルモン活性上昇を引き起こす。エネルギー代謝におけるＴＧＲ５の役割と一致して、雌ＴＧＲ５ノックアウトマウスは、高脂肪餌を与えられた場合に体重増加を伴う顕著な脂肪蓄積を示し、このことから、ＴＧＲ５欠損はエネルギー消費を低下させ、肥満を誘発することが示される（Ｍａｒｕｙａｍａら、２００６，Ｊ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．１９１，１９７）。さらにおよびエネルギーホメオスタシスにおけるＴＧＲ５の関与と一致して、膜受容体の胆汁酸活性化は、マウス腸内分泌細胞株におけるグルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ−１）の産生を促進することが報告されている（Ｋａｔｓｕｍａ，２００５，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．３２９，３８６）。したがって、ＴＧＲ５は、疾患（例えば、肥満、糖尿病およびメタボリックシンドローム）の処置に対する魅力的な標的である。
【０００４】
代謝疾患の処置および予防のためのＴＧＲ５アゴニストの使用に加えて、ＴＧＲ５を調整する化合物は、他の疾患、例えば中枢神経疾患ならびに炎症性疾患の処置にも有用である（国際公開第０１／７７３２５号パンフレットおよび同第０２／８４２８６号パンフレット）。さらに、ＴＧＲ５の修飾物質は、胆汁酸およびコレステロールホメオスタシス、脂肪酸吸収およびタンパク質および炭水化物消化を制御する方法において使用し得る。
【０００５】
最近、ケノデオキシコール酸（ＣＤＣＡ）の２３−アルキル置換および６，２３−ジアルキル置換誘導体、例えば６α−エチル−２３（Ｓ）−メチル−ケノデオキシコール酸などは、ＴＧＲ５の強力で選択的なアゴニストとして報告されている（Ｐｅｌｌｉｃｃｉａｒｉら、２００７，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．５０，４２６５）。ＴＧＲ５アゴニストは、初めて、ＢＡのゲノム対非ゲノム効果の薬理学的差異も提供し、有益な構造−活性関係の研究を可能にした。この文脈において、疾患の予防および処置に対するその関係をより詳しく理解するため、受容体活性化に影響を及ぼすさらなる特性をさらに同定するために、およびこの受容体の生理学的および薬理学的作用の特徴を調べるために、より強力で選択的なＴＧＲ５修飾物質が利用可能となる必要がある。
【０００６】
したがって、様々な疾患の処置および／または予防のためのＴＧＲ５修飾物質の開発が必要とされる。本願は、ＴＧＲ５を調整する化合物ならびにＴＧＲ５が関与する疾患を処置または予防するためにこれらの化合物を使用する方法を同定した。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本願は、ＴＧＲ５修飾物質および様々な疾患を処置および／または予防するためのそれらの使用に関する。一態様において、本願は、式Ａを有する化合物：
【化１】
2018518537.tif 000003
または薬学的に許容可能なその塩、溶媒和物、エステル、互変異性体、アミノ酸抱合体または代謝産物（式中、ｎ、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、発明を実施するための形態で後に定める化学的部分の個々の基から選択され得る）に関する。
【０００８】
別の態様において、本願は、本願の化合物または薬学的に許容可能なその塩、溶媒和物、エステル、互変異性体、アミノ酸抱合体または代謝産物と、少なくとも１つの薬学的に許容可能な賦形剤と、を含む医薬組成物に関する。
【０００９】
また別の態様において、本願は、対象において疾患または障害を処置または予防する方法であって、有効量の本願の化合物または薬学的に許容可能なその塩、溶媒和物、エステル、互変異性体、アミノ酸抱合体または代謝産物を対象に投与することを含む方法に関する。
【００１０】
また別の態様において、本願は、対象において疾患または障害を処置または予防する方法における使用のための、本願の化合物または薬学的に許容可能なその塩、溶媒和物、エステル、互変異性体、アミノ酸抱合体または代謝産物に関する。
【００１１】
また別の態様において、本願は、対象において疾患または障害を処置または予防するための薬剤の製造における、本願の化合物または薬学的に許容可能なその塩、溶媒和物、エステル、互変異性体、アミノ酸抱合体または代謝産物の使用に関する。
【００１２】
一態様において、ＴＧＲ５は疾患または障害に関与する。一態様において、ＴＧＲ５は、疾患または障害を引き起こす細胞経路の活性化／上方制御に関与する。別の態様において、ＴＧＲ５は、疾患または障害を引き起こす細胞経路の脱活性化／下方制御に関与する。さらなる実施形態において、疾患または障害は、代謝疾患、炎症性疾患、自己免疫疾患、心疾患、腎臓病、胃腸疾患、肺疾患および癌から選択される。
【００１３】
別段の定めがない限り、本明細書中で使用する全ての技術および科学用語は、本願が属する技術分野の通常の技術者により一般に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書中で、単数形は、文脈上、明確に他の意味が指示される場合を除き、複数も含む。本願の実践または試験において、本明細書中に記載のものと同様または同等である方法および材料を使用し得るものの、適切な方法および材料を以下に記載する。本明細書中で言及する、刊行物、特許出願、特許および他の参考文献は全て、参照により組み込まれる。本明細書中で引用する参考文献は、本願に対する先行技術であることを認めるものではない。矛盾がある場合は、定義を含め、本願が優先する。さらに、材料、方法および例は単なる例示であり、限定するものではない。
【００１４】
本願の他の特性および長所は、次の発明を実施するための形態および特許請求の範囲から明らかとなろう。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
定義
便宜上、本明細書、実施例および特許請求の範囲で使用するある一定の用語をここで集める。
【００１６】
本明細書中で使用される場合、「ＢＡ」は、胆汁酸および胆汁酸誘導体を意味する。胆汁酸は、コレステロール由来のステロイドカルボン酸である。一次胆汁酸は、コール酸およびケノデオキシコール酸である。体内で、これらの酸は、それらが胆汁に分泌される前にグリシンまたはタウリンと抱合される。
【００１７】
「アルキル」は、直鎖アルキル基（例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル）、分岐状鎖アルキル基（例えば、イソプロピル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソブチル）を含め、飽和脂肪族基を指す。ある一定の実施形態において、直鎖または分岐状鎖アルキルは、その骨格において６個以下の炭素原子を有し、これは「低級アルキル」と呼ばれる（例えば、直鎖に対するＣ１−Ｃ６は１、２、３、４、５または６個の炭素原子を意味し、分岐状鎖に対するＣ３−Ｃ６は、３、４、５または６個の炭素原子を意味する）。いくつかの例において、直鎖または分岐状鎖アルキルは、その骨格において４個以下の炭素原子を有する。さらなる例において、直鎖または分岐状鎖アルキルは、その骨格において３個以下の炭素原子を有する。
【００１８】
「置換アルキル」という用語は、炭化水素骨格の少なくとも１個の炭素上で１個以上の水素原子を置換する置換基を有するアルキル部分を指す。このような置換基は、例えば、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシル、アルキルカルボニル、アルコキシカルボニル、カルボキシレート、アミノカルボニル、アルキルアミノカルボニル、ジアルキルアミノカルボニル、シアノ、アミノ、ニトロおよびシアノを含み得る。
【００１９】
「アルコキシ」または「アルコキシル」という用語は、酸素原子に共有結合的に連結される、アルキル、アルケニルおよびアルキニル基を含む。アルコキシ基（またはアルコキシルラジカル）の例としては、メトキシ、エトキシ、イソプロピルオキシ、プロポキシ、ブトキシおよびペントキシ基が挙げられる。
【００２０】
「エステル」という用語は、カルボニル基の炭素に結合される酸素原子に結合される炭素またはヘテロ原子を含有する部分を指す。「エステル」という用語は、アルコキシカルボキシ基、例えばメトキシカルボニル、エトキシカルボニル、プロポキシカルボニル、ブトキシカルボニル、ペントキシカルボニルなどを含む。
【００２１】
「ヒドロキシ」または「ヒドロキシル」という用語は、−ＯＨまたは−Ｏ−を伴う基を含む。
【００２２】
「ハロゲン」という用語は、フッ素、臭素、塩素、ヨウ素などを含む。「ペルハロゲン化」という用語は一般に、全ての水素がハロゲン原子により置換される部分を指す。
【００２３】
化合物に対する何らかの構成物または式において何らかの可変要素（例えばＲ１）が複数回出現する場合、各出現でのその定義は、全ての他の出現でのその定義と独立している。したがって、例えば、基が０〜２個のＲ１部分で置換されることが示される場合、その基は、２個以下のＲ１部分で任意選択により置換され得、各出現でのＲ１は、Ｒ１の定義から独立して選択される。また、置換基および／または可変要素の組み合わせは許容可能であるが、このような組み合わせの結果、安定な化合物が生じる場合のみである。
【００２４】
「不安定な官能性」という用語は、不安定な連結、例えば生理的条件（例えば中性ｐＨ範囲での水溶液）下で加水分解または切断が起こり易い官能基または結合を含有する置換パターンを指す。不安定な官能基の例としてはアセタールおよびケタールが挙げられる。
【００２５】
さらに、本願の化合物またはその塩は、水和または非水和（無水）形態の何れかで、または他の溶媒分子との溶媒和物として存在し得る。水和物の非限定例としては、一水和物、二水和物などが挙げられる。溶媒和物の非限定例としては、エタノール溶媒和物、アセトン溶媒和物などが挙げられる。
【００２６】
「溶媒和物」は、溶媒の化学量論的または非化学量論的な量の何れかを含有する溶媒付加形態を意味する。一部の化合物は、結晶性固相において溶媒分子の固定モル比を捕捉する傾向があり、したがって溶媒和物を形成する。溶媒が水である場合、形成される溶媒和物は水和物であり、溶媒がアルコールである場合、形成される溶媒和物はアルコラートである。水和物は、１個以上の水分子と、水がＨ２Ｏとしてその分子状態を保持する物質のうち１つとの組み合わせにより形成され、このような組み合わせは１つ以上の水和物を形成可能である。
【００２７】
本願の化合物の一部の構造が非対称性炭素原子を含むということに注目すべきである。したがって、別段の指示がない限り、このような非対称性から生じる異性体（例えば、全てのエナンチオマーおよびジアステレオマー）が本願の範囲内に含まれることを理解すべきである。このような異性体は、古典的な分離技術により、および立体化学的に調節される合成により、実質的に純粋な形態で得ることができる。エナンチオマー（Ｒ−およびＳ−立体配置）は、Ｒ．Ｓ．Ｃａｈｎ，Ｃ．ＩｎｇｏｌｄおよびＶ．Ｐｒｅｌｏｇにより開発された系に従い命名される。
【００２８】
さらに、構造および本願で論じる他の化合物は、全てのそのアトロピック（Ａｔｒｏｐｉｃ）異性体を含む。アトロピック（Ａｔｒｏｐｉｃ）異性体は、２つの異性体の原子が空間的に異なるように配置される立体異性体の一タイプである。アトロピック（Ａｔｒｏｐｉｃ）異性体は、中央の結合の周囲の大きな基の回転の妨害により引き起こされる回転の制限に対するそれらの存在に負う部分がある。このようなアトロピック（Ａｔｒｏｐｉｃ）異性体は、一般的には混合物として存在する。しかし、クロマトグラフィー技術における最新の進歩の結果として、選択ケースにおける２つのアトロピック（Ａｔｒｏｐｉｃ）異性体の混合物を分離することが可能になった。
【００２９】
「互変異性体」は、釣り合って存在し、１つの異性体形態から別の形態へと容易に変換される２つ以上の構造異性体の１つである。この変換の結果、隣接する抱合化二重結合の切り替えが付随する水素原子の規則的な移動（ｆｏｒｍａｌ  ｍｉｇｒａｔｉｏｎ）が起こる。互変異性体は、溶液中で互変異性体セットの混合物として存在する。固形では、通常、１つの互変異性体が優位である。互変異性が可能である溶液中で、互変異性体の化学的同等物が達成される。互変異性体の正確な比率は、温度、溶媒およびｐＨを含むいくつかの要因に依存する。互変異性化により相互変換可能である互変異性体の概念は互変異性と呼ばれる。
【００３０】
可能である様々なタイプの互変異性のうち２つが一般的に観察される。ケト−エノール互変異性において、電子および水素原子の同時シフトが起こる。環−鎖互変異性は、糖鎖分子中のアルデヒド基（−ＣＨＯ）が同じ分子中のヒドロキシ基（−ＯＨ）の１つと反応し、それがグルコースにより示されるような環状（環の形の）形態になる結果として生じる。一般的な互変異性体対は、ケトン−エノール、アミド−ニトリル、ラクタム−ラクチム、複素環中のアミド−イミド酸互変異性（例えばグアニン、チミンおよびシトシンなどの核酸塩基において）、アミン−エナミンおよびエナミン−エナミンである。
【００３１】
本願の化合物は様々な互変異性体として示され得ることを理解されたい。化合物が互変異性形態を有する場合、全ての互変異性形態が本願の範囲中に含まれるものであり、その化合物の命名はあらゆる互変異性形態を排除しないことを意図することも理解されたい。
【００３２】
「安定な化合物」および「安定な構造」は、反応混合物からの有用な純度までの単離および有効な治療剤への製剤化を乗り越えるのに十分にロバストである化合物を示すことを意味する。
【００３３】
本明細書中で使用される場合、「類似体」という用語は、互いに構造的に類似であるが、（ある原子の異なる元素の原子によるかもしくは特定の官能基の存在下での置換またはある官能基の別の官能基による置換におけるように）組成が僅かに異なる化学的な化合物を指す。したがって、類似体は、参照化合物と機能および外観において同様であるかまたは同等である化合物である。
【００３４】
本明細書中で定められる場合、「誘導体」という用語は、例えば「胆汁酸誘導体」という用語において、共通するコア４員環構造を有し、本明細書中で記載のような様々な基で置換される化合物を指す。
【００３５】
本明細書中で定められる場合、「代謝産物」という用語は、例えば「胆汁酸代謝産物」という用語において、本明細書中に記載の化合物の、１つ以上のグルクロン酸または硫酸部分が本明細書中に記載の胆汁酸化合物に連結される、グルクロン酸抱合および硫酸化誘導体を指す。グルクロン酸部分は、胆汁酸化合物のヒドロキシル基と、グリコシド結合を通じて胆汁酸化合物に連結され得る（例えば、３−ヒドロキシル、７−ヒドロキシル、１２−ヒドロキシルおよび／または１５−ヒドロキシル）。胆汁酸化合物の硫酸化誘導体は、ヒドロキシル基の硫酸化を通じて形成され得る（例えば３−ヒドロキシル、７−ヒドロキシル、１２−ヒドロキシルおよび／または１５−ヒドロキシル）。胆汁酸代謝産物の例としては、本明細書中に記載の胆汁酸化合物の、３−Ｏ−グルクロニド、７−Ｏ−グルクロニド、１２−Ｏ−グルクロニド、１５−Ｏ−グルクロニド、３−Ｏ−７−Ｏ−グルクロニド、３−Ｏ−１２−Ｏ−グルクロニド、３−Ｏ−１５−Ｏ−グルクロニド、７−Ｏ−１２−Ｏ−グルクロニド、７−Ｏ−１５−Ｏ−グルクロニド、１２−Ｏ−１５−Ｏ−グルクロニド、３−Ｏ−７−Ｏ−１２−Ｏ−グルクロニド、３−Ｏ−７−Ｏ−１５−Ｏ−グルクロニドおよび７−Ｏ−１２−Ｏ−１５−Ｏ−グルクロニドおよび本明細書中に記載の胆汁酸化合物の、３−硫酸塩、７−硫酸塩、１２−硫酸塩、１５−硫酸塩、３，７−重硫酸塩、３，１２−重硫酸塩、３，１５−重硫酸塩、７，１２−重硫酸塩、７，１５−重硫酸塩、３，７，１２−トリ硫酸塩、３，７，１５−トリ硫酸塩、７，１２，１５−トリ硫酸塩が挙げられるが限定されない。
【００３６】
「生物学的等価体」という用語は、原子または原子の基を、別の、広くは同様の原子または原子の基で交換した結果生じる化合物を指す。生物学的等価置換は、物理化学的にまたは形態的に基づき得る。カルボン酸生物学的等価体の例としては、アシルスルホンイミド、テトラゾール、スルホネートおよびホスホネートが挙げられる。例えば、ＰａｔａｎｉおよびＬａＶｏｉｅ，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．９６，３１４７−３１７６（１９９６）を参照のこと。
【００３７】
本明細書中で使用される場合、「薬学的に許容可能な塩」は、その酸または塩基性塩を作製することによって親化合物が修飾される本願の化合物の誘導体を指す。薬学的に許容可能な塩の例としては、塩基性残基の鉱物または有機酸塩、例えばアミン；酸性残基のアルカリまたは有機塩、例えばカルボン酸などが挙げられるが限定されない。薬学的に許容可能な塩としては、例えば無毒性無機または有機酸から形成される親化合物の従来の無毒性塩または四級アンモニウム塩が挙げられる。例えば、このような従来の無毒性塩としては、２−アセトキシ安息香酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、酢酸、アスコルビン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、重炭酸、炭酸、クエン酸、エデト酸、エタンジスルホン酸、エタンスルホン酸、フマル酸、グルコヘプトン酸、グルコン酸、グルタミン酸、グリコール酸、グリコールアルサニル酸（ｇｌｙｃｏｌｌｙａｒｓａｎｉｌｉｃ）、ヘキシルレゾルシン酸、ヒドラバミン（ｈｙｄｒａｂａｍｉｃ）酸、臭化水素酸、塩酸、ヨウ化水素酸、ヒドロキシマレイン酸、ヒドロキシナフトエ酸、イセチオン酸、乳酸、ラクトビオン酸、ラウリルスルホン酸、マレイン酸、リンゴ酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、ナプシル酸、硝酸、シュウ酸、パモ酸、パントテン酸、フェニル酢酸、リン酸、ポリガラクツロン酸、プロピオン酸、サリチル酸、ステアリン酸、スバセチン酸（ｓｕｂａｃｅｔｉｃ）、コハク酸、スルファミン酸、スルファニル酸、硫酸、タンニン酸、酒石酸およびトルエンスルホン酸から選択される無機および有機酸由来のものが挙げられるが限定されない。
【００３８】
本願の薬学的に許容可能な塩は、従来の化学的方法によって、塩基性または酸性部分を含有する親化合物から合成され得る。一般に、このような塩は、これらの化合物の遊離酸または塩基形態を水中でもしくは有機溶媒中で、もしくはこれら２つの混合液中で化学両論的量の適切な塩基または酸と反応させることによって調製され得；一般に、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノールまたはアセトニトリルのような非水性媒体が好ましい。適切な塩のリストはＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ  ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ，ＵＳＡ，１４４５ページ（１９９０）で見出される。
【００３９】
本明細書中で使用される場合、「アミノ酸抱合体」という用語は、何らかの適切なアミノ酸との本願の化合物の抱合体を指す。タウリン（ＮＨ（ＣＨ２）２ＳＯ３Ｈ）、グリシン（ＮＨＣＨ２ＣＯ２Ｈ）およびサルコシン（Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＯ２Ｈ）はアミノ酸抱合体の例である。本化合物の適切なアミノ酸抱合体は、胆汁または腸液中での完全性の向上というさらなる長所を有する。適切なアミノ酸は、タウリン、グリシンおよびサルコシンに限定されない。本願は本願の化合物のアミノ酸抱合体を包含する。
【００４０】
本願の化合物は、プロドラッグまたは生理学的に同等な誘導体も含む。「プロドラッグ」または「生理学的に同等な誘導体」は、インビボで代謝により変換されて活性薬物を生成させる薬物の前駆形態を含む。本願は、本願の方法で使用されるＴＧＲ５修飾化合物にインビボで変換されるプロドラッグの使用をさらに企図する（例えば、Ｒ．Ｂ．Ｓｉｌｖｅｒｍａｎ，１９９２，Ｔｈｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｃｔｉｏｎ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｈａｐ．８）。このようなプロドラッグは、生体分布（例えば一般的には脳血管関門を横断しない化合物が脳血管関門を横断できるようにするため）またはＴＧＲ５修飾化合物の薬物動態を変化させるために使用され得る。例えば、陰イオン基、例えばカルボン酸基、硫酸基またはスルホン酸基などは、例えばアルキル基（例えばメチル基）またはフェニル基でエステル化されて、エステルを生成させ得る。エステルが対象に投与される場合、エステルは酵素によるかまたは非酵素的に、還元的に、または加水分解により切断されて、陰イオン基が現れる。このようなエステルは環状、例えば環状硫酸エステルまたはスルホンであり得るか、２つ以上の陰イオン部分が連結基を通じてエステル化され得る。陰イオン基は、切断されて、中間体ＴＧＲ５修飾化合物を見せる部分（例えばアシルオキシメチルエステル）でエステル化され得、続いて分解して、活性ＴＧＲ５修飾化合物を生じさせ得る。一実施形態において、プロドラッグは、カルボン酸、硫酸またはスルホン酸の還元型であり、例えばアルコールまたはチオールであり、これはインビボでＴＧＲ５修飾化合物に酸化される。さらに、陰イオン部分は、インビボで能動的に輸送される基または標的臓器により選択的に取り込まれる基へとエステル化され得る。
【００４１】
「本願の化合物」という用語は、本明細書中に記載の式を有する化合物を指す。
【００４２】
「ＴＧＲ５修飾物質」という用語は、ＴＧＲ５受容体と相互作用する何らかの化合物を意味する。相互作用は、ＴＧＲ５受容体のアンタゴニス、アゴニスト、部分的アゴニストまたはインバースアゴニストとして作用する化合物に限定されない。一態様において、本願の化合物は、ＴＧＲ５受容体のアンタゴニスとして作用する。別の態様において、本願の化合物は、ＴＧＲ５受容体のアゴニストとして作用する。別の態様において、本願の化合物は、ＴＧＲ５受容体の部分的アゴニストとして作用する。別の態様において、本願の化合物は、ＴＧＲ５受容体のインバースアゴニストとして作用する。
【００４３】
リガンドのプロファイル、従来的には内因性または合成プロファイルは、最初に１９６６年にＦｕｒｃｈｇｏｔｔにより記載されるその固有の効力「ｅ」により特徴づけられる。これは、同じ数の受容体を占有しながら、様々なリガンドが、種々の生物学的反応を生じさせる度合いを表すために使用される。一般に、「アゴニスト」という用語は、別の分子または受容体部位の活性を促進する化合物を意味する。古典的な定義によるアゴニストは、オルトステリック、アロステリック、インバースまたはコ−アゴニストが受容体へ結合する特性を有するにせよ、有しないにせよ、その受容体状態を変化させ、結果的に生物学的作用を生じさせる。結果として、アゴニズムは、生物学的作用を生じさせるためのアゴニストまたはリガンドの特性として定められる。対照的に、「アンタゴニス」は基本的に、同じ受容体巨大分子に対して親和性が高いが、固有の効力が非常に低いかまたは無視できるアゴニストであり、したがってアゴニストの生物学的作用を立体的に妨害する。特性として、アンタゴニズムは、機能的または生理学的であり得、アゴニストは、前者における受容体部位に対して直接的な競合を有し、後者では異なる受容体−メッセンジャー系を介して反対の効果を有する。より具体的に言うと、ＴＧＲ５アゴニストは、ＴＧＲ５に結合する受容体リガンドまたは化合物であり、受容体を発現する細胞において環状アデノシン一リン酸（ｃＡＭＰ）の濃度を少なくとも２０％増加させる。逆に、ＴＧＲ５アンタゴニスは、アゴニストの活性に拮抗するかまたはこれを阻止し、それによりｃＡＭＰの濃度の低下を引き起こす化合物である。
【００４４】
本願は、ＴＧＲ５受容体修飾活性を有する化合物および、代謝疾患、炎症性疾患、自己免疫疾患、心疾患、腎臓病、癌および消化器疾患を含む様々な疾患を処置および／または予防するためのそれらの使用に関する。さらに、本願は、本明細書中に記載の式の化合物に関する。
【００４５】
「薬学的に許容可能な」という句は、当技術分野で認められている。ある一定の実施形態において、この用語は、健全な医学的判断の範囲内で、合理的なベネフィット／リスク比と釣り合っている、過剰な毒性、刺激、アレルギー反応もしくは他の問題または副作用なくヒトおよび動物の組織と接触させる使用に適切である組成物、ポリマーおよび他の材料および／または剤型を含む。
【００４６】
「薬学的に許容可能な担体」という句は、当技術分野で認められており、ある臓器または身体の一部から別の臓器または身体の一部に何らかの対象組成物を運搬するかまたは輸送することに関与する、例えば薬学的に許容可能な材料、組成物またはビヒクル、例えば液体または固形充填剤、希釈剤、賦形剤、溶媒または封入材料などを含む。各担体は、対象組成物の他の成分と適合し、患者に害を与えないという意味において「許容可能」でなければならない。ある一定の実施形態において、薬学的に許容可能な担体は非発熱性である。薬学的に許容可能な担体となり得る材料の一部の例としては、（１）糖、例えばラクトース、グルコースおよびスクロース；（２）デンプン、例えばコーンスターチおよびジャガイモデンプン；（３）セルロースおよびその誘導体、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよび酢酸セルロース；（４）粉末化トラガカント；（５）麦芽；（６）ゼラチン；（７）タルク；（８）賦形剤、例えばカカオバターおよび坐薬ワックス；（９）油、例えばピーナツ油、綿実油、ヒマワリ油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油およびダイズ油；（１０）グリコール、例えばプロピレングリコール；（１１）ポリオール、例えばグリセリン、ソルビトール、マンニトールおよびポリエチレングリコール；（１２）エステル、例えばオレイン酸エチルおよびラウリン酸エチル；（１３）寒天；（１４）緩衝剤、例えば水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウム；（１５）アルギン酸；（１６）発熱物質不含水；（１７）等張食塩水；（１８）リンゲル液；（１９）エチルアルコール；（２０）リン酸緩衝液；および（２１）製剤処方で使用される他の無毒性の適合物質が挙げられる。
【００４７】
「組成物」または「薬学的に許容可能な組成物」は、本願の化合物またはその塩、溶媒和物、エステル、互変異性体、アミノ酸抱合体または代謝産物を含有する処方物である。一実施形態において、本医薬組成物は、バルクまたは単位剤型である。単位剤型は、例えばカプセル、ＩＶバッグ、錠剤、エアロゾル吸入器の単ポンプまたはバイアルを含む様々な形態の何れかである。組成物の単位用量中の活性成分（例えば本願の化合物またはその塩の処方物）の量は有効量であり、含まれる特定の処置に従い変動する。当業者にとって当然のことながら、患者の年齢および状態に依存して投与量について通常の変更を行うことが必要とされることがある。投与量は投与経路にも依存する。経口、眼内、点眼、肺、直腸、非経口、経皮、皮下、静脈内、筋肉内、腹腔内、鼻腔内などを含め、様々な経路が企図される。本願の化合物の局所または経皮投与のための剤型としては、粉末、噴霧、軟膏、ペースト、クリーム、ローション、ゲル、溶液、パッチおよび吸入薬が挙げられる。別の実施形態において、滅菌条件下で薬学的に許容可能な担体および必要とされる何らかの保存剤、緩衝液または噴霧剤と活性化合物を混合する。
【００４８】
「処置すること」という用語は、本明細書中で使用される場合、病状または疾患状態を、緩和する、和らげる、軽減する、排除する、調節する、または改善する、すなわち病状または疾患状態の軽快を引き起こすことを意味する。
【００４９】
「予防する」という用語は、本明細書中で使用される場合、特に患者または対象が病状または疾患状態に罹患し易いか、または罹患するリスクがある場合、患者または対象での発症から、完全にまたはほぼ完全に病状または疾患状態を不活性化させることを意味する。予防することは、病状または疾患状態の発現を阻害する、すなわち阻止すること、および例えば既に病状または疾患状態が存在し得る場合、病状または疾患状態を緩和するかまたは改善させること、すなわち病状または疾患状態の軽快を引き起こすことも含み得る。
【００５０】
「リスクを低下させる」という用語は、本明細書中で使用される場合、特に患者または対象においてこのような発症が起こり易いときに、患者での中枢神経系疾患、炎症性疾患および／または代謝疾患発症の確率または可能性を低くすることを意味する。
【００５１】
「併用療法」（または同時治療）は、これらの治療剤（すなわち本願の化合物および少なくとも第２の薬剤）の同時作用からの有益な効果を提供することを意図する具体的な治療計画の一部としての、本願の化合物および少なくとも第２の薬剤の投与を含む。併用の有益な効果としては、治療剤の併用の結果起こる薬物動態または薬力学的な相互作用が挙げられるが限定されない。併用でのこれらの治療剤の投与は、一般的には、定められた期間にわたり行われる（通常は、選択される組み合わせに依存して、分、時間、日または週）。「併用療法」は、一般的にではないが、偶発的および任意に本願の組み合わせを生じさせる個別の単剤療法計画の一部として、これらの治療剤のうち２対以上の投与を包含するものとし得る。「併用療法」は、連続的に、すなわち各治療剤が異なる時間に投与される、これらの治療剤の投与ならびに、実質的に同時に、これらの治療剤、または少なくとも２つの治療剤を投与することを包含するものとする。実質的に同時投与は、例えば各治療剤の比率が固定されている単カプセルまたは各治療剤に対する複数の単カプセルを対象に投与することによって完遂され得る。各治療剤の連続的または実質的に同時である投与は、経口経路、静脈内経路、筋肉内経路および粘膜組織を通じた直接吸収を含むが限定されない何らかの適切な経路により達成し得る。これらの治療剤は、同じ経路によるかまたは異なる経路により投与し得る。例えば、選択される組み合わせの第１の治療剤は静脈内注射により投与され得、一方でこの組み合わせの他方の治療剤は経口投与し得る。あるいは、例えば全ての治療剤を経口投与し得るか、または全ての治療剤を静脈内注射により投与し得る。治療剤が投与される順序は厳格に重要なものではない。
【００５２】
「併用療法」はまた、他の生物学的活性成分および非薬物治療（例えば外科的手術または機械による処置）とのさらなる組み合わせでの上記のような治療剤の投与も包含する。併用療法が非薬物処置をさらに含む場合、非薬物処置は、治療剤および非薬物処置の組み合わせの相互作用からの有益な効果が達成される限り、何らかの適切な時間に行われ得る。例えば、適切なケースにおいて、治療剤の投与から非薬物処置が一時的に排除される場合、おそらく数日またはさらには数週間、有益な効果が依然として達成される。
【００５３】
本願の化合物または化合物の組み合わせの「治療的有効量」は、化合物の量（量または濃度）である。一実施形態において、治療的有効量の化合物が、処置を必要とする対象に投与される場合、疾患から生じる症状は、すぐにまたは１回以上の化合物の投与後に改善する。対象に投与しようとする化合物の量は、特定の障害、投与方式、もしあれば同時投与される化合物および対象の特徴、例えば総体的健康状態、他の疾患、年齢、性別、遺伝子型、体重および薬物に対する耐容性に依存する。当業者は、これらおよび他の要因に依存して適切な投与量を決定することが可能である。
【００５４】
「予防的有効量」という用語は、疾患のリスクを防ぐかまたは低下させるために投与される本願の化合物または化合物の組み合わせの量（量または濃度）、−言い換えると、予防的または予防効果を提供するために必要とされる量を意味する。対象に投与しようとする本化合物の量は、特定の障害、投与方式、もしあれば同時投与される化合物および対象の特徴、例えば総体的健康状態、他の疾患、年齢、性別、遺伝子型、体重および薬物に対する耐容性に依存する。当業者は、これらおよび他の要因に依存して適切な投与量を決定することが可能である。
【００５５】
「フラッシュ用量（ｆｌａｓｈ  ｄｏｓｅ）」という用語は、急速分散剤型である化合物製剤を指す。
【００５６】
「対象」は、哺乳動物、例えばヒト、愛玩動物（例えばイヌ、ネコ、鳥類など）、家畜（例えばウシ、ヒツジ、ブタ、ウマ、家禽など）および実験動物（例えばラット、マウス、モルモット、鳥類など）を含む。一般的に対象はヒトである。
【００５７】
化合物および組成物
一態様において、本願は、式Ａの化合物：
【化２】
2018518537.tif 000004
または薬学的に許容可能なその塩、溶媒和物、エステル、互変異性体、アミノ酸抱合体または代謝産物（式中：
Ａは、
【化３】
2018518537.tif 000005
オキサジアゾロニルまたはイソオキサゾロニルであり、「＊」でマークされた炭素原子はＡが結合される炭素原子に結合され；
ｎは０、１または２であり；
Ｒ１はＨまたはＯＨであり；
Ｒ２はＨまたはＯＨであり；
Ｒ３は、ＣＲ１１Ｒ１２Ｃ（Ｏ）ＯＨ、Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ３１、テトラゾリル、オキサジアゾリル、オキサジアゾロニルまたは、ＮＨＳ（Ｏ）２−（Ｃ１−Ｃ３）アルキルで任意選択により置換されるチアゾリジン−ジオニルであり；
Ｒ１１およびＲ１２はそれぞれ独立に、Ｈ、Ｆ、ＯＨ、ＣＨ２ＯＨまたはＣＨ２Ｆであり、ただし、Ｒ１１およびＲ１２は両方ともＨではなく；
Ｒ３１はＯＨ、（ＣＨ２）ｐＯＨまたは（ＣＨ２）ｐＯＳＯ３Ｈであり；
ｐは１または２である）に関する。
（１）例えば、ｎは０である。
（２）例えば、ｎは１または２である。例えば、ｎは１である。例えばｎは２である。
（３）例えば、Ｒ１およびＲ２はそれぞれＨである。
（４）例えば、Ｒ１はＨであり、Ｒ２はＯＨである。
（５）例えば、Ｒ２はＨであり、Ｒ１はＯＨである。
（６）例えば、Ｒ２はＨであり、Ｒ１はα−ＯＨである。
（７）例えば、Ｒ２はＨであり、Ｒ１はβ−ＯＨである。
（８）例えば、Ｒ１およびＲ２はそれぞれＯＨである。
（９）例えば、Ｒ１はα−ＯＨであり、Ｒ２はＯＨである。
（１０）例えば、Ｒ１はβ−ＯＨであり、Ｒ２はＯＨである。
（１１）例えば、Ｒ３はＣＲ１１Ｒ１２Ｃ（Ｏ）ＯＨである。
（Ｉ１）例えば、Ｒ１１はＨであり、Ｒ１２はＦ、ＯＨ、ＣＨ２ＯＨまたはＣＨ２Ｆである。
（Ｉ２）例えば、Ｒ１１はＨであり、Ｒ１２はα−Ｆ、α−ＯＨ、α−ＣＨ２ＯＨまたはα−ＣＨ２Ｆである。
（Ｉ３）例えば、Ｒ１１はＨであり、Ｒ１２はβ−Ｆ、β−ＯＨ、β−ＣＨ２ＯＨまたはβ−ＣＨ２Ｆである。
（Ｉ４）例えば、Ｒ１１はＦであり、Ｒ１２はＦ、ＣＨ２ＯＨまたはＣＨ２Ｆである。
（Ｉ５）例えば、Ｒ１１はＦであり、Ｒ１２はＦである。
（Ｉ６）例えば、Ｒ１１はＦであり、Ｒ１２はＣＨ２ＯＨまたはＣＨ２Ｆである。
（Ｉ７）例えば、Ｒ１１はＦであり、Ｒ１２はα−ＣＨ２ＯＨまたはα−ＣＨ２Ｆである。
（Ｉ８）例えば、Ｒ１１はＦであり、Ｒ１２はβ−ＣＨ２ＯＨまたはβ−ＣＨ２Ｆである。
（Ｉ９）例えば、Ｒ１１はＯＨであり、Ｒ１２はＣＨ２ＯＨまたはＣＨ２Ｆである。
（Ｉ１０）例えば、Ｒ１１はＯＨであり、Ｒ１２はα−ＣＨ２ＯＨまたはα−ＣＨ２Ｆである。
（Ｉ１１）例えば、Ｒ１１はＯＨであり、Ｒ１２はβ−ＣＨ２ＯＨまたはβ−ＣＨ２Ｆである。
（Ｉ１２）例えば、Ｒ１１はＣＨ２ＯＨであり、Ｒ１２はＣＨ２ＯＨまたはＣＨ２Ｆである。
（Ｉ１３）例えば、Ｒ１１はＣＨ２ＯＨであり、Ｒ１２はＣＨ２ＯＨである。
（Ｉ１４）例えば、Ｒ１１はＣＨ２ＯＨであり、Ｒ１２はＣＨ２Ｆである。
（Ｉ１５）例えば、Ｒ１１はＣＨ２ＯＨであり、Ｒ１２はα−ＣＨ２Ｆである。
（Ｉ１６）例えば、Ｒ１１はＣＨ２ＯＨであり、Ｒ１２はβ−ＣＨ２Ｆである。
（Ｉ１７）例えば、Ｒ１１はＣＨ２Ｆであり、Ｒ１２はＣＨ２Ｆである。
（１２）例えば、Ｒ３は、テトラゾリル、オキサジアゾリル、オキサジアゾロニルまたはＮＨＳ（Ｏ）２−（Ｃ１−Ｃ３）アルキルで任意選択により置換されるチアゾリジン−ジオニルである。例えば、Ｒ３は、テトラゾリル、１，３，４−オキサジアゾリル、１，２，４−オキサジアゾロニルまたは、ＮＨＳ（Ｏ）２ＣＨ３で置換されるチアゾリジン−２，４−ジオニルである。
（１３）例えば、Ｒ３はＣ（Ｏ）ＮＨＲ３１である。
（ＩＩＩ１）例えば、Ｒ３１はＯＨである。
（ＩＩＩ２）例えば、Ｒ３１は（ＣＨ２）ｐＯＨである。
（ＩＩＩ３）例えば、Ｒ３１は（ＣＨ２）２ＯＨである。
（ＩＩＩ４）例えば、Ｒ３１は（ＣＨ２）ｐＯＳＯ３Ｈである。
（ＩＩＩ５）例えば、Ｒ３１は（ＣＨ２）２ＯＳＯ３Ｈである。
（ＩＩＩ６）例えば、ｐは１である。
（ＩＩＩ７）例えば、ｐは２である。
（１４）例えば、Ａは、
【化４】
2018518537.tif 000006
である。
（１５）例えば、Ａは、オキサジアゾロニルまたはイソオキサゾロニルである。例えば、Ａは、１，２，４−オキサジアゾロニルまたはイソオキサゾロニルである。
【００５８】
例えば、Ａ、ｎ、ｐ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ１１、Ｒ１２およびＲ３１のうち１つに対して定められる各置換基は、Ａ、ｎ、ｐ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ１１、Ｒ１２およびＲ３１の他のものについて定められる置換基の何れかと組み合わせられ得る。
（１６）例えば、ｎは０であり、Ｒ３はＣＲ１１Ｒ１２Ｃ（Ｏ）ＯＨであり、Ｒ１１およびＲ１２はそれぞれ、（Ｉ１）〜（Ｉ１７）の何れかで定められるとおりである。
（１７）例えば、ｎは１であり、Ｒ３はＣＲ１１Ｒ１２Ｃ（Ｏ）ＯＨであり、Ｒ１１およびＲ１２はそれぞれ、（Ｉ１）〜（Ｉ１７）の何れかで定められるとおりである。
（１８）例えば、ｎは１または２であり、Ｒ３は、テトラゾリル、オキサジアゾリル、オキサジアゾロニルまたは、ＮＨＳ（Ｏ）２−（Ｃ１−Ｃ３）アルキルで任意選択により置換されるチアゾリジン−ジオニルである。
（１９）例えば、ｎは０であり、Ｒ３はオキサジアゾロニルである。
（２０）例えば、ｎは１であり、Ｒ３はＣ（Ｏ）ＮＨＲ３１であり、Ｒ３１は（ＩＩＩ１）〜（ＩＩＩ５）の何れかで定められるとおりである。
【００５９】
例えば、式Ａの化合物は、式Ｉの化合物：
【化５】
2018518537.tif 000007
または薬学的に許容可能なその塩、溶媒和物、エステル、互変異性体、アミノ酸抱合体または代謝産物（式中：
Ｒ１１およびＲ１２はそれぞれ独立に、Ｈ、Ｆ、ＯＨ、ＣＨ２ＯＨまたはＣＨ２Ｆであり、ただし、Ｒ１１およびＲ１２は両方ともＨではなく；
Ｒ１３はＨまたはＯＨである）である。
（Ｉ１）例えば、Ｒ１１はＨであり、Ｒ１２はＦ、ＯＨ、ＣＨ２ＯＨまたはＣＨ２Ｆである。
（Ｉ２）例えば、Ｒ１１はＨであり、Ｒ１２はα−Ｆ、α−ＯＨ、α−ＣＨ２ＯＨまたはα−ＣＨ２Ｆである。
（Ｉ３）例えば、Ｒ１１はＨであり、Ｒ１２はβ−Ｆ、β−ＯＨ、β−ＣＨ２ＯＨまたはβ−ＣＨ２Ｆである。
（Ｉ４）例えば、Ｒ１１はＦであり、Ｒ１２はＦ、ＣＨ２ＯＨまたはＣＨ２Ｆである。
（Ｉ５）例えば、Ｒ１１はＦであり、Ｒ１２はＦである。
（Ｉ６）例えば、Ｒ１１はＦであり、Ｒ１２はＣＨ２ＯＨまたはＣＨ２Ｆである。
（Ｉ７）例えば、Ｒ１１はＦであり、Ｒ１２はα−ＣＨ２ＯＨまたはα−ＣＨ２Ｆである。
（Ｉ８）例えば、Ｒ１１はＦであり、Ｒ１２はβ−ＣＨ２ＯＨまたはβ−ＣＨ２Ｆである。
（Ｉ９）例えば、Ｒ１１はＯＨであり、Ｒ１２は、ＣＨ２ＯＨまたはＣＨ２Ｆである。
（Ｉ１０）例えば、Ｒ１１はＯＨであり、Ｒ１２は、α−ＣＨ２ＯＨまたはα−ＣＨ２Ｆである。
（Ｉ１１）例えば、Ｒ１１はＯＨであり、Ｒ１２は、β−ＣＨ２ＯＨまたはβ−ＣＨ２Ｆである。
（Ｉ１２）例えば、Ｒ１１はＣＨ２ＯＨであり、Ｒ１２はＣＨ２ＯＨまたはＣＨ２Ｆである。
（Ｉ１３）例えば、Ｒ１１はＣＨ２ＯＨであり、Ｒ１２はＣＨ２ＯＨである。
（Ｉ１４）例えば、Ｒ１１はＣＨ２ＯＨであり、Ｒ１２はＣＨ２Ｆである。
（Ｉ１５）例えば、Ｒ１１はＣＨ２ＯＨであり、Ｒ１２はα−ＣＨ２Ｆである。
（Ｉ１６）例えば、Ｒ１１はＣＨ２ＯＨであり、Ｒ１２はβ−ＣＨ２Ｆである。
（Ｉ１７）例えば、Ｒ１１はＣＨ２Ｆであり、Ｒ１２はＣＨ２Ｆである。
（Ｉ１８）例えば、Ｒ１３はＨである。
（Ｉ１９）例えば、Ｒ１３はＯＨである。
【００６０】
例えば、Ｒ１１、Ｒ１２およびＲ１３のうち１つに対して定められる各置換基は、Ｒ１１、Ｒ１２およびＲ１３のうち他の２つに対して定められる置換基の何れかと組み合わせられ得る。
（Ｉ２０）例えば、Ｒ１３はＨであり、Ｒ１１およびＲ１２はそれぞれ、（Ｉ１）〜（Ｉ１７）の何れかで定められるとおりである。
（Ｉ２１）例えば、Ｒ１３はＯＨであり、Ｒ１１およびＲ１２はそれぞれ、（Ｉ１）〜（Ｉ１７）の何れかで定められるとおりである。
【００６１】
例えば、式Ａの化合物は、式ＩＩの化合物：
【化６】
2018518537.tif 000008
または薬学的に許容可能なその塩、溶媒和物、エステル、互変異性体、アミノ酸抱合体または代謝産物（式中：
ｑは０、１または２であり；
Ｒ２１およびＲ２２はそれぞれ独立に、ＨまたはＯＨであり；
Ｒ２３は、テトラゾリル、オキサジアゾリル、オキサジアゾロニルまたは、ＮＨＳ（Ｏ）２−（Ｃ１−Ｃ３）アルキルで任意選択により置換されるチアゾリジン−ジオニルである）である。
（ＩＩ１）例えば、ｑは０である。
（ＩＩ２）例えば、ｑは１である。
（ＩＩ３）例えば、ｑは２である。
（ＩＩ４）例えば、Ｒ２１およびＲ２２はそれぞれＨである。
（ＩＩ５）例えば、Ｒ２１はＨであり、Ｒ２２はＯＨである。
（ＩＩ６）例えば、Ｒ２２はＨであり、Ｒ２１はＯＨである。
（ＩＩ７）例えば、Ｒ２２はＨであり、Ｒ２１はα−ＯＨである。
（ＩＩ８）例えば、Ｒ２２はＨであり、Ｒ２１はβ−ＯＨである。
（ＩＩ９）例えば、Ｒ２１およびＲ２２はそれぞれＯＨである。
（ＩＩ１０）例えば、Ｒ２２はＯＨであり、Ｒ２１はα−ＯＨである。
（ＩＩ１１）例えば、Ｒ２２はＯＨであり、Ｒ２１はβ−ＯＨである。
（ＩＩ１２）例えば、Ｒ２３は、テトラゾリル、オキサジアゾリル、オキサジアゾロニルまたは、ＮＨＳ（Ｏ）２−（Ｃ１−Ｃ３）アルキルで任意選択により置換されるチアゾリジン−ジオニルである。例えば、Ｒ２３は、テトラゾリル、１，３，４−オキサジアゾリル、１，２，４−オキサジアゾロニルまたは、ＮＨＳ（Ｏ）２ＣＨ３により置換されるチアゾリジン−２，４−ジオニルである）である。
【００６２】
例えば、ｑ、Ｒ２１、Ｒ２２およびＲ２３のうち１つに対して定められる各置換基は、ｑ、Ｒ２１、Ｒ２２およびＲ２３の他の３つに対して定められる置換基の何れかと組み合わせられ得る。
（ＩＩ１３）例えば、ｑは０であり、およびＲ２１およびＲ２２はそれぞれ、（ＩＩ４）−（ＩＩ１１）の何れかで定められるとおりであり、Ｒ２３は（ＩＩ１２）で定められるとおりである。
（ＩＩ１４）例えば、ｑは０であり、Ｒ２１はＨであり、Ｒ２２はＨであり、Ｒ２３はオキサジアゾロニルである。
（ＩＩ１５）例えば、ｑは０であり、Ｒ２１はＨであり、Ｒ２２はＯＨであり、Ｒ２３はオキサジアゾロニルである。
（ＩＩ１６）例えば、ｑは１であり、Ｒ２１およびＲ２２はそれぞれ、（ＩＩ４）〜（ＩＩ１１）の何れかで定められるとおりであり、Ｒ２３は（ＩＩ１２）で定められるとおりである。
（ＩＩ１７）例えば、ｑは１であり、Ｒ２１はＨであり、Ｒ２２はＨであり、Ｒ２３は、テトラゾリル、オキサジアゾリル、オキサジアゾロニルまたは、ＮＨＳ（Ｏ）２−（Ｃ１−Ｃ３）アルキルで任意選択により置換されるチアゾリジン−ジオニルである。
（ＩＩ１８）例えば、ｑは１であり、Ｒ２１はＨであり、Ｒ２２はＯＨであり、Ｒ２３は、テトラゾリル、オキサジアゾリル、オキサジアゾロニルまたは、ＮＨＳ（Ｏ）２−（Ｃ１−Ｃ３）アルキルで任意選択により置換されるチアゾリジン−ジオニルである。
（ＩＩ１９）例えば、ｑは２であり、Ｒ２１およびＲ２２はそれぞれ、（ＩＩ４）〜（ＩＩ１１）の何れかで定められるとおりであり、Ｒ２３は（ＩＩ１２）で定められるとおりである。
（ＩＩ２０）例えば、ｑは２であり、Ｒ２１はＨであり、Ｒ２２はＨであり、Ｒ２３は、テトラゾリル、オキサジアゾリル、オキサジアゾロニルまたは、ＮＨＳ（Ｏ）２−（Ｃ１−Ｃ３）アルキルで任意選択により置換されるチアゾリジン−ジオニルである。
（ＩＩ２１）例えば、ｑは２であり、Ｒ２１はＯＨであり、Ｒ２２はＨであり、Ｒ２３は、テトラゾリル、オキサジアゾリル、オキサジアゾロニルまたは、ＮＨＳ（Ｏ）２−（Ｃ１−Ｃ３）アルキルで任意選択により置換されるチアゾリジン−ジオニルである。
（ＩＩ２２）例えば、ｑは２であり、Ｒ２１はＨであり、Ｒ２２はＯＨであり、Ｒ２３は、テトラゾリル、オキサジアゾリル、オキサジアゾロニルまたは、ＮＨＳ（Ｏ）２−（Ｃ１−Ｃ３）アルキルで任意選択により置換されるチアゾリジン−ジオニルである。
（ＩＩ２３）例えば、ｑは２であり、Ｒ２１はＯＨであり、Ｒ２２はＯＨであり、Ｒ２３は、テトラゾリル、オキサジアゾリル、オキサジアゾロニルまたは、ＮＨＳ（Ｏ）２−（Ｃ１−Ｃ３）アルキルで任意選択により置換されるチアゾリジン−ジオニルである。
【００６３】
例えば、式Ａの化合物は、式ＩＩＩの化合物：
【化７】
2018518537.tif 000009
または薬学的に許容可能なその塩、溶媒和物、エステル、互変異性体、アミノ酸抱合体または代謝産物（式中：
Ｒ３１はＯＨ、（ＣＨ２）ｐＯＨまたは（ＣＨ２）ｐＯＳＯ３Ｈであり；
ｐは１または２である）である。
（ＩＩＩ１）例えば、ｐは１である。
（ＩＩＩ２）例えば、ｐは２である。
（ＩＩＩ３）例えば、Ｒ３１はＯＨである。
（ＩＩＩ４）例えば、Ｒ３１は（ＣＨ２）ｐＯＨである。
（ＩＩＩ５）例えば、Ｒ３１は（ＣＨ２）２ＯＨである。
（ＩＩＩ６）例えば、Ｒ３１は（ＣＨ２）ｐＯＳＯ３Ｈである。
（ＩＩＩ７）例えば、Ｒ３１は（ＣＨ２）２ＯＳＯ３Ｈである。
【００６４】
例えば、ｐおよびＲ３１のうち１つに対して定められる各置換基は、ｐおよびＲ３１の他のものに対して定められる置換基の何れかと組み合わせられ得る。
（ＩＩＩ１７）例えば、ｐは１であり、Ｒ３１は（ＩＩＩ３）〜（ＩＩＩ７）で定められるとおりである。
（ＩＩＩ１８）例えば、ｐは２であり、Ｒ３１は（ＩＩＩ３）〜（ＩＩＩ７）で定められるとおりである。
【００６５】
代表的な本願の化合物を表１で列挙する。
【００６６】
【表１】
2018518537.tif 000010
【００６７】
【表２】
2018518537.tif 000011
【００６８】
【表３】
2018518537.tif 000012
【００６９】
【表４】
2018518537.tif 000013
【００７０】
【表５】
2018518537.tif 000014
【００７１】
一態様において、本願は本願の化合物を含み、この化合物は薬学的に許容可能な塩である。
【００７２】
本願の一態様は、本願の化合物または薬学的に許容可能なその塩、溶媒和物、エステル、互変異性体、アミノ酸抱合体または代謝産物と、少なくとも１つの薬学的に許容可能な賦形剤と、を含む組成物を含む。
【００７３】
本願の化合物の合成
本願は、本明細書中に記載の式のそれぞれの化合物の合成のための方法を提供する。本願はまた、実施例で示されるような次のスキームによる様々な開示される本願の化合物の合成のための詳細な方法も提供する。
【００７４】
組成物が特異的な構成要素を有する、含むまたは含有するように記載される記載を通じて、組成物はまた、引用される構成要素から基本的になるかまたはそれらからなることも企図される。同様に、具体的な工程段階を有するか、含むかまたは含有するものとして方法または工程が記載される場合、この工程はまた、引用される処理段階から基本的になるかまたはそれらからなる。さらに、段階の順序またはある一定の行動を行うための順序が、本願が操作可能である限り重要ではないことを理解すべきである。さらに、２つ以上の段階または行動を同時に行い得る。
【００７５】
本願の合成工程は、多岐にわたる官能基に対して耐えることができ、したがって様々な置換出発材料を使用し得る。工程は、一般に、工程全体の完了時または完了時付近で所望の最終化合物を提供するものの、ある一定の例においては、化合物をその薬学的に許容可能な塩、エステルまたはプロドラッグにさらに変換することが望ましいものであり得る。
【００７６】
本願の化合物は、標準的な合成方法および当業者にとって公知であるか本明細書中の教示に照らして当業者にとって明らかとなるであろう手順を使用することによって、市販の出発材料、文献で知られる化合物を使用して、または容易に調製される中間体から、様々な方法で調製され得る。有機分子の調製および官能基変換および操作のための標準的な合成方法および手順は、関連する科学文献から、または本分野の標準的教科書から得ることができる。何れか１つまたはいくつかのソースに限定されないものの、本明細書中で参照により組み込まれるＳｍｉｔｈ，Ｍ．Ｂ．，Ｍａｒｃｈ，Ｊ．，Ｍａｒｃｈ’ｓ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ，ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，５ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，２００１；およびＧｒｅｅｎｅ，Ｔ．Ｗ．，Ｗｕｔｓ，Ｐ．Ｇ．Ｍ．，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，３ｒｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９９などの古典的な教科書は、有用であり、当業者にとって公知の有機合成の認められている参考書である。合成方法の次の記載は、本願の化合物の調製のための一般的手順を例示しようとするものであり、限定するものではない。
【００７７】
本願の化合物は、当業者にとって馴染み深い様々な方法によって都合よく調製され得る。本明細書中に記載の式のそれぞれの化合物は、市販の出発材料または文献の手順を使用して調製され得る出発材料から次の手順に従い調製され得る。これらの手順は本願の代表的化合物の調製を示す。
【００７８】
本願で使用される略語は全て、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｂｙ  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，ＩｎｃまたはＭＥＲＣＫ  ＆  Ｃｏ．，ＩｎｃによるＭＥＲＣＫ  ＩＮＤＥＸまたは他の化学の書籍またはＡｌｄｒｉｃｈなどの化学物質業者による化学カタログにおいて、または当技術分野で公知の使用に従い、見出される。
【００７９】
使用および方法
本願は、対象において疾患を処置または予防するための薬剤の製造における、化合物または薬学的に許容可能な塩、溶媒和物、エステル、互変異性体、アミノ酸抱合体または代謝産物の使用を含む。本願はまた、本願の化合物または薬学的に許容可能な塩、溶媒和物、エステル、互変異性体、アミノ酸抱合体もしくは代謝産物を対象に投与することによって対象において疾患を処置または予防する方法も含む。
【００８０】
本願の一態様は、疾患が、ＴＧＲ５が関与する疾患、すなわち「ＴＧＲ−５介在性疾患」である、使用または方法を含む。一実施形態において、ＴＧＲ５介在性疾患は、ＴＧＲ５が関与する、代謝疾患、炎症性疾患、自己免疫疾患、心疾患、腎臓病、癌および胃腸疾患から選択される。
【００８１】
一態様において、代謝疾患は、肥満、糖尿病（および糖尿病から生じる合併症、例えば糖尿病性腎症、糖尿病性神経障害、糖尿病性網膜症など）、糖尿肥満、メタボリックシンドローム、前糖尿病インスリン抵抗性を含むインスリン抵抗性、高血圧および脂質異常症から選択される。一態様において、代謝疾患は肥満である。別の態様において、代謝疾患は糖尿病である。一態様において、糖尿病は前糖尿病およびＩＩ型糖尿病から選択される。一態様において、代謝疾患はメタボリックシンドロームである。一態様において、代謝疾患はインスリン抵抗性である。一態様において、代謝疾患は脂質異常症である。一態様において、代謝疾患は糖尿肥満である。「糖尿肥満」という用語は、対象が糖尿病および過体重の両方を有する状態を指す。
【００８２】
一態様において、炎症性疾患は、アレルギー、変形性関節症（ＯＡ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、虫垂炎、気管支喘息、膵炎、アレルギー性発疹および乾癬から選択される。
【００８３】
一態様において、自己免疫疾患は、関節リウマチ、多発性硬化症およびＩ型糖尿病から選択される。一態様において、自己免疫疾患はエリテマトーデスである。
【００８４】
一態様において、心疾患は、うっ血性心不全、心筋梗塞、アテローム性動脈硬化症、狭心症、動脈硬化および脳血管疾患（出血、脳卒中、脳血管の梗塞）から選択される。
【００８５】
一態様において、腎臓病は、糖尿病性腎症、慢性腎不全、糸球体腎炎、高血圧性腎硬化症、慢性糸球体腎炎、慢性移植糸球体症、慢性間質性腎炎および多嚢胞性腎疾患から選択される。
【００８６】
一態様において、胃腸疾患は、炎症性腸疾患（クローン病、潰瘍性大腸炎）、短腸症候群（放射線照射後の大腸炎）、顕微鏡的大腸炎、過敏性腸症候群（吸収不良）および細菌異常増殖から選択される。
【００８７】
一態様において、癌は、結直腸癌、肝臓癌、肝細胞癌、胆管細胞癌、腎臓癌、胃癌、膵臓癌、前立腺癌およびインスラノーマ（ｉｎｓｕｌａｎｏｍａ）から選択される。
【００８８】
一態様において、本願は、本願の化合物がＴＧＲ５アゴニストである、使用または方法を含む。
【００８９】
一態様において、本願は、化合物または組成物が対象に経口投与、眼内投与、点眼、非経口、静脈内または局所投与される、使用または方法を含む。一態様において、対象はヒトである。
【００９０】
本願は、対象に治療的有効量の本願の化合物を投与することを含む、使用または方法を含む。本願はまた、対象に予防的有効量の本願の化合物を投与することを含む、使用または方法も含む。
【００９１】
本願の化合物および組成物は、様々な経路で投与され得、例えば、経口、皮下、筋肉内、静脈内または腹腔内投与され得る。好ましい投与経路は、７０ｋｇ成人に対する、１日あたり約０．０１〜５０００ｍｇ、好ましくは５〜５００ｍｇの本願の化合物の１日用量での、経口、皮下および静脈内投与である。適切な用量は、単回１日用量で、または適切な間隔で与えられる分割用量として、例えば１日あたり２、３、４回以上の分割用量として投与され得る。
【００９２】
本願の化合物を含有する医薬組成物を調製するために、不活性および薬学的に許容可能な担体を使用する。薬学的担体は固形または液体の何れかであり得る。固形製剤としては、例えば、粉剤、錠剤、分散性顆粒剤、カプセル、カシェーおよび坐薬が挙げられる。固形担体は、希釈剤、香味料、溶解剤、滑沢剤、懸濁剤、結合剤または錠剤崩壊剤としても作用し得る１つ以上の物質であり得；これは封入材料でもあり得る。
【００９３】
粉末において、担体は一般に、微粉化活性成分、例えば本願の化合物とともに混合物中にある微粉化固形物である。錠剤において、活性成分は、適切な割合で必要な結合特性を有する担体と混合され、所望の形態およびサイズに圧縮される。
【００９４】
坐薬の形態の医薬組成物を調製するために、脂肪酸グリセリドおよびカカオバターの混合物などの低融点ワックスを最初に溶融させ、例えば撹拌することにより活性成分がそこで分散される。次に、溶融した均一な混合物を都合の良いサイズの鋳型に注ぎ、冷却して固化させる。
【００９５】
粉末および錠剤は、好ましくは約５重量％〜約７０重量％の間の本願の化合物の活性成分を含有する。適切な担体としては、例えば、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ラクトース、糖、ペクチン、デキストリン、デンプン、トラガカント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、低融点ワックス、カカオバターなどが挙げられる。
【００９６】
本医薬組成物は、本願の化合物（他の担体ありまたはなし）が担体により取り囲まれるカプセルを提供する担体としての封入材料を伴う活性化合物の処方物を含み得、担体が化合物と会合するようになっている。同様に、カシェーも含まれ得る。経口投与に適切な固形剤型として錠剤、粉剤、カシェーおよびカプセルを使用し得る。
【００９７】
液体医薬組成物としては、例えば、経口、眼内、点眼または非経口投与に適切な溶液、経口投与に適切な懸濁液およびエマルションが挙げられる。水、緩衝水、生理食塩水、ＰＢＳ、エタノールまたはプロピレングリコールを含む活性成分の滅菌水溶液または溶媒中の活性成分の滅菌溶液は、非経口投与に適切な液体組成物の例である。本組成物は、ｐＨ調整および緩衝剤、等張性調整剤、湿潤剤、界面活性剤など、生理的状態に近付けるために、必要に応じて薬学的に許容可能な補助物質を含有し得る。
【００９８】
滅菌溶液は、所望の溶媒系中で活性成分（例えば本願の化合物）を溶解させ、次いで得られた溶液を膜フィルターに通してそれを滅菌することによって、あるいは滅菌条件下で既に滅菌された溶媒中で滅菌化合物を溶解させることによって調製され得る。得られる水溶液は、それ自身使用のためにパッケージ化され得るかまたは凍結乾燥され得、凍結乾燥製剤を投与前に滅菌水性担体と合わせる。本製剤のｐＨは一般的に、３〜１１、より好ましくは５〜９、最も好ましくは７〜８となろう。
【００９９】
本願の化合物を含有する医薬組成物は、予防的および／または治療的処置のために投与され得る。治療的適用において、組成物は、疾患およびその合併症の症状を治癒させる、逆転させる、または少なくとも部分的に遅延もしくは不活性化させるのに十分な量で投与される。疾患およびその合併症の症状を治癒させる、逆転させる、または少なくとも部分的に遅延もしくは不活性化させるのに的確な量は、「治療的有効用量」として定められる。予防的適用において、組成物は、疾患およびその合併症の症状を予防するのに十分な量で投与される。疾患およびその合併症の症状を予防するのに的確な量は、「予防的有効用量」として定められる。
【０１００】
治療用途に有効な量は、疾患または状態の重症度および患者の体重および全般的状態に依存するが、一般に７０ｋｇの患者に対して化合物約０．１ｍｇ〜約２，０００ｍｇ／日の範囲であり、７０ｋｇの患者に対して化合物約５ｍｇ〜約５００ｍｇ／日の投与量がより一般的に使用される。
【０１０１】
予防的な適用において、疾患の発症を遅延させるかまたは予防するのに十分な量で、本願の化合物を含有する医薬組成物を疾患に罹患し易いかまたは疾患発症のリスクがある患者に投与する。この使用において、本化合物の的確な量は、繰り返すと、患者の健康状態および体重に依存するが、一般に７０ｋｇの患者に対して約０．１ｍｇ〜約２，０００ｍｇ／日、より一般的には７０ｋｇの患者に対して約５ｍｇ〜約５００ｍｇ／日の範囲である。
【０１０２】
本組成物の単回または複数回投与は、処置を行う医師により選択される用量レベルおよびパターンで行い得る。何れにしても、本製剤処方は、患者において疾患を効果的に処置または予防するのに十分な量の本願の化合物を提供するべきである。
【０１０３】
本願はまた、本願の使用および方法に従い疾患を予防または処置するためのキットも提供する。一態様において、本願は、対象において疾患を処置または予防するためのキットを含み、このキットは、本願の化合物またはその塩、溶媒和物、エステル、互変異性体、アミノ酸抱合体または代謝産物を含む。本キットは、一般的には、有効量の本願の化合物を含有する医薬組成物ならびに、処置され得る患者のタイプ、スケジュール（例えば用量および頻度）および投与経路などの記載を含め、本医薬組成物の投薬方法の指示書を含有する情報資料を含む。
【０１０４】
本明細書中で引用される全ての刊行物および特許文書は、このような刊行物または文書のそれぞれが具体的に、および個別に、参照により本明細書中に組み込まれることを示すかのように、参照により本明細書中に組み込まれる。刊行物および特許文書の引用は、何れも関連先行技術であることを受け入れることを意図するものではないし、その内容または日付に関して何らかの受け入れを構成するものでもない。本願をここで書面により記載しているが、当業者は、本願が様々な実施形態において実施され得、前述の説明および以下の実施例が、例示目的のものであり、続く特許請求の範囲の限定ではないことを認識するであろう。
【実施例】
【０１０５】
実施例１：化合物１の合成
【化８】
2018518537.tif 000015
メチル３α，７α，１２α−トリメトキシメチルオキシ−６α−エチル−５β−コラン−２４−オアート（２）
ＭｅＯＨ（１５０ｍＬ）中の３α，７α，１２α−トリヒドロキシ−６α−エチル−５β−コラン−２４−オイン酸（６−ＥＣＡ、１）（２０．０ｇ、４５．９ｍｍｏｌ）の溶液に、ｐ−トルエンスルホン酸（０．４４ｇ、２．２９ｍｍｏｌ）を添加し、得られた混合物を超音波照射下で２時間反応させた。ＭｅＯＨを減圧下で除去し、残渣をＡｃＯＥｔ（２００ｍＬ）中で溶解させ、飽和ＮａＨＣＯ３（２００ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（２００ｍＬ）およびブライン（２００ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。次いで残渣をＣＨ２Ｃｌ２（１８０ｍＬ）中で溶解させ、得られた溶液をジイソプロピルエチルアミン（９４ｍＬ、５５０．５ｍｍｏｌ）、４−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）−ピリジン（０．５６ｇ、４．６ｍｍｏｌ）およびメトキシメチルクロリド（３１．２ｍＬ、４１２．８ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を撹拌し、４８時間還流させた。反応物を室温で冷却し、Ｈ２Ｏ（１００ｍＬ）、ＨＣｌ  ３Ｎ（１００ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（１００ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（１００ｍＬ）およびブライン（１００ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮して、２６．６１ｇ（４５．６５ｍｍｏｌ）の２を薄黄色油状物質として得た（定量的収率）。
【０１０６】
（Ｅ＋Ｚ）−３α，７α，１２α−トリメトキシメチルオキシ−６α−エチル−２４，２４−トリメチルシリルオキシ−メトキシ−５β−コラ−２３−エン（３）
Ｎ２雰囲気下で−４０℃で冷却した蒸留ＴＨＦ（４０ｍＬ）中のジイソプロピルアミン（１１．７ｍＬ、８２．５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ヘキサン中のｎＢｕＬｉ  ２．５Ｍ（３２．０ｍＬ、７９．３ｍｍｏｌ）を滴加した。１５分後、溶液を−７８℃まで冷却し、クロロトリメチルシラン（１２．７ｍＬ、８４．５ｍｍｏｌ）を滴加した。さらに１５分後、内部温度が−７０℃を超えないように維持しながら、蒸留ＴＨＦ（２０ｍＬ）中の３（６．０ｇ、１０．３０ｍｍｏｌ）の溶液を約２０分で少量ずつ添加した。添加が完了したら、反応混合物を−７８℃で１時間撹拌し、次いで室温で温めた。揮発性物質を減圧下で除去し、残渣を石油エーテル（８０ｍＬ）中で懸濁し、真空下でろ過した。液を減圧下で濃縮して、１０．１２ｇの油状残渣を得て、これをさらに精製せずに次の段階のために使用した。
【０１０７】
メチル３α，７α，１２α−トリメトキシメチルオキシ−６α−エチル−２３（Ｓ）−ヒドロキシ−５β−コラン−２４−オアート（４）
Ｎ２雰囲気下の蒸留ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）中の新鮮結晶化および酢酸不含四酢酸鉛（ＩＶ）（６．８５ｇ、１５．４６ｍｍｏｌ）の懸濁液に、ＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍＬ）中の３（１０．１２ｇ）の溶液を滴加した。３０分後、セライトパッドに通して反応混合物を真空下でろ過した。ろ液を減圧下で濃縮し、シリカゲルパッド（ｈ：６ｃｍ、φ：２ｃｍ）に通して残渣をろ過し、石油エーテル／ＡｃＯＥｔ（８：２、ｖ／ｖ）で粗製反応混合物を回収した。溶媒蒸発後、残渣（６．５０ｇ）をＭｅＯＨ（５０ｍＬ）中で溶解させ、室温で１５分間、炭酸カリウム（２．１３ｇ、１５．５ｍｍｏｌ）で処理した。次いで混合物をＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）で希釈し、真空下でろ過した。ろ液をさらにＣＨ２Ｃｌ２（７０ｍＬ）で希釈し、ブライン（７０ｍＬ）で洗浄した。水相をＣＨ２Ｃｌ２（３ｘ４０ｍＬ）で抽出し、回収した有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。残渣を中圧液体クロマトグラフィーによって精製し、石油エーテル／ＡｃＯＥｔ（６５：３５、ｖ／ｖ）により構成されるアイソクラチック溶出で、収率１９％で所望の化合物を回収した。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，２００ＭＨｚ）δ  ０．６５（３Ｈ，ｓ，１８−ＣＨ３），０．８１−０．８８（６Ｈ，ｍ，１９−ＣＨ３＋ＣＨ２ＣＨ３），０．９９（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２１−ＣＨ３），３．３２−３．３６（１Ｈ，ｍ，３−ＣＨ），３．３３（６Ｈ，ｍ，２ｘＯＣＨ２ＯＣＨ３），３．３９（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ２ＯＣＨ３），３．４６（１Ｈ，ｓ，７−ＣＨ），３．７４（３Ｈ，ｓ，ＣＯ２ＣＨ３），３．７６（１Ｈ，ｓ，１２−ＣＨ），４．１８（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２３−ＣＨ），４．５１−４．７２（６Ｈ，ｍ，３ｘＯＣＨ２ＯＣＨ３）．１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５０．３ＭＨｚ）δ  １１．７，１２．４，１８．７，２２．８，２３．０，２３．８，２４．９，２７．３，２７．６，２７．９，３０．３，３３．５，３５．５（ｘ２），４０．７，４１．２，４１．８，４２．２，４５．８，４６．３，４６．７，５２．２，５４．９，５５．７，５５．９，６９．９，７７．４，７９．９，８０．０，９４．３，９５．８，９８．４，１７６．０．
【０１０８】
３α，７α，１２α，２３（Ｓ）−テトラヒドロキシ−６α−エチル−５β−コラン−２４−オイン酸（化合物１）
ＭｅＯＨ（７ｍＬ）中の４（０．１０ｇ、０．１７ｍｍｏｌ）の溶液にＨＣｌ  ３Ｎ（０．６０ｍＬ、１．８０ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を４５℃で１８時間撹拌した。水酸化ナトリウム（０．１０ｇ、２．５０ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を４５℃でさらに５時間撹拌した。ＭｅＯＨを減圧下で除去し、残渣をＨ２Ｏで１０ｍＬまで希釈し、Ｅｔ２Ｏ（２ｘ５ｍＬ）で洗浄した。水相をＨＣｌ  ３Ｎで酸性化し、ＣＨ３Ｃｌ３／ＭｅＯＨ（８５：１５、ｖ／ｖ）（５ｘ１０ｍＬ）で抽出し、減圧下で濃縮した。溶出液としてＨ２Ｏ／ＭｅＯＨ（９：１→１：１、ｖ／ｖ）を使用することにより、得られた残渣をＲＰ−１８中圧液体クロマトグラフィーによって精製して、７８％の収率で所望の化合物、化合物１を得た。
ｒｆ：０．１１（ＴＬＣ：シリカゲル６０  ＲＰ−８  Ｆ２５４Ｓ；溶出液：Ｈ２Ｏ／ＭｅＣＮ  ６０：４０）。１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ，４００ＭＨｚ）δ  ０．５８（３Ｈ，ｓ，１８−ＣＨ３），０．７２−０．７５（６Ｈ，ｍ，１９−ＣＨ３＋ＣＨ２ＣＨ３），０．９０（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２１−ＣＨ３），３．２５−３．３４（１Ｈ，ｍ，３−ＣＨ），３．６２（１Ｈ，ｓ，７−ＣＨ），３．８９（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２３−ＣＨ），３．９３（１Ｈ，ｓ，１２−ＣＨ）．１３Ｃ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ，１００．６ＭＨｚ）δ  １１．０，１１．９，１７．８，２１．８，２２．４，２２．８，２６．７，２７．４，２７．７，２９．１，３２．４，３３．３，３４．７，３９．７，４１．０，４１．１，４１．６，４４．８，４６．２，４７．３，４８．８，７０．４，７１．９（ｘ２），７３．１，１８２．０．
【０１０９】
実施例２：化合物２の合成
【化９】
2018518537.tif 000016
メチル３α，７α，１２α−トリメトキシメチルオキシ−６α−エチル−５β−コラン−２４−オアート（２）
ＭｅＯＨ（１５０ｍＬ）中の３α，７α，１２α−トリヒドロキシ−６α−エチル−５β−コラン−２４−オイン酸（６−ＥＣＡ、１）（２０．０ｇ、４５．９ｍｍｏｌ）の溶液にｐ−トルエンスルホン酸（０．４４ｇ、２．２９ｍｍｏｌ）を添加し、得られた混合物を超音波照射下で２時間反応させた。ＭｅＯＨを減圧下で除去し、残渣をＡｃＯＥｔ（２００ｍＬ）中で溶解させ、ＮａＨＣＯ３飽和溶液（２００ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（２００ｍＬ）およびブライン（２００ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。次いで残渣をＣＨ２Ｃｌ２（１８０ｍＬ）中で溶解させ、得られた溶液をジイソプロピルエチルアミン（９４ｍＬ、５５０．５ｍｍｏｌ）、４−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）−ピリジン（０．５６ｇ、４．６ｍｍｏｌ）およびメトキシメチルクロリド（３１．２ｍＬ、４１２．８ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を撹拌し、４８時間還流させた。反応物を室温で冷却し、Ｈ２Ｏ（１００ｍＬ）、ＨＣｌ  ３Ｎ（１００ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（１００ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（１００ｍＬ）およびブライン（１００ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮して、２６．６１ｇ（４５．６５ｍｍｏｌ）の２を薄黄色油状物質として得た（定量的収率）。
【０１１０】
（Ｅ＋Ｚ）−３α，７α，１２α−トリメトキシメチルオキシ−６α−エチル−２４，２４−トリメチルシリルオキシ−メトキシ−５β−コラ−２３−エン（３）
Ｎ２雰囲気下で−４０℃で冷却した蒸留ＴＨＦ（４０ｍＬ）中のジイソプロピルアミン（１１．７ｍＬ、８２．５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ヘキサン中のｎＢｕＬｉ  ２．５Ｍ（３２．０ｍＬ、７９．３ｍｍｏｌ）を滴加した。１５分後、溶液を−７８℃まで冷却し、クロロトリメチルシラン（１２．７ｍＬ、８４．５ｍｍｏｌ）を滴加した。さらに１５分後、内部温度が−７０℃を超えないように維持しながら、蒸留ＴＨＦ（２０ｍＬ）中の３（６．０ｇ、１０．３０ｍｍｏｌ）の溶液を約２０分で少量ずつ添加した。添加が完了したら、反応混合物を−７８℃で１時間撹拌し、次いで室温で温めた。揮発性物質を減圧下で除去し、残渣を石油エーテル（８０ｍＬ）中で懸濁し、真空下でろ過した。液を減圧下で濃縮して、１０．１２ｇの油状残渣を得て、これをさらに精製せずに次の段階に対して使用した。
【０１１１】
メチル３α，７α，１２α−トリメトキシメチルオキシ−６α−エチル−２３（Ｒ）−ヒドロキシ−５β−コラン−２４−オアート（４）
Ｎ２雰囲気下の蒸留ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）中の新鮮結晶化および酢酸不含四酢酸鉛（ＩＶ）（６．８５ｇ、１５．４６ｍｍｏｌ）の懸濁液に、ＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍＬ）中の３（１０．１２ｇ）の溶液を滴加した。３０分後、セライトパッドに通して反応混合物を真空下でろ過した。ろ液を減圧下で濃縮し、シリカゲルパッド（ｈ：６ｃｍ、φ：２ｃｍ）に通して残渣をろ過し、石油エーテル／ＡｃＯＥｔ（８：２、ｖ／ｖ）で粗製反応混合物を回収した。溶媒蒸発後、残渣（６．５０ｇ）をＭｅＯＨ（５０ｍＬ）中で溶解させ、室温で１５分間、炭酸カリウム（２．１３ｇ、１５．５ｍｍｏｌ）で処理した。次いで混合物をＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）で希釈し、真空下でろ過した。ろ液をさらにＣＨ２Ｃｌ２（７０ｍＬ）で希釈し、ブライン（７０ｍＬ）で洗浄した。水相をＣＨ２Ｃｌ２（３ｘ４０ｍＬ）で抽出し、回収し、有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。残渣を中圧液体クロマトグラフィーによって精製し、石油エーテル／ＡｃＯＥｔ（６５：３５、ｖ／ｖ）により構成されるアイソクラチック溶出で所望の化合物を回収して、２０％の収率で４を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，２００ＭＨｚ）δ  ０．６９（３Ｈ，ｓ，１８−ＣＨ３），０．８３−０．９０（６Ｈ，ｍ，１９−ＣＨ３＋ＣＨ２ＣＨ３），１．０１（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，２１−ＣＨ３），３．２４−３．３５（１Ｈ，ｍ，３−ＣＨ），３．３４（６Ｈ，ｍ，２ｘＯＣＨ２ＯＣＨ３），３．４２（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ２ＯＣＨ３），３．４８（１Ｈ，ｓ，７−ＣＨ），３．７６（３Ｈ，ｓ，ＣＯ２ＣＨ３），３．８１（１Ｈ，ｓ，１２−ＣＨ），４．２０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ１＝１．９Ｈｚ，Ｊ２＝６．０Ｈｚ  ２３−ＣＨ），４．５６−４．７４（６Ｈ，ｍ，３ｘＯＣＨ２ＯＣＨ３）．１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５０．３ＭＨｚ）δ  １１．８，１２．５，１７．２，２８．８，２３．０，２３．８，２４．９，２７．４，２７．６，２７．８，３０．３，３２．４，３５．５（ｘ２），４０．７，４１．０，４１．９，４２．３，４５．８，４６．４，４６．５，５２．４，５４．９，５５．７，５５．９，６８．０，７７．４，８０．０，８１．０，９４．３，９５．９，９８．４，１７６．５．
【０１１２】
３α，７α，１２α，２３（Ｒ）−テトラヒドロキシ−６α−エチル−５β−コラン−２４−オイン酸（化合物２）
ＭｅＯＨ（７ｍＬ）中の４ａまたは４ｂ（０．１０ｇ、０．１７ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＣｌ  ３Ｎ（０．６０ｍＬ、１．８０ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を４５℃で１８時間撹拌した。水酸化ナトリウム（０．１０ｇ、２．５０ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を４５℃でさらに５時間撹拌した。ＭｅＯＨを減圧下で除去し、残渣をＨ２Ｏで１０ｍＬまで希釈し、Ｅｔ２Ｏ（２ｘ５ｍＬ）で洗浄した。水相をＨＣｌ  ３Ｎで酸性化し、ＣＨ３Ｃｌ３／ＭｅＯＨ（８５：１５、ｖ／ｖ）（５ｘ１０ｍＬ）で抽出し、減圧下で濃縮した。ＲＰ−１８中圧液体クロマトグラフィーにより、溶出液としてＨ２Ｏ／ＭｅＯＨ（９：１→１：１、ｖ／ｖ）を使用して、得られた残渣を精製して、７１％の収率で所望の化合物、化合物２を得た。
ｒｆ：０．１０（ＴＬＣ：シリカゲル６０ＲＰ−８Ｆ２５４Ｓ；溶出液：Ｈ２Ｏ／ＭｅＣＮ６０：４０）。１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ，４００ＭＨｚ）δ  ０．６６（３Ｈ，ｓ，１８−ＣＨ３），０．７８−０．８６（６Ｈ，ｍ，１９−ＣＨ３＋ＣＨ２ＣＨ３），０．９６（３Ｈ，ｐｓｓ，２１−ＣＨ３），１．９６−２．００（１Ｈ，ｍ，２２−ＣＨ２），３．３０−３．３７（１Ｈ，ｍ，３−ＣＨ），３．６６（１Ｈ，ｓ，７−ＣＨ），３．９５（１Ｈ，ｍ，２３−ＣＨ），４．０１（１Ｈ，ｓ，１２−ＣＨ）．１３Ｃ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ，１００．６ＭＨｚ）δ  １１．２，１２．２，１６．１，２１．９，２２．６，２２．８，２６．８，２７．３，２７．９，２９．１，３２．４，３４．８，３５．２，３９．９，４０．８，４１．３，４１．７，４５．０，４６．３（ｘ２），４７．３，６９．９，７０．４，７１．８，７３．０，１８２．７．
【０１１３】
実施例３：化合物３の合成
【化１０】
2018518537.tif 000017
メチル３α，７α，１２α−トリメトキシメチルオキシ−６α−エチル−５β−コラン−２４−オアート（２）
ＭｅＯＨ（１５０ｍＬ）中の３α，７α，１２α−トリヒドロキシ−６α−エチル−５β−コラン−２４−オイン酸（６−ＥＣＡ、１）（２０．０ｇ、４５．９ｍｍｏｌ）の溶液にｐ−トルエンスルホン酸（０．４４ｇ、２．２９ｍｍｏｌ）を添加し、得られた混合物を超音波照射下で２時間反応させた。ＭｅＯＨを減圧下で除去し、ＡｃＯＥｔ（２００ｍＬ）中で残渣を溶解させ、ＮａＨＣＯ３飽和溶液（２００ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（２００ｍＬ）およびブライン（２００ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。次いで残渣をＣＨ２Ｃｌ２（１８０ｍＬ）中で溶解させ、得られた溶液をジイソプロピルエチルアミン（９４ｍＬ、５５０．５ｍｍｏｌ）、４−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）−ピリジン（０．５６ｇ、４．６ｍｍｏｌ）およびメトキシメチルクロリド（３１．２ｍＬ、４１２．８ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を撹拌し、４８時間還流させた。反応物を室温で冷却し、Ｈ２Ｏ（１００ｍＬ）、ＨＣｌ  ３Ｎ（１００ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（１００ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（１００ｍＬ）およびブライン（１００ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮して、薄黄色油状物質として２６．６１ｇ（４５．６５ｍｍｏｌ）の２を得た（定量的収率）。
【０１１４】
（Ｅ＋Ｚ）−３α，７α，１２α−トリメトキシメチルオキシ−６α−エチル−２４，２４−トリメチルシリルオキシ−メトキシ−５β−コラ−２３−エン（３）
Ｎ２雰囲気下であり、−４０℃に冷却した蒸留ＴＨＦ（４０ｍＬ）中のジイソプロピルアミン（１１．７ｍＬ、８２．５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ヘキサン中のｎＢｕＬｉ  ２．５Ｍ（３２．０ｍＬ、７９．３ｍｍｏｌ）を滴加した。１５分後、溶液を−７８℃まで冷却し、クロロトリメチルシラン（１２．７ｍＬ、８４．５ｍｍｏｌ）を滴加した。さらに１５分後、内部温度が−７０℃を超えないように維持しながら、蒸留ＴＨＦ（２０ｍＬ）中の３（６．０ｇ、１０．３０ｍｍｏｌ）の溶液を約２０分で少量ずつ添加した。添加が完了したら、反応混合物を−７８℃で１時間撹拌し、次いで室温で温めた。揮発性物質を減圧下で除去し、残渣を石油エーテル（８０ｍＬ）中で懸濁し、真空下でろ過した。液を減圧下で濃縮して、１０．１２ｇの油状残渣を得て、これをさらに精製せずに次の段階で使用した。
【０１１５】
メチル２３（Ｒ＋Ｓ）−ヒドロキシ−６α−エチル−３α，７α，１２α−トリメトキシメチルオキシ−５β−コラン−２４−オアート（４）
Ｎ２雰囲気下の蒸留ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）中の新鮮結晶化および酢酸不含四酢酸鉛（ＩＶ）（６．８５ｇ、１５．４６ｍｍｏｌ）の懸濁液に、ＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍＬ）中の３（１０．１２ｇ）の溶液を滴加した。３０分後、セライトパッドに通して反応混合物を真空下でろ過した。ろ液を減圧下で濃縮し、シリカゲルパッド（ｈ：６ｃｍ、φ：２ｃｍ）に通して残渣をろ過し、石油エーテル／ＡｃＯＥｔ（８：２、ｖ／ｖ）で粗製反応混合物を回収した。溶媒蒸発後、残渣（６．５０ｇ）をＭｅＯＨ（５０ｍＬ）中で溶解させ、室温で１５分間、炭酸カリウム（２．１３ｇ、１５．５ｍｍｏｌ）で処理した。次いで混合物をＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）で希釈し、真空下でろ過した。ろ液をさらにＣＨ２Ｃｌ２（７０ｍＬ）で希釈し、ブライン（７０ｍＬ）で洗浄した。水相をＣＨ２Ｃｌ２（３ｘ４０ｍＬ）で抽出し、回収し、有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。溶出液として石油エーテル／ＡｃＯＥｔ（９：１→７：３、ｖ／ｖ）を使用することにより、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって残渣を精製して、２つのエピマーの混合物として２．５３ｇ（４．２６ｍｍｏｌ、４１％）の４を得た。
【０１１６】
メチル２３−オキソ−６α−エチル−３α，７α，１２α−トリメトキシメチルオキシ−５β−コラン−２４−オアート（５）
Ｎ２雰囲気下であり、−６０℃に冷却した蒸留ＣＨ２Ｃｌ２（７０ｍＬ）中の塩化オキサリル（４．０ｍＬ、４６．７ｍｍｏｌ）の溶液に、ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）中で希釈したＤＭＳＯ（６．６０ｍＬ、９３．４ｍｍｏｌ）を滴加した。１５分後、ＣＨ２Ｃｌ２（７０ｍＬ）中の４（１１．２ｇ、１８．７ｍｍｏｌ）の溶液を滴加し、得られた混合物を−６０℃で１時間撹拌した。トリエチルアミン（２６．２ｍＬ、１８６．８ｍｍｏｌ）を滴加し、混合物をゆっくりと室温で温めた。反応混合物を５分間、ＫＯＨ  １Ｍ（１００ｍＬ）で処理し、水および有機相を分離した。次いで水相をＣＨ２Ｃｌ２（２ｘ５０ｍＬ）で抽出した。回収した有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。シリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより残渣を精製し、石油エーテル／ＡｃＯＥｔの溶液（８５：１５、ｖ／ｖ）を使用して純粋な中間体５（６．８２ｇ、１１．４ｍｍｏｌ、６１％）を得た。
【０１１７】
メチル３α，７α，１２α−トリメトキシメチルオキシ−−６α−エチル−２３，２３−ゲムジフルオロ−５β−コラン−２４−オアート（６）
Ｎ２雰囲気下の蒸留ＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）中の５（６．８２ｇ、１１．４ｍｍｏｌ）の溶液に、ジエチルアミノサルファートリフルオリド（１５．１ｍＬ、１１４．４ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を室温で８時間撹拌した。水−氷浴中に入っており、マグネット撹拌下のＮａＨＣＯ３飽和溶液（２５０ｍＬ）中に混合物を慎重に注いだ。ＣＯ２の放出が完了したら、２相を分離し、有機層をＨ２Ｏ（１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。石油エーテル／ＡｃＯＥｔ（９：１、ｖ／ｖ）の溶液で溶出してシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより残渣を精製し、所望の化合物６（５．１７ｇ、８．４ｍｍｏｌ、７３％）を回収した。
【０１１８】
３α，７α，１２α−トリヒドロキシ−６α−エチル−２３，２３−ゲムジフルオロ−５β−コラン−２４−オイン酸（化合物３）
ＭｅＯＨ（５０ｍＬ）中の６（５．１７ｇ、８．４ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＣｌ  ３Ｎ（２５．１ｍＬ、７５．４ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を４５℃で１８時間撹拌した。水酸化ナトリウム（５．０ｇ、１２５．６ｍｍｏｌ）を添加し、４５℃でさらに５時間、混合物を反応させた。次いでＭｅＯＨを減圧下で除去し、残渣をＨ２Ｏで７０ｍＬまで希釈し、Ｅｔ２Ｏ（２ｘ３０ｍＬ）で洗浄した。水相をＨＣｌ  ３Ｎで酸性化し、ＲＰ−１８シリカゲルパッド（ｈ：４ｃｍ、φ：２ｃｍ）に通して、得られた白っぽい懸濁液を真空下でろ過し、Ｈ２Ｏ（２５０ｍＬ）で洗浄し、Ｈ２Ｏ／ＭｅＣＮ（１：１、ｖ／ｖ）で粗製化合物を回収した。溶媒を減圧下で除去したら、溶出液としてＨ２Ｏ／ＭｅＣＮ（８：２→６：４、ｖ／ｖ）を使用することにより、残渣をＲＰ−１８中圧液体クロマトグラフィーによって精製し、３．５９ｇの純粋な化合物３（９１％）を得た。
ｒｆ：０．６５（ＴＬＣ：シリカゲル６０  ＲＰ−８Ｆ２５４Ｓ；溶出液：Ｈ２Ｏ／ＭｅＣＮ  ５０：５０）。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，４００ＭＨｚ）δ  ０．６１（３Ｈ，ｓ，１８−ＣＨ３），０．８０−０．８６（６Ｈ，ｍ，１９−ＣＨ３＋ＣＨ２ＣＨ３），０．９３（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，２１−ＣＨ３），３．３０−３．３６（１Ｈ，ｍ，３−ＣＨ），３．４８（１Ｈ，ｓ，７−ＣＨ），３．７８（１Ｈ，ｓ，１２−ＣＨ），３．７８（１Ｈ，ｓ，ＯＨ），３．９７（１Ｈ，ｓ，ＯＨ），４．１７−４．２１（１Ｈ，ｂｓ，ＯＨ）．１３Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，１００．６ＭＨｚ）δ  １１．７，１２．１，１８．４，２２．１８，２２．６，２２．９，２６．５，２７．４，２８．６，３０．２，３０．６，３０．８，３３．４，３４．８，３５．５，４１．２，４１．６，４５．４，４５．９，４６．４，６８．３，７０．６，７０．８，１１７．２（ｔ，ＪＣ−Ｆ＝２４８．７Ｈｚ），１６５．５（ｔ，ＪＣ−Ｆ＝３１．９Ｈｚ）．１９Ｆ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，３７６．５ＭＨｚ）δ  −１０２．２（２Ｆ，ｍ）．ＭＳ−ＴＩＣ（−）ｍ／ｚ：４７１．３．
【０１１９】
実施例４：化合物４の合成
【化１１】
2018518537.tif 000018
メチル３α，７α，１２α−トリメトキシメチルオキシ−６α−エチル−５β−コラン−２４−オアート（２）
ＭｅＯＨ（１５０ｍＬ）中の３α，７α，１２α−トリヒドロキシ−６α−エチル−５β−コラン−２４−オイン酸（６−ＥＣＡ、１）（２０．０ｇ、４５．９ｍｍｏｌ）の溶液に、ｐ−トルエンスルホン酸（０．４４ｇ、２．２９ｍｍｏｌ）を添加し、得られた混合物を超音波照射下で２時間反応させた。ＭｅＯＨを減圧下で除去し、残渣をＡｃＯＥｔ（２００ｍＬ）中で溶解させ、ＮａＨＣＯ３飽和溶液（２００ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（２００ｍＬ）およびブライン（２００ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。次いで残渣をＣＨ２Ｃｌ２（１８０ｍＬ）中で溶解させ、得られた溶液をジイソプロピルエチルアミン（９４ｍＬ、５５０．５ｍｍｏｌ）、４−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）−ピリジン（０．５６ｇ、４．６ｍｍｏｌ）およびメトキシメチルクロリド（３１．２ｍＬ、４１２．８ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を撹拌し、４８時間還流させた。反応物を室温で冷却し、Ｈ２Ｏ（１００ｍＬ）、ＨＣｌ  ３Ｎ（１００ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（１００ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（１００ｍＬ）およびブライン（１００ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮して、薄黄色油状物質として２６．６１ｇ（４５．６５ｍｍｏｌ）の２を得た（定量的収率）。
【０１２０】
メチル３α，７α，１２α−トリメトキシメチルオキシ−６α−エチル−２３（Ａ＋Ｂ）−ヒドロキシメチル−５β−コラン−２４−オアート（４）
−７８℃のドライＴＨＦ（２５ｍＬ）中のジイソプロピルアミン（０．８７ｇ、８．５９ｍｍｏｌ）の溶液に、ヘキサン中のｎＢｕＬｉ  ２．５Ｍ（３．１ｍＬ、７．７３ｍｍｏｌ）を滴加した。１５分後、ドライＴＨＦ（１０ｍＬ）中の化合物２（０．５０ｇ、０．８６ｍｍｏｌ）の溶液を滴加し、混合物を−７８℃で１５分間反応させた。次いでギ酸エチル（１．２７ｇ、１７．１８ｍｍｏｌ）を添加し、１時間反応させた後、反応物を室温まで温めた。反応混合物をＨ２Ｏ（５０ｍＬ）に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３ｘ５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。このようにして得た中間体３をＭｅＯＨ（２０ｍＬ）中で溶解させ、０℃で３０分間、ＮａＢＨ４により処理した。反応をＨ２Ｏ（５０ｍＬ）で不活性化させ、ＣＨ２Ｃｌ２（３ｘ５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＨ２Ｏ（１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。シリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３中のイソプロパノールで溶出、２〜７％、ｖ／ｖ）によって粗製物を精製し、エピマー混合物として０．２９ｇの化合物４を得た（０．４８ｍｍｏｌ、５６％）。
【０１２１】
３α，７α，１２α−トリヒドロキシ−６α−エチル−２３（Ａ）−ヒドロキシメチル−５β−コラン−２４−オイン酸（化合物４）
ＭｅＯＨ（１５ｍＬ）中の化合物４（０．２９ｇ、０．４８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＣｌ  ３Ｎ（５ｍＬ）を添加し、得られた混合物を５０℃で４８時間撹拌した。混合物を室温に冷却し、４５℃で２４時間、ｐＨ１４までＮａＯＨ（ＭｅＯＨ中５％）で処理した。溶媒を減圧下で蒸発させ、粗製物をＨ２Ｏ（３０ｍＬ）中で懸濁し、Ｅｔ２Ｏ（２ｘ１０ｍＬ）で抽出した。水相をＨＣｌ  ３Ｎで酸性化し、沈殿物をろ過によって回収した。Ｈ２Ｏ／ＭｅＯＨ（ＭｅＯＨ、１０〜４０％）の溶液を使用して、粗製化合物を中圧液体クロマトグラフィーによって精製した。エピマー化合物４を２９％収率で得た（０．０６５ｇ、０．１４ｍｍｏｌ）。
ｒｆ：０．３９（ＴＬＣ：シリカゲル６０  ＲＰ−８  Ｆ２５４Ｓ；溶出液：Ｈ２Ｏ／ＭｅＯＨ  ２０：８０）。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δ：０．７１（３Ｈ，ｓ，１８−ＣＨ３），０．８９−０．９２（６Ｈ，ｍ，１９−ＣＨ３＋ＣＨ２ＣＨ３），１．０６（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２１−ＣＨ３），２．５５−２．６２（１Ｈ，ｂｓ，２３−ＣＨ），３．２９−３．３４（１Ｈ，ｍ，３−ＣＨ），３．５５−３．６４（１Ｈ，ｓ，７−ＣＨ），３．６４−３．６７（２Ｈ，ｂｓ，ＣＨ２ＯＨ），３．９７（１Ｈ，ｓ，１２−ＣＨ）．１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，１００．６ＭＨｚ）δ：１２．６，１３．８，１８．６，２４．０（ｘ２），２４．８，２８．８，２９．４，３０．２，３１．６，３４．９，３６．３，３６．８，３７．６，３７．８，４２．３，４３．７（ｘ２），４７．４，４８．２，６６．６，７１．７，７３．７，７４．６，１７６．３．
【０１２２】
実施例５：化合物５の合成
【化１２】
2018518537.tif 000019
メチル３α，７α，１２α−トリメトキシメチルオキシ−６α−エチル−５β−コラン−２４−オアート（２）
ＭｅＯＨ（１５０ｍＬ）中の３α，７α，１２α−トリヒドロキシ−６α−エチル−５β−コラン−２４−オイン酸（６−ＥＣＡ、１）（２０．０ｇ、４５．９ｍｍｏｌ）の溶液に、ｐ−トルエンスルホン酸（０．４４ｇ、２．２９ｍｍｏｌ）を添加し、得られた混合物を超音波照射下で２時間反応させた。ＭｅＯＨを減圧下で除去し、残渣をＡｃＯＥｔ（２００ｍＬ）中で溶解させ、ＮａＨＣＯ３飽和溶液（２００ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（２００ｍＬ）およびブライン（２００ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。次いで残渣をＣＨ２Ｃｌ２（１８０ｍＬ）中で溶解させ、得られた溶液をジイソプロピルエチルアミン（９４ｍＬ、５５０．５ｍｍｏｌ）、４−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）−ピリジン（０．５６ｇ、４．６ｍｍｏｌ）およびメトキシメチルクロリド（３１．２ｍＬ、４１２．８ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を撹拌し、４８時間還流させた。反応物を室温で冷却し、Ｈ２Ｏ（１００ｍＬ）、ＨＣｌ  ３Ｎ（１００ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（１００ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（１００ｍＬ）およびブライン（１００ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮して、薄黄色油状物質として２６．６１ｇ（４５．６５ｍｍｏｌ）の２を得た（定量的収率）。
【０１２３】
メチル３α，７α，１２α−トリメトキシメチルオキシ−６α−エチル−２３（Ａ＋Ｂ）−ヒドロキシメチル−５β−コラン−２４−オアート（４）
−７８℃のドライＴＨＦ（２５ｍＬ）中のジイソプロピルアミン（０．８７ｇ、８．５９ｍｍｏｌ）の溶液に、ヘキサン中のｎＢｕＬｉ  ２．５Ｍ（３．１ｍＬ、７．７３ｍｍｏｌ）を滴加した。１５分後、ドライＴＨＦ（１０ｍＬ）中の化合物２（０．５０ｇ、０．８６ｍｍｏｌ）の溶液を滴加し、混合物を−７８℃で１５分間反応させた。次いでギ酸エチル（１．２７ｇ、１７．１８ｍｍｏｌ）を添加し、１時間反応させた後、反応物を室温まで温めた。反応混合物をＨ２Ｏ（５０ｍＬ）に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３ｘ５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。このようにして得た中間体３をＭｅＯＨ（２０ｍＬ）中で溶解させ、０℃で３０分間、ＮａＢＨ４により処理した。反応をＨ２Ｏ（５０ｍＬ）で不活性化し、ＣＨ２Ｃｌ２（３ｘ５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＨ２Ｏ（１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。粗製物をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３中のイソプロパノールで溶出、２〜７％、ｖ／ｖ）によって精製し、エピマー混合物として０．２９ｇの化合物４を得た（０．４８ｍｍｏｌ、５６％）。
【０１２４】
３α，７α，１２α−トリヒドロキシ−６α−エチル−２３（Ｂ）−ヒドロキシメチル−５β−コラン−２４−オイン酸（化合物５）
ＭｅＯＨ（１５ｍＬ）中の化合物４（０．２９ｇ、０．４８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＣｌ  ３Ｎ（５ｍＬ）を添加し、得られた混合物を５０℃で４８時間撹拌した。混合物を室温に冷却し、４５℃で２４時間、ＮａＯＨ（ＭｅＯＨ中５％）でｐＨ１４まで処理した。溶媒を減圧下で蒸発させ、粗製物をＨ２Ｏ（３０ｍＬ）中で懸濁し、Ｅｔ２Ｏ（２ｘ１０ｍＬ）で抽出した。水相をＨＣｌ  ３Ｎで酸性化し、沈殿物をろ過によって回収した。Ｈ２Ｏ／ＭｅＯＨ（ＭｅＯＨ１０〜４０％）の溶液を使用して、粗製化合物を中圧液体クロマトグラフィーによって精製した。４０％収率でエピマー化合物５を得た（０．０９ｇ、０．１９ｍｍｏｌ）。
ｒｆ：０．３６（ＴＬＣ：シリカゲル６０  ＲＰ−８  Ｆ２５４Ｓ；溶出液：Ｈ２Ｏ／ＭｅＣＮ  ２０：８０）。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δ：０．７２（３Ｈ，ｓ，１８−ＣＨ３），０．８９−０．９２（６Ｈ，ｍ，１９−ＣＨ３＋ＣＨ２ＣＨ３），１．０６５（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２１−ＣＨ３），２．３９−２．４６（１Ｈ，ｂｓ，２３−ＣＨ），３．２８−３．３３（１Ｈ，ｍ，３−ＣＨ），３．６１（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２ＯＨ），３．６６（１Ｈ，ｓ，７−ＣＨ），３．９８（１Ｈ，ｓ，１２−ＣＨ）．１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，１００．６ＭＨｚ）δ：１２．０，１３．０，１８．０，２３．５（ｘ２），２４．２，２８．２，２９．０，２９．６，３０．７，３１．１，３４．４，３５．８，３６．３，３６．７，３７．０，４１．８，４３．１（ｘ２），４７．０，４７．７，６４．４，７１．２，７３．２，７４．１，１８４．５．
【０１２５】
実施例６：化合物６の合成
【化１３】
2018518537.tif 000020
メチル３α，７α，１２α−トリメトキシメチルオキシ−６α−エチル−５β−コラン−２４−オアート（２）
ＭｅＯＨ（１５０ｍＬ）中の３α，７α，１２α−トリヒドロキシ−６α−エチル−５β−コラン−２４−オイン酸（６−ＥＣＡ、１）（２０．０ｇ、４５．９ｍｍｏｌ）の溶液に、ｐ−トルエンスルホン酸（０．４４ｇ、２．２９ｍｍｏｌ）を添加し、得られた混合物を超音波照射下で２時間反応させた。ＭｅＯＨを減圧下で除去し、残渣をＡｃＯＥｔ（２００ｍＬ）中で溶解させ、ＮａＨＣＯ３飽和溶液（２００ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（２００ｍＬ）およびブライン（２００ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。次いで残渣をＣＨ２Ｃｌ２（１８０ｍＬ）中で溶解させ、得られた溶液をジイソプロピルエチルアミン（９４ｍＬ、５５０．５ｍｍｏｌ）、４−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）−ピリジン（０．５６ｇ、４．６ｍｍｏｌ）およびメトキシメチルクロリド（３１．２ｍＬ、４１２．８ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を撹拌し、４８時間還流させた。反応物を室温で冷却し、Ｈ２Ｏ（１００ｍＬ）、ＨＣｌ  ３Ｎ（１００ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（１００ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（１００ｍＬ）およびブライン（１００ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮して、薄黄色油状物質として２６．６１ｇ（４５．６５ｍｍｏｌ）の２を得た（定量的収率）。
【０１２６】
メチル３α，７α，１２α−トリメトキシメチルオキシ−６α−エチル−２３（Ａ＋Ｂ）−ヒドロキシメチル−５β−コラン−２４−オアート（４）
−７８℃のドライＴＨＦ（２５ｍＬ）中のジイソプロピルアミン（０．８７ｇ、８．５９ｍｍｏｌ）の溶液に、ヘキサン中のｎＢｕＬｉ  ２．５Ｍ（３．１ｍＬ、７．７３ｍｍｏｌ）を滴加した。１５分後、ドライＴＨＦ（１０ｍＬ）中の化合物２（０．５０ｇ、０．８６ｍｍｏｌ）の溶液を滴加し、混合物を−７８℃で１５分間反応させた。次いでギ酸エチル（１．２７ｇ、１７．１８ｍｍｏｌ）を添加し、１時間反応させた後、反応物を室温まで温めた。反応混合物をＨ２Ｏ（５０ｍＬ）に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３ｘ５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。このようにして得た中間体３をＭｅＯＨ（２０ｍＬ）中で溶解させ、０℃で３０分間、ＮａＢＨ４により処理した。反応をＨ２Ｏ（５０ｍＬ）で不活性化させ、ＣＨ２Ｃｌ２（３ｘ５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＨ２Ｏ（１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。粗製物をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３中のイソプロパノールで溶出、２〜７％、ｖ／ｖ）によって精製し、エピマー混合物として０．２９ｇの化合物４を得た（０．４８ｍｍｏｌ、５６％）。
【０１２７】
３α，７α，１２α−トリヒドロキシ−６α−エチル−２３（Ａ）−フルオロメチル−フルオロメチル−５β−コラン−２４−オイン酸（化合物６）
ドライＣＨ２Ｃｌ２（３ｍＬ）中の化合物４（０．０９ｇ、０．１６ｍｍｏｌ）の溶液に、ドライＣＨ２Ｃｌ２（２ｍＬ）中のＤＡＳＴ（０．０４ｇ、０．２３ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。混合物を−７８℃で２時間反応させ、続いてＮａＨＣＯ３飽和溶液（１０ｍＬ）に注いで、ＣＨ２Ｃｌ２（２ｘ１５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＨ２Ｏ（１０ｍＬ）、ブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。次いでＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中で中間体５を溶解させ、室温で１２時間、ＨＣｌ  ３７％（０．３ｍＬ）で処理した。溶媒を減圧下で蒸発させた。残渣をＨ２Ｏ（１０ｍＬ）で懸濁し、ＣＨ２Ｃｌ２（２ｘ１０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＨ２Ｏ（１０ｍＬ）、ブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。粗製物を２ｍＬのＮａＯＨ（ＴＨＦ中３％）中で溶解させ、室温で４時間反応させた。溶媒を減圧下で蒸発させ、Ｈ２Ｏ（１０ｍＬ）中で懸濁し、ＣＨ２Ｃｌ２（２ｘ１０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＨ２Ｏ（１０ｍＬ）、ブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。粗製物をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３の溶液で溶出して（９８：２→９：１、ｖ／ｖ＋０．１％ＡｃＯＨ）、１２ｍｇの純粋な化合物６（０．０２６ｍｍｏｌ、１６％）を得た。
ｒｆ：０．２９（ＴＬＣ：シリカゲル６０  ＲＰ−８  Ｆ２５４Ｓ；溶出液：Ｈ２Ｏ／ＭｅＯＨ  ２０：８０）。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δ  ０．７３（３Ｈ，ｓ，１８−ＣＨ３），０．９１−０．９７（６Ｈ，ｍ，１９−ＣＨ３＋ＣＨ２ＣＨ３），１．０５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．０，２１−ＣＨ３），２．１０−２．１９（２Ｈ，ｍ，２２−ＣＨ２），２．５１−２．５４（１Ｈ，ｍ，２３−ＣＨ），３．４１−３．４５（１Ｈ  ｍ，３−ＣＨ），３．５３−３．５７（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２Ｆ），３．６６（１Ｈ，ｓ，７−ＣＨ），３．９７（１Ｈ，ｓ，７−ＣＨ）．１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，１００．６ＭＨｚ）δ  １２．０，１３．０，１８．１，２３．４，２４．０，２８．２，２９．１，２９．７，３０．７（ｘ２），３１．０，３４．４，３６．０，３６．３，３６．７，３７．３，４１．７，４３．１（ｘ２），４６．９，４７．６，５８．９，７１．１，７３．２，７４．０，７８．４（ＪＣ−Ｆ＝３９２．３Ｈｚ），１８１．５．
【０１２８】
実施例７：化合物７の合成
【化１４】
2018518537.tif 000021
メチル３α，７α，１２α−トリメトキシメチルオキシ−６α−エチル−５β−コラン−２４−オアート（２）
ＭｅＯＨ（１５０ｍＬ）中の３α，７α，１２α−トリヒドロキシ−６α−エチル−５β−コラン−２４−オイン酸（６−ＥＣＡ、１）（２０．０ｇ、４５．９ｍｍｏｌ）の溶液に、ｐ−トルエンスルホン酸（０．４４ｇ、２．２９ｍｍｏｌ）を添加し、得られた混合物を超音波照射下で２時間反応させた。ＭｅＯＨを減圧下で除去し、残渣をＡｃＯＥｔ（２００ｍＬ）中で溶解させ、ＮａＨＣＯ３飽和溶液（２００ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（２００ｍＬ）およびブライン（２００ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。次いで残渣をＣＨ２Ｃｌ２（１８０ｍＬ）中で溶解させ、得られた溶液をジイソプロピルエチルアミン（９４ｍＬ、５５０．５ｍｍｏｌ）、４−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）−ピリジン（０．５６ｇ、４．６ｍｍｏｌ）およびメトキシメチルクロリド（３１．２ｍＬ、４１２．８ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を撹拌し、４８時間還流させた。反応物を室温で冷却し、Ｈ２Ｏ（１００ｍＬ）、ＨＣｌ  ３Ｎ（１００ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（１００ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（１００ｍＬ）およびブライン（１００ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮して、薄黄色油状物質として２６．６１ｇ（４５．６５ｍｍｏｌ）の２を得た（定量的収率）。
【０１２９】
メチル３α，７α，１２α−トリメトキシメチルオキシ−６α−エチル−２３（Ａ＋Ｂ）−ヒドロキシメチル−５β−コラン−２４−オアート（４）
−７８℃のドライＴＨＦ（２５ｍＬ）中のジイソプロピルアミン（０．８７ｇ、８．５９ｍｍｏｌ）の溶液に、ヘキサン中のｎＢｕＬｉ  ２．５Ｍ（３．１ｍＬ、７．７３ｍｍｏｌ）を滴加した。１５分後、ドライＴＨＦ（１０ｍＬ）中の化合物２（０．５０ｇ、０．８６ｍｍｏｌ）の溶液を滴加し、混合物を−７８℃で１５分間反応させた。次いでギ酸エチル（１．２７ｇ、１７．１８ｍｍｏｌ）を添加し、１時間反応させた後、反応物を室温まで温めた。反応混合物をＨ２Ｏ（５０ｍＬ）に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３ｘ５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。このようにして得た中間体３をＭｅＯＨ（２０ｍＬ）中で溶解させ、０℃で３０分間、ＮａＢＨ４により処理した。反応をＨ２Ｏ（５０ｍＬ）で不活性化させ、ＣＨ２Ｃｌ２（３ｘ５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＨ２Ｏ（１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。粗製物をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３中のイソプロパノールで溶出、２〜７％、ｖ／ｖ）によって精製し、エピマー混合物として０．２９ｇの化合物４を得た（０．４８ｍｍｏｌ、５６％）。
【０１３０】
３α，７α，１２α−トリヒドロキシ−６α−エチル−２３（Ａ）−フルオロメチル−フルオロメチル−５β−コラン−２４−オイン酸（化合物７）
ドライＣＨ２Ｃｌ２（３ｍＬ）中の化合物４（０．０９ｇ、０．１６ｍｍｏｌ）の溶液に、ドライＣＨ２Ｃｌ２（２ｍＬ）中のＤＡＳＴ（０．０４ｇ、０．２３ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。混合物を−７８℃で２時間反応させ、続いてＮａＨＣＯ３飽和溶液（１０ｍＬ）に注ぎ、ＣＨ２Ｃｌ２（２ｘ１５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＨ２Ｏ（１０ｍＬ）、ブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。次いでＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中で中間体５を溶解させ、室温で１２時間、ＨＣｌ  ３７％（０．３ｍＬ）で処理した。溶媒を減圧下で蒸発させた。残渣をＨ２Ｏ（１０ｍＬ）中で懸濁し、ＣＨ２Ｃｌ２（２ｘ１０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＨ２Ｏ（１０ｍＬ）、ブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。２ｍＬのＮａＯＨ（ＴＨＦ中３％）中で粗製物を溶解させ、室温で４時間反応させた。溶媒を減圧下で蒸発させ、Ｈ２Ｏ（１０ｍＬ）中で懸濁し、ＣＨ２Ｃｌ２（２ｘ１０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＨ２Ｏ（１０ｍＬ）、ブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。粗製物をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３の溶液（９８：２→９：１、ｖ／ｖ＋０．１％ＡｃＯＨ）で溶出して、１６ｍｇの純粋な化合物７（０．０３４ｍｍｏｌ、２１％）を得た。
ｒｆ：０．２７（ＴＬＣ：シリカゲル６０  ＲＰ−８  Ｆ２５４Ｓ；溶出液：Ｈ２Ｏ／ＭｅＯＨ  ２０：８０）。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δ  ０．７２（３Ｈ，ｓ，１８−ＣＨ３），０．９０−０．９６（６Ｈ，ｍ，１９−ＣＨ３＋ＣＨ２ＣＨ３），１．０６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，２１−ＣＨ３），２．１７−２．２２（１Ｈ，ｍ，２２−ＣＨ２），２．５４−２．５８（１Ｈ，ｍ，２３−ＣＨ），３．２８−３．３３（１Ｈ  ｍ，３−ＣＨ），３．３８−３．５８（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２Ｆ），３．６６（１Ｈ，ｓ，７−ＣＨ），３．９７（１Ｈ，ｓ，７−ＣＨ）．１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，１００．６ＭＨｚ）δ  １２．０，１３．０，１８．１，２３．５，２４．２，２８．２，２９．１，２９．７，３０．８，３１．０，３４．４，３６．０，３６．３，３６．７，３７．３，４１．７，４３．１，４６．９，４７．４，４７．６，５８．９，７１．１，７３．２，７４．０，７５．３（ＪＣ−Ｆ＝４５２．７Ｈｚ），１８１．５．
【０１３１】
実施例８：化合物８の合成
【化１５】
2018518537.tif 000022
メチル３α，７α，１２α−トリメトキシメチルオキシ−６α−エチル−５β−コラン−２４−オアート（２）
ＭｅＯＨ（１５０ｍＬ）中の３α，７α，１２α−トリヒドロキシ−６α−エチル−５β−コラン−２４−オイン酸（６−ＥＣＡ、１）（２０．０ｇ、４５．９ｍｍｏｌ）の溶液に、ｐ−トルエンスルホン酸（０．４４ｇ、２．２９ｍｍｏｌ）を添加し、得られた混合物を超音波照射下で２時間反応させた。ＭｅＯＨを減圧下で除去し、残渣をＡｃＯＥｔ（２００ｍＬ）中で溶解させ、ＮａＨＣＯ３飽和溶液（２００ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（２００ｍＬ）およびブライン（２００ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。次いで残渣をＣＨ２Ｃｌ２（１８０ｍＬ）中で溶解させ、得られた溶液をジイソプロピルエチルアミン（９４ｍＬ、５５０．５ｍｍｏｌ）、４−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）−ピリジン（０．５６ｇ、４．６ｍｍｏｌ）およびメトキシメチルクロリド（３１．２ｍＬ、４１２．８ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を撹拌し、４８時間還流させた。反応物を室温で冷却し、Ｈ２Ｏ（１００ｍＬ）、ＨＣｌ  ３Ｎ（１００ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（１００ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（１００ｍＬ）およびブライン（１００ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮して、薄黄色油状物質として２６．６１ｇ（４５．６５ｍｍｏｌ）の２を得た（定量的収率）。
【０１３２】
（Ｅ＋Ｚ）−３α，７α，１２α−トリメトキシメチルオキシ−６α−エチル−２４，２４−トリメチルシリルオキシ−メトキシ−５β−コラ−２３−エン（３）
Ｎ２雰囲気で−４０℃に冷却した蒸留ＴＨＦ（４０ｍＬ）中のジイソプロピルアミン（１１．７ｍＬ、８２．５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ヘキサン中のｎＢｕＬｉ  ２．５Ｍ（３２．０ｍＬ、７９．３ｍｍｏｌ）を滴加した。１５分後、溶液を−７８℃まで冷却し、クロロトリメチルシラン（１２．７ｍＬ、８４．５ｍｍｏｌ）を滴加した。さらに１５分後、内部温度が−７０℃を超えないように維持しながら、蒸留ＴＨＦ（２０ｍＬ）中の３（６．０ｇ、１０．３０ｍｍｏｌ）の溶液を約２０分で少量ずつ添加した。添加が完了したら、反応混合物を−７８℃で１時間撹拌し、次いで室温で温めた。揮発性物質を減圧下で除去し、残渣を石油エーテル（８０ｍＬ）中で懸濁し、真空下でろ過した。液を減圧下で濃縮して、１０．１２ｇの油状残渣を得て、これをさらに精製せずに次の段階で使用した。
【０１３３】
メチル３α，７α，１２α−トリメトキシメチルオキシ−６α−エチル−２３（Ｒ）−ヒドロキシ−５β−コラン−２４−オアート（４）
Ｎ２雰囲気下で蒸留ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）中で新鮮結晶化および酢酸不含四酢酸鉛（ＩＶ）（６．８５ｇ、１５．４６ｍｍｏｌ）の懸濁液に、ＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍＬ）中の３（１０．１２ｇ）の溶液を滴加した。３０分後、セライトパッドに通して反応混合物を真空下でろ過した。ろ液を減圧下で濃縮し、シリカゲルパッド（ｈ：６ｃｍ、φ：２ｃｍ）に通して残渣をろ過し、石油エーテル／ＡｃＯＥｔ（８：２、ｖ／ｖ）で粗製反応混合物を回収した。溶媒蒸発後、ＭｅＯＨ（５０ｍＬ）中で残渣（６．５０ｇ）を溶解させ、室温で１５分間、炭酸カリウム（２．１３ｇ、１５．５ｍｍｏｌ）で処理した。次いで混合物をＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）で希釈し、真空下でろ過した。ろ液をさらにＣＨ２Ｃｌ２（７０ｍＬ）で希釈し、ブライン（７０ｍＬ）で洗浄した。水相をＣＨ２Ｃｌ２（３ｘ４０ｍＬ）で抽出し、回収し、有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。残渣を中圧液体クロマトグラフィーによって精製し、石油エーテル／ＡｃＯＥｔ（６５：３５、ｖ／ｖ）により構成されるアイソクラチック溶出で所望の化合物を回収して、２０％収率で４を得た。
【０１３４】
メチル３α，７α，１２α−トリメトキシメチルオキシ−６α−エチル−２３（Ｓ）−フルオロ−５β−コラン−２４−オアート（５）
Ｎ２雰囲気下の蒸留ＣＨ２Ｃｌ２（４０ｍＬ）中の４（０．９２ｇ、１．５３ｍｍｏｌ）の溶液に、ジエチルアミノサルファートリフルオリド（１．０ｍＬ、７．７ｍｍｏｌ）を添加し、室温で１０分間、反応物を撹拌した。ＮａＨＣＯ３飽和溶液（３０ｍＬ）中に混合物を慎重に注ぎ、マグネット撹拌下で水−氷浴中に置いた。ＣＯ２の放出が完了したら、２相を分離し、有機層をＨ２Ｏ（２０ｍＬ）、ブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。石油エーテル／ＡｃＯＥｔ（８５：１５、ｖ／ｖ）を使用することにより、残渣をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、ほぼ定量的収率で所望の化合物５を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ  ０．７０（３Ｈ，ｓ，１８−ＣＨ３），０．８７−０．９２（６Ｈ，ｍ，１９−ＣＨ３＋ＣＨ２ＣＨ３），１．０７（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２１−ＣＨ３），３．３０−３．３７（１Ｈ，ｍ，３−ＣＨ），３．３５（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ２ＯＣＨ３），３．３６（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ２ＯＣＨ３），３．４３（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ２ＯＣＨ３），３．４９（１Ｈ，ｓ，７−ＣＨ），３．７９（３Ｈ，ｓ，ＣＯ２ＣＨ３），３．８１（１Ｈ，ｓ，１２−ＣＨ），４．５９−４．７４（６Ｈ，ｍ，３ｘＯＣＨ２ＯＣＨ３），５．０１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ１＝１０．１Ｈｚ，Ｊ２＝５２．０Ｈｚ，２３−ＣＨＦ）．
【０１３５】
３α，７α，１２α−トリヒドロキシ−６α−エチル−２３（Ｓ）−フルオロ−５β−コラン−２４−オアート（化合物８）
ＭｅＯＨ（２０ｍＬ）中の５（０．９２ｇ、１．５３ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＣｌ  ３Ｎ（４．６ｍＬ、１３．８ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を４５℃で１８時間撹拌した。水酸化ナトリウム（０．９０ｇ、２２．９５ｍｍｏｌ）を添加し、４５℃でさらに５時間、混合物を撹拌した。ＭｅＯＨを減圧下で除去し、残渣を３０ｍＬまでＨ２Ｏで希釈し、Ｅｔ２Ｏ（２ｘ１５ｍＬ）で洗浄した。水相をＨＣｌ  ３Ｎで酸性化し、ＣＨ３Ｃｌ３／ＭｅＯＨ（８５：１５、ｖ／ｖ）（５ｘ３０ｍＬ）で抽出し、減圧下で濃縮した。溶出液としてＨ２Ｏ／ＭｅＯＨ（６：４→３：７）を使用することにより、残渣をＲＰ−１８中圧液体クロマトグラフィーによって精製して、８７％収率で所望の化合物、化合物８を得た。
ｒｆ：０．４４（ＴＬＣ：シリカゲル６０  ＲＰ−８  Ｆ２５４Ｓ；溶出液：Ｈ２Ｏ／ＭｅＣＮ  ５０：５０）。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δ：０．７４（３Ｈ，ｓ，１８−ＣＨ３），０．８９−０．９２（６Ｈ，ｍ，１９−ＣＨ３＋ＣＨ２ＣＨ３），１．１３（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，２１−ＣＨ３），２．１７−２．２３（１Ｈ，ｍ，２２−ＣＨ２），３．３４−３．３４（１Ｈ，ｍ，３−ＣＨ），３．６７（１Ｈ，ｓ，７−ＣＨ），３．９７（１Ｈ，ｓ，１２−ＣＨ），４．９９（１Ｈ，ｐｓｄ，Ｊ（Ｈ−Ｆ）＝４８Ｈｚ，２３−ＣＨＦ）．１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，１００．６ＭＨｚ）δ  １２．９，１３．８，１９．７，２４．３（ｘ２），２５．０，２９．１，２９．７，３１．９，３５．３，３６．２，３７．２（ｘ２），３７．６，４１．２（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝１９．８Ｈｚ）４２．６，４４．０（ｘ２），４７．８，４８．５，７２．０，７４．１，７４．９，９１．７（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝１８０．４Ｈｚ），１７６．７（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝２２．０Ｈｚ）．１９Ｆ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，３７６．５ＭＨｚ）δ  −１８４．７（１Ｆ，ｍ）．
【０１３６】
実施例９：化合物９の合成
【化１６】
2018518537.tif 000023
メチル３α，７α，１２α−トリメトキシメチルオキシ−６α−エチル−５β−コラン−２４−オアート（２）
ＭｅＯＨ（１５０ｍＬ）中の３α，７α，１２α−トリヒドロキシ−６α−エチル−５β−コラン−２４−オイン酸（６−ＥＣＡ、１）（２０．０ｇ、４５．９ｍｍｏｌ）の溶液に、ｐ−トルエンスルホン酸（０．４４ｇ、２．２９ｍｍｏｌ）を添加し、得られた混合物を超音波照射下で２時間反応させた。ＭｅＯＨを減圧下で除去し、残渣をＡｃＯＥｔ（２００ｍＬ）中で溶解させ、ＮａＨＣＯ３飽和溶液（２００ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（２００ｍＬ）およびブライン（２００ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。次いで残渣をＣＨ２Ｃｌ２（１８０ｍＬ）中で溶解させ、得られた溶液をジイソプロピルエチルアミン（９４ｍＬ、５５０．５ｍｍｏｌ）、４−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）−ピリジン（０．５６ｇ、４．６ｍｍｏｌ）およびメトキシメチルクロリド（３１．２ｍＬ、４１２．８ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を撹拌し、４８時間還流させた。反応物を室温で冷却し、Ｈ２Ｏ（１００ｍＬ）、ＨＣｌ  ３Ｎ（１００ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（１００ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（１００ｍＬ）およびブライン（１００ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮して、薄黄色油状物質として２６．６１ｇ（４５．６５ｍｍｏｌ）の２を得た（定量的収率）。
【０１３７】
（Ｅ＋Ｚ）−３α，７α，１２α−トリメトキシメチルオキシ−６α−エチル−２４，２４−トリメチルシリルオキシ−メトキシ−５β−コラ−２３−エン（３）
Ｎ２雰囲気下の−４０℃で冷却した蒸留ＴＨＦ（４０ｍＬ）中のジイソプロピルアミン（１１．７ｍＬ、８２．５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ヘキサン中のｎＢｕＬｉ  ２．５Ｍ（３２．０ｍＬ、７９．３ｍｍｏｌ）を滴加した。１５分後、溶液を−７８℃まで冷却し、クロロトリメチルシラン（１２．７ｍＬ、８４．５ｍｍｏｌ）を滴加した。さらに１５分後、内部温度が−７０℃を超えないように維持しながら、蒸留ＴＨＦ（２０ｍＬ）中の３（６．０ｇ、１０．３０ｍｍｏｌ）の溶液を約２０分で少量ずつ添加した。添加が完了したら、反応混合物を−７８℃で１時間撹拌し、次いで室温で温めた。揮発性物質を減圧下で除去し、残渣を石油エーテル（８０ｍＬ）中で懸濁し、真空下でろ過した。液を減圧下で濃縮して、１０．１２ｇの油状残渣を得て、これをさらに精製せずに次の段階に対して使用した。
【０１３８】
メチル３α，７α，１２α−トリメトキシメチルオキシ−６α−エチル−２３（Ｓ）−ヒドロキシ−５β−コラン−２４−オアート（４）
Ｎ２雰囲気下の蒸留ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）中の新鮮結晶化および酢酸不含四酢酸鉛（ＩＶ）（６．８５ｇ、１５．４６ｍｍｏｌ）の懸濁液に、ＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍＬ）中の３（１０．１２ｇ）の溶液を滴加した。３０分後、セライトパッドに通して反応混合物を真空下でろ過した。ろ液を減圧下で濃縮し、シリカゲルパッド（ｈ：６ｃｍ、φ：２ｃｍ）に通して残渣をろ過し、石油エーテル／ＡｃＯＥｔ（８：２、ｖ／ｖ）で粗製反応混合物を回収した。溶媒蒸発後、残渣（６．５０ｇ）をＭｅＯＨ（５０ｍＬ）中で溶解させ、室温で１５分間、炭酸カリウム（２．１３ｇ、１５．５ｍｍｏｌ）で処理した。次いで混合物をＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）で希釈し、真空下でろ過した。ろ液をさらにＣＨ２Ｃｌ２（７０ｍＬ）で希釈し、ブライン（７０ｍＬ）で洗浄した。水相をＣＨ２Ｃｌ２（３ｘ４０ｍＬ）で抽出し、回収し、有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。残渣を中圧液体クロマトグラフィーによって精製し、石油エーテル／ＡｃＯＥｔ（６５：３５、ｖ／ｖ）により構成されるアイソクラチック溶出で所望の化合物を１９％収率で回収した。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，２００ＭＨｚ）δ  ０．６５（３Ｈ，ｓ，１８−ＣＨ３），０．８１−０．８８（６Ｈ，ｍ，１９−ＣＨ３＋ＣＨ２ＣＨ３），０．９９（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２１−ＣＨ３），３．３２−３．３６（１Ｈ，ｍ，３−ＣＨ），３．３３（６Ｈ，ｍ，２ｘＯＣＨ２ＯＣＨ３），３．３９（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ２ＯＣＨ３），３．４６（１Ｈ，ｓ，７−ＣＨ），３．７４（３Ｈ，ｓ，ＣＯ２ＣＨ３），３．７６（１Ｈ，ｓ，１２−ＣＨ），４．１８（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２３−ＣＨ），４．５１−４．７２（６Ｈ，ｍ，３ｘＯＣＨ２ＯＣＨ３）．１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５０．３ＭＨｚ）δ  １１．７，１２．４，１８．７，２２．８，２３．０，２３．８，２４．９，２７．３，２７．６，２７．９，３０．３，３３．５，３５．５（ｘ２），４０．７，４１．２，４１．８，４２．２，４５．８，４６．３，４６．７，５２．２，５４．９，５５．７，５５．９，６９．９，７７．４，７９．９，８０．０，９４．３，９５．８，９８．４，１７６．０．
【０１３９】
メチル３α，７α，１２α−トリメトキシメチルオキシ−６α−エチル−２３（Ｒ）−フルオロ−５β−コラン−２４−オアート（５）
Ｎ２雰囲気下の蒸留ＣＨ２Ｃｌ２（４０ｍＬ）中の４（０．９２ｇ、１．５３ｍｍｏｌ）の溶液に、ジエチルアミノサルファートリフルオリド（１．０ｍＬ、７．７ｍｍｏｌ）を添加し、室温で１０分間、反応物を撹拌した。ＮａＨＣＯ３飽和溶液（３０ｍＬ）中に混合物を慎重に注ぎ、マグネット撹拌下で水−氷浴中に置いた。ＣＯ２の放出が完了したら、２相を分離し、有機層をＨ２Ｏ（２０ｍＬ）、ブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。石油エーテル／ＡｃＯＥｔ（８５：１５、ｖ／ｖ）を使用することにより、残渣をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、ほぼ定量的収率で所望の化合物５を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ  ０．６９（３Ｈ，ｓ，１８−ＣＨ３），０．８７−０．９１（６Ｈ，ｍ，１９−ＣＨ３＋ＣＨ２ＣＨ３），１．０５（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２１−ＣＨ３），３．３０−３．３７（１Ｈ，ｍ，３−ＣＨ），３．３５（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ２ＯＣＨ３），３．３７（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ２ＯＣＨ３），３．４３（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ２ＯＣＨ３），３．４９（１Ｈ，ｓ，７−ＣＨ），３．７６（１Ｈ，ｓ，１２−ＣＨ），３．７９（３Ｈ，ｓ，ＣＯ２ＣＨ３），４．５９−４．７５（６Ｈ，ｍ，３ｘＯＣＨ２ＯＣＨ３），４．９７（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ１＝４．９Ｈｚ，Ｊ２＝４８．０Ｈｚ，２３−ＣＨＦ）．
【０１４０】
３α，７α，１２α−トリヒドロキシ−６α−エチル−２３（Ｒ）−フルオロ−５β−コラン−２４−オアート（化合物９）
ＭｅＯＨ（２０ｍＬ）中の５（０．９２ｇ、１．５３ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＣｌ  ３Ｎ（４．６ｍＬ、１３．８ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を４５℃で１８時間撹拌した。水酸化ナトリウム（０．９０ｇ、２２．９５ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を４５℃でさらに５時間撹拌した。ＭｅＯＨを減圧下で除去し、残渣をＨ２Ｏで３０ｍＬまで希釈し、Ｅｔ２Ｏ（２ｘ１５ｍＬ）で洗浄した。水相をＨＣｌ  ３Ｎで酸性化し、ＣＨ３Ｃｌ３／ＭｅＯＨ（８５：１５、ｖ／ｖ）（５ｘ３０ｍＬ）で抽出し、減圧下で濃縮した。溶出液としてＨ２Ｏ／ＭｅＯＨ（６：４→３：７）を使用することにより、残渣をＲＰ−１８中圧液体クロマトグラフィーによって精製し、８２％収率で所望の化合物、化合物９を得た。
ｒｆ：０．４２（ＴＬＣ：シリカゲル６０  ＲＰ−８  Ｆ２５４Ｓ；溶出液：Ｈ２Ｏ／ＭｅＣＮ  ５０：５０）。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δ：０．７４（３Ｈ，ｓ，１８−ＣＨ３），０．８９−０．９１（６Ｈ，ｍ，１９−ＣＨ３＋ＣＨ２ＣＨ３），１．１１（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，２１−ＣＨ３），２．１７−２．２１（１Ｈ，ｍ，２２−ＣＨ２），３．３１−３．３５（１Ｈ，ｍ，３−ＣＨ），３．６６（１Ｈ，ｓ，７−ＣＨ），３．９８（１Ｈ，ｓ，１２−ＣＨ），５．０１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ１（Ｈ−Ｆ）＝１０．０Ｈｚ，Ｊ２（Ｈ−Ｆ）＝５１．３Ｈｚ，２３−ＣＨＦ）．１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，１００．６ＭＨｚ）δ：１２．９４，１３．８７，１８．４０，２４．４０（ｘ２），２５．０４，２９．１７，２９．６９，３０．６３，３１．９５，３４．６３，３５．２９，３７．２０（ｘ２），３７．５８，４０．９０（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝２０．５Ｈｚ），４２．６２，４４．０２，４４．１０，４７．８５，４８．５５，７２．００，７４．０７，７４．８６，８９．０１（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝１８０．４Ｈｚ），１７５．４３（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝２４．１Ｈｚ）．１９Ｆ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，３７６．５ＭＨｚ）δ  −１８４．０（１Ｆ，ｂｓ）．
【０１４１】
実施例１０：化合物１０の合成
【化１７】
2018518537.tif 000024
メチル３α，７α−ジメトキシメチルオキシ−６α−エチル−５β−コラン−２４−オアート（２）
ＭｅＯＨ（３０ｍＬ）中のＯＣＡ（１）（１．９３ｇ、４．５９ｍｍｏｌ）の溶液に、ｐ−トルエンスルホン酸（０．０９ｇ、０．４６ｍｍｏｌ）を添加し、超音波照射下で２時間、得られた混合物を反応させた。ＭｅＯＨを減圧下で除去し、残渣をＡｃＯＥｔ（３０ｍＬ）中で溶解させ、ＮａＨＣＯ３飽和溶液（３０ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（３０ｍＬ）およびブライン（２０ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。次いで残渣をＣＨ２Ｃｌ２（６０ｍＬ）中で溶解させ、ジイソプロピルエチルアミン（７．１ｍＬ、４１．４ｍｍｏｌ）、４−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）−ピリジン（０．０５ｇ、０．４６ｍｍｏｌ）およびメトキシメチルクロリド（２．１ｍＬ、２７．６ｍｍｏｌ）で処理した。次いで混合物を３６時間還流させた。反応物を室温で冷却し、Ｈ２Ｏ（３０ｍＬ）、ＨＣｌ  ３Ｎ（３０ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（３０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（３００ｍＬ）およびブライン（３０ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮して、薄黄色油状物質として２．３８ｇ（４．５５ｍｍｏｌ）の２を得た（定量的収率）。
【０１４２】
メチル３α，７α−ジメトキシメチルオキシ−６α−エチル−２３（Ｒ＋Ｓ）−ヒドロキシ−５β−コラン−２４−オアート（４）
Ｎ２雰囲気下で−４０℃に冷却した蒸留ＴＨＦ（３０ｍＬ）中のジイソプロピルアミン（７．６ｍＬ、８２．５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ヘキサン中のｎＢｕＬｉ  ２．５Ｍ（２０．６ｍＬ、５１．６ｍｍｏｌ）を滴加した。１５分後、溶液を−７８℃に冷却し、クロロトリメチルシラン（８．５ｍＬ、６７．０ｍｍｏｌ）を滴加した。さらに１５分後、内部温度を−７０℃に維持しながら、蒸留ＴＨＦ（２０ｍＬ）中の２（３．５０ｇ、６．７０ｍｍｏｌ）の溶液を約２０分で少量ずつ添加した。添加が終了したら、反応混合物を−７８℃で１時間撹拌し、次いで室温で温めた。揮発性物質を減圧下で除去した。残渣を石油エーテル（８０ｍＬ）中で懸濁し、真空下でろ過した。液を減圧下で濃縮し、蒸留ＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍＬ）中で溶解させた。Ｎ２雰囲気下の蒸留ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）中の新鮮結晶化および酢酸不含四酢酸鉛（ＩＶ）（４．４５ｇ、１０．５０ｍｍｏｌ）の懸濁液に、得られた溶液を滴加した。３０分後、セライトパッドに通して反応混合物を真空下でろ過した。ろ液を減圧下で濃縮し、シリカゲルパッド（ｈ：４ｃｍ、φ：２ｃｍ）に通して残渣をろ過し、石油エーテル／ＡｃＯＥｔ（８：２、ｖ／ｖ）で粗製物を回収した。溶媒蒸発後、ＭｅＯＨ（３０ｍＬ）中で残渣を溶解させ、炭酸カリウム（１．３８ｇ、１０．０５ｍｍｏｌ）で処理した。得られた懸濁液を室温で１５分間、激しく撹拌した。次いで混合物をＣＨ２Ｃｌ２（４０ｍＬ）で希釈し、真空下でろ過した。ろ液をさらなるＣＨ２Ｃｌ２（７０ｍＬ）で希釈し、ブライン（７０ｍＬ）で洗浄した。水相をＣＨ２Ｃｌ２（３ｘ４０ｍＬ）で抽出し、回収した有機層全てを無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。石油エーテル／ＡｃＯＥｔ（８：２→１：１、ｖ／ｖ）を使用することによって、残渣をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、（エピマー混合物として）１．７３ｇ（３．２１ｍｍｏｌ、４８％）の４を得た。
【０１４３】
メチル３α，７α−ジメトキシメチルオキシ−６α−エチル−２３−オキソ−５β−コラン−２４−オアート（５）
Ｎ２雰囲気下で−６０℃に冷却した蒸留ＣＨ２Ｃｌ２（１２ｍＬ）中の塩化オキサリル（４０．２ｍＬ、２．１０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＣＨ２Ｃｌ２（２ｍＬ）中で希釈したＤＭＳＯ（０．３０ｍＬ、４．１８ｍｍｏｌ）を滴加した。１５分後、ＣＨ２Ｃｌ２（１２ｍＬ）中の４（０．４５ｇ、０．８４ｍｍｏｌ）の溶液を滴加し、得られた混合物を−６０℃で１時間撹拌した。トリエチルアミン（１．２ｍＬ、８．４０ｍｍｏｌ）を滴加し、混合物を室温でゆっくりと温めた。反応混合物をＫＯＨ  １Ｍ（２０ｍＬ）で５分間処理し、２相を分離し、水相をＣＨ２Ｃｌ２（２ｘ２０ｍＬ）で抽出した。回収した有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。溶出液として石油エーテル／ＡｃＯＥｔ（９：１→８：２、ｖ／ｖ）を使用して、シリカゲルフラッシュフラッシュクロマトグラフィーによって残渣を精製して、５（０．４３ｇ、０．８０ｍｍｏｌ、９６％）を得た。
【０１４４】
メチル３α，７α−ジメトキシメチルオキシ−６α−エチル−２３，２３−ゲムジフルオロ−５β−コラン−２４−オアート（６）
Ｎ２雰囲気下の蒸留ＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）中の５（０．４３ｇ、０．８０ｍｍｏｌ）の溶液に、ジエチルアミノサルファートリフルオリド（１．０６ｍＬ、８．０２ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を室温で１２時間撹拌した。飽和ＮａＨＣＯ３（５０ｍＬ）中に混合物を慎重に注ぎ、ＣＯ２放出が完了するまで水−氷浴中で撹拌した。２相を分離し、有機層をＨ２Ｏ（２０ｍＬ）、ブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。石油エーテル／ＡｃＯＥｔ（９５：５→８：２、ｖ／ｖ）の溶液を使用することにより、残渣をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、０．３１ｇ（０．５６ｍｍｏｌ、７１％）の純粋な６を得た。
【０１４５】
３α，７α−ジヒドロキシ−６α−エチル−２３，２３−ゲムジフルオロ−５β−コラン−２４−オイン酸（化合物１０）
ＭｅＯＨ（１５ｍＬ）中の６（０．３１ｇ、０．５６ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＣｌ  ３Ｎ（１．７ｍＬ、５．０４ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を４５℃で１２時間撹拌した。水酸化ナトリウム（０．３３ｇ、８．４０ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を４５℃でさらに４時間撹拌した。ＭｅＯＨを減圧下で除去し、残渣をＨ２Ｏで１５ｍＬまで希釈し、Ｅｔ２Ｏ（２ｘ１０ｍＬ）で洗浄した。ＨＣｌ  ３Ｎを添加することによって水相を酸性化し、得られた白っぽい懸濁液をＲＰ−１８シリカゲルパッド（ｈ：３ｃｍ、φ：１ｃｍ）に通して真空下でろ過し、Ｈ２Ｏ（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｈ２Ｏ／ＭｅＣＮ  ４０：６０（ｖ／ｖ）の溶液を使用して粗製物質を回収した。溶媒を減圧下で除去したら、Ｈ２Ｏ／ＭｅＣＮ（８：２→４：６、ｖ／ｖ）で残渣をＲＰ−１８中圧液体クロマトグラフィーによって精製した。０．２２ｇ（０．４８ｍｍｏｌ、８６％）の純粋なジフルオロ誘導体化合物１０を得た。
ｒｆ：０．３１（ＴＬＣ：シリカゲル６０ＲＰ−８  Ｆ２５４Ｓ；溶出液：Ｈ２Ｏ／ＭｅＣＮ６０：４０）。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，４００ＭＨｚ）δ：０．６２（３Ｈ，ｓ，１８−ＣＨ３），０．８２−０．９１（６Ｈ，ｍ，１９−ＣＨ３＋ＣＨ２ＣＨ３），１．０１（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，２１−ＣＨ３），２．０９−２．１３（１Ｈ，ｍ，２２−ＣＨ２），３．１７−３．２１（１Ｈ，ｍ，３−ＣＨ），３．４９（１Ｈ，ｓ，７−ＣＨ），４．０７（１Ｈ，ｂｓ，ＯＨ）．１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，１００．６ＭＨｚ）δ  １１．４，１１．６，１９．６，２０．３，２２．１，２２．９，２３．０，２８．０，３０．４，３０．９，３２．６，３３．５，３５．１，３５．５，４１．２，４２．０，４５．３，４８．５，５０．２，５５．６，６８．３，７０．５，１１７．３（ＪＣ−Ｆ＝２４８．７Ｈｚ），１６５．６（ＪＣ−Ｆ＝３１．６Ｈｚ）．１９Ｆ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，３７６．５ＭＨｚ）δ  −１００．９（２Ｆ，ｍ）．ＭＳ−ＴＩＣ（−）ｍ／ｚ：４５５．４．
【０１４６】
実施例１１：化合物１１の合成
【化１８】
2018518537.tif 000025
メチル３α，７α，１２α−トリメトキシメチルオキシ−６α−エチル−５β−コラン−２４−オアート（２）
ＭｅＯＨ（１５０ｍＬ）中の３α，７α，１２α−トリヒドロキシ−６α−エチル−５β−コラン−２４−オイン酸（６−ＥＣＡ、１）（２０．０ｇ、４５．９ｍｍｏｌ）の溶液に、ｐ−トルエンスルホン酸（０．４４ｇ、２．２９ｍｍｏｌ）を添加し、得られた混合物を超音波照射下で２時間反応させた。ＭｅＯＨを減圧下で除去し、残渣をＡｃＯＥｔ（２００ｍＬ）中で溶解させ、ＮａＨＣＯ３飽和溶液（２００ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（２００ｍＬ）およびブライン（２００ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。次いで残渣をＣＨ２Ｃｌ２（１８０ｍＬ）中で溶解させ、得られた溶液をジイソプロピルエチルアミン（９４ｍＬ、５５０．５ｍｍｏｌ）、４−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）−ピリジン（０．５６ｇ、４．６ｍｍｏｌ）およびメトキシメチルクロリド（３１．２ｍＬ、４１２．８ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を撹拌し、４８時間還流させた。反応物を室温で冷却し、Ｈ２Ｏ（１００ｍＬ）、ＨＣｌ  ３Ｎ（１００ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（１００ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（１００ｍＬ）およびブライン（１００ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮して、薄黄色油状物質として２６．６１ｇ（４５．６５ｍｍｏｌ）の２を得た（定量的収率）。
【０１４７】
３α，７α，１２α−トリメトキシメチルオキシ−６α−エチル−５β−コラン−２４−アミド（３）
還流温度にてマグネット撹拌下で２時間、２（１．５５ｇ、３．４４ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ中のＮａＯＨ５％（３０ｍＬ）で処理した。ＭｅＯＨを除去し、残渣をＡｃＯＥｔ（５０ｍＬ）中で溶解させ、Ｈ２Ｏ（５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。油状残渣をＴＨＦ（３０ｍＬ）中で溶解させ、クロロギ酸エチル（０．４５ｍＬ、４．８２ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．７２ｍＬ、５．１６ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を１時間、激しく撹拌した。反応物をＡｃＯＥｔ（５０ｍＬ）で希釈し、Ｈ２Ｏ（３０ｍＬ）、ＨＣｌ水１Ｎ（３０ｍＬ）、ブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮して、定量的収率で所望のアミド中間体３を得た。粗製物をさらに精製せずに次の段階に対して使用した。
【０１４８】
３α，７α，１２α−トリメトキシメチルオキシ−６α−エチル−２３−シアノ−２４−ノル−５β−コラン（４）
ＤＭＦ（２０ｍＬ）中の３（１．９５ｇ、３．４４ｍｍｏｌ）の溶液に、シアヌル酸クロリド（０．４２ｇ、６．８８ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を室温で１８時間撹拌した。混合物をＡｃＯＥｔ（１００ｍＬ）に注ぎ、Ｈ２Ｏ（５ｘ５０ｍＬ）、ブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。石油エーテル／ＡｃＯＥｔ（９：１→７：３、ｖ／ｖ）で残渣をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、１．１５ｇ（２．１０，ｍｍｏｌ、６１％）のシアノ誘導体４を得た。
【０１４９】
３α，７α，１２α−トリメトキシメチルオキシ−６α−エチル−５β−２４−Ｎ−ヒドロキシ−コラナミジン（ｃｈｏｌａｎａｍｉｄｉｎｅ）（５）
ＥｔＯＨ（３０ｍＬ）中の４（０．６０ｇ、１．１１ｍｍｏｌ）の溶液に、ヒドロキシルアミンクロロハイドレード（０．７７ｇ、１１．１６ｍｍｏｌ）および炭酸ナトリウム十水和物（３．２０ｇ、１１．１６ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を３６時間還流させた。揮発性物質を減圧下で除去し、得られた残渣をＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）中で溶解させ、Ｈ２Ｏ（３ｘ３０ｍＬ）、ブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮した。ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ（９８：２→９５：５、ｖ／ｖ）を使用することにより、粗製物をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、それによって０．４２ｇ（０．７２ｍｍｏｌ、６５％）の純粋な５を得た。
【０１５０】
３α，７α，１２α−トリメトキシメチルオキシ−６α−エチル−５β−２４−Ｎ［（エトキシカルボニル）オキシ］イミドコラナミド（６）
０℃に冷却し、Ｎ２雰囲気下の蒸留ＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍＬ）中の５（０．４２ｇ、０．７２ｍｍｏｌ）の溶液に、クロロギ酸エチル（０．０７ｍＬ、０．９４ｍｏｌ）およびピリジン（０．０９ｍＬ、１．０８ｍｍｏｌ）を滴加し、反応混合物を室温で１時間撹拌した。反応をＨ２Ｏ（１５ｍＬ）で不活性化し、２相を分離し、有機層をＨ２Ｏ（３ｘ１５ｍＬ）、ブライン（１５ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して、粗製物質として６（０．４４ｇ）を得て、これをさらに精製せずに次の段階に対して使用した。
【０１５１】
３α，７α，１２α−トリメトキシメチルオキシ−６α−エチル−２４−ノル−５β−２３（［１，２，４］−オキサジアゾール−３−オン−５イル）−コラン（７）
トルエン（２０ｍＬ）およびピリジン（５ｍＬ）中の６（０．４４ｇ）の溶液を４８時間還流させた。次いで混合物をＡｃＯＥｔ（５０ｍＬ）で希釈し、Ｈ２Ｏ（３ｘ５０ｍＬ）、ブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して、０．４３ｇの７を得て、これをそのまま次の段階に対して使用した。
【０１５２】
３α，７α，１２α−トリヒドロキシ−６α−エチル−２４−ノル−５β−２３（［１，２，４］−オキサジアゾール−３−オン−５イル）−コラン（化合物１１）
アセトン（１５ｍＬ）中の粗製物８（０．４３ｇ）の溶液に、ＨＣｌ  ３Ｎ（５ｍＬ）を添加し、混合物を５０℃で６時間撹拌した。有機溶媒を減圧下で除去し、残渣をＣＨＣｌ３（３０ｍＬ）中で溶解させ、Ｈ２Ｏ（３ｘ２０ｍＬ）、ブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮した。ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／ＡｃＯＨ（９８：２：０．１→９３：７：０．１、ｖ／ｖ／ｖ）を使用することによって残渣をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、０．１４ｇ（０．２９ｍｍｏｌ、中間体６から４１％）の純粋な化合物１１を得た。
ｒｆ：０．３７（ＴＬＣ：シリカゲル６０ＲＰ−８  Ｆ２５４Ｓ；溶出液：Ｈ２Ｏ／ＭｅＣＮ  ５０：５０）。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ：０．７０（３Ｈ，ｓ，１８−ＣＨ３），０．８９−０．９２（６Ｈ，ｍ，１９−ＣＨ３＋ＣＨ２ＣＨ３），１．０３（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，２１−ＣＨ３），２．１８−２．５９（２Ｈ，ｍ，２３−ＣＨ２），３．４２−３．４５（１Ｈ，ｍ，３−ＣＨ），３．７１（１Ｈ，ｓ，７−ＣＨ），３．９９（１Ｈ，ｓ，１２−ＣＨ）．１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００．６ＭＨｚ）δ：１１．６，１２．４，１７．２，２１．８，２２．１，２２．７，２３．２，２６．７，２７．５，２８．２，３０．０，３１．８，３３．４，３５．１，３５．４（ｘ２），３９．９，４１．３，４１．８，４５．０，４６．２，４６．４，７１．０，７２．２，７３．３，１６０．４，１６０．９．
【０１５３】
実施例１２：化合物１２の合成
【化１９】
2018518537.tif 000026
メチル３α，７α，１２α−トリメトキシメチルオキシ−６α−エチル−５β−コラン−２４−オアート（２）
ＭｅＯＨ（１５０ｍＬ）中の３α，７α，１２α−トリヒドロキシ−６α−エチル−５β−コラン−２４−オイン酸（６−ＥＣＡ、１）（２０．０ｇ、４５．９ｍｍｏｌ）の溶液に、ｐ−トルエンスルホン酸（０．４４ｇ、２．２９ｍｍｏｌ）を添加し、得られた混合物を超音波照射下で２時間反応させた。ＭｅＯＨを減圧下で除去し、残渣をＡｃＯＥｔ（２００ｍＬ）中で溶解させ、ＮａＨＣＯ３飽和溶液（２００ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（２００ｍＬ）およびブライン（２００ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。次いで残渣をＣＨ２Ｃｌ２（１８０ｍＬ）中で溶解させ、得られた溶液をジイソプロピルエチルアミン（９４ｍＬ、５５０．５ｍｍｏｌ）、４−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）−ピリジン（０．５６ｇ、４．６ｍｍｏｌ）およびメトキシメチルクロリド（３１．２ｍＬ、４１２．８ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を撹拌し、４８時間還流させた。反応物を室温で冷却し、Ｈ２Ｏ（１００ｍＬ）、ＨＣｌ  ３Ｎ（１００ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（１００ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（１００ｍＬ）およびブライン（１００ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮して、薄黄色油状物質として２６．６１ｇ（４５．６５ｍｍｏｌ）の２を得た（定量的収率）。
【０１５４】
３α，７α，１２α−トリメトキシメチルオキシ−６α−エチル−５β−コラン−２４−アミド（３）
還流温度でマグネット撹拌下で２時間、２（１．５５ｇ、３．４４ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ中のＮａＯＨ５％（３０ｍＬ）で処理した。ＭｅＯＨを除去し、残渣をＡｃＯＥｔ（５０ｍＬ）中で溶解させ、Ｈ２Ｏ（５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。油状残渣をＴＨＦ（３０ｍＬ）中で溶解させ、クロロギ酸エチル（０．４５ｍＬ、４．８２ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．７２ｍＬ、５．１６ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を激しく１時間撹拌した。反応物をＡｃＯＥｔ（５０ｍＬ）で希釈し、Ｈ２Ｏ（３０ｍＬ）、ＨＣｌ水  １Ｎ（３０ｍＬ）、ブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮して、定量的収率で所望のアミド中間体３を得た。粗製物をさらに精製せずに次の段階に対して使用した。
【０１５５】
３α，７α，１２α−トリメトキシメチルオキシ−６α−エチル−２３−シアノ−２４−ノル−５β−コラン（４）
ＤＭＦ（２０ｍＬ）中の３（１．９５ｇ、３．４４ｍｍｏｌ）の溶液に、シアヌル酸クロリド（０．４２ｇ、６．８８ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を室温で１８時間撹拌した。混合物をＡｃＯＥｔ（１００ｍＬ）に注ぎ、Ｈ２Ｏ（５ｘ５０ｍＬ）、ブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。石油エーテル／ＡｃＯＥｔ（９：１→７：３、ｖ／ｖ）で残渣をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、１．１５ｇ（２．１０，ｍｍｏｌ、６１％）のシアノ誘導体４を得た。
【０１５６】
３α，７α，１２α−トリヒドロキシ−６α−エチル−２３−（テトラゾール−５−イル）−２４−ノル−５β−コラン（化合物１２）
蒸留ＰｈＭｅ（１０ｍＬ）でＮ２雰囲気下の４（０．２０ｇ、０．３６ｍｍｏｌ）の溶液に、トリブチルスズアジド（０．５０ｍＬ、１．８０ｍｍｏｌ）を添加し、得られた混合物を７２時間還流させた。完了時に、反応混合物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で希釈し、Ｈ２Ｏ（３ｘ１５ｍＬ）、ブライン（１５ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮した。粗製物５（０．２４ｇ）をアセトン（１５ｍＬ）中で溶解させ、５０℃で６時間、ＨＣｌ  ３Ｎ（５ｍＬ）で処理した。アセトンを減圧下で除去し、残渣をＨ２Ｏ（２０ｍＬ）で希釈し、ＮａＯＨ  ３Ｎを添加することによって、ｐＨ１４まで塩基性化した。混合物をＥｔ２Ｏ（３ｘ２０ｍＬ）で洗浄し、ＨＣｌ  ３Ｎで酸性化し、ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ（９：１、ｖ／ｖ）で抽出し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／ＡｃＯＨ（９６：４：０．１→９０：１０：０．１、ｖ／ｖ／ｖ）を使用して残渣をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、０．１１ｇ（０．２４ｍｍｏｌ、６６％）の純粋な化合物１２を得た。
ｒｆ：０．３９（ＴＬＣ：シリカゲル６０  ＲＰ−８  Ｆ２５４Ｓ；溶出液：Ｈ２Ｏ／ＭｅＣＮ  ５０：５０）。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δ：０．７０（３Ｈ，ｓ，１８−ＣＨ３），０．８８−０．９１（６Ｈ，ｍ，１９−ＣＨ３＋ＣＨ２ＣＨ３），１．１３（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，２１−ＣＨ３），２．１８−２．２２（１Ｈ，ｍ，２２−ＣＨ２），２．８３−２．９１（１Ｈ，ｍ，２３−ＣＨ２），２．９７−３．０４（１Ｈ，ｍ，２３−ＣＨ２），３．２９−３．３４（１Ｈ，ｍ，３−ＣＨ），３．６６（１Ｈ，ｓ，７−ＣＨ），３．９６（１Ｈ，ｓ，１２−ＣＨ）．１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，１００．６ＭＨｚ）δ：１２．０，１２．９，１７．５，２１．１，２３．４，２３．５，２４．１，２８．２，２８．７，２９．７，３１．０，３４．３，３５．２，３６．３，３６．６，３６．７，４１．７，４３．１，４３．１，４６．９，４７．５，４７．８，７１．１，７３．１，７４．０，１５８．８．
【０１５７】
実施例１３：化合物１３の合成
【化２０】
2018518537.tif 000027
メチル３α，７α−ジヒドロキシ−６α−エチル−５β−コラノアート（２）
ＭｅＯＨ（１００ｍＬ）中のＯＣＡ（１）（５．０ｇ、１１．９ｍｍｏｌ）の溶液に、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（０．２３ｇ、１．１９ｍｍｏｌ）を添加し、室温で９０分間、混合物を超音波処理した。溶媒を減圧下で除去し、残渣をＣＨＣｌ３（１００ｍＬ）中で溶解させ、飽和ＮａＨＣＯ３（１００ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。このようにして得た白色固形物（５．１７ｇ、１１．８９ｍｍｏｌ）をさらに精製せずに次の段階に対して使用した。
【０１５８】
３α，７α−ジヒドロキシ−６α−エチル−２４，２４−ビフェニル−５β−コラン−２３−エン（３）
ドライＴＨＦ（１２５ｍＬ）中のメチル６α−エチル−３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラノアート（２）（５．１７ｇ、１１．８９ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｅｔ２Ｏ中の臭化フェニルマグネシウム３Ｍ（３９．６ｍＬ、１１８．９ｍｍｏｌ）を滴加した。混合物を１２時間還流させた。室温で冷却後、混合物をＨ２Ｏ（１００ｍＬ）およびＨＣｌ  ３Ｍ（１００ｍＬ）で処理した。混合物をＥｔＯＡｃ（３ｘ８０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層をブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。粗製物をＭｅＯＨ（１００ｍＬ）中で溶解させ、ＨＣｌ  ３７％（１０ｍＬ）の存在下で１時間還流させた。ＭｅＯＨを蒸発させ、得られた残渣をＥｔＯＡｃ（１２０ｍＬ）中で溶解させ、Ｈ２Ｏ（２ｘ１００ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。ビフェニル誘導体３を精製せずに次の段階に対して使用した。
【０１５９】
３α，７α−ジアセトキシ−６α−エチル−２４，２４−ビフェニル−５β−コラン−２３−エン（４）
ＣＨ２Ｃｌ２（７０ｍＬ）中の３（６．４２ｇ、１１．８９ｍｍｏｌ）の溶液に、無水酢酸（６．０６ｇ、５９．４５ｍｍｏｌ）およびトリフルオロメタンスルホン酸ビスマス（０．３９ｇ、０．５９ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を室温で１時間撹拌した。次いでＮａＨＣＯ３の飽和水溶液（５０ｍＬ）を慎重に添加し、相を分離した。水層をＣＨ２Ｃｌ２（２ｘ５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＨ２Ｏ（１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。石油エーテル／ＥｔＯＡｃ（９５：５→７：３、ｖ／ｖ）により構成される溶出液を使用して、粗製物をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、５．５６ｇ（８．９１ｍｍｏｌ、７５％）の所望の中間体４を得た。
【０１６０】
３α，７α−ジアセトキシ−６α−エチル−２４−ノル−５β−コラン−２３−オイン酸（５）
Ｈ２Ｏ（２０ｍＬ）中の過ヨウ素酸ナトリウム（２１．１３ｇ、９８．７３ｍｍｏｌ）の懸濁液に、Ｈ２Ｏ中のＨ２ＳＯ４  ２Ｎ（３．２２ｍＬ）を添加し、混合物を室温で１時間撹拌した。混合物を０℃に冷却し、三塩化ルテニウム水和物（０．１１ｇ、０．５５ｍｍｏｌ）で処理し、これを一度に添加した。１時間後、アセトニトリル（３１ｍＬ）をこの溶液に添加し、さらに５分後、ＥｔＯＡｃ（４３ｍＬ）中のビフェニル誘導体４（６．８５ｇ、１０．９７ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。混合物を室温で１時間撹拌した。このようにして形成された白色固形物をろ取し、次いで液をＨ２Ｏ（１００ｍＬ）に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３ｘ５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をセライトパッドに通してろ過し、Ｈ２Ｏ中のＮａ２Ｓ２Ｏ３飽和溶液（１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、１０〜５０％の石油エーテル中のＥｔＯＡｃで溶出した。白色固形物として所望の酸５を得た（５．２７ｇ、１０．７５ｍｍｏｌ、９８％）。
【０１６１】
３α，７α−ジアセトキシ−６α−エチル−２４−ノル−５β−コラン−２３−アミド（６）
０℃のドライＴＨＦ（４０ｍＬ）中の酸５（２．１２ｇ、４．３１ｍｍｏｌ）の溶液に、トリエチルアミン（０．６５ｇ、６．４７ｍｍｏｌ）およびクロロギ酸エチル（０．６５ｇ、６．０４ｍｍｏｌ）を添加した。得られた懸濁液を室温で１時間撹拌した。ＮＨ３（Ｈ２Ｏ中２８％、０．７３ｇ、２．９４ｍＬ）を混合物に滴加し、室温で１２時間撹拌した。混合物をＨ２Ｏ（５０ｍＬ）に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（２ｘ５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＨＣｌ  １Ｎ（５０ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（５０ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。化合物６をさらに精製せずに次の段階に対して使用した。
【０１６２】
３α，７α−ジアセトキシ−６α−エチル−２２−シアノ−２３，２４−ビスノル−５β−コラン（７）
ＤＭＦ（３０ｍＬ）中のアミド６（１．５０ｇ、３．０６ｍｍｏｌ）の溶液に、塩化シアン（０．３７ｇ、６．０１３ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で１２時間撹拌した。混合物をＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）で希釈し、Ｈ２Ｏ（３ｘ３０ｍＬ）、ブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。油状残渣をシリカゲルフラッシュフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、１０〜５０％（ｖ／ｖ）の石油エーテル中のＥｔＯＡｃで溶出して、０．９８ｇ（２．０８ｍｍｏｌ、６８％）の所望のニトリル誘導体７を得た。
【０１６３】
３α，７α−ジメトキシメチルオキシ−６α−エチル−２２−［１−（トリブチルスタンニル）−テトラゾール−５−イル］−２３，２４−ビスノル−５β−コラン（８）
トルエン（２５ｍＬ）中のニトリル７（０．８１ｇ、１．７２ｍｍｏｌ）の溶液に、トリブチルスズアジド（２．８７ｇ、８．５８ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を３６時間、還流させた。次いで混合物を室温で冷却し、ＥｔＯＡｃ（２５ｍＬ）で希釈し、ＨＣｌ  ３Ｎ（３ｘ２０ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（５０ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって精製し（２〜５％、ｖ／ｖのジクロロメタン中のメタノールで溶出）、０．３１ｇ（０．６１ｍｍｏｌ、６１％）の所望の保護されたテトラゾール８を得た。
【０１６４】
３α，７α−ジヒドロキシ−６α−エチル−２３−（テトラゾール−５−イル）−２４−ノル−５β−コラン（化合物１３）
Ｈ２Ｏ（１ｍＬ）およびＭｅＯＨ（７ｍＬ）中のテトラゾール８（０．２７ｇ、０．５３ｍｍｏｌ）の懸濁液に、ＫＯＨ（０．４４４ｇ、７．８７ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を１６時間、マイクロ波照射に供した（Ｔ＝１３５℃、Ｐｍａｘ＝２５０ｐｓｉ、出力ｍａｘ＝２００Ｗ）。有機溶媒を減圧下で除去し、残渣をＨ２Ｏ（５０ｍＬ）中で溶解させ、Ｅｔ２Ｏ（２ｘ１５ｍＬ）で抽出した。水相をＨＣｌ  ３Ｎで酸性化し、ＣＨ２Ｃｌ２（３ｘ１５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＨ２Ｏ（５０ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。粗製物をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３中ＭｅＯＨ０〜１０％、ｖ／ｖで溶出）によって精製し、白色固形物として所望の誘導体化合物１３を得た（０．１９ｇ、０．４４ｍｍｏｌ、８４％）。
ｒｆ：０．３１（ＴＬＣ：シリカゲル６０  Ｆ２５４Ｓ；溶出液：ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／ＡｃＯＨ  ９６：４：１）。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δ  ０．７５（３Ｈ，ｓ，１８−ＣＨ３），０．８９−０．８９２（９Ｈ，ｍ，１９−ＣＨ３＋２１−ＣＨ３＋ＣＨ２ＣＨ３），２．６６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ１＝９．７Ｈｚ，Ｊ２＝１４．５Ｈｚ，２２−ＣＨ２），３．０４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ１＝３．２Ｈｚ，Ｊ２＝１４．５Ｈｚ，２２−ＣＨ２），３．２９−３．３５（１Ｈ，ｍ，３−ＣＨ），３．６７（１Ｈ，ｓ，７−ＣＨ）．１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δ  １２．９，１３．１，２０．１，２２．８，２４．４，２４．６，２５．５，３０．４，３１．９，３２．１，３５．２，３５．４，３７．５，３７．６，３８．４，４１．７，４２．１，４４．０，４４．７，４７．８，５２．９，５８．３，７２．０，７４．０，１５８．１．
【０１６５】
実施例１４：化合物１４の合成
【化２１】
2018518537.tif 000028
３α−アセトキシ−６α−エチル−７α−ヒドロキシ−５β−コラン−２４−オイン酸（２）
ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）中のＯＣＡ（１）（５．００ｇ、１１．８７ｍｍｏｌ）の溶液に、Ａｃ２Ｏ（８．４ｍＬ、８９．２２ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（１５．５ｍＬ、８９．２２ｍｍｏｌ）および４−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）−ピリジン（０．５４ｇ、４．４６ｍｍｏｌ）を添加し、得られた懸濁液を１０分間、還流温度で撹拌した。混合物を室温で冷却し、ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）で希釈し、Ｈ２Ｏ（３ｘ５０ｍＬ）およびＨＣｌ  ３Ｎ（５０ｍＬ）で洗浄した。有機層を２分間、ＨＣｌ  ３７％（５ｍＬ）で処理した。Ｈ２Ｏ（５０ｍＬ）を添加し、２相を分離し、有機相を飽和ＮａＨＣＯ３（１００ｍＬ）およびブライン（１００ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮して、薄黄色固形物として５．４９ｇの２を得た（定量的収率）。
【０１６６】
３α−アセトキシ−６α−エチル−７α−オキソ−５β−コラン−２４−オイン酸（３）
ＣＨ２Ｃｌ２（６０ｍＬ）中の２（５．４９ｇ、１１．８７ｍｍｏｌ）の溶液に、クロロクロム酸ピリジニウム（７．６７ｇ、３５．６９ｍｍｏｌ）を添加し、得られた暗色の混合物を室温で２時間撹拌した。このようにして得た懸濁液をセライトパッドに通して真空下でろ過し、ろ液を飽和ＮａＨＣＯ３（１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。石油エーテル／ＡｃＯＥｔ（８：２→６：４、ｖ／ｖ）を使用することによって、残渣をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、それによって４．４３ｇ（９．６１ｍｍｏｌ、８０％）の純粋な３を得た。
【０１６７】
３α−アセトキシ−６α−エチル−７α−オキソ−２２−シアノ−２３，２４−ビスノル−５β−コラン（４）
０℃で冷却したトリフルオロ酢酸（３０ｍＬ）中の３（４．４３ｇ、９．５５ｍｍｏｌ）の溶液に、トリフルオロ酢酸無水物（１０．１ｍＬ、７１．６１ｍｍｏｌ）を添加し、得られた混合物を同じ温度で４５分間撹拌した。温度を０℃に維持しながら、亜硝酸ナトリウム（１．９８ｇ、２８．６４ｍｍｏｌ）を少量ずつ添加し、このようにして得た赤色の溶液を０℃で１時間、次いで４５℃でさらに５０分間撹拌した。混合物を室温で冷却し、Ｈ２Ｏ／氷浴（約１５０ｍＬ）にゆっくりと注ぎ、ＡｃＯＥｔ（３ｘ５０ｍＬ）で抽出した。中性ｐＨになるまで回収した有機層をＮａＯＨ  ５Ｍ（３ｘ５０ｍＬ）で洗浄し、Ｈ２Ｏ（５０ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮して、３．５１ｇの４を得て、それを次の段階に対してそのまま使用した。
【０１６８】
３α−アセトキシ−６α−エチル−７α−ヒドロキシ−２２−シアノ−２３，２４−ビスノル−５β−コラン（５）
０℃で冷却したＴＨＦ（８０ｍＬ）およびＨ２Ｏ（２０ｍＬ）中の４（３．５１ｇ、８．１８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮａＢＨ４（１．２５ｇ、３２．８８ｍｍｏｌ）を少量ずつ添加した。３０分後、ＡｃＯＥｔ（１００ｍＬ）およびＨＣｌ  ３Ｎ（３０ｍＬ）を添加することによって反応を不活性化させた。２相を分離し、水相をＡｃＯＥｔ（２ｘ５０ｍＬ）で抽出した。回収した有機層をＨ２Ｏ（５０ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮して、定量的収率で所望の５（３．５２ｇ）を得た。
【０１６９】
３α，７α−ジヒドロキシ−６α−エチル−２４−ノル−５β−２３−Ｎ−ヒドロキシ−コラナミジン（ｃｈｏｌａｎａｍｉｄｉｎｅ）（６）
ＥｔＯＨ（１２０ｍＬ）中の５（３．５２ｇ、８．１８ｍｍｏｌ）の溶液に、ヒドロキシルアミンクロロハイドレード（１７．５５ｇ、１０９．３５ｍｍｏｌ）および炭酸ナトリウム十水和物（３１．２８ｇ、１０９．３５ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を撹拌し、４８時間還流させた。揮発性物質を減圧下で除去し、得られた残渣をＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）中で溶解させ、Ｈ２Ｏ（３ｘ１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して、３．４５ｇの６を得て、それをさらに精製せずに次の段階に対して使用した。
【０１７０】
３α，７α−ジヒドロキシ−６α−エチル−２４−ノル−５β−２３−Ｎ［（エトキシカルボニル）オキシ］イミドコラナミド（７）
０℃で冷却した、Ｎ２雰囲気下の、蒸留ＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）中の６（３．４５ｇ、８．１８ｍｍｏｌｍｍｏｌ）の溶液に、ピリジン（０．９９ｍＬ、１２．２７ｍｍｏｌ）およびクロロギ酸エチル（０．７０ｍＬ、７．３６ｍｍｏｌ）を滴加し、反応混合物を室温で１時間撹拌した。反応をＨ２Ｏ（５０ｍＬ）で不活性化させ、２相を分離し、有機層をＨ２Ｏ（３ｘ５０ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して、７（３．５０ｇ）を得て、これをさらに精製せずに次の段階に対して使用した。
【０１７１】
３α，７α−ジヒドロキシ−６α−エチル−２３，２４−ビスノル−５β−２２（［１，２，４］−オキサジアゾール−３−オン−５イル）−コラン（化合物１４）
トルエン（１００ｍＬ）およびピリジン（２０ｍＬ）中の粗製物７（３．５０ｇ）の溶液を７２時間還流させた。次いで混合物を室温で冷却し、ＡｃＯＥｔ（２００ｍＬ）で希釈し、Ｈ２Ｏ（１００ｍＬ）、ＨＣｌ  ３Ｎ（１００ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（１００ｍＬ）、ブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮した。ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ／ＡｃＯＨ（９８：２：０．１→９５：５：０．１、ｖ／ｖ／ｖ）の溶液を使用することにより、残渣をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、中間体５から３４％で１．２３ｇの純粋な化合物１４を得た。
ｒｆ：０．１８（ＴＬＣ：シリカゲル６０  ＲＰ−８  Ｆ２５４Ｓ；溶出液：Ｈ２Ｏ／ＭｅＯＨ  ２０：８０）。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δ  ０．７５（３Ｈ，ｓ，１８−ＣＨ３），０．９２−０．９６（６Ｈ，ｍ，１９−ＣＨ３＋ＣＨ２ＣＨ３），０．９９（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．８，２１−ＣＨ３），２．１９（１Ｈ，ｍ，２２−ＣＨ２），２．６７（１Ｈ，ｍ，２２−ＣＨ２），３．２８−３．３５（１Ｈ，ｍ，３−ＣＨ），３．６６（１Ｈ，ｓ，７−ＣＨ）．１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δ  １２．０，１２．４，１９．１，２１．９，２３．４，２３．７，２４．５，２９．３，３１．２，３２．８，３４．３，３４．５，３５．６，３６．６，３６．７，４０．８，４１．５，４３．１，４３．９，４６．９，５１．６，５７．５，７１．１，７３．１，１６０．７，１６２．３．
【０１７２】
実施例１５：化合物１５の合成
【化２２】
2018518537.tif 000029
メチル３α，７α−ジメトキシメチルオキシ−６α−エチル−５β−コラン−２４−オアート（２）
ＭｅＯＨ（３０ｍＬ）中のＯＣＡ（１）（１．９３ｇ、４．５９ｍｍｏｌ）の溶液に、ｐ−トルエンスルホン酸（０．０９ｇ、０．４６ｍｍｏｌ）を添加し、超音波照射下で２時間、得られた混合物を反応させた。ＭｅＯＨを減圧下で除去し、残渣をＡｃＯＥｔ（３０ｍＬ）中で溶解させ、ＮａＨＣＯ３飽和溶液（３０ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（３０ｍＬ）およびブライン（２０ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。次いで残渣をＣＨ２Ｃｌ２（６０ｍＬ）中で溶解させ、ジイソプロピルエチルアミン（７．１ｍＬ、４１．４ｍｍｏｌ）、４−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）−ピリジン（０．０５ｇ、０．４６ｍｍｏｌ）およびメトキシメチルクロリド（２．１ｍＬ、２７．６ｍｍｏｌ）で処理した。次いで混合物を３６時間還流させた。反応物を室温で冷却し、Ｈ２Ｏ（３０ｍＬ）、ＨＣｌ  ３Ｎ（３０ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（３０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（３００ｍＬ）およびブライン（３０ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮して、薄黄色油状物質として２．３８ｇ（４．５５ｍｍｏｌ）の２を得た（定量的収率）。
【０１７３】
３α，７α−ジメトキシメチルオキシ−６α−エチル−５β−コラン−２４−アミド（３）
還流温度にてマグネット撹拌下で２時間、２（２．２４ｇ、４．３１ｍｍｏｌ）をＮａＯＨ  ５％の４０ｍＬのメタノール溶液で処理した。次いでＭｅＯＨを除去し、残渣をＡｃＯＥｔ（６０ｍＬ）中で溶解させ、Ｈ２Ｏ（６０ｍＬ）およびブライン（６０ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。油状残渣をＴＨＦ（４０ｍＬ）中で溶解させ、クロロギ酸エチル（０．５７ｍＬ、６．０４ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．９０ｍＬ、６．４７ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を１時間激しく撹拌した。反応が完了したら、混合物をＡｃＯＥｔ（６０ｍＬ）で希釈し、Ｈ２Ｏ（３０ｍＬ）、ＨＣｌ  １Ｎ（３０ｍＬ）、ブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮して、定量的収率で所望の中間体３を得た。粗製物をさらに精製せずに次の段階で使用した。
【０１７４】
３α，７α−ジメトキシメチルオキシ−６α−エチル−２３−シアノ−２４−ノル−５β−コラン（４）
ＤＭＦ（４０ｍＬ）中の３（２．０１ｇ、３．９６ｍｍｏｌ）の溶液に、シアヌル酸クロリド（０．４８ｇ、７．９２ｍｍｏｌ）を添加し、室温で１６時間、反応物を撹拌した。混合物をＡｃＯＥｔ（１００ｍＬ）に注ぎ、Ｈ２Ｏ（５ｘ５０ｍＬ）およびブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。溶出液として石油エーテル／ＡｃＯＥｔ（９：１→６５：３５、ｖ／ｖ）を用いて残渣をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、１．４３ｇ（２．９３ｍｍｏｌ、７４％）の４を得た。
【０１７５】
３α，７α−ジヒドロキシ−６α−エチル−２３−（テトラゾール−５−イル）−６α−エチル−２４−ノル−５β−コラン（化合物１５）
蒸留ＰｈＭｅ（１５ｍＬ）中でＮ２雰囲気下の４（０．７０ｇ、１．４３ｍｍｏｌ）の溶液に、トリブチルスズアジド（１．９７ｍＬ、７．４５ｍｍｏｌ）を添加し、得られた混合物を４８時間還流させた。完了時に、反応混合物をＥｔＯＡｃ（４０ｍＬ）で希釈し、Ｈ２Ｏ（３ｘ２０ｍＬ）、ブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮した。粗製物５（０．８０ｇ）をアセトン（３０ｍＬ）およびＨＣｌ  ３Ｎ（１０ｍＬ）中で溶解させ、得られた混合物を５０℃で６時間撹拌した。アセトンを減圧下で除去し、残渣をＨ２Ｏ（２０ｍＬ）で希釈し、ＮａＯＨ  ３Ｎ水を添加することによってｐＨ１４まで塩基性化した。混合物をＥｔ２Ｏ（３ｘ２０ｍＬ）で洗浄し、ＨＣｌ  ３Ｎで酸性化し、ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨの溶液（９５：１５、ｖ／ｖ）で抽出し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／ＡｃＯＨ（９８：２：０．１→９４：１７：０．１、ｖ／ｖ／ｖ）により構成される溶出液を使用することにより、残渣をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、０．３６ｇ（０．８１ｍｍｏｌ、中間体４から５７％）の純粋な化合物１５を得た。
ｒｆ：０．３８（ＴＬＣ：シリカゲルＦ２５４Ｓ；溶出液：ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ／ＡｃＯＨ  ９０：１０：１）。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δ：０．６８（３Ｈ，ｓ，１８−ＣＨ３），０．８９−０．９３（６Ｈ，ｍ，１９−ＣＨ３＋ＣＨ２ＣＨ３），１．０３（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，２１−ＣＨ３），２．８７−２．９２（１Ｈ，ｍ，２３−ＣＨ２），２．９７−３．００（１Ｈ，ｍ，２３−ＣＨ２），３．３３−３．３７（１Ｈ，ｍ，３−ＣＨ），３．６５（１Ｈ，ｓ，７−ＣＨ）．１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００．６ＭＨｚ）δ：１２．９，１３．１，１９．６，２１．９，２２．９，２４．４，２４．６，２５．４，３０．２，３２．１，３５．３，３５．４，３６．０，３７．５，３７．６，４１．９，４２．４，４４．０，４４．７，４７．８，５２．５，５８．０，７２．０，７４．１，１５９．２．
【０１７６】
実施例１６：化合物１６の合成
【化２３】
2018518537.tif 000030
メチル３α，７α−ジメトキシメチルオキシ−６α−エチル−５β−コラン−２４−オアート（２）
ＭｅＯＨ（３０ｍＬ）中のＯＣＡ（１）（１．９３ｇ、４．５９ｍｍｏｌ）の溶液に、ｐ−トルエンスルホン酸（０．０９ｇ、０．４６ｍｍｏｌ）を添加し、超音波照射下で２時間、得られた混合物を反応させた。ＭｅＯＨを減圧下で除去し、残渣をＡｃＯＥｔ（３０ｍＬ）中で溶解させ、ＮａＨＣＯ３飽和溶液（３０ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（３０ｍＬ）およびブライン（２０ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。次いで残渣をＣＨ２Ｃｌ２（６０ｍＬ）中で溶解させ、ジイソプロピルエチルアミン（７．１ｍＬ、４１．４ｍｍｏｌ）、４−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）−ピリジン（０．０５ｇ、０．４６ｍｍｏｌ）およびメトキシメチルクロリド（２．１ｍＬ、２７．６ｍｍｏｌ）で処理した。次いで混合物を３６時間還流させた。反応物を室温で冷却し、Ｈ２Ｏ（３０ｍＬ）、ＨＣｌ  ３Ｎ（３０ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（３０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（３００ｍＬ）およびブライン（３０ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮して、薄黄色油状物質として２．３８ｇ（４．５５ｍｍｏｌ）の２を得た（定量的収率）。
【０１７７】
３α，７α−ジメトキシメチルオキシ−６α−エチル−５β−コラン−２４−アミド（３）
還流温度でマグネット撹拌下で２時間、２（２．２４ｇ、４．３１ｍｍｏｌ）を４０ｍＬのＮａＯＨ  ５％のメタノール溶液で処理した。次いでＭｅＯＨを除去し、残渣をＡｃＯＥｔ（６０ｍＬ）中で溶解させ、Ｈ２Ｏ（６０ｍＬ）およびブライン（６０ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。油状残渣をＴＨＦ（４０ｍＬ）中で溶解させ、クロロギ酸エチル（０．５７ｍＬ、６．０４ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．９０ｍＬ、６．４７ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を１時間、激しく撹拌した。反応が完了したら、混合物をＡｃＯＥｔ（６０ｍＬ）で希釈し、Ｈ２Ｏ（３０ｍＬ）、ＨＣｌ  １Ｎ（３０ｍＬ）、ブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮して、定量的収率で所望の中間体３を得た。粗製物をさらに精製せずに次の段階に対して使用した。
【０１７８】
３α，７α−ジメトキシメチルオキシ−６α−エチル−２３−シアノ−２４−ノル−５β−コラン（４）
ＤＭＦ（４０ｍＬ）中の３（２．０１ｇ、３．９６ｍｍｏｌ）の溶液に、シアヌル酸クロリド（０．４８ｇ、７．９２ｍｍｏｌ）を添加し、室温で１６時間、反応物を撹拌した。混合物をＡｃＯＥｔ（１００ｍＬ）に注ぎ、Ｈ２Ｏ（５ｘ５０ｍＬ）およびブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。溶出液として石油エーテル／ＡｃＯＥｔ（９：１→６５：３５、ｖ／ｖ）を用いて、残渣をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、１．４３ｇ（２．９３ｍｍｏｌ、７４％）の４を得た。
【０１７９】
３α，７α−ジメトキシメチルオキシ−６α−エチル−５β−２４−Ｎ−ヒドロキシ−コラナミジン（ｃｈｏｌａｎａｍｉｄｉｎｅ）（５）
ＥｔＯＨ（４５ｍＬ）中の４（０．７９ｇ、１．６１ｍｍｏｌ）の溶液に、ヒドロキシルアミンクロロハイドレード（１．６８ｇ、２４．２０ｍｍｏｌ）および炭酸ナトリウム十水和物（６．９２ｇ、２４．２０ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を２４時間還流させた。揮発性物質を減圧下で除去し、得られた残渣をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）中で溶解させ、Ｈ２Ｏ（３ｘ５０ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して、ほぼ定量的収率で５（０．８１ｇ）を得た。粗製物次の段階に対してそのまま使用した。
【０１８０】
３α，７α−ジメトキシメチルオキシ−６α−エチル−５β−２４−Ｎ［（エトキシカルボニル）オキシ］イミドコラナミド（６）
０℃で冷却し、Ｎ２雰囲気下の蒸留ＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍＬ）中の５（０．８１ｇ、１．６１ｍｍｏｌ）の溶液に、クロロギ酸エチル（０．２０ｍＬ、２．１０ｍｏｌ）およびピリジン（０．１９ｍＬ、２．４２ｍｍｏｌ）を滴加し、反応混合物を室温で１時間撹拌した。Ｈ２Ｏ（１５ｍＬ）で反応を不活性化させ、２相を分離した。このようにして有機層をＨ２Ｏ（３ｘ１５ｍＬ）、ブライン（１５ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して、粗製物（０．８３ｇ）として６を得て、これをさらに精製せずに次の段階に対して使用した。
【０１８１】
３α，７α−ジメトキシメチルオキシ−６α−エチル−２４−ノル−５β−２３（［１，２，４］−オキサジアゾール−３−オン−５イル）−コラン（７）
トルエン（１５ｍＬ）およびピリジン（３ｍＬ）中の粗製物６（０．８３ｇ）の溶液を４８時間還流させた。混合物をＡｃＯＥｔ（３０ｍＬ）で希釈し、Ｈ２Ｏ（３ｘ５０ｍＬ）、ブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して、０．８１ｇの７を得て、これをそのまま次の段階に対して使用した。
【０１８２】
３α，７α−ジヒドロキシ−６α−エチル−２４−ノル−５β−２３（［１，２，４］−オキサジアゾール−３−オン−５−イル）−コラン（化合物１６）
アセトン（１５ｍＬ）中の粗製物７（０．８１ｇ）の溶液にＨＣｌ  ３Ｎ（５ｍＬ）を添加し、５０℃で６時間、混合物を撹拌した。有機溶媒を減圧下で除去し、残渣をＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍＬ）中で溶解させ、Ｈ２Ｏ（３ｘ３０ｍＬ）、ブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮した。溶出液としてＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ／ＡｃＯＨ（９７：３：０．１→９３：７：０．１、ｖ／ｖ／ｖ）の溶液を使用して、残渣をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、０．２７ｇ（０．５９ｍｍｏｌ、中間体４から３６％）の純粋な化合物１６を得た。
ｒｆ：０．４９（ＴＬＣ：シリカゲルＦ２５４Ｓ；溶出液：ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ／ＡｃＯＨ  ９０：１０：１）。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δ：０．７０（３Ｈ，ｓ，１８−ＣＨ３），０．９０−０．９６（６Ｈ，ｍ，１９−ＣＨ３＋ＣＨ２ＣＨ３），１．０２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，２１−ＣＨ３），２．４３−２．４３（１Ｈ，ｍ，２３−ＣＨ２），２．５７−２．６４（１Ｈ，ｍ，２３−ＣＨ２），３．２９−３．３３（１Ｈ，ｍ，３−ＣＨ），３．６６（１Ｈ，ｓ，７−ＣＨ）．１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００．６ＭＨｚ）δ：１２．９，１３．１，１９．６，２２．９，２３．８，２４．４，２４．６，２５．５，３０．２，３２．１，３３．９，３５．３，３５．４，３７．５，３７．６，３７．７，４１．９，４２．５，４４．０，４４．７，４７．８，５２．６，５８．０，７２．０，７４．１，１６２．７，１６３．２．
【０１８３】
実施例１７：化合物１７の合成
【化２４】
2018518537.tif 000031
メチル３α，７α−ジヒドロキシ−６α−エチル−５β−コラノアート（２）
ＭｅＯＨ（１００ｍＬ）中のＯＣＡ（１）（５．０ｇ、１１．９ｍｍｏｌ）の溶液に、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（０．２３ｇ、１．１９ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で９０分間、超音波処理した。溶媒を減圧下で除去し、残渣をＣＨＣｌ３（１００ｍＬ）中で溶解させ、ＮａＨＣＯ３飽和溶液（１００ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。このようにして得た白色固形物（５．１７ｇ、１１．８９ｍｍｏｌ）をさらに精製せずに次の段階に対して使用した。
【０１８４】
３α，７α−ジヒドロキシ−６α−エチル−２４，２４−ビフェニル−５β−コラン−２３−エン（３）
ドライＴＨＦ（１２５ｍＬ）中のメチル６α−エチル−３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラノアート（２）（５．１７ｇ、１１．８９ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｅｔ２Ｏ（３９．６ｍＬ、１１８．９ｍｍｏｌ）中の臭化フェニルマグネシウム３Ｍを滴加した。混合物を１２時間還流させた。室温で冷却後、混合物をＨ２Ｏ（１００ｍＬ）およびＨＣｌ  ３Ｍ（１００ｍＬ）で処理した。混合物をＥｔＯＡｃ（３ｘ８０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。粗製物をＭｅＯＨ（１００ｍＬ）中で溶解させ、ＨＣｌ  ３７％（１０ｍＬ）の存在下で１時間還流させた。ＭｅＯＨを蒸発させ、得られた残渣をＥｔＯＡｃ（１２０ｍＬ）中で溶解させ、Ｈ２Ｏ（２ｘ１００ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。ビフェニル誘導体３を精製せずに次の段階に対して使用した。
【０１８５】
３α，７α−ジアセトキシ−６α−エチル−２４，２４−ビフェニル−５β−コラン−２３−エン（４）
ＣＨ２Ｃｌ２（７０ｍＬ）中の３（６．４２ｇ、１１．８９ｍｍｏｌ）の溶液に、無水酢酸（６．０６ｇ、５９．４５ｍｍｏｌ）およびトリフルオロメタンスルホン酸ビスマス（０．３９ｇ、０．５９ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を室温で１時間撹拌した。次いでＮａＨＣＯ３飽和水溶液（５０ｍＬ）を慎重に添加し、相を分離した。水層をＣＨ２Ｃｌ２（２ｘ５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＨ２Ｏ（１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。石油エーテル／ＥｔＯＡｃ（９５：５→７：３、ｖ／ｖ）により構成される溶出液を使用して、粗製物をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、５．５６ｇ（８．９１ｍｍｏｌ、７５％）の所望の中間体４を得た。
【０１８６】
３α，７α−ジアセトキシ−６α−エチル−２４−ノル−５β−コラン−２３−オイン酸（５）
Ｈ２Ｏ（２０ｍＬ）中の過ヨウ素酸ナトリウム（２１．１３ｇ、９８．７３ｍｍｏｌ）の懸濁液に、Ｈ２Ｏ中のＨ２ＳＯ４  ２Ｎ（３．２２ｍＬ）を添加し、混合物を室温で１時間撹拌した。混合物を０℃に冷却し、三塩化ルテニウム水和物（０．１１ｇ、０．５５ｍｍｏｌ）で処理し、これを一度に添加した。１時間後、アセトニトリル（３１ｍＬ）をこの溶液に添加し、さらに５分後、ＥｔＯＡｃ（４３ｍＬ）中のビフェニル誘導体４（６．８５ｇ、１０．９７ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。混合物を室温で１時間撹拌した。このようにして形成された白色固形物をろ取し、次いで液をＨ２Ｏ（１００ｍＬ）に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３ｘ５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をセライトパッドに通してろ過し、Ｈ２Ｏ中のＮａ２Ｓ２Ｏ３飽和溶液（１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、１０〜５０％の石油エーテル中のＥｔＯＡｃで溶出した。白色固形物として所望の酸５を得た（５．２７ｇ、１０．７５ｍｍｏｌ、９８％）。
【０１８７】
３α，７α−ジアセトキシ−６α−エチル−２３−オキソ−２４，２４，２４−トリフルオロメチル−５β−コラン（６）
０℃で冷却したトルエン（１２５ｍＬ）中の５（１４．２０ｇ、２８．９８ｍｍｏｌ）の溶液に、ピリジン（１１．４４ｇ、１４４．９０ｍｍｏｌ）およびトリフルオロ酢酸無水物（３０．４３ｇ、１４４．９０ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を１８時間、還流させた。室温で冷却後、暗色の混合物を４５℃で１時間、Ｈ２Ｏ（１２０ｍＬ）で処理し、室温で冷却し、ＨＣｌ  １Ｎ（１００ｍＬ）を慎重に添加することによって酸性化した。次いで混合物をＡｃＯＥｔ（３ｘ８０ｍＬ）で抽出し、回収した有機層をブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、真空下でろ過し、減圧下で濃縮した。シリカゲルパッド（ｈ：１０ｃｍ、φ：４ｃｍ）に通して褐色の油状残渣をろ過し、石油エーテル／ＡｃＯＥｔ（８：２、ｖ／ｖ）で粗製物を回収し、薄黄色固形物として所望のトリフルオロメチルケトン６（１５．７ｇ）を得て、これをさらに精製せずに次の段階に対して使用した。
【０１８８】
３α，７α−ジアセトキシ−６α−エチル−２３−ラクトール誘導体（７）
機械式撹拌装置を備えたフラスコ中の、光から回復させたアセトニトリル（４１５ｍＬ）中の粗製物６（１５．７ｇ）の溶液に、Ｈ２Ｏ（３９５ｍＬ）中で溶解させたｔＢｕＯＨ（１３５ｍＬ）およびＥＤＴＡ（１７０ｍｇ、０．５８４ｍｍｏｌ）を添加した。ＮａＨＣＯ３（３６．７９ｇ、４３８．００ｍｍｏｌ）およびオキソン（８９．６４ｇ、１４６．００ｍｍｏｌ）を少量ずつ添加し、得られた懸濁液を１８時間、激しく撹拌した。混合物をろ過して固形物を除去し、ブライン（１００ｍＬ）で希釈し、Ｅｔ２Ｏ（３ｘ１５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１５０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルパッド（ｈ：１２ｃｍ、φ：５ｃｍ）に通してろ過し、石油エーテル／ＡｃＯＥｔ（９：１、ｖ／ｖ）で粗製物を回収した。９．６０ｇの所望のラクトール７を得た。粗製物質を次の段階に対してそのまま使用した。
【０１８９】
３α，７α−ジアセトキシ−６α−エチル−２３−ラクトン誘導体（８）
ＭｅＯＨ（５０ｍＬ）中の７（９．６０ｇ、１７．２０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＫＯＨの１０Ｍ水溶液（２５．８ｍＬ、２５８．０ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を還流温度で１８時間撹拌した。ＭｅＯＨを減圧下で除去し、Ｈ２Ｏ（２５ｍＬ）を添加し、得られた混合物をさらに２４時間、還流させた。室温で冷却後、混合物をＥｔ２Ｏ（３ｘ５０ｍＬ）で洗浄し、ＨＣｌ  ３Ｎで酸性化し、ＣＨＣｌ３（３ｘ１５０ｍＬ）で抽出した。回収した有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／ＡｃＯＨ（９７：３：０．１、ｖ／ｖ）のアイソクラチック溶液で溶出した。溶媒除去後、５．７０ｇ（ｍｍｏｌ、中間体５から４８％）の所望の中間体８を得た。
【０１９０】
３α，７α−ジメトキシメチルオキシ−６α−エチル−２３−ラクトン誘導体（９）
ＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍＬ）中のラクトン８（１．７５ｇ、４．３３ｍｍｏｌ）の溶液に、ジイソプロピルエチルアミン（５．０３ｇ、３８．９８ｍｍｏｌ）、ジメチルアミノピリジン（０．０５ｇ、０．４３ｍｍｏｌ）およびクロロメチルメチルエーテル（２．０８ｇ、２５．９９ｍｍｏｌ）を連続的に添加し、混合物を４８時間還流させた。Ｈ２Ｏ（３０ｍＬ）を添加することによって反応を不活性化させ、２相を分離した。有機相をＨＣｌ  １Ｎ（３０ｍＬ）、ＮａＨＣＯ３飽和溶液（３０ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、真空下でろ過し、減圧下で濃縮した。保護された誘導体９をさらに精製せずに次の段階に対して使用した。
【０１９１】
３α，７α−ジメトキシメチルオキシ−６α−エチル−１６β，２３−ジヒドロキシ−２４−ノル−５β−コラン（１０）
０℃で冷却したＴＨＦ（３０ｍＬ）中のＬｉＡｌＨ４（０．４９ｇ、１２．９９ｍｍｏｌ）の懸濁液に、ＴＨＦ（２０ｍＬ）中の９（２．１３ｇ、４．３３ｍｍｏｌ）の溶液を滴加した。反応物を３０分間撹拌した。水素遊離が消失するまで、Ｎａ２ＳＯ４十水和物をゆっくりと慎重に少量ずつ添加した。混合物を真空下でろ過し、固形残渣をＡｃＯＥｔ（５ｘ５ｍＬ）で洗浄し；回収した有機相を減圧下で濃縮して、１．９１ｇ（３．８６ｍｍｏｌ、８９％）の所望のテトラヒドロキシ胆汁誘導体１０を得て、これをさらに精製せずに次の段階に対するものとした。
【０１９２】
３α，７α−ジメトキシメチルオキシ−６α−エチル−１６β−ヒドロキシ−２３−アセトキシ−２４−ノル−５β−コラン（１１）
ＣＨ２Ｃｌ２（１２０ｍＬ）中の１０（１．４２ｇ、２．８６ｍｍｏｌ）の溶液に、Ａｃ２Ｏ（０．８１ｍＬ、８．５９ｍｍｏｌ）およびＥｔ３Ｎ（１．８１ｍＬ、１２．８８ｍｍｏｌ）を添加し、得られた溶液を室温で１２時間撹拌した。混合物をＮａＨＣＯ３飽和溶液（１００ｍＬ）に注ぎ、ＣＨ２Ｃｌ２（２ｘ６０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＨ２Ｏ（１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗製物１１（１．４６ｇ）を次の段階に対してそのまま使用した。
【０１９３】
３α，７α，１６β−トリメトキシメチルオキシ６α−エチル−２３−アセトキシ−２４−ノル−５β−コラン（１２）
ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）中の１１（１．４６ｇ、約２．８６ｍｍｏｌ）の溶液に、ジイソプロピルエチルアミン（１．９７ｍＬ、１１．４５ｍｍｏｌ）、ジメチルアミノピリジン（０．０３ｇ、０．２７ｍｍｏｌ）およびクロロメチルメチルエーテル（０．６５ｍＬ、８．５９ｍｍｏｌ）を連続的に添加した。混合物を５時間還流させた。Ｈ２Ｏ（３０ｍＬ）を添加することによって反応物を不活性化し、２相を分離した。有機相をＨＣｌ  １Ｎ（３０ｍＬ）で、ＮａＨＣＯ３の溶液（３０ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。誘導体１２（１．５１ｇ）をさらに精製せずに次の段階に対して使用した。
【０１９４】
３α，７α，１６β−トリメトキシメチルオキシ−６α−エチル−２３−ヒドロキシ−２４−ノル−５β−コラン（１３）
ＭｅＯＨ（５０ｍＬ）中の１２（１．５１ｇ、約２．８６ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮａＯＨ（０．５７ｇ、１４．３１ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を３時間還流させた。反応物を室温で冷却し、溶媒を減圧下で除去した。粗製物をＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）中で溶解させ、Ｈ２Ｏ（５０ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。残渣をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、石油エーテル中の酢酸エチル（５〜３０％）で溶出し、薄黄色油状物質として所望の化合物１３（１．３５ｇ、２．４９ｍｍｏｌ、中間体１０から８７％）を得た。
【０１９５】
３α，７α，１６β−トリメトキシメチルオキシ−６α−エチル−２３−イオジオ（ｉｏｄｉｏ）−２４−ノル−５β−コラン（１４）
ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）中のトリフェニルホスフィン（４．６ｇ、１７．５６ｍｍｏｌ）の溶液に、ヨウ素（２．０５ｇ、１６．１８ｍｍｏｌ）を添加した。１０分後、イミダゾール（１．１６ｇ、１７．１０ｍｍｏｌ）を溶液に添加した。さらに１５分後、ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）中のアルコール１３（１．２５ｇ、２．３１ｍｍｏｌ）の溶液を添加し、得られた混合物を室温で４８時間撹拌した。次いで反応物をＨ２Ｏ（１００ｍＬ）に注ぎ、相を分離し、水相をＣＨ２Ｃｌ２（２ｘ６０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。粗製物をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、石油エーテル中の酢酸エチル（５〜２０％）で溶出し、１．０５ｇ（１．６５ｍｍｏｌ、７１％）の所望の純粋なヨード誘導体１４を得た。
【０１９６】
３α，７α，１６β−トリメトキシメチルオキシ−６α−エチル−２３−シアノ−２４−ノル−５β−コラン（１５）
ＤＭＳＯ（１５ｍＬ）中のヨード誘導体１４（１．０３ｇ、１．５８ｍｍｏｌ）の溶液に、シアン化ナトリウム（０．０９ｇ、１．９０ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を８０℃で３時間撹拌した。次いで混合物を室温に冷却し、ＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）で希釈し、ＮａＨＣＯ３飽和溶液（５０ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（５０ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。シリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって混合物を精製し、石油エーテル中の酢酸エチル（１０〜３０％）で溶出し、０．８０ｇ（１．４５ｍｍｏｌ、９２％）の純粋な１５を得た。
【０１９７】
３α，７α，１６β−トリメトキシメチルオキシ−６α−エチル−２３−［１−（トリブチルスタンニル）−テトラゾール−５−イル］−２４−ノル−５β−コラン（１６）
トルエン（１２ｍＬ）中のニトリル１５（０．６８ｇ、１．１４ｍｍｏｌ）の溶液をアジドトリブチルスズ（ＩＶ）（１．９１ｇ、５．７２ｍｍｏｌ）とともに３６時間還流させた。混合物を室温で冷却し、ＥｔＯＡｃ（１５ｍＬ）で希釈し、Ｈ２Ｏ（５０ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。残渣（０．８２ｇ）をさらに精製せずに次の段階に対して使用した。
【０１９８】
３α，７α，１６β−トリヒドロキシ−６α−エチル−２３−（テトラゾール−５−イル）−２４−ノル−５β−コラン（化合物１７）
ＭｅＯＨ（２０ｍＬ）中の粗製物１６（０．８０ｇ）の溶液に、ＨＣｌ  ３Ｎ（５ｍＬ）を添加し、混合物を５０℃で４８時間撹拌した。混合物を室温で冷却し、次いでＮａＯＨ  ３Ｎ（７ｍＬ）で処理した。溶媒蒸発後、粗製残渣をＨ２Ｏ（５０ｍＬ）中に溶解させ、Ｅｔ２Ｏ（３ｘ４０ｍＬ）で洗浄した。次いで水相をＨＣｌ  ３ＮによりｐＨ＝１まで酸性化し、ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨの混合物（９：１、ｖ／ｖ、３ｘ５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。シリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって混合物を精製し、０．１％のＡｃＯＨの存在下でクロロホルム中のメタノール（１〜１０％）で溶出した。白色固形物として０．２８ｇの最終化合物、化合物１７を得た（中間体１５から５４％）。
ｒｆ：０．５３（ＴＬＣ：シリカゲル６０  Ｆ２５４Ｓ；溶出液：ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／ＡｃＯＨ  ９０：１０：１）。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δ：０．８７−０．９３（９Ｈ，ｍ，１８−ＣＨ３＋１９−ＣＨ３＋ＣＨ２ＣＨ３），１．０７（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，２１−ＣＨ３），２．１２−２．１７（１Ｈ，ｍ，２２−ＣＨ２），２．３７−２．４１（１Ｈ，ｍ，２２−ＣＨ２），２．９１−３．０８（２Ｈ，ｍ，２３−ＣＨ２），３．３１−３．３５（１Ｈ，ｍ，３−ＣＨ），３．６６（１Ｈ，ｓ，７−ＣＨ），４．４０−４．４４（１Ｈ，ｍ，１６−ＣＨ）．１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００．６ＭＨｚ）δ：１０．５，１１．８，１６．９，１９．９，２０．１，２２．０，２２．２，２９．５，２９．７，３２．７，３２．８，３３．０，３５．１（ｘ２），３５．４，３９．５，３９．６，４１．６，４２．０，４５．４，４８．０，６１．１，６９．５，７１．６（ｘ２），１５７．１．
【０１９９】
実施例１８：化合物１８の合成
【化２５】
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メチル３α，７α−ジヒドロキシ−６α−エチル−５β−コラノアート（２）
ＭｅＯＨ（１００ｍＬ）中のＯＣＡ（１）（５．０ｇ、１１．９ｍｍｏｌ）の溶液に、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（０．２３ｇ、１．１９ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で９０分間、超音波処理した。溶媒を減圧下で除去し、残渣をＣＨＣｌ３（１００ｍＬ）中で溶解させ、ＮａＨＣＯ３飽和溶液（１００ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。このようにして得た白色固形物（５．１７ｇ、１１．８９ｍｍｏｌ）をさらに精製せずに次の段階に対して使用した。
【０２００】
３α，７α−ジヒドロキシ−６α−エチル−２４，２４−ビフェニル−５β−コラン−２３−エン（３）
ドライＴＨＦ（１２５ｍＬ）中のメチル６α−エチル−３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラノアート（２）（５．１７ｇ、１１．８９ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｅｔ２Ｏ中の臭化フェニルマグネシウム３Ｍ（３９．６ｍＬ、１１８．９ｍｍｏｌ）を滴加した。混合物を１２時間還流させた。室温で冷却後、混合物をＨ２Ｏ（１００ｍＬ）およびＨＣｌ  ３Ｍ（１００ｍＬ）で処理した。混合物をＥｔＯＡｃ（３ｘ８０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層をブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。粗製物をＭｅＯＨ（１００ｍＬ）中で溶解させ、ＨＣｌ  ３７％（１０ｍＬ）の存在下で１時間還流させた。ＭｅＯＨを蒸発させ、得られた残渣をＥｔＯＡｃ（１２０ｍＬ）中で溶解させ、Ｈ２Ｏ（２ｘ１００ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。ビフェニル誘導体３を精製せずに次の段階に対して使用した。
【０２０１】
３α，７α−ジアセトキシ−６α−エチル−２４，２４−ビフェニル−５β−コラン−２３−エン（４）
ＣＨ２Ｃｌ２（７０ｍＬ）中の３（６．４２ｇ、１１．８９ｍｍｏｌ）の溶液に、無水酢酸（６．０６ｇ、５９．４５ｍｍｏｌ）およびトリフルオロメタンスルホン酸ビスマス（０．３９ｇ、０．５９ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を室温で１時間撹拌した。次いでＮａＨＣＯ３飽和水溶液（５０ｍＬ）を慎重に添加し、相を分離した。水層をＣＨ２Ｃｌ２（２ｘ５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＨ２Ｏ（１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗製物をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、石油エーテル／ＥｔＯＡｃ（９５：５→７：３、ｖ／ｖ）により構成される溶出液を使用して、５．５６ｇ（８．９１ｍｍｏｌ、７５％）の所望の中間体４を得た。
【０２０２】
３α，７α−ジアセトキシ−６α−エチル−２４−ノル−５β−コラン−２３−オイン酸（５）
Ｈ２Ｏ（２０ｍＬ）中の過ヨウ素酸ナトリウム（２１．１３ｇ、９８．７３ｍｍｏｌ）の懸濁液に、Ｈ２Ｏ中のＨ２ＳＯ４  ２Ｎ（３．２２ｍＬ）を添加し、混合物を室温で１時間撹拌した。混合物を０℃に冷却し、三塩化ルテニウム水和物（０．１１ｇ、０．５５ｍｍｏｌ）で処理し、これを一度に添加した。１時間後、アセトニトリル（３１ｍＬ）を溶液に添加し、さらに５分後、ＥｔＯＡｃ（４３ｍＬ）中のビフェニル誘導体４（６．８５ｇ、１０．９７ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。混合物を室温で１時間撹拌した。このようにして形成された白色固形物をろ取し、次いで液をＨ２Ｏ（１００ｍＬ）に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３ｘ５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をセライトパッドに通してろ過し、Ｈ２Ｏ中のＮａ２Ｓ２Ｏ３飽和溶液（１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、１０〜５０％の石油エーテル中のＥｔＯＡｃで溶出した。白色固形物として所望の酸５を得た（５．２７ｇ、１０．７５ｍｍｏｌ、９８％）。
【０２０３】
３α，７α−ジアセトキシ−６α−エチル−２３−オキソ−２４，２４，２４−トリフルオロメチル−５β−コラン（６）
０℃で冷却したトルエン（１２５ｍＬ）中の５（１４．２０ｇ、２８．９８ｍｍｏｌ）の溶液に、ピリジン（１１．４４ｇ、１４４．９０ｍｍｏｌ）およびトリフルオロ酢酸無水物（３０．４３ｇ、１４４．９０ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を１８時間還流させた。室温で冷却後、暗色の混合物を４５℃で１時間、Ｈ２Ｏ（１２０ｍＬ）で処理し、室温で冷却し、ＨＣｌ  １Ｎ（１００ｍＬ）を慎重に添加することによって酸性化した。次いで混合物をＡｃＯＥｔ（３ｘ８０ｍＬ）で抽出し、回収した有機層をブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、真空下でろ過し、減圧下で濃縮した。褐色の油状残渣をシリカゲルパッド（ｈ：１０ｃｍ、φ：４ｃｍ）に通してろ過し、石油エーテル／ＡｃＯＥｔ（８：２、ｖ／ｖ）で粗製物を回収し、薄黄色固形物として所望のトリフルオロメチルケトン６（１５．７ｇ）を得て、それをさらに精製せずに次の段階に対して使用した。
【０２０４】
３α，７α−ジアセトキシ−６α−エチル−２３−ラクトール誘導体（７）
機械式撹拌装置を備えたフラスコに入っており、光から回復させたアセトニトリル（４１５ｍＬ）中の粗製物６（１５．７ｇ）の溶液に、Ｈ２Ｏ（３９５ｍＬ）中で溶解させたｔＢｕＯＨ（１３５ｍＬ）およびＥＤＴＡ（１７０ｍｇ、０．５８４ｍｍｏｌ）を添加した。ＮａＨＣＯ３（３６．７９ｇ、４３８．００ｍｍｏｌ）およびオキソン（８９．６４ｇ、１４６．００ｍｍｏｌ）を少量ずつ添加し、得られた懸濁液を１８時間、激しく撹拌した。混合物をろ過して固形物を除去し、ブライン（１００ｍＬ）で希釈し、Ｅｔ２Ｏ（３ｘ１５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１５０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルパッド（ｈ：１２ｃｍ、φ：５ｃｍ）に通してろ過し、石油エーテル／ＡｃＯＥｔ（９：１、ｖ／ｖ）で粗製物を回収した。９．６０ｇの所望のラクトール７を得た。粗製物質を次の段階に対してそのまま使用した。
【０２０５】
３α，７α−ジアセトキシ−６α−エチル−２３−ラクトン誘導体（８）
ＭｅＯＨ（５０ｍＬ）中の７（９．６０ｇ、１７．２０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＫＯＨ  １０Ｍ（２５．８ｍＬ、２５８．０ｍｍｏｌ）の水溶液を添加し、混合物を還流温度で１８時間撹拌した。ＭｅＯＨを減圧下で除去し、Ｈ２Ｏ（２５ｍＬ）を添加し、得られた混合物をさらに２４時間、還流させた。室温で冷却後、混合物をＥｔ２Ｏ（３ｘ５０ｍＬ）で洗浄し、ＨＣｌ  ３Ｎで酸性化し、ＣＨＣｌ３（３ｘ１５０ｍＬ）で抽出した。回収した有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／ＡｃＯＨ（９７：３：０．１、ｖ／ｖ）のアイソクラチック溶液で溶出させた。溶媒除去後、５．７０ｇ（ｍｍｏｌ、中間体５から４８％）の所望の中間体８を得た。
【０２０６】
３α，７α−ジメトキシメチルオキシ−６α−エチル−２３−ラクトン誘導体（９）
ＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍＬ）中のラクトン８（１．７５ｇ、４．３３ｍｍｏｌ）の溶液に、ジイソプロピルエチルアミン（５．０３ｇ、３８．９８ｍｍｏｌ）、ジメチルアミノピリジン（０．０５ｇ、０．４３ｍｍｏｌ）およびクロロメチルメチルエーテル（２．０８ｇ、２５．９９ｍｍｏｌ）を連続的に添加し、混合物を４８時間還流させた。Ｈ２Ｏ（３０ｍＬ）を添加することによって反応物を不活性化し、２相を分離した。有機相をＨＣｌ  １Ｎ（３０ｍＬ）で、ＮａＨＣＯ３飽和溶液（３０ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、真空下でろ過し、減圧下で濃縮した。保護された誘導体９をさらに精製せずに次の段階に対して使用した。
【０２０７】
３α，７α−ジメトキシメチルオキシ−６α−エチル−１６β，２３−ジヒドロキシ−２４−ノル−５β−コラン（１０）
０℃で冷却したＴＨＦ（３０ｍＬ）中のＬｉＡｌＨ４（０．４９ｇ、１２．９９ｍｍｏｌ）の懸濁液に、ＴＨＦ（２０ｍＬ）中の９（２．１３ｇ、４．３３ｍｍｏｌ）の溶液を滴加した。反応物を３０分間撹拌した。水素遊離が消失するまで、Ｎａ２ＳＯ４十水和物をゆっくりと慎重に少量ずつ添加した。混合物を真空下でろ過し、固形残渣をＡｃＯＥｔ（５ｘ５ｍＬ）で洗浄し；回収した有機相を減圧下で濃縮して、１．９１ｇ（３．８６ｍｍｏｌ、８９％）の所望のテトラヒドロキシ胆汁誘導体１０を得て、これをさらに精製せずに次の段階に対するものとした。
【０２０８】
３α，７α−ジメトキシメチルオキシ−６α−エチル−１６β−ヒドロキシ−２３−アセトキシ−２４−ノル−５β−コラン（１１）
ＣＨ２Ｃｌ２（１２０ｍＬ）中の１０（１．４２ｇ、２．８６ｍｍｏｌ）の溶液に、Ａｃ２Ｏ（０．８１ｍＬ、８．５９ｍｍｏｌ）およびＥｔ３Ｎ（１．８１ｍＬ、１２．８８ｍｍｏｌ）を添加し、得られた溶液を室温で１２時間撹拌した。混合物をＮａＨＣＯ３飽和溶液（１００ｍＬ）に注ぎ、ＣＨ２Ｃｌ２（２ｘ６０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＨ２Ｏ（１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗製物１１（１．４６ｇ）を次の段階に対してそのまま使用した。
【０２０９】
３α，７α，１６β−トリメトキシメチルオキシ６α−エチル−２３−アセトキシ−２４−ノル−５β−コラン（１２）
ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）中の１１（１．４６ｇ、約２．８６ｍｍｏｌ）の溶液に、ジイソプロピルエチルアミン（１．９７ｍＬ、１１．４５ｍｍｏｌ）、ジメチルアミノピリジン（０．０３ｇ、０．２７ｍｍｏｌ）およびクロロメチルメチルエーテル（０．６５ｍＬ、８．５９ｍｍｏｌ）を連続的に添加した。混合物を５時間還流させた。Ｈ２Ｏ（３０ｍＬ）を添加することによって反応物を不活性化し、２相を分離した。有機相をＨＣｌ  １Ｎ（３０ｍＬ）で、ＮａＨＣＯ３飽和溶液（３０ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。誘導体１２（１．５１ｇ）をさらに精製せずに次の段階に対して使用した。
【０２１０】
３α，７α，１６β−トリメトキシメチルオキシ−６α−エチル−２３−ヒドロキシ−２４−ノル−５β−コラン（１３）
ＭｅＯＨ（５０ｍＬ）中の１２（１．５１ｇ、約２．８６ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮａＯＨ（０．５７ｇ、１４．３１ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を３時間、還流させた。反応物を室温で冷却し、溶媒を減圧下で除去した。粗製物をＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）中で溶解させ、Ｈ２Ｏ（５０ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。残渣をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、石油エーテル中の酢酸エチル（５〜３０％）で溶出し、薄黄色油状物質として所望の化合物６４（１．３５ｇ、２．４９ｍｍｏｌ、中間体１０から８７％）を得た。
【０２１１】
３α，７α，１６β−トリメトキシメチルオキシ−６α−エチル−２３−イオジオ（ｉｏｄｉｏ）−２４−ノル−５β−コラン（１４）
ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）中のトリフェニルホスフィン（４．６ｇ、１７．５６ｍｍｏｌ）の溶液に、ヨウ素（２．０５ｇ、１６．１８ｍｍｏｌ）を添加した。１０分後、イミダゾール（１．１６ｇ、１７．１０ｍｍｏｌ）を溶液に添加した。さらに１５分後、ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）中のアルコール１３（１．２５ｇ、２．３１ｍｍｏｌ）の溶液を添加し、得られた混合物を室温で４８時間撹拌した。次いで反応物をＨ２Ｏ（１００ｍＬ）に注ぎ、相を分離し、水相をＣＨ２Ｃｌ２（２ｘ６０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。粗製物をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、石油エーテル中の酢酸エチル（５〜２０％）で溶出して、１．０５ｇ（１．６５ｍｍｏｌ、７１％）の所望の純粋なヨード誘導体１４を得た。
【０２１２】
３α，７α，１６β−トリメトキシメチルオキシ−６α−エチル−２３−シアノ−２４−ノル−５β−コラン（１５）
ＤＭＳＯ（１５ｍＬ）中のヨード誘導体１４（１．０３ｇ、１．５８ｍｍｏｌ）の溶液に、シアン化ナトリウム（０．０９ｇ、１．９０ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を８０℃で３時間撹拌した。次いで混合物を室温に冷却し、ＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）で希釈し、ＮａＨＣＯ３飽和溶液（５０ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（５０ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。シリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって混合物を精製し、石油エーテル中の酢酸エチルで溶出し（１０〜３０％）、０．８０ｇ（１．４５ｍｍｏｌ、９２％）の純粋な１５を得た。
【０２１３】
３α，７α，１６β−トリメトキシメチルオキシ−６α−エチル−５β−２４−Ｎ−ヒドロキシ−コラナミジン（ｃｈｏｌａｎａｍｉｄｉｎｅ）（１６）
エタノール（１５ｍＬ）中の１５（０．１６ｇ、０．２９ｍｍｏｌ）の溶液に、炭酸ナトリウム十水和物（１．２５ｇ、４．３６ｍｍｏｌ）およびヒドロキシルアミン塩酸塩（０．３０ｇ、４．３６ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を１８時間還流させた。溶媒を減圧下で除去し、粗製物をＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍＬ）中で溶解させ、Ｈ２Ｏ（３０ｍＬ）、ブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。残渣（０．１７ｇ）を次の段階に対してそのまま使用した。
【０２１４】
３α，７α，１６β−トリメトキシメチルオキシ−６α−エチル−５β−２４−Ｎ［（エトキシカルボニル）オキシ］イミドコラナミド（１７）
０℃でＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）中の粗製ヒドロキシアミジン１６（０．１７ｇ、０．２９ｍｍｏｌ）の溶液にクロロギ酸エチル（０．０４ｇ、０．３８ｍｍｏｌ）およびピリジン（０．０３ｇ、０．４４ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で１時間撹拌した。Ｈ２Ｏ（１５ｍＬ）を添加することによって反応物を不活性化した。相を分離し、水相をＣＨ２Ｃｌ２（２ｘ１５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。粗製残渣（０．１８ｇ）をさらに精製せずに次の段階に対して使用した。
【０２１５】
３α，７α，１６β−トリメトキシメチルオキシ−６α−エチル−２４−ノル−５β−２３−（［１，２，４］−オキサジアゾール−３−オン−５イル）−コラン（１８）
トルエン（５ｍＬ）中の粗製物１７（０．１８ｇ、０．２９ｍｍｏｌ）の溶液をピリジン（１ｍＬ）の存在下で４８時間還流させた。反応物をＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で希釈し、Ｈ２Ｏ（３０ｍＬ）およびＨＣｌ  ３Ｎ（３０ｍＬ）、ＮａＨＣＯ３飽和溶液（３０ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。誘導体１８（０．１７ｇ）をさらに精製せずに次の段階に対して使用した。
【０２１６】
３α，７α，１６β−トリヒドロキシ−６α−エチル−２４−ノル−５β−２３−（［１，２，４］−オキサジアゾール−３−オン−５イル）−コラン（化合物１８）
アセトン（５ｍＬ）中の粗製化合物１８（０．１９ｇ）の溶液に、ＨＣｌ  ３Ｎ（１ｍＬ）を添加し、混合物を３５℃で４８時間撹拌した。溶媒を減圧下で蒸発させ、Ｈ２Ｏ（１０ｍＬ）中で懸濁し、ＣＨ２Ｃｌ２（２ｘ１０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＨ２Ｏ（１０ｍＬ）、ブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。０．１％ＡｃＯＨの存在下でクロロホルム中のメタノールの溶液（１〜１０％）を使用して、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって混合物を精製した。溶媒の蒸発によって、白色固形物として１１ｍｇの化合物１８（１３から８％収率）を得た。
ｒｆ：０．５１（ＴＬＣ：シリカゲル６０  Ｆ２５４Ｓ；溶出液：ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／ＡｃＯＨ  ９０：１０：１）。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δ：０．８７−０．９３（９Ｈ，ｍ，１８−ＣＨ３＋１９−ＣＨ３＋ＣＨ２ＣＨ３），１．０３（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２１−ＣＨ３），２．３６−２．３２（１Ｈ，ｍ，２２−ＣＨ２），２．５０−２．５７（１Ｈ，ｍ，２３−ＣＨ２），２．６３−２．６７（１Ｈ，ｍ，２３−ＣＨ２），３．２５−３．３３（１Ｈ，ｍ，３−ＣＨ），３．６５（１Ｈ，ｓ，７−ＣＨ），４．３３−４．３７（１Ｈ，ｍ，１６−ＣＨ）．１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００．６ＭＨｚ）δ：１０．９，１２．２，１７．２，２０．５，２２．１，２２．４，２２．６，３０．０，３０．１，３１．５，３３．２，３３．４，３５．５（ｘ２），３６．０，３９．９，４０．０，４２．０，４２．５，４５．８，６１．３，７０．０，７１．８，７２．０，１６０．８，１６１．１．
【０２１７】
実施例１９：化合物１９の合成
【化２６】
2018518537.tif 000033
メチル３α，７α−ジヒドロキシ−６α−エチル−５β−コラノアート（２）
ＭｅＯＨ（１００ｍＬ）中のＯＣＡ（１）（５．０ｇ、１１．９ｍｍｏｌ）の溶液に、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（０．２３ｇ、１．１９ｍｍｏｌ）を添加し、室温で９０分間、混合物を超音波処理した。溶媒を減圧下で除去し、残渣をＣＨＣｌ３（１００ｍＬ）中で溶解させ、ＮａＨＣＯ３飽和溶液（１００ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。このようにして得た白色固形物（５．１７ｇ、１１．８９ｍｍｏｌ）をさらに精製せずに次の段階に対して使用した。
【０２１８】
３α，７α−ジヒドロキシ−６α−エチル−２４，２４−ビフェニル−５β−コラン−２３−エン（３）
ドライＴＨＦ（１２５ｍＬ）中のメチル６α−エチル−３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラノアート（２）（５．１７ｇ、１１．８９ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｅｔ２Ｏ中の臭化フェニルマグネシウム３Ｍ（３９．６ｍＬ、１１８．９ｍｍｏｌ）を滴加した。混合物を１２時間還流させた。室温で冷却後、混合物をＨ２Ｏ（１００ｍＬ）およびＨＣｌ  ３Ｍ（１００ｍＬ）で処理した。混合物をＥｔＯＡｃ（３ｘ８０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。粗製物をＭｅＯＨ（１００ｍＬ）中で溶解させ、ＨＣｌ  ３７％（１０ｍＬ）の存在下で１時間還流させた。ＭｅＯＨを蒸発させ、得られた残渣をＥｔＯＡｃ（１２０ｍＬ）中で溶解させ、Ｈ２Ｏ（２ｘ１００ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。ビフェニル誘導体３を精製せずに次の段階に対して使用した。
【０２１９】
３α，７α−ジアセトキシ−６α−エチル−２４，２４−ビフェニル−５β−コラン−２３−エン（４）
ＣＨ２Ｃｌ２（７０ｍＬ）中の３（６．４２ｇ、１１．８９ｍｍｏｌ）の溶液に、無水酢酸（６．０６ｇ、５９．４５ｍｍｏｌ）およびトリフルオロメタンスルホン酸ビスマス（０．３９ｇ、０．５９ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を室温で１時間撹拌した。次いでＮａＨＣＯ３飽和水溶液（５０ｍＬ）を慎重に添加し、相を分離した。水層をＣＨ２Ｃｌ２（２ｘ５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＨ２Ｏ（１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。石油エーテル／ＥｔＯＡｃ（９５：５→７：３、ｖ／ｖ）により構成される溶出液を使用して、粗製物をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、５．５６ｇ（８．９１ｍｍｏｌ、７５％）の所望の中間体４を得た。
【０２２０】
３α，７α−ジアセトキシ−６α−エチル−２４−ノル−５β−コラン−２３−オイン酸（５）
Ｈ２Ｏ（２０ｍＬ）中の過ヨウ素酸ナトリウム（２１．１３ｇ、９８．７３ｍｍｏｌ）の懸濁液に、Ｈ２Ｏ中のＨ２ＳＯ４  ２Ｎ（３．２２ｍＬ）を添加し、混合物を室温で１時間撹拌した。混合物を０℃に冷却し、三塩化ルテニウム水和物（０．１１ｇ、０．５５ｍｍｏｌ）で処理し、これを一度に添加した。１時間後、アセトニトリル（３１ｍＬ）を溶液に添加し、さらに５分後、ＥｔＯＡｃ（４３ｍＬ）中のビフェニル誘導体４（６．８５ｇ、１０．９７ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。混合物を室温で１時間撹拌した。このようにして形成された白色固形物をろ取し、次いで液をＨ２Ｏ（１００ｍＬ）に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３ｘ５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をセライトパッドに通してろ過し、Ｈ２Ｏ中のＮａ２Ｓ２Ｏ３飽和溶液（１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、１０〜５０％の石油エーテル中のＥｔＯＡｃで溶出した。白色固形物として所望の酸５を得た（５．２７ｇ、１０．７５ｍｍｏｌ、９８％）。
【０２２１】
３α，７α−ジヒドロキシ−６α−エチル−２４−ノル５β−コラン−２３−オイン酸（６）
ＭｅＯＨ（７０ｍＬ）中の３α，７α−ジアセトキシ−６α−エチル−２４−ノル−５β−コラン酸（５）（５．２７ｇ、１０．７５ｍｍｏｌ）の溶液に、ＫＯＨの水溶液（１０ｍＬのＨ２Ｏ中、６．０２ｇ、１０７．５ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を６個の約１５ｍＬのバッチに分けた。各ロットを２時間、マイクロ波照射（Ｔ＝１２０℃、Ｐｍａｘ＝２７０ｐｓｉ、出力ｍａｘ＝２００Ｗ）に供した。様々なロットを回収し、溶媒を減圧下で除去し、粗製物をＨ２Ｏ（１００ｍＬ）中で溶解させ、Ｅｔ２Ｏ（２ｘ５０ｍＬ）で抽出した。水相をＨＣｌ  ３Ｎで酸性化し、ＣＨ２Ｃｌ２（３ｘ８０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＨ２Ｏ（１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。粗製物をフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、０．１％のＡｃＯＨの存在下でＣＨＣｌ３中のＭｅＯＨ（０〜１０％）で溶出して、白色固形物として所望の酸６（３．８５ｇ、９．４６ｍｍｏｌ、８８％）を得た。
【０２２２】
メチル３α，７α−ジヒドロキシ−６α−エチル−２４−ノル５β−コラン−２３−オアート（７）
ＭｅＯＨ（２０ｍＬ）中の３α，７α−ジヒドロキシ−６α−エチル−２４−ノル５β−コラン−２３−オイン酸（６）（０．８０ｇ、１．７２ｍｍｏｌ）の溶液に、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（０．０４ｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を２５℃で４時間超音波処理した。溶媒を減圧下で除去し、残渣をＣＨＣｌ３（８０ｍＬ）中で溶解させ、ＮａＨＣＯ３飽和溶液（８０ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（８０ｍＬ）、ブライン（８０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。このようにして得た白色固形物（０．８２ｇ、１．７２ｍｍｏｌ）をさらに精製せずに次の段階に対して使用した。
【０２２３】
３α，７α−ジヒドロキシ−６α−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−２４−ノル−５β−コラン−２３−アミド（化合物１９）
ＭｅＯＨ（８ｍＬ）中のメチルエステル７（０．８２ｇ、１．７２ｍｍｏｌ）およびエタノールアミン（８．０８ｇ、１３２．２４ｍｍｏｌ）の混合物を１時間、マイクロ波照射（Ｔ＝１３０℃、Ｐｍａｘ＝２００ｐｓｉ、出力ｍａｘ＝２００Ｗ）に供した。混合物を減圧下で濃縮し、残渣をＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）中で溶解させ、ＨＣｌ  ３Ｎ（５０ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（５０ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。粗製物をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ（０→１０％＋０．１％のＡｃＯＨ）で溶出して、白色固形物として所望の誘導体化合物１９を得た（０．６０ｇ、１．３４ｍｍｏｌ、７８％）。
ｒｆ：０．４２（ＴＬＣ：シリカゲルＦ２５４Ｓ；溶出液：ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／ＡｃＯＨ  ９０：１０：０．１）。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，４００ＭＨｚ）δ  ０．５３（３Ｈ，ｓ，１８−ＣＨ３），０．７１−０．７７（９Ｈ，ｍ，１９−ＣＨ３＋ＣＨ２ＣＨ３＋２１−ＣＨ３），２．０５（１Ｈ，ｍ，２２−ＣＨ２），２．９８−３．０４（３Ｈ，ｍ，３−ＣＨ＋ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ），３．２７（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ），３．３９（１Ｈ，ｓ，７−ＣＨ），３．１０−３．４０（１Ｈ，ｂｓ，ＯＨ），３．９６（１Ｈ，ｓ，ＯＨ），４．０５−４．３７（１Ｈ，ｂｓ，ＯＨ）．１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δ  １２．１（ｘ２），１９．４，２０．７，２２．５，２３．４（ｘ２），２８．２，３０．７，３２．９，３３．８，３３．９，３５．５，３５．８，４１．６，４１．７，４２．４，４３．２，４５．６，５０．５，５６．４，６０．３，６８．７，７０．９，１７２．３．
【０２２４】
実施例２０：化合物２０の合成
【化２７】
2018518537.tif 000034
メチル３α，７α−ジヒドロキシ−６α−エチル−５β−コラノアート（２）
ＭｅＯＨ（１００ｍＬ）中のＯＣＡ（１）（５．０ｇ、１１．９ｍｍｏｌ）の溶液に、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（０．２３ｇ、１．１９ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で９０分間、超音波処理した。溶媒を減圧下で除去し、残渣をＣＨＣｌ３（１００ｍＬ）中で溶解させ、ＮａＨＣＯ３飽和溶液（１００ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。このようにして得た白色固形物（５．１７ｇ、１１．８９ｍｍｏｌ）をさらに精製せずに次の段階に対して使用した。
【０２２５】
３α，７α−ジヒドロキシ−６α−エチル−２４，２４−ビフェニル−５β−コラン−２３−エン（３）
ドライＴＨＦ（１２５ｍＬ）中のメチル６α−エチル−３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラノアート（２）（５．１７ｇ、１１．８９ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｅｔ２Ｏ中の臭化フェニルマグネシウム３Ｍ（３９．６ｍＬ、１１８．９ｍｍｏｌ）を滴加した。混合物を１２時間還流させた。室温で冷却後、混合物をＨ２Ｏ（１００ｍＬ）およびＨＣｌ  ３Ｍ（１００ｍＬ）で処理した。混合物をＥｔＯＡｃ（３ｘ８０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層をブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。粗製物をＭｅＯＨ（１００ｍＬ）中で溶解させ、ＨＣｌ  ３７％（１０ｍＬ）の存在下で１時間、還流させた。ＭｅＯＨを蒸発させ、得られた残渣をＥｔＯＡｃ（１２０ｍＬ）中で溶解させ、Ｈ２Ｏ（２ｘ１００ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。ビフェニル誘導体３を精製せずに次の段階に対して使用した。
【０２２６】
３α，７α−ジアセトキシ−６α−エチル−２４，２４−ビフェニル−５β−コラン−２３−エン（４）
ＣＨ２Ｃｌ２（７０ｍＬ）中の３（６．４２ｇ、１１．８９ｍｍｏｌ）の溶液に、無水酢酸（６．０６ｇ、５９．４５ｍｍｏｌ）およびトリフルオロメタンスルホン酸ビスマス（０．３９ｇ、０．５９ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を室温で１時間撹拌した。次いでＮａＨＣＯ３飽和水溶液（５０ｍＬ）を慎重に添加し、相を分離した。水層をＣＨ２Ｃｌ２（２ｘ５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＨ２Ｏ（１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗製物をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、石油エーテル／ＥｔＯＡｃ（９５：５→７：３、ｖ／ｖ）により構成される溶出液を使用して、５．５６ｇ（８．９１ｍｍｏｌ、７５％）の所望の中間体４を得た。
【０２２７】
３α，７α−ジアセトキシ−６α−エチル−２４−ノル−５β−コラン−２３−オイン酸（５）
Ｈ２Ｏ（２０ｍＬ）中の過ヨウ素酸ナトリウム（２１．１３ｇ、９８．７３ｍｍｏｌ）の懸濁液に、Ｈ２Ｏ中のＨ２ＳＯ４  ２Ｎ（３．２２ｍＬ）を添加し、混合物を室温で１時間撹拌した。混合物を０℃に冷却し、三塩化ルテニウム水和物（０．１１ｇ、０．５５ｍｍｏｌ）で処理し、これを一度に添加した。１時間後、アセトニトリル（３１ｍＬ）を溶液に添加し、さらに５分後、ＥｔＯＡｃ（４３ｍＬ）中のビフェニル誘導体４（６．８５ｇ、１０．９７ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。混合物を室温で１時間撹拌した。このようにして形成させた白色固形物をろ取し、次いで液をＨ２Ｏ（１００ｍＬ）に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３ｘ５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をセライトパッドに通してろ過し、Ｈ２Ｏ中のＮａ２Ｓ２Ｏ３飽和溶液（１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、１０〜５０％の石油エーテル中のＥｔＯＡｃで溶出して、白色固形物として所望の酸５を得た（５．２７ｇ、１０．７５ｍｍｏｌ、９８％）。
【０２２８】
３α，７α−ジヒドロキシ−６α−エチル−２４−ノル５β−コラン−２３−オイン酸（６）
ＭｅＯＨ（７０ｍＬ）中の３α，７α−ジアセトキシ−６α−エチル−２４−ノル−５β−コラン酸（５）（５．２７ｇ、１０．７５ｍｍｏｌ）の溶液に、ＫＯＨの水溶液（１０ｍＬのＨ２Ｏ中の６．０２ｇ、１０７．５ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を６個の約１５ｍＬのバッチに分けた。各ロットを２時間、マイクロ波照射（Ｔ＝１２０℃、Ｐｍａｘ＝２７０ｐｓｉ、出力ｍａｘ＝２００Ｗ）に供した。様々なロットを回収し、溶媒を減圧下で除去し、粗製物をＨ２Ｏ（１００ｍＬ）中で溶解させ、Ｅｔ２Ｏ（２ｘ５０ｍＬ）で抽出した。水相をＨＣｌ  ３Ｎで酸性化し、ＣＨ２Ｃｌ２（３ｘ８０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＨ２Ｏ（１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。粗製物をフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、０．１％のＡｃＯＨの存在下でＣＨＣｌ３中のＭｅＯＨ（０〜１０％）で溶出して、白色固形物として所望の酸６を得た（３．８５ｇ、９．４６ｍｍｏｌ、８８％）。
【０２２９】
３α，７α−ジヒドロキシ−６α−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−２４−ノル５β−コラン−２３−ヒドロキシアミド（化合物２０）
ドライＤＭＦ（２０ｍＬ）中の６α−エチル−３α，７α−ジヒドロキシ−２３−ノル−５β−コラノアート（６）（０．５０ｇ、１．２３ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＭＴ−ＭＭ（１．３６ｇ、４．９２ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１．２４ｇ、１２．３０ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で１時間撹拌した。ドライＤＭＦ中のＮＨ２ＯＨ（０．０６ｇ、１．８４ｍｍｏｌ）の新鮮調製溶液を添加し、混合物を４時間還流させた。反応物をＨ２Ｏ（４０ｍＬ）に注ぎ、ＣＨＣｌ３（３ｘ３０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＨＣｌ  １Ｎ（４０ｍＬ）、ＮａＨＣＯ３飽和溶液（４０ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（４０ｍＬ）、ブライン（４０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ（０→８％＋０．１％ＡｃＯＨ）の溶液を使用して、粗製物をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。白色固形物として所望の化合物、化合物２０を得た（０．２４ｇ、０．５７ｍｍｏｌ、４６％）。
ｒｆ：０．２４（ＴＬＣ：シリカゲル６０  ＲＰ−８  Ｆ２５４Ｓ；溶出液：Ｈ２Ｏ／ＭｅＣＮ  ５０：５０）。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δ  ０．６１（３Ｈ，ｓ，１８−ＣＨ３），０．７７−０．８８（９Ｈ，ｍ，１９−ＣＨ３＋ＣＨ２ＣＨ３＋２１−ＣＨ３），２．１３−２．１６（１Ｈ，ｍ，２２−ＣＨ２），３．１８−３．２０（１Ｈ，ｍ，３−ＣＨ），３．５３（１Ｈ，ｓ，７−ＣＨ）．１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δ  １０．５９，１０．８１，１７．９，２０．５，２２．０，２２．３，２３．０，２７．８，２９．９，３２．９，３３．０，３３．６，３５．１，３５．２，３９．５（ｘ２），４０．０，４１．６，４２．１，４５．２，５０．２，５６．３，６９．５，７１．６，１７０．９．
【０２３０】
実施例２１：化合物２１の合成
【化２８】
2018518537.tif 000035
メチル３α，７α−ジヒドロキシ−６α−エチル−５β−コラノアート（２）
ＭｅＯＨ（１００ｍＬ）中のＯＣＡ（１）（５．０ｇ、１１．９ｍｍｏｌ）の溶液に、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（０．２３ｇ、１．１９ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で９０分間、超音波処理した。溶媒を減圧下で除去し、残渣をＣＨＣｌ３（１００ｍＬ）中で溶解させ、ＮａＨＣＯ３飽和溶液（１００ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。このようにして得た白色固形物（５．１７ｇ、１１．８９ｍｍｏｌ）をさらに精製せずに次の段階に対して使用した。
【０２３１】
３α，７α−ジヒドロキシ−６α−エチル−２４，２４−ビフェニル−５β−コラン−２３−エン（３）
ドライＴＨＦ（１２５ｍＬ）中のメチル６α−エチル−３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラノアート（２）（５．１７ｇ、１１．８９ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｅｔ２Ｏ中の臭化フェニルマグネシウム３Ｍ（３９．６ｍＬ、１１８．９ｍｍｏｌ）を滴加した。混合物を１２時間還流させた。室温で冷却後、混合物をＨ２Ｏ（１００ｍＬ）およびＨＣｌ  ３Ｍ（１００ｍＬ）で処理した。混合物をＥｔＯＡｃ（３ｘ８０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層をブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。粗製物をＭｅＯＨ（１００ｍＬ）中で溶解させ、ＨＣｌ  ３７％（１０ｍＬ）の存在下で１時間還流させた。ＭｅＯＨを蒸発させ、得られた残渣をＥｔＯＡｃ（１２０ｍＬ）中で溶解させ、Ｈ２Ｏ（２ｘ１００ｍＬ）、ＮａＨＣＯ３飽和溶液（１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。ビフェニル誘導体３を精製せずに次の段階に対して使用した。
【０２３２】
３α，７α−ジアセトキシ−６α−エチル−２４，２４−ビフェニル−５β−コラン−２３−エン（４）
ＣＨ２Ｃｌ２（７０ｍＬ）中の３（６．４２ｇ、１１．８９ｍｍｏｌ）の溶液に、無水酢酸（６．０６ｇ、５９．４５ｍｍｏｌ）およびトリフルオロメタンスルホン酸ビスマス（０．３９ｇ、０．５９ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を室温で１時間撹拌した。次いでＮａＨＣＯ３飽和水溶液（５０ｍＬ）を慎重に添加し、相を分離した。水層をＣＨ２Ｃｌ２（２ｘ５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＨ２Ｏ（１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。石油エーテル／ＥｔＯＡｃ（９５：５→７：３、ｖ／ｖ）により構成される溶出液を使用して、粗製物をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、５．５６ｇ（８．９１ｍｍｏｌ、７５％）の所望の中間体４を得た。
【０２３３】
３α，７α−ジアセトキシ−６α−エチル−２４−ノル−５β−コラン−２３−オイン酸（５）
Ｈ２Ｏ（２０ｍＬ）中の過ヨウ素酸ナトリウム（２１．１３ｇ、９８．７３ｍｍｏｌ）の懸濁液に、Ｈ２Ｏ中のＨ２ＳＯ４  ２Ｎ（３．２２ｍＬ）を添加し、混合物を室温で１時間撹拌した。混合物を０℃に冷却し、三塩化ルテニウム水和物（０．１１ｇ、０．５５ｍｍｏｌ）で処理し、これを一度に添加した。１時間後、アセトニトリル（３１ｍＬ）を溶液に添加し、さらに５分後、ＥｔＯＡｃ（４３ｍＬ）中のビフェニル誘導体４（６．８５ｇ、１０．９７ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。混合物を室温で１時間撹拌した。このようにして形成された白色固形物をろ取し、次いで液をＨ２Ｏ（１００ｍＬ）に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３ｘ５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をセライトパッドに通してろ過し、Ｈ２Ｏ中のＮａ２Ｓ２Ｏ３飽和溶液（１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、１０〜５０％の石油エーテル中のＥｔＯＡｃで溶出した。白色固形物として所望の酸５を得た（５．２７ｇ、１０．７５ｍｍｏｌ、９８％）。
【０２３４】
３α，７α−ジヒドロキシ−６α−エチル−２４−ノル５β−コラン−２３−オイン酸（６）
ＭｅＯＨ（７０ｍＬ）中の３α，７α−ジアセトキシ−６α−エチル−２４−ノル−５β−コラン酸（５）（５．２７ｇ、１０．７５ｍｍｏｌ）の溶液に、ＫＯＨの水溶液（１０ｍＬのＨ２Ｏ中、６．０２ｇ、１０７．５ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を６個の約１５ｍＬのバッチに分けた。各ロットを２時間、マイクロ波照射（Ｔ＝１２０℃、Ｐｍａｘ＝２７０ｐｓｉ、出力ｍａｘ＝２００Ｗ）に供した。様々なロットを回収し、溶媒を減圧下で除去し、粗製物をＨ２Ｏ（１００ｍＬ）中で溶解させ、Ｅｔ２Ｏ（２ｘ５０ｍＬ）で抽出した。水相をＨＣｌ  ３Ｎで酸性化し、ＣＨ２Ｃｌ２（３ｘ８０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＨ２Ｏ（１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。粗製物をフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、０．１％のＡｃＯＨの存在下でＣＨＣｌ３中のＭｅＯＨ（０〜１０％）で溶出し、白色固形物として所望の酸６を得た（３．８５ｇ、９．４６ｍｍｏｌ、８８％）。
【０２３５】
ナトリウム２−（３α，７α−ジヒドロキシ−６α−エチル−２４−ノル５β−コラン−２３−アミド）−エチルサルフェート（化合物２１）
エタノール（２５ｍＬ）中の６α−エチル−３α，７α−ジヒドロキシ−２３−ノル−５β−コラノアート（６）（０．９０ｇ、２．２１ｍｍｏｌ）の溶液に、トリエチルアミン（２．２４ｇ、２２．１３ｍｍｏｌ）および２−エトキシ−１−エトキシカルボニル−１，２−ジヒドロキノリン（１．３７ｇ、５．５３ｍｍｏｌ）を添加し、室温で３０分間、５０℃で１時間、得られた混合物を撹拌した。ナトリウムエタノールアミンサルフェート（Ｓｏｄｉｕｍ  ｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ  ｓｕｌｐｈａｔｅ）（アセトニトリル中のエタノールアミンおよびピリジン三酸化硫黄錯体の反応によって調製、８７％収率）（０．７２ｇ、４．４３ｍｍｏｌ）を混合物に添加し、これを９０℃で６時間反応させた。混合物を減圧下で濃縮し、残渣をＮａＯＨ水（Ｈ２Ｏ中５％、３０ｍＬ）中で溶解させ、３０分間撹拌した。水相をＥｔＯＡｃ（３ｘ５０ｍＬ）で抽出し、減圧下で濃縮した。粗製物を逆相フラッシュクロマトグラフィーによって精製し、水中のアセトニトリル（５〜３０％）で溶出し、０．７８ｇ（１．４１ｍｍｏｌ、６４％）の化合物２１を得た。
ｒｆ：０．４４（ＴＬＣ：シリカゲル６０  ＲＰ−８  Ｆ２５４Ｓ；溶出液：Ｈ２Ｏ／ＭｅＣＮ  ６５：３５）。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δ  ０．６５（３Ｈ，ｓ，１８−ＣＨ３），０．８０−０．８４（６Ｈ，ｍ，１９−ＣＨ３＋ＣＨ２ＣＨ３），０．８９（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，２１−ＣＨ３），３．２８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ１＝２．４Ｈｚ，Ｊ２＝１２．４Ｈｚ，２２−ＣＨ２），３．２０−３．２５（１Ｈ，ｍ，３−ＣＨ），３．３７（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，ＣＨ２ＣＨ２Ｏ），３．５７（１Ｈ，ｓ，７−ＣＨ），３．９６（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）．１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δ  １０．５，１０．８，１８．３，２０．４，２２．０，２２．２，２３．０，２７．８，２９．７，３３．０，３３．９，３５．１，３５．２，３８．６，３９．５，４０．０，４１．６，４２．３，４３．０，４５．４，５０．２，５６．４，６５．５，６９．９，７１．７，１７４．７．
【０２３６】
実施例２２：化合物２２の合成
【化２９】
2018518537.tif 000036
メチル３α，７α−ジヒドロキシ−６α−エチル−５β−コラノアート（２）
ＭｅＯＨ（１００ｍＬ）中のＯＣＡ（１）（５．０ｇ、１１．９ｍｍｏｌ）の溶液に、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（０．２３ｇ、１．１９ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で９０分間、超音波処理した。溶媒を減圧下で除去し、残渣をＣＨＣｌ３（１００ｍＬ）中で溶解させ、ＮａＨＣＯ３飽和溶液（１００ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。このようにして得た白色固形物（５．１７ｇ、１１．８９ｍｍｏｌ）をさらに精製せずに次の段階に対して使用した。
【０２３７】
３α，７α−ジヒドロキシ−６α−エチル−２４，２４−ビフェニル−５β−コラン−２３−エン（３）
ドライＴＨＦ（１２５ｍＬ）中のメチル６α−エチル−３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラノアート（２）（５．１７ｇ、１１．８９ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｅｔ２Ｏ中の臭化フェニルマグネシウム３Ｍ（３９．６ｍＬ、１１８．９ｍｍｏｌ）を滴加した。混合物を１２時間還流させた。室温で冷却後、混合物をＨ２Ｏ（１００ｍＬ）およびＨＣｌ  ３Ｍ（１００ｍＬ）で処理した。混合物をＥｔＯＡｃ（３ｘ８０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。粗製物をＭｅＯＨ（１００ｍＬ）中で溶解させ、ＨＣｌ  ３７％（１０ｍＬ）の存在下で１時間還流させた。ＭｅＯＨを蒸発させ、得られた残渣をＥｔＯＡｃ（１２０ｍＬ）中で溶解させ、Ｈ２Ｏ（２ｘ１００ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。ビフェニル誘導体３を精製せずに次の段階に対して使用した。
【０２３８】
３α，７α−ジアセトキシ−６α−エチル−２４，２４−ビフェニル−５β−コラン−２３−エン（４）
ＣＨ２Ｃｌ２（７０ｍＬ）中の３（６．４２ｇ、１１．８９ｍｍｏｌ）の溶液に、無水酢酸（６．０６ｇ、５９．４５ｍｍｏｌ）およびトリフルオロメタンスルホン酸ビスマス（０．３９ｇ、０．５９ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を室温で１時間撹拌した。次いでＮａＨＣＯ３飽和水溶液（５０ｍＬ）を慎重に添加し、相を分離した。水層をＣＨ２Ｃｌ２（２ｘ５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＨ２Ｏ（１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。石油エーテル／ＥｔＯＡｃ（９５：５→７：３、ｖ／ｖ）により構成される溶出液を使用して、粗製物をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、５．５６ｇ（８．９１ｍｍｏｌ、７５％）の所望の中間体４を得た。
【０２３９】
３α，７α−ジアセトキシ−６α−エチル−２４−ノル−５β−コラン−２３−オイン酸（５）
Ｈ２Ｏ（２０ｍＬ）中の過ヨウ素酸ナトリウム（２１．１３ｇ、９８．７３ｍｍｏｌ）の懸濁液に、Ｈ２Ｏ中のＨ２ＳＯ４  ２Ｎ（３．２２ｍＬ）を添加し、混合物を室温で１時間撹拌した。混合物を０℃に冷却し、三塩化ルテニウム水和物（０．１１ｇ、０．５５ｍｍｏｌ）で処理し、これを一度に添加した。１時間後、アセトニトリル（３１ｍＬ）を溶液に添加し、さらに５分後、ＥｔＯＡｃ（４３ｍＬ）中のビフェニル誘導体４（６．８５ｇ、１０．９７ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。混合物を室温で１時間撹拌した。このようにして形成された白色固形物をろ取し、次いで液をＨ２Ｏ（１００ｍＬ）に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３ｘ５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をセライトパッドに通してろ過し、Ｈ２Ｏ中のＮａ２Ｓ２Ｏ３飽和溶液（１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、１０〜５０％の石油エーテル中のＥｔＯＡｃで溶出した。白色固形物として所望の酸５を得た（５．２７ｇ、１０．７５ｍｍｏｌ、９８％）。
【０２４０】
３α，７α−ジヒドロキシ−６α−エチル−２４−ノル５β−コラン−２３−オイン酸（６）
ＭｅＯＨ（７０ｍＬ）中の３α，７α−ジアセトキシ−６α−エチル−２４−ノル−５β−コラン酸（５）（５．２７ｇ、１０．７５ｍｍｏｌ）の溶液に、ＫＯＨの水溶液（１０ｍＬのＨ２Ｏ中、６．０２ｇ、１０７．５ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を６個の約１５ｍＬのバッチに分けた。各ロットを２時間、マイクロ波照射（Ｔ＝１２０℃、Ｐｍａｘ＝２７０ｐｓｉ、出力ｍａｘ＝２００Ｗ）に供した。様々なロットを回収し、溶媒を減圧下で除去し、粗製物をＨ２Ｏ（１００ｍＬ）中で溶解させ、Ｅｔ２Ｏ（２ｘ５０ｍＬ）で抽出した。水相をＨＣｌ  ３Ｎで酸性化し、ＣＨ２Ｃｌ２（３ｘ８０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＨ２Ｏ（１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。粗製物をフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、０．１％のＡｃＯＨの存在下でＣＨＣｌ３中のＭｅＯＨ（０〜１０％）で溶出し、白色固形物として所望の酸６を得た（３．８５ｇ、９．４６ｍｍｏｌ、８８％）。
【０２４１】
メチル３α，７α−ジメトキシメチルオキシ−６α−エチル−２４−ノル−５β−コラン−２３−オアート（７）
ＭｅＯＨ（５０ｍＬ）中の３α，７α−ジヒドロキシ−６α−エチル−２４−ノル−５β−コラン酸（６）（３．０ｇ、７．３９ｍｍｏｌ）の溶液に、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（０．１４ｇ、０．７４ｍｍｏｌ）を添加し、得られた混合物を室温で４時間、超音波処理した。溶媒を減圧下で除去し、残渣をＣＨＣｌ３（８０ｍＬ）中で溶解させ、ＮａＨＣＯ３飽和溶液（５０ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。このようにして得たエステルをＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍＬ）中で溶解させ、得られた溶液に、ジイソプロピルエチルアミン（１０．１７ｍＬ、５９．１１ｍｍｏｌ）、４−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）−ピリジン（０．０９ｇ、０．７４ｍｍｏｌ）およびメトキシメチルクロリド（３．３５ｍＬ、４４．３３ｍｍｏｌ）を連続的に添加した。混合物を撹拌し、２４時間還流させた。次いで反応物を室温に冷却し、ＮＨ４Ｃｌ飽和溶液（３０ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（３０ｍＬ）およびブライン（３０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮して、薄黄色油状物質として３．５７ｇの７を得て、これをさらに精製せずに次の段階に対して使用した（３．５７ｇ、７．０２ｍｍｏｌ、９５％）。
【０２４２】
メチル３α，７α−ジメトキシメチルオキシ−６α−エチル−２２（Ｒ＋Ｓ）−ヒドロキシ−２４−ノル−５β−コラン−２３−オアート（９）
Ｎ２雰囲気下で−４０℃で冷却した蒸留ＴＨＦ（３０ｍＬ）中のジイソプロピルアミン（７．９２ｍＬ、５５．９１ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ｎＢｕＬｉ（ヘキサン中２．５Ｍ、２１．５２ｍＬ、５３．８１ｍｍｏｌ）を滴加した。１５分後、この溶液を−７８℃で冷却し、クロロトリメチルシラン（７．２８ｍＬ、５７．３０ｍｍｏｌ）を滴加した。さらに１５分後、内部温度が−７０℃を超えないように維持しながら、蒸留ＴＨＦ（１０ｍＬ）中の保護されたエステル７（３．５５ｇ、６．９９ｍｍｏｌ）の溶液を約２０分間滴加した。添加が終了したら、反応混合物を−７８℃でさらに１時間撹拌し、次いで室温で温めた。揮発性物質を減圧下で除去し、残渣を石油エーテル（８０ｍＬ）中で懸濁し、真空下でろ過した。液を減圧下で濃縮して、所望の化合物９を得た。このようにして得た中間体を蒸留ＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）中で直接溶解させ、Ｎ２雰囲気下で、０℃に冷却した、蒸留ＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍＬ）中の新鮮結晶化および酢酸不含四酢酸鉛（ＩＶ）（６．６４ｇ、１０．４８４ｍｍｏｌ）の懸濁液に滴加した。混合物を０℃で３０分間撹拌し、次いでセライトパッドに通して真空下でろ過した。ろ液を減圧下で濃縮し、残渣を迅速にシリカゲルパッド（ｈ：８ｃｍ、φ：４ｃｍ）に通してろ過し、石油エーテル／ＡｃＯＥｔ（８：２、ｖ／ｖ）で粗製物を回収した。溶媒の蒸発後、残渣をＭｅＯＨ（３０ｍＬ）中で溶解させ、得られた溶液に固形炭酸カリウム（１．９３ｇ、１３．９８ｍｍｏｌ）を添加した。得られた懸濁液を室温で１５分間、激しく撹拌した。次いで混合物をＣＨ２Ｃｌ２（４０ｍＬ）で希釈し、真空下でろ過した。ろ液をさらなるＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）でさらに希釈し、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄した。相を分離し、水相をＣＨ２Ｃｌ２（３ｘ４０ｍＬ）で抽出し、回収した有機層全てを合わせ、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。８０：２０（ｖ／ｖ）〜５０：５０（ｖ／ｖ）の石油エーテル／ＡｃＯＥｔを使用することによって、残渣をフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、２つのＣ２２−エピマー（１．１７ｇ、２．２４ｍｍｏｌ、３２％）の混合物として９を得た。
【０２４３】
メチル３α，７α−ジメトキシメチルオキシ−６α−エチル−２２−オキソ−２４−ノル−５β−コラン−２３−オアート（１０）
Ｎ２雰囲気下で−６０℃で冷却した蒸留ＣＨ２Ｃｌ２（１５ｍＬ）中の塩化オキサリル（０．４７ｍＬ、５．５０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＣＨ２Ｃｌ２（３ｍＬ）中で希釈したジメチルスルホキシド（０．７８ｍＬ、１０．９９ｍｍｏｌ）を滴加した。１５分後、ＣＨ２Ｃｌ２（１５ｍＬ）中の２２−ヒドロキシ誘導体９（１．１５ｇ、２．２０ｍｍｏｌ）の溶液を滴加し、得られた混合物を−６０℃で１時間撹拌した。次いでトリエチルアミン（３．０８ｍＬ、２１．９９ｍｍｏｌ）を滴加し、混合物をゆっくりと室温で温めた。反応混合物をＫＯＨ  １Ｍ（２０ｍＬ）で５分間処理し、２相を分離し、水相をＣＨ２Ｃｌ２（２ｘ２０ｍＬ）で抽出した。回収した有機層をブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。９０：１０（ｖ／ｖ）〜８０：２０（ｖ／ｖ）の石油エーテル／ＡｃＯＥｔを使用することによって、残渣をフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、所望の２２−オキソ誘導体１０（０．８８ｇ、１．６９ｍｍｏｌ、７７％）を回収した。
【０２４４】
メチル３α，７α−ジメトキシメチルオキシ−６α−エチル−２２，２２−ジフルオロ−２４−ノル−５β−コラン−２３−オアート（１１）
Ｎ２雰囲気下の蒸留ＴＨＦ（９ｍＬ）中の２２−ケト誘導体１０（０．５０ｇ、０．９６ｍｍｏｌ）の溶液に、ビス（２−メトキシエチル）アミノサルファートリフルオリド（Ｄｅｏｘｏ−ｆｌｕｏｒ（登録商標）、ＴＨＦ中５０％、３．２９ｍＬ、７．６７ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を５０℃で１６時間撹拌した。追加のＤｅｏｘｏ−ｆｌｕｏｒ（登録商標）（２．２７ｍＬ、５．２７ｍｍｏｌ）を添加し、混合物をさらに７２時間還流させた。次いで反応物を室温に冷却し、水−氷浴中に入っており、マグネット撹拌下のＮａＨＣＯ３飽和溶液（４０ｍＬ）中に混合物を慎重に注いだ。ＣＯ２放出が終了したら、混合物をＡｃＯＥｔ（２ｘ４０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層をＨ２Ｏ（６０ｍＬ）、ブライン（６０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。シリカパッドに通して残渣をろ過し、石油エーテル／ＡｃＯＥｔ  ８０：２０（ｖ／ｖ）で溶出し、粗製化合物１１をさらに精製せずに次の段階に対して使用した。
【０２４５】
３α，７α−ジヒドロキシ−６α−エチル−２２，２２−ジフルオロ−２４−ノル−５β−コラン−２３−オイン酸（化合物２２）
ＭｅＯＨ（１２ｍＬ）中の誘導体１１（０．９６ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＣｌ  ３７％（０．８０ｍＬ、９．６０ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を４５℃で１２時間撹拌した。次いで、水酸化ナトリウム（０．５７ｇ、１４．３９ｍｍｏｌ）を添加し、混合物をさらに４時間、４５℃で撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、残渣をＨ２Ｏ（２５ｍＬ）中で溶解させ、Ｅｔ２Ｏ（２ｘ２０ｍＬ）で洗浄した。ＨＣｌ  ３Ｎを添加することによって、水相をｐＨ＝５まで酸性化し、ＡｃＯＥｔ（３ｘ３０ｍＬ）で抽出した。溶媒を減圧下で除去し、９５：５（ｖ／ｖ）〜４０：６０（ｖ／ｖ）のＨ２Ｏ／ＭｅＣＮを使用することによって、残渣をＲＰ−１８中圧液体クロマトグラフィーによって精製し、白色固形物として０．０６ｇの化合物２２を得た（０．０６ｇ、０．１３ｍｍｏｌ、１４％）。
Ｒｆ＝０．５５（ＲＰ−Ｃ８  ＳｉＯ２、Ｆ−２５４ｓ、Ｈ２Ｏ／ＭｅＣＮ  ６０：４０）。Ｍ．ｐ．＝２５４−２５６℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，４００ＭＨｚ）δ：０．６０（３Ｈ，ｓ，１８−ＣＨ３），０．７８−０．８０（６Ｈ，ｍ，１９−ＣＨ３＋ＣＨ２ＣＨ３），０．９２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２１−ＣＨ３），２．０９−２．１４（１Ｈ，ｍ，２０−ＣＨ），３．０８−３．１２（１Ｈ，ｍ，３−ＣＨ），３．４７（１Ｈ，ｓ，７−ＣＨ）．１３Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，１００．６ＭＨｚ）δ  １１．８，１２．１，２０．９，２２．６，２３．５，２３．９，２７．８，３０．８，３１．１，３３．０，３３．９，３５．６，３５．９，４１．６，４３．２，４５．７，４９．８，５０．８，６８．８，７１．０，１２１．０（ＪＣ−Ｆ＝２７７．６Ｈｚ），１６７．２（ＪＣ−Ｆ＝２８．２Ｈｚ）．
【０２４６】
実施例２３：化合物２３の合成
【化３０】
2018518537.tif 000037
メトキシメチル３α，７α−ジメトキシメチルオキシ−６α−エチル−５β−コラン−２４−オアート（２）
ＣＨ２Ｃｌ２（４０ｍＬ）中のＯＣＡ（１）（１．０ｇ、２．３８ｍｍｏｌ）の溶液に、ジイソプロピルエチルアミン（４．９４ｍＬ、２８．５４ｍｍｏｌ）、メトキシメチルクロリド（１．４５ｍＬ、１９．０３ｍｍｏｌ）および４−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）−ピリジン（０．０６ｇ、０．４７ｍｍｏｌ）を連続的に添加した。得られた混合物を撹拌し、１８時間還流させた。次いで反応物をＮＨ４Ｃｌ飽和溶液（４０ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（４０ｍＬ）およびブライン（４０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮して、薄黄色油状物質として１．１８ｇの２を得て、これをさらに精製せずに次の段階に対して使用した（１．１８ｇ、２．１４ｍｍｏｌ）。
【０２４７】
２−（３α，７α−ジメトキシメチルオキシ−６α−エチル−５β−コラン−２４−ノル−２３−コラニル）−５−アミノ−１，３，４−オキサジアゾール（３）
ＥｔＯＨ（６ｍＬ）中のエステル２（０．５０ｇ、０．９０ｍｍｏｌ）の溶液に、ヒドラジン一水和物（水中６５％、０．１３ｍＬ、１．８１ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を３時間還流させた。反応物を室温で冷却し、臭化シアン（０．２９ｇ、２．７１ｍｍｏｌ）を少量ずつ添加した。このようにして得た懸濁液を室温でさらに５時間撹拌し、次いでＮａＨＣＯ３飽和溶液（４０ｍＬ）の添加によって不活性化した。混合物をＡｃＯＥｔ（３ｘ５０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層をＨ２Ｏ（１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。粗製物をフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、無色油状物質として所望のオキサジアゾールアミン誘導体３を得た（０．１９ｇ、０．３４ｍｍｏｌ、３８％）。
【０２４８】
２−（３α，７α−ジヒドロキシ−６α−エチル−５β−コラン−２４−ノル−２３−コラニル）−５−メチルスルホンアミド−１，３，４−オキサジアゾール（化合物２３）
ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）中のオキサジアゾールアミン誘導体３（０．１０ｇ、０．１８ｍｍｏｌ）の溶液に、トリエチルアミン（０．１６ｍＬ、１．１０ｍｍｏｌ）およびメタンスルホニルクロリド（０．０４ｍＬ、０．５５ｍｍｏｌ）を添加し、得られた混合物を４時間還流させた。次いで反応物をＮＨ４Ｃｌ飽和溶液（２０ｍＬ）で不活性化し、ＣＨ２Ｃｌ２（３ｘ１０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＮａＨＣＯ３飽和溶液（３０ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（３０ｍＬ）、ブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。次いで残渣をＭｅＯＨ（３ｍＬ）中に溶解させ、ＨＣｌ  ３Ｎ（１ｍＬ）で処理した。溶媒を減圧下で除去し、残渣をＨ２Ｏ（１５ｍＬ）中で溶解させ、Ｅｔ２Ｏ（３ｘ１５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＨ２Ｏ（３０ｍＬ）、ブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。粗製物をフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、溶出して、白色固形物として化合物２３を得た（２６ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ、２７％）。
Ｒｆ＝０．３１（ＳｉＯ２、Ｆ−２５４、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ  ９５：５）。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，４００ＭＨｚ）δ：０．５７（３Ｈ，ｓ，１８−ＣＨ３），０．７９−０．８５（６Ｈ，ｍ，１９−ＣＨ３＋ＣＨ２ＣＨ３），０．９０（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２１−ＣＨ３），２．４９−２．６８（２Ｈ，ｍ，２３−ＣＨ２），２．９３（３Ｈ，ｓ，ＳＣＨ３），３．０９−３．１３（１Ｈ，ｍ，３−ＣＨ），３．４７（１Ｈ，ｓ，７−ＣＨ）．１３Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，１００．６ＭＨｚ）δ  １２．５（２ｘ），１８．８，２１．２，２２．５，２２．９，２３．９（２ｘ），２８．６，３１．１，３１．９，３３．５，３４．２，３５．５，３５．９，３６．３，３９．３，４２．１（２ｘ），４２．９，４６．１，５０．９，５６．６９．３０，７１．５，１５７．６，１６０．６．
【０２４９】
実施例２４：化合物２４の合成
【化３１】
2018518537.tif 000038
メチル３α，７α−ジメトキシメチルオキシ−６α−エチル−５β−コラン−２４−オアート（２）
ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中のＯＣＡ（１）（２５０ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ）の溶液に、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（１０ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）を添加し、得られた混合物を２時間、超音波処理した。溶媒を減圧下で除去し、残渣をＡｃＯＥｔ（１５ｍＬ）中で溶解させ、連続的にＮａＨＣＯ３飽和溶液（１５ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（１０ｍＬ）およびブライン（１０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。次いで残渣をＣＨ２Ｃｌ２（１５ｍＬ）中で溶解させ、得られた溶液にジイソプロピルエチルアミン（０．３２ｍＬ、４．２３ｍｍｏｌ）、４−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）−ピリジン（７ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）およびメトキシメチルクロリド（０．２７ｍＬ、３．５５ｍｍｏｌ）を連続的に添加した。次いで完了まで混合物を還流させた。反応物を室温で冷却し、ＨＣｌ  ３Ｎ（１０ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（１０ｍＬ）、ＮａＨＣＯ３飽和溶液（２０ｍＬ）およびブライン（１５ｍＬ）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮して、薄黄色油状物質として３０２ｍｇの２を得て、これをさらに精製せずに次の段階に対して使用した（０．３ｇ、０．５８ｍｍｏｌ）。
【０２５０】
メチル３α，７α−ジメトキシメチルオキシ−６α−エチル−２３（Ｒ＋Ｓ）−ヒドロキシ−５β−コラン−２４−オアート（３）
Ｎ２雰囲気下で−４０℃で冷却した蒸留ＴＨＦ（５ｍＬ）中のジイソプロピルアミン（０．６５ｍＬ、４．６０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ｎＢｕＬｉ（ヘキサン中２．５Ｍ、１．７７ｍＬ、４．４３ｍｍｏｌ）を滴加した。１５分後、溶液を−７８℃に冷却し、クロロトリメチルシラン（０．５９ｍＬ、４．７２ｍｍｏｌ）を滴加した。ＴＨＦ（５ｍＬ）中の２（０．３０ｇ、０．５８ｍｍｏｌ）の溶液を−７０℃で少量ずつ添加した。添加が終了したら、反応混合物を−７８℃で１時間撹拌し、次いで室温で反応させた。揮発性物質を減圧下で除去した。残渣を蒸留ＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）中で直接溶解させた。得られた溶液をＮ２雰囲気下の蒸留ＣＨ２Ｃｌ２（７ｍＬ）中の新鮮結晶化および酢酸不含四酢酸鉛（ＩＶ）（０．３８ｇ、０．５６ｍｍｏｌ）の懸濁液に滴加した。３０分後、セライトパッドに通して反応混合物を真空下でろ過した。ろ液を減圧下で濃縮し、残渣をシリカゲルパッドに通してろ過した。残渣をＭｅＯＨ（６ｍＬ）中で溶解させ、炭酸カリウム（０．１６ｇ、１．１５ｍｍｏｌ）で処理した。得られた懸濁液を室温で１５分間、激しく撹拌した。次いで混合物をＣＨ２Ｃｌ２（１５ｍＬ）で希釈し、真空下でろ過した。ろ液をさらなるＣＨ２Ｃｌ２（１５ｍＬ）でさらに希釈し、ブライン（２０ｍＬ）で洗浄した。水相をＣＨ２Ｃｌ２（３ｘ１０ｍＬ）で抽出し、回収した有機層全てをＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、２つのＣ２３−エピマーの混合物として０．１３ｇの３を得た（０．１３ｇ、０．２４ｍｍｏｌ、４１％）。
【０２５１】
メチル３α，７α−ジメトキシメチルオキシ−６α−エチル−２３（Ｒ＋Ｓ）−（メタンスルホニルオキシ）−５β−コラン−２４−オアート（４）
ピリジン（５ｍＬ）中の３（０．１３ｇ、０．２４ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、メタンスルホニルクロリド（０．０９ｍＬ、１．１８ｍｍｏｌ）を添加し、得られた混合物を室温で１２時間撹拌した。次いで混合物をＨ２Ｏ（１０ｍＬ）に注ぎ、ＣＨ２Ｃｌ２（３ｘ１０ｍＬ）で抽出した。回収した有機層をＨＣｌ  ０．５Ｍ（３ｘ５ｍＬ）、ＮａＨＣＯ３飽和溶液（１０ｍＬ）、ブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮して、４（２つのＣ２３−エピマーの混合物として）を得て、これを次の段階に対してそのまま使用した。
【０２５２】
メチル３α，７α−ジメトキシメチルオキシ−６α−エチル−２３（Ｒ＋Ｓ）−ブロモ−５β−コラン−２４−オアート（５）
ＤＭＦ（５ｍＬ）中の４（０．２４ｍｍｏｌ）の溶液に、臭化リチウム（０．０６ｇ、０．７１ｍｍｏｌ）を添加し、得られた混合物を４０℃で６時間撹拌した。次いでＡｃＯＥｔ（１０ｍＬ）を添加し、混合物をＨ２Ｏ（３ｘ１０ｍＬ）、ブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。残渣を精製し、２つのＣ２３−エピマーの混合物として９０ｍｇの所望のブロモ誘導体５を得た（０．０９ｇ、０．１５ｍｍｏｌ、３から６３％）。
【０２５３】
３α，７α−ジメトキシメチルオキシ−６α−エチル−２３，２４−ビスノル−２２−（２−イミノ−４−オキソ−チアゾリジン−５−イル）−５β−コラン（６）
ＥｔＯＨ（１０ｍＬ）中のブロモ誘導体５（９０ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）の溶液に、チオ尿素（９１ｍｇ、１．１９ｍｍｏｌ）および酢酸ナトリウム（９８ｍｇ、１．１９ｍｍｏｌ）を添加し、得られた混合物を撹拌し、２４時間還流させた。反応物を室温で冷却し、揮発性物質を減圧下で除去した。残渣をＡｃＯＥｔ（１０ｍＬ）中で溶解させ、Ｈ２Ｏ（２ｘ１０ｍＬ）、ブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮して、エピマーの混合物として６を得た。粗製物をさらに精製せずに次の段階に対して使用した。
【０２５４】
３α，７α−ジヒドロキシ−６α−エチル−２３，２４−ビスノル−２２−（２，４−ジオキソ−チアゾリジン−５−イル）−５β−コラン（化合物２４）
ＥｔＯＨ（４ｍＬ）中のイミノチアゾリジン誘導体６（０．１５ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＣｌ  ３７％（０．７ｍＬ）を添加し、得られた混合物を撹拌し、還流させた。次いで混合物をＨ２Ｏ（８ｍＬ）で処理し、有機揮発性物質を減圧下で除去した。Ｈ２Ｏ（３ｍＬ）を添加し、混合物をＣＨ２Ｃｌ２（３ｘ７ｍＬ）で抽出し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。クロマトグラフィー精製後、５ｍｇの所望の化合物２４を得た（５ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ、５から７％）。
Ｒｆ＝０．２８（ＳｉＯ２、Ｆ−２５４、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ  ９０：１０）。Ｍ．ｐ．＝１３６−１３８℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δ：０．７１（３Ｈ，ｓ，１８−ＣＨ３），０．８７−０．９８（６Ｈ，ｍ，１９−ＣＨ３＋ＣＨ２ＣＨ３），１．０１（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２１−ＣＨ３），３．２９−３．３３（１Ｈ，ｍ，３−ＣＨ），３．６３（１Ｈ，ｓ，７−ＣＨ），４．１４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ１＝３．９Ｈｚ，Ｊ２＝１１．７Ｈｚ，２３−ＣＨ），４．５９（１Ｈ，ｂｓ，ＮＨ）．１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，１００．６ＭＨｚ）δ  １２．０，１２．２，１８．２，２１．９，２３．５，２３．８，２４．５，２９．４，３０．８，３１．２，３４．４，３４．５，３６．６，３６．７，３６．８，４０．９，４１．４，４１．５，４３．１，４３．９，４６．９，５１．７，５７．６，７１．１，７３．２，１７４．４，１７９．６．
【０２５５】
実施例２５：物理化学的特性
臨界ミセル濃度
２つの異なる方法：表面張力（ＳＴ）および色素可溶化（Ｒｏｄａら、１９８３）で臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）を計算することによって界面活性を評価した。第１の方法において、Ｓｅｎｓａｄｙｎｅ  ６０００張力計（Ｃｈｅｍ−Ｄｙｎｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｒｐ．，Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，ＷＩ）を使用して最大気泡圧力法によって表面張力測定を実施した。０．１Ｍ  ＮａＣｌ中のＢＡナトリウム塩の様々な濃度（０．１〜１００ｍＭの範囲）での水溶液の表面張力を２５℃で測定した。胆汁塩濃度の対数に対して表面張力値をプロットし；最小二乗法を使用して、曲線の２つの部分（単量体およびミセル相）に対応する回帰直線を計算した。２つの直線の交点によって臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）値（ｍＭ）を得た。
【０２５６】
第２の方法は、いくつかの色素、具体的にはＯｒａｎｇｅ  ＯＴ（Ｉｎｔｅｒｃｅｐｔ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｓ．ｐ．ａ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡから購入）は水にほぼ不溶性であるが、ミセル凝集体が組み込まれている溶液中では溶解するという事実に基づき；したがって溶液の色の強度が胆汁塩濃度とともに上昇する（ＣＭＣ達成後）。胆汁塩濃度に付随して溶解される色素の量は、分光光度分析で決定した。
【０２５７】
各胆汁酸に対して、適切に希釈した５０ｍＭ〜０．１ｍＭの間の様々な濃度の様々な溶液を撹拌下で室温にて３日間、過剰なＯｒａｎｇｅ  ＯＴとともに温置した。次に、全溶液を遠心し、０．２２μｍ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅフィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｃｏｒｐ．，Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ）に通してろ過した。
【０２５８】
分光光度計（Ｗｅｌｌｗａｒｍ，Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）を用いて４８３ｎｍ（Ｏｒａｎｇｅ  ＯＴ吸収の典型的な波長）で各溶液の吸収を測定した。
【０２５９】
水溶性
１００ｍＬの０．１Ｍ  ＨＣｌ、ｐＨ１．００中でＢＡを懸濁し、飽和溶液を２５℃に維持したサーモスタットを備えた水浴に移した。１週間の温置後、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅフィルター（０．２２ｍｍ）上で溶液をろ過し、以下で報告するようにＨＰＬＣ−ＥＳＭＳ／ＭＳによってＢＡ濃度を測定した。
【０２６０】
親油性
依然に記載のような（Ｒｏｄａら、１９９０）従来の振盪フラスコ（ｓｈａｋｅ−ｆｌａｓｋ）手順を使用して、１−オクタノール／水分配係数を評価した。ＢＡの完全なイオン化を確実にするために０．１Ｍリン酸カリウム緩衝液でｐＨ８．００に緩衝化した１ｍＭ初期胆汁塩溶液において実験を行った。以下で報告するように、ＨＰＬＣ−ＥＳＭＳ／ＭＳによって１−オクタノールでの分配前後の水相中のＢＡ濃度を測定した。
【０２６１】
アルブミン結合
固定ＢＡ−アルブミン比での平衡透析によってアルブミン結合を評価した（Ｒｏｄａら、１９８２）。５％ウシ血清アルブミン塩溶液中１００ｍＭの濃度でＢＡを溶解させ、２５℃で２４時間静置した。２５ｍＬの塩溶液に対して分子量カットオフが１２〜１４ｋＤａであるセルロース袋（Ｓｐｅｃｔｒａ／Ｐｏｒ；Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ  Ｉｎｃ．，Ｒａｎｃｈｏ  Ｄｏｍｉｎｇｕｅｚ，ＣＡ）中でこの溶液２ｍＬを透析した。２５℃で７２時間、機械的に振盪させることによってこの系を平衡化した。以下で報告するようにＨＰＬＣ−ＥＳ−ＭＳ／ＭＳによって出発溶液中および透析溶液中のＢＡ濃度を決定した。
【０２６２】
【表６】
2018518537.tif 000039
【０２６３】
実施例２６：インビトロＴＧＲ５／ＦＸＲ活性
スクリーニングアッセイ
ＦＸＲ活性：ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎコアクチベーター動員アッセイ。動員コアクチベーターアッセイ、すなわちＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ技術を使用して、ＦＸＲ受容体の活性化を決定した。ヒトグルタチオントランスフェラーゼ−タグ付加ＦＸＲ−ＬＢＤ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，ＵＳＡ）およびマウスグルタチオントランスフェラーゼ−タグ付加ＦＸＲ−ＬＢＤ（社内で作製）を使用して、アッセイを行った。簡潔に述べると、１０ｎＭグルタチオントランスフェラーゼ−タグ付加ＦＸＲ−ＬＢＤタンパク質および３０ｎＭビオチン化Ｓｒｃ−１ペプチドを含有する２５μＬの最終体積を使用して、白色低容積３８４ウェルＯｐｔｉＰｌａｔｅ中でアッセイを行った。２５℃で３０分間、様々なＢＡ濃度で刺激を行った。暗所にて２５℃で４時間、検出混合液（アクセプターおよびドナービーズ）とともに温置した後、ＥｎＶｉｓｉｏｎ  ２１０３マイクロプレート分析装置（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ，ＵＳＡ）において発光を読み取った。３つ組で用量反応曲線を実施し、アッセイのロバスト性を検証するためにＺ’値を使用した。
【０２６４】
ＴＧＲ５活性：細胞内ｃＡＭＰレベル検出。ＨＴＲ−ＦＲＥＴアッセイを使用してｃＡＭＰレベルを測定することによって、ＴＧＲ５の活性化を評価した。したがって、１０％ＦＣＳ、１００単位／ｍＬペニシリンおよび１００μｇ／ｍＬ硫酸ストレプトマイシンを補給したＤＭＥＭ中のＭａｔｒｉｇｅｌ（Ｃｏｒｎｉｎｇ，ＵＳＡ）（０．７５ｍｇ／ｍＬ）でコーティングした９６ウェルプレート上でＮＣＩ−Ｈ７１６細胞を培養した。２４時間後、１ｍＭ  ３−イソブチル−１−メチルキサンチンを含有するＯｐｔｉＭＥＭ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，ＣＡ，ＵＳＡ）中で３７℃で６０分間、試験ＢＡ濃度を上昇させながら細胞を刺激した。Ｌａｎｃｅキットを用いて細胞内ｃＡＭＰレベルを決定した。アッセイを検証するためにＺ’値を使用した。
【０２６５】
それぞれ、培地：１０％ＦＢＳ、１０μｇ／ｍＬピューロマイシン（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）入りのＤＭＥＭ  Ｆ１２および１０％ＦＢＳ、６００μｇ／ｍＬジェネティシン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、１０μｇ／ｍＬピューロマイシン（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）入りのＦ１２  Ｋａｉｇｈｎ’ｓ培地中でｈＴＧＲ５  ＣＨＯ−ｋ１およびｍＴＧＲ５  ＣＨＯ−Ｐｉ１０クローン４を維持した。
【０２６６】
実験日に、以前のプロトコールに従い、３７℃で３０分間、ＨＰ  Ｄ３００デジタルディスペンサーにより分注される様々な濃度の試験化合物で細胞を刺激した。
【０２６７】
細胞毒性アッセイ
製造者の説明書に従い、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用してＡＴＰレベルを測定することによって、細胞生存能を評価した。細胞の細胞毒性に対して胆汁酸コパラメーターとしてＬＣＡを使用し、一方でアッセイの対照としてタモキシフェン（Ｓｉｇｍａ）を使用した。製造者の説明に従い、ＣｙｔｏＴｏｘ−ＯＮＥ、ホモジニアス膜完全性アッセイ（ｈｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ  ａｓｓａｙ）（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して、壊死性細胞からの乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）の放出を測定することによって、細胞壊死を評価した。細胞生存能（ＡＴＰレベル）、アポトーシスおよび壊死（ＬＤＨ放出）の分析に対して、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン（ＥｕｒｏＣｌｏｎｅ）、１％ペニシリン／ストレプトマイシン（ＥｕｒｏＣｌｏｎｅ）および１０％ＦＢＳ（ＥｕｒｏＣｌｏｎｅ）入りの、白色９６ウェルマイクロプレート中の１００ｎＭ〜３５０μＭの範囲の濃度の試験化合物が入ったＭＥＭ（ＥｕｒｏＣｌｏｎｅ）培地中で、３７℃で４時間、２ｘ１０４個のＨｅｐＧ２細胞を刺激した。
【０２６８】
ＧＬＰ１分泌
ＤＭＥＭ高グルコース（ＥｕｒｏＣｌｏｎｅ）、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン（ＥｕｒｏＣｌｏｎｅ）、１％ペニシリン／ストレプトマイシン（ＥｕｒｏＣｌｏｎｅ）、１０％ＦＢＳ（ＥｕｒｏＣｌｏｎｅ）中で、Ｍａｔｒｉｇｅｌ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｅｎｃｅｓ）で予めコーティングした２４ウェル培養プレートにヒトＮＣＩ−Ｈ７１６細胞を播種した。２４時間後、１ｍＭ  ＣａＣｌおよびジペプチジルペプチダーゼＩＶ阻害剤ジプロチン−Ａ（Ｓｉｇｍａ）を含有するＰＢＳにより上清を置き換え、３７℃で１時間、被験化合物で刺激した。Ｂｉｏ−Ｐｌｅｘ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）によってＧＬＰ−１を測定し、タンパク質含量に対して正規化した。
【０２６９】
本願の代表的化合物の生物学的活性を表３で示す。
【０２７０】
【表７】
2018518537.tif 000040
【０２７１】
【表８】
2018518537.tif 000041
【０２７２】
実施例２７：３０ｍｇ／ｋｇをｏｂ／ｏｂマウスに経口投与した後の薬物動態学的特性
雄ｏｂ／ｏｂマウス（９〜１０週齢、Ｊａｎｖｉｅｒ／Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）において薬物動態学的研究を行った。化合物（０．５％ヒドロキシエチルセルロース中３０ｍｇ／ｋｇ懸濁液）をマウスに経口投与した。投与から１０、３０分および１、２、４、６および２４時間後にリチウム−ヘパリンチューブに血液を採取した。遠心して血漿を回収し、さらなる測定のために凍結した。オンライン抽出（Ｔｕｒｂｏｆｌｏｗ）に従い、ＨＰＬＣ−ＥＳＩ−ＭＳ／ＭＳ法を使用して、化合物の血漿濃度を決定した。最適パラメーターを用いてネガティブモードでエレクトロスプレーイオン化源（Ｔｕｒｂｏｓｐｒａｙ）とともにＭＳ系（ＳｃｉｅｘＡＰＩ４０００）を設定した。多反応監視モードで質量分析装置を使用してクロマトグラムを得た。
【０２７３】
実施例２８：３日間処置したｏｂ／ｏｂマウスにおけるＯＧＴＴ
ビヒクル（０．５％ＨＥＣ）または被験ＢＡ（１００ｍｇ／ｋｇ）で３日間、雄ｏｂ／ｏｂマウス（１０週齢、Ｊａｎｖｉｅｒ、ｎ＝９／群）を１日２回（ＢＩＤ）経口投与で処置した。最終投与の直後に、マウスを４時間空腹状態にした。次いで、経口ブドウ糖負荷試験を行った（グルコース１．５ｇ／ｋｇ）。血糖値測定器を使用した血糖レベル決定のためにＴ０（グルコース投与前）、１０、２５、６０および１２０分で、血漿インスリンレベル測定（ＡＬＰＣＯ  ＥＬＩＳＡキット）のためにＴ０（グルコース投与前）、１０、２５および６０分で、血液試料を回収した。実験終了時に、麻酔下のマウスにおいて胆嚢内の胆汁体積を決定した。
【０２７４】
実施例２９：正常マウスでのインビボＧＬＰ−１分泌
雄Ｃ５７Ｂｌ／６マウス（９週齢、Ｊａｎｖｉｅｒ）を一晩空腹状態にし、次いで被験ＢＡ（１００ｍｇ／ｋｇ）で経口投与で処置し、その後、シタグリプチン（１ｍｇ／ｋｇ）で処置した。被験ＢＡの投与とシタグリプチンの投与との間の時間は、被験ＢＡのＰＫプロファイルに依存して、０〜３時間の間で変動する。シタグリプチン処置から１時間後、マウスにグルコース（１．５ｇ／ｋｇ）を経口負荷した。グルコース負荷前および負荷から５分後、血糖値測定器（ＡｃｃｕＣｈｅｋ）を使用した血糖測定のために、およびＤＰＰ−ＩＶ阻害剤を含有するＫ３−ＥＤＴＡチューブを使用した血漿回収のために、血液を回収した。製造者の説明（Ｌｉｎｃｏ−Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）に従い、ＥＬＩＳＡによって活性ＧＬＰ１の血漿レベルを測定した。実験終了時に、麻酔下のマウスにおいて胆嚢内の胆汁体積を決定した。
【０２７５】
実施例３０：「胆汁瘻ラット」モデルにおける薬物動態学的実験
Ｒｏｄａら、２０１４、Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ，Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｌ  Ｄａｔａ  ＩＶにおいて胆汁瘻ラットモデルが報告された。簡潔に述べると、動物に麻酔した後、胆管にカニューレを挿入し、静脈内または強制経口投与による十二指腸内の何れかでＢＡを送達させた。各胆汁酸を１時間にわたり２．５ｍＬ／時間で１ｍｍｏｌ／分／ｋｇ体重の用量で注入した。注入中ずっと、および注入終了後２時間にわたり、１５分間隔で胆汁を回収した。十二指腸内注入中にわたり、および注入後２時間にわたり、３０分間隔で血漿を回収し、同時に、静脈内注入については、実験開始時および終了時に血漿試料を回収した。肝臓および腸内容物を各実験の終了時に回収した。
【０２７６】
ＨＰＬＣ−ＥＳ−ＭＳ／ＭＳ法
以前に報告されているように（Ｒｏｄａら、２０１４，Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ）、移動相Ａとして１５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ８．００）を、移動相Ｂとしてアセトニトリル／メタノール（７５：２５ｖ／ｖ）を使用して、溶出勾配方式でＢＡを分離した。最適パラメーターを用いてネガティブモードでエレクトロスプレーイオン化源（ＥＳ）とともにＭＳ系を設定した。多反応監視モードで質量分析装置を使用してクロマトグラムを得た。
【０２７７】
胆汁試料調製
ラット胆汁試料を２５℃にして、６５：３５（ｖ／ｖ）の比率で酢酸アンモニウム緩衝液１５ｍＭ、ｐＨ８．００およびアセトニトリル／メタノール（３：１ｖ／ｖ）を用いて、１：１００または１：１０（ｖ／ｖ）希釈した。最終溶液をオートサンプラーバイアルに移し、５ｍＬをカラムに注入した。胆汁分泌流の結果はμｍｏｌ／ｋｇ／分として表し、胆汁流の結果はμＬ／ｋｇ／分として表す。
【０２７８】
血漿試料調製
以前に報告されているように（Ｒｏｄａら、２０１４，Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ）、血漿試料（１００ｍＬ）を０．１Ｎ  ＮａＯＨで１：６（ｖ／ｖ）希釈し、３０分間、６４℃に加熱した。試料負荷前に、固相抽出（ＳＰＥ）Ｃ１８カートリッジを５ｍＬのメタノールおよび５ｍＬの水で調整した。調整したカートリッジに血漿試料を載せ、次いで１０ｍＬの水で洗浄した。次いで５ｍＬのメタノールを用いてカートリッジを溶出し、溶出液を真空下で乾燥させ、次に２００ｍＬの移動相で再構成し、ＨＰＬＣ−ＥＳ−ＭＳ／ＭＳ装置に５μＬを注入した。結果をμＭとして表す。
【０２７９】
肝臓試料調製
以前に報告されているように（Ｒｏｄａら、２０１４、Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ）、それぞれおよそ１ｇの重量のアリコートを肝臓試料の様々な点で採取した。各アリコートの重量を測定し、２ｍＬのリン酸緩衝液（０．００５Ｍ、ｐＨ７．２）を添加した。ポッター型ホモジナイザーを使用して混合物をホモジナイズし、次いでこれをメタノール（３ｘ１ｍＬ）で洗浄した。混合物を５分間超音波処理し、２分間ボルテックス処理し、２０分間３７℃に加熱し、遠心した（２１００ｇで１５分間）。１ｍＬの上清に１０ｍＬの内部標準実験溶液を添加し、真空下で乾燥させた。次いで２ｍＬのＮａＯＨ（０．１Ｎ）で残渣を再懸濁した。この溶液を１０分間超音波処理し、６４℃で３０分間加熱し、Ｃ１８抽出カートリッジ上でＳＰＥを行った（上記で示すとおり）。溶出液を真空下で乾燥させ、２００ｍＬの移動相で再構成し、ＨＰＬＣ−ＥＳ−ＭＳ系に注入した。結果はμｍｏｌ／ｇとして表すが、ｇは総肝臓重量である。
【０２８０】
腸内容物試料調製
以前に報告されているように（Ｒｏｄａら、２０１４、Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ）、腸内容物試料試料を回収し、ミキサーを使用してホモジナイズした。およそ１ｇの重量のアリコートをホモジネート液から採取した。各アリコートの重量を測定し、３ｍＬのイソプロピルアルコールを添加した。混合物を２分間ボルテックス処理し、遠心した（２１００ｇで１０分間）。次いで上清を移動相で１：１００ｖ／ｖに希釈し、１９０ｍＬのこれらの最終溶液に１０ｍＬの内部標準物質を添加した。結果はμｍｏｌ／ｇとして表すが、ｇは総腸内容物重量である。
【０２８１】
較正曲線
０．１〜２０ｎＭの直線範囲で、移動相において、採取した胆汁、糞便および肝臓の較正曲線を行った。血漿試料については、０．１〜２０ｎＭの直線範囲で、ＢＡ不含ラット血漿を使用して較正曲線を得た。
【０２８２】
回収率％
ＢＡの総量が投与された各マトリクスにおいて被験ＢＡおよびその代謝産物の量と比較して、回収率％を評価した。
【０２８３】
他の実施形態
本願の詳細な説明と組み合わせて本願を記載してきたが、前述の記載は説明目的であり、本願の範囲を限定するものではなく、本願の範囲は、添付の特許請求の範囲によって定められる。他の態様、長所および変更は続く特許請求の範囲の範囲内である。当業者により理解されるであろうが、形式および詳細の様々な変更が、添付の特許請求の範囲により包含される本願の範囲から逸脱することなくその中でなされ得る。
【国際調査報告】
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