(57)【要約】  本発明は、副補体経路の活性化における重要なドライバーであるＤ因子の活性を測定する方法、Ｄ因子阻害剤の力価を決定する方法、及びＤ因子阻害剤をスクリーニングする方法に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象に由来する試料におけるＤ因子の活性を測定する方法であって、近接に基づく測定アッセイを行うことを含み、近接に基づく測定アッセイが、Ｂ因子の切断を測定する、方法。
【請求項２】
（ａ）試料に、第１の部分で標識された抗Ｂａ因子抗体及び第２の部分で標識された抗Ｂｂ因子抗体を添加することであって、これらの部分の一方がドナーであり、他方の部分がアクセプターであり、アクセプター及び／又はドナーによって生じた近接シグナルが、Ｂａ因子及びＢｂ因子が近接していることを指し示すことと、
（ｂ）試料由来の近接シグナルの値を測定することと
を含み、試料におけるＤ因子の活性が、近接シグナルの値と負に相関する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
（ｃ）コントロール試料に、第１の部分で標識された抗Ｂａ因子抗体及び第２の部分で標識された抗Ｂｂ因子抗体を添加することと、
（ｄ）コントロール試料由来の近接シグナルの値を測定することと
をさらに含み、コントロール試料と比べて試料由来の近接シグナルの値がより大きいことが、コントロール試料と比べて試料におけるＤ因子の活性がより低いことを指し示す、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
抗Ｂａ因子抗体及び抗Ｂｂ因子抗体が、Ｄ因子の活性をクエンチする、請求項２又は３に記載の方法。
【請求項５】
（ａ）試料に、第１の部分で標識された抗Ｃ３ｂ因子抗体及び第２の部分で標識された抗Ｂａ因子抗体を添加することであって、これらの部分の一方がドナーであり、他方の部分がアクセプターであり、アクセプター及び／又はドナーによって生じた近接シグナルが、Ｃ３ｂ因子及びＢａ因子が近接していることを指し示すことと、
（ｂ）試料由来の近接シグナルの値を測定することと
を含み、試料におけるＤ因子の活性が、近接シグナルの値と負に相関する、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
（ｃ）コントロール試料に、第１の部分で標識された抗Ｃ３ｂ因子抗体及び第２の部分で標識された抗Ｂａ因子抗体を添加することと、
（ｄ）コントロール試料由来の近接シグナルの値を測定することと
をさらに含み、コントロール試料と比べて試料由来の近接シグナルの値がより大きいことが、コントロール試料と比べて試料におけるＤ因子の活性がより低いことを指し示す、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
（ａ）の工程の前に、過剰量のクエンチャーを試料に与えることにより、試料におけるＤ因子の活性をクエンチする工程をさらに含む、請求項２又は５に記載の方法。
【請求項８】
（ａ）の工程の前に、過剰量のクエンチャーを試料に与えることにより、試料におけるＤ因子の活性をクエンチする工程と、（ｃ）の工程の前に、過剰量のクエンチャーをコントロール試料に与えることにより、コントロール試料におけるＤ因子の活性をクエンチする工程とをさらに含む、請求項３又は６に記載の方法。
【請求項９】
クエンチャーが、Ｄ因子阻害剤である、請求項７又は８に記載の方法。
【請求項１０】
対象が、ヒトである、請求項１から９の何れか一項に記載の方法。
【請求項１１】
Ｄ因子活性の阻害におけるＤ因子阻害剤の力価を決定する方法であって、近接に基づく測定アッセイを行うことを含み、近接に基づく測定アッセイが、Ｂ因子の切断を測定する、方法。
【請求項１２】
（ａ）被験反応混合物においてＤ因子阻害剤をＤ因子、Ｂ因子及びＣ３ｂ因子と混合することと、
（ｂ）被験反応混合物をインキュベートすることと、
（ｃ）（ｂ）の工程の後に、被験反応混合物に、第１の部分で標識された抗Ｂａ因子抗体及び第２の部分で標識された抗Ｂｂ因子抗体を添加することであって、これらの部分の一方がドナーであり、他方の部分がアクセプターであり、アクセプター及び／又はドナーによって生じた近接シグナルが、Ｂａ因子及びＢｂ因子が近接していることを指し示すことと、
（ｄ）被験反応混合物由来の近接シグナルの値を測定することと
を含み、Ｄ因子阻害剤の力価が、近接シグナルの値と正に相関する、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
（ｅ）コントロール反応混合物を混合することと、
（ｆ）コントロール反応混合物をインキュベートすることと、
（ｇ）（ｆ）の工程の後に、コントロール反応混合物に、第１の部分で標識された抗Ｂａ因子抗体及び第２の部分で標識された抗Ｂｂ因子抗体を添加することと、
（ｈ）コントロール被験反応混合物由来の近接シグナルの値を測定することと
をさらに含み、コントロール反応混合物と比べて被験反応混合物由来の近接シグナルの値がより大きいことが、コントロール反応混合物と比べて被験反応混合物におけるＤ因子阻害剤によるＤ因子活性の阻害がより大きいことを指し示す、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
抗Ｂａ因子抗体及び抗Ｂｂ因子抗体が、Ｄ因子の活性をクエンチする、請求項１２又は１３に記載の方法。
【請求項１５】
（ａ）被験反応混合物においてＤ因子阻害剤をＤ因子、Ｂ因子及びＣ３ｂ因子と混合することと、
（ｂ）被験反応混合物をインキュベートすることと、
（ｃ）（ｂ）の工程の後に、被験反応混合物に、第１の部分で標識された抗Ｃ３ｂ因子抗体及び第２の部分で標識された抗Ｂａ因子抗体を添加することであって、これらの部分の一方がドナーであり、他方の部分がアクセプターであり、アクセプター及び／又はドナーによって生じた近接シグナルが、Ｃ３ｂ因子及びＢａ因子が近接していることを指し示すことと、
（ｄ）被験反応混合物由来の近接シグナルの値を測定することと
を含み、Ｄ因子阻害剤の力価が、近接シグナルの値と正に相関する、請求項１１に記載の方法。
【請求項１６】
（ｅ）コントロール反応混合物を混合することと、
（ｆ）コントロール反応混合物をインキュベートすることと、
（ｇ）（ｆ）の工程の後に、コントロール反応混合物に、第１の部分で標識された抗Ｃ３ｂ因子抗体及び第２の部分で標識された抗Ｂａ因子抗体を添加することと、
（ｈ）コントロール被験反応混合物由来の近接シグナルの値を測定することと
をさらに含み、コントロール反応混合物と比べて被験反応混合物由来の近接シグナルの値がより大きいことが、コントロール反応混合物と比べて被験反応混合物におけるＤ因子阻害剤によるＤ因子活性の阻害がより大きいことを指し示す、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
（ｃ）の工程の前に、過剰量のクエンチャーを試料に与えることにより、試料におけるＤ因子の活性をクエンチする工程をさらに含む、請求項１２又は１５に記載の方法。
【請求項１８】
（ｃ）の工程の前に、過剰量のクエンチャーを試料に与えることにより、試料におけるＤ因子の活性をクエンチする工程と、（ｈ）の工程の前に、過剰量のクエンチャーをコントロール試料に与えることにより、コントロール試料におけるＤ因子の活性をクエンチする工程とをさらに含む、請求項１３又は１６に記載の方法。
【請求項１９】
クエンチャーが、Ｄ因子阻害剤である、請求項１７又は１８に記載の方法。
【請求項２０】
Ｄ因子阻害剤が、抗体又はその抗原結合性断片である、請求項１１から１９の何れか一項に記載の方法。
【請求項２１】
抗体が、ランパリズマブである、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
抗体が、次のＨＶＲ：（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｉｉ）配列番号２、配列番号３若しくは配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｉｉｉ）配列番号５、配列番号６、配列番号７若しくは配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｉｖ）配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６若しくは配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｖ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；又は（ｖｉ）配列番号１９若しくは配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３のうち１、２、３、４、５又は６種を含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
抗体が、次のＨＶＲ：（ｉ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｉｉ）配列番号８６、配列番号８７、配列番号８８、配列番号８９、配列番号９０、配列番号９１、配列番号９２、配列番号９３若しくは配列番号９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｉｉｉ）配列番号９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｉｖ）配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｖ）配列番号９７、配列番号９８若しくは配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；又は（ｖｉ）配列番号１００若しくは配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３のうち１、２、３、４、５又は６種を含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２４】
複数のＤ因子阻害剤候補からＤ因子阻害剤をスクリーニングする方法であって、近接に基づく測定アッセイを行うことを含み、近接に基づく測定アッセイが、Ｂ因子の切断を測定する、方法。
【請求項２５】
（ａ）被験反応混合物においてＤ因子阻害剤候補をＤ因子、Ｂ因子及びＣ３ｂ因子と混合することと、
（ｂ）被験反応混合物をインキュベートすることと、
（ｃ）（ｂ）の工程の後に、被験反応混合物に、第１の部分で標識された抗Ｂａ因子抗体及び第２の部分で標識された抗Ｂｂ因子抗体を添加することであって、これらの部分の一方がドナーであり、他方がアクセプターであり、アクセプター及び／又はドナーによって生じた近接シグナルが、Ｂａ因子及びＢｂ因子が近接していることを指し示すことと、
（ｄ）被験反応混合物由来の近接シグナルの値を測定することと
を含み、Ｄ因子候補によるＤ因子活性阻害の程度が、近接シグナルの値と正に相関する、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
（ｅ）コントロール反応混合物を混合することと、
（ｆ）コントロール反応混合物をインキュベートすることと、
（ｇ）（ｇ）の工程の後に、コントロール反応混合物に、第１の部分で標識された抗Ｂａ因子抗体及び第２の部分で標識された抗Ｂｂ因子抗体を添加することと、
（ｈ）コントロール被験反応混合物由来の近接シグナルの値を測定することと
をさらに含み、コントロール反応混合物と比べて被験反応混合物由来の近接シグナルの値がより大きいことが、コントロール反応混合物と比べて被験反応混合物におけるＤ因子阻害剤候補によるＤ因子活性の阻害がより大きいことを指し示す、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
抗Ｂａ因子抗体及び抗Ｂｂ因子抗体が、Ｄ因子の活性をクエンチする、請求項２５又は２６に記載の方法。
【請求項２８】
（ａ）被験反応混合物においてＤ因子阻害剤候補をＤ因子、Ｂ因子及びＣ３ｂ因子と混合することと、
（ｂ）被験反応混合物をインキュベートすることと、
（ｃ）（ｂ）の工程の後に、被験反応混合物に、第１の部分で標識された抗Ｃ３ｂ因子抗体及び第２の部分で標識された抗Ｂａ因子抗体を添加することであって、これらの部分の一方がドナーであり、他方がアクセプターであり、アクセプター及び／又はドナーによって生じた近接シグナルが、Ｃ３ｂ因子及びＢａ因子が近接していることを指し示すことと、
（ｄ）被験反応混合物由来の近接シグナルの値を測定することと
を含み、Ｄ因子候補によるＤ因子活性阻害の程度が、近接シグナルの値と正に相関する、請求項２４に記載の方法。
【請求項２９】
（ｅ）コントロール反応混合物を混合することと、
（ｆ）コントロール反応混合物をインキュベートすることと、
（ｇ）（ｇ）の工程の後に、コントロール反応混合物に、第１の部分で標識された抗Ｃ３ｂ因子抗体及び第２の部分で標識された抗Ｂａ因子抗体を添加することと、
（ｈ）コントロール被験反応混合物由来の近接シグナルの値を測定することと
をさらに含み、コントロール反応混合物と比べて被験反応混合物由来の近接シグナルの値がより大きいことが、コントロール反応混合物と比べて被験反応混合物におけるＤ因子阻害剤候補によるＤ因子活性の阻害がより大きいことを指し示す、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
（ｃ）の工程の前に、過剰量のクエンチャーを試料に与えることにより、試料におけるＤ因子の活性をクエンチする工程をさらに含む、請求項２５又は２８に記載の方法。
【請求項３１】
（ｃ）の工程の前に、過剰量のクエンチャーを試料に与えることにより、試料におけるＤ因子の活性をクエンチする工程と、（ｇ）の工程の前に、過剰量のクエンチャーをコントロール試料に与えることにより、コントロール試料におけるＤ因子の活性をクエンチする工程とをさらに含む、請求項２６又は２９に記載の方法。
【請求項３２】
クエンチャーが、Ｄ因子阻害剤である、請求項３０又は３１に記載の方法。
【請求項３３】
（ａ）−（ｄ）の工程が、複数由来のＤ因子阻害剤候補毎に実行される、請求項２５から３２の何れか一項に記載の方法。
【請求項３４】
Ｄ因子阻害剤候補が、抗体又はその抗原結合性断片である、請求項２４から３３の何れか一項に記載の方法。
【請求項３５】
Ｄ因子が、組換えにより発現されたＤ因子である、請求項１２から２３及び２５から３４の何れか一項に記載の方法。
【請求項３６】
Ｄ因子が、対象に由来する試料から精製された、内因的に発現されたＤ因子である、請求項１２から２３及び２５から３４の何れか一項に記載の方法。
【請求項３７】
Ｂ因子が、組換えにより発現されたＢ因子である、請求項１から３６の何れか一項に記載の方法。
【請求項３８】
Ｂ因子が、対象に由来する試料から精製された、内因的に発現されたＢ因子である、請求項１から３６の何れか一項に記載の方法。
【請求項３９】
抗Ｂａ因子抗体、抗Ｂｂ因子抗体、第１の部分及び第２の部分を含むキットであって、
（ａ）抗Ｂａ因子抗体が、第１の部分で標識されており又は標識され得、抗Ｂｂ因子抗体が、第２の部分で標識されており又は標識され得、かつ
（ｂ）これらの部分の一方がドナーであり、他方の部分がアクセプターである、キット。
【請求項４０】
抗Ｂａ因子抗体及び／又は抗Ｂｂ因子抗体が、固体表面に固定化されている、請求項３９に記載のキット。
【請求項４１】
抗Ｃ３ｂ因子抗体、抗Ｂａ因子抗体、第１の部分及び第２の部分を含むキットであって、
（ａ）抗Ｃ３ｂ因子抗体が、第１の部分で標識されており又は標識され得、抗Ｂａ因子抗体が、第２の部分で標識されており又は標識され得、かつ
（ｂ）これらの部分の一方がドナーであり、他方の部分がアクセプターである、キット。
【請求項４２】
抗Ｃ３ｂ因子抗体及び／又は抗Ｂａ因子抗体が、固体表面に固定化されている、請求項４１に記載のキット。
【請求項４３】
固体表面が、プレート、マイクロプレート、チップ、膜又はビーズである、請求項４０又は４２に記載のキット。
【請求項４４】
既知のＤ因子活性を有するコントロール試料をさらに含む、請求項３９から４３の何れか一項に記載のキット。
【請求項４５】
Ｄ因子活性を阻害する既知の力価を有するコントロールＤ因子阻害剤をさらに含む、請求項３９から４３の何れか一項に記載のキット。
【請求項４６】
クエンチャーをさらに含む、請求項３９から４５の何れか一項に記載のキット。
【請求項４７】
クエンチャーが、Ｄ因子阻害剤である、請求項４６に記載のキット。
【請求項４８】
組換えにより発現されたＢ因子をさらに含む、請求項３９から４７の何れか一項に記載のキット。
【請求項４９】
対象に由来する試料から精製された、内因的に発現されたＢ因子をさらに含む、請求項３９から４７の何れか一項に記載のキット。
【請求項５０】
組換えにより発現されたＤ因子をさらに含む、請求項３９から４９の何れか一項に記載のキット。
【請求項５１】
対象に由来する試料から精製された、内因的に発現されたＤ因子をさらに含む、請求項３９から４９の何れか一項に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願とのクロスリファレンス
本願は、本明細書においてそれらの全体が出典明示により援用された、２０１５年１０月３０日に出願された米国特許仮出願第６２／２４９０７３号及び２０１５年１１月４日に出願された同第６２／２５０８８５号の利益を主張するものである。
【０００２】
電子提出された配列表の参照
本願は、２０１６年１０月１９日に作成され、１，６４７，５７８バイトのサイズを有する、表題「１２２７９−７０５−２２８＿ＳＥＱＬＩＳＴ．ｔｘｔ」のテキストファイルとして本願と共に提出された配列表を出典明示により援用する。
【０００３】
１．分野
本発明は、副補体経路の活性化における重要なドライバーであるＤ因子の活性を測定する方法、Ｄ因子阻害剤の力価を決定する方法、及びＤ因子阻害剤をスクリーニングする方法に関する。
【背景技術】
【０００４】
２．背景
Ｄ因子は、補体副経路の活性化における律速酵素である、高度に特異的なキモトリプシン様セリンプロテアーゼである（Katsche等、2012、J Biol Chem 287:12886-12892）。副補体経路の活性化増加は、加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）の発症に関連する、ブルッフ膜上に存在する細胞傷害性沈着物であるドルーゼンにおいて見出された（Damico等、2012, Arq Bras Oftalmol 75:71-75）。
【０００５】
Ｄ因子の阻害剤は、副補体経路の活性化を予防し、これにより、活性化された補体成分の炎症及び細胞傷害活性を阻害するための治療薬として開発されている（Tanhehco, 1999, Transplant Proc 31:2168-2171）。
【０００６】
副補体経路の活性化は典型的に、ウサギ赤血球にヒト血清を添加することにより測定される。次に、インタクトな赤血球及び細胞デブリが遠心分離によってペレットにされ、上清へのヘモグロビンの放出から生じる４１２ｎｍにおける吸光度を測定することにより溶解が決定される。
【０００７】
本明細書における参考文献の引用は、これが本開示にとって先行技術であることを承認するものとして解釈されるべきではない。
【発明の概要】
【０００８】
３．発明の概要
本発明は、Ｄ因子活性を測定する方法、Ｄ因子阻害剤の力価を決定する方法、及びＤ因子阻害剤をスクリーニングする方法に関し、これらは全て、近接に基づく測定アッセイを使用してＢ因子切断を測定することを含む。本方法は、単純、迅速、均一、且つハイスループットアッセイに適応可能であり、一部には、Ｄ因子の酵素活性を阻害するランパリズマブ（lampalizumab）（抗Ｄ因子抗体）の能力を測定するアッセイに関する本発明者らの開発及び特徴づけに基づく（セクション６を参照）。Ｄ因子の基質は、別の副補体経路セリンプロテアーゼ、Ｂ因子である。Ｃ３ｂ因子は、Ｂ因子に結合し；続いて、Ｄ因子は、Ｂ因子をＢａ因子及びＢｂ因子へと切断する。Ｂｂ因子は、Ｃ３ｂ因子に結合されたままとなり、副補体経路を惹起する活性Ｃ３コンバターゼを形成する（Volanakis等、1996, Protein Science 5:553-564）。従って、Ｂ因子が、Ｄ因子によって切断されない場合、Ｂａ因子及びＢｂ因子は、互いに空間的に近接し、Ｃ３ｂ因子及びＢａ因子も、互いに空間的に近接するであろう。しかし、Ｂ因子が、Ｄ因子によって切断される場合、Ｂａ因子及びＢｂ因子は、互いに離れ、Ｃ３ｂ因子及びＢａ因子も、互いに離れるであろう。
【０００９】
ある特定の実施態様では、本明細書に記載されている方法は、Ｂａ因子及びＢｂ因子の間の距離に頼り、この二者のうち一方が、ドナーで標識され、他方が、アクセプターで標識される。かかる実施態様では、ドナー及び／又はアクセプターは、Ｂａ因子若しくはＢｂ因子に結合するタンパク質（例えば、抗体又はその抗原結合性断片）、ペプチド、ペプチドミメティック、アプタマー、ヌクレオチド（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、アンチセンスＤＮＡ）若しくは他の何れかの分子によって、又は直接的化学標識によって、それぞれＢａ因子又はＢｂ因子に取り付けることができる（ドナーが、Ｂａ因子に取り付けられる場合、アクセプターは、Ｂｂ因子に取り付けられ；ドナーが、Ｂｂ因子に取り付けられる場合、アクセプターは、Ｂａ因子に取り付けられる）。
【００１０】
ある特定の実施態様では、本明細書に記載されている方法は、Ｃ３ｂ因子及びＢａ因子の間の距離に頼り、この二者のうち一方は、ドナーで標識され、他方は、アクセプターで標識される。かかる実施態様では、ドナー及び／又はアクセプターは、Ｃ３ｂ因子若しくはＢａ因子に結合するタンパク質（例えば、抗体又はその抗原結合性断片）、ペプチド、ペプチドミメティック、アプタマー、ヌクレオチド（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、アンチセンスＤＮＡ）若しくは他の何れかの分子によって、又は直接的化学標識によって、それぞれＣ３ｂ因子又はＢａ因子に取り付けることができる（ドナーが、Ｃ３ｂ因子に取り付けられる場合、アクセプターは、Ｂａ因子に取り付けられ；ドナーが、Ｂａ因子に取り付けられる場合、アクセプターは、Ｃ３ｂ因子に取り付けられる）。
【００１１】
Ｄ因子活性又はＤ因子阻害剤の力価をより正確に測定するために、クエンチャーを添加して、測定前に、Ｄ因子によるＢ因子の酵素的切断を終結することができる。幸運なことに、本発明者らは、抗Ｂａ因子及び抗Ｂｂ因子の両方が、検出試薬として使用される場合、これらが、アッセイにおけるＤ因子活性をクエンチし、従って、別のクエンチャーを添加する必要がないことを発見した。
【００１２】
Ｄ因子活性を測定する方法は、例えば、健常者と比べて増加又は減少したＤ因子活性に関連する障害を有する又はこれを有すると疑われるヒト患者の診断又はステージ分類において有用である。Ｄ因子阻害剤の力価を決定する方法は、例えば、バッチ製造における品質管理のための抗Ｄ因子治療薬の品質の評価において、及び選択された抗Ｄ因子治療用リードの力価の検査において有用である。Ｄ因子阻害剤をスクリーニングする方法は、例えば、新たなＤ因子阻害剤のハイスループットスクリーニングにおいて有用である。
【００１３】
一態様では、対象（例えば、ヒト）に由来する試料におけるＤ因子の活性を測定する方法であって、近接に基づく測定アッセイを行うことを含み、近接に基づく測定アッセイが、Ｂ因子の切断を測定する、方法が、本明細書に提供される。
【００１４】
様々な実施態様では、Ｄ因子の活性を測定する方法は、（ａ）試料に、第１の部分で標識された抗Ｂａ因子抗体及び第２の部分で標識された抗Ｂｂ因子抗体を添加することであって、これらの部分の一方がドナーであり、他方の部分がアクセプターであり、アクセプター及び／又はドナーによって生じた近接シグナルが、Ｂａ因子及びＢｂ因子が近接していることを指し示すことと、（ｂ）試料由来の近接シグナルの値を測定することとを含み、試料におけるＤ因子の活性が、近接シグナルの値と負に相関する。一部の実施態様では、本方法は、（ａ）の工程の前に、過剰量のクエンチャー（例えば、Ｄ因子阻害剤）を試料に与えることにより、試料におけるＤ因子の活性をクエンチする工程をさらに含む。
【００１５】
かかる様々な実施態様のある特定の態様では、Ｄ因子の活性を測定する方法は、（ｃ）コントロール試料に、第１の部分で標識された抗Ｂａ因子抗体及び第２の部分で標識された抗Ｂｂ因子抗体を添加することと、（ｄ）コントロール試料由来の近接シグナルの値を測定することとをさらに含み、コントロール試料と比べて試料由来の近接シグナルの値がより大きいことが、コントロール試料と比べて試料におけるＤ因子の活性がより低いことを指し示す。一部の実施態様では、本方法は、（ａ）の工程の前に、過剰量のクエンチャー（例えば、Ｄ因子阻害剤）を試料に与えることにより、試料におけるＤ因子の活性をクエンチする工程と、（ｃ）の工程の前に、過剰量のクエンチャーをコントロール試料に与えることにより、コントロール試料におけるＤ因子の活性をクエンチする工程とをさらに含む。
【００１６】
記載されているＤ因子の活性を測定する方法の一部の実施態様では、抗Ｂａ因子抗体及び抗Ｂｂ因子抗体は、Ｄ因子の活性をクエンチする。
【００１７】
他の様々な実施態様では、Ｄ因子の活性を測定する方法は、（ａ）試料に、第１の部分で標識された抗Ｃ３ｂ因子抗体及び第２の部分で標識された抗Ｂａ因子抗体を添加することであって、これらの部分の一方がドナーであり、他方の部分がアクセプターであり、アクセプター及び／又はドナーによって生じた近接シグナルが、Ｃ３ｂ因子及びＢａ因子が近接していることを指し示すことと、（ｂ）試料由来の近接シグナルの値を測定することとを含み、試料におけるＤ因子の活性が、近接シグナルの値と負に相関する。一部の実施態様では、本方法は、（ａ）の工程の前に、過剰量のクエンチャー（例えば、Ｄ因子阻害剤）を試料に与えることにより、試料におけるＤ因子の活性をクエンチする工程をさらに含む。
【００１８】
かかる他の様々な実施態様のある特定の態様では、Ｄ因子の活性を測定する方法は、（ｃ）コントロール試料に、第１の部分で標識された抗Ｃ３ｂ因子抗体及び第２の部分で標識された抗Ｂａ因子抗体を添加することと、（ｄ）コントロール試料由来の近接シグナルの値を測定することとをさらに含み、コントロール試料と比べて試料由来の近接シグナルの値がより大きいことが、コントロール試料と比べて試料におけるＤ因子の活性がより低いことを指し示す。一部の実施態様では、本方法は、（ａ）の工程の前に、過剰量のクエンチャー（例えば、Ｄ因子阻害剤）を試料に与えることにより、試料におけるＤ因子の活性をクエンチする工程と、（ｃ）の工程の前に、過剰量のクエンチャーをコントロール試料に与えることにより、コントロール試料におけるＤ因子の活性をクエンチする工程とをさらに含む。
【００１９】
本明細書に記載されているＤ因子の活性を測定する方法の具体的な実施態様では、Ｂ因子は、組換えにより発現されたＢ因子である。本明細書に記載されているＤ因子の活性を測定する方法の具体的な実施態様では、Ｂ因子は、対象に由来する試料から精製された、内因的に発現されたＢ因子である。
【００２０】
別の態様では、Ｄ因子活性の阻害におけるＤ因子阻害剤の力価を決定する方法であって、近接に基づく測定アッセイを行うことを含み、近接に基づく測定アッセイが、Ｂ因子の切断を測定する、方法が、本明細書に提供される。
【００２１】
様々な実施態様では、Ｄ因子阻害剤の力価を決定する方法は、（ａ）被験反応混合物においてＤ因子阻害剤をＤ因子、Ｂ因子及びＣ３ｂ因子と混合することと、（ｂ）被験反応混合物をインキュベートすることと、（ｃ）（ｂ）の工程の後に、被験反応混合物に、第１の部分で標識された抗Ｂａ因子抗体及び第２の部分で標識された抗Ｂｂ因子抗体を添加することであって、これらの部分の一方がドナーであり、他方の部分がアクセプターであり、アクセプター及び／又はドナーによって生じた近接シグナルが、Ｂａ因子及びＢｂ因子が近接していることを指し示すことと、（ｄ）被験反応混合物由来の近接シグナルの値を測定することとを含み、Ｄ因子阻害剤の力価が、近接シグナルの値と正に相関する。一部の実施態様では、本方法は、（ｃ）の工程の前に、過剰量のクエンチャー（例えば、Ｄ因子阻害剤）を試料に与えることにより、試料におけるＤ因子の活性をクエンチする工程をさらに含む。
【００２２】
かかる様々な実施態様のある特定の態様では、Ｄ因子阻害剤の力価を決定する方法は、（ｅ）コントロール反応混合物を混合することと、（ｆ）コントロール反応混合物をインキュベートすることと、（ｇ）（ｆ）の工程の後に、コントロール反応混合物に、第１の部分で標識された抗Ｂａ因子抗体及び第２の部分で標識された抗Ｂｂ因子抗体を添加することと、（ｈ）コントロール被験反応混合物由来の近接シグナルの値を測定することとをさらに含み、コントロール反応混合物と比べて被験反応混合物由来の近接シグナルの値がより大きいことが、コントロール反応混合物と比べて被験反応混合物におけるＤ因子阻害剤によるＤ因子活性の阻害がより大きいことを指し示す。一部の実施態様では、本方法は、（ｃ）の工程の前に、過剰量のクエンチャー（例えば、Ｄ因子阻害剤）を試料に与えることにより、試料におけるＤ因子の活性をクエンチする工程と、（ｇ）の工程の前に、過剰量のクエンチャーをコントロール試料に与えることにより、コントロール試料におけるＤ因子の活性をクエンチする工程とをさらに含む。
【００２３】
Ｄ因子阻害剤の力価を決定する方法の一部の実施態様では、抗Ｂａ因子抗体及び抗Ｂｂ因子抗体は、Ｄ因子の活性をクエンチする。
【００２４】
他の様々な実施態様では、Ｄ因子阻害剤の力価を決定する方法は、（ａ）被験反応混合物においてＤ因子阻害剤をＤ因子、Ｂ因子及びＣ３ｂ因子と混合することと、（ｂ）被験反応混合物をインキュベートすることと、（ｃ）（ｂ）の工程の後に、被験反応混合物に、第１の部分で標識された抗Ｃ３ｂ因子抗体及び第２の部分で標識された抗Ｂａ因子抗体を添加することであって、これらの部分の一方がドナーであり、他方の部分がアクセプターであり、アクセプター及び／又はドナーによって生じた近接シグナルが、Ｃ３ｂ因子及びＢａ因子が近接していることを指し示すことと、（ｄ）被験反応混合物由来の近接シグナルの値を測定することとを含み、Ｄ因子阻害剤の力価が、近接シグナルの値と正に相関する。一部の実施態様では、本方法は、（ｃ）の工程の前に、過剰量のクエンチャー（例えば、Ｄ因子阻害剤）を試料に与えることにより、試料におけるＤ因子の活性をクエンチする工程をさらに含む。
【００２５】
かかる他の様々な実施態様のある特定の態様では、Ｄ因子阻害剤の力価を決定する方法は、（ｅ）コントロール反応混合物を混合することと、（ｆ）コントロール反応混合物をインキュベートすることと、（ｇ）（ｆ）の工程の後に、コントロール反応混合物に、第１の部分で標識された抗Ｃ３ｂ因子抗体及び第２の部分で標識された抗Ｂａ因子抗体を添加することと、（ｈ）コントロール被験反応混合物由来の近接シグナルの値を測定することとをさらに含み、コントロール反応混合物と比べて被験反応混合物由来の近接シグナルの値がより大きいことが、コントロール反応混合物と比べて被験反応混合物におけるＤ因子阻害剤によるＤ因子活性の阻害がより大きいことを指し示す。一部の実施態様では、本方法は、（ｃ）の工程の前に、過剰量のクエンチャー（例えば、Ｄ因子阻害剤）を試料に与えることにより、試料におけるＤ因子の活性をクエンチする工程と、（ｇ）の工程の前に、過剰量のクエンチャーをコントロール試料に与えることにより、コントロール試料におけるＤ因子の活性をクエンチする工程とをさらに含む。
【００２６】
Ｄ因子阻害剤の力価を決定する方法の具体的な実施態様では、Ｄ因子阻害剤は、抗体又はその抗原結合性断片（例えば、ランパリズマブ）である。
【００２７】
具体的な実施態様では、抗体は、次のＨＶＲのうち１、２、３、４、５又は６種を含む：（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｉｉ）配列番号２、配列番号３若しくは配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｉｉｉ）配列番号５、配列番号６、配列番号７若しくは配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｉｖ）配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６若しくは配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｖ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；又は（ｖｉ）配列番号１９若しくは配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３。
【００２８】
具体的な実施態様では、抗体は、次のＨＶＲのうち１、２、３、４、５又は６種を含む：（ｉ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｉｉ）配列番号８６、配列番号８７、配列番号８８、配列番号８９、配列番号９０、配列番号９１、配列番号９２、配列番号９３若しくは配列番号９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｉｉｉ）配列番号９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｉｖ）配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｖ）配列番号９７、配列番号９８若しくは配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；又は（ｖｉ）配列番号１００若しくは配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３。
【００２９】
本明細書に記載されているＤ因子阻害剤の力価を決定する方法の具体的な実施態様では、Ｄ因子は、組換えにより発現されたＤ因子である。本明細書に記載されているＤ因子阻害剤の力価を決定する方法の具体的な実施態様では、Ｄ因子は、対象に由来する試料から精製された、内因的に発現されたＤ因子である。
【００３０】
本明細書に記載されているＤ因子阻害剤の力価を決定する方法の具体的な実施態様では、Ｂ因子は、組換えにより発現されたＢ因子である。本明細書に記載されているＤ因子阻害剤の力価を決定する方法の具体的な実施態様では、Ｂ因子は、対象に由来する試料から精製された、内因的に発現されたＢ因子である。
【００３１】
別の態様では、複数のＤ因子阻害剤候補からＤ因子阻害剤をスクリーニングする方法であって、近接に基づく測定アッセイを行うことを含み、近接に基づく測定アッセイが、Ｂ因子の切断を測定する、方法が、本明細書に提供される。
【００３２】
様々な実施態様では、Ｄ因子阻害剤をスクリーニングする方法は、（ａ）被験反応混合物においてＤ因子阻害剤候補をＤ因子、Ｂ因子及びＣ３ｂ因子と混合することと、（ｂ）被験反応混合物をインキュベートすることと、（ｃ）（ｂ）の工程の後に、被験反応混合物に、第１の部分で標識された抗Ｂａ因子抗体及び第２の部分で標識された抗Ｂｂ因子抗体を添加することであって、これらの部分の一方がドナーであり、他方がアクセプターであり、アクセプター及び／又はドナーによって生じた近接シグナルが、Ｂａ因子及びＢｂ因子が近接していることを指し示すことと、（ｄ）被験反応混合物由来の近接シグナルの値を測定することとを含み、Ｄ因子候補によるＤ因子活性阻害の程度が、近接シグナルの値と正に相関する。一部の実施態様では、本方法は、（ｃ）の工程の前に、過剰量のクエンチャー（例えば、Ｄ因子阻害剤）を試料に与えることにより、試料におけるＤ因子の活性をクエンチする工程をさらに含む。
【００３３】
かかる様々な実施態様のある特定の態様では、Ｄ因子阻害剤をスクリーニングする方法は、（ｅ）コントロール反応混合物を混合することと、（ｆ）コントロール反応混合物をインキュベートすることと、（ｇ）（ｆ）の工程の後に、コントロール反応混合物に、第１の部分で標識された抗Ｂａ因子抗体及び第２の部分で標識された抗Ｂｂ因子抗体を添加することと、（ｈ）コントロール被験反応混合物由来の近接シグナルの値を測定することとをさらに含み、コントロール反応混合物と比べて被験反応混合物由来の近接シグナルの値がより大きいことが、コントロール反応混合物と比べて被験反応混合物におけるＤ因子阻害剤候補によるＤ因子活性の阻害がより大きいことを指し示す。一部の実施態様では、本方法は、（ｃ）の工程の前に、過剰量のクエンチャーを試料に与えることにより、試料におけるＤ因子の活性をクエンチする工程と、（ｇ）の工程の前に、過剰量のクエンチャー（例えば、Ｄ因子阻害剤）をコントロール試料に与えることにより、コントロール試料におけるＤ因子の活性をクエンチする工程とをさらに含む。
【００３４】
Ｄ因子阻害剤をスクリーニングする方法の一部の実施態様では、抗Ｂａ因子抗体及び抗Ｂｂ因子抗体は、Ｄ因子の活性をクエンチする。
【００３５】
他の様々な実施態様では、Ｄ因子阻害剤をスクリーニングする方法は、（ａ）被験反応混合物においてＤ因子阻害剤候補をＤ因子、Ｂ因子及びＣ３ｂ因子と混合することと、（ｂ）被験反応混合物をインキュベートすることと、（ｃ）（ｂ）の工程の後に、被験反応混合物に、第１の部分で標識された抗Ｃ３ｂ因子抗体及び第２の部分で標識された抗Ｂａ因子抗体を添加することであって、これらの部分の一方がドナーであり、他方がアクセプターであり、アクセプター及び／又はドナーによって生じた近接シグナルが、Ｃ３ｂ因子及びＢａ因子が近接していることを指し示すことと、（ｄ）被験反応混合物由来の近接シグナルの値を測定することとを含み、Ｄ因子候補によるＤ因子活性阻害の程度が、近接シグナルの値と正に相関する。一部の実施態様では、本方法は、（ｃ）の工程の前に、過剰量のクエンチャー（例えば、Ｄ因子阻害剤）を試料に与えることにより、試料におけるＤ因子の活性をクエンチする工程をさらに含む。
【００３６】
かかる他の様々な実施態様のある特定の態様では、Ｄ因子阻害剤をスクリーニングする方法は、（ｅ）コントロール反応混合物を混合することと、（ｆ）コントロール反応混合物をインキュベートすることと、（ｇ）（ｆ）の工程の後に、コントロール反応混合物に、第１の部分で標識された抗Ｃ３ｂ因子抗体及び第２の部分で標識された抗Ｂａ因子抗体を添加することと、（ｈ）コントロール被験反応混合物由来の近接シグナルの値を測定することとをさらに含み、コントロール反応混合物と比べて被験反応混合物由来の近接シグナルの値がより大きいことが、コントロール反応混合物と比べて被験反応混合物におけるＤ因子阻害剤候補によるＤ因子活性の阻害がより大きいことを指し示す。一部の実施態様では、本方法は、（ｃ）の工程の前に、過剰量のクエンチャーを試料に与えることにより、試料におけるＤ因子の活性をクエンチする工程と、（ｇ）の工程の前に、過剰量のクエンチャー（例えば、Ｄ因子阻害剤）をコントロール試料に与えることにより、コントロール試料におけるＤ因子の活性をクエンチする工程とをさらに含む。
【００３７】
Ｄ因子阻害剤をスクリーニングする方法の具体的な実施態様では、（ａ）−（ｄ）の工程は、複数由来のＤ因子阻害剤候補毎に実行される。
【００３８】
Ｄ因子阻害剤をスクリーニングする方法の具体的な実施態様では、近接に基づく測定アッセイは、マイクロプレートにおいて実行される。
【００３９】
Ｄ因子阻害剤をスクリーニングする方法の具体的な実施態様では、近接に基づく測定アッセイは、ハイスループット様式で行われる。
【００４０】
Ｄ因子阻害剤をスクリーニングする方法の具体的な実施態様では、Ｄ因子阻害剤候補は、抗体又はその抗原結合性断片（例えば、ランパリズマブ）である。
【００４１】
抗Ｂａ因子抗体及び抗Ｂｂ因子抗体が使用される場合、上述の方法の一部の実施態様では、抗Ｂａ因子抗体は、ビオチン化され、第１の部分は、ストレプトアビジン、アビジン又はニュートラアビジン（好ましくは、ストレプトアビジン）を含む。他の実施態様では、抗Ｂａ因子抗体は、第１の部分に直接的にコンジュゲートされる。一部の実施態様では、抗Ｂｂ因子抗体は、ビオチン化され、第２の部分は、ストレプトアビジン、アビジン又はニュートラアビジン（好ましくは、ストレプトアビジン）を含む。他の実施態様では、抗Ｂｂ因子抗体は、第２の部分に直接的にコンジュゲートされる。
【００４２】
抗Ｃ３ｂ因子抗体及び抗Ｂａ因子抗体が使用される場合、上述の方法の一部の実施態様では、抗Ｃ３ｂ因子抗体は、ビオチン化され、第１の部分は、ストレプトアビジン、アビジン又はニュートラアビジン（好ましくは、ストレプトアビジン）を含む。他の実施態様では、抗Ｃ３ｂ因子抗体は、第１の部分に直接的にコンジュゲートされる。一部の実施態様では、抗Ｂａ因子抗体は、ビオチン化され、第２の部分は、ストレプトアビジン、アビジン又はニュートラアビジン（好ましくは、ストレプトアビジン）を含む。他の実施態様では、抗Ｂａ因子抗体は、第２の部分に直接的にコンジュゲートされる。
【００４３】
上述の方法のある特定の実施態様では、ドナー及び／又はアクセプターは、ビーズ（例えば、ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎビーズ）の形態である。
【００４４】
上述の方法のある特定の実施態様では、ドナーは、ユーロピウムを含み、アクセプターは、Ａｌｅｘａ  ６４７を含み、光源は、約３４０ｎｍの波長を有する。
【００４５】
本明細書に記載されているＤ因子阻害剤をスクリーニングする方法の具体的な実施態様では、Ｄ因子は、組換えにより発現されたＤ因子である。本明細書に記載されているＤ因子阻害剤をスクリーニングする方法の具体的な実施態様では、Ｄ因子は、対象に由来する試料から精製された、内因的に発現されたＤ因子である。
【００４６】
本明細書に記載されているＤ因子阻害剤をスクリーニングする方法の具体的な実施態様では、Ｂ因子は、組換えにより発現されたＢ因子である。本明細書に記載されているＤ因子阻害剤をスクリーニングする方法の具体的な実施態様では、Ｂ因子は、対象に由来する試料から精製された、内因的に発現されたＢ因子である。
【００４７】
別の態様では、Ｄ因子活性を測定するため、Ｄ因子阻害剤力価を決定するため、及び／又はＤ因子阻害剤をスクリーニングするためのキットが、本明細書に提供される。
【００４８】
様々な実施態様では、本キットは、抗Ｂａ因子抗体、抗Ｂｂ因子抗体、第１の部分及び第２の部分を含み、（ａ）抗Ｂａ因子抗体は、第１の部分で標識されており又は標識され得、抗Ｂｂ因子抗体は、第２の部分で標識されており又は標識され得、かつ（ｂ）これらの部分の一方がドナーであり、他方の部分がアクセプターである。
【００４９】
具体的な実施態様では、抗Ｂａ因子抗体及び／又は抗Ｂｂ因子抗体は、固体表面に固定化されている。具体的な実施態様では、固体表面は、プレート、マイクロプレート、チップ、膜又はビーズである。
【００５０】
他の様々な実施態様では、本キットは、抗Ｃ３ｂ因子抗体、抗Ｂａ因子抗体、第１の部分及び第２の部分を含み、（ａ）抗Ｃ３ｂ因子抗体は、第１の部分で標識されており又は標識され得、抗Ｂａ因子抗体は、第２の部分で標識されており又は標識され得、かつ（ｂ）これらの部分の一方がドナーであり、他方の部分がアクセプターである。
【００５１】
具体的な実施態様では、抗Ｃ３ｂ因子抗体及び／又は抗Ｂａ因子抗体は、固体表面に固定化されている。具体的な実施態様では、固体表面は、プレート、マイクロプレート、チップ、膜又はビーズである。
【００５２】
ある特定の実施態様では、本明細書に記載されているキットは、既知のＤ因子活性を有するコントロール試料をさらに含む。
【００５３】
ある特定の実施態様では、本明細書に記載されているキットは、Ｄ因子活性を阻害する既知の力価を有するコントロールＤ因子阻害剤をさらに含む。
【００５４】
ある特定の実施態様では、本明細書に記載されているキットは、クエンチャーをさらに含む。具体的な実施態様では、クエンチャーは、Ｄ因子阻害剤である。
【００５５】
具体的な実施態様では、本明細書に記載されているキットは、組換えにより発現されたＢ因子をさらに含む。具体的な実施態様では、本明細書に記載されているキットは、対象に由来する試料から精製された、内因的に発現されたＢ因子をさらに含む。
【００５６】
具体的な実施態様では、本明細書に記載されているキットは、組換えにより発現されたＤ因子をさらに含む。具体的な実施態様では、本明細書に記載されているキットは、対象に由来する試料から精製された、内因的に発現されたＤ因子をさらに含む。
【００５７】
３．１．定義
本願を通して使用されている用語は、当業者にとって通常且つ典型的な意義により解釈されるべきである。しかし、本発明の理解を容易にするために、次の定義を示す。
【００５８】
語句「近接シグナル」は、アクセプター及びドナー（これらのそれぞれは、タンパク質ペアの一員の一部である、これに結合する、又はこれに取り付けられる）を近く近接させたときに、アクセプター及び／又はドナーによって生じるシグナルを指す。近接シグナルの値は、アクセプター及びドナーの間の距離に対して感受性がある。一部の実施態様では、近接シグナルは、アクセプター及びドナー（よって、タンパク質ペア）が近接していることを指し示す、アクセプター及びドナーによって生じるシグナルである。一部の実施態様では、近接シグナルは、アクセプター及びドナー（よって、タンパク質ペア）が近接していることを指し示す、アクセプターによって生じるシグナルである。一部の実施態様では、近接シグナルは、アクセプター及びドナー（よって、タンパク質ペア）が近接していることを指し示す、ドナーによって生じるシグナルである。例えば、蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）技術が、ドナー及びアクセプターの間の距離のアッセイに利用される場合、近接シグナルは、ベースラインレベルよりも高い（例えば、約２倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍高い又はそれを超える）、ＦＲＥＴアクセプターの蛍光放出強度及びＦＲＥＴドナーの蛍光放出強度の間の比であり得る（ここでのベースラインレベルは、ＦＲＥＴアクセプター及びＦＲＥＴドナーが離れている場合の（例えば、１０ｎｍ、２０ｎｍ、５０ｎｍ、１００ｎｍ又は２００ｎｍを超えて離れている）、ＦＲＥＴアクセプターの蛍光放出強度及びＦＲＥＴドナーの蛍光放出強度の間の比である）。別の例では、ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ（登録商標）技術が、ドナー及びアクセプターの間の距離のアッセイに利用される場合、近接シグナルは、ベースラインレベルよりも高い（例えば、約２倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍高い又はそれを超える）、アクセプターの放出強度であり得る（ここでのベースラインレベルは、アクセプター及びドナーが離れている場合の（例えば、２００ｎｍ、３００ｎｍ、４００ｎｍ、５００ｎｍ、１０００ｎｍ、２０００ｎｍを超えて離れている）、アクセプターの放出強度である）。
【００５９】
語句「Ｄ因子活性」又は「Ｄ因子の活性」は、Ｂ因子を切断するＤ因子の酵素活性を指す。
【００６０】
語句「Ｄ因子阻害剤」又は「Ｄ因子の阻害剤」は、Ｄ因子の活性を低下又はブロックする医薬剤を指す。
【００６１】
語句「正に相関する」は、両者共に値が同じ方向に変化する、一対の項目の間の関係性について記載するために使用される。例えば、ＡがＢと「正に相関する」場合、Ｂの値が増加すると、Ａの値は増加し、Ｂの値が減少すると、減少するであろう。
【００６２】
語句「負に相関する」は、両者共に値が反対の方向に変化する、一対の項目の間の関係性について記載するために使用される。例えば、ＡがＢと「負に相関する」場合、Ｂの値が増加すると、Ａの値は減少し、Ｂの値が減少すると、増加するであろう。
【００６３】
本願を通して参照される用語「対象」は、ヒト、又は野生動物、飼育動物若しくは家畜等の非ヒト脊椎動物であり得るが、これらに限定されない。ある特定の実施態様では、対象は、哺乳類、例えば、ヒト、ウシ、イヌ、ネコ、ヤギ、ウマ、ヒツジ、ブタ、ラット又はマウスである。好まれる実施態様では、対象は、ヒトである。一部の実施態様では、対象は、健常者と比べて増加又は減少したＤ因子活性に関連する障害を有する又はこれを有すると疑われるヒト患者である。
【００６４】
Ｄ因子の活性に関する用語「クエンチ」は、Ｄ因子によるＢ因子の酵素的切断を終結させることを意味する。
【００６５】
用語「クエンチャー」は、Ｄ因子によるＢ因子の酵素的切断を終結させることができる薬剤を指す。
【００６６】
用語「抗体」は、最も広い意味で使用されており、完全長モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）及び抗原結合活性等、所望の生物活性を示す限り、抗体断片を特に網羅する。抗体（Ａｂ）及び免疫グロブリン（Ｉｇ）は、同じ構造的特性を有する糖タンパク質である。抗体が、特異的標的に対し結合特異性を示す一方、免疫グロブリンは、抗体及び標的特異性を欠く他の抗体様分子の両方を含む。ネイティブの抗体及び免疫グロブリンは通常、２本の同一軽（Ｌ）鎖及び２本の同一重（Ｈ）鎖から構成される、約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。各重鎖は、可変ドメイン（ＶＨ）に続くいくつかの定常ドメインを一端に有する。各軽鎖は、一端に可変ドメイン（ＶＬ）を、その他端に定常ドメインを有する。用語「抗体」は、本明細書において、抗原結合活性を保持する抗体断片を明確に包含する。
【００６７】
「抗体断片」は、インタクトな抗体が結合する抗原に結合する、インタクトな抗体の部分を含む、インタクトな抗体以外の分子を指す。抗体断片の例として、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ−ＳＨ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆａｂ−Ｃ、Ｆａｂ’−Ｃ、Ｆａｂ−Ｃ−ＳＨ、Ｆａｂ’−Ｃ−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２；ダイアボディ（diabody）；直鎖状抗体；単鎖抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ）；及び抗体断片から形成された多重特異性抗体が挙げられるがこれらに限定されない。
【００６８】
本明細書において、「Ｆａｂ」は、ＣＨ１ドメイン、又は軽鎖定常領域とのジスルフィド結合の形成に十分なＣＨ１ドメインの部分を含むが、ＣＨ２ドメイン又はＣＨ３ドメインを含有しない、重鎖定常領域を含む抗体を指す。本明細書において、Ｆａｂは、ヒンジ領域の一又は複数のアミノ酸を含むことができる。よって、本明細書において、用語「Ｆａｂ」は、Ｆａｂ’抗体を包含する。Ｆａｂは、Ｃ末端システイン等、追加的な非ネイティブアミノ酸を含むことができ、この場合これは、Ｆａｂ−Ｃと称されることがある。後述する通り、用語Ｆａｂ−Ｃは、Ｃ末端におけるネイティブシステインを含む、ヒンジ領域のネイティブアミノ酸を含むＦａｂも包含する。一部の実施態様では、Ｆａｂは、操作されたシステインを含む（即ち、Ｆａｂは、チオＭＡＢであり得る）。
【００６９】
「Ｆａｂ−Ｃ」は、当該残基位置に発生するネイティブシステインであっても（ヒンジ領域由来のシステイン等）、ネイティブシステインに対応しないＣ末端に付加されたシステインであってもよい、Ｃ末端システインを有するＦａｂを指す。非限定的な例示的Ｆａｂ−Ｃ重鎖定常領域は、配列番号８６３、８７５及び８７６の配列を含む。
【００７０】
「Ｆａｂ−ＳＨ」は、遊離チオール基を有するＦａｂを指す。一部の実施態様では、遊離チオール基は、ＦａｂのＣ末端の最後の１０アミノ酸に位置する。Ｆａｂ−Ｃ抗体は典型的に、Ｆａｂ−ＳＨ抗体でもある。さらに別の非限定的な例示的Ｆａｂ−ＳＨ重鎖定常領域は、配列番号８６５のアミノ酸配列を有する。典型的には、操作されたシステインを含むＦａｂ（即ち、チオＭＡＢであるＦａｂ）は、Ｆａｂ−ＳＨである。
【００７１】
用語「可変領域」又は「可変ドメイン」は、抗原への抗体の結合に関与する抗体重鎖又は軽鎖のドメインを指す。ネイティブ抗体の重鎖及び軽鎖の可変ドメイン（それぞれＶＨ及びＶＬ）は一般に、同様の構造を有し、各ドメインは、４個の保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）及び３個の超可変領域（ＨＶＲ）を含む（例えば、Kindt等、Kuby Immunology, 6th ed., W.H. Freeman and Co.、p91 (2007)を参照）。単一のＶＨ又はＶＬドメインは、抗原結合特異性を付与するのに十分であり得る。さらに、特定の抗原に結合する抗体を、抗原に結合する抗体由来のＶＨ又はＶＬドメインを使用して単離して、それぞれ相補的ＶＬ又はＶＨドメインのライブラリーをスクリーニングすることができる。例えば、Portolano等、J. Immunol. 150:880-887 (1993)；Clarkson等、Nature 352:624-628 (1991) を参照されたい。
【００７２】
用語「可変」は、可変ドメインのある特定の部分が、その配列が抗体の間で大幅に異なり、その特定の抗原に対する各特定の抗体の結合及び特異性において使用されるという事実を指す。しかし、可変性は、抗体の可変ドメインの至るところに均等に分布しない。これは、軽鎖及び重鎖可変ドメインの両方における超可変領域と呼ばれる３個のセグメントに集中する。可変ドメインのより高度に保存された部分は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。ネイティブ重鎖及び軽鎖の可変ドメインはそれぞれ、大部分はβ−シート立体配置の形をとる４個のＦＲを含み、これらは、β−シート構造を接続し、場合によってはその一部を形成する、ループを形成する３個の超可変領域によって接続される。各鎖における超可変領域は、ＦＲによって近く近接して一体に保持され、他の鎖由来の超可変領域は、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（Kabat等、Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)を参照）。定常ドメインは、抗原への抗体の結合に直接的に関与しないが、抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）における抗体の関与等、様々なエフェクター機能を示す。
【００７３】
抗体のパパイン消化は、単一の抗原結合部位をそれぞれ有する「Ｆａｂ」断片と呼ばれる２個の同一抗原結合性断片と、容易に結晶化するその能力を反映する名称である、残る「Ｆｃ」断片とを産生する。ペプシン処理は、２個の抗原結合部位を有し、依然として抗原を架橋することができる、Ｆ（ａｂ’）２断片を生じる。
【００７４】
Ｆａｂ断片は、軽鎖の定常ドメイン及び重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）も含有する。抗体ヒンジ領域由来の一又は複数のシステインを含む重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端における数残基の付加によって、Ｆａｂ’断片は、Ｆａｂ断片と異なる。Ｆａｂ’−ＳＨは、本明細書において、定常ドメインのシステイン残基（複数可）が少なくとも１個の遊離チオール基を有する、Ｆａｂ’の命名である。Ｆ（ａｂ’）２抗体断片は本来、その間にヒンジシステインを有するＦａｂ’断片のペアとして産生された。抗体断片の他の化学的カップリングも公知である。
【００７５】
「Ｆｖ」は、完全な抗原認識及び抗原結合部位を含有する、最小の抗体断片である。この領域は、緊密な非共有結合的会合をした、１個の重鎖及び１個の軽鎖可変ドメインのダイマーからなる。これは、この立体配置において、各可変ドメインの３個の超可変領域が相互作用して、ＶＨ−ＶＬダイマーの表面における抗原結合部位を定義するということである。まとめると、６個の超可変領域は、抗体に抗原結合特異性を付与する。しかし、結合部位全体よりも低い親和性であるが、単一の可変ドメイン（又は抗原に特異的な３個の超可変領域のみを含むＦｖの半分）であっても、抗原を認識し結合する能力を有する。
【００７６】
用語「超可変領域」又は「ＨＶＲ」は、本明細書において、配列が超可変であり、且つ／又は構造的に定義されたループ（「超可変ループ」）を形成する、抗体可変ドメインの領域のそれぞれを指す。一般に、ネイティブの４鎖抗体は、６個のＨＶＲを含む；３個はＶＨに（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）、３個はＶＬに（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）。ＨＶＲは一般に、超可変ループ及び／又は「相補性決定領域」（ＣＤＲ）由来のアミノ酸残基を含み、後者は、最高の配列可変性であり、且つ／又は抗原認識に関与する。ＨＶＲ−Ｈ３は、抗体への精細な特異性の付与において特有の役割を果たすと考えられる。例えば、Xu等、(2000) Immunity 13:37-45；Johnson及びWu (2003) in Methods in Molecular Biology 248:1-25 (Lo, ed., Human Press, Totowa, N.J.）を参照されたい。「フレームワーク領域」又は「ＦＲ」残基は、本明細書に定義されている超可変領域残基以外の可変ドメイン残基である。ＨＶＲ領域は、本明細書において、位置２４−３６（Ｌ１に関する）、４６−５６（Ｌ２に関する）、８９−９７（Ｌ３に関する）、２６−３５Ｂ（Ｈ１に関する）、４７−６５（Ｈ２に関する）及び９３−１０２（Ｈ３に関する）内に位置する何れかの数の残基を含む。従って、ＨＶＲは、以前に記載された位置における残基を含む：
Ａ）２４−３４（Ｌ１）、５０−５２（Ｌ２）、９１−９６（Ｌ３）、２６−３２（Ｈ１）、５３−５５（Ｈ２）及び９６−１０１（Ｈ３）（Chothia及びLesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)；
Ｂ）Ｌ１の２４−３４、Ｌ２の５０−５６、Ｌ３の８９−９７、Ｈ１の３１−３５Ｂ、Ｈ２の５０−６５及びＨ３の９５−１０２（Kabat等、Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)
Ｃ）３０−３６（Ｌ１）、４６−５５（Ｌ２）、８９−９６（Ｌ３）、３０−３５（Ｈ１）、４７−５８（Ｈ２）、９３−１００ａ−ｊ（Ｈ３）（MacCallum等、J. Mol. Biol. 262:732-745 (1996)。
【００７７】
超可変領域は、次に示す「拡大超可変領域」を含むことができる：ＶＬにおける２４−３６又は２４−３４（Ｌ１）、４６−５６又は５０−５６（Ｌ２）及び８９−９７（Ｌ３）、並びにＶＨにおける２６−３５Ｂ（Ｈ１）、５０−６５、４７−６５又は４９−６５（Ｈ２）及び９３−１０２、９４−１０２又は９５−１０２（Ｈ３）。可変ドメイン残基は、これらの定義のそれぞれについて、Ｋａｂａｔ等、上記参照に従ってナンバリングされる。
【図面の簡単な説明】
【００７８】
４．図面の簡単な説明
【図１】図１は、Ｄ因子ＴＲ−ＦＲＥＴ（時間分解ＦＲＥＴ）アッセイのアッセイ模式図を描写する。
【図２】図２は、ストレプトアビジン−Ａｌｅｘａ−Ｆｌｕｏｒ  ６４７及び抗Ｂａ因子−ユーロピウムの同時用量設定（co-titration）を描写する。様々な濃度のストレプトアビジン−Ａｌｅｘａ−Ｆｌｕｏｒ  ６４７及び抗Ｂａ因子−ユーロピウムを、固定濃度の他の試薬により解析し、次いで、ＴＲ−ＦＲＥＴアッセイのシグナルを最適化するために、セクション６．１に記載されている通りにアッセイを行った。
【図３】図３は、ランパリズマブ／Ｄ因子／Ｂ因子／Ｃ３ｂ因子混合物の酵素反応の異なるインキュベーション時間によるＴＲ−ＦＲＥＴ比を描写する。酵素反応の開始に先立ち検出試薬を添加した場合（ｔ＝０）、Ｄ因子の活性が大幅に減少しており、時間増加に伴い増加したことに留意されたい。
【図４】図４は、検出試薬（即ち、抗Ｂｂ因子、抗Ｂａ因子−ユーロピウム及びストレプトアビジン−Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６４７の混合物）の異なるインキュベーション時間によるＴＲ−ＦＲＥＴ比を描写する。
【図５】図５Ａ及び図５Ｂは、ＴＲ−ＦＲＥＴ及びＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ検出技術の両方が、優れたシグナル及びダイナミックレンジを生じたことを示す。
【発明を実施するための形態】
【００７９】
５．詳細な説明
本発明は、近接に基づく測定アッセイを行うことを含む、Ｄ因子活性を測定する方法、近接に基づく測定アッセイを行うことを含む、Ｄ因子阻害剤の力価を決定する方法、及び近接に基づく測定アッセイを使用してＢ因子切断を測定することを含む、Ｄ因子阻害剤をスクリーニングする方法を提供する。本方法は、単純、迅速、均一、且つハイスループットアッセイに適応可能であり、一部には、Ｄ因子の酵素活性を阻害するＤ因子阻害剤（ランパリズマブ（抗Ｄ因子抗体）を含む）の能力を測定するアッセイに関する本発明者らの開発及び特徴づけに基づく（セクション６を参照）。Ｄ因子活性又はＤ因子阻害剤の力価をより正確に測定するために、クエンチャーを添加して、測定前に、Ｄ因子によるＢ因子の酵素的切断を終結することができる。幸運なことに、本発明者らは、抗Ｂａ因子及び抗Ｂｂ因子の両方が、検出試薬として使用される場合、これらが、アッセイにおけるＤ因子活性をクエンチし、従って、別のクエンチャーを添加する必要がないことを発見した。
【００８０】
５．１．近接に基づく測定アッセイ
本明細書に記載されている方法に従って行われる近接に基づく測定アッセイは、タンパク質ペアの結合を測定するための、当該技術分野で公知の何れかの近接に基づく技術を利用することができる。かかるアッセイは、アクセプター及びドナー（これらのそれぞれは、タンパク質ペアの一員の一部である、これに結合する、又はこれに取り付けられる）を近く近接させたときに、アクセプター及び／又はドナーによって生じる近接シグナルを利用する。よって、近接シグナルの値は、アクセプター及びドナーの間の距離に対して感受性がある。一部の実施態様では、近接シグナルは、アクセプター及びドナー（よって、タンパク質ペア）が近接していることを指し示す、アクセプター及びドナーによって生じるシグナルである。一部の実施態様では、近接シグナルは、アクセプター及びドナー（よって、タンパク質ペア）が近接していることを指し示す、アクセプターによって生じるシグナルである。一部の実施態様では、近接シグナルは、アクセプター及びドナー（よって、タンパク質ペア）が近接していることを指し示す、ドナーによって生じるシグナルである。
【００８１】
よって、ドナー／アクセプターペアは、その値が両者の距離に対して感受性がある近接シグナルを生じ得る、何れかの分子ペアであり得る。ドナー及び／又はアクセプターは、タンパク質ペアの構成員に結合するタンパク質（例えば、抗体又はその抗原結合性断片）、ペプチド、ペプチドミメティック、アプタマー、ヌクレオチド（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、アンチセンスＤＮＡ）若しくは他の何れかの分子によって、又は直接的化学標識によって、目的の分子（複数可）（即ち、タンパク質ペアの構成員（複数可））に取り付けることができる。近接シグナルの誘発に必要とされるドナー及びアクセプターの間の近接の程度は、用いられる特異的技術に依存する。タンパク質ペアの結合を測定するための、非限定的な例示的な近接に基づく技術は、時間分解ＦＲＥＴ（ＴＲ−ＦＲＥＴ）、ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ（登録商標）、ＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）及びＰＣＲに基づく近接ライゲーションアッセイ等、蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）及び他のＦＲＥＴに基づく方法を含む（例えば、Morrison, 1988, Anal Biochem 174:101-120；Ullman等、1994, Proc Natl Acad Sci U S A 91: 5426-5430；Ullman等、1996, Clin Chem 42:1518-1526；Glickman等、2002, Journal of Biomolecular Screening 7:3-10；Bielefeld-Sevigny, 2009, Assay Drug Dev Technol 7:90-92；及びGullberg等、2004, Proc Natl Acad Sci U S A 101: 8420-8424を参照）。
【００８２】
蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）は、感光性ドナー及び感光性アクセプターの間のエネルギーの移動である。ドナーは、光源によって励起された後に、アクセプターにエネルギーを移動することができる。エネルギーの移動は、ドナーの蛍光放出強度の低下及びアクセプターの蛍光放出強度の増加をもたらす。このエネルギー移動の効率は、ドナー及びアクセプターの間の距離の６乗に反比例し、ＦＲＥＴを、距離の僅かな変化に対して極めて感受性にし、ＦＲＥＴを、ドナー及びアクセプターが、互いにある一定の距離内に存在するかについての決定において有用にする。近接に基づく技術が、蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）である場合、近接シグナルは、ベースラインレベルよりも高い（例えば、約２倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍高い又はそれを超える）、ＦＲＥＴアクセプターの蛍光放出強度及びＦＲＥＴドナーの蛍光放出強度の間の比であり得る。ここでのベースラインレベルは、ＦＲＥＴアクセプター及びＦＲＥＴドナーが離れている場合の（例えば、１０ｎｍ、２０ｎｍ、５０ｎｍ、１００ｎｍ又は２００ｎｍを超えて離れている）、ＦＲＥＴアクセプターの蛍光放出強度及びＦＲＥＴドナーの蛍光放出強度の間の比である。
【００８３】
ＴＲ−ＦＲＥＴは、バックグラウンドから非特異的な干渉する短命の放出シグナル（例えば、バッファー及び細胞溶解物）を低下又は排除するために、ドナーの励起及び蛍光測定の間に時間遅延を導入したＦＲＥＴ技術である。これに対し、ドナー及びアクセプター由来の放出シグナルは、長命であり、影響を受けないであろう。
【００８４】
ＦＲＥＴが発生するような様式で相互作用する感光性ドナー及びアクセプター分子のペアは、多くの場合、ＦＲＥＴペアと称され、当業者に知られている。ＦＲＥＴペア相互作用の機構は、アクセプターの励起スペクトルが、ドナーの放出スペクトルと重複することを必要とする（Stryer, 1978, Ann Rev Biochem 47:819-846；Cantor及びSchimmel, 1980, Biophysical Chemistry Part II: Techniques for the Study of Biological Structure And Function, p448-455, San Francisco, CA: W. H. Freeman and Co.；並びにSelvin, 1995, Methods in Enzymology 246:300-335を参照）。ＦＲＥＴ相互作用の効率は、この重複に線形に比例する（Haugland等、1969, Proc Natl Acad Sci U S A 63:24-30）。ＦＲＥＴペアは、これを基盤として選ばれた。
【００８５】
多数のＦＲＥＴペア組合せの何れかを、本発明における使用のために選択することができる（例えば、Pesce等編、1971, Fluorescence Spectroscopy, New York, NY: Marcel Dekker；White等、1970, Fluorescence Analysis: A practical Approach, New York, NY: Marcel Dekker；及びHaugland, 1996, Handbook of Fluorescent Probes and Research Chemicals, 6th Ed, Eugene, OR: Molecular Probes, Inc.を参照）。一般に、アクセプターの励起スペクトルと実質的に重複する放出スペクトルを有する好まれるドナーが選択される。かかる適用において、激烈なレーザー光、高出力ＬＥＤ又はキセノン閃光電球の使用は、ドナーを励起する有効な手段として機能し得る。アクセプターは、その励起スペクトルとドナーの放出スペクトルとの実質的重複を有する。加えて、アクセプターの放出スペクトルの波長最大は、好ましくは、ドナーの励起スペクトルの波長最大よりも少なくとも１０ｎｍ大きい。スペクトルの赤外領域におけるより長波長において放出を有するアクセプターを使用することができると考えられるが、アクセプターの放出スペクトルは典型的に、可視スペクトルの赤色部分に存在する。一部の実施態様では、ドナーは、ユーロピウムを含み、アクセプターは、Ａｌｅｘａ  ６４７を含み、光源は、約３４０ｎｍの波長を有する。
【００８６】
ドナー及びアクセプターの間にＦＲＥＴを得るために、両者は、互いに空間的に近接している必要がある。よって、ある特定の実施態様では、ドナー及びアクセプターが、約０．１ｎｍ、０．５ｎｍ、１ｎｍ、５ｎｍ若しくは１０ｎｍ互いに離れる又は約１０ｎｍ未満となって、ＦＲＥＴが発生し得るように、アッセイ成分は、標識されている。
【００８７】
ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ（登録商標）及びＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）は、ビーズに基づく技術であり、アッセイは、マイクロプレートフォーマットで行われる。ドナー及びアクセプターは、ビーズの形態である。ドナービーズは、６８０ｎｍにおける照明により周囲の酸素を励起された反応性形態のＯ２である一重項酸素変換する、光増感剤フタロシアニンを含有する。一重項酸素は、基底状態に戻る前に、限られた寿命を有する。その４μ秒の半減期内に、一重項酸素は、溶液中でおよそ２００ｎｍ拡散することができる。アクセプタービーズが、この近接内にある場合、エネルギーは、一重項酸素から、アクセプタービーズ内のチオキセン（thioxene）誘導体へと移動され、その後、５２０−−６２０ｎｍ（ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ）又は６１５ｎｍ（ＡｌｐｈａＬＩＳＡ）において光生成が最高に達する。アクセプタービーズの非存在下で、一重項酸素は、基底状態に下がり、シグナルは生じない。近接に基づく技術が、ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ（登録商標）である場合、近接シグナルは、ベースラインレベルよりも高い（例えば、約２倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍高い又はそれを超える）、アクセプターの放出強度であり得る。ここでのベースラインレベルは、アクセプター及びドナーが離れている場合の（例えば、２００ｎｍ、３００ｎｍ、４００ｎｍ、５００ｎｍ、１０００ｎｍ、２０００ｎｍを超えて離れている）、アクセプターの放出強度である。
【００８８】
ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ（登録商標）又はＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）技術を使用してアクセプターから近接シグナルを得るために、ドナー及びアクセプターは、互いに空間的に近接している必要がある。よって、ある特定の実施態様では、ドナー及びアクセプターが、約１ｎｍ、５ｎｍ、１０ｎｍ、２５ｎｍ、５０ｎｍ、７５ｎｍ、１００ｎｍ、１２５ｎｍ、１５０ｎｍ、１７５ｎｍ、２００ｎｍ互いに離れる又は約２００ｎｍ未満互いに離れて、近接依存性化学的エネルギー移動が発生し得るように、アッセイ成分は、標識されている。
【００８９】
ＰＣＲに基づく近接ライゲーションアッセイにおいて、ドナー及びアクセプターはそれぞれ、ライゲーションされ得るオリゴヌクレオチドを含有する。ドナー及びアクセプターの結合は、２種のオリゴヌクレオチドを近く近接させ、次いでこれらは、ＰＣＲによってライゲーション、増幅及び検出される。
【００９０】
ある特定の実施態様では、近接に基づく測定アッセイは、マイクロプレートにおいて実行される。具体的な実施態様では、近接に基づく測定アッセイは、ハイスループット様式で行われる。一部の実施態様では、ドナー及び／又はアクセプターは、ビーズ（例えば、ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎビーズ）の形態である。ある特定の実施態様では、ドナー及び／又はアクセプターは、アッセイ成分にコンジュゲートされたビオチンに結合することができる、ストレプトアビジン、アビジン又はニュートラアビジン（好ましくは、ストレプトアビジン）を含む。ある特定の実施態様では、ドナー及び／又はアクセプターは、アッセイ成分に直接的にコンジュゲートされる。
【００９１】
５．２．アッセイ成分
Ｄ因子の基質は、別の副補体経路セリンプロテアーゼ、Ｂ因子である。Ｃ３ｂ因子は、Ｂ因子に結合し；続いて、Ｄ因子は、Ｂ因子をＢａ因子及びＢｂ因子へと切断する。Ｂｂ因子は、Ｃ３ｂ因子に結合されたままとなり、副補体経路を惹起する活性Ｃ３コンバターゼを形成する（Volanakis等、1996, Protein Science 5:553-564）。従って、Ｂ因子が、Ｄ因子によって切断されない場合、Ｂａ因子及びＢｂ因子は、互いに空間的に近接し、Ｃ３ｂ因子及びＢａ因子も、互いに空間的に近接するであろう。しかし、Ｂ因子が、Ｄ因子によって切断される場合、Ｂａ因子及びＢｂ因子は、互いに離れ、Ｃ３ｂ因子及びＢａ因子も、互いに離れるであろう。
【００９２】
ある特定の実施態様では、本明細書に記載されている方法は、Ｂａ因子及びＢｂ因子の間の距離に頼り、この二者のうち一方が、ドナーで標識され、他方が、アクセプターで標識される。かかる実施態様では、ドナー及び／又はアクセプターは、Ｂａ因子若しくはＢｂ因子に結合するタンパク質（例えば、抗体又はその抗原結合性断片）、ペプチド、ペプチドミメティック、アプタマー、ヌクレオチド（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、アンチセンスＤＮＡ）若しくは他のいずれかの分子によって、又は直接的化学標識によって、それぞれＢａ因子又はＢｂ因子に取り付けることができる（ドナーが、Ｂａ因子に取り付けられる場合、アクセプターは、Ｂｂ因子に取り付けられ；ドナーが、Ｂｂ因子に取り付けられる場合、アクセプターは、Ｂａ因子に取り付けられる）。
【００９３】
ある特定の実施態様では、本明細書に記載されている方法は、Ｃ３ｂ因子及びＢａ因子の間の距離に頼り、この二者のうち一方は、ドナーで標識され、他方は、アクセプターで標識される。かかる実施態様では、ドナー及び／又はアクセプターは、Ｃ３ｂ因子若しくはＢａ因子に結合するタンパク質（例えば、抗体又はその抗原結合性断片）、ペプチド、ペプチドミメティック、アプタマー、ヌクレオチド（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、アンチセンスＤＮＡ）若しくは他のいずれかの分子によって、又は直接的化学標識によって、それぞれＣ３ｂ因子又はＢａ因子に取り付けることができる（ドナーが、Ｃ３ｂ因子に取り付けられる場合、アクセプターは、Ｂａ因子に取り付けられ；ドナーが、Ｂａ因子に取り付けられる場合、アクセプターは、Ｃ３ｂ因子に取り付けられる）。
【００９４】
５．３．Ｄ因子活性を測定する方法
一態様では、対象に由来する試料におけるＤ因子の活性を測定する方法であって、近接に基づく測定アッセイを行うことを含み、近接に基づく測定アッセイが、Ｂ因子の切断を測定する、方法が、本明細書に提供される。近接に基づく測定アッセイは、セクション５．１に記載されている通り、タンパク質ペアの結合を測定するための、当該技術分野で公知の何れかの近接に基づく技術を利用することができる。本セクションに記載されている方法は、例えば、健常者と比べて増加又は減少したＤ因子活性に関連する障害を有する又はこれを有すると疑われるヒト患者の診断又はステージ分類において有用である。
【００９５】
様々な実施態様では、Ｄ因子の活性を測定する方法は、（ａ）試料に、第１の部分で標識された抗Ｂａ因子抗体及び第２の部分で標識された抗Ｂｂ因子抗体を添加することであって、これらの部分の一方がドナーであり、他方の部分がアクセプターであり、アクセプター及び／又はドナーによって生じた近接シグナルが、Ｂａ因子及びＢｂ因子が近接していることを指し示すことと、（ｂ）試料由来の近接シグナルの値を測定することとを含み、試料におけるＤ因子の活性が、近接シグナルの値と負に相関する。
【００９６】
かかる様々な実施態様のある特定の態様では、Ｄ因子の活性を測定する方法は、（ｃ）コントロール試料に、第１の部分で標識された抗Ｂａ因子抗体及び第２の部分で標識された抗Ｂｂ因子抗体を添加することと、（ｄ）コントロール試料由来の近接シグナルの値を測定することとをさらに含み、コントロール試料と比べて試料由来の近接シグナルの値がより大きいこと（例えば、約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％大きい若しくはこれを超える、又は約１倍、１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍大きい若しくはこれを超える）が、コントロール試料と比べて試料におけるＤ因子の活性がより低いことを指し示す。
【００９７】
ドナー及び／又はアクセプターによって生じる近接シグナルが、光活性化によるドナー及びアクセプターの間のエネルギー移動に基づく場合、様々な実施態様では、Ｄ因子の活性を測定する方法は、（Ａ）試料に、第１の部分で標識された抗Ｂａ因子抗体及び第２の部分で標識された抗Ｂｂ因子抗体を添加することであって、これらの部分の一方がドナーであり、他方の部分がアクセプターであることと、（Ｂ）光源を与えて、試料におけるドナーを励起することと、（Ｃ）試料由来のドナー蛍光放出強度及び／又は試料由来のアクセプター蛍光放出強度を測定することとを含み、試料におけるＤ因子の活性が、試料由来のドナー蛍光放出強度と正に相関し、且つ／又は試料由来のアクセプター蛍光放出強度と負に相関する。ある特定の実施態様では、（Ｃ）の工程は、（Ｂ）の工程の期間の後に行われ、これは、干渉する短命のバックグランドシグナルの減少をもたらす。具体的な実施態様では、Ｄ因子の活性を測定する方法は、（Ｄ）コントロール試料に、第１の部分で標識された抗Ｂａ因子抗体及び第２の部分で標識された抗Ｂｂ因子抗体を添加することと、（Ｅ）同じ光源を与えて、コントロール試料におけるドナーを励起することと、（Ｆ）コントロール試料由来のドナー蛍光放出強度及び／又はコントロール試料由来のアクセプター蛍光放出強度を測定することとをさらに含み、コントロール試料と比べてより低い試料由来のドナー蛍光放出強度、及び／又はコントロール試料と比べてより高い試料由来のアクセプター蛍光放出強度が、コントロール試料と比べて試料におけるＤ因子の活性がより低いことを指し示す。ある特定の実施態様では、（Ｃ）の工程は、（Ｂ）の工程の期間の後に行われ、これは、干渉する短命のバックグランドシグナルの減少をもたらし、（Ｆ）の工程は、（Ｅ）の工程の同じ期間の後に行われる。
【００９８】
ある特定の実施態様では、Ｄ因子の活性を測定する方法において使用される抗Ｂａ因子抗体及び抗Ｂｂ因子抗体は、Ｄ因子の活性をクエンチする。かかる実施態様では、別のクエンチャーを添加する必要が取り除かれる。ある特定の実施態様では、Ｄ因子の活性を測定する方法は、（ａ）の工程の前に、過剰量のクエンチャーを試料に与えることにより、試料におけるＤ因子の活性をクエンチする工程をさらに含む。コントロール試料が使用される場合、ある特定の実施態様では、Ｄ因子の活性を測定する方法は、（ａ）の工程の前に、過剰量のクエンチャーを試料に与えることにより、試料におけるＤ因子の活性をクエンチする工程と、（ｃ）の工程の前に、過剰量のクエンチャーをコントロール試料に与えることにより、コントロール試料におけるＤ因子の活性をクエンチする工程とをさらに含む。具体的な実施態様では、クエンチャーは、Ｄ因子阻害剤（例えば、抗Ｄ因子抗体又は過剰量のＥＤＴＡ）である。
【００９９】
ある特定の実施態様では、抗Ｂａ因子抗体は、ビオチン化され、第１の部分は、ストレプトアビジン、アビジン又はニュートラアビジンを含む。一部の実施態様では、抗Ｂａ因子抗体は、ビオチン化され、第１の部分は、ストレプトアビジンを含む。ある特定の実施態様では、抗Ｂｂ因子抗体は、ビオチン化され、第２の部分は、ストレプトアビジン、アビジン又はニュートラアビジンを含む。一部の実施態様では、抗Ｂｂ因子抗体は、ビオチン化され、第２の部分は、ストレプトアビジンを含む。
【０１００】
他の様々な実施態様では、Ｄ因子の活性を測定する方法は、（ａ）試料に、第１の部分で標識された抗Ｃ３ｂ因子抗体及び第２の部分で標識された抗Ｂａ因子抗体を添加することであって、これらの部分の一方がドナーであり、他方の部分がアクセプターであり、アクセプター及び／又はドナーによって生じた近接シグナルが、Ｃ３ｂ因子及びＢａ因子が近接していることを指し示すことと、（ｂ）試料由来の近接シグナルの値を測定することとを含み、試料におけるＤ因子の活性が、近接シグナルの値と負に相関する。
【０１０１】
かかる他の様々な実施態様のある特定の態様では、Ｄ因子の活性を測定する方法は、（ｃ）コントロール試料に、第１の部分で標識された抗Ｃ３ｂ因子抗体及び第２の部分で標識された抗Ｂａ因子抗体を添加することと、（ｄ）コントロール試料由来の近接シグナルの値を測定することとをさらに含み、コントロール試料と比べて試料由来の近接シグナルの値がより大きいこと（例えば、約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％大きい若しくはこれを超える、又は約１倍、１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍大きい若しくはこれを超える）が、コントロール試料と比べて試料におけるＤ因子の活性がより低いことを指し示す。
【０１０２】
ドナー及び／又はアクセプターによって生じる近接シグナルが、光活性化によるドナー及びアクセプターの間のエネルギー移動に基づく場合、様々な実施態様では、Ｄ因子の活性を測定する方法は、（Ａ）試料に、第１の部分で標識された抗Ｃ３ｂ因子抗体及び第２の部分で標識された抗Ｂａ因子抗体を添加することであって、これらの部分の一方がドナーであり、他方の部分がアクセプターであることと、（Ｂ）光源を与えて、試料におけるドナーを励起することと、（Ｃ）試料由来のドナー蛍光放出強度及び／又は試料由来のアクセプター蛍光放出強度を測定することとを含み、試料におけるＤ因子の活性が、試料由来のドナー蛍光放出強度と正に相関し、且つ／又は試料由来のアクセプター蛍光放出強度と負に相関する。ある特定の実施態様では、（Ｃ）の工程は、（Ｂ）の工程の期間の後に行われ、これは、干渉する短命のバックグランドシグナルの減少をもたらす。具体的な実施態様では、Ｄ因子の活性を測定する方法は、（Ｄ）コントロール試料に、第１の部分で標識された抗Ｃ３ｂ因子抗体及び第２の部分で標識された抗Ｂａ因子抗体を添加することと、（Ｅ）同じ光源を与えて、コントロール試料におけるドナーを励起することと、（Ｆ）コントロール試料由来のドナー蛍光放出強度及び／又はコントロール試料由来のアクセプター蛍光放出強度を測定することとをさらに含み、コントロール試料と比べてより低い試料由来のドナー蛍光放出強度、及び／又はコントロール試料と比べてより高い試料由来のＦＲＥＴアクセプター蛍光放出強度が、コントロール試料と比べて試料におけるＤ因子の活性がより低いことを指し示す。ある特定の実施態様では、（Ｃ）の工程は、（Ｂ）の工程の期間の後に行われ、これは、干渉する短命のバックグランドシグナルの減少をもたらし、（Ｆ）の工程は、（Ｅ）の工程の同じ期間の後に行われる。
【０１０３】
抗Ｃ３ｂ因子抗体及び抗Ｂａ因子抗体が使用されるある特定の実施態様では、抗Ｃ３ｂ因子抗体は、ビオチン化され、第１の部分は、ストレプトアビジン、アビジン又はニュートラアビジンを含む。一部の実施態様では、抗Ｃ３ｂ因子抗体は、ビオチン化され、第１の部分は、ストレプトアビジンを含む。ある特定の実施態様では、抗Ｂａ因子抗体は、ビオチン化され、第２の部分は、ストレプトアビジン、アビジン又はニュートラアビジンを含む。一部の実施態様では、抗Ｂａ因子抗体は、ビオチン化され、第２の部分は、ストレプトアビジンを含む。
【０１０４】
抗Ｃ３ｂ因子抗体及び抗Ｂａ因子抗体が使用されるある特定の実施態様では、Ｄ因子の活性を測定する方法において使用される抗Ｃ３ｂ因子抗体及び抗Ｂａ因子抗体は、Ｄ因子の活性をクエンチする。かかる実施態様では、別のクエンチャーを添加する必要が取り除かれる。抗Ｃ３ｂ因子抗体及び抗Ｂａ因子抗体が使用されるある特定の実施態様では、Ｄ因子の活性を測定する方法は、（ａ）の工程の前に、過剰量のクエンチャーを試料に与えることにより、試料におけるＤ因子の活性をクエンチする工程をさらに含む。コントロール試料が使用される場合、ある特定の実施態様では、Ｄ因子の活性を測定する方法は、（ａ）の工程の前に、過剰量のクエンチャーを試料に与えることにより、試料におけるＤ因子の活性をクエンチする工程と、（ｃ）の工程の前に、過剰量のクエンチャーをコントロール試料に与えることにより、コントロール試料におけるＤ因子の活性をクエンチする工程とをさらに含む。具体的な実施態様では、クエンチャーは、Ｄ因子阻害剤（例えば、抗Ｄ因子抗体又は過剰量のＥＤＴＡ）である。
【０１０５】
試料は、Ｄ因子の活性を測定することができる、組織、対象から単離された細胞集団、対象に由来する培養細胞集団、又は組織、細胞集団若しくは培養細胞集団由来の調製物を含むことができる。コントロール試料が使用される場合、コントロール試料は、好ましくは、試料と同じフォーマットである。コントロール試料は、既知のＤ因子活性を有する試料又はＤ因子活性がない試料であり得るが、これらに限定されない。具体的な実施態様では、１を超えるコントロール試料が、本明細書に記載されている方法において使用される。ある特定の実施態様では、コントロール試料を測定する必要がなく、試料におけるＤ因子の活性を定量化するために、検量線が作成された。
【０１０６】
ドナー／アクセプターペアは、当該技術分野で公知の又はセクション５．１に記載の何れかであり得る。
【０１０７】
本明細書に記載されている方法において参照されている対象は、ヒト、又は野生動物、飼育動物若しくは家畜等の非ヒト脊椎動物であり得るが、これらに限定されない。ある特定の実施態様では、対象は、哺乳類、例えば、ヒト、ウシ、イヌ、ネコ、ヤギ、ウマ、ヒツジ、ブタ、ラット又はマウスである。好まれる実施態様では、対象は、ヒトである。一部の実施態様では、対象は、加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）等、健常者と比べて増加又は減少したＤ因子活性に関連する障害を有する又はこれを有すると疑われるヒト患者である。一部の実施態様では、対象は、過剰な又は制御されない補体活性化に関連する障害を有する又はこれを有すると疑われるヒト患者である。そのようなものとして、次のものが挙げられる：心肺バイパス手術の際の補体活性化；急性心筋梗塞、動脈瘤、脳卒中、出血性ショック、挫滅、多臓器不全、血液量減少性（hypobolemic）ショック及び腸虚血後の虚血再灌流による補体活性化。過剰な又は制御されない補体活性化に関連するこれらの障害は、疾患又は状態を含むこともでき、これは、重症熱傷、内毒血症、敗血症性ショック、成人性呼吸促迫症候群、血液透析；アナフィラキシーショック、重症喘息、血管浮腫、クローン病、鎌状赤血球貧血、連鎖球菌感染後糸球体腎炎及び膵炎等、炎症状態である。障害は、有害薬物反応、薬物アレルギー、ＩＬ−２誘導性血管漏出症候群又はＸ線検査造影剤アレルギーの結果であり得る。これは、全身性紅斑性狼瘡、重症筋無力症、関節リウマチ、アルツハイマー病及び多発性硬化症等、自己免疫疾患も含む。補体活性化は、移植片拒絶反応にも関連する。補体活性化は、例えば、限定するものではないが、乾性及び湿性（非滲出性及び滲出性）形態を含む全ステージの加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）等の黄斑変性疾患、糖尿病性網膜症及び他の虚血関連の網膜症、脈絡膜新生血管（ＣＮＶ）、ブドウ膜炎、糖尿病性黄斑浮腫、病的近視、フォンヒッペル・リンダウ病、眼のヒストプラスマ症、網膜中心静脈閉塞症（ＣＲＶＯ）、角膜血管新生並びに網膜血管新生等、眼性疾患（その病理に補体の古典的及び副経路を含む補体が関与する、あらゆる眼性状態及び疾患）にも関連する。一例では、補体関連の眼状態は、非滲出性（例えば、中等度乾性加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）又は地図状萎縮（ＧＡ））及び滲出性（例えば、湿性ＡＭＤ（脈絡膜新生血管（ＣＮＶ））ＡＭＤを含む加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）、糖尿病性網膜症（ＤＲ）、眼内炎並びにブドウ膜炎を含む。さらに別の例では、非滲出性ＡＭＤは、硬ドルーゼン、軟ドルーゼン、地図状萎縮及び／又は色素凝集の存在を含むことができる。別の例では、補体関連の眼状態は、早期加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）（例えば、複数の小型から一又は複数の広範でない中間サイズのドルーゼンを含む）、中等度ＡＭＤ（例えば、広範な中間ドルーゼンから一又は複数の大型ドルーゼンを含む）及び進行型ＡＭＤ（例えば、地図状萎縮又は進行型湿性ＡＭＤ（ＣＮＶ）を含む）を含む、加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）を含む。さらに別の例では、中等度乾性ＡＭＤは、大型集密的ドルーゼンを含むことができる。さらに別の例では、地図状萎縮は、光受容体及び／又は網膜色素上皮（ＲＰＥ）損失を含むことができる。さらに別���例では、地図状萎縮の区域は、小型若しくは大型であり得、且つ／又は黄斑区域若しくは末梢網膜に存在することができる。一例では、補体関連の眼状態は、中等度乾性ＡＭＤである。一例では、補体関連の眼状態は、地図状萎縮である。一例では、補体関連の眼状態は、湿性ＡＭＤ（脈絡膜新生血管（ＣＮＶ））である。
【０１０８】
上述のＢ因子の活性を測定する方法において、抗Ｂａ因子、抗Ｂｂ因子及び／又は抗Ｃ３ｂ因子は、それぞれＢａ因子、Ｂｂ因子若しくは抗Ｃ３ｂ因子に結合するペプチド、非抗体タンパク質、ペプチドミメティック（memetic）、アプタマー、ヌクレオチド（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、アンチセンスＤＮＡ）又は他の何れかの分子によって置き換えることができる。或いは、Ｂａ因子、Ｂｂ因子及び／又はＣ３ｂ因子は、（場合によっては）直接的化学標識によって、ドナー又はアクセプターに取り付けることができる。
【０１０９】
本明細書に記載されているＤ因子の活性を測定する方法の具体的な実施態様では、Ｂ因子は、組換えにより発現されたＢ因子である。本明細書に記載されているＤ因子の活性を測定する方法の具体的な実施態様では、Ｂ因子は、対象に由来する試料から精製された、内因的に発現されたＢ因子である。
【０１１０】
Ｄ因子は、組換えにより発現されても内因的に発現されてもよい。一部の実施態様では、Ｄ因子は、その活性の測定前に試料から精製される。
【０１１１】
本明細書に記載されている方法において参照されている用語「試料」は、血液試料又は血清試料であり得るが、これらに限定されない。
【０１１２】
５．４．Ｄ因子阻害剤の力価を決定する方法
別の態様では、Ｄ因子活性の阻害におけるＤ因子阻害剤の力価を決定する方法であって、近接に基づく測定アッセイが、近接に基づく測定アッセイを行うことを含み、Ｂ因子の切断を測定する、方法が、本明細書に提供される。近接に基づく測定アッセイは、セクション５．１に記載されている通り、タンパク質ペアの結合を測定するための、当該技術分野で公知の何れかの近接に基づく技術を利用することができる。本セクションに記載されている方法は、例えば、バッチ製造における品質管理のための抗Ｄ因子治療薬の品質の評価において、及び選択された抗Ｄ因子治療用リードの力価の検査において有用である。
【０１１３】
様々な実施態様では、Ｄ因子阻害剤の力価を決定する方法は、（ａ）被験反応混合物においてＤ因子阻害剤候補をＤ因子、Ｂ因子及びＣ３ｂ因子と混合することと、（ｂ）被験反応混合物をインキュベートすることと、（ｃ）（ｂ）の工程の後に、被験反応混合物に、第１の部分で標識された抗Ｂａ因子抗体及び第２の部分で標識された抗Ｂｂ因子抗体を添加することであって、これらの部分の一方がドナーであり、他方がアクセプターであり、アクセプター及び／又はドナーによって生じた近接シグナルが、Ｂａ因子及びＢｂ因子が近接していることを指し示すことと、（ｄ）被験反応混合物由来の近接シグナルの値を測定することとを含み、Ｄ因子阻害剤の力価が、近接シグナルの値と正に相関する。
【０１１４】
かかる様々な実施態様のある特定の態様では、Ｄ因子阻害剤の力価を決定する方法は、（ｅ）コントロール反応混合物を混合することと、（ｆ）コントロール反応混合物をインキュベートすることと、（ｇ）（ｆ）の工程の後に、コントロール反応混合物に、第１の部分で標識された抗Ｂａ因子抗体及び第２の部分で標識された抗Ｂｂ因子抗体を添加することと、（ｈ）コントロール被験反応混合物由来の近接シグナルの値を測定することとをさらに含み、コントロール反応混合物と比べて被験反応混合物由来の近接シグナルの値がより大きいこと（例えば、約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％大きい若しくはこれを超える、又は約１倍、１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍大きい若しくはこれを超える）が、コントロール反応混合物と比べて被験反応混合物におけるＤ因子阻害剤によるＤ因子活性の阻害がより大きいことを指し示す。
【０１１５】
ドナー及び／又はアクセプターによって生じる近接シグナルが、光活性化によるドナー及びアクセプターの間のエネルギー移動に基づく場合、様々な実施態様では、Ｄ因子阻害剤の力価を決定する方法は、（Ａ）被験反応混合物においてＤ因子阻害剤をＤ因子、Ｂ因子及びＣ３ｂ因子と混合することと、（Ｂ）被験反応混合物をインキュベートすることと、（Ｃ）（Ｂ）の工程の後に、被験反応混合物に、第１の部分で標識された抗Ｂａ因子抗体及び第２の部分で標識された抗Ｂｂ因子抗体を添加することであって、これらの部分の一方がドナーであり、他方の部分がアクセプターであることと、（Ｄ）光源を与えて、被験反応混合物におけるドナーを励起することと、（Ｅ）被験反応混合物由来のドナー蛍光放出強度及び／又は被験反応混合物由来のアクセプター蛍光放出強度を測定することとを含み、Ｄ因子阻害剤の力価が、被験反応混合物由来のドナー蛍光放出強度と負に相関し、且つ／又は被験反応混合物由来のアクセプター蛍光放出強度と正に相関する。具体的な実施態様では、（Ｂ）の工程は、約１５分間、３０分間、４５分間、６０分間、７５分間又は９０分間行われる。一部の実施態様では、（Ｂ）の工程は、約４５分間行われる。ある特定の実施態様では、（Ｅ）の工程は、（Ｄ）の工程の期間の後に行われ、これは、干渉する短命のバックグランドシグナルの減少をもたらす。具体的な実施態様では、Ｄ因子阻害剤の力価を決定する方法は、（Ｆ）コントロール反応混合物を混合することと、（Ｇ）コントロール反応混合物をインキュベートすることと、（Ｈ）（Ｇ）の工程の後に、コントロール反応混合物に、第１の部分で標識された抗Ｂａ因子抗体及び第２の部分で標識された抗Ｂｂ因子抗体を添加することと、（Ｉ）同じ光源を与えて、コントロール反応混合物におけるドナーを励起することと、（Ｊ）コントロール反応混合物由来のドナー蛍光放出強度及び／又はコントロール反応混合物由来のアクセプター蛍光放出強度を測定することとをさらに含み、コントロール反応混合物と比べてより低い被験反応混合物由来のドナー蛍光放出強度及び／又はコントロール反応混合物と比べてより高い被験反応混合物由来のアクセプター蛍光放出強度が、コントロール反応混合物と比べて被験反応混合物におけるＤ因子阻害剤によるＤ因子活性の阻害がより大きいことを指し示す。具体的な実施態様では、（Ｂ）及び（Ｇ）の工程は、約１５分間、３０分間、４５分間、６０分間、７５分間又は９０分間行われる。一部の実施態様では、（Ｂ）及び（Ｇ）の工程は、約４５分間行われる。ある特定の実施態様では、（Ｅ）の工程は、（Ｄ）の工程の期間の後に行われ、これは、干渉する短命のバックグランドシグナルの減少をもたらし、（Ｊ）の工程は、（Ｉ）の工程の同じ期間の後に行われる。
【０１１６】
ある特定の実施態様では、Ｄ因子阻害剤の力価を決定する方法において使用される抗Ｂａ因子抗体及び抗Ｂｂ因子抗体は、Ｄ因子の活性をクエンチする。かかる実施態様では、特に別のクエンチャーを添加する必要が取り除かれる。ある特定の実施態様では、Ｄ因子阻害剤の力価を決定する方法は、（ｃ）の工程の前に、過剰量のクエンチャーを試料に与えることにより、試料におけるＤ因子の活性をクエンチする工程をさらに含む。コントロール試料が使用される場合、ある特定の実施態様では、Ｄ因子の活性を測定する方法は、（ｃ）の工程の前に、過剰量のクエンチャーを試料に与えることにより、試料におけるＤ因子の活性をクエンチする工程と、（ｇ）の工程の前に、過剰量のクエンチャーをコントロール試料に与えることにより、コントロール試料におけるＤ因子の活性をクエンチする工程とをさらに含む。具体的な実施態様では、クエンチャーは、Ｄ因子阻害剤（例えば、抗Ｄ因子抗体又は過剰量のＥＤＴＡ）である。
【０１１７】
ある特定の実施態様では、抗Ｂａ因子抗体は、ビオチン化され、第１の部分は、ストレプトアビジン、アビジン又はニュートラアビジンを含む。一部の実施態様では、抗Ｂａ因子抗体は、ビオチン化され、第１の部分は、ストレプトアビジンを含む。ある特定の実施態様では、抗Ｂｂ因子抗体は、ビオチン化され、第２の部分は、ストレプトアビジン、アビジン又はニュートラアビジンを含む。一部の実施態様では、抗Ｂｂ因子抗体は、ビオチン化され、第２の部分は、ストレプトアビジンを含む。
【０１１８】
他の様々な実施態様では、Ｄ因子阻害剤の力価を決定する方法は、（ａ）被験反応混合物においてＤ因子阻害剤候補をＤ因子、Ｂ因子及びＣ３ｂ因子と混合することと、（ｂ）被験反応混合物をインキュベートすることと、（ｃ）（ｂ）の工程の後に、被験反応混合物に、第１の部分で標識された抗Ｃ３ｂ因子抗体及び第２の部分で標識された抗Ｂａ因子抗体を添加することであって、これらの部分の一方がドナーであり、他方がアクセプターであり、アクセプター及び／又はドナーによって生じた近接シグナルが、Ｃ３ｂ因子及びＢａ因子が近接していることを指し示すことと、（ｄ）被験反応混合物由来の近接シグナルの値を測定することとを含み、Ｄ因子阻害剤の力価が、近接シグナルの値と正に相関する。
【０１１９】
かかる他の様々な実施態様のある特定の態様では、Ｄ因子阻害剤の力価を決定する方法は、（ｅ）コントロール反応混合物を混合することと、（ｆ）コントロール反応混合物をインキュベートすることと、（ｇ）（ｆ）の工程の後に、コントロール反応混合物に、第１の部分で標識された抗Ｃ３ｂ因子抗体及び第２の部分で標識された抗Ｂａ因子抗体を添加することと、（ｈ）コントロール被験反応混合物由来の近接シグナルの値を測定することとをさらに含み、コントロール反応混合物と比べて被験反応混合物由来の近接シグナルの値がより大きいこと（例えば、約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％大きい若しくはこれを超える、又は約１倍、１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍大きい若しくはこれを超える）が、コントロール反応混合物と比べて被験反応混合物におけるＤ因子阻害剤によるＤ因子活性の阻害がより大きいことを指し示す。
【０１２０】
ドナー及び／又はアクセプターによって生じる近接シグナルが、光活性化によるドナー及びアクセプターの間のエネルギー移動に基づく場合、様々な実施態様では、Ｄ因子阻害剤の力価を決定する方法は、（Ａ）被験反応混合物においてＤ因子阻害剤をＤ因子、Ｂ因子及びＣ３ｂ因子と混合することと、（Ｂ）被験反応混合物をインキュベートすることと、（Ｃ）（Ｂ）の工程の後に、被験反応混合物に、第１の部分で標識された抗Ｃ３ｂ因子抗体及び第２の部分で標識された抗Ｂａ因子抗体を添加することであって、これらの部分の一方がドナーであり、他方の部分がアクセプターであることと、（Ｄ）光源を与えて、被験反応混合物におけるドナーを励起することと、（Ｅ）被験反応混合物由来のドナー蛍光放出強度及び／又は被験反応混合物由来のアクセプター蛍光放出強度を測定することとを含み、Ｄ因子阻害剤の力価が、被験反応混合物由来のドナー蛍光放出強度と負に相関し、且つ／又は被験反応混合物由来のアクセプター蛍光放出強度と正に相関する。具体的な実施態様では、（Ｂ）の工程は、約１５分間、３０分間、４５分間、６０分間、７５分間又は９０分間行われる。一部の実施態様では、（Ｂ）の工程は、約４５分間行われる。ある特定の実施態様では、（Ｅ）の工程は、（Ｄ）の工程の期間の後に行われ、これは、干渉する短命のバックグランドシグナルの減少をもたらす。具体的な実施態様では、Ｄ因子阻害剤の力価を決定する方法は、（Ｆ）コントロール反応混合物を混合することと、（Ｇ）コントロール反応混合物をインキュベートすることと、（Ｈ）（Ｇ）の工程の後に、コントロール反応混合物に、第１の部分で標識された抗Ｃ３ｂ因子抗体及び第２の部分で標識された抗Ｂａ因子抗体を添加することと、（Ｉ）前記光源を与えて、コントロール反応混合物におけるドナーを励起することと、（Ｊ）コントロール反応混合物由来のドナー蛍光放出強度及び／又はコントロール反応混合物由来のアクセプター蛍光放出強度を測定することとをさらに含み、コントロール反応混合物と比べてより低い被験反応混合物由来のドナー蛍光放出強度及び／又はコントロール反応混合物と比べてより高い被験反応混合物由来のアクセプター蛍光放出強度が、コントロール反応混合物と比べて被験反応混合物におけるＤ因子阻害剤によるＤ因子活性の阻害がより大きいことを指し示す。具体的な実施態様では、（Ｂ）及び（Ｇ）の工程は、約１５分間、３０分間、４５分間、６０分間、７５分間又は９０分間行われる。一部の実施態様では、（Ｂ）及び（Ｇ）の工程は、約４５分間行われる。ある特定の実施態様では、（Ｅ）の工程は、（Ｄ）の工程の期間の後に行われ、これは、干渉する短命のバックグランドシグナルの減少をもたらし、（Ｊ）の工程は、（Ｉ）の工程の同じ期間の後に行われる。
【０１２１】
抗Ｃ３ｂ因子抗体及び抗Ｂａ因子抗体が使用されるある特定の実施態様では、抗Ｃ３ｂ因子抗体は、ビオチン化され、第１の部分は、ストレプトアビジン、アビジン又はニュートラアビジンを含む。一部の実施態様では、抗Ｃ３ｂ因子抗体は、ビオチン化され、第１の部分は、ストレプトアビジンを含む。ある特定の実施態様では、抗Ｂａ因子抗体は、ビオチン化され、第２の部分は、ストレプトアビジン、アビジン又はニュートラアビジンを含む。一部の実施態様では、抗Ｂａ因子抗体は、ビオチン化され、第２の部分は、ストレプトアビジンを含む。
【０１２２】
抗Ｃ３ｂ因子抗体及び抗Ｂａ因子抗体が使用されるある特定の実施態様では、Ｄ因子阻害剤の力価を決定する方法において使用される抗Ｃ３ｂ因子抗体及び抗Ｂａ因子抗体は、Ｄ因子の活性をクエンチする。かかる実施態様では、特に別のクエンチャーを添加する必要が取り除かれる。抗Ｃ３ｂ因子抗体及び抗Ｂａ因子抗体が使用されるある特定の実施態様では、Ｄ因子阻害剤の力価を決定する方法は、（ｃ）の工程の前に、過剰量のクエンチャーを試料に与えることにより、試料におけるＤ因子の活性をクエンチする工程をさらに含む。コントロール試料が使用される場合、ある特定の実施態様では、Ｄ因子阻害剤の力価を決定する方法は、（ｃ）の工程の前に、過剰量のクエンチャーを試料に与えることにより、試料におけるＤ因子の活性をクエンチする工程と、（ｇ）の工程の前に、過剰量のクエンチャーをコントロール試料に与えることにより、コントロール試料におけるＤ因子の活性をクエンチする工程とをさらに含む。具体的な実施態様では、クエンチャーは、Ｄ因子阻害剤（例えば、抗Ｄ因子抗体又は過剰量のＥＤＴＡ）である。
【０１２３】
コントロール反応混合物は、例えば、既知の力価（例えば、１００％力価）を有する異なるＤ因子阻害剤を含むことができ、又はＤ因子阻害剤を含まないが、被験反応混合物と本質的に同じであるその他全てを含有する。上述のクエンチャーは、コントロール反応混合物における異なるＤ因子阻害剤として使用することができる。具体的な実施態様では、１を超えるコントロール反応混合物が、本明細書に記載されている方法において使用される。ある特定の実施態様では、コントロール反応混合物を測定する必要がなく、試料におけるＤ因子阻害剤の力価を定量化するために、検量線が作成された。
【０１２４】
ドナー／アクセプターペアは、当該技術分野で公知の又はセクション５．１に記載の何れかであり得る。
【０１２５】
Ｄ因子阻害剤は、Ｄ因子の活性を低下又はブロックする何れかの医薬剤であり得る。
【０１２６】
具体的な実施態様では、Ｄ因子阻害剤は、抗体又はその抗原結合性断片、例えば、Ｄ因子に結合する抗体又はその抗原結合性断片である（例えば、これによりその開示全体が本明細書において出典明示により援用された、国際公開第１９９９／０４２１３３号、国際公開第２００７／０５６２２７号、国際公開第２００８／０５５２０６号、国際公開第２００８／１４７８８３号及び国際公開第２００９／１３４７１１号を参照）。一部の実施態様では、抗体は、マウス抗体である。他の実施態様では、抗体は、ヒト化抗体である。具体的な実施態様では、抗体は、二重特異性抗体（例えば、Ｄ因子及びＨＴＲＡ１に結合する二重特異性抗体）である。一部の実施態様では、抗体は、ランパリズマブである（これによりその開示全体が本明細書において出典明示により援用された、国際公開第２００９／１３４７１１号を参照）。
【０１２７】
一部の実施態様では、抗体は、次のＨＶＲのうち１、２、３、４、５又は６種を含む：（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｉｉ）配列番号２、配列番号３若しくは配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｉｉｉ）配列番号５、配列番号６、配列番号７若しくは配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｉｖ）配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６若しくは配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｖ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；又は（ｖｉ）配列番号１９若しくは配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３（表１を参照されたい）。
【０１２８】
一部の実施態様では、抗体は、次のＨＶＲのうち１、２、３、４、５又は６種を含む：（ｉ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｉｉ）配列番号８６、配列番号８７、配列番号８８、配列番号８９、配列番号９０、配列番号９１、配列番号９２、配列番号９３若しくは配列番号９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｉｉｉ）配列番号９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｉｖ）配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｖ）配列番号９７、配列番号９８若しくは配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；又は（ｖｉ）配列番号１００若しくは配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３（表２を参照されたい）。
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【０１２９】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０１３０】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０１３１】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０１３２】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０１３３】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０１３４】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０１３５】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１３６】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１３７】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１３８】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１３９】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１４０】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１４１】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１４２】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１４３】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１４４】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１４５】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１４６】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１４７】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１４８】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１４９】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１５０】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１５１】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１５２】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１５３】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１５４】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１５５】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１５６】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１５７】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１５８】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１５９】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１６０】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１６１】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１６２】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号８６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０１６３】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号８７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０１６４】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０１６５】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０１６６】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０１６７】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０１６８】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号９２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０１６９】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号９３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０１７０】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０１７１】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１７２】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号９８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１７３】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１７４】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１７５】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号８６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１７６】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号８７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１７７】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１７８】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１７９】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１８０】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１８１】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号９２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１８２】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号９３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１８３】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号８７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号９８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１８４】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号８７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１８５】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号８７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１８６】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１８７】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号２１のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメインを含む。表３を参照されたい。
【０１８８】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号２２のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号２２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表３を参照されたい。
【０１８９】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号２１のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号２２のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号２２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表３を参照されたい。
【０１９０】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号２３のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号２３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメインを含む。表３を参照されたい。
【０１９１】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号２４のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号２４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表３を参照されたい。
【０１９２】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号２３のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号２４のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号２３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号２４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表３を参照されたい。
【０１９３】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号２５のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号２５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメインを含む。表３を参照されたい。
【０１９４】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号２６のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号２６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表３を参照されたい。
【０１９５】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号２５のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号２６のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号２５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号２６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表３を参照されたい。
【０１９６】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号２７のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号２７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメインを含む。表３を参照されたい。
【０１９７】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号２８のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号２８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表３を参照されたい。
【０１９８】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号２７のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号２８のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号２７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号２８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表３を参照されたい。
【０１９９】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号２９のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号２９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメインを含む。表３を参照されたい。
【０２００】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号３０のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号３０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表３を参照されたい。
【０２０１】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号２９のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号３０のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号２９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号３０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表３を参照されたい。
【０２０２】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号３１のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号３１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメインを含む。表３を参照されたい。
【０２０３】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号３２のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号３２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表３を参照されたい。
【０２０４】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号３１のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号３２のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号３１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号３２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表３を参照されたい。
【０２０５】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号３３のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号３３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメインを含む。表３を参照されたい。
【０２０６】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号３４のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号３４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表３を参照されたい。
【０２０７】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号３３のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号３４のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号３３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号３４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表３を参照されたい。
【０２０８】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号３５のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号３５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメインを含む。表３を参照されたい。
【０２０９】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号３６のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号３６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表３を参照されたい。
【０２１０】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号３５のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号３６のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号３５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号３６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表３を参照されたい。
【０２１１】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号３７のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号３７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメインを含む。表３を参照されたい。
【０２１２】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号３８のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号３８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表３を参照されたい。
【０２１３】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号３７のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号３８のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号３７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号３８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表３を参照されたい。
【０２１４】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号３９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメインを含む。表３を参照されたい。
【０２１５】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号４０のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号４０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表３を参照されたい。
【０２１６】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号４０のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号３９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号４０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表３を参照されたい。
【０２１７】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号４１のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号４１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメインを含む。表３を参照されたい。
【０２１８】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号４２のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号４２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表３を参照されたい。
【０２１９】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号４１のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号４２のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号４１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号４２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表３を参照されたい。
【０２２０】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号４３のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号４３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメインを含む。表３を参照されたい。
【０２２１】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号４４のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号４４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表３を参照されたい。
【０２２２】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号４３のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号４４のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号４３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号４４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表３を参照されたい。
【０２２３】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号４５のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号４５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメインを含む。表３を参照されたい。
【０２２４】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号４６のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号４６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表３を参照されたい。
【０２２５】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号４５のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号４６のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号４５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号４６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表３を参照されたい。
【０２２６】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号４７のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号４７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメインを含む。表３を参照されたい。
【０２２７】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号４８のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号４８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表３を参照されたい。
【０２２８】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号４７のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号４８のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号４７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号４８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表３を参照されたい。
【０２２９】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号４９のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号４９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメインを含む。表３を参照されたい。
【０２３０】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号５０のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号５０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表３を参照されたい。
【０２３１】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号４９のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号５０のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号４９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号５０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表３を参照されたい。
【０２３２】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号５１のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号５１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメインを含む。表３を参照されたい。
【０２３３】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号５２のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号５２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表３を参照されたい。
【０２３４】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号５１のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号５２のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号５１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号５２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表３を参照されたい。
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2018537081.tif 000006
【０２３５】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１０２のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１０２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメインを含む。表４を参照されたい。
【０２３６】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１０３のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１０３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表４を参照されたい。
【０２３７】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１０２のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号１０３のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１０２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号１０３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表４を参照されたい。
【０２３８】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１０４のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１０４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメインを含む。表４を参照されたい。
【０２３９】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１０５のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１０５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表４を参照されたい。
【０２４０】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１０４のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号１０５のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１０４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号１０５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表４を参照されたい。
【０２４１】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１０６のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１０６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメインを含む。表４を参照されたい。
【０２４２】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１０７のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１０７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表４を参照されたい。
【０２４３】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１０６のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号１０７のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１０６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号１０７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表４を参照されたい。
【０２４４】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１０８のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１０８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメインを含む。表４を参照されたい。
【０２４５】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１０９のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１０９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表４を参照されたい。
【０２４６】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１０８のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号１０９のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１０８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号１０９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表４を参照されたい。
【０２４７】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１１０のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメインを含む。表４を参照されたい。
【０２４８】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１１１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１１１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表４を参照されたい。
【０２４９】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１１０のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号１１１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号１１１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表４を参照されたい。
【０２５０】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１１２のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１１２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメインを含む。表４を参照されたい。
【０２５１】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１１３のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１１３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表４を参照されたい。
【０２５２】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１１２のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号１１３のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１１２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号１１３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表４を参照されたい。
【０２５３】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１１４のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１１４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメインを含む。表４を参照されたい。
【０２５４】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１１５のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１１５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表４を参照されたい。
【０２５５】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１１４のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号１１５のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１１４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号１１５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表４を参照されたい。
【０２５６】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１１６のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１１６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメインを含む。表４を参照されたい。
【０２５７】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１１７のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１１７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表４を参照されたい。
【０２５８】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１１６のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号１１７のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１１６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号１１７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表４を参照されたい。
【０２５９】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１１８のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１１８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメインを含む。表４を参照されたい。
【０２６０】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１１９のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１１９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表４を参照されたい。
【０２６１】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１１８のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号１１９のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１１８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号１１９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表４を参照されたい。
【０２６２】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１２０のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１２０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメインを含む。表４を参照されたい。
【０２６３】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１２１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１２１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表４を参照されたい。
【０２６４】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１２０のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号１２１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１２０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号１２１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表４を参照されたい。
【０２６５】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１２２のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１２２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメインを含む。表４を参照されたい。
【０２６６】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１２３のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１２３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表４を参照されたい。
【０２６７】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１２２のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号１２３のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１２２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号１２３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表４を参照されたい。
【０２６８】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１２４のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１２４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメインを含む。表４を参照されたい。
【０２６９】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１２５のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１２５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表４を参照されたい。
【０２７０】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１２４のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号１２５のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１２４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号１２５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表４を参照されたい。
【０２７１】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１２６のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１２６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメインを含む。表４を参照されたい。
【０２７２】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１２７のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１２７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表４を参照されたい。
【０２７３】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１２６のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号１２７のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１２６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号１２７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表４を参照されたい。
【０２７４】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１２８のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１２８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメインを含む。表４を参照されたい。
【０２７５】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１２９のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１２９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表４を参照されたい。
【０２７６】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１２８のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号１２９のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１２８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号１２９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表４を参照されたい。
【０２７７】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１３０のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１３０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメインを含む。表４を参照されたい。
【０２７８】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１３１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１３１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表４を参照されたい。
【０２７９】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１３０のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号１３１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１３０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号１３１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表４を参照されたい。
【０２８０】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１３２のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１３２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメインを含む。表４を参照されたい。
【０２８１】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１３３のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１３３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表４を参照されたい。
【０２８２】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１３２のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号１３３のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１３２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号１３３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表４を参照されたい。
【０２８３】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１３４のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１３４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメインを含む。表４を参照されたい。
【０２８４】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１３５のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１３５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表４を参照されたい。
【０２８５】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１３４のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号１３５のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１３４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号１３５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表４を参照されたい。
【０２８６】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１３６のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１３６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメインを含む。表４を参照されたい。
【０２８７】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１３７のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１３７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表４を参照されたい。
【０２８８】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１３６のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号１３７のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１３６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号１３７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表４を参照されたい。
【０２８９】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１３８のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１３８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメインを含む。表４を参照されたい。
【０２９０】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１３９のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１３９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表４を参照されたい。
【０２９１】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１３８のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号１３９のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１３８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号１３９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。表４を参照されたい。
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【０２９２】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号５３のアミノ酸配列を有する重鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号５３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖を含む。表５を参照されたい。
【０２９３】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号５４のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号５４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表５を参照されたい。
【０２９４】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号５３のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号５４のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号５３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖、及び配列番号５４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表５を参照されたい。
【０２９５】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号５５のアミノ酸配列を有する重鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号５５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖を含む。表５を参照されたい。
【０２９６】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号５６のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号５６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表５を参照されたい。
【０２９７】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号５５のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号５６のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号５５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖、及び配列番号５６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表５を参照されたい。
【０２９８】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号５７のアミノ酸配列を有する重鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号５７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖を含む。表５を参照されたい。
【０２９９】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号５８のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号５８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表５を参照されたい。
【０３００】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号５７のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号５８のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号５７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖、及び配列番号５８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表５を参照されたい。
【０３０１】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号５９のアミノ酸配列を有する重鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号５９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖を含む。表５を参照されたい。
【０３０２】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号６０のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号６０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表５を参照されたい。
【０３０３】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号５９のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号６０のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号５９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖、及び配列番号６０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表５を参照されたい。
【０３０４】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号６１のアミノ酸配列を有する重鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号６１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖を含む。表５を参照されたい。
【０３０５】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号６２のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号６２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表５を参照されたい。
【０３０６】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号６１のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号６２のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号６１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖、及び配列番号６２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表５を参照されたい。
【０３０７】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号６３のアミノ酸配列を有する重鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号６３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖を含む。表５を参照されたい。
【０３０８】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号６４のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号６４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表５を参照されたい。
【０３０９】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号６３のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号６４のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号６３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖、及び配列番号６４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表５を参照されたい。
【０３１０】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号６５のアミノ酸配列を有する重鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号６５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖を含む。表５を参照されたい。
【０３１１】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号６６のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号６６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表５を参照されたい。
【０３１２】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号６５のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号６６のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号６５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖、及び配列番号６６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表５を参照されたい。
【０３１３】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号６７のアミノ酸配列を有する重鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号６７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖を含む。表５を参照されたい。
【０３１４】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号６８のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号６８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表５を参照されたい。
【０３１５】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号６７のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号６８のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号６７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖、及び配列番号６８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表５を参照されたい。
【０３１６】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号６９のアミノ酸配列を有する重鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号６９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖を含む。表５を参照されたい。
【０３１７】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号７０のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号７０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表５を参照されたい。
【０３１８】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号６９のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号７０のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号６９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖、及び配列番号７０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表５を参照されたい。
【０３１９】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号７１のアミノ酸配列を有する重鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号７１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖を含む。表５を参照されたい。
【０３２０】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号７２のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号７２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表５を参照されたい。
【０３２１】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号７１のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号７２のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号７１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖、及び配列番号７２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表５を参照されたい。
【０３２２】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号７３のアミノ酸配列を有する重鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号７３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖を含む。表５を参照されたい。
【０３２３】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号７４のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号７４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表５を参照されたい。
【０３２４】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号７３のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号７４のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号７３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖、及び配列番号７４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表５を参照されたい。
【０３２５】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号７５のアミノ酸配列を有する重鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号７５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖を含む。表５を参照されたい。
【０３２６】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号７６のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号７６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表５を参照されたい。
【０３２７】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号７５のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号７６のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号７５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖、及び配列番号７６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表５を参照されたい。
【０３２８】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号７７のアミノ酸配列を有する重鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号７７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖を含む。表５を参照されたい。
【０３２９】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号７８のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号７８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表５を参照されたい。
【０３３０】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号７７のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号７８のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号７７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖、及び配列番号７８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表５を参照されたい。
【０３３１】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号７９のアミノ酸配列を有する重鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号７９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖を含む。表５を参照されたい。
【０３３２】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号８０のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号８０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表５を参照されたい。
【０３３３】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号７９のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号８０のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号７９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖、及び配列番号８０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表５を参照されたい。
【０３３４】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号８１のアミノ酸配列を有する重鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号８１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖を含む。表５を参照されたい。
【０３３５】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号８２のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号８２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表５を参照されたい。
【０３３６】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号８１のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号８２のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号８１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖、及び配列番号８２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表５を参照されたい。
【０３３７】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号８３のアミノ酸配列を有する重鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号８３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖を含む。表５を参照されたい。
【０３３８】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号８４のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号８４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表５を参照されたい。
【０３３９】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号８３のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号８４のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号８３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖、及び配列番号８４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表５を参照されたい。
2018537081.tif 000009
2018537081.tif 000010
2018537081.tif 000011
【０３４０】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１４０のアミノ酸配列を有する重鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１４０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖を含む。表６を参照されたい。
【０３４１】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１４１のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１４１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表６を参照されたい。
【０３４２】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１４０のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号１４１のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１４０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖、及び配列番号１４１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表６を参照されたい。
【０３４３】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１４２のアミノ酸配列を有する重鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１４２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖を含む。表６を参照されたい。
【０３４４】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１４３のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１４３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表６を参照されたい。
【０３４５】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１４２のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号１４３のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１４２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖、及び配列番号１４３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表６を参照されたい。
【０３４６】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１４４のアミノ酸配列を有する重鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１４４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖を含む。表６を参照されたい。
【０３４７】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１４５のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１４５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表６を参照されたい。
【０３４８】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１４４のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号１４５のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１４４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖、及び配列番号１４５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表６を参照されたい。
【０３４９】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１４６のアミノ酸配列を有する重鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１４６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖を含む。表６を参照されたい。
【０３５０】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１４７のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１４７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表６を参照されたい。
【０３５１】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１４６のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号１４７のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１４６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖、及び配列番号１４７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表６を参照されたい。
【０３５２】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１４８のアミノ酸配列を有する重鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１４８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖を含む。表６を参照されたい。
【０３５３】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１４９のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１４９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表６を参照されたい。
【０３５４】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１４８のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号１４９のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１４８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖、及び配列番号１４９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表６を参照されたい。
【０３５５】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１５０のアミノ酸配列を有する重鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１５０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖を含む。表６を参照されたい。
【０３５６】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１５１のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１５１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表６を参照されたい。
【０３５７】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１５０のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号１５１のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１５０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖、及び配列番号１５１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表６を参照されたい。
【０３５８】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１５２のアミノ酸配列を有する重鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１５２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖を含む。表６を参照されたい。
【０３５９】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１５３のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１５３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表６を参照されたい。
【０３６０】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１５２のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号１５３のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１５２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖、及び配列番号１５３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表６を参照されたい。
【０３６１】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１５４のアミノ酸配列を有する重鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１５４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖を含む。表６を参照されたい。
【０３６２】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１５５のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１５５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表６を参照されたい。
【０３６３】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１５４のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号１５５のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１５４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖、及び配列番号１５５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表６を参照されたい。
【０３６４】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１５６のアミノ酸配列を有する重鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１５６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖を含む。表６を参照されたい。
【０３６５】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１５７のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１５７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表６を参照されたい。
【０３６６】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１５６のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号１５７のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１５６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖、及び配列番号１５７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表６を参照されたい。
【０３６７】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１５８のアミノ酸配列を有する重鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１５８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖を含む。表６を参照されたい。
【０３６８】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１５９のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１５９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表６を参照されたい。
【０３６９】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１５８のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号１５９のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１５８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖、及び配列番号１５９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表６を参照されたい。
【０３７０】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１６０のアミノ酸配列を有する重鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１６０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖を含む。表６を参照されたい。
【０３７１】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１６１のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１６１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表６を参照されたい。
【０３７２】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１６０のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号１６１のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１６０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖、及び配列番号１６１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表６を参照されたい。
【０３７３】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１６２のアミノ酸配列を有する重鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１６２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖を含む。表６を参照されたい。
【０３７４】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１６３のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１６３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表６を参照されたい。
【０３７５】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１６２のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号１６３のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１６２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖、及び配列番号１６３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表６を参照されたい。
【０３７６】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１６４のアミノ酸配列を有する重鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１６４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖を含む。表６を参照されたい。
【０３７７】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１６５のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１６５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表６を参照されたい。
【０３７８】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１６４のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号１６５のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１６４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖、及び配列番号１６５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表６を参照されたい。
【０３７９】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１６６のアミノ酸配列を有する重鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１６６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖を含む。表６を参照されたい。
【０３８０】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１６７のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１６７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表６を参照されたい。
【０３８１】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１６６のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号１６７のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１６６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖、及び配列番号１６７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表６を参照されたい。
【０３８２】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１６８のアミノ酸配列を有する重鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１６８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖を含む。表６を参照されたい。
【０３８３】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１６９のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１６９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表６を参照されたい。
【０３８４】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１６８のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号１６９のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１６８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖、及び配列番号１６９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表６を参照されたい。
【０３８５】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１７０のアミノ酸配列を有する重鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１７０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖を含む。表６を参照されたい。
【０３８６】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１７１のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１７１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表６を参照されたい。
【０３８７】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１７０のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号１７１のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１７０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖、及び配列番号１７１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表６を参照されたい。
【０３８８】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１７２のアミノ酸配列を有する重鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１７２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖を含む。表６を参照されたい。
【０３８９】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１７３のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１７３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表６を参照されたい。
【０３９０】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１７２のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号１７３のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１７２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖、及び配列番号１７３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表６を参照されたい。
【０３９１】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１７４のアミノ酸配列を有する重鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１７４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖を含む。表６を参照されたい。
【０３９２】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１７５のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１７５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表６を参照されたい。
【０３９３】
一部の実施態様では、抗体は、配列番号１７４のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号１７５のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、配列番号１７４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖、及び配列番号１７５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖を含む。表６を参照されたい。
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【０３９４】
本明細書に記載されている抗体及び抗原結合性断片は、抗体又は抗原結合性断片を種々の非タンパク質性（proteinacious）ポリマー分子のうちの１種にコンジュゲートすることによって、さらに共有結合的に修飾されていてもよい。抗体−ポリマーコンジュゲートは、ポリマーにより抗体を誘導体化するためのいずれか適した技法を使用して作製することができ、抗体又は抗体断片及びポリマーの間のいずれか特定の種類の連結を利用したコンジュゲートに限定されない。
【０３９５】
一態様では、コンジュゲートは、ポリマーが、親抗体における特異的部位（単数又は複数）に共有結合的に取り付けられた種を含む、即ち、ポリマー取り付けは、親抗体又は抗体断片における特定の領域又は特定のアミノ酸残基（単数又は複数）へと標的化される。ポリマーの部位特異的コンジュゲーションは、最も一般的には、親抗体又は抗体断片におけるシステイン残基への取り付けによって達成される。かかる実施態様では、カップリング化学は、例えば、親抗体におけるジスルフィド架橋中に存在しないシステイン残基の遊離スルフヒドリル基を利用することができる。ポリマーは、マレイミド、スルフヒドリル、チオール、トリフラート、トシレート（tesylate）、アジリジン、オキシラン（exirane）及び５−ピリジル官能基等、親抗体における遊離スルフヒドリル又はチオール基（複数可）と特異的に反応させることができるいずれかの官能基により活性化され得る。ポリマーは、米国特許第４１７９３３７号；同第７１２２６３６号及びJevsevar等(2010) Biotech. J. 5:113-128に記載されているプロトコール及び系等、選択されたカップリング系の化学に適したいずれかのプロトコールを使用して、親抗体にカップルすることができる。
【０３９６】
一部の実施態様では、親抗体において天然に存在する一又は複数のシステイン残基（複数可）が、ポリマーコンジュゲーションのための取り付け部位（複数可）として使用される。一部の実施態様では、一又は複数のシステイン残基（複数可）は、ポリマーのための特異的取り付け部位（単数又は複数）を与える目的で、親抗体における選択された部位（単数又は複数）へと操作される。システイン操作抗体は、以前に記載された（これら全て、その全内容が本明細書に参照により援用された、米国特許出願公開第２００７／００９２９４０号及びJunutula, J. R.等、J. Immunol Methods, Vol. 332(l-2), pp. 41-52 (2008)）。一部の実施態様では、システイン操作抗体は、親抗体であり得る。これは、特定の場所、典型的には、定常領域、例えば、ＣＬ又はＣＨ１に遊離システインを有する抗体断片の作製に有用である。システインを含有するように操作された親抗体は、「チオＭａｂ」と称されることがあり、かかるシステイン操作抗体から産生されたＦａｂ断片は、産生方法に関係なく、「チオＭａｂ」又は「チオＦａｂ」と称されることがある。以前に記載された通り（例えば、米国特許出願公開第２００７／００９２９４０号及びJunutula, J. R.等、J. Immunol Methods, Vol. 332(l-2), pp. 41-52 (2008) を参照）、置き換えられた（「操作された」）システイン（Ｃｙｓ）残基を有する突然変異体は、新たに導入された操作されたシステインチオール基の反応性について評価される。チオール反応性の値は、０〜１．０の範囲内の相対的で数値的な用語であり、いかなるシステイン操作抗体に対して測定することもできる。反応性チオール基を有することに加えて、チオＭａｂは、抗原結合能力を保持するように選択されるべきである。システイン操作抗体の設計、選択及び調製については、以前に詳細に記載された（例えば、本明細書に参照により援用された、国際公開第２０１１／０６９１０４号を参照）。操作されたシステインは、好ましくは、重鎖又は軽鎖の定常ドメインに導入される。そのようなものとして、システイン操作抗体は、好ましくは、その野生型、親抗体対応物の抗原結合能力を保持する筈であり、そのようなものは、抗原に特異的に結合することができる。
【０３９７】
一態様では、本発明は、抗体−ポリマーコンジュゲートを包含し、この場合、抗体は、Ｆａｂ断片であり、ポリマーは、通常、軽鎖及び重鎖を連結する鎖間ジスルフィド結合を形成するであろうＦａｂ断片の軽鎖又は重鎖における一又は複数のシステイン残基に取り付けられる。一部の実施態様では、抗体のヒンジ領域に天然に存在する一又は複数のシステイン残基（複数可）は、ポリマーの取り付けに使用される。一部の実施態様では、一又は複数のシステイン残基は、ポリマーのための特異的取り付け部位（単数又は複数）を与える目的で、Ｆａｂ断片のヒンジ領域へと操作される。
【０３９８】
別の態様では、本発明は、抗体−ポリマーコンジュゲートを包含し、この場合、抗体は、Ｆａｂ−Ｃ又はＦａｂ’断片であり、ポリマー取り付けは、Ｆａｂ−Ｃ又はＦａｂ’断片のヒンジ領域へと標的化される。一部の実施態様では、抗体のヒンジ領域に天然に存在する一又は複数のシステイン残基（複数可）は、ポリマーの取り付けに使用される。一部の実施態様では、一又は複数のシステイン残基は、ポリマーのための特異的取り付け部位（単数又は複数）を与える目的で、Ｆａｂ断片のＣ末端に付加される。
【０３９９】
別の態様では、本発明は、抗体−ポリマーコンジュゲートを包含し、この場合、抗体は、Ｆ（ａｂ’）２断片であり、ポリマー取り付けは、Ｆ（ａｂ’）２断片のヒンジ領域へと標的化される。一部の実施態様では、抗体のヒンジ領域に天然に存在する一又は複数のシステイン残基（複数可）は、ポリマーの取り付けに使用される。一部の実施態様では、一又は複数のシステイン残基は、ポリマーのための特異的取り付け部位（単数又は複数）を与える目的で、Ｆ（ａｂ’）２断片のヒンジ領域へと操作される。
【０４００】
一部の実施態様では、抗Ｄ因子抗体（例えば、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片又はＦ（ａｂ’）２断片）は、ポリマーコンジュゲーションのための１個の取り付け部位を与える目的で、重鎖のＣ’末端側の端に１個のシステインを付加することにより修飾される。一部の実施態様では、抗Ｄ因子抗体（例えば、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片又はＦ（ａｂ’）２断片）は、ポリマーコンジュゲーションのための２個の取り付け部位を与える目的で、重鎖のＣ’末端側の端に４個の追加的な残基、Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓを付加することにより修飾される。一部の実施態様では、抗Ｄ因子抗体（例えば、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片又はＦ（ａｂ’）２断片）は、ポリマーコンジュゲーションのための１個の取り付け部位を与える目的で、重鎖のＣ’末端側の端に４個の追加的な残基、Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒを付加することにより修飾される。一部の実施態様では、抗Ｄ因子抗体（例えば、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片又はＦ（ａｂ’）２断片）は、ポリマーコンジュゲーションのための１個の取り付け部位を与える目的で、重鎖のＣ’末端側の端に４個の追加的な残基、Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓを付加することにより修飾される。一部の実施態様では、抗Ｄ因子抗体（例えば、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片又はＦ（ａｂ’）２断片）は、ポリマーコンジュゲーションのための１個の取り付け部位を与える目的で、重鎖のＣ’末端側の端に４個の追加的な残基、Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓを付加することにより修飾される。一部の実施態様では、抗Ｄ因子抗体（例えば、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片又はＦ（ａｂ’）２断片）は、ポリマーコンジュゲーションのための１個の取り付け部位を与える目的で、重鎖のＣ’末端側の端に４個の追加的な残基、Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓを付加することにより修飾される。具体的な実施態様では、ポリマーコンジュゲーションは、ＰＥＧポリマーコンジュゲーションである。
【０４０１】
一般的に使用される抗体コンジュゲーションの１種は、ペグ化であり、一又は複数のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ポリマーが、抗体の定常領域に共有結合的に取り付けられる。米国特許第４１７９３３７号；同第７１２２６３６号を参照されたい。異なるサイズ（例えば、約５００Ｄから約３００，０００Ｄ）及び形状（例えば、直鎖状又は分枝状）のＰＥＧポリマーが、当該分野において知られており、広く使用されている。本発明に有用なポリマーは、商業的に入手することができる（例えば、Ｎｉｐｐｏｎ  Ｏｉｌ  ａｎｄ  Ｆａｔｓ；Ｎｅｋｔａｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ；Ｃｒｅａｔｉｖｅ  ＰＥＧＷｏｒｋｓから）、又は従来の化学的手順を使用して市販の出発物質から調製することができる。ペグ化は、抗体薬物の物理的及び化学的特性を変化させ、改善された安定性、減少した免疫原性、延長された循環寿命及び増加した滞留時間等、改善された薬物動態挙動をもたらし得る。
【０４０２】
一部の実施態様では、抗体（例えば、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆａｂ−Ｃ断片又はＦ（ａｂ’）２断片）は、配列番号１７６のアミノ酸配列を有する重鎖を含む。一部の実施態様では、抗体（例えば、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆａｂ−Ｃ断片又はＦ（ａｂ’）２断片）は、配列番号１７６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖を含む。一部の実施態様では、抗体（例えば、Ｆａｂ’断片、Ｆａｂ−Ｃ断片又はＦ（ａｂ’）２断片）は、配列番号１７６のアミノ酸配列を有する重鎖を含み、Ｃ’末端側の端におけるシステインが、ポリマー（例えば、ＰＥＧポリマー）に取り付けられる。一部の実施態様では、抗体（例えば、Ｆａｂ’断片、Ｆａｂ−Ｃ断片又はＦ（ａｂ’）２断片）は、配列番号１７６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖を含み、Ｃ’末端側の端におけるシステインが、ポリマー（例えば、ＰＥＧポリマー）に取り付けられる。表７を参照されたい。
【０４０３】
一部の実施態様では、抗体（例えば、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆａｂ−Ｃ断片又はＦ（ａｂ’）２断片）は、配列番号１７７のアミノ酸配列を有する重鎖を含む。一部の実施態様では、抗体（例えば、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆａｂ−Ｃ断片又はＦ（ａｂ’）２断片）は、配列番号１７７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖を含む。一部の実施態様では、抗体（例えば、Ｆａｂ’断片、Ｆａｂ−Ｃ断片又はＦ（ａｂ’）２断片）は、配列番号１７７のアミノ酸配列を有する重鎖を含み、Ｃ’末端側の端におけるＣｙｓ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ配列の２個のシステインはそれぞれ、ポリマー（例えば、ＰＥＧポリマー）に取り付けられる。一部の実施態様では、抗体（例えば、Ｆａｂ’断片、Ｆａｂ−Ｃ断片又はＦ（ａｂ’）２断片）は、配列番号１７７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖を含み、Ｃ’末端側の端におけるＣｙｓ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ配列の２個のシステインはそれぞれ、ポリマー（例えば、ＰＥＧポリマー）に取り付けられる。表７を参照されたい。
【０４０４】
一部の実施態様では、抗体（例えば、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆａｂ−Ｃ断片又はＦ（ａｂ’）２断片）は、配列番号１７８のアミノ酸配列を有する重鎖を含む。一部の実施態様では、抗体（例えば、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆａｂ−Ｃ断片又はＦ（ａｂ’）２断片）は、配列番号１７８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖を含む。一部の実施態様では、抗体（例えば、Ｆａｂ’断片、Ｆａｂ−Ｃ断片又はＦ（ａｂ’）２断片）は、配列番号１７８のアミノ酸配列を有する重鎖を含み、Ｃ’末端側の端におけるシステインが、ポリマー（例えば、ＰＥＧポリマー）に取り付けられる。一部の実施態様では、抗体（例えば、Ｆａｂ’断片、Ｆａｂ−Ｃ断片又はＦ（ａｂ’）２断片）は、配列番号１７８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖を含み、Ｃ’末端側の端におけるシステインが、ポリマー（例えば、ＰＥＧポリマー）に取り付けられる。表７を参照されたい。
【０４０５】
一部の実施態様では、抗体（例えば、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆａｂ−Ｃ断片又はＦ（ａｂ’）２断片）は、配列番号１７９のアミノ酸配列を有する重鎖を含む。一部の実施態様では、抗体（例えば、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆａｂ−Ｃ断片又はＦ（ａｂ’）２断片）は、配列番号１７９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖を含む。一部の実施態様では、抗体（例えば、Ｆａｂ’断片、Ｆａｂ−Ｃ断片又はＦ（ａｂ’）２断片）は、配列番号１７９のアミノ酸配列を有する重鎖を含み、Ｃ’末端側の端におけるＣｙｓ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ配列の２個のシステインはそれぞれ、ポリマー（例えば、ＰＥＧポリマー）に取り付けられる。一部の実施態様では、抗体（例えば、Ｆａｂ’断片、Ｆａｂ−Ｃ断片又はＦ（ａｂ’）２断片）は、配列番号１７９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖を含み、Ｃ’末端側の端におけるＣｙｓ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ配列の２個のシステインはそれぞれ、ポリマー（例えば、ＰＥＧポリマー）に取り付けられる。表７を参照されたい。
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【０４０６】
Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ−Ｃ及びＦ（ａｂ’）２断片は、小型のサイズ、短い血清半減期及びエフェクター機能欠如の利点をもたらすが、典型的には、ネオエピトープ（neoepitope）として機能し得る上部ヒンジ（hindge）領域の部分を含み、免疫系によって最終的に認識され、抗ヒンジ抗体（ＡＨＡ）が生成される。このような先在するＡＨＡ力価は、ドナー間で変動し、過去及び現在でのネオエピトープへの曝露を表すことができる。ＡＨＡは、代理Ｆｃとして作用し、タンパク質分解性に不活性化された抗体のエフェクター機能を回復することができる。治療フォーマットとしてＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ−Ｃ又はＦ（ａｂ’）２分子を使用する理由の１つは、エフェクター機能を排除することである。よって、先在するＡＨＡによって復元されたエフェクター機能を有し、何らかの潜在的な安全性の懸念の危険を冒すことは望まれない。先在するＡＨＡによる認識を逃れるために、ＩｇＧ２又はＩｇＧ４アイソタイプのＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ−Ｃ又はＦ（ａｂ’）２断片を使用することができる。或いは、ＩｇＧ１アイソタイプのＦａｂの重鎖は、Ｃｙｓ−Ａｓｐ又はＣｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕで終結するように修飾することができる。
【０４０７】
具体的な実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、ＩｇＧ２アイソタイプのＦａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆａｂ−Ｃ断片又はＦ（ａｂ’）２断片である。具体的な実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、ＩｇＧ４アイソタイプのＦａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆａｂ−Ｃ断片又はＦ（ａｂ’）２断片である。具体的な実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプのＦａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆａｂ−Ｃ断片又はＦ（ａｂ’）２断片である。
【０４０８】
具体的な実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、その重鎖Ｃ末端が、Ｃｙｓ−Ａｓｐ（ＣＤ）、Ｃｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ（ＣＤＫ）、Ｃｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ（ＣＤＫＴ）、Ｃｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ（ＣＤＫＴＨ）、Ｃｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ（ＣＤＫＴＨＴ）又はＣｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ（ＣＤＫＴＨＬ）で終結するように修飾されたＦａｂ断片である。具体的な実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、その重鎖Ｃ末端が、Ｃｙｓ−Ａｓｐ（ＣＤ）、Ｃｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ（ＣＤＫ）、Ｃｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ（ＣＤＫＴ）、Ｃｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ（ＣＤＫＴＨ）又はＣｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ（ＣＤＫＴＨＬ）で終結するように修飾されたＦａｂ断片である。具体的な実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、その重鎖Ｃ末端が、Ｃｙｓ−Ａｓｐ（ＣＤ）又はＣｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ（ＣＤＫＴＨＬ）で終結するように修飾されたＦａｂ断片である。具体的な実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、その重鎖Ｃ末端が、Ｃｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ｘ（ＣＤＫＴＨＸ）（式中、Ｘは、Ｔｈｒ（Ｔ）を除くいずれかのアミノ酸である）で終結するように修飾されたＦａｂ断片である。システイン残基（複数可）は、ポリマー（例えば、ＰＥＧポリマー）に取り付けることができる。具体的な実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプのＦａｂ断片である。
【０４０９】
具体的な実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、その重鎖Ｃ末端が、Ｃｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ（ＣＤＫＴＨＴＣ）で終結するように修飾されたＦａｂ−Ｃ断片である。具体的な実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、その重鎖Ｃ末端が、Ｃｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ（ＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣ）、Ｃｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ（ＣＤＫＴＨＴＣＰＰＳ）、Ｃｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ（ＣＤＫＴＨＴＳＰＰＣ）、Ｃｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ（ＣＤＫＴＨＴＡＰＰＣ）又はＣｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（ＣＤＫＴＨＴＳＧＧＣ）で終結するように修飾されたＦａｂ断片、Ｆａｂ’断片又はＦ（ａｂ’）２断片である。具体的な実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、その重鎖Ｃ末端が、Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ（ＣＹＧＰＰＣ）で終結するように修飾されたＦａｂ断片である。システイン残基（複数可）（場合によっては）のうち１、２又は３個はそれぞれ、ポリマー（例えば、ＰＥＧポリマー）に取り付けることができる。具体的な実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプのＦａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆａｂ−Ｃ断片又はＦ（ａｂ’）２断片である。
【０４１０】
具体的な実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、その重鎖Ｃ末端が、Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ（ＶＥＲＫ）で終結するように修飾されたＦａｂ断片である。具体的な実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、その重鎖Ｃ末端が、Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ（ＶＥＲＫＣ）で終結するように修飾されたＦａｂ−Ｃ断片である。システイン残基は、ポリマー（例えば、ＰＥＧポリマー）に取り付けることができる。具体的な実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、ＩｇＧ２アイソタイプのＦａｂ断片又はＦａｂ−Ｃ断片である。
【０４１１】
具体的な実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、その重鎖Ｃ末端が、Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ（ＫＹＧＰＰ）、Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ（ＫＹＧＰ）、Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ（ＫＹＧ）、Ｌｙｓ−Ｔｙｒ（ＫＹ）又はＬｙｓ（Ｋ）で終結するように修飾されたＦａｂ断片である。具体的な実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、その重鎖Ｃ末端が、Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ（ＫＹＧＰＰＣ）で終結するように修飾されたＦａｂ−Ｃ断片である。システイン残基は、ポリマー（例えば、ＰＥＧポリマー）に取り付けることができる。具体的な実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、ＩｇＧ４アイソタイプのＦａｂ断片又はＦａｂ−Ｃ断片である。
【０４１２】
一部の実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、配列番号１８０、配列番号１８１、配列番号１８２、配列番号１８３、配列番号１８４、配列番号１８５、配列番号１８６、配列番号１８７、配列番号１８８、配列番号１８９、配列番号１９０、配列番号１９１、配列番号１９２、配列番号１９３、配列番号１９４、配列番号１９５、配列番号１９６、配列番号１９７、配列番号１９８、配列番号１９９、配列番号２００、配列番号２０１、配列番号２０２、配列番号２０３、配列番号２０４、配列番号２０５、配列番号２０６、配列番号２０７、配列番号２０８、配列番号２０９、配列番号２１０、配列番号２１１、配列番号２１２、又は配列番号２１３のアミノ酸配列を有する重鎖を含むＦａｂ断片である。一部の実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、配列番号１８０、配列番号１８１、配列番号１８２、配列番号１８３、配列番号１８４、配列番号１８５、配列番号１８６、配列番号１８７、配列番号１８８、配列番号１８９、配列番号１９０、配列番号１９１、配列番号１９２、配列番号１９３、配列番号１９４、配列番号１９５、配列番号１９６、配列番号１９７、配列番号１９８、配列番号１９９、配列番号２００、配列番号２０１、配列番号２０２、配列番号２０３、配列番号２０４、配列番号２０５、配列番号２０６、配列番号２０７、配列番号２０８、配列番号２０９、配列番号２１０、配列番号２１１、配列番号２１２、又は配列番号２１３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖を含むＦａｂ断片である。表８を参照されたい。具体的な実施態様では、Ｆａｂ断片は、ＩｇＧ１アイソタイプのものである。具体的な実施態様では、Ｃ’末端側の端におけるＣｙｓ−Ａｓｐ（ＣＤ）配列のシステインは、ポリマー（例えば、ＰＥＧポリマー）に取り付けられる。
【０４１３】
一部の実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、配列番号２１４、配列番号２１５、配列番号２１６、配列番号２１７、配列番号２１８、配列番号２１９、配列番号２２０、配列番号２２１、配列番号２２２、配列番号２２３、配列番号２２４、配列番号２２５、配列番号２２６、配列番号２２７、配列番号２２８、配列番号２２９、配列番号２３０、配列番号２３１、配列番号２３２、配列番号２３３、配列番号２３４、配列番号２３５、配列番号２３６、配列番号２３７、配列番号２３８、配列番号２３９、配列番号２４０、配列番号２４１、配列番号２４２、配列番号２４３、配列番号２４４、配列番号２４５、配列番号２４６、又は配列番号２４７のアミノ酸配列を有する重鎖を含むＦａｂ断片である。一部の実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、配列番号２１４、配列番号２１５、配列番号２１６、配列番号２１７、配列番号２１８、配列番号２１９、配列番号２２０、配列番号２２１、配列番号２２２、配列番号２２３、配列番号２２４、配列番号２２５、配列番号２２６、配列番号２２７、配列番号２２８、配列番号２２９、配列番号２３０、配列番号２３１、配列番号２３２、配列番号２３３、配列番号２３４、配列番号２３５、配列番号２３６、配列番号２３７、配列番号２３８、配列番号２３９、配列番号２４０、配列番号２４１、配列番号２４２、配列番号２４３、配列番号２４４、配列番号２４５、配列番号２４６、又は配列番号２４７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖を含むＦａｂ断片である。表８を参照されたい。具体的な実施態様では、Ｆａｂ断片は、ＩｇＧ１アイソタイプのものである。具体的な実施態様では、Ｃ’末端側の端におけるＣｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ（ＣＤＫＴＨＬ）配列のシステインは、ポリマー（例えば、ＰＥＧポリマー）に取り付けられる。
【０４１４】
一部の実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、配列番号２４８、配列番号２４９、配列番号２５０、配列番号２５１、配列番号２５２、配列番号２５３、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、配列番号２５７、配列番号２５８、配列番号２５９、配列番号２６０、配列番号２６１、配列番号２６２、配列番号２６３、配列番号２６４、配列番号２６５、配列番号２６６、配列番号２６７、配列番号２６８、配列番号２６９、配列番号２７０、配列番号２７１、配列番号２７２、配列番号２７３、配列番号２７４、配列番号２７５、配列番号２７６、配列番号２７７、配列番号２７８、配列番号２７９、配列番号２８０、又は配列番号２８１のアミノ酸配列を有する重鎖を含むＦａｂ断片である。一部の実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、配列番号２４８、配列番号２４９、配列番号２５０、配列番号２５１、配列番号２５２、配列番号２５３、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、配列番号２５７、配列番号２５８、配列番号２５９、配列番号２６０、配列番号２６１、配列番号２６２、配列番号２６３、配列番号２６４、配列番号２６５、配列番号２６６、配列番号２６７、配列番号２６８、配列番号２６９、配列番号２７０、配列番号２７１、配列番号２７２、配列番号２７３、配列番号２７４、配列番号２７５、配列番号２７６、配列番号２７７、配列番号２７８、配列番号２７９、配列番号２８０、又は配列番号２８１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖を含むＦａｂ断片である。表８を参照されたい。具体的な実施態様では、Ｆａｂ断片は、ＩｇＧ１アイソタイプのものである。具体的な実施態様では、Ｃ’末端側の端におけるＣｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ（ＣＤＫ）配列のシステインは、ポリマー（例えば、ＰＥＧポリマー）に取り付けられる。
【０４１５】
一部の実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、配列番号２８２、配列番号２８３、配列番号２８４、配列番号２８５、配列番号２８６、配列番号２８７、配列番号２８８、配列番号２８９、配列番号２９０、配列番号２９１、配列番号２９２、配列番号２９３、配列番号２９４、配列番号２９５、配列番号２９６、配列番号２９７、配列番号２９８、配列番号２９９、配列番号３００、配列番号３０１、配列番号３０２、配列番号３０３、配列番号３０４、配列番号３０５、配列番号３０６、配列番号３０７、配列番号３０８、配列番号３０９、配列番号３１０、配列番号３１１、配列番号３１２、配列番号３１３、配列番号３１４、又は配列番号３１５のアミノ酸配列を有する重鎖を含むＦａｂ断片である。一部の実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、配列番号２８２、配列番号２８３、配列番号２８４、配列番号２８５、配列番号２８６、配列番号２８７、配列番号２８８、配列番号２８９、配列番号２９０、配列番号２９１、配列番号２９２、配列番号２９３、配列番号２９４、配列番号２９５、配列番号２９６、配列番号２９７、配列番号２９８、配列番号２９９、配列番号３００、配列番号３０１、配列番号３０２、配列番号３０３、配列番号３０４、配列番号３０５、配列番号３０６、配列番号３０７、配列番号３０８、配列番号３０９、配列番号３１０、配列番号３１１、配列番号３１２、配列番号３１３、配列番号３１４、又は配列番号３１５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖を含むＦａｂ断片である。表８を参照されたい。具体的な実施態様では、Ｆａｂ断片は、ＩｇＧ１アイソタイプのものである。具体的な実施態様では、Ｃ’末端側の端におけるＣｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ（ＣＤＫＴ）配列のシステインは、ポリマー（例えば、ＰＥＧポリマー）に取り付けられる。
【０４１６】
一部の実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、配列番号３１６、配列番号３１７、配列番号３１８、配列番号３１９、配列番号３２０、配列番号３２１、配列番号３２２、配列番号３２３、配列番号３２４、配列番号３２５、配列番号３２６、配列番号３２７、配列番号３２８、配列番号３２９、配列番号３３０、配列番号３３１、配列番号３３２、配列番号３３３、配列番号３３４、配列番号３３５、配列番号３３６、配列番号３３７、配列番号３３８、配列番号３３９、配列番号３４０、配列番号３４１、配列番号３４２、配列番号３４３、配列番号３４４、配列番号３４５、配列番号３４６、配列番号３４７、配列番号３４８、又は配列番号３４９のアミノ酸配列を有する重鎖を含むＦａｂ断片である。一部の実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、配列番号３１６、配列番号３１７、配列番号３１８、配列番号３１９、配列番号３２０、配列番号３２１、配列番号３２２、配列番号３２３、配列番号３２４、配列番号３２５、配列番号３２６、配列番号３２７、配列番号３２８、配列番号３２９、配列番号３３０、配列番号３３１、配列番号３３２、配列番号３３３、配列番号３３４、配列番号３３５、配列番号３３６、配列番号３３７、配列番号３３８、配列番号３３９、配列番号３４０、配列番号３４１、配列番号３４２、配列番号３４３、配列番号３４４、配列番号３４５、配列番号３４６、配列番号３４７、配列番号３４８、又は配列番号３４９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖を含むＦａｂ断片である。表８を参照されたい。具体的な実施態様では、Ｆａｂ断片は、ＩｇＧ１アイソタイプのものである。具体的な実施態様では、Ｃ’末端側の端におけるＣｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ（ＣＤＫＴＨ）配列のシステインは、ポリマー（例えば、ＰＥＧポリマー）に取り付けられる。
【０４１７】
一部の実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、配列番号３５０、配列番号３５１、配列番号３５２、配列番号３５３、配列番号３５４、配列番号３５５、配列番号３５６、配列番号３５７、配列番号３５８、配列番号３５９、配列番号３６０、配列番号３６１、配列番号３６２、配列番号３６３、配列番号３６４、配列番号３６５、配列番号３６６、配列番号３６７、配列番号３６８、配列番号３６９、配列番号３７０、配列番号３７１、配列番号３７２、配列番号３７３、配列番号３７４、配列番号３７５、配列番号３７６、配列番号３７７、配列番号３７８、配列番号３７９、配列番号３８０、配列番号３８１、配列番号３８２、又は配列番号３８３のアミノ酸配列を有する重鎖を含むＦａｂ−Ｃ断片である。一部の実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、配列番号３５０、配列番号３５１、配列番号３５２、配列番号３５３、配列番号３５４、配列番号３５５、配列番号３５６、配列番号３５７、配列番号３５８、配列番号３５９、配列番号３６０、配列番号３６１、配列番号３６２、配列番号３６３、配列番号３６４、配列番号３６５、配列番号３６６、配列番号３６７、配列番号３６８、配列番号３６９、配列番号３７０、配列番号３７１、配列番号３７２、配列番号３７３、配列番号３７４、配列番号３７５、配列番号３７６、配列番号３７７、配列番号３７８、配列番号３７９、配列番号３８０、配列番号３８１、配列番号３８２、又は配列番号３８３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖を含むＦａｂ−Ｃ断片である。表８を参照されたい。具体的な実施態様では、Ｆａｂ−Ｃ断片は、ＩｇＧ１アイソタイプのものである。具体的な実施態様では、Ｃ’末端側の端におけるＣｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ（ＣＤＫＴＨＴＣ）配列の２個のシステインはそれぞれ、ポリマー（例えば、ＰＥＧポリマー）に取り付けられる。具体的な実施態様では、Ｃ’末端側の端におけるＣｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ（ＣＤＫＴＨＴＣ）配列の第１のシステインは、ポリマー（例えば、ＰＥＧポリマー）に取り付けられる。具体的な実施態様では、Ｃ’末端側の端におけるＣｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ（ＣＤＫＴＨＴＣ）配列の第２のシステインは、ポリマー（例えば、ＰＥＧポリマー）に取り付けられる。
【０４１８】
一部の実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、配列番号３８４、配列番号３８５、配列番号３８６、配列番号３８７、配列番号３８８、配列番号３８９、配列番号３９０、配列番号３９１、配列番号３９２、配列番号３９３、配列番号３９４、配列番号３９５、配列番号３９６、配列番号３９７、配列番号３９８、配列番号３９９、配列番号４００、配列番号４０１、配列番号４０２、配列番号４０３、配列番号４０４、配列番号４０５、配列番号４０６、配列番号４０７、配列番号４０８、配列番号４０９、配列番号４１０、配列番号４１１、配列番号４１２、配列番号４１３、配列番号４１４、配列番号４１５、配列番号４１６、又は配列番号４１７のアミノ酸配列を有する重鎖を含むＦａｂ断片、Ｆａｂ’断片又はＦ（ａｂ’）２断片である。一部の実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、配列番号３８４、配列番号３８５、配列番号３８６、配列番号３８７、配列番号３８８、配列番号３８９、配列番号３９０、配列番号３９１、配列番号３９２、配列番号３９３、配列番号３９４、配列番号３９５、配列番号３９６、配列番号３９７、配列番号３９８、配列番号３９９、配列番号４００、配列番号４０１、配列番号４０２、配列番号４０３、配列番号４０４、配列番号４０５、配列番号４０６、配列番号４０７、配列番号４０８、配列番号４０９、配列番号４１０、配列番号４１１、配列番号４１２、配列番号４１３、配列番号４１４、配列番号４１５、配列番号４１６、又は配列番号４１７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖を含むＦａｂ断片、Ｆａｂ’断片又はＦ（ａｂ’）２断片である。表８を参照されたい。具体的な実施態様では、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片又はＦ（ａｂ’）２断片は、ＩｇＧ１アイソタイプのものである。具体的な実施態様では、Ｃ’末端側の端におけるＣｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ（ＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣ）配列の３個のシステインはそれぞれ、ポリマー（例えば、ＰＥＧポリマー）に取り付けられる。具体的な実施態様では、Ｃ’末端側の端におけるＣｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ（ＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣ）配列の第２のシステイン及び第３のシステインはそれぞれ、ポリマー（例えば、ＰＥＧポリマー）に取り付けられる。具体的な実施態様では、Ｃ’末端側の端におけるＣｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ（ＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣ）配列の第１のシステイン及び第３のシステインはそれぞれ、ポリマー（例えば、ＰＥＧポリマー）に取り付けられる。具体的な実施態様では、Ｃ’末端側の端におけるＣｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ（ＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣ）配列の第１のシステイン及び第２のシステインはそれぞれ、ポリマー（例えば、ＰＥＧポリマー）に取り付けられる。具体的な実施態様では、Ｃ’末端側の端におけるＣｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ（ＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣ）配列の第１のシステインは、ポリマー（例えば、ＰＥＧポリマー）に取り付けられる。具体的な実施態様では、Ｃ’末端側の端におけるＣｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ（ＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣ）配列の第２のシステインは、ポリマー（例えば、ＰＥＧポリマー）に取り付けられる。具体的な実施態様では、Ｃ’末端側の端におけるＣｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ（ＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣ）配列の第３のシステインは、ポリマー（例えば、ＰＥＧポリマー）に取り付けられる。
【０４１９】
一部の実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、配列番号４１８、配列番号４１９、配列番号４２０、配列番号４２１、配列番号４２２、配列番号４２３、配列番号４２４、配列番号４２５、配列番号４２６、配列番号４２７、配列番号４２８、配列番号４２９、配列番号４３０、配列番号４３１、配列番号４３２、配列番号４３３、配列番号４３４、配列番号４３５、配列番号４３６、配列番号４３７、配列番号４３８、配列番号４３９、配列番号４４０、配列番号４４１、配列番号４４２、配列番号４４３、配列番号４４４、配列番号４４５、配列番号４４６、配列番号４４７、配列番号４４８、配列番号４４９、配列番号４５０、又は配列番号４５１のアミノ酸配列を有する重鎖を含むＦａｂ断片、Ｆａｂ’断片又はＦ（ａｂ’）２断片である。一部の実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、配列番号４１８、配列番号４１９、配列番号４２０、配列番号４２１、配列番号４２２、配列番号４２３、配列番号４２４、配列番号４２５、配列番号４２６、配列番号４２７、配列番号４２８、配列番号４２９、配列番号４３０、配列番号４３１、配列番号４３２、配列番号４３３、配列番号４３４、配列番号４３５、配列番号４３６、配列番号４３７、配列番号４３８、配列番号４３９、配列番号４４０、配列番号４４１、配列番号４４２、配列番号４４３、配列番号４４４、配列番号４４５、配列番号４４６、配列番号４４７、配列番号４４８、配列番号４４９、配列番号４５０、又は配列番号４５１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖を含むＦａｂ断片、Ｆａｂ’断片又はＦ（ａｂ’）２断片である。表８を参照されたい。具体的な実施態様では、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片又はＦ（ａｂ’）２断片は、ＩｇＧ１アイソタイプのものである。具体的な実施態様では、Ｃ’末端側の端におけるＣｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ（ＣＤＫＴＨＴＣＰＰＳ）配列の２個のシステインはそれぞれ、ポリマー（例えば、ＰＥＧポリマー）に取り付けられる。具体的な実施態様では、Ｃ’末端側の端におけるＣｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ（ＣＤＫＴＨＴＣＰＰＳ）配列の第１のシステインは、ポリマー（例えば、ＰＥＧポリマー）に取り付けられる。具体的な実施態様では、Ｃ’末端側の端におけるＣｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ（ＣＤＫＴＨＴＣＰＰＳ）配列の第２のシステインは、ポリマー（例えば、ＰＥＧポリマー）に取り付けられる。
【０４２０】
一部の実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、配列番号４５２、配列番号４５３、配列番号４５４、配列番号４５５、配列番号４５６、配列番号４５７、配列番号４５８、配列番号４５９、配列番号４６０、配列番号４６１、配列番号４６２、配列番号４６３、配列番号４６４、配列番号４６５、配列番号４６６、配列番号４６７、配列番号４６８、配列番号４６９、配列番号４７０、配列番号４７１、配列番号４７２、配列番号４７３、配列番号４７４、配列番号４７５、配列番号４７６、配列番号４７７、配列番号４７８、配列番号４７９、配列番号４８０、配列番号４８１、配列番号４８２、配列番号４８３、配列番号４８４、又は配列番号４８５のアミノ酸配列を有する重鎖を含むＦａｂ断片、Ｆａｂ’断片又はＦ（ａｂ’）２断片である。一部の実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、配列番号４５２、配列番号４５３、配列番号４５４、配列番号４５５、配列番号４５６、配列番号４５７、配列番号４５８、配列番号４５９、配列番号４６０、配列番号４６１、配列番号４６２、配列番号４６３、配列番号４６４、配列番号４６５、配列番号４６６、配列番号４６７、配列番号４６８、配列番号４６９、配列番号４７０、配列番号４７１、配列番号４７２、配列番号４７３、配列番号４７４、配列番号４７５、配列番号４７６、配列番号４７７、配列番号４７８、配列番号４７９、配列番号４８０、配列番号４８１、配列番号４８２、配列番号４８３、配列番号４８４、又は配列番号４８５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖を含むＦａｂ断片、Ｆａｂ’断片又はＦ（ａｂ’）２断片である。表８を参照されたい。具体的な実施態様では、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片又はＦ（ａｂ’）２断片は、ＩｇＧ１アイソタイプのものである。具体的な実施態様では、Ｃ’末端側の端におけるＣｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ（ＣＤＫＴＨＴＳＰＰＣ）配列の２個のシステインはそれぞれ、ポリマー（例えば、ＰＥＧポリマー）に取り付けられる。具体的な実施態様では、Ｃ’末端側の端におけるＣｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ（ＣＤＫＴＨＴＳＰＰＣ）配列の第１のシステインは、ポリマー（例えば、ＰＥＧポリマー）に取り付けられる。具体的な実施態様では、Ｃ’末端側の端におけるＣｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ（ＣＤＫＴＨＴＳＰＰＣ）配列の第２のシステインは、ポリマー（例えば、ＰＥＧポリマー）に取り付けられる。
【０４２１】
一部の実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、配列番号４８６、配列番号４８７、配列番号４８８、配列番号４８９、配列番号４９０、配列番号４９１、配列番号４９２、配列番号４９３、配列番号４９４、配列番号４９５、配列番号４９６、配列番号４９７、配列番号４９８、配列番号４９９、配列番号５００、配列番号５０１、配列番号５０２、配列番号５０３、配列番号５０４、配列番号５０５、配列番号５０６、配列番号５０７、配列番号５０８、配列番号５０９、配列番号５１０、配列番号５１１、配列番号５１２、配列番号５１３、配列番号５１４、配列番号５１５、配列番号５１６、配列番号５１７、配列番号５１８、又は配列番号５１９のアミノ酸配列を有する重鎖を含むＦａｂ断片、Ｆａｂ’断片又はＦ（ａｂ’）２断片である。一部の実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、配列番号４８６、配列番号４８７、配列番号４８８、配列番号４８９、配列番号４９０、配列番号４９１、配列番号４９２、配列番号４９３、配列番号４９４、配列番号４９５、配列番号４９６、配列番号４９７、配列番号４９８、配列番号４９９、配列番号５００、配列番号５０１、配列番号５０２、配列番号５０３、配列番号５０４、配列番号５０５、配列番号５０６、配列番号５０７、配列番号５０８、配列番号５０９、配列番号５１０、配列番号５１１、配列番号５１２、配列番号５１３、配列番号５１４、配列番号５１５、配列番号５１６、配列番号５１７、配列番号５１８、又は配列番号５１９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖を含むＦａｂ断片、Ｆａｂ’断片又はＦ（ａｂ’）２断片である。表８を参照されたい。具体的な実施態様では、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片又はＦ（ａｂ’）２断片は、ＩｇＧ１アイソタイプのものである。具体的な実施態様では、Ｃ’末端側の端におけるＣｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ（ＣＤＫＴＨＴＡＰＰＣ）配列の２個のシステインはそれぞれ、ポリマー（例えば、ＰＥＧポリマー）に取り付けられる。具体的な実施態様では、Ｃ’末端側の端におけるＣｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ（ＣＤＫＴＨＴＡＰＰＣ）配列の第１のシステインは、ポリマー（例えば、ＰＥＧポリマー）に取り付けられる。具体的な実施態様では、Ｃ’末端側の端におけるＣｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ（ＣＤＫＴＨＴＡＰＰＣ）配列の第２のシステインは、ポリマー（例えば、ＰＥＧポリマー）に取り付けられる。
【０４２２】
一部の実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、配列番号５２０、配列番号５２１、配列番号５２２、配列番号５２３、配列番号５２４、配列番号５２５、配列番号５２６、配列番号５２７、配列番号５２８、配列番号５２９、配列番号５３０、配列番号５３１、配列番号５３２、配列番号５３３、配列番号５３４、配列番号５３５、配列番号５３６、配列番号５３７、配列番号５３８、配列番号５３９、配列番号５４０、配列番号５４１、配列番号５４２、配列番号５４３、配列番号５４４、配列番号５４５、配列番号５４６、配列番号５４７、配列番号５４８、配列番号５４９、配列番号５５０、配列番号５５１、配列番号５５２、又は配列番号５５３のアミノ酸配列を有する重鎖を含むＦａｂ断片、Ｆａｂ’断片又はＦ（ａｂ’）２断片である。一部の実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、配列番号５２０、配列番号５２１、配列番号５２２、配列番号５２３、配列番号５２４、配列番号５２５、配列番号５２６、配列番号５２７、配列番号５２８、配列番号５２９、配列番号５３０、配列番号５３１、配列番号５３２、配列番号５３３、配列番号５３４、配列番号５３５、配列番号５３６、配列番号５３７、配列番号５３８、配列番号５３９、配列番号５４０、配列番号５４１、配列番号５４２、配列番号５４３、配列番号５４４、配列番号５４５、配列番号５４６、配列番号５４７、配列番号５４８、配列番号５４９、配列番号５５０、配列番号５５１、配列番号５５２、又は配列番号５５３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖を含むＦａｂ断片、Ｆａｂ’断片又はＦ（ａｂ’）２断片である。表８を参照されたい。具体的な実施態様では、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片又はＦ（ａｂ’）２断片は、ＩｇＧ１アイソタイプのものである。具体的な実施態様では、Ｃ’末端側の端におけるＣｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（ＣＤＫＴＨＴＳＧＧＣ）配列の２個のシステインはそれぞれ、ポリマー（例えば、ＰＥＧポリマー）に取り付けられる。具体的な実施態様では、Ｃ’末端側の端におけるＣｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（ＣＤＫＴＨＴＳＧＧＣ）配列の第１のシステインは、ポリマー（例えば、ＰＥＧポリマー）に取り付けられる。具体的な実施態様では、Ｃ’末端側の端におけるＣｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（ＣＤＫＴＨＴＳＧＧＣ）配列の第２のシステインは、ポリマー（例えば、ＰＥＧポリマー）に取り付けられる。
【０４２３】
一部の実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、配列番号５５４、配列番号５５５、配列番号５５６、配列番号５５７、配列番号５５８、配列番号５５９、配列番号５６０、配列番号５６１、配列番号５６２、配列番号５６３、配列番号５６４、配列番号５６５、配列番号５６６、配列番号５６７、配列番号５６８、配列番号５６９、配列番号５７０、配列番号５７１、配列番号５７２、配列番号５７３、配列番号５７４、配列番号５７５、配列番号５７６、配列番号５７７、配列番号５７８、配列番号５７９、配列番号５８０、配列番号５８１、配列番号５８２、配列番号５８３、配列番号５８４、配列番号５８５、配列番号５８６、又は配列番号５８７のアミノ酸配列を有する重鎖を含むＦａｂ断片である。一部の実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、配列番号５５４、配列番号５５５、配列番号５５６、配列番号５５７、配列番号５５８、配列番号５５９、配列番号５６０、配列番号５６１、配列番号５６２、配列番号５６３、配列番号５６４、配列番号５６５、配列番号５６６、配列番号５６７、配列番号５６８、配列番号５６９、配列番号５７０、配列番号５７１、配列番号５７２、配列番号５７３、配列番号５７４、配列番号５７５、配列番号５７６、配列番号５７７、配列番号５７８、配列番号５７９、配列番号５８０、配列番号５８１、配列番号５８２、配列番号５８３、配列番号５８４、配列番号５８５、配列番号５８６、又は配列番号５８７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖を含むＦａｂ断片である。表８を参照されたい。具体的な実施態様では、Ｆａｂ断片は、ＩｇＧ１アイソタイプのものである。具体的な実施態様では、Ｃ’末端側の端におけるＣｙｓ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ（ＣＹＧＰＰＣ）配列の２個のシステインはそれぞれ、ポリマー（例えば、ＰＥＧポリマー）に取り付けられる。具体的な実施態様では、Ｃ’末端側の端におけるＣｙｓ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ（ＣＹＧＰＰＣ）配列の第１のシステインは、ポリマー（例えば、ＰＥＧポリマー）に取り付けられる。具体的な実施態様では、Ｃ’末端側の端におけるＣｙｓ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ（ＣＹＧＰＰＣ）配列の第２のシステインは、ポリマー（例えば、ＰＥＧポリマー）に取り付けられる。
【０４２４】
一部の実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、配列番号５８８、配列番号５８９、配列番号５９０、配列番号５９１、配列番号５９２、配列番号５９３、配列番号５９４、配列番号５９５、配列番号５９６、配列番号５９７、配列番号５９８、配列番号５９９、配列番号６００、配列番号６０１、配列番号６０２、配列番号６０３、配列番号６０４、配列番号６０５、配列番号６０６、配列番号６０７、配列番号６０８、配列番号６０９、配列番号６１０、配列番号６１１、配列番号６１２、配列番号６１３、配列番号６１４、配列番号６１５、配列番号６１６、配列番号６１７、配列番号６１８、配列番号６１９、配列番号６２０、又は配列番号６２１のアミノ酸配列を有する重鎖を含むＦａｂ断片である。一部の実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、配列番号５８８、配列番号５８９、配列番号５９０、配列番号５９１、配列番号５９２、配列番号５９３、配列番号５９４、配列番号５９５、配列番号５９６、配列番号５９７、配列番号５９８、配列番号５９９、配列番号６００、配列番号６０１、配列番号６０２、配列番号６０３、配列番号６０４、配列番号６０５、配列番号６０６、配列番号６０７、配列番号６０８、配列番号６０９、配列番号６１０、配列番号６１１、配列番号６１２、配列番号６１３、配列番号６１４、配列番号６１５、配列番号６１６、配列番号６１７、配列番号６１８、配列番号６１９、配列番号６２０、又は配列番号６２１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖を含むＦａｂ断片である。表８を参照されたい。具体的な実施態様では、Ｆａｂ断片は、ＩｇＧ２アイソタイプのものである。
【０４２５】
一部の実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、配列番号６２２、配列番号６２３、配列番号６２４、配列番号６２５、配列番号６２６、配列番号６２７、配列番号６２８、配列番号６２９、配列番号６３０、配列番号６３１、配列番号６３２、配列番号６３３、配列番号６３４、配列番号６３５、配列番号６３６、配列番号６３７、配列番号６３８、配列番号６３９、配列番号６４０、配列番号６４１、配列番号６４２、配列番号６４３、配列番号６４４、配列番号６４５、配列番号６４６、配列番号６４７、配列番号６４８、配列番号６４９、配列番号６５０、配列番号６５１、配列番号６５２、配列番号６５３、配列番号６５４、又は配列番号６５５のアミノ酸配列を有する重鎖を含むＦａｂ−Ｃ断片である。一部の実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、配列番号６２２、配列番号６２３、配列番号６２４、配列番号６２５、配列番号６２６、配列番号６２７、配列番号６２８、配列番号６２９、配列番号６３０、配列番号６３１、配列番号６３２、配列番号６３３、配列番号６３４、配列番号６３５、配列番号６３６、配列番号６３７、配列番号６３８、配列番号６３９、配列番号６４０、配列番号６４１、配列番号６４２、配列番号６４３、配列番号６４４、配列番号６４５、配列番号６４６、配列番号６４７、配列番号６４８、配列番号６４９、配列番号６５０、配列番号６５１、配列番号６５２、配列番号６５３、配列番号６５４、又は配列番号６５５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖を含むＦａｂ−Ｃ断片である。表８を参照されたい。具体的な実施態様では、Ｆａｂ−Ｃ断片は、ＩｇＧ２アイソタイプのものである。具体的な実施態様では、Ｃ’末端側の端におけるＶａｌ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ（ＶＥＲＫＣ）配列のシステインは、ポリマー（例えば、ＰＥＧポリマー）に取り付けられる。
【０４２６】
一部の実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、配列番号６５６、配列番号６５７、配列番号６５８、配列番号６５９、配列番号６６０、配列番号６６１、配列番号６６２、配列番号６６３、配列番号６６４、配列番号６６５、配列番号６６６、配列番号６６７、配列番号６６８、配列番号６６９、配列番号６７０、配列番号６７１、配列番号６７２、配列番号６７３、配列番号６７４、配列番号６７５、配列番号６７６、配列番号６７７、配列番号６７８、配列番号６７９、配列番号６８０、配列番号６８１、配列番号６８２、配列番号６８３、配列番号６８４、配列番号６８５、配列番号６８６、配列番号６８７、配列番号６８８、又は配列番号６８９のアミノ酸配列を有する重鎖を含むＦａｂ−Ｃ断片である。一部の実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、配列番号６５６、配列番号６５７、配列番号６５８、配列番号６５９、配列番号６６０、配列番号６６１、配列番号６６２、配列番号６６３、配列番号６６４、配列番号６６５、配列番号６６６、配列番号６６７、配列番号６６８、配列番号６６９、配列番号６７０、配列番号６７１、配列番号６７２、配列番号６７３、配列番号６７４、配列番号６７５、配列番号６７６、配列番号６７７、配列番号６７８、配列番号６７９、配列番号６８０、配列番号６８１、配列番号６８２、配列番号６８３、配列番号６８４、配列番号６８５、配列番号６８６、配列番号６８７、配列番号６８８、又は配列番号６８９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖を含むＦａｂ−Ｃ断片である。表８を参照されたい。具体的な実施態様では、Ｆａｂ−Ｃ断片は、ＩｇＧ４アイソタイプのものである。具体的な実施態様では、Ｃ’末端側の端におけるＬｙｓ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ（ＫＹＧＰＰＣ）配列のシステインは、ポリマー（例えば、ＰＥＧポリマー）に取り付けられる。
【０４２７】
一部の実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、配列番号６９０、配列番号６９１、配列番号６９２、配列番号６９３、配列番号６９４、配列番号６９５、配列番号６９６、配列番号６９７、配列番号６９８、配列番号６９９、配列番号７００、配列番号７０１、配列番号７０２、配列番号７０３、配列番号７０４、配列番号７０５、配列番号７０６、配列番号７０７、配列番号７０８、配列番号７０９、配列番号７１０、配列番号７１１、配列番号７１２、配列番号７１３、配列番号７１４、配列番号７１５、配列番号７１６、配列番号７１７、配列番号７１８、配列番号７１９、配列番号７２０、配列番号７２１、配列番号７２２、又は配列番号７２３のアミノ酸配列を有する重鎖を含むＦａｂ断片である。一部の実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、配列番号６９０、配列番号６９１、配列番号６９２、配列番号６９３、配列番号６９４、配列番号６９５、配列番号６９６、配列番号６９７、配列番号６９８、配列番号６９９、配列番号７００、配列番号７０１、配列番号７０２、配列番号７０３、配列番号７０４、配列番号７０５、配列番号７０６、配列番号７０７、配列番号７０８、配列番号７０９、配列番号７１０、配列番号７１１、配列番号７１２、配列番号７１３、配列番号７１４、配列番号７１５、配列番号７１６、配列番号７１７、配列番号７１８、配列番号７１９、配列番号７２０、配列番号７２１、配列番号７２２、又は配列番号７２３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖を含むＦａｂ断片である。表８を参照されたい。具体的な実施態様では、Ｆａｂ断片は、ＩｇＧ４アイソタイプのものである。
【０４２８】
一部の実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、配列番号７２４、配列番号７２５、配列番号７２６、配列番号７２７、配列番号７２８、配列番号７２９、配列番号７３０、配列番号７３１、配列番号７３２、配列番号７３３、配列番号７３４、配列番号７３５、配列番号７３６、配列番号７３７、配列番号７３８、配列番号７３９、配列番号７４０、配列番号７４１、配列番号７４２、配列番号７４３、配列番号７４４、配列番号７４５、配列番号７４６、配列番号７４７、配列番号７４８、配列番号７４９、配列番号７５０、配列番号７５１、配列番号７５２、配列番号７５３、配列番号７５４、配列番号７５５、配列番号７５６、又は配列番号７５７のアミノ酸配列を有する重鎖を含むＦａｂ断片である。一部の実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、配列番号７２４、配列番号７２５、配列番号７２６、配列番号７２７、配列番号７２８、配列番号７２９、配列番号７３０、配列番号７３１、配列番号７３２、配列番号７３３、配列番号７３４、配列番号７３５、配列番号７３６、配列番号７３７、配列番号７３８、配列番号７３９、配列番号７４０、配列番号７４１、配列番号７４２、配列番号７４３、配列番号７４４、配列番号７４５、配列番号７４６、配列番号７４７、配列番号７４８、配列番号７４９、配列番号７５０、配列番号７５１、配列番号７５２、配列番号７５３、配列番号７５４、配列番号７５５、配列番号７５６、又は配列番号７５７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖を含むＦａｂ断片である。表８を参照されたい。具体的な実施態様では、Ｆａｂ断片は、ＩｇＧ４アイソタイプのものである。
【０４２９】
一部の実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、配列番号７５８、配列番号７５９、配列番号７６０、配列番号７６１、配列番号７６２、配列番号７６３、配列番号７６４、配列番号７６５、配列番号７６６、配列番号７６７、配列番号７６８、配列番号７６９、配列番号７７０、配列番号７７１、配列番号７７２、配列番号７７３、配列番号７７４、配列番号７７５、配列番号７７６、配列番号７７７、配列番号７７８、配列番号７７９、配列番号７８０、配列番号７８１、配列番号７８２、配列番号７８３、配列番号７８４、配列番号７８５、配列番号７８６、配列番号７８７、配列番号７８８、配列番号７８９、配列番号７９０、又は配列番号７９１のアミノ酸配列を有する重鎖を含むＦａｂ断片である。一部の実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、配列番号７５８、配列番号７５９、配列番号７６０、配列番号７６１、配列番号７６２、配列番号７６３、配列番号７６４、配列番号７６５、配列番号７６６、配列番号７６７、配列番号７６８、配列番号７６９、配列番号７７０、配列番号７７１、配列番号７７２、配列番号７７３、配列番号７７４、配列番号７７５、配列番号７７６、配列番号７７７、配列番号７７８、配列番号７７９、配列番号７８０、配列番号７８１、配列番号７８２、配列番号７８３、配列番号７８４、配列番号７８５、配列番号７８６、配列番号７８７、配列番号７８８、配列番号７８９、配列番号７９０、又は配列番号７９１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖を含むＦａｂ断片である。表８を参照されたい。具体的な実施態様では、Ｆａｂ断片は、ＩｇＧ４アイソタイプのものである。
【０４３０】
一部の実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、配列番号７９２、配列番号７９３、配列番号７９４、配列番号７９５、配列番号７９６、配列番号７９７、配列番号７９８、配列番号７９９、配列番号８００、配列番号８０１、配列番号８０２、配列番号８０３、配列番号８０４、配列番号８０５、配列番号８０６、配列番号８０７、配列番号８０８、配列番号８０９、配列番号８１０、配列番号８１１、配列番号８１２、配列番号８１３、配列番号８１４、配列番号８１５、配列番号８１６、配列番号８１７、配列番号８１８、配列番号８１９、配列番号８２０、配列番号８２１、配列番号８２２、配列番号８２３、配列番号８２４、又は配列番号８２５のアミノ酸配列を有する重鎖を含むＦａｂ断片である。一部の実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、配列番号７９２、配列番号７９３、配列番号７９４、配列番号７９５、配列番号７９６、配列番号７９７、配列番号７９８、配列番号７９９、配列番号８００、配列番号８０１、配列番号８０２、配列番号８０３、配列番号８０４、配列番号８０５、配列番号８０６、配列番号８０７、配列番号８０８、配列番号８０９、配列番号８１０、配列番号８１１、配列番号８１２、配列番号８１３、配列番号８１４、配列番号８１５、配列番号８１６、配列番号８１７、配列番号８１８、配列番号８１９、配列番号８２０、配列番号８２１、配列番号８２２、配列番号８２３、配列番号８２４、又は配列番号８２５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖を含むＦａｂ断片である。表８を参照されたい。具体的な実施態様では、Ｆａｂ断片は、ＩｇＧ４アイソタイプのものである。
【０４３１】
一部の実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、配列番号８２６、配列番号８２７、配列番号８２８、配列番号８２９、配列番号８３０、配列番号８３１、配列番号８３２、配列番号８３３、配列番号８３４、配列番号８３５、配列番号８３６、配列番号８３７、配列番号８３８、配列番号８３９、配列番号８４０、配列番号８４１、配列番号８４２、配列番号８４３、配列番号８４４、配列番号８４５、配列番号８４６、配列番号８４７、配列番号８４８、配列番号８４９、配列番号８５０、配列番号８５１、配列番号８５２、配列番号８５３、配列番号８５４、配列番号８５５、配列番号８５６、配列番号８５７、配列番号８５８、又は配列番号８５９のアミノ酸配列を有する重鎖を含むＦａｂ断片である。一部の実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、配列番号７９２、配列番号８２６、配列番号８２７、配列番号８２８、配列番号８２９、配列番号８３０、配列番号８３１、配列番号８３２、配列番号８３３、配列番号８３４、配列番号８３５、配列番号８３６、配列番号８３７、配列番号８３８、配列番号８３９、配列番号８４０、配列番号８４１、配列番号８４２、配列番号８４３、配列番号８４４、配列番号８４５、配列番号８４６、配列番号８４７、配列番号８４８、配列番号８４９、配列番号８５０、配列番号８５１、配列番号８５２、配列番号８５３、配列番号８５４、配列番号８５５、配列番号８５６、配列番号８５７、配列番号８５８、又は配列番号８５９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖を含むＦａｂ断片である。表８を参照されたい。具体的な実施態様では、Ｆａｂ断片は、ＩｇＧ４アイソタイプのものである。
【０４３２】
一部の実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、配列番号８８２、配列番号８８３、配列番号８８４、配列番号８８５、配列番号８８６、配列番号８８７、配列番号８８８、配列番号８８９、配列番号８９０、配列番号８９１、配列番号８９２、配列番号８９３、配列番号８９４、配列番号８９５、配列番号８９６、配列番号８９７、配列番号８９８、配列番号８９９、配列番号９００、配列番号９０１、配列番号９０２、配列番号９０３、配列番号９０４、配列番号９０５、配列番号９０６、配列番号９０７、配列番号９０８、配列番号９０９、配列番号９１０、配列番号９１１、配列番号９１２、配列番号９１３、配列番号９１４、又は配列番号９１５のアミノ酸配列を有する重鎖を含むＦａｂ断片である。一部の実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、配列番号８８２、配列番号８８３、配列番号８８４、配列番号８８５、配列番号８８６、配列番号８８７、配列番号８８８、配列番号８８９、配列番号８９０、配列番号８９１、配列番号８９２、配列番号８９３、配列番号８９４、配列番号８９５、配列番号８９６、配列番号８９７、配列番号８９８、配列番号８９９、配列番号９００、配列番号９０１、配列番号９０２、配列番号９０３、配列番号９０４、配列番号９０５、配列番号９０６、配列番号９０７、配列番号９０８、配列番号９０９、配列番号９１０、配列番号９１１、配列番号９１２、配列番号９１３、配列番号９１４、又は配列番号９１５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖を含むＦａｂ断片である。表８を参照されたい。ここで、ＣＤＫＴＨＸの配列中のＸは、Ｔを除くいずれかのアミノ酸である。具体的な実施態様では、Ｆａｂ断片は、ＩｇＧ１アイソタイプのものである。具体的な実施態様では、Ｃ’末端側の端におけるＣｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ−Ｘ（ＣＤＫＴＨＴＸ）配列のシステインは、ポリマー（例えば、ＰＥＧポリマー）に取り付けられる。具体的な実施態様では、ＸがＣである場合、Ｃ’末端側の端におけるＣｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ−Ｘ（ＣＤＫＴＨＴＸ）配列の２個のシステインはそれぞれ、ポリマー（例えば、ＰＥＧポリマー）に取り付けられる。具体的な実施態様では、ＸがＣである場合、Ｃ’末端側の端におけるＣｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ−Ｘ（ＣＤＫＴＨＴＸ）配列の第２のシステインは、ポリマー（例えば、ＰＥＧポリマー）に取り付けられる。
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【０４３３】
一部の実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、配列番号８６０のアミノ酸配列を有する軽鎖定常領域を含むＦａｂ断片、Ｆａｂ’断片又はＦ（ａｂ’）２断片である。一部の実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、配列番号８６０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖定常領域を含むＦａｂ断片、Ｆａｂ’断片又はＦ（ａｂ’）２断片である。表９を参照されたい。
【０４３４】
一部の実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、配列番号８６１、配列番号８６２、配列番号８６９、配列番号８７０、配列番号８７１、配列番号８７２、配列番号８７３、配列番号８７４、配列番号８７７、配列番号８７８、配列番号８７９、配列番号８８０、配列番号８８１、又は配列番号９１６のアミノ酸配列を有する重鎖定常領域を含むＦａｂ断片である。一部の実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、配列番号８６４、配列番号８６５、配列番号８６６、配列番号８６７又は配列番号８６８のアミノ酸配列を有する重鎖定常領域を含むＦａｂ断片、Ｆａｂ’断片又はＦ（ａｂ’）２断片である。一部の実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、配列番号８６３、配列番号８７５又は配列番号８７６のアミノ酸配列を有する重鎖定常領域を含むＦａｂ−Ｃ断片である。一部の実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、配列番号８６１、配列番号８６２、配列番号８６９、配列番号８７０、配列番号８７１、配列番号８７２、配列番号８７３、配列番号８７４、配列番号８７７、配列番号８７８、配列番号８７９、配列番号８８０、配列番号８８１、又は配列番号９１６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖定常領域を含むＦａｂ断片である。一部の実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、配列番号８６４、配列番号８６５、配列番号８６６、配列番号８６７又は配列番号８６８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖定常領域を含むＦａｂ断片、Ｆａｂ’断片又はＦ（ａｂ’）２断片である。一部の実施態様では、抗Ｄ因子抗体は、配列番号８６３、配列番号８７５又は配列番号８７６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖定常領域を含むＦａｂ−Ｃ断片である。表９を参照されたい。
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【０４３５】
具体的な実施態様では、Ｄ因子阻害剤は、小分子阻害剤である。具体的な実施態様では、Ｄ因子阻害剤は、ヌクレオチド（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、アンチセンスＤＮＡ）である。具体的な実施態様では、Ｄ因子阻害剤は、Ｄ因子に結合するペプチド、タンパク質、ペプチドミメティック、アプタマー又は他の何れかの分子である。
【０４３６】
上に記載されているＤ因子阻害剤の力価を決定する方法において、抗Ｂａ因子、抗Ｂｂ因子及び／又は抗Ｃ３ｂ因子は、それぞれＢａ因子、Ｂｂ因子若しくは抗Ｃ３ｂ因子に結合するペプチド、非抗体タンパク質、ペプチドミメティック（memetic）、アプタマー、ヌクレオチド（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、アンチセンスＤＮＡ）又は他の何れかの分子によって置き換えることができる。或いは、Ｂａ因子、Ｂｂ因子及び／又はＣ３ｂ因子は、（場合によっては）直接的化学標識によって、ドナー又はアクセプターに取り付けることができる。
【０４３７】
本明細書に記載されているＤ因子阻害剤の力価を決定する方法の具体的な実施態様では、Ｄ因子は、組換えにより発現されたＤ因子である。本明細書に記載されているＤ因子阻害剤の力価を決定する方法の具体的な実施態様では、Ｄ因子は、対象に由来する試料から精製された、内因的に発現されたＤ因子である。
【０４３８】
本明細書に記載されているＤ因子阻害剤の力価を決定する方法の具体的な実施態様では、Ｂ因子は、組換えにより発現されたＢ因子である。本明細書に記載されているＤ因子阻害剤の力価を決定する方法の具体的な実施態様では、Ｂ因子は、対象に由来する試料から精製された、内因的に発現されたＢ因子である。
【０４３９】
本明細書に記載されている方法において参照されている用語「試料」は、血液試料又は血清試料であり得るが、これらに限定されない。
【０４４０】
本明細書に記載されている方法において参照されている対象は、ヒト、又は野生動物、飼育動物若しくは家畜等の非ヒト脊椎動物であり得るが、これらに限定されない。ある特定の実施態様では、対象は、哺乳類、例えば、ヒト、ウシ、イヌ、ネコ、ヤギ、ウマ、ヒツジ、ブタ、ラット又はマウスである。好まれる実施態様では、対象は、ヒトである。
【０４４１】
５．５．Ｄ因子阻害剤をスクリーニングする方法
別の態様では、複数のＤ因子阻害剤候補からＤ因子阻害剤をスクリーニングする方法であって、近接に基づく測定アッセイを行うことを含み、近接に基づく測定アッセイが、Ｂ因子の切断を測定する、方法が、本明細書に提供される。近接に基づく測定アッセイは、セクション５．１に記載されている通り、タンパク質ペアの結合を測定するための、当該技術分野で公知の何れかの近接に基づく技術を利用することができる。本セクションに記載されている方法は、例えば、新たなＤ因子阻害剤のハイスループットスクリーニングにおいて有用である。
【０４４２】
様々な実施態様では、Ｄ因子阻害剤をスクリーニングする方法は、（ａ）被験反応混合物においてＤ因子阻害剤候補をＤ因子、Ｂ因子及びＣ３ｂ因子と混合することと、（ｂ）被験反応混合物をインキュベートすることと、（ｃ）（ｂ）の工程の後に、被験反応混合物に、第１の部分で標識された抗Ｂａ因子抗体及び第２の部分で標識された抗Ｂｂ因子抗体を添加することであって、これらの部分の一方がドナーであり、他方がアクセプターであり、アクセプター及び／又はドナーによって生じた近接シグナルが、Ｂａ因子及びＢｂ因子が近接していることを指し示すことと、（ｄ）被験反応混合物由来の近接シグナルの値を測定することとを含み、Ｄ因子候補によるＤ因子活性阻害の程度が、近接シグナルの値と正に相関する。ある特定の実施態様では、（ａ）−（ｄ）の工程は、複数由来のＤ因子阻害剤候補毎に実行される。
【０４４３】
かかる様々な実施態様のある特定の態様では、Ｄ因子阻害剤をスクリーニングする方法は、（ｅ）コントロール反応混合物を混合することと、（ｆ）コントロール反応混合物をインキュベートすることと、（ｇ）（ｆ）の工程の後に、コントロール反応混合物に、第１の部分で標識された抗Ｂａ因子抗体及び第２の部分で標識された抗Ｂｂ因子抗体を添加することと、（ｈ）コントロール被験反応混合物由来の近接シグナルの値を測定することとをさらに含み、コントロール反応混合物と比べて被験反応混合物由来の近接シグナルの値がより大きいこと（例えば、約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％大きい若しくはこれを超える、又は約１倍、１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍大きい若しくはこれを超える）が、コントロール反応混合物と比べて被験反応混合物におけるＤ因子阻害剤候補によるＤ因子活性の阻害がより大きいことを指し示す。
【０４４４】
ドナー及び／又はアクセプターによって生じる近接シグナルが、光活性化によるドナー及びアクセプターの間のエネルギー移動に基づく場合、様々な実施態様では、Ｄ因子阻害剤をスクリーニングする方法は、（Ａ）被験反応混合物においてＤ因子阻害剤候補をＤ因子、Ｂ因子及びＣ３ｂ因子と混合することと、（Ｂ）被験反応混合物をインキュベートすることと、（Ｃ）（Ｂ）の工程の後に、被験反応混合物に、第１の部分で標識された抗Ｂａ因子抗体及び第２の部分で標識された抗Ｂｂ因子抗体を添加することであって、これらの部分の一方がドナーであり、他方がアクセプターであることと、（Ｄ）光源を与えて、被験反応混合物におけるドナーを励起することと、（Ｅ）被験反応混合物由来のドナー蛍光放出強度及び／又は被験反応混合物由来のアクセプター蛍光放出強度を測定することとを含み、Ｄ因子候補によるＤ因子活性阻害の程度が、被験反応混合物由来のドナー蛍光放出強度と負に相関し、且つ／又は被験反応混合物由来のアクセプター蛍光放出強度と正に相関する。具体的な実施態様では、（Ｂ）の工程は、約１５分間、３０分間、４５分間、６０分間、７５分間又は９０分間行われる。一部の実施態様では、（Ｂ）の工程は、約４５分間行われる。ある特定の実施態様では、（Ｅ）の工程は、（Ｄ）の工程の期間の後に行われ、これは、干渉する短命のバックグランドシグナルの減少をもたらす。具体的な実施態様では、Ｄ因子阻害剤をスクリーニングする方法は、（Ｆ）コントロール反応混合物を混合することと、（Ｇ）コントロール反応混合物をインキュベートすることと、（Ｈ）（Ｇ）の工程の後に、コントロール反応混合物に、第１の部分で標識された抗Ｂａ因子抗体及び第２の部分で標識された抗Ｂｂ因子抗体を添加することと、（Ｉ）同じ光源を与えて、コントロール反応混合物におけるドナーを励起することと、（Ｊ）コントロール反応混合物由来のドナー蛍光放出強度及び／又はコントロール反応混合物由来のアクセプター蛍光放出強度を測定することとをさらに含み、コントロール反応混合物と比べてより低い被験反応混合物由来のドナー蛍光放出強度及び／又はコントロール反応混合物と比べてより高い被験反応混合物由来のアクセプター蛍光放出強度が、コントロール反応混合物と比べて被験反応混合物におけるＤ因子阻害剤候補によるＤ因子活性の阻害がより大きいことを指し示す。具体的な実施態様では、（Ｂ）及び（Ｇ）の工程は、約１５分間、３０分間、４５分間、６０分間、７５分間又は９０分間行われる。一部の実施態様では、（Ｂ）及び（Ｇ）の工程は、約４５分間行われる。ある特定の実施態様では、（Ｅ）の工程は、（Ｄ）の工程の期間の後に行われ、これは、干渉する短命のバックグランドシグナルの減少をもたらし、（Ｊ）の工程は、（Ｊ）の工程の同じ期間の後に行われる。ある特定の実施態様では、（Ａ）−（Ｅ）の工程は、複数由来のＤ因子阻害剤候補毎に実行される。
【０４４５】
ある特定の実施態様では、Ｄ因子阻害剤をスクリーニングする方法において使用される抗Ｂａ因子抗体及び抗Ｂｂ因子抗体は、Ｄ因子の活性をクエンチする。かかる実施態様では、特に別のクエンチャーを添加する必要が取り除かれる。ある特定の実施態様では、Ｄ因子阻害剤をスクリーニングする方法は、（ｃ）の工程の前に、過剰量のクエンチャーを試料に与えることにより、試料におけるＤ因子の活性をクエンチする工程をさらに含む。コントロール試料が使用される場合、ある特定の実施態様では、Ｄ因子阻害剤をスクリーニングする方法は、（ｃ）の工程の前に、過剰量のクエンチャーを試料に与えることにより、試料におけるＤ因子の活性をクエンチする工程と、（ｇ）の工程の前に、過剰量のクエンチャーをコントロール試料に与えることにより、コントロール試料におけるＤ因子の活性をクエンチする工程とをさらに含む。具体的な実施態様では、クエンチャーは、Ｄ因子阻害剤（例えば、抗Ｄ因子抗体又は過剰量のＥＤＴＡ）である。
【０４４６】
ある特定の実施態様では、抗Ｂａ因子抗体は、ビオチン化され、第１の部分は、ストレプトアビジン、アビジン又はニュートラアビジンを含む。一部の実施態様では、抗Ｂａ因子抗体は、ビオチン化され、第１の部分は、ストレプトアビジンを含む。ある特定の実施態様では、抗Ｂｂ因子抗体は、ビオチン化され、第２の部分は、ストレプトアビジン、アビジン又はニュートラアビジンを含む。一部の実施態様では、抗Ｂｂ因子抗体は、ビオチン化され、第２の部分は、ストレプトアビジンを含む。
【０４４７】
他の様々な実施態様では、Ｄ因子阻害剤をスクリーニングする方法は、（ａ）被験反応混合物においてＤ因子阻害剤候補をＤ因子、Ｂ因子及びＣ３ｂ因子と混合することと、（ｂ）被験反応混合物をインキュベートすることと、（ｃ）（ｂ）の工程の後に、被験反応混合物に、第１の部分で標識された抗Ｃ３ｂ因子抗体及び第２の部分で標識された抗Ｂａ因子抗体を添加することであって、これらの部分の一方がドナーであり、他方がアクセプターであり、アクセプター及び／又はドナーによって生じた近接シグナルが、Ｃ３ｂ因子及びＢａ因子が近接していることを指し示すことと、（ｄ）被験反応混合物由来の近接シグナルの値を測定することとを含み、Ｄ因子候補によるＤ因子活性阻害の程度が、近接シグナルの値と正に相関する。ある特定の実施態様では、（ａ）−（ｄ）の工程は、複数由来のＤ因子阻害剤候補毎に実行される。
【０４４８】
かかる他の様々な実施態様のある特定の態様では、Ｄ因子阻害剤をスクリーニングする方法は、（ｅ）コントロール反応混合物を混合することと、（ｆ）コントロール反応混合物をインキュベートすることと、（ｇ）（ｆ）の工程の後に、コントロール反応混合物に、第１の部分で標識された抗Ｃ３ｂ因子抗体及び第２の部分で標識された抗Ｂａ因子抗体を添加することと、（ｈ）コントロール被験反応混合物由来の近接シグナルの値を測定することとをさらに含み、コントロール反応混合物と比べて被験反応混合物由来の近接シグナルの値がより大きいこと（例えば、約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％大きい若しくはこれを超える、又は約１倍、１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍大きい若しくはこれを超える）が、コントロール反応混合物と比べて被験反応混合物におけるＤ因子阻害剤候補によるＤ因子活性の阻害がより大きいことを指し示す。
【０４４９】
ドナー及び／又はアクセプターによって生じる近接シグナルが、光活性化によるドナー及びアクセプターの間のエネルギー移動に基づく場合、様々な実施態様では、Ｄ因子阻害剤をスクリーニングする方法は、（Ａ）被験反応混合物においてＤ因子阻害剤候補をＤ因子、Ｂ因子及びＣ３ｂ因子と混合することと、（Ｂ）被験反応混合物をインキュベートすることと、（Ｃ）（Ｂ）の工程の後に、被験反応混合物に、第１の部分で標識された抗Ｃ３ｂ因子抗体及び第２の部分で標識された抗Ｂａ因子抗体を添加することであって、これらの部分の一方がドナーであり、他方がアクセプターであることと、（Ｄ）光源を与えて、被験反応混合物におけるドナーを励起することと、（Ｅ）被験反応混合物由来のドナー蛍光放出強度及び／又は被験反応混合物由来のアクセプター蛍光放出強度を測定することとを含み、Ｄ因子候補によるＤ因子活性阻害の程度が、被験反応混合物由来のドナー蛍光放出強度と負に相関し、且つ／又は被験反応混合物由来のアクセプター蛍光放出強度と正に相関する。具体的な実施態様では、（Ｂ）の工程は、約１５分間、３０分間、４５分間、６０分間、７５分間又は９０分間行われる。一部の実施態様では、（Ｂ）の工程は、約４５分間行われる。ある特定の実施態様では、（Ｅ）の工程は、（Ｄ）の工程の期間の後に行われ、これは、干渉する短命のバックグランドシグナルの減少をもたらす。具体的な実施態様では、Ｄ因子阻害剤をスクリーニングする方法は、（Ｆ）コントロール反応混合物を混合することと、（Ｇ）コントロール反応混合物をインキュベートすることと、（Ｈ）（Ｇ）の工程の後に、コントロール反応混合物に、第１の部分で標識された抗Ｃ３ｂ因子抗体及び第２の部分で標識された抗Ｂａ因子抗体を添加することと、（Ｉ）前記光源を与えて、コントロール反応混合物におけるドナーを励起することと、（Ｊ）コントロール反応混合物由来のドナー蛍光放出強度及び／又はコントロール反応混合物由来のアクセプター蛍光放出強度を測定することとをさらに含み、コントロール反応混合物と比べてより低い被験反応混合物由来のドナー蛍光放出強度及び／又はコントロール反応混合物と比べてより高い被験反応混合物由来のアクセプター蛍光放出強度が、コントロール反応混合物と比べて被験反応混合物におけるＤ因子阻害剤候補によるＤ因子活性の阻害がより大きいことを指し示す。具体的な実施態様では、（Ｂ）及び（Ｇ）の工程は、約１５分間、３０分間、４５分間、６０分間、７５分間又は９０分間行われる。一部の実施態様では、（Ｂ）及び（Ｇ）の工程は、約４５分間行われる。ある特定の実施態様では、（Ｅ）の工程は、（ｄ）の工程の期間の後に行われ、これは、干渉する短命のバックグランドシグナルの減少をもたらし、（Ｊ）の工程は、（Ｉ）の工程の同じ期間の後に行われる。ある特定の実施態様では、（Ａ）−（Ｅ）の工程は、複数由来のＤ因子阻害剤候補毎に実行される。
【０４５０】
ある特定の実施態様では、抗Ｃ３ｂ因子抗体及び抗Ｂａ因子抗体が使用される場合、抗Ｃ３ｂ因子抗体は、ビオチン化され、第１の部分は、ストレプトアビジン、アビジン又はニュートラアビジンを含む。一部の実施態様では、抗Ｃ３ｂ因子抗体は、ビオチン化され、第１の部分は、ストレプトアビジンを含む。ある特定の実施態様では、抗Ｂａ因子抗体は、ビオチン化され、第２の部分は、ストレプトアビジン、アビジン又はニュートラアビジンを含む。一部の実施態様では、抗Ｂａ因子抗体は、ビオチン化され、第２の部分は、ストレプトアビジンを含む。
【０４５１】
ある特定の実施態様では、抗Ｃ３ｂ因子抗体及び抗Ｂａ因子抗体が使用される場合、Ｄ因子阻害剤をスクリーニングする方法において使用される抗Ｃ３ｂ因子抗体及び抗Ｂａ因子抗体は、Ｄ因子の活性をクエンチする。かかる実施態様では、特に別のクエンチャーを添加する必要が取り除かれる。ある特定の実施態様では、抗Ｃ３ｂ因子抗体及び抗Ｂａ因子抗体が使用される場合、Ｄ因子阻害剤をスクリーニングする方法は、（ｃ）の工程の前に、過剰量のクエンチャーを試料に与えることにより、試料におけるＤ因子の活性をクエンチする工程をさらに含む。コントロール試料が使用される場合、ある特定の実施態様では、Ｄ因子阻害剤をスクリーニングする方法は、（ｃ）の工程の前に、過剰量のクエンチャーを試料に与えることにより、試料におけるＤ因子の活性をクエンチする工程と、（ｇ）の工程の前に、過剰量のクエンチャーをコントロール試料に与えることにより、コントロール試料におけるＤ因子の活性をクエンチする工程とをさらに含む。具体的な実施態様では、クエンチャーは、Ｄ因子阻害剤（例えば、抗Ｄ因子抗体又は過剰量のＥＤＴＡ）である。
【０４５２】
コントロール反応混合物は、例えば、既知の力価（例えば、１００％力価）を有する異なるＤ因子阻害剤を含むことができる、又はＤ因子阻害剤を含まないが、被験反応混合物と本質的に同じであるその他全てを含有する。具体的な実施態様では、１を超えるコントロール反応混合物が、本明細書に記載されている方法において使用される。ある特定の実施態様では、コントロール反応混合物を測定する必要がなく、Ｄ因子阻害剤をスクリーニングするために、検量線が作成された。
【０４５３】
ドナー／アクセプターペアは、当該技術分野で公知の又はセクション５．１に記載の何れかであり得る。
【０４５４】
Ｄ因子阻害剤候補は、Ｄ因子の活性を低下又はブロックすることができる何れかの医薬剤であり得る。具体的な実施態様では、Ｄ因子阻害剤候補は、抗体又はその抗原結合性断片、例えば、Ｄ因子に結合する抗体又はその抗原結合性断片である。具体的な実施態様では、抗体は、二重特異性抗体である。具体的な実施態様では、Ｄ因子阻害剤候補は、小分子阻害剤である。具体的な実施態様では、Ｄ因子阻害剤候補は、ヌクレオチド（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、アンチセンスＤＮＡ）である。具体的な実施態様では、Ｄ因子阻害剤候補は、Ｄ因子に結合するペプチド、タンパク質、ペプチドミメティック、アプタマー又は他の何れかの分子である。
【０４５５】
上に記載されているＤ因子阻害剤をスクリーニングする方法において、抗Ｂａ因子、抗Ｂｂ因子及び／又は抗Ｃ３ｂ因子は、それぞれＢａ因子、Ｂｂ因子若しくは抗Ｃ３ｂ因子に結合するペプチド、非抗体タンパク質、ペプチドミメティック（memetic）、アプタマー、ヌクレオチド（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、アンチセンスＤＮＡ）又は他の何れかの分子によって置き換えることができる。或いは、Ｂａ因子、Ｂｂ因子及び／又はＣ３ｂ因子は、（場合によっては）直接的化学標識によって、ドナー又はアクセプターに取り付けることができる。
【０４５６】
本明細書に記載されているＤ因子阻害剤をスクリーニングする方法の具体的な実施態様では、Ｄ因子は、組換えにより発現されたＤ因子である。本明細書に記載されているＤ因子阻害剤をスクリーニングする方法の具体的な実施態様では、Ｄ因子は、対象に由来する試料から精製された、内因的に発現されたＤ因子である。
【０４５７】
本明細書に記載されているＤ因子阻害剤をスクリーニングする方法の具体的な実施態様では、Ｂ因子は、組換えにより発現されたＢ因子である。本明細書に記載されているＤ因子阻害剤をスクリーニングする方法の具体的な実施態様では、Ｂ因子は、対象に由来する試料から精製された、内因的に発現されたＢ因子である。
【０４５８】
本明細書に記載されている方法において参照されている用語「試料」は、血液試料又は血清試料であり得るが、これらに限定されない。
【０４５９】
本明細書に記載されている方法において参照されている対象は、ヒト、又は野生動物、飼育動物若しくは家畜等の非ヒト脊椎動物であり得るが、これらに限定されない。ある特定の実施態様では、対象は、哺乳類、例えば、ヒト、ウシ、イヌ、ネコ、ヤギ、ウマ、ヒツジ、ブタ、ラット又はマウスである。好まれる実施態様では、対象は、ヒトである。
【０４６０】
５．６．キット
別の態様では、Ｄ因子活性を測定するため、Ｄ因子阻害剤力価を決定するため、及び／又はＤ因子阻害剤をスクリーニングするためのキットが、本明細書に提供される。本明細書に記載されているキットは、必要に応じて上に記載されている何れかの方法に従って使用することができる。
【０４６１】
様々な実施態様では、本キットは、抗Ｂａ因子抗体、抗Ｂｂ因子抗体、第１の部分及び第２の部分を含み、（ａ）抗Ｂａ因子抗体は、第１の部分で標識されており又は標識され得、抗Ｂｂ因子抗体は、第２の部分で標識されており又は標識され得、かつ（ｂ）これらの部分の一方がドナーであり、他方の部分がアクセプターである。本キットを使用する場合、具体的な実施態様では、近接シグナルは、ドナー及び／又はアクセプターによって生じることができ、これは、アクセプター及びドナーが近接していることを指し示す。
【０４６２】
ドナー及び／又はアクセプターによって生じる近接シグナルが、光活性化によるドナー及びアクセプターの間のエネルギー移動に基づく場合、様々な実施態様では、本キットは、抗Ｂａ因子抗体、抗Ｂｂ因子抗体、第１の部分及び第２の部分を含み、（ａ）抗Ｂａ因子抗体は、第１の部分で標識されており又は標識され得、抗Ｂｂ因子抗体は、第２の部分で標識されており又は標識され得、かつ（ｂ）これらの部分の一方がドナーであり、他方の部分がアクセプターである。本キットを使用する場合、具体的な実施態様では、光源による励起により、ベースラインレベルよりも高いアクセプター蛍光放出強度及びドナー蛍光放出強度の間の比は、ドナー及びアクセプターが近接していることを指し示す（ここでのベースラインレベルは、アクセプター及びドナーが離れている（例えば、１０ｎｍ、２０ｎｍ、５０ｎｍ、１００ｎｍ又は２００ｎｍを超えて離れている）場合の、アクセプターの蛍光放出強度及びドナーの蛍光放出強度の間の比である）。
【０４６３】
具体的な実施態様では、抗Ｂａ因子抗体は、ビオチン化され、第１の部分は、ストレプトアビジン、アビジン又はニュートラアビジンを含む。一部の実施態様では、抗Ｂａ因子抗体は、ビオチン化され、第１の部分は、ストレプトアビジンを含む。ある特定の実施態様では、抗Ｂｂ因子抗体は、ビオチン化され、第２の部分は、ストレプトアビジン、アビジン又はニュートラアビジンを含む。一部の実施態様では、抗Ｂｂ因子抗体は、ビオチン化され、第２の部分は、ストレプトアビジンを含む。
【０４６４】
具体的な実施態様では、抗Ｂａ因子抗体及び／又は抗Ｂｂ因子抗体は、固体表面に固定化されている。具体的な実施態様では、固体表面は、プレート、マイクロプレート、チップ、膜又はビーズである。
【０４６５】
他の様々な実施態様では、本キットは、抗Ｃ３ｂ因子抗体、抗Ｂａ因子抗体、第１の部分及び第２の部分を含み、（ａ）抗Ｃ３ｂ因子抗体は、第１の部分で標識されており又は標識され得、抗Ｂａ因子抗体は、第２の部分で標識されており又は標識され得、かつ（ｂ）これらの部分の一方がドナーであり、他方の部分がアクセプターである。本キットを使用する場合、具体的な実施態様では、近接シグナルは、ドナー及び／又はアクセプターによって生じることができ、これは、アクセプター及びドナーが近接していることを指し示す。
【０４６６】
ドナー及び／又はアクセプターによって生じる近接シグナルが、光活性化によるドナー及びアクセプターの間のエネルギー移動に基づく場合、様々な実施態様では、本キットは、抗Ｃ３ｂ因子抗体、抗Ｂａ因子抗体、第１の部分及び第２の部分を含み、（ａ）抗Ｃ３ｂ因子抗体は、第１の部分で標識されており又は標識され得、抗Ｂａ因子抗体は、第２の部分で標識されており又は標識され得、かつ（ｂ）これらの部分の一方がドナーであり、他方の部分がアクセプターである。本キットを使用する場合、具体的な実施態様では、光源による励起により、ベースラインレベルよりも高いアクセプター蛍光放出強度及びドナー蛍光放出強度の間の比は、ドナー及びアクセプターが近接していることを指し示す（ここでのベースラインレベルは、アクセプター及びドナーが離れている（例えば、１０ｎｍ、２０ｎｍ、５０ｎｍ、１００ｎｍ又は２００ｎｍを超えて離れている）場合の、アクセプターの蛍光放出強度及びドナーの蛍光放出強度の間の比である）。
【０４６７】
具体的な実施態様では、抗Ｃ３ｂ因子抗体は、ビオチン化され、第１の部分は、ストレプトアビジン、アビジン又はニュートラアビジンを含む。一部の実施態様では、抗Ｃ３ｂ因子抗体は、ビオチン化され、第１の部分は、ストレプトアビジンを含む。ある特定の実施態様では、抗Ｂａ因子抗体は、ビオチン化され、第２の部分は、ストレプトアビジン、アビジン又はニュートラアビジンを含む。一部の実施態様では、抗Ｂａ因子抗体は、ビオチン化され、第２の部分は、ストレプトアビジンを含む。
【０４６８】
具体的な実施態様では、抗Ｃ３ｂ因子抗体及び／又は抗Ｂａ因子抗体は、固体表面に固定化されている。具体的な実施態様では、固体表面は、プレート、マイクロプレート、チップ、膜又はビーズである。
【０４６９】
ある特定の実施態様では、本明細書に記載されているキットは、既知のＤ因子活性を有するコントロール試料をさらに含む。
【０４７０】
ある特定の実施態様では、本明細書に記載されているキットは、Ｄ因子活性を阻害する既知の力価（例えば、１００％力価）を有するコントロールＤ因子阻害剤をさらに含む。ある特定の実施態様では、本キットは、Ｄ因子阻害剤を含有しないコントロール試料をさらに含む。
【０４７１】
ある特定の実施態様では、本明細書に記載されているキットは、クエンチャーをさらに含む。具体的な実施態様では、クエンチャーは、Ｄ因子阻害剤（例えば、抗Ｄ因子抗体又は過剰量のＥＤＴＡ）である。
【０４７２】
具体的な実施態様では、本キットは、組換えにより発現されたＢ因子をさらに含む。具体的な実施態様では、本キットは、対象に由来する試料から精製された、内因的に発現されたＢ因子をさらに含む。
【０４７３】
具体的な実施態様では、本キットは、組換えにより発現されたＤ因子をさらに含む。具体的な実施態様では、本キットは、対象に由来する試料から精製された、内因的に発現されたＤ因子をさらに含む。
【０４７４】
本明細書に記載されているキットにおいて参照されている用語「試料」は、血液試料又は血清試料であり得るが、これらに限定されない。
【０４７５】
本明細書に記載されているキットにおいて参照されている対象は、ヒト、又は野生動物、飼育動物若しくは家畜等の非ヒト脊椎動物であり得るが、これらに限定されない。ある特定の実施態様では、対象は、哺乳類、例えば、ヒト、ウシ、イヌ、ネコ、ヤギ、ウマ、ヒツジ、ブタ、ラット又はマウスである。好まれる実施態様では、対象は、ヒトである。
【０４７６】
ドナー／アクセプターペアは、当該技術分野で公知の又はセクション５．１に記載のいずれかであり得る。
【０４７７】
本キットの個々の成分（例えば、抗Ｂａ因子抗体、抗Ｂｂ因子抗体、第１の部分、第２の部分、クエンチャー、コントロール）は、一又は複数の容器内に包装され得る。一部の実施態様では、各成分は、それ自身の容器内に包装される。一部の実施態様では、本キットが、抗Ｂａ因子抗体及び抗Ｂｂ因子抗体を含む場合、抗Ｂａ因子抗体及び第１の部分は、１個の容器内に包装される。一部の実施態様では、本キットが、抗Ｂａ因子抗体及び抗Ｂｂ因子抗体を含む場合、抗Ｂｂ因子抗体及び第２の部分は、１個の容器内に包装される。一部の実施態様では、本キットが、抗Ｃ３ｂ因子抗体及び抗Ｂａ因子抗体を含む場合、抗Ｃ３ｂ因子抗体及び第１の部分は、１個の容器内に包装される。一部の実施態様では、本キットが、抗Ｃ３ｂ因子抗体及び抗Ｂａ因子抗体を含む場合、抗Ｂａ因子抗体及び第２の部分は、１個の容器内に包装される。一又は複数の容器は、ボトル（複数可）、バイアル（複数可）、チューブ（複数可）、プレート（複数可）及び／又はマイクロプレート（複数可）を含むことができる。具体的な実施態様では、本キットは、本キットの使用説明書をさらに含む。
【実施例】
【０４７８】
６．実施例
次に示すこの非限定的な実施例は、近接に基づく測定アッセイが、Ｄ因子活性及びＤ因子阻害剤力価を測定するための望ましい方法であることを実証する。
【０４７９】
６．１．序文
Ｄ因子活性は、副補体経路の活性化における重要なドライバーとして同定された。
【０４８０】
ランパリズマブは、補体成分Ｄ因子に対して作製されたＦａｂである（Katsche等、2012, J Biol Chem 287:12886-12892）。Ｄ因子は、補体副経路の活性化における律速酵素である、高度に特異的なキモトリプシン様セリンプロテアーゼである（Katsche等、2012, J Biol Chem 287:12886-12892）。Ｄ因子の基質は、別の副補体経路セリンプロテアーゼのＢ因子である。Ｃ３ｂ因子は、Ｂ因子に結合し；次いで、Ｄ因子は、Ｂ因子をＢａ因子及びＢｂ因子へと切断する（Volanakis及びNarayana, 1996, Protein Sci 5:553-564）。Ｂｂ因子は、Ｃ３ｂ因子に結合したままとなり、副補体経路を惹起する活性Ｃ３コンバターゼを形成する。副補体経路の活性化増加は、加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）の発症に関連する、ブルッフ膜上に存在する細胞傷害性沈着物であるドルーゼンにおいて見出された（Damico等、2012, Arq Bras Oftalmol 75:71-75）。
【０４８１】
ランパリズマブは、Ｂ因子のＤ因子媒介性切断を阻害し、副経路活性化を予防し、これにより、活性化された補体成分の炎症及び細胞傷害活性を阻害する（Tanhehco, 1999, Transplant Proc 31:2168-2171）。
【０４８２】
副補体経路の活性化は典型的に、ウサギ赤血球にヒト血清を添加することにより測定される。次に、インタクトな赤血球及び細胞デブリが遠心分離によってペレットにされ、上清へのヘモグロビンの放出から生じる４１２ｎｍにおける吸光度を測定することにより溶解が決定される。
【０４８３】
時間分解フェルスターエネルギー共鳴移動（即ち、蛍光共鳴エネルギー移動、ＦＲＥＴ）を使用してＢ因子の切断を測定することにより、Ｄ因子酵素活性を測定するための代替方法を開発した。この方法を使用して、Ｄ因子に対して作製された中和Ｆａｂ断片の活性の特徴を明らかにした。このアッセイは、単純、均一であり、２から１２５ｎｇ／ｍＬの濃度範囲内の再現性のある用量応答曲線を示す。５％未満のアッセイ間ばらつき及び９７−１０４％の回収率により、このアッセイは、容認できる正確さ及び精度を実証し、酸化的ストレスに晒された抗Ｄ因子Ｆａｂ断片試料の分解性変化を検出することができ、品質管理における力価方法としての使用に適していることを示唆する。
【０４８４】
アッセイ開発及び最適化のための戦略、並びにアッセイの特徴づけの結果を下に示す。
【０４８５】
６．２．材料と方法
６．２．１．材料
次の試薬は、ＦＲＥＴ研究に使用した：ランパリズマブ、組換えヒトＤ因子、並びに抗Ｂａ因子及び抗Ｂｂ因子抗体は、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ（Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、ＣＡ）で作製された。補体Ｂ因子及び補体Ｃ３ｂ因子は、Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｔｙｌｅｒ、ＴＸ）から購入した。抗Ｂｂ因子のビオチン化は、Ｐｉｅｒｃｅ（Ｒｏｃｋｌａｎｄ、ＩＬ）から購入されたキットを使用して、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈで行われた。ストレプトアビジン−Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６４７、及びユーロピウムへの補体Ｂａ因子のカスタムコンジュゲーションは、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ、ＮＹ）によって提供された。
【０４８６】
次の試薬は、ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎアッセイに使用した：抗Ｂ因子抗体、補体Ｂ因子、Ｃ３ｂ因子及びＤ因子、並びに抗Ｄ因子抗体は、上に記載されている通りである。ストレプトアビジン被覆ドナービーズ及びアクセプタービーズは、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ（Ｗａｌｔｈａｍ、Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ）から購入した。
【０４８７】
次の試薬は、溶血アッセイに使用した：ウサギ赤血球は、Ｃｏｌｏｒａｄｏ  Ｓｅｒｕｍ（Ｄｅｎｖｅｒ、ＣＯ）から購入した。ベロナールバッファー及びゼラチンは、Ｌｏｎｚａ（Ａｌｌｅｎｄａｌｅ、ＮＪ）から購入した。Ｃ１ｑ枯渇ヒト血清は、Ｑｕｉｄｅｌ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）から購入した。
【０４８８】
６．２．２．Ｂ因子切断アッセイ手順
図１は、ランパリズマブＴＲ−ＦＲＥＴ（時間分解ＦＲＥＴ）アッセイのためのアッセイ模式図を示す。全試薬を酵素反応バッファー（７５ｍＭ塩化ナトリウム、１ｍＭ塩化マグネシウム、２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ、０．００５％Ｔｗｅｅｎ  ２０、ｐＨ７．３）中に調製した。参照及び試料ランパリズマブを用量設定した。Ｄ因子を１２．５ｎｇ／ｍＬとなるよう希釈し、ランパリズマブ用量設定物を希釈されたＤ因子と１：１添加した。補体Ｂ因子及び補体Ｃ３ｂ因子をそれぞれ１μｇ／ｍＬ及び７μｇ／ｍＬとなるよう希釈し、１：１混合した。ウェル当たり５０μＬのランパリズマブ／Ｄ因子混合物を、Ｇｒｅｉｎｅｒ（Ｍｏｎｒｏｅ、ＮＣ）製の非結合９６ウェルプレートに添加し、続いて５０μＬのＢ因子／Ｃ３ｂ因子混合物を添加し、プレートを２５Ｃで穏やかに撹拌しつつ４５分間インキュベートした。これらの試薬の作業濃度をＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎによって決定した（データ図示せず）。５０μＬの検出混合物（１．２μｇ／ｍＬビオチン化抗Ｂｂ因子、４．０ｎＭ抗Ｂａ因子−ユーロピウム及び２５ｎＭストレプトアビジン−Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６４７）を添加し、プレートを２５Ｃで穏やかに撹拌しつつ１時間インキュベートした。ＨＴＲＦカートリッジを備えるＰａｒａｄｉｇｍプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ、Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ、ＣＡ）において、ユーロピウムの励起（３４０ｎｍ）並びにユーロピウム及びＡｌｅｘａ  ６４７フルオロフォアの放出（それぞれ６１５ｎｍ及び６６５ｎｍ）に適切なフィルターにより、ユーロピウム及びＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６４７蛍光シグナルを測定した。Ａｌｅｘａ  ６４７由来の蛍光をユーロピウムの蛍光で割り、１０，０００を掛けることにより、ＴＲ−ＦＲＥＴ比を決定した。４パラメータカーブフィッティングプログラム（Ｓｏｆｔｍａｘ  Ｐｒｏ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ、Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ、ＣＡ）を使用して、ランパリズマブのＴＲ−ＦＲＥＴ比を抗体濃度に対してプロットした。
【０４８９】
６．２．３．溶血アッセイ手順
副経路活性を決定するために、ウサギ赤血球（Ｅｒ）を、ゼラチンベロナールバッファー（ＧＶＢ）（ベロナールバッファーにおける０．１％ゼラチンであり、２×１０９／ｍｌとなるよう再懸濁した）において３回洗浄した。ランパリズマブ（５０μｌ）及び２０μｌのＥｒ懸濁液を、ＧＶＢ／０．１Ｍ  ＥＧＴＡ／０．１Ｍ  ＭｇＣｌ２と１：１混合した。Ｃ１ｑ枯渇ヒト血清（Ｑｕｉｄｅｌ；３０μｌ、ＧＶＢにおいて１：３希釈）の添加により補体活性化を惹起した。室温での３０分間のインキュベーション後に、２００μｌ  ＧＶＢ／１０ｍＭ  ＥＤＴＡを添加して反応を停止し、試料を５分間５００ｇで遠心分離した。４１２ｎｍにおける吸光度を測定することにより、２００μｌ上清において溶血を定量化した。阻害剤の非存在下で誘導された溶血の％としてデータを表現した。
【０４９０】
６．３．結果
６．３．１．Ｂ因子切断の検出のための条件の最適化
ＴＲ−ＦＲＥＴアッセイのシグナルを最適化するために、変動濃度のストレプトアビジン−Ａｌｅｘａ−Ｆｌｕｏｒ  ６４７及び抗Ｂａ因子−ユーロピウムを、固定濃度の他の試薬と共に解析し、次いでセクション６．１に記載されている通りにアッセイを行った。図２は、ストレプトアビジン−Ａｌｅｘａ−Ｆｌｕｏｒ  ６４７及び抗Ｂａ因子−ユーロピウムの、この同時用量設定を示す。最適なシグナルをもたらした作業濃度のストレプトアビジン−Ａｌｅｘａ−Ｆｌｕｏｒ  ６４７及び抗Ｂａ因子−ユーロピウムは、それぞれ４．０ｎＭ抗Ｂａ因子−ユーロピウム及び２５ｎＭストレプトアビジン−Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６４７であった。
【０４９１】
抗Ｂａ因子及び抗Ｂｂ因子検出試薬を、Ｄ因子によるＢ因子の切断を阻害するこれらの能力について検査した。図３は、酵素反応の開始前から検出試薬が添加された場合（ｔ＝０）、Ｄ因子の活性が大幅に縮小され、時間増加と共に増加したことを示す。ｔ＝０に見られた少量の活性は、抗Ｂａ因子及び抗Ｂｂ因子によるＤ因子の不完全な不活性化によるものである可能性があり、この実験を行うには延長された時間量が必要とされた。４５分間の酵素インキュベーション時間が、適切なシグナル及び確実な方法の実行をもたらすと決定された。
【０４９２】
次に、検出試薬によるインキュベーションを最適化した。検出試薬によるインキュベーションが１０−１２０分間変動された以外は、セクション６．２に記載されている通りにアッセイを行った。図４から分かる通り、６０分間の検出試薬インキュベーションは、適切なシグナル及び確実な方法の実行をもたらした。
【０４９３】
代替検出試薬を使用して、Ｂ因子の切断を測定することが可能であることを実証するために、ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ試薬を使用してアッセイを行った。ストレプトアビジンコンジュゲートされたアルファドナービーズ及び抗Ｂａ因子コンジュゲートされたアルファアクセプタービーズを、ＴＲ−ＦＲＥＴ試薬の代わりとした。図５Ａ及び図５Ｂは、両方の検出技術が、優れたシグナル及びダイナミックレンジを生じたことを示す。
【０４９４】
６．３．２．抗Ｄ因子ＴＲ−ＦＲＥＴアッセイの特徴づけ
最終アッセイフォーマットを使用して、本出願人らは、精度及び正確さの初期評価の研究を行うことにより、アッセイの特徴をさらに明らかにした。簡潔に説明すると、それぞれ０．５ｍｇ／ｍＬの標的濃度の６０、８０、１００及び１２０及び１４０％に対応する、０．３、０．４、０．５、０．６及び０．７ｍｇ／ｍＬの名目上の濃度となるよう抗Ｄ因子を希釈した。これらの希釈物のタンパク質濃度をＵＶ分光光度的スキャンによって正確に決定したところ、０．３０７、０．３８１、０．５１２、０．５９７、０．７２２ｍｇ／ｍＬであると決定された。各試料をその後、酵素反応バッファーにおいてさらに希釈し、セクション６．１に記載されている通りに検査した。アッセイ毎に新たな試料及び参照希釈物を使用して、各試料を１２回アッセイした（２名の異なる分析者によって各６回）。
【０４９５】
アッセイの精度を評価するために、測定された活性を予想される活性で割り、パーセンテージ回収率として表現した。表１０は、６０、７９、１００、１２０及び１３９％の平均活性が得られたことを示す。これは、９７−１０４％に及ぶパーセンテージ回収率を表す。変動係数（ＣＶ）によって指し示されるアッセイ間ばらつきは、５％未満であった。
【０４９６】
これらのデータは、アッセイが、親和性の差に対して感受性があることを強く示唆する。
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【０４９７】
ストレスに晒されたランパリズマブ試料の活性の変化を検出するＢ因子切断アッセイの能力を評価した。上に記載されている方法に従って３回のアッセイにおいて各試料を検査した。結果は、表１１に概要を述べる。酸化条件（３０ｍＭ  ＡＡＰＨ）に晒されたランパリズマブ試料は、９３％のコントロール値と比較して、６３％の活性低下を示した。
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【０４９８】
ストレス試料の活性を、ウサギ赤血球溶解アッセイも使用して測定して、この２方法の能力を比較した。この比較のデータは、表１１に示されており、Ｂ因子切断方法が、より正確であり、熱及び酸化的分解反応に対してより感受性があることを実証する。
【０４９９】
６．４．結論
ランパリズマブの活性は、Ｄ因子に結合し、その酵素活性を阻害するその能力に依存する。この種の活性は、Ｆａｂ断片とのインキュベーション後のウサギ赤血球細胞溶解をモニターすることにより、インビトロで測定することができる。本明細書に記載されているＴＲ−ＦＲＥＴアッセイは、代替補体経路の活性化における律速工程である、Ｄ因子に結合し、その酵素活性を阻害するランパリズマブの能力を測定する。この方法が、Ｄ因子活性の適した尺度として機能し得るか決定するために、この方法を、酸化的ストレスに晒されたランパリズマブの活性の変化を検出するその能力について評価し、この方法によって生じたデータを、より確立された溶血方法により生じたデータと比較した。ＴＲ−ＦＲＥＴアッセイは、酸化的ストレスに晒された抗Ｄ因子の活性の損失を検出することができる。ＴＲ−ＦＲＥＴアッセイを使用して得られた結果は、溶血方法よりも高い、ストレスに対する感受性を明らかにし、ＴＲ−ＦＲＥＴアッセイが、Ｄ因子活性の測定に適した方法であることを実証する。
【０５００】
７．参照による援用
特許、特許出願及び刊行物等、様々な参考文献が、本明細書に引用されており、これらの開示は、その全内容が、これにより本明細書に参照により援用されている。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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