(57)【要約】リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ−３）に結合する抗体またはその抗原結合性断片、特に、ＬＡＧ−３のアゴニストである抗体またはその抗原結合性断片について記載される。抗体は、ＬＡＧ−３に結合し、抗原により誘導されるＣＤ４＋  Ｔ細胞および／またはＣＤ８＋  Ｔ細胞の増殖、または抗原により誘導されるＣＤ４＋  Ｔ細胞および／またはＣＤ８＋  Ｔ細胞の活性化を阻害する。抗体は、特に、炎症性障害および自己免疫障害など、ＣＤ４＋  Ｔ細胞および／またはＣＤ８＋  Ｔ細胞の増殖および／または活性化と関連する状態を処置するための医薬として使用することができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ−３）に結合し、抗原により誘導されるＣＤ４＋Ｔ細胞および／もしくはＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖、または抗原により誘導されるＣＤ４＋Ｔ細胞および／もしくはＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化を阻害する単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項２】
抗原により誘導されるＣＤ４＋Ｔ細胞および抗原により誘導されるＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を阻害する、請求項１に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項３】
抗原により誘導されるＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を、抗原により誘導されるＣＤ４＋Ｔ細胞の増殖より強く阻害する、請求項１または２に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項４】
抗原により誘導されるＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖の前記阻害が、ＬＡＧ−３依存性、かつＩＬ−２非依存性である、先行するいずれかの請求項に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項５】
抗原により誘導されるＣＤ４＋Ｔ細胞および／またはＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖、ならびに抗原により誘導されるＣＤ４＋Ｔ細胞および／またはＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化を阻害する、先行するいずれかの請求項に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項６】
リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ−３）に結合し、抗原により誘導されるＣＤ４＋Ｔ細胞および／またはＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化を阻害する単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項７】
モノクローナル抗体１７Ｂ４より大きなアフィニティーで、ＬＡＧ−３に結合する、先行するいずれかの請求項に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項８】
ＬＡＧ−３またはＩＭＰ３２１の、ＭＨＣクラスＩＩ陽性細胞への結合を阻害する、先行するいずれかの請求項に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項９】
ＬＡＧ−３により誘導される抗原提示細胞（ＡＰＣ）の活性化、またはＩＭＰ３２１により誘導される単球の活性化を阻害する、先行するいずれかの請求項に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１０】
ＬＡＧ−３のＭＨＣクラスＩＩ結合性部位と重複する、ＬＡＧ−３のエピトープに結合する、先行するいずれかの請求項に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１１】
配列番号７のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）領域の、１つ、２つ、もしくは３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）、および／または配列番号８のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）領域の、１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲを含む、先行するいずれかの請求項に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１２】
前記抗体ＶＨ領域のＣＤＲが、配列番号１、２、３、２１、２２、および２３のアミノ酸配列のＣＤＲから選択され、前記抗体ＶＬ領域のＣＤＲが、配列番号４、５、６、２４、２５、および２６のアミノ酸配列のＣＤＲから選択される、請求項１１に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１３】
ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、およびＶＨ  ＣＤＲ３を含む抗体ＶＨ領域を含む、請求項１１または１２に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片であって、該ＶＨ  ＣＤＲ１が、配列番号１および２１から選択されるアミノ酸配列を有し、かつ／または該ＶＨ  ＣＤＲ２が、配列番号２および２２から選択されるアミノ酸配列を有し、かつ／または該ＶＨ  ＣＤＲ３が、配列番号３および２３から選択されるアミノ酸配列を有する、単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１４】
前記ＶＨ  ＣＤＲ１が、配列番号１および２１から選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＶＨ  ＣＤＲ２が、配列番号２および２２から選択されるアミノ酸配列を有するか；
前記ＶＨ  ＣＤＲ１が、配列番号１および２１から選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＶＨ  ＣＤＲ３が、配列番号３および２３から選択されるアミノ酸配列を有するか；
前記ＶＨ  ＣＤＲ２が、配列番号２および２２から選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＶＨ  ＣＤＲ３が、配列番号３および２３から選択されるアミノ酸配列を有するか；または
前記ＶＨ  ＣＤＲ１が、配列番号１および２１から選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＶＨ  ＣＤＲ２が、配列番号２および２２から選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＶＨ  ＣＤＲ３が、配列番号３および２３から選択されるアミノ酸配列を有する、
請求項１３に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１５】
ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、およびＶＬ  ＣＤＲ３を含む抗体ＶＬ領域を含む、請求項１１から１４のいずれかに記載の単離抗体またはその抗原結合性断片であって、該ＶＬ  ＣＤＲ１が、配列番号４および２４から選択されるアミノ酸配列を有し、かつ／または該ＶＬ  ＣＤＲ２が、配列番号５および２５から選択されるアミノ酸配列を有し、かつ／または該ＶＬ  ＣＤＲ３が、配列番号６および２６から選択されるアミノ酸配列を有する、単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１６】
前記ＶＬ  ＣＤＲ１が、配列番号４および２４から選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＶＬ  ＣＤＲ２が、配列番号５および２５から選択されるアミノ酸配列を有するか；
前記ＶＬ  ＣＤＲ１が、配列番号４および２４から選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＶＬ  ＣＤＲ３が、配列番号６および２６から選択されるアミノ酸配列を有するか；
前記ＶＬ  ＣＤＲ２が、配列番号５および２５から選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＶＬ  ＣＤＲ３が、配列番号６および２６から選択されるアミノ酸配列を有するか；または
前記ＶＬ  ＣＤＲ１が、配列番号４および２４から選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＶＬ  ＣＤＲ２が、配列番号５および２５から選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＶＬ  ＣＤＲ３が、配列番号６および２６から選択されるアミノ酸配列を有する、
請求項１５に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１７】
前記ＶＨ  ＣＤＲ１が、配列番号１および２１から選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＶＨ  ＣＤＲ２が、配列番号２および２２から選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＶＨ  ＣＤＲ３が、配列番号３および２３から選択されるアミノ酸配列を有し；かつ／または前記ＶＬ  ＣＤＲ１が、配列番号４および２４から選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＶＬ  ＣＤＲ２が、配列番号５および２５から選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＶＬ  ＣＤＲ３が、配列番号６および２６から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項１３から１６のいずれかに記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１８】
前記抗体ＶＨ領域のＣＤＲが、配列番号１、２、および３のアミノ酸配列のＣＤＲであり、前記抗体ＶＬ領域のＣＤＲが、配列番号４、５、および６のアミノ酸配列のＣＤＲである、請求項１１から１７のいずれかに記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１９】
前記抗体ＶＨ領域のＣＤＲが、配列番号２１、２２、および２３のアミノ酸配列のＣＤＲであり、前記抗体ＶＬ領域のＣＤＲが、配列番号２４、２５、および２６のアミノ酸配列のＣＤＲである、請求項１１から１７のいずれかに記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項２０】
配列番号１、２、および３のアミノ酸配列を含むＣＤＲを有する抗体ＶＨ領域、ならびに／または配列番号４、５、および６のアミノ酸配列を含むＣＤＲを有する抗体ＶＬ領域を含む、先行するいずれかの請求項に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項２１】
配列番号２１、２２、および２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲを有する抗体ＶＨ領域、ならびに／または配列番号２４、２５、および２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲを有する抗体ＶＬ領域を含む、請求項１から１９のいずれかに記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項２２】
（ａ）配列番号１、または配列番号１と比較して、１、２、３、４、もしくは５つの、アミノ酸の置換、欠失、もしくは付加を有するアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ１領域；（ｂ）配列番号２、または配列番号２と比較して、１、２、３、４、もしくは５つの、アミノ酸の置換、欠失、もしくは付加を有するアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２領域；および（ｃ）配列番号３、または配列番号３と比較して、１、２、３、４、もしくは５つの、アミノ酸の置換、欠失、もしくは付加を有するアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３領域を含む重鎖可変領域；ならびに／あるいは（ａ）配列番号４、または配列番号４と比較して、１、２、３、４、もしくは５つの、アミノ酸の置換、欠失、もしくは付加を有するアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１領域；（ｂ）配列番号５、または配列番号５と比較して、１、２、３、４、もしくは５つの、アミノ酸の置換、欠失、もしくは付加を有するアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２領域；および（ｃ）配列番号６、または配列番号６と比較して、１、２、３、４、もしくは５つの、アミノ酸の置換、欠失、もしくは付加を有するアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３領域を含む軽鎖可変領域を含む、先行するいずれかの請求項に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項２３】
（ａ）配列番号２１、または配列番号２１と比較して、１、２、３、４、もしくは５つの、アミノ酸の置換、欠失、もしくは付加を有するアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ１領域；（ｂ）配列番号２２、または配列番号２２と比較して、１、２、３、４、もしくは５つの、アミノ酸の置換、欠失、もしくは付加を有するアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２領域；および（ｃ）配列番号２３、または配列番号２３と比較して、１、２、３、４、もしくは５つの、アミノ酸の置換、欠失、もしくは付加を有するアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３領域を含む重鎖可変領域；ならびに／あるいは（ａ）配列番号２４、または配列番号２４と比較して、１、２、３、４、もしくは５つの、アミノ酸の置換、欠失、もしくは付加を有するアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１領域；（ｂ）配列番号２５、または配列番号２５と比較して、１、２、３、４、もしくは５つの、アミノ酸の置換、欠失、もしくは付加を有するアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２領域；および（ｃ）配列番号２６、または配列番号２６と比較して、１、２、３、４、もしくは５つの、アミノ酸の置換、欠失、もしくは付加を有するアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３領域を含む軽鎖可変領域を含む、先行するいずれかの請求項に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項２４】
配列番号７のアミノ酸配列、もしくは配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも６０％同一であるアミノ酸配列を含む抗体ＶＨ領域、および／または配列番号８のアミノ酸配列、もしくは配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも６０％同一であるアミノ酸配列を含む抗体ＶＬ領域を含む、先行するいずれかの請求項に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項２５】
配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも６０％同一であるアミノ酸配列を含む抗体ＶＨ領域、および配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも６０％同一であるアミノ酸配列を含む抗体ＶＬ領域を含む、請求項２４に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項２６】
配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも６０％同一であるアミノ酸配列を含む抗体ＶＨ領域、および配列番号８のアミノ酸配列を含む抗体ＶＬ領域を含む、請求項２４に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項２７】
配列番号７のアミノ酸配列を含む抗体ＶＨ領域、および配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも６０％同一であるアミノ酸配列を含む抗体ＶＬ領域を含む、請求項２４に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項２８】
配列番号７のアミノ酸配列を含む抗体ＶＨ領域、および配列番号８のアミノ酸配列を含む抗体ＶＬ領域を含む、請求項２４に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項２９】
配列番号１７のアミノ酸配列を含む抗体ＶＨ領域の、１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲ、および／または配列番号１８のアミノ酸配列を含む抗体ＶＬ領域の、１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲを含む、先行するいずれかの請求項に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項３０】
前記抗体ＶＨ領域のＣＤＲが、配列番号１１、１２、１３、３１、３２、および３３のアミノ酸配列のＣＤＲから選択され、前記抗体ＶＬ領域のＣＤＲが、配列番号１４、１５、１６、３４、３５、および３６のアミノ酸配列のＣＤＲから選択される、請求項２９に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項３１】
ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、およびＶＨ  ＣＤＲ３を含む抗体ＶＨ領域を含む、請求項２９または３０に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片であって、該ＶＨ  ＣＤＲ１が、配列番号１１および３１から選択されるアミノ酸配列を有し、かつ／または該ＶＨ  ＣＤＲ２が、配列番号１２および３２から選択されるアミノ酸配列を有し、かつ／または該ＶＨ  ＣＤＲ３が、配列番号１３および３３から選択されるアミノ酸配列を有する、単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項３２】
前記ＶＨ  ＣＤＲ１が、配列番号１１および３１から選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＶＨ  ＣＤＲ２が、配列番号１２および３２から選択されるアミノ酸配列を有するか；
前記ＶＨ  ＣＤＲ１が、配列番号１１および３１から選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＶＨ  ＣＤＲ３が、配列番号１３および３３から選択されるアミノ酸配列を有するか；
前記ＶＨ  ＣＤＲ２が、配列番号１２および３２から選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＶＨ  ＣＤＲ３が、配列番号１３および３３から選択されるアミノ酸配列を有するか；または
前記ＶＨ  ＣＤＲ１が、配列番号１１および３１から選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＶＨ  ＣＤＲ２が、配列番号１２および３２から選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＶＨ  ＣＤＲ３が、配列番号１３および３３から選択されるアミノ酸配列を有する、
請求項３１に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項３３】
ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、およびＶＬ  ＣＤＲ３を含む抗体ＶＬ領域を含む、請求項２９から３２のいずれかに記載の単離抗体またはその抗原結合性断片であって、該ＶＬ  ＣＤＲ１が、配列番号１４および３４から選択されるアミノ酸配列を有し、かつ／または該ＶＬ  ＣＤＲ２が、配列番号１５および３５から選択されるアミノ酸配列を有し、かつ／または該ＶＬ  ＣＤＲ３が、配列番号１６および３６から選択されるアミノ酸配列を有する、単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項３４】
前記ＶＬ  ＣＤＲ１が、配列番号１４および３４から選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＶＬ  ＣＤＲ２が、配列番号１５および３５から選択されるアミノ酸配列を有するか；
前記ＶＬ  ＣＤＲ１が、配列番号１４および３４から選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＶＬ  ＣＤＲ３が、配列番号１６および３６から選択されるアミノ酸配列を有するか；
前記ＶＬ  ＣＤＲ２が、配列番号１５および３５から選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＶＬ  ＣＤＲ３が、配列番号１６および３６から選択されるアミノ酸配列を有するか；または
前記ＶＬ  ＣＤＲ１が、配列番号１４および３４から選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＶＬ  ＣＤＲ２が、配列番号１５および３５から選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＶＬ  ＣＤＲ３が、配列番号１６および３６から選択されるアミノ酸配列を有する、
請求項３３に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項３５】
前記ＶＨ  ＣＤＲ１が、配列番号１１および３１から選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＶＨ  ＣＤＲ２が、配列番号１２および３２から選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＶＨ  ＣＤＲ３が、配列番号１３および３３から選択されるアミノ酸配列を有し；かつ／または前記ＶＬ  ＣＤＲ１が、配列番号１４および３４から選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＶＬ  ＣＤＲ２が、配列番号１５および３５から選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＶＬ  ＣＤＲ３が、配列番号１６および３６から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項３１から３４のいずれかに記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項３６】
前記抗体ＶＨ領域のＣＤＲが、配列番号１１、１２、および１３のアミノ酸配列のＣＤＲであり、前記抗体ＶＬ領域のＣＤＲが、配列番号１４、１５、および１６のアミノ酸配列のＣＤＲである、請求項２９から３５のいずれかに記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項３７】
前記抗体ＶＨ領域のＣＤＲが、配列番号３１、３２、および３３のアミノ酸配列のＣＤＲであり、前記抗体ＶＬ領域のＣＤＲが、配列番号３４、３５、および３６のアミノ酸配列のＣＤＲである、請求項２９から３５のいずれかに記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項３８】
配列番号１１、１２、および１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲを有する抗体ＶＨ領域、ならびに／または配列番号１４、１５、および１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲを有する抗体ＶＬ領域を含む、先行するいずれかの請求項に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項３９】
配列番号３１、３２、および３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲを有する抗体ＶＨ領域、ならびに／または配列番号３４、３５、および３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲを有する抗体ＶＬ領域を含む、先行するいずれかの請求項に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項４０】
（ａ）配列番号１１、または配列番号１１と比較して、１、２、３、４、もしくは５つの、アミノ酸の置換、欠失、もしくは付加を有するアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ１領域；（ｂ）配列番号１２、または配列番号１２と比較して、１、２、３、４、もしくは５つの、アミノ酸の置換、欠失、もしくは付加を有するアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２領域；および（ｃ）配列番号１３、または配列番号１３と比較して、１、２、３、４、もしくは５つの、アミノ酸の置換、欠失、もしくは付加を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３領域を含む重鎖可変領域；ならびに／あるいは（ａ）配列番号１４、または配列番号１４と比較して、１、２、３、４、もしくは５つの、アミノ酸の置換、欠失、もしくは付加を有するアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１領域；（ｂ）配列番号１５、または配列番号１５と比較して、１、２、３、４、もしくは５つの、アミノ酸の置換、欠失、もしくは付加を有するアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２領域；および（ｃ）配列番号１６、または配列番号１６と比較して、１、２、３、４、もしくは５つの、アミノ酸の置換、欠失、もしくは付加を有するアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３領域を含む軽鎖可変領域を含む、先行するいずれかの請求項に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項４１】
（ａ）配列番号３１、または配列番号３１と比較して、１、２、３、４、もしくは５つの、アミノ酸の置換、欠失、もしくは付加を有するアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ１領域；（ｂ）配列番号３２、または配列番号３２と比較して、１、２、３、４、もしくは５つの、アミノ酸の置換、欠失、もしくは付加を有するアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２領域；および（ｃ）配列番号３３、または配列番号３３と比較して、１、２、３、４、もしくは５つの、アミノ酸の置換、欠失、もしくは付加を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３領域を含む重鎖可変領域；ならびに／あるいは（ａ）配列番号３４、または配列番号３４と比較して、１、２、３、４、もしくは５つの、アミノ酸の置換、欠失、もしくは付加を有するアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１領域；（ｂ）配列番号３５、または配列番号３５と比較して、１、２、３、４、もしくは５つの、アミノ酸の置換、欠失、もしくは付加を有するアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２領域；および（ｃ）配列番号３６、または配列番号３６と比較して、１、２、３、４、もしくは５つの、アミノ酸の置換、欠失、もしくは付加を有するアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３領域を含む軽鎖可変領域を含む、先行するいずれかの請求項に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項４２】
配列番号１７のアミノ酸配列、もしくは配列番号１７のアミノ酸配列と少なくとも６０％同一であるアミノ酸配列を含む抗体ＶＨ領域、および／または配列番号１８のアミノ酸配列、もしくは配列番号１８のアミノ酸配列と少なくとも６０％同一であるアミノ酸配列を含む抗体ＶＬ領域を含む、先行するいずれかの請求項に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項４３】
配列番号１７のアミノ酸配列と少なくとも６０％同一であるアミノ酸配列を含む抗体ＶＨ領域、および配列番号１８のアミノ酸配列と少なくとも６０％同一であるアミノ酸配列を含む抗体ＶＬ領域を含む、請求項４２に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項４４】
配列番号１７のアミノ酸配列と少なくとも６０％同一であるアミノ酸配列を含む抗体ＶＨ領域、および配列番号１８のアミノ酸配列を含む抗体ＶＬ領域を含む、請求項４２に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項４５】
配列番号１７のアミノ酸配列を含む抗体ＶＨ領域、および配列番号１８のアミノ酸配列と少なくとも６０％同一であるアミノ酸配列を含む抗体ＶＬ領域を含む、請求項４２に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項４６】
配列番号１７のアミノ酸配列を含む抗体ＶＨ領域、および配列番号１８のアミノ酸配列を含む抗体ＶＬ領域を含む、請求項４２に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項４７】
ヒト化モノクローナル抗体またはその抗原結合性断片である、先行するいずれかの請求項に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項４８】
ヒト化軽鎖フレームワーク領域を含む、先行するいずれかの請求項に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項４９】
前記ヒト化軽鎖フレームワーク領域が、ＶＬ１、ＶＬ２、ＶＬ３、またはＶＬ４について表２７に示したアミノ酸置換のうちのいずれかを有するアミノ酸配列を含む、請求項４８に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項５０】
前記ヒト化軽鎖フレームワーク領域が、配列番号６８〜８３のうちのいずれかのアミノ酸配列を含む、請求項４８または４９に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項５１】
配列番号６８のＶＬフレームワーク領域１（ＶＬ  ＦＲ１）；配列番号６９のＶＬ  ＦＲ２；配列番号７０のＶＬ  ＦＲ３；および配列番号７１のＶＬ  ＦＲ４；
配列番号７２のＶＬフレームワーク領域１（ＶＬ  ＦＲ１）；配列番号７３のＶＬ  ＦＲ２；配列番号７４のＶＬ  ＦＲ３；および配列番号７５のＶＬ  ＦＲ４；
配列番号７６のＶＬフレームワーク領域１（ＶＬ  ＦＲ１）；配列番号７７のＶＬ  ＦＲ２；配列番号７８のＶＬ  ＦＲ３；および配列番号７９のＶＬ  ＦＲ４；または
配列番号８０のＶＬフレームワーク領域１（ＶＬ  ＦＲ１）；配列番号８１のＶＬ  ＦＲ２；配列番号８２のＶＬ  ＦＲ３；および配列番号８３のＶＬ  ＦＲ４
を含む、請求項５０に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項５２】
配列番号６８のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１；配列番号４および２４から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号６９のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２；配列番号５および２５から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号７０のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３；配列番号６および２６から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３；ならびに配列番号７１のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４
を含む抗体ＶＬ領域を含む、請求項４８から５１のいずれかに記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項５３】
配列番号６８のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１；配列番号４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号６９のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２；配列番号５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号７０のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３；配列番号６のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３；ならびに配列番号７１のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４
を含む抗体ＶＬ領域を含む、請求項４８から５１のいずれかに記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項５４】
配列番号６８のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１；配列番号２４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号６９のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２；配列番号２５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号７０のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３；配列番号２６のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３；ならびに配列番号７１のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４
を含む抗体ＶＬ領域を含む、請求項４８から５１のいずれかに記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項５５】
配列番号７２のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１；配列番号４および２４から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号７３のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２；配列番号５および２５から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号７４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３；配列番号６および２６から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３；ならびに配列番号７５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４
を含む抗体ＶＬ領域を含む、請求項４８から５１のいずれかに記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項５６】
配列番号７２のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１；配列番号４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号７３のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２；配列番号５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号７４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３；配列番号６のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３；ならびに配列番号７５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４
を含む抗体ＶＬ領域を含む、請求項４８から５１のいずれかに記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項５７】
配列番号７２のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１；配列番号２４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号７３のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２；配列番号２５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号７４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３；配列番号２６のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３；ならびに配列番号７５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４
を含む抗体ＶＬ領域を含む、請求項４８から５１のいずれかに記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項５８】
配列番号７６のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１；配列番号４および２４から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号７７のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２；配列番号５および２５から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号７８のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３；配列番号６および２６から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３；ならびに配列番号７９のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４
を含む抗体ＶＬ領域を含む、請求項４８から５１のいずれかに記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項５９】
配列番号７６のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１；配列番号４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号７７のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２；配列番号５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号７８のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３；配列番号６のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３；ならびに配列番号７９のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４
を含む抗体ＶＬ領域を含む、請求項４８から５１のいずれかに記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項６０】
配列番号７６のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１；配列番号２４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号７７のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２；配列番号２５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号７８のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３；配列番号２６のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３；ならびに配列番号７９のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４
を含む抗体ＶＬ領域を含む、請求項４８から５１のいずれかに記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項６１】
配列番号８０のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１；配列番号４および２４から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号８１のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２；配列番号５および２５から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号８２のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３；配列番号６および２６から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３；ならびに配列番号８３のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４
を含む抗体ＶＬ領域を含む、請求項４８から５１のいずれかに記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項６２】
配列番号８０のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１；配列番号４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号８１のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２；配列番号５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号８２のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３；配列番号６から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３；ならびに配列番号８３のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４
を含む抗体ＶＬ領域を含む、請求項４８から５１のいずれかに記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項６３】
配列番号８０のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１；配列番号２４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号８１のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２；配列番号２５から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号８２のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３；配列番号２６から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３；ならびに配列番号８３のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４
を含む抗体ＶＬ領域を含む、請求項４８から５１のいずれかに記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項６４】
配列番号６８のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１；配列番号１４および３４から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号６９のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２；配列番号１５および３５から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号７０のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３；配列番号１６および３６から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３；ならびに配列番号７１のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４
を含む抗体ＶＬ領域を含む、請求項４８から５１のいずれかに記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項６５】
配列番号６８のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１；配列番号１４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号６９のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２；配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号７０のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３；配列番号１６のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３；ならびに配列番号７１のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４
を含む抗体ＶＬ領域を含む、請求項４８から５１のいずれかに記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項６６】
配列番号６８のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１；配列番号３４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号６９のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２；配列番号３５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号７０のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３；配列番号３６のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３；ならびに配列番号７１のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４
を含む抗体ＶＬ領域を含む、請求項４８から５１のいずれかに記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項６７】
配列番号７２のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１；配列番号１４および３４から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号７３のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２；配列番号１５および３５から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号７４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３；配列番号１６および３６から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３；ならびに配列番号７５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４
を含む抗体ＶＬ領域を含む、請求項４８から５１のいずれかに記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項６８】
配列番号７２のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１；配列番号１４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号７３のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２；配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号７４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３；配列番号１６のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３；ならびに配列番号７５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４
を含む抗体ＶＬ領域を含む、請求項４８から５１のいずれかに記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項６９】
配列番号７２のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１；配列番号３４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号７３のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２；配列番号３５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号７４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３；配列番号３６のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３；ならびに配列番号７５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４
を含む抗体ＶＬ領域を含む、請求項４８から５１のいずれかに記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項７０】
配列番号７６のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１；配列番号１４および３４から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号７７のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２；配列番号１５および３５から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号７８のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３；配列番号１６および３６から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３；ならびに配列番号７９のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４
を含む抗体ＶＬ領域を含む、請求項４８から５１のいずれかに記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項７１】
配列番号７６のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１；配列番号１４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号７７のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２；配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号７８のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３；配列番号１６のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３；ならびに配列番号７９のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４
を含む抗体ＶＬ領域を含む、請求項４８から５１のいずれかに記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項７２】
配列番号７６のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１；配列番号３４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号７７のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２；配列番号３５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号７８のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３；配列番号３６のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３；ならびに配列番号７９のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４
を含む抗体ＶＬ領域を含む、請求項４８から５１のいずれかに記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項７３】
配列番号８０のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１；配列番号１４および３４から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号８１のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２；配列番号１５および３５から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号８２のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３；配列番号１６および３６から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３；ならびに配列番号８３のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４
を含む抗体ＶＬ領域を含む、請求項４８から５１のいずれかに記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項７４】
配列番号８０のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１；配列番号１４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号８１のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２；配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号８２のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３；配列番号１６のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３；ならびに配列番号８３のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４
を含む抗体ＶＬ領域を含む、請求項４８から５１のいずれかに記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項７５】
配列番号８０のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１；配列番号３４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号８１のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２；配列番号３５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号８２のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３；配列番号３６のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３；ならびに配列番号８３のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４
を含む抗体ＶＬ領域を含む、請求項４８から５１のいずれかに記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項７６】
ヒト化重鎖フレームワーク領域を含む、先行するいずれかの請求項に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項７７】
前記ヒト化重鎖フレームワーク領域が、ＶＨ１、ＶＨ２、ＶＨ３、またはＶＨ４について表２６に示したアミノ酸置換のうちのいずれかを有するアミノ酸配列を含む、請求項７６に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項７８】
前記ヒト化重鎖フレームワーク領域が、配列番号５２〜６７のうちのいずれかのアミノ酸配列を含む、請求項７６または７７に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項７９】
配列番号５２のＶＨフレームワーク領域１（ＶＨ  ＦＲ１）；配列番号５３のＶＨ  ＦＲ２；配列番号５４のＶＨ  ＦＲ３；および配列番号５５のＶＨ  ＦＲ４；
配列番号５６のＶＨフレームワーク領域１（ＶＨ  ＦＲ１）；配列番号５７のＶＨ  ＦＲ２；配列番号５８のＶＨ  ＦＲ３；および配列番号５９のＶＨ  ＦＲ４；
配列番号６０のＶＨフレームワーク領域１（ＶＨ  ＦＲ１）；配列番号６１のＶＨ  ＦＲ２；配列番号６２のＶＨ  ＦＲ３；および配列番号６３のＶＨ  ＦＲ４；または
配列番号６４のＶＨフレームワーク領域１（ＶＨ  ＦＲ１）；配列番号６５のＶＨ  ＦＲ２；配列番号６６のＶＨ  ＦＲ３；および配列番号６７のＶＨ  ＦＲ４
を含む、請求項７８に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項８０】
配列番号５２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１；配列番号１および２１から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号５３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２；配列番号２および２２から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号５４のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３；配列番号３および２３から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３；ならびに配列番号５５のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４
を含む抗体ＶＨ領域を含む、請求項７６から７９のいずれかに記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項８１】
配列番号５２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１；配列番号１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号５３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２；配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号５４のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３；配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３；ならびに配列番号５５のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４
を含む抗体ＶＨ領域を含む、請求項７６から７９のいずれかに記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項８２】
配列番号５２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１；配列番号２１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号５３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２；配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号５４のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３；配列番号２３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３；および配列番号５５のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４
を含む抗体ＶＨ領域を含む、請求項７６から７９のいずれかに記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項８３】
配列番号５６のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１；配列番号１および２１から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号５７のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２；配列番号２および２２から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号５８のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３；配列番号３および２３から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３；および配列番号５９のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４
を含む抗体ＶＨ領域を含む、請求項７６から７９のいずれかに記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項８４】
配列番号５６のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１；配列番号１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号５７のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２；配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号５８のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３；配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３；および配列番号５９のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４
を含む抗体ＶＨ領域を含む、請求項７６から７９のいずれかに記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項８５】
配列番号５６のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１；配列番号２１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号５７のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２；配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号５８のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３；配列番号２３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３；および配列番号５９のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４
を含む抗体ＶＨ領域を含む、請求項７６から７９のいずれかに記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項８６】
配列番号６０のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１；配列番号１および２１から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号６１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２；配列番号２および２２から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号６２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３；配列番号３および２３から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３；および配列番号６３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４
を含む抗体ＶＨ領域を含む、請求項７６から７９のいずれかに記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項８７】
配列番号６０のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１；配列番号１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号６１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２；配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号６２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３；配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３；および配列番号６３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４
を含む抗体ＶＨ領域を含む、請求項７６から７９のいずれかに記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項８８】
配列番号６０のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１；配列番号２１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号６１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２；配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号６２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３；配列番号２３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３；および配列番号６３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４
を含む抗体ＶＨ領域を含む、請求項７６から７９のいずれかに記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項８９】
配列番号６４のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１；配列番号１および２１から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号６５のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２；配列番号２および２２から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号６６のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３；配列番号３および２３から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３；および配列番号６７のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４
を含む抗体ＶＨ領域を含む、請求項７６から７９のいずれかに記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項９０】
配列番号６４のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１；配列番号１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号６５のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２；配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号６６のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３；配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３；および配列番号６７のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４
を含む抗体ＶＨ領域を含む、請求項７６から７９のいずれかに記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項９１】
配列番号６４のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１；配列番号２１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号６５のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２；配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号６６のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３；配列番号２３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３；および配列番号６７のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４
を含む抗体ＶＨ領域を含む、請求項７６から７９のいずれかに記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項９２】
配列番号５２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１；配列番号１１および３１から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号５３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２；配列番号１２および３２から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号５４のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３；配列番号３および３３から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３；および配列番号５５のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４
を含む抗体ＶＨ領域を含む、請求項７６から７９のいずれかに記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項９３】
配列番号５２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１；配列番号１１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号５３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２；配列番号１２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号５４のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３；配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３；および配列番号５５のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４
を含む抗体ＶＨ領域を含む、請求項７６から７９のいずれかに記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項９４】
配列番号５２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１；配列番号３１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号５３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２；配列番号３２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号５４のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３；配列番号３３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３；および配列番号５５のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４
を含む抗体ＶＨ領域を含む、請求項７６から７９のいずれかに記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項９５】
配列番号５６のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１；配列番号１１および３１から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号５７のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２；配列番号１２および３２から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号５８のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３；配列番号１３および３３から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３；および配列番号５９のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４
を含む抗体ＶＨ領域を含む、請求項７６から７９のいずれかに記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項９６】
配列番号５６のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１；配列番号１１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号５７のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２；配列番号１２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号５８のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３；配列番号１３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３；および配列番号５９のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４
を含む抗体ＶＨ領域を含む、請求項７６から７９のいずれかに記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項９７】
配列番号５６のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１；配列番号３１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号５７のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２；配列番号３２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号５８のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３；配列番号３３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３；および配列番号５９のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４
を含む抗体ＶＨ領域を含む、請求項７６から７９のいずれかに記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項９８】
配列番号６０のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１；配列番号１１および３１から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号６１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２；配列番号１２および３２から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号６２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３；配列番号１３および３３から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３；および配列番号６３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４
を含む抗体ＶＨ領域を含む、請求項７６から７９のいずれかに記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項９９】
配列番号６０のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１；配列番号１１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号６１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２；配列番号１２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号６２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３；配列番号１３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３；および配列番号６３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４
を含む抗体ＶＨ領域を含む、請求項７６から７９のいずれかに記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１００】
配列番号６０のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１；配列番号３１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号６１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２；配列番号３２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号６２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３；配列番号３３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３；および配列番号６３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４
を含む抗体ＶＨ領域を含む、請求項７６から７９のいずれかに記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１０１】
配列番号６４のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１；配列番号１１および３１から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号６５のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２；配列番号１２および３２から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号６６のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３；配列番号１３および３３から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３；および配列番号６７のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４
を含む抗体ＶＨ領域を含む、請求項７６から７９のいずれかに記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１０２】
配列番号６４のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１；配列番号１１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号６５のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２；配列番号１２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号６６のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３；配列番号１３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３；および配列番号６７のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４
を含む抗体ＶＨ領域を含む、請求項７６から７９のいずれかに記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１０３】
配列番号６４のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１；配列番号３１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号６５のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２；配列番号３２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号６６のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３；配列番号３３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３；および配列番号６７のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４
を含む抗体ＶＨ領域を含む、請求項７６から７９のいずれかに記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１０４】
配列番号６４のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１；配列番号１および２１から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号６５のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２；配列番号２および２２から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号６６のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３；配列番号３および２３から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３；ならびに配列番号６７のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４を含む抗体ＶＨ領域と；配列番号７６のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１；配列番号４および２４から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号７７のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２；配列番号５および２５から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号７８のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３；配列番号６および２６から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３；ならびに配列番号７９のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４を含む抗体ＶＬ領域とを含む、先行するいずれかの請求項に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１０５】
配列番号６４のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１；配列番号１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号６５のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２；配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号６６のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３；配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３；ならびに配列番号６７のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４を含む抗体ＶＨ領域と；配列番号７６のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１；配列番号４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号７７のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２；配列番号５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号７８のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３；配列番号６のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３；ならびに配列番号７９のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４を含む抗体ＶＬ領域とを含む、先行するいずれかの請求項に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１０６】
配列番号６４のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１；配列番号２１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号６５のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２；配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号６６のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３；配列番号２３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３；ならびに配列番号６７のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４を含む抗体ＶＨ領域と；配列番号７６のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１；配列番号２４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号７７のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２；配列番号２５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号７８のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３；配列番号２６のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３；ならびに配列番号７９のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４を含む抗体ＶＬ領域とを含む、先行するいずれかの請求項に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１０７】
キメラ抗体分子、またはその抗原結合性断片である、先行するいずれかの請求項に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１０８】
先行するいずれかの請求項に記載の抗体の可変領域アミノ酸配列、およびヒト定常領域アミノ酸配列を含む、請求項１０７に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１０９】
補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）および抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を欠く、先行するいずれかの請求項に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１１０】
ヒトＬＡＧ−３タンパク質（またはヒトＬＡＧ−３Ｉｇタンパク質）に、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ解析により決定される、１００ｐＭ以下の、９０ｐＭ以下の、８０ｐＭ以下の、７０ｐＭ以下の、６０ｐＭ以下の、５０ｐＭ以下の、４０ｐＭ以下の、３０ｐＭ以下の、または２５ｐＭ以下の解離定数（ＫＤ）で結合する、先行するいずれかの請求項に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１１１】
アゴニスト性の抗ＬＡＧ−３抗体またはその抗原結合性断片である、先行するいずれかの請求項に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１１２】
ヒトＬＡＧ−３タンパク質の、第１のＮ末端Ｄ１ドメインの、３０アミノ酸のエクストラループ配列（配列番号４０）に結合しない、先行するいずれかの請求項に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１１３】
先行するいずれかの請求項に記載の抗体またはその抗原結合性断片をコードするヌクレオチド配列を含む核酸。
【請求項１１４】
配列番号９、１０、１９、もしくは２０のうちのいずれかのヌクレオチド配列、または配列番号９、１０、１９、もしくは２０のうちのいずれかのヌクレオチド配列と、少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配列を含む核酸。
【請求項１１５】
請求項１１３または１１４に記載の核酸を含む組換えベクター。
【請求項１１６】
請求項１１３もしくは１１４に記載の核酸、または請求項１１５に記載の組換えベクターを含む組換え細胞。
【請求項１１７】
請求項１から１１２のいずれか一項に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片、および薬学的に許容されるキャリア、賦形剤、または希釈剤を含む医薬組成物。
【請求項１１８】
医薬としての使用のための、請求項１から１１２のいずれか一項に記載の単離抗体もしくはその抗原結合性断片、または請求項１１７に記載の医薬組成物。
【請求項１１９】
Ｔ細胞媒介性免疫障害の処置における使用のための、請求項１から１１２のいずれか一項に記載の単離抗体もしくはその抗原結合性断片、または請求項１１７に記載の医薬組成物。
【請求項１２０】
Ｔ細胞媒介性免疫障害を処置するための医薬の製造における、請求項１から１１２のいずれか一項に記載の単離抗体もしくはその抗原結合性断片、または請求項１１７に記載の医薬組成物の使用。
【請求項１２１】
Ｔ細胞媒介性免疫障害を処置する方法であって、有効量の、請求項１から１１２のいずれか一項に記載の単離抗体もしくはその抗原結合性断片、または請求項１１７に記載の医薬組成物を、このような処置を必要とする被験体へと投与するステップを含む方法。
【請求項１２２】
前記Ｔ細媒介在性免疫障害が、炎症性疾患または自己免疫障害である、請求項１１９に記載の単離抗体もしくはその抗原結合性断片、請求項１２０に記載の使用、または請求項１２１に記載の方法。
【請求項１２３】
前記Ｔ細胞媒介性免疫障害が、感染症（ウイルス、細菌、真菌、および寄生虫の）、感染症と関連する内毒素性ショック、敗血症、関節炎、関節リウマチ、喘息、ＣＯＰＤ、骨盤炎症性疾患、アルツハイマー病、炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、ペーロニー病、セリアック病、胆嚢疾患、毛巣病、腹膜炎、乾癬、血管炎、手術に伴う癒着、脳卒中、Ｉ型糖尿病、ライム病、関節炎、髄膜脳炎、自己免疫性ブドウ膜炎；多発性硬化症、ループス（全身性エリテマトーデスなど）、およびギラン−バレー症候群など、中枢および末梢神経系の免疫媒介性炎症性障害；アトピー性皮膚炎、自己免疫性肝炎、線維化肺胞炎、グレーブス病、ＩｇＡ腎症、特発性血小板減少性紫斑病、メニエール病、天疱瘡、原発性胆汁性肝硬変、サルコイドーシス、強皮症、ウェゲナー肉芽腫症、他の自己免疫障害、膵炎、外傷（手術による外傷）、移植片対宿主病、移植片拒絶；心筋梗塞およびアテローム性動脈硬化などの虚血性疾患を含む心疾患；血管内凝固、骨吸収、骨粗鬆症、骨関節炎、歯周炎、ならびに低塩酸症（hypochlorhydia）、または母児間免疫寛容の欠如と関連する不妊症からなる群から選択される、請求項１１９に記載の単離抗体もしくはその抗原結合性断片、請求項１２０に記載の使用、または請求項１２１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ−３）に結合する抗体またはその抗原結合性断片、とりわけ、ＬＡＧ−３のアゴニストである抗体またはその抗原結合性断片、特に、ＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋  Ｔ細胞の増殖および／または活性化と関連する状態、特に、炎症性障害および自己免疫障害を処置するための医薬としての抗体または断片の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ−３）は、４つの細胞外Ｉｇスーパーファミリードメインを有する、ＣＤ４相同体のＩ型膜タンパク質である。ＣＤ４と同様に、ＬＡＧ−３は、Ｔ細胞の表面においてオリゴマー化し、抗原提示細胞（ＡＰＣ）上のＭＨＣクラスＩＩ分子に結合するが、ＣＤ４より著明に大きなアフィニティーで結合する。ＬＡＧ−３は、活性化ＣＤ４陽性およびＣＤ８陽性Ｔリンパ球上で発現し、そこで、細胞表面のＣＤ３−ＴＣＲ複合体と会合し、シグナル伝達を負に調節する。結果として、ＬＡＧ−３は、Ｔ細胞の増殖、機能、およびホメオスタシスを負に調節する。特異的ＴＣＲによる、ＭＨＣクラスＩＩ−ペプチド複合体の認識が生じると、細胞内シグナルは、Ｔ細胞においてはＴＣＲを介して、ＡＰＣにおいてはＭＨＣクラスＩＩ分子を介して伝達される。ＬＡＧ−３によるＴ細胞へのシグナル伝達が担う負の調節の役割は、初代ＣＤ４ヒトＴ細胞応答および初代ＣＤ８ヒトＴ細胞応答において作用する（Macon-Lemaitreら、Immunology.、２００５年６月、１１５巻（２号）：１７０〜１７８頁）。
【０００３】
ＬＡＧ−３はまた、ＬＡＧ−３の可溶性形態（ｓＬＡＧ−３）へと翻訳される、代替的なスプライスバリアントもコードする。可溶性分子としては、ＬＡＧ−３は、ＭＨＣクラスＩＩによるシグナル伝達を介して、抗原提示細胞（ＡＰＣ）を活性化させ、ｉｎ  ｖｉｖｏにおける、抗原特異的Ｔ細胞応答の増大をもたらす（Triebel、Trends  Immunol.、２００３年、２４巻：６１９〜６２２頁）。
【０００４】
ヒトおよびマウスのＬＡＧ−３タンパク質のアミノ酸配列は、Huardら（Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA、１１巻：５７４４〜５７４９頁、１９９７年）の図１に提示されている。ヒトＬＡＧ−３タンパク質の配列を、下の図１に再掲する（配列番号２７）。ヒトＬＡＧ−３の、４つの細胞外Ｉｇスーパーファミリードメイン（Ｄ１、Ｄ２、Ｄ３、およびＤ４）のアミノ酸配列は、アミノ酸残基：１〜１４９（Ｄ１）（配列番号２８）；１５０〜２３９（Ｄ２）（配列番号２９）；２４０〜３３０（Ｄ３）（配列番号３９）；および３３１〜４１２（Ｄ４）（配列番号５１）にある。
【０００５】
Baixerasら（J.  Exp.  Med.、１９９２年、１７６巻：３２７〜３３７頁）は、ヒトＬＡＧ−３タンパク質に対するマウスモノクローナル抗体（アイソタイプＩｇＧ１）である、１７Ｂ４の作製について記載している。この抗体は、ヒトＬＡＧ−３の第１のＮ末端Ｄ１ドメインの、３０アミノ酸のエクストラループを認識する。１７Ｂ４は、ＬＡＧ−３／ＭＨＣクラス間の相互作用を阻害し、ＬＡＧ−３シグナル伝達のアンタゴニストとして、Ｔ細胞の増殖を増大させる（Huardら、Eur  J  Immunol.、１９９６年、２６巻：１１８０〜６頁）。１７Ｂ４  ｍＡｂは、副次的架橋試薬の非存在下では、Ｔ細胞への、細胞内の遊離カルシウムの増大を誘導することが可能でないことにより決定されされる通り、アゴニスト活性を有さない（Hannierら、J  Immunol.、１９９８年、１６１巻：４０５８〜６５頁）。
【０００６】
ＣＤ８陽性Ｔ細胞およびＣＤ４陽性Ｔ細胞の活性化および／またはエフェクター機能をモジュレートすることが可能な薬剤が、非常に望ましい。特に、多くの自己免疫障害は、自己反応性Ｔ細胞および自己抗体を有することが公知である。したがって、病原体に対して防御する免疫系の能力を損なわずに、自己反応性リンパ球を阻害するかまたは消失させることが可能な薬剤が必要とされている。
【０００７】
Poirierら（Clinical  and  Experimental  Immunology、２０１１年、１６４巻：２６５〜２７４頁）は、細胞毒性ＬＡＧ−３キメラ抗体（キメラＡ９Ｈ１２）の評価について記載している。ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて、抗体は、リンパ節内のＬＡＧ−３＋活性化Ｔ細胞を枯渇させ、ヒヒにおけるツベルクリン誘導性遅延型過敏症（ＤＴＨ）モデルの皮膚炎症の低減において、有効性を示した。活性化Ｔ細胞を特異的に枯渇させる抗体は、自己免疫障害を防止および／または処置するための、有望な治療戦略となる。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Macon-Lemaitreら、Immunology.、２００５年６月、１１５巻（２号）：１７０〜１７８頁
【非特許文献２】Triebel、Trends  Immunol.、２００３年、２４巻：６１９〜６２２
【非特許文献３】Huardら、Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA、１１巻：５７４４〜５７４９頁、１９９７年
【非特許文献４】Baixerasら、J.  Exp.  Med.、１９９２年、１７６巻：３２７〜３３７頁
【非特許文献５】Huardら、Eur  J  Immunol.、１９９６年、２６巻：１１８０〜６頁
【非特許文献６】Hannierら、J  Immunol.、１９９８年、１６１巻：４０５８〜６５頁
【非特許文献７】Poirierら（Clinical  and  Experimental  Immunology、２０１１年、１６４巻：２６５〜２７４頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
代替的戦略として、本出願者は、ＬＡＧ−３アゴニストが、Ｔ細胞を枯渇させることなく、Ｔ細胞の増殖および／または機能を負に調節し、このようなアゴニストが、炎症性障害または自己免疫障害を処置するのにもまた使用されうることを認識している。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本出願者には、抗ＬＡＧ−３アゴニスト性モノクローナル抗体を作製することができた。これらの抗体は、抗原により誘導されるＣＤ４陽性Ｔ細胞およびＣＤ８陽性Ｔ細胞の増殖を阻害する。このような抗体およびそれらの抗原結合性断片は、炎症性障害および自己免疫障害を含む免疫障害、特に、Ｔ細胞媒介性免疫障害を処置するために使用することができる。
【００１１】
本発明に従い、アゴニスト性の抗ＬＡＧ−３抗体またはその抗原結合性断片が提供される。特に、抗体は、アゴニスト性の抗ＬＡＧ−３モノクローナル抗体またはその抗原結合性断片である。
【００１２】
本明細書で使用される「ＬＡＧ−３」という用語は、リンパ球活性化遺伝子３を指す。「ＬＡＧ−３」という用語は、バリアント、アイソフォーム、相同体、オーソログ、およびパラログを含む。例えば、ある特定の場合には、ヒトＬＡＧ−３タンパク質に特異的な抗体は、ヒト以外の種に由来するＬＡＧ−３タンパク質と交差反応しうる。他の実施形態では、ヒトＬＡＧ−３タンパク質に特異的な抗体は、ヒトＬＡＧ−３タンパク質に完全に特異的であることが可能であり、種についての交差反応性または他の種類の交差反応性を呈しない場合も、ある特定の他の種に由来するＬＡＧ−３とは交差反応するが、他の全ての種に由来するＬＡＧ−３とは交差反応しない場合もある（例えば、サルＬＡＧ−３とは交差反応するが、マウスＬＡＧ−３とは交差反応しない）。「ヒトＬＡＧ−３」という用語は、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号：ＮＰ  ００２２７７（配列番号３８）を有する、ヒトＬＡＧ−３の完全アミノ酸配列、または図１（配列番号２７）に与えられている、ヒトＬＡＧ−３タンパク質のアミノ酸配列などのヒトＬＡＧ−３配列を指す。「マウスＬＡＧ−３」という用語は、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号：ＮＰ＿０３２５０５を有する、マウスＬＡＧ−３の完全アミノ酸配列などのマウスＬＡＧ−３配列を指す。当技術分野では、ＬＡＧ−３はまた、例えば、ＣＤ２２３としても公知である。ヒトＬＡＧ−３配列は、例えば、保存された変異または保存されていない領域内の変異を有することにより、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号：ＮＰ＿００２２７７のヒトＬＡＧ−３と異なりうるが、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号：ＮＰ＿００２２７７のヒトＬＡＧ−３と、実質的に同じ生物学的機能を有する。例えば、ヒトＬＡＧ−３の生物学的機能は、本開示の抗体が特異的に結合する、ＬＡＧ−３の細胞外ドメイン内のエピトープを有すること、またはヒトＬＡＧ−３の生物学的機能は、ＭＨＣクラスＩＩ分子に結合することである。
【００１３】
「サルＬＡＧ−３」という用語は、カニクイザルＬＡＧ−３およびアカゲザルＬＡＧ−３を含むがこれらに限定されない、旧世界ザルおよび新世界ザルで発現しているＬＡＧ−３タンパク質を包含することが意図される。サルＬＡＧ−３の代表的なアミノ酸配列は、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号：ＸＭ＿００１１０８９２３としてもまた寄託されている、アカゲザルＬＡＧ−３アミノ酸配列である。サルＬＡＧ−３の別の代表的なアミノ酸配列は、ＵＳ２０１１／０１５０８９２Ａ１において記載されている、クローンｐａ２３−５の、代替的なアカゲザル配列である。この代替的なアカゲザル配列は、Ｇｅｎｂａｎｋ寄託配列と比較して、４１９位において、単一のアミノ酸差違を呈する。
【００１４】
特定のヒトＬＡＧ−３配列は一般に、アミノ酸配列が、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号：ＮＰ＿００２２７７のヒトＬＡＧ−３と、少なくとも９０％同一であり、他の種の（例えば、マウスの）ＬＡＧ−３アミノ酸配列と比較した場合に、アミノ酸配列を、ヒトとして同定するアミノ酸残基を含有する。ある特定の場合には、ヒトＬＡＧ−３は、アミノ酸配列が、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号：ＮＰ＿００２２７７のＬＡＧ−３と、少なくとも９５％、なおまたは少なくとも９６％、９７％、９８％、もしくは９９％同一でありうる。ある特定の実施形態では、ヒトＬＡＧ−３配列は、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号：ＮＰ＿００２２７７のＬＡＧ−３配列からの、１０アミノ酸以下の差違を示す。ある特定の実施形態では、ヒトＬＡＧ−３は、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号：ＮＰ＿００２２７７のＬＡＧ−３配列からの、５以下、なおまたは４、３、２、もしくは１アミノ酸以下の差違を示しうる。同一性パーセントは、本明細書で記載される通りに決定することができる。
【００１５】
一部の実施形態によれば、本発明のアゴニスト性の抗ＬＡＧ−３抗体またはその抗原結合性断片は、抗原により誘導されるＣＤ４＋および／もしくはＣＤ８＋  Ｔ細胞の増殖、または抗原により誘導されるＣＤ４＋および／もしくはＣＤ８＋  Ｔ細胞の活性化を阻害する。
【００１６】
本発明のアゴニスト性の抗ＬＡＧ−３抗体またはその抗原結合性断片は、単離された、アゴニスト性の抗ＬＡＧ−３抗体またはその抗原結合性断片でありうる。
【００１７】
本明細書では、「アゴニスト性」という用語を、「アゴニスト」という用語と互換的に使用する。
【００１８】
本発明に従い、ＬＡＧ−３に結合し、抗原により誘導されるＣＤ４＋および／もしくはＣＤ８＋  Ｔ細胞の増殖、または抗原により誘導されるＣＤ４＋および／もしくはＣＤ８＋  Ｔ細胞の活性化を阻害する、単離抗体またはその抗原結合性断片もまた提供される。
【００１９】
一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、抗原により誘導されるＣＤ４＋Ｔ細胞の増殖、および／または抗原により誘導されるＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を阻害する。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、抗原により誘導されるＣＤ４＋Ｔ細胞の増殖、および抗原により誘導されるＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を阻害する。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、抗原により誘導されるＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を、抗原により誘導されるＣＤ４＋Ｔ細胞の増殖より強く阻害する。
【００２０】
図２１は、枯渇型抗ＬＡＧ−３抗体と、アンタゴニストの抗ＬＡＧ−３抗体と、本発明の抗体（すなわち、アゴニスト性の抗ＬＡＧ−３抗体であり、ＬＡＧ−３に結合し、抗原により誘導されるＣＤ４＋および／もしくはＣＤ８＋  Ｔ細胞の増殖、または抗原により誘導されるＣＤ４＋および／もしくはＣＤ８＋  Ｔ細胞の活性化を阻害する抗体）との差違を例示する。
【００２１】
枯渇型抗ＬＡＧ−３抗体は、細胞の表面に発現したＬＡＧ−３に結合することにより、活性化Ｔ細胞の枯渇を引き起こす。枯渇は、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）により、または補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）により生じる場合がある。ＡＤＣＣでは、枯渇型抗体のＦｃ領域は、ナチュラルキラーおよびマクロファージなど、免疫エフェクター細胞の表面上のＦｃ受容体（ＦｃγＲ）に結合することにより、標的とした細胞の溶解をもたらす。ＣＤＣでは、枯渇型抗体のＦｃ領域は、補体のＣ１ｑ構成成分に結合し、細胞表面において、補体カスケードを誘発することにより、標的とした細胞を死滅させる。したがって、枯渇型抗ＬＡＧ−３抗体は、Ｔ細胞媒介性免疫応答を阻害する。枯渇型抗ＬＡＧ−３抗体の効果は、長時間持続性であり、活性化Ｔ細胞の破壊を引き起こすため、不可逆性であることが認識される。このような抗体は、例えば、炎症性障害および自己免疫障害の処置および移植片拒絶の防止に有用である。
【００２２】
アンタゴニストの抗ＬＡＧ−３抗体は、活性化Ｔ細胞の表面上のＬＡＧ−３に結合し、ＬＡＧ−３の、抗原提示細胞（ＡＰＣ）の表面上のＭＨＣクラスＩＩ分子との相互作用を防止する。これは、ＡＰＣが、活性化Ｔ細胞上のＬＡＧ−３に結合する場合に生じる、シグナル伝達の負の調節を遮断する。結果として、アンタゴニストの抗ＬＡＧ−３抗体は、正常ではＬＡＧ−３により媒介される、Ｔ細胞の増殖、機能、およびホメオスタシスの負の調節を防止する。このような抗体は、例えば、がんおよび感染性疾患の処置に有用である。
【００２３】
本発明の抗体は、活性化Ｔ細胞の表面上のＬＡＧ−３に結合し、ＬＡＧ−３に対するアゴニズムを介して、シグナル伝達を負に調節することにより、Ｔ細胞の増殖および／または活性化に対する負の調節を引き起こす。したがって、本発明の抗体は、特に、抗原により誘導されるＣＤ４＋および／もしくはＣＤ８＋  Ｔ細胞の増殖、ならびに／または抗原により誘導されるＣＤ４＋および／もしくはＣＤ８＋  Ｔ細胞の活性化を阻害することにより、Ｔ細胞媒介性免疫応答を阻害する。このような抗体の効果は、可逆性であり、活性化Ｔ細胞の破壊を引き起こさないので、枯渇型抗ＬＡＧ−３抗体の効果ほど長時間持続性ではない場合がある。本発明の抗体が有効である時間の長さは、抗体の血漿半減期に依存することが認識される。
【００２４】
抗原により誘導されるＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋  Ｔ細胞の増殖の阻害は、当業者に公知の、任意の適切な方法により決定することができる。適切な方法の例は、同じアイソタイプの陰性対照抗体の存在下における対応する増殖と比較して、抗体または断片の存在下で抗原ペプチドにより誘導される、ＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋  Ｔ細胞の増殖を測定することによる。ＣＤ４＋およびＣＤ８＋  Ｔ細胞は、例えば、健常ドナーから得られた末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の試料中に存在しうる。細胞の増殖は、ＣＭＶ  ｐｐ３５の配列を対象とするペプチドプールなど、任意の適切な抗原ペプチドにより誘導することができる。細胞の増殖は、例えば、カルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）など、蛍光細胞染色色素により、細胞を標識することにより測定することができる。抗原により誘導されるＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋  Ｔ細胞の増殖の阻害を決定するための方法の例については、下の実施例１０においてより詳細に記載する。
【００２５】
抗原により誘導されるＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋  Ｔ細胞の増殖の阻害百分率は、下の実施例１０でより詳細に記載される通り、各分裂ピーク（ＦＡＣＳにより評価される）下におけるＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋  Ｔ細胞の百分率に分裂数を乗じた合計として計算される、増殖指数（ＰＩ）の阻害百分率として決定することができる。
【００２６】
一部の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、抗原により誘導されるＣＤ４＋  Ｔ細胞の増殖を、抗体または断片の非存在下で抗原により誘導されるＣＤ４＋  Ｔ細胞の増殖と比較して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％阻害する。
【００２７】
一部の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、抗原により誘導されるＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を、抗体または断片の非存在下で抗原により誘導されるＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖と比較して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％阻害する。
【００２８】
一部の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、抗原により誘導されるＣＤ４＋  Ｔ細胞の増殖、および抗原により誘導されるＣＤ８＋  Ｔ細胞の増殖の各々を、抗体または断片の非存在下で抗原により誘導されるＣＤ４＋  Ｔ細胞の増殖、および抗原により誘導されるＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖のそれぞれと比較して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％阻害する。
【００２９】
一実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、抗原により誘導されるＣＤ４＋  Ｔ細胞の増殖を、抗体または断片の非存在下で抗原により誘導されるＣＤ４＋  Ｔ細胞の増殖と比較して、少なくとも２０％阻害し、抗原により誘導されるＣＤ８＋  Ｔ細胞の増殖を、抗体または断片の非存在下で抗原により誘導されるＣＤ８＋  Ｔ細胞の増殖と比較して、少なくとも３０％阻害する。
【００３０】
本発明の抗体またはその断片による、抗原により誘導されるＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋  Ｔ細胞の増殖の阻害は、同じアイソタイプの陰性対照抗体またはその断片の存在下で抗原により誘導されるＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋  Ｔ細胞の増殖と比較することができる。
【００３１】
一部の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、抗原により誘導されるＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％、抗体または断片が抗原により誘導されるＣＤ４＋  Ｔ細胞の増殖を阻害するより強く阻害する。
【００３２】
一部の実施形態によれば、抗原により誘導されるＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖の阻害は、ＬＡＧ−３依存性、かつＩＬ−２非依存性である。
【００３３】
一部の実施形態によれば、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、抗原により誘導されるＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋  Ｔ細胞の活性化を阻害する。ある特定の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、抗原により誘導されるＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋  Ｔ細胞の増殖、ならびに抗原により誘導されるＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋  Ｔ細胞の活性化を阻害する。
【００３４】
特に、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、ＬＡＧ−３に結合し、抗原により誘導されるＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋  Ｔ細胞の活性化を阻害しうる。ある特定の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、ＬＡＧ−３に結合し、抗原により誘導されるＣＤ４＋  Ｔ細胞の活性化、および抗原により誘導されるＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化を阻害する。
【００３５】
ＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋  Ｔ細胞の活性化の阻害は、当業者に公知の、任意の適切な方法により決定することができる。適切な方法の例は、抗体または断片の、ＣＤ４＋および／もしくはＣＤ８＋  Ｔ細胞活性化マーカーの発現、またはＴ細胞活性化マーカーの分泌に対する効果を測定することによる。例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化は、同じアイソタイプの陰性対照抗体の存在下における対応するＣＤ２５の発現と比較して、抗体または断片の存在下で抗原ペプチドにより誘導される、ＣＤ８＋Ｔ細胞上の活性化マーカーとしてのＣＤ２５の発現を測定することにより測定することができる。代替的に、Ｔ細胞の活性化は、同じアイソタイプの陰性対照抗体の存在下における対応する分泌と比較して、抗体または断片の存在下で抗原ペプチドにより誘導される、Ｔ細胞の細胞上清中のＩＦＮ−γの分泌を測定することにより測定することができる。Ｔ細胞は、例えば、健常ドナーから得られたＰＢＭＣの試料中に存在しうる。細胞の活性化は、ＣＭＶ  ｐｐ３５の配列を対象とするペプチドプールなど、任意の適切な抗原ペプチドにより誘導することができる。Ｔ細胞活性化マーカーの分泌を測定することにより、抗原により誘導されるＴ細胞の活性化の阻害を決定するための方法の例については、下の実施例１５においてより詳細に記載する。ＣＤ８＋  Ｔ細胞活性化マーカーの発現を測定することにより、抗原により誘導されるＣＤ８＋  Ｔ細胞の活性化の阻害を決定するための方法の例については、下の実施例１６においてより詳細に記載する。
【００３６】
一部の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、抗原により誘導されるＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋  Ｔ細胞の活性化を、抗体または断片の非存在下で抗原により誘導されるＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋  Ｔ細胞の活性化と比較して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％阻害する。
【００３７】
本発明の抗体またはその断片による、抗原により誘導されるＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋  Ｔ細胞の活性化の阻害は、同じアイソタイプの陰性対照抗体またはその断片の存在下で抗原により誘導されるＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋  Ｔ細胞の活性化と比較することができる。
【００３８】
一部の実施形態によれば、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、ＩＭＰ３２１の、ＭＨＣクラスＩＩ陽性細胞への結合を阻害する。
【００３９】
ＩＭＰ３２１（下ではまた、「ＬＡＧ−３Ｉｇ」とも称する）は、組換え可溶性ヒトＬＡＧ−３Ｉｇ融合タンパク質である。融合タンパク質は、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃへと融合させたヒトＬＡＧ−３の細胞外ドメインをコードするプラスミドをトランスフェクトされたチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞内で産生される、２００ｋＤａの二量体として得られる。ＩＭＰ３２１の配列は、米国特許出願第２０１１／０００８３３１号の配列番号１７に提示されている。
【００４０】
ＩＭＰ３２１の、ＭＨＣクラスＩＩ陽性細胞への結合は、例えば、下の実施例８において記載されている通り、ＩＭＰ３２１−標識コンジュゲート（例えば、ＩＭＰ３２１−Ａｌｅｘ  ４８８コンジュゲート）の、Ｒａｊｉ細胞（これらは、ＭＨＣクラスＩＩ陽性Ｂ細胞である）への結合を測定することにより決定することができる。
【００４１】
一部の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、ＩＭＰ３２１の、ＭＨＣクラスＩＩ陽性細胞への結合を、抗体または断片の非存在下における、ＩＭＰ３２１の、ＭＨＣクラスＩＩ陽性細胞への結合と比較して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％阻害する。
【００４２】
一部の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、ＩＭＰ３２１の、ＭＨＣクラスＩＩ陽性細胞への結合を、抗体または断片の非存在下における、ＩＭＰ３２１の、ＭＨＣクラスＩＩ陽性細胞への結合と比較して、少なくとも３０％阻害するが、この場合、抗体または断片とＩＭＰ３２１との濃度比は、０．１：１である。
【００４３】
一部の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、ＩＭＰ３２１の、ＭＨＣクラスＩＩ陽性細胞への結合を、抗体または断片の非存在下における、ＩＭＰ３２１の、ＭＨＣクラスＩＩ陽性細胞への結合と比較して、少なくとも８０％阻害するが、この場合、抗体または断片とＩＭＰ３２１との濃度比は、０．３：１または１：１である。
【００４４】
一部の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、ＩＭＰ３２１により誘導される単球の活性化を阻害する。
【００４５】
ＩＭＰ３２１は、ヒト単球細胞株ＴＨＰ−１の細胞を活性化させることが可能である。ＴＨＰ−１細胞の活性化は、ＴＨＰ−１細胞による、ケモカインリガンド４（ＣＣＬ４、マクロファージ炎症性タンパク質１β、ＭＩＰ−１βとしてもまた公知である）の分泌レベルにより決定することができる。ＴＨＰ−１細胞を有する混合物のインキュベーションの前における、本発明の抗体または断片の、ＩＭＰ３２１とのプレインキュベーションを使用して、抗体または断片が、ＩＭＰ３２１により誘導される単球の活性化を阻害するのかどうかを決定することができる。ＩＭＰ３２１により誘導される単球の活性化の阻害を決定するための方法については、下の実施例９においてより詳細に記載する。
【００４６】
一部の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、ＩＭＰ３２１により誘導される単球の活性化を、抗体または断片の非存在下における、ＩＭＰ３２１により誘導される単球の活性化の量と比較して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％阻害する。
【００４７】
一部の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、ＩＭＰ３２１により誘導される単球の活性化を、抗体または断片の非存在下における、ＩＭＰ３２１により誘導される単球の活性化の量と比較して、少なくとも７０％阻害するが、この場合、抗体または断片とＩＭＰ３２１との濃度比は、１：１である。
【００４８】
Huardら（Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA、１１巻：５７４４〜５７４９頁、１９９７年）は、ＬＡＧ−３タンパク質上のＭＨＣクラスＩＩ結合性部位の特徴付けについて記載している。ＭＨＣクラスＩＩタンパク質への結合に不可欠な残基の多くが、ＬＡＧ−３のＤ１ドメイン内の、大型の３０アミノ酸のエクストラループ構造の底部にクラスタリングしている。ヒトＬＡＧ−３タンパク質の、Ｄ１ドメインの、エクストラループ構造のアミノ酸配列は、GPPAAAPGHPLAPGPHPAAPSSWGPRPRRY（配列番号４０）、図１で下線を付した配列である。
【００４９】
本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、ＬＡＧ−３上のＭＨＣクラスＩＩ結合性部位と重複する、ヒトＬＡＧ−３のエピトープに結合しうる。
【００５０】
本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、ヒトＬＡＧ−３の、第１のＮ末端Ｄ１ドメインの、３０アミノ酸のエクストラループと重複するエピトープに結合しうる。
【００５１】
他の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、ヒトＬＡＧ−３タンパク質の、第１のＮ末端Ｄ１ドメインの、３０アミノ酸のエクストラループ配列（配列番号４０）に結合しない。
【００５２】
本発明の抗体は、ＬＡＧ−３の、ＭＨＣクラスＩＩ分子への結合を、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて阻害しうる。特に、本発明の抗体は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）への、ＭＨＣクラスＩＩ活性化シグナルをアンタゴナイズしうる。したがって、本発明の抗体は、ＬＡＧ−３により誘導されるＡＰＣの活性化、例えば、樹状細胞の活性化、例えば、ＬＡＧ−３により誘導される単球またはマクロファージの活性化を阻害しうる。
【００５３】
一部の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、ＬＡＧ−３の、ＭＨＣクラスＩＩ陽性細胞への結合を、抗体または断片の非存在下におけるＬＡＧ−３の、ＭＨＣクラスＩＩ陽性細胞への結合と比較して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％阻害する。
【００５４】
一部の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、ＬＡＧ−３により誘導されるＡＰＣの活性化を、抗体または断片の非存在下におけるＬＡＧ−３により誘導されるＡＰＣの活性化の量と比較して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％阻害する。
【００５５】
本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）領域の、１つ、２つ、もしくは３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）、および／または配列番号８のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）領域の、１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲを含み得る。
【００５６】
本発明によれば、配列番号７のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）領域の、１つ、２つ、もしくは３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）、および／または配列番号８のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）領域の、１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲを含む、抗ＬＡＧ−３抗体またはその抗原結合性断片もまた提供される。
【００５７】
抗体ＶＨ領域のＣＤＲは、配列番号１、２および３のアミノ酸配列のＣＤＲであり得、前記抗体ＶＬ領域のＣＤＲは、配列番号４、５および６のアミノ酸配列のＣＤＲであり得る。
【００５８】
本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１、２、および３のアミノ酸配列を含むＣＤＲを有する抗体ＶＨ領域、ならびに／または配列番号４、５、および６のアミノ酸配列を含むＣＤＲを有する抗体ＶＬ領域を含み得る。
【００５９】
配列番号１、２、および３のアミノ酸配列のＣＤＲは、ＶＨ領域内に、任意の順序で存在してもよく、配列番号４、５、および６のアミノ酸配列のＣＤＲは、ＶＬ領域内に、任意の順序で存在してもよい。しかし、好ましい実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｈ２、および配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｈ３、ならびに／または配列番号４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｌ２、および配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｌ３を含む。
【００６０】
抗体ＶＨ領域のＣＤＲは、配列番号２１、２２、および２３のアミノ酸配列のＣＤＲであることが可能であり、抗体ＶＬ領域のＣＤＲは、配列番号２４、２５、および２６のアミノ酸配列のＣＤＲであることが可能である。
【００６１】
本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２１、２２、および２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲを有する抗体ＶＨ領域、ならびに／または配列番号２４、２５、および２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲを有する抗体ＶＬ領域を含み得る。
【００６２】
配列番号２１、２２、および２３のアミノ酸配列のＣＤＲは、ＶＨ領域内に、任意の順序で存在してもよく、配列番号２４、２５、および２６のアミノ酸配列のＣＤＲは、ＶＬ領域内に、任意の順序で存在してもよい。しかし、好ましい実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号２１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｈ２、および配列番号２３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｈ３、ならびに／または配列番号２４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｌ１、配列番号２５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｌ２、および配列番号２６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｌ３を含む。
【００６３】
一部の実施形態では、抗体ＶＨ領域のＣＤＲは、配列番号１、２、３、２１、２２、および２３のアミノ酸配列のＣＤＲから選択され、抗体ＶＬ領域のＣＤＲは、配列番号４、５、６、２４、２５、および２６のアミノ酸配列のＣＤＲから選択される。
【００６４】
一部の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、およびＶＨ  ＣＤＲ３を含む抗体ＶＨ領域を含み、ＶＨ  ＣＤＲ１は、配列番号１および２１から選択されるアミノ酸配列を有し、かつ／またはＶＨ  ＣＤＲ２は、配列番号２および２２から選択されるアミノ酸配列を有し、かつ／またはＶＨ  ＣＤＲ３は、配列番号３および２３から選択されるアミノ酸配列を有する。
【００６５】
一部の実施形態では、ＶＨ  ＣＤＲ１は、配列番号１および２１から選択されるアミノ酸配列を有し、ＶＨ  ＣＤＲ２は、配列番号２および２２から選択されるアミノ酸配列を有するか；
ＶＨ  ＣＤＲ１は、配列番号１および２１から選択されるアミノ酸配列を有し、ＶＨ  ＣＤＲ３は、配列番号３および２３から選択されるアミノ酸配列を有するか；
ＶＨ  ＣＤＲ２は、配列番号２および２２から選択されるアミノ酸配列を有し、ＶＨ  ＣＤＲ３は、配列番号３および２３から選択されるアミノ酸配列を有するか；または
ＶＨ  ＣＤＲ１は、配列番号１および２１から選択されるアミノ酸配列を有し、ＶＨ  ＣＤＲ２は、配列番号２および２２から選択されるアミノ酸配列を有し、ＶＨ  ＣＤＲ３は、配列番号３および２３から選択されるアミノ酸配列を有する。
【００６６】
一部の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、およびＶＬ  ＣＤＲ３を含む抗体ＶＬ領域を含み、ＶＬ  ＣＤＲ１は、配列番号４および２４から選択されるアミノ酸配列を有し、かつ／またはＶＬ  ＣＤＲ２は、配列番号５および２５から選択されるアミノ酸配列を有し、かつ／またはＶＬ  ＣＤＲ３は、配列番号６および２６から選択されるアミノ酸配列を有する。
【００６７】
一部の実施形態では、ＶＬ  ＣＤＲ１は、配列番号４および２４から選択されるアミノ酸配列を有し、ＶＬ  ＣＤＲ２は、配列番号５および２５から選択されるアミノ酸配列を有するか；
ＶＬ  ＣＤＲ１は、配列番号４および２４から選択されるアミノ酸配列を有し、ＶＬ  ＣＤＲ３は、配列番号６および２６から選択されるアミノ酸配列を有するか；
ＶＬ  ＣＤＲ２は、配列番号５および２５から選択されるアミノ酸配列を有し、ＶＬ  ＣＤＲ３は、配列番号６および２６から選択されるアミノ酸配列を有するか；または
ＶＬ  ＣＤＲ１は、配列番号４および２４から選択されるアミノ酸配列を有し、ＶＬ  ＣＤＲ２は、配列番号５および２５から選択されるアミノ酸配列を有し、ＶＬ  ＣＤＲ３は、配列番号６および２６から選択されるアミノ酸配列を有する。
【００６８】
特定の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１および２１から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号２および２２から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２、ならびに配列番号３および２３から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３を含む抗体ＶＨ領域；ならびに配列番号４および２４から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号５および２５から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２、ならびに配列番号６および２６から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３を含む抗体ＶＬ領域を含む。
【００６９】
本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号７のアミノ酸配列と、少なくとも６０％、７０％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％同一であるアミノ酸配列を含む抗体ＶＨ領域、および／または配列番号８のアミノ酸配列と、少なくとも６０％、７０％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％同一であるアミノ酸配列を含む抗体ＶＬ領域を含みうる。
【００７０】
好ましい実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含む抗体ＶＨ領域、および／または配列番号８のアミノ酸配列を含む抗体ＶＬ領域を含む。
【００７１】
本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、本明細書の実施例１、２、および３で記載される、マウス抗ＬＡＧ−３モノクローナル抗体１３Ｅ２のＶＨ領域および／またはＶＬ領域のアミノ酸配列（１３Ｅ２  ＶＨのアミノ酸配列：配列番号７；１３Ｅ２  ＶＬのアミノ酸配列：配列番号８）と、少なくとも６０％、７０％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％同一であるか、または同一であるアミノ酸配列を含む抗体ＶＨ領域および／または抗体ＶＬ領域を含みうる。
【００７２】
本発明に従い、ＬＡＧ−３への結合について、配列番号７のアミノ酸配列を含む抗体ＶＨ領域、および配列番号８のアミノ酸配列を含む抗体ＶＬ領域を含む抗体と競合する、抗体またはその抗原結合性断片もまた提供される。
【００７３】
さらに、本発明に従い、ＬＡＧ−３への結合について、マウス抗ＬＡＧ−３モノクローナル抗体１３Ｅ２と競合する、抗体またはその抗原結合性断片も提供される。
【００７４】
本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１７のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）領域の、１つ、２つ、もしくは３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）、および／または配列番号１８のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）領域の、１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲを含み得る。
【００７５】
本発明によれば、配列番号１７のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）領域の、１つ、２つ、もしくは３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）、および／または配列番号１８のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）領域の、１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲを含む、抗ＬＡＧ−３抗体またはその抗原結合性断片もまた提供される。
【００７６】
抗体ＶＨ領域のＣＤＲは、配列番号１１、１２および１３のアミノ酸配列のＣＤＲであり得、抗体ＶＬ領域のＣＤＲは、配列番号１４、１５および１６のアミノ酸配列のＣＤＲであり得る。
【００７７】
本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１１、１２、および１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲを有する抗体ＶＨ領域、ならびに／または配列番号１４、１５、および１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲを有する抗体ＶＬ領域を含み得る。
【００７８】
配列番号１１、１２、および１３のアミノ酸配列のＣＤＲは、ＶＨ領域内に、任意の順序で存在してもよく、配列番号１４、１５、および１６のアミノ酸配列のＣＤＲは、ＶＬ領域内に、任意の順序で存在してもよい。しかし、好ましい実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号１１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｈ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｈ３、ならびに／または配列番号１４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｌ２、および配列番号１６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｌ３を含む。
【００７９】
抗体ＶＨ領域のＣＤＲは、配列番号３１、３２、および３３のアミノ酸配列のＣＤＲであることが可能であり、抗体ＶＬ領域のＣＤＲは、配列番号３４、３５、および３６のアミノ酸配列のＣＤＲあることが可能である。
【００８０】
本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号３１、３２、および３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲを有する抗体ＶＨ領域、ならびに／または配列番号３４、３５、および３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲを有する抗体ＶＬ領域を含み得る。
【００８１】
配列番号３１、３２、および３３のアミノ酸配列のＣＤＲは、ＶＨ領域内に、任意の順序で存在してもよく、配列番号３４、３５、および３６のアミノ酸配列のＣＤＲは、ＶＬ領域内に、任意の順序で存在してもよい。しかし、好ましい実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号３１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｈ２、および配列番号３３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｈ３、ならびに／または配列番号３４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｌ１、配列番号３５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｌ２、および配列番号３６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｌ３を含む。
【００８２】
一部の実施形態では、抗体ＶＨ領域のＣＤＲは、配列番号１１、１２、１３、３１、３２、および３３のアミノ酸配列のＣＤＲから選択され、抗体ＶＬ領域のＣＤＲは、配列番号１４、１５、１６、３４、３５、および３６のアミノ酸配列のＣＤＲから選択される。
【００８３】
一部の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、およびＶＨ  ＣＤＲ３を含む抗体ＶＨ領域を含み、ＶＨ  ＣＤＲ１は、配列番号１１および３１から選択されるアミノ酸配列を有し、かつ／またはＶＨ  ＣＤＲ２は、配列番号１２および３２から選択されるアミノ酸配列を有し、かつ／またはＶＨ  ＣＤＲ３は、配列番号１３および３３から選択されるアミノ酸配列を有する。
【００８４】
一部の実施形態では、ＶＨ  ＣＤＲ１は、配列番号１１および３１から選択されるアミノ酸配列を有し、ＶＨ  ＣＤＲ２は、配列番号１２および３２から選択されるアミノ酸配列を有するか；
ＶＨ  ＣＤＲ１は、配列番号１１および３１から選択されるアミノ酸配列を有し、ＶＨ  ＣＤＲ３は、配列番号１３および３３から選択されるアミノ酸配列を有するか；
ＶＨ  ＣＤＲ２は、配列番号１２および３２から選択されるアミノ酸配列を有し、ＶＨ  ＣＤＲ３、配列番号１３および３３から選択されるアミノ酸配列を有するか；または
ＶＨ  ＣＤＲ１は、配列番号１１および３１から選択されるアミノ酸配列を有し、ＶＨ  ＣＤＲ２は、配列番号１２および３２から選択されるアミノ酸配列を有し、ＶＨ  ＣＤＲ３は、配列番号１３および３３から選択されるアミノ酸配列を有する
。
【００８５】
一部の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、およびＶＬ  ＣＤＲ３を含む抗体ＶＬ領域を含み、ＶＬ  ＣＤＲ１は、配列番号１４および３４から選択されるアミノ酸配列を有し、かつ／またはＶＬ  ＣＤＲ２は、配列番号１５および３５から選択されるアミノ酸配列を有し、かつ／またはＶＬ  ＣＤＲ３は、配列番号１６および３６から選択されるアミノ酸配列を有する。
【００８６】
一部の実施形態では、ＶＬ  ＣＤＲ１は、配列番号１４および３４から選択されるアミノ酸配列を有し、ＶＬ  ＣＤＲ２は、配列番号１５および３５から選択されるアミノ酸配列を有するか；
ＶＬ  ＣＤＲ１は、配列番号１４および３４から選択されるアミノ酸配列を有し、ＶＬ  ＣＤＲ３は、配列番号１６および３６から選択されるアミノ酸配列を有するか；
ＶＬ  ＣＤＲ２は、配列番号１５および３５から選択されるアミノ酸配列を有し、ＶＬ  ＣＤＲ３は、配列番号１６および３６から選択されるアミノ酸配列を有するか；または
ＶＬ  ＣＤＲ１は、配列番号１４および３４から選択されるアミノ酸配列を有し、ＶＬ  ＣＤＲ２は、配列番号１５および３５から選択されるアミノ酸配列を有し、ＶＬ  ＣＤＲ３は、配列番号１６および３６から選択されるアミノ酸配列を有する。
【００８７】
特定の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、
前記が、
配列番号１１および３１から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１２および３２から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２、配列番号１３および３３から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３を含む抗体ＶＨ領域；ならびに配列番号１４および３４から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１５および３５から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２、配列番号１６および３６から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３を含む抗体ＶＬ領域を含む。
【００８８】
本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１７のアミノ酸配列と、少なくとも６０％、７０％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％同一であるアミノ酸配列を含む抗体ＶＨ領域、および／または配列番号１８のアミノ酸配列と、少なくとも６０％、７０％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％同一であるアミノ酸配列を含む抗体ＶＬ領域を含みうる。
【００８９】
好ましい実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１７のアミノ酸配列を含む抗体ＶＨ領域、および／または配列番号１８のアミノ酸配列を含む抗体ＶＬ領域を含む。
【００９０】
本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、本明細書の実施例４、５、および６で記載される、マウス抗ＬＡＧ−３モノクローナル抗体３４Ｆ４のＶＨ領域およびＶＬ領域のアミノ酸配列（３４Ｆ４  ＶＨのアミノ酸配列：配列番号１７；３４Ｆ４  ＶＬのアミノ酸配列：配列番号１８）と、少なくとも６０％、７０％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％同一であるか、または同一であるアミノ酸配列を含む抗体ＶＨ領域および抗体ＶＬ領域を含みうる。
【００９１】
本発明に従い、ＬＡＧ−３への結合について、配列番号１７のアミノ酸配列を含む抗体ＶＨ領域、および配列番号１８のアミノ酸配列を含む抗体ＶＬ領域を含む抗体と競合する、抗体またはその抗原結合性断片もまた提供される。
【００９２】
さらに、本発明に従い、ＬＡＧ−３への結合について、マウス抗ＬＡＧ−３モノクローナル抗体３４Ｆ４と競合する、抗体またはその抗原結合性断片も提供される。
【００９３】
ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、ＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域、ならびにＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列、およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域を含み、それらは、抗体１３Ｅ２または３４Ｆ４の重鎖可変領域および軽鎖可変領域と、１つまたは複数の保存的修飾、例えば、最大で５つの保存的修飾により異なる。当技術分野では、抗原への結合を除去しない、ある特定の保存的配列修飾を施しうることが理解される。例えば、Brummellら（１９９３年）、Biochem、３２巻：１１８０〜８頁；de  Wildtら（１９９７年）、Prot.  Eng.、１０巻：８３５〜４１頁；Komissarovら（１９９７年）、J.  Biol.  Chem.、２７２巻：２６８６４〜２６８７０頁；Hallら（１９９２年）、J.  Immunol.、１４９巻：１６０５〜１２頁；KelleyおよびO’Connell（１９９３年）、Biochem.、３２巻：６８６２〜３５頁；Adib-Conquyら（１９９８年）、Int.  Immunol.、１０巻：３４１〜６頁；ならびにBeersら（２０００年）、Clin.  Can.  Res.、６巻：２８３５〜４３頁を参照されたい。
【００９４】
本明細書で使用される「保存的配列修飾」という用語は、アミノ酸配列を含有する抗体の結合特徴に著明な影響を及ぼしたりこれを著明に変更したりしないアミノ酸修飾を指す。このような保存的修飾は、アミノ酸の置換、付加、および欠失を含む。修飾は、部位指向性変異誘発およびＰＣＲ媒介性変異誘発など、当技術分野で公知の標準的な技法により、本発明の抗体へと導入することができる。保存的アミノ酸置換は、アミノ酸残基を、類似の側鎖を有するアミノ酸残基で置きかえたアミノ酸置換である。当技術分野では、類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーが定義されている。これらのファミリーは、塩基性側鎖（例えば、リシン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非帯電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、ベータ−分枝型側鎖（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）、および芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸を含む。したがって、本発明の抗体のＣＤＲ領域内の１つまたは複数のアミノ酸残基は、同じ側鎖ファミリーに由来する他のアミノ酸残基で置きかえることができ、変更された抗体は、本明細書で記載される機能アッセイを使用して、保持された機能（すなわち、上で明示した機能）について調べることができる。
【００９５】
本発明の抗体は、１３Ｅ２または３４Ｆ４のＶＨ配列および／またはＶＬ配列のうちの１つまたは複数を有する抗体を、修飾抗体を操作するための出発材料として使用して調製することができる。抗体は、一方または両方の可変領域（すなわち、ＶＨおよび／またはＶＬ）内、例えば、１つもしくは複数のＣＤＲ領域内、および／または１つもしくは複数のフレームワーク領域内の１つまたは複数の残基を修飾することにより操作することができる。加えて、または代替的に、抗体は、例えば、抗体のエフェクター機能を変更するように、定常領域内の残基を修飾することにより操作することもできる。
【００９６】
ある特定の実施形態では、ＣＤＲグラフティングを使用して、抗体の可変領域を操作することができる。抗体は、主に６つの重鎖および軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）内に位置するアミノ酸残基を介して、標的抗原と相互作用する。この理由で、ＣＤＲ内のアミノ酸配列は、個別の抗体の間の多様性が、ＣＤＲの外部の配列より大きい。ＣＤＲ配列は、大半の抗体−抗原間相互作用の一因となるため、異なる特性を有する異なる抗体に由来するフレームワーク配列へとグラフトされた、特異的な、自然における抗体に由来するＣＤＲ配列を含む発現ベクターを構築することにより、特異的な、自然における抗体の特性を模倣する組換え抗体を発現させることが可能である（例えば、Riechmannら（１９９８年）、Nature、３３２巻：３２３〜３２７頁；Jonesら（１９８６年）、Nature、３２１巻：５２２〜５２５頁；Queenら（１９８９年）、Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  U.S.A.、８６巻：１００２９〜１００３３頁；米国特許第５，２２５，５３９号；同第５，５３０，１０１号；同第５，５８５，０８９号；同第５，６９３，７６２号；および同第６，１８０，３７０号を参照されたい）。
【００９７】
本発明に従い、本発明の抗体またはその抗原結合性断片、例えば、配列番号７のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み、かつ／または配列番号８のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３（すなわち、１３Ｅ２のＣＤＲ）を含む、モノクローナル抗体またはその抗原結合性断片もまた提供される。このような抗体は、モノクローナル抗体１３Ｅ２のＶＨ  ＣＤＲ配列およびＶＬ  ＣＤＲ配列を含有する一方で、異なるフレームワーク配列を含有しうる。
【００９８】
同様に、本発明に従い、本発明の抗体またはその抗原結合性断片、例えば、配列番号１７のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み、かつ／または配列番号１８のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３（すなわち、３４Ｆ４のＣＤＲ）を含む、モノクローナル抗体またはその抗原結合性断片もまた提供される。このような抗体は、モノクローナル抗体３４Ｆ４のＶＨ  ＣＤＲ配列およびＶＬ  ＣＤＲ配列を含有する一方で、異なるフレームワーク配列を含有しうる。
【００９９】
このようなフレームワーク配列は、生殖細胞系列の抗体遺伝子配列を含む、公表されたＤＮＡデータベースまたは公表された参考文献から得ることができる。例えば、ヒト重鎖および軽鎖可変領域遺伝子の生殖細胞系列のＤＮＡ配列は、ヒト生殖細胞系列の配列データベースである「ＶＢａｓｅ」（インターネットのwww.mrc-cpe.cam.ac.uk/vbaseで利用可能である）のほか、それらの各々の内容が、参照により本明細書に明示的に組み込まれる、Kabatら（１９９１年）、前出で引用した；Tomlinsonら（１９９２年）、「The  Repertoire  of  Human  Germline  VH  Sequences  Reveals  about  Fifty  Groups  of  VH  Segments  with  Different  Hypervariable  Loops」、J.  Mol.  Biol.、２２７巻：７７６〜７９８頁；およびCoxら（１９９４年）、「A  Directory  of  Human  Germ-line  VH  Segments  Reveals  a  Strong  Bias  in  their  Usage」、Eur.  J.  Immunol.、２４巻：８２７〜８３６頁においても見出すことができる。別の例として、ヒト重鎖およびヒト軽鎖可変領域遺伝子の生殖細胞系列のＤＮＡ配列は、Ｇｅｎｂａｎｋデータベースにおいて見出すことができる。例えば、ＨＣｏ７  ＨｕＭＡｂマウスにおいて見出される、以下の重鎖生殖細胞系列の配列は、併記されるＧｅｎｂａｎｋ受託番号において入手可能である：１−６９（ＮＧ＿００１０１０９、ＮＴ＿０２４６３７およびＢＣ０７０３３３）、３−３３（ＮＧ＿００１０１０９およびＮＴ＿０２４６３７）、および３−７（ＮＧ＿００１０１０９およびＮＴ＿０２４６３７）。別の例として、ＨＣｏｌ２  ＨｕＭＡｂマウスにおいて見出される、以下の重鎖生殖細胞系列の配列は、併記されるＧｅｎｂａｎｋ受託番号において入手可能である：１−６９（ＮＧ＿００１０１０９、ＮＴ＿０２４６３７およびＢＣ０７０３３３）、５−５１（ＮＧ＿００１０１０９およびＮＴ＿０２４６３７）、４−３４（ＮＧ＿００１０１０９およびＮＴ＿０２４６３７）、３−３０．３（ＣＡＪ５５６６４４）および３−２３（ＡＪ４０６６７８）。
【０１００】
抗体のタンパク質配列は、当業者に周知の、Ｇａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴと呼ばれる配列類似性検索法（Altschulら、（１９９７年）、前出）のうちの１つを使用して、集成されたタンパク質配列データベースに照らして比較する。
【０１０１】
本発明の抗体における使用に好ましいフレームワーク配列は、１３Ｅ２抗体または３４Ｆ４抗体のフレームワーク配列と構造的に類似するフレームワーク配列である。
【０１０２】
モノクローナル抗体１３Ｅ２のＶＨドメインをコードする核酸配列との著明なアライメントを示す配列は、以下の生殖細胞系列遺伝子：ＩＧＨＶ８−８＊０１、ＩＧＨＶ８−１１＊０１、ＩＧＨＶ８−１２＊０１、ＩＧＨＤ２−１２＊０１、ＩＧＨＤ１−１＊０１、ＩＧＨＪ１＊０１、ＩＧＨＪ１＊０２、ＩＧＨＪ１＊０３を含む。
【０１０３】
モノクローナル抗体１３Ｅ２のＶＬドメインをコードする核酸配列との著明なアライメントを示す配列は、以下の生殖細胞系列遺伝子：ＩＧＫＶ６−１７＊０１、ＩＧＫＶ６−２５＊０１、ＩＧＫＶ６−２３＊０１、ＩＧＫＪ２＊０１、ＩＧＫＪ２＊０３、ＩＧＫＪ２＊０２を含む。
【０１０４】
モノクローナル抗体３４Ｆ４のＶＨドメインをコードする核酸配列との著明なアライメントを示す配列は、以下の生殖細胞系列遺伝子：ＩＧＨＶ８−８＊０１、ＩＧＨＶ８−１２＊０１、ＩＧＨＶ８−１１＊０１、ＩＧＨＤ１−１＊０１、ＩＧＨＤ１−２＊０１、ＩＧＨＤ２−３＊０１、ＩＧＨＪ２＊０１、ＩＧＨＪ２＊０２、ＩＧＨＪ２＊０３を含む。
【０１０５】
モノクローナル抗体３４Ｆ４のＶＬドメインをコードする核酸配列との著明なアライメントを示す配列は、以下の生殖細胞系列遺伝子：ＩＧＫＶ６−１７＊０１、ＩＧＫＶ６−２５＊０１、ＩＧＫＶ６−２３＊０１、ＩＧＫＪ１＊０１、ＩＧＫＪ１＊０２、ＩＧＫＪ２＊０１を含む。
【０１０６】
本発明の抗体における使用に好ましい重鎖フレームワーク配列は、生殖細胞系列のＶ遺伝子である、ＩＧＨＶ８−８＊０１、ＩＧＨＶ８−１１＊０１、またはＩＧＨＶ８−１２＊０１、とりわけ、ＩＧＨＶ８−８＊０１によりコードされるフレームワーク配列と構造的に類似するフレームワーク配列である。本発明の抗体における使用に好ましい軽鎖フレームワーク配列は、生殖細胞系列のＶ遺伝子である、ＩＧＫＶ６−１７＊０１、ＩＧＫＶ６−２５＊０１、またはＩＧＫＶ６−２３＊０１、とりわけ、ＩＧＫＶ６−１７＊０１によりコードされるフレームワーク配列と構造的に類似するフレームワーク配列である。
【０１０７】
ＶＨ  ＣＤＲ１配列、ＶＨ  ＣＤＲ２配列、およびＶＨ  ＣＤＲ３配列、ならびにＶＬ  ＣＤＲ１配列、ＶＬ  ＣＤＲ２配列、およびＶＬ  ＣＤＲ３配列を、フレームワーク配列が由来する生殖細胞系列の免疫グロブリン遺伝子内で見出される配列と同一な配列を有するフレームワーク領域へとグラフトすることもでき、ＣＤＲ配列を、生殖細胞系列の配列と比較して、１つまたは複数の変異を含有するフレームワーク領域へとグラフトすることもできる。例えば、ある特定の場合には、抗体の抗原結合能力を維持または増強するように、フレームワーク領域内の残基を変異させることが有益であることが見出されている（例えば、米国特許第５，５３０，１０１号；同第５，５８５，０８９号；同第５，６９３，７６２号；および同第６，１８０，３７０号を参照されたい）。
【０１０８】
可変領域修飾の別の種類は、ＶＨ  ＣＤＲ１領域、ＶＨ  ＣＤＲ２領域、および／もしくはＶＨ  ＣＤＲ３領域、ならびに／またはＶＬ  ＣＤＲ１領域、ＶＬ  ＣＤＲ２領域、および／もしくはＶＬ  ＣＤＲ３領域内のアミノ酸残基を変異させて、これにより、目的の抗体の１つまたは複数の結合特性（例えば、アフィニティー）を改善することである。部位指向性変異誘発またはＰＣＲ媒介性変異誘発を実施して、変異を導入することができ、本明細書で記載され、実施例で提示される、ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイまたはｉｎ  ｖｉｖｏアッセイにおいて、抗体の目的の結合特性または他の機能的特性に対する効果を評価することができる。保存的修飾（上で論じた）を導入することが好ましい。変異は、アミノ酸の置換、付加、または欠失の場合があるが、置換が好ましい。さらに、ＣＤＲ領域内の、典型的には１つ、２つ、３つ、４つ、または５つ以下の残基も変更する。一部の実施形態では、合計６つのＣＤＲ領域全てのうちの、１つ、２つ、３つ、４つ、または５つ以下の残基を変更する。
【０１０９】
特定の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、
配列番号１および２１から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号２および２２から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；ならびに配列番号３および２３から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３を含む抗体ＶＨ領域と；配列番号４および２４から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号５および２５から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；ならびに配列番号６および２６から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３を含む抗体ＶＬ領域と
を含むか；または
１つ、２つ、３つ、４つ、もしくは５つ以下のアミノ酸残基を、ＣＤＲ配列内の、アミノ酸置換、付加、もしくは欠失により変更した、これらのバリアント
を含む。
【０１１０】
特定の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、
配列番号１１および３１から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号１２および３２から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２、ならびに配列番号１３および３３から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３を含む抗体ＶＨ領域と；配列番号１４および３４から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１５および３５から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２、ならびに配列番号１６および３６から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３を含む抗体ＶＬ領域と
を含むか；または
１つ、２つ、３つ、４つ、もしくは５つ以下のアミノ酸残基を、ＣＤＲ配列内の、アミノ酸置換、付加、もしくは欠失により変更した、これらのバリアント
を含む。
【０１１１】
別の実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号１、または配列番号１と比較して、１、２、３、４、もしくは５つの、アミノ酸の置換、欠失、もしくは付加を有するアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ１領域；（ｂ）配列番号２、または配列番号２と比較して、１、２、３、４、もしくは５つの、アミノ酸の置換、欠失、もしくは付加を有するアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２領域；および（ｃ）配列番号３、または配列番号３と比較して、１、２、３、４、もしくは５つの、アミノ酸の置換、欠失、もしくは付加を有するアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３領域を含む重鎖可変領域；ならびに／あるいは（ａ）配列番号４、または配列番号４と比較して、１、２、３、４、もしくは５つの、アミノ酸の置換、欠失、もしくは付加を有するアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１領域；（ｂ）配列番号５、または配列番号５と比較して、１、２、３、４、もしくは５つの、アミノ酸の置換、欠失、もしくは付加を有するアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２領域；および（ｃ）配列番号６、または配列番号６と比較して、１、２、３、４、もしくは５つの、アミノ酸の置換、欠失、もしくは付加を有するアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３領域を含む軽鎖可変領域を含む、抗ＬＡＧ−３モノクローナル抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【０１１２】
さらなる実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号１１、または配列番号１１と比較して、１、２、３、４、もしくは５つの、アミノ酸の置換、欠失、もしくは付加を有するアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ１領域；（ｂ）配列番号１２、または配列番号１２と比較して、１、２、３、４、もしくは５つの、アミノ酸の置換、欠失、もしくは付加を有するアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２領域；および（ｃ）配列番号１３、または配列番号１３と比較して、１、２、３、４、もしくは５つの、アミノ酸の置換、欠失、もしくは付加を有するアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３領域を含む重鎖可変領域；ならびに／あるいは（ａ）配列番号１４、または配列番号１４と比較して、１、２、３、４、もしくは５つの、アミノ酸の置換、欠失、もしくは付加を有するアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１領域；（ｂ）配列番号１５、または配列番号１５と比較して、１、２、３、４、もしくは５つの、アミノ酸の置換、欠失、もしくは付加を有するアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２領域；および（ｃ）配列番号１６、または配列番号１６と比較して、１、２、３、４、もしくは５つの、アミノ酸の置換、欠失、もしくは付加を有するアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３領域を含む軽鎖可変領域を含む、抗ＬＡＧ−３モノクローナル抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【０１１３】
別の実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号２１、または配列番号２１と比較して、１、２、３、４、もしくは５つの、アミノ酸の置換、欠失、もしくは付加を有するアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ１領域；（ｂ）配列番号２２、または配列番号２２と比較して、１、２、３、４、もしくは５つの、アミノ酸の置換、欠失、もしくは付加を有するアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２領域；および（ｃ）配列番号２３、または配列番号２３と比較して、１、２、３、４、もしくは５つの、アミノ酸の置換、欠失、もしくは付加を有するアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３領域を含む重鎖可変領域；ならびに／あるいは（ａ）配列番号２４、または配列番号２４と比較して、１、２、３、４、もしくは５つの、アミノ酸の置換、欠失、もしくは付加を有するアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１領域；（ｂ）配列番号２５、または配列番号２５と比較して、１、２、３、４、もしくは５つの、アミノ酸の置換、欠失、もしくは付加を有するアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２領域；および（ｃ）配列番号２６、または配列番号２６と比較して、１、２、３、４、もしくは５つの、アミノ酸の置換、欠失、もしくは付加を有するアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３領域を含む軽鎖可変領域を含む、抗ＬＡＧ−３モノクローナル抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【０１１４】
さらなる実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号３１、または配列番号３１と比較して、１、２、３、４、もしくは５つの、アミノ酸の置換、欠失、もしくは付加を有するアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ１領域；（ｂ）配列番号３２、または配列番号３２と比較して、１、２、３、４、もしくは５つの、アミノ酸の置換、欠失、もしくは付加を有するアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２領域；および（ｃ）配列番号３３、または配列番号３３と比較して、１、２、３、４、もしくは５つの、アミノ酸の置換、欠失、もしくは付加を有するアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３領域を含む重鎖可変領域；ならびに／あるいは（ａ）配列番号３４、または配列番号３４と比較して、１、２、３、４、もしくは５つの、アミノ酸の置換、欠失、もしくは付加を有するアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１領域；（ｂ）配列番号３５、または配列番号３５と比較して、１、２、３、４、もしくは５つの、アミノ酸の置換、欠失、もしくは付加を有するアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２領域；および（ｃ）配列番号３６、または配列番号３６と比較して、１、２、３、４、もしくは５つの、アミノ酸の置換、欠失、もしくは付加を有するアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３領域を含む軽鎖可変領域を含む、抗ＬＡＧ−３モノクローナル抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【０１１５】
本発明の操作抗体は、例えば、抗体の特性を改善するように、ＶＨおよび／またはＶＬ内のフレームワーク残基へと、修飾を施した操作抗体を含む。このようなフレームワーク修飾は、抗体の免疫原性を低下させるように施すことが典型的である。例えば、１つの手法は、１つまたは複数のフレームワーク残基を、対応する生殖細胞系列配列へと「復帰変異させる」ことである。より具体的には、体細胞変異を経た抗体は、抗体が由来する生殖細胞系列配列と異なるフレームワーク残基を含有しうる。このような残基は、抗体フレームワーク配列を、抗体が由来する生殖細胞系列配列と比較することにより同定することができる。
【０１１６】
フレームワーク修飾の別の種類は、Ｔ細胞エピトープを除去して、これにより、抗体の潜在的な免疫原性を低減するように、フレームワーク領域内の１つもしくは複数の残基、なおまたは１つもしくは複数のＣＤＲ領域内の１つもしくは複数の残基を変異させることを伴う。この手法はまた、「脱免疫化」とも称し、米国特許出願公開第２００３０１５３０４３号においてさらに詳細に記載されている。
【０１１７】
フレームワーク領域またはＣＤＲ領域内に施された修飾に加えて、またはこれと代替的に、本発明の抗体は、典型的に、血清半減期、補体の固定、Ｆｃ受容体の結合、および／または抗原依存性細胞媒介性細胞傷害性など、抗体の１つまたは複数の機能的特性を変更するのに、Ｆｃ領域内の修飾を含むように操作することもできる。さらに、本発明の抗体は、ここでもまた、抗体の１つまたは複数の機能的特性を変更するのに、化学的に修飾する（例えば、１つまたは複数の化学的部分を、抗体へと付着させることができる）、またはそのグリコシル化を変更するように修飾することができる。これらの実施形態の各々については、下でさらに詳細に記載する。Ｆｃ領域内の残基の番号付けは、ＫａｂａｔによるＥＵインデックスの番号付けである。
【０１１８】
一実施形態では、ヒンジ領域内のシステイン残基の数を変更する、例えば、増大または減少させるように、ＣＦ１１のヒンジ領域を修飾する。この手法は、米国特許第５，６７７，４２５号においてさらに記載されている。ＣＦ１１のヒンジ領域内のシステイン残基の数は、例えば、軽鎖および重鎖のアセンブリーを容易とするか、または抗体の安定性を増大もしくは減少させるように変更する。
【０１１９】
別の実施形態では、抗体のＦｃヒンジ領域を変異させて、抗体の生物学的半減期を短縮する。より具体的には、抗体のブドウ球菌（Staphylococcyl）プロテインＡ（ＳｐＡ）への結合が、天然Ｆｃ−ヒンジドメインのＳｐＡへの結合と比べて損なわれるように、１つまたは複数のアミノ酸変異を、Ｆｃ−ヒンジ断片の、ＣＦ１２ドメイン−ＣＦ１３ドメイン間界面領域へと導入する。この手法は、米国特許第６，１６５，７４５号においてさらに詳細に記載されている。
【０１２０】
別の実施形態では、抗体を、その生物学的半減期を延長するように修飾する。ＩｇＧクラスは、最も安定であり、２０日間の血清半減期を有するのに対し、ＩｇＭおよびＩｇＡは、５〜８日間のみ存続する（BrekkeおよびSandlie、２００３年、Nature  Reviews  Drug  Discovery、２巻、５２〜６２頁）。多様な手法が可能である。例えば、以下の変異：米国特許第６，２７７，３７５号において記載されている、Ｔ２５２Ｌ、Ｔ２５４Ｓ、Ｔ２５６Ｆのうちの１つまたは複数を導入することができる。代替的に、生物学的半減期を延長するために、抗体を、米国特許第５，８６９，０４６号；および同第６，１２１，０２２号において記載されている、ＩｇＧのＦｃ領域のＣＦ１２ドメインの２つのループから取ったサルベージ受容体結合性エピトープを含有するように、ＣＦ１１領域またはＣＬ領域内で変更することもできる。
【０１２１】
本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、抗体または断片を使用して、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）または補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）の結果として、Ｔ細胞を枯渇させることなく、Ｔ細胞の増殖および／または機能を負に調節しうるように、ＡＤＣＣおよびＣＤＣを欠くものとする。
【０１２２】
ＡＤＣＣでは、抗体のＦｃ領域は、ナチュラルキラーおよびマクロファージなど、免疫エフェクター細胞の表面上のＦｃ受容体（ＦｃγＲ）に結合し、標的とした細胞の溶解をもたらす。ＣＤＣでは、Ｆｃ領域は、補体のＣ１ｑ構成成分に結合し、細胞表面において、補体カスケードを誘発することにより、標的とした細胞を死滅させる。抗体のＡＤＣＣ活性およびＣＤＣ活性は、そのアイソタイプに依存する。ＩｇＭおよびＩｇＧのいずれもが、補体の固定を媒介しうるのに対し、ＩｇＧのみが抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を促進しうる。ＩｇＧアイソフォームは、異なるレベルのＣＤＣおよびＡＤＣＣ：
ＩｇＧ：ＣＤＣ（ｈＩｇＧ３＞ｈＩｇＧ１＞ｈＩｇＧ２＞ｈＩｇＧ４；ｍＩｇＧ２ａ＞ｍＩｇＧ１）；
ＡＤＣＣ（ｈＩｇＧ１≧ｈＩｇＧ３＞ｈＩｇＧ２≧ＩｇＧ４；ｍＩｇＧ２ａ＞ｍＩｇＧ１）
を呈する。
【０１２３】
したがって、一部の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、抗体または断片が、ＡＤＣＣ活性およびＣＤＣ活性を欠くことを確保するように、マウスＩｇＧ１  Ｆｃ部分またはヒトＩｇＧ４  Ｆｃ部分を含む。
【０１２４】
本発明の抗体またはその抗原結合性断片のＡＤＣＣ活性およびＣＤＣ活性は、当業者に公知の、任意の適切な方法により決定することができる。ＣＤＣ活性およびＡＤＣＣ活性の適切なアッセイの例については、ＷＯ２００８／１３２６０１および下に記載されている。
【０１２５】
ＣＤＣ活性を呈する抗ＬＡＧ−３抗体は、補体の存在下で、そのアイソタイプ対照と比較して、一貫してＬＡＧ−３＋細胞を死滅させる。
【０１２６】
ＣＤＣ試験のために、抗ＬＡＧ−３抗体を評価するのに使用される標的細胞は、ＬＡＧ−３をトランスフェクトされた細胞株、またはＬＡＧ−３の発現を誘導するように活性化させた初代Ｔ細胞でよい。例えば、ＣＤＣ試験のための可能な１つのアッセイでは、標的細胞は、ｗｔ  ＣＨＯ細胞との比較における、ＬＡＧ−３＋  ＣＨＯ細胞である。いずれの細胞型（すなわち、ＬＡＧ−３を発現する細胞、およびＬＡＧ−３を発現しない同等細胞）も、抗ＬＡＧ−３試験抗体またはアイソタイプをマッチさせたその陰性対照抗体のいずれか、および活性の補体を含有するウサギ血清と共に、３７℃で１時間インキュベートする。次いで、それらの膜完全性を喪失した（死後に急速に現れる現象）細胞を標識する蛍光色素である、７−アミノ−アクチノマイシンＤ（７−ＡＡＤ）を使用して、細胞の生存率を評価する。７−ＡＡＤ陽性ＣＨＯ細胞（すなわち、死滅した標的細胞）の百分率を、フローサイトメトリー解析により決定する。ＣＤＣ活性を呈する抗体は、補体の存在下で、ＬＡＧ−３＋細胞（例えば、ＬＡＧ−３＋  ＣＨＯ細胞）だけを死滅させる。抗ＬＡＧ−３  Ａｂを、その濃度を低下させながら滴定して、抗体が、低抗体濃度で、ＣＤＣを活性化させる有効性を決定することができる。
【０１２７】
ＣＤＣアッセイはまた、スーパー抗原であるＳＥＢで刺激されたＰＢＭＣ上でも実施することができる。試験抗体の細胞傷害性は、活性化ＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞およびＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞（すなわち、ＣＤ２５＋／ＬＡＧ−３＋細胞）、ならびに非活性化ＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞およびＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞（すなわち、ＣＤ２５−／ＬＡＧ−３−細胞）のいずれにおいても解析する。ＣＤＣを呈する抗体は、活性化されたＣＤ４＋およびＣＤ８＋  Ｔ細胞だけを、特異的に死滅させる。
【０１２８】
ＡＤＣＣ試験のために、ＰＭＢＣを、エフェクター細胞として役に立つように、ＩＬ−２で一日刺激し、ＬＡＧ−３発現細胞（例えば、ＬＡＧ−３＋  ＣＨＯ細胞）を、標的細胞として役に立つように、生存を示す色素であるＣＦＳＥで標識する。試験抗ＬＡＧ−３抗体の存在下で、エフェクター細胞（ＰＢＭＣ）が、アイソタイプをマッチさせた陰性対照抗体と比較して、著明な百分率のＬＡＧ−３発現細胞（例えば、ＬＡＧ−３＋  ＣＨＯ細胞）を死滅させることが可能である場合、試験抗体は、ＡＤＣＣを呈する。この効果は、エフェクター細胞の数と共に増大するはずである。試験抗体を、その濃度を低下させながら滴定して、抗体が、低抗体濃度で、ＡＤＣＣを誘導する有効性を決定することができる。
【０１２９】
試験抗ＬＡＧ−３抗体は、上で記載したアッセイのうちのいずれかにおいて、アイソタイプをマッチさせた陰性対照抗体の２倍未満のＬＡＧ−３＋細胞しか死滅させない場合、ＣＤＣまたはＡＤＣＣを呈しないと考えられうる。
【０１３０】
ドナー末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の亜集団を、エフェクター細胞として使用する古典的ＡＤＣＣバイオアッセイでは、標的細胞の殺滅を使用する。しかし、これらの細胞は、応答にばらつきがある場合があり、高バックグラウンドリーディングを結果としてもたらしうる。Ｐｒｏｍｅｇａから市販されているＡＤＣＣ  Ｒｅｐｏｒｔｅｒ  Ｂｉｏａｓｓａｙは、ＡＤＣＣ経路活性化の早期の時点：エフェクター細胞内のＮＦＡＴ（ｎｕｃｌｅａｒ  ｆａｃｔｏｒ  ｏｆ  ａｃｔｉｖａｔｅｄ  Ｔ−ｃｅｌｌ）経路を介する遺伝子転写の活性化における、代替的なリードアウトを使用する。加えて、ＡＤＣＣ  Ｒｅｐｏｒｔｅｒ  Ｂｉｏａｓｓａｙは、ＦｃγＲＩＩＩａ受容体、Ｖ１５８（高アフィニティー）バリアント、およびホタルルシフェラーゼの発現を駆動するＮＦＡＴ応答エレメントを安定的に発現する操作Ｊｕｒｋａｔ細胞を、エフェクター細胞として使用する。ＡＤＣＣにおける、抗体の生物学的活性は、ＮＦＡＴ経路活性化の結果として産生されるルシフェラーゼを介して定量化され、エフェクター細胞内のルシフェラーゼ活性は、発光リードアウトにより定量化される。このアッセイを使用すると、シグナルは増大し、アッセイバックグラウンドは低下する。適正な表面抗原を有する標的細胞、適正な特異的抗体、およびＦｃγＲＩＩＩａを発現するエフェクター細胞が存在する場合に限り、良好なアッセイ応答が得られる。これらのうちのいずれか１つでも逸失すれば、応答は得られない。
【０１３１】
ＡＤＣＣ  Ｒｅｐｏｒｔｅｒ  Ｂｉｏａｓｓａｙを使用して、抗体のＡＤＣＣ活性について評価する場合、測定される生体発光の増大が、アイソタイプをマッチさせたその陰性対照抗体の生体発光の２倍未満であれば、試験抗体は、ＡＤＣＣを呈しないと考えられうる。
【０１３２】
他の実施形態では、Ｆｃ領域は、Ｆａｂアーム交換を消失させる、Ｓ２２８Ｐ変異を伴う、変異体ヒトＩｇＧ４  Ｆｃ配列（重鎖配列１３Ｅ２ＩｇＧ４ｍｕｔを含むキメラ抗体Ｃｈｉｍ１３Ｅ２ＩｇＧ４については、図２０（Ａ）に示す）を含む。
【０１３３】
他の実施形態では、Ｆｃ領域は、野生型ヒトＩｇカッパ（ＩｇＫ）鎖Ｃ部分（１３Ｅ２ＩｇＫ）（軽鎖配列１３Ｅ２ＩｇＫを含むキメラ抗体Ｃｈｉｍ１３Ｅ２ＩｇＧ４については、図２０（Ｂ）に示す）を含む。
【０１３４】
上で記載した、ヒトＩｇＧ４  Ｆｃ変異体について使用される、Ｆｃ領域内の残基の番号付けは、Ｋａｂａｔにおける、Ｅｕインデックスによる、標準的な番号付けである（Kabat,  E.A.ら、Sequences  of  proteins  of  immunological  interest、５版、US  Department  of  Health  and  Human  Services、ＮＩＨ刊行物第９１−３２４２号、６６２、６８０、６８９頁（１９９１年））。
【０１３５】
さらに別の実施形態では、抗体のグリコシル化を修飾する。例えば、脱グリコシル化抗体（すなわち、抗体は、グリコシル化を欠く）を作製することができる。グリコシル化は、例えば、抗原に対する抗体のアフィニティーを増大させるように変更することができる。このような炭水化物修飾は、例えば、抗体配列内の１つまたは複数のグリコシル化部位を変更することにより達することができる。例えば、１つまたは複数の可変領域フレームワークのグリコシル化部位の消失を結果としてもたらす、１つまたは複数のアミノ酸置換を施して、これにより、この部位におけるグリコシル化を消失させることができる。このような脱グリコシル化により、抗原に対する抗体のアフィニティーを増大させることができる。例えば、米国特許第５，７１４，３５０号および同第６，３５０，８６１号を参照されたい。
【０１３６】
本開示で想定される、本明細書の抗体の別の修飾は、ペグ化である。抗体をペグ化して、例えば、抗体の生物学的（例えば、血清）半減期を延長することができる。抗体をペグ化するには、抗体またはその断片を、ＰＥＧの反応性エステルまたはアルデヒド誘導体などのポリエチレングリコール（ＰＥＧ）と、１つまたは複数のＰＥＧ基が、抗体または抗体断片へと付着する条件下で反応させることが典型的である。ペグ化は、反応性ＰＥＧ分子（または類似する反応性の水溶性ポリマー）とのアシル化反応またはアルキル化反応を介して実行することが好ましい。本明細書で使用される「ポリエチレングリコール」という用語は、モノ（Ｃ１〜Ｃ１０）アルコキシ−ポリエチレングリコールもしくはアリールオキシ−ポリエチレングリコールまたはポリエチレングリコール−マレイミドなど、他のタンパク質を誘導体化するのに使用されているＰＥＧの形態のうちのいずれかを包含することを意図する。ある特定の実施形態では、ペグ化される抗体は、脱グリコシル化抗体である。タンパク質をペグ化するための方法が当技術分野で公知であり、本発明の抗体に適用することができる。例えば、ＥＰ  ０  １５４  ３１６および欧州特許第ＥＰ  ０  ４０１  ３８４を参照されたい。
【０１３７】
本発明の抗体は、モノクローナル抗体またはその抗原結合性断片でありうる。
【０１３８】
「抗体」および「免疫グロブリン」という用語は、Ｆａｂ断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ断片、およびＦｄ断片、キメラ抗体、ヒト化抗体、単鎖抗体（ｓｃＡｂ）、単一ドメイン抗体（ｄＡｂ）、単一ドメイン重鎖抗体、単一ドメイン軽鎖抗体、二特異性抗体、多特異性抗体、ならびに抗体および抗体以外のタンパク質の抗原結合性（ａｎｔｉｇｅｎ−ｂｉｎｄｉｎｇ）（本明細書ではまた、抗原結合性（ａｎｔｉｇｅｎ  ｂｉｎｄｉｎｇ）とも称する）部分を含む融合タンパク質を含むがこれらに限定されない、任意のアイソタイプの抗体または免疫グロブリン、抗原への特異的結合を保持する抗体の断片を含む。用語はまた、Ｆａｂ’、Ｆｖ、Ｆ（ａｂ’）２、および／または抗原への特異的結合を保持する他の抗体断片、ならびにモノクローナル抗体も包含する。抗体は、一価であっても、二価であってもよい。抗体は、４つのポリペプチド鎖：ジスルフィド結合により接続された２つの重鎖および２つの軽鎖からなる「Ｙ字型」分子である、Ｉｇ単量体でありうる。抗体は、例えば、放射性同位元素、検出可能な生成物を発生させる酵素、蛍光タンパク質などで、検出可能に標識することができる。抗体は、特異的結合対のメンバー、例えば、ビオチン（ビオチン−アビジン特異的結合対のメンバー）など、他の部分へと、さらにコンジュゲートさせることもできる。抗体はまた、ポリスチレンプレートまたはビーズなどを含むがこれらに限定されない固体支持体に結合させることもできる。
【０１３９】
「抗体断片」は、無傷抗体の部分、例えば、無傷抗体の抗原結合性領域または可変領域を含む。抗体断片の例は、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、およびＦｖ断片；ダイアボディー；直鎖状抗体（Zapataら、Protein  Eng.、８巻（１０号）：１０５７〜１０６２頁（１９９５年））；ドメイン抗体（ｄＡｂ；Holtら（２００３年）、Trends  Biotechnol.、２１巻：４８４頁）；単鎖抗体分子；ならびに抗体断片から形成された多特異性抗体を含む。抗体のパパイン消化により、「Ｆａｂ」断片と呼ばれる、各々が、単一の抗原結合性部位を有する２つの同一な抗原結合性断片、および残りの「Ｆｃ」断片（たやすく結晶化する能力を反映する呼称である）が生じる。ペプシン処理は、２つの抗原結合性（ｃｏｍｂｉｎｉｎｇ）部位を有し、抗原を架橋することがやはり可能な、Ｆ（ａｂ’）２断片をもたらす。
【０１４０】
「Ｆｖ」は、完全な抗原認識部位および抗原結合性部位を含有する、最小の抗体断片である。この領域は、緊密な非共有結合的会合下にある、１つの重鎖可変ドメインおよび１つの軽鎖可変ドメインの二量体からなる。各可変ドメインの３つのＣＤＲが相互作用して、ＶＨ−ＶＬ二量体の表面上で、抗原結合性部位を定義するのは、この立体構成においてである。合わせて、６つのＣＤＲは、抗原結合特異性を、抗体に付与する。しかし、単一の可変ドメイン（または抗原に特異的な３つのＣＤＲだけを含むＦｖの半分）でもなお、結合性部位全体より小さなアフィニティーではあるが、抗原を認識し、抗原に結合する能力を有する。
【０１４１】
「Ｆａｂ」断片はまた、軽鎖の定常ドメインおよび重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）も含有する。Ｆａｂ’断片は、抗体のヒンジ領域に由来する１つまたは複数のシステインを含む、重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシル末端における少数の残基の付加により、Ｆａｂ断片と異なる。Ｆａｂ’−ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基が、遊離チオール基を持つＦａｂ’のための、本明細書における呼称である。Ｆ（ａｂ’）２抗体断片は、元は、それらの間にヒンジシステインを有するＦａｂ’断片の対として作製された。また、抗体断片の他の化学的カップリングも公知である。
【０１４２】
任意の脊椎動物種に由来する抗体の「軽鎖」は、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づき、カッパおよびラムダと呼ばれる、２つの顕著に異なる種類のうちの１つへと割り当てることができる。それらの重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、免疫グロブリンは、異なるクラスへと割り当てることができる。免疫グロブリンの５つの主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭが存在し、これらのクラスのうちのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、およびＩｇＡ２へとさらに分けることができる。サブクラスは、種類、例えば、ＩｇＧ２ａおよびＩｇＧ２ｂへとさらに分けることができる。
【０１４３】
「単鎖Ｆｖ」抗体断片または「ｓＦｖ」抗体断片または「ｓｃＦｖ」抗体断片は、抗体のＶＨドメインおよびＶＬドメインを含み、この場合、これらのドメインは、単一のポリペプチド鎖内に存在する。一部の実施形態では、Ｆｖポリペプチドは、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間のポリペプチドリンカーをさらに含み、これは、ｓＦｖが抗原への結合に所望の構造を形成することを可能とする。ｓＦｖの総説については、Pluckthun、The  Pharmacology  of  Monoclonal  Antibodies、１１３巻、RosenburgおよびMoore編、Springer-Verlag、New  York、２６９〜３１５頁（１９９４年）を参照されたい。
【０１４４】
「ダイアボディー」という用語は、２つの抗原結合性部位を有する小型の抗体断片を指し、その断片は、同じポリペプチド鎖内で軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）へと接続された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む（ＶＨ−ＶＬ）。同じ鎖上の２つのドメイン間の対合を可能とするには短すぎるリンカーを使用することにより、ドメインは、別の鎖の相補性ドメインと対合し、２つの抗原結合性部位を創出するように強いられる。ダイアボディーについては、例えば、ＥＰ４０４，０９７；ＷＯ９３／１１１６１；およびHollingerら（１９９３年）、Proc.  Natl.  Acad.  Sci.、USA、９０巻：６４４４〜６４４８頁においてより十全に記載されている。
【０１４５】
本明細書で使用される「モノクローナル抗体」は、それらの全てが、細胞の複製の反復により、単一の細胞から作製された、同一な細胞の群により産生された抗体である。すなわち、細胞のクローンは、単一の抗体種だけを産生する。モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ作製技術を使用して作製しうるが、当業者に公知の他の作製法もまた使用することができる（例えば、抗体のファージディスプレイライブラリー由来の抗体）。
【０１４６】
本明細書で使用される「ＣＤＲ」または「相補性決定領域」という用語は、重鎖ポリペプチドおよび軽鎖ポリペプチドの両方の可変領域内で見出される、非連続的な抗原結合性（ｃｏｍｂｉｎｉｎｇ）部位を意味することを意図する。ＣＤＲについては、Kabatら、J.  Biol.  Chem.、２５２巻：６６０９〜６６１６頁（１９７７年）；Kabatら、U.S.  Dept.  of  Health  and  Human  Services、「Sequences  of  proteins  of  immunological  interest」（１９９１年）（本明細書ではまた、Kabat、１９９１年とも称する）により；Chothiaら、J.  Mol.  Biol.、１９６巻：９０１〜９１７頁（１９８７年）（本明細書ではまた、Chothia、１９８７年とも称する）により；およびMacCallumら、J.  Mol.  Biol.、２６２巻：７３２〜７４５頁（１９９６年）により記載されている。さらなるシステムは、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）番号付けシステムである（Lefrancら、Nucleic  Acids  Research、２７巻：２０９〜２１２頁（１９９９年））。定義は、互いに対して比較した場合の、アミノ酸残基の重複またはサブセットを含む。しかしながら、抗体もしくはグラフト抗体またはそのバリアントのＣＤＲに言及するための、いずれの定義の適用も、本明細書で定義および使用される用語の範囲内にあること意図する。上で引用した参考文献の各々により定義される、ＣＤＲを包含するアミノ酸残基を、下の表１に、比較として明示する。実施例２の表４、および実施例５の表９に列挙されるＣＤＲは、Lefranc、１９９９年、およびKabat、１９９１年に従い定義されている。
【０１４７】
【表１】
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【０１４８】
本明細書で使用される「ＣＤＲ−Ｌ１」、「ＣＤＲ−Ｌ２」、および「ＣＤＲ−Ｌ３」という用語は、それぞれ、軽鎖可変領域内の第１のＣＤＲ、第２のＣＤＲ、および第３のＣＤＲを指す。本明細書で使用される「ＣＤＲ−Ｈ１」、「ＣＤＲ−Ｈ２」、および「ＣＤＲ−Ｈ３」という用語は、それぞれ、重鎖可変領域内の第１のＣＤＲ、第２のＣＤＲ、および第３のＣＤＲを指す。本明細書で使用される「ＣＤＲ−１」、「ＣＤＲ−２」、および「ＣＤＲ−３」という用語は、それぞれ、いずれかの鎖の可変領域の第１のＣＤＲ、第２のＣＤＲ、および第３のＣＤＲを指す。
【０１４９】
本明細書で使用される「アフィニティー」という用語は、２つの作用因子（例えば、抗体および抗原）の可逆的結合についての平衡定数を指し、解離定数（ＫＤ）として表される。アフィニティーは、非類縁アミノ酸配列に対する抗体のアフィニティーより、少なくとも１倍大きい、少なくとも２倍大きい、少なくとも３倍大きい、少なくとも４倍大きい、少なくとも５倍大きい、少なくとも６倍大きい、少なくとも７倍大きい、少なくとも８倍大きい、少なくとも９倍大きい、少なくとも１０倍大きい、少なくとも２０倍大きい、少なくとも３０倍大きい、少なくとも４０倍大きい、少なくとも５０倍大きい、少なくとも６０倍大きい、少なくとも７０倍大きい、少なくとも８０倍大きい、少なくとも９０倍大きい、少なくとも１００倍大きい、または少なくとも１，０００倍大きい、またはこれを超えうる。抗体の、標的タンパク質に対するアフィニティーは、例えば、約１００ナノモル（ｎＭ）〜約０．１ｎＭ、約１００ｎＭ〜約１ピコモル（ｐＭ）、または約１００ｎＭ〜約１フェムトモル（ｆＭ）またはこれを超えうる。本明細書で使用される「アビディティー」という用語は、希釈後における、２つまたはこれを超える作用因子の複合体の、解離に対する抵抗性を指す。本明細書では、抗体および／または抗原結合性断片に関する「免疫反応性」および「〜に優先的に結合する」という用語は、互換的に使用される。
【０１５０】
「〜に結合すること」という用語は、例えば、塩架橋および水架橋などの相互作用を含む、共有結合的相互作用、静電的相互作用、疎水相互作用、およびイオン性相互作用、ならびに／または水素結合による相互作用に起因する、２つの分子間の直接的な会合を指す。本発明の抗体は、ＬＡＧ−３タンパク質、特に、ヒトＬＡＧ−３タンパク質内のエピトープに特異的に結合する。「特異的結合」は、少なくとも約５×１０−７Ｍまたはこれを超える、例えば、１０−７Ｍ、５×１０−８Ｍ、１０−８Ｍ、またはこれを超えるアフィニティーで結合することを指す。「非特異的結合」は、約１０−７Ｍ未満のアフィニティーで結合する、例えば、１０−６Ｍ、１０−５Ｍ、１０−４Ｍなどのアフィニティーで結合することを指す。本明細書で使用される、「ヒトＬＡＧ−３に特異的に結合する」抗体は、ヒトＬＡＧ−３タンパク質（および、おそらく、１つまたは複数の非ヒト種に由来するＬＡＧ−３タンパク質）には結合するが、非ＬＡＧ−３タンパク質には実質的に結合しない抗体を指すことを意図する。好ましくは、抗体は、ヒトＬＡＧ−３タンパク質に、「高アフィニティー」で、すなわち、１×１０−７Ｍまたはこれ未満、より好ましくは１×１０−８Ｍまたはこれ未満、より好ましくは５×１０−９Ｍまたはこれ未満、より好ましくは１×１０−９Ｍまたはこれ未満のＫＤで結合する。
【０１５１】
本明細書で使用される、タンパク質または細胞に「実質的に結合しない」という用語は、タンパク質または細胞に結合しないか、または高アフィニティーで結合しない、すなわち、タンパク質または細胞に、１×１０−６Ｍまたはこれを超える、より好ましくは１×１０−５Ｍまたはこれを超える、より好ましくは１×１０−４Ｍまたはこれを超える、より好ましくは１×１０−３Ｍまたはこれを超える、なおより好ましくは１×１０−２Ｍまたはこれを超えるＫＤで結合することを意味する。
【０１５２】
本明細書で使用される「Ｋａｓｓｏｃ」または「Ｋａ」という用語が、特定の抗体−抗原間相互作用の会合速度を指すことを意図するのに対し、本明細書で使用される「Ｋｄｉｓ」または「Ｋｄ」という用語は、特定の抗体−抗原間相互作用の解離速度を指すことを意図する。本明細書で使用される「ＫＤ」という用語は、Ｋｄの、Ｋａに対する比（すなわち、Ｋｄ／Ｋａ）から得られ、モル濃度（Ｍ）として表される解離定数を指すことを意図する。
【０１５３】
ＩｇＧ抗体についての「高アフィニティー」という用語は、標的抗原に対して、１×１０−７Ｍまたはこれ未満、より好ましくは５×１０−８Ｍまたはこれ未満、なおより好ましくは１×１０−８Ｍまたはこれ未満、なおより好ましくは５×１０−９Ｍまたはこれ未満、なおより好ましくは１×１０−９Ｍまたはこれ未満のＫＤを有する抗体を指す。しかし、他の抗体アイソタイプに対する「高アフィニティー」の結合は変動しうる。例えば、ＩｇＭアイソタイプに対する「高アフィニティー」の結合とは、１０−６Ｍまたはこれ未満、より好ましくは１０−７Ｍまたはこれ未満、なおより好ましくは１０−８Ｍまたはこれ未満のＫＤを有する抗体を指す。
【０１５４】
一部の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、ヒトＬＡＧ−３タンパク質に、アンタゴニスト性抗ＬＡＧ−３モノクローナル抗体１７Ｂ４より大きなアフィニティーで（すなわち、より小さな解離定数で）結合する（Baixerasら、J.  Exp.  Med.、１９９２年、１７６巻：３２７〜３３７頁）。下の実施例７は、１７Ｂ４抗体の、ヒトＬＡＧ−３Ｉｇタンパク質への結合についてのＢｉａｃｏｒｅ解析の結果について記載する。結果は、１７Ｂ４の、ヒトＬＡＧ−３Ｉｇに対する解離定数が、３．６９ｎＭであったことを示す。したがって、一部の実施形態では、本発明の抗体は、ヒトＬＡＧ−３タンパク質（またはヒトＬＡＧ−３Ｉｇタンパク質）に、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ解析により決定される、３．６９ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）で結合する。
【０１５５】
一部の実施形態では、本発明の抗体は、ヒトＬＡＧ−３タンパク質（またはヒトＬＡＧ−３Ｉｇタンパク質など、その誘導体）に、３．５ｎＭ以下の、２．５ｎＭ以下の、２ｎＭ以下の、１ｎＭ以下の、０．９ｎＭ以下の、０．８ｎＭ以下の、０．７ｎＭ以下の、０．６ｎＭ以下の、０．５ｎＭ以下の、０．４ｎＭ以下の、０．３ｎＭ以下の、０．２ｎＭ以下の、０．１ｎＭ以下の解離定数（ＫＤ）で結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＬＡＧ−３抗体は、ヒトＬＡＧ−３タンパク質に、９０ｐＭ以下の、８０ｐＭ以下の、７０ｐＭ以下の、６０ｐＭ以下の、５０ｐＭ以下の、４０ｐＭ以下の、３０ｐＭ以下の、２０ｐＭ以下の、１０ｐＭ以下の、９ｐＭ以下の、８ｐＭ以下の、７ｐＭ以下の、６ｐＭ以下の、５ｐＭ以下の、４ｐＭ以下の、３ｐＭ以下の、２ｐＭ以下の、または１ｐＭ以下のＫＤで結合する。
【０１５６】
下の実施例２０は、キメラ１３Ｅ２  ＩｇＧ４抗体（下で記載される）、およびヒト化１３Ｅ２  ＩｇＧ４（下で記載される）の、ヒトＬＡＧ−３Ｉｇタンパク質への結合についてのＢｉａｃｏｒｅ解析の結果について記載する。結果は、キメラ１３Ｅ２  ＩｇＧ４抗体の、ヒトＬＡＧ−３Ｉｇに対する解離定数は、２１．９ｐＭであり、ヒト化１３Ｅ２  ＩｇＧ４の、ヒトＬＡＧ−３Ｉｇに対する解離定数は、２２．８ｐＭであったことを示す。
【０１５７】
特定の実施形態では、本発明の抗体は、ヒトＬＡＧ−３タンパク質（またはヒトＬＡＧ−３Ｉｇタンパク質）に、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ解析により決定される、１００ｐＭ以下の、９０ｐＭ以下の、８０ｐＭ以下の、７０ｐＭ以下の、６０ｐＭ以下の、５０ｐＭ以下の、４０ｐＭ以下の、３０ｐＭ以下の、または２５ｐＭ以下の解離定数（ＫＤ）で結合する。
【０１５８】
一部の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片のアフィニティーは、ヒトＬＡＧ−３タンパク質に対する１７Ｂ４のアフィニティーより、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％大きくてもよい。一部の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、ヒトＬＡＧ−３タンパク質に対する１７Ｂ４のアフィニティーの、少なくとも１．５、２、２．５、３、または３．５倍でありうる。
【０１５９】
当業者は、抗体の、ヒトＬＡＧ−３タンパク質に対するアフィニティーを、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅシステムなどのバイオセンサーシステムを使用して、表面プラズモン共鳴により、適切に決定することができる（Murphyら、Using  Biacore  to  measure  the  binding  kinetics  of  an  antibody-antigen  interaction、Curr  Protoc  Protein  Sci.、２００６年９月、１９章、１９．１４部）。例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ解析を使用して、本発明の抗体と、ヒトＬＡＧ−３タンパク質との間の解離定数を決定することができる。
【０１６０】
ヒトＬＡＧ−３への結合は、これらもまた当技術分野で十分に確立されている、１つまたは複数の他の技法を使用して評価することができる。例えば、抗体は、それらの細胞表面上にヒトＬＡＧ−３を発現するようにトランスフェクトされたＣＨＯ細胞など、ヒトＬＡＧ−３を発現する細胞株と抗体を反応させるフローサイトメトリーアッセイにより調べることができる。フローサイトメトリーアッセイにおける使用に適する他の細胞は、天然ＬＡＧ−３を発現するＳＥＢ刺激ＰＢＭＣまたは抗ＣＤ３刺激ＣＤ４＋活性化Ｔ細胞を含む。さらに他の適切な結合アッセイは、例えば、組換えＬＡＧ−３タンパク質を使用するＥＬＩＳＡアッセイを含む。
【０１６１】
本発明の抗体は、単離抗体である。「単離」抗体は、その自然環境の構成成分から同定ならびに分離および／または回収された抗体である。その自然環境の夾雑構成成分は、抗体の診断的使用または治療的使用に干渉する材料であり、酵素、ホルモン、および他のタンパク質性溶質または非タンパク質性溶質を含みうる。一部の実施形態では、抗体を（１）ローリー法により決定される通り、抗体の重量で、９０％を超える、９５％を超える、もしくは９８％を超えるまで、例えば、重量で９９％を超えるまで、（２）スピニングカップ型シークェネーターを使用することにより、Ｎ末端のアミノ酸配列もしくは内部アミノ酸配列のうちの少なくとも１５残基を得るのに十分な程度まで、または（３）クーマシーブルーもしくは銀染色を使用して、還元条件下もしくは非還元条件下で、ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）により均質となるまで、精製する。単離抗体は、抗体の自然環境の少なくとも１つの構成成分が存在しないので、組換え細胞内のｉｎ  ｓｉｔｕにおける抗体を含む。場合によって、単離抗体は、少なくとも１つの精製ステップにより調製する。
【０１６２】
好ましい実施形態では、本発明の抗体は、ヒト化抗体またはその抗原結合性断片、特に、ヒト化モノクローナル抗体またはその抗原結合性断片である。
【０１６３】
本発明のヒト化抗体またはその抗原結合性断片は、ヒト化軽鎖フレームワーク領域および／またはヒト化重鎖フレームワーク領域を含みうる。
【０１６４】
本明細書で使用される「ヒト化抗体」という用語は、起源の異なる免疫グロブリンの部分を含む免疫グロブリンを指し、この場合、少なくとも１つの部分は、ヒト起源のアミノ酸配列を含む。例えば、ヒト化抗体は、マウスなど、必須の特異性を有する非ヒト起源の免疫グロブリン由来、および従来の技法（例えば、合成）により、化学的に互いに接合されるか、または遺伝子的な操作技法を使用して、連続的ポリペプチドとして調製された（例えば、連続的ポリペプチド鎖を生じるように、キメラ抗体のタンパク質部分をコードするＤＮＡを発現させうる）ヒト起源の免疫グロブリン配列（例えば、免疫グロブリン）由来の部分を含みうる。ヒト化免疫グロブリンの別の例は、非ヒト起源の抗体由来のＣＤＲ、ならびにヒト起源の軽鎖および／または重鎖由来のフレームワーク領域を含む、１つまたは複数の免疫グロブリン鎖を含有する免疫グロブリン（例えば、フレームワークの変化を有するかまたは有しない、ＣＤＲグラフト抗体）である。単鎖キメラ抗体または単鎖ＣＤＲグラフト抗体もまた、ヒト化免疫グロブリンという用語に包含される。例えば、Cabillyら、米国特許第４，８１６，５６７号；Cabillyら、欧州特許第０，１２５，０２３Ｂ１号；Bossら、米国特許第４，８１６，３９７号；Bossら、欧州特許第０，１２０，６９４Ｂ１号；Neuberger,  M.  S.、ＷＯ８６／０１５３３；Neuberger,  M.  S.ら、欧州特許第０，１９４，２７６Ｂ１号；Winter、米国特許第５，２２５，５３９号；Winter、欧州特許第０，２３９，４００Ｂ１号；Padlan,  E.  A.ら、欧州特許出願第０，５１９，５９６Ａ１号を参照されたい。単鎖抗体についてはまた、Ladnerら、米国特許第４，９４６，７７８号；Huston、米国特許第５，４７６，７８６号；およびBird,  R.  E.ら、Science、２４２巻：４２３〜４２６頁（１９８８年））を参照されたい。
【０１６５】
「キメラ抗体」という用語は、可変領域配列は、マウス抗体に由来し、定常領域配列は、ヒト抗体に由来する抗体など、可変領域配列は、１つの種に由来し、定常領域配列は、別の種に由来する抗体を指すことを意図する。可変領域アミノ酸配列は、それが由来する種の可変領域アミノ酸配列（例えば、マウス配列）と同一である場合もあり、この可変領域配列と、少なくとも６０％、７０％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である場合もある。例えば、本発明のキメラ抗体の可変領域アミノ酸配列は、それが由来する種の可変領域アミノ酸配列と比較して、１つまたは複数の、アミノ酸の欠失、置換、または付加（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個の、アミノ酸の欠失、置換、または付加）を含みうる。
【０１６６】
同様に、定常領域アミノ酸配列は、それが由来する種の定常領域アミノ酸配列（例えば、ヒト配列）と同一である場合もあり、この定常領域アミノ酸配列と、少なくとも６０％、７０％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である場合もある。例えば、本発明のキメラ抗体の定常領域アミノ酸配列は、それが由来する種の定常領域アミノ酸配列と比較して、１つまたは複数の、アミノ酸の欠失、置換、または付加（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個の、アミノ酸の欠失、置換、または付加）を含みうる。
【０１６７】
例えば、上で記載した通り、キメラ抗体のＦｃヒンジ領域のアミノ酸配列は、抗体の生物学的半減期を短縮するように変異させることもでき、Ｆｃ領域のアミノ酸配列は、キメラ抗体の生物学的半減期を延長するように変異させることもできる。
【０１６８】
例えば、本発明のキメラ抗体についての一部の実施形態では、重鎖可変領域配列は、マウス抗体を含むか、またはこれに由来し、重鎖定常領域配列は、ＩｇＧ４  Ｆｃ配列を含むか、またはこれに由来する。他の実施形態では、軽鎖可変領域配列は、マウス抗体を含むか、またはこれに由来し、軽鎖定常領域配列は、ヒトＩｇカッパ（ＩｇＫ）鎖Ｃ配列を含むか、またはこれに由来する。
【０１６９】
他の実施形態では、Ｆｃ領域は、Ｆａｂアーム交換を消失させる、Ｓ２２８Ｐ変異を伴う、変異体ヒトＩｇＧ４  Ｆｃ配列（重鎖配列１３Ｅ２ＩｇＧ４ｍｕｔを含むキメラ抗体Ｃｈｉｍ１３Ｅ２ＩｇＧ４については、図２０（Ａ）に示す）を含む。
【０１７０】
他の実施形態では、Ｆｃ領域は、野生型ヒトＩｇカッパ（ＩｇＫ）鎖Ｃ部分（１３Ｅ２ＩｇＫ）（軽鎖配列１３Ｅ２ＩｇＫを含むキメラ抗体Ｃｈｉｍ１３Ｅ２ＩｇＧ４については、図２０（Ｂ）に示す）を含む。
【０１７１】
上で記載した、ヒトＩｇＧ４  Ｆｃ変異体について使用される、Ｆｃ領域内の残基の番号付けは、Ｋａｂａｔにおける、Ｅｕインデックスによる、標準的な番号付けである（Kabat,  E.A.ら、Sequences  of  proteins  of  immunological  interest、５版、US  Department  of  Health  and  Human  Services、ＮＩＨ刊行物第９１−３２４２号、６６２、６８０、６８９頁（１９９１年））。
【０１７２】
所望のヒト化鎖をコードする遺伝子（例えば、ｃＤＮＡ）を調製するのに、合成核酸および／または組換え核酸を使用して、ヒト化抗体を作製することができる。例えば、ヒト化可変領域をコードする核酸（例えば、ＤＮＡ）配列は、既にヒト化された可変領域に由来するＤＮＡ鋳型など、ヒト鎖またはヒト化鎖をコードするＤＮＡ配列を変更するように、ＰＣＲ変異誘発法を使用して構築することができる（例えば、Kamman,  M.ら、Nucl.  Acids  Res.、１７巻：５４０４頁（１９８９年））；Sato,  K.ら、Cancer  Research、５３巻：８５１〜８５６頁（１９９３年）；Daugherty,  B.  L.  ら、Nucleic  Acids  Res.、１９巻（９号）：２４７１〜２４７６頁（１９９１年）；ならびにLewis,  A.  P.およびJ.  S.  Crowe、Gene、１０１巻：２９７〜３０２頁（１９９１年）を参照されたい）。また、これらの方法または他の適切な方法を使用して、バリアントをたやすく作製することもできる。例えば、クローニングされた可変領域を、変異誘発させ、所望の特異性を有するバリアントをコードする配列を、選択することができる（例えば、ファージライブラリーから；例えば、Krebberら、米国特許第５，５１４，５４８号；１９９３年４月１日に公表された、Hoogenboomら、ＷＯ９３／０６２１３を参照されたい）。
【０１７３】
抗体の可変領域に言及して使用される場合に、本明細書で使用される「フレームワーク」という用語は、抗体の可変領域内のＣＤＲ領域外の、全てのアミノ酸残基を意味することを意図する。可変領域のフレームワークは一般に、約１００〜１２０アミノ酸の間の長さの、不連続なアミノ酸配列であるが、ＣＤＲ外のアミノ酸だけに言及することを意図する。本明細書で使用される「フレームワーク領域」という用語は、ＣＤＲにより分離された、フレームワークの各ドメインを意味することを意図する。
【０１７４】
フレームワーク領域のヒト化は、抗体が、ヒトにおいて、ヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）応答を惹起する危険性を低減する。当技術分野で認知された、免疫応答を決定する方法を実施して、特定の患者または臨床試験におけるＨＡＭＡ応答をモニタリングすることができる。ヒト化抗体を投与される患者には、治療の投与の開始時および全期間において、免疫原性評価を下すことができる。ＨＡＭＡ応答は、表面プラズモン共鳴技術（ＢＩＡＣＯＲＥ）および／または固相酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）解析を含む、当業者に公知の方法を使用して、例えば、患者に由来する血清試料中のヒト化治療用試薬に対する抗体を検出することにより測定する。多くの場合、本発明のヒト化抗体は、ヒト被験体において、ＨＡＭＡ応答を、実質的に惹起しない。
【０１７５】
ヒト可変領域のフレームワーク残基に由来するある特定のアミノ酸を、ＣＤＲのコンフォメーションおよび／または抗原への結合に対するそれらの可能な影響に基づき、置換のために選択する。マウスＣＤＲ領域の、ヒト可変フレームワーク領域との非天然の並置は、ある特定のアミノ酸残基の置換により是正しなければ、結合アフィニティーの喪失をもたらす、非天然のコンフォメーション拘束を結果としてもたらす場合がある。
【０１７６】
置換のためのアミノ酸残基の選択は、部分的に、コンピューターによるモデル化により決定することができる。免疫グロブリン分子の三次元画像を作製するための、コンピューターハードウェアおよびソフトウェアが当技術分野で公知である。一般に、分子モデルは、免疫グロブリン鎖またはそれらのドメインについての構造の解明から出発して作製する。モデル化される鎖を、アミノ酸配列の類似性について、三次元構造が解明された鎖またはドメインと比較し、最大の配列類似性を示す鎖またはドメインを、分子モデルを構築するための出発点として選択する。少なくとも５０％の配列同一性を共有する鎖またはドメインを、モデル化のために選択する。例えば、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、またはこれを超える配列同一性を共有する鎖またはドメインを、モデル化のために選択する。解明された出発構造は、モデル化される免疫グロブリン鎖またはドメイン内の実際のアミノ酸と、出発構造内のアミノ酸との差違を許容するように改変する。次いで、改変された構造を、複合免疫グロブリンへとアセンブルする。最後に、エネルギー最小化により、ならびに全ての原子が、互いから適切な距離内にあり、結合長および結合角が、化学的に許容可能な限界内にあることを検証することにより、モデルを精緻化する。
【０１７７】
ＣＤＲ領域およびフレームワーク領域は、Kabat、Sequences  of  Proteins  of  Immunological  Interest（National  Institutes  of  Health、Bethesda、Md.、１９８７年および１９９１年）により定義されている通りでありうる。代替的な構造的定義は、Chothiaら、J.  Mol.  Biol.、１９６巻：９０１頁（１９８７年）；Nature、３４２巻：８７８頁（１９８９年）；およびJ.  Mol.  Biol.、１８６巻：６５１頁（１９８９年）（合わせて、「Ｃｈｏｔｈｉａ」と称する）により提起されている。Kabat、前出により定義されるフレームワーク残基が、Chothia、前出により定義される構造的ループ残基を構成する場合、マウス抗体内に存在するアミノ酸を、ヒト化抗体への置換のために選択することができる。「ＣＤＲ領域に隣接する」残基は、ヒト化免疫グロブリン鎖の一次配列内のＣＤＲのうちの１つまたは複数にじかに隣接する位置にある、例えば、Ｋａｂａｔにより定義されたＣＤＲ、またはＣｈｏｔｈｉａ（例えば、ChothiaおよびLesk、JMB、１９６巻：９０１頁（１９８７年）を参照されたい）により定義されたＣＤＲにじかに隣接する位置にあるアミノ酸残基を含む。これらのアミノ酸は特に、ＣＤＲ内のアミノ酸と相互作用し、アクセプターから選択される場合、ドナーＣＤＲを変形させ、アフィニティーを低減する可能性が高い。さらに、隣接するアミノ酸は、抗原と直接相互作用することが可能であり（Amitら、Science、２３３巻：７４７頁（１９８６年））、これらのアミノ酸を、ドナーから選択することは、元の抗体内でアフィニティーをもたらす、全ての抗原との接触を保つのに望ましい場合がある。代替的に、ＣＤＲ領域およびフレームワーク領域は、ＭａｃＣａｌｌｕｍらまたはＬｅｆｒａｎｃら（前出；表１を参照されたい）により定義される通りでありうる。
【０１７８】
場合によって、ヒト化ＶＨフレームワークまたはヒト化ＶＬフレームワークは、コンセンサスのヒト化フレームワークである。コンセンサスのヒト化フレームワークは、ヒト免疫グロブリンのＶＬフレームワーク配列またはＶＨフレームワーク配列の選択において、最も一般に生じるアミノ酸残基を表しうる。
【０１７９】
一部の実施形態では、本発明の抗体またはその断片は、１つまたは複数のヒト化フレームワーク領域（ＦＲ）を含む。一部の実施形態では、対象の抗ＬＡＧ−３抗体は、ヒト化された、１つ、２つ、３つ、または４つの軽鎖ＦＲを含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、対象抗体は、Ｎ末端からＣ末端への順序で、ヒト化軽鎖ＦＲ１；本明細書で明示されるＣＤＲ−Ｌ１；ヒト化軽鎖ＦＲ２；本明細書で明示されるＣＤＲ−Ｌ２；ヒト化軽鎖ＦＲ３；本明細書で明示されるＣＤＲ−Ｌ３；およびヒト化軽鎖ＦＲ４を含む、軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、およびＣＤＲ−Ｌ３のそれぞれのアミノ酸配列は、配列番号１、配列番号２、および配列番号３である。
【０１８０】
例えば、対象抗体は、Ｎ末端からＣ末端への順序で、ヒト化軽鎖ＦＲ１；配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１；ヒト化軽鎖ＦＲ２；配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２；ヒト化軽鎖ＦＲ３；配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３；およびヒト化軽鎖ＦＲ４を含む、軽鎖可変領域を含みうる。
【０１８１】
他の実施形態では、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、およびＣＤＲ−Ｌ３のそれぞれのアミノ酸配列は、配列番号４、配列番号５、および配列番号６である。
【０１８２】
例えば、対象抗体は、Ｎ末端からＣ末端への順序で、ヒト化軽鎖ＦＲ１；配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１；ヒト化軽鎖ＦＲ２；配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２；ヒト化軽鎖ＦＲ３；配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３；およびヒト化軽鎖ＦＲ４を含む、軽鎖可変領域を含みうる。
【０１８３】
他の実施形態では、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、およびＣＤＲ−Ｌ３のそれぞれのアミノ酸配列は、配列番号２４、配列番号２５、および配列番号２６である。
【０１８４】
例えば、対象抗体は、Ｎ末端からＣ末端への順序で、ヒト化軽鎖ＦＲ１；配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１；ヒト化軽鎖ＦＲ２；配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２；ヒト化軽鎖ＦＲ３；配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３；およびヒト化軽鎖ＦＲ４を含む、軽鎖可変領域を含みうる。
【０１８５】
他の実施形態では、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、およびＣＤＲ−Ｌ３のそれぞれのアミノ酸配列は、配列番号４および２４（ＣＤＲ−Ｌ１）；配列番号５および２５（ＣＤＲ−Ｌ２）；ならびに配列番号６および２６（ＣＤＲ−Ｌ３）から選択される。
【０１８６】
例えば、対象抗体は、Ｎ末端からＣ末端への順序で、ヒト化軽鎖ＦＲ１；配列番号４および２４から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１；ヒト化軽鎖ＦＲ２；配列番号５および２５から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２；ヒト化軽鎖ＦＲ３；配列番号６および２６から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３；ならびにヒト化軽鎖ＦＲ４を含む、軽鎖可変領域を含みうる。
【０１８７】
他の実施形態では、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、およびＣＤＲ−Ｌ３のそれぞれのアミノ酸配列は、配列番号１１、配列番号１２、および配列番号１３である。
【０１８８】
例えば、対象抗体は、Ｎ末端からＣ末端への順序で、ヒト化軽鎖ＦＲ１；配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１；ヒト化軽鎖ＦＲ２；配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２；ヒト化軽鎖ＦＲ３；配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３；およびヒト化軽鎖ＦＲ４を含む、軽鎖可変領域を含みうる。
【０１８９】
他の実施形態では、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、およびＣＤＲ−Ｌ３のそれぞれのアミノ酸配列は、配列番号１４、配列番号１５、および配列番号１６である。
【０１９０】
例えば、対象抗体は、Ｎ末端からＣ末端への順序で、ヒト化軽鎖ＦＲ１；配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１；ヒト化軽鎖ＦＲ２；配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２；ヒト化軽鎖ＦＲ３；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３；およびヒト化軽鎖ＦＲ４を含む、軽鎖可変領域を含みうる。
【０１９１】
他の実施形態では、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、およびＣＤＲ−Ｌ３のそれぞれのアミノ酸配列は、配列番号３４、配列番号３５、および配列番号３６である。
【０１９２】
例えば、対象抗体は、Ｎ末端からＣ末端への順序で、ヒト化軽鎖ＦＲ１；配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１；ヒト化軽鎖ＦＲ２；配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２；ヒト化軽鎖ＦＲ３；配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３；およびヒト化軽鎖ＦＲ４を含む、軽鎖可変領域を含みうる。
【０１９３】
他の実施形態では、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、およびＣＤＲ−Ｌ３のそれぞれのアミノ酸配列は、配列番号１４および３４（ＣＤＲ−Ｌ１）；配列番号１５および３５（ＣＤＲ−Ｌ２）；ならびに配列番号１６および３６（ＣＤＲ−Ｌ３）から選択される。
【０１９４】
例えば、対象抗体は、Ｎ末端からＣ末端への順序で、ヒト化軽鎖ＦＲ１；配列番号１４および３４から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１；ヒト化軽鎖ＦＲ２；配列番号１５および３５から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２；ヒト化軽鎖ＦＲ３；配列番号１６および３６から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３；ならびにヒト化軽鎖ＦＲ４を含む、軽鎖可変領域を含みうる。
【０１９５】
一部の実施形態では、対象の抗ＬＡＧ−３抗体は、ヒト化された、１つ、２つ、３つ、または４つの重鎖ＦＲを含む重鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、対象抗体は、Ｎ末端からＣ末端への順序で、ヒト化重鎖ＦＲ１；本明細書で明示されるＣＤＲ−Ｈ１；ヒト化重鎖ＦＲ２；本明細書で明示されるＣＤＲ−Ｈ２；ヒト化重鎖ＦＲ３；本明細書で明示されるＣＤＲ−Ｈ３；およびヒト化重鎖ＦＲ４を含む、重鎖可変領域を含む。
【０１９６】
一部の実施形態では、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、およびＣＤＲ−Ｈ３のそれぞれのアミノ酸配列は、配列番号４、配列番号５、および配列番号６である。
【０１９７】
例えば、対象抗体は、Ｎ末端からＣ末端への順序で、ヒト化重鎖ＦＲ１；配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１；ヒト化重鎖ＦＲ２；配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２；ヒト化重鎖ＦＲ３；配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３；およびヒト化重鎖ＦＲ４を含む、重鎖可変領域を含みうる。
【０１９８】
他の実施形態では、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、およびＣＤＲ−Ｈ３のそれぞれのアミノ酸配列は、配列番号１、配列番号２、および配列番号３である。
【０１９９】
例えば、対象抗体は、Ｎ末端からＣ末端への順序で、ヒト化重鎖ＦＲ１；配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１；ヒト化重鎖ＦＲ２；配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２；ヒト化重鎖ＦＲ３；配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３；およびヒト化重鎖ＦＲ４を含む、重鎖可変領域を含みうる。
【０２００】
他の実施形態では、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、およびＣＤＲ−Ｈ３のそれぞれのアミノ酸配列は、配列番号２１、配列番号２２、および配列番号２３である。
【０２０１】
例えば、対象抗体は、Ｎ末端からＣ末端への順序で、ヒト化重鎖ＦＲ１；配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１；ヒト化重鎖ＦＲ２；配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２；ヒト化重鎖ＦＲ３；配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３；およびヒト化重鎖ＦＲ４を含む、重鎖可変領域を含みうる。
【０２０２】
他の実施形態では、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、およびＣＤＲ−Ｈ３のそれぞれのアミノ酸配列は、配列番号１および２１（ＣＤＲ−Ｈ１）；配列番号２および２２（ＣＤＲ−Ｈ２）；ならびに配列番号３および２３（ＣＤＲ−Ｈ３）から選択される。
【０２０３】
例えば、対象抗体は、Ｎ末端からＣ末端への順序で、ヒト化重鎖ＦＲ１；配列番号１および２１から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１；ヒト化重鎖ＦＲ２；配列番号２および２２から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２；ヒト化重鎖ＦＲ３；配列番号３および２３から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３；ならびにヒト化重鎖ＦＲ４を含む、重鎖可変領域を含みうる。
【０２０４】
他の実施形態では、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、およびＣＤＲ−Ｈ３のそれぞれのアミノ酸配列は、配列番号１４、配列番号１５、および配列番号１６である。
【０２０５】
例えば、対象抗体は、Ｎ末端からＣ末端への順序で、ヒト化重鎖ＦＲ１；配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１；ヒト化重鎖ＦＲ２；配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２；ヒト化重鎖ＦＲ３；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３；およびヒト化重鎖ＦＲ４を含む、重鎖可変領域を含みうる。
【０２０６】
他の実施形態では、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、およびＣＤＲ−Ｈ３のそれぞれのアミノ酸配列は、配列番号１１、配列番号１２、および配列番号１３である。
【０２０７】
例えば、対象抗体は、Ｎ末端からＣ末端への順序で、ヒト化重鎖ＦＲ１；配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１；ヒト化重鎖ＦＲ２；配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２；ヒト化重鎖ＦＲ３；配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３；およびヒト化重鎖ＦＲ４を含む、重鎖可変領域を含みうる。
【０２０８】
他の実施形態では、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、およびＣＤＲ−Ｈ３のそれぞれのアミノ酸配列は、配列番号３１、配列番号３２、および配列番号３３である。
【０２０９】
例えば、対象抗体は、Ｎ末端からＣ末端への順序で、ヒト化重鎖ＦＲ１；配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１；ヒト化重鎖ＦＲ２；配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２；ヒト化重鎖ＦＲ３；配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３；およびヒト化重鎖ＦＲ４を含む、重鎖可変領域を含みうる。
【０２１０】
他の実施形態では、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、およびＣＤＲ−Ｈ３のそれぞれのアミノ酸配列は、配列番号１１および３１（ＣＤＲ−Ｈ１）；配列番号１２および３２（ＣＤＲ−Ｈ２）；ならびに配列番号１３および３３（ＣＤＲ−Ｈ３）から選択される。
【０２１１】
例えば、対象抗体は、Ｎ末端からＣ末端への順序で、ヒト化重鎖ＦＲ１；配列番号１１および３１から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１；ヒト化重鎖ＦＲ２；配列番号１２および３２から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２；ヒト化重鎖ＦＲ３；配列番号１３および３３から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３；ならびにヒト化重鎖ＦＲ４を含む、重鎖可変領域を含みうる。
【０２１２】
適切なヒト化フレームワーク配列の例は、
ＶＨバリアント１（ＶＨ１）
ＶＨ１  ＦＲ１：QVTLKESGPALVKPTQTLTLTCTFS（配列番号５２）；
ＶＨ１  ＦＲ２：WIRQPPGKALEWLA（配列番号５３）；
ＶＨ１  ＦＲ３：RLTISKDTSKSQVILNMTNMDPVDTATYYC（配列番号５４）；および
ＶＨ１  ＦＲ４：WGQGTTVTVSS（配列番号５５）；
ＶＨバリアント２（ＶＨ２）
ＶＨ２  ＦＲ１：QITLKESGPALVKPTQTLTLTCSFS（配列番号５６）；
ＶＨ２  ＦＲ２：WIRQPPGKALEWLA（配列番号５７）；
ＶＨ２  ＦＲ３：RLTISKDTSKNQVVLTMANMDPVDTATYYC（配列番号５８）；
ＶＨ２  ＦＲ４：WGQGTTVTVSS（配列番号５９）；
ＶＨバリアント３（ＶＨ３）
ＶＨ３  ＦＲ１：QITLKETGPTLVKPTQTLTLTCTFS（配列番号６０）；
ＶＨ３  ＦＲ２：WIRQPPGKALEWVT（配列番号６１）；
ＶＨ３  ＦＲ３：RVTIRKDTSKNQVALTMTNMDPLDTGTYYC（配列番号６２）；
ＶＨ３  ＦＲ４：WGQGTLVTVSS（配列番号６３）；
ＶＨバリアント４（ＶＨ４）
ＶＨ４  ＦＲ１：QITLKESGPTLVKPTQTLTLTCTFS（配列番号６４）；
ＶＨ４  ＦＲ２：WIRQPPGKTLEWLT（配列番号６５）；
ＶＨ４  ＦＲ３：RLSITKDTSKNQVVLTMTNMDPLDTGTYYC（配列番号６６）；
ＶＨ４  ＦＲ４：WGQGTLVTVSS（配列番号６７）；
ＶＬバリアント１（ＶＬ１）
ＶＬ１  ＦＲ１：DIVMTQSPDSLAVSLGERATINC（配列番号６８）；
ＶＬ１  ＦＲ２：WYQQKPGQPPKLLIY（配列番号６９）；
ＶＬ１  ＦＲ３：GVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYC（配列番号７０）；および
ＶＬ１  ＦＲ４：ＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号７１）
ＶＬバリアント２（ＶＬ２）
ＶＬ２  ＦＲ１：DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC（配列番号７２）；
ＶＬ２  ＦＲ２：WYQQKPGQAPKLLIF（配列番号７３）；
ＶＬ２  ＦＲ３：GVPSRFSGSGSGTDFTLTLSSLQPEDFATYYC（配列番号７４）；および
ＶＬ２  ＦＲ４：FGQGTKVEIK（配列番号７５）
ＶＬバリアント３（ＶＬ３）
ＶＬ３  ＦＲ１：DIVMTQTPSSLSASVGDRVTITC（配列番号７６）；
ＶＬ３  ＦＲ２：WYQQRPGQAPKLLIY（配列番号７７）；
ＶＬ３  ＦＲ３：GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC（配列番号７８）；および
ＶＬ３  ＦＲ４：FGQGTRLDIK（配列番号７９）
ＶＬバリアント４（ＶＬ４）
ＶＬ４  ＦＲ１：EIVLTQSPDSLAVSLGERATINC（配列番号８０）；
ＶＬ４  ＦＲ２：WYQQKAGQSPKLLIY（配列番号８１）；
ＶＬ４  ＦＲ３：GVPDRFSGSGSGTDFTLTIDSLQAEDVAVYYC（配列番号８２）；および
ＶＬ４  ＦＲ４：FGGGTKVEIK（配列番号８３）
を含む。
【０２１３】
元のマウス抗体１３Ｅ２の対応する配列とアライメントして、ヒト化ＶＨバリアント１〜４およびヒト化ＶＬバリアント１〜４の可変領域の配列を、図２２に示す。ＣＤＲ配列を、グレーで強調する。元のマウス配列と比較したバリアントのヒト化フレームワーク配列の変化が、下線および太字で示されている。各バリアントについて、ヒト化配列内で変化させた残基もまた、実施例１８の表２６（重鎖配列）および２７（軽鎖配列）に明示する。
【０２１４】
一部の実施形態では、本発明のヒト化抗体（またはその抗原結合性断片）は、ＶＨ１、ＶＨ２、ＶＨ３、もしくはＶＨ４について表２６に示したアミノ酸置換のうちのいずれかを含むヒト化重鎖、および／またはＶＬ１、ＶＬ２、ＶＬ３、もしくはＶＬ４について表２７に示したアミノ酸置換のうちのいずれかを含むヒト化軽鎖を含む。
【０２１５】
本発明の抗体またはその抗原結合性断片（特に、本発明のヒト化抗体またはその抗原結合性断片）は、上記のヒト化フレームワーク配列（配列番号５２〜８３）のうちのいずれか、または上記のヒト化フレームワーク配列（配列番号５２〜８３）の任意の組合せを含みうる。
【０２１６】
一部の実施形態では、ヒト化重鎖フレームワーク領域は、配列番号５２、５３、５４、もしくは５５のうちのいずれか；配列番号５６、５７、５８、もしくは５９のうちのいずれか；配列番号６０、６１、６２、もしくは６３のうちのいずれか；または配列番号６４、６５、６６、もしくは６７のうちのいずれかのアミノ酸配列を含みうる。
【０２１７】
特定の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片（特に、本発明のヒト化抗体またはその抗原結合性断片）は、
配列番号５２のＶＨフレームワーク領域１（ＶＨ  ＦＲ１）；配列番号５３のＶＨ  ＦＲ２；配列番号５４のＶＨ  ＦＲ３；および配列番号５５のＶＨ  ＦＲ４；
配列番号５６のＶＨフレームワーク領域１（ＶＨ  ＦＲ１）；配列番号５７のＶＨ  ＦＲ２；配列番号５８のＶＨ  ＦＲ３；および配列番号５９のＶＨ  ＦＲ４；
配列番号６０のＶＨフレームワーク領域１（ＶＨ  ＦＲ１）；配列番号６１のＶＨ  ＦＲ２；配列番号６２のＶＨ  ＦＲ３；および配列番号６３のＶＨ  ＦＲ４；または
配列番号６４のＶＨフレームワーク領域１（ＶＨ  ＦＲ１）；配列番号６５のＶＨ  ＦＲ２；配列番号６６のＶＨ  ＦＲ３；および配列番号６７のＶＨ  ＦＲ４
を含み得る。
【０２１８】
代替的に、または加えて、一部の実施形態では、ヒト化軽鎖フレームワーク領域は、配列番号６８、６９、７０、もしくは７１のうちのいずれか；配列番号７２、７３、７４、もしくは７５のうちのいずれか；配列番号７６、７７、７８、もしくは７９のうちのいずれか；または配列番号８０、８１、８２、もしくは８３のうちのいずれかのアミノ酸配列を含みうる。
【０２１９】
特定の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片（特に、本発明のヒト化抗体またはその抗原結合性断片）は、
配列番号６８のＶＬフレームワーク領域１（ＶＬ  ＦＲ１）；配列番号６９のＶＬ  ＦＲ２；配列番号７０のＶＬ  ＦＲ３；および配列番号７１のＶＬ  ＦＲ４；
配列番号７２のＶＬフレームワーク領域１（ＶＬ  ＦＲ１）；配列番号７３のＶＬ  ＦＲ２；配列番号７４のＶＬ  ＦＲ３；および配列番号７５のＶＬ  ＦＲ４；
配列番号７６のＶＬフレームワーク領域１（ＶＬ  ＦＲ１）；配列番号７７のＶＬ  ＦＲ２；配列番号７８のＶＬ  ＦＲ３；および配列番号７９のＶＬ  ＦＲ４；または
配列番号８０のＶＬフレームワーク領域１（ＶＬ  ＦＲ１）；配列番号８１のＶＬ  ＦＲ２；配列番号８２のＶＬ  ＦＲ３；および配列番号８３のＶＬ  ＦＲ４を含みうる。
【０２２０】
特定の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片（特に、本発明のヒト化抗体またはその抗原結合性断片）は、ヒト化フレームワーク配列の以下の組合せ：
ＶＨ１  ＦＲ１−ＦＲ４；およびＶＬ１  ＦＲ１−ＦＲ４；
ＶＨ１  ＦＲ１−ＦＲ４；およびＶＬ２  ＦＲ１−ＦＲ４；
ＶＨ１  ＦＲ１−ＦＲ４；およびＶＬ３  ＦＲ１−ＦＲ４；
ＶＨ１  ＦＲ１−ＦＲ４；およびＶＬ４  ＦＲ１−ＦＲ４；
ＶＨ２  ＦＲ１−ＦＲ４；およびＶＬ１  ＦＲ１−ＦＲ４；
ＶＨ２  ＦＲ１−ＦＲ４；およびＶＬ２  ＦＲ１−ＦＲ４；
ＶＨ２  ＦＲ１−ＦＲ４；およびＶＬ３  ＦＲ１−ＦＲ４；
ＶＨ２  ＦＲ１−ＦＲ４；およびＶＬ４  ＦＲ１−ＦＲ４；
ＶＨ３  ＦＲ１−ＦＲ４；およびＶＬ１  ＦＲ１−ＦＲ４；
ＶＨ３  ＦＲ１−ＦＲ４；およびＶＬ２  ＦＲ１−ＦＲ４；
ＶＨ３  ＦＲ１−ＦＲ４；およびＶＬ３  ＦＲ１−ＦＲ４；
ＶＨ３  ＦＲ１−ＦＲ４；およびＶＬ４  ＦＲ１−ＦＲ４；
ＶＨ４  ＦＲ１−ＦＲ４；およびＶＬ１  ＦＲ１−ＦＲ４；
ＶＨ４  ＦＲ１−ＦＲ４；およびＶＬ２  ＦＲ１−ＦＲ４；
ＶＨ４  ＦＲ１−ＦＲ４；およびＶＬ３  ＦＲ１−ＦＲ４；
ＶＨ４  ＦＲ１−ＦＲ４；およびＶＬ４  ＦＲ１−ＦＲ４
のうちのいずれかを含みうる。
【０２２１】
特定の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片（特に、本発明のヒト化抗体またはその抗原結合性断片）は、以下のヒト化フレームワーク配列を含む：
ＶＨ４  ＦＲ１：ＱＩＴＬＫＥＳＧＰＴＬＶＫＰＴＱＴＬＴＬＴＣＴＦＳ（配列番号６４）；
ＶＨ４  ＦＲ２：ＷＩＲＱＰＰＧＫＴＬＥＷＬＴ（配列番号６５）；
ＶＨ４  ＦＲ３：ＲＬＳＩＴＫＤＴＳＫＮＱＶＶＬＴＭＴＮＭＤＰＬＤＴＧＴＹＹＣ（配列番号６６）；  ａｎｄ
ＶＨ４  ＦＲ４：ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号６７）；  ａｎｄ
ＶＬ３  ＦＲ１：ＤＩＶＭＴＱＴＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号７６）；
ＶＬ３  ＦＲ２：ＷＹＱＱＲＰＧＱＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号７７）；
ＶＬ３  ＦＲ３：ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号７８）；および
ＶＬ３  ＦＲ４：ＦＧＱＧＴＲＬＤＩＫ（配列番号７９）。
【０２２２】
特定の実施形態では、本発明の単離抗体またはその抗原結合性断片は、
配列番号５２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１；配列番号１および２１から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号５３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２；配列番号２および２２から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号５４のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３；配列番号３および２３から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３；ならびに配列番号５５のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４；
配列番号５２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１；配列番号１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号５３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２；配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号５４のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３；配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３；ならびに配列番号５５のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４；
配列番号５２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１；配列番号２１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号５３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２；配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号５４のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３；配列番号２３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３；および配列番号５５のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４；
配列番号５６のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１；配列番号１および２１から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号５７のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２；配列番号２および２２から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号５８のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３；配列番号３および２３から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３；および配列番号５９のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４；
配列番号５６のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１；配列番号１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号５７のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２；配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号５８のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３；配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３；および配列番号５９のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４；
配列番号５６のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１；配列番号２１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号５７のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２；配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号５８のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３；配列番号２３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３；および配列番号５９のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４；
配列番号６０のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１；配列番号１および２１から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号６１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２；配列番号２および２２から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号６２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３；配列番号３および２３から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３；および配列番号６３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４；
配列番号６０のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１；配列番号１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号６１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２；配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号６２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３；配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３；および配列番号６３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４；
配列番号６０のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１；配列番号２１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号６１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２；配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号６２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３；配列番号２３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３；および配列番号６３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４；
配列番号６４のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１；配列番号１および２１から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号６５のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２；配列番号２および２２から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号６６のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３；配列番号３および２３から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３；および配列番号６７のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４；
配列番号６４のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１；配列番号１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号６５のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２；配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号６６のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３；配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３；および配列番号６７のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４；または
配列番号６４のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１；配列番号２１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号６５のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２；配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号６６のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３；配列番号２３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３；および配列番号６７のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４
を含む抗体ＶＨ領域を含む。
【０２２３】
特定の実施形態では、本発明の単離抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号８４のアミノ酸配列を含む抗体重鎖を含む。
【０２２４】
あるいは、または加えて、特定の実施形態では、本発明の単離抗体またはその抗原結合性断片は、
配列番号６８のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１；配列番号４および２４から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号６９のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２；配列番号５および２５から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号７０のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３；配列番号６および２６から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３；ならびに配列番号７１のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４；
配列番号６８のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１；配列番号４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号６９のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２；配列番号５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号７０のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３；配列番号６のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３；ならびに配列番号７１のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４；
配列番号６８のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１；配列番号２４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号６９のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２；配列番号２５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号７０のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３；配列番号２６のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３；ならびに配列番号７１のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４；
配列番号７２のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１；配列番号４および２４から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号７３のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２；配列番号５および２５から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号７４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３；配列番号６および２６から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３；ならびに配列番号７５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４；
配列番号７２のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１；配列番号４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号７３のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２；配列番号５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号７４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３；配列番号６のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３；ならびに配列番号７５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４；
配列番号７２のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１；配列番号２４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号７３のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２；配列番号２５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号７４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３；配列番号２６のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３；ならびに配列番号７５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４；
配列番号７６のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１；配列番号４および２４から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号７７のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２；配列番号５および２５から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号７８のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３；配列番号６および２６から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３；ならびに配列番号７９のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４；
配列番号７６のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１；配列番号４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号７７のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２；配列番号５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号７８のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３；配列番号６のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３；ならびに配列番号７９のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４；
配列番号７６のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１；配列番号２４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号７７のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２；配列番号２５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号７８のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３；配列番号２６のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３；ならびに配列番号７９のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４；
配列番号８０のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１；配列番号４および２４から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号８１のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２；配列番号５および２５から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号８２のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３；配列番号６および２６から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３；ならびに配列番号８３のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４；
配列番号８０のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１；配列番号４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号８１のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２；配列番号５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号８２のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３；配列番号６から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３；ならびに配列番号８３のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４；または
配列番号８０のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１；配列番号２４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号８１のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２；配列番号２５から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号８２のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３；配列番号２６から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３；ならびに配列番号８３のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４
を含む抗体ＶＬ領域を含む。
【０２２５】
特定の実施形態では、本発明の単離抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号８５のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖を含む。
【０２２６】
さらなる特定の実施形態では、本発明の単離抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号８４のアミノ酸配列を含む抗体重鎖、および配列番号８５のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖を含む。
【０２２７】
他の実施形態では、本発明の単離抗体またはその抗原結合性断片は、
配列番号５２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１；配列番号１１および３１から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号５３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２；配列番号１２および３２から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号５４のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３；配列番号１３および３３から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３；および配列番号５５のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４；
配列番号５２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１；配列番号１１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号５３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２；配列番号１２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号５４のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３；配列番号１３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３；および配列番号５５のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４；
配列番号５２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１；配列番号３１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号５３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２；配列番号３２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号５４のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３；配列番号３３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３；および配列番号５５のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４；
配列番号５６のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１；配列番号１１および３１から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号５７のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２；配列番号１２および３２から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号５８のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３；配列番号１３および３３から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３；および配列番号５９のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４；
配列番号５６のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１；配列番号１１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号５７のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２；配列番号１２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号５８のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３；配列番号１３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３；および配列番号５９のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４；
配列番号５６のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１；配列番号３１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号５７のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２；配列番号３２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号５８のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３；配列番号３３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３；および配列番号５９のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４；
配列番号６０のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１；配列番号１１および３１から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号６１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２；配列番号１２および３２から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号６２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３；配列番号１３および３３から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３；および配列番号６３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４；
配列番号６０のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１；配列番号１１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号６１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２；配列番号１２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号６２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３；配列番号１３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３；および配列番号６３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４；
配列番号６０のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１；配列番号３１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号６１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２；配列番号３２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号６２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３；配列番号３３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３；および配列番号６３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４；
配列番号６４のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１；配列番号１１および３１から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号６５のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２；配列番号１２および３２から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号６６のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３；配列番号１３および３３から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３；および配列番号６７のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４；
配列番号６４のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１；配列番号１１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号６５のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２；配列番号１２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号６６のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３；配列番号１３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３；および配列番号６７のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４；または
配列番号６４のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１；配列番号３１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号６５のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２；配列番号３２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号６６のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３；配列番号３３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３；および配列番号６７のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４
を含む抗体ＶＨ領域を含む。
【０２２８】
あるいは、または加えて、特定の実施形態では、本発明の単離抗体またはその抗原結合性断片は、
配列番号６８のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１；配列番号１４および３４から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号６９のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２；配列番号１５および３５から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号７０のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３；配列番号１６および３６から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３；ならびに配列番号７１のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４；
配列番号６８のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１；配列番号１４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号６９のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２；配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号７０のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３；配列番号１６のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３；ならびに配列番号７１のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４；
配列番号６８のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１；配列番号３４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号６９のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２；配列番号３５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号７０のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３；配列番号３６のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３；ならびに配列番号７１のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４；
配列番号７２のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１；配列番号１４および３４から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号７３のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２；配列番号１５および３５から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号７４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３；配列番号１６および３６から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３；ならびに配列番号７５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４；
配列番号７２のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１；配列番号１４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号７３のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２；配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号７４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３；配列番号１６のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３；ならびに配列番号７５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４；
配列番号７２のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１；配列番号３４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号７３のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２；配列番号３５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号７４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３；配列番号３６のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３；ならびに配列番号７５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４；
配列番号７６のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１；配列番号１４および３４から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号７７のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２；配列番号１５および３５から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号７８のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３；配列番号１６および３６から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３；ならびに配列番号７９のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４；
配列番号７６のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１；配列番号１４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号７７のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２；配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号７８のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３；配列番号１６のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３；ならびに配列番号７９のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４；
配列番号７６のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１；配列番号３４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号７７のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２；配列番号３５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号７８のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３；配列番号３６のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３；ならびに配列番号７９のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４；
配列番号８０のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１；配列番号１４および３４から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号８１のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２；配列番号１５および３５から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号８２のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３；配列番号１６および３６から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３；ならびに配列番号８３のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４；
配列番号８０のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１；配列番号１４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号８１のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２；配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号８２のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３；配列番号１６のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３；ならびに配列番号８３のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４；または
配列番号８０のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１；配列番号３４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号８１のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２；配列番号３５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号８２のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３；配列番号３６のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３；ならびに配列番号８３のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４
を含む抗体ＶＬ領域を含む。場合によって、対象抗体は、免疫グロブリンの定常領域（例えば、Ｆｃ領域）を含む。一部の実施形態では、存在する場合、Ｆｃ領域は、ヒトＦｃ領域である。定常領域が存在する場合、抗体は、軽鎖定常領域および重鎖定常領域の両方を含有しうる。適切な重鎖定常領域は、ＣＨ１領域、ヒンジ領域、ＣＨ２領域、ＣＨ３領域、およびＣＨ４領域を含む。
【０２２９】
適切な重鎖Ｆｃ領域の例は、ヒトアイソタイプＩｇＧ４  Ｆｃである。軽鎖定常領域は、ラムダまたはカッパでありうる。対象抗体（例えば、対象のヒト化抗体）は、１つを超えるクラスまたはアイソタイプに由来する配列を含みうる。抗体は、２つの軽鎖および２つの重鎖を含有する四量体として、個別の重鎖、軽鎖として、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖとして、または重鎖可変ドメインと、軽鎖可変ドメインとを、スペーサーを介して連結した単鎖抗体として表すことができる。
【０２３０】
場合によって、重鎖領域は、アイソタイプＩｇＧ４の重鎖領域である。これらの実施形態のうちの一部では、ヒンジ領域は、Ｓ２４１Ｐ置換を含む。例えば、Angalら（１９９３年）、Mol.  Immunol.、３０巻：１０５頁を参照されたい。これらの実施形態のうちの一部では、ヒンジ領域は、Ｌ２３６Ｅ（またはＬ２３５Ｅ；ＥＵ番号付けを使用する；Kabatら（１９９１年）、Sequences  of  Proteins  of  Immunological  Interest、５版、U.S.  Dept.  Health  and  Human  Services、Bethesda、MD、ＮＩＨ刊行物第９１−３２４２号）置換を含む。例えば、Reddyら（２０００年）、J.  Immunol.、１６４巻：１９２５頁；およびKlechevskyら（２０１０年）、Blood、１１６巻：１６８５頁を参照されたい。これらの実施形態のうちの一部では、ヒンジ領域は、Ｓ２４１Ｐ置換およびＬ２３６Ｅ置換を含む。
【０２３１】
定常領域アミノ酸配列は、それが由来する種の定常領域アミノ酸配列（例えば、ヒト配列）と同一である場合もあり、この定常領域アミノ酸配列と、少なくとも６０％、７０％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である場合もある。例えば、本発明の抗体の定常領域アミノ酸配列は、それが由来する種の定常領域アミノ酸配列と比較して、１つまたは複数の、アミノ酸の欠失、置換、または付加（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個の、アミノ酸の欠失、置換、または付加）を含みうる。
【０２３２】
例えば、上で記載した通り、本発明の抗体のＦｃヒンジ領域のアミノ酸配列は、抗体の生物学的半減期を短縮するように変異させることもでき、Ｆｃ領域のアミノ酸配列は、抗体の生物学的半減期を延長するように変異させることもできる。
【０２３３】
本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、抗体または断片を使用して、ＡＤＣＣまたはＣＤＣの結果として、Ｔ細胞を枯渇させることなく、Ｔ細胞の増殖および／または機能を負に調節しうるように、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）および補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）を欠くことを確保するものとする。
【０２３４】
例えば、一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、野生型ヒトＩｇＧ４  Ｆｃ配列を含む。
【０２３５】
他の実施形態では、Ｆｃ領域は、Ｆａｂアーム交換を消失させる、Ｓ２２８Ｐ変異を有する、変異体ヒトＩｇＧ４  Ｆｃ配列（重鎖配列１３Ｅ２ＩｇＧ４ｍｕｔを含むキメラ抗体Ｃｈｉｍ１３Ｅ２ＩｇＧ４については、図２０（Ａ）に示す）を含む。
【０２３６】
他の実施形態では、Ｆｃ領域は、野生型ヒトＩｇカッパ（ＩｇＫ）鎖Ｃ部分（１３Ｅ２ＩｇＫ）（軽鎖配列１３Ｅ２ＩｇＫを含むキメラ抗体Ｃｈｉｍ１３Ｅ２ＩｇＧ４については、図２０（Ｂ）に示す）を含む。
【０２３７】
上で記載した、ヒトＩｇＧ４  Ｆｃ変異体について使用される、Ｆｃ領域内の残基の番号付けは、Ｋａｂａｔにおける、ＥＵインデックスによる、標準的な番号付けである（Kabat,  E.A.ら、Sequences  of  proteins  of  immunological  interest、５版、US  Department  of  Health  and  Human  Services、ＮＩＨ刊行物第９１−３２４２号、６６２、６８０、６８９頁（１９９１年））。
【０２３８】
対象抗体は、抗体を、第２のポリペプチド（例えば、対象抗体を含む別の抗体）、足場、キャリアなどへと付着させるのに使用されうる、カルボキシル末端における遊離チオール（−ＳＨ）基を含みうる。
【０２３９】
一部の実施形態では、対象抗体は、１つまたは複数の自然にはないアミノ酸を含む。一部の実施形態では、非天然コードアミノ酸は、カルボニル基、アセチル基、アミノオキシ基、ヒドラジン基、ヒドラジド基、セミカルバジド基、アジド基、またはアルキン基を含む。例えば、適切な自然にはないアミノ酸については、米国特許第７，６３２，９２４号を参照されたい。自然にはないアミノ酸の組入れは、ポリマー、第２のポリペプチド、足場などへの連結をもたらしうる。例えば、水溶性ポリマーへと連結された対象抗体は、カルボニル基を含む水溶性ポリマー（例えば、ＰＥＧ）を、アミノオキシ基、ヒドラジン基、ヒドラジド基、またはセミカルバジド基を含む非天然コードアミノ酸を含む抗体と反応させることにより作製することができる。別の例として、水溶性ポリマーへと連結された対象抗体は、アルキン含有アミノ酸を含む対象抗体を、アジド部分を含む水溶性ポリマー（例えば、ＰＥＧ）と反応させることにより作製することができ、一部の実施形態では、アジドまたはアルキン基を、アミド連結を介して、ＰＥＧ分子へと連結する。「非天然コードアミノ酸」は、２０の一般的アミノ酸またはピロリシンもしくはセレノシステインのうちの１つではないアミノ酸を指す。「非天然コードアミノ酸」という用語と同義に使用されうる他の用語は、「非天然アミノ酸（ｎｏｎ−ｎａｔｕｒａｌ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ）」、「非天然アミノ酸（ｕｎｎａｔｕｒａｌ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ）」、「自然にはないアミノ酸」、ならびにこれらの様々にハイフンを付した変化形およびこれらのハイフンを付さない変化形である。「非天然コードアミノ酸」という用語はまた、天然コードアミノ酸（２０の一般的アミノ酸またはピロリシンおよびセレノシステインを含むがこれらに限定されない）の修飾（例えば、翻訳後修飾）により生じるが、それ自体、自然では、翻訳複合体により、成長するポリペプチド鎖へと組み込まれないアミノ酸も含むがこれらに限定されない。このような自然にはないアミノ酸の例は、Ｎ−アセチルグルコサミニル−Ｌ−セリン、Ｎ−アセチルグルコサミニル−Ｌ−トレオニン、およびＯ−ホスホチロシンを含むがこれらに限定されない。
【０２４０】
一部の実施形態では、対象抗体を、ポリマー（例えば、ポリペプチド以外のポリマー）へと連結する（例えば、共有結合的に連結する）。適切なポリマーは、例えば、生体適合性ポリマーおよび水溶性の生体適合性ポリマーを含む。適切なポリマーは、合成ポリマーおよび自然におけるポリマーを含む。適切なポリマーは、例えば、置換もしくは非置換の、直鎖もしくは分枝鎖の、ポリアルキレンポリマー、ポリアルケニレンポリマー、もしくはポリオキシアルキレンポリマー、または分枝状もしくは非分枝状の多糖、例えば、ホモ多糖もしくはヘテロ多糖を含む。適切なポリマーは、例えば、エチレンビニルアルコールコポリマー（一般に、一般名であるＥＶＯＨによりまたは商標名であるＥＶＡＬにより公知である）；ポリブチルメタクリレート；ポリ（ヒドロキシバレレート）；ポリ（Ｌ−乳酸）；ポリカプロラクトン；ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）；ポリ（ヒドロキシブチレート）；ポリ（ヒドロキシブチレート−ｃｏ−バレレート）；ポリジオキサノン；ポリオルトエステル；ポリ無水物；ポリ（グリコール酸）；ポリ（Ｄ，Ｌ−乳酸）；ポリ（グリコール酸−ｃｏ−トリメチレンカーボネート）；ポリホスホエステル；ポリホスホエステルウレタン；ポリ（アミノ酸）；シアノアクリレート；ポリ（トリメチレンカーボネート）；ポリ（イミノカーボネート）；ポリ（エーテル−ｃｏ−エステル）（copoly(ether-esters)）（例えば、ポリ（エチレンオキシド）−ポリ（乳酸）（ＰＥＯ／ＰＬＡ）コポリマー）；ポリアルキレンオキサレート；ポリホスファゼン；フィブリン、フィブリノゲン、セルロース、デンプン、コラーゲン、およびヒアルロン酸などの生体分子；ポリウレタン；シリコーン；ポリエステル；ポリオレフィン；ポリイソブチレン、およびエチレン−アルファオレフィンコポリマー；アクリルポリマーおよびアクリルコポリマー；ポリ塩化ビニルなど、ハロゲン化ビニルポリマーおよびハロゲン化ビニルコポリマー；ポリビニルメチルエーテルなどのポリビニルエーテル；ポリフッ化ビニリデンおよびポリ塩化ビニリデンなどのポリハロゲン化ビニリデン；ポリアクリロニトリル；ポリビニルケトン；ポリスチレンなどのポリビニル芳香族化合物；ポリ酢酸ビニルなどのポリビニルエステル；ビニル単量体の互いとのコポリマー、ならびにエチレン−メチルメタクリレートコポリマー、アクリロニトリル−スチレンコポリマー、ＡＢＳ樹脂、およびエチレン−酢酸ビニルコポリマーなどのオレフィン；Ｎｙｌｏｎ  ６６およびポリカプトラクタムなどのポリアミド；アルキド樹脂；ポリカーボネート；ポリオキシメチレン；ポリイミド；ポリエーテル；エポキシ樹脂；ポリウレタン；レーヨン；レーヨン−トリアセテート；セルロース；酢酸セルロース；セルロースブチレート；セルロースアセテートブチレート；セロファン；硝酸セルロース；プロピオン酸セルロース；セルロースエーテル；アモルファスＴｅｆｌｏｎ；ポリ（エチレングリコール）；ならびにカルボキシメチルセルロースを含む。
【０２４１】
適切な合成ポリマーは、非置換または置換の、直鎖または分枝鎖の、ポリ（エチレングリコール）、ポリ（プロピレングリコール）、ポリ（ビニルアルコール）、およびこれらの誘導体、例えば、メトキシポリ（エチレングリコール）などの置換ポリ（エチレングリコール）およびその誘導体を含む。適切な、自然におけるポリマーは、例えば、アルブミン、アミロース、デキストラン、グリコーゲン、およびこれらの誘導体を含む。
【０２４２】
適切なポリマーは、５００Ｄａ〜５０，０００Ｄａ、例えば、５，０００Ｄａ〜４０，０００Ｄａ、または２５，０００〜４０，０００Ｄａの範囲の平均分子量を有しうる。例えば、対象抗体が、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）またはメトキシポリ（エチレングリコール）ポリマーを含む、一部の実施形態では、ＰＥＧまたはメトキシポリ（エチレングリコール）ポリマーは、約０．５キロダルトン（ｋＤａ）〜１ｋＤａ、約１ｋＤａ〜５ｋＤａ、５ｋＤａ〜１０ｋＤａ、１０ｋＤａ〜２５ｋＤａ、２５ｋＤａ〜４０ｋＤａ、または４０ｋＤａ〜６０ｋＤａの範囲の分子量を有しうる。
【０２４３】
上記の通り、一部の実施形態では、対象抗体を、ペプチド以外の合成ポリマーへと共有結合的に連結する。一部の実施形態では、対象抗体を、ＰＥＧポリマーへと共有結合的に連結する。一部の実施形態では、対象ｓｃＦｖ多量体を、ＰＥＧポリマーへと共有結合的に連結する。例えば、Albrechtら（２００６年）、J.  Immunol.  Methods、３１０巻：１００頁を参照されたい。タンパク質のＰＥＧ化に適する方法および試薬が当技術分野で周知であり、例えば、米国特許第５，８４９，８６０号において見出すことができる。タンパク質へのコンジュゲーションに適するＰＥＧは一般に、室温で、水に可溶性であり、一般式Ｒ（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｎＯ−Ｒ［式中、Ｒは、水素またはアルキル基またはアルカノール基などの保護基であり、ｎは、１〜１，０００の整数である］を有する。Ｒが保護基である場合、Ｒは一般に１〜８個の炭素を有する。
【０２４４】
一部の実施形態では、対象抗体へとコンジュゲートさせるＰＥＧは、直鎖状である。一部の実施形態では、対象抗体へとコンジュゲートさせるＰＥＧは、分枝状である。米国特許第５，６４３，５７５号において記載されている分枝状ＰＥＧ誘導体である、「スターＰＥＧ」などの分枝状ＰＥＧ誘導体、およびＳｈｅａｒｗａｔｅｒ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ，Ｉｎｃ．のカタログである、「Polyethylene  Glycol  Derivatives  1997-1998」において記載されているマルチアーム型ＰＥＧなどのマルチアーム型ＰＥＧ。スターＰＥＧは、例えば、米国特許第６，０４６，３０５号を含め、当技術分野で記載されている。
【０２４５】
対象抗体は、グリコシル化することができる、例えば、対象抗体は、共有結合的に連結された炭水化物部分または多糖部分を含みうる。抗体のグリコシル化は、典型的に、Ｎ連結型またはＯ連結型である。Ｎ連結型は、炭水化物部分の、アスパラギン残基の側鎖への付着を指す。トリペプチド配列である、アスパラギン−Ｘ−セリンおよびアスパラギン−Ｘ−トレオニン［配列中、Ｘは、プロリンを除く任意のアミノ酸である］は、炭水化物部分の、アスパラギン側鎖への酵素的付着のための認識配列である。したがって、これらのトリペプチド配列のうちのいずれかの、ポリペプチド内の存在は、潜在的なグリコシル化部位を創出する。Ｏ連結型グリコシル化は、糖であるＮ−アセチルガラクトサミン、ガラクトース、またはキシロースのうちの１つの、５−ヒドロキシプロリンまたは５−ヒドロキシリシンもまた使用されうるが、最も一般には、セリンまたはトレオニンである、ヒドロキシアミノ酸への付着を指す。
【０２４６】
グリコシル化部位の、抗体への付加は、アミノ酸配列を、それが、上で記載したトリペプチド配列のうちの１つまたは複数を含有するように変更することにより、簡便に達せられる（Ｎ連結型グリコシル化部位の場合）。変更はまた、元の抗体の配列に対する、１つまたは複数のセリン残基またはトレオニン残基の付加により、またはこれらによる置換により施すこともできる（Ｏ連結型グリコシル化部位の場合）。同様に、グリコシル化部位の除去も、抗体の天然のグリコシル化部位内のアミノ酸の変更により達することができる。
【０２４７】
一部の実施形態では、対象抗体は、「放射線不透過性」標識、例えば、ｘ線を使用して、例えば、容易に視覚化されうる標識を含む。当業者には、放射線不透過性材料が周知である。最も一般的な放射線不透過性材料は、ヨウ化物塩、臭化物塩、またはバリウム塩を含む。他の放射線不透過性材料もまた公知であり、有機ビスマス誘導体（例えば、米国特許第５，９３９，０４５号を参照されたい）、放射線不透過性マルチウレタン（米国特許第５，３４６，９８１号を参照されたい）、有機ビスマス複合体（例えば、米国特許第５，２５６，３３４号を参照されたい）、放射線不透過性バリウム多量体複合体（例えば、米国特許第４，８６６，１３２号を参照されたい）などを含むがこれらに限定されない。
【０２４８】
対象抗体は、例えば、グルタルアルデヒド、ホモ二官能性架橋剤、またはヘテロ二官能性架橋剤を使用して、第２の部分（例えば、脂質、対象抗体以外のポリペプチド、合成ポリマー、炭水化物など）へと、共有結合的に連結することができる。グルタルアルデヒドは、それらのアミノ部分を介して、ポリペプチドを架橋する。ホモ二官能性架橋剤（例えば、ホモ二官能性イミドエステル、ホモ二官能性Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル（ＮＨＳ）エステル、またはホモ二官能性スルフヒドリル反応性架橋剤）は、２つまたはこれを超える、同一な反応性部分を含有し、架橋剤を、連結されるポリペプチドの混合物を含有する溶液へと添加する、１ステップの反応手順において使用することができる。ホモ二官能性のＮＨＳエステルおよびイミドエステルは、アミン含有ポリペプチドを架橋する。弱いアルカリ性のｐＨでは、イミドエステルは、一級アミンだけと反応して、イミドアミドを形成し、架橋されたポリペプチド全体の電荷には影響を及ぼさない。ホモ二官能性スルフヒドリル反応性架橋剤は、ビスマレイミドヘキサン（ＢＭＨ）、１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン（ＤＦＤＮＢ）、および１，４−ジ−（３’，２’−ピリジルジチオ）プロピノアミドブタン（ＤＰＤＰＢ）を含む。
【０２４９】
ヘテロ二官能性架橋剤は、２つまたはこれを超える、異なる反応性部分（例えば、アミン反応性部分およびスルフヒドリル反応性部分）を有し、アミン反応性部分またはスルフヒドリル反応性部分を介して、ポリペプチドのうちの１つと架橋し、次いで、非反応部分を介して、他のポリペプチドと反応する。ピリジルジスルフィド架橋剤がそうであるように、複数のヘテロ二官能性ハロアセチル架橋剤が利用可能である。カルボジイミドは、カルボキシルを、アミンへとカップリングする結果として、アミド結合をもたらす、ヘテロ二官能性架橋試薬の古典的な例である。
【０２５０】
対象抗体は、固体支持体上に固定化することができる。適切な支持体が当技術分野で周知であり、とりわけ、市販されているカラム材料、ポリスチレンビーズ、ラテックスビーズ、磁気ビーズ、コロイド金属粒子、ガラスチップおよびガラス表面ならびに／またはケイ素チップおよびケイ素表面、ニトロセルロースストリップ、ナイロン膜、シート、ｄｕｒａｃｙｔｅ、反応トレーのウェル（例えば、マルチウェルプレート）、プラスチックチューブなどを含む。固体支持体は、例えば、ガラス、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリカーボネート、デキストラン、ナイロン、アミロース、天然セルロースおよび修飾セルロース、ポリアクリルアミド、アガロース、ならびにマグネタイトを含む、様々な物質のうちのいずれかを含みうる。対象抗体を、固体支持体へと固定化するのに適する方法は周知であり、イオン性相互作用、疎水性相互作用、共有結合的相互作用などを含むがこれらに限定されない。固体支持体は、例えば、水溶液中で、可溶性であっても、不溶性であってもよい。一部の実施形態では、適切な固体支持体は一般に、水溶液中で、不溶性である。
【０２５１】
一部の実施形態では、対象抗体は、検出可能な標識を含む。適切な検出可能な標識は、分光的手段、光化学的手段、生化学的手段、免疫化学的手段、電気的手段、光学的手段、または化学的手段により検出可能な、任意の組成物を含む。適切な標識は、磁気ビーズ（例えば、Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（商標））、蛍光色素（例えば、フルオレセインイソチオシアネート、テキサスレッド、ローダミン、緑色蛍光タンパク質、赤色蛍光タンパク質、黄色蛍光タンパク質など）、放射性標識（例えば、３Ｈ、１２５Ｉ、３５Ｓ、１４Ｃ、または３２Ｐ）、酵素（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ルシフェラーゼ、および酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）で一般に使用される他の酵素）、および金コロイド、または有色ガラスまたは有色プラスチック（例えば、ポリスチレン、ポリプロピレン、ラテックスなど）ビーズなどの比色標識を含むがこれらに限定されない。
【０２５２】
一部の実施形態では、対象抗体は、イメージング、例えば、ヒトにおいて実行されるイメージング手順における使用に適する、造影剤または放射性同位元素を含む。標識の非限定的な例は、１２３１Ｉ（ヨウ素）、１８Ｆ（フッ素）、９９Ｔｃ（テクネシウム）、１１１Ｉｎ（インジウム）、および６７Ｇａ（ガリウム）などの放射性同位元素、ならびにガドリニウム（Ｇｄ）、ジスプロシウム、および鉄などの造影剤を含む。Ｇｄの放射性同位体（１５３Ｇｄ）もまた、利用可能であり、非ヒト哺乳動物におけるイメージング手順に適する。
【０２５３】
対象抗体は、標準的な技法を使用して標識することができる。例えば、対象抗体は、クロラミンＴまたは１，３，４，６−テトラクロロ−３α，６α−ジフェニルグリコウリルを使用して、ヨウ素化することができる。フッ素化のためには、フッ化物イオン置換反応による合成時に、フッ素を、対象抗体へと添加する。このような放射性同位体を伴うタンパク質の合成の総説については、Muller-Gartner,  H.、TIB  Tech.、１６巻：１２２〜１３０頁（１９９８年）；およびSaji,  H.、Crit.  Rev.  Ther.  Drug  Carrier  Syst.、１６巻（２号）：２０９〜２４４頁（１９９９年）を参照されたい。対象抗体はまた、標準的な技法を介して、造影剤で標識することもできる。例えば、対象抗体は、Ｇｄジエチレントリアミン五酢酸（ＧｄＤＴＰＡ）またはＧｄテトラアザシクロドデカン四酢酸（ＧｄＤＯＴＡ）などの低分子Ｇｄキレートを、抗体へとコンジュゲートすることにより、Ｇｄで標識することができる。Caravanら、Chem.  Rev.、９９巻：２２９３〜２３５２頁（１９９９年）；およびLaufferら、J.  Magn.  Reson.  Imaging、３巻：１１〜１６頁（１９８５年）を参照されたい。対象抗体は、例えば、ポリリシン−Ｇｄキレートを、抗体へとコンジュゲートすることにより、Ｇｄで標識することができる。例えば、Curtetら、Invest.  Radiol.、３３巻（１０号）：７５２〜７６１頁（１９９８年）を参照されたい。代替的に、対象抗体は、Ｇｄキレーター脂質を含む常磁性重合化リポソームを、アビジンおよびビオチニル化抗体と共にインキュベートすることにより、Ｇｄで標識することもできる。例えば、Sipkinsら、Nature  Med.、４巻：６２３〜６２６頁（１９９８年）を参照されたい。
【０２５４】
対象抗体へと連結されうる、適切な蛍光タンパク質は、Ａｅｑｕｏｒｉａ  ｖｉｃｔｏｒｉａに由来する緑色蛍光タンパク質、または、例えば、米国特許第６，０６６，４７６号；同第６，０２０，１９２号；同第５，９８５，５７７号；同第５，９７６，７９６号；同第５，９６８，７５０号；同第５，９６８，７３８号；同第５，９５８，７１３号；同第５，９１９，４４５号；同第５，８７４，３０４号に記載されている、その変異体もしくは誘導体；例えば、増強型ＧＦＰ、例えば、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．から市販されている、多くのこのようなＧＦＰ；赤色蛍光タンパク質；黄色蛍光タンパク質；例えば、Matzら（１９９９年）、Nature  Biotechnol.、１７巻：９６９〜９７３頁などにおいて記載されている、花虫動物種に由来する様々な蛍光タンパク質および有色タンパク質のうちのいずれかを含むがこれらに限定されない。
【０２５５】
一部の実施形態では、対象抗体を、治療薬へとコンジュゲートさせる。本明細書で開示される対象抗体のうちのいずれかを使用して、抗体−薬剤コンジュゲートを形成することができる。薬剤は、軽鎖のＮ末端、軽鎖のＣ末端、重鎖のＮ末端、または重鎖のＣ末端へと付着させることができる。一部の実施形態では、薬剤を、抗体のヒンジまたは抗体上の１つもしくは複数の他の部位へと付着させる。単鎖抗体では、薬剤を、単鎖抗体のＮ末端またはＣ末端へと付着させることができる。薬剤は、当業者に公知の技法を使用して、抗体へと直接、またはリンカーを介してコンジュゲートさせることができる。リンカーは、切断型であっても、非切断型であってもよい。当業者には、このような治療剤（例えば、治療における使用のための）の例が公知である。
【０２５６】
一部の実施形態では、対象抗体を、融合パートナー、例えば、リガンド；エピトープタグ；ペプチド；抗体以外のタンパク質などへと連結する（例えば、共有結合的または非共有結合的に連結する）。適切な融合パートナーは、ｉｎ  ｖｉｖｏにおける安定性の増強（例えば、血清半減期の延長）を付与する、ペプチドおよびポリペプチド；精製の容易さをもたらすペプチドおよびポリペプチド、例えば、（Ｈｉｓ）ｎ、例えば、６Ｈｉｓなど；融合タンパク質の、細胞からの分泌をもたらすペプチドおよびポリペプチド；エピトープタグをもたらすペプチドおよびポリペプチド、例えば、ＧＳＴ、ヘマグルチニン（ＨＡ；例えば、ＹＰＹＤＶＰＤＹＡ；配列番号４１）、ＦＬＡＧ（例えば、ＤＹＫＤＤＤＤＫ；配列番号４２）、ｃ−ｍｙｃ（例えば、ＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬ；配列番号４３）など；検出可能なシグナルをもたらすペプチドおよびポリペプチド、例えば、検出可能な生成物を発生させる酵素（例えば、β−ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ）、またはそれ自体が検出可能なタンパク質、例えば、緑色蛍光タンパク質、赤色蛍光タンパク質、黄色蛍光タンパク質など；多量体化をもたらすペプチドおよびポリペプチド、例えば、免疫グロブリンのＦｃ部分などの多量体化ドメインなどを含む。
【０２５７】
融合体はまた、例えば、同定または精製に有用な固体支持体上に固定化されたパートナーなどの結合パートナーと相互作用しうるペプチド配列を含む、アフィニティードメインも含みうる。タンパク質へと融合させた場合の、ヒスチジンなど、連続的な単一アミノ酸は、ニッケルセファロースなどの樹脂カラムへの高アフィニティーの結合による、融合タンパク質の１ステップの精製のために使用することができる。例示的なアフィニティードメインは、Ｈｉｓ５（ＨＨＨＨＨ）（配列番号４４）、ＨｉｓＸ６（ＨＨＨＨＨＨ）（配列番号４５）、ｃ−ｍｙｃ（ＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬ）（配列番号４６）、Ｆｌａｇ（ＤＹＫＤＤＤＤＫ）（配列番号４２）、ＳｔｒｅｐＴａｇ（ＷＳＨＰＱＦＥＫ）（配列番号４７）、ヘマグルチニン、例えば、ＨＡ  Ｔａｇ（ＹＰＹＤＶＰＤＹＡ；配列番号４１）、グルタチオン（glutathinone）−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、チオレドキシン、セルロース結合性ドメイン、ＲＹＩＲＳ（配列番号４８）、Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ（配列番号４９）、キチン結合性ドメイン、Ｓ−ペプチド、Ｔ７ペプチド、ＳＨ２ドメイン、Ｃ末端ＲＮＡタグ、ＷＥＡＡＡＲＥＡＣＣＲＥＣＣＡＲＡ（配列番号５０）、金属結合性ドメイン、例えば、亜鉛結合性ドメイン、またはカルシウム結合性タンパク質、例えば、カルモジュリン、トロポニンＣ、カルシニューリンＢ、ミオシン軽鎖、リカバリン、Ｓ−モジュリン、ビシニン、ＶＩＬＩＰ、ニューロカルシン、ヒポカルシン、フレケニン、カルトラクチン、カルパイン大サブユニット、Ｓ１００タンパク質、パルブアルブミン、カルビンジンＤ９Ｋ、カルビンジンＤ２８Ｋ、およびカルレチニンなどのカルシウムタンパク質に由来するカルシウム結合性ドメイン、インテイン、ビオチン、ストレプトアビジン、ＭｙｏＤ、ロイシンジッパー配列、およびマルトース結合性タンパク質を含む。
【０２５８】
ヌクレオチド配列およびアミノ酸配列について、「同一な」または「同一性」という用語は、最適にアライメントされ、適切な挿入または欠失と比較された場合における、２つの核酸配列または２つのアミノ酸配列の間の同一性の程度を指し示す。
【０２５９】
２つの配列間の同一性パーセントとは、配列により共有される同一な位置の数の関数（すなわち、同一性％＝同一な位置の数／位置の総数×１００）であって、２つの配列の最適なアライメントのために導入を必要とする、ギャップの数と、各ギャップの長さとを考慮に入れた関数である。配列の比較、および２つの配列間の同一性パーセントの決定は、下で記載される数学的アルゴリズムを使用して達することができる。
【０２６０】
クエリー核酸配列と、対象核酸配列との間の同一性パーセントとは、ペアワイズＢＬＡＳＴＮアライメントを実施した後で、対象核酸配列が、クエリー核酸配列により、１００％のクエリーカバレッジを有する場合に、ＢＬＡＳＴＮアルゴリズムにより計算される百分率として表される「同一性」値である。クエリー核酸配列と、対象核酸配列との間の、このようなペアワイズＢＬＡＳＴＮアライメントは、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅのウェブサイト上で入手可能なＢＬＡＳＴＮアルゴリズムのデフォルトの設定を、低複雑性領域のためのフィルターをオフとして使用することにより実施する。重要なことに、クエリー核酸配列を、本明細書の１つまたは複数の請求項において同定される核酸配列により記載しうる。
【０２６１】
クエリーアミノ酸配列と、対象アミノ酸配列との間の同一性パーセントは、ペアワイズＢＬＡＳＴＰアライメントを実施した後で、対象アミノ酸配列が、クエリーアミノ酸配列により、１００％のクエリーカバレッジを有する場合に、ＢＬＡＳＴＰアルゴリズムにより計算される百分率として表される「同一性」値である。クエリーアミノ酸配列と、対象アミノ酸配列との間の、このようなペアワイズＢＬＡＳＴＰアライメントは、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅのウェブサイト上で入手可能なＢＬＡＳＴＰアルゴリズムのデフォルトの設定を、低複雑性領域のためのフィルターをオフとして使用することにより実施する。重要なことに、クエリーアミノ酸配列を、本明細書の１つまたは複数の請求項において同定されるアミノ酸配列により記載しうる。
【０２６２】
対象抗体を作製する方法
対象抗体は、任意の公知の方法、例えば、タンパク質合成のための従来の合成法；組換えＤＮＡ法などにより作製することができる。一部の実施形態では、対象抗体を、組換えによる作製および化学合成からなる群から選択される方法により作製する。
【０２６３】
対象抗体が、単鎖ポリペプチドである場合、対象抗体を、標準的な化学的ペプチド合成技法を使用して合成することができる。ポリペプチドを化学合成する場合、合成は、液相または固相を介して進行しうる。配列のＣ末端アミノ酸を、不溶性支持体へと付着させた後、配列内の残りのアミノ酸を逐次付加する、固相ポリペプチド合成（ＳＰＰＳ）は、対象抗体の化学合成に適する方法の例である。ＦｍｏｃおよびＢｏｃなど、ＳＰＰＳの多様な形態が、対象抗体の合成のために利用可能である。固相合成のための技法については、BaranyおよびMerrifield、Solid-Phase  Peptide  Synthesis；３〜２８４頁、The  Peptides：Analysis,  Synthesis,  Biology、２巻：Special  Methods  in  Peptide  Synthesis、Ａ部、Merrifieldら、J.  Am.  Chem.  Soc.、８５巻：２１４９〜２１５６頁（１９６３年）；Stewartら、Solid  Phase  Peptide  Synthesis、２版、Pierce  Chem.  Co.、Rockford、Ill.（１９８４年）；ならびにGanesan  A.、２００６年、Mini  Rev.  Med  Chem.、６巻：３〜１０頁；ならびにCamarero  JAら、２００５年、Protein  Pept  Lett.、１２巻：７２３〜８頁により記載されている。略述すると、小型、不溶性で、多孔性のビーズを、官能基で処理し、この上にペプチド鎖を構築する。カップリング／脱保護サイクルを繰り返した後、付着させた固相の遊離Ｎ末端アミンを、単一のＮ−保護アミノ酸単位へとカップリングさせる。次いで、この単位を脱保護し、新たなＮ末端アミンを露出させ、これにさらにアミノ酸を付着させることができる。ペプチドは、固相上の固定されたままで、濾過工程を経てから、切断される。
【０２６４】
対象抗体を作製するために、標準的な組換え方法を使用することができる。例えば、任意選択で、定常領域へと連結された、軽鎖可変領域および重鎖可変領域をコードする核酸を、発現ベクターへと挿入する。軽鎖および重鎖は、同じまたは異なる発現ベクター内にクローニングすることができる。免疫グロブリン鎖をコードするＤＮＡセグメントは、免疫グロブリンポリペプチドの発現を確保する発現ベクター内の制御配列に作動可能に連結する。発現制御配列は、プロモーター（例えば、天然で会合するプロモーターまたは異種プロモーター）、シグナル配列、エンハンサーエレメント、リプレッサーエレメント、および転写終結配列を含むがこれらに限定されない。発現制御配列は、真核宿主細胞（例えば、ＣＯＳ細胞またはＣＨＯ細胞）を形質転換するか、またはこれにトランスフェクトすることが可能なベクター内の真核プロモーター系でありうる。ベクターを、適切な宿主へと組み込んだら、宿主を、高レベルのヌクレオチド配列の発現、ならびに抗体の回収および精製に適する条件下で維持する。
【０２６５】
コードの縮重性のために、様々な核酸配列が、各免疫グロブリンのアミノ酸配列をコードしうる。所望の核酸配列は、デノボの固相ＤＮＡ合成により、または所望のポリヌクレオチドの、あらかじめ調製されたバリアントに対するポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）変異誘発により作製することができる。オリゴヌクレオチド媒介性変異誘発は、標的ポリペプチドＤＮＡの置換バリアント、欠失バリアント、および挿入バリアントを調製するのに適する方法の例である。Adelmanら、DNA、２巻：１８３頁（１９８３年）を参照されたい。略述すると、所望の変異をコードするオリゴヌクレオチドを、一本鎖ＤＮＡ鋳型とハイブリダイズさせることにより、標的ポリペプチドＤＮＡを変更する。ハイブリダイゼーションの後、ＤＮＡポリメラーゼを使用して、オリゴヌクレオチドプライマーを組み込み、標的ポリペプチドＤＮＡ内の選択された変更をコードする鋳型の、第２の相補鎖の全体を合成する。
【０２６６】
適切な発現ベクターは、宿主生物において、エピソームとしてまたは宿主染色体ＤＮＡの不可欠な部分として、複製可能であることが典型的である。一般に、発現ベクターは、所望のＤＮＡ配列で形質転換された細胞の検出を可能とするように、選択マーカー（例えば、アンピシリン耐性、ヒグロマイシン耐性、テトラサイクリン耐性、カナマイシン耐性、またはネオマイシン耐性）を含有する。
【０２６７】
Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉは、対象抗体をコードするポリヌクレオチドをクローニングするために使用されうる、原核宿主細胞の例である。使用に適する他の微生物宿主は、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓなどの桿菌、ならびにＳａｌｍｏｎｅｌｌａ種、Ｓｅｒｒａｔｉａ種、および多様なＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ種など、他のＥｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅを含む。これらの原核宿主ではまた、宿主細胞と適合性の発現制御配列（例えば、複製起点）を典型的には含有する発現ベクターを作製しうる。加えて、ラクトースプロモーター系、トリプトファン（ｔｒｐ）プロモーター系、ベータ−ラクタマーゼプロモーター系、またはファージラムダに由来するプロモーター系など、任意の数の、周知の様々なプロモーターも存在する。プロモーターは、任意選択で、オペレーター配列により、発現を制御し、転写および翻訳を開始および終了するための、リボソーム結合性部位配列などを有することが典型的である。
【０２６８】
酵母など、他の微生物もまた、発現に有用である。Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ（例えば、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）およびＰｉｃｈｉａは、所望に応じて、発現制御配列（例えば、プロモーター）、複製起点、終結配列などを有する、適切なベクターを有する、適切な酵母宿主細胞の例である。典型的なプロモーターは、３−ホスホグリセリン酸キナーゼおよび他の解糖系酵素を含む。誘導性酵母プロモーターは、中でも、アルコールデヒドロゲナーゼ、イソチトクロームＣ、ならびにマルトースおよびガラクトースの利用の一因となる酵素に由来するプロモーターを含む。
【０２６９】
微小生物に加えて、哺乳動物細胞（例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏの細胞培養物中で増殖させる哺乳動物細胞）もまた、本開示の抗ＬＡＧ−３抗体（例えば、対象の抗ＬＡＧ−３抗体をコードするポリヌクレオチド）を発現させ、作製するのに使用することができる。Winnacker、From  Genes  to  Clones、VCH  Publishers、N.Y.、N.Y.（１９８７年）を参照されたい。適切な哺乳動物宿主細胞は、ＣＨＯ細胞株、多様なＣｏｓ細胞株、ＨｅＬａ細胞、骨髄腫細胞株、および形質転換されたＢ細胞、またはハイブリドーマを含む。これらの細胞のための発現ベクターは、複製起点、プロモーター、およびエンハンサーなどの発現制御配列（Queenら、Immunol.  Rev.、８９巻：４９頁（１９８６年））、ならびにリボソーム結合性部位、ＲＮＡスプライス部位、ポリアデニル化部位、および転写ターミネーター配列など、必要なプロセシング情報部位を含みうる。適切な発現制御配列の例は、免疫グロブリン遺伝子、ＳＶ４０、アデノウイルス、ウシパピローマウイルス、サイトメガロウイルスなどに由来するプロモーターである。Coら、J.  Immunol.、１４８巻：１１４９頁（１９９２年）を参照されたい。他の方法では、本発明の抗体は、マウスにおいて作製することができる（例えば、Laffleurら、「Production  of  human  or  humanized  antibodies  in  mice」、Methods  Mol  Biol.、２０１２年、９０１巻：１４９〜５９頁を参照されたい）。
【０２７０】
合成した（化学的または組換えにより）ら、対象抗体の、全抗体、それらの二量体、個々の軽鎖および重鎖、または他の形態（例えば、ｓｃＦｖなど）を、硫酸アンモニウム沈殿、アフィニティーカラム、カラムクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）精製、ゲル電気泳動など（一般に、Scopes,  Protein  Purification、Springer-Verlag、N.Y.（１９８２年）を参照されたい）を含む、当技術分野の標準的な手順に従い、精製することができる。対象抗体は、実質的に純粋、例えば、少なくとも約８０％〜８５％純粋、少なくとも約８５％〜９０％純粋、少なくとも約９０％〜９５％純粋、もしくは９８％〜９９％、またはこれを超えて純粋、例えば、細胞破砕物、対象抗体以外の高分子などの夾雑物を含まない可能性がある。
【０２７１】
核酸分子、発現ベクター、および宿主細胞
本発明はまた、本発明の抗ＬＡＧ−３抗体またはその抗原結合性断片をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子も提供する。
【０２７２】
一部の実施形態では、本開示の核酸分子は、配列番号７または配列番号１７に明示したアミノ酸配列に対する、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のアミノ酸配列の同一性を有する重鎖可変領域を含む、対象の抗ＬＡＧ−３抗体をコードする。一部の実施形態では、本開示の核酸分子は、配列番号７または配列番号１７に明示したアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、対象の抗ＬＡＧ−３抗体をコードする。
【０２７３】
一部の実施形態では、本開示の核酸分子は、配列番号８または配列番号１８に明示したアミノ酸配列に対する、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のアミノ酸配列の同一性を有する軽鎖可変領域を含む、対象の抗ＬＡＧ−３抗体をコードする。一部の実施形態では、本開示の核酸分子は、配列番号８または配列番号１８に明示したアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、対象の抗ＬＡＧ−３抗体をコードする。
【０２７４】
一部の実施形態では、本開示の核酸分子は、それぞれ、配列番号１、配列番号２、および配列番号３のＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、およびＣＤＲ−Ｈ３を含む重鎖可変領域を含む、対象の抗ＬＡＧ−３抗体をコードする。
【０２７５】
一部の実施形態では、本開示の核酸分子は、それぞれ、配列番号４、配列番号５、および配列番号６のＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、およびＣＤＲ−Ｌ３を含む軽鎖可変領域を含む、対象の抗ＬＡＧ−３抗体をコードする。
【０２７６】
一部の実施形態では、本開示の核酸分子は、それぞれ、配列番号１１、配列番号１２、および配列番号１３のＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、およびＣＤＲ−Ｈ３を含む重鎖可変領域を含む、対象の抗ＬＡＧ−３抗体をコードする。
【０２７７】
一部の実施形態では、本開示の核酸分子は、それぞれ、配列番号１４、配列番号１５、および配列番号１６のＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、およびＣＤＲ−Ｌ３を含む軽鎖可変領域を含む、対象の抗ＬＡＧ−３抗体をコードする。
【０２７８】
一部の実施形態では、本開示の核酸分子は、それぞれ、配列番号２１、配列番号２２、および配列番号２３のＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、およびＣＤＲ−Ｈ３を含む重鎖可変領域を含む、対象の抗ＬＡＧ−３抗体をコードする。
【０２７９】
一部の実施形態では、本開示の核酸分子は、それぞれ、配列番号２４、配列番号２５、および配列番号２６のＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、およびＣＤＲ−Ｌ３を含む軽鎖可変領域を含む、対象の抗ＬＡＧ−３抗体をコードする。
【０２８０】
一部の実施形態では、本開示の核酸分子は、それぞれ、配列番号３１、配列番号３２、および配列番号３３のＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、およびＣＤＲ−Ｈ３を含む重鎖可変領域を含む、対象の抗ＬＡＧ−３抗体をコードする。
【０２８１】
一部の実施形態では、本開示の核酸分子は、それぞれ、配列番号３４、配列番号３５、および配列番号３６のＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、およびＣＤＲ−Ｌ３を含む軽鎖可変領域を含む、対象の抗ＬＡＧ−３抗体をコードする。
【０２８２】
一部の実施形態では、本開示の核酸分子は、軽鎖可変領域および重鎖可変領域を含む、対象の抗ＬＡＧ−３抗体をコードする。
【０２８３】
対象抗体をコードする核酸分子は、ヌクレオチド配列の、意図される標的細胞（例えば、コードされる抗体を合成するように遺伝子改変された細胞）内の発現を可能とするプロモーターおよびエンハンサーなど、１つまたは複数の調節的エレメントに作動可能に連結することができる。
【０２８４】
適切なプロモーターエレメントおよびエンハンサーエレメントが当技術分野で公知である。原核宿主細胞における使用に適するプロモーターは、バクテリオファージＴ７  ＲＮＡポリメラーゼプロモーター；Ｔ３プロモーター；Ｔ５プロモーター；ラムダＰプロモーター；ｔｒｐプロモーター；ｌａｃオペロンプロモーター；ハイブリッドプロモーター、例えば、ｌａｃ／ｔａｃハイブリッドプロモーター、ｔａｃ／ｔｒｃハイブリッドプロモーター、ｔｒｐ／ｌａｃプロモーター、Ｔ７／ｌａｃプロモーター；ｔｒｃプロモーター；ｔａｃプロモーターなど；ｇｐｔプロモーター；ａｒａＢＡＤプロモーター；ｓｓａＧプロモーターまたは類縁のプロモーターなど、ｉｎ  ｖｉｖｏ調節型プロモーター（例えば、米国特許公開第２００４０１３１６３７号を参照されたい）、ｐａｇＣプロモーター（PulkkinenおよびMiller、J.  Bacteriol.、１９９１年：１７３巻（１号）：８６〜９３頁；Alpuche-Arandaら、PNAS、１９９２年；８９巻（２１号）：１００７９〜８３頁）、ｎｉｒＢプロモーター（Harborneら（１９９２年）、Mol.  Micro.、６巻：２８０５〜２８１３頁）など（例えば、Dunstanら（１９９９年）、Infect.  Immun.、６７巻：５１３３〜５１４１頁；McKelvieら（２００４年）、Vaccine、２２巻：３２４３〜３２５５頁；およびChatfieldら（１９９２年）、Biotechnol.、１０巻：８８８〜８９２頁を参照されたい）；シグマ７０プロモーター、例えば、コンセンサスシグマ７０プロモーター（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＡＸ７９８９８０、ＡＸ７９８９６１、およびＡＸ７９８１８３を参照されたい）；静止期プロモーター、例えば、ｄｐｓプロモーター、ｓｐｖプロモーターなど；病原性アイランドに由来するプロモーターＳＰＩ−２（例えば、ＷＯ９６／１７９５１を参照されたい）；ａｃｔＡプロモーター（例えば、Shetron-Ramaら（２００２年）、Infect.  Immun.、７０巻：１０８７〜１０９６頁を参照されたい）；ｒｐｓＭプロモーター（例えば、ValdiviaおよびFalkow（１９９６年）、Mol.  Microbiol.、２２巻：３６７頁を参照されたい）；ｔｅｔプロモーター（例えば、Hillen,  W.およびWissmann,  A.（１９８９年）、Saenger,W.およびHeinemann,  U.（編）、Topics  in  Molecular  and  Structural  Biology,  Protein-Nucleic  Acid  Interaction.、Macmillan、London、UK、１０巻、１４３〜１６２頁を参照されたい）；ＳＰ６プロモーター（例えば、Meltonら（１９８４年）、Nucl.  Acids  Res.、１２巻：７０３５頁を参照されたい）などを含むがこれらに限定されない。Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉなど、原核生物における使用のための、適切な強力プロモーターは、Ｔｒｃ、Ｔａｃ、Ｔ５、Ｔ７、およびＰＬａｍｂｄａを含むがこれらに限定されない。細菌宿主細胞における使用のためのオペレーターの非限定的な例は、ラクトースプロモーターオペレーター（ＬａｃＩリプレッサータンパク質は、ラクトースと接触すると、コンフォメーションを変化させ、これにより、ＬａｃＩリプレッサータンパク質が、オペレーターに結合することを防止する）、トリプトファンプロモーターオペレーター（トリプトファンと複合体化すると、ＴｒｐＲリプレッサータンパク質は、オペレーターに結合するコンフォメーションを有するが、トリプトファンの非存在下では、ＴｒｐＲリプレッサー��ンパク質は、オペレーターに結合しないコンフォメーションを有する）、およびｔａｃプロモーターオペレーターを含む（例えば、deBoerら（１９８３年）、Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  U.S.A.、８０巻：２１〜２５頁を参照されたい）。
【０２８５】
一部の実施形態では、例えば、酵母細胞内の発現のために、適切なプロモーターは、ＡＤＨ１プロモーター、ＰＧＫ１プロモーター、ＥＮＯプロモーター、ＰＹＫ１プロモーターなどの構成的プロモーター；またはＧＡＬ１プロモーター、ＧＡＬ１０プロモーター、ＡＤＨ２プロモーター、ＰＨＯ５プロモーター、ＣＵＰ１プロモーター、ＧＡＬ７プロモーター、ＭＥＴ２５プロモーター、ＭＥＴ３プロモーター、ＣＹＣ１プロモーター、ＨＩＳ３プロモーター、ＡＤＨ１プロモーター、ＰＧＫプロモーター、ＧＡＰＤＨプロモーター、ＡＤＣ１プロモーター、ＴＲＰ１プロモーター、ＵＲＡ３プロモーター、ＬＥＵ２プロモーター、ＥＮＯプロモーター、ＴＰ１プロモーター、およびＡＯＸ１（例えば、Ｐｉｃｈｉａにおける使用のため）などの調節性プロモーターである。
【０２８６】
真核細胞内での発現の場合、適切なプロモーターは、軽鎖免疫グロブリン遺伝子および／または重鎖免疫グロブリン遺伝子のプロモーターエレメントおよびエンハンサーエレメント；サイトメガロウイルス最初期プロモーター；単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼプロモーター；初期ＳＶ４０プロモーターおよび後期ＳＶ４０プロモーター；レトロウイルスに由来するＬＴＲ（ｌｏｎｇ  ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｒｅｐｅａｔ）内に存在するプロモーター；マウスメタロチオネイン−Ｉプロモーター；ならびに当技術分野で公知の、多様な組織特異的プロモーターを含むがこれらに限定されない。
【０２８７】
適切なベクターおよびプロモーターの選択は、当業者のレベルの範囲内にある。
【０２８８】
対象抗体をコードする核酸分子は、発現ベクターおよび／またはクローニングベクター内に存在しうる。本開示は、対象抗体をコードする核酸分子を、クローニングベクター内に含む、組換えベクターを提供する。本開示はまた、コードされる抗体の発現を確保するように、発現ベクター内の、適切な調節配列に作動的に連結した対象抗体をコードする核酸分子を含む組換え分子も提供する。対象抗体が、２つの個別のポリペプチドを含む場合、２つのポリペプチドをコードする核酸分子を、同じベクターまたは個別のベクターにクローニングして、１つまたは複数の組換え分子を形成することができる。組換え分子は、選択用マーカー、複製起点、ならびに組換え分子の複製および／または維持をもたらす他の特色を含みうる。
【０２８９】
多数の適切なベクターおよびプロモーターが当業者には公知であり、対象の組換え分子を作出するために、多くが市販されている。以下のベクターは、例として提供する。細菌性：ｐＢｓ、ｐｈａｇｅｓｃｒｉｐｔ、ＰｓｉＸ１７４、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ  ＳＫ、ｐＢｓ  ＫＳ、ｐＮＨ８ａ、ｐＮＨ１６ａ、ｐＮＨ１８ａ、ｐＮＨ４６ａ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ、Ｌａ  Ｊｏｌｌａ、Ｃａｌｉｆ．、ＵＳＡ）；ｐＴｒｃ９９Ａ、ｐＫＫ２２３−３、ｐＫＫ２３３−３、ｐＤＲ５４０、およびｐＲＩＴ５（Ｐｈａｒｍａｃｉａ、Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ）。真核細胞性：ｐＷＬｎｅｏ、ｐＳＶ２ｃａｔ、ｐＯＧ４４、ＰＸＲ１、ｐＳＧ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）ｐＳＶＫ３、ｐＢＰＶ、ｐＭＳＧ、およびｐＳＶＬ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）。
【０２９０】
発現ベクターは一般に、異種タンパク質をコードする核酸配列の挿入をもたらすように、プロモーター配列の近傍に配置された簡便な制限部位を有する。発現宿主内で作動的な選択用マーカーも存在しうる。適切な発現ベクターは、ウイルスベクターを含むがこれらに限定されない。ウイルスベクターの例は、ワクシニアウイルス；ポリオウイルス；アデノウイルス（例えば、Liら、Invest  Opthalmol  Vis  Sci、３５巻：２５４３〜２５４９頁、１９９４年；Borrasら、Gene  Ther、６巻：５１５〜５２４頁、１９９９年；LiおよびDavidson、PNAS、９２巻：７７００〜７７０４頁、１９９５年；Sakamotoら、H  Gene  Ther、５巻：１０８８〜１０９７頁、１９９９年；ＷＯ９４／１２６４９、ＷＯ９３／０３７６９；ＷＯ９３／１９１９１；ＷＯ９４／２８９３８；ＷＯ９５／１１９８４；ならびにＷＯ９５／００６５５を参照されたい）；アデノ随伴ウイルス（例えば、Aliら、Hum  Gene  Ther、９巻：８１〜８６頁、１９９８年、Flanneryら、PNAS、９４巻：６９１６〜６９２１頁、１９９７年；Bennettら、Invest  Opthalmol  Vis  Sci、３８巻：２８５７〜２８６３頁、１９９７年；Jomaryら、Gene  Ther、４巻：６８３〜６９０頁、１９９７年、Rollingら、Hum  Gene  Ther、１０巻：６４１〜６４８頁、１９９９年；Aliら、Hum  Mol  Genet  ５巻：５９１〜５９４頁、１９９６年；Srivastava、ＷＯ９３／０９２３９、Samulskiら、J.  Vir.（１９８９年）、６３巻：３８２２〜３８２８頁；Mendelsonら、Virol.（１９８８年）、１６６巻：１５４〜１６５頁；およびFlotteら、PNAS（１９９３年）、９０巻：１０６１３〜１０６１７頁を参照されたい）；ＳＶ４０；単純ヘルペスウイルス；レトロウイルスベクター（例えば、マウス白血病ウイルス、脾臓壊死ウイルス、ならびにラウス肉腫ウイルス、ハーベイ肉腫ウイルス、トリ白血病ウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（例えば、Miyoshiら、PNAS、９４巻：１０３１９〜２３頁、１９９７年；Takahashiら、J  Virol、７３巻：７８１２〜７８１６頁、１９９９年を参照されたい）、骨髄増殖性肉腫ウイルス、および乳腺腫瘍ウイルスなど、レトロウイルスに由来するベクター）などに基づくウイルスベクターを含むがこれらに限定されない。
【０２９１】
上記の通り、対象の核酸分子は、本開示の抗ＬＡＧ−３抗体をコードするヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、対象の核酸分子は、対象の１３Ｅ２抗体または３４Ｆ４抗体の、重鎖ＣＤＲおよび軽鎖ＣＤＲをコードするヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、対象の核酸分子は、対象抗体の重鎖ＣＤＲおよび軽鎖ＣＤＲをコードするヌクレオチド配列であって、ＣＤＲをコードする配列がＦＲをコードするヌクレオチド配列を散在させた、ヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、ＦＲをコードするヌクレオチド配列は、ヒトＦＲをコードするヌクレオチド配列である。
【０２９２】
宿主細胞
本開示は、対象の核酸分子で遺伝子改変された、単離遺伝子改変宿主細胞（例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞）を提供する。一部の実施形態では、対象の単離遺伝子改変宿主細胞は、対象抗体を産生しうる。このような細胞を、組換え細胞と称する。組換え細胞は、対象抗体をコードする組換え分子を含む。
【０２９３】
適切な宿主細胞は、哺乳動物細胞、昆虫宿主細胞、酵母細胞などの真核宿主細胞；および細菌細胞などの原核細胞を含む。対象核酸の、宿主細胞への導入は、例えば、リン酸カルシウム沈殿、ＤＥＡＥデキストラン媒介型トランスフェクション、リポソーム媒介型トランスフェクション、電気穿孔、または他の公知の方法により行うことができる。
【０２９４】
適切な哺乳動物細胞は、初代細胞および不死化細胞株を含む。適切な哺乳動物細胞株は、ヒト細胞株、非ヒト霊長動物細胞株、齧歯動物（例えば、マウス、ラット）細胞株などを含む。適切な哺乳動物細胞株は、ＨｅＬａ細胞（例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）番号：ＣＣＬ−２）、ＣＨＯ細胞（例えば、ＡＴＣＣ番号：ＣＲＬ９６１８、ＣＣＬ６１、ＣＲＬ９０９６）、２９３細胞（例えば、ＡＴＣＣ番号：ＣＲＬ−１５７３）、Ｖｅｒｏ細胞、ＮＩＨ  ３Ｔ３細胞（例えば、ＡＴＣＣ番号：ＣＲＬ−１６５８）、Ｈｕｈ−７細胞、ＢＨＫ細胞（例えば、ＡＴＣＣ番号：ＣＣＬ１０）、ＰＣ１２細胞（ＡＴＣＣ番号：ＣＲＬ１７２１）、ＣＯＳ細胞、ＣＯＳ−７細胞（ＡＴＣＣ番号：ＣＲＬ１６５１）、ＲＡＴ１細胞、マウスＬ細胞（ＡＴＣＣ番号：ＣＣＬＩ．３）、ヒト胎児腎（ＨＥＫ）細胞（ＡＴＣＣ番号：ＣＲＬ１５７３）、ＨＬＨｅｐＧ２細胞などを含むがこれらに限定されない。場合によって、細胞は、ＨＥＫ細胞である。場合によって、細胞は、ＣＨＯ細胞、例えば、ＣＨＯ−Ｋ１細胞（ＡＴＣＣ番号：ＣＣＬ−６１）、ＣＨＯ−Ｍ細胞、ＣＨＯ−ＤＧ４４細胞（ＡＴＣＣ番号：ＰＴＡ−３３５６）などである。一部の実施形態では、宿主細胞は、ＣＯＳ細胞である。一部の実施形態では、宿主細胞は、２９３細胞である。一部の実施形態では、宿主細胞は、ＣＨＯ細胞である。
【０２９５】
適切な酵母細胞は、Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ、Ｐｉｃｈｉａ  ｆｉｎｌａｎｄｉｃａ、Ｐｉｃｈｉａ  ｔｒｅｈａｌｏｐｈｉｌａ、Ｐｉｃｈｉａ  ｋｏｃｌａｍａｅ、Ｐｉｃｈｉａ  ｍｅｍｂｒａｎａｅｆａｃｉｅｎｓ、Ｐｉｃｈｉａ  ｏｐｕｎｔｉａｅ、Ｐｉｃｈｉａ  ｔｈｅｒｍｏｔｏｌｅｒａｎｓ、Ｐｉｃｈｉａ  ｓａｌｉｃｔａｒｉａ、Ｐｉｃｈｉａ  ｇｕｅｒｃｕｕｍ、Ｐｉｃｈｉａ  ｐｉｊｐｅｒｉ、Ｐｉｃｈｉａ  ｓｔｉｐｔｉｓ、Ｐｉｃｈｉａ  ｍｅｔｈａｎｏｌｉｃａ、Ｐｉｃｈｉａ  ｓｐ．、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．、Ｈａｎｓｅｎｕｌａ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈａ、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ  ｌａｃｔｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｄｕｌａｎｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ、Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｌｕｃｋｎｏｗｅｎｓｅ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｓｐ．、Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｇｒａｍｉｎｅｕｍ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｖｅｎｅｎａｔｕｍ、Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ  ｃｒａｓｓａ、Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ  ｒｅｉｎｈａｒｄｔｉｉなどを含むがこれらに限定されない。一部の実施形態では、宿主細胞は、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓである。一部の実施形態では、宿主細胞は、Ｐｉｃｈｉａである。
【０２９６】
適切な原核細胞は、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ（例えば、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．などの様々な検査室株のうちのいずれかを含むがこれらに限定されない。例えば、Carrierら（１９９２年）、J.  Immunol.、１４８巻：１１７６〜１１８１頁；米国特許第６，４４７，７８４号；およびSizemoreら（１９９５年）、Science、２７０巻：２９９〜３０２頁を参照されたい。検査室株は、非病原性の株であることが典型的である。一部の実施形態では、宿主細胞は、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉである。一部の実施形態では、宿主細胞は、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓである。
【０２９７】
組成物
本開示は、対象抗体を含む組成物を提供する。対象抗体組成物は、対象抗体に加えて、塩、例えば、ＮａＣｌ、ＭｇＣｌ２、ＫＣｌ、ＭｇＳＯ４など；緩衝化剤、例えば、リン酸緩衝液、クエン酸緩衝液、トリス緩衝液、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−Ｎ’−（２−エタンスルホン酸）（ＨＥＰＥＳ）、２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）、２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸ナトリウム塩（ＭＥＳ）、３−（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、Ｎ−トリス［ヒドロキシメチル］メチル−３−アミノプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳ）など；可溶化剤；デタージェント、例えば、Ｔｗｅｅｎ−２０などの非イオン性デタージェントなど；プロテアーゼ阻害剤；グリセロールなどのうちの１つまたは複数を含みうる。
【０２９８】
医薬組成物
本開示は、対象抗体を含む医薬組成物を含む組成物を提供する。一般に、本明細書ではまた、製剤とも称する医薬組成物は、有効量の対象抗体を含む。「有効量」は、所望の結果、例えば、免疫障害と関連する有害症状の低減、免疫障害の症状の改善、免疫障害の進行の緩徐化などをもたらすのに十分な投与量を意味する。一般に、所望の結果は、免疫障害の症状の、少なくとも、対照と比較した低減である。
【０２９９】
製剤
対象の方法では、所望の治療効果または診断効果を結果としてもたらすことが可能な、任意の簡便な手段を使用して、対象抗体を、宿主へと投与することができる。したがって、薬剤は、治療的投与のための様々な製剤へと、組み込むことができる。より特定すると、対象抗体は、適切な、薬学的に許容されるキャリア、薬学的に許容される希釈剤、または他の薬学的に許容される賦形剤と組み合わせることにより、医薬組成物へと製剤化することができ、錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、軟膏剤、溶液、坐剤、注射剤、吸入剤、およびエアゾール剤など、固体形態、半固体形態、液体形態、または気体形態の調製物へと製剤化することができる。一部の実施形態では、医薬組成物は、対象抗体、および薬学的に許容される賦形剤を含む。
【０３００】
医薬剤形中で、対象抗体は、それらの薬学的に許容される塩の形態で投与することもでき、単独でまたは他の薬学的に活性な化合物との適切な会合ならびに組合せで使用することもできる。以下の方法および賦形剤は、例示的なものであるに過ぎず、限定的なものではない。
【０３０１】
経口調製物のために、錠剤、散剤、顆粒剤、またはカプセル剤を得るには、対象抗体を、単独で、または適切な添加剤、例えば、ラクトース、マンニトール、トウモロコシデンプン、またはバレイショデンプンなど、従来の添加剤と；結晶質セルロース、セルロース誘導体、アカシアガム、トウモロコシデンプン、またはゼラチンなどの結合剤と；トウモロコシデンプン、バレイショデンプン、またはカルボキシメチルセルロースナトリウムなどの崩壊剤と；滑石またはステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤と；ならびに、所望の場合、希釈剤、緩衝化剤、湿潤剤、保存剤、および芳香剤と組み合わせて使用することができる。
【０３０２】
対象抗体は、植物油または他の類似の油、プロピレングリコール、合成脂肪酸グリセリド、注射用有機エステル（例えば、オレイン酸エチル）、高級脂肪酸のエステル、またはプロピレングリコールなど、水性溶媒中または非水性溶媒中に、所望の場合、溶解剤、等張剤、懸濁化剤、乳化剤、安定化剤、および保存剤など、従来の添加剤と共に、溶解、懸濁、または乳化させることにより、注射用調製物へと製剤化することができる。非経口媒体は、塩化ナトリウム溶液、リンゲルデキストロース、デキストロース、および塩化ナトリウム、乳酸加リンゲル液、または固定油を含む。静脈内媒体は、流体、および栄養物補充剤、電解質補充剤（リンゲルデキストロースに基づく補充剤など）などを含む。さらに、本開示の医薬組成物はさらに、医薬組成物の意図される使用に応じて、ドーパミンまたは精神薬理薬などの薬剤も含みうる。
【０３０３】
対象抗体を含む医薬組成物は、所望の程度の純度を有する対象抗体を、任意選択の、生理学的に許容されるキャリア、他の賦形剤、安定化剤、界面活性剤、緩衝剤、および／または等張化剤と混合することにより調製する。許容されるキャリア、他の賦形剤、および／または安定化剤は、用いられる投与量および濃度で、レシピエントに対して非毒性であり、リン酸、クエン酸、および他の有機酸などの緩衝剤；アスコルビン酸、グルタチオン、システイン、メチオニン、およびクエン酸を含む抗酸化剤；保存剤（エタノール、ベンジルアルコール、フェノール、ｍ−クレゾール、ｐ−クロル−ｍ−クレゾール、メチルパラベンもしくはプロピルパラベン、塩化ベンザルコニウム、またはこれらの組合せなど）；アルギニン、グリシン、オルニチン、リシン、ヒスチジン、グルタミン酸、アスパラギン酸、イソロイシン、ロイシン、アラニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、メチオニン、セリン、プロリン、およびこれらの組合せなどのアミノ酸；単糖、二糖、および他の炭水化物；低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド；ゼラチンもしくは血清アルブミンなどのタンパク質；ＥＤＴＡなどのキレート化剤；トレハロース、スクロース、ラクトース、グルコース、マンノース、マルトース、ガラクトース、フルクトース、ソルボース、ラフィノース、グルコサミン、Ｎ−メチルグルコサミン、ガラクトサミン、およびノイラミン酸などの糖；ならびに／またはＴｗｅｅｎ、Ｂｒｉｊ  Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ、Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ、もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤を含む。
【０３０４】
医薬組成物は、液体形態、凍結乾燥形態、または凍結乾燥形態から復元される液体形態であってもよく、投与の前に、凍結乾燥調製物は、滅菌溶液で復元する。凍結乾燥組成物を復元するための標準的な手順は、ある容量（典型的には、凍結乾燥時に除去される容量と同等）の純水を、添加し戻すことであるが、非経口投与用の医薬組成物を作製するためには、抗菌剤を含む溶液を使用することもできる（また、Chen（１９９２年）、Drug  Dev  Ind  Pharm、１８巻、１３１１〜５４頁も参照されたい）。
【０３０５】
対象の医薬組成物中の、例示的な抗体濃度は、約１ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬ、または約５０ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬ、または約１５０ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの範囲でありうる。
【０３０６】
水性の抗体製剤は、例えば、ｐＨを約４．０〜約７．０、または約５．０〜約６．０の範囲、または代替的に、約５．５とする、ｐＨ緩衝溶液中で調製することができる。この範囲内のｐＨに適する緩衝液の例は、リン酸緩衝液、ヒスチジン緩衝液、クエン酸緩衝液、コハク酸緩衝液、酢酸緩衝液、および他の有機酸緩衝液を含む。緩衝液濃度は、例えば、緩衝剤、および製剤の所望の張性に応じて、約１ｍＭ〜約１００ｍＭ、または約５ｍＭ〜約５０ｍＭでありうる。
【０３０７】
製剤の張性をモジュレートするように、等張化剤を、抗体製剤に含むことができる。例示的な等張化剤は、塩化ナトリウム、塩化カリウム、グリセリン、ならびにアミノ酸、糖のほか、これらの組合せの群に由来する任意の構成成分を含む。一部の実施形態では、水性製剤は、高張性溶液または低張性溶液が適する場合もあるが、等張性である。「等張性」という用語は、生理的塩類溶液または血清など、それが比較される、他の一部の溶液と同じ張性を有する溶液を表す。等張化剤は、約５ｍＭ〜約３５０ｍＭの量、例えば、１００ｍＭ〜３５０ｎＭの量で使用することができる。
【０３０８】
製剤化された抗体の凝集を低減し、かつ／または製剤中の微粒子の形成を最小化し、かつ／または吸着を低減するように、界面活性剤もまた、抗体製剤へと添加することができる。例示的な界面活性剤は、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル（Ｔｗｅｅｎ）、ポリオキシエチレンアルキルエーテル（Ｂｒｉｊ）、アルキルフェニルポリオキシエチレンエーテル（Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ）、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンコポリマー（Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ；Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）、およびドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）を含む。適切なポリオキシエチレンソルビタン−脂肪酸エステルの例は、ポリソルベート２０（Ｔｗｅｅｎ  ２０（商標）の商標名で販売されている）およびポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ  ８０（商標）の商標名で販売されている）である。適切なポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンコポリマーの例は、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ６８またはＰｏｌｏｘａｍｅｒ  １８８（商標）の商品名で販売されている、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンコポリマーである。適切なポリオキシエチレンアルキルエーテルの例は、Ｂｒｉｊ（商標）の商標名で販売されている、ポリオキシエチレンアルキルエーテルである。界面活性剤の例示的な濃度は、約０．００１％〜約１％ｗ／ｖの範囲でありうる。
【０３０９】
凍結乾燥工程中の不安定化状態に対して易変性の有効成分（例えば、タンパク質）を保護するために、凍結乾燥保護剤もまた添加することができる。例えば、公知の凍結乾燥保護剤は、糖（グルコースおよびスクロースを含む）；ポリオール（マンニトール、ソルビトール、およびグリセロールを含む）；およびアミノ酸（アラニン、グリシン、およびグルタミン酸を含む）を含む。凍結乾燥保護剤は、約１０ｍＭ〜５００ｎＭの量で含まれうる。
【０３１０】
一部の実施形態では、対象製剤は、対象抗体、および上記で同定した薬剤（例えば、界面活性剤、緩衝剤、安定化剤、等張化剤）のうちの１つまたは複数を含み、エタノール、ベンジルアルコール、フェノール、ｍ−クレゾール、ｐ−クロル−ｍ−クレゾール、メチルパラベンもしくはプロピルパラベン、塩化ベンザルコニウム、およびこれらの組合せなど、１つまたは複数の保存剤を本質的に含まない。他の実施形態では、保存剤は、例えば、約０．００１〜約２％（ｗ／ｖ）の範囲の濃度で、製剤中に含まれる。
【０３１１】
例えば、対象製剤は、非経口投与に適する、液体製剤または凍結乾燥製剤であることが可能であり、約１ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの対象抗体；約０．００１％〜約１％の、少なくとも１つの界面活性剤；約１ｍＭ〜約１００ｍＭの緩衝剤；任意選択で、約１０ｍＭ〜約５００ｍＭの安定化剤；および約５ｍＭ〜約３０５ｍＭの等張化剤を含むことができ、ｐＨが約４．０〜約７．０である。
【０３１２】
別の例として、対象の非経口製剤は、約１ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの対象抗体；０．０４％のＴｗｅｅｎ  ２０  ｗ／ｖ；２０ｍＭのＬ−ヒスチジン；および２５０ｍＭのスクロースを含み；ｐＨが５．５である、液体製剤または凍結乾燥製剤である。
【０３１３】
別の例として、対象の非経口製剤は、１）１５ｍｇ／ｍＬの対象抗体；０．０４％のＴｗｅｅｎ  ２０  ｗ／ｖ；２０ｍＭのＬ−ヒスチジン；および２５０ｍＭのスクロースを含み；ｐＨが５．５であるか；または２）７５ｍｇ／ｍＬの対象抗体；０．０４％のＴｗｅｅｎ  ２０  ｗ／ｖ；２０ｍＭのＬ−ヒスチジン；および２５０ｍＭのスクロースを含み；ｐＨが５．５であるか；または３）７５ｍｇ／ｍＬの対象抗体；０．０２％のＴｗｅｅｎ  ２０  ｗ／ｖ；２０ｍＭのＬ−ヒスチジン；および２５０ｍＭのスクロースを含み；ｐＨが５．５であるか；または４）７５ｍｇ／ｍＬの対象抗体；０．０４％のＴｗｅｅｎ  ２０  ｗ／ｖ；２０ｍＭのＬ−ヒスチジン；および２５０ｍＭのトレハロースを含み；ｐＨが５．５であるか；または５）７５ｍｇ／ｍＬの対象抗体；０．０２％のＴｗｅｅｎ  ２０  ｗ／ｖ；２０ｍＭのＬ−ヒスチジン；および２５０ｍＭのトレハロースを含み；ｐＨが５．５である凍結乾燥製剤を含む。
【０３１４】
別の例として、対象の非経口製剤は、１）７．５ｍｇ／ｍＬの対象抗体；０．０２％のＴｗｅｅｎ  ２０  ｗ／ｖ；１２０ｍＭのＬ−ヒスチジン；および２５０  １２５ｍＭのスクロースを含み；ｐＨが５．５であるか；または２）３７．５ｍｇ／ｍＬの対象抗体；０．０２％のＴｗｅｅｎ  ２０  ｗ／ｖ；１０ｍＭのＬ−ヒスチジン；および１２５ｍＭのスクロースを含み；ｐＨが５．５であるか；または３）３７．５ｍｇ／ｍＬの対象抗体；０．０１％のＴｗｅｅｎ  ２０  ｗ／ｖ；１０ｍＭのＬ−ヒスチジン；および１２５ｍＭのスクロースを含み；ｐＨが５．５であるか；または４）３７．５ｍｇ／ｍＬの対象抗体；０．０２％のＴｗｅｅｎ  ２０  ｗ／ｖ；１０ｍＭのＬ−ヒスチジン；１２５ｍＭのトレハロースを含み；ｐＨが５．５であるか；または５）３７．５ｍｇ／ｍＬの対象抗体；０．０１％のＴｗｅｅｎ  ２０  ｗ／ｖ；１０ｍＭのＬ−ヒスチジン；および１２５ｍＭのトレハロースを含み；ｐＨが５．５であるか；または６）５ｍｇ／ｍＬの対象抗体；０．０２％のＴｗｅｅｎ  ２０  ｗ／ｖ；２０ｍＭのＬ−ヒスチジン；および２５０ｍＭのトレハロースを含み；ｐＨが５．５であるか；または７）７５ｍｇ／ｍＬの対象抗体；０．０２％のＴｗｅｅｎ  ２０  ｗ／ｖ；２０ｍＭのＬ−ヒスチジン；および２５０ｍＭのマンニトールを含み；ｐＨが５．５であるか；または８）７５ｍｇ／ｍＬの対象抗体；０．０２％のＴｗｅｅｎ  ２０  ｗ／ｖ；２０ｍＭのＬ−ヒスチジン；および１４０ｍＭの塩化ナトリウムを含み；ｐＨが５．５であるか；または９）１５０ｍｇ／ｍＬの対象抗体；０．０２％のＴｗｅｅｎ  ２０  ｗ／ｖ；２０ｍＭのＬ−ヒスチジン；および２５０ｍＭのトレハロースを含み；ｐＨが５．５であるか；または１０）１５０ｍｇ／ｍＬの対象抗体；０．０２％のＴｗｅｅｎ  ２０  ｗ／ｖ；２０ｍＭのＬ−ヒスチジン；および２５０ｍＭのマンニトールを含み；ｐＨが５．５であるか；または１１）１５０ｍｇ／ｍＬの対象抗体；０．０２％のＴｗｅｅｎ  ２０  ｗ／ｖ；２０ｍＭのＬ−ヒスチジン；および１４０ｍＭの塩化ナトリウムを含み；ｐＨが５．５であるか；または１２）１０ｍｇ／ｍＬの対象抗体；０．０１％のＴｗｅｅｎ  ２０  ｗ／ｖ；２０ｍＭのＬ−ヒスチジン；および４０ｍＭの塩化ナトリウムを含み；ｐＨが５．５である液体製剤である。
【０３１５】
対象抗体は、吸入を介して投与されるエアゾール製剤中で利用することができる。対象抗体は、ジクロロジフルオロメタン、プロパン、窒素など、加圧された許容される噴霧剤へと製剤化することができる。経鼻スプレー製剤などのエアゾール製剤は、防腐剤および等張剤を有する、活性薬剤の精製水溶液または他の精製溶液を含む。このような製剤は、鼻腔粘膜と適合性のｐＨおよび等張性状態へと調整される。
【０３１６】
さらに、対象抗体は、乳化基剤または水溶性基剤など、様々な基剤と混合することにより、坐剤とすることができる。対象抗体は、坐剤を介して、直腸内投与することができる。坐剤は、体温では溶融するが、室温では固化する、ココアバター、カーボワックス、およびポリエチレングリコールなどの媒体を含みうる。
【０３１７】
シロップ剤、エリキシル剤、および懸濁剤など、経口投与用または直腸内投与用の単位剤形であって、各投与量単位、例えば、茶さじ１杯、大さじ１杯、錠剤、または坐剤が、既定量の組成物を含有する、単位剤形を提供することができる。同様に、注射投与用または静脈内投与用の単位剤形は、滅菌水、通常の生理食塩水、または別の薬学的に許容されるキャリア中の溶液としての組成物中に、対象抗体を含みうる。
【０３１８】
本明細書で使用される「単位剤形」という用語は、ヒト被験体および動物被験体のための単位投与量として適する、物理的に個別の単位を指し、各単位は、薬学的に許容される希釈剤、キャリア、または媒体と会合して、所望の効果をもたらすのに十分な量に計算された、既定分量の、本開示の抗ＬＡＧ−３抗体を含有する。対象抗体の仕様は、用いられる特定の抗体、達成される効果、および宿主における各抗体と関連する薬力学に依存しうる。
【０３１９】
他の投与方式もまた、本開示の方法と共に使用が見出される。例えば、対象抗体は、坐剤に、場合によって、エアゾール剤および鼻腔内組成物に製剤化することができる。坐剤のためには、媒体組成物は、ポリアルキレングリコール、またはトリグリセリドなど、従来の結合剤およびキャリアを含む。このような坐剤は、有効成分を、約０．５％〜約１０％（ｗ／ｗ）、例えば、約１％〜約２％の範囲で含有する混合物から形成することができる。
【０３２０】
鼻腔内製剤は通例、鼻腔粘膜への刺激を引き起こしたり、繊毛機能を著しく撹乱したりしない媒体を含む。水、生理食塩水溶液、または他の公知の物質などの希釈剤も用いることができる。経鼻製剤はまた、クロロブタノールおよび塩化ベンザルコニウムなどであるがこれらに限定されない保存剤も含有しうる。鼻腔粘膜による対象抗体の吸収を増強するように、界面活性剤も存在しうる。
【０３２１】
対象抗体は、注射用製剤として投与することができる。注射用組成物は、液体溶液または懸濁液として調製することが典型的であるが、注射の前に液体媒体中に溶解または懸濁させるのに適する固体形態もまた、調製することができる。調製物はまた、乳化させても、リポソーム媒体内に封入した抗体でもよい。
【０３２２】
適切な賦形剤媒体は、例えば、水、食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールなど、およびこれらの組合せである。加えて、所望の場合、媒体は、保湿剤または乳化剤またはｐＨ緩衝化剤など、少量の補助物質も含有しうる。このような剤形を調製する実際の方法は、当業者に公知であるか、または明らかであろう。例えば、Remington's  Pharmaceutical  Sciences、Mack  Publishing  Company、Easton、Pennsylvania、１７版、１９８５年を参照されたい。投与される組成物または製剤は、いずれにせよ、処置される対象において所望の状態を達成するのに適正な分量の対象抗体を含有するであろう。
【０３２３】
媒体、アジュバント、キャリア、または希釈剤など、薬学的に許容される賦形剤は、公衆にたやすく入手可能である。さらに、ｐＨ調整剤および緩衝化剤、張性調整剤、安定化剤、保湿剤など、薬学的に許容される補助物質も、公衆にたやすく入手可能である。
【０３２４】
一部の実施形態では、対象抗体を、制御放出製剤に製剤化する。持続放出調製物は、当技術分野で周知の方法を使用して調製することができる。持続放出調製物の適切な例は、抗体を含有する固体の疎水性ポリマーによる半透性マトリックスであって、成形品、例えば、フィルムまたはマイクロカプセルの形態にあるマトリックスを含む。持続放出マトリックスの例は、ポリエステル、Ｌ−グルタミン酸と、エチル−Ｌ−グルタメートとのコポリマー、非分解性エチレン−酢酸ビニル、ハイドロゲル、ポリラクチド、分解性乳酸−グリコール酸コポリマー、およびポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸を含む。持続放出調製物中に含まれる抗体の、生物学的活性の可能な喪失および免疫原性の可能な変化は、適切な添加剤を使用することにより、水分含量を制御することにより、および特異的ポリマーマトリックス組成物を開発することにより防止することができる。
【０３２５】
本開示の範囲内にある制御放出は、いくつかの延長放出剤形のうちのいずれか１つを意味すると解することができる。本開示の目的では、以下の用語：連続放出、制御放出、遅延放出、デポー剤、延長放出、段階的放出、即時放出、長期放出、プログラム放出、長時間放出、比例放出、長期化放出、リポジトリー、遅延、緩徐放出、間隔放出、持続放出、タイムコート、時限放出、遅延作用、延長作用、多層時間作用、長時間作用型、長期作用、反復作用、緩徐作用型、持続作用、および持続作用投薬は、制御放出と実質的に同等であると考えることができる。これらの用語についてのさらなる考察は、Lesczek  Krowczynski、Extended-Release  Dosage  Forms、１９８７年（CRC  Press,  Inc.）において見出すことができる。
【０３２６】
多様な制御放出技術は、薬物剤形の非常に広範なスペクトルを対象とする。制御放出技術は、物理系および化学的系を含むがこれらに限定されない。
【０３２７】
物理系は、マイクロカプセル化系、マクロカプセル化系、および膜系など、速度制御膜を有するレザバー系；中空糸、超微小孔性三酢酸セルロース、および多孔性ポリマー基質、および発泡体など、速度制御膜を伴わないレザバー系；非多孔性、ポリマー性、またはエラストマー性のマトリックス内に物理的に溶存させた系（例えば、非浸食性、浸食性、環境作用物質進入性、および分解性）、および非多孔性、ポリマー性、またはエラストマー性のマトリックス内に物理的に分散させた材料（例えば、非浸食性、浸食性、環境作用物質進入、および分解性）を含むモノリシック系；制御外層と化学的に類似するかまたは類似しないレザバー層を含む層状構造；ならびに浸透圧ポンプまたはイオン交換樹脂への吸着など、他の物理的方法を含むがこれらに限定されない。
【０３２８】
化学系は、ポリマーマトリックスの化学的浸食（例えば、異種浸食または同種浸食）、またはポリマーマトリックスの生物学的浸食（例えば、異種または同種）を含むがこれらに限定されない。制御放出のための系の類別についてのさらなる考察は、Agis  F.  Kydonieus、Controlled  Release  Technologies：Methods,  Theory  and  Applications、１９８０年（CRC  Press,  Inc.）において見出すことができる。
【０３２９】
いくつかの経口投与のために開発されている制御放出薬物製剤がある。これらは、浸透圧制御型胃腸管送達系；動圧制御型胃腸管送達系；微小孔性膜透過制御型胃腸管送達デバイスを含む、膜透過制御型胃腸管送達系；胃液抵抗性腸ターゲティング制御放出胃腸管送達デバイス；ゲル拡散制御型胃腸管送達系；ならびにカチオン性薬物およびアニオン性薬物を含む、イオン交換制御型胃腸管送達系を含むがこれらに限定されない。制御放出薬物送達系に関するさらなる情報は、Yie  W.  Chien、Novel  Drug  Delivery  Systems、１９９２年（Marcel  Dekker,  Inc.）において見出すことができる。
【０３３０】
投与量
適切な投与量は、主治医または他の有資格の医療従事者が、多様な臨床因子に基づき決定することができる。医療技術分野で周知の通り、任意の１人の患者のための投与量は、患者の体格、体表面積、年齢、投与される特定の化合物、患者の性別、投与回数および投与経路、全般的な健康状態、ならびに共時的に投与されている他の薬物を含む多くの因子に依存する。対象抗体は、用量当たり体重１ｋｇ当たり１ｎｇ〜体重１ｋｇ当たり２０ｍｇ、例えば、体重１ｋｇ当たり０．００１〜１０、０．０１〜１０、０．１〜１０、１〜１０、０．００１〜１、０．０１〜１、０．１〜１、０．０５〜５、０．０５〜０．５、または０．５〜５ｍｇの量で投与することができる。しかし、とりわけ、上述の因子を考慮して、この例示的な範囲を下回るか、または上回る用量も想定される。レジメンが連続注入である場合、用量は、１分間当たり体重１ｋｇ当たり１μｇ〜体重１ｋｇ当たり１０ｍｇの範囲でありうる。
【０３３１】
一部の実施形態では、対象の抗ＬＡＧ−３抗体の用量は、０．００１μｇ〜１００ｍｇの範囲、例えば、０．００１μｇ〜１０ｍｇ、０．００１μｇ〜１ｍｇ、０．００１μｇ〜０．１ｍｇ、０．０１μｇ〜１０ｍｇ、０．１μｇ〜１０ｍｇ、０．１μｇ〜１ｍｇ、または０．１μｇ〜０．１ｍｇ、または０．０１〜１００ｍｇ、０．０１〜１０ｍｇ、０．０１〜１ｍｇ、０．０１〜０．１ｍｇ、０．１〜１００ｍｇ、０．１〜１０ｍｇ、０．１〜１ｍｇにある。
【０３３２】
一部の実施形態では、投与量は、例えば、体重１ｋｇ当たり約０．０００１〜１００ｍｇ、または体重１ｋｇ当たり約０．０１〜５ｍｇ（例えば、０．０２〜５ｍｇ／ｋｇ、０．２５〜５ｍｇ／ｋｇ、０．５〜５ｍｇ／ｋｇ、０．７５〜５ｍｇ／ｋｇ、１〜５ｍｇ／ｋｇ、２〜５ｍｇ／ｋｇなど）の範囲でありうる。例えば、投与量は、体重１ｋｇ当たり０．１、１、もしくは１０ｍｇ、または０．０１〜１０ｍｇ／ｋｇの範囲内、または少なくとも０．１ｍｇ／ｋｇでありうる。
【０３３３】
特定の実施形態では、本発明の抗ＬＡＧ−３抗体またはその断片の用量は、最大で体重１ｋｇ当たり０．５ｍｇ、例えば、体重１ｋｇ当たり０．０００１〜０．５ｍｇ、体重１ｋｇ当たり０．００１〜０．５ｍｇ、体重１ｋｇ当たり０．０１〜０．５ｍｇ、体重１ｋｇ当たり０．１〜０．５ｍｇ、体重１ｋｇ当たり０．０００１〜０．１ｍｇ、体重１ｋｇ当たり０．００１〜０．１ｍｇ、体重１ｋｇ当たり０．０１〜０．１ｍｇの範囲である。
【０３３４】
一部の実施形態では、対象の抗ＬＡＧ−３抗体の用量を、約０．００１μｇ／ｍｌ〜約１ｍｇ／ｍｌ、例えば、０．０００１μｇ／ｍｌ〜１μｇ／ｍｌ、０．００１μｇ／ｍｌ〜１μｇ／ｍｌ、０．００１μｇ／ｍｌ〜０．１μｇ／ｍｌ、０．０１〜１、または０．０１〜０．１μｇ／ｍｌ、または約０．００５μｇ／ｍｌ〜約１μｇ／ｍｌ、または約０．１μｇ／ｍｌ〜約１μｇ／ｍｌ、または約１μｇ／ｍｌ〜約２．５μｇ／ｍｌ、約２．５μｇ／ｍｌ〜約５μｇ／ｍｌ、約５μｇ／ｍｌ〜約７．５μｇ／ｍｌ、約７．５μｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、約１０μｇ／ｍｌ〜約２５μｇ／ｍｌ、約２５μｇ／ｍｌ〜約５０μｇ／ｍｌ、約５０μｇ／ｍｌ〜約１００μｇ／ｍｌ、約１００μｇ／ｍｌ〜約２５０μｇ／ｍｌ、約２５０μｇ／ｍｌ〜約５００μｇ／ｍｌ、約５００μｇ／ｍｌ〜約７５０μｇ／ｍｌ、または約７５０μｇ／ｍｌ〜約１０００μｇ／ｍｌのピーク血清濃度をもたらす量で投与する。一部の実施形態では、対象の抗ＬＡＧ−３抗体を、１ｍｇ／ｍｌを超える、例えば、約１ｍｇ／ｍｌ〜約２ｍｇ／ｍｌ、約２ｍｇ／ｍｌ〜約５ｍｇ／ｍｌ、または約５ｍｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌのピーク血清濃度をもたらす量で投与する。他の実施形態では、本発明の抗ＬＡＧ−３抗体またはその断片を、最大で１μｇ／ｍｌ、例えば、０．０００１μｇ／ｍｌ〜１μｇ／ｍｌ、０．００１μｇ／ｍｌ〜１μｇ／ｍｌ、０．０１μｇ／ｍｌ〜１μｇ／ｍｌ、０．１〜１μｇ／ｍｌ、０．０００１μｇ／ｍｌ〜０．１μｇ／ｍｌ、０．００１μｇ／ｍｌ〜０．１μｇ／ｍｌ、または０．０１μｇ／ｍｌ〜０．１μｇ／ｍｌの範囲のピーク血清濃度をもたらす量で投与する。このような投与は、皮下注射により行うことが適切である。
【０３３５】
個体には、このような用量を、毎日、隔日、毎週、または実証解析により決定される、他の任意のスケジュールに従い投与することができる。例示的な処置は、長期間、例えば、少なくとも６カ月間にわたる、複数投与量による投与を伴う。さらなる例示的な処置レジメンは、隔週１回または毎月１回または３〜６カ月ごとに１回の投与を伴う。
【０３３６】
例示的な投与量スケジュールは、毎日０．０１〜１ｍｇ／ｋｇ、０．０１〜０．１ｍｇ／ｋｇ、０．１〜１ｍｇ／ｋｇ、１〜１０ｍｇ／ｋｇ、もしくは１５ｍｇ／ｋｇ、隔日０．０２〜２０ｍｇ／ｋｇ、例えば、０．２ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、もしくは２０ｍｇ／ｋｇ、または毎週０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ、例えば、１ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ、もしくは６０ｍｇ／ｋｇを含む。一部の方法では、結合特異性が異なる、２つまたはこれを超えるモノクローナル抗体を、同時に投与するが、この場合、投与される各抗体の投与量は、示した範囲内に収まる。進行は、定期的な評価によりモニタリングすることができる。
【０３３７】
被験体における、ＬＡＧ−３を発現するＣＤ４＋  Ｔ細胞および／またはＣＤ８＋  Ｔ細胞の数は、比較的小さい。本発明の抗体（特に、ヒトＩｇＧアイソタイプ抗体（これは、ＣＤＣ活性およびＡＤＣＣ活性を欠く）などの、少なくとも２週間の血清半減期を有し、著明なＣＤＣおよびＡＤＣＣ活性を欠く、本発明の抗体、またはＣＤＣ活性およびＡＤＣＣ活性を低減するか、または消失させる、１つもしくは複数の変異を含む抗体）の単回投与は、抗原により誘導されるＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋  Ｔ細胞の増殖を、少なくとも数週間阻害することにおいて、有効でありうることが予測される。この見地から、適切な処置レジメンは、本発明の抗体（例えば、０．０１〜１ｍｇ／ｋｇの抗体）の、４、６、８、もしくは１０週間ごとに１回、または２もしくは３カ月ごとに１回の投与を含みうる。このような処置は、少なくとも６カ月間、または少なくとも１、２、３、４、もしくは５年間、またはこれを超える期間にわたり、例えば、投与により処置される疾患の経過を通して、または被験体の生涯を通して提供することができる。
【０３３８】
当業者は、用量レベルおよび投与スケジュールが、具体的な抗体、症状の重症度、および被験体の副作用に対する感受性の関数として変動しうることをたやすく認識するであろう。所与の化合物に好ましい投与量および投与スケジュールは、当業者が、様々な手段により、たやすく決定可能である。
【０３３９】
投与経路
薬物送達に適する、ｉｎ  ｖｉｖｏ法およびｅｘ  ｖｉｖｏ法のほか、全身投与経路および局所投与経路を含む、任意の利用可能な方法および経路を使用して、対象抗体を、個体へと投与する。
【０３４０】
従来の薬学的に許容される投与経路は、鼻腔内、筋内、気管内、髄腔内、頭蓋内、皮下、皮内、局所、静脈内、腹腔内、動脈内（例えば、頸動脈を介する）、脊髄内または脳内送達、直腸内、経鼻、経口、ならびに他の経腸および非経口投与経路を含む。投与経路は、所望の場合、抗体および／または所望の効果に応じて、組み合わせる、あるいは調整することができる。対象抗体の組成物は、単回投与で、または複数回投与で投与することができる。一部の実施形態では、対象抗体の組成物は、経口投与する。一部の実施形態では、対象抗体の組成物は、吸入経路を介して投与する。一部の実施形態では、対象抗体の組成物は、鼻腔内投与する。一部の実施形態では、対象抗体の組成物は、局所投与する。一部の実施形態では、対象抗体の組成物は、頭蓋内投与する。一部の実施形態では、対象抗体の組成物は、静脈内投与する。一部の実施形態では、対象抗体の組成物は、髄腔内投与する。
【０３４１】
本開示の抗体は、従来の薬物の送達に適する、任意の利用可能な、従来の方法および全身経路または局所経路を含む経路を使用して、宿主へと投与することができる。一般に、本発明により想定される投与経路は、経腸経路、非経口経路、または吸入経路を含むが必ずしもこれらに限定されない。
【０３４２】
吸入投与以外の非経口投与経路は、局所経路、経皮経路、皮下経路、筋内経路、眼窩内経路、関節包内経路、脊髄内経路、胸骨内経路、髄腔内経路、および静脈内経路、すなわち、消化管を介する以外の任意の投与経路を含むが必ずしもこれらに限定されない。非経口投与は、対象抗体の、全身送達または局所送達をもたらすように実行することができる。全身送達が所望される場合、投与は、医薬調製物の、侵襲性であるかまたは全身吸収性である、局所投与または経粘膜投与を伴うことが典型的である。
【０３４３】
対象抗体はまた、被験体へと、経腸投与により送達することもできる。経腸投与経路は、経口達および直腸内（例えば、坐剤を使用する）送達を含むが必ずしもこれらに限定されない。
【０３４４】
「処置」は、少なくとも宿主が罹患する病態と関連する症状の改善を意味し、ここで、改善は、例えば、免疫障害など、処置される病態と関連する症状の、少なくともパラメーターの大きさにおける低減を指すように、広い意味で使用される。したがって、処置はまた、病態、または少なくともこれと関連する症状を、完全に阻害する、例えば、これが生じることを防止するか、またはこれを停止させる、例えば、宿主がもはや、病態、または少なくとも病態を特徴付ける症状を患わないように、これを終結させた状況も含む。
【０３４５】
一部の実施形態では、対象抗体は、例えば、脳動脈内の部位へ注射および／または送達により、または脳組織へと直接、投与する。対象抗体はまた、例えば、標的部位への遺伝子銃送達により、標的部位へと直接投与することもできる。
【０３４６】
様々な宿主（本明細書では、「宿主」という用語を、「被験体」、「個体」、および「患者」という用語と互換的に使用する）が、対象の方法に従い処置可能である。一般に、このような宿主は、「哺乳動物」または「哺乳動物の」宿主であり、この場合、これらの用語は、食肉目（例えば、ネコ）、草食動物（例えば、ウシ、ウマ、およびヒツジ）、雑食動物（例えば、イヌ、ヤギ、およびブタ）、齧歯目（例えば、マウス、モルモット、およびラット）、および霊長目（例えば、ヒト、チンパンジー、およびサル）を含む、哺乳綱内の生物について記載するのに広く使用される。一部の実施形態では、宿主は、哺乳動物、魚類、または無脊椎動物など、補体系を有する個体である。一部の実施形態では、宿主は、補体系を含有する哺乳動物、魚類、または無脊椎動物である、愛玩動物、農場動物、作業動物、動物園動物、または実験動物である。一部の実施形態では、宿主は、ヒトである。
【０３４７】
実施形態は、個体へと投与するための、対象の抗ＬＡＧ−３抗体を含む組成物を含有するのに適する容器を含む組成物を含む。例えば、対象抗体は、医薬組成物を含有するのに適する容器内に配置することができる。容器は、例えば、ボトル（例えば、キャップなどの閉止デバイスを有する）、ブリスターパック（例えば、ブリスター１つ当たり１回または複数回の用量の封入をもたらす）、バイアル、可撓性のパッケージング（例えば、密閉型Ｍｙｌａｒバッグまたはプラスチックバッグ）、アンプル（溶液による単回用量用）、ドロッパー、シリンジ、薄膜、チューブなどでありうる。一部の実施形態では、滅菌容器などの容器は、対象の医薬組成物を含む。一部の実施形態では、容器は、ボトルまたはシリンジである。一部の実施形態では、容器は、ボトルである。一部の実施形態では、容器は、シリンジである。
【０３４８】
例えば、経口用量または注射用用量では、単位用量の対象抗体を有するキットが提供される。このようなキットでは、単位用量を含有する容器に加えて、情報を与える添付文書が、目的の病態の処置における抗体の使用およびこれに付随する有益性について記載している。好ましい化合物および単位用量は、本明細書の上で記載した化合物および単位用量である。
【０３４９】
処置法
本発明に従い、医薬としての使用のための、本発明の抗体、もしくはその抗原結合性断片、または本発明の医薬組成物もまた提供される。
【０３５０】
本発明の抗体、断片、または組成物は、被験体におけるＬＡＧ−３の効果を増大させることが所望される、任意の治療において利用することができる。
【０３５１】
「被験体」という用語は、任意のヒトまたは非ヒト動物を含む。「非ヒト動物」という用語は、非ヒト霊長動物、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ニワトリ、両生類、および爬虫類など、全ての脊椎動物、例えば、哺乳動物および非哺乳動物を含むが、非ヒト霊長動物、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウシ、およびウマなど、哺乳動物が好ましい。
【０３５２】
抗体、断片、または組成物は、Ｔ細胞の増殖および／または機能を負に調節することが所望される、任意の治療において使用することができる。
【０３５３】
本発明に従い、被験体における、ＣＤ４＋および／もしくはＣＤ８＋  Ｔ細胞の増殖もしくは活性と関連する障害、または被験体におけるＬＡＧ−３の発現および／もしくは活性の減少と関連する障害の処置における使用のための、本発明の抗体、もしくはその抗原結合性断片、または本発明の医薬組成物もまた提供される。
【０３５４】
本発明に従い、被験体における、ＣＤ４＋および／もしくはＣＤ８＋  Ｔ細胞の増殖もしくは活性と関連する障害、または被験体におけるＬＡＧ−３の発現および／もしくは活性の減少と関連する障害を処置するための医薬の製造における、本発明の抗体、もしくはその抗原結合性断片、または本発明の医薬組成物の使用もまた提供される。
【０３５５】
さらに、本発明に従い、被験体における、ＣＤ４＋および／もしくはＣＤ８＋  Ｔ細胞の増殖もしくは活性と関連する障害、または被験体におけるＬＡＧ−３の発現および／もしくは活性の減少と関連する障害を処置する方法であって、有効量の、本発明の抗体、もしくはその抗原結合性断片、または本発明の医薬組成物を、このような処置を必要とする被験体へと投与するステップを含む方法も提供される。
【０３５６】
ＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋  Ｔ細胞の増殖または活性と関連する障害は、免疫障害、特に、炎症性疾患または自己免疫障害などのＴ細胞媒介性免疫障害でありうる。
【０３５７】
抗体、断片、または組成物を使用して、炎症過程を軽減する、または炎症過程を防止することができる。一実施形態では、Ｔ細胞の増殖または活性化、特に、不適切な炎症性免疫応答に関与する、例えば、このような応答の近傍／場所へと動員されるＴ細胞の増殖または活性化の、ｉｎ  ｖｉｖｏにおける低減が提供される。
【０３５８】
本明細書で用いられる、Ｔ細胞の増殖または活性化の低減は、処置の前または処置を伴わない場合と比較して、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、またはこれを超えるパーセントの低減でありうる。
【０３５９】
有利には、本発明に従う抗体、断片、または組成物による処置は、患者の一般的なＴ細胞（非活性化Ｔ細胞）レベルを低減することなく、Ｔ細胞の増殖または活性化の低減を可能としうる。これは、副作用の減少を結果としてもたらし、患者におけるＴ細胞の枯渇を防止しうる。
【０３６０】
免疫障害は、例えば、感染症（ウイルス、細菌、真菌、および寄生虫の）、感染症と関連する内毒素性ショック、敗血症、関節炎、関節リウマチ、喘息、ＣＯＰＤ、骨盤炎症性疾患、アルツハイマー病、炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、ペーロニー病、セリアック病、胆嚢疾患、毛巣病、腹膜炎、乾癬、血管炎、手術に伴う癒着、脳卒中、Ｉ型糖尿病、ライム病、関節炎、髄膜脳炎、自己免疫性ブドウ膜炎；多発性硬化症、ループス（全身性エリテマトーデスなど）、およびギラン−バレー症候群など、中枢および末梢神経系の免疫媒介性炎症性障害；アトピー性皮膚炎、自己免疫性肝炎、線維化肺胞炎、グレーブス病、ＩｇＡ腎症、特発性血小板減少性紫斑病、メニエール病、天疱瘡、原発性胆汁性肝硬変、サルコイドーシス、強皮症、ウェゲナー肉芽腫症、他の自己免疫障害、膵炎、外傷（手術による外傷）、移植片対宿主病、移植片拒絶；心筋梗塞およびアテローム性動脈硬化などの虚血性疾患を含む心疾患；血管内凝固、骨吸収、骨粗鬆症、骨関節炎、歯周炎、ならびに低塩酸症（hypochlorhydia）、または母児間免疫寛容の欠如と関連する不妊症からなる群から選択され得る。
【０３６１】
本発明の抗体、断片、または組成物は、ＬＡＧ−３の、ＭＨＣクラスＩＩ分子への結合を阻害するか、抗原提示細胞（ＡＰＣ）への、ＭＨＣクラスＩＩ活性化シグナルをアンタゴナイズするか、またはＬＡＧ−３により誘導されるＡＰＣの活性化を阻害することが所望される、任意の治療において使用することができる。
【０３６２】
本発明に従い、被験体におけるＡＰＣの活性化と関連する障害の処置における使用のための、本発明の抗体、もしくはその抗原結合性断片、または本発明の医薬組成物もまた提供される。
【０３６３】
本発明に従い、被験体におけるＡＰＣの活性化と関連する障害を処置するための医薬の製造における、本発明の抗体、もしくはその抗原結合性断片、または本発明の医薬組成物の使用もまた提供される。
【０３６４】
さらに、本発明に従い、被験体におけるＡＰＣの活性化と関連する障害を処置する方法であって、有効量の、本発明の抗体、もしくはその抗原結合性断片、または本発明の医薬組成物を、このような処置を必要とする被験体へと投与するステップを含む方法も提供される。
【０３６５】
本明細書で使用される、「処置」、「〜を処置すること」、「〜を処置する」などの用語は、所望の薬理学的効果および／または生理学的効果を得ることを指す。効果は、疾患もしくはその症状の完全もしくは部分的な防止の点で予防的な場合もあり、かつ／または疾患および／もしくは疾患に帰せられる有害効果の部分的もしくは完全な治癒の点で治療的な場合もある。本明細書で使用される「処置」は、哺乳動物、特に、ヒトにおける疾患の任意の処置を対象とし、（ａ）疾患に素因がありうるが、それを有するとまだ診断されてはいない被験体において、疾患が生じることを防止すること；（ｂ）疾患を阻害すること、すなわち、その進展を停止させること；および（ｃ）疾患を和らげること、すなわち、疾患の退縮を引き起こすことを含む。
【０３６６】
本明細書で互換的に使用される、「個体」、「被験体」、「宿主」、および「患者」という用語は、任意のヒトまたは非ヒト動物を含む。「非ヒト動物」という用語は、非ヒト霊長動物、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ニワトリ、両生類、および爬虫類など、全ての脊椎動物、例えば、哺乳動物および非哺乳動物を含むが、非ヒト霊長動物、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウシ、およびウマなど、哺乳動物が好ましい。
【０３６７】
「治療有効量」または「効果的な量」は、疾患を処置するために、哺乳動物または他の被験体へと投与されると、疾患のためのこのような処置を行うのに十分な、抗ＬＡＧ−３抗体の量を指す。「治療有効量」は、抗ＬＡＧ−３抗体、疾患、およびその重症度、ならびに処置される被験体の年齢、重量などに応じて変動する。
【０３６８】
本明細書で言及される全ての刊行物は、それらとの関係で刊行物が引用される、方法および／または材料について開示および記載するために、参照により本明細書に組み込まれる。
【０３６９】
本発明の実施形態は、これより添付図面を参照して一例としてのみ記載される。
【図面の簡単な説明】
【０３７０】
【図１】図１は、成熟ヒトＬＡＧ−３タンパク質のアミノ酸配列（配列番号２７）を示す。４つの細胞外Ｉｇスーパーファミリードメインは、アミノ酸残基１〜１４９（Ｄ１）、１５０〜２３９（Ｄ２）、２４０〜３３０（Ｄ３）、および３３１〜４１２（Ｄ４）にある。ヒトＬＡＧ−３タンパク質のＤ１ドメインのエクストラループ構造のアミノ酸配列が太字下線で示されている（配列番号４０）。
【０３７１】
【図２】図２は、モノクローナル抗体１３Ｅ２のＶＨ  ＣＤＲループ（Lefranc,  M.-P.ら、Dev.  Comp.  Immunol.、２７巻、５５〜７７頁（２００３年））の図形表示を示す。
【０３７２】
【図３】図３は、コードする核酸配列とアライメントされたモノクローナル抗体１３Ｅ２のＶＨドメインのアミノ酸配列を示す。
【０３７３】
【図４】図４は、モノクローナル抗体１３Ｅ２のＶＬ  ＣＤＲループ（Lefranc,  M.-P.ら、Dev.  Comp.  Immunol.、２７巻、５５〜７７頁（２００３年））の図形表示を示す。
【０３７４】
【図５】図５は、コードする核酸配列とアライメントされたモノクローナル抗体１３Ｅ２のＶＬドメインのアミノ酸配列を示す。
【０３７５】
【図６】図６は、モノクローナル抗体３４Ｆ４のＶＨ  ＣＤＲループ（Lefranc,  M.-P.ら、Dev.  Comp.  Immunol.、２７巻、５５〜７７頁（２００３年））の図形表示を示す。
【０３７６】
【図７】図７は、コードする核酸配列とアライメントされたモノクローナル抗体３４Ｆ４のＶＨドメインのアミノ酸配列を示す。
【０３７７】
【図８】図８は、モノクローナル抗体３４Ｆ４のＶＬ  ＣＤＲループ（Lefranc,  M.-P.ら、Dev.  Comp.  Immunol.、２７巻、５５〜７７頁（２００３年））の図形表示を示す。
【０３７８】
【図９】図９は、コードする核酸配列とアライメントされたモノクローナル抗体３４Ｆ４のＶＬドメインのアミノ酸配列を示す。
【０３７９】
【図１０】図１０は、モノクローナル抗体１３Ｅ２のＶＨ領域をコードするヌクレオチド配列のトップＶ−Ｄ−Ｊ生殖系列ＢＬＡＳＴアライメントを示す。
【０３８０】
【図１１】図１１は、モノクローナル抗体１３Ｅ２のＶＬ領域をコードするヌクレオチド配列のトップＶ−Ｊ生殖系列ＢＬＡＳＴアライメントを示す。
【０３８１】
【図１２】図１２は、モノクローナル抗体３４Ｆ４のＶＨ領域をコードするヌクレオチド配列のトップＶ−Ｄ−Ｊ生殖系列ＢＬＡＳＴアライメントを示す。
【０３８２】
【図１３】図１３は、モノクローナル抗体３４Ｆ４のＶＬ領域をコードするヌクレオチド配列のトップＶ−Ｊ生殖系列ＢＬＡＳＴアライメントを示す。
【０３８３】
【図１４】図１４は、アイソタイプ対照抗体（ｍＩｇＧ１）と比較した、ＬＡＧ−３トランスフェクトチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞に対する種々の濃度のアゴニスト抗ＬＡＧ−３モノクローナル抗体１３Ｅ２および３４Ｆ４、ならびにアンタゴニスト抗ＬＡＧ−３モノクローナル抗体１７Ｂ４の結合の結果を示す。
【０３８４】
【図１５】図１５は、健康なドナー（ドナー１）由来の、アイソタイプ対照抗体（ｍＩｇＧ１）と比較した、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋初代細胞（ＳＥＢ刺激ＰＢＭＣ）に対する種々の濃度のアゴニスト抗ＬＡＧ−３モノクローナル抗体１３Ｅ２および３４Ｆ４、ならびにアンタゴニスト抗ＬＡＧ−３モノクローナル抗体１７Ｂ４の結合の結果を示す。
【０３８５】
【図１６】図１６Ａは、アイソタイプ対照抗体（ｍＩｇＧ１）と比較した、種々の濃度のアゴニスト抗ＬＡＧ−３モノクローナル抗体１３Ｅ２および３４Ｆ４、ならびにアンタゴニスト抗ＬＡＧ−３モノクローナル抗体１７Ｂ４による、ＭＨＣクラスＩＩ陽性Ｂ細胞へのＩＭＰ３２１（ＬＡＧ−３Ｉｇ、１μｇ／ｍｌ）の結合の阻害の結果を示す。図１６Ｂは、アイソタイプ対照抗体（ｍＩｇＧ１）と比較した、種々の濃度のアゴニスト抗ＬＡＧ−３モノクローナル抗体１３Ｅ２および３４Ｆ４、ならびにアンタゴニスト抗ＬＡＧ−３モノクローナル抗体１７Ｂ４の存在下のＩＭＰ３２１（２０ｎｇ／ｍｌ）によるＴＨＰ−１細胞の活性化の阻害の結果を示す。
【０３８６】
【図１７】図１７（Ａ）は、実施例１０に記載されたアッセイに使用されたフローサイトメトリーおよびゲーティング戦略により解析した、ｍＩｇＧ１、１７Ｂ４、１３Ｅ２、または３４Ｆ４の存在下の１人のドナーのＣＤ８＋Ｔ細胞のＣＭＶにより誘導される増殖プロファイルを図示する。図１７（Ｂ）は、同じドナーについてアイソタイプ対照抗体（ｍＩｇＧ１）と比較した、抗体１３Ｅ２、３４Ｆ４、および１７Ｂ４によるＣＤ８＋Ｔ細胞増殖の阻害に関するアッセイの結果を示す。ベースライン増殖も示されている（刺激なし）。
【０３８７】
【図１８】図１８は、幾人かの異なるドナーにおいてアイソタイプ対照抗体（ｍＩｇＧ１）と比較した、抗体１３Ｅ２または３４Ｆ４によるＣＤ４＋またはＣＤ８＋Ｔ細胞増殖の阻害に関するアッセイの結果を示す。
【０３８８】
【図１９】図１９は、ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖に対する種々の濃度のアゴニスト抗ＬＡＧ−３モノクローナル抗体１３Ｅ２および３４Ｆ４の効果を示す。
【０３８９】
【図２０】図２０は、キメラ１３Ｅ２−ヒトＩｇＧ４  Ｆｃ抗体の重鎖アミノ酸配列（図中、キメラ１３Ｅ２−ヒトＩｇＧ４  Ｆｃ重鎖アミノ酸配列は１３Ｅ２ＩｇＧ４ｍｕｔと呼ばれる）、およびキメラ１３Ｅ２−ヒトＩｇＫ抗体の軽鎖アミノ酸配列（図中、キメラ１３Ｅ２−ヒトＩｇＫ軽鎖アミノ酸配列は１３Ｅ２ＩｇＫと呼ばれる）を示す。
【０３９０】
【図２１】図２１は、枯渇、アンタゴニスト、およびアゴニスト抗ＬＡＧ−３抗体のＴ細胞に対する異なる効果を図示する。
【０３９１】
【図２２】図２２は、元のマウスモノクローナル抗体１３Ｅ２の対応する配列（それぞれ、１３Ｅ２  ＶＨおよび１３Ｅ２  ＶＬ）と、ヒト化ＶＨバリアント１〜４（ＶＨ１、ＶＨ２、ＶＨ３、およびＶＨ４）の可変領域のアライメント、およびヒト化ＶＬバリアント１〜４（ＶＬ１、ＶＬ２、ＶＬ３、およびＶＬ４）の可変領域のアライメントを示す。ＣＤＲ配列がグレーで強調されている。元のマウス配列と比較したバリアントのヒト化フレームワーク配列の変化が、下線および太字で示されている。
【０３９２】
【図２３】図２３は、抗体Ｃｈｉｍ１３Ｅ２ＩｇＧ４のキメラ１３Ｅ２−ヒトＩｇＧ４  Ｆｃ重鎖アミノ酸配列（１３Ｅ２ＩｇＧ４ｍｕｔ）とアライメントさせたヒト化１３Ｅ２−ヒトＩｇＧ４  Ｆｃ抗体（ＩＭＰ７６１）の重鎖アミノ酸配列を示す。ＶＨ領域が太字で示され、Ｆｃ領域が強調して示されている。キメラ１３Ｅ２ＩｇＧ４ｍｕｔ配列の対応する残基とは異なるヒト化ＩＭＰ７６１配列のアミノ酸残基に一重下線が引かれている。ＣＤＲ配列（組み合わされたＩＭＧＴ／Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ配列同定に基づく）は二重下線で示されている。
【０３９３】
【図２４】図２４は、抗体Ｃｈｉｍ１３Ｅ２ＩｇＧ４のキメラ１３Ｅ２−ヒトＩｇＫ軽鎖アミノ酸配列（１３Ｅ２ＩｇＫ）とアライメントさせたヒト化１３Ｅ２−ヒトＩｇＫ抗体（ＩＭＰ７６１）の軽鎖アミノ酸配列を示す。ＶＬ領域が太字で示され、ＩｇＫ領域が強調して示されている。キメラ１３Ｅ２Ｉｇκ配列の対応する残基とは異なるヒト化ＩＭＰ７６１配列のアミノ酸残基に一重下線が引かれている。ＣＤＲ配列（組み合わされたＩＭＧＴ／Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ配列同定に基づく）は二重下線で示されている。
【０３９４】
【図２５】図２５は、ＣＨＯ−ＬＡＧ−３＋細胞へのキメラ１３Ｅ２−ヒトＩｇＧ４  Ｆｃ抗体（Ｃｈｉｍ１３Ｅ２ＩｇＧ４）およびＩＭＰ７６１の結合を試験するアッセイの結果を示す。
【０３９５】
【図２６】図２６は、（ａ）抗原により誘導されるＣＤ８＋Ｔ細胞増殖、および（ｂ）ＣＤ８＋Ｔ細胞内のＣＤ２５発現に対するＩＭＰ７６１およびＣｈｉｍ１３Ｅ２ＩｇＧ４の効果を試験するアッセイの結果を示す。
【０３９６】
【図２７】図２７は、アイソタイプをマッチさせた対照と比較した（ａ）ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖の阻害百分率、および（ｂ）ＣＤ８＋Ｔ細胞内のＣＤ２５発現の阻害百分率のプロットとしての、抗原により誘導されるＣＤ８＋Ｔ細胞増殖、およびＣＤ２５発現に対するＩＭＰ７６１およびＣｈｉｍ１３Ｅ２ＩｇＧ４の効果を示す。
【０３９７】
【図２８】図２８は、抗原により誘導されるＣＤ８＋Ｔ細胞増殖に対する種々の濃度のＩＭＰ７６１およびＣｈｉｍ１３Ｅ２ＩｇＧ４の効果を示す。
【０３９８】
【図２９】図２９は、Ｐｒｏｍｅｇａから入手可能なＡＤＣＣ  Ｒｅｐｏｒｔｅｒ  Ｂｉｏａｓｓａｙ（ａ）、およびＩＬ−２刺激ＰＢＭＣをエフェクター細胞として用いたＡＤＣＣアッセイ（結果は、ＰＢＭＣ集団におけるＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞（ｂ）、またはＬＡＧ−３＋ＣＤ４＋およびＬＡＧ−３＋ＣＤ８＋Ｔ細胞（ｃ）の百分率としてプロットされている）を用いて、ＩＭＰ７６１がＬＡＧ−３発現細胞に対して細胞傷害活性を有するかどうかを決定するためのＡＤＣＣアッセイの結果を示す。
【０３９９】
【図３０】図３０は、ＩＭＰ７６１がＬＡＧ−３発現細胞に対して細胞傷害活性を有するかどうかを決定するための、ウサギ補体を用いたＣＤＣアッセイの結果を示す（結果は、ＰＢＭＣ集団における（ａ）ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞、または（ｂ）ＬＡＧ−３＋ＣＤ４＋およびＬＡＧ−３＋ＣＤ８＋Ｔ細胞の百分率としてプロットされている）。
【０４００】
【図３１】図３１は、抗原刺激ＰＢＭＣを抗体と３日間培養した後、ＩＭＰ７６１がＬＡＧ−３発現細胞に対して細胞傷害活性を有するかどうかを決定するためのアッセイの結果を示す。結果は、（ａ）ＰＢＭＣ集団におけるＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞の百分率、および（ｂ）ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞亜集団におけるＬＡＧ−３＋細胞の百分率としてプロットされている。
【発明を実施するための形態】
【０４０１】
（実施例１）
１３Ｅ２抗ＬＡＧ−３モノクローナル抗体の生成
抗ＬＡＧ−３抗体を生成するために、１５匹のＢａｌｂ／ｃマウス（以下にマウス番号１〜１５と呼ばれる）を以下に記載された免疫化プロトコールに従って免疫した。
【０４０２】
１３匹のマウスは、１００μｇのＩＭＰ３２１（ＬＡＧ−３Ｉｇ）、臨床等級ロットＳ０１７／ＬＣ１／０４１０１１（以下「ＬＣ１」と称する）の皮下（ｓ．ｃ．）注射によりそれぞれ免疫した：３回（マウス番号１２）；４回（マウス番号９）；５回（マウス番号５および１４）；または０日目、１５日目、３０日目、５０日目、６７日目、および１０８日目に６回（マウス番号３、および１１）。マウス番号１、２、４、８、１０、１３、および１５は、さらに最大４回免疫した。並行して、対照として使用される２匹のマウス（マウス番号６およびマウス番号７）は、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）中１０μｇのＬＣ１で０日目に１回、ならびに不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）中同じ用量の抗原で１５日目、３０日目、５０日目、６７日目、および１０８日目に免疫した。
【０４０３】
６回目の免疫化の１２日後、マウス番号１、２、３、４、８、１０、１１、１３、および１５の血清を採取し（マウス番号５、９、１２、および１４はすでに屠殺済み）、ＬＡＧ−３  Ｄ１〜Ｄ４を被覆抗原、精製抗ＬＡＧ−３  １７Ｂ４マウスモノクローナル抗体を参照、およびヤギ抗マウスＩｇ−ＨＲＰを標識二次抗体として用いる酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）で解析して、血清中に存在する抗ＬＡＧ−３抗体の濃度を決定した。結果を以下の表２に示す：
【表２】
2018537400.tif 000003
【０４０４】
６回の免疫化後、数匹のマウス（マウス番号３を含む）由来の血清は、これらのマウスがアジュバントとしてのＣＦＡまたはＩＦＡの非存在下、ＩＭＰ３２１で免疫されたにもかかわらず、驚くべきことに２匹の陽性対照マウス（番号６および７）由来の血清より良い結果を示した。この通常とは異なる手法（すなわち、ＣＦＡまたはＩＦＡをアジュバントとして使用することなく、ＰＢＳでＩＭＰ３２１により免疫化）はまた、ＩＦＡでＬＡＧ−３発現ＣＨＯ細胞を用いた他の実験と比較して良い結果を示した（データ不図示）。理論に拘束されることなく、これはＩＭＰ３２１自体がアジュバントとなる、すなわち、ＩＭＰ３２１が樹状細胞の活性化および成熟を直接引き起こすことが理由たり得ると考えられる。
【０４０５】
同じ血清試料を、Ｒａｊｉ  Ｂ細胞で発現されるＩＭＰ３２１のリガンド、ＭＨＣクラスＩＩへのＩＭＰ３２１の結合を阻害する能力について評価した。Ａｌｅｘａ−Ｆｌｕｏｒ４８８コンジュゲートＩＭＰ３２１  １０μｇ／ｍｌの溶液１０マイクロリットルを、各マウスから収集した血清またはナイーブ血清５μｌと共に、およびこれらの血清なしで４℃、３０分間プレインキュベートした。次いでＲａｊｉ細胞を５０μｌの最終容量に添加し、４℃で３０分間インキュベートした。細胞結合蛍光をフローサイトメトリーにより解析した。
【０４０６】
マウス番号３由来の血清が、Ｄ１〜Ｄ４血清ＥＬＩＳＡアッセイにおいて高い力価（４２３μｇ／ｍｌ）（表１）、およびＭＨＣクラスＩＩ＋Ｒａｊｉ  Ｂ細胞へのＩＭＰ３２１の結合を阻害する強い能力を示したため、マウス番号３を選択した。
【０４０７】
６回目の免疫化の１２日後、マウス番号３は、１０μｇ  Ｄ１〜Ｄ４  ＬＡＧ−３（Ｆｃテールなし）組換えタンパク質（ＣＨＯ細胞で作製され、精製された）による静脈内（ｉ．ｖ．）追加免疫を受けた。ｉ．ｖ．追加免疫注射の３日後、マウス番号３を屠殺し、脾臓を取り除いた。脾臓細胞を、脾臓の断片を５ｍｌ注射器ゴムプランジャーで圧搾して完全無血清ＤＭＥＭを含有するペトリ皿に抽出した。脾臓細胞およびＳｐ２／０骨髄腫細胞（ＲＰＭＩ  １６４０＋１０％ＦＣＳ＋２ｍＭグルタミン＋０．５％Ｐ／Ｓで培養した）を無血清培地で洗浄した。２つの細胞型を脾臓細胞：骨髄腫５：１の比で混ぜ合わせ、次いで遠心分離によりペレット化した。融合剤（ＰＥＧ−１５００、ＰＢＳ中ポリエチレングリコール溶液５０％ｗ／ｖ、Ｒｏｃｈｅ  １０７８３６４１００１、１０８細胞当たり１ｍｌ）を３７℃で予熱し、細胞ペレットドロップに滴下した。細胞をごく穏やかに再懸濁し、９０秒後に容量を倍増して希釈した。細胞を、約５分にわたって一定の間隔で１〜１５の最終希釈までさらに希釈した。細胞を次いで遠心分離し、１０％ＦＢＳを含有する培地に再懸濁し、３７℃で約１時間インキュベートした。細胞（１０，０００細胞／ウェル）を次いで、４６枚の９６ウェルプレート中、Ｕｌｔｒａｌｏｗ  Ｉｇ  ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ  １６２５０）１０％、２％  ＨＡＴ（Ｇｉｂｃｏ  ２１０６０）を含有し、１０％ＢＭ  Ｃｏｎｄｉｍｅｄ  Ｈ１（融合後およびクローニング中にＢ細胞ハイブリドーマの増殖を支持するための培養培地への補充物、Ｒｏｃｈｅ  １１０８８９４７００１）を補充した完全ＲＰＭＩに播種し、スクリーニングまで培養した。
【０４０８】
スクリーニングをＬＡＧ−３が膜発現しているＣＨＯ細胞を用いてサイトメトリーにより行って、ＦＩＴＣコンジュゲートヤギ抗マウスＩｇにより明らかにした、増殖しているハイブリドーマの上清に存在する抗体の結合能力を解析した。陽性ハイブリドーマを拡大増殖させ、ＣＨＯ  ＬＡＧ−３＋細胞および野生型ＣＨＯ細胞について再スクリーニングした。この融合から、合計６３２ウェルをＬＡＧ−３発現ＣＨＯ細胞についてＦＡＣＳ解析によりスクリーニングした（１４％の収量）。１３Ｅ２を含む４個のハイブリドーマクローンが、抗ＬＡＧ−３抗体を安定に発現することを見出した。ハイブリドーマを限界希釈により次いでサブクローニングした。
【表３】
2018537400.tif 000004
【０４０９】
（実施例２）
抗体１３Ｅ２の可変領域のアミノ酸配列
ＶＨアミノ酸配列：
【化１】
2018537400.tif 000005
【０４１０】
配列番号７は、抗体１３Ｅ２の重鎖可変（ＶＨ）ドメインのアミノ酸配列である。ＩＭＧＴ番号付けシステム（Lefranc,  M.-P.ら、Nucleic  Acids  Research、２７巻、２０９〜２１２頁（１９９９年））により決定した相補性決定領域（ＣＤＲ）に下線が引かれている。Ｋａｂａｔ番号付けシステムにより決定したＣＤＲは太字で示されている。
【０４１１】
図２は、モノクローナル抗体１３Ｅ２のＶＨ  ＣＤＲループ（Lefranc,  M.-P.ら、Dev.  Comp.  Immunol.、２７巻、５５〜７７頁（２００３年））の図形表示を示す。網かけした円（残基番号４、１２、１３、１９、２１、２３、２５、４１、５０、５２、５３、７１、７６、７８、８７、８９、９１、９４、１００）は、大多数の抗体において疎水性である部位のフレームワーク１〜３中の疎水性（非極性）残基である。四角は、各ＣＤＲの開始および終了の重要な残基である。フレームワークのアミノ酸残基番号２３、４１、８９、１０４、１１８は、構造的に保存されたアミノ酸である。
【０４１２】
ＶＬアミノ酸配列：
【化２】
2018537400.tif 000006
【０４１３】
配列番号８は、抗体１３Ｅ２の軽鎖可変（ＶＬ）ドメインのアミノ酸配列である。ＩＭＧＴ番号付けシステム（Lefranc,  M.-P.ら、Nucleic  Acids  Research、２７巻、２０９〜２１２頁（１９９９年））により決定した相補性決定領域（ＣＤＲ）は下線が引かれている。Ｋａｂａｔ番号付けシステムにより決定したＣＤＲは、太字で示されている。
【０４１４】
【表４】
2018537400.tif 000007
【０４１５】
図４は、モノクローナル抗体１３Ｅ２のＶＬ  ＣＤＲループ（Lefranc,  M.-P.ら、Dev.  Comp.  Immunol.、２７巻、５５〜７７頁（２００３年））の図形表示を示す。網かけした円（残基番号４、１１、１９、２１、２３、２５、４０、４１、５２、５３、５４、７１、７６、８７、８９、９１、９４、９６、１００、１０１）は、大多数の抗体において疎水性である部位のフレームワーク１〜３中の疎水性（非極性）残基である。四角は、各ＣＤＲの開始および終了の重要な残基である。フレームワークのアミノ酸残基番号２３、４１、８９、１０４、１１８は、構造的に保存されたアミノ酸である。
【０４１６】
（実施例３）
抗体１３Ｅ２の可変ドメインをコードする核酸配列
モノクローナル抗体１３Ｅ２のＶＨドメインをコードする核酸配列を図３、および以下に示す：
CAGGTTACTCTGAAAGAGTCTGGCCCTGGGATATTGCAGCCCTCCCAGACCCTCAGTCTGACTTGTTCTTTCTCTGGGTTTTCACTGAGCACTTCTGGTATGGGTCTAGGCTGGATTCGTCAGCCATCAGGGAAGGGTCTGGAGTGGCTGACACACATTTGGTGGGATGATATCAAGCGCTATAACCCAGACCTGAGGAGCCGACTGACTATCTCCAAGGATACCTCCAGCAGCCAGATTTTCCTCAAGATCGCCAGTGTGGACACTGCAGATACTGCCACATATTACTGTGCTCGAATAGTGGAGGGTTCATACAGTAGTAGTTACTTCGATGTCTGGGGCGCAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCAG（配列番号9)。
【０４１７】
核酸ＢＬＡＳＴアライメントは、モノクローナル抗体１３Ｅ２のＶＨドメインをコードする核酸配列が、以下の生殖系列遺伝子：ＩＧＨＶ８−８＊０１、ＩＧＨＶ８−１１＊０１、ＩＧＨＶ８−１２＊０１、ＩＧＨＤ２−１２＊０１、ＩＧＨＤ１−１＊０１、ＩＧＨＪ１＊０１、ＩＧＨＪ１＊０２、ＩＧＨＪ１＊０３の配列と有意な同一性を有することを示している。
【０４１８】
図１０は、１３Ｅ２抗体のＶＨドメインをコードする核酸配列のトップ生殖系列遺伝子マッチとのアライメントを示す。図１０は、１３Ｅ２  ＶＨ領域のヌクレオチド１〜３０１を含む部分（重鎖フレームワーク領域ＦＲ１、ＦＲ２、およびＦＲ３を包含する）が、Ｖ遺伝子ＩＧＨＶ８−８＊０１の核酸配列と９２．７％核酸配列同一性を有することを示している。
【表５】
2018537400.tif 000008
【０４１９】
モノクローナル抗体１３Ｅ２のＶＬドメインをコードする核酸配列を図５、および以下に示す：
GACATTGTGATGACCCAGCCTCACAAATTCATGTCCACATCAGTGGAAGACAGGGTCACCATCACCTGCAAGGCCAGTCAGGATGTGATTTTTGATGTAGCCTGGTATCAACAGAAACCAGGACAATCTCCTAAATTACTGATTTACTCGGCATCCTCCCGGGTCAGTGGAGTCCCTGATCGCTTCACTGGCAGTGGATCTGGGACGGATTTCACTTTCACCATCAGTAGTGTGCAGGCTGAAGACCTGGCAGTTTATTACTGTCAGCAACACTATAGTACTCCGTACACGTTCGGAGGGGGGACCACGCTGGAAATAAAAC（配列番号10)。
【０４２０】
核酸ＢＬＡＳＴアライメントは、モノクローナル抗体１３Ｅ２のＶＬドメインをコードする核酸配列が、以下の生殖系列遺伝子：ＩＧＫＶ６−１７＊０１、ＩＧＫＶ６−２５＊０１、ＩＧＫＶ６−２３＊０１、ＩＧＫＪ２＊０１、ＩＧＫＪ２＊０３、ＩＧＫＪ２＊０２の配列と有意な同一性を有することを示している。
【０４２１】
図１１は、１３Ｅ２抗体のＶＬドメインをコードする核酸配列のトップ生殖系列遺伝子マッチとのアライメントを示す。図１１は、１３Ｅ２  ＶＬ領域のヌクレオチド１〜２８４を含む部分（軽鎖フレームワーク領域ＦＲ１、ＦＲ２、およびＦＲ３を包含する）が、Ｖ遺伝子ＩＧＫＶ６−１７＊０１の核酸配列と９４．７％核酸配列同一性を有することを示している。
【０４２２】
【表６】
2018537400.tif 000009
【０４２３】
（実施例４）
３４Ｆ４抗ＬＡＧ−３モノクローナル抗体の生成
４匹のＢａｌｂ／ｃマウス（以下にマウス番号１〜４と呼ばれる）を、０日目、１４日目、２８日目、４３日目、および７０日目に、１００μｇ  ＩＭＰ３２１（ＬＡＧ−３Ｉｇ）、臨床等級ロットＳ０１７／ＬＣ１／０４１０１１（以下「ＬＣ１」と称する）の４回（マウス番号２および４）、または５回（マウス番号１および３）ｓ．ｃ．注射によりそれぞれ免疫した。追加のＢａｌｂ／ｃマウス（以下にマウス番号５と呼ばれる）を、Ｄ１〜Ｄ４  ＬＡＧ−３の３回ｓ．ｃ．注射により免疫した。
【０４２４】
３回目の注射の２週間後、各マウス由来の血清をＥＬＩＳＡアッセイ（実施例１に記載）で抗ＬＡＧ−３抗体含量について試験した。結果を以下の表７に示す：
【表７】
2018537400.tif 000010
【０４２５】
Ｒａｊｉ  Ｂ細胞へのＩＭＰ３２１の結合を阻害する、各マウス由来の血清の能力を、ＦＡＣＳ解析（実施例１に記載）により決定した。
【０４２６】
表７から分かるように、抗体価は全てのマウスにおいて低かった。いずれの血清も３回の免疫化後、ＭＨＣクラスＩＩ＋Ｒａｊｉ  Ｂ細胞へのＩＭＰ３２１の結合を阻害しなかった。血清力価および阻害能を試験するための他の採血は行われなかった。免疫化工程を継続し、ＬＣ１の５回ｓ．ｃ．注射を受けたマウス番号３を、９２日目に１０μｇのＤ１〜Ｄ４  ＬＡＧ−３  ｉ．ｖ．で追加免疫した。
【０４２７】
ｉ．ｖ．追加免疫注射の３日後、マウス番号３由来の７，３００万個の脾臓細胞を、実施例１に記載された同じ手順後に１，５００万個のＳｐ２／０骨髄腫細胞と融合させた。４０枚の９６ウェルプレートのウェルに１ウェル当たり約２５，５００細胞を播種し、次いで１０％ＢＭ  Ｃｏｎｄｉｍｅｄ  Ｈ１を含む培養培地を補充して培養した。２，２５６ウェルを、ＬＡＧ−３発現ＣＨＯ細胞についてＦＡＣＳ解析によりスクリーニングした（５９％の収量）。３４Ｆ４を含む２個の安定な抗ＬＡＧ−３ハイブリドーマを選択した（以下の表８を参照のこと）。
【０４２８】
【表８】
2018537400.tif 000011
【０４２９】
（実施例５）
抗体３４Ｆ４の可変領域のアミノ酸配列
ＶＨアミノ酸配列：
【化３】
2018537400.tif 000012
【０４３０】
配列番号１７は、抗体３４Ｆ４の重鎖可変（ＶＨ）ドメインのアミノ酸配列である。ＩＭＧＴ番号付けシステム（Lefranc,  M.-P.ら、Nucleic  Acids  Research、２７巻、２０９〜２１２頁（１９９９年））により決定した相補性決定領域（ＣＤＲ）に下線が引かれている。Ｋａｂａｔ番号付けシステムにより決定したＣＤＲは太字で示されている。
【０４３１】
図６は、モノクローナル抗体３４Ｆ４のＶＨ  ＣＤＲループ（Lefranc,  M.-P.ら、Dev.  Comp.  Immunol.、２７巻、５５〜７７頁（２００３年））の図形表示を示す。網かけした円（残基番号４、１２、１３、１９、２１、２３、２５、４１、５０、５２、５３、７１、７６、７８、８７、８９、９１、９４、１００）は、大多数の抗体において疎水性である部位のフレームワーク１〜３の疎水性（非極性）残基である。四角は、各ＣＤＲの開始および終了の重要な残基である。フレームワークのアミノ酸残基番号２３、４１、８９、１０４、１１８は、構造的に保存されたアミノ酸である。
【０４３２】
ＶＬアミノ酸配列：
【化４】
2018537400.tif 000013
【０４３３】
配列番号１８は、抗体３４Ｆ４の軽鎖可変（ＶＬ）ドメインのアミノ酸配列である。ＩＭＧＴ番号付けシステム（Lefranc,  M.-P.ら、Nucleic  Acids  Research、２７巻、２０９〜２１２頁（１９９９年））により決定した相補性決定領域（ＣＤＲｓ）に下線が引かれている。Ｋａｂａｔ番号付けシステムにより決定したＣＤＲは太字で示されている。
【０４３４】
【表９】
2018537400.tif 000014
【０４３５】
図８は、モノクローナル抗体３４Ｆ４のＶＬ  ＣＤＲループ（Lefranc,  M.-P.ら、Dev.  Comp.  Immunol.、２７巻、５５〜７７頁（２００３年））の図形表示を示す。網かけした円（残基番号４、１１、１９、２１、２３、２５、４０、４１、５２、５３、５４、７１、７６、８７、８９、９１、９４、９６、１００、１０１）は、大多数の抗体において疎水性である部位のフレームワーク１〜３の疎水性（非極性）残基である。四角は、各ＣＤＲの開始および終了の重要な残基である。フレームワークのアミノ酸残基番号２３、４１、８９、１０４、１１８は、構造的に保存されたアミノ酸である。
【０４３６】
（実施例６）
抗体３４Ｆ４の可変ドメインをコードする核酸配列
モノクローナル抗体３４Ｆ４のＶＨドメインをコードする核酸配列を図７、および以下に示す：
CAGGTTACTCTGAAAGAGTCTGGCCCTGGGATATTGCAGCCCTCCCAGACCCTCAGTCTGACTTGTTCTTTCTCTGGGTTTTCACTGAACACTTCTGGTATGGGTGTAGGCTGGATTCGTCAGCCATCAGGGAAGGGTCTGGAGTGGCTGACACACATTTGGTGGGATGATGTCAAGCGCTATAATCCAGCCCTGAAGAGCCGACTGACTATCTCCAAGGATACCTCCAGCAGCCAGGTATTCCTCAAGATCGCCAGTGTGGACACTGCAGATACTGCCACATACTACTGTGCTCGAATAGAGGGGGATACTTACTACGACTATTACTTTGACTACTGGGGCCAAGGCGTCACTCTCACAGTCTCCTCAG（配列番号19).
【０４３７】
核酸ＢＬＡＳＴアライメントは、モノクローナル抗体３４Ｆ４のＶＨドメインをコードする核酸配列が、以下の生殖系列遺伝子：ＩＧＨＶ８−８＊０１、ＩＧＨＶ８−１２＊０１、ＩＧＨＶ８−１１＊０１、ＩＧＨＤ１−１＊０１、ＩＧＨＤ１−２＊０１、ＩＧＨＤ２−３＊０１、ＩＧＨＪ２＊０１、ＩＧＨＪ２＊０２、ＩＧＨＪ２＊０３の配列と有意な同一性を有することを示している。
【０４３８】
図１２は、３４Ｆ４抗体のＶＨドメインをコードする核酸配列のトップ生殖系列遺伝子マッチとのアライメントを示す。図１２は、３４Ｆ４  ＶＨ領域のヌクレオチド１〜３０１を含む部分（重鎖フレームワーク領域ＦＲ１、ＦＲ２、およびＦＲ３を包含する）が、Ｖ遺伝子ＩＧＨＶ８−８＊０１の核酸配列と９４．４％核酸配列同一性を有することを示している。
【０４３９】
【表１０】
2018537400.tif 000015
【０４４０】
モノクローナル抗体３４Ｆ４のＶＬドメインをコードする核酸配列を図９、および以下に示す：
GACATTGTGATGACCCAGTCTCACAAACTCATGTCCACATCAGTTGGAGACGGGCTCAGCATCACCTGCAAGGCCAGTCAGGATGTGAGCATTGCTGTAGTCTGGTATCAACAGAAACCAGGACAATCTCCTAAACTGCTGATTTACTCGGCATCCTTCCGGTACACTGGAGTCCCTGATCGCTTCACTGGCAGTGGATCTGGGACGGATTTCACTTTCACCATCAGCAGTGTGCAGGCTGAAGACCTGGCAGTTTATTACTGTCAGCAACATTATAGTATTCCGTGGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAAAC（配列番号20).
【０４４１】
核酸ＢＬＡＳＴアライメントは、モノクローナル抗体３４Ｆ４のＶＬドメインをコードする核酸配列が、以下の生殖系列遺伝子：ＩＧＫＶ６−１７＊０１、ＩＧＫＶ６−２５＊０１、ＩＧＫＶ６−２３＊０１、ＩＧＫＪ１＊０１、ＩＧＫＪ１＊０２、ＩＧＫＪ２＊０１の配列と有意な同一性を有することを示している。
【０４４２】
図１３は、３４Ｆ４抗体のＶＬドメインをコードする核酸配列のトップ生殖系列遺伝子マッチとのアライメントを示す。図１３は、３４Ｆ４  ＶＬ領域のヌクレオチド１〜２８４を含む部分（軽鎖フレームワーク領域ＦＲ１、ＦＲ２、およびＦＲ３を包含する）が、Ｖ遺伝子ＩＧＫＶ６−１７＊０１の核酸配列と９４．７％核酸配列同一性を有することを示している。
【０４４３】
【表１１】
2018537400.tif 000016
【０４４４】
（実施例７）
１７Ｂ４アンタゴニストモノクローナル抗体と比較した、ＬＡＧ−３＋トランスフェクト初代細胞へのアゴニスト１３Ｅ２および３４Ｆ４モノクローナル抗体の結合
ＬＡＧ−３＋トランスフェクトＣＨＯ細胞、または健康なドナー由来のＳＥＢ刺激ＰＢＭＣを、抗ＬＡＧ−３モノクローナル抗体、またはアイソタイプ対照（ｍＩｇＧ１）とＰＢＳ、ＢＳＡ０．５％、アジド０．１％中で４℃、３０分間インキュベートした。細胞を洗浄し、細胞結合抗体をＦＩＴＣコンジュゲートヤギＦ（ａｂ’）２抗マウスＩｇ（Ｈ＋Ｌ）（Ｃｏｕｌｔｅｒ）により明らかにした。二次抗体を洗い流し、ＣＨＯ細胞はフローサイトメトリーにより直接解析した。ＰＢＭＣはＣＤ４−ＰＥ−Ｃｙ７およびＣＤ８−ＡＰＣ−Ｃｙ７を用いて表現型を決定した。
【０４４５】
ＣＨＯ  ＬＡＧ−３＋細胞への結合
結果は、抗体濃度の関数としての、ヒトＬＡＧ−３コードプラスミドをトランスフェクトしたＣＨＯ細胞の蛍光強度の平均（ＭＦＩ）として示される。結果を、以下の表１２および図１４に示す。
【０４４６】
【表１２】
2018537400.tif 000017
【０４４７】
表１２の結果に基づき、ＬＡＧ−３発現ＣＨＯ細胞への各抗体の結合に対するＥＣ５０値、１７Ｂ４：０．７ｎＭ、１３Ｅ２：０．３ｎＭ、３４Ｆ４：０．５ｎＭである。
【０４４８】
ＬＡＧ−３発現ＣＨＯ細胞への各抗体の結合に対する４つの独立した実験からの平均ＥＣ５０値（データ不図示）は、１７Ｂ４：０．７ｎＭ、１３Ｅ２：０．４ｎＭ、３４Ｆ４：０．５ｎＭである。
【０４４９】
４つの独立した実験からの１３Ｅ２  ＥＣ５０値の平均は、１７Ｂ４  ＥＣ５０値の平均の２．７倍である。
【０４５０】
４つの独立した実験からの３４Ｆ４  ＥＣ５０値の平均は、１７Ｂ４  ＥＣ５０値の平均の１．６倍である。
【０４５１】
ＳＥＢ刺激ＰＢＭＣへの結合
結果は、抗体濃度の関数としての、３日間０．５μｇ／ｍｌ  ＳＥＢで刺激したドナー（ドナー１）のＰＢＭＣ由来のＣＤ４＋またはＣＤ８＋細胞における蛍光強度の平均として示される。ドナー１に関するＣＤ４＋およびＣＤ８＋細胞への結合の結果を、以下の表１３および図１５に示す。
【表１３】
2018537400.tif 000018
【０４５２】
表１３に示された結果に基づき、ＣＤ４＋細胞への各抗体の結合に対するＥＣ５０値は、１７Ｂ４：０．５ｎＭ、１３Ｅ２：０．１ｎＭ、３４Ｆ４：０．１ｎＭである。
【０４５３】
ＣＤ４＋細胞への各抗体の結合に対する３人のドナーからの平均ＥＣ５０値（データ不図示）は、１７Ｂ４：０．８ｎＭ、１３Ｅ２：０．２ｎＭ、３４Ｆ４：０．２ｎＭである。
【０４５４】
３人のドナーからの１３Ｅ２および３４Ｆ４  ＣＤ４＋  ＥＣ５０値の平均は、１７Ｂ４  ＥＣ５０値の平均の３．８倍である。
【０４５５】
表１３に示された結果に基づき、ＣＤ８＋細胞への各抗体の結合に対するＥＣ５０値は、１７Ｂ４：０．７ｎＭ、１３Ｅ２：０．３ｎＭ、３４Ｆ４：０．２ｎＭである。
【０４５６】
ＣＤ８＋細胞への各抗体の結合に対する３人のドナーからの平均ＥＣ５０値（データ不図示）は、１７Ｂ４：１ｎＭ、１３Ｅ２：０．４ｎＭ、３４Ｆ４：０．５ｎＭである。
【０４５７】
３人のドナーからの１３Ｅ２および３４Ｆ４  ＣＤ８＋  ＥＣ５０値の平均は、１７Ｂ４  ＥＣ５０値の平均の２．５倍である。
【０４５８】
結果は、１３Ｅ２および３４Ｆ４モノクローナル抗体がそれぞれ、ＬＡＧ−３＋を発現するＣＨＯ細胞、ならびにＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞と１７Ｂ４より高いアフィニティーで結合することを示している。
チップ上のＬＡＧ−３Ｉｇおよびランニング緩衝液中の１７Ｂ４抗体を用いたＢｉａｃｏｒｅ解析は、以下の結果を示した：
ka  (1/Ms)  1.09  x  106
kd  (1/s)  1.32  x  10-4
KD  (M)    1.21  x  10-10
チップ上の１７Ｂ４抗体およびランニング緩衝液中のＬＡＧ−３Ｉｇを用いたＢｉａｃｏｒｅ解析は、以下の結果を示した：
ka  (1/Ms)  2.22  x  105
kd  (1/s)  8.18  x  10-4
KA  (1/M)  2.71  x  108
KD  (M)    3.69  x  10-9
【０４５９】
（実施例８）
ＭＨＣクラスＩＩ陽性細胞へのＩＭＰ３２１（ＬＡＧ−３Ｉｇ）の結合の１３Ｅ２および３４Ｆ４による阻害
ＭＨＣクラスＩＩ陽性Ｂ細胞（Ｒａｊｉ細胞）へのＩＭＰ３２１コンジュゲート（ＬＡＧ−３Ｉｇ−Ａｌｅｘａ  ４８８）の結合を、コンジュゲート（４℃、１μｇ／ｍｌ）と、抗ＬＡＧ−３モノクローナル抗体（１３Ｅ２、３４Ｆ４、または１７Ｂ４）またはアイソタイプ対照（ｍＩｇＧ１）とのプレインキュベーション後に決定した。細胞結合蛍光の解析は、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）を用いて実施した。
【０４６０】
抗体濃度の関数としての細胞結合ＬＡＧ−３Ｉｇに対応する平均蛍光強度（ＭＦＩ）を、以下の表１４および図１６Ａに示す。
【０４６１】
【表１４】
2018537400.tif 000019
【０４６２】
結果は、Ｒａｊｉ細胞へのＩＭＰ３２１の結合が、ＬＡＧ−３特異的モノクローナル抗体の各々とのプレインキュベーションにより阻害されたことを示している。
【０４６３】
（実施例９）
１３Ｅ２および３４Ｆ４によるＩＭＰ３２１（ＬＡＧ−３Ｉｇ）により誘導される単球活性化の阻害
ＩＭＰ３２１（２０ｎｇ／ｍｌ）を、抗ＬＡＧ−３モノクローナル抗体１３Ｅ２、３４Ｆ４、もしくは１７Ｂ４、またはアイソタイプ対照（ｍＩｇＧ１）と３７℃で５分間プレインキュベートした後、混合物をＴＨＰ−１細胞と３７℃で４時間インキュベーションした。ＴＨＰ−１細胞によるＣＣＬ４分泌の量を使用して、単球活性化のレベルを決定した。
【０４６４】
Ａｂ濃度の関数としてのＣＣＬ４濃度（ｐｇ／ｍｌで表された）を、以下の表１５および図１６Ｂに示す。
【０４６５】
【表１５】
2018537400.tif 000020
【０４６６】
結果は、ＩＭＰ３２１により誘導される単球活性化が、ＩＭＰ３２１とアンタゴニスト抗ＬＡＧ−３モノクローナル抗体１７Ｂ４とのプレインキュベーションにより、ならびにまたアゴニストモノクローナル抗体１３Ｅ２および３４Ｆ４とのプレインキュベーションによっても阻害されることを示している。
【０４６７】
アンタゴニスト１７Ｂ４モノクローナル抗体と同じようにアゴニストモノクローナル抗体１３Ｅ２および３４Ｆ４は、ＬＡＧ−３Ｉｇ（ＩＭＰ３２１）の結合および活性をブロックする能力により示される通り、ＬＡＧ−３のＭＨＣクラスＩＩ結合部位と相互作用するまたは近接していることが、これらの結果および実施例８の結果から結論付けられた。
【０４６８】
（実施例１０）
１７Ｂ４と比較した１３Ｅ２および３４Ｆ４によるＴ細胞増殖の阻害
３人の健康なドナー由来のＰＢＭＣ（完全ＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳ中１×１０６／ｍｌで０．２×１０６細胞／ウェル）をカルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）で標識し、モノクローナル抗ＬＡＧ−３抗体１３Ｅ２、３４Ｆ４、１７Ｂ４、またはアイソタイプ対照（ｍＩｇＧ１）の存在下、ＣＭＶ  ｐｐ３５の配列を含むペプチドのプールとインキュベートした（最適上限用量、ドナー＃１および＃２については３００ｎｇ／ｍｌ、ドナー＃３については１００ｎｇ／ｍｌ）。
【０４６９】
Ｔ細胞応答を、５日目にＣＤ４＋またはＣＤ８＋Ｔ細胞のＣＦＳＥベースの増殖を測定して調べた。それぞれの異なる抗体の存在下のドナー＃１のＣＤ８＋Ｔ細胞のＦＡＣＳプロファイルおよびゲーティング戦略を、図１７（Ａ）に示す。図１７（Ｂ）は、細胞分裂の関数としての、同じドナーに関する各分裂ピーク下のＣＤ８＋Ｔ細胞の百分率を示す。３人のドナーの結果を以下の表１６に示す。抗原ペプチドなしにおけるベースライン増殖（刺激なし）も測定した（図１７（Ａ）最下位のパネルおよび表１６を参照のこと）。ドナー＃１のＣＤ４＋Ｔ細胞はＣＭＶ特異的増殖を全く示さなかったため、この集団の結果は含まれていない。
【０４７０】
【表１６】
2018537400.tif 000021
【０４７１】
増殖指数（ＰＩ）（各分裂ピーク下のＣＤ４＋またはＣＤ８＋Ｔ細胞の百分率に分裂数を乗じた合計として計算）を表１７に示す。この指数は、数回の分裂を経験した細胞の百分率を際立たせる。表１７はまた、ＰＩ値に基づくアイソタイプ対照（ｍＩｇＧ１）と比較した各抗体の阻害百分率も記録する。
【０４７２】
【表１７】
2018537400.tif 000022
【０４７３】
結果は、モノクローナル抗体１３Ｅ２および３４Ｆ４は、抗原ペプチドにより誘導されたＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を一貫して阻害したが、モノクローナル抗体１７Ｂ４は、試験した濃度では軽度の正の効果を有する傾向があることを示している。
【０４７４】
（実施例１１）
１３Ｅ２および３４Ｆ４によるＴ細胞増殖の阻害
１２人の健康なドナー由来のＰＢＭＣ（完全ＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳ中１×１０６／ｍｌで０．２×１０６細胞／ウェル）をＣＦＳＥで標識し、モノクローナル抗ＬＡＧ−３抗体１３Ｅ２、３４Ｆ４、またはアイソタイプ対照（ｍＩｇＧ１）の存在下、ＣＭＶ  ｐｐ３５の配列を含むペプチドのプールとインキュベートした。
【０４７５】
Ｔ細胞応答を、５日目にＣＤ４＋またはＣＤ８＋Ｔ細胞のＣＦＳＥベースの増殖を測定して調べた。各分裂ピーク下のＣＤ４＋またはＣＤ８＋Ｔ細胞の百分率を、図１７（Ａ）に図示されたゲーティング戦略を用いて細胞分裂の関数として計算した。抗原ペプチドなしにおけるベースライン増殖（刺激なし）も測定した。ドナー＃１、＃５、および＃１２のＣＤ４＋Ｔ細胞はＣＭＶ特異的増殖を全く示さなかったため、これらの試料の結果は含まれていない。
【０４７６】
各ドナーに対する増殖指数（ＰＩ）（各分裂ピーク下のＣＤ４＋またはＣＤ８＋Ｔ細胞の百分率に分裂数を乗じた合計として計算）を表１８に示し、結果を図１８にプロットする。表１８はまた、ＰＩ値に基づくアイソタイプ対照（ｍＩｇＧ１）と比較した各抗体の阻害百分率も記録する。
【０４７７】
【表１８】
2018537400.tif 000023
【０４７８】
これらの結果からの平均値を表１９に提示する。
【０４７９】
【表１９】
2018537400.tif 000024
【０４８０】
結果は、モノクローナル抗ＬＡＧ−３抗体１３Ｅ２および３４Ｆ４が、抗原ペプチドにより誘導されたＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を阻害することを示している。結果は、各抗体の阻害効果がＣＤ４＋Ｔ細胞よりＣＤ８＋Ｔ細胞に対してより顕著となり得ることを示唆している。試験したドナーのほとんどで、１３Ｅ２および３４Ｆ４抗体の効果は極めて類似していたため、抗体は同等の活性を有すると思われる。
【０４８１】
（実施例１２）
ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖に対するアゴニスト抗体の用量反応
ＣＦＳＥ標識ＰＢＭＣを、様々な濃度のアゴニスト抗ＬＡＧ−３モノクローナル抗体１３Ｅ２、３４Ｆ４、またはアイソタイプ対照（ｍＩｇＧ１）の存在下、上記したようにＣＭＶペプチドにより刺激した。
【０４８２】
Ｔ細胞応答を、５日目にＣＤ８＋Ｔ細胞のＣＦＳＥベースの増殖を測定して調べた。増殖指数（各分裂ピーク下のＣＤ８＋Ｔ細胞の百分率に分裂数を乗じた合計として計算）を表２０に示す。
【０４８３】
【表２０】
2018537400.tif 000025
【０４８４】
以下の表２１は、抗体濃度の関数としてのＣＤ８＋Ｔ細胞増殖指数を記録する。表２１の結果は、図１９にプロットされている。
【表２１】
2018537400.tif 000026
【０４８５】
結果は、モノクローナル抗ＬＡＧ−３抗体１３Ｅ２または３４Ｆ４の３０ｎｇ／ｍｌと低い用量が、ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖の最大阻害をもたらすことを示している。結果はまた、抗体の効果が極めて類似していたことも示している。
【０４８６】
（実施例１３）
３４Ｆ４によるＣＤ８＋Ｔ細胞増殖の阻害はＩＭＰ３２１とのプレインキュベーションにより元に戻る
２人のドナー由来のＣＦＳＥ標識ＰＢＭＣを、様々な濃度の３４Ｆ４抗体の存在下、上記したようにＣＭＶペプチドにより刺激した。１μｇ／ｍｌ用量の３４Ｆ４も、１０倍過剰のＩＭＰ３２１で中和後に評価した。
【０４８７】
Ｔ細胞応答を、５日目にＣＤ８＋Ｔ細胞のＣＦＳＥベースの増殖を測定して調べた。ＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖の阻害の百分率を、ＩＭＰ３２１ありまたはなしにおける対照と比較した、３４Ｆ４抗体、または３４Ｆ４抗体およびＩＭＰ３２１（ＬＡＧ−３Ｉｇ）の存在下で観察された分裂細胞の百分率に基づき計算した。
【０４８８】
結果を以下の表２２に示す。
【０４８９】
【表２２】
2018537400.tif 000027
【０４９０】
結果は、３４Ｆ４抗体とＩＭＰ３２１とのプレインキュベーションが、ＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖に対する３４Ｆ４抗体の阻害効果を元に戻すことを示している。これは、３４Ｆ４によって媒介されるＣＤ８＋Ｔ細胞増殖の阻害が、ＬＡＧ−３への３４Ｆ４抗体の結合に依存することを示している。
【０４９１】
（実施例１４）
１３Ｅ２および３４Ｆ４によるＣＤ８＋Ｔ細胞増殖の阻害はＩＬ−２により元に戻らない
ＣＦＳＥ標識ＰＢＭＣを、ＩＬ−２ありまたはなしで、１３Ｅ２または３４Ｆ４抗体の存在下、上記したようにＣＭＶペプチドにより刺激した。
【０４９２】
Ｔ細胞応答を、５日目にＣＤ８＋Ｔ細胞のＣＦＳＥベースの増殖を測定して調べた。ＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖の阻害の百分率を、ＩＬ−２ありまたはなしにおけるアイソタイプ対照と比較した、ＩＬ−２ありまたはなしにおける１３Ｅ２または３４Ｆ４抗体の存在下で観察された分裂細胞の百分率に基づき計算した。
【０４９３】
結果を以下の表２３に示す。
【０４９４】
【表２３】
2018537400.tif 000028
【０４９５】
結果は、外因性ＩＬ−２の付加が、ＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖に対する１３Ｅ２または３４Ｆ４抗体の阻害効果を克服できなかったことを示している。これらの結果から、抗体１３Ｅ２および３４Ｆ４はそれぞれ、ＣＤ８＋Ｔ細胞においてシグナル１（ＣＭＶ抗原に対する応答、Ｔ細胞受容体依存性経路）を直接阻害するが、シグナル２（ＩＬ−２に対する応答、すなわちＣＤ４細胞からの助け）を直接阻害しないと結論付けられる。
【０４９６】
（実施例１５）
Ｔ細胞活性化マーカー分泌に対する１３Ｅ２の効果
末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）は、リンパ球（Ｔ細胞、Ｂ細胞、およびＮＫ細胞）、単球、および樹状細胞を含む。ＩＦＮ−γは、活性化ＣＤ４＋およびＣＤ８＋メモリーおよびエフェクターＴ細胞、ならびに活性化時のＮＫ細胞により主に分泌される。ｉｎ  ｖｉｔｒｏで特異的抗原により再刺激後、ＩＦＮ−γの分泌が誘導される。
【０４９７】
４人の健康なドナー由来のＰＢＭＣ（完全ＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳ中１×１０６／ｍｌで０．２×１０６細胞／ウェル）をＣＦＳＥで標識し、モノクローナル抗ＬＡＧ−３抗体１３Ｅ２またはアイソタイプ対照（ｍＩｇＧ１）の存在下、ＣＭＶ  ｐｐ３５の配列を含むペプチドのプールとインキュベートした。Ｔ細胞応答を、２日目に細胞上清中のＩＦＮ−γの放出を測定して調べた。ＩＦＮ−γの濃度、および１３Ｅ２によるＩＦＮ−γ分泌の阻害百分率を、以下の表２４に示す。
【０４９８】
【表２４】
2018537400.tif 000029
【０４９９】
結果は、モノクローナル抗体１３Ｅ２が、試験したドナーの各々においてＩＦＮ−γの分泌を阻害したことを示している。これは、モノクローナル抗体１３Ｅ２がＴ細胞の活性化を阻害する証拠を提供するものである。
【０５００】
（実施例１６）
Ｔ細胞活性化マーカー発現に対する１３Ｅ２および３４Ｆ４の効果
４人の健康なドナー由来のＰＢＭＣ（完全ＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳ中１×１０６／ｍｌで０．２×１０６細胞／ウェル）をＣＦＳＥで標識し、モノクローナル抗ＬＡＧ−３抗体１３Ｅ２もしくは３４Ｆ４、またはアイソタイプ対照（ｍＩｇＧ１）の存在下、ＣＭＶ  ｐｐ３５の配列を含むペプチドのプールとインキュベートした。
【０５０１】
Ｔ細胞応答を、５日目にＣＤ８＋Ｔ細胞における活性化マーカーとしてのＣＤ２５の発現を測定して調べた。ＣＤ２５を発現するＣＤ８＋Ｔ細胞の百分率、および１３Ｅ２または３４Ｆ４によるＣＤ２５発現の阻害百分率を、以下の表２５に示す。
【表２５】
2018537400.tif 000030
【０５０２】
結果は、各モノクローナル抗体、１３Ｅ２および３４Ｆ４が、ＣＤ８＋Ｔ細胞におけるＣＤ２５の発現を有意に阻害したことを示している。これは、各抗体がＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化を阻害する証拠を提供するものである。
【０５０３】
（実施例１７）
キメラ１３Ｅ２−ヒト抗体配列
１３Ｅ２重鎖および軽鎖のマウス可変領域をコードするヌクレオチド配列を、それぞれヒトＩｇＧ４重鎖およびカッパ軽鎖の定常領域をコードする配列と融合させた。これらの合成キメラ配列を、発現ベクターにサブクローニングし、懸濁液で増殖させたＣＨＯ細胞において発現させた。
【０５０４】
キメラ１３Ｅ２−ヒトＩｇＧ４  Ｆｃ抗体の重鎖アミノ酸配列を、以下および図２０（Ａ）に示す。抗体は、マウスモノクローナル抗体１３Ｅ２のＶＨドメイン、およびＳ２２８Ｐ変異（Ｆａｂアーム交換をなくすための）を有するヒトＩｇＧ４  Ｆｃ部分（１３Ｅ２ＩｇＧ４ｍｕｔ）を含む。図中、ＶＨ領域は太字で示され、Ｆｃ領域は強調して示されている。
【０５０５】
１３Ｅ２ＩｇＧ４ｍｕｔ
MGWTLVFLFLLSVTAGVHSQVTLKESGPGILQPSQTLSLTCSFSGFSLSTSGMGLGWIRQPSGKGLEWLTHIWWDDIKRYNPDLRSRLTISKDTSSSQIFLKIASVDTADTATYYCARIVEGSYSSSYFDVWGAGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK（配列番号30)
【０５０６】
キメラ１３Ｅ２−ヒトＩｇＫ抗体の軽鎖アミノ酸配列を、以下および図２０（Ｂ）に示す。抗体は、モノクローナル抗体１３Ｅ２のＶＬドメイン、および野生型ヒトＩｇカッパ（ＩｇＫ）鎖Ｃ部分（１３Ｅ２ＩｇＫ）を含む。図中、ＶＬ領域は太字で示され、ＩｇＫ領域は強調して示されている。
【０５０７】
１３Ｅ２ＩｇＫ
MVSSAQFLGLLLLCFQGTRCDIVMTQPHKFMSTSVEDRVTITCKASQDVIFDVAWYQQKPGQSPKLLIYSASSRVSGVPDRFTGSGSGTDFTFTISSVQAEDLAVYYCQQHYSTPYTFGGGTTLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC（配列番号37)
【０５０８】
キメラ１３Ｅ２−ヒト抗体（Ｃｈｉｍ１３Ｅ２ＩｇＧ４と呼ばれる）は、キメラ重鎖および軽鎖：１３Ｅ２ＩｇＧ４ｍｕｔおよび１３Ｅ２ＩｇＫを含む。
【０５０９】
（実施例１８）
ヒト化１３Ｅ２モノクローナル抗体（ＩＭＰ７６１）配列
ＣＤＲループコンフォメーションの最適保持には、組み合わされたＩＭＧＴ／Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ配列同定を使用して、１３Ｅ２のヒト化バージョンを得るためにマウス１３Ｅ２由来のＣＤＲをヒトフレームワークにグラフトした。これらの合成キメラ配列を発現ベクターにサブクローニングし、懸濁液で増殖させたＣＨＯ細胞において発現させた。
【０５１０】
ヒト化１３Ｅ２モノクローナル抗体（ＩＭＰ７６１と呼ばれる）の重鎖および軽鎖アミノ酸配列を以下に示す。可変ドメインは太字で示され、ＣＤＲ配列は下線で示されている。
【０５１１】
ＩＭＰ７６１重鎖のアミノ酸配列
【化５】
2018537400.tif 000031
【０５１２】
この配列（ＩＭＰ７６１重鎖）と実施例１７のキメラ重鎖配列、１３Ｅ２ＩｇＧ４ｍｕｔとのアライメントを図２３に示す。図中、ＶＨ領域は太字で示され、Ｆｃ領域は強調して示されている。キメラ１３Ｅ２ＩｇＧ４ｍｕｔ配列の対応する残基とは異なるヒト化ＩＭＰ７６１配列のアミノ酸残基に一重下線が引かれている。ＣＤＲ配列（組み合わされたＩＭＧＴ／Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ配列同定に基づく）は二重下線で示されている。ヒト化配列における変化した残基も以下の表２６に提示する（ＶＨバリアント４、ＶＨ４、ならびに元の１３Ｅ２重鎖配列の３つの他のヒト化バリアント：ＶＨバリアント１、２、および３、ＶＨ１、ＶＨ２、およびＶＨ３における変化した残基として）。
【０５１３】
【表２６】
2018537400.tif 000032
【０５１４】
ヒト化抗体（抗体ＩＭＰ７６１）の重鎖フレームワーク配列は：
VH  FR1：QITLKESGPTLVKPTQTLTLTCTFS（配列番号64);
VH  FR2：WIRQPPGKTLEWLT（配列番号65);
VH  FR3：RLSITKDTSKNQVVLTMTNMDPLDTGTYYC（配列番号66);  and
VH  FR4：WGQGTLVTVSS（配列番号67)
である。
【０５１５】
ＩＭＰ７６１軽鎖のアミノ酸配列
【化６】
2018537400.tif 000033
【０５１６】
この配列（ＩＭＰ７６１軽鎖）と実施例１７のキメラ軽鎖配列、１３Ｅ２Ｉｇκとのアライメントを図２４に示す。図中、ＶＬ領域は太字で示され、ＩｇＫ領域は強調して示されている。キメラ１３Ｅ２Ｉｇκ配列の対応する残基とは異なるヒト化ＩＭＰ７６１配列のアミノ酸残基に一重下線が引かれている。ＣＤＲ配列（組み合わされたＩＭＧＴ／Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ配列同定に基づく）は二重下線で示されている。ヒト化配列における変化した残基を以下の表２７に提示する（ＶＬバリアント３、ＶＨ３、ならびに元の１３Ｅ２軽鎖配列の３つの他のヒト化バリアント：ＶＬバリアント１、２、および４、ＶＬ１、ＶＬ２、およびＶＬ４における変化した残基として）。
【０５１７】
【表２７】
2018537400.tif 000034
【０５１８】
ヒト化抗体（抗体ＩＭＰ７６１）の軽鎖フレームワーク配列は：
ＶＬ  ＦＲ１：DIVMTQTPSSLSASVGDRVTITC（配列番号６４）；
ＶＬ  ＦＲ２：WYQQRPGQAPKLLIY（配列番号６５）；
ＶＬ  ＦＲ３：GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC（配列番号６６）；および
ＶＬ  ＦＲ４：FGQGTRLDIK（配列番号６７）
である。
【０５１９】
（実施例１９）
ＣＨＯ−ＬＡＧ−３＋細胞へのキメラ１３Ｅ２−ヒト抗体（Ｃｈｉｍ１３Ｅ２ＩｇＧ４）およびヒト化１３Ｅ２抗体（ＩＭＰ７６１）の結合
ＬＡＧ−３を表面に発現するＣＨＯ細胞（ＰＢＳ、０．５％ＢＳＡ、０．１％アジド中、０．０５×１０６細胞／ウェル）を、実施例１７に記載されたキメラ重鎖および軽鎖（重鎖：１３Ｅ２ＩｇＧ４ｍｕｔ、軽鎖：１３Ｅ２ＩｇＫ）を含む種々の濃度のキメラ１３Ｅ２−ヒト抗体（Ｃｈｉｍ１３Ｅ２ＩｇＧ４と呼ばれる）、ＩＭＰ７６１、またはヒトＩｇＧ４（アイソタイプをマッチさせた陰性対照として）とインキュベートした。二次抗体ヤギ抗ヒトＩｇＧ−ＦＩＴＣを使用して、ＣＨＯ−ＬＡＧ−３＋細胞の表面の抗体の存在を検出した。ＦＩＴＣ平均蛍光強度（mean  fluorescence  of  intensity）（ＭＦＩ）を、フローサイトメトリーによる解析後に決定した。
【０５２０】
結果を以下の表２８および図２５に示す。
【０５２１】
【表２８】
2018537400.tif 000035
【０５２２】
結果は、ヒト化モノクローナル抗体ＩＭＰ７６１が、キメラ抗体と極めて同じように表面にＬＡＧ−３を発現するＣＨＯ細胞に結合することを示している。
【０５２３】
（実施例２０）
ヒトＬＡＧ−３Ｉｇタンパク質に対するキメラ１３Ｅ２−ヒト抗体（Ｃｈｉｍ１３Ｅ２ＩｇＧ４）およびヒト化１３Ｅ２抗体（ＩＭＰ７６１）の結合アフィニティー
Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）表面プラズモン共鳴解析を、Ｃ１センサーチップに共有結合で固定化したキメラ抗体Ｃｈｉｍ１３Ｅ２ＩｇＧ４（実施例１７に記載されたキメラ重鎖１３Ｅ２ＩｇＧ４ｍｕｔ、およびキメラ軽鎖１３Ｅ２ＩｇＫを含む）、または実施例１８に記載されたヒト化１３Ｅ２抗体（ＩＭＰ７６１）を用いて行った。被覆を１０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ５．０中で行って１３±１ＲＵに達した。組換えヒトＬＡＧ−３Ｉｇタンパク質（ＩＭＰ３２１）に、次いで、２５℃の解析用緩衝液（１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．４、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、３ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０）中、０．０７８〜２．５ｎＭにわたる６つの異なる濃度で捕捉抗体を通過させ、サイクルごとに再生した。解析はＢｉａｃｏｒｅ（商標）Ｔ２００で実施し、データは動態グローバルフィット（kinetic  global  fit）（ラングミュア１：１）モデルを用いてフィットさせた。動態パラメーターは表２９に記録されており、３回のランの平均を表している。
【表２９】
2018537400.tif 000036
【０５２４】
結果は、ヒト化モノクローナル抗体ＩＭＰ７６１が、ヒトＬＡＧ−３Ｉｇタンパク質に対してキメラ抗体と同じアフィニティーを有することを示している。両方の抗体は、ＬＡＧ−３に対する１３Ｅ２由来抗体の高いアフィニティーを説明する、極めて速い会合速度を示す。
【０５２５】
（実施例２１）
抗原刺激により誘導されたＣＤ８＋Ｔ細胞増殖およびＣＤ２５発現に対するヒト化１３Ｅ２抗体（ＩＭＰ７６１）の効果
健康なドナー由来のＣＦＳＥ標識ＰＢＭＣ（完全ＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳ中、０．２×１０６細胞／ウェル）を、３００ｎｇ／ｍｌヒトＩｇＧ４（アイソタイプ対照）、Ｃｈｉｍ１３Ｅ２ＩｇＧ４またはＩＭＰ７６１と共に、ＣＭＶ  ｐｐ３５の配列を含むペプチドのプールと三連でインキュベートした。増殖指数（各分裂ピーク下のＣＤ８＋Ｔ細胞の百分率に分裂数を乗じた合計として計算）を用いて評価した増殖、およびフローサイトメトリーによる５日目のＣＤ２５の発現を測定して、Ｔ細胞応答を評価した。アイソタイプをマッチさせた陰性対照（ｈｕＩｇＧ４）と比較した各抗体の阻害百分率を、増殖指数値、またはＣＤ８＋Ｔ細胞集団内のＣＤ２５＋Ｔ細胞の百分率に基づき計算した。
【０５２６】
結果を、以下の表３０および３１ならびに図２６および２７に示す。
【０５２７】
【表３０】
2018537400.tif 000037
【０５２８】
【表３１】
2018537400.tif 000038
【０５２９】
結果は、ヒト化モノクローナル抗体ＩＭＰ７６１が、抗原により誘導されるＣＤ８＋Ｔ細胞増殖、およびＣＤ２５＋発現の阻害に対してキメラ抗体Ｃｈｉｍ１３Ｅ２ＩｇＧ４と類似した効果があったことを示している。両方の抗体は平均すると、抗原により誘導されるＣＤ８＋Ｔ細胞増殖の約６０％阻害、およびＣＤ８＋Ｔ細胞集団内のＣＤ２５＋Ｔ細胞の約４５％阻害をもたらした。
【０５３０】
（実施例２２）
ＣＤ８＋Ｔ細胞応答に対する種々の用量のキメラ１３Ｅ２−ヒト抗体（Ｃｈｉｍ１３Ｅ２ＩｇＧ４）およびヒト化１３Ｅ２抗体（ＩＭＰ７６１）の効果
健康なドナー由来のＣＦＳＥ標識ＰＢＭＣ（完全ＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳ中、０．２×１０６細胞／ウェル）を、種々の用量のＣｈｉｍ１３Ｅ２ＩｇＧ４、ＩＭＰ７６１、またはヒトＩｇＧ４（アイソタイプをマッチさせた陰性対照）と共に、ＣＭＶ  ｐｐ３５の配列を含むペプチドのプールと三連でインキュベートした。Ｔ細胞応答を、５日目にフローサイトメトリーにより増殖（ＣＦＳＥ希釈）を測定して評価した。分裂数ごとのＣＤ８＋Ｔ細胞の百分率を、使用した種々の抗体用量に対して計算した。
【０５３１】
結果を、以下の表３２および図２８に示す。
【０５３２】
【表３２】
2018537400.tif 000039
【０５３３】
結果は、抗原により誘導されるＣＤ８＋Ｔ細胞増殖に対するＩＭＰ７６１およびＣｈｉｍ１３Ｅ２ＩｇＧ４の阻害効果が、用量依存的であることを示している。特に、各抗体の阻害効果は、用量が１０ｎｇ／ｍｌ〜１００ｎｇ／ｍｌ抗体に増加するにつれて増加した。３００ｎｇ／ｍｌ抗体では、阻害効果は１００ｎｇ／ｍｌ抗体と類似していた。ＩＭＰ７６１の阻害効果は、試験した全ての用量でＣｈｉｍ１３Ｅ２ＩｇＧ４と類似していた。
【０５３４】
（実施例２３）
ヒト化１３Ｅ２抗体（ＩＭＰ７６１）はＬＡＧ−３発現細胞に対する細胞傷害活性を持たない
ヒト化１３Ｅ２抗体（ＩＭＰ７６１）がＬＡＧ−３発現細胞に対する細胞傷害活性を持たないことを確認するために、幾つかのタイプのアッセイを使用した。
【０５３５】
１）ＡＤＣＣレポーターバイオアッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｇ７０１５）
このアッセイでは、初代ドナーＰＢＭＣまたはＮＫ細胞を、ヒトＦｃγＲＩＩＩａ（高アフィニティーＶ１５８受容体）を安定に発現するＪｕｒｋａｔ細胞、およびルシフェラーゼレポーター遺伝子の発現を駆動するＮＦＡＴ応答性エレメントと置き換えた。試験抗体がＡＤＣＣ活性を有するならば、試験抗体は標的細胞とＪｕｒｋａｔ細胞のＦｃγＲＩＩＩａ受容体とを結び付けることになる。ＦｃγＲＩＩＩａ受容体のシグナル伝達経路下流の得られた活性化はＮＦＡＴ経路活性化をもたらし、それによってルシフェラーゼレポーター遺伝子発現を誘導する。ルシフェラーゼ活性は、発光読み取りにより定量化する。
【０５３６】
ＬＡＧ−３トランスフェクトＣＨＯおよびＪｕｒｋａｔ細胞、およびＬＡＧ−３の発現をもたらすためにＳＥＢにより２日間刺激したＰＢＭＣ（ＰＢＭＣの５５％がＬＡＧ−３＋であった）を標的細胞として使用して、アイソタイプをマッチさせた陰性対照抗体、ｈＩｇＧ４（ＢｉｏＲａｄ製の組換えｍＡｂ）と比較したＩＭＰ７６１のＡＤＣＣ活性をアッセイした。アッセイキットにより提供された抗ＣＤ２０抗体およびＲａｊｉ細胞を、陽性対照として使用した。抗ＣＤ２０抗体もＳＥＢ刺激ＰＢＭＣで試験した。アッセイは、１２，５００個の標的細胞を含む７５，０００個のエフェクター細胞を用いて、製造者の説明書に従って実施した。３７℃で６時間インキュベーション後、製造者の説明書に従ってＢｉｏ−Ｇｌｏルシフェラーゼアッセイシステムを使用して、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  ＥｎＶｉｓｉｏｎ  ２１０３ルミノメーター（０．５秒／ウェルの積分時間）を用いて発光を測定した。
【０５３７】
結果を、以下の表３３および図２９（ａ）に示す。結果は、試験抗体（製造者により推奨された最大濃度、３μｇ／ｍｌの）の存在下で得られたＲＬＵを、抗体なしで得られたＲＬＵで除して計算した、相対発光量（ＲＬＵ）の変化（倍）として示されている。
【０５３８】
【表３３】
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【０５３９】
結果は、標的細胞がＬＡＧ−３を発現しているか否かにかかわらず、ＩＭＰ７６１抗体のＲＬＵの変化（倍）は試験した異なる標的細胞の各々に関して約１倍であったことを示している。アイソタイプをマッチさせた陰性対照抗体、ｈＩｇＧ４に関して得られたＲＬＵの変化（倍）はわずかに高く、異なる標的細胞に関して１．４〜２．５倍であった。陽性対照抗ＣＤ２０抗体は、Ｒａｊｉ細胞（Ｂ細胞株）に対して、およびわずかな百分率のＢ細胞を含有するＳＥＢ刺激ＰＢＭＣに対して有意なＡＤＣＣ活性を示した。
【０５４０】
ＩＭＰ７６１抗体は、ＬＡＧ−３発現細胞に対して全くＡＤＣＣ活性を持たないことがこれらの結果から結論付けられた。
【０５４１】
２）従来のＡＤＣＣアッセイ
このアッセイは、ＩＬ−２（Ｒｏｃｈｅ）１００ＩＵ／ｍｌによりＸ−Ｖｉｖｏ  １０培地（Ｌｏｎｚａ）で１日刺激したＰＢＭＣ、およびＴ細胞でのＬＡＧ−３の発現を可能にするためにＳＥＢで２日間刺激したＣＦＳＥ標識ＰＢＭＣを使用した。アッセイは、高用量（３μｇ／ｍｌ）ＩＭＰ７６１またはアイソタイプをマッチさせた陰性対照抗体、ｈＩｇＧ４と共に、５０：１エフェクター：標的比でＸ−Ｖｉｖｏ  １０培地で実施した。４時間後、細胞混合物を回収し、蛍光色素コンジュゲート抗体を用いてＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５およびＬＡＧ−３について染色した。各血液細胞集団における細胞生存率を次いで、膜の完全性を失った（細胞死の後に急速に出現する現象）細胞を標識する蛍光色素である、７−アミノ−アクチノマイシンＤ（７−ＡＡＤ）染色に対して陽性と思われた細胞を除外後、フローサイトメトリーにより評価した。
【０５４２】
結果を、表３４ならびに図２９（ｂ）および（ｃ）に示す。結果は、ＰＢＭＣ集団中の生きているＣＤ４＋またはＣＤ８＋細胞の百分率（ｂ）、およびＰＢＭＣ集団中の生きているＬＡＧ−３＋ＣＤ４＋またはＬＡＧ−３＋ＣＤ８＋細胞の百分率（ｃ）として示されている。
【０５４３】
【表３４】
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【０５４４】
結果は、ＩＭＰ７６１抗体が、ＰＢＭＣ集団中のＣＤ８＋もしくはＣＤ４＋Ｔ細胞の百分率、またはＰＢＭＣ集団中のＬＡＧ−３＋ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞、もしくはＬＡＧ−３＋ＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞の百分率を減少させないことを示している。アイソタイプをマッチさせた陰性対照抗体、ｈＩｇＧ４は、ＰＢＭＣ集団中のＴ細胞、特にＬＡＧ−３を発現する活性化Ｔ細胞の生存率のわずかな減少をもたらした。
【０５４５】
ＩＭＰ７６１抗体は、ＬＡＧ−３発現Ｔ細胞に対して全くＡＤＣＣ活性を持たないことがこれらの結果から結論付けられた。
【０５４６】
３）ＣＤＣアッセイ
ＣＤＣ試験のために、標的細胞として使用したＳＥＢ刺激細胞を、ＰＢＳ、０．５％ＢＳＡ中で４５分間、３μｇ／ｍｌのＩＭＰ７６１、アイソタイプをマッチさせた陰性対照抗体、ｈＩｇＧ４、ＣＤＣ陽性抗ＣＤ３対照抗体（クローンＭＥＭ−５７、Ｃｅｒｄａｌａｎｅ）、またはアイソタイプをマッチさせた陰性対照マウス抗体、ｍＩｇＧ２ａとインキュベートした。非結合抗体を次いで洗い流し、細胞を、ＲＰＭＩ培地で３７℃、１時間、３容量により希釈したウサギ補体とインキュベートした。細胞を、蛍光色素コンジュゲート抗体を用いてＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５およびＬＡＧ−３について染色した。各血液細胞集団における細胞生存率を次いで、７−ＡＡＤにより標識した細胞を除外後、フローサイトメトリーにより評価した。
【０５４７】
結果を、表３５および図３０に示す。結果は、ＰＢＭＣ集団中の生きているＣＤ４＋またはＣＤ８＋の百分率（ａ）、およびＰＢＭＣ集団中の生きているＬＡＧ−３＋ＣＤ４＋またはＬＡＧ−３＋ＣＤ８＋細胞の百分率（ｂ）として示されている。
【０５４８】
【表３５】
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【０５４９】
結果は、ＩＭＰ７６１抗体が、ＰＢＭＣ集団中のＣＤ８＋もしくはＣＤ４＋Ｔ細胞の百分率、またはＰＢＭＣ集団中のＬＡＧ−３＋ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞、もしくはＬＡＧ−３＋ＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞の百分率を減少させないことを示している。予想通り、抗ＣＤ３陽性対照抗体は、ＰＢＭＣ集団中のＴ細胞、およびＬＡＧ−３を発現する活性化Ｔ細胞の百分率の減少をもたらした。
【０５５０】
ＩＭＰ７６１抗体は、ＬＡＧ−３発現Ｔ細胞に対して全くＣＤＣ活性を持たないことがこれらの結果から結論付けられた。
【０５５１】
４）Ｔ細胞増殖アッセイにおける細胞傷害性の評価
ＩＭＰ７６１抗体は、上記の（１）〜（３）に記載された短期細胞傷害性アッセイのいずれにおいても細胞傷害活性を示さなかった。ＬＡＧ−３発現Ｔ細胞に対するＩＭＰ７６１の細胞傷害性も、抗原刺激ＰＢＭＣを数日間培養した後に評価した。以前の例に記載された増殖アッセイと同じような方法で、健康なドナー由来のＰＢＭＣ（完全ＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳ中、０．２×１０６細胞／ウェル）を、３００ｎｇ／ｍｌ  ＩＭＰ７６１、またはヒトＩｇＧ４（アイソタイプをマッチさせた陰性対照として）の存在下、ＣＭＶ  ｐｐ３５の配列を含むペプチドのプールと三連でインキュベートした。３日後、生きているリンパ球においてゲーティングしたＣＤ８＋およびＣＤ４＋Ｔ細胞の百分率、ならびにこれらのＴ細胞サブセットにおけるＬＡＧ−３＋細胞の百分率を、フローサイトメトリーにより測定した。
【０５５２】
結果を、表３６および図３１に示す。
【０５５３】
【表３６】
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【０５５４】
結果は、ＩＭＰ７６１抗体が、リンパ球集団中のＣＤ８＋もしくはＣＤ４＋Ｔ細胞の百分率、またはリンパ球集団中のＬＡＧ−３＋ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞、もしくはＬＡＧ−３＋ＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞の百分率を減少させないことを示している。
【０５５５】
ＩＭＰ７６１抗体は、この増殖アッセイにおいてＬＡＧ−３発現Ｔ細胞に対して全く細胞傷害活性を示さないことがこれらの結果から結論付けられた。
【０５５６】
ＩＭＰ７６１抗体は細胞傷害活性を持たず、そのため、この抗体による、抗原により誘導されるＴ細胞増殖および活性化の阻害は、活性化Ｔ細胞に対する何らかの細胞傷害活性によるものではないことがこの例で示された結果から結論付けられた。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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