(57)【要約】本開示は、ＩＬ２３Ａ及びＢＡＦＦに特異的な化合物、その化合物を含む組成物、及びその使用方法に関する。この化合物及び組成物に関連する核酸、細胞、及び作製方法もまた開示する。【選択図】図１Ａ
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドを含む化合物であって、
（Ａ）前記第１のポリペプチドは、
（ｉ）第１の標的タンパク質に特異的な第１の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメイン（ＶＬ１）；
（ｉｉ）第２の標的タンパク質に特異的な第２の免疫グロブリンの重鎖可変ドメイン（ＶＨ２）；ならびに
（ｉｉｉ）ヒンジ領域、重鎖定常領域２（ＣＨ２）、及び重鎖定常領域３（ＣＨ３）を含み、
（Ｂ）前記第２のポリペプチドは、
（ｉ）前記第２の標的タンパク質に特異的な第２の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメイン（ＶＬ２）；
（ｉｉ）前記第１の標的タンパク質に特異的な第１の免疫グロブリンの重鎖可変ドメイン（ＶＨ１）を含み、
前記化合物において、
ａ）前記ＶＬ１及びＶＨ１は会合して、前記第１の標的タンパク質に結合する結合部位を形成し、
ｂ）前記ＶＬ２及びＶＨ２は会合して、前記第２の標的タンパク質に結合する結合部位を形成し、
ｃ）前記重鎖定常領域２（ＣＨ２）は、Ｋａｂａｔと同様のＥＵインデックスによる番号の２５２位にチロシン、２５４位にスレオニン、２５６位にグルタミン酸を含み、
ｄ）前記第１の標的タンパク質がＢＡＦＦであり、前記第２の標的タンパク質がＩＬ−２３Ａであるか、または前記第１の標的タンパク質がＩＬ−２３Ａであり、前記第２の標的タンパク質がＢＡＦＦであり、
さらに前記化合物において、
（ｉ）前記ＶＬ１は配列番号２を含み、前記ＶＨ１は配列番号１を含み、前記ＶＬ２は配列番号４を含み、前記ＶＨ２は配列番号３を含むか、または
（ｉｉ）前記ＶＬ１は配列番号４を含み、前記ＶＨ１は配列番号３を含み、前記ＶＬ２は配列番号２を含み、前記ＶＨ２は配列番号１を含むか、または
（ｉｉｉ）前記ＶＬ１は配列番号８９を含み、前記ＶＨ１は配列番号８８を含み、前記ＶＬ２は配列番号４を含み、前記ＶＨ２は配列番号３を含むか、または
（ｉｖ）前記ＶＬ１は配列番号４を含み、前記ＶＨ１は配列番号３を含み、前記ＶＬ２は配列番号８９を含み、前記ＶＨ２は配列番号８８を含むか、または
（ｖ）前記ＶＬ１は配列番号９１を含み、前記ＶＨ１は配列番号９０を含み、前記ＶＬ２は配列番号４を含み、前記ＶＨ２は配列番号３を含むか、または
（ｖｉ）前記ＶＬ１は配列番号４を含み、前記ＶＨ１は配列番号３を含み、前記ＶＬ２は配列番号９１を含み、前記ＶＨ２は配列番号９０を含む、前記化合物。
【請求項２】
前記第１のポリペプチドがさらに前記ＶＬ１と前記ＶＨ２との間に第１のリンカーを含み、前記第２のポリペプチドがさらに前記ＶＬ２と前記ＶＨ１との間に第２のリンカーを含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
前記第１のリンカーまたは前記第２のリンカーが、アミノ酸配列ＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号６９）を含む、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
前記第１のリンカー及び前記第２のリンカーが、アミノ酸配列ＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号６９）を含む、請求項２に記載の化合物。
【請求項５】
前記第１のポリペプチドはさらに重鎖定常領域１ドメイン（ＣＨ１）を含み、前記第２のポリペプチドはさらに軽鎖定常領域ドメイン（ＣＬ）を含み、ここで前記ＣＬ及び前記ＣＨ１がジスルフィド結合によって共に会合され、Ｃ１ドメインを形成する、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
前記第１のポリペプチドがさらに前記ＶＨ２と前記ＣＨ１との間に第３のリンカーを含み、前記第２のポリペプチドがさらに前記ＶＨ１と前記ＣＬとの間に第４のリンカーを含む、請求項５に記載の化合物。
【請求項７】
前記第３のリンカーまたは前記第４のリンカーが、アミノ酸配列ＬＧＧＧＳＧ（配列番号７０）を含む、請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
前記第３のリンカー及び前記第４のリンカーが、アミノ酸配列ＬＧＧＧＳＧ（配列番号７０）を含む、請求項６に記載の化合物。
【請求項９】
前記重鎖定常領域２（ＣＨ２）が、Ｋａｂａｔと同様のＥＵインデックスによる番号の２３４位にアラニン、及び２３５位にアラニンを含む、先行請求項のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１０】
前記ヒンジ領域、前記重鎖定常領域２（ＣＨ２）、または前記重鎖定常領域３（ＣＨ３）の前記アミノ酸配列が、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４に由来する、先行請求項のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１１】
前記ヒンジ領域が、アミノ酸配列ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号７６）、アミノ酸配列ＬＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号１３０）、またはアミノ酸配列ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰ（配列番号１３４）を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１２】
前記化合物が２つの前記第１のポリペプチドと２つの前記第２のポリペプチドとを含み、前記２つの第１のポリペプチドが少なくとも１つのジスルフィド結合によって共に会合する、先行請求項のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１３】
請求項１に記載の化合物であって、
（ｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号８のアミノ酸配列を含むか、または
（ｉｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号９のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号１０のアミノ酸配列を含むか、または
（ｉｖ）前記第１のポリペプチドが配列番号１１のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号１２のアミノ酸配列を含むか、または
（ｖ）前記第１のポリペプチドが配列番号１３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号１４のアミノ酸配列を含むか、または
（ｖｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号１５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号１６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｖｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号１７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号１８のアミノ酸配列を含むか、または
（ｖｉｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号１９のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号２０のアミノ酸配列を含むか、または
（ｉｘ）前記第１のポリペプチドが配列番号３７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号３８のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘ）前記第１のポリペプチドが配列番号３９のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号４０のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号４１のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号４２のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号４３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号４４のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｉｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号４５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号４６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｉｖ）前記第１のポリペプチドが配列番号４７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号４８のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｖ）前記第１のポリペプチドが配列番号４９のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号５０のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｖｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号５１のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号５２のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｖｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号６１のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号６２のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｖｉｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号６３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号６４のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｉｘ）前記第１のポリペプチドが配列番号６５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号６６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘ）前記第１のポリペプチドが配列番号６７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号６８のアミノ酸配列を含む、前記化合物。
【請求項１４】
前記化合物が２つの前記第１のポリペプチドと２つの前記第２のポリペプチドとを含み、前記２つの第１のポリペプチドが少なくとも１つのジスルフィド結合によって共に会合し、かつ前記第１のポリペプチドのそれぞれが少なくとも１つのジスルフィド結合によって１つの前記第２のポリペプチドと会合する、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１５】
前記化合物が２つの前記第１のポリペプチドと２つの前記第２のポリペプチドとを含み、前記第１のポリペプチドのそれぞれがＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、及びＣＨ３を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれがＣＬを含み、ここで前記第１のポリペプチドのうち一方の前記ヒンジ、ＣＨ２、及びＣＨ３が、前記第１のポリペプチドのうち他方の前記ヒンジ、ＣＨ２、及びＣＨ３と会合し、前記第１のポリペプチドそれぞれのＣＨ１が、前記１つの第２のポリペプチドのＣＬと会合して、４価分子を形成する、請求項１３または１４に記載の化合物。
【請求項１６】
ＩＬ−２３Ａ及びＢＡＦＦへの結合を第２の化合物と競合する第１の化合物であって、前記第１の化合物が第３のポリペプチド及び第４のポリペプチドを含み、前記化合物において、
（Ａ）前記第３のポリペプチドは、
（ｉ）第１の標的タンパク質に特異的な第１の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメイン（ＶＬ１）；
（ｉｉ）第２の標的タンパク質に特異的な第２の免疫グロブリンの重鎖可変ドメイン（ＶＨ２）；ならびに
（ｉｉｉ）ヒンジ領域、重鎖定常領域２（ＣＨ２）、及び重鎖定常領域３（ＣＨ３）を含み、
（Ｂ）前記第４のポリペプチドは、
（ｉ）前記第２の標的タンパク質に特異的な第２の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメイン（ＶＬ２）；
（ｉｉ）前記第１の標的タンパク質に特異的な第１の免疫グロブリンの重鎖可変ドメイン（ＶＨ１）を含み、
さらに前記化合物において、
ａ）前記ＶＬ１及びＶＨ１は会合して、前記第１の標的タンパク質に結合する結合部位を形成し、
ｂ）前記ＶＬ２及びＶＨ２は会合して、前記第２の標的タンパク質に結合する結合部位を形成し、
ｃ）前記第１の標的タンパク質がＢＡＦＦであり、前記第２の標的タンパク質がＩＬ−２３Ａであるか、または前記第１の標的タンパク質がＩＬ−２３Ａであり、前記第２の標的タンパク質がＢＡＦＦであり、
さらにここで前記第２の化合物が第１のポリペプチドと第２のポリペプチドとを含み、
（ｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号８のアミノ酸配列を含むか、または
（ｉｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号９のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号１０のアミノ酸配列を含むか、または
（ｉｖ）前記第１のポリペプチドが配列番号１１のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号１２のアミノ酸配列を含むか、または
（ｖ）前記第１のポリペプチドが配列番号１３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号１４のアミノ酸配列を含むか、または
（ｖｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号１５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号１６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｖｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号１７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号１８のアミノ酸配列を含むか、または
（ｖｉｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号１９のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号２０のアミノ酸配列を含むか、または
（ｉｘ）前記第１のポリペプチドが配列番号３７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号３８のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘ）前記第１のポリペプチドが配列番号３９のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号４０のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号４１のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号４２のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号４３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号４４のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｉｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号４５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号４６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｉｖ）前記第１のポリペプチドが配列番号４７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号４８のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｖ）前記第１のポリペプチドが配列番号４９のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号５０のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｖｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号５１のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号５２のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｖｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号６１のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号６２のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｖｉｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号６３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号６４のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｉｘ）前記第１のポリペプチドが配列番号６５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号６６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘ）前記第１のポリペプチドが配列番号６７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号６８のアミノ酸配列を含む、前記化合物。
【請求項１７】
２つの第１のポリペプチドと２つの第２のポリペプチドとを含む化合物であって、前記２つの第１のポリペプチドが少なくとも１つのジスルフィド結合によって共に会合し、かつ前記第１のポリペプチドのそれぞれが少なくとも１つのジスルフィド結合によって１つの前記第２のポリペプチドと会合し、
前記第１のポリペプチドのそれぞれは、
（ｉ）第１の標的タンパク質に特異的な第１の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメイン（ＶＬ１）；
（ｉｉ）第２の標的タンパク質に特異的な第２の免疫グロブリンの重鎖可変ドメイン（ＶＨ２）；
（ｉｉｉ）重鎖定常領域１（ＣＨ１）、ヒンジ領域、重鎖定常領域２（ＣＨ２）、及び重鎖定常領域３（ＣＨ３）を含み、
前記第２のポリペプチドのそれぞれは、
（ｉ）前記第２の標的タンパク質に特異的な第２の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメイン（ＶＬ２）；
（ｉｉ）前記第１の標的タンパク質に特異的な第１の免疫グロブリンの重鎖可変ドメイン（ＶＨ１）、
（ｉｉｉ）軽鎖定常領域ドメイン（ＣＬ）を含み、
前記第１のポリペプチドのうち一方の前記ヒンジ、ＣＨ２、及びＣＨ３が、前記第１のポリペプチドのうち他方の前記ヒンジ、ＣＨ２、及びＣＨ３と会合し、前記第１のポリペプチドそれぞれのＣＨ１が、前記第２のポリペプチドそれぞれのＣＬと会合して、４価分子を形成し、
前記化合物において、
ａ）前記ＶＬ１及びＶＨ１は会合して、前記第１の標的タンパク質に結合する結合部位を形成し、
ｂ）前記ＶＬ２及びＶＨ２は会合して、前記第２の標的タンパク質に結合する結合部位を形成し、
ｃ）前記重鎖定常領域２（ＣＨ２）は、Ｋａｂａｔと同様のＥＵインデックスによる番号の２５２位にチロシン、２５４位にスレオニン、２５６位にグルタミン酸を含み、
ｄ）前記第１の標的タンパク質がＢＡＦＦであり、前記第２の標的タンパク質がＩＬ−２３Ａであるか、または前記第１の標的タンパク質がＩＬ−２３Ａであり、前記第２の標的タンパク質がＢＡＦＦであり、
さらに前記化合物において、
（ｉ）前記ＶＬ１は配列番号２を含み、前記ＶＨ１は配列番号１を含み、前記ＶＬ２は配列番号４を含み、前記ＶＨ２は配列番号３を含むか、または
（ｉｉ）前記ＶＬ１は配列番号４を含み、前記ＶＨ１は配列番号３を含み、前記ＶＬ２は配列番号２を含み、前記ＶＨ２は配列番号１を含むか、または
（ｉｉｉ）前記ＶＬ１は配列番号８９を含み、前記ＶＨ１は配列番号８８を含み、前記ＶＬ２は配列番号４を含み、前記ＶＨ２は配列番号３を含むか、または
（ｉｖ）前記ＶＬ１は配列番号４を含み、前記ＶＨ１は配列番号３を含み、前記ＶＬ２は配列番号８９を含み、前記ＶＨ２は配列番号８８を含むか、または
（ｖ）前記ＶＬ１は配列番号９１を含み、前記ＶＨ１は配列番号９０を含み、前記ＶＬ２は配列番号４を含み、前記ＶＨ２は配列番号３を含むか、または
（ｖｉ）前記ＶＬ１は配列番号４を含み、前記ＶＨ１は配列番号３を含み、前記ＶＬ２は配列番号９１を含み、前記ＶＨ２は配列番号９０を含む、前記化合物。
【請求項１８】
前記第１のポリペプチドのそれぞれが、前記ＶＬ１と前記ＶＨ２との間に第１のリンカーをさらに含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが、前記ＶＬ２と前記ＶＨ１との間に第２のリンカーをさらに含む、請求項１７に記載の化合物。
【請求項１９】
前記第１のリンカーまたは前記第２のリンカーが、アミノ酸配列ＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号６９）を含む、請求項１８に記載の化合物。
【請求項２０】
前記第１のリンカー及び前記第２のリンカーが、アミノ酸配列ＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号６９）を含む、請求項１８に記載の化合物。
【請求項２１】
前記第１のポリペプチドのそれぞれが、前記ＶＨ２と前記ＣＨ１との間に第３のリンカーをさらに含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが、前記ＶＨ１と前記ＣＬとの間に第４のリンカーをさらに含む、請求項１８に記載の化合物。
【請求項２２】
前記第３のリンカーまたは前記第４のリンカーが、アミノ酸配列ＬＧＧＧＳＧ（配列番号７０）を含む、請求項２１に記載の化合物。
【請求項２３】
前記第３のリンカー及び前記第４のリンカーが、アミノ酸配列ＬＧＧＧＳＧ（配列番号７０）を含む、請求項２１に記載の化合物。
【請求項２４】
前記重鎖定常領域２（ＣＨ２）が、Ｋａｂａｔと同様のＥＵインデックスによる番号の２３４位にアラニン、及び２３５位にアラニンを含む、請求項１７に記載の化合物。
【請求項２５】
前記ヒンジ領域、前記重鎖定常領域２（ＣＨ２）、または前記重鎖定常領域３（ＣＨ３）の前記アミノ酸配列が、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４に由来する、請求項１７に記載の化合物。
【請求項２６】
前記ヒンジ領域が、アミノ酸配列ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号７６）、アミノ酸配列ＬＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号１３０）、またはアミノ酸配列ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰ（配列番号１３４）を含む、請求項１７に記載の化合物。
【請求項２７】
請求項１７に記載の化合物であって、
（ｉ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｉｉ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号８のアミノ酸配列を含むか、または
（ｉｉｉ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号１３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号１４のアミノ酸配列を含むか、または
（ｉｖ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号１５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号１６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｖ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号３７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号３８のアミノ酸配列を含むか、または
（ｖｉ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号４１のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号４２のアミノ酸配列を含むか、または
（ｖｉｉ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号４５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号４６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｖｉｉｉ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号４９のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号５０のアミノ酸配列を含むか、または
（ｉｘ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号６１のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号６２のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号６３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号６４のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｉ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号６５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号６６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｉｉ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号６７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号６８のアミノ酸配列を含む、前記化合物。
【請求項２８】
請求項１〜２７のいずれか１項に記載の化合物を含む、医薬組成物。
【請求項２９】
請求項１〜２７のいずれか１項に記載の化合物または前記化合物を含む医薬組成物を対象に投与することを含む、自己免疫疾患または炎症性疾患の治療方法。
【請求項３０】
医療に使用される、請求項１〜２７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項３１】
前記使用が自己免疫疾患または炎症性疾患の治療である、請求項３０に記載の化合物。
【請求項３２】
医療に使用される、請求項１〜２７のいずれか１項に記載の化合物を含む、医薬組成物。
【請求項３３】
前記使用が自己免疫疾患または炎症性疾患の治療である、請求項３２に記載の医薬組成物。
【請求項３４】
請求項１〜２７のいずれか１項に記載のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸。
【請求項３５】
請求項３４に記載の核酸を含むベクター。
【請求項３６】
前記核酸に機能的に連結されたプロモーターをさらに含む、請求項３５に記載のベクター。
【請求項３７】
請求項３４に記載の核酸または請求項３５もしくは３６に記載のベクターを含む細胞。
【請求項３８】
請求項３７に記載の細胞を得ることと、前記核酸を前記細胞に発現させることとを含む、請求項１〜２７のいずれか１項に記載のポリペプチドを産生する方法。
【請求項３９】
前記ポリペプチドを単離して精製することをさらに含む、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記自己免疫疾患または炎症性疾患が、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、腎臓に関連する全身性エリテマトーデス／ループス腎炎（ＬＮ）、ＡＮＣＡ関連血管炎（ＡＡＶ）、原発性シェーグレン症候群（ｐＳＳ）、慢性移植片対宿主病（ｃＧＶＨＤ）、全身性強皮症（ＳＳｃ）、関節リウマチ（ＲＡ）、乾癬（Ｐｓ）、強直性脊椎炎（ＡＳ）、または乾癬性関節炎（ＰＡ）を含む、請求項２９に記載の方法、請求項３１に記載の化合物、または請求項３２に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１５年７月２３日出願の米国仮出願第６２／１９６，１７０号；２０１５年８月４日出願の同第６２／２０１，０６７号；及び２０１６年６月２７日出願の同第６２／３５５，３０２号、いずれも表題「ＣＯＭＰＯＵＮＤ  ＴＡＲＧＥＴＩＮＧ  ＩＬ−２３Ａ  ＡＮＤ  Ｂ−ＣＥＬＬ  ＡＣＴＩＶＡＴＩＮＧ  ＦＡＣＴＯＲ  （ＢＡＦＦ）  ＡＮＤ  ＵＳＥＳ  ＴＨＥＲＥＯＦ」に対する米国特許法１１９条に基づく出願日の利益を主張するものであり、それらすべての内容全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
炎症は、感染との戦いに必要とされる自然免疫応答及び適応免疫応答と関連する。しかしながら、炎症が抑制されない場合、自己免疫疾患または自己炎症疾患、神経変性疾患、さらには癌をも発症する可能性がある。ＩＬ１、ＢＡＦＦ、ＴＮＦ−α、ＩＬ６、ＩＬ１２、ＩＬ１７、ＩＬ１８、及びＩＬ２３などの炎症誘発性サイトカインは、炎症、及び免疫細胞を活性化する特異的経路に関与することが知られているが、これらのサイトカインの１つまたは複数の阻害によって、自己免疫疾患または自己炎症疾患を治療できるのか、またどのようにすれば治療できるのかは不明である。
【０００３】
インターロイキン２３（ＩＬ２３）は、２つのサブユニットｐ４０及びｐ１９からなるヘテロ二量体サイトカインである。ｐ１９サブユニットは、ＩＬ−２３Ａとも呼ばれている。ｐ１９サブユニットはＩＬ２３に特有のものであるが、ｐ４０サブユニットはサイトカインＩＬ１２と共通である。ＩＬ２３は、局所組織の炎症及び損傷をもたらすＩＬ１７、ＩＬ２２、及び他のサイトカインの産生を促進する病原性Ｔｈ１７、γδＴ、及び自然リンパ球（ＩＬＣ）の重要な調節物質として注目されている。ＩＬ２３はマトリックスメタロプロテアーゼＭＭＰ９の上方調節を促進し、血管新生を増加させ、ＣＤ８＋  Ｔ細胞の浸潤を減少させることから、癌性腫瘍の発生に関与するとされている。さらにＩＬ２３は、ＩＬ６及びＴＧＦβ１と連係して、ナイーブＣＤ４＋  Ｔ細胞を刺激し、Ｔｈ１７細胞に分化させる。分化に伴い、Ｔｈ１７細胞はＩＬ１７を産生するが、これは、Ｔ細胞プライミングを増強し、ＩＬ１、ＩＬ６、ＴＮＦ−α、ＮＯＳ−２などの炎症誘発性サイトカインの産生を刺激すると共に、炎症及び疾患の病因を引き起こすケモカインの発現も誘導する炎症誘発性サイトカインである。ＩＬ２３は、固有のサブユニットＩＬ２３Ｒと対となるＩＬ１２受容体のサブユニットＩＬ１２β１から構成される細胞表面受容体を介してその効果を発揮する。ＩＬ２３Ｒの発現は、免疫細胞の特異的集団に限定され、主にＴ細胞のサブセット（αβ及びγδＴＣＲ＋）及びＮＫ細胞に見出される。
【０００４】
マウスでは、ＩＬ２３ｐ１９遺伝子を遺伝子破壊すると、抗原特異的免疫グロブリンの産生低下及び遅延型過敏反応の障害を含む、Ｔ依存性免疫応答の重度不全を伴うＩＬ２３機能の選択的喪失をもたらす（Ｇｈｉｌａｒｄｉ  Ｎ，ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７２（５）：２８２７−３３）。ＩＬ２３ｐ４０もしくはＩＬ２３ｐ１９のいずれか、またはＩＬ２３受容体のいずれかのサブユニット（ＩＬ２３Ｒ及びＩＬ１２β１）を欠損しているノックアウトマウスは、多発性硬化症、関節炎、及び炎症性腸疾患の動物モデルにおいて症状の重篤度の低下を示す。同様の結果はＩＬ２３ｐ１９に特異的な抗体を用いたＥＡＥに確認されており、さらにＴ細胞媒介性大腸炎モデルでも、これらの疾患環境におけるＩＬ２３の役割が実証されている（Ｃｈｅｎ  Ｙ．  ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｔ．１１６（５）：１３１７−２６；Ｅｌｓｏｎ  ＣＯ．Ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  １３２（７）：２３５９−７０）。このことは、慢性炎症におけるＩＬ２３の重要性を浮き彫りにしている（Ｌａｎｇｏｗｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｎａｔｕｒｅ  ４４２（７１０１）：４６１−５；Ｋｉｋｌｙ  Ｋ，ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８（６）：６７０−５）。加えて、ＩＬ２３産生の上昇は、炎症性関節炎及び炎症性自己免疫疾患における主要な因子であることを意味する（Ａｄａｍｏｐｏｕｌｏｓ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８７：５９３−５９４；及びＬａｎｇｒｉｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２０１：２３３−２４０）。ＩＬ２３、その下流のサイトカインＩＬ２２、及び骨形成との関連性が、ＩＬ２３を過剰発現するマウスモデル系で報告されている（Ｓｈｅｒｌｏｃｋ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｎａｔ．Ｍｅｄ．１８：１０６９−７６）。
【０００５】
Ｂ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）リガンドスーパーファミリーに属するサイトカインであり、受容体ＢＡＦＦ−Ｒ（ＢＲ３）、ＴＡＣＩ（ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ  ａｃｔｉｖａｔｏｒ  ａｎｄ  ｃａｌｃｉｕｍ  ｍｏｄｕｌａｔｏｒ  ａｎｄ  ｃｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎ  ｌｉｇａｎｄ  ｉｎｔｅｒａｃｔｏｒ、膜貫通活性化因子及びカルシウム調節因子及びシクロフィリンリガンド相互作用因子）、及びＢＣＭＡ（Ｂ細胞成熟抗原）のリガンドとして作用する。ＢＡＦＦとその受容体との間の相互作用は、Ｂ細胞の形成及び維持に必須のシグナルを誘発し、それによりＢ細胞は外来物質による侵入に応答して免疫グロブリンを合成する。患者のＢＡＦＦレベルが適切であれば、正常な免疫レベルの維持に役立つが、レベルが不適切であれば免疫不全につながり、レベルが過剰であれば異常に高い抗体産生をもたらす可能性がある。患者が自己免疫性を示すと、自己の身体の組織または器官に対して抗体を産生する。紅斑性狼瘡及び関節リウマチを含む自己免疫疾患は、体内のＢＡＦＦレベルの過剰に起因する。したがって、これらの疾患を有する患者を治療するには、ＢＡＦＦの産生を調節することが重要である。
【０００６】
ＢＡＦＦは、膜結合（ｍｂＢＡＦＦ）、可溶性三量体ＢＡＦＦ（ｓＢＡＦＦ）、及び６０個のＢＡＦＦ単量体（ＢＡＦＦ６０量体）からなる多量体形態という３つの形態で存在し得る。様々な形態のＢＡＦＦが正常生理機能及び疾患生理機能に及ぼす相対的重要性は十分に解明されていない。上記のように、ＢＡＦＦは３つの受容体、ＢＡＦＦＲ（ＢＲ３）、ＴＡＣＩ、及びＢＣＭＡに結合する。ＴＮＦ受容体リガンドファミリーの関連メンバーである増殖誘導リガンド（ＡＰＲＩＬ）は、ＴＡＣＩ及びＢＣＭＡに高親和性で結合することが示されている。高親和性のＡＰＲＩＬ：ＢＣＭＡ相互作用とは対照的に、ＢＡＦＦ：ＢＣＭＡ相互作用は低親和性（１〜２μＭ）であり、ｉｎ  ｖｉｖｏで重要な役割を果たすとは考えられていない（Ｂｏｓｓｅｎ  ａｎｄ  Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ，２００６）。
【０００７】
可溶性ＢＡＦＦは、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）を有する個体、及び炎症を起こした腎臓などの標的器官に高レベルで発現する。可溶性ＢＡＦＦは、Ｂ細胞のホメオスタシス及び生存にとって重要な因子として作用する（Ｋａｌｌｅｄ  ｅｔ  ａｌ．，２００５；Ｍａｃｋａｙ  ｅｔ  ａｌ．，２００３；Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｒｏ，２００３；Ｐａｔｋｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００４）。ＢＡＦＦ依存性Ｂ細胞による自己抗体形成は、糸球体基底膜（ＧＢＭ）に始まり、近位尿細管上皮細胞（ＰＴＥＣ）内のメサンギウム及び間質組織へとＩＣの糸球体沈着を生じさせる。このようなＩＣ沈着は、補体結合及び好中球活性化を引き起こし、局所腎臓損傷をもたらす。損傷を受けた腎臓細胞（ＭＣ、ＰＴＥＣ、腎線維芽細胞、内皮細胞）によって産生される炎症性メディエーター（例えば、ＩＬ６、ＩＬ８、ＭＣＰ−１）は、免疫細胞（例えば、Ｂ細胞、Ｔ細胞、樹状細胞、好中球、及びマクロファージ）の浸潤を増加させることにより炎症サイクルを促進する。
【０００８】
抗ＢＡＦＦモノクローナル抗体ベリムマブ（Ｂｅｎｌｙｓｔａ（登録商標））は、自己抗体形成を減少させる能力が実証されており、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）患者に多大な利益をもたらしている。しかしながら、ＳＬＥ患者におけるベリムマブの有効性は、よくても中等度であり、改善の余地は十分にある（Ｆｕｒｉｅ  ｅｔ  ａｌ，２０１１）。したがって、自己免疫疾患または炎症性疾患を治療及び予防するための有効性が増強された新規組成物が依然として必要性とされている。さらに、より有効な治療法を特定することで、投与量の低減が可能となり、それに加えて治療関連コストも削減されるはずである。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本明細書では、ＢＡＦＦ及びＩＬ２３Ａに特異的な化合物、そのような化合物を含む組成物、ならびにその使用方法及び製造方法を提供する。
【００１０】
本開示の態様は、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドを含む化合物に関し、
（Ａ）前記第１のポリペプチドは、
（ｉ）第１の標的タンパク質に特異的な第１の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメイン（ＶＬ１）；
（ｉｉ）第２の標的タンパク質に特異的な第２の免疫グロブリンの重鎖可変ドメイン（ＶＨ２）；ならびに
（ｉｉｉ）ヒンジ領域、重鎖定常領域２（ＣＨ２）、及び重鎖定常領域３（ＣＨ３）を含み、
（Ｂ）前記第２のポリペプチドは、
（ｉ）前記第２の標的タンパク質に特異的な第２の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメイン（ＶＬ２）；
（ｉｉ）前記第１の標的タンパク質に特異的な第１の免疫グロブリンの重鎖可変ドメイン（ＶＨ１）を含み、
本化合物において、
ａ）前記ＶＬ１及びＶＨ１は会合して、前記第１の標的タンパク質に結合する結合部位を形成し、
ｂ）前記ＶＬ２及びＶＨ２は会合して、前記第２の標的タンパク質に結合する結合部位を形成し、
ｃ）前記重鎖定常領域２（ＣＨ２）は、Ｋａｂａｔと同様のＥＵインデックスによる番号の２５２位にチロシン、２５４位にスレオニン、２５６位にグルタミン酸を含み、
ｄ）前記第１の標的タンパク質がＢＡＦＦであり、前記第２の標的タンパク質がＩＬ−２３Ａであるか、または前記第１の標的タンパク質がＩＬ−２３Ａであり、前記第２の標的タンパク質がＢＡＦＦであり、
さらに本化合物において、
ｉ）前記ＶＬ１は配列番号２を含み、前記ＶＨ１は配列番号１を含み、前記ＶＬ２は配列番号４を含み、前記ＶＨ２は配列番号３を含むか、または
ｉｉ）前記ＶＬ１は配列番号４を含み、前記ＶＨ１は配列番号３を含み、前記ＶＬ２は配列番号２を含み、前記ＶＨ２は配列番号１を含むか、または
ｉｉｉ）前記ＶＬ１は配列番号８５を含み、前記ＶＨ１は配列番号８４を含み、前記ＶＬ２は配列番号４を含み、前記ＶＨ２は配列番号４を含むか、または
ｉｖ）前記ＶＬ１は配列番号４を含み、前記ＶＨ１は配列番号３を含み、前記ＶＬ２は配列番号８５を含み、前記ＶＨ２は配列番号８４を含むか、または
ｖ）前記ＶＬ１は配列番号８７を含み、前記ＶＨ１は配列番号８６を含み、前記ＶＬ２は配列番号４を含み、前記ＶＨ２は配列番号３を含むか、または
ｖｉ）前記ＶＬ１は配列番号４を含み、前記ＶＨ１は配列番号３を含み、前記ＶＬ２は配列番号８７を含み、前記ＶＨ２は配列番号８６を含むか、または
ｖｉｉ）前記ＶＬ１は配列番号８９を含み、前記ＶＨ１は配列番号８８を含み、前記ＶＬ２は配列番号４を含み、前記ＶＨ２は配列番号３を含むか、または
ｖｉｉｉ）前記ＶＬ１は配列番号４を含み、前記ＶＨ１は配列番号３を含み、前記ＶＬ２は配列番号８９を含み、前記ＶＨ２は配列番号８８を含むか、または
ｉｘ）前記ＶＬ１は配列番号９１を含み、前記ＶＨ１は配列番号９０を含み、前記ＶＬ２は配列番号４を含み、前記ＶＨ２は配列番号３を含むか、または
ｘ）前記ＶＬ１は配列番号４を含み、前記ＶＨ１は配列番号３を含み、前記ＶＬ２は配列番号９１を含み、前記ＶＨ２は配列番号９０を含む。
【００１１】
いくつかの実施形態では、前記第１のポリペプチドはさらに、前記ＶＬ１と前記ＶＨ２との間に第１のリンカーを含み、前記第２のポリペプチドはさらに、前記ＶＬ２と前記ＶＨ１との間に第２のリンカーを含む。いくつかの実施形態では、前記第１のリンカーまたは前記第２のリンカーは、アミノ酸配列ＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号６９）を含む。いくつかの実施形態では、前記第１のリンカー及び前記第２のリンカーは、アミノ酸配列ＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号６９）を含む。いくつかの実施形態では、前記第１のポリペプチドはさらに、前記ＶＨ２または前記ＶＬ１と前記ヒンジ領域との間に第３のリンカーを含み、前記第２のポリペプチドはさらに、前記ＶＨ１（そのＣ末端）または前記ＶＬ２（そのＣ末端）の後ろに第４のリンカーを含む。いくつかの実施形態では、前記第１のポリペプチドの前記第３のリンカーは、アミノ酸配列ＧＧＣＧＧＧＥＶＡＡＣＥＫＥＶＡＡＬＥＫＥＶＡＡＬＥＫＥＶＡＡＬＥＫ（配列番号８２）を含み、前記第２のポリペプチドの前記第４のリンカーは、アミノ酸配列ＧＧＣＧＧＧＫＶＡＡＣＫＥＫＶＡＡＬＫＥＫＶＡＡＬＫＥＫＶＡＡＬＫＥ（配列番号８３）を含む。他の実施形態では、前記第１のポリペプチドの前記第３のリンカーは、アミノ酸配列ＧＧＣＧＧＧＫＶＡＡＣＫＥＫＶＡＡＬＫＥＫＶＡＡＬＫＥＫＶＡＡＬＫＥ（配列番号８３）を含み、前記第２のポリペプチドの前記第４のリンカーは、アミノ酸配列ＧＧＣＧＧＧＥＶＡＡＣＥＫＥＶＡＡＬＥＫＥＶＡＡＬＥＫＥＶＡＡＬＥＫ（配列番号８２）を含む。いくつかの実施形態では、前記第１のポリペプチドの前記第３のリンカーは、アミノ酸配列ＧＧＣＧＧＧＥＶＡＡＣＥＫＥＶＡＡＬＥＫＥＶＡＡＬＥＫＥＶＡＡＬＥＫ（配列番号８２）またはアミノ酸配列ＧＧＣＧＧＧＫＶＡＡＣＫＥＫＶＡＡＬＫＥＫＶＡＡＬＫＥＫＶＡＡＬＫＥ（配列番号８３）を含む。他の実施形態では、前記第２のポリペプチドの前記第４のリンカーは、アミノ酸配列ＧＧＣＧＧＧＥＶＡＡＣＥＫＥＶＡＡＬＥＫＥＶＡＡＬＥＫＥＶＡＡＬＥＫ（配列番号８２）またはアミノ酸配列ＧＧＣＧＧＧＫＶＡＡＣＫＥＫＶＡＡＬＫＥＫＶＡＡＬＫＥＫＶＡＡＬＫＥ（配列番号８３）を含む。いくつかの実施形態では、前記第３のリンカーは、アミノ酸配列ＶＥＰＫＳＣ（配列番号７２）またはアミノ酸配列ＦＮＲＧＥＣ（配列番号７１）を含む。いくつかの実施形態では、前記第４のリンカーは、アミノ酸配列ＦＮＲＧＥＣ（配列番号７１）またはアミノ酸配列ＶＥＰＫＳＣ（配列番号７２）を含む。いくつかの実施形態では、前記第３のリンカーは、アミノ酸配列ＶＥＰＫＳＣ（配列番号７２）を含み、前記第４のリンカーはアミノ酸配列ＦＮＲＧＥＣ（配列番号７１）を含む。
【００１２】
いくつかの実施形態では、前記第１のポリペプチドはさらに、（構成に応じて）前記ＶＨ２または前記ＶＬ１と前記ヒンジ領域との間に重鎖定常領域１ドメイン（ＣＨ１）を含み、前記第２のポリペプチドはさらに、（構成に応じて）前記ＶＨ１またはＶＬ２のＣ末端に軽鎖定常領域ドメイン（ＣＬ）を含み、ここで前記ＣＬ及び前記ＣＨ１はジスルフィド結合によって共に会合され、Ｃ１ドメインを形成する。いくつかの実施形態では、前記第１のリンカー（前記ＶＬ１と前記ＶＨ２との間）または前記第２のリンカー（前記ＶＬ２と前記ＶＨ１との間）は、アミノ酸配列ＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号６９）を含む。いくつかの実施形態では、前記第１のリンカー及び前記第２のリンカーは、アミノ酸配列ＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号６９）を含む。いくつかの実施形態では、前記第１のポリペプチドはさらに、（構成に応じて）前記ＶＨ２または前記ＶＬ１と前記ＣＨ１との間に第３のリンカーを含み、第２のポリペプチドはさらに、（構成に応じて）前記ＶＨ１または前記ＶＬ２と前記ＣＬとの間に第４のリンカーを含む。いくつかの実施形態では、前記第３のリンカーまたは前記第４のリンカーは、アミノ酸配列ＬＧＧＧＳＧ（配列番号７０）を含む。いくつかの実施形態では、前記第３のリンカー及び前記第４のリンカーは、アミノ酸配列ＬＧＧＧＳＧ（配列番号７０）を含む。いくつかの実施形態では、前記第３のリンカー及び／または前記第４のリンカーは、任意のシステイン残基を含む。いくつかの実施形態では、前記第３のリンカー及び／または前記第４のリンカーは、アミノ酸配列ＧＧＣＧＧＧ（配列番号１３５）またはＬＧＧＣＧＧＧＳ（配列番号１３６）を含む。
【００１３】
いくつかの実施形態では、前記重鎖定常領域２（ＣＨ２）は、従来抗体に対するＫａｂａｔと同様のＥＵインデックスによる番号の２３４位にアラニン、及び２３５位にアラニンを含む。
【００１４】
いくつかの実施形態では、前記ヒンジ領域、前記重鎖定常領域２（ＣＨ２）、または前記重鎖定常領域３（ＣＨ３）のアミノ酸配列は、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４に由来する。いくつかの実施形態では、前記ヒンジ領域は、アミノ酸配列ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号７６）を含む。配列番号７６のヒンジ領域は、例えば、配列番号５のポリペプチドに存在する。他の実施形態では、ヒンジ領域は、アミノ酸配列ＬＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号１３０）を含む。配列番号１３０のヒンジ領域は、例えば、配列番号９のポリペプチドに存在する。さらに他の実施形態では、ヒンジ領域は、アミノ酸配列ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰ（配列番号１３４）を含む。配列番号１３４のヒンジ領域は、例えば、配列番号１３のポリペプチドに存在する。
【００１５】
いくつかの実施形態では、前記化合物は２つの前記第１のポリペプチドと２つの前記第２のポリペプチドとを含み、前記２つの第１のポリペプチドは少なくとも１つのジスルフィド結合によって共に会合する。いくつかの実施形態では、前記化合物は２つの前記第１のポリペプチドと２つの前記第２のポリペプチドとを含み、前記２つの第１のポリペプチドは少なくとも１つのジスルフィド結合によって共に会合し、かつ前記第１のポリペプチドのそれぞれが少なくとも１つのジスルフィド結合によって１つの前記第２のポリペプチドと会合する。
【００１６】
いくつかの実施形態では、
（ｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号８のアミノ酸配列を含むか、または
（ｉｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号９のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号１０のアミノ酸配列を含むか、または
（ｉｖ）前記第１のポリペプチドが配列番号１１のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号１２のアミノ酸配列を含むか、または
（ｖ）前記第１のポリペプチドが配列番号１３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号１４のアミノ酸配列を含むか、または
（ｖｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号１５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号１６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｖｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号１７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号１８のアミノ酸配列を含むか、または
（ｖｉｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号１９のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号２０のアミノ酸配列を含むか、または
（ｉｘ）前記第１のポリペプチドが配列番号２１のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号２２のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘ）前記第１のポリペプチドが配列番号２３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号２４のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号２５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号２６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号２７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号２８のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｉｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号２９のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号３０のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｉｖ）前記第１のポリペプチドが配列番号３１のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号３２のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｖ）前記第１のポリペプチドが配列番号３３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号３４のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｖｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号３５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号３６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｖｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号３７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号３８のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｖｉｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号３９のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号４０のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｉｘ）前記第１のポリペプチドが配列番号４１のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号４２のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘ）前記第１のポリペプチドが配列番号４３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号４４のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号４５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号４６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号４７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号４８のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘｉｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号４９のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号５０のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘｉｖ）前記第１のポリペプチドが配列番号５１のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号５２のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘｖ）前記第１のポリペプチドが配列番号５３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号５４のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘｖｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号５５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号５６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘｖｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号５７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号５８のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘｖｉｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号５９のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号６０のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘｉｘ）前記第１のポリペプチドが配列番号６１のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号６２のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘｘ）前記第１のポリペプチドが配列番号６３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号６４のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘｘｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号６５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号６６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘｘｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号６７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号６８のアミノ酸配列を含む。
【００１７】
いくつかの実施形態では、前記化合物が２つの前記第１のポリペプチドと２つの前記第２のポリペプチドとを含み、ここで前記２つの第１のポリペプチドは少なくとも１つのジスルフィド結合によって共に会合する。
【００１８】
いくつかの実施形態では、前記化合物は、２つの前記第１のポリペプチドと２つの前記第２のポリペプチドとを含み、さらにここで第１のポリペプチドのうち一方のヒンジ、ＣＨ２、及びＣＨ３が、第１のポリペプチドのうち他方のヒンジ、ＣＨ２、及びＣＨ３と会合し、４価分子を形成する。いくつかの実施形態では、前記化合物は、２つの前記第１のポリペプチドと２つの前記第２のポリペプチドとを含み、前記第１のポリペプチドそれぞれがＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、及びＣＨ３を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれがＣＬを含み、さらにここで第１のポリペプチドのうち一方のヒンジ、ＣＨ２、及びＣＨ３が、第１のポリペプチドのうち他方のヒンジ、ＣＨ２、及びＣＨ３と会合し、前記第１のポリペプチドそれぞれのＣＨ１が、前記第２のポリペプチドの一方のＣＬと会合して、４価分子（例えば、実施例のセクションに記載される単量体、単量体抗体）（例えば、化合物Ｅ及びＶ）を形成する。いくつかの実施形態では、前記化合物は、２つの前記第１のポリペプチドと２つの前記第２のポリペプチドとを含み、前記第１のポリペプチドのそれぞれが第３のリンカー、ヒンジ、ＣＨ２、及びＣＨ３を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが第４のリンカーを含み、さらにここで第１のポリペプチドのうち一方のヒンジ、ＣＨ２、及びＣＨ３が、第１のポリペプチドのうち他方のヒンジ、ＣＨ２、及びＣＨ３と会合し、前記第１のポリペプチドそれぞれの第３のリンカーが、前記第２のポリペプチドの一方の第４のリンカーと会合して、４価分子（例えば、実施例のセクションに記載される単量体、単量体抗体）（例えば、化合物Ｕ及びＴ）を形成する。
【００１９】
本開示の他の態様は、ＩＬ−２３Ａ及びＢＡＦＦへの結合を第２の化合物と競合する第１の化合物に関し、前記第１の化合物は、第３のポリペプチド及び第４のポリペプチドを含み、本化合物において、
（Ａ）前記第３のポリペプチドは、
（ｉ）第１の標的タンパク質に特異的な第１の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメイン（ＶＬ１）；
（ｉｉ）第２の標的タンパク質に特異的な第２の免疫グロブリンの重鎖可変ドメイン（ＶＨ２）；ならびに
（ｉｉｉ）ヒンジ領域、重鎖定常領域２（ＣＨ２）、及び重鎖定常領域３（ＣＨ３）を含み、
（Ｂ）前記第４のポリペプチドは、
（ｉ）前記第２の標的タンパク質に特異的な第２の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメイン（ＶＬ２）；
（ｉｉ）前記第１の標的タンパク質に特異的な第１の免疫グロブリンの重鎖可変ドメイン（ＶＨ１）を含み、
さらに本化合物において、
（ｉ）前記ＶＬ１及びＶＨ１は会合して、前記第１の標的タンパク質に結合する結合部位を形成し、
（ｉｉ）前記ＶＬ２及びＶＨ２は会合して、前記第２の標的タンパク質に結合する結合部位を形成し、
（ｉｉｉ）前記第１の標的タンパク質がＢＡＦＦであり、前記第２の標的タンパク質がＩＬ−２３Ａであるか、または前記第１の標的タンパク質がＩＬ−２３Ａであり、前記第２の標的タンパク質がＢＡＦＦであり、
さらにここで前記第２の化合物は第１のポリペプチドと第２のポリペプチドとを含み、
（ｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号８のアミノ酸配列を含むか、または
（ｉｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号９のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号１０のアミノ酸配列を含むか、または
（ｉｖ）前記第１のポリペプチドが配列番号１１のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号１２のアミノ酸配列を含むか、または
（ｖ）前記第１のポリペプチドが配列番号１３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号１４のアミノ酸配列を含むか、または
（ｖｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号１５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号１６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｖｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号１７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号１８のアミノ酸配列を含むか、または
（ｖｉｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号１９のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号２０のアミノ酸配列を含むか、または
（ｉｘ）前記第１のポリペプチドが配列番号２１のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号２２のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘ）前記第１のポリペプチドが配列番号２３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号２４のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号２５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号２６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号２７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号２８のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｉｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号２９のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号３０のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｉｖ）前記第１のポリペプチドが配列番号３１のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号３２のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｖ）前記第１のポリペプチドが配列番号３３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号３４のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｖｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号３５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号３６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｖｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号３７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号３８のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｖｉｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号３９のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号４０のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｉｘ）前記第１のポリペプチドが配列番号４１のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号４２のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘ）前記第１のポリペプチドが配列番号４３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号４４のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号４５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号４６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号４７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号４８のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘｉｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号４９のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号５０のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘｉｖ）前記第１のポリペプチドが配列番号５１のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号５２のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘｖ）前記第１のポリペプチドが配列番号５３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号５４のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘｖｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号５５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号５６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘｖｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号５７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号５８のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘｖｉｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号５９のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号６０のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘｉｘ）前記第１のポリペプチドが配列番号６１のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号６２のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘｘ）前記第１のポリペプチドが配列番号６３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号６４のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘｘｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号６５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号６６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘｘｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号６７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号６８のアミノ酸配列を含む。
【００２０】
本開示の他の態様は、２つの第１のポリペプチドと２つの第２のポリペプチドとを含む化合物に関し、本化合物において、前記２つの第１のポリペプチドは少なくとも１つのジスルフィド結合によって共に会合し、かつ前記第１のポリペプチドのそれぞれが少なくとも１つのジスルフィド結合によって１つの前記第２のポリペプチドと会合し、
ここで前記第１のポリペプチドのそれぞれは、
（ｉ）第１の標的タンパク質に特異的な第１の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメイン（ＶＬ１）；
（ｉｉ）第２の標的タンパク質に特異的な第２の免疫グロブリンの重鎖可変ドメイン（ＶＨ２）；
（ｉｉｉ）重鎖定常領域１（ＣＨ１）、ヒンジ領域、重鎖定常領域２（ＣＨ２）、及び重鎖定常領域３（ＣＨ３）を含み、
前記第２のポリペプチドのそれぞれは、
（ｉ）前記第２の標的タンパク質に特異的な第２の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメイン（ＶＬ２）；
（ｉｉ）前記第１の標的タンパク質に特異的な第１の免疫グロブリンの重鎖可変ドメイン（ＶＨ１）；
（ｉｉｉ）軽鎖定常領域ドメイン（ＣＬ）を含み、
ここで第１のポリペプチドのうち一方のヒンジ、ＣＨ２、及びＣＨ３が、第１のポリペプチドのうち他方のヒンジ、ＣＨ２、及びＣＨ３と会合し、前記第１のポリペプチドそれぞれのＣＨ１が、前記第２のポリペプチドそれぞれのＣＬと会合して、４価分子を形成し、
本化合物において、
ａ）前記ＶＬ１及びＶＨ１は会合して、前記第１の標的タンパク質に結合する結合部位を形成し、
ｂ）前記ＶＬ２及びＶＨ２は会合して、前記第２の標的タンパク質に結合する結合部位を形成し、
ｃ）前記重鎖定常領域２（ＣＨ２）は、Ｋａｂａｔと同様のＥＵインデックスによる番号の２５２位にチロシン、２５４位にスレオニン、２５６位にグルタミン酸を含み、
ｄ）前記第１の標的タンパク質がＢＡＦＦであり、前記第２の標的タンパク質がＩＬ−２３Ａであるか、または前記第１の標的タンパク質がＩＬ−２３Ａであり、前記第２の標的タンパク質がＢＡＦＦであり、
さらに本化合物において、
（ｉ）前記ＶＬ１は配列番号２を含み、前記ＶＨ１は配列番号１を含み、前記ＶＬ２は配列番号４を含み、前記ＶＨ２は配列番号３を含むか、または
（ｉｉ）前記ＶＬ１は配列番号４を含み、前記ＶＨ１は配列番号３を含み、前記ＶＬ２は配列番号２を含み、前記ＶＨ２は配列番号１を含むか、または
（ｉｉｉ）前記ＶＬ１は配列番号８５を含み、前記ＶＨ１は配列番号８４を含み、前記ＶＬ２は配列番号４を含み、前記ＶＨ２は配列番号４を含むか、または
（ｉｖ）前記ＶＬ１は配列番号４を含み、前記ＶＨ１は配列番号３を含み、前記ＶＬ２は配列番号８５を含み、前記ＶＨ２は配列番号８４を含むか、または
（ｖ）前記ＶＬ１は配列番号８７を含み、前記ＶＨ１は配列番号８６を含み、前記ＶＬ２は配列番号４を含み、前記ＶＨ２は配列番号３を含むか、または
（ｖｉ）前記ＶＬ１は配列番号４を含み、前記ＶＨ１は配列番号３を含み、前記ＶＬ２は配列番号８７を含み、前記ＶＨ２は配列番号８６を含むか、または
（ｖｉｉ）前記ＶＬ１は配列番号８９を含み、前記ＶＨ１は配列番号８８を含み、前記ＶＬ２は配列番号４を含み、前記ＶＨ２は配列番号３を含むか、または
（ｖｉｉｉ）前記ＶＬ１は配列番号４を含み、前記ＶＨ１は配列番号３を含み、前記ＶＬ２は配列番号８９を含み、前記ＶＨ２は配列番号８８を含むか、または
（ｉｘ）前記ＶＬ１は配列番号９１を含み、前記ＶＨ１は配列番号９０を含み、前記ＶＬ２は配列番号４を含み、前記ＶＨ２は配列番号３を含むか、または
（ｘ）前記ＶＬ１は配列番号４を含み、前記ＶＨ１は配列番号３を含み、前記ＶＬ２は配列番号９１を含み、前記ＶＨ２は配列番号９０を含む。
【００２１】
上記態様に関するいくつかの実施形態では、前記第１のポリペプチドのそれぞれが、前記ＶＬ１と前記ＶＨ２との間に第１のリンカーをさらに含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが、前記ＶＬ２と前記ＶＨ１との間に第２のリンカーをさらに含む。いくつかの実施形態では、前記第１のリンカーまたは前記第２のリンカーは、アミノ酸配列ＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号６９）を含む。いくつかの実施形態では、前記第１のリンカー及び前記第２のリンカーは、アミノ酸配列ＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号６９）を含む。いくつかの実施形態では、前記第１のポリペプチドのそれぞれが、前記ＶＨ２（または前記ＶＬ１）と前記ＣＨ１との間に第３のリンカーをさらに含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが、前記ＶＨ１（または前記ＶＬ２）と前記ＣＬとの間に第４のリンカーをさらに含む。いくつかの実施形態では、前記第３のリンカーまたは前記第４のリンカーは、アミノ酸配列ＬＧＧＧＳＧ（配列番号７０）を含む。いくつかの実施形態では、前記第３のリンカー及び前記第４のリンカーは、アミノ酸配列ＬＧＧＧＳＧ（配列番号７０）を含む。いくつかの実施形態では、前記第３のリンカー及び／または前記第４のリンカーは、任意のシステイン残基を含む。いくつかの実施形態では、前記第３のリンカー及び／または前記第４のリンカーは、アミノ酸配列ＧＧＣＧＧＧ（配列番号１３５）またはＬＧＧＣＧＧＧＳ（配列番号１３６）を含む。いくつかの実施形態では、前記重鎖定常領域２（ＣＨ２）は、Ｋａｂａｔと同様のＥＵインデックスによる番号の２３４位にアラニン、及び２３５位にアラニンを含む。いくつかの実施形態では、前記ヒンジ領域、前記重鎖定常領域２（ＣＨ２）、または前記重鎖定常領域３（ＣＨ３）のアミノ酸配列は、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４に由来する。いくつかの実施形態では、前記ヒンジ領域は、アミノ酸配列ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号７６）、アミノ酸配列ＬＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号１３０）、またはアミノ酸配列ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰ（配列番号１３４）を含む。
【００２２】
いくつかの実施形態では、
（ｉ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｉｉ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号８のアミノ酸配列を含むか、または
（ｉｉｉ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号１３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号１４のアミノ酸配列を含むか、または
（ｉｖ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号１５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号１６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｖ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号２１のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号２２のアミノ酸配列を含むか、または
（ｖｉ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号２５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号２６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｖｉｉ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号２９のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号３０のアミノ酸配列を含むか、または
（ｖｉｉｉ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号３３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号３４のアミノ酸配列を含むか、または
（ｉｘ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号３７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号３８のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号４１のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号４２のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｉ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号４５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号４６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｉｉ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号４９のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号５０のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｉｉｉ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号５３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号５４のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｉｖ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号５５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号５６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｖ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号５７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号５８のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｖｉ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号５９のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号６０のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｖｉｉ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号６１のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号６２のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｖｉｉｉ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号６３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号６４のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｉｘ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号６５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号６６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号６７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号６８のアミノ酸配列を含む。
【００２３】
本開示の他の態様は、２つの第１のポリペプチドと２つの第２のポリペプチドとを含む化合物に関し、本化合物において、前記２つの第１のポリペプチドは少なくとも１つのジスルフィド結合によって共に会合し、かつ前記第１のポリペプチドのそれぞれが少なくとも１つのジスルフィド結合によって１つの前記第２のポリペプチドと会合し、さらに（ｉ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｉｉ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号８のアミノ酸配列を含むか、または
（ｉｉｉ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号１３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号１４のアミノ酸配列を含むか、または
（ｉｖ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号１５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号１６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｖ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号２１のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号２２のアミノ酸配列を含むか、または
（ｖｉ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号２５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号２６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｖｉｉ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号２９のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号３０のアミノ酸配列を含むか、または
（ｖｉｉｉ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号３３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号３４のアミノ酸配列を含むか、または
（ｉｘ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号３７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号３８のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号４１のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号４２のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｉ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号４５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号４６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｉｉ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号４９のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号５０のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｉｉｉ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号５３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号５４のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｉｖ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号５５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号５６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｖ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号５７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号５８のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｖｉ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号５９のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号６０のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｖｉｉ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号６１のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号６２のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｖｉｉｉ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号６３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号６４のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｉｘ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号６５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号６６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号６７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号６８のアミノ酸配列を含む。
【００２４】
本開示の他の態様は、２つの第１のポリペプチドと２つの第２のポリペプチドとを含む化合物に関し、本化合物において、前記２つの第１のポリペプチドは少なくとも１つのジスルフィド結合によって共に会合し、かつ前記第１のポリペプチドのそれぞれが少なくとも１つのジスルフィド結合によって１つの前記第２のポリペプチドと会合し、
ここで前記第１のポリペプチドのそれぞれは、
（ｉｖ）第１の標的タンパク質に特異的な第１の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメイン（ＶＬ１）；
（ｖ）第２の標的タンパク質に特異的な第２の免疫グロブリンの重鎖可変ドメイン（ＶＨ２）；
（ｖｉ）ヒンジ領域、重鎖定常領域２（ＣＨ２）、及び重鎖定常領域３（ＣＨ３）を含み、
前記第２のポリペプチドのそれぞれは、
（ｉ）第２の標的タンパク質に特異的な第２の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメイン（ＶＬ２）；
（ｉｉ）前記第１の標的タンパク質に特異的な第１の免疫グロブリンの重鎖可変ドメイン（ＶＨ１）を含み、
ここで第１のポリペプチドのうち一方のヒンジ、ＣＨ２、及びＣＨ３が、第１のポリペプチドのうち他方のヒンジ、ＣＨ２、及びＣＨ３と会合し、
本化合物において、
ｅ）前記ＶＬ１及びＶＨ１は会合して、前記第１の標的タンパク質に結合する結合部位を形成し、
ｆ）前記ＶＬ２及びＶＨ２は会合して、前記第２の標的タンパク質に結合する結合部位を形成し、
ｇ）前記重鎖定常領域２（ＣＨ２）は、Ｋａｂａｔと同様のＥＵインデックスによる番号の２５２位にチロシン、２５４位にスレオニン、２５６位にグルタミン酸を含み、
ｈ）前記第１の標的タンパク質がＢＡＦＦであり、前記第２の標的タンパク質がＩＬ−２３Ａであるか、または前記第１の標的タンパク質がＩＬ−２３Ａであり、前記第２の標的タンパク質がＢＡＦＦであり、
さらに本化合物において、
（ｉ）前記ＶＬ１は配列番号２を含み、前記ＶＨ１は配列番号１を含み、前記ＶＬ２は配列番号４を含み、前記ＶＨ２は配列番号３を含むか、または
（ｉｉ）前記ＶＬ１は配列番号４を含み、前記ＶＨ１は配列番号３を含み、前記ＶＬ２は配列番号２を含み、前記ＶＨ２は配列番号１を含むか、または
（ｉｉｉ）前記ＶＬ１は配列番号８５を含み、前記ＶＨ１は配列番号８４を含み、前記ＶＬ２は配列番号４を含み、前記ＶＨ２は配列番号４を含むか、または
（ｉｖ）前記ＶＬ１は配列番号４を含み、前記ＶＨ１は配列番号３を含み、前記ＶＬ２は配列番号８５を含み、前記ＶＨ２は配列番号８４を含むか、または
（ｖ）前記ＶＬ１は配列番号８７を含み、前記ＶＨ１は配列番号８６を含み、前記ＶＬ２は配列番号４を含み、前記ＶＨ２は配列番号３を含むか、または
（ｖｉ）前記ＶＬ１は配列番号４を含み、前記ＶＨ１は配列番号３を含み、前記ＶＬ２は配列番号８７を含み、前記ＶＨ２は配列番号８６を含むか、または
（ｖｉｉ）前記ＶＬ１は配列番号８９を含み、前記ＶＨ１は配列番号８８を含み、前記ＶＬ２は配列番号４を含み、前記ＶＨ２は配列番号３を含むか、または
（ｖｉｉｉ）前記ＶＬ１は配列番号４を含み、前記ＶＨ１は配列番号３を含み、前記ＶＬ２は配列番号８９を含み、前記ＶＨ２は配列番号８８を含むか、または
（ｉｘ）前記ＶＬ１は配列番号９１を含み、前記ＶＨ１は配列番号９０を含み、前記ＶＬ２は配列番号４を含み、前記ＶＨ２は配列番号３を含むか、または
（ｘ）前記ＶＬ１は配列番号４を含み、前記ＶＨ１は配列番号３を含み、前記ＶＬ２は配列番号９１を含み、前記ＶＨ２は配列番号９０を含む。
【００２５】
上記態様に関するいくつかの実施形態では、前記第１のポリペプチドのそれぞれが、前記ＶＬ１と前記ＶＨ２との間に第１のリンカーをさらに含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが、前記ＶＬ２と前記ＶＨ１との間に第２のリンカーをさらに含む。いくつかの実施形態では、前記第１のリンカーまたは前記第２のリンカーは、アミノ酸配列ＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号６９）を含む。いくつかの実施形態では、前記第１のリンカー及び前記第２のリンカーは、アミノ酸配列ＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号６９）を含む。いくつかの実施形態では、前記第１のポリペプチドのそれぞれが、前記ＶＨ２または前記ＶＬ１と前記ヒンジ領域との間に第３のリンカーをさらに含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが、前記ＶＨ１または前記ＶＬ２のＣ末端に第４のリンカーをさらに含む。いくつかの実施形態では、前記第１のポリペプチドの前記第３のリンカーは、アミノ酸配列ＧＧＣＧＧＧＥＶＡＡＣＥＫＥＶＡＡＬＥＫＥＶＡＡＬＥＫＥＶＡＡＬＥＫ（配列番号８２）を含み、前記第２のポリペプチドの前記第４のリンカーは、アミノ酸配列ＧＧＣＧＧＧＫＶＡＡＣＫＥＫＶＡＡＬＫＥＫＶＡＡＬＫＥＫＶＡＡＬＫＥ（配列番号８３）を含む。他の実施形態では、前記第１のポリペプチドの前記第３のリンカーは、アミノ酸配列ＧＧＣＧＧＧＫＶＡＡＣＫＥＫＶＡＡＬＫＥＫＶＡＡＬＫＥＫＶＡＡＬＫＥ（配列番号８３）を含み、前記第２のポリペプチドの前記第４のリンカーは、アミノ酸配列ＧＧＣＧＧＧＥＶＡＡＣＥＫＥＶＡＡＬＥＫＥＶＡＡＬＥＫＥＶＡＡＬＥＫ（配列番号８２）を含む。いくつかの実施形態では、前記第１のポリペプチドの前記第３のリンカーは、アミノ酸配列ＧＧＣＧＧＧＥＶＡＡＣＥＫＥＶＡＡＬＥＫＥＶＡＡＬＥＫＥＶＡＡＬＥＫ（配列番号８２）またはアミノ酸配列ＧＧＣＧＧＧＫＶＡＡＣＫＥＫＶＡＡＬＫＥＫＶＡＡＬＫＥＫＶＡＡＬＫＥ（配列番号８３）を含む。他の実施形態では、前記第２のポリペプチドの前記第４のリンカーは、アミノ酸配列ＧＧＣＧＧＧＥＶＡＡＣＥＫＥＶＡＡＬＥＫＥＶＡＡＬＥＫＥＶＡＡＬＥＫ（配列番号８２）またはアミノ酸配列ＧＧＣＧＧＧＫＶＡＡＣＫＥＫＶＡＡＬＫＥＫＶＡＡＬＫＥＫＶＡＡＬＫＥ（配列番号８３）を含む。いくつかの実施形態では、前記第３のリンカーは、アミノ酸配列ＶＥＰＫＳＣ（配列番号７２）またはアミノ酸配列ＦＮＲＧＥＣ（配列番号７１）を含む。いくつかの実施形態では、前記第４のリンカーは、アミノ酸配列ＦＮＲＧＥＣ（配列番号７１）またはアミノ酸配列ＶＥＰＫＳＣ（配列番号７２）を含む。いくつかの実施形態では、前記第３のリンカーは、アミノ酸配列ＶＥＰＫＳＣ（配列番号７２）を含み、前記第４のリンカーはアミノ酸配列ＦＮＲＧＥＣ（配列番号７１）を含む。いくつかの実施形態では、前記重鎖定常領域２（ＣＨ２）は、Ｋａｂａｔと同様のＥＵインデックスによる番号の２３４位にアラニン、及び２３５位にアラニンを含む。いくつかの実施形態では、前記ヒンジ領域、前記重鎖定常領域２（ＣＨ２）、または前記重鎖定常領域３（ＣＨ３）のアミノ酸配列は、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４に由来する。いくつかの実施形態では、前記ヒンジ領域は、アミノ酸配列ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号７６）、アミノ酸配列ＬＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号１３０）、またはアミノ酸配列ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰ（配列番号１３４）を含む。いくつかの実施形態では、（ｉ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号９のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号１０のアミノ酸配列を含むか、または
（ｉｉ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号１１のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号１２のアミノ酸配列を含むか、または
（ｉｉｉ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号１７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号１８のアミノ酸配列を含むか、または
（ｉｖ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号１９のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号２０のアミノ酸配列を含むか、または
（ｖ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号２３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号２４のアミノ酸配列を含むか、または
（ｖｉ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号２７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号２８のアミノ酸配列を含むか、または
（ｖｉｉ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号３１のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号３２のアミノ酸配列を含むか、または
（ｖｉｉｉ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号３５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号３６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｉｘ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号３９のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号４０のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号４３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号４４のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｉ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号４７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号４８のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｉｉ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号５１のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号５２のアミノ酸配列を含む。
【００２６】
さらに本開示の他の態様は、上記の化合物などの本明細書に記載の化合物を含む医薬組成物に関する。
【００２７】
本開示の他の態様は、上記の化合物などの本明細書に記載の化合物、または前記化合物を含む医薬組成物を対象に投与することを含む、自己免疫疾患または炎症性疾患の治療方法に関する。
【００２８】
さらに本開示の他の態様は、医療に使用される、上記の化合物などの本明細書に記載の化合物に関する。いくつかの実施形態では、前記使用は自己免疫疾患または炎症性疾患の治療である。
【００２９】
本開示の他の態様は、医療に使用される、上記の化合物などの本明細書に記載の化合物を含む医薬組成物に関する。いくつかの実施形態では、前記使用は自己免疫疾患または炎症性疾患の治療である。
【００３０】
さらに本開示の他の態様は、上記のポリペプチドなどの本明細書に記載のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸に関する。本開示の他の態様は、前記核酸を含むベクターに関する。いくつかの実施形態では、ベクターは、前記核酸に機能的に連結されたプロモーターを含む。本開示の他の態様は、前記核酸または前記ベクターを含む細胞に関する。
【００３１】
本開示の他の態様は、上記の細胞などの本明細書に記載の細胞を得ることと、本明細書に記載の核酸を前記細胞に発現させることを含む、上記のポリペプチドなどの本明細書に記載の化合物またはポリペプチドの作製方法に関する。いくつかの実施形態では、本方法は前記ポリペプチドまたは化合物を単離して精製することをさらに含む。
【００３２】
本開示の１つ以上の実施形態の詳細を以下の説明に記載する。本開示の他の特徴や利点は、以下の図面及び複数の実施形態の詳細な説明から、また添付の特許請求の範囲から明らかであろう。
【００３３】
以下の図面は本明細書の一部を構成し、本開示のある特定の態様を詳細に説明するために含まれており、本明細書で提示される特定の実施形態の詳細な説明と合わせて、これらの図面の１つまたは複数を参照することにより、本開示を十分に理解することができる。
【図面の簡単な説明】
【００３４】
【図１Ａ】ＢＡＦＦとＩＬ２３Ａに対して特異的な例示的化合物の図である。第１のポリペプチド鎖は、ＣＨ３、ＣＨ２、ＶＨ２（ＶＨＩＩ）、及びＶＬ１（ＶＬＩ）ドメインを含む。第２のポリペプチド鎖は、ＶＨ１（ＶＨＩ）及びＶＬ２（ＶＬＩＩ）ドメインを含む。ＶＬ１及びＶＨ１は、第１の標的タンパク質（ＢＡＦＦまたはＩＬ２３Ａのいずれか）に対して特異的であり、ＶＬ２及びＶＨ２は、第２の標的タンパク質（ＩＬ２３ＡまたはＢＡＦＦのいずれか）に対して特異的である。上段のパネルは、各ポリペプチド鎖を個別に示している。下段のパネルは、１つの第１のポリペプチドのＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインと、別の第１のポリペプチドのＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインとの会合によって形成された４価化合物（例えば、実施例のセクションに記載される単量体、単量体抗体）を示す。第１及び第２の標的タンパク質に対する結合ドメインは、それぞれ、ＶＨ１とＶＬ１との会合によって、及びＶＨ２とＶＬ２との会合によって形成される。
【図１Ｂ】ＢＡＦＦとＩＬ２３Ａに対して特異的な別の例示的化合物の図である。第１のポリペプチド鎖は、ＣＨ３、ＣＨ２、ＣＨ１、ＶＨ２（ＶＨＩＩ）、及びＶＬ１（ＶＬＩ）ドメインを含む。第２のポリペプチド鎖は、ＣＬ、ＶＨ１（ＶＨＩ）、及びＶＬ２（ＶＬＩＩ）ドメインを含む。ＶＬ１及びＶＨ１は、第１の標的タンパク質（ＢＡＦＦまたはＩＬ２３Ａのいずれか）に対して特異的であり、ＶＬ２及びＶＨ２は、第２の標的タンパク質（ＩＬ２３ＡまたはＢＡＦＦのいずれか）に対して特異的である。上段のパネルは、各ポリペプチド鎖を個別に示している。下段のパネルは、１つの第１のポリペプチドのＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインと、別の第１のポリペプチドのＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインとの会合によって形成された４価化合物（例えば、実施例のセクションに記載される単量体、単量体抗体）を示す。第１及び第２の標的タンパク質に対する結合ドメインは、それぞれ、ＶＨ１とＶＬ１との会合によって、及びＶＨ２とＶＬ２との会合によって形成される。この化合物は、ＣＬドメインとＣＨ１ドメイン間の相互作用によってさらに会合する。
【図２】実施例１０に記載される、雄カニクイザルでの、化合物Ａ（黒四角）、化合物Ｂ（白四角）、化合物Ｃ（黒三角）、及び化合物Ｄ（白三角）の単回１ｍｇ／ｋｇ静脈内投与後の血清濃度（平均±ＳＤ）を示すグラフである。
【図３】実施例１１に記載される、隔週１回の１００ｍｇの皮下投与後の化合物Ｂの予測ヒト血清濃度−時間プロファイルを示す。点線は目標Ｃｍｉｎ（３０ｎＭ）を表す。
【図４】実施例１４に記載される、化合物Ｂの濃度に対する単量体パーセンテージの集計グラフを示す。
【図５】化合物Ｂが、ｉｎ  ｖｉｖｏで抗ＢＡＦＦに対する機能的効力を維持することを示す。抗ＢＡＦＦまたは化合物Ｂのいずれかをマウスに等モル投与し、ヒトＢＡＦＦのミニサークルを負荷してＢ細胞増殖を誘導した。１４日目に脾臓を回収し、ＢＡＦＦの機能的遮断の指標としてマウスＢ２２０＋Ｂ細胞についてフローサイトメトリーにより分析した。
【図６】化合物Ｂが、ｉｎ  ｖｉｖｏで抗ＩＬ２３に対する機能的効力を維持することを示す。ＩＬ２３誘導性サイトカインアッセイにおける化合物Ｂの評価である。抗ＩＬ２３または化合物Ｂのいずれかをマウスに等モル投与し、ヒトＩＬ２３を２回負荷して耳の炎症を誘導した。最後の注射後２４時間で両耳を回収し、ＩＬ２３の機能的遮断の指標としてマウスＩＬ１７Ａ及びマウスＩＬ２２について分析した。
【発明を実施するための形態】
【００３５】
本明細書では、ＢＡＦＦとＩＬ−２３Ａ（ＩＬ２３ｐ１９またはＩＬ２３Ａとも称する）の両方に結合する化合物について記載する。現在まで、ＢＡＦＦとＩＬ２３Ａの両方を標的とする認可済み化合物は存在しない。生物学的治療法を使用して２つ以上の重要な炎症性メディエーターを同時に中和する研究は限定的であり、またこうした研究は関節リウマチ（ＲＡ）に関する評価で臨床転帰の改善を示さなかった。加えて、そのような組み合わせは、感染リスクなどの副作用を高めることがある（例えば、Ｇｅｎｏｖｅｓｅ，Ｍ．Ｃ．，Ｃｏｈｅｎ，Ｓ．，Ｍｏｒｅｌａｎｄ，Ｌ．，Ｌｉｕｍ，Ｄ．，Ｒｏｂｂｉｎｓ，Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．（２００４）．Ａｒｔｈ．Ｒｈｅｕｍ．５０，１４１２−９；Ｇｅｎｏｖｅｓｅ，Ｍ．Ｃ．，Ｃｏｈｅｎ，Ｓ．，Ｍｏｒｅｌａｎｄ，Ｌ．，Ｌｉｕｍ，Ｄ．，Ｒｏｂｂｉｎｓ，Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．（２００４）．Ａｒｔｈ．Ｒｈｅｕｍ．５０，１４１２−９；及びＷｅｉｎｂｌａｔｔ，Ｍ．，Ｓｃｈｉｆｆ，Ｍ．，Ｇｏｌｄｍａｎ，Ａ．Ｋｒｅｍｅｒ，Ｊ．，Ｌｕｇｇｅｎ，Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．（２００７）．Ａｎｎ．Ｒｈｅｕｍ．Ｄｉｓ．６６，２２８−３４を参照）。さらに、このような二重特異性化合物は、溶解性に関連する問題（例えば、凝集）及び安定性に関連する問題（例えば、不適切な薬物動態）により、設計が困難であった。
【００３６】
驚くべきことに、本明細書に記載のＢＡＦＦとＩＬ−２３Ａに結合する化合物のいくつかは、ＩＬ−２３ＡまたはＢＡＦＦのいずれかを標的とする個々の抗体と比較して、同様または改善された特性を有することが見出されている。また、化合物によっては、適切な薬物動態を有することが見出され、投与目的に適する範囲の可溶性を示した。さらに、いくつかの実施形態では、個々の療法の副作用の観点から、また用量低減の観点から、個々の用量の複数回投与よりも単回投与に利点がある。加えて、いくつかの実施形態では、化合物のＣＭＣ特性によると、一部の化合物が高融解温度（Ｔｍ）及び低凝集を有することを示した。一態様では、１つの例示的な化合物が、高濃度で特に低い凝集を示した。本明細書に記載の化合物は、標準的な抗体分子、例えばＩｇＧ分子または抗原結合断片（例えば、Ｆａｂ）と比較して、１つ以上の有利な特性、例えば副作用の減少、投与の容易さ及び安全性の向上、半減期の延長、結合親和性の増加、または阻害活性の増加を有すると考えられる。
【００３７】
したがって、本開示の態様はＢＡＦＦとＩＬ−２３Ａの両方に特異的な化合物、ならびにそのような化合物の使用方法及び製造方法に関する。一態様では、本技術は、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、腎臓に関連する全身性エリテマトーデス／ループス腎炎（ＬＮ）、ＡＮＣＡ関連血管炎（ＡＡＶ）、原発性シェーグレン症候群（ｐＳＳ）、慢性移植片対宿主病（ｃＧＶＨＤ）、全身性強皮症（ＳＳｃ）、関節リウマチ（ＲＡ）、乾癬（Ｐｓ）、強直性脊椎炎（ＡＳ）、及び乾癬性関節炎（ＰＡ）などの自己免疫疾患または炎症性疾患を治療及び予防するための有効性が増加した組成物に関する。ＢＡＦＦ／ＩＬ２３Ａ二重アンタゴニストは、自己抗体／免疫複合体及びＩＬ２３軸媒介性末端器官損傷の両方を阻害し、ＳＬＥ及びＬＮ治療を目的とした現在の標準治療よりも優れた臨床反応の誘導と維持を達成することができる。ＢＡＦＦ抗体とＩＬ−２３抗体を同時投与して、両方の経路を同時に阻害する場合と比較して、ＢＡＦＦ／ＩＬ２３Ａ二重アンタゴニストは、服薬遵守を改善し、痛みを緩和させることができ、患者にとっての利便性が高い。ＢＡＦＦ／ＩＬ２３Ａ二重アンタゴニストにより、投与量の低減が可能になり、それに加えて治療関連コストも削減されるはずである。加えて、ＢＡＦＦ／ＩＬ２３Ａアンタゴニストはまた、原発性シェーグレン症候群（ｐＳＳ）、慢性移植片対宿主病（ｃＧＶＨＤ）、全身性強皮症（ＳＳｃ）、及びＡＮＣＡ関連血管炎（ＡＡＶ）を含む、調節不全Ｂ細胞／自己抗体及びＩＬ２３媒介性組織損傷を伴う疾患群の治療に有益であり得る。
【００３８】
２つの薬理学的要素を集約しつつ、各成分の機能的効力を維持すると同時に、大規模製造に適した生物物理学的特性を有する二重標的治療分子を設計することは困難である。二重標的分子の開発は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏでの安定性に関連する多数の問題、例えば、不十分な発現、凝集、貯蔵寿命の限界、不十分な血清安定性、ｉｎ  ｖｉｖｏでの不適切な薬物動態特性などに阻まれてきた（Ｄｅｍａｒｅｓｔ  ＳＪ，Ｇｌａｓｅｒ  ＳＭ．（２００８）．Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ  Ｄｅｖｅｌ．１１，６７５−８７）。
【００３９】
本明細書では、ＢＡＦＦとＩＬ２３両方の機能を阻害する二重標的分子を作製するための方法を開示する。本技術の二重標的分子は、高融解温度（Ｔｍ）、高濃度での低凝集性、及び予測ヒトＰＫ特性などの利点及び予想外の特性を有し、隔週１回またはそれより少ない頻度での皮下投与が可能である。
【００４０】
化合物
本開示の態様は、ＢＡＦＦ及びＩＬ２３Ａの両方に特異的な化合物に関する。ＢＡＦＦに対する例示的なタンパク質配列とＩＬ２３Ａに対する例示的なタンパク質配列を以下に示す。
【００４１】
＞ｓｐ｜Ｑ９Ｙ２７５｜Ｂ細胞活性化因子ＢＡＦＦ）−ＴＮ１３Ｂ＿ＨＵＭＡＮ腫瘍壊死因子リガンドスーパーファミリーのメンバー１３Ｂ  ＯＳ＝Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ  ＧＮ＝ＴＮＦＳＦ１３Ｂ  ＰＥ＝１  ＳＶ＝１
ＭＤＤＳＴＥＲＥＱＳＲＬＴＳＣＬＫＫＲＥＥＭＫＬＫＥＣＶＳＩＬＰＲＫＥＳＰＳＶＲＳＳＫＤＧＫＬＬＡＡＴＬＬＬＡＬＬＳＣＣＬＴＶＶＳＦＹＱＶＡＡＬＱＧＤＬＡＳＬＲＡＥＬＱＧＨＨＡＥＫＬＰＡＧＡＧＡＰＫＡＧＬＥＥＡＰＡＶＴＡＧＬＫＩＦＥＰＰＡＰＧＥＧＮＳＳＱＮＳＲＮＫＲＡＶＱＧＰＥＥＴＶＴＱＤＣＬＱＬＩＡＤＳＥＴＰＴＩＱＫＧＳＹＴＦＶＰＷＬＬＳＦＫＲＧＳＡＬＥＥＫＥＮＫＩＬＶＫＥＴＧＹＦＦＩＹＧＱＶＬＹＴＤＫＴＹＡＭＧＨＬＩＱＲＫＫＶＨＶＦＧＤＥＬＳＬＶＴＬＦＲＣＩＱＮＭＰＥＴＬＰＮＮＳＣＹＳＡＧＩＡＫＬＥＥＧＤＥＬＱＬＡＩＰＲＥＮＡＱＩＳＬＤＧＤＶＴＦＦＧＡＬＫＬＬ（配列番号８０）
＞ＮＰ＿０５７６６８．１−ＩＬ２３Ａ［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ］
ＭＬＧＳＲＡＶＭＬＬＬＬＬＰＷＴＡＱＧＲＡＶＰＧＧＳＳＰＡＷＴＱＣＱＱＬＳＱＫＬＣＴＬＡＷＳＡＨＰＬＶＧＨＭＤＬＲＥＥＧＤＥＥＴＴＮＤＶＰＨＩＱＣＧＤＧＣＤＰＱＧＬＲＤＮＳＱＦＣＬＱＲＩＨＱＧＬＩＦＹＥＫＬＬＧＳＤＩＦＴＧＥＰＳＬＬＰＤＳＰＶＧＱＬＨＡＳＬＬＧＬＳＱＬＬＱＰＥＧＨＨＷＥＴＱＱＩＰＳＬＳＰＳＱＰＷＱＲＬＬＬＲＦＫＩＬＲＳＬＱＡＦＶＡＶＡＡＲＶＦＡＨＧＡＡＴＬＳＰ（アミノ酸１〜１９は予測シグナル配列）（配列番号８１）
【００４２】
いくつかの実施形態では、化合物は第１のポリペプチドと第２のポリペプチドとを含む。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、（ｉ）第１の標的タンパク質に特異的な第１の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメイン（ＶＬ１）、（ｉｉ）第２の標的タンパク質に特異的な第２の免疫グロブリンの重鎖可変ドメイン（ＶＨ２）、ならびに（ｉｉｉ）ヒンジ領域、重鎖定常領域２（ＣＨ２）、及び重鎖定常領域３（ＣＨ３）を含む。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは重鎖定常領域１（ＣＨ１）をさらに含む。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドは、（ｉ）第２の標的タンパク質に特異的な第２の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメイン（ＶＬ２）、（ｉｉ）第１の標的タンパク質に特異的な第１の免疫グロブリンの重鎖可変ドメイン（ＶＨ１）を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドは軽鎖定常領域（ＣＬ）をさらに含む。
【００４３】
第１のポリペプチドの可変ドメイン及び定常ドメイン／領域は任意の順序であってよく、第２のポリペプチドの可変ドメイン及び定常ドメイン／領域（存在する場合）は任意の順序であってよいと理解すべきである。以下に、第１及び第２のポリペプチド上のドメイン／領域に対する複数の例示的な構成をＮ末端からＣ末端の順に示す。
【００４４】
第１のポリペプチドの構成１：Ｎ−ＶＬ１−ＶＨ２−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−Ｃ
第１のポリペプチドの構成２：Ｎ−ＶＨ２−ＶＬ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−Ｃ
第１のポリペプチドの構成３：Ｎ−ＶＬ１−ＶＨ２−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−Ｃ
第１のポリペプチドの構成４：Ｎ−ＶＨ２−ＶＬ１−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−Ｃ
第２のポリペプチドの構成１：Ｎ−ＶＬ２−ＶＨ１−Ｃ
第２のポリペプチドの構成２：Ｎ−ＶＨ１−ＶＬ２−Ｃ
第２のポリペプチドの構成３：Ｎ−ＶＬ２−ＶＨ１−ＣＬ−Ｃ
第２のポリペプチドの構成４：Ｎ−ＶＨ１−ＶＬ２−ＣＬ−Ｃ
【００４５】
化合物の例示的な構成を図１Ａ及び図１Ｂに示す。
【００４６】
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドの可変領域は互いに会合して、第１の標的タンパク質に対する結合部位及び第２の標的タンパク質に対する結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドのＶＬ１と第２のポリペプチドのＶＨ１が会合して、第１の標的タンパク質に結合する結合部位を形成し、第２のポリペプチドのＶＬ２と第１のポリペプチドのＶＨ２が会合して、第２の標的タンパク質に結合する結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、第１の標的タンパク質はＢＡＦＦであり、第２の標的タンパク質はＩＬ２３Ａである。他の実施形態では、第１の標的タンパク質はＩＬ２３Ａであり、第２の標的タンパク質はＢＡＦＦである。用語「第１」及び「第２」は、いずれかの標的タンパク質に対する重要度を意味することを意図しないと理解すべきである。
【００４７】
ＶＬ１、ＶＨ１、ＶＬ２、及びＶＨ２のそれぞれに対する例示的な配列の組み合わせを、以下の表１、また実施例１の表２に示す。
【００４８】
【表１】
2018527323.tif 000003
【００４９】
いくつかの実施形態では、化合物は、第１の軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＬ１配列と、第１の重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＨ１配列と、第２の軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＬ２配列と、第２の重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＨ２配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、表１に記載する１つ以上のＶＬ１、ＶＨ１、ＶＬ２、及びＶＨ２配列のＣＤＲである。表１に記載するＶＬ１、ＶＨ１、ＶＬ２、及びＶＨ２配列の例示的な軽鎖及び重鎖ＣＤＲ配列を以下に示す：
配列番号１のＣＤＲ：ＧＧＴＦＮＮＮＡＩＮ（配列番号９２）（ＣＤＲ１）、ＧＩＩＰＭＦＧＴＡＫＹＳＱＮＦＱＧ（配列番号９３）（ＣＤＲ２）、ＳＲＤＬＬＬＦＰＨＨＡＬＳＰ（配列番号９４）（ＣＤＲ３）
配列番号２のＣＤＲ：ＱＧＤＳＬＲＳＹＹＡＳ（配列番号９５）（ＣＤＲ１）、ＧＫＮＮＲＰＳ（配列番号９６）（ＣＤＲ２）、ＳＳＲＤＳＳＧＮＨＷＶ（配列番号９７）（ＣＤＲ３）
配列番号３のＣＤＲ：ＧＹＴＦＴＤＱＴＩＨ（配列番号９８）（ＣＤＲ１）、ＹＩＹＰＲＤＤＳＰＫＹＮＥＮＦＫＧ（配列番号９９）（ＣＤＲ２）、ＰＤＲＳＧＹＡＷＦＩＹ（配列番号１００）（ＣＤＲ３）
配列番号４のＣＤＲ：ＫＡＳＲＤＶＡＩＡＶＡ（配列番号１０１）（ＣＤＲ１）、ＷＡＳＴＲＨＴ（配列番号１０２）（ＣＤＲ２）、ＨＱＹＳＳＹＰＦＴ（配列番号１０３）（ＣＤＲ３）
配列番号８４のＣＤＲ：ＤＨＩＦＳＩＨＷＭＱ（配列番号１０４）（ＣＤＲ１）、ＥＩＦＰＧＳＧＴＴＤＹＮＥＫＦＫＧ（配列番号１０５）（ＣＤＲ２）、ＧＡＦＤＹ（配列番号１０６）（ＣＤＲ３）
配列番号８５のＣＤＲ：ＲＡＳＱＤＩＧＮＲＬＳ（配列番号１０７）（ＣＤＲ１）、ＡＴＳＳＬＤＳ（配列番号１０８）（ＣＤＲ２）、ＬＱＹＡＳＳＰＦＴ（配列番号１０９）（ＣＤＲ３）
配列番号８６のＣＤＲ：ＤＨＩＦＳＩＨＷＭＱ（配列番号１１０）（ＣＤＲ１）、ＥＩＦＰＧＳＧＴＴＤＹＮＥＫＦＫＧ（配列番号１１１）（ＣＤＲ２）、ＧＡＦＤＹ（配列番号１１２）（ＣＤＲ３）
配列番号８７のＣＤＲ：ＲＡＳＱＤＩＧＮＲＬＮ（配列番号１１２）（ＣＤＲ１）、ＡＴＳＳＬＤＳ（配列番号１１３）（ＣＤＲ２）、ＬＱＹＡＳＳＰＦＴ（配列番号１１４）（ＣＤＲ３）
配列番号８８のＣＤＲ：ＧＹＳＦＳＴＦＦＩＨ（配列番号１１５）（ＣＤＲ１）、ＲＩＤＰＮＳＧＡＴＫＹＮＥＫＦＥＳ（配列番号１１６）（ＣＤＲ２）、ＧＥＤＬＬＩＲＴＤＡＬＤＹ（配列番号１１７）（ＣＤＲ３）
配列番号８９のＣＤＲ：ＫＡＳＱＮＡＧＩＤＶＡ（配列番号１１８）（ＣＤＲ１）、ＳＫＳＮＲＹＴ（配列番号１１９）（ＣＤＲ２）、ＬＱＹＲＳＹＰＲＴ（配列番号１２０）（ＣＤＲ３）
配列番号９０のＣＤＲ：ＧＹＳＦＳＴＦＦＩＨ（配列番号１２１）（ＣＤＲ１）、ＧＲＩＤＰＮＳＧＡＴＫＹＮＥＫＦＥＳ（配列番号１２２）（ＣＤＲ２）、ＧＥＤＬＬＩＲＴＤＡＬＤＹ（配列番号１２３）（ＣＤＲ３）
配列番号９１のＣＤＲ：ＫＡＳＱＮＡＧＩＤＶＡ（配列番号１２４）（ＣＤＲ１）、ＳＫＳＮＲＹＴ（配列番号１２５）（ＣＤＲ２）、ＬＱＹＲＳＹＰＲＴ（配列番号１２６）（ＣＤＲ３）
【００５０】
いくつかの実施形態では、化合物は、表１に記載する配列に対して、（配列全長にわたる残基単位で）少なくとも８０％（例えば、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）同一である配列を含むＶＨ１、ＶＬ１、ＶＨ２、及び／またはＶＬ２を含む。２つのアミノ酸配列の「同一性パーセント」は、Ｋａｒｌｉｎ  ａｎｄ  Ａｌｔｓｃｈｕｌ  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８７：２２６４−６８，１９９０のアルゴリズムをＫａｒｌｉｎ  ａｎｄ  Ａｌｔｓｃｈｕｌ  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：５８７３−７７，１９９３に従って修正して使用し、決定する。このようなアルゴリズムは、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−１０，１９９０のＮＢＬＡＳＴ及びＸＢＬＡＳＴプログラム（バージョン２．０）に組み込まれている。ＸＢＬＡＳＴプログラムでスコア＝５０、ワード長＝３としてＢＬＡＳＴタンパク質検索を実行することにより、目的のタンパク質分子に相同なアミノ酸配列を得ることができる。２つの配列間にギャップが存在する場合、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５（１７）：３３８９−３４０２，１９９７に記載のように、Ｇａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴを利用することができる。ＢＬＡＳＴ及びＧａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴプログラムを利用する際、それぞれのプログラム（例えば、ＸＢＬＡＳＴ及びＮＢＬＡＳＴ）の初期設定パラメーターを使用することができる。
【００５１】
いくつかの実施形態では、化合物は、表１に記載の配列中に１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれ以上）の変異を含んでいる配列を含むＶＨ１、ＶＬ１、ＶＨ２、及び／またはＶＬ２を含む。そのような変異は保存的アミノ酸置換であり得る。本明細書で使用される場合、「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸置換がなされるタンパク質の相対電荷またはサイズ特性を変化させないアミノ酸置換を指す。アミノ酸の保存的置換としては、例えば、（ａ）Ｍ、Ｉ、Ｌ、Ｖ；（ｂ）Ｆ、Ｙ、Ｗ；（ｃ）Ｋ、Ｒ、Ｈ；（ｄ）Ａ、Ｇ；（ｅ）Ｓ、Ｔ；（ｆ）Ｑ、Ｎ；及び（ｇ）Ｅ、Ｄの各群内のアミノ酸間でなされる置換が挙げられる。
【００５２】
化合物のヒンジ領域、ＣＨ２、及びＣＨ３（場合によりＣＨ１及びＣＬ、化合物が当該領域を含んでいる場合）のアミノ酸配列は、任意の適切な起源、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４などの抗体の定常領域に由来してもよい。抗体の重鎖及び軽鎖定常領域のアミノ酸配列は、当技術分野で周知であり、例えば、ＩＭＧＴデータベース（ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ）またはｗｗｗ．ｖｂａｓｅ２．ｏｒｇ／ｖｂｓｔａｔ．ｐｈｐ．に提供されているものがあり、そのいずれのサイトも参照により本明細書に組み込まれる。さらに、いくつかの発現系では、ＣＨ３ドメインのＣ末端リジン残基を翻訳後に除去してもよい。したがって、ＣＨ３ドメインのＣ末端リジン残基は任意のアミノ酸残基である。具体的に本発明によって提供されるのは、ＣＨ３ドメインのＣ末端リジン残基を欠失する分子である。また、具体的に本発明に包含されるのは、ＣＨ３ドメインのＣ末端リジン残基を含むそのような構築物である。いくつかの実施形態では、ＣＨ２及びＣＨ３のアミノ酸配列は、ＩｇＧ１（例えば、配列番号７５）またはＩｇＧ４（例えば、配列番号７３）に由来する。いくつかの実施形態では、ＣＬは、カッパＣＬまたはラムダＣＬのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ヒンジ領域は、アミノ酸配列ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号７６）を含む。配列番号７６のヒンジ領域は、例えば、配列番号５のポリペプチドに存在する。他の実施形態では、ヒンジ領域は、アミノ酸配列ＬＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号１３０）を含む。配列番号１３０のヒンジ領域は、例えば、配列番号９のポリペプチドに存在する。配列番号１３０のヒンジ領域はまた、配列番号１２９のＦｃドメインの先頭に存在する。さらに他の実施形態では、ヒンジ領域は、アミノ酸配列ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰ（配列番号１３４）を含む。配列番号１３４のヒンジ領域は、例えば、配列番号１３のポリペプチドに存在する。配列番号１３４のヒンジ領域はまた、配列番号１２７のＦｃドメインの先頭に存在する。
【００５３】
いくつかの実施形態では、化合物のＣＨ２及び／またはＣＨ３（場合によりＣＨ１及びＣＬ、化合物が当該領域を含んでいる場合）は、野生型ＣＨ２またはＣＨ３とは異なる１つ以上のアミノ酸置換、例えば、野生型ＩｇＧ１のＣＨ２またはＣＨ３に１つ以上のアミノ酸置換、または野生型ＩｇＧ４のＣＨ２またはＣＨ３に１つ以上のアミノ酸置換を含んでもよい（配列番号３９は例示的な野生型ＩｇＧ１を示す）。そのような置換は当技術分野で既知である（例えば、ＵＳ７７０４４９７、ＵＳ７０８３７８４、ＵＳ６８２１５０５、ＵＳ８３２３９６２、ＵＳ６７３７０５６、及びＵＳ７４１６７２７を参照）。
【００５４】
いくつかの実施形態では、ＣＨ２は、従来抗体に対するＫａｂａｔと同様のＥＵインデックスによる番号の２３４位、２３５位、２５２位、２５４位、及び／または２５６位にアミノ酸置換を含む（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，１９９１、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。本明細書に記載のアミノ酸位置はすべて、従来抗体に対するＫａｂａｔと同様のＥＵインデックス番号を指すと理解すべきである。いくつかの実施形態では、ＣＨ２は、２５２位、２５４位、及び／または２５６位にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、２５２位のアミノ酸は、チロシン、フェニルアラニン、セリン、トリプトファン、またはスレオニンである。いくつかの実施形態では、２５４位のアミノ酸はスレオニンである。いくつかの実施形態では、２５４位のアミノ酸はセリン、アルギニン、グルタミン、グルタミン酸、またはアスパラギン酸である。いくつかの実施形態では、ＣＨ２は、２５２位にチロシン、２５４位にスレオニン、２５６位にグルタミン酸を含む（本明細書でＹＴＥ変異体と称する）。いくつかの実施形態では、ＣＨ２は、２３４位及び／または２３５位にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ２は、２３４位にアラニン、及び２３５位にアラニンを含み、これはまた本明細書でＫＯ変異体とも称する。いくつかの実施形態では、ＣＨ２は、２５２位にチロシン、２５４位にスレオニン、２５６位にグルタミン酸、２３４位にアラニン、及び２３５位にアラニンを含み、これはまた本明細書でＫＯ−ＹＴＥ変異体とも称する。
【００５５】
いくつかの実施形態では、１つ以上のリンカーを使用して、第１及び／または第２のポリペプチドにあるドメイン／領域を一つに連結することができる。例えば、第１のポリペプチドは、ＶＬ１とＶＨ２との間にリンカーを含んでもよい。第１のポリペプチドはさらに、（上記の構成に応じて）ＶＬ１またはＶＨ２とヒンジとの間にリンカーを含む（例えば、−ＶＬ１−リンカー−ヒンジ、または−ＶＨ２−リンカー−ヒンジ）。第１のポリペプチドがＣＨ１を含む場合、例えば、第１のポリペプチドは、（上記の構成に応じて）ＶＬ１またはＶＨ２とＣＨ１との間にリンカーを含んでもよい（例えば、−ＶＬ１−リンカー−ＣＨ１、または−ＶＨ２−リンカー−ＣＨ１）。別の例では、第２のポリペプチドは、ＶＬ２とＶＨ１との間にリンカーを含んでもよい。第２のポリペプチドはさらに、ポリペプチド鎖のＣ末端のＶＬ２またはＶＨ１の後ろにリンカーを含んでもよい（上記の構成に応じて、例えば−ＶＬ２−リンカー、または−ＶＨ１−リンカー）。第２のポリペプチドがさらにＣＬを含む場合、第２のポリペプチドはさらに、（上記の構成に応じて）ＶＬ２またはＶＨ１とＣＬとの間にリンカーを含んでもよい（同様に、例えば−ＶＬ２−リンカー−ＣＬ、または−ＶＨ１−リンカー−ＣＬ）。当然ながら、任意の数のリンカーを使用して、任意のドメインまたは領域を第１のポリペプチドの任意の他のドメインまたは領域に連結することも、及び／または任意の数のリンカーを使用して、任意のドメインまたは領域を第２のポリペプチドの他の任意の別のドメインまたは領域に連結することもできる。
【００５６】
当技術分野で既知の好適なリンカーのいずれをも本明細書での使用が企図される。いくつかの実施形態では、リンカーはペプチドリンカーである。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、少なくとも２つのアミノ酸、例えば２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれ以上のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、５０、４０、３０、２５、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、または２以下のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、２〜５０、２〜４０、２〜３０、２〜２０、２〜１０、２〜９、２〜８、２〜７、または２〜６アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、アミノ酸配列ＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号６９）、ＬＧＧＧＳＧ（配列番号７０）、ＦＮＲＧＥＣ（配列番号７１）、ＶＥＰＫＳＣ（配列番号７２）、ＧＧＣＧＧＧＥＶＡＡＣＥＫＥＶＡＡＬＥＫＥＶＡＡＬＥＫＥＶＡＡＬＥＫ（配列番号８２）、ＧＧＣＧＧＧＫＶＡＡＣＫＥＫＶＡＡＬＫＥＫＶＡＡＬＫＥＫＶＡＡＬＫＥ（配列番号８３）またはそれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、リンカー配列の複数のコピー、例えば、配列ＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号６９）、ＬＧＧＧＳＧ（配列番号７０）、ＦＮＲＧＥＣ（配列番号７１）、ＶＥＰＫＳＣ（配列番号７２）またはそれらの組み合わせの複数のコピーを含んでもよい。
【００５７】
いくつかの実施形態では、第１及び第２のポリペプチドは、以下の構成：
第１のポリペプチドの構成１：Ｎ−ＶＬ１−ＶＨ２−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−Ｃ、
第１のポリペプチドの構成２：Ｎ−ＶＨ２−ＶＬ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−Ｃ、
第２のポリペプチドの構成１：Ｎ−ＶＬ２−ＶＨ１−Ｃ、
第２のポリペプチドの構成２：Ｎ−ＶＨ１−ＶＬ２−Ｃを有し、
第１のポリペプチドのＶＬ１とＶＨ２との間の第１のリンカー、または第２のポリペプチドのＶＬ２とＶＨ１との間の第２のリンカーは、アミノ酸配列ＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号６９）を含む。いくつかの実施形態では、前記第１のリンカー及び前記第２のリンカーは、アミノ酸配列ＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号６９）を含む。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドはさらに、ＶＨ２またはＶＬ２と前記ヒンジ領域との間に第３のリンカーを含み、第２のポリペプチドはさらに、前記ＶＨ１またはＶＬ２（そのＣ末端）の後ろに第４のリンカーを含む。いくつかの実施形態では、前記第１のポリペプチドの前記第３のリンカーは、アミノ酸配列ＧＧＣＧＧＧＥＶＡＡＣＥＫＥＶＡＡＬＥＫＥＶＡＡＬＥＫＥＶＡＡＬＥＫ（配列番号８２）を含み、前記第２のポリペプチドの前記第４のリンカーは、アミノ酸配列ＧＧＣＧＧＧＫＶＡＡＣＫＥＫＶＡＡＬＫＥＫＶＡＡＬＫＥＫＶＡＡＬＫＥ（配列番号８３）を含む。他の実施形態では、前記第１のポリペプチドの前記第３のリンカーは、アミノ酸配列ＧＧＣＧＧＧＫＶＡＡＣＫＥＫＶＡＡＬＫＥＫＶＡＡＬＫＥＫＶＡＡＬＫＥ（配列番号８３）を含み、前記第２のポリペプチドの前記第４のリンカーは、アミノ酸配列ＧＧＣＧＧＧＥＶＡＡＣＥＫＥＶＡＡＬＥＫＥＶＡＡＬＥＫＥＶＡＡＬＥＫ（配列番号８２）を含む。いくつかの実施形態では、前記第１のポリペプチドの前記第３のリンカーは、アミノ酸配列ＧＧＣＧＧＧＥＶＡＡＣＥＫＥＶＡＡＬＥＫＥＶＡＡＬＥＫＥＶＡＡＬＥＫ（配列番号８２）またはアミノ酸配列ＧＧＣＧＧＧＫＶＡＡＣＫＥＫＶＡＡＬＫＥＫＶＡＡＬＫＥＫＶＡＡＬＫＥ（配列番号８３）を含む。他の実施形態では、前記第２のポリペプチドの前記第４のリンカーは、アミノ酸配列ＧＧＣＧＧＧＥＶＡＡＣＥＫＥＶＡＡＬＥＫＥＶＡＡＬＥＫＥＶＡＡＬＥＫ（配列番号８２）またはアミノ酸配列ＧＧＣＧＧＧＫＶＡＡＣＫＥＫＶＡＡＬＫＥＫＶＡＡＬＫＥＫＶＡＡＬＫＥ（配列番号８３）を含む。いくつかの実施形態では、前記第３のリンカーは、アミノ酸配列ＶＥＰＫＳＣ（配列番号７２）またはアミノ酸配列ＦＮＲＧＥＣ（配列番号７１）を含む。いくつかの実施形態では、前記第４のリンカーは、アミノ酸配列ＦＮＲＧＥＣ（配列番号７１）またはアミノ酸配列ＶＥＰＫＳＣ（配列番号７２）を含む。いくつかの実施形態では、前記第３のリンカーは、アミノ酸配列ＶＥＰＫＳＣ（配列番号７２）を含み、前記第４のリンカーはアミノ酸配列ＦＮＲＧＥＣ（配列番号７１）を含む。アミノ酸配列ＦＮＲＧＥＣ（配列番号７１）は、ＣＬドメイン（配列番号７７）の最後の６アミノ酸残基であり、アミノ酸ＶＥＰＫＳＣ（配列番号７２）は、ＣＨ１の最後のアミノ酸及び配列番号７６のヒンジ領域の最初の５アミノ酸残基（配列番号５と同様）を含む。
【００５８】
いくつかの実施形態では、第１及び第２のポリペプチドは、以下の構成：
第１のポリペプチドの構成３：Ｎ−ＶＬ１−ＶＨ２−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−Ｃ、
第１のポリペプチドの構成４：Ｎ−ＶＨ２−ＶＬ１−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−Ｃ、
第２のポリペプチドの構成３：Ｎ−ＶＬ２−ＶＨ１−ＣＬ−Ｃ、
第２のポリペプチドの構成４：Ｎ−ＶＨ１−ＶＬ２−ＣＬ−Ｃを有し、
第１のポリペプチドの前記ＶＬ１と前記ＶＨ２との間の第１のリンカー、または第２のポリペプチドの前記ＶＬ２と前記ＶＨ１との間の前記第２のリンカーは、アミノ酸配列ＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号６９）を含む。いくつかの実施形態では、前記第１のリンカー及び前記第２のリンカーは、アミノ酸配列ＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号６９）を含む。いくつかの実施形態では、前記第１のポリペプチドはさらに、前記ＶＨ２またはＶＬ１と前記ＣＨ１との間に第３のリンカーを含み、第２のポリペプチドはさらに、前記ＶＨ１または前記ＶＬ２と前記ＣＬとの間に第４のリンカーを含む。いくつかの実施形態では、前記第３のリンカーまたは前記第４のリンカーは、アミノ酸配列ＬＧＧＧＳＧ（配列番号７０）を含む。いくつかの実施形態では、前記第３のリンカー及び前記第４のリンカーは、アミノ酸配列ＬＧＧＧＳＧ（配列番号７０）を含む。いくつかの実施形態では、前記第３のリンカー及び／または前記第４のリンカーは、任意のシステイン残基を含む。いくつかの実施形態では、前記第３のリンカー及び／または前記第４のリンカーは、アミノ酸配列ＧＧＣＧＧＧ（配列番号１３５）またはＬＧＧＣＧＧＧＳ（配列番号１３６）を含む。
【００５９】
いくつかの実施形態では、前記重鎖定常領域２（ＣＨ２）は、従来抗体に対するＫａｂａｔと同様のＥＵインデックスによる番号の２３４位にアラニン、及び２３５位にアラニンを含む。
【００６０】
いくつかの実施形態では、化合物は２つの第１のポリペプチドと２つの第２のポリペプチドとを含む。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドのうち一方のヒンジ、ＣＨ２、及びＣＨ３が、第１のポリペプチドのうち他方のヒンジ、ＣＨ２、及びＣＨ３と会合し、４価分子（例えば、２つの第１のポリペプチドが、それぞれの対応するヒンジ、ＣＨ２、及びＣＨ３ドメインとの会合により二量体化され、第１の標的タンパク質に特異的な２つの結合部位及び第２の標的タンパク質に特異的な２つの結合部位を含む４価分子を形成する）、すなわち実施例のセクションに記載される単量体または単量体抗体を形成する。第１のポリペプチドがＣＨ１ドメインをさらに含み、第２のポリペプチドがＣＬドメインをさらに含む場合、ＣＨ１及びＣＬドメインはまた、４価分子（例えば、２つの第１のポリペプチドが、それぞれの対応するヒンジ、ＣＨ２、及びＣＨ３ドメインとの会合により二量体化され、前記第１のポリペプチドそれぞれのＣＨ１が１つの前記第２のポリペプチドのＣＬと会合し、第１の標的タンパク質に対する２つの結合部位及び第２の標的タンパク質に対する２つの結合部位を含む４価分子を形成する）、すなわち実施例のセクションに記載される単量体、単量体抗体の形成に関与し得る。いくつかの実施形態では、２つの第１のポリペプチドは少なくとも１つのジスルフィド結合によって共に会合する。いくつかの実施形態では、前記化合物は、２つの前記第１のポリペプチドと２つの前記第２のポリペプチドとを含み、前記第１のポリペプチドのそれぞれが第３のリンカー、ヒンジ、ＣＨ２、及びＣＨ３を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが第４のリンカーを含み、さらにここで第１のポリペプチドのうち一方のヒンジ、ＣＨ２、及びＣＨ３が、第１のポリペプチドのうち他方のヒンジ、ＣＨ２、及びＣＨ３と会合し、前記第１のポリペプチドそれぞれの第３のリンカーが、前記第２のポリペプチドの一方の第４のリンカーと会合して、４価分子（例えば、実施例のセクションに記載される単量体、単量体抗体）（例えば、化合物Ｕ及びＴ）を形成する。
【００６１】
いくつかの実施形態では、本開示は、２つの第１のポリペプチドと２つの第２のポリペプチドとを含む化合物に関し、本化合物において、前記２つの第１のポリペプチドは少なくとも１つのジスルフィド結合によって共に会合し、かつ前記第１のポリペプチドのそれぞれが少なくとも１つのジスルフィド結合によって１つの前記第２のポリペプチドと会合し、
ここで前記第１のポリペプチドのそれぞれは、
（ｉ）第１の標的タンパク質に特異的な第１の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメイン（ＶＬ１）；
（ｉｉ）第２の標的タンパク質に特異的な第２の免疫グロブリンの重鎖可変ドメイン（ＶＨ２）；
（ｉｉｉ）重鎖定常領域１（ＣＨ１）、ヒンジ領域、重鎖定常領域２（ＣＨ２）、及び重鎖定常領域３（ＣＨ３）を含み、
前記第２のポリペプチドのそれぞれは、
（ｉ）前記第２の標的タンパク質に特異的な第２の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメイン（ＶＬ２）；
（ｉｉ）前記第１の標的タンパク質に特異的な第１の免疫グロブリンの重鎖可変ドメイン（ＶＨ１）、
（ｉｉｉ）軽鎖定常領域ドメイン（ＣＬ）を含み、
ここで第１のポリペプチドのうち一方のヒンジ、ＣＨ２、及びＣＨ３が、第１のポリペプチドのうち他方のヒンジ、ＣＨ２、及びＣＨ３と会合し、前記第１のポリペプチドそれぞれのＣＨ１が、前記第２のポリペプチドそれぞれのＣＬと会合して、４価分子を形成し、
本化合物において、
ａ）前記ＶＬ１及びＶＨ１は会合して、前記第１の標的タンパク質に結合する結合部位を形成し、
ｂ）前記ＶＬ２及びＶＨ２は会合して、前記第２の標的タンパク質に結合する結合部位を形成し、
ｃ）前記重鎖定常領域２（ＣＨ２）は、Ｋａｂａｔと同様のＥＵインデックスによる番号の２５２位にチロシン、２５４位にスレオニン、２５６位にグルタミン酸を含み、
ｄ）前記第１の標的タンパク質がＢＡＦＦであり、前記第２の標的タンパク質がＩＬ−２３Ａであるか、または前記第１の標的タンパク質がＩＬ−２３Ａであり、前記第２の標的タンパク質がＢＡＦＦであり、
さらに本化合物において、
（ｉ）前記ＶＬ１は配列番号２を含み、前記ＶＨ１は配列番号１を含み、前記ＶＬ２は配列番号４を含み、前記ＶＨ２は配列番号３を含むか、または
（ｉｉ）前記ＶＬ１は配列番号４を含み、前記ＶＨ１は配列番号３を含み、前記ＶＬ２は配列番号２を含み、前記ＶＨ２は配列番号１を含むか、または
（ｉｉｉ）前記ＶＬ１は配列番号８５を含み、前記ＶＨ１は配列番号８４を含み、前記ＶＬ２は配列番号４を含み、前記ＶＨ２は配列番号４を含むか、または
（ｉｖ）前記ＶＬ１は配列番号４を含み、前記ＶＨ１は配列番号３を含み、前記ＶＬ２は配列番号８５を含み、前記ＶＨ２は配列番号８４を含むか、または
（ｖ）前記ＶＬ１は配列番号８７を含み、前記ＶＨ１は配列番号８６を含み、前記ＶＬ２は配列番号４を含み、前記ＶＨ２は配列番号３を含むか、または
（ｖｉ）前記ＶＬ１は配列番号４を含み、前記ＶＨ１は配列番号３を含み、前記ＶＬ２は配列番号８７を含み、前記ＶＨ２は配列番号８６を含むか、または
（ｖｉｉ）前記ＶＬ１は配列番号８９を含み、前記ＶＨ１は配列番号８８を含み、前記ＶＬ２は配列番号４を含み、前記ＶＨ２は配列番号３を含むか、または
（ｖｉｉｉ）前記ＶＬ１は配列番号４を含み、前記ＶＨ１は配列番号３を含み、前記ＶＬ２は配列番号８９を含み、前記ＶＨ２は配列番号８８を含むか、または
（ｉｘ）前記ＶＬ１は配列番号９１を含み、前記ＶＨ１は配列番号９０を含み、前記ＶＬ２は配列番号４を含み、前記ＶＨ２は配列番号３を含むか、または
（ｘ）前記ＶＬ１は配列番号４を含み、前記ＶＨ１は配列番号３を含み、前記ＶＬ２は配列番号９１を含み、前記ＶＨ２は配列番号９０を含む。
【００６２】
上記態様に関するいくつかの実施形態では、前記第１のポリペプチドのそれぞれが、前記ＶＬ１と前記ＶＨ２との間に第１のリンカーをさらに含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが、前記ＶＬ２と前記ＶＨ１との間に第２のリンカーをさらに含む。いくつかの実施形態では、前記第１のリンカーまたは前記第２のリンカーは、アミノ酸配列ＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号６９）を含む。いくつかの実施形態では、前記第１のリンカー及び前記第２のリンカーは、アミノ酸配列ＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号６９）を含む。いくつかの実施形態では、前記第１のポリペプチドのそれぞれが、前記ＶＨ２または前記ＶＬ１と前記ＣＨ１との間に第３のリンカーをさらに含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが、前記ＶＨ１または前記ＶＬ２と前記ＣＬとの間に第４のリンカーをさらに含む。いくつかの実施形態では、前記第３のリンカーまたは前記第４のリンカーは、アミノ酸配列ＬＧＧＧＳＧ（配列番号７０）を含む。いくつかの実施形態では、前記第３のリンカー及び前記第４のリンカーは、アミノ酸配列ＬＧＧＧＳＧ（配列番号７０）を含む。いくつかの実施形態では、前記第３のリンカー及び／または前記第４のリンカーは、任意のシステイン残基を含む。いくつかの実施形態では、前記第３のリンカー及び／または前記第４のリンカーは、アミノ酸配列ＧＧＣＧＧＧ（配列番号１３５）またはＬＧＧＣＧＧＧＳ（配列番号１３６）を含む。いくつかの実施形態では、前記重鎖定常領域２（ＣＨ２）は、Ｋａｂａｔと同様のＥＵインデックスによる番号の２３４位にアラニン、及び２３５位にアラニンを含む。いくつかの実施形態では、前記ヒンジ領域、前記重鎖定常領域２（ＣＨ２）、または前記重鎖定常領域３（ＣＨ３）のアミノ酸配列は、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４に由来する。いくつかの実施形態では、前記ヒンジ領域は、アミノ酸配列ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号７６）、アミノ酸配列ＬＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号１３０）、またはアミノ酸配列ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰ（配列番号１３４）を含む。いくつかの実施形態では、（ｉ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｉｉ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号８のアミノ酸配列を含むか、または
（ｉｉｉ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号１３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号１４のアミノ酸配列を含むか、または
（ｉｖ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号１５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号１６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｖ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号２１のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号２２のアミノ酸配列を含むか、または
（ｖｉ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号２５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号２６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｖｉｉ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号２９のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号３０のアミノ酸配列を含むか、または
（ｖｉｉｉ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号３３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号３４のアミノ酸配列を含むか、または
（ｉｘ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号３７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号３８のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号４１のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号４２のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｉ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号４５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号４６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｉｉ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号４９のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号５０のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｉｉｉ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号５３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号５４のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｉｖ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号５５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号５６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｖ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号５７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号５８のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｖｉ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号５９のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号６０のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｖｉｉ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号６１のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号６２のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｖｉｉｉ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号６３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号６４のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｉｘ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号６５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号６６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号６７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号６８のアミノ酸配列を含む。
【００６３】
本開示の他の態様は、２つの第１のポリペプチドと２つの第２のポリペプチドとを含む化合物に関し、本化合物において、前記２つの第１のポリペプチドは少なくとも１つのジスルフィド結合によって共に会合し、かつ前記第１のポリペプチドのそれぞれが少なくとも１つのジスルフィド結合によって１つの前記第２のポリペプチドと会合し、さらにここで（ｉ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｉｉ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号８のアミノ酸配列を含むか、または
（ｉｉｉ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号１３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号１４のアミノ酸配列を含むか、または
（ｉｖ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号１５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号１６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｖ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号２１のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号２２のアミノ酸配列を含むか、または
（ｖｉ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号２５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号２６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｖｉｉ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号２９のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号３０のアミノ酸配列を含むか、または
（ｖｉｉｉ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号３３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号３４のアミノ酸配列を含むか、または
（ｉｘ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号３７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号３８のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号４１のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号４２のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｉ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号４５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号４６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｉｉ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号４９のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号５０のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｉｉｉ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号５３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号５４のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｉｖ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号５５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号５６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｖ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号５７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号５８のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｖｉ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号５９のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号６０のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｖｉｉ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号６１のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号６２のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｖｉｉｉ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号６３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号６４のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｉｘ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号６５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号６６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘ）前記第１のポリペプチドのそれぞれが配列番号６７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれが配列番号６８のアミノ酸配列を含む。
【００６４】
また、本明細書に記載の化合物と結合を競合する他の化合物、例えばＢＡＦＦ及びＩＬ２３Ａへの結合を本明細書に記載の化合物と競合する試験化合物も企図される。いくつかの実施形態では、試験化合物は、（配列の全長にわたるアミノ酸単位で）本明細書に記載の化合物と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有し得る。競合結合は、当技術分野で既知の任意のアッセイ、例えば、平衡結合、ＥＬＩＳＡ、表面プラズモン共鳴、または分光法を用いて決定することができる。
【００６５】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の化合物は、ＢＡＦＦとＩＬ２３Ａの両方に特異的に結合する。抗原またはエピトープに「特異的に結合する」化合物は、当技術分野で周知の用語であり、そのような特異的結合を決定する方法もまた当技術分野で周知である。ある分子が、特定の標的抗原に対して、別の標的に対するよりも高頻度で、迅速に、長時間持続して、及び／または高親和性で反応または会合する場合、その分子は「特異的結合」を示すと言われる。ある化合物が、他の物質と結合するよりも高親和性で、高結合活性で、より速やかに、及び／または長時間持続して結合する場合、その化合物は標的抗原またはエピトープと「特異的に結合する」。例えば、抗原（例えば、ＢＡＦＦまたはＩＬ２３Ａ）またはその抗原エピトープに特異的に（または優先的に）結合する化合物は、この標的抗原に対して、他の抗原または同じ抗原の他のエピトープに結合するよりも高親和性で、高結合活性で、より速やかに、及び／または長時間持続して結合する化合物である。また、この定義を読めば、例えば、第１の標的抗原に特異的に結合する化合物が、第２の標的抗原に特異的または優先的に結合してもしなくてもよいことが理解される。このように、「特異的結合」または「優先的結合」は、必ずしも排他的結合を必要としない（ただし、含むことは可能である）。必ずしもそうとは限らないが、一般的に結合について記述する場合、優先的結合を意味する。いくつかの例では、標的抗原またはそのエピトープに「特異的に結合する」化合物は、他の抗原または同じ抗原の他のエピトープに結合しない場合がある。
【００６６】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の化合物は、ＢＡＦＦ及びＩＬ２３またはそれらの抗原エピトープに対して適切な結合親和性を有する。本明細書で使用される場合、「結合親和性」とは、見かけの会合定数すなわちＫＡを指す。ＫＡは、解離定数（ＫＤ）の逆数である。明細書に記載の化合物は、標的抗原または抗原エピトープの一方または両方に対して、少なくとも１０−５、１０−６、１０−７、１０−８、１０−９、１０−１０、１０−１１、１０−１２Ｍまたはそれ以下の結合親和性（ＫＤ）を有し得る。結合親和性の増加はＫＤの低下に対応する。いくつかの実施形態では、明細書に記載の化合物は、標的抗原または抗原エピトープの一方または両方に対して、少なくとも１０−１１Ｍ以下の結合親和性（ＫＤ）を有する。化合物が、第３の抗原よりも第１の抗原及び第２の抗原に対して高結合親和性であることは、第３の抗原との結合のＫＡ（または数値ＫＤ）よりも、第１の抗原及び第２の抗原との結合のＫＡの方が高い（または数値ＫＤが小さい）ことにより表すことができる。この場合、化合物は、第１の抗原及び第２の抗原（例えば、第１の立体構造である第１のタンパク質またはその模倣体、及び第１の立体構造である第２のタンパク質またはその模倣体）に対して、第３の抗原（例えば、第２の立体構造である同じ第１または第２のタンパク質もしくはその模倣体；または第３のタンパク質）に対するよりも特異性を有する。結合親和性（例えば、特異性または他の比較について）の差は、少なくとも１．５、２、３、４、５、１０、１５、２０、３７．５、５０、７０、８０、９１、１００、５００、１０００、１０，０００、または１０５倍であり得る。
【００６７】
結合親和性（または結合特異性）は、平衡結合、ＥＬＩＳＡ、表面プラズモン共鳴、または分光法（例えば、蛍光アッセイを用いる）を含む様々な方法によって決定することができる。結合親和性を評価する際の例示的な条件は、ＨＢＳ−Ｐ緩衝液（１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．４、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、０．００５％（ｖ／ｖ）Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ  Ｐ２０）中でのものである。これらの技術を使用して、結合した結合タンパク質の濃度を標的タンパク質濃度の関数として測定することができる。結合した結合タンパク質の濃度（［結合］）は、遊離した標的タンパク質の濃度（［遊離］）及び標的上の結合タンパク質の結合部位の濃度と関係性があり、（Ｎ）が標的分子あたりの結合部位の数であるとき以下の式で表される：
［結合］＝［Ｎ］［遊離］／（Ｋｄ＋［遊離］）
【００６８】
ただし、例えば、ＥＬＩＳＡまたはＦＡＣＳ分析などの方法を用いて決定される親和性の定量的測定値を得れば十分な場合があるため、ＫＡを正確に求めることは必ずしも必要とされない。これはＫＡに比例するので、親和性が高いかどうか、例えば２倍高いかどうかを決定するなどの比較に使用することで、親和性の定性的測定を得ることや、または機能的アッセイ、例えばｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏアッセイでの活性などによる親和性の推定を得ることができる。
【００６９】
いくつかの実施形態では、化合物は、表２Ａに定義される第１のポリペプチドと第２のポリペプチドとを含む。いくつかの実施形態では、化合物は以下を含む：
（ｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号８のアミノ酸配列を含むか、または
（ｉｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号９のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号１０のアミノ酸配列を含むか、または
（ｉｖ）前記第１のポリペプチドが配列番号１１のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号１２のアミノ酸配列を含むか、または
（ｖ）前記第１のポリペプチドが配列番号１３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号１４のアミノ酸配列を含むか、または
（ｖｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号１５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号１６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｖｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号１７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号１８のアミノ酸配列を含むか、または
（ｖｉｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号１９のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号２０のアミノ酸配列を含むか、または
（ｉｘ）前記第１のポリペプチドが配列番号２１のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号２２のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘ）前記第１のポリペプチドが配列番号２３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号２４のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号２５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号２６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号２７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号２８のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｉｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号２９のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号３０のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｉｖ）前記第１のポリペプチドが配列番号３１のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号３２のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｖ）前記第１のポリペプチドが配列番号３３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号３４のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｖｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号３５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号３６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｖｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号３７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号３８のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｖｉｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号３９のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号４０のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｉｘ）前記第１のポリペプチドが配列番号４１のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号４２のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘ）前記第１のポリペプチドが配列番号４３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号４４のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号４５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号４６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号４７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号４８のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘｉｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号４９のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号５０のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘｉｖ）前記第１のポリペプチドが配列番号５１のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号５２のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘｖ）前記第１のポリペプチドが配列番号５３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号５４のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘｖｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号５５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号５６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘｖｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号５７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号５８のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘｖｉｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号５９のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号６０のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘｉｘ）前記第１のポリペプチドが配列番号６１のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号６２のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘｘ）前記第１のポリペプチドが配列番号６３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号６４のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘｘｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号６５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号６６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘｘｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号６７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号６８のアミノ酸配列を含む。
【００７０】
化合物、核酸、ベクター、及び細胞の作製方法
本開示の態様はまた、本明細書に記載の化合物または本明細書に記載のポリペプチド（例えば、本明細書に記載の第１または第２のポリペプチド）をコードする核酸を含むが、化合物またはポリペプチドは一緒にコードされていても個別にコードされていてもよい。当技術分野で既知のいずれの方法によっても、本明細書に記載の化合物または本明細書に記載のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを得ることができ、またポリヌクレオチドのヌクレオチド配列を決定することができる。
【００７１】
いくつかの実施形態では、核酸は発現ベクターなどのベクター内に含まれる。いくつかの実施形態では、ベクターは、核酸に機能的に連結されたプロモーターを含む。
【００７２】
本明細書に記載の化合物または本明細書に記載のポリペプチドの発現に種々のプロモーターを使用することができ、これには、限定されないが、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）中初期（ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ  ｅａｒｌｙ）プロモーター、ウイルスＬＴＲ、例えばラウス肉腫ウイルスＬＴＲ、ＨＩＶ−ＬＴＲ、ＨＴＬＶ−１  ＬＴＲ、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）初期プロモーター、Ｅ．ｃｏｌｉ  ｌａｃ  ＵＶ５プロモーター、及び単純ヘルペスｔｋウイルスプロモーターが含まれる。
【００７３】
また、調節可能なプロモーターを使用することもできる。そのような調節可能なプロモーターとしては、転写調節因子としてＥ．ｃｏｌｉ由来のｌａｃリプレッサーを使用し、ｌａｃオペレーターを有する哺乳動物細胞プロモーターからの転写を調節するもの［Ｂｒｏｗｎ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ，４９：６０３−６１２（１９８７）］、テトラサイクリンリプレッサー（ｔｅｔＲ）を使用するもの［Ｇｏｓｓｅｎ，Ｍ．，ａｎｄ  Ｂｕｊａｒｄ，Ｈ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：５５４７−５５５１（１９９２）；Ｙａｏ，Ｆ．ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ，９：１９３９−１９５０（１９９８）；Ｓｈｏｃｋｅｌｔ，  Ｐ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９２：６５２２−６５２６（１９９５）］が挙げられる。他の系として、エストラジオール、ＲＵ４８６、ジフェノールムリスレロン（ｄｉｐｈｅｎｏｌ  ｍｕｒｉｓｌｅｒｏｎｅ）、またはラパマイシンを使用するＦＫ５０６二量体、ＶＰ１６、またはｐ６５が挙げられる。誘導系はＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、及びＡｒｉａｄから入手可能である。
【００７４】
リプレッサーを含む調節可能なプロモーターをオペロンに使用することができる。一実施形態では、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ由来のｌａｃリプレッサーは、ｌａｃオペレーターを有する哺乳動物細胞プロモーターからの転写を調節する転写調節因子［Ｍ．Ｂｒｏｗｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ，４９：６０３−６１２（１９８７）］；Ｇｏｓｓｅｎ  ａｎｄ  Ｂｕｊａｒｄ（１９９２）；［Ｍ．  Ｇｏｓｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：５５４７−５５５１（１９９２）］として、テトラサイクリンリプレッサー（ｔｅｔＲ）と複合的に機能することができ、ｔｅｔＲは転写活性化因子（ＶＰ１６）と共にｔｅｔＲ哺乳動物細胞転写活性化因子融合タンパク質、ｔＴａ（ｔｅｔＲ−ＶＰ  １６）を生成し、ヒトサイトメガロウイルス（ｈＣＭＶ）主要最初期プロモーターに由来するｔｅｔＯを有する哺乳動物プロモーターと共に、哺乳動物細胞の遺伝子発現を制御するｔｅｔＲ−ｔｅｔオペレーター系を生成する。一実施形態では、テトラサイクリン誘導性スイッチを使用する（Ｙａｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ；Ｇｏｓｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：５５４７−５５５１（１９９２）；Ｓｈｏｃｋｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９２：６５２２−６５２６（１９９５））。
【００７５】
加えて、ベクターには、例えば、以下の一部またはすべてを含み得る：哺乳動物細胞における安定性または一過性トランスフェクタントを選別するためのネオマイシン遺伝子などの選択マーカー遺伝子；高レベル転写のためのヒトＣＭＶの最初期遺伝子からのエンハンサー／プロモーター配列；ｍＲＮＡ安定性のためのＳＶ４０からの転写終結及びＲＮＡプロセシングシグナル；適切なエピソーム複製のためのＳＶ４０ポリオーマ複製起点及びＣｏｌＥ１；内部リボソーム結合部位（ＩＲＥＳ）、万能マルチクローニング部位；センス及びアンチセンスＲＮＡのｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写のためのＴ７及びＳＰ６  ＲＮＡプロモーター。導入遺伝子を含んだベクターの作製に適するベクター及び方法は、当技術分野において周知であり、利用可能である。
【００７６】
核酸を含む発現ベクターは、従来技術（例えば、エレクトロポレーション、リポソームトランスフェクション、及びリン酸カルシウム沈殿）によって宿主細胞に移入することができ、次いでトランスフェクトされた細胞を従来技術によって培養し、本明細書に記載の化合物を産生させる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の化合物の発現を、構成的プロモーター、誘導性プロモーター、または組織特異的プロモーターにより調節する。
【００７７】
本明細書に記載の化合物または本明細書に記載のポリペプチドの発現に使用される宿主細胞は、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉなどの細菌細胞であってもよいが、真核細胞が好ましい。特に、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）などの哺乳動物細胞を、ヒトサイトメガロウイルス由来の主要中初期遺伝子プロモーターエレメントなどのベクターと組み合わせたものが、免疫グロブリンに有効な発現系である（Ｆｏｅｃｋｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（１９８６）“Ｐｏｗｅｒｆｕｌ  Ａｎｄ  Ｖｅｒｓａｔｉｌｅ  Ｅｎｈａｎｃｅｒ−Ｐｒｏｍｏｔｅｒ  Ｕｎｉｔ  Ｆｏｒ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｖｅｃｔｏｒｓ，”  Ｇｅｎｅ  ４５：１０１−１０６；Ｃｏｃｋｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０）“Ｈｉｇｈ  Ｌｅｖｅｌ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｏｆ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  Ｏｆ  Ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ  Ｉｎ  Ｃｈｉｎｅｓｅ  Ｈａｍｓｔｅｒ  Ｏｖａｒｙ  Ｃｅｌｌｓ  Ｕｓｉｎｇ  Ｇｌｕｔａｍｉｎｅ  Ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ  Ｇｅｎｅ  Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ，”  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ８：６６２−６６７）。
【００７８】
本明細書に記載の化合物または本明細書に記載のポリペプチドの発現には、種々の宿主発現ベクター系を利用することができる。そのような宿主発現系は、それによって本明細書に記載の化合物または本明細書に記載のポリペプチドのコード配列を産生し、続いてそれを精製することができる媒体を意味するが、適切なヌクレオチドコード配列で形質転換またはトランスフェクトした場合に、本明細書に記載の化合物をｉｎ  ｓｉｔｕで発現することができる細胞もまた意味する。それには、本明細書に記載の化合物のコード配列を含む、組換えバクテリオファージＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、もしくはコスミドＤＮＡ発現ベクターで形質転換された細菌（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ及びＢ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）などの微生物；本明細書に記載の化合物をコードする配列を含む組換え酵母発現ベクターで形質転換された酵母（例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｐｉｃｈｉａ）；本明細書に記載の化合物をコードする配列を含む組換えウイルス発現ベクター（例えばバキュロウイルス）で感染させた昆虫細胞系：本明細書に記載の分子化合物をコードする配列を含む、組換ウイルス発現ベクター（例えばカリフラワーモザイクウイルス（ＣａＭＶ）及びタバコモザイクウイルス（ＴＭＶ）で感染させたか、もしくは組換えプラスミド発現ベクター（例えば、Ｔｉプラスミド）で形質転換した植物細胞系；または、哺乳動物細胞系（例えば、哺乳動物細胞のゲノムに由来するプロモーター（例えば、メタロチオネインプロモーター）もしくは哺乳動物ウイルス由来のプロモーター（例えば、アデノウイルス後期プロモーター；ワクシニアウイルス７．５Ｋプロモーター）を含む組換え発現構築物を保有する、ＣＯＳ、ＣＨＯ、ＢＨＫ、２９３，２９３Ｔ、３Ｔ３細胞、リンパ性細胞（米国特許第５，８０７，７１５号を参照）、Ｐｅｒ  Ｃ．６細胞（Ｃｒｕｃｅｌｌにより開発されたヒト網膜細胞））が挙げられるが、これらに限定されない。
【００７９】
細菌系の場合、発現させる化合物の使用目的に応じて複数の発現ベクターを選択できる点で有利である。例えば、本明細書に記載の化合物の医薬組成物を生成するために、そのようなタンパク質を大量に作製する場合、容易に精製される融合タンパク質産物を高レベルで発現させるベクターが望ましい場合がある。そのようなベクターとしては、コード配列をｌａｃ  Ｚコード領域とインフレームになるようにベクターに個々にライゲートして、融合タンパク質を産生させることができる、Ｅ．ｃｏｌｉ発現ベクターｐＵＲ２７８（Ｒｕｔｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９８３）“Ｅａｓｙ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｏｆ  ｃＤＮＡ  Ｃｌｏｎｅｓ，”  ＥＭＢＯ  Ｊ．２：１７９１−１７９４）、ｐＩＮベクター（Ｉｎｏｕｙｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９８５）“Ｕｐ−Ｐｒｏｍｏｔｅｒ  Ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  Ｉｎ  Ｔｈｅ  ｌｐｐ  Ｇｅｎｅ  Ｏｆ  Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  Ｃｏｌｉ，”  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  １３：３１０１−３１１０；Ｖａｎ  Ｈｅｅｋｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）“Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  Ａｓｐａｒａｇｉｎｅ  Ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ  Ｉｎ  Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  Ｃｏｌｉ，”Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２４：５５０３−５５０９）などが挙げられるが、これらに限定されない。また、ｐＧＥＸベクターを使用して、外来ポリペプチドをグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）との融合タンパク質として発現させることもできる。一般に、そのような融合タンパク質は可溶性であり、マトリックスであるグルタチオンアガロースビーズへの吸着及び結合と、それに続く遊離グルタチオンの存在下での溶出により、溶解細胞から容易に精製することができる。ｐＧＥＸベクターは、クローニングされた標的遺伝子産物をＧＳＴ部分から放出できるようにトロンビンまたは第Ｘａ因子プロテアーゼ切断部位を含むように設計されている。
【００８０】
昆虫系においては、Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ  ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ核多角体病ウイルス（ＡｃＮＰＶ）が、外来遺伝子を発現するためのベクターとして使用される。このウイルスは、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞中で増殖する。コード配列をウイルスの非必須領域（例えば、ポリヘドリン遺伝子）に個々にクローニングして、ＡｃＮＰＶプロモーター（例えば、ポリヘドリンプロモーター）の制御下に置くことができる。
【００８１】
哺乳動物宿主細胞では、いくつかのウイルスによる発現系を使用することができる。アデノウイルスを発現ベクターとして使用する場合、目的の抗体コード配列を、アデノウイルス転写／翻訳制御複合体、例えば、後期プロモーター及び三元（ｔｒｉｐａｒｔｉｔｅ）リーダー配列とライゲートしてもよい。次いで、このキメラ遺伝子を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏ組換えによりアデノウイルスゲノムに挿入することができる。ウイルスゲノムの非必須領域（例えば、領域Ｅ１またはＥ３）への挿入により、感染宿主内で生存可能であり、かつ、免疫グロブリン分子を発現可能な組換えウイルスが得られる（例えば、Ｌｏｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８４）“Ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ  Ｔｒｉｐａｒｔｉｔｅ  Ｌｅａｄｅｒ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｅｎｈａｎｃｅｓ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ  Ｏｆ  ｍＲＮＡｓ  Ｌａｔｅ  Ａｆｔｅｒ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ，”Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８１：３６５５−３６５９を参照）。挿入された抗体コード配列の効率的な翻訳には、特異的開始シグナルもまた必要な場合がある。このようなシグナルとしては、ＡＴＧ開始コドン及び隣接配列が挙げられる。さらに、全インサートが確実に翻訳されるように、開始コドンが、目的のコード配列のリーディングフレームと一致していなければならない。この外因性翻訳制御シグナル及び開始コドンは、天然及び合成いずれもの種々の起源のものであり得る。適切な転写エンハンサーエレメント、転写ターミネーターなどを組み込むことにより発現効率を高めることができる（Ｂｉｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）“Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  Ｆｏｒ  Ｙｅａｓｔ，”  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５３：５１６−５４４を参照）。
【００８２】
加えて、挿入された配列の発現を調節する宿主細胞株、または望ましい特定の様式で遺伝子産物を修飾し、プロセシングする宿主細胞株を選択することができる。タンパク質産物のこのような修飾（例えば、グリコシル化）及びプロセシング（例えば、切断）が、タンパク質の機能にとって重要となる場合がある。例えば、ある種の実施形態では、本明細書に記載の化合物を単一の遺伝子産物として（例えば、単一のポリペプチド鎖として、すなわちポリタンパク質前駆体として）発現させることができるが、その場合、本明細書に記載の化合物の個々のポリペプチドを形成するには、天然または組換え細胞機構によるタンパク質分解性切断が必要となる。したがって、本開示は、本明細書に記載の化合物のポリペプチドを含むポリタンパク質前駆体分子をコードし、前記ポリタンパク質前駆体の翻訳後切断を誘導できるコード配列を含む核酸配列を遺伝子操作することを包含する。ポリタンパク質前駆体の翻訳後切断により、本明細書に記載の化合物のポリペプチドが得られる。本明細書に記載の化合物のポリペプチドを含む前駆体分子の翻訳後切断は、ｉｎ  ｖｉｖｏで（すなわち、天然または組換えの細胞系／機構、例えば適切な部位でのフューリン切断によって宿主細胞内で）発生させても、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ（例えば、既知の活性のプロテアーゼまたはペプチダーゼを含む組成物中、及び／または望ましいタンパク質分解性作用を促進することが知られている条件または試薬を含む組成物中での前記ポリペプチド鎖のインキュベーション）で発生させてもよい。組換えタンパク質の精製及び修飾は当技術分野で周知であり、したがってポリタンパク質前駆体の設計には、当業者によって容易に理解される複数の実施形態を含み得る。記載する前駆体分子の修飾には、当技術分野で既知である任意のプロテアーゼまたはペプチダーゼ、例えば、トロンビンまたは第Ｘａ因子（Ｎａｇａｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９８５）“Ｏｘｙｇｅｎ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  Ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  Ｍｕｔａｎｔ  Ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎｓ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄ  Ｉｎ  Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  Ｃｏｌｉ，”  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２：７２５２−７２５５、及びＪｅｎｎｙ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）“Ａ  Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｆｏｒ  Ｃｌｅａｖａｇｅ  Ｏｆ  Ｆｕｓｉｏｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  Ｗｉｔｈ  Ｔｈｒｏｍｂｉｎ  Ａｎｄ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｘａ，”  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｘｐｒ．Ｐｕｒｉｆ．３１：１−１１に概説、それぞれ全体が参照により本明細書に組み込まれる）、エンテロキナーゼ（Ｃｏｌｌｉｎｓ−Ｒａｃｉｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）“Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ｂｏｖｉｎｅ  Ｅｎｔｅｒｏｋｉｎａｓｅ  Ｃａｔａｌｙｔｉｃ  Ｓｕｂｕｎｉｔ  Ｉｎ  Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  Ｃｏｌｉ  Ｕｓｉｎｇ  Ｔｈｅ  Ｎｏｖｅｌ  Ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ  Ｆｕｓｉｏｎ  Ｐａｒｔｎｅｒ  ＤｓｂＡ，”  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １３：９８２−９８７、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）、フーリン、及びＡｃＴＥＶ（Ｐａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）“Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  Ａｎｄ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  Ｆｒｏｍ  Ｆｕｓｉｏｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  Ｕｓｉｎｇ  Ａ  Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ｐｌａｎｔ  Ｖｉｒｕｓ  Ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ，”  Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２１６：４１３−４１７、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）、及び口蹄疫ウイルスプロテアーゼＣ３を使用することができる。
【００８３】
異なる宿主細胞は、タンパク質及び遺伝子産物の翻訳後プロセシング及び修飾に関して特徴的かつ特異的な機構を有する。発現された外来タンパク質の正確な修飾とプロセシングが確保されるように、適切な細胞系または宿主系を選択することができる。この目的のために、一次転写物の正確なプロセシング、遺伝子産物のグリコシル化及びリン酸化のための細胞機構を有する真核生物宿主細胞を使用してもよい。そのような哺乳動物宿主細胞としては、ＣＨＯ、ＶＥＲＹ、ＢＨＫ、Ｈｅｌａ、ＣＯＳ、ＭＤＣＫ、２９３、２９３Ｔ、３Ｔ３、ＷＩ３８、ＢＴ４８３、Ｈｓ５７８Ｔ、ＨＴＢ２、ＢＴ２０及びＴ４７Ｄ、ＣＲＬ７０３０、及びＨｓ５７８Ｂｓｔ細胞が挙げられるが、これらに限定されない。
【００８４】
組換えタンパク質を長期間にわたり高収率で産生するためには、安定した発現が好ましい。例えば、本明細書に記載の化合物を安定して発現する細胞株を遺伝子操作することができる。ウイルスの複製起点を含む発現ベクターを使用する代わりに、適切な発現制御エレメント（例えば、プロモーター、エンハンサー、配列、転写ターミネーター、ポリアデニル化部位など）により制御されるＤＮＡ、及び選択マーカーを用いて宿主細胞を形質転換することができる。外来ＤＮＡの導入後、遺伝子操作した細胞を富栄養培地で１〜２日間増殖させた後、選択培地に切り換えてもよい。組換えプラスミド中の選択マーカーは、選択に対する耐性を付与し、細胞がその染色体中にプラスミドを安定的に組み込み、増殖してフォーカスを形成することを可能にする。それによってフォーカスをクローニングして細胞株に拡大することができる。この方法は、本明細書に記載の化合物を発現する細胞株の遺伝子操作に使用する際に有利であり得る。そのような遺伝子操作された細胞株は、本明細書に記載の化合物と直接的または間接的に相互作用する化合物のスクリーニング及び評価に特に有用であり得る。
【００８５】
複数の選択系を使用することができ、限定するものではないが、例えば、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（Ｗｉｇｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９７７）“Ｔｒａｎｓｆｅｒ  Ｏｆ  Ｐｕｒｉｆｉｅｄ  Ｈｅｒｐｅｓ  Ｖｉｒｕｓ  Ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ  Ｋｉｎａｓｅ  Ｇｅｎｅ  Ｔｏ  Ｃｕｌｔｕｒｅｄ  Ｍｏｕｓｅ  Ｃｅｌｌｓ，”  Ｃｅｌｌ  １１：２２３−２３２）、ヒポキサンチン−グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｓｚｙｂａｌｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）“Ｕｓｅ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  ＨＰＲＴ  Ｇｅｎｅ  Ａｎｄ  Ｔｈｅ  ＨＡＴ  Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ  Ｉｎ  ＤＮＡ−Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ  Ｆｉｒｓｔ  Ｓｔｅｐｓ  Ｔｏｗａｒｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  Ａｎｄ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ，”  Ｂｉｏｅｓｓａｙｓ  １４：４９５−５００）、及びアデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｌｏｗｙ  ｅｔ  ａｌ．（１９８０）“Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ  ＤＮＡ：  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｔｈｅ  Ｈａｍｓｔｅｒ  ａｐｒｔ  Ｇｅｎｅ，”Ｃｅｌｌ  ２２：８１７−８２３）遺伝子が挙げられるが、これらはそれぞれｔｋ−、ｈｇｐｒｔ−、またはａｐｒｔ−細胞において使用することができる。また、以下の遺伝子については、代謝拮抗物質耐性を選択の基準として利用することができる：メトトレキサート耐性を付与するｄｈｆｒ（Ｗｉｇｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９８０）“Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ  Ｗｉｔｈ  Ａｎ  Ａｍｐｌｉｆｉａｂｌｅ  Ｄｏｍｉｎａｎｔ−Ａｃｔｉｎｇ  Ｇｅｎｅ，”  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：３５６７−３５７０；Ｏ’Ｈａｒｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９８１）“Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｍｏｕｓｅ  Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ  Ｔｏ  Ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ  Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  Ｂｙ  Ａ  Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ｐｌａｓｍｉｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ  Ａ  Ｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃ  Ｄｉｈｙｄｒｏｆｏｌａｔｅ  Ｒｅｄｕｃｔａｓｅ，”Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７８：１５２７−１５３１）；マイコフェノール酸耐性を付与するｇｐｔ（Ｍｕｌｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８１）“Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  Ｆｏｒ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌｓ  Ｔｈａｔ  Ｅｘｐｒｅｓｓ  Ｔｈｅ  Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  Ｇｅｎｅ  Ｃｏｄｉｎｇ  Ｆｏｒ  Ｘａｎｔｈｉｎｅ−Ｇｕａｎｉｎｅ  Ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｂｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，”  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７８：２０７２−２０７６）；アミノグリコシドＧ−４１８耐性を付与するｎｅｏ（Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ（１９９３）“Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｃｏｎｃｅｐｔｓ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｔｒｉａｌｓ  Ａｎｄ  Ｆｕｔｕｒｅ  Ｄｉｒｅｃｔｉｏｎｓ，”  Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．３２：５７３−５９６；Ｍｕｌｌｉｇａｎ（１９９３）“Ｔｈｅ  Ｂａｓｉｃ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｏｆ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ，”  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６０：９２６−９３２；及びＭｏｒｇａｎ  ���ｔ  ａｌ．（１９９３）“Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ，”Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６２：１９１−２１７）；及びハイグロマイシン耐性を付与するｈｙｇｒｏ（Ｓａｎｔｅｒｒｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９８４）“Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｏｆ  Ｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃ  Ｇｅｎｅｓ  Ｆｏｒ  Ｈｙｇｒｏｍｙｃｉｎ  Ｂ  Ａｎｄ  Ｇ４１８  Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  Ａｓ  Ｄｏｍｉｎａｎｔ−Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  Ｍａｒｋｅｒｓ  Ｉｎ  Ｍｏｕｓｅ  Ｌ  Ｃｅｌｌｓ，”Ｇｅｎｅ  ３０：１４７−１５６）。使用することができる組換えＤＮＡ技術の当技術分野で一般的に知られる方法は、Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），１９９３，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，ＮＹ；Ｋｒｉｅｇｌｅｒ，１９９０，Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ；及びｉｎ  Ｃｈａｐｔｅｒｓ  １２  ａｎｄ  １３，Ｄｒａｃｏｐｏｌｉ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ），１９９４，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，ＮＹ．；Ｃｏｌｂｅｒｒｅ−Ｇａｒａｐｉｎ  ｅｔ  ａｌ．１９８１）“Ａ  Ｎｅｗ  Ｄｏｍｉｎａｎｔ  Ｈｙｂｒｉｄ  Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  Ｍａｒｋｅｒ  Ｆｏｒ  Ｈｉｇｈｅｒ  Ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ  Ｃｅｌｌｓ，”Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５０：１−１４に記載されている。
【００８６】
本明細書に記載の化合物または本明細書に記載のポリペプチドの発現レベルは、ベクター増幅により上昇させることができる（概説については、Ｂｅｂｂｉｎｇｔｏｎ  ａｎｄ  Ｈｅｎｔｓｃｈｅｌ，Ｔｈｅ  ｕｓｅ  ｏｆ  ｖｅｃｔｏｒｓ  ｂａｓｅｄ  ｏｎ  ｇｅｎｅ  ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｃｌｏｎｅｄ  ｇｅｎｅｓ  ｉｎ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ＤＮＡ  ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｖｏｌ．３（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８７を参照）。本明細書に記載の化合物を発現するベクター系中のマーカーが増幅可能である場合、宿主細胞培養中に存在する阻害剤レベルを増加させればマーカー遺伝子のコピー数が増加する。増幅される領域は本明細書に記載の化合物または本明細書に記載のポリペプチドのヌクレオチド配列と関連しているため、ポリペプチドの産生もまた増加する（Ｃｒｏｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９８３）“Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ａｎｄ  Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ  Ｍｏｕｓｅ  Ｄｉｈｙｄｒｏｆｏｌａｔｅ  Ｒｅｄｕｃｔａｓｅ  Ｍｉｎｉｇｅｎｅｓ，”  Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．３：２５７−２６６）。
【００８７】
宿主細胞を、２つの発現ベクター、すなわち、本明細書に記載の化合物の第１のポリペプチドをコードする第１のベクターと、本明細書に記載の化合物の第２のポリペプチドをコードする第２のベクターとを用いて同時トランスフェクトしてもよい。この２つのベクターは、両方のポリペプチドの同等の発現を可能にする同一の選択マーカーを含有してもよい。あるいは、両方のポリペプチドをコードする単一ベクターを使用してもよい。本明細書に記載の化合物のポリペプチドに対するコード配列は、ｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡを含んでいてもよい。
【００８８】
本明細書に記載の化合物または本明細書に記載のポリペプチドを組換え発現した後は、ポリペプチド、ポリタンパク質、または抗体を精製するための（例えば、抗原選択性に基づいた抗体精製スキームと類似する）当技術分野で既知の任意の方法、例えば、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、特に特異的抗原に対する親和性によるもの（化合物がＦｃドメイン（またはその一部）を含む場合にはプロテインＡの選択後）、及びサイズ排除カラムクロマトグラフィー）、遠心分離、示差溶解度、またはポリペプチドもしくは抗体を精製するための他の任意の標準技術によって精製することができる。
【００８９】
本開示の他の態様は、本明細書に記載の核酸または本明細書に記載のベクターを含む細胞に関する。細胞は、原核細胞であっても真核細胞であってもよい。いくつかの実施形態では、細胞は哺乳動物細胞である。例示的な細胞型を本明細書に記載する。
【００９０】
本開示のさらに他の態様は、本明細書に記載の化合物または本明細書に記載のポリペプチド（例えば、第１のポリペプチドまたは第２のポリペプチド）の作製方法であって、本明細書に記載の細胞を得ることと、本明細書に記載の核酸を前記細胞に発現させることを含む方法に関する。いくつかの実施形態では、本方法は本明細書に記載の化合物または本明細書に記載のポリペプチドを単離して精製することをさらに含む。
【００９１】
医療に使用される治療方法及び組成物
本開示の他の態様は、医療に使用される治療方法及び組成物に関する。そのような方法及び組成物に使用される化合物の非限定的な例は、以下を含むものである：
（ｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号８のアミノ酸配列を含むか、または
（ｉｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号９のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号１０のアミノ酸配列を含むか、または
（ｉｖ）前記第１のポリペプチドが配列番号１１のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号１２のアミノ酸配列を含むか、または
（ｖ）前記第１のポリペプチドが配列番号１３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号１４のアミノ酸配列を含むか、または
（ｖｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号１５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号１６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｖｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号１７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号１８のアミノ酸配列を含むか、または
（ｖｉｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号１９のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号２０のアミノ酸配列を含むか、または
（ｉｘ）前記第１のポリペプチドが配列番号２１のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号２２のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘ）前記第１のポリペプチドが配列番号２３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号２４のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号２５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号２６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号２７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号２８のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｉｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号２９のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号３０のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｉｖ）前記第１のポリペプチドが配列番号３１のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号３２のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｖ）前記第１のポリペプチドが配列番号３３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号３４のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｖｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号３５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号３６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｖｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号３７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号３８のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｖｉｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号３９のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号４０のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｉｘ）前記第１のポリペプチドが配列番号４１のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号４２のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘ）前記第１のポリペプチドが配列番号４３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号４４のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号４５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号４６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号４７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号４８のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘｉｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号４９のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号５０のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘｉｖ）前記第１のポリペプチドが配列番号５１のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号５２のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘｖ）前記第１のポリペプチドが配列番号５３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号５４のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘｖｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号５５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号５６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘｖｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号５７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号５８のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘｖｉｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号５９のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号６０のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘｉｘ）前記第１のポリペプチドが配列番号６１のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号６２のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘｘ）前記第１のポリペプチドが配列番号６３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号６４のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘｘｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号６５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号６６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘｘｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号６７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号６８のアミノ酸配列を含む。
【００９２】
いくつかの実施形態では、治療方法または使用とは、自己免疫疾患または炎症性疾患の治療方法またはそのような方法の使用である。いくつかの実施形態では、方法は、本明細書に記載の化合物または前記化合物を含む医薬組成物を、対象、例えば自己免疫疾患または炎症性疾患を有するかまたは有するリスクのある対象に投与することを含む。
【００９３】
本明細書に記載の方法によって治療される対象は、哺乳動物、より好ましくはヒトであり得る。哺乳動物としては、家畜、競技用動物、ペット、霊長類、ウマ、イヌ、ネコ、マウス、及びラットが挙げられるが、これらに限定されない。治療を必要とするヒト対象は、疾患を有する対象、疾患リスクのある対象、または疾患が疑われる対象であり得る。疾患を有する対象は、例えば、身体検査、臨床検査、臓器機能検査、ＣＴスキャン、または超音波といった通常の検診により特定することができる。そのような疾患のいずれかを有することが疑われる対象は、疾患の１つ以上の症状を示す場合がある。疾患、例えば自己免疫疾患及び炎症性疾患の徴候及び症状は、当業者に周知されている。疾患リスクのある対象は、その疾患のリスク要因のうち１つ以上を有する対象であり得る。
【００９４】
自己免疫疾患の非限定的な例としては、ループス腎炎（ＬＮ）（腎臓に関連する全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ））、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、原発性シェーグレン症候群（ＰＳＳ）、シェーグレン病、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）（例えば、慢性移植片対宿主病（ｃＧＶＨＤ））、全身性強皮症（ＳＳｃ）、抗好中球細胞質自己抗体（ＡＮＣＡ）関連血管炎（ＡＡＶ）、関節リウマチ、乾癬、１型糖尿病、全身性エリテマトーデス、移植拒絶反応、自己免疫性甲状腺疾患（橋本病）、サルコイドーシス、強皮症、肉芽腫性血管炎、クローン病、潰瘍性大腸炎、シェーグレン病、強直性脊椎炎、乾癬性関節炎、多発性筋炎の皮膚筋炎、結節性多発動脈炎、免疫介在性水疱皮膚疾患、ベーチェット症候群、多発性硬化症、グッドパスチャー病、または免疫介在性糸球体腎炎が挙げられる。
【００９５】
炎症性疾患の非限定的例としては、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、円形脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群、自己免疫アジソン病、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性内耳疾患、自己免疫性リンパ増殖症候群（ＡＬＰＳ）、自己免疫性血小板減少性紫斑病（ＡＴＰ）、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、心筋症、セリアック病皮膚炎、慢性疲労症候群免疫不全症候群（ＣＦＩＤＳ）、慢性炎症性脱髄性多発神経障害、瘢痕性類天疱瘡、寒冷凝集素症、ＣＲＥＳＴ症候群、クローン病、デゴス病、皮膚筋炎、若年性皮膚筋炎、円板状ループス、本態性混合型クリオグロブリン血症、原発性線維筋痛症、グレーブス病、ギラン・バレー、橋本甲状腺炎、特発性肺胞線維症、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、ＩｇＡ腎症、インスリン依存性糖尿病（Ｉ型）、若年性関節炎、メニエール病、混合性結合組織病、多発性硬化症、重症筋無力症、尋常性天疱瘡、悪性貧血、結節性多発動脈炎、多発性軟骨炎、多腺性内分泌症候群、リウマチ性多発筋痛、多発性筋炎及び皮膚筋炎、原発性無ガンマグロブリン血症、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、レイノー現象、ライター症候群、リウマチ熱、サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症候群、スティッフパーソン症候群、高安動脈炎、側頭動脈炎／巨細胞動脈炎、潰瘍性大腸炎、ブドウ膜炎、血管炎、白斑、多発血管炎性肉芽腫症が挙げられる。いくつかの実施形態では、自己免疫疾患または炎症性疾患は、クローン病、強直性脊椎炎、または乾癬性関節炎である。
【００９６】
本明細書に開示する方法を実施するために、有効量の本明細書に記載の化合物または医薬組成物を、治療を必要とする対象（例えば、ヒト）に投与することができる。様々な送達系が知られており、本技術の化合物の投与に使用することができる。投与方法には、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、及び経口といった経路が挙げられるが、これらに限定されない。本技術の化合物は、例えば、輸液、ボーラス、または注射によって投与することができ、抗炎症薬などの他の生物学的に活性な薬剤と一緒に投与することができる。投与は全身でも局所でも可能である。好ましい実施形態では、投与は皮下注射によるものである。そのような注射用製剤は、例えば、隔週回投与することができるプレフィルドシリンジ製剤であってもよい。
【００９７】
本明細書で使用される場合、「有効量」とは、単独で、または１つ以上の他の化合物と組み合わせて、対象に治療効果を与えるのに必要な各化合物の量を指す。有効量は、当業者が認識しているように、治療する個別の病態、病態の重症度、年齢、体調、体格、性別及び体重を含む個々の対象のパラメーター、治療期間、併用療法の性質（受けている場合）、特定の投与経路、及び医療従事者の知識と経験の範囲内である同様の要因に応じて異なる。このような要因は、当業者に周知されており、通常の実験の範囲内で対処することができる。一般に、個々の成分またはその組み合わせの最大用量、すなわち堅実な医学的判断に基づいた最大安全用量を使用することが好ましい。ただし、医学的理由、心理的理由、または事実上他のいかなる理由から、対象が低い用量または耐用量を要求する場合があることを当業者は理解しているはずである。
【００９８】
半減期などの実験的考察は一般に、投与量を決定する一因となる。例えば、ヒト化抗体または完全ヒト抗体からの領域を含む化合物などの、ヒト免疫系と適合性がある化合物を使用すると、化合物の半減期を延長し、宿主の免疫系による化合物への攻撃を防止することができる。治療経過に応じて投与頻度を決定及び調整してもよく、必ずしもそうとは限らないが一般にこれは、疾患の治療及び／もしくは抑制ならびに／または改善及び／もしくは遅延に基づく。あるいは、化合物を持続的に連続して放出する製剤が適切な場合もある。持続放出を実現するための様々な製剤及びデバイスが当技術分野で既知である。
【００９９】
いくつかの実施形態では、投与量は、毎日、隔日、３日ごと、４日ごと、５日ごと、または６日ごとである。いくつかの実施形態では、投与頻度は、週１回、２週に１回、４週に１回、５週に１回、６週に１回、７週に１回、８週に１回、９週に１回、もしくは１０週に１回、または月１回、２か月に１回、３か月に１回であるか、またはそれ以降に１回である。この療法の進捗は、従来技術及びアッセイによって容易にモニターされる。（使用される化合物を含む）投与計画は、経時的に変更することができる。
【０１００】
いくつかの実施形態では、正常体重の成人対象の場合、約０．０１〜１０００ｍｇ／ｋｇの範囲の用量を投与することができる。いくつかの実施形態では、用量は１〜２００ｍｇである。個別の投与計画、すなわち用量、タイミング、及び反復は、個別の対象及びその対象の病歴に加え、化合物の特性（例えば、化合物の半減期及び当技術分野で周知の他の考慮事項）に応じて決定される。
【０１０１】
本開示の目的では、本明細書に記載の化合物の適切な投与量は、使用される具体的な化合物（またはその組成物）、製剤及び投与経路、疾患のタイプ及び重症度、化合物の投与が予防目的であるか治療目的であるか、過去の治療、対象の臨床歴及びアンタゴニストに対する反応性、ならびに主治医の裁量に応じて決定される。通常、臨床医は目的の結果を達成する投与量に到達するまで化合物を投与する。１つ以上の化合物の投与は、例えば、レシピエントの生理学的状態、投与の目的が治療的であるか予防的であるか、及び熟練従事者に既知である他の要因に応じて、連続的でも断続的でもよい。化合物の投与は、予め選択された期間にわたり本質的に連続していてもよく、または例えば疾患を発症する前、発症中、または発症後といった一連の間隔を空けた投与であってもよい。
【０１０２】
本明細書で使用される場合、用語「治療する」とは、疾患、疾患の症状、または疾患素因の治癒（ｃｕｒｅ、ｈｅａｌ）、緩和／軽減（ａｌｌｅｖｉａｔｅ、ｒｅｌｉｅｖｅ）、変化、回復、改善（ａｍｅｌｉｏｒａｔｅ、ｉｍｐｒｏｖｅ）、またはそれに対する作用を目的とした、疾患、疾患の症状、または疾患の素因を有する対象に、化合物または化合物を含む組成物を適用または投与することを指す。
【０１０３】
疾患を緩和することは、疾患の発症または進行を遅延させること、または疾患の重症度を低下させることを含む。疾患を緩和することは、必ずしも治癒結果を必要としない。本明細書で使用される場合、疾患の発症を「遅延させる（ｄｅｌａｙｉｎｇ）」とは、疾患の進行を延期（ｄｅｆｅｒ）、妨害、遅延（ｓｌｏｗ、ｒｅｔａｒｄ）、安定化、及び／または延期（ｐｏｓｔｐｏｎｅ）することを意味する。この遅延は、治療される疾患及び／または個体の履歴に応じて様々な期間であり得る。疾患の発症を「遅延」もしくは緩和する、または疾患の発現を遅延させる方法とは、この方法を使用しない場合と比較して、所与の時間枠内で疾患の１つ以上の症状を発症する確率を低下させる方法、及び／または所与の時間枠内で症状の程度を低下させる方法である。このような比較は通常、統計的に有意な結果を得るのに十分である複数の対象を用いた臨床試験に基づく。
【０１０４】
疾患の「発症」または「進行」とは、疾患の初期症状及び／またはその後の進行を意味する。疾患の発症は、当技術分野で周知の標準的な臨床技術を用いて検出及び評価することができる。ただし発症とはまた、検出不能であり得る進行も指す。この開示の目的で、発症または進行とは症状の生物学的経過を指す。「発症」には発生、再発、及び発現が含まれる。本明細書で使用される場合、疾患の「発現」または「発生」には、初期発現及び／または再発が含まれる。
【０１０５】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の化合物は、治療を必要とする対象に、ｉｎ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏでＢＡＦＦまたはＩＬ２３Ａの一方または両方の活性を少なくとも２０％（例えば、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、またはそれ以上）阻害するのに十分な量で投与される。化合物の阻害能力を決定するための方法は、当技術分野において既知である。例示的なＢＡＦＦ及びＩＬ２３Ａ阻害アッセイを実施例に記載する。
【０１０６】
治療すべき疾患のタイプまたは疾患の部位に応じて、医学分野の当業者に既知の従来の方法を使用して、化合物または医薬組成物を対象に投与することができる。この組成物はまた、例えば、経口、非経口、吸入スプレー、局所、直腸、鼻腔、頬側、膣、または埋込式リザーバーでの投与といった、他の従来の経路により投与することもできる。本明細書で使用される場合、用語「非経口」には、皮下、皮内、静脈内、筋肉内、関節内、動脈内、滑液内、胸骨内、髄腔内、病巣内、及び頭蓋内への注射または注入技術を含む。加えて、１か月、３か月、または６か月のデポー注射用または生分解性の材料及び方法を使用するような、注射によるデポー投与経路を介して対象に投与することができる。
【０１０７】
医薬組成物
さらに本開示の他の態様は、本明細書に記載の化合物を含む医薬組成物に関する。本技術の化合物（例えば、ＢＡＦＦ及びＩＬ２３Ａの両方に特異的な化合物）を含む組成物は、自己免疫疾患または炎症性疾患を有するかまたは有するリスクのある対象に投与することができる。本技術はさらに、自己免疫疾患または炎症性疾患を治療するための医薬品の製造における本技術の化合物の使用を提供する。化合物は、自己免疫疾患または炎症性疾患の予防または治療において、単独で、または他の組成物と組み合わせて投与することができる。そのような医薬組成物に使用される本技術の化合物の非限定的な例は、以下を含むものである：
（ｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号８のアミノ酸配列を含むか、または
（ｉｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号９のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号１０のアミノ酸配列を含むか、または
（ｉｖ）前記第１のポリペプチドが配列番号１１のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号１２のアミノ酸配列を含むか、または
（ｖ）前記第１のポリペプチドが配列番号１３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号１４のアミノ酸配列を含むか、または
（ｖｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号１５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号１６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｖｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号１７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号１８のアミノ酸配列を含むか、または
（ｖｉｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号１９のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号２０のアミノ酸配列を含むか、または
（ｉｘ）前記第１のポリペプチドが配列番号２１のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号２２のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘ）前記第１のポリペプチドが配列番号２３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号２４のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号２５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号２６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号２７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号２８のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｉｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号２９のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号３０のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｉｖ）前記第１のポリペプチドが配列番号３１のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号３２のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｖ）前記第１のポリペプチドが配列番号３３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号３４のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｖｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号３５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号３６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｖｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号３７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号３８のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｖｉｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号３９のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号４０のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｉｘ）前記第１のポリペプチドが配列番号４１のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号４２のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘ）前記第１のポリペプチドが配列番号４３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号４４のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号４５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号４６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号４７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号４８のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘｉｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号４９のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号５０のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘｉｖ）前記第１のポリペプチドが配列番号５１のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号５２のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘｖ）前記第１のポリペプチドが配列番号５３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号５４のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘｖｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号５５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号５６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘｖｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号５７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号５８のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘｖｉｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号５９のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号６０のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘｉｘ）前記第１のポリペプチドが配列番号６１のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号６２のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘｘ）前記第１のポリペプチドが配列番号６３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号６４のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘｘｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号６５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号６６のアミノ酸配列を含むか、または
（ｘｘｘｉｉ）前記第１のポリペプチドが配列番号６７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号６８のアミノ酸配列を含む。
【０１０８】
本明細書で使用される場合、用語「医薬組成物」は、薬学的に許容される担体と組み合わせた本明細書に記載の化合物の製剤を指す。医薬組成物はさらに、（例えば、特異的送達、半減期の延長、または他の治療化合物のための）追加薬剤を含むことができる。
【０１０９】
本明細書で使用される場合、用語「薬学的に許容される担体」は、身体のある部位（例えば送達部位）から別の部位（例えば、身体の器官、組織、または部分）への化合物の運搬または輸送に関与する、液体または固体の増量剤、希釈剤、賦形剤、製造助剤（例えば、潤沢剤、タルクマグネシウム、ステアリン酸カルシウムもしくはステアリン酸亜鉛、またはステアリン酸）、または溶媒封入材料などの、薬学的に許容される材料、組成物、またはビヒクルを意味する。薬学的に許容される担体は、製剤の他の成分と適合性があり、かつ対象の組織に有害でないという意味において「許容される」ものである（例えば、生理学的適合性、滅菌性、生理学的ｐＨなど）。薬学的に許容される担体として機能し得る材料の一部の例として、（１）ラクトース、グルコース、及びスクロースなどの糖；（２）コーンスターチ及びバレイショデンプンなどのデンプン；（３）カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、エチルセルロース、微結晶セルロース、及び酢酸セルロースなどのセルロース及びその誘導体；（４）粉末トラガント；（５）麦芽；（６）ゼラチン；（７）ステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、及びタルクなどの滑沢剤；（８）ココアバター及び坐剤用ワックスなどの賦形剤；（９）ピーナッツ油、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、コーン油、及び大豆油などの油；（１０）プロピレングリコールなどのグリコール；（１１）グリセリン、ソルビトール、マンニトール、及びポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などのポリオール；（１２）オレイン酸エチル及びラウリン酸エチルなどのエステル；（１３）寒天；（１４）水酸化マグネシウム及び水酸化アルミニウムなどの緩衝剤；（１５）アルギン酸；（１６）パイロジェンフリー水；（１７）等張生理食塩水；（１８）リンゲル溶液；（１９）エチルアルコール；（２０）ｐＨ緩衝溶液；（２１）ポリエステル、ポリカーボネート、及び／またはポリ無水物；（２２）ポリペプチド及びアミノ酸などの充填剤；（２３）血清アルブミン、ＨＤＬ、及びＬＤＬなどの血清成分；（２２）エタノールなどのＣ２〜Ｃ１２アルコール；ならびに（２３）医薬製剤に用いられる他の適合可能な非毒性物質が挙げられる。製剤にはまた、湿潤剤、着色剤、剥離剤、コーティング剤、甘味剤、矯味剤、着香剤、防腐剤、及び抗酸化剤が存在してもよい。「賦形剤」、「担体」、「薬学的に許容される担体」またはそれに類する用語は、本明細書で同じ意味で用いられる。
【０１１０】
いくつかの実施形態では、組成物中の本技術の化合物は、注射、カテーテル、坐剤、またはインプラントによって投与され、インプラントは、シラスティック（ｓｉａｌａｓｔｉｃ）膜などの膜または繊維を含む、多孔質、非多孔質、またはゼラチン状膜である。通常、組成物を投与する場合、本技術の化合物が吸収しない物質が使用される。
【０１１１】
他の実施形態では、本技術の化合物は制御放出系で送達される。一実施形態では、ポンプを使用してもよい（例えば、Ｌａｎｇｅｒ，１９９０，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７−１５３３；Ｓｅｆｔｏｎ，１９８９，ＣＲＣ  Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２０１；Ｂｕｃｈｗａｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９８０，Ｓｕｒｇｅｒｙ  ８８：５０７；Ｓａｕｄｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２１：５７４を参照）。別の実施形態では、高分子材料を使用することができる。（例えば、Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ（Ｌａｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｗｉｓｅ  ｅｄｓ．，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，Ｆｌａ．，１９７４）；Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ，Ｄｒｕｇ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ（Ｓｍｏｌｅｎ  ａｎｄ  Ｂａｌｌ  ｅｄｓ．，Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８４）；Ｒａｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｐｅｐｐａｓ，１９８３，Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｓｃｉ．Ｒｅｖ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．２３：６１を参照。また、Ｌｅｖｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２８：１９０；Ｄｕｒｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．２５：３５１；Ｈｏｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．７１：１０５を参照）。他の制御放出系は、例えば上記Ｌａｎｇｅｒに記載されている。
【０１１２】
本技術の化合物は、治療有効量の結合薬及び１つ以上の薬学的適合性成分を含む医薬組成物として投与することができる。
【０１１３】
通常の実施形態では、医薬組成物は、対象、例えば、ヒトへの静脈内または皮下投与に適合した医薬組成物として、通常の手順に従って製剤化される。通常、注射により投与される組成物は、滅菌等張性緩衝液の溶液である。必要に応じて、医薬品はまた、可溶化剤及び注射部位での疼痛を緩和するためのリグノカインなどの局所麻酔剤を含んでもよい。一般に、成分は個別に、または一つに混合されて単位剤形で、例えば、活性薬剤の量を表示したアンプルまたはサシェなどの密閉容器中の凍結乾燥粉末または水を含まない濃縮物として供給される。医薬品が注入によって投与される場合、医薬品等級の滅菌水または生理食塩水を入れた輸液ボトルで調剤することができる。医薬品が注射によって投与される場合、注射用の滅菌水または生理食塩水のアンプルを提供することで、投与前に成分を混合することができる。
【０１１４】
全身投与のための医薬組成物は、液体、例えば滅菌生理食塩水、乳酸加リンゲル液、またはハンクス液であり得る。加えて、医薬組成物は、固体形態であり、使用直前に再溶解または懸濁させることができる。凍結乾燥形態もまた企図される。
【０１１５】
医薬組成物は、非経口投与にも適している、リポソームまたは微結晶などの脂質粒子または小胞内に封入することができる。粒子は、組成物がその中に含まれている限り、単層または複数層などの任意の適切な構造のものであり得る。化合物は、融合誘導性脂質ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、低レベル（５〜１０モル％）のカチオン性脂質を含有し、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）コーティングにより安定化された、「安定化プラスミド脂質粒子」（ＳＰＬＰ）内に封入することができる（Ｚｈａｎｇ  Ｙ．Ｐ．ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．１９９９，６：１４３８−４７）。Ｎ−［１−（２，３−ジオレオイロキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチル−アンモニウムメチルサルフェート、すなわち「ＤＯＴＡＰ」などの正荷電脂質は、このような粒子及び小胞に特に好ましい。そのような脂質粒子の調製は周知である。例えば、米国特許第４，８８０，６３５号；同第４，９０６，４７７号；同第４，９１１，９２８号；同第４，９１７，９５１号；同第４，９２０，０１６号；及び同第４，９２１，７５７号を参照。
【０１１６】
本開示の医薬組成物は、例えば、単位用量として投与または包装することができる。本開示の医薬組成物に関して使用される場合、用語「単位用量」は、対象に対する単位投与量として適した物理的な個別単位を指し、各単位は、必要な希釈剤、すなわち担体またはビヒクルと共に望ましい治療効果を生じるように計算された所定量の活性物質を含有する。
【０１１７】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の化合物は、治療部分、例えば抗炎症剤とコンジュゲートされてもよい。そのような治療部分をポリペプチド（例えばＦｃドメインを含む）とコンジュゲートする技術は周知である。たとえば、Ａｍｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｆｏｒ  Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ  Ｏｆ  Ｄｒｕｇｓ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ”，ｉｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｒｅｉｓｆｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），１９８５，ｐｐ．２４３−５６，Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．）；Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ  ｅｔ  ａｌ．，“Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｆｏｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ”，ｉｎ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ（２ｎｄ  Ｅｄ．），Ｒｏｂｉｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），１９８７，ｐｐ．６２３−５３，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．）；Ｔｈｏｒｐｅ，“Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  Ｏｆ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ  Ｒｅｖｉｅｗ”，ｉｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ’８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｐｉｎｃｈｅｒａ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），１９８５，ｐｐ．４７５−５０６）；“Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｒｅｓｕｌｔｓ，Ａｎｄ  Ｆｕｔｕｒｅ  Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｕｓｅ  Ｏｆ  Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ”，ｉｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｂａｌｄｗｉｎ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），１９８５，ｐｐ．３０３−１６，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ；ａｎｄ  Ｔｈｏｒｐｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９８２）“Ｔｈｅ  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  Ｏｆ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｔｏｘｉｎ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ，”Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．，６２：１１９−１５８を参照。
【０１１８】
さらに、医薬組成物は、（ａ）凍結乾燥形態である本技術の化合物を含有する容器と、（ｂ）注射用の薬学的に許容される希釈剤（例えば、滅菌水）を含有する第２の容器とを含む医薬キットとして提供することができる。薬学的に許容される希釈剤を、本技術の凍結乾燥化合物の再構成または希釈に使用することができる。場合によって、そのような容器（複数可）には、医薬品または生物学的製品の製造、使用、または販売を規制する政府当局によって定められた形態の通知が添付されることがあり、この通知はヒト投与用の製造、使用、または販売に関する当局による認可を表す。
【０１１９】
別の態様では、上記の疾患の治療に有用な物質を含有する製品が含まれる。いくつかの実施形態では、製品は容器及びラベルを含む。好適な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、及び試験管が挙げられる。容器は、ガラスやプラスチックなどの種々の材料で形成されていてよい。いくつかの実施形態では、容器は、本明細書に記載の疾患の治療に有効である組成物を保有し、滅菌アクセスポートを有し得る。例えば、容器は、皮下注射針によって穿孔可能な栓を有する静注液バッグまたはバイアルであり得る。組成物中の活性薬剤は本技術の化合物である。いくつかの実施形態では、容器表面のラベルまたは容器に添付されるラベルには、選ばれた疾患の治療に組成物を使用する旨が表示されている。製品は、リン酸緩衝生理食塩水、リンゲル液、またはデキストロース溶液などの薬学的に許容される緩衝液を含む第２の容器をさらに含んでもよい。さらに商業的観点及び使用者の観点から望ましい他の材料、例えば緩衝液、希釈剤、フィルター、針、シリンジ、及び使用説明書付きの添付文書を含んでもよい。
【０１２０】
当業者は、これ以上の説明がなくとも上記の説明に基づいて、本開示を最大限に利用できると考えられる。したがって、以下の具体的な実施形態は、単なる例示として解釈されるものであり、いかなる場合においても本開示の残部を限定するものではない。本明細書に引用されるすべての刊行物は、本明細書で参照される目的または主題について参照として組み込まれる。
【実施例】
【０１２１】
実施例１．ＩＬ２３Ａ及びＢＡＦＦを標的とする例示的化合物の構築
本技術の化合物は、当技術分野で既知の組換え方法（例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ２００６／１１３６６５、ＷＯ２００８／１５７３７９、及びＷＯ２０１０／０８０５３８を参照。そのすべての内容が参照により本明細書に組み込まれる）により作製した。表２Ａは、以下の各実施例で利用した、ＩＬ２３Ａ及びＢＡＦＦの両方に結合する例示的な化合物を示している。簡潔には、各化合物のための第１及び第２のポリペプチドをコードするプラスミドを、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ  ＭＡＸ  Ｒｅａｇｅｎｔ（ＣＨＯ）を使用してＣＨＯ−Ｓ細胞に一緒にトランスフェクトした。細胞を１３〜１４日間培養し、この細胞によって産生された化合物を、プロテインＡクロマトグラフィーを使用して精製した。化合物を、サイズ排除クロマトグラフィーを使用してさらに精製した。
【表２Ａ−１】
2018527323.tif 000004
【表２Ａ−２】
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【表２Ａ−３】
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【表２Ａ−４】
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【表２Ａ−５】
2018527323.tif 000008
【０１２２】
比較目的で対照抗体も使用した。対照は、ＢＡＦＦまたはＩＬ２３のいずれかを標的とするモノクローナル抗体であった。
【表２Ｂ】
2018527323.tif 000009
【０１２３】
実施例２：化合物の熱安定性
方法
化合物のリン酸緩衝液溶液２ｍｇ／ｍｌの、熱的アンフォールディング及び凝集を、自動化キャピラリーＤＳＣ（ＭｉｃｒｏＣａｌ，ＬＬＣ、Ｂｏｓｔｏｎ）によって走査速度６０℃／時にて２０℃〜１１０℃でモニターした。対応する緩衝液で２回走査を実施して、機器の熱履歴を確認し、各サンプルについて機器ベースラインを得て、両走査の平均をその後のタンパク質サーモグラムから差し引くことにより、見かけの熱容量を得た。次いで走査を正規化してＯｒｉｇｉｎ  ７．０で分析した。それぞれの得られた熱容量サーモグラムから転移前のベースラインを差し引いて得られた超過熱容量（Ｃｐ，ｅｘ）を温度の関数として得た。転移温度（Ｔｍ）の報告値は、実験から得たサーモグラムの目視検査により決定されたピーク最大値の位置を表す。
【０１２４】
結果
結果を表３に示す。データは、ＩＬ２３Ａ及びＢＡＦＦを標的とする例示的な化合物の第１ピーク（Ｔｍ１）の転移温度範囲が、５１．５９〜７１．２５℃の範囲であることを示す。例示的な化合物すべてが同じ全体構造を有し、ＩＬ−２３Ａを標的とする同じＶＨ及びＶＬ遺伝子配列を含んでいたため、この結果は意外である。転移温度が高い化合物ほど安定であり、長期の貯蔵寿命を有すると予測される。
【表３】
2018527323.tif 000010
【０１２５】
実施例３．例示的な化合物の表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）親和性
試験化合物をＳＰＲによって分析し、ＢＡＦＦ及びＩＬ２３Ａに対する親和性を決定した。
【０１２６】
材料及び方法
ＳＰＲ実験は、ＰｒｏｔｅＯｎ  ＸＰＲ３６装置（Ｂｉｏ  Ｒａｄ）で実施した。０．５％ＳＤＳ、５０ｍＭ  ＮａＯＨ、及び１００ｍＭ  ＨＣｌを、垂直及び水平の両方向に流速３０μｌ／分にて６０秒間逐次注入してＧＬＭチップを予めコンディショニングした。
【０１２７】
次いで、１：１比のＥＤＣ（７６．７ｍｇ／ｍｌ）及びスルホ−ＮＨＳ（２１．７ｍｇ／ｍｌ）混合物を水平６チャネルに注入して、予めコンディショニングしたＧＬＭチップを活性化した。１０ｍＭ、ｐＨ５．０の酢酸ナトリウム緩衝液中の濃度３０μｇ／ｍｌのヤギ抗ヒトＩｇＧ（ＧＡＨＡ）Ｆｃガンマ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を、水平６チャネルの活性化されたＧＬＭチップ上に８０００レゾナンスユニットとなるように固定化した。最後に、水平６チャネルに１ＭエタノールアミンＨＣｌを入れ、このチップを不活性化させた。調製したＧＡＨＡチップを垂直方向に回転させて、垂直５チャネルにわたり試験化合物を捕捉し、最後のチャネルはカラム標準として使用した。
【０１２８】
次いで、捕捉したチップを再び水平方向に回転して結合させた。１０．０ｎＭ、５．００ｎＭ、２．５０ｎＭ、１．２５ｎＭ、及び０．６２５ｎＭの５種類の濃度の結合したヒトＩＬ−２３（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）を、以下のランニング緩衝液（Ｂｉｏ  Ｒａｄ）：リン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．４）、０．００５％Ｔｗｅｅｎ２０中で流速４０μｌ／分にて１０分間、試験化合物表面にわたって水平に注入した。２時間、解離させた。１０分間の会合及び２時間の解離の後、０．８５％リン酸（Ｂｉｏ  Ｒａｄ）を水平及び垂直の両方向に流速１００μｌ／分で短時間パルス注入（１８秒）して、ＧＡＨＡ表面を再生した。再生したＧＡＨＡは別の結合サイクルですぐに使用できる状態であった。カニクイザルＩＬ２３、ヒトＢＡＦＦ、またはカニクイザルＢＡＦＦへの化合物の結合を同様の方法で行ったが、ヒトＢＡＦＦまたはカニクイザルＢＡＦＦへの結合での滴定濃度は、６．２５ｎＭ、３．１２ｎＭ、１．５６ｎＭ、０．７８ｎＭ、及び０．３９ｎＭである。
【０１２９】
結果：
表４の結果は、試験した両方の化合物がピコモル範囲の解離定数（ＫＤ）でＢＡＦＦ及びＩＬ２３に結合できることを示している。
【表４】
2018527323.tif 000011
【０１３０】
実施例４．ＢＡＦＦＲ−ＣＨＯルシフェラーゼレポーター細胞におけるヒト及びカニクイザルＢＡＦＦ三量体誘導性ＮＦｋＢ活性化の阻害
材料／方法：
簡潔には、ヒトＢＡＦＦＲ  ＣＨＯ  ＮＦｋＢルシフェラーゼレポーター細胞を採取、洗浄、計数し、既知組成の無血清培地（Ｌｏｎｚａ）であるＸ−ＶＩＶＯ１５にペニシリン／ストレプトマイシン１％（ｖ／ｖ）を加えたアッセイ培地（ＡＭ）中に濃度１．６×１０６細胞／ｍｌで再懸濁した。組換えヒトまたはカニクイザルＢＡＦＦ三量体（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  ＩｎｇｅｌｈｅｉｍＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）をＡＭ中にて単一濃度（５２ｐＭ）で調製し、加湿インキュベーターにて、３７℃、５％ＣＯ２で３０分間、ＡＭ単独、または逐次滴定した試験化合物とプレインキュベートした。ＢＡＦＦと試験化合物のプレインキュベーション後、５０ｕｌの混合物（複数可）を５０ｕｌの細胞に添加し、試験プレートをさらに（上記の通り）３７℃で２４時間インキュベートした。対照サンプルに、ＡＭ（非刺激対照）またはＡＭで希釈した組換えＢＡＦＦ三量体（刺激対照）を加えた。２４時間のインキュベーション後、細胞懸濁液を１００ｕｌのＳＴＥＡＤＹ−Ｇｌｏ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて製造業者の指示に従って処理し、ルシフェラーゼ発現についてアッセイした。結果の相対発光量（ＲＬＵ）を試験化合物のＬｏｇ１０ナノモル濃度に対してプロットし、ＩＣ５０及びＩＣ９０値を、ＥｘｃｅｌアドインＸｌｆｉｔ（ＩＤ  Ｂｕｓｉｎｅｓｓ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ  Ｌｉｍｉｔｅｄ）でサポートされる４パラメーターロジスティックモデルを用いて算出した。試験化合物のＩＣ５０及びＩＣ９０値を上記のように算出し、複数の実験全体の幾何平均を算出し、表５及び表６に示した。
【０１３１】
結果：
試験化合物は、ＢＡＦＦＲ−ＣＨＯルシフェラーゼレポーター細胞においてヒト及びカニクイザルＢＡＦＦ三量体誘導性ＮＦｋＢ活性化を用量依存的に阻害した。表５及び６に示す結果は、試験化合物のＩＣ５０及びＩＣ９０の幾何平均値が対照ＢＡＦＦアンタゴニストに匹敵するか、またはそれよりも強力であることを示している。
【表５】
2018527323.tif 000012
【表６】
2018527323.tif 000013
【０１３２】
実施例５．ＴＡＣＩ−ＣＨＯルシフェラーゼレポーター細胞におけるヒトＢＡＦＦ三量体誘導性ＮＦｋＢ活性化の阻害
材料／方法：
簡潔には、ヒトＴＡＣＩ  ＣＨＯ  ＮＦｋＢルシフェラーゼレポーター細胞を採取、洗浄、計数し、既知組成の無血清培地（Ｌｏｎｚａ）であるＸ−ＶＩＶＯ１５にペニシリン／ストレプトマイシン１％（ｖ／ｖ）を加えたアッセイ培地（ＡＭ）中に濃度１．６×１０６細胞／ｍｌで再懸濁した。組換えヒトＢＡＦＦ三量体（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  ＩｎｇｅｌｈｅｉｍＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）をＡＭ中にて単一濃度（２２２ｐＭ）で調製し、加湿インキュベーターにて、３７℃、５％ＣＯ２で３０分間、ＡＭ単独、または逐次滴定した試験化合物とプレインキュベートした。ＢＡＦＦと試験化合物のプレインキュベーション後、５０ｕｌの混合物（複数可）を５０ｕｌの細胞に添加し、試験プレートをさらに（上記の通り）３７℃で２４時間インキュベートした。対照サンプルに、ＡＭ（非刺激対照）またはＡＭで希釈した組換えヒトＢＡＦＦ三量体（刺激対照）を加えた。２４時間のインキュベーション後、細胞懸濁液を１００ｕｌのＳＴＥＡＤＹ−Ｇｌｏ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて製造業者の指示に従って処理し、ルシフェラーゼ発現についてアッセイした。結果の相対発光量（ＲＬＵ）を試験化合物のＬｏｇ１０ナノモル濃度に対してプロットし、ＩＣ５０及びＩＣ９０値を、ＥｘｃｅｌアドインＸｌｆｉｔ（ＩＤ  Ｂｕｓｉｎｅｓｓ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ  Ｌｉｍｉｔｅｄ）でサポートされる４パラメーターロジスティックモデルを用いて算出した。試験化合物のＩＣ５０及びＩＣ９０値を上記のように算出し、複数の実験全体の幾何平均を算出し、表７に示した。
【０１３３】
結果：
試験化合物は、ＴＡＣＩ−ＣＨＯルシフェラーゼレポーター細胞においてヒトＢＡＦＦ三量体誘導性ＮＦｋＢ活性化を用量依存的に阻害した。表７に示す結果は、試験化合物のＩＣ５０及びＩＣ９０の幾何平均値が対照ＢＡＦＦアンタゴニストに匹敵するか、またはそれよりも強力であることを示している。
【表７】
2018527323.tif 000014
【０１３４】
実施例６．ＢＡＦＦＲ−ＣＨＯルシフェラーゼレポーター細胞におけるＢＡＦＦ６０量体誘導性ＮＦｋＢ活性化の阻害
材料／方法：
簡潔には、ヒトＢＡＦＦＲ  ＣＨＯ  ＮＦｋＢルシフェラーゼレポーター細胞を採取、洗浄、計数し、既知組成の無血清培地（Ｌｏｎｚａ）であるＸ−ＶＩＶＯ１５にペニシリン／ストレプトマイシン１％（ｖ／ｖ）を加えたアッセイ培地（ＡＭ）中に濃度１．６×１０６細胞／ｍｌで再懸濁した。組換えヒトＢＡＦＦ６０量体（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  ＩｎｇｅｌｈｅｉｍＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）をＡＭ中にて単一濃度（４．２ｐＭ）で調製し、加湿インキュベーターにて、３７℃、５％ＣＯ２で３０分間、ＡＭ単独、または逐次滴定した試験化合物とプレインキュベートした。ＢＡＦＦと試験化合物のプレインキュベーション後、５０ｕｌの混合物（複数可）を５０ｕｌの細胞に添加し、試験プレートをさらに（上記の通り）３７℃で２４時間インキュベートした。対照サンプルに、ＡＭ（非刺激対照）またはＡＭで希釈した組換えヒトＢＡＦＦ６０量体（刺激対照）を加えた。２４時間のインキュベーション後、細胞懸濁液を１００ｕｌのＳＴＥＡＤＹ−Ｇｌｏ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて製造業者の指示に従って処理し、ルシフェラーゼ発現についてアッセイした。結果の相対発光量（ＲＬＵ）を試験化合物のＬｏｇ１０ナノモル濃度に対してプロットし、ＩＣ５０及びＩＣ９０値を、ＥｘｃｅｌアドインＸｌｆｉｔ（ＩＤ  Ｂｕｓｉｎｅｓｓ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ  Ｌｉｍｉｔｅｄ）でサポートされる４パラメーターロジスティックモデルを用いて算出した。試験化合物のＩＣ５０及びＩＣ９０値を上記のように算出し、複数の実験全体の幾何平均を算出し、表８に示した。
【０１３５】
結果：
試験化合物は、ＢＡＦＦＲ−ＣＨＯルシフェラーゼレポーター細胞においてヒトＢＡＦＦ６０量体誘導性ＮＦｋＢ活性化を用量依存的に阻害した。表８に示す結果は、試験化合物Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｏ、Ｐ、Ｑ、及びＲのＩＣ５０及びＩＣ９０の幾何平均値が３つすべての対照ＢＡＦＦアンタゴニストよりも強力であったことを示している。
【表８】
2018527323.tif 000015
【０１３６】
実施例７：ＢＡＦＦＲ−ＣＨＯルシフェラーゼレポーター細胞における膜結合ＢＡＦＦ誘導性ＮＦｋＢ活性化の中和
材料／方法：
ヒトＢＡＦＦを発現するＣＨＯ−Ｋ１細胞を計数し、２×１０６細胞／ｍｌの濃度で標準成長培地中に再懸濁した。膜結合ＢＡＦＦの切断を停止するために、細胞を０．１２５％パラホルムアルデヒド（Ｅｌｅｃｔｒｏｎ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ）で処理し、室温で１時間インキュベートした。次いで、固定したヒトＢＡＦＦ  ＣＨＯ−Ｋ１細胞を洗浄し、標準成長培地中に２×１０６細胞／ｍｌで再懸濁し、３７℃、５％ＣＯ２で一晩インキュベートした。次いで、固定したヒトＢＡＦＦ  ＣＨＯ−Ｋ１細胞を採取し、ペニシリン／ストレプトマイシン１％（ｖ／ｖ）を含有する既知組成の無血清アッセイ培地（ＡＭ）であるＸ−ＶＩＶＯ１５（Ｌｏｎｚａ）に濃度３．２×１０６細胞／ｍｌで再懸濁した。
【０１３７】
ヒトＢＡＦＦＲ  ＣＨＯ  ＮＦｋＢルシフェラーゼレポーター細胞を採取、洗浄し、アッセイ培地中に濃度１．６×１０６細胞／ｍｌで再懸濁した。固定したヒトＢＡＦＦ  ＣＨＯ−Ｋ１細胞を、ＡＭ中で３．２×１０６細胞／ｍｌに調製し、逐次滴定した試験化合物と３０分間プレインキュベートした後、５０ｕｌのヒトＢＡＦＦＲ  ＣＨＯ  ＮＦｋＢルシフェラーゼレポーター細胞に添加し、３７℃でさらに２４時間インキュベートした。対照レポーター細胞に、ＡＭ（非刺激対照）またはＡＭで希釈した固定したヒトＢＡＦＦ  ＣＨＯ−Ｋ１細胞（刺激対照）を加えた。２４時間のインキュベーション後、サンプルを１００ｕｌのＳＴＥＡＤＹ−Ｇｌｏ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて処理し、ルシフェラーゼ発現についてアッセイした。相対発光量（ＲＬＵ）を試験化合物のＬｏｇ１０ナノモル濃度に対してプロットし、ＩＣ５０及びＩＣ９０値を、ＥｘｃｅｌアドインＸｌｆｉｔ（ＩＤ  Ｂｕｓｉｎｅｓｓ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ  Ｌｉｍｉｔｅｄ）でサポートされる４パラメーターロジスティックモデルを用いて算出した。試験化合物のＩＣ５０及びＩＣ９０値を上記のように算出し、複数の実験全体の幾何平均を算出し、表９に示した。
【０１３８】
結果
試験化合物は、ＢＡＦＦＲ−ＣＨＯルシフェラーゼレポーター細胞において膜結合ヒトＢＡＦＦ誘導性ＮＦｋＢ活性化を用量依存的に阻害した。表９に示す結果は、試験化合物のＩＣ５０及びＩＣ９０値が３つすべての対照ＢＡＦＦアンタゴニストよりも強力であったことを示している。
【表９】
2018527323.tif 000016
【０１３９】
実施例８：ＳＴＡＴ３−ルシフェラーゼレポーターを用いた、リンパ芽球Ｂ細胞（ＤＢ細胞）におけるヒトＩＬ−２３活性の阻害
材料／方法：
リンパ芽球Ｂ細胞（ＤＢ細胞；ＡＴＣＣカタログ番号ＣＲＬ−２２８９）を、レンチウイルスＳＴＡＴ−３／ルシフェラーゼレポーター遺伝子（Ｑｉａｇｅｎ）で安定に形質導入した。形質導入された細胞は、ピューロマイシン（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて選択した。完全培地は、１０％ＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）及び２μｇ／ｍＬピューロマイシン（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を補充したＲＰＭＩ−１６４０培地（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）であった。アッセイ培地は、１０％ＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）を補充したＲＰＭＩ−１６４０培地（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）であった。
【０１４０】
遺伝子操作したＤＢ−ＳＴＡＴ３細胞を、８０μＬ／ウェルでアッセイ培地を入れた白色の平底９６ウェルプレートに２０，０００細胞／ウェルで播種した。試験化合物（１０倍）を、アッセイ培地を入れたポリプロピレンの丸底９６ウェルプレート中で調製し、１μｇ／ｍＬ〜１０ｐｇ／ｍＬの用量範囲になるように希釈した。１０μＬの希釈した試験分子またはアッセイ培地（対照ウェル用）を３連の各ウェルに添加した。１０μＬの１０倍ヒトＩＬ−２３（最終濃度１プレートあたり７５ｎｇ／ｍＬまで）を各ウェルに添加した。あるいは、１０μＬの培地を対照ウェルに添加した。アッセイで使用する際に選択したＩＬ−２３の用量は、以前の研究で決定された遺伝子操作ＤＢ細胞に対するヒトＩＬ−２３のＥＣ６０刺激薬用量を表す。プレートを５％ＣＯ２中、３７℃で一晩インキュベートした。ＯＮＥ−Ｇｌｏ（商標）ルシフェラーゼアッセイ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）を調製し、１００μＬを各ウェルに添加して混合した。発光をＥｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダーで測定した後、抗体濃度（ｘ軸）に対してプロットした（ｙ軸）。化合物のＩＣ５０値は、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ６ソフトウェアを使用して４パラメーターシグモイド用量反応関数にデータを適用することによって決定した。ＩＣ９０値は、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ６ソフトウェアのＦｉｎｄ  ＥＣａｎｙｔｈｉｎｇによりデータを算出することによって決定した。複数の実験全体の幾何平均を算出し、表１０に示した。
【０１４１】
結果
結果は、試験化合物が、ＳＴＡＴ３−ルシフェラーゼレポーターにより、ＤＢ細胞におけるヒトＩＬ−２３活性を阻害できることを示した。
【表１０】
2018527323.tif 000017
【０１４２】
実施例９：マウス脾細胞におけるヒト及びカニクイザルＩＬ−２３活性の阻害
材料及び方法
マウス脾臓（１３週齢未満の雌Ｃ５７ＢＬ／６；Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）由来の単核細胞を単離、洗浄、計数し、標準Ｔ細胞培地（ＴＣＭ）中に４×１０６細胞／ｍｌで再懸濁した。１００マイクロリットルのｍＩＬ−２／脾細胞懸濁液を９６ウェルマイクロタイタープレートに添加した。組換えヒトＩＬ−２３（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）または組換えカニクイザルＩＬ−２３（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  ＩｎｇｅｌｈｅｉｍＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）をＴＣＭで希釈し、ＴＣＭ単独または滴定した試験サンプルと３７℃で２時間プレインキュベートした。試験サンプルとＩＬ−２３のプレインキュベーション後、１００ｕｌの混合物を細胞に添加し、試験プレートを５％ＣＯ２加湿空気と共に３７℃で４８時間インキュベートした。対照サンプルに、ＴＣＭ（非刺激対照）またはＴＣＭで希釈した組換えＩＬ−２３（刺激対照）を加えた。インキュベーション後、製造業者の指示（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）に従ってＱｕａｎｔｉｋｉｎｅ（登録商標）マウスＩＬ−１７イムノアッセイを用いて上清からマウスＩＬ−１７レベルを測定した。ｍＩＬ−１７ｐｇ／ｍｌの補間値を各サンプルについて測定し、対照のパーセント（ＰＯＣ）に変換した。ＰＯＣを試験サンプル濃度に対してプロットし、ＩＣ９０値を、ＥｘｃｅｌアドインＸＬｆｉｔ（Ａｃｔｉｖｉｔｙ  Ｂａｓｅソフトウェア、ＩＤ  Ｂｕｓｉｎｅｓｓ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ，Ｌｔｄ．）で可能である４パラメーターロジスティックモデルを用いて算出した。試験化合物を上記のようにＩＣ５０及びＩＣ９０に関して分析し、各試験化合物に対する複数の実験全体の幾何平均を算出し、表１１に示した。
【０１４３】
結果
結果は、試験化合物が、ヒト及びカニクイザル両方のＩＬ２３誘導性マウス脾細胞のマウスＩＬ−１７の放出を阻害できることを示した。
【表１１】
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【０１４４】
実施例１０．カニクイザルにおける化合物の薬物動態学
材料及び方法
試験化合物Ａ、Ｂ、Ｃ、及びＤについての単回静脈内（ＩＶ）用量ＰＫ試験を雄カニクイザル（分子あたりｎ＝２）で実施した。用量を１ｍｇ／ｋｇの低速ＩＶボーラス注射として投与した。投与前、投与日の投与後０．２５時間、２時間、及び６時間後、投与後１日、２日、３日、４日、７日、１０日、１４日、２１日、及び２８日後に全血サンプルを採取した。投与された分子の血清濃度は、ＭＳＤを用いたリガンド結合アッセイによって測定した。
【０１４５】
較正標準曲線及び品質管理（ＱＣ）サンプルを、１００％のプールしたカニクイザル血清で調製した。各標準曲線は、開始濃度５１２ｎｇ／ｍＬから３倍に系列希釈された０以外の７ポイントからなる。またブランクサンプル（アナライトを含まないマトリックス）も含めた。開始濃度２５６ｎｇ／ｍＬで低範囲、中範囲、及び高範囲の５種類のＱＣサンプルを調製し、次いで８ｎｇ／ｍＬまで４倍に系列希釈し、さらに２倍希釈物を使用して最低のＱＣを４ｎｇ／ｍＬで調製した。標準曲線及びＱＣサンプルは、分析の実行ごとに２連で構成した。定量の下限及び上限は、公称濃度が３０パーセント（％）を超えない再現可能な逆算濃度を有する最低及び最大のＱＣポイントと定義した。標準曲線ポイントの許容基準は、公称濃度の３０パーセント（％）であった。
【０１４６】
血清サンプル中の活性薬物濃度を測定するために、結合緩衝液（０．０５％Ｔｗｅｅｎ  ２０を加えた１倍ＰＢＳ中、５％ＢＳＡ）に、０．５μｇ／ｍＬのビオチン化組換えヒトＢＡＦＦ及び０．５μｇ／ｍＬのスルホ標識化ヤギ抗ヒトＩｇＧ検出物を混合し、マスターミックスを調製した。マスターミックスをウェルあたり５０μＬで９６ウェル非結合性遮光プレートに添加した。２５μＬの標準及びＱＣ物質（原液を結合緩衝液で１：２０に希釈）を、マスターミックスを入れた非結合性プレートに２連でウェルごとに添加した。未知の血清サンプルを、結合緩衝液で１：２０に、５％血清を含有する結合緩衝液で１：４００に希釈した。２５μＬの希釈サンプルを、マスターミックスを入れた非結合性プレートにウェルごとに添加した。非結合性プレートをプレートシェーカー上で室温にてインキュベートした（５００ｒｐｍ、１．５時間）。並行して、ＭＳＤストレプトアビジン金プレートを１５０μＬのブロッキング緩衝液（０．０５％Ｔｗｅｅｎ  ２０を加えた１倍ＰＢＳによる５％ＢＳＡ）を用いてブロッキングし、プレートシェーカー上で室温にてインキュベートした（５００ｒｐｍ、１．５時間）。インキュベーション後、ＭＳＤプレートをウェルあたり３００μＬの洗浄緩衝液（１倍ＰＢＳ中、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０）で３回洗浄した。非結合性プレートから５０μＬのサンプルをＭＳＤプレートに添加し、室温でインキュベートした（１．５時間、６００ｒｐｍ）。インキュベーション後、プレートを洗浄緩衝液で３回洗浄し、１５０μＬの２倍リード緩衝液Ｔを各ウェルに添加し、ＭＳＤ  Ｓｅｃｔｏｒ  Ｉｍａｇｅｒ  ２４００で直ちに読み取った。ＭＳＤ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｗｏｒｋｂｅｎｃｈソフトウェアを使用して、標準曲線を４パラメーターロジスティック式にフィッティングした。薬物動態パラメーターを、Ｐｈｏｅｎｉｘ  ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ  ６．３（Ｃｅｒｔａｒａ、ＭＤ，ＵＳＡ）のノンコンパートメント解析を使用して算出した。
【０１４７】
結果：
試験化合物に関する平均（ＳＤ）血清濃度対時間プロファイルを図２に示す。試験化合物に関する平均（ＳＤ）薬物動態パラメーターを表１２にまとめる。陽性の抗薬物抗体であることが確認され、経時的薬物濃度の急激な低下を示した血清サンプルは、薬物動態学パラメーター計算から除外した。
【表１２】
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【０１４８】
実施例１１．例示的な化合物のヒトＰＫ及びヒト用量の予測
分布容積１．０、クリアランス０．８５のアロメトリー指数を用いて、基本的なＤｅｄｒｉｃｋ法によるスケーリングを使用し、化合物Ｂの平均サル血清濃度をヒトにスケーリングした。予測ヒト静脈内血清濃度−時間プロファイルを、線形２コンパートメントモデルにフィッティングした。２コンパートメント静脈内モデルからのパラメーターと、市販の治療用ｍＡｂで測定された平均皮下吸収速度及びバイオアベイラビリティとを組み合わせることにより、ヒト皮下血清濃度−時間プロファイルを予測した。クリアランス及び終末相半減期は、健常ヒトにおいてそれぞれ０．３４Ｌ／ｄ及び９．９ｄであると予測される。隔週１回の１００ｍｇ皮下用量投与後の化合物Ｂの予測ヒト血清濃度−時間プロファイルを図３に示す。
【０１４９】
ヒトの予測有効用量は、隔週１回の皮下送達で１ｍｇ／ｋｇである。この用量計画は、隔週またはそれ以下の頻度の皮下投与でＣｍｉｎ≧３０ｎＭ（６μｇ／ｍＬ）を維持すると予測される。予測有効用量は、ＳＬＥ及びＲＡ患者におけるベリムマブ（Ｂｅｎｌｙｓｔａ（登録商標））、タバルマブ、及びブリシビモドについて観察された濃度−ＰＤバイオマーカー応答に基づいてもよい。これらの研究では、定常状態におけるＣｍｉｎが３０〜４０ｎＭの場合にＢＡＦＦ関連バイオマーカーの阻害が最大となることを関連付けた。ＩＬ２３の中和に必要な濃度は、ＢＡＦＦの中和に必要とされるよりもはるかに低く、したがって二重アンタゴニスト全体で必要とされるＣｍｉｎには影響を及ぼさない。
【０１５０】
実施例１２．化合物の精製
方法：
アフィニティー精製工程としてＭａｂ  Ｓｅｌｅｃｔ  ＳｕＲｅを使用して化合物を精製した。溶出は酢酸ナトリウム緩衝液ｐＨ３．５を使用して実施した。Ｍａｂ  Ｓｅｌｅｃｔ  ＳｕＲｅ精製の後、サンプルを中和し、Ｐｏｒｏｓ  ５０  ＨＳ樹脂に添加して、クエン酸ナトリウム緩衝液中で塩化ナトリウム勾配を利用して溶出した。単量体ピークは２０ｍＭクエン酸ナトリウム及び１２０ＭＭ  ＮａＣｌ（ｐＨ６．０）で溶出する。イオン交換クロマトグラフィー後、サンプルは一貫して＞９５％単量体であった。
【０１５１】
超遠心分析法（ＡＵＣ）による沈降速度（ＳＶ）実験を用いて、サンプルの純度及び凝集状態に関する情報を得た。回転数４０，０００ｒｐｍのＡｎ６０Ｔｉ４穴ローターを使用して、ｏｐｔｉｍａ  ＸＬ−Ｉ（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ、Ｆｕｌｌｅｒｔｏｎ，ＣＡ）にて２０℃でサンプルを遠心分離した。対応する希釈緩衝液を標準緩衝液として用い、２８０ｎｍでの紫外線吸光度により沈降過程をモニターした。超遠心セル内の濃度分布の経時的変化を、ＸＬ−Ｉで動作するソフトウェアを使用して収集し、ＳＥＤＦＩＴソフトウエア（バージョン１４．１）の連続ｃ（Ｓ）分布モデルを用いて分析することにより沈降係数の分布を求めた。単量体パーセンテージを、積分ピーク面積に基づき算出した。
【０１５２】
結果：
化合物の精製の結果を表１３に示す。データは、化合物が高い純度及び均質性を有することを示しており、このことは良好な安定性を示す。
【表１３】
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【０１５３】
実施例１３：化合物の質量分析プロファイル
方法：
未変性サンプル
この手順により、化合物またはタンパク質の未変性状態の質量を得た。サンプル０．１５ｕｌを、Ａｇｉｌｅｎｔ  ＰｏｒｏＳｈｅｌｌ  ３００ＳＢ−Ｃ３カラム、５ｕｍ（３０×１．０ｍｍ）に注入した。カラム温度は８０℃であり、流速は１５０ｕｌ／分であった。化合物またはタンパク質を、０分の時点の１０％Ｂから、６分で８５％Ｂになる勾配でカラムから溶出させた。移動相Ａは、水／アセトニトリル／ギ酸／酢酸アンモニウム（９９／１／０．１／２ｍＭ）であり、移動相Ｂは、ｎ−プロパノール／アセトニトリル／水／ギ酸（７０／２０／１０／０．１）であった。溶出液をＡｇｉｌｅｎｔ  ６２２４  ＴＯＦ質量分析計に送り、質量６００〜質量３２００をスキャンした。生データをＭａｓｓＨｕｎｔｅｒプログラムでデコンボリューションした。
【０１５４】
還元サンプル
この手順により、タンパク質または軽鎖の質量、及び重鎖の質量を得た。サンプル５ｕｌを、２０：１の８ＭグアニジンＨＣＬ：ＴＣＥＰ混合物５ｕＬに添加し、室温にて１５分間インキュベートした。このサンプル０．１５ｕｌを、以下の点を除いて上記の通り注入した：化合物またはタンパク質は、０分の時点の５％Ｂから、６分で８５％Ｂになる勾配でカラムから溶出させ、カラム温度は６０℃であり、質量範囲は６００〜２０００であった。
【０１５５】
脱グリコシル化サンプル
この手順により、タンパク質または軽鎖及び重鎖の脱グリコシル化質量を得た。サンプル７．５ｕｌを、２０：１の４００ｍＭ重炭酸アンモニウム：ＰＮＧａｓｅ  Ｆ混合物３．２ｕＬに添加し、３７℃で３時間インキュベートした。次いで、このサンプルに２０：１の８ＭグアニジンＨＣＬ：ＴＣＥＰ混合物１０ｕｌを添加し、室温にて１５分間インキュベートした。このサンプルを、上記の還元サンプルの通りに注入した。
【０１５６】
質量分析によるペプチドマッピング
６Ｍ  ＧｄＨＣｌ、２５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、及び１０ｍＭ  ＤＴＴからなる変性緩衝液でサンプルを希釈し、次いで３７℃で３０分間インキュベートした。次いで、ヨードアセトアミドでサンプルをアルキル化し、暗所で室温にて３０分間インキュベートした。反応混合物を精製し、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５  Ｓｕｐｅｒｆｉｎｅカートリッジを使用して緩衝液を１００ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣＬ（ｐＨ７．５）に交換した。次いで、サンプルを３７℃で４時間インキュベーションする間に、トリプシンで消化した。その後、ＴＦＡを添加することにより、反応混合物の消化をクエンチした。
【０１５７】
得られたトリプシン消化物を、Ｄｉｏｎｅｘ  Ｕｌｔｉｍａｔｅ  ３０００  ＨＰＬＣのオートサンプラー経由でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｊｕｐｉｔｅｒ  Ｃ１８逆相カラムに注入した。溶媒Ａ：０．１％ギ酸／９９％水／１％アセトニトリル、溶媒Ｂ：０．１％ギ酸／５％水／９５％アセトニトリルからなる勾配溶媒系を利用した。溶媒Ｂの比率を１４０分かけて０％から３８％に増加させた。クロマトグラフィー分離は、室温にて流速１００μｌ／分で行った。オートサンプラー内のサンプルストレージは４℃であった。クロマトグラフィー分離の後、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｏｒｂｉｔｒａｐ  Ｆｕｓｉｏｎ質量分析計にサンプルを入れ、正エレクトロスプレーイオン化モードで作動させた。用いた方法には、分解能３０，０００、最小シグナル１０，０００、分離幅１．０、及び正規化コリジョンエネルギー３５．０Ｖを利用した活性化型のＣＩＤを含めた。Ｓ−レンズＲＦレベルは２０％に設定した。データ収集型は、フルＭＳスキャンではプロファイル、ＣＩＤ  ＭＳ／ＭＳデータではセントロイドであった。データは、取得速度１スペクトル／秒で２５０〜２０００Ｄａの質量範囲にわたって収集する。
【０１５８】
Ｐｒｏｔｅｏｍｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒ  １．４（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を利用して、酵素消化物から収集されたＬＣ−ＭＳ及びＬＣ−ＭＳ／ＭＳの生断片化データを所定の配列に対して分析した。次いで、Ｎ−Ｘ−Ｓ／Ｔ（ＸがＰではない）のコンセンサスを含む同定されたペプチドを、グリコシル化ペプチドに対するＥＩＣを手動で抽出することにより分析した。ＥＩＣ全体のグリコシル化ペプチドのＭＳ強度を用いて、グリコフォームの全存在量に占める割合を推定した。
【０１５９】
結果：
結果を表１４に示す。データは、意図したアミノ酸配列及び構造が発現しており、予期せぬ不均一化を伴わずに回収されたことを示す。グリコシル化パターンは、ＣＨＯ細胞で発現する従来の抗体に典型的なものであり、いかなる非定型構造も示していない。
【表１４】
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【０１６０】
実施例１４：高濃度での単量体含有量
このプロセスを記述する目的は、高濃度での凝集を評価することにより、化合物Ｂの固有の特性を評価することである。２０ｍＭクエン酸ナトリウム、１２０ｍＭ  ＮａＣｌ（ｐＨ６）の標準的な緩衝液を使用して、製剤を評価することなく分子の凝集傾向を把握する。
【０１６１】
方法：
カットオフ分子量５０，０００ダルトンのＡｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ遠心式フィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ）を用いて、沈殿の観察が見られない最大濃度まで徐々に化合物Ｂを濃縮した。次いで、濃縮したタンパク質溶液を分析的ＳＥＣ解析にかけ、サンプルの純度及び凝集状態に関する情報を得た。クロマトグラフィーは、Ａｇｉｌｅｎｔ  １２００シリーズＨＰＬＣシステムを使用して実行した。システムは１．０ｍｌ／分で２３分間実行した。約３０ｕｇの材料をＴｏｓｏｈ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  ＴＳＫｇｅｌ  Ｇ３０００ＳＷＸＬカラム（５ｕｍ  ２５０ａ  ７．８×３０ｃｍ）に注入し、２８０ｎｍの結果を読み取った。使用したランニング緩衝液は、５０ｍＭリン酸ナトリウム、０．２Ｍ  Ｌ−アルギニン（ｐＨ６．８）であった。
【０１６２】
結果：
濃縮工程時の化合物Ｂに関する分析的ＳＥＣデータのまとめを表１５及び図４に記載する。高濃度での凝集及びサンプル純度を示すデータは、化合物Ｂが、高濃度で凝集する傾向を有しないことを実証していることを表す。
【表１５】
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【０１６３】
実施例１５：化合物の原子価
方法：
Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｍｅｍｂｒａｎｅ−Ｃｏｎｆｉｎｅｄ  Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓを使用して、１０ｍＭ酢酸塩、５０ｍＭ  ＫＣｌ（ｐＨ５．０）緩衝液に予め一晩透析した化合物の原子価を測定した。実験装置では、１ｍｇ／ｍＬのサンプル２０μＬを、１０ＭＷＣＯの半透過性再生セルロースバイオグレード膜によって両端を封止した２×２×４ｍｍ３の石英キュベットに充填した。この膜は、巨大分子を捕捉する一方、水及び溶媒成分を通過させる。次いで、１ｍＡの電流をキュベットに印加し、キュベットの長軸方向に電界を確立し、新鮮な緩衝液を連続して流しながら荷電した巨大分子を電界中で移動させた。リアルタイム移動濃度境界を、キュベットに沿って離間する強度読み取り値を示すリニアフォトダイオードアレイ（ＬＰＤＡ）を用いて検出した。濃度境界の速度を用いて、電気泳動移動度、続いて有効原子価を算出した。次いで、ストークス半径（ＡＵＣでの沈降速度のランから得た）、対イオン半径（塩化物イオンでは０．１２２ｎｍ）、緩衝液のコンダクタンス（６．３５ｍＳ）、及びイオン強度（０．０５Ｍ）などの追加情報を使用して、巨大分子の基底状態の原子価を明らかにした。
【０１６４】
結果：
原子価データ（表１６を参照）は、溶液中の化合物のコロイド安定性、すなわち溶液中のタンパク質とタンパク質との正味の相互作用を示す。原子価が１５を超える化合物は、強力な正味の反発相互作用を有し、高濃度で製剤化できる可能性が高い。
【表１６】
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【０１６５】
実施例１６：化合物の全血安定性
方法
Ｏｃｔｅｔ  ＲＥＤ９６で全血による干渉アッセイを行い、全血（ＷＢ）の存在下での化合物に対する非特異的結合または標的外結合の影響を検出した。化合物の全血及び１倍のキネティック用ランニング緩衝液（１ｘｋｂ）溶液を、温度３７℃で４８時間インキュベートした。インキュベートした化合物サンプルの速度論的測定は、ストレプトアビジン（ＳＡ）バイオセンサーチップ（ＦｏｒｔｅＢｉｏ、Ｍｅｎｌｏ  Ｐａｒｋ，ＣＡ）を搭載したＯｃｔｅｔ  ＲＥＤ９６を用いて２７℃で実施した。緩衝液及び全血でのオンレート／結合シグナルの比を記録した。２未満の比は干渉なしを示すとみなした。
【０１６６】
結果
結果を表１７に示す。試験化合物には全血の干渉は観察されなかった。
【表１７】
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【０１６７】
実施例１７：ｉｎ  ｓｉｌｉｃｏ免疫原性の予測
方法
タンパク質治療薬の免疫原性を、ＥｐｉＶａｘ，Ｉｎｃ．（Ｐｒｏｖｉｄｅｎｃｅ，ＲＩ）が開発した計算ツールＥｐｉＭａｔｒｉｘを利用してｉｎ  ｓｉｌｉｃｏで予測した。ＥｐｉＭａｔｒｉｘには、ＴヘルパーエピトープならびにＴｒｅｇエピトープの予測が組み込まれており、前者は免疫応答を誘発するのに対して後者は阻害性である。簡潔には、最初にタンパク質配列を、クラスＩＩ  ＨＬＡ結合のコアであることが実証されている重複する９量体ペプチドフレームに解析した。８つの共通するクラスＩＩ  ＨＬＡアレルのそれぞれに対する９量体ペプチドの結合可能性を、実験データまたは計算予測に基づいて評価する。各ＨＬＡアレルに対する９量体ペプチドの結合可能性を反映させたスコアを作成し、さらに複数のＨＬＡアレルにまたがる９量体も比較でき、網羅的規模での免疫原性予測が可能であるように正規化を実行した。最後に、プログラムにより、全体的な「免疫原性スコア」であるｔＲｅｇ  Ａｄｊｕｓｔｅｄ  Ｅｐｘスコアを作成する。これは化合物がｉｎ  ｖｉｖｏで免疫応答を誘発する尤度である。
【０１６８】
結果
結果を表１８に示す。試験化合物の全体的な免疫原性スコアは低く、これらの化合物がｉｎ  ｖｉｖｏで強力な免疫応答を誘発する可能性は低いと予測される。
【表１８】
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【０１６９】
実施例１８：初代ヒトＢ細胞増殖アッセイにおけるヒトＢＡＦＦの阻害
材料及び方法
本試験で使用する正常で健康な血液サンプル（ｎ＝３ドナー）は、Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ）から購入した。完全培地は、１０％ＦＢＳ（Ｌｉｆｅ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）＋Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を補充したＩＭＤＭ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）であった。Ｂ細胞の単離緩衝液は、２％ＦＢＳ＋２ｍＭ  ＥＤＴＡ（Ｌｉｆｅ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を加えたＭｇ＋＋及びＣａ＋＋フリーの滅菌ＤＰＢＳ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で構成した。
【０１７０】
健常なヒト全血からのヒトＢ細胞の単離
ヘパリン化全血４００ｍＬを１０００ｍＬの滅菌ポリスチレンボトルに移し、等量のＤＰＢＳを添加した。ＰＢＳで希釈した血液３５ｍＬを、５０ｍＬのポリスチレン丸底チューブに予め充填された１５ｍＬのＦｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ（商標）Ｐｌｕｓ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）勾配媒体上部に配置した。チューブをブレーキなしで室温にて２０分間２０００ｒｐｍで遠心分離した。次に、上清の上部３分の２を吸引し、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を含む中間灰色層を５０ｍＬのコニカルチューブに移した。ＤＰＢＳ（ＣＡ＋＋及びＭｇ＋＋フリー）＋２％ＦＢＳを最大５０ｍＬ容積まで添加した。チューブを１２００ｒｐｍで１０分間、遠心沈殿させた。得られた細胞ペレットをＤＰＢＳ（ＣＡ＋＋及びＭｇ＋＋フリー）＋２％ＦＢＳ（洗浄緩衝液）で再懸濁し、遠心分離工程（１２００ｒｐｍで１０分間）を繰り返した。細胞ペレットを洗浄緩衝液で再び５０ｍＬまで再懸濁した。この時点で細胞生存率及び細胞濃度を測定した。
【０１７１】
次いでチューブを１２００ｒｐｍで１０分間、遠心沈殿させ、上清を廃棄した。細胞ペレットを完全培地で再懸濁し、細胞濃度を５×１０６細胞／ｍＬに調整した。懸濁した細胞を７５ｃｍ２の組織培養フラスコに入れ、５％Ｃ０２インキュベーター内（３７℃）で一晩インキュベートした。次いで、Ｂ細胞を、Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）Ｕｎｔｏｕｃｈｅｄ（商標）ヒトＢ細胞キット（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用し、製造業者のプロトコールに従って単離した。細胞濃度は、細胞濃度及び生存率の測定後、下流手順に適したものとなるように調整した。
【０１７２】
３Ｈ−チミジン取り込みアッセイを使用したＢ細胞増殖の評価
Ｂ細胞をＦａｌｃｏｎ組織培養用９６ウェル丸底プレートに播種した（ウェルあたり１×１０５細胞／１００μＬ培地）。次いで、完全培地を用いて、試験品を０．０２８〜２０ｎＭの範囲の４段階濃度に調製し、Ｂ細胞刺激薬（抗ＩｇＭ抗体及びヒトＢＡＦＦ）を４倍濃度（それぞれ、８μｇ／ｍＬ及び２０ｎｇ／ｍＬ）で調製した。予め希釈した試験品５０μＬを各ウェルに添加した（最終濃度０．００７〜５ｎＭ）。次いで、予め希釈したヤギ抗ヒトＩｇＭ（最終濃度２μｇ／ｍＬ）及びｈＢＡＦＦ（最終濃度５ｎｇ／ｍＬまたは９８ｐＭ）５０μＬを対応するウェル（図６を参照）に添加した。Ｂ細胞を３７℃の５％ＣＯ２加湿インキュベーター内で７２時間培養した。インキュベーションが終了する１８時間前に、１μＣｉの３Ｈ−チミジン（Ｐｅｌｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）２０μＬを各ウェルに添加した。セルハーベスターを使用して、３Ｈ−チミジン取り込みＤＮＡ／ウェルをマイクロファイバーガラスフィルタープレートに移した。このとき、少なくとも４時間、プレートを風乾した後、３０μＬのシンチレーションエンハンサーをウェルに添加した。各ウェルの計数毎分（ｃｐｍ）値をＭｉｃｒｏＢｅｔａ  Ｔｏｐｃｏｕｎｔを使用して測定し、試験品の濃度（ｘ軸）に対するｃｐｍ値（ｙ軸）をプロットした。
【０１７３】
統計分析
ＩＣ５０及びＩＣ９０を、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ６ソフトウェアを使用して、データを４パラメーターシグモイド用量反応関数にカーブフィッティングすることにより決定した。３実験間の幾何平均を算出し、表１９に示した。
【０１７４】
結果
結果が示すように、ＩＣ５０及びＩＣ９０値を比較した場合、化合物Ｂは対照抗体３と比べ約２倍強力であることが明らかであった。
【表１９】
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【０１７５】
実施例１９．Ｂ１０．ＲＩＩＩマウスにおけるヒトＢＡＦＦの過剰発現によって誘導されるＢ２２０＋Ｂ細胞数の阻害
材料及び方法
簡潔には、初日にＢ１０．ＲＩＩＩ雌マウス（６〜８週齢、Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）を無作為に１０群、１０匹／群に分け、クエン酸緩衝液（２０ｍＭクエン酸ナトリウム、１１５ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ６．０）または等モル用量の試験化合物、それぞれ１．３、０．４及び０．１３ｍｇ／ｋｇ対１、３及び０．１ｍｇ／ｋｇを１００μＬの腹腔内注射により投与した。追加対照は未処置のナイーブマウスであった。治療初日の直後に、空のベクター（ＥＶ）対照群に対する、ヒトＢＡＦＦミニサークルＤＮＡ（Ｓｙｓｔｅｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）の単回３ｍｇ用量（１．５ｍｇ／ｍＬ）をハイドロダイナミック注入法によりマウスに投与した。クエン酸緩衝液または試験化合物のいずれかによる腹腔内処置を３、６、９、及び１２日目に７２時間ごとに繰り返した。
【０１７６】
１４日目に、マウスをイソフルラン（Ｂｕｔｌｅｒ  Ｓｃｈｅｉｎ）で麻酔し、頸椎脱臼により犠牲死させた。脾臓を切除し、Ｂ２２０＋Ｂ細胞について細胞懸濁液をフローサイトメトリーにより分析した。各処置群の平均数を決定し、一元配置分散分析後のダネット多重比較検定を用いて、対照と比較した有意差を算出した。結果を図５に示す。
【０１７７】
結果
結果は、化合物Ｂによる１４日間の処置が、ヒトＢＡＦＦのミニサークルＤＮＡによって誘導されるＢ２２０＋Ｂ細胞の増殖を有意に阻害できることを示した。
【０１７８】
実施例２０．Ｃ５７／Ｂｌ６マウスにおけるヒトＩＬ２３誘導性マウスのＩＬ１７Ａ及びＩＬ２２放出の阻害
材料及び方法
簡潔には、Ｃ５７ＢＬ／６雌マウス（７〜１０週齢、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ）を無作為に８群、８匹／群に分け、クエン酸緩衝液（２０ｍＭクエン酸ナトリウム、１１５ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ６．０）または等モル用量の試験化合物、それぞれ１．３、０．４及び０．１３ｍｇ／ｋｇ対１、３及び０．１ｍｇ／ｋｇを１００μＬの腹腔内注射により投与した。
【０１７９】
試験化合物投与の１時間後にマウスをイソフルラン（Ｂｕｔｌｅｒ  Ｓｃｈｅｉｎ）により麻酔し、生理食塩水（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で希釈した０．１％ＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ）対照または１５μｇ／ｍｌ（０．３μｇ）のｒｈＩＬ２３（内製）を両耳への２０μＬの皮内注射により投与した。皮下への負荷を２日連続して毎日繰り返した。２回目の負荷後２４時間で、マウスを頚椎脱臼により犠牲死させ、各耳を切除した。ＭＰ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ  Ｆａｓｔ−Ｐｒｅｐ  ２４ホモジナイザーを使用して、均質化緩衝液１ｍｌ（ＨＢＳＳ（Ｇｉｂｃｏ）；０．４％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００（Ｓｉｇｍａ）；１Ｘ  ＳｉｇｍａＦａｓｔプロテアーゼ阻害剤（Ｓｉｇｍａ））中で耳組織をホモジナイズした。ホモジナイズしたサンプルを４℃で１０分間遠心分離し、上清を回収した。製造業者の指示（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）に従ってＱｕａｎｔｉｋｉｎｅ（登録商標）マウスＩＬ−１７及びマウスＩＬ−２２イムノアッセイを用いて、マウスＩＬ１７Ａ及びＩＬ２２の存在について上清をアッセイした。サイトカインｐｇ／ｍｌの補間値を各サンプルについて測定した。各処置群の平均ｐｇ／ｍｌレベルを決定し、一元配置分散分析後のダネット多重比較検定を用いて、対照と比較した有意差を算出した。
【０１８０】
結果
図６の結果は、化合物Ｂの単回腹腔内用量での処置が、組換えヒトＩＬ２３の２日連続した内皮注射によって誘発される皮膚でのマウスＩＬ１７及びＩＬ２２の放出を有意に阻害できることを示した。
【０１８１】
【表２０−１】
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【表２０−２】
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【表２０−３】
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【表２０−４】
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【表２０−５】
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【表２０−６】
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【表２０−７】
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【表２０−８】
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【表２０−９】
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【表２０−１０】
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【表２０−１１】
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【表２０−１２】
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【表２０−１３】
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【表２０−１４】
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【表２０−１５】
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【０１８２】
他の実施形態
本明細書中に開示される機能はすべて、どのような組み合わせで組み合わせてもよい。本明細書中に開示される各機能は、同一の、同等な、または同様な目的を果たす代替機能で置き換えることができる。したがって、特に明示されない限り、開示される各機能は一般的な一連の等価または同様の機能の一例にすぎない。
【０１８３】
上記の説明から、当業者であれば本開示の本質的な特徴を容易に確認することができ、本開示の趣旨及び範囲を逸脱することなく、本開示に様々な変更及び改変を行って、本開示を様々な用途及び条件に適合させることができる。したがって、他の実施形態もまた請求項の範囲内である。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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